BR112019023608A2 - Materiais e métodos para células manipuladas e seus usos em imuno-oncologia - Google Patents

Materiais e métodos para células manipuladas e seus usos em imuno-oncologia Download PDF

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BR112019023608A2
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gene
cells
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fact
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BR112019023608-2A
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Alexander Terrett Jonathan
Kalaitzidis Demetrios
Klein Lawrence
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Crispr Therapeutics Ag
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    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
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    • C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
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    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
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    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2521/00—Reaction characterised by the enzymatic activity
    • C12Q2521/30—Phosphoric diester hydrolysing, i.e. nuclease
    • C12Q2521/301—Endonuclease

Abstract

a presente invenção refere-se a materiais e métodos para produzir células editadas no genoma manipuladas para expressar um construto de receptor de antígeno quimérico (car) na superfície celular e materiais e métodos para edição do genoma para modular a expressão, função ou atividade de um ou mais genes relacionados à imuno-oncologia em uma célula, e materiais e métodos para tratar um paciente usando as células manipuladas editadas no genoma.

Description

PEDIDOS RELACIONADOS
[0001] Este pedido reivindica o benefício de acordo com 35 U.S.C. § 119(e) do pedido provisório US NQ 62/505,649, depositado em 12 de maio de 2017, pedido provisório US NQ 62/508,862, depositado em 19 de maio de 2017, pedido provisório US NQ 62/538,138, depositado em 28 de julho de 2017, pedido provisório US NQ 62/567,012, depositado em 2 de outubro de 2017, pedido provisório US NQ 62/567,008, depositado em 2 de outubro de 2017, pedido provisório US NQ 62/583,793, depositado em 9 de novembro 2017, pedido provisório US NQ 62/639,332, depositado em 6 de março de 2018, pedido provisório US NQ 62/648,138, depositado em 26 de março, 2018, e pedido provisório US NQ 62/655,510, depositado em 10 de abril de 2018, cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade.
CAMPO
[0002] Em alguns aspectos, o presente pedido fornece materiais e métodos para a produção de células editadas no genoma manipuladas para expressar um construto de receptor de antígeno quimérico (CAR) na superfície celular. Em outros aspectos, o presente pedido fornece materiais e métodos para edição de genoma para modular a expressão, função ou atividade de um ou mais genes relacionados à imunooncologia em uma célula. Em ainda outros aspectos, o presente pedido fornece materiais e métodos para o tratamento de um paciente usando as células manipuladas editadas no genoma, tanto ex vivo quanto in vivo.
INCORPORAÇÃO POR REFERÊNCIA DA LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[0003] Este pedido contém uma Listagem de Sequências na forma
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2/714 legível por computador (nome do arquivo: C154270000WO00-SEQHJD; 1,19 MB - arquivo de texto ASCII; criado em 11 de maio de 2018), que é aqui incorporada por referência na sua totalidade e forma parte da divulgação.
ANTECEDENTES
[0004] A manipulação do genoma refere-se a estratégias e técnicas para a modificação específica e direcionada da informação genética (genoma) dos organismos vivos. A manipulação do genoma é um campo ativo de pesquisa devido à ampla gama de aplicações possíveis, particularmente na área da saúde humana, por exemplo, para corrigir um gene portador de uma mutação prejudicial ou para explorar a função de um gene. As primeiras tecnologias desenvolvidas para inserir um transgene em uma célula viva eram frequentemente limitadas pela natureza aleatória do sítio de inserção da nova sequência no genoma. Inserções aleatórias no genoma podem resultar na interrupção da regulação normal dos genes vizinhos, levando a efeitos indesejados graves. Além disso, as tecnologias de integração aleatória oferecem pouca reprodutibilidade, pois não há garantia de que a sequência seja inserida no mesmo sítio em duas células diferentes. Estratégias comuns de manipulação de genoma, tais como ZFNs, TALENs, HEs e MegaTALs, permitem que uma área específica do DNA seja modificada, aumentando assim a precisão da correção ou inserção em comparação às tecnologias anteriores. Estas plataformas oferecem um maior grau de reprodutibilidade, mas as limitações permanecem.
[0005] Apesar dos esforços de investigadores e profissionais médicos em todo o mundo para tratar de desordens genéticas, e apesar das promessas de abordagens anteriores da manipulação do genoma, ainda existe uma necessidade sentida de desenvolver células doadoras universais seguras e eficazes para apoio a tratamentos de terapia celular envolvendo medicina regenerativa e/ou indicações relacionadas
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3/714 à imuno-oncologia.
SUMÁRIO
[0006] São aqui fornecidos, em algumas modalidades, células, métodos e composições (por exemplo, ácidos nucleicos, vetores, composições farmacêuticas) utilizados para o tratamento de certas doenças malignas. A tecnologia de edição de genes da presente divulgação, em alguns aspectos, é usada para manipular terapias de células imunes com alvo nas células tumorais que expressam os antígenos CD19, CD70 ou BCMA. Surpreendentemente, as terapias de células imunes manipuladas, de acordo com os métodos da presente divulgação, são capazes de reduzir o volume do tumor in vivo, em algumas modalidades, em pelo menos 80%, em relação aos controles não tratados. Os dados de modelos animais, conforme aqui fornecidos, demonstram que as terapias de células imunes manipuladas, em algumas modalidades, eliminam a presença de células tumorais detectáveis apenas 30 dias após a administração in vivo, e o efeito nesses modelos animais, após uma dose única da terapia celular, persiste por pelo menos 66 dias. Além disso, em algumas modalidades, as terapias de células imunes manipuladas da presente divulgação são capazes de aumentar a taxa de sobrevivência do sujeito em pelo menos 50% em relação aos controles não tratados.
[0007] Além disso, estas células são manipuladas para bloquear a doença hospedeiro-versus-enxerto e a doença enxerto-versushospedeiro, o que as torna adequadas para uso como terapêutica alogênica de transplante de células.
[0008] Além disso, os construtos genéticos e métodos aqui fornecidos podem ser utilizados, em algumas modalidades, para manipular populações de células imunes com eficiências de modificação de genes elevadas o suficiente para que as populações de células não exijam purificação ou enriquecimento antes da
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4/714 administração in vivo. Por exemplo, pelo menos 80% das células imunes de uma população de células manipuladas exemplificativa da presente divulgação não possuem expressão superficial do gene constante alfa do receptor de células T e do gene da microglobulina β2, e pelo menos 50% das células imunes também expressam o receptor de antígeno quimérico específico de interesse (por exemplo, com alvo em CD19, CD70 ou BCMA).
[0009] Assim, em alguns aspectos, são proporcionadas aqui populações de células compreendendo células T modificadas que compreendem um gene da região constante da cadeia alfa do receptor de células T (TRAC) interrompido por inserção de um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR), que compreende (i) um ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo antiCD19, (ii) um domínio transmembranar CD8 e (iii) um endodomínio que compreende um domínio coestimulador CD28 ou 41 BB e, opcionalmente, um domínio coestimulador CD3z e um gene de beta-2microglobulina interrompido (B2M), em que pelo menos 70% das células T manipuladas não expressam um nível detectável de proteína de superfície TCR e não expressam um nível detectável de proteína de superfície B2M, e/ou em que pelo menos 50% das células T manipuladas expressam um nível detectável de CAR.
[0010] Outros aspectos fornecem populações de células compreendendo células T manipuladas que compreendem
[0011] um gene TRAC interrompido pela inserção de um ácido nucleico que codifica um CAR compreendendo (i) um ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo anti-CD70, (ii) um domínio transmembranar CD8 e (iii) um endodomínio que compreende um domínio coestimulador CD28 ou 41 BB e, opcionalmente, um domínio coestimulador CD3z e um gene de B2M interrompido, em que pelo menos 70% das células T manipuladas não expressam um nível
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5/714 detectável de proteína de superfície TCR e não expressam um nível detectável de proteína de superfície B2M, e/ou em que pelo menos 50% de as células T manipuladas expressam um nível detectável de CAR.
[0012] Ainda em outros aspectos, são fornecidas populações de células compreendendo células T manipuladas que compreendem um gene TRAC interrompido pela inserção de um ácido nucleico que codifica um CAR compreendendo (i) um ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo anti-BCMA, (ii) um domínio transmembranar CD8 e (iii) um endodomínio que compreende um domínio coestimulador CD28 ou 41 BB e, opcionalmente, um domínio coestimulador CD3z e um gene de B2M interrompido, em que pelo menos 70% das células T manipuladas não expressam um nível detectável de proteína de superfície TCR e não expressam um nível detectável de proteína de superfície B2M, e/ou em que pelo menos 50% de as células T manipuladas expressam um nível detectável de CAR.
[0013] Alguns aspectos da presente divulgação fornecem métodos para a produção de uma célula T manipulada adequada para transplante alogênico, o método compreendendo (a) entregar a uma composição compreendendo uma célula T, uma nuclease guiada por RNA, um gRNA com alvo em um gene TRAC, um gRNA com alvo em um gene B2M e um vetor compreendendo um modelo de doador que compreende um ácido nucleico que codifica um CAR, em que o CAR compreende (i) um ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo anti-CD19, (ii) um domínio transmembranar CD8 e (iii) um endodomínio que compreende um domínio coestimulador de CD28 ou 41 BB e, opcionalmente, um domínio coestimulador de CD3z, em que o ácido nucleico que codifica o CAR é flanqueado por braços de homologia esquerdo e direito ao sítio do gene TRAC; e (b) produzir uma célula T manipulada adequada para transplante alogênico.
[0014] Outros aspectos da presente divulgação fornecem métodos
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6/714 para a produção de uma célula T manipulada adequada para transplante alogênico, o método compreendendo (a) entregar a uma composição compreendendo uma célula T, uma nuclease guiada por RNA, um gRNA com alvo em um gene TRAC, um gRNA com alvo em um gene B2M e um vetor compreendendo um modelo de doador que compreende um ácido nucleico que codifica um CAR, em que o CAR compreende (i) um ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo anti-CD70, (ii) um domínio transmembranar CD8 e (iii) um endodomínio que compreende um domínio coestimulador de CD28 ou 41 BB e, opcionalmente, um domínio coestimulador de CD3z, em que o ácido nucleico que codifica o CAR é flanqueado por braços de homologia esquerdo e direito ao sítio do gene TRAC; e (b) produzir uma célula T manipulada adequada para transplante alogênico.
[0015] Ainda outros aspectos da presente divulgação fornecem métodos para a produção de uma célula T manipulada adequada para transplante alogênico, o método compreendendo (a) entregar a uma composição compreendendo uma célula T, uma nuclease guiada por RNA, um gRNA com alvo em um gene TRAC, um gRNA com alvo em um gene B2M e um vetor compreendendo um modelo de doador que compreende um ácido nucleico que codifica um CAR, em que o CAR compreende (i) um ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo anti-BCMA, (ii) um domínio transmembranar CD8 e (iii) um endodomínio que compreende um domínio coestimulador de CD28 ou 41 BB e, opcionalmente, um domínio coestimulador de CD3z, em que o ácido nucleico que codifica o CAR é flanqueado por braços de homologia esquerdo e direito ao sítio do gene TRAC; e (b) produzir uma célula T manipulada adequada para transplante alogênico.
[0016] Em algumas modalidades, as células T manipuladas são não purificadas e/ou não enriquecidas. Em algumas modalidades, a população de células não é purificada e/ou não é enriquecida.
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7/714
[0017] Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo antiCD19 é um fragmento de anticorpo anti-CD19 scFv. Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo anti-CD70 é um fragmento de anticorpo anti-CD70 scFv. Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo anti-BCMA é um fragmento de anticorpo anti-BCMA scFv.
[0018] Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo (por exemplo, fragmento scFv) é humanizado. Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo anti-CD19 humanizado é codificado pela sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 1333 e/ou em que o fragmento de anticorpo anti-CD19 humanizado compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1334. Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo anti-CD19 humanizado compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1595. Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo anti-CD19 humanizado compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1596. Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo anti-CD70 humanizado é codificado pela sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 1475 ou 1476 e/ou em que o fragmento de anticorpo anti-CD70 humanizado compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1499 ou 1500. Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo antiCD70 humanizado compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1592. Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo anti-CD70 humanizado compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1593. Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo anti-BCMA humanizado é codificado pela sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 1479 ou 1485, em que o fragmento de anticorpo anti-BCMA humanizado compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1503 ou 1509. Em algumas
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8/714 modalidades, o fragmento de anticorpo anti-BCMA humanizado compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1589 ou 1524. Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo anti-BCMA humanizado compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1590 ou 1526.
[0019] Em algumas modalidades, o ectodomínio do CAR compreende ainda um peptídeo sinal, opcionalmente um peptídeo sinal CD8. Em algumas modalidades, o CAR compreende ainda um domínio de dobradiça, opcionalmente um domínio de dobradiça CD8, localizado entre o fragmento de anticorpo anti-CD19 e o domínio transmembranar CD8. Em algumas modalidades, o CAR compreende o seguinte arranjo estrutural do terminal N ao terminal C: o ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo anti-CD19, um domínio de dobradiça CD8, o domínio transmembranar CD8 e o endodomínio que compreende um domínio coestimulador de CD28 ou 41 BB e um domínio coestimulador de CD3z.
[0020] Em algumas modalidades, o CAR (CAR anti-CD19) é codificado pela sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 1316 e/ou em que o CAR compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1338. Em algumas modalidades, o CAR (CAR anti-CD70) é codificado pela sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 1423, 1424 ou 1275, e/ou em que o CAR compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1449, 1450 ou 1276. Em algumas modalidades, o CAR (CAR anti-BCMA) é codificado pela sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 1427, 1428, 1434 ou 1435, e/ou em que o CAR compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1453, 1454, 1460 ou 1461.
[0021] Em algumas modalidades, pelo menos 70% (por exemplo, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95%) das células T modificadas não expressam um nível
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9/714 detectável de proteína de superfície TCR e/ou B2M.
[0022] Em algumas modalidades, pelo menos 50% (por exemplo, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, ou pelo menos 75%) das células T modificadas expressam um nível detectável de CAR.
[0023] Em algumas modalidades, pelo menos 50% (por exemplo, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75% ou pelo menos 80%) das células T manipuladas expressam um nível detectável de CAR e não expressam um nível detectável de proteína de superfície TCR ou proteína de superfície B2M (por exemplo, detectável por citometria de fluxo).
[0024] Em algumas modalidades, a cocultura da célula T manipulada com células B CD19+ resulta em lise de pelo menos 50% (por exemplo, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70% ou pelo menos 75%) das células B CD19+. Em algumas modalidades, a cocultura da célula T manipulada com células B CD70+ resulta em lise de pelo menos 50% (por exemplo, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70% ou pelo menos 75%) das células B CD70+. Em algumas modalidades, a cocultura da célula T manipulada com células B BCMA+ resulta em lise de pelo menos 50% (por exemplo, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70% ou pelo menos 75%) das células B BCMA+.
[0025] Em algumas modalidades, as células T manipuladas produzem interferon gama na presença de células CD19+. Em algumas modalidades, as células T manipuladas produzem interferon gama na presença de células CD70+. Em algumas modalidades, as células T manipuladas produzem interferon gama na presença de células BCMA+.
[0026] Em algumas modalidades, as células T manipuladas não proliferam na ausência de estimulação por citocinas, estimulação por
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10/714 fator de crescimento ou estimulação por antígeno.
[0027] Em algumas modalidades, a população de células compreende ainda um gene interrompido da proteína 1 da morte celular programada (PD1). Em algumas modalidades, pelo menos 70% (por exemplo, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85% ou pelo menos 90%) das células T manipuladas não expressam um nível detectável de proteína de superfície PD1.
[0028] Em algumas modalidades, a população de células compreende ainda um gene interrompido da proteína 4 associada a linfócitos T citotóxicos (CTLA-4). Em algumas modalidades, pelo menos 70% (por exemplo, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85% ou pelo menos 90%) das células T manipuladas não expressam um nível detectável de proteína de superfície CTLA-4.
[0029] Em algumas modalidades, a população de células compreende ainda um gRNA com alvo no gene TRAC, um gRNA com alvo no gene B2M e a proteína Cas9 (por exemplo, uma proteína Cas9 de S. pyogenes).
[0030] Em algumas modalidades, o gRNA com alvo no gene TRAC compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 83-158. Em algumas modalidades, o gRNA com alvo no gene TRAC tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 7-82. Em algumas modalidades, o gRNA com alvo no gene B2M compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 458-506. Em algumas modalidades, o gRNA com alvo no gene B2M tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 409-457. Em algumas modalidades, o gRNA com alvo no gene TRAC compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 152. Em algumas modalidades, o gRNA com alvo no gene TRAC tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 76. Em algumas modalidades, o gRNA com alvo no gene B2M compreende a sequência nucleotídica de
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11/714
SEQ ID NO: 466. Em algumas modalidades, o gRNA com alvo no gene B2M tem alvo na sequência nucleotidica de SEQ ID NO: 417.
[0031] Em algumas modalidades, a população de células compreende ainda um gRNA com alvo no gene PD1. Em algumas modalidades, o gRNA com alvo no gene PD1 compreende a sequência nucleotidica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1083-1274 e/ou tem alvo na sequência nucleotidica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 891 1082. Em algumas modalidades, o gRNA com alvo no gene PD1 compreende a sequência nucleotidica de SEQ ID NOs: 1086. Em algumas modalidades, o gRNA com alvo no gene PD1 tem alvo na sequência nucleotidica de SEQ ID NO: 894.
[0032] Em algumas modalidades, a população de células compreende ainda um gRNA com alvo no gene CTLA-4. Em algumas modalidades, o gRNA com alvo no gene CTLA-4 compreende a sequência nucleotidica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1289-1298. Em algumas modalidades, o gRNA com alvo no gene CTLA-4 tem alvo na sequência nucleotidica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 12781287. Em algumas modalidades, o gRNA com alvo no gene CTLA-4 compreende a sequência nucleotidica de SEQ ID NO: 1292. Em algumas modalidades, o gRNA com alvo no gene CTLA-4 tem alvo na sequência nucleotidica de SEQ ID NO: 1281.
[0033] Em algumas modalidades, as células T manipuladas da população de células compreendem uma deleção da sequência nucleotidica da SEQ ID NO: 76, em relação às células T não modificadas.
[0034] Em algumas modalidades, o gene B2M interrompido compreende uma inserção de pelo menos um par de bases nucleotídicas e/ou uma deleção de pelo menos um par de bases nucleotídicas.
[0035] Em algumas modalidades, um gene B2M interrompido das
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12/714 células T manipuladas compreende pelo menos uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1560; SEQ ID NO: 1561; SEQ ID NO: 1562; SEQ ID NO: 1563; SEQ ID NO: 1564; e SEQ ID NO: 1565.
[0036] Em algumas modalidades, pelo menos 16% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1560; pelo menos 6% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1561; pelo menos 4% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1562; pelo menos 2% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1563; pelo menos 2% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1564; e pelo menos 2% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1565.
[0037] Em algumas modalidades, o vetor é um vetor viral adenoassociado (AAV). Em algumas modalidades, o vetor AAV é um vetor AAV de serotipo 6 (AAV6). Em algumas modalidades, o vetor AAV compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1354-1357. Em algumas modalidades, o vetor AAV compreende a sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1354. Em algumas modalidades, o vetor AAV compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1358-1360. Em algumas modalidades, o vetor AAV compreende a sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1360. Em algumas modalidades, o vetor AAV compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1365, 1366, 1372 ou 1373. Em algumas modalidades, o vetor AAV compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NOs: 1366 ou 1373.
[0038] Em algumas modalidades, o modelo de doador compreende
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13/714 a sequência nucleotídica de qualquer uma das reivindicações 13901393. Em algumas modalidades, o modelo de doador compreende a sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1390. Em algumas modalidades, o modelo de doador compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID Nos: 1394-1396. Em algumas modalidades, o modelo de doador compreende a sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1396. Em algumas modalidades, o modelo de doador compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID Nos: 1401, 1402, 1408 ou 1409. Em algumas modalidades, o modelo de doador compreende a sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1402 ou 1409. Entende-se que as invenções descritas neste relatório descritivo não estão limitadas aos exemplos sumarizados neste Sumário. Vários outros aspectos são descritos e exemplificados aqui.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0039] Vários aspectos de materiais e métodos para a produção de células editadas no genoma manipuladas para expressar um construto de receptor de antígeno quimérico (CAR) na superfície da célula e materiais e métodos para o tratamento de um paciente usando as células manipuladas editadas no genoma divulgadas e descritas neste relatório descritivo podem ser melhor compreendidas por referência às figuras anexas, nas quais:
[0040] A Figura 1 é um gráfico que representa uma lista ordenada por classificação de gRNAs de IVT com alvo no gene TRAC e suas respetivas atividades (% InDel) em 293 células.
[0041] As Figuras 2A e 2B são uma série de gráficos que representam uma lista ordenada por classificação de gRNAs de IVT com alvo no gene CD3-epsilon (CD3E) e suas respetivas atividades (% InDel) em células 293.
[0042] A Figura 3 é um gráfico que representa uma lista ordenada por classificação de gRNAs de IVT com alvo no gene B2M e suas
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14/714 respetivas atividades (% InDel) em células 293.
[0043] As Figuras 4A, 4B, 4C e 4D são uma série de gráficos que representam uma lista ordenada por classificação de gRNAs de IVT com alvo no gene CIITA e suas respetivas atividades (% InDel) em células 293.
[0044] As Figuras 5A, 5B e 5C são uma série de gráficos que representam uma lista ordenada por classificação de gRNAs de IVT com alvo no gene PD1 e suas respetivas atividades (% InDel) em células 293.
[0045] As Figuras 6A e 6B são uma série de imagens de gráficos de citometria de fluxo que representam falta de reatividade a PHA-L, mas respostas normais a PMA/ionomicina por células T humanas nulas para TCRa ou CD3e, em comparação com os controles. A Figura 6A mostra os níveis do marcador de ativação de células T CD69 (painel superior) e os níveis de CFSE (marcação do histórico proliferative) (painel inferior), e a Figura 6B mostra os níveis de degranulação (CD107a) e IFNgl (painel esquerdo) e os níveis de IL-2 e TNF (painel direito) no controle e nas células T humanas editadas em gene.
[0046] A Figura 7 é uma série de gráficos que representam a perda da expressão da superfície do MHC-II medida por citometria de fluxo após tratamento de células T humanas primárias com RNPs contendo RNPs para os genes CIITA ou RFX-5.
[0047] A Figura 8 é um gráfico que descreve os níveis de perda de proteínas de superfície, medido por citometria de fluxo, após tratamento de células T humanas primárias com RNPs com alvo em 1,2 ou 3 genes isolados ou simultaneamente (edição multiplex).
[0048] A Figura 9 é um gráfico que descreve os níveis de superfície de PD1 por citometria de fluxo após tratamento com PMA/ionomicina no controle e RNP (contendo PD1 sgRNA) contendo células T humanas primárias.
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[0049] A Figura 10 é uma imagem gerada a partir de uma análise Agilent Tapestation de DNA amplificado por PCR a partir de células que sofreram reparação direcionada por homologia de uma quebra de fita dupla de DNA evocada pelo complexo RNP Cas9/sgRNA com alvo em um sítio genômico no locus AAVS1. A reparação foi facilitada por um modelo de doador contendo um cassete de expressão de GFP flanqueado por braços de homologia ao redor do sítio de corte de RNP e foi entregue por um vírus AAV6. Não é também mostrado nenhum controle de RNP e um RNP com alvo em um locus genômico diferente, sem homologia com o modelo de doador de AAV.
[0050] A Figura 11 mostra gráficos de citometria de fluxo representando células T únicas com perda simultânea de TCRa e B2M e expressão de GFP após indução de HDR por um RNP distinto com alvo no locus AAVS1 e o modelo de doador entregue por AAV6 em células T primárias humanas.
[0051] A Figura 12 é um gráfico que quantifica a percentagem de células que são positivas para GFP (uma leitura para RNP/AAV HDR) em células de 3 doadores biológicos tratados com controles, bem como RNPs com alvo para AAVS1, TRAC e B2M. HDR também é quantificado em classificações de células que foram transformadas em TRACB2M+ ou TRAC B2M’ por Cas9/sgRNAs.
[0052] A Figura 13A é uma representação gráfica de uma célula CAR-T alogênica na qual a expressão de mais um gene é modulada por CRISPR/Cas9/sgRNAs e modelos de doador entregues por AAV6. Esta representação mostra a modulação de um ou mais genes alvo com a ativação (knock-in)de um construto CAR dentro ou perto do locus do gene alvo, mediado por HDR.
[0053] A Figura 13B é uma representação gráfica de uma célula CAR-T alogênica que não possui expressão de MHC-I produzida por CRISPR/Cas9/sgRNAs e modelos de doador entregues por AAV6. Esta
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16/714 representação mostra a inativação (knock-out) do gene TRAC com ativação (knock-in) de um construto CAR no locus de TRAC (mediado por HDR). Esta representação também mostra a deleção de sítios no gene B2M.
[0054] A Figura 14 é uma representação esquemática de gráficos de modelo de construtos de AAV a serem utilizados na produção de vírus AAV para entrega de modelos de DNA de doadores para reparação de quebras de fita dupla induzidas por Cas9 e inserção de transgene sítio específico.
[0055] A Figura 15 é um gráfico representando a análise TIDE no DNA das células T humanas tratadas com RNP Cas9:sgRNA para demonstrar a inativação tripla simultânea do TCR, B2M e CIITA. Os tratamentos com RNP incluíram combinações de TCRa (TRAC), B2M e/ou CIITA.
[0056] A Figura 16A é uma série de gráficos que representam a capacidade das células T, expressando um construto CAR anti-CD19 inserido no locus AAVS1 (AAVS1 RNP + CTX131) ou no locus TRAC (TRAC RNP + CTX-138), para lisar as células do linfoma Raji em um ensaio de cocultura (painel esquerdo) e para a produção de Interferon gama (IFNg ou IFNy) na presença de células de linfoma de Raji (painel da direita).
[0057] A Figura 16B é uma série de gráficos que demonstram uma falta de produção de interferon gama (IFNg) na presença de células CAR-T anti-CD19 geradas por CRISPR/AAV cocultivadas com células K562 (painel esquerdo). Os níveis de produção de IFNg aumentam na presença de CAR-T expressando CAR anti-CD19 do locus AAVS1 (AAVS1 RNP + CTX131) ou do locus TRAC (TRAC RNP + CTX-138) quando cocultivados com células K562 que foram concebidas para sobre-expressar CD19 (painel direito).
[0058] A Figura 17A é uma série de gráficos de citometria de fluxo
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17/714 demonstrando que células únicas expressam um construto CAR e não têm expressão superficial de TCR e B2M somente quando as células foram tratadas com RN Ps para TRAC e B2M e foram infectadas com um vetor que entrega um modelo doador contendo um construto CAR flanqueado por sequência homóloga à integração sítio especifica mediada por locus TRAC e expressão do construto CAR.
[0059] A Figura 17B é um gráfico de citometria de fluxo em série demonstrando proporções normais de células T CD4 e CD8 que são CAR+TCRB2M-.
[0060] A Figura 17C é um gráfico de pontos que resume as proporções da expressão de CD4 e CD8 em réplicas da experiência de citometria de fluxo na Figura 17B. Foram analisadas quatro repetições de CAR+TCRB2M’ e quatro repetições de Controle. As frequências de CD4 e CD8 permanecem inalteradas na produção de células T CAR+TCR B2M’ em comparação com os controles.
[0061] A Figura 17D é um gráfico que representa o número de células viáveis enumeradas 8 dias após a eletroporação e infecção por AAV6.
[0062] A Figura 18A é um gráfico que demonstra a falta de produção de IFNg nas coculturas de K562 e nas células indicadas.
[0063] A Figura 18B é um gráfico que demonstra o aumento da produção de IFNg apenas em células criadas para expressar um CAR anti-CD19 integrado no locus TRAC com ou sem inativação de B2M quando as células T foram cocultivadas com células K562 que expressam CD19.
[0064] A Figura 18C é um gráfico demonstrando o aumento da produção de IFNg em coculturas da linha celular do linfoma Raji CD19+ e células T tratadas como indicado.
[0065] A Figura 19 é um gráfico que representa uma diminuição estatisticamente significativa no volume do tumor (mm3) (p = 0, 007) em
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18/714 camundongos NOG Raji após o tratamento com células TC1.
[0066] A Figura 20 é um gráfico de curva de sobrevivência demonstrando maior sobrevivência de camundongos NOG Raji tratados com células TC1 em comparação com camundongos NOG Raji que não receberam tratamento.
[0067] A Figura 21A é uma série de gráficos de citometria de fluxo demonstrando que as células TC1 persistem em camundongos NOG Raji.
[0068] A Figura 21B é um gráfico que demonstra que as células TC1 erradicam seletivamente células Raji esplênicas em camundongos NOG Raji tratados com TC1 em comparação com controles (camundongos NOG Raji sem tratamento ou camundongos NOG). O efeito é representado como uma massa esplênica reduzida em camundongos NOG Raji tratados com TC1 em comparação com os controles.
[0069] A Figura 22 é uma série de gráficos de citometria de fluxo demonstrando que células TC1 esplênicas persistentes são editadas em dois camundongos NOG Raji independentes com tratamento com TC1.
[0070] A Figura 23 é um gráfico que demonstra que as células TC1 não exibem crescimento independente de citocinas in vitro.
[0071] A Figura 24A é uma representação gráfica de uma célula CAR-T que não possui expressão de MHC-I produzida por CRISPR/Cas9/sgRNAs e modelos de doadores entregues por AAV6. Esta representação mostra a inativação do gene TRAC com knockin de um construto CAR no locus de TRAC (mediado por HDR). Esta representação também mostra a deleção de sítios no gene B2M.
[0072] A Figura 24B é uma representação esquemática de construtos de AAV na produção de vírus AAV para entrega de modelos de DNA de doadores para reparação de quebras de fita dupla induzidas por Cas9 e inserção de transgene sítio-específico.
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[0073] A Figura 25A são dados de citometria de fluxo que demonstram a produção de células T TRACCD70CAR+ usando sgRNA de TRAC contendo RNPs e AAV6 para entregar o modelo de doador CTX-145 nas células T.
[0074] A Figura 25B mostra a manutenção de proporções de subconjunto CD4/CD8 em células T TRAC CD70CAR+ geradas usando sgRNA de TRAC contendo RNPs e AAV6 para entregar o modelo de doador CTX-145 nas células T.
[0075] A Figura 26 é um dado da citometria de fluxo que demonstra a expressão do construto CD70CAR apenas quando há RNP para induzir uma quebra de fita dupla no locus TRAC. A expressão do construto CD70 CAR não ocorre com o vetor epissomal de AAV6.
[0076] A Figura 27 são dados de citometria de fluxo mostrando a produção de CD70CAR-T com deleções de TCR e B2M.
[0077] A Figura 28A é um histograma a partir de dados de citometria de fluxo mostrando expressão aumentada de CD70 a partir de células K562-CD70 que foram subsequentemente usadas em um ensaio funcional.
[0078] A Figura 28B é um gráfico que mostra os níveis de expressão de CD70 nativos em um painel de linhas de células. Os dados são normalizados para a expressão CD70 nas células Raji.
[0079] A Figura 29A é um gráfico que mostra a % de lise celular de células K562 que expressam CD70 (CD70-K562) na presença de células T TRAC7anti-CD70 CAR+ (painel esquerdo) e secreção de IFNy de células T TRAC7anti-CD70 CAR+ somente quando interagem com as células K562 que expressam CD70 (CD70-K562) (painel direito).
[0080] A Figura 29B é um gráfico que descreve a secreção de IFNy de células T TRAC/anti-CD70 CAR+ (TRAC-CD70CAR+) apenas quando cocultivadas com células Raji CD70+, e não nas células Nalm6 negativas para CD70.
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[0081] A Figura 29C é um gráfico que mostra que as células T TRAC7anti-CD70 CAR+ (TRAC-CD70CAR+) não secretam IFNy devido à auto-estimulação quando apenas as células T TRAC7anti-CD70 CAR+ estão presentes sozinhas na ausência células alvo expressando CD70.
[0082] A Figura 29D são dados de citometria de fluxo que demonstram a atividade de GranzymeB apenas nas células alvo que expressam CD70+ (Raji) que interagiram com as células T TRAC /antiCD70 CAR+ (TCR-CAR+).
[0083] A Figura 30A é um gráfico de dados de morte celular, demonstrando a morte celular específica de CD70.
[0084] A Figura 30B é um gráfico que mostra que as células T TRAC-CD70CAR+ induzem a lise celular de linhas celulares derivadas de carcinoma de células renais (pontos de tempo de 24 e 48 horas).
[0085] A Figura 30C é um gráfico que demonstra que as células CAR-T anti-CD70 com deficiência de TCR (CD70 CAR+) exibem atividade de morte celular contra um painel de linhas celulares RCC com expressão variável de CD70 (ponto de tempo de 24 horas), em comparação com as células TCR- (controle).
[0086] A Figura 31A é uma representação gráfica de uma célula CAR-T que não possui expressão de MHC-I produzida por CRISPR/Cas9/sgRNAs e modelos de doadores entregues por AAV6. Esta representação mostra inativação do gene TRAC com knockin de um construto CAR no locus de TRAC (mediado por HDR). Esta representação também mostra a deleção de sítios no gene B2M.
[0087] A Figura 31B é uma representação esquemática de construtos de AAV na produção de vírus AAV para entrega de modelos de DNA de doadores para reparação de quebras de fita dupla induzidas por Cas9 e inserção de transgene sítio-específico. Concepção esquemática do modelo de doador anti-BCMA CAR AAV. Ambos
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CTX152 e CTX154 foram concebidos para coexpressar CAR e a proteína fluorescente verde (GFP) de um mRNA bicistrônico. CTX-152 CAR = VH-VL; CTX-154 CAR = VL-VH.
[0088] A Figura 32 são dados de citometria de fluxo que mostram a produção de células CAR-T anti-BCMA (CTX152 e CTX154) com deleções de TCR e B2M (células TRAC7B2M-BCMA CAR+). Os genes TRAC e B2M foram interrompidos usando CRISPR/CAS9 e os construtos CAR foram inseridos no locus TRAC usando reparação direcionada homóloga. Aproximadamente 77% das Células T foram TCR7B2M- conforme medido por FACS (painel superior). As células CAR+ foram positivas para expressão de GFP e ligação recombinante a BCMA (painel inferior). Estas células T CAR foram produzidas de acordo com os métodos descritos no Exemplo 15. Os eixos x e y são representados em escala logarítmica.
[0089] A Figura 33A é um gráfico que mostra que o tratamento das células RPMI8226 que expressam BCMA com células TRAC7B2MBCMA CAR-T resulta em citotoxicidade, enquanto o tratamento com células T não modificadas (SEM RNP/AAV) mostra citotoxicidade mínima.
[0090] A Figura 33B é um gráfico que mostra níveis elevados de secreção de IFNy a partir de células anti-BCMA CAR-T e a secreção de um mínimo de Células T não modificadas (SEM RNP/AAV). Ambos os gráficos são da mesma experiência de citotoxicidade. O interferon gama foi medido de acordo com o método descrito no Exemplo 18.
[0091] A Figura 34 é um gráfico que mostra uma forte correlação entre a expressão de CD19 CAR à superfície e frequência HDR (R2 = 0,88). Isso indica integração específica do sítio e elevados níveis de expressão do construto CD19 CAR no locus TRAC das células T usando a edição do gene CRISPR.
[0092] A Figura 35A são dados de citometria de fluxo que
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22/714 demonstram a atividade de GranzymeB apenas nas células alvo que expressam CD19+ (Nalm6) que interagiram com as células T TRAC/B2M-CD19CAR+.
[0093] A Figura 35B é um gráfico que mostra que as células T TRAC7B2M-CD19CAR+ secretam elevados níveis de IFNy quando em cultura com células Nalm6 positivas para CD19.
[0094] A Figura 35C é um gráfico de dados de morte celular, mostrando que as células T TRAC7B2M-CD19CAR+ matam seletivamente as células Nalm6 em baixas taxas de células T para células alvo.
[0095] A Figura 36A é uma série de gráficos de citometria de fluxo mostrando a percentagem de células que expressam CD70 durante a produção de células T CD70 CAR+.
[0096] A Figura 36B é uma série de gráficos de citometria de fluxo que representam proporções de células T que expressam um ou mais de CD4, CD8, TCR ou CD70 CAR. O painel superior das plotagens corresponde à população de células CD70- da Figura 36A. O painel inferior das plotagens corresponde à população de células CD70+ da Figura 36A.
[0097] A Figura 37A é um gráfico que representa uma diminuição no volume do tumor (mm3) no dia 31 após o tratamento de camundongos NOG que foram injetados por via subcutânea com linhas celulares de carcinoma de células renais A498 com células T TRAC/anti-CD70 CAR+. Todos os grupos de camundongos NOG foram injetados com 5x106 células/camundongo. O grupo 1 não recebeu tratamento com células T. Os camundongos no Grupo 2 foram tratados intravenosamente com 1x107células/camundongo de células T TRAC/anti-CD70 CAR+ no dia 10. Os camundongos no Grupo 3 foram tratados intravenosamente com 2x107células/camundongo de células T TRAC-/anti-CD70 CAR+ no dia 10.
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[0098] A Figura 37B é um gráfico que representa uma diminuição no volume do tumor (mm3) após o tratamento de camundongos NOG que foram injetados por via subcutânea com linhas celulares de carcinoma de células renais A498 com células T TRAC-/anti-CD70 CAR+. Ambos os grupos de camundongos NOG foram injetados com 5x106 células/camundongo. O grupo de controle não recebeu qualquer tratamento de células T, e o grupo de teste de camundongos foram tratados intravenosamente com 2x107células/camundongo de células T TRAC-/anti-CD70 CAR+ no dia 10.
[0099] A Figura 38A é uma série de gráficos de citometria de fluxo demonstrando a produção de células anti-CD19 CAR-T expressando CAR e sem expressão superficial de TCR e B2M, que possuem expressão superficial ou ausente de PD1 (PD1L0 e PD1K0, respetivamente). As células CAR-T anti-CD19 preferidas expressam o CAR e não têm expressão superficial de TCR, B2M e PD1.
[0100] A Figura 38B é um gráfico de barras que representa a eficiência de edição para cada edição de genes, medida por citometria de fluxo. As medições foram feitas a partir da população de células representada na linha inferior da Figura 38A.
[0101] A Figura 39 é um gráfico representando elevadas taxas de edição alcançadas nos loci T TRAC e B2M nas células T TRAC7B2M’ CD19CAR+ (TC1). A expressão à superfície de TCR e MHCI, que é a saída funcional da edição de genes, foi medida e plotada como percentagem de edição no eixo y. Elevada eficiência (por exemplo, superior a 50%), integração específica do sítio e expressão do CAR a partir do locus TRAC foram detectadas. Estes dados demonstram uma eficiência maior que 50% para a geração de células T TRAC7B2M7antiCD19CAR+.
[0102] A Figura 40 é uma série de gráficos de citometria de fluxo de células T primárias humanas, células T TRAC /B2M CD19CAR+ (TC1),
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24/714 dias após a edição. Os gráficos mostram expressão superficial reduzida de TRAC e B2M. As células de inativação para TCR/MHC I expressam elevados níveis do transgene CAR (painel inferior). A seleção negativa de células TC1 com esferas de purificação leva a uma redução nas células positivas para TCR (painel direito).
[0103] A Figura 41 é um gráfico que demonstra um aumento estatisticamente significativo na produção de IFNy nas células T TRAC/B2M-CD19CAR+ (TC1) quando cocultivadas com células K562 que expressam CD19, mas não quando cocultivadas com células K562 que não possuem a expressão de CD19. Esta experiência foi realizada em triplicata, de acordo com o método da Figura 18B. A análise estatística foi realizada com ANOVA usando o teste de comparações múltiplas de Tukey.
[0104] As Figuras 42A e 42B são gráficos da curva de sobrevivência demonstrando o aumento da sobrevivência de camundongos NOG Raji (Figura 42A) ou camundongos NOG Nalm6 (Figura 42B) tratados com células T TRAC7B2M-CD19CAR+ (TC1) no Dia 4, em comparação com camundongos de controle que não receberam tratamento no Dia 1. Esta foi, em parte, uma experiência replicada modificada da Figura 20.
[0105] A Figura 43 é um gráfico que mostra os dados de lise celular após o tratamento de células tumorais Nalm6 com células T TRAC/B2M-CD19CAR+ (TC1) ou com o modelo de DNA de doador de CART empacotado em um vetor de lentivírus. Ambos os tratamentos produziram potência semelhante em relação à percentagem de lise celular. As células T TCR CAR’ de controle medidas em experiências separadas não mostraram atividade de lise celular.
[0106] A Figura 44 é um gráfico de pontos que representa a percentagem consistente de células T TRAC7B2M CD19CAR+ (TC1) que são produzidas a partir do modelo de DNA do doador. Além disso, em combinação com os atributos adicionais de > 80% de TCR-/B2M- de
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25/714 inativação dupla e > 99,6% de TCR- após a purificação, a produção de TC1 é mais homogênea e consistente do que outros produtos CAR-T lentivirais.
[0107] A Figura 45A é um gráfico que mostra que o tratamento de RPMI8226 que expressa BCMA, provoca níveis elevados de secreção de IFNy de células T TRAC7B2M- BCMA CAR- e secreção de um mínimo de Células T não modificadas (TCR+CAR-) (Razão 4:1 de célula T:RPMI-8226). O interferon gama foi medido de acordo com o método descrito no Exemplo 18.
[0108] A Figura 45B é um gráfico que mostra que o tratamento de células RPMI8226 que expressam BCMA, com células T TRAC7B2MBCMA CAR+ resulta em lise celular e citotoxicidade.
[0109] As Figuras 46A-46C são gráficos de dados demonstrando que as células CAR-T anti-BCMA mostram citotoxicidade específica em relação a células U-266 e RPMI8226 expressando BCMA. As células T alogênicas (TRAC-, B2M-) que expressaram os construtos CAR antiBCMA CTX152 e CTX154 expressam INFy na presença e lise induzida de células U-266 (Figura 46A) e RMPI8226 (Figura 46B) enquanto células T alogênicas sem CAR e células T não modificadas apresentaram atividade mínima. CTX152 e CTX154 não mostraram citotoxicidade específica para células K562 que não possuem expressão de BCMA (Figura 46C).
[0110] As Figuras 47A-47B são gráficos de dados demonstrando que outras células T CAR anti-BCMA secretam interferon gama especificamente na presença de células que expressam BCMA.
[0111] A Figura 48 é um gráfico que mostra a expressão de CAR anti-BCMA. As células T CAR alogênicas foram geradas como descrito anteriormente. A expressão de CAR anti-BCMA foi medida determinando a percentagem de células que se ligavam a BCMA recombinante biotinilado humano subsequentemente detectado por
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FACS utilizando estreptavidina-APC.
[0112] As Figuras 49A-49C são gráficos de dados demonstrando que as células T CAR anti-BCMA que expressam o CAR são potencialmente citotóxicas para as células RPMI-8226. Os construtos de CAR foram avaliados quanto à sua capacidade de matar células RPMI-8226. Todas as células T CAR eram potencialmente citotóxicas em relação às células efetoras, enquanto as células T alogênicas sem um CAR mostraram pouca citotoxicidade.
[0113] A Figura 50 mostra gráficos de citometria de fluxo demonstrando que a saúde das células T TRAC-/B2M-/ anti-CD19+CAR é mantida no dia 21 após a edição do gene. As células foram analisadas quanto a marcadores de baixa exaustão, LAG3 e PD1 (gráfico à esquerda), bem como marcador de baixa senenscência, CD57 (gráfico à direita).
[0114] A Figura 51 mostra gráficos de citometria de fluxo demonstrando que 95,5% das células editadas pelo gene são negativas para TCR, sem enriquecimento adicional para uma população de células negativas para TCR. Após o enriquecimento/purificação, mais de 99,5% das células editadas pelo gene são negativas para TCR.
[0115] A Figura 52A mostra um gráfico representativo de FACS da expressão de β2Μ e TRAC uma semana após a edição do gene (à esquerda) e um gráfico representativo de FACS da expressão de CAR após a knockin no locus de TRAC (à direita). A Figura 52B é um gráfico que mostra a expressão superficial reduzida de TCR e MHC-I observada após a edição do gene. Combinado com uma elevada expressão de CAR, isso leva a mais de 60% de células com todas as modificações desejadas TCR-/ β2Μ-/ CAR+). A Figura 52C é um gráfico que mostra que a produção de células CAR-T anti-BCMA alogênicas preserva as proporções de CD4 e CD8.
[0116] A Figura 53 é um gráfico que mostra que as células
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27/714 alogênicas BCMA-CAR-T mantêm dependência das citocinas para expansão ex vivo.
[0117] A Figura 54A mostra gráficos que demonstram que células alogênicas CAR-T anti-BCMA matam de maneira eficiente e seletiva a linha celular MM que expressa BCMA MM.1S em um ensaio de morte celular de 4 horas, poupando a linha leucêmica K562 negativa para BCMA. A Figura 54B é um gráfico que mostra que as células também secretam seletivamente as citocinas de ativação de células T IFNy e IL2, que são reguladas positivamente em resposta à indução apenas por células MM.1S. Valores abaixo do limite de detecção são mostrados como pontos de dados ocos. Também foi observada morte celular potente após a exposição de células CAR-T anti-BCMA a linhas celulares MM adicionais: (Figura 54C) RPMI-8226 (ensaio de 24 horas) e (Figura 54 D) H929 (ensaio de 4 horas).
[0118] A Figura 55 é um gráfico que mostra que as células CAR-T anti-BCMA alogênicas erradicam tumores em um modelo de xenoenxerto de tumor subcutâneo RPMI-8226. Foram injetadas 1x107 células RPMI-8226 por via subcutânea em camundongos NOG, seguidas por células CAR-T por via intravenosa, 10 dias após a inoculação. Não foram observados sinais clínicos de GvHD nos camundongos em nenhum momento. N = 5 para cada grupo.
[0119] A Figura 56A é um gráfico que demonstra que são alcançadas elevadas taxas de edição nos loci TRAC e β2Μ, resultando na expressão superficial reduzida de TCR e MHC-I. Também foi detectada a integração sítio-especifica altamente eficiente e expressão do CAR a partir do locus TRAC. Os dados são de três doadores saudáveis.
[0120] A Figura 56B é um gráfico que demonstra que a produção de células CAR-T anti-CD70 alogênicas (TCR-p2M-CAR+) preserva as proporções de CD4 e CD8.
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[0121] A Figura 57 é um gráfico que demonstra que as células CART anti-CD70 alogênicas (TCR-p2M-CAR+) mostram citotoxicidade potente contra a linha celular derivada de mieloma múltiplo CD70+ MM.1S.
[0122] A Figura 58A é um gráfico que mostra que a edição múltipla resulta em expressão superficial reduzida de TCR e MHC-I, bem como em elevada expressão de CAR. A Figura 58B é um gráfico que mostra que as razões de CD4/CD8 permanecem semelhantes nas células CAR-T anti-BCMA multieditadas. A Figura 58C é um gráfico que mostra que as células CAR-T anti-BCMA multieditadas permanecem dependentes das citocinas para crescimento após a edição multiCRISPR/Cas9.
[0123] A Figura 59A são gráficos que mostram que as células CART anti-BCMA matam de maneira eficiente e seletiva a linha celular MM que expressa BCMA MM.1 S em um ensaio de morte celular de 4 horas, poupando a linha leucêmica K562 negativa para BCMA. A Figura 59B são gráficos que mostram que as células também secretam seletivamente as citocinas de ativação de células T IFNy e IL-2, que são reguladas positivamente em resposta à indução apenas por células BCMA+ MM.1S.
[0124] A Figura 60 é um gráfico que mostra a não observação de alteração no marcador de exaustão LAG-3 entre inativação dupla ou tripla (KO) de células CAR-T anti-BCMA após 1 semana de cultura. No entanto, após 4 semanas de cultura, a expressão do marcador de exaustão Lag3 foi reduzida nas células CAR-T anti-BCMA triplas KO. [0125] A Figura 61 é um esquema de CTX-145b (SEQ ID NO: 1360), que inclui um CAR anti-CD70 com um domínio coestimulador de 4-1 BB flanqueado nos braços de homologia esquerdo e direito ao gene TRAC. [0126] A Figura 62 é um gráfico que mostra que as proporções normais dos subconjuntos de células T CD4+/CD8+ mantêm a fração
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TRAC-/B2M-/anti-CD70 CAR+ a partir de células tratadas com RNPs contendo TRAC e B2M sgRNA e CTX 145b AAV6.
[0127] A Figura 63 são gráficos que demonstram a inserção eficiente de transgene e inativação de genes simultâneos por RNP Cas9:sgRNA e modelo de doador entregue por AAV6 (CTX -145 e CTX -145b) contendo um construto CAR anti-CD70 nas células T humanas primárias.
[0128] A Figura 64 é um gráfico que demonstra que as proporções normais dos subconjuntos de células T CD4+/CD8+ são mantidas na fração PD1-/TRAC-/B2M-/anti-CD70 CAR+ das células tratadas com RNPs contendo PD1, TRAC e B2M sgRNA e CTX-145b AAV6.
[0129] A Figura 65 é um gráfico que mostra que as células TRAC/B2M-/anti-CD70 CAR+ demonstraram potente morte celular de linhas celulares derivadas de carcinoma de células renais (células A498) após 24 horas de coincubação.
[0130] A Figura 66 é um gráfico que mostra que as células TRAC/B2M-/anti-CD70 CAR+ e as células PD1-/ TRAC-/B2M-/anti-CD70 CAR+ induziram a morte celular potente da linha celular derivada de CD70 que expressa carcinoma de células renais aderentes (RRC), ACHN, com um domínio coestimulador CD28 ou 41 BB, na razão de 3:1 de célula T:célula alvo.
[0131] A Figura 67 é um gráfico que mostra a expressão de CAR anti-BCMA (CD28 v. 4-1 BB) em células T editadas.
[0132] A Figura 68 é um gráfico que mostra os resultados de um ensaio de citotoxicidade com células MM.1S e células T TRAC7B2M/anti-BCMA (CD28 ou 4-1 BB) CAR+.
[0133] A Figura 69 inclui gráficos mostrando os resultados de um estudo de secreção de IFN-ycom células MM.1S (esquerda) ou células K562 (direita) e células T TRAC-/B2M-/anti-BCMA (CD28 ou 4-1 BB) CAR+.
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[0134] A Figura 70 inclui gráficos que mostram os resultados de um ensaio de morte celular utilizando células T TRAC-/B2M-/anti-BCMA (41BB) CAR+ com células RPMI-8226 (canto superior esquerdo), células H929 (canto superior direito), células U2661 (canto inferior esquerdo) ou células K562 (canto inferior direito).
[0135] A Figura 71 inclui gráficos que mostram estudos de estimulação de IFN-γ, na presença de células T TRAC-/B2M-/antiBCMA (4-1 BB) CAR+ com células RPMI-8226 (canto superior esquerdo), células U2261 (canto superior direito), células H929 (canto inferior esquerdo) ou células K562 (canto inferior direito).
[0136] A Figura 72 inclui gráficos que mostram estudos de estimulação de IL-2, na presença de células T TRAC-/B2M-/anti-BCMA (4-1 BB) CAR+ com células RPMI-8226 (canto superior esquerdo), células U2261 (canto superior direito), células H929 (canto inferior esquerdo) ou células K562 (canto inferior direito).
[0137] A Figura 73 inclui gráficos que mostram o volume do tumor em um modelo de camundongo de tumor subcutâneo RPMI-8226 administrado por células T TRAC-/B2M-/anti-BCMA (CD28) CAR+ ou células T TRAC-/B2M-/PD-1-/anti-BCMA (CD28) CAR+.
[0138] A Figura 74 inclui gráficos que mostram os resultados de citotoxicidade (esquerda), estimulação IFN-γ (meio), e estudos de estimulação IL-2 com células T TRAC-/B2M-/anti-BCMA (4-1 BB) CAR+ ou células T TRAC7B2M-/PD-1 -/anti-BCMA (4-1 BB) CAR+ na presença de células MM.1S ou células K562.
[0139] A Figura 75 inclui um gráfico que mostra que células T TRAC-/B2M-/anti-CD70 CAR+ ou TRAC-/B2M-/PD1-/anti-CD70 CAR+, com um domínio coestimulador CD28 ou 41 BB, apresentam atividade antitumor em células de carcinoma renal de modelo camundongo.
BREVE DESCRIÇÃO DA LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[0140] SEQ ID NOs: 1-3 são sequências da estrutura principal de
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31/714 sgRNA (Tabela 1).
[0141] SEQ ID NOs: 4-6 são sequências de endonucleases homing. [0142] SEQ ID NOs: 7-82 são sequências alvo do gene TRAC (Tabela 4).
[0143] SEQ ID NOs: 83-158 são sequências espaçadoras de gRNA direcionadas ao gene TRAC (Tabela 4).
[0144] SEQ ID NOs: 159-283 são sequências alvo do gene CD3E (Tabela 5).
[0145] SEQ ID NOs: 384-408 são sequências espaçadoras de gRNA direcionadas ao gene CD3E (Tabela 5).
[0146] SEQ ID NOs: 409-457 são sequências alvo do gene B2M (Tabela 6).
[0147] SEQ ID NOs: 458-506 são sequências espaçadoras de gRNA direcionadas ao gene B2M (Tabela 6).
[0148] SEQ ID NOs: 507-698 são sequências alvo do gene CIITA (Tabela 7).
[0149] SEQ ID NOs: 699-890 são sequências espaçadoras de gRNA direcionadas ao gene CIITA (Tabela 7).
[0150] SEQ ID NOs: 891-1082 são sequências alvo do gene PD1 (Tabela 8).
[0151] SEQ ID NOs: 1083-1274 são sequências espaçadoras de gRNA direcionadas ao gene PD1 (Tabela 8).
[0152] SEQ ID NO: 1275 é a sequência nucleotídica para o CAR de CTX-145b (Tabela 36).
[0153] SEQ ID NO: 1276 é a sequência de aminoácidos para o CAR de CTX-145b (Tabela 36).
[0154] SEQ ID NOs: 1277-1287 são sequências alvo do gene CTLA-4 (Tabela 10).
[0155] SEQ ID NOs: 1288-1298 são sequências espaçadoras de gRNA direcionadas ao gene CTLA-4 (Tabela 10).
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[0156] SEQ ID NO: 1299 é uma sequência alvo do gene TRAC (Tabela 11).
[0157] SEQ ID NO: 1300 é uma sequência alvo do gene PD1 (Tabela 11).
[0158] SEQ ID NOs: 1301 e 1302 são sequências alvo de AAVS1 (Tabela 11).
[0159] SEQ ID NOs: 1303 e 1305 são sequências alvo de CD52 (Tabela 11).
[0160] SEQ ID NOs: 1305-1307 são sequências alvo de RFX5 (Tabela 11).
[0161] SEQ ID NO: 1308 é uma sequência espaçadora de gRNA que tem como alvo o gene AAVS1.
[0162] SEQ ID NOs: 1309-1311 são sequências espaçadoras de gRNA direcionadas ao gene RFX5.
[0163] SEQ ID NO: 1312 é uma sequência espaçadora de gRNA que tem como alvo o gene CD52.
[0164] SEQ ID NOs: 1313-1338 são sequências de componentes do modelo doador para gerar as células T anti-CD19 CAR (ver Tabela 12).
[0165] SEQ ID NO: 1339 é a sequência nucleotídica para o domínio coestimulador de 4-1 BB.
[0166] SEQ ID NO: 1340 é a sequência de aminoácidos para o domínio coestimulador de 4-1 BB.
[0167] SEQ ID NO: 1341 é uma sequência do ligante.
[0168] SEQ ID NOs: 1342-1347 são sequências de sgRNA quimicamente modificadas e não modificadas para B2M, TRAC e AAVS1 (ver Tabela 32).
[0169] SEQ ID NOs: 1348-1386 são sequências de rAAV de vários modelos de doadores (ver Tabela 34).
[0170] SEQ ID NOs: 1387-1422 são sequências do braço esquerdo
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33/714 de homologia (LHA) para o braço direito de homologia (RHA) de vários modelos de doadores (ver a Tabela 35).
[0171] SEQ ID NOs: 1423-1448 são sequências de nucleotideos de CAR de modelos de doadores da presente divulgação (ver Tabela 36).
[0172] SEQ ID NOs: 1449-1474 são sequências de aminoácidos de CAR codificadas por modelos de doadores da presente divulgação (ver Tabela 37).
[0173] SEQ ID NOs: 1475-1498 são sequências de ácidos nucleicos scFv de CARs da presente divulgação (ver Tabela 38).
[0174] SEQ ID NOs: 1499-1522 são sequências de aminoácidos scFv codificadas por CARs da presente divulgação (ver Tabela 39).
[0175] SEQ ID NOs: 1523-1531 são sequências de cadeia leve e cadeia pesada anti-BCMA (ver Tabela 39).
[0176] SEQ ID NOs: 1532-1553 são sequências de plasmídeos da presente divulgação.
[0177] SEQ ID NOs: 1554-1559 são sequências de iniciador usadas em um ensaio de ddPCR (ver a Tabela 25).
[0178] SEQ ID NOs: 1560-1565 são sequências editadas por gene no gene B2M (Tabela 12.3).
[0179] SEQ ID NOs: 1566-1573 são sequências editadas pot gene no gene TRAC (Tabela 12.4).
[0180] SEQ ID NOs: 1574 e 1575 são sequências de sgRNA quimicamente modificadas e não modificadas para PD1 (ver Tabela 32). [0181] SEQ ID NOs: 1576-1577 são sequências de ITR (Tabela 12). [0182] SEQ ID NOs: 1578-1582 são sequências nucleotídicas para os braços esquerdos de homologia e braços direitos de homologia utilizados para CTX-139.1-CTX-139.3 (Tabela 12).
[0183] SEQ ID NO: 1586 é uma sequência peptídica de sinal CD8 (Tabela 12).
[0184] SEQ ID NOs: 1587 e 1588 são sequências de sgRNA
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34/714 quimicamente modificadas e não modificadas para TRAC (EXON1_T7) (ver Tabela 32).
[0185] SEQ ID NOs: 1589-1597 são as sequências de cadeia pesada, cadeia leve e ligante, por exemplo, moléculas scFv anti-BCMA, anti-CD70 e anti-CD19 (Tabela 39).
[0186] SEQ ID NO: 1598 é a sequência peptídica líder para o CAR anti-CD19 (Tabela 12).
[0187] SEQ ID NO: 1599 é a sequência transmembranar de CD8a sem o ligante (Tabela 12).
[0188] SEQ ID NO: 1600 é a sequência peptídica de CD8a.
[0189] SEQ ID NO: 1601 é a sequência peptídica do domínio coestimulador de CD28.
[0190] SEQ ID NO: 1602 é a sequência peptídica do domínio coestimulador de CD3-zeta.
DESCRIÇÃO DETALHADA
Abordagem terapêutica
[0191] As células editadas por CRISPR, tal como, por exemplo, as células T editadas por CRISPR, podem ter usos terapêuticos em vários estados de doença. A título de exemplo não limitative, os ácidos nucleicos, vetores, células, métodos e outros materiais fornecidos na presente divulgação são úteis no tratamento de câncer, doença inflamatória e/ou doença autoimune.
[0192] A edição de genes fornece uma melhoria importante em relação às terapias existentes ou potenciais, tal como a introdução de cassetes de expressão de genes alvo através da entrega e integração de lentivírus. A edição de genes para modular a atividade e/ou expressão de genes tem a vantagem de modificação precisa do genoma e menores efeitos adversos, além de restaurar os níveis corretos de expressão e controle temporal.
[0193] Os materiais e métodos aqui fornecidos são úteis na
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35/714 modulação da atividade de um gene alvo. Por exemplo, o gene alvo pode ser uma sequência de genes associada à resposta do hospedeiro versus enxerto, uma sequência de genes associada à resposta do enxerto versus hospedeiro, uma sequência de genes que codifica um supressor imunológico (por exemplo: inibidor de ponto de verificação) ou qualquer combinação dos mesmos.
[0194] O gene alvo pode ser uma sequência de genes associada a uma resposta enxerto versus hospedeiro que é selecionada a partir do grupo que consiste em TRAC, CD3-épsilon (CD3e) e combinações das mesmas. TRAC e CD3e são componentes do receptor de células T (TCR). Ao interrompê-los pela edição de genes, a capacidade das células T para causar a doença do enxerto versus hospedeiro será retirada.
[0195] O gene alvo pode ser uma sequência de genes associada a uma resposta hospedeiro versus enxerto que é selecionado do grupo que consiste em B2M, CIITA, RFX5 e combinações dos mesmos. B2M é um componente comum (invariável) dos complexos MHC I. A sua ablação por edição de genes impedirá respostas hospedeiro versus células T alogênicas terapêuticas, levando ao aumento da persistência de células T alogênicas. CIITA e RFX5 são componentes de um complexo regulador da transcrição necessário para a expressão dos genes do MHC II. Interrompê-los por edição de genes impedirá respostas hospedeiro versus células T alogênicas terapêuticas, levando ao aumento da persistência de células T alogênicas.
[0196] O gene alvo pode ser uma sequência de genes que codifica um inibidor de ponto de verificação que é selecionado a partir do grupo que consiste em PD1, CTLA-4 e combinações dos mesmos. PDCD1 (PD1) e CTLA4 são moléculas de ponto de verificação imunes que são reguladas positivamente nas células T ativadas e servem para amortecer ou interromper as respostas das células T. A sua interrupção
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36/714 pela edição de genes pode levar a respostas terapêuticas mais persistentes e/ou potentes das células T.
[0197] O gene alvo pode ser uma sequência associada à modulação farmacológica de uma célula. Por exemplo, CD52 é o alvo do anticorpo terapêutico alemtuzumab que causa linfodepleção. A interrupção de CD52 pela edição de genes tornará as células T terapêuticas resistentes ao alemtuzumab, o que pode ser útil em certas situações de câncer.
[0198] A deleção dos genes acima pode ser alcançada com RNAs guia que foram escolhidos de rastreamentos de escala pequena (<5) a média (>50). Os exemplos aqui fornecidos ilustram ainda a seleção de várias regiões alvo e gRNAs úteis para a criação de indels que resultam na interrupção de um gene alvo, por exemplo, redução ou eliminação da expressão e/ou função de genes. Os exemplos aqui fornecidos ilustram ainda a seleção de várias regiões alvo e gRNAs úteis para a criação de DSBs que facilitam a inserção de um modelo de doador no genoma. Exemplos de genes alvo associados à doença do enxerto versus hospedeiro, doença do hospedeiro versus gráfico e/ou supressão imunológica. Em alguns aspectos, o RNA guia é um gRNA que compreende uma sequência aqui divulgada.
[0199] Os métodos usam construtos de receptor de antígeno quimérico (CARs) que são inseridos em loci genômicos usando o RNA guia/Cas9 para induzir uma quebra de fita dupla que é reparada por HDR usando um modelo de doador entregue por AAV6 com homologia em torno do sítio de corte.
[0200] Um receptor de antígeno quimérico (CAR) é uma proteína ou polipeptídeo híbrido construído artificialmente contendo um domínio de ligação ao antígeno de um anticorpo (por exemplo, um fragmento variável de fita simples (scFv)) ligado a domínios de sinalização de células T ou de ativação de células T. Os CARs têm a capacidade de
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37/714 redirecionar a especificidade e reatividade das células T para um alvo selecionado de uma maneira não restrita ao MHC, explorando as propriedades de ligação ao antígeno dos anticorpos monoclonais. O reconhecimento de antígeno não restrito a MHC dá às células T, que expressam os CARs, a capacidade de reconhecer um antígeno independente do processamento do antígeno, ignorando assim um mecanismo principal de escape do tumor. Além disso, quando expressos em células T, os CARs vantajosamente não se dimerizam com as fitas alfa e beta do receptor endógeno de células T (TCR).
[0201] Os materiais e métodos aqui fornecidos ativam (knock-in) um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR) em, ou próximo a, um locus de um gene alvo, deletando permanentemente pelo menos uma porção do gene alvo e inserindo um ácido nucleico que codifica o CAR. Os CARs utilizados nos materiais e métodos aqui fornecidos incluem (i) um ectodomínio compreendendo uma região de reconhecimento de antígeno; (ii) um domínio transmembranar e (iii) um endodomínio compreendendo pelo menos um domínio coestimulador. O ácido nucleico que codifica o CAR também pode incluir um promotor, um ou mais elementos reguladores de genes ou uma combinação dos mesmos. Por exemplo, o elemento regulador do gene pode ser uma sequência de intensificador, uma sequência de íntron, uma sequência de poliadenilação (poli (A)) e/ou combinações das mesmas.
[0202] O doador para inserção por reparação direcionada por homologia (HDR) contém a sequência corrigida com braços de homologia flanqueadores pequenos ou grandes para permitir o anelamento. A HDR é essencialmente um mecanismo sem erros que usa uma sequência de DNA homóloga fornecida como modelo durante a reparação de DSB. A taxa de reparação direcionada por homologia (HDR) é uma função da distância entre a mutação e o sítio de corte,
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38/714 portanto é importante escolher sítios alvo sobrepostos ou próximos. Os modelos podem incluir sequências extras flanqueadas pelas regiões homólogas ou podem conter uma sequência que difere da sequência genômica, permitindo assim a edição da sequência.
[0203] O gene alvo pode ser associado a uma resposta imune em um sujeito, em que a interrupção da expressão do gene alvo modula a resposta imune. Por exemplo, a criação de pequenas inserções ou deleções no gene alvo e/ou a exclusão permanente de pelo menos uma porção do gene alvo e/ou a inserção de uma sequência exógena no gene alvo podem interromper a expressão do gene alvo. A sequência do gene alvo pode ser associada à resposta do hospedeiro versus enxerto, uma sequência de gene associada à resposta do enxerto versus hospedeiro, uma sequência de genes que codifica um inibidor do ponto de verificação e/ou qualquer combinação dos mesmos.
[0204] Os genes alvo associados a uma resposta de enxerto versus hospedeiro (GVH) incluem, por exemplo, TRAC, CD3-épsilon (CD3e) e combinações dos mesmos. A deleção permanente de pelo menos uma porção desses genes, a criação de pequenas inserções ou deleções nesses genes e/ou a inserção do ácido nucleico que codifica o CAR pode reduzir a resposta GVH em um sujeito. A redução na resposta GVH pode ser parcial ou completa.
[0205] Os genes alvo associados a uma resposta hospedeiro versus enxerto (HVG) incluem, por exemplo, B2M, CIITA, RFX5 e combinações dos mesmos. A deleção permanente de pelo menos uma porção desses genes, a criação de pequenas inserções ou deleções nesses genes e/ou a inserção do ácido nucleico que codifica o CAR pode reduzir a resposta HVG em um sujeito. A redução na resposta HVG pode ser parcial ou completa.
[0206] Os genes alvo associados à supressão imunológica incluem, por exemplo, inibidores de ponto de verificação, tal como PD1, CTLA-4
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39/714 e combinações dos mesmos. A deleção permanente de pelo menos uma porção desses genes, a criação de pequenas inserções ou deleções nesses genes e/ou a inserção do ácido nucleico que codifica o CAR pode reduzir a supressão imunológica em um sujeito. A redução na supressão imunológica pode ser parcial ou completa.
[0207] O gene alvo pode ser associado à modulação farmacológica de uma célula, em que a interrupção da expressão do gene alvo modula uma ou características farmacológicas da célula.
[0208] Os genes alvo associados à modulação farmacológica de uma célula incluem, por exemplo, CD52. A deleção permanente de pelo menos uma porção desses genes, a criação de pequenas inserções ou deleções nesses genes e/ou a inserção do ácido nucleico que codifica o CAR pode modular positiva ou negativamente uma ou características farmacológicas da célula. A modulação de uma ou características farmacológicas da célula pode ser parcial ou completa. Por exemplo, deletar permanentemente pelo menos uma porção desses genes e inserir o ácido nucleico que codifica o CAR pode impactar positivamente ou permitir que as células T do CAR sobrevivam. Alternativamente, a deleção permanente de pelo menos uma porção desses genes e a inserção do ácido nucleico que codifica o CAR podem impactar negativamente ou matar as células T do CAR.
[0209] Os modelos de doadores usados nos construtos de ácido nucleico que codificam o CAR também podem incluir um minigene ou cDNA. Por exemplo, o minigene ou cDNA pode compreender uma sequência de genes associada à modulação farmacológica de uma célula. A sequência do gene pode codificar Her2.
[0210] Uma sequência do gene Her2 pode ser permanentemente inserida em um locus diferente no gene alvo ou em um locus diferente no genoma de onde o ácido nucleico que codifica o construto CAR é inserido.
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[0211] São aqui fornecidos métodos para DSBs que induzem pequenas inserções ou deleções em um gene alvo, resultando na interrupção (por exemplo: redução ou eliminação da expressão e/ou função do gene) do gene alvo.
[0212] Além disso, são aqui apresentados métodos para criar DBSs e/ou excluir permanentemente dentro ou perto do gene alvo e inserir um construto de ácido nucleico que codifica um construto CAR no gene, induzindo uma quebra de fita dupla com Cas9 e um sgRNA em uma sequência alvo (ou um par de quebras de fita dupla, utilizando dois sgRNAs adequados), e para fornecer um molde de DNA doador para induzir a Reparação de Direcionada por Homologia (HDR). Em algumas modalidades, o modelo de DNA doador pode ser um oligonucleotídeo de fita simples curta, um oligonucleotídeo de fita dupla curta, uma molécula de DNA de fita simples ou dupla longa. Esses métodos usam gRNAs e moléculas de DNA doador para cada alvo. Em algumas modalidades, o DNA doador é DNA de fita simples ou dupla tendo braços homólogos na região correspondente. Em algumas modalidades, os braços homólogos são direcionados para a região alvo de nuclease de um gene selecionado do grupo que consiste em TRAC (chr14:22278151-22553663), CD3e (chr11:118301545-118319175), B2M (chr15:44708477-44721877), CIITA (chr16:10874198-10935281), RFX5 (chr1:151337640-151350251), PD1 (chr2:241846881241861908), CTLA-4 (chr2:203864786-203876960), CD52 (chr1:26314957-26323523), PPP1R12C (chr19:55087913-55120559) e suas combinações.
[0213] São aqui fornecidos métodos para ativar (knock-in) o cDNA alvo ou um minigene (compreendido por um ou mais éxons e introns ou introns naturais ou sintéticos) no locus do gene correspondente. Esses métodos usam um par de sgRNA com alvo no primeiro éxon e/ou ao primeiro intron do gene alvo. Em algumas modalidades, o DNA doador
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41/714 é DNA de fita simples ou dupla tendo braços homólogos para a região alvo da nuclease de um gene Her2 selecionado.
[0214] São aqui fornecidos métodos celulares (por exemplo, ex vivo ou in vivo) para o uso de ferramentas de manipulação do genoma para criar alterações permanentes no genoma por: 1) criar DSBs para induzir pequenas inserções, deleções ou mutações dentro ou próximo de um gene alvo, 2) deletar dentro ou perto do gene alvo ou outras sequências de DNA que codificam elementos reguladores do gene alvo e inserir, por HDR, um ácido nucleico que codifica um construto CAR knockin dentro ou perto do gene alvo ou outras sequências de DNA que codificam elementos reguladores do gene alvo, ou 3) criar DSBs dentro ou perto do gene alvo e inserir um construto de ácido nucleico dentro ou perto do gene alvo por HDR. Esses métodos usam endonucleases, tais como nucleases associadas a CRISPR (Cas9, Cpf 1 e similares), para deletar, inserir, editar, corrigir ou substituir permanentemente um ou mais ou éxons ou porções dos mesmos (por exemplo, mutações dentro ou perto das sequências de codificação e/ou de corte (splicing)) ou inserir no locus genômico do gene alvo ou outras sequências de DNA que codificam elementos reguladores do gene alvo. Dessa maneira, os exemplos apresentados na presente divulgação restauram o quadro de leitura ou a sequência do tipo selvagem ou, de outro modo, corrigem o gene com um único tratamento (em vez de oferecer terapias potenciais para a vida do paciente).
[0215] São aqui fornecidos métodos para o tratamento de um paciente com uma condição médica. Um aspecto desse método é uma terapia baseada em células ex vivo. Por exemplo, células mononucleares de sangue periférico são isoladas a partir do paciente. Em seguida, o DNA cromossômico dessas células é editado usando os materiais e métodos aqui descritos. Finalmente, as células editadas no genoma são implantadas no paciente.
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[0216] Também são aqui fornecidos métodos para reduzir o volume de um tumor em um sujeito, compreendendo administrar ao sujeito uma dose de uma composição farmacêutica compreendendo uma população de células (por exemplo, células T manipuladas) da presente divulgação e reduzir o volume do tumor no sujeito em pelo menos 50% (por exemplo, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70% ou pelo menos 75%) em relação ao controle (por exemplo, um sujeito não tratado).
[0217] São ainda aqui fornecidos métodos para aumentar a taxa de sobrevivência de um sujeito, compreendendo administrar ao sujeito uma dose de uma composição farmacêutica compreendendo uma população de células (por exemplo, células T manipuladas) da presente divulgação e aumentar a taxa de sobrevivência do sujeito em pelo menos 50% (por exemplo, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70% ou pelo menos 75%) em relação ao controle (por exemplo, um indivíduo não tratado).
[0218] Em algumas modalidades, a composição compreende 1x105 a 1x106 células. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende 1x105 a 2x106 células. Por exemplo, a composição pode compreender de 1x105, 2x105, 3x105, 4x105, 5x105, 6x105, 7x105, 8x105, 9x105, 1x106 ou 2x106. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende 1 x105 a 5x105 células, 5x105 a 1 x106 células, ou 5x105 a 1,5x106 células.
[0219] Outro aspecto de uma terapia baseada em células ex vivo pode incluir, por exemplo, o isolamento de células T de um doador. Em seguida, o DNA cromossômico dessas células é editado usando os materiais e métodos aqui descritos. Finalmente, as células editadas no genoma são implantadas em um paciente.
[0220] Em certos aspectos, as células T são isoladas de mais de um doador. Estas células são editadas usando os materiais e métodos
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43/714 aqui descritos. Finalmente, as células editadas no genoma são implantadas em um paciente.
[0221] Uma vantagem de uma abordagem de terapia celular ex vivo é a capacidade de realizar uma análise abrangente da terapêutica antes da administração. A terapêutica baseada em nuclease tem algum nível de efeitos fora do alvo. A realização da correção de genes ex vivo permite caracterizar completamente a população celular corrigida antes da implantação. A presente divulgação inclui sequenciar todo o genoma das células corrigidas para garantir que os efeitos fora do alvo, se houver, estejam em locais genômicos associados a um risco mínimo para o paciente. Além disso, populações de células específicas, incluindo populações clonais, podem ser isoladas antes da implantação. [0222] Outra modalidade de tais métodos também inclui uma terapia com base in vivo. Neste método, o DNA cromossômico das células do paciente é editado usando os materiais e métodos aqui descritos. Em algumas modalidades, as células são células T, tais como células T CD4+, células T CD8+ ou uma combinação das mesmas.
[0223] Também é aqui fornecido um método celular para editar o gene alvo em uma célula por edição de genoma. Por exemplo, uma célula é isolada de um paciente ou animal. Em seguida, o DNA cromossômico da célula é editado usando os materiais e métodos aqui descritos.
[0224] Os métodos aqui fornecidos, em algumas modalidades, envolvem uma, ou uma combinação das seguintes: 1) criar indels dentro ou perto do gene alvo ou outras sequências de DNA que codificam elementos reguladores do gene alvo, 2) deletar dentro ou perto do gene alvo ou outras sequências de DNA que codificam elementos reguladores do gene alvo, 3) inserção, por HDR ou NHEJ, de um ácido nucleico que codifica um construto CAR knockin dentro ou próximo ao gene alvo ou outras sequências de DNA que codificam elementos
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44/714 reguladores do gene alvo, ou 4) deleção de pelo menos uma porção do gene alvo e/ou insersão de cDNA alvo ou um minigene (compreendido por de um ou mais éxons ou introns ou introns naturais ou sintéticos) ou introdução de sequência exógena de DNA ou cDNA alvo ou um seu fragmento no locus do gene.
[0225] As estratégias de knockin utilizam um modelo de DNA de doador em Reparação Direcionada por Homologia (HDR) ou União de Extremidade Não Homóloga (NHEJ). HDR em qualquer estratégia pode ser realizada fazendo-se uma ou mais quebras de fita simples (SSBs) ou quebras de fita dupla (DSBs) em sítios específicos no genoma usando uma ou mais endonucleases.
[0226] Por exemplo, a estratégia de knockin envolve o knockin de cDNA alvo ou um minigene (compreendido por promotor e intensificador natural ou sintético, um ou mais éxons e introns naturais ou sintéticos, e sinal de 3'UTR e poliadenilação natural ou sintético) no locus do gene usando um gRNA (por exemplo, crRNA + tracrRNA ou sgRNA) ou um par de sgRNAs com alvo a montante, ou no primeiro ou outro, éxon e/ou intron do gene alvo. O DNA doador pode ser um DNA de fita simples ou dupla com braços homólogos para a região alvo da nuclease do gene alvo. Por exemplo, o DNA doador pode ser um DNA de fita simples ou dupla, com braços homólogos para a região alvo da nuclease de um gene selecionado do grupo que consiste em TRAC (chr14:2227815122553663), CD3e (chr11:118301545-118319175), B2M (chr15:44708477-44721877), CIITA (chr16:10874198-10935281), RFX5 (chr1:151337640-151350251), PD1 (chr2:241846881241861908), CTLA-4 (chr2:203864786-203876960), CD52 (chr1:26314957-26323523), PPP1R12C (chr19:55087913-55120559), e suas combinações.
[0227] Por exemplo, a estratégia de deleção envolve, em alguns aspectos, a deleção de um ou mais introns, éxons, regiões reguladoras
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45/714 do gene alvo, segmentos parciais do gene alvo ou toda a sequência do gene alvo usando uma ou mais endonucleases e um ou mais gRNAs ou sgRNAs.
[0228] Como outro exemplo, a estratégia de deleção envolve, em alguns aspectos, a deleção de um ou mais ácidos nucleicos de um ou mais genes alvo, resultando em pequenas inserções ou deleções (indels) usando uma ou mais endonucleases e um ou mais gRNAs ou sgRNAs.
[0229] Além das estratégias de edição de genoma acima, outro exemplo de estratégia de edição envolve a modulação da expressão, função ou atividade de um gene alvo através da edição na sequência reguladora.
[0230] Além das opções de edição listadas acima, Cas9 ou proteínas semelhantes podem ser usadas para direcionar domínios efetores para os mesmos sítios alvo que podem ser identificados para edição, ou sítios alvo adicionais dentro do alcance do domínio de efetor. Uma gama de enzimas modificadoras de cromatina, metilases ou desmetilases, pode ser usada para alterar a expressão do gene alvo. Uma possibilidade é aumentar a expressão da proteína alvo se a mutação levar a uma menor atividade. Estes tipos de regulação epigenética têm algumas vantagens, principalmente porque são limitados em possíveis efeitos fora do alvo.
[0231] Um número de tipos de sítios alvo genômicos estão presentes, além de mutações, nas sequências de codificação e splicing. [0232] A regulação da transcrição e tradução implica várias classes diferentes de sítios que interagem com proteínas ou nucleotídeos celulares. Frequentemente, os sítios de ligação ao DNA de fatores de transcrição ou outras proteínas podem ser direcionados para mutação ou deleção para estudar o papel do sítio, embora também possam ser direcionados para alterar a expressão de genes. Os sítios podem ser
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46/714 adicionados por meio da união de extremidade não homóloga NHEJ ou pela edição direta do genoma por reparação direcionada por homologia (HDR). O aumento do uso do sequenciamento do genoma, expressão do RNA e estudos de ligação ao fator de transcrição em todo o genoma, aumentaram a capacidade de identificar como os sítios levam à regulação de genes temporal ou de desenvolvimento. Esses sistemas de controle podem ser diretos ou podem envolver uma ampla regulamentação cooperativa que pode exigir a integração de atividades de intensificadores múltiplos. Os fatores de transcrição normalmente ligam sequências de DNA degeneradas de 6 a 12 pb de comprimento. O baixo nível de especificidade fornecido por sítios individuais sugere que interações e regras complexas estão envolvidas na ligação e no resultado funcional. Sítios de ligação com menos degeneração podem fornecer meios mais simples de regulação. Os fatores de transcrição artificiais podem ser concebidos para especificar sequências mais longas que possuem sequências menos semelhantes no genoma e têm menor potencial de divagem fora do alvo. Qualquer um desses tipos de sítios de ligação pode ser mutado, deletado ou mesmo criado para permitir alterações na regulação ou expressão de genes (Canver, M.C. et al., Nature (2015)).
[0233] Outra classe de regiões reguladoras de genes com essas características são os sítios de ligação ao microRNA (miRNA). Os miRNAs são RNAs não codificantes que desempenham papéis importantes na regulação de genes pós-transcricional. O miRNA pode regular a expressão de 30% de todos os genes que codificam proteínas de mamífero. Descobriu-se um silenciamento de genes específico e potente por RNA de fita dupla (RNAi), além de um pequeno RNA não codificante adicional (Canver, M.C. etal., Nature (2015)). A maior classe de RNAs não codificantes importantes para o silenciamento de genes são os miRNAs. Nos mamíferos, os miRNAs são primeiro transcritos
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47/714 como transcritos de RNA longos, que podem ser unidades transcricionais separadas, parte de introns de proteínas ou outros transcritos. Os transcritos longos são chamados de miRNA primário (primiRNA) que incluem estruturas em gancho imperfeitamente emparelhadas com bases. Esses pri-miRNA são clivados em um ou mais miRNAs precursores mais curtos (pre-miRNAs) pelo Microprocessador, um complexo de proteínas no núcleo, envolvendo Drosha.
[0234] Os pre-miRNAs são laços curtos com aproximadamente 70 nucleotídeos de comprimento com uma saliência de 2 nucleotídeos em 3’ que são exportados para os duplexes miRNA:miRNA* de 19-25 nucleotídeos maduros. A fita de miRNA com menor estabilidade do emparelhamento de bases (a fita guia) pode ser carregada no complexo de silenciamento induzido por RNA (RISC). A fita guia passageira (marcada com *) pode estar funcional, mas geralmente está degradada. O miRNA maduro amarra o RISC a motivos de sequência parcialmente complementares em mRNAs alvo encontrados predominantemente nas regiões não traduzidas a 3’ (UTRs) e induz o silenciamento de genes pós-transcricionais (Bartel, D.P. Cell 136, 215-233 (2009); Saj, A. & Lai, E.C. CurrOpin Genet Dev 21,504-510 (2011)).
[0235] Os miRNAs são importantes no desenvolvimento, diferenciação, ciclo celular e controle de crescimento e em praticamente todas as vias biológicas em mamíferos e outros organismos multicelulares. Os miRNAs também estão envolvidos no controle do ciclo celular, apoptose e diferenciação de células-tronco, hematopoiese, hipóxia, desenvolvimento muscular, neurogênese, secreção de insulina, metabolismo do colesterol, envelhecimento, replicação viral e respostas imunes.
[0236] Um único miRNA pode ter como alvo centenas de transcrições diferentes de mRNA, enquanto uma transcrição individual
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48/714 pode ser direcionada por muitos miRNAs diferentes. Mais de 28645 microRNAs foram anotados na versão mais recente do miRBase (v.21). Alguns miRNAs são codificados por múltiplos loci, alguns dos quais são expressos a partir de clusters cotranscritos em tandem. As características permitem redes reguladoras complexas com várias vias e controles de feedback. Os miRNAs são partes integrais desses circuitos reguladores e de feedback e podem ajudar a regular a expressão de genes, mantendo a produção de proteínas dentro de limites (Herranz, H. & Cohen, S.M. Genes Dev 24, 1339-1344 (2010); Posadas, D.M. & Carthew, R.W. CurrOpin Genet Dev 27, 1-6 (2014)). [0237] Os miRNAs são também importantes em um grande número de doenças humanas que estão associadas com a expressão anormal de miRNA. Essa associação ressalta a importância da via reguladora do miRNA. Estudos recentes de deleção de miRNA ligaram o miRNA à regulação das respostas imunes (Stern-Ginossar, N. etaL, Science 317, 376-381 (2007)).
[0238] Os miRNAs também têm uma forte ligação com o câncer e podem desempenhar um papel em diferentes tipos de câncer. Verificouse que os miRNAs são regulados negativamente em vários tumores. Os miRNAs são importantes na regulação das vias-chave relacionadas com o câncer, tais como o controle do ciclo celular e a resposta a danos no DNA, e são, portanto, utilizados no diagnóstico e estão sendo visados clinicamente. Os microRNAs regulam delicadamente o equilíbrio da angiogênese, de modo que as experiências que esgotam todos os microRNAs suprimem a angiogênese do tumor (Chen, S. etaL, Genes Dev 28, 1054-1067 (2014)).
[0239] Como foi demonstrado para os genes codificantes de proteínas, os genes do miRNA também estão sujeitos a alterações epigenéticas que ocorrem com o câncer. Muitos loci de miRNA estão associados a ilhas CpG, aumentando sua oportunidade de regulação
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49/714 por metilação do DNA (Weber, B., Stresemann, C., Brueckner, B. & Lyko, F. Cell Cycle 6, 1001-1005 (2007)). A maioria dos estudos utilizou o tratamento com fármacos de remodelação da cromatina para revelar miRNAs epigeneticamente silenciados.
[0240] Além de seu papel no silenciamento de RNA, o miRNA também pode ativar a tradução (Posadas, D.M. & Carthew, R.W. Curr Opin Genet Dev 27, 1-6 (2014)). Inativar estes sítios pode levar à diminuição da expressão do gene alvo, enquanto a introdução desses sítios pode aumentar a expressão.
[0241] Os miRNAs individuais podem ser eliminados de forma mais eficaz por mutação da sequência semente (bases 2-8 do microRNA), que é importante para a especificidade de ligação. A divagem nesta região, seguida pela reparação incorreta por NHEJ, pode efetivamente abolir a função do miRNA, bloqueando a ligação aos sítios alvo. O miRNA também pode ser inibido pelo direcionamento específico da região de laço especial adjacente à sequência palindrômica. Cas9 cataliticamente inativa também pode ser usada para inibir a expressão de shRNA (Zhao, Y. et aí., Sei Rep 4, 3943 (2014)). Além de direcionar o miRNA, os sítios de ligação também podem ser direcionados e mutados para impedir o silenciamento pelo miRNA.
Células T do receptor de antígeno quimérico (CAR)
[0242] Um receptor de antígeno quimérico se refere a um receptor de célula imune artificial que é manipulado para reconhecer e se ligar a um antígeno expresso por células tumorais. Geralmente, um CAR é concebido para uma célula T e é uma quimera de um domínio de sinalização do complexo receptor de células T (TcR) e um domínio de reconhecimento de antígeno (por exemplo, um fragmento de fita simples (scFv) de um anticorpo ou outro fragmento de anticorpo) (Enblad et al., Human Gene Therapy. 2015; 26(8):498-505). Uma célula T que expressa um CAR é referida como uma célula T CAR. Os CARs têm a
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50/714 capacidade de redirecionar a especificidade e reatividade das células T para um alvo selecionado de uma maneira não restrita ao MHC O reconhecimento de antígeno não restrito a MHC dá às células T, que expressam os CARs, a capacidade de reconhecer um antígeno independentemente do processamento do antígeno, ignorando, assim, um mecanismo principal de escape do tumor. Além disso, quando expressos em células T, os CARs vantajosamente não se dimerizam com as fitas alfa e beta do receptor endógeno de células T (TCR).
[0243] Existem quatro gerações de CARs, cada uma contendo componentes diferentes. Os CARs de primeira geração unem um scFv derivado de anticorpo ao domínio de sinalização intracelular CD3zeta (ζ ou z) do receptor de células T através de domínios de dobradiça e transmembrana. Os CARs de segunda geração incorporam um domínio adicional, por exemplo, CD28, 4-1 BB (41 BB) ou ICOS, para fornecer um sinal coestimulador. Os CARs de terceira geração contêm dois domínios coestimuladores fundidos com a fita TcR CD3-<. Os domínios coestimuladores de terceira geração podem incluir, por exemplo, uma combinação de CD3z, CD27, CD28, 4-1 BB, ICOS ou 0X40. Os CARs, em algumas modalidades, contêm um ectodomínio (por exemplo, CD3<), comumente derivado de um fragmento variável de fita simples (scFv), uma dobradiça, um domínio transmembranar e um endodomínio com um (primeira geração), dois (segunda geração), ou três domínios de sinalização (terceira geração), derivados de CD3Z e/ou moléculas coestimuladoras (Maude et al., Blood. 2015; 125(26):4017-4023; Kakarla and Gottschalk, Cancer J. 2014; 20(2):151-155).
[0244] Os CARs normalmente se diferem em suas propriedades funcionais. O domínio de sinalização CD3< do receptor de células T, quando ativado, ativa e induz a proliferação de células T, mas pode levar à anergia (falta de reação pelos mecanismos de defesa do corpo, resultando em indução direta da tolerância linfocitária periférica). Os
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51/714 linfócitos são considerados anérgicos quando não respondem a um antígeno específico. A adição de um domínio coestimulador nos CARs de segunda geração melhorou a capacidade replicativa e a persistência de células T modificadas. Efeitos antitumorais semelhantes são observados in vitro com CARs CD28 ou 4-1 BB, mas estudos préclínicos in vivo sugerem que os CAR 4-1 BB podem produzir proliferação e/ou persistência superiores. Os ensaios clínicos sugerem que ambos os CARs de segunda geração são capazes de induzir uma proliferação substancial de células T in vivo, mas os CARs contendo o domínio coestimulador 4-1 BB parecem persistir por mais tempo. Os CARs de terceira geração combinam múltiplos domínios de sinalização (coestimuladores) para aumentar a potência.
[0245] Em algumas modalidades, um receptor de antígeno quimérico é um CAR de primeira geração. Em outras modalidades, um receptor de antígeno quimérico é um CAR de segunda geração. Em ainda outras modalidades, um receptor de antígeno quimérico é um CAR de terceira geração.
[0246] Um CAR, em algumas modalidades, compreende um domínio extracelular (ecto) compreendendo um domínio de ligação ao antígeno (por exemplo, um anticorpo, tal como um scFv), um domínio transmembranar e um domínio citoplasmático (endo).
[0247] Ectodomínio. O ectodomínio é a região do CAR que é exposta ao fluido extracelular e, em algumas modalidades, inclui um domínio de ligação ao antígeno e, opcionalmente, um peptídeo sinal, um domínio espaçador e/ou um domínio de dobradiça. Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno é um fragmento variável de fita simples (scFv) que inclui as fitas leve e pesada de imunoglobinas conectadas a um peptídeo ligante curto (por exemplo, qualquer uma das SEQ ID NO: 1591, 1594 ou 1597). O ligante, em algumas modalidades, inclui resíduos hidrofílicos com trechos de glicina e serina para
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52/714 flexibilidade, bem como trechos de glutamato e lisina para maior solubilidade. Um fragmento variável de fita simples (scFv) não é realmente um fragmento de um anticorpo, mas sim uma proteína de fusão das regiões variáveis das fitas pesada (VH) e leve (VL) de imunoglobulinas, conectadas a um peptídeo ligante curto de dez a cerca de 25 aminoácidos. O ligante geralmente é rico em glicina para flexibilidade, bem como serina ou treonina para solubilidade, e pode conectar o terminal N de VH ao terminal C de VL ou vice-versa. Esta proteína retém a especificidade da imunoglobulina original, apesar da remoção das regiões constantes e da introdução do ligante. Em algumas modalidades, o scFv da presente divulgação é humanizado. Em outras modalidades, o scFv é totalmente humano. Em ainda outras modalidades, o scFv é uma quimera (por exemplo, sequência de camundongo e humana). Em algumas modalidades, o scFv é um scFv anti-CD70 (liga-se especificamente a CD70). Exemplos não limitativos de proteínas scFv anti-CD70 e fitas pesadas e/ou leves que podem ser usadas como aqui fornecidas incluem aquelas que compreendem qualquer uma das SEQ ID NOs: 1499 (scFv), 1500 (scFV), 1592 (cadeia pesada) ou 1593 (cadeia leve).
[0248] O peptídeo sinal pode melhorar a especificidade do antígeno da ligação ao CAR. Os peptídeos sinal podem ser derivados de anticorpos, tais como, mas não limitados a, CD8, bem como marcadores de epítopos tais como, mas não limitados a, GST ou FLAG. Exemplos de peptídeos sinais incluemMLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP (SEQ ID NO: 1598) e MALPVTALLLPLALLLHAARP (SEQ ID NO: 1586). Outros peptídeos sinaispodem ser utilizados.
[0249] Em algumas modalidades, um domínio espaçador ou domínio de dobradiça está localizado entre um domínio extracelular (compreendendo o domínio de ligação ao antígeno) e um domínio transmembranar de um CAR, ou entre um domínio citoplasmático e um
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53/714 domínio transmembranar do CAR. Um domínio espaçador é qualquer oligopeptídeo ou polipeptídeo que funciona para ligar o domínio transmembranar ao domínio extracelular e/ou ao domínio citoplasmático na fita polipeptídica. Um domínio de dobradiça é qualquer oligopeptídeo ou polipeptídeo que funciona para fornecer flexibilidade ao CAR, ou domínios do mesmo, ou para impedir impedimento estérico do CAR, ou domínios do mesmo. Em algumas modalidades, um domínio espaçador ou um domínio de dobradiça pode compreender até 300 aminoácidos (por exemplo, 10 a 100 aminoácidos ou 5 a 20 aminoácidos). Em algumas modalidades, um ou mais domínios espaçadores podem ser incluídos em outras regiões de um CAR. Em algumas modalidades, o domínio de dobradiça é um domínio de dobradiça CD8. Outros domínios de dobradiças podem ser usados.
[0250] Domínio Transmembranar. O domínio transmembranar é uma hélice alfa hidrofóbica que atravessa a membrana. O domínio transmembranar fornece estabilidade ao CAR. Em algumas modalidades, o domínio transmembranar de um CAR, conforme aqui fornecido, é um domínio transmembranar CD8. Em outras modalidades, o domínio transmembranar é um domínio transmembranar CD28. Em ainda outras modalidades, o domínio transmembranar é uma quimera de um domínio transmembranar CD8 e CD28. Outros domínios transmembranares podem ser utilizados como aqui fornecido. Em algumas modalidades, o domínio transmembranar é um domínio transmembranar CD8a, incluindo opcionalmente um ligante 5'.
[0251] Endodomínio. O endodomínio é o fim funcional do receptor. Após o reconhecimento do antígeno, os receptores se agrupam e um sinal é transmitido para a célula. O componente de endodomínio mais usado é o CD3-zeta, que contém três (3) ITAMs. Isso transmite um sinal de ativação para a célula T após a ligação do antígeno. Em muitos casos, o CD3-zeta pode não fornecer um sinal de ativação total mente
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54/714 competente e, portanto, é utilizada uma sinalização coestimuladora. Por exemplo, CD28 e/ou 4-1 BB podem ser usados com CD3-zeta (CD3<) para transmitir um sinal proliferativo/de sobrevivência. Assim, em algumas modalidades, a molécula coestimuladora de um CAR, como aqui fornecido, é uma molécula coestimuladora de CD28. Em outras modalidades, a molécula coestimuladora é uma molécula coestimuladora de 4-1 BB. Em algumas modalidades, um CAR inclui Οϋ3ζ e CD28. Em outras modalidades, um CAR inclui CD3-zeta e 41BB. Ainda em outras modalidades, um CAR inclui Οϋ3ζ, CD28 e 41BB. Exemplos não limitativos de moléculas coestimuladoras que podem ser usadas aqui incluem aquelas codificadas pela sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1377 (CD3-zeta), SEQ ID NO 1336 (CD28), e/ou SEQ ID NO: 1339 (4-1 BB).
Células Humanas.
[0252] Como aqui descrito e ilustrado, os principais alvos para edição de genes são células humanas. Por exemplo, células T humanas primárias, CD4+ e/ou CD8+, podem ser editadas. Estas podem ser isoladas a partir de isolados de células mononucleares do sangue periférico.
[0253] A edição de genes pode ser verificada por alterações na expressão da proteína da superfície alvo, bem como pela análise do DNA por PCR e/ou sequenciamento.
[0254] As células editadas podem ter uma vantagem seletiva. As células T inativadas para MHC-I e/ou MHC-II, bem como para PDCD1 ou CTLA4 podem persistir por mais tempo nos pacientes.
[0255] As células editadas podem ser testadas para edição de genes fora do alvo, bem como translocações. Também podem ser testadas quanto à capacidade de crescer em meio livre de citocinas. Se as células editadas exibirem baixa atividade fora do alvo e translocações mínimas, além de não conseguirem crescer em meio livre de citocinas,
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55/714 elas serão consideradas seguras.
[0256] As células T humanas primárias podem ser isoladas de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) isoladas de leucopaques. As células T podem ser expandidas a partir de PBMC por tratamento com nanopartículas ou esferas acopladas a anticorpos antiCD3/CD28. As células T ativadas podem ser eletroporadas com RNP(s) contendo Cas9 complexado em sgRNA. As células podem então ser tratadas com o vírus AAV6 contendo DNA modelo doador quando HDR é necessária, por exemplo, para inserção de um ácido nucleico que codifica um construto CAR. As células podem então ser expandidas por 1-2 semanas em cultura líquida. Quando células negativas para TCR são necessárias, as células editadas podem ser selecionadas por métodos baseados em anticorpos/colunas, como, por exemplo, MACS. [0257] Ao realizar a edição de genes em células alogênicas derivadas de um doador que não tem ou não é suspeito de ter uma condição médica a ser tratada, é possível gerar células que podem ser reintroduzidas com segurança no paciente e efetivamente fornecer aumento para uma população de células que são eficazes na melhoria de uma ou mais condições clínicas associadas à doença do paciente.
[0258] Ao realizar a edição de genes em células autólogas derivadas e, portanto, já completamente compatíveis imunologicamente com o paciente em necessidade, é possível gerar células que possam ser reintroduzidas com segurança no paciente e efetivamente dar origem a uma população de células que são eficazes para melhorar uma ou mais condições clínicas associadas à doença do paciente.
[0259] As células progenitoras (também aqui referidas como células-tronco) são capazes de se proliferar e dar origem a mais células progenitoras, tendo por sua vez a capacidade de gerar um grande número de células-mãe que, por sua vez, podem gerar células-filhas diferenciadas ou diferenciáveis. As próprias células-filhas podem ser
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56/714 induzidas a se proliferar e produzir progênies que subsequentemente se diferenciam em um ou mais tipos de células maduras, mantendo também uma ou mais células com potencial de desenvolvimento parental. O termo célula-tronco refere-se então a uma célula com capacidade ou potencial, em circunstâncias particulares, de se diferenciar em um fenótipo mais especializado ou diferenciado, e que retém a capacidade, em certas circunstâncias, de se proliferar sem se diferenciar substancialmente. Em um aspecto, o termo progenitor ou célula-tronco refere-se a uma célula-mãe generalizada cujos descendentes (progênies) se especializam, geralmente em direções diferentes, por diferenciação, por exemplo, adquirindo caracteres completamente individuais, como ocorre na diversificação progressiva de células e tecidos embrionários. A diferenciação celular é um processo complexo que ocorre normalmente através de muitas divisões celulares. Uma célula diferenciada pode derivar de uma célula multipotente que, em si, é derivada de uma célula multipotente e assim por diante. Embora cada uma dessas células multipotentes possa ser considerada como células-tronco, o intervalo de tipos de células aos quais cada uma pode originar pode variar consideravelmente. Algumas células diferenciadas também têm a capacidade de dar origem a células com maior potencial de desenvolvimento. Essa capacidade pode ser natural ou pode ser induzida artificialmente após tratamento com vários fatores. Em muitos casos biológicos, as células-tronco também são multipotentes porque podem produzir descendentes de mais de um tipo de células distinto, mas isso não é necessário para similaridade à célula-tronco (sternness).
[0260] A auto-renovação é outro aspecto importante da célulatronco. Em teoria, a autorrenovação pode ocorrer por um dos dois principais mecanismos. As células-tronco podem se dividir assimetricamente, com uma filha mantendo o estado-tronco e a outra
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57/714 filha expressando alguma outra função e fenótipo específico distinto. Alternativamente, algumas das células-tronco de uma população podem se dividir simetricamente em duas hastes, mantendo algumas célulastronco na população como um todo, enquanto outras células da população dão origem apenas a progênies diferenciadas. Geralmente, células progenitoras têm um fenótipo celular mais primitivo (isto é, está em uma etapa anterior ao longo de uma via ou progressão do desenvolvimento do que uma célula totalmente diferenciada). Frequentemente, as células progenitoras também têm um potencial proliferative significativo ou muito alto. As células progenitoras podem dar origem a vários tipos de células diferenciadas ou a um único tipo de célula diferenciada, dependendo da via de desenvolvimento e do ambiente em que as células se desenvolvem e se diferenciam.
[0261] No contexto da ontogenia celular, o adjetivo diferenciado ou diferenciando é um termo relativo. Uma célula diferenciada é uma célula que progrediu mais no caminho do desenvolvimento do que na célula à qual está sendo comparada. Assim, as células-tronco podem se diferenciar em células precursoras restritas à linhagem (tal como uma célula progenitora de miócitos), que por sua vez podem se diferenciar em outros tipos de células precursoras mais adiante no caminho (tal como um precursor de miócitos) e, em seguida, até um final estágio celular diferenciado, como um miócito, que desempenha um papel característico em um determinado tipo de tecido e pode ou não reter a capacidade de se proliferar ainda mais.
[0262] O termo célula progenitora hematopoética refere-se a células de uma linhagem de células-tronco que dão origem a todos os tipos de células sanguíneas, incluindo eritroide (eritrócitos ou glóbulos vermelhos (RBCs)), mieloide (monócitos e macrófagos, neutrófilos, basófilos, eosinófilos, megacariócitos/plaquetas e células dendríticas) e linfoides (células T, células B, células NK).
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Isolando uma célula mononuclear do sangue periférico
[0263] As células mononucleares do sangue periférico podem ser isoladas de acordo com qualquer método conhecido na técnica. Por exemplo, os glóbulos brancos podem ser isolados de uma amostra líquida por centrifugação e cultura de células.
Tratar um paciente com GCSF
[0264] Um paciente pode, opcionalmente, ser tratado com fator estimulador de colônias de granulócitos (GCSF) de acordo com qualquer método conhecido na técnica. Em algumas modalidades, o GCSF é administrado em combinação com Plerixaflor.
Modelos animais
[0265] Para estudos de eficácia, camundongos NOG ou NSG podem ser usados. Eles podem ser transplantados com linhas celulares de linfoma humano e subsequentemente transplantados com células T CAR humanas editadas. A perda/prevenção de células de linfoma pode indicar a eficácia das células T editadas.
[0266] A segurança das células T editadas por TCR pode ser avaliada em camundongos NOG ou NSG. As células T humanas transplantadas para esses camundongos podem causar um enxerto xenogênico letal versus doença do hospedeiro (GVHD). A remoção de TCR por edição de genes deve aliviar esse tipo de GVHD.
Edição de Genoma
[0267] A edição do genoma refere-se geralmente ao processo de modificação da sequência nucleotídica de um genoma, de preferência de maneira precisa ou pré-determinada. Exemplos de métodos de edição de genoma aqui descritos incluem métodos de utilização de nucleases direcionadas ao sítio para cortar o ácido desoxirribonucléico (DNA) em sítios alvo precisos no genoma, criando, assim, quebras de DNA de fita simples ou dupla em sítios específicos dentro do genoma. Tais quebras podem ser e são regularmente reparadas por processos
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59/714 celulares endógenos naturais, como reparação direcionada por homologia (HDR) e união da extremidade não homóloga (NHEJ), como recentemente revisto em Cox et a!., Nature Medicine 21(2), 121-31 (2015). Esses dois processos principais de reparação do DNA consistem em uma família de caminhos alternativos. NHEJ une diretamente as extremidades do DNA resultantes de uma quebra de fita dupla, às vezes com a perda ou adição da sequência de nucleotídeos, que pode interromper ou melhorar a expressão de genes. O HDR utiliza uma sequência homóloga, ou sequência doadora, como modelo para inserir uma sequência de DNA definida no ponto de interrupção. A sequência homóloga pode estar no genoma endógeno, como uma cromátide irmã. Alternativamente, o doador pode ser um ácido nucleico exógeno, tal como um plasmídeo, um oligonucleotídeo de fita simples, um oligonucleotídeo de fita dupla, um oligonucleotídeo duplex ou um vírus, que possui regiões de alta homologia com o locus clivado por nuclease, mas que também pode conter sequência adicional ou alterações na sequência, incluindo deleções que podem ser incorporadas no locus alvo clivado. Um terceiro mecanismo de reparação é união de extremidade mediada por micro-homologia (MMEJ), também referida como NHEJ Alternativa, em que o resultado genético é semelhante à NHEJ em que pequenas deleções e inserções podem ocorrer no sítio de divagem. A MMEJ faz uso de sequências homólogas de alguns pares de bases que flanqueiam o sítio de quebra de DNA para gerar um resultado de reparação de união de extremidade de DNA mais favorecido, e relatórios recentes elucidaram ainda mais o mecanismo molecular desse processo; ver, por exemplo, Cho and Greenberg, Nature 518,174-76 (2015); Kent eta\., Nature Structural and Molecular Biology, Adv. Online doi:10.1038/nsmb.2961 (2015); MateosGomez et al., Nature 518, 254-57 (2015); Ceccaldi et al., Nature 528, 258-62 (2015). Em alguns casos, pode ser possível prever resultados
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60/714 prováveis de reparação com base na análise de potenciais microhomologias no sítio da quebra do DNA.
[0268] Cada um desses mecanismos de edição de genoma pode ser usado para criar as alterações genômicas desejadas. Um passo no processo de edição do genoma é criar uma ou duas quebras de DNA, as últimas como quebras de fita dupla ou duas quebras de fita simples, no locus alvo o mais próximo possível do sítio da mutação pretendida. Isto pode ser conseguido através do uso de polipeptídeos direcionados ao sítio, como descrito e ilustrado aqui.
[0269] Os polipeptídeos direcionados ao sítio, tal como uma endonuclease de DNA, podem introduzir quebras de fita dupla ou quebras de fita simples em ácidos nucleicos, por exemplo, DNA genômico. A quebra de fita dupla pode estimular as vias endógenas de reparação de DNA de uma célula (por exemplo, reparação dependente de homologia ou união de extremidade não homóloga ou união de extremidade não homóloga alternativa (A-NHEJ) ou união de extremidade mediada por micro-homologia). O NHEJ pode reparar o ácido nucleico alvo clivado sem a necessidade de um modelo homólogo. Às vezes, isso pode resultar em pequenas deleções ou inserções (indels) no ácido nucleico alvo no sítio da divagem e pode levar à interrupção ou alteração da expressão de genes. A HDR pode ocorrer quando um modelo de reparação homóloga, ou doador, está disponível. O modelo doador homólogo compreende sequências que são homólogas às sequências que flanqueiam o sítio de divagem do ácido nucleico alvo. A cromátide irmã é geralmente usada pela célula como modelo de reparação. No entanto, para fins de edição do genoma, o modelo de reparação é frequentemente fornecido como um ácido nucleico exógeno, tal como um plasmídeo, oligonucleotídeo duplex, oligonucleotídeo de fita simples, oligonucleotídeo de fita dupla, oligonucleotídeo de fita dupla ou ácido nucleico viral. Com modelos
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61/714 doadores exógenos, é comum introduzir uma sequência adicional de ácido nucleico (como um transgene) ou uma modificação (como uma mudança de base única ou múltipla ou uma deleção) entre as regiões flanqueadoras da homologia, para que a sequência de ácido nucleico adicional ou alterada também seja incorporada ao sítio alvo. A MMEJ resulta em um resultado genético que é semelhante à NHEJ em que pequenas deleções e inserções podem ocorrer no sítio de divagem. A MMEJ faz uso de sequências homólogas de alguns pares de bases que flanqueiam o sítio de divagem para alcançar um resultado favorável de reparação de DNA por união de extremidades. Em alguns casos, pode ser possível prever resultados prováveis de reparação com base na análise de potenciais micro-homologias nas regiões alvo da nuclease.
[0270] Assim, em algumas modalidades, a união de extremidade não homóloga ou a recombinação homóloga é usada para inserir uma sequência polinucleotídica exógena no sítio de divagem do ácido nucleico alvo. Uma sequência polinucleotídica exógena é aqui denominada polinucleotídeo doador (ou sequência doadora ou doadora ou modelo doador de polinucleotídeo). Em algumas modalidades, o polinucleotídeo doador, uma porção do polinucleotídeo doador, uma cópia do polinucleotídeo doador ou uma porção de uma cópia do polinucleotídeo doador é inserido no sítio de divagem do ácido nucleico alvo. Em algumas modalidades, o polinucleotídeo doador é uma sequência polinucleotídica exógena, isto é, uma sequência que não ocorre naturalmente no sítio de divagem do ácido nucleico alvo.
[0271] As modificações do DNA alvo devido a NHEJ e/ou HDR podem levar a, por exemplo, mutações, deleções, alterações, integrações, correção de genes, substituição de genes, marcação de genes, inserção de transgene, deleção de nucleotídeos, interrupção de genes, translocações e/ou mutação de genes. Os processos de deleção de DNA genômico e integração de ácido nucleico não nativo no DNA
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62/714 genômico são exemplos de edição de genoma.
Sistema de Endonuclease CRISPR
[0272] Um locus genômico CRISPR (Repetições Palindrômicas Curtas Agrupadas Regularmente Intercaladas) pode ser encontrado nos genomas de muitos procariontes (por exemplo, bactérias e archaea). Nos procariontes, o locus CRISPR codifica produtos que funcionam como um tipo de sistema imunológico para ajudar a defender os procariontes contra invasores estranhos, tais como vírus e fagos. Existem três estágios da função do locus CRISPR: integração de novas sequências no locus CRISPR, expressão do RNA CRISPR (crRNA) e silenciamento de ácido nucleico invasor estranho. Foram identificados cinco tipos de sistemas CRISPR (por exemplo, Tipo I, Tipo II, Tipo III, Tipo U e Tipo V).
[0273] Um locus CRISPR inclui um número de sequências curtas de repetição, conhecidas como repetições. Quando expressas, as repetições podem formar estruturas secundárias (por exemplo, grampos) e/ou compreender sequências não estruturadas de fita simples. As repetições geralmente ocorrem em grupos e frequentemente divergem entre as espécies. As repetições são regularmente espaçadas com sequências intervenientes únicas, chamadas de espaçadores, resultando em uma arquitetura de locus de repetição-espaçador-repetição. Os espaçadores são idênticos ou possuem alta homologia com sequências invasoras estranhas conhecidas. Uma unidade de repetição de espaçador codifica um crisprRNA (crRNA), que é processado em uma forma madura da unidade de repetição de espaçador. Um crRNA compreende uma semente ou sequência espaçadora que está envolvida no direcionamento de um ácido nucleico alvo (na forma que ocorre naturalmente em procariontes, a sequência espaçadora tem como alvo o ácido nucleico invasor estranho). Uma sequência espaçadora está
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63/714 localizada na extremidade 5’ ou 3' do crRNA.
[0274] Um locus CRISPR também compreende sequências polinucleotídicas que codificam genes associados a CRISPR (Cas). Os genes Cas codificam endonucleases envolvidas na biogênese e nos estágios de interferência da função de crRNA em procariontes. Alguns genes Cas compreendem estruturas secundárias e/ou terciárias homólogas.
Sistemas CRISPR tipo II
[0275] A biogênese do crRNA em um sistema CRISPR do tipo II na natureza requer um RNA CRISPR de ativação trans (tracrRNA). O tracrRNA é modificado pela RNaselll endógena e depois se híbrida com uma repetição de crRNA no arranjo pre-crRNA. A RNaselll endógena é recrutada para clivar o pre-crRNA. Os crRNAs clivados são submetidos a cortes de exoribonuclease para produzir a forma madura de crRNA (por exemplo, corte de 5'). O tracrRNA permanece hibridado com o crRNA, e o tracrRNA e o crRNA se associam a um polipeptídeo direcionado ao sítio (por exemplo, Cas9). O crRNA docomplexo crRNAtracrRNA-Cas9 guia o complexo para um ácido nucleico alvo ao qual o crRNA pode hibridar. A hibridação do crRNA no ácido nucleico alvo ativa a Cas9 para a divagem do ácido nucleico alvo. O ácido nucleico alvo em um sistema CRISPR do tipo II é referido como um motivo adjacente do proto-espaçador (PAM). Na natureza, o PAM é essencial para facilitar a ligação de um polipeptídeo direcionado ao sítio (por exemplo, Cas9) ao ácido nucleico alvo. Os sistemas tipo II (também referidos por Nmeni ou CASS4) são ainda subdivididos em tipo ll-A (CASS4) e ll-B (CASS4a). Jinek et al., Science, 337(6096):816-821 (2012) mostraram que o sistema CRISPR/Cas9 é útil para edição de genoma programável por RNA, e o número de publicação internacional do pedido de patente WO2013/176772 fornece vários exemplos e aplicações do sistema de endonuclease CRISPR/Cas para edição de genes específicos do sítio.
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Sistemas CRISPR tipo V
[0276] Os sistemas CRISPR tipo V apresentam várias diferenças importantes em relação aos sistemas Tipo II. Por exemplo, Cpf 1 é uma única endonuclease guiada por RNA que, em contraste com os sistemas do Tipo II, não possui tracrRNA. De fato, os arranjos CRISPR associados a Cpf1 são processados em crRNAs maduros sem a necessidade de um tracrRNA adicional de ativação trans. O arranjo CRISPR do Tipo V é processado em crRNAs curtos maduros de 42-44 nucleotídeos de comprimento, com cada crRNA maduro começando com 19 nucleotídeos de repetição direta seguido por 23-25 nucleotídeos de sequência espaçadora. Em contraste, os crRNAs maduros nos sistemas Tipo II começam com 20-24 nucleotídeos da sequência espaçadora, seguidos por cerca de 22 nucleotídeos de repetição direta. Além disso, Cpf 1 utiliza um motivo adjacente ao protoespaçador rico em T, de tal modo que complexos de Cpf 1-crRNA clivam eficientemente um DNA alvo precedido por um PAM curto rico em T, o que está em contraste com PAM rico em G na sequência do DNA alvo para sistemas de Tipo II. Assim, os sistemas de Tipo V clivam em um ponto distante do PAM, enquanto os sistemas Tipo II clivam em um ponto adjacente ao PAM. Além disso, em contraste com os sistemas do Tipo II, Cpf 1 cliva o DNA através de uma quebra de fita dupla de DNA escalonada com uma saliência de 4 ou 5 nucleotídeos em 5'. Os sistemas do Tipo II clivam através de uma quebra de fita dupla. Semelhante aos sistemas Tipo II, Cpf 1 contém um domínio previsto de endonuclease semelhante a RuvC, mas não possui um segundo domínio de endonuclease HNH, o que contrasta com os sistemas Tipo II.
Genes/Polipeptídeos Cas e Motivos Adjacentes ao Protoespaçador
[0277] Os polipeptídeos CRISPR/Cas exemplificativos incluem os polipeptídeos Cas9 na Fig. 1 deFonfara et a!., Nucleic Acids Research,
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42: 2577-2590 (2014). O sistema de nomeação de genes CRISPR/Cas passou por uma extensa reescrita desde que os genes Cas foram descobertos. A Fig. 5 de Fonfara, supra, fornece sequências de PAM para os polipeptídeos Cas9 de várias espécies.
Polipeptídeos Direcionados ao Sítio
[0278] Um polipeptídeo direcionado ao sítio é uma nuclease usada na edição do genoma para clivar o DNA. O sítio direcionado pode ser administrado a uma célula ou a um paciente como: um ou mais polipeptídeos, ou um ou mais mRNAs que codificam o polipeptídeo.
[0279] No contexto de um sistema CRISPR/Cas ou CRISPR/Cpf1, o polipeptídeo direcionado ao sítio pode se ligar a um RNA guia que, por sua vez, especifica o sítio no DNA alvo ao qual o polipeptídeo é direcionado. Em modalidades dos sistemas CRISPR/Cas ou CRISPR/Cpf1 aqui descritas, o polipeptídeo direcionado ao sítio é uma endonuclease, tal como uma endonuclease de DNA.
[0280] Em algumas modalidades, um polipeptídeo direcionado ao sítio compreende uma pluralidade de domínios de divagem de ácidos nucleicos (isto é, nuclease). Dois ou mais domínios de divagem de ácidos nucleicos podem ser ligados juntos através de um ligante. Por exemplo, o ligante compreende um ligante flexível. Em algumas modalidades, os ligantes compreendem 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12,13,14,15,16,17,18,19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 30, 35, 40 ou mais aminoácidos de comprimento.
[0281] As enzimas Cas9 de tipo selvagem de ocorrência natural compreendem dois domínios de nuclease, um domínio de nuclease HNH e um domínio RuvC. Aqui, Cas9 refere-se a Cas9s de ocorrência natural e recombinante. As enzimas Cas9 aqui contempladas compreendem um domínio de nuclease do tipo HNH ou semelhante a HNH e/ou um domínio de nuclease do tipo RuvC ou semelhante a RuvC. [0282] Os domínios HNH ou semelhantes a HNH compreendem
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66/714 uma dobra semelhante a McrA. Os domínios HNH ou semelhantes a HNH compreendem duas fitas β antiparalelas e uma α-hélice. Os domínios HNH ou semelhantes a HNH compreendem um sítio de ligação de metal (por exemplo, um sítio de ligação de cátion divalente). Os domínios HNH ou semelhantes a HNH podem clivar uma fita de um ácido nucleico alvo (por exemplo, a fita complementar da fita alvo do crRNA).
[0283] Os domínios RuvC ou semelhantes a RuvC compreendem uma dobra RNaseH ou semelhante a RNaseH. Os domínios RuvC/RNaseH estão envolvidos em um conjunto diversificado de funções baseadas em ácidos nucleicos, incluindo a ação em ambos o RNA e o DNA. O domínio RNaseH compreende 5 fitas-β cercadas por uma pluralidade de hélices-α. Os domínios RuvC/RNaseH ou semelhantes a RuvC/RNaseH compreendem um sítio de ligação de metal (por exemplo, um sítio de ligação de cátion divalente). Os domínios RuvC/RNaseH ou semelhantes a RuvC/RNaseH podem clivar uma fita de um ácido nucleico alvo (por exemplo, a fita não complementar de um DNA alvo de fita dupla).
[0284] Os polipeptídeos direcionados ao sítio podem introduzir quebras de fita dupla ou quebras de fita simples em ácidos nucleicos, por exemplo, DNA genômico. A quebra de fita dupla pode estimular as vias endógenas de reparação de DNA de uma célula (por exemplo, reparação dependente de homologia (HDR) ou união de extremidade não homóloga (NHEJ) ou união de extremidade não homóloga alternativa (A-NHEJ) ou união de extremidade mediada por microhomologia (MMEJ)). O NHEJ pode reparar o ácido nucleico alvo clivado sem a necessidade de um modelo homólogo. Às vezes, isso pode resultar em pequenas deleções ou inserções (indels) no ácido nucleico alvo no sítio da divagem e pode levar à interrupção ou alteração da expressão de genes. O HDR pode ocorrer quando um modelo de
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67/714 reparação homóloga, ou doador, está disponível. O modelo doador homólogo compreende sequências que são homólogas às sequências que flanqueiam o sítio de divagem do ácido nucleico alvo. A cromátide irmã é geralmente usada pela célula como modelo de reparação. No entanto, para fins de edição do genoma, o modelo de reparação é frequentemente fornecido como um ácido nucleico exógeno, tal como um plasmídeo, oligonucleotídeo duplex, oligonucleotídeo de fita simples ou ácido nucleico viral. Com modelos doadores exógenos, é comum introduzir uma sequência adicional de ácido nucleico (como um transgene) ou uma modificação (como uma mudança de base única ou múltipla ou uma deleção) entre as regiões flanqueadoras da homologia, para que a sequência de ácido nucleico adicional ou alterado também seja incorporada ao sítio alvo. A MMEJ resulta em um resultado genético que é semelhante à NHEJ em que pequenas deleções e inserções podem ocorrer no sítio de divagem. A MMEJ faz uso de sequências homólogas de alguns pares de bases que flanqueiam o sítio de divagem para alcançar um resultado favorável de reparação DNA por união de extremidades. Em alguns casos, pode ser possível prever resultados prováveis de reparação com base na análise de potenciais micro-homologias nas regiões alvo da nuclease.
[0285] Assim, em algumas modalidades, a recombinação homóloga é usada para inserir uma sequência polinucleotídica exógena no sítio de divagem do ácido nucleico alvo. Uma sequência polinucleotídica exógena é aqui denominada polinucleotídeo doador (ou doador ou sequência doadora). Em algumas modalidades, o polinucleotídeo doador, uma porção do polinucleotídeo doador, uma cópia do polinucleotídeo doador ou uma porção de uma cópia do polinucleotídeo doador é inserido no sítio de divagem do ácido nucleico alvo. Em algumas modalidades, o polinucleotídeo doador é uma sequência polinucleotídica exógena, isto é, uma sequência que não ocorre
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68/714 naturalmente no sítio de divagem do ácido nucleico alvo.
[0286] As modificações do DNA alvo devido a NHEJ e/ou HDR podem levar a, por exemplo, mutações, deleções, alterações, integrações, correção de genes, substituição de genes, marcação de genes, inserção de transgenes, deleção de nucleotídeos, interrupção de genes, translocações e/ou mutação de genes. Os processos de deleção de DNA genômico e integração de ácido nucleico não nativo no DNA genômico são exemplos de edição de genoma.
[0287] Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende uma sequência de aminoácidos possuindo pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos a um polipeptídeo do tipo selvagem direcionado ao sítio exemplificativo [por exemplo, Cas9 de S. pyogenes, Sequência ID NQ 8 de US2014/0068797 ou Sapranauskas etal., Nucleic Acids Fies, 39(21): 9275-9282 (2011)] e vários outros polipeptídeos direcionados ao sítio. Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende pelo menos 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 99, ou 100% de identidade a um polipeptídeo direcionado ao sítio do tipo selvagem (por exemplo, Cas9 de S. pyogenes, supra) sobre 10 aminoácidos contíguos. [0288] Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende uma sequência de aminoácidos possuindo pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 99% ou 100% de identidade de sequência de aminoácidos a um domínio de nuclease do tipo selvagem direcionado ao sítio exemplificativo (por exemplo, Cas9 de S. pyogenes, supra).
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[0289] Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende no máximo: 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 99, ou 100% de identidade a um polipeptídeo direcionado ao sítio do tipo selvagem (por exemplo, Cas9 de S. pyogenes, supra) sobre 10 aminoácidos contíguos. Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende pelo menos: 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 99, ou 100% de identidade a um polipeptídeo direcionado ao sítio do tipo selvagem (por exemplo, Cas9 de S. pyogenes, supra) sobre 10 aminoácidos contíguos em um domínio de nuclease HNH do polipeptídeo direcionado ao sítio. Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende no máximo: 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 99, ou 100% de identidade a um polipeptídeo direcionado ao sítio do tipo selvagem (por exemplo, Cas9 de S. pyogenes, supra) sobre 10 aminoácidos contíguos em um domínio de nuclease HNH do polipeptídeo direcionado ao sítio. Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende pelo menos: 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 99, ou 100% de identidade a um polipeptídeo direcionado ao sítio do tipo selvagem (por exemplo, Cas9 de S. pyogenes, supra) sobre 10 aminoácidos contíguos em um domínio de nuclease RuvC do polipeptídeo direcionado ao sítio. Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende no máximo: 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 99, ou 100% de identidade a um polipeptídeo direcionado ao sítio do tipo selvagem (por exemplo, Cas9 de S. pyogenes, supra) sobre 10 aminoácidos contíguos em um domínio de nuclease RuvC do polipeptídeo direcionado ao sítio. [0290] Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende uma forma modificada de um polipeptídeo direcionado ao sítio exemplificativo do tipo selvagem. Em algumas modalidades, a forma modificada do polipeptídeo direcionado ao sítio exemplificativo do tipo selvagem compreende uma mutação que reduz a atividade de divagem do ácido nucleico do polipeptídeo direcionado ao sítio. Em
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70/714 algumas modalidades, a forma modificada do polipeptídeo direcionado ao sítio exemplificative do tipo selvagem tem menos de 90%, menos de 80%, menos de 70%, menos de 60%, menos de 50%, menos de 40%, menos de 30%, menos de 20%, menos de 10%, menos de 5% ou menos de 1% da atividade de divagem de ácidos nucleicos do polipeptídeo direcionado ao sítio exemplificative de tipo selvagem (por exemplo, Cas9 de S. pyogenes, supra). Em algumas modalidades, a forma modificada do polipeptídeo direcionado ao sítio não possui atividade substancial de divagem de ácido nucleico. Quando um polipeptídeo direcionado ao sítio é uma forma modificada que não possui atividade substancial de divagem de ácido nucleico, é aqui referido como enzimaticamente inativo.
[0291] Em algumas modalidades, a forma modificada do polipeptídeo direcionado ao sítio compreende uma mutação tal que possa induzir uma quebra de fita simples (SSB) em um ácido nucleico alvo (por exemplo, por corte de apenas uma das estruturas principais de açúcar-fosfato de um ácido nucleico alvo de fita dupla). Em algumas modalidades, o resultado da mutação é menor que 90%, menor que 80%, menor que 70%, menor que 60%, menor que 50%, menor que 40%, menor que 30%, menor que 20%, menos de 10%, menos de 5% ou menos de 1% da atividade de divagem de ácidos nucleicos em um ou mais da pluralidade de domínios de divagem de ácidos nucleicos do polipeptídeo direcionado ao sítio selvagem (por exemplo, Cas9 de S. pyogenes, supra). Em algumas modalidades, a mutação resulta em uma ou mais da pluralidade de domínios de divagem de ácidos nucleicos que retêm a capacidade para clivar a fita complementar do ácido nucleico alvo, mas reduzindo a sua capacidade para clivar a fita não complementar do ácido nucleico alvo. Em algumas modalidades, a mutação resulta em uma ou mais da pluralidade de domínios de divagem de ácidos nucleicos que retêm a capacidade para clivar a fita
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71/714 não complementar do ácido nucleico alvo, mas reduzindo a sua capacidade para clivar a fita complementar do ácido nucleico alvo. Por exemplo, resíduos no polipeptídeo exemplificativo de S. pyogenes Cas9 do tipo selvagem, tal como Asp10, His840, Asn854 e Asn856, são mutados para inativar um ou mais da pluralidade de domínios de divagem de ácidos nucleicos (por exemplo, domínios de nuclease). Os resíduos a serem mutados podem corresponder aos resíduos Asp10, His840, Asn854 e Asn856 no polipeptídeo Cas9 exemplificativo de tipo selvagem de S. pyogenes (por exemplo, conforme determinado pela sequência e/ou alinhamento estrutural). Exemplos não limitativos de mutações incluem D10A, H840A, N854A ou N856A. Um perito na técnica reconhecerá que outras mutações que não as substituições de alanina podem ser adequadas.
[0292] Em algumas modalidades, uma mutação D10A é combinada com uma ou mais das mutações H840A, N854A ou N856A para produzir um polipeptídeo direcionado ao sítio substancialmente sem a atividade de divagem do DNA. Em algumas modalidades, uma mutação H840A é combinada com uma ou mais das mutações D10A, N854A ou N856A para produzir um polipeptídeo direcionado ao sítio substancialmente sem a atividade de divagem do DNA. Em algumas modalidades, uma mutação N854A é combinada com uma ou mais das mutações H840A, D10A ou N856A para produzir um polipeptídeo direcionado ao sítio substancialmente sem a atividade de divagem do DNA. Em algumas modalidades, a mutação aN856A é combinada com uma ou mais das mutações H840A, N854A ou D10A para produzir um polipeptídeo direcionado ao sítio substancialmente sem a atividade de divagem do DNA. Os polipeptídeos direcionados ao sítio que compreendem um domínio de nuclease substancialmente inativo são referidos como nickases.
