JPH05506014A - オリゴヌクレオチド類似体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 オリゴヌクレオチド類似体 技術分野 本発明は、オリゴヌクレオチド類似体における１個またはそれ以上のヌクレオチ ド間リン酸ジエステル結合が硫黄をベースとした結合（ｓｕｌｆｕｒ　ｂａｓｅ ｄ　ｌｉｎｋａｇｅ）に置換されている新規な化合物に関する。

背景技術 治療手段のために有効な物質のレパートリ−としては主に比較的低分子量の有機 化合物が挙げられる。最近、そのレパートリ−も拡大され、効能、特性および安 定性を備えた蛋白質化合物を含むようになった。今や、例えば核酸のような他の 種類の生物高分子の治療上の潜在能力が注目されている。

核酸はペンダントのアデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）およびチ ミン（Ｔ）〔または同族のウラシル（Ｕ）〕塩基グループを有する線状のホスホ ペントースポリマーである。ペントースはリボース（ＲＮＡ）または２′−デオ キシリポース（ＤＮＡ）でありうる。これらは選択性に関して高い潜在能力を有 するため治療上魅力的な候補である。この高い選択性は核酸の良（知られたアン チパラレルで２本鎖のらせん構造（または二重型）を形成する能力に基づくもの であり、そしてその構造的相補性は相対する鎖の塩基の間の水素結合の形成（ワ トソンークリック塩基対）によるものである。相補性は相対する鎖に関してＧと Ｃとの、およびＡとＴ（またはＵ）とのベアリングとして定義される。完全な相 補性を有する二重らせん構造は熱力学的に好ましい。短鎖〔２０未満の残基また はヌクレオチド（ｎｔ）　）のオリゴヌクレオチドの場合、たった一つの不適当 なベアリングまたはミスマツチが有意に二重らせん構造を不安定化させることが できる。したがって、原則として３　Ｘ　１０’ｎｔのヒトゲノム（ヒトの遺伝 物質の全体）における単一の部位を１６〜２０ｎｔのオリゴヌクレオチドで選択 的にアドレスすることができる。これは一般に従来の低分子量の薬剤で達成しう るものより実質的に大きな選択性である。この程度の潜在的な選択性があるなら ば、形質発現のレベルにおいて治療効果を発揮するというアプローチを考慮する ことができる。遺伝物質の宿主系への組込みにより作用するウィルス剤の場合、 組込みおよび複製に含まれる多くの段階の１つを阻止することを考えることがで きる。

核酸を相補的にアドレスされた治療剤として使用する試みの多くは一重鎖ターゲ ットを含んでいた。このようなターゲットにはメツセンジャーＲＮＡ（■ＲＮＡ ）および−重鎖ウィルスゲツムがある。このような場合、試薬の核酸はターゲッ トに対し相補的であり、「アンチセンス試剤（ａｎｔｉ−ｓｅｎｓｅ　ｒｅａｇ ｅｎｔｓ）Ｊと呼ばれる。このような薬剤を使用して特異的な効果を発揮させる 方法を本明細書では「アンチセンスターゲツティング（ａｎｔｉ−ｓｅｎｓｅｔ ａｒｇｅｔｉｎｇ）Ｊ　（参考文献１〜３．３２）と称する。

ごく最近では、第２の高特異的モードの核酸結合が研究されている。二重鎖ＤＮ Ａの特定配列が第３の鎖と結合して三重らせんまたは二重鎖を形成することが見 い出された（参考文献４）。二重鎖形成にはいわゆるフーグスティーン型の水素 結合を形成する追加の塩基との三重の塩基対の形成が含まれる。本明細書では、 このようなモードで結合するよう企画された試薬を「二重鎖試薬」と称し、そし てこのような試薬を使用して特異的な効果を発揮させる方法を「二重鎖ターゲツ ティング（ｔｒｉｐｌｅｘｔａｒｇｅｔｉｎｇ）　Ｊと称する。二重鎖ターゲツ ティングアプローチの利点は二重鎖ゲノムＤＮＡを直接アドレスすることができ ることである。不利な点は、少な（ともこの時点で、すべての配列がこの様にし て処理することができるわけではないということである。単一の不変性オリゴデ オキシヌクレオチドの合成の容易さおよび化学的安定性のため、アンチセンス試 剤としてのこれらの使用の広汎な研究がなされている。このアプローチはとりわ けヒト免疫不全ウィルス（＋１１７）　、ラウス肉腫ウィルスおよびｃ−Ｉｌｙ ｃ腫瘍遺伝子発現に対してインビトロにおいて様々な成功を伴なって使用されて いる（参考文献２８）。

単オリゴデオキシヌクレオチドアンチセンス試剤は２つの方法のうち一方または 両方においてその効果を発揮することができる。これらは二重鎖形成によりその ターゲットと単純に結合することができ、そのため機能的な一重鎖ターゲットの 有効濃度を減少させる。別法として、ターゲットが一重鎖ＲＮ＾の場合、Ｉ？Ｎ ＾／ＤＮＡハイブリッドは内在リボヌクレアーゼＨ（ＲＮアーゼＨ）の基質とし て作用することができる。ＲＮアーゼＨはリン酸ジエステル結合の加水分解によ りＲＮ＾／ＤＮＡハイブリッドのＲＮＡ鎖を切断する酵素である。ＲＮアーゼＨ の媒介により、薬剤それ自体は切断されないためすべてのターゲットがノーイブ リッドに作用するのに必要なものより低い濃度でアンチセンス試剤を取り扱うこ とができ、そして各分子はターゲットの多くの分子の切断を導くことができる。

オリゴデオキシヌクレオチドのアンチセンス試剤としての機能を改良するべく、 多くの構造変形のアプローチが研究されている。ある種の変形には薬剤／ターゲ ット二重鎖を安定化するために、または付着部位でターゲットを切断するために 化学的付加物の付着が含まれる。フレキシブルなつなぎ鎖により付着されたアク リジン誘導体がインターカレーションによる二重鎖の熱力学的安定性を改良する ことがわかっている（参考文献５）。同様に、つなぎ鎖でつながれたソラレン（ ｐｓｏｒａｌｅｎｓ）を有するオリゴデオキシヌクレオチドは共有結合的にター ゲットと架橋結合し、次いで二重鎖の照射を行なうことができる（参考文献６） 。架橋結合はまた、つなぎ鎖でつながれたアルキル化剤の使用により達成するこ とができる（参考文献７）。つなぎ鎖でつながれたエチレンジアミン四酢酸（Ｅ ＤＴＡ）　／鉄（参考文献８）または１，１０−フェナントロリン／銅（参考文 献９）を有するオリゴデオキシヌクレオチドの使用によるターゲットの切断がイ ンビトロで証明されている。これらの目的のための他の付着が数多く記載されて いる。輸送を改良するためにポリ（Ｌ−リシン）を用いての機能化が採用されて いる（参考文献３１）。

しかしながら、インビボでのオリゴデオキシヌクレオチドのアンチセンス試剤と しての使用は２つの根本的な問題により制限される。第一の問題は小さな一重鎖 オリゴデオキシヌクレオチドはエンドヌクレアーゼにより急速に消化されるとい うことである。結果として、インビボで高濃度を維持するのが困難となる。第２ の問題はオリゴデオキシヌクレオチドがヌクレオチド残基あたり大よそ１個の完 全な負の電荷を有して高く帯電していることである。このことは一般に膜を通し ての輸送率の減少をもたらし、ある場合には作用の最終部位への接近が制限され る。これらの２つの効果が結合して比較的低い生体利用率（ｂｉｏａｖａｉｌａ ｂｉｌｉｔｙ）を与える。

オリゴデオキシヌクレオチドの末端への（上述したような）化学的機能性の取り つけは幾つかの場合においてヌクレアーゼ耐性を高めることができる。リボフラ ノシル環への塩基の取りつけによりβ一体からα一体に変化されたα−オリゴデ オキシヌクレオチドは平行鎖の二重鎖を形成し、ヌクレアーゼ耐性の増加を示す （参考文献１０）。

安定性および輸送の問題を解決するためのアプローチの幾つかにおいて、結合の 中心のリン原子はそのままであるが付着原子が置換または修飾されている。Ｏ− アルキルリン酸トリエステルは電荷がないがもとの結合よりもかさ高く、幾らか 化学的安定性の減少を示す（参考文献１１．１２）。ホスホロチオエートジエス テルはもとの結合上同型構造であり、ヌクレアーゼ耐性の増加を示すが、また帯 電している（参考文献１３）。メチルホスホネートは電荷がなく相当親油性であ るが、完全に置換されたハイブリッドはＲＮアーゼＨの基質ではない（参考文献 １４）。

これらの類似体に伴なう根本的な困難性の１つは、すべてリン酸ジエステル結合 における非架橋酸素原子の１つのシングル置換から由来するという事実である。

リン原子が結合内でプロキラルなので、１個の酸素の非特異的置換はキラル中心 を形成し、これによりジアステレオマ一対の生成をもたらす。各々の追加的な非 特異的置換は存在するジアステレオマーの数を倍にする。これらのジアステレオ マーは分析を複雑にする異なった物理特性を有し、そしである場合には幅広く異 なったハイブリッド形成能力を有することがわかっている（参考文献３４）。

したがって、多数の結合置換を有するオリゴデオキシヌクレオチド類似体は一般 に幅広く異なった生物学的効能を有することのできる種の複合混合物である。

ジアステレオマー混合物の問題は、リン酸ジエステル結合中の両方の架橋酸素が 同じ化学グループと置換することにより回避することができる。この方針に沿っ てホスホロジチオエートジエステルが研究されている（参考文献１５）。しかし ながら、ホスホロチオエート結合のようにこの部分はまだ帯電している。

より広範囲にわたる変形を含むアプローチもまた報告されている。リン酸ジエス テル結合と炭素中心の、中性カルバメートとの置換が研究されている（参考文献 １６．１７）。カルバメート結合は平面性であるためその導入はジアステレオマ ーを生成しないが、しかし完全に調査されていない結果ではあるが、リン酸ジエ ステルの四面体形態からの逸脱を示すことは確かである。少なくとも１つの誘導 体が相補性ターゲットを用いて二重鎖を形成することができることがわかってい る。カルバメートのヌクレアーゼ感受性およびＲＮアーゼＨを活性化する能力は まだ報告されていない。

最近の研究の幾つかは部分的なリン酸ジエステル結合置換を有するオリゴデオキ シヌクレオチドに興味が向けられている。その根本理由は所望の特性（例えばヌ クレアーゼ耐性、ハイブリッド安定性、ＲＮアーゼＨ活性など）のバランスのと れたプロフィールを工学的に作り出すことができつるかもしれないということで ある。これらの研究は有用ではあるが上記したような問題の一般的な解決はもた らしそうもない。

幾つかの類似体では、生物学的効果が非連続特異的方法において発揮するという 観察により状況はさらに複雑になる（参考文献１８．１９）。これらの効果の原 因は不明のままである。

アンチセンス試剤としてのオリゴデオキシヌクレオチドの機能を高めるための試 みにおいて調査された変形の上記記載は代表的なものであって決して網羅してい るわけではない。この主題の分野を取り扱っている２つの最近のレビュー（参考 文献１．２）および１つのモノグラフ（参考文献３２）が包括的である。

一連の天然由来のスルファモイルモノヌクレオシド抗生物質および幾つかの合成 的類似体が開示されている（参考文献２１〜２４）。さらに、天然オリゴヌクレ オチドとの結合を形成することのできるサブユニット間の結合グループとしてス ルフィド、スルホキシドおよびスルホンを含むＤＮＡの類似体が開示されている （参考文献３３）。

ｐ３１１オリゴヌクレオチドのβ−崩壊はスルフェートが結合したオリゴヌクレ オチドを与えることが予想されるが、しかしこのようなサルフェートが結合した オリゴヌクレオチドは報告されていない。

本発明者らはオリゴヌクレオチド類似体における１個以上のヌクレオチド間リン 酸ジエステル結合が硫黄をベースとした結合に置換されている一連の新規な化合 物を開発した。この結合はリン酸ジエステルと同型の構造であり、そして同数の 電子を持っている。本発明者らは合成的に容易であり、化学的耐性、ヌクレアー ゼ耐性があり、そして二重鎖形成をサポートすることのできる結合を見い出した 。

本発明の化合物は核酸機能の治療コントロールのためのアンチセンス試剤および 三重鎮剤として優れた潜在能力を有する。さらに、このような化合物は抗ウィル ス剤としての潜在能力およびハイブリッド形成プローブとしての実用性を有する 。

発明の開示 本発明によれば、式 （式中、ＡはＨ，０■、ＯＲ，、ＯＱまたはハロゲンであり、Ｂは天然由来の核 酸塩基または合成的に修飾された核酸塩基であり、 ＹはＲＮまたはＯであり、 ＺはＲ，ＮまたはＯであり、 Ｍは５（＝０）＝０、ｐ（−ｏ）−ｏ−１Ｐ（＝０）−Ｓ−１Ｐ（＝Ｓ）−Ｓ− １Ｐ（＝０）−ＯＲ，、Ｐ（＝Ｏ）−１？、、Ｐ（−０）−ＳＲ４またはＰ（＝ ０）−ＮＲ８Ｒ，（ただし、少なくとも１個のＭは５（−Ｏ）−Ｏであり、そし てＭが５（＝０）−０である時、ＹおよびＺのうち１個だけが０である）であり 、 ｎは１またはそれより大きいものであり、ＲはＨまたはアルキルであり、 Ｒ４はＨ，ＰＯ，，１１，Ｒ２０，、■４Ｐ３０７およびこれらの適当な塩、Ｈ または保護基であり、 Ｒ２はＨ２ＰＯ３、＋１．Ｒ２０，、Ｈ４Ｐ３０．およびこれらの適当な塩、Ｈ または保護基であり、 Ｒ３はアルキルまたはシアノエチルであり、Ｒ４はＨまたはアルキルであり、 Ｒ６はＨまたはアルキルであり、 Ｒ６はＨまたはアルキルであり、 Ｒ７はＨまたはアルキルであり、 Ｒ８はアルキルであり、 Ｒｏはアルキルまたはシアノエチルであり、そしてＱは保護基である） を有する化合物が提供される。

本発明の別の見地によれば、式 （式中、ＡはＨ，０Ｒ１０１？ｔ、　ＯＱまたはハロゲンであり、Ｂは天然由来 の核酸塩基または合成的に修飾された核酸塩基であり、 ＹはＲＮまたはＯであり、 ＺはＲ，ＮまたはＯであり、 Ｘは適当な脱離基であり、 Ｑは保護基であり、 ＲはＨまたはアルキルであり、 Ｒ，はＨまたはアルキルであり、そしてＲ２はアルキルまたは ■ である） を有する中間体化合物が提供される。

さらに、本発明によればアンチセンス試剤、三重鎮剤および抗ウィルス剤が提供 される。

本発明の別の現地によれば、ハイブリッド形成プローブが提供される。

図面の簡単な説明 図１：修飾オリゴデオキシヌクレオチド９ａ　：　９ｃ　（丸）および各々の鎖 にスルファメート結合のみを含む２つのオリゴデオキシヌクレオチド９ｂ　：　 ９ｄ　（四角）の融解曲線を示す。緩衝剤はｐＨ７，０で２０ロー麓のナトリウ ムを含んだ。

図２：図２ａにｄＣＳＴ％ｄＧおよびｄＡからなる標準的な混合物のＨＰＬＣク ロマトグラムを示す。ＩＩＵ２ｂにオリゴデオキシヌクレオチド９Ｃの長期の消 化から得られた生成物混合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。使用したＥＩＰ ＬＣ条件は以下の様である：ガード付Ｃ１８Ｒａｌｎｉｎ分析用カラム（４，６ ｍ＋ｉＸ　２５ｃｍ）　、流速１．０８１７分、５０ｍＭのＫｎ、ＰＯ，／水（ 溶媒Ａ）中における１０％水／メタノール（溶媒Ｂ）のグラジェント〔０〜２０ 分（３，０％溶媒Ｂ／溶媒Ａ）、２０〜４０分（３〜４０％溶媒Ｂ／溶媒Ａ：直 線）、４０〜４５分（４０％溶媒Ｂ／溶媒Ａ）３゜ 図３＝この図はＮ５ｉＩによるスルファメートまたはホスフェートの結合された オリゴヌクレオチドの切断を図解する２０％変性ポリアクリルアミドゲルのオー トラジオグラフ写真である。

