CN100594037C - 通过补体受体2定向的补体调节剂 - Google Patents

通过补体受体2定向的补体调节剂 Download PDF

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Abstract

对补体系统的调节是与补体激活有关的大量病理疾病的一种治疗形式。在制备靶向补体激活和疾病位点的补体抑制剂的策略中，公开了这样的组合物，该组合物包含与补体受体(CR)2连接的补体抑制剂。所公开的该组合物可以通过调节补体系统用于治疗病原性疾病和炎性疾病的方法中。

Description

通过补体受体2定向的补体调节剂
本申请要求2002年11月15日提交的美国临时申请号60/426,676的权益，这里将此临时申请的整体并入为参考文献。
背景技术
补体是一系列血液蛋白的总称，并且是免疫系统的主要效应子机制。补体激活和其在靶结构上的沉积可以引起直接的补体介导的细胞裂解，或者可以由于有效的炎症调节剂的产生和免疫效应细胞的募集和激活而间接地引起细胞或组织破坏。在补体途径中的各个点产生介导组织损害的补体激活产物。宿主组织上不适当的补体激活在许多自身免疫病和炎性疾病的病理学中起重要作用，并且也是造成与例如心肺炎症和移植排斥后的生物不相容性有关的许多病状的原因。补体抑制是治疗这些免疫介导的疾病和病状的潜在治疗方式。已经证明了系统地抑制补体的补体抑制蛋白在各种疾病的动物模型中(和在一些临床试验中)是有效的，但是在安全性和有效性方面，靶向疾病和补体激活位点的补体抑制剂提供了显著潜在的优点。
在健康个体中，通过在细胞表面表达补体抑制蛋白阻止宿主细胞膜上的补体沉积。这些补体抑制蛋白也常常以增加的水平在肿瘤细胞表面上表达，并且被认为是肿瘤细胞抵抗单克隆抗体(靶向肿瘤细胞和激活补体的单克隆抗体)介导的免疫治疗的重要起作用因素。
补体系统包含约30种蛋白质，并且是免疫系统的主要效应子机制之一。补体级联主要通过经典(通常是依赖于抗体的)或旁路(通常是非依赖于抗体的)途径激活。通过两种途径中任何一种途径的激活都引起了C3转化酶的产生，该C3转化酶是该级联的中心酶复合物。C3转化酶将血清C3切割成C3a和C3b，其中C3b共价地结合激活位点，并且引起C3转化酶的进一步产生(放大循环)。激活产物C3b(和只通过经典途径产生的C4b)和其分解产物是重要的调理素，并且参与促进细胞介导的靶细胞裂解(通过吞噬细胞和NK细胞)及免疫复合物转运和溶解。C3/C4激活产物和它们在免疫系统的各种细胞上的受体在调节细胞免疫应答方面也是重要的。C3转化酶参与C5转化酶形成，C5转化酶是一种复合物，切割C5以产生C5a和C5b。C5a具有有效的促炎和趋化特性，并且可以募集和激活免疫效应细胞。C5b的形成起始了终末补体途径，引起了补体蛋白质C6，C7，C8和(C9)n的顺序组装以形成膜攻击复合物(MAC或C5b-9)。靶细胞膜中MAC的形成可以引起直接的细胞裂解，但是也可以引起细胞激活和各种炎性调剂剂的表达/释放。
存在两大类的膜补体抑制剂；补体激活途径的抑制剂(抑制C3转化酶形成)，和终末补体途径的抑制剂(抑制MAC形成)。补体激活的膜抑制剂包括补体受体1(CR1)，衰变加速因子(DAF)和膜辅因子蛋白(MCP)。它们都具有如下蛋白质结构，该蛋白质结构由可变数量的称为短共有重复(SCR)的约60-70个氨基酸的重复单元组成，该短共有重复(SCR)是C3/C4结合蛋白的共同特征。已经鉴定了人补体激活抑制剂的啮齿类动物的同系物。啮齿类动物蛋白质Crry是广泛分布的补体激活抑制剂，其作用与DAF和MCP相似。尽管Crry看起来是啮齿类动物中功能上最重要的补体激活调节剂，但是啮齿类动物也表达DAF和MCP。尽管在人类中没有发现Crry同系物，但是在动物模型中Crry的研究和其用途具有临床相关性。
终末补体途径和宿主细胞膜上MAC的形成主要通过CD59活性来控制，CD59是广泛分布的20kD糖蛋白，其通过葡糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚附着质膜。在组装MAC时CD59结合C8和C9，并且阻止膜插入。
目前正在研究用于治疗与生物不相容性相关的炎性疾病和病状的各种类型的补体抑制蛋白。两种最具治疗特征的人补体抑制剂是可溶形式的补体受体1(sCR1)和抗C5单克隆抗体。这些系统活性的抑制蛋白在各种疾病的动物模型中以及最近在临床试验中已经显示了效力(1-5，6：#1037)。抗C5 mAb抑制C5a和MAC的产生，而sCR1是补体激活的抑制剂，并且也抑制C3激活产物的产生。在炎性和生物不相容性动物模型中，也已经证明可溶形式的人衰变加速因子(DAF)和膜辅因子蛋白(MCP)(补体激活的膜抑制剂)具有保护性(7-11)。CD59是补体的膜抑制剂，其阻断MAC的装配，但是不引起补体调理素或C3a和C5a的产生。已经产生了可溶形式的CD59，但是在体外，特别是在血清存在的情况下，其低的功能活性表明sCD59几乎没有或根本没有治疗效力(12-15)。
将补体抑制剂靶向补体激活和疾病位点可能改进它们的效力。因为补体在宿主防御和免疫复合物分解代谢中起重要的作用，所以定向的补体抑制剂也可以减少特别是长期补体抑制带来的潜在严重的副作用。最近，制备了装饰有唾液酸-Lewis x(sLex)的修饰形式的sCR1，并且表明其结合表达P和E选择蛋白的内皮细胞。在炎性疾病的啮齿类动物模型中，证明sCR1sLex是比sCR1更有效的治疗剂(16，17)。在体外可行性研究中，证明与保护未靶向细胞相比，抗体-DAF(18)和抗体-CD59(19)融合蛋白更有效地保护靶向的细胞免受补体的破坏。通过偶联抑制剂与膜插入肽，也已经获得了重组补体抑制剂的非特异性膜靶向(20，21)。
C3激活片段是在补体激活位点发现的丰富的补体调理素，并且它们做为各种C3受体的配体。这样的一种受体是补体受体2(CR2)，一种跨膜蛋白，它通过主要在成熟B细胞和滤泡树突细胞上的表达而在体液免疫中起重要的作用(22，23)。CR2是C3结合蛋白家族的成员，并且由15-16个短共有重复(SCR)结构域(这些蛋白质的特征性结构单元)组成，C3结合位点包含在2个N末端SCR中(24，25)。不同于补体激活抑制剂(DAF，MCP，CR1和Crry)，CR2不是补体抑制剂，并且它不结合C3b。CR2的天然配体是iC3b，C3dg和C3d，其是结合CR2两个N末端SCR结构域的C3b的细胞结合裂解片段(26，27)。C3的裂解最初引起C3b的产生及其在激活细胞表面上的沉积。C3b片段参与酶复合物的产生，该酶复合物扩大补体级联。在细胞表面上，特别是当在含有补体激活调节剂的宿主表面(即，大多数宿主组织)上沉积C3b时，C3b快速转化为失活的iC3b。即时在不存在膜结合的补体调节剂的情况下，也形成相当高水平的iC3b。随后，iC3b被血清蛋白酶消化为膜结合片段C3dg和C3d，但是这个过程相对慢(28，29)。因此，CR2的C3配体一旦产生后就相对长寿，并且以高浓度存在于补体激活位点。
发明内容
根据这里所体现和充分描述的本发明目的，一方面，本发明涉及通过CR2定向的补体活性调节剂。
本发明的其它优点部分地在下面的说明书中阐述，并且部分可以从说明书中显而易见，或者通过实施本发明可以获知。本发明的优点特别可以通过所附权利要求中指出的要素和组合来实现和获得。应当理解，前述一般性描述和下面详细的描述都是只是示例性和解释性的，并不限制本发明。
附图说明
包含在本说明书并且组成本说明书的一部分的附图与说明书一起示例了本发明的几种实施方式，用于解释本发明的原理。
图1表示CR2-补体抑制剂融合蛋白例子的示图。
图2表示纯化的重组融合蛋白和可溶补体抑制剂的SDS-PAGE和Western印迹分析。用考马斯亮蓝染色凝胶(10％丙烯酰胺)。利用补体抑制剂的抗体做为初级抗体显影Western印迹。
图3表示重组融合蛋白与C3调理的CHO细胞的结合。在缺乏C6的血清中温育抗体敏化的CHO细胞，洗涤并且与20μg/ml可溶补体抑制剂(黑色痕迹)或者在N末端(浅灰痕迹)或C末端(深灰痕迹)具有CR2的融合蛋白质温育。利用抗DAF或抗CD59 mAbs，通过流式细胞术检测重组蛋白的细胞结合。CHO细胞与PBS，而不是补体抑制剂的温育产生了与sDAF和sCD59相似的荧光谱。代表3次单独的试验。
图4表示通过表面等离子体共振(surface plasmon resonance)对CR2融合蛋白和C3d之间相互作用的分析。实线表示不同浓度的CR2融合蛋白。虚线表示拟合1∶1 Langmuir结合模型的曲线。
图5表示通过重组sDAF和DAF融合蛋白对补体介导的裂解的抑制。抗体敏化的CHO细胞(图a)或绵羊红细胞(图b)与重组蛋白和10％人血清(CHO细胞)或0.33％人血清(红细胞)温育。这些浓度引起了约90％未保护细胞的裂解。在37℃温育45分钟后测定裂解。通过在加热灭活的血清中温育细胞测定的背景裂解小于5％，并且该背景裂解被扣除。平均值+/-SD，n＝4。
图6表示通过重组sCD59和CD59融合蛋白对补体介导的裂解的抑制。抗体敏化的CHO细胞(图a)或绵羊红细胞(图b)与重组蛋白和10％人血清(CHO细胞)或0.33％人血清(红细胞)温育。这些浓度引起了约90％未保护细胞的裂解。在37℃温育45分钟后测定裂解。通过在加热灭活的血清中温育细胞测定的背景裂解小于5％，并且该背景裂解被扣除。平均值+/-SD，n＝4。
图7表示重组融合蛋白对U937细胞粘附的影响。用IgM抗体敏化绵羊红细胞，并且在缺乏C6的血清中温育。在500nM重组融合蛋白或PBS存在的情况下，C3调理的红细胞与U937细胞共温育。温育后，通过显微镜检测每个红细胞结合的平均U937细胞数。平均值+/-SD，n＝3。
图8表示成熟人CR2-DAF的核苷酸和预测的氨基酸序列。下划线的氨基酸表示CR2和DAF之间的连接序列。
图9表示成熟人CR2-CD59的核苷酸和预测的氨基酸序列。下划线的氨基酸表示CR2和CD59之间的连接序列。
图10表示成熟人DAF-CR2的核苷酸和预测的氨基酸序列。下划线的氨基酸表示DAF和CR2之间的连接序列。
图11表示成熟人CD59-CR2的核苷酸和预测的氨基酸序列。下划线的氨基酸表示CD59和CR2之间的连接序列。
图12表示含有CR2的融合蛋白靶向C3包被的CHO细胞。通过在10％抗CHO抗血清和10％C6耗竭的人血清中温育细胞(以阻止膜攻击复合物的形成和细胞裂解)，在CHO细胞上产生C3配体。洗细胞，并且与融合蛋白温育(20μg/ml，4℃，30分钟)。利用抗适当补体抑制剂(DAF或CD59)的抗体，通过流式细胞术分析检测结合。黑线：对照(无融合蛋白)；浅灰：在C末端的CR2；深灰：在N末端的CR2。
图13表示通过表面等离子体共振对CR2-DAF结合C3dg的分析。
图14表示通过表面等离子体共振对CR2-CD59结合C3dg的分析。
图15表示通过表面等离子体共振对DAF-CR2结合C3dg的分析。
图16表示通过表面等离子体共振对CD59-CR2结合C3dg的分析。
图17表示定向和未定向的DAF对补体介导的CHO细胞裂解的影响。用抗CHO抗血清(10％浓度，4℃，30分钟)敏化CHO细胞使其对补体敏感，随后在不同浓度的补体抑制蛋白存在的情况下，与10％的正常人血清(NHS)温育(37℃，60分钟)。然后通过台盼蓝排除测定法检测细胞裂解。代表性试验显示平均值+/-SD(n＝3)。利用不同的融合蛋白制备物进行3个单独的试验。
图18表示定向和未定向的CD59对补体介导的CHO细胞裂解的影响。如图17的图注中所述进行测定。代表性试验显示平均值+/-SD(n＝3)。利用不同的融合蛋白制备物进行3个单独的试验。
图19表示定向和未定向的DAF对补体介导的溶血的影响。用抗绵羊E抗体敏化绵羊红细胞(E)，随后在不同浓度的补体抑制蛋白存在的情况下，与1/300稀释度的NHS温育(37℃，60分钟)。通过测定释放的血红蛋白(在412nm的吸光度)检测细胞裂解。代表性试验显示平均值+/-SD(n＝3)。利用不同的融合蛋白制备物进行2个单独的试验。
图20表示定向和未定向的CD59对补体介导的溶血的影响。如图19的图注中所述进行测定。代表性试验表示平均值+/-SD(b＝3)。利用不同的融合蛋白制备物进行2个单独的试验。
图21表示成熟人CR2-人IgG1 Fc的核苷酸和预测的氨基酸序列。下划线的氨基酸表示CR2和Fc区之间的连接序列。表达质粒含有基因组Fc区(铰链-内含子-CH2-内含子-CH3)。
图22表示CR2-Fc融合蛋白的SDS-PAGE分析。在非还原(道1)或还原(道2)条件下电泳纯化的CR2-Fc。用考马斯亮蓝染色凝胶。(道3为分子量标记，参见图2)。
图23表示CR2-Fc靶向C3包被的CHO细胞。如所述(图12的图注)，产生C3配体。洗细胞并且与CR2-Fc温育(20μg/ml，4℃，30分钟)。利用缀合FITC的抗人Fc抗体，通过流式细胞术分析检测结合。上方的图表示CR2-Fc与C3包被的CHO细胞温育的结果，下方的图表示CR2-Fc与对照CHO细胞温育的结果。
图24表示表面等离子体共振的感应曲线(sensorgram)，该曲线显示CR2-Fc与固定在芯片上的C3d配体的结合。
图25表示在34周龄NZB/W F1小鼠中125I-CR2-DAF和125I-sDAF的生物分布。将放射性标记的蛋白质注射到尾部静脉中，并且24小时后检测放射性标记的生物分布。将每种蛋白质注射到2只小鼠中。
图26表示结合24周龄MRL/lpr小鼠肾小球的CR2-DAF的成像。每种蛋白质尾静脉注射后24小时分析CD2-DAF(a)和sDAF(b)的肾小球结合。该图表示肾截面的免疫荧光染色。
图27表示单链抗体CD59-Crry构建体。该图表示该构建体包含来源于K9/9mAb的可变轻链(VL)和可变重链(VH)。在酵母表达载体pPICZα(Invitrogen)中制备该构建体。
图28表示大鼠中补体抑制剂和K9/9单链Ab的生物分布。PAN处理后4天施用碘化重组蛋白质，48小时后测定器官中放射性。
图29表示在用PAN处理和接受所示治疗的大鼠中肌酸酐的清除(n＝4，+/-SD)。
图30表示PAS染色的肾皮质。图30A表示无PAN对照，图30B：PAN加PBS处理，图30C：PAN加定向的K9/9 Crry处理，和图30D：PAN加sCrry处理。
图31表示重组蛋白质给药后血清中补体抑制活性。通过敏化的绵羊红细胞的裂解来测量。所示是相对于来源于对照大鼠的血清的百分比抑制活性。
发明详述
通过参考下面本发明优选实施方式的详细描述及本文所包含的实施例，和参考附图和附图前后的描述可以更容易地理解本发明。
在公开和描述本发明的化合物、组合物、物品、装置和/或方法以前，应该理解除非另外的说明，本发明不限于特定的合成方法、特定的重组生物技术方法，或者特定的试剂，因为这些是当然可以改变的。也应该理解这里所用的术语仅仅旨在描述特定实施方式，而不意在限制。
A.定义
除了上下文另外明确地规定以外，说明书和所附权利要求中所用的单数形式“a/an”及“the”包括复数。因此，例如提到“a”药物载体包括两种或多种此类载体的混合物，等等。
这里可以将范围表示为从“约”一个特定数值，和/或到“约”另一个特定的数值。当表示这种范围时，另一种实施方式包括从一个特定的数值和/或到另一个特定的数值。相似地，通过利用先行词“约”将数值表示为近似值时，应理解特定的数值形成了另一个实施方式。也应理解每个范围的端点不论是相对于另一端点而言还是独立于另一端点而言都是有意义的。
在本说明书和随后权利要求书中，将提及大量的术语，所述术语被定义具有下面的含义：
“可选的”或“可选地”意指随后描述的事件或情形可以发生或可以不发生，并且该描述包括所述事件或情形发生的情况和所述事件或情形不发生的情况。
“治疗”意指向患有疾病的对象施用组合物，其中该疾病可以是任何病原性疾病，自身免疫病，癌症或炎性疾病。向对象施用组合物的效果可以是但不限于：减少疾病的症状、降低疾病的严重性或者完全消除疾病。
这里“抑制”意指减少活性。应理解抑制可以意指轻微的减少活性到完全去除所有活性。“抑制剂”可以是减少活性的任何物质。
这里“活化”或“激活”意指增加活性。应理解活化可以意指增加已有的活性及诱导新活性。“激活剂”可以是增加活性的任何物质。
B.补体抑制和激活构建体
本发明公开了包含如下构建体的组合物，其中该构建体包含CR2和补体活性调节剂。
CR2具有由15或16个称为短共有重复(SCR)的重复单元组成的细胞外部分。氨基酸第1-20位包含前导肽，氨基酸23-82包含SCR1，氨基酸91-146包含SCR2，氨基酸154-210包含SCR3，氨基酸215-271包含SCR4。活性位点(C3dg结合位点)位于SCR1-2(头2个N-末端SCR)中。SCR单元由作为间隔区的可变长度短序列分隔。应理解可以使用含有活性位点的任何数量的SCR。在一个实施方式中，构建体含有4个N-末端SCR单元。在另一个实施方式中，构建体含有头2个N-末端SCR。在另一个实施方式中，构建体含有头3个N-末端SCR。
可以理解对于公开的肽、多肽、蛋白质、蛋白质片段和组合物，存在物种和株系变异。特别公开所公开的肽、多肽、蛋白质、蛋白质片段和组合物的所有物种和株系变异。
也公开了组合物，其中构建体是融合蛋白。
这里的“融合蛋白”意指可操作地连接的包含肽、多肽或蛋白质的两个或多个成分。CR2可以通过氨基酸连接序列连接补体抑制剂或激活剂。接头的例子是本领域所熟知的。接头的例子可以包括但不限于(Gly4Ser)3(G4S)，(Gly3Ser)4(G3S)，SerGly4和SerGly4SerGly4。连接序列也可以由在人类(或小鼠)蛋白质中SCR单元之间发现的“天然”连接序列，例如VSVFPLE，人CR2的SCR2和3之间的连接序列组成。也可以构建无连接序列的融合蛋白。
也公开了本发明的组合物，其中融合蛋白抑制补体。
也公开了本发明的组合物，其中补体活性调节剂包含补体抑制剂。
也公开了本发明的组合物，例如，其中补体抑制剂是衰变加速因子(DAF)SEQ ID NO：1(核苷酸)和SEQ ID NO：2(氨基酸)。例如，DAF可以是没有糖基磷脂酰锚和丝氨酸-苏氨酸富集区的包含4个SCR结构域的可溶人DAF。DAF也可以是包含4个SCR结构域和丝氨酸-苏氨酸富集区但是没有糖基磷脂酰锚的可溶人DAF。
DAF细胞外区由N-末端的4个SCR单元及接着的丝氨酸-苏氨酸富集区组成。氨基酸1-34包含前导肽，氨基酸35-95包含SCR1，氨基酸97-159包含SCR2，氨基酸162-221包含SCR3，氨基酸224-284包含SCR4，氨基酸287-356包含S/T区。在本发明的一个实施方式中，本发明的组合物包含所有4个SCR单元。在本发明的另一个实施方式中，组合物包含DAF的SCR2-4。
公开了本发明的组合物，其中补体抑制剂包含CD59和另一补体抑制剂的融合蛋白，该另一补体抑制剂选自DAF，MCP，Crry和CR1。也公开了本发明的组合物，其中补体抑制剂是两种或多种补体抑制剂的融合蛋白。
也公开了本发明的组合物，其中融合蛋白包含CR2-DAF(SEQ IDNO：6)。也公开了本发明的组合物，其中由包含SEQ ID NO：5的核苷酸编码融合蛋白。
也公开了本发明的组合物，其中融合蛋白包含DAF-CR2(SEQ IDNO：10)。也公开了本发明的组合物，其中由包含SEQ ID NO：9的核苷酸编码融合蛋白。
也公开了本发明的组合物，其中补体抑制剂是人CD59(SEQ ID NO：3(核苷酸)和SEQ ID NO：4(氨基酸))。人CD59可以是可溶人CD59，其包含没有糖基磷脂酰锚的成熟蛋白。
也公开了本发明的组合物，其中融合蛋白包含CR2-人CD59(SEQ IDNO：8)。也公开了本发明的组合物，其中由包含SEQ ID NO：7的核苷酸编码融合蛋白。
也公开了本发明的组合物，其中融合蛋白包含人CD59-CR2(SEQ IDNO：12)。也公开了本发明的组合物，其中由包含SEQ ID NO：10的核苷酸编码融合蛋白。
也公开了本发明的组合物，其中补体抑制剂是抗C5的抗体。也公开了本发明的组合物，其中融合蛋白包含CR2-抗-C5抗体。
也公开了本发明的组合物，其中补体抑制剂是CR1(SEQ ID NO：13(核苷酸)和SEQ ID NO：14(氨基酸))。CR1的细胞外区域可以包含30个SCR单元。组合物可以包含CR1的整个细胞外区，这是本发明的一个实施方式。在本发明的另一个实施方式中，组合物包含CR1的一个或多个活性位点。CR1的活性位点是包含前导肽的氨基酸1-46，包含SCR1-4的氨基酸47-300(C4b结合位点，对C3b亲和性较低)，包含SCR8-11的氨基酸497-750(C3b结合位点，对C4b亲和性较低)，包含SCR15-18的氨基酸947-1200(C3b结合位点，对C4b亲和性较低)和包含C1q结合位点的氨基酸1400-1851。在本发明的另一个实施方式中，本发明的组合物可以包含CR1的任何一个活性位点或其活性位点的任意组合，或者所有的活性位点。
也公开了本发明的组合物，其中补体抑制剂包含CR1活性位点，并且其中此一个或多个活性位点进一步包括含有氨基酸6-46的前导肽，含有SCR1-4的氨基酸47-300(C4b结合位点，对C3b亲和性较低)，含有SCR8-11的氨基酸497-750(C3b结合位点，对C4b亲和性较低)，含有SCR15-18的氨基酸947-1200(C3b结合位点，对C4b亲和性较低)和含有C1q结合位点的氨基酸1400-1851。在本发明的另一个实施方式中，本发明的组合物可以包含CR1的任何一个活性位点或其活性位点的任意组合，或者所有的活性位点。
也公开了本发明的组合物，其中补体抑制剂是MCP(SEQ ID NO：15(核苷酸)和SEQ ID NO：16(氨基酸))。细胞外区域由4个SCR单元及接着的ser/thr区组成。氨基酸1-34包含前导肽，氨基酸35-95包含SCR1，氨基酸96-158包含SCR2，氨基酸159-224包含SCR3，氨基酸225-285包含SCR4，并且氨基酸286-314包含S/T区。
也公开了本发明的组合物，其中补体抑制剂是Crry(SEQ ID NO：17)。Crry可以是可溶的小鼠Crry，其包含5个N-末端SCR结构域且没有跨膜区。
也公开了本发明的组合物，其中补体抑制剂是鼠CD59。鼠CD59可以是可溶的鼠CD59，其包含没有糖基磷脂酰锚的成熟蛋白。
也公开了本发明的组合物，其中融合蛋白激活补体。
因此，也公开了本发明的组合物，其中补体活性的调节剂包含补体激活剂。
也公开了本发明的组合物，其中补体激活剂是人IgG1 Fc(SEQ IDNO：18)。
也公开了本发明的组合物，其中补体激活剂包含CR2-人IgG1 Fc(SEQID NO：20)。也公开了本发明的组合物，其中由包含SEQ ID NO：21的核苷酸编码融合蛋白。
公开了本发明的组合物，其中融合蛋白是人IgM(SEQ ID NO：19)。
也公开了本发明的组合物，其中融合蛋白包含CR2-人IgM Fc.
公开了本发明的组合物，其中补体激活剂是小鼠IgG3(SEQ IDNO：22).
也公开了本发明的组合物，其中融合蛋白包含CR2-鼠IgG3 Fc。
也公开了本发明的组合物，其中融合蛋白包含CR2-鼠IgM Fc。
特别可以想到通过组合物的Fc部分，补体激活剂也可以增加依赖于抗体的细胞介导的细胞毒性(ADCC)。ADCC指通过NK细胞上的Fc受体对Fc区的识别和接触，由天然杀伤(NK)细胞破坏靶细胞。这可以是IgG1Fc或IgG3 Fc的FcγRIII识别。Fc受体与Fc接触后，NK细胞通过使用穿孔素和粒酶裂解靶细胞。该机制在控制肿瘤生长方面是重要的。
公开了本发明的组合物，其中CR2-Fc融合蛋白不具有免疫原性。可以理解受试者自身的免疫应答不太可能攻击和失活不具免疫原性(即，不激发免疫应答)的组合物。预期CR2-Fc缺少免疫原性也使之潜在地优于抗C3d的抗体(即使抗体被人源化)。本发明的一个实施方式中，融合CR2的Fc区可以来源于任何人类或小鼠的IgG同种型，人类或小鼠的IgM，或者含有mu-尾片(mu-tailpiece)的任何人类或小鼠的IgG同种型。Mu-尾片(mu-tailpiece)是来源于IgM的18个氨基酸的C-末端区，当向IgG Fc序列C-末端添加时，引起了聚合形式IgG的产生(与IgM相似)，该聚合形式IgG有效地激活补体并且对Fc受体具有增强的亲和力。融合可以在组合物Fc部分的铰链区发生。
含有具mu-尾片的IgM或IgG Fc区的CR2融合蛋白可以优于CR2-IgG Fc融合蛋白。IgM或IgG-mu Fc区将导致产生具有多达6个Fc和12个CR2位点的聚合融合蛋白。这些构建体对于C3配体具有增强的亲合力并具有增强的效应子功能(补体激活和Fc受体结合)。
也公开了本发明的组合物，其中补体激活剂是CVF(SEQ ID NO：23(核苷酸)和SEQ ID NO：24(氨基酸))。
在本发明的一个实施方式中，CVF可以偶联可溶的CR2。可以理解CVF结合因子B并且通过形成CVFBb激活补体的旁路途径，CVFBb是一种不被补体抑制蛋白失活的C3/C5转化酶。CVFBb的半衰期是约7小时，相比较，对于生理旁路途径的转化酶C3bBb而言半衰期是约1分钟。
CVF可以化学偶联可溶的CR2是本发明的实施方式。
公开了本发明的组合物，其中构建体位于载体中。
公开了包含本发明载体的细胞。
也公开了组合物，其中构建体是免疫缀合物。这里“免疫缀合物”意指通过化学交联剂可操作地连接的两种或多种包含肽、多肽或蛋白质的成分。可以在位于该成分上的反应性基团上发生免疫缀合物成分的连接。可以利用交联剂靶向的反应性基团包括伯胺、巯基、羰基、碳水化合物和羧酸，或者可以向蛋白质添加活性基团。化学交联剂的例子是本领域所熟知的，并且可以包括但不限于双马来酰亚氨基己烷，间马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯，NHS-酯-马来酰亚胺交联剂如MBS，磺基-MBS，SMPB，磺基-SMPB，GMBS，磺基-GMBS，EMCS，磺基-EMCS；亚氨酯交联剂如DMA，DMP，DMS，DTBP；EDC[1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐]，[2-(4-羟基苯基)乙基]-4-马来酰亚氨基甲基-环己烷-1-甲酰胺，DTME：二硫代-双-马来酰亚氨基乙烷，DMA(二甲基己二亚氨酸酯·2HCl，Dimethyl adipimidate)，DMP(二甲基庚二亚氨酸酯·2HCl，Dimethyl pimelimidate·2HCl)，DMS(二甲基辛二亚氨酸酯·2HCl，Dimethyl suberimidate·2HCl)，DTBP(二甲基3，3′-二硫代双丙亚氨酸·2HCl)，MBS(间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)，磺基-MBS(间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)，磺基-SMPB(磺基琥珀酰亚氨基4-[对马来酰亚氨基苯基]丁酸酯)，GMBS(N-[·-马来酰亚氨基丁酰氧基]琥珀酰亚胺酯)，EMCS(N-[·-马来酰亚氨基己酰氧基]琥珀酰亚胺酯)，和磺基-EMCS(N-[·-马来酰亚氨基己酰氧基]磺基琥珀酰亚胺酯).
C.使用组合物的方法
目前正在研究用于治疗与生物不相容性相关的炎性疾病和病状的各种类型的补体抑制蛋白。两种最具治疗特征的人补体抑制剂是可溶形式的补体受体1(sCR1)和抗C5单克隆抗体。这些系统活性的抑制蛋白在各种疾病的动物模型中以及最近在临床试验中已经显示了效力(1-5，6：#1037，这里将这些文献并入作为有关体内效力和临床结果的教导的参考)。
公开了在对象中治疗受补体影响的疾病的方法，该方法包括向对象施用本发明的组合物。可以理解向对象施用组合物可以具有但是不限于下面的作用：减少疾病的症状，降低疾病严重性或完全消除疾病。
1、使用组合物抑制补体的方法
公开了在对象中治疗受补体影响的疾病的方法，该方法包括向对象施用本发明的组合物，其中该组合物抑制补体活性。可以理解向对象施用组合物可以具有但是不限于下面的作用：减少疾病的症状，降低疾病严重性或完全消除疾病。
公开了减少补体介导的损害的方法，该方法包括向对象施用抑制补体的本发明的组合物。
公开了本发明的方法，其中所治疗的疾病是炎性疾病。也公开了本发明的方法，其中炎性疾病可以选自哮喘、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、反应性关节炎、脊椎关节炎、系统性血管炎、胰岛素依赖型糖尿病、多发性硬化、实验性变应性脑脊髓炎、舍格伦综合征、移植物抗宿主病、炎性肠病包括局限性回肠炎、溃疡性结肠炎、局部缺血再灌注损伤、心肌梗塞、阿尔茨海默氏病、移植排斥(同种异体和异种)、烧伤、任何免疫复合物诱导的炎症、肾小球肾炎、重症肌无力、脑狼疮、吉-巴综合征、血管炎、系统性硬化、过敏症、导管反应(catheter reactions)、粉瘤(atheroma)、不育、甲状腺炎、ARDS、post-bypass综合症、血液透析、幼年型类风湿、Behcets综合症、溶血性贫血、天疱疮、大疱性类天疱疮、中风、动脉粥样硬化和硬皮病。
也公开了本发明的方法，其中疾病是病毒感染。也公开了本发明的方法，其中病毒感染可以选自下面的病毒：甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、登革病毒、黄热病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙热病毒、东方马脑炎病毒、日本脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、Murray河谷脑炎病毒、西尼罗病毒、立夫特山谷热病毒、轮状病毒A、轮状病毒B、轮状病毒C、辛德毕斯病毒和汉坦病毒。
公开了本发明的方法，其中该疾病是对病毒载体的炎性反应。病毒载体可以选自下面的病毒：腺病毒、痘苗病毒、腺相关病毒、修饰的痘苗ancara病毒和巨细胞病毒。可以理解其它病毒载体可以用于疫苗递送。具体公开的是本领域已知的每种病毒载体。
本领域技术人员理解念珠菌属(Candida)表达CR3样蛋白质，该CR3样蛋白质具有与CR2相似的结合特性。CR3样蛋白质看起来参与发病机理。因此，本发明的一个实施方式是治疗真菌感染的患者，其中该治疗阻断了真菌“CR3”功能及抑制了补体，该方法包括给患者施子本发明的组合物。
公开了本发明的方法，其中补体抑制剂可以增强基于细胞调亡的治疗(例如，用表达Fas配体的腺病毒进行基因治疗)的结果。
正常发育期间出现的细胞调亡是非炎性的，并且参与了免疫耐受性的诱导。尽管根据如何和在什么类型的细胞中激活细胞调亡，细胞调亡也可以是炎性的(例如，连接Fas的治疗剂能诱导炎症)，但是坏死的细胞死亡能引起持久有效的炎性应答，其中由释放的细胞内含物和受刺激的吞噬细胞释放的促炎细胞因子介导该炎性应答。正常地，通过吞噬细胞清除调亡的细胞和小泡，由此阻止细胞裂解的促炎后果。在本发明上下文中，已经证明调亡细胞和凋亡小体直接固定补体，并且补体可以通过调理作用以及增强的对调亡细胞的吞噬作用来维持抗炎性应答。
炎症涉及免疫细胞的非特异性募集，其可以影响天然和适应性免疫应答。在基于细胞调亡的肿瘤治疗期间调节补体的激活以抑制凋亡细胞/小体的吞噬细胞摄取，将增强肿瘤环境中的炎性/天然免疫应答。此外，调亡的细胞可以是免疫原性自身抗原的来源，并且未清除的凋亡小体可以引起自身免疫。除了产生增强的免疫刺激环境外，在诱导肿瘤细胞发生细胞调亡的位点调节补体，还可以扩大或者触发特异性免疫，该特异性免疫对抗正常在宿主中具有耐受性的肿瘤。
本发明公开的组合物可以用作CR2和CR3拮抗剂。公开了通过抑制CR2来抑制补体活性的方法，该方法包括向对象施用本发明组合物。也公开了通过抑制CR3来抑制补体活性的方法，该方法包括向对象施用本发明组合物。正如CR2拮抗剂可以调节免疫应答，CR3拮抗剂可以具有第二抗炎作用机理，因为CR3是结合内皮ICAM1的整联蛋白。ICAM1在炎症位点表达，并且参与白细胞粘着和血细胞渗出。此外，补体激活产物可以上调ICAM1表达。
2、使用组合物激活补体的方法
公开了在对象中治疗受补体影响的疾病的方法，该方法包括向对象施用本发明的组合物，其中该组合物将激活补体。可以理解向对象给予组合物可以具有但是不限于下面的作用：减少疾病的症状，降低疾病严重性或完全去除疾病。
公开了增强补体介导的损害的方法，该方法包括向对象施用激活补体的本发明组合物。
也公开了本发明的方法，其中该疾病是癌症。癌症可以选自(霍奇金和非霍奇金)淋巴瘤，B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、髓性白血病、白血病、蕈样肉芽肿病、癌、实体组织癌、鳞状细胞癌、腺癌、肉瘤、神经胶质瘤、胚细胞瘤(blastoma)、神经母细胞瘤、浆细胞瘤、组织细胞瘤、黑素瘤、腺瘤、缺氧肿瘤(hypoxic tumour)、骨髓瘤、AIDS相关淋巴瘤或肉瘤、转移性癌症、膀胱癌、脑癌、神经系统癌、头和颈的鳞状细胞癌、神经母细胞瘤/成胶质细胞瘤、卵巢癌、皮肤癌、肝癌、黑素瘤、口腔、喉、咽和肺的鳞状细胞癌、结肠癌、宫颈恶性肿瘤(cervical cancer)、宫颈癌(cervical carcinoma)、乳腺癌、上皮癌、肾癌、泌尿生殖器癌症、肺癌、食管癌、头和颈癌、造血性癌症(hematopoietic cancer)、睾丸癌症、结肠-直肠癌、前列腺癌或胰腺癌。
在本发明的一个实施方式中，由于施用的抗肿瘤抗体或者由于正常无效的体液免疫应答，CR2可以靶向肿瘤细胞上沉积的补体。
因此，可以联合抗肿瘤抗体施用本发明的补体激活组合物。这种抗肿瘤抗体的例子是本领域熟知的，并且可以包括抗PSMA单克隆抗体J591，PEQ226.5和PM2P079.1(Fracasso，G.等，(2002)Prostate 53(1)：9-23)；抗Her2抗体hu4D5(Gerstner，R.B.，等，(2002)J.Mol.Biol.321(5)：851-62)；抗disialosyl Gb5单克隆抗体5F3，其可以用做抗肾细胞癌的抗体(Ito A.等，(2001)Glycoconj.J.18(6)：475-485)；抗MAGE单克隆抗体57B(Antonescu，C.R.等，(2002)Hum.Pathol.33(2)：225-9)；抗癌单克隆抗体CLN-Ig(Kubo，O.等，(2002)Nippon Rinsho.60(3)：497-503)；抗Dalton淋巴瘤相关抗原(DLAA)单克隆抗体DLAB(Subbiah，K.等，(2001)Indian J.Exp.Biol.39(10)：993-7)。只要当抗体存在于肿瘤部位时本发明组合物也可以存在于肿瘤部位，则本发明组合物可以在抗肿瘤抗体给药之前，同时或之后给药。
所公开的组合物可以用于治疗的代表性，但非限制性癌症如下：淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿病、多发性骨髓瘤、霍奇金病、髓性白血病、膀胱癌、脑癌、神经系统癌、头和颈癌、头和颈的鳞状细胞癌、肾癌、肺癌诸如小细胞肺癌和非小细胞肺癌、尿道上皮癌、腺癌、肉瘤、神经胶质瘤、高级神经胶质瘤、胚细胞瘤、神经母细胞瘤、浆细胞瘤、组织细胞瘤、腺瘤、缺氧肿瘤、骨髓瘤、AIDS相关淋巴瘤或肉瘤、转移性癌症、神经母细胞瘤/成胶质细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、肝癌、黑素瘤、口腔、喉、咽和肺的鳞状细胞癌、结肠癌、宫颈恶性肿瘤、宫颈癌、乳癌和上皮癌、肾癌、泌尿生殖器癌症、肺癌、食管癌、头和颈癌、大肠癌、造血性癌症、睾丸癌症、结肠直肠癌、胃癌、前列腺癌、瓦尔登斯特伦病或胰腺癌。
这里公开的补体激活组合物也可以用于治疗癌前疾病诸如宫颈和肛门发育异常、其它发育异常、严重发育异常、增生、不典型增生和瘤形成。公开了本发明的方法，其中疾病是癌前疾病。可以理解组合物将识别在癌前细胞表面上超表达的抗原。
也公开了利用本发明的补体激活组合物治疗病毒感染的方法。病毒感染可以选自下面的病毒：单纯疱疹病毒1型，单纯疱疹病毒2型，巨细胞病毒、EB病毒、水痘-带状疱疹病毒、人疱疹病毒6、人疱疹病毒7、人疱疹病毒8、天花病毒、水泡性口炎病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、鼻病毒、冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、麻疹病毒、多瘤病毒、人乳头瘤病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、柯萨奇病毒、登革病毒、腮腺炎病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、Rous肉瘤病毒、黄热病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙热病毒、东方马脑炎病毒、日本脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、Murray河谷脑炎病毒、西尼罗病毒、立夫特山谷热病毒、轮状病毒A、轮状病毒B、轮状病毒C、辛德毕斯病毒、猿猴免疫缺陷病毒、人T细胞白血病病毒1型，汉坦病毒、风疹病毒、猿免疫缺陷病毒、人免疫缺陷病毒1型和人免疫缺陷病毒2型。
也公开了利用本发明的补体激活组合物治疗细菌感染的方法。也公开了本发明的方法，其中细菌感染可以选自下面的细菌：结核分枝杆菌(M.tuberculosis)，牛分枝杆菌(M.bovis)，牛分枝杆菌株BCG，BCG亚株，鸟分枝杆菌(M.avium)，胞内分枝杆菌(M.intracellulare)，非洲分枝杆菌(M.africanum)，堪萨斯分枝杆菌(M.kansasii)，海分枝杆菌(M.marinum)，溃疡分枝杆菌(M.ulcerans)，鸟分枝杆菌副结核亚种(M.aviumsubspecies paratuberculosis)，星状诺卡氏菌(Nocardia asteroides)，其它诺卡氏菌属(Nocardia)物种，嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)，其它军团菌属(Legionella)物种，伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)，其它沙门氏菌属(Salmonella)物种，志贺氏菌属(Shigella)物种，鼠疫耶尔森氏菌(Yersiniapestis)，溶血巴斯德氏菌(Pasteurella haemolytica)，多杀巴斯德氏菌(Pasteurella multocida)，其它巴斯德氏菌属(Pasteurella)物种，胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)，单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)，伊氏李斯特氏菌(Listeriaivanovii)，流产布鲁氏菌(Brucella abortus)，其它布鲁氏菌属(Brucella)物种，反刍类考德里氏体(Cowdria ruminantium)，肺炎衣原体(Chlamydiapneumoniae)，砂眼衣原体(Chlamydia trachomatis)，鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)，伯氏考克斯氏体(Coxiella burnetti)，其它立克次氏体属(Rickettsial)物种，埃里希氏体属(Ehrlichia)物种，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)，酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)，无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)，炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)，大肠杆菌(Escherichia coli)，霍乱弧菌(Vibrio cholerae)，弯曲杆菌属(Campylobacter)物种，脑膜炎奈瑟氏球菌(Neiserria meningitidis)，淋病奈瑟氏球菌(Neiserria gonorrhea)，铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)，其它假单胞菌属(Pseudomonas)物种，流感嗜血菌(Haemophilius influenzae)，杜氏嗜血菌(Haemophilus ducreyi)，其它嗜血菌属(Hemophilus)物种，破伤风梭菌(Clostridium tetani)，其它梭菌属(Clostridium)物种，小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersiniaenterolitica)和其它耶尔森氏菌属(Yersinia)物种。
也公开了利用本发明的补体激活组合物治疗寄生虫感染的方法。也公开了本发明的方法，其中寄生虫感染可以选自鼠弓形体(Toxoplasmagondii)，恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)，间日疟原虫(Plasmodiumvivax)，三日疟原虫(Plasmodium malariae)，其它疟原虫属(Plasmodium)物种，布氏锥虫(Trypanosoma brucei)，克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)，硕大利什曼原虫(Leishmania major)，其它利什曼原虫属(Leishmania)物种，曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)，其它血吸虫属(Schistosoma)物种和痢疾阿米巴(Entamoeba histolytica)。
也公开了利用本发明的补体激活组合物治疗真菌感染的方法。也公开了本发明的方法，其中真菌感染可以选自：白色念珠菌(Candida albicans)，新型隐球酵母(Cryptococcus neoformans)，荚膜组织胞浆菌(Histoplamacapsulatum)，烟曲霉(Aspergillus fumigatus)，粗球孢子菌(Coccidiodesimmitis)，巴西类球孢子菌(Paracoccidiodes brasiliensis)，皮炎芽生菌(Blastomyces dermitidis)，卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carnii)，Penicillium marnefri和链格孢(Alternaria alternata)。在本发明的方法中，对象可以是哺乳动物。例如哺乳动物可以是人类、非人灵长类、小鼠、大鼠、猪、狗、猫、猴子、牛或马。
3、使用组合物做为研究工具的方法
可以用各种方式，将公开的组合物用做研究工具。例如，公开的组合物可以用于研究补体激活的抑制剂。
公开的组合物可以用做涉及与补体激活有关的疾病，诸如癌症、病毒感染、细菌感染、寄生虫感染和真菌感染的诊断工具。CR2-融合蛋白将靶向补体激活位点，并且标记的CR2融合蛋白可以诊断与补体激活有关的疾病。例如，肿瘤反应性抗体将在肿瘤细胞上激活补体，CR2将靶向该补体。然后，标记的CR2-Fc可以在抗体打靶后扩大信号。
D、组合物
公开了用于制备公开的组合物的成分及用在这里所公开的方法中的组合物本身。这里公开了这些和其它材料，并且可以理解当公开这些材料的组合、子集、相互作用、群组等时，尽管可能不明确地一一具体提到这些化合物的各种单独和集合的组合及排列中的每种情况，但这里具体地考虑和描述了每种情况。例如，除非有特别相反的说明外，如果描述了特定的CR2，DAF，CD59，CR1，MCP，Crry，IgGl，IgM，IgG3，CVF，和/或公开和讨论了其特定的组合，和/或讨论了可以对多种分子(包括CR2，DAF，CD59，CR1，MCP，Crry，IgGl，IgM，IgG3，CVF)和/或其组合进行的多种修饰，则具体地考虑的是可能的CR2，DAF，CD59，CR1，MCP，Crry，IgGl，IgM，IgG3，CVF或者其组合的每种组合和排列和可能的修饰。因此，如果公开了一类分子A，B和C及公开了一类分子D，E和F和组合分子的例子，A-D，那么即使没有单独列举每种情况，也单独和集合地考虑了每种情况，即意味着组合A-E，A-F，B-D，B-E，B-F，C-D，C-E和C-F均被认为公开了。同样，也公开了这些组合的任何子集或组合。因此，例如，也认为公开了A-E，B-F和C-E的亚群组。这个概念适用于本申请的所有方面，包括但不限于制备和使用所公开的组合物的方法中的步骤。因此，如果存在可以进行的各种附加步骤，可以理解这些附加步骤之每个步骤均可以在所公开的方法的任何特定实施方式或实施方式的组合中实施。
1、序列相似性
可以理解，如这里所述术语同源性和同一性的应用意指与相似性相同的含义。因此，例如，如果在两个非天然序列之间使用术语同源性，可以理解这不一定表明这两个序列之间的进化关系，而是考虑它们核酸序列之间的相似性或相关性。测定两个进化相关分子之间同源性的许多方法常规地适用于任何两个或多个核酸或蛋白质以测定序列相似性，而不管它们是否是进化相关还是不相关的。
一般地，可以理解定义这里所公开的基因和蛋白质的任何已知的变异体和衍生物或可能产生的变异体和衍生物的一种方式是以相对于具体公开的序列的同源性来定义这些变异体和衍生物。也在这里以外的其它地方讨论了这里公开的具体序列的这种同一性。例如，SEQ ID NO：25给出了CR2的一个特定序列，SEQ ID NO：26给出了SEQ ID NO：25所编码的蛋白质，即CR2蛋白质的一个特定序列。具有地，公开了这里所公开的这些和其它基因和蛋白质的变异体，该变异体与所述序列具有至少70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99百分比同源性。本领域技术人员容易理解如何确定两个蛋白质或核酸诸如基因的同源性。例如，可以在为使同源性在其最高水平而比对两个序列后，计算同源性。
通过公开的算法可以进行另一种计算同源性的方法。通过Smith和Waterman Adv.Appl.Math.2：482(1981)的局部同源性算法，通过Needleman和Wunsch，J.MoL Biol.48：443(1970)的同源性比对算法，通过Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85：2444(1988)的相似性检索方法，通过计算机化的这些算法的执行程序(GAP，BESTFIT，FASTA，和TFASTA，Wisconsin Genetics Software Package，GeneticsComputer Group，575 Science Dr.，Madison，WI)或者通过视察可以进行所比较的序列的最佳比对(alignment)。
例如，通过Zuker，M.Science 244：48-52，1989，Jaeger等.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：7706-7710，1989，Jaeger等.Methods Enzymol.183：281-306，1989中公开的算法可以获得核酸的相同类型同源性，这里将这些文献并入至少作为核酸比对相关材料的参考。可以理解通常地可以使用任何方法，并且在一些情况下，这些不同方法的结果可以不同，但是本领域的技术人员理解如果用这些方法中至少一种方法发现了同一性，那么就称这些序列具有所述的同一性，并且在这里公开。
例如，如这里所述，所述与另一个序列具有特定百分比同源性的序列指这些序列具有通过上述一种或多种计算方法所计算的所述同源性。例如，如果利用Zuker计算方法计算得到第一序列与第二序列具有80％同源性，即使用任何其它计算方法计算第一序列与第二序列没有80％同源性，那么如这里所定义，第一序列与第二序列也具有80％同源性。再如，如果利用Zuker计算方法及Pearson和Lipman计算方法计算得到第一序列与第二序列具有80％同源性，即使用Smith和Waterman计算方法、Needleman和Wunsch计算方法、Jaeger计算方法或任何其它计算方法计算第一序列与第二序列没有80％同源性，那么如这里所定义，第一序列与第二序列也具有80％同源性。再如，如果利用任何一种计算方法计算都得到第一序列与第二序列具有80％同源性，那么如这里所定义，第一序列与第二序列具有80％同源性(尽管实际上，不同的方法将常常产生不同的同源性百分数计算结果)。
2、核酸
这里公开了基于核酸的各种分子，例如，包括编码例如CR2，DAF，CD59，CR1，MCP，Crry，IgGl，IgM，IgG3，CVF，CR2-DAF，DAF-CR2，CR2-CD59，CD59-CR2，CR2-CR1，CR1-CR2，CR2-MCP，MCP-CR2，CR2-Crry，Crry-CR2，CR2-抗-C5，CR2-IgGl Fc(人)，CR2-IgM Fc，CR2-IgG3 Fc(鼠)或CR2-CVF的核酸以及各种功能性核酸。公开的核酸由例如核苷酸、核苷酸类似物或核苷酸替代物组成。这里讨论了这些和其它分子的非限制性例子。可以理解例如，当在细胞中表达载体时，表达的mRNA通常由A，C，G和U组成。同样地，可以理解例如，将反义分子通过例如外源递送方式引入到细胞或细胞环境中时，有利地，反义分子由核苷酸类似物组成，其中该核苷酸类似物降低了反义分子在细胞环境中的降解。