[0293] As variantes de nickase de endonucleases guiadas por RNA,
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72/714 por exemplo Cas9, podem ser usadas para aumentar a especificidade da edição de genoma mediada por CRISPR. O Cas9 de tipo selvagem é tipicamente guiado por um único RNA guia concebido para hibridar com uma sequência nucleotídica especificada de ~ 20 nucleotídeos na sequência alvo (tal como um locus genômico endógeno). No entanto, vários desemparelhamentos podem ser tolerados entre o RNA guia e o locus alvo, reduzindo efetivamente o comprimento da homologia necessária no sítio alvo para, por exemplo, apenas 13 nt de homologia, resultando em potencial elevado para ligação e divagem de ácido nucleico de fita dupla pelo complexo CRISPR/Cas9 em outras partes do genoma alvo - também conhecida como divagem fora do alvo. Como as variantes de nickase do Cas9 cortam apenas uma fita, para criar uma quebra de fita dupla, é necessário que um par de nickases se ligue nas proximidades e em fitas opostas do ácido nucleico alvo, criando assim um par de nicks, que é o equivalente a uma quebra de fita dupla. Isso requer que dois RNAs guia separados - um para cada nickase - se liguem muito próximos e em fitas opostas do ácido nucleico alvo. Esse requisito basicamente duplica o comprimento mínimo de homologia necessário para que a quebra de fita dupla ocorra, reduzindo assim a probabilidade de um evento de divagem de fita dupla ocorra em outro sítio do genoma, onde os dois sítios de RNA guia - se existirem - são improváveis de estar suficientemente próximos um do outro para permitir a quebra da fita dupla. Como descrito na técnica, as nickases também podem ser usadas para promover HDR versus NHEJ. A HDR pode ser usada para introduzir alterações selecionadas nos sítios alvo no genoma através do uso de sequências específicas de doadores que mediam efetivamente as alterações desejadas. As descrições de vários sistemas CRISPR/Cas para uso na edição de genes podem ser encontradas, por exemplo, no número de publicação do pedido internacional de patente WO2013/176772, e em Nature Biotechnology
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32, 347-355 (2014), e referências neles citadas.
[0294] As mutações contempladas incluem substituições, adições e deleções, ou qualquer combinação das mesmas. Em algumas modalidades, a mutação converte o aminoácido mutado em alanina. Em algumas modalidades, a mutação converte o aminoácido mutado em outro aminoácido (por exemplo, glicina, serina, treonina, cisteína, valina, leucina, isoleucina, metionina, prolina, fenilalanina, tirosina, triptofano, ácido aspártico, ácido glutâmico, asparagina, glutamina, histidina, lisina ou arginina). Em algumas modalidades, a mutação converte o aminoácido mutado em um aminoácido não natural (por exemplo, selenometionina). Em algumas modalidades, a mutação converte o aminoácido mutado em miméticos de aminoácidos (por exemplo, fosfomímicos). Em algumas modalidades, a mutação é uma mutação conservativa. Por exemplo, a mutação converte o aminoácido mutado em aminoácidos que se assemelham ao tamanho, forma, carga, polaridade, conformação e/ou rotâmeros dos aminoácidos mutados (por exemplo, mutação cisteína/serina, mutação lisina/asparagina, mutação histidina/fenilalanina). Em algumas modalidades, a mutação causa uma mudança no quadro de leitura e/ou a criação de um códon de terminação prematuro. Em algumas modalidades, as mutações causam alterações nas regiões reguladoras de genes ou sítios que afetam a expressão de um ou mais genes.
[0295] Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio (por exemplo, polipeptídeo variante, mutado, enzimaticamente inativo e/ou condicionalmente enzimaticamente inativo direcionado ao sítio) tem como alvo o ácido nucleico. Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio (por exemplo, endoribonuclease variante, mutada, enzimaticamente inativo e/ou condicionalmente enzimaticamente inativa) tem como alvo o DNA. Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio (por exemplo,
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74/714 endoribonuclease variante, mutada, enzimaticamente inativa e/ou condicionalmente enzimaticamente inativa) tem como alvo o RNA.
[0296] Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende uma ou mais sequências não nativas (por exemplo, o polipeptídeo direcionado ao sítio é uma proteína de fusão).
[0297] Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende uma sequência de aminoácidos compreendendo pelo menos 15% de identidade de aminoácidos a um Cas9 de uma bactéria (por exemplo, S. pyogenes), um domínio de ligação a ácidos nucleicos e dois domínios de divagem de ácidos nucleicos (ou seja, um domínio HNH e um domínio RuvC).
[0298] Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende uma sequência de aminoácidos compreendendo pelo menos 15% de identidade de aminoácidos a um Cas9 de uma bactéria (por exemplo, S. pyogenes), e dois domínios de divagem de ácidos nucleicos (ou seja, um domínio HNH e um domínio RuvC).
[0299] Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende uma sequência de aminoácidos compreendendo pelo menos 15% de identidade de aminoácidos a um Cas9 de uma bactéria (por exemplo, S. pyogenes), e dois domínios de divagem de ácidos nucleicos, em que um ou ambos os domínios de divagem de ácidos nucleicos compreendem pelo menos 50% de identidade de aminoácidos com um domínio de nuclease de Cas9 de uma bactéria (por exemplo, S. pyogenes).
[0300] Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende uma sequência de aminoácidos compreendendo pelo menos 15% de identidade de aminoácidos a um Cas9 de uma bactéria (por exemplo, S. pyogenes), dois domínios de divagem de ácidos nucleicos (ou seja, um domínio HNH e um domínio RuvC) e sequência não nativa (por exemplo, um sinal de localização nuclear) ou um ligante
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75/714 que liga o polipeptídeo direcionado ao sítio a uma sequência não nativa. [0301] Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende uma sequência de aminoácidos compreendendo pelo menos 15% de identidade de aminoácidos a um Cas9 de uma bactéria (por exemplo, S. pyogenes), dois domínios de divagem de ácidos nucleicos (ou seja, um domínio HNH e um domínio RuvC), em que o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende uma mutação em um ou ambos os domínios de divagem de ácido nucleico que reduz a atividade de divagem dos domínios de nuclease em pelo menos 50%.
[0302] Em algumas modalidades, o polipeptídeo direcionado ao sítio compreende uma sequência de aminoácidos compreendendo pelo menos 15% de identidade de aminoácidos a um Cas9 de uma bactéria (por exemplo, S. pyogenes), e dois domínios de divagem de ácidos nucleicos (ou seja, um domínio HNH e um domínio RuvC), em que um dos domínios da nuclease compreende a mutação do ácido aspártico 10 e/ou em que um dos domínios da nuclease compreende uma mutação da histidina 840 e em que a mutação reduz a atividade de divagem do(s) domínio(s) da(s) nuclease(s) em pelo menos 50%.
[0303] Em algumas modalidades, o um ou mais polipeptídeos direcionados ao sítio, por exemplo, endonucleases de DNA, compreende duas nickases que juntas efetuam uma quebra de fita dupla em um locus específico no genoma, ou quatro nickases que juntas afetam ou causam duas quebras de fita dupla em loci específicos do genoma. Alternativamente, um polipeptídeo direcionado ao sítio, por exemplo endonuclease de DNA, tem efeito em uma quebra de fita dupla em um locus específico no genoma.
Ácido Nucleico com Alvo no Genoma
[0304] A presente divulgação fornece um ácido nucleico com alvo no genoma que pode direcionar as atividades de um polipeptídeo associado (por exemplo, um polipeptídeo direcionado ao sítio) para uma
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76/714 sequência alvo específica dentro de um ácido nucleico alvo. O ácido nucleico com alvo no genoma pode ser um RNA. Um RNA com alvo no genoma é referido aqui como RNA guia ou gRNA. Um RNA guia compreende pelo menos uma sequência espaçadora que híbrida com uma sequência alvo de ácido nucleico de interesse e uma sequência repetida de CRISPR. Nos sistemas do Tipo II, o gRNA também compreende um segundo RNA chamado sequência tracrRNA. No RNA guia Tipo II (gRNA), a sequência de repetição CRISPR e a sequência tracrRNA hibridam entre si para formar um duplex. No RNA guia do Tipo V (gRNA), o crRNA forma um duplex. Nos dois sistemas, o duplex se liga a um polipeptídeo direcionado ao sítio, de modo que o RNA guia e o polipeptídeo direcionado ao sítio formem um complexo. Em algumas modalidades, o ácido nucleico com alvo no genoma fornece a especificidade do alvo para o complexo em virtude de sua associação com o polipeptídeo direcionado ao sítio. O ácido nucleico com alvo no genoma direciona assim a atividade do polipeptídeo direcionado ao sítio.
[0305] Os RNAs de guia exemplificativos incluem as sequências espaçadoras em SEQ ID NOs 83-158, 284-408, 458-506, 699-890, 1083-1276, 1288-1298, e 1308-1312, com a localização do genoma da sua sequência alvo e a local de corte associado à endonuclease (por exemplo, Cas9). Como é entendido pelo perito na técnica, cada RNA guia é concebido para incluir uma sequência espaçadora complementar à sua sequência alvo genômica. Por exemplo, cada uma das sequências espaçadoras em SEQ ID NOs: 83-158, 284-408, 458-506, 699-890, 1083-1276, 1288-1298 e 1308-1312 pode ser colocada em uma quimera de RNA simples ou um crRNA (junto com um tracrRNA correspondente). Ver Jinek et al., Science, 337, 816-821 (2012) e Deltcheva etal., Nature, 471,602-607 (2011).
[0306] Em algumas modalidades, o ácido nucleico com alvo no
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77/714 genoma é um RNA guia de molécula dupla. Em algumas modalidades, o ácido nucleico com alvo no genoma é um RNA guia de molécula simples.
[0307] Um RNA guia de dupla molécula compreende duas fitas de RNA. A primeira fita compreende na direção 5’ a 3', uma sequência opcional de extensão espaçadora, uma sequência espaçadora e uma sequência mínima de repetição CRISPR. A segunda fita compreende uma sequência mínima de tracrRNA (complementar à sequência mínima de repetição de CRISPR), uma sequência de tracrRNA 3’ e uma sequência de extensão opcional de tracrRNA.
[0308] Um RNA guia de molécula simples (sgRNA) em um sistema Tipo II compreende, na direção 5’ a 3', uma sequência opcional de extensão espaçadora, uma sequência espaçadora, uma sequência mínima de repetição CRISPR, um ligante guia de molécula simples, uma sequência mínima de tracrRNA, uma sequência de tracrRNA em 3’ e uma sequência de extensão opcional de tracrRNA. A extensão opcional do tracrRNA pode compreender elementos que contribuem com funcionalidade adicional (por exemplo, estabilidade) ao RNA guia. O ligante guia de molécula simples liga a repetição mínima de CRISPR e a sequência mínima de tracrRNA para formar uma estrutura em grampo. A extensão tracrRNA opcional compreende um ou mais grampos.
[0309] Um RNA guia de molécula simples (sgRNA) em um sistema Tipo V compreende, na direção 5 'a 3', uma sequência de repetição mínima de CRISPR e uma sequência espaçadora.
[0310] O sgRNA pode compreender uma sequência espaçadora de 20 nucleotídeos na extremidade 5’ da sequência de sgRNA. O sgRNA pode compreender uma sequência espaçadora menor que 20 nucleotídeos na extremidade 5’ da sequência de sgRNA. O sgRNA pode compreender uma sequência espaçadora de mais de 20 nucleotídeos na extremidade 5’ da sequência de sgRNA. O sgRNA pode
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78/714 compreender uma sequência espaçadora de comprimento variável com 17-30 nucleotídeos na extremidade 5’ da sequência de sgRNA (ver Tabela 1).
[0311] O sgRNA não pode compreender uracila na extremidade 3' da sequência de sgRNA, tal como na SEQ ID NO: 1 da Tabela 1. O sgRNA pode compreender uma ou mais uracilas na extremidade 3' da sequência de sgRNA, tal como nas SEQ ID NOs: 1,2 ou 3 na Tabela 1. Por exemplo, o sgRNA pode compreender 1 uracila (U) na extremidade 3' da sequência de sgRNA. O sgRNA pode compreender 2 uracilas (UU) na extremidade 3' da sequência de sgRNA. O sgRNA pode compreender 3 uracilas (UUU) na extremidade 3' da sequência de sgRNA. O sgRNA pode compreender 4 uracilas (UUUU) na extremidade 3' da sequência de sgRNA. O sgRNA pode compreender 5 uracilas (UUUUU) na extremidade 3' da sequência de sgRNA. O sgRNA pode compreender 6 uracilas (UUUUUU) na extremidade 3' da sequência de sgRNA. O sgRNA pode compreender 7 uracilas (UUUUUUU) na extremidade 3' da sequência de sgRNA. O sgRNA pode compreender 8 uracilas (UUUUUUUU) na extremidade 3' da sequência de sgRNA.
[0312] O sgRNA pode ser não modificado ou modificado. Por exemplo, os sgRNAs modificados podem compreender um ou mais nucleotídeos de 2'-O-metil fosforotioato.
Tabela 1
SEQ ID NO. Sequência sgRNA
1 nnnnnnnnnnnnnnnnnnnnguuuuagagcuagaaauagcaaguuaaaaua aggcuaguccguuaucaacuugaaaaaguggcaccgagucggugcuuuu
2 nnnnnnnnnnnnnnnnnnnnguuuuagagcuagaaauagcaaguuaaaaua aggcuaguccguuaucaacuugaaaaaguggcaccgagucggugc
3 n(17-30)guuuuagagcuagaaauag caag u u aaaau aag g cu ag u ccg u u au caacu ug aaaaag u ggcaccgagucggugcu(1 -8)
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[0313] A título ilustrativo, os RNAs guia usados no sistema CRISPR/Cas/Cpf1 ou outros RNAs menores podem ser facilmente sintetizados por meios químicos, tal como ilustrado abaixo e descrito na técnica. Embora os procedimentos químicos sintéticos estejam em constante expansão, a purificação desses RNAs por procedimentos como a cromatografia líquida de alta performance (HPLC, que evita o uso de géis como o PAGE) tende a se tornar mais desafiadora, pois os comprimentos dos polinucleotídeos aumentam significativamente além de cem nucleotídeos. Uma abordagem usada para gerar RNAs de maior comprimento é produzir duas ou mais moléculas que são ligadas entre si. RNAs muito mais longos, como os que codificam uma endonuclease Cas9 ou Cpf1, são mais facilmente gerados enzimaticamente. Vários tipos de modificações de RNA podem ser introduzidos durante ou após a síntese química e/ou geração enzimática de RNAs, por exemplo, modificações que aumentam a estabilidade, reduzem a probabilidade ou o grau de resposta imune inata e/ou melhoram outros atributos, conforme descrito na técnica.
Sequência de Extensão do Espaçador
[0314] Em alguns exemplos de ácidos nucleicos com alvo no genoma, uma sequência de extensão espaçadora pode modificar a atividade, fornecer estabilidade e/ou fornecer um local para modificações de um ácido nucleico com alvo no genoma. Uma sequência de extensão espaçadora pode modificar a atividade ou especificidade dentro ou fora do alvo. Em algumas modalidades, é fornecida uma sequência de extensão espaçadora. Uma sequência de extensão espaçadora pode ter um comprimento de mais de 1,5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 220, 240, 260, 280, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, ou 7000ou mais nucleotídeos. A sequência de extensão espaçadora pode ter um comprimento menor que 1,5, 10, 15,
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20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 220, 240, 260, 280, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000 ou mais nucleotídeos. Em algumas modalidades, a sequência de extensão espaçadora tem menos de 10 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de extensão espaçadora está entre 10-30 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de extensão espaçadora está entre 30-70 nucleotídeos de comprimento.
[0315] Em algumas modalidades, a sequência de extensão espaçadora compreende uma outra porção (por exemplo, uma sequência de controle de estabilidade, uma sequência de ligação de endorribonuclease, uma ribozima). Em algumas modalidades, a porção diminui ou aumenta a estabilidade de um ácido nucleico com alvo em ácido nucleico. Em algumas modalidades, a porção é um segmento de terminação de transcrição (isto é, uma sequência de terminação de transcrição). Em algumas modalidades, a porção funciona em uma célula eucariótica. Em algumas modalidades, a porção funciona em uma célula procariótica. Em algumas modalidades, a porção funciona em ambas as células procarióticas e eucarióticas. Exemplos não limitativos de porções adequadas incluem: uma cap 5’ (por exemplo, uma cap de 7-metilguanilato (m7 G)), uma sequência de riboswitch (por exemplo, para permitir estabilidade regulada e/ou acessibilidade regulada por proteínas e complexos de proteínas), uma sequência que forma um dsRNA duplex (isto é, um grampo), uma sequência que tem como alvo o RNA para uma localização subcelular (por exemplo, núcleo, mitocôndrias, cloroplastos e similares), uma modificação ou sequência que fornece rastreamento (por exemplo, conjugação direta com uma molécula fluorescente, conjugação com uma porção que facilita a detecção fluorescente, uma sequência que permite a detecção fluorescente etc.) e/ou uma modificação ou sequência que fornece um
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81/714 sítio de ligação para proteínas (por exemplo, proteínas que atuam no DNA, incluindo ativadores da transcrição, repressores da transcrição, metiltransferases de DNA, desmetilases de DNA, acetiltransferases de histonas, desacetilases de histonas e similares).
Sequência espaçadora
[0316] Um gRNA compreende uma sequência espaçadora. Uma sequência de espaçador é uma sequência (por exemplo, uma sequência de 20 pares de base) que define a sequência alvo (por exemplo, uma sequência de DNA alvo, tal como uma sequência alvo genômico) de um ácido nucleico alvo de interesse. A sequência alvo é adjacente a uma sequência PAM e é a sequência modificada por uma nuclease guiada por RNA (por exemplo, Cas9). O ácido nucleico alvo é uma molécula de fita dupla: uma fita compreende a sequência alvo e é referida como a fita PAM, e a outra fita complementar é conhecida como a fita não PAM. Um perito na técnica reconhece que a sequência espaçadora de gRNA híbrida com o complemento reverso da sequência alvo, o qual está localizado na fita não PAM do ácido nucleico alvo de interesse. Assim, a sequência espaçadora de gRNA é o equivalente de RNA da sequência alvo. Por exemplo, se a sequência alvo é 5'AGAGCAACAGTGCTGTGGCC-3' (SEQ ID NO: 76), então a sequência espaçadora de gRNA é 5'-AGAGCAACAGUGCUGUGGCC-3' (SEQ ID NO: 152). O espaçador de um gRNA interage com um ácido nucleico alvo de interesse de uma maneira específica de sequência via hibridação (isto é, emparelhamento de bases). A sequência de nucleotídeos do espaçador varia, portanto, dependendo da sequência alvo do ácido nucleico alvo de interesse.
[0317] Em um sistema CRISPR/Cas aqui descrito, a sequência espaçadora é concebida para hibridar com uma região do ácido nucleico alvo que está localizada a 5’ de um PAM da enzima Cas9 usada no sistema. O espaçador pode corresponder perfeitamente à sequência
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82/714 alvo ou pode ter desemparelhamentos. Cada enzima Cas9 possui uma sequência PAM específica que reconhece um DNA alvo. Por exemplo, S. pyogenes reconhece em um ácido nucleico alvo um PAM que compreende a sequência 5'-NRG-3', em que R compreende A ou G, onde N é qualquer nucleotídeo e N é imediatamente 3' da sequência alvo de ácido nucleico alvo da sequência espaçadora.
[0318] Em algumas modalidades, a sequência de ácido nucleico alvo compreende 20 nucleotídeos. Em algumas modalidades, o ácido nucleico alvo compreende menos de 20 nucleotídeos. Em algumas modalidades, o ácido nucleico alvo compreende mais de 20 nucleotídeos. Em algumas modalidades, o ácido nucleico alvo compreende pelo menos: 5, 10, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30 ou mais nucleotídeos. Em algumas modalidades, o ácido nucleico alvo compreende no máximo: 5, 10, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30 ou mais nucleotídeos. Em algumas modalidades, a sequência de ácido nucleico alvo compreende 20 bases imediatamente 5’ do primeiro nucleotídeo de PAM. Por exemplo, em uma sequência compreendendo 5'-NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNRG-3', o ácido nucleico alvo compreende a sequência que corresponde a Ns, em que N é qualquer nucleotídeo e a sequência NRG sublinhada é PAM de S. pyogenes.
[0319] Em algumas modalidades, a sequência espaçadora que híbrida com o ácido nucleico alvo tem um comprimento de pelo menos cerca de 6 nucleotídeos (nt). A sequência espaçadora pode ser pelo menos cerca de 6 nt, pelo menos cerca de 10 nt, pelo menos cerca de 15 nt, pelo menos cerca de 18 nt, pelo menos cerca de 19 nt, pelo menos cerca de 20 nt, pelo menos cerca de 25 nt, pelo menos cerca de 30 nt, pelo menos cerca de 35 nt ou pelo menos cerca de 40 nt, de cerca de 6 nt a cerca de 80 nt, de cerca de 6 nt a cerca de 50 nt, de cerca de 6 nt a cerca de 45 nt, de cerca de 6 nt a cerca de 40 nt, de cerca de 6 nt a
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83/714 cerca de 35 nt, de cerca de 6 nt a cerca de 30 nt, de cerca de 6 nt a cerca de 25 nt, de cerca de 6 nt a cerca de 20 nt, de cerca de 6 nt a cerca de 19 nt, de cerca de 10 nt a cerca de 50 nt, de cerca de 10 nt a cerca de 45 nt, de cerca de 10 nt a cerca de 40 nt, de cerca de 10 nta cerca de 35 nt, de cerca de 10 nt a cerca de 30 nt, de cerca de 10 nta cerca de 25 nt, de cerca de 10 nt a cerca de 20 nt, de cerca de 10 nta cerca de 19 nt, de cerca de 19 nt a cerca de 25 nt, de cerca de 19 nta cerca de 30 nt, de cerca de 19 nt a cerca de 35 nt, de cerca de 19 nta cerca de 40 nt, de cerca de 19 nt a cerca de 45 nt, de cerca de 19 nta cerca de 50 nt, de cerca de 19 nt a cerca de 60 nt, de cerca de 20 nta cerca de 25 nt, de cerca de 20 nt a cerca de 30 nt, de cerca de 20 nta cerca de 35 nt, de cerca de 20 nt a cerca de 40 nt, de cerca de 20 nta cerca de 45 nt, de cerca de 20 nt a cerca de 50 nt, ou de cerca de 20 nt a cerca de 60 nt. Em algumas modalidades, a sequência de espaçador compreende 20 nucleotídeos. Em algumas modalidades, o espaçador compreende 19 nucleotídeos.
[0320] Em algumas modalidades, a complementaridade percentual entre a sequência espaçadora e o ácido nucleico alvo é de pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 40%, pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 65%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99% ou 100%. Em algumas modalidades, a complementaridade percentual entre a sequência espaçadora e o ácido nucleico alvo é no máximo cerca de 30%, no máximo cerca de 40%, no máximo cerca de 50%, no máximo cerca de 60%, no máximo cerca de 65%, no máximo cerca de 70%, no máximo cerca de 75%, no máximo cerca de 80%, no máximo cerca de 85%, no máximo cerca de 90%, no máximo cerca de 95%, no máximo cerca de 97%, no máximo cerca de
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98%, no máximo cerca de 99% ou 100%. Em algumas modalidades, a complementaridade percentual entre a sequência espaçadora e o ácido nucleico alvo é de 100% sobre os seis nucleotídeos 5'-contíguos da sequência alvo da fita complementar do ácido nucleico alvo. Em algumas modalidades, a complementaridade percentual entre a sequência espaçadora e o ácido nucleico alvo é de pelo menos 60% em cerca de 20 nucleotídeos contíguos. Em algumas modalidades, o comprimento da sequência espaçadora e o ácido nucleico alvo diferem por 1 a 6 nucleotídeos, que podem ser pensados como uma protuberância ou protuberâncias.
[0321] Em algumas modalidades, a sequência espaçadora pode ser concebida usando um programa de computador. O programa de computador pode usar variáveis, tal como temperatura de fusão prevista, formação de estrutura secundária, temperatura de anelamento prevista, identidade de sequência, contexto genômico, acessibilidade da cromatina, % GC, frequência de ocorrência genômica (por exemplo, de sequências idênticas ou similares, mas variam em um ou mais pontos como resultado de desemparelhamento, inserção ou deleção), estado de metilação, presença de SNPs e similares.
Sequência de Repetição Mínima de CRISPR
[0322] Em algumas modalidades, uma sequência de repetição mínima de CRISPR é uma sequência com pelo menos cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de repetição de CRISPR de referência (por exemplo, crRNA de S. pyogenes).
[0323] Uma sequência de repetição mínima de CRISPR compreende nucleotídeos que podem hibridar com uma sequência mínima de tracrRNA em uma célula. A sequência de repetição mínima
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85/714 de CRISPR e uma sequência mínima de tracrRNA formam um duplex, isto é, uma estrutura de fita dupla emparelhada com base. Juntas, a sequência de repetição minima de CRISPR e a sequência minima de tracrRNA se ligam ao polipeptídeo direcionado ao sítio. Pelo menos uma parte da sequência de repetição mínima de CRISPR híbrida com a sequência mínima de tracrRNA. Em algumas modalidades, pelo menos uma parte da sequência de repetição mínima de CRISPR compreende pelo menos cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95% ou 100% complementar à sequência mínima de tracrRNA. Em algumas modalidades, pelo menos uma parte da sequência de repetição mínima de CRISPR compreende no máximo cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95% ou 100% complementar à sequência mínima de tracrRNA.
[0324] A sequência de repetição mínima de CRISPR pode ter um comprimento de cerca de 7 nucleotídeos a cerca de 100 nucleotídeos. Por exemplo, o comprimento da sequência de repetição mínima de CRISPR é de cerca de 7 nucleotídeos (nt) a cerca de 50 nt, de cerca de 7 nt a cerca de 40 nt, de cerca de 7 nt a cerca de 30 nt, de cerca de 7 nt a cerca de 25 nt, de cerca de 7 nt a cerca de 20 nt, de cerca de 7 nt a cerca de 15 nt, de cerca de 8 nt a cerca de 40 nt, de cerca de 8 nt a cerca de 30 nt, de cerca de 8 nt a cerca de 25 nt, de cerca de 8 nt a cerca de 20 nt, de cerca de 8 nt a cerca de 15 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 100 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 80 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 50 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 40 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 30 nt, ou de cerca de 15 nt a cerca de 25 nt. Em algumas modalidades, a sequência de repetição mínima de CRISPR é de aproximadamente 9 nucleotídeos de comprimento. Em algumas
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86/714 modalidades, a sequência de repetição mínima de CRISPR é de aproximadamente 12 nucleotídeos de comprimento.
[0325] Em algumas modalidades, a sequência de repetição mínima de CRISPR é pelo menos cerca de 60% idêntica a uma sequência de repetição mínima de CRISPR de referência (por exemplo, crRNA de tipo selvagem de S. pyogenes) ao longo de um trecho de pelo menos 6, 7 ou 8 nucleotídeos contíguos. Por exemplo, a sequência de repetição mínima de CRISPR é pelo menos cerca de 65% idêntica, pelo menos cerca de 70% idêntica, pelo menos cerca de 75% idêntica, pelo menos cerca de 80% idêntica, pelo menos cerca de 85% idêntica, pelo menos cerca de 90% idêntica, pelo menos cerca de 95% idêntica, pelo menos cerca de 98% idêntica, pelo menos cerca de 99% idêntica ou 100% idêntica a uma sequência de repetição mínima de CRISPR de referência ao longo de um trecho de pelo menos 6, 7 ou 8 nucleotídeos contíguos.
Sequência Mínima de tracrRNA
[0326] Em algumas modalidades, uma sequência mínima de tracrRNA é uma sequência com pelo menos cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de tracrRNA de referência (por exemplo, tracrRNA de tipo selvagem de S. pyogenes).
[0327] Uma sequência mínima de tracrRNA compreende nucleotídeos que hibridam com uma sequência de repetição mínima de CRISPR em uma célula. Uma sequência mínima de tracrRNA e uma sequência mínima de repetição de CRISPR formam um duplex, isto é, uma estrutura de fita dupla emparelhada com base. Juntas, a sequência mínima de tracrRNA e a repetição mínima de CRISPR se ligam a um polipeptídeo direcionado ao sítio. Pelo menos uma parte da sequência mínima de tracrRNA pode hibridar com a sequência de repetição mínima de CRISPR. Em algumas modalidades, a sequência mínima de
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87/714 tracrRNA é pelo menos cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de
80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95% ou 100% complementar à sequência de repetição mínima de CRISPR.
[0328] A sequência mínima de tracrRNA pode ter um comprimento de cerca de 7 nucleotídeos a cerca de 100 nucleotídeos. Por exemplo, a sequência mínima de tracrRNA pode ser de cerca de 7 nucleotídeos (nt) a cerca de 50 nt, de cerca de 7 nt a cerca de 40 nt, de cerca de 7 nt a cerca de 30 nt, de cerca de 7 nt a cerca de 25 nt, de cerca de 7 nt cerca de 20 nt, de cerca de 7 nt cerca de 15 nt, de cerca de 8 nt cerca de 40 nt, de cerca de 8 nt cerca de 30 nt, de cerca de 8 nt cerca de 25 nt, de cerca de 8 nt cerca de 20 nt, de cerca de 8 nt cerca de 15 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 100 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 80 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 50 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 40 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 30 nt, ou de cerca de 15 nt a cerca de 25 nt de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência mínima de tracrRNA tem aproximadamente 9 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência mínima de tracrRNA tem aproximadamente 12 nucleotídeos. Em algumas modalidades, o tracrRNA mínimo consiste em tracrRNA nt 23-48 descrito em Jinek etal., supra.
[0329] Em algumas modalidades, a sequência mínima de tracrRNA é pelo menos cerca de 60% idêntica a uma sequência mínima de referência de tracrRNA (por exemplo, tipo selvagem, tracrRNA de S. pyogenes) ao longo de um trecho de pelo menos 6, 7 ou 8 nucleotídeos contíguos. Por exemplo, a sequência mínima de tracrRNA é, pelo menos, cerca de 65% idêntica, cerca de 70% idêntica, cerca de 75% idêntica, cerca de 80% idêntica, cerca de 85% idêntica, cerca de 90% idêntica, cerca de 95% idêntica, cerca de 98% idêntica, cerca de 99% idêntica ou 100% idêntica a uma sequência mínima de referência de
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88/714 tracrRNA ao longo de um trecho de pelo menos 6, 7 ou 8 nucleotídeos contíguos.
[0330] Em algumas modalidades, o duplex entre o RNA CRISPR mínimo e o tracrRNA mínimo compreende uma dupla hélice. Em algumas modalidades, o duplex entre o RNA CRISPR mínimo e o tracrRNA mínimo compreende pelo menos cerca de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10ou mais nucleotídeos. Em algumas modalidades, o duplex entre o RNA CRISPR mínimo e o tracrRNA mínimo compreende no máximo cerca de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10ou mais nucleotídeos.
[0331] Em algumas modalidades, o duplex compreende um desemparelhado (isto é, as duas fitas do duplex não são 100% complementares). Em algumas modalidades, o duplex compreende pelo menos cerca de 1, 2, 3, 4 ou 5 ou desemparelhamentos. Em algumas modalidades, o duplex compreende no máximo cerca de 1,2, 3, 4 ou 5 ou desemparelhamentos. Em algumas modalidades, o duplex compreende não mais do que 2 desemparelhamentos.
Protuberâncias
[0332] Em algumas modalidades, existe uma protuberância no duplex entre o CRISPR RNA mínimo e o tracrRNA mínimo. Uma protuberância é uma região não emparelhada de nucleotídeos dentro do duplex. Em algumas modalidades, a protuberância contribui para a ligação do duplex ao polipeptídeo direcionado ao sítio. Em algumas modalidades, a protuberância compreende, em um lado do duplex, um 5'-XXXY-3’ não emparelhado, onde X é qualquer purina e Y compreende um nucleotídeo que pode formar um par oscilável com um nucleotídeo na fita oposta, e uma região nucleotídica não emparelhada do outro lado do duplex. O número de nucleotídeos não emparelhados nos dois lados do duplex pode ser diferente.
[0333] Em algumas modalidades, a protuberância compreende uma purina não emparelhada (por exemplo, adenina) na fita de repetição
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89/714 mínima CRISPR da protuberância. Em algumas modalidades, a protuberância compreende um 5'-AAGY-3’ da fita de sequência tracrRNA mínima da protuberância, em que Y compreende um nucleotídeo que pode formar um emparelhamento oscilante com um nucleotídeo na fita de repetição mínima de CRISPR.
[0334] Em algumas modalidades, uma protuberância no lado de repetição mínima de CRISPR do duplex compreende pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 ou mais nucleotídeos não emparelhados. Em algumas modalidades, uma protuberância no lado de repetição mínima de CRISPR do duplex compreende no máximo 1, 2, 3, 4 ou 5 ou mais nucleotídeos não emparelhados. Em algumas modalidades, uma protuberância no lado de repetição mínima de CRISPR do duplex compreende 1 nucleotídeo não emparelhado.
[0335] Em algumas modalidades, uma protuberância no lado mínimo da sequência de tracrRNA do duplex compreende pelo menos 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 ou mais nucleotídeos não emparelhados. Em algumas modalidades, uma protuberância no lado mínimo da sequência de tracrRNA do duplex compreende no máximo 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 ou mais nucleotídeos não emparelhados. Em algumas modalidades, uma protuberância em um segundo lado do duplex (por exemplo, o lado mínimo da sequência tracrRNA do duplex) compreende 4 nucleotídeos não emparelhados.
[0336] Em algumas modalidades, uma protuberância compreende pelo menos um emparelhamento de oscilação. Em algumas modalidades, uma protuberância compreende no máximo um emparelhamento de oscilação. Em algumas modalidades, uma protuberância compreende pelo menos um nucleotídeo de purina. Em algumas modalidades, uma protuberância compreende pelo menos 3 nucleotídeos de purina. Em algumas modalidades, uma sequência de protuberância compreende pelo menos 5 nucleotídeos de purina. Em
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90/714 algumas modalidades, uma sequência de protuberância compreende pelo menos um nucleotídeo de guanina. Em algumas modalidades, uma sequência de protuberância compreende pelo menos um nucleotídeo de adenina.
Grampos
[0337] Em várias modalidades, um ou mais grampos estão localizados a 3’ do tracrRNA mínimo na sequência do tracrRNA 3'.
[0338] Em algumas modalidades, o grampo começa a, pelo menos, cerca de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10,15, ou 20 ou mais nucleotídeos 3' a partir do último nucleotídeo emparelhado na sequência duplex de repetição mínima CRISPR e tracrRNA mínimo. Em algumas modalidades, o grampo começa no máximo cerca de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 ou mais nucleotídeos 3’ a partir do último nucleotídeo emparelhado na sequência duplex de repetição mínima CRISPR e tracrRNA mínimo.
[0339] Em algumas modalidades, o grampo compreende pelo menos cerca de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10,15, ou 20ou mais nucleotídeos consecutivos. Em algumas modalidades, o grampo compreende no máximo a cerca de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8,9, 10, 15 ou mais nucleotídeos consecutivos.
[0340] Em algumas modalidades, o grampo compreende um dinucleotídeo CC (isto é, dois nucleotídeos de citosina consecutivos).
[0341] Em algumas modalidades, o grampo compreende nucleotídeos duplexados (por exemplo, nucleotídeos em um grampo, hibridizados juntos). Por exemplo, um grampo compreende um dinucleotídeo CC que é hibridizado com um dinucleotídeo GG em um duplex em grampo da sequência em tracrRNA em 3'.
[0342] Um ou mais grampos podem interagir com as regiões que interagem com o RNA guia de um polipeptídeo direcionado ao sítio.
[0343] Em algumas modalidades, existem dois ou mais grampos e
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91/714 em outras modalidades existem três ou mais grampos.
Sequência de tracrRNA em 3’
[0344] Em algumas modalidades, uma sequência de tracrRNA em 3’ compreende uma sequência com pelo menos cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95% ou
100% de identidade de sequência com uma sequência de tracrRNA de referência (por exemplo, tracrRNA de S. pyogenes).
[0345] A sequência de tracrRNA em 3’ tem um comprimento de cerca de 6 nucleotídeos a cerca de 100 nucleotídeos. Por exemplo, a sequência de tracrRNA em 3’ tem um comprimento de cerca de 6 nucleotídeos (nt) a cerca de 50 nt, de cerca de 6 nt a cerca de 40 nt, de cerca de 6 nt cerca de 6 nt cerca de 8 nt cerca de 8 nt a cerca de 30 a cerca de 20 a cerca de 40 a cerca de 25 nt, de cerca nt, de cerca nt, de cerca nt, de cerca de 6 nt a cerca de 6 nt a cerca de 8 nt a cerca de 8 nt a cerca de 25 nt, de de 15 nt, de de 30 nt, de de 20 nt, de cerca de 8 nt a cerca de 15 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 100 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 80 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 50 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 40 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 30 nt, ou de cerca de 15 nt a cerca de 25 nt. Em algumas modalidades, a sequência de tracrRNA em 3' tem um comprimento de aproximadamente 14 nucleotídeos.
[0346] Em algumas modalidades, a sequência de tracrRNA em 3’ é pelo menos cerca de 60% idêntica a uma sequência de referência de tracrRNA em 3’ (por exemplo, sequência de tracrRNA em 3’ do tipo selvagem, de S. pyogenes) ao longo de um trecho de pelo menos 6, 7 ou 8 nucleotídeos contíguos. Por exemplo, a sequência de tracrRNA em 3’ é pelo menos cerca de 60% idêntica, cerca de 65% idêntica, cerca de 70% idêntica, cerca de 75% idêntica, cerca de 80% idêntica, cerca de 85% idêntica, cerca de 90% idêntica, cerca de 95% idêntica, cerca de
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98% idêntica, cerca de 99% idêntica ou 100% idêntica a uma sequência de tracrRNA em 3’ de referência (por exemplo, sequência de tracrRNA em 3’ do tipo selvagem, de S. pyogenes), ao longo de um trecho de pelo menos 6, 7 ou 8 nucleotídeos contíguos.
[0347] Em algumas modalidades, a sequência de tracrRNA em 3’ compreende mais de uma região duplexada (por exemplo, grampo, região hibridada). Em algumas modalidades, a sequência de tracrRNA em 3’ compreende duas regiões duplexadas.
[0348] Em algumas modalidades, a sequência de tracrRNA em 3’ compreende uma estrutura em laço-haste. Em algumas modalidades, a estrutura em laço-haste no tracrRNA 3’ compreende pelo menos 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15 ou 20 ou mais nucleotídeos. Em algumas modalidades, a estrutura em laço-haste no tracrRNA 3’ compreende no máximo 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 ou mais nucleotídeos. Em algumas modalidades, a estrutura em laço-haste compreende uma porção funcional. Por exemplo, a estrutura em laço-haste pode compreender um aptâmero, uma ribozima, um grampo que interage com proteínas, um arranjoCRISPR, um íntron ou um éxon. Em algumas modalidades, a estrutura em laço-haste compreende pelo menos cerca de 1, 2, 3, 4 ou 5 ou mais porções funcionais. Em algumas modalidades, a estrutura em laço-haste compreende no máximo cerca de 1,2, 3, 4 ou 5 ou mais porções funcionais.
[0349] Em algumas modalidades, o laço na sequência tracrRNA em 3’ compreende um domínio-P. Em algumas modalidades, o domínio P compreende uma região de fita dupla no grampo.
Sequência de Extensão de tracrRNA
[0350] Em algumas modalidades, uma sequência de extensão de tracrRNA é fornecida se o tracrRNA está no contexto de guias de molécula simples ou guias de molécula dupla. Em algumas modalidades, a sequência de extensão do tracrRNA tem um
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93/714 comprimento de cerca de 1 nucleotídeo a cerca de 400 nucleotídeos. Em algumas modalidades, a sequência de extensão do tracrRNA tem um comprimento superior a 1,5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 220, 240, 260, 280, 300, 320, 340, 360, 380, ou 400nucleotídeos. Em algumas modalidades, a sequência de extensão do tracrRNA tem um comprimento de cerca de 20 a cerca de 5000 ou mais nucleotídeos. Em algumas modalidades, a sequência de extensão do tracrRNA tem um comprimento de mais de 1000 nucleotídeos. Em algumas modalidades, a sequência de extensão do tracrRNA tem um comprimento menor que 1,5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 220, 240, 260, 280, 300, 320, 340, 360, 380, 400 ou mais nucleotídeos. Em algumas modalidades, a sequência de extensão do tracrRNA tem um comprimento de menos de 1000 nucleotídeos. Em algumas modalidades, a sequência de extensão do tracrRNA compreende menos de 10 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de extensão do tracrRNA tem 10-30 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de extensão do tracrRNA tem 30-70 nucleotídeos de comprimento.
[0351] Em algumas modalidades, a sequência de extensão do tracrRNA compreende um fragmento funcional (por exemplo, uma sequência de controle de estabilidade, ribozima, sequência de ligação a endorribonuclease). Em algumas modalidades, a porção funcional compreende um segmento de terminação de transcrição (ou seja, uma sequência de terminação da transcrição). Em algumas modalidades, a porção funcional tem um comprimento total de cerca de 10 nucleotídeos (nt) a cerca de 100 nucleotídeos, de cerca de 10 nt a cerca de 20 nt, de cerca de 20 nt a cerca de 30 nt, de cerca de 30 nt a cerca de 40 nt,de cerca de 40 nt a cerca de 50 nt, de cerca de 50 nt a cerca de 60 nt,de cerca de 60 nt a cerca de 70 nt, de cerca de 70 nt a cerca de 80 nt,de
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94/714 cerca de 80 nt a cerca de 90 nt, ou de cerca de 90 nt a cerca de 100 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 80 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 50 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 40 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 30 nt, ou de cerca de 15 nt a cerca de 25 nt. Em algumas modalidades, a porção funcional funciona em uma célula eucariótica. Em algumas modalidades, a porção funcional funciona em uma célula procariótica. Em algumas modalidades, a porção funcional funciona em ambas as células procarióticas e eucarióticas.
[0352] Exemplos não limitativos de porções funcionais de extensão de tracrRNA adequadas incluem uma cauda poliadenilada 3', uma sequência de riboswitch (por exemplo, para permitir estabilidade regulada e/ou acessibilidade regulada por proteínas e complexos de proteínas), uma sequência que forma um dsRNA duplex (isto é, um grampo), uma sequência que tem como alvo o RNA para uma localização subcelular (por exemplo, núcleo, mitocôndrias, cloroplastos e similares), uma modificação ou sequência que fornece rastreamento (por exemplo, conjugação direta com uma molécula fluorescente, conjugação com uma porção que facilita a detecção fluorescente, uma sequência que permite a detecção fluorescente etc.) e/ou uma modificação ou sequência que fornece um sítio de ligação para proteínas (por exemplo, proteínas que atuam no DNA, incluindo ativadores da transcrição, repressores da transcrição, metiltransferases de DNA, desmetilases de DNA, acetiltransferases de histonas, desacetilases de histonas e similares). Em algumas modalidades, a sequência de extensão do tracrRNA compreende um sítio de ligação do iniciador ou um índice molecular (por exemplo, sequência de código de barras). Em algumas modalidades, a sequência de extensão do tracrRNA compreende um ou mais marcadores de afinidade.
Sequência do Ligante Guia de Molécula Simples
[0353] Em algumas modalidades, a sequência de ligante de um
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95/714 ácido nucleico guia de molécula simples tem um comprimento de cerca de 3 nucleotídeos a cerca de 100 nucleotídeos. Em Jinek et al., supra, por exemplo, foi utilizado um tetra-laço simples de 4 nucleotídeos (GAAA-), Science, 337(6096):816-821 (2012). Um ligante ilustrativo tem um comprimento de cerca de 3 nucleotídeos (nt) a cerca de 90 nt, de cerca de 3 nt a cerca de 80 nt,de cerca de 3 nt a cerca de 60 nt,de cerca de 3 nt a cerca de 40 nt,de cerca de 3 nt a cerca de 70 nt,de cerca de 3 nt a cerca de 50 nt,de cerca de 3 nt a cerca de 30 nt,de cerca de 3 nt a cerca de 20 nt, de cerca de 3 nt a cerca de 10 nt. Por exemplo, o ligante pode ter um comprimento de cerca de 3 nt a cerca de 5 nt, de cerca de 5 nt a cerca de 10 nt, de cerca de 10 nt a cerca de 15 nt, de cerca de 15 nt a cerca de 20 nt, de cerca de 20 nt a cerca de nt, de cerca de 25 nt a cerca de 30 nt, de cerca de 30 nt a cerca de nt, de cerca de 35 nt a cerca de 40 nt, de cerca de 40 nt a cerca de nt, de cerca de 50 nt a cerca de 60 nt, de cerca de 60 nt a cerca de nt, de cerca de 70 nt a cerca de 80 nt, de cerca de 80 nt a cerca de nt, ou de cerca de 90 nt a cerca de 100 nt. Em algumas modalidades, o ligante de um ácido nucleico guia de molécula simples está entre 4 e nucleotídeos. Em algumas modalidades, o ligante é pelo menos cerca de 100, 500, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500 ou 7000 ou mais nucleotídeos. Em algumas modalidades, o ligante é no máximo cerca de 100, 500, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500 ou 7000 ou mais nucleotídeos.
[0354] Os ligantes compreendem qualquer uma de uma variedade de sequências, embora em alguns exemplos o ligante não compreenda sequências que possuem extensas regiões de homologia com outras porções do RNA guia, o que pode causar ligação intramolecular que pode interferir com outras regiões funcionais do guia. Em Jinek et al., supra, foi utilizada uma sequência simples de 4 nucleotídeos -GAAA-,
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Science, 337(6096):816-821 (2012), mas inúmeras outras sequências, incluindo sequências mais longas, podem igualmente ser usadas.
[0355] Em algumas modalidades, a sequência do ligante compreende uma porção funcional. Por exemplo, a sequência do ligante pode compreender um ou mais elementos, incluindo um aptâmero, uma ribozima, um grampo que interage com a proteína, um sítio de ligação à proteína, um arranjo CRISPR, um intron ou um éxon. Em algumas modalidades, a sequência do ligante compreende pelo menos cerca de 1,2, 3, 4 ou 5 ou mais porções funcionais. Em algumas modalidades, a sequência do ligante compreende no máximo cerca de 1,2, 3, 4 ou 5 ou mais porções funcionais.
Estratégias de manipulação do genoma para editar células por deleção, inserção ou modulação de um ou mais ácidos nucleicos ou éxons dentro ou perto de um gene alvo, e ativação (knockingin) do cDNA, um vetor de expressão ou minigene no locus do gene alvo correspondente
[0356] Algumas estratégias de manipulação do genoma envolvem a deleção do DNA alvo e/ou cDNA de inserção, vetor de expressão ou um minigene (composto por um ou mais éxons e introns ou introns naturais ou sintéticos) e/ou knocking-in um cDNA interrompido por alguns ou todos os introns alvo no locus do gene correspondente. Essas estratégias tratam e/ou mitigam o estado de doença. Essas estratégias podem exigir uma abordagem mais personalizada. Isto é vantajoso, pois as eficiências de HDR podem estar inversamente relacionadas ao tamanho da molécula doadora. Além disso, espera-se que os modelos doadores possam encaixar-se em moléculas de vetor viral de tamanho restrito, por exemplo, moléculas de vírus adenoassociado (AAV), que têm mostrado ser um meio eficaz de entrega de modelo doador. Além disso, espera-se que os modelos doadores possam caber em outras moléculas de tamanho restrito, incluindo, a título de exemplo não
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97/714 limitativo, plaquetas e/ou exossomos ou outras microvesiculas.
[0357] A reparação direcionada por homologia é um mecanismo celular para reparação de quebras de fita dupla (DSBs). A forma mais comum é a recombinação homóloga. Existem vias adicionais para HDR, incluindo anelamento de fita simples e HDR alternativa. As ferramentas de manipulação do genoma permitem que os investigadores manipulem as vias de recombinação celular homólogas para criar modificações específicas do sítio no genoma. Verificou-se que as células podem reparar uma quebra de fita dupla usando uma molécula doadora sintética fornecida em trans. Portanto, introduzindo uma quebra de fita dupla perto de uma mutação específica e fornecendo um doador adequado, podem ser feitas alterações direcionadas no genoma. A divagem específica aumenta a taxa de HDR mais de 1.000 vezes acima da taxa de 1 em 106 células que recebem apenas um doador homólogo. A taxa de reparação direcionada por homologia (HDR) em um nucleotídeo específico é uma função da distância do sítio de corte, portanto, é importante escolher sítios alvo sobrepostos ou mais próximos. A edição de genes oferece a vantagem sobre a adição de genes, pois a correção in situ deixa o resto do genoma imperturbável.
[0358] Os doadores fornecidos para edição por HDR variam acentuadamente, mas geralmente contêm a sequência pretendida com braços de homologia flanqueadores pequenos ou grandes para permitir o anelamento no DNA genômico. As regiões de homologia flanqueiam as alterações genéticas introduzidas podem ser de 30 pb ou menor ou tão grande como um cassete de multiquiilobase que pode conter promotores, cDNAs, etc. Ambos doadores de oligonucleotídeos de fita simples e de fita dupla foram utilizados. Esses oligonucleotídeos variam em tamanho de menos de 100 nt a mais de muitos kb, embora também seja possível gerar e usar ssDNA mais longos. Doadores de fita dupla são frequentemente usados, incluindo amplicons de PCR, plasmídeos
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98/714 e minicírculos. Em geral, verificou-se que um vetor AAV é um meio muito eficaz de fornecer um modelo doador, embora os limites de embalagem para doadores individuais sejam <5kb. A transcrição ativa do doador aumentou HDR em três vezes, indicando que a inclusão do promotor pode aumentar a conversão. Por outro lado, a metilação de CpG do doador diminuiu a expressão de genes e a HDR.
[0359] Além das endonucleases de tipo selvagem, tal como Cas9, existem variantes de nickase que possuem um ou outro domínio de nuclease inativado, resultando no corte de apenas uma fita de DNA. A HDR pode ser direcionada a partir de nickases Cas individuais ou usando pares de nickases que flanqueiam a área alvo. Os doadores podem ser de fita simples, cortados ou dsDNA.
[0360] O DNA do doador pode ser fornecido com a nuclease ou independentemente por uma variedade de métodos diferentes como, por exemplo, por transfecção, nanopartículas, microinjeção ou transdução viral. Uma gama de opções de tethering tem sido proposta para aumentar a disponibilidade dos doadores para HDR. Os exemplos incluem anexar o doador à nuclease, anexar às proteínas de ligação ao DNA que se ligam nas proximidades ou anexar às proteínas envolvidas na ligação ou reparação final do DNA.
[0361] A escolha da via de reparação pode ser orientada por várias condições de cultura, tais como as que influenciam o ciclo celular, ou pelo direcionamento da reparação do DNA e das proteínas associadas. Por exemplo, para aumentar HDR, as principais moléculas de NHEJ podem ser suprimidas, tais como KU70, KU80 ou DNA ligase IV.
[0362] Sem a presença de um doador, as extremidades de uma quebra de DNA ou extremidades de diferentes quebras podem ser unidas usando as várias vias de reparação não homóloga nas quais as extremidades de DNA são unidas com pouco ou nenhum pareamento de bases na junção. Além da NHEJ canônica, existem mecanismos de
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99/714 reparação semelhantes, tais como alt-NHEJ. Se houver duas quebras, o segmento intermediário poderá ser deletado ou invertido. As vias de reparação de NHEJ podem levar a inserções, deleções ou mutações nas articulações.
[0363] A NHEJ foi utilizada para inserir um cassete de expressão de genes em um locus definido nas linhas celulares humanas após a divagem por nuclease tanto da molécula do cromossomo quanto da doadora. (Cristea, etal., Biotechnology and Bioengineering 110:871-880 (2012); Maresca, M., Lin, V.G., Guo, N. & Yang, Y., Genome Fies 23, 539-546 (2013)).
[0364] Além da edição do genoma por NHEJ ou HDR, foram realizadas inserções genéticas específicas do sítio que utilizam tanto a via NHEJ quanto HR. Uma abordagem combinada pode ser aplicável em determinadas configurações, possivelmente incluindo fronteiras íntron/éxon. A NHEJ pode ser eficaz para a ligação no íntron, enquanto HDR sem erros pode ser mais adequada na região de codificação.
[0365] O gene alvo contém um número de éxons. Qualquer um ou mais dos éxons ou introns próximos podem ser alvos. Como alternativa, existem várias mutações associadas a várias afecções médicas, que são uma combinação de inserções, deleções, sentido errado, sem sentido, troca de fas de leitura e outras mutações, com o efeito comum de inativar o alvo. Qualquer uma ou mais das mutações pode ser reparada para restaurar o alvo inativo. Como alternativa adicional, um construto de cDNA, vetor de expressão ou minigene (composto por, intensificador e promotor natural ou sintético, um ou mais éxons e introns naturais ou sintéticos e sinal de 3'UTR e poliadenilação natural ou sintética) pode ser knocked-in no genoma ou em um gene alvo. Em algumas modalidades, os métodos podem fornecer um gRNA ou um par de gRNAs que podem ser usados para facilitar a incorporação de uma nova sequência a partir de um modelo doador de polinucleotídeo para
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100/714 knock-in um construto de cDNA, vetor de expressão ou minigene.
[0366] Algumas modalidades dos métodos fornecem pares de gRNA que fazem uma deleção cortando o gene duas vezes, um corte de gRNA na extremidade 5’ de uma ou mais mutações e outro corte de gRNA na extremidade 3' de uma ou mais mutações que facilita a inserção de uma nova sequência de um modelo doador de polinucleotídeo para substituir uma ou mais mutações ou a deleção pode excluir aminoácidos mutantes ou aminoácidos adjacentes a ele (por exemplo, códon de terminação prematuro) e levar à expressão de uma proteína funcional ou restaurar um quadro de leitura aberta. O corte pode ser realizado por um par de endonucleases de DNA, em que cada uma produz um DSB no genoma ou por várias nickases que juntas formam um DSB no genoma.
[0367] Alternativamente, algumas modalidades dos métodos fornecem um gRNA para fazer um corte na fita dupla em torno de uma ou mais mutações que facilita a inserção de uma nova sequência a partir de um modelo doador de polinucleotídeo para substituir a uma ou mais mutações. O corte na fita dupla pode ser feito por uma única endonuclease de DNA ou múltiplas nickases que juntas formam um DSB no genoma, ou um único gRNA pode levar à deleção (MMEJ), que pode excluir o aminoácido mutante (por exemplo, códon de terminação prematuro) e levar à expressão de uma proteína funcional ou restaurar um quadro de leitura aberta.
[0368] Modificações ilustrativas dentro do gene alvo incluem substituições dentro ou próximas (proximais) das mutações referidas acima, tal como na região de menos de 3 kb, menos de 2 kb, menos de 1 kb, menos de 0,5 kb a montante ou a jusante da mutação específica. Dadas as variações relativamente amplas de mutações no gene alvo, será apreciado que numerosas variações das substituições mencionadas acima (incluindo, sem limitação, deleções maiores e
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101/714 menores) resultariam na restauração do gene alvo.
[0369] Tais variantes incluem substituições que são maiores na direção 5’ e/ou 3' do que a mutação específica em questão, ou menores em qualquer direção. Por conseguinte, por próximo ou proximal em relação a substituições específicas, pretende-se que o locus SSB ou DSB associado a um limite de substituição desejado (também aqui referido como um ponto final) possa estar dentro de uma região inferior a cerca de 3 kb do locus de referência indicado. Em algumas modalidades, o locus SSB ou DSB é mais proximal e dentro de 2 kb, dentro de 1 kb, dentro de 0,5 kb ou dentro de 0,1 kb. No caso de substituição pequena, o ponto final desejado é no ou adjacente ao locus de referência, pelo qual se pretende que o ponto final esteja dentro de 100 bp, dentro de 50 bp, dentro de 25 bp ou inferior a cerca de 10 bp a 5 bp a partir do locus de referência.
[0370] É esperado que modalidades que compreendem substituições maiores ou menores forneçam a mesma vantagem, contanto que a atividade da proteína alvo seja restaurada. Deste modo, espera-se que muitas variações das substituições descritas e ilustradas aqui sejam eficazes para melhorar uma afecção médica.
[0371] Outra estratégia de manipulação do genoma envolve a deleção do éxon. A deleção direcionada de éxons específicos é uma estratégia atraente para o tratamento de um grande subconjunto de pacientes com um único coquetel terapêutico. As deleções podem ser deleções de éxons únicos ou deleções de vários éxons. Embora as deleções com vários éxons possam atingir um número maior de pacientes, para deleções maiores, a eficiência da deleção diminui bastante com o aumento do tamanho. Portanto, as deleções variam de tamanho de 40 a 10.000 pares de bases (pb). Por exemplo, deleções podem variar de 40-100; 100-300; 300-500; 500-1,000; 1,000-2,000; 2,000-3,000; 3,000-5,000; ou 5,000-10,000pares de bases em tamanho.
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[0372] As deleções podem ocorrer no intensificador, promotor, 1Q íntron e/ou 3'UTR, levando à regulação positiva da expressão do gene e/ou através da deleção dos elementos reguladores.
[0373] Para garantir que o pré-mRNA seja processado adequadamente após a deleção, os sinais de splicing circundantes podem ser deletados. O doador e os aceitadores de splicing estão geralmente dentro de 100 pares de bases do íntron vizinho. Portanto, em algumas modalidades, os métodos podem fornecer todos os gRNAs que cortam aproximadamente +/- 100-3100 pb em relação a cada junção éxon/íntron de interesse.
[0374] Para qualquer uma das estratégias de edição do genoma, a edição do gene pode ser confirmada por sequenciamento ou análise por PCR.
Seleção da Sequência Alvo
[0375] Mudanças na localização do limite 5’ e/ou do limite 3' em relação a loci de referência específicos são usadas para facilitar ou melhorar aplicações específicas de edição de genes, que dependem em parte do sistema de endonucleases selecionado para a edição, conforme descrito e ilustrado aqui.
[0376] Em um primeiro exemplo não limitative de tal seleção de sequência alvo, muitos sistemas de endonuclease têm regras ou critérios que orientam a seleção inicial de potenciais sítios alvo para a divagem, tais como a exigência de um motivo de sequência PAM em uma determinada posição adjacente aos sítios de divagem de DNA no caso de endonucleases CRISPR Tipo II ou Tipo V.
[0377] Em outro exemplo não limitative de seleção ou otimização da sequência alvo, a frequência da atividade fora do alvo para uma combinação específica de endonuclease de sequência alvo e edição de genes (ou seja, a frequência de DSBs que ocorrem em sítios diferentes da sequência alvo selecionada) é avaliada em relação à frequência de
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103/714 atividade no alvo. Em algumas modalidades, as células que foram editadas corretamente no locus desejado podem ter uma vantagem seletiva em relação a outras células. Exemplos ilustrativos, mas não limitativos, de uma vantagem seletiva incluem a aquisição de atributos, tais como taxas de replicação melhoradas, persistência, resistência a certas condições, taxas melhoradas de enxerto bem-sucedido ou persistência in vivo após a introdução em um paciente e outros atributos associados à manutenção ou aumento do número ou viabilidade dessas células. Em outras modalidades, as células que foram editadas corretamente no locus desejado podem ser selecionadas positivamente para um ou mais métodos de rastreamento usados para identificar, classificar ou de outra forma selecionar as células que foram editadas corretamente. Tanto a vantagem seletiva quanto os métodos de seleção direcionada podem tirar proveito do fenótipo associado à correção. Em algumas modalidades, as células podem ser editadas duas ou mais vezes, a fim de criar uma segunda modificação que cria um novo fenótipo que é usado para selecionar ou purificar a população pretendida de células. Essa segunda modificação pode ser criada adicionando-se um segundo gRNA para um marcador selecionável ou rastreável. Em algumas modalidades, as células podem ser editadas corretamente no locus desejado usando um fragmento de DNA que contém o cDNA e também um marcador selecionável.
[0378] Se qualquer vantagem seletiva é aplicável ou se uma seleção direcionada deve ser aplicada em um caso específico, a seleção da sequência alvo também é orientada pela consideração de frequências fora do alvo, a fim de melhorar a eficácia da aplicação e/ou reduzir o potencial de alterações indesejadas em sítios que não sejam o alvo desejado. Como descrito mais adiante e ilustrado aqui e na técnica, a ocorrência de atividade fora do alvo é influenciada por vários fatores, incluindo semelhanças e diferenças entre o sítio alvo e vários
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104/714 sítios fora do alvo, bem como a endonuclease específica usada. Estão disponíveis ferramentas de bioinformática que auxiliam na previsão de atividade fora do alvo, e frequentemente essas ferramentas também podem ser usadas para identificar os sítios mais prováveis de atividade fora do alvo, que podem ser avaliados em contextos experimentais para avaliar as frequências relativas fora do alvo para atividade no alvo, permitindo assim a seleção de sequências que possuem atividades relativas ao alvo mais altas. Exemplos ilustrativos de tais técnicas são fornecidos neste documento, e outros são conhecidos na técnica.
[0379] Outro aspecto da seleção da sequência alvo refere-se a eventos de recombinação homóloga. As sequências que compartilham regiões da homologia podem servir como pontos focais para eventos de recombinação homóloga que resultam na deleção de sequências intervenientes. Esses eventos de recombinação ocorrem durante o decurso normal da replicação de cromossomos e outras sequências de DNA e também em outros momentos em que as sequências de DNA estão sendo sintetizadas, como no caso de reparações de quebras de fita dupla (DSBs), que ocorrem regularmente durante o ciclo normal de replicação celular, mas também podem ser melhorados pela ocorrência de vários eventos (tais como luz UV e outros indutores de quebra de DNA) ou pela presença de certos agentes (tais como vários indutores químicos). Muitos desses indutores causam a ocorrência de DSBs indistintamente no genoma, e DSBs são regularmente ser induzidas e reparadas nas células normais. Durante a reparação, a sequência original pode ser reconstruída com fidelidade completa, no entanto, em algumas modalidades, pequenas inserções ou deleções (referidas como indels) são introduzidas no sítio de DSB.
[0380] As DSBs também podem ser induzidas especificamente em sítios específicos, tal como no caso dos sistemas de endonucleases aqui descritos, que podem ser usados para causar eventos de
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105/714 modificação de genes direcionados ou preferenciais em localizações cromossômicas selecionadas. A tendência de sequências homólogas serem sujeitas a recombinação no contexto da reparação do DNA (bem como a replicação) pode ser aproveitada em várias circunstâncias e é a base para uma aplicação de sistemas de edição de genes, tal como CRISPR, em que a reparação direcionada por homologia é usada para inserir uma sequência de interesse, fornecida através do uso de um polinucleotídeo doador, em uma localização cromossômica desejada. [0381] Regiões de homologia entre sequências particulares, que podem ser pequenas regiões de micro-homologia que podem compreender até dez pares de bases ou menos, também podem ser usadas para provocar deleções desejadas. Por exemplo, uma única DSB é introduzida em um sítio que exibe micro-homologia com uma sequência próxima. Durante o decurso normal de reparação dessa DSB, um resultado que ocorre com alta frequência é a deleção da sequência intermediária como resultado da recombinação facilitada por DSB e pelo processo de reparação celular concomitante.
[0382] Em algumas circunstâncias, no entanto, a seleção de sequências alvo dentro de regiões de homologia também pode dar origem a deleções muito maiores, incluindo fusões de genes (quando as deleções estão em regiões de codificação), que podem ou não ser desejadas, dadas as circunstâncias particulares.
[0383] Os exemplos aqui fornecidos ilustram ainda mais a seleção de várias regiões alvo para a criação de DSBs concebidas para induzir substituições que resultam em modulação da atividade da proteína alvo, bem como a seleção de sequências alvo específicas nessas regiões concebidas para minimizar eventos fora do alvo relativos a eventos no alvo.
Modificações de Ácido Nucleico
[0384] Em algumas modalidades, os polinucleotídeos introduzidos
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106/714 nas células compreendem uma ou mais modificações que podem ser usadas individualmente ou em combinação, por exemplo, para melhorar a atividade, estabilidade ou especificidade, alterar a entrega, reduzir as respostas imunes inatas nas células hospedeiras ou para outras melhorias, como ainda descrito aqui e conhecido na técnica.
[0385] Em algumas modalidades, polinucleotídeos modificados são usados no sistema CRISP R/Cas9/Cpf 1, caso em que os RNAs guia (guias de molécula simples ou guias de molécula dupla) e/ou um DNA ou um RNA que codifica uma endonuclease Cas ou Cpf 1 introduzida em uma célula, podem ser modificados, como descrito e ilustrado abaixo. Tais polinucleotídeos modificados podem ser utilizados no sistema CRISPR/Cas9/Cpf1 para editar qualquer um ou mais loci genômicos.
[0386] Usando o sistema CRISPR/Cas9/Cpf1 para fins de ilustrações não limitativas de tais usos, modificações dos RNAs guia podem ser usadas para melhorar a formação ou estabilidade do complexo de edição do genoma CRISPR/Cas9/Cpf1 que compreende RNAs guia, que podem ser de guias de molécula simples ou molécula dupla e uma endonuclease Cas ou Cpf1. Modificações de RNAs guia podem também ou alternativamente ser usadas para melhorar a iniciação, estabilidade ou cinética de interações entre o complexo de edição do genoma e a sequência alvo no genoma, que pode ser usada, por exemplo, para melhorar a atividade no alvo. Modificações de RNAs guia também podem ou, alternativamente, ser usadas para aumentar a especificidade, por exemplo, as taxas relativas de edição do genoma no sítio alvo, em comparação com os efeitos em outros sítios (fora do alvo). [0387] Modificações podem também ou, alternativamente, ser usadas para aumentar a estabilidade de um RNA guia, por exemplo, aumentando sua resistência à degradação por ribonucleases (RNases) presentes em uma célula, aumentando assim sua meia-vida na célula. Modificações que melhoram a meia-vida do RNA guia podem ser
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107/714 particularmente úteis em aspectos nos quais uma endonuclease Cas ou Cpf 1 é introduzida na célula a ser editada por meio de um RNA que precisa ser traduzido para gerar endonuclease, pois aumentam a meiavida dos RNAs guia introduzidos ao mesmo tempo que o RNA que codifica a endonuclease, pode ser usado para aumentar o tempo em que os RNAs guia e a endonuclease Cas ou Cpf 1 codificada coexistem na célula.
[0388] Modificações podem também ou, alternativamente, ser usadas para diminuir a probabilidade ou o grau em que os RNAs introduzidos nas células provocam respostas imunes inatas. Tais respostas, que foram bem caracterizadas no contexto de RNA de interferência (RNAi), incluindo RNAs de pequena interferência (siRNAs), conforme descrito abaixo e na técnica, tendem a estar associadas à meia-vida reduzida do RNA e/ou a indução de citocinas ou outros fatores associados às respostas imunes.
[0389] Um ou mais tipos de modificações também podem ser feitos nos RNAs que codificam uma endonuclease que são introduzidos em uma célula, incluindo, sem limitação, modificações que melhoram a estabilidade do RNA (tal como aumentar sua degradação pelas RNAs presentes na célula), modificações que melhoram a tradução do produto resultante (isto é, a endonuclease) e/ou modificações que diminuem a probabilidade ou o grau em que os RNAs introduzidos nas células provocam respostas imunes inatas.
[0390] Combinações de modificações, tais como as anteriores e outras, também podem ser usadas. No caso de CRISP R/Cas9/Cpf1, por exemplo, um ou mais tipos de modificações podem ser feitos em RNAs guia (incluindo aqueles exemplificados acima) e/ou um ou mais tipos de modificações podem ser feitos em RNAs que codificam a endonuclease Cas (incluindo os exemplificados acima).
[0391] A título ilustrativo, os RNAs guia usados no sistema
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CRISP R/Cas9/Cpf1 ou outros RNAs menores podem ser facilmente sintetizados por meios químicos, permitindo que várias modificações sejam prontamente incorporadas, tal como ilustrado abaixo e descrito na técnica. Embora os procedimentos químicos sintéticos estejam em constante expansão, a purificação desses RNAs por procedimentos como a cromatografia líquida de alta performance (HPLC, que evita o uso de géis como o PAGE) tende a se tornar mais desafiadora, pois os comprimentos dos polinucleotídeos aumentam significativamente além de cem nucleotídeos. Uma abordagem usada para gerar RNAs modificados quimicamente de maior comprimento é produzir duas ou mais moléculas que são ligadas entre si. RNAs muito mais longos, como os que codificam uma endonuclease Cas9, são mais facilmente gerados enzimaticamente. Embora menos tipos de modificações estejam geralmente disponíveis para uso em RNAs produzidos enzimaticamente, ainda existem modificações que podem ser usadas para, por exemplo, aumentar a estabilidade, reduzir a probabilidade ou o grau de resposta imune inata e/ou melhorar outros atributos, conforme descrito a seguir abaixo e na técnica; e novos tipos de modificações estão sendo desenvolvidas regularmente.
[0392] A título ilustrativo de vários tipos de modificações, especialmente aquelas usadas frequentemente com RNAs sintetizados quimicamente menores, as modificações podem compreender um ou mais nucleotídeos modificados na posição 2’ do açúcar, em algumas modalidades, um 2'-O-alquila, 2'-O-alquil-O-alquila, ou nucleotídeo 2'fluoro-modificado. Em algumas modalidades, as modificações de RNA compreendem modificações de 2'-fluoro, 2'-amino ou 2'-O-metila na ribose de pirimidinas, resíduos básicos ou uma base invertida na extremidade 3’ do RNA. Tais modificações são rotineiramente incorporadas nos oligonucleotídeos e mostrou-se que esses oligonucleotídeos têm uma Tm maior (isto é, maior afinidade de ligação
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109/714 ao alvo) do que os 2'-desóxi-oligonucleotídeos contra um determinado alvo.
[0393] Foi demonstrado que várias modificações de nucleotídeos e nucleosídeos tornam o oligonucleotídeo no qual são incorporados mais resistentes à digestão com nucleases do que o oligonucleotídeo nativo; esses oligos modificados sobrevivem intactos por mais tempo do que os oligonucleotídeos não modificados. Exemplos específicos de oligonucleotídeos modificados incluem aqueles que compreendem estruturas principais modificadas, por exemplo, fosforotioatos, fosfotriésteres, fosfonatos de metila, ligações inter-açúcares cicloalquila ou alquila de fita curta ou ligações inter-açucares heteroatômicas ou heterocíclicas de fita curta. Alguns oligonucleotídeos são oligonucleotídeos com estruturas principais de fosforotioato e aquelas com estruturas principais de heteroátomo, em particular CH2 -NH-OCH2, CH,~N(CH3)~O~CH2 (conhecida como uma estrutural principal de metileno(metilimino) ou MMI), estruturas principais CH2 -O-N (CH3)CH2, CH2 -N (CH3)-N (CH3)-CH2 e O-N (CH3)- CH2 -CH2, em que a estrutura principal nativa de fosfodiéster é representada como O- P- OCH,); estruturas principais de amida [ver De Mesmaeker et al., Ace. Chem. Res. 28:366-374(1995)]; estruturas principais de morfolino (ver Summerton e Weller, Patente US NQ 5,034,506); estrutura principal do ácido nucleico peptídico (PNA) (em que a estrutura principal do fosfodiéster do oligonucleotídeo é substituída por uma estrutura principal de poliamida, os nucleotídeos sendo ligados direta ou indiretamente aos átomos de aza nitrogênio da estrutura principal de poliamida, ver Nielsen et al., Science 1991, 254, 1497). As ligações contendo fósforo incluem, mas não estão limitadas a, fosforotioatos, fosforotioatos quirais, fosforoditioatos, fosfotriésteres, aminoalquilfosfotriésteres, fosfonatos de metila e outras alquilas compreendendo fosfonatos de 3'alquileno e fosfonatos quirais,
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110/714 fosfinatos, fosforofamidatos compreendendo 3’amino fosforamidato e aminoalquilfosforamidatos, tionofosforamidatos, tionoalquilfosfonatos, tionoalquilfosfotriésteres e boranofosfatos com ligações 3'-5’ normais, análogos ligados 2'-5' destes e aqueles com polaridade invertida em que os pares adjacentes de unidades nucleosídicas estão ligados 3'-5’ normais, análogos ligados 2'-5' destes e aqueles com polaridade invertida, em que os pares adjacentes de unidades nucleosídicas estão ligados 3'-5' a 5'-3' ou 2'-5' a 5'-2’; ver Patentes US NQ 3,687,808; 4,469,863; 4,476,301; 5,023,243; 5,177,196; 5,188,897; 5,264,423; 5,276,019; 5,278,302; 5,286,717; 5,321,131; 5,399,676; 5,405,939; 5,453,496; 5,455,233; 5,466,677; 5,476,925; 5,519,126; 5,536,821; 5,541,306; 5,550,111; 5,563,253; 5,571,799; 5,587,361; e 5,625,050, cada uma das quais é aqui incorporada por referência.
[0394] Os compostos oligoméricos à base de morfolino são descritos em Braasch e David Corey, Biochemistry, 41(14): 4503-4510 (2002); Genesis, Volume 30, Edição 3, (2001); Heasman, Dev. Biol., 243: 209-214 (2002); Nasevicius etal., Nat. Genet., 26:216-220 (2000); Lacerra etal., Proc. Natl. Acad. Sci., 97: 9591-9596 (2000); e Patente US NQ 5,034,506, emitida em 23 de julho de 1991.
[0395] Os miméticos de oligonucleotideo do ácido nucleico ciclohexenila são descritos em Wang et al., J. Am. Chem. Soc. 122: 85958602 (2000).
[0396] As estruturas principais dos oligonucleotídeos modificados que não incluem um átomo de fósforo nos mesmos têm estruturas principais formadas por ligações internucleosídicas de alquila ou cicloalquila de fita curta, heteroátomo misto e ligações internucleosídicas de alquila ou cicloalquila, ou uma ou mais ligações internucleosídicas heteroatômicas ou heterocíclicas de fita curta. Estes compreendem aqueles com ligações morfolino (formadas em parte a partir da porção de açúcar de um nucleosídeo); estrutura principal de
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111/714 siloxano; estrutura principal de sulfeto, sulfoxide e sulfona; estruturas principais formacetil e tioformacetil; estrutura principal de metileno formacetil e tioformacetil; estrutura principal contendo alceno; estruturas principais de sulfamato; estruturas principais de metilenoimino e metileno-hidrazino; estruturas principais de sulfonato e sulfonamida; estruturas principais da amida; e outras tendo misturado partes dos componentes N, O, S e CH2; ver Patentes US NQ. 5,034,506; 5,166,315; 5,185,444; 5,214,134; 5,216,141; 5,235,033; 5,264,562; 5,264,564; 5,405,938; 5,434,257; 5,466,677; 5,470,967; 5,489,677; 5,541,307; 5,561,225; 5,596,086; 5,602,240; 5,610,289; 5,602,240; 5,608,046; 5,610,289; 5,618,704; 5,623,070; 5,663,312; 5,633,360; 5,677,437; e 5,677,439, cada uma das quais é aqui incorporada por referência.
[0397] Uma ou mais porções de açúcares substituídos também podem ser incluídas, por exemplo, um dos seguintes na posição 2': OH, SH, SCH3, F, OCN, OCH3, OCH3 O(CH2)n CH3, O(CH2)n NH2, ou O(CH2)n CH3, onde n é de 1 a cerca de 10; alquila inferior C1 a C10, alcoxialcóxi, alquila inferior substituída, alquilarila ou aralquila; Cl; Br; CN; CF3; OCF3; O-, S-, ou N-alquila; O-, S-, ou N-alquileno; SOCH3; SO2 CH3; ONO2; NO2; N3; NH2; heterocicloalquila; heterocicloalcarila; aminoalquilamino; polialquilamino; sililo substituído; um grupo de divagem de RNA; um grupo de repórteres; um intercalador; um grupo para melhorar as propriedades farmacocinéticas de um oligonucleotídeo; ou um grupo para melhorar as propriedades farmacodinâmicas de um oligonucleotídeo e outros substituintes com propriedades semelhantes. Em algumas modalidades, uma modificação inclui 2'- metoxietóxi (2'-0-CH2CH2OCH3, também conhecido como 2'-O(2-metóxietil)) (Martin et al, Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486). Outras modificações incluem 2'-metóxi (2'-0-CH3), 2'-propóxi (2'-OCH2 CH2CH3) e 2'-fluoro (2'-F). Modificações semelhantes também podem ser feitas em outras posições no oligonucleotídeo, particularmente na posição 3’
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112/714 do açúcar no nucleotideo terminal 3' e na posição 5’ do nucleotideo terminal 5'. Os oligonucleotídeos também podem ter miméticos de açúcar, tal como ciclobutilos no lugar do grupo pentofuranosil.
[0398] Em algumas modalidades, uma ligação de açúcar e uma ligação internucleosídica, isto é, a estrutura principal, das unidades nucleotídicas são substituídas por novos grupos. As unidades de base são mantidas para hibridação com um composto alvo de ácido nucleico apropriado. Um desses compostos oligoméricos, um oligonucleotídeo mimético que demonstrou ter excelentes propriedades de hibridação, é referido como um ácido nucleico peptídico (PNA). Nos compostos de PNA, a estrutura principal de açúcar de um oligonucleotídeo é substituída por uma estrutura principal contendo amida, por exemplo, uma estrutura principal de aminoetilglicina. As nucleobases são retidas e estão ligadas direta ou indiretamente aos átomos de nitrogênio aza da porção amida da estrutura principal. As patentes representativas dos Estados Unidos que ensinam a preparação de compostos de PNA compreendem, mas não estão limitadas a, Patentes US NQ 5,539,082; 5,714,331; e 5,719,262. Um ensino adicional de compostos de PNA pode ser encontrado em Nielsen etal, Science, 254: 1497-1500 (1991). [0399] Os RNAs guia também podem incluir, adicionalmente ou alternativamente, modificações ou substituições da nucleobase (frequentemente referida na técnica simplesmente como base). Como aqui utilizado, nucleobases não modificadas ou naturais incluem adenina (A), guanina (G), timina (T), citosina (C) e uracilo (U). As nucleobases modificadas incluem nucleobases encontradas apenas com pouca frequência ou transitoriamente em ácidos nucleicos naturais, por exemplo, hipoxantina, 6-metiladenina, 5-Me pirimidinas, particularmente 5-metilcitosina (também referida como 5-metil-2’ desoxicitosina e frequentemente referida na técnica como 5-Me-C), 5hidroximetilcitosina (HMC), glicosila HMC e gentobiosila HMC, bem
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113/714 como nucleobases sintéticas, por exemplo, 2-aminoadenina, 2(metilamino)adenina, 2-(imidazolilalquil)adenina, 2(aminoalquilamino)adenina ou outras alquiladeninas heterossubstituídas, 2-tiouracila, 2-tiotimina, 5-bromouracila, 5hidroximetiluracila, 8-azaguanina, 7-desazaguanina, N6 (6-aminohexil)adenina e 2,6-diaminopurina. Kornberg, A., DNA Replication, W. H. Freeman & Co., San Francisco, pp75-77 (1980); Gebeyehu et al., Nucl. Acids Res. 15:4513 (1997). Uma base universal conhecida na técnica, por exemplo, inosina, também pode ser incluída. Foi demonstrado que as substituições de 5-Me-C aumentam a estabilidade do duplex de ácido nucleico em 0,6-1,2 QC. (Sanghvi, Y. S., in Crooke, S. T. and Lebleu, B., eds., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278) e são modalidades de substituições de bases.
[0400] As nucleobases modificadas compreendem outras nucleobases sintéticas e naturais, tais como 5-metilcitosina (5-me-C), 5hidroximetil-citosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-metil e outros derivados alquilados de adenina e guanina, 2-propila e outros derivados alquila da adenina e guanina, 2-tiouracila, 2-tiotimina e 2tiocitosina, 5-halouracil e citosina, 5-propinila uracila e citosina, 6-azo uracila, citosina e timina, 5-uracila (pseudo-uracila), 4-tiouracila, 8-halo, 8-amino, 8-tiol, 8-tioalquila, 8-hidroxila e outras adeninas e guaninas 8substituídas, 5-halo, particularmente 5-bromo, 5-trifluorometila e outras uracilas e citosinas 5-substituídas, 7-metilquanina e 7-metiladenina, 8azaguanina e 8-azaadenina, 7-deazaguanina e 7-deazaadenina e 3deazaguanina e 3-deazaadenina.
[0401] Além disso, as nucleobases compreendem as divulgadas na Patente US NQ 3,687,808, as divulgadas em The Concise Encyclopedia of Polymer Science And Engineering', páginas 858-859, Kroschwitz, J.I., ed. John Wiley & Sons, 1990, as divulgadas por Englisch et al.,
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Angewandle Chemie, International Edition', 1991, 30, página 613, e as divulgadas por Sanghvi, Y. S., Chapter 15, Antisense Research and Applications', páginas 289- 302, Crooke, S.T. and Lebleu, B. ea., CRC Press, 1993. Algumas destas nucleobases são particularmente úteis para aumentar a afinidade de ligação dos compostos oligoméricos da divulgação. Estas incluem pirimidinas 5-substituídas, 6-azapirimidinas e purinas substituídas N-2, N-6 e 0-6, compreendendo 2aminopropiladenina, 5-propiniluracila e 5-propinilcitosina. Foi demonstrado que as substituições de 5-metilcitosina aumentam a estabilidade do duplex de ácido nucleico em 0,6-1,2 QC (Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. and Lebleu, B., eds, 'Antisense Research and Applications', CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278) e são aspectos de substituições de bases, ainda mais particularmente quando combinadas com modificações de açúcar 2'-O-metoxietila. As nucleobases modificadas são descritas nas patentes US NQ 3,687,808, bem como 4,845,205; 5,130,302; 5,134,066; 5,175,273; 5,367,066; 5,432,272; 5,457,187; 5,459,255; 5,484,908; 5,502,177; 5,525,711; 5,552,540; 5,587,469; 5,596,091; 5,614,617; 5,681,941; 5,750,692; 5,763,588; 5,830,653; 6,005,096; e publicação do pedido de patente US NQ 2003/0158403.
[0402] Assim, o termo modificado se refere a um açúcar, fosfato ou base não natural que é incorporado em um RNA guia, uma endonuclease ou ambos, um RNA guia e uma endonuclease. Não é necessário que todas as posições em um determinado oligonucleotídeo sejam modificadas uniformemente e, de fato, mais de uma das modificações mencionadas acima pode ser incorporada em um único oligonucleotídeo, ou mesmo em um único nucleosídeo dentro de um oligonucleotídeo.
[0403] Em algumas modalidades, os RNAs guia e/ou mRNA (ou DNA) que codificam uma endonuclease estão quimicamente ligados a
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115/714 uma ou mais porções ou conjugados que aumentam a atividade, a distribuição celular ou a captação celular do oligonucleotídeo. Tais porções compreendem, mas não estão limitadas a, partes lipídicas, como uma porção de colesterol [Letsinger et aí, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 86: 6553-6556 (1989)]; ácido cólico [Manoharan et aí., Bioorg. Med. Chem. Let., 4: 1053-1060 (1994)]; um tioéter, por exemplo, hexilS-tritiltiol [Manoharan et al, Ann. N. Y. Acad. Sei., 660: 306-309 (1992) e Manoharan etal., Bioorg. Med. Chem. Let., 3: 2765-2770 (1993)]; um tiocolesterol [Oberhauser etal., Nucl. Acids Res., 20: 533-538 (1992)]; uma fita alifática, por exemplo, resíduos de dodecandiol ou undecila [Kabanov et al., FEBS Lett., 259: 327-330 (1990) e Svinarchuk et al., Biochimie, 75: 49-54(1993)]; um fosfolipídeo, por exemplo, di-hexadecilrac-glicerol ou 1,2-di-O-hexadecil-rac-glicero-3-H-fosfonato de trietilamônio [Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 36: 3651-3654 (1995) e Shea et al., Nucl. Acids Res., 18: 3777-3783 (1990)]; uma fita de poliamina ou polietilenoglicol [Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 14: 969-973 (1995)]; ácido acético de adamantano [Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 36: 3651-3654 (1995)]; uma porção palmitila [(Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1264: 229-237 (1995)]; ou uma porção de octadecilamina ou hexilamino-carbonil-t oxicolesterol [Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Then, 277: 923-937 (1996)]. Ver também Patentes US NQ. 4,828,979; 4,948,882; 5,218,105; 5,525,465; 5,541,313; 5,545,730; 5,552,538; 5,578,717, 5,580,731; 5,591,584; 5,109,124; 5,118,802; 5,138,045; 5,414,077; 5,486,603; 5,512,439; 5,578,718; 5,608,046; 4,587,044; 4,605,735; 4,667,025; 4,762,779; 4,789,737; 4,824,941; 4,835,263; 4,876,335; 4,904,582; 4,958,013; 5,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,245,022; 5,254,469; 5,258,506; 5,262,536; 5,272,250; 5,292,873; 5,317,098; 5,371,241, 5,391,723; 5,416,203, 5,451,463; 5,510,475; 5,512,667; 5,514,785; 5,565,552; 5,567,810; 5,574,142;
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5,585,481; 5,587,371; 5,595,726; 5,597,696; 5,599,923; 5,599, 928 e 5,688,941.
[0404] Açúcares e outras porções podem ser utilizados para direcionar proteínas e complexos compreendendo nucleotídeos, tal como polissomos e lipossomos catiônicos, para sítios específicos. Por exemplo, a transferência dirigida a células hepáticas pode ser mediada através de receptores de asialoglicoproteínas (ASGPRs); ver, por exemplo, Hu, et al., Protein Pept Lett. 21(10):1025-30 (2014). Outros sistemas conhecidos na técnica e regularmente desenvolvidos podem ser utilizados para direcionar biomoléculas de uso no presente caso e/ou seus complexos para células alvo específicas de interesse.
[0405] Essas porções ou conjugados de direcionamento podem incluir grupos conjugados ligados covalentemente a grupos funcionais, tal como grupos hidroxila primários ou secundários. Grupos conjugados da divulgação incluem intercaladores, moléculas repórter, poliaminas, poliamidas, polietilenoglicois, poliéteres, grupos que melhoram as propriedades farmacodinâmicas de oligômeros e grupos que melhoram as propriedades farmacocinéticas de oligômeros. Grupos conjugados típicos incluem colesteróis, lipídeos, fosfolipídeos, biotina, fenazina, folato, fenantridina, antraquinona, acridina, fluoresceínas, rodaminas, cumarinas e corantes. Grupos que melhoram as propriedades farmacodinâmicas, no contexto desta divulgação, incluem grupos que melhoram a captação, aumentam a resistência à degradação e/ou fortalecem a hibridação específica de sequência com o ácido nucleico alvo. Grupos que melhoram as propriedades farmacocinéticas, no contexto desta divulgação, incluem grupos que melhoram a captação, distribuição, metabolismo ou excreção dos compostos da presente divulgação. Grupos conjugados representativos são divulgados no Pedido Internacional de Patente NQ PCT/US92/09196, depositado em 23 de outubro de 1992, e Pat. US NQ. 6,287,860, que são aqui
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117/714 incorporadas por referência. As porções conjugadas incluem, mas não estão limitadas a, porções lipídicas, tal como uma porção de colesterol, ácido cólico, um tioéter, por exemplo, hexil-5-tritiltiol, um tiocolesterol, uma fita alifática, por exemplo, resíduos de dodecandiol ou undecila, um fosfolipídeo, por exemplo, di-hexadecil-rac-glicerol ou l,2-di-Ohexadecil-rac-glicero-3-H-fosfonato de trietilamônio, uma fita de poliamina ou polietilenoglicol ou ácido acético adamantano, um radical palmitil ou uma octadecilamina ou porção hexilamino-carbonil-óxicolesterol. Ver, por exemplo, Patentes US NQ. 4,828,979; 4,948,882; 5,218,105; 5,525,465; 5,541,313; 5,545,730; 5,552,538; 5,578,717, 5,580,731; 5,591,584; 5,109,124; 5,118,802; 5,138,045; 5,414,077; 5,486,603; 5,512,439; 5,578,718; 5,608,046; 4,587,044; 4,605,735; 4,667,025; 4,762,779; 4,789,737; 4,824,941; 4,835,263; 4,876,335; 4,904,582; 4,958,013; 5,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,245,022; 5,254,469; 5,258,506; 5,262,536; 5,272,250; 5,292,873; 5,317,098; 5,371,241, 5,391,723; 5,416,203, 5,451,463; 5,510,475; 5,512,667; 5,514,785; 5,565,552; 5,567,810; 5,574,142; 5,585,481; 5,587,371; 5,595,726; 5,597,696; 5,599,923; 5,599,928 e 5,688,941.
[0406] Polinucleotídeos mais longos que são menos passíveis de síntese química e são tipicamente produzidos por síntese enzimática também podem ser modificados por vários meios. Tais modificações podem incluir, por exemplo, a introdução de certos análogos de nucleotídeos, a incorporação de sequências particulares ou outras porções nas extremidades 5’ ou 3' das moléculas e outras modificações. A título de ilustração, o mRNA que codifica Cas9 tem aproximadamente 4 kb de comprimento e pode ser sintetizado por transcrição in vitro. Modificações no mRNA podem ser aplicadas para, por exemplo, aumentar sua tradução ou estabilidade (tal como aumentar sua resistência à degradação com uma célula) ou reduzir a tendência do RNA a provocar uma resposta imune inata que é frequentemente
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118/714 observada nas células após a introdução de RNAs exógenos, particularmente RNAs mais longos, como o que codifica Cas9.
[0407] Numerosas modificações foram descritas na técnica, tais como caudas de poliA, análogos de 5’ cap (por exemplo, análogo de cap antirreverso (ARCA) ou m7G(5’)ppp(5’)G (mCAP)), regiões não traduzidas modificadas em 5' ou em 3’ (UTRs), uso de bases modificadas (tais como Pseudo-UTP, 2-Tio-UTP, 5-metilcitidina-5'trifosfato (5-Metil-CTP) ou N6-Metil-ATP) ou tratamento com fosfatase para remover os fosfatos terminais 5'. Essas e outras modificações são conhecidas na técnica e novas modificações de RNAs estão sendo desenvolvidas regularmente.
[0408] Existem inúmeros fornecedores comerciais de RNAs modificados, incluindo, por exemplo, TriLink Biotech, AxoLabs, BioSynthesis Inc., Dharmacon e muitos outros. Como descrito por TriLink, por exemplo, o 5-Metil-CTP pode ser usado para conferir características desejáveis, tais como estabilidade da nuclease aumentada, tradução aumentada ou interação reduzida de receptores imunes inatos com RNA transcrito in vitro. Também se demonstrou que a 5-MetiIcitidina-5'Trifosfato (5-Metil-CTP), N6-Metil-ATP, bem como o pseudo-UTP e o 2tio-UTP, reduzem a estimulação imune inata na cultura e in vivo enquanto melhoram a tradução, como ilustrado nas publicações de Kormann et ai. e Warren et ai. referidas abaixo.
[0409] Foi demonstrado que o mRNA quimicamente modificado entregue in vivo pode ser usado para alcançar efeitos terapêuticos melhorados; ver, por exemplo, Kormann etal., Nature Biotechnology 29, 154-157 (2011). Tais modificações podem ser usadas, por exemplo, para aumentar a estabilidade da molécula de RNA e/ou reduzir sua imunogenicidade. Usando modificações químicas, tal como Pseudo-U, N6-Metil-A, 2-Tio-U e 5-Metil-C, verificou-se que substituindo apenas um quarto dos resíduos de uridina e citidina por 2-Tio-U e 5-Metil-C,
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119/714 respetivamente, resultou em uma diminuição significativa no reconhecimento do mRNA mediado por receptor tipo toll (TLR) em camundongos. Ao reduzir a ativação do sistema imunológico inato, essas modificações podem ser usadas para aumentar efetivamente a estabilidade e a longevidade do mRNA in vivo; ver, por exemplo, Kormann etal., supra.
[0410] Também foi demonstrado que a administração repetida de RNAs mensageiros sintéticos incorporando modificações concebidas para contornar respostas antivirais inatas, pode reprogramar células humanas diferenciadas para pluripotência. Ver, por exemplo, Cell Stem Cell, 7(5):618-30 (2010). Esses mRNAs modificados que atuam como proteínas de reprogramação primárias podem ser um meio eficiente de reprogramar vários tipos de células humanas. Tais células são denominadas células-tronco da pluripotência induzida (iPSCs), e verificou-se que o RNA sintetizado enzimaticamente incorporando 5Metil-CTP, Pseudo-UTP e um análogo de cap antirreverso (ARCA) podería ser usado para evitar efetivamente a resposta antiviral da célula; ver, por exemplo, Warren etal., supra.
[0411] Outras modificações de polinucleotídeos descritas na técnica incluem, por exemplo, o uso de caudas de poli A, a adição de análogos de 5’ cap (tais como, m7G(5’)ppp(5’)G (mCAP)), modificações de regiões não traduzidas em 3’ e 5’ (UTRs) ou tratamento com fosfatase para remover os fosfatos terminais 5' - e novas abordagens estão sendo desenvolvidas regularmente.
[0412] Várias composições e técnicas aplicáveis à geração de RNAs modificados para uso aqui foram desenvolvidas em conexão com a modificação de RNA de interferência (RNAi), incluindo RNAs de pequena interferência (siRNAs). Os siRNAs apresentam desafios particulares in vivo porque seus efeitos no silenciamento de genes por interferência de mRNA são geralmente transitórios, o que pode exigir
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120/714 administração repetida. Além disso, os siRNAs são RNAs de fita dupla (dsRNA) e as células de mamíferos têm respostas imunes que evoluíram para detectar e neutralizar o dsRNA, que geralmente é um subproduto da infecção viral. Assim, existem enzimas de mamíferos, tais como a PKR (quinase responsiva ao dsRNA) e o gene I potencialmente induzível ao ácido retinoico (RIG-I), que podem mediar as respostas celulares ao dsRNA, bem como receptores do tipo Toll (tais como TLR3, TLR7 e TLR8) que podem desencadear a indução de citocinas em resposta a essas moléculas; ver, por exemplo, as revisões de Angart etal., Pharmaceuticals (Basel) 6(4): 440-468 (2013); Kanasty et al., Molecular Therapy 20(3): 513-524 (2012); Burnett et al., Biotechnol J. 6(9):1130-46 (2011); Judge e MacLachlan, Hum Gene Ther 19(2):111-24 (2008); e referências aí citadas.
[0413] Uma grande variedade de modificações foi desenvolvida e aplicada para melhorar a estabilidade do RNA, reduzir as respostas imunes inatas e/ou alcançar outros benefícios que podem ser úteis em conexão com a introdução de polinucleotídeos nas células humanas, como descrito aqui; ver, por exemplo, as revisões de Whitehead KA et al., Annual Review of Chemical and Biomolecular Engineering, 2: 77-96 (2011); Gaglione and Messere, Mini Rev Med Chem, 10(7):578-95 (2010); Chernolovskaya etal, Curr Opin Mol Ther., 12(2):158-67 (2010); Deleavey et al., Curr Protoc Nucleic Acid Chem Capitulo 16:Unidade16.3 (2009); Behlke, Oligonucleotides 18(4):305-19 (2008); Fucini et al., Nucleic Acid Ther 22(3): 205-210 (2012); Bremsen et al., Front Genet 3:154 (2012).
[0414] Como observado acima, existem vários fornecedores comerciais de RNAs modificados, muitos dos quais especializados em modificações concebidas para melhorar a eficácia dos siRNAs. Uma variedade de abordagens é oferecida com base em vários achados relatados na literatura. Por exemplo, Dharmacon observa que a
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121/714 substituição de oxigênio sem ponte por enxofre (fosforotioato, PS) tem sido extensivamente usada para melhorar a resistência à nuclease de siRNAs, conforme relatado por Kole, Nature Reviews Drug Discovery 11:125-140 (2012). Foram relatadas modificações da posição 2’ da ribose para melhorar a resistência da nuclease à ligação fosfato internucleotídico enquanto aumentam a estabilidade duplex (Tm), que também demonstrou fornecer proteção contra a ativação imune. Uma combinação de modificações moderadas da estrutura principal de PS com pequenas substituições-2’ bem toleradas (2'-O-Metil, 2'-Fluoro, 2'Hidro) foram associadas a siRNAs altamente estáveis para aplicações in vivo, conforme relatado por Soutschek et al. Nature 432:173-178 (2004); foi relatado que as modificações de 2'-O-Metil são eficazes na melhoria da estabilidade, como relatado por Volkov, Oligonucleotides 19: 191-202 (2009). Em relação à diminuição da indução de respostas imunes inatas, foi relatado que a modificação de sequências específicas com 2'-O-Metil, 2'-Fluoro, 2'-Hidro reduz a interação TLR7/TLR8 enquanto preserva geralmente a atividade silenciosa; ver, por exemplo, Judge et ai., Mol. Ther. 13:494-505 (2006); e Cekaite et al., J. Mol. Biol. 365:90-108 (2007). Modificações adicionais, tais como 2-tiouracila, pseudouracila, 5-metilcitosina, 5-metiluracila e N6-metiladenosina, também demonstraram minimizar os efeitos imunológicos mediados por TLR3, TLR7 e TLR8; ver, por exemplo, Kariko, K. et al. Immunity 23:165175 (2005).
[0415] Como também é conhecido na técnica, e disponível comercialmente, vários conjugados podem ser aplicados a polinucleotídeos, tais como RNAs, para uso aqui que podem melhorar sua entrega e/ou captação pelas células, incluindo, por exemplo, colesterol, tocoferol e fólico ácido, lipídeos, peptídeos, polímeros, ligantes e aptâmeros; ver, por exemplo, a revisão de Winkler, Ther. Deliv. 4: 791-809 (2013) e referências aqui citadas.
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Otimização de Códons
[0416] Em algumas modalidades, um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo direcionado ao sítio é otimizado por códon, de acordo com métodos padrão na técnica para expressão na célula que contém o DNA alvo de interesse. Por exemplo, se o ácido nucleico alvo pretendido estiver em uma célula humana, um polinucleotídeo humano otimizado por códon que codifica Cas9 é contemplado para uso na produção do polipeptídeo Cas9.
Complexos de um Ácido Nucleico com Alvo no Genoma e um Polipeptídeo Direcionado ao Sítio
[0417] Um ácido nucleico com alvo no genoma interage com um polipeptídeo direcionado ao sítio (por exemplo, uma nuclease guiada por ácido nucleico, tal como Cas9), formando assim um complexo. O ácido nucleico com alvo no genoma guia o polipeptídeo direcionado ao sítio para um ácido nucleico alvo.
RNPs
[0418] O polipeptídeo direcionado ao sítio e o ácido nucleico com alvo no genoma podem cada um ser administrados separadamente a uma célula ou a um paciente. Por outro lado, o polipeptídeo direcionado ao sítio pode ser pré-complexado com um ou mais RNAs guia, ou um ou mais crRNA junto com um tracrRNA. O material pré-complexado pode então ser administrado a uma célula ou a um paciente. Esse material pré-complexado é conhecido como partícula de ribonucleoproteína (RNP).
Ácidos Nucleicos que Codificam Componentes do Sistema
[0419] A presente divulgação fornece um ácido nucleico compreendendo uma sequência nucleotídica que codifica um ácido nucleico com alvo no genoma da divulgação, um polipeptídeo direcionado ao sítio da divulgação e/ou qualquer ácido nucleico ou molécula proteica necessária para realizar os aspectos dos métodos da
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123/714 divulgação.
[0420] O ácido nucleico que codifica um ácido nucleico com alvo no genoma da divulgação, um polipeptídeo direcionado ao sítio da divulgação e/ou qualquer ácido nucleico ou molécula proteica necessária para realizar os aspectos dos métodos da divulgação compreende um vetor (por exemplo, um vetor de expressão recombinante).
[0421] O termo vetor refere-se a uma molécula de ácido nucleico capaz de transportar outro ácido nucleico ao qual foi ligado. Um tipo de vetor é um plasmídeo, que se refere a um laço de DNA de fita dupla circular no qual segmentos de ácido nucleico podem ser ligados. Outro tipo de vetor é um vetor viral (por exemplo, AAV), em que segmentos adicionais de ácido nucleico podem ser ligados ao genoma viral. Certos vetores são capazes de replicação autônoma em uma célula hospedeira na qual são introduzidos (por exemplo, vetores bacterianos possuindo uma origem de replicação bacteriana e vetores epissômicos de mamífero). Outros vetores (por exemplo, vetores de mamíferos não epissômicos) são integrados no genoma de uma célula hospedeira após introdução na célula hospedeira e, desse modo, são replicados juntamente com o genoma do hospedeiro.
[0422] Em algumas modalidades, os vetores são capazes de direcionar a expressão de ácidos nucleicos aos quais estão operativamente ligados. Tais vetores são aqui referidos como vetores de expressão recombinantes, ou simplesmente vetores de expressão, que servem funções equivalentes.
[0423] O termo operacionalmente ligado significa que a sequência nucleotidica de interesse está ligada à(s) sequência(s) reguladora(s) de uma maneira que permite a expressão da sequência nucleotidica. O termo sequência reguladora pretende incluir, por exemplo, promotores, intensificadores e outros elementos de controle de
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124/714 expressão (por exemplo, sinais de poliadenilação). Tais sequências reguladoras são bem conhecidas na técnica e são descritas, por exemplo, em Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990). Sequências reguladoras incluem aquelas que direcionam a expressão constitutiva de uma sequência nucleotídica em muitos tipos de células hospedeiras e aquelas que direcionam a expressão da sequência nucleotídica apenas em determinadas células hospedeiras (por exemplo, sequências reguladoras específicas de tecidos). Será apreciado pelos peritos na técnica que o design do vetor de expressão pode depender de fatores, taiscomo a escolha da célula alvo, o nível de expressão desejado e similares.
[0424] Os vetores de expressão contemplados incluem, entre outros, vetores virais baseados no vírus vaccinia, poliovirus, adenovirus, vírus adenoassociado, SV40, vírus do herpes simplex, vírus da imunodeficiência humana, retrovirus (por exemplo, Vírus da Leucemia Murina, vírus da necrose do baço e vetores derivados de retrovirus, tais como o vírus Rous Sarcoma, vírus Harvey Sarcoma, vírus da leucose aviária, um lentivírus, vírus da imunodeficiência humana, vírus mieloproliferativo do sarcoma e vírus do tumor mamário) e outros vetores recombinantes. Outros vetores contemplados para células alvo eucarióticas incluem, mas não estão limitados a, os vetores pXT1, pSG5, pSVK3, pBPV, pMSG e pSVLSV40 (Pharmacia). Os vetores adicionais contemplados para células alvo eucarióticas incluem, mas não estão limitados a, os vetores. Outros vetores podem ser utilizados desde que sejam compatíveis com a célula hospedeira.
[0425] Em algumas modalidades, um vetor compreende um ou mais elementos de controle de transcrição e/ou tradução. Dependendo do sistema hospedeiro/vetor utilizado, qualquer um de vários elementos de controle de transcrição e tradução adequados, incluindo promotores
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125/714 constitutivos e indutíveis, elementos intensificadores de transcrição, terminadores de transcrição, etc., podem ser utilizados no vetor de expressão. Em algumas modalidades, o vetor é um vetor de autoinativação que inativa as sequências virais ou os componentes da maquinaria CRISPR ou outros elementos.
[0426] Exemplos não limitativos de promotores eucarióticos adequados (ou seja, promotores funcionais em uma célula eucariótica) incluem aqueles de precoce imediato citomegalovírus (CMV), timidina quinase do vírus do herpes simplex (HSV), precoce e tardio de SV40, repetições terminais longas (LTRs) do retrovirus, promotor do fator-1 de alongamento humano (EF1), um construto híbrido que compreende o intensificador de citomegalovírus (CMV) fundido ao promotor de betaactina de frango (CAG), promotor do vírus da célula-tronco de murino (MSCV), promotor do locus de fosfoglicerato quinase-1 (PGK) e metalotioneína-l de camundongo.
[0427] Para expressar pequenos RNAs, incluindo RNAs de guia usados em conexão com a endonuclease Cas, vários promotores, tais como promotores de RNA polimerase III, incluindo, por exemplo, U6 e H1, podem ser vantajosos. Descrições e parâmetros para melhorar o uso de tais promotores são conhecidos na técnica, e informações e abordagens adicionais estão sendo regularmente descritas; ver, por exemplo, Ma, H. etal., Molecular Therapy - Nucleic Acids 3, e161 (2014) doi:10.1038/mtna.2014.12.
[0428] O vetor de expressão também pode conter um sítio de ligação ao ribossomo para iniciar a tradução e um terminador de transcrição. O vetor de expressão também pode compreender sequências apropriadas para amplificar a expressão. O vetor de expressão também pode incluir sequências de nucleotídeos que codificam marcadores não nativos (por exemplo, marcador de histidina, marcador de hemaglutinina, proteína fluorescente verde, etc.) que são
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126/714 fundidos ao polipeptídeo direcionado ao sítio, resultando assim em uma proteína de fusão.
[0429] Em algumas modalidades, um promotor é um promotor induzível (por exemplo, um promotor de choque térmico, promotor regulado por tetraciclina, promotor regulado por esteroides, promotor regulado por metal, promotor regulado por receptor de estrogênio, etc.). Em algumas modalidades, o promotor é um promotor constitutivo (por exemplo, promotor CMV, promotor UBC). Em algumas modalidades, o promotor é um promotor espacialmente restrito e/ou temporalmente restrito (por exemplo, um promotor específico de tecido, um promotor específico de tipo de célula, etc.).
[0430] Em algumas modalidades, o ácido nucleico que codifica um ácido nucleico com alvo no genoma da divulgação e/ou um polipeptídeo direcionado ao sítio é empacotado em ou na superfície dos veículos de entrega para entrega às células. Os veículos de entrega contemplados incluem, mas não estão limitados a, nanoesferas, lipossomas, pontos quânticos, nanopartículas, partículas de polietilenoglicol, hidrogéis e micelas. Como descrito na técnica, uma variedade de porções de direcionamento pode ser usada para melhorar a interação preferencial de tais veículos com os tipos de células ou localizações desejados.
[0431] A introdução dos complexos, polipeptídeos e ácidos nucleicos da divulgação nas células pode ocorrer por infecção viral ou bacteriófago, transfecção, conjugação, fusão de protoplastos, lipofecção, eletroporação, nucleofecção, precipitação de fosfato de cálcio, transfecção mediada por polietilenoimina (PEI), transfecção mediada por DEAE-dextrano, transfecção mediada por lipossomas, tecnologia de pistola de partículas, precipitação com fosfato de cálcio, microinjeção direta, entrega de ácido nucleico mediada por nanopartículas e similares.
Entrega
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[0432] Os polinucleotídeos de RNA guia (RNA ou DNA) e/ou polinucleotideo(s) de endonuclease (RNA ou DNA) podem ser entregues por veículos de entrega viral ou não viral conhecidos na técnica. Alternativamente, os polipeptídeo(s) de endonuclease podem ser entregues por veículos de entrega virais ou não virais conhecidos na técnica, tais como eletroporação ou nanopartículas lipídicas. Em algumas modalidades, a endonuclease de DNA pode ser entregue como um ou mais polipeptídeos, isolados ou pré-complexos com um ou mais RNAs guia, ou um ou mais crRNA junto com um tracrRNA.
[0433] Os polinucleotídeos podem ser entregues por veículos de entrega não virais, incluindo, mas não limitados a, nanopartículas, lipossomas, ribonucleoproteínas, peptídeos com carga positiva, conjugados de RNA de molécula pequena, quimeras de RNA de aptâmero e complexos de proteínas de fusão de RNA. Alguns veículos de entrega não virais exemplificativos são descritos em Peer e Lieberman, Gene Therapy, 18:1127-1133 (2011) (que se concentra em veículos de entrega não virais para siRNA que também são úteis para a entrega de outros polinucleotídeos).
[0434] Polinucleotídeos, tais como RNA guia, sgRNA e mRNA que codificam uma endonuclease, podem ser entregues a uma célula ou a um paciente por uma nanopartícula lipídica (LNP).
[0435] Uma LNP refere-se a qualquer partícula com um diâmetro inferior a 1000 nm, 500 nm, 250 nm, 200 nm, 150 nm, 100 nm, 75 nm, 50 nm ou 25 nm. Alternativamente, uma nanopartícula pode variar em tamanho de 1-1000 nm, 1-500 nm, 1-250 nm, 25-200 nm, 25-100 nm, 35-75 nm ou 25-60 nm.
[0436] As LNPs podem ser feitas de lipídeos catiônicos, aniônicos ou neutros. Lipídeos neutros, tais como o fosfolipídeo fusogênico DOPE ou o colesterol do componente da membrana, podem ser incluídos nas LNPs como 'lipídeos auxiliares' para melhorar a atividade de transfecção
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128/714 e a estabilidade das nanoparticulas. As limitações dos lipídeos catiônicos incluem baixa eficácia devido à baixa estabilidade e rápida depuração, bem como à geração de respostas inflamatórias ou antiinflamatórias.
[0437] As LNPs também podem ser compostos de lipídeos hidrofóbicos, lipídeos hidrofílicos ou lipídeos hidrofóbicos e hidrofílicos. [0438] Qualquer lipídeo ou combinação de lipídeos que são conhecidos na técnica podem ser usados para produzir uma LNP. Exemplos de lipídeos usados para produzir LNPs são: DOTMA, DOSPA, DOTAP, DMRIE, DC-colesterol, DOTAP-colesterol, GAPDMORIE-DPyPE, e GL67A-DOPE-DMPE-polietilenoglicol (PEG). Exemplos de lipídeos catiônicos são: 98N12-5, C12-200, DLin-KC2DMA (KC2), DLin-MC3-DMA (MC3), XTC, MD1, e 7C1. Exemplos de lipídeos neutros são: DPSC, DPPC, POPC, DOPE, e SM. Exemplos de lipídeos modificados por PEG são: PEG-DMG, PEG-CerC14 e PEGCerC20.
[0439] Os lipídeos podem ser combinados em qualquer número de razões molares para produzir um LNP. Além disso, o(s) polinucleotídeo(s) pode(m) ser combinado(s) com lipídeo(s) em uma ampla gama de razões molares para produzir uma LNP.
[0440] Como referido anteriormente, o polipeptídeo direcionado ao sítio e o ácido nucleico com alvo no genoma podem cada um ser administrados separadamente a uma célula ou a um paciente. Por outro lado, o polipeptídeo direcionado ao sítio pode ser pré-complexado com um ou mais RNAs guia, ou um ou mais crRNA junto com um tracrRNA. O material pré-complexado pode então ser administrado a uma célula ou a um paciente. Esse material pré-complexado é conhecido como partícula de ribonucleoproteína (RNP).
[0441] O RNA é capaz de formar interações específicas com o RNA ou o DNA. Embora essa propriedade seja explorada em muitos
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129/714 processos biológicos, também traz o risco de interações promíscuas em um ambiente celular rico em ácido nucleico. Uma solução para esse problema é a formação de partículas de ribonucleoproteínas (RNPs), nas quais o RNA é pré-complexado com uma endonuclease. Outro benefício de RNP é a proteção do RNA contra a degradação.
[0442] A endonuclease na RNP pode ser modificada ou não modificada. Da mesma forma, o gRNA, crRNA, tracrRNA ou sgRNA podem ser modificados ou não modificados. Numerosas modificações são conhecidas na técnica e podem ser usadas.
[0443] A endonuclease e o sgRNA podem geralmente ser combinados na proporção molar de 1:1. Alternativamente, a endonuclease, crRNA e tracrRNA podem geralmente ser combinados na proporção molar de 1:1:1. No entanto, uma ampla gama de razões molares pode ser usada para produzir uma RNP.
[0444] Um vetor de vírus adenoassociado recombinante (AAV) pode ser usado para entrega. Técnicas para produzir partículas de rAAV, nas quais um genoma de AAV a ser empacotado que inclui o polinucleotídeo a ser entregue, genes rep e cap e funções de vírus auxiliar são fornecidos a uma célula, são padrão na técnica. Produção de rAAV requer que os seguintes componentes estejam presentes dentro de uma única célula (aqui denominada como uma célula de empacotamento): um genoma de rAAV, os genes de AAV rep e cap separados do (ou seja, não estão em) genoma de rAAV, e as funções de vírus auxiliar. Os genes rep e cap do AAV podem ser de qualquer serotipoAAV para o qual o vírus recombinante possa ser derivado e podem ser de um serotipo AAV diferente dos ITRs do genoma do rAAV, incluindo, mas não se limitando aos serotipos AAV-1, AAV-2, AAV-3, AAV-4, AAV-5, AAV-6, AAV-7, AAV-8, AAV-9, AAV-10, AAV-11, AAV12, AAV-13 e AAV rh.74. A produção de rAAV pseudotipado é divulgada, por exemplo, no pedido internacional de patente número de
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130/714 publicação WO 01/83692. Ver a Tabela 2.
Tabela 2
Serotipo de AAV Acesso da GenBank N2
AAV-1 NC_002077,1
AAV-2 NC_001401,2
AAV-3 NC_001729,1
AAV-3B AF028705,1
AAV-4 NC_001829,1
AAV-5 NC_006152,1
AAV-6 AF028704,1
AAV-7 NC_006260,1
AAV-8 NC_006261,1
AAV-9 AX753250,1
AAV-10 AY631965,1
AAV-11 AY631966,1
AAV-12 DQ813647,1
AAV-13 EU285562,1
[0445] Um método para gerar uma célula de empacotamento envolve a criação de uma linha celular que expresse de maneira estável todos os componentes necessários para a produção de partículas de AAV. Por exemplo, um plasmídeo (ou vários plasmídeos) compreendendo um genoma de rAAV sem os genes rep e cap de AAV, os genes rep e cap de AAV separados do genoma de rAAV, e um marcador selecionável, tal como um gene de resistência à neomicina, são integrados ao genoma de uma célula. Os genomas de AAV foram introduzidos em plasmídeos bacterianos por procedimentos, tais como tailing de GC (Samulski etal., 1982, Proc. Natl. Acad. S6. USA, 79:20772081), adição de ligantes sintéticos contendo sítios de divagem de endonucleases de restrição (Laughlin et a!., 1983, Gene, 23:65-73) ou
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131/714 por ligação direta na extremidade cega (Senapathy & Carter, 1984, J. Biol. Chem., 259:4661-4666). A linha celular de empacotamento é então infectada com um vírus auxiliar, como o adenovirus. As vantagens deste método são que as células são selecionáveis e são adequadas para a produção em larga escala de rAAV. Outros exemplos de métodos adequados empregam adenovirus ou baculovírus, em vez de plasmídeos, para introduzir genomas de rAAV e/ou genes rep e cap em células de empacotamento.
[0446] Os princípios gerais da produção de rAAV estão revistos em, por exemplo, Carter, 1992, Current Opinions in Biotechnology, 1533539; e Muzyczka, 1992, Curr. Topics in Microbial, and Immunol., 158:97129). Várias abordagens são descritas em Ratschin etal., Mol. Cell. Biol. 4:2072 (1984); Hermonat et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6466 (1984); Tratschin etal., Mo1. Cell. Biol. 5:3251 (1985); McLaughlin etal., J. Virol., 62:1963 (1988); e Lebkowski etal., 1988 Mol. Cell. Biol., 7:349 (1988). Samulski et al. (1989, J. Virol., 63:3822-3828); Patente US NQ 5,173,414; WO 95/13365 e correspondente Patente US NQ 5,658.776; WO 95/13392; WO 96/17947; PCT/US98/18600; WO 97/09441 (PCT/US96/14423); WO 97/08298 (PCT/US96/13872); WO 97/21825 (PCT/US96/20777); WO 97/06243 (PCT/FR96/01064); WO 99/11764; Perrin et al. (1995) Vaccine 13:1244-1250; Paul et al. (1993) Human Gene Therapy 4:609-615; Clark et al. (1996) Gene Therapy 3:11241132; Patente US NQ 5,786,211; Patente US NQ 5,871,982; e Patente US NQ 6,258,595.
[0447] Os serotipos do vetor AAV podem corresponder aos tipos de células alvo. Por exemplo, os seguintes tipos de células exemplificativos podem ser transduzidos pelos serotipos AAV indicados, entre outros. Ver a Tabela 3.
Tabela 3
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132/714
Tipo de Célula/Tecido Serotipo
Fígado AAV3, AAV5, AAV8, AAV9
Músculo esquelético AAV1, AAV7, AAV6, AAV8, AAV9
Sistema nervoso central AAV5, AAV1, AAV4
RPE AAV5, AAV4
Células fotorreceptoras AAV5
Pulmão AAV9
Coração AAV8
Pâncreas AAV8
Rim AAV2, AAV8
Células-tronco hematopoiéticas AAV6
[0448] Além dos vetores virais adenoassociados, outros vetores virais podem ser utilizados. Tais vetores virais incluem, mas não estão limitados a, lentivírus, alfavírus, enterovirus, pestivírus, baculovírus, herpesvirus, vírus Epstein Barr, papovavírus, poxvirus, vírus vaccinia e vírus herpes simplex.
[0449] Em algumas modalidades, o mRNA de Cas9, o sgRNA com alvo em um ou dois loci no gene alvo e o DNA do doador são formulados separadamente em nanopartículas lipídicas ou são todos coformulados em uma nanopartícula lipídica ou coformulados em duas ou mais nanopartículas lipídicas.
[0450] Em algumas modalidades, o mRNA de Cas9 é formulado em uma nanopartícula lipídica, enquanto o sgRNA e o DNA do doador são entregues em um vetor AAV. Em algumas modalidades, o mRNA de Cas9 e o sgRNA são coformulados em uma nanopartícula lipídica, enquanto o DNA do doador é entregue em um vetor AAV.
[0451] Estão disponíveis opções para entregar a nuclease Cas9 como um plasmídeo de DNA, como mRNA ou como uma proteína. O RNA guia pode ser expresso a partir do mesmo DNA ou também pode
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133/714 ser entregue como um RNA. O RNA pode ser quimicamente modificado para alterar ou melhorar sua meia-vida ou diminuir a probabilidade ou o grau de resposta imune. A proteína da endonuclease pode ser complexada com o gRNA antes da entrega. Os vetores virais permitem entrega eficiente; versões divididas de Cas9 e ortólogos menores de Cas9 podem ser empacotados no AAV, assim como doadores para HDR. Também existe uma variedade de métodos de entrega não virais que podem entregar cada um desses componentes, ou métodos não virais e virais podem ser aplicados em conjunto. Por exemplo, nanopartículas podem ser usadas para fornecer a proteína e orientar o RNA, enquanto o AAV pode ser usado para fornecer um DNA doador. Exossomos
[0452] Os exossomos, um tipo de microvesícula ligada à bicamada fosfolipídica, podem ser usados para fornecer ácidos nucleicos a tecidos específicos. Muitos tipos diferentes de células no corpo secretam naturalmente exossomos. Os exossomos se formam no citoplasma quando os endossomos invaginam e formam os endossomos multivesiculares (MVE). Quando o MVE se funde com a membrana celular, os exossomos são secretados no espaço extracelular. Variando entre 30-120 nm de diâmetro, os exossomos podem transportar várias moléculas de uma célula para outra em uma forma de comunicação célula a célula. Células que produzem exossomos naturalmente, como mastócitos, podem ser geneticamente alteradas para produzir exossomos com proteínas de superfície que visam tecidos específicos; alternativamente, exossomos podem ser isolados da corrente sanguínea. Ácidos nucleicos específicos podem ser colocados dentro dos exossomos manipulados com eletroporação. Quando introduzidos sistemicamente, os exossomos podem entregar os ácidos nucleicos ao tecido alvo específico.
Células Geneticamente Modificadas
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[0453] O termo célula geneticamente modificada se refere a uma célula que compreende pelo menos uma modificação genética introduzida pela edição do genoma (por exemplo, usando o sistema CRISP R/Cas9/Cpf1). Em alguns exemplos, (por exemplo, exemplos ex vivo), a célula geneticamente modificada é uma célula progenitora geneticamente modificada. Em alguns exemplos aqui, a célula geneticamente modificada é uma célula T geneticamente modificada. Uma célula geneticamente modificada compreendendo um ácido nucleico exógeno com alvo no genoma e/ou um ácido nucleico exógeno que codifica um ácido nucleico com alvo no genoma, é aqui contemplada.
[0454] O termo população tratada com controle descreve uma população de células que foram tratadas com meios idênticos, indução viral, sequências de ácidos nucleicos, temperatura, confluência, tamanho do frasco, pH, etc., com exceção da adição dos componentes de edição do genoma. Qualquer método conhecido na técnica pode ser usado para medir a restauração do gene ou expressão ou atividade da proteína alvo, por exemplo, análise Western Blot da proteína alvo ou quantificação do mRNA alvo.
[0455] O termo célula isolada se refere a uma célula que foi removida de um organismo em que foi originalmente encontrada ou a um descendente dessa célula. Opcionalmente, a célula é cultivada in vitro, por exemplo, sob condições definidas ou na presença de outras células. Opcionalmente, a célula é posteriormente introduzida em um segundo organismo ou reintroduzida no organismo do qual foi isolada (ou a célula da qual é descendente).
[0456] O termo população isolada em relação a uma população isolada de células se refere a uma população de células que foi removida e separada de uma população mista ou heterogênea de células. Em algumas modalidades, a população isolada é uma
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135/714 população substancialmente pura de células, em comparação com a população heterogênea da qual as células foram isoladas ou enriquecidas. Em algumas modalidades, a população isolada é uma população isolada de células progenitoras humanas, por exemplo, uma população substancialmente pura de células progenitoras humanas, em comparação com uma população heterogênea de células compreendendo células progenitoras humanas e células das quais as células progenitoras humanas foram derivadas.
[0457] O termo substancialmente melhorada, em relação a uma população celular específica, se refere a uma população de células na qual a ocorrência de um tipo específico de célula é aumentada em relação aos níveis pré-existentes ou de referência, em pelo menos 2 vezes, em pelo menos 3-, pelo menos 4-, pelo menos 5-, pelo menos 6, pelo menos 7-, pelo menos 8-, pelo menos 9, pelo menos 10-, pelo menos 20-, pelo menos 50-, pelo menos 100-, pelo menos 400-, pelo menos 1000-, pelo menos 5000-, pelo menos 20000-, pelo menos 100000- ou mais vezes, dependendo, por exemplo, dos níveis desejados de tais células para melhorar uma condição médica.
[0458] O termo substancialmente enriquecido em relação a uma população celular específica se refere a uma população de células que é pelo menos cerca de 10%, cerca de 20%, cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70% ou mais em relação às células que compõem uma população total de células.
[0459] Os termos substancialmente enriquecido ou substancialmente puro em relação a uma população celular específica, se refere a uma população de células que é pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90% ou pelo menos cerca de 95% pura, em relação às células que compõem uma população total de células. Ou seja, os termos substancialmente puro ou essencialmente purificado, em relação a uma população de
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136/714 células progenitoras, se refere a uma população de células que contém menos de cerca de 20%, cerca de 15%, cerca de 10%, cerca de 9%, cerca de 8%, cerca de 7%, cerca de 6%, cerca de 5%, cerca de 4%, cerca de 3%, cerca de 2%, cerca de 1 % ou menos de 1 % de células que não são células progenitoras, como definido pelos termos aqui.
Implantando células em pacientes
[0460] Outro passo dos métodos ex vivo da presente divulgação compreende implantar as células em pacientes. Este passo de implantação pode ser realizado usando qualquer método de implantação conhecido na técnica. Por exemplo, as células geneticamente modificadas podem ser injetadas diretamente no sangue do paciente ou de outra forma administradas ao paciente. As células geneticamente modificadas podem ser purificadas ex vivo usando um marcador selecionado.
Transportadores Farmaceuticamente Aceitáveis
[0461] Os métodos ex vivo de administração de células progenitoras a um sujeito aqui contemplados envolvem o uso de composições terapêuticas compreendendo células progenitoras.
[0462] As composições terapêuticas contêm um transportador fisiologicamente tolerável juntamente com a composição celular e, opcionalmente, pelo menos um agente bioativo adicional como descrito aqui, dissolvido ou disperso no mesmo como ingrediente ativo. Em algumas modalidades, a composição terapêutica não é substancialmente imunogênica quando administrada a um mamífero ou paciente humano para fins terapêuticos, a menos que desejado.
[0463] Em geral, as células progenitoras descritas aqui são administradas como uma suspensão com um veículo farmaceuticamente aceitável. Um perito na técnica reconhecerá que um transportador farmaceuticamente aceitável para ser usado em uma composição celular não incluirá tampões, compostos, agentes de
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137/714 criopreservação, conservantes ou outros agentes em quantidades que interfiram substancialmente na viabilidade das células a serem entregues ao sujeito. Uma formulação compreendendo células pode incluir, por exemplo, tampões osmóticos que permitem manter a integridade da membrana celular e, opcionalmente, nutrientes para manter a viabilidade celular ou melhorar o enxerto após a administração. Tais formulações e suspensões são conhecidas dos peritos na técnica e/ou podem ser adaptadas para uso com as células progenitoras, como descrito aqui, utilizando experimentação de rotina.
[0464] Uma composição celular também pode ser emulsionada ou apresentada como uma composição lipossômica, desde que o procedimento de emulsificação não afete adversamente a viabilidade celular. As células e qualquer outro ingrediente ativo podem ser misturados com excipientes que são farmaceuticamente aceitáveis e compatíveis com o ingrediente ativo, e em quantidades adequadas para uso nos métodos terapêuticos aqui descritos.
[0465] Agentes adicionais incluídos em uma composição celular podem incluir sais farmaceuticamente aceitáveis dos componentes nela contidos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais de adição de ácido (formados com os grupos amino livres do polipeptídeo) que são formados com ácidos inorgânicos, tais como, por exemplo, ácidos clorídrico ou fosfórico ou ácidos orgânicos como acético, tartárico, mandélico e similares. Os sais formados com os grupos carboxila livres também podem ser derivados de bases inorgânicas, tais como, por exemplo, hidróxido de sódio, potássio, amônio, cálcio ou férrico e bases orgânicas, tais como isopropilamina, trimetilamina, 2etilaminoetanol, histidina, procaína e similares.
[0466] Os transportadores fisiologicamente toleráveis são bem conhecidos na técnica. Transportadores líquidos exemplificativos são soluções aquosas estéreis que não contêm materiais além dos
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138/714 ingredientes ativos e água, ou contêm um tampão, tal como fosfato de sódio com valor fisiológico de pH, solução salina fisiológica ou ambos, tal como solução salina tamponada com fosfato. Além disso, os transportadores aquosos podem conter mais de um sal tampão, bem como sais como cloretos de sódio e potássio, dextrose, polietilenoglicol e outros solutos. As composições líquidas também podem conter fases líquidas em adição à água e à exclusão de água. Exemplos de tais fases líquidas adicionais são glicerina, óleos vegetais, tal como óleo de semente de algodão e emulsões de óleo e água. A quantidade de um composto ativo utilizado nas composições celulares que é eficaz no tratamento de uma desordem ou afecção particular vai depender da natureza da desordem ou afecção e pode ser determinada por técnicas clínicas padrão.
Administração e Eficácia
[0467] Os termos administração, introdução e transplante são usados alternadamente no contexto da colocação de células, por exemplo, células progenitoras, em um sujeito, por um método ou via que resulta em pelo menos localização parcial das células introduzidas em um sítio desejado, tal como um sítio de lesão ou reparação, de modo que um efeito(s) desejado(s) seja produzido. As células, por exemplo, células progenitoras ou sua progênie diferenciada, podem ser administradas por qualquer via apropriada que resulte na entrega para um sítio desejado no sujeito, onde pelo menos uma porção das células implantadas ou componentes das células permaneçam viáveis. O período de viabilidade das células após a administração a um sujeito pode ser tão curto quanto algumas horas, por exemplo, vinte e quatro horas, a alguns dias, até vários anos, ou mesmo o tempo de vida do paciente, ou seja enxerto de longo prazo. Por exemplo, em alguns aspectos aqui descritos, uma quantidade eficaz de células progenitoras miogênicas é administrada por uma via sistêmica de administração, tal
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139/714 como uma via intraperitoneal ou intravenosa.
[0468] Os termos indivíduo, sujeito, hospedeiro e paciente são usados de forma intercambiável aqui e se referem a qualquer sujeito para quem o diagnóstico, tratamento ou terapia é desejado. Em alguns aspectos, o sujeito é um mamífero. Em alguns aspectos, o sujeito é um ser humano.
[0469] O termo doador é usado para se referir a um sujeito que não é o paciente. Em algumas modalidades, o doador é um sujeito que não tem ou não é suspeito de ter a afecção médica a ser tratada. Em algumas modalidades, vários doadores, por exemplo, dois ou mais doadores, podem ser usados. Em algumas modalidades, cada doador usado é um sujeito que não tem ou não é suspeito de ter a afecção médica a ser tratada.
