KR20210123299A - Il-2 콘쥬게이트 및 이의 사용 방법 - Google Patents

Il-2 콘쥬게이트 및 이의 사용 방법 Download PDF

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KR20210123299A
KR20210123299A KR1020217021917A KR20217021917A KR20210123299A KR 20210123299 A KR20210123299 A KR 20210123299A KR 1020217021917 A KR1020217021917 A KR 1020217021917A KR 20217021917 A KR20217021917 A KR 20217021917A KR 20210123299 A KR20210123299 A KR 20210123299A
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KR
South Korea
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seq
conjugate
amino acid
kda
conjugates described
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Application number
KR1020217021917A
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English (en)
Inventor
제로드 프타신
캐롤리나 이. 카파로
마르코스 밀라
Original Assignee
신톡스, 인크.
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Publication date
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    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/55—IL-2
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    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants

Abstract

하나 이상의 적응증의 치료에 유용한 인터류킨(IL) 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)를 포함하는 조성물, 키트 및 방법이 본원에 개시된다. 하나 이상의 인터류킨 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)를 포함하는 제약 조성물 및 키트가 또한 본원에 기술된다.

Description

IL-2 콘쥬게이트 및 이의 사용 방법
상호 참조
본 출원은 2019년 2월 6일자로 출원된 미국 가출원 제62/802,191호, 2019년 5월 14일자로 출원된 미국 가출원 제62/847,844호, 2019년 7월 3일자로 출원된 미국 가출원 제62/870,581호, 2019년 9월 11일자로 출원된 미국 가출원 제62/899,035호 및 2019년 11월 25일자로 출원된 미국 가출원 제62/940,173호의 이익을 주장하며, 이들 전부는 그 전체가 참고로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.　 2020년 3월 4일자로 생성된 상기 ASCII 사본은 명칭이 46085-729_601_SL.txt이며, 크기가 124,806 바이트이다.
서로 다른 T 세포 집단은 면역 항상성 및 관용을 유지하도록 면역계를 조절한다. 예를 들어, 조절 T(Treg) 세포는 병리학적 자가-반응성을 방지함으로써 면역계에 의한 부적절한 반응을 방지하는 반면, 세포독성 T 세포는 감염된 세포 및/또는 암세포를 표적화하고 파괴한다. 일부 예에서, 상이한 T 세포 집단의 조절은 질환 또는 적응증의 치료에 대한 옵션을 제공한다.
IL-2 콘쥬게이트에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 하기 화학식 I의 구조로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시된다:
[화학식 I]
Figure pct00001
여기서,
Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00002
이거나;
Y는 CH2이고 Z는
Figure pct00003
이거나;
Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00004
이거나; 또는
Y는 CH2이고 Z는
Figure pct00005
이며;
W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00006
를 갖는다
(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00007
이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, Y는 CH2이고 Z는
Figure pct00008
이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00009
이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00010
이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, Y는 CH2이고 Z는
Figure pct00011
이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 5 kDa, 10 kDa, 20 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 10 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 15 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 20 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 25 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 35 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 40 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 45 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 50 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 60 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69, 및 L72로부터 선택되며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 F42, E62, 및 P65로부터 선택되며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 K35이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 F42이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 F44이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 K43이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 E62이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 P65이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 R38이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 T41이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 E68이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 Y45이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 V69이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 L72이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물).
IL-2 콘쥬게이트에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 하기 화학식 I의 구조로 대체된 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시된다:
[화학식 I]
Figure pct00012
여기서,
Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00013
이거나;
Y는 CH2이고 Z는
Figure pct00014
이거나;
Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00015
이거나; 또는
Y는 CH2이고 Z는
Figure pct00016
이며;
W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00017
를 갖는다
(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00018
이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, Y는 CH2이고 Z는
Figure pct00019
이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00020
이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00021
이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, Y는 CH2이고 Z는
Figure pct00022
이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 5 kDa, 10 kDa, 20 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 10 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 15 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 20 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 25 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 35 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 40 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 45 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 50 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 60 kDa의 평균 분자량을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69, 및 L72로부터 선택되며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 F42, E62, 및 P65로부터 선택되며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 K35이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 F42이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 F44이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 K43이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 E62이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 P65이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 R38이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 T41이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 E68이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 Y45이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 V69이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 L72이며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물).
서열 번호 15~19 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, [AzK_PEG]는 하기 화학식 II 또는 화학식 III의 구조, 또는 화학식 II와 화학식 III의 조합을 갖는다:
[화학식 II]
Figure pct00023
[화학식 III]
Figure pct00024
여기서,
W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa으로부터 선택되는 평?? 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00025
를 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG]는 화학식 II와 화학식 III의 조합이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG]는 하기 화학식 II의 구조를 갖는다:
[화학식 II]
Figure pct00026
(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG]는 하기 화학식 III의 구조를 갖는다:
[화학식 III]
Figure pct00027
(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 선형 또는 분지형 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 선형 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 분지형 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 메톡시 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 메톡시 PEG 기는 선형 또는 분지형이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 메톡시 PEG 기는 선형이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 메톡시 PEG 기는 분지형이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 메톡시 PEG 기의 예시적인 구조는 실시예 2의 반응식 1의 mPEG-DBCO 구조에 예시되어 있다.
서열 번호 15, 16, 17, 18, 및 19 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG]는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 15, 16, 17, 18, 및 19 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG]는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 15, 16, 17, 18, 및 19 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG]는 10 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 15, 16, 17, 18, 및 19 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG]는 15 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 15, 16, 17, 18, 및 19 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG]는 20 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 15, 16, 17, 18, 및 19 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG]는 25 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 15, 16, 17, 18, 및 19 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG]는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 15, 16, 17, 18, 및 19 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG]는 35 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 15, 16, 17, 18, 및 19 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG]는 40 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 15, 16, 17, 18, 및 19 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG]는 45 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 15, 16, 17, 18, 및 19 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG]는 50 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 15, 16, 17, 18, 및 19 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG]는 60 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 15, 16, 17, 18, 및 19 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG]는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함하며, 여기서, PEG 기는 메톡시 PEG 기, 선형 메톡시 PEG 기, 또는 분지형 메톡시 PEG 기이다.
서열 번호 20~24 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, [AzK_PEG5kD]는 하기 화학식 II 또는 화학식 III의 구조, 또는 화학식 II와 화학식 III의 조합을 갖는다:
[화학식 II]
Figure pct00028
[화학식 III]
Figure pct00029
여기서,
W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00030
를 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG5kD]는 하기 화학식 II의 구조를 갖는다:
[화학식 II]
Figure pct00031
(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG5kD]는 하기 화학식 III의 구조를 갖는다:
[화학식 III]
Figure pct00032
(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물).
서열 번호 25~29 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, [AzK_PEG30kD]는 하기 화학식 II 또는 화학식 III의 구조를 갖거나, 또는 화학식 II 및 화학식 III의 구조의 조합이다.
[화학식 II]
Figure pct00033
[화학식 III]
Figure pct00034
여기서,
W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00035
를 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 26의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG30kD]는 하기 화학식 II의 구조를 갖는다:
[화학식 II]
Figure pct00036
(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 26의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_PEG30kD]는 하기 화학식 III의 구조를 갖는다:
[화학식 III]
Figure pct00037
(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 26의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물).
서열 번호 15~19 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, [AzK_PEG]는 화학식 II 및 화학식 III의 구조의 조합이다:
[화학식 II]
Figure pct00038
[화학식 III]
Figure pct00039
여기서,
W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00040
를 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG] 양을 포함함)의 비는 약 1:1이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG] 양을 포함함)의 비는 1:1 초과이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG] 양을 포함함)의 비는 1:1 미만이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 선형 또는 분지형 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 선형 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 분지형 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 메톡시 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 메톡시 PEG 기는 선형 또는 분지형이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 메톡시 PEG 기는 선형이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 메톡시 PEG 기는 분지형이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물).
서열 번호 20~24 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, [AzK_PEG5kD]는 화학식 II 및 화학식 III의 구조의 조합이다:
[화학식 II]
Figure pct00041
[화학식 III]
Figure pct00042
여기서,
W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00043
를 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG5kD] 양을 포함함)의 비는 약 1:1이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG5kD] 양을 포함함)의 비는 1:1 초과이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG5kD] 양을 포함함)의 비는 1:1 미만이다.
서열 번호 25~29 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, [AzK_PEG30kD]는 화학식 II 및 화학식 III의 구조의 조합이다:
[화학식 II]
Figure pct00044
[화학식 III]
Figure pct00045
여기서,
W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00046
를 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG30kD] 양을 포함함)의 비는 약 1:1이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG30kD] 양을 포함함)의 비는 1:1 초과이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG30kD] 양을 포함함)의 비는 1:1 미만이다.
서열 번호 40~44 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, [AzK_L1_PEG]는 하기 화학식 IV 또는 화학식 V의 구조, 또는 화학식 IV와 화학식 V의 조합을 갖는다:
[화학식 IV]
Figure pct00047
[화학식 V]
Figure pct00048
여기서,
W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa으로부터 선택되는 평?? 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00049
를 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG]는 화학식 IV와 화학식 V의 조합이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG]는 하기 화학식 IV의 구조를 갖는다:
[화학식 IV]
Figure pct00050
(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 40의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG]는 하기 화학식 V의 구조를 갖는다:
[화학식 V]
Figure pct00051
(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 40의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 선형 또는 분지형 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 선형 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 분지형 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 메톡시 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 메톡시 PEG 기는 선형 또는 분지형이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 메톡시 PEG 기는 선형이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 메톡시 PEG 기는 분지형이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 서열 번호 40, 41, 42, 43, 및 44 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG]는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 40, 41, 42, 43, 및 44 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG]는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 40, 41, 42, 43, 및 44 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG]는 10 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 40, 41, 42, 43, 및 44 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG]는 15 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 40, 41, 42, 43, 및 44 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG]는 20 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 40, 41, 42, 43, 및 44 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG]는 25 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 40, 41, 42, 43, 및 44 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG]는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 40, 41, 42, 43, 및 44 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG]는 35 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 40, 41, 42, 43, 및 44 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG]는 40 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 40, 41, 42, 43, 및 44 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG]는 45 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 40, 41, 42, 43, 및 44 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG]는 50 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 40, 41, 42, 43, 및 44 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG]는 60 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함한다. 서열 번호 40, 41, 42, 43, 및 44 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG]는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기를 포함하며, 여기서, PEG 기는 메톡시 PEG 기, 선형 메톡시 PEG 기, 또는 분지형 메톡시 PEG 기이다.