a)核苷酸和相关的分子
核苷酸是含有碱基部分、糖部分和磷酸部分的分子。核苷酸可以通过它们的磷酸部分和糖部分产生核苷酸间的键而连接在一起。核苷酸的碱基部分可以是腺嘌呤-9-基(A)，胞嘧啶-1-基(C)，鸟嘌呤-9-基(G)，尿嘧啶-1-基(U)，和胸腺嘧啶-1-基(T)。核苷酸的糖部分是核糖或脱氧核糖。核苷酸的磷酸部分是五价磷酸。核苷酸的非限制性例子是3′-AMP(3′-腺苷一磷酸)或5′-GMP(5′-鸟苷一磷酸)。
核苷酸类似物是含有对碱基、糖或磷酸部分的某种修饰的核苷酸。对碱基部分的修饰包括A，C，G和T/U及不同的嘌呤或嘧啶碱基诸如尿嘧啶-5-基(.psi.)，次黄嘌呤-9-基(I)和2-氨基腺嘌呤-9-基的天然和合成修饰。修饰的碱基包括，但不限于5-甲基胞嘧啶(5-me-C)，5-羟甲基胞嘧啶，黄嘌呤，次黄嘌呤，2-氨基腺嘌呤，腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基和其它烷基衍生物，腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物，2-硫尿嘧啶，2-硫胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶，5-卤代尿嘧啶和胞嘧啶，5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶，6-氮杂尿嘧啶(6-azouracil)、胞嘧啶和胸腺嘧啶，5-尿嘧啶(假尿嘧啶)，4-硫尿嘧啶，8-卤代，8-氨基，8-巯基，8-烷硫基，8-羟基和其它8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤，5-卤代，特别是5-溴代，5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶，7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤，8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤，7-脱氮杂鸟嘌呤和7-脱氮杂腺嘌呤，3-脱氮杂鸟嘌呤和3-脱氮杂腺嘌呤。其它碱基修饰可以例如，在美国专利号3,687,808，Englisch等，Angewandte Chemie，International Edition，1991，30，613，和Sanghvi，Y.S.，15章，Antisense Research and Applications，289-302页，Crooke，S.T.和Lebleu，B.编辑，CRC Press，1993中发现。一些核苷酸类似物，诸如5-取代的嘧啶，6-氮杂嘧啶和N-2，N-6和O-6取代的嘌呤，包括2-氨基丙基腺嘌呤，5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶可以增加双螺旋形成的稳定性。常常，碱基修饰可以与例如糖修饰，诸如2′-O-甲氧基乙基联合以获得独特的特性诸如增加的双螺旋稳定性。有大量的美国专利诸如4,845,205；5,130,302；5,134,066；5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,457,187；5,459,255；5,484,908；5,502,177；5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,594,121；5,596,091；5,614,617；和5,681,941详细地描述了一系列的碱基修饰。这里将这些专利中每篇专利并入为参考文献。
核苷酸类似物也可以包括糖部分的修饰。糖部分的修饰包括核糖和脱氧核糖的天然修饰及合成修饰。糖部分的修饰包括但不限于下面的在2’位置的修饰：OH；F；O-，S-，或N-烷基；O-，S-，或N-烯基；O-，S-或N-炔基；或O-烷基-O-烷基，其中烷基、烯基和炔基可以是取代的或未取代的C1到C10烷基或C2到C10烯基和炔基。2’糖修饰也包括但不限于-O[(CH2)nO]mCH3，-O(CH2)n OCH3，-O(CH2)nNH2，-O(CH2)nCH3，-O(CH2)n-ONH2，和-O(CH2)nON[(CH2)n CH3]]2，其中n和m是1到约10。
在2’位置的其它修饰包括但不限于：C1到C10低级烷基，取代的低级烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH3、OCN、Cl、Br、CN、CF3、OCF3、SOCH3、SO2CH3、ONO2、NO2、N3、NH2，杂环烷基、杂环烷基芳基、氨基烷基氨基、多烷基氨基(polyalkylamino)、取代的甲硅烷基、RNA切割基团(RNA cleaving group)、报道基团、嵌入剂、改进寡核苷酸药代动力学特征的基团，或者改进寡核苷酸药物动力学特征的基团和具有相似特征的其它取代基。也可以在糖上其它位置，特别地在3’末端核苷酸或2’-5’连接的寡核苷酸糖中的3’位置及5’末端核苷酸的5’位置进行相似的修饰。修饰的糖也包括在桥环氧位置含有修饰，诸如CH2和S的糖。核苷酸糖类似物也可以具有糖模拟物，诸如代替呋喃戊糖基糖的环丁基部分。有大量的美国专利教导了这种修饰糖结构的制备，诸如4,981,957；5,118,800；5,319,080；5,359,044；5,393,878；5,446,137；5,466,786；5,514,785；5,519,134；5,567,811；5,576,427；5,591,722；5,597,909；5,610,300；5,627,053；5,639,873；5,646,265；5,658,873；5,670,633；和5,700,920，这里将每篇专利整体并入为参考文献。
也可以在磷酸部分修饰核苷酸类似物。修饰的磷酸部分包括但不限于可以修饰磷酸部分使两个核苷酸之间的键含有硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基磷酸三酯、甲基和其它烷基膦酸酯，包括3’-亚烷基膦酸酯和手性膦酸酯，次膦酸酯，氨基磷酸酯，包括3’-氨基氨基磷酸酯和氨基烷基氨基磷酸酯，硫羰基氨基磷酸酯，硫羰基烷基膦酸酯，硫羰基烷基磷酸三酯和boranophosphates。可以理解两个核苷酸之间的这些磷酸酯或修饰的磷酸酯键可以是3’-5’键或2’-5’键，并且该键可以含有反转极性诸如3’-5’到5’-3’或者2’-5’到5’-2’。也包括各种盐、混合的盐和自由酸形式。大量的美国专利教导了如何制备和使用含有修饰磷酸的核苷酸，这些专利包括但不限于3,687,808；4,469,863；4,476,301；5,023,243；5,177,196；5,188,897；5,264,423；5,276,019；5,278,302；5,286,717；5,321,131；5,399,676；5,405,939；5,453,496；5,455,233；5,466,677；5,476,925；5,519,126；5,536,821；5,541,306；5,550,111；5,563,253；5,571,799；5,587,361；和5,625,050，这里将每篇专利并入为参考文献。
可以理解核苷酸类似物只需要含有单一修饰，但是也可以在核苷酸的一个部分中或不同部分之间含有多个修饰。
核苷酸替代物是与核苷酸具有相似功能特性的分子，但是该分子不含有磷酸部分，诸如肽核酸(PNA)。核苷酸替代物是可以以Watson-Crick或Hoogsteen方式识别核酸但是通过非磷酸部分的其它部分连接在一起的分子。当核苷酸替代物与适合的靶核酸相互作用时，其能遵循双螺旋类结构。
核苷酸替代物是磷酸部分和/或糖部分被置换的核苷酸或核苷酸类似物。核苷酸替代物不含有标准磷原子。例如，短链烷基或环烷基核苷间键、混合的杂原子和烷基或环烷基核苷间键、或者一个或多个短链杂原子的或杂环的核苷间键可以替代磷酸。这包括具有(部分地由核苷的糖部分形成的)吗啉键；硅氧烷骨架；硫醚、亚砜和砜骨架；formacetyl和thioformacetyl骨架；亚甲基formacetyl和thioformacetyl骨架；含有烯烃的骨架；氨基磺酸酯骨架；亚氨基亚甲基(methyleneimino)和肼基亚甲基(methylenehydrazino)骨架；磺酸酯和氨磺酰骨架；酰胺骨架的那些；和具有混合的N，O，S和CH2组成部分的那些。大量的美国专利公开了如何制备和使用这些类型的磷酸置换，这些专利包括但不限于5,034,506；5,166,315；5,185,444；5,214,134；5,216,141；5,235,033；5,264,562；5,264,564；5,405,938；5,434,257；5,466,677；5,470,967；5,489,677；5,541,307；5,561,225；5,596,086；5,602,240；5,610,289；5,602,240；5,608,046；5,610,289；5,618,704；5,623,070；5,663,312；5,633,360；5,677,437；和5,677,439，这里将每篇专利并入为参考文献。
也可以理解在核苷酸替代物中，核苷酸的糖和磷酸部分都可以被替代，例如被酰胺类型的键(氨基乙基甘氨酸)(PNA)替代。美国专利5,539,082；5,714,331；和5,719,262教导了如何制备和使用PNA分子，这里将每篇专利并入为参考文献。(也参见Nielsen等，Science，1991，254，1497-1500)。
也可以连接其它类型分子(缀合物)和核苷酸或核苷酸类似物以增强，例如细胞摄取。缀合物可以化学地连接核苷酸或核苷酸类似物。这种缀合物包括但不限于脂质部分诸如胆固醇部分(Letsinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1989，86，6553-6556)，胆酸(Manoharan等，Bioorg.Med.Chem.Let.，1994，4，1053-1060)，硫醚，例如己基-S-三苯甲基硫醇(Manoharan等，Ann.N.Y.Acad.Sci.，1992，660，306-309；Manoharan等，Bioorg.Med.Chem.Let.，1993，3，2765-2770)，硫代胆固醇(Oberhauser等，Nucl.AcidsRes.，1992，20，533-538)，脂族链，例如十二烷二醇或十一烷基基团(Saison-Behmoaras等，EMBO J.，1991，10，1111-1118；Kabanov等，FEBS Lett.，1990，259，327-330；Svinarchuk等，Biochimie，1993，75，49-54)，磷脂，例如二-十六烷基-rac-甘油或三乙基铵1，2-二-O-十六烷基-rac-甘油-3-H-膦酸盐/酯(Manoharan等，Tetrahedron Lett.，1995，36，3651-3654；Shea等，Nucl.Acids Res.，1990，18，3777-3783)，聚胺或聚乙二醇链(Manoharan等，Nucleosides&Nucleotides，1995，14，969-973)，或金刚烷醋酸(Manoharan等，Tetrahedron Lett.，1995，36，3651-3654)，棕榈基部分(Mishra等，Biochim.Biophys.Acta，1995，1264，229-237)，或者十八胺或己基氨基-羰基-氧基胆固醇部分(Crooke等，J.Pharmacol.Exp.Ther.，1996，277，923-937。大量的美国专利教导了这些缀合物的制备，这些专利包括但不限于美国专利号4,828,979；4,948,882；5,218,105；5,525,465；5,541,313；5,545,730；5,552,538；5,578,717；5,580,731；5,580,731；5,591,584；5,109,124；5,118,802；5,138,045；5,414,077；5,486,603；5,512,439；5,578,718；5,608,046；4,587,044；4,605,735；4,667,025；4,762,779；4,789,737；4,824,941；4,835,263；4,876,335；4,904,582；4,958,013；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,245,022；5,254,469；5,258,506；5,262,536；5,272,250；5,292,873；5,317,098；5,371,241；5,391,723；5,416,203；5,451,463；5,510,475；5,512,667；5,514,785；5,565,552；5,567,810；5,574,142；5,585,481；5,587,371.；5,595,726；5,597,696；5,599,923；5,599,928和5,688,941，这里将每篇专利并入为参考文献。
Watson-Crick相互作用是至少与核苷酸、核苷酸类似物或核苷酸替代物的Watson-Crick面的一种相互作用。核苷酸、核苷酸类似物或核苷酸替代物的Watson-Crick面包括基于嘌呤的核苷酸、核苷酸类似物或核苷酸替代物的C2、N1和C6位置和基于嘧啶的核苷酸、核苷酸类似物或核苷酸替代物的C2、N3、C4位置。
Hoogsteen相互作用是在核苷酸或核苷酸类似物的Hoogsteen面上发生的相互作用，该面暴露在双螺旋DNA的大沟中。Hoogsteen面包括嘌呤核苷酸的N7位置和C6位置的活性基团(NH2或O)。
b)序列
存在各种与CR2，DAF，CD59，CR1，MCP，Crry，IgG1，IgM，IgG3，CVF，CR2-DAF，DAF-CR2，CR2-CD59，CD59-CR2，CR2-CR1，CR1-CR2，CR2-MCP，MCP-CR2，CR2-Crry，Crry-CR2，CR2-IgGl Fc(人)，CR2-IgMFc，CR2-IgG3 Fc(鼠)或CR2-CVF基因相关的序列，包括例如，这里所公开的序列或文献中可以获得的序列。这里将这些序列和其它序列整体及其中含有的各单个亚序列并入为参考。
这里使用SEQ ID NO：25中所示一个特定序列做为例子以示例公开的组合物和方法。应理解除非特别地另外说明外，涉及该序列的描述可以应用于与CR2，CR2-DAF，DAF-CR2，CR2-CD59，CD59-CR2，CR2-CR1，CR1-CR2，CR2-MCP，MCP-CR2，CR2-Crry，Crry-CR2，CR2-IgGl Fc(人)，CR2-IgM Fc，CR2-IgG3 Fc(鼠)或CR2-CVF相关的任何序列。本领域的技术人员理解如何解决序列差异和不同并调节与特定序列相关的组合物和方法以适应于其它相关序列(即，CR2，DAF，CD59，CR1，MCP，Crry，IgGl，IgM，IgG3，CVF，CR2-DAF，DAF-CR2，CR2-CD59，CD59-CR2，CR2-CR1，CR1-CR2CR2-MCP，MCP-CR2，CR2-Crry，Crry-CR2，CR2-IgGl Fc(人)，CR2-IgM Fc，CR2-IgG3 Fc(鼠)或CR2-CVF的序列)。根据这里所公开和本领域已知的信息，可以设计用于任何CR2，DAF，CD59，CR1，MCP，Crry，IgGl，IgM，IgG3，CVF，CR2-DAF，DAF-CR2，CR2-CD59，CD59-CR2，CR2-CR1，CR1-CR2，CR2-MCP，MCP-CR2，CR2-Crry，Crry-CR2，CR2-IgGl Fc(人)，CR2-IgM Fc，CR2-IgG3 Fc(鼠)或CR2-CVF序列的引物和/或探针。
3、将组合物递送给细胞
有多种组合物和方法可以在体外或体内用于向细胞递送本发明融合蛋白组合物，免疫缀合物组合物和核酸组合物。优选地，可以在药物学上可接受的载体中向对象给药本发明组合物。在Remington；The Science andPractice of Pharmacy(第19版)，A.R.Gennaro编辑，Mack PublishingCompany，Easton，PA 1995中描述了适宜的载体和它们的制剂。通常地，在制剂中使用适当量的药物学上可接受的盐以使得制剂变得等渗。药物学上可接受的载体的例子包括但不限于盐水，水：油乳剂，油：水乳剂，水：油：水乳剂，和林格溶液和葡萄糖溶液。优选地，溶液的pH从约5到约8，更优选地从约7到约7.5。其它载体包括缓释制剂，诸如含有抗体的固体疏水性聚合物半透性基质，该基质是有形物体的形式，例如薄膜、脂质体或微粒。对本领域技术人员显而易见的是，例如，根据给药的途径和施用的抗体浓度，有些载体是更优选的。
可以通过注射(例如，静脉内、腹膜内、皮下、肌内)，或者通过可以确保以有效的形式向血流递送组合物的其它方法诸如输注向对象、患者或细胞施用本发明的组合物。优选局部或静脉内注射。
可以凭经验确定施用本发明组合物的有效剂量和方案，并且做出这种决定是本领域技术人员技术范围之内的事情。本领域的技术人员将理解必须给药的本发明组合物的剂量将根据例如，将接受组合物的对象、给药的途径、所用的特定类型组合物和正在施用的其它药物而变化。根据上面提到的因素，单独使用时本发明组合物的典型日剂量范围从每天约1μg/kg直到100mg/kg体重，或者更多。
a)基于核酸的递送系统
有可以在体外或体内用于向细胞递送核酸的大量组合物和方法。大致可以将这些方法和组合物分成2类：基于病毒的递送系统和基于非病毒的递送系统。例如，可以通过多种直接递送系统，诸如电穿孔、脂质转染法、磷酸钙沉淀、质粒、病毒载体、病毒核酸、噬菌体核酸、噬菌体、粘粒或通过在细胞或运载体诸如阳离子脂质体中转移遗传物质来递送核酸。例如，Wolff，J.A.，等，Science，247，1465-1468，(1990)；和Wolff，J.A.Nature，352，815-818，(1991)描述了转染的适宜方法，包括病毒载体、化学转染子或物理机理的方法诸如电穿孔和DNA的直接扩散。这些方法是本领域所熟知的，并且容易适用于与这里所述组合物和方法一起使用。在一些情况下，将修改这些方法以特异地用于大DNA分子。而且，通过利用运载体的靶向特征，这些方法可以用于靶向一些疾病和细胞群。
转移载体可以是用于将基因递送到细胞中的任何核苷酸构建体(例如，质粒)，或者是递送基因的一般策略的一部分，例如重组逆转录病毒或腺病毒的一部分(Ram等.Cancer Res.53：83-88，(1993))。
这里所用的质粒或病毒载体是将公开的核酸，诸如SEQ ID NO：25转运到细胞中而不出现降解的试剂，其包括在基因所递送至的细胞中造成基因表达的启动子。在一些实施方式中，CR2，DAF，CD59，CR1，MCP，Crry，IgG1，IgM，IgG3，CVF，CR2-DAF，DAF-CR2，CR2-CD59，CD59-CR2，CR2-CR1，CR1-CR2，CR2-MCP，MCP-CR2，CR2-Crry，Crry-CR2，CR2-IgGl Fc(人)，CR2-IgM Fc，CR2-IgG3 Fc(鼠)或CR2-CVF来源于病毒或逆转录病毒。例如，病毒载体是腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒、痘苗病毒、脊髓灰质炎病毒、AIDS病毒、神经元向性病毒、辛德毕斯病毒和其它RNA病毒，包括具有HIV骨架的病毒。也优选的是具有这些病毒的如下特征的任何病毒家族，所述特征为使这些病毒适于用做载体的特征。逆转录病毒包括Maloney鼠白血病病毒，MMLV，和做为载体表达MMLV的期望特性的逆转录病毒。逆转录病毒载体与其它病毒载体相比能携带更大的遗传有效负载，即转基因或标记基因，并且因为这个原因，它们是通常使用的载体。然而，在非增殖细胞中不能使用它们。腺病毒载体相对稳定，并且容易操作，具有高的滴度，可以以气溶胶制剂形式被递送，可以转染非分裂的细胞。痘病毒载体是大的病毒载体，有几个用于插入基因的位点，它们是热稳定的，并且可以在室温下贮藏。优选的实施方式是被改造以致抑制了病毒抗原激发的宿主生物体免疫应答的病毒载体。优选的这种类型载体将携带白细胞介素8或10的编码区。
病毒载体可以比化学或物理方法具有更高的将基因引入到细胞中的反式作用能力(引入基因的能力)。通常，病毒载体含有非结构性早期基因，结构晚期基因，RNA聚合酶III转录物，复制和衣壳化所需的末端反向重复序列，和控制病毒基因组转录和复制的启动子。当改造做为载体时，病毒通常有一个或多个早期基因被移除，并且基因或基因/启动子盒插入到病毒基因组中置换移除的病毒DNA。这种类型的构建体通常携带有达到约8kb的外源遗传物质。通常由已经被改造以反式表达早期基因产物的细胞系提供移除的早期基因的必需功能。
(1)逆转录病毒载体
逆转录病毒是属于逆转录病毒科(Retroviridae)的动物病毒，包括任何类型、亚科、属或向性。一般地，Verma，I.M.，Retroviral vectors forgene transfer.In Microbiology-1985，American Society for Microbiology，229-232页，Washington，(1985)描述了逆转录病毒载体，这里将这篇文献并入为参考文献。在美国专利号4,868,116和4,980,286；PCT申请WO90/02806和WO89/07136；和Mulligan，(Science 260：926-932(1993))中描述了使用逆转录病毒载体用于基因治疗的方法的例子；这里将其中所教导的内容并入为参考文献。
逆转录病毒实质上是已经将核酸载货包装在其中的包装物。核酸载货上带有包装信号，这确保了复制的子代分子在包装外壳中被有效地包装。除了包装信号外，还有对于病毒复制和复制的病毒的包装而言顺式所需的大量分子。通常，逆转录病毒基因组含有gag，pol和env基因，这些基因参与蛋白质外壳的制备。待要转移到靶细胞中的外源DNA通常置换gag，pol和env基因。逆转录病毒载体通常含有用于掺入到包装衣壳中的包装信号，指示gag转录单元起始的信号序列，逆转录必需的元件，包括结合逆转录tRNA引物的引物结合位点，在DNA合成期间引导RNA链转换的末端重复序列，位于3’LTR的5’端做为第二条链DNA合成的合成引发位点的嘌呤富集序列和能使逆转录病毒DNA状态的插入片段插入到宿主基因组中的LTRs末端附近的特异性序列。gag，pol和env基因的移除允许约8kb的外源序列被插入到病毒基因组中，并且可以逆转录，而且一旦复制后可以包装成新的逆转录病毒颗粒。根据每种转录物的大小，这一核酸量足以使得人们递送一到多个基因。优选地，在插入片段中包含阳性或阴性选择性标记及其它基因。
因为已经移除了大多数逆转录病毒载体中的复制机器和包装蛋白(gag，pol和env)，所以通常通过放置在包装细胞系中来产生载体。包装细胞系是用逆转录病毒转染或转化的细胞系，该逆转录病毒含有复制和包装机器但是缺少包装信号。当带有所选择的DNA的载体被转染到这些细胞系中时，通过辅助细胞顺式提供的机器，含有目的基因的载体被复制和包装成新的逆转录病毒颗粒。该机器的基因组不被包装，因为它们缺少必需的信号。
(2)腺病毒载体
复制缺陷的腺病毒的构建已有描述(Berkner等，J.Virology 61：1213-1220(1987)；Massie等，Mol.Cell.Biol.6：2872-2883(1986)；Haj-Ahmad等，J.Virology 57：267-274(1986)；Davidson等，J.Virology 61：1226-1239(1987)；Zhang″Generation and identification of recombinantadenovirus by liposome-mediated transfection and PCR analysis″BioTechniques 15：868-872(1993))。使用这些病毒做为载体的益处是它们向其它细胞类型的传播是受限的，因为它们可以在最初感染的细胞中复制，但是不能形成新的感染性病毒颗粒。已经证明，将重组腺病毒体内直接递送到气道上皮，肝细胞，血管内皮，CNS实质和多种其它组织位点后，可以获得高效率基因转移(Morsy，J.Clin.Invest.92：1580-1586(1993)；Kirshenbaum，J.Clin.Invest.92：381-387(1993)；Roessler，J.Clin.Invest.92：1085-1092(1993)；Moullier，Nature Genetics 4：154-159(1993)；LaSalle，Science 259：988-990(1993)；Gomez-Foix，J.Biol.Chem.267：25129-25134(1992)；Rich，Human Gene Therapy 4：461-476(1993)；Zabner，Nature Genetics 6：75-83(1994)；Guzman，Circulation Research73：1201-1207(1993)；Bout，Human Gene Therapy 5：3-10(1994)；Zabner，Cell 75：207-216(1993)；Caillaud，Eur.J.Neuroscience 5：1287-1291(1993)；和Ragot，J.Gen.Virology 74：501-507(1993))。重组腺病毒通过结合特异性细胞表面受体，随后通过受体介导的胞吞作用以野生型和复制缺陷型腺病毒相同的方式内化而获得基因转导(Chardonnet和Dales，Virology 40：462-477(1970)；Brown和Burlingham，J.Virology 12：386-396(1973)；Svensson和Persson，J.Virology 55：442-449(1985)；Seth等，J.Virol.51：650-655(1984)；Seth等，Mol.Cell.Biol.4：1528-1533(1984)；Varga等，J.Virology 65：6061-6070(1991)；Wickham等，Cell 73：309-319(1993))。
病毒载体也可以是基于移除了E1基因的腺病毒的病毒载体，并且在细胞系诸如人类293细胞系中产生这些病毒体。在另一个优选的实施方式中，从腺病毒基因组移除了E1和E3基因。
(3)腺相关病毒载体
另一种类型的病毒载体基于腺相关病毒(AAV)。这种缺陷的细小病毒是优选的载体，因为它可以感染许多细胞类型并且对人类是非致病的。AAV类型载体可以转运约4到5kb，并且已知野生型AAV稳定地插入到染色体19中。优选含有这种位点特异性整合特性的载体。这种类型载体的特别优选的实施方式是Avigen，San Francisco，CA产生的P4.1C载体，其可以含有单纯疱疹病毒胸苷激酶基因，HSV-tk和/或标记基因，诸如编码绿色荧光蛋白GFP的基因。
在另一种类型AAV病毒中，AAV含有一对末端反向重复序列(ITRs)，该ITR位于至少一个含有启动子的盒子的侧翼，该启动子引导与之可操作地连接的异源基因的细胞特异性表达。在上下文中异源指不是AAV和B19细小病毒天然的任何核苷酸序列或基因。
通常，缺失AAV和B19编码区以产生安全的非细胞毒性的载体。AAVITRs或其修饰形式赋予了感染性和位点特异性整合，但是不导致细胞毒性，并且该启动子引导细胞特异性表达。这里将涉及AAV载体相关材料的美国专利号6,261,834并入为参考文献。
因此，本发明的载体提供了DNA分子，该DNA分子能整合到哺乳动物染色体中而没有实质的毒性。
病毒和逆转录病毒中插入的基因通常含有启动子和/或增强子以帮助控制期望基因产物的表达。启动子通常是一个或多个DNA序列，当位于相对于转录起始位点而言相对固定的位置时，其发挥作用。启动子含有RNA聚合酶和转录因子基本相互作用所需的核心元件，并且可以含有上游元件和应答元件。
(4)大负载的病毒载体
使用大的人疱疹病毒的分子遗传试验提供了在允许用疱疹病毒感染的细胞中克隆、繁殖和建立大的异源DNA片段的方法(Sun等，Naturegenetics 8：33-41，1994；Cotter and Robertson，.Curr Opin Mol Ther 5：633-644，1999)。这些大的DNA病毒(单纯疱疹病毒(HSV)和EB病毒(EBV))具有潜力向特定细胞递送大于150kb的人异源DNA片段。EBV重组体可以在感染的B细胞中以游离型DNA形式维持大片段的DNA。各单独的克隆可以带有看似遗传稳定的多达330kb的人基因组插入片段。这些游离体的维持需要在EBV感染期间组成型表达的特异的EBV核蛋白，EBNA1。此外，这些载体可以用于转染，从而可以体外瞬时产生大量蛋白质。疱疹病毒扩增子系统也用于包装大于220kb的DNA片段和用于感染可以稳定地以游离体形式维持DNA的细胞。
其它有用的系统包括例如，复制和宿主限制的非复制痘苗病毒载体。
b)基于非核酸的系统
可以用各种方法将公开的组合物递送给靶细胞。例如，可以通过电穿孔或者通过脂质转染，或者通过磷酸钙沉淀递送组合物。选择的递送机理将部分地依赖于靶向的细胞类型和是否在例如体内或体外发生递送。
因此，组合物除了包含例如公开的CR2，DAF，CD59，CR1，MCP，Crry，IgGl，IgM，IgG3，CVF，CR2-DAF，DAF-CR2，CR2-CD59，CD59-CR2，CR2-CR1，CR1-CR2，CR2-MCP，MCP-CR2，CR2-Crry，Crry-CR2，CR2-IgGl Fc(人)，CR2-IgM Fc，CR2-IgG3 Fc(鼠)或CR2-CVF或载体外，还可以包含脂质诸如脂质体，诸如阳离子脂质体(例如，DOTMA，DOPE，DC-胆固醇)或阴离子脂质体。如果希望，脂质体可以进一步包含有利于靶向特定细胞的蛋白质。包含化合物和阳离子脂质体的组合物的给药方式可以是向输入靶器官的血液施用或者吸入呼吸道从而达到呼吸道的靶细胞。关于脂质体，参见，例如Brigham等.Am.JResp.Cell.Mol.Biol.1：95-100(1989)；Felgner等.Proc.Natl.Acad.Sci USA 84：7413-7417(1987)；美国专利号4,897,355。而且，化合物可以做为微囊的成分给药，该微囊可以靶向特定的细胞类型，诸如巨噬细胞，或者可以设计以特定速率或剂量从微囊扩散或递送化合物。
在上述公开的包括给药和将外源DNA摄取到对象的细胞中(即，基因转导或转染)的方法中，可以通过各种机制向细胞递送组合物。做为一个例子，利用商购脂质体制剂诸如LIPOFECTIN，LIPOFECTAMINE(GIBCO-BRL，Inc.，Gaithersburg，MD)，SUPERFECT(Qiagen，Inc.Hilden，Germany)和TRANSFECTAM(Promega Biotec，Inc.，Madison，WI)及根据本领域标准程序开发的其它脂质体，可以通过脂质体进行递送。此外，可以通过电穿孔，可从Genetronics，Inc.(San Diego，CA)获得的技术，及通过SoNOPORATION机器(ImaRx Pharmaceutical Corp.，Tucson，AZ)体内递送本发明的核酸或载体。
材料可以在溶液、悬浮液中(例如，掺入微颗粒、脂质体或细胞中)。通过抗体、受体或受体配体，这些材料可以靶向特定的细胞类型。下面的参考文献是应用这种技术将特定蛋白质靶向肿瘤组织的例子(Senter等，Bioconjugate Chem.，2：447-451，(1991)；Bagshawe，K.D.，Br.J.Cancer，60：275-281，(1989)；Bagshawe等，Br.J.Cancer，58：700-703，(1988)；Senter等，Bioconjugate Chem.，4：3-9，(1993)；Battelli等，Cancer Immunol. Immunother.，35：421-425，(1992)；Pietersz和McKenzie，Immunolog. Reviews，129：57-80，(1992)；和Roffler等，Biochem.Pharmacol，42：2062-2065，(1991))。这些技术可以用于各种其它特定的细胞类型。载体诸如“隐形”(stealth)和其它抗体缀合的脂质体(包括靶向结肠癌的脂质介导的药物)，借助细胞特异性配体而介导DNA靶向的受体，淋巴细胞指导的肿瘤靶向，高度特异性治疗性逆转录病毒对体内鼠神经胶质瘤细胞的靶向。下面的参考文献是这项技术用于将特定蛋白质靶向肿瘤组织的例子(Hughes等，Cancer Research，49：6214-6220，(1989)；Litzinger和Huang，Biochimica et Biophysica Acta，1104：179-187，(1992))。一般地，受体参与组成性或配体诱导的胞吞作用途径。这些受体簇集在披有网格蛋白的小窝中，通过披有网格蛋白的小泡进入细胞，通过酸化的内体(endosome)，在内体中分拣受体，然后受体或者重新回到细胞表面、或者细胞内贮藏，或者在溶酶体中降解。内在化途径具有各种功能，诸如营养物摄取，活化蛋白的移除，大分子的清除，病毒和毒素的机会进入，配体的解离和降解，及受体水平的调节。根据细胞类型、受体浓度、配体类型、配体化合价和配体浓度，许多受体遵循一条以上的细胞内途径。已经综述了受体介导的胞吞作用的分子和细胞机制(Brown和Greene，DNA and Cell Biology 10：6，399-409(1991))。
通常，递送给细胞的将要整合到宿主细胞基因组中的核酸含有整合序列。特别是使用基于病毒的系统时，这些序列常常是病毒相关序列。也可以将这些病毒整合系统掺入到待递送的核酸中，其中利用基于非核酸的递送系统，诸如脂质体递送所述核酸，这样，递送系统中含有的核酸可以整合到宿主基因组中。
用于整合到宿主基因组中的其它常规技术包括，例如设计的用于促进与宿主基因组同源重组的系统。通常，这些系统依赖于位于待要表达的核酸的侧翼的序列，该序列与宿主细胞基因组中靶序列具有足够的同源性，这样就发生了载体核酸和靶核酸之间的重组，引起递送的核酸整合到宿主基因组中。本领域技术人员已知促进同源重组所必需的这些系统和方法。
c)体内/离体
如上述，可以在药物学可接受的载体中施用组合物，并且可以用本领域已知的各种机制(例如，裸DNA的摄取、脂质体融合、通过基因枪的DNA肌内注射，胞吞作用等等)，体内和/或离体地将该组合物递送给对象细胞。
如果使用离体的方法，可以移出细胞或组织，并且根据本领域熟知的标准方法在体外维持。可以通过任何基因转移机制诸如，例如磷酸钙介导的基因递送、电穿孔、微注射或脂蛋白体将组合物引入到细胞中。然后，根据用于该细胞或组织类型的标准方法，可以将转导的细胞输注(例如，在药物学可接受的载体中)或等位地移植回对象中。已知用于将各种细胞移植或输注到对象中的标准方法。
4、表达系统
递送给细胞的核酸通常含有表达控制系统。例如，病毒和逆转录病毒系统中的插入基因通常含有启动子和/或增强子以帮助控制期望基因产物的表达。启动子通常是一个或多个DNA序列，当位于相对于转录起始位点而言相对固定位置时，其起作用。启动子含有RNA聚合酶和转录因子基本相互作用所需的核心元件，并且可以含有上游元件和应答元件。
a)病毒启动子和增强子
可以从各种来源，例如病毒诸如：多瘤病毒、猿猴病毒40(SV40)、腺病毒、逆转录病毒、乙型肝炎病毒和最优选的巨细胞病毒的基因组，或者从异源哺乳动物启动子，例如β-肌动蛋白启动子获得在哺乳动物宿主细胞中控制载体转录的优选的启动子。可以方便地以SV40限制片段获得SV40病毒的早期和晚期启动子，所述SV40限制片段也含有SV40病毒复制起点(Fiers等，Nature，273：113(1978))。可以方便地以HindIII E限制片段获得人巨细胞病毒立即早期启动子(Greenway，P.J.等，Gene 18：355-360(1982))。当然，这里也可以使用来源于宿主细胞或相关物种的启动子。
增强子通常指在距离转录起始位点非固定距离处起作用的DNA序列，并且其可以在转录单元的5′(Laimins，L.等，Proc.Natl.Acad.Sci.78：993(1981))或3′(Lusky，M.L.，等，Mol.Cell Bio.3：1108(1983))。而且，增强子可以位于内含子中(Banerji，J.L.等，Cell 33：729(1983))及编码序列本身中(Osborne，T.F.，et al.，Mol.Cell Bio.4：1293(1984))。它们的长度通常是10和300bp之间，并且它们顺式发挥作用。增强子的功能是增强从附近启动子的转录。增强子也常常含有介导转录调节的应答元件。启动子也可以含有介导转录调节的应答元件。增强子常常决定基因的表达调节。尽管现在已知许多来源于哺乳动物基因(珠蛋白、弹性蛋白酶、白蛋白、胎蛋白和胰岛素)的增强子序列，但是通常人们使用来源于真核生物细胞病毒的增强子用于一般表达。优选的例子是SV40复制起点晚期侧上的增强子(bp100-270)，巨细胞病毒早期启动子增强子，多瘤病毒复制起点晚期侧上的增强子和腺病毒增强子。
启动子和/或增强子可以由触发它们功能的光或特异性化学事件特异性地激活。可以用试剂诸如四环素和地塞米松调节系统。还有各种可以通过暴露于辐射，诸如γ辐射，或者烷基化化学治疗药物来增强病毒载体基因表达的方法。
在一些实施方式中，启动子和/或增强子区可以是组成型启动子和/或增强子，从而最大化待要转录的转录单元区的表达。在一些构建体中，启动子和/或增强子区在所有真核生物细胞类型中均具有活性，即使其只在特定的时间于特定的细胞类型中表达。这种类型的优选启动子是CMV启动子(650个碱基)。其它优选的启动子是SV40启动子，巨细胞病毒(全长启动子)和逆转录病毒载体LTF。
已经证明可以克隆所有的特异性调节元件，并且该特异性调节元件可以用于构建在特异性细胞类型，诸如黑素瘤细胞中选择性表达的表达载体。胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)启动子已经用于选择性地在胶质来源细胞中表达基因。
真核宿主细胞(酵母、真菌、昆虫、植物、动物、人类或有核的细胞)中使用的表达载体也可以含有转录终止必需的序列，该序列可以影响mRNA表达。在编码组织因子蛋白的mRNA的非翻译部分中，这些区域转录为聚腺苷酸化片段。3’非翻译区也包含转录终止位点。优选地，转录单元也含有聚腺苷酸化区。这种区的一个益处是它增加了转录单元象mRNA一样被加工和转运的可能性。已经充分确立了聚腺苷酸化信号的鉴定及其在表达构建体中的用途。优选地，在转基因构建体中使用同源的聚腺苷酸化信号。在一些转录单元中，聚腺苷酸化区来源于SV40早期聚腺苷酸化信号，并且由约400个碱基组成。也优选地，转录单元含有单独的或者联合上述序列的其它标准序列，以改进构建体的表达或稳定性。
b)标记
病毒载体可以包含编码标记产物的核酸序列。这种标记产物用于确定是否基因已经递送给细胞，以及基因递送给细胞后是否表达了该基因。优选的标记基因是编码β-半乳糖苷酶的大肠杆菌lacZ基因和绿色荧光蛋白。
在一些实施方式中，标记可以是选择性标记。哺乳动物细胞的适宜选择性标记的例子是二氢叶酸还原酶(DHFR)、胸苷激酶、新霉素、新霉素类似物G418、潮霉素和嘌呤霉素。当将这种选择性标记成功地转移到哺乳动物宿主细胞中时，如果放置在选择性压力下，转化的哺乳动物宿主细胞可以存活。有两种广泛使用的不同类型的选择性方案。第一种方案基于细胞代谢和突变细胞系的使用，该突变细胞系缺少独立于补料培养基而生长的能力。两个例子是CHO DHFR细胞和小鼠LTK细胞。在没有添加营养物诸如胸苷或次黄嘌呤的情况下，这些细胞缺少生长的能力。因为这些细胞缺少完整核苷酸合成途径所必需的一些基因，所以只有在补料培养基中提供了缺少的核苷酸时它们才能存活。对补料培养基的一个替代方案是向缺少DHFR或TK基因的细胞中引入相应完整的基因，由此改变它们的生长要求。没有被DHFR或TK基因转化的细胞个体将不能在非补料培养基中存活。
第二种方案是显性选择，所述显性选择指可以在任何细胞类型上使用的选择方案，不需要使用突变细胞系。这些方案通常使用药物阻止宿主细胞的生长。具有新基因的这些细胞将表达赋予药物抗性的蛋白质，并且在筛选中可以存活。这种显性筛选的例子使用药物新霉素(Southern P.和Berg，P.，J.Molec.Appl.Genet.1：327(1982))，霉酚酸(Mulligan，R.C.和Berg，P.Science 209：1422(1980))或潮霉素(Sugden，B.等，Mol.Cell.Biol.5：410-413(1985))。这3个例子使用在真核生物控制下的细菌基因以分别赋予对适当药物G418或新霉素(geneticin)，xgpt(霉酚酸)或潮霉素的抗性。其它药物包括新霉素类似物G418和嘌呤霉素。
5、肽
a)蛋白质变异体
如这里所述，存在大量CR2，DAF，CD59，CRI，MCP，Crry，IgGl，IgM，IgG3，CVF，CR2-DAF，DAF-CR2，CR2-CD59，CD59-CR2，CR2-CR1，CR1-CR2，CR2-MCP，MCP-CR2，CR2-Crry，Crry-CR2，CR2-IgGI Fc(人)，CR2-IgM Fc，CR2-IgG3 Fc(鼠)和CR2-CVF蛋白质的变异体，这些变异体是已知的且是本文所考虑的。此外，除了已知的功能性CR2，DAF，CD59，CR1，MCP，Crry，IgGl，IgM，IgG3，CVF，CR2-DAF，DAF-CR2，CR2-CD59，CD59-CR2，CR2-CR1，CR1-CR2，CR2-MCP，MCP-CR2，CR2-Crry，Crry-CR2，CR2-IgG1 Fc(人)，CR2-IgM Fc，CR2-IgG3 Fc(鼠)和CR2-CVF的株系变异体，尚有也可以在本公开的方法和组合物中起作用的CR2、DAF、CD59、CR1、MCP、Crry、IgGl、IgM、IgG3、CVF、CR2-DAF、DAF-CR2、CR2-CD59、CD59-CR2、CR2-CR1、CR1-CR2、CR2-MCP、MCP-CR2、CR2-Crry、Crry-CR2、CR2-IgGlFc(人)、CR2-IgM Fc、CR2-IgG3 Fc(鼠)和CR2-CVF蛋白质的衍生物。本领域技术人员充分理解蛋白质变异体和衍生物，并且蛋白质变异体和衍生物可以包含氨基酸序列修饰。例如，氨基酸序列修饰通常分为3类修饰：置换、插入或缺失变异体。插入包括单个或多个氨基酸残基的氨基和/或羧基末端融合及序列内插入。插入通常是比氨基或羧基末端融合要小的插入，例如约1到4个残基。通过体外交联或者通过利用以编码融合蛋白的DNA转化的重组细胞培养物，可以将靶序列融合至足够大以致可以赋予免疫原性的多肽上，制备诸如实施例中所述的免疫原性融合蛋白衍生物。缺失的特征是从蛋白质序列中移除一个或多个氨基酸残基。通常，在蛋白质分子中任何一个位点缺失不多于约2到6个残基。通常，通过编码蛋白质的DNA中核苷酸的位点特异性诱变，由此产生编码变异体的DNA，并且此后在重组细胞培养物中表达该DNA而制备这些变异体。在具有已知序列的DNA中于预定位点进行置换诱变的技术是熟知的，例如M13引物诱变和PCR诱变。通常，氨基酸置换是单个残基置换，但是也可以一次出现在多个不同的位置；插入通常在约1到10个氨基酸残基的级别上；缺失的范围是约1到30个残基。优选地，在相邻碱基对中进行缺失或插入，即，2个残基的缺失或2个残基的插入。可以联合置换、缺失、插入或它们的任何组合以获得最终的构建体。突变不应当导致序列脱离阅读框，并且优选地，突变不导致可以产生二级mRNA结构的互补区。置换变异体是移除至少一个残基并且在该位置插入了不同残基的变异体。通常，根据下表1和2进行这种置换，并且这种置换称为保守性置换。
表1氨基酸缩写
  氨基酸  缩写
  丙氨酸  Ala A
  allosoleucine  AIle
  精氨酸  Arg R
  天冬酰胺  Asn N
  天冬氨酸  Asp D
  半胱氨酸  Cys C
  谷氨酸  Glu E
  谷氨酰胺  Gln Q
  甘氨酸  Gly G
  组氨酸  His H
  异亮氨酸  Ile I
  亮氨酸  Leu L
  赖氨酸  Lys K
  苯丙氨酸  Phe F
  脯氨酸  Pro P
  焦谷氨酸  pGlu
  丝氨酸  Ser S
  苏氨酸  Thr T
  酪氨酸  Tyr Y
  色氨酸  Trp W
  缬氨酸  Val V
表2氨基酸置换
原始残基示例性保守置换，其它置换是本领域已知的
  Ala；Ser
  Arg；Lys；Gln
  Asn；Gln；His
  Asp；Glu
  Cys；Ser
  Gln；Asn，Lys
  Glu；Asp
  Gly；Pro
  His；Asn；Gln
  Ile；Leu；Val
  Leu；Ile；Val
  Lys；Arg；Gln；
  Met；Leu；Ile
  Phe；Met；Leu；Tyr
  Ser；Thr
  Thr；Ser
  Trp；Tyr
  Tyr；Trp；Phe
  Val；ne；Leu
通过选择没有表2中的置换保守的那些置换，即选择在维持(a)置换区中多肽骨架的结构，例如片层或螺旋构象，(b)靶位点处分子的电荷或疏水性或(c)侧链的大小方面具有更显著不同作用的残基，可以造成功能或免疫学身份的实质性改变。通常预期会在蛋白质特性上造成最大改变的置换是(a)亲水残基，例如丝氨酰基或苏氨酰基置换(或被置换为)疏水残基，例如亮氨酰基、异亮氨酰基、苯丙氨酰基、缬氨酰基或丙氨酰基；(b)半胱氨酸或脯氨酸置换(或被置换为)任何其它的残基；(c)具有正电侧链的残基，例如赖氨酰基、精氨酰基或组氨酰基置换(或被置换为)负电残基，例如谷氨酰基或天冬氨酰基；或(d)具有大侧链的残基，例如苯丙氨酸置换(或被置换为)没有侧链的残基，例如甘氨酸，在本情况中，(e)增加硫酸化和/或糖基化位点的数量。
例如，一个氨基酸残基与另一个生物学和/或化学相似的氨基酸残基的替代是本领域技术人员已知的保守性置换。例如，保守性置换将是用一个疏水性残基替代另一个疏水性残基，或者用另一个极性残基置换另一个极性残基。这些置换包括组合诸如，Gly，Ala；Val，Ile，Leu；Asp，Glu；Asn，Gln；Ser，Thr；Lys，Arg；和Phe，Tyr。这里提供的嵌合多肽中包括每个明确公开序列的这种保守性置换变异。
可以利用置换或缺失诱变以插入N-糖基化位点(Asn-X-Thr/Ser)或O-糖基化位点(Ser或Thr)。也可能希望缺失半胱氨酸或其它易变残基。缺失或置换潜在的蛋白酶解位点，例如Arg，可以例如，通过缺失或用谷氨酰胺酰基或组氨酰基置换其中一个碱性残基而完成。
一些翻译后衍生化是重组宿主细胞对表达的多肽的作用结果。谷氨酰胺酰基和天冬酰胺酰基残基常常在翻译后被脱酰胺成为相应的谷氨酰和天冬氨酰残基。做为可替代的方案，可以在温和酸性条件下将这些残基脱酰胺。其它的翻译后修饰包括脯氨酸和赖氨酸的羟基化，丝氨酰基或苏氨酰基残基的羟基基团的磷酸化，赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的O-氨基的甲基化(T.E.Creighton，Proteins：Structure and Molecular Properties，W.H.Freeman&Co.，San Francisco 79-86页[1983])，N-末端胺基的乙酰化，和在一些情况下，C-末端羧基的酰胺化。
可以理解定义这里公开的蛋白质的变异体和衍生物的一个方法是根据与具体已知序列的同源性/同一性来定义变异体和衍生物。例如，SEQ IDNO：26给出了CR2的一个特定序列，SEQ ID NO：2给出了DAF蛋白质的一个特定序列。而具体公开了这里公开的这些和其它蛋白质的变异体，该变异体与所述序列具有至少70％或75％或80％或85％或90％或95％的同源性。本领域技术人员易于理解如何确定两种蛋白质的同源性。例如，可以在使同源性处于其最高水平而比对两个序列后计算同源性。
通过公开的算法可以进行另一种计算同源性的方法。通过Smith和Waterman Adv.Appl.Math.2：482(1981)的局部同源性算法，通过Needleman和Wunsch，J.MoL Biol.48：443(1970)的同源性比对算法，通过Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85：2444(1988)的相似性检索方法，通过这些算法的计算机化实施(GAP，BESTFIT，FASTA，和TFASTA，Wisconsin Genetics Software Package，Genetics ComputerGroup，575 Science Dr.，Madison，WI)或者通过视察可以进行所比较的序列的最佳比对。
例如，通过Zuker，M.Science 244：48-52，1989，Jaeger等.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：7706-7710，1989，Jaeger等.Methods Enzymol.183：281-306，1989中公开的算法可以获得核酸的相同类型同源性，这里将该文献并入至少作为核酸比对相关材料的参考。
可以理解保守性突变和同源性的描述可以以任何组合方式联合，诸如与特定序列具有至少70％同源性的实施方式，其中变异是保守性突变。