[0470] Quando fornecidas profilaticamente, as células progenitoras descritas aqui podem ser administradas a um sujeito antes de qualquer sintoma de uma afecção médica, por exemplo, antes do desenvolvimento de linfopenia de células T alfa/beta com expansão de células T gama/delta, infecção grave por citomegalovírus (CMV), autoimunidade, inflamação crônica da pele, eosinofilia, falha no crescimento, linfonodos inchados, baço inchado, diarréia e aumento do fígado. Por conseguinte, a administração profilática de uma população de células progenitoras hematopoiéticas serve para prevenir uma afecção médica.
[0471] Quando fornecidas terapeuticamente, as células progenitoras hematopoiéticas são fornecidas no (ou após) início de um sintoma ou indicação de uma afecção médica, por exemplo, no início da doença.
[0472] Em algumas modalidades, a população de células a ser administrada de acordo com os métodos aqui descritos compreendem células T alogênicas obtidas a partir de um ou mais doadores. Em
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140/714 algumas modalidades, a população de células a ser administrada pode ser células sanguíneas alogênicas, células-tronco hematopoiéticas, células progenitoras hematopoiéticas, células-tronco embrionárias ou células-tronco embrionárias induzidas. Alogênico se refere a uma célula, população celular ou amostras biológicas compreendendo células, obtidas de um ou mais doadores diferentes da mesma espécie, onde os genes em um ou mais loci não são idênticos ao receptor. Por exemplo, uma população de células progenitoras hematopoéticas, ou população de células T, a ser administrada a um sujeito pode ser derivada de um ou mais doadores não relacionados, ou a partir de um ou mais irmãos não idênticos. Em algumas modalidades, as populações de células singeneicas podem ser utilizadas, tais como as obtidas a partir de doadores geneticamente idênticos, (por exemplo, gêmeos idênticos). Em algumas modalidades, as células são células autólogas; isto é, as células (por exemplo: células progenitoras hematopoiéticas ou células T) são obtidas ou isoladas de um sujeito e administradas ao mesmo sujeito, isto é, o doador e o receptor são os mesmos.
[0473] O termo quantidade eficaz se refere à quantidade de uma população de células progenitoras ou sua progênie necessária para prevenir ou aliviar pelo menos um ou mais sinais ou sintomas de uma afecção médica e se refere a uma quantidade suficiente de uma composição para fornecer o desejado efeito, por exemplo, para tratar um sujeito tendo uma afecção médica. O termo quantidade terapeuticamente eficaz se refere, portanto, a uma quantidade de células progenitoras ou uma composição compreendendo células progenitoras que é suficiente para promover um efeito específico quando administrada a um sujeito típico, tal como alguém que tem ou corre risco de uma afecção médica. Uma quantidade eficaz também incluiría uma quantidade suficiente para impedir ou atrasar o desenvolvimento de um sintoma da doença, alterar o decurso de um
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141/714 sintoma da doença (por exemplo, mas não limitado a, retardar a progressão de um sintoma da doença), ou reverter um sintoma da doença. Entende-se que, para qualquer caso, uma quantidade eficaz apropriada pode ser determinada por um perito na técnica usando experimentação de rotina.
[0474] Para uso nos vários aspectos aqui descritos, uma quantidade eficaz de células progenitoras compreende pelo menos 102 células progenitoras, pelo menos 5 X 102 células progenitoras, pelo menos 103 células progenitoras, pelo menos 5 X 103 células progenitoras, pelo menos 104 células progenitoras, pelo menos 5 X 104 células progenitoras, pelo menos 105 células progenitoras, pelo menos 2 X 105 células progenitoras, pelo menos 3 X 105 células progenitoras, pelo menos 4 X 105 células progenitoras, pelo menos 5 X 105 células progenitoras, pelo menos 6 X 105 células progenitoras, pelo menos 7 X 105 células progenitoras, pelo menos 8 X 105 células progenitoras, pelo menos 9 X 105 células progenitoras, pelo menos 1 X 106 células progenitoras, pelo menos 2 X 106 células progenitoras, pelo menos 3 X 106 células progenitoras, pelo menos 4 X 106 células progenitoras, pelo menos 5 X 106 células progenitoras, pelo menos 6 X 106 células progenitoras, pelo menos 7 X 106 células progenitoras, pelo menos 8 X 106 células progenitoras, pelo menos 9 X 106 células progenitoras, ou múltiplos das mesmas. As células progenitoras são derivadas de um ou mais doadores, ou são obtidos a partir de uma fonte autóloga. Em alguns exemplos aqui descritos, as células progenitoras são expandidas em cultura antes da administração a um sujeito em necessidade.
[0475] Aumentos modestos e incrementais nos níveis do alvo funcional expresso nas células dos pacientes com uma afecção médica podem ser benéficos para melhorar um ou mais sintomas da doença, aumentar a sobrevivência a longo prazo e/ou reduzir os efeitos colaterais associados a outros tratamentos. Após a administração de
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142/714 tais células a pacientes humanos, a presença de progenitores hematopoiéticos que produzem níveis aumentados de alvo funcional é benéfica. Em algumas modalidades, o tratamento eficaz de um sujeito dá origem a pelo menos cerca de 3%, 5% ou 7% do alvo funcional em relação ao alvo total no sujeito tratado. Em algumas modalidades, o alvo funcional será pelo menos cerca de 10% do alvo total. Em algumas modalidades, o alvo funcional será de pelo menos cerca de 20% a 30% do alvo total. Do mesmo modo, a introdução de subpopulações de células relativamente limitadas com níveis significativamente elevados de alvo funcional pode ser benéfica em vários pacientes, porque em algumas situações as células normalizadas terão uma vantagem seletiva em relação às células doentes. No entanto, mesmo níveis modestos de progenitores hematopoiéticos com níveis elevados de alvo funcional podem ser benéficos para melhorar um ou mais aspectos de uma afecção médica em pacientes. Em algumas modalidades, cerca de 10%, cerca de 20%, cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%, cerca de 80%, cerca de 90% ou mais dos progenitores hematopoiéticos nos pacientes aos quais tais as células são administradas estão produzindo níveis aumentados de alvo funcional.
[0476] Administrado se refere à entrega de uma composição de células progenitoras a um sujeito por um método ou via que resulta em pelo menos localização parcial da composição celular em um sítio desejado. Uma composição celular pode ser administrada por qualquer via apropriada que resulte em tratamento eficaz no sujeito, ou seja, a administração resulta na entrega em um sítio desejado no sujeito onde pelo menos uma porção da composição é entregue, isto é, pelo menos 1 x 104 células são entregues no sítio desejado por um período de tempo. Os modos de administração incluem injeção, infusão, instilação ou ingestão. Injeção inclui, sem limitação, injeção e infusão
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143/714 intravenosa, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intraventricular, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraceal, subcutânea, subcuticular, intra-articular, subcapsular, subaracnoidea, intra-espinhal, intracérebro-espinhal e intra-esternal. Em algumas modalidades, a via é intravenosa. Para a entrega das células, pode ser feita a administração por injeção ou infusão.
[0477] As células são administradas sistemicamente. As frases administração sistêmica, administrada sistemicamente, administração periférica e administrada periférica se referem à administração de uma população de células progenitoras que não seja diretamente em um sítio, tecido ou órgão alvo, de forma que entre no sistema circulatório do sujeito e, portanto, está sujeito ao metabolismo e outros processos semelhantes.
[0478] A eficácia de um tratamento compreendendo uma composição para o tratamento de uma afecção médica pode ser determinada pelo médico especialista. No entanto, um tratamento é considerado tratamento eficaz, se algum ou todos os sinais ou sintomas de, como um exemplo, níveis de alvo funcional forem alterados de maneira benéfica (por exemplo, aumentado em pelo menos 10%), ou outros sintomas clinicamente aceites ou marcadores da doença são melhorados ou aperfeiçoados. A eficácia também pode ser medida pela falha de um sujeito em piorar, conforme avaliado por hospitalização ou necessidade de intervenções médicas (por exemplo, a progressão da doença é interrompida ou pelo menos retardada). Os métodos para medir esses indicadores são conhecidos dos peritos na técnica e/ou aqui descritos. O tratamento inclui qualquer tratamento de uma doença em um sujeito ou animal (alguns exemplos não limitativos incluem um humano ou um mamífero) e inclui: (1) inibição da doença, por exemplo, interromper ou retardar a progressão dos sintomas; ou (2) aliviar a doença, por exemplo, causando regressão dos sintomas; e (3) prevenir
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144/714 ou reduzir a probabilidade de desenvolvimento de sintomas.
[0479] O tratamento de acordo com a presente divulgação melhora um ou mais sintomas associados com uma afecção médica através do aumento da quantidade de alvo funcional no sujeito. Os primeiros sinais normalmente associados a uma afecção médica incluem, por exemplo, desenvolvimento de linfopenia de células T alfa/beta com expansão de células T gama/delta, infecção grave por citomegalovírus (CMV), autoimunidade, inflamação crônica da pele, eosinofilia, falha no crescimento, linfonodos inchados, baço inchado, diarréia e aumento do fígado.
Kits
[0480] A presente divulgação fornece kits para executar os métodos aqui descritos. Um kit pode incluir um ou mais de um ácido nucleico com alvo no genoma, um polinucleotídeo que codifica um ácido nucleico com alvo no genoma, um polipeptídeo direcionado ao sítio, um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo direcionado ao sítio e/ou qualquer ácido nucleico ou molécula proteica necessária realizar os aspectos dos métodos aqui descritos, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0481] Em algumas modalidades, um kit compreende: (1) um vetor compreendendo uma sequência nucleotídica que codifica um ácido nucleico com alvo no genoma, (2) o polipeptídeo direcionado ao sítio ou um vetor compreendendo uma sequência nucleotídica que codifica o polipeptídeo direcionado ao sítio e (3) um reagente para reconstituição e/ou diluição do(s) vetor(es) e/ou polipeptídeo.
[0482] Em algumas modalidades, um kit compreende: (1) um vetor compreendendo (i) uma sequência de nucleotídeos que codifica um ácido nucleico com alvo no genoma e (ii) uma sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo direcionado ao sítio; e (2) um reagente para reconstituição e/ou diluição do vetor.
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[0483] Em algumas modalidades, de qualquer um dos kits acima, o kit compreende um ácido nucleico com alvo no genoma guia de molécula simples. Em algumas modalidades, de qualquer um dos kits acima, o kit compreende um ácido nucleico com alvo no genoma de molécula dupla. Em algumas modalidades, de qualquer um dos kits acima, o kit compreende duas ou mais moléculas guias duplas ou moléculas simples guias. Em algumas modalidades, os kits compreendem um vetor que codifica o ácido nucleico com alvo no ácido nucleico.
[0484] Em qualquer um dos kits acima, o kit compreende ainda um polinucleotídeo a ser inserido para afetar a modificação genética desejada.
[0485] Os componentes de um kit podem estar em recipientes separados ou combinados em um único recipiente.
[0486] Qualquer kit descrito acima pode ainda compreender um ou mais reagentes adicionais, onde tais reagentes adicionais são selecionados a partir de um tampão, um tampão para a introdução de um polipeptídeo ou polinucleotídeo em uma célula, um tampão de lavagem, um reagente de controle, um vetor de controle, um polinucleotídeo RNA de controle, um reagente para produção in vitro do polipeptídeo a partir de DNA, adaptadores para sequenciamento e similares. Um tampão pode ser um tampão de estabilização, um tampão de reconstituição, um tampão de diluição ou similares. Em algumas modalidades, um kit também compreende um ou mais componentes que podem ser usados para facilitar ou aumentar a ligação ao alvo ou a divagem do DNA pela endonuclease, ou melhorar a especificidade de direcionamento.
[0487] Além dos componentes mencionados acima, um kit compreende ainda instruções para usar os componentes do kit para praticar os métodos. As instruções para a prática dos métodos são
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146/714 geralmente gravadas em um meio de gravação adequado. Por exemplo, as instruções podem ser impressas em um substrato, tal como papel ou plástico, etc. As instruções podem estar presentes nos kits como um folheto informativo, na rotulagem do recipiente do kit ou de seus componentes (ou seja, associados a embalagem ou subembalagem), etc. As instruções podem estar presentes como um arquivo de dados de armazenamento eletrônico presente em um meio de armazenamento legível por computador adequado, por exemplo, CD-ROM, disquete, unidade flash etc. Em alguns casos, as instruções reais não estão presentes no kit, mas podem ser fornecidos meios para obter as instruções de uma fonte remota (por exemplo, via Internet). Um exemplo deste caso é um kit que compreende um endereço da Web em que as instruções podem ser visualizadas e/ou do qual as instruções podem ser baixadas. Como nas instruções, este meio para obter as instruções pode ser gravado em um substrato adequado.
Formulação de RNA Guia
[0488] Os RNAs guia da presente divulgação são formulados com excipientes farmaceuticamente aceitáveis, tais como transportadores, solventes, estabilizadores, adjuvantes, diluentes, etc., dependendo do modo particular de administração e forma de dosagem. Composições de RNA guia são geralmente formuladas para atingir um pH fisiologicamente compatível, e variam de um pH de cerca de 3 a um pH de cerca de 11, cerca de pH 3 a cerca de pH 7, dependendo da formulação e da via de administração. Em algumas modalidades, o pH é ajustado para uma gama de cerca de pH 5,0 a cerca de pH 8. Em algumas modalidades, as composições compreendem uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um composto como aqui descrito, juntamente com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Opcionalmente, as composições compreendem uma combinação dos compostos aqui descritos ou podem incluir um segundo
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147/714 ingrediente ativo útil no tratamento ou prevenção do crescimento bacteriano (por exemplo e sem limitação, agentes antibacterianos ou antimicrobianos), ou pode incluir uma combinação de reagentes da presente divulgação.
[0489] Excipientes adequados incluem, por exemplo, moléculas transportadoras que incluem macromoléculas grandes, metabolizadas lentamente, tais como proteínas, polissacarídeos, ácidos poliláticos, ácidos poliglicólicos, aminoácidos poliméricos, copolímeros de aminoácidos e partículas de vírus inativas. Outros excipientes exemplificativos podem incluir antioxidantes (por exemplo e sem limitação, ácido ascórbico), agentes quelantes (por exemplo e sem limitação, EDTA), carboidratos (por exemplo e sem limitação, dextrina, hidroxialquilcelulose e hidroxialquilmetilcelulose), ácido esteárico, líquidos (por exemplo e sem limitação, óleos, água, solução salina, glicerol e etanol), agentes umectantes ou emulsificantes, substâncias tamponantes de pH e similares.
Outras abordagens terapêuticas possíveis
[0490] A edição de genes pode ser realizada usando nucleases concebidas para atingir sequências específicas. Até o momento, existem quatro tipos principais de nucleases: meganucleases e suas derivadas, nucleases de dedo de zinco (ZFNs), ativador de transcrição, tais como nucleases efetoras (TALENs) e sistemas de nuclease CRISPR-Cas9. As plataformas de nuclease variam em dificuldade de design, densidade de direcionamento e o modo de ação, principalmente porque a especificidade de ZFNs e TALENs ocorre por meio de interações proteína-DNA, enquanto as interações RNA-DNA orientam principalmente Cas9. A divagem Cas9 também requer um motivo adjacente, o PAM, que difere entre os diferentes sistemas CRISPR. Cas9 de Streptococcus pyogenes cliva usando um NRG PAM, CRISPR de Neisseria meningitidis pode clivar em sítios com PAMs incluindo
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NNNNGATT, NNNNNGTTT e NNNNGCTT. Vários outros ortólogos Cas9 têm como alvo o proto-espaçador adjacente aos PAMs alternativos.
[0491] Endonucleases de CRISPR, tal como Cas9, podem ser usadas nos métodos da presente divulgação. No entanto, os ensinamentos aqui descritos, tais como sítios alvo terapêuticos, podem ser aplicados a outras formas de endonucleases, tais como ZFNs, TALENs, HEs ou MegaTALs, ou usando combinações de nucleases. No entanto, para aplicar os ensinamentos da presente divulgação a essas endonucleases, seria necessário, entre outras coisas, manipular proteínas direcionadas para os sítios alvo específicos.
[0492] Domínios de ligação adicionais podem ser fundidos à proteína Cas9 para aumentar a especificidade. Os sítios alvo desses construtos mapeariam para o sítio especificado de gRNA identificado, mas exigiríam motivos de ligação adicionais, tal como para um domínio de dedo de zinco. No caso de Mega-TAL, uma meganuclease pode ser fundida com um domínio de ligação de DNA TALE. O domínio da meganuclease pode aumentar a especificidade e fornecer a divagem. Da mesma forma, Cas9 inativada ou morta (dCas9) pode ser fundida com um domínio de divagem e requer o sítio alvo sgRNA/Cas9 e o sítio de ligação adjacente para o domínio de ligação ao DNA fundido. Isso provavelmente exigiría alguma manipulação de proteínas de dCas9, além da inativação catalítica, para diminuir a ligação sem o sítio de ligação adicional.
Nucleases de Dedo de Zinco
[0493] As nucleases de dedo de zinco (ZFNs) são proteínas modulares constituídas por um domínio de ligação de DNA de dedo de zinco manipulado, ligado ao domínio catalítico da endonuclease tipo II Fokl. Como o Fokl funciona apenas como um dímero, um par de ZFNs deve ser manipulado para se ligar às sequências cognitivas de meio
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149/714 sítio alvo em fitas de DNA opostas e com espaçamento preciso entre elas para permitir a formação do dímero Fokl cataiiticamente ativo. Após a dimerização do domínio Fokl, que por si só não possui especificidade de sequência, é gerada uma quebra de fita dupla de DNA entre os meios-sítios ZFN como o passo inicial na edição do genoma.
[0494] O domínio de ligação ao DNA de cada ZFN é tipicamente composto por 3-6 dedos de zinco da abundante arquitetura Cys2-His2, com cada dedo reconhecendo principalmente um tripleto de nucleotídeos em uma fita da sequência de DNA alvo, embora a interação da fita cruzada com umo quarto nucleotídeo também pode ser importante. A alteração dos aminoácidos de um dedo em posições que fazem contatos importantes com o DNA altera a especificidade da sequência de um dado dedo. Assim, uma proteína de dedo de zinco com quatro dedos reconhecerá seletivamente uma sequência alvo de 12 pb, onde a sequência alvo é um composto das preferências de tripletos contribuídas por cada dedo, embora a preferência de tripletos possa ser influenciada em graus variados pelos dedos vizinhos. Um aspecto importante dos ZFNs é que eles podem ser facilmente redirecionados para quase qualquer endereço genômico, simplesmente modificando dedos individuais, embora seja necessário um conhecimento considerável para fazer isso bem. Na maioria das aplicações de ZFNs, são utilizadas proteínas de 4-6 dedos, reconhecendo 12-18 pb, respetivamente. Portanto, um par de ZFNs reconhecerá tipicamente uma sequência alvo combinada de 24-36 pb, não incluindo o espaçador de 5-7 pb entre os meios-sítios. Os sítios de ligação podem ser separados ainda mais com espaçadores maiores, incluindo 15-17 pb. É provável que uma sequência alvo deste comprimento seja única no genoma humano, assumindo que sequências repetitivas ou homólogos de genes sejam excluídos durante o processo de design. No entanto, as interações DNA-proteína ZFN não
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150/714 são absolutas em sua especificidade, portanto ocorrem eventos de ligação e divagem fora do alvo, como um heterodímero entre os dois ZFNs ou como um homodímero de um ou outro dos ZFNs. A última possibilidade foi efetivamente eliminada pela manipulação da interface de dimerização do domínio Fokl para criar variantes mais e menos, também conhecidas como variantes obrigatórias de heterodímero, que só podem dimerizar entre si e não consigo mesmas. Forçar o heterodímero obrigatório impede a formação do homodímero. Isso aumentou muito a especificidade de ZFNs, bem como qualquer outra nuclease que adota essas variantes de Fokl.
[0495] Uma variedade de sistemas baseados em ZFN foi descrita na técnica, suas modificações são relatadas regularmente e inúmeras referências descrevem regras e parâmetros que são usados para guiar o design de ZFNs; ver, por exemplo, Segal et al., Proc Natl Acad Sei USA 96(6):2758-63 (1999); Dreier B et al., J Mol Biol. 303(4):489-502 (2000); Liu Q et al., J Biol Chem. 277(6):3850-6 (2002); Dreier et al., J Biol Chem 230(42):35588-97 (2005); e Dreier et al., J Biol Chem. 276(31 ):29466-78 (2001).
Nucleases de Efetores do Tipo Ativador de Transcrição (TALENs) [0496] TALENs representam outro formato de nucleases modulares em que, assim como os ZFNs, um domínio de ligação de DNA manipulado é ligado ao domínio de nuclease de Fokl e um par de TALENs opera em conjunto para alcançar a divagem de DNA direcionada. A principal diferença dos ZFNs é a natureza do domínio de ligação ao DNA e as propriedades de reconhecimento de sequência de DNA alvo associadas. O domínio de ligação DE DNA TALEN deriva das proteínas TALE, que foram originalmente descritas no patógeno bacteriano vegetal Xanthomonas sp. As TALEs são compostas por arranjos em tandem de 33 a 35 repetições de aminoácidos, com cada repetição reconhecendo um único par de bases na sequência de DNA
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151/714 alvo que normalmente tem até 20 pb de comprimento, fornecendo um comprimento total de sequência alvo de até 40 pb. A especificidade nucleotídica de cada repetição é determinada pelo diresíduo variável de repetição (RVD), que inclui apenas dois aminoácidos nas posições 12 e 13. As bases guanina, adenina, citosina e timina são predominantemente reconhecidas pelos quatro RVDs: Asn-Asn, Asnlle, His-Asp e Asn-Gly, respectivamente. Isso constitui um código de reconhecimento muito mais simples do que para os dedos de zinco e, portanto, representa uma vantagem sobre o último para o design da nuclease. No entanto, assim como os ZFNs, as interações proteínaDNA de TALENs não são absolutas em sua especificidade, e as TALENs também se beneficiaram do uso de variantes heterodiméricas obrigatórias do domínio Fokl para reduzir a atividade fora do alvo.
[0497] Foram criadas variantes adicionais do domínio Fokl que são desativadas em sua função catalítica. Se metade de um par TALEN ou ZFN contiver um domínio Fokl inativo, apenas a divagem de DNA de fita simples (nicking') ocorrerá no sítio alvo, em vez de um DSB. O resultado é comparável ao uso de mutantes nickase CRISP R/Cas9/Cpf1 nos quais um dos domínios de divagem Cas9 foi desativado. Os nicks de DNA podem ser usados para conduzir a edição do genoma por HDR, mas com menor eficiência do que com um DSB. O principal benefício é que os nicks fora do alvo são reparados com rapidez e precisão, ao contrário de DSB, que é propenso a reparações mediadas por NHEJ.
[0498] Uma variedade de sistemas baseados em TALEN foi descrita na técnica e suas modificações são relatadas regularmente; ver, por exemplo, Boch, Science 326(5959):1509-12 (2009); Mak et aí., Science 335(6069):716-9 (2012); e Moscou et aí., Science 326(5959):1501 (2009). O uso de TALENs com base na plataforma Golden Gate, ou esquema de clonagem, foi descrito por vários grupos;
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152/714 ver, por exemplo, Cermak et al., Nucleic Acids Res. 39(12):e82 (2011); Li etal., Nucleic Acids Res. 39(14):6315-25(2011); Weber etal., PLoS One. 6(2) :e 16765 (2011); Wang etal., J Genet Genomics 41(6):339-47, Epub 17 de maio de 2014 (2014); e Cermak T et al., Methods Mol Biol. /239:133-59 (2015).
Endonucleases Homing
[0499] Endonucleases homing (HEs) são endonucleases específicas de sequência que possuem longas sequências de reconhecimento (14-44 pares de bases) e clivam o DNA com alta especificidade - geralmente em sítios únicos no genoma. Existem pelo menos seis famílias conhecidas de HEs classificadas por sua estrutura, incluindo LAGLIDADG (SEQ ID NO: 4), GIY-YIG (SEQ ID NO: 5), caixa His-Cis, H-N-H, PD-(D/E)xK (SEQ ID NO: 6) e tipo Vsr que são derivadas de uma ampla gama de hospedeiros, incluindo eucarióticas, procarióticos, bactérias, archaea, cianobactérias e fagos. Como nas ZFNs e TALENs, as HEs podem ser usadas para criar um DSB em um sítio alvo como o passo inicial na edição do genoma. Além disso, algumas HEs naturais e manipuladas cortam apenas uma única fita de DNA, funcionando assim como nickases específicas do sítio. A grande sequência alvo de HEs e a especificidade que eles oferecem os tornaram candidatos atraentes para criar DSBs específicos do sítio.
[0500] Uma variedade de sistemas baseados em HE foi descrita na técnica e suas modificações são relatadas regularmente; ver, por exemplo, as revisões de Steentoft et al., Glycobiology 24(8):663-80 (2014); Belfort e Bonocora, Methods Mol Biol. 1123Λ-26 (2014); Hafez e Hausner, Genome 55(8):553-69 (2012); e referências aí citadas.
MegaTAL I Tev-mTALEN I MegaTev
[0501] Como exemplos adicionais de nucleases híbridas, a plataforma MegaTAL e a plataforma Tev-mTALEN usam uma fusão de domínios de ligação ao DNA TALE e HEs cataliticamente ativas,
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153/714 aproveitando a ligação e especificidade ajustáveis do DNA da TALE, bem como a especificidade da sequência de divagem de HE; ver, por exemplo, Boissel etal., NAR42:2591 -2601 (2014); Kleinstiver etal., G3 4:1155-65 (2014); e Boissel e Scharenberg, Methods Mol. Biol. 1239: 171-96 (2015).
[0502] Em uma variação adicional, a arquitetura MegaTev é a fusão de uma meganuclease (Mega) com o domínio nuclease derivado da endonuclease homing l-Tevl (Tev) GIY-YIG. Os dois sítios ativos estão posicionados a ~30 pb de distância em um substrato de DNA e geram dois DSBs com extremidades coesivas não compatíveis; ver, por exemplo, Wolfs et aí., NAR 42, 8816-29 (2014). Prevê-se que outras combinações de abordagens baseadas em nuclease existentes evoluam e sejam úteis para alcançar as modificações de genoma direcionadas aqui descritas.
dCas9-Fokl ou dCpf1-Fok1 e outras nucleases
[0503] A combinação das propriedades estruturais e funcionais das plataformas de nuclease descritas acima oferece uma abordagem adicional à edição do genoma que pode potencialmente superar algumas das deficiências inerentes. Como exemplo, o sistema de edição do genoma CRISPR normalmente usa uma única endonuclease Cas9 para criar um DSB. A especificidade do direcionamento é dirigida por uma sequência de 20 ou 22 nucleotídeos no RNA guia que sofre o emparelhamento de bases de Watson-Crick com o DNA alvo (mais 2 bases adicionais na sequência adjacente de NAG ou NGG PAM no caso de Cas9 de Spyogenes). Essa sequência é longa o suficiente para ser única no genoma humano; no entanto, a especificidade da interação RNA/DNA não é absoluta, com promiscuidade significativa às vezes tolerada, particularmente na metade 5’ da sequência alvo, reduzindo efetivamente o número de bases que geram especificidade. Uma solução para isso foi desativar completamente a função catalítica Cas9
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154/714 ou Cpf 1 - mantendo apenas a função de ligação ao DNA guiada por RNA - e, em vez disso, fundindo um domínio Fokl a Cas9 desativada; ver, por exemplo, Tsai et al., Nature Biotech 32: 569-76 (2014); e Guilinger et al., Nature Biotech. 32: 577-82 (2014). Como o Fokl deve dimerizar para se tornar cataiiticamente ativo, são necessários dois RNAs guia para amarrar duas fusões Fokl nas proximidades para formar o dímero e clivar o DNA. Tal basicamente duplica o número de bases nos sítios alvo combinados, aumentando assim o rigor do direcionamento por sistemas baseados em CRISPR.
[0504] Como exemplo adicional, a fusão do domínio de ligação de TALE DNA a uma HE cataiiticamente ativa, tal como I-Tevl, aproveita a ligação e a especificidade ajustáveis de TALE, bem como a especificidade da sequência de divagem do I-Tevl, com a expectativa de que a divagem fora do alvo possa ser reduzida ainda mais.
Aspectos Adicionais
[0505] São aqui fornecidos ácidos nucleicos, vetores, células, métodos e outros materiais para uso em métodos ex vivo e in vivo para criar mudanças permanentes no genoma, deletando, inserindo ou modulando a expressão ou função de um ou mais ácidos nucleicos ou éxons dentro ou próximo a um gene alvo ou outras sequências de DNA que codificam elementos reguladores do gene alvo ou knocking em um cDNA, vetor de expressão ou minigene, que podem ser usados para tratar uma condição médica, tal como, por meio de exemplo não limitative, câncer, doença inflamatória e/ou doença autoimune. Também são fornecidos neste documento componentes, kits e composições para a execução de tais métodos. Também são fornecidas células produzidas por esses métodos.
[0506] Os parágrafos seguintes também são abrangidos pela presente divulgação:
1. Um ácido nucleico isolado que codifica um construto de
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155/714 receptor de antígeno quimérico (CAR) de knockin, em que o construto de CAR de knockin compreende um modelo doador de polinucleotídeo, compreendendo pelo menos uma porção de um gene alvo operacionalmente ligado a um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR) compreendendo: (i) um ectodomínio compreendendo uma região de reconhecimento de antígeno; (ii) um domínio transmembranar e (iii) um endodomínio compreendendo pelo menos um domínio coestimulador.
2. O ácido nucleico isolado do parágrafo 1, compreendendo ainda um promotor, um ou mais elementos reguladores de genes ou uma combinação dos mesmos.
3. O ácido nucleico isolado do parágrafo 2, em que o um ou mais elementos reguladores de genes são selecionados a partir do grupo que consiste em uma sequência intensificadora, uma sequência de introns, uma sequência de poliadenilação (poli(A)) e suas combinações.
4. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 3, em que o gene alvo compreende uma sequência do gene alvo associada à resposta do hospedeiro versus enxerto, uma sequência de gene associada à resposta do enxerto versus hospedeiro, uma sequência de genes que codifica um inibidor do ponto de verificação ou qualquer combinação dos mesmos.
5. O ácido nucleico isolado do parágrafo 4, em que a sequência de genes associada a uma resposta enxerto versus hospedeiro é selecionada a partir do grupo que consiste em TRAC, CD3-épsilon (CD3e) e suas combinações.
6. O ácido nucleico isolado do parágrafo 4, em que a sequência de genes associada a uma resposta hospedeiro versus enxerto é selecionada a partir do grupo que consiste em B2M, CIITA, RFX5 e suas combinações.
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7. O ácido nucleico isolado do parágrafo 4, em que a sequência de genes que codifica um inibidor de ponto de verificação é selecionada do grupo que consiste em PD1, CTLA-4 e suas combinações.
8. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 3, em que o gene alvo compreende uma sequência associada à modulação farmacológica de uma célula.
9. O ácido nucleico isolado do parágrafo 8, em que o gene alvo é CD52.
10. O ácido nucleico isolado do parágrafo 8, em que a modulação é positiva ou negativa.
11. O ácido nucleico isolado do parágrafo 8, em que a modulação permite que as células T CAR sobrevivam.
12. O ácido nucleico isolado do parágrafo 8, em que a modulação mata as células T CAR.
13. O ácido nucleico isolado do parágrafo 1, compreendendo ainda um minigene ou cDNA.
14. O ácido nucleico isolado do parágrafo 13, em que o minigene ou cDNA compreende uma sequência de genes associada à modulação farmacológica de uma célula.
15. O ácido nucleico isolado do parágrafo 14, em que a sequência do gene codifica Her2.
16. O ácido nucleico isolado do parágrafo 4, em que o gene alvo compreende um gene selecionado do grupo que consiste em TRAC, CD3e, B2M, CIITA, RFX5, PD1, CTLA-4, CD52, PPP1R12C e suas combinações.
17. O ácido nucleico isolado do parágrafo 4, em que o gene alvo compreende um gene selecionado do grupo que consiste em TRAC, B2M e PD1.
18. O ácido nucleico isolado do parágrafo 4, em que o gene alvo compreende dois ou mais genes selecionados do grupo que consiste
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157/714 em TRAC, CD3e, B2M, CIITA, RFX5, PD1, CTLA-4, CD52, PPP1R12C e suas combinações.
19. O ácido nucleico isolado do parágrafo 4, em que o gene alvo compreende dois ou mais genes selecionados do grupo que consiste em TRAC, B2M e PD1.
20. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 19, em que o modelo doador é um polinucleotídeo de fita simples ou dupla.
21. O ácido nucleico isolado do parágrafo 20, em que a porção do gene alvo é selecionada do grupo que consiste em TRAC, CD3e, B2M, CIITA, RFX5, PD1, CTLA-4, CD52, PPP1R12C e suas combinações.
22. O ácido nucleico isolado do parágrafo 20, em que a porção do gene alvo compreende uma porção de TRAC, uma porção de B2M e/ou uma porção de PD1.
23. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 22, em que o domínio de reconhecimento de antígeno reconhece CD19, BCMA, CD70, ou suas combinações.
24. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 22, em que o domínio de reconhecimento de antígeno reconhece CD19.
25. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 22, em que o domínio de reconhecimento de antígeno reconhece CD70.
26. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 22, em que o domínio de reconhecimento de antígeno reconhece BCMA.
27. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 26, em que o domínio de reconhecimento é um scFV.
28. O ácido nucleico isolado do parágrafo 27, em que o scFV é um scFv anti-CD19 codificado por uma sequência de ácidos nucleicos compreendendo SEQ ID NO: 1333 ou uma sequência de aminoácidos
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158/714 compreendendo SEQ ID NO: 1334.
29. O ácido nucleico isolado do parágrafo 27, em que o scFV é um scFv anti-CD70
1) codificado por uma sequência de ácido nucleico compreendendo SEQ ID NO: 1475 ou uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO: 1499 ou
2) codificado por uma sequência de ácido nucleico compreendendo SEQ ID NO: 1476 ou uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO: 1500.
30. O ácido nucleico isolado do parágrafo 27, em que o scFV é um scFv anti-BCMA
1) codificado por uma sequência de ácido nucleico compreendendo SEQ ID NO: 1477-1498 ou uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO: 1501-1522 ou
2) codificado por uma sequência de ácido nucleico compreendendo SEQ ID NO: 1485 ou uma sequência de aminoácidos compreendendo SEQ ID NO: 1509.
31. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 30, em que o domínio coestimulador compreende um domínio coestimulador de CD28 ou um domínio coestimulador de 4-1 BB.
32. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 31, em que o endodomínio compreende ainda um domínio CD3-zeta (CD3<).
33. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 32, em que o ectodomínio compreende ainda um peptídeo sinal.
34. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 33, em que o ectodomínio compreende ainda uma dobradiça entre a região de reconhecimento de antígeno e o domínio transmembranar.
35. O ácido nucleico isolado do parágrafo 34, em que a dobradiça compreende uma região de dobradiça CD8.
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36. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 35, em que o domínio de reconhecimento de antígeno é um fragmento variável de fita simples (scFv), em que a região de dobradiça compreende uma região de dobradiça CD8 e em que o endodomínio compreende um domínio coestimulador CD28 e um domínio Οϋ3ζ, ou um domínio coestimulador 4-1 BB e um domínio Οϋ3ζ.
38. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 36, em que o construto CAR possui o seguinte arranjo estrutural do terminal N ao terminal C: domínio de reconhecimento de antígeno scFv + dobradiça CD8 + domínio transmembranar + domínio costimulador CD28 + domínio Οϋ3ζ, ou domínio de reconhecimento de antígeno scFv + dobradiça CD8 + domínio transmembranar + domínio costimulador 41 BB + domínio Οϋ3ζ.
39. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 38, em que a sequência do modelo doador compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1387-1422.
40. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 38, em que a sequência do modelo doador compreende a sequência da SEQ ID NO: 1390.
41. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 38, em que a sequência do modelo doador compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1394-1396.
42. O ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 38, em que a sequência do modelo doador compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1397-1422, por exemplo, SEQ ID NOs: 1398, 1401, 1402, 1408 ou 1409.
43. Um vetor compreendendo o ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1 a 42.
44. O vetor do parágrafo 42, em que o vetor é um AAV.
45. O vetor do parágrafo 43 ou 44, em que o vetor AAV é um
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160/714 vetor AAV6.
46. O vetor do parágrafo 43 ou 44, em que o vetor compreende uma sequência de DNA selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO: 1348-1386.
47. O vetor do parágrafo 43 ou 44, em que o vetor compreende uma sequência de DNA da SEQ ID NO: 1354.
48. O vetor do parágrafo 42 ou 43, em que o vetor compreende uma sequência de DNA selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO: 1358-1360.
49. O vetor do parágrafo 42 ou 43, em que o vetor compreende uma sequência de DNA selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO: 1362, 1365, 1366, 1372, e 1373.
50. Uma célula isolada compreendendo o vetor de qualquer um dos parágrafos 43-49.
51. A célula isolada do parágrafo 50, em que a célula é uma célula T.
52. A célula isolada do parágrafo 51, em que a célula T é uma célula T CD4+, uma célula T CD8+ ou uma combinação das mesmas.
53. Um ou mais ácidos ribonucleicos de guia (gRNAs) para editar um gene, o um ou mais gRNAs selecionados do grupo que consiste em:
(a) um ou mais gRNAs para editar um gene TRAC, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada a partir do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 83-158;
(b) um ou mais gRNAs para editar um gene B2M, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada a partir do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 458-506;
(c) um ou mais gRNAs para editar um gene CIITA, o um ou
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161/714 mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada a partir do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 699-890;
(d) um ou mais gRNAs para editar um gene CD3e, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada a partir do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 284-408; ou (e) um ou mais gRNAs para editar um gene PD1, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada a partir do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 1083-1274.
54. O um ou mais gRNAs do parágrafo 53, em que o um ou mais gRNAs são um ou mais RNAs guia de molécula única (sgRNAs).
55. O um ou mais gRNAs ou sgRNAs dos parágrafos 53 ou 54, em que o um ou mais gRNAs ou um ou mais sgRNAs são um ou mais gRNAs modificados ou um ou mais sgRNAs modificados.
56. Uma partícula de ribonucleoproteína que compreende um ou mais gRNAs ou sgRNAs de qualquer um dos parágrafos 53-55 e um ou mais polipeptídeos direcionados ao sítio.
57. A partícula de ribonucleoproteína do parágrafo 56, em que o um ou mais polipeptídeos direcionados ao sítio são uma ou mais endonucleases do ácido desoxirribonucleico (DNA).
58. A partícula de ribonucleoproteína do parágrafo 57, em que a uma ou mais endonucleases de DNA é uma endonuclease Cas9 ou Cpf1; ou um seu homólogo, recombinação da molécula que ocorre naturalmente, versão otimizada por códon ou modificada da mesma e combinações das mesmas.
59. A partícula de ribonucleoproteína dos parágrafos 57 ou 58, em que as uma ou mais endonucleases de DNA são pré-complexadas com um ou mais gRNAs ou um ou mais sgRNAs.
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60. Uma composição que compreende o ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1-42 e uma ou mais partículas de ribonucleoproteína de qualquer um dos parágrafos 56-59.
61. A composição do parágrafo 60, em que o gene alvo é um gene TRAC, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD19 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene TRAC.
62. A composição do parágrafo 60, em que o gene alvo é um gene B2M, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD19 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene B2M.
63. A composição do parágrafo 60, em que o gene alvo é um gene PD1, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD19 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene PD1.
64. A composição do parágrafo 60, em que o gene alvo é um gene TRAC, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD70 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene TRAC.
65. A composição do parágrafo 60, em que o gene alvo é um gene B2M, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD70 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene B2M.
66. A composição do parágrafo 60, em que o gene alvo é um gene PD1, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD70 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene PD1.
67. A composição do parágrafo 60, em que o gene alvo é um gene TRAC, a região de reconhecimento de antígeno reconhece BCMA e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene
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TRAC.
68. A composição do parágrafo 60, em que o gene alvo é um gene B2M, a região de reconhecimento de antígeno reconhece BCMA e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene B2M.
69. A composição do parágrafo 60, em que o gene alvo é um gene PD1, a região de reconhecimento de antígeno reconhece BCMA e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene PD1.
70. A composição de qualquer um dos parágrafos 61 -69, em que o modelo doador é um polinucleotídeo de fita simples ou dupla.
71. A composição de qualquer um dos parágrafos 60, 61,64, 67 ou 70, em que a uma ou mais partículas de ribonucleoproteína compreendem uma ou mais endonucleases de DNA e um ou mais gRNAs para editar um gene TRAC, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 83-158. 72. A composição de qualquer um dos parágrafos 60, 62, 65, 68 ou 70, em que a uma ou mais partículas de ribonucleoproteína compreendem uma ou mais endonucleases de DNA e um ou mais gRNAs para editar um gene B2M, o um ou mais gRNAs compreendendo um sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 458-506.
73. A composição de qualquer um dos parágrafos 60, 63, 66, 69 ou 70, em que a uma ou mais partículas de ribonucleoproteína compreendem uma ou mais endonucleases de DNA e um ou mais gRNAs para editar um gene PD1, o um ou mais gRNAs compreendendo um sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 1083-1274.
74. A composição dos parágrafos 71 ou 73, em que as uma ou
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164/714 mais partículas de ribonucleoproteínas compreendem ainda um ou mais gRNAs para editar um gene B2M, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos de SEQ ID NOs: 458-506.
75. A composição dos parágrafos 71 ou 72, em que as uma ou mais partículas de ribonucleoproteínas compreendem ainda um ou mais gRNAs para editar um gene PD1, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos de SEQ ID NOs: 1083-1274.
76. A composição dos parágrafos 72 ou 73, em que as uma ou mais partículas de ribonucleoproteínas compreendem ainda um ou mais gRNAs para editar um gene TRAC, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos de SEQ ID NOs: 83-158.
77. Uma composição que compreende o vetor de qualquer um dos parágrafos 43-49 e uma ou mais partículas de ribonucleoproteína de qualquer um dos parágrafos 56-59.
78. A composição do parágrafo 77, em que o gene alvo é um gene TRAC, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD19 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene TRAC.
79. A composição do parágrafo 77, em que o gene alvo é um gene B2M, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD19 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene B2M.
80. A composição do parágrafo 77, em que o gene alvo é um gene PD1, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD19 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene PD1.
81. A composição do parágrafo 77, em que o gene alvo é um
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165/714 gene TRAC, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD70 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene TRAC.
82. A composição do parágrafo 77, em que o gene alvo é um gene B2M, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD70 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene B2M.
83. A composição do parágrafo 77, em que o gene alvo é um gene PD1, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD70 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene PD1.
84. A composição do parágrafo 77, em que o gene alvo é um gene TRAC, a região de reconhecimento de antígeno reconhece BCMA e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene TRAC.
85. A composição do parágrafo 77, em que o gene alvo é um gene B2M, a região de reconhecimento de antígeno reconhece BCMA e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene B2M.
86. A composição do parágrafo 77, em que o gene alvo é um gene PD1, a região de reconhecimento de antígeno reconhece BCMA e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene PD1.
87. A composição de qualquer um dos parágrafos 78-86, em que o modelo doador é um polinucleotídeo de fita simples ou dupla.
88. A composição de qualquer um dos parágrafos 77, 78, 81,84 ou 87, em que a uma ou mais partículas de ribonucleoproteína compreendem uma ou mais endonucleases de DNA e um ou mais gRNAs para editar um gene TRAC, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada do grupo que
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166/714 consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 83-158. 89. A composição de qualquer um dos parágrafos 77, 79, 82, 85 ou 87, em que a uma ou mais partículas de ribonucleoproteína compreendem uma ou mais endonucleases de DNA e um ou mais gRNAs para editar um gene B2M, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 458-506.
90. A composição de qualquer um dos parágrafos 77, 80, 83, 86 ou 87, em que a uma ou mais partículas de ribonucleoproteína compreendem uma ou mais endonucleases de DNA e um ou mais gRNAs para editar um gene PD1, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 1083-1275.
91. A composição dos parágrafos 88 ou 90, em que as uma ou mais partículas de ribonucleoproteínas compreendem ainda um ou mais gRNAs para editar um gene B2M, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos de SEQ ID NOs: 458-506.
92. A composição dos parágrafos 88 ou 89, em que as uma ou mais partículas de ribonucleoproteínas compreendem ainda um ou mais gRNAs para editar um gene PD1, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos de SEQ ID NOs: 1083-1275.
93. A composição dos parágrafos 89 ou 90, em que as uma ou mais partículas de ribonucleoproteínas compreendem ainda um ou mais gRNAs para editar um gene TRAC, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos de SEQ ID NOs: 83-158.
94. A composição de qualquer um dos parágrafos 77, 78, 81,84, 87, 88 ou 93, em que o modelo doador compreende uma sequência
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167/714 selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1387 e 1390 e o gRNA é um sgRNA para editar um gene TRAC compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 1342 ou 1343.
95. A composição de qualquer um dos parágrafos 77, 78, 81,84, 87, 88 ou 93, em que o modelo doador compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1394-1396 e o gRNA é um sgRNA para editar um gene TRAC compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 1342 ou 1343.
96. A composição de qualquer um dos parágrafos 77, 78, 81,84, 87, 88 ou 93, em que o modelo doador compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1398, 1400, 1401, 1402, 1408, e 1409 e o gRNA é um sgRNA para editar um gene TRAC compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 1342 ou 1343.
97. A composição de qualquer um dos parágrafos 94-96, compreendendo ainda um sgRNA para editar um gene B2M compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 1344 ou 1345.
98. A composição de qualquer um dos parágrafos 77, 79, 82, 85, 87, 89, 91, em que o modelo doador compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1387 e 1390 e o gRNA é um sgRNA para editar um gene B2M compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 1342 ou 1343.
99. A composição de qualquer um dos parágrafos 77, 79, 82, 85, 87, 89, 91, em que o modelo doador compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1394 e 1395 e o gRNA é um sgRNA para editar um gene B2M compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 1342 ou 1343.
100. A composição de qualquer um dos parágrafos 77, 79, 82, 85, 87, 89, 91, em que o modelo doador compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1398 e 1400 e o gRNA é um sgRNA para editar um gene B2M compreendendo a
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168/714 sequência da SEQ ID NO: 1342 ou 1343.
101. Uma célula isolada que compreende o ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1-42 e uma ou mais partículas de ribonucleoproteína de qualquer um dos parágrafos 56-59.
102. A célula isolada do parágrafo 101, em que o gene alvo é um gene TRAC, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD19 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene TRAC.
103. A célula isolada do parágrafo 101, em que o gene alvo é um gene B2M, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD19 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene B2M.
104. A célula isolada do parágrafo 101, em que o gene alvo é um gene PD1, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD19 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene PD1.
105. A célula isolada do parágrafo 101, em que o gene alvo é um gene TRAC, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD70 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene TRAC.
106. A célula isolada do parágrafo 101, em que o gene alvo é um gene B2M, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD70 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene B2M.
107. A célula isolada do parágrafo 101, em que o gene alvo é um gene PD1, a região de reconhecimento de antígeno reconhece CD70 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene PD1.
108. A célula isolada do parágrafo 101, em que o gene alvo é um gene TRAC, a região de reconhecimento de antígeno reconhece BCMA
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169/714 e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene TRAC.
109. A célula isolada do parágrafo 101, em que o gene alvo é um gene B2M, a região de reconhecimento de antígeno reconhece BCMA e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene B2M.
110. A célula isolada do parágrafo 101, em que o gene alvo é um gene PD1, a região de reconhecimento de antígeno reconhece BCMA e o modelo doador compreende pelo menos uma porção de um gene PD1.
111. A célula isolada de qualquer um dos parágrafos 102-110, em que o modelo doador é um polinucleotídeo de fita simples ou dupla.
112. A célula isolada de qualquer um dos parágrafos 101, 102, 105, 108 ou 111, em que a uma ou mais partículas de ribonucleoproteína compreendem uma ou mais endonucleases de DNA e um ou mais gRNAs para editar um gene TRAC, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 83-158. 113. A célula isolada de qualquer um dos parágrafos 101, 103, 106, 109 ou 111, em que a uma ou mais partículas de ribonucleoproteína compreendem uma ou mais endonucleases de DNA e um ou mais gRNAs para editar um gene B2M, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 458-506. 114. A célula isolada de qualquer um dos parágrafos 101, 104, 107, 110 ou 111, em que a uma ou mais partículas de ribonucleoproteína compreendem uma ou mais endonucleases de DNA e um ou mais gRNAs para editar um gene PD1, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 1083-
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170/714
1274.
115. A célula isolada dos parágrafos 112 ou 114, em que as uma ou mais partículas de ribonucleoproteínas compreendem ainda um ou mais gRNAs para editar um gene B2M, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos de SEQ ID NOs: 458-506. 116. A célula isolada dos parágrafos 112 ou 113, em que as uma ou mais partículas de ribonucleoproteínas compreendem ainda um ou mais gRNAs para editar um gene PD1, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos de SEQ ID NOs: 10831274.
117. A célula isolada dos parágrafos 113 ou 114, em que as uma ou mais partículas de ribonucleoproteínas compreendem ainda um ou mais gRNAs para editar um gene TRAC, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos de SEQ ID NOs: 83-158.
118. A célula isolada de qualquer um dos parágrafos 101 -118, em que a uma ou mais partículas de ribonucleoproteína compreendem duas ou mais populações diferentes de partículas de ribonucleoproteína.
119. A célula isolada do parágrafo 118, em que as uma ou mais partículas de ribonucleoproteína compreendem uma ou mais endonucleases de DNA e duas ou mais populações diferentes de partículas de ribonucleoproteína selecionadas a partir do grupo que consiste em:
(a) um ou mais gRNAs para editar um gene TRAC, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada a partir do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 83-158;
(b) um ou mais gRNAs para editar um gene B2M, o um ou
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171/714 mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada a partir do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 458-506;
(c) um ou mais gRNAs para editar um gene CIITA, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada a partir do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 699-890 para edição do gene CIITA;
(d) um ou mais gRNAs para editar um gene CD3e, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada a partir do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 284-408;
(e) um ou mais gRNAs para editar um gene PD1, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada a partir do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 1083-1274;
(f) um ou mais gRNAs para editar um gene TRAC, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora compreendendo a sequência de ácido nucleico da SEQ ID NO: 1299;
(g) um ou mais gRNAs para editar um gene CTLA-4, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora compreendendo a sequência de ácido nucleico da SEQ ID NO: 1277;
(h) um ou mais gRNAs para editar um gene AAVS1 (PPP1R12C), o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada a partir do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 1301-1302;
(i) um ou mais gRNAs para editar um gene CD52, o um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada a partir do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 1303-1304; e (j) um ou mais gRNAs para editar um gene RFX5, o um ou
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172/714 mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada a partir do grupo que consiste nas sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 1305-1307.
120. Uma célula isolada compreendendo o ácido nucleico isolado de um dos parágrafos 1-42 e uma primeira população de uma ou mais partículas de ribonucleoproteína de qualquer um dos parágrafos 56-59, em que o ácido nucleico isolado é inserido no genoma em um locus dentro ou próximo a um primeiro gene alvo, que resulta em uma deleção permanente dentro ou próxima ao primeiro gene alvo e inserção do ácido nucleico isolado que codifica o CAR.
121. A célula isolada do parágrafo 120, em que a célula isolada compreende ainda uma segunda população de uma ou mais partículas de ribonucleoproteína de qualquer um dos parágrafos 56-59, em que a primeira população de uma ou mais partículas de ribonucleoproteína compreende um ou mais gRNAs para edição de um primeiro gene alvo e a segunda população de uma ou mais partículas de ribonucleoproteína compreendem um ou mais gRNAs para editar um segundo gene alvo diferente.
122. Uma célula isolada, expressando um receptor de antígeno quimérico codificado pelo ácido nucleico de qualquer um dos parágrafos 1-42 e compreendendo uma deleção em um ou mais genes selecionados dentre: TRAC, CD3e, B2M, CIITA, RFX5, PD1, e CTLA-4.
123. Uma célula isolada, expressando um receptor de antígeno quimérico codificado pelo ácido nucleico de qualquer um dos parágrafos 1-42 e compreendendo uma deleção em um ou mais genes selecionados de TRAC, B2M e PD1.
124. Uma célula isolada, expressando um receptor de antígeno quimérico codificado pelo ácido nucleico de qualquer um dos parágrafos 1-42 e compreendendo uma deleção em TRAC.
125. A célula isolada do parágrafo 124, compreendendo ainda
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173/714 uma deleção no B2M.
126. A célula isolada do parágrafo 124, compreendendo ainda uma deleção no B2M e PD1.
127. A célula isolada de qualquer um dos parágrafos 101 -126, em que o receptor de antígeno quimérico é expresso a partir do locus TRAC.
128. A célula isolada do parágrafo 127, em que o receptor de antígeno quimérico compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste na SEQ ID NO: 1334, 1499, 1500, 1501, e 1502.
129. A célula isolada do parágrafo 127, em que o receptor de antígeno quimérico (CAR) compreende uma sequência que codifica o CAR selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO: 1316, 1423, 1424, 1425 e 1426.
130. A célula isolada do parágrafo 127, em que o receptor de antígeno quimérico (CAR) compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste na SEQ ID NO: 1338, 1449, 1450, 1451 e 1452.
131. Uma célula isolada transfectada com o vetor compreendendo um ácido nucleico selecionado do grupo que consiste em: SEQ ID Nos: 1348, 1354, 1358, 1359, 1362 e 1364 e compreendendo ainda uma deleção em um ou mais genes selecionados a partir de: TRAC, CD3e, B2M, CIITA, RFX5, PD1, e CTLA-4.
132. Uma célula isolada transfectada com o vetor compreendendo um ácido nucleico selecionado do grupo que consiste em: SEQ ID Nos: 1348, 1354, 1358, 1359, 1362 e 1364 e compreendendo ainda uma deleção em TRAC.
133. Uma célula isolada transfectada com o vetor compreendendo um ácido nucleico selecionado do grupo que consiste em: SEQ ID Nos: 1348, 1354, 1358, 1359, 1362 e 1364 e compreendendo ainda uma deleção em TRAC e B2M.
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134. Uma célula isolada transfectada com o vetor compreendendo um ácido nucleico selecionado do grupo que consiste em: SEQ ID Nos: 1348, 1354, 1358, 1359, 1362 e 1364 e compreendendo ainda uma deleção em TRAC, B2M e PD1.
135. A célula isolada de qualquer um dos parágrafos 127-134, em que a sequência de ácido nucleico compreende um modelo doador que é permanentemente inserido no gene TRAC, interrompendo a expressão do gene TRAC.
136. A célula isolada do parágrafo 135, compreendendo ainda uma deleção no gene B2M.
137. A célula isolada do parágrafo 136, compreendendo ainda uma deleção no gene PD1.
138. A célula isolada de qualquer um dos parágrafos 131 -137, em que:
a) uma ou mais partículas de ribonucleoproteína efetuam uma ou mais quebras de fita simples ou quebras de fita dupla no gene alvo TRAC, resultando em uma deleção permanente no gene TRAC, em que as partículas de ribonucleoproteína compreendem um ou mais sgRNAs compreendendo uma sequência SEQ ID NO: 1342 ou 1343 e uma ou mais endonucleases do ácido desoxirribonucléico (DNA); e
b) uma ou mais partículas de ribonucleoproteína efetuam uma ou mais quebras de fita simples ou quebras de fita dupla no gene alvo B2M, resultando em uma deleção permanente no gene B2M, em que as partículas de ribonucleoproteína compreendem um ou mais sgRNAs compreendendo uma sequência SEQ ID NO: 1344 ou 1345 e uma ou mais endonucleases do ácido desoxirribonucléico (DNA) 139. Uma célula isolada que compreende:
a) o ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1-42, em que o ácido nucleico isolado é inserido no genoma por recombinação homóloga em um locus dentro ou perto de um gene
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175/714
TRAC que resulta em uma deleção permanente dentro ou perto do gene TRAC;
b) uma deleção permanente dentro ou próxima de um segundo gene alvo, em que o segundo gene alvo é B2M;
c) inserção do ácido nucleico isolado que codifica o CAR no gene TRAC, em que o CAR compreende um domínio de reconhecimento de antígeno CD19; e
d) o CAR é expresso na superfície da célula.
140. Uma célula isolada que compreende:
a) o ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1-42, em que o ácido nucleico isolado é inserido no genoma por recombinação homóloga em um locus dentro ou perto de um gene TRAC que resulta em uma deleção permanente dentro ou perto do gene TRAC;
b) uma deleção permanente dentro ou próxima de um segundo gene alvo, em que o segundo gene alvo é B2M;
c) inserção do ácido nucleico isolado que codifica o CAR no gene TRAC, em que o CAR compreende um domínio de reconhecimento de antígeno CD70; e
d) o CAR é expresso na superfície da célula.
141. Uma célula isolada que compreende:
a) o ácido nucleico isolado de qualquer um dos parágrafos 1-42, em que o ácido nucleico isolado é inserido no genoma por recombinação homóloga em um locus dentro ou perto de um gene TRAC que resulta em uma deleção permanente dentro ou perto do gene TRAC;
b) uma deleção permanente dentro ou próxima de um segundo gene alvo, em que o segundo gene alvo é B2M;
c) inserção do ácido nucleico isolado que codifica o CAR no gene TRAC, em que o CAR compreende um domínio de
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176/714 reconhecimento de antígeno BCMA; e
d) o CAR é expresso na superfície da célula.
142. A célula isolada de qualquer um dos parágrafos 139-141, compreendendo ainda uma deleção permanente dentro ou perto de um terceiro gene alvo, em que o terceiro gene alvo é PD1.
143. A célula isolada de qualquer um dos parágrafos 139-142, em que:
a) o ácido nucleico isolado compreende uma sequência nucleotídica das SEQ ID Nos: 1348, 1354, 1358, 1359, 1362 e 1364;
b) um ou mais gRNAs compreendem uma sequência espaçadora selecionada de SEQ ID Nos: 83-158 e uma ou mais endonucleases de ácido desoxirribonucléico (DNA), efetuam uma ou mais quebras de fita simples ou quebras de fita dupla no gene TRAC, resultando em uma permanente deleção no gene TRAC; e
c) um ou mais gRNAs compreendendo uma sequência espaçadora selecionada das SEQ ID Nos: 458-506 e uma ou mais endonucleases de ácido desoxirribonucléico (DNA), efetuam uma ou mais quebras de fita simples ou quebras de fita dupla no gene B2M, resultando em uma permanente deleção no gene B2M.
144. A célula isolada do parágrafo 143, em que:
a) o ácido nucleico isolado compreende uma sequência nucleotídica é selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 13481357;
b) uma ou mais partículas de ribonucleoproteína efetuam uma ou mais quebras de fita simples ou quebras de fita dupla no gene alvo TRAC, resultando em uma deleção permanente no gene alvo TRAC, em que as partículas de ribonucleoproteína compreendem um ou mais sgRNAs compreendendo uma sequência SEQ ID NO: 1342 ou 1343 e uma ou mais endonucleases do ácido desoxirribonucléico (DNA); e
c) uma ou mais partículas de ribonucleoproteína efetuam
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177/714 uma ou mais quebras de fita simples ou quebras de fita dupla no gene alvo B2M, resultando em uma deleção permanente no gene alvo B2M, em que as partículas de ribonucleoproteína compreendem um ou mais sgRNAs compreendendo uma sequência SEQ ID NO: 1344 ou 1345 e uma ou mais endonucleases do ácido desoxirribonucléico (DNA).
145. A célula isolada do parágrafo 143, em que:
a) o ácido nucleico isolado compreende uma sequência nucleotídica é selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1358 e 1359;
b) uma ou mais partículas de ribonucleoproteína efetuam uma ou mais quebras de fita simples ou quebras de fita dupla no gene alvo TRAC, resultando em uma deleção permanente no gene alvo TRAC, em que as partículas de ribonucleoproteína compreendem um ou mais sgRNAs compreendendo uma sequência SEQ ID NO: 1342 ou 1343 e uma ou mais endonucleases do ácido desoxirribonucléico (DNA); e
c) uma ou mais partículas de ribonucleoproteína efetuam uma ou mais quebras de fita simples ou quebras de fita dupla no gene alvo B2M, resultando em uma deleção permanente no gene alvo B2M, em que as partículas de ribonucleoproteína compreendem um ou mais sgRNAs compreendendo uma sequência SEQ ID NO: 1344 ou 1345 e uma ou mais endonucleases do ácido desoxirribonucléico (DNA).
146. A célula isolada do parágrafo 143, em que:
a) o ácido nucleico isolado compreende uma sequência nucleotídica é selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1362 e 1364;
b) uma ou mais partículas de ribonucleoproteína efetuam uma ou mais quebras de fita simples ou quebras de fita dupla no gene alvo TRAC, resultando em uma deleção permanente no gene alvo TRAC, em que as partículas de ribonucleoproteína compreendem um
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178/714 ou mais sgRNAs compreendendo uma sequência SEQ ID NO: 1342 ou 1343 e uma ou mais endonucleases do ácido desoxirribonucléico (DNA); e
c) uma ou mais partículas de ribonucleoproteína efetuam uma ou mais quebras de fita simples ou quebras de fita dupla no gene alvo B2M, resultando em uma deleção permanente no gene alvo B2M, em que as partículas de ribonucleoproteína compreendem um ou mais sgRNAs compreendendo uma sequência SEQ ID NO: 1344 ou 1345 e uma ou mais endonucleases do ácido desoxirribonucléico (DNA).
147. Composição farmacêutica compreendendo a célula isolada de qualquer um dos parágrafos 101-146.
148. Método para produzir uma célula editada em gene, o método compreendendo os passos de: introdução na célula (i) o ácido nucleico isolado que codifica um construto de receptor de antígeno quimérico (CAR) knockin de qualquer um dos parágrafos 1-42, (ii) um ou mais sgRNA e (iii) uma ou mais endonucleases de ácido desoxirribonucléico (DNA) para efetuar uma ou mais quebras de fita simples (SSBs) ou quebras de fita dupla (DSBs) dentro ou perto de um primeiro gene alvo que resulta em: a) uma deleção permanente dentro ou próxima do primeiro gene alvo que afeta a expressão ou função do primeiro gene alvo, opcionalmente em que a deleção permanente é em PAM ou na sequência alvo de sgRNA e, opcionalmente, em que a deleção permanente é uma deleção de 20 nucleotídeos, b) inserção do construto do CAR dentro ou próxima do primeiro gene alvo e c) expressão do CAR na superfície de uma célula.
149. Método para modular uma ou mais atividades biológicas de uma célula, o método compreendendo o passo de:
introdução na célula (i) o ácido nucleico isolado que codifica um construto de receptor de antígeno quimérico (CAR) knockin de qualquer um dos parágrafos 1-42, (ii) um ou mais sgRNA e (iii) uma ou mais
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179/714 endonucleases de ácido desoxirribonucléico (DNA) para efetuar uma ou mais quebras de fita simples (SSBs) ou quebras de fita dupla (DSBs) dentro ou perto de um primeiro gene alvo que resulta em: a) uma deleção permanente dentro ou próximo do primeiro gene alvo que afeta a expressão ou função do primeiro gene alvo, opcionalmente em que a deleção permanente é em PAM ou na sequência alvo de sgRNA e, opcionalmente, em que a deleção permanente é uma deleção de 20 nucleotídeos, b) inserção do construto do CAR dentro ou próximo do primeiro gene alvo e c) expressão do CAR na superfície de uma célula. 150. O método dos parágrafos 148 ou 149, em que o gRNA e a endonuclease formam uma partícula de ribonucleoproteína.
151. O método de qualquer um dos parágrafos 148-150, compreendendo ainda o passo de introdução na célula de um ou mais gRNAs e uma ou mais endonucleases de ácido desoxirribonucléico (DNA) para efetuar uma ou mais quebras de fita simples (SSBs) ou quebras de fita dupla (DSBs) dentro ou perto de um segundo gene alvo que resulta em uma deleção permanente dentro ou perto do segundo gene alvo afetando a expressão ou função do segundo gene alvo.
152. O método do parágrafo 151, em que o gRNA e a endonuclease formam uma partícula de ribonucleoproteína.
153. O método de qualquer um dos parágrafos 148-152, em que a deleção permanente resulta na modulação de uma ou mais atividades biológicas.
154. O método do parágrafo 153, em que a modulação de atividades biológicas compreende a eliminação de uma atividade biológica do primeiro gene alvo, do segundo gene alvo, opcionalmente de um terceiro gene alvo ou uma combinação das mesmas.
155. O método dos parágrafos 153 ou 154, em que a atividade biológica é resposta hospedeiro versus enxerto, resposta enxerto versus hospedeiro, resposta do ponto de verificação imune, supressão
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180/714 imune ou qualquer combinação dos mesmos.
156. O método dos parágrafos 153 ou 154, em que a atividade biológica é uma resposta enxerto versus hospedeiro, e o primeiro gene alvo, o segundo gene alvo ou uma combinação dos mesmos é selecionado a partir do grupo que consiste em TRAC, CD3-épsilon (CD3e) e suas combinações.
157. O método dos parágrafos 153 ou 154, em que a atividade biológica é uma resposta hospedeiro versus enxerto, e o primeiro gene alvo, o segundo gene alvo ou uma combinação dos mesmos é selecionado a partir do grupo que consiste em B2M, CIITA, RFX5 e combinações dos mesmos.
158. O método dos parágrafos 153 ou 154, em que a atividade biológica é um inibidor de ponto de verificação, e o primeiro gene alvo, o segundo gene alvo ou uma combinação dos mesmos é selecionado a partir do grupo que consiste em PD1, CTLA-4 e combinações dos mesmos.
159. O método dos parágrafos 153 ou 154, em que a atividade biológica é a sobrevivência celular aumentada ou a viabilidade celular melhorada, e o primeiro gene alvo, o segundo gene alvo ou uma combinação dos mesmos é selecionado a partir do grupo que consiste em TRAC, B2M, PD1 e combinações dos mesmos.
160. O método dos parágrafos 153 ou 154, em que o gene codifica uma sequência que modula o controle farmacológico de CAR
T.
161. O método do parágrafo 160, em que o gene codifica CD52.
162. O método do parágrafo 160, em que a modulação é positiva ou negativa.
163. O método do parágrafo 160, em que a modulação permite que as células T CAR sobrevivam.
164. O método do parágrafo 160, em que a modulação mata as
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181/714 células T CAR.
165. O método de qualquer um dos parágrafos 153, 154 ou 163, em que o primeiro gene alvo, o segundo gene alvo ou uma combinação dos mesmos compreende um gene selecionado do grupo que consiste em TRAC, CD3e, B2M, CIITA, RFX5, PD1, CTLA-4, CD52, PPP1R12C e suas combinações.
166. O método de qualquer um dos parágrafos 153, 154 ou 163, em que o primeiro gene alvo, o segundo gene alvo ou uma combinação dos mesmos compreende dois ou mais genes selecionados do grupo que consiste em TRAC, B2M, PD1 e combinações dos mesmos.
167. O método de qualquer um dos parágrafos 153, 154 ou 163, em que o primeiro gene alvo, o segundo gene alvo ou uma combinação dos mesmos compreende TRAC, B2M e PD1.
168. O método dos parágrafos 153 ou 154, em que o modelo doador é um polinucleotídeo de fita simples ou dupla.
169. O método do parágrafo 168, em que a porção do gene alvo é selecionada do grupo que consiste em TRAC, CD3e, B2M, CIITA, RFX5, PD1, CTLA-4, CD52, PPP1R12C e suas combinações.
170. O método do parágrafo 169, em que a porção do gene alvo é selecionada do grupo que consiste em TRAC, B2M, PD1 e suas combinações.
171. O método do parágrafo 169, em que a porção do gene alvo compreende uma porção de TRAC.
172. O método do parágrafo 169, em que a porção do gene alvo compreende uma porção de TRAC e/ou uma porção de B2M.
173. O método do parágrafo 169, em que a porção do gene alvo compreende uma porção de TRAC, uma porção de B2M e/ou uma porção de PD1.
174. O método dos parágrafos 153 ou 154, em que as uma ou mais endonucleases de DNA são pré-complexadas com um ou mais
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182/714 gRNAs, opcionalmente, um ou mais sgRNAs.
175. O método dos parágrafos 153 ou 154, em que o modelo doador é entregue por um vetor viral.
176. O método do parágrafo 175, em que o vetor viral é um vetor de vírus adenoassociado (AAV).
177. O método do parágrafo 176, em que o vetor AAV é um vetor AAV6.
178. O método dos parágrafos 153 ou 154, em que a célula é uma célula T humana primária.
179. O método do parágrafo 178, em que a célula T humana primária é isolada de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs).
180. O método dos parágrafos 178 ou 179, em que as células são alogênicas.
181. O método de qualquer um dos parágrafos 148-180, em que a uma ou mais endonucleases de DNA é uma endonuclease Cas9 ou Cpf1; ou um seu homólogo, recombinação da molécula que ocorre naturalmente, versão modificada por códon ou modificada e combinações das mesmas.
182. O método do parágrafo 181, em que o método compreende introduzir na célula um ou mais polinucleotídeos que codificam a uma ou mais endonucleases de DNA.
183. O método do parágrafo 182, em que o método compreende introduzir na célula um ou mais ácidos ribonucleicos (RNAs) que codificam a uma ou mais endonucleases de DNA.
184. O método dos parágrafos 181 ou 182, em que o um ou mais polinucleotídeos ou um ou mais RNAs são um ou mais polinucleotídeos modificados ou um ou mais RNAs modificados.
185. O método do parágrafo 184, em que a endonuclease de DNA é uma proteína ou polipeptídeo.
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183/714
186. Um método ex vivo para o tratamento de um paciente com uma afecção médica, compreendendo os passos de:
i) isolar uma célula T do paciente;
ii) edição dentro ou próxima de um gene alvo da célula T ou de outras sequências de DNA que codificam elementos reguladores do gene alvo da célula T; e iii) implantar a célula T editada no genoma no paciente.
187. Um método ex vivo para o tratamento de um paciente com uma afecção médica, compreendendo os passos de:
i) isolar uma célula T de um doador;
ii) edição dentro ou próxima de um gene alvo da célula T ou de outras sequências de DNA que codificam elementos reguladores do gene alvo da célula T; e iii) implantar a célula T editada no genoma no paciente.
188. O método dos parágrafos 186 ou 187, em que o passo de isolamento compreende: centrifugação diferencial de células, cultura de células e suas combinações.
189. Um método para o tratamento de um paciente com uma afecção médica, compreendendo os passos de:
i) edição dentro ou perto de um ou mais genes alvo da célula T, ou uma ou mais outras sequências de DNA que codificam elementos reguladores do gene alvo da célula T; e ii) implantar a célula T editada no genoma no paciente.
190. O método de qualquer um dos parágrafos 186-189, em que o passo de edição compreende a introdução na célula T (i) o ácido nucleico isolado que codifica um construto de receptor de antígeno quimérico (CAR) knockin de qualquer um dos parágrafos 1-42, (ii) um ou mais gRNA e (iii) uma ou mais endonucleases de ácido desoxirribonucléico (DNA) para efetuar uma ou mais quebras de fita simples (SSBs) ou quebras de fita dupla (DSBs) dentro ou perto de um primeiro gene alvo
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184/714 que resulta em: a) uma deleção permanente dentro ou próxima do primeiro gene alvo que afeta a expressão ou função do primeiro gene alvo, opcionalmente em que a deleção permanente é em PAM ou na sequência alvo de sgRNA e, opcionalmente, em que a deleção permanente é uma deleção de 20 nucleotídeos, b) inserção do construto do CAR dentro ou próxima do primeiro gene alvo e c) expressão do CAR na superfície de uma célula.
191. O método do parágrafo 190, compreendendo ainda o passo de introdução na célula de um ou mais gRNA e uma ou mais endonucleases de ácido desoxirribonucleico (DNA) para efetuar uma ou mais quebras de fita simples (SSBs) ou quebras de fita dupla (DSBs) dentro ou perto de um segundo gene alvo que resulta em uma deleção permanente dentro ou perto do segundo gene alvo afetando a expressão ou função do segundo gene alvo.
192. O método de qualquer um dos parágrafos 189-191, em que o passo de implantação compreende implantar a célula T editada no genoma no paciente por transplante, injeção local ou infusão sistêmica ou suas combinações.
193. O método de qualquer um dos parágrafos 189-192, em que a célula T é uma célula T CD4+, uma célula T CD8+ ou uma combinação das mesmas.
194. O método de qualquer um dos parágrafos 189-193, em que a afecção médica é câncer.
195. O método do parágrafo 194, em que o câncer é leucemia linfoblástica aguda de células B (B-ALL), linfoma não Hodgkin de células B (B-NHL), leucemia linfocítica crônica (C-CLL), linfoma de Hodgkin, linfoma de células T, leucemia de células T, carcinoma de células renais de células claras (ccRCC), câncer de tireoide, câncer nasofaríngeo, câncer do pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer de pâncreas, melanoma, câncer de ovário, glioblastoma, câncer cervical ou
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185/714 mieloma múltiplo.
196. Um método in vivo para tratar um paciente com uma afecção médica que compreende o passo de editar um primeiro gene alvo em uma célula do paciente ou outras sequências de DNA que codificam elementos reguladores do gene alvo, em que o passo de edição compreende a introdução na célula T (i) o ácido nucleico isolado que codifica um construto de receptor de antígeno quimérico (CAR) knockin de qualquer um dos parágrafos 1-42, (ii) um ou mais gRNAs e (iii) uma ou mais endonucleases de ácido desoxirribonucléico (DNA) para efetuar uma ou mais quebras de fita simples (SSBs) ou quebras de fita dupla (DSBs) dentro ou perto de um primeiro gene alvo que resulta em: a) uma deleção permanente dentro ou próximo do primeiro gene alvo que afeta a expressão ou função do primeiro gene alvo, opcionalmente em que a deleção permanente é em PAM ou na sequência alvo de sgRNA e, opcionalmente, em que a deleção permanente é uma deleção de 20 nucleotídeos, b) inserção do construto do CAR dentro ou próxima do primeiro gene alvo e c) expressão do CAR na superfície da célula.
197. O método do parágrafo 196, compreendendo ainda o passo de introdução na célula de um ou mais gRNA e uma ou mais endonucleases de ácido desoxirribonucléico (DNA) para efetuar uma ou mais quebras de fita simples (SSBs) ou quebras de fita dupla (DSBs) dentro ou perto de um segundo gene alvo que resulta em uma deleção permanente dentro ou perto do segundo gene alvo afetando a expressão ou função do segundo gene alvo.
198. O método dos parágrafos 196 ou 197, em que a célula T é uma célula T CD4+, uma célula T CD8+ ou uma combinação das mesmas.
199. O método de qualquer um dos parágrafos 196-198, em que a afecção médica é câncer.
200. O método do parágrafo 180, em que o câncer é leucemia linfoblástica aguda de células B (B-ALL), linfoma não Hodgkin de células
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B (B-NHL), leucemia linfocítica crônica (C-CLL), linfoma de Hodgkin, linfoma de células T, leucemia de células T, carcinoma de células renais de células claras (ccRCC), câncer de tireoide, câncer nasofaríngeo, câncer do pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer de pâncreas, melanoma, câncer de ovário, glioblastoma, câncer cervical ou mieloma múltiplo.
201. Um ácido nucleico isolado compreendendo uma sequência de ácido nucleico selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1348-1357.
202. Um ácido nucleico isolado compreendendo uma sequência de ácido nucleico selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1358-1359.
203. Um ácido nucleico isolado compreendendo uma sequência de ácido nucleico selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1361-1364.
204. Um método para tratamento de câncer em um sujeito, compreendendo os passos de administração a um sujeito de uma composição compreendendo a célula isolada de qualquer um dos parágrafos 101-146.
205. Um método para diminuir o volume do tumor em um sujeito compreendendo o passo de administração a um sujeito de uma composição compreendendo a célula isolada de qualquer um dos parágrafos 101-146.
206. Um método para aumentar a sobrevivência em um sujeito com câncer, compreendendo o passo de administração a um sujeito de uma composição compreendendo a célula isolada de qualquer um dos parágrafos 101-146.
207. A composição de qualquer um dos parágrafos 60-100, em que o ácido nucleico isolado compreende uma sequência de ácido nucleico selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1348-1357, 1358
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1359, 1362 e 1364.
208. A composição de qualquer um dos parágrafos 60-100 ou 207, em que o modelo doador compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1390,1394-1395,1398 e 1400 e o gRNA é um sgRNA para editar um gene TRAC tendo a sequência da SEQ ID NO: 1342.
209. A composição de qualquer um dos parágrafos 60-100, 207 ou 208, em que o modelo doador compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 1390, 1394-1395, 1398 e 1400 e o gRNA é um sgRNA para editar um gene TRAC tendo a sequência da SEQ ID NO: 1342 e o sgRNA para editar um gene B2M tendo a sequência da SEQ ID NO: 1344.
[0507] O termo compreendendo ou compreende é usado em referência a composições, métodos e respetivos componentes, que são essenciais para a invenção, mas abertos à inclusão de elementos não especificados, essenciais ou não.
[0508] O termo consistindo essencialmente em se refere aos elementos necessários para um determinado aspecto. O termo permite a presença de elementos adicionais que não afetam materialmente as características básicas e novas ou funcionais desse aspecto da invenção.
[0509] O termo consistindo em se refere a composições, métodos e respetivos componentes, conforme descrito aqui, que são exclusivos de qualquer elemento não recitado nessa descrição do aspecto.
[0510] As formas singulares um, uma, e o, a incluem referências plurais, a menos que o contexto indique claramente o contrário.
[0511] Certos valores numéricos aqui apresentados são precedidos pelo termo cerca. O termo cerca é usado para fornecer suporte literal ao valor numérico que o termo cerca precede, bem como um valor
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188/714 numérico que é aproximadamente o valor numérico, que é que o valor numérico não aproximado pode ser um número que, no contexto em que é apresentado, é o equivalente substancial do valor numérico especificamente recitado. O termo cerca significa valores numéricos dentro de + 10% do valor numérico recitado.
[0512] Quando um intervalo de valores numéricos é apresentado aqui, é contemplado que cada valor intermediário entre o limite inferior e superior do intervalo, os valores que são os limites superior e inferior do intervalo e todos os valores declarados com o intervalo sejam abrangidos pela divulgação. Todos os subintervalos possíveis dentro dos limites inferior e superior do intervalo também são contemplados pela divulgação.
EXEMPLOS
[0513] A invenção será mais completamente compreendida por referência às seguintes modalidades, que fornecem aspectos ilustrativos não limitativos da invenção.
[0514] Os exemplos descrevem o uso do sistema CRISPR como uma técnica ilustrativa de edição de genoma para criar deleções, inserções ou substituições genômicas terapêuticas definidas, denominadas aqui por modificações genômicas, em ou próximo a um gene alvo que leva à correção permanente de mutações no locus genômico, ou expressão em um locus heterólogo, que restaura a atividade da proteína alvo. A introdução das modificações terapêuticas definidas representa uma nova estratégia terapêutica para a melhoria potencial de várias afecções médicas, como aqui descrito e ilustrado.
Exemplo 1 - Rastreamento de gRNAs
[0515] Para identificar um grande espectro de gRNAs capazes de editar a região alvo do DNA cognato, foi realizado um rastreamento de gRNA transcrito in vitro (IVT). As sequências espaçadoras foram incorporadas a uma sequência da estrutura principal para gerar sgRNAs
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189/714 de comprimento completo. Exemplos de sequências de estruturas principais são mostrados na Tabela 1. Para gerar uma lista de sequências espaçadoras a serem usadas para a interrupção de genes, os éxons de codificação de proteínas foram selecionados para cada gene alvo, particularmente aqueles que contêm o códon de ATG de iniciação e/ou codificam domínios de proteínas críticos (por exemplo, domínios de ligação a DNA, domínios extracelulares, etc.). A sequência genômica relevante foi submetida para análise utilizando o software de design de gRNA. A lista resultante de gRNAs foi reduzida a uma lista de cerca de -200 gRNAs com base na singularidade da sequência (somente os gRNAs sem uma combinação perfeita em outro lugar do genoma foram rastreados) e efeitos mínimos previstos fora do alvo. Este conjunto de gRNAs foi transcrito in vitro e transfectado usando o messenger Max em células HEK293T que expressam constitutivamente Cas9. As células foram recolhidas 48 horas após a transfecção, o DNA genômico foi isolado e a eficiência da edição foi avaliada usando a análise Tracking of Indels by DEcomposition (TIDE). Os resultados são mostrados nas Figuras 1-5 e Tabelas abaixo.
[0516] É convencional na técnica descrever uma sequência espaçadora de gRNA no contexto de uma sequência alvo de DNA (por exemplo, genômica), a qual é adjectiva à sequência PAM. Entende-se, no entanto, que a sequência espaçadora de gRNA atual usada nos métodos e composições deste documento é o equivalente da sequência de DNA alvo. Por exemplo, a sequência espaçadora TRAC gRNA descrita como incluindo AGAGCAACAGTGCTGTGGCC (SEQ ID NO: 76), inclui a sequência espaçadora de RNA AGAGCAACAGUGCUGUGGCC (SEQ ID NO: 152).
Rastreamento de gRNA TRAC
[0517] Para TRAC, segmentos genômicos contendo o primeiro de três (3) éxons codificantes de proteína foram utilizados como entrada no
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190/714 software de design de gRNA. Os segmentos genômicos também incluíram sequências aceitadoras/doadoras no sítio de splice de flanqueamento. Os gRNAs desejados foram aqueles que levariam a inserções ou deleções na sequência de codificação, interrompendo a sequência de aminoácidos do TRAC, fazendo com que as funções de alelo(s) ficassem fora do quadro de leitura ou levando à sua perda. Todos os 76 espaçadores de gRNA identificados em silico com alvo em TRAC foram utilizados em um rastreamento IVT. Setenta e três (73) produziram dados mensuráveis por análise TIDE. Nove (9) sequências de gRNAs produziram percentagens de InDel acima de 50% que poderíam ser adequadas para rastreamentos secundários.
[0518] Uma avaliação dependente da homologia de TRAC gRNA compreendendo a SEQ ID NO: 152 mostrou que este guia tinha uma frequência indel inferior a 0,5% em um local fora do alvo. Esses dados guiaram a seleção desse TRAC gRNA em particular para análise posterior.
Tabela 4. Sequências alvo de TRAC, sequências espaçadoras de gRNA e eficiências de corte em células HEK293T
Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
GTAAAACCAAG AGGCCACAG 7 GUAAAACCAAGA GGCCACAG 83 TRAC EXON3_T23 97,7 0,99
GACTGTGCCTC TGTTTGACT 8 GACUGUGCCUC UGUUUGACU 84 TRAC EXON3_T15 88,4 0,946
GTTATGGGCTT GCATGTCCC 9 GUUAUGGGCUU GCAUGUCCC 85 TRAC EXON3_T7 63,5 0,967
TCTCTCAGCTG GTACACGGC 10 UCUCUCAGCUG GUACACGGC 86 TRAC ΕΧΟΝ1Τ1 59,1 0,949
CACCAAAGCTG CCCTTACCT 11 CACCAAAGCUGC CCUUACCU 87 TRAC ΕΧΟΝ1Τ15 59 0,96
GAGAATCAAAA TCGGTGAAT 12 GAGAAUCAAAAU CGGUGAAU 88 TRAC ΕΧΟΝ1Τ7 56,5 0,976
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
ATCCTCCTCCT GAAAGTGGC 13 AUCCUCCUCCUG AAAGUGGC 89 TRAC EXON3_T16 55,5 0,96
AGCAAGGAAAC AGCCTGCGA 14 AGCAAGGAAACA GCCUGCGA 90 TRAC EXON1T9 54,2 0,897
TGTGCTAGACA TGAGGTCTA 15 UGUGCUAGACAU GAGGUCUA 91 TRAC EXON1T3 53,8 0,973
CCGAATCCTCC TCCTGAAAG 16 CCGAAUCCUCCU CCUGAAAG 92 TRAC EXON3_T13 52,1 0,947
CCACTTTCAGG AGGAGGATT 17 CCACUUUCAGGA GGAGGAUU 93 TRAC EXON3_T19 46,9 0,955
CATCACAGGAA CTTTCTAAA 18 CAUCACAGGAAC UUUCUAAA 94 TRAC EXON2T8 43,7 0,98
CGTCATGAGCA GATTAAACC 19 CGUCAUGAGCA GAUUAAACC 95 TRAC EXON3_T6 43,5 0,98
TAGGCAGACAG ACTTGTCAC 20 UAGGCAGACAGA CUUGUCAC 96 TRAC EXON1T6 41,5 0,983
ACCCGGCCACT TTCAGGAGG 21 ACCCGGCCACUU UCAGGAGG 97 TRAC EXON3_T11 40,7 0,975
GCACCAAAGCT GCCCTTACC 22 GCACCAAAGCUG CCCUUACC 98 TRAC EXON1T5 37,6 0,984
ACCTGGCCATT CCTGAAGCA 23 ACCUGGCCAUUC CUGAAGCA 99 TRAC EXON1T21 37,6 0,79
TACCAAACCCA GTCAAACAG 24 UACCAAACCCAG UCAAACAG 100 TRAC EXON3_T12 37,4 0,939
GACACCTTCTT CCCCAGCCC 25 GACACCUUCUUC CCCAGCCC 101 TRAC EXON1T40 37,1 0,984
TCTGTTTGACT GGGTTTGGT 26 UCUGUUUGACU GGGUUUGGU 102 TRAC EXON3_T14 36,6 0,926
TCCTCCTCCTG AAAGTGGCC 27 UCCUCCUCCUGA AAGUGGCC 103 TRAC EXON3_T18 32,8 0,98
AGACTGTGCCT CTGTTTGAC 28 AGACUGUGCCU CUGUUUGAC 104 TRAC EXON3_T8 31,4 0,94
ATGCAAGCCCA TAACCGCTG 29 AUGCAAGCCCAU AACCGCUG 105 TRAC EXON3_T1 30,7 0,986
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
GCTTTGAAACA GGTAAGACA 30 GCUUUGAAACAG GUAAGACA 106 TRAC EXON2T7 29,4 0,979
CAAGAGGCCAC AGCGGTTAT 31 CAAGAGGCCACA GCGGUUAU 107 TRAC EXON3_T4 28,3 0,987
CCATAACCGCT GTGGCCTCT 32 CCAUAACCGCUG UGGCCUCU 108 TRAC EXON3_T9 27,5 0,982
ACAAAACTGTG CTAGACATG 33 ACAAAACUGUGC UAGACAUG 109 TRAC EXON1T16 27,4 0,988
TTCGGAACCCA ATCACTGAC 34 UUCGGAACCCAA UCACUGAC 110 TRAC EXON3_T5 26,9 0,984
GATTAAACCCG GCCACTTTC 35 GAUUAAACCCGG CCACUUUC 111 TRAC EXON3_T2 26,6 0,984
TCTGTGGGACA AGAGGATCA 36 UCUGUGGGACA AGAGGAUCA 112 TRAC EXON1T20 24,4 0,989
GCTGGTACACG GCAGGGTCA 37 GCUGGUACACG GCAGGGUCA 113 TRAC EXON1T22 24,1 0,991
CTCTCAGCTGG TACACGGCA 38 CUCUCAGCUGG UACACGGCA 114 TRAC EXON1T13 23,7 0,99
CTGACAGGTTT TGAAAGTTT 39 CUGACAGGUUU UGAAAGUUU 115 TRAC EXON3_T25 23,3 0,982
AGAGTCTCTCA GCTGGTACA 40 AGAGUCUCUCAG CUGGUACA 116 TRAC EXON1T25 18,9 0,992
CTCGACCAGCT TGACATCAC 41 CUCGACCAGCUU GACAUCAC 117 TRAC EXON2T1 16,5 0,992
TAAACCCGGCC ACTTTCAGG 42 UAAACCCGGCCA CUUUCAGG 118 TRAC EXON3_T10 12,9 0,991
GTCAGGGTTCT GGATATCTG 43 GUCAGGGUUCU GGAUAUCUG 119 TRAC EXON1T27 12,8 0,992
TTCGTATCTGTA AAACCAAG 44 UUCGUAUCUGUA AAACCAAG 120 TRAC EXON3_T24 12,8 0,994
CTTCAAGAGCA ACAGTGCTG 45 CUUCAAGAGCAA CAGUGCUG 121 TRAC EXON1T17 12,5 0,99
CTGGATATCTG TGGGACAAG 46 CUGGAUAUCUG UGGGACAAG 122 TRAC EXON1T31 12,1 0,992
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 250/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
AAGTTCCTGTG ATGTCAAGC 47 AAGUUCCUGUGA UGUCAAGC 123 TRAC EXON2T3 11,6 0,991
GGCAGCTTTGG TGCCTTCGC 48 GGCAGCUUUGG UGCCUUCGC 124 TRAC EXON1T2 11 0,99
CTTCTTCCCCA GCCCAGGTA 49 CUUCUUCCCCAG CCCAGGUA 125 TRAC EXON1T33 10,6 0,993
TTCAAAACCTG TCAGTGATT 50 UUCAAAACCUGU CAGUGAUU 126 TRAC EXON3_T21 9,4 0,966
TCAGGGTTCTG GATATCTGT 51 UCAGGGUUCUG GAUAUCUGU 127 TRAC EXON1T18 9,3 0,973
GTCGAGAAAAG CTTTGAAAC 52 GUCGAGAAAAGC UUUGAAAC 128 TRAC EXON2T4 8,9 0,991
TTAATCTGCTCA TGACGCTG 53 UUAAUCUGCUCA UGACGCUG 129 TRAC EXON3_T26 8,7 0,993
CTGTTTCCTTG CTTCAGGAA 54 CUGUUUCCUUG CUUCAGGAA 130 TRAC EXON1T39 7,6 0,99
TGGATTTAGAG TCTCTCAGC 55 UGGAUUUAGAG UCUCUCAGC 131 TRAC EXON1T4 7,3 0,993
CTTACCTGGGC TGGGGAAGA 56 CUUACCUGGGC UGGGGAAGA 132 TRAC EXON1T38 6,7 0,993
AGCCCAGGTAA GGGCAGCTT 57 AGCCCAGGUAAG GGCAGCUU 133 TRAC EXON1T11 6,1 0,994
GGGACAAGAG GATCAGGGTT 58 GGGACAAGAGG AUCAGGGUU 134 TRAC EXON1T26 5 0,993
TTCTTCCCCAG CCCAGGTAA 59 UUCUUCCCCAGC CCAGGUAA 135 TRAC EXON1T35 4,9 0,994
TGCCTCTGTTT GACTGGGTT 60 UGCCUCUGUUU GACUGGGUU 136 TRAC EXON3_T17 4,9 0,94
AGCTGGTACAC GGCAGGGTC 61 AGCUGGUACAC GGCAGGGUC 137 TRAC EXON1T8 4,3 0,994
TGCTCATGACG CTGCGGCTG 62 UGCUCAUGACG CUGCGGCUG 138 TRAC EXON3_T27 3,4 0,994
TTTCAAAACCT GTCAGTGAT 63 UUUCAAAACCUG UCAGUGAU 139 TRAC EXON3_T20 2,1 0,965
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 251/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
ACACGGCAGG GTCAGGGTTC 64 ACACGGCAGGG UCAGGGUUC 140 TRAC EXON1T14 1,4 0,994
AGCTTTGAAAC AGGTAAGAC 65 AGCUUUGAAACA GGUAAGAC 141 TRAC EXON2T5 1,4 0,993
CTGGGGAAGAA GGTGTCTTC 66 CUGGGGAAGAA GGUGUCUUC 142 TRAC EXON1T28 1,3 0,994
TCCTTGCTTCA GGAATGGCC 67 UCCUUGCUUCA GGAAUGGCC 143 TRAC EXON1T29 1,2 0,98
AAGCTGCCCTT ACCTGGGCT 68 AAGCUGCCCUUA CCUGGGCU 144 TRAC EXON1T24 1,1 0,995
AACAAATGTGT CACAAAGTA 69 AACAAAUGUGUC ACAAAGUA 145 TRAC EXON1T36 1,1 0,995
AAAGTCAGATT TGTTGCTCC 70 AAAGUCAGAUUU GUUGCUCC 146 TRAC EXON1T12 0,8 0,995
AGCTGCCCTTA CCTGGGCTG 71 AGCUGCCCUUAC CUGGGCUG 147 TRAC EXON1T30 0,8 0,995
TGGAATAATGC TGTTGTTGA 72 UGGAAUAAUGCU GUUGUUGA 148 TRAC EXON1T34 0,8 0,994
ATTTGTTTGAGA ATCAAAAT 73 AUUUGUUUGAGA AUCAAAAU 149 TRAC EXON1T37 0,7 0,996
AAAGCTGCCCT TACCTGGGC 74 AAAGCUGCCCUU ACCUGGGC 150 TRAC EXON1T10 0,5 0,995
CCAAGAGGCCA CAGCGGTTA 75 CCAAGAGGCCAC AGCGGUUA 151 TRAC EXON3_T3 0,5 0,994
AGAGCAACAGT GCTGTGGCC 76 AGAGCAACAGUG CUGUGGCC 152 TRAC EXON1T32 0,2 0,994
ATCTGTGGGAC AAGAGGATC 77 AUCUGUGGGAC AAGAGGAUC 153 TRAC EXON1T19 0,1 0,994
GGTAAGACAGG GGTCTAGCC 78 GGUAAGACAGG GGUCUAGCC 154 TRAC EXON2T2 0,1 0,993
GTAAGACAGGG GTCTAGCCT 79 GUAAGACAGGG GUCUAGCCU 155 TRAC EXON2T6 0,1 0,994
GCAGGCTGTTT CCTTGCTTC 80 GCAGGCUGUUU CCUUGCUUC 156 TRAC EXON1T23
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 252/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
CTTTGAAACAG GTAAGACAG 81 CUUUGAAACAGG UAAGACAG 157 TRAC EXON2T9
AGAGGCACAGT CTCTTCAGC 82 AGAGGCACAGUC UCUUCAGC 158 TRAC EXON3_T22
[0519] Em algumas modalidades, um gRNA compreende a sequência de qualquer uma das SEQ ID NOs: 83-158 ou tem alvo na sequência de qualquer uma das SEQ ID NOs: 7-82.
Rastreamento de gRNA CD3e
[0520] Para CD3e (CD3E), segmentos genômicos contendo os cinco (5) éxons codificantes de proteína foram utilizados como entrada no software de design de gRNA. Os segmentos genômicos também incluíram sequências aceitadoras/doadoras no sítio de splice de flanqueamento. Os gRNAs desejados foram aqueles que levariam a inserções ou deleções na sequência de codificação, interrompendo a sequência de aminoácidos do CD3E, fazendo com que as funções de alelo(s) ficassem fora do quadro de leitura ou levando à sua perda. Cento e vinte e cinco (125) espaçadores de gRNA identificados em silico com alvo em CD3E foram utilizados em um rastreamento IVT. Cento e vinte (120) produziram dados mensuráveis por análise TIDE. Nove (9) sequências de gRNA produziram percentagens de InDel acima de 50% que poderíam ser adequadas para rastreamentos secundários.
Tabela 5. Sequências alvo de CD3E, sequências espaçadoras de gRNA e eficiências de corte em células HEK293T
Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
GTCAGAGGAGA TTCCTGCCA 159 GUCAGAGGAGA UUCCUGCCA 284 CD3E exon4_T18 83,2 0,976
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 253/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
AGAGGAGATTC CTGCCAAGG 160 AGAGGAGAUUC CUGCCAAGG 285 CD3E exon4_T20 61,6 0,955
GAAC1 1 1 1ATCT CTACCTGA 161 GAACUUUUAUC UCUACCUGA 286 CD3E exon3_T22 58,8 0,984
AAGCCTGTGAC ACGAGGAGC 162 AAGCCUGUGAC ACGAGGAGC 287 CD3E exon4_T11 57,8 0,919
CATCCTACTCA CCTGATAAG 163 CAUCCUACUCA CCUGAUAAG 288 CD3E exon1_T14 54,9 0,978
CTGGATTACCT CTTGCCCTC 164 CUGGAUUACCU CUUGCCCUC 289 CD3E exon3_T12 54,4 0,98
CATGAAACAAA GATGCAGTC 165 CAUGAAACAAA GAUGCAGUC 290 CD3E exon1_T18 53,1 0,97
ATTTCAGATCC AGGATACTG 166 AUUUCAGAUCC AGGAUACUG 291 CD3E exon3_T13 51,5 0,964
TCAGAGGAGAT TCCTGCCAA 167 UCAGAGGAGAU UCCUGCCAA 292 CD3E exon4_T12 51,3 0,96
GCAGTTCTCAC ACACTGTGG 168 GCAGUUCUCAC ACACUGUGG 293 CD3E exon4_T29 49,6 0,975
CACAATGATAA AAACATAGG 169 CACAAUGAUAA AAACAUAGG 294 CD3E exon3_T28 49,1 0,95
GTGTGAGAACT GCATGGAGA 170 GUGUGAGAACU GCAUGGAGA 295 CD3E exon4_T37 48,8 0,84
GATGTCCACTA TGACAATTG 171 GAUGUCCACUA UGACAAUUG 296 CD3E exon4_T4 48 0,93
ACTCACCTGAT AAGAGGCAG 172 ACUCACCUGAU AAGAGGCAG 297 CD3E exon1_T13 45,5 0,959
CTCTTATCAGG TGAGTAGGA 173 CUCUUAUCAGG UGAGUAGGA 298 CD3E exon1_T7 44,1 0,974
TATCTCTACCT GAGGGCAAG 174 UAUCUCUACCU GAGGGCAAG 299 CD3E exon3_T10 43,6 0,764
ATCCTGGATCT GAAATACTA 175 AUCCUGGAUCU GAAAUACUA 300 CD3E exon3_T20 43,5 0,951
AGATGGAGACT TTATATGCT 176 AGAUGGAGACU UUAUAUGCU 301 CD3E exon3_T14 42,4 0,955
CTGCCTCTTAT CAGGTGAGT 177 CUGCCUCUUAU CAGGUGAGU 302 CD3E exon1_T5 40,1 0,967
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
TATATGCTGGG GAGAAAGAA 178 UAUAUGCUGGG GAGAAAGAA 303 CD3E exon3_T29 40 0,972
AGTGGACATCT GCATCACTG 179 AGUGGACAUCU GCAUCACUG 304 CD3E exon4_T24 38,8 0,969
CAAGCCTGTGA CACGAGGAG 180 CAAGCCUGUGA CACGAGGAG 305 CD3E exon4_T10 38 0,974
GTGGACATCTG CATCACTGG 181 GUGGACAUCUG CAUCACUGG 306 CD3E exon4_T13 36,9 0,947
GATGGAGACTT TATATGCTG 182 GAUGGAGACUU UAUAUGCUG 307 CD3E exon3_T5 36,1 0,973
TCTCACACACT GTGGGGGGT 183 UCUCACACACU GUGGGGGGU 308 CD3E exon4_T21 35,8 0,924
CAGGCAAAGG GGTAAGGCTG 184 CAGGCAAAGGG GUAAGGCUG 309 CD3E exon4_T38 35,2 0,817
GTTACCTCATA GTCTGGGTT 185 GUUACCUCAUA GUCUGGGUU 310 CD3E exon5_T7 35,1 0,978
CTTCTGGTTTG CTTCCTCTG 186 CUUCUGGUUUG CUUCCUCUG 311 CD3E exon3_T33 34,2 0,985
ATGCAGTTCTC ACACACTGT 187 AUGCAGUUCUC ACACACUGU 312 CD3E exon4_T30 32,3 0,967
CCCACGTTACC TCATAGTCT 188 CCCACGUUACC UCAUAGUCU 313 CD3E exon5_T5 30,4 0,977
TTCCTCCGCAG GACAAAACA 189 UUCCUCCGCAG GACAAAACA 314 CD3E exon5_T11 30,2 0,979
CTGGGCCTCTG CCTCTTATC 190 CUGGGCCUCUG CCUCUUAUC 315 CD3E exon1_T12 30,1 0,987
GGAGATGGATG TGATGTCGG 191 GGAGAUGGAUG UGAUGUCGG 316 CD3E exon4_T14 30,1 0,98
TGTTCCCAACC CAGACTATG 192 UGUUCCCAACC CAGACUAUG 317 CD3E exon5_T10 29,9 0,977
ACACGAGGAG CGGGTGCTGG 193 ACACGAGGAGC GGGUGCUGG 318 CD3E exon4_T25 28,8 0,982
TTATATGCTGG GGAGAAAGA 194 UUAUAUGCUGG GGAGAAAGA 319 CD3E exon3_T30 28,3 0,98
TTTCAGATCCA GGATACTGA 195 UUUCAGAUCCA GGAUACUGA 320 CD3E exon3_T17 28 0,771
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
CATGGAGATGG ATGTGATGT 196 CAUGGAGAUGG AUGUGAUGU 321 CD3E exon4_T32 28 0,97
AGATGCAGTCG GGCACTCAC 197 AGAUGCAGUCG GGCACUCAC 322 CD3E exon1_T1 27,5 0,982
TATTATGTCTG CTACCCCAG 198 UAUUAUGUCUG CUACCCCAG 323 CD3E exon3_T11 27,5 0,988
GTTTCCCCTCC TTCCTCCGC 199 GUUUCCCCUCC UUCCUCCGC 324 CD3E exon5_T18 27,1 0,984
TAAAAACATAG GCAGTGATG 200 UAAAAACAUAG GCAGUGAUG 325 CD3E exon3_T25 26,5 0,895
GGTGGCCACAA TTGTCATAG 201 GGUGGCCACAA UUGUCAUAG 326 CD3E exon4_T2 26,1 0,986
GCATATAAAGT CTCCATCTC 202 GCAUAUAAAGU CUCCAUCUC 327 CD3E exon3_T16 25 0,98
TATTACTGTGG TTCCAGAGA 203 UAUUACUGUGG UUCCAGAGA 328 CD3E exon3_T21 25 0,984
CAACACAATGA TAAAAACAT 204 CAACACAAUGA UAAAAACAU 329 CD3E exon3_T26 24,6 0,963
GTAATCCAGGT CTCCAGAAC 205 GUAAUCCAGGU CUCCAGAAC 330 CD3E exon3_T7 24,2 0,991
CCCAGACTATG AGGTAACGT 206 CCCAGACUAUG AGGUAACGU 331 CD3E exon5_T1 24,1 0,979
ATAGTGGACAT CTGCATCAC 207 AUAGUGGACAU CUGCAUCAC 332 CD3E exon4_T8 24 0,96
ATCTTCTGGTT TGCTTCCTC 208 AUCUUCUGGUU UGCUUCCUC 333 CD3E exon3_T19 23,9 0,981
TTTTGTCCTGC GGAGGAAGG 209 UUUUGUCCUGC GGAGGAAGG 334 CD3E exon5_T15 23,7 0,963
CTGAGGGCAA GAGGTAATCC 210 CUGAGGGCAAG AGGUAAUCC 335 CD3E exon3_T8 22,5 0,989
TTGACATGCCC TCAGTATCC 211 UUGACAUGCCC UCAGUAUCC 336 CD3E exon3_T4 22,4 0,978
CAGAGGAGATT CCTGCCAAG 212 CAGAGGAGAUU CCUGCCAAG 337 CD3E exon4_T17 21,8 0,989
TGCTGCTGCTG GTTTACTAC 213 UGCUGCUGCUG GUUUACUAC 338 CD3E exon4_T3 20,8 0,987
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 256/1851
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Sequência Alvo SEQID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQID NO: Nome Guia % Indel R2
GAGGTAACGTG GGATAGAAA 214 GAGGUAACGUG GGAUAGAAA 339 CD3E exon5_T20 20,5 0,965
ACCCAGACTAT GAGGTAACG 215 ACCCAGACUAU GAGGUAACG 340 CD3E exon5_T2 20,3 0,977
CACTGGGGGC TTGCTGCTGC 216 CACUGGGGGCU UGCUGCUGC 341 CD3E exon4_T26 20 0,987
ATCAGGTGAGT AGGATGGAG 217 AUCAGGUGAGU AGGAUGGAG 342 CD3E exon1_T15 19,9 0,989
GGCACTCACTG GAGAGTTCT 218 GGCACUCACUG GAGAGUUCU 343 CD3E exon1_T17 19 0,988
TTTGTCCTGCG GAGGAAGGA 219 UUUGUCCUGCG GAGGAAGGA 344 CD3E exon5_T16 18,7 0,977
TGAGGATCACC TGTCACTGA 220 UGAGGAUCACC UGUCACUGA 345 CD3E exon3_T15 18,2 0,771
TTACTTTACTAA GATGGCGG 221 UUACUUUACUA AGAUGGCGG 346 CD3E exon1_T2 18 0,987
TAAAAACATAG GCGGTGATG 222 UAAAAACAUAG GCGGUGAUG 347 CD3E exon3_T1 17 0,971
CTGAAAATTCC TTCAGTGAC 223 CUGAAAAUUCC UUCAGUGAC 348 CD3E exon3_T18 16,9 0,779
TTGTCCTGCGG AGGAAGGAG 224 UUGUCCUGCGG AGGAAGGAG 349 CD3E exon5_T21 16,9 0,99
TCTTCTGGTTT GCTTCCTCT 225 UCUUCUGGUUU GCUUCCUCU 350 CD3E exon3_T31 16,5 0,98
GGGCACTCACT GGAGAGTTC 226 GGGCACUCACU GGAGAGUUC 351 CD3E exon1_T8 15,7 0,989
TTCTCACACAC TGTGGGGGG 227 UUCUCACACAC UGUGGGGGG 352 CD3E exon4_T31 15,4 0,967
CGGGTGCTGG CGGCAGGCAA 228 CGGGUGCUGG CGGCAGGCAA 353 CD3E exon4_T19 14,8 0,986
AGGTAACGTGG GATAGAAAT 229 AGGUAACGUGG GAUAGAAAU 354 CD3E exon5_T12 14,7 0,982
CTGTTACTTTA CTAAGATGG 230 CUGUUACUUUA CUAAGAUGG 355 CD3E exon1_T9 14,6 0,986
CCTCTCCTTGT TTTGTCCTG 231 CCUCUCCUUGU UUUGUCCUG 356 CD3E exon5_T17 13,7 0,984
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 257/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
TAGTGGACATC TGCATCACT 232 UAGUGGACAUC UGCAUCACU 357 CD3E exon4_T15 13,5 0,978
GGACTGTTACT TTACTAAGA 233 GGACUGUUACU UUACUAAGA 358 CD3E exon1_T6 12,2 0,99
ACTGAAGGAAT TTTCAGAAT 234 ACUGAAGGAAU UUUCAGAAU 359 CD3E exon3_T27 11,9 0,966
CCATGAAACAA AGATGCAGT 235 CCAUGAAACAA AGAUGCAGU 360 CD3E exon1_T16 11,5 0,987
GAGATGGAGAC TTTATATGC 236 GAGAUGGAGAC UUUAUAUGC 361 CD3E exon3_T2 11,3 0,986
TTTTCAGAATT GGAGCAAAG 237 UUUUCAGAAUU GGAGCAAAG 362 CD3E exon3_T23 11 0,993
TCATAGTCTGG GTTGGGAAC 238 UCAUAGUCUGG GUUGGGAAC 363 CD3E exon5_T14 10,5 0,984
CCGCAGGACAA AACAAGGAG 239 CCGCAGGACAA AACAAGGAG 364 CD3E exon5_T13 10,3 0,985
TCTGGGTTGGG AACAGGTGG 240 UCUGGGUUGG GAACAGGUGG 365 CD3E exon5_T22 9,5 0,991
ACACAGACACG TGAGTTTAT 241 ACACAGACACG UGAGUUUAU 366 CD3E exon2_T1 9,1 0,926
GCCAGCAGACT TACTACTTC 242 GCCAGCAGACU UACUACUUC 367 CD3E exon1_T3 9 0,987
TAGTCTGGGTT GGGAACAGG 243 UAGUCUGGGUU GGGAACAGG 368 CD3E exon5_T19 9 0,99
CGAAC11 1 1A1 CTCTACCTG 244 CGAACUUUUAU CUCUACCUG 369 CD3E exon3_T24 8,7 0,983
CGCTCCTCGTG TCACAGGCT 245 CGCUCCUCGUG UCACAGGCU 370 CD3E exon4_T9 8 0,987
CTACTGGAGCA AGAATAGAA 246 CUACUGGAGCA AGAAUAGAA 371 CD3E exon4_T28 8 0,972
CGTTACCTCAT AGTCTGGGT 247 CGUUACCUCAU AGUCUGGGU 372 CD3E exon5_T4 7,9 0,984
AGATAAAAGTT CGCATCTTC 248 AGAUAAAAGUU CGCAUCUUC 373 CD3E exon3_T3 7,8 0,969
AAGGCCAAGCC TGTGACACG 249 AAGGCCAAGCC UGUGACACG 374 CD3E exon4_T5 7,8 0,989
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 258/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
TGGCGGCAGG CAAAGGGGTA 250 UGGCGGCAGG CAAAGGGGUA 375 CD3E exon4_T34 7,7 0,985
AGGGCATGTCA ATATTACTG 251 AGGGCAUGUCA AUAUUACUG 376 CD3E exon3_T6 7,4 0,925
TCGTGTCACAG GCTTGGCCT 252 UCGUGUCACAG GCUUGGCCU 377 CD3E exon4_T16 7,4 0,98
TGCAGTTCTCA CACACTGTG 253 UGCAGUUCUCA CACACUGUG 378 CD3E exon4_T23 7,3 0,973
GGGGGGTGGG GTGGGGAGAG 254 GGGGGGUGGG GUGGGGAGAG 379 CD3E exon4_T41 7 0,975
GATGAGGATGA TAAAAACAT 255 GAUGAGGAUGA UAAAAACAU 380 CD3E exon3_T32 6,7 0,991
CATGCAGTTCT CACACACTG 256 CAUGCAGUUCU CACACACUG 381 CD3E exon4_T35 6,4 0,987
ACGTGGGATAG AAATGGGCC 257 ACGUGGGAUAG AAAUGGGCC 382 CD3E exon5_T9 6,3 0,987
TACCACCTGAA AATGAAAAA 258 UACCACCUGAA AAUGAAAAA 383 CD3E exon2_T4 5,3 0,94
TGGCAGGAATC TCCTCTGAC 259 UGGCAGGAAUC UCCUCUGAC 384 CD3E exon4_T7 5 0,989
CTCACACACTG TGGGGGGTG 260 CUCACACACUG UGGGGGGUG 385 CD3E exon4_T33 5 0,975
GTGACACGAG GAGCGGGTGC 261 GUGACACGAGG AGCGGGUGC 386 CD3E exon4_T6 4,9 0,988
CAGTTCTCACA CACTGTGGG 262 CAGUUCUCACA CACUGUGGG 387 CD3E exon4_T40 4,9 0,971
TGCCATAGTAT TTCAGATCC 263 UGCCAUAGUAU UUCAGAUCC 388 CD3E exon3_T9 4,6 0,984
TCCAGAAGTAG TAAGTCTGC 264 UCCAGAAGUAG UAAGUCUGC 389 CD3E exon1_T4 4,3 0,989
GGTGCTGGCG GCAGGCAAAG 265 GGUGCUGGCG GCAGGCAAAG 390 CD3E exon4_T36 4,3 0,971
TCCCACGTTAC CTCATAGTC 266 UCCCACGUUAC CUCAUAGUC 391 CD3E exon5_T3 4,3 0,992
CACAGTGTGTG AGAACTGCA 267 CACAGUGUGUG AGAACUGCA 392 CD3E exon4_T27 3,9 0,986
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 259/1851
202/714
Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
CGACTGCATCT TTGTTTCAT 268 CGACUGCAUCU UUGUUUCAU 393 CD3E exon1_T11 3,8 0,989
GGGTGCTGGC GGCAGGCAAA 269 GGGUGCUGGC GGCAGGCAAA 394 CD3E exon4_T42 3,8 0,994
GAGGAGCGGG TGCTGGCGGC 270 GAGGAGCGGG UGCUGGCGGC 395 CD3E exon4_T45 3,3 0,994
TTG11 1 1GTCCT GCGGAGGA 271 UUGUUUUGUCC UGCGGAGGA 396 CD3E exon5_T8 3,2 0,99
CTCCTTG11 1 1 GTCCTGCGG 272 CUCCUUGUUUU GUCCUGCGG 397 CD3E exon5_T6 3,1 0,99
CCGACTGCATC TTTGTTTCA 273 CCGACUGCAUC UUUGUUUCA 398 CD3E exon1_T10 1,9 0,991
TGTTTCC11111 TCA11 1 1 C 274 UGUUUCCUUUU UUCAUUUUC 399 CD3E exon2_T2 1,9 0,92
TTCC11 1 1 1 1 CA TTTTCAGG 275 uuccuuuuuuc AUUUUCAGG 400 CD3E exon2_T3 1,5 0,94
AGGCTGTGGA GTCCAGTCAG 276 AGGCUGUGGAG UCCAGUCAG 401 CD3E exon4_T22 1,2 0,992
TGGGGGGTGG GGTGGGGAGA 277 UGGGGGGUGG GGUGGGGAGA 402 CD3E exon4_T44 0,9 0,991
ACACTGTGGGG GGTGGGGTG 278 ACACUGUGGGG GGUGGGGUG 403 CD3E exon4_T47 0,3 0,992
CACACTGTGGG GGGTGGGGT 279 CACACUGUGGG GGGUGGGGU 404 CD3E exon4_T43 0,2 0,992
GTGGGGGGTG GGGTGGGGAG 280 GUGGGGGGUG GGGUGGGGAG 405 CD3E exon4_T46 0 0,993
ACACACTGTGG GGGGTGGGG 281 ACACACUGUGG GGGGUGGGG 406 CD3E exon4_T48 0 0,992
GCACCCGCTCC TCGTGTCAC 282 GCACCCGCUCC UCGUGUCAC 407 CD3E exon4_T1
GAGCAAGAATA GAAAGGCCA 283 GAGCAAGAAUA GAAAGGCCA 408 CD3E exon4_T39
[0521] Em algumas modalidades, um gRNA compreende a sequência de qualquer uma das SEQ ID NOs: 284-408 ou tem alvo na
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 260/1851
203/714 sequência de qualquer uma das SEQ ID NOs: 159-283.
Rastreamento de gRNA B2M
[0522] Para B2M, segmentos genômicos contendo o primeiro de três (3) éxons codificantes de proteína foram utilizados como entrada no software de design de gRNA. Os segmentos genômicos também incluíram sequências aceitadoras/doadoras no sítio de splice de flanqueamento. Os gRNAs desejados foram aqueles que levariam a inserções ou deleções na sequência de codificação, interrompendo a sequência de aminoácidos do B2M, fazendo com que as funções de alelo(s) ficassem fora do quadro de leitura ou levando à sua perda. Todos os quarenta e nove (49) espaçadores de gRNA identificados em silico com alvo em B2M foram utilizados em um rastreamento IVT. Todos os gRNAs produziram dados mensuráveis por análise TIDE. Oito (8) sequências de gRNA produziram percentagens de InDel acima de 50% que poderíam ser adequadas para rastreamentos secundários.
[0523] Uma avaliação dependente da homologia de B2M gRNA compreendendo a SEQ ID NO: 466 mostrou que este guia tinha uma frequência indel inferior a 0,5% em um local fora do alvo. Esses dados guiaram a seleção desse B2M gRNA em particular para análise posterior.
Tabela 6. Sequências alvo de B2M, sequências espaçadoras de gRNA e eficiências de corte em células HEK293T
Sequência Alvo SEQ ID NO: Espaçador gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
TCCTGAAGCT GACAGCATTC 409 UCCUGAAGCUG ACAGCAUUC 458 B2M EXON1T13 89,5 0,924
CAGTAAGTCA ACTTCAATGT 410 CAGUAAGUCAA CUUCAAUGU 459 B2M EXON2T9 80,4 0,966
GGCCGAGATG TCTCGCTCCG 411 GGCCGAGAUGU CUCGCUCCG 460 B2M EXON1T2 70,7 0,99
ACAAAGTCAC ATGGTTCACA 412 ACAAAGUCACA UGGUUCACA 461 B2M EXON2T23 65,5 0,972
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 261/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Espaçador gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
CGCGAGCACA GCTAAGGCCA 413 CGCGAGCACAG CUAAGGCCA 462 B2M EXON1T11 60,3 0,972
CATACTCATCT 1 11 1CAGTG 414 CAUACUCAUCU UUUUCAGUG 463 B2M EXON2T24 59,9 0,989
ACTCTCTCTTT CTGGCCTGG 415 ACUCUCUCUUU CUGGCCUGG 464 B2M EXON1T19 57,1 0,96
CTCGCGCTAC TCTCTCTTTC 416 CUCGCGCUACU CUCUCUUUC 465 B2M EXON1T12 54,8 0,812
GCTACTCTCTC TTTCTGGCC 417 GCUACUCUCUC UUUCUGGCC 466 B2M EXON1T20 45,9 0,867
TCTCTCCTACC CTCCCGCTC 418 UCUCUCCUACC CUCCCGCUC 467 B2M EXON1T15 43,5 0,968
CAGCCCAAGA TAGTTAAGTG 419 CAGCCCAAGAU AGUUAAGUG 468 B2M EXON2T5 42,7 0,988
TCACGTCATC CAGCAGAGAA 420 UCACGUCAUCC AGCAGAGAA 469 B2M EXON2T17 39,8 0,974
TTACCCCACTT AACTATCTT 421 UUACCCCACUU AACUAUCUU 470 B2M EXON2T11 32,7 0,977
GGCCACGGAG CGAGACATCT 422 GGCCACGGAGC GAGACAUCU 471 B2M EXON1T8 32,1 0,99
CTTACCCCACT TAACTATCT 423 CUUACCCCACU UAACUAUCU 472 B2M EXON2T7 31,9 0,984
GGCATACTCA TC 1 1 1 11CAG 424 GGCAUACUCAU CUUUUUCAG 473 B2M EXON2T15 31,7 0,985
TATAAGTGGA GGCGTCGCGC 425 UAUAAGUGGAG GCGUCGCGC 474 B2M EXON1T1 31,6 0,991
GCCCGAATGC TGTCAGCTTC 426 GCCCGAAUGCU GUCAGCUUC 475 B2M EXON1T10 30,5 0,99
GAAGTTGACTT ACTGAAGAA 427 GAAGUUGACUU ACUGAAGAA 476 B2M EXON2T19 30,4 0,98
GAGGAAGGAC CAGAGCGGGA 428 GAGGAAGGACC AGAGCGGGA 477 B2M EXON1T18 28,9 0,993
AAGTGGAGGC GTCGCGCTGG 429 AAGUGGAGGCG UCGCGCUGG 478 B2M EXON1T4 27,1 0,983
ACTCACGCTG GATAGCCTCC 430 ACUCACGCUGG AUAGCCUCC 479 B2M EXON1T7 22,3 0,992
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Espaçador gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
GAGTAGCGCG AGCACAGCTA 431 GAGUAGCGCGA GCACAGCUA 480 B2M EXON1T5 20,8 0,97
AGGGTAGGAG AGACTCACGC 432 AGGGUAGGAGA GACUCACGC 481 B2M EXON1T9 19,9 0,993
TTCAGACTTGT CTTTCAGCA 433 UUCAGACUUGU CUUUCAGCA 482 B2M EXON2T21 18,9 0,991
CACAGCCCAA GATAGTTAAG 434 CACAGCCCAAG AUAGUUAAG 483 B2M EXON2T6 18,6 0,991
TTGGAGTACC TGAGGAATAT 435 UUGGAGUACCU GAGGAAUAU 484 B2M EXON2T26 18,1 0,99
AAGGACCAGA GCGGGAGGGT 436 AAGGACCAGAG CGGGAGGGU 485 B2M EXON1T16 17,4 0,994
AGAGGAAGGA CCAGAGCGGG 437 AGAGGAAGGAC CAGAGCGGG 486 B2M EXON1T17 17,4 0,992
AAGTCAACTTC AATGTCGGA 438 AAGUCAACUUC AAUGUCGGA 487 B2M EXON2T2 15,2 0,981
AGTGGAGGCG TCGCGCTGGC 439 AGUGGAGGCGU CGCGCUGGC 488 B2M EXON1T3 14,2 0,995
TGGAGTACCT GAGGAATATC 440 UGGAGUACCUG AGGAAUAUC 489 B2M EXON2T12 11,7 0,98
ACAGCCCAAG ATAGTTAAGT 441 ACAGCCCAAGA UAGUUAAGU 490 B2M EXON2T4 11,5 0,995
CGTGAGTAAA CCTGAATCTT 442 CGUGAGUAAAC CUGAAUCUU 491 B2M EXON2T3 10,4 0,99
TGGAGAGAGA ATTGAAAAAG 443 UGGAGAGAGAA UUGAAAAAG 492 B2M EXON2T28 9,2 0,993
ATACTCATCTT TTTCAGTGG 444 AUACUCAUCUU UUUCAGUGG 493 B2M EXON2T25 8 0,988
AGTCACATGG TTCACACGGC 445 AGUCACAUGGU UCACACGGC 494 B2M EXON2T1 6,4 0,99
CACGCGTTTA ATATAAGTGG 446 CACGCGUUUAA UAUAAGUGG 495 B2M EXON1T6 5,2 0,99
CTCAGGTACT CCAAAGATTC 447 CUCAGGUACUC CAAAGAUUC 496 B2M EXON2T8 5 0,99
TTTGACTTTCC ATTCTCTGC 448 UUUGACUUUCC AUUCUCUGC 497 B2M EXON2T27 4,8 0,991
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 263/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Espaçador gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
ACCCAGACAC ATAGCAATTC 449 ACCCAGACACA UAGCAAUUC 498 B2M EXON2T13 4,7 0,992
TGGGCTGTGA CAAAGTCACA 450 UGGGCUGUGAC AAAGUCACA 499 B2M EXON2T22 4,4 0,993
CTGAATCTTTG GAGTACCTG 451 CUGAAUCUUUG GAGUACCUG 500 B2M EXON2T14 3 0,993
TTCCTGAATTG CTATGTGTC 452 UUCCUGAAUUG CUAUGUGUC 501 B2M EXON2T16 3 0,992
ACTTGTCTTTC AGCAAGGAC 453 ACUUGUCUUUC AGCAAGGAC 502 B2M EXON2T10 2,8 0,992
TTCCTGAAGCT GACAGCATT 454 UUCCUGAAGCU GACAGCAUU 503 B2M EXON1T14 2,5 0,994
GCATACTCATC 1 1 1 11CAGT 455 GCAUACUCAUC UUUUUCAGU 504 B2M EXON2T20 2,4 0,988
TCCTGAATTGC TATGTGTCT 456 UCCUGAAUUGC UAUGUGUCU 505 B2M EXON2T18 1,9 0,99
TCATAGATCGA GACATGTAA 457 UCAUAGAUCGA GACAUGUAA 506 B2M EXON3_T1 1,5 0,992
0524] Em algumas modalidades, um gRNA compreende a sequência de qualquer uma das SEQ ID NOs: 458-506 ou tem alvo na sequência de qualquer uma das SEQ ID NOs: 409-457.
Rastreamento de gRNA CIITA
[0525] Para CIITA, segmentos genômicos contendo o éxon ATG a jusante do promotor de Tipo 3, o promotor do Tipo IV/éxon alternativo 1, e os próximos três (3) éxons a jusante (aqui denominado exon3exon5) foram usados como entrada no software de design de gRNA (ver Muhlethaler-Mottet et al., 1997. EMBO J. 10, 2851-2860 para anotação do gene CIITA). Os segmentos genômicos incluíram regiões codificantesas de proteínas e sítios aceitadores/doadores de splicing flanqueado, bem como potenciais elementos reguladores da expressão de genes. Os gRNAs desejados foram aqueles que levariam a inserções ou deleções na sequência de codificação, interrompendo a sequência de aminoácidos do CIITA, fazendo com que as funções de alelo(s)
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207/714 ficassem fora do quadro de leitura ou levando à sua perda. Somente os gRNAs sem uma combinação perfeita em outras partes do genoma foram rastreados. De um total de -274 espaçadores de gRNA direcionados a CIITA (identificados in silico), cento e noventa e seis (196) espaçadores de gRNA foram escolhidos para rastreamento IVT. Cento e oitenta (180) sgRNAs produziram dados mensuráveis por análise TIDE. Oitenta e uma (81) sequências de gRNA produziram percentagens de InDel acima de 50% que poderíam ser adequadas para rastreamentos secundários.