서열 번호 45~49 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, [AzK_L1_PEG5kD]는 하기 화학식 IV 또는 화학식 V의 구조, 또는 화학식 IV와 화학식 V의 조합을 갖는다:
[화학식 IV]
Figure pct00052
[화학식 V]
Figure pct00053
여기서,
W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00054
를 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG5kD]는 하기 화학식 IV의 구조를 갖는다:
[화학식 IV]
Figure pct00055
(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG5kD]는 하기 화학식 V의 구조를 갖는다:
[화학식 V]
Figure pct00056
(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물).
서열 번호 50~54 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, [AzK_L1_PEG30kD]는 하기 화학식 IV 또는 화학식 V의 구조를 갖거나, 또는 화학식 IV 및 화학식 IV의 구조의 조합이다:
[화학식 IV]
Figure pct00057
[화학식 V]
Figure pct00058
여기서,
W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00059
를 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG30kD]는 하기 화학식 IV의 구조를 갖는다:
[화학식 IV]
Figure pct00060
(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, [AzK_L1_PEG30kD]는 하기 화학식 V의 구조를 갖는다:
[화학식 V]
Figure pct00061
(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물).
서열 번호 40~44 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, [Azk_L1_PEG]는 화학식 IV 및 화학식 V의 구조의 조합이다:
[화학식 IV]
Figure pct00062
[화학식 V]
Figure pct00063
여기서,
W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00064
를 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_PEG] 양을 포함함)의 비는 약 1:1이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_PEG] 양을 포함함)의 비는 1:1 초과이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_PEG] 양을 포함함)의 비는 1:1 미만이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 선형 또는 분지형 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 선형 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 분지형 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, W는 메톡시 PEG 기이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 메톡시 PEG 기는 선형 또는 분지형이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 메톡시 PEG 기는 선형이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 메톡시 PEG 기는 분지형이다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물).
서열 번호 45~49 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, [AzK_L1_PEG5kD]는 하기 화학식 IV 및 화학식 V의 구조의 조합이다:
[화학식 IV]
Figure pct00065
[화학식 V]
Figure pct00066
여기서,
W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00067
를 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_ PEG5kD] 양을 포함함)의 비는 약 1:1이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_PEG5kD] 양을 포함함)의 비는 1:1 초과이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_PEG5kD] 양을 포함함)의 비는 1:1 미만이다.
서열 번호 50~54 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, [AzK_L1_PEG30kD]는 화학식 IV 및 화학식 V의 구조의 조합이다:
[화학식 IV]
Figure pct00068
[화학식 V]
Figure pct00069
여기서,
W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00070
를 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_PEG30kD] 양을 포함함)의 비는 약 1:1이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_PEG30kD] 양을 포함함)의 비는 1:1 초과이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_PEG30kD] 양을 포함함)의 비는 1:1 미만이다.
IL-2 콘쥬게이트에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 하기 화학식 VI 또는 VII의 구조, 또는 VI과 VII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시된다:
[화학식 VI]
Figure pct00071
[화학식 VII]
Figure pct00072
여기서,
N은 약 2 내지 약 5000의 범위의 정수이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00073
를 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VI 및 VII의 화합물에서의 n은 약 5 내지 약 4600, 또는 약 10 내지 약 4000, 또는 약 20 내지 약 3000, 또는 약 100 내지 약 3000, 또는 약 100 내지 약 2900, 또는 약 150 내지 약 2900, 또는 약 125 내지 약 2900, 또는 약 100 내지 약 2500, 또는 약 100 내지 약 2000, 또는 약 100 내지 약 1900, 또는 약 100 내지 약 1850, 또는 약 100 내지 약 1750, 또는 약 100 내지 약 1650, 또는 약 100 내지 약 1500, 또는 약 100 내지 약 1400, 또는 약 100 내지 약 1300, 또는 약 100 내지 약 1250, 또는 약 100 내지 약 1150, 또는 약 100 내지 약 1100, 또는 약 100 내지 약 1000, 또는 약 100 내지 약 900, 또는 약 100 내지 약 750, 또는 약 100 내지 약 700, 또는 약 100 내지 약 600, 또는 약 100 내지 약 575, 또는 약 100 내지 약 500, 또는 약 100 내지 약 450, 또는 약 100 내지 약 내지 약 350, 또는 약 100 내지 약 275, 또는 약 100 내지 약 230, 또는 약 150 내지 약 475, 또는 약 150 내지 약 340, 또는 약 113 내지 약 340, 또는 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 340 내지 약 795, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909, 또는 약 227 내지 약 1500, 또는 약 225 내지 약 2280, 또는 약 460 내지 약 2160, 또는 약 460 내지 약 2050, 또는 약 341 내지 약 1820, 또는 약 341 내지 약 1710, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 225 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1136, 또는 약 341 내지 약 1023, 또는 약 341 내지 약 910, 또는 약 341 내지 약 796, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 341 내지 약 568, 또는 약 114 내지 약 1000, 또는 약 114 내지 약 950, 또는 약 114 내지 약 910, 또는 약 114 내지 약 800, 또는 약 114 내지 약 690, 또는 약 114 내지 약 575의 범위이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VI 및 VII의 화합물에서의 n은 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, 및 4546으로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VI, 화학식 VII의 구조, 또는 화학식 VI과 VII의 조합의 위치는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택되며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 3에서의 위치와 관련된다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VI, 화학식 VII의 구조, 또는 화학식 VI과 VII의 조합의 위치는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택된다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VI, 화학식 VII의 구조, 또는 화학식 VI과 VII의 조합의 위치는 위치 K34에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VI, 화학식 VII의 구조, 또는 화학식 VI과 VII의 조합의 위치는 위치 F41에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VI, 화학식 VII의 구조, 또는 화학식 VI과 VII의 조합의 위치는 위치 F43에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VI, 화학식 VII의 구조, 또는 화학식 VI과 VII의 조합의 위치는 위치 K42에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VI, 화학식 VII의 구조, 또는 화학식 VI과 VII의 조합의 위치는 위치 E61에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VI, 화학식 VII의 구조, 또는 화학식 VI과 VII의 조합의 위치는 위치 P64에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VI, 화학식 VII의 구조, 또는 화학식 VI과 VII의 조합의 위치는 위치 R37에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VI, 화학식 VII의 구조, 또는 화학식 VI과 VII의 조합의 위치는 위치 T40에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VI, 화학식 VII의 구조, 또는 화학식 VI과 VII의 조합의 위치는 위치 E67에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VI, 화학식 VII의 구조, 또는 화학식 VI과 VII의 조합의 위치는 위치 Y44에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VI, 화학식 VII의 구조, 또는 화학식 VI과 VII의 조합의 위치는 위치 V68에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VI, 화학식 VII의 구조, 또는 화학식 VI과 VII의 조합의 위치는 위치 L71에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VI의 구조의 양:화학식 VII의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 약 1:1이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VI의 구조의 양:화학식 VII의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 1:1 초과이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VI의 구조의 양:화학식 VII의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 1:1 미만이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 VI 또는 화학식 VII의 구조, 또는 VI과 VII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택되고, n은 100 내지 약 1150, 또는 약 100 내지 약 1100, 또는 약 100 내지 약 1000, 또는 약 100 내지 약 900, 또는 약 100 내지 약 750, 또는 약 100 내지 약 700, 또는 약 100 내지 약 600, 또는 약 100 내지 약 575, 또는 약 100 내지 약 500, 또는 약 100 내지 약 450, 또는 약 100 내지 약 내지 약 350, 또는 약 100 내지 약 275, 또는 약 100 내지 약 230, 또는 약 150 내지 약 475, 또는 약 150 내지 약 340, 또는 약 113 내지 약 340, 또는 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 340 내지 약 795, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909, 또는 약 227 내지 약 1500, 또는 약 225 내지 약 2280, 또는 약 460 내지 약 2160, 또는 약 460 내지 약 2050, 또는 약 341 내지 약 1820, 또는 약 341 내지 약 1710, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 225 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1136, 또는 약 341 내지 약 1023, 또는 약 341 내지 약 910, 또는 약 341 내지 약 796, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 341 내지 약 568, 또는 약 114 내지 약 1000, 또는 약 114 내지 약 950, 또는 약 114 내지 약 910, 또는 약 114 내지 약 800, 또는 약 114 내지 약 690, 또는 약 114 내지 약 575의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VI 및 VII의 화합물에서의 n은 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, 및 4546으로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 VI 또는 VII의 구조, 또는 VI과 VII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 F41, F43, K42, E61, 및 P64로부터 선택되고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VI 및 VII의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 및 1249로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 VI 또는 VII의 구조, 또는 VI과 VII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 E61 및 P64로부터 선택되고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VI 및 VII의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 VI 또는 VII의 구조, 또는 VI과 VII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 E61이고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VI 및 VII의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 500 내지 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 550 내지 약 800이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 681이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 VI 또는 VII의 구조, 또는 VI과 VII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 P64이고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VI 및 VII의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 500 내지 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 550 내지 약 800이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 681이다.
IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 VI 또는 VII의 구조, 또는 VI과 VII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 1,000 Da 약 약 200,000 Da, 또는 약 2,000 Da 내지 약 150,000 Da, 또는 약 3,000 Da 내지 약 125,000 Da, 또는 약 4,000 Da 내지 약 100,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 100,000 Da, 또는 약 6,000 Da 내지 약 90,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 80,000 Da, 또는 약 8,000 Da 내지 약 70,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 70,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 65,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 60,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 6,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,500 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,500 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 9,500 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,500 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 30,000 Da의 범위가 되도록 하는 정수이다. IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 VI 또는 VII의 구조, 또는 VI과 VII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 5,000 Da, 약 7,500 Da, 약 10,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 약 50,000 Da, 약 60,000 Da, 약 70,000 Da, 약 80,000 Da, 약 90,000 Da, 약 100,000 Da, 약 125,000 Da, 약 150,000 Da, 약 175,000 Da 또는 약 200,000 Da이 되도록 하는 정수이다. IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 VI 또는 VII의 구조, 또는 VI과 VII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 5,000 Da, 약 7,500 Da, 약 10,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 또는 약 50,000 Da이 되도록 하는 정수이다.