当本说明书讨论各种蛋白质和蛋白质序列时，应理解也公开了可以编码这些蛋白质序列的核酸。这将包括与特定蛋白质序列相关的所有简并序列，即，具有编码一个特定蛋白质序列的序列的所有核酸及编码公开的蛋白质序列的变异体和衍生物的所有核酸，包括简并核酸。因此，尽管不可能在这里写出每个特定的核酸序列，但是应理解实际上通过公开的蛋白质序列已在这里公开和描述了每个序列。例如，在SEQ ID NO：25中给出了可以编码SEQ ID NO：26中所示蛋白质序列的许多核酸序列之一。此外，例如，SEQ ID NO：29中示出了公开的SEQ ID NO：26的保守性衍生物，其中在位置9的异亮氨酸(I)被改变为缬氨酸(V)。应理解对于此突变，也公开了编码任何公开序列的这种特定衍生物的所有核酸序列。也应理解尽管氨基酸序列不表示怎样的具体DNA序列在生物体中编码该蛋白质，但当这里描述所公开蛋白质的特定变异体时，也已知且在这里描述和公开了编码该蛋白质的起源蛋白质的已知核酸序列。
6、抗体
a)抗体概述
如这里所述，这里所用的术语“抗体”具有广泛的意义，并且包括多克隆和单克隆抗体。除了完整的免疫球蛋白分子，术语“抗体”也包括这些免疫球蛋白分子的片段或聚合物，和人或人源化形式的免疫球蛋白分子或其片段。可以利用这里所述的体外测定法，或者通过类似的方法检测抗体的期望活性，随后，根据已知的临床试验方法检测它们体内的治疗和/或预防活性。
这里所用的术语“抗体”包括但不限于任何类型的完整免疫球蛋白(即，完整的抗体)。天然抗体通常是异源四聚体糖蛋白，由2条相同的轻(L)链和2条相同的重(H)链组成。通常，每条轻链通过一个共价二硫键连接重链，而在不同免疫球蛋白同种型的重链之间二硫键的数量不同。每条重和轻链也具有规则间隔的链内二硫键。每条重链的一个末端具有可变结构域(V(H))，接着是多个恒定结构域。每条轻链的一个末端具有可变结构域(V(L))，另一端具有恒定结构域；轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对齐，并且轻链的可变结构域与重链的可变结构域对齐。据认为特定的氨基酸残基形成轻链和重链可变结构域之间的界面。来源于任何脊椎动物物种的抗体轻链均可以根据它们恒定结构域的氨基酸序列被归到称为κ和λ的两个明显不同类型中的一种类型。根据免疫球蛋白重链恒定结构域的氨基酸序列，可以将免疫球蛋白归为不同的类别。有5大类人免疫球蛋白：IgA，IgD，IgE，IgG和IgM，并且一些类别的免疫球蛋白可以进一步分为亚类(同种型)，例如IgG-1，IgG-2，IgG-3，和IgG-4；IgA-1和IgA-2。本领域技术人员知道小鼠的相应类别。对应于不同类免疫球蛋白的重链恒定结构域分别被称为α、δ、ε、γ和μ。
这里使用术语“可变”描述可变结构域中的一些部分，其在抗体之间具有不同的序列并在每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性中具有用途。然而，可变性通常不是平均分布在整个抗体的可变结构域上。通常集中在轻链和重链可变结构域中称为互补决定区(CDRs)或超变区的3个片段中。可变结构域中较高保守性的部分称为构架(FR)。天然重链和轻链的可变结构域都各包含4个FR区，大体上采用了通过3个CDRs连接的β片层构型，该3个CDRs形成环连接该β片层结构并在一些情况下形成β片层结构的部分。每条链上CDRs通过FR区而紧靠在一起，并且与来源于另一链的CDRs一起促成抗体的抗原结合位点的形成(参见，Kabat E.A.等，″Sequences of Proteins of Immunological Interest，″NationalInstitutes of Health，Bethesda，Md.(1987))。恒定结构域不直接地参与抗体和抗原的结合，但是显示各种效应子功能，诸如依赖于抗体的细胞毒性中抗体的参与。
这里所用的术语“抗体或其片段”包括具有双或多个抗原或表位特异性的嵌合抗体和杂合抗体，和诸如scFv，sFv，F(ab′)2，Fab′，Fab等片段，包括杂合片段。因此，提供了保留结合抗体的特异性抗原的能力的抗体片段。例如，术语“抗体或其片段”的含义中包括了维持补体结合活性的抗体片段。可以用本领域已知的技术制备这种抗体和片段，并且可以根据实施例中所述的方法和用于产生抗体和筛选抗体特异性和活性的一般方法来筛选特异性和活性(参见，Harlow和Lane.Antibodies，A LaboratoryManual.Cold Spring Harbor Publications，New York，(1988))。
“抗体或其片段”的含义中也包括抗体片段和抗原结合蛋白质(单链抗体)的缀合物，例如，如美国专利号4,704,692中所述，因此将其内容并入为参考文献。
这里所用的术语“抗体”也可以指人抗体和/或人源化抗体。许多非人抗体(例如，来源于小鼠、大鼠或兔子的抗体)在人类中具有天然抗原性，因此当向人施用这些抗体时，可以产生不期望的免疫应答。因此，本发明方法中应用人或人源化抗体可以减少由施用给人的抗体激发不期望的免疫应答的可能性。
可选地，在其它物种中产生抗体，并且经过“人源化”后在人类中施用该抗体。非人(例如鼠的)抗体的人源化形式是嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(诸如，Fc，scFv，sFv，Fv，Fab，Fab′，F(ab′)2，或者抗体的其它抗原结合亚序列)，其含有最少的来源于非人免疫球蛋白的序列。人源化抗体包括人免疫球蛋白(受体抗体)，其中用具有期望特异性、亲合性和能力的来源于非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠或兔子的CDR的残基替代受体互补决定区(CDR)的残基。在一些情况下，用相应的非人残基替代人免疫球蛋白的Fv构架残基。人源化抗体也可以包含在受体抗体中及在输入的CDR或构架序列中均不存在的残基。一般地，人源化抗体将基本包含至少一个，和通常2个可变结构域的全部，其中所有或基本所有的CDR区对应于非人免疫球蛋白的CDR区，并且所有或基本所有的FR区是具有人免疫球蛋白共有序列的FR区。可选地，人源化抗体也将包含免疫球蛋白恒定区的至少一部分(Fc)，通常是人免疫球蛋白的部分(Jones等，Nature，321：522-525(1986)；Riechmann等，Nature，332：323-327(1988)；和Presta，Curr.Op.Struct.Biol.，2：593-596(1992))。
人源化非人抗体的方法是本领域已知的。一般地，人源化抗体具有从非人来源引入的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基常常被称为“输入”残基，通常从“输入”可变结构域获得该“输入”残基。可以通过将人抗体的相应序列置换为啮齿动物的CDR或CDR序列，基本根据Winter和其同事的方法进行人源化(Jones等，Nature，321：522-525(1986)；Riechmann等，Nature，332：323-327(1988)；Verhoeyen等，Science，239：1534-1536(1988))。因此，这种“人源化”抗体是嵌合抗体(美国专利号4,816,567)，其中用来源于非人物种的相应序列置换了实质上不足全部的人可变结构域。实际上，人源化抗体通常是人抗体，其中一些CDR残基和可能的一些FR残基被来源于啮齿动物抗体中类似位点的残基置换。
为了减少抗原性，选择用于制备人源化抗体的人轻链和重链可变结构域是非常重要的。根据“最佳匹配方法”(best-fit method)，相对于已知人可变结构域序列的完整文库，筛选啮齿动物抗体的可变结构域序列。然后，接受最接近啮齿动物序列的人序列做为人源化抗体的人构架(FR)(Sims等，J.Immunol.，151：2296(1993)和Chothia等，J.Mol.Biol.，196：901(1987))。另一种方法使用来源于特定轻链或重链亚型的所有人抗体的共有序列的特定构架。相同的构架可以用于几种不同的人源化抗体(Carter等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：4285(1992)；Presta等，J.Immunol.，151：2623(1993))。
人源化抗体保留对抗原的高亲合力和其它有利的生物特性也是重要的。为了达到该目的，根据优选的方法，利用亲本和人源化序列的三维模型，通过分析亲本序列和各种概念人源化产物而制备人源化抗体。本领域技术人员普遍可以获得并且熟悉三维免疫球蛋白模型。现有可以使用的计算机程序，该计算机程序可以说明和显示选定的候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构。检查这些显示的结构可以分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。以这种方式，可以从共有和输入序列选择和组合FR残基，以便获得期望的抗体特性诸如对靶抗原增加的亲合性。一般地，CDR残基直接地和最实质性地参与影响抗原结合(参见，1994年3月3日公开的WO94/04679)。
抗体消化中产生的Fab片段也含有轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域。Fab′片段由于在重链结构域羧基末端添加几个残基，包括来源于抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸，而不同于Fab片段。F(ab′)2片段是二价片段，其包含在铰链区通过二硫键连接的2个Fab′片段。这里Fab′-SH表示其中恒定结构域的半胱氨酸残基具有自由巯基的Fab′。最初，产生Fab′片段对形式的抗体片段，其中该Fab′片段对之间具有铰链半胱氨酸。抗体片段的其它化学偶联也是已知的。
也提供了分离的免疫原性特异的抗体互补位或片段。通过化学或机械地破坏抗体分子，可以从整个抗体分离抗体的特异性免疫原性表位。通过这里所教导的方法，检测由此获得的纯化片段的免疫原性和特异性。可选地，可以直接合成抗体的免疫反应性互补位。免疫反应性片段定义为具有来源于抗体氨基酸序列的至少约2到5个连续氨基酸的氨基酸序列。
产生包含本发明抗体的蛋白质的一种方法是通过蛋白质化学技术将2或多个肽或多肽连接在一起。例如，利用目前可用的实验室设备，利用Fmoc(9-芴基甲氧羰基)或Boc(叔丁氧羰基)化学可以化学合成肽或多肽(Applied Biosystems，Inc.，Foster City，CA)。本领域技术人员容易理解可以例如，通过标准化学反应合成对应于本发明抗体的肽或多肽。例如，可以合成肽或多肽，并且不从其合成树脂上切割下来，而可以合成抗体的其它片段并且随后将其从树脂上切割下来，由此暴露了在该其它片段上被功能性封闭的端基。通过肽缩合反应，这两个片段可以分别在它们的羧基和氨基末端通过肽键共价连接以形成抗体或其片段(Grant GA(1992)Synthetic Peptides：A User Guide.W.H.Freeman和Co.，N.Y.(1992)；Bodansky M和Trost B.，编辑(1993)Principles of Peptide Synthesis.Springer-Verlag Inc.，NY。做为替代的方案，如上所述在体内独立合成肽或多肽。一旦分离这些独立的肽或多肽，就可以通过相似的肽缩合反应，连接它们以形成抗体或其片段。
例如，克隆或合成的肽片段的酶促连接允许相对短的肽片段被连接以产生更大的肽片段、多肽或整个蛋白质结构域(Abrahmsen L等，Biochemistry，30：4151(1991))。做为可替代的方案，合成肽的天然化学连接可以用于从较短的肽片段合成地构建大的肽或多肽。这种方法包括2步化学反应(Dawson等.Synthesis of Proteins by Native Chemical Ligation.Science，266：776-779(1994))。第一步是未保护的合成肽-α-硫酯与另一含有氨基末端Cys残基的未保护肽片段的化学选择性反应，以产生硫酯连接的中间体作为最初的共价产物。不改变反应条件，该中间体经自发的快速分子内反应在连接位点形成天然的肽键。通过制备人白细胞介素8(IL-8)示例了这种天然的化学连接方法在蛋白质分子的全合成中的应用(Baggiolini M等.(1992)FEBS Lett.307：97-101；Clark-Lewis I等，J.Biol.Chem.，269：16075(1994)；Clark-Lewis I等，Biochemistry，30：3128(1991)；Rajarathnam K等，Biochemistry 33：6623-30(1994))。
做为可替代的方案，可以化学连接未保护的肽片段，其中由于化学连接在肽片段之间形成的键是非天然(非肽)键(Schnolzer，M等.Science，256：221(1992))。这种技术已经用于合成蛋白质结构域的类似物及大量具有全部生物活性的相对纯的蛋白质(deLisle Milton RC等，Techniques inProtein Chemistry IV.Academic Press，New York，257-267页(1992))。
本发明也提供了具有生物活性的抗体片段。本发明的多肽片段可以是重组蛋白质，其中通过将编码多肽的核酸克隆在能产生其多肽片段的表达系统，诸如腺病毒或杆状病毒表达系统中获得所述重组蛋白质。例如，可以从特异性杂交瘤确定抗体的活性结构域，其中该杂交瘤可以引起与抗体和Fc受体的相互作用相关的生物学效果。例如，发现对抗体活性或结合特异性或亲合性不起作用的氨基酸可以被缺失，而不损失相应活性。例如，在各种实施方式中，可以从天然或修饰的非免疫球蛋白分子或免疫球蛋白分子顺序地移除氨基或羧基末端氨基酸并在许多可获得的测定法之一中测定各自的活性。在另一个例子中，抗体片段包括修饰的抗体，其中在特定的位置至少一个氨基酸已经置换了天然出现的氨基酸并且抗体的一部分氨基末端或羧基末端氨基酸或者甚至内部区域已被能利于修饰抗体纯化的多肽片段或其它部分，诸如生物素所替代。
只要与未修饰的抗体或抗体片段比较，没有显著改变或损害片段的活性，则无论是连接其它序列还是没连接其它序列的片段均可以包含特定区域或特定氨基酸残基的插入、缺失、置换或其它选定的修饰。这些修饰可以提供一些附加的特性，诸如移除或添加能形成二硫键的氨基酸、增加生物寿命，改变分泌特征等。在任何情况下，片段必须具有生物活性特性，诸如结合活性、对结合结构域的结合的调节等。通过蛋白质特异区的诱变，接着表达和检测表达的多肽，可以鉴定抗体的功能或活性区。这些方法对本领域技术人员显而易见，并且可以包括编码抗原的核酸的位点特异性诱变(Zoller MJ等.Nucl.Acids Res.10：6487-500(1982)。
可以使用各种免疫测定法以筛选选择性结合特定蛋白质，变异体或片段的抗体。例如，常规地使用固相ELISA免疫测定法以筛选与蛋白质、蛋白质变异体或其片段选择性发生免疫反应的抗体。参见，Harlow和Lane.Antibodies，A Laboratory Manual.Cold Spring Harbor Publications，NewYork，(1988)，描述了可以用于检测选择性结合的免疫测定形式和条件。例如，通过Scatchard分析(Munson等，Anal.Biochem.，107：220(1980))可以检测单克隆抗体的结合亲合力。
也提供了具有抗体试剂的试剂盒，该试剂盒包含容器，该容器装有本发明的单克隆抗体或其片段和用于检测抗体或其片段与Fc受体分子结合的一种或多种试剂。例如，试剂可以包括荧光标签、酶标签或其它标签。试剂也可以包括二级或三级抗体或者用于酶促反应的试剂，其中酶促反应产生可以观察的产物。
b)人抗体
可以利用任何技术制备本发明的人抗体。产生人单克隆抗体的技术例子包括Cole等.(Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，77页，1985)和Boerner等.(J Immunol.，147(1)：86-95，1991)描述的技术。利用噬菌体展示文库也可以产生本发明的人抗体(和其片段)(Hoogenboom等，J.Mol.Biol.，227：381，1991；Marks等，J.Mol.Biol.，222：581，1991)。
也可以从转基因动物获得本发明的人抗体。例如，已描述了能应答免疫接种而产生人抗体全部组成成分的转基因突变小鼠(参见，例如Jakobovits等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：2551-255(1993)；Jakobovits等，Nature，362：255-258(1993)；Bruggermann等，Year in Immuol.，7：33(1993))。具体地，在这些嵌合的种系突变小鼠中抗体重链连接区(J(H))基因的纯合缺失使内源抗体产生受到完全抑制，而一旦抗原攻击，成功地转移到这种种系突变小鼠中的一系列人种系抗体基因将引起人抗体的产生。如这里所述，可以利用Env-CD4-共受体复合物，筛选具有期望活性的抗体。
d)抗体的施用
优选地，在药物学可接受的载体中向对象施用本发明的抗体。在Remington；The Science and Practice of Pharmacy(第19版)A.R.Gennaro编辑，Mack Publishing Company，Easton，PA 1995中描述了适合的载体和它们的制剂。通常地，在制剂中使用适当量的药物学可接受的盐以使制剂等渗。药物学可接受的载体例子包括但不限于盐水、林格溶液和葡萄糖溶液。溶液的pH优选地从约5到约8，更优选地从约7到约7.5。其它的载体包括缓释制剂诸如含有抗体的固体疏水性聚合物的半透性基质，该基质是有形物体的形式，例如薄膜、脂质体或微颗粒。对本领域技术人员显而易见，根据例如，给药的途径和抗体的给药浓度，有些载体可能是更优选的。
可以通过注射(例如，静脉内、腹膜内、皮下、肌内)，或者通过其它方法诸如输注向对象、患者或细胞施用抗体，其中所述其它方法将确保以有效的形式向血流递送抗体。优选局部或静脉内注射。
可以凭经验确定给予抗体的有效剂量和方案，并且做出这种决定是本领域技术人员技术范围之内的事情。本领域的技术人员将理解必须给予的抗体剂量将根据例如，将接受抗体的对象、给药的途径、所用的特定类型抗体和给予的其它药物而变化。在关于抗体治疗用途的文献中可以发现选择适合抗体剂量的指导，例如Handbook of Monoclonal Antibodies，Ferrone等编辑，Noges Publications，Park Ridge，N.J.，(1985)22章和303-357页；Smith等，Antibodies in Human Diagnosis and Therapy，Haber等编辑，Raven Press，New York(1977)，365-389页。根据上面提到的因素，单独使用的抗体的典型日剂量范围可以从每天约1μg/kg直到100mg/kg体重，或者更多。
给予用于治疗、抑制或预防HIV感染的抗体后，可以用本领域技术人员熟知的各种方法估测治疗抗体的效力。例如，本领域普通技术人员将理解，当观察抗体减少病毒负载或阻止病毒负载的进一步增加时，本发明抗体有效地治疗或抑制对象中的HIV感染。可以用本领域已知的方法测量病毒负载，例如在来自于对象或患者的样品(例如，不限于血液)中利用聚合酶链式反应试验检测HIV核酸的存在或利用抗体试验检测HIV蛋白质的存在，或者测定患者中循环抗HIV抗体水平。通过测定HIV感染的对象中CD4+T细胞的数量，也可以测定抗体治疗的效力。抑制HIV阳性对象或患者中CD4+T细胞的最初或进一步减少或者引起HIV阳性对象或患者中CD4+T细胞数量增加的抗体治疗是有效的抗体治疗。
d)用于递送抗体的核酸方法
本发明组合物也可以以编码抗体或抗体片段的核酸制备物(例如，DNA或RNA)形式施用给患者或对象，这样患者或对象自己的细胞将摄取核酸，并且产生和分泌编码的组合物(例如，CR2-DAF、DAF-CR2、CR2-CD59，CD59-CR2、CR2-CR1、CR1-CR2、CR2-MCP、MCP-CR2、CR2-Crry、Crry-CR2、CR2-IgGl Fc(人)、CR2-IgM Fc、CR2-IgG3 Fc(鼠)或CR2-CVF)。
e)核酸递送
在上述包括外源DNA施用和摄取到对象细胞中(即，基因转导或转染)的方法中，本发明的核酸可以是裸DNA或RNA形式，或者该核酸可以在用于向细胞递送核酸的载体中，由此编码抗体的DNA片段受启动子转录调节控制，这是本领域普通技术人员将充分理解的。载体可以是商购的制备物，诸如腺病毒载体(Quantum Biotechnologies，Inc.(Laval，Quebec，Canada)。可以通过各种机制向细胞递送核酸或载体。做为一个例子，利用商购脂质体制备物诸如LIPOFECTIN，LIPOFECTAMINE(GIBCO-BRL，Inc.，Gaithersburg，MD)，SUPERFECT(Qiagen，Inc.Hilden，Germany)和TRANSFECTAM(Promega Biotec，Inc.，Madison，WI)，及根据本领域标准程序开发的其它脂质体，可以通过脂质体进行递送。此外，可以通过电穿孔及通过SONOPORATION机器(ImaRx PharmaceuticalCorp.，Tucson，AZ)体内递送本发明的核酸或载体，其中可以从Genetronics，Inc.(San Diego，CA)获得电穿孔技术。
做为一个例子，可以通过病毒系统，诸如可以包装重组逆转录病毒基因组的逆转录病毒载体系统进行载体递送(参见，例如Pastan等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85：4486，1988；Miller等，Mol.Cell.Biol.6：2895，1986)。然后，重组逆转录病毒可以用于感染，并且向感染的细胞递送编码本发明中和抗体(或其活性片段)的核酸。当然，向哺乳动物细胞中引入改变的核酸的确切方法不限于逆转录病毒载体的应用。广泛地可获得用于这个方法的其它技术，包括腺病毒载体(Mitani等，Hum.Gene Ther.5：941-948，1994)，腺相关病毒(AAV)载体(Goodman等，Blood 84：1492-1500，1994)，慢病毒载体(Naidini等，Science 272：263-267，1996)，假型逆转录病毒载体(Agrawal等，Exper.Hemato.24：738-747，1996)的应用。也可以使用物理转导技术，诸如脂质体递送及受体介导的和其它的胞吞机制(参见，例如Schwartzenberger等.，Blood 87：472-478，1996)。本发明可以联合这些或其它常用的基因递送方法中任一种方法。
做为一个例子，如果用腺病毒载体向对象细胞递送编码补体调节构建体的本发明核酸，向人类给药腺病毒的剂量范围可以是约107到109噬斑形成单位(pfu)/每次注射，但也可以高达1012pfu/每次注射(Crystal，Hum.Gene Ther.8：985-1001，1997；Alvarez和Curiel，Hune.Gene Ther.8：597-613，1997)。对象可以接受单次注射，或者如果需要另外的注射，可以每隔6个月(或者本领域医师确定的其它适合的时间间隔)重复注射，为期不限和/或直到已经确立治疗效力为止。
如果使用本发明核酸或载体的非肠胃外给药，一般地其特征在于注射。可以制备常规形式的注射剂，例如液体溶液或悬浮液，适于注射前在液体中制成溶液或悬浮液的固体形式或者乳液。最近修改的用于非肠道给药的方法包括使用缓释或持续释放系统，以维持恒定剂量。参见，例如美国专利号3,610,795，这里将这篇专利并入为参考文献。对于适合的制剂和治疗化合物的各种给药途径的其它讨论，参见，例如Remington：The Science andPractice of Pharmacy(19版)A.R.Gennaro编辑，Mack PublishingCompany，Easton，PA 1995。
7、药物学载体/药物学产品的递送
如上所述，也可以在药物学可接受载体中体内施用组合物。“药物学可接受”意指不是生物学上或其它不期望的物质，即，该物质可以与核酸或载体一起施用给对象，而不引起任何不期望的生物学作用或者以有害的方式与含有其的药物学组合物中的任何其它成分相互作用。自然地将选择载体以最小化活性组分的任何降解和最小化对象中的任何副作用，这也是本领域技术人员所熟知的。尽管通常优选局部鼻内给药或通过吸入剂给药，但是也可以口服，非肠道(例如，静脉内)，通过肌内注射、通过腹膜内注射，经皮，体外(extracorporeally)，局部地等等施用组合物。这里所用的“局部鼻内给药”意指通过一个或两个鼻孔向鼻子或鼻通道中递送组合物，并且可以包括通过喷雾机制或滴液机制，或者通过核酸或载体的气雾化进行递送。当同时处理大量动物时，后者是有效的。通过吸入剂施用组合物可以是通过喷雾或滴液机制经过鼻子或口递送。也可以通过插管法直接向呼吸系统的任何区域(例如，肺)进行递送。根据对象的物种、年龄、重量和总的状况，治疗的过敏性疾病的严重性，使用的特定核酸或载体，其给药的方式等等，所需组合物的确切量随着对象而变化。因此，不可能为每种组合物规定确切的量。然而，利用这里的教导只要常规试验，本领域的普通技术人员就可以确定适当的量。
如果使用组合物的非肠道给药，一般地其特征在于注射。可以制备常规形式的注射剂，例如液体溶液或悬浮液，适于注射前在液体中制成悬浮溶液的固体形式或者乳液。最近修改的用于非肠道给药的方法包括使用缓释或持续释放系统，以维持恒定剂量。参见，例如美国专利号3,610,795，这里将这篇专利并入为参考文献。
物质可以在溶液、悬浮液中(例如，掺入到微颗粒、脂质体或细胞中的)。这些物质可以通过抗体、受体或受体配体靶向特定的细胞类型。下面的参考文献是使用这种技术将特定蛋白质靶向肿瘤组织的例子(Senter等，Bioconjugate Chem.，2：447-451，(1991)；Bagshawe，K.D.，Br.J.Cancer，60：275-281，(1989)；Bagshawe等，Br.J.Cancer，58：700-703，(1988)；Senter等，Bioconjugate Chem.，4：3-9，(1993)；Battelli等，Cancer Immunol.Immunother.，35：421-425，(1992)；Pietersz和McKenzie，Immunolog.Reviews，129：57-80，(1992)；和Roffler等，Biochem. Pharmacol，42：2062-2065，(1991))。载体诸如“隐形”和其它抗体缀合的脂质体(包括靶向结肠癌的脂质介导的药物)，受体介导的通过细胞特异性配体实现的DNA靶向，淋巴细胞引导的肿瘤靶向，靶向体内鼠神经胶质瘤细胞的高度特异性治疗性逆转录病毒。下面的参考文献是这项技术用于将特异性蛋白质靶向肿瘤组织的例子(Hughes等，Cancer Research，49：6214-6220，(1989)；Litzinger和Huang，Biochimica et Biophysica Acta，1104：179-187，(1992))。一般地，受体参与组成性或配体诱导的胞吞作用途径。这些受体在披有网格蛋白的小窝中簇集，通过披有网格蛋白的小泡进入细胞，穿过酸化的内体，在内体中分拣受体，然后受体或者重新回到细胞表面、或者细胞内贮藏，或者在溶酶体中降解。内在化途径具有各种功能，诸如营养物摄取，活化蛋白的移除，大分子的清除，病毒和毒素的机会进入，配体的解离和降解，及受体水平的调节。根据细胞类型、受体浓度、配体类型、配体价和配体浓度，许多受体遵循一条以上的途径。已经综述了受体介导的胞吞作用的分子和细胞机制(Brown和Greene，DNA and Cell Biology 10：6，399-409(1991))。
a)药物学可接受载体
可以联合药物学可接受载体在治疗上使用组合物，包括抗体。
药物学载体是本领域技术人员已知的。这些药物学载体大多数一般是向人施用药物时的标准载体，包括溶液诸如无菌水、盐水和在生理pH的缓冲溶液。可以肌内或皮下施用组合物。而其它的化合物可以根据本领域技术人员使用的标准方法施用。
药物学组合物除了包含选定的分子外，还可以包含载体、增稠剂、稀释剂、缓冲液、防腐剂、表面活性剂等。药物学组合物也可以含有一种或多种活性组分诸如抗微生物剂，抗炎剂、麻醉剂等等。
根据是否期望局部或系统的治疗及待要治疗的区域，可以用多种方式给药药物组合物。给药可以是局部(包括眼睛、阴道、直肠、鼻内)，口服，吸入，或非肠道，例如静脉滴注、皮下、腹膜内或肌内注射。可以静脉内、腹膜内、肌内、皮下、腔内或经皮给药公开的抗体。
非肠道给药的制剂包括无菌水性或非水性溶液、悬浮液和乳液。非水溶剂的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油诸如橄榄油和注射用有机酯诸如油酸乙酯。含水载体包括水、醇/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。非肠道赋形药包括氯化钠溶液、林格葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏液或固定油。静脉内赋形药包括液体和营养补充剂、电解质补充剂(诸如基于林格葡萄糖的)等等。也可以存在防腐剂和其它添加剂诸如，抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等等。
用于局部给药的制剂可以包括软膏、洗液、乳膏、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉末。常规的药物学载体、水性的，粉末的或油性的基质、增稠剂等可能是必需的或期望的。
口服给药的组合物包括粉末或颗粒，水或非水介质中的悬浮液或溶液，胶囊，小药囊或片剂。也可能期望有增稠剂、调味剂、稀释剂、乳化剂、分散助剂或粘合剂。
有些组合物可以以药物学可接受的酸或碱加成盐形式给药，所述盐通过与无机酸诸如盐酸、氢溴酸、高氯酸、硝酸、硫氰酸、硫酸和磷酸，及有机酸诸如甲酸、醋酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸和延胡索酸反应形成，或者通过与无机碱诸如氢氧化钠、氢氧化铵、氢氧化钾和有机碱诸如单、二、三烷基和芳基胺和取代的乙醇胺反应形成。
b)治疗应用
组合物给药的剂量范围是足可以产生影响症状疾病的期望效果的剂量。剂量不应该大到引起副作用，诸如不希望的交叉反应、过敏性反应等等。一般地，剂量将随着患者的年龄、状况、性别和疾病的程度而变化，并且本领域的技术人员可以确定该剂量。如果发生禁忌症，个体的医师可以调整该剂量。剂量可以改变，并且可以每日施用一次或多次剂量，施用1天或几天。
8、计算机可读介质
应理解公开的核酸和蛋白质可以表示为由核苷酸或氨基酸组成的序列。有各种方法显示这些序列，例如可以用G或g表示鸟苷酸。同样地，可以用Val或V表示缬氨酸氨基酸。本领域技术人员理解如何用现有的各种方法之任一显示和表示任何核酸或蛋白质序列，这里考虑公开了所述的每种方法。这里尤其考虑的是在计算机可读介质，诸如商购的软盘、磁带、芯片、硬驱、光盘和视盘上或其它计算机可读介质上显示这些序列。也公开了所公开序列的二进制码表示。本领域技术人员理解什么计算机可读介质记录、储存或保存核酸或蛋白质序列。
公开了计算机可读介质，该介质包含关于这里所述序列的序列和信息。也公开了计算机可读介质，该介质包含关于这里所述序列的序列和信息，其中该序列不包括SEQ ID Nos：37，38，39，40，41和42。
9、通过用公开的组合物筛选而鉴定的组合物
a)计算机辅助的药物设计
公开的组合物可以用作任何分子模建技术的靶以用于鉴定公开组合物的结构或用于鉴定以期望的方式与公开的组合物相互作用的潜在或实际的分子，诸如小分子。这里公开的核酸、肽和相关分子可以用做任何分子模建程序或方法中的靶。
可以理解当在模建技术中使用公开的组合物时，可以鉴定具有特定期望的特性诸如抑制或刺激靶分子的功能的性质的分子，诸如大分子。因此，也公开了通过使用公开的组合物诸如CR2，DAF，CD59，CR1，MCP，Crry，IgG1，IgM，IgG3，CVF，CR2-DAF，DAF-CR2，CR2-CD59，CD59-CR2，CR2-CR1，CR1-CR2，CR2-MCP，MCP-CR2，CR2-Crry，Crry-CR2，CR2-IgG1 Fc(人)，CR2-IgM Fc，CR2-IgG3 Fc(鼠)或CR2-CVF而鉴定和分离的分子。因此，利用涉及公开的组合物诸如CR2，DAF，CD59，CR1，MCP，Crry，IgGl，IgM，IgG3，CVF，CR2-DAF，DAF-CR2，CR2-CD59，CD59-CR2，CR2-CR1，CR1-CR2，CR2-MCP，MCP-CR2，CR2-Crry，Crry-CR2，CR2-IgG1 Fc(人)，CR2-IgM Fc，CR2-IgG3 Fc(鼠)或CR2-CVF的分子模建方法产生的产物也被认为在这里公开。
因此，分离与选定分子结合的分子的一种方法是合理的设计。通过结构信息和计算机模建获得该合理设计。计算机模建技术允许观察选定分子的三维原子结构和合理设计与该分子相互作用的新化合物。三维结构通常取决于来自于选定分子的x射线结晶分析或NMR成像数据。分子动力学需要力场数据。计算机制图系统能够预测新的化合物将如何连接靶分子，从而允许实验操作化合物及靶分子的结构以完善结合特异性。当在分子和化合物之一或两者上实施小的改变后预测分子-化合物的相互作用需要分子力学软件和计算密集型计算机，该计算机通常偶联有在分子设计程序和用户之间的用户友好、菜单驱动的界面。
分子模建系统的例子是CHARMm和QUANTA程序，PolygenCorporation，Waltham，MA。CHARMm执行能量最小化和分子动力学函数。QUANTA执行分子结构的构建、图形模建和分析。QUANTA允许交互式构建、修饰、观察和分析彼此相互作用的分子的行为。
大量的论文综述了与特定蛋白质相互作用的药物的计算机模建，诸如Rotivinen等，1988 Acta Pharmaceutica Fennica 97，159-166；Ripka，NewScientist 54-57(1988年6月16日)；McKinaly和Rossmann，1989 Annu.Rev.Pharmacol.Toxiciol.29，111-122；Perry和Davies，QSAR： Quantitative Structure-Activity Relationships in Drug Design 189-193页(Alan R.Liss，Inc.1989)；Lewis和Dean，1989 Proc.R.Soc.Lond.236，125-140和141-162；以及，关于用于核酸成分的模型酶，Askew等，1989J.Am.Chem.Soc.111，1082-1090。可以从公司诸如BioDesign，Inc.，Pasadena，CA.，Allelix，Inc，Mississauga，Ontario，Canada和Hypercube，Inc.，Cambridge，Ontario得到用于筛选和图形描述化学制品的其它计算机程序。
尽管主要设计这些程序用于对特定蛋白质具有特异性的药物，但是一旦鉴定了DNA或RNA的特定区，就可以改变这些程序以设计与DNA或RNA特定区特异性相互作用的分子。
尽管上述提及到设计和产生可以改变结合的化合物，但是也可以筛选已知化合物文库，包括天然产物或合成化学制品，和生物活性物质，诸如蛋白质，以选择改变底物结合或酶促活性的化合物。
10、试剂盒
这里公开了试剂盒，该试剂盒涉及在实施这里所述方法时可以使用的试剂。试剂盒可以包含这里所述的或者可以理解在实施所公开的方法时需要或有益的任何试剂或试剂组合。例如，试剂盒可以包含在一些方法的实施方式中进行扩增反应的引物，及按预期使用引物所需的缓冲液和酶。例如，公开了用于评价对象患上癌症、哮喘、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、反应性关节炎、脊椎关节炎、系统性血管炎、胰岛素依赖型糖尿病、多发性硬化、实验性变应性脑脊髓炎、舍格伦综合征、移植物抗宿主病、炎性肠病包括局限性回肠炎、溃疡性结肠炎、局部缺血再灌注损伤、心肌梗塞、阿尔茨海默氏病、移植排斥(同种异体和异种)、烧伤、任何免疫复合物诱导的炎症、肾小球肾炎、重症肌无力、多发性硬化、脑狼疮、吉-巴综合征、血管炎、系统性硬化、过敏症、导管反应(catheter reactions)、粉瘤(atheroma)、不育、甲状腺炎、ARDS、post-bypass综合症、血液透析、幼年型类风湿、Behcets综合症、溶血性贫血、天疱疮、大疱性类天疱疮、中风、动脉粥样硬化和硬皮病的风险的试剂盒。
11、具有相似功能的组合物
应理解这里公开的组合物具有一些功能，诸如调节补体活性或结合CR2，CR3或C3b。这里公开了执行该公开的功能的一些结构要求，并且可以理解存在与所公开的结构相关的可以执行相同功能的多种结构，并且这些结构最终将获得相同的结果，例如刺激或抑制补体活性。
E、制备组合物的方法
除了另外特别说明外，可以利用用于特定试剂或化合物的本领域技术人员已知的任何方法制备这里公开的组合物和实施所公开的方法所必需的组合物。
公开了制备包含构建体的组合物的方法，其中构建体包含CR2和补体调节剂。也公开了制备组合物的方法，其中组合物是本发明的组合物。
1、肽合成
一种产生此处公开的蛋白质，诸如SEQ ID NO：6的方法是通过蛋白质化学技术将2个或多个肽或多肽连接在一起。例如，利用目前可用的实验室设备，利用Fmoc(9-芴基甲氧羰基)或Boc(叔丁氧羰基)化学可以化学合成肽或多肽(Applied Biosystems，Inc.，Foster City，CA)。本领域技术人员容易理解可以例如，通过标准化学反应合成对应于所公开的蛋白质的肽或多肽。例如，可以合成肽或多肽，并且不从合成树脂上切下该肽或多肽，而可以合成肽或蛋白质的其它片段，并且随后从树脂上切下所述的片段，由此暴露所述其它片段上被功能性封闭的端基。通过肽缩合反应，这两个片段可以分别在它们的羧基和氨基末端通过肽键共价连接以形成抗体或其片段(Grant GA(1992)Synthetic Peptides：A User Guide.W.H.Freeman和Co.，N.Y.(1992)；Bodansky M和Trost B.，编辑(1993)Principles ofPeptide Synthesis.Springer-Verlag Inc.，NY(这里将其并入以至少作为涉及肽合成的材料的参考文献)。做为替代的方案，如本文所述可以在体内独立合成肽或多肽。一旦分离这些独立的肽或多肽，就可以通过相似的肽缩合反应，连接它们以形成肽或其片段。
例如，克隆或合成的肽片段的酶促连接允许相对短的肽片段被连接以产生更大的肽片段、多肽或整个蛋白质结构域(Abrahmsen L等，Biochemistry，30：4151(1991))。做为可替代的方案，合成肽的天然化学连接可以用于从较短的肽片段合成地构建大的肽或多肽。这种方法有2步化学反应(Dawson等.Synthesis of Proteins by Native Chemical Ligation.Science，266：776-779(1994))。第一步是未保护的合成肽-硫酯与另一含有氨基末端Cys残基的未保护肽片段的化学选择性反应，以产生硫酯连接的中间体做为最初的共价产物。不改变反应条件，该中间体经受了自发的，快速分子内反应以在连接位点形成天然的肽键(Baggiolini M等.(1992)FEBS Lett.307：97-101；Clark-Lewis I等，J.Biol.Chem.，269：16075(1994)；Clark-Lewis I等，Biochemistry，30：3128(1991)；Rajarathnam K等，Biochemistry 33：6623-30(1994))。
做为可替代的方案，可以化学连接未保护的肽片段，其中由于化学连接在肽片段之间形成的键是非天然(非肽)键(Schnolzer，M等.Science，256：221(1992))。这种技术已经用于合成蛋白质结构域的类似物及大量具有全部生物活性的相对纯化的蛋白质(deLisle Milton RC等，Techniques inProtein Chemistry IV.Academic Press，New York，257-267页(1992))。
2、制备组合物的方法
公开了制备组合物及制备产生组合物的中间体的方法。例如，公开了SEQ ID NOs：5中的核酸。有各种方法诸如合成的化学方法和标准分子生物学方法可以用于制备这些组合物。应理解具体地公开了制备这些和其它公开的组合物的方法。
公开了通过下述方法产生的核酸分子，该方法包括以可操作方式连接包含SEQ ID NO：25中所示序列的核酸和控制该核酸表达的序列。
也公开了通过下述方法产生的核酸分子，该方法包括以可操作方式连接包含与SEQ ID NO：25中所示序列具有80％同一性的序列的核酸分子和控制该核酸表达的序列。
公开了通过用这里所公开的任何一种核酸分子转染动物体内细胞的方法而产生的动物。公开了通过用这里所公开的任何一种核酸分子转染动物体内细胞的方法而产生的动物，其中该动物是哺乳动物。也公开了通过用这里所公开的任何一种核酸分子转染动物体内细胞的方法而产生的动物，其中哺乳动物是小鼠、大鼠、兔子、母牛、绵羊、猪和灵长类。
也公开了通过向动物添加任何一种这里所公开的细胞而产生的动物。
在整个申请中，参考了各种出版物。这里将这些出版物公开的内容整体并入为本申请的参考文献以更充分地描述本发明涉及的现有技术的状况。这里也针对提及参考文献的句子中讨论的该参考文献中所含的材料，而将公开的参考文献单独和具体地并入为参考文献。
本领域技术人员显而易见，可以在本发明中进行各种修饰和改变，而不背离本发明的范围或精神。在考虑说明书和实践这里公开的本发明时，本领域技术人员显而易见本发明的其它实施方式。说明书和实施例仅仅被认为是示例性的，下面的权利要求表明了本发明的真正的范围和精神。
F、实施例
给出了下面的实施例以提供给本领域普通技术人员关于如果制备和评估这里所述的化合物、组合物、物品、装置和/或方法的完整公开和描述，这些实施例旨在仅仅示例本发明，而不意在限制Tomlinson博士所认为的其发明的范围。尽管努力确保数值的精确性(例如，量、温度等)，但是应该考虑一些误差和偏差。除了另外指明外，份是按重量计算的份，温度是℃或者环境温度，并且压力是或大约是大气压。
1、实施例1：补体受体2(CR2)介导的补体抑制剂靶向补体激活位点
a)方法
(1)细胞系和DNA
在来源于p118-mIgG1(30)的哺乳动物表达载体PBM中进行所有的DNA操作，其中通过缺失小鼠IgG1 Fc编码区产生该PBM。中国仓鼠卵巢(CHO)细胞用于蛋白质表达，并且在补加有10％FCS的Dulbecco改进的Eagle培养基(DMEM)(GIBCO Invitrogen Corp，Carlsbad，CA)中维持该中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。在G418存在的情况下培养稳定转染的CHO细胞克隆，并且在没有FCS的CHO-S-SFM II(GIBCO)中悬浮培养重组蛋白质表达细胞。在RPMI(GIBCO)，10％FCS中培养U937细胞。
(2)抗体、试剂和血清
通过标准技术(31)制备抗CHO细胞膜、纯化的人DAF和CD59的兔抗血清。描述了小鼠抗DAF mAb 1H4(32)，大鼠抗CD59 mAb YTH53.1(33)和小鼠抗人CR2 mAb 171(结合SCR1-2)。抗绵羊红细胞IgM来源于Research Diagnostic Inc.(Flanders，NJ)。从Sigma(St.Louis，MO)购买所有二级抗体。由B.P.Morgan博士(University of Wales，Cardiff，UK)惠赠纯化的重组sCD59。从Quidel(San Diego，CA)购买C6耗竭的人血清，并且在实验室中从健康志愿者血液获得正常的人血清(NHS)。
(3)表达质粒的构建和蛋白质表达
图1中描述制备的重组融合蛋白和可溶补体抑制剂。通过将编码4个N末端SCR单元(成熟蛋白质的残基1-250，Swissprot登录号P20023)的CR2序列和编码DAF或CD59细胞外区的序列连接而制备cDNA构建体。所用的补体抑制剂序列编码成熟DAF蛋白质序列的残基1-249(Swissprot登录号P08174)和成熟CD59蛋白质序列的残基1-77(Swissprot登录号P13987)。为了连接CR2和补体抑制剂序列，编码SS(GGGGS)3和(GGGS)2的连接序列分别用于在C末端和N末端含有CR2的融合蛋白中。通过标准PCR方法学制备基因构建体(35)。在PBM载体中进行所有的克隆步骤，该PBM载体也用于蛋白质表达(30)。为了表达，利用脂质转染胺试剂，根据制造商(GIBCO)的说明书，将质粒转染至CHO细胞中。通过所述(30)的有限稀释来筛选稳定转染的克隆，并且通过ELISA定量克隆的蛋白质表达。
(4)ELISA和蛋白质测定法
利用标准ELISA技术(31)进行培养悬浮液中重组蛋白质的检测和相对蛋白质浓度的测定。根据要测定的重组蛋白质的类型，捕获抗体是抗-DAF mAb1H4或抗-CD59 mAb YTH53.1。一级检测抗体是抗-DAF或抗CD59兔多克隆抗体。在一些ELISAs，抗-CR2 mAb A-3也用做一级检测抗体，并且尽管不太灵敏感，仍获得了相似的数据。通过UV吸光度或通过利用BCA蛋白质测定试剂盒(Pierce Chemical Company，Rockford111)测定重组蛋白质的蛋白质浓度。
(5)蛋白质纯化
通过亲和层析，从培养上清液纯化重组蛋白。如制造商所述，通过将抗DAF 1H4 mAb或抗CD59 YTH53.1mAb偶联到HiTrap NHS活化的亲和柱(Pharmacia Biotech，New Jersey，USA)上制备亲和柱。将含有重组蛋白的培养上清液调整到pH8.0，并且以0.5ml/min的流速加样到亲和柱上。用6到8倍柱体积的PBS冲洗柱子，用pH2.4的2到3倍柱体积的0.1M甘氨酸洗脱重组蛋白。将含有融合蛋白的级份收集到含有1M Tris缓冲液，pH8.0的试管中，并且用PBS透析。
(6)SDS-PAGE和Western印迹
在非还原条件下，在SDS-PAGE 10％丙烯酰胺凝胶(Bio-Rad LifeScience，Hercules，CA)中分离纯化的重组蛋白。用考马斯亮蓝染色凝胶。对于Western印迹，标准方法如下(31)。简而言之，将分离的蛋白质转移到聚偏氟乙烯膜上，并且通过抗-DAF mAb 1H4或抗-CD59 mAbYTH53.1的方法检测转移的蛋白质。用ECL检测试剂盒(AmershamBiosciences，Piscataway，NJ)显影膜。也通过SDS-PAGE，接着进行聚糖酶(glycanase)处理而分析了CR2-CD59。在含有0.1％SDS，10mM 2-巯基乙醇和5mM EDTA的15mM磷酸钠缓冲液(pH7.5)中，95℃加热CR2-CD59(2mg)3分钟。冷却后，在1％Nonidet P40和0.3mM PMSF存在的情况下，在37℃温育CR2-CD59和3U脑膜脓毒性黄杆菌(Flavobacterium meningosepticum)N-聚糖酶(EC 3.5.1.52，Sigma)20小时。
(7)流式细胞术
通过流式细胞术测定重组融合蛋白与C3调理的细胞的结合。在10％抗CHO抗血清中温育CHO细胞(30分钟/4℃)，在10％C6耗竭的NHS中洗涤和温育(45分钟/37℃)。然后，洗涤C3调理的细胞，并且与1μM重组蛋白温育(60分钟/4℃)。洗后，在适当的情况下，细胞与10μg/ml抗DAF mAb 1H4或抗CD59mAb YTH53.1温育(30分钟/4℃)，接着与FITC缀合的二级抗体温育(1∶100，30min/4℃)。然后洗细胞，在PBS中用2％多聚甲醛固定，然后用FACSan流式细胞仪(Becton DickinsonImmunocytometry Systems，San Jose，CA)分析。在DMEM中进行所有的温育和洗涤。
(8)分析C3配体与CR2融合蛋白的结合
在BIAcore 3000仪器上进行表面等离子体共振(SPR)测定以进行CR2融合蛋白与C3dg-生物素相互作用的动力学分析。通过在2μl/min在芯片的一个流动室(flow cell)表面上以50μg/ml注射C3dg-生物素，从而将如所述(36)制备的人C3dg-生物素结合在BIAcore链霉抗生物素蛋白(SA)传感器芯片的表面。流动缓冲液是0.5X PBS+0.05％Tween 20。来自于捕获的C3dg的SPR信号产生了250到500的BIAcore应答单位(response unit)。在没有蛋白质的情况下运行对照链霉抗生物素蛋白包被的流动室。在25℃，0.5X PBS，0.05％Tween 20中，以流速25μl/分钟评估在一系列CR2融合蛋白浓度(15.6-500nM)下的结合。利用Kinject指令，以50μl等份注射CR2融合蛋白样品。监测融合蛋白与配体的缔合120秒，之后在仅有缓冲液存在的情况下，允许复合物解离另外120秒。以50μl/min，通过10秒200mM碳酸钠(pH9.5)脉冲，在不同融合蛋白浓度分析之间再生结合表面。相对于与对照流动室的结合，校正CR2融合蛋白片段与固定有C3d的流动室的结合。利用BIAevaluation版本3.1软件(BIAcore)，结合数据拟合1∶1 Langmuir结合模型，并且通过低残值(residual)和χ2值，评估最佳拟合。利用BIAevaluation版本3.1程序，所获得的动力学解离曲线用于计算结合速率和解离速率(ka和kd)和亲和常数(kD)。在实验之间，以50μl/min，用60秒50mM氢氧化钠(pH9.5)脉冲再生链霉抗生物素蛋白表面，并且如上所述再次应用C3dg-生物素。