図４：ｐＨ７，５で１０ｍ１ｌのマグネシウムＨの緩衝剤中におけるα（＾Ｓ＾ ）対ポリウリジンの融解曲線を示す。

発明の詳細な説明 アンチセンス試剤としての機能を高めるためオリゴデオキシヌクレオチド類似体 中におけるリン酸ジエステル結合を置換する従来の試みはすべて部分的な解決に すぎない。完全に満足ゆくプロフィールの特性を有するリン酸ジエステル置換は １つもない。本発明者らはある化合物が満たすかどうかの、アンチセンス、抗ウ ィルスおよび二重鎖機能のような優れた機能をもたらすような化学的、生化学的 および構造的基準のリストを作成した。結合は、１）リン酸ジエステルと同型の 構造（同数の電子をもち、電子配置が同じ）；２）ヌクレアーゼ耐性：３）生理 学的ｐ■において帯電していない；４）アキラル：５）生理学的条件下で化学的 に安定；６）合成的に容易である：そして７）分析可能であるべきである。

本発明者らはこれらの基準をすべて満たす少な（とも１つの新規な硫黄中心の結 合を有する化合物を開発した。

これらの結合はスルファメートエステルである。概念上、これらはリン酸ジエス テルと等電子配置であり、そして同数の電子をもつスルフェートジエステルから 由来するものである。架橋酸素の何れかを窒素と置換することによりスルファメ ートエステルが得られる。本発明者らは合成的に容易であり、化学的耐性、ヌク レアーゼ耐性があり、そして二重鎖形成をサポートすることのできるヌクレオチ ド間スルファメート結合を見い出した。

本発明の新規な化合物は式 （式中、ＡはＨ１０■、０１？、、ＯＱまたはハロゲンであり、Ｂは天然由来の 核酸塩基または合成的に修飾された核酸塩基であり、 Ｙは［ｌＮまたはＯであり、 ２は！？、ＮまたはＯであり、 Ｍは５（−０）＝０、ｐ（＝ｏ）−ｏ−１ｐ（＝ｏ）−ｓ−１Ｐ（＝Ｓ）−３− １ｐ（＝ｏ）−ｏｇ、、ｐ（＝ｏ）−Ｒ，、Ｐ（＝０）〜ＳＲ４またはＰ　（０ ）−ＮＲｓＲｓ（ただし、少なくとも１個のＭは５（＝Ｏ）＝Ｏであり、そして Ｍが５（＝Ｏ）＝Ｏである時、ＹおよびＺのうち１個だけがＯである）であり、 ｎは１またはそれより大きいものであり、ＲはＨまたはアルキルであり、 Ｒ５はＨ，ＰＯ，、ＩＩ、Ｒ２０，、Ｈ４Ｐ２Ｏ７およびこれらの適当な塩、Ｈ または保護基であり、 Ｒ１はＨ，ＰＯ，、ＨｓＰ２０ｓ、■４ｐ３ｏフおよびこれらの適当な塩、Ｈま たは保護基であり、 Ｒ５はアルキルまたはシアノエチルであり、Ｒ４はＨまたはアルキルであり、 Ｒ６はＨまたはアルキルであり、 Ｒ６はＨまたはアルキルであり、 Ｒ７はＨまたはアルキルであり、 Ｒ８はアルキルであり、 Ｒｏはアルキルまたはシアノエチルであり、モしてＱは保護基である） により表わされる。

塩基（Ｂ）に関する限り、根本的な制限は考えられない。天然由来のヌクレオチ ド塩基だけでなく合成的に修飾された核酸塩基例えばイノシン、デアザアデノシ ンなども含まれる。好ましくはＢは天然由来のヌクレオチド塩基のアデニン、グ アニン、シトシン、チミンまたはウラシルである（参考文献３Ｇ、３３）。

糖に関しては、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチドおよびジデオキシ リボヌクレオチドはすべて可能である。ハロゲン置換（Ａはハロゲンである）を 有し、糖装置の変化した糖（例えばアラビノシトおよびα−リボシド）もまた企 画されつる（参考文献３０）。

上記化合物において、ｎは少なくとも１であるが、ｎが２００までのものは標準 的な方法により入手しつる。ｎが２００より大きい化合物は連結技術により製造 されうる。

ヌクレオチド間結合（Ｍ）に関しては、本発明者らはたった１つの硫黄ベース結 合を有する化合物の製造および完全置換化合物の製造を証明した。本発明の少な （とも１つの硫黄ベース結合が実質的に化合物の少なくとも１つの末端の近（で ある化合物は特に有用であることが予想される。このような化合物は実質的にエ キソヌクレアーゼ活性から保護されるであろう。硫黄ベース結合で完全に置換さ れていない化合物はＭで定義づけられるような結合（ＤＮＡ、　ＲＮＡおよび当 業者に公知の合成的に修飾されたヌクレオチドにおいて見い出されるようなもの ）を含有する。リンベース結合の部分的な置換をある程度有する物質が本発明者 らが開発した方法により入手しうることは理解されよう。その上、混合リポース 構造（例えばリボヌクレオチドとデオキシリボヌクレオチドの両方を含有する一 重鎖）を有する化合物を製造することができる。

Ｒ置換基がアルキルの場合、５以下の炭素原子からなるアルキルが有用であると 予想される。

さらに、二重鎖の安定化、架橋またはターゲット配列の切断のために、あるいは 輸送を容易にするために本発明の化合物に化学的付加物を付着させてもよい（上 文参照。参考文献５〜９．３１）。

リン酸ジエステル結合とは違って、スルファメートは方向性を有する。この結合 は化合物末端に関して２方向のうち１方向に配向されつる。この２つの形態は窒 素が結合している硫黄の３′側または５′側にあるかどうかで３′−ＮＳＯまた は５’　−ＮＳＯと称される。

３’　−ＮＳＯスルファメート結合 ５’　−ＮＳＯスルファメート結合 （合成） 概念上、２個の置換基をもつスルファメートはヒドロキシ化合物とスルファモイ ル−Ｘ（ここでＸは適当な脱離基である）の反応（スキーム１）またはアミノ化 合物とアルコキシスルホニル−Ｘの反応（スキーム２）により製造することがで きる。一般に、脱離基（Ｘ）は容易に置換されるような基（例えばハライド、ア ジド、スルホネートなど）である。還元硫黄試薬（例えばスルフィニル基）との 等量反応次いで酸化という方法もまた企画これらのルートの何れも、本出願の主 題であるスルファメートの結合したオリゴヌクレオチド誘導体の製造のためには 実行可能なものである。本発明者らは特に有効なスキーム１の一態様を見い出し た。この方法において、５’−Ｎ−（Ｘ−スルホニル）−５′−アミノ−５′− デオキシヌクレオシド中間体をヒドロキシ含有のヌクレオシドまたはヒドロキシ 含有のオリゴヌクレオチドと反応させると３’　−ＮＳＯスルファメート結合誘 導体が得られる。

この方法において、Ｘは適当な脱離基例えばハライド、スルホネートまたはアジ ド基であり、好ましくはアジド基である。同様にして、５’−ＮＳＯスルファメ ート結合誘導体は３’−Ｎ−（Ｘ−スルホニル）−３′−アミノ−３′−デオキ シヌクレオシドをヒドロキシ含有のヌクレオシドまたはヒドロキシ含有のオリゴ ヌクレオチドと反応させることによって製造することができる。

るが、金属イオンで容易にすることもまたできる。

これらの方法において鍵となる中間体であるＮ−（Ｘ−スルホニル）−アミノ− デオキシヌクレオシドは好都合には適当なアミノ−デオキシヌクレオシドと二官 能性スルホン化剤Ｘ−５Ｏ２−Ｘ’の反応によって製造することができる。例え ば、Ｘ＝アジドの場合、Ｎ−（アジドスルホニル）−アミノ−デオキシヌクレオ シドはアミノ−デオキシヌクレオシドをアジドスルホニルクロライドと反応させ ることにより製造される。

これらのＮ−（Ｘ−スルホニル）−アミノーデオキシヌクレオシド中間体はまた アミノ含有ヌクレオシドまたはアミノ含有オリゴヌクレオチドと反応して本出願 の主題でもあるスルファミドの結合したオリゴヌクレオチド誘導体を与えること ができる。

本発明の中間体は式 （式中、ＡはＨ，０Ｈ１ＯＲ，、ＯＱまたはハロゲンであり、Ｂは天然由来の核 酸塩基または合成的に修飾された核酸塩基であり、 Ｙは［ｌＮまたはＯであり、 ＺはＲ，Ｎまたは０であり、 Ｘは適当な脱離基であり、 Ｑは保護基であり、 ＲはＨまたはアルキルであり、 Ｒ１はＨまたはアルキルであり、そしてＲ２はアルキルまたは である）を有する化合物である。

本発明のスルファメート結合をより大きな化合物に挿入するための計画は所望す る置換の程度に依存する。単一の部位またはほんの少しの部位における導入の場 合、ブロック−ダイマー（ｂｌｏｃｋ−ｄｉｍｅｒ）アプローチが好ましい。こ のアプローチにおいては、ヌクレオシドホスホラミジット（ｐｈｏｓｐｈｏｒａ ａ＋１ｄｉｔｅｓ）による単ヌクレオチＦ（７）段階的な添加（３′から５′へ 成長）に基づく自動オリゴヌクレオチド合成の標準的な化学技術が採用される（ 参考文献３９）。合成の所定の点において、通常の試薬のかわりに、本発明のブ ロック−ダイマーのホスホラミジット、５′−ジメチトキシトリチルで保護され たスルファメート結合ジヌクレオシド３′−ホスホラミジットが使用される。

このことはスルファメートの結合した２種のヌクレオチドの、成長鎖の５′−末 端への付加をもたらす。本発明のブ０−／クマルチｖ　−（ｂｌｏｃｋ　ｍｕｌ ｔｉ−厘ｅｒ）により１回連続したスルファメート結合が導入される。

本発明のブロックマルチマーのホスホラミジット化合物は式 （式中、ＡはＨ，０１１，０１？イ、ＯＱまたはハロゲンであり、Ｂは天然由来 の核酸塩基または合成的に修飾された核酸塩基であり、 ｎは少なくとも１であり、 Ｒ１はアルキルであり、 Ｒ１はジアルキルアミノ、モルホリノ、ピペリジノまたはピロリトノであり、 Ｒ８はアルキルであり、 Ｒ４はアルキルであり、 ＹはＲＮまたはＯであり、 ＺはＲＮまたはＯであり、 ＲはＨまたはアルキルであり、 Ｑは保護基であり、そして Ｖは保護基である） で表わされる。

５以下の炭素原子からなるアルキルを有するＲ、Ｒ，、Ｒ３およびＲ４置換基が 有用であると予想される。

■は塩基性条件下で開裂することのできる保護基例えばシアノエチルおよびメチ ルである。

本発明のすべての化合物において、Ｑはアルキルあるいはアシル、トリアルキル シリル、シアノエチルまたはテトラヒドロピランから選択される保護基である。

Ａ置換基が酸素を含む場合、３つのレベルの保護を想到することができる。第１ のケースとして、保護基Ｑは■に関するものと同じような条件下で切断を受けや すいであろう。第２の可能性は安定性の理由からＶを除去するために使用される 脱保護条件に対してＱを安定にすることである。最後のケースはＱはまったく除 去されない、例えばアルキル基であろう。

スルファメート結合の安定性の問題は本アプローチにおいて重要なものである。

第１に、この結合は以下のサイクリング条件すなわち、１）適当な強酸を用いて の５′−トリチル基の除去、２）テトラゾール活性化ホスホラミジットとのカッ プリングおよび３）塩基性条件下におけるヨウ素を用いての酸化の繰り返しの処 理に耐えうるちのでな）すればならない。本発明者らはこれらの条件下の繰り返 しの処理に完全に安定なヌクレオチド結合を見い出した。第２に、この結合は樹 脂から新生オリゴヌクレオチドを切断するのに、そしてヌクレオチド塩基がら保 護基を除去するのに要求される条件に耐えうるものでなければならない。塩基の 保護は一般にアシル化（Ｃ，Ａにっいてはベンゾイル化、Ｇについてはイソブチ リル化）により環の外にあるアミノ基をブロックすることを含む。

樹脂からの切断および塩基−脱保護は両方とも一般に濃アンモニア水で処理する ことにより行なわれる。樹脂からの切断は室温で急速に起こるが、完全な塩基の 脱保護には高められた温度におけるより長期の処理が必要とされる。スルファメ ート結合はこの濃アンモニア水を用いての長期の処理に対して完全に耐性がある 。

ブロックダイマーアプローチを使用して、１〜多数のスルファメート結合を有す る化合物のオリゴヌクレオチド類似体を製造することができる。（３′−末端に おける）最初の結合がスルファメートではなく、そして連続のスルファメートを 導入することができないということが唯一の制限である（これらの制限はそれぞ れ、樹脂の結合したスルファメートブロックダイマーを出発物質として使用する ことにより、またはブロックマルチマーの使用により克服しつる）。

すべてのヌクレオチド間結合がスルファメートで置換されつる化合物の合成のた め、異なった計画が採用される。ここでは段階的な合成が好ましい。合成は５’ 　−３’方向に単一のヌクレオチドユニットを一度に加えることにより行なわれ る。３′−位の保護された５′−アジドスルホンアミドモノマーはその場で活性 化され、成長オリゴヌクレオチドの３′−ヒドロキシルに加えられる。

鎖合成のこの方向は通常の自動オリゴデオキシヌクレオチド合成において採用さ れるものの逆である。したがってこの２つの方法はわずかに両立できない。しか しながら、所望によりスルファメートまたはリン酸ジエステルの何れかを加える ことのできるサイクルを考えることは可能である。例えば、５′−位の保護され た３′−アジドスルホンアミドモノマーを用いてスルファメート結合を所望の点 に取り入れることが可能である。これは伸長方向が３′から５′であることの結 果であり、同じ方向がホスホラミジット伸長において使用される。

一般に、活性化モノマーアプローチは、ａ）すべての可能な配列をアドレスする ことができること：およびｂ）１６の試薬と対照して必要なのはわずか４つであ る、という点でブロックダイマーアプローチより優れている。

（実用性） 本発明の化合物はこれらの化合物が他の系におけるアンチセンス機能と相互関係 があることがわかっている物理的特性を実質的に示しているようにアンチセンス 試剤としての用途（すなわち治療上の）を見い出せる。同様に、本発明者らは、 これらの試薬が二重鎖ターゲツティング用途において機能することができると予 想している。

他の可能な治療用途がある。例えば、２’　、　５’−オリゴアデノシンのスル ファメート類似体は抗ウイルス特性を示すことが予想されつる（参考文献２６） 。

スルファメートの置換されたオリゴデオキシヌクレオチドが他の類似体で観察さ れるものと同じ非連続の特異的抗ウイルス効能を幾らか示すことが予想されつる （参考文献１８．１９）。

研究分野においても多くの潜在的な用途がある。スルファメート結合系はハイブ リッド形成プローブとして、突然変異誘発のための試薬として、そして蛋白質／ 核酸相互作用の研究のための構造類似体として有用でありうる。スルファメート 結合置換は触媒ＲＮＡ系に取り込まれる場合に有用な特性を与えることができる （参考文献３５）。

Ｍが５（＝０）＝０であり、モしてＹおよびＺの両方がＯであるオリゴヌクレオ チド類似体化合物についても同様の実用性が予想される。

（二重鎖形成） アンチセンス試剤として機能するために、本発明の化合物は相補的配列を認識す る（ハイブリッド形成、アニーリング、二重鎖形成）能力を維持しなければなら ない。

短鎖のオリゴヌクレオチドに関しては、これは二重鎖形成を伴なうＵｖ吸収の変 化を観察することにより容易にアッセイされつる。一般に、２６０ｎｍにおける 吸収は温度の関数として測定される。

二重鎖形成における単一のリン酸ジエステル結合をスルファメートと置換する効 果を研究するために、それぞれ単一のスルファメート結合を有する一対の修飾さ れた相補的１８−マーをその対応する対の非修飾の１８−マーと比較した。この ２つの対はわずかに同一の融解曲線（滑らかなＳ−曲線）を示し、修飾対の曲線 がほんの少し低温側に移動している。吸収変化の程度が同一で、曲線の形が殆ん ど同一であることは二重鎖がスルファメート結合により殆んど動じず、そして単 一のドメイン融解が起こることを示唆している。転移温度がわずかに低いことは 、これらの条件下で修飾された二重鎖がその非修飾のものよりわずかに安定性が 低いことを示している。