IL-2 콘쥬게이트에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 하기 화학식 VIII 또는 IX의 구조, 또는 VIII과 IX의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시된다:
[화학식 VIII]
Figure pct00074
[화학식 IX]
Figure pct00075
여기서,
N은 약 2 내지 약 5000의 범위의 정수이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00076
를 갖는다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VIII 및 IX의 화합물에서의 n은 약 5 내지 약 4600, 또는 약 10 내지 약 4000, 또는 약 20 내지 약 3000, 또는 약 100 내지 약 3000, 또는 약 100 내지 약 2900, 또는 약 150 내지 약 2900, 또는 약 125 내지 약 2900, 또는 약 100 내지 약 2500, 또는 약 100 내지 약 2000, 또는 약 100 내지 약 1900, 또는 약 100 내지 약 1850, 또는 약 100 내지 약 1750, 또는 약 100 내지 약 1650, 또는 약 100 내지 약 1500, 또는 약 100 내지 약 1400, 또는 약 100 내지 약 1300, 또는 약 100 내지 약 1250, 또는 약 100 내지 약 1150, 또는 약 100 내지 약 1100, 또는 약 100 내지 약 1000, 또는 약 100 내지 약 900, 또는 약 100 내지 약 750, 또는 약 100 내지 약 700, 또는 약 100 내지 약 600, 또는 약 100 내지 약 575, 또는 약 100 내지 약 500, 또는 약 100 내지 약 450, 또는 약 100 내지 약 내지 약 350, 또는 약 100 내지 약 275, 또는 약 100 내지 약 230, 또는 약 150 내지 약 475, 또는 약 150 내지 약 340, 또는 약 113 내지 약 340, 또는 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 340 내지 약 795, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909, 또는 약 227 내지 약 1500, 또는 약 225 내지 약 2280, 또는 약 460 내지 약 2160, 또는 약 460 내지 약 2050, 또는 약 341 내지 약 1820, 또는 약 341 내지 약 1710, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 225 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1136, 또는 약 341 내지 약 1023, 또는 약 341 내지 약 910, 또는 약 341 내지 약 796, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 341 내지 약 568, 또는 약 114 내지 약 1000, 또는 약 114 내지 약 950, 또는 약 114 내지 약 910, 또는 약 114 내지 약 800, 또는 약 114 내지 약 690, 또는 약 114 내지 약 575의 범위이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VIII 및 IX의 화합물에서의 n은 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, 및 4546으로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VIII, 화학식 IX의 구조, 또는 화학식 VIII과 IX의 조합의 위치는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택되며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 3에서의 위치와 관련된다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VIII, 화학식 IX의 구조, 또는 화학식 VIII과 IX의 조합의 위치는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택된다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VIII, 화학식 IX의 구조, 또는 화학식 VIII과 IX의 조합의 위치는 위치 K34에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VIII, 화학식 IX의 구조, 또는 화학식 VIII과 IX의 조합의 위치는 위치 F41에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VIII, 화학식 IX의 구조, 또는 화학식 VIII과 IX의 조합의 위치는 위치 F43에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VIII, 화학식 IX의 구조, 또는 화학식 VIII과 IX의 조합의 위치는 위치 K42에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VIII, 화학식 IX의 구조, 또는 화학식 VIII과 IX의 조합의 위치는 위치 E61에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VIII, 화학식 IX의 구조, 또는 화학식 VIII과 IX의 조합의 위치는 위치 P64에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VIII, 화학식 IX의 구조, 또는 화학식 VIII과 IX의 조합의 위치는 위치 R37에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VIII, 화학식 IX의 구조, 또는 화학식 VIII과 IX의 조합의 위치는 위치 T40에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VIII, 화학식 IX의 구조, 또는 화학식 VIII과 IX의 조합의 위치는 위치 E67에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VIII, 화학식 IX의 구조, 또는 화학식 VIII과 IX의 조합의 위치는 위치 Y44에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VIII, 화학식 IX의 구조, 또는 화학식 VIII과 IX의 조합의 위치는 위치 V68에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 VIII, 화학식 IX의 구조, 또는 화학식 VIII과 IX의 조합의 위치는 위치 L71에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VIII의 구조의 양:화학식 IX의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 약 1:1이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VIII의 구조의 양:화학식 IX의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 1:1 초과이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VIII의 구조의 양:화학식 IX의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 1:1 미만이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 VIII 또는 IX의 구조, 또는 VIII과 IX의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택되고, n은 100 내지 약 1150, 또는 약 100 내지 약 1100, 또는 약 100 내지 약 1000, 또는 약 100 내지 약 900, 또는 약 100 내지 약 750, 또는 약 100 내지 약 700, 또는 약 100 내지 약 600, 또는 약 100 내지 약 575, 또는 약 100 내지 약 500, 또는 약 100 내지 약 450, 또는 약 100 내지 약 내지 약 350, 또는 약 100 내지 약 275, 또는 약 100 내지 약 230, 또는 약 150 내지 약 475, 또는 약 150 내지 약 340, 또는 약 113 내지 약 340, 또는 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 340 내지 약 795, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909, 또는 약 227 내지 약 1500, 또는 약 225 내지 약 2280, 또는 약 460 내지 약 2160, 또는 약 460 내지 약 2050, 또는 약 341 내지 약 1820, 또는 약 341 내지 약 1710, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 225 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1136, 또는 약 341 내지 약 1023, 또는 약 341 내지 약 910, 또는 약 341 내지 약 796, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 341 내지 약 568, 또는 약 114 내지 약 1000, 또는 약 114 내지 약 950, 또는 약 114 내지 약 910, 또는 약 114 내지 약 800, 또는 약 114 내지 약 690, 또는 약 114 내지 약 575의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VIII 및 IX의 화합물에서의 n은 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, 및 4546으로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 VIII 또는 IX의 구조, 또는 VIII과 IX의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 F41, F43, K42, E61, 및 P64로부터 선택되고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VIII 및 IX의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 및 1249로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 VIII 또는 IX의 구조, 또는 VIII과 IX의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 E61 및 P64로부터 선택되고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VIII 및 IX의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 VIII 또는 IX의 구조, 또는 VIII과 IX의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 E61이고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VIII 및 IX의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 500 내지 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 550 내지 약 800이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 681이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 VIII 또는 IX의 구조, 또는 VIII과 IX의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 P64이고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VIII 및 IX의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 500 내지 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 550 내지 약 800이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 681이다.
IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 VIII 또는 IX의 구조, 또는 VIII과 IX의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 1,000 Da 약 약 200,000 Da, 또는 약 2,000 Da 내지 약 150,000 Da, 또는 약 3,000 Da 내지 약 125,000 Da, 또는 약 4,000 Da 내지 약 100,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 100,000 Da, 또는 약 6,000 Da 내지 약 90,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 80,000 Da, 또는 약 8,000 Da 내지 약 70,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 70,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 65,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 60,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 6,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,500 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,500 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 9,500 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,500 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 30,000 Da의 범위가 되도록 하는 정수이다. IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 VIII 또는 IX의 구조, 또는 VIII과 IX의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 5,000 Da, 약 7,500 Da, 약 10,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 약 50,000 Da, 약 60,000 Da, 약 70,000 Da, 약 80,000 Da, 약 90,000 Da, 약 100,000 Da, 약 125,000 Da, 약 150,000 Da, 약 175,000 Da 또는 약 200,000 Da이 되도록 하는 정수이다. IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 VIII 또는 IX의 구조, 또는 VIII과 IX의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 5,000 Da, 약 7,500 Da, 약 10,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 또는 약 50,000 Da이 되도록 하는 정수이다.
IL-2 콘쥬게이트에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 하기 화학식 X 또는 XI의 구조, 또는 X과 XI의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시된다:
[화학식 X]
Figure pct00077
[화학식 XI]
Figure pct00078
여기서,
N은 약 2 내지 약 5000의 범위의 정수이며;
물결선은 대체되지 않은 서열 번호 3 내의 아미노산 잔기에 대한 공유 결합을 나타낸다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물).
일부 실시 형태에서, 화학식 X 및 화학식 XI 내의 키랄 중심의 입체화학은 라세미이거나, (R)이 풍부하거나, (S)가 풍부하거나, 실질적으로 (R)이거나, 실질적으로 (S)이거나, (R)이거나 (S)이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 X 및 화학식 XI 내의 키랄 중심의 입체화학은 라세미이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 X 및 화학식 XI 내의 키랄 중심의 입체화학은 (R)이 풍부하다. 일부 실시 형태에서, 화학식 X 및 화학식 XI 내의 키랄 중심의 입체화학은 (S)가 풍부하다. 일부 실시 형태에서, 화학식 X 및 화학식 XI 내의 키랄 중심의 입체화학은 실질적으로 (R)이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 X 및 화학식 XI 내의 키랄 중심의 입체화학은 실질적으로 (S)이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 X 및 화학식 XI 내의 키랄 중심의 입체화학은 (R)이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 X 및 화학식 XI 내의 키랄 중심의 입체화학은 (S)이다.