(9)补体裂解试验
用versene(GIBCO)处理60％-80％铺满的CHO细胞，洗细胞2次，在DMEM中重悬浮到106/ml。通过向细胞添加10％兔抗CHO细胞膜抗血清，使细胞对补体敏感(30min/4℃)。然后移除抗血清，并且在稀释在DMEM中的NHS中重悬浮细胞。最终的试验体积是50或100μl。在37℃放置45分钟后，通过台盼蓝排阻测定法(计数活和死细胞)或51Cr释放试验测定细胞的生活力(37)。两种测定产生了相似的结果。为了测定重组蛋白的补体抑制活性，在DMEM中稀释蛋白质，并且在向CHO细胞添加前，向NHS添加蛋白质。使用10％NHS的终浓度，其引起了约90％未保护的抗体敏化的CHO细胞裂解。利用抗体敏化的绵羊红细胞(EA)(Advanced Research Technologies，San Diego，CA)检测对补体介导的溶血作用的抑制。在300μl终体积中在明胶veronal缓冲液(GVB++)(AdvancedResearch Technologies)中进行溶血测定，其中300μl终体积中含有2.5×107EA，1/300终稀释的NHS和递增浓度的融合蛋白。在37℃温育反应混合物60min，并且通过添加含有10mM EDTA的300μl PBS终止反应。通过离心移除细胞，并且在413nm，通过上清液中血红蛋白的分光光度定量分析细胞裂解。
(10)U937细胞粘着红细胞
基本如所述(38)分析与C3调理的红细胞的依赖于CR3的粘着。简而言之，在37℃，在GVB(Advanced Research Technologies)中，用预定的亚凝集量的兔抗SRBC IgM敏化新鲜的绵羊红细胞(SRBC)30分钟。洗2次后，通过在GVB中温育IgM敏化的SRBC和等体积的1∶2稀释的C6耗竭的人血清(120分钟/37℃)制备C3b调理的SRBC。洗细胞2次，并且在GVB中重悬浮沉淀。该处理后，由于血清中C3b的短半衰期，结合红细胞的大多数C3是iC3b或C3d降解产物的形式(CR2配体)。U937细胞(200μl中4×105个细胞)添加到50μl C3调理的SRBC(2×106个细胞)中，并且离心混合物(4min/40×g)，在室温放置90分钟。然后，用相差显微技术检查细胞，并且确定粘着红细胞的U937细胞的数量。每个样品对至少100个红细胞进行评分，计算每个红细胞结合的平均U937数量。对每次试验进行一式三份的测定。在一些试验中，收获细胞前，在50ng/ml乙酸肉豆蔻佛波醇(PMA)存在的情况下培养U937细胞3天，这是引起CR3上调的处理(39，40)。单独与IgM包被的SRBC温育的细胞，或者直接与C6耗竭的人血清温育的SRBC用作对照。
(11)生物分布研究
接着进行用于检测注射的放射标记蛋白质的组织分布的标准方法(41，42)。简而言之，将1.7μg 125I标记的CR2-DAF(4.20×106cpm/mg)或sDAF(4.84×106cpm/mg)注射到34周龄雌性NZB/NZW F1小鼠(Jackson Labs，Bar Harbor，ME)的尾静脉中。24小时后，取血液样品，并且移出主要的器官、切碎并在含有10mM EDTA的PBS中洗涤，称重和计算。靶向特异性被评估为每克组织的百分比注射剂量。根据制造商的说明书，使用iodogen方法碘化蛋白质(Pierce Chemical Co.)。
(12)免疫荧光显微术
向24周龄的MRL/lpr小鼠尾静脉注射CR2-DAF或sDAF(270μg)。24小时后，移出肾脏，并且快速冷冻。在丙酮中固定从冷冻肾脏制备的冰冻切片(5μm)，并且进行处理用于间接的免疫荧光显微术。等摩尔的小鼠抗人DAF 1A10和1H6mAb混合物用做一级检测抗体(终浓度，10μg/ml)，而抗小鼠IgG Fc特异性FITC缀合的抗体作为二级抗体(F4143，Sigma-Aldrich)。接着是标准方法(49，这里将其教导的抗体染色技术并入为参考文献)，除了为减少最可能由小鼠肾脏中沉积的免疫复合物引起的背景染色，以1∶800稀释二级FITC标记的抗体(10倍于推荐的稀释度)。获得数字图像，并且利用相同设置，用Adobe Photoshop优化该数字图像。
b)结果
(1)构建体设计、表达和纯化
重组融合蛋白含有人CR2的4个N末端SCR单元，其连接到可溶形式人CD59或DAF的N或C末端(图1中所示的构建体)。从稳定转染的CHO细胞克隆的培养上清液纯化重组蛋白，产率是100-200μg/l。通过SDS-PAGE和Western印迹分析纯化的重组蛋白，显示了期望分子量范围内的蛋白质(图2)，并且除了CR2-CD59，所有蛋白质都做为单条带迁移。观察到的CR2-CD59的两条带是由于糖基化差异引起，因为在聚糖酶处理后，CR2-CD59做为单条带迁移。
(2)融合蛋白靶向补体调理的细胞
通过CHO细胞与补体激活抗体和C6耗尽的血清(以阻止MAC形成和细胞裂解)温育，在CHO细胞上沉积CR2的C3配体。所有含有CR2的融合蛋白，但不是sCD59或sDAF，均结合C3包被的CHO细胞(图3)。
(3)融合蛋白和C3dg配体之间相互作用的动力学分析
通过表面等离子体共振测定法比较不同重组融合蛋白对CR2配体C3dg的亲合力。使可变浓度的融合蛋白通过含有捕获的C3dg-生物素的Biacore链霉抗生物素蛋白芯片进行试验(约2000个应答单位)。数据的动力学分析表明利用Global拟合参数，对1∶1(Langmuir)结合相互作用模型的最佳拟合(图4)。在N末端具有CR2的两种融合蛋白(CR2-DAF和CR2-CD59)显示了相似的结合曲线，具有快速的结合和快速的解离速率。相反，在C末端具有CR2的融合蛋白(DAF-CR2和CD59-CR2)的结合显示了慢的结合和解离速率(图4，表1)。然而，N末端CR2融合蛋白以最高亲和力结合(表1)。CD59融合蛋白比DAF融合蛋白具有更高的结合亲和力。可溶的DAF和sCD59不结合固定的C3dg。
(4)融合蛋白的补体抑制活性
通过测定定向和未定向的补体抑制剂对补体介导的CHO细胞和红细胞裂解作用的影响，分析它们的补体抑制活性。在这些试验中，在人血清(以引起90-100％未保护细胞裂解的浓度)中温育抗体敏化细胞和重组蛋白。对于两种细胞类型，在抑制补体介导的裂解方面，定向的补体抑制剂比它们相应的未定向蛋白质更显著有效。定向的DAF蛋白质是比定向的CD59更有效的抑制剂(图5和6)。含有连接到DAF或CD59N末端的CR2的融合蛋白比C末端CR2融合蛋白为更有效的抑制剂。补体裂解的最有效抑制剂是CR2-DAF，需要18nM浓度以抑制50％CHO细胞裂解。相反，未定向的sDAF需要375nM以抑制50％CHO细胞裂解，有20倍差异(图5a)。sCD59是特别差的补体抑制剂，并且在500nM只提供25％防止CHO细胞裂解的保护作用，该浓度是检测的最高浓度。然而，CR2-CD59在102nM就提供了50％CHO细胞裂解抑制作用，其比未定向的sDAF更有效(图6a)。表4比较了不同重组补体抑制剂的抑制活性。N末端CR2融合蛋白的更高补体抑制活性与这些蛋白质显示的对C3dg配体更高的亲和性相关(表3)。
在保护CHO细胞和红细胞免受补体介导的裂解时，补体抑制剂的相对效力有一些差异。对于DAF抑制剂，这特别正确；尽管定向的DAF更有效，但是与sDAF保护CHO细胞免受补体介导的裂解比较，sDAF更显著有效地保护红细胞免受补体介导的裂解。当红细胞是补体裂解的靶细胞时，CR2-DAF和DAF-CR2的抑制活性也有很小的差别。
(5)CR2融合蛋白对细胞粘着的影响
补体受体3是白细胞受体，该受体参与内皮粘附、血细胞渗出和细胞的细胞溶解机制(吞噬作用和脱粒)的活化。因为CR2和CR3共有相同的iC3b补体配体，测定是否CR2融合蛋白干扰CR3介导的细胞结合。对于这些试验使用U937，一种充分表征的幼单核细胞系(CRd2-，CR3+)，该细胞系以依赖CR3的机制结合iC3b包被的红细胞(40)。所有的CR2融合蛋白，但不是sDAF或sCD59，都显著抑制U937细胞与C3调理的绵羊红细胞的结合(P＜0.01)。每种CR2融合蛋白在500nM浓度以相似的程度抑制U937结合(图7)。在利用PMA刺激U937细胞的试验中获得了相似的数据，PMA刺激是引起CR3上调的处理(39，40)。对于红细胞的补体调理作用，由于红细胞上沉积的IgG将结合U937细胞上表达的Fcγ受体，所以IgM用于激活补体。U937细胞也表达CR4(p150，95，CD11c/CD18)，其是共有iC3b配体的第三种受体。然而，U937细胞与C3调理的红细胞的结合不依赖于CR4，这可能是由于CR4与细胞骨架结合并且其在细胞膜上是固定的(40)。
(6)CR2-DAF靶向肾炎小鼠的肾脏
为了确定是否CR2融合蛋白将在体内靶向补体激活和疾病位点，进行雌性NZB/W F1小鼠中CR2-DAF和sDAF的生物分布研究。NZB/W F1小鼠患有与人系统性红斑狼疮(SLE)非常相似的自发性自身免疫病，从26到28周龄，产生自身抗体和形成与补体沉积有关的严重免疫复合物介导的肾小球肾炎(4，52)。在注射后24小时和48小时检测34周龄NZB/WF1小鼠中[125I]CR2-DAF和[125I]sDAF的生物分布。尾静脉注射[125I]CR2-DAF后24小时，与检测的其它器官相比，显著更高比例的放射性定位到肾脏(图25a)。在[125I]CR2-DAF注射后48小时，肾脏中放射性水平与24小时时肾脏中放射性水平相似，但是肝脏和脾脏中放射性增加，血液放射性降低(图25b)。肝脏和脾脏是免疫复合物清除的位点，这可能解释在后面的时间点[125I]CR2-DAF向这些器官增加的靶向。[125I]sDAF在肾脏或任何其它器官中没有显示优选的结合(图25，a和b)。在8周龄肾炎前NZB/W F1小鼠中，没有[125I]CR2-DAF靶向肾脏的迹象(图25c)。更有意义的是，[125I]sDAF从循环中的清除比[125I]CR2-DAF从循环中的清除要快得多，表明CR2部分有延长融合蛋白的循环半衰期的作用。然而，在24小时，年轻小鼠血液中的[125I]CR2-DAF水平是年老小鼠中记录的水平的约一半，并且[125I]CR2-DAF的长循环半衰期可能至少部分是其结合循环免疫复合物的结果。
通过肾脏切片的直接检查，在另一个SLE鼠模型中也检查了CR2-DAF靶向肾脏中沉积的补体。与雌性NZB/W F1小鼠相似，MRL/lpr小鼠到24周龄出现严重增生性肾小球肾炎，伴有与肾小球免疫沉积物有关的补体沉积(53，这里将其关于该小鼠模型的教导并入为参考文献)。将CR2-DAF和sDAF注射到24周龄MRL/lpr小鼠尾静脉中，并且24小时后，通过荧光显微镜方法分析肾脏切片的人DAF免疫反应性。来源于用CR2-DAF注射的小鼠的肾脏切片显示了高水平的DAF染色，在肾小球中具有优先的定位，定位模式与观察到的免疫复合物的定位模式相同。在来源于用sDAF注射的小鼠的肾小球中，DAF染色不明显(图26)。
c)结论
本研究描述了含有可溶人DAF和CD59的蛋白质的产生和表征，其中该蛋白质靶向补体激活位点。该靶向蛋白质比它们未靶向的对应物显著更有效地抑制补体。通过连接抑制剂和结合补体C3激活产物的人CR2片段获得CD59和DAF的靶向。CR2的C3配体相对长寿，并且常常大量共价结合在补体激活位点。因此，CR2介导的定向补体抑制作用对大量与补体相关的疾病或疾病状态具有治疗益处。与这种假说一致，已证明CR2-DAF靶向肾炎NZB/W F1小鼠的肾脏。这些小鼠产生自身抗体，随后在肾脏中形成和沉积免疫复合物，引起补体激活和沉积(2，43)。人CR2以相似的亲和性结合人和小鼠C3配体(44)，并且生物分布研究确立CR2融合蛋白在体内保留靶向功能。该研究确立了这种方法抑制人补体的可行性。此靶向方法对其它补体激活抑制剂诸如可溶性CR1也可能有效，所述可溶性CR1处在临床试验中，并且在体外是比DAF更有效的补体抑制剂(9)。
不同CR2融合蛋白对C3dg的相对亲和性使人想到CR2的SCR1-2和CR2的SCR1-15对C3dg的亲和性。CR2 SCR1-2和CR2 SCR1-15与C3dg相互作用的KD值相似，但是CR2 SCR1-2的结合和解离快得多，表明另外的SCR结构域对总体亲和性的贡献(36)。对另一种含有SCR的蛋白质，因子H的溶液结构分析表明SCR结构域本身回折，并且SCR结构域之间的相互作用可以调节C3配体结合特征(45)。预测SCR结构域之间的构象可变性是不同(天然)接头长度造成的结果，接头越长提供越大的构象柔性。在本发明上下文中，用相对长的ser-gly接头连接CR2和DAFSCR结构域，这可以允许融合配偶体回折于彼此之上，引起可以调节CR2结合亲和性的SCR-SCR相互作用。
利用抗体敏化的CHO细胞或绵羊红细胞做为靶进行补体介导的裂解试验。在保护不同的细胞免受补体介导的裂解方面，有些补体抑制剂的相对活性具有显著的差异。与sDAF，DAF-CR2和CD59-CR2对CHO细胞的保护相比，它们显著更有效地保护绵羊红细胞免受补体介导的裂解。不象红细胞，补体介导的有核细胞裂解不完全由胶体渗透压下调引起，其需要质膜中多个MACs的沉积(46-48)。利用红细胞做为补体介导的裂解的靶细胞，大多数以前研究已经进行了研究可溶(未靶向的)补体抑制剂的抑制活性。然而，对于体外试验，CHO细胞可能代表一种更生理相关的靶。
补体介导的损害的不同机制涉及不同的疾病状况，并且不同疾病可以从作用在该途径中不同点的抑制策略中获益。例如，如果可应用于疾病，在途径中后面步骤阻断补体的一个特别益处是宿主防御功能和补体的免疫内稳态机制将保持完整。因此，在发病机理主要涉及终末溶细胞途径的疾病中，基于CD59的抑制剂将提供优于补体激活抑制剂的优点。由于可溶CD59体外非常差的活性，其不可能具有治疗益处，但是这里证明CR2介导的CD59靶向显著地增加了其补体抑制活性。实际上，CR2-CD59比sDAF更有效地抑制补体介导的裂解，而sDAF的体内治疗效力是已经得以证明的(8)。CR2-CD59的啮齿动物类似物也可以是用于仔细分析早期补体激活产物与MAC形成在疾病病理中的相对作用的有用工具。目前不太理解许多疾病状态中不同补体激活产物对组织损害的相对贡献，并且对此存在争议。
CR2融合蛋白抑制U937细胞与C3调理的红细胞结合。CR2和CR3都结合iC3b，并且该数据表明CR2融合蛋白作为CR3拮抗剂，因为U937与C3调理的红细胞的结合是依赖于CR3的(40)。做为一种粘着分子，CR3在炎性位点通过其与细胞间粘着分子-1(ICAM-1)的高亲和性相互作用而介导内皮粘着和血细胞渗出。做为补体受体，CR3通过其与iC3b相互作用，促进和增强了吞噬和脱粒作用。ICAM-1和iC3b都结合CR3上重叠的表位(参见Ross综述)。因此，CR3可能是在炎性位点促进细胞介导的组织损害的重要决定因素，并且在几种炎性病症中已证明了阻断CR3的抗体的效力(参见Ross综述)。因此，CR2对CR3结合的拮抗作用提示CR2补体抑制剂融合蛋白作用的第二抗炎机制，这种抗炎机制与补体抑制协同地起作用。
将补体抑制剂靶向补体激活和疾病位点可以相当大地增强它们的效力。实际上，对于将获益于基于CD59的治疗的疾病状态，CD59靶向补体激活位点将是一个必要条件。CR2介导的靶向与其它靶向方法，诸如抗体介导的靶向相比的优点是CR2部分可以靶向任何可接近的补体激活位点，并且具有广泛的治疗应用。CR2融合蛋白也可以做为CR3拮抗剂，并且这代表第二重要的治疗益处。人CR2-补体抑制剂融合蛋白比含有抗体可变区的重组抑制剂更不可能是免疫原性的。预测定向的补体激活抑制剂能够提供有效的局部浓度同时具有低水平系统抑制，这种能力也减少了危害宿主防御机制的可能性，特别是由于长期全身性补体抑制而危害宿主防御机制的可能性(对于基于CD59的抑制剂，这是不太重要的考虑因素)。通过CR2定向的抑制剂也可以靶向激活补体的感染因子。
2、实施例2：靶向的补体抑制和激活
a)补体抑制剂(炎性/生物不相容性)
补体抑制剂具有相当大的希望治疗许多自身免疫病和炎性疾病及与生物不相容性相关的疾病状态。目前尚未有安全有效的药物补体抑制剂。研究大多数关注于开发基于宿主细胞膜-结合的补体-调节蛋白质的可溶抑制剂。通过移除细胞膜连接区，已经产生了重组形式的可溶CR1，MCP，DAF和Crry，并且在多种疾病模型中，已经证明所有的蛋白质均有效地减少炎症和补体介导的组织损害。阻断补体蛋白质C5的功能的抗体和可溶CR1处于临床试验中。然而，在系统施用的可溶性补体抑制剂的临床应用中存在严重的问题。补体在天然和适应性免疫性中起到至关重要的作用，并且C3b的产生对调理作用和白细胞介导的许多病原微生物的清除至关重要。此外，也证明液相补体激活产物C5a在控制感染方面是重要的，并且可能在从循环中清除病原物质方面也是重要的。因此，补体的全身性抑制可能会对宿主控制感染的能力造成严重的后果。补体对于免疫复合物的有效分解代谢也至关重要，因此在使用补体抑制剂治疗自身免疫病和免疫复合物疾病时，这是特别重要的考虑因素。
补体抑制剂靶向补体激活和疾病位点可以允许低得多的有效血清浓度，并且显著降低系统性补体抑制的水平。增加的效力是定向补体抑制剂的一个重要益处，并且靶向也可以解决可溶性重组补体抑制剂在循环中的短半衰期问题。
除了上述关于补体抑制剂靶向的考虑因素外，选择性阻断补体途径的不同部分也可以允许有益的补体激活产物的产生，而抑制参与疾病病理的补体激活产物的产生。例如，补体激活的抑制剂(诸如CR1，DAF，Crry)抑制C3b，C5a和C5b-9产生。C5抗体抑制C5a和C5b-9产生。另一方面，基于CD59的抑制剂不影响C3b和C5a产生，而是只阻断C5b-9形成(参见，图8)。已证明终末补体途径和C5b-9产生在促进炎症方面是重要的，并且尤其是参与一些肾脏疾病(诸如免疫复合物肾小球肾炎)的进展。因此，对于一些疾病，基于CD59的抑制剂可以抑制疾病病理，而不干扰对于宿主防御和免疫复合物清除而言重要的早期补体激活产物的产生。然而，可溶CD59不是补体的有效抑制剂(不同于激活抑制剂DAF，CR1，MCP或Crry)，并且不可能具有任何临床应用。然而，靶向细胞的CD59可以是可行的治疗剂。有关抗体介导的CD59靶向的数据[Zhang等1999，J.Clin.Invest.103，55-61]，和这里有关CR2介导的CD59靶向所给出的数据表明，靶向细胞膜的CD59比可溶性未靶向的CD59显著更有效。
b)补体激活剂(癌症)
还没有实现抗癌补体激活单克隆抗体做为癌症免疫治疗剂的最初希望。这种情况的一个原因是肿瘤细胞上补体抑制性蛋白的表达(补体抑制剂在肿瘤细胞上常常被上调)。因此，尽管已经证明一些抗体靶向人体中的肿瘤，并且激活肿瘤细胞表面上的补体，但是肿瘤细胞仍抵抗补体介导的破坏作用。有大量来自于体外研究的证据表明补体抑制剂在肿瘤对抗体治疗的抗性中起重要作用。此外，有报道[Caragine等，2002，Cancer Res，62，1110-15；Chenet等，2000，Cancer Res.，60，3013-18；Baranyi等，1994，Immunology，82，522-8]已经确立肿瘤细胞表面上体内表达的补体抑制剂对补体沉积和肿瘤发生具有功能作用。增加肿瘤细胞上补体沉积允许更有效地通过免疫介导清除肿瘤细胞，并且提高利用补体激活抗肿瘤抗体进行成功免疫治疗的前景。增加的补体激活将压到肿瘤细胞表达的补体抑制性蛋白质。
c)结果-1
(1)定向的补体抑制剂融合蛋白
如前述，已经被表达、纯化和进行了靶向表征和被估测了体外补体抑制性功能的人融合蛋白的例子包括：CR2-DAF，CR2-CD59，DAF-CR2和CD59-CR2。成熟人融合蛋白的核苷酸序列和预测的氨基酸序列如图8-11中所示。
(2)表达和纯化
编码融合蛋白的cDNA质粒构建体被转染到CHO细胞中，并且分离稳定的表达克隆。选择表达最高水平融合蛋白的克隆。在生物反应器中培养选定的克隆，并且通过亲和层析从培养上清液分离融合蛋白。利用缀合抗DAF和抗CD59抗体的琼脂糖凝胶制备亲和性柱子。通过SDS-PAGE和Western印迹分析重组蛋白(图2)。
(3)融合蛋白与C3配体的结合
(a)流式细胞术
如前所述进行流式细胞术试验。如通过流式细胞术所分析的，所有含有CR2的融合蛋白都结合C3包被的CHO细胞(图12)。sDAF和sCD59不结合C3包被的CHO细胞。
(b)ELISA
如前所述进行ELISA试验。在ELISA试验中，向用纯化的C3dg包被的孔添加含有CR2的构建体。通过抗补体抑制剂抗体和酶缀合的二级抗体检测结合。所有含有CR2的构建体都结合C3d，但是sCD59和sDAF不结合C3d。
(c)表面等离子体共振
生物素酰化的C3dg(CR2配体)结合链霉抗生物素蛋白包被的BIAcore芯片，并且测定含有CR2的融合蛋白的结合动力学(图13-16)。sDAF和sCD59不结合捕获的C3dg。在N-末端具有CR2的融合蛋白以最高亲和力结合。含有CD59的融合蛋白比相应含有DAF的融合蛋白以更高的亲和力结合。
(4)融合蛋白的补体抑制功能
通过测定蛋白质对补体介导的细胞裂解的影响，分析融合蛋白和可溶未靶向的补体抑制剂的功能性活性。利用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(图17和18)和绵羊红细胞(E)(图19和20)进行试验。
定向的补体抑制剂比可溶未定向的补体抑制剂提供了显著更多的避免补体介导的细胞裂解的保护作用。对于含有DAF和CD59的融合蛋白，在N末端含有CR2的融合蛋白最有效。在BIAcore试验中，N末端CR2融合蛋白也比C末端CR2融合蛋白以更高的亲和力结合C3d(参见上述)。在这些试验中，CR2-DAF比CR2-CD59提供了显著更有效的防止补体介导的裂解的保护作用。然而，值得注意的是即使在高浓度时，未靶向的sCD59也只具有非常弱的补体抑制活性(不象sDAF)，并且CD59靶向细胞表面是CD59功能所必需的。
定向与未定向的补体抑制剂比较，它们对CHO细胞和E的相对效力不同。然而，红细胞通过“一次击中”裂解(即，单个MAC的形成引起E裂解)，而有核细胞(诸如CHO)具有其它抗性机制(诸如MAC的加帽和脱落)，并且要求沉积多个MAC以进行裂解。这些差异可能解释裂解抑制数据的差异，并且对于这些体外试验，CHO细胞可能代表更生理学相关的靶。
D)结果-2
(1)靶向的补体激活融合/缀合蛋白质
已经表达和纯化了人CR2-IgG1 Fc，并且证明其适当地体外靶向C3调理的细胞。制备了含有(用于与CVF缀合的)人和小鼠sCR2及小鼠融合蛋白的编码序列的表达质粒。图21显示成熟人融合蛋白的核苷酸序列和预测的氨基酸序列。
(2)表达和纯化
编码CR2最初4个SCR的cDNA连接编码人IgG1 Fc区的基因组序列。编码融合蛋白的质粒被转染到CHO细胞中，并且分离稳定的表达克隆。选择表达最高水平融合蛋白的克隆。在生物反应器中培养选定的克隆，并且通过蛋白质A亲和层析从培养上清液分离融合蛋白。通过SDS-PAGE(图22)和Western印迹分析重组蛋白。在还原和非还原的条件下，蛋白质以预期的分子量迁移(CR2-Fc是二硫化物连接的二聚体)。构建了编码CR2-小鼠IgG3的鼠质粒构建体。
(3)融合蛋白与C3配体的结合
(a)流式细胞术
如通过流式细胞术所进行的分析，CR2-Fc结合C3包被的CHO细胞(图23)。
(b)ELISA
在ELISA试验中，向用纯化的C3dg包被的孔添加CR2-Fc。通过抗人Fc抗体和酶缀合的二级抗体检测结合。CR2-Fc结合C3d。
(c)表面等离子体共振
生物素酰化的C3dg(CR2配体)结合链霉抗生物素蛋白包被的BIAcore芯片，并且证明了CR2-Fc的结合(图24)。
3、实施例3
a)在急性肾小管间质损伤的大鼠模型中抗体靶向的补体抑制剂
使用一组很好地被表征的小鼠抗大鼠肾脏单克隆抗体(49，50，这里将其中关于这些抗体和它们的序列的教导并入为参考文献)。通过标准PCR技术从总共5种抗体分离可变区DNA(35，这里将其中关于PCR的教导并入为参考文献)。成功地克隆了所有这些DNA，并且一些表达为单链抗体。所有单链抗体都体外识别大鼠肾脏上皮或内皮细胞系。一种mAb，K9/9结合上皮细胞表面鉴定的糖蛋白，并且对体内肾小球毛细管壁和近端小管具有特异性(49)。这种抗体被选作靶向载体，用于在急性肾小管间质损伤的大鼠模型中研究定向的Crry和CD59介导的补体抑制。尽管在以前的研究(49)中表明K9/9 mAb诱导肾小球损伤，但是只是当与弗氏佐剂一起给药时抗体具有致病性。实际上，K9/9 mAb(与佐剂)的致病性质未再现。
在蛋白尿和进行性肾损害之间具有联系，并且有数据支持蛋白尿本身引起间质纤维化和炎症的假说。不知道蛋白尿引起肾中毒损害的机理，但是有证据表明补体起重要的作用，并且MAC是由于蛋白尿引起的肾小管间质损伤的主要介体。(最近已经综述了在肾小管间质损伤中补体和蛋白尿的作用(51，52))。对K9/9 mAb的先前表征(参见上述(49))提示在由蛋白尿引起的大鼠肾小管间质损伤模型中，该mAb适于定向研究靶向的补体抑制剂的治疗用途。可以特异性阻断MAC形成的抑制剂的可获得性允许在临床相关条件下估测MAC在肾小管间质损伤中的作用。
制备编码连接大鼠Crry或大鼠CD59的单链K9/9抗体的质粒构建体(图27中所示)。也制备表达可溶性大鼠Crry(sCrry)和单链K9/9(仅靶向载体)的构建体。通过在15升New Brunswich发酵罐中进行毕赤酵母(pichia)发酵，在培养基中以15mg/l以上表达所有重组蛋白质。
如上所述，利用大鼠上皮细胞系做为靶细胞，表征重组蛋白的体外靶向及补体抑制活性。单链K9/9，K9/9-Crry和K9/9-CD59体外特异性结合大鼠上皮细胞。sCrry和K9/9-Crry抑制补体沉积和裂解，并且K9/9-CD59抑制补体介导的裂解。在大鼠嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾变病模型中表征了两种定向的补体抑制剂，sCrry和K9/9单链Ab(53，这里将其中关于sCrry和K9/9的教导并入为参考文献)(因为未靶向的CD59只有非常弱的补体抑制活性(54)，所以没有评估sCD59)。首先，为了证实K9/9融合蛋白的肾脏靶向，如上所述(54，41)，通过碘化蛋白质的生物分布确定体内结合特异性。单链K9/9和K9/9融合蛋白，但不是sCrry，特异性靶向大鼠肾脏，并且在给药后48小时可以检测到(图28)。给药后24小时的生物分布是相似的，并且24小时时在血液中没有放射标记残留。
在治疗研究中，在0天由4只大鼠组成的组接受了PAN(150mg/kg)，在4，7和10天，它们接受了PBS或补体抑制剂(40mg/kg)。收集尿(代谢笼子)和血液，并且在11天处死动物。如通过肌酸酐清除所测定的，PAN处理显著地损害了肾功能(图29，从左起第2条柱)。在接受sCrry治疗的大鼠中，有轻微但不显著的肾功能改善。然而，在接受靶向的Crry或CD59治疗的PAN处理的大鼠中显著改进了肌酸酐的清除(p＜0.01)。在对照(非蛋白尿症)大鼠和接受两种靶向抑制剂中任一种的PAN处理大鼠之间肌酸酐清除率没有显著差异(图29)。如预期的，在所有不论用补体抑制剂治疗还是没有用补体抑制剂治疗的大鼠中，PAN均诱导高的蛋白尿(表1)。如通过刷状缘损失所估测的，从用PAN处理但没有接受治疗的大鼠制备的肾脏切片表明管腔扩大及小管和上皮细胞退化(参见图30b，也在附录中)。用sCrry治疗观察到了最小的改进(图30d)。相比较，在接受靶向Crry和CD59的PAN处理大鼠中显著地抑制了小管扩大和退化(图30c表示K9/9-Crry，但是对于K9/9-CD59，组织学无差别)。这些数据证明了该模型中补体抑制的治疗效力，证明了靶向比非靶向的补体抑制显著有益，并且直接证明了在由蛋白尿诱导的肾小管间质损伤中MAC介导的损害的重要作用。sCD59不是有效的抑制剂，但该研究证明适当靶向的CD59允许体内特异性抑制MAC。
在单独的试验中，如所述测定了碘化重组蛋白的循环半衰期(54，41，这里将教导该技术的部分并入为参考文献)。蛋白质的半衰期(t1/2)如下：sCrry：19分钟，K9/9-Crry：23分钟，K9/9-CD59，29分钟，单链K9/9：21分钟。为了测定重组蛋白对系统性补体抑制的影响，用蛋白质以40mg/kg注射大鼠，并且在对应于1，3，5和7x t1/2的时间收集血液。通过测定溶血活性(敏化的绵羊红细胞)检测血清中补体抑制活性。如所预期的，在血清中，K9/9-CD59具有最小的抑制活性(未靶向的试验系统)(图31)。到sCrry和K9/9-Crry注射后约3小时(7x t1/2)，血清中残留了极小的补体抑制活性。靶向和未靶向的抑制剂的短t1/2，以及生物分布数据和sCrry不具有保护性的事实证明了结合肾脏的补体抑制剂有效地局部长期抑制补体。
这些数据确立了靶向的补体抑制剂的体内用途，并且证明在疾病模型中靶向的相对于未靶向的系统补体抑制的重要益处。尽管在这些研究中使用了不同的靶向载体(抗体片段)，相同的原理适用于其它靶向载体，诸如CR2。
4、实施例4
这里公开了根据这里所教导的方法制备的本发明构建体的例子。所用的术语具有下列含义：SCR＝短共有重复；LP＝前导序列。所有构建体都有CR2-接头-补体调节剂或补体调节剂-接头-CR2的基本式。括弧里的注释表明了组合物特定部分的详细情况。例如“(完整的)”意思是在该构建体中使用了完整成熟的蛋白质，而“(SCR2-4)”表示SCR1不是构建体的一部分。可以理解接头可以是化学接头、天然接头肽或氨基酸连接序列(例如(Gly4Ser)3)。可以理解此列表不是限制性的，只提供了本申请中公开的一些构建体的例子。
CR2(完整的)-(Gly4Ser)3-DAF
CR2(完整的)-(Gly4Ser)3-人CD59
CR2(完整的)-(Gly4Ser)3-MCP
CR2(完整的)-(Gly4Ser)3-CRl
CR2(完整的)-(Gly4Ser)3-Crry
CR2(完整的)-(Gly4Ser)3-小鼠CD59
CR2(完整的)-(Gly4Ser)3-人IgGl Fc
CR2(完整的)-(Gly4Ser)3-人IgM Fc
CR2(完整的)-(Gly4Ser)3-鼠IgG3 Fc
CR2(完整的)-(Gly4Ser)3-鼠IgM Fc
CR2(完整的)-(Gly4Ser)3-CVF
CR2(完整的)-(Gly3Ser)4-DAF
CR2(完整的)-(Gly3Ser)4-人CD59
CR2(完整的)-(Gly3Ser)4-MCP
CR2(完整的)-(Gly3Ser)4-CRl
CR2(完整的)-(Gly3Ser)4-Crry
CR2(完整的)-(Gly3Ser)4-小鼠CD59
CR2(完整的)-(Gly3Ser)4-人IgGI Fc
CR2(完整的)-(Gly3Ser)4-人IgM Fc
CR2(完整的)-(Gly3Ser)4-鼠IgG3 Fc
CR2(完整的)-(Gly3Ser)4-鼠IgM Fc
CR2(完整的)-(Gly3Ser)4-CVF
CR2(完整的)-(Gly4Ser)3-DAF(SCR 2-4)
CR2(完整的)-(Gly3Ser)4-DAF(SCR 2-4)
CR2(完整的)-(Gly4Ser)3-CRl(LP--SCRl-4-SCR8-11-SCR15-18)
CR2(完整的)-(Gly4Ser)3-Crry(5个N-末端SCR)
CR2(完整的)-VSVFPLE-DAF
CR2(完整的)-VSVFPLE-人CD59
CR2(完整的)-VSVFPLE-MCP
CR2(完整的)-VSVFPLE-CR1
CR2(完整的)-VSVFPLE-Crry
CR2(完整的)-VSVFPLE-小鼠CD59
CR2(完整的)-VSVFPLE-人IgG1 Fc
CR2(完整的)-VSVFPLE-人IgM Fc
CR2(完整的)-VSVFPLE-鼠IgG3 Fc
CR2(完整的)-VSVFPLE-鼠IgM Fc
CR2(完整的)-VSVFPLE-CVF
CR2(完整的)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-DAF
CR2(完整的)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-人CD59
CR2(完整的)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-MCP
CR2(完整的)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-CR1
CR2(完整的)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-Crry
CR2(完整的)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-小鼠CD59
CR2(完整的)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-人IgG1Fc
CR2(完整的)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-人IgMFc
CR2(完整的)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-鼠IgG3Fc
CR2(完整的)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-鼠IgMFc
CR2(完整的)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-CVF
CR2(完整的)-双马来酰亚氨基己烷-DAF
CR2(完整的)-双马来酰亚氨基己烷-人CD59
CR2(完整的)-双马来酰亚氨基己烷-MCP
CR2(完整的)-双马来酰亚氨基己烷-CR1
CR2(完整的)-双马来酰亚氨基己烷-Crry
CR2(完整的)-双马来酰亚氨基己烷-小鼠CD59
CR2(完整的)-双马来酰亚氨基己烷-人IgG1 Fc
CR2(完整的)-双马来酰亚氨基己烷-人IgM Fc
CR2(完整的)-双马来酰亚氨基己烷-鼠IgG3 Fc
CR2(完整的)-双马来酰亚氨基己烷-鼠IgM Fc
CR2(完整的)-双马来酰亚氨基己烷-CVF
CR2(SCR1-2)-(Gly4Ser)3-DAF
CR2(SCR1-2)-(Gly4Ser)3-人CD59
CR2(SCR1-2)-(Gly4Ser)3-MCP
CR2(SCR1-2)-(Gly4Ser)3-CR1
CR2(SCR1-2)-(Gly4Ser)3-Crry
CR2(SCR1-2)-(Gly4Ser)3-小鼠CD59
CR2(SCR1-2)-(Gly4Ser)3-人IgG1Fc
CR2(SCR1-2)-(Gly4Ser)3-人IgM Fc
CR2(SCR1-2)-(Gly4Ser)3-鼠IgG3 Fc
CR2(SCR1-2)-(Gly4Ser)3-鼠IgM Fc
CR2(SCR1-2)-(Gly4Ser)3-CVF
CR2(SCR1-2)-(Gly3Ser)4-DAF
CR2(SCR1-2)-(Gly3Ser)4-人CD59
CR2(SCR1-2)-(Gly3Ser)4-MCP
CR2(SCR1-2)-(Gly3Ser)4-CR1
CR2(SCR1-2)-(Gly3Ser)4-Crry
CR2(SCR1-2)-(Gly3Ser)4-小鼠CD59
CR2(SCR1-2)-(Gly3Ser)4-人IgG1 Fc
CR2(SCR1-2)-(Gly3Ser)4-人IgM Fc
CR2(SCR1-2)-(Gly3Ser)4-鼠IgG3 Fc
CR2(SCR1-2)-(Gly3Ser)4-鼠IgM Fc
CR2(SCR1-2)-(Gly3Ser)4-CVF
CR2(SCR1-2)-(Gly4Ser)3-DAF(SCR 2-4)
CR2(SCR1-2)-(Gly3Ser)4-DAF(SCR 2-4)
CR2(SCR1-2)-(Gly4Ser)3-CRl(LP--SCRl-4-SCR8-11-SCR15-18)
CR2(SCR1-2)-(Gly4Ser)3-Crry(5个N-末端SCR)
CR2(SCR1-2)-VSVFPLE-DAF
CR2(SCR1-2)-VSVFPLE-人CD59
CR2(SCR1-2)-VSVFPLE-MCP
CR2(SCR1-2)-VSVFPLE-CR1
CR2(SCR1-2)-VSVFPLE-Crry
CR2(SCR1-2)-VSVFPLE-小鼠CD59
CR2(SCR1-2)-VSVFPLE-人IgG1 Fc
CR2(SCR1-2)-VSVFPLE-人IgM Fc
CR2(SCR1-2)-VSVFPLE-鼠IgG3 Fc
CR2(SCR1-2)-VSVFPLE-鼠IgM Fc
CR2(SCR1-2)-VSVFPLE-CVF
CR2(SCR1-2)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-DAF
CR2(SCR1-2)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-人CD59
CR2(SCR1-2)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-MCP
CR2(SCR1-2)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-CR1
CR2(SCR1-2)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-Crry
CR2(SCR1-2)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-小鼠CD59
CR2(SCR1-2)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-人IgG1Fc
CR2(SCR1-2)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-人IgMFc
CR2(SCR1-2)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-鼠IgG3Fc
CR2(SCR1-2)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-鼠IgMFc
CR2(SCR1-2)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-CVF
CR2(SCR1-2)-双马来酰亚氨基己烷-DAF
CR2(SCR1-2)-双马来酰亚氨基己烷-人CD59
CR2(SCR1-2)-双马来酰亚氨基己烷-MCP
CR2(SCR1-2)-双马来酰亚氨基己烷-CR1
CR2(SCR1-2)-双马来酰亚氨基己烷-Crry
CR2(SCR1-2)-双马来酰亚氨基己烷-小鼠CD59
CR2(SCR1-2)-双马来酰亚氨基己烷-人IgG1 Fc
CR2(SCR1-2)-双马来酰亚氨基己烷-人IgM Fc
CR2(SCR1-2)-双马来酰亚氨基己烷-鼠IgG3 Fc
CR2(SCR1-2)-双马来酰亚氨基己烷-鼠IgM Fc
CR2(SCR1-2)-双马来酰亚氨基己烷-CVF
CR2(SCR1-3)-(Gly4Ser)3-DAF
CR2(SCR1-3)-(Gly4Ser)3-人CD59
CR2(SCR1-3)-(Gly4Ser)3-MCP
CR2(SCR1-3)-(Gly4Ser)3-CR1
CR2(SCR1-3)-(Gly4Ser)3-Crry
CR2(SCR1-3)-(Gly4Ser)3-小鼠CD59
CR2(SCR1-3)-(Gly4Ser)3-人IgG1 Fc
CR2(SCR1-3)-(Gly4Ser)3-人IgM Fc
CR2(SCR1-3)-(Gly4Ser)3-鼠IgG3 Fc
CR2(SCR1-3)-(Gly4Ser)3-鼠IgM Fc
CR2(SCR1-3)-(Gly4Ser)3-CVF
CR2(SCR1-3)-(Gly3Ser)4-DAF
CR2(SCR1-3)-(Gly3Ser)4-人CD59
CR2(SCR1-3)-(Gly3Ser)4-MCP
CR2(SCR1-3)-(Gly3Ser)4-CR1
CR2(SCR1-3)-(Gly3Ser)4-Crry
CR2(SCR1-3)-(Gly3Ser)4-小鼠CD59
CR2(SCR1-3)-(Gly3Ser)4-人IgG1 Fc
CR2(SCR1-3)-(Gly3Ser)4-人IgM Fc
CR2(SCR1-3)-(Gly3Ser)4-鼠IgG3 Fc
CR2(SCR1-3)-(Gly3Ser)4-鼠IgM Fc
CR2(SCR1-3)-(Gly3Ser)4-CVF
CR2(SCR1-3)-(Gly4Ser)3-DAF(SCR 2-4)
CR2(SCR1-3)-(Gly3Ser)4-DAF(SCR 2-4)
CR2(SCR1-3)-(Gly4Ser)3-CRl(LP--SCRl-4-SCR8-11-SCR15-18)
CR2(SCR1-3)-(Gly4Ser)3-Crry(5个N-末端SCR)
CR2(SCR1-3)-VSVFPLE-DAF
CR2(SCR1-3)-VSVFPLE-人CD59
CR2(SCR1-3)-VSVFPLE-MCP
CR2(SCR1-3)-VSVFPLE-CR1
CR2(SCR1-3)-VSVFPLE-Crry
CR2(SCR1-3)-VSVFPLE-小鼠CD59
CR2(SCR1-3)-VSVFPLE-人IgG1 Fc
CR2(SCR1-3)-VSVFPLE-人IgM Fc
CR2(SCR1-3)-VSVFPLE-鼠IgG3 Fc
CR2(SCR1-3)-VSVFPLE-鼠IgM Fc
CR2(SCR1-3)-VSVFPLE-CVF
CR2(SCR1-3)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-DAF
CR2(SCR1-3)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-人CD59
CR2(SCR1-3)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-MCP
CR2(SCR1-3)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-CR1
CR2(SCR1-3)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-Crry
CR2(SCR1-3)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-小鼠CD59
CR2(SCR1-3)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-人IgG1Fc
CR2(SCR1-3)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-人IgMFc
CR2(SCR1-3)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-鼠IgG3Fc
CR2(SCR1-3)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-鼠IgMFc
CR2(SCR1-3)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-CVF
CR2(SCR1-3)-双马来酰亚氨基己烷-DAF
CR2(SCR1-3)-双马来酰亚氨基己烷-人CD59
CR2(SCR1-3)-双马来酰亚氨基己烷-MCP
CR2(SCR1-3)-双马来酰亚氨基己烷-CR1
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CR2(SCR1-3)-双马来酰亚氨基己烷-小鼠CD59
CR2(SCR1-3)-双马来酰亚氨基己烷-人IgG1 Fc
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CR2(SCR1-3)-双马来酰亚氨基己烷-鼠IgM Fc
CR2(SCR1-3)-双马来酰亚氨基己烷-CVF
CR2(SCR1-4)-(Gly4Ser)3-DAF
CR2(SCR1-4)-(Gly4Ser)3-人CD59
CR2(SCR1-4)-(Gly4Ser)3-MCP
CR2(SCR1-4)-(Gly4Ser)3-CR1
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CR2(SCR1-4)-(Gly4Ser)3-人IgG1 Fc
CR2(SCR1-4)-(Gly4Ser)3-人IgM Fc
CR2(SCR1-4)-(Gly4Ser)3-鼠IgG3 Fc
CR2(SCR1-4)-(Gly4Ser)3-鼠IgM Fc
CR2(SCR1-4)-(Gly4Ser)3-CVF
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CR2(SCR1-4)-(Gly3Ser)4-人IgG1 Fc
CR2(SCR1-4)-(Gly3Ser)4-人IgM Fc
CR2(SCR1-4)-(Gly3Ser)4-鼠IgG3 Fc
CR2(SCR1-4)-(Gly3Ser)4-鼠IgM Fc
CR2(SCR1-4)-(Gly3Ser)4-CVF
CR2(SCR1-4)-(Gly4Ser)3-DAF(SCR 2-4)
CR2(SCR1-4)-(Gly3Ser)4-DAF(SCR 2-4)
CR2(SCR1-4)-(Gly4Ser)3-CRl(LP--SCRl-4-SCR8-11-SCR15-18)
CR2(SCR1-4)-(Gly4Ser)3-Crry(5个N-末端SCR)
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CR2(SCR1-4)-VSVFPLE-人IgG1 Fc
CR2(SCR1-4)-VSVFPLE-人IgM Fc
CR2(SCR1-4)-VSVFPLE-鼠IgG3 Fc
CR2(SCR1-4)-VSVFPLE-鼠IgM Fc
CR2(SCR1-4)-VSVFPLE-CVF
CR2(SCR1-4)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-DAF
CR2(SCR1-4)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-人CD59
CR2(SCR1-4)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-MCP
CR2(SCR1-4)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-CR1
CR2(SCR1-4)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-Crry
CR2(SCR1-4)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-小鼠CD59
CR2(SCR1-4)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-人IgG1Fc
CR2(SCR1-4)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-人IgMFc
CR2(SCR1-4)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-鼠IgG3Fc
CR2(SCR1-4)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-鼠IgMFc
CR2(SCR1-4)-间-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯-CVF
CR2(SCR1-4)-双马来酰亚氨基己烷-DAF
CR2(SCR1-4)-双马来酰亚氨基己烷-人CD59
CR2(SCR1-4)-双马来酰亚氨基己烷-MCP
CR2(SCR1-4)-双马来酰亚氨基己烷-CR1
CR2(SCR1-4)-双马来酰亚氨基己烷-Crry
CR2(SCR1-4)-双马来酰亚氨基己烷-小鼠CD59
CR2(SCR1-4)-双马来酰亚氨基己烷-人IgG1 Fc
CR2(SCR1-4)-双马来酰亚氨基己烷-人IgM Fc
CR2(SCR1-4)-双马来酰亚氨基己烷-鼠IgG3 Fc
CR2(SCR1-4)-双马来酰亚氨基己烷-鼠IgM Fc
CR2(SCR1-4)-双马来酰亚氨基己烷-CVF
G.参考文献
1.Wang，Y.，Rollins，S.A.，Madri，J.A.，和Matis，L.A.1995.抗-C5单克隆抗体治疗阻止胶原诱导的关节炎和改善确立的疾病.Proc Natl AcadSci USA 92：8955-8959.