Tabela 7. Sequências alvo de CIITA, sequências espaçadoras de gRNA e eficiências de corte em células HEK293T
Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
CTGGGGCCGCG GCAAGTCTG 507 CUGGGGCCGCGGC AAGUCUG 699 CIITA PIV T19 93,4 0,992
CTCCAGTCGGT TCCTCACAG 508 CUCCAGUCGGUUCC UCACAG 700 CIITA PIV T22 90,4 0,978
AGAGGTCTTGG ATTCCTGCT 509 AGAGGUCUUGGAUU CCUGCU 701 CIITA PIV T60 88,6 0,974
GCCCTGCCGGT CC1 1 1 1CAG 510 GCCCUGCCGGUCCU UUUCAG 702 CIITA PIV T20 88,4 0,943
AGACTCCGGGA GCTGCTGCC 511 AGACUCCGGGAGCU GCUGCC 703 CIITA P3_T27 87,5 0,99
GTCACCTACCG CTGTTCCCC 512 GUCACCUACCGCUG UUCCCC 704 CIITA PIV T25 87,1 0,97
GCCTGGCTCCA CGCCCTGCT 513 GCCUGGCUCCACGC CCUGCU 705 CIITA P3_T38 86,9 0,992
CTGGGACTCTC CCCGAAGTG 514 CUGGGACUCUCCCC GAAGUG 706 CIITA PIV T23 86,1 0,99
GAGCTGCCACA GACTTGCCG 515 GAGCUGCCACAGAC UUGCCG 707 CIITA PIV T7 84,9 0,99
CTTGGATGCCC CAGGCAGTT 516 CUUGGAUGCCCCAG GCAGUU 708 CIITA PIV T52 84,4 0,969
TCTGCAAGTCC TGAGTTGCA 517 UCUGCAAGUCCUGA GUUGCA 709 CIITA PIV T58 84,4 0,988
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
GGGATACCGGA AGAGACCAG 518 GGGAUACCGGAAGA GACCAG 710 CIITA EXON3_T23 83,8 0,924
GGTCACCTACC GCTGTTCCC 519 GGUCACCUACCGCU GUUCCC 711 CIITA PIV T6 83,2 0,899
ACAATGCTCAG TCACCTCAC 520 ACAAUGCUCAGUCA CCUCAC 712 CIITA EXON3_T14 83,1 0,943
GGAGCCCGGG GAACAGCGGT 521 GGAGCCCGGGGAAC AGCGGU 713 CIITA PIV T56 82,8 0,86
GGCCACTGTGA GGAACCGAC 522 GGCCACUGUGAGGA ACCGAC 714 CIITA PIV T12 82,5 0,929
TGGAGATGCCA GCAGAAGTT 523 UGGAGAUGCCAGCA GAAGUU 715 CIITA EXON5_T8 82,3 0,966
ATAGGACCAGA TGAAGTGAT 524 AUAGGACCAGAUGA AGUGAU 716 CIITA EXON5_T12 82 0,977
CTTCTGAGCTG GGCATCCGA 525 CUUCUGAGCUGGGC AUCCGA 717 CIITA P3_T11 81,6 0,964
TCCTACCTGTCA GAGCCCCA 526 UCCUACCUGUCAGA GCCCCA 718 CIITA P3_T18 81,2 0,961
GCCCAGAAAAG GACAATCAA 527 GCCCAGAAAAGGAC AAUCAA 719 CIITA EXON4T22 81 0,928
GAGGTGGTTTG CCACTTTCA 528 GAGGUGGUUUGCCA CUUUCA 720 CIITA PIV T41 80,2 0,943
GAAGCTGAGGG CACGAGGAG 529 GAAGCUGAGGGCAC GAGGAG 721 CIITA P3_T35 80 0,942
GGCTTATGCCA ATATCGGTG 530 GGCUUAUGCCAAUA UCGGUG 722 CIITA EXON4T1 79,8 0,938
CTCCTCTGATG CTGGCCCTA 531 CUCCUCUGAUGCUG GCCCUA 723 CIITA PIV T46 79,7 0,941
GGATACCGGAA GAGACCAGA 532 GGAUACCGGAAGAG ACCAGA 724 CIITA EXON3_T25 79,3 0,872
GGACAAGCTCC CTGCAACTC 533 GGACAAGCUCCCUG CAACUC 725 CIITA PIV T51 78,8 0,976
CATCCATGGAA GGTACCTGA 534 CAUCCAUGGAAGGU ACCUGA 726 CIITA PIV T33 78,5 0,929
TAGCTCAGTTA GCTCATCTC 535 UAGCUCAGUUAGCU CAUCUC 727 CIITA PIV T27 77,1 0,962
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
GATATTGGCATA AGCCTCCC 536 GAUAUUGGCAUAAG CCUCCC 728 CIITA EXON4T7 75,5 0,931
TAGTGATGAGG CTAGTGATG 537 UAGUGAUGAGGCUA GUGAUG 729 CIITA P3_T21 74,8 0,945
GAAGTGGCATC CCAACTGCC 538 GAAGUGGCAUCCCA ACUGCC 730 CIITA PIV T28 74,3 0,965
GCTCAGTTAGC TCATCTCAG 539 GCUCAGUUAGCUCA UCUCAG 731 CIITA PIV T43 74,2 0,985
AGGTGATGAAG AGACCAGGG 540 AGGUGAUGAAGAGA CCAGGG 732 CIITA EXON4T25 73,9 0,871
GAGGCCACCAG CAGCGCGCG 541 GAGGCCACCAGCAG CGCGCG 733 CIITA PIV T26 73,3 0,987
TTCTAGGGGCC CCAACTCCA 542 UUCUAGGGGCCCCA ACUCCA 734 CIITA EXON3_T29 73,3 0,867
AGTCTCCTCTGT AACCCCTA 543 AGUCUCCUCUGUAA CCCCUA 735 CIITA PIV_T44 72,3 0,925
AAGTGGCAAAC CACCTCCGA 544 AAGUGGCAAACCAC CUCCGA 736 CIITA PIV T3 72,2 0,947
TTTTACCTTGGG GCTCTGAC 545 UUUUACCUUGGGGC UCUGAC 737 CIITA P3_T8 71,7 0,968
GGTCCATCTGG TCATAGAAG 546 GGUCCAUCUGGUCA UAGAAG 738 CIITA EXON3_T6 71,5 0,881
GAGCAACCAAG CACCTACTG 547 GAGCAACCAAGCAC CUACUG 739 CIITA PIV T32 71,1 0,887
TCGTGCCCTCA GCTTCCCCA 548 UCGUGCCCUCAGCU UCCCCA 740 CIITA P3_T28 70,6 0,96
ACTTCTGATAAA GCACGTGG 549 ACUUCUGAUAAAGC ACGUGG 741 CIITA PIV T17 70,4 0,939
ATGGAGTTGGG GCCCCTAGA 550 AUGGAGUUGGGGC CCCUAGA 742 CIITA EXON3_T30 68,7 0,983
AGCCCAGAAAA GGACAATCA 551 AGCCCAGAAAAGGA CAAUCA 743 CIITA EXON4T21 68,6 0,805
TAGGGGCCCCA ACTCCATGG 552 UAGGGGCCCCAACU CCAUGG 744 CIITA EXON3_T20 68,5 0,77
GTGGCACACTG TGAGCTGCC 553 GUGGCACACUGUGA GCUGCC 745 CIITA EXON3_T24 68 0,938
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 267/1851
210/714
Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
GAAGCACCTGA GCCCAGAAA 554 GAAGCACCUGAGCC CAGAAA 746 CIITA EXON4T27 66,6 0,695
GTCAGAGCCCC AAGGTAAAA 555 GUCAGAGCCCCAAG GUAAAA 747 CIITA P3_T16 65,9 0,959
GCTCCAGGTAG CCACCTTCT 556 GCUCCAGGUAGCCA CCUUCU 748 CIITA EXON3_T16 65,8 0,856
CTTTCACGGTT GGACTGAGT 557 CUUUCACGGUUGGA CUGAGU 749 CIITA PIV T18 65,6 0,963
GCCACTTCTGA TAAAGCACG 558 GCCACUUCUGAUAA AGCACG 750 CIITA PIV T4 65,4 0,955
AATCCCTCAGG TACCTTCCA 559 AAUCCCUCAGGUAC CUUCCA 751 CIITA PIV T61 64,5 0,866
GTCTGTGGCAG CTCGTCCGC 560 GUCUGUGGCAGCUC GUCCGC 752 CIITA PIV_T1 64,4 0,981
ACACTGTGAGC TGCCTGGGA 561 ACACUGUGAGCUGC CUGGGA 753 CIITA EXON3_T38 63,5 0,891
AAAGTGGCAAA CCACCTCCG 562 AAAGUGGCAAACCA CCUCCG 754 CIITA PIV T2 61,9 0,973
AGGCATCCTTG GGGAAGCTG 563 AGGCAUCCUUGGGG AAGCUG 755 CIITA P3_T32 61,6 0,95
ACTCAGTCCAA CCGTGAAAG 564 ACUCAGUCCAACCG UGAAAG 756 CIITA PIV_T11 61,5 0,964
AGGGACCTCTT GGATGCCCC 565 AGGGACCUCUUGGA UGCCCC 757 CIITA PIV T55 61,1 0,796
AGCAAGGCTAG GTTGGATCA 566 AGCAAGGCUAGGUU GGAUCA 758 CIITA EXON5_T4 60,7 0,839
GCCCTTGATTG TCC1 11 1 CT 567 GCCCUUGAUUGUCC UUUUCU 759 CIITA ΕΧΟΝ4Τ15 60,4 0,876
GGAAGGTGATG AAGAGACCA 568 GGAAGGUGAUGAAG AGACCA 760 CIITA ΕΧΟΝ4Τ26 59,8 0,7
ACCACGTGCTT TATCAGAAG 569 ACCACGUGCUUUAU CAGAAG 761 CIITA PIV T30 59,1 0,962
ACCTTGGGGCT CTGACAGGT 570 ACCUUGGGGCUCUG ACAGGU 762 CIITA P3_T17 58,6 0,972
AGGTAGGACCC AGCAGGGCG 571 AGGUAGGACCCAGC AGGGCG 763 CIITA P3_T22 58,2 0,956
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 268/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
GGGCATCCGAA GGCATCCTT 572 GGGCAUCCGAAGGC AUCCUU 764 CIITA P3_T2 58 0,96
CAGTGGCCAGC CCCACTTCG 573 CAGUGGCCAGCCCC ACUUCG 765 CIITA PIV T36 57,6 0,804
CCCAGCCAGGC AGCAGCTCC 574 CCCAGCCAGGCAGC AGCUCC 766 CIITA P3_T39 57,5 0,966
GGCATCCGAAG GCATCCTTG 575 GGCAUCCGAAGGCA UCCUUG 767 CIITA P3_T10 57 0,855
GCCTGGGACTC TCCCCGAAG 576 GCCUGGGACUCUCC CCGAAG 768 CIITA PIV T24 56,6 0,889
CACTGTGAGGA ACCGACTGG 577 CACUGUGAGGAACC GACUGG 769 CIITA PIV T15 56 0,876
AAAAGAACTGC GGGGAGGCG 578 AAAAGAACUGCGGG GAGGCG 770 CIITA PIV T66 55,9 0,968
TGAGCATTGTCT TCCCTCCC 579 UGAGCAUUGUCUUC CCUCCC 771 CIITA EXON3_T31 55,4 0,954
CCTCAGGTACC TTCCATGGA 580 CCUCAGGUACCUUC CAUGGA 772 CIITA PIV T45 54,7 0,853
CACACTGTGAG CTGCCTGGG 581 CACACUGUGAGCUG CCUGGG 773 CIITA EXON3_T36 54,5 0,94
CTTCTCCAGCC AGGTCCATC 582 CUUCUCCAGCCAGG UCCAUC 774 CIITA EXON3_T17 54 0,885
GGAAGAGACCA GAGGGAGGA 583 GGAAGAGACCAGAG GGAGGA 775 CIITA EXON3_T44 53,5 0,958
AGCCAGGCAAC GCATTGTGT 584 AGCCAGGCAACGCA UUGUGU 776 CIITA P3_T1 53,4 0,972
AAGGCTAGGTT GGATCAGGG 585 AAGGCUAGGUUGGA UCAGGG 777 CIITA EXON5_T6 52,6 0,878
CCTGGGACTCT CCCCGAAGT 586 CCUGGGACUCUCCC CGAAGU 778 CIITA PIV T9 52,3 0,745
ACAGTGTGCCA CCATGGAGT 587 ACAGUGUGCCACCA UGGAGU 779 CIITA EXON3_T4 51,6 0,938
GGCTAGGTTGG ATCAGGGAG 588 GGCUAGGUUGGAUC AGGGAG 780 CIITA EXON5_T11 50,4 0,91
CTCCAAGGCAT GAGACTTTG 589 CUCCAAGGCAUGAG ACUUUG 781 CIITA PIV T67 50,3 0,975
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 269/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
GCCCCTAGAAG GTGGCTACC 590 GCCCCUAGAAGGUG GCUACC 782 CIITA EXON3_T2 50,1 0,936
CTGACAGGTAG GACCCAGCA 591 CUGACAGGUAGGAC CCAGCA 783 CIITA P3_T19 48,3 0,952
GCAGGGCTCTT GCCACGGCT 592 GCAGGGCUCUUGCC ACGGCU 784 CIITA PIV T21 47,9 0,963
GAGCCCCAAGG TAAAAAGGC 593 GAGCCCCAAGGUAA AAAGGC 785 CIITA P3_T9 47,6 0,958
GCTATTCACTCC TCTGATGC 594 GCUAUUCACUCCUC UGAUGC 786 CIITA PIV T39 47,4 0,965
CATCGCTGTTAA GAAGCTCC 595 CAUCGCUGUUAAGA AGCUCC 787 CIITA EXON3_T1 46,7 0,703
GGGTGTGGTCA TGGTAACAC 596 GGGUGUGGUCAUG GUAACAC 788 CIITA PIV T53 46,2 0,956
AAGTGGCATCC CAACTGCCT 597 AAGUGGCAUCCCAA CUGCCU 789 CIITA PIV T63 45,9 0,968
GGGAAGCTGAG GGCACGAGG 598 GGGAAGCUGAGGG CACGAGG 790 CIITA P3_T36 45,8 0,965
CTTCTATGACCA GATGGACC 599 CUUCUAUGACCAGA UGGACC 791 CIITA EXON3_T11 45,5 0,892
CTCCAGGTAGC CACCTTCTA 600 CUCCAGGUAGCCAC CUUCUA 792 CIITA EXON3_T7 45,2 0,857
GGAAGCTGAGG GCACGAGGA 601 GGAAGCUGAGGGCA CGAGGA 793 CIITA P3_T37 45 0,86
CAATGCTCAGT CACCTCACA 602 CAAUGCUCAGUCAC CUCACA 794 CIITA EXON3_T27 44,7 0,95
CTTTCCCGGCC 1 1 1 1 1ACCT 603 CUUUCCCGGCCUUU UUACCU 795 CIITA P3_T14 43,7 0,931
GCTGAACTGGT CGCAGTTGA 604 GCUGAACUGGUCGC AGUUGA 796 CIITA EXON4T3 43,4 0,923
TTGCAGATCACT TGCCCAAG 605 UUGCAGAUCACUUG CCCAAG 797 CIITA PIV T49 43,1 0,982
CTCCTCCCTCT GGTCTCTTC 606 CUCCUCCCUCUGGU CUCUUC 798 CIITA EXON3_T42 42,4 0,872
TTCCTACACAAT GCGTTGCC 607 UUCCUACACAAUGC GUUGCC 799 CIITA P3_T3 42,3 0,95
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 270/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
TTGGGGAAGCT GAGGGCACG 608 UUGGGGAAGCUGAG GGCACG 800 CIITA P3_T34 42 0,975
TCCAGGTAGCC ACCTTCTAG 609 UCCAGGUAGCCACC UUCUAG 801 CIITA EXON3_T9 41,4 0,746
TGAAGTGATCG GTGAGAGTA 610 UGAAGUGAUCGGUG AGAGUA 802 CIITA EXON5_T1 39,3 0,974
CCTCTTTCCAAC ACCCTGTG 611 CCUCUUUCCAACAC CCUGUG 803 CIITA EXON3_T33 39,1 0,711
ACCTCTGAAAA GGACCGGCA 612 ACCUCUGAAAAGGA CCGGCA 804 CIITA PIV_T10 38,9 0,981
GTGAGGAACCG ACTGGAGGC 613 GUGAGGAACCGACU GGAGGC 805 CIITA PIV T42 38,2 0,969
GGGCCATGTGC CCTCGGAGG 614 GGGCCAUGUGCCCU CGGAGG 806 CIITA PIV T62 37,5 0,976
AGGCTAGGTTG GATCAGGGA 615 AGGCUAGGUUGGAU CAGGGA 807 CIITA EXON5_T7 37,1 0,951
TTCCCGGCCTT TTTACCTTG 616 UUCCCGGCCUUUUU ACCUUG 808 CIITA P3_T13 36,5 0,983
CAGAGGTCTTG GATTCCTGC 617 CAGAGGUCUUGGAU UCCUGC 809 CIITA PIV T48 36,1 0,976
ATAGAAGTGGT AGAGGCACA 618 AUAGAAGUGGUAGA GGCACA 810 CIITA EXON3_T41 36,1 0,979
TTCTGGGAGGA AAAGTCCCT 619 UUCUGGGAGGAAAA GUCCCU 811 CIITA EXON4T13 35,9 0,947
TCTGACAGGTA GGACCCAGC 620 UCUGACAGGUAGGA CCCAGC 812 CIITA P3_T7 34,8 0,981
GCAGTTGATGG TGTCTGTGT 621 GCAGUUGAUGGUGU CUGUGU 813 CIITA EXON4T19 34,8 0,937
CCTCACAGGGT GTTGGAAAG 622 CCUCACAGGGUGUU GGAAAG 814 CIITA EXON3_T26 34,4 0,952
GACCGGCAGGG CTCTTGCCA 623 GACCGGCAGGGCUC UUGCCA 815 CIITA PIV T47 34,3 0,943
TACCGGAAGAG ACCAGAGGG 624 UACCGGAAGAGACC AGAGGG 816 CIITA EXON3_T28 32,7 0,982
TGGGCATCCGA AGGCATCCT 625 UGGGCAUCCGAAGG CAUCCU 817 CIITA P3_T4 32,5 0,983
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 271/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
GAGGAGGGGCT GCCAGACTC 626 GAGGAGGGGCUGC CAGACUC 818 CIITA P3_T25 32,1 0,982
GAAATTTCCTTC TTCATCCA 627 GAAAUUUCCUUCUU CAUCCA 819 CIITA EXON4T23 31,6 0,955
AGATTGAGCTC TACTCAGGT 628 AGAUUGAGCUCUAC UCAGGU 820 CIITA EXON3_T3 31 0,946
CAGCTCACAGT GTGCCACCA 629 CAGCUCACAGUGUG CCACCA 821 CIITA EXON3_T15 30,7 0,968
CTACCACTTCTA TGACCAGA 630 CUACCACUUCUAUG ACCAGA 822 CIITA EXON3_T12 30,1 0,987
CACCTCAAAGT CTCATGCCT 631 CACCUCAAAGUCUC AUGCCU 823 CIITA PIV T68 29,2 0,972
AGGCTGTTGTG TGACATGGA 632 AGGCUGUUGUGUGA CAUGGA 824 CIITA EXON4T14 28,2 0,9
TCTGGTCATAG AAGTGGTAG 633 UCUGGUCAUAGAAG UGGUAG 825 CIITA EXON3_T34 27,5 0,979
AGTGTGCCACC ATGGAGTTG 634 AGUGUGCCACCAUG GAGUUG 826 CIITA EXON3_T18 27,3 0,961
CAGTGTGCCAC CATGGAGTT 635 CAGUGUGCCACCAU GGAGUU 827 CIITA EXON3_T10 26,5 0,979
CACACAACAGC CTGCTGAAC 636 CACACAACAGCCUG CUGAAC 828 CIITA EXON4T12 25,4 0,834
GACTCTCCCCG AAGTGGGGC 637 GACUCUCCCCGAAG UGGGGC 829 CIITA PIV T13 24,5 0,963
CAGGGCTCTTG CCACGGCTG 638 CAGGGCUCUUGCCA CGGCUG 830 CIITA PIV T64 24,4 0,958
AGGAGGGGCTG CCAGACTCC 639 AGGAGGGGCUGCCA GACUCC 831 CIITA P3_T29 24 0,989
TGGTTTGCCAC TTTCACGGT 640 UGGUUUGCCACUUU CACGGU 832 CIITA PIV T8 24 0,99
TTTCTCAAAGTA GAGCACAT 641 UUUCUCAAAGUAGA GCACAU 833 CIITA EXON5_T10 23,1 0,947
ACTTGCCGCGG CCCCAGAGC 642 ACUUGCCGCGGCCC CAGAGC 834 CIITA PIV T50 22 0,991
TCAGTCACCTC ACAGGGTGT 643 UCAGUCACCUCACA GGGUGU 835 CIITA EXON3_T22 21,1 0,985
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 272/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
AGGTGCTTCCT CACCGATAT 644 AGGUGCUUCCUCAC CGAUAU 836 CIITA EXON4T2 21 0,979
TGGCACACTGT GAGCTGCCT 645 UGGCACACUGUGAG CUGCCU 837 CIITA EXON3_T32 20,9 0,968
TGCCTGGCTCC ACGCCCTGC 646 UGCCUGGCUCCACG CCCUGC 838 CIITA P3_T40 20,7 0,988
CAGCAGGCTGT TGTGTGACA 647 CAGCAGGCUGUUGU GUGACA 839 CIITA EXON4T10 20,6 0,981
GCTCCCGCGCG CGCTGCTGG 648 GCUCCCGCGCGCG CUGCUGG 840 CIITA PIV T54 20,5 0,994
CATAGAAGTGG TAGAGGCAC 649 CAUAGAAGUGGUAG AGGCAC 841 CIITA EXON3_T19 20 0,962
CAGGGGCCATG TGCCCTCGG 650 CAGGGGCCAUGUGC CCUCGG 842 CIITA PIV T38 19,3 0,984
CTCTCACCGAT CACTTCATC 651 CUCUCACCGAUCAC UUCAUC 843 CIITA EXON5_T2 18,2 0,981
AGCTTCCCCAA GGATGCCTT 652 AGCUUCCCCAAGGA UGCCUU 844 CIITA P3_T12 16,7 0,987
GACCTCTGAAA AGGACCGGC 653 GACCUCUGAAAAGG ACCGGC 845 CIITA PIV T5 16,6 0,988
TGCCCTTGATT GTCC11 1 1C 654 UGCCCUUGAUUGUC CUUUUC 846 CIITA EXON4T11 16,6 0,911
AGGCTGTGTGC TTCTGAGCT 655 AGGCUGUGUGCUUC UGAGCU 847 CIITA P3_T23 16,4 0,987
CAGGTGGGCCC TCCTCCCTC 656 CAGGUGGGCCCUCC UCCCUC 848 CIITA EXON3_T39 16,1 0,987
AGGGAGGCTTA TGCCAATAT 657 AGGGAGGCUUAUGC CAAUAU 849 CIITA EXON4T5 15,8 0,981
AAACCACCTCC GAGGGCACA 658 AAACCACCUCCGAG GGCACA 850 CIITA PIV T31 15,5 0,165
AAATTTCCTTCT TCATCCAA 659 AAAUUUCCUUCUUC AUCCAA 851 CIITA EXON4T24 14,3 0,964
CAGTTGATGGT GTCTGTGTC 660 CAGUUGAUGGUGUC UGUGUC 852 CIITA EXON4T17 13,3 0,985
CCGGGAGCTGC TGCCTGGCT 661 CCGGGAGCUGCUG CCUGGCU 853 CIITA P3_T33 13,2 0,992
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 273/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
GAAGAGATTGA GCTCTACTC 662 GAAGAGAUUGAGCU CUACUC 854 CIITA EXON3_T8 12,4 0,986
TGGTGTCTGTG TCGGGTTCT 663 UGGUGUCUGUGUC GGGUUCU 855 CIITA EXON4T8 12,4 0,959
AGGCCACCAGC AGCGCGCGC 664 AGGCCACCAGCAGC GCGCGC 856 CIITA PIV T14 12,1 0,995
CCCACTTCGGG GAGAGTCCC 665 CCCACUUCGGGGAG AGUCCC 857 CIITA PIV T29 11,3 0,978
GAGGCTGTGTG CTTCTGAGC 666 GAGGCUGUGUGCU UCUGAGC 858 CIITA P3_T24 11,1 0,991
CGGGCTCCCGC GCGCGCTGC 667 CGGGCUCCCGCGC GCGCUGC 859 CIITA PIV T34 10,8 0,993
TTTCCCGGCCT TTTTACCTT 668 UUUCCCGGCCUUUU UACCUU 860 CIITA P3_T20 9,7 0,992
AGCTGAGGGGT GGGGGATAC 669 AGCUGAGGGGUGG GGGAUAC 861 CIITA EXON3_T37 8,8 0,981
CCGGTCC1 1 1 1 CAGAGGTCT 670 CCGGUCCUUUUCAG AGGUCU 862 CIITA PIV T37 8,6 0,984
AAGCAAGGCTA GGTTGGATC 671 AAGCAAGGCUAGGU UGGAUC 863 CIITA EXON5_T3 8 0,965
TGATTGTGTGA GTTGGTCTC 672 UGAUUGUGUGAGUU GGUCUC 864 CIITA EXON5_T5 7,7 0,974
ATGGTGTCTGT GTCGGGTTC 673 AUGGUGUCUGUGUC GGGUUC 865 CIITA EXON4T6 6,9 0,943
AGGCAGCAGCT CCCGGAGTC 674 AGGCAGCAGCUCCC GGAGUC 866 CIITA P3_T15 6,5 0,986
AGCCCCAAGGT AAAAAGGCC 675 AGCCCCAAGGUAAA AAGGCC 867 CIITA P3_T6 5,8 0,995
TGCTTGGTTGC TCCACAGCC 676 UGCUUGGUUGCUCC ACAGCC 868 CIITA PIV T59 5,8 0,994
ATCTGCAAGTC CTGAGTTGC 677 AUCUGCAAGUCCUG AGUUGC 869 CIITA PIV T40 5,1 0,995
ATTGTGTAGGA ATCCCAGCC 678 AUUGUGUAGGAAUC CCAGCC 870 CIITA P3_T5 4,6 0,993
GGCAGGGCTCT TGCCACGGC 679 GGCAGGGCUCUUG CCACGGC 871 CIITA PIV T16 4,2 0,985
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 274/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
TCCGGGAGCTG CTGCCTGGC 680 UCCGGGAGCUGCU GCCUGGC 872 CIITA P3_T30 3,9 0,993
GGCATCCTTGG GGAAGCTGA 681 GGCAUCCUUGGGGA AGCUGA 873 CIITA P3_T26 3,6 0,99
TATGACCAGAT GGACCTGGC 682 UAUGACCAGAUGGA CCUGGC 874 CIITA EXON3_T13 3,5 0,991
AGGGCTCTTGC CACGGCTGG 683 AGGGCUCUUGCCAC GGCUGG 875 CIITA PIV T35 2,9 0,959
CAATCTCTTCTT CTCCAGCC 684 CAAUCUCUUCUUCU CCAGCC 876 CIITA EXON3_T40 1,5 0,99
ACCCAGCAGGG CGTGGAGCC 685 ACCCAGCAGGGCGU GGAGCC 877 CIITA P3_T31 0,7 0,995
C1 1 1 1C1GCCCA ACTTCTGC 686 CUUUUCUGCCCAAC UUCUGC 878 CIITA EXON5_T9 0,2 0,993
AGCTCAGTTAG CTCATCTCA 687 AGCUCAGUUAGCUC AUCUCA 879 CIITA PIV T57
AGGGAAAAAGA ACTGCGGGG 688 AGGGAAAAAGAACU GCGGGG 880 CIITA PIV T65
GAGATTGAGCT CTACTCAGG 689 GAGAUUGAGCUCUA CUCAGG 881 CIITA EXON3_T5
GAGTTGGGGCC CCTAGAAGG 690 GAGUUGGGGCCCC UAGAAGG 882 CIITA EXON3_T21
TAGAAGTGGTA GAGGCACAG 691 UAGAAGUGGUAGAG GCACAG 883 CIITA EXON3_T35
AGAAGTGGTAG AGGCACAGG 692 AGAAGUGGUAGAGG CACAGG 884 CIITA EXON3_T43
CGGAAGAGACC AGAGGGAGG 693 CGGAAGAGACCAGA GGGAGG 885 CIITA EXON3_T45
TCAACTGCGAC CAGTTCAGC 694 UCAACUGCGACCAG UUCAGC 886 CIITA ΕΧΟΝ4Τ4
TGTCTGTGTCG GGTTCTGGG 695 UGUCUGUGUCGGG UUCUGGG 887 CIITA ΕΧΟΝ4Τ9
GATTGTCC11 1 1 CTGGGCTC 696 GAUUGUCCUUUUCU GGGCUC 888 CIITA ΕΧΟΝ4Τ16
AAAAGTCCCTT GGATGAAGA 697 AAAAGUCCCUUGGA UGAAGA 889 CIITA ΕΧΟΝ4Τ18
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 275/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
TGGAAGGTGAT GAAGAGACC 698 UGGAAGGUGAUGAA GAGACC 890 CIITA EXON4T20
[0526] Em algumas modalidades, um gRNA compreende a sequência de qualquer uma das SEQ ID NOs: 699-890 ou tem alvo na sequência de qualquer uma das SEQ ID NOs: 507-698.
Rastreamento de gRNA PD1
[0527] Para PDCD1 (PD1), segmentos genômicos contendo o primeiro de três (3) éxons codificantes de proteína foram utilizados como entrada no software de design de gRNA. Os segmentos genômicos também incluíram sequências aceitadoras/doadoras no sítio de splice de flanqueamento. Os gRNAs desejados foram aqueles que levariam a inserções ou deleções na sequência de codificação, interrompendo a sequência de aminoácidos do PDCD1, fazendo com que as funções de alelo(s) ficassem fora do quadro de leitura ou levando à sua perda. Cento e noventa e dois (192) espaçadores de gRNA identificados em silico com alvo em PDCD1 foram utilizados em um rastreamento IVT. Cento e noventa (190) produziram dados mensuráveis por análise TIDE. Quarenta (40) sequências de gRNA produziram percentagens de InDel acima de 50% que poderíam ser adequadas para rastreamentoss secundários.
Tabela 8. Sequências alvo de PD1, sequências espaçadoras de gRNA e eficiências de corte em células HEK293T
Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
TGTCTGGGGAGT CTGAGAGA 891 UGUCUGGGGAGU CUGAGAGA 1083 PD1 EXON2T84 94,7 0,96
ACTGCTCAGGCG GAGGTGAGCGG 892 ACUGCUCAGGCG GAGGUGAG 1084 PD1 EXON1T40 84,4 0,977
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 276/1851
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
CGCAGATCAAAG AGAGCCTG 893 CGCAGAUCAAAG AGAGCCUG 1085 PD1 EXON2T51 83,1 0,894
CTGCAGCTTCTC CAACACAT 894 CUGCAGCUUCUC CAACACAU 1086 PD1 EXON2T57 82,4 0,9
GCCCTGGCCAGT CGTCTGGGCGG 895 CGCCUUCUCCAC UGCUCAGG 1087 PD1 EXON1T23 80,8 0,961
CAGCGGCACCTA CCTCTGTG 896 CAGCGGCACCUA CCUCUGUG 1088 PD1 EXON2T50 77,7 0,928
CTTCTCCACTGCT CAGGCGGAGG 897 ACGACUGGCCAG GGCGCCUG 1089 PD1 EXON1T29 77,2 0,919
GTTGGAGAAGCT GCAGGTGA 898 GUUGGAGAAGCU GCAGGUGA 1090 PD1 EXON2T94 76,7 0,92
CGTGTCACACAA CTGCCCAA 899 CGUGUCACACAA CUGCCCAA 1091 PD1 EXON2T33 71,4 0,842
CAGTGGAGAAGG CGGCACTCTGG 900 GGAGAAGGCGGC ACUCUGGU 1092 PD1 EXON1T19 70,3 0,924
CGCCTGAGCAGT GGAGAAGGCGG 901 GCUCACCUCCGC CUGAGCAG 1093 PD1 EXON1T37 66,6 0,885
CCCTTCGGTCAC CACGAGCA 902 CCCUUCGGUCAC CACGAGCA 1094 PD1 EXON2T14 66,2 0,867
GGCGCCCTGGCC AGTCGTCTGGG 903 UCUUAGGUAGGU GGGGUCGG 1095 PD1 EXON1T7 65,8 0,804
GTCTGGGCGGTG CTACAACTGGG 904 CGACUGGCCAGG GCGCCUGU 1096 PD1 EXON1T3 65,5 0,856
GGAGAAGGCGGC ACTCTGGTGGG 905 CGGUGCUACAAC UGGGCUGG 1097 PD1 EXON1T13 65,1 0,945
TGCCGCCTTCTC CACTGCTCAGG 906 CUCAGGCGGAGG UGAGCGGA 1098 PD1 EXON1T32 63,4 0,876
GGAGTCTGAGAG ATGGAGAG 907 GGAGUCUGAGAG AUGGAGAG 1099 PD1 EXON2T86 63,4 0,86
GCCCACGACACC AACCACCA 908 GCCCACGACACC AACCACCA 1100 PD1 EXON3_T17 62,2 0,859
CCAGGGAGATGG CCCCACAG 909 CCAGGGAGAUGG CCCCACAG 1101 PD1 EXON2T70 60,6 0,87
GCTCACCTCCGC CTGAGCAGTGG 910 AGGCGCCCUGGC CAGUCGUC 1102 PD1 EXON1T25 60,2 0,858
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 277/1851
220/714
Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
GCAGATCAAAGA GAGCCTGC 911 GCAGAUCAAAGA GAGCCUGC 1103 PD1 EXON2T52 58,4 0,701
GGAGAAGCTGCA GGTGAAGG 912 GGAGAAGCUGCA GGUGAAGG 1104 PD1 EXON2T99 58,4 0,88
CATGAGCCCCAG CAACCAGA 913 CAUGAGCCCCAG CAACCAGA 1105 PD1 EXON2T56 58,1 0,908
TGGAAGGGCACA AAGGTCAG 914 UGGAAGGGCACA AAGGUCAG 1106 PD1 EXON3_T36 58,1 0,786
GAGCCTGCGGGC AGAGCTCA 915 GAGCCUGCGGGC AGAGCUCA 1107 PD1 EXON2T72 57,9 0,75
CGCCCACGACAC CAACCACC 916 CGCCCACGACAC CAACCACC 1108 PD1 EXON3_T8 56 0,855
TGGAGAAGGCGG CACTCTGGTGG 917 GAGAAGGCGGCA CUCUGGUG 1109 PD1 EXON1T20 55,6 0,743
TCCAGGCATGCA GATCCCACAGG 918 CAGUGGAGAAGG CGGCACUC 1110 PD1 EXON1T28 55,5 0,725
GACAGCGGCACC TACCTCTG 919 GACAGCGGCACC UACCUCUG 1111 PD1 EXON2T44 53,6 0,794
GAGAAGGCGGCA CTCTGGTGGGG 920 GGGCGGUGCUAC AACUGGGC 1112 PD1 EXON1T18 52,7 0,864
GCTTGTCCGTCT GGTTGCTG 921 GCUUGUCCGUCU GGUUGCUG 1113 PD1 EXON2T37 52,5 0,584
CCTCTGTGGGGC CATCTCCC 922 CCUCUGUGGGGC CAUCUCCC 1114 PD1 EXON2T66 52,2 0,787
TGCAGATCCCAC AGGCGCCCTGG 923 CUUCUCCACUGC UCAGGCGG 1115 PD1 EXON1T30 52,1 0,862
CACTCTGGTGGG GCTGCTCCAGG 924 UGGAGAAGGCGG CACUCUGG 1116 PD1 EXON1T36 51,8 0,854
GCAGTTGTGTGA CACGGAAG 925 GCAGUUGUGUGA CACGGAAG 1117 PD1 EXON2T25 51,3 0,553
TGTAGCACCGCC CAGACGACTGG 926 UGUAGCACCGCC CAGACGAC 1118 PD1 EXON1T1 51,1 0,93
GGCCATCTCCCT GGCCCCCA 927 GGCCAUCUCCCU GGCCCCCA 1119 PD1 EXON2T88 50,9 0,86
CCTGCTCGTGGT GACCGAAG 928 CCUGCUCGUGGU GACCGAAG 1120 PD1 EXON2T13 50,8 0,914
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 278/1851
221/714
Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
GGGGTTCCAGGG CCTGTCTG 929 GGGGUUCCAGGG CCUGUCUG 1121 PD1 EXON2T78 50,8 0,74
GGCCAGGATGGT TCTTAGGTAGG 930 CGUCUGGGCGGU GCUACAAC 1122 PD1 EXON1T9 50,7 0,715
TCAGGCGGAGGT GAGCGGAAGGG 931 GGCCAGGAUGGU UCUUAGGU 1123 PD1 EXON1T26 48,8 0,913
TCTGGTTGCTGG GGCTCATG 932 UCUGGUUGCUGG GGCUCAUG 1124 PD1 EXON2T69 48,7 0,76
CTTCTCCCCAGC CCTGCTCG 933 CUUCUCCCCAGC CCUGCUCG 1125 PD1 EXON2T73 48,7 0,9
CGACTGGCCAGG GCGCCTGTGGG 934 GGUAGGUGGGGU CGGCGGUC 1126 PD1 EXON1T11 48,4 0,868
TTCTCTCTGGAAG GGCACAA 935 UUCUCUCUGGAA GGGCACAA 1127 PD1 EXON3_T31 48,2 0,969
CCTGGCCGTCAT CTGCTCCC 936 CCUGGCCGUCAU CUGCUCCC 1128 PD1 EXON3_T33 48,1 0,789
CTCCGCCTGAGC AGTGGAGAAGG 937 UGCAGAUCCCAC AGGCGCCC 1129 PD1 EXON1T38 47,2 0,948
CGTTGGGCAGTT GTGTGACA 938 CGUUGGGCAGUU GUGUGACA 1130 PD1 EXON2T30 45,9 0,934
GGATGGTTCTTA GGTAGGTGGGG 939 GUCUGGGCGGUG CUACAACU 1131 PD1 EXON1T17 45,6 0,91
GGTTCTTAGGTA GGTGGGGTCGG 940 CUACAACUGGGC UGGCGGCC 1132 PD1 EXON1T35 45,4 0,917
CGGTCACCACGA GCAGGGCT 941 CGGUCACCACGA GCAGGGCU 1133 PD1 EXON2T34 45,3 0,917
GCCTGTGGGATC TGCATGCCTGG 942 UGGCGGCCAGGA UGGUUCUU 1134 PD1 EXON1T27 45,2 0,968
CACCTACCTAAGA ACCATCCTGG 943 GGCGCCCUGGCC AGUCGUCU 1135 PD1 EXON1T10 44 0,827
AGGCGCCCTGGC CAGTCGTCTGG 944 AGGAUGGUUCUU AGGUAGGU 1136 PD1 EXON1T4 43,7 0,962
GCGTGACTTCCA CATGAGCG 945 GCGUGACUUCCA CAUGAGCG 1137 PD1 EXON2T6 42,9 0,941
ACGACTGGCCAG GGCGCCTGTGG 946 CUCCGCCUGAGC AGUGGAGA 1138 PD1 EXON1T24 42,8 0,925
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 279/1851
222/714
Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
AGGGCCCGGCGC AATGACAG 947 AGGGCCCGGCGC AAUGACAG 1139 PD1 EXON2T17 42,3 0,902
TGGCGGCCAGGA TGGTTCTTAGG 948 GCCUGUGGGAUC UGCAUGCC 1140 PD1 EXON1T14 42,1 0,928
GGTGACAGGTGC GGCCTCGG 949 GGUGACAGGUGC GGCCUCGG 1141 PD1 EXON2T27 41,5 0,807
GCCCTGCTCGTG GTGACCGA 950 GCCCUGCUCGUG GUGACCGA 1142 PD1 EXON2T4 40,3 0,877
CAGTTCCAAACC CTGGTGGT 951 CAGUUCCAAACC CUGGUGGU 1143 PD1 EXON3_T15 40,1 0,908
CGATGTGTTGGA GAAGCTGC 952 CGAUGUGUUGGA GAAGCUGC 1144 PD1 EXON2T54 39,6 0,926
GTGTCACACAACT GCCCAAC 953 GUGUCACACAAC UGCCCAAC 1145 PD1 EXON2T26 38,6 0,907
CAGGATGGTTCTT AGGTAGGTGG 954 GCCCUGGCCAGU CGUCUGGG 1146 PD1 EXON1T21 38,4 0,964
CCGGGCTGGCTG CGGTCCTC 955 CCGGGCUGGCUG CGGUCCUC 1147 PD1 EXON2T38 37,6 0,838
GCTGCGGTCCTC GGGGAAGG 956 GCUGCGGUCCUC GGGGAAGG 1148 PD1 EXON2T67 37,6 0,897
CGGGCTGGCTGC GGTCCTCG 957 CGGGCUGGCUGC GGUCCUCG 1149 PD1 EXON2T36 36,3 0,813
CGCCTTCTCCACT GCTCAGGCGG 958 ACCGCCCAGACG ACUGGCCA 1150 PD1 EXON1T33 36,1 0,487
ACAGCGGCACCT ACCTCTGT 959 ACAGCGGCACCU ACCUCUGU 1151 PD1 EXON2T42 35,8 0,864
CAAGCTGGCCGC CTTCCCCG 960 CAAGCUGGCCGC CUUCCCCG 1152 PD1 EXON2T31 35,3 0,945
CTCAGCTCACCC CTGCCCCG 961 CUCAGCUCACCC CUGCCCCG 1153 PD1 EXON2T77 34,7 0,89
ATGTGGAAGTCA CGCCCGTT 962 AUGUGGAAGUCA CGCCCGUU 1154 PD1 EXON2T1 34,6 0,935
GAGATGGAGAGA GGTGAGGA 963 GAGAUGGAGAGA GGUGAGGA 1155 PD1 EXON2T89 34,4 0,885
GAAGGTGGCGTT GTCCCCTT 964 GAAGGUGGCGUU GUCCCCUU 1156 PD1 EXON2T15 32,4 0,976
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 280/1851
223/714
Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
TGACACGGAAGC GGCAGTCC 965 UGACACGGAAGC GGCAGUCC 1157 PD1 EXON2T18 32,4 0,876
ACCCTGGTGGTT GGTGTCGT 966 ACCCUGGUGGUU GGUGUCGU 1158 PD1 EXON3_T7 31,3 0,465
CTTCCACATGAG CGTGGTCA 967 CUUCCACAUGAG CGUGGUCA 1159 PD1 EXON2T21 31,1 0,962
CCCTGCTCGTGG TGACCGAA 968 CCCUGCUCGUGG UGACCGAA 1160 PD1 EXON2T5 30,5 0,965
AGATGGAGAGAG GTGAGGAA 969 AGAUGGAGAGAG GUGAGGAA 1161 PD1 EXON2T98 29,9 0,896
TCCTGGCCGTCA TCTGCTCC 970 UCCUGGCCGUCA UCUGCUCC 1162 PD1 EXON3_T22 29,9 0,802
GGACCCAGACTA GCAGCACC 971 GGACCCAGACUA GCAGCACC 1163 PD1 EXON3_T26 29,8 0,819
TGACGTTACCTC GTGCGGCC 972 UGACGUUACCUC GUGCGGCC 1164 PD1 EXON3_T2 29 0,822
CTGAGAGATGGA GAGAGGTG 973 CUGAGAGAUGGA GAGAGGUG 1165 PD1 EXON2T81 27,8 0,89
GATGGAGAGAGG TGAGGAAG 974 GAUGGAGAGAGG UGAGGAAG 1166 PD1 EXON2T82 27,2 0,956
CACCAGGGTTTG GAACTGGC 975 CACCAGGGUUUG GAACUGGC 1167 PD1 EXON3_T24 25,9 0,896
GCAGGGCTGGGG AGAAGGTG 976 GCAGGGCUGGGG AGAAGGUG 1168 PD1 EXON2T96 25,2 0,966
GGCTCAGCTCAC CCCTGCCC 977 GGCUCAGCUCAC CCCUGCCC 1169 PD1 EXON2T106 24,8 0,955
AACTGGGCTGGC GGCCAGGATGG 978 CACCUACCUAAG AACCAUCC 1170 PD1 EXON1T34 23,9 0,969
AGCAGGGCTGGG GAGAAGGT 979 AGCAGGGCUGGG GAGAAGGU 1171 PD1 EXON2T85 23,8 0,807
ACATGAGCGTGG TCAGGGCC 980 ACAUGAGCGUGG UCAGGGCC 1172 PD1 EXON2T41 23,7 0,984
TCGGTCACCACG AGCAGGGC 981 UCGGUCACCACG AGCAGGGC 1173 PD1 EXON2T28 23,5 0,954
GGGCCCTGACCA CGCTCATG 982 GGGCCCUGACCA CGCUCAUG 1174 PD1 EXON2T22 23,3 0,976
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 281/1851
224/714
Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
CGTCTGGGCGGT GCTACAACTGG 983 CACCGCCCAGAC GACUGGCC 1175 PD1 EXON1T2 23,2 0,967
CTGGCTGCGGTC CTCGGGGA 984 CUGGCUGCGGUC CUCGGGGA 1176 PD1 EXON2T39 22,8 0,963
TTTGTGCCCTTCC AGAGAGA 985 UUUGUGCCCUUC CAGAGAGA 1177 PD1 EXON3_T38 22,4 0,87
AGGATGGTTCTTA GGTAGGTGGG 986 CGCCUGAGCAGU GGAGAAGG 1178 PD1 EXON1T16 22,2 0,968
GGTGCTGCTAGT CTGGGTCC 987 GGUGCUGCUAGU CUGGGUCC 1179 PD1 EXON3_T16 22,1 0,937
GGCACTTCTGCC CTTCTCTC 988 GGCACUUCUGCC CUUCUCUC 1180 PD1 EXON3_T37 21,6 0,926
ACAAAGGTCAGG GGTTAGGA 989 ACAAAGGUCAGG GGUUAGGA 1181 PD1 EXON3_T40 20,9 0,895
TTCTGCCCTTCTC TCTGGAA 990 UUCUGCCCUUCU CUCUGGAA 1182 PD1 EXON3_T42 20,5 0,951
CATGTGGAAGTC ACGCCCGT 991 CAUGUGGAAGUC ACGCCCGU 1183 PD1 EXON2T2 20,3 0,979
GTGCGGCCTCGG AGGCCCCG 992 GUGCGGCCUCGG AGGCCCCG 1184 PD1 EXON2T40 20,2 0,99
GATCTGCGCCTT GGGGGCCA 993 GAUCUGCGCCUU GGGGGCCA 1185 PD1 EXON2T49 20 0,977
GGGCGGTGCTAC AACTGGGCTGG 994 CACUCUGGUGGG GCUGCUCC 1186 PD1 EXON1T8 18,4 0,981
GAGGTGAGGAAG GGGCTGGG 995 GAGGUGAGGAAG GGGCUGGG 1187 PD1 EXON2T105 18,2 0,963
ACGGAAGCGGCA GTCCTGGC 996 ACGGAAGCGGCA GUCCUGGC 1188 PD1 EXON2T35 18,1 0,986
CTGGAAGGGCAC AAAGGTCA 997 CUGGAAGGGCAC AAAGGUCA 1189 PD1 EXON3_T32 18,1 0,963
GAGGGGCTGGG GTGGGCTGT 998 GAGGGGCUGGG GUGGGCUGU 1190 PD1 EXON3_T44 17,5 0,94
ACTTCCACATGAG CGTGGTC 999 ACUUCCACAUGA GCGUGGUC 1191 PD1 EXON2T10 17,4 0,984
GGTCACCACGAG CAGGGCTG 1000 GGUCACCACGAG CAGGGCUG 1192 PD1 EXON2T55 17,4 0,989
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 282/1851
225/714
Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
CGCCTTGGGGGC CAGGGAGA 1001 CGCCUUGGGGGC CAGGGAGA 1193 PD1 EXON2T103 17,2 0,933
AGCCGGCCAGTT CCAAACCC 1002 AGCCGGCCAGUU CCAAACCC 1194 PD1 EXON3_T12 17,1 0,972
TGCGGCCCGGGA GCAGATGA 1003 UGCGGCCCGGGA GCAGAUGA 1195 PD1 EXON3_T23 16,6 0,954
CCCGAGGACCGC AGCCAGCC 1004 CCCGAGGACCGC AGCCAGCC 1196 PD1 EXON2T63 16,1 0,96
GTAACGTCATCC CAGCCCCT 1005 GUAACGUCAUCC CAGCCCCU 1197 PD1 EXON3_T25 15,6 0,957
GGTGTCGTGGGC GGCCTGCT 1006 GGUGUCGUGGGC GGCCUGCU 1198 PD1 EXON3_T14 15,3 0,982
ATCTCTCAGACTC CCCAGAC 1007 AUCUCUCAGACU CCCCAGAC 1199 PD1 EXON2T48 14,4 0,988
GGTAGGTGGGGT CGGCGGTCAGG 1008 GGAUGGUUCUUA GGUAGGUG 1200 PD1 EXON1T12 13,7 0,973
AGGTGCCGCTGT CATTGCGC 1009 AGGUGCCGCUGU CAUUGCGC 1201 PD1 EXON2T11 13,5 0,982
TGGGATGACGTT ACCTCGTG 1010 UGGGAUGACGUU ACCUCGUG 1202 PD1 EXON3_T1 13,2 0,964
TCACCCTGAGCT CTGCCCGC 1011 UCACCCUGAGCU CUGCCCGC 1203 PD1 EXON2T62 12,5 0,974
CGGCCAGTTCCA AACCCTGG 1012 CGGCCAGUUCCA AACCCUGG 1204 PD1 EXON3_T20 12,1 0,97
GCTCAGCTCACC CCTGCCCC 1013 GCUCAGCUCACC CCUGCCCC 1205 PD1 EXON2T90 12 0,148
CGGGCAGAGCTC AGGGTGAC 1014 CGGGCAGAGCUC AGGGUGAC 1206 PD1 EXON2T58 10,9 0,98
GGTGCCGCTGTC ATTGCGCC 1015 GGUGCCGCUGUC AUUGCGCC 1207 PD1 EXON2T12 10,7 0,987
GCAGCCTGGTGC TGCTAGTC 1016 GCAGCCUGGUGC UGCUAGUC 1208 PD1 EXON3_T19 10,7 0,95
TGGAACTGGCCG GCTGGCCT 1017 UGGAACUGGCCG GCUGGCCU 1209 PD1 EXON3_T27 10,6 0,974
GAGCAGGGCTGG GGAGAAGG 1018 GAGCAGGGCUGG GGAGAAGG 1210 PD1 EXGN2T100 10,3 0,97
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 283/1851
226/714
Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
CACGAGCAGGGC TGGGGAGA 1019 CACGAGCAGGGC UGGGGAGA 1211 PD1 EXON2T95 10,2 0,977
GGACCGCAGCCA GCCCGGCC 1020 GGACCGCAGCCA GCCCGGCC 1212 PD1 EXON2T74 10 0,97
CAGGGCTGGGGA GAAGGTGG 1021 CAGGGCUGGGGA GAAGGUGG 1213 PD1 EXON2T97 10 0,956
CCCCTTCGGTCA CCACGAGC 1022 CCCCUUCGGUCA CCACGAGC 1214 PD1 EXON2T8 9,8 0,993
ATCTGCTCCCGG GCCGCACG 1023 AUCUGCUCCCGG GCCGCACG 1215 PD1 EXON3_T5 9,8 0,982
CTTCTGCCCTTCT CTCTGGA 1024 CUUCUGCCCUUC UCUCUGGA 1216 PD1 EXON3_T46 9,7 0,992
AGCTTGTCCGTCT GGTTGCT 1025 AGCUUGUCCGUC UGGUUGCU 1217 PD1 EXON2T19 9,6 0,995
CCTCGGAGGCCC CGGGGCAG 1026 CCUCGGAGGCCC CGGGGCAG 1218 PD1 EXON2T76 9,3 0,933
AGGCGGCCAGCT TGTCCGTC 1027 AGGCGGCCAGCU UGUCCGUC 1219 PD1 EXON2T9 9,1 0,991
AGGGTTTGGAAC TGGCCGGC 1028 AGGGUUUGGAAC UGGCCGGC 1220 PD1 EXON3_T6 9,1 0,965
AGAGCCTGCGGG CAGAGCTC 1029 AGAGCCUGCGGG CAGAGCUC 1221 PD1 EXON2T59 8,8 0,984
CAACCACCAGGG TTTGGAAC 1030 CAACCACCAGGG UUUGGAAC 1222 PD1 EXON3_T21 8,8 0,967
TCTGGAAGGGCA CAAAGGTC 1031 UCUGGAAGGGCA CAAAGGUC 1223 PD1 EXON3_T28 8,8 0,984
GGCCTCGGAGGC CCCGGGGC 1032 GGCCUCGGAGGC CCCGGGGC 1224 PD1 EXON2T102 8,6 0,969
AGAGCTCAGGGT GACAGGTG 1033 AGAGCUCAGGGU GACAGGUG 1225 PD1 EXON2T93 8,4 0,087
CGGTGCTACAAC TGGGCTGGCGG 1034 UCCAGGCAUGCA GAUCCCAC 1226 PD1 EXON1T22 8,3 0,985
CAGCCTGGTGCT GCTAGTCT 1035 CAGCCUGGUGCU GCUAGUCU 1227 PD1 EXON3_T29 8,2 0,977
GGAGATGGCCCC ACAGAGGT 1036 GGAGAUGGCCCC ACAGAGGU 1228 PD1 EXON2T60 8,1 0,089
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 284/1851
227/714
Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
AAAGGTCAGGGG TTAGGACG 1037 AAAGGUCAGGGG UUAGGACG 1229 PD1 EXON3_T18 8,1 0,987
CAAAGGTCAGGG GTTAGGAC 1038 CAAAGGUCAGGG GUUAGGAC 1230 PD1 EXON3_T34 7,8 0,983
CTGGTGGTTGGT GTCGTGGG 1039 CUGGUGGUUGGU GUCGUGGG 1231 PD1 EXON3_T30 7,7 0,984
CCCGGGAGCAGA TGACGGCC 1040 CCCGGGAGCAGA UGACGGCC 1232 PD1 EXON3_T10 7,5 0,986
CGGAGAGCTTCG TGCTAAAC 1041 CGGAGAGCUUCG UGCUAAAC 1233 PD1 EXON2T3 7,3 0,994
CACGAAGCTCTC CGATGTGT 1042 CACGAAGCUCUC CGAUGUGU 1234 PD1 EXON2T7 7 0,993
CCCCTGCCCCGG GGCCTCCG 1043 CCCCUGCCCCGG GGCCUCCG 1235 PD1 EXON2T83 7 0,992
GGGCTGGGGAGA AGGTGGGG 1044 GGGCUGGGGAGA AGGUGGGG 1236 PD1 EXON2T101 6,7 0,974
GAGAGAGGTGAG GAAGGGGC 1045 GAGAGAGGUGAG GAAGGGGC 1237 PD1 EXON2T92 6,6 0,982
GGGGGGTTCCAG GGCCTGTC 1046 GGGGGGUUCCAG GGCCUGUC 1238 PD1 EXON2T68 6,5 0,963
TGGTGTCGTGGG CGGCCTGC 1047 UGGUGUCGUGGG CGGCCUGC 1239 PD1 EXON3_T13 6,2 0,983
AGGGCTGGGGAG AAGGTGGG 1048 AGGGCUGGGGAG AAGGUGGG 1240 PD1 EXON2T91 5,5 0,992
GGTGCGGCCTCG GAGGCCCC 1049 GGUGCGGCCUCG GAGGCCCC 1241 PD1 EXON2T64 5,3 0,99
AGCCCCTCACCC AGGCCAGC 1050 AGCCCCUCACCC AGGCCAGC 1242 PD1 EXON3_T41 5,3 0,99
CTCAGGCGGAGG TGAGCGGAAGG 1051 GGUUCUUAGGUA GGUGGGGU 1243 PD1 EXON1T39 5,2 0,99
AGCGGCAGTCCT GGCCGGGC 1052 AGCGGCAGUCCU GGCCGGGC 1244 PD1 EXON2T43 5,2 0,981
GGGCACAAAGGT CAGGGGTT 1053 GGGCACAAAGGU CAGGGGUU 1245 PD1 EXON3_T35 5,2 0,99
CAGCTTGTCCGT CTGGTTGC 1054 CAGCUUGUCCGU CUGGUUGC 1246 PD1 EXON2T16 5,1 0,996
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 285/1851
228/714
Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
CCTGGGTGAGGG GCTGGGGT 1055 CCUGGGUGAGGG GCUGGGGU 1247 PD1 EXON3_T45 4,8 0,995
CGACACCAACCA CCAGGGTT 1056 CGACACCAACCA CCAGGGUU 1248 PD1 EXON3_T9 4,7 0,992
CGGAAGCGGCAG TCCTGGCC 1057 CGGAAGCGGCAG UCCUGGCC 1249 PD1 EXON2T46 4,4 0,995
TTGGAACTGGCC GGCTGGCC 1058 UUGGAACUGGCC GGCUGGCC 1250 PD1 EXON3_T11 4,3 0,989
GGAGAAGGTGGG GGGGTTCC 1059 GGAGAAGGUGGG GGGGUUCC 1251 PD1 EXON2T80 4,2 0,989
ACCGCCCAGACG ACTGGCCAGGG 1060 CAGGAUGGUUCU UAGGUAGG 1252 PD1 EXON1T5 4,1 0,984
GAGAAGGTGGGG GGGTTCCA 1061 GAGAAGGUGGGG GGGUUCCA 1253 PD1 EXON2T65 3,8 0,987
CTGGCCGGCTGG CCTGGGTG 1062 CUGGCCGGCUGG CCUGGGUG 1254 PD1 EXON3_T43 3,5 0,991
CTACAACTGGGC TGGCGGCCAGG 1063 UGCCGCCUUCUC CACUGCUC 1255 PD1 EXON1T15 3,2 0,981
TCTTAGGTAGGT GGGGTCGGCGG 1064 AACUGGGCUGGC GGCCAGGA 1256 PD1 EXON1T31 3,1 0,98
GGGGGTTCCAGG GCCTGTCT 1065 GGGGGUUCCAGG GCCUGUCU 1257 PD1 EXON2T75 3,1 0,993
CACCGCCCAGAC GACTGGCCAGG 1066 UCAGGCGGAGGU GAGCGGAA 1258 PD1 EXON1T6 2,9 0,979
CTCTTTGATCTGC GCCTTGG 1067 CUCUUUGAUCUG CGCCUUGG 1259 PD1 EXON2T32 2,5 0,979
GCCGGGCTGGCT GCGGTCCT 1068 GCCGGGCUGGCU GCGGUCCU 1260 PD1 EXON2T53 2,5 0,996
AGGTGCGGCCTC GGAGGCCC 1069 AGGUGCGGCCUC GGAGGCCC 1261 PD1 EXON2T61 2,2 0,989
TGATCTGCGCCTT GGGGGCC 1070 UGAUCUGCGCCU UGGGGGCC 1262 PD1 EXON2T45 2,1 0,997
CAGACTCCCCAG ACAGGCCC 1071 CAGACUCCCCAG ACAGGCCC 1263 PD1 EXON2T104 2 0,992
CAGCAACCAGAC GGACAAGC 1072 CAGCAACCAGAC GGACAAGC 1264 PD1 EXON2T24 1,9 0,996
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Sequência Alvo SEQ ID NO: Sequência Espaçadora de gRNA SEQ ID NO: Nome Guia % Indel R2
TCTCTTTGATCTG CGCCTTG 1073 UCUCUUUGAUCU GCGCCUUG 1265 PD1 EXON2T29 1,9 0,994
TTGTGCCCTTCCA GAGAGAA 1074 UUGUGCCCUUCC AGAGAGAA 1266 PD1 EXON3_T39 1,9 0,993
AGTCCTGGCCGG GCTGGCTG 1075 AGUCCUGGCCGG GCUGGCUG 1267 PD1 EXON2T79 1,4 0,996
AGAGAGGTGAGG AAGGGGCT 1076 AGAGAGGUGAGG AAGGGGCU 1268 PD1 EXON2T87 1,2 0,993
GCTCTCTTTGATC TGCGCCT 1077 GCUCUCUUUGAU CUGCGCCU 1269 PD1 EXON2T20 1 0,992
CAGGGTGACAGG TGCGGCCT 1078 CAGGGUGACAGG UGCGGCCU 1270 PD1 EXON2T47 0,8 0,993
GCCTCGGAGGCC CCGGGGCA 1079 GCCUCGGAGGCC CCGGGGCA 1271 PD1 EXON2T71 0,2 0,993
CTCTCTTTGATCT GCGCCTT 1080 CUCUCUUUGAUC UGCGCCUU 1272 PD1 EXON2T23 0,1 0,994
GACGTTACCTCG TGCGGCCC 1081 GACGUUACCUCG UGCGGCCC 1273 PD1 EXON3_T3
AACCCTGGTGGT TGGTGTCG 1082 AACCCUGGUGGU UGGUGUCG 1274 PD1 EXON3_T4
[0528] Em algumas modalidades, um gRNA compreende a sequência de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1083-1275 ou compreende a sequência que tem alvo na sequência de qualquer uma das SEQ ID NOs: 891-1082.
Rastreamento PD1 em Células SpCas9/HEK293T e Células T
[0529] Cinco (5) PD1 gRNAs foram selecionados para análise posterior em células HEK293T e células T. Três dos cinco guias tiveram melhor desempenho (maior percentual de indel) do que o controle positivo (controle PD1). Surpreendentemente, o guia que produz a maior percentagem de indel (frequência de edição) (Guia 2) não produziu o maior nível de inativação da expressão da proteína PD1 (comparado
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230/714 com os Guias 3-5 - ver a Tabela 9).
Tabela 9. Sequências espaçadoras de PD1 gRNA
Sequência de sgRNA SEQ ID NO: Indel HEK Indel Célula T PD1 + Células T
Apenas Cas9 - - - - 44,7%
Controle PD1 CGCCCACGACACCAACCACC 1108 56,0% 70,7% 19,0%
Guia 1 UGUCUGGGGAGUCUGAGAGA 1083 94,7% 86,4% 31,7%
Guia 2 ACUGCUCAGGCGGAGGUGAG 1084 84,4% 99,5% 44,4%
Guia 3 CGCAGAUCAAAGAGAGCCUG 1085 83,1% 60,3% 4,76%
Guia 4 CUGCAGCUUCUCCAACACAU 1086 82,4% 92,7% 0,24%
Guia 5 GCCCUGGCCAGUCGUCUGGG 1146 80,8% 99,0% 0,31%
[0530] Uma avaliação dependente de homologia de PD1 gRNAs da Tabela 9 mostrou que o PD1 Guia 5 (compreendendo SEQ ID NO: 1276) tinha uma frequência indel de 20% em um sítio fora do alvo, enquanto PD1 Guia 4 (SEQ ID NO: 1086 tinha uma frequência indel inferior a 2,0% em um local fora do alvo. Esses dados guiaram a seleção de PD1 Guia 4 para análise posterior.
Rastreamento de CTLA-4 em Células T
[0531] Um (1) milhão de células T foram eletroporadas com 1000 pmol de gRNA e 200 pmol de proteína Cas9. 48-72 horas pós-EP, as células foram estimuladas com uma solução de coquetel de PMA/ionomicina e simultaneamente coradas com anticorpo CTLA4 (diluição 1:100, Biolegend #349907). Quatro (4) horas após a estimulação, as células foram coletadas para análise FACS. Foram utilizados dois doadores diferentes (Doador 46 e Doador 13). A expressão de proteína foi medida por citometria de fluxo. Os resultados são mostrados na Tabela 10. O uso do Guia 5 (com espaçador SEQ ID NO: 1292) resultou consistentemente na menor expressão de proteína (por exemplo, 8,6%). O uso do Guia 2 (com espaçador SEQ ID NO: 1290) e Guia 9 (com espaçador SEQ ID NO: 1297) também resultou em
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231/714 baixa expressão de proteína (11,9% e 12,2%, respectivamente).
Tabela 10. Sequências espaçadoras de gRNAs e do alvo CTLA-4
Sequência Alvo Sequência espaçadora PAM (NGG) CCTop (Bruto) * Indel Doador 46 (%) Indel Doador13 (%) Proteína Doador 46 (%)
Controle CTLA-4 TGCCCAGGT AGTATGGCG GT (SEQ ID NO: 1277) UGCCCAGG UAGUAUGG CGGU (SEQ ID NO: 1288) GGG -157 85,6 73,1 9,08
Guia 1 ACACCGCTC CCATAAAGC CA (SEQ ID NO: 1278) ACACCGCU CCCAUAAA GCCA (SEQ ID NO: 1289) TGG -662 93,5 91,1 57,6
Guia 2 TGGCTTGCC TTGGATTTC AG (SEQ ID NO: 1279) UGGCUUGC CUUGGAUU UCAG (SEQ ID NO: 1290) CGG -1537,8 89,4 85,6 11,9
Guia 3 GCACAAGGC TCAGCTGAA CC (SEQ ID NO: 1280) GCACAAGG CUCAGCUG AACC (SEQ ID NO: 1291) TGG -5276,6 90,8 81,7 17,3
Guia 4 TTCCATGCT AGCAATGCA CG (SEQ ID NO: 1281) UUCCAUGC UAGCAAUG CACG (SEQ ID NO: 1292) TGG -967,3 77,7 42,2 21,3
Guia 5 GCACGTGGC CCAGCCTGC TG (SEQ ID NO: 1282) GCACGUGG CCCAGCCU GCUG (SEQ ID NO: 1293) TGG -2387,2 91,9 82,9 8,6
Guia 6 GTGGTACTG GCCAGCAGC CG (SEQ ID NO: 1283) GUGGUACU GGCCAGCA GCCG (SEQ ID NO: 1294) AGG -1048,4 85,1 51,5 27,6
Guia 7 GTGTGTGAG TATGCATCT CC (SEQ ID NO: 1284) GUGUGUGA GUAUGCAU CUCC (SEQ ID NO: 1295) AGG -1299,5 93,9 59,1 14,6
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Sequência Alvo Sequência espaçadora PAM (NGG) CCTop (Bruto) * Indel Doador 46 (%) Indel Doador13 (%) Proteína Doador 46 (%)
Guia 8 AGGACTGAG GGCCATGGA CA (SEQ ID NO: 1285) AGGACUGA GGGCCAUG GACA (SEQ ID NO: 1296) CGG -1624,6 76,1 64,4 12,2
Guia 9 TCCTTGCAG CAGTTAGTT CG (SEQ ID NO: 1286) UCCUUGCA GCAGUUAG UUCG (SEQ ID NO: 1297) GGG -242,2 95,5 90,9 12,2
Guia 10 TCAGAATCT GGGCACGGT TC (SEQ ID NO: 1287) UCAGAAUC UGGGCACG GUUC (SEQ ID NO: 1298) TGG -516,9 93,6 54,1 37,9
Exemp ο 2 - Inativação de genes o nível genotípico e fenotípico nas células
[0532] Este exemplo demonstra inativação eficiente por CRISPR/Cas9 de Enxerto vs. Hospedeiro (GVH) ou Hospedeiro vs Enxerto (HVG) ou genes de ponto de verificação Imune ao nível genotípico e fenotípico nas células T humanas primárias.
[0533] As células T humanas primárias foram isoladas do sangue periférico (AllCells, Alameda, CA) usando o Kit de Isolamento de Células T Humanas EasySep Direct (Stemcell Technologies, Vancouver, Canadá). As células foram plaqueadas a 0,5 x 106 células/mL em frascos grandes. As Dynabeads CD3/CD28 Ativador T humano (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) foram ressuspensas e lavadas com PBS antes de serem adicionadas às células. As células foram incubadas com Dynabeads CD3/CD28 Ativador T humano (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) na proporção de esferas para célula de 1:1 em meio isento de soro hematopoiético X-vivo 15 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) suplementado com soro humano a 5% (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), IL-2 recombinante humana de 50 ng/mL (Peprotech, Rocky Hill, NJ) e IL-7 recombinante humana de 10 ng/mL (Thermo
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Fisher Scientific, Waltham, MA). Após 3 dias, as células foram transferidas para um tubo de 15 mL e as esferas foram removidas colocando o tubo em um magneto por 5 minutos. As células foram, em seguida, transferidas, sedimentadas e plaqueadas a 0,5 x 106 células/mL.
[0534] Três (3) dias depois as esferas foram removidas, as células T foram eletroporadas utilizando o 4D-Nucleofector (programa E0115) (Lonza, Walkersville, MD) e o Kit Nucleofector de Células T Humanas (Lonza, Walkersville, MD). A mistura de nucleofecção continha a solução Nucleofector, 106 células, Cas9 1 μΜ (Feldan, Quebec, Canadá) e 5 μΜ de sgRNA modificado com 2'-O-metila 3’ fosforotioato (MS) (triLink BioTechonologies, San Diego, CA) (Como descrito em Hendel etal., 2015: PMID: 26121415). A modificação MS foi incorporada em três nucleotídeos nas extremidades 5’ e 3'. Para permitir a formação estável de ribonucleoproteínas Cas9:sgRNA (RNPs), a Cas9 foi préincubada com sgRNAs em uma proporção molar Cas9:sgRNA de 1:5 a 37Ό por 10 min antes de adicionar a mistura de nucleofecção. Para experiências de edição multiplex, 1 μΜ (concentração final) de cada Cas9 pré-complexado individualmente com sgRNAs foi adicionado à mistura de tampão de eletroporação. Os controles típicos para cada experiência incluíram: células não eletroporadas, um tratamento simulado sem os RNPs, um tratamento apenas com Cas9 e um tratamento com sgRNA de AAVS1 modificado por MS para monitorar a eficiência da transfecção. Após a nucleofecção, as células foram incubadas a 37 Q por 4-7 dias e analisadas por cit ometria de fluxo para expressão de proteínas de superfície e Rastreamento de InDels por Decomposição (TIDE) para inserções ou deleções (InDels) no DNA genômico.
[0535] O TIDE é uma ferramenta web para avaliar rapidamente a edição do genoma pelo CRISPR/Cas9 do locus alvo determinado por
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234/714 um RNA guia (gRNA ou sgRNA). Com base em dados quantitativos de rastreamento de sequência de duas reações padrão de sequenciamento capilar, o software TIDE quantifica a eficácia da edição e identifica os tipos predominantes de inserções e deleções (InDeis) no DNA de um agrupamento de células alvo.
[0536] Este exemplo e o exemplo a seguir testaram sgRNAs entregues por RNP. A sequência de sgRNA compreende uma sequência espaçadora de 20 nucleotídeos (indicada em cada exemplo) seguida por uma sequência de estrutura principal. A Tabela 11 lista sequências alvo específicas para o gene indicado que foram usadas como sgRNAs na forma sintética e modificada que quando complexadas com a proteína Cas9 produziram a % InDel indicada nas células T primárias humanas. A Tabela 11 lista as frequências InDel para sequências sintéticas e/modificadas de sgRNA (entregues como RNPs) tendo como alvo os genes e sequências alvo indicados nas células T humanas primárias.
[0537] Exemplos de sequências de estruturas principais são mostrados na Tabela 1.
Tabela 11. Frequências de Indel
SEQ ID NO: Gene Sequência Alvo % In Del nas Células T (Guias Sintéticos)
76 TRAC AGAGCAACAGTGCTGTGGCC 72
1299 TRAC GGCTCTCGGAGAATGACGAG 61
962 PD1 ATGTGGAAGTCACGCCCGTT 25
916 PD1 CGCCCACGACACCAACCACC 53
1300 PD1 CGACTGGCCAGGGCGCCTGT 48,4
1277 CTLA4 TGCCCAGGTAGTATGGCGGT 40
417 B2M GCTACTCTCTCTTTCTGGCC 91
1301 AAVS1 GGGGCCACTAGGGACAGGAT 75
1302 AAVS1 GCCAGTAGCCAGCCCCGTCC 40
546 CIITA GGTCCATCTGGTCATAGAAG 81
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SEQ ID NO: Gene Sequência Alvo % In Del nas Células T (Guias Sintéticos)
1303 CD52 TTACCTGTACCATAACCAGG 83
1304 CD52 CCTACTCACCATCAGCCTCC 87
226 CD3E GGGCACTCACTGGAGAGTTC 67
222 CD3E TAAAAACATAGGCGGTGATG 68
1305 RFX5 TACCTCGGAGCCTCTGAAGA 88
1306 RFX5 TGTGCTCTTCCAGGTGGTTG 87
1307 RFX5 ATCAAAGCTCGAAGGCTTGG 70
Exemplo 3 - Editando componentes TCR nas células
[0538] Este exemplo demonstra as consequências funcionais in vitro em células T humanas primárias de componentes TCR de edição (TTCRa e CD3e). Os resultados são mostrados nas Figuras 6A e 6B.
[0539] Para as experiências de citometria de fluxo, aproximadamente 0,5x106 a 1x106 células transfectadas RNP foram removidas a partir da cultura de 4-6 dias após a eletroporação e transferidas para um tubo Eppendorf limpo. As células foram sedimentadas por centrifugação a 1.200 rpm por 5 min e ressuspensas em 100 pLde tampão FACS (0,5% de BSA/PBS). Para corar as células, um coquetel de anticorpo apropriado foi adicionado à amostra, seguido de incubação por 10 a 15 minutos à temperatura ambiente. Utilizaramse UltraComp eBeads (Ebioscience, San Diego, CA) para preparar controles de compensação juntamente com o anticorpo conjugado específico quando necessário. As esferas de compensação foram coradas a 1:100 com anticorpo primário específico individual utilizado na experiência por cerca de 5 min. As amostras coradas (incluindo os controles de compensação) foram lavadas com 1 mL de tampão FACS, centrifugadas a 1.200 rpm e aspiradas para remover o tampão. As esferas de compensação foram ressuspensas em 200 pL de tampão FACS e passadas através de um tubo FACS de 5 mL com uma tampa
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236/714 de filtro celular (Corning Inc., Corning, NY). As amostras de células foram ressuspensas em 200 μΙ_ de tampão FACS contendo 1:1000 7AAD (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) e passadas através de um tubo FACS de 5 mL com uma tampa de filtro celular. As amostras foram então examinadas no citômetro de fluxo NovoCyte ACEA 3000 (ACEA Biosciences, San Diego, CA) usando o software de compensação automática e os dados foram analisados no Flowjo10.1r5. Os anticorpos utilizados incluem CD3 anti-humano BV510 (LJCHT1, BioLegend, San Diego, CA), TCRap anti-humano PE (BW242/412, Miltenyi Biotec, Auburn, CA), CD8 anti-humano PE/Cy7 (SK1, BioLegend, San Diego, CA) e CD4 anti-humano APC/Cy7 (RPA-T4, BioLegend, San Diego, CA).
[0540] Sem estar limitada pela teoria, a razão para interromper TCR nas células T terapêuticas era que essas células T não sinalizavam através de estímulos a montante para TCR e, portanto, não reagiam com peptídeos/antígenos receptores, mas mantinham sua capacidade de responder a jusante da sinalização TCR mesmo após a inativação de TCR. Fito-hemaglutanina (PHA) e miristato de acetato de forbol (PMA)/lonomicina são dois regimes de estimulação comumente usados para a ativação de células T in vitro, mas agem através de mecanismos distintos. A PHA é uma lectina mitogênica que ativa as células reticulando o complexo TCR/CD3, bem como outras proteínas da membrana glicosilada. Pelo contrário, PMA/lonomicina estimula as células T ativando diretamente as vias a jusante de TCR, ignorando a necessidade de estimulação do receptor de superfície. Portanto, esperava-se que as células T deficientes em TCR/CD3 reagissem à PMA/lonomicina, mas não à PHA.
[0541] Para avaliar a função das células T abladas por TCR, as células T humanas primárias foram editadas com CRISPR/Cas9 para interromper os componentes do TCR TCRa ou CD3e, tratadas com os
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237/714 dois regimes de estimulação e testadas quanto à ativação, proliferação, degranulação e produção de citocinas usando uma série dos ensaios descritos abaixo. As células T humanas primárias foram primeiro eletroporadas com Cas9 ou complexosde RNP Cas9:sgRNA com alvo em AAVS1 (GGGGCCACTAGGGACAGGAT (SEQ ID NO: 1301)), TRAC (AGAGCAACAGTGCTGTGGCC (SEQ ID NO: 76)), ou CD3e (GGGCACTCACTGGAGAGTTC (SEQ ID NO: 226)). Seis (6) dias após a transfecção, as células foram coradas para CD3e e a percentagem de células com níveis baixos ou inexistentes de CD3 ε foi avaliada por citometria de fluxo. Os resultados mostraram que a transfecção com Cas9:TRAC sgRNA ou Cas9:CD3£ sgRNA reduziu bastante a apresentação superficial de CD3. A população de CD3' em células transfectadas com Cas9:TRAC sgRNA e Cas9:CD3£ sgRNA foi de 89% e 81%, respectivamente, enquanto que a percentagem foi de 10% e 5% em apenas Cas9 ou células transfectadas com Cas9:AAVS1 sgRNA. Isto confirmou que as células editadas por CRISPR/Cas9 tinham complexos de TCR/CD3 deficientes. Essas células serviram como entradas para a avaliação nas experiências subsequentes do ensaio. Os gRNAs utilizados neste Exemplo compreendem as sequências espaçadoras seguintes: espaçador AAVS1 gRNA (GGGGCCACUAGGGACAGGAU (SEQ ID NO: 1308)), espaçador TRAC gRNA (AGAGCAACAGUGCUGUGGCC (SEQ ID NO: 152)), e espaçador CD3s gRNA (GGGCACUCACUGGAGAGUUC (SEQ ID NO: 351)).
Ensaio de ativação de CD69
[0542] CD69 é um marcador substituto da resposta das células T ao estímulo mitógeno e antígeno e é usado como uma medida da ativação das células T. 7 dias após a transfecção, as células foram estimuladas com PHA-L (Ebioscience, San Diego, CA) ou PMA/lonomicina e cultivadas por mais 2 dias. As células foram então coradas com o
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238/714 anticorpo CD69 anti-humano de camundongo APC (L78, BD Biosciences, San Jose, CA) e os níveis de CD69 foram testados por citometria de fluxo (FIG. 6A). As células de controle que não receberam tratamento com PHA nem PMA/lonomicina apresentaram pouca expressão de CD69, sugerindo que não houve ativação de células T. Células com complexos intactos de TCR/CD3 (grupos transfectados com Mock[-], Cas9 sozinho e Cas9:AAVS1 sgRNA) exibiram expressão induzida de CD69 após tratamento com PHA ou PM/lonomicina, embora em graus variados. Em contraste, nem as células tratadas com Cas9:TRAC (com alvo em AGAGCAACAGTGCTGTGGCC (SEQ ID NO: 76)), nem as células tratadas com Cas9: CD3e (com alvo em GGGCACTCACTGGAGAGTTC (SEQ ID NO: 226)), mostraram expressão induzida de CD69 após o tratamento com PHA, o que indica que o complexo TCR/CD3e foi interrompido no interior dessas células. No entanto, ambos os grupos de tratamento exibiram forte expressão de CD69 após tratamento com PMA/lonomicina (Figura 6A). Isso demonstrou que as células T deficientes em TCR/CD3 mostram respostas embotadas aos agonistas de TCR, mas mantiveram a capacidade de serem ativadas com sinais a jusante de TCR.
Ensaio de proliferação de CFSE
[0543] Para examinar melhor a proliferação celular em células deficientes em TCR/CD3, foi avaliada a resposta a PHA e PMA/Inomicina nas células deficientes em TCR/CD3. O éster succinimidílico da carboxifluoresceína (CFSE) é um corante à base de fluoresceína permeante celular usado para monitorar a proliferação de linfócitos. Após a transfecção, as células foram marcadas com CFSE 500 nM por 15 min a 37 QC. Após a lavagem, as células foram plaqueadas em meio livre de soro e citocina por 4 dias. Os níveis de CFSE foram medidos por citometria de fluxo no canal FITC (Figura 6A). As células de controle que não receberam tratamento com PHA nem
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PMA/Inomicina mostraram a intensidade de CFSE esperada para células não divididas. Ambos os tratamentos com PHA e PMA/Inomicina causaram uma alteração na intensidade de CFSE nas células transfectadas com Mock (Cas9 sozinho) e nos grupos transfectados com Cas9:AAVS1 sgRNA, indicando que a proliferação celular é estimulada em células com TCR e CD3 da superfície celular. Como esperado, células transfectadas com Cas9:TRAC sgRNA (com alvo em AGAGCAACAGTGCTGTGGCC (SEQ ID NO: 76)), e Cas9:CD3e sgRNA (com alvo em GGGCACTCACTGGAGAGTTC (SEQ ID NO: 226)) não exibiram proliferação celular após o tratamento com PHA, mas exibiram forte proliferação celular após tratamento com PHA/Inomicina. Esse resultado foi consistente com nossa observação anterior: o tratamento Cas9:TRAC sgRNA e Cas9:CD3e sgRNA interrompe a sinalização celular através do complexo TCR/CD3.
Avaliação por citometria de fluxo de CD107a e citocinas intracelulares
[0544] Dois outros eventos de ativação de células T, degranulação e produção de citocinas, também foram examinados usando citometria de fluxo. As células transfectadas foram não tratadas, tratadas com PHA ou PMA em meio livre de soro e citocina. Simultaneamente, as células foram incubadas com Golgi Plug (BD Biosciences, San Jose, CA), Golgi Stop (BD Biosciences, San Jose, CA) e anticorpo CD107a anti-humano PE-Cy7 (H4A3, Biolegend, San Diego, CA). Quatro (4) horas após o tratamento, as células foram coradas na superfície com os seguintes anticorposCD3 anti-humano (UCHT1, BioLegend, San Dieg o, CA), CD8 anti-humano PE/Cy7 (SK1, BioLegend, San Diego, CA), e CD4 antihumano APC/Cy7 (RPA-T4, BioLegend, San Diego, CA) e fixas e permeabilizadas usando o kit BD Cytofix/Cytoperm Plus (BD Biosciences, San Jose, CA). Finalmente, as células foram coradas para citocinas intracelulares com anticorpoTNFa anti-humano FITC (Mab11,
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Biolegend, San Diego, CA), anticorpo IFNy anti-humano APC de camundongo (25723.11, BD Biosciences, San Jose, CA) e anticorpo IL2 anti-humano PE de rato (MQ1 -17H12, BD Biosciences, San Jose, CA), lavadas e analisadas por citometria de fluxo.
[0545] CD107a expresso na superfície é um marcador para degranulação de células T CD8+ após estimulação. As células de controle que não receberam tratamento com PHA nem PMA/Inomicina mostraram expressão superficial mínima de CD107. Ambos os tratamentos com PHA e PMA/Inomicina induziram a expressão de CD107a em grupos transfectados simulados, Cas9 sozinho e Cas9:AAVS1 sgRNA transfectado. Novamente, as células deficientes em TCRa ou CD3e mostraram níveis básicos de expressão de CD107a após o tratamento com PHA, mas aumentaram largamente os níveis de expressão de CD107a após o tratamento com PMA/Inomicina (FIG. 6B). Isso demonstrou que PMA/Inomicina, mas não PHA, foi capaz de induzir degranulação em células com deficiência de TCR/CD3.
[0546] Da mesma forma, níveis aumentados de citocina intracelular TNF, IFNy e IL-2 foram observados após o tratamento com PHA ou PMA/Inomicina no simulado transfectado, Cas9 sozinho e células transfectadas com Cas9:AAVS1 sgRNA (Figura 6B).
[0547] Tomadas em conjunto, essas experiâncias demonstraram que o complexo TCR/CD3 é interrompido nas células editadas pelo gene, com a sinalização a jusante de TCR permanecendo intacto nas células com deficiência de TCR/CD3, como indicado pela proliferação celular, degranulação e produção efetiva de citocinas.
Exemplo 4 - Edição de componentes MHC II nas células
[0548] Este exemplo demonstra as consequências funcionais in vitro em células T humanas primárias da edição de componentes do MHC II (CIITA ou RFX5). Os resultados são mostrados na Figura 7.
[0549] As células T humanas primárias foram transfectadas com
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RNP contendo sgRNAs sintéticos com alvo em AAVS1 (GGGGCCACTAGGGACAGGAT (SEQ ID NO: 1301)), B2M (GCTACTCTCTCTTTCTGGCC (SEQ ID NO: 417)), CIITA (GGTCCATCTGGTCATAGAAG (SEQ ID NO: 546)), RFX5-1 (TACCTCGGAGCCTCTGAAGA (SEQ ID NO: 1305)), RFX5-5 (TGTGCTCTTCCAGGTGGTTG (SEQ ID NO: 1306)), e RFX5-10 (ATCAAAGCTCGAAGGCTTGG (SEQ ID NO: 1307)). 4-6 dias após a transfecção, as células foram tratadas com PMA/lonomicina durante a noite e os níveis à superfície de MHC-II foram avaliados por citometria de fluxo (Tu39, conjugado de PE-Cy7, Biolegend). A quantidade de indução de MHC-II (avaliada pela intensidade fluorescente mediana [MFI]) por amostra de teste foi normalizada para a quantidade de MHCII presente nas células transfectadas de controle (AAVS1) (Figura 7). A percentagem de células MHC-II+ restantes após a transfecção e indução por PMA/ionomicina é indicada no painel esquerdo. Os dados são de 4 ou 3 doadores biológicos para células transfectadas com sgRNA simples ou duplo, respectivamente. A significância estatística foi avaliada usando ANOVA com correção post hoc de Tukey.
[0550] Além disso, RNPs contendo Cas9 e sgRNAs com alvo em CIITA ou RFX5 diminuem os níveis à superfície de MHC-II em células T humanas primárias induzidas.
[0551] Os gRNAs utilizados neste Exemplo compreendem a sequências espaçadoras seguintes: espaçador AAVS1 gRNA (GGGGCCACUAGGGACAGGAU (SEQ ID NO: 1308)); espaçador B2M gRNA (GCUACUCUCUCUUUCUGGCC (SEQ ID NO: 466)); espaçador CIITA gRNA (GGUCCAUCUGGUCAUAGAAG (SEQ ID NO: 738)), espaçador RFX5-1 gRNA (UACCUCGGAGCCUCUGAAGA (SEQ ID NO: 1309)), espaçador RFX5-5 gRNA (UGUGCUCUUCCAGGUGGUUG (SEQ ID NO: 1310)), e espaçador RFX5-10 gRNA (AUCAAAGCUCGAAGGCUUGG (SEQ ID NO: 1311)).
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Exemplo 5 - Edição de componentes do ponto de verificação imune nas células
[0552] As células T humanas primárias foram transfectadas com RNP contendo sgRNAs sintéticos com alvo em PD-1 (CGCCCACGACACCAACCACC (SEQ ID NO: 916 e compreendendo a sequência espaçadora de SEQ ID NO: 1108) ou controle. 4-6 dias após a transfecção, as células foram tratadas com PMA/lonomicina e os níveis à superfície de PD-1 foram avaliados por citometria de fluxo (EH12.2H7, conjugado de BV421, Biolegend). A quantidade de indução de PD1 (avaliada pela intensidade fluorescente mediana [MFI]) por amostra de teste foi normalizada para a quantidade de PD1 presente nas células transfectadas de controle não tratadas. Os dados são de 3 doadores biológicos para células transfectadas com sgRNA simples ou duplo, respectivamente. A significância estatística foi avaliada pelo teste t de Student.
[0553] Além disso, RNPs contendo Cas9 e sgRNAs com alvo em PD1 diminuem os níveis à superfície de PD1 em células T humanas primárias induzidas.
Exemplo 6 - Edição multiplex em células
[0554] Este exemplo demonstra edição multiplex eficiente e eliminação de proteínas alvo em células T humanas primárias. Os resultados são mostrados na Figura 8.
[0555] As células T humanas primárias foram transfectadas com RNP contendo sgRNAs sintéticos com alvo nos genes indicados. Para a inativação de 2 ou mais genes e seus produtos de proteína na mesma célula (edição multiplex), 1 μΜ (concentração final) de cada Cas9 précomplexado individualmente com sgRNAs foi adicionado à mistura de nucleofecção. Os níveis à superfície das proteínas indicadas foram medidos por citometria de fluxo 4-6 dias após a transfecção. Os anticorpos utilizados incluem CD3 anti-humano BV510 (UCHT1,
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BioLegend, San Diego, CA), TCRap anti-humano PE (BW242/412, Miltenyi Biotec, Auburn, CA), APC anti-humano B2M (2M2, Biolegend), FITC anti-humano CD52 (097, Biolegend). Cada símbolo são dados de um doador biológico individual, em que as células tratadas com RNP de teste são comparadas com as células tratadas com RNP de controle. A significância estatística foi avaliada pelo teste t de Student.
[0556] Os guias usados neste exemplo estão listados abaixo com as respectivas sequências alvo e espaçadoras:
TRAC AGAGCAACAGTGCTGTGGCC (SEQ ID NO: 76);
AGAGCAACAGUGCUGUGGCC (SEQ ID NO: 152)
B2M GCTACTCTCTCTTTCTGGCC (SEQ ID NO: 417);
GCUACUCUCUCUUUCUGGCC (SEQ ID NO: 466)
CD3e GGGCACTCACTGGAGAGTTC (SEQ ID NO: 226);
GGGCACUCACUGGAGAGUUC (SEQ ID NO: 351);
CD52 TTACCTGTACCATAACCAGG (SEQ ID NO: 1303) UUACCUGUACCAUAACCAGG (SEQ ID NO: 1312)
CIITA GGTCCATCTGGTCATAGAAG (SEQ ID NO: 546) GGUCCAUCUGGUCAUAGAAG (SEQ ID NO: 738)
AAVS1 GGGGCCACTAGGGACAGGAT (SEQ ID NO: 1301) GGGGCCACUAGGGACAGGAU (SEQ ID NO: 1308)
[0557] De modo a avaliar a viabilidade de inativação tripla usando CRISPR/Cas9, células T primárias (5 x 106) foram transfectadas com RNP pré-formado com alvo em três genes separados: TRAC, B2M e CIITA. RNP contendo sgRNAs com alvo em AAVS1 serviu como controle negativo. Após 4 dias, as células foram divididas em duas metades: uma metade foi tratada com anticorpos anti-CD3/anti-B2M biotina e subsequentemente purificada usando Streptavidin Microbeads (Miltenyi Biotec, Cambridge, MA), e a outra metade permaneceu sem tratamento. As células purificadas (pur) e não purificadas (un) foram ambas analisadas por TIDE. A análise TIDE mostrou que essa
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244/714 abordagem produziu uma frequência InDel tripla de inativação de -36% em comparação ao grupo controle, provando, ao nível do DNA, que é possível inativar três genes simultaneamente usando Cas9:sgRNA RNPs em uma única experiência (Figura 15).
[0558] Além disso, os dados na Figura 15 demonstram que a inativação de genes simples, dupla, tripla eficiente pode ser obtida em células primárias humanas T transfectadas com Cas9:sgRNA sintético (RNPs).
Exemplo 7 - Inserção de transgene nas células mediada por HDR
[0559] Este exemplo demonstra a inserção do transgene eficiente em células T humanas primárias por meio de reparação direcionada por homologia (HDR) por quebras de DNA genômico de fita dupla mediada por Cas9:sgRNA RNP com um modelo de DNA doador AAV6.
[0560] As células T humanas primárias foram isoladas e ativadas com esferas anti-CD3/CD28, como descrito no Exemplo 2. As esferas foram removidas após 3 dias. No dia 4, as células T (5x106) foram eletroporadas com Cas9 sozinho ou RNP Cas9:AAVS1 sgRNA (com alvo em GGGGCCACTAGGGACAGGAT (SEQ ID NO: 1301)). 45 min. após transfecção, 1 x106 das células tratadas com Cas9 ou RNP foram simuladas transduzidas (controle), transduzidas com um vetor viral AAV6-DNM-GFP com braços de homologia AAVS1 com comprimentos de 400 (HA 400) ou 700 (HA700) pb que flanqueiam o cassete MNDGFP (FIG. 10). A transdução com AAV6 foi realizada em um MOI de 50.000 genomas virai /célula. Como controle negativo, as células foram transfectadas com RNP contendo sgRNA com alvo no gene B2M (com alvo em GCTACTCTCTCTTTCTGGCC (SEQ ID NO: 417)). Como o vírus AAV6-MND-GFP não contém homologia em torno da mira de corte genômico de B2M, qualquer integração observada nas células tratadas com B2P RNP seria o resultado de inserção mediada por não HDR. Enquanto a expressão de GFP foi observada após o corte com AAVS1,
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245/714 nenhuma foi observada acima do histórico com o uso do B2M guia, indicando a ausência de inserção mediada por não HDR.
[0561] Para avaliar a eficiência de HDR mediada por AAV6/RNP, foi realizada uma análise de PCR (FIG. 11). Os iniciadores direto e reverso que flanqueiam os sítios de corte de RNP foram utilizados para amplificar a região de 2,3 kb. Os produtos de PCR foram separados em um gel de agarose. Uma banda de 4 kb indica uma inserção da sequência MND-GFP (1,7 kb) no locus como resultado de HDR. Somente na presença de RNP com alvo no locus AAVS1, foi evidente a banda de 4 kb, indicando inserção bem-sucedida do transgene por HDR. Pareceu que os construtos MND-GFP contendo 700 pb de braços de homologia de flanqueamento com o locus de AAVS1 (HA700) levaram a HDR mais eficiente do que com os braços de homologia de 400 pb (HA400). Estes dados demonstram a viabilidade de realizar a inserção de transgene de direcionamento em células T humanas primárias por Cas9:sgRNA RNPs e modelo de DNA doador entregue por AAV6. Os gRNAs utilizados neste Exemplo compreendem as sequências espaçadoras seguintes: espaçador AAVS1 gRNA (GGGGCCACUAGGGACAGGAU (SEQ ID NO: 1308)); e espaçador B2M gRNA (GCUACUCUCUCUUUCUGGCC (SEQ ID NO: 466)).
Exemplo 8 - Inserção simultânea de transgene nas células mediada por HDR
[0562] Este exemplo demonstra inserção eficiente de transgene e inativação de genes simultâneos por Cas9:sgRNA RNP (para indução de quebra de fita dupla) e modelo doador entregue por AAV6 para facilitar HDR em células T humanas primárias.
[0563] As células T humanas primárias foram ativadas com esferas magnéticas CD3/CD28 (como acima). Três dias depois, as esferas de ativação foram removidas. No dia seguinte 5x106 células foram eletroporadas com os complexos RNPs com sgRNAs com alvo em
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AAVS1 (1 RNP), TRAC + B2M (2 RNPs separadamente complexados), ou TRAC+B2M+AAVS1 (3 RNP separadamente complexados). 1 hora após a eletroporação, as células foram infectadas com o vetor viral -/+ AAV6-MND-GFP com braços de homologia AAVS1 com comprimentos de 700 pb flanqueando o cassete MND-GFP (AAV6 (HA700-GFP) (Figura 11). 7 dias após a manipulação as células foram analisadas por citometria de fluxo por coloração com os seguintes anticorpos PE antihumano TCRap (BW242/412, Miltenyi Biotech, Auburn, CA), APC antihumano B2M (2M2, Biolegend) e detecção de GFP. Células tratadas com RNPs com alvo em TRAC+B2M mostrou perda de expressão superficial de TRAC e B2M, mas nenhuma expressão de GFP em células de inativação simples ou duplas quando infectadas com AAV6HA700-GFP. Quando células tratadas com TRAC+B2M também são eletroporadas com RNP com alvo em AAVS1 junto com AAV6-HA700GFP, a expressão de GFP foi evidente nas células de inativação simples e dupla, indicativas de inserção específica do sítio mediada por HDR do transgene MND-GFP. Finalmente, as células transfectadas com RNP simples AAVS1 apresentaram altos níveis de expressão transgênica, mas nenhuma perda de expressão da superfície de TCR ou B2M. A mesma experiência foi repetida com células T ativadas isoladas de 3 doadores biológicos distintos (Figura 12). Os dados mostram que a inserção de transgene de alta eficiência por Cas9:sgRNA RNP induziu quebra de fita dupla e HDR subsequente de um modelo de DNA entregue por AAV6 (contendo homologia com o sítio de corte) pode ocorrer com inativação simultânea de até 2 genes alvo com subsequente perda de expressão de proteínas de superfície ao nível de célula única.
[0564] Os guias usados neste exemplo têm como alvo as seguintes sequências:
TRAC: AGAGCAACAGTGCTGTGGCC (SEQ ID NO: 76)
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B2M: GCTACTCTCTCTTTCTGGCC (SEQ ID NO: 417)
AAVS1: GGGGCCACTAGGGACAGGAT (SEQ ID NO: 1301)
[0565] As sequências sgRNA aqui usadas: TRAC SEQ ID NO: 686, B2M SEQ ID NO: 688 e AAVS1 SEQ ID NO: 690, e podem ser modificadas como se segue: TRAC SEQ ID NO: 685, B2M SEQ ID NO: 687 e AAVS1 SEQ ID NO: 689. Os gRNAs utilizados neste Exemplo compreendem a sequências espaçadoras seguintes: espaçador AAVS1 gRNA (GGGGCCACUAGGGACAGGAU (SEQ ID NO: 1308)); espaçador TRAC gRNA (AGAGCAACAGUGCUGUGGCC (SEQ ID NO: 152)); e espaçador B2M gRNA (GCUACUCUCUCUUUCUGGCC (SEQ ID NO: 466)).
Exemplo 9 - Inativação mediada por CRISPR/Cas9 de componentes de TCR e MHC I e expressão de construtos de receptores de antígeno quiméricos
[0566] Este exemplo descreve a produção por CRISPR/Cas9 e AAV6 de células T humanas alogênicas que não têm expressão de TCR e MHC I e expressam um receptor de antígeno quimérico com alvo em cânceres CD19+.
[0567] A representação esquemática de células CAR-T alogênicas geradas por CRISPR/Cas9 é mostrada na Figura 13A e Figura 13B.
[0568] O CRISPR/Cas9 foi usado para interromper (inativação [KO]) a sequência de codificação do gene da região constante de TCRa (TRAC). Esta interrupção leva à perda de função de TCR e processa as células T com gene editado não alorreativas e adequadas para o transplante alogênico, minimizando o risco de doença de enxerto versus hospedeiro. A quebra de fita dupla do DNA no locus de TRAC foi reparada por reparação direcionada por homologia com um modelo de DNA entregue pelo AAV6 contendo braços de homologia direito e esquerdo para o locus de TRAC que flanqueia um cassete de receptor de antígeno quimérico (-/+ elementos reguladores para expressão de
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248/714 genes). Para reduzir hospedeiro versus enxerto (hospedeiro vs CAR-T) e permitir a persistência do produto alogênico CAR-T, o gene B2M foi interrompido pelos componentes CRISPR/Cas9. Juntas, essas edições do genoma resultam em uma célula T com expressão superficial de um CAR (expresso a partir do locus TRAC) com alvo em câncer CD19+, juntamente com a perda de TCR e MHC I, para reduzir a doença de GVH e HVG, respectivamente.
[0569] Esquemas de genoma do vetor AAV transportando modelos doadores para facilitar a inserção genômica alvo de cassetes de expressão CAR por HDR de quebras de fita dupla de DNA especifico de sítio evocado de Cas9 são mostrados na Figura 14.
Tabela 12: Sequências de Componentes do Modelo Doador
SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
1313 TTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCT CACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGA CGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGA GCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAA CTCCATCACTAGGGGTTCCT ITR esquerdo (5’ ITR) 145
1576 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACT GAGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGT CGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCA GAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGT TCCT ITR esquerdo (5’ ITR) (alternativo) 130
1314 AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCC TCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGC CCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTT GGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGC GCAGAGAGGGAGTGGCCAA ITR direito (3’ ITR) 145
1577 AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCC TCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGG GCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTT ITR direito (3’ ITR) (alternativo) 141
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SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
GCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGC GCAGCTGCCTGCAGG
1315 GGCCGCCAGTGTGATGGATATCTGCAGAATTC GCCCTTATGGGGATCCGAACAGAGAGACAGCA GAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTGGTAAG CAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAG TTGGAACAGCAGAATATGGGCCAAACAGGATA TCTGTGGTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGG GCCAAGAACAGATGGTCCCCAGATGCGGTCCC GCCCTCAGCAGTTTCTAGAGAACCATCAGATGT TTCCAGGGTGCCCCAAGGACCTGAAATGACCC TGTGCCTTATTTGAACTAACCAATCAGTTCGCT TCTCGCTTCTGTTCGCGCGCTTCTGCTCCCCG AGCTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACC GTCAGATCGCCTGGAGACGCCATCCACGCTGT TTTGACCTCCATAGAAGACACCGACTCTAGAG pMND 451
1316 ATGCTTCI I I IGGITACGTCTCTGTTGCTTTGC GAACTTCCTCATCCAGCGTTCTTGCTGATCCCC GATATTCAGATGACTCAGACCACCAGTAGCTTG TCTGCCTCACTGGGAGACCGAGTAACAATCTC CTGCAGGGCAAGTCAAGACATTAGCAAATACC TCAATTGGTACCAGCAGAAGCCCGACGGAACG GTAAAACTCCTCATCTATCATACGTCAAGGTTG CATTCCGGAGTACCGTCACGAI I I ICAGGTTCT GGGAGCGGAACTGACTATTCCTTGACTATTTCA AACCTCGAGCAGGAGGACATTGCGACATATTTT TGTCAACAAGGTAATACCCTCCCTTACACTTTC GGAGGAGGAACCAAACTCGAAATTACCGGGTC CACCAGTGGCTCTGGGAAGCCTGGCAGTGGA GAAGGTTCCACTAAAGGCGAGGTGAAGCTCCA GGAGAGCGGCCCCGGTCTCGTTGCCCCCAGT CAAAGCCTCTCTGTAACGTGCACAGTGAGTGG TGTATCATTGCCTGATTATGGCGTCTCCTGGAT FMC63-28Z (FMC63CD8[tm]CD28[domíni 0 coestimulador ]-CD3z) 1518
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SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
AAGGCAGCCCCCGCGAAAGGGTCTTGAATGGC TTGGGGTAATATGGGGCTCAGAGACAACGTAT TATAACTCCGCTCTCAAAAGTCGCTTGACGATA ATAAAAGATAACTCCAAGAGTCAAG I I I I CCTTA AAATGAACAGTTTGCAGACTGACGATACCGCTA TATATTATTGTGCTAAACATTATTACTACGGCGG TAGTTACGCGATGGATTATTGGGGGCAGGGGA CTTCTGTCACAGTCAGTAGTGCTGCTGCCTTTG TCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACG ACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCC CACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCC CGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCT GTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGA TATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTG CGGCGTCC I I I I GTTGTCACTCGTTATTACTTT GTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGA GTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGA CTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACAT TACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGC TGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG I I I ICCCGAA GCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAG AATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGC CGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCG GGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCC CGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAA TGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCT ACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGA CGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGG GTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATG CACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGA
1317 GGAAGCGGAGCTACTAACTTCAGCCTGCTGAA GCAGGCTGGAGACGTGGAGGAGAACCCTGGA CCT 2A 66
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SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
1318 ATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCG GGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGG CGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCG GCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAA GCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCA AGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACC ACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCG CTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCT TCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAG GAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAA CTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGG GCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAG GGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCT GGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCC ACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAG AACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCA CAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCC GACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGA CGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACC TGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCC AACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGA GTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCA TGGACGAGCTGTACAAGTAA EGFP 720
1319 AATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGT GTTGG I I I I I IGTGTG pA 49
1320 GAAGCCCAGAGCAGGGCCTTAGGGAAGCGGG ACCCTGCTCTGGGCGGAGGAATATGTCCCAGA TAGCACTGGGGACTCTTTAAGGAAAGAAGGAT GGAGAAAGAGAAAGGGAGTAGAGGCGGCCAC GACCTGGTGAACACCTAGGACGCACCATTCTC ACAAAGGGAGI I I ICCACACGGACACCCCCCT CCTCACCACAGCCCTGCCAGGACGGGGCTGG CTACTGGCCTTATCTCACAGGTAAAACTGACGC AAVS1-LHA 700
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SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
ACGGAGGAACAATATAAATTGGGGACTAGAAA GGTGAAGAGCCAAAGTTAGAACTCAGGACCAA CTTATTCTGAI I I I G I I I I I CCAAACTGCTTCTC CTCTTGGGAAGTGTAAGGAAGCTGCAGCACCA GGATCAGTGAAACGCACCAGACGGCCGCGTCA GAGCAGCTCAGGTTCTGGGAGAGGGTAGCGC AGGGTGGCCACTGAGAACCGGGCAGGTCACG CATCCCCCCCTTCCCTCCCACCCCCTGCCAAG CTCTCCCTCCCAGGATCCTCTCTGGCTCCATC GTAAGCAAACCTTAGAGGTTCTGGCAAGGAGA GAGATGGCTCCAGGAAATGGGGGTGTGTCACC AGATAAGGAATCTGCCTAACAGGAGGTGGGGG TTAGACCCAATATCAGGAGACTAGGAAGGAGG AGGCCTAAGGATGGGGCI I I ICTGTCACCA
1321 ACTGTGGGGTGGAGGGGACAGATAAAAGTACC CAGAACCAGAGCCACATTAACCGGCCCTGGGA ATATAAGGTGGTCCCAGCTCGGGGACACAGGA TCCCTGGAGGCAGCAAACATGCTGTCCTGAAG TGGACATAGGGGCCCGGGTTGGAGGAAGAAG ACTAGCTGAGCTCTCGGACCCCTGGAAGATGC CATGACAGGGGGCTGGAAGAGCTAGCACAGA CTAGAGAGGTAAGGGGGGTAGGGGAGCTGCC CAAATGAAAGGAGTGAGAGGTGACCCGAATCC ACAGGAGAACGGGGTGTCCAGGCAAAGAAAG CAAGAGGATGGAGAGGTGGCTAAAGCCAGGG AGACGGGGTACTTTGGGGTTGTCCAGAAAAAC GGTGATGATGCAGGCCTACAAGAAGGGGAGG CGGGACGCAAGGGAGACATCCGTCGGAGAAG GCCATCCTAAGAAACGAGAGATGGCACAGGCC CCAGAAGGAGAAGGAAAAGGGAACCCAGCGA GTGAAGACGGCATGGGGTTGGGTGAGGGAGG AGAGATGCCCGGAGAGGACCCAGACACGGGG AGGATCCGCTCAGAGGACATCACGTGGTGCAG AAVS1-RHA 700
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SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
CGCCGAGAAGGAAGTGCTCCGGAAAGAGCATC CTTGGGCAGCAACACAGCAGAGAGCAAGGGG AAGAGGGAGTGGAGGAAGACGGAACCTGAAG GAGGCGGC
1322 GAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGTAT TATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCA CTGAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAG CTTGTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCAC GAGCAGCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTA TAAAGCATGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCAC AGAGCCCCGCCCTTGTCCATCACTGGCATCTG GACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAAAGAGGGAA ATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCCTCTTGTC CCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTG TACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAA GTCTGTCTGCCTATTCACCGAI I I IGATTCTCA AACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGT GTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAG GTCTATGGACTTCA TRAC-LHA (500 pb) 500
1323 TGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAAC GCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACC TTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGG TGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAAT GGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGA TGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCC TTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAA GAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAG AATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAG GTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCA GTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTT TGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTA GGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCT TRAC-RHA (500 pb) 500
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SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
CTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTT CCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACT CATTAACCC
1324 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAG GCCTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGC TTAGACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAA CCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAAT GTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAACATACC ATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAA GTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATGTA CAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGT TTTGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAG CAGTATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTT CCTTGAGTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAA CGTTCACTGAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGAT TGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTC CATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGATGCTATTT CCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTTGCCAG CCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCACTGG CATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAAAGA GGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCCTC TTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTGC CGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATC TRAC-LHA (680 pb) 678
1325 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAG GCCTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGC TTAGACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAA CCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAAT GTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAACATACC ATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAA GTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATGTA CAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGT TRAC-LHA (800 pb) 800
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 312/1851
255/714
SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
TTTGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAG CAGTATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTT CCTTGAGTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAA CGTTCACTGAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGAT TGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTC CATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGATGCTATTT CCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTTGCCAG CCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCACTGG CATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAAAGA GGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCCTC TTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTGC CGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTG ACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGAI I I IGATT CTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTG ATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACA TGAGGTCTATGGACTTCA
1326 TGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAAC GCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACC TTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGG TGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAAT GGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGA TGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCC TTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAA GAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAG AATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAG GTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCA GTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTT TGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTA GGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCT CTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTT CCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACT CATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCAC ATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATT TRAC-RHA (800 pb) 804
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 313/1851
256/714
SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
AAAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAA GCACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCA GCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAA TGTG I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTAC CTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTG AAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGCCCTACCA AGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCTGG GACAGGAGCTCAATGAGAAAGG
1327 TAATCCTCCGGCAAACCTCTGTTTCCTCCTCAA AAGGCAGGAGGTCGGAAAGAATAAACAATGAG AGTCACATTAAAAACACAAAATCCTACGGAAAT ACTGAAGAATGAGTCTCAGCACTAAGGAAAAG CCTCCAGCAGCTCCTGCTTTCTGAGGGTGAAG GATAGACGCTGTGGCTCTGCATGACTCACTAG CACTCTATCACGGCCATATTCTGGCAGGGTCA GTGGCTCCAACTAACATTTGTTTGGTACTTTAC AGTTTATTAAATAGATGTTTATATGGAGAAGCTC TCATTTCTTTCTCAGAAGAGCCTGGCTAGGAAG GTGGATGAGGCACCATATTCAI I I IGCAGGTGA AATTCCTGAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTG CTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCT GGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTT CAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCCTG GTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAG CCTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAG ATGTACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCA TGCCTGCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCT GGGG I I I IGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGA ATAAGCAGTATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCA GGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGGCCTGGCCG TGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTCTTGGCCA AGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGAGTCCCA TRAC-LHA (1000 pb) 1000
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 314/1851
257/714
SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
GTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGATGCTA TTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTTGCC AGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCACT GGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAAA GAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATC CTCTTGTCCCACAGATATC
1328 CCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATT TTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGG ATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGC TAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACA GTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTT GCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATT CCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAA GGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCC TTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAG CTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATT GGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAA CCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTT CTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAG CAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCAC GTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTC CTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCC CTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCC TTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTC TGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAG TCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAATCAC TGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTGT TGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGG GTGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGG GGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAA TAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGG TTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCA GGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAA TRAC-RHA (1000 pb) 999
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 315/1851
258/714
SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
GATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGGA CCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAATGA GAAAGGAGAAGAGCAGCAGGCATGAGTTGAAT GAAGGAGGCAGGGCCGGGTCACAGGG
1578 TGTTTGGTACTTTACAGTTTATTAAATAGATGTT TATATGGAGAAGCTCTCATTTCTTTCTCAGAAG AGCCTGGCTAGGAAGGTGGATGAGGCACCATA TTCAI I I I GCAGGTGAAATTCCTGAGATGTAAG GAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGCCTTATATCG AGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAGACGCAGG TGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTATCAATG AGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAGATTTC CCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTCCCA TTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGAC CACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTG CTGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTG CCAGAGTTATATTGCTGGGG I I I I GAAGAAGAT CCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAG TAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAG GCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATC ATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCC TGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCAGCT GGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCAT GAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAG CCTGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCA TGTCCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATA TCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTG AGAGACTCTAAATC TRAC-LHA usado em CTX-139.1 800
1579 TGTTTGGTACTTTACAGTTTATTAAATAGATGTT TATATGGAGAAGCTCTCATTTCTTTCTCAGAAG AGCCTGGCTAGGAAGGTGGATGAGGCACCATA TTCA I I I I GCAGGTGAAATTCCTGAGATGTAAG TRAC-LHA usado em CTX-139.2
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 316/1851
259/714
SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
GAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGCCTTATATCG AGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAGACGCAGG TGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTATCAATG AGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAGATTTC CCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTCCCA TTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGAC CACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTG CTGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTG CCAGAGTTATATTGCTGGGG I I I I GAAGAAGAT CCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAG TAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAG GCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATC ATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCC TGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCAGCT GGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCAT GAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAG CCTGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCA TGTCCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATA TCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTG AGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGC C
1580 TGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAAC GCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACC TTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGG TGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAAT GGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGA TGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCC TTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAA GAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAG AATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAG GTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCA GTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTT TRAC-RHA usado em CTX-139.2
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 317/1851
260/714
SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
TGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTA GGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCT CTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTT CCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACT CATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCAC ATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATT AAAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAA GCACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCA GCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAA TGTG I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTAC CTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTG AAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGCCCTACCA AGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCTGG GACAGGAGCTCAATGAGAAAGG
1581 TGTTTGGTACTTTACAGTTTATTAAATAGATGTT TATATGGAGAAGCTCTCATTTCTTTCTCAGAAG AGCCTGGCTAGGAAGGTGGATGAGGCACCATA TTCAI I I I GCAGGTGAAATTCCTGAGATGTAAG GAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGCCTTATATCG AGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAGACGCAGG TGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTATCAATG AGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAGATTTC CCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTCCCA TTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGAC CACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTG CTGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTG CCAGAGTTATATTGCTGGGG I I I I GAAGAAGAT CCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAG TAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAG GCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATC ATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCC TGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCAGCT GGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCAT TRAC-LHA (841 pb) usado em CTX-139.3
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 318/1851
261/714
SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
GAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAG CCTGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCA TGTCCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATA TCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTG AGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGA CTATTCACCGAI I I IGATTCTC
1582 ATTCACCGAI I I IGATTCTCAAACAAATGTGTCA CAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGAC AAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTC AAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAA ATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAA CAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAG CCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAG GCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCT GCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTC CTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCC ACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAG CCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGG AAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGA GGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACT GAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGT TTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTA AGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCT CCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACT AAGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCAC CAATCACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCAC CAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAG ATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCT AGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAA GTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IAA CTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGAC AAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGC TRAC-RHA (905 pb) usado em CTX-139.3
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 319/1851
262/714
SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
TACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGG GAGAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAG CTCAATGAGAAAGG
1329 TTTTGTAAAGAATATAGGTAAAAAGTGGCATTTT TTCTTTGGATTTAATTCTTATGGATTTAAGTCAA CATGTAI I I I CAAGCCAACAAG I I I I GTTAATAA GATGGCTGCACCCTGCTGCTCCATGCCAGATC CACCACACAGAAAGCAAATGTTCAGTGCATCTC CCTCTTCCTGTCAGAGCTTATAGAGGAAGGAA GACCCCGCAATGTGGAGGCATATTGTATTACAA TTAC I I I IAAIGGCAAAAAC I GCAG I I AC I I I IG TGCCAACCTACTACATGGTCTGGACAGCTAAAT GTCATGTATTTTTCATGGCCCCTCCAGGTATTG TCAGAGTCCTCTTGTTTGGCCTTCTAGGAAGGC TGTGGGACCCAGCTTTCTTCAACCAGTCCAGG TGGAGGCCTCTGCCTTGAACGTTTCCAAGTGA GGTAAAACCCGCAGGCCCAGAGGCCTCTCTAC TTCCTGTGTGGGGTTCAGAAACCCTCCTCCCCT CCCAGCCTCAGGTGCCTGCTTCAGAAAATGGT GAGTCTCTCTCTTATAAAGCCCTCCTTTTTCATC CTAGCATTGGGAACAATGGCCCCAGGGTCCTT ATCTCTAGCAGATG I I I I GAAAAAGTCATCTGTT TTGC I I I I I I ICCAGAAGTAGTAAGTCTGCTGG CCTCCGCCATCTTAGTAAAGTAACAGTCCCATG AAACAAAG CD3E-LHA (700 pb) 700
1330 GTGAGTAGGATGGAGTGGAAAGGGTGGTGTGT CTCCAGACCGCTGGAAGGCTTACAGCCTTACC TGGCACTGCCTAGTGGCACCAAGGAGCCTCAT TTACCAGATGTAAGGAACTGTTTGTGCTATGTT AGGGTGAGGGATTAGAGCTGGGGACTAAAGAA AAAGATAGGCCACGGGTGCCTGGGAGAGCGTT CGGGGAGCAGGCAAAGAAGAGCAGTTGGGGT GATCATAGCTATTGTGAGCAGAGAGGTCTCGC CD3E-RHA (700 pb) 700
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 320/1851
263/714
SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
TACCTCTAAGTACGAGCTCATTCCAACTTACCC AGCCCTCCAGAACTAACCCAAAAGAGACTGGA AGAGCGAAGCTCCACTCCTTG I I I IGAAGAGAC CAGATACTTGCGTCCAAACTCTGCACAGGGCA TATATAGCAATTCACTATCTTTGAGACCATAAAA CGCCTCGTAAI I I I I AG I CO I I I I CAAGTGACC AACAACTTTCAGTTTATTTCAI I I I I I I GAAGCA AGATGGATTATGAATTGATAAATAACCAAGAGC ATTTCTGTATCTCATATGAGATAAATAATACCAA AAAAAGTTGCCATTTATTGTCAGATACTGTGTAA AGAAAAAATTATTTAGACGTGTTAACTGGTTTAA TCCTACTTCTGCCTAGGAAGGAAGGTGTTATAT CCTC I I I I IAAAAI I 0 I I I I IAAI I I IGACTATAT AAACTGATAA
1331 GGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCA CATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGA GGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAG GTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCG TGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGG GGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGT GAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCA GAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGC GGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTG CGTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTAC GTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAG TGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAG GAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCC TGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAA TCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCT TTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGCI I I I I I ICTGGCAAGATA GTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACT GGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGA EF1a 1178
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 321/1851
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SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
CGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCG GCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGA GAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCG GCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCG TGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGG CCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAG ATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCT CAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCG GGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGG GCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCAC CTCGATTAGTTCTCGAGCI I I IGGAGTACGTCG TCTTTAGGTTGGGGGGAGGGG I I I IATGCGAT GGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTG AAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCT CCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTT GGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAA G I I I I I I I CTTCCATTTCAGGTGTCGTGA
Sequências do Componente FMC63-28Z (FMC63 coestimulador]-CD3z) -CD8[tm]-CD28[domínio
1332 ATGCTTCI I I IGGITACGTCTCTGTTGCTTTGC GAACTTCCTCATCCAGCGTTCTTGCTGATCCCC sinal peptídico GM-CSF
1598 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP sinal peptídico GM-CSF
1333 GATATTCAGATGACTCAGACCACCAGTAGCTTG TCTGCCTCACTGGGAGACCGAGTAACAATCTC CTGCAGGGCAAGTCAAGACATTAGCAAATACC TCAATTGGTACCAGCAGAAGCCCGACGGAACG GTAAAACTCCTCATCTATCATACGTCAAGGTTG Anti-CD19 scFv
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 322/1851
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SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
CATTCCGGAGTACCGTCACGAI I I ICAGGTTCT GGGAGCGGAACTGACTATTCCTTGACTATTTCA AACCTCGAGCAGGAGGACATTGCGACATATTTT TGTCAACAAGGTAATACCCTCCCTTACACTTTC GGAGGAGGAACCAAACTCGAAATTACCGGGTC CACCAGTGGCTCTGGGAAGCCTGGCAGTGGA GAAGGTTCCACTAAAGGCGAGGTGAAGCTCCA GGAGAGCGGCCCCGGTCTCGTTGCCCCCAGT CAAAGCCTCTCTGTAACGTGCACAGTGAGTGG TGTATCATTGCCTGATTATGGCGTCTCCTGGAT AAGGCAGCCCCCGCGAAAGGGTCTTGAATGGC TTGGGGTAATATGGGGCTCAGAGACAACGTAT TATAACTCCGCTCTCAAAAGTCGCTTGACGATA ATAAAAGATAACTCCAAGAGTCAAG I I I I CCTTA AAATGAACAGTTTGCAGACTGACGATACCGCTA TATATTATTGTGCTAAACATTATTACTACGGCGG TAGTTACGCGATGGATTATTGGGGGCAGGGGA CTTCTGTCACAGTCAGTAGT
1334 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLN WYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGS GTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGG TKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGP GLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPR KGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQ VFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYW GQGTSVTVSS Sequência de aminoácidos CD19 scFv Ligante sublinhado
1335 GCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCC AAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCC GACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTC TTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCC GCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGG CD8a transmembra nar + 5’ Ligante (sublinhado)
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 323/1851
266/714
SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
ACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGT TGGCGGGTACGTGCGGCGTCCI I I IGTTGTCA CTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATC GC
1599 TTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACC ACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCG CTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTC GCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGG TGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTT GTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTA CGTGCGGCGTCCI I I IGTTGTCACTCGTTATTA CTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGC CD8a transmembra nar (sem ligante)
1600 FVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPE ACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVL LLSLVITLYCNHRNR CD8a transmembra nar
1336 TCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTAC ATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGAC AAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCAC GAGACTTCGCTGCGTACAGGTCC CD28 coestimulador
1601 SKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPR DFAAYRS CD28 coestimulador
1337 CGAGTGAAG I I I ICCCGAAGCGCAGACGCTCC GGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATA ACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTAT GACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCC GGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATC CCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAG GATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGG CD3z
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 324/1851
267/714
SEQ ID NO: Sequência Nome Domínio Comprimento (pb)
TATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGT CACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGC AACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGCA GGCCCTGCCTCCCAGA
1602 RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYD VLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKD KMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK DTYDALHMQALPPR peptídeo CD3z
1338 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPDIQMTQTTSSLSAS LGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIY HTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDI ATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPG SGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVS GVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTY YNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIY YCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSAAAFV PVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEAC Aminoácidos de FMC6328Z (FMC63CD8[tm]CD28[domíni 0 coestimulador ]-CD3z) CD8a transmembra nar sublinhado
RPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLL
SLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPG
PTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAY QQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEM GGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKG ERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPP R
[0570] CTX-131 (SEQ ID NO: 1348) contém urn construto CAR (FMC63-CD8[tm]-CD28[dominio coestimulador]-CD3z) (SEQ ID NO: 1316) com uma sequência sintética de poli-adenilação 3’ (pA) cuja expressão é dirigida pelo promotor MND e está translacionalmente ligada por uma sequência de picornavírus 2A a qualquer potencial
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 325/1851
268/714 transcrição a jusante (a GFP é mostrada neste exemplo). CTX-131 contém braços de homologia que flanqueiam um sítio alvo de Cas9/sgRNA genômico no locus AAVS1. CTX-132 (SEQ ID NO: 1349) é a mesma versão deste construto, mas carece de braços de homologia para AAVS1.
[0571] CTX-133 (SEQ ID NO: 1350) contém um construto CAR (FMC63-CD8[tm]-CD28[domínio coestimulador]-CD3z) (SEQ ID NO: 1316) com uma sequência sintética de poli-adenilação 3’ (pA) cuja expressão é dirigida pelo promotor EF1a e está translacionalmente ligada por uma sequência de picornavírus 2A a qualquer potencial transcrição a jusante (a GFP é mostrada neste exemplo). CTX-133 contém braços de homologia que flanqueiam um sítio alvo de Cas9/sgRNA genômico no locus TRAC. CTX-134 (SEQ ID NO: 1351) é a mesma versão deste construto, mas carece de braços de homologia para TRAC. CTX-138 (SEQ ID NO: 1354) é uma versão de CTX -133 sem a sequência 2A-GFP, e os braços de homologia flanqueados de 500 pb são substituídos por braços de homologia flanqueados de 800 pb. CTX-139 (SEQ ID NO: 1355) é uma versão de CTX-138 em que o braço de homologia esquerdo de TRAC foi substituído por um braço de homologia de 678 pb (TRAC-LHA (680 pb)).
[0572] CTX-140 (SEQ ID NO: 1356) contém um construto CAR (FMC63-CD8[tm]-CD28[domínio coestimulador]-CD3z) (SEQ ID NO: 1316) com uma sequência sintética de poli-adenilação 3’ (pA) cuja expressão é dirigida por elementos reguladores TCR endógenos e está translacionalmente ligada por uma sequência de picornavírus 2A a qualquer potencial transcrito TCRa a jusante. CTX-140 contém braços de homologia que flanqueiam um sítio alvo de Cas9/sgRNA genômico no locus TRAC (distinto de CTX-133, CTX-138, e CTX-139). CTX-141 (SEQ ID NO: 1357) é a mesma versão do construto CTX-140 e também está ligada de translação a qualquer potencial sequência a jusante por
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269/714 uma sequência 2A adicional (GFP é mostrada neste exemplo).
[0573] O construto CTX-139.1 (SEQ ID NO: 1583) é uma versão semelhante do construto CTX-139, no entanto, a sequência do braço de homologia esquerdo (LHA) é substituída por uma TRAC-LHA 800bp alternativa, criando uma deleção maior por recombinação homóloga. O CTX- 139.2 é semelhante ao CTX139.1, mas com um LHA de 20 pb estendido e um RHA de 105 pb que aproxima a sequência homóloga do sítio de corte do guia Exon1_T7, mas não tem a sequência alvo do guia Exon1_T7. O CTX-139.3 é semelhante ao CTX-139.2 com 21 pb adicionais adicionados ao LHA e 20 pb adicionados ao RHA. CTX-139.2 contém toda a sequência alvo do Exon1_T7, mas possui uma mutação na sequência PAM correspondente.
[0574] CTX-135 (SEQ ID NO: 1352) contém um construto CAR (FMC63-CD8[tm]-CD28[domínio coestimulador]-CD3z) (SEQ ID NO: 1316) com uma sequência sintética de poli-adenilação 3’ (pA) cuja expressão é dirigida por elementos reguladores CD3E endógenos e está translacionalmente ligada por uma sequência de picornavírus 2A a qualquer potencial transcrição a jusante (a GFP é mostrada neste exemplo). CTX-135 contém braços de homologia 700 pb que flanqueiam um sítio alvo de Cas9/sgRNA genômico no locus CD3E. CTX-136 (SEQ ID NO: 1353) é a versão de CTX-135, mas carece de braços de homologia para CD3E.
Inativação mediada por CRISPR/Cas9 de componentes de TCR e MHC I, expressão de construtos de receptores de antígeno quiméricos (CAR) e função efetora retida
[0575] Este exemplo descreve a produção por CRISPR/Cas9 e AAV6 de células T humanas alogênicas que não têm expressão de TCR e MHC I, expressam um receptor de antígeno quimérico com alvo em a cânceres CD19+ e que retêm a função efetora de células T.
[0576] A inserção de transgene em células T primárias humanas via
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270/714 reparação direcionada por homologia (HDR) e inativação genética simultâneas por Cas9:RNA sgRNA foi realizada conforme descrito acima nos Exemplos 8 e 9. As células T humanas primárias foram primeiro eletroporadas com Cas9 ou complexos de RNP Cas9:sgRNA com alvo em TRAC (AGAGCAACAGTGCTGTGGCC (SEQ ID NO: 76)), B2M1 (GCTACTCTCTCTTTCTGGCC (SEQ ID NO: 417)), ou AAVS1 (GGGGCCACTAGGGACAGGAT (SEQ ID NO: 1301)). Os gRNAs utilizados neste Exemplo compreendem a sequências espaçadoras seguintes: espaçador AAVS1 gRNA (GGGGCCACUAGGGACAGGAU (SEQ ID NO: 1308)); espaçador TRAC gRNA (AGAGCAACAGUGCUGUGGCC (SEQ ID NO: 152)); e espaçador B2M gRNA (GCUACUCUCUCUUUCUGGCC (SEQ ID NO: 466)).
[0577] A coloração de células T foi efetuada tal como descrito acima no Exemplo 3 com uma modificação em que as células foram coradas com anticorpo Fab2 anticamundongo marcado com biotina (115-065006, Jackson ImmunoRes) a uma diluição de 1:5 durante 30 minutos a 4Ό. As células foram então lavadas e coradas com u m conjugado de estreptavidina. Os resultados da citometria de fluxo são mostrados nas Figuras 17A e 17B.
[0578] A capacidade das células manipuladas para lisar células de linfoma de Raji e para a produção de interferão gama (IFNg ou IFNy) foi então analisada utilizando um ensaio de morte celular e de ELISA. Resumidamente, o ensaio de morte celular e ELISA foram realizados usando placas de 96 poços de parede preta, 100 pg de estaurosporina (Fisher 1285100U), coquetel de Estimulação Celular (PMA) (Fisher 501129036), azul de tripano (Fisher 15250061), PBS e meio Raji (Soro Fetal Bovino Inativado por Calor a 10% (Sigma F4135-500ML, 15L115)) e RPMI 1640 (Life Technologies 61870036)) ou Meio K562 (Soro Fetal Bovino Fetal Inativado por Calor a 10% (Sigma F4135-500ML, 15L115) e IMDM (Life Technologies 12440061).
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[0579] As células T e as amostras CAR-T foram ressuspensas em meio apropriado RPMI/10% de FBS a uma diluição de 4,0x105/100 μΙ_, e as células que expressam luciferase foram ressuspensas a 1,0x105/100 uL. Após a ressuspensão, todas as amostras foram plaqueadas em urn volume final de 200 μΙ_ por poço, como mostrado. As placas foram incubadas durante a noite e após 24 horas, as placas foram centrifugadas por 10 minutos. Trinta (30) μΙ_ do meio sobrenadante superior foram coletados para uso em ELISA IFNp (RD Systems SIF50) em uma nova placa. O volume restante da placa foi então utilizado no ensaio de luciferase (Perkin Elmer 6RT0665).
[0580] As células T que expressam um construto anti-CD19 CAR do locus AAVS1 (AAVS1 RNP + CTX-131) ou do locus TRAC (TRAC RNP + CTX-138) foram capazes de lisar as células do linfoma Raji em um ensaio de cocultura (Figura 16A, painel esquerdo). As células CAR-T, mas não os controles negativos de CAR, foram capazes de produzir interferon gama (IFNyou IFNg) na presença de células de linfoma Raji (Figura 16A, painel direito). As células CAR-T anti-CD19 geradas por CRISPR/AAV não produziram IFNy quando cocultivadas com células K562, uma linha celular negativa para a expressão de CD19. Quando K562 foi produzida para sobre-expressão de CD19 e cocultivadas com células CAR-T expressando CAR anti-CD19 a partir do locus AAVS1 (AAVS1 RNP + CTX-131) ou do locus TRAC (TRAC RNP + CTX-138), células expressando CAR -T induziram produção de IFNy. A Figura 16B (painel esquerdo) mostra que as células CAR-T que expressam CAR anti-CD19 não induzem IFNy nas células K562 sem CD19. No entanto, os níveis IFNy de células CAR-T que expressam anti-CD19 são estimulados em células K562 que expressam CD19 (Figura 16B, painel da direita).
[0581] A Figura 17A demonstra que células únicas manipuladas para expressar um construto CAR e a falta de expressão superficial de
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TCR e B2M apenas o fizeram quando as células foram tratadas com RNPs para TRAC e B2M e infectadas com AAV6 (CTX-138) que fornece um modelo doador contendo um construto CAR flanqueado por sequência homóloga à integração e expressão específica do sítio especifico de integração mediado por locus TRAC e expressão do construto CAR. Foram observadas proporções normais de células T CD4 e CD8 que eram CAR+TCR B2M’, como mostrado nas Figuras 17B e 17C. As células manipuladas permaneceram viáveis 8 dias após a eletroporação e infecção AAV6, como mostrado na Figura 17 D.
[0582] As Figuras 18A e 18B demonstram que as células manipuladas produzem e aumentam o nível de produção de interferon gama (IFNg ou IFNy) apenas em células produzidas para expressar um CAR anti-CD19 integrado no locus TRAC com ou sem inativação de B2M quando as células T eram cocultivadas com células K562 que expressam CD19. A Figura 18C demonstra aumento da produção de IFN yem coculturas da linha celular de linfoma CD19+ Raji e células T tratadas como indicado.
Expressão de CAR usando construtos de rAAV com diferentes sgRNAs de TRAC
[0583] Este exemplo descreve o efeito do design do doador e da seleção de guia na expressão de CAR em células T humanas alogênicas que não possuem expressão de TCR e MHC I e expressam um receptor de antígeno quimérico. As células foram preparadas usando os seguintes sgRNAs: TRAC gRNA espaçador EXON1_T32: AGAGCAACAGUGCUGUGGCC (SEQ ID NO: 152); sgRNA (SEQ ID NO: 1345); TRAC gRNA espaçador Exon1_T7 (GAGAAUCAAAAUCGGUGAAU (SEQ ID NO: 88); sgRNA (SEQ ID NO: 1588) e os construtos rAAV são mostrados na tabela abaixo.