すべてのスルファメート結合を有するＴ−ホモポリマーの短鎖のｄＡホモポリマ ー（リン酸ジエステルを有する）へのアニーリングを明らかにするための試みは 不成功であった。このことは幾分困惑させるが、同じ現象がカルバメートおよび メチルホスホネートで観察された：オリゴＴｓ（およびＵｓ）はあまり、または まった（ポリＡにアニーリングしないが、他の塩基を有する配列はよくアニーリ ングする（参考文献１７．２０）。このことは結合が帯電していない場合のオリ ゴＴｓの特有性かもしれない。

スルファメートの結合したアデノシンダイマーのポリＵへのアニーリングが明ら かにされている。ここで、その相互作用は非常に強く、転移温度はその対応する 非修飾のアデノシンダイマーより数ｌθ″高かった。

（ヌクレアーゼ耐性） インビボでの安定性のためには、アンチセンス試剤は段階的な様式で何れかの末 端から消化するエキソヌクレアーゼと鎖の真ん中で開裂するエンドヌクレアーゼ に対して耐性があることが望ましい。

エキソヌクレアーゼ耐性を試験するために、単一のスルファメート結合を有する 本発明の化合物を幾つかエキソヌクレアーゼ、ヘビ毒ホスホジェステラーゼおよ びアルカリ性ホスファターゼ（分析を容易にするため）の混合物での長期の処置 に付した。それぞれの場合において、スルファメート結合は完全にその構成要素 のヌクレオシドに消化された化合物の残りと一緒に（二量体として）そのまま再 生した。

エンドヌクレアーゼ耐性はＮｓｉ　１制限工ンドヌクレアーゼ認識配列を含む短 鎖の二重鎖オリゴマーの切断を調べることによって試験した。このエンドヌクレ アーゼは通常、互い違いの様式でその認識配列内で両方の鎖を切断する。何れか の、または両方の鎖中の切断部位におけるリン酸ジエステル結合の置換は変化し た鎖中の切断に対する耐性を付与した。

実施例 実施例Ｉ Ｎ、−ベンゾイル−３’−０−ｔ−ブチルジメチルシリル−５′−スルファモイ ルアジド−２’　、　５’−ジデオキシアデノシンの製造 １００諺ｌの無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中における８、９９（２４ミ リモル）の５′−アジド−Ｎ６−ベンゾイル−２’　、　５’−ジデオキシアデ ノシン（参考文献３６の記載に従って製造することができる）　、５．４ｇ（３ ５ミリモル）のｔ−ブチルジメチルシリルクロライドおよび３．３ｇ（４８ミリ モル）のイミダゾールの混合物を室温（ＲＴ）で２０時間撹拌した。溶媒を真空 下で除去し、その残留物を半飽和ブラインおよびＥｔＯＡｃ　（２Ｘ　２００冨 ｌ）に分配した。合一した有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し 、そして蒸発させた。２０〜４０％のＥｔＯ＾ｃ／　ＤＣＭを用いるシリカ［Ｅ Ｍサイエンス社製シリカゲル（２４０〜４００メツシユ）〕上におけるクロマト グラフィーによる精製により１１．１９の５′−アジド−Ｎ６−ペンゾイルー３ ’−０−ｔ−ブチルジメチルシリル−２’、５’−ジデオキシアデノシンを白色 の泡状物として得た。

ＮＭＲ（３００１１ｔｌｚ、　ｄ、−ＤＩＩＳＯ）６１１．２５（ｂｒ、１［１ ）、　８．７８（ｓ、ＩＨ）。

８．７１（ｓ、ＩＨ）、　８．０５（＋１．２Ｈ）、　７．５−７．７（ｍ、３ ■）、　６．５２（ｔ、ＩＨ。

Ｊ＝７Ｈｚ）、４．７２（ｍ、ＬＨ）、４．０２（ｍ、１■）、３．６７（ｄｄ 、１■、Ｊ＝１３．７Ｈｚ）、　３．５６（ｄｄ、ＬＨ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ）、 　３．０９（ｍ、Ｈｆ）、　２．４３Ｃａ。

ＩＮ）、　０．９２（ｓ、９Ｈ）、　０．１４（ｓ、６１１）。

６９ｍＡ’のエタノールおよび３．　（ｈｌの酢酸中における５、　０８ｇ（１ ０，４ミリモル）の５′−アジド−Ｎ６−ペンゾイルー３′−〇−１−ブチルジ メチルシリルー２’　、　５’−ジデオキシアデノシンおよび２．１ｇの■０％ Ｐｄ／Ｃの混合物を１気圧の水素下で４時間撹拌した。スラリーをメタノールで 洗浄しながらセライトを通して濾過した。ｐ−トルエンスルホン酸−水和物（１ ，９７９，１０，４ミリモル）を加え、混合物を撹拌して溶解した。溶液を蒸発 させ、得られた固形物をシリカ上でクロマトグラフィー処理（１〜１２％メタノ ール／ＤＣＭ）　Ｉ、て４．６３ｇの５′−アミノ−Ｎ６−ペンゾイルー３′− ０−１−ブチルジメチルシリル−２’、５’−ジデオキシアテノシン、ｐ−トル エンスルホネート塩を得た。

ＮＩＩＲ（３００Ｍ［Ｉｚ、　ｄｓ−ＤＩＩＳＯ）δ８．７６（ｓ、１ｆｌ）、 ８．７４（ｓ、ＬＨ）。

８．０５（ｄ、２ｔｌ、Ｊ＝８ｆｌｚ）、　７．６７（ｔ、１■、Ｊ＝８Ｈｚ） 、　７．５７（ｔ、２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、　７．４８（ｄ、２１１．Ｊ＝８１１ ｚ）、　７．１１（ｄ、２１１．Ｊ＝８Ｈｚ）、　６．５３（ｔ。

ＩＨ，Ｊ＝７１１１ｚ）、４．６８（ｍ、１１１）、４．０１（ｍ、１）１）、 　３．０６（ｍ、２［）。

２．５６（ｍ、１ｆｌ）、　２．３９（ｍ、１１１）、　２．２９（ｓ、３ｆｌ ）、０．９３（ｓ、９Ｈ）。

０、１５（ｓ、　６１ｉ）。

１０Ｉ１１の無水アセトニトリルおよび２０１１／の無水ＤＣＭ中における４、 　２４９（６，６８ミリモル）の５′−アミノ−Ｎ６−ペンゾイルー３’−０− ｔ−ブチルジメチルシリル−２’、５’−ジデオキシアデノシンおよび４人のモ レキュラーシーブス（〜５ｇ）の混合物を窒素下で２時間撹拌した。０．９３Ｎ ｌ（６，６８ミリモル）のトリエチルアミンを加えた後、混合物を５分間撹拌し 、そして０．４２ｍ１のクロロスルホニルアジド（ＩＭ／アセトニトリル）を加 えた。反応混合物を１時間撹拌した後、スラリーを濾過し、濾液を水およびＥｔ ＯＡｃ　（２Ｘ　１０（ｂｊ’）に分配した。合一した有機相をブラインで洗浄 し、乾燥しそして蒸発させた。シリカ上におけるクロマトグラフィー（１〜３％ １ｌｅＯＨ／ＤＣＭ）による精製により０．８９ｇのＮ６−ペンゾイルー３’− ０−ｔ−ブチルジメチルシリル−５′−スルファモイルアジド−２’　、　５’ −ジデオキシアデノシンを白色の泡状物として得た。

ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、　ｄ、−ＤＭＳＯ）δ１１．２２（ｂｒ、ＩＦＩ）、　 ９．２８（ｂｒ、１■）。

８．７５（ｓ、ＩＨ）、８．７１（ｓ、１Ｂ）、８．０５（ｄ、２■、Ｊ＝８Ｈ ｚ）、７．６６（ｔ。

１１Ｔ、Ｊ＝８１１ｚ）、７．５６（ｔ、２Ｈ，Ｉ＝８Ｈｚ）、６．５２（ｔ、 ＩＨ，Ｊ＝８Ｈｚ）。

４．６７（＋、ＩＨ）、４゜００（＋、１ｔｌ）、３．０７（ｍ、ｌ１ｌ）、２ ．３４（ａ＋、ＬＨ）。

０．９３（ｓ、９１１）、０．１５（ｓ、６Ｈ）。ＩＲ（ＫＢｒ）３４００，３ ０８０．２９５０゜２９３０、　２８８０．　２８６０．　２１３０．　１７０ ０．　１６１０．　１５８５．　１５１０゜１３７０、　１１７０ｃｍ−’。

実施例２ Ｎ６−ペンゾイルー３’−０−ｔ−ブチルジメチルシリル−５′〜スルファモイ ルアジド−２’　、　５’−ジデオキシシチジンの製造 １２、０９９　（３５，１ミリモル）の５′−アジド−Ｎ６−ペンゾイルー２’ 、５’−ジデオキシシチジン（参考文献３６の記載に従って製造することができ る）　、７．９４ｖ（５２，７ミリモル）のｔ−ブチルジメチルシリルクロライ ドおよび４．７８ｇ（７０，３ミリモル）のイミダゾールの混合物を７０寓ｌの 無水ＤＩＩＦ中において窒素下、室温で２０時間撹拌した。ＤＭＦを真空下で除 去し、得られた混合物をＤＣＭ中に溶解し、そして直接シリカカラムにかけた。

２５％ＥｔＯＡｃ／　ＤＣＭ溶液を用いて、生成物をカラムから溶離した。生成 物を含有するフラクションを蒸発させて１３．３５９の５′−アジド−Ｎ６−ペ ンゾイルー３’−０−ｔ−ブチルジメチルシリル−２’、５’−ジデオキシシチ ジンを白色の泡状物として得た。

ＮＭＲ（３００１１Ｔｌｚ、　δ６−ＤＩＩＳＯ）δ１１．３１（ｂｒ、ＩＨ） 、　８．１８（ｄ、　ＬＬ　Ｉ＝８Ｈｚ）、　８．０１（１，２１’り、　７． ６３（ｍ、１１１）、　７．５６（ｔ、２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）。

７．３９（ｄ、ＩＨｊ＝８Ｈｚ）、　６．２０（ｔ、ＩＨ，Ｊ＝７Ｈｚ）、　４ ．３８（ｍ、ＩＨ）。

３．９６（ｍ、ＩＨ）、３−６８（ｄｄ、ＩＢ、Ｊ＝１３．６Ｈｚ）、３−６１ （ｄｄ、ＬＨ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ）、２．３０（ｍ、１ｔｌ）、０．８８（ｓ、 ９Ｈ）、０．１０（ｓ、６１１）。

１３０ｍ１のエタノールおよび５＠ｌの酢酸中における６、８８ｇ（１５ミリモ ル）の５′−アジド−Ｎ６−ペンゾイルー３′−〇−ｔ−ブチルジメチルシリル ー２’　、　５’−ジデオキシシチジンおよび３．０ｇの１０％Ｐｄ／　Ｃの混 合物を１気圧の水素下で４時間撹拌した。スラリーをメタノールで洗浄しながら セライトを通して濾過した。ｐ−）ルエンスルホン酸−水和物（２，８５９，１ ５ミリモル）を加え、混合物を撹拌して溶解した。溶液を蒸発させ、得られた固 形物をシリカ上でクロマトグラフィー処理（１〜１２％メタノール／　ＤＣＭ） して６．３２９の純粋な５′−アミノ−Ｎ６−ペンゾイルー３′−〇−１−ブチ ルジメチルシリルー２’　、　５’−ジデオキシシチジン　ｐ−トルエンスルホ ネート塩を黄かっ色の固形物として得た。

ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、　ｄａ−ＤＭＳＯ）δ８．３１（ｄ、ＩＥｌ、Ｊ＝８Ｈ ｚ）、　８．０２（ｄ。

２Ｈｊ＝８Ｈｚ）、７．６４（ｍ、ＩＨ）、７．５２（ｍ、４ｔｌ）、７．３８ （ｄ、Ｈｌ、Ｊ＝８Ｈｚ）、　７．１２（ｄ、２１１．Ｊ＝８Ｈｚ）、　６．１ ９（ｔ、ＩＨ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）、　４．４３（＋ａ、１１）、３．９７（ａ＋ 、ＬＨ）、　３．０２（ｍ、２Ｆｌ）、　２．３０（ｍ、５Ｈ）、　０．８９（ ｓ、９Ｉ（）、　０．１１（ｓ、６Ｈ）。

３０ｘｌの５０％無水ＤＣＭ／アセトニトリル中における３４０ｇ（５，６３ミ リモル）の５′−アミノ−Ｎ、−ベンゾイル−３′−〇−１−ブチルジメチルシ リルー２’、５’−ジデオキシシチジン　ｐ−トルエンスルホネート塩および４ 人のモレキュラーシーブス（〜５９）の混合物を窒素下で１時間撹拌した。０℃ まで冷却した後、０．１８ｍ１　（５，６３ミリモル）のトリエチルアミンを加 え、撹拌を１０分間継続した。最後に、３．９＠ｌ　（３，９ミリモル）のクロ ロスルホニルアジド（ＩＭ／アセトニトリル）を加え、冷浴を取り外し、そして 反応混合物を２．５時間撹拌した。スラリーを濾過し、濾液を半飽和ブラインお よび３００ｍ１のＥｔＯＡｃに分配した。有機相をブラインで洗浄し、乾燥し、 蒸発させた。

シリカ上におけるクロマトグラフィー（１〜４％メタノール／　ＤＣＩＩ）によ る精製により２種の不純物を含む０．９９９の生成物を得た。さらにクロマトグ ラフィー処理することにより純粋なＮ、−ベンゾイル−３’−０−ｔ−ブチルジ メチルシリル−５′−スルファモイルアジド−２’　、　５’−ジデオキシシチ ジンを白色の泡状物として得た。

ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、　ｄ、−ＤＭＳＯ）δ１ｌ−２７（ｂｒ、１１１）、　 ９．３０（ｂｒ、１［１）。

８．２１（ｄ、１１１．Ｊ＝８＋１ｚ）、　８．０１（ｉ＋、２ｔｌ）、　７． ６２（ｍ、Ｉｎ）、　７．５０（ｔ。

２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、　７．３７（ｄ、１ＬＪ＝８１１ｚ）、　６．１７（ｔ、 ＩＴｌ、Ｊ＝６．５＋Ｔｚ）。

４．３９（ｍ、ＨＩ）、　３．９５（■、１１１）、　３．３５（■、２■）、 　２．２７（ｍ、２Ｈ）。

０．８９（ｓ、９Ｈ）、　０．１０（ｓ、６Ｂ）。

実施例３ ３’−０−ｔ−ブチルジメチルシリル−Ｎ４−ｉ−ブチリル−０ｓ−（４−ニト ロフェネチル）−５’−スルファモイルアジド−２’　、　５’−ジデオキシグ アノシンの製造参考文献３７に記載の方法により、５．００９（１７，５ミリモ ル）の２′−デオキシグアノシン（Ｓｉｇｍａ社製）　、５３ｘｌの無水ＤＣＭ 、　１３＋＋１の無水ピリジンおよび９．３＠ｌ　（８８ミリモル）のイソブチ リルクロライドを用いて１０．３４９の粗製Ｎ、、（３’、５’　−０）−トリ ー１−ブチリル−２′−デオキシグアノシンを得た。

１０、．３４９（〜１７ミリモル）の粗製Ｎ４．（３’、５’　−０）　−）リ ーｉ−ブチリルー２′−デオキシグアノシンを７０ｘｌの無水ＤＣＭ中に窒素下 で溶解した後、８．９１９　（３４ミリモル）のトリフェニルホスフィンおよび ５．６８９（３４ミリモル）の４−二トロフエネチルアルコールを加え、撹拌し ながら溶解した。０℃まで冷却した後、５．３＠１（３４ミリモル）のジエチル ジアゾジカルボキシレートを５分間にわたって加えた。冷浴を取り外し、反応混 合物を１８時間撹拌した。反応混合物のＴＬＣ（１０％メタノール／　ＤＣＭ） はまだ出発物質が幾らか存在していることを示した。トリフェニルホスフィン（ ４，４５ｇ）　、４−ニトロフェネチルアルコール（５，３０ｇ）およびジエチ ルジアゾジカルボキシレー）　（２，６５ｍＡ’）を逐次的に加え、混合物をさ らに１時間撹拌した。