2.Wang，Y.，Hu，Q.，Madri，J.A.，Rollins，S.A.，Chodera，A.，和Matis，L.A.1996.利用对补体成分C5特异的阻断单克隆抗体治疗后NZB/W Fl小鼠中狼疮样自身免疫病的改善.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：8563-8568.
3.Kaplan，M.2002.Eculizumab(Alexion).Curr Opin Investig Drugs 3：1017-1023.
4.Whiss，P.A.2002.Pexelizumab Alexion.Curr Opina Investig Drugs 3：870-877.
5.Weisman，H.F.，Bartow，T.，Leppo，M.K.，Marsh，H.C.，Carson，G.R.，Consino，M.F.，Boyle，M.P.，Roux，K.H.，Weisfeldt，M.L.，和Fearon，D.T.1990.可溶性1型人补体受体：阻抑缺血后心肌炎症和坏死的体内补体抑制剂.Science 249：146-151.
6.Rioux，P.2001.TP-10(AVANT免疫治疗剂).Curr Opin Investig Drugs 2：364-371.
7.Higgins，P.J.，Ko，J.-L.，Lobell，R.，Sardonini，C.，Alessi，M.K.，和Yeh，C.G.1997.具有衰变加速因子和因子I辅因子活性的可溶嵌合补体激活抑制蛋白.J.Immunol.158：2872-2881.
8.Moran，P.，Beasly，H.，Gorrel，A.，Martin，E.，Gribling，P.，Fuchs，H.，Gillet，N.，Burton，L.E.，和Caras，I.W.1992.人重组可溶衰变加速因子体外和体内抑制补体活性.J.Immunol.149：1736-1743.
9.Christiansen，D.，Milland，J.，Thorley，B.R.，McKenzie，I.F.，和Loveland，B.E.1996.重组可溶CD46的体内功能分析和与体外重组可溶形式的CD55和CD35的比较.eji 26：578-585.
10.Salerno，C.T.，Kulick，D.M.，Yeh，C.G.，Guzman-Paz，M.，Higgins，P.J.，Benson，B.A.，Park，S.J.，Shumway，S.J.，Bolman，R.M.，第三版，和Dalmasso，A.P.2002.在猪到恒河猴的心脏移植中C3和C5转化酶的可溶嵌合抑制剂，补体激活阻断剂2延长了移植存活.Xenotransplantation 9：125-134.
11.Kroshus，T.J.，Salerno，C.T.，Yeh，C.G.，Higgins，P.J.，Bolman，R.M.，第三版，和Dalmasso，A.P.2000.在猪到人心脏移植模型中，由人CD46和CD55组成的重组可溶嵌合补体抑制剂减少了急性心脏组织的损伤.Transplantation 69：2282-2289.
12.Rushmere，N.K.，Van Den Berg，C.W.，和Morgan，B.P.2000.可溶重组形式的小鼠CD59的产生和功能表征.Immunology 99：326-332.
13.Quigg，R.J.，He，C.，Hack，B.K.，Alexander，J.J.，和Morgan，B.P.2000.在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)中，大鼠CD59和嵌合CD59-Crry做为活性可溶蛋白质的产生和功能性分析.Immunology 99：46-53.
14.Sugita，Y.，Ito，K.，Shiozuka，K.，Gushima，H.，Tomita，M.，和Masuho，Y.1994.重组可溶CD59抑制补体的反应性溶血作用.Immunol.82：34-41.
15.Meri，S.，Lehto，T.，Sutton，C.W.，Tyynela，J.，和Baumann，M.1996.可溶CD59的结构组成和功能特征：通过激光解吸质谱分析揭示出寡糖和糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚的异质性.Biochem J 316(Pt 3)：923-935.
16.Mulligan，M.S.，Warner，R.L.，Ritterhaus，C.W.，Thomas，L.J.，Ryan，U.S.，Foreman，K.E.，Crouch，L.D.，Till，G.O.，和Ward，P.A.1999.具有唾液酸lewis X部分的补体抑制剂的内皮靶向和增加的抗炎性作用.J.Immunol.162：4952-4959.
17.Ritterhaus，C.W.，Thomas，L.J.，Miller，D.P.，Picard，M.D.，Georhegan-Barek，K.M.，Scesney，S.M.，Henry，L.D.，Sen，A.C.，Bertino，A.M.，Hannig，G.，等.1999.抑制补体活化和结合选择蛋白粘着分子的重组糖蛋白.J.Biol.Chem.274：11237-11244.
18.Zhang Hf，H.，Lu，S.，Morrison，S.L.，和Tomlinson，S.2001.功能性抗体-衰变加速因子(DAF)融合蛋白靶向细胞表面.J Biol Chem 14：14.
19.Zhang，H.-F.，Yu，J.，Bajwa，E.，Morrison，S.L.，和Tomlinson，S.1999.功能性抗体-CD59融合蛋白靶向细胞表面.J.Clin.Invest.103：55-66.
20.Linton，S.M.，Williams，A.S.，Dodd，I.，Smith，R.，Williams，B.D.，和Morgan，B.P.2000.在大鼠的抗原诱导的关节炎中，新的细胞膜靶向的补体调节剂的治疗效力.Arthritis Rheum 43：2590-2597.
21.Smith，G.P.，和Smith，R.A.2001.细胞膜靶向的补体抑制剂.MolImmunol 38：249-255.
22.Carroll，M.C.1998.在免疫性诱导和调节中补体和补体受体的作用.Annu.Rev.Immunol.16：545-568.
23.Carroll，M.C.2000.在B细胞激活和耐受中补体的作用.Adv Immunol74：61-88.
24.Holers，V.M.1989.补体受体.Year Immunol 4：231-240.
25.Dierich，M.P.，Schulz，T.F.，Eigentler，A.，Huemer，H.，和Schwable，W.1988.补体系统的受体和调节剂之间的结构和功能关系.Mol Immunol25：1043-1051.
26.Lowell，C.A.，Klickstein，L.B.，Carter，R.H.，Mitchell，J.A.，Fearon，D.T.，和Ahearn，J.M.1989.将EB病毒和C3dg结合位点作图定位至2型补体受体的共同结构域J Exp Med 170：1931-1946.
27.Szakonyi，G.，Guthridge，J.M.，Li，D.，Young，K.，Holers，V.M.，和Chen，X.S.2001.补体受体2与其C3配体复合的结构.Science 292：1725-1728.
28.Law，S.K.，Fearon，D.T.，和Levine，R.P.1979.C3b失活剂对结合细胞的C3b的作用.J Immunol 122：759-765.
29.Seya，T.，和Nagasawa，S.1985.通过调节性酶C3b失活剂限制补体蛋白C3b的蛋白酶解：生物活性片段C3dg的分离和表征.J Biochem(Tokyo)97：373-382.
30.Quigg，R.A.，Kozono，Y.，Berthiaume，D.，Lim，A.，Salant，J.，Weinfeld，A.，Griffin，P.，Kremmer，E.，和Holers，V.M.1998.用可溶鼠补体抑制剂Crry-Ig封闭抗体诱导的肾小球肾炎.J Immunol.160：4553-4560.
31.Harlow，E.，和Lane，D.1988.Antibodies.A laboratory manual.NewYork：Cold Spring Harbor Laboratory.
32.Kim，S.1993.脂质体做为癌症化疗的载体，目前的状况和未来的前景.Drugs 46：618-638.
33.Davies，A.，Simmons，D.L.，Hale，G.，Harrison，R.A.，Tighe，H.，Lachmann，P.J.，和Waldmann，H.1989.人淋巴细胞中表达的Ly-6蛋白质，CD59调节同源细胞的补体膜攻击复合物的作用.Journal ofExperimental Medicine 170：637-654.
34.Guthridge，J.M.，Young，K.，Gipson，M.G.，Sarrias，M.R.，Szakonyi，G.，Chen，X.S.，Malaspina，A.，Donoghue，E.，James，J.A.，Lambris，J.D.，等.2001.利用2型补体受体(CR2)/CD21的X射线晶体结构进行表位作图：直接识别CR2-C3d介面的高抑制性单克隆抗体的鉴定.J Immunol167：5758-5766.
35.1995.PCR Primer.A laboratory manual.Cold Spring Harbor：ColdSpring Harbor Laboratory Press.
36.Guthridge，J.M.，Rakstang，J.K.，Young，K.A.，Hinshelwood，J.，Aslam，M.，Robertson，A.，Gipson，M.G.，Sarrias，M.R.，Moore，W.T.，Meagher，M.，等.2001.2型补体受体(CR2/CD21)短共有/补体重复结构域的重组N末端对的溶液中结构研究和与其配体C3dg的相互作用.Biochemistry 40：5931-5941.
37.Yu，J.，Caragine，T.，Chen，S.，Morgan，B.P.，Frey，A.F.，和Tomlinson，S.1999.通过表达异源CD59保护人乳腺癌细胞免受补体介导的裂解.Clin.Exp.Immunol.115：13-18.
38.Duits，A.J.，Jainandunsing，S.M.，van de Winkel，J.G.，和Capel，P.J.1991.在人幼单核细胞U937细胞分化期间，通过白细胞介素6选择性增加Leu-CAM表达.Scand J Immunol 33：151-159.
39.Rothlein，R.，和Springer，T.A.1986.由佛波酯刺激的同型白细胞粘着中需要淋巴细胞功能相关抗原1.J Exp Med 163：1132-1149.
40.Ross，G.D.，Reed，W.，Dalzell，J.G.，Becker，S.E.，和Hogg，N.1992.巨噬细胞细胞骨架与CR3和CR4缔合可以调节受体运动性和iC3b调理的红细胞的吞噬作用.J Leukoc Biol 51：109-117.
41.Sharkey，R.M.，Motta-Hennessy，C.，Pawlyk，D.，Siegel，J.A.，和Goldenberg，D.M.1990.在具有人结肠肿瘤异种移植物的裸鼠中钇和碘标记的单克隆抗体IgG和片段的生物分布和剂量估算.Cancer Res.50：2330-2336.
42.Sharkey，R.M.，Natale，A.，Goldenberg，D.M.，和Mattes，M.J.1991.在裸鼠中快速清除血液中免疫球蛋白G2a和免疫球蛋白G2b.Cancer Res51：3102-3107.
43.Andrews，B.S.，Eisenberg，R.A.，Theofilopoulos，A.N.，Izui，S.，Wilson，C.B.，McConahey，P.J.，Murphy，E.D.，Roths，J.B.，和Dixon，F.J.1978.自发鼠狼疮样综合症.在几种株系中的临床和免疫病理学表现.JExp Med 148：1198-1215.
44.Hebell，T.，Ahearn，J.M.，和Fearon，D.T.1991.通过B淋巴细胞的可溶补体受体抑制免疫应答.Science 254：102-105.
45.Aslam，M.，和Perkins，S.J.2001.通过同步加速器X射线和中子散射、分析性超离心和限定的分子模建，人补体单体因子H的回折溶液结构.JMol Biol 309：1117-1138.
46.Koski，C.L.，Ramm，L.E.，Hammer，C.H.，Mayer，M.M.，和Shin，M.L.1983.通过补体对有核细胞的细胞溶解：细胞死亡显示多次击中的特征.Proc Natl Acad Sci USA 80：3816-3820.
47.Ramm，L.E.，Whitlow，M.B.，和Mayer，M.M.1982.通过补体形成跨膜通道：单通道所需的C5b6，C7，C8和C9分子数量的功能分析.Proc NatlAcad Sci U S A 79：4751-4755.
48.Takeda，J.，Kozono，H.，Takata，Y.，Hong，K.，Kinoshita，T.，Sayama，K.，Tanaka，E.，和Inoue，K.1986.补体介导的溶血所必需的击中数量.Microbiol Immunol 30：461-468.
49.Mendrick，D.L.，和H.G.Rennke.1988.通过抗SGP-115/107的单克隆抗体对大鼠中蛋白尿的诱导.Kidney Int 33：818-830.
50.Mendrick，D.L.，H.G.Rennke，R.S.Cotran，T.A.Springer，和A.K.Abbas.1983.抗大鼠肾小球抗原的单克隆抗体：产生和特异性.LaboratoryInvestigation 49：107-117.
51.Hsu，S.I.，和W.G.Couser.2003.通过补体激活介导蛋白尿肾病中肾小管间质损伤的慢性进展：补体抑制剂的治疗作用？.J Am Soc Nephrol 14：S186-191.
52.Sheerin，N.S.，和S.H.Sacks.2002.肾脏中泄漏的蛋白质和间质损伤：补体是丢失的连接？Clin Exp Immunol 130：1-3.
53.Hori，Y.，K.Yamada，N.Hanafusa，T.Okuda，N.Okada，T.Miyata，W.G.Couser，K.Kurokawa，T.Fujita，和M.Nangaku.1999.Crry，一种补体调节蛋白，调节由蛋白尿诱导的肾间质疾病.Kidney Int 56：2096-2106.
54.Song，H.，C.He，C.Knaak，J.M.Guthridge，V.M.Holers，和S.Tomlinson.2003.补体受体2介导补体抑制剂靶向补体激活位点.J ClinInvest 111：1875-1885.
H.序列
1、DAF
核苷酸序列对应于SEQ ID NO：1
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：2
2、CD59
核苷酸序列对应于SEQ ID NO：3
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：4
3、CR2-DAF
核苷酸序列对应于SEQ ID NO：5
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：6
4、CR2-人CD59
核苷酸序列对应于SEQ ID NO：7
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：8
5、DAF-CR2
核苷酸序列对应于SEQ ID NO：9
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：10
6、人CD59-CR2
核苷酸序列对应于SEQ ID NO：11
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：12
7、CR1
核苷酸序列对应于SEQ ID NO：13
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：14
8、MCP
核苷酸序列对应于SEQ ID NO：15
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：16
9、小鼠Crry
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：17
10、人IgG1 Fc
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：18
11、人IgM Fc
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：19
12、CR2-人IgG1 Fc
核苷酸序列对应于SEQ ID NO：20
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：21
13、小鼠IgG3 Fc
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：22
14、眼镜蛇毒因子
核苷酸序列对应于SEQ ID NO：23
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：24
15、人CR2
核苷酸序列对应于SEQ ID NO：25
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：26
16、小鼠CR2
核苷酸序列对应于SEQ ID NO：27
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：28
17、人CR2
氨基酸序列对应于SEQ ID NO：29
序列表
<110>MUSC研究发展基金会(MUSC Foundation For Research Development)
科罗拉多大学董事会(Regents of University of Colorado)
<120>通过补体受体2定向的补体调节剂
<130>57771-20002.40
<140>PCT/US2003/036459
<141>2003-11-13
<150>60/426,676
<151>2002-11-15
<160>29
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>1
<211>1041
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>1
gactgtggcc ttcccccaga tgtacctaat gcccagccag ctttggaagg ccgtacaagt  60
tttcccgagg atactgtaat aacgtacaaa tgtgaagaaa gctttgtgaa aattcctggc  120
gagaaggact cagtgatctg ccttaagggc agtcaatggt cagatattga agagttctgc  180
aatcgtagct gcgaggtgcc aacaaggcta aattctgcat ccctcaaaca gccttatatc  240
actcagaatt attttccagt cggtactgtt gtggaatatg agtgccgtcc aggttacaga  300
agagaacctt ctctatcacc aaaactaact tgccttcaga atttaaaatg gtccacagca  360
gtcgaatttt gtaaaaagaa atcatgccct aatccgggag aaatacgaaa tggtcagatt  420
gatgtaccag gtggcatatt atttggtgca accatctcct tctcatgtaa cacagggtac  480
aaattatttg gctcgacttc tagtttttgt cttatttcag gcagctctgt ccagtggagt  540
gacccgttgc cagagtgcag agaaatttat tgtccagcac caccacaaat tgacaatgga  600
ataattcaag gggaacgtga ccattatgga tatagacagt ctgtaacgta tgcatgtaat  660
aaaggattca ccatgattgg agagcactct atttattgta ctgtgaataa tgatgaagga  720
gagtggagtg gcccaccacc tgaatgcaga ggaaaatctc taacttccaa ggtcccacca  780
acagttcaga aacctaccac agtaaatgtt ccaactacag aagtctcacc aacttctcag  840
aaaaccacca caaaaaccac cacaccaaat gctcaagcaa cacggagtac acctgtttcc  900
aggacaacca agcattttca tgaaacaacc ccaaataaag gaagtggaac cacttcaggt  960
actacccgtc ttctatctgg gcacacgtgt ttcacgttga caggtttgct tgggacgcta  1020
gtaaccatgg gcttgctgac t                                            1041
<210>2
<211>380
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>2
Met Thr Val Ala Arg Pro Ser Val Pro Ala Ala Leu Pro Leu Leu Gly
 1               5                  10                  15
Glu Leu Pro Arg Leu Leu Leu Leu Val Leu Leu Cys Leu Pro Ala Val
            20                  25                  30
Trp Asp Cys Gly Leu Pro Pro Asp Val Pro Asn Ala Gln Pro Ala Leu
        35                  40                  45
Glu Gly Arg Thr Ser Phe Pro Glu Asp Thr Val Ile Thr Tyr Lys Cys
    50                  55                  60
Glu Glu Ser Phe Val Lys Ile Pro Gly Glu Lys Asp Ser Val Ile Cys
65                  70                  75                  80
Leu Lys Gly Ser Gln Trp Ser Asp Ile Glu Glu Phe Cys Asn Arg Ser
                85                  90                  95
Cys Glu Val Pro Thr Arg Leu Asn Ser Ala Ser Leu Lys Gln Pro Tyr
            100                 105                 110
Ile Thr Gln Asn Tyr Phe Pro Val Gly Thr Val Val Glu Tyr Glu Cys
        115                 120                 125
Arg Pro Gly Tyr Arg Arg Glu Pro Ser Leu Ser Pro Lys Leu Thr Cys
    130                 135                 140
Leu Gln Asn Leu Lys Trp Ser Thr Ala Val Glu Phe Cys Lys Lys Lys
145                 150                 155                 160
Ser Cys Pro Asn Pro Gly Glu  Ile Arg Asn Gly GlnIle Asp Val Pro
                165                 170                 175
Gly Gly Ile Leu Phe Gly Ala Thr Ile Ser Phe Ser Cys Asn Thr Gly
            180                 185                 190
Tyr Lys Leu Phe Gly Ser Thr Ser Ser Phe Cys Leu Ile Ser Gly Ser
        195                 200                 205
Ser Val Gln Trp Ser Asp Pro Leu Pro Glu Cys Arg Glu Ile Tyr Cys
    210                 215                 220
Pro Ala Pro Pro Gln Ile Asp Asn Gly Ile Ile Gln Gly Glu Arg Asp
225                 230                 235                 240
His Tyr Gly Tyr Arg Gln Ser Val Thr Tyr Ala Cys Asn Lys Gly Phe
                245                 250                 255
Thr Met Ile Gly Glu His Ser Ile Tyr Cys Thr Val Asn Asn Asp Glu
            260                 265                 270
Gly Glu Trp Ser Gly Pro Pro Pro Glu Cys Arg Gly Lys Ser Leu Thr
        275                 280                 285
Ser Lys Val Pro Pro Thr Val Gln Lys Pro Thr Thr Val Asn Val Pro
    290                 295                 300
Thr Thr Glu Val Ser Pro Thr Ser Gln Lys Thr Thr Thr Lys Thr Thr
305                 310                 315                 320
Thr Pro Asn Ala Gln Ala Thr Arg Ser Thr Pro Val Ser Arg Thr Thr
                325                 330                 335
Lys His Phe His Glu Thr Thr Pro Asn Lys Gly Ser Gly Thr Thr Ser
            340                 345                 350
Gly Thr Thr Arg Leu Leu Ser Gly His Thr Cys Phe Thr Leu Thr Gly
        355                 360                 365
Leu Leu Gly Thr Leu Val Thr Met Gly Leu Leu Thr
    370                 375                 380
<210>3
<211>306
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>3
cagtgctaca actgtcctaa cccaactgct gactgcaaaa cagccgtcaa ttgttcatct  60
gattttgatg cgtgtctcat taccaaagct gggttacaag tgtataacaa gtgttggaag  120
tttgagcatt gcaatttcaa cgacgtcaca acccgcttga gggaaaatga gctaacgtac  180
tactgctgca agaaggacct gtgtaacttt aacgaacagc ttgaaaatgg tgggacatcc  240
ttatcagaga aaacagttct tctgctggtg actccatttc tggcagcagc ctggagcctt  300
catccc                                                             306
<210>4
<211>126
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>4
Met Gly Ile Gln Gly Gly Ser Val Leu Phe Gly Leu Leu Leu Val Leu
1                5                  10                  15
Ala Val Phe Cys His Ser Gly His Gln Cys Tyr Asn Cys Pro Asn Pro
            20                  25                  30
Thr Ala Asp Cys Lys Thr Ala Val Asn Cys Ser Ser Asp Phe Asp Ala
        35                  40                  45
Cys Leu Ile Thr Lys Ala Gly Leu Gln Val Tyr Asn Lys Cys Trp Lys
    50                  55                  60
Phe Glu His Cys Asn Phe Asn Asp Val Thr Thr Arg Leu Arg Glu Asn
65                  70                  75                  80
Glu Leu Thr Tyr Tyr Cys Cys Lys Lys Asp Leu Cys Asn Phe Asn Glu
                85                  90                  95
Gln Leu Glu Asn Gly Gly Thr Ser Leu Ser Glu Lys Thr Val Leu Leu
            100                 105                 110
Leu Val Thr Pro Phe Leu Ala Ala Ala Trp Ser Leu His Pro
        115                 120                 125
<210>5
<211>1485
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>5
atttcttgtg gctctcctcc gcctatccta aatggccgga ttagttatta ttctaccccc  60
attgctgttg gtaccgtgat aaggtacagt tgttcaggta ccttccgcct cattggagaa  120
aaaagtctat tatgcataac taaagacaaa gtggatggaa cctgggataa acctgctcct  180
aaatgtgaat atttcaataa atattcttct tgccctgagc ccatagtacc aggaggatac  240
aaaattagag gctctacacc ctacagacat ggtgattctg tgacatttgc ctgtaaaacc  300
aacttctcca tgaacggaaa caagtctgtt tggtgtcaag caaataatat gtgggggccg  360
acacgactac caacctgtgt aagtgttttc cctctcgagt gtccagcact tcctatgatc  420
cacaatggac atcacacaag tgagaatgtt ggctccattg ctccaggatt gtctgtgact  480
tacagctgtg aatctggtta cttgcttgtt ggagaaaaga tcattaactg tttgtcttcg  540
ggaaaatgga gtgctgtccc ccccacatgt gaagaggcac gctgtaaatc tctaggacga  600
tttcccaatg ggaaggtaaa ggagcctcca attctccggg ttggtgtaac tgcaaacttt  660
ttctgtgatg aagggtatcg actgcaaggc ccaccttcta gtcggtgtgt aattgctgga  720
cagggagttg cttggaccaa aatgccagta tgtggaggtg ggtcgggtgg cggcggatcc  780
gactgtggcc ttcccccaga tgtacctaat gcccagccag ctttggaagg ccgtacaagt  840
tttcccgagg atactgtaat aacgtacaaa tgtgaagaaa gctttgtgaa aattcctggc  900
gagaaggact cagtgatctg ccttaagggc agtcaatggt cagatattga agagttctgc  960
aatcgtagct gcgaggtgcc aacaaggcta aattctgcat ccctcaaaca gccttatatc  1020
actcagaatt attttccagt cggtactgtt gtggaatatg agtgccgtcc aggttacaga  1080
agagaacctt ctctatcacc aaaactaact tgccttcaga atttaaaatg gtccacagca  1140
gtcgaatttt gtaaaaagaa atcatgccct aatccgggag aaatacgaaa tggtcagatt  1200
gatgtaccag gtggcatatt atttggtgca accatctcct tctcatgtaa cacagggtac  1260
aaattatttg gctcgacttc tagtttttgt cttatttcag gcagctctgt ccagtggagt  1320
gacccgttgc cagagtgcag agaaatttat tgtccagcac caccacaaat tgacaatgga  1380
ataattcaag gggaacgtga ccattatgga tatagacagt ctgtaacgta tgcatgtaat  1440
aaaggattca ccatgattgg agagcactct atttattgta ctgtg                  1485
<210>6
<211>495
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>6
Ile Ser Cys Gly Ser Pro Pro Pro Ile Leu Asn Gly Arg Ile Ser Tyr
1                5                  10                  15
Tyr Ser Thr Pro Ile Ala Val Gly Thr Val Ile Arg Tyr Ser Cys Ser
            20                  25                  30
Gly Thr Phe Arg Leu Ile Gly Glu Lys Ser Leu Leu Cys Ile Thr Lys
        35                  40                  45
Asp Lys Val Asp Gly Thr Trp Asp Lys Pro Ala Pro Lys Cys Glu Tyr
    50                  55                  60
Phe Asn Lys Tyr Ser Ser Cys Pro Glu Pro Ile Val Pro Gly Gly Tyr
65                  70                  75                  80
Lys Ile Arg Gly Ser Thr Pro Tyr Arg His Gly Asp Ser Val Thr Phe
                85                  90                  95
Ala Cys Lys Thr Asn Phe Ser Met Asn Gly Asn Lys Ser Val Trp Cys
            100                 105                 110
Gln Ala Asn Asn Met Trp Gly Pro Thr Arg Leu Pro Thr Cys Val Ser
        115                 120                 125
Val Phe Pro Leu Glu Cys Pro Ala Leu Pro Met Ile His Asn Gly His
    130                 135                 140
His Thr Ser Glu Asn Val Gly Ser Ile Ala Pro Gly Leu Ser Val Thr
145                 150                 155                 160
Tyr Ser Cys Glu Ser Gly Tyr Leu Leu Val Gly Glu Lys Ile Ile Asn
                165                 170                 175
Cys Leu Ser Ser Gly Lys Trp Ser Ala Val Pro Pro Thr Cys Glu Glu
            180                 185                 190
Ala Arg Cys Lys Ser Leu Gly Arg Phe Pro Asn Gly Lys Val Lys Glu
        195                 200                 205
Pro Pro Ile Leu Arg Val Gly Val Thr Ala Asn Phe Phe Cys Asp Glu
    210                 215                 220
Gly Tyr Arg Leu Gln Gly Pro Pro Ser Ser Arg Cys Val Ile Ala Gly
225                 230                 235                 240
Gln Gly Val Ala Trp Thr Lys Met Pro Val Cys Gly Gly Gly Ser Gly
                245                 250                 255
Gly Gly Gly Ser Asp Cys Gly Leu Pro Pro Asp Val Pro Asn Ala Gln
            260                 265                 270
Pro Ala Leu Glu Gly Arg Thr Ser Phe Pro Glu Asp Thr Val Ile Thr
        275                 280                 285
Tyr Lys Cys Glu Glu Ser Phe Val Lys Ile Pro Gly Glu Lys Asp Ser
    290                 295                 300
Val Ile Cys Leu Lys Gly Ser Gln Trp Ser Asp Ile Glu Glu Phe Cys
305                 310                 315                 320
Asn Arg Ser Cys Glu Val Pro Thr Arg Leu Asn Ser Ala Ser Leu Lys
                325                 330                 335
Gln Pro Tyr Ile Thr Gln Asn Tyr Phe Pro Val Gly Thr Val Val Glu
            340                 345                 350
Tyr Glu Cys Arg Pro Gly Tyr Arg Arg Glu Pro Ser Leu Ser Pro Lys
        355                 360                 365
Leu Thr Cys Leu Gln Asn Leu Lys Trp Ser Thr Ala Val Glu Phe Cys
    370                 375                 380
Lys Lys Lys Ser Cys Pro Asn Pro Gly Glu Ile Arg Asn Gly Gln Ile
385                 390                 395                 400
Asp Val Pro Gly Gly Ile Leu Phe Gly Ala Thr Ile Ser Phe Ser Cys
                405                 410                 415
Asn Thr Gly Tyr Lys Leu Phe Gly Ser Thr Ser Ser Phe Cys Leu Ile
            420                 425                 430
Ser Gly Ser Ser Val Gln Trp Ser Asp Pro Leu Pro Glu Cys Arg Glu
        435                 440                 445
Ile Tyr Cys Pro Ala Pro Pro Gln Ile Asp Asn Gly Ile Ile Gln Gly
    450                 455                 460
Glu Arg Asp His Tyr Gly Tyr Arg Gln Ser Val Thr Tyr Ala Cys Asn
465                 470                 475                 480
Lys Gly Phe Thr Met Ile Gly Glu His Ser Ile Tyr Cys Thr Val
                485                 490                 495
<210>7
<211>1002
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>7
atttcttgtg gctctcctcc gcctatccta aatggccgga ttagttatta ttctaccccc  60
attgctgttg gtaccgtgat aaggtacagt tgttcaggta ccttccgcct cattggagaa  120
aaaagtctat tatgcataac taaagacaaa gtggatggaa cctgggataa acctgctcct  180
aaatgtgaat atttcaataa atattcttct tgccctgagc ccatagtacc aggaggatac  240
aaaattagag gctctacacc ctacagacat ggtgattctg tgacatttgc ctgtaaaacc  300
aacttctcca tgaacggaaa caagtctgtt tggtgtcaag caaataatat gtgggggccg  360
acacgactac caacctgtgt aagtgttttc cctctcgagt gtccagcact tcctatgatc  420
cacaatggac atcacacaag tgagaatgtt ggctccattg ctccaggatt gtctgtgact  480
tacagctgtg aatctggtta cttgcttgtt ggagaaaaga tcattaactg tttgtcttcg  540
ggaaaatgga gtgctgtccc ccccacatgt gaagaggcac gctgtaaatc tctaggacga  600
tttcccaatg ggaaggtaaa ggagcctcca attctccggg ttggtgtaac tgcaaacttt  660
ttctgtgatg aagggtatcg actgcaaggc ccaccttcta gtcggtgtgt aattgctgga  720
cagggagttg cttggaccaa aatgccagta tgttcaggag gaggaggttc cctgcagtgc  780
tacaactgtc ctaacccaac tgctgactgc aaaacagccg tcaattgttc atctgatttt  840
gatgcgtgtc tcattaccaa agctgggtta caagtgtata acaagtgttg gaagtttgag  900
cattgcaatt tcaacgacgt cacaacccgc ttgagggaaa atgagctaac gtactactgc  960
tgcaagaagg acctgtgtaa ctttaacgaa cagcttgaaa at                     1002
<210>8
<211>334
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>8
Ile Ser Cys Gly Ser Pro Pro Pro Ile Leu Asn Gly Arg Ile Ser Tyr
 1               5                  10                  15
Tyr Ser Thr Pro Ile Ala Val Gly Thr Val Ile Arg Tyr Ser Cys Ser
            20                  25                  30
Gly Thr Phe Arg Leu Ile Gly Glu Lys Ser Leu Leu Cys Ile Thr Lys
        35                  40                  45
Asp Lys Val Asp Gly Thr Trp Asp Lys Pro Ala Pro Lys Cys Glu Tyr
    50                  55                  60
Phe Asn Lys Tyr Ser Ser Cys Pro Glu Pro Ile Val Pro Gly Gly Tyr
65                  70                  75                  80
Lys Ile Arg Gly Ser Thr Pro Tyr Arg His Gly Asp Ser Val Thr Phe
                85                  90                  95
Ala Cys Lys Thr Asn Phe Ser Met Asn Gly Asn Lys Ser Val Trp Cys
            100                 105                 110
Gln Ala Asn Asn Met Trp Gly Pro Thr Arg Leu Pro Thr Cys Val Ser
        115                 120                 125
Val Phe Pro Leu Glu Cys Pro Ala Leu Pro Met Ile His Asn Gly His
    130                 135                 140
His Thr Ser Glu Asn Val Gly Ser Ile Ala Pro Gly Leu Ser Val Thr
145                 150                 155                 160
Tyr Ser Cys Glu Ser Gly Tyr Leu Leu Val Gly Glu Lys Ile Ile Asn
                165                 170                 175
Cys Leu Ser Ser Gly Lys Trp Ser Ala Val Pro Pro Thr Cys Glu Glu
            180                 185                 190
Ala Arg Cys Lys Ser Leu Gly Arg Phe Pro Asn Gly Lys Val Lys Glu
        195                 200                 205
Pro Pro Ile Leu Arg Val Gly Val Thr Ala Asn Phe Phe Cys Asp Glu
    210                 215                 220
Gly Tyr Arg Leu Gln Gly Pro Pro Ser Ser Arg Cys Val Ile Ala Gly
225                 230                 235                 240
Gln Gly Val Ala Trp Thr Lys Met Pro Val Cys Ser Gly Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Ser Leu Gln Cys Tyr Asn Cys Pro Asn Pro Thr Ala Asp Cys Lys Thr
            260                 265                 270
Ala Val Asn Cys Ser Ser Asp Phe Asp Ala Cys Leu Ile Thr Lys Ala
        275                 280                 285
Gly Leu Gln Val Tyr Asn Lys Cys Trp Lys Phe Glu His Cys Asn Phe
    290                 295                 300
Asn Asp Val Thr Thr Arg Leu Arg Glu Asn Glu Leu Thr Tyr Tyr Cys
305                 310                 315                 320
Cys Lys Lys Asp Leu Cys Asn Phe Asn Glu Gln Leu Glu Asn
                325                 330
<210>9
<211>1554
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>9
gactgtggcc ttcccccaga tgtacctaat gcccagccag ctttggaagg ccgtacaagt  60
tttcccgagg atactgtaat aacgtacaaa tgtgaagaaa gctttgtgaa aattcctggc  120
gagaaggact cagtgatctg ccttaagggc agtcaatggt cagatattga agagttctgc  180
aatcgtagct gcgaggtgcc aacaaggcta aattctgcat ccctcaaaca gccttatatc  240
actcagaatt attttccagt cggtactgtt gtggaatatg agtgccgtcc aggttacaga  300
agagaacctt ctctatcacc aaaactaact tgccttcaga atttaaaatg gtccacagca  360
gtcgaatttt gtaaaaagaa atcatgccct aatccgggag aaatacgaaa tggtcagatt  420
gatgtaccag gtggcatatt atttggtgca accatctcct tctcatgtaa cacagggtac  480
aaattatttg gctcgacttc tagtttttgt cttatttcag gcagctctgt ccagtggagt  540
gacccgttgc cagagtgcag agaaatttat tgtccagcac caccacaaat tgacaatgga  600
ataattcaag gggaacgtga ccattatgga tatagacagt ctgtaacgta tgcatgtaat  660
aaaggattca ccatgattgg agagcactct atttattgta ctgtgaataa tgatgaagga  720
gagtggagtg gcccaccacc tgaatgcaga tcctctggtg gcggtggctc gggcggaggt  780
gggtcgggtg gcggcggatc catttcttgt ggctctcctc cgcctatcct aaatggccgg  840
attagttatt attctacccc cattgctgtt ggtaccgtga taaggtacag ttgttcaggt  900
accttccgcc tcattggaga aaaaagtcta ttatgcataa ctaaagacaa agtggatgga  960
acctgggata aacctgctcc taaatgtgaa tatttcaata aatattcttc ttgccctgag  1020
cccatagtac caggaggata caaaattaga ggctctacac cctacagaca tggtgattct  1080
gtgacatttg cctgtaaaac caacttctcc atgaacggaa acaagtctgt ttggtgtcaa  1140
gcaaataata tgtgggggcc gacacgacta ccaacctgtg taagtgtttt ccctctcgag  1200
tgtccagcac ttcctatgat ccacaatgga catcacacaa gtgagaatgt tggctccatt  1260
gctccaggat tgtctgtgac ttacagctgt gaatctggtt acttgcttgt tggagaaaag  1320
atcattaact gtttgtcttc gggaaaatgg agtgctgtcc cccccacatg tgaagaggca  1380
cgctgtaaat ctctaggacg atttcccaat gggaaggtaa aggagcctcc aattctccgg  1440
gttggtgtaa ctgcaaactt tttctgtgat gaagggtatc gactgcaagg cccaccttct  1500
agtcggtgtg taattgctgg acagggagtt gcttggacca aaatgccagt atgt        1554
<210>10
<211>518
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>10
Asp Cys Gly Leu Pro Pro Asp Val Pro Asn Ala Gln Pro Ala Leu Glu
 1              5                   10                  15
Gly Arg Thr Ser Phe Pro Glu Asp Thr Val Ile Thr Tyr Lys Cys Glu
            20                  25                  30
Glu Ser Phe Val Lys Ile Pro Gly Glu Lys Asp Ser Val Ile Cys Leu
        35                  40                  45
Lys Gly Ser Gln Trp Ser Asp Ile Glu Glu Phe Cys Asn Arg Ser Cys
    50                  55                  60
Glu Val Pro Thr Arg Leu Asn Ser Ala Ser Leu Lys Gln Pro Tyr Ile
65                  70                  75                  80
Thr Gln Asn Tyr Phe Pro Val Gly Thr Val Val Glu Tyr Glu Cys Arg
                85                  90                  95
Pro Gly Tyr Arg Arg Glu Pro Ser Leu Ser Pro Lys Leu Thr Cys Leu
            100                 105                 110
Gln Asn Leu Lys Trp Ser Thr Ala Val Glu Phe Cys Lys Lys Lys Ser
        115                 120                 125
Cys Pro Asn Pro Gly Glu Ile Arg Asn Gly Gln Ile Asp Val Pro Gly
    130                 135                 140
Gly Ile Leu Phe Gly Ala Thr Ile Ser Phe Ser Cys Asn Thr Gly Tyr
145                 150                 155                 160
Lys Leu Phe Gly Ser Thr Ser Ser Phe Cys Leu Ile Ser Gly Ser Ser
                165                 170                 175
Val Gln Trp Ser Asp Pro Leu Pro Glu Cys Arg Glu Ile Tyr Cys Pro
            180                 185                 190
Ala Pro Pro Gln Ile Asp Asn Gly Ile Ile Gln Gly Glu Arg Asp His
        195                 200                 205
Tyr Gly Tyr Arg Gln Ser Val Thr Tyr Ala Cys Asn Lys Gly Phe Thr
    210                 215                 220
Met Ile Gly Glu His Ser Ile Tyr Cys Thr Val Asn Asn Asp Glu Gly
225                 230                 235                 240
Glu Trp Ser Gly Pro Pro Pro Glu Cys Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Ser Cys Gly Ser
            260                 265                 270
Pro Pro Pro Ile Leu Asn Gly Arg Ile Ser Tyr Tyr Ser Thr Pro Ile
        275                 280                 285
Ala Val Gly Thr Val Ile Arg Tyr Ser Cys Ser Gly Thr Phe Arg Leu
    290                 295                 300
Ile Gly Glu Lys Ser Leu Leu Cys Ile Thr Lys Asp Lys Val Asp Gly
305                 310                 315                 320
Thr Trp Asp Lys Pro Ala Pro Lys Cys Glu Tyr Phe Asn Lys Tyr Ser
                325                 330                 335
Ser Cys Pro Glu Pro Ile Val Pro Gly Gly Tyr Lys Ile Arg Gly Ser
            340                 345                 350
Thr Pro Tyr Arg His Gly Asp Ser Val Thr Phe Ala Cys Lys Thr Asn
        355                 360                 365
Phe Ser Met Asn Gly Asn Lys Ser Val Trp Cys Gln Ala Asn Asn Met
    370                 375                 380
Trp Gly Pro Thr Arg Leu Pro Thr Cys Val Ser Val Phe Pro Leu Glu
385                 390                 395                 400
Cys Pro Ala Leu Pro Met Ile His Asn Gly His His Thr Ser Glu Asn
                405                 410                 415
Val Gly Ser Ile Ala Pro Gly Leu Ser Val Thr Tyr Ser Cys Glu Ser
            420                 425                 430
Gly Tyr Leu Leu Val Gly Glu Lys Ile Ile Asn Cys Leu Ser Ser Gly
        435                 440                 445
Lys Trp Ser Ala Val Pro Pro Thr Cys Glu Glu Ala Arg Cys Lys Ser
    450                 455                 460
Leu Gly Arg Phe Pro Asn Gly Lys Val Lys Glu Pro Pro Ile Leu Arg
465                 470                 475                 480
Val Gly Val Thr Ala Asn Phe Phe Cys Asp Glu Gly Tyr Arg Leu Gln
                485                 490                 495
Gly Pro Pro Ser Ser Arg Cys Val Ile Ala Gly Gln Gly Val Ala Trp
            500                 505                 510
Thr Lys Met Pro Val Cys
        515
<210>11
<211>990
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>11
ctgcagtgct acaactgtcc taacccaact gctgactgca aaacagccgt caattgttca  60
tctgattttg atgcgtgtct cattaccaaa gctgggttac aagtgtataa caagtgttgg  120
aagtttgagc attgcaattt caacgacgtc acaacccgct tgagggaaaa tgagctaacg  180
tactactgct gcaagaagga cctgtgtaac tttaacgaac agcttgaaaa ttcctctggt  240
ggcggtggct ccggcggagg tgggtccggt ggcggcggat ccatttcttg tggctctcct  300
ccgcctatcc taaatggccg gattagttat tattctaccc ccattgctgt tggtaccgtg  360
ataaggtaca gttgttcagg taccttccgc ctcattggag aaaaaagtct attatgcata  420
actaaagaca aagtggatgg aacctgggat aaacctgctc ctaaatgtga atatttcaat  480
aaatattctt cttgccctga gcccatagta ccaggaggat acaaaattag aggctctaca  540
ccctacagac atggtgattc tgtgacattt gcctgtaaaa ccaacttctc catgaacgga  600
aacaagtctg tttggtgtca agcaaataat atgtgggggc cgacacgact accaacctgt  660
gtaagtgttt tccctctcga gtgtccagca cttcctatga tccacaatgg acatcacaca  720
agtgagaatg ttggctccat tgctccagga ttgtctgtga cttacagctg tgaatctggt  780
tacttgcttg ttggagaaaa gatcattaac tgtttgtctt cgggaaaatg gagtgctgtc  840
ccccccacat gtgaagaggc acgctgtaaa tctctaggac gatttcccaa tgggaaggta  900
aaggagcctc caattctccg ggttggtgta actgcaaact ttttctgtga tgaagggtat  960
cgactgcaag gcccaccttc tagtcggtgt                                   990
<210>12
<211>330
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>12
Leu Gln Cys Tyr Asn Cys Pro Asn Pro Thr Ala Asp Cys Lys Thr Ala
 1               5                  10                  15
Val Asn Cys Ser Ser Asp Phe Asp Ala Cys Leu Ile Thr Lys Ala Gly
            20                  25                  30
Leu Gln Val Tyr Asn Lys Cys Trp Lys Phe Glu His Cys Asn Phe Asn
        35                  40                  45
Asp Val Thr Thr Arg Leu Arg Glu Asn Glu Leu Thr Tyr Tyr Cys Cys
    50                  55                  60
Lys Lys Asp Leu Cys Asn Phe Asn Glu Gln Leu Glu Asn Ser Ser Gly
65                  70                  75                  80
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Ser
                85                  90                  95
Cys Gly Ser Pro Pro Pro Ile Leu Asn Gly Arg Ile Ser Tyr Tyr Ser
            100                 105                 110
Thr Pro Ile Ala Val Gly Thr Val Ile Arg Tyr Ser Cys Ser Gly Thr
        115                 120                 125
Phe Arg Leu Ile Gly Glu Lys Ser Leu Leu Cys Ile Thr Lys Asp Lys
    130                 135                 140
Val Asp Gly Thr Trp Asp Lys Pro Ala Pro Lys Cys Glu Tyr Phe Asn
145                 150                 155                 160
Lys Tyr Ser Ser Cys Pro Glu Pro Ile Val Pro Gly Gly Tyr Lys Ile
                165                 170                 175
Arg Gly Ser Thr Pro Tyr Arg His Gly Asp Ser Val Thr Phe Ala Cys
            180                 185                 190
Lys Thr Asn Phe Ser Met Asn Gly Asn Lys Ser Val Trp Cys Gln Ala
        195                 200                 205
Asn Asn Met Trp Gly Pro Thr Arg Leu Pro Thr Cys Val Ser Val Phe
    210                 215                 220
Pro Leu Glu Cys Pro Ala Leu Pro Met Ile His Asn Gly His His Thr
225                 230                 235                 240
Ser Glu Asn Val Gly Ser Ile Ala Pro Gly Leu Ser Val Thr Tyr Ser
                245                 250                 255
Cys Glu Ser Gly Tyr Leu Leu Val Gly Glu Lys Ile Ile Asn Cys Leu
            260                 265                 270
Ser Ser Gly Lys Trp Ser Ala Val Pro Pro Thr Cys Glu Glu Ala Arg
        275                 280                 285
Cys Lys Ser Leu Gly Arg Phe Pro Asn Gly Lys Val Lys Glu Pro Pro
    290                 295                 300
Ile Leu Arg Val Gly Val Thr Ala Asn Phe Phe Cys Asp Glu Gly Tyr
305                 310                 315                 320
Arg Leu Gln Gly Pro Pro Ser Ser Arg Cys
                325                 330
<210>13
<211>5994
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>13
caatgcaatg ccccagaatg gcttccattt gccaggccta ccaacctaac tgatgagttt  60
gagtttccca ttgggacata tctgaactat gaatgccgcc ctggttattc cggaagaccg  120
ttttctatca tctgcctaaa aaactcagtc tggactggtg ctaaggacag gtgcagacgt  180
aaatcatgtc gtaatcctcc agatcctgtg aatggcatgg tgcatgtgat caaaggcatc  240
cagttcggat cccaaattaa atattcttgt actaaaggat accgactcat tggttcctcg  300
tctgccacat gcatcatctc aggtgatact gtcatttggg ataatgaaac acctatttgt  360
gacagaattc cttgtgggct accccccacc atcaccaatg gagatttcat tagcaccaac  420
agagagaatt ttcactatgg atcagtggtg acctaccgct gcaatcctgg aagcggaggg  480
agaaaggtgt ttgagcttgt gggtgagccc tccatatact gcaccagcaa tgacgatcaa  540
gtgggcatct ggagcggccc cgcccctcag tgcattatac ctaacaaatg cacgcctcca  600
aatgtggaaa atggaatatt ggtatctgac aacagaagct tattttcctt aaatgaagtt  660
gtggagttta ggtgtcagcc tggctttgtc atgaaaggac cccgccgtgt gaagtgccag  720
gccctgaaca aatgggagcc ggagctacca agctgctcca gggtatgtca gccacctcca  780
gatgtcctgc atgctgagcg tacccaaagg gacaaggaca acttttcacc tgggcaggaa  840
gtgttctaca gctgtgagcc cggctacgac ctcagagggg ctgcgtctat gcgctgcaca  900
ccccagggag actggagccc tgcagccccc acatgtgaag tgaaatcctg tgatgacttc  960
atgggccaac ttcttaatgg ccgtgtgcta tttccagtaa atctccagct tggagcaaaa  1020
gtggattttg tttgtgatga aggatttcaa ttaaaaggca gctctgctag ttactgtgtc  1080
ttggctggaa tggaaagcct ttggaatagc agtgttccag tgtgtgaaca aatcttttgt  1140
ccaagtcctc cagttattcc taatgggaga cacacaggaa aacctctgga agtctttccc  1200
tttggaaaag cagtaaatta cacatgcgac ccccacccag acagagggac gagcttcgac  1260
ctcattggag agagcaccat ccgctgcaca agtgaccctc aagggaatgg ggtttggagc  1320
agccctgccc ctcgctgtgg aattctgggt cactgtcaag ccccagatca ttttctgttt  1380
gccaagttga aaacccaaac caatgcatct gactttccca ttgggacatc tttaaagtac  1440
gaatgccgtc ctgagtacta cgggaggcca ttctctatca catgtctaga taacctggtc  1500
tggtcaagtc ccaaagatgt ctgtaaacgt aaatcatgta aaactcctcc agatccagtg  1560
aatggcatgg tgcatgtgat cacagacatc caggttggat ccagaatcaa ctattcttgt  1620
actacagggc accgactcat tggtcactca tctgctgaat gtatcctctc gggcaatgct  1680
gcccattgga gcacgaagcc gccaatttgt caacgaattc cttgtgggct accccccacc  1740
atcgccaatg gagatttcat tagcaccaac agagagaatt ttcactatgg atcagtggtg  1800
acctaccgct gcaatcctgg aagcggaggg agaaaggtgt ttgagcttgt gggtgagccc  1860
tccatatact gcaccagcaa tgacgatcaa gtgggcatct ggagcggccc ggcccctcag  1920
tgcattatac ctaacaaatg cacgcctcca aatgtggaaa atggaatatt ggtatctgac  1980
aacagaagct tattttcctt aaatgaagtt gtggagttta ggtgtcagcc tggctttgtc  2040
atgaaaggac cccgccgtgt gaagtgccag gccctgaaca aatgggagcc ggagctacca  2100
agctgctcca gggtatgtca gccacctcca gatgtcctgc atgctgagcg tacccaaagg  2160
gacaaggaca acttttcacc cgggcaggaa gtgttctaca gctgtgagcc cggctatgac  2220
ctcagagggg ctgcgtctat gcgctgcaca ccccagggag actggagccc tgcagccccc  2280
acatgtgaag tgaaatcctg tgatgacttc atgggccaac ttcttaatgg ccgtgtgcta  2340
tttccagtaa atctccagct tggagcaaaa gtggattttg tttgtgatga aggatttcaa  2400
ttaaaaggca gctctgctag ttattgtgtc ttggctggaa tggaaagcct ttggaatagc  2460
agtgttccag tgtgtgaaca aatcttttgt ccaagtcctc cagttattcc taatgggaga  2520
cacacaggaa aacctctgga agtctttccc tttggaaaag cagtaaatta cacatgcgac  2580
ccccacccag acagagggac gagcttcgac ctcattggag agagcaccat ccgctgcaca  2640
agtgaccctc aagggaatgg ggtttggagc agccctgccc ctcgctgtgg aattctgggt  2700
cactgtcaag ccccagatca ttttctgttt gccaagttga aaacccaaac caatgcatct  2760
gactttccca ttgggacatc tttaaagtac gaatgccgtc ctgagtacta cgggaggcca  2820
ttctctatca catgtctaga taacctggtc tggtcaagtc ccaaagatgt ctgtaaacgt  2880
aaatcatgta aaactcctcc agatccagtg aatggcatgg tgcatgtgat cacagacatc  2940
caggttggat ccagaatcaa ctattcttgt actacagggc accgactcat tggtcactca  3000
tctgctgaat gtatcctctc aggcaatact gcccattgga gcacgaagcc gccaatttgt  3060
caacgaattc cttgtgggct acccccaacc atcgccaatg gagatttcat tagcaccaac  3120
agagagaatt ttcactatgg atcagtggtg acctaccgct gcaatcttgg aagcagaggg  3180
agaaaggtgt ttgagcttgt gggtgagccc tccatatact gcaccagcaa tgacgatcaa  3240
gtgggcatct ggagcggccc cgcccctcag tgcattatac ctaacaaatg cacgcctcca  3300
aatgtggaaa atggaatatt ggtatctgac aacagaagct tattttcctt aaatgaagtt  3360
gtggagttta ggtgtcagcc tggctttgtc atgaaaggac cccgccgtgt gaagtgccag  3420
gccctgaaca aatgggagcc agagttacca agctgctcca gggtgtgtca gccgcctcca  3480
gaaatcctgc atggtgagca taccccaagc catcaggaca acttttcacc tgggcaggaa  3540
gtgttctaca gctgtgagcc tggctatgac ctcagagggg ctgcgtctct gcactgcaca  3600
ccccagggag actggagccc tgaagccccg agatgtgcag tgaaatcctg tgatgacttc  3660
ttgggtcaac tccctcatgg ccgtgtgcta tttccactta atctccagct tggggcaaag  3720
gtgtcctttg tctgtgatga agggtttcgc ttaaagggca gttccgttag tcattgtgtc  3780
ttggttggaa tgagaagcct ttggaataac agtgttcctg tgtgtgaaca tatcttttgt  3840
ccaaatcctc cagctatcct taatgggaga cacacaggaa ctccctctgg agatattccc  3900
tatggaaaag aaatatctta cacatgtgac ccccacccag acagagggat gaccttcaac  3960
ctcattgggg agagcaccat ccgctgcaca agtgaccctc atgggaatgg ggtttggagc  4020
agccctgccc ctcgctgtga actttctgtt cgtgctggtc actgtaaaac cccagagcag  4080
tttccatttg ccagtcctac gatcccaatt aatgactttg agtttccagt cgggacatct  4140
ttgaattatg aatgccgtcc tgggtatttt gggaaaatgt tctctatctc ctgcctagaa  4200
aacttggtct ggtcaagtgt tgaagacaac tgtagacgaa aatcatgtgg acctccacca  4260