[0584] Os braços de homologia usados nos construtos de AAV podem ser concebidos para emparelhar com mais eficiência os gRNAs
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273/714 e/ou induzir uma deleção ou mutação no locus do gene alvo (por exemplo: locus TRAC) após a inserção do transgene. Por exemplo, os braços de homologia podem ser concebidos para flanquear uma ou mais sequências espaçadoras que resultam na deleção da(s) sequência(s) espaçadora(s) após a inserção do transgene por HDR (por exemplo: CTX-138). Alternativamente, os braços de homologia podem ser concebidos com alterações na sequência TRAC que resultam em alterações do par de bases, gerando mutações nas sequências PAM ou espaçadoras. O design específico do guia, emparelhado com um RNA guia específico, pode melhorar a expressão do CAR.
Tabela 12.1. Design de construto e efeito da inserção de transgene no gene TRAC
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Modelo doador (LHA-RHA) SEQ ID NO: LHA (pb) LHA SEQ ID NO: RHA (pb) RHA SEQ ID NO:
CTX-138 1354 800 1325 800 1326
CTX-139 1355 678 1324 800 1326
CTX-139,1 1583 800 1578 800 1326
CTX-139,2 1584 820 1579 905 1580
CTX-139,3 1585 841 1581 925 1582
Tabela 12.1. Expressão de CAR após inserção de transgene
Modelo doador (LHARHA) Efeito de HDR no locus TRAC Guia: EXON1T32 SEQ ID NO: Guia: EXON1T7 SEQ ID NO:
CTX-138 Deleção de 20 pb, abrangendo a sequência alvo Exon1_T32 55% 9,5%
CTX-139 Deleção de 141 pb, abrangendo a sequência alvo Exon1_T32 & Exon1_T7 54% 30%
CTX-139,1 Deleção de 141 pb, abrangendo a sequência alvo Exon1_T32 & Exon1_T7 n.a. 19%
CTX-139,2 Deleção de 20 pb, abrangendo a sequência alvo Exon1_T7 n.a. 50%
CTX-139,3 Deleção de 0 pb; mutação da sequência PAM 3’ da sequência alvo Exon1_T7; (1 alteração de nucleotídeo em PAM) n.a. 54%
Exemplo 10 - Análise de perfis indel no alvo em células T
[0585] A análise de amplicons no alvo foi conduzida no locus TRAC
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275/714 e B2M após a edição de genes usando os seguintes guias:
Espaçador B2M: GCUACUCUCUCUUUCUGGCC (SEQ ID NO: 466); sgRNA (SEQ ID NO: 1343
Espaçador TRAC: AGAGCAACAGUGCUGUGGCC (SEQ ID NO: 152); sgRNA (SEQ ID NO: 1345)
[0586] Após a edição do gene, a análise de amplicons no alvo foi realizada em torno do locus TRAC e B2M nas células TRAC-/B2M-/antiCD19 CAR+.
[0587] Um PCR inicial foi realizado usando 2x Kapa HiFi Hotstart Mastermix (Kapa Biosystems, Wilmington, MA). 50 ng de gDNA de entrada foram combinados com 300 nM de cada iniciador. Os iniciadores TRAC_F e TRAC_R foram emparelhados para o locus TRAC, e os iniciadores B2M_F e B2M_R foram emparelhados para amplificar o locus B2M (Tabela ##).
Tabela 12.2. Iniciadores para preparação da biblioteca de amplicons TRAC e B2M
TRAC_F TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGcgtgtaccagctgagagact
TRAC_R GTCTCGTGGGCTCGG AG ATGTGTAT AAG AG AC AGatgctgttgttgaaggcgtt
B2MF TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGgggcattcctgaagctgaca
B2MR GT CT CGT GGGCT CGG AG AT GT GT AT AAG AGACAGttggagaagggaagtcacgg
[0588] A análise do locus B2M em uma população de células T após a edição de genes para produzir células T TRAC7B2M7CAR+ resulta nas seguintes frequências indel e sequências de genes editadas no locus B2M (deleções como traços e inserções em negrito).
Tabela 12.3.
SEQ ID NO: Sequência de gene editado Frequência
1560 CGTGGCCTTAGCTGTGCTCGCGCTACTCTCTCTTTCT- GCCTGGAGGCTATCCAGCGTGAGTCTCTCCTACCCTCCCGCT 16,2%
1561 CGTGGCCTTAGCTGTGCTCGCGCTACTCTCTCTTTC- GCCTGGAGGCTATCCAGCGTGAGTCTCTCCTACCCTCCCGCT 6,3%
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SEQ ID NO: Sequência de gene editado Frequência
1562 CGTGGCCTTAGCTGTGCTCGCGCTACTCTCTCTTT—- CTGGAGGCTATCCAGCGTGAGTCTCTCCTACCCTCCCGCT 4,7%
1563 CGTGGCCTTAGCTGTGCTCGCGCTACTCTCTCTTTCTGGATAG CCTGGAGGCTATCCAGCGTGAGTCTCTCCTACCCTCCCGCT 2,2%
1564 CGTGGCCTTAGCTGTGCTCGC------------------------- GCTATCCAGCGTGAGTCTCTCCTACCCTCCCGCT 2,1%
1565 CGTGGCCTTAGCTGTGCTCGCGCTACTCTCTCTTTCTGTGGC CTGGAGGCTATCCAGCGTGAGTCTCTCCTACCCTCCCGCT 2,1%
[0589] A análise do locus TRAC em uma população de células T após a edição de genes para produzir células T TRAC7B2M7CAR+ resulta nas seguintes frequências indel e sequências de genes editadas no locus TRAC em células T sem inserção de CAR (deleções como traços e inserções em negrito).
Tabela 12.4.
SEQ ID NO: Sequência de gene editado Frequência
1566 AA---------------------GAGCAACAAATCTGACT 16,4%
1567 AAGAGCAACAGTGCTGT- GCCTGGAGCAACAAATCTGACT 16,0%
1568 AAGAGCAACAGTG-------CTGGAGCAACAAATCTGACT 7,5%
1569 AAGAGCAACAGT------ GCCTGGAGCAACAAATCTGACT 7,0%
1570 AAGAGCAACAGTG---------------------CTGACT 1,6%
1571 AAGAGCAACAGTGCTGTGGGCCTGGAGCAACAAAT CTGACT 2,5%
1572 AAGAGCAACAGTGC- TGGCCTGGAGCAACAAATCTGACT 2,2%
1573 AAGAGCAACAGTGCTGTGTGCCTGGAGCAACAAATC TGACT 2,0%
Exemplo 11 - Produção de Células CD19 CAR-T Alogênicas
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277/714 específicas do sítio por CRISPR-Cas9 para Malignidades de Células B
[0590] As tecnologias CRISPR/Cas9 foram aplicadas para desenvolver células T do receptor de antígeno quimérico anti-CD19 alogênicas (CAR-T) com potencial reduzido para doença do enxerto versus hospedeiro (GVHD) e potencial de rejeição reduzido para o tratamento de malignidades CD19 positivas. A eficiência do sistema CRISPR/Cas9 permite a produção rápida de produtos CAR-T homogêneos de doadores saudáveis pré-selecionados e, portanto, pode potencialmente ser desenvolvida como uma terapia pronta para uso para entrega eficiente aos pacientes. A terapêutica autóloga de CAR-T com alvo em CD19 mostrou respostas impressionantes em malignidades de células B, mas atualmente exige esforços de fabricação individualizados significativos e pode sofrer falhas de fabricação. Além disso, esses CAR-Ts autólogos são produzidos usando retrovirus ou lentivírus, para os quais a natureza variável da integração pode levar a um produto heterogêneo. Produtos CAR-T alogênicos ou prontos- para-uso com integração CAR especifica do sítio gerados com tecnologias de edição de gene pode abordar alguns destes desafios significativos observados para produtos autólogos.
[0591] A tecnologia CRISPR-Cas9 foi utilizada em células T humanas primárias para produzir células CAR-T alogênicas por edição de genoma multiplexado. Um sistema robusto para integração específica do sítio do CAR e edição simultânea de genes multiplexados em células T únicas foi desenvolvido utilizando reparação dirigida por homologia (HDR) com ribonucleoproteína Cas9 (RNP) e um modelo doador entregue por AAV6.
[0592] Com a tecnologia de edição CRISPR/Cas9, foi alcançada a inativação de elevada frequência da região constante do gene TCRa (TRAC) com redução de -98% da expressão da superfície de TCR nas
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278/714 células T primárias humanas de doadores saudáveis, o que visa prejudicar significativamente a doença enxerto-versus-hospedeiro (GVHD). Também pode ser obtida a inativação em alta frequência do gene da β-2-microglobulina (B2M), que visa aumentar a persistência nos pacientes, potencialmente levando ao aumento da potência geral. As frequências de inativação dupla TRAC/B2M foram obtidas em -80% das células T sem qualquer purificação ou enriquecimento subsequente baseado em anticorpos. As células T humanas que expressam um CAR específico para CD19 de dentro de um locus TRAC interrompido, produzido por reparação direcionada por homologia usando um modelo de doador entregue por AAV6, juntamente com a inativação do gene B2M, foram consistentemente produzidas com alta eficiência. Essa integração específica do sítio do CAR protege contra o crescimento potencial de células CD3+CAR+, reduzindo ainda mais o risco de GVHD, além de reduzir o risco de mutagênese de inserção associada a mecanismos de entrega retroviral ou lentiviral. Estas células CAR-T alogênicas manipuladas mostram a secreção de citocinas de células T dependentes de CD19 e a potente lise de células de câncer específicas de CD19.
[0593] Somos capazes de utilizar a edição genoma com o sistema de CRISPR-Cas9 para criar eficientemente um produto de células CART pronto-a-usar alogênico (por exemplo: TC1) que demonstra efeitos anticancerígenos potentes e específicos para pacientes com cânceres humanos expressando CD19. Mais especificamente, e conforme demonstrado aqui, a produção de produto alogênico anti-CD19 CAR-T (Figura 40) que exibe alta edição de eficiência (por exemplo, maior que 50% de eficiência das células TRAC7B2M7anti-CD19CAR+T) (Figura 39), funções efetoras específicas de CD19 (Figura 35 e Figura 41), mata CD19 + células de leucemia ou de linfoma in vitro e in vivo (Figura 35 e Figura 42), e não proliferam na ausência de citocinas (Figura 23). Além
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279/714 disso, o perfil fora do alvo é consistente com os resultados de outras terapêuticas de células T editadas por genes em desenvolvimento.
Exemplo 12 - Estudo de escalonamento da dose para determinar a eficácia de células CAR-T no modelo de xenoenxerto de tumor de linfoma Burkett Raji Humano subcutâneo em camundongos NOG [0594] Neste exemplo, a eficácia das células CAR-T contra o modelo de xenoenxerto de tumor de linfoma Burkett Raji Humano subcutâneo em camundongos NOG foi avaliada. A inserção de transgene em células T primárias humanas, via reparação direcionada por homologia (HDR) e inativação de genes simultâneos por Cas9:sgRNA RNA foi realizada conforme descrito acima nos Exemplos 8-10 para produzir células sem expressão de TCR e B2M à superfície e expressar simultaneamente um construto CAR anti-CD19 (células TRAC7B2MCD19CAR+). As células T humanas primárias foram primeiro eletroporadas com Cas9 ou complexos de RNP Cas9:sgRNA com alvo em TRAC (AGAGCAACAGTGCTGTGGCC (SEQ ID NO: 76) e B2M1 (GCTACTCTCTCTTTCTGGCC (SEQ ID NO: 417)). A quebra de fita dupla do DNA no locus TRAC foi reparada por reparação direcionada por homologia com um modelo de DNA AAV6-entregue (CTX -138; SEQ ID NO: 675) contendo braços de homologia esquerdo e direito do locus de TRAC que flanqueiam um cassete de receptor de antígeno quimérico (-/+ elementos reguladores para a expressão do gene). As células T modificadas resultantes (TC1) são TRAC7B2M’ CD19CAR+. A capacidade de células T TRAC7B2MCD19CAR+ modificadas para melhorar a doença causada por uma linha de células CD19+ do linfoma (Raji) foi avaliada em camundongos NOG usando métodos empregues por Translational Drug Development, LLC (Scottsdale, AZ). Brevemente, 12 camundongos fêmeas CIEA NOG (NOD.Cg-Prkdcscidl12rgtm1Sug/ JicTac), 5 a 8 semanas de idade foram alojados individualmente em gaiolas microisoladoras ventiladas,
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280/714 mantidas sob condições livres de patógenos, 5-7 dias antes do início do estudo. No dia 1 os camundongos receberam uma inoculação subcutânea de 5x106 células Raji/camundongo. Os camundongos foram ainda divididos em 3 grupos de tratamento, como mostrado na Tabela 13. No Dia 8 (7 dias após a inoculação com as células Raji), o grupo de tratamento 2 e o grupo 3 receberam uma única dose intravenosa de 200μΙ de células TRAC/B2MCD19CAR+ (TC1) de acordo com a Tabela 13. Os gRNAs utilizados neste Exemplo compreendem as sequências espaçadoras seguintes: espaçador TRAC gRNA (AGAGCAACAGUGCUGUGGCC (SEQ ID NO: 152)); e espaçador B2M gRNA (GCUACUCUCUCUUUCUGGCC (SEQ ID NO: 466)).
Tabela 13. Grupos de tratamento
Grupo Células Raji (s.c.) Tratamento TC1 (i.v.) N
1 5x106 células/camundongo Nenhum 4
2 5x106 células/camundongo 5x106 células/camundongo 4
3 5x106 células/camundongo 1 x107 células/camundongo 4
[0595] O volume do tumor e o peso corporal foram medidos e os camundongos individuais foram sacrificados quando o volume do tumor era > 500 mm3.
[0596] No dia 18, os dados mostram uma diminuição estatisticamente significativa no volume do tumor em resposta às células TC1 em comparação com camundongos não tratados (Figura 19). O efeito no volume do tumor era dependente da dose (Tabela 14); os camundongos que receberam doses mais elevadas de células TC1 mostram que reduziu significativamente o volume do tumor quando comparado com os camundongos que receberam quer uma dose mais baixa de células TC1 ou nenhum tratamento. Também foi observado um aumento na sobrevivência no grupo tratado (Tabela 14).
Tabela 14. Resposta e sobrevivência tumoral
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Grupo Volume do tumor (Dia 18) Volume do tumor (Dia 20) Sobrevivência (Dias) N
1 379,6 ±67,10 482 ± 47,37 20-22 4
2 214,0 ±20,73 372,2 ±78,21 25 4
3 107,5 ±7,33* 157,1 ± 10,62** 27 (fim do estudo) 4
p = 0,007 em comparação com o controle (Grupo 1) “p = 0,0005 em comparação com o controle (Grupo 1)
[0597] Além de CT1 descrito acima, células T modificadas adicionais que expressam um receptor de antígeno quimérico (CAR) compreendendo um domínio extracelular compreendendo um scFv antiCD19 e compreendendo ainda uma inativação dupla dos genes TRAC e B2M são contempladas para uso neste e outros exemplos aqui descritos. Em certas modalidades, das células TRAC7B2M CD19CAR+, a deleção de TRAC pode ser realizada usando qualquer uma das sequências espaçadoras de TRAC aqui descritas. Em certas modalidades das células TRAC7B2M CD19CAR+, a deleção de β2Μ pode ser realizada usando qualquer uma das sequências espaçadoras de B2M aqui descritas.
Exemplo 13 - Avaliação da Eficácia das Células CAR-T em Modelos Disseminados por via Intravenosa em Camundongos NOG
[0598] Modelo de Xenoenxerto de Tumor de Linfoma Burkett Raji Humano Disseminado por via Intravenosa
[0599] O Modelo Disseminado por via intravenosa (Modelo Disseminado) usando a linha de células do Tumor de Linfoma Burkett Raji Humano em camundongos NOG foi usado neste exemplo para demonstrar melhor a eficácia de células TRAC7B2M CD19CAR+. A geração de células TRAC7B2M CD19CAR+ (TC1) utilizadas neste modelo foi descrita nos exemplos acima e avaliadas no Modelo Disseminado usando métodos utilizados por Translations Drug Development, LLC (Scottsdale, AZ) e aqui descritos. Brevemente, 24 camundongos fêmeas CIEA NOG (NOD.Cg-Prkdcscidl12rgtm1Sug/JicTac)
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282/714 com 5 a 8 semanas de idade foram alojados individualmente em gaiolas microisoladoras ventiladas, mantidas sob condições livres de patógenos, 5-7 dias antes do início do estudo. No início do estudo, os camundongos foram divididos em 5 grupos de tratamento, como mostrado na Tabela 15. No dia 1, os camundongos dos grupos 2-5 receberam uma injeção intravenosa de 0,5 x 106 células Raji/camundongo. Os camundongos foram inoculados por via intravenosa para o modelo disseminado da doença. No Dia 8 (7 dias após a injeção com as células Raji), os grupos de tratamento 3-5 receberam uma única dose intravenosa de 200 μΙ_ células TC1 conforme descrito na Tabela 15.
Tabela 15. Grupos de tratamento
Grupo Células Raji (i.v.) Tratamento TC1 (i.v.) N
1 Nenhum Nenhum 8
2 0,5x106 células/camundongo Nenhum 4
3 0,5x106 células/camundongo 1 x106 células/camundongo (-0,5x106 células CAR-T+) 4
4 0,5x106 células/camundongo 2x106 células/camundongo (-1,0x106 células CAR-T+) 4
5 0,5x106 células/camundongo 4x106 células/camundongo (-2,0x106 células CAR-T+) 4
[0600] Durante o decurso do estudo, os camundongos foram monitorizados diariamente e o peso corporal foi medido duas vezes por semana. Um parâmetro significante foi o tempo para a peri-morbidade e o efeito do enxerto de células T também foi avaliado. A percentagem de mortalidade animal e o tempo até a morte foram registrados para todos os grupos do estudo. Os camundongos foram sacrificados antes de atingir um estado moribundo. Os camundongos podem ser definidos como moribundos e sacrificados se um ou mais dos seguintes critérios forem atendidos:
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283/714
[0601] Perda de peso corporal igual ou superior a 20%, sustentada por um periodo superior a 1 semana;
[0602] Tumores que inibem a função fisiológica normal, como comer, beber, mobilidade e capacidade de urinar e/ou defecar;
[0603] Diarréia excessiva e prolongada levando a perda excessiva de peso (> 20%); ou
[0604] Chiado persistente e dificuldade respiratória.
[0605] Os animais foram também considerados moribundos se houve uma prolongada ou excessiva dor ou desconforto, tal como definido por observações clínicas, tais como: prostração, postura arqueada, paralisia/paresia, distensão abdominal, ulcerações, abcessos, convulsões e/ou hemorragias.
[0606] Semelhante ao modelo de xenoenxerto subcutâneo (Exemplo 12), o Modelo Disseminado revelou uma vantagem de sobrevivência estatisticamente significativa em camundongos tratados com células TRAC7B2M CD19CAR+ (TC1) como mostrado na Figura 20, p <0,0001. O efeito do tratamento com TC1 na sobrevivência no modelo disseminado também foi dependente da dose (Tabela 16).
Tabela 16. Sobrevivência animal
Grupo Células Raji (i.v.) Tratamento TC1 (i.v.) Sobrevivência Max (dias) Sobrevivência mediana (dias)
1 Não Não Max Max
2 Sim Não 20 20
3 Sim 1x106 células/camundongo 21 21
4 Sim 2x106 células/camundongo 25 25
5 Sim 4x106 células/camundongo 32 26
[0607] Uma segunda experiência foi realizada usando o modelo Disseminado Intravenoso descrito acima.
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[0608] No dia 1, os camundongos dos grupos 2-4 receberam uma injeção intravenosa de 0,5 x 106 células Raji/camundongo. Os camundongos foram inoculados por via intravenosa para o modelo disseminado da doença. No Dia 4 (3 dias após a injeção com as células Raji), os grupos de tratamento 2-4 receberam uma única dose intravenosa de 200 μΙ_ de células TC1 como mostra a Tabela 17.
Tabela 17. Grupos de tratamento
Grupo Células Raji (i.v.) Tratamento TC1 (i.v.) N
1 0,5x106 células/camundongo Nenhum 6
2 0,5x106 células/camundongo 0,6x106 células CARVcamundongo 7
3 0,5x106 células/camundongo 1,2x106 células CARVcamundongo 5
4 0,5x106 células/camundongo 2,4x106 células CARVcamundongo 5
[0609] Novamente, o Modelo Disseminado revelou uma vantagem de sobrevivência estatisticamente significativa em camundongos tratados com células TRAC7B2MCD19CAR+ (TC1), como mostrado na Figura 42A, p = 0,0016. O efeito do tratamento com TC1 na sobrevivência no modelo disseminado também foi dependente da dose (Tabela 18).
Tabela 18. Sobrevivência animal
Grupo Células Raji (i.v.) Tratamento TC1 (i.v.) Sobrevivência Máx (dias) Sobrevivência Mediana (dias) Significância
1 Sim Não 20 20
2 Sim 0,6x106 células CARVcamundongo 35 27 p=0,005
3 Sim 1,2x106 células CARVcamundongo 39 37 p=0,016
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Grupo Células Raji (i.v.) Tratamento TC1 (i.v.) Sobrevivência Máx (dias) Sobrevivência Mediana (dias) Significância
4 Sim 2,4x106 células CARVcamundongo 49 46 p=0,016
Avaliação da resposta Esplênica ao tratamento com TC1
[0610] O baço foi coletado de camundongos 2-3 semanas após a injeção de Raji e o tecido foi avaliado por citometria de fluxo quanto à persistência das células TC1 e erradicação das células Raji no baço.
Procedimento de Análise por Citometria de Fluxo
[0611] O baço foi transferido para 3 mL de 1X DPBS CMF em um tubo C e dissociado usando o dissociador MAC S Octo. A amostra foi transferida através de uma tela de 100 microns para um tubo cônico de 15 mL, centrifugada (1700 rpm, 5 minutos, ART com freio) e ressuspensa em 1 mL de 1X DPBS CMF para contagem usando o Guava PCA. A medula óssea foi centrifugada e ressuspensa em 1 mL de 1X DPBS CMF para contagem usando o Guava PCA. As células foram ressuspensas a uma concentração de 10 x 106 células/mL em 1X DPBS CMF para coloração de citometria de fluxo.
[0612] As amostras (50 pL) foram adicionadas a 1 mL de 1X Pharm Lyse e incubadas por 10 a 12 minutos à temperatura ambiente (TA). As amostras foram centrifugadas e depois lavadas uma vez com 1X DPBS CMF. As amostras foram ressuspensas em 50 pL de 1X DPBS e incubadas com TruStain humano e de camundongo por 10 a 15 minutos à temperatura ambiente. As amostras foram lavadas uma vez com 1 mL de 1X DPBS CMF e ressuspendidas em 50 pL de 1X DPBS CMF para coloração. Os anticorpos de superfície foram adicionados e as células incubadas durante 15 a 20 minutos no escuro à TA e, em seguida, lavouse com 1 mL de 1X DPBS CMF. Em seguida, as amostras foram
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286/714 ressuspensas em 125 μΙ_ de 1X DPBS para aquisição CMF no citômetro de fluxo.
[0613] As células foram coradas com o seguinte painel de anticorpos de superfície:
Tabela 19.
FITC PE APC C3 APCCy7 V421 V510
huCD3 (UCHT1) huCD45 (HI30) huCD19 (HIB19) 7AAD CD8 (SK1) CD4 (RPA-T4) mCD45 (30-F11)
[0614] As populações de células foram determinadas por classificações eletrônicas (PI = leucócitos totais) com base na dispersão direta versus lateral. A compensação para tratar o derramamento de um canal para outro foi realizada após a configuração inicial do instrumento, usando Ultra Comp Beads da Thermo Fisher. O citômetro de fluxo foi ajustado para coletar 10,000 eventos CD45+ em cada tubo. A aquisição dos dados citométricos de fluxo foi realizada usando o citômetro de fluxo FACSCantoll™. Os dados foram adquiridos usando o software BO FACSDiva™ (versão 6.1.3 ou 8.0.1). A análise dos dados da citometria de fluxo foi realizada na forma de Citogramas de Fluxo, que são representações gráficas geradas para medir percentagens relativas de cada tipo de célula.
[0615] Este exemplo demonstra que ao seguir o tratamento de células TC1, o benefício terapêutico de células TRAC7B2MCD19CAR+ persiste no baço e erradica seletivamente células Raji a partir do tecido (Figura 21 A). Além disso, o tratamento com células TC1 não exibe aumento induzido por Raji na massa celular (Figura 21B). Além disso, a Figura 22 mostra que as células humanas restantes nos baços de camundongos tratados com células TRAC7B2M CD19CAR+ são CD8+. Essas células T CD8+ também são CD3 negativas, provando que as células T persistentes neste modelo permanecem negativas para TCR/CD3 e, portanto, são editadas.
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Modelo de Xenoenxerto de Tumor de Leucemia Linfoblástica Aguda Humana Nalm-6 Disseminado Intravenoso
[0616] O Modelo Disseminado por via Intravenosa (Modelo Disseminado) usando a linha de células do tumor de Leucemia Linfoblástica Aguda Humana Nalm-6 em camundongos NOG foi usado neste exemplo para demonstrar melhor a eficácia de células TRAC' /B2MCD19CAR+. A geração das células TRAC7B2MCD19CAR+ (TC1) utilizadas neste modelo foi descrita nos exemplos acima e avaliadas no Modelo Disseminado usando métodos utilizados por Translations Drug Development, LLC (Scottsdale, AZ) e aqui descritos. Brevemente, 24 camundongos fêmeas CIEA NOG (NOD.CgPrkdcscidl12rgtm1Sug/JicTac) com 5 a 8 semanas de idade foram alojados individualmente em gaiolas de microisoladoras ventiladas, mantidas sob condições livres de patógenos, 5-7 dias antes do início do estudo. No início do estudo, os camundongos foram divididos em 5 grupos de tratamento, como mostrado na Tabela 20. No dia 1, os camundongos dos grupos 2-4 receberam uma injeção intravenosa de 0,5 x 106 células Nalm6/camundongo. Os camundongos foram inoculados por via intravenosa para o modelo disseminado da doença. No Dia 4 (3 dias após a injeção com as células Nalm6), os grupos de tratamento 2-4 receberam uma única dose intravenosa de 200 pL de células TC1 conforme descrito na Tabela 20.
Tabela 20. Grupos de tratamento
Grupo Células Nalm6 (i.v.) Tratamento TC1 (i.v.) N
1 0,5x106 células/camundongo Nenhum 6
2 0,5x106 células/camundongo 1x106 CARVcamundongo células 6
3 0,5x106 células/camundongo 2x106 CARVcamundongo células 6
4 0,5x106 células/camundongo 4x106 CARVcamundongo células 6
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[0617] Durante o decurso do estudo, os camundongos foram monitorizados diariamente e o peso corporal foi medido duas vezes por semana, como descrito acima.
[0618] Semelhante ao modelo disseminado intravenoso Raji (acima), o Modelo Nalm6 também mostrou uma vantagem de sobrevivência estatisticamente significativa em camundongos tratados com células TRAC7B2MCD19CAR+ (TC1), como mostrado na Figura 42B, p = 0,0004. O efeito do tratamento com TC1 na sobrevivência no modelo disseminado Nalm6 também foi dependente da dose (Tabela 21).
Tabela 21. Sobrevivência animal
Grupo Células Nalm6 (i.v.) Tratamento TC1 (i.v.) Sobrevivência Máx (dias) Sobrevivência Mediana (dias) Significância
2 Sim Não 31 25,5
3 Sim 1x106 células CARVcamundongo 32 31 p=0,03
4 Sim 2x106 células CARVcamundongo 38 36 p=0,0004
5 Sim 4x106 células CARVcamundongo 52 46 p=0,0004
Exemplo 14 - Proliferação de TC1 é dependente da Citocina
[0619] A produção de células TRAC7B2M CD19CAR+, TC1, pode resultar em indesejada edição fora do alvo que podería gerar células com propriedades adversas. Uma dessas propriedades adversas pode ser o crescimento descontrolado das células. Nesta experiência, avaliamos a capacidade das células TC1 crescerem na ausência de citocinas e/ou soro.
[0620] Plaquearam-se 1x106 células TC1 ~2 semanas após a produção (Dia 0). O número de células viáveis foi enumerado 7 e 14 dias após o plaqueamento em meio completo, soro humano a 5% sem
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289/714 citocinas (IL-2 e IL-7) ou meio básico sem soro e citocinas. Não foram detectadas células aos 14 dias plaqueadas nas culturas que não tinham citocinas, sugerindo que quaisquer efeitos potenciais fora do alvo devido à edição do genoma não conferiam crescí mento/proliferação independente do fator de crescimento às células TC1. As células TC1 apenas proliferam na presença de citocinas (por exemplo, meio completo que contém citocinas) e que não proliferam na presença de apenas soro, como mostrado na Figura 23. Assim, in vivo, as células TC1 provavelmente não cresceríam na ausência de citocina, fator de crescimento ou estimulação de antígeno devido a qualquer edição de genoma fora do alvo.
Exemplo 15 - Inativação mediada por CRISPR/Cas9 de componentes de TOR e MHO I e expressão de construtos CD70 de receptores de antígeno quiméricos
[0621] Este exemplo descreve a produção por CRISPR/Cas9 e AAV6 de células T humanas alogênicas que não têm expressão de TCR, ou TCR e MHC I e expressam um receptor de antígeno quimérico com alvo em a cânceres CD70+.
[0622] A representação esquemática de células CAR-T alogênicas geradas por CRISPR/Cas9 é mostrada na Figura 24A.
[0623] Similar ao Exemplo 9 acima, CRISPR/Cas9 foi usado para interromper (inativação [KO]) a sequência de codificação do gene da região constante de TCRa (TRAC). Esta interrupção leva à perda de função de TCR e processa as células T com gene editado não alorreativas e adequadas para o transplante alogênico, minimizando o risco de doença de enxerto versus hospedeiro (GVHD). A quebra de fita dupla do DNA no locus de TRAC foi reparada por reparação direcionada por homologia com um modelo de DNA entregue pelo AAV6 contendo braços de homologia direito e esquerdo para o locus de TRAC que flanqueia um cassete de receptor de antígeno quimérico (-/+ elementos
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290/714 reguladores para expressão de genes). Para reduzir hospedeiro versus enxerto (HVG) (por exemplo: hospedeiro vs CAR-T) e permitir a persistência do produto alogênico CAR-T, o gene B2M foi também interrompido usando componentes CRISPR/Cas9. Juntas, essas edições do genoma resultam em uma célula T com expressão superficial de um CAR (expresso a partir do locus TRAC) com alvo em câncer CD70+, juntamente com a perda de TCR e MHC I, para reduzir GVHD e HVG, respectivamente. A célula T pode ser referida como uma célula TRAC7B2M CD70CAR+.
[0624] Para certas experiências, descritas nos exemplos a seguir, também foram produzidas e testadas células TRAC-CD70 CAR+ inativadas únicas.
[0625] Um esquema de construtos de plasmídeo de DNA para produção de vírus AAV recombinantes portadores de modelos doadores para facilitar a inserção genômica alvo de cassetes de expressão CAR por HDR de quebras de fita dupla de DNA especifico de sítio evocado de Cas9 é mostrado na Figura 24B.
Tabela 22: Sequências de Componentes do Modelo Doador
SEQ ID NO: Nome do Domínio Comprimento (pb)
1313 ITR esquerdo (5’ ITR) 145
1314 ITR direito (3’ ITR) 145
1423 CD70A CAR 1518
1424 CD70B CAR 1518
1319 pA 49
1325 TRAC-LHA (800 pb) 800
1326 TRAC-RHA (800 pb) 804
1331 EF1a 1178
[0626] CTX-142 e CTX-145 são derivados de CTX-138, mas o CAR foi modificado para compreender regiões codificantes anti-CD70 scFV humanas (Figura 24B) em vez de regiões codificantes anti-CD19 scFV;
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291/714 além disso, o CAR é modificado para compreender um peptídeo sinal alternativo (por exemplo: CD8; MALPVTALLLPLALLLHAARP (SEQ ID NO: 1586)) em comparação com o CAR codificado por CTX-138. CTX142 e CTX-145 são derivados de CTX-138, mas com as regiões codificantes anti-CD19 scFv substituídas pelas regiões codificantes antiCD70 scFv humanas (Figura 24B). CTX-142 e CTX-145 diferem na orientação das fitas variável pesada (VH) e variável leve (VL) antiCD70 scFv. CTX-142 (SEQ ID NO: 1358) contém um construto ant-CD70 CAR (antiCD70A: CD8[peptídeo sinal]-VL-ligante-VH-CD8[tm]CD28[domínio coestimulador]-CD3z) (SEQ ID NO: 1423) com uma sequência sintética de poli-adenilação 3’ (pA) cuja expressão é dirigida pelo promotor EF1a. O scFv é construído de tal modo que a fita VL é um terminal amino da fita VH. CTX-142 (SEQ ID NO: 1358) também contém braços de homologia de 800 pb, flanqueando um sítio alvo de Cas9/sgRNA genômico no locus TRAC. CTX-145 (SEQ ID NO: 1359) é semelhante a CTX-142, no entanto, o construto CAR antiCD70 (contém um construto CAR antiCD70 (antiCD70B: CD8[peptídeo sinal]-VHligante-VL-CD8[tm]-CD28[domínio coestimulador]-CD3z) (SEQ ID NO: 1424) mudou a orientação das fitas VH e VL, o VH é animo terminal a VL.
[0627] As células T CAR anti CD70 foram produzidas com componentes CRISPR/Cas9 e AAV como descrito (aqui). A inserção de transgene em células T primárias humanas via reparação direcionada por homologia (HDR) e inativação genética simultâneas por Cas9:RNA sgRNA foi realizada conforme descrito acima nos Exemplos 8 e 9. As células T humanas primárias foram primeiro eletroporadas com Cas9 ou complexos de RNP Cas9:sgRNA com alvo em TRAC (AGAGCAACAGTGCTGTGGCC (SEQ ID NO: 76); compreendendo sgRNA (SEQ ID NO: 1343) e B2M1 (GCTACTCTCTCTTTCTGGCC (SEQ ID NO: 417); compreendendo sgRNA (SEQ ID NO: 1345). Os
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292/714 gRNAs utilizados neste Exemplo compreendem as sequências espaçadoras seguintes: espaçador TRAC gRNA (AGAGCAACAGUGCUGUGGCC (SEQ ID NO: 152)); e espaçador B2M gRNA (GCUACUCUCUCUUUCUGGCC (SEQ ID NO: 466)).
[0628] As sequências de sgRNA podem ser modificadas como se segue: TRAC SEQ ID NO: 1342, B2M SEQ ID NO: 1345.
[0629] A quebra de fita dupla do DNA no locus TRAC foi reparada por reparação direcionada por homologia com um modelo de DNA AAV6-entregue (CTX-142 ou CTX-145).
Exemplo 16 - Inserção simultânea de transgene mediada por HDR nas células para gerar células TRAC-CD70CAR+ e TRAC-B2MCD70CAR+
[0630] Este exemplo demonstra inserção eficiente de transgene e inativação de genes simultâneos por Cas9:sgRNA RNP (para indução de quebra de fita dupla) e modelo doador entregue por AAV6 (CTX-142 ou CTX-145) contendo um construto CD70 CAR em células T humanas primárias.
[0631] As células T humanas primárias foram ativadas com esferas magnéticas CD3/CD28 (como descrito anteriormente no Exemplo 2). Três dias depois, as esferas de ativação foram removidas. No dia seguinte, as células foram eletroporadas com complexos de RNP, incluindo sgRNAs com alvo em TRAC isoladamente ou TRAC + B2M (2 RNPs complexados separadamente). 7 dias após a manipulação, as células foram analisadas por citometria de fluxo, como anteriormente descrito aqui e no Exemplo 2.
[0632] Os guias usados neste exemplo têm como alvo:
[0633] TRAC: AGAGCAACAGTGCTGTGGCC (SEQ ID NO: 76); e compreendem TRAC sgRNA (SEQ ID NO: 1343)
[0634] B2M: GCTACTCTCTCTTTCTGGCC (SEQ ID NO: 417); e compreendem B2M sgRNA (SEQ ID NO: 1345)
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[0635] Os gRNAs utilizados neste Exemplo compreendem a sequências espaçadoras seguintes: espaçador TRAC gRNA (AGAGCAACAGUGCUGUGGCC (SEQ ID NO: 152)); e espaçador B2M gRNA (GCUACUCUCUCUUUCUGGCC (SEQ ID NO: 466)).
[0636] As sequências de sgRNA podem ser modificadas como se segue: TRAC SEQ ID NO: 1342, B2M SEQ ID NO: 1344.
[0637] A Figura 25A mostra que as células tratadas com TRAC sgRNA contendo RNP e CTX-145 AAV6 produziram níveis mais altos de expressão de um construto CAR, enquanto as células tratadas com TRAC sgRNA RNP e CTX-142 AAV6 não foram tão eficazes na produção de células que expressam CD70 CAR. A Figura 25B demonstra proporções normais de subconjuntos de células T CD4/CD8 mantidas na fração CAR+ negativa TRAC de células tratadas com sgRNA TRAC contendo RNP e CTX-145 AAV6, sugerindo que a expressão de uma célula T anti CD70 CAR geneticamente modificada afeta a proporção de subpopulações de células T.
[0638] Além disso, as células infectadas com AAV6 que codifica apenas CTX-145 não expressam altos níveis de anti CD70 CAR. É necessária uma quebra de fita dupla induzida por um sgRNA TRAC contendo RNP e reparação subsequente por HDR usando o modelo doador CTX-145 para a expressão à superfície de CAR anti CD70 (Figura 26). Assim, o construto CTX-145 é expresso apenas após a integração no gene TRAC e não seria expresso em células que não foram tratadas com ambos TRAC RNP e vetor AAV.
[0639] A Figura 27 demonstra a produção bem-sucedida de células T humanas únicas sem expressão à superfície de TCR e B2M com expressão simultânea do CD70 CAR de um transgene integrado no locus TRAC usando os métodos descritos acima (TCR-/B2MCD70CAR+).
[0640] A percentagem de células que expressam CD70 foi
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294/714 rastreada durante a produção de células CD70 CAR-T. No dia 0, uma pequena percentagem de células T expressa CD70 e é principalmente CD4+ (Figura 36A). Essas percentagens são consistentes 4 dias após a eletroporação/infecção pelo AAV6, exceto nas células que se tornam CD70CAR+. As culturas CD70CAR+ carecem de células que expressam CD70. A alta frequência de células CD70CAR+, juntamente com a falta de expressão de CD70 nas culturas antiCD70-CAR +, sugere que as células T CD70+ servem como alvos das células antiCD70-CART, o que leva ao fratricídio das células T CD70+, juntamente com a expansão das células antiCD70-CAR-T (Figura 36B Painel superior corresponde às células CD70- da Figura 36A; Painel inferior corresponde às células CD70+ da Figura 36A).
Exemplo 17 - Geração de linhas de células que expressam CD70 [0641] As células K562 foram infectadas com partículas lentivirais que codificam um cDNA de CD70 humano sob o controle do promotor EF1a, bem como um cassete de expressão de puromicina (Genecopoeia). As células foram selecionadas em 2 mg/mL de puromicina por 4-7 dias e analisadas quanto à expressão de CD70 à superfície usando um anticorpo anti-CD70 conjugado com Alexa fluor 647 (Biolegend, 355115). A Figura 28A demonstra uma expressão elevada de CD70 à superfície em células K562 com sobre-expressão de CD70 (CD70+K562) em comparação com células K562 parentais e níveis de expressão comparáveis ao CD70 nativo expresso na linha celular Raji.
[0642] Um painel de outras linhas celulares também foi testado para expressão de CD70 à superfície usando citometria de fluxo: Nalm6 (linfoide), 293 (rim embrionário), ACHN (renal), Caki-2 (renal), Raji (linfoide), Caki-1 (renal), A498 (renal) e 786-0 (renal). Os resultados são mostrados na Figura 28B. As linhas celulares Raji, Caki-1 e A498 exibiram os níveis mais altos de expressão da superfície de CD70 neste
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295/714 ensaio. Estas linhas celulares e as células K562 que expressam CD70 podem ser utilizadas para avaliar a função efetiva e a especificidade de CR-/anti-CD70 CAR+ e TCR-/B2M-/anti-CD70 CAR+.
Exemplo 18 - Avaliação da função efetora em células T modificadas por CRISPR/Cas9 que expressam um receptor de antígeno quimérico CD70 (CAR)
Estimulação de interferon gama por células T geneticamente modificadas que expressam um CD70 CAR
[0643] A capacidade das células manipuladas para produzir o interferon gama (IFNy) em uma célula alvo foi analisada utilizando um ensaio ELISA, tal como descrito acima e no Exemplo 10.
[0644] A especificidade das células T geneticamente modificadas que expressam um CD70 CAR integrado no gene TRAC foi avaliada em um ensaio ELISA in vitro. O IFNy de sobrenadantes de coculturas celulares foi medido. Apenas as células TRAC7anti-CD70 CAR+ secretam altos níveis de IFNy quando cultivadas com CD70+K562. A secreção de IFNy não foi detectada quando as células TRAC / anti-CD70 CAR+ foram cultivadas com células K562 que não foram modificadas para sobre-expressar CD70 à superfície (Figura 5A) (em uma razão de 4:1 de células CAR-T para alvo).
[0645] Da mesma forma, as células TRAC7anti-CD70CAR+ estimularam apenas as células IFNy CD70+ Raji, mas não as células CD70- Nalm6 (Figura 29B) (na razão de 2:1 de célula CAR-T para alvo). As células TRAC7anti-CD70 CAR+ T não secretam níveis detectáveis de IFNyquando cultivadas sozinhas na ausência de células alvo (Figura 29C).
Ensaio de GranzymeB
[0646] Para avaliar ainda mais as funções efetoras das células TRAC-/anti-CD70CAR+, os níveis intracelulares de GranzymeB nas células alvo foram medidos em um ensaio de lise celular substituto. As
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296/714 células alvo que são GranzymeB+ tiveram poros de membrana contendo perforina formados e injeção subsequente de GranzymeB através dos poros para iniciar a apoptose pelas células TRAC-/antiCD70CAR+. O ensaio GranToxiLux foi realizado com células Raji (células CD70 positivas) ou células Nalm6 (células CD70 negativas) de acordo com as instruções do fabricante (Oncoimmunin Inc.). As células alvo marcadas com fluorescência foram cocultivadas na razão de 2:1 com as células T de teste (por exemplo: TRAC/anti-CD70CAR+:células alvo) no substrato GranzymbeB por 2 horas a 37 QC. As células foram lavadas e a % das células alvo positivas para a atividade de GranzymbeB foram quantificadas por citometria de fluxo. Outras células de teste de controle também foram avaliadas em razões semelhantes (células T não editadas (TRC+) e células T TRAC ). A Figura 29B mostra a inserção e atividade eficientes de GranzymeB pelas células TRAC' /anti-CD70CAR+ apenas nas células Raji (CD70+) e não nas células Nalm6 (CD70-). As outras células de controle testadas não induziram inserção e atividade de GranzymeB em nenhum tipo de célula alvo. Assim, as células TRAC/anti-CD70CAR+ podem induzir a lise de células alvo positivas para CD70.
Ensaio de Morte Celular no Carcinoma Renal de Células Aderentes - no Contexto de coestimulador CD28
[0647] Para avaliar a capacidade das células T modificadas por CRISPR/Cas9 que expressam um CAR CD70 para matar as linhas celulares derivadas de carcinoma de células renais aderentes (RRC) que expressam CD70, foi elaborado um ensaio de morte celular. As células aderentes foram semeadas em placas de 96 poços a 50.000 células por poço e deixadas durante a noite a 37 °C. No dia seguinte, as células T foram adicionadas aos poços que contêm as células alvo a uma proporção de 2:1. Após o período de incubação indicado, as células T foram removidas da cultura por aspiração e 100 pL de Cell titer-GIo
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297/714 (Promega) foram adicionados a cada poço da placa para avaliar o número de células viáveis restantes. A quantidade de luz emitida por poço foi então quantificada usando um leitor de placas. As células TRACCD70CAR+ induziram a morte celular potente de linhas celulares derivadas de carcinoma de células renais após uma coincubação de 72 horas (Figura 30A), enquanto as células de teste de controle (células T de controle: TCR+ ou TRAC-) não tiveram efeito. Como esperado, as células TRAC CD70CAR+ não exibiram capacidade de lisar uma linha celular derivada de rim embrionário humano negativa para CD70 (HEK293 ou 293). A estaurosporina (Tocris) foi usada como controle positivo para mostrar que os níveis de morte celular induzidos por uma molécula pequena eram comparáveis entre os três tipos de células alvo testados. Estes resultados demonstram que a lise celular induzida pela célula TRAC CD70CAR+ é específica para células alvo que expressam CD70 à superfície. Além disso, as células T modificadas por CRISPR/Cas9 que expressam um CAR CD70 exibiram uma potente lise celular de uma série de linhas celulares derivadas de carcinoma de células renais que expressam CD70 (Figura 30B e 30C).
Avaliação dos Domínios Coestimulatórios 41 Bb e CD28 em Células Anti-CD70 CAR T
[0648] O CTX145b (SEQ ID NO: 1360) é derivado do CTX145, onde o CD28[domínio coestimulador] foi substituído por 41BB[domínio coestimulador] (Figura 61). A sequência do domínio 4-1 BB é AAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTA TGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCC GATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTG (nucleotídeoSEQ ID NO: 1339);
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL (aminoácido-SEQ ID NO: 1340).
Criação eficiente de células CAR-T anti-41BB-CD70 de Inativação
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Dupla TRAC, B2M
[0649] Este exemplo demonstra inserção eficiente de transgene e inativação de genes simultâneos por Cas9:sgRNA RNP (para indução de quebra de fita dupla) e modelo doador entregue por AAV6 (CTX-145b (SEQ ID NO: 1360)) contendo um construto CD70 CAR em células T humanas primárias. A produção de células T humanas alogênicas é como descrito no Exemplo 16. A alta eficiência é semelhante quando se utiliza o modelo doador entregue por AAV6 CTX-145 (SEQ ID NO: 1359) e CTX145b (89,7% de células CAR+ usando CTX-145 v. 88,6% de células CAR+ usando CTX-145b, em comparação com 2,38% de células CAR+ com controle (sem modelo de doador)).
[0650] A Figura 62 demonstra proporções normais de subconjuntos de células T CD4/CD8 mantidas na fração CAR+ de TRAC-/B2M-/antiCD70(4-1BB coestimulador) de células tratadas com RNPs contendo TRAC e B2M sgRNA e CTX-145b AAV6, sugerindo que a expressão de uma célula T geneticamente modificada que expressa anti-CD70 CAR que possui um domínio coestimulador 4-1 BB não afeta significativamente a proporção de subconjuntos de células T.
Produção eficiente de células CAR-T anti-CD70, de Inativação Tripla PD1, TRAC, B2M, com um domínio coestimulador de 4-1 BB ou CD28
[0651] Este exemplo demonstra inserção eficiente de transgene e inativação de genes simultâneos por Cas9:sgRNA RNP (para indução de quebra de fita dupla) e modelo doador entregue por AAV6 (CTX-145 ou CTX-145b) contendo um construto anti-CD70 CAR em células T humanas primárias. A produção de células T humanas alogênicas é como descrito no Exemplo 24, onde CTX-138 foi substituído por CTX145 (CD28 coestimulador) ou CTX-145b (4-1 BB coestimulador).
[0652] A alta eficiência foi semelhante quando se utiliza modelo doador entregue por AAV6 (comparar CTX-145 e CTX145b) (Figura 63).
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80% das células T manipuladas expressaram o anti-CD70 CAR com ο domínio coestimulador CD28, em que 82% expressaram o anti-CD70 CAR com o domínio coestimulador 4-1 BB.
[0653] A Figura 64 mostra que as proporções normais de subconjuntos de células T CD4/CD8 foram mantidas na fração PD1/TRAC-/B2M-/anti-CD70 CAR+ das células tratadas com sgRNA PD1, TRAC e B2M contendo RNPs e CTX-145b AAV6, sugerindo que a expressão de um anti-CD70 CAR que possui um domínio coestimulador de 4-1 BB em células T geneticamente modificadas não afeta significativamente a proporção de subconjuntos de células T.
Ensaio de Morte Celular no Carcinoma de Células Renais Aderentes
[0654] Para avaliar a capacidade das células T modificadas por CRISPR/Cas9 que expressam um anti-CD70 CAR para matar as linhas celulares derivadas de carcinoma de células renais aderentes (RRC) que expressam CD70, foi elaborado um ensaio de morte celular, como descrito acima. As células TRAC-/B2M-/anti-CD70 CAR+ demonstraram potente morte celular de linhas celulares derivadas de carcinoma de células renais (células A498) após 24 horas de coincubação (Figura 65), no contexto dos domínios coestimuladores CD28 e 41 BB, em comparação com células de teste de controle (células T de controle: TCR+). As células PD1-/TRAC-/B2M-/anti-CD70 CAR+ induziram a morte celular potente semelhante de células A498 com o domínio coestimulador 4-1 BB (em comparação com células KO duplas), mas com menor potência com o domínio coestimulador CD28 (Figura 65).
[0655] A Figura 66 mostra que as células TRAC-/B2M-/anti-CD70 (4-1 BB ou CD28) CAR+ e células PD1 -/ TRAC-/B2M-/anti-CD70 (4-1 BB ou CD28) CAR+ induziram a morte celular potente da linha celular derivada de carcinoma de células renais aderentes (RRC) expressando
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CD70, ACHN na proporção de 3:1 célula T:célula alvo.
Exemplo 19 - Células T anti-BCMA CAR
Inativação mediada por CRISPR/Cas9 de componentes de TCR e MHC I e expressão de construtos BCMA de receptores de antígeno quiméricos
[0656] Este exemplo descreve a produção por CRISPR/Cas9 e AAV6 de células T humanas alogênicas que não têm expressão de TCR, ou TCR e MHC I e expressam um receptor de antígeno quimérico com alvo em cânceres BCMA+.
[0657] A representação esquemática de células CAR-T alogênicas geradas por CRISPR/Cas9 é mostrada na Figura 31 A.
[0658] Similar aos Exemplos 9 e 15 acima, CRISPR/Cas9 foi usado para interromper (inativação [KO]) a sequência de codificação do gene da região constante de TCRa (TRAC). Esta interrupção leva à perda de função de TCR e processa as células T com gene editado não alorreativas e adequadas para o transplante alogênico, minimizando o risco de doença de enxerto versus hospedeiro (GVHD). A quebra de fita dupla do DNA no locus de TRAC foi reparada por reparação direcionada por homologia com um modelo de DNA entregue pelo AAV6 contendo braços de homologia direito e esquerdo para o locus de TRAC que flanqueia um cassete de receptor de antígeno quimérico (-/+ elementos reguladores para expressão de genes). Para reduzir hospedeiro versus enxerto (HVG) (por exemplo: hospedeiro vs CAR-T) e permitir a persistência do produto alogênico CAR-T, o gene B2M foi também interrompido usando componentes CRISPR/Cas9. Juntas, essas edições do genoma resultam em uma célula T com expressão superficial de um CAR (expresso a partir do locus TRAC) com alvo em câncer BCMA+, juntamente com a perda de TCR e MHC I, para reduzir GVHD e HVG, respectivamente. A célula T pode ser referida como uma célula TRAC7B2M7anti-BCMA CAR+.
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[0659] Para certas experiências, descritas nos exemplos a seguir, também foram produzidas e testadas células TRAC-BCMA CAR+ inativadas únicas.
[0660] Um esquema de construtos de plasmídeo de DNA para produção de vírus AAV recombinantes portadores de modelos doadores para facilitar a inserção genômica alvo de cassetes de expressão CAR por HDR de quebras de fita dupla de DNA especifico de sítio evocado de Cas9 é mostrado na Figura 31B.
Tabela 23: Sequências de Componentes do Modelo Doador
SEQ ID NO: Nome de Domínio Comprimento (Pb)
1313 ITR esquerdo (5’ ITR) 145
1314 ITR direito (3’ ITR) 145
1425 BCMA-1 CAR 1512
1426 BCMA-2 CAR 1512
1317 2A 66
1318 EGFP 720
1319 pA 49
1325 TRAC-LHA (800 pb) 800
1326 TRAC-RHA (800 pb) 804
1331 EF1a 1178
[0661] O CTX-153 (SEQ ID NO: 1362) e CTX-155 (SEQ ID NO: 1364) são derivados de CTX-145, mas com a região codificante antiCD70 scFv de CTX-145 é substituída pela região codificante BCMA scFv humana (Figura 31B e Figura 14). O CTX-152 (SEQ ID NO: 1361) e CTX-154 (SEQ ID NO: 1363) diferem de CTX-153 e CTX-155, respectivamente, pela adição das sequências de picornavírus 2A e GFP. CTX-152, CTX-153, CTX-154 e CTX-155, todos contêm braços de homologia que flanqueiam um sítio alvo de Cas9/sgRNA genômico no locus TRAC. CTX-152 e CTX-153 contêm braços de homologia de 800
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302/714 pb, enquanto CTX-154 (SEQ ID NO: 1363) e CTX-155 contêm braços de homologia de 500 pb (Figura 31B). O CTX-152 (SEQ ID NO: 1361) e CTX-154 diferem entre si na orientação das fitas variável pesada (VH) e variável leve (VL) anti-BCMA scFv. O CTX-152 (SEQ ID NO: 1361) contém um construto anti-BCMA CAR (anti-BCMA (sequência nucleotidica (SEQ ID NO: 1425); sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 1451)): CD8 [peptideo sinal]-VH-ligante-VL-CD8[tm]-CD28[dominio coestimulador]-CD3z) com uma sequência de adenilação poli 3’ sintética (pA) cuja expressão é dirigida pelo promotor EF1a. O scFv é construído de tal modo que a fita VH é um terminal amino da fita VL. CTX-154 é semelhante ao CTX-152, no entanto, o construto anti-BCMA CAR (contém um construto anti-BCMA CAR (anti-BCMA (sequência nucleotidica (SEQ ID NO: 1426); sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 1452): CD8[peptídeo sinal]-VL-ligante-VH-CD8[tm]-CD28[domínio coestimulador]-CD3z) mudou a orientação das fitas VH e VL, VL está em um terminal amino em relação a VH.
[0662] As fitas VH e VL que foram usadas para construir anti-BCMA scFvs são BCMA_VH1 (SEQ ID NO: 1523) e BCMA_VL1 (SEQ ID NO: 1525), respetivamente. Essas fitas foram derivadas de anticorpos de camundongos. Uma versão humanizada da sequência VH foi construída (SEQ ID NO: 1524) e duas versões humanizadas da sequência VL foram construídas (SEQ ID NOs: 1526 e 1527). Estes foram utilizados para construir construtos anti-BCMA humanizados scFv BCMA-3, scFv BCMA-4, scFv BCMA-5 e scFv BCMA-6 (SEQ ID NOs: 1503-1506) utilizando o método descrito acima. Qualquer um desses scFvs pode ser usado para construir construtos CAR, como descrito anteriormente. Os construtos scFv CAR humanizados têm a sequência de ligação de GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 1341).
[0663] Os scFv anti-BCMA adicionais foram construídos usando o método descrito acima. Por exemplo, as fitas VH e VL BCMA_VH2 (SEQ
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ID NO: 1528) e BCMA_VL2 (SEQ ID NO: 1529) podem ser usadas para construir anti-BCMA scFvs. Estas fitas variáveis foram usadas para construir os construtos anti-BCMA scFv BCMA-7 (VH-VL; SEQ ID NO: 1507) e scFv BCMA-8 (VL-VH; SEQ ID NO: 1508). Qualquer um desses scFvs pode ser usado para construir construtos CAR, como descrito anteriormente.
[0664] Em outro exemplo, as fitas VH e VL BCMA_VH3 (SEQ ID NO: 1530) e BCMA_VL3 (SEQ ID NO: 1531) foram usadas para construir anti-BCMA scFvs. Especificamente, estas fitas variáveis foram usadas para construir os construtos anti-BCMA scFv BCMA-9 (VH-VL; SEQ ID NO: 1513) e scFv BCMA-10 (VL-VH; SEQ ID NO: 1514). Qualquer um desses scFvs pode ser usado para construir construtos CAR, como descrito anteriormente. As células T CAR anti BCMA foram produzidas com componentes CRISPR/Cas9 e AAV como descrito (aqui). A inserção de transgene em células T primárias humanas via reparação direcionada por homologia (HDR) e inativação genética simultâneas por Cas9:RNA sgRNA foi realizada conforme descrito acima nos Exemplos 8 e 9. As células T humanas primárias foram primeiro eletroporadas com Cas9 ou complexos de RNP Cas9:sgRNA com alvo em TRAC (AGAGCAACAGTGCTGTGGCC (SEQ ID NO: 76); sgRNA (SEQ ID NO: 1343) e B2M1 (GCTACTCTCTCTTTCTGGCC (SEQ ID NO: 417); sgRNA (SEQ ID NO: 1345).
[0665] As sequências de sgRNA podem ser modificadas como se segue: TRAC SEQ ID NO: 1342, B2M SEQ ID NO: 1344.
[0666] A quebra de fita dupla do DNA no locus TRAC foi reparada por reparação direcionada por homologia com um modelo de DNA AAV6-entregue (CTX-152 ou CTX-154).
Edição Múltipla de Alta Eficiência por CRISPR/Cas9 para Produzir Células Anti-BCMA CAR-T
[0667] A edição múltipla resultou em expressão superficial reduzida
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304/714 de TCR e MHC-I, bem como em elevada expressão de CAR. Mais de 60% de células T possuíam todas as três modificações desejadas (TCR/p2M-/anti-BCMA CAR+) ou quatro (TCR-/p2M-/PD1-/anti-BCMA CAR+) (Figura 58A). Eficiências de edição semelhantes foram observadas com inativações duplas ou triplas. As razões de CD4/CD8 permaneceram semelhantes nas células CAR-T anti-BCMA multieditadas (Figura 58B). As células CAR-T anti-BCMA multieditadas permaneceram dependentes das citocinas para crescimento após a edição multi-CRISPR/Cas9 (Figura 58C).
[0668] As seguintes sequências espaçadoras de gRNA foram usadas neste exemplo:
TRAC: AGAGCAACAGUGCUGUGGCC (SEQ ID NO: 152)
B2M: GCUACUCUCUCUUUCUGGCC (SEQ ID NO: 466) PD1: CUGCAGCUUCUCCAACACAU (SEQ ID NO: 1086)
O modelo doador usado neste exemplo foi a SEQ ID NO: 1408 (LHA a RHA de CTX-166), que inclui anti-BCMA CAR compreendendo a SEQ ID NO: 1434.
Células Anti-BCMA CAR-T Multieditadas Mostram Melhores Propriedades Anticâncer
[0669] As células CAR-T anti-BCMA mataram de maneira eficiente e seletiva a linha celular MM que expressa BCMA MM.1 S em um ensaio de morte celular de 4 horas, poupando a linha leucêmica K562 negativa para BCMA (Figura 59A). As diferenças na resposta foram notáveis nas concentrações mais baixas de células T entre multi-edições de inativação dupla e tripla. As células também secretaram seletivamente as citocinas de ativação de células T IFNy e IL-2, que são reguladas positivamente em resposta à indução apenas por células BCMA+ MM.1S (Figura 59B).
PD1 KO Reduz a Expressão do Marcador de Exaustão Lag3 em Cultura in vitro a Longo prazo
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[0670] Não foi observada alteração no marcador de exaustão Lag3 entre as células (TCR-/p2M-/anti-BCMA CAR+) KO dupla ou (TCR/p2M-/PD1-/anti-BCMA CAR+) KO tripla anti-BCMA CAR-T após 1 semana na cultura. No entanto, após quatro (4) semanas de cultura, a expressão de Lag3 foi reduzida nas células anti-BCMA CAR-T KO tripla, indicando que as células com o PD1 KO estavam menos esgotadas.
Tabela 24. Construtos de BCMA de exemplo
Construto s* Construto SEQ ID NO: (ácido nucleico) Modelo doador (ácido nucleico) LHA a RHA CAR SEQ ID NO: (ácido nucleico) CAR SEQ ID NO: (aminoáci do) scFv SEQ ID NO: (ácido nucleico) scFv SEQ ID NO: (aminoácido)
CTX-152 1361 1397 1425 1451 1477 1501
CTX-153 1362 1398 1425 1451 1477 1501
CTX-154 1363 1399 1426 1452 1478 1502
CTX-155 1364 1400 1426 1452 1478 1502
CTX-160 1365 1401 1427 1453 1479 1503
CTX-161 1367 1403 1429 1455 1480 1504
CTX-162 1368 1404 1430 1456 1481 1505
CTX-163 1369 1405 1431 1457 1482 1506
CTX-164 1370 1406 1432 1458 1483 1507
CTX-165 1371 1407 1433 1459 1484 1508
CTX-166 1372 1408 1434 1460 1485 1509
CTX-167 1374 1410 1436 1462 1486 1510
CTX-168 1375 1411 1437 1463 1487 1511
CTX-169 1376 1412 1438 1464 1488 1512
CTX-170 1377 1413 1439 1465 1489 1513
CTX-171 1378 1414 1440 1466 1490 1514
CTX-172 1379 1415 1441 1467 1491 1515
CTX-173 1380 1416 1442 1468 1492 1516
CTX-174 1381 1417 1443 1469 1493 1517
CTX-175 1382 1418 1444 1470 1494 1518
CTX-176 1383 1419 1445 1471 1495 1519
CTX-177 1384 1420 1446 1472 1496 1520
CTX-178 1385 1421 1447 1473 1497 1521
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CTX-179 1386 1422 1448 1474 1498 1522
[0671] Deve ser entendido que, para qualquer um dos construtos fornecidos na Tabela 24, o fragmento scFv do CAR pode ser substituído por qualquer outro fragmento scFv listado na Tabela 24.
Exemplo 25 - Inserção simultânea de transgene mediada por HDR nas células para gerar células TRAC-B2M-BCMA CAR+
[0672] Este exemplo demonstra inserção eficiente de transgene e inativação de genes simultâneos por Cas9:sgRNA RNP (para indução de quebra de fita dupla) e modelo doador entregue por AAV6 (CTX-152 ou CTX-154) contendo um construto BCMA CAR em células T humanas primárias.
[0673] As células T humanas primárias foram ativadas com esferas magnéticas CD3/CD28 (como descrito anteriormente no Exemplo 2). Três dias depois, as esferas de ativação foram removidas. No dia seguinte, as células foram eletroporadas com complexos de RNP, incluindo sgRNAs com alvo em TRAC ou B2M (2 RNPs complexados separadamente). 7 dias após a manipulação, as células foram analisadas por citometria de fluxo, como anteriormente descrito aqui e no Exemplo 2.
[0674] Os guias usados neste exemplo têm como alvo:
TRAC: AGAGCAACAGTGCTGTGGCC (SEQ ID NO: 76); e compreendem TRAC sgRNA (SEQ ID NO: 686)
B2M: GCTACTCTCTCTTTCTGGCC (SEQ ID NO: 417); e compreendem B2M sgRNA (SEQ ID NO: 688)
Os gRNAs utilizados neste Exemplo compreendem a sequências espaçadoras seguintes: espaçador TRAC gRNA (AGAGCAACAGUGCUGUGGCC (SEQ ID NO: 152)); e espaçador B2M gRNA (GCUACUCUCUCUUUCUGGCC (SEQ ID NO: 466)).
[0675] As sequências de sgRNA podem ser modificadas como se segue: TRAC SEQ ID NO: 1342, B2M SEQ ID NO: 1345.
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[0676] A análise FACS demonstrou que 77% de células T foram TRAC-, B2M- a seguir ao tratamento com TRAC sgRNA contem RNP e B2M sgRNA contendo RNP (Figura 32 - painel superior). Além disso, as células editadas pelo gene expressavam o construto CAR, como evidenciado pela expressão positiva de GFP e ligação recombinante ao BCMA (Figura 32 - painéis inferiores).
[0677] A Figura 32 demonstra a produção bem-sucedida de células T humanas únicas sem expressão à superfície de TCR e B2M com expressão simultânea do BCMA CAR de um transgene integrado no locus TRAC usando os métodos descritos acima (TCR7B2M-BCMA CAR+).
Exemplo 21 - Avaliação da função efetora em células T modificadas por CRISPR/Cas9 que expressam um receptor de antígeno quimérico BCMA (CAR)
Ensaio de Morte Celular em Células que Expressam BCMA
[0678] Para avaliar a capacidade das células T TRAC7B2M7antiBCMA CAR+ de matar as linhas celulares em suspensão, foi desenvolvido um ensaio de morte celular baseado em citometria de fluxo. As células T TRAC7B2M7anti-BCMA CAR+ (ver Exemplo 19 para a Tabela de CArs usadas) foram cocultivadas com células da linha celular alvo de plasmacitoma humano RPMI8226 expressando BCMA (ATCC Cat# ATCC-155), células da linha celular U-266 expressando BCMA, ou células da linha celular K562, que não expressam BCMA (coletivamente referidas como células alvo). As células alvo foram marcadas com 5 μΜ de efluor670 (eBiosciences), lavadas e incubadas em coculturas com as células T TRAC7B2M7anti-BCMA CAR+ em razões variáveis (de 0,1:1 a 8:1 células T para células alvo) a 50.000 células alvo por poço de Placa de 96 poços de fundo em U durante a noite. No dia seguinte, os poços foram lavados e o meio foi substituído por 200 μΙ_ de meio contendo uma diluição 1:500 de DAPI 5 mg/mL
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308/714 (Molecular Probes) (para enumerar células mortas/moribundas). Finalmente, 25 μΙ_ de esferas CountBright (Life Technologies) foram adicionados a cada poço. As células foram então processadas por citometria de fluxo.
[0679] As células alvo por pL foram então calculadas a partir dos dados de citometria de fluxo:
Células/pL = ((número de eventos de células alvo ativas)/(número de eventos de esferas)) X ((Contagem de lotes de esferas atribuídas (esferas/50 pL))/(volume de amostra))
O total de células alvo foi calculado multiplicando as células/pL x o volume total de células.
A percentagem de lise celular foi então calculada com a seguinte equação:
% de lise celular = (1-((Número total de células alvo na amostra de teste)/(Número total de células alvo na amostra de controle)) X 100
[0680] As Figuras 33A, Figura 45B e Figura 46B (gráfico da esquerda) mostram que as células T TRAC-/B2M-/anti-BCMA CAR+ mataram seletivamente as células RPMI 8226 em baixas razões de células T para células alvo expressando BCMA; a Figura 46A (gráfico da esquerda) mostra que as células T TRAC-/B2M-/anti-BCMA CAR+ mataram seletivamente células U-266 (ATCC® TIB-196™); e a Figura 46C (gráfico da esquerda) mostra que as células T TRAC-/B2M-/antiBCMA CAR+ não mostraram toxicidade específica para as células K562 (que não possuem expressão de BCMA). Os resultados indicam que as células T modificadas por CRISPR/Cas9 aqui descritas induzem lise celular potente na linha celular de plasmocitoma que expressa BCMA.
Estimulação de interferon gama por células T geneticamente modificadas que expressam um BCMA CAR
[0681] A capacidade das células manipuladas para produzir o
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309/714 interferon gama (IFNy) em uma célula alvo foi analisada utilizando um ensaio ELISA, tal como descrito acima e nos Exemplos 10 e 18.
[0682] A especificidade das células T geneticamente modificadas que expressam um anti-BCMA CAR integrado no gene TRAC foi avaliada em um ensaio ELISA in vitro. O IFNy de sobrenadantes de coculturas celulares foi medido. As células RPMI8226 foram cultivadas com células T geneticamente modificadas que expressam anti-BCMA CAR, ou controles. A Figura 33B demonstra que as células T TRAC' /B2M7anti-BCMA CAR+ (células que expressam CTX152 ou CTX154) secretam níveis mais altos de IFNy quando cultivadas com células RPMI8226 (ATCC Cat# ATCC-155) em comparação com células T que não expressam anti-BCMA CAR (sem RNP/AAV) (na proporção de 0,2:1, 1:1,2:1 e 4:1 de células CAR-T para alvo). De modo semelhante, a Figura 46B (gráfico da direita) e Figura 47B demonstram que células T TRAC7B2M7anti-BCMA CAR+ secretam maiores níveis de IFNy quando cultivadas com células RPMI8226 (ATCC Cat# ATCC-155) em comparação com os controles. A Figura 46A (gráfico à direita) mostra que as células T TRAC7B2M7anti-BCMA CAR+ também secretam níveis mais altos de IFNy quando cultivadas com células U-266. Por outro lado, a Figura 46C (gráfico à direita) e a Figura 47A mostram que as células T TRAC7B2M7anti-BCMA CAR+ não secretam IFNy quando cultivadas com células K562 (células que não expressam BCMA). Assim, não apenas as células T anti-BCMA CAR da presente divulgação produzem IFNy, mas o fazem especificamente na presença de células que expressam BCMA.
Exemplo 22 - Avaliação de Frequências HDR em Células CD19 CAR-T produzidas por CRISPR-Cas9
[0683] Um ensaio de PCR digital de gotículas (ddPCR) foi concebido para medir a eficiência da integração do construto CAR (CTX-138) no locus TRAC. Os iniciadores e sondas utilizados no ensaio
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310/714 ddPCR são mostrados na Tabela 25. As SEQ ID NO: 1554-1556 foram usadas para detectar a integração do construto CAR, e a SEQ ID NO: 1557-1559 foram usadas para amplificar uma região genômica de referência de controle.
[0684] Quarenta (40) ng de DNA genômico foram usados em reações de ddPCR, gotículas foram geradas e depois processadas em um termociclador nas condições mostradas na Tabela 26 e Tabela 27. [0685] A percentagem de células que coraram CD19 CAR+ por citometria de fluxo foi plotada contra a percentagem de células positivas para um construto CAR integrado de 4 células TRAC- B2M- CAR-T doadoras saudáveis (Figura 34). Os resultados ddPCR mostram uma forte correlação entre a expressão do CD19 CAR e frequência HDR (R2 = 0,88), indicando que alcançaram níveis de integração e de expressão elevada específica do sítio do construto CD19 CAR dentro do locus de TRAC de células T utilizando edição de gene CRISPR.
Tabela 25 - Iniciadores e sondas usados no ensaio ddPCR
Iniciadores/Sondas Sequência Locus SEQ ID NO:
EH_TRAC_dPCR_F5 AGAAGGATAAGATGGCGGAGG TRAC 1554
EH_TRAC_dPCR_R5 GCTTTCTGGCGTCCTTAGAA TRAC 1555
EH_TRAC_Sonda_3extrem_2 TCTACCCTCTCATGGCCTAGAAGG TRAC 1556
EH_controle_1 kb_F1 TGGAGTGATTAGGAACATGAGCT Controle 1557
EH_controle_1 kb_R1 AAGCTCAAGCACTTCTAGTTAGAAAC Controle 1558
EH_controle_1 kb_sonda_1 ATTCCACCCCACCTTCACTAAG Controle 1559
Tabela 26. Mistura de PCR
1X
2X gotículas de PCR Supermix 12,5
Iniciador direto (18 uM) 1,25
Iniciador reverso (18 uM) 1,25
Sonda (5 uM) 1,25
Iniciador direto (18 uM) 1,25
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311/714
Iniciador reverso (18 uM) 1,25
Sonda (5 uM) 1,25
H20
Volume da mistura 20
Tabela 26. Condições de PCR
# Ciclos Temp Duração do Ciclo
1 95 C 10 min
40 90 C 30 seg
59 C 1 min
72 C 3 min
1 98 C 10 min
1 4C sempre
Exemplo 23 - Avaliação da função efetora de células T TRAC-/B2M/anti-CD19 CAR+ em uma linha celular B-ALL
[0686] Neste exemplo, avaliaram-se as funções efetoras de células T TRAC-/B2M-/anti-CD19 CAR+ quando cocultivadas com a linha celular B-ALL humana Nalm6.
Ensaio de GranzymeB
[0687] Para avaliar ainda mais as funções efetoras das células T TRAC-/B2M-/anti-CD19 CAR+, os níveis intracelulares de GranzymeB nas células alvo foram medidos em um ensaio de lise celular substituto. A secreção de granzymeB foi avaliada como descrito no Exemplo 18. Células T TRAC-/B2M-/anti-CD19 CAR+ ou células de controle foram cocultivadas com a linha celular Nalm6. Como mostrado na Figura 35 A, as células T TRAC-/B2M-/anti-CD19 CAR+ cocultivadas com a linha celular Nalm6 B-ALL humana na proporção de 4:1 exibem inserção eficiente de GranzymeB, indicando que as células T TRAC-/B2M-/antiCD19 CAR+ podem induzir a lise da linha celular Nalm6 B-ALL positiva
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312/714 para CD19.
Estimulação de interferon gama por células T geneticamente modificadas que expressam um CD19 CAR
[0688] A capacidade das células manipuladas para produzir o interferon gama (IFNy) em uma célula alvo foi analisada utilizando um ensaio ELISA, tal como descrito aqui e no Exemplo 10.
[0689] O IFNyde sobrenadantes de coculturas celulares foi medido. As células T TRAC7B2M7 anti-CD19 CAR+ secretam altos níveis de IFNy quando cultivadas com células Nalm6 positivas para CD19, como mostra a Figura 35 B.
Ensaio de Morte Celular para linhas de células em suspensão
[0690] Para avaliar a capacidade das células T TRAC7B2M7antiCD19 CAR+ CAR+ de matar as linhas celulares em suspensão, foi desenvolvido um ensaio de morte celular baseado em citometria de fluxo. As células foram cocultivadas com a linha celular alvo da leucemia linfoblástica aguda de células B humanas Nalm6 (B-ALL). As células alvo Nalm6 foram marcadas com 5 μΜ de efluor670 (eBiosciences), lavadas e incubadas em coculturas com as células T em razões variáveis (de 0,1:1 a 8:1 células T para células alvo) a 50.000 células alvo por poço de Placa de 96 poços de fundo em U durante a noite. No dia seguinte, os poços foram lavados e o meio foi substituído por 200 pL de meio contendo uma diluição 1:500 de DAPI 5 mg/mL (Molecular Probes) (para enumerar células mortas/moribundas). Finalmente, 25 pL de esferas CountBright (Life Technologies) foram adicionados a cada poço. As células foram então processadas por citometria de fluxo.
[0691] As células por pL foram então calculadas a partir dos dados de citometria de fluxo analisados:
Células/pL = ((número de eventos de células alvo ativas)/(número de eventos de esferas)) X ((Contagem de lotes de esferas atribuídas (esferas/50 pL))/(volume de amostra))
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313/714
O total de células foi calculado multiplicando as células/pL x o volume total de células.
A percentagem de lise celular foi então calculada com a seguinte equação:
% de lise celular = (1-((Número total de células na amostra de teste)/(Número total de células alvo na amostra de controle)) X 100 [0692] A Figura 35C mostra que as células T TRAC-/B2M-/antiCD19 CAR+ mataram seletivamente células Nalm6 em baixas taxas de células T para células alvo. Os resultados indicam que as células T modificadas por CRISPR/Cas9 aqui descritas induzem lise celular potente na linha celular de leucemia linfoblástica aguda que expressa CD19.
Exemplo 24 - Criação de Células anti-CD19 CAR-T de Inativação Tripla PD1, B2M, TRAC
[0693] Este exemplo descreve a produção por CRISPR/Cas9 e AAV6 de células T humanas alogênicas que não têm expressão de TCR, MHC I e PD1 e expressam um receptor de antígeno quimérico com alvo em a cânceres CD19+.
[0694] CRISPR/Cas9 e AAV6 foram usados como acima (ver, por exemplo, Exemplos 8-10 e 12) para criar células T humanas que não têm expressão de TCR, B2M e PD1 com expressão concomitante do locus TRAC usando um construto CAR com alvo em CD19 (CTX-138; SEQ ID NO: 675). Neste exemplo, as células T ativadas foram eletroporadas com 3 complexos RNP distintos contendo sgRNAs com alvo em TRAC (por exemplo: SEQ ID NO: 76), B2M (por exemplo: SEQ ID NO: 417 e PD1 (CTGCAGCTTCTCCAACACAT (SEQ ID NO: 916)). Os gRNAs utilizados neste Exemplo compreendem a sequências espaçadoras seguintes: espaçador TRAC gRNA (AGAGCAACAGUGCUGUGGCC (SEQ ID NO: 152)); espaçador B2M gRNA (GCUACUCUCUCUUUCUGGCC (SEQ ID NO: 466)); e
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314/714 espaçador PD1 gRNA (CUGCAGCUUCUCCAACACAU (SEQ ID NO: 1086)). Cerca de 1 semana após a eletroporação, as células foram deixadas sem tratamento ou tratadas com PMA/ionomicina durante a noite. No dia seguinte, as células foram processadas para citometria de fluxo. A Figura 58A mostra que apenas as células tratadas com PD1 sgRNA contendo RNP não regulam os níveis de PD1 à superfície em resposta a um tratamento noturno de PMA/ionomicinina.
Exemplo 25 - Eficácia das células T CD70 CAR+: o Modelo de Xenoenxerto de Tumor de Carcinoma de Células Renais Subcutâneas em Camundongos NOG
[0695] Camundongos NOG foram injetados subcutaneamente com 5 x 106 células de carcinoma renal A498. No dia 10 os camundongos após a inoculação foram deixados sem tratamento ou injetados por via intravenosa (I.V.) com uma dose terapêutica de 1 x 107 ou 2 x 107 células anti-CD70 CAR-T. Os volumes tumorais foram medidos a cada 2 dias durante o estudo (31 dias). A injeção de células CART anti-CD70 leva à diminuição dos volumes tumorais em ambas as doses (Figura 37). Estes dados mostram que as células anti-CD70 CAR-T podem regredir tumores de câncer de rim CD70+ in vivo.
[0696] A inserção de transgene em células T primárias humanas, via reparação direcionada por homologia (HDR) e inativação de genes simultâneas por Cas9:sgRNA RNA foi realizada conforme descrito acima no Exemplo 16 para produzir células sem expressão de TCR à superfície e expressar simultaneamente um construto CAR anti-CD70 (células TRAC7anti-CD70CAR+). As células T humanas primárias foram primeiro eletroporadas com Cas9 ou complexos de RNP Cas9:sgRNA com alvo em TRAC (AGAGCAACAGTGCTGTGGCC (SEQ ID NO: 76); espaçador TRAC gRNA (AGAGCAACAGUGCUGUGGCC (SEQ ID NO: 152)). A quebra de fita dupla do DNA no locus TRAC foi reparada por reparação direcionada por homologia com um modelo de DNA AAV6
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315/714 entregue (CTX-145; SEQ ID NO: 1359) contendo braços de homologia esquerdo e direito do locus de TRAC que flanqueiam um cassete de receptor de antígeno quimérico (-/+ elementos reguladores para a expressão do gene). As células T modificadas resultantes são TRAC' /anti-CD70CAR+. A capacidade de células T TRAC/ anti-CD70CAR+ modificadas para melhorar a doença causada por uma linha celular de carcinoma renal CD70+ foi avaliada em camundongos NOG usando métodos empregues por Translational Drug Development, LLC (Scottsdale, AZ). Brevemente, doze (12) camundongos fêmeas CIEA NOG (NOD.Cg-Prkdcscidl12rgtm1Sug/ JicTac) de 5 a 8 semanas de idade foram alojados individualmente em gaiolas de microisoladoras ventiladas, mantidas sob condições livres de patógenos, 5-7 dias antes do início do estudo. No dia 1, os camundongos receberam uma inoculação subcutânea de 5x106 células de carcinoma renal A498/camundongo. Os camundongos foram ainda divididos em 3 grupos de tratamento, como mostrado na Tabela 26. No Dia 10 (9 dias após a inoculação com as células A498), o grupo de tratamento 2 e o grupo 3 receberam uma única dose intravenosa de 200μΙ de células TRAC7anti-CD70CAR+ de acordo com a Tabela 26.
Tabela 28. Grupos de tratamento
Grupo Células A498 Tratamento célula T (i.v.) N
1 5x106 células/camundongo Nenhum 8
2 5x106 células/camundongo 1 x107 células/camundongo 3
3 5x106 células/camundongo 2x107 células/camundongo 3
[0697] Volumes tumorais foram medidos a cada 2 dias. No dia 18, o tratamento com as células anti-CD70 CART em ambas as doses começou a mostrar uma diminuição no volume do tumor (Figura 37). O volume do tumor continua a diminuir durante o estudo. Estes dados demonstram que as células anti-CD70 CAR-T podem regredir tumores de câncer de rim CD70+ in vivo.
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Exemplo 26. - Expressão e Citotoxicidade de Anti-BCMA CAR
[0698] As células T anti-BCMA CAR alogênicas foram geradas como descrito acima. A expressão de anti-BCMA CAR foi medida determinando a percentagem de células que se ligavam a BCMA biotinilada subsequentemente detectada por FACS utilizando estreptavidina-APC (Figura 47).
[0699] Os construtos de anti-BCMA CAR foram depois avaliados quanto à sua capacidade de matar células RPMI-8226. Todas as células T anti-BCMA CAR com >10% de expressão eram potencialmente citotóxicas em relação às células efetoras, enquanto as células T alogênicas sem um CAR mostraram pouca citotoxicidade (Figura 48).
Exemplo 27. - Edição Pós-Gene de Manutenção da Integridade das Células
[0700] As células T anti-CD19 CAR alogênicas foram geradas como descrito acima. Aos 21 dias após a edição do gene, foi utilizado o seguinte protocolo para corar as células para expressão do marcador indicado:
Corar as células com o seguinte anticorpo por 30 min a 4 °C.
Fab2 biotina anticamundongo 115-065-006 (Jackson ImmunoRes) 1:5 Lavar as células 1x com tampão FACS.
Adicionar 1 pg de IgG normal de camundongo (Peprotech 500-M00) a 100 pL de células durante 10 min à TA.
Lavar as células 1x com tampão FACS e ressuspender em 100 pL de tampão FACS.
Corar as células com o coquetel seguinte por 15 min à TA.
[0701] Os anticorpos usados neste exemplo são os seguintes:
Tabela 29.
Anticorpo Clone Flúor N- de Catálogo Diluição Para 1
CD4 RPA-T4 BV510 300545 (Biolegend) 1:100 1 uL
CD8 SK1 BV605 344741 (Biolegend) 1:100 1 uL
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317/714
CD45RA HI100 APC- CY7 304128 (Biolegend) 1:100 1 uL
CCR7 G043H7 Pacific Blue 353210 (Biolegend) 1:100 1 uL
PD1 EH12,2H7 PE 329906 (Biolegend) 1:100 1 uL
LAG3 11C3C65 PE-Cy7 369310 (Biolegend) 1:100 1 uL
CD57 HCD57 FITC 322306 (Biolegend) 1:100 1 uL
Estreptavidina APC 17-4317-82 (eBioscience) 1:100 1 uL
[0702] Estes dados mostram que a saúde das células T TRAC/B2M-/anti-CD19+CAR é mantida no dia 21 após a edição do gene (as células se comportam como células normais (não editadas)).
Exemplo 28. Comparação do Genótipo TCR em Células Editadas no Gene Antes e Depois do Enriquecimento
[0703] As células T TRAC-/B2M-/anti-CD19+CAR (TC1) foram produzidas e depletadas usando anticorpos TCRab e o Prodigy System (Miltenyi Biotech). A pureza de > 99,5% de células TCRab' na população total foi alcançada a partir das entradas iniciais de 95,5% de células TCRab-.
Exemplo 29. - Direcionamento Alogênico de Células T anti-BCMA CAR
[0704] Este exemplo demonstra a geração de células alogênicas anti-BCMA CAR-T usando edição de genoma CRISPR/Cas9. A edição de elevada eficiência foi obtida com mais de 60% das células que abrigavam as três edições desejadas. As células CAR-T mantêm uma proporção normal de CD4/CD8, bem como a característica dependência de citocinas, sugerindo que não ocorreu sinalização tônica anormal da inserção ou transformação do CAR devido ao processo de edição. As células CAR-T mataram seletivamente células BCMA+ e secretaram citocinas de ativação de células T após o encontro com células que expressam BCMA. As células CAR-T erradicaram células MM em um
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318/714 modelo subcutâneo de xenoenxerto tumoral RPMI-8226, confirmando atividade potente in vivo.
Edição de Genoma de Elevada Eficiência por CRISPR/Cas9
[0705] As células TRAC7B2M7anti-BCMA CAR+ foram geradas usando os métodos descritos no Exemplo 19. A Figura 52A mostra um gráfico de FACS da expressão de β2Μ e TRAC uma semana após a edição do gene (à esquerda) e um gráfico representativo de FACS da expressão de CAR após a inserção no locus de TRAC (à direita). A Figura 52B é um gráfico que mostra a expressão superficial reduzida de TCR e MHC-I após a edição do gene. Combinado com uma elevada expressão de CAR, isso leva a mais de 60% de células com todas as modificações desejadas (TCR-/ β2M-/anti-BCMA CAR+).
Proporção de Células T CD4+/CD8+ após a Edição
[0706] Em duas semanas após a edição do gene, foi utilizado o seguinte protocolo para corar as células TCR-/ β2M-/anti-BCMA CAR+ para expressão do marcador indicado:
Corar as células com o seguinte anticorpo por 30 min a 4 °C.
BCMA humano biotinilado recombinante (Acro Biosystems Cat:# BC7H82F0 a uma concentração de 100 nM
Lavar as células 1x com tampão FACS e ressuspender em 100 pL de tampão FACS.
Corar as células com o coquetel seguinte por 15 min à TA.
[0707] Os anticorpos utilizados neste exemplo foram CD4 e CD8 (ver Tabela 27). Estes dados mostraram que as células T editadas tinham a mesma proporção CD4+/CD8+ que as células T não editadas, (dados não mostrados).
[0708] Duas semanas após a edição e a inativação do anti-BCMA CAR, soro e/ou citocinas foram removidos do meio de crescimento. Como esperado, na ausência de citocinas, não foi observada proliferação adicional de células T (Figura 53). Além disso, as células T
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319/714 apresentaram proliferação reduzida após cultura in vitro prolongada Células Anti-BCMA CAR T Alogénicas Mostram Atividade Potente e Específica In vitro
[0709] Para avaliar a capacidade das células T TRAC7B2M7antiBCMA CAR+ de matar seletivamente a linha celular de mieloma múltiplo expressando BCMA (MM.1S), foi desenvolvido um ensaio de morte celular baseado em citometria de fluxo, similar ao ensaio descrito no Exemplo 21. As células T TRAC7B2M7anti-BCMA CAR+ (ver Exemplo 19 para a Tabela de CARs usados) foram cocultivadas com células da linha celular do mieloma múltiplo expressando BCMA (MM.1S) ou células da linha celular K562, que não expressam BCMA (coletivamente referidas como células alvo).
[0710] As células alvo por μΙ_ foram então calculadas a partir dos dados de citometria de fluxo:
Células/pL = ((número de eventos de células alvo ativas)/(número de eventos de esferas)) X ((Contagem de lotes de esferas atribuídas (esferas/50 pl_))/(volume de amostra))
O total de células alvo foi calculado multiplicando as células/pL x o volume total de células.
[0711] A percentagem de lise celular foi então calculada com a seguinte equação:
% de lise celular = (1-((Número total de células alvo na amostra de teste)/(Número total de células alvo na amostra de controle)) X 100
A Figura 54A mostra que as células T TRAC-/B2M-/anti-BCMA CAR+ mataram seletivamente células MM.1S, mas não mostraram toxicidade específica para células K562 (que não possuem expressão de BCMA). Os resultados indicam que as células T modificadas por CRISPR/Cas9 aqui descritas induzem lise celular potente na linha celular de mieloma múltiplo que expressa BCMA.
[0712] A capacidade das células T TRAC-/B2M-/anti-BCMA CAR+
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320/714 manipuladas para produzir o interferon gama (IFNy) e IL-2 em resposta às células alvo foi analisada utilizando um ensaio ELISA, tal como descrito acima e nos Exemplos 10, 18 e 21.
[0713] A especificidade das células T geneticamente modificadas que expressam um anti-BCMA CAR integrado no gene TRAC foi avaliada em um ensaio ELISA in vitro. O IFNye IL-2 de sobrenadantes de coculturas celulares foram medidos. As células MM.1S foram cultivadas com células T geneticamente modificadas que expressam anti-BCMA CAR, ou controles. A Figura 54B demonstra que as células T TRAC7B2M7anti-BCMA CAR+ (células que expressam CTX166) secretam níveis mais altos de IFNye IL-2 quando cultivadas com células MM.1 S em comparação com células T que não expressam o anti-BCMA CAR (células T não editadas). Por outro lado, as células T TRAC7B2M’ /anti-BCMA CAR+ não secretam IFNy ou IL-2 quando cultivadas com células K562 (células que não expressam BCMA).
[0714] O ensaio de morte celular foi repetido com a adição da linha celular de mieloma múltiplo H929, que expressa níveis mais altos de BCMA em comparação com MM.1S (Figura 54C). A Figura 54D mostra que a morte acelerada das células H929 foi observada em comparação com as células MM1s (D). A eficiência de morte celular é mostrada usando uma razão de 1:1 efetor para célula T.
[0715] Assim, não apenas as células T anti-BCMA CAR da presente divulgação produzem IFNy e IL-2, mas o fazem especificamente na presença de células que expressam BCMA.
Células Anti-BCMA CAR T Alogênicas Mostram Atividade Potente In vivo
[0716] Neste exemplo, a eficácia de células CAR-T contra o modelo de xenoenxerto de tumor RPMI-8226 subcutâneo em camundongos NOG foi avaliada. Brevemente, 12 camundongos fêmeas CIEA NOG (NOD.Cg-PrkdcscidH2rgtm1Sug/ JicTac) de 5 a 8 semanas de idade foram
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321/714 alojados individualmente em gaiolas de microisoladoras ventiladas, mantidas sob condições livres de patógenos, 5-7 dias antes do início do estudo. No dia 1 os camundongos receberam uma inoculação subcutânea de 10x106 células RPMI-8226/camundongo. Os camundongos foram ainda divididos em dois grupos de tratamento. Dez (10) dias após a inoculação com células RPMI-8226, o primeiro grupo de tratamento (N = 5) recebeu200 μΙ_ de uma única dose intravenosa de 10x106 células T editadas TRAC/B2M/anti-BCMA CAR+, e o segundo grupo de tratamento (N = 5) recebeu 200 μΙ_ de uma única dose intravenosa de 20x106 células T editadas TRAC/B2M/anti-BCMA CAR+.
[0717] O volume do tumor e o peso corporal foram medidos e os camundongos individuais foram sacrificados quando o volume do tumor era > 500 mm3. No dia 18, os dados mostram uma diminuição estatisticamente significativa no volume do tumor em resposta às células T TRAC/B2M/anti-BCMA CAR+ em comparação com camundongos não tratados (Figura 55).
Células anti-BCMA CAR-T de Inativação Tripla PD1, B2M, TRAC
[0718] Este exemplo descreve a produção por CRISPR/Cas9 e AAV6 de células T humanas alogênicas que não têm expressão de TCR, MHC I e PD1 e expressam um receptor de antígeno quimérico com alvo em cânceres BCMA+.
[0719] CRISPR/Cas9 e AAV6 foram usados como acima (ver, por exemplo, Exemplos 8-10 e 12) para criar células T humanas que não têm expressão de TCR, B2M e PD1 com expressão concomitante do locus TRAC usando um construto CAR com alvo em BCMA (SEQ ID NO: 1434). Neste exemplo, as células T ativadas foram eletroporadas com 3 complexos RNP distintos contendo sgRNAs com alvo em TRAC (por exemplo: espaçador TRAC gRNA SEQ ID NO: 152), B2M (por exemplo, espaçador B2M gRNA SEQ ID NO: 466) e PD1 por exemplo,
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322/714 espaçador PD1 gRNA SEQ ID NO: 1086). Cerca de 1 semana após a eletroporação, as células foram deixadas sem tratamento ou tratadas com PMA/ionomicina durante a noite. No dia seguinte, as células foram processadas para citometria de fluxo. A Figura 38 mostra que apenas as células tratadas com PD1 sgRNA contendo RNP não regulam os níveis de PD1 à superfície em resposta a um tratamento noturno de PMA/ionomicinina.
Exemplo 30. - Direcionamento Alogênico de Células T Anti-CD70 CAR
Alta Eficiência de Edição de Gene CRISPR/Cas9 para Produzir Células Anti-CD70 CAR-T Alogênicas
[0720] Este exemplo demonstra inserção eficiente de transgene e inativação de genes simultâneos por Cas9:sgRNA RNP (para indução de quebra de fita dupla) e modelo doador entregue por AAV6 contendo um construto CD70 CAR (SEQ ID NO: 1424) em células T humanas primárias. As experiências descritas aqui são semelhantes às descritas no Exemplo 16.
[0721] As células T humanas primárias foram ativadas com esferas magnéticas CD3/CD28 (como descrito anteriormente no Exemplo 2). Três dias depois, as esferas de ativação foram removidas. No dia seguinte, as células foram eletroporadas com complexos de RNP, incluindo sgRNAs com alvo em TRAC isoladamente ou TRAC + B2M (dois RNPs complexados separadamente). Sete dias após a manipulação, as células foram analisadas por citometria de fluxo, como anteriormente descrito aqui e no Exemplo 2.
[0722] Os guias usados neste exemplo têm como alvo:
TRAC: AGAGCAACAGTGCTGTGGCC (SEQ ID NO: 76); TRAC sgRNA (SEQ ID NO: 686)
B2M: GCTACTCTCTCTTTCTGGCC (SEQ ID NO: 417); TRAC sgRNA (SEQ ID NO: 688).
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[0723] Os gRNAs utilizados neste Exemplo compreendem a sequências espaçadoras seguintes: espaçador TRAC gRNA (AGAGCAACAGUGCUGUGGCC (SEQ ID NO: 152)); e espaçador B2M gRNA (GCUACUCUCUCUUUCUGGCC (SEQ ID NO: 466)). A Figura 56 A mostra que foram alcançadas elevadas taxas de edição nos loci TRAC e β2Μ, resultando na expressão superficial reduzida de TCR e MHC-I. Também foi detectada a integração especifica do sítio altamente eficiente e expressão do anti-CD70 CAR a partir do locus TRAC. Os dados são de três doadores saudáveis. A Figura 56B mostra que a produção de células CAR-T anti-CD70 alogênicas (TCR-p2M-CAR+) preserva as proporções de CD4 e CD8.
Células Anti-CD70 CAR-T Matam Células de Mieloma Múltiplo
[0724] Para avaliar a capacidade das células T TRAC7B2M7antiCD70 CAR+ de matar a linha celular de mieloma múltiplo expressando CD70 (MM.1S), foi desenvolvido um ensaio de morte celular - baseado em citometria de fluxo, similar ao ensaio descrito nos Exemplos 21 e 29. As células T TRAC/B2M/anti-CD70 CAR+ foram cocultivadas com células da linha celular de mieloma múltiplo MM.1s que expressam BCMA. A Figura 57 mostra que as células CAR-T anti-CD70 alogênicas (TCR-p2M-CAR+) mostram citotoxicidade potente contra a linha celular derivada de mieloma múltiplo CD70+ MM.1 S.
Exemplo 31. Comparação de Anti-BCMA (CD28) CAR e Anti-BCMA (4-1 BB) CAR Expressão de CAR
[0725] Células alogênicas T TRAC-/B2M-/anti-BCMA CAR foram geradas como descrito acima, possuindo um domínio coestimulador de CD28 (codificado por CTX-160 ou CTX-166) ou um domínio coestimulador de 4-1 BB (codificado por CTX160b ou CTX166b). A expressão de anti-BCMA CAR foi medida determinando a percentagem de células que se ligavam a BCMA biotinilada subsequentemente
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324/714 detectada por FACS utilizando estreptavidina-APC (Figura 67). Mais de 60% das células expressaram o CAR na superfície celular.
Citotoxicidade
[0726] Para avaliar a capacidade das mesmas células T TRAC' /B2M7anti-BCMA (CD28 v. 4-1 BB) CAR+ de matar seletivamente a linha celular de mieloma múltiplo expressando BCMA (MM.1S), foi desenvolvido um ensaio de morte celular baseado em citometria de fluxo, similar ao ensaio descrito no Exemplo 21. As células T TRAC’ /B2M7anti-BCMA CAR+ foram cocultivadas com células da linha celular de mieloma múltiplo MM.1S que expressam BCMA.
[0727] As células alvo por μΙ_ foram então calculadas a partir dos dados de citometria de fluxo:
Células/pL = ((número de eventos de células alvo ativas)/(número de eventos de esferas)) X ((Contagem de lotes de esferas atribuídas (esferas/50 pl_))/(volume de amostra))
O total de células alvo foi calculado multiplicando as células/pL x o volume total de células.
[0728] A percentagem de lise celular foi então calculada com a seguinte equação:
% de lise celular = (1-((Número total de células alvo na amostra de teste)/(Número total de células alvo na amostra de controle)) X 100 A Figura 68 mostra que todas as células T TRAC-/B2M-/anti-BCMA CAR+ mataram células MM.1S. Os resultados indicam que as células T modificadas por CRISPR/Cas9 aqui descritas induzem lise celular potente na linha celular de mieloma múltiplo que expressa BCMA.
Secreção de Interferon Gama
[0729] A capacidade das células T TRAC-/B2M-/anti-BCMA (CD28 v. 4-1 BB) CAR+ manipuladas para produzir o interferon gama (IFNy) em resposta às células alvo foi analisado utilizando um ensaio ELISA, tal como descrito acima e nos Exemplos 10, 18 e 21.
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[0730] A especificidade das células T geneticamente modificadas foi avaliada em um ensaio ELISA in vitro. O IFNyde sobrenadantes de coculturas celulares foi medido. As células MM.1S foram cultivadas com células T geneticamente modificadas que expressam anti-BCMA CAR, ou controles. A Figura 69 demonstra que as todas as células T TRAC' /B2M7anti-BCMA CAR+ secretam níveis mais altos de IFNy quando cultivadas com células MM.1S em comparação com células T que não expressam o anti-BCMA CAR (células T não editadas). Por outro lado, as células T TRAC7B2M7anti-BCMA CAR+ não secretam IFNyou IL-2 quando cultivadas com células K562 (células que não expressam BCMA).
[0731] Assim, não apenas as células T anti-BCMA CAR da presente divulgação produzem IFNy, mas o fazem especificamente na presença de células que expressam BCMA.
Ensaio de Morte Celular
[0732] Para avaliar a capacidade das células T TRAC7B2M7antiBCMA(4-1BB) CAR+ de matar as linhas celulares em suspensão, foi desenvolvido um ensaio de morte celular baseado em citometria de fluxo. As células T TRAC7B2M7anti-BCMA CAR+ foram cocultivadas com células da linha celular alvo de plasmacitoma humano RPMI-8226 expressando BCMA (ATCC Cat# ATCC-155), células da linha celular U266 expressando BCMA, células da linha celular de mieloma múltiplo H929, ou células da linha celular K562, que não expressam BCMA (coletivamente referidas como células alvo). As células alvo foram marcadas com 5 μΜ efluor670 (eBiosciences), lavadas e incubadas em coculturas com as células T TRAC7B2M7anti-BCMA CAR+ em razões variáveis (de 0,1:1 a 8:1 células T para células alvo) a 50.000 células alvo por poço de Placa de 96 poços de fundo em U durante a noite. No dia seguinte, os poços foram lavados e o meio foi substituído por 200 pL de meio contendo uma diluição 1:500 de DAPI 5 mg/mL (Molecular
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Probes) (para enumerar células mortas/moribundas). Finalmente, 25 μΙ_ de esferas CountBright (Life Technologies) foram adicionados a cada poço. As células foram então processadas por citometria de fluxo.
[0733] As células alvo por pL foram então calculadas a partir dos dados de citometria de fluxo:
Células/pL = ((número de eventos de células alvo ativas)/(número de eventos de esferas)) X ((Contagem de lotes de esferas atribuídas (esferas/50 pL))/(volume de amostra))
O total de células alvo foi calculado multiplicando as células/pL x o volume total de células.
[0734] A percentagem de lise celular foi então calculada com a seguinte equação:
% de lise celular = (1-((Número total de células alvo na amostra de teste)/(Número total de células alvo na amostra de controle)) X 100
A Figura 70 mostra as células T TRAC-/B2M-/anti-BCMA (4-1 BB) CAR+ mataram seletivamente as células RPMI 8226, as células U-266, e células H929, com nenhuma toxicidade específica para células K562 (que não tem expressão de BCMA). Os resultados indicam que as células T modificadas por CRISPR/Cas9 induzem lise celular potente na linha celular de plasmocitoma que expressa BCMA.
Estimulação com Interferon gama e IL-2
[0735] A capacidade das células T TRAC-/B2M-/anti-BCMA (4-1 BB) CAR+ para produzir o interferon gama (IFNy) em uma célula alvo foi analisada utilizando um ensaio ELISA, tal como descrito acima e nos Exemplos 10 e 18.
[0736] A especificidade das células T geneticamente modificadas que expressam um anti-BCMA CAR integrado no gene TRAC foi avaliada em um ensaio ELISA in vitro. O IFNye IL-2 de sobrenadantes de coculturas celulares foram medidos. As células alvo RPMI-8226, U2261, H929 ou K562 foram cultivadas com células T geneticamente
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327/714 modificadas que expressam anti-BCMA CAR, ou controles. As Figuras 73 e 74 demonstram que as células T TRAC7B2M7anti-BCMA CAR+ secretam maiores níveis de IFNy (Figura 71) e IL-2 (Figura 72) quando cultivadas com cada uma das linhas de células alvo, em comparação com células T que não expressam anti-BCMA CAR (sem RNP) (na proporção de 0,5:1,1:1,1,5:1,2:1 e 2,5:1 de células CAR-T para alvo), com a exceção da linha de células K562. Assim, não apenas as células T TRAC-/B2M-/anti-BCMA (4-1 BB) CAR+ da presente divulgação produzem IFNye IL-2, como o fazem especificamente na presença de células que expressam BCMA.
[0737] Estudos semelhantes como acima foram repetidos usando células T TRAC-/B2M-/anti-BCMA (4-1 BB) CAR+ em comparação com células T TRAC-/B2M-/PD-1-/anti-BCMA (4-1 BB) CAR+. As células ensaiadas foram editadas com células MM.1S ou células K562 para citotoxicidade, estimulação de IFN-γ, e estimulação de IL-2. Os resultados estão representados na Figura 74, mostrando que as células editadas induzem lise celular potente especificamente na linha celular K562 que expressa BCMA e produzem IFNye IL-2 especificamente na presença de células que expressam BCMA (Figura 74).
Exemplo 32 - Modelo de Tumor in vivo para Anti-BCMA CAR no contexto de Inativação PD-1
[0738] A eficácia das células T TRAC-/B2M-/anti-BCMA (CD28 coestimulador) CAR+ e células T TRAC7B2M-/PD-1 -/anti-BCMA (CD28 coestimulador) CAR+ contra o modelo de xenoenxerto tumoral RPMI8226 subcutâneo em camundongos NOG foi avaliada. Brevemente, trinta e cinco (35) camundongos fêmeas CIEA NOG (NOD.CgPrkdcscidl 12rgtm1Sug/ JicTac) de 5 a 8 semanas de idade foram alojados individualmente em gaiolas de microisoladoras ventiladas, mantidas sob condições livres de patógenos, 5-7 dias antes do início do estudo. No dia 1 os camundongos receberam uma inoculação subcutânea de
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10x106 células RPMI-8226/camundongo. Dez (10) dias após a inoculação com células RPMI-8226, os camundongos foram divididos em 6 grupos de tratamento (N = 5) e dosados como indicado na Tabela 30.
Tabela 30.
Grupo Célula T CAR Ns de Células T injetadas N
1 N/A N/A 4
2 TRAC-/B2M-/PD1- /CTX160 1 x107 células/camundongo 4
3 TRAC-/B2M-/CTX160 1 x107 células/camundongo 4
4 TRAC-/B2M-/CTX160 2x107 células/camundongo N
5 TRAC-/B2M-/PD1- /CTX166 1 x107 células/camundongo 4
6 TRAC-/B2M-/CTX166 1 x107 células/camundongo 4
7 TRAC-/B2M-/CTX166 2x107 células/camundongo 4
[0739] O volume do tumor e o peso corporal foram medidos e os camundongos individuais foram sacrificados quando o volume do tumor era > 500 mm3. No dia 18, os dados mostram uma diminuição estatisticamente significativa no volume do tumor em resposta às células T TRAC7B2M-/anti-BCMA (CD28 coestimulador) CAR+ T e células T TRAC7B2M-/PD-1-/anti-BCMA (CD28 coestimulador) CAR+, em comparação com camundongos não tratados (Figura 73).
Exemplo 33 - Eficácia de células T TRAC-/B2M-/anti-CD70 CAR+ ou células T TRAC-/B2M-/PD1-/anti-CD70 CAR+, com domínios costimuladores CD28 ou 41 BB: o Modelo de Xenoenxerto de Tumor de Carcinoma de Células Renais Subcutâneas em Camundongos NOG
[0740] Camundongos NOG foram injetados subcutaneamente com 5 x 106 células de carcinoma renal A498. Quando os tumores atingiram ~ 150 mm3, os camundongos foram deixados sem tratamento ou
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329/714 injetados por via intravenosa (I.V.) com uma dose terapêutica de 1 x 107 de células anti-CD70 CAR-T. Os volumes tumorais foram medidos a cada 2 dias durante o estudo. A injeção de células anti-CD70 CART leva à diminuição dos volumes tumorais (Figura 75) antes que os tumores cresçam novamente. Estes dados mostram que as células T TRAC/B2M- ou TRAC7B2M-/PD1- anti-CD70 CAR+, com domínios coestimuladores CD28 ou 41 BB, têm atividade antitumoral semelhante contra tumores de câncer de rim CD70+ in vivo.
[0741] As células T anti-CD70 CAR foram geradas como descrito acima no Exemplo 18. Além disso, o estudo in vivo foi conduzido de maneira semelhante à descrita no Exemplo 25. A capacidade das células T TRAC7B2M- ou TRAC-/B2M-/PD1- anti-CD70CAR+ modificadas, com domínios coestimuladores CD28 ou 41 BB, de melhorar a doença causada por uma linha celular de carcinoma renal CD70+ foi avaliada em camundongos NOG usando métodos empregados pela Translational Drug Development, LLC (Scottsdale, AZ). Brevemente, camundongos fêmeas CIEA NOG (NOD.CgPrkdcscidl 12rgtm1Sug/ JicTac) de 5 a 8 semanas de idade foram alojados individualmente em gaiolas de microisoladoras ventiladas, mantidas sob condições livres de patógenos, 5-7 dias antes do início do estudo. No dia 1, os camundongos receberam uma inoculação subcutânea de 5x106 células de carcinoma renal A498/camundongo. Os camundongos foram ainda divididos em 5 grupos de tratamento, como mostrado na Tabela 31. Quando os tumores atingirem ~ 150 mm3, os grupos de tratamento 2, 3, 4 e 5 receberam uma dose intravenosa única de 200 pL de células TRAC /anti-CD70CAR+, de acordo com a Tabela 31.
Tabela 31. Grupos de tratamento
Grupo Células A498 Tratamento célula T (i.v.) N
1 5x106 Nenhum 12
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células/camundongo
2. CD28, TRAC- B2M- 5x106 células/camundongo 1x107 células/camundongo 5
3. CD28, TRAC- B2M- PD1- 5x106 células/camundongo 1x107 células/camundongo 5
4. 41 BB, TRAC-, B2M- 5x106 células/camundongo 1x107 células/camundongo 5
5. 41 BB, TRAC-, B2M-, PD1- 5x106 células/camundongo 1x107 células/camundongo 5
[0742] Os volumes tumorais foram medidos a cada 2 dias. Estes dados demonstram que as células T TRAC7B2M- ou TRAC7B2M-/PD1 anti-CD70 CAR+, com domínios coestimuladores CD28 ou 41 BB, têm atividade antitumoral semelhante contra tumores de câncer de rim CD70+ in vivo.
[0743] A Figura 75 é um gráfico que representa uma diminuição semelhante no volume do tumor (mm3) após o tratamento de camundongos NOG que foram injetados por via subcutânea com linhas celulares de carcinoma de células renais A498 com células T TRAC/B2M- ou TRAC7B2M-/PD1- anti-CD70 CAR+, com domínios coestimuladores CD28 ou 41 BB. Todos os grupos de camundongos NOG foram injetados com 5x106 células/camundongo. O grupo 1 não recebeu tratamento com células T. Os camundongos no Grupo 2 foram tratados intravenosamente com 1x107células/camundongo de células T TRAC7B2M- anti-CD70 CAR+, com domínio coestimulador CD28, quando os tumores alcançaram -150 mm3. Os camundongos no Grupo 3 foram tratados intravenosamente com 2x107células/camundongo de células T TRAC7B2M-/PD1- anti-CD70 CAR+, com domínio coestimulador CD28, quando os tumores alcançaram -150 mm3. Os camundongos no Grupo 3 foram tratados intravenosamente com 1x107células/camundongo de células T TRAC7B2M- anti-CD70 CAR+,
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331/714 com domínio coestimulador 41 BB, quando os tumores alcançaram -150 mm3. Os camundongos no Grupo 4 foram tratados intravenosamente com 2x107células/camundongo de células T TRAC7B2M-/PD1- antiCD70 CAR+, com domínio coestimulador 41 BB, quando os tumores alcançaram -150 mm3.
Tabela 32. sgRNAs modificados
SEQ ID NO: DESCRIÇÃO SEQUÊNCIA (*: indica um nucleotídeo com uma modificação de 2'-O'metila fosforotioato)
1342 sgRNA modificado TRAC A*G*A*GCAACAGUGCUGUGGCCGUUUUAGAGCUAG AAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCA ACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*U*U*U
1343 sgRNA não modificado TRAC AGAGCAACAGUGCUGUGGCCGUUUUAGAGCUAGAA AUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAAC UUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
1344 sgRNA modificado B2M G*C*U*ACUCUCUCUUUCUGGCCGUUUUAGAGCUAG AAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCA ACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*U*U*U
1345 sgRNA não modificado B2M GCUACUCUCUCUUUCUGGCCGUUUUAGAGCUAGAA AUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAAC UUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
1346 sgRNA modificado AAVS1 G*G*G*GCCACUAGGGACAGGAUGUUUUAGAGCUAG AAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCA ACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*U*U*U
1347 sgRNA não modificado AAVS1 GGGGCCACUAGGGACAGGAUGUUUUAGAGCUAGA AAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAA CUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
1574 sgRNA modificado PD1 C*U*G*CAGCUUCUCCAACACAUGUUUUAGAGCUAG AAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCA ACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*U*U*U
1575 sgRNA não modificado PD1 CUGCAGCUUCUCCAACACAUGUUUUAGAGCUAGAA AUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAAC UUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
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SEQ ID NO: DESCRIÇÃO SEQUÊNCIA (*: indica um nucleotídeo com uma modificação de 2'-O'metila fosforotioato)
1587 sgRNA modificado TRAC G*A*G*AAUCAAAAUCGGUGAAUGUUUUAGAGCUAG AAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCA ACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCU*U*U*U
1588 sgRNA não modificado TRAC GAGAAUCAAAAUCGGUGAAUGUUUUAGAGCUAGAA AUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAAC UUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUUU
Tabela 33.Construtos
Nome Descrição rAAV Tabel a 34 LHA a RHA Tabela 35 Nucleotíd eo de CAR Tabela 36 Aminoácidos de CAR Tabela 37 Núcleo tídeo de scFv Tabela 38 Amino ácidos de scFv Tabela 39
SEQ ID NOs.