溶媒を蒸発させ、その残留物を次の反応に直接使用した。

サンプルをシリカ上におけるクロマトグラフィー（１〜５％メタノール／　ＤＣ Ｍ）により精製してり、　（３’、５’　−０）　−トリーミーブチリル−ｏ、 −（４−ニトロフェネチル）−２′−デオキシグアノシンを白色の泡状物として 得た。

ＮＭＲ（３００１１Ｈ２，ＣＤＣ１３）δ８．１？（ｄ、２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、 　８．０７（ｂｒ。

ＩＨ）、　７．９７（ｓ、ＩＨ）＝　７．５３（ｄ、２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、　６ ．３６（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ＝７．６ｔｌｚ）、　５．４３（＋ｓ、ＩＨ）、　４． ８４（ｔ、２１１．Ｊ＝７［１ｚ）、　４．５４（ｄｄ、ＬＨ。

Ｊｌ＝１２．５Ｈｚ）、　４．３９（ｍ、２Ｈ）、　３．３３（ｔ、２Ｈ，Ｊ＝ ７Ｈｚ）、　２．５−３．１（国、５■）、１．３９（ｄ、６Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ） 、１．３２（ｄ、６Ｂ、Ｊ＝７Ｈｚ）、１．２６（ｄ。

３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、１．２４（ｄ、３Ｈ，Ｊ＝７１１ｚ）。

粗製Ｎ、、　（３’、５’　−０）　−）リーｉ−ブチリル−ｏ、−（４−ニト ロフェネチル）−２′−デオキシグアノシン（〜１７ミリモル）を４０（ｈｌの メタノール中に溶解し、４０（ｈｌの２７％水酸化アンモニウムを加えた。混合 物がくもったのでメタノール（１００＋＋／）を加えて反応を均一にした。室温 で２０時間撹拌した後、溶媒を蒸発させ、その残留物を１００■ｌのＤＣＭに取 った。ヘキサンを十分に加えたところ溶液がくもった。−晩装置した後、明るい 黄色の結晶を集めて５．８３９のＮ４−ｉ−ブチリル−０ｓ−（４−ニトロフェ ネチル）−２′−デオキシグアノシンを得た。二度目の結晶化により追加の物質 が得られ、全部で８．６０ｇのＮ４−ｉ−ブチリル−ｏ、−（４−ニトロフェネ チル）−２′−デオキシＮｉｌＲＮ１１Ｒ（３００，２０％ｄ４−メタノール／ ＣＤＣ４’ｓ）δ８．１８（ｄ。

２Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ）、　８．１７（ｓ、ＩＨ）、　７．５７（ｃ！、２Ｈｊ＝９ Ｈｚ）、　６．３８（ｔ、ＩＨ。

Ｊ＝７Ｈｚ）、　４．８４（ｔ、２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、　４．７２（ｍ、ＬＨ） 、　４．０７（ｑ、ｉｌｌ、Ｊ＝４Ｈｚ）、　３．８３（ｄｄｄ、２Ｈ，Ｊ＝３ ３．１２．４Ｈｚ）、　３．３３（ｔ、２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）。

２．７５−２．９（＊、２Ｈ）、　２．４４（ｄｄｄ、ＩＨＪ−１４，７，４Ｈ ｚ）、　１．３７（ｄ、６Ｈ。

Ｊ＝８Ｈｚ）。

７５ｍ１の無水ピリジン中における７、　２８９　（１４，９ミリモル）のＮ４ −ｉ−ブチリル−ｏｓ−（４−ニトロフェネチル）−２′−デオキシグアノシン の溶液を窒素下で０℃まで冷却した。２．８４９（１４，９ミリモル）のｐ−ト ルエンスルホニルクロライドを加えた後、反応混合物を０℃で２時間、次いで５ ℃で１８時間撹拌した。ピリジンを蒸発させ、残留物を水およびＥｔＯＡｃに分 配した。有機相をブラインで洗浄し、乾燥し、そして蒸発させて６．２２ｇを得 た。シリカ上におけるクロマトグラフィー（１〜５％メタノール／ＤＣＩＩ）に よる精製により４．０８９のＮ４−ｉ−ブチリル−Ｏｇ−（４−ニトロフェネチ ル）−５’−０−ｐ−）ルエンスルホニルー２′−デオキシグアノシンを白色の 泡状物として得た。

（３００１１Ｈｚ、　２０％ｄａ−ＤＩＩＳＯ）６１０．３４（ｂｒ、ＩＨ）、 ８．２４（ｓ。

ＬＨ）、　８．１９（ｄ、２Ｈ，Ｊ＝８＋１ｚ）、　７．６７（ｄ、２Ｈ，Ｊ＝ ８Ｈｚ）、　７．６１（ｄ、２Ｈ。

Ｊ＝８Ｈｚ）、　７．２２（ｄ、２ＨＪ＝８Ｈｚ）、　６Ｊ８（ｔ、ＩＩＩ、Ｊ ＝７Ｈｚ）、　５．４６（ｄ。

１１１１、　Ｊ＝５■ｚ）、４．８２（ｔ、２１１４＝７Ｈｚ）、　４．６４（ ｍ、１■）、　４．３３（ｄｄｄ。

２■、Ｊ＝２６．１２．Ｈｚ）、３．９７（＋、ｌ■）、３．３５（ｔ、２１１ ．Ｊ＝７Ｈｚ）。

２．８２（１，２１１）、　２．２７（ｓ、３Ｈ）、１．１２（ｄ、３■、Ｊ＝ ７■Ｚ）、１．１０（ｄ。

３Ｂ、　Ｊ＝７Ｈｚ）。

２１ｍ１の無水り訂中における４、　０８９　（６，３５ミリモル）のＮ。

−１−ブチリル−ｏｓ−（４−ニトロフェネチル）−５’−０−ｐ−）ルエンス ルホニルー２′−デオキシグアノシンおよび４６７■９（９，５２ミリモル）の リチウムアジド（Ｋｏｄａｋ社製）の溶液を１００℃まで３時間加熱した。溶媒 を真空下で除去した。残留物を水およびＥｔＯＡｃに分配した。有機相をブライ ンで洗浄し、乾燥しそして蒸発させて３．９５９の粗生成物を得た。シリカ上に おけるクロマトグラフィー（１〜１０％メタノール／ＤＣＭ）による精製により 、極性の少ない物質が１．４７９と極性の多い物質が４１９■得られた。極性の 少ない物質の方は白色の泡状物で５′−アジド−Ｎ４−ｉ−ブチリル−Ｏじ（４ −ニトロフェネチル）−２’　、　５’−ジデオキシグアノシンであることがわ かった。

ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、　ｄ、−ＤＩＩＳＯ）６１０．４０（ｂｒ、１１１）、 　８．４１（ｓ、１１１）。

８．１８（ｄ、２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、　７．６４（ｄ、２Ｈ，Ｊ＝８１１ｚ）、 　６．３７（ｔ、ＩＨ，Ｊ＝７＋１ｚ）、　５．４６（ｄ、ＩＦＩ、Ｊ＝４Ｈｚ ）、　４．７９（ｔ、２Ｂ、Ｊ＝７Ｈｚ）、　４．６３（ｍ。

ＬＨ）、　３．９７（ｍ、ＬＨ）、　３．８６（ｄｄ、１１１．Ｊ＝１３．８■ ｚ）、３．５３（ｄｄ、　Ｈｌ。

Ｊ＝１３．５ｔｌｚ）、　３．３６（ｔ、２ｔｌ、Ｊ＝７Ｈｚ）、　３．０５（ ｍ、ＩＨ）、　２．８４（ｍ。

ＩＨ）、　２．２８（ｄｄｄ、ＩＢｊ＝１４．６．３１１ｚ）、　１−１２（ｄ 、６ＨＪ＝８Ｈｚ）。

５′−アジド−Ｎ６−ペンゾイルー３’−０−ｔ−ブチルジメチルシリル−２’ 、５’−ジデオキシシチジンと同様にして、１．４７ｇ（２，８７ミリモル）の ５′−アジド−Ｎ４−ｉ−ブチリル−０６−（４−ニトロフェネチル）　−２’ 、５’−ジデオキシグアノシン、０．６５１（４，３ミリモル）のｔ−ブチルジ メチルシリルクロライド、０．３９９　（５，７ミリモル）のイミダゾールおよ びｌＱｗｌの無水ＤＩＩＦを使用して、シリカ上におけるクロマトグラフィー処 理（１０％ＥｔＯ＾ｃ／ＤＣＭ）の後１、４９９の５′−アジド−３’−ｏ−ｔ −ブチルジメチルシリル−Ｎ、−ｉ−ブチリル−ｏ、−（４−ニトロフェネチル ）−２’、５’−ジデオキシグアノシンを白色の泡状物として得た。

Ｎ１１Ｒ（３００１！Ｉ’ｌｚ、　ｄａ−ＤＭＳＯ）δ１０．４０（ｂｒ、ＩＨ ）、８．４０（ｓ、１１１）。

８、１８（ｄ、　２■、Ｊ＝９Ｈｚ）、７．６５（ｄ、２Ｂ、Ｊ＝９Ｈｚ）、６ ．３５（ｔ、１！Ｉ、Ｊ＝７Ｈｚ）、４．７８（ｔ、２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、４． ７３（ｍ、ＬＨ）、３．９４（ｍ、ＬＨ）。

３．８４（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ＝１３．８［１）、３−５６（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ＝１３ ．５Ｈｚ）、３．３１（ｔ。

２■、Ｊ＝７Ｈｚ）、３．１０（ｍ、ＬＨ）、２．８２（＋ａ、ＬＨ）、２．２ ９（ｍ、１■）。

１．１０（ｄ、６Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、０．８９（ｓ、９Ｈ）、０．１４（ｓ、３ Ｂ）、０．１２（ｓ。

３Ｈ）。

１０ｆｂｇ（０，１５９ミリモル）の５′−アジド−３’−０−ｔ−ブチルジメ チルシリル−Ｎ４−ｉ−ブチリル−ｏ、−（４−二トロフェネチル）　−２’、 ５’−ジデオキシグアノシン、０、０６４調Ｊ（０，６４ミリモル）の１．３− プロパンジチオール、０、０８９ｍ／（０，６４ミリモル）のトリエチルアミン および１寓ｌのメタノールの混合物を窒素下、室温で４日間撹拌した。

０、５ｍｌの酢酸を加えた後、反応混合物を真空下で濃縮した。シリカ上におけ るクロマトグラフィー（１〜１５％メタノール／ＤＣＩｇ）による精製により１ ２１ｍ＋９の酢酸塩の生成物を得た。この物質を飽和炭酸カリウムおよびＥｔＯ Ａｃに分配した。有機相を乾燥し、蒸発させて９１諺すの５′−アミノ−３’− ０−ｔ−ブチルジメチルシリル−Ｎ４−ｉ−ブチリル−ｏｓ−（４−ニトロフェ ネチル）　−２’、５’−ジデオキシグアノシンを得た。

ＮＭＲ（３００１１ｔｌｚ、　ＣＤＣＡｓ）δ８．１７（ｄ、２Ｈ，Ｊ＝８［Ｔ ｚ）、　７．９８（ｓ、１Ｂ）。

７．９０（ｂｒ、１ｆｌ）、　７．５２（ｄ、２■、Ｊ＝８■ｚ）、　６．２８ （ｔ、ＩＨＪ＝７Ｈｚ）。

４．８０（ｔ、２ｆ１．Ｊ＝７Ｈｚ）、　４．７１（ｉ、ＩＨ）、　３．９３（ ｑ、１１．Ｊ＝４Ｈｚ）。

３．３２（ｔ、２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、　３．［１４（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ＝１４．ｉ ｚ）、　２．９３（ｄｄ、ＩＨ。

Ｊ＝１４．６［１ｚ）、　２．８４（ｍ、１■）、　２．３９（ｍ、ｌ１１）、 １．２８（ｄ、６Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、　０．９３（ｓ、９Ｈ）、　０．１３（ｓ 、３Ｈ）、　０．１１（ｓ、３Ｈ）。

２翼ｌの集水ＤＣ１ｉ中における９０厘ｇ（０，１５ミリモル）の５′−アミノ −３’−０−ｔ−ブチルジメチルシリル−Ｎ４−ｉ−ブチリル−ｏ、−（４−ニ トロフェネチル）　−２’、５’−ジデオキシグアノシンの溶液を窒素下、室温 で０．１１ｍＪのクロロスルホニルアジド（ＩＭ／アセトニトリル）を加えなが ら撹拌した。１時間撹拌した後、溶液を半飽和ブラインおよびＥｔＯＡｃに分配 した。有機相をブラインで洗浄し、乾燥し、そして蒸発させた。残留物をシリカ 上におけるクロマトグラフィー（１〜３％メタノール／ＤＣＭ）により精製して １８ｍｇの３’−０−ｔ−ブチルジメチルシリル−Ｎ４−ｉ−ブチリル−０ｓ− （４−ニトロフェネチル）−５′−スルファモイルアジド−２’、５’−ジデオ キシグアノシンを得た。

ＮＭＲ（３００１１Ｈｚ、　ＣＤ（Ｊｓ）δ８．６７（ｂｒ、ＬＨ）、　８．４ ６（ｔ、ｉｌｌ、Ｊ＝６Ｈｚ）、８．１６（ｄ、２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．８１ （ｓ、ＩＨ）、７．５４（ｄ、２ＬＪ＝８ｆｌｚ）、６．１７（ｄｄ、ＬＨ，Ｊ ＝８．６Ｈｚ）、４．８７（ｍ、３Ｈ）、４．１７（ａ＋。

ＩＥ［）、３．５７（ｍ、１［１）、３．３４（ｔ、２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、２． ９８（１，ｌ１ｌ）。

２．６５（ｍ、１［１）、　２．２５（ｍ、ＩＨ）、　１．２７（ｄ、３Ｈ，Ｊ ＝７Ｈｚ）、　１．２６（ｄ。

３１１、　Ｊ＝７Ｈｚ）、　０．９３（ｓ、９１）、　０．１６（ｓ、３ｔｌ） 、　０．１４（ｓ、３Ｈ）。

実施例４ ３’−０−ｔ−ブチルジメチルシリル−５′−スルファモイルアジド−５′−デ オキシチミジンの製造１９（１＋１の無水ＤＭＦ中における２５．０９（９３， ６ミリモル）の５′−アジド−５′−デオキシチミジン（参考文献３６の記載に 従って製造することができる）　、２１．１９　（１４０ミリモル）のｔ−ブチ ルジメチルシリルクロライドおよび１：１７ｇ（１８７ミリモル）のイミダゾー ルの溶液を窒素下、室温で１８時間撹拌した。ＤＭＦを真空下で除去した。油状 物をエーテル（５００富Ｊ）およびｌＮＮａ０■（２Ｘ　３００ｍＪ）に分配し た。水相を氷で冷却し、６５０ｍ１のｌＮＨＣｌ！を加えた。生成物をＥｔＯＡ ｃ　（２Ｘ　７５０ｍ／）で抽出し、そして有機相をブラインで洗浄し、乾燥し 、蒸発させた。高真空下に２４時間放置すると、油状物が結晶化して２７．９ｑ の５′−アジド−３’−０−ｔ−ブチルジメチルシリル−５′−デオキシチミジ ンを白色の固形物を得た。

ＮＩＩＲ（３００ＭＨｚ、　ｄｓ−ＤＩＩＳＯ）６１１．３４（ｂｒ、１ｔｌ） 、　７．５０（ｓ、ＩＨ）。

６．１６（ｔ、１１１．Ｊ−７＋１ｚ）、４．３６（ｍ、１■）、３．８４（ｍ 、１■）、３．５５（ｍ。

２Ｈ）、　２．３４（ｍ、１Ｂ）、　２．０５（■、１１１）、　１．７９（ｓ 、３Ｈ）、　０．８６（ｓ。

９Ｈ）、　０．０８（ｓ、６［１）。

２００冨！のＥｔＯＡｃ中における１５．０９（３９，３ミリモル）の５′−ア ジド−３’−０−ｔ−ブチルジメチルシリル−５′−デオキシチミジンおよび４ ．０ｇの１０％Ｐｄ／Ｃの混合物を１気圧の水素下で４．５時間激しく撹拌した 。スラリーをメタノールで洗浄しながらセライトを通して濾過した。濾液を蒸発 させて１５５ｇの濃厚な油状物（溶媒を幾らか含む）を得た。サンプルをシリカ 上におけるクロマトグラフィー（２〜１０％メタノール／ＤＣ）ｌ）により精製 して純粋な５′−アミノ−３’−０−ｔ−ブチルジメチルシリル−５′−デオキ シチミジンを白色の固形物として得た。

ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、　δ６−ＤＭＳＯ）δ７．６４（ｓ、１１１）、　６． １３（ｄｄ、ＬＨ，Ｊ＝８．６Ｈｚ）、　４．３７（１，ＬＨ）、　３．６５（ １，１８）、　２．７８（ｉ、２Ｈ）、　２．２１（ａ＋。

１ｆｌ）、２．０１（ｄｄｄ、ＬＨ，Ｊ＝１２．６．４Ｈｚ）、１．７９（ｓ、 ３Ｈ）、０．８９（ｓ。

９Ｈ）、０．０８（ｓ、６Ｈ）。

１５０冨ｌのヘキサメチルジキシラザン（ＩＩＩＩＤＳ）中における５、　５２ ９の５′−アミノ−３’−０−ｔ−ブチルジメチルシリル−５′−デオキシチミ ジンおよび１６８ｍｖの硫酸アンモニウムの混合物を窒素下で加熱して溶解した 。室温で１８時間撹拌した後、スラリーを２時間８０℃まで加熱した。

ＨＭＤＳを真空下で除去して濃厚な油状物を得、これを窒素下で４５ｍ１の無水 アセトニトリル中に溶解した。この溶液を滴下ロートに加え、前もって０℃まで 冷却された１０ｗｒｌのクロロスルホニルアジド（ＩＭ／アセトニトリル）に２ ５分間かけて滴下した。添加後、冷浴を取り外し、混合物を１時間撹拌した。反 応混合物を２００ｍ１の半飽和ブラインに注ぎ込み、ＥｔＯ＾Ｃ（２Ｘ　２００ ｍ１）で抽出した。合一した有機相をブラインで洗浄し、乾燥し、そして蒸発さ せて５．２９ｇの固形物を得た。シリカ上におけるクロマトグラフィー（１〜５ ％メタノール／ＤＣＩＩ）による精製により３．７０９のかなり純粋な３’−０ −ｔ−ブチルジメチルシリル−５′−スルファモイルアジド−５′−デオキシチ ミジンを黄かっ色の泡状物として得た。

ＮＩＩＲ（３００１１Ｈｚ、　ＣＤＣ４’ｓ）δ８．５７（ｂｒ、ＬＨ）、　７ ．０２（ｓ、ＩＨ）、　６．８８（ｂｒ、ＬＨ）、　５．７５（ｔ、ＬＨ，Ｊ＝ ８Ｈｚ）、　４．４９（ｍ、ＩＨ）、４．０４（＋ｗ。

ｌ１ｌ）、　３．４８（ｍ、２Ｈ）、　２．７２（ｍ、１ｔｌ）、　２．１８（ ｉ＋、ＬＨ）、　１．９２（ｓ。

３１）、　、８９（ｓ、９Ｈ）、　、１１（履、６■）。

実施例５ ３’−０−アセチル−５′−スルファモイルアジド−５′−デオキシチミジンの 製造 １、０Ｏｖ（３，５３ミリモル）の５′−アミノ−３′−〇−アセチルー５′− デオキシチミジン（参考文献３８の記載に従って製造することができる）および ９４Ｍｇの硫酸アンモニウムの混合物を２０翼！のｔ１ＭＤｓ中において、窒素 下、室温で１８時間撹拌した。スラリーを２４時間ゆるやかに加熱（６０℃）し た。ＨＭＤＳを一７８℃でトラップ中に真空除去した。アセトニトリル（４（１ ＋＋Ａ’）を窒素下で加えて均一な溶液を得た。

５、　Ｏｗｌのクロロスルホニルアジド（１，０Ｍ／アセトニトリル）を反応に 加え、混合物を１．５時間撹拌した。水（５（１＋ｊりを加え、生成物をＥｔＯ Ａｃ　（２Ｘ　１５０＋＋／）で抽出した。有機相をブラインで洗浄し、乾燥し 、蒸発させて０．８９９の固形物を得た。シリカ上におけるクロマトグラフィー （１〜５％メタノール／ＤＣＭ）による精製により０．６４ｆ２の純粋な３′− 〇−アセチルー５′−スルファモイルアジド−５′−デオキシチミジンを泡状物 として得た。

ＮＭＲ（３００ＭＩｌｌｚ、　ｄｏ−ＤＩＩＳＯ）δＬ１．４０（Ｂｒ、１１Ｔ ）、　９．３１（Ｂｒ、ＩＨ）。

７．５９（ｓ、ＩＨ）、　６．１７（ｄｄ、ｌＨ，Ｊ＝７．５．６．５＋１ｚ） 、　５．１４（ｍ、ＬＨ）。

４．０３（ｍ、ＩＨ）、　３．４４（１１，２Ｈ）、　２．４７（＋、１■）、 　２．２５（ｏ＋、ＬＨ）。

２．０７（ｓ、：３０）、　１．８０（ｓ、３Ｈ）；　ＩＲ（ｆｉｌｍ）３２０ ０．２９２０．２８４０゜２１３５、　１７３０．　１６８５．１３６５．１２ ４０．　１１７０ｃｍ−’　；マススペクトル（ＦＡＢ）実測値３８８．９８ａ ＋／ｚ、計算値（Ｃ１Ｊ＋　ｅＮ＊ｏ□Ｓとして）　３８９．０８　（Ｍ＋Ｈ） 実施例６ ５′−ジメトキシトリチル−３′−スルファモイルアジド−３′−デオキシチミ ジンの製造 ２５翼！のエタノール中における２、　１７ｇの３′−アジド−３′−デオキシ チミジン（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）および０．９１９のｌＯ％Ｐｄ／Ｃのスラリー を１気圧の水素下で４時間激しく撹拌した。混合物をセライトを通して濾過し、 メタノールで洗浄し、そして濾液を蒸発させた。シリカ上におけるクロマトグラ フィー（２〜４０％メタノール／　ＤＣＭ）による精製により１．７２　ｑの３ ′−アミノ−３′−デオキシチミジンを明るい黄色の固形物として得た。

ＮＩＩＲ（３００１１Ｈｚ、　ｄ、−ＤＩＩＳＯ）６７．７６（ｓ、ＩＨ）、　 ６．０７（ｔ、Ｉｌｌ、Ｊ＝６Ｈｚ）、　４．９７（ｍ、１［１）、３．５−３ ．７（ｍ、　３■）、３．３９（ｑ、ＩＨ，Ｊ＝７Ｈｚ）、３．３３（ｂｒ、２ Ｈ）、１．９−２．１５（鳳、２Ｈ）、１．７７（ｓ、３［１）。

１０＠ｌのメタノール中における１、　０４ｇの３′−アミノ−３′−デオキシ チミジン、０．９０ｓ＋１のトリエチルアミンおよび１．５ｉのエチルトリフル オロアセテートの溶液を窒素下、室温で２０時間撹拌した。蒸発させることによ り生成物を得、これは精製することなしに使用した。サンプルをシリカ上におけ るカラムクロマトグラフィー（１〜２０％メタノール／ＤＣＭ）に付して純粋な ３′−トリフルオロアセアミド−３′−デオキシチミジンを得た。

ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、　ｄａ−ＤＭＳＯ）δ１１．３３（ｂｒｌＨ）、　９． ８４（ｂｒ、ＬＨ）。

７．７６（ｓ、ＩＨ）、６．２６（ｔ、ｔＨ，Ｊ＝７Ｈｚ）、　５．１５（ｔ、 ＩＨｊ＝５Ｈｚ）。

４．４７（ｍ、ＩＨ）、３．８９（ｍ、ＩＨ）、３．６（ｓ、２１１）、２２− ２７（，２Ｈ）。

１、７８（ｓ、　３Ｈ）。

ピリジン中における粗製３′−トリフルオロアセアミド−３′−デオキシチミジ ンの溶液に１．２■ｌのトリエチルアミン、０．１０ｇのＮ、Ｎ−ジメチルアミ ノピリジンおよび２．２ｇのジメトキシトリチルクロライドを窒素下で加えた。

１８時間撹拌した後、溶媒を蒸発させた。暗色の油状物を半飽和重炭酸塩および ＥｔＯＡｃに分配した。有機相をブラインで洗浄し、乾燥し、そして蒸発させた 。シリカ上におけるクロマトグラフィー（１〜７％メタノール／　ＤＣＭ）によ る精製により２．１８　ｑの純粋な５′−ジメトキシトリチル−３’−トリフル オロアセトアミド−３′−デオキシチミジンを黄色の固形物として得た。

ＮＭＲ（３０θＭＨｚ、　ＣＤＣら）６８．８９（ｂｒ、ＬＨ）、　８．３１（ ｄ、ＩＨ，Ｊ＝７Ｈｚ）、７．６５（ｓ、１［１）、　７．２−７．４５（ｍ、 ９Ｂ）、６．８４（ｄ、４１１．Ｊ＝９Ｈｚ）、　６．５１（ｔ、ＩＨ，Ｊ＝７ ＋１ｚ）、　４．７２（ｍ、ＦＨ）、　４．０９（ｍ、ＩＨ）。

３．７８（ｓ、６Ｂ）、　３．５３（■、２Ｈ）、　２．４５（ｓ、２ｆｌ）、 　１．６４（ｓ、３ｔｌ）。

メタノール中における１、　５４９の５′−ジメトキシトリチル−３′−トリフ ルオロアセトアミド−３′−デオキシチミジンの溶液を室温でアンモニアガスで 飽和した。反応容器を４日間密閉した。溶媒を蒸発させた後、残留物をシリカ上 におけるクロマトグラフィー（１〜１０％メタノール／　ＤＣＭ）により精製し て１．１７９の３′−アミノ−５’　−０−ジメトキシトリチル−３′−デオキ シチミジンを得た。

ＮＭＲ（３００１１Ｈｚ、　ｄ、−ＤＭＳＯ）δ７．５１（ｓ、ＬＨ）、７．２ −７．４５（ｍ。

９０）、　６．８８（ｄ、４Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、　６．１４（ｔ、ＩＯ，Ｊ＝６ Ｈｚ）、　３．７４（ｓ。

６１）、３．６８（ｍ、ＩＨ）、３．５０（ｑ、１■、Ｊ＝７Ｈｚ）、３．３３ （ｂｒ、２Ｈ）。

３．２１（ｍ、２１］）、２．２１（ｍ、ＩＨ）、２．０３（ｍ、ＩＨ）、１． ４７（ｓ、３１１）。

実施例４と同様にして、６０５重りの３′−アミノ−５′−〇−ジメトキシトリ チル−３′−デオキシチミジン、２０冨ｌのＨＩＩＤＳ、　０．７８ｍＡ’のク ロロスルホニルアジド（ＩＭ／アセトニトリル）および６ｔｌの無水アセトニト リルを使用して（１〜５％メタノール／ＤＣＭを用いるシリカ上での精製後）、 ２１７ｇｖの５′−ジメトキシトリチル−３′−スルファモイルアジド−３′− デオキシチミジンを明るいオレンジ色の固形物として得た。

！ＦＩＲ（３００）ＩＨｚ、ＣＤ（Ｊｓ）６７．５８（ｓ、ＩＨ）、７．２−７ ．４（ｍ、９ｇ）。

６．８５（ｄ、４Ｂ、Ｊ＝９Ｈｚ）、　６．５５（ｔ、１■、Ｊ−７Ｈｚ）、　 ４．３１（ｍ、１ｆｌ）。

４．２３（ｍ、ＩＥＩ）、　３．７８（ｓ、６Ｈ）、　３．５０（ｄｄ、１Ｂ、 Ｊ−１１，３Ｈｚ）、　３．３９（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ）、　２．４ ６（ｓ、２Ｈ）、　１．４７（ｓ、３Ｈ）。

実施例７ スルファメートの結合したダイマーｄ（ＡｓＴ）の製造７ｓ＋ｊ’の乾燥アセト ニトリル中における４８０ｍｖの実施例４で得られた化合物および４９３すのＮ ＠−ベンゾイル−５′−ジメトキシトリチル−２′−デオキシアデノシン（Ａｌ ｄｒｉｃｈ社製）の混合物を幾らかの４人モレキュラーシーブスと一緒に２時間 撹拌した。０．１７！のトリエチルアミンを反応に加え、そして１８時間撹拌し た。混合物を濾過し、蒸発させた。シリカ上におｔするクロマトグラフィー（１ 〜７％メタノール／　ＤＣＭ）による精製により６２１ｍｇの（ＤＭＴＯ）＾” ｓＴ（ＯＴＢＤＭＳ）を白色の固体として得た。

ＮＭＲ（３００ＭＩＨｚ、ｄａ−ＤＭＳＯ）δ１１．３３（ｓ、ＬＨ）、１１． ２３（ｂｒ、ＬＨ）。

８．５８（ｓ、ＩＨ）、８．５７（ｓ、ＩＨ）、８．５１（ｂｒ、ＩＨ）、８． ０５（＋、２Ｈ）。

７、５−７．７（ｍ、　４■）、７．３４（１１，２Ｈ）、７．２１（！１．７ ［１）、６．８０（ｄｄ、４１１゜Ｊ＝８．５Ｈｚ）、６．５２（ｔ、１１．Ｊ ＝７Ｈｚ）、６．１４（ｔ、Ｉｎ、Ｊ＝７Ｈｚ）、５．２８（＠、１１）、４． ３７（ｍ、２Ｈ）、３．８１（＋＊、１■）、３．７１（ｓ、６Ｈ）、３．２９ （ｍ。

４１）、３．１４（ｄｄ、１１１．ＪＪ７．５Ｈｚ）、２．７８（＋、ＩＨ）、 ２．２６（ｌｉ。

ＩＨ）、２．０４（ｍ、１］１）、１．７７（ｓ、３１１Ｉ）、０．８７（ｓ、 ９１）、０．０９（Ｓ。

６ｔｌ）。マススペクトル（ＦＡＢ）　１０７５．４７ｍ／ｚ（Ｍ　＋　Ｈ）　 、計算値（Ｃａ２Ｏｇ□Ｎ、０．　、ＳＳｉ　＋　Ｈとして）　１０７５．４０ ゜ＩＲ（Ｃ１ｌｚＣ１ｚ）３３ｇ０．　３１８０．　３０６０．　２９６０．　 ２９３０．　２８６０．　１６９５．　１６１０゜１５８５、　１５１０．　１ ３６０．　１１８０．１２５０ｃｍ−一完全に保護されたダイマーの（ＤｉｌＴ Ｏ）　Ａ”ｓＴ（ＯＴＢＤＭＳ）を１時間間隔での４つの等しいアリコートで全 部で５ｔｌの１Ｍフッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム／ＴＨＦ（Ａｌｄｒｉ ｃｈ社製）で処理した（ここで小さなＳはスルファメート結合を意味する）。最 後の添加が終了した後、反応混合物を１時間撹拌した。溶液を１Ｍリン酸二水素 ナトリウムおよび酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）に分配した。有機相をブラインで洗 浄し、乾燥し、そして蒸発させた。粗生成物をシリカ上におけるクロマトグラフ ィー（１〜７％メタノール／　ＤＣＭ）処理して４２０すの（ＤｉｌＴＯ）　Ａ ”５Ｔ（ＯＨ）を固形物として得た。

ＮＩＩＲ（３００Ｍｌｌｌｚ、　ｄｓ−ＤＭＳＯ）　Ｘ　１１．３１（ｂｒ、　 １Ｂ）、１１．２２（ｂｒ。

ＬＨ）、　８．５８（ｓ、２Ｈ）、　８．４７（ｂｒ、ＩＨ）、　８．０３（ｍ 、２Ｈ）、　７．４５−７．７（ｔ４Ｈ）、７．３４（ｍ、２１）、７．２０（ 蕩、７１１）、６．８１（ｄｄ、４１１．Ｊ＝８．５Ｈｚ）、６．５２（ｔ、Ｉ Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、６．１４（ｔ、月１．Ｊ−７Ｈｚ）、５．３９（ｄ。