본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 X 및 XI의 화합물에서의 n은 약 5 내지 약 4600, 또는 약 10 내지 약 4000, 또는 약 20 내지 약 3000, 또는 약 100 내지 약 3000, 또는 약 100 내지 약 2900, 또는 약 150 내지 약 2900, 또는 약 125 내지 약 2900, 또는 약 100 내지 약 2500, 또는 약 100 내지 약 2000, 또는 약 100 내지 약 1900, 또는 약 100 내지 약 1850, 또는 약 100 내지 약 1750, 또는 약 100 내지 약 1650, 또는 약 100 내지 약 1500, 또는 약 100 내지 약 1400, 또는 약 100 내지 약 1300, 또는 약 100 내지 약 1250, 또는 약 100 내지 약 1150, 또는 약 100 내지 약 1100, 또는 약 100 내지 약 1000, 또는 약 100 내지 약 900, 또는 약 100 내지 약 750, 또는 약 100 내지 약 700, 또는 약 100 내지 약 600, 또는 약 100 내지 약 575, 또는 약 100 내지 약 500, 또는 약 100 내지 약 450, 또는 약 100 내지 약 내지 약 350, 또는 약 100 내지 약 275, 또는 약 100 내지 약 230, 또는 약 150 내지 약 475, 또는 약 150 내지 약 340, 또는 약 113 내지 약 340, 또는 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 340 내지 약 795, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909, 또는 약 227 내지 약 1500, 또는 약 225 내지 약 2280, 또는 약 460 내지 약 2160, 또는 약 460 내지 약 2050, 또는 약 341 내지 약 1820, 또는 약 341 내지 약 1710, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 225 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1136, 또는 약 341 내지 약 1023, 또는 약 341 내지 약 910, 또는 약 341 내지 약 796, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 341 내지 약 568, 또는 약 114 내지 약 1000, 또는 약 114 내지 약 950, 또는 약 114 내지 약 910, 또는 약 114 내지 약 800, 또는 약 114 내지 약 690, 또는 약 114 내지 약 575의 범위이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 X 및 XI의 화합물에서의 n은 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, 및 4546으로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 X 및 XI의 구조, 또는 화학식 X과 XI의 조합의 위치는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택되며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 3에서의 위치와 관련된다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 X 및 XI의 구조, 또는 화학식 X과 XI의 조합의 위치는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택된다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 X 및 XI의 구조, 또는 화학식 X과 XI의 조합의 위치는 위치 K34에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 X 및 XI의 구조, 또는 화학식 X과 XI의 조합의 위치는 위치 F41에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 X 및 XI의 구조, 또는 화학식 X과 XI의 조합의 위치는 위치 F43에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 X 및 XI의 구조, 또는 화학식 X과 XI의 조합의 위치는 위치 K42에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 X 및 XI의 구조, 또는 화학식 X과 XI의 조합의 위치는 위치 E61에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 X 및 XI의 구조, 또는 화학식 X과 XI의 조합의 위치는 위치 P64에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 X 및 XI의 구조, 또는 화학식 X과 XI의 조합의 위치는 위치 R37에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 X 및 XI의 구조, 또는 화학식 X과 XI의 조합의 위치는 위치 T40에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 X 및 XI의 구조, 또는 화학식 X과 XI의 조합의 위치는 위치 E67에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 X 및 XI의 구조, 또는 화학식 X과 XI의 조합의 위치는 위치 Y44에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 X 및 XI의 구조, 또는 화학식 X과 XI의 조합의 위치는 위치 V68에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 X 및 XI의 구조 또는 화학식 X과 XI의 조합의 위치는 위치 L71에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 X의 구조의 양:화학식 XI의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 약 1:1이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 X의 구조의 양:화학식 XI의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 1:1 초과이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 X의 구조의 양:화학식 XI의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 1:1 미만이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 X 또는 XI의 구조, 또는 X과 XI의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택되고, n은 100 내지 약 1150, 또는 약 100 내지 약 1100, 또는 약 100 내지 약 1000, 또는 약 100 내지 약 900, 또는 약 100 내지 약 750, 또는 약 100 내지 약 700, 또는 약 100 내지 약 600, 또는 약 100 내지 약 575, 또는 약 100 내지 약 500, 또는 약 100 내지 약 450, 또는 약 100 내지 약 내지 약 350, 또는 약 100 내지 약 275, 또는 약 100 내지 약 230, 또는 약 150 내지 약 475, 또는 약 150 내지 약 340, 또는 약 113 내지 약 340, 또는 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 340 내지 약 795, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909, 또는 약 227 내지 약 1500, 또는 약 225 내지 약 2280, 또는 약 460 내지 약 2160, 또는 약 460 내지 약 2050, 또는 약 341 내지 약 1820, 또는 약 341 내지 약 1710, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 225 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1136, 또는 약 341 내지 약 1023, 또는 약 341 내지 약 910, 또는 약 341 내지 약 796, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 341 내지 약 568, 또는 약 114 내지 약 1000, 또는 약 114 내지 약 950, 또는 약 114 내지 약 910, 또는 약 114 내지 약 800, 또는 약 114 내지 약 690, 또는 약 114 내지 약 575의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 VI 및 VII의 화합물에서의 n은 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, 및 4546으로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 X 또는 XI의 구조, 또는 X과 XI의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 F41, F43, K42, E61, 및 P64로부터 선택되고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 X 및 XI의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 및 1249로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 X 또는 XI의 구조, 또는 X과 XI의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 E61 및 P64로부터 선택되고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 X 및 XI의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 X 또는 XI의 구조, 또는 X과 XI의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 E61이고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 X 및 XI의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 500 내지 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 550 내지 약 800이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 681이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 X 또는 XI의 구조, 또는 X과 XI의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 P64이고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 X 및 XI의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 500 내지 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 550 내지 약 800이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 681이다.
IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 X 또는 XI의 구조, 또는 X과 XI의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 1,000 Da 약 약 200,000 Da, 또는 약 2,000 Da 내지 약 150,000 Da, 또는 약 3,000 Da 내지 약 125,000 Da, 또는 약 4,000 Da 내지 약 100,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 100,000 Da, 또는 약 6,000 Da 내지 약 90,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 80,000 Da, 또는 약 8,000 Da 내지 약 70,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 70,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 65,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 60,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 6,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,500 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,500 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 9,500 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,500 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 30,000 Da의 범위가 되도록 하는 정수이다. IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 X 또는 XI의 구조, 또는 X과 XI의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 5,000 Da, 약 7,500 Da, 약 10,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 약 50,000 Da, 약 60,000 Da, 약 70,000 Da, 약 80,000 Da, 약 90,000 Da, 약 100,000 Da, 약 125,000 Da, 약 150,000 Da, 약 175,000 Da 또는 약 200,000 Da이 되도록 하는 정수이다. IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 X 또는 XI의 구조, 또는 X과 XI의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 5,000 Da, 약 7,500 Da, 약 10,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 또는 약 50,000 Da이 되도록 하는 정수이다.
IL-2 콘쥬게이트에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 하기 화학식 XII 또는 XIII의 구조, 또는 XII와 XIII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시된다:
[화학식 XII]
Figure pct00079
[화학식 XIII]
Figure pct00080
여기서,
N은 약 2 내지 약 5000의 범위의 정수이며;
물결선은 대체되지 않은 서열 번호 3 내의 아미노산 잔기에 대한 공유 결합을 나타낸다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물).
일부 실시 형태에서, 화학식 XII 및 화학식 XIII 내의 키랄 중심의 입체화학은 라세미이거나, (R)이 풍부하거나, (S)가 풍부하거나, 실질적으로 (R)이거나, 실질적으로 (S)이거나, (R)이거나 (S)이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XII 및 화학식 XIII 내의 키랄 중심의 입체화학은 라세미이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XII 및 화학식 XIII 내의 키랄 중심의 입체화학은 (R)이 풍부하다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XII 및 화학식 XI 내의 키랄 중심의 입체화학은 (S)가 풍부하다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XII 및 화학식 XIII 내의 키랄 중심의 입체화학은 실질적으로 (R)이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XII 및 화학식 XIII 내의 키랄 중심의 입체화학은 실질적으로 (S)이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XII 및 화학식 XIII 내의 키랄 중심의 입체화학은 (R)이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XII 및 화학식 XIII 내의 키랄 중심의 입체화학은 (S)이다.
본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XII 및 XIII의 화합물에서의 n은 약 5 내지 약 4600, 또는 약 10 내지 약 4000, 또는 약 20 내지 약 3000, 또는 약 100 내지 약 3000, 또는 약 100 내지 약 2900, 또는 약 150 내지 약 2900, 또는 약 125 내지 약 2900, 또는 약 100 내지 약 2500, 또는 약 100 내지 약 2000, 또는 약 100 내지 약 1900, 또는 약 100 내지 약 1850, 또는 약 100 내지 약 1750, 또는 약 100 내지 약 1650, 또는 약 100 내지 약 1500, 또는 약 100 내지 약 1400, 또는 약 100 내지 약 1300, 또는 약 100 내지 약 1250, 또는 약 100 내지 약 1150, 또는 약 100 내지 약 1100, 또는 약 100 내지 약 1000, 또는 약 100 내지 약 900, 또는 약 100 내지 약 750, 또는 약 100 내지 약 700, 또는 약 100 내지 약 600, 또는 약 100 내지 약 575, 또는 약 100 내지 약 500, 또는 약 100 내지 약 450, 또는 약 100 내지 약 내지 약 350, 또는 약 100 내지 약 275, 또는 약 100 내지 약 230, 또는 약 150 내지 약 475, 또는 약 150 내지 약 340, 또는 약 113 내지 약 340, 또는 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 340 내지 약 795, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909, 또는 약 227 내지 약 1500, 또는 약 225 내지 약 2280, 또는 약 460 내지 약 2160, 또는 약 460 내지 약 2050, 또는 약 341 내지 약 1820, 또는 약 341 내지 약 1710, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 225 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1136, 또는 약 341 내지 약 1023, 또는 약 341 내지 약 910, 또는 약 341 내지 약 796, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 341 내지 약 568, 또는 약 114 내지 약 1000, 또는 약 114 내지 약 950, 또는 약 114 내지 약 910, 또는 약 114 내지 약 800, 또는 약 114 내지 약 690, 또는 약 114 내지 약 575의 범위이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XII 및 XIII의 화합물에서의 n은 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, 및 4546으로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XII 및 XIII의 구조, 또는 화학식 XII와 XIII의 조합의 위치는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택되며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 3에서의 위치와 관련된다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XII 및 XIII의 구조, 또는 화학식 XII와 XIII의 조합의 위치는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택된다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XII 및 XIII의 구조, 또는 화학식 XII와 XIII의 조합의 위치는 위치 K34에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XII 및 XIII의 구조, 또는 화학식 XII와 XIII의 조합의 위치는 위치 F41에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XII 및 XIII의 구조, 또는 화학식 XII와 XIII의 조합의 위치는 위치 F43에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XII 및 XIII의 구조, 또는 화학식 XII와 XIII의 조합의 위치는 위치 K42에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XII 및 XIII의 구조, 또는 화학식 XII와 XIII의 조합의 위치는 위치 E61에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XII 및 XIII의 구조, 또는 화학식 XII와 XIII의 조합의 위치는 위치 P64에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XII 및 XIII의 구조, 또는 화학식 XII와 XIII의 조합의 위치는 위치 R37에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XII 및 XIII의 구조, 또는 화학식 XII와 XIII의 조합의 위치는 위치 T40에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XII 및 XIII의 구조, 또는 화학식 XII와 XIII의 조합의 위치는 위치 E67에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XII 및 XIII의 구조, 또는 화학식 XII와 XIII의 조합의 위치는 위치 Y44에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XII 및 XIII의 구조, 또는 화학식 XII와 XIII의 조합의 위치는 위치 V68에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XII 및 XIII의 구조, 또는 화학식 XII와 XIII의 조합의 위치는 위치 L71에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XII의 구조의 양:화학식 XIII의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 약 1:1이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XII의 구조의 양:화학식 XIII의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 1:1 초과이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XII의 구조의 양:화학식 XIII의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 1:1 미만이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XII 또는 XIII의 구조, 또는 XII와 XIII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택되고, n은 100 내지 약 1150, 또는 약 100 내지 약 1100, 또는 약 100 내지 약 1000, 또는 약 100 내지 약 900, 또는 약 100 내지 약 750, 또는 약 100 내지 약 700, 또는 약 100 내지 약 600, 또는 약 100 내지 약 575, 또는 약 100 내지 약 500, 또는 약 100 내지 약 450, 또는 약 100 내지 약 내지 약 350, 또는 약 100 내지 약 275, 또는 약 100 내지 약 230, 또는 약 150 내지 약 475, 또는 약 150 내지 약 340, 또는 약 113 내지 약 340, 또는 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 340 내지 약 795, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909, 또는 약 227 내지 약 1500, 또는 약 225 내지 약 2280, 또는 약 460 내지 약 2160, 또는 약 460 내지 약 2050, 또는 약 341 내지 약 1820, 또는 약 341 내지 약 1710, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 225 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1136, 또는 약 341 내지 약 1023, 또는 약 341 내지 약 910, 또는 약 341 내지 약 796, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 341 내지 약 568, 또는 약 114 내지 약 1000, 또는 약 114 내지 약 950, 또는 약 114 내지 약 910, 또는 약 114 내지 약 800, 또는 약 114 내지 약 690, 또는 약 114 내지 약 575의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XII 및 XIII의 화합물에서의 n은 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, 및 4546으로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XII 또는 XIII의 구조, 또는 XII와 XIII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 F41, F43, K42, E61, 및 P64로부터 선택되고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XII 및 XIII의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 및 1249로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XII 또는 XIII의 구조, 또는 XII와 XIII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 E61 및 P64로부터 선택되고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XII 및 XIII의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XII 또는 XIII의 구조, 또는 XII와 XIII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 E61이고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XII 및 XIII의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 500 내지 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 550 내지 약 800이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 681이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XII 또는 XIII의 구조, 또는 XII와 XIII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 P64이고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XII 및 XIII의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 500 내지 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 550 내지 약 800이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 681이다.
IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XII 또는 XIII의 구조, 또는 XII와 XIII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 1,000 Da 약 약 200,000 Da, 또는 약 2,000 Da 내지 약 150,000 Da, 또는 약 3,000 Da 내지 약 125,000 Da, 또는 약 4,000 Da 내지 약 100,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 100,000 Da, 또는 약 6,000 Da 내지 약 90,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 80,000 Da, 또는 약 8,000 Da 내지 약 70,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 70,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 65,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 60,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 6,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,500 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,500 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 9,500 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,500 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 30,000 Da의 범위가 되도록 하는 정수이다. IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XII 또는 XIII의 구조, 또는 XII와 XIII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 5,000 Da, 약 7,500 Da, 약 10,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 약 50,000 Da, 약 60,000 Da, 약 70,000 Da, 약 80,000 Da, 약 90,000 Da, 약 100,000 Da, 약 125,000 Da, 약 150,000 Da, 약 175,000 Da 또는 약 200,000 Da이 되도록 하는 정수이다. IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XII 또는 XIII의 구조, 또는 XII와 XIII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 5,000 Da, 약 7,500 Da, 약 10,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 또는 약 50,000 Da이 되도록 하는 정수이다.
IL-2 콘쥬게이트에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 하기 화학식 XIV 또는 XV의 구조, 또는 XIV와 XV의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시된다:
[화학식 XIV]
Figure pct00081
[화학식 XV]
Figure pct00082
여기서,
m은 0 내지 20의 정수이며;
p는 0 내지 20의 정수이며;
N은 약 2 내지 약 5000의 범위의 정수이며;
물결선은 대체되지 않은 서열 번호 3 내의 아미노산 잔기에 대한 공유 결합을 나타낸다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물).
일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 화학식 XV 내의 키랄 중심의 입체화학은 라세미이거나, (R)이 풍부하거나, (S)가 풍부하거나, 실질적으로 (R)이거나, 실질적으로 (S)이거나, (R)이거나 (S)이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 화학식 XV 내의 키랄 중심의 입체화학은 라세미이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 화학식 XV 내의 키랄 중심의 입체화학은 (R)이 풍부하다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 화학식 XV 내의 키랄 중심의 입체화학은 (S)가 풍부하다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 화학식 XV 내의 키랄 중심의 입체화학은 실질적으로 (R)이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 화학식 XV 내의 키랄 중심의 입체화학은 실질적으로 (S)이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 화학식 XV 내의 키랄 중심의 입체화학은 (R)이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 화학식 XV 내의 키랄 중심의 입체화학은 (S)이다.
본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 0 내지 20, 또는 0 내지 18, 또는 0 내지 16, 또는 0 내지 14, 또는 0 내지 12, 또는 0 내지 10, 또는 0 내지 9, 또는 0 내지 8, 또는 0 내지 7, 또는 0 내지 6, 또는 0 내지 5, 또는 0 내지 4, 또는 0 내지 3, 또는 0 내지 2이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 0이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 1이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 2이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 3이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 4이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 5이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 6이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 7이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 8이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 9이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 10이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 11이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 12이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 13이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 14이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 15이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 16이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 17이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 18이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 19이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 20이다.
본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 0 내지 20, 또는 0 내지 18, 또는 0 내지 16, 또는 0 내지 14, 또는 0 내지 12, 또는 0 내지 10, 또는 0 내지 9, 또는 0 내지 8, 또는 0 내지 7, 또는 0 내지 6, 또는 0 내지 5, 또는 0 내지 4, 또는 0 내지 3, 또는 0 내지 2이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 0이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 1이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 2이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 3이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 4이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 5이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 6이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 7이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 8이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 9이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 10이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 11이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 12이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 13이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 14이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 15이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 m은 16이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 17이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 18이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 19이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 p는 20이다.
본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 n은 약 5 내지 약 4600, 또는 약 10 내지 약 4000, 또는 약 20 내지 약 3000, 또는 약 100 내지 약 3000, 또는 약 100 내지 약 2900, 또는 약 150 내지 약 2900, 또는 약 125 내지 약 2900, 또는 약 100 내지 약 2500, 또는 약 100 내지 약 2000, 또는 약 100 내지 약 1900, 또는 약 100 내지 약 1850, 또는 약 100 내지 약 1750, 또는 약 100 내지 약 1650, 또는 약 100 내지 약 1500, 또는 약 100 내지 약 1400, 또는 약 100 내지 약 1300, 또는 약 100 내지 약 1250, 또는 약 100 내지 약 1150, 또는 약 100 내지 약 1100, 또는 약 100 내지 약 1000, 또는 약 100 내지 약 900, 또는 약 100 내지 약 750, 또는 약 100 내지 약 700, 또는 약 100 내지 약 600, 또는 약 100 내지 약 575, 또는 약 100 내지 약 500, 또는 약 100 내지 약 450, 또는 약 100 내지 약 내지 약 350, 또는 약 100 내지 약 275, 또는 약 100 내지 약 230, 또는 약 150 내지 약 475, 또는 약 150 내지 약 340, 또는 약 113 내지 약 340, 또는 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 340 내지 약 795, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909, 또는 약 227 내지 약 1500, 또는 약 225 내지 약 2280, 또는 약 460 내지 약 2160, 또는 약 460 내지 약 2050, 또는 약 341 내지 약 1820, 또는 약 341 내지 약 1710, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 225 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1136, 또는 약 341 내지 약 1023, 또는 약 341 내지 약 910, 또는 약 341 내지 약 796, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 341 내지 약 568, 또는 약 114 내지 약 1000, 또는 약 114 내지 약 950, 또는 약 114 내지 약 910, 또는 약 114 내지 약 800, 또는 약 114 내지 약 690, 또는 약 114 내지 약 575의 범위이다.
본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 0 내지 6의 정수이며, p는 0 내지 6의 정수이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 1 내지 6의 정수이며, p는 1 내지 6의 정수이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 2 내지 6의 정수이며, p는 2 내지 6의 정수이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 2 내지 4의 정수이며, p는 2 내지 4의 정수이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 1이며, p는 2이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 2이며, p는 2이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 3이며, p는 2이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 4이며, p는 2이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 5이며, p는 2이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 6이며, p는 2이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 7이며, p는 2이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 8이며, p는 2이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 9이며, p는 2이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 10이며, p는 2이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 11이며, p는 2이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 11이며, p는 2이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 2이며, p는 2이며, n은 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다.
본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 n은 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, 및 4546으로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XIV 및 XV의 구조, 또는 화학식 XIV와 XV의 조합의 위치는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택되며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 3에서의 위치와 관련된다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XIV 및 XV의 구조, 또는 화학식 XIV와 XV의 조합의 위치는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택된다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XIV 및 XV의 구조, 또는 화학식 XIV와 XV의 조합의 위치는 위치 K34에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XIV 및 XV의 구조, 또는 화학식 XIV와 XV의 조합의 위치는 위치 F41에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XIV 및 XV의 구조, 또는 화학식 XIV와 XV의 조합의 위치는 위치 F43에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XIV 및 XV의 구조, 또는 화학식 XIV와 XV의 조합의 위치는 위치 K42에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XIV 및 XV의 구조, 또는 화학식 XIV와 XV의 조합의 위치는 위치 E61에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XIV 및 XV의 구조, 또는 화학식 XIV와 XV의 조합의 위치는 위치 P64에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XIV 및 XV의 구조, 또는 화학식 XIV와 XV의 조합의 위치는 위치 R37에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XIV 및 XV의 구조, 또는 화학식 XIV와 XV의 조합의 위치는 위치 T40에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XIV 및 XV의 구조, 또는 화학식 XIV와 XV의 조합의 위치는 위치 E67에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XIV 및 XV의 구조, 또는 화학식 XIV와 XV의 조합의 위치는 위치 Y44에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XIV 및 XV의 구조, 또는 화학식 XIV와 XV의 조합의 위치는 위치 V68에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XIV 및 XV의 구조, 또는 화학식 XIV와 XV의 조합의 위치는 위치 L71에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV의 구조의 양:화학식 XV의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 약 1:1이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV의 구조의 양:화학식 XV의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 1:1 초과이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV의 구조의 양:화학식 XV의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 1:1 미만이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XIV 또는 XV의 구조, 또는 XIV와 XV의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택되고, n은 100 내지 약 1150, 또는 약 100 내지 약 1100, 또는 약 100 내지 약 1000, 또는 약 100 내지 약 900, 또는 약 100 내지 약 750, 또는 약 100 내지 약 700, 또는 약 100 내지 약 600, 또는 약 100 내지 약 575, 또는 약 100 내지 약 500, 또는 약 100 내지 약 450, 또는 약 100 내지 약 내지 약 350, 또는 약 100 내지 약 275, 또는 약 100 내지 약 230, 또는 약 150 내지 약 475, 또는 약 150 내지 약 340, 또는 약 113 내지 약 340, 또는 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 340 내지 약 795, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909, 또는 약 227 내지 약 1500, 또는 약 225 내지 약 2280, 또는 약 460 내지 약 2160, 또는 약 460 내지 약 2050, 또는 약 341 내지 약 1820, 또는 약 341 내지 약 1710, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 225 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1136, 또는 약 341 내지 약 1023, 또는 약 341 내지 약 910, 또는 약 341 내지 약 796, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 341 내지 약 568, 또는 약 114 내지 약 1000, 또는 약 114 내지 약 950, 또는 약 114 내지 약 910, 또는 약 114 내지 약 800, 또는 약 114 내지 약 690, 또는 약 114 내지 약 575의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 n은 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, 및 4546으로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XIV 또는 XV의 구조, 또는 XIV와 XV의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 F41, F43, K42, E61, 및 P64로부터 선택되고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 및 1249로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XIV 또는 XV의 구조, 또는 XIV와 XV의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 E61 및 P64로부터 선택되고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XIV 또는 XV의 구조, 또는 XIV와 XV의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 E61이고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 500 내지 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 550 내지 약 800이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 681이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XIV 또는 XV의 구조, 또는 XIV와 XV의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 P64이고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 500 내지 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 550 내지 약 800이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 681이다.
IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XIV 또는 XV의 구조, 또는 XIV와 XV의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 1,000 Da 약 200,000 Da, 또는 약 2,000 Da 내지 약 150,000 Da, 또는 약 3,000 Da 내지 약 125,000 Da, 또는 약 4,000 Da 내지 약 100,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 100,000 Da, 또는 약 6,000 Da 내지 약 90,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 80,000 Da, 또는 약 8,000 Da 내지 약 70,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 70,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 65,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 60,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 6,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,500 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,500 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 9,500 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,500 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 30,000 Da의 범위가 되도록 하는 정수이다. IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XIV 또는 XV의 구조, 또는 XIV와 XV의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 5,000 Da, 약 7,500 Da, 약 10,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 약 50,000 Da, 약 60,000 Da, 약 70,000 Da, 약 80,000 Da, 약 90,000 Da, 약 100,000 Da, 약 125,000 Da, 약 150,000 Da, 약 175,000 Da 또는 약 200,000 Da이 되도록 하는 정수이다. IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XIV 또는 XV의 구조, 또는 XIV와 XV의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 5,000 Da, 약 7,500 Da, 약 10,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 또는 약 50,000 Da이 되도록 하는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XIV 또는 XV의 구조, 또는 XIV와 XV의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 F41, F43, K42, E61, 및 P64로부터 선택되고, m은 0 내지 6의 정수이며, p는 0 내지 6의 정수이며, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 2이며, p는 2이며, n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 및 1249로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XIV 또는 XV의 구조, 또는 XIV와 XV의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 E61 및 P64로부터 선택되고, m은 0 내지 6의 정수이며, p는 0 내지 6의 정수이며, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 2이며, p는 2이며, n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XIV 또는 XV의 구조, 또는 XIV와 XV의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 E61이고, m은 0 내지 6의 정수이며, p는 0 내지 6의 정수이며, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 2이며, p는 2이며, n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 500 내지 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 550 내지 약 800이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 681이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XIV 또는 XV의 구조, 또는 XIV와 XV의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 P64이고, m은 0 내지 6의 정수이며, p는 0 내지 6의 정수이며, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XIV 및 XV의 화합물에서, m은 2이며, p는 2이며, n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 500 내지 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 550 내지 약 800이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 681이다.
IL-2 콘쥬게이트에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 하기 화학식 XVI 또는 XVII의 구조, 또는 XVI과 XVII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시된다:
[화학식 XVI]
Figure pct00083
[화학식 XVII]
Figure pct00084
여기서,
m은 0 내지 20의 정수이며;
N은 약 2 내지 약 5000의 범위의 정수이며;
물결선은 대체되지 않은 서열 번호 3 내의 아미노산 잔기에 대한 공유 결합을 나타낸다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물).
일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 화학식 XVII 내의 키랄 중심의 입체화학은 라세미이거나, (R)이 풍부하거나, (S)가 풍부하거나, 실질적으로 (R)이거나, 실질적으로 (S)이거나, (R)이거나 (S)이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 화학식 XVII 내의 키랄 중심의 입체화학은 라세미이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 화학식 XVII 내의 키랄 중심의 입체화학은 (R)이 풍부하다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 화학식 XVII 내의 키랄 중심의 입체화학은 (S)가 풍부하다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 화학식 XVII 내의 키랄 중심의 입체화학은 실질적으로 (R)이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 화학식 XVII 내의 키랄 중심의 입체화학은 실질적으로 (S)이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 화학식 XVII 내의 키랄 중심의 입체화학은 (R)이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 화학식 XVII 내의 키랄 중심의 입체화학은 (S)이다.
본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 0 내지 20, 또는 0 내지 18, 또는 0 내지 16, 또는 0 내지 14, 또는 0 내지 12, 또는 0 내지 10, 또는 0 내지 9, 또는 0 내지 8, 또는 0 내지 7, 또는 0 내지 6, 또는 0 내지 5, 또는 0 내지 4, 또는 0 내지 3, 또는 0 내지 2이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 0이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 1이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 2이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 3이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 4이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 5이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 6이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 7이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 8이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 9이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 10이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 11이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 12이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 13이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 14이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 15이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 16이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 17이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 18이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 19이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 m은 20이다.
본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 n은 약 5 내지 약 4600, 또는 약 10 내지 약 4000, 또는 약 20 내지 약 3000, 또는 약 100 내지 약 3000, 또는 약 100 내지 약 2900, 또는 약 150 내지 약 2900, 또는 약 125 내지 약 2900, 또는 약 100 내지 약 2500, 또는 약 100 내지 약 2000, 또는 약 100 내지 약 1900, 또는 약 100 내지 약 1850, 또는 약 100 내지 약 1750, 또는 약 100 내지 약 1650, 또는 약 100 내지 약 1500, 또는 약 100 내지 약 1400, 또는 약 100 내지 약 1300, 또는 약 100 내지 약 1250, 또는 약 100 내지 약 1150, 또는 약 100 내지 약 1100, 또는 약 100 내지 약 1000, 또는 약 100 내지 약 900, 또는 약 100 내지 약 750, 또는 약 100 내지 약 700, 또는 약 100 내지 약 600, 또는 약 100 내지 약 575, 또는 약 100 내지 약 500, 또는 약 100 내지 약 450, 또는 약 100 내지 약 내지 약 350, 또는 약 100 내지 약 275, 또는 약 100 내지 약 230, 또는 약 150 내지 약 475, 또는 약 150 내지 약 340, 또는 약 113 내지 약 340, 또는 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 340 내지 약 795, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909, 또는 약 227 내지 약 1500, 또는 약 225 내지 약 2280, 또는 약 460 내지 약 2160, 또는 약 460 내지 약 2050, 또는 약 341 내지 약 1820, 또는 약 341 내지 약 1710, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 225 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1136, 또는 약 341 내지 약 1023, 또는 약 341 내지 약 910, 또는 약 341 내지 약 796, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 341 내지 약 568, 또는 약 114 내지 약 1000, 또는 약 114 내지 약 950, 또는 약 114 내지 약 910, 또는 약 114 내지 약 800, 또는 약 114 내지 약 690, 또는 약 114 내지 약 575의 범위이다.
본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 0 내지 6의 정수이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 1 내지 6의 정수이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 2 내지 6의 정수이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 2 내지 4의 정수이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 1이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 2이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 3이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 4이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 5이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 6이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 7이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 8이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 9이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 10이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 11이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 12이며, n은 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 2이며, n은 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 및 1137로부터 선택되는 정수이다.
본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 n은 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, 및 4546으로부터 선택되는 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XVI 및 XVII의 구조, 또는 화학식 XVI과 XVII의 조합의 위치는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택되며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 3에서의 위치와 관련된다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XVI 및 XVII의 구조, 또는 화학식 XVI과 XVII의 조합의 위치는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택된다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XVI 및 XVII의 구조, 또는 화학식 XVI과 XVII의 조합의 위치는 위치 K34에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XVI 및 XVII의 구조, 또는 화학식 XVI과 XVII의 조합의 위치는 위치 F41에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XVI 및 XVII의 구조, 또는 화학식 XVI과 XVII의 조합의 위치는 위치 F43에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XVI 및 XVII의 구조, 또는 화학식 XVI과 XVII의 조합의 위치는 위치 K42에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XVI 및 XVII의 구조, 또는 화학식 XVI과 XVII의 조합의 위치는 위치 E61에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XVI 및 XVII의 구조, 또는 화학식 XVI과 XVII의 조합의 위치는 위치 P64에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XVI 및 XVII의 구조, 또는 화학식 XVI과 XVII의 조합의 위치는 위치 R37에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XVI 및 XVII의 구조, 또는 화학식 XVI과 XVII의 조합의 위치는 위치 T40에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XVI 및 XVII의 구조, 또는 화학식 XVI과 XVII의 조합의 위치는 위치 E67에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XVI 및 XVII의 구조, 또는 화학식 XVI과 XVII의 조합의 위치는 위치 Y44에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XVI 및 XVII의 구조, 또는 화학식 XVI과 XVII의 조합의 위치는 위치 V68에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 서열 번호 3의 IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 XVI 및 XVII의 구조, 또는 화학식 XVI과 XVII의 조합의 위치는 위치 L71에 있다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI의 구조의 양:화학식 XVII의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 약 1:1이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI의 구조의 양:화학식 XVII의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 1:1 초과이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI의 구조의 양:화학식 XVII의 구조의 양(총 IL-2 콘쥬게이트 양을 포함함)의 비는 1:1 미만이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XVI 또는 XVII의 구조, 또는 XVI과 XVII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, 및 L71로부터 선택되고, n은 100 내지 약 1150, 또는 약 100 내지 약 1100, 또는 약 100 내지 약 1000, 또는 약 100 내지 약 900, 또는 약 100 내지 약 750, 또는 약 100 내지 약 700, 또는 약 100 내지 약 600, 또는 약 100 내지 약 575, 또는 약 100 내지 약 500, 또는 약 100 내지 약 450, 또는 약 100 내지 약 내지 약 350, 또는 약 100 내지 약 275, 또는 약 100 내지 약 230, 또는 약 150 내지 약 475, 또는 약 150 내지 약 340, 또는 약 113 내지 약 340, 또는 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 340 내지 약 795, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909, 또는 약 227 내지 약 1500, 또는 약 225 내지 약 2280, 또는 약 460 내지 약 2160, 또는 약 460 내지 약 2050, 또는 약 341 내지 약 1820, 또는 약 341 내지 약 1710, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 225 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1250, 또는 약 341 내지 약 1136, 또는 약 341 내지 약 1023, 또는 약 341 내지 약 910, 또는 약 341 내지 약 796, 또는 약 341 내지 약 682, 또는 약 341 내지 약 568, 또는 약 114 내지 약 1000, 또는 약 114 내지 약 950, 또는 약 114 내지 약 910, 또는 약 114 내지 약 800, 또는 약 114 내지 약 690, 또는 약 114 내지 약 575의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 n은 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, 및 4546으로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XVI 또는 XVII의 구조, 또는 XVI과 XVII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 F41, F43, K42, E61, 및 P64로부터 선택되고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 및 1249로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XVI 또는 XVII의 구조, 또는 XVI과 XVII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 E61 및 P64로부터 선택되고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XVI 또는 XVII의 구조, 또는 XVI과 XVII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 E61이고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 500 내지 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 550 내지 약 800이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 681이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XVI 또는 XVII의 구조, 또는 XVI과 XVII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 P64이고, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서의 n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 500 내지 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 550 내지 약 800이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 681이다.
IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XVI 또는 XVII의 구조, 또는 XVI과 XVII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 1,000 Da 약 200,000 Da, 또는 약 2,000 Da 내지 약 150,000 Da, 또는 약 3,000 Da 내지 약 125,000 Da, 또는 약 4,000 Da 내지 약 100,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 100,000 Da, 또는 약 6,000 Da 내지 약 90,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 80,000 Da, 또는 약 8,000 Da 내지 약 70,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 70,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 65,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 60,000 Da, 또는 약 5,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 6,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 7,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,500 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 8,500 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 9,500 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 9,500 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 10,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 15,000 Da 내지 약 30,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 50,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 45,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 40,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 35,000 Da, 또는 약 20,000 Da 내지 약 30,000 Da의 범위가 되도록 하는 정수이다. IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XVI 또는 XVII의 구조, 또는 XVI과 XVII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 5,000 Da, 약 7,500 Da, 약 10,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 약 50,000 Da, 약 60,000 Da, 약 70,000 Da, 약 80,000 Da, 약 90,000 Da, 약 100,000 Da, 약 125,000 Da, 약 150,000 Da, 약 175,000 Da 또는 약 200,000 Da이 되도록 하는 정수이다. IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XVI 또는 XVII의 구조, 또는 XVI과 XVII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, n은 PEG 모이어티의 분자량이 약 5,000 Da, 약 7,500 Da, 약 10,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 또는 약 50,000 Da이 되도록 하는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XVI 또는 XVII의 구조, 또는 XVI과 XVII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 F41, F43, K42, E61, 및 P64로부터 선택되고, m은 0 내지 6의 정수이며, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 2이며, n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 및 1249로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XVI 또는 XVII의 구조, 또는 XVI과 XVII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 E61 및 P64로부터 선택되고, m은 0 내지 6의 정수이며, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 2이며, n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XVI 또는 XVII의 구조, 또는 XVI과 XVII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 E61이고, m은 0 내지 6의 정수이며, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 2이며, n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 500 내지 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 550 내지 약 800이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 681이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학식 XVI 또는 XVII의 구조, 또는 XVI과 XVII의 조합으로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 대체되는 서열 번호 3에서의 아미노산 잔기는 P64이고, m은 0 내지 6의 정수이며, n은 약 450 내지 약 800, 또는 약 454 내지 약 796, 또는 약 454 내지 약 682, 또는 약 568 내지 약 909의 정수이다. 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서 화학식 XVI 및 XVII의 화합물에서, m은 2이며, n은 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 및 910으로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 500 내지 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 550 내지 약 800이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 681이다.
본원에 개시된 Il-콘쥬게이트의 유효량 및 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제를 포함하는 제약 조성물이 본원에 개시된다.
대상체에서 암을 치료하는 방법이 본원에 개시되며, 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에서의 암은 신장 세포 암종(RCC), 비소세포 폐암(NSCLC), 두경부 편평 세포 암(HNSCC), 고전적 호지킨 림프종(cHL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBCL), 요로상피 암종, 현미부수체 불안정 암, 현미부수체 안정 암, 위암, 자궁경부암, 간세포 암종(HCC), 메르켈 세포 암종(MCC), 흑색종, 소세포폐암(SCLC), 식도암, 교모세포종, 중피종, 유방암, 삼중 음성 유방암, 전립선암, 거세 저항성 전립선암, 전이성 거세 저항성 전립선암, DNA 손상 반응(DDR) 결함이 있는 전이성 거세 저항성 전립선암 , 방광암, 난소암, 중등도 내지 저 돌연변이 부담 종양, 피부 편평 세포 암종(CSCC), 편평 세포 피부암(SCSC), 저 발현 내지 비-발현 PD-L1 종양, 해부학적 원발 기원 부위를 넘어 간 및 CNS에 전신적으로 파종된 종양, 및 미만성 거대 B 세포 림프종으로부터 선택된다. 대상체에서 암을 치료하는 방법이 본원에 개시되며, 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에서의 암은 담관암종이다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에서의 암은 신장 세포 암종(RCC), 비소세포 폐암(NSCLC), 요로상피 암종 및 흑색종으로부터 선택된다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 이를 필요로 하는 대상체에게 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 5주에 1회, 6주에 1회, 7주에 1회 또는 8주에 1회 투여된다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 이를 필요로 하는 대상체에게 주 1회 또는 2주에 1회 투여된다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 이를 필요로 하는 대상체에게 주 1회 투여된다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 이를 필요로 하는 대상체에게 2주에 1회 투여된다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 혈관 누출 증후군을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 등급 2, 등급 3 또는 등급 4 혈관 누출 증후군을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 등급 2 혈관 누출 증후군을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 등급 3 혈관 누출 증후군을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 등급 4 혈관 누출 증후군을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 혈관 긴장도의 손실을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체의 혈관외 공간으로의 혈장 단백질 및 유체의 유출을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 저혈압 및 감소된 기관 관류를 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 손상된 호중구 기능을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 감소된 주화성을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 파종성 감염의 증가된 위험과 관련이 없다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 파종성 감염은 패혈증 또는 세균성 심내막염이다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 파종성 감염은 패혈증이다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 파종성 감염은 세균성 심내막염이다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체는 IL-2 콘쥬게이트의 투여 전에 임의의 기존 세균 감염에 대하여 치료를 받는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체는 IL-2 콘쥬게이트의 투여 전에 옥사실린, 나프실린, 시프로플록사신 및 반코마이신으로부터 선택되는 항균제로 치료를 받는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 자가면역 질환 또는 염증성 장애의 기존 또는 초기 증상을 악화시키지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 자가면역 질환의 기존 또는 초기 증상을 악화시키지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 염증성 장애의 기존 또는 초기 증상을 악화시키지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 크론병, 경피증, 갑상선염, 염증성 관절염, 진성 당뇨병, 안구-구근 중증 근무력증, 반월상 IgA 사구체신염, 담낭염, 뇌혈관염, 스티븐스-존슨 증후군 및 수포성 유천포창으로부터 선택된다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 크론병이다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 경피증이다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 갑상선염이다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 염증성 관절염이다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 진성 당뇨병이다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 안구-구근 중증 근무력증이다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 반월상 IgA 사구체신염이다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 담낭염이다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 뇌혈관염이다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 스티븐스-존슨 증후군이다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 수포성 유천포창이다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 정신 상태의 변화, 언어 장애, 피질맹, 사지 또는 보행 실조증, 환각, 동요, 둔감 또는 혼수 상태를 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 발작을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 공지된 발작 장애를 갖는 대상체에서 금기 사항이 아니다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 모세혈관 누출 증후군을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 등급 2, 등급 3 또는 등급 4 모세혈관 누출 증후군을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 등급 2 모세혈관 누출 증후군을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 등급 3 모세혈관 누출 증후군을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 등급 4 모세혈관 누출 증후군을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체에서 평균 동맥 혈압의 저하를 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체에서 저혈압을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 IL-2 콘쥬게이트를 대상체에게 투여한 후 대상체가 90 mmHg 미만의 수축기 혈압 또는 기준 수축기 혈압으로부터의 20 mmHg 저하를 경험하는 것을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체에서 부종을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체에서 신장 또는 간 기능의 손상을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체에서 호산구 증가증을 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체의 말초 혈액 중 호산구 카운트가 μL 당 500개를 초과하도록 하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체의 말초 혈액 중 호산구 카운트가 μL 당 500 μL 내지 1500개를 초과하도록 하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체의 말초 혈액 중 호산구 카운트가 μL 당 1500개 내지 μL 당 5000개를 초과하도록 하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체의 말초 혈액 중 호산구 카운트가 μL 당 5000개를 초과하도록 하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 기존의 향정신성 약물 요법에 대한 대상체에서의 금기 사항이 아니다.
본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 기존의 신독성, 골수 독성, 심장 독성 또는 간독성 약물 요법에 대한 대상체에서의 금기 사항이 아니다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 기존의 아미노글리코시드, 세포독성 화학요법, 독소루비신, 메토트렉세이트 또는 아스파라기나아제 요법에 대한 대상체에서의 금기 사항이 아니다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 항신생물제를 함유하는 병용 요법을 받는 대상체에서 금기 사항이 아니다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 항신생물제는 다카르바진, 시스-백금, 타목시펜 및 인터페론-알파로부터 선택된다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체에서 하나 이상의 등급 4 이상 사례를 야기하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 상기 하나 이상의 등급 4 이상 사례는 저체온증; 쇼크; 서맥; 심실 주기외수축; 심근 허혈; 실신; 출혈; 심방 부정맥; 정맥염; 2도 AV 차단; 심내막염; 심낭 삼출; 말초 괴저; 혈전증; 관상 동맥 장애; 구내염; 오심 및 구토; 간 기능 검사 비정상; 위장관 출혈; 토혈; 혈성 설사; 위장 장애; 장 천공; 췌장염; 빈혈; 백혈구 감소증; 백혈구 증가증; 저칼슘혈증; 알칼리 포스파타아제 증가; 혈액 요소 질소(BUN) 증가; 고요산혈증; 비-단백질 질소(NPN) 증가; 호흡성 산증; 졸림; 동요; 신경병증; 편집병양 반응; 경련; 대발작 경련; 섬망; 천식, 폐 부종; 과호흡; 저산소증; 객혈; 저호흡; 기흉; 산동; 동공 장애; 신장 기능 이상; 신부전; 및 급성 세뇨관 괴사로부터 선택된다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체 군에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 1% 이하의 대상체에서 하나 이상의 등급 4 이상 사례를 야기한다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 상기 하나 이상의 등급 4 이상 사례는 저체온증; 쇼크; 서맥; 심실 주기외수축; 심근 허혈; 실신; 출혈; 심방 부정맥; 정맥염; 2도 AV 차단; 심내막염; 심낭 삼출; 말초 괴저; 혈전증; 관상 동맥 장애; 구내염; 오심 및 구토; 간 기능 검사 비정상; 위장관 출혈; 토혈; 혈성 설사; 위장 장애; 장 천공; 췌장염; 빈혈; 백혈구 감소증; 백혈구 증가증; 저칼슘혈증; 알칼리 포스파타아제 증가; 혈액 요소 질소(BUN) 증가; 고요산혈증; 비-단백질 질소(NPN) 증가; 호흡성 산증; 졸림; 동요; 신경병증; 편집병양 반응; 경련; 대발작 경련; 섬망; 천식, 폐 부종; 과호흡; 저산소증; 객혈; 저호흡; 기흉; 산동; 동공 장애; 신장 기능 이상; 신부전; 및 급성 세뇨관 괴사로부터 선택된다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체 군에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 1% 이하의 대상체에서 하나 이상의 이상 사례를 야기하며, 여기서, 상기 하나 이상의 이상 사례는 십이지장 궤양; 장 괴사; 심근염; 심실상빈맥; 시신경염에 이차적인 영구적 또는 일시적 실명; 일과성 허혈 발작; 수막염; 뇌 부종; 심낭염; 알러지성 간질성 신염; 및 기관식도 누공으로부터 선택된다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체 군에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 1% 이하의 대상체에서 하나 이상의 이상 사례를 야기하며, 여기서, 상기 하나 이상의 이상 사례는 악성 고열증; 심정지; 심근 경색증; 폐색전; 뇌졸중; 장 천공; 간부전 또는 신부전; 자살로 이어지는 중증 우울증; 폐 부종; 호흡 정지; 호흡 부전으로부터 선택된다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 IL-2 콘쥬게이트에 대한 중화 항체의 생성을 초래하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 투여는 대상체에서 말초 CD4+ 조절 T 세포의 수를 증가시키지 않으면서 대상체에서 말초 CD8+ T 및 NK 세포의 수를 증가시킨다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 투여는 대상체에서 말초 호산구의 수를 증가시키지 않으면서 대상체에서 말초 CD8+ T 및 NK 세포의 수를 증가시킨다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 투여는 대상체에서 종양내 CD4+ 조절 T 세포의 수를 증가시키지 않으면서 대상체에서 종양내 CD8+ T 및 NK 세포의 수를 증가시킨다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 집중 치료 시설 또는 심폐 또는 집중 치료 의학의 숙련된 전문가의 가용성을 필요로 하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 집중 치료 시설의 가용성을 필요로 하지 않는다. 본원에 기술된 암의 치료 방법의 일부 실시 형태에서, 유효량의 IL-2 콘쥬게이트를 대상체에게 투여하는 것은 심폐 또는 집중 치료 의학 분야의 숙련된 전문가의 가용성을 필요로 하지 않는다.