CTX-131 Anti-CD19 (GFP) 1348 1387 1316 1338 1333 1334
CTX-132 Anti-CD19 (GFP) 1349 - 1316 1338 1333 1334
CTX-133 Anti-CD19 (GFP) 1350 1388 1316 1338 1333 1334
CTX-134 Anti-CD19 (GFP) 1351 - 1316 1338 1333 1334
CTX-135 Anti-CD19 (GFP) 1352 1389 1316 1338 1333 1334
CTX-136 Anti-CD19 (GFP) 1353 - 1316 1338 1333 1334
CTX-138 Anti-CD19 (sem GFP) 1354 1390 1316 1338 1333 1334
CTX-139 Anti-CD19 (sem 1355 1391 1316 1338 1333 1334
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Nome Descrição rAAV Tabel a 34 LHA a RHA Tabela 35 Nucleotíd eo de CAR Tabela 36 Aminoácidos de CAR Tabela 37 Núcleo tídeo de scFv Tabela 38 Amino ácidos de scFv Tabela 39
GFP)
CTX- 139,1 Anti-CD19 (sem GFP) 1583 1316 1338 1333 1334
CTX- 139,2 Anti-CD19 (sem GFP) 1584 1316 1338 1333 1334
CTX- 139,3 Anti-CD19 (sem GFP) 1585 1316 1338 1333 1334
CTX-140 Anti-CD19 (sem GFP) 1356 1392 1316 1338 1333 1334
CTX-141 Anti-CD19 (sem GFP) 1357 1393 1316 1338 1333 1334
CTX-142 Anti-CD70 (CD70A, sem GFP) 1358 1394 1423 1449 1475 1499
CTX-145 Anti-CD70 (CD70B, sem GFP) 1359 1395 1424 1450 1476 1500
CTX- 145b Anti-CD70 (4-1 BB) 1360 1396 1275 1276 1476 1500
CTX-152 AntiBCMA (BCMA-1, GFP) 1361 1397 1425 1451 1477 1501
CTX-153 Anti- 1362 1398 1425 1451 1477 1501
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Nome Descrição rAAV Tabel a 34 LHA a RHA Tabela 35 Nucleotíd eo de CAR Tabela 36 Aminoácidos de CAR Tabela 37 Núcleo tídeo de scFv Tabela 38 Amino ácidos de scFv Tabela 39
BCMA (BCMA-1, sem GFP)
CTX-154 Anti- BCMA (BCMA-2, GFP) 1363 1399 1426 1452 1478 1502
CTX-155 Anti- BCMA (BCMA-2, sem GFP) 1364 1400 1426 1452 1478 1502
CTX-160 Anti- BCMA 1365 1401 1427 1453 1479 1503
CTX- 160b Anti- BCMA (41BB) 1366 1402 1428 1454 1479 1503
CTX-161 Anti- BCMA 1367 1403 1429 1455 1480 1504
CTX-162 Anti- BCMA 1368 1404 1430 1456 1481 1505
CTX-163 Anti- BCMA 1369 1405 1431 1457 1482 1506
CTX-164 Anti- BCMA 1370 1406 1432 1458 1483 1507
CTX-165 Anti- BCMA 1371 1407 1433 1459 1484 1508
CTX-166 Anti- BCMA 1372 1408 1434 1460 1485 1509
CTX- Anti- 1373 1409 1435 1461 1485 1509
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 392/1851
335/714
Nome Descrição rAAV Tabel a 34 LHA a RHA Tabela 35 Nucleotíd eo de CAR Tabela 36 Aminoácidos de CAR Tabela 37 Núcleo tídeo de scFv Tabela 38 Amino ácidos de scFv Tabela 39
166b BCMA (41BB)
CTX-167 Anti- BCMA 1374 1410 1436 1462 1486 1510
CTX-168 Anti- BCMA 1375 1411 1437 1463 1487 1511
CTX-169 Anti- BCMA 1376 1412 1438 1464 1488 1512
CTX-170 Anti- BCMA 1377 1413 1439 1465 1489 1513
CTX-171 Anti- BCMA 1378 1414 1440 1466 1490 1514
CTX-172 Anti- BCMA 1379 1415 1441 1467 1491 1515
CTX-173 Anti- BCMA 1380 1416 1442 1468 1492 1516
CTX-174 Anti- BCMA 1381 1417 1443 1469 1493 1517
CTX-175 Anti- BCMA 1382 1418 1444 1470 1494 1518
CTX-176 Anti- BCMA 1383 1419 1445 1471 1495 1519
CTX-177 Anti- BCMA 1384 1420 1446 1472 1496 1520
CTX-178 Anti- BCMA 1385 1421 1447 1473 1497 1521
CTX-179 Anti- BCMA 1386 1422 1448 1474 1498 1522
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 393/1851
336/714
Tabela 34.Sequências rAAV
SEQ ID NO: Descrição Sequência
1348 CTX-131 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCG ACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGA GCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACT AGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGAAGCCCAG AGCAGGGCCTTAGGGAAGCGGGACCCTGCTCTG GGCGGAGGAATATGTCCCAGATAGCACTGGGGA CTCTTTAAGGAAAGAAGGATGGAGAAAGAGAAAG GGAGTAGAGGCGGCCACGACCTGGTGAACACCT AGGACGCACCATTCTCACAAAGGGAG I I I I CCAC ACGGACACCCCCCTCCTCACCACAGCCCTGCCA GGACGGGGCTGGCTACTGGCCTTATCTCACAGG TAAAACTGACGCACGGAGGAACAATATAAATTGG GGACTAGAAAGGTGAAGAGCCAAAGTTAGAACTC AGGACCAACTTATTCTGAI I I IG I I I I I CCAAACT GCTTCTCCTCTTGGGAAGTGTAAGGAAGCTGCAG CACCAGGATCAGTGAAACGCACCAGACGGCCGC GTCAGAGCAGCTCAGGTTCTGGGAGAGGGTAGC GCAGGGTGGCCACTGAGAACCGGGCAGGTCACG CATCCCCCCCTTCCCTCCCACCCCCTGCCAAGCT CTCCCTCCCAGGATCCTCTCTGGCTCCATCGTAA GCAAACCTTAGAGGTTCTGGCAAGGAGAGAGATG GCTCCAGGAAATGGGGGTGTGTCACCAGATAAG GAATCTGCCTAACAGGAGGTGGGGGTTAGACCC AATATCAGGAGACTAGGAAGGAGGAGGCCTAAG GATGGGGCI I I ICTGTCACCAGCCACTAGTGGCC GCCAGTGTGATGGATATCTGCAGAATTCGCCCTT ATGGGGATCCGAACAGAGAGACAGCAGAATATG GGCCAAACAGGATATCTGTGGTAAGCAGTTCCTG CCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGTTGGAACAGC AGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTGGTAAGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 394/1851
337/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGAT GGTCCCCAGATGCGGTCCCGCCCTCAGCAGTTT CTAGAGAACCATCAGATGTTTCCAGGGTGCCCCA AGGACCTGAAATGACCCTGTGCCTTATTTGAACT AACCAATCAGTTCGCTTCTCGCTTCTGTTCGCGC GCTTCTGCTCCCCGAGCTCTATATAAGCAGAGCT CGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTGGAGACGCC ATCCACGCTG 1 1 1 1GACCTCCATAGAAGACACCG ACTCTAGAGGGACCATGCTTC 1 1 1 1 GGTTACGTCT CTGTTGCTTTGCGAACTTCCTCATCCAGCGTTCTT GCTGATCCCCGATATTCAGATGACTCAGACCACC AGTAGCTTGTCTGCCTCACTGGGAGACCGAGTAA CAATCTCCTGCAGGGCAAGTCAAGACATTAGCAA ATACCTCAATTGGTACCAGCAGAAGCCCGACGGA ACGGTAAAACTCCTCATCTATCATACGTCAAGGTT GCATTCCGGAGTACCGTCACGA1 1 1 1CAGGTTCT GGGAGCGGAACTGACTATTCCTTGACTATTTCAA ACCTCGAGCAGGAGGACATTGCGACATATTTTTG TCAACAAGGTAATACCCTCCCTTACACTTTCGGA GGAGGAACCAAACTCGAAATTACCGGGTCCACCA GTGGCTCTGGGAAGCCTGGCAGTGGAGAAGGTT CCACTAAAGGCGAGGTGAAGCTCCAGGAGAGCG GCCCCGGTCTCGTTGCCCCCAGTCAAAGCCTCTC TGTAACGTGCACAGTGAGTGGTGTATCATTGCCT GATTATGGCGTCTCCTGGATAAGGCAGCCCCCG CGAAAGGGTCTTGAATGGCTTGGGGTAATATGGG GCTCAGAGACAACGTATTATAACTCCGCTCTCAA AAGTCGCTTGACGATAATAAAAGATAACTCCAAGA GTCAAG 1 1 1 1 CCTTAAAATGAACAGTTTGCAGACT GACGATACCGCTATATATTATTGTGCTAAACATTA TTACTACGGCGGTAGTTACGCGATGGATTATTGG GGGCAGGGGACTTCTGTCACAGTCAGTAGTGCT GCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAAC CGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 395/1851
338/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCT TCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGG GTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTG TGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACG TGCGGCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTT GTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGT AGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCC TCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAA CCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACA GGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACG CTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTA TAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTAT GACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCG GAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCC CAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATA AGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAA GGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGG CCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGAT ACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTC CCAGAGGAAGCGGAGCTACTAACTTCAGCCTGCT GAAGCAGGCTGGAGACGTGGAGGAGAACCCTGG ACCTATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCAC CGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGG CGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGG CGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCT GACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTG CCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTG ACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCC GACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCG CCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCA TCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCG CGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGT GAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAA GGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 396/1851
339/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATG GCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAAC TTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGC GTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACC CCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGAC AACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCA AAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCT GCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCT CGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAATAATAAAAT AAAATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTG G 1 1 1 1 1 1GTGTGACTGTGGGGTGGAGGGGACAGA TAAAAGTACCCAGAACCAGAGCCACATTAACCGG CCCTGGGAATATAAGGTGGTCCCAGCTCGGGGA CACAGGATCCCTGGAGGCAGCAAACATGCTGTC CTGAAGTGGACATAGGGGCCCGGGTTGGAGGAA GAAGACTAGCTGAGCTCTCGGACCCCTGGAAGAT GCCATGACAGGGGGCTGGAAGAGCTAGCACAGA CTAGAGAGGTAAGGGGGGTAGGGGAGCTGCCCA AATGAAAGGAGTGAGAGGTGACCCGAATCCACA GGAGAACGGGGTGTCCAGGCAAAGAAAGCAAGA GGATGGAGAGGTGGCTAAAGCCAGGGAGACGGG GTACTTTGGGGTTGTCCAGAAAAACGGTGATGAT GCAGGCCTACAAGAAGGGGAGGCGGGACGCAA GGGAGACATCCGTCGGAGAAGGCCATCCTAAGA AACGAGAGATGGCACAGGCCCCAGAAGGAGAAG GAAAAGGGAACCCAGCGAGTGAAGACGGCATGG GGTTGGGTGAGGGAGGAGAGATGCCCGGAGAG GACCCAGACACGGGGAGGATCCGCTCAGAGGAC ATCACGTGGTGCAGCGCCGAGAAGGAAGTGCTC CGGAAAGAGCATCCTTGGGCAGCAACACAGCAG AGAGCAAGGGGAAGAGGGAGTGGAGGAAGACG GAACCTGAAGGAGGCGGCGGTAACCACGTGCGG ACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGGAACC CCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 397/1851
340/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
GCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAG GTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGC CTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCA GG
1349 CTX-132 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCG ACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGA GCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACT AGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTACTAGTGGC CGCCAGTGTGATGGATATCTGCAGAATTCGCCCT TATGGGGATCCGAACAGAGAGACAGCAGAATATG GGCCAAACAGGATATCTGTGGTAAGCAGTTCCTG CCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGTTGGAACAGC AGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTGGTAAGC AGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGAT GGTCCCCAGATGCGGTCCCGCCCTCAGCAGTTT CTAGAGAACCATCAGATGTTTCCAGGGTGCCCCA AGGACCTGAAATGACCCTGTGCCTTATTTGAACT AACCAATCAGTTCGCTTCTCGCTTCTGTTCGCGC GCTTCTGCTCCCCGAGCTCTATATAAGCAGAGCT CGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTGGAGACGCC ATCCACGCTG I I I IGACCTCCATAGAAGACACCG ACTCTAGAGGGACCATGCTTC I I I I GGTTACGTCT CTGTTGCTTTGCGAACTTCCTCATCCAGCGTTCTT GCTGATCCCCGATATTCAGATGACTCAGACCACC AGTAGCTTGTCTGCCTCACTGGGAGACCGAGTAA CAATCTCCTGCAGGGCAAGTCAAGACATTAGCAA ATACCTCAATTGGTACCAGCAGAAGCCCGACGGA ACGGTAAAACTCCTCATCTATCATACGTCAAGGTT GCATTCCGGAGTACCGTCACGAI I I ICAGGTTCT GGGAGCGGAACTGACTATTCCTTGACTATTTCAA ACCTCGAGCAGGAGGACATTGCGACATATTTTTG TCAACAAGGTAATACCCTCCCTTACACTTTCGGA GGAGGAACCAAACTCGAAATTACCGGGTCCACCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 398/1851
341/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTGGCTCTGGGAAGCCTGGCAGTGGAGAAGGTT CCACTAAAGGCGAGGTGAAGCTCCAGGAGAGCG GCCCCGGTCTCGTTGCCCCCAGTCAAAGCCTCTC TGTAACGTGCACAGTGAGTGGTGTATCATTGCCT GATTATGGCGTCTCCTGGATAAGGCAGCCCCCG CGAAAGGGTCTTGAATGGCTTGGGGTAATATGGG GCTCAGAGACAACGTATTATAACTCCGCTCTCAA AAGTCGCTTGACGATAATAAAAGATAACTCCAAGA GTCAAG 1 1 1 1 CCTTAAAATGAACAGTTTGCAGACT GACGATACCGCTATATATTATTGTGCTAAACATTA TTACTACGGCGGTAGTTACGCGATGGATTATTGG GGGCAGGGGACTTCTGTCACAGTCAGTAGTGCT GCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAAC CGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACAC CCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCT TCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGG GTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTG TGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACG TGCGGCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTT GTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGT AGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCC TCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAA CCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACA GGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACG CTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTA TAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTAT GACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCG GAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCC CAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATA AGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAA GGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGG CCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGAT ACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTC CCAGAGGAAGCGGAGCTACTAACTTCAGCCTGCT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 399/1851
342/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
GAAGCAGGCTGGAGACGTGGAGGAGAACCCTGG ACCTATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCAC CGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGG CGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGG CGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCT GACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTG CCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTG ACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCC GACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCG CCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCA TCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCG CGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGT GAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAA GGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGA GTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATG GCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAAC TTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGC GTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACC CCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGAC AACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCA AAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCT GCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCT CGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAATAATAAAAT AAAATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTG G I I I I I IGTGTGGGTAACCACGTGCGGACCGAGG CTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCTAGTGA TGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTC GCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCG ACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAG CGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1350 CTX-133 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCG ACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGA GCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 400/1851
343/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGAAGATCCT ATTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGC CCTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAG GCCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCT CTTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTG AGTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAG ATGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGAC TTGCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATC ACTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCA AAGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATC CTCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCT GCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTG ACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1GATTCT CAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGT GTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGG TCTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 401/1851
344/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGCTTC1 1 1 1G GTTACGTCTCTGTTGCTTTGCGAACTTCCTCATCC AGCGTTCTTGCTGATCCCCGATATTCAGATGACT CAGACCACCAGTAGCTTGTCTGCCTCACTGGGAG ACCGAGTAACAATCTCCTGCAGGGCAAGTCAAGA CATTAGCAAATACCTCAATTGGTACCAGCAGAAG CCCGACGGAACGGTAAAACTCCTCATCTATCATA CGTCAAGGTTGCATTCCGGAGTACCGTCACGATT TTCAGGTTCTGGGAGCGGAACTGACTATTCCTTG ACTATTTCAAACCTCGAGCAGGAGGACATTGCGA CATATTTTTGTCAACAAGGTAATACCCTCCCTTAC ACTTTCGGAGGAGGAACCAAACTCGAAATTACCG GGTCCACCAGTGGCTCTGGGAAGCCTGGCAGTG GAGAAGGTTCCACTAAAGGCGAGGTGAAGCTCC AGGAGAGCGGCCCCGGTCTCGTTGCCCCCAGTC AAAGCCTCTCTGTAACGTGCACAGTGAGTGGTGT ATCATTGCCTGATTATGGCGTCTCCTGGATAAGG CAGCCCCCGCGAAAGGGTCTTGAATGGCTTGGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 402/1851
345/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTAATATGGGGCTCAGAGACAACGTATTATAACT CCGCTCTCAAAAGTCGCTTGACGATAATAAAAGA TAACTCCAAGAGTCAAG 1 1 1 1 CCTTAAAATGAACA GTTTGCAGACTGACGATACCGCTATATATTATTGT GCTAAACATTATTACTACGGCGGTAGTTACGCGA TGGATTATTGGGGGCAGGGGACTTCTGTCACAGT CAGTAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTC CCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGC CCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAAC CTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCG CCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGG ACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTG GCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCG TTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCA AAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGA ATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAA AACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTT CGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGA AGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAG AATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCC GCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGG GGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAA GAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACT CCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGA AATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAA AGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACG GCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGC AGGCCCTGCCTCCCAGAGGAAGCGGAGCTACTA ACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCTGGAGACGTGG AGGAGAACCCTGGACCTATGGTGAGCAAGGGCG AGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGG TCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGT TCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCA CCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 403/1851
346/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCT CGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTT CAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGA CTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTC CAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGC AACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAG GGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAG GGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTG GGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACA ACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGG CATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATC GAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTAC CAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTG CTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGT CCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCG ATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGC CGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAA GTAATAATAAAATAAAATCGCTATCCATCGAAGAT GGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAACA AATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAAC AGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCC CAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCT GTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCC AGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTG ATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAA ACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTC TGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCA GATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGG CCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCT GCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTG CTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAG TTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAA TCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGT CACTCATTAACCCGGTAACCACGTGCGGACCGAG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 404/1851
347/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
GCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCTAGT GATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCG CTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGC CCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGT GAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1351 CTX-134 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCG ACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGA GCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACT AGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGGCTCCGGT GCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACA GTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAAT TGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTA AACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCC TTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAG TGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAAC GGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTG TGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTT ATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTGG CTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGG TTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCG CTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGA GGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGC GAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGC TTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATG ACCTGCTGCGACGCI I I I I I ICTGGCAAGATAGT CTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTA TTTCGGI I I I IGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGG CCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGC GGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGA CGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTG GTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCG CCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACC AGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 405/1851
348/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCG GCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCA CACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGT CGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCC GTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GG AGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1 ATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGA GACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAA TTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATC TTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAA G 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCACCA TGCTTC1 1 1 1GGTTACGTCTCTGTTGCTTTGCGAA CTTCCTCATCCAGCGTTCTTGCTGATCCCCGATAT TCAGATGACTCAGACCACCAGTAGCTTGTCTGCC TCACTGGGAGACCGAGTAACAATCTCCTGCAGGG CAAGTCAAGACATTAGCAAATACCTCAATTGGTAC CAGCAGAAGCCCGACGGAACGGTAAAACTCCTC ATCTATCATACGTCAAGGTTGCATTCCGGAGTAC CGTCACGA1 1 1 1CAGGTTCTGGGAGCGGAACTGA CTATTCCTTGACTATTTCAAACCTCGAGCAGGAG GACATTGCGACATATTTTTGTCAACAAGGTAATAC CCTCCCTTACACTTTCGGAGGAGGAACCAAACTC GAAATTACCGGGTCCACCAGTGGCTCTGGGAAG CCTGGCAGTGGAGAAGGTTCCACTAAAGGCGAG GTGAAGCTCCAGGAGAGCGGCCCCGGTCTCGTT GCCCCCAGTCAAAGCCTCTCTGTAACGTGCACAG TGAGTGGTGTATCATTGCCTGATTATGGCGTCTC CTGGATAAGGCAGCCCCCGCGAAAGGGTCTTGA ATGGCTTGGGGTAATATGGGGCTCAGAGACAAC GTATTATAACTCCGCTCTCAAAAGTCGCTTGACGA TAATAAAAGATAACTCCAAGAGTCAAG 1 1 1 1 CCTT AAAATGAACAGTTTGCAGACTGACGATACCGCTA TATATTATTGTGCTAAACATTATTACTACGGCGGT AGTTACGCGATGGATTATTGGGGGCAGGGGACTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 406/1851
349/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTGTCACAGTCAGTAGTGCTGCTGCCTTTGTCCC GGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCC GCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATC GCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCAT GCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGA GGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTG GGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACA GGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTC CGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGG CCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCC CACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGA AG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCA GCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAAT TTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGAT AAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGG TAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTC TACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGG CCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACG ACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGG GTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCA CTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGAGGAAGC GGAGCTACTAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCTG GAGACGTGGAGGAGAACCCTGGACCTATGGTGA GCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGC CCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACG GCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGG GCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTT CATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTG GCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGT GCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAA GCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAA GGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGG ACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 407/1851
350/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
AGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCG AGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCA ACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAA CAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAG AAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCC ACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCG ACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACG GCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGA GCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACG AGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGT GACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGA GCTGTACAAGTAATAATAAAATAAAATCGCTATCC ATCGAAGATGGATGTGTGTTGG I I I I I IGTGTGG GTAACCACGTGCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGT CCTCCCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCA CTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGG CCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGC TTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCG CGCAGCTGCCTGCAGG
1352 CTX-135 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCG ACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGA GCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACT AGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCG I I I IGTAAAG AATATAGGTAAAAAGTGGCAI I I I I I CTTTGGATT TAATTCTTATGGATTTAAGTCAACATGTAI I I ICAA GCCAACAAG I I I IGTTAATAAGATGGCTGCACCC TGCTGCTCCATGCCAGATCCACCACACAGAAAGC AAATGTTCAGTGCATCTCCCTCTTCCTGTCAGAG CTTATAGAGGAAGGAAGACCCCGCAATGTGGAG GCATATTGTATTACAATTAC I I I IAATGGCAAAAA CTGCAGTTAC I I I IGTGCCAACCTACTACATGGTC TGGACAGCTAAATGTCATGTATTTTTCATGGCCCC TCCAGGTATTGTCAGAGTCCTCTTGTTTGGCCTTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 408/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TAGGAAGGCTGTGGGACCCAGCTTTCTTCAACCA GTCCAGGTGGAGGCCTCTGCCTTGAACGTTTCCA AGTGAGGTAAAACCCGCAGGCCCAGAGGCCTCT CTACTTCCTGTGTGGGGTTCAGAAACCCTCCTCC CCTCCCAGCCTCAGGTGCCTGCTTCAGAAAATGG TGAGTCTCTCTCTTATAAAGCCCTCCTTTTTCATC CTAGCATTGGGAACAATGGCCCCAGGGTCCTTAT CTCTAGCAGATG 1 1 1 1 GAAAAAG 1 CA 1 0 1G 1 1 1 1 G C 1 1 1 1 1 1 1 CCAGAAGTAGTAAGTCTGCTGGCCTCC GCCATCTTAGTAAAGTAACAGTCCCATGAAACAAA GATGCTTC1 1 1 1GGTTACGTCTCTGTTGCTTTGCG AACTTCCTCATCCAGCGTTCTTGCTGATCCCCGA TATTCAGATGACTCAGACCACCAGTAGCTTGTCT GCCTCACTGGGAGACCGAGTAACAATCTCCTGCA GGGCAAGTCAAGACATTAGCAAATACCTCAATTG GTACCAGCAGAAGCCCGACGGAACGGTAAAACT CCTCATCTATCATACGTCAAGGTTGCATTCCGGA GTACCGTCACGA1 1 1 1CAGGTTCTGGGAGCGGAA CTGACTATTCCTTGACTATTTCAAACCTCGAGCAG GAGGACATTGCGACATATTTTTGTCAACAAGGTAA TACCCTCCCTTACACTTTCGGAGGAGGAACCAAA CTCGAAATTACCGGGTCCACCAGTGGCTCTGGGA AGCCTGGCAGTGGAGAAGGTTCCACTAAAGGCG AGGTGAAGCTCCAGGAGAGCGGCCCCGGTCTCG TTGCCCCCAGTCAAAGCCTCTCTGTAACGTGCAC AGTGAGTGGTGTATCATTGCCTGATTATGGCGTC TCCTGGATAAGGCAGCCCCCGCGAAAGGGTCTT GAATGGCTTGGGGTAATATGGGGCTCAGAGACAA CGTATTATAACTCCGCTCTCAAAAGTCGCTTGAC GATAATAAAAGATAACTCCAAGAGTCAAG 1 1 1 1 CC TTAAAATGAACAGTTTGCAGACTGACGATACCGC TATATATTATTGTGCTAAACATTATTACTACGGCG GTAGTTACGCGATGGATTATTGGGGGCAGGGGA CTTCTGTCACAGTCAGTAGTGCTGCTGCCTTTGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 409/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACT CCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACC ATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGG CATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATA CGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACAT TTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCCT TTTGTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCA CAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCAT TCCGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTG GGCCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCC CCCACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGT GAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATAT CAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGA ATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTG ATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGG GTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACT CTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAG GCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGAC GACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAG GGTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGC ACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGAGGAAG CGGAGCTACTAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCT GGAGACGTGGAGGAGAACCCTGGACCTATGGTG AGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTG CCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAAC GGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAG GGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAG TTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCT GGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCG TGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAA GCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAA GGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGG ACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGA AGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 410/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCA ACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAA CAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAG AAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCC ACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCG ACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACG GCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGA GCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACG AGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGT GACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGA GCTGTACAAGTAATAATAAAATAAAATCGCTATCC ATCGAAGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGGT GAGTAGGATGGAGTGGAAAGGGTGGTGTGTCTC CAGACCGCTGGAAGGCTTACAGCCTTACCTGGCA CTGCCTAGTGGCACCAAGGAGCCTCATTTACCAG ATGTAAGGAACTGTTTGTGCTATGTTAGGGTGAG GGATTAGAGCTGGGGACTAAAGAAAAAGATAGGC CACGGGTGCCTGGGAGAGCGTTCGGGGAGCAG GCAAAGAAGAGCAGTTGGGGTGATCATAGCTATT GTGAGCAGAGAGGTCTCGCTACCTCTAAGTACGA GCTCATTCCAACTTACCCAGCCCTCCAGAACTAA CCCAAAAGAGACTGGAAGAGCGAAGCTCCACTC CTTG 1 1 1 1 GAAGAGACCAGATACTTGCGTCCAAA CTCTGCACAGGGCATATATAGCAATTCACTATCTT TGAGACCATAAAACGCCTCGTAATTTTTAGTCCTT TTCAAGTGACCAACAACTTTCAGTTTATTTCA1 1 1 1 TTTGAAGCAAGATGGATTATGAATTGATAAATAAC CAAGAGCATTTCTGTATCTCATATGAGATAAATAA TACCAAAAAAAGTTGCCATTTATTGTCAGATACTG TGTAAAGAAAAAATTATTTAGACGTGTTAACTGGT TTAATCCTACTTCTGCCTAGGAAGGAAGGTGTTAT ATCCTC 1 1 1 1 1AAAA1 1 0 1 1 1 1 1AA1 1 1 1 GACTATAT AAACTGATAAGGTAACCACGTGCGGACCGAGGCT GCAGCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCTAGTGATG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 411/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
GAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCG CTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGA CGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGC GAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1353 CTX-136 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCG ACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGA GCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACT AGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTATGCTTCTTT TGGTTACGTCTCTGTTGCTTTGCGAACTTCCTCAT CCAGCGTTCTTGCTGATCCCCGATATTCAGATGA CTCAGACCACCAGTAGCTTGTCTGCCTCACTGGG AGACCGAGTAACAATCTCCTGCAGGGCAAGTCAA GACATTAGCAAATACCTCAATTGGTACCAGCAGA AGCCCGACGGAACGGTAAAACTCCTCATCTATCA TACGTCAAGGTTGCATTCCGGAGTACCGTCACGA I I I ICAGGTTCTGGGAGCGGAACTGACTATTCCT TGACTATTTCAAACCTCGAGCAGGAGGACATTGC GACATATTTTTGTCAACAAGGTAATACCCTCCCTT ACACTTTCGGAGGAGGAACCAAACTCGAAATTAC CGGGTCCACCAGTGGCTCTGGGAAGCCTGGCAG TGGAGAAGGTTCCACTAAAGGCGAGGTGAAGCT CCAGGAGAGCGGCCCCGGTCTCGTTGCCCCCAG TCAAAGCCTCTCTGTAACGTGCACAGTGAGTGGT GTATCATTGCCTGATTATGGCGTCTCCTGGATAA GGCAGCCCCCGCGAAAGGGTCTTGAATGGCTTG GGGTAATATGGGGCTCAGAGACAACGTATTATAA CTCCGCTCTCAAAAGTCGCTTGACGATAATAAAA GATAACTCCAAGAGTCAAG I I I I CCTTAAAATGAA CAGTTTGCAGACTGACGATACCGCTATATATTATT GTGCTAAACATTATTACTACGGCGGTAGTTACGC GATGGATTATTGGGGGCAGGGGACTTCTGTCACA GTCAGTAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTC TCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 412/1851
355/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCA ACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCC GCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTG GACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTT GGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTC GTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTC AAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATG AATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGA AAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACT TCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCG AAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACA GAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGC CGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGG GGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGA AGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAAC TCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAG AAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAA AAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTAC GGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATG CAGGCCCTGCCTCCCAGAGGAAGCGGAGCTACT AACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCTGGAGACGTG GAGGAGAACCCTGGACCTATGGTGAGCAAGGGC GAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTG GTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAG TTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCC ACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCA CCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCC TCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTT CAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGA CTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTC CAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGC AACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAG GGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAG GGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 413/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
GGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACA ACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGG CATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATC GAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTAC CAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTG CTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGT CCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCG ATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGC CGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAA GTAATAATAAAATAAAATCGCTATCCATCGAAGAT GGATGTGTGTTGG I I I I I IGTGTGGGTAACCACG TGCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAG GAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTC TGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGAC CAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGG CGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCC TGCAGG
1354 CTX-138 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 414/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 415/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGCTTC1 1 1 1GGTTACGTCTCTGTTGCTTTGCG AACTTCCTCATCCAGCGTTCTTGCTGATCCCCGA TATTCAGATGACTCAGACCACCAGTAGCTTGTCT GCCTCACTGGGAGACCGAGTAACAATCTCCTGCA GGGCAAGTCAAGACATTAGCAAATACCTCAATTG GTACCAGCAGAAGCCCGACGGAACGGTAAAACT CCTCATCTATCATACGTCAAGGTTGCATTCCGGA GTACCGTCACGA1 1 1 1CAGGTTCTGGGAGCGGAA CTGACTATTCCTTGACTATTTCAAACCTCGAGCAG GAGGACATTGCGACATATTTTTGTCAACAAGGTAA TACCCTCCCTTACACTTTCGGAGGAGGAACCAAA CTCGAAATTACCGGGTCCACCAGTGGCTCTGGGA AGCCTGGCAGTGGAGAAGGTTCCACTAAAGGCG AGGTGAAGCTCCAGGAGAGCGGCCCCGGTCTCG TTGCCCCCAGTCAAAGCCTCTCTGTAACGTGCAC AGTGAGTGGTGTATCATTGCCTGATTATGGCGTC TCCTGGATAAGGCAGCCCCCGCGAAAGGGTCTT GAATGGCTTGGGGTAATATGGGGCTCAGAGACAA CGTATTATAACTCCGCTCTCAAAAGTCGCTTGAC GATAATAAAAGATAACTCCAAGAGTCAAG 1 1 1 1CC TTAAAATGAACAGTTTGCAGACTGACGATACCGC TATATATTATTGTGCTAAACATTATTACTACGGCG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 416/1851
359/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTAGTTACGCGATGGATTATTGGGGGCAGGGGA CTTCTGTCACAGTCAGTAGTGCTGCTGCCTTTGT CCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACT CCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACC ATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGG CATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATA CGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACAT TTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCCT TTTGTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCA CAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCAT TCCGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTG GGCCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCC CCCACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGT GAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATAT CAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGA ATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTG ATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGG GTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACT CTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAG GCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGAC GACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAG GGTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGC ACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAA TAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTT GG 1 1 1 1 1 1 GTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTG CATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCA GAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCA GCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTC AGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTC AATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCG GCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACT AAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAG AATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGT GGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 417/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
CTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTC AGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTC ATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTAT TTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCA CTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCA CCAATCACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACC AGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATG AGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTT GGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCA AATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGG TTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAG GGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGAT ACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTA TAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGG TAACCACGTGCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTC CTCCCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCAC TCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGC CGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTT TGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGC GCAGCTGCCTGCAGG
1355 CTX-139 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 418/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCA GAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTG GGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAG AGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGAT GTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTG GGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGT GAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGA ACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGG CCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGC CTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGTGATTC TTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGG AGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTC GCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCG CTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCT TCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTA GCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCT 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCC AAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGC CGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGC GCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCG CGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAA GCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCG CCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGG CTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 419/1851
362/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGC TCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGG GCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCC TTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCA CGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATT AGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTTTAGG TTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGTTTCCC CACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCA GCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGC CCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGC CTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTT CAGGTGTCGTGACCACCATGCTTC1 1 1 1GGTTAC GTCTCTGTTGCTTTGCGAACTTCCTCATCCAGCG TTCTTGCTGATCCCCGATATTCAGATGACTCAGAC CACCAGTAGCTTGTCTGCCTCACTGGGAGACCGA GTAACAATCTCCTGCAGGGCAAGTCAAGACATTA GCAAATACCTCAATTGGTACCAGCAGAAGCCCGA CGGAACGGTAAAACTCCTCATCTATCATACGTCA AGGTTGCATTCCGGAGTACCGTCACGA1 1 1 1CAG GTTCTGGGAGCGGAACTGACTATTCCTTGACTAT TTCAAACCTCGAGCAGGAGGACATTGCGACATAT 1 1 1 1 GTCAACAAGGTAATACCCTCCCTTACACTTT CGGAGGAGGAACCAAACTCGAAATTACCGGGTC CACCAGTGGCTCTGGGAAGCCTGGCAGTGGAGA AGGTTCCACTAAAGGCGAGGTGAAGCTCCAGGA GAGCGGCCCCGGTCTCGTTGCCCCCAGTCAAAG CCTCTCTGTAACGTGCACAGTGAGTGGTGTATCA TTGCCTGATTATGGCGTCTCCTGGATAAGGCAGC CCCCGCGAAAGGGTCTTGAATGGCTTGGGGTAAT ATGGGGCTCAGAGACAACGTATTATAACTCCGCT CTCAAAAGTCGCTTGACGATAATAAAAGATAACTC CAAGAGTCAAG 1 1 1 1 CCTTAAAATGAACAGTTTGC AGACTGACGATACCGCTATATATTATTGTGCTAAA CATTATTACTACGGCGGTAGTTACGCGATGGATT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 420/1851
363/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
ATTGGGGGCAGGGGACTTCTGTCACAGTCAGTA GTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGC CAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCC GACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTT AGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCC GGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTC GCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGG GTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCGTTATT ACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCG GAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGA CTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTA CCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGC GTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCA GACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAG CTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGG AGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAG ACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGA ATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAA GGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGT ATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCAC GATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCA AAGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCT GCCTCCCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGA AGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGC AACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAA CAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCA GCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAG GCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTG CCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCT CTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACC AAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTG TTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAG CAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGT GGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 421/1851
364/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
CTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTAC TGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCA AGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAA AATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCA GTCACTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCC GGCACATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGG AATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGG AAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCA GCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAAT GTG I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTT CAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGA AATGCTACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGC AGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGA GCTCAATGAGAAAGGTAACCACGTGCGGACCGA GGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCTAG TGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCG CTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGC CCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGT GAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1356 CTX-140 TTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCA CTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCC CGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGC GAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCA CTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTAATCCTC CGGCAAACCTCTGTTTCCTCCTCAAAAGGCAGGA GGTCGGAAAGAATAAACAATGAGAGTCACATTAA AAACACAAAATCCTACGGAAATACTGAAGAATGA GTCTCAGCACTAAGGAAAAGCCTCCAGCAGCTCC TGCTTTCTGAGGGTGAAGGATAGACGCTGTGGCT CTGCATGACTCACTAGCACTCTATCACGGCCATA TTCTGGCAGGGTCAGTGGCTCCAACTAACATTTG TTTGGTACTTTACAGTTTATTAAATAGATGTTTATA TGGAGAAGCTCTCATTTCTTTCTCAGAAGAGCCT GGCTAGGAAGGTGGATGAGGCACCATATTCATTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 422/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGCAGGTGAAATTCCTGAGATGTAAGGAGCTGCT GTGACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGG TAGTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTT ATAGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCT CCTGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCA ACATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAG CCTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGAT GTACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGC CTGCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGG 1 1 1 1 GAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGC AGTATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCT TGAGTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTC ACTGAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAG CTTGTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGA GCAGCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAA GCATGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGC CCCGCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCA GCCTGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCA TGTCCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATC GGAAGCGGAGCTACTAACTTCAGCCTGCTGAAGC AGGCTGGAGACGTGGAGGAGAACCCTGGACCCA TGCTTC1 1 1 1GGTTACGTCTCTGTTGCTTTGCGAA CTTCCTCATCCAGCGTTCTTGCTGATCCCCGATAT TCAGATGACTCAGACCACCAGTAGCTTGTCTGCC TCACTGGGAGACCGAGTAACAATCTCCTGCAGGG CAAGTCAAGACATTAGCAAATACCTCAATTGGTAC CAGCAGAAGCCCGACGGAACGGTAAAACTCCTC ATCTATCATACGTCAAGGTTGCATTCCGGAGTAC CGTCACGA1 1 1 1CAGGTTCTGGGAGCGGAACTGA CTATTCCTTGACTATTTCAAACCTCGAGCAGGAG GACATTGCGACATATTTTTGTCAACAAGGTAATAC CCTCCCTTACACTTTCGGAGGAGGAACCAAACTC GAAATTACCGGGTCCACCAGTGGCTCTGGGAAG CCTGGCAGTGGAGAAGGTTCCACTAAAGGCGAG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 423/1851
366/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTGAAGCTCCAGGAGAGCGGCCCCGGTCTCGTT GCCCCCAGTCAAAGCCTCTCTGTAACGTGCACAG TGAGTGGTGTATCATTGCCTGATTATGGCGTCTC CTGGATAAGGCAGCCCCCGCGAAAGGGTCTTGA ATGGCTTGGGGTAATATGGGGCTCAGAGACAAC GTATTATAACTCCGCTCTCAAAAGTCGCTTGACGA TAATAAAAGATAACTCCAAGAGTCAAG 1 1 1 1 CCTT AAAATGAACAGTTTGCAGACTGACGATACCGCTA TATATTATTGTGCTAAACATTATTACTACGGCGGT AGTTACGCGATGGATTATTGGGGGCAGGGGACTT CTGTCACAGTCAGTAGTGCTGCTGCCTTTGTCCC GGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCC GCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATC GCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCAT GCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGA GGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTG GGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACA GGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTC CGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGG CCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCC CACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGA AG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCA GCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAAT TTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGAT AAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGG TAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTC TACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGG CCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACG ACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGG GTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCA CTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAAT AAAATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTG G 1 1 1 1 1 1GTGTGCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 424/1851
367/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TTCACCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACA AAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAA CTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAG CAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGAC TTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTAT TCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAG GGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTG CTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTG GTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTC TCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTT ACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCA GAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAA GGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCA GTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTT GCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGG CCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCC TTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAG CTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAAC CCACCAATCACTGATTGTGCCGGCACATGAATGC ACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAG ATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTA GTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGT CCAAATAACTTCAGATTGGAATGTG 1 1 1 1AACTCA GGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGT CAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAA GATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACC CTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAA GGAGAAGAGCAGCAGGCATGAGTTGAATGAAGG AGGCAGGGCCGGGTCACAGGGTAACCACGTGCG GACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGGAAC CCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCG CGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAA GCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGG CCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 425/1851
368/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTGGCCAA
1357 CTX-141 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCG ACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGA GCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACT AGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTAATCCTCCG GCAAACCTCTGTTTCCTCCTCAAAAGGCAGGAGG TCGGAAAGAATAAACAATGAGAGTCACATTAAAAA CACAAAATCCTACGGAAATACTGAAGAATGAGTC TCAGCACTAAGGAAAAGCCTCCAGCAGCTCCTGC TTTCTGAGGGTGAAGGATAGACGCTGTGGCTCTG CATGACTCACTAGCACTCTATCACGGCCATATTCT GGCAGGGTCAGTGGCTCCAACTAACATTTGTTTG GTACTTTACAGTTTATTAAATAGATGTTTATATGGA GAAGCTCTCATTTCTTTCTCAGAAGAGCCTGGCT AGGAAGGTGGATGAGGCACCATATTCAI I I I GCA GGTGAAATTCCTGAGATGTAAGGAGCTGCTGTGA CTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTAGT GCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTATAG TTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCCTG GTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAACAT ACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGCCT AAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATGTA CAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCTG CCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGG I I I I GAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGTA TTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGAG TGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACTG AAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTTG TGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCAG CTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCAT GAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCCG CCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCCT GGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 426/1851
369/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCGGA AGCGGAGCTACTAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGG CTGGAGACGTGGAGGAGAACCCTGGACCCATGC TTC 1 1 1 1 GGTTACGTCTCTGTTGCTTTGCGAACTT CCTCATCCAGCGTTCTTGCTGATCCCCGATATTC AGATGACTCAGACCACCAGTAGCTTGTCTGCCTC ACTGGGAGACCGAGTAACAATCTCCTGCAGGGC AAGTCAAGACATTAGCAAATACCTCAATTGGTACC AGCAGAAGCCCGACGGAACGGTAAAACTCCTCAT CTATCATACGTCAAGGTTGCATTCCGGAGTACCG TCACGA1 1 1 1CAGGTTCTGGGAGCGGAACTGACT ATTCCTTGACTATTTCAAACCTCGAGCAGGAGGA CATTGCGACATATTTTTGTCAACAAGGTAATACCC TCCCTTACACTTTCGGAGGAGGAACCAAACTCGA AATTACCGGGTCCACCAGTGGCTCTGGGAAGCCT GGCAGTGGAGAAGGTTCCACTAAAGGCGAGGTG AAGCTCCAGGAGAGCGGCCCCGGTCTCGTTGCC CCCAGTCAAAGCCTCTCTGTAACGTGCACAGTGA GTGGTGTATCATTGCCTGATTATGGCGTCTCCTG GATAAGGCAGCCCCCGCGAAAGGGTCTTGAATG GCTTGGGGTAATATGGGGCTCAGAGACAACGTAT TATAACTCCGCTCTCAAAAGTCGCTTGACGATAAT AAAAGATAACTCCAAGAGTCAAG 1 1 1 1 CCTTAAAA TGAACAGTTTGCAGACTGACGATACCGCTATATAT TATTGTGCTAAACATTATTACTACGGCGGTAGTTA CGCGATGGATTATTGGGGGCAGGGGACTTCTGT CACAGTCAGTAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTA TTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCC CGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCT CTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCG ACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGG CTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTC CGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTC ACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 427/1851
370/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTA CATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGAC AAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGA GACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1 CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAG GACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGG ACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACG CCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACC CCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAAT GAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTAC TCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGG GGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGA GTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCA TATGCAGGCCCTGCCTCCCAGAGGAAGCGGAGC TACTAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCTGGAGAC GTGGAGGAGAACCCTGGACCTATGGTGAGCAAG GGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATC CTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCAC AAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGAT GCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCT GCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCA CCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGT GCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGC ACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTA CGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGAC GGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTC GAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTG AAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATC CTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGC CACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGA ACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAA CATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCA CTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCC CGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 428/1851
371/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAA GCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGAC CGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCT GTACAAGTAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGA TGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGCCAGTGACA AGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTCAA ACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTA TATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCT ATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGA GCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTT CAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCC CCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCG CAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTT CTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACT CCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCC ACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCC TTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAA AAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCA CGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCC TGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCT TACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCT CCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCA AAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACG CAGTCACTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGC CGGCACATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAG GAATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAG GAAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTC AGCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAA TGTG 1 1 1 1AACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCT TCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGA AATGCTACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGC AGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGA GCTCAATGAGAAAGGAGAAGAGCAGCAGGCATG AGTTGAATGAAGGAGGCAGGGCCGGGTCACAGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 429/1851
372/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
GTAACCACGTGCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGT CCTCCCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCA CTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGG CCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGC TTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCG CGCAGCTGCCTGCAGG
1358 CTX-142 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGAI I I I GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 430/1851
373/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 431/1851
374/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AAG 1 1 1 1 1 1 1 C 1 1 CCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGA TATAGTTATGACCCAATCACCCGATAGTCTTGCG GTAAGCCTGGGGGAGCGAGCAACAATAAACTGT CGGGCATCAAAATCCGTCAGTACAAGCGGGTATT CATTCATGCACTGGTATCAACAGAAACCCGGTCA GCCACCCAAGCTCCTGATTTATCTTGCGTCTAATC TTGAGTCCGGCGTCCCAGACCGG 1 1 1 1CCGGCTC CGGGAGCGGCACGGA1 1 1 1ACTCTTACTATTTCT AGCCTTCAGGCCGAAGATGTGGCGGTATACTACT GCCAGCATTCAAGGGAAGTTCCTTGGACGTTCGG TCAGGGCACGAAAGTGGAAATTAAAGGCGGGGG GGGATCCGGCGGGGGAGGGTCTGGAGGAGGTG GCAGTGGTCAGGTCCAACTGGTGCAGTCCGGGG CAGAGGTAAAAAAACCCGGCGCGTCTGTTAAGGT TTCATGCAAGGCCAGTGGATATACTTTCACCAATT ACGGAATGAACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGTC AAGGCCTGAAATGGATGGGATGGATAAACACGTA CACCGGTGAACCTACCTATGCCGATGCCTTTAAG GGTCGGGTTACGATGACGAGAGACACCTCCATAT CAACAGCCTACATGGAGCTCAGCAGATTGAGGAG TGACGATACGGCAGTCTATTACTGTGCAAGAGAC TACGGCGATTATGGCATGGATTACTGGGGCCAG GGCACTACAGTAACCGTTTCCAGCAGTGCTGCTG CCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGAC CACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGC TCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGC CCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGC TGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGAT ATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCG GCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTAT TGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGT TGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 432/1851
375/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACCCT ATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAGGT CCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTC CGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAA CGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGA CGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGA AATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAA GAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGA TGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGA TGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1 GTGTGTGGAGCAACAAATC TGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGC ATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAG GTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTT CCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAG CTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGG TGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCT CTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCA GTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAA GAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAG CCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTG CCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTC TAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCC TCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTT CCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTC ATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCACAT GAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAA AGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACC ATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGA AAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTG 1 1 1 1A ACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 433/1851
376/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
AAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTAC TTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGA GGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAAT GAGAAAGGTAACCACGTGCGGACCGAGGCTGCA GCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCTAGTGATGGA GTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTC ACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGC CCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAG CGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1359 CTX-145 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 434/1851
377/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCGA1 1 1 1 GA 1 1 CTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 435/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCA GGTCCAGTTGGTGCAAAGCGGGGCGGAGGTGAA AAAACCCGGCGCTTCCGTGAAGGTGTCCTGTAAG GCGTCCGGTTATACGTTCACGAACTACGGGATGA ATTGGGTTCGCCAAGCGCCGGGGCAGGGACTGA AATGGATGGGGTGGATAAATACCTACACCGGCGA ACCTACATACGCCGACGC1 1 1 1AAAGGGCGAGTC ACTATGACGCGCGATACCAGCATATCCACCGCAT ACATGGAGCTGTCCCGACTCCGGTCAGACGACA CGGCTGTCTACTATTGTGCTCGGGACTATGGCGA TTATGGCATGGACTACTGGGGTCAGGGTACGACT GTAACAGTTAGTAGTGGTGGAGGCGGCAGTGGC GGGGGGGGAAGCGGAGGAGGGGGTTCTGGTGA CATAGTTATGACCCAATCCCCAGATAGTTTGGCG GTTTCTCTGGGCGAGAGGGCAACGATTAATTGTC GCGCATCAAAGAGCGTTTCAACGAGCGGATATTC 1 1 1 1ATGCATTGGTACCAGCAAAAACCCGGACAA CCGCCGAAGCTGCTGATCTACTTGGCTTCAAATC TTGAGTCTGGGGTGCCGGACCGA1 1 1 1CTGGTAG TGGAAGCGGAACTGACTTTACGCTCACGATCAGT TCACTGCAGGCTGAGGATGTAGCGGTCTATTATT GCCAGCACAGTAGAGAAGTCCCCTGGACCTTCG GTCAAGGCACGAAAGTAGAAATTAAAAGTGCTGC TGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCG ACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCC GCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTC GCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGT GCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTG ATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 436/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGGCGTCCI 1 1 1G1TGTCACTCGTTATTACTTTGT ATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAG GTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTC GCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAAC CCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAG GTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCT CCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATA ACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATG ACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGG AAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCA AGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAG ATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGA TGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1 GTGTGTGGAGCAACAAATC TGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGC ATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAG GTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTT CCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAG CTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGG TGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCT CTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCA GTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAA GAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAG CCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTG CCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTC TAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCC TCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTT CCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTC ATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCACAT GAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAA AGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 437/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
ATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGA AAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IA ACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACA AAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTAC TTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGA GGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAAT GAGAAAGGTAACCACGTGCGGACCGAGGCTGCA GCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCTAGTGATGGA GTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTC ACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGC CCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAG CGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1360 CTX-145b CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 438/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 439/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCA GGTCCAGTTGGTGCAAAGCGGGGCGGAGGTGAA AAAACCCGGCGCTTCCGTGAAGGTGTCCTGTAAG GCGTCCGGTTATACGTTCACGAACTACGGGATGA ATTGGGTTCGCCAAGCGCCGGGGCAGGGACTGA AATGGATGGGGTGGATAAATACCTACACCGGCGA ACCTACATACGCCGACGC1 1 1 1AAAGGGCGAGTC ACTATGACGCGCGATACCAGCATATCCACCGCAT ACATGGAGCTGTCCCGACTCCGGTCAGACGACA CGGCTGTCTACTATTGTGCTCGGGACTATGGCGA TTATGGCATGGACTACTGGGGTCAGGGTACGACT GTAACAGTTAGTAGTGGTGGAGGCGGCAGTGGC GGGGGGGGAAGCGGAGGAGGGGGTTCTGGTGA CATAGTTATGACCCAATCCCCAGATAGTTTGGCG GTTTCTCTGGGCGAGAGGGCAACGATTAATTGTC GCGCATCAAAGAGCGTTTCAACGAGCGGATATTC 1 1 1 1ATGCATTGGTACCAGCAAAAACCCGGACAA CCGCCGAAGCTGCTGATCTACTTGGCTTCAAATC TTGAGTCTGGGGTGCCGGACCGA1 1 1 1CTGGTAG TGGAAGCGGAACTGACTTTACGCTCACGATCAGT TCACTGCAGGCTGAGGATGTAGCGGTCTATTATT GCCAGCACAGTAGAGAAGTCCCCTGGACCTTCG GTCAAGGCACGAAAGTAGAAATTAAAAGTGCTGC TGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCG ACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCC GCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 440/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGT GCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTG ATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTG CGGCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGT ATTGTAATCACAGGAATCGCAAACGGGGCAGAAA GAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGA GACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTG TAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGA TGTGAACTGCGAGTGAAG1 1 1 1CCCGAAGCGCAG ACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCT GTATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGA GTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGA CCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAA TCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAG GATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTA TGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACG ATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAA AGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTG CCTCCCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAA GATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCA ACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAAC AACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCA GCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAG GCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTG CCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCT CTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACC AAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTG TTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAG CAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGT GGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGC CTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTAC TGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCA AGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAA AATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 441/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
GTCACTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCC GGCACATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGG AATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGG AAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCA GCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAAT GTG I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTT CAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGA AATGCTACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGC AGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGA GCTCAATGAGAAAGGTAACCACGTGCGGACCGA GGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCTAG TGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCG CTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGC CCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGT GAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1361 CTX-152 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCG ACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGA GCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACT AGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGAAGATCCT ATTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGC CCTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAG GCCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCT CTTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTG AGTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAG ATGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGAC TTGCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATC ACTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCA AAGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATC CTCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCT GCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTG ACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGAI I I IGATTCT CAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGT GTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 442/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TCTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 443/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCTCTTCCT GTAACCGCACTTCTGCTTCCTCTTGCTCTGCTGC TTCATGCTGCTAGACCTCAGGTGCAGTTACAACA GTCAGGAGGAGGATTAGTGCAGCCAGGAGGATC TCTGAAACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGAATCGAT TTTAGCAGGTACTGGATGTCTTGGGTGAGAAGAG CCCCTGGAAAAGGACTGGAGTGGATCGGCGAGA TTAATCCTGATAGCAGCACCATCAACTATGCCCCT AGCCTGAAGGACAAGTTCATCATCAGCCGGGACA ATGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAAATGAGCAA GGTGAGGAGCGAGGATACAGCTCTGTACTACTGT GCCAGCCTGTACTACGATTACGGAGATGCTATGG ACTATTGGGGCCAGGGAACAAGCGTTACAGTGTC TTCTGGAGGAGGAGGATCCGGTGGTGGTGGTTC AGGAGGTGGAGGTTCGGGAGATATTGTGATGAC ACAAAGCCAGCGGTTCATGACCACATCTGTGGGC GACAGAGTGAGCGTGACCTGTAAAGCTTCTCAGT CTGTGGACAGCAATGTTGCCTGGTATCAGCAGAA GCCCAGACAGAGCCCTAAAGCCCTGATC1 1 1 1CT GCCAGCCTGAGA1 1 1 1CTGGCGTTCCTGCCAGAT TTACCGGCTCTGGCTCTGGCACCGA1 1 1 1ACACT GACCATCAGCAATCTGCAGTCTGAGGATCTGGCC GAGTAC 1 1 1 1 GCCAGCAGTACAACAACTACCCCC TGACCTTTGGAGCTGGCACAAAACTGGAGCTGAA GAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCA GCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCT CCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTC TTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCG CCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACT TCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGC GGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCGTT ATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAA GCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAAT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 444/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAA CATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCG CTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAG CGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAA TCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGC GAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGG AGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGA AAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCC AGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAAT AGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGG TCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCA ACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGG CCCTGCCTCCCAGAGGAAGCGGAGCTACTAACTT CAGCCTGCTGAAGCAGGCTGGAGACGTGGAGGA GAACCCTGGACCTATGGTGAGCAAGGGCGAGGA GCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGA GCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAG CGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTA CGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACC GGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTG ACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGC CGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCT TCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGG AGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTA CAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGA CACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCAT CGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCA CAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTC TATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCA AGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGA CGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCA GAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCT GCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGC CCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 445/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
CATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGG GATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAA TAATAAAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGAT GTGTGTTGG I I I I I I GTGTGTGGAGCAACAAATCT GACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCA TTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGG TAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTC CTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGC TCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGT GGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCTC TTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAG TCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAAG AGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGC CTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGC CTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCT AGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCT CTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTC CCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTCA TTAACCCGGTAACCACGTGCGGACCGAGGCTGC AGCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCTAGTGATGGA GTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTC ACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGC CCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAG CGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1362 CTX-153 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCG ACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGA GCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACT AGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGAGATGTAA GGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGCCTTATATCG AGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAGACGCAGGT GTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTATCAATGAG AGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAGATTTCCCAA CTTAATGCCAACATACCATAAACCTCCCATTCTGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 446/1851
389/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGACCACTCCAG ATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTT TTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCCAGAGTTATAT TGCTGGGG 1 1 1 1 GAAGAAGATCCTATTAAATAAAA GAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCA GGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGT GAACGTTCACTGAAATCATGGCCTCTTGGCCAAG ATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTC CATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGATGCTATTTC CCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTTGCCAGCCC CACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCACTGGCATCT GGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAA TGAGATCATGTCCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCA CAGATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCA GCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTC TGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGT GTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAG ACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTT CAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCA CATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAG GGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGT GGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGT ACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAG AACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGT TCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAG GTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGC CTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAA TTACTTCCACTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATC CCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTT CGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTC GTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGG GCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCG CCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATT TAAAA1 1 1 1 1 GA 1 GACC 1 GO 1 GCGACGC 1 1 1 1 1 1 1
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 447/1851
390/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGAT CTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGG GCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACA TGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCC ACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGG CCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCC GTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGC CCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATG GCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAA ATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGG GTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCC GTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAG TACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCT CGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGG GGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGTTTCCCCACACT GAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGG CACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCC 1 1 1 1 TGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGA CAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTG TCGTGACCACCATGGCTCTTCCTGTAACCGCACT TCTGCTTCCTCTTGCTCTGCTGCTTCATGCTGCTA GACCTCAGGTGCAGTTACAACAGTCAGGAGGAG GATTAGTGCAGCCAGGAGGATCTCTGAAACTGTC TTGTGCCGCCAGCGGAATCGA1 1 1 1AGCAGGTAC TGGATGTCTTGGGTGAGAAGAGCCCCTGGAAAA GGACTGGAGTGGATCGGCGAGATTAATCCTGATA GCAGCACCATCAACTATGCCCCTAGCCTGAAGGA CAAGTTCATCATCAGCCGGGACAATGCCAAGAAC ACCCTGTACCTGCAAATGAGCAAGGTGAGGAGC GAGGATACAGCTCTGTACTACTGTGCCAGCCTGT ACTACGATTACGGAGATGCTATGGACTATTGGGG CCAGGGAACAAGCGTTACAGTGTCTTCTGGAGGA GGAGGATCCGGTGGTGGTGGTTCAGGAGGTGGA GGTTCGGGAGATATTGTGATGACACAAAGCCAGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 448/1851
391/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGTTCATGACCACATCTGTGGGCGACAGAGTGA GCGTGACCTGTAAAGCTTCTCAGTCTGTGGACAG CAATGTTGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCAGACAG AGCCCTAAAGCCCTGATC1 1 1 1CTGCCAGCCTGA GA 1 1 1 1CTGGCGTTCCTGCCAGATTTACCGGCTC TGGCTCTGGCACCGA1 1 1 1ACACTGACCATCAGC AATCTGCAGTCTGAGGATCTGGCCGAGTAC1 1 1 1 GCCAGCAGTACAACAACTACCCCCTGACCTTTGG AGCTGGCACAAAACTGGAGCTGAAGAGTGCTGCT GCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGA CCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCG CTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCG CCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTG CTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGA TATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGC GGCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTA TTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGG TTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCG CCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACC CTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAG GTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCT CCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATA ACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATG ACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGG AAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCA AGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAG ATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGA TGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1 GTGTGTGGAGCAACAAATC TGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGC ATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 449/1851
392/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
GTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTT CCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAG CTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGG TGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCT CTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCA GTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAA GAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAG CCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTG CCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTC TAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCC TCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTT CCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTC ATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCACAT GAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAA AGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACC ATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGA AAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IA ACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACA AAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTAC TTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGA GGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAAT GAGAAAGGTAACCACGTGCGGACCGAGGCTGCA GCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCTAGTGATGGA GTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTC ACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGC CCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAG CGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1363 CTX-154 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCG ACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGA GCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACT AGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGAAGATCCT ATTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGC CCTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 450/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCT CTTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTG AGTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAG ATGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGAC TTGCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATC ACTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCA AAGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATC CTCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCT GCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTG ACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1GATTCT CAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGT GTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGG TCTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 451/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCTCTTCCT GTAACCGCACTTCTGCTTCCTCTTGCTCTGCTGC TTCATGCTGCTAGACCTGACATCGTGATGACCCA AAGCCAGAGGTTCATGACCACATCTGTGGGCGAT AGAGTGAGCGTGACCTGTAAAGCCTCTCAGTCTG TGGACAGCAATGTTGCCTGGTATCAGCAGAAGCC TAGACAGAGCCCTAAAGCCCTGATCTTTAGCGCC AGCCTGAGATTTAGCGGAGTTCCTGCCAGATTTA CCGGAAGCGGATCTGGAACCGA1 1 1 1ACACTGAC CATCAGCAACCTGCAGAGCGAGGATCTGGCCGA GTAC 1 1 1 1 GCCAGCAGTACAACAATTACCCTCTGA CCTTTGGAGCCGGCACAAAGCTGGAGCTGAAAG GAGGAGGAGGATCTGGTGGTGGTGGTTCAGGAG GTGGAGGTTCGGGACAAGTTCAATTACAGCAATC TGGAGGAGGACTGGTTCAGCCTGGAGGAAGCCT GAAGCTGTCTTGTGCCGCTTCTGGAATCGA1 1 1 1 AGCAGATACTGGATGAGCTGGGTGAGAAGAGCC CCTGGCAAAGGACTGGAGTGGATTGGCGAGATT AATCCTGATAGCAGCACCATCAACTATGCCCCTA GCCTGAAGGACAAGTTCATCATCAGCCGGGACAA TGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAAATGAGCAAG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 452/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTGAGGAGCGAGGATACAGCTCTGTACTACTGTG CCAGCCTGTACTACGATTACGGAGATGCTATGGA CTATTGGGGCCAGGGAACAAGCGTTACAGTGAG CAGCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTC CCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGC CCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAAC CTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCG CCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGG ACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTG GCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCG TTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCA AAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGA ATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAA AACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTT CGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGA AGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAG AATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCC GCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGG GGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAA GAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACT CCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGA AATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAA AGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACG GCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGC AGGCCCTGCCTCCCAGAGGAAGCGGAGCTACTA ACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCTGGAGACGTGG AGGAGAACCCTGGACCTATGGTGAGCAAGGGCG AGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGG TCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGT TCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCA CCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCAC CACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCT CGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTT CAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 453/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTC CAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGC AACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAG GGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAG GGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTG GGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACA ACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGG CATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATC GAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTAC CAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTG CTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGT CCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCG ATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGC CGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAA GTAATAATAAAATAAAATCGCTATCCATCGAAGAT GGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAACA AATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAAC AGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCC CAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCT GTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCC AGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTG ATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAA ACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTC TGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCA GATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGG CCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCT GCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTG CTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAG TTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAA TCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGT CACTCATTAACCCGGTAACCACGTGCGGACCGAG GCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCTAGT GATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCG CTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 454/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGT GAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1364 CTX-155 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCG ACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGA GCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACT AGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTGAGATGTAA GGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGCCTTATATCG AGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAGACGCAGGT GTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTATCAATGAG AGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAGATTTCCCAA CTTAATGCCAACATACCATAAACCTCCCATTCTGC TAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGACCACTCCAG ATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTT TTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCCAGAGTTATAT TGCTGGGG I I I I GAAGAAGATCCTATTAAATAAAA GAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCA GGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGT GAACGTTCACTGAAATCATGGCCTCTTGGCCAAG ATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTC CATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGATGCTATTTC CCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTTGCCAGCCC CACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCACTGGCATCT GGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAA TGAGATCATGTCCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCA CAGATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCA GCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTC TGCCTATTCACCGAI I I I GATTCTCAAACAAATGT GTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAG ACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTT CAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCA CATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAG GGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGT GGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 455/1851
398/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACTGGCTCCGCC1 1 1 1 1CCCGAGGGTGGGGGAG AACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGT TCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAG GTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGC CTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAA TTACTTCCACTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATC CCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTT CGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTC GTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGG GCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCG CCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATT TAAAA1 1 1 1 1 GA 1 GACC 1 GO 1 GCGACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGAT CTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGG GCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACA TGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCC ACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGG CCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCC GTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGC CCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATG GCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAA ATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGG GTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCC GTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAG TACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCT CGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGG GGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGTTTCCCCACACT GAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGG CACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCC 1 1 1 1 TGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGA CAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTG TCGTGACCACCATGGCTCTTCCTGTAACCGCACT TCTGCTTCCTCTTGCTCTGCTGCTTCATGCTGCTA GACCTGACATCGTGATGACCCAAAGCCAGAGGTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 456/1851
399/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CATGACCACATCTGTGGGCGATAGAGTGAGCGT GACCTGTAAAGCCTCTCAGTCTGTGGACAGCAAT GTTGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTAGACAGAGCC CTAAAGCCCTGATCTTTAGCGCCAGCCTGAGATT TAGCGGAGTTCCTGCCAGATTTACCGGAAGCGGA TCTGGAACCGA1 1 1 1ACACTGACCATCAGCAACC TGCAGAGCGAGGATCTGGCCGAGTAC1 1 1 1GCCA GCAGTACAACAATTACCCTCTGACCTTTGGAGCC GGCACAAAGCTGGAGCTGAAAGGAGGAGGAGGA TCTGGTGGTGGTGGTTCAGGAGGTGGAGGTTCG GGACAAGTTCAATTACAGCAATCTGGAGGAGGAC TGGTTCAGCCTGGAGGAAGCCTGAAGCTGTCTTG TGCCGCTTCTGGAATCGA1 1 1 1AGCAGATACTGG ATGAGCTGGGTGAGAAGAGCCCCTGGCAAAGGA CTGGAGTGGATTGGCGAGATTAATCCTGATAGCA GCACCATCAACTATGCCCCTAGCCTGAAGGACAA GTTCATCATCAGCCGGGACAATGCCAAGAACACC CTGTACCTGCAAATGAGCAAGGTGAGGAGCGAG GATACAGCTCTGTACTACTGTGCCAGCCTGTACT ACGATTACGGAGATGCTATGGACTATTGGGGCCA GGGAACAAGCGTTACAGTGAGCAGCAGTGCTGC TGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCG ACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCC GCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTC GCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGT GCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTG ATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTG CGGCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGT ATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAG GTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTC GCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAAC CCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAG GTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCT CCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 457/1851
400/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATG ACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGG AAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCA AGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAG ATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGA TGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1 GTGTGTGGAGCAACAAATC TGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGC ATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAG GTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTT CCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAG CTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGG TGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCT CTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCA GTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAA GAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAG CCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTG CCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTC TAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCC TCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTT CCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTC ATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCACAT GAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAA AGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACC ATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGA AAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTG 1 1 1 1A ACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACA AAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTAC TTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGA GGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAAT GAGAAAGGTAACCACGTGCGGACCGAGGCTGCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 458/1851
401/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
GCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCTAGTGATGGA GTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTC ACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGC CCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAG CGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1365 CTX-160 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGAI I I I GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 459/1851
402/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 460/1851
403/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGA GGTCCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGAGGACTGGT CCAGCCTGGCGGCTCCCTGAAACTGAGCTGCGC CGCCAGCGGCATCGACTTCAGCAGGTACTGGAT GAGCTGGGTGAGACAGGCCCCTGGCAAGGGCCT GGAATGGATCGGCGAGATCAACCCCGACTCCAG CACCATCAACTACGCCGACAGCGTCAAGGGCAG GTTCACCATTAGCAGGGACAATGCCAAGAACACC CTGTACCTGCAGATGAACCTGAGCAGGGCCGAA GACACCGCCCTGTACTACTGTGCCAGCCTGTACT ACGACTATGGCGACGCTATGGACTACTGGGGCC AGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCTCCGGAGGAG GCGGCAGCGGCGGAGGCGGCAGCGGCGGAGGC GGCAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGC AGCCTGAGCGCCTCCGTGGGAGATAGGGTGACA ATCACCTGTAGGGCCAGCCAGAGCGTGGACTCC AACGTGGCCTGGTATCAACAGAAGCCCGAGAAG GCCCCCAAGAGCCTGATC1 1 1 1CCGCCTCCCTGA GGTTCAGCGGAGTCCCCAGCAGGTTCTCCGGAT CCGGCTCCGGAACCGACTTTACCCTGACCATCTC CAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTA CTGCCAGCAGTACAACAGCTACCCCCTGACCTTC GGCGCCGGCACAAAGCTGGAGATCAAGAGTGCT GCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAAC CGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACAC CCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCT TCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGG GTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTG TGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACG TGCGGCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTT GTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGT AGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCC TCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 461/1851
404/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACA GGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACG CTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTA TAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTAT GACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCG GAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCC CAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATA AGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAA GGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGG CCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGAT ACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTC CCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATG GATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAACAA ATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACA GCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCC AGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTG TTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCA GAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGAT TGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAAC CCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTG GCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGAT GAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCC CAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGC CTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCT CTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTT GCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATC TTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCA CTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCA CATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTA AAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGC ACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTG GGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTGTT TTAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGG ACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 462/1851
405/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
TACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGA GAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCA ATGAGAAAGGTAACCACGTGCGGACCGAGGCTG CAGCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCTAGTGATGG AGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCT CACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACG CCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGA GCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1366 CTX-160b CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGAI I I I GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 463/1851
406/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 464/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
AATTCTCCTTGGAATTTGCCC1 1 1 1 1 GAG FTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGA GGTCCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGAGGACTGGT CCAGCCTGGCGGCTCCCTGAAACTGAGCTGCGC CGCCAGCGGCATCGACTTCAGCAGGTACTGGAT GAGCTGGGTGAGACAGGCCCCTGGCAAGGGCCT GGAATGGATCGGCGAGATCAACCCCGACTCCAG CACCATCAACTACGCCGACAGCGTCAAGGGCAG GTTCACCATTAGCAGGGACAATGCCAAGAACACC CTGTACCTGCAGATGAACCTGAGCAGGGCCGAA GACACCGCCCTGTACTACTGTGCCAGCCTGTACT ACGACTATGGCGACGCTATGGACTACTGGGGCC AGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCTCCGGAGGAG GCGGCAGCGGCGGAGGCGGCAGCGGCGGAGGC GGCAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGC AGCCTGAGCGCCTCCGTGGGAGATAGGGTGACA ATCACCTGTAGGGCCAGCCAGAGCGTGGACTCC AACGTGGCCTGGTATCAACAGAAGCCCGAGAAG GCCCCCAAGAGCCTGATC1 1 1 1CCGCCTCCCTGA GGTTCAGCGGAGTCCCCAGCAGGTTCTCCGGAT CCGGCTCCGGAACCGACTTTACCCTGACCATCTC CAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTA CTGCCAGCAGTACAACAGCTACCCCCTGACCTTC GGCGCCGGCACAAAGCTGGAGATCAAGAGTGCT GCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAAC CGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACAC CCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCT TCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGG GTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTG TGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACG TGCGGCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 465/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTATTGTAATCACAGGAATCGCAAACGGGGCAGA AAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTAT GAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGC TGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAG GATGTGAACTGCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGC AGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAG CTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGG AGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAG ACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGA ATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAA GGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGT ATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCAC GATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCA AAGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCT GCCTCCCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGA AGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGC AACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAA CAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCA GCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAG GCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTG CCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCT CTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACC AAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTG TTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAG CAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGT GGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGC CTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTAC TGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCA AGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAA AATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCA GTCACTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCC GGCACATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGG AATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGG AAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 466/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
GCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAAT GTG I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTT CAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGA AATGCTACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGC AGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGA GCTCAATGAGAAAGGTAACCACGTGCGGACCGA GGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCTAG TGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCG CTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGC CCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGT GAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1367 CTX-161 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 467/1851
410/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 468/1851
411/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGA GGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGAGGAGGACTGGT GCAGCCCGGAGGCTCCCTGAAGCTGAGCTGCGC TGCCTCCGGCATCGACTTCAGCAGGTACTGGATG AGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGCAAAGGCCTG GAGTGGATCGGCGAGATCAACCCCGACAGCAGC ACCATCAACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGG TTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAATACCC TGTACCTGCAGATGAACCTGAGCAGGGCCGAGG ACACAGCCCTGTACTACTGTGCCAGCCTGTACTA CGACTATGGAGACGCTATGGACTACTGGGGCCA GGGAACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGAGGCG GAGGCTCCGGCGGCGGAGGCAGCGGAGGAGGC GGCAGCGATATCCAGATGACCCAGTCCCCCAGC TCCCTGAGCGCTAGCCCTGGCGACAGGGTGAGC GTGACATGCAAGGCCAGCCAGAGCGTGGACAGC AACGTGGCCTGGTACCAGCAGAAACCCAGACAG GCCCCCAAGGCCCTGATCTTCAGCGCCAGCCTG AGGTTTAGCGGCGTGCCCGCTAGGTTTACCGGAT CCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCT CCAACCTGCAGTCCGAGGACTTCGCCACCTACTA CTGCCAGCAGTACAACAACTACCCCCTGACATTC GGCGCCGGAACCAAGCTGGAGATCAAGAGTGCT GCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAAC CGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACAC CCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCT TCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 469/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTG TGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACG TGCGGCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTT GTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGT AGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCC TCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAA CCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACA GGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACG CTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTA TAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTAT GACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCG GAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCC CAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATA AGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAA GGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGG CCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGAT ACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTC CCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATG GATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAACAA ATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACA GCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCC AGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTG TTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCA GAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGAT TGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAAC CCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTG GCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGAT GAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCC CAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGC CTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCT CTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTT GCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATC TTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCA CTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 470/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
CATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTA AAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGC ACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTG GGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTGTT TTAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGG ACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGC TACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGA GAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCA ATGAGAAAGGTAACCACGTGCGGACCGAGGCTG CAGCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCTAGTGATGG AGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCT CACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACG CCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGA GCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1368 CTX-162 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 471/1851
414/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 472/1851
415/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGA CATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAG CGCTAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTG CAGGGCCAGCCAGAGCGTGGACTCCAACGTGGC CTGGTACCAGCAGAAGCCCGAGAAGGCCCCCAA GAGCCTGATCTTCAGCGCCAGCCTGAGGTTCTCC GGAGTGCCTAGCAGATTTAGCGGCAGCGGCAGC GGCACAGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCC AGCCCGAGGATTTCGCCACCTACTACTGCCAGCA GTACAACTCCTACCCCCTGACCTTCGGCGCCGG CACAAAGCTGGAGATCAAGGGAGGAGGAGGAAG CGGAGGAGGAGGAAGCGGAGGCGGAGGAAGCG AGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGCCTGG TGCAACCTGGAGGCAGCCTGAAGCTGAGCTGTG CCGCCAGCGGAATCGACTTCAGCAGGTACTGGA TGTCCTGGGTGAGACAGGCCCCTGGCAAGGGCC TGGAGTGGATCGGAGAGATCAACCCCGACAGCT CCACCATCAACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCA GGTTCACCATCAGCAGAGACAACGCCAAGAACAC CCTGTACCTGCAGATGAACCTGTCCAGAGCCGAG GACACCGCCCTGTACTACTGCGCCAGCCTGTATT ACGACTACGGCGACGCTATGGACTACTGGGGCC AGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCAGCAGTGCTG CTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 473/1851
416/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACC CGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTT CGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGG TGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGT GATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGT GCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCGTTATTACTTTG TATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTA GGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCT CGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAA CCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACA GGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACG CTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTA TAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTAT GACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCG GAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCC CAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATA AGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAA GGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGG CCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGAT ACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTC CCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATG GATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAACAA ATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACA GCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCC AGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTG TTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCA GAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGAT TGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAAC CCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTG GCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGAT GAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCC CAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGC CTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCT CTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 474/1851
417/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
GCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATC TTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCA CTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCA CATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTA AAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGC ACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTG GGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTGTT TTAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGG ACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGC TACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGA GAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCA ATGAGAAAGGTAACCACGTGCGGACCGAGGCTG CAGCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCTAGTGATGG AGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCT CACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACG CCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGA GCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1369 CTX-163 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 475/1851
418/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 476/1851
419/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGA CATCCAAATGACCCAGTCCCCTAGCAGCCTGTCC GCCAGCCCTGGAGACAGGGTGTCCGTGACCTGC AAGGCCAGCCAGTCCGTGGACAGCAACGTCGCC TGGTATCAGCAGAAGCCCAGGCAAGCTCCCAAG GCTCTGATCTTCTCCGCCAGCCTGAGA1 1 1 1CCG GCGTGCCCGCCAGATTCACCGGAAGCGGCAGCG GCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAACCTGCA GAGCGAGGATTTCGCCACATACTACTGCCAGCAG TACAACAACTACCCCCTGACCTTCGGAGCCGGCA CCAAGCTGGAGATCAAAGGCGGCGGAGGCAGCG GCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCGGATCCGAA GTGCAGCTGGTGGAAAGCGGAGGCGGACTCGTG CAGCCTGGCGGAAGCCTGAAGCTGAGCTGTGCC GCCAGCGGCATCGACTTCAGCAGGTACTGGATG AGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGCAAAGGCCTG GAGTGGATCGGCGAGATCAACCCTGACAGCAGC ACCATCAACTACGCCGACAGCGTGAAAGGCAGG TTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACACCC TGTACCTGCAGATGAACCTGTCCAGAGCCGAGGA CACCGCCCTGTACTACTGCGCCAGCCTGTACTAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 477/1851
420/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GACTACGGCGACGCTATGGACTACTGGGGCCAA GGCACCCTCGTGACCGTCAGCTCCAGTGCTGCT GCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGA CCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCG CTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCG CCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTG CTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGA TATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGC GGCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTA TTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGG TTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCG CCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACC CTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAG GTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCT CCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATA ACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATG ACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGG AAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCA AGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAG ATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGA TGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1 GTGTGTGGAGCAACAAATC TGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGC ATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAG GTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTT CCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAG CTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGG TGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCT CTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCA GTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAA GAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 478/1851
421/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
CCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTG CCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTC TAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCC TCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTT CCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTC ATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCACAT GAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAA AGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACC ATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGA AAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IA ACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACA AAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTAC TTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGA GGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAAT GAGAAAGGTAACCACGTGCGGACCGAGGCTGCA GCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCTAGTGATGGA GTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTC ACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGC CCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAG CGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1370 CTX-164 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 479/1851
422/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 480/1851
423/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGA GGTGCAGCTGCAGCAGTCCGGCCCTGAGCTCGT GAAGCCTGGAGCCAGCGTGAAAATGAGCTGTAA GGCCTCCGGCAACACCCTCACCAACTACGTGATC CATTGGATGAAGCAGATGCCCGGCCAGGGCCTG GACTGGATTGGCTACATTCTGCCCTACAACGACC TGACCAAGTACAACGAGAAGTTCACCGGCAAGGC CACCCTGACCAGCGATAAGAGCTCCAGCAGCGC CTACATGGAGCTGAACTCCCTGACCAGCGAGGA CAGCGCCGTGTACTACTGCACCAGGTGGGACTG GGATGGCTTCTTCGACCCCTGGGGACAGGGCAC CACCCTGACAGTGTCCAGCGGAGGAGGCGGCAG CGGCGGCGGCGGCTCCGGCGGCGGCGGCAGCG ATATCGTGATGACACAGTCCCCTCTGAGCCTGCC TGTGAGCCTGGGCGACCAGGCCAGCATCAGCTG CAGGTCCACCCAGTCCCTGGTGCACTCCAACGG CAACACCCACCTGCACTGGTACCTGCAAAGGCCC GGCCAGTCCCCTAAGCTGCTGATCTACAGCGTGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 481/1851
424/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCAACAGGTTTAGCGAGGTGCCCGATAGA1 1 1 1C CGCCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACACTGAA GATCTCCAGGGTGGAGGCCGAGGATCTGGGCGT GTACTTCTGCAGCCAGACCAGCCACATCCCCTAC ACCTTCGGCGGCGGAACCAAGCTGGAGATCAAG AGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAG CCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTC CGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCT TAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGC CGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTT CGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCG GGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCGTTA TTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAG CGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATAT GACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACA TTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCT GCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGC GCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAAT CAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCG AGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGA GAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAA AGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCA GAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATA GGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGT CACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAA CCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGGC CCTGCCTCCCAGATAATAATAAAATCGCTATCCAT CGAAGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGG AGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCT TCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTC CCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTC GCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGT TCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAAC TCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 482/1851
425/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
CACCAAAACCCTC I I I I I AC IAAGAAACAGTGAGC CTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAA AAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGC ACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTC CTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCC TTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTC TCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCC AAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCAC GCAGTCACTCATTAACCCACCAATCACTGATTGT GCCGGCACATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGG AGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAG AGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTG TCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGG AATGTG I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTAC CTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAA GAAATGCTACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGG GCAGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAG GAGCTCAATGAGAAAGGTAACCACGTGCGGACC GAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCT AGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCT CGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTC GCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCA GTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1371 CTX-165 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 483/1851
426/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TACAGTTTGCTTTGCTGGGCC1 1 1 1 1CCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 484/1851
427/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
ATTTCGG1 1 1 1 1GGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGA CATCGTGATGACCCAGAGCCCCCTGAGCCTGCC TGTGTCCCTGGGAGACCAGGCTTCCATCAGCTGC AGGTCCACCCAGAGCCTGGTGCACTCCAACGGC AACACCCACCTGCACTGGTACCTGCAGAGGCCT GGCCAGTCCCCCAAGCTGCTGATCTACAGCGTG AGCAATAGGTTCAGCGAGGTGCCCGACAGATTCA GCGCCAGCGGAAGCGGCACCGACTTCACCCTGA AGATCAGCAGGGTCGAGGCCGAAGATCTGGGCG TGTACTTCTGCTCCCAGACATCCCACATCCCTTAC ACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATTAAG GGCGGCGGAGGATCCGGCGGAGGAGGATCCGG AGGAGGAGGAAGCGAGGTGCAGCTGCAGCAGAG CGGACCCGAGCTGGTGAAACCCGGAGCCAGCGT CAAAATGAGCTGCAAGGCCAGCGGCAACACCCT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 485/1851
428/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GACCAACTACGTCATCCACTGGATGAAGCAGATG CCCGGACAGGGCCTGGACTGGATCGGCTACATC CTGCCCTACAACGACCTGACCAAGTACAACGAGA AATTCACCGGCAAGGCCACCCTGACCAGCGACA AGAGCAGCAGCAGCGCCTACATGGAGCTGAACA GCCTGACCAGCGAGGACTCCGCCGTGTACTATT GCACCAGGTGGGACTGGGACGGCTTCTTTGACC CCTGGGGCCAGGGCACAACACTCACCGTGAGCT CCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCC AGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCC TCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCT CTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCC GCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGAC TTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGC GGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCGTT ATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAA GCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAAT ATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAA CATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCG CTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAG CGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAA TCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGC GAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGG AGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGA AAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCC AGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAAT AGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGG TCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCA ACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGG CCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAATCGCTATCCA TCGAAGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTG GAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCC TTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTT CCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 486/1851
429/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
CGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGG TTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAA CTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTG CCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAG CCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAA AAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGG CACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTT CCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCC CTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTT CTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGC CAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCA CGCAGTCACTCATTAACCCACCAATCACTGATTGT GCCGGCACATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGG AGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAG AGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTG TCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGG AATGTG I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTAC CTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAA GAAATGCTACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGG GCAGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAG GAGCTCAATGAGAAAGGTAACCACGTGCGGACC GAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCCT AGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCT CGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTC GCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCA GTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1372 CTX-166 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 487/1851
430/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 488/1851
431/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAA1 1 1 1 1GAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCA GGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAGCTCAA GAAGCCCGGAGCCTCCGTGAAGGTGAGCTGCAA GGCCAGCGGCAACACCCTGACCAACTACGTGAT CCACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCCAAAGGCT GGAGTGGATGGGCTACATCCTGCCCTACAACGA CCTGACCAAGTACAGCCAGAAGTTCCAGGGCAG GGTGACCATCACCAGGGATAAGAGCGCCTCCAC CGCCTATATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGA GGACACCGCTGTGTACTACTGTACAAGGTGGGAC TGGGACGGCTTCTTTGACCCCTGGGGCCAGGGC ACAACAGTGACCGTCAGCAGCGGCGGCGGAGGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 489/1851
432/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCGGAAG CGAAATCGTGATGACCCAGAGCCCCGCCACACT GAGCGTGAGCCCTGGCGAGAGGGCCAGCATCTC CTGCAGGGCTAGCCAAAGCCTGGTGCACAGCAA CGGCAACACCCACCTGCACTGGTACCAGCAGAG ACCCGGACAGGCTCCCAGGCTGCTGATCTACAG CGTGAGCAACAGGTTCTCCGAGGTGCCTGCCAG GTTTAGCGGCAGCGGAAGCGGCACCGACTTTAC CCTGACCATCAGCAGCGTGGAGTCCGAGGACTT CGCCGTGTATTACTGCAGCCAGACCAGCCACATC CCTTACACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAG ATCAAAAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCT CCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCG CCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAA CCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCC GCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTG GACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTT GGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTC GTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTC AAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATG AATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGA AAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACT TCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCG AAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACA GAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGC CGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGG GGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGA AGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAAC TCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAG AAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAA AAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTAC GGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATG CAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAATCGCT ATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 490/1851
433/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
TGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAA CGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACC TTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTG CCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGC CAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCT AAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCC ATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAG TGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACG GGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAG AGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACT GAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTT TGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGC CCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTG TCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAG TCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAATCACT GATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTGTTGA AGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTG CCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGCC CATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTCA GATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAA CAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCT CTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGCCCT ACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCT GGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGGTAACCACGT GCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGG AACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCT GCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACC AAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGC GGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCT GCAGG
1373 CTX-166b CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 491/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 492/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCA GGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAGCTCAA GAAGCCCGGAGCCTCCGTGAAGGTGAGCTGCAA GGCCAGCGGCAACACCCTGACCAACTACGTGAT CCACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCCAAAGGCT GGAGTGGATGGGCTACATCCTGCCCTACAACGA CCTGACCAAGTACAGCCAGAAGTTCCAGGGCAG GGTGACCATCACCAGGGATAAGAGCGCCTCCAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 493/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGCCTATATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGA GGACACCGCTGTGTACTACTGTACAAGGTGGGAC TGGGACGGCTTCTTTGACCCCTGGGGCCAGGGC ACAACAGTGACCGTCAGCAGCGGCGGCGGAGGC AGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCGGAAG CGAAATCGTGATGACCCAGAGCCCCGCCACACT GAGCGTGAGCCCTGGCGAGAGGGCCAGCATCTC CTGCAGGGCTAGCCAAAGCCTGGTGCACAGCAA CGGCAACACCCACCTGCACTGGTACCAGCAGAG ACCCGGACAGGCTCCCAGGCTGCTGATCTACAG CGTGAGCAACAGGTTCTCCGAGGTGCCTGCCAG GTTTAGCGGCAGCGGAAGCGGCACCGACTTTAC CCTGACCATCAGCAGCGTGGAGTCCGAGGACTT CGCCGTGTATTACTGCAGCCAGACCAGCCACATC CCTTACACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAG ATCAAAAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCT CCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCG CCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAA CCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCC GCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTG GACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTT GGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTC GTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCAA ACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAA CAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGA GGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAA GAAGAAGGAGGATGTGAACTGCGAGTGAAG 1 1 1 1 CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAG GACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGG ACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACG CCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACC CCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAAT GAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTAC TCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 494/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGA GTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCA TATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAAT CGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGGTTTTT TGTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTG CAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGA CACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTT GGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAA TGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGAT GTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTT ATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAA ACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGA CACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCA GGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCC AACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGAC TGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCT AAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTC CCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAG TCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAAT CACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTG TTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGG TGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGG AGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAAC TTCAGATTGGAATGTG 1 1 1 1AACTCAGGGTTGAGA AAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGG GCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGC CCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGG CCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGGTAACCA CGTGCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCT AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTC TCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCG ACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCG GGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCT GCCTGCAGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 495/1851
438/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
1374 CTX-167 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGAI I I I GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 496/1851
439/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCA GGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGCTGAA GAAACCTGGCGCCAGCGTCAAGGTGAGCTGCAA GGCTTCCGGAAACACCCTCACCAACTACGTGATC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 497/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGACAGAGACTG GAGTGGATGGGCTACATTCTGCCCTACAACGACC TGACCAAGTACAGCCAGAAGTTCCAGGGCAGGG TCACCATCACCAGGGACAAGAGCGCCAGCACCG CCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGTCCGAGG ACACAGCCGTGTACTACTGCACCAGGTGGGACT GGGACGGATTCTTCGACCCTTGGGGCCAAGGCA CCACAGTGACAGTGAGCTCCGGCGGAGGCGGCA GCGGCGGCGGAGGAAGCGGCGGCGGCGGAAGC GACATCGTGATGACCCAGAGCCCTCTGAGCCTG CCCGTGACACTGGGACAGCCTGCCACACTGTCC TGCAGGAGCACCCAGAGCCTGGTGCATAGCAAC GGCAACACCCACCTGCACTGGTTCCAGCAGAGA CCTGGCCAGAGCCCCCTGAGACTGATCTACAGC GTGAGCAACAGGGACAGCGGCGTGCCCGATAGA TTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTTACC CTGAAAATCTCCAGGGTGGAGGCCGAGGATGTG GGCGTGTATTACTGCTCCCAGACAAGCCACATTC CCTATACATTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGA TCAAGAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCT CCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCG CCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAA CCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCC GCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTG GACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTT GGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTC GTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTC AAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATG AATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGA AAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACT TCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCG AAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACA GAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGC CGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 498/1851
441/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGA AGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAAC TCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAG AAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAA AAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTAC GGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATG CAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAATCGCT ATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTG TGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAA CGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACC TTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTG CCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGC CAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCT AAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCC ATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAG TGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACG GGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAG AGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACT GAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTT TGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGC CCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTG TCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAG TCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAATCACT GATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTGTTGA AGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTG CCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGCC CATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTCA GATTGGAATGTG 1 1 1 1AACTCAGGGTTGAGAAAA CAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCT CTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGCCCT ACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCT GGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGGTAACCACGT GCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGG AACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 499/1851
442/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
GCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACC AAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGC GGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCT GCAGG
1375 CTX-168 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGAI I I I GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 500/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 501/1851
444/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGA AATCGTGATGACCCAGAGCCCTGCCACACTGAGC GTGAGCCCTGGCGAGAGAGCCAGCATCAGCTGC AGGGCCTCCCAGAGCCTGGTGCACTCCAACGGC AATACCCACCTGCACTGGTATCAGCAGAGACCCG GCCAGGCCCCTAGGCTGCTGATCTACTCCGTGA GCAACAGGTTCTCCGAGGTGCCCGCCAGATTCA GCGGATCCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTCA CCATCTCCAGCGTGGAGAGCGAGGACTTCGCCG TCTACTACTGCAGCCAGACAAGCCACATCCCCTA CACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCAA GGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGAGGCAGC GGAGGCGGCGGATCCCAGGTGCAACTGGTGCAG AGCGGAGCCGAGCTGAAGAAGCCCGGAGCCAGC GTGAAGGTCAGCTGCAAGGCCAGCGGCAACACC CTGACAAACTACGTGATCCACTGGGTGAGGCAG GCCCCTGGCCAAAGGCTCGAGTGGATGGGCTAC ATCCTCCCCTACAACGACCTGACCAAGTACTCCC AGAAGTTCCAGGGCAGGGTGACCATCACCAGGG ATAAGAGCGCCAGCACCGCCTACATGGAACTCAG CAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTA CTGCACCAGGTGGGACTGGGATGGCTTCTTCGA CCCTTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACAGTGAG CTCCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTC CCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGC CCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAAC CTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCG CCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGG ACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTG GCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCG TTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCA AAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGA ATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAA AACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 502/1851
445/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGA AGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAG AATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCC GCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGG GGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAA GAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACT CCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGA AATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAA AGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACG GCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGC AGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAATCGCTA TCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGT GTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAAC GCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTT CTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGC CTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCC AGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTA AAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCA TTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGT GAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGG GAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGA GGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTG AGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTT GCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGC CCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTG TCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAG TCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAATCACT GATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTGTTGA AGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTG CCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGCC CATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTCA GATTGGAATGTG 1 1 1 1AACTCAGGGTTGAGAAAA CAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCT CTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGCCCT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 503/1851
446/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
ACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCT GGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGGTAACCACGT GCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGG AACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCT GCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACC AAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGC GGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCT GCAGG
1376 CTX-169 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGAI I I I GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 504/1851
447/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 505/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
AATTCTCCTTGGAATTTGCCC1 1 1 1 1 GAG FTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGA CATCGTGATGACACAATCCCCCCTCAGCCTGCCT GTGACACTGGGCCAGCCTGCCACCCTGAGCTGC AGGAGCACCCAGTCCCTGGTGCACTCCAACGGC AACACCCACCTGCACTGGTTCCAGCAGAGGCCT GGACAGAGCCCCCTGAGGCTGATCTACAGCGTG AGCAACAGGGACTCCGGCGTGCCCGATAGATTC AGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGATTTCACCCTG AAGATCTCCAGAGTGGAAGCCGAGGACGTGGGC GTCTACTACTGCAGCCAGACCAGCCATATCCCCT ACACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCA AGGGAGGCGGCGGAAGCGGCGGAGGCGGATCC GGAGGCGGAGGCTCCCAAGTGCAGCTGGTGCAG AGCGGCGCTGAGCTGAAGAAGCCCGGAGCCAGC GTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCAGCGGAAACACC CTGACCAACTACGTGATCCACTGGGTGAGACAGG CCCCCGGACAGAGACTCGAGTGGATGGGCTACA TCCTGCCCTACAACGACCTGACCAAGTACAGCCA GAAGTTCCAGGGCAGGGTGACAATCACCAGGGA CAAGAGCGCCAGCACCGCCTACATGGAGCTGAG CAGCCTGAGATCCGAGGACACCGCCGTGTACTA CTGCACCAGGTGGGACTGGGACGGCTTCTTTGA CCCCTGGGGCCAGGGAACCACAGTGACCGTGTC CTCCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTC CCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGC CCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAAC CTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCG CCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGG ACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTG GCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 506/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCA AAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGA ATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAA AACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTT CGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGA AGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAG AATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCC GCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGG GGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAA GAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACT CCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGA AATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAA AGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACG GCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGC AGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAATCGCTA TCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGT GTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAAC GCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTT CTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGC CTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCC AGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTA AAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCA TTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGT GAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGG GAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGA GGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTG AGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTT GCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGC CCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTG TCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAG TCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAATCACT GATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTGTTGA AGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTG CCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 507/1851
450/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
CATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTCA GATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAA CAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCT CTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGCCCT ACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCT GGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGGTAACCACGT GCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGG AACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCT GCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACC AAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGC GGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCT GCAGG
1377 CTX-170 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 508/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 509/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGA GGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGCCCTGAGCTGGT GAAGCCCGGCGCCAGCGTGAAGATCAGCTGCAA GACCTCCGGCTATACCTTTACCGAGTACACCATC AACTGGGTGAAGCAGAGCCACGGCAAGAGCCTG GAGTGGATCGGCGATATCTACCCCGACAACTACA ACATCAGGTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGC CACCCTGACCGTGGACAAGTCCAGCAGCACCGC CTACATGGAGCTGAGGAGCCTGTCCAGCGAGGA CTCCGCCATCTACTACTGCGCCAACCACGACTTT TTCGTCTTCTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACA GTGTCCGCTGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGG CGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGACATCCAGAT GACACAGGCCACAAGCTCCCTGTCCGCCAGCCT GGGCGATAGGGTGACCATCAATTGCAGGACCTC CCAGGACATCAGCAACCACCTGAACTGGTACCAG CAGAAACCCGACGGCACCGTGAAGCTGCTCATCT ACTACACCAGCAGGCTGCAGTCCGGCGTCCCTA GCAGATTCAGCGGATCCGGCAGCGGCACCGACT ATAGCCTGACCATCAGCAACCTCGAGCAGGAGG ACATCGGCACCTACTTCTGCCATCAGGGCAACAC CCTGCCCCCTACCTTTGGCGGCGGCACAAAGCT GGAGATTAAGAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTA TTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCC CGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCT CTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 510/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGG CTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTC CGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTC ACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATC GCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTA CATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGAC AAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGA GACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1 CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAG GACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGG ACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACG CCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACC CCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAAT GAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTAC TCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGG GGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGA GTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCA TATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAAT CGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGGTTTTT TGTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTG CAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGA CACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTT GGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAA TGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGAT GTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTT ATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAA ACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGA CACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCA GGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCC AACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGAC TGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCT AAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTC CCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAG TCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAAT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 511/1851
454/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
CACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTG TTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGG TGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGG AGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAAC TTCAGATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGGTTGAGA AAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGG GCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGC CCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGG CCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGGTAACCA CGTGCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCT AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTC TCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCG ACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCG GGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCT GCCTGCAGG
1378 CTX-171 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 512/1851
455/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 513/1851
456/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGA TATCCAGATGACCCAGGCCACCAGCAGCCTGAG CGCTTCCCTCGGCGACAGGGTGACCATCAACTG CAGGACCAGCCAGGACATCTCCAACCACCTGAAC TGGTACCAGCAGAAGCCCGACGGCACCGTGAAA CTGCTGATCTACTACACCAGCAGACTGCAGAGCG GCGTGCCCTCCAGA1 1 1 1CCGGCAGCGGCTCCG GCACCGACTACAGCCTGACCATTAGCAACCTGGA GCAGGAGGACATCGGAACCTACTTCTGCCACCA GGGCAACACACTGCCTCCCACCTTCGGCGGCGG CACAAAGCTCGAGATCAAGGGCGGCGGCGGAAG CGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGAGGCTCCG AGGTGCAACTGCAACAGAGCGGACCTGAGCTGG TGAAGCCTGGCGCCAGCGTGAAGATCTCCTGTAA GACCAGCGGCTACACCTTCACCGAGTACACCATC AACTGGGTGAAGCAGAGCCACGGCAAGAGCCTC GAATGGATCGGCGACATCTATCCCGACAACTACA ATATCAGATACAACCAGAAGTTCAAGGGAAAGGC CACCCTGACCGTGGATAAGTCCTCCTCCACCGCT TACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGCAGCGAGGAC TCCGCCATCTACTACTGCGCCAACCACGACTTCT TCGTGTTCTGGGGCCAAGGCACCCTCGTGACCG TGAGCGCCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 514/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCC GCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTC TCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGA CCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGC TTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCC GTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCA CTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCG CTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTAC ATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAA GAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGA CTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG11 1 1CC CGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGA CAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGAC GCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCC GGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCC GAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGA ACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCA GAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGA AAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTA CGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATAT GCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAATCGC TATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GT GTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAA ACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACAC CTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGT GCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGG CCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTC TAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATC CATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACA GTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACAC GGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGA GAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAAC TGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGT TTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 515/1851
458/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
CCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCT GTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCA GTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAATCAC TGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTGTTG AAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGT GCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGC CCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTC AGATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAA CAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCT CTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGCCCT ACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCT GGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGGTAACCACGT GCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGG AACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCT GCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACC AAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGC GGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCT GCAGG
1379 CTX-172 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 516/1851
459/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 517/1851
460/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCA GGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGCGCTGAGCTGAA GAAGCCCGGCGCCAGCGTGAAGATCAGCTGCAA GGCCAGCGGCTACACCTTCACCGAATACACCATC AACTGGGTGAGACAGGCCCCTGGACAGAGGCTC GAGTGGATGGGCGACATCTACCCCGACAACTACA GCATCAGGTACAACCAGAAGTTCCAGGGCAGGG TGACAATCACCAGGGACACCAGCGCCAGCACCG CCTATATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCCGAGG ACACCGCCGTCTATTACTGCGCCAACCACGACTT CTTCGTGTTCTGGGGCCAGGGAACACTGGTGAC CGTGTCCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCG GAGGAAGCGGCGGCGGCGGCAGCGATATCCAG ATGACCCAGAGCCCCTCCTCCCTGAGCGCTAGC GTGGGCGACAGGGTGACCATTACCTGTCAGGCC TCCCAGGACATCAGCAACTACCTGAACTGGTACC AGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGA TCTATTACACCAGCAGGCTGGAGACCGGCGTGC CCTCCAGATTCAGCGGCTCCGGCTCCGGAACCG ACTTCACCTTCACCATCAGCTCCCTGCAGCCTGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 518/1851
461/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGACATCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGGCAA CACCCTGCCTCCCACATTCGGCGGCGGCACAAA GGTGGAGATCAAAAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCG GTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCG CCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCG CCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATG CCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAG GGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGG GCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1G TTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAG GAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCC GATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGC CGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCC ACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAA G 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAG CAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATT TGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATA AACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGT AAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCT ACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGG CCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACG ACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGG GTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCA CTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAAT AAAATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTG G 1 1 1 1 1 1 GTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGC ATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCA GAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCA GCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTC AGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTC AATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCG GCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACT AAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAG AATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 519/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
GGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCT CTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTC AGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTC ATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTAT TTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCA CTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCA CCAATCACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACC AGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATG AGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTT GGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCA AATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGG TTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAG GGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGAT ACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTA TAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGG TAACCACGTGCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTC CTCCCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCAC TCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGC CGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTT TGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGC GCAGCTGCCTGCAGG
1380 CTX-173 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 520/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 521/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCA GGTGCAGCTGGTCCAGTCCGGCGCCGAACTGAA GAAGCCTGGCGCCAGCGTGAAGATCAGCTGCAA GGCCTCCGGCTACACCTTCACCGAGTACACCATC AACTGGGTGAGGCAAGCCCCCGGCCAGAGACTG GAGTGGATGGGCGACATCTACCCCGACAACTACA GCATCAGGTACAACCAGAAGTTCCAGGGCAGGG TGACAATCACCAGGGATACCAGCGCCAGCACAG CCTATATGGAGCTGTCCTCCCTGAGATCCGAGGA CACCGCCGTGTATTACTGCGCCAACCACGACTTC TTCGTGTTCTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACC GTGAGCAGCGGCGGCGGCGGCTCCGGCGGCGG AGGCTCCGGAGGCGGAGGCAGCGACATCCAGAT GACCCAGAGCCCTTCCAGCCTGAGCGCTAGCCT GGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGACCAG CCAGGACATCAGCAATCACCTGAACTGGTACCAG CAAAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 522/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACTACACCAGCAGGCTGGAAAGCGGCGTGCCTA GCAGGTTCAGCGGCAGCGGCTCCGGAACCGACT ACAGCCTGACCATTAGCAGCCTGCAACCTGAGGA CATCGGCACCTATTACTGCCAGCAGGGCAACACC CTGCCTCCTACCTTTGGCGGCGGCACCAAACTCG AGATCAAGAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATT TCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCC GCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTC TCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGA CCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGC TTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCC GTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCA CTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCG CTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTAC ATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAA GAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGA CTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG11 1 1CC CGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGA CAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGAC GCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCC GGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCC GAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGA ACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCA GAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGA AAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTA CGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATAT GCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAATCGC TATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GT GTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAA ACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACAC CTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGT GCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGG CCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTC TAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 523/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
CATTGCCACCAAAACCCTCI I I I IACTAAGAAACA GTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACAC GGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGA GAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAAC TGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGT TTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAG CCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCT GTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCA GTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAATCAC TGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTGTTG AAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGT GCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGC CCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTC AGATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAA CAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCT CTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGCCCT ACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCT GGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGGTAACCACGT GCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGG AACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCT GCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACC AAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGC GGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCT GCAGG
1381 CTX-174 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 524/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 525/1851
468/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCA GGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCCCTGAGCTGAA GAAGCCCGGAGCCAGCGTGAAGATCTCCTGCAA GACCTCCGGCTACACCTTCACCGAGTACACCATC AACTGGGTGAAGCAGGCCCCCGGACAGGGACTG GAATGGATCGGCGACATCTACCCCGACAACTACA ACATCAGGTACAACCAGAAGTTCCAAGGCAAGGC CACCATCACAAGGGACACCAGCAGCAGCACCGC CTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGA TACCGCCGTGTACTACTGCGCCAACCACGACTTC TTCGTGTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACA GTGAGCAGCGGAGGAGGCGGAAGCGGAGGAGG AGGATCCGGAGGAGGAGGCAGCGACATCCAGAT GACCCAGTCCCCCTCCTCCCTGAGCGCCTCCGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 526/1851
469/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCCAGGCCAG CCAGGACATCAGCAACTACCTGAACTGGTACCAG CAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATT TACTACACCAGCAGGCTGGAAACCGGCGTGCCC AGCAGATTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGAC TTTACCTTTACCATCTCCAGCCTGCAGCCCGAGG ATATCGCCACATACTACTGCCAGCAGGGCAACAC CCTCCCCCCTACCTTTGGCGGCGGCACCAAGGT GGAGATTAAGAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTA TTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCC CGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCT CTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCG ACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGG CTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTC CGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTC ACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATC GCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTA CATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGAC AAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGA GACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1 CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAG GACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGG ACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACG CCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACC CCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAAT GAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTAC TCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGG GGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGA GTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCA TATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAAT CGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGGTTTTT TGTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTG CAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGA CACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 527/1851
470/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
GGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAA TGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGAT GTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTT ATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAA ACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGA CACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCA GGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCC AACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGAC TGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCT AAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTC CCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAG TCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAAT CACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTG TTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGG TGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGG AGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAAC TTCAGATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGGTTGAGA AAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGG GCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGC CCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGG CCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGGTAACCA CGTGCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCT AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTC TCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCG ACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCG GGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCT GCCTGCAGG
1382 CTX-175 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 528/1851
471/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 529/1851
472/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCA GGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGCCCCGAACTGAA AAAGCCCGGCGCCAGCGTCAAGATCAGCTGCAA GACCTCCGGCTACACCTTCACCGAGTACACCATC AACTGGGTGAAGCAGGCCCCCGGCCAGGGACTG GAATGGATTGGCGACATCTACCCCGACAACTACA ACATTAGGTATAACCAGAAGTTCCAGGGCAAGGC CACCATCACAAGAGACACCAGCAGCAGCACCGC CTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGA CACCGCCGTGTACTACTGCGCCAACCACGACTTC TTCGTGTTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTGACA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 530/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTGTCCAGCGGCGGCGGCGGCTCCGGCGGCGG CGGCTCCGGCGGCGGCGGCAGCGACATTCAGAT GACACAGAGCCCCTCCAGCCTGAGCGCCAGCCT GGGCGATAGGGTGACCATCACCTGCAGAACCAG CCAGGACATCAGCAACCACCTGAATTGGTACCAG CAGAAGCCCGGAAAGGCCCCCAAACTGCTGATC TACTACACCAGCAGGCTGGAGAGCGGCGTGCCT AGCAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACAGAT TACAGCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAA GACATCGGCACCTACTACTGCCAGCAGGGCAAC ACCCTGCCCCCTACCTTTGGCGGAGGCACCAAG CTGGAGATCAAGAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGG TATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGC CCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGC CTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGC CGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGG GGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGG CTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTT GTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGA ATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGA TTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCG ACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCAC GAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAGTT TTCCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAA GGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGG GACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAAC GCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAA CCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACA ATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTA CTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACG GGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTT GAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTG CATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAA ATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGGTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 531/1851
474/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
I I I I G I GTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATG TGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAA GACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCT TTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGG AATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATG ATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCC TTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAG AAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAAT GACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGG CAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCT CCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAG ACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATT CTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTC TCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTA AGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCA ATCACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGG TGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGG GGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGG GGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATA ACTTCAGATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGGTTGA GAAAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAA GGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCA GCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGA GGCCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGGTAAC CACGTGCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCC CTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCC TCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGG CGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCC CGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG CTGCCTGCAGG
1383 CTX-176 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 532/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 533/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGA CATCCAGATGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGAG CGCTTCCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTG CCAGGCCAGCCAGGACATCAGCAACTACCTCAAC TGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAG CTGCTGATCTACTACACCTCCAGGCTGGAGACCG GAGTGCCCTCCAGA1 1 1 1CCGGCAGCGGCAGCG GCACCGATTTCACCTTCACCATCAGCAGCCTGCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 534/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCCCGAGGACATCGCCACCTACTATTGCCAGCA GGGCAACACCCTGCCCCCCACATTTGGAGGCGG CACCAAGGTGGAGATCAAGGGCGGAGGAGGAAG CGGAGGAGGAGGAAGCGGAGGAGGCGGAAGCC AGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCTGAGCTCA AGAAGCCTGGCGCCAGCGTGAAGATCAGCTGCA AAGCCTCCGGATACACCTTCACCGAGTACACCAT CAATTGGGTGAGACAGGCCCCCGGCCAAAGACT GGAGTGGATGGGCGACATCTATCCCGACAACTAC AGCATCAGGTACAACCAGAAGTTCCAGGGCAGG GTGACAATCACCAGAGACACCAGCGCCAGCACC GCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAG GACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAATCACGACT TCTTCGTGTTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTGA CCGTCAGCTCCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGT ATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCC CCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCC TCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCC GACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGG GCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCT CCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGT CACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAAT CGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATT ACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGA CAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACG AGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAGTTT TCCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAA GGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGG GACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAAC GCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAA CCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACA ATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTA CTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACG GGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 535/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTG CATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAA ATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGGTT I I I I GTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATG TGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAA GACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCT TTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGG AATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATG ATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCC TTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAG AAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAAT GACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGG CAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCT CCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAG ACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATT CTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTC TCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTA AGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCA ATCACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGG TGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGG GGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGG GGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATA ACTTCAGATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGGTTGA GAAAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAA GGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCA GCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGA GGCCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGGTAAC CACGTGCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCC CTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCC TCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGG CGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCC CGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAG CTGCCTGCAGG
1384 CTX-177 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 536/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 537/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGA TATCCAGATGACACAGAGCCCTAGCTCCCTGAGC GCCAGCCTGGGCGATAGGGTGACCATCACCTGC AGGACCTCCCAGGACATCAGCAACCACCTGAACT GGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAAGCCCCCAAGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 538/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGCTGATCTACTACACCAGCAGGCTGGAAAGCGG CGTGCCCAGCAGGTTTAGCGGAAGCGGCAGCGG CACCGACTACAGCCTGACCATCAGCTCCCTGCAG CCCGAGGACATCGGCACCTACTACTGCCAGCAG GGCAACACCCTGCCTCCCACCTTCGGAGGCGGA ACCAAGCTGGAGATTAAGGGAGGCGGCGGAAGC GGCGGCGGCGGCTCCGGCGGAGGAGGCAGCCA GGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGAGCCGAGCTGAA AAAGCCTGGCGCCAGCGTGAAGATCAGCTGCAA GGCCAGCGGCTACACCTTCACCGAGTACACCATC AACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCCAGAGACTC GAGTGGATGGGCGACATCTACCCCGACAACTACT CCATCAGGTACAACCAGAAGTTTCAGGGCAGGGT GACCATTACCAGGGACACCAGCGCCAGCACAGC CTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGA TACAGCCGTCTACTACTGCGCCAACCACGACTTT TTCGTGTTCTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACC GTGTCCTCCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTAT TTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCC GCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTC TCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGA CCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGC TTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCC GTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCA CTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCG CTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTAC ATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAA GAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGA CTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG11 1 1CC CGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGA CAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGAC GCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCC GGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCC GAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 539/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCA GAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGA AAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTA CGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATAT GCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAATCGC TATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1 GT GTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAA ACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACAC CTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGT GCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGG CCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTC TAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATC CATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACA GTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACAC GGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGA GAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAAC TGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGT TTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAG CCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCT GTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCA GTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAATCAC TGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTGTTG AAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGT GCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGC CCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTC AGATTGGAATGTG 1 1 1 1AACTCAGGGTTGAGAAAA CAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCT CTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGCCCT ACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCT GGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGGTAACCACGT GCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGG AACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCT GCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACC AAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 540/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCT GCAGG
1385 CTX-178 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGAI I I I GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 541/1851
484/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