Ｉｎ、Ｊ＝５Ｈｚ）、５．２９（１，ＩＨ）、４．３８（ｍ、２ｆｌ）、４．１ ７（ｍ、１ｆｉ）。

３．８０（ｍ、１１１）、３．７２（ｓ、６Ｈ）、３．３（＊、４Ｈ）、３．１ ４（ｍ、１１１１）。

２．７９（ｍ、ＩＨ）、２．４（ｍ、１■）、２．１５ＣＩ１．ＩＨ）、１．７ ６（ｓ、３■）。ＩＲ（ＫＢｒ）３４００．　３１８０．　３０５５．　２９５ ５．　２９３０．　２８３０．　１６９０゜１６１０、１５８０．１５１０．１ ３６０．１２５０．１１８０ｃｍ−’０？ススベクトル（ＦＡＢ）　９６１．６ ６ＣＭ＋Ｈ）　、計算値（Ｃ４８Ｈ４８Ｎ１０１　ｚｓ＋Ｈとして）９６１．０ ？。

５ｔｌのアセトニトリル中１こおける１０２冨９の（Ｄ）ＩＴＯ）＾”５Ｔ（０ １１）の溶液に０．２２ｓｊ！のジクロロ酢酸を加えた。オレンジ色の溶液を室 温で１５分間撹拌した。反応溶液を半飽和重炭酸塩中に注いだ後、生成物をＥｔ ＯＡｃ　（２ｘ　４０ｍｊ７）で抽出した。合一した有機相をブラインで洗浄し 、乾燥し、そして蒸発させた。シリカ上におけるクロマトグラフィー（１〜１０ ％メタノール／ＤＣＭ）による精製により６８りの（■０）＾”ｓＴ　（ＯＨ） を得た。

ＮＩＩＲ（３００１１Ｈｚ、　δ６−ＤＭＳＯ）δ１１．３３（ｂｒ、ＩＨ）、 １１．２６（ｂｒ。

Ｉｎ）、　８．７７（ｓ、１１１）、　８．７０（ｓ、１ｆｌ）、　８．４７（ ｂｒ、１１１）、　８．０６（ｄ。

２■、Ｊ＝８Ｈｚ）、　７．６６（ｔ、ＬＨ，Ｊ＝８Ｈｚ）、　７．５９（ｓ、 １ｔｌ）、　７．５５（ｄ。

２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、６．５２（ｔ、ＬＨ，Ｊ＝７Ｈｚ）、６．１８（ｔ、１１ １．Ｊ＝７Ｈｚ）。

５．４１（ｄ、ＩＢ、Ｊ＝５Ｈｚ）、　５．３２（ｔ、ＩＨ，Ｊ＝５Ｈｚ）、　 ５．２３（＋＊、ＨＩ）。

４．２５（ｍ、Ｈｌ）、　４．１９（ｍ、１■）、　３．８２（ｍ、１ｆｌ）、 　３．６５（ｍ、２Ｈ）。

３．０−３．３（＋＊、３Ｈ）、２．７８（論、ＩＨ）、２．０−２．３（ｍ、 ２Ｈ）、１．７９（ｓ。

３■）ｏ　ＩＲ（ＫＢｒ）３４２０．１６９０．１６２０．１５８５．１３６０ ．１１７５ｃｓＩ−’。

マススペクトル（ＦＡＢ）測定値６５９．２３（Ｍ　＋　Ｈ）　、計算値（Ｃｚ ７■ｓ。ＮｓＯ＋ｏＳ＋Ｈとして）　６５９．１９゜３慮ｌのメタノール中にお ける３１冨すの（ＨＯ）Ａ”５Ｔ（０■）のスラリーを室温においてアンモニア ガスで飽和した。反応を密閉し、４時間５５℃まで加熱した。溶媒を蒸発させた 。シリカ上におけるクロマトグラフィー（メタノール／　ＤＣＭグリシエンド） による精製により１９冨すのｄ（ＡｓＴ）を得た。

ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、　ｄ、−ＤＭＳＯ）δ〔部分スペクトル１８．３４（ｓ 。

ＩＨ）、　８．１４（ｓ、ＬＨ）、　７．３５（ｓ、ＬＨ）、　７．４１（ｂｒ 、２Ｈ）、　６．３７（ｄｄ。

ＩＩｌ、　Ｊ＝９．６■ｚ）、　６．１７（ｔ、ＩＨ，Ｊ＝７Ｈｚ）、　５．６ ７（ｂｒ、ＩＨ）、　５．３９（ｄ。

ＩＨ，Ｊ−５Ｈｚ）、　５．１８（ｍ、１Ｂ）、４．２（ｍ、２Ｈ）、　３．８ １（ｇ＋、ＩＨ）、　３．６３（ｉ、２１１）、　３．１９（ｍ、ＩＨ）、　３ ．０１（ｍ、１１１）、　２．６６（ｍ、ｌ１ｌ）、　２．１８（ｍ。

１１１）、　１．７８（ｓ、３Ｂ）。

実施例８ スルファメートエステルの結合したｄＡ−ヌクレオシドダイマーｄ（ＡｓＴ）の 製造 ０、５＊ｌのアセトニトリル中における５７ｍｐ（０，１０ミリモル）の実施例 １で得られた化合物および６５ｍｇ（０，１０ミリモル）のＮｓ−ベンゾイル− ５′−ジメトキシトリチル−２′−デオキシアデノシン（Ａｌｄｒｉｃｈ社製） の混合物を窒素下、室温で撹拌した。０．０２８ｓ＋１！（０，２ミリモル）を 加え、反応混合物を２０時間撹拌した。混合物を蒸発させ、シリカ上において精 製（１〜３％メタノール／ＤＣＩＩ）　シた後、８７りの完全に保護されたダイ マーの（ＤＩＴＯ）＾”ｓＡ”（ＯＴＢＤＩＩＳ）を得た。

ＮＭＲ（部分スペクトル）　（３００ＭＨｚ、　ｄｉ−ＤＭＳＯ）δ１１．２３ （ｂｒ。

２Ｈ）、８．６６（ｓ、ＩＨ）、８．６５（ｓ、ＬＨ）、８．５８（ｓ、ＬＨ） 、８．５６（ｓ。

１１１）、８．５６（ｂｒ、ＩＨ）、８．０４（ｄ、４１１．Ｊ＝８Ｈｚ）、７ ．５−７．７（＋ｓ。

６Ｈ）、７．１５−７．３５（ｍ、９Ｈ）、６．７７（ｄｄ、４１．Ｊ＝８．６ Ｈｚ）、６．５３（ｔ。

１［１，Ｊ＝７Ｈｚ）、６．４７（ｔ、ＩＨ，Ｊ＝７Ｈｚ）、５５−２７（、Ｉ Ｈ）、４．６４（ｍ。

ｌ■）、４．３４（ｍ、ｌ■）、４．０１（ｉ、ＬＨ）、３．６８（ｓ、６Ｈ） 、３．０２（＋ｗ。

１Ｂ）、２．７８（ｍ、ＬＨ）、２．３６（ｍ、ＩＨ）、０．９１（ｓ、９Ｈ） 、Ｏ，Ｌ５（ｓ。

６Ｈ）。

５１ｍａ（７）　（ＤＭＴＯ）　Ａ”ｓＡ”（ＯＴＢＤＩＩＳ）ヲＭ　素工、１ 　時間間隔での３つのアリコートで全部で１．５黛１の１Ｍフッ化テトラ−ｎ− ブチルアンモニウム／ＴＨＦを加えて処理した。

フッ化物試薬の最後の添加の終了後、反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応 溶液を１Ｍリン酸二水素ナトリウムおよびＥｔＯＡｃに分配した。有機相をブラ インで洗浄し、乾燥し、そして蒸発させた。シリカ上におけるカラムクロマトグ ラフィー（１〜６％メタノール／ＤＣＭ）による精製により３６膳９の純粋な（ ＤＩＴＯ）　ｄ（Ａｌ　ｘ　ＳＡ　ｌ　ｇ　）　（□Ｈ）を得た。

ＮＭＲ（３００ＭＩｌｚ、　ｄ、−ＤＭＳＯ）δ１１．２２（ｂｒ、２Ｈ）、　 ８．６７（ｓ、ＩＨ）。

８、６５（ｓ、　１■）、　８．５８（ｂｒ、２■）、　８．５４（ｂｒ、１■ ）、　８．０５（ｄ、４１１．Ｊ−７Ｈｚ、　７．５−７．７（ｍ、６Ｈ）、　 ７．３３（ｍ、２Ｂ）、　７．２（ｍ、７Ｈ）、　６．７９（ｄｄ。

４１１、Ｊ＝７Ｈｚ）、６．５２（ｔ、ＩＨ，Ｊ−７Ｈｚ）、　６．４７（ｔ、 １■、　Ｊ＝７Ｈｚ）。

５．５３（ｄ、ＬＨ，Ｊ＝５Ｈｚ）、　５．３７（ｍ、ＩＨ）、　４．４５（Ｉ ｌ、ＩＨ）、　４．３４（ａ＋。

ＩＦり、　４．０１（ｍ、ＩＨ）、　３．６９（ｓ、６Ｈ）、　３．１−３．５ （＋ｓ、５Ｈ（ｅｓｔ、））。

２、７−２．９５（ｓ、　２［１）；　２．３８（ｍ、　１■）。

２１１１９の（ＤＭＴＯ）　（＾”ｓＡ”）（ＯＨ）を密閉容器中、室温で３日 間、３富！の飽和ＮＯｘ／Ｎｅｏ■で処理した。溶媒を蒸発させ、その残留物を １＊ｌの８０％ｔｌＯＡｃ／水と一緒に室温で４５分間撹拌した。室温で真空ポ ンプ／回転蒸発器および水浴を用いて溶媒を蒸発した。ＨＰＬＣ［Ｃ８Ｒａ１ｎ ｉｎ　ｌＱｍｍＸ　２５ｃｍカラム（ガード付）、グラジェント＝１０〜６０％ ＭｅＯｔｌ／水（直線）、流速＝　３．５Ｎｌ／分、試料を２０％ＭｅＯＨ／水 に溶解した。６ｃは２１．２分で溶離した］により純粋なｄ（Ａｓ＾）が得られ た。

ＮＩＲ［部分スペクトル］（３００麗ｆｉｚ、　δ４−Ｍｅａｎ、すべての化学 シフトは３．３０のＭｅＯＥＩと相対的）δ８．２３（ｓ、ｌ１１）、８．２０ （ｓ。

ＩＩ）、　８．１９（ｓ、ＬＨ）、　８．１１（ｓ、ＬＨ）、　６゜３７（ｍ、 ２Ｈ）、　５．２２（ｄ、ＩＨ。

Ｊ＝６Ｈｚ）、４．５９（ｍ、１１１）、４Ｊ３（ｇ＋、１ｔ［）、４．１６（ ｄｄ、ＬＨ，Ｊ＝７．４ｔｌｚ）、　３．７４（ｄｑ、２Ｈ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ ）、　３．４７（ｍ、２１１）、　２．８５−３．０（ｍ、２１１）、　２．６ ９（ｄｄｄ、ＩＨ，Ｊ＝１３．６．１．５■Ｚ）、　２．３７（ｄｄｄ、ＩＨ。

Ｊ＝１３．６．３Ｈｚ）。

実施例９ リポヌクレオシドの２′−または３′−位に結合されたスルファメートを有する オリゴヌクレオチドＩ：（（Ｐｈ）３ＣＯ）　［ｒＵ］ｓＴ（ＯＴＢＤＭＳ）： ｌの製造 ２、５＊ｌの無水アセトニトリル中における２０１］＋ｇの５′−トリチルウリ ジン（ＳｉｇＩＩａ社製）および１８９ｇｗの３’−０−を−ブチルジメチルシ リル−５′−スルファモイルアンド−５′−デオキシチミジン（実施例４で得ら れたもの）の溶液に窒素下で０．　ｌｌ＋＋ｊ’のトリエチルアミンを加えた。

室温で２０時間撹拌した後、溶媒を蒸発させ、そして残留物をシリカ上における クロマトグラフィー（１〜７％メタノール／　ＤＣｌｌ）により精製して８１ｍ ｆの主生成物をＴＬＣ上で１点として得た。分析用ＨＰＬＣは５０：５０混合物 の生成物を示した。分取用１１１ＰＬＣ［ガード付Ｃ８１０ｘ　２５ｍｍカラム （Ｒａｉｎｉｎ）グラジェント：２５分間にわたって８０〜９０％のメタノール １０．１Ｍ重炭酸トリエチルアンモニウム、流速＝４ｍｌ／分、サンプル：１０ 〜１５ｍｇ／注入〕により純粋な（（Ｐｈ）３ＣＯ）［ｒＵ）ｓＴ（ＯＴＢＤＭ Ｓ）　（２’−位結合）および純粋な（（Ｐｈ）３ＣＯ）（ｒＵ）ｓＴ（ＯＴＢ ＤＭＳ）　（３’−位結合）が得られた。

２′−位結合：保持時間＝１６．６１分；　ＮＭＲ（３００Ｍｔｌｚ。

ｄ、−ＤＭＳＯ）δ１１．４７（ｂｒ、　１■）、　１１．３４（ｂｒ、ＩＨ） 、　８．３９（ｂｒ。

ＩＨ）、　７．６９（ｄ、ＩＨ，Ｊ＝８Ｈｚ）、　７．２５−７．４（ｍ、１５ Ｈ）、　６．１５（ｄｄ、１１１゜Ｊ＝７．６Ｈｚ）、　５．９３（ｄ、ＩＨ， Ｊ＝４Ｈｚ）、　５．７１（ｍ、１ｆｌ）、　５．４９（ｄ、ＬＨ。

Ｊ＝８Ｈｚ）、　５．０１（ｍ、ＬＨ）、　４．４２（ｔｌＨ）、　４．３６（ ｍ、ｌ１ｌ）、　３．９９（ｍ。

ＬＨ）、　３．７８（ｍ、１ｔｌ）、　３．２３（ｍ、２Ｈ）、　２．２５（ｍ 、ＩＨ）、　２．０３（ｍ。

ＩＨ）、　１７７（ｓ、３Ｈ）、　０．８７（ｓ、９１Ｔ）、　０．０９（ｓ、 ６Ｈ）。

３′−位結合：保持時間＝１８．１５分；　ＮＭＲ（３００ＭＩｌｚ。

ｄ、−ＤＭＳＯ）δ１１．４６（ｂｒ、ＩＨ）、　１１．３３（ｂｒ、ＩＨ）、 　８．３７（ｂｒ。

ｌ■）、　７．６５（ｄ、ＩＨ，Ｊ＝９■ｚ）、　７．３５−７．５（ｗ、１６ Ｈ）、　６．１３（ｄｄ、ＩＨ。

Ｊ＝８．６Ｈｚ）、　６．０７（ｂｒ、１１１）、　５．７９（ｄ、１ｔ１．Ｊ ＝６Ｈｚ）、　４．８７（ｍ。

ｌ１ｌ）、４．４７（＋ｓ、ＬＨ）、４．３４（ｉ、ＩＨ）、４．２９（ｍ、Ｉ Ｈ）、３．８０（ｍ。

ＬＨ）、　３．１−３．４（ｍ、７Ｈ）、　２．２４（Ｉｌ、ＩＨ）、　２．０ ３（ｍ、Ｌｌｌ）、　１．７６（ｓ、１■）、　０．８７（ｓ、９Ｈ）、　０． ０８（ｓ、６Ｈ）。

実施例１０ スルファメートエステルの結合したブロックダイマーホスホラミジット［（Ｄｌ ｌＴＯ）＾”５Ｔ（ＯＰ（ＯＣ１ｌ１２ＣＨ２ＣＮ）Ｎ（ｉＰｒｚ））］の製造 ２９４冨９の（ＤＩＩＴＯ）Ａ”５Ｔ（Ｏｌｌ）を３璽ｌの乾燥ＤＣ旧こ溶解し た後、１１６ｊＡ’の２−シアノエチルＮ、　Ｎ、　Ｎ’　、　Ｎ’−テトライ ソブロピルホスホロジアミジット（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）および３１＊９のジイ ソプロピルアンモニウムテトラゾリド塩（等量のテトラゾールとジイソプロピル アミンを混合することにより製造した）を加え、混合物を１時間撹拌した。ＴＬ Ｃ（１０％メタノール／　ＤＣＭ）によれば反応は完了していなかった。さらに ６０ｐｌの４ｄおよび１５すのテトラゾール塩を加え、撹拌をさらに１時間継続 した。反応溶液を半飽和重炭酸塩およびＥｔＯ＾Ｃに分配した。有機相をブライ ンで洗浄し、乾燥し、そして蒸発させた。生成物をシリカ上におけるクロマトグ ラフィー（０，５％ピリジンとともに１〜５％メタノール／ＤＣＭ）処理して４ ５２ｍ＋９の準純粋な（ＤＭＴＯ）＾’　”５Ｔ（ＯＰ（ＯＣＩＩＩｚＣＨｔＣ Ｎ）Ｎ（ｉＰｒｚ））を得た。この物質を３ｍＭのＤＣ旧こ溶解し、これを１５ ０ｍ１のペンタンに一７８℃で撹拌しながら加えた。沈殿物を濾過し、集めた。