gaacccttca atggaatggt gcatataaac acagatacac agtttggatc aacagttaat  4320
tattcttgta atgaagggtt tcgactcatt ggttccccat ctactacttg tctcgtctca  4380
ggcaataatg tcacatggga taagaaggca cctatttgtg agatcatatc ttgtgagcca  4440
cctccaacca tatccaatgg agacttctac agcaacaata gaacatcttt tcacaatgga  4500
acggtggtaa cttaccagtg ccacactgga ccagatggag aacagctgtt tgagcttgtg  4560
ggagaacggt caatatattg caccagcaaa gatgatcaag ttggtgtttg gagcagccct  4620
ccccctcggt gtatttctac taataaatgc acagctccag aagttgaaaa tgcaattaga  4680
gtaccaggaa acaggagttt cttttccctc actgagatca tcagatttag atgtcagccc  4740
gggtttgtca tggtagggtc ccacactgtg cagtgccaga ccaatggcag atgggggccc  4800
aagctgccac actgctccag ggtgtgtcag ccgcctccag aaatcctgca tggtgagcat  4860
accctaagcc atcaggacaa cttttcacct gggcaggaag tgttctacag ctgtgagccc  4920
agctatgacc tcagaggggc tgcgtctctg cactgcacgc cccagggaga ctggagccct  4980
gaagccccta gatgtacagt gaaatcctgt gatgacttcc tgggccaact ccctcatggc  5040
cgtgtgctac ttccacttaa tctccagctt ggggcaaagg tgtcctttgt ttgcgatgaa  5100
gggttccgat taaaaggcag gtctgctagt cattgtgtct tggctggaat gaaagccctt  5160
tggaatagca gtgttccagt gtgtgaacaa atcttttgtc caaatcctcc agctatcctt  5220
aatgggagac acacaggaac tccctttgga gatattccct atggaaaaga aatatcttac  5280
gcatgcgaca cccacccaga cagagggatg accttcaacc tcattgggga gagctccatc  5340
cgctgcacaa gtgaccctca agggaatggg gtttggagca gccctgcccc tcgctgtgaa  5400
ctttctgttc ctgctgcctg cccacatcca cccaagatcc aaaacgggca ttacattgga  5460
ggacacgtat ctctatatct tcctgggatg acaatcagct acacttgtga ccccggctac  5520
ctgttagtgg gaaagggctt cattttctgt acagaccagg gaatctggag ccaattggat  5580
cattattgca aagaagtaaa ttgtagcttc ccactgttta tgaatggaat ctcgaaggag  5640
ttagaaatga aaaaagtata tcactatgga gattatgtga ctttgaagtg tgaagatggg  5700
tatactctgg aaggcagtcc ctggagccag tgccaggcgg atgacagatg ggaccctcct  5760
ctggccaaat gtacctctcg tgcacatgat gctctcatag ttggcacttt atctggtacg  5820
atcttcttta ttttactcat cattttcctc tcttggataa ttctaaagca cagaaaaggc  5880
aataatgcac atgaaaaccc taaagaagtg gctatccatt tacattctca aggaggcagc  5940
agcgttcatc cccgaactct gcaaacaaat gaagaaaata gcagggtcct tcct        5994
<210>14
<211>2048
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>14
Met Cys Leu Gly Arg Met Gly Ala Ser Ser Pro Arg Ser Pro Glu Pro
 1               5                  10                  15
Val Gly Pro Pro Ala Pro Gly Leu Pro Phe Cys Cys Gly Gly Ser Leu
            20                  25                  30
Leu Ala Val Val Val Leu Leu Ala Leu Pro Val Ala Trp Gly Gln Cys
        35                  40                  45
Asn Ala Gln Cys Asn Ala Pro Glu Trp Leu Pro Phe Ala Arg Pro Thr
    50                  55                  60
Asn Leu Thr Asp Glu Phe Glu Phe Pro Ile Gly Thr Tyr Leu Asn Tyr
65                  70                  75                  80
Glu Cys Arg Pro Gly Tyr Ser Gly Arg Pro Phe Ser Ile Ile Cys Leu
                85                  90                  95
Lys Asn Ser Val Trp Thr Gly Ala Lys Asp Arg Cys Arg Arg Lys Ser
            100                 105                 110
Cys Arg Asn Pro Pro Asp Pro Val Asn Gly Met Val His Val Ile Lys
        115                 120                 125
Gly Ile Gln Phe Gly Ser Gln Ile Lys Tyr Ser Cys Thr Lys Gly Tyr
    130                 135                 140
Arg Leu Ile Gly Ser Ser Ser Ala Thr Cys Ile Ile Ser Gly Asp Thr
145                 150                 155                 160
Val Ile Trp Asp Asn Glu Thr Pro Ile Cys Asp Arg Ile Pro Cys Gly
                165                 170                 175
Leu Pro Pro Thr Ile Thr Asn Gly Asp Phe Ile Ser Thr Asn Arg Glu
            180                 185                 190
Asn Phe His Tyr Gly Ser Val Val Thr Tyr Arg Cys Asn Pro Gly Ser
        195                 200                 205
Gly Gly Arg Lys Val Phe Glu Leu Val Gly Glu Pro Ser Ile Tyr Cys
    210                 215                 220
Thr Ser Asn Asp Asp Gln Val Gly Ile Trp Ser Gly Pro Ala Pro Gln
225                 230                 235                 240
Cys Ile Ile Pro Asn Lys Cys Thr Pro Pro Asn Val Glu Asn Gly Ile
                245                 250                 255
Leu Val Ser Asp Asn Arg Ser Leu Phe Ser Leu Asn Glu Val Val Glu
            260                 265                 270
Phe Arg Cys Gln Pro Gly Phe Val Met Lys Gly Pro Arg Arg Val Lys
        275                 280                 285
Cys Gln Ala Leu Asn Lys Trp Glu Pro Glu Leu Pro Ser Cys Ser Arg
    290                 295                 300
Val Cys Gln Pro Pro Pro Asp Val Leu His Ala Glu Arg Thr Gln Arg
305                 310                 315                 320
Asp Lys Asp Asn Phe Ser Pro Gly Gln Glu Val Phe Tyr Ser Cys Glu
                325                 330                 335
Pro Gly Tyr Asp Leu Arg Gly Ala Ala Ser Met Arg Cys Thr Pro Gln
            340                 345                 350
Gly Asp Trp Ser Pro Ala Ala Pro Thr Cys Glu Val Lys Ser Cys Asp
        355                 360                 365
Asp Phe Met Gly Gln Leu Leu Asn Gly Arg Val Leu Phe Pro Val Asn
    370                 375                 380
Leu Gln Leu Gly Ala Lys Val Asp Phe Val Cys Asp Glu Gly Phe Gln
385                 390                 395                 400
Leu Lys Gly Ser Ser Ala Ser Tyr Cys Val Leu Ala Gly Met Glu Ser
                405                 410                 415
Leu Trp Asn Ser Ser Val Pro Val Cys Glu Gln Ile Phe Cys Pro Ser
            420                 425                 430
Pro Pro Val Ile Pro Asn Gly Arg His Thr Gly Lys Pro Leu Glu Val
        435                 440                 445
Phe Pro Phe Gly Lys Ala Val Asn Tyr Thr Cys Asp Pro His Pro Asp
    450                 455                 460
Arg Gly Thr Ser Phe Asp Leu Ile Gly Glu Ser Thr Ile Arg Cys Thr
465                 470                 475                 480
Ser Asp Pro Gln Gly Asn Gly Val Trp Ser Ser Pro Ala Pro Arg Cys
                485                 490                 495
Gly Ile Leu Gly His Cys Gln Ala Pro Asp His Phe Leu Phe Ala Lys
            500                 505                 510
Leu Lys Thr Gln Thr Asn Ala Ser Asp Phe Pro Ile Gly Thr Ser Leu
        515                 520                 525
Lys Tyr Glu Cys Arg Pro Glu Tyr Tyr Gly Arg Pro Phe Ser Ile Thr
    530                 535                 540
Cys Leu Asp Asn Leu Val Trp Ser Ser Pro Lys Asp Val Cys Lys Arg
545                 550                 555                 560
Lys Ser Cys Lys Thr Pro Pro Asp Pro Val Asn Gly Met Val His Val
                565                 570                 575
Ile Thr Asp Ile Gln Val Gly Ser Arg Ile Asn Tyr Ser Cys Thr Thr
            580                 585                 590
Gly His Arg Leu Ile Gly His Ser Ser Ala Glu Cys Ile Leu Ser Gly
        595                 600                 605
Asn Ala Ala His Trp Ser Thr Lys Pro Pro Ile Cys Gln Arg Ile Pro
    610                 615                 620
Cys Gly Leu Pro Pro Thr Ile Ala Asn Gly Asp Phe Ile Ser Thr Asn
625                 630                 635                 640
Arg Glu Asn Phe His Tyr Gly Ser Val Val Thr Tyr Arg Cys Asn Pro
                645                 650                 655
Gly Ser Gly Gly Arg Lys Val Phe Glu Leu Val Gly Glu Pro Ser Ile
            660                 665                 670
Tyr Cys Thr Ser Asn Asp Asp Gln Val Gly Ile Trp Ser Gly Pro Ala
        675                 680                 685
Pro Gln Cys Ile Ile Pro Asn Lys Cys Thr Pro Pro Asn Val Glu Asn
    690                 695                 700
Gly Ile Leu Val Ser Asp Asn Arg Ser Leu Phe Ser Leu Asn Glu Val
705                 710                 715                 720
Val Glu Phe Arg Cys Gln Pro Gly Phe Val Met Lys Gly Pro Arg Arg
                725                 730                 735
Val Lys Cys Gln Ala Leu Asn Lys Trp Glu Pro Glu Leu Pro Ser Cys
            740                 745                 750
Ser Arg Val Cys Gln Pro Pro Pro Asp Val Leu His Ala Glu Arg Thr
        755                 760                 765
Gln Arg Asp Lys Asp Asn Phe Ser Pro Gly Gln Glu Val Phe Tyr Ser
    770                 775                 780
Cys Glu Pro Gly Tyr Asp Leu Arg Gly Ala Ala Ser Met Arg Cys Thr
785                 790                 795                 800
Pro Gln Gly Asp Trp Ser Pro Ala Ala Pro Thr Cys Glu Val Lys Ser
                805                 810                 815
Cys Asp Asp Phe Met Gly Gln Leu Leu Asn Gly Arg Val Leu Phe Pro
            820                 825                 830
Val Asn Leu Gln Leu Gly Ala Lys Val Asp Phe Val Cys Asp Glu Gly
        835                 840                 845
Phe Gln Leu Lys Gly Ser Ser Ala Ser Tyr Cys Val Leu Ala Gly Met
    850                 855                 860
Glu Ser Leu Trp Asn Ser Ser Val Pro Val Cys Glu Gln Ile Phe Cys
865                 870                 875                 880
Pro Ser Pro Pro Val Ile Pro Asn Gly Arg His Thr Gly Lys Pro Leu
                885                 890                 895
Glu Val Phe Pro Phe Gly Lys Ala Val Asn Tyr Thr Cys Asp Pro His
            900                 905                 910
Pro Asp Arg Gly Thr Ser Phe Asp Leu Ile Gly Glu Ser Thr Ile Arg
        915                 920                 925
Cys Thr Ser Asp Pro Gln Gly Asn Gly Val Trp Ser Ser Pro Ala Pro
    930                 935                 940
Arg Cys Gly Ile Leu Gly His Cys Gln Ala Pro Asp His Phe Leu Phe
945                 950                 955                 960
Ala Lys Leu Lys Thr Gln Thr Asn Ala Ser Asp Phe Pro Ile Gly Thr
                965                 970                 975
Ser Leu Lys Tyr Glu Cys Arg Pro Glu Tyr Tyr Gly Arg Pro Phe Ser
            980                 985                 990
Ile Thr Cys Leu Asp Asn Leu Val Trp Ser Ser Pro Lys Asp Val Cys
        995                 1000                1005
Lys Arg Lys Ser Cys Lys Thr Pro Pro Asp Pro Val Asn Gly Met Val
    1010                1015                1020
His Val Ile Thr Asp Ile Gln Val Gly Ser Arg Ile Asn Tyr Ser Cys
1025                1030                1035                1040
Thr Thr Gly His Arg Leu Ile Gly His Ser Ser Ala Glu Cys Ile Leu
                1045                1050                1055
Ser Gly Asn Thr Ala His Trp Ser Thr Lys Pro Pro Ile Cys Gln Arg
            1060                1065                1070
Ile Pro Cys Gly Leu Pro Pro Thr Ile Ala Asn Gly Asp Phe Ile Ser
        1075                1080                1085
Thr Asn Arg Glu Asn Phe His Tyr Gly Ser Val Val Thr Tyr Arg Cys
    1090                1095                1100
Asn Leu Gly Ser Arg Gly Arg Lys Val Phe Glu Leu Val Gly Glu Pro
1105                1110                1115                1120
Ser Ile Tyr Cys Thr Ser Asn Asp Asp Gln Val Gly Ile Trp Ser Gly
                1125                1130                1135
Pro Ala Pro Gln Cys Ile Ile Pro Asn Lys Cys Thr Pro Pro Asn Val
            1140                1145                1150
Glu Asn Gly Ile Leu Val Ser Asp Asn Arg Ser Leu Phe Ser Leu Asn
        1155                1160                1165
Glu Val Val Glu Phe Arg Cys Gln Pro Gly Phe Val Met Lys Gly Pro
    1170                1175                1180
Arg Arg Val Lys Cys Gln Ala Leu Asn Lys Trp Glu Pro Glu Leu Pro
1185                1190                1195                1200
Ser Cys Ser Arg Val Cys Gln Pro Pro Pro Glu Ile Leu His Gly Glu
                1205                1210                1215
His Thr Pro Ser His Gln Asp Asn Phe Ser Pro Gly Gln Glu Val Phe
            1220                1225                1230
Tyr Ser Cys Glu Pro Gly Tyr Asp Leu Arg Gly Ala Ala Ser Leu His
        1235                1240                1245
Cys Thr Pro Gln Gly Asp Trp Ser Pro Glu Ala Pro Arg Cys Ala Val
    1250                1255                1260
Lys Ser Cys Asp Asp Phe Leu Gly Gln Leu Pro His Gly Arg Val Leu
1265                1270                1275                1280
Phe Pro Leu Asn Leu Gln Leu Gly Ala Lys Val Ser Phe Val Cys Asp
                1285                1290                1295
Glu Gly Phe Arg Leu Lys Gly Ser Ser Val Ser His Cys Val Leu Val
            1300                1305                1310
Gly Met Arg Ser Leu Trp Asn Asn Ser Val Pro Val Cys Glu His Ile
        1315                1320                1325
Phe Cys Pro Asn Pro Pro Ala Ile Leu Asn Gly Arg His Thr Gly Thr
    1330                1335                1340
Pro Ser Gly Asp Ile Pro Tyr Gly Lys Glu Ile Ser Tyr Thr Cys Asp
1345                1350                1355                1360
Pro His Pro Asp Arg Gly Met Thr Phe Asn Leu Ile Gly Glu Ser Thr
                1365                1370                1375
Ile Arg Cys Thr Ser Asp Pro His Gly Asn Gly Val Trp Ser Ser Pro
            1380                1385                1390
Ala Pro Arg Cys Glu Leu Ser Val Arg Ala Gly His Cys Lys Thr Pro
        1395                1400                1405
Glu Gln Phe Pro Phe Ala Ser Pro Thr Ile Pro Ile Asn Asp Phe Glu
    1410                1415                1420
Phe Pro Val Gly Thr Ser Leu Asn Tyr Glu Cys Arg Pro Gly Tyr Phe
1425                1430                1435                1440
Gly Lys Met Phe Ser Ile Ser Cys Leu Glu Asn Leu Val Trp Ser Ser
                1445                1450                1455
Val Glu Asp Asn Cys Arg Arg Lys Ser Cys Gly Pro Pro Pro Glu Pro
            1460                1465                1470
Phe Asn Gly Met Val His Ile Asn Thr Asp Thr Gln Phe Gly Ser Thr
        1475                1480                1485
Val Asn Tyr Ser Cys Asn Glu Gly Phe Arg Leu Ile Gly Ser Pro Ser
    1490                1495                1500
Thr Thr Cys Leu Val Ser Gly Asn Asn Val Thr Trp Asp LysLys Ala
1505                1510                1515               1520
Pro Ile Cys Glu Ile Ile Ser Cys Glu Pro Pro Pro Thr I1e Ser Asn
                1525                1530                1535
Gly Asp Phe Tyr Ser Asn Asn Arg Thr Ser Phe His Asn Gly Thr Val
            1540                1545                1550
Val Thr Tyr Gln Cys His Thr Gly Pro Asp Gly Glu Gln Leu Phe Glu
        1555                1560                1565
Leu Val Gly Glu Arg Ser Ile Tyr Cys Thr Ser Lys Asp Asp Gln Val
    1570                1575                1580
Gly Val Trp Ser Ser Pro Pro Pro Arg Cys Ile Ser Thr Asn Lys Cys
1585                1590                1595                1600
Thr Ala Pro Glu Val Glu Asn Ala Ile Arg Val Pro Gly Asn Arg Ser
                1605                1610                1615
Phe Phe Ser Leu Thr Glu Ile Ile Arg Phe Arg Cys Gln Pro Gly Phe
            1620                1625                1630
Val Met Val Gly Ser His Thr Val Gln Cys Gln Thr Asn Gly Arg Trp
        1635                1640                1645
Gly Pro Lys Leu Pro His Cys Ser Arg Val Cys Gln Pro Pro Pro Glu
    1650                1655                1660
Ile Leu His Gly Glu His Thr Leu Ser His Gln Asp Asn Phe Ser Pro
1665                1670                1675                1680
Gly Gln Glu Val Phe Tyr Ser Cys Glu Pro Ser Tyr Asp Leu Arg Gly
                1685                1690                1695
Ala Ala Ser Leu His Cys Thr Pro Gln Gly Asp Trp Ser Pro Glu Ala
            1700                1705                1710
Pro Arg Cys Thr Val Lys Ser Cys Asp Asp Phe Leu Gly Gln Leu Pro
        1715                1720                1725
His Gly Arg Val Leu Leu Pro Leu Asn Leu Gln Leu Gly Ala Lys Val
    1730                1735                1740
Ser Phe Val Cys Asp Glu Gly Phe Arg Leu Lys Gly Arg Ser Ala Ser
1745                1750                1755                1760
His Cys Val Leu Ala Gly Met Lys Ala Leu Trp Asn Ser Ser Val Pro
                1765                1770                1775
Val Cys Glu Gln Ile Phe Cys Pro Asn Pro Pro Ala Ile Leu Asn Gly
            1780                1785                1790
Arg His Thr Gly Thr Pro Phe Gly Asp Ile Pro Tyr Gly Lys Glu Ile
        1795                1800                1805
Ser Tyr Ala Cys Asp Thr His Pro Asp Arg Gly Met Thr Phe Asn Leu
    1810                1815                1820
Ile Gly Glu Ser Ser Ile Arg Cys Thr Ser Asp Pro Gln Gly Asn Gly
1825                1830                1835                1840
Val Trp Ser Ser Pro Ala Pro Arg Cys Glu Leu Ser Val Pro Ala Ala
                1845                1850                1855
Cys Pro His Pro Pro Lys Ile Gln Asn Gly His Tyr Ile Gly Gly His
             1860                1865                1870
Val Ser Leu Tyr Leu Pro Gly Met Thr Ile Ser Tyr Thr Cys Asp Pro
        1875                1880                1885
Gly Tyr Leu Leu Val Gly Lys Gly Phe Ile Phe Cys Thr Asp Gln Gly
    1890                1895                1900
Ile Trp Ser Gln Leu Asp His Tyr Cys Lys Glu Val Asn Cys Ser Phe
1905                1910                1915                1920
Pro Leu Phe Met Asn Gly Ile Ser Lys Glu Leu Glu Met Lys Lys Val
                1925                1930                1935
Tyr His Tyr Gly Asp Tyr Val Thr Leu Lys Cys Glu Asp Gly Tyr Thr
            1940                1945                1950
Leu Glu Gly Ser Pro Trp Ser Gln Cys Gln Ala Asp Asp Arg Trp Asp
        1955                1960                1965
Pro Pro Leu Ala Lys Cys Thr Ser Arg Ala His Asp Ala Leu Ile Val
    1970                1975                1980
Gly Thr Leu Ser Gly Thr Ile Phe Phe Ile Leu Leu Ile Ile Phe Leu
1985                1990                1995                2000
Ser Trp Ile Ile Leu Lys His Arg Lys Gly Asn Asn Ala His Glu Asn
                2005                2010                2015
Pro Lys Glu Val Ala Ile His Leu His Ser Gln Gly Gly Ser Ser Val
            2020                2025                2030
His Pro Arg Thr Leu Gln Thr Asn Glu Glu Asn Ser Arg Val Leu Pro
        2035                2040                2045
<210>15
<211>1029
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>15
tgtgaggagc caccaacatt tgaagctatg gagctcattg gtaaaccaaa accctactat  60
gagattggtg aacgagtaga ttataagtgt aaaaaaggat acttctatat acctcctctt  120
gccacccata ctatttgtga tcggaatcat acatggctac ctgtctcaga tgacgcctgt  180
tatagagaaa catgtccata tatacgggat cctttaaatg gccaagcagt ccctgcaaat  240
gggacttacg agtttggtta tcagatgcac tttatttgta atgagggtta ttacttaatt  300
ggtgaagaaa ttctatattg tgaacttaaa ggatcagtag caatttggag cggtaagccc  360
ccaatatgtg aaaaggtttt gtgtacacca cctccaaaaa taaaaaatgg aaaacacacc  420
tttagtgaag tagaagtatt tgagtatctt gatgcagtaa cttatagttg tgatcctgca  480
cctggaccag atccattttc acttattgga gagagcacga tttattgtgg tgacaattca  540
gtgtggagtc gtgctgctcc agagtgtaaa gtggtcaaat gtcgatttcc agtagtcgaa  600
aatggaaaac agatatcagg atttggaaaa aaattttact acaaagcaac agttatgttt  660
gaatgcgata agggttttta cctcgatggc agcgacacaa ttgtctgtga cagtaacagt  720
acttgggatc ccccagttcc aaagtgtctt aaagtgtcga cttcttccac tacaaaatct  780
ccagcgtcca gtgcctcagg tcctaggcct acttacaagc ctccagtctc aaattatcca  840
ggatatccta aacctgagga aggaatactt gacagtttgg atgtttgggt cattgctgtg  900
attgttattg ccatagttgt tggagttgca gtaatttgtg ttgtcccgta cagatatctt  960
caaaggagga agaagaaagg cacataccta actgatgaga cccacagaga agtaaaattt  1020
acttctctc                                                          1029
<210>16
<211>378
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>16
Met Glu Pro Pro Gly Arg Arg Glu Cys Pro Phe Pro Ser Trp Arg Phe
 1               5                  10                  15
Phe Pro Gly Leu Leu Leu Ala Ala Met Val Leu Leu Leu Tyr Ser Phe
            20                  25                  30
Ser Asp Ala Cys Glu Glu Pro Pro Thr Phe Glu Ala Met Glu Leu Ile
        35                  40                  45
Gly Lys Pro Lys Pro Tyr Tyr Glu Ile Gly Glu Arg Val Asp Tyr Lys
    50                  55                  60
Cys Lys Lys Gly Tyr Phe Tyr Ile Pro Pro Leu Ala Thr His Thr Ile
65                  70                  75                  80
Cys Asp Arg Asn His Thr Trp Leu Pro Val Ser Asp Asp Ala Cys Tyr
                85                  90                  95
Arg Glu Thr Cys Pro Tyr Ile Arg Asp Pro Leu Asn Gly Gln Ala Val
            100                 105                 110
Pro Ala Asn Gly Thr Tyr Glu Phe Gly Tyr Gln Met His Phe Ile Cys
        115                 120                 125
Asn Glu Gly Tyr Tyr Leu Ile Gly Glu Glu Ile Leu Tyr Cys Glu Leu
    130                 135                 140
Lys Gly Ser Val Ala Ile Trp Ser Gly Lys Pro Pro Ile Cys Glu Lys
145                 150                 155                 160
Val Leu Cys Thr Pro Pro Pro Lys Ile Lys Asn Gly Lys His Thr Phe
                165                 170                 175
Ser Glu Val Glu Val Phe Glu Tyr Leu Asp Ala Val Thr Tyr Ser Cys
            180                 185                 190
Asp Pro Ala Pro Gly Pro Asp Pro Phe Ser Leu Ile Gly Glu Ser Thr
        195                 200                 205
Ile Tyr Cys Gly Asp Asn Ser Val Trp Ser Arg Ala Ala Pro Glu Cys
    210                 215                 220
Lys Val Val Lys Cys Arg Phe Pro Val Val Glu Asn Gly Lys Gln Ile
225                 230                 235                 240
Ser Gly Phe Gly Lys Lys Phe Tyr Tyr Lys Ala Thr Val Met Phe Glu
                245                 250                 255
Cys Asp Lys Gly Phe Tyr Leu Asp Gly Ser Asp Thr Ile Val Cys Asp
            260                 265                 270
Ser Asn Ser Thr Trp Asp Pro Pro Val Pro Lys Cys Leu Lys Val Ser
        275                 280                 285
Thr Ser Ser Thr Thr Lys Ser Pro Ala Ser Ser Ala Ser Gly Pro Arg
    290                 295                 300
Pro Thr Tyr Lys Pro Pro Val Ser Asn Tyr Pro Gly Tyr Pro Lys Pro
305                 310                 315                 320
Glu Glu Gly Ile Leu Asp Ser Leu Asp Val Trp Val Ile Ala Val Ile
                325                 330                 335
Val Ile Ala Ile Val Val Gly Val Ala Val Ile Cys Val Val Pro Tyr
            340                 345                 350
Arg Tyr Leu Gln Arg Arg Lys Lys Lys Gly Thr Tyr Leu Thr Asp Glu
        355                 360                 365
Thr His Arg Glu Val Lys Phe Thr Ser Leu
    370                 375
<210>17
<211>440
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>17
Met Glu Val Ser Ser Arg Ser Ser Glu Pro Leu Asp Pro Val Trp Leu
 1               5                  10                  15
Leu Val Ala Phe Gly Arg Gly Gly Val Lys Leu Glu Val Leu Leu Leu
            20                  25                  30
Phe Leu Leu Pro Phe Thr Leu Gly His Cys Pro Ala Pro Ser Gln Leu
        35                  40                  45
Pro Ser Ala Lys Pro Ile Asn Leu Thr Asp Glu Ser Met Phe Pro Ile
    50                  55                  60
Gly Thr Tyr Leu Leu Tyr Glu Cys Leu Pro Gly Tyr Ile Lys Arg Gln
65                  70                  75                  80
Phe Ser Ile Thr Cys Lys Gln Asp Ser Thr Trp Thr Ser Ala Glu Asp
                85                  90                  95
Lys Cys Ile Arg Lys Gln Cys Lys Thr Pro Ser Asp Pro Glu Asn Gly
            100                 105                 110
Leu Val His Val His Thr Gly Ile Gln Phe Gly Ser Arg Ile Asn Tyr
        115                 120                 125
Thr Cys Asn Gln Gly Tyr Arg Leu Ile Gly Ser Ser Ser Ala Val Cys
    130                 135                 140
Val Ile Thr Asp Gln Ser Val Asp Trp Asp Thr Glu Ala Pro Ile Cys
145                 150                 155                 160
Glu Trp Ile Pro Cys Glu Ile Pro Pro Gly Ile Pro Asn Gly Asp Phe
                165                 170                 175
Phe Ser Ser Thr Arg Glu Asp Phe His Tyr Gly Met Val Val Thr Tyr
            180                 185                 190
Arg Cys Asn Thr Asp Ala Arg Gly Lys Ala Leu Phe Asn Leu Val Gly
        195                 200                 205
Glu Pro Ser Leu Tyr Cys Thr Ser Asn Asp Gly Glu Ile Gly Val Trp
    210                 215                 220
Ser Gly Pro Pro Pro Gln Cys Ile Glu Leu Asn Lys Cys Thr Pro Pro
225                 230                 235                 240
Pro Tyr Val Glu Asn Ala Val Met Leu Ser Glu Asn Arg Ser Leu Phe
                245                 250                 255
Ser Leu Arg Asp Ile Val Glu Phe Arg Cys His Pro Gly Phe Ile Met
            260                 265                 270
Lys Gly Ala Ser Ser Val His Cys Gln Ser Leu Asn Lys Trp Glu Pro
        275                 280                 285
Glu Leu Pro Ser Cys Phe Lys Gly Val Ile Cys Arg Leu Pro Gln Glu
    290                 295                 300
Met Ser Gly Phe Gln Lys Gly Leu Gly Met Lys Lys Glu Tyr Tyr Tyr
305                 310                 315                 320
Gly Glu Asn Val Thr Leu Glu Cys Glu Asp Gly Tyr Thr Leu Glu Gly
                325                 330                 335
Ser Ser Gln Ser Gln Cys Gln Ser Asp Gly Ser Trp Asn Pro Leu Leu
            340                 345                 350
Ala Lys Cys Val Ser Arg Ser Ile Ser Gly Leu Ile Val Gly Ile Phe
        355                 360                 365
Ile Gly Ile Ile Val Phe Ile Leu Val Ile Ile Val Phe Ile Trp Met
    370                 375                 380
Ile Leu Lys Tyr Lys Lys Arg Asn Thr Thr Asp Glu Lys Tyr Lys Glu
385                 390                 395                 400
Val Gly Ile His Leu Asn Tyr Lys Glu Asp Ser Cys Val Arg Leu Gln
                405                 410                 415
Ser Leu Leu Thr Ser Gln Glu Asn Ser Ser Thr Thr Ser Pro Ala Arg
            420                 425                 430
Asn Ser Leu Thr Gln Glu Val Ser
        435                 440
<210>18
<211>232
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>18
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
 1               5                  10                  15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
            20                  25                  30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
        35                  40                  45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
    50                  55                  60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65                  70                  75                  80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
                85                  90                  95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
            100                 105                 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
        115                 120                 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
    130                 135                 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145                 150                 155                 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
                165                 170                 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Pro Phe Phe Leu Tyr
            180                 185                 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
        195                 200                 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
    210                 215                 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225                 230
<210>19
<211>454
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>19
Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn
 1               5                  10                  15
Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp
            20                  25                  30
Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser
        35                  40                  45
Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys
    50                  55                  60
Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln
65                  70                  75                  80
Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn
                85                  90                  95
Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys
            100                 105                 110
Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg
        115                 120                 125
Ser Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln
    130                 135                 140
Ile Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val
145                 150                 155                 160
Thr Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr
                165                 170                 175
Tyr Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Ser
            180                 185                 190
Gln Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln
        195                 200                 205
Gln Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg
    210                 215                 220
Val Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser
225                 230                 235                 240
Thr Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val
                245                 250                 255
Thr Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr
            260                 265                 270
Asn Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu
        275                 280                 285
Ala Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys
    290                 295                 300
Thr Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser
305                 310                 315                 320
Arg Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro
                325                 330                 335
Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys
            340                 345                 350
Leu Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln
        355                 360                 365
Arg Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met
    370                 375                 380
Pro Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr
385                 390                 395                 400
Val Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val
                405                 410                 415
Ala His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys
            420                 425                 430
Ser Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp
        435                 440                 445
Thr Ala Gly Thr Cys Tyr
    450
<210>20
<211>1530
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>20
atgggcgccg cgggcctgct cggggttttc ttggctctcg tcgcaccggg ggtcctcggg  60
atttcttgtg gctctcctcc gcctatccta aatggccgga ttagttatta ttctaccccc  120
attgctgttg gtaccgtgat aaggtacagt tgttcaggta ccttccgcct cattggagaa  180
aaaagtctat tatgcataac taaagacaaa gtggatggaa cctgggataa acctgctcct  240
aaatgtgaat atttcaataa atattcttct tgccctgagc ccatagtacc aggaggatac  300
aaaattagag gctctacacc ctacagacat ggtgattctg tgacatttgc ctgtaaaacc  360
aacttctcca tgaacggaaa caagtctgtt tggtgtcaag caaataatat gtgggggccg  420
acacgactac caacctgtgt aagtgttttc cctctcgagt gtccagcact tcctatgatc  480
cacaatggac atcacacaag tgagaatgtt ggctccattg ctccaggatt gtctgtgact  540
tacagctgtg aatctggtta cttgcttgtt ggagaaaaga tcattaactg tttgtcttcg  600
ggaaaatgga gtgctgtccc ccccacatgt gaagaggcac gctgtaaatc tctaggacga  660
tttcccaatg ggaaggtaaa ggagcctcca attctccggg ttggtgtaac tgcaaacttt  720
ttctgtgatg aagggtatcg actgcaaggc ccaccttcta gtcggtgtgt aattgctgga  780
cagggagttg cttggaccaa aatgccagta tgtgaagaaa ttttttgccc actgcggccg  840
cagtctagag acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga  900
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct  960
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg  1020
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac  1080
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag  1140
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagtcc ccatcgagaa aaccatctcc  1200
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag  1260
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc  1320
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg  1380
ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg  1440
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg  1500
cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa                                   1530
<210>21
<211>510
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>21
Met Gly Ala Ala Gly Leu Leu Gly Val Phe Leu Ala Leu Val Ala Pro
 1               5                  10                  15
Gly Val Leu Gly Ile Ser Cys Gly Ser Pro Pro Pro Ile Leu Asn Gly
            20                  25                  30
Arg Ile Ser Tyr Tyr Ser Thr Pro Ile Ala Val Gly Thr Val Ile Arg
        35                  40                  45
Tyr Ser Cys Ser Gly Thr Phe Arg Leu Ile Gly Glu Lys Ser Leu Leu
    50                  55                  60
Cys Ile Thr Lys Asp Lys Val Asp Gly Thr Trp Asp Lys Pro Ala Pro
65                  70                  75                  80
Lys Cys Glu Tyr Phe Asn Lys Tyr Ser Ser Cys Pro Glu Pro Ile Val
                85                  90                  95
Pro Gly Gly Tyr Lys Ile Arg Gly Ser Thr Pro Tyr Arg His Gly Asp
            100                 105                 110
Ser Val Thr Phe Ala Cys Lys Thr Asn Phe Ser Met Asn Gly Asn Lys
        115                 120                 125
Ser Val Trp Cys Gln Ala Asn Asn Met Trp Gly Pro Thr Arg Leu Pro
    130                 135                 140
Thr Cys Val Ser Val Phe Pro Leu Glu Cys Pro Ala Leu Pro Met Ile
145                 150                 155                 160
His Asn Gly His His Thr Ser Glu Asn Val Gly Ser Ile Ala Pro Gly
                165                 170                 175
Leu Ser Val Thr Tyr Ser Cys Glu Ser Gly Tyr Leu Leu Val Gly Glu
            180                 185                 190
Lys Ile Ile Asn Cys Leu Ser Ser Gly Lys Trp Ser Ala Val Pro Pro
        195                 200                 205
Thr Cys Glu Glu Ala Arg Cys Lys Ser Leu Gly Arg Phe Pro Asn Gly
    210                 215                 220
Lys Val Lys Glu Pro Pro Ile Leu Arg Val Gly Val Thr Ala Asn Phe
225                 230                 235                 240
Phe Cys Asp Glu Gly Tyr Arg Leu Gln Gly Pro Pro Ser Ser Arg Cys
                245                 250                 255
Val Ile Ala Gly Gln Gly Val Ala Trp Thr Lys Met Pro Val Cys Glu
            260                 265                 270
Glu Ile Phe Cys Pro Leu Arg Pro Gln Ser Arg Asp Lys Thr His Thr
        275                 280                 285
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
    290                 295                 300
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
305                 310                 315                 320
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
                 325                 330                 335
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
             340                 345                 350
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
        355                 360                 365
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
    370                 375                 380
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
385                 390                 395                 400
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
                405                 410                 415
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
            420                 425                 430
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
        435                 440                 445
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
    450                 455                 460
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
465                 470                 4754                 80
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
                485                 490                 495
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            500                 505                 510
<210>22
<211>233
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>22
Glu Pro Arg Ile Pro Lys Pro Ser Thr Pro Pro Gly Ser Ser Cys Pro
 1               5                  10                  15
Pro Gly Asn Ile Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys
            20                  25                  30
Pro Lys Asp Ala Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val
        35                  40                  45
Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val His Val Ser Trp Phe
    50                  55                  60
Val Asp Asn Lys Glu Val His Thr Ala Trp Thr Gln Pro Arg Glu Ala
65                  70                  75                  80
Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His
                85                  90                  95
Gln Asp Trp Met Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys
            100                 105                 110
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Arg
        115                 120                 125
Ala Gln Thr Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Arg Glu Gln Met
    130                 135                 140
Ser Lys Lys Lys Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Thr Asn Phe Phe Ser
145                 150                 155                 160
Glu Ala Ile Ser Val Glu Trp Glu Arg Asn Gly Glu Leu Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Tyr Lys Asn Thr Pro Pro Ile Leu Asp Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Leu
            180                 185                 190
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Thr Asp Ser Trp Leu Gln Gly Glu Ile
        195                 200                 205
Phe Thr Cys Ser Val Val His Glu Ala Leu His Asn His His Thr Gln
    210                 215                 220
Lys Asn Leu Ser Arg Ser Pro Gly Lys
225                 230
<210>23
<211>4860
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>23
gctctctaca ccctcatcac ccctgctgtt ttgcgaacag acacagaaga gcaaattttg  60
gtggaggccc atggagacag tactccaaaa cagcttgaca tctttgttca tgattttcca  120
cggaagcaga aaaccttgtt ccaaaccaga gtagatatga atccagcagg aggcatgctt  180
gtcactccaa ctatagagat tccagcaaaa gaagtgagta cggactccag gcaaaatcaa  240
tatgtggttg tgcaagtaac tggtcctcaa gtgagattgg aaaaggtggt tctcctttct  300
taccagagta gctttctgtt tatccagaca gataaaggca tctatacacc agggtctcca  360
gtactctatc gtgttttttc tatggatcac aacacaagca agatgaacaa aactgtgatt  420