C1 1 1 1 1CCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGA CATCCAAATGACCCAGAGCCCTAGCTCCCTGAGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 542/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCTTCCGTGGGCGACAGAGTGACCATTACCTGC CAGGCCAGCCAGGACATCAGCAACTACCTGAACT GGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCCAAGC TGCTGATCTACTACACCAGCAGGCTGGAGACCG GAGTGCCCAGCAGGTTTAGCGGCTCCGGATCCG GCACCGACTTCACCTTCACCATCTCCAGCCTGCA GCCCGAGGACATCGCCACCTACTACTGCCAGCA GGGCAATACCCTCCCCCCTACCTTCGGAGGCGG CACCAAGGTGGAGATCAAGGGCGGCGGCGGCTC CGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCGGCAGCC AGGTGCAACTGGTGCAGAGCGGCCCTGAGCTGA AGAAACCCGGCGCCAGCGTGAAAATCAGCTGCA AGACCAGCGGCTACACATTCACCGAGTACACCAT CAACTGGGTGAAGCAGGCTCCCGGACAGGGACT GGAGTGGATCGGCGACATCTACCCTGACAACTAC AACATCAGATACAACCAAAAGTTCCAGGGCAAGG CCACCATCACCAGGGACACCAGCTCCTCCACCG CCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGG ACACCGCTGTGTACTACTGCGCCAACCACGACTT CTTCGTGTTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTGAC CGTGAGCAGCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTA TTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCC CGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCT CTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCG ACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGG CTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTC CGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTC ACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATC GCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTA CATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGAC AAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGA GACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1 CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAG GACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 543/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACG CCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACC CCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAAT GAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTAC TCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGG GGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGA GTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCA TATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAAT CGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGGTTTTT TGTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTG CAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGA CACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTT GGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAA TGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGAT GTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTT ATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAA ACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGA CACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCA GGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCC AACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGAC TGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCT AAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTC CCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAG TCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAAT CACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTG TTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGG TGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGG AGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAAC TTCAGATTGGAATGTG 1 1 1 1AACTCAGGGTTGAGA AAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGG GCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGC CCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGG CCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGGTAACCA CGTGCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 544/1851
487/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTC TCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCG ACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCG GGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCT GCCTGCAGG
1386 CTX-179 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTGAGATGTAAGGAGCTGCTGT GACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGGTA GTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTAT AGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAAC ATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGC CTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATG TACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCT GCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGGTTT TGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGT ATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGA GTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACT GAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTT GTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCA GCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCA TGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCC GCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCC TGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGT CCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGAI I I I GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGT AAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGT GCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 545/1851
488/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT AATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 546/1851
489/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCC CTTGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGA TATCCAGATGACACAAAGCCCCAGCAGCCTGTCC GCTAGCCTGGGCGATAGGGTGACCATCACATGC AGGACCAGCCAGGACATCTCCAACCACCTGAACT GGTACCAGCAGAAGCCTGGAAAGGCCCCCAAAC TGCTGATCTACTACACCAGCAGGCTGGAGAGCG GCGTGCCTAGCAGG 1 1 1 1CCGGCAGCGGCAGCG GCACCGACTATAGCCTGACCATCAGCTCCCTGCA GCCCGAGGACATCGGCACCTACTACTGCCAGCA GGGAAACACACTGCCCCCCACCTTTGGCGGCGG CACAAAGCTGGAGATCAAGGGCGGCGGCGGATC CGGCGGCGGAGGCAGCGGAGGAGGAGGAAGCC AGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGCCCTGAGCTGA AGAAGCCCGGAGCCAGCGTGAAAATTAGCTGCA AGACCTCCGGCTACACATTCACCGAGTACACCAT CAACTGGGTGAAGCAGGCTCCCGGCCAGGGACT GGAGTGGATCGGCGACATCTACCCCGACAACTA CAACATCAGGTACAACCAGAAATTCCAGGGCAAG GCCACCATCACCAGGGACACCAGCTCCTCCACC GCCTATATGGAGCTGTCCAGCCTGAGAAGCGAG GATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAACCACGATT TCTTCGTGTTCTGGGGCCAGGGCACACTGGTCAC CGTGAGCAGCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTA TTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCC CGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCT CTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCG ACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGG CTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTC CGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTC ACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATC GCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTA CATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGAC AAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 547/1851
490/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1 CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAG GACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGG ACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACG CCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACC CCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAAT GAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTAC TCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGG GGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGA GTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCA TATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAAT CGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGGTTTTT TGTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTG CAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGA CACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTT GGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAA TGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGAT GTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTT ATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAA ACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGA CACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCA GGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCC AACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGAC TGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCT AAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTC CCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAG TCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAAT CACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTG TTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGG TGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGG AGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAAC TTCAGATTGGAATGTG 1 1 1 1AACTCAGGGTTGAGA AAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGG GCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 548/1851
491/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
CCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGG CCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGGTAACCA CGTGCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCT AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTC TCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCG ACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCG GGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCT GCCTGCAGG
1583 CTX-139,1 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTTGTTTGGTACTTTACAGTTTA TTAAATAGATGTTTATATGGAGAAGCTCTCATTTC TTTCTCAGAAGAGCCTGGCTAGGAAGGTGGATGA GGCACCATATTCAI I I I GCAGGTGAAATTCCTGA GATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGCCT TATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAGAC GCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTATC AATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAGAT TTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTCCC ATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGACC ACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGCTG GGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCCAG AGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTATT AAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCCCT GCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGGCC TGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTCTT GGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGAGT CCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGATG CTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTTG CCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCACT GGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAAAG AGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCCTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 549/1851
492/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTGCC GTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCGGCTCCGG TGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCAC AGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAA TTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGT AAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGC CTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAA GTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAA CGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGT GTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGG TTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTG GCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGG GTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGC GCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTG AGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTG CGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTG CTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGAT GACCTGCTGCGACGC11 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAG TCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGT ATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGG GCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGG CGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGG ACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCT GGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCAC CAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCG GCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGC GGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCC ACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCG TCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGC CGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1G GAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTT TTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTG GAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 550/1851
493/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AATTCTCCTTGGAATTTGCCC1 1 1 1 1 GAG FTTGGA TCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCA AAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCAC CATGCTTC1 1 1 1GGTTACGTCTCTGTTGCTTTGCG AACTTCCTCATCCAGCGTTCTTGCTGATCCCCGA TATTCAGATGACTCAGACCACCAGTAGCTTGTCT GCCTCACTGGGAGACCGAGTAACAATCTCCTGCA GGGCAAGTCAAGACATTAGCAAATACCTCAATTG GTACCAGCAGAAGCCCGACGGAACGGTAAAACT CCTCATCTATCATACGTCAAGGTTGCATTCCGGA GTACCGTCACGA1 1 1 1CAGGTTCTGGGAGCGGAA CTGACTATTCCTTGACTATTTCAAACCTCGAGCAG GAGGACATTGCGACATATTTTTGTCAACAAGGTAA TACCCTCCCTTACACTTTCGGAGGAGGAACCAAA CTCGAAATTACCGGGTCCACCAGTGGCTCTGGGA AGCCTGGCAGTGGAGAAGGTTCCACTAAAGGCG AGGTGAAGCTCCAGGAGAGCGGCCCCGGTCTCG TTGCCCCCAGTCAAAGCCTCTCTGTAACGTGCAC AGTGAGTGGTGTATCATTGCCTGATTATGGCGTC TCCTGGATAAGGCAGCCCCCGCGAAAGGGTCTT GAATGGCTTGGGGTAATATGGGGCTCAGAGACAA CGTATTATAACTCCGCTCTCAAAAGTCGCTTGAC GATAATAAAAGATAACTCCAAGAGTCAAG 1 1 1 1CC TTAAAATGAACAGTTTGCAGACTGACGATACCGC TATATATTATTGTGCTAAACATTATTACTACGGCG GTAGTTACGCGATGGATTATTGGGGGCAGGGGA CTTCTGTCACAGTCAGTAGTGCTGCTGCCTTTGT CCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACT CCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACC ATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGG CATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATA CGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACAT TTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCCT TTTGTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 551/1851
494/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCAT TCCGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTG GGCCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCC CCCACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGT GAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATAT CAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGA ATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTG ATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGG GTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACT CTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAG GCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGAC GACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAG GGTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGC ACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAA TAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTT GG 1 1 1 1 1 1 GTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTG CATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCA GAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCA GCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTC AGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTC AATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCG GCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACT AAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAG AATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGT GGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCT CTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTC AGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTC ATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTAT TTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCA CTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCA CCAATCACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACC AGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATG AGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTT GGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 552/1851
495/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
AATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IAACI CAGGG TTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAG GGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGAT ACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTA TAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGG TAACCACGTGCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTC CTCCCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCAC TCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGC CGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTT TGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGC GCAGCTGCCTGCAGG
1584 CTX-139,2 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGA GGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCC CGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGG GAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGG CCGCACGCGTtgtttggtactttacagtttattaaatagatgtttatatgga gaagctctcatttctttctcagaagagcctggctaggaaggtggatgaggca ccatattcattttgcaggtgaaattcctG AG AT GT AAGG AGCT GC TGTGACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGTAAACGG TAGTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTTCTGATTTA TAGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGAGCAATCTCC TGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTTAATGCCAACA TACCATAAACCTCCCATTCTGCTAATGCCCAGCCTA AGTTGGGGAGACCACTCCAGATTCCAAGATGTACA GTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTT TACTCTGCCAGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAG AAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATT AAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCA GGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCAT GGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTC CCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCT AAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTG ACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCAT CACTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 553/1851
496/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AAGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTGC CGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACA AGTCTGTCTGCCGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGG CAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTT GGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTA GAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGAT GTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGG GGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGA ACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACA CAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTG GCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGA ATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATC CCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTC GAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGT GCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCC GCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTG TCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAA 1 1 1 1 1 GA 1GACC1 GO 1GCGACGC1 1 1 1 1 1 1CTGGCA AGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACA CTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGA CGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCG AGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATC GGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTC TGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCC GCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACC AGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGC CCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGC GCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACAC AAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCT TCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCA GGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACG TCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGG1 1 1 1ATGCGAT GGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 554/1851
497/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTT GGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCAT TCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1CT TCCATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGCTTC1 1 1 1G GTTACGTCTCTGTTGCTTTGCGAACTTCCTCATCCA GCGTTCTTGCTGATCCCCGATATTCAGATGACTCA GACCACCAGTAGCTTGTCTGCCTCACTGGGAGACC GAGTAACAATCTCCTGCAGGGCAAGTCAAGACATT AGCAAATACCTCAATTGGTACCAGCAGAAGCCCGA CGGAACGGTAAAACTCCTCATCTATCATACGTCAA GGTTGCATTCCGGAGTACCGTCACGA1 1 1 1CAGGT TCTGGGAGCGGAACTGACTATTCCTTGACTATTTC AAACCTCGAGCAGGAGGACATTGCGACATATTTTT GTCAACAAGGTAATACCCTCCCTTACACTTTCGGA GGAGGAACCAAACTCGAAATTACCGGGTCCACCA GTGGCTCTGGGAAGCCTGGCAGTGGAGAAGGTTC CACTAAAGGCGAGGTGAAGCTCCAGGAGAGCGGC CCCGGTCTCGTTGCCCCCAGTCAAAGCCTCTCTGT AACGTGCACAGTGAGTGGTGTATCATTGCCTGATT ATGGCGTCTCCTGGATAAGGCAGCCCCCGCGAAA GGGTCTTGAATGGCTTGGGGTAATATGGGGCTCA GAGACAACGTATTATAACTCCGCTCTCAAAAGTCG CTTGACGATAATAAAAGATAACTCCAAGAGTCAAGT TTTCCTTAAAATGAACAGTTTGCAGACTGACGATAC CGCTATATATTATTGTGCTAAACATTATTACTACGG CGGTAGTTACGCGATGGATTATTGGGGGCAGGGG ACTTCTGTCACAGTCAGTAGTGCTGCTGCCTTTGT CCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTC CCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCAT CGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCAT GCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAG GGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGG CTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTG TCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAAT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 555/1851
498/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTA CATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACA AGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGA CTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG1 1 1 1CCC GAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACA GAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCC GCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGG GAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGA AAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCA GAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATA GGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTC ACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAAC CAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCC TGCCTCCCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGA AGATGGATGTGTGTTGGTTTTTTGTGTGAAACAAAT GTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACA GACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTT CAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAAT CTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGC ATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGG TAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCC TTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTC TGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGT CTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTT ACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAG AGAATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAG GTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTC TCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTC AGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCAT TCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTC TCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAA GTCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAAT CACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTGT TGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 556/1851
499/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
TGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGC CCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTCA GATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAAC AGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCT CTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGCCCTACC AAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCTGGGA CAGGAGCTCAATGAGAAAGGTAACCACGTGCGGA CCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGGAACCCC TAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCT CGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCG CCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGT GAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG
1585 CTX-139,3 CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTG AGGCCGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGC CCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGA GGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTG CGGCCGCACGCGTTGTTTGGTACTTTACAGTTTA TTAAATAGATGTTTATATGGAGAAGCTCTCATTTC TTTCTCAGAAGAGCCTGGCTAGGAAGGTGGATGA GGCACCATATTCAI I I I GCAGGTGAAATTCCTGA GATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGCCT TATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAGAC GCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTATC AATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAGAT TTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTCCC ATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGACC ACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGCTG GGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCCAG AGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTATT AAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCCCT GCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGGCC TGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTCTT GGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGAGT CCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGATG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 557/1851
500/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTTG CCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCACT GGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAAAG AGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCCTC TTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTGCC GTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACA AGTCTGTCTGACTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTCGG CTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATC GCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGT CGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCG CGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTG GCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACC GTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTT TTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAA GTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCT TTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTAC TTCCACTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCG AGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGA GGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTG CTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCC GCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCT GTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAA AA1 1 1 1 1 GA 1 GACC 1 GO 1 GCGACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTG GCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTG CACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGC GGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGT TCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACC GAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCG GCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTG TATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCG GTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCC GCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATG GAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTG AGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 558/1851
501/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTAC CGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCG AGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGG AGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGA GTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCA CTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTG AGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACA GTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTC GTGACCACCATGCTTC1 1 1 1GGTTACGTCTCTGTT GCTTTGCGAACTTCCTCATCCAGCGTTCTTGCTG ATCCCCGATATTCAGATGACTCAGACCACCAGTA GCTTGTCTGCCTCACTGGGAGACCGAGTAACAAT CTCCTGCAGGGCAAGTCAAGACATTAGCAAATAC CTCAATTGGTACCAGCAGAAGCCCGACGGAACG GTAAAACTCCTCATCTATCATACGTCAAGGTTGCA TTCCGGAGTACCGTCACGA1 1 1 1CAGGTTCTGGG AGCGGAACTGACTATTCCTTGACTATTTCAAACCT CGAGCAGGAGGACATTGCGACATATTTTTGTCAA CAAGGTAATACCCTCCCTTACACTTTCGGAGGAG GAACCAAACTCGAAATTACCGGGTCCACCAGTGG CTCTGGGAAGCCTGGCAGTGGAGAAGGTTCCAC TAAAGGCGAGGTGAAGCTCCAGGAGAGCGGCCC CGGTCTCGTTGCCCCCAGTCAAAGCCTCTCTGTA ACGTGCACAGTGAGTGGTGTATCATTGCCTGATT ATGGCGTCTCCTGGATAAGGCAGCCCCCGCGAA AGGGTCTTGAATGGCTTGGGGTAATATGGGGCTC AGAGACAACGTATTATAACTCCGCTCTCAAAAGTC GCTTGACGATAATAAAAGATAACTCCAAGAGTCAA G 1 1 1 1 CCTTAAAATGAACAGTTTGCAGACTGACGA TACCGCTATATATTATTGTGCTAAACATTATTACTA CGGCGGTAGTTACGCGATGGATTATTGGGGGCA GGGGACTTCTGTCACAGTCAGTAGTGCTGCTGCC TTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCA CGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 559/1851
502/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCC CGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTG TTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATAT TTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGG CGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATT GTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTT GTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCGCC GGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACCCTA TGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTC CCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCC GGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAAC GAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGAC GTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAA ATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAA GAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGA TGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGA TGTGTGTTGGI 1 1 1 1 IGIGIGAIICACCGAI 1 1 IG ATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCT GATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACAT GAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTG GCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAA ACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACAC CTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGT GCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGG CCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTC TAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATC CATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACA GTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACAC GGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGA GAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 560/1851
503/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGT TTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAG CCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCT GTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCA GTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAATCAC TGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTGTTG AAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGT GCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGC CCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTC AGATTGGAATGTG 1 1 1 1AACTCAGGGTTGAGAAAA CAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCT CTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGCCCT ACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCT GGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGGTAACCACGT GCGGACCGAGGCTGCAGCGTCGTCCTCCCTAGG AACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCT GCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACC AAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGC GGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCT GCAGG
Tabela 35.Sequências de Nucleotídeos do Modelo Doador - Braço de Homologia Esquerdo para Braço de Homologia Direito
SEQ ID NO: Descrição Sequência
1387 LHA a RHA de CTX-131 GAAGCCCAGAGCAGGGCCTTAGGGAAGCGGGAC CCTGCTCTGGGCGGAGGAATATGTCCCAGATAG CACTGGGGACTCTTTAAGGAAAGAAGGATGGAGA AAGAGAAAGGGAGTAGAGGCGGCCACGACCTGG TGAACACCTAGGACGCACCATTCTCACAAAGGGA G I I I ICCACACGGACACCCCCCTCCTCACCACAG CCCTGCCAGGACGGGGCTGGCTACTGGCCTTAT CTCACAGGTAAAACTGACGCACGGAGGAACAATA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 561/1851
504/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TAAATTGGGGACTAGAAAGGTGAAGAGCCAAAGT TAGAACTCAGGACCAACTTATTCTGA1 1 1 1 G 1 1 1 1 TCCAAACTGCTTCTCCTCTTGGGAAGTGTAAGGA AGCTGCAGCACCAGGATCAGTGAAACGCACCAG ACGGCCGCGTCAGAGCAGCTCAGGTTCTGGGAG AGGGTAGCGCAGGGTGGCCACTGAGAACCGGGC AGGTCACGCATCCCCCCCTTCCCTCCCACCCCCT GCCAAGCTCTCCCTCCCAGGATCCTCTCTGGCTC CATCGTAAGCAAACCTTAGAGGTTCTGGCAAGGA GAGAGATGGCTCCAGGAAATGGGGGTGTGTCAC CAGATAAGGAATCTGCCTAACAGGAGGTGGGGG TTAGACCCAATATCAGGAGACTAGGAAGGAGGAG GCCTAAGGATGGGGC1 1 1 1CTGTCACCAGCCACT AGTGGCCGCCAGTGTGATGGATATCTGCAGAATT CGCCCTTATGGGGATCCGAACAGAGAGACAGCA GAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTGGTAAGCA GTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGTTG GAACAGCAGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGT GGTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAG AACAGATGGTCCCCAGATGCGGTCCCGCCCTCA GCAGTTTCTAGAGAACCATCAGATGTTTCCAGGG TGCCCCAAGGACCTGAAATGACCCTGTGCCTTAT TTGAACTAACCAATCAGTTCGCTTCTCGCTTCTGT TCGCGCGCTTCTGCTCCCCGAGCTCTATATAAGC AGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTGGA GACGCCATCCACGCTG 1 1 1 1GACCTCCATAGAAG ACACCGACTCTAGAGGGACCATGCTTC1 1 1 1GGT TACGTCTCTGTTGCTTTGCGAACTTCCTCATCCAG CGTTCTTGCTGATCCCCGATATTCAGATGACTCA GACCACCAGTAGCTTGTCTGCCTCACTGGGAGAC CGAGTAACAATCTCCTGCAGGGCAAGTCAAGACA TTAGCAAATACCTCAATTGGTACCAGCAGAAGCC CGACGGAACGGTAAAACTCCTCATCTATCATACG TCAAGGTTGCATTCCGGAGTACCGTCACGA1 1 1 1
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 562/1851
505/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CAGGTTCTGGGAGCGGAACTGACTATTCCTTGAC TATTTCAAACCTCGAGCAGGAGGACATTGCGACA TATTTTTGTCAACAAGGTAATACCCTCCCTTACAC TTTCGGAGGAGGAACCAAACTCGAAATTACCGGG TCCACCAGTGGCTCTGGGAAGCCTGGCAGTGGA GAAGGTTCCACTAAAGGCGAGGTGAAGCTCCAG GAGAGCGGCCCCGGTCTCGTTGCCCCCAGTCAA AGCCTCTCTGTAACGTGCACAGTGAGTGGTGTAT CATTGCCTGATTATGGCGTCTCCTGGATAAGGCA GCCCCCGCGAAAGGGTCTTGAATGGCTTGGGGT AATATGGGGCTCAGAGACAACGTATTATAACTCC GCTCTCAAAAGTCGCTTGACGATAATAAAAGATAA CTCCAAGAGTCAAG 1 1 1 1 CCTTAAAATGAACAGTT TGCAGACTGACGATACCGCTATATATTATTGTGCT AAACATTATTACTACGGCGGTAGTTACGCGATGG ATTATTGGGGGCAGGGGACTTCTGTCACAGTCAG TAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCA GCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCT CCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTC TTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCG CCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACT TCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGC GGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCGTT ATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAA GCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAAT ATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAA CATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCG CTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAG CGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAA TCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGC GAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGG AGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGA AAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCC AGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAAT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 563/1851
506/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGG TCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCA ACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGG CCCTGCCTCCCAGAGGAAGCGGAGCTACTAACTT CAGCCTGCTGAAGCAGGCTGGAGACGTGGAGGA GAACCCTGGACCTATGGTGAGCAAGGGCGAGGA GCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGA GCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAG CGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTA CGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACC GGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTG ACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGC CGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCT TCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGG AGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTA CAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGA CACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCAT CGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCA CAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTC TATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCA AGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGA CGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCA GAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCT GCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGC CCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCA CATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGG GATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAA TAATAAAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGAT GTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGACTGTGGGGTGGAG GGGACAGATAAAAGTACCCAGAACCAGAGCCACA TTAACCGGCCCTGGGAATATAAGGTGGTCCCAGC TCGGGGACACAGGATCCCTGGAGGCAGCAAACA TGCTGTCCTGAAGTGGACATAGGGGCCCGGGTT GGAGGAAGAAGACTAGCTGAGCTCTCGGACCCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 564/1851
507/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGGAAGATGCCATGACAGGGGGCTGGAAGAGCT AGCACAGACTAGAGAGGTAAGGGGGGTAGGGGA GCTGCCCAAATGAAAGGAGTGAGAGGTGACCCG AATCCACAGGAGAACGGGGTGTCCAGGCAAAGA AAGCAAGAGGATGGAGAGGTGGCTAAAGCCAGG GAGACGGGGTACTTTGGGGTTGTCCAGAAAAAC GGTGATGATGCAGGCCTACAAGAAGGGGAGGCG GGACGCAAGGGAGACATCCGTCGGAGAAGGCCA TCCTAAGAAACGAGAGATGGCACAGGCCCCAGA AGGAGAAGGAAAAGGGAACCCAGCGAGTGAAGA CGGCATGGGGTTGGGTGAGGGAGGAGAGATGCC CGGAGAGGACCCAGACACGGGGAGGATCCGCTC AGAGGACATCACGTGGTGCAGCGCCGAGAAGGA AGTGCTCCGGAAAGAGCATCCTTGGGCAGCAAC ACAGCAGAGAGCAAGGGGAAGAGGGAGTGGAG GAAGACGGAACCTGAAGGAGGCGGC
1388 LHA a RHA de CTX-133 GAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTA TTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTG GCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACTGAA ATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTTGTG CCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCAGCT GGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCATGA GACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCCGCC CTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCCTGG GTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGTCCTA ACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCAGAAC CCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTA AATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA I I I I GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGG ATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTA GACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCC CGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTC CCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGA ACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 565/1851
508/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTT TTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTG CAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGG GTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGT GGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTAT GGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCT GCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTT GGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCT TAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGG CCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGA ATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTT TCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGA CCTGCTGCGACGC1 1 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAGTC TTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTAT TTCGG1 1 1 1 1GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGC CCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCG GGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGAC GGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGG TGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGC CCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCA GTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGC CCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGG CGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACA CAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCG CTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGT CCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAG TACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1 AT GCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAG ACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAAT TCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCT TGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAA G 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCACCA TGCTTC1 1 1 1GGTTACGTCTCTGTTGCTTTGCGAA CTTCCTCATCCAGCGTTCTTGCTGATCCCCGATAT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 566/1851
509/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TCAGATGACTCAGACCACCAGTAGCTTGTCTGCC TCACTGGGAGACCGAGTAACAATCTCCTGCAGGG CAAGTCAAGACATTAGCAAATACCTCAATTGGTAC CAGCAGAAGCCCGACGGAACGGTAAAACTCCTC ATCTATCATACGTCAAGGTTGCATTCCGGAGTAC CGTCACGA1 1 1 1CAGGTTCTGGGAGCGGAACTGA CTATTCCTTGACTATTTCAAACCTCGAGCAGGAG GACATTGCGACATATTTTTGTCAACAAGGTAATAC CCTCCCTTACACTTTCGGAGGAGGAACCAAACTC GAAATTACCGGGTCCACCAGTGGCTCTGGGAAG CCTGGCAGTGGAGAAGGTTCCACTAAAGGCGAG GTGAAGCTCCAGGAGAGCGGCCCCGGTCTCGTT GCCCCCAGTCAAAGCCTCTCTGTAACGTGCACAG TGAGTGGTGTATCATTGCCTGATTATGGCGTCTC CTGGATAAGGCAGCCCCCGCGAAAGGGTCTTGA ATGGCTTGGGGTAATATGGGGCTCAGAGACAAC GTATTATAACTCCGCTCTCAAAAGTCGCTTGACGA TAATAAAAGATAACTCCAAGAGTCAAG 1 1 1 1 CCTT AAAATGAACAGTTTGCAGACTGACGATACCGCTA TATATTATTGTGCTAAACATTATTACTACGGCGGT AGTTACGCGATGGATTATTGGGGGCAGGGGACTT CTGTCACAGTCAGTAGTGCTGCTGCCTTTGTCCC GGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCC GCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATC GCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCAT GCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGA GGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTG GGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACA GGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTC CGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGG CCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCC CACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGA AG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 567/1851
510/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAAT TTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGAT AAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGG TAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTC TACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGG CCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACG ACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGG GTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCA CTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGAGGAAGC GGAGCTACTAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCTG GAGACGTGGAGGAGAACCCTGGACCTATGGTGA GCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGC CCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACG GCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGG GCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTT CATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTG GCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGT GCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAA GCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAA GGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGG ACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGA AGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCG AGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCA ACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAA CAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAG AAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCC ACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCG ACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACG GCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGA GCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACG AGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGT GACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGA GCTGTACAAGTAATAATAAAATAAAATCGCTATCC ATCGAAGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 568/1851
511/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCC TTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTT CCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTT CGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGG TTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAA CTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTG CCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAG CCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAA AAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGG CACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTT CCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCC CTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTT CTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGC CAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCA CGCAGTCACTCATTAACCC
1389 LHA a RHA de CTX-135 I I I I G IAAAGAATATAGGTAAAAAGTGGCAI I I I I TCTTTGGATTTAATTCTTATGGATTTAAGTCAACAT GTAI I I I CAAGCCAACAAG I I I I GTTAATAAGATG GCTGCACCCTGCTGCTCCATGCCAGATCCACCAC ACAGAAAGCAAATGTTCAGTGCATCTCCCTCTTC CTGTCAGAGCTTATAGAGGAAGGAAGACCCCGCA ATGTGGAGGCATATTGTATTACAATTAC I I I IAAT GGCAAAAACTGCAGTTAC I I I I GTGCCAACCTACT ACATGGTCTGGACAGCTAAATGTCATGTATTTTTC ATGGCCCCTCCAGGTATTGTCAGAGTCCTCTTGT TTGGCCTTCTAGGAAGGCTGTGGGACCCAGCTTT CTTCAACCAGTCCAGGTGGAGGCCTCTGCCTTGA ACGTTTCCAAGTGAGGTAAAACCCGCAGGCCCAG AGGCCTCTCTACTTCCTGTGTGGGGTTCAGAAAC CCTCCTCCCCTCCCAGCCTCAGGTGCCTGCTTCA GAAAATGGTGAGTCTCTCTCTTATAAAGCCCTCCT I I I ICATCCTAGCATTGGGAACAATGGCCCCAGG GTCCTTATCTCTAGCAGATG I I I I GAAAAAGTCAT CTG I I I I GO I I I I I I I CCAGAAGTAGTAAGTCTGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 569/1851
512/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGGCCTCCGCCATCTTAGTAAAGTAACAGTCCCA TGAAACAAAGATGCTTC1 1 1 1 GGTTACGTCTCTGT TGCTTTGCGAACTTCCTCATCCAGCGTTCTTGCT GATCCCCGATATTCAGATGACTCAGACCACCAGT AGCTTGTCTGCCTCACTGGGAGACCGAGTAACAA TCTCCTGCAGGGCAAGTCAAGACATTAGCAAATA CCTCAATTGGTACCAGCAGAAGCCCGACGGAAC GGTAAAACTCCTCATCTATCATACGTCAAGGTTGC ATTCCGGAGTACCGTCACGA1 1 1 1CAGGTTCTGG GAGCGGAACTGACTATTCCTTGACTATTTCAAACC TCGAGCAGGAGGACATTGCGACATATTTTTGTCA ACAAGGTAATACCCTCCCTTACACTTTCGGAGGA GGAACCAAACTCGAAATTACCGGGTCCACCAGTG GCTCTGGGAAGCCTGGCAGTGGAGAAGGTTCCA CTAAAGGCGAGGTGAAGCTCCAGGAGAGCGGCC CCGGTCTCGTTGCCCCCAGTCAAAGCCTCTCTGT AACGTGCACAGTGAGTGGTGTATCATTGCCTGAT TATGGCGTCTCCTGGATAAGGCAGCCCCCGCGA AAGGGTCTTGAATGGCTTGGGGTAATATGGGGCT CAGAGACAACGTATTATAACTCCGCTCTCAAAAGT CGCTTGACGATAATAAAAGATAACTCCAAGAGTC AAG 1 1 1 1 CCTTAAAATGAACAGTTTGCAGACTGAC GATACCGCTATATATTATTGTGCTAAACATTATTA CTACGGCGGTAGTTACGCGATGGATTATTGGGG GCAGGGGACTTCTGTCACAGTCAGTAGTGCTGCT GCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGA CCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCG CTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCG CCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTG CTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGA TATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGC GGCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTA TTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGG TTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 570/1851
513/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACC CTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAG GTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCT CCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATA ACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATG ACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGG AAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCA AGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAG ATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGAGGAAGCGGAGCTACTAACTTCAGCCTGCTGA AGCAGGCTGGAGACGTGGAGGAGAACCCTGGAC CTATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCG GGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCG ACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCG AGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGA CCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCC CGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGAC CTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGA CCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCC ATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATC TTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCG CCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGA ACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGG AGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGT ACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGC CGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTC AAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTG CAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCC ATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAAC CACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAA GACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 571/1851
514/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTC GGCATGGACGAGCTGTACAAGTAATAATAAAATA AAATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGG I I I I I IGTGTGGTGAGTAGGATGGAGTGGAAAGG GTGGTGTGTCTCCAGACCGCTGGAAGGCTTACA GCCTTACCTGGCACTGCCTAGTGGCACCAAGGA GCCTCATTTACCAGATGTAAGGAACTGTTTGTGCT ATGTTAGGGTGAGGGATTAGAGCTGGGGACTAAA GAAAAAGATAGGCCACGGGTGCCTGGGAGAGCG TTCGGGGAGCAGGCAAAGAAGAGCAGTTGGGGT GATCATAGCTATTGTGAGCAGAGAGGTCTCGCTA CCTCTAAGTACGAGCTCATTCCAACTTACCCAGC CCTCCAGAACTAACCCAAAAGAGACTGGAAGAGC GAAGCTCCACTCCTTG I I I I GAAGAGACCAGATA CTTGCGTCCAAACTCTGCACAGGGCATATATAGC AATTCACTATCTTTGAGACCATAAAACGCCTCGTA AI I I I I AG I CC I I I I CAAGTGACCAACAACTTTCA GTTTATTTCAI I I I I I IGAAGCAAGATGGATTATGA ATTGATAAATAACCAAGAGCATTTCTGTATCTCAT ATGAGATAAATAATACCAAAAAAAGTTGCCATTTA TTGTCAGATACTGTGTAAAGAAAAAATTATTTAGA CGTGTTAACTGGTTTAATCCTACTTCTGCCTAGGA AGGAAGGTGTTATATCCTC I I I I IAAAAI I C I I I I I AAI I I I GACTATATAAACTGATAA
1390 LHA a RHA de CTX-138 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 572/1851
515/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 573/1851
516/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGCTTC1 1 1 1G GTTACGTCTCTGTTGCTTTGCGAACTTCCTCATCC AGCGTTCTTGCTGATCCCCGATATTCAGATGACT CAGACCACCAGTAGCTTGTCTGCCTCACTGGGAG ACCGAGTAACAATCTCCTGCAGGGCAAGTCAAGA CATTAGCAAATACCTCAATTGGTACCAGCAGAAG CCCGACGGAACGGTAAAACTCCTCATCTATCATA CGTCAAGGTTGCATTCCGGAGTACCGTCACGATT TTCAGGTTCTGGGAGCGGAACTGACTATTCCTTG ACTATTTCAAACCTCGAGCAGGAGGACATTGCGA CATATTTTTGTCAACAAGGTAATACCCTCCCTTAC ACTTTCGGAGGAGGAACCAAACTCGAAATTACCG GGTCCACCAGTGGCTCTGGGAAGCCTGGCAGTG GAGAAGGTTCCACTAAAGGCGAGGTGAAGCTCC AGGAGAGCGGCCCCGGTCTCGTTGCCCCCAGTC AAAGCCTCTCTGTAACGTGCACAGTGAGTGGTGT ATCATTGCCTGATTATGGCGTCTCCTGGATAAGG CAGCCCCCGCGAAAGGGTCTTGAATGGCTTGGG GTAATATGGGGCTCAGAGACAACGTATTATAACT CCGCTCTCAAAAGTCGCTTGACGATAATAAAAGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 574/1851
517/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TAACTCCAAGAGTCAAG 1 1 1 1 CCTTAAAATGAACA GTTTGCAGACTGACGATACCGCTATATATTATTGT GCTAAACATTATTACTACGGCGGTAGTTACGCGA TGGATTATTGGGGGCAGGGGACTTCTGTCACAGT CAGTAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTC CCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGC CCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAAC CTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCG CCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGG ACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTG GCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCG TTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCA AAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGA ATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAA AACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTT CGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGA AGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAG AATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCC GCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGG GGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAA GAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACT CCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGA AATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAA AGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACG GCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGC AGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAATCGCTA TCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGT GTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAAC GCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTT CTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGC CTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCC AGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTA AAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCA TTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 575/1851
518/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGG GAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGA GGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTG AGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTT GCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGC CCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTG TCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAG TCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAATCACT GATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTGTTGA AGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTG CCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGCC CATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTCA GATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAA CAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCT CTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGCCCT ACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCT GGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGG
1391 LHA a RHA de CTX-139 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 576/1851
519/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCGGCTCC GGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCC ACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGC AATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGG GTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCC GCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATAT AAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGC AACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCC GTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACG GGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCA CTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTT CGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCT TGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAG TTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGC GTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTC GCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTT TTGATGACCTGCTGCGACGC1 1 1 1 1 1 1CTGGCAA GATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACA CTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCG ACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGG CGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGA ATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCT GCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATC GCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTC GGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCT TCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAG GACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGT CACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTC AGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCG GGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAG C1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAG GGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 577/1851
520/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACT TGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAG TTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGT GGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGT GACCACCATGCTTC1 1 1 1GGTTACGTCTCTGTTGC TTTGCGAACTTCCTCATCCAGCGTTCTTGCTGATC CCCGATATTCAGATGACTCAGACCACCAGTAGCT TGTCTGCCTCACTGGGAGACCGAGTAACAATCTC CTGCAGGGCAAGTCAAGACATTAGCAAATACCTC AATTGGTACCAGCAGAAGCCCGACGGAACGGTA AAACTCCTCATCTATCATACGTCAAGGTTGCATTC CGGAGTACCGTCACGA1 1 1 1CAGGTTCTGGGAGC GGAACTGACTATTCCTTGACTATTTCAAACCTCGA GCAGGAGGACATTGCGACATATTTTTGTCAACAA GGTAATACCCTCCCTTACACTTTCGGAGGAGGAA CCAAACTCGAAATTACCGGGTCCACCAGTGGCTC TGGGAAGCCTGGCAGTGGAGAAGGTTCCACTAA AGGCGAGGTGAAGCTCCAGGAGAGCGGCCCCG GTCTCGTTGCCCCCAGTCAAAGCCTCTCTGTAAC GTGCACAGTGAGTGGTGTATCATTGCCTGATTAT GGCGTCTCCTGGATAAGGCAGCCCCCGCGAAAG GGTCTTGAATGGCTTGGGGTAATATGGGGCTCAG AGACAACGTATTATAACTCCGCTCTCAAAAGTCG CTTGACGATAATAAAAGATAACTCCAAGAGTCAAG 1 1 1 1 CCTTAAAATGAACAGTTTGCAGACTGACGAT ACCGCTATATATTATTGTGCTAAACATTATTACTAC GGCGGTAGTTACGCGATGGATTATTGGGGGCAG GGGACTTCTGTCACAGTCAGTAGTGCTGCTGCCT TTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCAC GACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCC CACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCC GAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTT CATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTT ACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 578/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTA ATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTT GCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGG CCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATG CCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCC GAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGG CATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGA ACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGT GCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAAT GGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGA AGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATG GCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGC GAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTC TACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGT ACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAG ATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGATG TGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAACAAATCTG ACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATT ATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTA AGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCT TGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTC TGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTG GTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCTCT 1 1 1 1ACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGT CCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGA GAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCT CAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCT TTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAG GCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCT CCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCC AGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATT AACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCACATGAA TGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGT CAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 579/1851
522/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAA AGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IAAC TCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACAAA AGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTT GAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGG ACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAATGA GAAAGG
1392 LHA a RHA de CTX-140 TAATCCTCCGGCAAACCTCTGTTTCCTCCTCAAAA GGCAGGAGGTCGGAAAGAATAAACAATGAGAGT CACATTAAAAACACAAAATCCTACGGAAATACTGA AGAATGAGTCTCAGCACTAAGGAAAAGCCTCCAG CAGCTCCTGCTTTCTGAGGGTGAAGGATAGACGC TGTGGCTCTGCATGACTCACTAGCACTCTATCAC GGCCATATTCTGGCAGGGTCAGTGGCTCCAACTA ACATTTGTTTGGTACTTTACAGTTTATTAAATAGAT GTTTATATGGAGAAGCTCTCATTTCTTTCTCAGAA GAGCCTGGCTAGGAAGGTGGATGAGGCACCATA TTCAI I I I GCAGGTGAAATTCCTGAGATGTAAGGA GCTGCTGTGACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGT AAACGGTAGTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTT CTGATTTATAGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGA GCAATCTCCTGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTT AATGCCAACATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAA TGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATT CCAAGATGTACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTC CCATGCCTGCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGC TGGGG I I I IGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAA TAAGCAGTATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGT TTCCTTGAGTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAA CGTTCACTGAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATT GATAGCTTGTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCAT CACGAGCAGCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCG TATAAAGCATGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCAC AGAGCCCCGCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 580/1851
523/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTCCAGCCTGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGA GATCATGTCCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACA GATATCGGAAGCGGAGCTACTAACTTCAGCCTGC TGAAGCAGGCTGGAGACGTGGAGGAGAACCCTG GACCCATGCTTC1 1 1 1GGTTACGTCTCTGTTGCTT TGCGAACTTCCTCATCCAGCGTTCTTGCTGATCC CCGATATTCAGATGACTCAGACCACCAGTAGCTT GTCTGCCTCACTGGGAGACCGAGTAACAATCTCC TGCAGGGCAAGTCAAGACATTAGCAAATACCTCA ATTGGTACCAGCAGAAGCCCGACGGAACGGTAA AACTCCTCATCTATCATACGTCAAGGTTGCATTCC GGAGTACCGTCACGA1 1 1 1CAGGTTCTGGGAGCG GAACTGACTATTCCTTGACTATTTCAAACCTCGAG CAGGAGGACATTGCGACATATTTTTGTCAACAAG GTAATACCCTCCCTTACACTTTCGGAGGAGGAAC CAAACTCGAAATTACCGGGTCCACCAGTGGCTCT GGGAAGCCTGGCAGTGGAGAAGGTTCCACTAAA GGCGAGGTGAAGCTCCAGGAGAGCGGCCCCGG TCTCGTTGCCCCCAGTCAAAGCCTCTCTGTAACG TGCACAGTGAGTGGTGTATCATTGCCTGATTATG GCGTCTCCTGGATAAGGCAGCCCCCGCGAAAGG GTCTTGAATGGCTTGGGGTAATATGGGGCTCAGA GACAACGTATTATAACTCCGCTCTCAAAAGTCGCT TGACGATAATAAAAGATAACTCCAAGAGTCAAGTT TTCCTTAAAATGAACAGTTTGCAGACTGACGATAC CGCTATATATTATTGTGCTAAACATTATTACTACG GCGGTAGTTACGCGATGGATTATTGGGGGCAGG GGACTTCTGTCACAGTCAGTAGTGCTGCTGCCTT TGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACG ACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCC ACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCG AGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTC ATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTA CATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 581/1851
524/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAA TCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTG CATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGC CTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGC CCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCG AGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGC ATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAA CTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTG CTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATG GGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAA GGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGG CGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCG AACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCT ACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTA CGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGA TAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGATGT GTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGCCAGTGACAAGTCTGT CTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTCAAACAAATG TGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACA GACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACT TCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAA ATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACA GCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCC AGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTG TTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCA GAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGAT TGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAAC CCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTG GCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGAT GAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCC CAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGC CTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCT CTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTT GCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 582/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCA CTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCA CATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTA AAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGC ACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTG GGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTGTT TTAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGG ACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGC TACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGA GAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCA ATGAGAAAGGAGAAGAGCAGCAGGCATGAGTTG AATGAAGGAGGCAGGGCCGGGTCACAGGG
1393 LHA a RHA de CTX-141 TAATCCTCCGGCAAACCTCTGTTTCCTCCTCAAAA GGCAGGAGGTCGGAAAGAATAAACAATGAGAGT CACATTAAAAACACAAAATCCTACGGAAATACTGA AGAATGAGTCTCAGCACTAAGGAAAAGCCTCCAG CAGCTCCTGCTTTCTGAGGGTGAAGGATAGACGC TGTGGCTCTGCATGACTCACTAGCACTCTATCAC GGCCATATTCTGGCAGGGTCAGTGGCTCCAACTA ACATTTGTTTGGTACTTTACAGTTTATTAAATAGAT GTTTATATGGAGAAGCTCTCATTTCTTTCTCAGAA GAGCCTGGCTAGGAAGGTGGATGAGGCACCATA TTCAI I I I GCAGGTGAAATTCCTGAGATGTAAGGA GCTGCTGTGACTTGCTCAAGGCCTTATATCGAGT AAACGGTAGTGCTGGGGCTTAGACGCAGGTGTT CTGATTTATAGTTCAAAACCTCTATCAATGAGAGA GCAATCTCCTGGTAATGTGATAGATTTCCCAACTT AATGCCAACATACCATAAACCTCCCATTCTGCTAA TGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGACCACTCCAGATT CCAAGATGTACAGTTTGCTTTGCTGGGCCTTTTTC CCATGCCTGCCTTTACTCTGCCAGAGTTATATTGC TGGGG I I I IGAAGAAGATCCTATTAAATAAAAGAA TAAGCAGTATTATTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGT TTCCTTGAGTGGCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 583/1851
526/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGTTCACTGAAATCATGGCCTCTTGGCCAAGATT GATAGCTTGTGCCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCAT CACGAGCAGCTGGTTTCTAAGATGCTATTTCCCG TATAAAGCATGAGACCGTGACTTGCCAGCCCCAC AGAGCCCCGCCCTTGTCCATCACTGGCATCTGGA CTCCAGCCTGGGTTGGGGCAAAGAGGGAAATGA GATCATGTCCTAACCCTGATCCTCTTGTCCCACA GATATCGGAAGCGGAGCTACTAACTTCAGCCTGC TGAAGCAGGCTGGAGACGTGGAGGAGAACCCTG GACCCATGCTTC1 1 1 1GGTTACGTCTCTGTTGCTT TGCGAACTTCCTCATCCAGCGTTCTTGCTGATCC CCGATATTCAGATGACTCAGACCACCAGTAGCTT GTCTGCCTCACTGGGAGACCGAGTAACAATCTCC TGCAGGGCAAGTCAAGACATTAGCAAATACCTCA ATTGGTACCAGCAGAAGCCCGACGGAACGGTAA AACTCCTCATCTATCATACGTCAAGGTTGCATTCC GGAGTACCGTCACGA1 1 1 1CAGGTTCTGGGAGCG GAACTGACTATTCCTTGACTATTTCAAACCTCGAG CAGGAGGACATTGCGACATATTTTTGTCAACAAG GTAATACCCTCCCTTACACTTTCGGAGGAGGAAC CAAACTCGAAATTACCGGGTCCACCAGTGGCTCT GGGAAGCCTGGCAGTGGAGAAGGTTCCACTAAA GGCGAGGTGAAGCTCCAGGAGAGCGGCCCCGG TCTCGTTGCCCCCAGTCAAAGCCTCTCTGTAACG TGCACAGTGAGTGGTGTATCATTGCCTGATTATG GCGTCTCCTGGATAAGGCAGCCCCCGCGAAAGG GTCTTGAATGGCTTGGGGTAATATGGGGCTCAGA GACAACGTATTATAACTCCGCTCTCAAAAGTCGCT TGACGATAATAAAAGATAACTCCAAGAGTCAAGTT TTCCTTAAAATGAACAGTTTGCAGACTGACGATAC CGCTATATATTATTGTGCTAAACATTATTACTACG GCGGTAGTTACGCGATGGATTATTGGGGGCAGG GGACTTCTGTCACAGTCAGTAGTGCTGCTGCCTT TGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 584/1851
527/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCC ACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCG AGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTC ATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTA CATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGT CC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAA TCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTG CATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGC CTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGC CCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCG AGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGC ATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAA CTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTG CTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATG GGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAA GGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGG CGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCG AACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCT ACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTA CGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGA GGAAGCGGAGCTACTAACTTCAGCCTGCTGAAGC AGGCTGGAGACGTGGAGGAGAACCCTGGACCTA TGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGG TGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACG TAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGG GCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCC TGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGT GCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTA CGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCA CATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATG CCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCT TCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCG AGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACC GCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 585/1851
528/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACA ACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGA CAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAG ATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAG CTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATC GGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCAC TACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGAC CCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTG GAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGC ATGGACGAGCTGTACAAGTAATAATAAAATCGCTA TCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGT GCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATT TTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGAT TCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGA CATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCT GTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTG CAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGA CACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTT GGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAA TGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGAT GTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTT ATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAA ACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGA CACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCA GGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCC AACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGAC TGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCT AAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTC CCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAG TCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAAT CACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTG TTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGG TGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGG AGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 586/1851
529/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TTCAGATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGGTTGAGA AAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGG GCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGC CCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGG CCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGGAGAAGA GCAGCAGGCATGAGTTGAATGAAGGAGGCAGGG CCGGGTCACAGGG
1394 LHA a RHA de CTX-142 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGAI I I I GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 587/1851
530/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GATGTCGTGTACTGGCTCCGCC1 1 1 1 1CCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGGATATAGTTATGACCCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 588/1851
531/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
ATCACCCGATAGTCTTGCGGTAAGCCTGGGGGA GCGAGCAACAATAAACTGTCGGGCATCAAAATCC GTCAGTACAAGCGGGTATTCATTCATGCACTGGT ATCAACAGAAACCCGGTCAGCCACCCAAGCTCCT GATTTATCTTGCGTCTAATCTTGAGTCCGGCGTC CCAGACCGG 1 1 1 1CCGGCTCCGGGAGCGGCACG GA 1 1 1 1ACTCTTACTATTTCTAGCCTTCAGGCCGA AGATGTGGCGGTATACTACTGCCAGCATTCAAGG GAAGTTCCTTGGACGTTCGGTCAGGGCACGAAA GTGGAAATTAAAGGCGGGGGGGGATCCGGCGG GGGAGGGTCTGGAGGAGGTGGCAGTGGTCAGGT CCAACTGGTGCAGTCCGGGGCAGAGGTAAAAAA ACCCGGCGCGTCTGTTAAGGTTTCATGCAAGGCC AGTGGATATACTTTCACCAATTACGGAATGAACTG GGTGAGGCAGGCCCCTGGTCAAGGCCTGAAATG GATGGGATGGATAAACACGTACACCGGTGAACCT ACCTATGCCGATGCCTTTAAGGGTCGGGTTACGA TGACGAGAGACACCTCCATATCAACAGCCTACAT GGAGCTCAGCAGATTGAGGAGTGACGATACGGC AGTCTATTACTGTGCAAGAGACTACGGCGATTAT GGCATGGATTACTGGGGCCAGGGCACTACAGTA ACCGTTTCCAGCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGG TATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGC CCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGC CTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGC CGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGG GGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGG CTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTT GTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGA ATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGA TTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCG ACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCAC GAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAGTT TTCCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 589/1851
532/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGG GACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAAC GCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAA CCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACA ATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTA CTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACG GGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTT GAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTG CATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAA ATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGGTT 1 1 1 1 GTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATG TGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAA GACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCT TTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGG AATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATG ATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCC TTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAG AAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAAT GACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGG CAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCT CCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAG ACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATT CTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTC TCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTA AGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCA ATCACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGG TGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGG GGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGG GGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATA ACTTCAGATTGGAATGTG 1 1 1 1AACTCAGGGTTGA GAAAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAA GGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCA GCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGA GGCCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 590/1851
533/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
1395 LHA a RHA de CTX-145 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGAI I I I GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 591/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGCAGGTCCAGTTGGTGC AAAGCGGGGCGGAGGTGAAAAAACCCGGCGCTT CCGTGAAGGTGTCCTGTAAGGCGTCCGGTTATAC GTTCACGAACTACGGGATGAATTGGGTTCGCCAA GCGCCGGGGCAGGGACTGAAATGGATGGGGTG GATAAATACCTACACCGGCGAACCTACATACGCC GACGC1 1 1 1AAAGGGCGAGTCACTATGACGCGCG ATACCAGCATATCCACCGCATACATGGAGCTGTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 592/1851
535/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCGACTCCGGTCAGACGACACGGCTGTCTACTAT TGTGCTCGGGACTATGGCGATTATGGCATGGACT ACTGGGGTCAGGGTACGACTGTAACAGTTAGTAG TGGTGGAGGCGGCAGTGGCGGGGGGGGAAGCG GAGGAGGGGGTTCTGGTGACATAGTTATGACCCA ATCCCCAGATAGTTTGGCGGTTTCTCTGGGCGAG AGGGCAACGATTAATTGTCGCGCATCAAAGAGCG TTTCAACGAGCGGATATTC 1 1 1 1ATGCATTGGTAC CAGCAAAAACCCGGACAACCGCCGAAGCTGCTG ATCTACTTGGCTTCAAATCTTGAGTCTGGGGTGC CGGACCGA1 1 1 1CTGGTAGTGGAAGCGGAACTGA CTTTACGCTCACGATCAGTTCACTGCAGGCTGAG GATGTAGCGGTCTATTATTGCCAGCACAGTAGAG AAGTCCCCTGGACCTTCGGTCAAGGCACGAAAGT AGAAATTAAAAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTA TTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCC CGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCT CTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCG ACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGG CTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTC CGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTC ACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATC GCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTA CATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGAC AAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGA GACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1 CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAG GACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGG ACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACG CCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACC CCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAAT GAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTAC TCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGG GGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 593/1851
536/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCA TATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAAT CGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGGTTTTT TGTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTG CAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGA CACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTT GGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAA TGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGAT GTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTT ATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAA ACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGA CACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCA GGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCC AACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGAC TGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCT AAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTC CCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAG TCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAAT CACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTG TTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGG TGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGG AGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAAC TTCAGATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGGTTGAGA AAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGG GCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGC CCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGG CCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGG
1396 LHA a RHA de CTX-145b GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 594/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGGGCC1 1 1 1 1CCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG 1 1 1 1GAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 595/1851
538/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGCAGGTCCAGTTGGTGC AAAGCGGGGCGGAGGTGAAAAAACCCGGCGCTT CCGTGAAGGTGTCCTGTAAGGCGTCCGGTTATAC GTTCACGAACTACGGGATGAATTGGGTTCGCCAA GCGCCGGGGCAGGGACTGAAATGGATGGGGTG GATAAATACCTACACCGGCGAACCTACATACGCC GACGC1 1 1 1AAAGGGCGAGTCACTATGACGCGCG ATACCAGCATATCCACCGCATACATGGAGCTGTC CCGACTCCGGTCAGACGACACGGCTGTCTACTAT TGTGCTCGGGACTATGGCGATTATGGCATGGACT ACTGGGGTCAGGGTACGACTGTAACAGTTAGTAG TGGTGGAGGCGGCAGTGGCGGGGGGGGAAGCG GAGGAGGGGGTTCTGGTGACATAGTTATGACCCA ATCCCCAGATAGTTTGGCGGTTTCTCTGGGCGAG AGGGCAACGATTAATTGTCGCGCATCAAAGAGCG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 596/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TTTCAACGAGCGGATATTC 1 1 1 1ATGCATTGGTAC CAGCAAAAACCCGGACAACCGCCGAAGCTGCTG ATCTACTTGGCTTCAAATCTTGAGTCTGGGGTGC CGGACCGA1 1 1 1CTGGTAGTGGAAGCGGAACTGA CTTTACGCTCACGATCAGTTCACTGCAGGCTGAG GATGTAGCGGTCTATTATTGCCAGCACAGTAGAG AAGTCCCCTGGACCTTCGGTCAAGGCACGAAAGT AGAAATTAAAAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTA TTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCC CGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCT CTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCG ACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGG CTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTC CGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTC ACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATC GCAAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATT CAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTC AAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGA AGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTGCGAGTGAA G 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAG CAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATT TGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATA AACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGT AAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCT ACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGG CCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACG ACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGG GTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCA CTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAAT AAAATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTG G 1 1 1 1 1 1 GTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGC ATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCA GAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCA GCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 597/1851
540/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTC AATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCG GCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACT AAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAG AATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGT GGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCT CTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTC AGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTC ATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTAT TTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCA CTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCA CCAATCACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACC AGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATG AGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTT GGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCA AATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGG TTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAG GGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGAT ACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTA TAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGG
1397 LHA a RHA de CTX-152 GAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTA TTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTG GCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACTGAA ATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTTGTG CCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCAGCT GGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCATGA GACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCCGCC CTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCCTGG GTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGTCCTA ACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCAGAAC CCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTA AATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA I I I I GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGG ATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 598/1851
541/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCC CGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTC CCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGA ACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAAC TGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTT TTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTG CAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGG GTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGT GGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTAT GGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCT GCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTT GGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCT TAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGG CCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGA ATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTT TCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGA CCTGCTGCGACGC1 1 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAGTC TTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTAT TTCGG1 1 1 1 1GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGC CCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCG GGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGAC GGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGG TGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGC CCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCA GTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGC CCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGG CGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACA CAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCG CTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGT CCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAG TACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1 AT GCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAG ACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAAT TCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 599/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAA G 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCACCA TGGCTCTTCCTGTAACCGCACTTCTGCTTCCTCTT GCTCTGCTGCTTCATGCTGCTAGACCTCAGGTGC AGTTACAACAGTCAGGAGGAGGATTAGTGCAGCC AGGAGGATCTCTGAAACTGTCTTGTGCCGCCAGC GGAATCGA1 1 1 1AGCAGGTACTGGATGTCTTGGG TGAGAAGAGCCCCTGGAAAAGGACTGGAGTGGA TCGGCGAGATTAATCCTGATAGCAGCACCATCAA CTATGCCCCTAGCCTGAAGGACAAGTTCATCATC AGCCGGGACAATGCCAAGAACACCCTGTACCTG CAAATGAGCAAGGTGAGGAGCGAGGATACAGCT CTGTACTACTGTGCCAGCCTGTACTACGATTACG GAGATGCTATGGACTATTGGGGCCAGGGAACAA GCGTTACAGTGTCTTCTGGAGGAGGAGGATCCG GTGGTGGTGGTTCAGGAGGTGGAGGTTCGGGAG ATATTGTGATGACACAAAGCCAGCGGTTCATGAC CACATCTGTGGGCGACAGAGTGAGCGTGACCTG TAAAGCTTCTCAGTCTGTGGACAGCAATGTTGCC TGGTATCAGCAGAAGCCCAGACAGAGCCCTAAAG CCCTGATC1 1 1 101GCCAGCC1 GAGA 1 1 1 1CTGG CGTTCCTGCCAGATTTACCGGCTCTGGCTCTGGC ACCGA1 1 1 1ACACTGACCATCAGCAATCTGCAGT CTGAGGATCTGGCCGAGTAC1 1 1 1GCCAGCAGTA CAACAACTACCCCCTGACCTTTGGAGCTGGCACA AAACTGGAGCTGAAGAGTGCTGCTGCCTTTGTCC CGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCC CGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCAT CGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCA TGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACG AGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTG GGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACA GGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 600/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGG CCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCC CACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGA AG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCA GCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAAT TTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGAT AAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGG TAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTC TACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGG CCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACG ACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGG GTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCA CTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGAGGAAGC GGAGCTACTAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCTG GAGACGTGGAGGAGAACCCTGGACCTATGGTGA GCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGC CCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACG GCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGG GCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTT CATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTG GCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGT GCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAA GCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAA GGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGG ACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGA AGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCG AGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCA ACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAA CAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAG AAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCC ACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCG ACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACG GCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGA GCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 601/1851
544/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGT GACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGA GCTGTACAAGTAATAATAAAATAAAATCGCTATCC ATCGAAGATGGATGTGTGTTGG I I I I I IGTGTGTG GAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCC TTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTT CCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTT CGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGG TTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAA CTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTG CCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAG CCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAA AAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGG CACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTT CCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCC CTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTT CTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGC CAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCA CGCAGTCACTCATTAACCC
1398 LHA a RHA de CTX-153 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 602/1851
545/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 603/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCTCTTCCT GTAACCGCACTTCTGCTTCCTCTTGCTCTGCTGC TTCATGCTGCTAGACCTCAGGTGCAGTTACAACA GTCAGGAGGAGGATTAGTGCAGCCAGGAGGATC TCTGAAACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGAATCGAT TTTAGCAGGTACTGGATGTCTTGGGTGAGAAGAG CCCCTGGAAAAGGACTGGAGTGGATCGGCGAGA TTAATCCTGATAGCAGCACCATCAACTATGCCCCT AGCCTGAAGGACAAGTTCATCATCAGCCGGGACA ATGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAAATGAGCAA GGTGAGGAGCGAGGATACAGCTCTGTACTACTGT GCCAGCCTGTACTACGATTACGGAGATGCTATGG ACTATTGGGGCCAGGGAACAAGCGTTACAGTGTC TTCTGGAGGAGGAGGATCCGGTGGTGGTGGTTC AGGAGGTGGAGGTTCGGGAGATATTGTGATGAC ACAAAGCCAGCGGTTCATGACCACATCTGTGGGC GACAGAGTGAGCGTGACCTGTAAAGCTTCTCAGT CTGTGGACAGCAATGTTGCCTGGTATCAGCAGAA GCCCAGACAGAGCCCTAAAGCCCTGATC1 1 1 1CT GCCAGCCTGAGA1 1 1 1CTGGCGTTCCTGCCAGAT TTACCGGCTCTGGCTCTGGCACCGA1 1 1 1ACACT GACCATCAGCAATCTGCAGTCTGAGGATCTGGCC GAGTAC 1 1 1 1 GCCAGCAGTACAACAACTACCCCC TGACCTTTGGAGCTGGCACAAAACTGGAGCTGAA GAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 604/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCT CCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTC TTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCG CCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACT TCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGC GGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCGTT ATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAA GCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAAT ATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAA CATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCG CTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAG CGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAA TCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGC GAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGG AGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGA AAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCC AGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAAT AGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGG TCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCA ACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGG CCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAATCGCTATCCA TCGAAGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTG GAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCC TTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTT CCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTT CGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGG TTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAA CTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTG CCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAG CCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAA AAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGG CACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTT CCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCC CTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 605/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGC CAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCA CGCAGTCACTCATTAACCCACCAATCACTGATTGT GCCGGCACATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGG AGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAG AGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTG TCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGG AATGTG I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTAC CTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAA GAAATGCTACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGG GCAGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAG GAGCTCAATGAGAAA
1399 LHA a RHA de CTX-154 GAAGATCCTATTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTA TTAAGTAGCCCTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTG GCAGGCCAGGCCTGGCCGTGAACGTTCACTGAA ATCATGGCCTCTTGGCCAAGATTGATAGCTTGTG CCTGTCCCTGAGTCCCAGTCCATCACGAGCAGCT GGTTTCTAAGATGCTATTTCCCGTATAAAGCATGA GACCGTGACTTGCCAGCCCCACAGAGCCCCGCC CTTGTCCATCACTGGCATCTGGACTCCAGCCTGG GTTGGGGCAAAGAGGGAAATGAGATCATGTCCTA ACCCTGATCCTCTTGTCCCACAGATATCCAGAAC CCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTA AATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA I I I I GATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGG ATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTA GACATGAGGTCTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCC CGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTC CCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGA ACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAAC TGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTT TTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTG CAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGG GTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 606/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTAT GGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCT GCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTT GGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCT TAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGG CCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGA ATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTT TCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGA CCTGCTGCGACGC1 1 1 1 1 1 1CTGGCAAGATAGTC TTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTAT TTCGG1 1 1 1 1GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGC CCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCG GGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGAC GGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGG TGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGC CCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCA GTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGC CCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGG CGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACA CAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCG CTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGT CCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAG TACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1 AT GCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAG ACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAAT TCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCT TGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAA G 1 1 1 1 1 1 1 CTTCCATTTCAGGTGTCGTGACCACCA TGGCTCTTCCTGTAACCGCACTTCTGCTTCCTCTT GCTCTGCTGCTTCATGCTGCTAGACCTGACATCG TGATGACCCAAAGCCAGAGGTTCATGACCACATC TGTGGGCGATAGAGTGAGCGTGACCTGTAAAGC CTCTCAGTCTGTGGACAGCAATGTTGCCTGGTAT CAGCAGAAGCCTAGACAGAGCCCTAAAGCCCTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 607/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ATCTTTAGCGCCAGCCTGAGATTTAGCGGAGTTC CTGCCAGATTTACCGGAAGCGGATCTGGAACCGA 1 1 1 1ACACTGACCATCAGCAACCTGCAGAGCGAG GATCTGGCCGAGTAC 1 1 1 1 GCCAGCAGTACAACA ATTACCCTCTGACCTTTGGAGCCGGCACAAAGCT GGAGCTGAAAGGAGGAGGAGGATCTGGTGGTGG TGGTTCAGGAGGTGGAGGTTCGGGACAAGTTCA ATTACAGCAATCTGGAGGAGGACTGGTTCAGCCT GGAGGAAGCCTGAAGCTGTCTTGTGCCGCTTCTG GAATCGA1 1 1 1AGCAGATACTGGATGAGCTGGGT GAGAAGAGCCCCTGGCAAAGGACTGGAGTGGAT TGGCGAGATTAATCCTGATAGCAGCACCATCAAC TATGCCCCTAGCCTGAAGGACAAGTTCATCATCA GCCGGGACAATGCCAAGAACACCCTGTACCTGC AAATGAGCAAGGTGAGGAGCGAGGATACAGCTC TGTACTACTGTGCCAGCCTGTACTACGATTACGG AGATGCTATGGACTATTGGGGCCAGGGAACAAG CGTTACAGTGAGCAGCAGTGCTGCTGCCTTTGTC CCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTC CCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCA TCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGC ATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATAC GAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTT GGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCCTTT TGTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACA GGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTC CGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGG CCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCC CACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGA AG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCA GCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAAT TTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGAT AAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGG TAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 608/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGG CCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACG ACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGG GTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCA CTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGAGGAAGC GGAGCTACTAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCTG GAGACGTGGAGGAGAACCCTGGACCTATGGTGA GCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGC CCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACG GCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGG GCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTT CATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTG GCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGT GCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAA GCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAA GGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGG ACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGA AGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCG AGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCA ACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAA CAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAG AAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCC ACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCG ACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACG GCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGA GCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACG AGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGT GACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGA GCTGTACAAGTAATAATAAAATAAAATCGCTATCC ATCGAAGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTG GAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCC TTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTT CCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTT CGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 609/1851
552/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAA CTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTG CCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAG CCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAA AAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGG CACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTT CCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCC CTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTT CTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGC CAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCA CGCAGTCACTCATTAACCC
1400 LHA a RHA de CTX-155 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGAI I I I GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 610/1851
553/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 611/1851
554/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCTCTTCCT GTAACCGCACTTCTGCTTCCTCTTGCTCTGCTGC TTCATGCTGCTAGACCTGACATCGTGATGACCCA AAGCCAGAGGTTCATGACCACATCTGTGGGCGAT AGAGTGAGCGTGACCTGTAAAGCCTCTCAGTCTG TGGACAGCAATGTTGCCTGGTATCAGCAGAAGCC TAGACAGAGCCCTAAAGCCCTGATCTTTAGCGCC AGCCTGAGATTTAGCGGAGTTCCTGCCAGATTTA CCGGAAGCGGATCTGGAACCGA1 1 1 1ACACTGAC CATCAGCAACCTGCAGAGCGAGGATCTGGCCGA GTAC 1 1 1 1 GCCAGCAGTACAACAATTACCCTCTGA CCTTTGGAGCCGGCACAAAGCTGGAGCTGAAAG GAGGAGGAGGATCTGGTGGTGGTGGTTCAGGAG GTGGAGGTTCGGGACAAGTTCAATTACAGCAATC TGGAGGAGGACTGGTTCAGCCTGGAGGAAGCCT GAAGCTGTCTTGTGCCGCTTCTGGAATCGA1 1 1 1 AGCAGATACTGGATGAGCTGGGTGAGAAGAGCC CCTGGCAAAGGACTGGAGTGGATTGGCGAGATT AATCCTGATAGCAGCACCATCAACTATGCCCCTA GCCTGAAGGACAAGTTCATCATCAGCCGGGACAA TGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAAATGAGCAAG GTGAGGAGCGAGGATACAGCTCTGTACTACTGTG CCAGCCTGTACTACGATTACGGAGATGCTATGGA CTATTGGGGCCAGGGAACAAGCGTTACAGTGAG CAGCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTC CCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGC CCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAAC CTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCG CCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGG ACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTG GCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCG TTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCA AAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 612/1851
555/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
ATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAA AACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTT CGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGA AGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAG AATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCC GCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGG GGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAA GAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACT CCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGA AATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAA AGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACG GCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGC AGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAAATCGCTA TCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGT GTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAAC GCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTT CTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGC CTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCC AGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTA AAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCA TTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGT GAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGG GAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGA GGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTG AGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTT GCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGC CCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTG TCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAG TCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCAATCACT GATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGGTGTTGA AGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTG CCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGGGGAGCC CATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATAACTTCA GATTGGAATGTG 1 1 1 1AACTCAGGGTTGAGAAAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 613/1851
556/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAAGGGCT CTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCAGCCCT ACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGAGGCCT GGGACAGGAGCTCAATGAGAAA
1401 LHA a RHA de CTX-160 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGAI I I I GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 614/1851
557/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGGAGGTCCAGCTGGTGG AGAGCGGCGGAGGACTGGTCCAGCCTGGCGGCT CCCTGAAACTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCATCG ACTTCAGCAGGTACTGGATGAGCTGGGTGAGACA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 615/1851
558/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAATGGATCGGCGA GATCAACCCCGACTCCAGCACCATCAACTACGCC GACAGCGTCAAGGGCAGGTTCACCATTAGCAGG GACAATGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGA ACCTGAGCAGGGCCGAAGACACCGCCCTGTACT ACTGTGCCAGCCTGTACTACGACTATGGCGACGC TATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGAC AGTGAGCTCCGGAGGAGGCGGCAGCGGCGGAG GCGGCAGCGGCGGAGGCGGCAGCGACATCCAG ATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCTCC GTGGGAGATAGGGTGACAATCACCTGTAGGGCC AGCCAGAGCGTGGACTCCAACGTGGCCTGGTAT CAACAGAAGCCCGAGAAGGCCCCCAAGAGCCTG ATC1 1 1 1CCGCCTCCCTGAGGTTCAGCGGAGTCC CCAGCAGGTTCTCCGGATCCGGCTCCGGAACCG ACTTTACCCTGACCATCTCCAGCCTGCAGCCCGA GGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAAC AGCTACCCCCTGACCTTCGGCGCCGGCACAAAG CTGGAGATCAAGAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGG TATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGC CCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGC CTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGC CGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGG GGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGG CTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTT GTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGA ATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGA TTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCG ACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCAC GAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAGTT TTCCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAA GGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGG GACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAAC GCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 616/1851
559/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACA ATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTA CTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACG GGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTT GAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTG CATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAA ATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGGTT I I I I GTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATG TGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAA GACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCT TTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGG AATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATG ATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCC TTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAG AAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAAT GACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGG CAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCT CCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAG ACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATT CTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTC TCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTA AGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCA ATCACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGG TGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGG GGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGG GGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATA ACTTCAGATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGGTTGA GAAAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAA GGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCA GCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGA GGCCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGG
1402 LHA a RHA de CTX-160b GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 617/1851
560/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG 1 1 1 1GAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 618/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGGAGGTCCAGCTGGTGG AGAGCGGCGGAGGACTGGTCCAGCCTGGCGGCT CCCTGAAACTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCATCG ACTTCAGCAGGTACTGGATGAGCTGGGTGAGACA GGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAATGGATCGGCGA GATCAACCCCGACTCCAGCACCATCAACTACGCC GACAGCGTCAAGGGCAGGTTCACCATTAGCAGG GACAATGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGA ACCTGAGCAGGGCCGAAGACACCGCCCTGTACT ACTGTGCCAGCCTGTACTACGACTATGGCGACGC TATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 619/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGTGAGCTCCGGAGGAGGCGGCAGCGGCGGAG GCGGCAGCGGCGGAGGCGGCAGCGACATCCAG ATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCTCC GTGGGAGATAGGGTGACAATCACCTGTAGGGCC AGCCAGAGCGTGGACTCCAACGTGGCCTGGTAT CAACAGAAGCCCGAGAAGGCCCCCAAGAGCCTG ATC1 1 1 1CCGCCTCCCTGAGGTTCAGCGGAGTCC CCAGCAGGTTCTCCGGATCCGGCTCCGGAACCG ACTTTACCCTGACCATCTCCAGCCTGCAGCCCGA GGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAAC AGCTACCCCCTGACCTTCGGCGCCGGCACAAAG CTGGAGATCAAGAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGG TATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGC CCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGC CTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGC CGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGG GGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGG CTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTT GTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGA ATCGCAAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATAT ATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTA CTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCC AGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTGCGAGT GAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATAT CAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGA ATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTG ATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGG GTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACT CTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAG GCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGAC GACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAG GGTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGC ACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAA TAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 620/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GG I I I I I I GTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTG CATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCA GAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCA GCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTC AGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTC AATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCG GCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACT AAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAG AATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGT GGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCT CTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTC AGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTC ATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTAT TTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCA CTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCA CCAATCACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACC AGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATG AGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTT GGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCA AATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGG TTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAG GGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGAT ACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTA TAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGG
1403 LHA a RHA de CTX-161 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 621/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 622/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGGAGGTGCAGCTGGTGG AGAGCGGAGGAGGACTGGTGCAGCCCGGAGGC TCCCTGAAGCTGAGCTGCGCTGCCTCCGGCATC GACTTCAGCAGGTACTGGATGAGCTGGGTGAGG CAGGCTCCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGATCGGC GAGATCAACCCCGACAGCAGCACCATCAACTACG CCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCA GGGACAACGCCAAGAATACCCTGTACCTGCAGAT GAACCTGAGCAGGGCCGAGGACACAGCCCTGTA CTACTGTGCCAGCCTGTACTACGACTATGGAGAC GCTATGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTG ACCGTGAGCAGCGGAGGCGGAGGCTCCGGCGG CGGAGGCAGCGGAGGAGGCGGCAGCGATATCC AGATGACCCAGTCCCCCAGCTCCCTGAGCGCTA GCCCTGGCGACAGGGTGAGCGTGACATGCAAGG CCAGCCAGAGCGTGGACAGCAACGTGGCCTGGT ACCAGCAGAAACCCAGACAGGCCCCCAAGGCCC TGATCTTCAGCGCCAGCCTGAGGTTTAGCGGCGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 623/1851
566/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCCCGCTAGGTTTACCGGATCCGGCAGCGGCAC CGACTTCACCCTGACCATCTCCAACCTGCAGTCC GAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACA ACAACTACCCCCTGACATTCGGCGCCGGAACCAA GCTGGAGATCAAGAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCG GTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCG CCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCG CCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATG CCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAG GGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGG GCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1G TTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAG GAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCC GATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGC CGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCC ACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAA G 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAG CAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATT TGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATA AACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGT AAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCT ACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGG CCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACG ACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGG GTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCA CTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAAT AAAATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTG G 1 1 1 1 1 1 GTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGC ATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCA GAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCA GCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTC AGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTC AATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCG GCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 624/1851
567/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAG AATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGT GGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCT CTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTC AGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTC ATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTAT TTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCA CTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCA CCAATCACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACC AGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATG AGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTT GGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCA AATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGG TTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAG GGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGAT ACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTA TAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGG
1404 LHA a RHA de CTX-162 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 625/1851
568/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 626/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGGACATCCAGATGACCC AGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCTAGCGTGGGCG ACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGA GCGTGGACTCCAACGTGGCCTGGTACCAGCAGA AGCCCGAGAAGGCCCCCAAGAGCCTGATCTTCA GCGCCAGCCTGAGGTTCTCCGGAGTGCCTAGCA GATTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACAGACTTCA CCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGATTT CGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACAACTCCTAC CCCCTGACCTTCGGCGCCGGCACAAAGCTGGAG ATCAAGGGAGGAGGAGGAAGCGGAGGAGGAGG AAGCGGAGGCGGAGGAAGCGAGGTGCAGCTGG TGGAGTCCGGAGGAGGCCTGGTGCAACCTGGAG GCAGCCTGAAGCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGAA TCGACTTCAGCAGGTACTGGATGTCCTGGGTGAG ACAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGG AGAGATCAACCCCGACAGCTCCACCATCAACTAC GCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGC AGAGACAACGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGA TGAACCTGTCCAGAGCCGAGGACACCGCCCTGT ACTACTGCGCCAGCCTGTATTACGACTACGGCGA CGCTATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGT GACAGTGAGCAGCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCC GGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCC GCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 627/1851
570/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCAT GCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGA GGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTG GGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACA GGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTC CGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGG CCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCC CACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGA AG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCA GCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAAT TTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGAT AAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGG TAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTC TACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGG CCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACG ACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGG GTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCA CTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAAT AAAATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTG G 1 1 1 1 1 1 GTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGC ATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCA GAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCA GCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTC AGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTC AATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCG GCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACT AAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAG AATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGT GGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCT CTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTC AGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTC ATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTAT TTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 628/1851
571/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCA CCAATCACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACC AGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATG AGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTT GGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCA AATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IAACTCAGGG TTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAG GGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGAT ACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTA TAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGG
1405 LHA a RHA de CTX-163 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGAI I I I GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 629/1851
572/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 630/1851
573/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGGACATCCAAATGACCC AGTCCCCTAGCAGCCTGTCCGCCAGCCCTGGAG ACAGGGTGTCCGTGACCTGCAAGGCCAGCCAGT CCGTGGACAGCAACGTCGCCTGGTATCAGCAGA AGCCCAGGCAAGCTCCCAAGGCTCTGATCTTCTC CGCCAGCCTGAGA1 1 1 1CCGGCGTGCCCGCCAG ATTCACCGGAAGCGGCAGCGGCACCGACTTCAC CCTGACCATCAGCAACCTGCAGAGCGAGGATTTC GCCACATACTACTGCCAGCAGTACAACAACTACC CCCTGACCTTCGGAGCCGGCACCAAGCTGGAGA TCAAAGGCGGCGGAGGCAGCGGCGGCGGCGGC AGCGGCGGAGGCGGATCCGAAGTGCAGCTGGTG GAAAGCGGAGGCGGACTCGTGCAGCCTGGCGGA AGCCTGAAGCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCATC GACTTCAGCAGGTACTGGATGAGCTGGGTGAGG CAGGCTCCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGATCGGC GAGATCAACCCTGACAGCAGCACCATCAACTACG CCGACAGCGTGAAAGGCAGGTTCACCATCAGCA GGGACAACGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGAT GAACCTGTCCAGAGCCGAGGACACCGCCCTGTA CTACTGCGCCAGCCTGTACTACGACTACGGCGAC GCTATGGACTACTGGGGCCAAGGCACCCTCGTG ACCGTCAGCTCCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGG TATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGC CCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGC CTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGC CGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGG GGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGG CTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTT GTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGA ATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGA TTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 631/1851
574/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCAC GAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAGTT TTCCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAA GGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGG GACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAAC GCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAA CCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACA ATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTA CTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACG GGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTT GAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTG CATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGATAATAATAAA ATCGCTATCCATCGAAGATGGATGTGTGTTGGTT 1 1 1 1 GTGTGTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATG TGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAA GACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAAGGGCAGCT TTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTTGCTTCAGG AATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCTGGTCAATG ATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGGTCTCGGCC TTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTTTTACTAAG AAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTCCAGAGAAT GACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGAGAAGGTGG CAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCTCAGTCTCT CCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCTTTGCTCAG ACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAGGCCTCATT CTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCTCCTTATTTC TCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCCAGCTCACTA AGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATTAACCCACCA ATCACTGATTGTGCCGGCACATGAATGCACCAGG TGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGTCAGATGAGG GGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATTCTAGTTGGG GGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAAAGTCCAAATA ACTTCAGATTGGAATGTG 1 1 1 1AACTCAGGGTTGA GAAAACAGCTACCTTCAGGACAAAAGTCAGGGAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 632/1851
575/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTTGAAGATACCA GCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGGACCCTATAGA GGCCTGGGACAGGAGCTCAATGAGAAAGG
1406 LHA a RHA de CTX-164 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGAI I I I GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 633/1851
576/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGGAGGTGCAGCTGCAGC AGTCCGGCCCTGAGCTCGTGAAGCCTGGAGCCA GCGTGAAAATGAGCTGTAAGGCCTCCGGCAACA CCCTCACCAACTACGTGATCCATTGGATGAAGCA GATGCCCGGCCAGGGCCTGGACTGGATTGGCTA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 634/1851
577Π14
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CATTCTGCCCTACAACGACCTGACCAAGTACAAC GAGAAGTTCACCGGCAAGGCCACCCTGACCAGC GATAAGAGCTCCAGCAGCGCCTACATGGAGCTG AACTCCCTGACCAGCGAGGACAGCGCCGTGTAC TACTGCACCAGGTGGGACTGGGATGGCTTCTTCG ACCCCTGGGGACAGGGCACCACCCTGACAGTGT CCAGCGGAGGAGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGC TCCGGCGGCGGCGGCAGCGATATCGTGATGACA CAGTCCCCTCTGAGCCTGCCTGTGAGCCTGGGC GACCAGGCCAGCATCAGCTGCAGGTCCACCCAG TCCCTGGTGCACTCCAACGGCAACACCCACCTGC ACTGGTACCTGCAAAGGCCCGGCCAGTCCCCTA AGCTGCTGATCTACAGCGTGAGCAACAGGTTTAG CGAGGTGCCCGATAGA Illi CCGCCAGCGGCAG CGGCACCGACTTCACACTGAAGATCTCCAGGGTG GAGGCCGAGGATCTGGGCGTGTACTTCTGCAGC CAGACCAGCCACATCCCCTACACCTTCGGCGGC GGAACCAAGCTGGAGATCAAGAGTGCTGCTGCC TTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCA CGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTC CCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCC CGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTG TTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATAT TTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGG CGTCC Illi GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATT GTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTT GTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCGCC GGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACCCTA TGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTC CCGAGTGAAG Illi CCCGAAGCGCAGACGCTCC GGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAAC GAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGAC GTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAA ATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 635/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGA TGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGA TGTGTGTTGG I I I I I I GTGTGTGGAGCAACAAATC TGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGC ATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAG GTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTT CCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAG CTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGG TGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCT CTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCA GTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAA GAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAG CCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTG CCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTC TAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCC TCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTT CCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTC ATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCACAT GAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAA AGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACC ATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGA AAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IA ACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACA AAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTAC TTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGA GGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAAT GAGAAAGG
1407 LHA a RHA CTX-165 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 636/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG 1 1 1 1GAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 637/1851
580/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGGACATCGTGATGACCC AGAGCCCCCTGAGCCTGCCTGTGTCCCTGGGAG ACCAGGCTTCCATCAGCTGCAGGTCCACCCAGA GCCTGGTGCACTCCAACGGCAACACCCACCTGC ACTGGTACCTGCAGAGGCCTGGCCAGTCCCCCA AGCTGCTGATCTACAGCGTGAGCAATAGGTTCAG CGAGGTGCCCGACAGATTCAGCGCCAGCGGAAG CGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGCAGGGT CGAGGCCGAAGATCTGGGCGTGTACTTCTGCTC CCAGACATCCCACATCCCTTACACCTTCGGCGGC GGCACCAAGCTGGAGATTAAGGGCGGCGGAGGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 638/1851
581/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TCCGGCGGAGGAGGATCCGGAGGAGGAGGAAG CGAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGAGCT GGTGAAACCCGGAGCCAGCGTCAAAATGAGCTG CAAGGCCAGCGGCAACACCCTGACCAACTACGT CATCCACTGGATGAAGCAGATGCCCGGACAGGG CCTGGACTGGATCGGCTACATCCTGCCCTACAAC GACCTGACCAAGTACAACGAGAAATTCACCGGCA AGGCCACCCTGACCAGCGACAAGAGCAGCAGCA GCGCCTACATGGAGCTGAACAGCCTGACCAGCG AGGACTCCGCCGTGTACTATTGCACCAGGTGGG ACTGGGACGGCTTCTTTGACCCCTGGGGCCAGG GCACAACACTCACCGTGAGCTCCAGTGCTGCTGC CTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACC ACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCT CCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCC CCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCT GTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATA TTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGG CGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATT GTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTT GTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCGCC GGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACCCTA TGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTC CCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCC GGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAAC GAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGAC GTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAA ATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAA GAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGA TGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 639/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGTGTGTTGG I I I I I I GTGTGTGGAGCAACAAATC TGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGC ATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAG GTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTT CCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAG CTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGG TGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCT CTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCA GTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAA GAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAG CCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTG CCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTC TAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCC TCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTT CCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTC ATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCACAT GAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAA AGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACC ATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGA AAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IA ACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACA AAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTAC TTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGA GGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAAT GAGAAAGG
1408 LHA a RHA de CTX-166 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 640/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 641/1851
584/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGCAGGTGCAGCTGGTGC AGAGCGGAGCCGAGCTCAAGAAGCCCGGAGCCT CCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCAGCGGCAACA CCCTGACCAACTACGTGATCCACTGGGTGAGACA AGCCCCCGGCCAAAGGCTGGAGTGGATGGGCTA CATCCTGCCCTACAACGACCTGACCAAGTACAGC CAGAAGTTCCAGGGCAGGGTGACCATCACCAGG GATAAGAGCGCCTCCACCGCCTATATGGAGCTGA GCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACT ACTGTACAAGGTGGGACTGGGACGGCTTCTTTGA CCCCTGGGGCCAGGGCACAACAGTGACCGTCAG CAGCGGCGGCGGAGGCAGCGGCGGCGGCGGCA GCGGCGGAGGCGGAAGCGAAATCGTGATGACCC AGAGCCCCGCCACACTGAGCGTGAGCCCTGGCG AGAGGGCCAGCATCTCCTGCAGGGCTAGCCAAA GCCTGGTGCACAGCAACGGCAACACCCACCTGC ACTGGTACCAGCAGAGACCCGGACAGGCTCCCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 642/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGCTGCTGATCTACAGCGTGAGCAACAGGTTCTC CGAGGTGCCTGCCAGGTTTAGCGGCAGCGGAAG CGGCACCGACTTTACCCTGACCATCAGCAGCGTG GAGTCCGAGGACTTCGCCGTGTATTACTGCAGCC AGACCAGCCACATCCCTTACACCTTCGGCGGCG GCACCAAGCTGGAGATCAAAAGTGCTGCTGCCTT TGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACG ACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCC ACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCG AGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTC ATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTA CATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGT CC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAA TCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTG CATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGC CTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGC CCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCG AGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGC ATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAA CTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTG CTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATG GGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAA GGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGG CGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCG AACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCT ACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTA CGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGA TAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGATGT GTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAACAAATCTGA CTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTA TTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTAA GGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCTT GCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTCT GGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 643/1851
586/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCTCTTT TTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGTC CAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGA GAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCT CAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCT TTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAG GCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCT CCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCC AGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATT AACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCACATGAA TGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGT CAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATT CTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAA AGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IAAC TCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACAAA AGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTT GAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGG ACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAATGA GAAAGG
1409 LHA a RHA de CTX-166b GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 644/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 645/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGCAGGTGCAGCTGGTGC AGAGCGGAGCCGAGCTCAAGAAGCCCGGAGCCT CCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCAGCGGCAACA CCCTGACCAACTACGTGATCCACTGGGTGAGACA AGCCCCCGGCCAAAGGCTGGAGTGGATGGGCTA CATCCTGCCCTACAACGACCTGACCAAGTACAGC CAGAAGTTCCAGGGCAGGGTGACCATCACCAGG GATAAGAGCGCCTCCACCGCCTATATGGAGCTGA GCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACT ACTGTACAAGGTGGGACTGGGACGGCTTCTTTGA CCCCTGGGGCCAGGGCACAACAGTGACCGTCAG CAGCGGCGGCGGAGGCAGCGGCGGCGGCGGCA GCGGCGGAGGCGGAAGCGAAATCGTGATGACCC AGAGCCCCGCCACACTGAGCGTGAGCCCTGGCG AGAGGGCCAGCATCTCCTGCAGGGCTAGCCAAA GCCTGGTGCACAGCAACGGCAACACCCACCTGC ACTGGTACCAGCAGAGACCCGGACAGGCTCCCA GGCTGCTGATCTACAGCGTGAGCAACAGGTTCTC CGAGGTGCCTGCCAGGTTTAGCGGCAGCGGAAG CGGCACCGACTTTACCCTGACCATCAGCAGCGTG GAGTCCGAGGACTTCGCCGTGTATTACTGCAGCC AGACCAGCCACATCCCTTACACCTTCGGCGGCG GCACCAAGCTGGAGATCAAAAGTGCTGCTGCCTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 646/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACG ACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCC ACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCG AGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTC ATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTA CATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGT CC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAA TCACAGGAATCGCAAACGGGGCAGAAAGAAACTC CTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGT ACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGC CGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAAC TGCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCC GGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAAC GAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGAC GTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAA ATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAA GAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGA TGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGA TGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1 GTGTGTGGAGCAACAAATC TGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGC ATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAG GTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTT CCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAG CTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGG TGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCT CTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCA GTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAA GAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAG CCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTG CCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 647/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCC TCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTT CCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTC ATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCACAT GAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAA AGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACC ATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGA AAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IA ACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACA AAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTAC TTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGA GGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAAT GAGAAAGG
1410 LHA a RHA de CTX-167 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGAI I I I GATTCTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 648/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 649/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGCAGGTGCAGCTGGTGC AGAGCGGCGCCGAGCTGAAGAAACCTGGCGCCA GCGTCAAGGTGAGCTGCAAGGCTTCCGGAAACA CCCTCACCAACTACGTGATCCACTGGGTGAGGCA GGCCCCCGGACAGAGACTGGAGTGGATGGGCTA CATTCTGCCCTACAACGACCTGACCAAGTACAGC CAGAAGTTCCAGGGCAGGGTCACCATCACCAGG GACAAGAGCGCCAGCACCGCCTACATGGAGCTG AGCAGCCTGAGGTCCGAGGACACAGCCGTGTAC TACTGCACCAGGTGGGACTGGGACGGATTCTTC GACCCTTGGGGCCAAGGCACCACAGTGACAGTG AGCTCCGGCGGAGGCGGCAGCGGCGGCGGAGG AAGCGGCGGCGGCGGAAGCGACATCGTGATGAC CCAGAGCCCTCTGAGCCTGCCCGTGACACTGGG ACAGCCTGCCACACTGTCCTGCAGGAGCACCCA GAGCCTGGTGCATAGCAACGGCAACACCCACCT GCACTGGTTCCAGCAGAGACCTGGCCAGAGCCC CCTGAGACTGATCTACAGCGTGAGCAACAGGGA CAGCGGCGTGCCCGATAGATTTAGCGGCAGCGG CAGCGGCACCGACTTTACCCTGAAAATCTCCAGG GTGGAGGCCGAGGATGTGGGCGTGTATTACTGC TCCCAGACAAGCCACATTCCCTATACATTCGGCG GCGGCACCAAGCTGGAGATCAAGAGTGCTGCTG CCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGAC CACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGC TCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGC CCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGC TGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGAT ATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 650/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCGTCC1 1 1 1G1 1GTCACTCGTTATTACTTTGTAT TGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGT TGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCGC CGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACCCT ATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAGGT CCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTC CGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAA CGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGA CGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGA AATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAA GAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGA TGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGA TGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1 GTGTGTGGAGCAACAAATC TGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGC ATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAG GTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTT CCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAG CTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGG TGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCT CTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCA GTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAA GAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAG CCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTG CCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTC TAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCC TCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTT CCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTC ATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCACAT GAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAA AGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 651/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGA AAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IA ACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACA AAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTAC TTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGA GGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAAT GAGAAAGG
1411 LHA a RHA de CTX-168 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGAI I I I GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 652/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GATGTCGTGTACTGGCTCCGCC1 1 1 1 1CCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGGAAATCGTGATGACCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 653/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGAGCCCTGCCACACTGAGCGTGAGCCCTGGCG AGAGAGCCAGCATCAGCTGCAGGGCCTCCCAGA GCCTGGTGCACTCCAACGGCAATACCCACCTGCA CTGGTATCAGCAGAGACCCGGCCAGGCCCCTAG GCTGCTGATCTACTCCGTGAGCAACAGGTTCTCC GAGGTGCCCGCCAGATTCAGCGGATCCGGCAGC GGCACCGACTTCACCCTCACCATCTCCAGCGTGG AGAGCGAGGACTTCGCCGTCTACTACTGCAGCCA GACAAGCCACATCCCCTACACCTTCGGCGGCGG CACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGCGGCGGCAG CGGCGGCGGAGGCAGCGGAGGCGGCGGATCCC AGGTGCAACTGGTGCAGAGCGGAGCCGAGCTGA AGAAGCCCGGAGCCAGCGTGAAGGTCAGCTGCA AGGCCAGCGGCAACACCCTGACAAACTACGTGAT CCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCCAAAGGCT CGAGTGGATGGGCTACATCCTCCCCTACAACGAC CTGACCAAGTACTCCCAGAAGTTCCAGGGCAGG GTGACCATCACCAGGGATAAGAGCGCCAGCACC GCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAG GACACCGCCGTGTACTACTGCACCAGGTGGGAC TGGGATGGCTTCTTCGACCCTTGGGGCCAGGGC ACCACCGTGACAGTGAGCTCCAGTGCTGCTGCCT TTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCAC GACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCC CACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCC GAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTT CATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTT ACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCG TCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTA ATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTT GCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGG CCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATG CCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCC GAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCCGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 654/1851
597/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGA ACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGT GCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAAT GGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGA AGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATG GCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGC GAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTC TACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGT ACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAG ATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGATG TGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAACAAATCTG ACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATT ATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGGTA AGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTTCCT TGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAGCTC TGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGGTG GTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCTCT 1 1 1 1ACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCAGT CCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAAGA GAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAGCCT CAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTGCCT TTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTCTAG GCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCCTCT CCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTTCCC AGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTCATT AACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCACATGAA TGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAAAGT CAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACCATT CTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGAAA AGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTG 1 1 1 1AAC TCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACAAA AGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTACTT GAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGAGG ACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAATGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 655/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GAAAGG
1412 LHA a RHA de CTX-169 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGAI I I I GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 656/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGGACATCGTGATGACAC AATCCCCCCTCAGCCTGCCTGTGACACTGGGCCA GCCTGCCACCCTGAGCTGCAGGAGCACCCAGTC CCTGGTGCACTCCAACGGCAACACCCACCTGCA CTGGTTCCAGCAGAGGCCTGGACAGAGCCCCCT GAGGCTGATCTACAGCGTGAGCAACAGGGACTC CGGCGTGCCCGATAGATTCAGCGGCAGCGGCTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 657/1851
600/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGGCACCGATTTCACCCTGAAGATCTCCAGAGTG GAAGCCGAGGACGTGGGCGTCTACTACTGCAGC CAGACCAGCCATATCCCCTACACCTTCGGCGGC GGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGAGGCGGCGGA AGCGGCGGAGGCGGATCCGGAGGCGGAGGCTC CCAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCTGAGCT GAAGAAGCCCGGAGCCAGCGTGAAGGTGAGCTG CAAGGCCAGCGGAAACACCCTGACCAACTACGT GATCCACTGGGTGAGACAGGCCCCCGGACAGAG ACTCGAGTGGATGGGCTACATCCTGCCCTACAAC GACCTGACCAAGTACAGCCAGAAGTTCCAGGGC AGGGTGACAATCACCAGGGACAAGAGCGCCAGC ACCGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCC GAGGACACCGCCGTGTACTACTGCACCAGGTGG GACTGGGACGGCTTCTTTGACCCCTGGGGCCAG GGAACCACAGTGACCGTGTCCTCCAGTGCTGCT GCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGA CCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCG CTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCG CCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTG CTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGA TATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGC GGCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTA TTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGG TTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCG CCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACC CTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAG GTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCT CCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATA ACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATG ACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGG AAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCA AGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAG ATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 658/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATGGA TGTGTGTTGG I I I I I I GTGTGTGGAGCAACAAATC TGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGC ATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAG GTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTGTTT CCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCAGAG CTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGATTGG TGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAACCCT CTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTGGCA GTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGATGAA GAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCCCAG CCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGCCTG CCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCTCTTC TAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTTGCC TCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATCTTT CCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCACTC ATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCACAT GAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTAAAA AGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGCACC ATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTGGGA AAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTG I I I IA ACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGGACA AAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGCTAC TTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGAGA GGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCAAT GAGAAAGG
1413 LHA a RHA de CTX-170 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 659/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG 1 1 1 1GAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 660/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACGC 1 1 1 1 1 1 1 C 1 GGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGGAGGTGCAGCTGCAGC AGAGCGGCCCTGAGCTGGTGAAGCCCGGCGCCA GCGTGAAGATCAGCTGCAAGACCTCCGGCTATAC CTTTACCGAGTACACCATCAACTGGGTGAAGCAG AGCCACGGCAAGAGCCTGGAGTGGATCGGCGAT ATCTACCCCGACAACTACAACATCAGGTACAACC AGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACCCTGACCGTGG ACAAGTCCAGCAGCACCGCCTACATGGAGCTGA GGAGCCTGTCCAGCGAGGACTCCGCCATCTACT ACTGCGCCAACCACGACTTTTTCGTCTTCTGGGG ACAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCCGCTGGCGG CGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCG GCGGCAGCGACATCCAGATGACACAGGCCACAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 661/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCTCCCTGTCCGCCAGCCTGGGCGATAGGGTGA CCATCAATTGCAGGACCTCCCAGGACATCAGCAA CCACCTGAACTGGTACCAGCAGAAACCCGACGG CACCGTGAAGCTGCTCATCTACTACACCAGCAGG CTGCAGTCCGGCGTCCCTAGCAGATTCAGCGGA TCCGGCAGCGGCACCGACTATAGCCTGACCATC AGCAACCTCGAGCAGGAGGACATCGGCACCTAC TTCTGCCATCAGGGCAACACCCTGCCCCCTACCT TTGGCGGCGGCACAAAGCTGGAGATTAAGAGTG CTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAA ACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGAC ACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGT CTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGG GGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTT GTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTAC GTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCGTTATTACTT TGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAG TAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTC CTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACC AACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTA CAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGA CGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTG TATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGT ATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACC CGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATC CCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGA TAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATG AAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGAT GGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAA GATACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGC CTCCCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAG ATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAA CAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACA ACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 662/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGG CTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGC CCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTC TGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCA AAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGT TCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGC AGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTG GCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCC TGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACT GCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAA GTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAA ATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAG TCACTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCG GCACATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAA TTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAA GCACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGC TGGGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGT G I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCA GGACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAAT GCTACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGG GAGAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCT CAATGAGAAAGG
1414 LHA a RHA de CTX-171 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 663/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 664/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGGATATCCAGATGACCC AGGCCACCAGCAGCCTGAGCGCTTCCCTCGGCG ACAGGGTGACCATCAACTGCAGGACCAGCCAGG ACATCTCCAACCACCTGAACTGGTACCAGCAGAA GCCCGACGGCACCGTGAAACTGCTGATCTACTAC ACCAGCAGACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCCAGA 1 1 1 1CCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTACAGC CTGACCATTAGCAACCTGGAGCAGGAGGACATC GGAACCTACTTCTGCCACCAGGGCAACACACTGC CTCCCACCTTCGGCGGCGGCACAAAGCTCGAGA TCAAGGGCGGCGGCGGAAGCGGCGGCGGCGGC AGCGGCGGCGGAGGCTCCGAGGTGCAACTGCAA CAGAGCGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGCGCC AGCGTGAAGATCTCCTGTAAGACCAGCGGCTACA CCTTCACCGAGTACACCATCAACTGGGTGAAGCA GAGCCACGGCAAGAGCCTCGAATGGATCGGCGA CATCTATCCCGACAACTACAATATCAGATACAACC AGAAGTTCAAGGGAAAGGCCACCCTGACCGTGG ATAAGTCCTCCTCCACCGCTTACATGGAGCTGAG GAGCCTGAGCAGCGAGGACTCCGCCATCTACTA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 665/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTGCGCCAACCACGACTTCTTCGTGTTCTGGGGC CAAGGCACCCTCGTGACCGTGAGCGCCAGTGCT GCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAAC CGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACAC CCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCT TCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGG GTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTG TGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACG TGCGGCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTT GTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGT AGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCC TCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAA CCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACA GGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACG CTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTA TAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTAT GACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCG GAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCC CAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATA AGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAA GGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGG CCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGAT ACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTC CCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATG GATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAACAA ATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACA GCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCC AGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTG TTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCA GAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGAT TGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAAC CCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTG GCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGAT GAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 666/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGC CTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCT CTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTT GCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATC TTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCA CTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCA CATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTA AAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGC ACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTG GGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTGTT TTAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGG ACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGC TACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGA GAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCA ATGAGAAAGG
1415 LHA a RHA de CTX-172 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 667/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 668/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1A TGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGCAGGTGCAGCTGGTGC AGTCCGGCGCTGAGCTGAAGAAGCCCGGCGCCA GCGTGAAGATCAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACA CCTTCACCGAATACACCATCAACTGGGTGAGACA GGCCCCTGGACAGAGGCTCGAGTGGATGGGCGA CATCTACCCCGACAACTACAGCATCAGGTACAAC CAGAAGTTCCAGGGCAGGGTGACAATCACCAGG GACACCAGCGCCAGCACCGCCTATATGGAGCTG AGCAGCCTGAGATCCGAGGACACCGCCGTCTATT ACTGCGCCAACCACGACTTCTTCGTGTTCTGGGG CCAGGGAACACTGGTGACCGTGTCCAGCGGCGG CGGCGGCAGCGGCGGCGGAGGAAGCGGCGGCG GCGGCAGCGATATCCAGATGACCCAGAGCCCCT CCTCCCTGAGCGCTAGCGTGGGCGACAGGGTGA CCATTACCTGTCAGGCCTCCCAGGACATCAGCAA CTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCTGGCAAG GCCCCCAAGCTGCTGATCTATTACACCAGCAGGC TGGAGACCGGCGTGCCCTCCAGATTCAGCGGCT CCGGCTCCGGAACCGACTTCACCTTCACCATCAG CTCCCTGCAGCCTGAGGACATCGCCACCTACTAC TGCCAGCAGGGCAACACCCTGCCTCCCACATTC GGCGGCGGCACAAAGGTGGAGATCAAAAGTGCT GCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAAC CGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACAC CCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCT TCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGG GTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 669/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACG TGCGGCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTT GTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGT AGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCC TCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAA CCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACA GGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACG CTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTA TAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTAT GACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCG GAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCC CAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATA AGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAA GGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGG CCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGAT ACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTC CCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATG GATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAACAA ATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACA GCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCC AGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTG TTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCA GAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGAT TGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAAC CCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTG GCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGAT GAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCC CAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGC CTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCT CTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTT GCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATC TTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCA CTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCA CATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 670/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
AAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGC ACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTG GGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTGTT TTAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGG ACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGC TACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGA GAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCA ATGAGAAAGG
1416 LHA a RHA de CTX-173 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGAI I I I GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 671/1851
614/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 672/1851
615/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TCCACGCAGCAAGGCCGCAGGTGCAGCTGGTCC AGTCCGGCGCCGAACTGAAGAAGCCTGGCGCCA GCGTGAAGATCAGCTGCAAGGCCTCCGGCTACA CCTTCACCGAGTACACCATCAACTGGGTGAGGCA AGCCCCCGGCCAGAGACTGGAGTGGATGGGCGA CATCTACCCCGACAACTACAGCATCAGGTACAAC CAGAAGTTCCAGGGCAGGGTGACAATCACCAGG GATACCAGCGCCAGCACAGCCTATATGGAGCTGT CCTCCCTGAGATCCGAGGACACCGCCGTGTATTA CTGCGCCAACCACGACTTCTTCGTGTTCTGGGGC CAAGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGC GGCGGCTCCGGCGGCGGAGGCTCCGGAGGCGG AGGCAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCTTC CAGCCTGAGCGCTAGCCTGGGCGACAGGGTGAC CATCACCTGCAGGACCAGCCAGGACATCAGCAAT CACCTGAACTGGTACCAGCAAAAGCCCGGCAAG GCCCCTAAGCTGCTGATCTACTACACCAGCAGGC TGGAAAGCGGCGTGCCTAGCAGGTTCAGCGGCA GCGGCTCCGGAACCGACTACAGCCTGACCATTA GCAGCCTGCAACCTGAGGACATCGGCACCTATTA CTGCCAGCAGGGCAACACCCTGCCTCCTACCTTT GGCGGCGGCACCAAACTCGAGATCAAGAGTGCT GCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAAC CGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACAC CCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCT TCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGG GTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTG TGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACG TGCGGCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTT GTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGT AGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCC TCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAA CCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACA GGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 673/1851
616/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTA TAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTAT GACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCG GAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCC CAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATA AGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAA GGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGG CCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGAT ACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTC CCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATG GATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAACAA ATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACA GCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCC AGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTG TTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCA GAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGAT TGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAAC CCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTG GCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGAT GAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCC CAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGC CTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCT CTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTT GCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATC TTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCA CTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCA CATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTA AAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGC ACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTG GGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTGTT TTAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGG ACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGC TACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGA GAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 674/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ATGAGAAAGG
1417 LHA a RHA de CTX-174 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGAI I I I GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 675/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGCAGGTGCAGCTGGTGC AGAGCGGCCCTGAGCTGAAGAAGCCCGGAGCCA GCGTGAAGATCTCCTGCAAGACCTCCGGCTACAC CTTCACCGAGTACACCATCAACTGGGTGAAGCAG GCCCCCGGACAGGGACTGGAATGGATCGGCGAC ATCTACCCCGACAACTACAACATCAGGTACAACC AGAAGTTCCAAGGCAAGGCCACCATCACAAGGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 676/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACACCAGCAGCAGCACCGCCTACATGGAGCTGA GCAGCCTGAGGAGCGAGGATACCGCCGTGTACT ACTGCGCCAACCACGACTTCTTCGTGTTCTGGGG CCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCAGCGGAGG AGGCGGAAGCGGAGGAGGAGGATCCGGAGGAG GAGGCAGCGACATCCAGATGACCCAGTCCCCCT CCTCCCTGAGCGCCTCCGTGGGAGACAGGGTGA CCATCACCTGCCAGGCCAGCCAGGACATCAGCA ACTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAA GGCCCCCAAGCTGCTGATTTACTACACCAGCAGG CTGGAAACCGGCGTGCCCAGCAGATTTAGCGGC AGCGGCAGCGGCACCGACTTTACCTTTACCATCT CCAGCCTGCAGCCCGAGGATATCGCCACATACTA CTGCCAGCAGGGCAACACCCTCCCCCCTACCTTT GGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAGAGTGCT GCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAAC CGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACAC CCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCT TCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGG GTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTG TGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACG TGCGGCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTT GTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGT AGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCC TCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAA CCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACA GGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACG CTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTA TAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTAT GACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCG GAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCC CAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATA AGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAA GGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 677/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGAT ACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTC CCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATG GATGTGTGTTGG I I I I I IGTGTGTGGAGCAACAA ATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACA GCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCC AGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTG TTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCA GAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGAT TGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAAC CCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTG GCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGAT GAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCC CAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGC CTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCT CTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTT GCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATC TTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCA CTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCA CATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTA AAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGC ACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTG GGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTGTT TTAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGG ACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGC TACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGA GAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCA ATGAGAAAGG
1418 LHA a RHA de CTX-175 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 678/1851
621/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG 1 1 1 1GAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 679/1851
622/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGG 1 1 1 1 1 GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGCAGGTGCAGCTGGTGC AGTCCGGCCCCGAACTGAAAAAGCCCGGCGCCA GCGTCAAGATCAGCTGCAAGACCTCCGGCTACAC CTTCACCGAGTACACCATCAACTGGGTGAAGCAG GCCCCCGGCCAGGGACTGGAATGGATTGGCGAC ATCTACCCCGACAACTACAACATTAGGTATAACCA GAAGTTCCAGGGCAAGGCCACCATCACAAGAGA CACCAGCAGCAGCACCGCCTACATGGAGCTGAG CAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTA CTGCGCCAACCACGACTTCTTCGTGTTCTGGGGC CAGGGAACCCTGGTGACAGTGTCCAGCGGCGGC GGCGGCTCCGGCGGCGGCGGCTCCGGCGGCGG CGGCAGCGACATTCAGATGACACAGAGCCCCTC CAGCCTGAGCGCCAGCCTGGGCGATAGGGTGAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 680/1851
623/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CATCACCTGCAGAACCAGCCAGGACATCAGCAAC CACCTGAATTGGTACCAGCAGAAGCCCGGAAAG GCCCCCAAACTGCTGATCTACTACACCAGCAGGC TGGAGAGCGGCGTGCCTAGCAGGTTTAGCGGCA GCGGCAGCGGCACAGATTACAGCCTGACCATCA GCAGCCTGCAGCCCGAAGACATCGGCACCTACT ACTGCCAGCAGGGCAACACCCTGCCCCCTACCTT TGGCGGAGGCACCAAGCTGGAGATCAAGAGTGC TGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAA CCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACA CCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTC TTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGG GGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTT GTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTAC GTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCGTTATTACTT TGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAG TAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTC CTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACC AACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTA CAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGA CGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTG TATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGT ATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACC CGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATC CCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGA TAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATG AAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGAT GGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAA GATACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGC CTCCCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAG ATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAA CAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACA ACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAG CCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 681/1851
624/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGC CCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTC TGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCA AAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGT TCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGC AGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTG GCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCC TGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACT GCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAA GTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAA ATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAG TCACTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCG GCACATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAA TTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAA GCACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGC TGGGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGT G I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCA GGACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAAT GCTACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGG GAGAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCT CAATGAGAAAGG
1419 LHA a RHA de CTX-176 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 682/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 683/1851
626/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGGACATCCAGATGACAC AGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCTTCCGTGGGCG ACAGGGTGACCATCACCTGCCAGGCCAGCCAGG ACATCAGCAACTACCTCAACTGGTACCAGCAGAA GCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACTAC ACCTCCAGGCTGGAGACCGGAGTGCCCTCCAGA 1 1 1 1CCGGCAGCGGCAGCGGCACCGATTTCACCT TCACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACATCG CCACCTACTATTGCCAGCAGGGCAACACCCTGCC CCCCACATTTGGAGGCGGCACCAAGGTGGAGAT CAAGGGCGGAGGAGGAAGCGGAGGAGGAGGAA GCGGAGGAGGCGGAAGCCAGGTGCAGCTGGTG CAGAGCGGCGCTGAGCTCAAGAAGCCTGGCGCC AGCGTGAAGATCAGCTGCAAAGCCTCCGGATACA CCTTCACCGAGTACACCATCAATTGGGTGAGACA GGCCCCCGGCCAAAGACTGGAGTGGATGGGCGA CATCTATCCCGACAACTACAGCATCAGGTACAAC CAGAAGTTCCAGGGCAGGGTGACAATCACCAGA GACACCAGCGCCAGCACCGCCTACATGGAGCTG AGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTAC TACTGCGCCAATCACGACTTCTTCGTGTTCTGGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 684/1851
627/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCCAGGGAACCCTGGTGACCGTCAGCTCCAGTG CTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAA ACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGAC ACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGT CTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGG GGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTT GTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTAC GTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCGTTATTACTT TGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAG TAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTC CTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACC AACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTA CAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGA CGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTG TATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGT ATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACC CGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATC CCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGA TAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATG AAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGAT GGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAA GATACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGC CTCCCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAG ATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAA CAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACA ACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAG CCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGG CTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGC CCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTC TGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCA AAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGT TCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGC AGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTG GCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 685/1851
628/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACT GCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAA GTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAA ATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAG TCACTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCG GCACATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAA TTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAA GCACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGC TGGGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGT G I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCA GGACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAAT GCTACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGG GAGAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCT CAATGAGAAAGG
1420 LHA a RHA de CTX-177 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 686/1851
629/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGA1 1 1 1 GA TTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 687/1851
630/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGGATATCCAGATGACACA GAGCCCTAGCTCCCTGAGCGCCAGCCTGGGCGA TAGGGTGACCATCACCTGCAGGACCTCCCAGGA CATCAGCAACCACCTGAACTGGTACCAGCAGAAG CCCGGCAAAGCCCCCAAGCTGCTGATCTACTACA CCAGCAGGCTGGAAAGCGGCGTGCCCAGCAGGT TTAGCGGAAGCGGCAGCGGCACCGACTACAGCC TGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGAGGACATCG GCACCTACTACTGCCAGCAGGGCAACACCCTGC CTCCCACCTTCGGAGGCGGAACCAAGCTGGAGA TTAAGGGAGGCGGCGGAAGCGGCGGCGGCGGC TCCGGCGGAGGAGGCAGCCAGGTGCAGCTGGT GCAGTCCGGAGCCGAGCTGAAAAAGCCTGGCGC CAGCGTGAAGATCAGCTGCAAGGCCAGCGGCTA CACCTTCACCGAGTACACCATCAACTGGGTGAGG CAGGCCCCTGGCCAGAGACTCGAGTGGATGGGC GACATCTACCCCGACAACTACTCCATCAGGTACA ACCAGAAGTTTCAGGGCAGGGTGACCATTACCAG GGACACCAGCGCCAGCACAGCCTACATGGAGCT GAGCAGCCTGAGGAGCGAGGATACAGCCGTCTA CTACTGCGCCAACCACGACTTTTTCGTGTTCTGG GGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCTCCAGT GCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCA AACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGA CACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAG TCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGG GGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCT TGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 688/1851
631/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CGTGCGGCGTCC1 1 1 1G1 1GTCACTCGTTATTACT TTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGA GTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACT CCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTAC CAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGT ACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGA CGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTG TATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGT ATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACC CGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATC CCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGA TAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATG AAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGAT GGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAA GATACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGC CTCCCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAG ATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAA CAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACA ACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAG CCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGG CTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGC CCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTC TGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCA AAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGT TCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGC AGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTG GCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCC TGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACT GCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAA GTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAA ATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAG TCACTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCG GCACATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAA TTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 689/1851
632/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGC TGGGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGT G I I I IAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCA GGACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAAT GCTACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGG GAGAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCT CAATGAGAAAGG
1421 LHA a RHA de CTX-178 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGAI I I I GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 690/1851
633/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GATGTCGTGTACTGGCTCCGCC1 1 1 1 1CCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGGACATCCAAATGACCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 691/1851
634/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
AGAGCCCTAGCTCCCTGAGCGCTTCCGTGGGCG ACAGAGTGACCATTACCTGCCAGGCCAGCCAGG ACATCAGCAACTACCTGAACTGGTATCAGCAGAA GCCTGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACTAC ACCAGCAGGCTGGAGACCGGAGTGCCCAGCAGG TTTAGCGGCTCCGGATCCGGCACCGACTTCACCT TCACCATCTCCAGCCTGCAGCCCGAGGACATCG CCACCTACTACTGCCAGCAGGGCAATACCCTCCC CCCTACCTTCGGAGGCGGCACCAAGGTGGAGAT CAAGGGCGGCGGCGGCTCCGGCGGCGGCGGCA GCGGCGGAGGCGGCAGCCAGGTGCAACTGGTG CAGAGCGGCCCTGAGCTGAAGAAACCCGGCGCC AGCGTGAAAATCAGCTGCAAGACCAGCGGCTACA CATTCACCGAGTACACCATCAACTGGGTGAAGCA GGCTCCCGGACAGGGACTGGAGTGGATCGGCGA CATCTACCCTGACAACTACAACATCAGATACAACC AAAAGTTCCAGGGCAAGGCCACCATCACCAGGG ACACCAGCTCCTCCACCGCCTACATGGAGCTGAG CAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACTA CTGCGCCAACCACGACTTCTTCGTGTTCTGGGGC CAGGGAACCCTGGTGACCGTGAGCAGCAGTGCT GCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAAC CGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACAC CCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCT TCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGG GTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTG TGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACG TGCGGCGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTT GTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGT AGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCC TCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAA CCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACA GGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1 CCCGAAGCGCAGACG CTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 692/1851
635/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTAT GACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCG GAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCC CAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATA AGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAA GGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGG CCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGAT ACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTC CCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAGATG GATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAACAA ATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACA GCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCC AGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGGCTG TTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGCCCA GAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTCTGAT TGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCAAAAC CCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGTTCTG GCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGCAGAT GAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTGGCC CAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCCTGC CTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACTGCT CTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAAGTT GCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAAATC TTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAGTCA CTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCGGCA CATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAATTA AAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAAGC ACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGCTG GGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGTGTT TTAACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCAGG ACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAATGC TACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGGGA GAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCTCA ATGAGAAAGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 693/1851
636/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