この操作を１回繰り返した。乾燥ピリジン（２Ｘ）、次いで乾燥トルエンから白 色の固形物を蒸発させた。（ＤＭＴＯ）＾”　５Ｔ（ＯＰ（ＯＣｔｈＣｌｈＣＮ ）Ｎ（ｉＰｒｚ））を白色の固形物として得た（さらに精製することなしに用い た）。

”Ｐ　Ｎ１１Ｒ（３００１１Ｈｚ、ｄｓ−ＤＭＳＯ）δ１５１．１３３（ｓ）、 　１５０．５９６（ｓ）（１５−２１ｐｐａ＋における少量の不純物）　：　’ ＨＮＭＲ（３００１１ｔｌｚ。

ｄ、−ＤＭＳＯ）δ１１．３３（ｂｒ、ＬＨ）、　１１．２１（ｂｒ、ＩＨ）、 　８．５８（ｓ、２■）。

８．５２（ｂｒ、ＩＨ）、８．０３（ｍ、２Ｈ）、７．１−７．７（ｍ）、６． ８０（ｍ、４１１）。

６．５２（ｔ、ＩＨ，Ｊ＝７Ｈｚ）、６．１５（ｔ、ＬＨ１Ｊ＝７Ｈｚ）、５． １８（ｍ、ＩＨ）。

４．４６（ｍ、ＩＨ）、４．３７（ｍ、ＬＨ）、３．９−４．１（鳳）、２−８ ８（ｔ、２１１．Ｊ−６Ｈｚ）、２．７７（ｑ、２ｔｌ、Ｊ＝６［１ｚ）、２． ２（ｍ、ＩＨ）、１．７６（ｓ、３Ｈ）。

１、１７（１１）。マススペクトル（ＦＡＢ）測定値１１６１．７６（Ｍ　＋　 Ｈ）。

計算値（Ｃ５７Ｈ８５Ｎｌ。０．３ＰＳ＋Ｈとして）　１１６１．４３゜実施例 １１ 単一のスルファメート結合を有するオリゴデオキシリボヌクレオチドの製造 オリゴデオキシヌクレオチド”　ｄ（ＧＣＧＴＧＣＡＴＧＣ［ＡｓＴ）ＣＧＴＡ ＣＧ）”　（９ｃ）はＣ０ＤＥＲ自動ＤＮＡ合成器で１ミクロモルスケールでＸ の入口に置いた０、１Ｍアセトニトリル溶液中における（実施例１０で得られた ）ブロックダイマーホスホラミジット（（ＤＩＩＴＯ）Ａ”５Ｔ（ＯＰ（００ｂ ＧＨｚＣＮ）Ｎ（ｉＰｒｚ）））を用いての標準的なプロトコルにより合成した 。２７％水酸化アンモニウムを用いて１時間かけてゆつ（りと溶離しながらオリ ゴマーを固体の支持体から切断した。この溶液を密閉した容器に入れ、４時間５ ５℃まで加熱した。回転蒸発器で蒸発させた後、粗生成物を直線状グラジェント の５〜１５％アセトニトリル１０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ＴＥＡＡ ）を用いる■ＰＬＣ（Ｃ８カラム、　ｌＱｍｍＸ２５ｃ＋ｓ）により精製した。

油状の生成物を５０％エタノール／水から蒸発させて、白色の粉末を得た。精製 した生成物は９．００分の保持時間（Ｃ８分析用１０Ｃｍカラム、　１．０ｗ１ １分。

１５分間にわたる５〜２０％ＣＨ，ＣＮ１０．１Ｍ　ＴＥＡＡ）を有した。

５、０００ｓ　９ｃ／　ａｒｔの水（滅菌）を含むストック溶液を調製し、フリ ーザーに保存した。

実施例Ｉ２ 単一のスルファメート結合を有する１対のオリゴデオキシリボヌクレオチドのア ニーリング 使用した緩衝剤はｐＨ１７，００で、２００＋＊ＩＩの塩化ナトリウムおよびＱ 、　１ｍＭのＥＤＴＡを含む１ｂＭのリン酸ナトリウム水溶液である。参照用細 胞はこの緩衝剤を含んだ。相補的鎖（それぞれ１．５μＭ）を１５℃でアニール し、次に２６０ｎｍにおけるＵｖ吸収を温度が７５℃まで上昇（０，４℃／分） するにしたがって測定した。得られた融解曲線を図１に示す。ダイヤモンド形の 印はオリゴヌクレオチド対９ａ　：　９ｃ　（Ｔｏｌ＝６８℃と推定した）のデ ータであり、そして正方形の印はオリゴヌクレオチド対９ｂ　：　９ｄ　（Ｔｓ ＋＝　７２℃と推定した）のデータである〔オリゴヌクレオチド配列９ａ、　９ ｂおよび９ｄについては下記を参照〕。

実施例１３ 単一のスルファメート結合を有するオリゴデオキシリボヌクレオチドのエキソヌ クレアーゼ耐性の証明使用した酵素ストック溶液は１．８ユニツト／諺ｌの５ｖ Ｐ（ホスホジェステラーゼＩ、５１ｇ１ａ社製）および１４７ユニツト／ａｌｌ のＡＰ（アルカリ性ホスファターゼ、　Ｓｉｇｍａ社製）である。使用した緩衝 剤溶液はトリス（１００ｍ１１．　ｐＨ９）およびＭｇＣｈ　（５０１Ｍ）であ る。消化はｌ、　５ｍＭのエツペンドルフ管中において０．１絶対ユニツトの実 施例１４で得られた化合物を２５．６＋＋Ｊのトリス緩衡剤、　２７ｊｌのＭｇ （Ｊ、緩衝剤。

１０μｌのＳｖＰストック溶液および１３．６μｌのＡＰスト・ツク溶液ととも に３７℃で１８時間インキュベートすること薯こより行なった。次に、１０μ！ の２．５Ｍ酢酸ナトリウム、次０で２５０μｌのエタノールを加えた。３０分間 、−７８°まで冷却し、遠心分離（１２Ｋ　ｒｐｍ、　ＩＱ分）した後、上澄み 液をエタノールでｌ＋＋１に希釈して、再び遠心分離した。上澄み液を集め、高 速真空で蒸発させた。残留物をｌ、　Ｑｍｌの滅菌水に再溶解し、分析するまで に４°で保存した。図２ａｉ：ｄＣ。

Ｔ、　ｄＧおよびｄＡの標準混合物をＨＰＬＣクロマトグラムを示す。図２ｂに オリゴデオキシヌクレオチド９Ｃの長期の消化から得られた生成物混合物ＨＰＬ Ｃクロマトグラムを示す。

スルファメートエステル結合を有するＯＤＮが長時間消化される場合、ブロック ダイマーがそのまま現われることがわかる。別に合成した全体的に脱保護された ブロックダイマーｄ（ＡｓＴ）　（実施例１９参照）のサンプルのＨＰＬＣクロ マトグラムにより、〔八ｓＴ）とラベルしたピークが合成物質と同じ保持時間を 有することが確認された。このことはスルファメートエステル結合がエキソヌク レアーゼに対して非常に耐性があることを示している。

実施例１４ 単一のスルファメート結合を有するオリゴデオキシ１ノボヌクレオチドの二重鎖 のエンドヌクレアーゼ耐性の証明 オリゴヌクレオチド９ａは実施例Ｈ（９ｃ）の記載のようにして合成した。オリ ゴヌクレオチド９ｂおよび９ｄは当業者によく知られている標準方法により合成 した。追加の配列は次のようである： ９ａ　”ｄ（ＣＧＴＡＣＧＡＴＧＣ（ＡｓＴ）ＧＣＡＣＧＣ）”９ｂ　ｓ′ｄ（ ＣＧＴＡＣＧＡＴＧＣＡＴＧＣＡＣＧＣ）”９ｄ　”ｄ（ＧＣＧＴＧＣＡＴＧＣ ＡＴＣＧＴＡＣＧ）”４つのオリゴマー鎖９ａ〜９ｄ（１０〜１００ピコモル末 端）のそれぞれを、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼ（１０ユニツト）を用いてγ −”Ｐ　ＡＴＰ　（３０００ＣＬ／ミリモル）で５′−末端を標識した。鎖をフ ェノール：クロロホルム抽出、クロ０　ホ／Ｌ／ム抽出、エーテル抽出および２ 回連続のエタノール沈殿により精製した。過剰のＡＴＰを標準プロトコルに従っ てＮＡＣ３Ｐｒｅｐａｃカラム（ＢＲＬ社製）を用いて除去した。

５′−末端が標識された一重鎖オリゴマー（１２，ＯＯＯｃｐｍ、〜１ピコモル ）を５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ　（ｐＨ８，０）　、１ｈｌｌのＭｇＣ１，およ び１００ｍＭのＮａＣ１を含む１１＋ｉ’の緩衝剤中においてその未標識補体（ １０ピコモル）にアニールした。混合物を１５分間、８０℃まで加熱し、次いで ６０分間ゆっくりと室温まで冷却した。制限エンドヌクレアーゼＮｓｉ　Ｉ　（ １０ユニツト／ｌｘ／）および７ａｌの酵素反応緩衝剤をそれぞれのアニールし たサンプルに加えた。二重鎖ＤＮＡおよびＮ５ｉ１混合物を３７℃で６０分間放 置した。１０μｌの７．５Ｍ酢酸アンモニウム、１μｌのｔＲＮ＾および９０ｇ １の１００％エタノールを添加して、サンプルをエタノール沈殿した。サンプル を室温下、１４．００Ｏｒｐｍで１５分間遠心分離し、上澄み液を除去し、そし てＤＮＡベレットを真空乾燥した。サンプルを８０％脱イオン化ホルムアミド、 ０．１％キシレンシアツールおよび０．１％ブロモフェノールブルーを含む３μ ！のホルムアミド色素中で再び懸濁し、そして２０％変性ポリアクリルアミドゲ ル上にのせた。サンプルを２時間、２０００Ｖの電気泳動にかけた。釣５ルを一 ７０℃で８〜２４時間、Ｋｏｄａｋ　ＸＡＲフィルムにさらした。その結果を図 ３に示す。

レーン１および２はそれぞれ鎖９Ｃおよび９ｄにアニールされた鎖９ａを含み： レーン３および４はそれぞれ鎖９Ｃおよび９ｄにアニールされた鎖９ｂを含み： レーン５および６はそれぞれ鎖９ｂおよび９ａにアニールされた鎖９Ｃを含み、 レーン７および８はそれぞれ鎖９ｂおよび９ａにアニールされた鎖９ｄを含む。

−８−はスルファメート結合を示し、そして−Ｐ−はリン酸ジエステル結合を示 す。

実施例１５ ポリＵを用いたスルファメートの結合のＡ−ヌクレオシドダイマーのアニーリン グ 使用した緩衝剤は塩化マグネシウムおよびトリス（塩基）の１０ｍＭ溶液で、そ して０．１Ｍ　ＨＣＩでｐｔ１７．５に調整した。

参照用細胞はこの緩衝剤を含んだ。サンプル細胞は１．００ｍ１の緩衝剤中、０ ．６６０００ユニツトのポリＵ　（ＳｉｇＩＩｌａ社製）および０．３３００Ｄ ユニツトのｄ−ＡｓＡを含んだ。細胞を０．６℃で１時間平衡化し温度を１℃／ 分で傾斜させた。融解曲線を図４に示す。３５％の淡色効果を伴ないＴ１１は１ ５〜１８℃と推定した。その対応する天然のリン酸ジエステルダイマー、ｄ−Ａ ｐＡの報告された文献値は７．６℃である（参考文献２５）。本実施例により、 スルファメート結合（複数回）だけを含むオリゴデオキシヌクレオチドがハイブ リッド形成されてその相補的未修飾体となりうることおよびそのハイブリッドが より大きな安定性を有しうることが証明される。

実施例１６ リボヌクレオチドの２′−位または３′−位に結合された場合におけるスルファ メートの安定性の証明３ｍｌの２７％水酸化アンモニウム中における１諺すの３ ′−位に結合された（（Ｐｈ）３ＣＯ）　［ｒＵ］５Ｔ（ＯＴＢＤＩＩＳ）（実 施例９で得た）の溶液を密閉した容器中、室温で２４時間インキュベートした。

溶媒を蒸発させた。残留物をＨＰＬＣ［ガード付Ｃ１８Ｒａｌｎｉｎ分析用カラ ム（４，６＋＋＋ｍＸ２５ｃｍ）　、流速１．５ｍｌ／分および１５分間にわた る直線状グラジェントの８０〜９０％メタノール／水〕により分析した結果、１ ２−３７５分におけるピークの何れも２′−位に結合された（（Ｐｈ）３ＣＯ） 　（ｒＵ］５Ｔ（ＯＴＢＤＮＳ）　（保持時間１１．１１０分）に変換されたも のではない。２′−位に結合された（（Ｐｈ）３ＣＯ）　［ｒＵ）ｓＴ（ＯＴＢ ＤＭＳ）の１りのサンプルを同様に処理した場合もまた、平衡化はまったく見ら れなかった。このことはスルファメートの結合したオリゴリボヌクレオチド誘導 体が切断および移動に関して塩基安定性であることを証明している。

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Ｍ、Ｂｕｃｋ、Ｎｕｃｌ、Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、、１７．　４７６９−４７８２ 　（１９８９年）。

１３、Ｍ、Ｍａｔｓｕｋｕｒａ、Ｋ、５ｈｉｎｏｚｕｋａ、Ｇ、Ｚｏｎ、Ｈ，１ ｌｉｔｓｕｙａ。

Ｍ、　Ｒｅ１ｔｚ、　Ｊ、　Ｓ、　Ｃｏｈｅｎ、およびＳ、　Ｂｒｏｄｅｒ、　 Ｐｒｏｃ。

Ｎａ　ｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ、　８４．７７０６−７７１０　（１ ９８７年）。

１４、　Ｐ、Ｊ、Ｆｕｒｄｏｎ、Ｚ、Ｄｏｓ＋１ｎｓｋｉ、およびＲ，ＫａＬｅ 。

Ｎｕｃｌ、　Ａｃ１ｄｓ、　Ｒｅｓ、、１７．９１９３−９２０４　（１９８９ 年）。

１５、　Ｗ、　Ｋ、−Ｄ、　Ｂｒ１ｌＬ、　Ｊ、　−Ｙ、　Ｔａｎｇ、　Ｙ、　 −Ｘ、　Ｈａ、およびＭ、Ｂ、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ、Ｊ、Ａｍｅｒ、ＣｈｅＩｌ 、Ｓａｃ、、１１１゜２３２１−２３２２　（１９８９年）。

１６、Ｊ、　Ｍ、　Ｃｏｕｌｌ、　Ｄ、　’ｉ、　Ｃａｒｌｓｏｎ、およびＨ， Ｌ、　Ｗｅｉｔｈ。

Ｔｅｔ、　Ｌｅｔｔ、、２８．　７４５−７４８　（１９８７年）。

１７、　Ｅ、　Ｐ、　５ｔｉｒｃｈａｋ、　Ｊ、　Ｅ、　Ｓｕｓｍｅｒｔｏｎ、 およびり、　Ｄ。

冒ｅｌｌｅｒ、　Ｊ、　Ｏｒｇ、Ｃｈｅｗ、、５２．　４２０２−４２０６（１ ９８７年）。

１８、Ｓ、＾ｇｒａｗａ１．　１．　Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ、Ｍ、Ｐ、Ｃ１ｖｅｉ ｒａ、＾、ｉｌｌ。