gttgagtttc agactccaga aggcattctt gtcagttcta attcagttga cctaaacttc  480
ttctggcctt acaatttacc agaccttgtc agtttgggga cttggaggat tgtggccaaa  540
tatgaacatt ccccagagaa ttatactgca tattttgatg tcaggaaata tgtgttgcca  600
agctttgaag tccgtctgca accatcagag aagttttttt acattgacgg caatgaaaat  660
ttccacgtgt ctatcactgc aaggtacttg tatggagagg aagtggaagg tgtggccttt  720
gtcctctttg gagtgaaaat agatgatgct aaaaagagta ttccagactc actcacgaga  780
attccgatta ttgatggaga tgggaaagca acactaaaaa gagatacatt ccgttctcga  840
tttccaaatc tcaatgagct tgttgggcat actctgtatg catctgtaac agtcatgaca  900
gaatcaggca gtgatatggt agtgactgag caaagcggca ttcatattgt ggcatctccc  960
tatcagatcc acttcacaaa aacccccaaa tatttcaagc caggaatgcc atatgaactg  1020
acggtgtatg ttaccaaccc tgatggctca ccagctgccc atgtgccagt ggtatcagag  1080
gcctttcatt ctatgggaac cactttgagt gatgggactg ctaagctcat cctgaacata  1140
ccattgaatg ctcaaagcct accaatcact gttagaacta accatggaga cctcccaaga  1200
gaacgccagg caacaaagtc catgacagcc atagcctacc aaacccaggg aggatctgga  1260
aactatcttc atgtagccat tacatctaca gagattaagc ccggagataa cttacctgtc  1320
aatttcaatg tgaagggcaa tgcaaattca ctgaagcaga tcaaatattt cacatacctc  1380
atattgaata aagggaagat tttcaaggtt ggcaggcaac ccaggagaga tgggcagaat  1440
ctggtgacca tgaatctgca tatcactcca gatctcatcc cttccttccg gtttgtggct  1500
tactaccaag tgggaaacaa cgaaattgtg gctgattctg tctgggtgga tgtgaaggat  1560
acctgcatgg gaacgttggt tgtgaaagga gacaatctaa tacaaatgcc aggagctgca  1620
atgaaaatca aattggaagg ggatccaggt gctcgggttg gtcttgtggc tgtggacaaa  1680
gcagtatatg ttctcaatga taaatataag attagccaag ctaagatatg ggacacaata  1740
gaaaagagtg actttggctg tacagctggc agtggccaga ataatctggg tgtgtttgaa  1800
gatgctggac tggctctgac aaccagcact aatctcaaca ccaaacagag atcagctgca  1860
aagtgtcctc agcctgcaaa tcggaggcgt cgcagttctg ttttgctgct tgacagcaac  1920
gcaagcaaag cggcagaatt tcaggatcaa gacctgcgta aatgctgtga agatgtcatg  1980
catgagaacc ccatggggta cacttgtgaa aagcgtgcaa aatacatcca ggagggagat  2040
gcttgtaagg ctgccttcct tgaatgctgt cgctacatca agggggtccg agatgaaaac  2100
caacgggaga gcgagttgtt tctggcaaga gatgataatg aagatggttt catagcagat  2160
agtgatatca tctcaaggtc tgatttcccc aagagttggt tgtggctaac aaaggacttg  2220
accgaggagc ctaacagtca agggatttca agcaagacaa tgtcttttta tctgagggat  2280
tccatcacaa cctgggtggt gctggctgta agctttacac ccaccaaagg gatctgtgtg  2340
gctgaacctt atgaaataag agtcatgaaa gtcttcttca ttgatcttca aatgccatat  2400
tcagtagtga agaatgagca ggtggagatt cgagctattc tgcacaacta cgttaacgag  2460
gatatttatg tgcgagtgga actgttatac aacccagcct tctgcagtgc ttccacaaaa  2520
ggacaaagat accgacagca gttcccaatt aaagccctgt cctccagagc agtaccgttt  2580
gtgatagtcc cattagagca aggattgcat gatgttgaga ttaaagcaag tgtccaggaa  2640
gcgttgtggt cagacggtgt gaggaagaaa ctgaaagttg tacctgaagg ggtacagaaa  2700
tccattgtga ctattgttaa actggaccca agggcaaaag gagttggtgg aacacagcta  2760
gaagtgatca aagcccgcaa attagatgac agagtgcctg acacagaaat tgaaaccaag  2820
attatcatcc aaggtgaccc tgtggctcag attattgaaa actcaattga tggaagtaaa  2880
ctcaaccatc tcattatcac tccttctggc tgtggggagc aaaatatgat ccgcatggcc  2940
gcaccagtta ttgccaccta ctacctggac accacagagc agtgggagac tctcggcata  3000
aatcgcagga ctgaagctgt caatcagatc gtgactggtt atgcccagca gatggtgtac  3060
aagaaagcag atcattccta tgcagcattt acaaaccgtg catctagttc ttggctaaca  3120
gcatatgtcg taaaagtctt tgccatggct gccaaaatgg tagcaggcat tagtcatgaa  3180
atcatttgtg gaggtgtgag gtggctgatt ctgaacaggc aacaaccaga tggagcgttc  3240
aaagaaaatg cccctgtact ttctggaaca atgcagggag gaattcaagg tgctgaagaa  3300
gaagtatatt taacagcttt cattctggtt gcgttgttgg aatccaaaac aatctgcaat  3360
gactatgtca atagtctaga cagcagcatc aagaaggcca caaattattt actcaaaaag  3420
tatgagaaac tgcaaaggcc ttacactaca gccctcacag cctatgcttt ggctgctgca  3480
gaccaactca atgatgacag ggtactcatg gcagcatcaa caggaaggga tcattgggaa  3540
gaatacaatg ctcacaccca caacattgaa ggcacttcct atgccttgtt ggccctgctg  3600
aaaatgaaga aatttgatca aactggtccc atagtcagat ggctgacaga tcagaatttt  3660
tatggggaaa catatggaca aacccaagca acagttatgg catttcaagc tcttgctgaa  3720
tatgagattc agatgcctac ccataaggac ttaaacttag atattactat tgaactgcca  3780
gatcgagaag tacctataag gtacagaatt aattatgaaa atgctctcct ggctcggaca  3840
gtagagacca aactcaacca agacatcact gtgacagcat caggtgatgg aaaagcaaca  3900
atgaccattt tgacattcta taacgcacag ttgcaggaga aggcaaatgt ttgcaataaa  3960
tttcatctta atgtttctgt tgaaaacatc cacttgaatg caatgggagc caagggagcc  4020
ctcatgctca agatctgcac aaggtatctg ggagaagttg attctacaat gacaataatt  4080
gatatttcta tgctgactgg ttttctccct gatgctgaag accttacaag gctttctaaa  4140
ggagtggaca gatacatctc cagatatgaa gttgacaata atatggctca gaaagtagct  4200
gttatcattt acttaaacaa ggtctcccac tctgaagatg aatgcctgca ctttaagatt  4260
ctcaagcatt ttgaagttgg cttcattcag ccaggatcag tcaaggtgta cagctactac  4320
aatctagatg aaaaatgtac caagttctac catccagata aaggaacagg ccttctcaat  4380
aagatatgta ttggtaacgt ttgccgatgt gcaggagaaa cctgttcctc gctcaaccat  4440
caggaaagga ttgatgttcc attacaaatt gaaaaagcct gcgagacgaa tgtggattat  4500
gtctacaaaa ccaagctgct tcgaatagaa gaacaagatg gtaatgatat ctatgtcatg  4560
gatgttttag aagttattaa acaaggtact gacgaaaatc cacgagcaaa gacccaccag  4620
tacataagtc aaaggaaatg ccaggaggct ctgaatctga aggtgaatga tgattatctg  4680
atctggggtt ccaggagtga cctgttgccc acgaaagata aaatttccta catcattaca  4740
aagaacacat ggattgagag atggccacat gaagacgaat gtcaggaaga agaattccaa  4800
aagttgtgtg atgactttgc tcagtttagc tacacattga ctgagtttgg ctgccctact  4860
<210>24
<211>1620
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>24
Ala Leu Tyr Thr Leu Ile Thr Pro Ala Val Leu Arg Thr Asp Thr Glu
 1               5                  10                  15
Glu Gln Ile Leu Val Glu Ala His Gly Asp Ser Thr Pro Lys Gln Leu
            20                  25                  30
Asp Ile Phe Val His Asp Phe Pro Arg Lys Gln Lys Thr Leu Phe Gln
        35                  40                  45
Thr Arg Val Asp Met Asn Pro Ala Gly Gly Met Leu Val Thr Pro Thr
    50                  55                  60
Ile Glu Ile Pro Ala Lys Glu Val Ser Thr Asp Ser Arg Gln Asn Gln
65                  70                  75                  80
Tyr Val Val Val Gln Val Thr Gly Pro Gln Val Arg Leu Glu Lys Val
                85                  90                  95
Val Leu Leu Ser Tyr Gln Ser Ser Phe Lau Phe Ile Gln Thr Asp Lys
            100                 105                 110
Gly Ile Tyr Thr Pro Gly Ser Pro Val Leu Tyr Arg Val Phe Ser Met
        115                 120                 125
Asp His Asn Thr Ser Lys Met Asn Lys Thr Val Ile Val Glu Phe Gln
    130                 135                 140
Thr Pro Glu Gly Ile Leu Val Ser Ser Asn Ser Val Asp Leu Asn Phe
145                 150                 155                 160
Phe Trp Pro Tyr Asn Leu Pro Asp Leu Val Ser Leu Gly Thr Trp Arg
                165                 170                 175
Ile Val Ala Lys Tyr Glu His Ser Pro Glu Asn Tyr Thr Ala Tyr Phe
            180                 185                 190
Asp Val Arg Lys Tyr Val Leu Pro Ser Phe Glu Val Arg Leu Gln Pro
        195                 200                 205
Ser Glu Lys Phe Phe Tyr Ile Asp Gly Asn Glu Asn Phe His Val Ser
    210                 215                 220
Ile Thr Ala Arg Tyr Leu Tyr Gly Glu Glu Val Glu Gly Val Ala Phe
225                 230                 235                 240
Val Leu Phe Gly Val Lys Ile Asp Asp Ala Lys Lys Ser Ile Pro Asp
                245                 250                 255
Ser Leu Thr Arg Ile Pro Ile Ile Asp Gly Asp Gly Lys Ala Thr Leu
            260                 265                 270
Lys Arg Asp Thr Phe Arg Ser Arg Phe Pro Asn Leu Asn Glu Leu Val
        275                 280                 285
Gly His Thr Leu Tyr Ala Ser Val Thr Val Met Thr Glu Ser Gly Ser
    290                 295                 300
Asp Met Val Val Thr Glu Gln Ser Gly Ile His Ile Val Ala Ser Pro
305                 310                 315                 320
Tyr Gln Ile His Phe Thr Lys Thr Pro Lys Tyr Phe Lys Pro Gly Met
                325                 330                 335
Pro Tyr Glu Leu Thr Val Tyr Val Thr Asn Pro Asp Gly Ser Pro Ala
            340                 345                 350
Ala His Val Pro Val Val Ser Glu Ala Phe His Ser Met Gly Thr Thr
        355                 360                 365
Leu Ser Asp Gly Thr Ala Lys Leu Ile Leu Asn Ile Pro Leu Asn Ala
    370                 375                 380
Gln Ser Leu Pro Ile Thr Val Arg Thr Asn His Gly Asp Leu Pro Arg
385                 390                 395                 400
Glu Arg Gln Ala Thr Lys Ser Met Thr Ala Ile Ala Tyr Gln Thr Gln
                405                 410                 415
Gly Gly Ser Gly Asn Tyr Leu His Val Ala Ile Thr Ser Thr Glu Ile
            420                 425                 430
Lys Pro Gly Asp Asn Leu Pro Val Asn Phe Asn Val Lys Gly Asn Ala
        435                 440                 445
Asn Ser Leu Lys Gln Ile Lys Tyr Phe Thr Tyr Leu Ile Leu Asn Lys
    450                 455                 460
Gly Lys Ile Phe Lys Val Gly Arg Gln Pro Arg Arg Asp Gly Gln Asn
465                 470                 475                 480
Leu Val Thr Met Asn Leu His Ile Thr Pro Asp Leu Ile Pro Ser Phe
                485                 490                 495
Arg Phe Val Ala Tyr Tyr Gln Val Gly Asn Asn Glu Ile Val Ala Asp
            500                 505                 510
Ser Val Trp Val Asp Val Lys Asp Thr Cys Met Gly Thr Leu Val Val
        515                 520                 525
Lys Gly Asp Asn Leu Ile Gln Met Pro Gly Ala Ala Met Lys Ile Lys
    530                 535                 540
Leu Glu Gly Asp Pro Gly Ala Arg Val Gly Leu Val Ala Val Asp Lys
545                 550                 555                 560
Ala Val Tyr Val Leu Asn Asp Lys Tyr Lys Ile Ser Gln Ala Lys Ile
                565                 570                 575
Trp Asp Thr Ile Glu Lys Ser Asp Phe Gly Cys Thr Ala Gly Ser Gly
            580                 585                 590
Gln Asn Asn Leu Gly Val Phe Glu Asp Ala Gly Leu Ala Leu Thr Thr
        595                 600                 605
Ser Thr Asn Leu Asn Thr Lys Gln Arg Ser Ala Ala Lys Cys Pro Gln
    610                 615                 620
Pro Ala Asn Arg Arg Arg Arg Ser Ser Val Leu Leu Leu Asp Ser Asn
625                 630                 635                 640
Ala Ser Lys Ala Ala Glu Phe Gln Asp Gln Asp Leu Arg Lys Cys Cys
                645                 650                 655
Glu Asp Val Met His Glu Asn Pro Met Gly Tyr Thr Cys Glu Lys Arg
            660                 665                 670
Ala Lys Tyr Ile Gln Glu Gly Asp Ala Cys Lys Ala Ala Phe Leu Glu
        675                 680                 685
Cys Cys Arg Tyr Ile Lys Gly Val Arg Asp Glu Asn Gln Arg Glu Ser
    690                 695                 700
Glu Leu Phe Leu Ala Arg Asp Asp Asn Glu Asp Gly Phe Ile Ala Asp
705                 710                 715                 720
Ser Asp Ile Ile Ser Arg Ser Asp Phe Pro Lys Ser Trp Leu Trp Leu
                725                 730                 735
Thr Lys Asp Leu Thr Glu Glu Pro Asn Ser Gln Gly Ile Ser Ser Lys
            740                 745                 750
Thr Met Ser Phe Tyr Leu Arg Asp Ser Ile Thr Thr Trp Val Val Leu
        755                 760                 765
Ala Val Ser Phe Thr Pro Thr Lys Gly Ile Cys Val Ala Glu Pro Tyr
    770                 775                 780
Glu Ile Arg Val Met Lys Val Phe Phe Ile Asp Leu Gln Met Pro Tyr
785                 790                 795                 800
Ser Val Val Lys Asn Glu Gln Val Glu Ile Arg Ala Ile Leu His Asn
                805                 810                 815
Tyr Val Asn Glu Asp Ile Tyr Val Arg Val Glu Leu Leu Tyr Asn Pro
            820                 825                 830
Ala Phe Cys Ser Ala Ser Thr Lys Gly Gln Arg Tyr Arg Gln Gln Phe
        835                 840                 845
Pro Ile Lys Ala Leu Ser Ser Arg Ala Val Pro Phe Val Ile Val Pro
    850                 855                 860
Leu Glu Gln Gly Leu His Asp Val Glu Ile Lys Ala Ser Val Gln Glu
865                 870                 875                 880
Ala Leu Trp Ser Asp Gly Val Arg Lys Lys Leu Lys Val Val Pro Glu
                885                 890                 895
Gly Val Gln Lys Ser Ile Val Thr Ile Val Lys Leu Asp Pro Arg Ala
            900                 905                 910
Lys Gly Val Gly Gly Thr Gln Leu Glu Val Ile Lys Ala Arg Lys Leu
        915                 920                 925
Asp Asp Arg Val Pro Asp Thr Glu Ile Glu Thr Lys Ile Ile Ile Gln
    930                 935                 940
Gly Asp Pro Val Ala Gln Ile Ile Glu Asn Ser Ile Asp Gly Ser Lys
945                 950                 955                 960
Leu Asn His Leu Ile Ile Thr Pro Ser Gly Cys Gly Glu Gln Asn Met
                965                 970                 975
Ile Arg Met Ala Ala Pro Val Ile Ala Thr Tyr Tyr Leu Asp Thr Thr
            980                 985                 990
Glu Gln Trp Glu Thr Leu Gly Ile Asn Arg Arg Thr Glu Ala Val Asn
        995                 1000                1005
Gln Ile Val Thr Gly Tyr Ala Gln Gln Met Val Tyr Lys Lys Ala Asp
    1010                1015                1020
His Ser Tyr Ala Ala Phe Thr Asn Arg Ala Ser Ser Ser Trp Leu Thr
1025                1030                1035                1040
Ala Tyr Val Val Lys Val Phe Ala Met Ala Ala Lys Met Val Ala Gly
                1045                1050                1055
Ile Ser His Glu Ile Ile Cys Gly Gly Val Arg Trp Leu Ile Leu Asn
            1060                1065                1070
Arg Gln Gln Pro Asp Gly Ala Phe Lys Glu Asn Ala Pro Val Leu Ser
        1075                1080                1085
Gly Thr Met Gln Gly Gly Ile Gln Gly Ala Glu Glu Glu Val Tyr Leu
    1090                1095                1100
Thr Ala Phe Ile Leu Val Ala Leu Leu Glu Ser Lys Thr Ile Cys Asn
1105                1110                1115                1120
Asp Tyr Val Asn Ser Leu Asp Ser Ser Ile Lys Lys Ala Thr Asn Tyr
                1125                1130                1135
Leu Leu Lys Lys Tyr Glu Lys Leu Gln Arg Pro Tyr Thr Thr Ala Leu
            1140                1145                1150
Thr Ala Tyr Ala Leu Ala Ala Ala Asp Gln Leu Asn Asp Asp Arg Val
        1155                1160                1165
Leu Met Ala Ala Ser Thr Gly Arg Asp His Trp Glu Glu Tyr Asn Ala
    1170                1175                1180
His Thr His Asn Ile Glu Gly Thr Ser Tyr Ala Leu Leu Ala Leu Leu
1185                1190                1195                1200
Lys Met Lys Lys Phe Asp Gln Thr Gly Pro Ile Val Arg Trp Leu Thr
                1205                1210                1215
Asp Gln Asn Phe Tyr Gly Glu Thr Tyr Gly Gln Thr Gln Ala Thr Val
            1220                1225                1230
Met Ala Phe Gln Ala Leu Ala Glu Tyr Glu Ile Gln Met Pro Thr His
        1235                1240                1245
Lys Asp Leu Asn Leu Asp Ile Thr Ile Glu Leu Pro Asp Arg Glu Val
    1250                1255                1260
Pro Ile Arg Tyr Arg Ile Asn Tyr Glu Asn Ala Leu Leu Ala Arg Thr
1265                1270                1275                1280
Val Glu Thr Lys Leu Asn Gln Asp Ile Thr Val Thr Ala Ser Gly Asp
                1285                1290                1295
Gly Lys Ala Thr Met Thr Ile Leu Thr Phe Tyr Asn Ala Gln Leu Gln
            1300                1305                1310
Glu Lys Ala Asn Val Cys Asn Lys Phe His Leu Asn Val Ser Val Glu
        1315                1320                1325
Asn Ile His Leu Asn Ala Met Gly Ala Lys Gly Ala Leu Met Leu Lys
    1330                1335                1340
Ile Cys Thr Arg Tyr Leu Gly Glu Val Asp Ser Thr Met Thr Ile Ile
1345                1350                1355                1360
Asp Ile Ser Met Leu Thr Gly Phe Leu Pro Asp Ala Glu Asp Leu Thr
                1365                1370                1375
Arg Leu Ser Lys Gly Val Asp Arg Tyr Ile Ser Arg Tyr Glu Val Asp
            1380                1385                1390
Asn Asn Met Ala Gln Lys Val Ala Val Ile Ile Tyr Leu Asn Lys Val
        1395                1400                1405
Ser His Ser Glu Asp Glu Cys Leu His Phe Lys Ile Leu Lys His Phe
    1410                1415                1420
Glu Val Gly Phe Ile Gln Pro Gly Ser Val Lys Val Tyr Ser Tyr Tyr
1425                1430                1435                1440
Asn Leu Asp Glu Lys Cys Thr Lys Phe Tyr His Pro Asp Lys Gly Thr
                1445                1450                1455
Gly Leu Leu Asn Lys Ile Cys Ile Gly Asn Val Cys Arg Cys Ala Gly
            1460                1465                1470
Glu Thr Cys Ser Ser Leu Asn His Gln Glu Arg Ile Asp Val Pro Leu
        1475                1480                1485
Gln Ile Glu Lys Ala Cys Glu Thr Asn Val Asp Tyr Val Tyr Lys Thr
    1490                1495                1500
Lys Leu Leu Arg Ile Glu Glu Gln Asp Gly Asn Asp Ile Tyr Val Met
1505                1510                1515                1520
Asp Val Leu Glu Val Ile Lys Gln Gly Thr Asp Glu Asn Pro Arg Ala
                1525                1530                1535
Lys Thr His Gln Tyr Ile Ser Gln Arg Lys Cys Gln Glu Ala Leu Asn
            1540                1545                1550
Leu Lys Val Asn Asp Asp Tyr Leu Ile Trp Gly Ser Arg Ser Asp Leu
        1555                1560                1565
Leu Pro Thr Lys Asp Lys Ile Ser Tyr Ile Ile Thr Lys Asn Thr Trp
    1570                1575                1580
Ile Glu Arg Trp Pro His Glu Asp Glu Cys Gln Glu Glu Glu Phe Gln
1585                1590                1595                1600
Lys Leu Cys Asp Asp Phe Ala Gln Phe Ser Tyr Thr Leu Thr Glu Phe
                1605                1610                1615
Gly Cys Pro Thr
            1620
<210>25
<211>3039
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>25
atttcttgtg gctctcctcc gcctatccta aatggccgga ttagttatta ttctaccccc  60
attgctgttg gtaccgtgat aaggtacagt tgttcaggta ccttccgcct cattggagaa  120
aaaagtctat tatgcataac taaagacaaa gtggatggaa cctgggataa acctgctcct  180
aaatgtgaat atttcaataa atattcttct tgccctgagc ccatagtacc aggaggatac  240
aaaattagag gctctacacc ctacagacat ggtgattctg tgacatttgc ctgtaaaacc  300
aacttctcca tgaacggaaa caagtctgtt tggtgtcaag caaataatat gtgggggccg  360
acacgactac caacctgtgt aagtgttttc cctctcgagt gtccagcact tcctatgatc  420
cacaatggac atcacacaag tgagaatgtt ggctccattg ctccaggatt gtctgtgact  480
tacagctgtg aatctggtta cttgcttgtt ggagaaaaga tcattaactg tttgtcttcg  540
ggaaaatgga gtgctgtccc ccccacatgt gaagaggcac gctgtaaatc tctaggacga  600
tttcccaatg ggaaggtaaa ggagcctcca attctccggg ttggtgtaac tgcaaacttt  660
ttctgtgatg aagggtatcg actgcaaggc ccaccttcta gtcggtgtgt aattgctgga  720
cagggagttg cttggaccaa aatgccagta tgtgaagaaa ttttttgccc atcacctccc  780
cctattctca atggaagaca tataggcaac tcactagcaa atgtctcata tggaagcata  840
gtcacttaca cttgtgaccc ggacccagag gaaggagtga acttcatcct tattggagag  900
agcactctcc gttgtacagt tgatagtcag aagactggga cctggagtgg ccctgcccca  960
cgctgtgaac tttctacttc tgcggttcag tgtccacatc cccagatcct aagaggccga  1020
atggtatctg ggcagaaaga tcgatatacc tataacgaca ctgtgatatt tgcttgcatg  1080
tttggcttca ccttgaaggg cagcaagcaa atccgatgca atgcccaagg cacatgggag  1140
ccatctgcac cagtctgtga aaaggaatgc caggcccctc ctaacatcct caatgggcaa  1200
aaggaagata gacacatggt ccgctttgac cctggaacat ctataaaata tagctgtaac  1260
cctggctatg tgctggtggg agaagaatcc atacagtgta cctctgaggg ggtgtggaca  1320
ccccctgtac cccaatgcaa agtggcagcg tgtgaagcta caggaaggca actcttgaca  1380
aaaccccagc accaatttgt tagaccagat gtcaactctt cttgtggtga agggtacaag  1440
ttaagtggga gtgtttatca ggagtgtcaa ggcacaattc cttggtttat ggagattcgt  1500
ctttgtaaag aaatcacctg cccaccaccc cctgttatct acaatggggc acacaccggg  1560
agttccttag aagattttcc atatggaacc acggtcactt acacatgtaa ccctgggcca  1620
gaaagaggag tggaattcag cctcattgga gagagcacca tccgttgtac aagcaatgat  1680
caagaaagag gcacctggag tggccctgct cccctatgta aactttccct ccttgctgtc  1740
cagtgctcac atgtccatat tgcaaatgga tacaagatat ctggcaagga agccccatat  1800
ttctacaatg acactgtgac attcaagtgt tatagtggat ttactttgaa gggcagtagt  1860
cagattcgtt gcaaagctga taacacctgg gatcctgaaa taccagtttg tgaaaaagaa  1920
acatgccagc atgtgagaca gagtcttcaa gaacttccag ctggttcacg tgtggagcta  1980
gttaatacgt cctgccaaga tgggtaccag ttgactggac atgcttatca gatgtgtcaa  2040
gatgctgaaa atggaatttg gttcaaaaag attccacttt gtaaagttat tcactgtcac  2100
cctccaccag tgattgtcaa tgggaagcac acagggatga tggcagaaaa ctttctatat  2160
ggaaatgaag tctcttatga atgtgaccaa ggattctatc tcctgggaga gaaaaaattg  2220
cagtgcagaa gtgattctaa aggacatgga tcttggagcg ggccttcccc acagtgctta  2280
cgatctcctc ctgtgactcg ctgccctaat ccagaagtca aacatgggta caagctcaat  2340
aaaacacatt ctgcatattc ccacaatgac atagtgtatg ttgactgcaa tcctggcttc  2400
atcatgaatg gtagtcgcgt gattaggtgt catactgata acacatgggt gccaggtgtg  2460
ccaacttgta tgaaaaaagc cttcataggg tgtccacctc cgcctaagac ccctaacggg  2520
aaccatactg gtggaaacat agctcgattt tctcctggaa tgtcaatcct gtacagctgt  2580
gaccaaggct acctgctggt gggagaggca ctccttcttt gcacacatga gggaacctgg  2640
agccaacctg cccctcattg taaagaggta aactgtagct caccagcaga tatggatgga  2700
atccagaaag ggctggaacc aaggaaaatg tatcagtatg gagctgttgt aactctggag  2760
tgtgaagatg ggtatatgct ggaaggcagt ccccagagcc agtgccaatc ggatcaccaa  2820
tggaaccctc ccctggcggt ttgcagatcc cgttcacttg ctcctgtcct ttgtggtatt  2880
gctgcaggtt tgatacttct taccttcttg attgtcatta ccttatacgt gatatcaaaa  2940
cacagagaac gcaattatta tacagataca agccagaaag aagcttttca tttagaagca  3000
cgagaagtat attctgttga tccatacaac ccagccagc                         3039
<210>26
<211>1033
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>26
Met Gly Ala Ala Gly Leu Leu Gly Val Phe Leu Ala Leu Val Ala Pro
 1               5                  10                  15
Gly Val Leu Gly Ile Ser Cys Gly Ser Pro Pro Pro Ile Leu Asn Gly
            20                  25                  30
Arg Ile Ser Tyr Tyr Ser Thr Pro Ile Ala Val Gly Thr Val Ile Arg
        35                  40                  45
Tyr Ser Cys Ser Gly Thr Phe Arg Leu Ile Gly Glu Lys Ser Leu Leu
    50                  55                  60
Cys Ile Thr Lys Asp Lys Val Asp Gly Thr Trp Asp Lys Pro Ala Pro
65                  70                  75                  80
Lys Cys Glu Tyr Phe Asn Lys Tyr Ser Ser Cys Pro Glu Pro Ile Val
                85                  90                  95
Pro Gly Gly Tyr Lys Ile Arg Gly Ser Thr Pro Tyr Arg His Gly Asp
            100                 105                 110
Ser Val Thr Phe Ala Cys Lys Thr Asn Phe Ser Met Asn Gly Asn Lys
        115                 120                 125
Ser Val Trp Cys Gln Ala Asn Asn Met Trp Gly Pro Thr Arg Leu Pro
    130                 135                 140
Thr Cys Val Ser Val Phe Pro Leu Glu Cys Pro Ala Leu Pro Met Ile
145                 150                 155                 160
His Asn Gly His His Thr Ser Glu Asn Val Gly Ser Ile Ala Pro Gly
                165                 170                 175
Leu Ser Val Thr Tyr Ser Cys Glu Ser Gly Tyr Leu Leu Val Gly Glu
            180                 185                 190
Lys Ile Ile Asn Cys Leu Ser Ser Gly Lys Trp Ser Ala Val Pro Pro
        195                 200                 205
Thr Cys Glu Glu Ala Arg Cys Lys Ser Leu Gly Arg Phe Pro Asn Gly
    210                 215                 220
Lys Val Lys Glu Pro Pro Ile Leu Arg Val Gly Val Thr Ala Asn Phe
225                 230                 235                 240
Phe Cys Asp Glu Gly Tyr Arg Leu Gln Gly Pro Pro Ser Ser Arg Cys
                245                 250                 255
Val Ile Ala Gly Gln Gly Val Ala Trp Thr Lys Met Pro Val Cys Glu
            260                 265                 270
Glu Ile Phe Cys Pro Ser Pro Pro Pro Ile Leu Asn Gly Arg His Ile
        275                 280                 285
Gly Asn Ser Leu Ala Asn Val Ser Tyr Gly Ser Ile Val Thr Tyr Thr
    290                 295                 300
Cys Asp Pro Asp Pro Glu Glu Gly Val Asn Phe Ile Leu Ile Gly Glu
305                 310                 315                 320
Ser Thr Leu Arg Cys Thr Val Asp Ser Gln Lys Thr Gly Thr Trp Ser
                325                 330                 335
Gly Pro Ala Pro Arg Cys Glu Leu Ser Thr Ser Ala Val Gln Cys Pro
            340                 345                 350
His Pro Gln Ile Leu Arg Gly Arg Met Val Ser Gly Gln Lys Asp Arg
        355                 360                 365
Tyr Thr Tyr Asn Asp Thr Val Ile Phe Ala Cys Met Phe Gly Phe Thr
    370                 375                 380
Leu Lys Gly Ser Lys Gln Ile Arg Cys Asn Ala Gln Gly Thr Trp Glu
385                 390                 395                 400
Pro Ser Ala Pro Val Cys Glu Lys Glu Cys Gln Ala Pro Pro Asn Ile
                405                 410                 415
Leu Asn Gly Gln Lys Glu Asp Arg His Met Val Arg Phe Asp Pro Gly
            420                 425                 430
Thr Ser Ile Lys Tyr Ser Cys Asn Pro Gly Tyr Val Leu Val Gly Glu
        435                 440                 445
Glu Ser Ile Gln Cys Thr Ser Glu Gly Val Trp Thr Pro Pro Val Pro
    450                 455                 460
Gln Cys Lys Val Ala Ala Cys Glu Ala Thr Gly Arg Gln Leu Leu Thr
465                 470                 475                 480
Lys Pro Gln His Gln Phe Val Arg Pro Asp Val Asn Ser Ser Cys Gly
                485                 490                 495
Glu Gly Tyr Lys Leu Ser Gly Ser Val Tyr Gln Glu Cys Gln Gly Thr
            500                 505                 510
Ile Pro Trp Phe Met Glu Ile Arg Leu Cys Lys Glu Ile Thr Cys pro
        515                 520                 525
Pro Pro Pro Val Ile Tyr Asn Gly Ala His Thr Gly Ser Ser Leu Glu
    530                 535                 540
Asp Phe Pro Tyr Gly Thr Thr Val Thr Tyr Thr Cys Asn Pro Gly Pro
545                 550                 555                 560
Glu Arg Gly Val Glu Phe Ser Leu Ile Gly Glu Ser Thr Ile Arg Cys
                565                 570                 575
Thr Ser Asn Asp Gln Glu Arg Gly Thr Trp Ser Gly Pro Ala Pro Leu
            580                 585                 590
Cys Lys Leu Ser Leu Leu Ala Val Gln Cys Ser His Val His Ile Ala
        595                 600                 605
Asn Gly Tyr Lys Ile Ser Gly Lys Glu Ala Pro Tyr Phe Tyr Asn Asp
    610                 615                 620
Thr Val Thr Phe Lys Cys Tyr Ser Gly Phe Thr Leu Lys Gly Ser Ser
625                 630                 635                 640
Gln Ile Arg Cys Lys Ala Asp Asn Thr Trp Asp Pro Glu Ile Pro Val
                645                 650                 655
Cys Glu Lys Glu Thr Cys Gln His Val Arg Gln Ser Leu Gln Glu Leu
            660                 665                 670
Pro Ala Gly Ser Arg Val Glu Leu Val Asn Thr Ser Cys Gln Asp Gly
        675                 680                 685
Tyr Gln Leu Thr Gly His Ala Tyr Gln Met Cys Gln Asp Ala Glu Asn
    690                 695                 700
Gly Ile Trp Phe Lys Lys Ile Pro Leu Cys Lys Val Ile His Cys His
705                 710                 715                 720
Pro Pro Pro Val Ile Val Asn Gly Lys His Thr Gly Met Met Ala Glu
                725                 730                 735
Asn Phe Leu Tyr Gly Asn Glu Val Ser Tyr Glu Cys Asp Gln Gly Phe
            740                 745                 750
Tyr Leu Leu Gly Glu Lys Lys Leu Gln Cys Arg Ser Asp Ser Lys Gly
        755                 760                 765
His Gly Ser Trp Ser Gly Pro Ser Pro Gln Cys Leu Arg Ser Pro Pro
    770                 775                 780
Val Thr Arg Cys Pro Asn Pro Glu Val Lys His Gly Tyr Lys Leu Asn
785                 790                 795                 800
Lys Thr His Ser Ala Tyr Ser His Asn Asp Ile Val Tyr Val Asp Cys
                805                 810                 815
Asn Pro Gly Phe Ile Met Asn Gly Ser Arg Val Ile Arg Cys His Thr
            820                 825                 830
Asp Asn Thr Trp Val Pro Gly Val Pro Thr Cys Met Lys Lys Ala Phe
        835                 840                 845
Ile Gly Cys Pro Pro Pro Pro Lys Thr Pro Asn Gly Asn His Thr Gly
    850                 855                 860
Gly Asn Ile Ala Arg Phe Ser Pro Gly Met Ser Ile Leu Tyr Ser Cys
865                 870                 875                 880
Asp Gln Gly Tyr Leu Leu Val Gly Glu Ala Leu Leu Leu Cys Thr His
                885                 890                 895
Glu Gly Thr Trp Ser Gln Pro Ala Pro His Cys Lys Glu Val Asn Cys
            900                 905                 910
Ser Ser Pro Ala Asp Met Asp Gly Ile Gln Lys Gly Leu Glu Pro Arg
        915                 920                 925
Lys Met Tyr Gln Tyr Gly Ala Val Val Thr Leu Glu Cys Glu Asp Gly
    930                 935                 940
Tyr Met Leu Glu Gly Ser Pro Gln Ser Gln Cys Gln Ser Asp His Gln
945                 950                 955                 960
Trp Asn Pro Pro Leu Ala Val Cys Arg Ser Arg Ser Leu Ala Pro Val
                965                 970                 975
Leu Cys Gly Ile Ala Ala Gly Leu Ile Leu Leu Thr Phe Leu Ile Val
            980                 985                 990
Ile Thr Leu Tyr Val Ile Ser Lys His Arg Glu Arg Asn Tyr Tyr Thr
        995                 1000                1005
Asp Thr Ser Gln Lys Glu Ala Phe His Leu Glu Ala Arg Glu Val Tyr
    1010                1015                1020
Ser Val Asp Pro Tyr Asn Pro Ala Ser
1025                1030
<210>27
<211>3042
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>27
atttcttgtg accctcctcc tgaagtcaaa aatgctcgga aaccctatta ttctcttccc  60
atagttcctg gaactgttct gaggtacact tgttcaccta gctaccgcct cattggagaa  120
aaggctatct tttgtataag tgaaaatcaa gtgcatgcca cctgggataa agctcctcct  180
atatgtgaat ctgtgaataa aaccatttct tgctcagatc ccatagtacc agggggattc  240
atgaataaag gatctaaggc accattcaga catggtgatt ctgtgacatt tacctgtaaa  300
gccaacttca ccatgaaagg aagcaaaact gtctggtgcc aggcaaatga aatgtgggga  360
ccaacagctc tgccagtctg tgagagtgat ttccctctgg agtgcccatc acttccaacg  420
attcataatg gacaccacac aggacagcat gttgaccagt ttgttgctgg gttgtctgtg  480
acatacagtt gtgaacctgg ctatttgctc actggaaaaa agacaattaa gtgcttatct  540
tcaggagact gggatggtgt catcccgaca tgcaaagagg cccagtgtga acatccagga  600
aagtttccca atgggcaggt aaaggaacct ctgagccttc aggttggcac aactgtgtac  660
ttctcctgta atgaagggta ccaattacaa ggacaaccct ctagtcagtg tgtaattgtt  720
gaacagaaag ccatctggac taagaagcca gtatgtaaag aaattctctg cccaccacct  780
ccacctgttc gtaatggaag tcatacaggc agcttttcag aaaatgtacc atatggaagc  840
acagttacct acacctgtga cccaagccca gagaaaggcg tgagcttcac tcttattgga  900
gagaagacta tcaattgtac tactggtagt cagaagactg ggatctggag tggccctgct  960
ccatattgtg tactttcaac ttctgcagtt ctgtgtttac aaccgaagat caaaagaggg  1020
caaatattat ctattttgaa agatagttat tcatataatg acactgtggc attttcttgt  1080
gaacctggct tcaccttgaa gggcaacagg agcattcgat gcaatgctca tggcacatgg  1140
gagccaccgg taccagtgtg tgaaaaagga tgtcaggctc ctcctaaaat tatcaatggg  1200
caaaaagaag atagttactt gctcaacttt gaccctggta catccataag atatagctgt  1260
gaccctggct atttactggt gggagaggac actatacatt gcacccctga ggggaagtgg  1320
acacccatta ctccccagtg cacagttgca gagtgtaagc cagtaggacc acatctcttt  1380
aagaggcctc agaatcagtt tattaggaca gctgttaatt cttcttgtga tgaagggttc  1440
cagttaagtg agagtgctta tcaactgtgt caaggtacaa ttccttggtt tatagaaatc  1500
cgtctttgta aagaaatcac ctgcccacca cctcctgtta tacacaacgg gacacataca  1560
tggagttcct cagaagatgt cccatatgga actgtggtca catacatgtg ctatcctggg  1620
ccagaggaag gcgtaaaatt caaactcatc ggggagcaaa ccatccactg tacaagtgac  1680
agcagaggaa gaggctcctg gagtagccct gctcctctct gtaaactttc cctcccagct  1740
gtccagtgca cagacgttca tgttgaaaat ggagtcaagc tcactgacaa taaagcccca  1800
tatttctaca atgatagtgt gatgttcaag tgtgatgatg gatatatttt gagtggaagc  1860
agtcagatcc ggtgtaaagc caataatacc tgggatcctg aaaaaccact ttgtaaaaaa  1920
gaaggatgtg agcctatgag agtacatggc cttccagatg attcacatat aaaactagtg  1980
aaaagaacct gtcaaaatgg gtaccagttg actggatata cttatgagaa gtgtcaaaat  2040
gctgagaatg ggacttggtt taaaaagatt gaagtttgta cagttattct ctgtcaacct  2100
ccaccaaaaa ttgcaaatgg tggtcacaca ggcatgatgg caaagcactt cctatatgga  2160
aatgaagttt cttatgaatg tgatgaaggg ttctatcttt tgggagagaa aagtttgcag  2220
tgcgtaaatg attctaaagg tcatggctct tggagtggac ctccaccaca atgcttacaa  2280
tcttctcctc taactcattg ccccgatcca gaagtcaaac atggttacaa actcaataaa  2340
actcattctg cattttctca taatgacata gtacattttg tctgcaatca aggcttcatc  2400
atgaacggca gccacttgat aaggtgtcat actaataaca catggttacc aggtgtacca  2460
acttgtatca gaaaggcttc tttagggtgt cagtctccat ccacaatccc caatgggaat  2520
catactggtg ggagtatagc tcgatttccc cctggaatgt cagtcatgta cagttgctac  2580
caaggcttcc ttatggctgg agaggcacgt cttatctgta ctcatgaggg tacctggagt  2640
caacctcccc ctttttgcaa agaggtaaac tgtagcttcc ctgaagatac aaatggaatc  2700
cagaagggat ttcaacctgg gaaaacctat cgatttgggg ctactgtgac tctggaatgt  2760
gaggatgggt ataccttgga gggaagtccc cagagccagt gccaggatga cagccaatgg  2820
aaccctccct tggctctttg caaataccgt aggtggtcaa ctattcctct tatttgtggt  2880
atttctgtgg gctcagcact tatcattttg atgagtgtcg gcttctgtat gatattaaaa  2940
cacagagaaa gcaattatta tacaaagaca agacccaaag aaggagctct tcatttagaa  3000
acacgagaag tatattctat tgatccatat aacccagcaa gc                     3042
<210>28
<211>1014
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>28
Ile Ser Cys Asp Pro Pro Pro Glu Val Lys Asn Ala Arg Lys Pro Tyr
 1               5                  10                  15
Tyr Ser Leu Pro Ile Val Pro Gly Thr Val Leu Arg Tyr Thr Cys Ser
            20                  25                  30
Pro Ser Tyr Arg Leu Ile Gly Glu Lys Ala Ile Phe Cys Ile Ser Glu
        35                  40                  45
Asn Gln Val His Ala Thr Trp Asp Lys Ala Pro Pro Ile Cys Glu Ser
    50                  55                  60
Val Asn Lys Thr Ile Ser Cys Ser Asp Pro Ile Val Pro Gly Gly Phe
65                  70                  75                  80
Met Asn Lys Gly Ser Lys Ala Pro Phe Arg His Gly Asp Ser Val Thr
                85                  90                  95
Phe Thr Cys Lys Ala Asn Phe Thr Met Lys Gly Ser Lys Thr Val Trp
            100                 105                 110
Cys Gln Ala Asn Glu Met Trp Gly Pro Thr Ala Leu Pro Val Cys Glu
        115                 120                 125
Ser Asp Phe Pro Leu Glu Cys Pro Ser Leu Pro Thr Ile His Asn Gly
    130                 135                 140
His His Thr Gly Gln His Val Asp Gln Phe Val Ala Gly Leu Ser Val
145                 150                 155                 160
Thr Tyr Ser Cys Glu Pro Gly Tyr Leu Leu Thr Gly Lys Lys Thr Ile
                165                 170                 175
Lys Cys Leu Ser Ser Gly Asp Trp Asp Gly Val Ile Pro Thr Cys Lys
            180                 185                 190
Glu Ala Gln Cys Glu His Pro Gly Lys Phe Pro Asn Gly Gln Val Lys
        195                 200                 205
Glu Pro Leu Ser Leu Gln Val Gly Thr Thr Val Tyr Phe Ser Cys Asn
    210                 215                 220
Glu Gly Tyr Gln Leu Gln Gly Gln Pro Ser Ser Gln Cys Val Ile Val
225                 230                 235                 240
Glu Gln Lys Ala Ile Trp Thr Lys Lys Pro Val Cys Lys Glu Ile Leu
                245                 250                 255
Cys Pro Pro Pro Pro Pro Val Arg Asn Gly Ser His Thr Gly Ser Phe
            260                 265                 270
Ser Glu Asn Val Pro Tyr Gly Ser Thr Val Thr Tyr Thr Cys Asp Pro
        275                 280                 285
Ser Pro Glu Lys Gly Val Ser Phe Thr Leu Ile Gly Glu Lys Thr Ile
    290                 295                 300
Asn Cys Thr Thr Gly Ser Gln Lys Thr Gly Ile Trp Ser Gly Pro Ala
305                 310                 315                 320
Pro Tyr Cys Val Leu Ser Thr Ser Ala Val Leu Cys Leu Gln Pro Lys
                325                 330                 335
Ile Lys Arg Gly Gln Ile Leu Ser Ile Leu Lys Asp Ser Tyr Ser Tyr
            340                 345                 350
Asn Asp Thr Val Ala Phe Ser Cys Glu Pro Gly Phe Thr Leu Lys Gly
        355                 360                 365
Asn Arg Ser Ile Arg Cys Asn Ala His Gly Thr Trp Glu Pro Pro Val
    370                 375                 380
Pro Val Cys Glu Lys Gly Cys Gln Ala Pro Pro Lys Ile Ile Asn Gly
385                 390                 395                 400
Gln Lys Glu Asp Ser Tyr Leu Leu Asn Phe Asp Pro Gly Thr Ser Ile
                405                 410                 415
Arg Tyr Ser Cys Asp Pro Gly Tyr Leu Leu Val Gly Glu Asp Thr Ile
            420                 425                 430
His Cys Thr Pro Glu Gly Lys Trp Thr Pro Ile Thr Pro Gln Cys Thr
        435                 440                 445
Val Ala Glu Cys Lys Pro Val Gly Pro His Leu Phe Lys Arg Pro Gln
    450                 455                 460
Asn Gln Phe Ile Arg Thr Ala Val Asn Ser Ser Cys Asp Glu Gly Phe
465                 470                 475                 480
Gln Leu Ser Glu Ser Ala Tyr Gln Leu Cys Gln Gly Thr Ile Pro Trp
                485                 490                 495
Phe Ile Glu Ile Arg Leu Cys Lys Glu Ile Thr Cys Pro Pro Pro Pro
            500                 505                 510
Val Ile His Asn Gly Thr His Thr Trp Ser Ser Ser Glu Asp Val Pro
        515                 520                 525
Tyr Gly Thr Val Val Thr Tyr Met Cys Tyr Pro Gly Pro Glu Glu Gly
    530                 535                 540
Val Lys Phe Lys Leu Ile Gly Glu Gln Thr Ile His Cys Thr Ser Asp
545                 550                 555                 560
Ser Arg Gly Arg Gly Ser Trp Ser Ser Pro Ala Pro Leu Cys Lys Leu
                565                 570                 575
Ser Leu Pro Ala Val Gln Cys Thr Asp Val His Val Glu Asn Gly Val
            580                 585                 590
Lys Leu Thr Asp Asn Lys Ala Pro Tyr Phe Tyr Asn Asp Ser Val Met
        595                 600                 605
Phe Lys Cys Asp Asp Gly Tyr Ile Leu Ser Gly Ser Ser Gln Ile Arg
    610                 615                 620
Cys Lys Ala Asn Asn Thr Trp Asp Pro Glu Lys Pro Leu Cys Lys Lys
625                 630                 635                 640
Glu Gly Cys Glu Pro Met Arg Val His Gly Leu Pro Asp Asp Ser His
                645                 650                 655
Ile Lys Leu Val Lys Arg Thr Cys Gln Asn Gly Tyr Gln Leu Thr Gly
            660                 665                 670
Tyr Thr Tyr Glu Lys Cys Gln Asn Ala Glu Asn Gly Thr Trp Phe Lys
        675                 680                 685
Lys Ile Glu Val Cys Thr Val Ile Leu Cys Gln Pro Pro Pro Lys Ile
    690                 695                 700
Ala Asn Gly Gly His Thr Gly Met Met Ala Lys His Phe Leu Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Asn Glu Val Ser Tyr Glu Cys Asp Glu Gly Phe Tyr Leu Leu Gly Glu