1422 LHA a RHA de CTX-179 GAGATGTAAGGAGCTGCTGTGACTTGCTCAAGGC CTTATATCGAGTAAACGGTAGTGCTGGGGCTTAG ACGCAGGTGTTCTGATTTATAGTTCAAAACCTCTA TCAATGAGAGAGCAATCTCCTGGTAATGTGATAG ATTTCCCAACTTAATGCCAACATACCATAAACCTC CCATTCTGCTAATGCCCAGCCTAAGTTGGGGAGA CCACTCCAGATTCCAAGATGTACAGTTTGCTTTGC TGGGCCTTTTTCCCATGCCTGCCTTTACTCTGCC AGAGTTATATTGCTGGGG I I I IGAAGAAGATCCTA TTAAATAAAAGAATAAGCAGTATTATTAAGTAGCC CTGCATTTCAGGTTTCCTTGAGTGGCAGGCCAGG CCTGGCCGTGAACGTTCACTGAAATCATGGCCTC TTGGCCAAGATTGATAGCTTGTGCCTGTCCCTGA GTCCCAGTCCATCACGAGCAGCTGGTTTCTAAGA TGCTATTTCCCGTATAAAGCATGAGACCGTGACTT GCCAGCCCCACAGAGCCCCGCCCTTGTCCATCA CTGGCATCTGGACTCCAGCCTGGGTTGGGGCAA AGAGGGAAATGAGATCATGTCCTAACCCTGATCC TCTTGTCCCACAGATATCCAGAACCCTGACCCTG CCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGA CAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGAI I I I GATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTG TATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGT CTATGGACTTCAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGG GCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAG TTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCC TAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGT GATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGG GTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCG CCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGC CAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCG CGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGC GTGCCTTGAATTACTTCCACTGGCTGCAGTACGT GATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 694/1851
637/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCC CCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTG GGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGG CACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGT CTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCG ACGC 1 1 1 1 1 1 1 CTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGC GGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTT GGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTC CCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCG AGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTC TCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCT CGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGG CAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAG CGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAG GGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAG AGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAA GGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGA CTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCT CGATTAGTTCTCGAGC1 1 1 1GGAGTACGTCGTCTT TAGGTTGGGGGGAGGGG 1 1 1 1ATGCGATGGAGT TTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAG GCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAA TTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCT CAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAG 1 1 1 1 1 1 1 CTTC CATTTCAGGTGTCGTGACCACCATGGCGCTTCCG GTGACAGCACTGCTCCTCCCCTTGGCGCTGTTGC TCCACGCAGCAAGGCCGGATATCCAGATGACACA AAGCCCCAGCAGCCTGTCCGCTAGCCTGGGCGA TAGGGTGACCATCACATGCAGGACCAGCCAGGA CATCTCCAACCACCTGAACTGGTACCAGCAGAAG CCTGGAAAGGCCCCCAAACTGCTGATCTACTACA CCAGCAGGCTGGAGAGCGGCGTGCCTAGCAGGT TTTCCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTATAGCC TGACCATCAGCTCCCTGCAGCCCGAGGACATCG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 695/1851
638/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCACCTACTACTGCCAGCAGGGAAACACACTGCC CCCCACCTTTGGCGGCGGCACAAAGCTGGAGAT CAAGGGCGGCGGCGGATCCGGCGGCGGAGGCA GCGGAGGAGGAGGAAGCCAGGTGCAGCTGGTG CAGTCCGGCCCTGAGCTGAAGAAGCCCGGAGCC AGCGTGAAAATTAGCTGCAAGACCTCCGGCTACA CATTCACCGAGTACACCATCAACTGGGTGAAGCA GGCTCCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATCGGCGA CATCTACCCCGACAACTACAACATCAGGTACAAC CAGAAATTCCAGGGCAAGGCCACCATCACCAGG GACACCAGCTCCTCCACCGCCTATATGGAGCTGT CCAGCCTGAGAAGCGAGGATACCGCCGTGTACT ACTGCGCCAACCACGATTTCTTCGTGTTCTGGGG CCAGGGCACACTGGTCACCGTGAGCAGCAGTGC TGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAA CCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACA CCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTC TTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGG GGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTT GTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTAC GTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCGTTATTACTT TGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAG TAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTC CTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACC AACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTA CAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGA CGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTG TATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGT ATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACC CGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATC CCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGA TAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATG AAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGAT GGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 696/1851
639/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GATACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGC CTCCCAGATAATAATAAAATCGCTATCCATCGAAG ATGGATGTGTGTTGG 1 1 1 1 1 1GTGTGTGGAGCAA CAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACA ACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAG CCCAGGTAAGGGCAGCTTTGGTGCCTTCGCAGG CTGTTTCCTTGCTTCAGGAATGGCCAGGTTCTGC CCAGAGCTCTGGTCAATGATGTCTAAAACTCCTC TGATTGGTGGTCTCGGCCTTATCCATTGCCACCA AAACCCTCTTTTTACTAAGAAACAGTGAGCCTTGT TCTGGCAGTCCAGAGAATGACACGGGAAAAAAGC AGATGAAGAGAAGGTGGCAGGAGAGGGCACGTG GCCCAGCCTCAGTCTCTCCAACTGAGTTCCTGCC TGCCTGCCTTTGCTCAGACTGTTTGCCCCTTACT GCTCTTCTAGGCCTCATTCTAAGCCCCTTCTCCAA GTTGCCTCTCCTTATTTCTCCCTGTCTGCCAAAAA ATCTTTCCCAGCTCACTAAGTCAGTCTCACGCAG TCACTCATTAACCCACCAATCACTGATTGTGCCG GCACATGAATGCACCAGGTGTTGAAGTGGAGGAA TTAAAAAGTCAGATGAGGGGTGTGCCCAGAGGAA GCACCATTCTAGTTGGGGGAGCCCATCTGTCAGC TGGGAAAAGTCCAAATAACTTCAGATTGGAATGT G 1 1 1 1AACTCAGGGTTGAGAAAACAGCTACCTTCA GGACAAAAGTCAGGGAAGGGCTCTCTGAAGAAAT GCTACTTGAAGATACCAGCCCTACCAAGGGCAGG GAGAGGACCCTATAGAGGCCTGGGACAGGAGCT CAATGAGAAAGG
Tabela 36.Sequências de nucleotídeos de CAR
SEQ NO: ID Descrição Sequência
1316 Anti-CD19 CAR de ATGCTTCI I I IGG rTACGTCTCTGTTGCTTTGCGA ACTTCCTCATCCAGCGTTCTTGCTGATCCCCGAT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 697/1851
640/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTX-131 a CTX-141 ATTCAGATGACTCAGACCACCAGTAGCTTGTCTG CCTCACTGGGAGACCGAGTAACAATCTCCTGCAG GGCAAGTCAAGACATTAGCAAATACCTCAATTGG TACCAGCAGAAGCCCGACGGAACGGTAAAACTC CTCATCTATCATACGTCAAGGTTGCATTCCGGAG TACCGTCACGAI I I ICAGGTTCTGGGAGCGGAAC TGACTATTCCTTGACTATTTCAAACCTCGAGCAGG AGGACATTGCGACATATTTTTGTCAACAAGGTAAT ACCCTCCCTTACACTTTCGGAGGAGGAACCAAAC TCGAAATTACCGGGTCCACCAGTGGCTCTGGGAA GCCTGGCAGTGGAGAAGGTTCCACTAAAGGCGA GGTGAAGCTCCAGGAGAGCGGCCCCGGTCTCGT TGCCCCCAGTCAAAGCCTCTCTGTAACGTGCACA GTGAGTGGTGTATCATTGCCTGATTATGGCGTCT CCTGGATAAGGCAGCCCCCGCGAAAGGGTCTTG AATGGCTTGGGGTAATATGGGGCTCAGAGACAAC GTATTATAACTCCGCTCTCAAAAGTCGCTTGACGA TAATAAAAGATAACTCCAAGAGTCAAG I I I I CCTT AAAATGAACAGTTTGCAGACTGACGATACCGCTA TATATTATTGTGCTAAACATTATTACTACGGCGGT AGTTACGCGATGGATTATTGGGGGCAGGGGACTT CTGTCACAGTCAGTAGTGCTGCTGCCTTTGTCCC GGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCC GCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATC GCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCAT GCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGA GGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTG GGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCCI I I I GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACA GGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTC CGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGG CCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCC CACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGA AG I I I ICCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 698/1851
641/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAAT TTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGAT AAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGG TAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTC TACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGG CCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACG ACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGG GTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCA CTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGA
1423 Anti- CD70A CAR de CTX-142 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGATA TAGTTATGACCCAATCACCCGATAGTCTTGCGGT AAGCCTGGGGGAGCGAGCAACAATAAACTGTCG GGCATCAAAATCCGTCAGTACAAGCGGGTATTCA TTCATGCACTGGTATCAACAGAAACCCGGTCAGC CACCCAAGCTCCTGATTTATCTTGCGTCTAATCTT GAGTCCGGCGTCCCAGACCGG I I I ICCGGCTCC GGGAGCGGCACGGAI I I IACTCTTACTATTTCTA GCCTTCAGGCCGAAGATGTGGCGGTATACTACTG CCAGCATTCAAGGGAAGTTCCTTGGACGTTCGGT CAGGGCACGAAAGTGGAAATTAAAGGCGGGGGG GGATCCGGCGGGGGAGGGTCTGGAGGAGGTGG CAGTGGTCAGGTCCAACTGGTGCAGTCCGGGGC AGAGGTAAAAAAACCCGGCGCGTCTGTTAAGGTT TCATGCAAGGCCAGTGGATATACTTTCACCAATTA CGGAATGAACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGTCA AGGCCTGAAATGGATGGGATGGATAAACACGTAC ACCGGTGAACCTACCTATGCCGATGCCTTTAAGG GTCGGGTTACGATGACGAGAGACACCTCCATATC AACAGCCTACATGGAGCTCAGCAGATTGAGGAGT GACGATACGGCAGTCTATTACTGTGCAAGAGACT ACGGCGATTATGGCATGGATTACTGGGGCCAGG GCACTACAGTAACCGTTTCCAGCAGTGCTGCTGC CTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 699/1851
642/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCT CCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCC CCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCT GTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATA TTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGG CGTCC I I I I GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATT GTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTT GTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCGCC GGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACCCTA TGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTC CCGAGTGAAG I I I ICCCGAAGCGCAGACGCTCC GGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAAC GAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGAC GTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAA ATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAA GAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGA TGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGA
1424 Anti- CD70B CAR de CTX-145 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCAGG TCCAGTTGGTGCAAAGCGGGGCGGAGGTGAAAA AACCCGGCGCTTCCGTGAAGGTGTCCTGTAAGG CGTCCGGTTATACGTTCACGAACTACGGGATGAA TTGGGTTCGCCAAGCGCCGGGGCAGGGACTGAA ATGGATGGGGTGGATAAATACCTACACCGGCGAA CCTACATACGCCGACGCI I I IAAAGGGCGAGTCA CTATGACGCGCGATACCAGCATATCCACCGCATA CATGGAGCTGTCCCGACTCCGGTCAGACGACAC GGCTGTCTACTATTGTGCTCGGGACTATGGCGAT TATGGCATGGACTACTGGGGTCAGGGTACGACT GTAACAGTTAGTAGTGGTGGAGGCGGCAGTGGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 700/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGGGGGGGAAGCGGAGGAGGGGGTTCTGGTGA CATAGTTATGACCCAATCCCCAGATAGTTTGGCG GTTTCTCTGGGCGAGAGGGCAACGATTAATTGTC GCGCATCAAAGAGCGTTTCAACGAGCGGATATTC I I I IATGCATTGGTACCAGCAAAAACCCGGACAA CCGCCGAAGCTGCTGATCTACTTGGCTTCAAATC TTGAGTCTGGGGTGCCGGACCGAI I I ICTGGTAG TGGAAGCGGAACTGACTTTACGCTCACGATCAGT TCACTGCAGGCTGAGGATGTAGCGGTCTATTATT GCCAGCACAGTAGAGAAGTCCCCTGGACCTTCG GTCAAGGCACGAAAGTAGAAATTAAAAGTGCTGC TGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCG ACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCC GCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTC GCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGT GCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTG ATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTG CGGCGTCC I I I I GTTGTCACTCGTTATTACTTTGT ATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAG GTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTC GCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAAC CCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAG GTCCCGAGTGAAG I I I ICCCGAAGCGCAGACGCT CCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATA ACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATG ACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGG AAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCA AGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAG ATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGA
1275 Anti-CD70 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 701/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CAR de CTX-145b TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCAGG TCCAGTTGGTGCAAAGCGGGGCGGAGGTGAAAA AACCCGGCGCTTCCGTGAAGGTGTCCTGTAAGG CGTCCGGTTATACGTTCACGAACTACGGGATGAA TTGGGTTCGCCAAGCGCCGGGGCAGGGACTGAA ATGGATGGGGTGGATAAATACCTACACCGGCGAA CCTACATACGCCGACGC Illi AAAGGGCGAGTCA CTATGACGCGCGATACCAGCATATCCACCGCATA CATGGAGCTGTCCCGACTCCGGTCAGACGACAC GGCTGTCTACTATTGTGCTCGGGACTATGGCGAT TATGGCATGGACTACTGGGGTCAGGGTACGACT GTAACAGTTAGTAGTGGTGGAGGCGGCAGTGGC GGGGGGGGAAGCGGAGGAGGGGGTTCTGGTGA CATAGTTATGACCCAATCCCCAGATAGTTTGGCG GTTTCTCTGGGCGAGAGGGCAACGATTAATTGTC GCGCATCAAAGAGCGTTTCAACGAGCGGATATTC Illi ATGCATTGGTACCAGCAAAAACCCGGACAA CCGCCGAAGCTGCTGATCTACTTGGCTTCAAATC TTGAGTCTGGGGTGCCGGACCGA Illi CTGGTAG TGGAAGCGGAACTGACTTTACGCTCACGATCAGT TCACTGCAGGCTGAGGATGTAGCGGTCTATTATT GCCAGCACAGTAGAGAAGTCCCCTGGACCTTCG GTCAAGGCACGAAAGTAGAAATTAAAAGTGCTGC TGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCG ACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCC GCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTC GCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGT GCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTG ATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTG CGGCGTCC Illi GTTGTCACTCGTTATTACTTTGT ATTGTAATCACAGGAATCGCAAACGGGGCAGAAA GAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGA GACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTG TAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 702/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGTGAACTGCGAGTGAAGI I I ICCCGAAGCGCAG ACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCT GTATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGA GTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGA CCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAA TCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAG GATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTA TGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACG ATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAA AGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTG CCTCCCAGATAA
1425 Anti- BCMA-1 CAR de CTX 152 e CTX-153 ATGGCTCTTCCTGTAACCGCACTTCTGCTTCCTCT TGCTCTGCTGCTTCATGCTGCTAGACCTCAGGTG CAGTTACAACAGTCAGGAGGAGGATTAGTGCAGC CAGGAGGATCTCTGAAACTGTCTTGTGCCGCCAG CGGAATCGAI I I IAGCAGGTACTGGATGTCTTGG GTGAGAAGAGCCCCTGGAAAAGGACTGGAGTGG ATCGGCGAGATTAATCCTGATAGCAGCACCATCA ACTATGCCCCTAGCCTGAAGGACAAGTTCATCAT CAGCCGGGACAATGCCAAGAACACCCTGTACCT GCAAATGAGCAAGGTGAGGAGCGAGGATACAGC TCTGTACTACTGTGCCAGCCTGTACTACGATTAC GGAGATGCTATGGACTATTGGGGCCAGGGAACA AGCGTTACAGTGTCTTCTGGAGGAGGAGGATCC GGTGGTGGTGGTTCAGGAGGTGGAGGTTCGGGA GATATTGTGATGACACAAAGCCAGCGGTTCATGA CCACATCTGTGGGCGACAGAGTGAGCGTGACCT GTAAAGCTTCTCAGTCTGTGGACAGCAATGTTGC CTGGTATCAGCAGAAGCCCAGACAGAGCCCTAAA GCCCTGATCI I I ICIGCCAGCCI GAGA I I I ICTG GCGTTCCTGCCAGATTTACCGGCTCTGGCTCTGG CACCGAI I I IACACTGACCATCAGCAATCTGCAG TCTGAGGATCTGGCCGAGTACI I I IGCCAGCAGT ACAACAACTACCCCCTGACCTTTGGAGCTGGCAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 703/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
AAAACTGGAGCTGAAGAGTGCTGCTGCCTTTGTC CCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTC CCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCA TCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGC ATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATAC GAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTT GGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCCTTT TGTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACA GGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTC CGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGG CCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCC CACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGA AG I I I ICCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCA GCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAAT TTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGAT AAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGG TAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTC TACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGG CCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACG ACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGG GTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCA CTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGA
1426 Anti- BCMA-2 CAR de CTX-154 e CTX-155 ATGGCTCTTCCTGTAACCGCACTTCTGCTTCCTCT TGCTCTGCTGCTTCATGCTGCTAGACCTGACATC GTGATGACCCAAAGCCAGAGGTTCATGACCACAT CTGTGGGCGATAGAGTGAGCGTGACCTGTAAAG CCTCTCAGTCTGTGGACAGCAATGTTGCCTGGTA TCAGCAGAAGCCTAGACAGAGCCCTAAAGCCCTG ATCTTTAGCGCCAGCCTGAGATTTAGCGGAGTTC CTGCCAGATTTACCGGAAGCGGATCTGGAACCGA I I I IACACTGACCATCAGCAACCTGCAGAGCGAG GATCTGGCCGAGTAC I I I I GCCAGCAGTACAACA ATTACCCTCTGACCTTTGGAGCCGGCACAAAGCT GGAGCTGAAAGGAGGAGGAGGATCTGGTGGTGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 704/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
TGGTTCAGGAGGTGGAGGTTCGGGACAAGTTCA ATTACAGCAATCTGGAGGAGGACTGGTTCAGCCT GGAGGAAGCCTGAAGCTGTCTTGTGCCGCTTCTG GAATCGAI I I IAGCAGATACTGGATGAGCTGGGT GAGAAGAGCCCCTGGCAAAGGACTGGAGTGGAT TGGCGAGATTAATCCTGATAGCAGCACCATCAAC TATGCCCCTAGCCTGAAGGACAAGTTCATCATCA GCCGGGACAATGCCAAGAACACCCTGTACCTGC AAATGAGCAAGGTGAGGAGCGAGGATACAGCTC TGTACTACTGTGCCAGCCTGTACTACGATTACGG AGATGCTATGGACTATTGGGGCCAGGGAACAAG CGTTACAGTGAGCAGCAGTGCTGCTGCCTTTGTC CCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTC CCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCA TCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGC ATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATAC GAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTT GGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCCTTT TGTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACA GGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTC CGATTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGG CCGACAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCC CACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGA AG I I I ICCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCA GCAAGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAAT TTGGGACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGAT AAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGG TAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTC TACAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGG CCTACTCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACG ACGGGGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGG GTTGAGTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCA CTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCCAGA
1427 Anti-BCMA ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 705/1851
648/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CAR de CTX-160 TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGAGG TCCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGAGGACTGGTCC AGCCTGGCGGCTCCCTGAAACTGAGCTGCGCCG CCAGCGGCATCGACTTCAGCAGGTACTGGATGA GCTGGGTGAGACAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGG AATGGATCGGCGAGATCAACCCCGACTCCAGCA CCATCAACTACGCCGACAGCGTCAAGGGCAGGT TCACCATTAGCAGGGACAATGCCAAGAACACCCT GTACCTGCAGATGAACCTGAGCAGGGCCGAAGA CACCGCCCTGTACTACTGTGCCAGCCTGTACTAC GACTATGGCGACGCTATGGACTACTGGGGCCAG GGCACCCTGGTGACAGTGAGCTCCGGAGGAGGC GGCAGCGGCGGAGGCGGCAGCGGCGGAGGCG GCAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCA GCCTGAGCGCCTCCGTGGGAGATAGGGTGACAA TCACCTGTAGGGCCAGCCAGAGCGTGGACTCCA ACGTGGCCTGGTATCAACAGAAGCCCGAGAAGG CCCCCAAGAGCCTGATC Illi CCGCCTCCCTGAG GTTCAGCGGAGTCCCCAGCAGGTTCTCCGGATC CGGCTCCGGAACCGACTTTACCCTGACCATCTCC AGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACT GCCAGCAGTACAACAGCTACCCCCTGACCTTCGG CGCCGGCACAAAGCTGGAGATCAAGAGTGCTGC TGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCG ACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCC GCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTC GCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGT GCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTG ATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTG CGGCGTCC Illi GTTGTCACTCGTTATTACTTTGT ATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAG GTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTC GCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAAC CCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 706/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
GTCCCGAGTGAAG I I I ICCCGAAGCGCAGACGCT CCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATA ACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATG ACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGG AAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCA AGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAG ATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGA
1428 Anti-BCMA CAR de CTX-160b ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGAGG TCCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGAGGACTGGTCC AGCCTGGCGGCTCCCTGAAACTGAGCTGCGCCG CCAGCGGCATCGACTTCAGCAGGTACTGGATGA GCTGGGTGAGACAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGG AATGGATCGGCGAGATCAACCCCGACTCCAGCA CCATCAACTACGCCGACAGCGTCAAGGGCAGGT TCACCATTAGCAGGGACAATGCCAAGAACACCCT GTACCTGCAGATGAACCTGAGCAGGGCCGAAGA CACCGCCCTGTACTACTGTGCCAGCCTGTACTAC GACTATGGCGACGCTATGGACTACTGGGGCCAG GGCACCCTGGTGACAGTGAGCTCCGGAGGAGGC GGCAGCGGCGGAGGCGGCAGCGGCGGAGGCG GCAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCA GCCTGAGCGCCTCCGTGGGAGATAGGGTGACAA TCACCTGTAGGGCCAGCCAGAGCGTGGACTCCA ACGTGGCCTGGTATCAACAGAAGCCCGAGAAGG CCCCCAAGAGCCTGATCI I I ICCGCCTCCCTGAG GTTCAGCGGAGTCCCCAGCAGGTTCTCCGGATC CGGCTCCGGAACCGACTTTACCCTGACCATCTCC AGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACT GCCAGCAGTACAACAGCTACCCCCTGACCTTCGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 707/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
CGCCGGCACAAAGCTGGAGATCAAGAGTGCTGC TGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCG ACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCC GCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTC GCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGT GCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTG ATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTG CGGCGTCC I I I I GTTGTCACTCGTTATTACTTTGT ATTGTAATCACAGGAATCGCAAACGGGGCAGAAA GAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGA GACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTG TAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGA TGTGAACTGCGAGTGAAGI I I ICCCGAAGCGCAG ACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCT GTATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGA GTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGA CCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAA TCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAG GATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTA TGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACG ATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAA AGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTG CCTCCCAGA
1429 Anti-BCMA CAR de CTX-161 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGAGG TGCAGCTGGTGGAGAGCGGAGGAGGACTGGTGC AGCCCGGAGGCTCCCTGAAGCTGAGCTGCGCTG CCTCCGGCATCGACTTCAGCAGGTACTGGATGAG CTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGCAAAGGCCTGGA GTGGATCGGCGAGATCAACCCCGACAGCAGCAC CATCAACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTT CACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAATACCCTG TACCTGCAGATGAACCTGAGCAGGGCCGAGGAC ACAGCCCTGTACTACTGTGCCAGCCTGTACTACG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 708/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACTATGGAGACGCTATGGACTACTGGGGCCAGG GAACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGAGGCGGAG GCTCCGGCGGCGGAGGCAGCGGAGGAGGCGGC AGCGATATCCAGATGACCCAGTCCCCCAGCTCCC TGAGCGCTAGCCCTGGCGACAGGGTGAGCGTGA CATGCAAGGCCAGCCAGAGCGTGGACAGCAACG TGGCCTGGTACCAGCAGAAACCCAGACAGGCCC CCAAGGCCCTGATCTTCAGCGCCAGCCTGAGGTT TAGCGGCGTGCCCGCTAGGTTTACCGGATCCGG CAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCCAAC CTGCAGTCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCC AGCAGTACAACAACTACCCCCTGACATTCGGCGC CGGAACCAAGCTGGAGATCAAGAGTGCTGCTGC CTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACC ACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCT CCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCC CCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCT GTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATA TTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGG CGTCC 1 1 1 1 GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTATT GTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTT GTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCGCC GGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACCCTA TGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAGGTC CCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCAGACGCTCC GGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATAAC GAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATGAC GTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGGAA ATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCAA GAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAGA TGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 709/1851
652/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
AGA
1430 Anti-BCMA CAR de CTX-162 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGACA TCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCG CTAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCA GGGCCAGCCAGAGCGTGGACTCCAACGTGGCCT GGTACCAGCAGAAGCCCGAGAAGGCCCCCAAGA GCCTGATCTTCAGCGCCAGCCTGAGGTTCTCCG GAGTGCCTAGCAGATTTAGCGGCAGCGGCAGCG GCACAGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCA GCCCGAGGATTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAG TACAACTCCTACCCCCTGACCTTCGGCGCCGGCA CAAAGCTGGAGATCAAGGGAGGAGGAGGAAGCG GAGGAGGAGGAAGCGGAGGCGGAGGAAGCGAG GTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGCCTGGTG CAACCTGGAGGCAGCCTGAAGCTGAGCTGTGCC GCCAGCGGAATCGACTTCAGCAGGTACTGGATGT CCTGGGTGAGACAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGG AGTGGATCGGAGAGATCAACCCCGACAGCTCCA CCATCAACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGT TCACCATCAGCAGAGACAACGCCAAGAACACCCT GTACCTGCAGATGAACCTGTCCAGAGCCGAGGA CACCGCCCTGTACTACTGCGCCAGCCTGTATTAC GACTACGGCGACGCTATGGACTACTGGGGCCAG GGCACCCTGGTGACAGTGAGCAGCAGTGCTGCT GCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGA CCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCG CTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCG CCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTG CTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGA TATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGC GGCGTCC I I I I GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTA TTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGG TTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 710/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
CCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACC CTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAG GTCCCGAGTGAAG I I I ICCCGAAGCGCAGACGCT CCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATA ACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATG ACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGG AAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCA AGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAG ATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGA
1431 Anti-BCMA CAR de CTX-163 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGACA TCCAAATGACCCAGTCCCCTAGCAGCCTGTCCGC CAGCCCTGGAGACAGGGTGTCCGTGACCTGCAA GGCCAGCCAGTCCGTGGACAGCAACGTCGCCTG GTATCAGCAGAAGCCCAGGCAAGCTCCCAAGGC TCTGATCTTCTCCGCCAGCCTGAGAI I I ICCGGC GTGCCCGCCAGATTCACCGGAAGCGGCAGCGGC ACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAACCTGCAGA GCGAGGATTTCGCCACATACTACTGCCAGCAGTA CAACAACTACCCCCTGACCTTCGGAGCCGGCAC CAAGCTGGAGATCAAAGGCGGCGGAGGCAGCGG CGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCGGATCCGAAG TGCAGCTGGTGGAAAGCGGAGGCGGACTCGTGC AGCCTGGCGGAAGCCTGAAGCTGAGCTGTGCCG CCAGCGGCATCGACTTCAGCAGGTACTGGATGA GCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGCAAAGGCCTGG AGTGGATCGGCGAGATCAACCCTGACAGCAGCA CCATCAACTACGCCGACAGCGTGAAAGGCAGGTT CACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACACCCT GTACCTGCAGATGAACCTGTCCAGAGCCGAGGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 711/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
CACCGCCCTGTACTACTGCGCCAGCCTGTACTAC GACTACGGCGACGCTATGGACTACTGGGGCCAA GGCACCCTCGTGACCGTCAGCTCCAGTGCTGCT GCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGA CCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCG CTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCG CCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTG CTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGA TATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGGGTACGTGC GGCGTCC I I I I GTTGTCACTCGTTATTACTTTGTA TTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCGGAGTAGG TTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGACTCCTCG CCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTACCAACC CTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGCGTACAG GTCCCGAGTGAAG I I I ICCCGAAGCGCAGACGCT CCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAGCTGTATA ACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGGAGTATG ACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAGACCCGG AAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGAATCCCCA AGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAAGGATAAG ATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGTATGAAGG GCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCACGATGGCC TCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCAAAGATAC GTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCTGCCTCCC AGA
1432 Anti-BCMA CAR de CTX-164 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGAGG TGCAGCTGCAGCAGTCCGGCCCTGAGCTCGTGA AGCCTGGAGCCAGCGTGAAAATGAGCTGTAAGG CCTCCGGCAACACCCTCACCAACTACGTGATCCA TTGGATGAAGCAGATGCCCGGCCAGGGCCTGGA CTGGATTGGCTACATTCTGCCCTACAACGACCTG ACCAAGTACAACGAGAAGTTCACCGGCAAGGCCA CCCTGACCAGCGATAAGAGCTCCAGCAGCGCCT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 712/1851
655/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACATGGAGCTGAACTCCCTGACCAGCGAGGACA GCGCCGTGTACTACTGCACCAGGTGGGACTGGG ATGGCTTCTTCGACCCCTGGGGACAGGGCACCA CCCTGACAGTGTCCAGCGGAGGAGGCGGCAGCG GCGGCGGCGGCTCCGGCGGCGGCGGCAGCGAT ATCGTGATGACACAGTCCCCTCTGAGCCTGCCTG TGAGCCTGGGCGACCAGGCCAGCATCAGCTGCA GGTCCACCCAGTCCCTGGTGCACTCCAACGGCA ACACCCACCTGCACTGGTACCTGCAAAGGCCCG GCCAGTCCCCTAAGCTGCTGATCTACAGCGTGAG CAACAGGTTTAGCGAGGTGCCCGATAGA1 1 1 1 CC GCCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACACTGAAG ATCTCCAGGGTGGAGGCCGAGGATCTGGGCGTG TACTTCTGCAGCCAGACCAGCCACATCCCCTACA CCTTCGGCGGCGGAACCAAGCTGGAGATCAAGA GTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCCAGC CAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCCTCC GACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCTCTT AGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCCGCC GGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGACTTC GCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGCGG GTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCGTTATT ACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAAGCG GAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAATATGA CTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAACATTA CCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCGCTGC GTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAGCGCA GACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAATCAG CTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGCGAGG AGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGGAGAG ACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGAAAGA ATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCCAGAA GGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAATAGGT ATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGTCAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 713/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
GATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAACCA AAGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCCCT GCCTCCCAGA
1433 Anti-BCMA CAR de CTX-165 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGACA TCGTGATGACCCAGAGCCCCCTGAGCCTGCCTG TGTCCCTGGGAGACCAGGCTTCCATCAGCTGCA GGTCCACCCAGAGCCTGGTGCACTCCAACGGCA ACACCCACCTGCACTGGTACCTGCAGAGGCCTG GCCAGTCCCCCAAGCTGCTGATCTACAGCGTGA GCAATAGGTTCAGCGAGGTGCCCGACAGATTCA GCGCCAGCGGAAGCGGCACCGACTTCACCCTGA AGATCAGCAGGGTCGAGGCCGAAGATCTGGGCG TGTACTTCTGCTCCCAGACATCCCACATCCCTTAC ACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATTAAG GGCGGCGGAGGATCCGGCGGAGGAGGATCCGG AGGAGGAGGAAGCGAGGTGCAGCTGCAGCAGAG CGGACCCGAGCTGGTGAAACCCGGAGCCAGCGT CAAAATGAGCTGCAAGGCCAGCGGCAACACCCT GACCAACTACGTCATCCACTGGATGAAGCAGATG CCCGGACAGGGCCTGGACTGGATCGGCTACATC CTGCCCTACAACGACCTGACCAAGTACAACGAGA AATTCACCGGCAAGGCCACCCTGACCAGCGACA AGAGCAGCAGCAGCGCCTACATGGAGCTGAACA GCCTGACCAGCGAGGACTCCGCCGTGTACTATT GCACCAGGTGGGACTGGGACGGCTTCTTTGACC CCTGGGGCCAGGGCACAACACTCACCGTGAGCT CCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCC AGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCC TCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCT CTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCC GCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGAC TTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGC GGGTACGTGCGGCGTCCI I I IGTTGTCACTCGTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 714/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAA GCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAAT ATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAA CATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCG CTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG I I I ICCCGAAG CGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAA TCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGC GAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGG AGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGA AAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCC AGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAAT AGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGG TCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCA ACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGG CCCTGCCTCCCAGA
1434 Anti-BCMA CAR de CTX-166 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCAGG TGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAGCTCAAGA AGCCCGGAGCCTCCGTGAAGGTGAGCTGCAAGG CCAGCGGCAACACCCTGACCAACTACGTGATCCA CTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCCAAAGGCTGGA GTGGATGGGCTACATCCTGCCCTACAACGACCTG ACCAAGTACAGCCAGAAGTTCCAGGGCAGGGTG ACCATCACCAGGGATAAGAGCGCCTCCACCGCC TATATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGAC ACCGCTGTGTACTACTGTACAAGGTGGGACTGGG ACGGCTTCTTTGACCCCTGGGGCCAGGGCACAA CAGTGACCGTCAGCAGCGGCGGCGGAGGCAGC GGCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCGGAAGCGA AATCGTGATGACCCAGAGCCCCGCCACACTGAG CGTGAGCCCTGGCGAGAGGGCCAGCATCTCCTG CAGGGCTAGCCAAAGCCTGGTGCACAGCAACGG CAACACCCACCTGCACTGGTACCAGCAGAGACC CGGACAGGCTCCCAGGCTGCTGATCTACAGCGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 715/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
GAGCAACAGGTTCTCCGAGGTGCCTGCCAGGTTT AGCGGCAGCGGAAGCGGCACCGACTTTACCCTG ACCATCAGCAGCGTGGAGTCCGAGGACTTCGCC GTGTATTACTGCAGCCAGACCAGCCACATCCCTT ACACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCA AAAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCC AGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCC TCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCT CTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCC GCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGAC TTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGC GGGTACGTGCGGCGTCCI I I IGTTGTCACTCGTT ATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAA GCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAAT ATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAA CATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCG CTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG I I I ICCCGAAG CGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAA TCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGC GAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGG AGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGA AAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCC AGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAAT AGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGG TCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCA ACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGG CCCTGCCTCCCAGA
1435 Anti-BCMA CAR de CTX-166b ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCAGG TGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAGCTCAAGA AGCCCGGAGCCTCCGTGAAGGTGAGCTGCAAGG CCAGCGGCAACACCCTGACCAACTACGTGATCCA CTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCCAAAGGCTGGA GTGGATGGGCTACATCCTGCCCTACAACGACCTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 716/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACCAAGTACAGCCAGAAGTTCCAGGGCAGGGTG ACCATCACCAGGGATAAGAGCGCCTCCACCGCC TATATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGAC ACCGCTGTGTACTACTGTACAAGGTGGGACTGGG ACGGCTTCTTTGACCCCTGGGGCCAGGGCACAA CAGTGACCGTCAGCAGCGGCGGCGGAGGCAGC GGCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCGGAAGCGA AATCGTGATGACCCAGAGCCCCGCCACACTGAG CGTGAGCCCTGGCGAGAGGGCCAGCATCTCCTG CAGGGCTAGCCAAAGCCTGGTGCACAGCAACGG CAACACCCACCTGCACTGGTACCAGCAGAGACC CGGACAGGCTCCCAGGCTGCTGATCTACAGCGT GAGCAACAGGTTCTCCGAGGTGCCTGCCAGGTTT AGCGGCAGCGGAAGCGGCACCGACTTTACCCTG ACCATCAGCAGCGTGGAGTCCGAGGACTTCGCC GTGTATTACTGCAGCCAGACCAGCCACATCCCTT ACACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCA AAAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCC AGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCC TCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCT CTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCC GCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGAC TTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGC GGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCGTT ATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCAAACG GGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAA CCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGG AAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGA AGAAGGAGGATGTGAACTGCGAGTGAAG 1 1 1 1 CC CGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGA CAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGAC GCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCC GGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCC GAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 717/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCA GAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGA AAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTA CGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATAT GCAGGCCCTGCCTCCCAGA
1436 Anti-BCMA CAR de CTX-167 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCAGG TGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGCTGAAGA AACCTGGCGCCAGCGTCAAGGTGAGCTGCAAGG CTTCCGGAAACACCCTCACCAACTACGTGATCCA CTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGACAGAGACTGGA GTGGATGGGCTACATTCTGCCCTACAACGACCTG ACCAAGTACAGCCAGAAGTTCCAGGGCAGGGTC ACCATCACCAGGGACAAGAGCGCCAGCACCGCC TACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGTCCGAGGAC ACAGCCGTGTACTACTGCACCAGGTGGGACTGG GACGGATTCTTCGACCCTTGGGGCCAAGGCACC ACAGTGACAGTGAGCTCCGGCGGAGGCGGCAGC GGCGGCGGAGGAAGCGGCGGCGGCGGAAGCGA CATCGTGATGACCCAGAGCCCTCTGAGCCTGCC CGTGACACTGGGACAGCCTGCCACACTGTCCTG CAGGAGCACCCAGAGCCTGGTGCATAGCAACGG CAACACCCACCTGCACTGGTTCCAGCAGAGACCT GGCCAGAGCCCCCTGAGACTGATCTACAGCGTG AGCAACAGGGACAGCGGCGTGCCCGATAGATTT AGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTTACCCTG AAAATCTCCAGGGTGGAGGCCGAGGATGTGGGC GTGTATTACTGCTCCCAGACAAGCCACATTCCCT ATACATTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCA AGAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCC AGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCC TCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCT CTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCC GCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 718/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
TTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGC GGGTACGTGCGGCGTCCI I I IGTTGTCACTCGTT ATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAA GCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAAT ATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAA CATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCG CTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG I I I ICCCGAAG CGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAA TCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGC GAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGG AGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGA AAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCC AGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAAT AGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGG TCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCA ACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGG CCCTGCCTCCCAGA
1437 Anti-BCMA CAR de CTX-168 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGAAA TCGTGATGACCCAGAGCCCTGCCACACTGAGCG TGAGCCCTGGCGAGAGAGCCAGCATCAGCTGCA GGGCCTCCCAGAGCCTGGTGCACTCCAACGGCA ATACCCACCTGCACTGGTATCAGCAGAGACCCGG CCAGGCCCCTAGGCTGCTGATCTACTCCGTGAG CAACAGGTTCTCCGAGGTGCCCGCCAGATTCAG CGGATCCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTCAC CATCTCCAGCGTGGAGAGCGAGGACTTCGCCGT CTACTACTGCAGCCAGACAAGCCACATCCCCTAC ACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCAAG GGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGAGGCAGCG GAGGCGGCGGATCCCAGGTGCAACTGGTGCAGA GCGGAGCCGAGCTGAAGAAGCCCGGAGCCAGC GTGAAGGTCAGCTGCAAGGCCAGCGGCAACACC CTGACAAACTACGTGATCCACTGGGTGAGGCAG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 719/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
GCCCCTGGCCAAAGGCTCGAGTGGATGGGCTAC ATCCTCCCCTACAACGACCTGACCAAGTACTCCC AGAAGTTCCAGGGCAGGGTGACCATCACCAGGG ATAAGAGCGCCAGCACCGCCTACATGGAACTCAG CAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTA CTGCACCAGGTGGGACTGGGATGGCTTCTTCGA CCCTTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACAGTGAG CTCCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTC CCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGC CCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAAC CTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCG CCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGG ACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTG GCGGGTACGTGCGGCGTCCI I I IGTTGTCACTCG TTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCA AAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGA ATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAA AACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTT CGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG I I I ICCCGA AGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAG AATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCC GCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGG GGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAA GAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACT CCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGA AATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAA AGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACG GCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGC AGGCCCTGCCTCCCAGA
1438 Anti-BCMA CAR de CTX-169 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGACA TCGTGATGACACAATCCCCCCTCAGCCTGCCTGT GACACTGGGCCAGCCTGCCACCCTGAGCTGCAG GAGCACCCAGTCCCTGGTGCACTCCAACGGCAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 720/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
CACCCACCTGCACTGGTTCCAGCAGAGGCCTGG ACAGAGCCCCCTGAGGCTGATCTACAGCGTGAG CAACAGGGACTCCGGCGTGCCCGATAGATTCAG CGGCAGCGGCTCCGGCACCGATTTCACCCTGAA GATCTCCAGAGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGT CTACTACTGCAGCCAGACCAGCCATATCCCCTAC ACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCAAG GGAGGCGGCGGAAGCGGCGGAGGCGGATCCGG AGGCGGAGGCTCCCAAGTGCAGCTGGTGCAGAG CGGCGCTGAGCTGAAGAAGCCCGGAGCCAGCGT GAAGGTGAGCTGCAAGGCCAGCGGAAACACCCT GACCAACTACGTGATCCACTGGGTGAGACAGGC CCCCGGACAGAGACTCGAGTGGATGGGCTACAT CCTGCCCTACAACGACCTGACCAAGTACAGCCAG AAGTTCCAGGGCAGGGTGACAATCACCAGGGAC AAGAGCGCCAGCACCGCCTACATGGAGCTGAGC AGCCTGAGATCCGAGGACACCGCCGTGTACTACT GCACCAGGTGGGACTGGGACGGCTTCTTTGACC CCTGGGGCCAGGGAACCACAGTGACCGTGTCCT CCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTTCTCCC AGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCGCGCCC TCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCTCAACCT CTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGACCCGCC GCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCTTGGAC TTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCGTTGGC GGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTCACTCGTT ATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGCTCAAA GCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACATGAAT ATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAAGAAAA CATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGACTTCG CTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1CCCGAAG CGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGACAGAA TCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACGCCGC GAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGGGGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 721/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
AGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAAGA AAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTCC AGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAAT AGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGG TCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCA ACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGG CCCTGCCTCCCAGA
1439 Anti-BCMA CAR de CTX-170 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGAGG TGCAGCTGCAGCAGAGCGGCCCTGAGCTGGTGA AGCCCGGCGCCAGCGTGAAGATCAGCTGCAAGA CCTCCGGCTATACCTTTACCGAGTACACCATCAA CTGGGTGAAGCAGAGCCACGGCAAGAGCCTGGA GTGGATCGGCGATATCTACCCCGACAACTACAAC ATCAGGTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCA CCCTGACCGTGGACAAGTCCAGCAGCACCGCCT ACATGGAGCTGAGGAGCCTGTCCAGCGAGGACT CCGCCATCTACTACTGCGCCAACCACGACTTTTT CGTCTTCTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACAGT GTCCGCTGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCG GCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGACATCCAGATGA CACAGGCCACAAGCTCCCTGTCCGCCAGCCTGG GCGATAGGGTGACCATCAATTGCAGGACCTCCCA GGACATCAGCAACCACCTGAACTGGTACCAGCAG AAACCCGACGGCACCGTGAAGCTGCTCATCTACT ACACCAGCAGGCTGCAGTCCGGCGTCCCTAGCA GATTCAGCGGATCCGGCAGCGGCACCGACTATA GCCTGACCATCAGCAACCTCGAGCAGGAGGACA TCGGCACCTACTTCTGCCATCAGGGCAACACCCT GCCCCCTACCTTTGGCGGCGGCACAAAGCTGGA GATTAAGAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTT CTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCG CGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCT CAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 722/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
CCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCT TGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCG TTGGCGGGTACGTGCGGCGTCCI I I IGTTGTCAC TCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGC TCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACA TGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAA GAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGA CTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAGI I I ICC CGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGA CAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGAC GCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCC GGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCC GAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGA ACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCA GAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGA AAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTA CGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATAT GCAGGCCCTGCCTCCCAGA
1440 Anti-BCMA CAR de CTX-171 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGATA TCCAGATGACCCAGGCCACCAGCAGCCTGAGCG CTTCCCTCGGCGACAGGGTGACCATCAACTGCA GGACCAGCCAGGACATCTCCAACCACCTGAACTG GTACCAGCAGAAGCCCGACGGCACCGTGAAACT GCTGATCTACTACACCAGCAGACTGCAGAGCGG CGTGCCCTCCAGAI I I ICCGGCAGCGGCTCCGG CACCGACTACAGCCTGACCATTAGCAACCTGGAG CAGGAGGACATCGGAACCTACTTCTGCCACCAG GGCAACACACTGCCTCCCACCTTCGGCGGCGGC ACAAAGCTCGAGATCAAGGGCGGCGGCGGAAGC GGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGAGGCTCCGA GGTGCAACTGCAACAGAGCGGACCTGAGCTGGT GAAGCCTGGCGCCAGCGTGAAGATCTCCTGTAA GACCAGCGGCTACACCTTCACCGAGTACACCATC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 723/1851
666/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
AACTGGGTGAAGCAGAGCCACGGCAAGAGCCTC GAATGGATCGGCGACATCTATCCCGACAACTACA ATATCAGATACAACCAGAAGTTCAAGGGAAAGGC CACCCTGACCGTGGATAAGTCCTCCTCCACCGCT TACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGCAGCGAGGAC TCCGCCATCTACTACTGCGCCAACCACGACTTCT TCGTGTTCTGGGGCCAAGGCACCCTCGTGACCG TGAGCGCCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATT TCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCC GCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTC TCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGA CCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGC TTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCC GTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCCI I I IGTTGTCA CTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCG CTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTAC ATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAA GAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGA CTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAGI I I ICC CGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGA CAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGAC GCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCC GGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCC GAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGA ACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCA GAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGA AAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTA CGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATAT GCAGGCCCTGCCTCCCAGA
1441 Anti-BCMA CAR de CTX-172 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCAGG TGCAGCTGGTGCAGTCCGGCGCTGAGCTGAAGA AGCCCGGCGCCAGCGTGAAGATCAGCTGCAAGG CCAGCGGCTACACCTTCACCGAATACACCATCAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 724/1851
667/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTGGGTGAGACAGGCCCCTGGACAGAGGCTCGA GTGGATGGGCGACATCTACCCCGACAACTACAG CATCAGGTACAACCAGAAGTTCCAGGGCAGGGT GACAATCACCAGGGACACCAGCGCCAGCACCGC CTATATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCCGAGGA CACCGCCGTCTATTACTGCGCCAACCACGACTTC TTCGTGTTCTGGGGCCAGGGAACACTGGTGACC GTGTCCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGG AGGAAGCGGCGGCGGCGGCAGCGATATCCAGAT GACCCAGAGCCCCTCCTCCCTGAGCGCTAGCGT GGGCGACAGGGTGACCATTACCTGTCAGGCCTC CCAGGACATCAGCAACTACCTGAACTGGTACCAG CAGAAGCCTGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATC TATTACACCAGCAGGCTGGAGACCGGCGTGCCC TCCAGATTCAGCGGCTCCGGCTCCGGAACCGAC TTCACCTTCACCATCAGCTCCCTGCAGCCTGAGG ACATCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGGCAACAC CCTGCCTCCCACATTCGGCGGCGGCACAAAGGT GGAGATCAAAAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTA TTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCC CGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCT CTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCG ACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGG CTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTC CGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTC ACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATC GCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTA CATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGAC AAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGA GACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1 CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAG GACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGG ACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACG CCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 725/1851
668/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
CCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAAT GAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTAC TCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGG GGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGA GTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCA TATGCAGGCCCTGCCTCCCAGA
1442 Anti-BCMA CAR de CTX-173 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCAGG TGCAGCTGGTCCAGTCCGGCGCCGAACTGAAGA AGCCTGGCGCCAGCGTGAAGATCAGCTGCAAGG CCTCCGGCTACACCTTCACCGAGTACACCATCAA CTGGGTGAGGCAAGCCCCCGGCCAGAGACTGGA GTGGATGGGCGACATCTACCCCGACAACTACAG CATCAGGTACAACCAGAAGTTCCAGGGCAGGGT GACAATCACCAGGGATACCAGCGCCAGCACAGC CTATATGGAGCTGTCCTCCCTGAGATCCGAGGAC ACCGCCGTGTATTACTGCGCCAACCACGACTTCT TCGTGTTCTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACCG TGAGCAGCGGCGGCGGCGGCTCCGGCGGCGGA GGCTCCGGAGGCGGAGGCAGCGACATCCAGATG ACCCAGAGCCCTTCCAGCCTGAGCGCTAGCCTG GGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGACCAGC CAGGACATCAGCAATCACCTGAACTGGTACCAGC AAAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTA CTACACCAGCAGGCTGGAAAGCGGCGTGCCTAG CAGGTTCAGCGGCAGCGGCTCCGGAACCGACTA CAGCCTGACCATTAGCAGCCTGCAACCTGAGGAC ATCGGCACCTATTACTGCCAGCAGGGCAACACCC TGCCTCCTACCTTTGGCGGCGGCACCAAACTCGA GATCAAGAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATTT CTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCCG CGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTCT CAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGAC CCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGCT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 726/1851
669/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
TGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCCG TTGGCGGGTACGTGCGGCGTCCI I I IGTTGTCAC TCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCGC TCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTACA TGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAA GAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGA CTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAGI I I I CC CGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGA CAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGAC GCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCC GGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCC GAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGA ACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCA GAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGA AAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTA CGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATAT GCAGGCCCTGCCTCCCAGA
1443 Anti-BCMA CAR de CTX-174 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCAGG TGCAGCTGGTGCAGAGCGGCCCTGAGCTGAAGA AGCCCGGAGCCAGCGTGAAGATCTCCTGCAAGA CCTCCGGCTACACCTTCACCGAGTACACCATCAA CTGGGTGAAGCAGGCCCCCGGACAGGGACTGGA ATGGATCGGCGACATCTACCCCGACAACTACAAC ATCAGGTACAACCAGAAGTTCCAAGGCAAGGCCA CCATCACAAGGGACACCAGCAGCAGCACCGCCT ACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGATA CCGCCGTGTACTACTGCGCCAACCACGACTTCTT CGTGTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGT GAGCAGCGGAGGAGGCGGAAGCGGAGGAGGAG GATCCGGAGGAGGAGGCAGCGACATCCAGATGA CCCAGTCCCCCTCCTCCCTGAGCGCCTCCGTGG GAGACAGGGTGACCATCACCTGCCAGGCCAGCC AGGACATCAGCAACTACCTGAACTGGTACCAGCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 727/1851
670/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
GAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATTTA CTACACCAGCAGGCTGGAAACCGGCGTGCCCAG CAGATTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTT TACCTTTACCATCTCCAGCCTGCAGCCCGAGGAT ATCGCCACATACTACTGCCAGCAGGGCAACACCC TCCCCCCTACCTTTGGCGGCGGCACCAAGGTGG AGATTAAGAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATT TCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCC GCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTC TCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGA CCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGC TTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCC GTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCCI I I IGTTGTCA CTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCG CTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTAC ATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAA GAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGA CTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAGI I I ICC CGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGA CAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGAC GCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCC GGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCC GAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGA ACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCA GAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGA AAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTA CGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATAT GCAGGCCCTGCCTCCCAGA
1444 Anti-BCMA CAR de CTX-175 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGCAGG TGCAGCTGGTGCAGTCCGGCCCCGAACTGAAAA AGCCCGGCGCCAGCGTCAAGATCAGCTGCAAGA CCTCCGGCTACACCTTCACCGAGTACACCATCAA CTGGGTGAAGCAGGCCCCCGGCCAGGGACTGGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 728/1851
671/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
ATGGATTGGCGACATCTACCCCGACAACTACAAC ATTAGGTATAACCAGAAGTTCCAGGGCAAGGCCA CCATCACAAGAGACACCAGCAGCAGCACCGCCT ACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACA CCGCCGTGTACTACTGCGCCAACCACGACTTCTT CGTGTTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTGACAGT GTCCAGCGGCGGCGGCGGCTCCGGCGGCGGCG GCTCCGGCGGCGGCGGCAGCGACATTCAGATGA CACAGAGCCCCTCCAGCCTGAGCGCCAGCCTGG GCGATAGGGTGACCATCACCTGCAGAACCAGCC AGGACATCAGCAACCACCTGAATTGGTACCAGCA GAAGCCCGGAAAGGCCCCCAAACTGCTGATCTA CTACACCAGCAGGCTGGAGAGCGGCGTGCCTAG CAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACAGATTA CAGCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAAGA CATCGGCACCTACTACTGCCAGCAGGGCAACAC CCTGCCCCCTACCTTTGGCGGAGGCACCAAGCT GGAGATCAAGAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTA TTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCC CGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCT CTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCG ACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGG CTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTC CGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1GTTGTC ACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATC GCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTA CATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGAC AAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGA GACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG 1 1 1 1 CCCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAG GACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGG ACGCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACG CCGGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACC CCGAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAAT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 729/1851
672/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GAACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTAC TCAGAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGG GGAAAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGA GTACGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCA TATGCAGGCCCTGCCTCCCAGA
1445 Anti-BCMA CAR de CTX-176 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGACA TCCAGATGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCG CTTCCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCC AGGCCAGCCAGGACATCAGCAACTACCTCAACTG GTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCT GCTGATCTACTACACCTCCAGGCTGGAGACCGGA GTGCCCTCCAGAI I I ICCGGCAGCGGCAGCGGC ACCGATTTCACCTTCACCATCAGCAGCCTGCAGC CCGAGGACATCGCCACCTACTATTGCCAGCAGG GCAACACCCTGCCCCCCACATTTGGAGGCGGCA CCAAGGTGGAGATCAAGGGCGGAGGAGGAAGCG GAGGAGGAGGAAGCGGAGGAGGCGGAAGCCAG GTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCTGAGCTCAAG AAGCCTGGCGCCAGCGTGAAGATCAGCTGCAAA GCCTCCGGATACACCTTCACCGAGTACACCATCA ATTGGGTGAGACAGGCCCCCGGCCAAAGACTGG AGTGGATGGGCGACATCTATCCCGACAACTACAG CATCAGGTACAACCAGAAGTTCCAGGGCAGGGT GACAATCACCAGAGACACCAGCGCCAGCACCGC CTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGA CACCGCCGTGTACTACTGCGCCAATCACGACTTC TTCGTGTTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTGACC GTCAGCTCCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTAT TTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCC GCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTC TCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGA CCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGC TTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 730/1851
673/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCCI I I IGI TGTCA CTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCG CTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTAC ATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAA GAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGA CTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAGI I I ICC CGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGA CAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGAC GCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCC GGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCC GAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGA ACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCA GAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGA AAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTA CGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATAT GCAGGCCCTGCCTCCCAGA
1446 Anti-BCMA CAR de CTX-177 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGATA TCCAGATGACACAGAGCCCTAGCTCCCTGAGCG CCAGCCTGGGCGATAGGGTGACCATCACCTGCA GGACCTCCCAGGACATCAGCAACCACCTGAACTG GTACCAGCAGAAGCCCGGCAAAGCCCCCAAGCT GCTGATCTACTACACCAGCAGGCTGGAAAGCGG CGTGCCCAGCAGGTTTAGCGGAAGCGGCAGCGG CACCGACTACAGCCTGACCATCAGCTCCCTGCAG CCCGAGGACATCGGCACCTACTACTGCCAGCAG GGCAACACCCTGCCTCCCACCTTCGGAGGCGGA ACCAAGCTGGAGATTAAGGGAGGCGGCGGAAGC GGCGGCGGCGGCTCCGGCGGAGGAGGCAGCCA GGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGAGCCGAGCTGAA AAAGCCTGGCGCCAGCGTGAAGATCAGCTGCAA GGCCAGCGGCTACACCTTCACCGAGTACACCATC AACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCCAGAGACTC GAGTGGATGGGCGACATCTACCCCGACAACTACT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 731/1851
674/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
CCATCAGGTACAACCAGAAGTTTCAGGGCAGGGT GACCATTACCAGGGACACCAGCGCCAGCACAGC CTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGA TACAGCCGTCTACTACTGCGCCAACCACGACTTT TTCGTGTTCTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACC GTGTCCTCCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTAT TTCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCC GCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTC TCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGA CCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGC TTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCC GTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCCI I I IGTTGTCA CTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCG CTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTAC ATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAA GAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGA CTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAGI I I I CC CGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGA CAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGAC GCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCC GGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCC GAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGA ACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCA GAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGA AAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTA CGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATAT GCAGGCCCTGCCTCCCAGA
1447 Anti-BCMA CAR de CTX-178 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCTT GGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGACATC CAAATGACCCAGAGCCCTAGCTCCCTGAGCGCTTC CGTGGGCGACAGAGTGACCATTACCTGCCAGGCC AGCCAGGACATCAGCAACTACCTGAACTGGTATCA GCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATC TACTACACCAGCAGGCTGGAGACCGGAGTGCCCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 732/1851
675/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GCAGGTTTAGCGGCTCCGGATCCGGCACCGACTT CACCTTCACCATCTCCAGCCTGCAGCCCGAGGACA TCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGGCAATACCCTC CCCCCTACCTTCGGAGGCGGCACCAAGGTGGAGA TCAAGGGCGGCGGCGGCTCCGGCGGCGGCGGCA GCGGCGGAGGCGGCAGCCAGGTGCAACTGGTGC AGAGCGGCCCTGAGCTGAAGAAACCCGGCGCCAG CGTGAAAATCAGCTGCAAGACCAGCGGCTACACAT TCACCGAGTACACCATCAACTGGGTGAAGCAGGCT CCCGGACAGGGACTGGAGTGGATCGGCGACATCT ACCCTGACAACTACAACATCAGATACAACCAAAAG TTCCAGGGCAAGGCCACCATCACCAGGGACACCA GCTCCTCCACCGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCT GAGGAGCGAGGACACCGCTGTGTACTACTGCGCC AACCACGACTTCTTCGTGTTCTGGGGCCAGGGAAC CCTGGTGACCGTGAGCAGCAGTGCTGCTGCCTTT GTCCCGGTATTTCTCCCAGCCAAACCGACCACGAC TCCCGCCCCGCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACC ATCGCCTCTCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGC ATGCCGACCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACG AGGGGCTTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTG GGCTCCGTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCC1 1 1 1G TTGTCACTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGG AATCGCTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGA TTACATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGA CAAGAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGA GACTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG1 1 1 1C CCGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGA CAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGACG CCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCCGG GGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCCGAA GAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGAACTC CAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCAGAAAT AGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGAAAAGGT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 733/1851
676/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
CACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTACGGCAA CCAAAGATACGTACGATGCACTGCATATGCAGGCC CTGCCTCCCAGA
1448 Anti-BCMA CAR de CTX-179 ATGGCGCTTCCGGTGACAGCACTGCTCCTCCCCT TGGCGCTGTTGCTCCACGCAGCAAGGCCGGATA TCCAGATGACACAAAGCCCCAGCAGCCTGTCCG CTAGCCTGGGCGATAGGGTGACCATCACATGCA GGACCAGCCAGGACATCTCCAACCACCTGAACTG GTACCAGCAGAAGCCTGGAAAGGCCCCCAAACT GCTGATCTACTACACCAGCAGGCTGGAGAGCGG CGTGCCTAGCAGG I I I ICCGGCAGCGGCAGCGG CACCGACTATAGCCTGACCATCAGCTCCCTGCAG CCCGAGGACATCGGCACCTACTACTGCCAGCAG GGAAACACACTGCCCCCCACCTTTGGCGGCGGC ACAAAGCTGGAGATCAAGGGCGGCGGCGGATCC GGCGGCGGAGGCAGCGGAGGAGGAGGAAGCCA GGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGCCCTGAGCTGAA GAAGCCCGGAGCCAGCGTGAAAATTAGCTGCAA GACCTCCGGCTACACATTCACCGAGTACACCATC AACTGGGTGAAGCAGGCTCCCGGCCAGGGACTG GAGTGGATCGGCGACATCTACCCCGACAACTACA ACATCAGGTACAACCAGAAATTCCAGGGCAAGGC CACCATCACCAGGGACACCAGCTCCTCCACCGC CTATATGGAGCTGTCCAGCCTGAGAAGCGAGGAT ACCGCCGTGTACTACTGCGCCAACCACGATTTCT TCGTGTTCTGGGGCCAGGGCACACTGGTCACCG TGAGCAGCAGTGCTGCTGCCTTTGTCCCGGTATT TCTCCCAGCCAAACCGACCACGACTCCCGCCCC GCGCCCTCCGACACCCGCTCCCACCATCGCCTC TCAACCTCTTAGTCTTCGCCCCGAGGCATGCCGA CCCGCCGCCGGGGGTGCTGTTCATACGAGGGGC TTGGACTTCGCTTGTGATATTTACATTTGGGCTCC GTTGGCGGGTACGTGCGGCGTCCI I I IGTTGTCA CTCGTTATTACTTTGTATTGTAATCACAGGAATCG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 734/1851
677/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CTCAAAGCGGAGTAGGTTGTTGCATTCCGATTAC ATGAATATGACTCCTCGCCGGCCTGGGCCGACAA GAAAACATTACCAACCCTATGCCCCCCCACGAGA CTTCGCTGCGTACAGGTCCCGAGTGAAG11 1 1CC CGAAGCGCAGACGCTCCGGCATATCAGCAAGGA CAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAATTTGGGAC GCCGCGAGGAGTATGACGTGCTTGATAAACGCC GGGGGAGAGACCCGGAAATGGGGGGTAAACCCC GAAGAAAGAATCCCCAAGAAGGACTCTACAATGA ACTCCAGAAGGATAAGATGGCGGAGGCCTACTCA GAAATAGGTATGAAGGGCGAACGACGACGGGGA AAAGGTCACGATGGCCTCTACCAAGGGTTGAGTA CGGCAACCAAAGATACGTACGATGCACTGCATAT GCAGGCCCTGCCTCCCAGA
Tabela 37.Sequências de aminoácidos de CAR
SEQ NO: ID Descrição Sequência
1338 Anti-CD19 CAR de CTX-131 a CTX-141 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPDIQMTQTTSSLSASLG DRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTS RLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFC QQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGST KGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYG VSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTI IKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSY AMDYWGQGTSVTVSSAAAFVPVFLPAKPTTTPAPR PPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFA CDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRL LHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDV LDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMA EAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDA LHMQALPPR
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 735/1851
678/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
1449 Anti- CD70A CAR de CTX-142 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIVMTQSPDSLAVSLG ERATINCRASKSVSTSGYSFMHWYQQKPGQPPKLL IYLASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDV AVYYCQHSREVPWTFGQGTKVEIKGGGGSGGGGS GGGGSGQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYT FTNYGMNWVRQAPGQGLKWMGWINTYTGEPTYA DAFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYC ARDYGDYGMDYWGQGTTVTVSSSAAAFVPVFLPA KPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGA VHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNH RNRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAP PRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNL GRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYN ELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLS TATKDTYDALHMQALPPR
1450 Anti- CD70B CAR de CTX-145 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGAEVKKPG ASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLKWM GW INTYTGE PTYADAFKG R VTMTRDTSISTAYM E LS RLRSDDTAVYYCARDYGDYGMDYWGQGTTVTVSS GGGGSGGGGSGGGGSGDIVMTQSPDSLAVSLGE RATINCRASKSVSTSGYSFMHWYQQKPGQPPKLLI YLASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVA VYYCQHSREVPWTFGQGTKVEIKSAAAFVPVFLPA KPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGA VHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNH RNRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAP PRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNL GRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYN ELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLS TATKDTYDALHMQALPPR
1276 Anti-CD70 CAR de CTX-145b MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGAEVKKPG ASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLKWM GW INTYTGE PTYADAFKG R VTMTRDTS ISTAYM E LS RLRSDDTAVYYCARDYGDYGMDYWGQGTTVTVSS
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 736/1851
679/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGGGSGGGGSGGGGSGDIVMTQSPDSLAVSLGE RATINCRASKSVSTSGYSFMHWYQQKPGQPPKLLI YLASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVA VYYCQHSREVPWTFGQGTKVEIKSAAAFVPVFLPA KPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGA VHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNH RNRKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRF PEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNEL NLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGL YNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQG LSTATKDTYDALHMQALPPR
1451 Anti- BCMA-1 CAR de CTX 152 e CTX-153 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQQSGGGLVQP GGSLKLSCAASGIDFSRYWMSWVRRAPGKGLEWI GEINPDSSTINYAPSLKDKFIISRDNAKNTLYLQMSK V RS E DTAL YYC AS L YYD YG D AM D YW GQGTS VTVS SGGGGSGGGGSGGGGSGDIVMTQSQRFMTTSVG DRVSVTCKASQSVDSNVAWYQQKPRQSPKALIFSA SLRFSGVPARFTGSGSGTDFTLTISNLQSEDLAEYF CQQYNNYPLTFGAGTKLELKSAAAFVPVFLPAKPTT TPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTR GLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRS KRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDF AAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRR EEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQ KDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTAT KDTYDALHMQALPPR
1452 Anti- BCMA-2 CAR de CTX-154 e CTX-155 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIVMTQSQRFMTTSV GDRVSVTCKASQSVDSNVAWYQQKPRQSPKALIFS ASLRFSGVPARFTGSGSGTDFTLTISNLQSEDLAEY FCQQYNNYPLTFGAGTKLELKGGGGSGGGGSGGG GSGQVQLQQSGGGLVQPGGSLKLSCAASGIDFSR YWMSWVRRAPGKGLEWIGEINPDSSTINYAPSLKD KFIISRDNAKNTLYLQMSKVRSEDTALYYCASLYYD YGDAMDYWGQGTSVTVSSSAAAFVPVFLPAKPTTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 737/1851
680/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
PAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTR GLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRS KRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDF AAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRR EEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQ KDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTAT KDTYDALHMQALPPR
1453 Anti-BCMA CAR de CTX-160 e CTX-160b MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPG GSLKLSCAASGIDFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIG EINPDSSTINYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNLS RAE DTALYYCAS LYYDYG DAM DYWGQGTLVTVSS GGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDR VTITCRASQSVDSNVAWYQQKPEKAPKSLIFSASLR FSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ YNSYPLTFGAGTKLEIKSAAAFVPVFLPAKPTTTPAP RPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDF ACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSR LLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYR SRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYD VLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKM AEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYD ALHMQALPPR
1454 Anti-BCMA CAR de CTX-160b MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPG GSLKLSCAASGIDFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIG EINPDSSTINYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNLS RAE DTALYYCAS LYYDYG DAM DYWGQGTLVTVSS GGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDR VTITCRASQSVDSNVAWYQQKPEKAPKSLIFSASLR FSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQ YNSYPLTFGAGTKLEIKSAAAFVPVFLPAKPTTTPAP RPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDF ACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRKRGRK KLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGC ELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEY
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 738/1851
681/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
DVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDK MAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDT YDALHMQALPPR
1455 Anti-BCMA CAR de CTX-161 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLVESGGGLVQPG GSLKLSCAASGIDFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIG EINPDSSTINYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNLS RAE DTALYYCAS LYYDYG DAM DYWGQGTLVTVSS GGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASPGDR VSVTCKASQSVDSNVAWYQQKPRQAPKALIFSASL RFSGVPARFTGSGSGTDFTLTISNLQSEDFATYYCQ QYNNYPLTFGAGTKLEIKSAAAFVPVFLPAKPTTTPA PRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLD FACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRS RLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAY RSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEY DVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDK MAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDT YDALHMQALPPR
1456 Anti-BCMA CAR de CTX-162 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQSPSSLSASV GDRVTITCRASQSVDSNVAWYQQKPEKAPKSLIFS ASLRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATY YCQQYNSYPLTFGAGTKLEIKGGGGSGGGGSGGG GSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGIDFSRYW MSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYADSVKGRF TISRDNAKNTLYLQMNLSRAEDTALYYCASLYYDYG DAMDYWGQGTLVTVSSSAAAFVPVFLPAKPTTTPA PRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLD FACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRS RLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAY RSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEY DVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDK MAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDT YDALHMQALPPR
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 739/1851
682/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
1457 Anti-BCMA CAR de CTX-163 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQSPSSLSASP GDRVSVTCKASQSVDSNVAWYQQKPRQAPKALIFS ASLRFSGVPARFTGSGSGTDFTLTISNLQSEDFATY YCQQYNNYPLTFGAGTKLEIKGGGGSGGGGSGGG GSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGIDFSRYW MSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYADSVKGRF TISRDNAKNTLYLQMNLSRAEDTALYYCASLYYDYG DAMDYWGQGTLVTVSSSAAAFVPVFLPAKPTTTPA PRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLD FACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRS RLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAY RSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEY DVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDK MAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDT YDALHMQALPPR
1458 Anti-BCMA CAR de CTX-164 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLQQSGPELVKPG ASVKMSCKASGNTLTNYVIHWMKQMPGQGLDWIG YILPYNDLTKYNEKFTGKATLTSDKSSSSAYMELNS LTS E DS AVYYCTRW DW DG FFDPWGQGTTLTVSSG GGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVSLGDQAS ISCRSTQSLVHSNGNTHLHWYLQRPGQSPKLLIYSV SNRFSEVPDRFSASGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYF CSQTSHIPYTFGGGTKLEIKSAAAFVPVFLPAKPTTT PAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTR GLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRS KRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDF AAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRR EEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQ KDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTAT KDTYDALHMQALPPR
1459 Anti-BCMA CAR de CTX-165 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIVMTQSPLSLPVSLG DQASISCRSTQSLVHSNGNTHLHWYLQRPGQSPKL LIYSVSNRFSEVPDRFSASGSGTDFTLKISRVEAEDL GVYFCSQTSHIPYTFGGGTKLEIKGGGGSGGGGSG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 740/1851
683/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGGSEVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGNTLT NYVIHWMKQMPGQGLDWIGYILPYNDLTKYNEKFT G KATLTS DKSSSSAYME LNS LTSE DS AVYYCTRW D WDGFFDPWGQGTTLTVSSSAAAFVPVFLPAKPTTT PAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTR GLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRS KRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDF AAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRR EEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQ KDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTAT KDTYDALHMQALPPR
1460 Anti-BCMA CAR de CTX-166 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGAELKKPG ASVKVSCKASGNTLTNYVIHWVRQAPGQRLEWMG YILPYNDLTKYSQKFQGRVTITRDKSASTAYMELSSL RSEDTAVYYCTRWDWDGFFDPWGQGTTVTVSSG GGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERAS ISCRASQSLVHSNGNTHLHWYQQRPGQAPRLLIYS VSNRFSEVPARFSGSGSGTDFTLTISSVESEDFAVY YCSQTSHIPYTFGGGTKLEIKSAAAFVPVFLPAKPTT TPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTR GLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRS KRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDF AAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRR EEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQ KDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTAT KDTYDALHMQALPPR
1461 Anti-BCMA CAR de CTX-166b MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGAELKKPG ASVKVSCKASGNTLTNYVIHWVRQAPGQRLEWMG YILPYNDLTKYSQKFQGRVTITRDKSASTAYMELSSL RSEDTAVYYCTRWDWDGFFDPWGQGTTVTVSSG GGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERAS ISCRASQSLVHSNGNTHLHWYQQRPGQAPRLLIYS VSNRFSEVPARFSGSGSGTDFTLTISSVESEDFAVY YCSQTSHIPYTFGGGTKLEIKSAAAFVPVFLPAKPTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 741/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
TPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTR GLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRK RGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEE EGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGR REEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNEL QKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTA TKDTYDALHMQALPPR
1462 Anti-BCMA CAR de CTX-167 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGAELKKPG ASVKVSCKASGNTLTNYVIHWVRQAPGQRLEWMG YILPYNDLTKYSQKFQGRVTITRDKSASTAYMELSSL RSEDTAVYYCTRWDWDGFFDPWGQGTTVTVSSG GGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTLGQPAT LSCRSTQSLVHSNGNTHLHWFQQRPGQSPLRLIYS VSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGV YYCSQTSHIPYTFGGGTKLEIKSAAAFVPVFLPAKPT TTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHT RGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNR SKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRD FAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGR REEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNEL QKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTA TKDTYDALHMQALPPR
1463 Anti-BCMA CAR de CTX-168 MALPVTALLLPLALLLHAARPEIVMTQSPATLSVSPG ERASISCRASQSLVHSNGNTHLHWYQQRPGQAPR LLIYSVSNRFSEVPARFSGSGSGTDFTLTISSVESED FAVYYCSQTSHIPYTFGGGTKLEIKGGGGSGGGGS GGGGSQVQLVQSGAELKKPGASVKVSCKASGNTL TNYVIHWVRQAPGQRLEWMGYILPYNDLTKYSQKF QGRVTITRDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRW DWDGFFDPWGQGTTVTVSSSAAAFVPVFLPAKPTT TPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTR GLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRS KRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDF AAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRR
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 742/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
EEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQ KDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTAT KDTYDALHMQALPPR
1464 Anti-BCMA CAR de CTX-169 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIVMTQSPLSLPVTLG QPATLSCRSTQSLVHSNGNTHLHWFQQRPGQSPL RLIYSVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAE DVGVYYCSQTSHIPYTFGGGTKLEIKGGGGSGGGG SGGGGSQVQLVQSGAELKKPGASVKVSCKASGNT LTNYVIHWVRQAPGQRLEWMGYILPYNDLTKYSQK FQGRVTITRDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTR WDWDGFFDPWGQGTTVTVSSSAAAFVPVFLPAKP TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVH TRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPR DFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLG RREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNE LQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLST ATKDTYDALHMQALPPR
1465 Anti-BCMA CAR de CTX-170 MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLQQSGPELVKPG ASVKISCKTSGYTFTEYTINWVKQSHGKSLEWIGDIY PDNYNIRYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLSS EDSAIYYCANHDFFVFWGQGTLVTVSAGGGGSGG GGSGGGGSDIQMTQATSSLSASLGDRVTINCRTSQ DISNHLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLQSGVPSRFS GSGSGTDYSLTISNLEQEDIGTYFCHQGNTLPPTFG GGTKLEIKSAAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTI ASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAP LAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDYMN MTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRS ADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGR DPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIG MKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQAL PPR
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 743/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
1466 Anti-BCMA CAR de CTX-171 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQATSSLSASLG DRVTINCRTSQDISNHLNWYQQKPDGTVKLLIYYTS RLQSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIGTYFC HQGNTLPPTFGGGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGS EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGYTFTEYTINW VKQSHGKSLEWIGDIYPDNYNIRYNQKFKGKATLTV DKSSSTAYMELRSLSSEDSAIYYCANHDFFVFWGQ GTLVTVSASAAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTI ASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAP LAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDYMN MTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRS ADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGR DPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIG MKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQAL PPR
1467 Anti-BCMA CAR de CTX-172 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGAELKKPG ASVKISCKASGYTFTEYTINWVRQAPGQRLEWMGD IYPDNYSIRYNQKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLR SEDTAVYYCANHDFFVFWGQGTLVTVSSGGGGSG GGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQAS QDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLETGVPSRF SGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGNTLPPTF GGGTKVEIKSAAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAP TIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIW APLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDY MNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFS RSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRR GRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSE IGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQ ALPPR
1468 Anti-BCMA CAR de CTX-173 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGAELKKPG ASVKISCKASGYTFTEYTINWVRQAPGQRLEWMGD IYPDNYSIRYNQKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLR SEDTAVYYCANHDFFVFWGQGTLVTVSSGGGGSG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 744/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASLGDRVTITCRTS QDISNHLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLESGVPSRF SGSGSGTDYSLTISSLQPEDIGTYYCQQGNTLPPTF GGGTKLEIKSAAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAP TIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIW APLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDY MNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFS RSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRR GRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSE IGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQ ALPPR
1469 Anti-BCMA CAR de CTX-174 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGPELKKPG ASVKISCKTSGYTFTEYTINWVKQAPGQGLEWIGDI YPDNYNIRYNQKFQGKATITRDTSSSTAYMELSSLR SEDTAVYYCANHDFFVFWGQGTLVTVSSGGGGSG GGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQAS QDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLETGVPSRF SGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGNTLPPTF GGGTKVEIKSAAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAP TIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIW APLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDY MNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFS RSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRR GRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSE IGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQ ALPPR
1470 Anti-BCMA CAR de CTX-175 MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVQSGPELKKPG ASVKISCKTSGYTFTEYTINWVKQAPGQGLEWIGDI YPDNYNIRYNQKFQGKATITRDTSSSTAYMELSSLR SEDTAVYYCANHDFFVFWGQGTLVTVSSGGGGSG GGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASLGDRVTITCRTS QDISNHLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLESGVPSRF SGSGSGTDYSLTISSLQPEDIGTYYCQQGNTLPPTF GGGTKLEIKSAAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAP
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 745/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
TIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIW APLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDY MNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFS RSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRR GRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSE IGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQ ALPPR
1471 Anti-BCMA CAR de CTX-176 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQSPSSLSASV GDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYT SRLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYY CQQGNTLPPTFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGG GSQVQLVQSGAELKKPGASVKISCKASGYTFTEYTI NWVRQAPGQRLEWMGDIYPDNYSIRYNQKFQGRV TITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCANHDFFVF WGQGTLVTVSSSAAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPT PAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDI YIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHS DYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVK FSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDK RRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAY SEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH MQALPPR
1472 Anti-BCMA CAR de CTX-177 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQSPSSLSASLG DRVTITCRTSQDISNHLNWYQQKPGKAPKLLIYYTS RLESGVPSRFSGSGSGTDYSLTISSLQPEDIGTYYC QQGNTLPPTFGGGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGS QVQLVQSGAELKKPGASVKISCKASGYTFTEYTINW VRQAPGQRLEWMGDIYPDNYSIRYNQKFQGRVTIT RDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCANHDFFVFWG QGTLVTVSSSAAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAP TIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIW APLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDY MNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFS RSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRR
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 746/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSE IGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQ ALPPR
1473 Anti-BCMA CAR de CTX-178 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQSPSSLSASV GDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYT SRLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYY CQQGNTLPPTFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGG GSQVQLVQSGPELKKPGASVKISCKTSGYTFTEYTI NWVKQAPGQGLEWIGDIYPDNYNIRYNQKFQGKAT ITRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCANHDFFVFW GQGTLVTVSSSAAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPA PTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYI WAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSD YMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKF SRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKR RGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYS EIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHM QALPPR
1474 Anti-BCMA CAR de CTX-179 MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQSPSSLSASLG DRVTITCRTSQDISNHLNWYQQKPGKAPKLLIYYTS RLESGVPSRFSGSGSGTDYSLTISSLQPEDIGTYYC QQGNTLPPTFGGGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGS QVQLVQSGPELKKPGASVKISCKTSGYTFTEYTINW VKQAPGQGLEWIGDIYPDNYNIRYNQKFQGKATITR DTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCANHDFFVFWGQ GTLVTVSSSAAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTI ASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAP LAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDYMN MTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRS ADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGR DPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIG MKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQAL PPR
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 747/1851
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Tabela 38.Sequências de nucleotídeos de scFv
SEQ NO: ID Descrição Sequência
1333 Anti-CD19 scFv de CTX-131 a CTX-141 ATTCAGATGACTCAGACCACCAGTAGCTTGTCTG CCTCACTGGGAGACCGAGTAACAATCTCCTGCAG GGCAAGTCAAGACATTAGCAAATACCTCAATTGG TACCAGCAGAAGCCCGACGGAACGGTAAAACTC CTCATCTATCATACGTCAAGGTTGCATTCCGGAG TACCGTCACGAI I I ICAGGTTCTGGGAGCGGAAC TGACTATTCCTTGACTATTTCAAACCTCGAGCAGG AGGACATTGCGACATATTTTTGTCAACAAGGTAAT ACCCTCCCTTACACTTTCGGAGGAGGAACCAAAC TCGAAATTACCGGGTCCACCAGTGGCTCTGGGAA GCCTGGCAGTGGAGAAGGTTCCACTAAAGGCGA GGTGAAGCTCCAGGAGAGCGGCCCCGGTCTCGT TGCCCCCAGTCAAAGCCTCTCTGTAACGTGCACA GTGAGTGGTGTATCATTGCCTGATTATGGCGTCT CCTGGATAAGGCAGCCCCCGCGAAAGGGTCTTG AATGGCTTGGGGTAATATGGGGCTCAGAGACAAC GTATTATAACTCCGCTCTCAAAAGTCGCTTGACGA TAATAAAAGATAACTCCAAGAGTCAAG I I I I CCTT AAAATGAACAGTTTGCAGACTGACGATACCGCTA TATATTATTGTGCTAAACATTATTACTACGGCGGT AGTTACGCGATGGATTATTGGGGGCAGGGGACTT CTGTCACAGTCAGT
1475 Anti- CD70A scFv de CTX-142 GATATAGTTATGACCCAATCACCCGATAGTCTTGC GGTAAGCCTGGGGGAGCGAGCAACAATAAACTG TCGGGCATCAAAATCCGTCAGTACAAGCGGGTAT TCATTCATGCACTGGTATCAACAGAAACCCGGTC AGCCACCCAAGCTCCTGATTTATCTTGCGTCTAAT CTTGAGTCCGGCGTCCCAGACCGG I I I ICCGGCT CCGGGAGCGGCACGGAI I I IACTCTTACTATTTC TAGCCTTCAGGCCGAAGATGTGGCGGTATACTAC TGCCAGCATTCAAGGGAAGTTCCTTGGACGTTCG GTCAGGGCACGAAAGTGGAAATTAAAGGCGGGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 748/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
GGGGATCCGGCGGGGGAGGGTCTGGAGGAGGT GGCAGTGGTCAGGTCCAACTGGTGCAGTCCGGG GCAGAGGTAAAAAAACCCGGCGCGTCTGTTAAG GTTTCATGCAAGGCCAGTGGATATACTTTCACCA ATTACGGAATGAACTGGGTGAGGCAGGCCCCTG GTCAAGGCCTGAAATGGATGGGATGGATAAACAC GTACACCGGTGAACCTACCTATGCCGATGCCTTT AAGGGTCGGGTTACGATGACGAGAGACACCTCC ATATCAACAGCCTACATGGAGCTCAGCAGATTGA GGAGTGACGATACGGCAGTCTATTACTGTGCAAG AGACTACGGCGATTATGGCATGGATTACTGGGGC CAGGGCACTACAGTAACCGTTTCCAGC
1476 Anti- CD70B scFv de CTX-145 e CTX-145b CAGGTCCAGTTGGTGCAAAGCGGGGCGGAGGTG AAAAAACCCGGCGCTTCCGTGAAGGTGTCCTGTA AGGCGTCCGGTTATACGTTCACGAACTACGGGAT GAATTGGGTTCGCCAAGCGCCGGGGCAGGGACT GAAATGGATGGGGTGGATAAATACCTACACCGGC GAACCTACATACGCCGACGCI I I IAAAGGGCGAG TCACTATGACGCGCGATACCAGCATATCCACCGC ATACATGGAGCTGTCCCGACTCCGGTCAGACGAC ACGGCTGTCTACTATTGTGCTCGGGACTATGGCG ATTATGGCATGGACTACTGGGGTCAGGGTACGAC TGTAACAGTTAGTAGTGGTGGAGGCGGCAGTGG CGGGGGGGGAAGCGGAGGAGGGGGTTCTGGTG ACATAGTTATGACCCAATCCCCAGATAGTTTGGC GGTTTCTCTGGGCGAGAGGGCAACGATTAATTGT CGCGCATCAAAGAGCGTTTCAACGAGCGGATATT C I I I IATGCATTGGTACCAGCAAAAACCCGGACA ACCGCCGAAGCTGCTGATCTACTTGGCTTCAAAT CTTGAGTCTGGGGTGCCGGACCGAI I I ICTGGTA GTGGAAGCGGAACTGACTTTACGCTCACGATCAG TTCACTGCAGGCTGAGGATGTAGCGGTCTATTAT TGCCAGCACAGTAGAGAAGTCCCCTGGACCTTCG GTCAAGGCACGAAAGTAGAAATTAAA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 749/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
1477 Anti- BCMA-1 scFv de CTX 152 e CTX-153 CAGGTGCAGTTACAACAGTCAGGAGGAGGATTAG TGCAGCCAGGAGGATCTCTGAAACTGTCTTGTGC CGCCAGCGGAATCGAI I I IAGCAGGTACTGGATG TCTTGGGTGAGAAGAGCCCCTGGAAAAGGACTG GAGTGGATCGGCGAGATTAATCCTGATAGCAGCA CCATCAACTATGCCCCTAGCCTGAAGGACAAGTT CATCATCAGCCGGGACAATGCCAAGAACACCCTG TACCTGCAAATGAGCAAGGTGAGGAGCGAGGAT ACAGCTCTGTACTACTGTGCCAGCCTGTACTACG ATTACGGAGATGCTATGGACTATTGGGGCCAGGG AACAAGCGTTACAGTGTCTTCTGGAGGAGGAGGA TCCGGTGGTGGTGGTTCAGGAGGTGGAGGTTCG GGAGATATTGTGATGACACAAAGCCAGCGGTTCA TGACCACATCTGTGGGCGACAGAGTGAGCGTGA CCTGTAAAGCTTCTCAGTCTGTGGACAGCAATGT TGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCAGACAGAGCCC TAAAGCCCTGATC I I I I CIGCCAGCCI GAGA I I I I CTGGCGTTCCTGCCAGATTTACCGGCTCTGGCTC TGGCACCGAI I I IACACTGACCATCAGCAATCTG CAGTCTGAGGATCTGGCCGAGTACI I I IGCCAGC AGTACAACAACTACCCCCTGACCTTTGGAGCTGG CACAAAACTGGAGCTGAAG
1478 Anti- BCMA-2 scFv de CTX-154 e CTX-155 GACATCGTGATGACCCAAAGCCAGAGGTTCATGA CCACATCTGTGGGCGATAGAGTGAGCGTGACCT GTAAAGCCTCTCAGTCTGTGGACAGCAATGTTGC CTGGTATCAGCAGAAGCCTAGACAGAGCCCTAAA GCCCTGATCTTTAGCGCCAGCCTGAGATTTAGCG GAGTTCCTGCCAGATTTACCGGAAGCGGATCTGG AACCGAI I I IACACTGACCATCAGCAACCTGCAG AGCGAGGATCTGGCCGAGTACI I I IGCCAGCAGT ACAACAATTACCCTCTGACCTTTGGAGCCGGCAC AAAGCTGGAGCTGAAAGGAGGAGGAGGATCTGG TGGTGGTGGTTCAGGAGGTGGAGGTTCGGGACA AGTTCAATTACAGCAATCTGGAGGAGGACTGGTT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 750/1851
693/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CAGCCTGGAGGAAGCCTGAAGCTGTCTTGTGCC GCTTCTGGAATCGAI I I IAGCAGATACTGGATGA GCTGGGTGAGAAGAGCCCCTGGCAAAGGACTGG AGTGGATTGGCGAGATTAATCCTGATAGCAGCAC CATCAACTATGCCCCTAGCCTGAAGGACAAGTTC ATCATCAGCCGGGACAATGCCAAGAACACCCTGT ACCTGCAAATGAGCAAGGTGAGGAGCGAGGATA CAGCTCTGTACTACTGTGCCAGCCTGTACTACGA TTACGGAGATGCTATGGACTATTGGGGCCAGGGA ACAAGCGTTACAGTGAGCAGC
1479 Anti-BCMA scFv de CTX-160 e CTX-160b GAGGTCCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGAGGACT GGTCCAGCCTGGCGGCTCCCTGAAACTGAGCTG CGCCGCCAGCGGCATCGACTTCAGCAGGTACTG GATGAGCTGGGTGAGACAGGCCCCTGGCAAGGG CCTGGAATGGATCGGCGAGATCAACCCCGACTC CAGCACCATCAACTACGCCGACAGCGTCAAGGG CAGGTTCACCATTAGCAGGGACAATGCCAAGAAC ACCCTGTACCTGCAGATGAACCTGAGCAGGGCC GAAGACACCGCCCTGTACTACTGTGCCAGCCTGT ACTACGACTATGGCGACGCTATGGACTACTGGGG CCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCTCCGGAGG AGGCGGCAGCGGCGGAGGCGGCAGCGGCGGAG GCGGCAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCTA GCAGCCTGAGCGCCTCCGTGGGAGATAGGGTGA CAATCACCTGTAGGGCCAGCCAGAGCGTGGACT CCAACGTGGCCTGGTATCAACAGAAGCCCGAGA AGGCCCCCAAGAGCCTGATCI I I ICCGCCTCCCT GAGGTTCAGCGGAGTCCCCAGCAGGTTCTCCGG ATCCGGCTCCGGAACCGACTTTACCCTGACCATC TCCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACT ACTGCCAGCAGTACAACAGCTACCCCCTGACCTT CGGCGCCGGCACAAAGCTGGAGATCAAG
1480 Anti-BCMA scFv de GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGAGGAGGACT GGTGCAGCCCGGAGGCTCCCTGAAGCTGAGCTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 751/1851
694/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
CTX-161 CGCTGCCTCCGGCATCGACTTCAGCAGGTACTG GATGAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGCAAAGG CCTGGAGTGGATCGGCGAGATCAACCCCGACAG CAGCACCATCAACTACGCCGACAGCGTGAAGGG CAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAAT ACCCTGTACCTGCAGATGAACCTGAGCAGGGCC GAGGACACAGCCCTGTACTACTGTGCCAGCCTGT ACTACGACTATGGAGACGCTATGGACTACTGGGG CCAGGGAACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGAGG CGGAGGCTCCGGCGGCGGAGGCAGCGGAGGAG GCGGCAGCGATATCCAGATGACCCAGTCCCCCA GCTCCCTGAGCGCTAGCCCTGGCGACAGGGTGA GCGTGACATGCAAGGCCAGCCAGAGCGTGGACA GCAACGTGGCCTGGTACCAGCAGAAACCCAGAC AGGCCCCCAAGGCCCTGATCTTCAGCGCCAGCC TGAGGTTTAGCGGCGTGCCCGCTAGGTTTACCG GATCCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCTCCAACCTGCAGTCCGAGGACTTCGCCACCTA CTACTGCCAGCAGTACAACAACTACCCCCTGACA TTCGGCGCCGGAACCAAGCTGGAGATCAAG
1481 Anti-BCMA scFv de CTX-162 GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTG AGCGCTAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACC TGCAGGGCCAGCCAGAGCGTGGACTCCAACGTG GCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGAGAAGGCCCCC AAGAGCCTGATCTTCAGCGCCAGCCTGAGGTTCT CCGGAGTGCCTAGCAGATTTAGCGGCAGCGGCA GCGGCACAGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCT CCAGCCCGAGGATTTCGCCACCTACTACTGCCAG CAGTACAACTCCTACCCCCTGACCTTCGGCGCCG GCACAAAGCTGGAGATCAAGGGAGGAGGAGGAA GCGGAGGAGGAGGAAGCGGAGGCGGAGGAAGC GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGCCTG GTGCAACCTGGAGGCAGCCTGAAGCTGAGCTGT GCCGCCAGCGGAATCGACTTCAGCAGGTACTGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 752/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ATGTCCTGGGTGAGACAGGCCCCTGGCAAGGGC CTGGAGTGGATCGGAGAGATCAACCCCGACAGC TCCACCATCAACTACGCCGACAGCGTGAAGGGC AGGTTCACCATCAGCAGAGACAACGCCAAGAACA CCCTGTACCTGCAGATGAACCTGTCCAGAGCCGA GGACACCGCCCTGTACTACTGCGCCAGCCTGTAT TACGACTACGGCGACGCTATGGACTACTGGGGC CAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCAGC
1482 Anti-BCMA scFv de CTX-163 GACATCCAAATGACCCAGTCCCCTAGCAGCCTGT CCGCCAGCCCTGGAGACAGGGTGTCCGTGACCT GCAAGGCCAGCCAGTCCGTGGACAGCAACGTCG CCTGGTATCAGCAGAAGCCCAGGCAAGCTCCCA AGGCTCTGATCTTCTCCGCCAGCCTGAGAI I I IC CGGCGTGCCCGCCAGATTCACCGGAAGCGGCAG CGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAACCTG CAGAGCGAGGATTTCGCCACATACTACTGCCAGC AGTACAACAACTACCCCCTGACCTTCGGAGCCGG CACCAAGCTGGAGATCAAAGGCGGCGGAGGCAG CGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCGGATCCG AAGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGAGGCGGACTCG TGCAGCCTGGCGGAAGCCTGAAGCTGAGCTGTG CCGCCAGCGGCATCGACTTCAGCAGGTACTGGA TGAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGCAAAGGCC TGGAGTGGATCGGCGAGATCAACCCTGACAGCA GCACCATCAACTACGCCGACAGCGTGAAAGGCA GGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACA CCCTGTACCTGCAGATGAACCTGTCCAGAGCCGA GGACACCGCCCTGTACTACTGCGCCAGCCTGTA CTACGACTACGGCGACGCTATGGACTACTGGGG CCAAGGCACCCTCGTGACCGTCAGCTCC
1483 Anti-BCMA scFv de CTX-164 GAGGTGCAGCTGCAGCAGTCCGGCCCTGAGCTC GTGAAGCCTGGAGCCAGCGTGAAAATGAGCTGT AAGGCCTCCGGCAACACCCTCACCAACTACGTGA TCCATTGGATGAAGCAGATGCCCGGCCAGGGCC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 753/1851
696/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
TGGACTGGATTGGCTACATTCTGCCCTACAACGA CCTGACCAAGTACAACGAGAAGTTCACCGGCAAG GCCACCCTGACCAGCGATAAGAGCTCCAGCAGC GCCTACATGGAGCTGAACTCCCTGACCAGCGAG GACAGCGCCGTGTACTACTGCACCAGGTGGGAC TGGGATGGCTTCTTCGACCCCTGGGGACAGGGC ACCACCCTGACAGTGTCCAGCGGAGGAGGCGGC AGCGGCGGCGGCGGCTCCGGCGGCGGCGGCAG CGATATCGTGATGACACAGTCCCCTCTGAGCCTG CCTGTGAGCCTGGGCGACCAGGCCAGCATCAGC TGCAGGTCCACCCAGTCCCTGGTGCACTCCAAC GGCAACACCCACCTGCACTGGTACCTGCAAAGG CCCGGCCAGTCCCCTAAGCTGCTGATCTACAGC GTGAGCAACAGGTTTAGCGAGGTGCCCGATAGAT TTTCCGCCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACAC TGAAGATCTCCAGGGTGGAGGCCGAGGATCTGG GCGTGTACTTCTGCAGCCAGACCAGCCACATCCC CTACACCTTCGGCGGCGGAACCAAGCTGGAGAT CAAG
1484 Anti-BCMA scFv de CTX-165 GACATCGTGATGACCCAGAGCCCCCTGAGCCTG CCTGTGTCCCTGGGAGACCAGGCTTCCATCAGCT GCAGGTCCACCCAGAGCCTGGTGCACTCCAACG GCAACACCCACCTGCACTGGTACCTGCAGAGGC CTGGCCAGTCCCCCAAGCTGCTGATCTACAGCGT GAGCAATAGGTTCAGCGAGGTGCCCGACAGATT CAGCGCCAGCGGAAGCGGCACCGACTTCACCCT GAAGATCAGCAGGGTCGAGGCCGAAGATCTGGG CGTGTACTTCTGCTCCCAGACATCCCACATCCCT TACACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATT AAGGGCGGCGGAGGATCCGGCGGAGGAGGATC CGGAGGAGGAGGAAGCGAGGTGCAGCTGCAGC AGAGCGGACCCGAGCTGGTGAAACCCGGAGCCA GCGTCAAAATGAGCTGCAAGGCCAGCGGCAACA CCCTGACCAACTACGTCATCCACTGGATGAAGCA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 754/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GATGCCCGGACAGGGCCTGGACTGGATCGGCTA CATCCTGCCCTACAACGACCTGACCAAGTACAAC GAGAAATTCACCGGCAAGGCCACCCTGACCAGC GACAAGAGCAGCAGCAGCGCCTACATGGAGCTG AACAGCCTGACCAGCGAGGACTCCGCCGTGTAC TATTGCACCAGGTGGGACTGGGACGGCTTCTTTG ACCCCTGGGGCCAGGGCACAACACTCACCGTGA GCTCC
1485 Anti-BCMA scFv de CTX-166 e CTX-166b CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAGCTC AAGAAGCCCGGAGCCTCCGTGAAGGTGAGCTGC AAGGCCAGCGGCAACACCCTGACCAACTACGTG ATCCACTGGGTGAGACAAGCCCCCGGCCAAAGG CTGGAGTGGATGGGCTACATCCTGCCCTACAACG ACCTGACCAAGTACAGCCAGAAGTTCCAGGGCA GGGTGACCATCACCAGGGATAAGAGCGCCTCCA CCGCCTATATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCG AGGACACCGCTGTGTACTACTGTACAAGGTGGGA CTGGGACGGCTTCTTTGACCCCTGGGGCCAGGG CACAACAGTGACCGTCAGCAGCGGCGGCGGAGG CAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCGGAA GCGAAATCGTGATGACCCAGAGCCCCGCCACAC TGAGCGTGAGCCCTGGCGAGAGGGCCAGCATCT CCTGCAGGGCTAGCCAAAGCCTGGTGCACAGCA ACGGCAACACCCACCTGCACTGGTACCAGCAGA GACCCGGACAGGCTCCCAGGCTGCTGATCTACA GCGTGAGCAACAGGTTCTCCGAGGTGCCTGCCA GGTTTAGCGGCAGCGGAAGCGGCACCGACTTTA CCCTGACCATCAGCAGCGTGGAGTCCGAGGACT TCGCCGTGTATTACTGCAGCCAGACCAGCCACAT CCCTTACACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGA GATCAAA
1486 Anti-BCMA scFv de CTX-167 CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGCTG AAGAAACCTGGCGCCAGCGTCAAGGTGAGCTGC AAGGCTTCCGGAAACACCCTCACCAACTACGTGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 755/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
TCCACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGACAGAGAC TGGAGTGGATGGGCTACATTCTGCCCTACAACGA CCTGACCAAGTACAGCCAGAAGTTCCAGGGCAG GGTCACCATCACCAGGGACAAGAGCGCCAGCAC CGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGTCCGA GGACACAGCCGTGTACTACTGCACCAGGTGGGA CTGGGACGGATTCTTCGACCCTTGGGGCCAAGG CACCACAGTGACAGTGAGCTCCGGCGGAGGCGG CAGCGGCGGCGGAGGAAGCGGCGGCGGCGGAA GCGACATCGTGATGACCCAGAGCCCTCTGAGCC TGCCCGTGACACTGGGACAGCCTGCCACACTGT CCTGCAGGAGCACCCAGAGCCTGGTGCATAGCA ACGGCAACACCCACCTGCACTGGTTCCAGCAGA GACCTGGCCAGAGCCCCCTGAGACTGATCTACA GCGTGAGCAACAGGGACAGCGGCGTGCCCGATA GATTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTTA CCCTGAAAATCTCCAGGGTGGAGGCCGAGGATG TGGGCGTGTATTACTGCTCCCAGACAAGCCACAT TCCCTATACATTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGA GATCAAG
1487 Anti-BCMA scFv de CTX-168 GAAATCGTGATGACCCAGAGCCCTGCCACACTGA GCGTGAGCCCTGGCGAGAGAGCCAGCATCAGCT GCAGGGCCTCCCAGAGCCTGGTGCACTCCAACG GCAATACCCACCTGCACTGGTATCAGCAGAGACC CGGCCAGGCCCCTAGGCTGCTGATCTACTCCGT GAGCAACAGGTTCTCCGAGGTGCCCGCCAGATT CAGCGGATCCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCT CACCATCTCCAGCGTGGAGAGCGAGGACTTCGC CGTCTACTACTGCAGCCAGACAAGCCACATCCCC TACACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATC AAGGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGAGGCAG CGGAGGCGGCGGATCCCAGGTGCAACTGGTGCA GAGCGGAGCCGAGCTGAAGAAGCCCGGAGCCA GCGTGAAGGTCAGCTGCAAGGCCAGCGGCAACA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 756/1851
699/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CCCTGACAAACTACGTGATCCACTGGGTGAGGCA GGCCCCTGGCCAAAGGCTCGAGTGGATGGGCTA CATCCTCCCCTACAACGACCTGACCAAGTACTCC CAGAAGTTCCAGGGCAGGGTGACCATCACCAGG GATAAGAGCGCCAGCACCGCCTACATGGAACTCA GCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACT ACTGCACCAGGTGGGACTGGGATGGCTTCTTCG ACCCTTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACAGTGA GCTCC
1488 Anti-BCMA scFv de CTX-169 GACATCGTGATGACACAATCCCCCCTCAGCCTGC CTGTGACACTGGGCCAGCCTGCCACCCTGAGCT GCAGGAGCACCCAGTCCCTGGTGCACTCCAACG GCAACACCCACCTGCACTGGTTCCAGCAGAGGC CTGGACAGAGCCCCCTGAGGCTGATCTACAGCG TGAGCAACAGGGACTCCGGCGTGCCCGATAGAT TCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGATTTCACCC TGAAGATCTCCAGAGTGGAAGCCGAGGACGTGG GCGTCTACTACTGCAGCCAGACCAGCCATATCCC CTACACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGAT CAAGGGAGGCGGCGGAAGCGGCGGAGGCGGAT CCGGAGGCGGAGGCTCCCAAGTGCAGCTGGTGC AGAGCGGCGCTGAGCTGAAGAAGCCCGGAGCCA GCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCAGCGGAAACA CCCTGACCAACTACGTGATCCACTGGGTGAGACA GGCCCCCGGACAGAGACTCGAGTGGATGGGCTA CATCCTGCCCTACAACGACCTGACCAAGTACAGC CAGAAGTTCCAGGGCAGGGTGACAATCACCAGG GACAAGAGCGCCAGCACCGCCTACATGGAGCTG AGCAGCCTGAGATCCGAGGACACCGCCGTGTAC TACTGCACCAGGTGGGACTGGGACGGCTTCTTTG ACCCCTGGGGCCAGGGAACCACAGTGACCGTGT CCTCC
1489 Anti-BCMA scFv de GAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGCCCTGAGCTG GTGAAGCCCGGCGCCAGCGTGAAGATCAGCTGC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 757/1851
700/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
CTX-170 AAGACCTCCGGCTATACCTTTACCGAGTACACCA TCAACTGGGTGAAGCAGAGCCACGGCAAGAGCC TGGAGTGGATCGGCGATATCTACCCCGACAACTA CAACATCAGGTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAG GCCACCCTGACCGTGGACAAGTCCAGCAGCACC GCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTGTCCAGCGAG GACTCCGCCATCTACTACTGCGCCAACCACGACT I I I ICGTCTTCTGGGGACAGGGCACCCTGGTGAC AGTGTCCGCTGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCG GCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGACATCCAG ATGACACAGGCCACAAGCTCCCTGTCCGCCAGC CTGGGCGATAGGGTGACCATCAATTGCAGGACCT CCCAGGACATCAGCAACCACCTGAACTGGTACCA GCAGAAACCCGACGGCACCGTGAAGCTGCTCAT CTACTACACCAGCAGGCTGCAGTCCGGCGTCCC TAGCAGATTCAGCGGATCCGGCAGCGGCACCGA CTATAGCCTGACCATCAGCAACCTCGAGCAGGAG GACATCGGCACCTACTTCTGCCATCAGGGCAACA CCCTGCCCCCTACCTTTGGCGGCGGCACAAAGC TGGAGATTAAG
1490 Anti-BCMA scFv de CTX-171 GATATCCAGATGACCCAGGCCACCAGCAGCCTG AGCGCTTCCCTCGGCGACAGGGTGACCATCAAC TGCAGGACCAGCCAGGACATCTCCAACCACCTGA ACTGGTACCAGCAGAAGCCCGACGGCACCGTGA AACTGCTGATCTACTACACCAGCAGACTGCAGAG CGGCGTGCCCTCCAGAI I I ICCGGCAGCGGCTC CGGCACCGACTACAGCCTGACCATTAGCAACCTG GAGCAGGAGGACATCGGAACCTACTTCTGCCAC CAGGGCAACACACTGCCTCCCACCTTCGGCGGC GGCACAAAGCTCGAGATCAAGGGCGGCGGCGGA AGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGAGGCTC CGAGGTGCAACTGCAACAGAGCGGACCTGAGCT GGTGAAGCCTGGCGCCAGCGTGAAGATCTCCTG TAAGACCAGCGGCTACACCTTCACCGAGTACACC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 758/1851
701/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
ATCAACTGGGTGAAGCAGAGCCACGGCAAGAGC CTCGAATGGATCGGCGACATCTATCCCGACAACT ACAATATCAGATACAACCAGAAGTTCAAGGGAAA GGCCACCCTGACCGTGGATAAGTCCTCCTCCACC GCTTACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGCAGCGAG GACTCCGCCATCTACTACTGCGCCAACCACGACT TCTTCGTGTTCTGGGGCCAAGGCACCCTCGTGAC CGTGAGCGCC
1491 Anti-BCMA scFv de CTX-172 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGCGCTGAGCTG AAGAAGCCCGGCGCCAGCGTGAAGATCAGCTGC AAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCGAATACACCA TCAACTGGGTGAGACAGGCCCCTGGACAGAGGC TCGAGTGGATGGGCGACATCTACCCCGACAACTA CAGCATCAGGTACAACCAGAAGTTCCAGGGCAG GGTGACAATCACCAGGGACACCAGCGCCAGCAC CGCCTATATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCCGA GGACACCGCCGTCTATTACTGCGCCAACCACGAC TTCTTCGTGTTCTGGGGCCAGGGAACACTGGTGA CCGTGTCCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGC GGAGGAAGCGGCGGCGGCGGCAGCGATATCCA GATGACCCAGAGCCCCTCCTCCCTGAGCGCTAG CGTGGGCGACAGGGTGACCATTACCTGTCAGGC CTCCCAGGACATCAGCAACTACCTGAACTGGTAC CAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTG ATCTATTACACCAGCAGGCTGGAGACCGGCGTG CCCTCCAGATTCAGCGGCTCCGGCTCCGGAACC GACTTCACCTTCACCATCAGCTCCCTGCAGCCTG AGGACATCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGGCA ACACCCTGCCTCCCACATTCGGCGGCGGCACAA AGGTGGAGATCAAA
1492 Anti-BCMA scFv de CTX-173 CAGGTGCAGCTGGTCCAGTCCGGCGCCGAACTG AAGAAGCCTGGCGCCAGCGTGAAGATCAGCTGC AAGGCCTCCGGCTACACCTTCACCGAGTACACCA TCAACTGGGTGAGGCAAGCCCCCGGCCAGAGAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 759/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
TGGAGTGGATGGGCGACATCTACCCCGACAACTA CAGCATCAGGTACAACCAGAAGTTCCAGGGCAG GGTGACAATCACCAGGGATACCAGCGCCAGCAC AGCCTATATGGAGCTGTCCTCCCTGAGATCCGAG GACACCGCCGTGTATTACTGCGCCAACCACGACT TCTTCGTGTTCTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGAC CGTGAGCAGCGGCGGCGGCGGCTCCGGCGGCG GAGGCTCCGGAGGCGGAGGCAGCGACATCCAGA TGACCCAGAGCCCTTCCAGCCTGAGCGCTAGCC TGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGACCA GCCAGGACATCAGCAATCACCTGAACTGGTACCA GCAAAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGAT CTACTACACCAGCAGGCTGGAAAGCGGCGTGCC TAGCAGGTTCAGCGGCAGCGGCTCCGGAACCGA CTACAGCCTGACCATTAGCAGCCTGCAACCTGAG GACATCGGCACCTATTACTGCCAGCAGGGCAACA CCCTGCCTCCTACCTTTGGCGGCGGCACCAAACT CGAGATCAAG
1493 Anti-BCMA scFv de CTX-174 CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCCCTGAGCTG AAGAAGCCCGGAGCCAGCGTGAAGATCTCCTGC AAGACCTCCGGCTACACCTTCACCGAGTACACCA TCAACTGGGTGAAGCAGGCCCCCGGACAGGGAC TGGAATGGATCGGCGACATCTACCCCGACAACTA CAACATCAGGTACAACCAGAAGTTCCAAGGCAAG GCCACCATCACAAGGGACACCAGCAGCAGCACC GCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAG GATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAACCACGACT TCTTCGTGTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGA CAGTGAGCAGCGGAGGAGGCGGAAGCGGAGGA GGAGGATCCGGAGGAGGAGGCAGCGACATCCAG ATGACCCAGTCCCCCTCCTCCCTGAGCGCCTCC GTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCCAGGCC AGCCAGGACATCAGCAACTACCTGAACTGGTACC AGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGA
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 760/1851
703/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
TTTACTACACCAGCAGGCTGGAAACCGGCGTGCC CAGCAGATTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGA CTTTACCTTTACCATCTCCAGCCTGCAGCCCGAG GATATCGCCACATACTACTGCCAGCAGGGCAACA CCCTCCCCCCTACCTTTGGCGGCGGCACCAAGG TGGAGATTAAG
1494 Anti-BCMA scFv de CTX-175 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGCCCCGAACTG AAAAAGCCCGGCGCCAGCGTCAAGATCAGCTGC AAGACCTCCGGCTACACCTTCACCGAGTACACCA TCAACTGGGTGAAGCAGGCCCCCGGCCAGGGAC TGGAATGGATTGGCGACATCTACCCCGACAACTA CAACATTAGGTATAACCAGAAGTTCCAGGGCAAG GCCACCATCACAAGAGACACCAGCAGCAGCACC GCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAG GACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAACCACGACT TCTTCGTGTTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTGA CAGTGTCCAGCGGCGGCGGCGGCTCCGGCGGC GGCGGCTCCGGCGGCGGCGGCAGCGACATTCA GATGACACAGAGCCCCTCCAGCCTGAGCGCCAG CCTGGGCGATAGGGTGACCATCACCTGCAGAAC CAGCCAGGACATCAGCAACCACCTGAATTGGTAC CAGCAGAAGCCCGGAAAGGCCCCCAAACTGCTG ATCTACTACACCAGCAGGCTGGAGAGCGGCGTG CCTAGCAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACA GATTACAGCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCC GAAGACATCGGCACCTACTACTGCCAGCAGGGC AACACCCTGCCCCCTACCTTTGGCGGAGGCACC AAGCTGGAGATCAAG
1495 Anti-BCMA scFv de CTX-176 GACATCCAGATGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGA GCGCTTCCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCT GCCAGGCCAGCCAGGACATCAGCAACTACCTCA ACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCTA AGCTGCTGATCTACTACACCTCCAGGCTGGAGAC
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 761/1851
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SEQ NO: ID Descrição Sequência
CGGAGTGCCCTCCAGAI I I ICCGGCAGCGGCAG CGGCACCGATTTCACCTTCACCATCAGCAGCCTG CAGCCCGAGGACATCGCCACCTACTATTGCCAGC AGGGCAACACCCTGCCCCCCACATTTGGAGGCG GCACCAAGGTGGAGATCAAGGGCGGAGGAGGAA GCGGAGGAGGAGGAAGCGGAGGAGGCGGAAGC CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCTGAGCTC AAGAAGCCTGGCGCCAGCGTGAAGATCAGCTGC AAAGCCTCCGGATACACCTTCACCGAGTACACCA TCAATTGGGTGAGACAGGCCCCCGGCCAAAGAC TGGAGTGGATGGGCGACATCTATCCCGACAACTA CAGCATCAGGTACAACCAGAAGTTCCAGGGCAG GGTGACAATCACCAGAGACACCAGCGCCAGCAC CGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGA GGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAATCACGA CTTCTTCGTGTTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTG ACCGTCAGCTCC
1496 Anti-BCMA scFv de CTX-177 GATATCCAGATGACACAGAGCCCTAGCTCCCTGA GCGCCAGCCTGGGCGATAGGGTGACCATCACCT GCAGGACCTCCCAGGACATCAGCAACCACCTGA ACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAAGCCCCCA AGCTGCTGATCTACTACACCAGCAGGCTGGAAAG CGGCGTGCCCAGCAGGTTTAGCGGAAGCGGCAG CGGCACCGACTACAGCCTGACCATCAGCTCCCT GCAGCCCGAGGACATCGGCACCTACTACTGCCA GCAGGGCAACACCCTGCCTCCCACCTTCGGAGG CGGAACCAAGCTGGAGATTAAGGGAGGCGGCGG AAGCGGCGGCGGCGGCTCCGGCGGAGGAGGCA GCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGAGCCGAGC TGAAAAAGCCTGGCGCCAGCGTGAAGATCAGCT GCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCGAGTACA CCATCAACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCCAGA GACTCGAGTGGATGGGCGACATCTACCCCGACA ACTACTCCATCAGGTACAACCAGAAGTTTCAGGG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 762/1851
705/714
SEQ NO: ID Descrição Sequência
CAGGGTGACCATTACCAGGGACACCAGCGCCAG CACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAG CGAGGATACAGCCGTCTACTACTGCGCCAACCAC GACTTTTTCGTGTTCTGGGGACAGGGCACCCTGG TGACCGTGTCCTCC
1497 Anti-BCMA scFv de CTX-178 GACATCCAAATGACCCAGAGCCCTAGCTCCCTGA GCGCTTCCGTGGGCGACAGAGTGACCATTACCT GCCAGGCCAGCCAGGACATCAGCAACTACCTGA ACTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCCA AGCTGCTGATCTACTACACCAGCAGGCTGGAGAC CGGAGTGCCCAGCAGGTTTAGCGGCTCCGGATC CGGCACCGACTTCACCTTCACCATCTCCAGCCTG CAGCCCGAGGACATCGCCACCTACTACTGCCAG CAGGGCAATACCCTCCCCCCTACCTTCGGAGGC GGCACCAAGGTGGAGATCAAGGGCGGCGGCGG CTCCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCGGCA GCCAGGTGCAACTGGTGCAGAGCGGCCCTGAGC TGAAGAAACCCGGCGCCAGCGTGAAAATCAGCT GCAAGACCAGCGGCTACACATTCACCGAGTACAC CATCAACTGGGTGAAGCAGGCTCCCGGACAGGG ACTGGAGTGGATCGGCGACATCTACCCTGACAAC TACAACATCAGATACAACCAAAAGTTCCAGGGCA AGGCCACCATCACCAGGGACACCAGCTCCTCCA CCGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCG AGGACACCGCTGTGTACTACTGCGCCAACCACGA CTTCTTCGTGTTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTG ACCGTGAGCAGC
1498 Anti-BCMA scFv de CTX-179 GATATCCAGATGACACAAAGCCCCAGCAGCCTGT CCGCTAGCCTGGGCGATAGGGTGACCATCACAT GCAGGACCAGCCAGGACATCTCCAACCACCTGA ACTGGTACCAGCAGAAGCCTGGAAAGGCCCCCA AACTGCTGATCTACTACACCAGCAGGCTGGAGAG CGGCGTGCCTAGCAGG I I I ICCGGCAGCGGCAG CGGCACCGACTATAGCCTGACCATCAGCTCCCTG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 763/1851
706/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
CAGCCCGAGGACATCGGCACCTACTACTGCCAG CAGGGAAACACACTGCCCCCCACCTTTGGCGGC GGCACAAAGCTGGAGATCAAGGGCGGCGGCGGA TCCGGCGGCGGAGGCAGCGGAGGAGGAGGAAG CCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGCCCTGAGCT GAAGAAGCCCGGAGCCAGCGTGAAAATTAGCTG CAAGACCTCCGGCTACACATTCACCGAGTACACC ATCAACTGGGTGAAGCAGGCTCCCGGCCAGGGA CTGGAGTGGATCGGCGACATCTACCCCGACAACT ACAACATCAGGTACAACCAGAAATTCCAGGGCAA GGCCACCATCACCAGGGACACCAGCTCCTCCAC CGCCTATATGGAGCTGTCCAGCCTGAGAAGCGA GGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAACCACGAT TTCTTCGTGTTCTGGGGCCAGGGCACACTGGTCA CCGTGAGCAGC
Tabela 39.Sequências de aminoácidso de scFv
SEQ ID NO: Descrição Sequência
1334 Anti-CD19 scFv de CTX- 131 a CTX-141 IQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQ QKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSL TISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGST SGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLS VTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGS ETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTA IYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVS
1499 Anti-CD70A scFv de CTX- 142 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSF MHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPDRFSGSGS GTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREVPWTFGQGT KVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGQVQLVQSGAEVK KPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLK WMGWINTYTGEPTYADAFKGRVTMTRDTSISTAYM ELSRLRSDDTAVYYCARDYGDYGMDYWGQGTTVT
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 764/1851
707/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
vss
1500 Anti-CD70B scFv de CTX- 145 e CTX- 145b QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGM NWVRQAPGQGLKWMGWINTYTGEPTYADAFKGR VTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDYGD YGMDYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSG DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSF MHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPDRFSGSGS GTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREVPWTFGQGT KVEIK
1501 Anti-BCMA-1 scFv de CTX 152 e CTX-153 QVQLQQSGGGLVQPGGSLKLSCAASGIDFSRYWM SWVRRAPGKGLEWIGEINPDSSTINYAPSLKDKFIIS RDN AKNTLYLQMS KVRS E DTALYYCAS LYYDYG DA MDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGDIV MTQSQRFMTTSVGDRVSVTCKASQSVDSNVAWYQ QKPRQSPKALIFSASLRFSGVPARFTGSGSGTDFTL TISNLQSEDLAEYFCQQYNNYPLTFGAGTKLELK
1502 Anti-BCMA-2 scFv de CTX- 154 e CTX-155 DIVMTQSQRFMTTSVGDRVSVTCKASQSVDSNVA WYQQKPRQSPKALIFSASLRFSGVPARFTGSGSGT DFTLTISNLQSEDLAEYFCQQYNNYPLTFGAGTKLE LKGGGGSGGGGSGGGGSGQVQLQQSGGGLVQP GGSLKLSCAASGIDFSRYWMSWVRRAPGKGLEWI GEINPDSSTINYAPSLKDKFIISRDNAKNTLYLQMSK V RS E DTALYYCAS LYYDYG D AM D YW GQGTS VTVS S
1503 Anti-BCMA scFv de CTX160 e CTX160b (BCMA3) EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGIDFSRYWMS WVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYADSVKGRFTIS RDNAKNTLYLQMNLSRAEDTALYYCASLYYDYGDA MDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQM TQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVDSNVAWYQQK PEKAPKSLIFSASLRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGAGTKLEIK
1504 Anti-BCMA EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGIDFSRYWMS
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 765/1851
708/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
scFv de CTX161 (BCMA-4) WVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYADSVKGRFTIS RDNAKNTLYLQMNLSRAEDTALYYCASLYYDYGDA MDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQM TQSPSSLSASPGDRVSVTCKASQSVDSNVAWYQQ KPRQAPKALIFSASLRFSGVPARFTGSGSGTDFTLTI SNLQSEDFATYYCQQYNNYPLTFGAGTKLEIK
1505 Anti-BCMA scFv de CTX162 (BCMA-5) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVDSNVAW YQQKPEKAPKSLIFSASLRFSGVPSRFSGSGSGTDF TLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGAGTKLEIKG GGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLK LSCAASGIDFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPD SSTINYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNLSRAED TALYYCASLYYDYGDAMDYWGQGTLVTVSS
1506 Anti-BCMA scFv de CTX163 (BCMA-6) DIQMTQSPSSLSASPGDRVSVTCKASQSVDSNVAW YQQKPRQAPKALIFSASLRFSGVPARFTGSGSGTD FTLTISNLQSEDFATYYCQQYNNYPLTFGAGTKLEIK GGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSL KLSCAASGIDFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINP DSSTINYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNLSRAE □TALYYCASLYYDYGDAMDYWGQGTLVTVSS
1507 Anti-BCMA scFv de CTX164 (BCMA-7) EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGNTLTNYVIH WMKQMPGQGLDWIGYILPYNDLTKYNEKFTGKATL TS DKSSSS AYME LNS LTSE DSAVYYCTRW DW DG F FDPWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVM TQSPLSLPVSLGDQASISCRSTQSLVHSNGNTHLH WYLQRPGQSPKLLIYSVSNRFSEVPDRFSASGSGT DFTLKISRVEAEDLGVYFCSQTSHIPYTFGGGTKLEI K
1508 Anti-BCMA scFv de CTX165 (BCMA-8) DIVMTQSPLSLPVSLGDQASISCRSTQSLVHSNGNT HLHWYLQRPGQSPKLLIYSVSNRFSEVPDRFSASG SGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQTSHIPYTFGGGT KLEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPELVKP GASVKMSCKASGNTLTNYVIHWMKQMPGQGLDWI
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 766/1851
709/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
GYILPYNDLTKYNEKFTGKATLTSDKSSSSAYMELN SLTSEDSAVYYCTRWDWDGFFDPWGQGTTLTVSS
1509 Anti-BCMA scFv de CTX166 (BCMA11) e CTX166b QVQLVQSGAELKKPGASVKVSCKASGNTLTNYVIH WVRQAPGQRLEWMGYILPYNDLTKYSQKFQGRVTI TRDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWDWDGF FDPWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVM TQSPATLSVSPGERASISCRASQSLVHSNGNTHLH WYQQRPGQAPRLLIYSVSNRFSEVPARFSGSGSGT DFTLTISSVESEDFAVYYCSQTSHIPYTFGGGTKLEI K
1510 Anti-BCMA scFv de CTX167 (BCMA12) QVQLVQSGAELKKPGASVKVSCKASGNTLTNYVIH WVRQAPGQRLEWMGYILPYNDLTKYSQKFQGRVTI TRDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWDWDGF FDPWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVM TQSPLSLPVTLGQPATLSCRSTQSLVHSNGNTHLH WFQQRPGQSPLRLIYSVSNRDSGVPDRFSGSGSG TDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQTSHIPYTFGGGTKL EIK
1511 Anti-BCMA scFv de CTX168 (BCMA13) EIVMTQSPATLSVSPGERASISCRASQSLVHSNGNT HLHWYQQRPGQAPRLLIYSVSNRFSEVPARFSGSG SGTDFTLTISSVESEDFAVYYCSQTSHIPYTFGGGT KLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAELKKP GASVKVSCKASGNTLTNYVIHWVRQAPGQRLEWM GYILPYNDLTKYSQKFQGRVTITRDKSASTAYMELS SLRSEDTAVYYCTRWDWDGFFDPWGQGTTVTVSS
1512 Anti-BCMA scFv de CTX169 (BCMA14) DIVMTQSPLSLPVTLGQPATLSCRSTQSLVHSNGNTH LHWFQQRPGQSPLRLIYSVSNRDSGVPDRFSGSGS GTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQTSHIPYTFGGGTKL EIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAELKKPGAS VKVSCKASGNTLTNYVIHWVRQAPGQRLEWMGYILP YNDLTKYSQKFQGRVTITRDKSASTAYMELSSLRSED TAVYYCTRWDWDGFFDPWGQGTTVTVSS
1513 Anti-BCMA EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGYTFTEYTINW
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 767/1851
710/714
SEQ ID NO: Descrição Sequência
scFv de CTX170 (BCMA-9) VKQSHGKSLEWIGDIYPDNYNIRYNQKFKGKATLTV DKSSSTAYMELRSLSSEDSAIYYCANHDFFVFWGQ GTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQATSSL SASLGDRVTINCRTSQDISNHLNWYQQKPDGTVKL LIYYTSRLQSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDI GTYFCHQGNTLPPTFGGGTKLEIK
1514 Anti-BCMA scFv de CTX171 (BCMA10) DIQMTQATSSLSASLGDRVTINCRTSQDISNHLNWY QQKPDGTVKLLIYYTSRLQSGVPSRFSGSGSGTDY SLTISNLEQEDIGTYFCHQGNTLPPTFGGGTKLEIKG GGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPELVKPGASVKI SCKTSGYTFTEYTINWVKQSHGKSLEWIGDIYPDNY NIRYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLSSEDSA IYYCANHDFFVFWGQGTLVTVSA
1515 Anti-BCMA scFv de CTX172 (BCMA15) QVQLVQSGAELKKPGASVKISCKASGYTFTEYTINW VRQAPGQRLEWMGDIYPDNYSIRYNQKFQGRVTIT RDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCANHDFFVFWG QGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPS SLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAP KLLIYYTSRLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPE DIATYYCQQGNTLPPTFGGGTKVEIK
1516 Anti-BCMA scFv de CTX173 (BCMA16) QVQLVQSGAELKKPGASVKISCKASGYTFTEYTINW VRQAPGQRLEWMGDIYPDNYSIRYNQKFQGRVTIT RDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCANHDFFVFWG QGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPS SLSASLGDRVTITCRTSQDISNHLNWYQQKPGKAP KLLIYYTSRLESGVPSRFSGSGSGTDYSLTISSLQPE DIGTYYCQQGNTLPPTFGGGTKLEIK
1517 Anti-BCMA scFv de CTX174 (BCMA17) QVQLVQSGPELKKPGASVKISCKTSGYTFTEYTINW VKQAPGQGLEWIGDIYPDNYNIRYNQKFQGKATITR DTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCANHDFFVFWGQ GTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSL SASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKL LIYYTSRLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDI
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 768/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
ATYYCQQGNTLPPTFGGGTKVEIK
1518 Anti-BCMA scFv de CTX175 (BCMA18) QVQLVQSGPELKKPGASVKISCKTSGYTFTEYTINW VKQAPGQGLEWIGDIYPDNYNIRYNQKFQGKATITR DTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCANHDFFVFWGQ GTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSL SASLGDRVTITCRTSQDISNHLNWYQQKPGKAPKLL IYYTSRLESGVPSRFSGSGSGTDYSLTISSLQPEDIG TYYCQQGNTLPPTFGGGTKLEIK
1519 Anti-BCMA scFv de CTX176 (BCMA19) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWY QQKPGKAPKLLIYYTSRLETGVPSRFSGSGSGTDFT FTISSLQPEDIATYYCQQGNTLPPTFGGGTKVEIKG GGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAELKKPGASVKI SCKASGYTFTEYTINWVRQAPGQRLEWMGDIYPDN YSIRYNQKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDT AVYYCANHDFFVFWGQGTLVTVSS
1520 Anti-BCMA scFv de CTX177 (BCMA20) DIQMTQSPSSLSASLGDRVTITCRTSQDISNHLNWY QQKPGKAPKLLIYYTSRLESGVPSRFSGSGSGTDY SLTISSLQPEDIGTYYCQQGNTLPPTFGGGTKLEIKG GGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAELKKPGASVKI SCKASGYTFTEYTINWVRQAPGQRLEWMGDIYPDN YSIRYNQKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDT AVYYCANHDFFVFWGQGTLVTVSS
1521 Anti-BCMA scFv de CTX178 (BCMA21) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWY QQKPGKAPKLLIYYTSRLETGVPSRFSGSGSGTDFT FTISSLQPEDIATYYCQQGNTLPPTFGGGTKVEIKG GGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGPELKKPGASVKI SCKTSGYTFTEYTINWVKQAPGQGLEWIGDIYPDNY NIRYNQKFQGKATITRDTSSSTAYMELSSLRSEDTA VYYCANHDFFVFWGQGTLVTVSS
1522 Anti-BCMA scFv de CTX179 (BCMA- DIQMTQSPSSLSASLGDRVTITCRTSQDISNHLNWY QQKPGKAPKLLIYYTSRLESGVPSRFSGSGSGTDY SLTISSLQPEDIGTYYCQQGNTLPPTFGGGTKLEIKG
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 769/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
22) GGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGPELKKPGASVKI SCKTSGYTFTEYTINWVKQAPGQGLEWIGDIYPDNY NIRYNQKFQGKATITRDTSSSTAYMELSSLRSEDTA VYYCANHDFFVFWGQGTLVTVSS
1523 BCMAVH1 QVQLQQSGGGLVQPGGSLKLSCAASGIDFSRYWM SWVRRAPGKGLEWIGEINPDSSTINYAPSLKDKFIIS RDN AKNTLYLQMS KVRS E DTALYYCAS LYYDYG DA MDYWGQGTSVTVSS
1524 BCMA_VH1.1 (de CTX-160) EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGIDFSRYWMS WVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYADSVKGRFTIS RDNAKNTLYLQMNLSRAEDTALYYCASLYYDYGDA MDYWGQGTLVTVSS
1525 BCMAVL1 DIVMTQSQRFMTTSVGDRVSVTCKASQSVDSNVA WYQQKPRQSPKALIFSASLRFSGVPARFTGSGSGT DFTLTISNLQSEDLAEYFCQQYNNYPLTFGAGTKLE LK
1526 BCMA_VL1.1 (de CTX-160) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVDSNVAW YQQKPEKAPKSLIFSASLRFSGVPSRFSGSGSGTDF TLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGAGTKLEIK
1527 BCMAVL1.2 DIQMTQSPSSLSASPGDRVSVTCKASQSVDSNVAW YQQKPRQAPKALIFSASLRFSGVPARFTGSGSGTD FTLTISNLQSEDFATYYCQQYNNYPLTFGAGTKLEIK
1528 BCMAVH2 EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGNTLTNYVIH WMKQMPGQGLDWIGYILPYNDLTKYNEKFTGKATL TS DKSSSS AYME LNS LTSE DSAVYYCTRW DW DG F FDPWGQGTTLTVSS
1529 BCMAVL2 DIVMTQSPLSLPVSLGDQASISCRSTQSLVHSNGNT HLHWYLQRPGQSPKLLIYSVSNRFSEVPDRFSASG SGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQTSHIPYTFGGGT KLEIK
1530 BCMAVH3 EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGYTFTEYTINW VKQSHGKSLEWIGDIYPDNYNIRYNQKFKGKATLTV DKSSSTAYMELRSLSSEDSAIYYCANHDFFVFWGQ
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 770/1851
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SEQ ID NO: Descrição Sequência
GTLVTVSA
1531 BCMAVL3 DIQMTQATSSLSASLGDRVTINCRTSQDISNHLNWY QQKPDGTVKLLIYYTSRLQSGVPSRFSGSGSGTDY SLTISNLEQEDIGTYFCHQGNTLPPTFGGGTKLEIK
1589 BCMA VH (de CTX-166) QVQLVQSGAELKKPGASVKVSCKASGNTLTNYVIH WVRQAPGQRLEWMGYILPYNDLTKYSQKFQGRVTI TRDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWDWDGF FDPWGQGTTVTVSS
1590 BCMA VL (de CTX-166) EIVMTQSPATLSVSPGERASISCRASQSLVHSNGNT HLHWYQQRPGQAPRLLIYSVSNRFSEVPARFSGSG SGTDFTLTISSVESEDFAVYYCSQTSHIPYTFGGGT KLEIK
1591 ligante BCMA GGGGSGGGGSGGGGS
1592 CD70 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGM NWVRQAPGQGLKWMGWINTYTGEPTYADAFKGR VTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDYGD YGMDYWGQGTTVTVSS
1593 CD70 VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSF MHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPDRFSGSGS GTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREVPWTFGQGT KVEIK
1594 ligante (CD70) GGGGSGGGGSGGGGSG
1595 CD19 VH EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVS WIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIK DNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYA MDYWGQGTSVTVSS
1596 CD19 VL DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWY QQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDY SLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT
1597 ligante (CD19) GSTSGSGKPGSGEGSTKG
Nota Sobre Exemplos Ilustrativos
Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 771/1851
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[0744] Embora a presente divulgação forneça descrições de vários aspectos específicos com o objetivo de ilustrar vários aspectos da presente invenção e/ou suas possíveis aplicações, entende-se que variações e modificações ocorrerão para os peritos na técnica. Por conseguinte, a invenção ou invenções aqui descritas devem ser entendidas como sendo pelo menos tão amplas quanto reivindicadas, e não tão definidas de maneira mais restrita por aspectos ilustrativos particulares aqui fornecidos.
[0745] Qualquer patente, publicação ou outro material de divulgação aqui identificado é incorporado por referência a esta especificação em sua totalidade, a menos que seja indicado o contrário, mas apenas na medida em que o material incorporado não conflite com descrições, definições, declarações ou outro material de divulgação expressamente estabelecido nesta especificação. Como tal, e na medida do necessário, a divulgação expressa conforme estabelecida nesta especificação substitui qualquer material conflitante incorporado por referência. Qualquer material, ou parte dele, que se diz incorporado por referência a esta especificação, mas que conflite com as definições, declarações ou outro material de divulgação aqui estabelecido, é incorporado apenas na medida em que não ocorra conflito entre esse material incorporado e o material de divulgação existente. Os requerentes reservam-se o direito de alterar esta especificação para recitar expressamente qualquer assunto ou parte dele incorporado aqui por referência.

Claims (186)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. População de células, caracterizado pelo fato de que compreende:
    células T manipuladas que compreendem um gene da região constante da cadeia alfa do receptor de célula T (TRAC) interrompido pela inserção de um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR) compreendendo (i) um ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo antiCD19, (ii) um domínio transmembranar CD8 e (iii) um endodomínio que compreende um domínio coestimulador de CD28 ou 41 BB e, opcionalmente, um domínio coestimulador de CD3z; e um gene interrompido de beta-2-microglobulina (B2M), em que pelo menos 70% das células T manipuladas não expressam um nível detectável de proteína de superfície de TCR e não expressam um nível detectável de proteína de superfície B2M e/ou em que, pelo menos, 50% das células T manipuladas expressam um nível detectável do CAR.
  2. 2. População de células, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que as células T modificadas são não purificadas e/ou não enriquecidas.
  3. 3. População de células, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que a população de células não é purificada e/ou não é enriquecida.
  4. 4. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o fragmento de anticorpo anti~CD19 é um fragmento de anticorpo anti-CD19 scFv.
  5. 5. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o fragmento de anticorpo anti-CD19 é um fragmento de anticorpo anti-CD19 humanizado.
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    2/35
  6. 6. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que:
    o fragmento de anticorpo anti-CD19 é codificado pela sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1333 e/ou em que o fragmento de anticorpo anti-CD19 compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1334;
    o fragmento de anticorpo anti-CD19 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1595; e/ou o fragmento de anticorpo anti-CD19 compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1596.
  7. 7. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que o ectodomínio do CAR compreende ainda um peptídeo sinal, opcionalmente um peptídeo sinal CD8.
  8. 8. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que o CAR compreende ainda um domínio de dobradiça, opcionalmente um domínio de dobradiça CD8, localizado entre o fragmento de anticorpo anti-CD19 e o domínio transmembranar CD8.
  9. 9. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o CAR compreende o seguinte arranjo estrutural do terminal N ao terminal C: o ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo anti-CD19, um domínio de dobradiça CD8, o domínio transmembranar CD8 e o endodomínio que compreende um domínio coestimulador de CD28 ou 41 BB e um domínio coestimulador de CD3z.
  10. 10. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de que o CAR é
    Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 774/1851
    3/35 codificado pela sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1316 e/ou em que o CAR compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1338.
  11. 11. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% das células T modificadas não expressam um nível detectável de proteína de superfície TCR.
  12. 12. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizada pelo fato de que pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, ou pelo menos 75% das células T modificadas expressam um nível detectável do CAR.
  13. 13. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que pelo menos 50% das células T manipuladas expressam um nível detectável do CAR e não expressam um nível detectável de proteína de superfície TCR ou proteína de superfície B2M.
  14. 14. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizada pelo fato de que a cocultura da célula T manipulada com células B CD19+ resulta em lise de, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70% ou pelo menos 75% das células B CD19+.
  15. 15. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizada pelo fato de que as células T manipuladas produzem interferon gama na presença de células CD19+.
  16. 16. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizada pelo fato de que as células T manipuladas não proliferam na ausência de estimulação de citocinas, estimulação de fator de crescimento ou estimulação de antígeno.
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    4/35
  17. 17. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gene interrompido da proteína 1 da morte celular programada (PD1), opcionalmente em que, pelo menos, 80% das células T manipuladas não expressam um nível detectável de proteína de superfície PD1.
  18. 18. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gene interrompido da proteína 4 associada a linfócitos T citotóxicos (CTLA-4), opcionalmente em que, pelo menos, 80% das células T manipuladas não expressam um nível detectável de proteína de superfície CTLA-4.
  19. 19. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gRNA com alvo no gene TRAC, um gRNA com alvo no gene B2M e proteína Cas9.
  20. 20. População de células, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo fato de que:
    o gRNA com alvo no gene TRAC compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 83-158 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 7-82; e/ou o gRNA com alvo no gene B2M compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 458-506 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 409-457.
  21. 21. População de células, de acordo com a reivindicação 20, caracterizada pelo fato de que:
    o gRNA com alvo no gene TRAC compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 152 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 76; e/ou o gRNA com alvo no gene B2M compreende a sequência
    Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 776/1851
    5/35 nudeotídica de SEQ ID NO: 466 e/ou tem alvo na sequênda nudeotídica de SEQ ID NO: 417.
  22. 22. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 18, 19, 20 ou 21, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gRNA com alvo no gene PD1.
  23. 23. População de células, de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pelo fato de que o gRNA com alvo no gene PD1 compreende a sequênda nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1083-1274 e/ou tem alvo na sequência nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 891-1082.
  24. 24. População de células, de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que o gRNA com alvo no gene PD1 compreende a sequência nudeotídica da SEQ ID NO: 1086 e/ou tem alvo na sequência nudeotídica de SEQ ID NO: 894.
  25. 25. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 18 a 24, caracterizada peto fato de que compreende ainda um gRNA com alvo no gene CTLA-4.
  26. 26. População de células, de acordo com a reivindicação 25, caracterizada pelo fato de que o gRNA com alvo no gene CTLA-4 compreende a sequência nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1289-1298 e/ou tem alvo na sequência nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1278-1287.
  27. 27. População de células, de acordo com a reivindicação 26, caracterizada pelo fato de que o gRNA com alvo no gene CTLA-4 compreende a sequência nudeotídica da SEQ ID NO: 1292 e/ou tem alvo na sequência nudeotídica de SEQ ID NO: 1281.
  28. 28. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 27, caracterizada pelo fato de que as células T manipuladas da população de células compreendem uma deleção da sequência nudeotídica da SEQ ID NO: 76 no gene TRAC, em relação
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    6/35 às células T não modificadas.
  29. 29. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 28, caracterizada pelo fato de que o gene B2M interrompido compreende uma inserção de, pelo menos, um par de bases nucleotídicas e/ou uma deleção de, pelo menos, um par de bases nucleotídicas.
  30. 30. População de células, de acordo com a reivindicação 29, caracterizada pelo fato de que um gene B2M interrompido das células T manipuladas compreende, pelo menos, uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1560; SEQ ID NO: 1561; SEQ ID NO: 1562; SEQ ID NO: 1563; SEQ ID NO: 1564: e SEQ ID NO: 1565.
  31. 31. População de células, de acordo com a reivindicação 30, caracterizada pelo fato de que pelo menos 16% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1560; pelo menos 6% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1561; pelo menos 4% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1562; pelo menos 2% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1563; pelo menos 2% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1564; e pelo menos 2% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1565.
  32. 32. Método para reduzir o volume de um tumor em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao sujeito uma dose de uma composição farmacêutica compreendendo a população de células, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 32, e reduzir o volume do tumor no sujeito em, pelo
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    7/35 menos, 50% em relação ao controle, e opcionalmente, em que a composição compreende a 1x105 a 1x106 células da população.
  33. 33. Método para aumentar a taxa de sobrevivência em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao sujeito uma dose de uma composição farmacêutica compreendendo a população de células, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 32, e aumentar a taxa de sobrevivência no sujeito em, pelo menos, 50% em relação ao controle, e opcionalmente, em que a composição compreende a 1x105 a 1x106 células da população.
  34. 34. Método, de acordo com a reivindicação 32 ou 33, caracterizado pelo fato de que o controle é um sujeito não tratado.
  35. 35. Método para produzir uma célula T manipulada adequada para transplante alogênico, caracterizado pelo fato de que compreende (a) entrega a uma célula T:
    uma nuclease guiada por RNA, um gRNA com alvo em um gene TRAC, um gRNA com alvo em um gene B2M e um vetor compreendendo um modelo doador que compreende um ácido nucleico que codifica um CAR, em que o CAR compreende (i) um ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo anti-CD19, (ii) um domínio transmembranar CD8 e (iii) um endodomínio que compreende um domínio coestimulador de CD28 ou 41 BB e opcionalmente um domínio coestimulador de CD3z, em que o ácido nucleico que codifica o CAR é flanqueado nos braços de homologia esquerdo e direito ao locus do gene TRAC; e (b) produzir uma célula T manipulada adequada para transplante alogênico.
  36. 36. Método, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que o fragmento de anticorpo anti-CD19 é um
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    8/35 fragmento de anticorpo anti-CD19 scFv.
  37. 37. Método, de acordo com a reivindicação 35 ou 36, caracterizado pelo fato de que o fragmento de anticorpo anti-CD19 é um fragmento de anticorpo anti-CD19 humanizado.
  38. 38. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 37, caracterizado pelo fato de que:
    o fragmento de anticorpo anti-CD19 é codificado pela sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1333 e/ou em que o fragmento de anticorpo anti-CD19 compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1334;
    o fragmento de anticorpo anti-CD19 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1595; e/ou o fragmento de anticorpo anti-CD19 compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1596.
  39. 39. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 38, caracterizado pelo fato de que o ectodomínio do CAR compreende ainda um peptídeo sinal, opcionalmente um peptídeo sinal CD8.
  40. 40. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 39, caracterizado pelo fato de que o CAR compreende ainda um domínio de dobradiça, opcionalmente um domínio de dobradiça CD8, localizado entre o fragmento de anticorpo anti-CD19 e o domínio transmembranar CD8.
  41. 41. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 40, caracterizado pelo fato de que o CAR compreende o seguinte arranjo estrutural do terminal N ao terminal C: o ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo anti-CD19, um domínio de dobradiça CD8, o domínio transmembranar CD8 e o
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    9/35 endodomínio que compreende um domínio coestimulador de CD28 ou 41 BB e um domínio coestimulador de CD3z.
  42. 42. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 41, caracterizado pelo fato de que o CAR é codificado pela sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1316 e/ou em que o CAR compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1338.
  43. 43. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 41, caracterizado pelo fato de que:
    o gRNA com alvo no gene TRAC compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 83-158 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 7-82; e/ou o gRNA com alvo no gene B2M compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 458-506 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 409-457.
  44. 44. Método, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene TRAC compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 152 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 76; e/ou o gRNA com alvo no gene B2M compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 466 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 417.
  45. 45. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 44, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a entrega à composição de um gRNA com alvo em um gene da proteína 1 de morte celular programada (PD1).
  46. 46. Método, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene PD1 compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID
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    NOs: 1083-1274 e/ou tem alvo na sequência nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 891-1082.
  47. 47. Método, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene PD1 compreende a sequência nudeotídica de SEQ ID NO: 1086 e/ou tem alvo na sequência nudeotídica de SEQ ID NO: 894.
  48. 48. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 47, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a entrega à composição de um gRNA com alvo em um gene de proteína 4 associado a llnfócitos T citotóxicos (CTLA-4).
  49. 49. Método, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene CTLA-4 compreende a sequência nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1289-1298 e/ou tem alvo na sequência nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1278-1287.
  50. 50. Método, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene CTLA-4 compreende a sequência nudeotídica de SEQ ID NO: 1292 e/ou tem alvo na sequência nudeotídica de SEQ ID NO: 1281.
  51. 51. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 50, caracterizada pelo fato de que a nuclease guiada por RNA é uma nuclease Cas9, opcionalmente uma nudease Cas9 de Streptococcus pyogenes.
  52. 52. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 51, caracterizada pelo fato de que o vetor é um vetor viral adenoassociado (AAV), opcionalmente um vetor do serotipo 6 do AAV (AAV6).
  53. 53. Método, de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo fato de que o vetor AAV compreende a sequência nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1354-1357.
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    11/35
  54. 54. Método, de acordo com a reivindicação 53, caracterizado pelo fato de que o vetor AAV compreende a sequência nudeotídica de SEQ ID NOs: 1354.
  55. 55. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 54, caracterizado pelo fato de que o modelo doador compreende a sequência nudeotídica, como definida em qualquer uma das reivindicações 1390-1393.
  56. 56. Método, de acordo com a reivindicação 55, caracterizado pelo fato de que o modelo doador compreende a sequência nudeotídica de SEQ ID NOs: 1390.
  57. 57. Célula T manipulada adequada para transplante alogênico, caracterizada pelo fato de que é produzida pelo método, como definido em qualquer uma das reivindicações 35 a 56.
  58. 58. Célula T manipulada, caracterizada pelo fato de que compreende um gene da região constante da cadeia alfa do receptor de célula T (TRAC) modificado para compreender a sequência nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1390-1393.
  59. 59. Célula T manipulada, de acordo com a reivindicação 58, caracterizada pelo fato de que o gene TRAC é modificado para compreender a sequência nudeotídica da SEQ ID NO: 1390.
  60. 60. Célula T manipulada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 58 ou 59, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gene interrompido beta-2-microglobulina (B2M).
  61. 61. Célula T manipulada, caracterizada pelo fato de que compreende um gene da região constante da cadeia alfa do receptor de célula T (TRAC) modificado para compreender um receptor de antígeno quimérico (CAR) e uma deleção da sequência nudeotídica da SEQ ID NO: 76, em relação a uma célula T não modificada.
  62. 62. Célula T manipulada, de acordo com a reivindicação 61, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gene
    Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 783/1851
    12/35 interrompido beta-2-microglobulina (B2M).
  63. 63. Método para manipular uma célula T do receptor de antígeno quimérico (CAR), caracterizado pelo fato de que compreende (a) entrega à célula T:
    uma nuclease guiada por RNA e um gRNA com alvo em um gene TRAC; e um modelo doador que compreende um ácido nucleico que codifica um CAR, em que o ácido nucleico é flanqueado pelos braços de homologia esquerdo e direito ao gene TRAC e em que a recombinação homóloga do modelo doador no gene TRAC resulta na inserção do CAR e uma deleção e/ou mutação no gene TRAC; e (b) produção de uma célula T CAR.
  64. 64. Método, de acordo com a reivindicação 63, caracterizado pelo fato de que a deleção é uma deleção de 20 pares de bases de nucleotídeos.
  65. 65. Método para manipulação de células T compreendendo uma molécula de interesse, caracterizado pelo fato de que compreende (a) entrega à célula T uma nuclease guiada por RNA e um gRNA com alvo em um gene TRAC, em que o gRNA compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 152; e um modelo doador que compreende um ácido nucleico que codifica uma molécula de interesse, em que o ácido nucleico é flanqueado por um braço de homologia esquerdo e direito ao gene TRAC, em que o braço de homologia esquerdo compreende a SEQ ID NO: 1325 e o braço de homologia direito compreende SEQ ID NO: 1326, e em que a recombinação homóloga do modelo doador no gene TRAC resulta na inserção da molécula de interesse e, opcionalmente, uma deleção no gene TRAC: e
    Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 784/1851
    13/35 (b) produzir uma célula T compreendendo a molécula de interesse.
  66. 66. Método para manipulação de células T compreendendo uma molécula de interesse, caracterizado pelo fato de que compreende (a) entrega à célula T uma nuclease guiada por RNA e um gRNA com alvo em um gene TRAC, em que o gRNA compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NOs: 83-158; e um modelo doador que compreende um ácido nucleico que codifica uma molécula de interesse, em que o ácido nucleico é flanqueado por um braço de homologia esquerdo e direito ao gene TRAC, em que o braço de homologia esquerdo compreende a SEQ ID NO: 1322, 1324, 1325, 1327, 1578, 1579 ou 1581 e o braço de homologia direito compreende a SEQ ID NO: 1323, 1326, 1328, 1580 ou 1582 e em que a recombinação homóloga do modelo doador no gene TRAC resulta na inserção da molécula de interesse e, opcionalmente, uma deleção e/ou mutação no gene TRAC; e (b) produzir uma célula T compreendendo a molécula de interesse.
  67. 67. População de células, caracterizada pelo fato de que compreende:
    células T manipuladas que compreendem um gene da região constante da cadeia alfa do receptor de célula T (TRAC) interrompido pela inserção de um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR) compreendendo (i) um ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo antiCD70, (ii) um domínio transmembranar CD8, e (iii) um endodomínio que compreende um domínio coestimulador de CD28 ou 41 BB e opcionalmente um domínio coestimulador de CD3z; e
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    14/35 um gene interrompido de beta-2-microglobulina (B2M), em que pelo menos 70% das células T manipuladas não expressam um nível detectável de proteína de superfície de TCR e não expressam um nível detectável de proteína de superfície B2M e/ou em que, pelo menos, 50% das células T manipuladas expressam um nível detectável do CAR.
  68. 68. População de células, de acordo com a reivindicação 67, caracterizada pelo fato de que as células T modificadas são não purificadas e/ou não enriquecidas.
  69. 69. População de células, de acordo com a reivindicação 67 ou 68, caracterizada pelo fato de que a população de células não é purificada e/ou não é enriquecida.
  70. 70. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 69, caracterizada pelo fato de que o fragmento de anticorpo anti-CD70 é um fragmento de anticorpo anti-CD70 scFv.
  71. 71. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 70, caracterizada pelo fato de que o fragmento de anticorpo anti-CD70 é um fragmento de anticorpo anti~CD70 humanizado.
  72. 72. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 71, caracterizada pelo fato de que:
    o fragmento de anticorpo anti-CD70 é codificado pela sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1475 ou 1476 e/ou em que o fragmento de anticorpo anti-CD70 compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1499 ou 1500;
    o fragmento de anticorpo anti-CD70 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1592; e/ou o fragmento de anticorpo anti-CD70 compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:
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    15/35
    1593.
  73. 73. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 72, caracterizada pelo fato de que o ectodomínio do CAR compreende ainda um peptídeo sinal, opcionalmente um peptídeo sinal CD8.
  74. 74. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 73, caracterizada pelo fato de que o CAR compreende ainda um domínio de dobradiça, opcionalmente um domínio de dobradiça CD8, localizado entre o fragmento de anticorpo anti-CD70 e o domínio transmembranar CD8.
  75. 75. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 74, caracterizada pelo fato de que o CAR compreende o seguinte arranjo estrutural do terminal N ao terminal C: o ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo anti-CD70, um domínio de dobradiça CD8, o domínio transmembranar CD8 e o endodomínio que compreende um domínio coestimulador de CD28 ou 41 BB e um domínio coestimulador de CD3z.
  76. 76. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 75, caracterizada pelo fato de que o CAR é codificado pela sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1423, 1424 ou 1275, e/ou em que o CAR compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1449, 1450 ou 1276.
  77. 77. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 76, caracterizada pelo fato de que pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% das células T modificadas não expressam um nível detectável de proteína de superfície TCR.
  78. 78. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 77, caracterizada pelo fato de que pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, ou pelo
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    16/35 menos 75% das células T modificadas expressam um nível detectável do CAR.
  79. 79. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 78, caracterizada pelo fato de que pelo menos 50% das células T manipuladas expressam um nível detectável do CAR e não expressam um nível detectável de proteína de superfície TCR ou proteína de superfície B2M.
  80. 80. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 79, caracterizada pelo fato de que a cocultura da célula T manipulada com células B CD70+ resulta em lise de pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70% ou pelo menos 75% das células B CD70*.
  81. 81. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 80, caracterizada pelo fato de que as células T manipuladas produzem interferon gama na presença de células CD70+.
  82. 82. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 81, caracterizada pelo fato de que as células T manipuladas não proliferam na ausência de estimulação de citocinas, estimulação de fator de crescimento ou estimulação de antígeno.
  83. 83. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 82, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gene interrompido da proteína 1 (PD1) da morte celular programada, opcionalmente em que, pelo menos, 80% das células T manipuladas não expressam um nível detectável de proteína de superfície PD1.
  84. 84. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 83, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gene interrompido da proteína 4 associada a llnfócitos T citotóxicos (CTLA-4), opcionalmente em que, pelo menos, 80% das células T manipuladas não expressam um nível detectável de proteína
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    17/35 de superfície CTLA-4.
  85. 85. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 84, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gRNA com alvo no gene TRAC, um gRNA direcionado ao gene B2M e proteína Cas9.
  86. 86. População de células, de acordo com a reivindicação 85, caracterizada pelo fato de que:
    o gRNA com alvo no gene TRAC compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 83-158 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 7-82; e/ou o gRNA com alvo no gene B2M compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 458-506 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 409-457.
  87. 87. População de células, de acordo com a reivindicação 86, caracterizada pelo fato de que:
    o gRNA com alvo no gene TRAC compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 152 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 76; e/ou o gRNA com alvo no gene B2M compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 466 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 417.
  88. 88. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 84 a 87, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gRNA com alvo no gene PD1.
  89. 89. População de células, de acordo com a reivindicação 88, caracterizada pelo fato de que o gRNA com alvo no gene PD1 compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1083-1274 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 891-1082.
  90. 90. População de células, de acordo com a reivindicação
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    18/35
    89, caracterizada peio fato de que o gRNA com alvo no gene PD1 compreende a sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1086 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 894.
  91. 91. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 84 a 90, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gRNA com alvo no gene CTLA-4.
  92. 92. População de células, de acordo com a reivindicação 91, caracterizada pelo fato de que o gRNA com alvo no gene CTLA-4 compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1289-1298 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1278-1287.
  93. 93. População de células, de acordo com a reivindicação 92, caracterizada pelo fato de que o gRNA com alvo no gene CTLA-4 compreende a sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1292 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 1281.
  94. 94. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 93, caracterizada pelo fato de que as células T manipuladas da população de células compreendem uma deleção da sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 76, em relação às células T não modificadas.
  95. 95. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 94, caracterizada pelo fato de que o gene B2M interrompido compreende uma inserção de, pelo menos, um par de bases nucleotídicas e/ou uma deleção de, pelo menos, um par de bases nucleotídicas.
  96. 96. População de células, de acordo com a reivindicação 95, caracterizada pelo fato de que um gene B2M interrompido das células T manipuladas compreende, pelo menos, uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1560; SEQ ID NO: 1561; SEQ ID NO: 1562; SEQ ID NO: 1563; SEQ ID NO:
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    1564; e SEQ ID NO: 1565.
  97. 97. População de células, de acordo com a reivindicação 96, caracterizada pelo fato de que pelo menos 16% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1560; pelo menos 6% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1561; pelo menos 4% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1562; pelo menos 2% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1563; pelo menos 2% das células compreendem um gene B2IVI editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1564; e pelo menos 2% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1565.
  98. 98. Método para reduzir o volume de um tumor em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao sujeito uma dose de uma composição farmacêutica compreendendo a população de células, como definida em qualquer uma das reivindicações 67 a 97, e reduzir o volume do tumor no sujeito em, pelo menos, 50% em relação ao controle, opcionalmente, em que a composição compreende 1x105 a 1x10® células de população.
  99. 99. Método para aumentar a taxa de sobrevivência em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao sujeito uma dose de uma composição farmacêutica compreendendo a população de células, como definida em qualquer uma das reivindicações 67 a 98, e aumentar a taxa de sobrevivência no sujeito em, pelo menos, 50% em relação ao controle, e opcionalmente, em que a composição compreende a 1x105 a 1x106 células da população.
  100. 100. Método, de acordo com a reivindicação 98 ou 99, caracterizado pelo fato de que o controle é um sujeito não tratado.
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  101. 101. Método para produzir uma célula T manipulada adequada para transplante alogênico, caracterizado pelo fato de que compreende (a) entrega a uma composição compreendendo uma célula T:
    uma nuclease guiada por RNA;
    um gRNA com alvo em um gene TRAC;
    um gRNA com alvo em um gene B2M; e um vetor compreendendo um modelo doador que compreende um ácido nucleico que codifica um CAR, em que o CAR compreende (I) um ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo anti-CD70, (ii) um domínio transmembranar CD8 e (ill) um endodomínio que compreende um domínio coestimulador de CD28 ou 41 BB e opcionalmente um domínio coestimulador de CD3z, em que o ácido nucleico que codifica o CAR é flanqueado nos braços de homologia esquerdo e direito ao locus do gene TRAC; e (b) produzir uma célula T manipulada adequada para transplante alogênico.
  102. 102. Método, de acordo com a reivindicação 101, caracterizado pelo fato de que o fragmento de anticorpo anti-CD70 é um fragmento de anticorpo anti~CD70 scFv.
  103. 103. Método, de acordo com a reivindicação 101 ou 102, caracterizado pelo fato de que o fragmento de anticorpo anti-CD70 é um fragmento de anticorpo anti~CD70 humanizado.
  104. 104. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 103, caracterizado pelo fato de que:
    o fragmento de anticorpo anti-CD70 é codificado pela sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1475 ou 1476 e/ou em que o fragmento de anticorpo anti~CD70 compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1499 ou 1500;
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    21/35 o fragmento de anticorpo anti-CD70 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1592; e/ou o fragmento de anticorpo anti-CD70 compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1593.
  105. 105. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 104, caracterizado pelo fato de que o ectodomínio do CAR compreende ainda um peptídeo sinal, opcionalmente um peptídeo sinal CD8.
  106. 106. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 105, caracterizado pelo fato de que o CAR compreende ainda um domínio de dobradiça, opcionalmente um domínio de dobradiça CD8, localizado entre o fragmento de anticorpo anti-CD70 e o domínio transmembranar CD8.
  107. 107. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 106, caracterizado pelo fato de que o CAR compreende o seguinte arranjo estrutural do terminal N ao terminal C: o ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo anti-CD70, um domínio de dobradiça CD8, o domínio transmembranar CD8 e o endodomínio que compreende um domínio coestimulador de CD28 ou 41 BB e um domínio coestimulador de CD3z.
  108. 108. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 107, caracterizado pelo fato de que o CAR é codificado pela sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1423, 1424 ou 1275, e/ou em que o CAR compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1449, 1450 ou 1276.
  109. 109. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 108, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene TRAC compreende a sequência
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    22/35 nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 83-158 e/ou tem alvo na sequência nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 7-82; e/ou o gRNA com alvo no gene B2M compreende a sequência nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 458-506 e/ou tem alvo na sequência nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 409-457.
  110. 110. Método, de acordo com a reivindicação 109, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene TRAC compreende a sequência nudeotídica de SEQ ID NO: 152 e/ou tem alvo na sequência nudeotídica de SEQ ID NO: 76; e/ou o gRNA com alvo no gene B2M compreende a sequência nudeotídica de SEQ ID NO: 466 e/ou tem alvo na sequência nudeotídica de SEQ ID NO: 417.
  111. 111. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 110, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a entrega à composição de um gRNA com alvo em um gene da proteína 1 de morte celular programada (PD1).
  112. 112. Método, de acordo com a reivindicação 111, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene PD1 compreende a sequência nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1083-1274 e/ou tem alvo na sequência nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 891-1082.
  113. 113. Método, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene PD1 compreende a sequência nudeotídica de SEQ ID NO: 1086 e/ou tem alvo na sequência nudeotídica de SEQ ID NO: 894.
  114. 114. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 113, caracterizada pelo fato de que compreende ainda a entrega à composição de um gRNA com alvo em um gene de proteína 4 associado a linfódtos T citotóxicos (CTLA-4).
    Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 794/1851
    23/35
  115. 115. Método, de acordo com a reivindicação 114, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene CTLA-4 compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1289-1298 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1278-1287.
  116. 116. Método, de acordo com a reivindicação 115, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene CTLA-4 compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 1292 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 1281.
  117. 117. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 116, caracterizado pelo fato de que a nuclease guiada por RNA é uma nuclease Cas9, opcionalmente uma nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes.
  118. 118. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 117, caracterizado pelo fato de que o vetor é um vetor viral adenoassociado (AAV), opcionalmente um vetor do serotipo 6 (AAV6) do AAV.
  119. 119. Método, de acordo com a reivindicação 118, caracterizado pelo fato de que o vetor AAV compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1358-1360.
  120. 120. Método, de acordo com a reivindicação 119, caracterizado pelo fato de que o vetor AAV compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NOs: 1360.
  121. 121. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 120, caracterizado pelo fato de que o modelo doador compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1394-1396.
  122. 122. Método, de acordo com a reivindicação 121, caracterizado pelo fato de que o modelo doador compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NOs: 1396.
    Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 795/1851
    24/35
  123. 123. Célula T manipulada adequada para transplante alogênico, caracterizada pelo fato de que é produzida pelo método, como definido em qualquer uma das reivindicações 101 a 122.
  124. 124. Célula T manipulada, caracterizada pelo fato de que compreende um gene da região constante da cadeia alfa do receptor de célula T (TRAC) modificado para compreender a sequência nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1394-1396.
  125. 125. Célula T manipulada, de acordo com a reivindicação 124, caracterizada pelo fato de que o gene TRAC é modificado para compreendera sequência nudeotídica da SEQ ID NO: 1396.
  126. 126. Célula T manipulada, de acordo com a reivindicação 124 ou 125, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gene interrompido beta-2-microglobulina (B2M).
  127. 127. População de células, caracterizada pelo fato de que compreende:
    células T manipuladas que compreendem um gene da região constante da cadeia alfa do receptor de célula T (TRAC) interrompido pela inserção de um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR) compreendendo (i) um ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo antiBCMA, (ii) um domínio transmembranar CD8, e (iii) um endodomínio que compreende um domínio coestimulador de CD28 ou 41 BB e opcionalmente um domínio coestimulador de CD3z; e um gene interrompido de beta-2-mlcroglobulina (B2M), em que pelo menos 70% das células T manipuladas não expressam um nível detectável de proteína de superfície de TCR e não expressam um nível detectável de proteína de superfície B2M e/ou em que, pelo menos, 50% das células T manipuladas expressam um nível detectável do CAR.
  128. 128. População de células, de acordo com a reivindicação
    Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 796/1851
    25/35
    127, caracterizada peio fato de que as células T modificadas são não purificadas e/ou não enriquecidas.
  129. 129. População de células, de acordo com a reivindicação 127 ou 128, caracterizada pelo fato de que a população de células não é purificada e/ou não é enriquecida.
  130. 130. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 129, caracterizada pelo fato de que o fragmento de anticorpo anti-BCMA é um fragmento de anticorpo antiBCMA scFv.
  131. 131. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 130, caracterizada pelo fato de que o fragmento de anticorpo anti-BCMA é um fragmento de anticorpo antiBCMA humanizado.
  132. 132. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 131, caracterizada pelo fato de que:
    o fragmento de anticorpo anti-BCMA é codificado pela sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1479 ou 1485 em que o fragmento de anticorpo anti-BCMA compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1503 ou 1509:
    o fragmento de anticorpo anti-BCMA compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1589 ou 1524; e/ou o fragmento de anticorpo anti-BCMA compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1590 ou 1526.
  133. 133. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 132, caracterizada pelo fato de que o ectodomínio do CAR compreende ainda um peptídeo sinal, opcionalmente um peptídeo sinal CD8.
  134. 134. População de células, de acordo com qualquer uma
    Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 797/1851
    26/35 das reivindicações 127 a 133, caracterizada pelo fato de que o CAR compreende ainda um domínio de dobradiça, opcionalmente um domínio de dobradiça CD8, localizado entre o fragmento de anticorpo anti-BCMA e o domínio transmembranar CD8.
  135. 135. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 134, caracterizada peio fato de que o CAR compreende o seguinte arranjo estrutural do terminal N ao terminal C: o ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo anti-BCMA, um domínio de dobradiça CD8, o domínio transmembranar CD8 e o endodomínio que compreende um domínio coestimulador de CD28 ou 41 BB e um domínio coestimuiador de CD3z.
  136. 136. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 135, caracterizada pelo fato de que o CAR é codificado pela sequência nudeotídica da SEQ ID NO: 1427,1428,1434 ou 1435, e/ou em que o CAR compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1453, 1454, 1460 ou 1461.
  137. 137. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 136, caracterizada pelo fato de que pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% das células T modificadas não expressam um nível detectável de proteína de superfície TCR.
  138. 138. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 136, caracterizada pelo fato de que pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, ou pelo menos 75% das células T modificadas expressam um nível detectável do CAR.
  139. 139. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 138, caracterizada pelo fato de que pelo menos 50% das células T manipuladas expressam um nível detectável do CAR e não expressam um nível detectável de proteína de superfície
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    TCR ou proteína de superfície B2M.
  140. 140. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 139, caracterizada pelo fato de que a cocultura da célula T manipulada com células B BCMA+ resulta em lise de pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70% ou pelo menos 75% das células B BCMA+.
  141. 141. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 140, caracterizada pelo fato de que as células T manipuladas produzem interferon gama na presença de células BCMA+.
  142. 142. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 141, caracterizada pelo fato de que as células T manipuladas não proliferam na ausência de estimulação de citocinas, estimulação de fator de crescimento ou estimulação de antígeno.
  143. 143. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 142, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gene interrompido da proteína 1 (PD1) da morte celular programada, opcionalmente em que, pelo menos, 80% das células T manipuladas não expressam um nível detectável de proteína de superfície PD1.
  144. 144. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 143, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gene interrompido da proteína 4 associada a linfócitos T citotóxicos (CTLA-4), opcionalmente em que, pelo menos, 80% das células T manipuladas não expressam um nível detectável de proteína de superfície CTLA-4.
  145. 145. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 144, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gRNA com alvo no gene TRAC, um gRNA direcionado ao gene B2M e proteína Cas9.
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    28/35
  146. 146. População de células, de acordo com a reivindicação 145, caracterizada pelo fato de que:
    o gRNA com alvo no gene TRAC compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 83-158 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 7-82; e/ou o gRNA com alvo no gene B2M compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 458-506 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 409-457.
  147. 147. População de células, de acordo com a reivindicação 146, caracterizada pelo fato de que:
    o gRNA com alvo no gene TRAC compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 152 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 76; e/ou o gRNA com alvo no gene B2M compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 466 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 417.
  148. 148. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 144 a 147, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gRNA com alvo no gene PD1.
  149. 149. População de células, de acordo com a reivindicação 148, caracterizada pelo fato de que o gRNA com alvo no gene PD1 compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1083-1274 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 891-1082.
  150. 150. População de células, de acordo com a reivindicação 149, caracterizada pelo fato de que o gRNA com alvo no gene PD1 compreende a sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1086 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 894.
  151. 151. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 144 a 150, caracterizada pelo fato de que
    Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 800/1851
    29/35 compreende ainda um gRNA com alvo no gene CTLA-4.
  152. 152. População de células, de acordo com a reivindicação 151, caracterizada pelo fato de que o gRNA com alvo no gene CTLA-4 compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1289-1298 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1278-1287.
  153. 153. População de células, de acordo com a reivindicação 152, caracterizada pelo fato de que o gRNA com alvo no gene CTLA-4 compreende a sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1292 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 1281.
  154. 154. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 153, caracterizada pelo fato de que as células T manipuladas da população de células compreendem uma deleção da sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 76, em relação às células T não modificadas.
  155. 155. População de células, de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 154, caracterizada pelo fato de que o gene B2M interrompido compreende uma inserção de, pelo menos, um par de bases nucleotídicas e/ou uma delação de, pelo menos, um par de bases nucleotídicas.
  156. 156. População de células, de acordo com a reivindicação 155, caracterizada pelo fato de que um gene B2M interrompido das células T manipuladas compreende, pelo menos, uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1560; SEQ ID NO: 1561; SEQ ID NO: 1562; SEQ ID NO: 1563; SEQ ID NO: 1564; e SEQ ID NO: 1565.
  157. 157. População de células, de acordo com a reivindicação 156, caracterizada pelo fato de que pelo menos 16% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1560; pelo menos 6% das células compreendem um
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    30/35 gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1561; pelo menos 4% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1562; pelo menos 2% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1563; pelo menos 2% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1564; e pelo menos 2% das células compreendem um gene B2M editado para compreender o nucleotídeo da SEQ ID NO: 1565.
  158. 158. Método para reduzir o volume de um tumor em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao sujeito uma dose de uma composição farmacêutica compreendendo a população de células, como definida em qualquer uma das reivindicações 127 a 157, e reduzir o volume do tumor no sujeito em pelo menos 50% em relação ao controle, opcionalmente, em que a composição compreende a 1x105 a 1x106 células da população.
  159. 159. Método para aumentar a taxa de sobrevivência em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreendendo administrar ao sujeito uma dose de uma composição farmacêutica compreendendo a população de células, como definida em qualquer uma das reivindicações 127 a 158, e aumentar a taxa de sobrevivência no sujeito em, pelo menos, 50% em relação ao controle, e opcionalmente, em que a composição compreende a 1x105 a 1x10® células da população.
  160. 160. Método, de acordo com a reivindicação 158 ou 159, caracterizado pelo fato de que o controle é um sujeito não tratado.
  161. 161. Método para produzir uma célula T manipulada adequada para transplante alogênico, caracterizado pelo fato de que compreende (a) entregar a uma composição compreendendo uma célula T:
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    31/35 uma nuclease guiada por RNA;
    um gRNA com alvo em um gene TRAC;
    um gRNA com alvo em um gene B2M; e um vetor compreendendo um modelo doador que compreende um ácido nucleico que codifica um CAR, em que o CAR compreende (i) um ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo anti-BCMA, (ii) um domínio transmembranar CD8 e (iii) um endodomínio que compreende um domínio coestimulador de CD28 ou 41 BB e opcionalmente um domínio coestimulador de CD3z, em que o ácido nucleico que codifica o CAR é flanqueado nos braços de homologia esquerdo e direito ao locus do gene TRAC e (b) produzir uma célula T manipulada adequada para transplante alogênico.
  162. 162. Método, de acordo com a reivindicação 161, caracterizado pelo fato de que o fragmento de anticorpo anti-BCMA é um fragmento de anticorpo anti-BCMA scFv.
  163. 163. Método, de acordo com a reivindicação 161 ou 162, caracterizado pelo fato de que o fragmento de anticorpo anti-BCMA é um fragmento de anticorpo anti-BCMA humanizado.
  164. 164. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 161 a 163, caracterizado pelo fato de que o fragmento de anticorpo anti-BCMA é codificado pela sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1333 e/ou em que o fragmento de anticorpo anti-BCMA compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1334;
    o fragmento de anticorpo anti-BCMA compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1589 ou 1524; e/ou o fragmento de anticorpo anti-BCMA compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID
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    NO: 1590 ou 1526.
  165. 165. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 161 a 164, caracterizado pelo fato de que o ectodomínio do CAR compreende ainda um peptídeo sinal, opcionalmente um peptídeo sinal CD8.
  166. 166. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 161 a 165, caracterizado pelo fato de que o CAR compreende ainda um domínio de dobradiça, opcionalmente um domínio de dobradiça CD8, localizado entre o fragmento de anticorpo anti-BCMA e o domínio transmembranar CD8.
  167. 167. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 161 a 166, caracterizado pelo fato de que o CAR compreende o seguinte arranjo estrutural do terminal N ao terminal C: o ectodomínio que compreende um fragmento de anticorpo anti-BCMA, um domínio de dobradiça CD8, o domínio transmembranar CD8 e o endodomínio que compreende um domínio coestimulador de CD28 ou 41 BB e um domínio coestimulador de CD3z.
  168. 168. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 161 a 167, caracterizado pelo fato de que o CAR é codificado pela sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 1316 e/ou em que o CAR compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1338.
  169. 169. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 161 a 168, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene TRAC compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 83-158 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 7-82; e/ou o gRNA com alvo no gene B2M compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 458-506 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 409-457.
    Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 804/1851
    33/35
  170. 170. Método, de acordo com a reivindicação 169, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene TRAC compreende a sequência nucieotídica de SEQ ID NO: 152 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 76; e/ou o gRNA com alvo no gene B2M compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 466 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 417.
  171. 171. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 161 a 170, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a entrega à composição de um gRNA com alvo em um gene da proteína 1 de morte celular programada (PD1).
  172. 172. Método, de acordo com a reivindicação 171, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene PD1 compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1083-1274 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 891-1082.
  173. 173. Método, de acordo com a reivindicação 172, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene PD1 compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 1086 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 894.
  174. 174. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 161 a 173, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a entrega à composição de um gRNA com alvo em um gene de proteína 4 associado a linfócitos T citotóxicos (CTLA-4).
  175. 175. Método, de acordo com a reivindicação 174, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene CTLA-4 compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1289-1298 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1278-1287.
    Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 805/1851
    34/35
  176. 176. Método, de acordo com a reivindicação 175, caracterizado pelo fato de que o gRNA com alvo no gene CTLA-4 compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 1292 e/ou tem alvo na sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 1281.
  177. 177. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 161 a 176, caracterizado pelo fato de que a nuclease guiada por RNA é uma nuclease Cas9, opcionalmente uma nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes.
  178. 178. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 161 a 177, caracterizado pelo fato de que o vetor é um vetor viral adenoassociado (AAV), opcionalmente um vetor do serotipo 6 (AAV6) do AAV.
  179. 179. Método, de acordo com a reivindicação 178, caracterizado pelo fato de que o vetor AAV compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1365, 1366, 1372 ou 1373.
  180. 180. Método, de acordo com a reivindicação 179, caracterizado pelo fato de que o vetor AAV compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NOs: 1366 ou 1373.
  181. 181. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 161 a 180, caracterizado pelo fato de que o modelo doador compreende a sequência nucleotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1401, 1402, 1408 ou 1409.
  182. 182. Método, de acordo com a reivindicação 181, caracterizado pelo fato de que o modelo doador compreende a sequência nucleotídica de SEQ ID NOs: 1402 ou 1409.
  183. 183. Célula T manipulada adequada para transplante alogênico, caracterizada pelo fato de que é produzida pelo método, como definido em qualquer uma das reivindicações 161 a 182.
  184. 184. Célula T manipulada, caracterizada pelo fato de que
    Petição 870190115253, de 08/11/2019, pág. 806/1851
    35/35 compreende um gene da região constante da cadeia alfa do receptor de célula T (TRAC) modificado para compreender a sequência nudeotídica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1390-1393.
  185. 185. Célula T manipulada, de acordo com a reivindicação
    184, caracterizada pelo fato de que o gene TRAC é modificado para compreendera sequência nudeotídica da SEQ ID NO: 1390.
  186. 186. Célula T manipulada, de acordo com a reivindicação 184 ou 185, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um gene interrompido beta-2-microglobulina (B2M)
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