Ｔｈｒｏｎｔｏｎ、　Ｐ、　Ｓ、　５ａｒｉｎ、およびＰ、Ｃ，Ｚａｍｅｃｎｉ ｋ。

Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ、Ｓｃｆ、ＵＳＡ、８５．　７０７９−７０８３　 （１９８８年）。

１９、Ｍ、＋１．　Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ、Ｗ、Ｋ　−Ｄ、Ｂｒ１ｌｌ、Ｙ、−Ｘ 、Ｈａ、ｊＳ、　Ｍａｒｓｈａｌｌ、　Ｊ、　Ｎ１ｅｌｓｅｎ、　Ｈ，Ｓａｓｍ ｏｒ、およびＪ。

−Ｙ、Ｔａｎｇ、Ｊ、Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、５ｕｐｐ、１３０．　１ ７（１９８９年）。

２０、１９８９年４月１６〜２１日に英国シェフイールドで開かれた’Ｒｅｃｏ ｇｎｉｔｉｏｎ　５ｔｕｄｉｅｓ　ｉｎ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ”の会議 においてＣ，Ｂｌｏｎｓｋｉにより提示されたポスター。

２１、　Ｄ、　Ａ、　Ｓｈｕｍａｎ、　Ｒ，に、　Ｒｏｂｉｎｓ、およびＭ、　 Ｊ、　Ｒｏｂｉｎｓ。

Ｊ、　Ａｍｅｒ、　ＣｈｅＩｌ、　Ｓｏｃ、、　９１．３３９１−３３９２　（ １９６９年）。

２２、　Ｇ、　Ｒ，Ｇｏｕｇｈ、　Ｄ、　Ｎ、　Ｎｏｂｂｓ、　Ｊ、　Ｃ，Ｍｉ ｄｄｌｅｔｏｎ、　Ｆ。

Ｐｅｎｇｌｉｓ−Ｃａｒｅｄｅｓ、および菖、Ｈ，Ｍａｇｕｉｒｅ、　１．　Ｗ ｅｄ。

Ｃｈｅｔａ、、２１．　５２０−５２５　（１９７８年）。

２３、　Ｋ、　ｌ５ｏｎｏ、　Ｍ、　Ｕｒａｍｏｔｏ、　Ｉｌ、　Ｋｕｓａｋａ ｂｅ、　Ｎ、　Ｍｉｙａｔａ。

Ｔ、　Ｋｏｙａｔａａ、　Ｍ、　ｔｌｂｕｋａｔａ、　Ｓ、　Ｋ−５ｅｔｈｉ、 およびＪ。

＾９ＭｃＣ１ｏｓｋｅｙ、　Ｊ、＾ｎｔｉｂｉｏｔ、、　３７．６７０−６７２ 　（１９８４年）ａ ２４、菫、Ｕｂｕｋａｔａ　およびに、ｌ５ｏｎｏ、Ｔｅｔ−Ｌｅｔｔ、、２７ ゜３９０７−３９０８　（１９８６年）。

２５、　Ｐ、　Ｓ、　１ｌｉｌｌｅｒ、　Ｋ、　Ｎ、　Ｆａｎｇ、　Ｎ、　Ｓ、 　Ｋｏｎｄｏ、およびＰ、　Ｏ，Ｐ、　Ｔｓ’ｏ、　Ｊ、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅ ｗ、　Ｓａｃ、、　９３．６６５７−６６６５　（１９７１年）。

２６、Ｃｈａｒａｃｈｏｎ、Ｇ、、５ｏｂｏｌ、Ｒ，盲、Ｂ１５ｂａｌ、Ｃ，。

５ａｌｅｈｚａｄａ、Ｔ、、５ｉｌｈｏｌ、　Ｍ、、　Ｃｈａｒｕｂｕｌａ、Ｒ ，。

Ｐｆｌｅｉｄｅｒｅｒ、　Ｗ、、　Ｌｅｂｌｅｕ、　Ｂ、および５ｕｈａｄｏｌ ｎｉｋ。

Ｂｉｏｃｈｅｔａｉｓｔｒｙ、　２９．２５５０−２５５５　（１９９０年）。

２７、　Ｚａａ＋ｅｃｎｉｋ、　Ｐ、　Ｒ−、Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ、　Ｊ、、　 Ｔａｇｕｃｈｆ、　Ｙ、および５ａｒｉｎ、　Ｐ、Ｓ、、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ ｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、　ＵＳＡ。

８３、　（１９８６年）　ｐｐ、　１０２８−１０３２゜２８、　ＩＴａｒｅｌ −Ｂｅｌｌａｎ、＾、　Ｆｅｒｒｆｓ、　Ｄ、　Ｋ、、　Ｖｉｎｏｃｏｕｒ、　 Ｍ、。

Ｍｏ１ｔ、　Ｊ、Ｔ、、およびＦａｒｒａｒ、　１．Ｌ、、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎ ｏｌ、。

１４０、（１９８８年）　２４３１−２４３５゜、２９．　Ｗａｌｄｅｒ、　Ｒ ，Ｙ、、およびＷａｌｄｅｒ、　Ｊ、　Ａ、、　（１９８８年）Ｐｒｏｃ、　Ｎ ａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＩＪｓ＾、　８５．　（１９８８年）、　５０ １１−５０１５゜ ３０、　Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　５ｔｒｕｃ ｔｕｒｅｓ、　（１９８４年）　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、　Ｎｅｗ　 Ｙｏｒｋ、　ｐｐ、　５１−１０４．１５９−２００゜ ３１、　Ｌａｍａｉｔｒｅ、Ｍ、、Ｂａｙａｒｄ、Ｂ、およびＬｅｂｌｅｗ、Ｂ 。

（１９８７年）　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ、８４． 　６４８−６５２゜ ３２、”Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：＾ｎｔｉｓｅｎｓｅ　 ｒｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆ　Ｇｅｎｅ　Ｅｘｐｅｒｓｓｉｏｎ”、　Ｔｏｐｉｃ ｓ　ｉｎ　１ｌｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｎｄＳｔｒｕｃｔｕｒａｌ　Ｂｉｏｌｏｇ ｙ　５ｅｒｉｅｓ、　ＣＲＣＰｒｅｓｓ　Ｉｎｃ、。

Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ、　Ｆｌｏｒｉｄａ　（１９８９年）。

３３、Ｓ、Ｂｅｎｎｅｒ、１０８９／１２０６０゜３４、　Ｐ、Ｓ、　Ｍｉｌ工 ｅｒ、　Ｊ、　Ｙａｎｏ、　Ｅ、Ｙａｎｏ、　Ｃ，Ｃａｒｒｏｌｌ、　Ｋ。

Ｊｏｙａｒａｍａｎ、およびＰ、Ｔｓｏ、Ｂｉｏｃｈｅ＋ｓ、、１８．　５１３ ４−５１４３　（１９７９年）。

３５、　Ｒ，Ｂ、　ｆａｒｉｎｇ、　Ｎｕｃｌ、＾ｃｉｄｓ　Ｒｅｓ、、１７． 　１０２８１−１０２９３　（１９８９年）。

３６、Ｉ、Ｙａｍａｍｏｔｏ、Ｍ、５ｅｋｉｎｅ、およびＴ、Ｈａｔａ、Ｊ。

Ｃｈｅｗ、　５ａｃ−、Ｐｅｒｋｉｎ　Ｔｒａｎｓ、！、　３０６−３１０（１ ９８０年）。

３７、　Ｃｈａｒｕｂａｌａ、　Ｕｈｌｍａｎｎ、　Ｂｅｔｅｒ、およびＰｆｌ ｅｉｄｅｒｅｒ。

５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　９６５　（１９８４年）。

３８、Ｔ、−３，Ｌｉｎ、Ｊ、Ｐｈａｒｍ、Ｓｃｉ、、７３．　１５６８−１５ ７０　（１９８４年）。

３９、　Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ：　Ａ　Ｐｒａ ｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ、Ｅｄ、ｂｙ　Ｍ、Ｊ、Ｇａ１ｔ、ＩＲＬ　Ｐｒ ｅｓｓ　Ｌｔｄ、。

ｆａｓｈｉｎｇｔｏｎ、　ＤＣ（１９８４年）。

図１ 融解曲線−１８マー　（ＮＳＩ　ｌ） 図２ａ 図３ 図４ ｄ　（ＡｓＡ）対ポリＵ 温度℃ 要　約　書 本発明は治療的潜在能力において興味のもたれる１またはそれ以上のヌクレオチ ド間リン酸ジエステル結合が硫黄をベースとする結合により置換された新規なオ リゴヌクレオチド類似体に関する。

閏１ｇ謹審謡専 ｌヤ１１＋１１１１＋ｌｌ　Ａ１１ｍ＋４Ｊ１４１１　Ｎ。ＰＣＴ／ＵＳ　９１ １０１０６６国際調査報告 ＵＳ　９１０１０６６ Ｓ＾　４５２２６

Claims (39)

【特許請求の範囲】
1. １．式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＡはＨ、ＯＨ、ＯＲ８、ＯＱまたはハロゲンであり、Ｂは天然由来の核 酸塩基または合成的に修飾された核酸塩基であり、 ＹはＲＮまたはＯであり、 ＺはＲ７ＮまたはＯであり、 ＭはＳ（＝Ｏ）＝Ｏ、Ｐ（＝Ｏ）−Ｏ−、Ｐ（＝Ｏ）−Ｓ−、Ｐ（＝Ｓ）−Ｓ− 、Ｐ（＝Ｏ）−ＯＲ３、Ｐ（＝Ｏ）−Ｒ９、Ｐ（＝０）−ＳＲ４またはＰ（＝Ｏ ）−ＮＲ５Ｒ６（ただし、少なくとも１個のＭはＳ（＝Ｏ）＝Ｏであり、そして ＭがＳ（＝Ｏ）＝Ｏである時、ＹおよびＺのうち１個だけがＯである）であり、 ｎは１またはそれより大きいものであり、ＲはＨまたはアルキルであり、 Ｒ１はＨ２ＰＯ３、Ｈ３Ｐ２Ｏ５、Ｈ４Ｐ３Ｏ７およびこれらの適当な塩、Ｈま たは保護基であり、 Ｒ２はＨ２ＰＯ３、Ｈ３Ｐ２Ｏ５、Ｈ４Ｐ３Ｏ７およびこれらの適当な塩、Ｈま たは保護基であり、 Ｒ３はアルキルまたはシアノエチルであり、Ｒ４はＨまたはアルキルであり、 Ｒ５はＨまたはアルキルであり、 Ｒ６はＨまたはアルキルであり、 Ｒ７はＨまたはアルキルであり、 Ｒ８はアルキルであり、 Ｒ９はアルキルまたはシアノエチルであり、そしてＱは保護基である） を有する化合物。
2. ２．ＭがＳ（＝Ｏ）＝Ｏであり、ＹまたはＺのうち１つがＲＮまたはＲ７Ｎであ り、そしてＲまたはＲ７がＨである請求項１記載の化合物。
3. ３．Ｒが５以下の炭素原子を有するアルキルである請求項１記載の化合物。
4. ４．Ｒ３が５以下の炭素原子を有するアルキルである請求項１記載の化合物。
5. ５．Ｒ４が５以下の炭素原子を有するアルキルである請求項１記載の化合物。
6. ６．Ｒ５が５以下の炭素原子を有するアルキルである請求項１記載の化合物。
7. ７．Ｒ６が５以下の炭素原子を有するアルキルである請求項１記載の化合物。
8. ８．Ｒ７が５以下の炭素原子を有するアルキルである請求項１記載の化合物。
9. ９．Ｒ８が５以下の炭素原子を有するアルキルである請求項１記載の化合物。
10. １０．Ｒ９が５以下の炭素原子を有するアルキルである請求項１記載の化合物。
11. １１．Ａ置換基が２′−位にある請求項１記載の化合物。
12. １２．ＡがＨまたはＯＨからなる群より選ばれる請求項１記載の化合物。
13. １３．Ｂがアデニン、グアニン、シトシン、チミンまたはウラシルである請求項 １記載の化合物。
14. １４．少なくとも１つのＭがＳ（＝Ｏ）＝Ｏであり、そして実質的に化合物の少 なくとも１つの末端の近くである請求項１記載の化合物。
15. １５．ＭがＳ（＝Ｏ）＝Ｏである請求項１記載の化合物。
16. １６．ＭがＳ（＝Ｏ）＝ＯまたはＰ（＝Ｏ）−Ｏ−である請求項１記載の化合物 。
17. １７．ＹまたはＺのうち１つがＲＮまたはＲ７Ｎであり、そしてＲまたはＲ７が Ｈである請求項１６記載の化合物。
18. １８．式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＡはＨ、ＯＨ、ＯＲ２、ＯＱまたはハロゲンであり、Ｂは天然由来の核 酸塩基または合成的に修飾された核酸塩基であり、 ＹはＲＮまたはＯであり、 ＺはＲ１ＮまたはＯであり、 Ｘは適当な脱離基であり、 Ｑは保護基であり、 ＲはＨまたはアルキルであり、 Ｒ１はＨまたはアルキルであり、そしてＲ２はアルキルである） を有する化合物。
19. １９．式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＡはＨ、ＯＨ、ＯＲ２、ＯＱまたはハロゲンであり、Ｂは天然由来の核 酸塩基または合成的に修飾された核酸塩基であり、 ＹはＲＮまたはＯであり、 ＺはＲ１ＮまたはＯであり、 Ｘは適当な脱離基であり、 Ｑは保護基であり、 ＲはＨまたはアルキルであり、 Ｒ１はＨまたはアルキルであり、そしてＲ２はアルキルである） を有する化合物。
20. ２０．Ｘがハライド、アジドおよびスルホネートからなる群より選択される請求 項１８または１９記載の化合物。
21. ２１．Ｒが５以下の炭素原子を有するアルキルである請求項１８または１９記載 の化合物。
22. ２２．Ｒ１が５以下の炭素原子を有するアルキルである請求項１７または１８記 載の化合物。
23. ２３．Ｒ２が５以下の炭素原子を有するアルキルである請求項１７または１８記 載の化合物。
24. ２４．請求項１８または１９記載の化合物をヒドロキシまたはアミノを含有する ヌクレオシド、ヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドと接触させることを含む 、ＭがＳ（＝Ｏ）＝Ｏである請求項１記載の化合物の製造法。
25. ２５．金属触媒が使用される請求項２４記載の方法。
26. ２６．式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＡはＨ、ＯＨ、ＯＲ４、ＯＱまたはハロゲンであり、Ｂは天然由来の核 酸塩基または合成的に修飾された核酸塩基であり、 ｎは少なくとも１であり、 Ｒ１はアルキルであり、 Ｒ２はジアルキルアミノ、モルホリノ、ピペリジノまたはピロリドノであり、 Ｒ３はアルキルであり、 Ｒ４はアルキルであり、 ＹはＲＮまたはＯであり、 ＺはＲＮまたはＯであり、 ＲはＨまたはアルキルであり、 Ｑは保護基であり、そして Ｖは保護基である） を有する化合物。
27. ２７．Ｖがジアノエチルまたはメチルである請求項２６記載の化合物。
28. ２８．ＱがＣ１〜Ｃ５−トリアルキルシリル、Ｃ１〜Ｃ５−アルキル、アシル、 シアノエチルまたはテトラヒドロピランからなる群より選択される請求項１、１ ８、１９または２６記載の化合物。
29. ２９．Ｒが５以下の炭素原子を有するアルキルである請求項２６記載の化合物。
30. ３０．Ｒ１が５以下の炭素原子を有するアルキルである請求項２６記載の化合物 。
31. ３１．Ｒ３が５以下の炭素原子を有するアルキルである請求項２６記載の化合物 。
32. ３２．Ｒ４が５以下の炭素原子を有するアルキルである請求項２６記載の化合物 。
33. ３３．請求項１記載の化合物を含有するアンチセンス試剤。
34. ３４．請求項１記載の化合物を含有する抗ウイルス剤。
35. ３５．請求項１記載の化合物を含有するハイブリッド形成プローブ。
36. ３６．請求項１記載の化合物を含有する三重鎖剤。
37. ３７．ＭがＳ（＝Ｏ）＝Ｏである場合にＹおよびＺの両方がＯである請求項１記 載の化合物を含有するアンチセンス試剤。
38. ３８．請求項３７記載の化合物を含有する抗ウイルス剤。
39. ３９．請求項３７記載の化合物を含有する三重鎖剤。