                725                 730                 735
Lys Ser Leu Gln Cys Val Asn Asp Ser Lys Gly His Gly Ser Trp Ser
            740                 745                 750
Gly Pro Pro Pro Gln Cys Leu Gln Ser Ser Pro Leu Thr His Cys Pro
        755                 760                 765
Asp Pro Glu Val Lys His Gly Tyr Lys Leu Asn Lys Thr His Ser Ala
    770                 775                 780
Phe Ser His Asn Asp Ile Val His Phe Val Cys Asn Gln Gly Phe Ile
785                 790                 795                 800
Met Asn Gly Ser His Leu Ile Arg Cys His Thr Asn Asn Thr Trp Leu
                805                 810                 815
Pro Gly Val Pro Thr Cys Ile Arg Lys Ala Ser Leu Gly Cys Gln Ser
            820                 825                 830
Pro Ser Thr Ile Pro Asn Gly Asn His Thr Gly Gly Ser Ile Ala Arg
        835                 840                 845
Phe Pro Pro Gly Met Ser Val Met Tyr Ser Cys Tyr Gln Gly Phe Leu
    850                 855                 860
Met Ala Gly Glu Ala Arg Leu Ile Cys Thr His Glu Gly Thr Trp Ser
865                 870                 875                 880
Gln Pro Pro Pro Phe Cys Lys Glu Val Asn Cys Ser Phe Pro Glu Asp
                885                 890                 895
Thr Asn Gly Ile Gln Lys Gly Phe Gln Pro Gly Lys Thr Tyr Arg Phe
            900                 905                 910
Gly Ala Thr Val Thr Leu Glu Cys Glu Asp Gly Tyr Thr Leu Glu Gly
        915                 920                 925
Ser Pro Gln Ser Gln Cys Gln Asp Asp Ser Gln Trp Asn Pro Pro Leu
    930                 935                 940
Ala Leu Cys Lys Tyr Arg Arg Trp Ser Thr Ile Pro Leu Ile Cys Gly
945                 950                 955                 960
Ile Ser Val Gly Ser Ala Leu Ile Ile Leu Met Ser Val Gly Phe Cys
                965                 970                 975
Met Ile Leu Lys His Arg Glu Ser Asn Tyr Tyr Thr Lys Thr Arg Pro
            980                 985                 990
Lys Glu Gly Ala Leu His Leu Glu Thr Arg Glu Val Tyr Ser Ile Asp
        995                 1000                1005
Pro Tyr Asn Pro Ala Ser
    1010
<210>29
<211>1033
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：/注释＝
合成构建体
<400>29
Met Gly Ala Ala Gly Leu Leu Gly Val Phe Leu Ala Leu Val Ala Pro
 1               5                  10                  15
Gly Val Leu Gly Ile Ser Cys Gly Ser Pro Pro Pro Val Leu Asn Gly
            20                  25                  30
Arg Ile Ser Tyr Tyr Ser Thr Pro Ile Ala Val Gly Thr Val Ile Arg
Tyr Ser Cys Ser Gly Thr Phe Arg Leu Ile Gly Glu Lys Ser Leu Leu
    50                  55                  60
Cys Ile Thr Lys Asp Lys Val Asp Gly Thr Trp Asp Lys Pro Ala Pro
65                  70                  75                  80
Lys Cys Glu Tyr Phe Asn Lys Tyr Ser Ser Cys Pro Glu Pro Ile Val
                85                  90                  95
Pro Gly Gly Tyr Lys Ile Arg Gly Ser Thr Pro Tyr Arg His Gly Asp
            100                 105                 110
Ser Val Thr Phe Ala Cys Lys Thr Asn Phe Ser Met Asn Gly Asn Lys
        115                 120                 125
Ser Val Trp Cys Gln Ala Asn Asn Met Trp Gly Pro Thr Arg Leu Pro
    130                 135                 140
Thr Cys Val Ser Val Phe Pro Leu Glu Cys Pro Ala Leu Pro Met Ile
145                 150                 155                 160
His Asn Gly His His Thr Ser Glu Asn Val Gly Ser Ile Ala Pro Gly
                165                 170                 175
Leu Ser Val Thr Tyr Ser Cys Glu Ser Gly Tyr Leu Leu Val Gly Glu
            180                 185                 190
Lys Ile Ile Asn Cys Leu Ser Ser Gly Lys Trp Ser Ala Val Pro Pro
        195                 200                 205
Thr Cys Glu Glu Ala Arg Cys Lys Ser Leu Gly Arg Phe Pro Asn Gly
    210                 215                 220
Lys Val Lys Glu Pro Pro Ile Leu Arg Val Gly Val Thr Ala Asn Phe
225                 230                 235                 240
Phe Cys Asp Glu Gly Tyr Arg Leu Gln Gly Pro Pro Ser Ser Arg Cys
                245                 250                 255
Val Ile Ala Gly Gln Gly Val Ala Trp Thr Lys Met Pro Val Cys Glu
            260                 265                 270
Glu Ile Phe Cys Pro Ser Pro Pro Pro Ile Leu Asn Gly Arg His Ile
        275                 280                 285
Gly Asn Ser Leu Ala Asn Val Ser Tyr Gly Ser Ile Val Thr Tyr Thr
    290                 295                 300
Cys Asp Pro Asp Pro Glu Glu Gly Val Asn Phe Ile Leu Ile Gly Glu
305                 310                 315                 320
Ser Thr Leu Arg Cys Thr Val Asp Ser Gln Lys Thr Gly Thr Trp Ser
                325                 330                 335
Gly Pro Ala Pro Arg Cys Glu Leu Ser Thr Ser Ala Val Gln Cys Pro
            340                 345                 350
His Pro Gln Ile Leu Arg Gly Arg Met Val Ser Gly Gln Lys Asp Arg
        355                 360                 365
Tyr Thr Tyr Asn Asp Thr Val Ile Phe Ala Cys Met Phe Gly Phe Thr
    370                 375                 380
Leu Lys Gly Ser Lys Gln Ile Arg Cys Asn Ala Gln Gly Thr Trp Glu
385                 390                 395                 400
Pro Ser Ala Pro Val Cys Glu Lys Glu Cys Gln Ala Pro Pro Asn Ile
                405                 410                 415
Leu Asn Gly Gln Lys Glu Asp Arg His Met Val Arg Phe Asp Pro Gly
            420                 425                 430
Thr Ser Ile Lys Tyr Ser Cys Asn Pro Gly Tyr Val Leu Val Gly Glu
        435                 440                 445
Glu Ser Ile Gln Cys Thr Ser Glu Gly Val Trp Thr Pro Pro Val Pro
    450                 455                 460
Gln Cys Lys Val Ala Ala Cys Glu Ala Thr Gly Arg Gln Leu Leu Thr
465                 470                 475                 480
Lys Pro Gln His Gln Phe Val Arg Pro Asp Val Asn Ser Ser Cys Gly
                485                 490                 495
Glu Gly Tyr Lys Leu Ser Gly Ser Val Tyr Gln Glu Cys Gln Gly Thr
            500                 505                 510
Ile Pro Trp Phe Met Glu Ile Arg Leu Cys Lys Glu Ile Thr Cys Pro
        515                 520                 525
Pro Pro Pro Val Ile Tyr Asn Gly Ala His Thr Gly Ser Ser Leu Glu
    530                 535                 540
Asp Phe Pro Tyr Gly Thr Thr Val Thr Tyr Thr Cys Asn Pro Gly Pro
545                 550                 555                 560
Glu Arg Gly Val Glu Phe Ser Leu Ile Gly Glu Ser Thr Ile Arg Cys
                565                 570                 575
Thr Ser Asn Asp Gln Glu Arg Gly Thr Trp Ser Gly Pro Ala Pro Leu
            580                 585                 590
Cys Lys Leu Ser Leu Leu Ala Val Gln Cys Ser His Val His Ile Ala
        595                 600                 605
Asn Gly Tyr Lys Ile Ser Gly Lys Glu Ala Pro Tyr Phe Tyr Asn Asp
    610                 615                 620
Thr Val Thr Phe Lys Cys Tyr Ser Gly Phe Thr Leu Lys Gly Ser Ser
625                 630                 635                 640
Gln Ile Arg Cys Lys Ala Asp Asn Thr Trp Asp Pro Glu Ile Pro Val
                645                 650                 655
Cys Glu Lys Glu Thr Cys Gln His Val Arg Gln Ser Leu Gln Glu Leu
            660                 665                 670
Pro Ala Gly Ser Arg Val Glu Leu Val Asn Thr Ser Cys Gln Asp Gly
        675                 680                 685
Tyr Gln Leu Thr Gly His Ala Tyr Gln Met Cys Gln Asp Ala Glu Asn
    690                 695                 700
Gly Ile Trp Phe Lys Lys Ile Pro Leu Cys Lys Val Ile His Cys His
705                 710                 715                 720
Pro Pro Pro Val Ile Val Asn Gly Lys His Thr Gly Met Met Ala Glu
                725                 730                 735
Asn Phe Leu Tyr Gly Asn Glu Val Ser Tyr Glu Cys Asp Gln Gly Phe
            740                 745                 750
Tyr Leu Leu Gly Glu Lys Lys Leu Gln Cys Arg Ser Asp Ser Lys Gly
        755                 760                 765
His Gly Ser Trp Ser Gly Pro Ser Pro Gln Cys Leu Arg Ser Pro Pro
    770                 775                 780
Val Thr Arg Cys Pro Asn Pro Glu Val Lys His Gly Tyr Lys Leu Asn
785                 790                 795                 800
Lys Thr His Ser Ala Tyr Ser His Asn Asp Ile Val Tyr Val Asp Cys
                805                 810                 815
Asn Pro Gly Phe Ile Met Asn Gly Ser Arg Val Ile Arg Cys His Thr
            820                 825                 830
Asp Asn Thr Trp Val Pro Gly Val Pro Thr Cys Met Lys Lys Ala Phe
        835                 840                 845
Ile Gly Cys Pro Pro Pro Pro Lys Thr Pro Asn Gly Asn His Thr Gly
    850                 855                 860
Gly Asn Ile Ala Arg Phe Ser Pro Gly Met Ser Ile Leu Tyr Ser Cys
865                 870                 875                 880
Asp Gln Gly Tyr Leu Leu Val Gly Glu Ala Leu Leu Leu Cys Thr His
                885                 890                 895
Glu Gly Thr Trp Ser Gln Pro Ala Pro His Cys Lys Glu Val Asn Cys
            900                 905                 910
Ser Ser Pro Ala Asp Met Asp Gly Ile Gln Lys Gly Leu Glu Pro Arg
        915                 920                 925
Lys Met Tyr Gln Tyr Gly Ala Val Val Thr Leu Glu Cys Glu Asp Gly
    930                 935                 940
Tyr Met Leu Glu Gly Ser Pro Gln Ser Gln Cys Gln Ser Asp His Gln
945                 950                 955                 960
Trp Asn Pro Pro Leu Ala Val Cys Arg Ser Arg Ser Leu Ala Pro Val
                965                 970                 975
Leu Cys Gly Ile Ala Ala Gly Leu Ile Leu Leu Thr Phe Leu Ile Val
            980                 985                 990
Ile Thr Leu Tyr Val Ile Ser Lys His Arg Glu Arg Asn Tyr Tyr Thr
        995                 1000                1005
Asp Thr Ser Gln Lys Glu Ala Phe His Leu Glu Ala Arg Glu Val Tyr
    1010                1015                1020
Ser Val Asp Pro Tyr Asn Pro Ala Ser
1025                1030

Claims (13)

1、一种包含构建体的组合物，其中该构建体包含：
(a)CR2或其片段，其中该片段包含CR2蛋白质的至少前两个N-末端SCR结构域；和
(b)补体活性调节剂，其中该补体活性调节剂包含补体抑制剂。
2、权利要求1的组合物，其中CR2或其片段包含CR2蛋白质的前四个N-末端SCR结构域。
3、权利要求1的组合物，其中CR2包含全长CR2蛋白质。
4、如权利要求1-3之任一项所述的组合物，其中该构建体是融合蛋白。
5、权利要求4的组合物，其中CR2或其片段与补体活性抑制剂的N端或C端融合。
6、如权利要求5所述的组合物，其中补体抑制剂包含衰变加速因子(DAF)的前四个SCR结构域、人CD59的细胞外区域、鼠CD59的细胞外区域、Crry的前5个SCR结构域、MCP的前4个SCR结构域、补体受体1(CR1)的胞外域、CR1的前4个SCR结构域、CR1的SCR结构域8-11、或CR1的SCR结构域15-18。
7、如权利要求5所述的组合物，其中补体抑制剂选自DAF、人CD59、鼠CD59、Crry、MCP和CR1。
8、如权利要求5-7之任一项所述的组合物，其中该组合物包含SEQID NO：10(DAF-CR2)、SEQ ID NO：6(CR2-DAF)、SEQ ID NO：12(人CD59-CR2)、SEQ ID NO：8(CR2-人CD59)、SEQ ID NO：17(Crry)、SEQID NO：14(CR1)、或SEQ ID NO：16(MCP)。
9、如权利要求1所述的组合物，其中该构建体是CR2或其片段与补体抑制剂的免疫缀合物。
10、权利要求1-9中任一项的组合物在制造用于治疗对象中病毒感染、真菌感染或炎性疾病的药物中的用途。
11、如权利要求10所述的用途，其中该炎性疾病是中风或局部缺血/再灌注损伤。
12、权利要求1-9中任一项的组合物在制造用于减少对象中补体介导的损伤的药物中的用途。
13、核苷酸序列，其编码权利要求2的融合蛋白。
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Families Citing this family (125)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6820011B2 (en) 2001-04-11 2004-11-16 The Regents Of The University Of Colorado Three-dimensional structure of complement receptor type 2 and uses thereof
JP4915980B2 (ja) 2002-11-15 2012-04-11 エムユーエスシー ファウンデーション フォー リサーチ デベロップメント 補体レセプター２標的化補体調節因子
ZA200603619B (en) 2003-11-06 2008-10-29 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
US8454963B2 (en) * 2003-11-13 2013-06-04 Musc Foundation For Research Development Tissue targeted complement modulators
US8124097B2 (en) * 2004-01-21 2012-02-28 Case Western Reserve University Hybrid and chimeric polypeptides that regulate activation of complement
JP5137053B2 (ja) 2004-02-10 2013-02-06 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ コロラド，ア ボディー コーポレイト 抗ｂ因子抗体もしくはその抗原結合性フラグメント、それを含む組成物、抗原結合性ポリペプチド、および治療薬
KR20120064120A (ko) 2004-06-01 2012-06-18 제넨테크, 인크. 항체 약물 접합체 및 방법
NZ580115A (en) 2004-09-23 2010-10-29 Genentech Inc Cysteine engineered antibody light chains and conjugates
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
ES2548700T3 (es) * 2005-05-26 2015-10-20 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Inhibición de la vía alternativa del complemento para el tratamiento de lesión cerebral traumática, lesión de médula espinal y afecciones relacionadas
US7897561B2 (en) * 2005-06-06 2011-03-01 Girish J. Kotwal Methods for treatment or prophylaxis of atherosclerosis and reperfusion injury
CN101563363B (zh) 2006-06-21 2013-01-02 南卡罗来纳医疗大学研究发展基金会 用于治疗疾病的靶向补体因子h
US7723292B2 (en) * 2006-09-06 2010-05-25 Fernando And Anna Foundation Compositions and methods for treating cancer
PL2698166T3 (pl) 2006-10-10 2016-03-31 Regenesance B V Hamowanie układu dopełniacza służące do lepszej regeneracji nerwów
EP2565207A3 (en) 2007-03-14 2013-06-12 Alexion Cambridge Corporation Humaneered Anti-Factor B Antibody
MX2009013004A (es) * 2007-06-01 2010-01-20 Univ Maryland Agentes de union al receptor de la region constante fc de inmunoglobulina.
AU2009215118B2 (en) * 2008-02-15 2015-01-22 Tufts University A humanized model of membrane attack complex (MAC) formation on murine retina and compositions, kits and methods for treatment of macular degeneration
WO2009151634A1 (en) * 2008-06-12 2009-12-17 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Complement inhibitory agents as therapeutics in posttraumatic and degenerative arthritis
WO2010091183A2 (en) * 2009-02-04 2010-08-12 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Non-invasive detection of complement-mediated inflammation using cr2-targeted nanoparticles
WO2011003098A1 (en) * 2009-07-02 2011-01-06 Musc Foundation For Research Development Methods of stimulating liver regeneration
AU2010268690B2 (en) 2009-07-03 2011-11-10 Avipep Pty Ltd Immuno-conjugates and methods for producing them
AU2010292172A1 (en) 2009-09-09 2012-05-03 Centrose, Llc Extracellular targeted drug conjugates
NZ600393A (en) 2009-11-05 2014-08-29 Alexion Cambridge Corp Treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, hemolytic anemias and disease states involving intravascular and extravascular hemolysis
US9315581B2 (en) 2009-12-23 2016-04-19 A Vipep Pty Limited Immuno-conjugates and methods for producing them
JP6148013B2 (ja) 2010-03-05 2017-06-14 リグショスピタレト 補体活性化のキメラ抑制分子
JP5972864B2 (ja) 2010-04-15 2016-08-17 メディミューン リミテッド ピロロベンゾジアゼピン及びそれらのコンジュゲート
EP2563385B1 (en) 2010-04-28 2017-08-02 Oncoimmune Inc. Methods of use of soluble cd24 for therapy of rheumatoid arthritis
US20130231464A1 (en) 2010-04-28 2013-09-05 Oncolmmune, Inc. Methods of use of soluble cd24 for therapy of rheumatoid arthritis
KR20130080443A (ko) * 2010-05-14 2013-07-12 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 콜로라도, 어 바디 코포레이트 개선된 보체 수용체 ２(ｃｒ２) 표적 그룹들
SG10201600791TA (en) 2010-06-08 2016-03-30 Genentech Inc Cysteine engineered antibodies and conjugates
MX2012014975A (es) * 2010-06-22 2013-03-12 Univ Colorado Regents Anticuerpos al fragmento c3d de componente 3 de complemento.
BR112013002074B1 (pt) 2010-07-28 2021-09-14 Gliknik Inc Composto homodimérico, dímero ou multímero de ordem superior do composto homodimérico, composição, composto, multímero e usos dos mesmos
CN103282380B (zh) * 2010-08-10 2018-02-16 洛桑聚合联合学院 红细胞结合性治疗剂
US9517257B2 (en) 2010-08-10 2016-12-13 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Erythrocyte-binding therapeutics
WO2012021891A2 (en) * 2010-08-13 2012-02-16 Tufts University Compositions, kits and methods for treatment of complement-related disorders
ES2544608T3 (es) 2010-11-17 2015-09-02 Genentech, Inc. Conjugados de anticuerpo y de alaninil-maitansinol
AU2012214259B2 (en) 2011-02-10 2017-02-23 President And Fellows Of Harvard College Surrogates of post-translationally modified proteins and uses thereof
US10409850B2 (en) * 2011-03-02 2019-09-10 T-Mobile Usa, Inc. Preconfigured media file uploading and sharing
EP3103810A3 (en) 2011-04-21 2017-03-08 Garvan Institute of Medical Research Modified variable domain molecules and methods for producing and using them
MX2013013054A (es) 2011-05-12 2014-02-20 Genentech Inc Metodo de monitoreo de lc-ms/ms de reaccion multiple para detectar anticuerpos terapeuticos en muestras de animales utilizando peptidos de firma de estructura.
JP5867834B2 (ja) * 2011-09-15 2016-02-24 株式会社島津製作所 肺癌マーカー補体Ｃ３ｄｇ分子及び肺癌マーカーの分析方法
RS54446B1 (en) 2011-10-14 2016-06-30 Medimmune Limited PIROLOBENZIDIAZEPINE AND ITS CONJUGATES
AU2012318288B2 (en) * 2011-12-01 2015-09-17 Ap Biosciences, Inc. Protein inhibitors to complement and VEGF pathways and methods of use thereof
WO2013130093A1 (en) 2012-03-02 2013-09-06 Genentech, Inc. Biomarkers for treatment with anti-tubulin chemotherapeutic compounds
EP2855529A4 (en) 2012-05-24 2015-12-09 Alexion Pharma Inc HUMANIZED ANTI-FACTOR B ANTIBODIES
AU2013302441B2 (en) 2012-08-17 2018-05-10 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Compositions and methods for detecting complement activation
US10413620B2 (en) 2012-08-17 2019-09-17 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Light-emitting versions of the monoclonal antibody to C3D (MAB 3D29) for imaging
EP2906296B1 (en) 2012-10-12 2018-03-21 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US9931414B2 (en) 2012-10-12 2018-04-03 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US10695433B2 (en) 2012-10-12 2020-06-30 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
LT2839860T (lt) 2012-10-12 2019-07-10 Medimmune Limited Pirolobenzodiazepinai ir jų konjugatai
WO2014057114A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates
PL2906253T3 (pl) 2012-10-12 2019-02-28 Adc Therapeutics Sa Koniugaty pirolobenzodiazepina-przeciwciało anty-psma
RS56520B1 (sr) 2012-10-12 2018-02-28 Adc Therapeutics Sa Pirolobenzodiazepin-anti-cd22 konjugati antitela
JP6527466B2 (ja) 2012-12-21 2019-06-05 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ 増殖性疾患および自己免疫疾患の治療に使用するための非対称ピロロベンゾジアゼピンニ量体
CN110452242A (zh) 2012-12-21 2019-11-15 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓及其结合物
EP2954071B1 (en) * 2013-02-08 2020-08-12 Allegheny-Singer Research Institute Cell-bound complement activation products as diagnostic biomarkers for pre-lupus
JP6340019B2 (ja) 2013-03-13 2018-06-06 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ ピロロベンゾジアゼピン及びそのコンジュゲート
EA027910B1 (ru) 2013-03-13 2017-09-29 Медимьюн Лимитед Пирролобензодиазепины и их конъюгаты
CA2905181C (en) 2013-03-13 2020-06-02 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof for providing targeted therapy
AU2014307080B2 (en) 2013-08-12 2018-06-07 Genentech, Inc. 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1H-benzo(E)indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment
US9956299B2 (en) 2013-10-11 2018-05-01 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine—antibody conjugates
EP3054983B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054985B1 (en) 2013-10-11 2018-12-26 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
KR20170042495A (ko) 2013-12-16 2017-04-19 제넨테크, 인크. 펩티드모방체 화합물 및 그의 항체-약물 접합체
WO2015095212A1 (en) 2013-12-16 2015-06-25 Genentech, Inc. 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1h-benzo[e]indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment
CA2928952A1 (en) 2013-12-16 2015-06-25 Genentech, Inc. Peptidomimetic compounds and antibody-drug conjugates thereof
US10046056B2 (en) 2014-02-21 2018-08-14 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
EP3107563B1 (en) 2014-02-21 2021-04-07 Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) EPFL-TTO Glycotargeting therapeutics
US10953101B2 (en) 2014-02-21 2021-03-23 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
US10946079B2 (en) 2014-02-21 2021-03-16 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Glycotargeting therapeutics
CN106687141A (zh) 2014-09-10 2017-05-17 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓及其缀合物
AU2015314826A1 (en) 2014-09-12 2017-03-02 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
JP6622293B2 (ja) 2014-09-12 2019-12-18 ジェネンテック， インコーポレイテッド アントラサイクリンジスルフィド中間体、抗体−薬物複合体、及び方法
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
JP2017533887A (ja) 2014-09-17 2017-11-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド ピロロベンゾジアゼピン類及びその抗体ジスルフィドコンジュゲート
US10780096B2 (en) 2014-11-25 2020-09-22 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CA2969689A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 Genentech, Inc. Quaternary amine compounds and antibody-drug conjugates thereof
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
US20190016766A1 (en) * 2015-10-07 2019-01-17 Daniel E. Benjamin Use of improved modulators of complement function as cancer therapeutics
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
MA45326A (fr) 2015-10-20 2018-08-29 Genentech Inc Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation
GB201601431D0 (en) 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB201602356D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
EP4273551A3 (en) 2016-03-25 2024-01-17 F. Hoffmann-La Roche AG Multiplexed total antibody and antibody-conjugated drug quantification assay
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
ES2858151T3 (es) 2016-05-20 2021-09-29 Hoffmann La Roche Conjugados de PROTAC-anticuerpo y procedimientos de uso
EP3465221B1 (en) 2016-05-27 2020-07-22 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bioanalytical method for the characterization of site-specific antibody-drug conjugates
JP7043425B2 (ja) 2016-06-06 2022-03-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド シルベストロール抗体－薬物コンジュゲート及び使用方法
WO2017214321A1 (en) 2016-06-07 2017-12-14 Gliknik Inc. Cysteine-optimized stradomers
CN109689111B (zh) 2016-08-11 2024-04-05 基因泰克公司 吡咯并苯并二氮杂䓬前药及其抗体缀合物
EP3522933B1 (en) 2016-10-05 2021-12-15 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for preparing antibody drug conjugates
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
PE20191354A1 (es) 2016-12-09 2019-10-01 Gliknik Inc Optimizacion de fabricacion de gl-2045, un stradomer multimerizante
JP2020500856A (ja) 2016-12-09 2020-01-16 グリックニック インコーポレイテッド 多価ｆｃ化合物を用いる炎症性疾患の治療方法
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
JP6671555B2 (ja) 2017-02-08 2020-03-25 アーデーセー セラピューティクス ソシエテ アノニム ピロロベンゾジアゼピン抗体複合体
AU2018255876B2 (en) 2017-04-18 2020-04-30 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
US20200129637A1 (en) 2017-04-20 2020-04-30 Adc Therapeutics Sa Combination therapy with an anti-axl antibody-drug conjugate
EP3612625A4 (en) 2017-04-21 2021-08-18 Mellitus, LLC PROCEDURE AND ANTIBODIES FOR DIABETES ASSOCIATED APPLICATIONS
JP7185884B2 (ja) 2017-05-02 2022-12-08 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター Ｉｌ－６及び好中球の関連する疾患の治療効果の予測及び判定方法
CN106983722B (zh) * 2017-05-08 2019-11-08 广西医科大学 一种治疗酒精性肝病的靶向性补体抗体微囊制剂及其制备方法与应用
EP3621635A4 (en) * 2017-05-10 2021-02-24 Wellstat Immuno Therapeutics, LLC WRAPPED VIRUS RESISTANT TO INACTIVATION OF THE CANCER TREATMENT COMPLEMENT
AU2018285562B2 (en) 2017-06-14 2024-01-18 Adc Therapeutics Sa Dosage regimes for the administration of an anti-CD19 ADC
EP3638296A1 (en) 2017-06-16 2020-04-22 The University Of Chicago Compositions and methods for inducing immune tolerance
AU2018316532B2 (en) 2017-08-18 2022-11-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
US20200216463A1 (en) 2017-09-20 2020-07-09 Ph Pharma Co., Ltd. Thailanstatin analogs
KR20200074160A (ko) 2017-10-20 2020-06-24 가꼬우호우징 효고 이카다이가쿠 항il-6 수용체 항체를 함유하는 수술 후의 유착을 억제하기 위한 의약 조성물
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
CN113056287A (zh) 2018-10-24 2021-06-29 豪夫迈·罗氏有限公司 缀合的化学降解诱导剂及使用方法
EP3894427A1 (en) 2018-12-10 2021-10-20 Genentech, Inc. Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
CN109929026B (zh) * 2019-03-15 2020-10-13 北京康普美特创新医药科技有限责任公司 人源靶向补体抑制物蛋白mCR2-DAF及应用
CN109970870B (zh) * 2019-04-24 2022-07-26 北京康普美特创新医药科技有限责任公司 人源靶向补体抑制物蛋白mCR2-CD59及应用
CN110423271A (zh) * 2019-08-07 2019-11-08 北京市农林科学院 鸡cr2基因的克隆、蛋白的表达和纯化及其多克隆抗体的制备
GB201912437D0 (en) * 2019-08-30 2019-10-16 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd CR2 Binding Proteins and their use in Medical Therapy
WO2021247487A1 (en) * 2020-06-01 2021-12-09 Medical University Of South Carolina Recombinant fusion proteins targeting p-selectin, and methods of use thereof for treating diseases and disorders
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
CN114209813A (zh) * 2021-11-30 2022-03-22 广西医科大学第一附属医院 靶向补体抑制剂在制备改善胆汁淤积性肝损伤药物中的应用

Family Cites Families (167)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2007A (en) * 1841-03-16 Improvement in the mode of harvesting grain
FR1601438A (zh) 1968-10-17 1970-08-24
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US5212071A (en) 1988-04-01 1993-05-18 The Johns Hopkins University Nucleic acids encoding a human C3b/C4b receptor (CR1)
US5981481A (en) 1974-12-06 1999-11-09 The Johns Hopkins University Human C3b/C4b receptor (CR1)
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
JPS5927900A (ja) 1982-08-09 1984-02-14 Wakunaga Seiyaku Kk 固定化オリゴヌクレオチド
FR2540122B1 (fr) 1983-01-27 1985-11-29 Centre Nat Rech Scient Nouveaux composes comportant une sequence d'oligonucleotide liee a un agent d'intercalation, leur procede de synthese et leur application
US4605735A (en) 1983-02-14 1986-08-12 Wakunaga Seiyaku Kabushiki Kaisha Oligonucleotide derivatives
US4948882A (en) 1983-02-22 1990-08-14 Syngene, Inc. Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis
US4824941A (en) 1983-03-10 1989-04-25 Julian Gordon Specific antibody to the native form of 2'5'-oligonucleotides, the method of preparation and the use as reagents in immunoassays or for binding 2'5'-oligonucleotides in biological systems
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4587044A (en) 1983-09-01 1986-05-06 The Johns Hopkins University Linkage of proteins to nucleic acids
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
US5118802A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology DNA-reporter conjugates linked via the 2' or 5'-primary amino group of the 5'-terminal nucleoside
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5430136A (en) 1984-10-16 1995-07-04 Chiron Corporation Oligonucleotides having selectably cleavable and/or abasic sites
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
US5258506A (en) 1984-10-16 1993-11-02 Chiron Corporation Photolabile reagents for incorporation into oligonucleotide chains
US4828979A (en) 1984-11-08 1989-05-09 Life Technologies, Inc. Nucleotide analogs for nucleic acid labeling and detection
US4897355A (en) 1985-01-07 1990-01-30 Syntex (U.S.A.) Inc. N[ω,(ω-1)-dialkyloxy]- and N-[ω,(ω-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
US4762779A (en) 1985-06-13 1988-08-09 Amgen Inc. Compositions and methods for functionalizing nucleic acids
AU6131086A (en) 1985-07-05 1987-01-30 Whitehead Institute For Biomedical Research Epithelial cells expressing foreign genetic material
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
JPH0742235B2 (ja) 1985-11-08 1995-05-10 三共株式会社 自己免疫性疾病の予防・治療剤
US5317098A (en) 1986-03-17 1994-05-31 Hiroaki Shizuya Non-radioisotope tagging of fragments
JPS638396A (ja) 1986-06-30 1988-01-14 Wakunaga Pharmaceut Co Ltd ポリ標識化オリゴヌクレオチド誘導体
US4704692A (en) 1986-09-02 1987-11-03 Ladner Robert C Computer based system and method for determining and displaying possible chemical structures for converting double- or multiple-chain polypeptides to single-chain polypeptides
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US4904582A (en) 1987-06-11 1990-02-27 Synthetic Genetics Novel amphiphilic nucleic acid conjugates
DE3851889T2 (de) 1987-06-24 1995-04-13 Florey Howard Inst Nukleosid-derivate.
US5585481A (en) 1987-09-21 1996-12-17 Gen-Probe Incorporated Linking reagents for nucleotide probes
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
US5525465A (en) 1987-10-28 1996-06-11 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Oligonucleotide-polyamide conjugates and methods of production and applications of the same
DE3738460A1 (de) 1987-11-12 1989-05-24 Max Planck Gesellschaft Modifizierte oligonukleotide
ATE152169T1 (de) 1988-02-05 1997-05-15 Whitehead Biomedical Inst Modifizierte hepatozyten und deren anwendung
US5082830A (en) 1988-02-26 1992-01-21 Enzo Biochem, Inc. End labeled nucleotide probe
EP0406309A4 (en) 1988-03-25 1992-08-19 The University Of Virginia Alumni Patents Foundation Oligonucleotide n-alkylphosphoramidates
US5256642A (en) 1988-04-01 1993-10-26 The Johns Hopkins University Compositions of soluble complement receptor 1 (CR1) and a thrombolytic agent, and the methods of use thereof
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5109124A (en) 1988-06-01 1992-04-28 Biogen, Inc. Nucleic acid probe linked to a label having a terminal cysteine
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
WO1990002806A1 (en) 1988-09-01 1990-03-22 Whitehead Institute For Biomedical Research Recombinant retroviruses with amphotropic and ecotropic host ranges
US5262536A (en) 1988-09-15 1993-11-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company Reagents for the preparation of 5'-tagged oligonucleotides
US5512439A (en) 1988-11-21 1996-04-30 Dynal As Oligonucleotide-linked magnetic particles and uses thereof
US5599923A (en) 1989-03-06 1997-02-04 Board Of Regents, University Of Tx Texaphyrin metal complexes having improved functionalization
US5457183A (en) 1989-03-06 1995-10-10 Board Of Regents, The University Of Texas System Hydroxylated texaphyrins
US5328470A (en) 1989-03-31 1994-07-12 The Regents Of The University Of Michigan Treatment of diseases by site-specific instillation of cells or site-specific transformation of cells and kits therefor
US5391723A (en) 1989-05-31 1995-02-21 Neorx Corporation Oligonucleotide conjugates
EP0402226A1 (en) 1989-06-06 1990-12-12 Institut National De La Recherche Agronomique Transformation vectors for yeast yarrowia
US4958013A (en) 1989-06-06 1990-09-18 Northwestern University Cholesteryl modified oligonucleotides
US5451463A (en) 1989-08-28 1995-09-19 Clontech Laboratories, Inc. Non-nucleoside 1,3-diol reagents for labeling synthetic oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5254469A (en) 1989-09-12 1993-10-19 Eastman Kodak Company Oligonucleotide-enzyme conjugate that can be used as a probe in hybridization assays and polymerase chain reaction procedures
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5264562A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs with novel linkages
EP0942000B1 (en) 1989-10-24 2004-06-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-Modified oligonucleotides
US5292873A (en) 1989-11-29 1994-03-08 The Research Foundation Of State University Of New York Nucleic acids labeled with naphthoquinone probe
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
US5130302A (en) 1989-12-20 1992-07-14 Boron Bilogicals, Inc. Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same
US5486603A (en) 1990-01-08 1996-01-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide having enhanced binding affinity
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US5578718A (en) 1990-01-11 1996-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Thiol-derivatized nucleosides
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5214136A (en) 1990-02-20 1993-05-25 Gilead Sciences, Inc. Anthraquinone-derivatives oligonucleotides
WO1991013080A1 (en) 1990-02-20 1991-09-05 Gilead Sciences, Inc. Pseudonucleosides and pseudonucleotides and their polymers
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
US6458360B1 (en) 1990-04-25 2002-10-01 The Johns Hopkins University Soluble complement regulatory molecules
GB9009980D0 (en) 1990-05-03 1990-06-27 Amersham Int Plc Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides
DK0455905T3 (da) 1990-05-11 1998-12-07 Microprobe Corp Dipsticks til nukleinsyrehybridiseringsassays og fremgangsmåde til kovalent immobilisering af oligonukleotider
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5688941A (en) 1990-07-27 1997-11-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods of making conjugated 4' desmethyl nucleoside analog compounds
US5138045A (en) 1990-07-27 1992-08-11 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5218105A (en) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
ATE154246T1 (de) 1990-07-27 1997-06-15 Isis Pharmaceuticals Inc Nuklease resistente, pyrimidin modifizierte oligonukleotide, die die gen-expression detektieren und modulieren
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5245022A (en) 1990-08-03 1993-09-14 Sterling Drug, Inc. Exonuclease resistant terminally substituted oligonucleotides
WO1992002534A2 (en) 1990-08-03 1992-02-20 Sterling Drug, Inc. Compounds and methods for inhibiting gene expression
US5177196A (en) 1990-08-16 1993-01-05 Microprobe Corporation Oligo (α-arabinofuranosyl nucleotides) and α-arabinofuranosyl precursors thereof
US5512667A (en) 1990-08-28 1996-04-30 Reed; Michael W. Trifunctional intermediates for preparing 3'-tailed oligonucleotides
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
WO1992005186A1 (en) 1990-09-20 1992-04-02 Gilead Sciences Modified internucleoside linkages
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
KR930702373A (ko) 1990-11-08 1993-09-08 안토니 제이. 페이네 합성 올리고누클레오티드에 대한 다중 리포터(Reporter)그룹의 첨합
EP1413587A2 (en) 1991-05-03 2004-04-28 Washington University Modified complement system regulator
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
US5719262A (en) 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
US5714331A (en) 1991-05-24 1998-02-03 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US5371241A (en) 1991-07-19 1994-12-06 Pharmacia P-L Biochemicals Inc. Fluorescein labelled phosphoramidites
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
EP0538194B1 (de) 1991-10-17 1997-06-04 Novartis AG Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
US6261834B1 (en) 1991-11-08 2001-07-17 Research Corporation Technologies, Inc. Vector for gene therapy
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
US5565552A (en) 1992-01-21 1996-10-15 Pharmacyclics, Inc. Method of expanded porphyrin-oligonucleotide conjugate synthesis
US5595726A (en) 1992-01-21 1997-01-21 Pharmacyclics, Inc. Chromophore probe for detection of nucleic acid
FR2687679B1 (fr) 1992-02-05 1994-10-28 Centre Nat Rech Scient Oligothionucleotides.
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
DE4222534A1 (de) 1992-07-09 1994-01-13 Behringwerke Ag Verwendung von Komplement-Inhibitoren zur Herstellung eines Arzneimittels zur Prophylaxe und Therapie von entzündlichen Darm- und Hauterkrankungen sowie Purpura
US5272250A (en) 1992-07-10 1993-12-21 Spielvogel Bernard F Boronated phosphoramidate compounds
US5574142A (en) 1992-12-15 1996-11-12 Microprobe Corporation Peptide linkers for improved oligonucleotide delivery
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
EP0691968B1 (en) 1993-03-30 1997-07-16 Sanofi Acyclic nucleoside analogs and oligonucleotide sequences containing them
EP0691977B1 (en) 1993-03-31 1997-11-26 Sanofi Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages
DE4311944A1 (de) 1993-04-10 1994-10-13 Degussa Umhüllte Natriumpercarbonatpartikel, Verfahren zu deren Herstellung und sie enthaltende Wasch-, Reinigungs- und Bleichmittelzusammensetzungen
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5679546A (en) 1993-09-24 1997-10-21 Cytomed, Inc. Chimeric proteins which block complement activation
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5446137B1 (en) 1993-12-09 1998-10-06 Behringwerke Ag Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5627053A (en) 1994-03-29 1997-05-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5597696A (en) 1994-07-18 1997-01-28 Becton Dickinson And Company Covalent cyanine dye oligonucleotide conjugates
US5580731A (en) 1994-08-25 1996-12-03 Chiron Corporation N-4 modified pyrimidine deoxynucleotides and oligonucleotide probes synthesized therewith
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
US5949562A (en) 1994-11-30 1999-09-07 Canon Kabushiki Kaisha Transmission wavelength control method permitting efficient wavelength multiplexing, optical communication method, optical transmitter, optical transmitter-receiver apparatus, and optical communication system
US5949961A (en) 1995-07-19 1999-09-07 International Business Machines Corporation Word syllabification in speech synthesis system
US5922320A (en) * 1996-06-14 1999-07-13 Georgetown University Recombinant proCVF
WO1997047321A1 (en) 1996-06-14 1997-12-18 The Johns Hopkins University School Of Medicine Use of chimeric vaccinia virus complement control proteins to inhibit complement
AU733890B2 (en) 1996-08-21 2001-05-31 Sugen, Inc. Crystal structures of a protein tyrosine kinase
GB9624731D0 (en) 1996-11-28 1997-01-15 Univ Leicester Complement inhibitor
US8088386B2 (en) 1998-03-20 2012-01-03 Genentech, Inc. Treatment of complement-associated disorders
US6503947B1 (en) 1998-01-27 2003-01-07 Brigham And Women's Hospital Method of treating cytotoxic damage
AU762799B2 (en) 1998-06-12 2003-07-03 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Enhancement of B cell activation and immunoglobulin secretion by co-stimulation of receptors for antigen and EBV Gp350/220
EP1001021B1 (en) 1998-09-25 2003-08-27 Wolfgang Prodinger Monoclonal antibody to human CD21, and its uses
JP2002534959A (ja) * 1998-12-08 2002-10-22 バイオベーション リミテッド 免疫原性タンパク質の改変方法
DK2026073T3 (en) 2000-04-29 2016-07-25 Univ Iowa Res Found Diagnosis and treatment of macular degeneration-related disorders
US6820011B2 (en) 2001-04-11 2004-11-16 The Regents Of The University Of Colorado Three-dimensional structure of complement receptor type 2 and uses thereof
JP4915980B2 (ja) 2002-11-15 2012-04-11 エムユーエスシー ファウンデーション フォー リサーチ デベロップメント 補体レセプター２標的化補体調節因子
US20070123466A1 (en) 2003-05-13 2007-05-31 New York Society For The Ruptured And Crippled Maintaining The Hospital For Special Surgery Method of treating recurrent miscarriages
US8454963B2 (en) 2003-11-13 2013-06-04 Musc Foundation For Research Development Tissue targeted complement modulators
JP2009508964A (ja) 2005-09-19 2009-03-05 パリンゲン インコーポレーテッド 抗生殖系列抗体結合剤を用いるｂ細胞性疾患の治療
CN101563363B (zh) 2006-06-21 2013-01-02 南卡罗来纳医疗大学研究发展基金会 用于治疗疾病的靶向补体因子h
WO2011003098A1 (en) 2009-07-02 2011-01-06 Musc Foundation For Research Development Methods of stimulating liver regeneration

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