본 발명의 신규한 특징이 첨부된 청구범위에 구체적으로 제시되어 있다. 본 발명의 특징 및 장점에 대한 더 나은 이해는 본 발명의 원리가 이용되는 예시적인 실시 형태 및 첨부 도면을 설명하는 다음의 상세한 설명을 참조하여 얻어질 것이다.
도 1은 예시적인 비천연 아미노산을 보여준다. 도 1은 문헌[Young et al., "Beyond the canonical 20 amino acids: expanding the genetic lexicon," J. of Biological Chemistry 285(15): 11039-11044 (2010)]의 도 2로부터 수정된 것이다.
도 2a~도 2b는 예시적인 비천연 아미노산을 나타낸다. 도 2a는 예시적인 라이신 유도체를 나타낸다. 도 2b는 예시적인 페닐알라닌 유도체를 나타낸다.
도 3a~도 3d는 예시적인 비천연 아미노산을 나타낸다. 이들 비천연 아미노산(UAA)이 단백질에서 유전자 코딩되었다(도 3a - UAA #1~42; 도 3b - UAA #43~89; 도 3c - UAA #90~128; 도 3d - UAA #129~167). 도 3a~도 3d는 문헌[Dumas et al., Chemical Science 2015, 6, 50-69]의 표 1에서 발췌된 것이다.
도 4a~도 4c는 천연 IL-2, P65_30kD, P65_5kD, E62_30kD, E62_5kD, 및 F42_30kD PEG 콘쥬게이트의 표면 플라즈몬 공명(SPR) 분석을 보여준다. 도 4a는 고정화 IL-2 Rα에 대한 IL-2 변이체 결합의 SPR 분석을 보여준다. 도 4b는 고정화 IL-2 Rβ에 대한 IL-2 변이체 결합의 SPR 분석을 보여준다. 도 4c는 고정화 IL-2 Rα 및 IL-2 Rβ에 대한 재조합 IL-2 및 IL-2 변이체 F42_30kD 결합의 SPR 분석을 보여준다.
도 5a~도 5f는 인간 LRS 일차 세포 집단에서의 pSTAT5 신호전달에 대한 예시적인 IL-2 변이체 용량 반응 곡선을 보여준다. 도 5a: 천연 IL-2; 도 5b: P65_30kD; 도 5c: K64_30kD; 도 5d: K43_30kD; 도 5e: K35_30kD, 및 도 5f: F42_30kD.
도 6a~도 6c는 PEG 및 잔기 치환이 IL-2 변이체의 노-알파 약리학(no-alpha pharmacology)에 기여함을 보여준다. 도 6a: 천연 IL-2; 도 6b: E62K; 도 6c: E62_30kD.
도 7은 IL-2 변이체의 노-알파 약리학이 PEG 크기 비의존성임을 보여준다.
도 8은 C57BL/6 마우스에 대한 알데스류킨(IL-2), E62_5, E62_30 및 P65_30의 단회 IV 볼루스 용량 후 평균(±SD) 혈장중 농도 대 시간 프로파일을 보여준다.
도 9는 C57BL/6 마우스에 대한 P65_30 또는 알데스류킨의 단회 IV 볼루스 용량을 이용한 처리 후의 말초 혈액에서의 pSTAT5+ CD8+ T 세포 대 시점의 세포의 백분율을 보여준다.
도 10a~도 10c는 P65_30 또는 알데스류킨(IL-2)의 단회 IV 볼루스 용량을 이용한 처리 후의 PBMC 집단 중 CD8+ T 세포(도 10a), NK 세포(도 10b) 및 CD4+ Treg 세포(도 10c)의 백분율을 보여준다. 표시된 시점에서 심장 천자를 통해 혈액을 채취하고, 면역 세포 집단을 유세포 분석법으로 평가하였다. 각각의 데이터점은 각각의 시점에서의 3회 반복의 평균 ± SEM을 나타낸다.
도 11a~도 11b는 P65_30 또는 알데스류킨(IL-2)의 단회 IV 볼루스 용량을 이용한 처리 후 CD3+ 집단 내에서의 기억 CD8+CD44+ T 세포 증식의 자극에 있어서의 P65_30과 IL-2(알데스류킨) 사이의 차이를 보여준다. 표시된 시점에서 심장 천자를 통해 혈액을 채취하고, 면역 세포 집단을 유세포 분석법으로 평가하였다. 데이터는 비대응 스튜던트(Student) t 검정을 이용하여 분석되었다. ***은 P 값이 <0.001임을 나타낸다. 도 11a는 72, 96 및 120시간에서의 기억 CD8+CD44+ T 세포 증식을 보여준다. 도 11b는 120 h의 시점에서의 상기 세포의 유세포 분석법에 의한 분석을 보여준다.
도 12a~도 12b는 P65_30의 단회 IV 볼루스 용량을 이용한 처리 후 동계 B16F10 종양을 갖는 C57Bl6 마우스에서의 종양 침윤 림프구(TIL)의 증가 대 시간을 보여준다. 도 12a는 처리한지 5일차에 P65_30-처리 동물 대 비처리(비히클) 동물에서의 NK, CD8+ T 및 CD4+ T reg 세포의 백분율을 보여준다. 도 12b는 P65_30-처리 동물 및 대조(비히클) 동물에서의 CD8+ / CD4+ Treg 세포의 비를 보여준다. 데이터는 비대응 스튜던트 t 검정을 이용하여 분석되었다. ***은 P 값이 <0.001임을 나타낸다.
도 13a~도 13b는 증가하는 수준(0.01 ~ 5 mg/kg)의 P65_30 또는 알데스류킨(IL-2)의 단회 IV 볼루스 용량을 이용한 처리 후 마우스 IL-2, TNF-α, IFNγ, IL-5 및 IL-6의 혈장 수준을 보여준다. 혈장 중 각각의 사이토카인의 농도는 ELISA(Abcam, 영국 캠브리지 소재)를 통하여 결정되었다. 각각의 용량군에 있어서 N은 3마리의 마우스였으며, 샘플을 투약 후 4, 34 및 72 h에 수집하였다. 도 13a는 알데스류킨-투약 동물의 사이토카인 수준을 보여주며, 도 13b는 P65_30-투약 동물의 사이토카인 수준을 보여준다.
도 14는 수컷 시노몰구스 원숭이에 대한 P65_30kD의 단회 IV 용량 후 백혈구, 림프구 및 호산구 카운트(평균 ± SD)를 보여준다.
도 15a~도 15b는 인간 LRS 일차 세포에서의 pSTAT5 신호전달에 대한 예시적인 IL-2 변이체의 용량 반응 곡선(도 15a) 및 마우스 CTLL-2 집단에서의 증식 반응(도 15b)을 보여준다.
도 16a~도 16b는 PEG IL-2 화합물이 정상 IL-2 대조군과 비교하여 일차 림프구에서 생체 외에서 면역 세포 집단을 특이적으로 확장시킬 수 있음을 보여준다. 도 16a는 IL-2(대조군)로 처리한 후의 면역 세포 확장을 보여준다. 도 16b는 P65_30kD로 처리한 후의 면역 세포 확장을 보여준다.
도 17a~도 17b는 IL-2R 알파 표면에 대한 rhIL-2(재조합 인간 인터류킨-2, 도 17a) 및 합성 콘쥬게이트 IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1(도 17b)의 결합 반응의 센서그램을 보여준다. 이러한 조건 하에서는 IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1의 경우 유의한 결합 반응이 검출되지 않았다.
도 17c-도 17d는 IL-2R 베타 표면에 결합하는 rhIL-2(재조합 인간 인터류킨-2, 도 17c) 및 합성 콘쥬게이트 IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1(도 17d) 샘플의 센서그램을 보여준다.
도 18은 Treg의 유세포 분석 세포 분류를 위한 게이팅 전략을 보여준다. 세포는 FSC-A x FSC-H를 사용하여 단일선에서 먼저 게이팅하여 응집체 또는 이중선을 제외하였다(단일선 게이트, 제1 패널). 이 게이트 내에서 세포는 중간 내지 고 전방 산란기(FSC-A) 및 측면 산란기(SSC-A)에서 게이팅하여 적혈구, 파편 및 과립구를 제외하였다(림프구 게이트, 제2 패널). 그 후 T 세포는 CD3+, CD56/16 음성 집단 제3 패널로서 게이팅되었다. NK 세포는 CD3 음성, 고 CD56/16 집단, 제3 패널로 확인되었다. 그 후 T 세포를 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포로 나누었다(제4 패널). 그 후 Treg는 CD25hi x C127lo 집단, 제5 패널로서 CD4+ T 세포로부터 게이팅되었다.
도 19는 실시예 15에 기술된 바와 같이 168시간까지의 3가지 농도에서의 인간 혈청 중 화합물 IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1의 안정성을 보여준다.
사이토카인은 세포 신호전달 단백질의 패밀리, 예컨대 케모카인, 인터페론, 인터류킨, 림포카인, 종양 괴사 인자, 및 기타 성장 인자(선천성 및 적응성 면역세포 항상성에서 역할을 함)를 포함한다. 사이토카인은 면역 세포, 예컨대 대식세포, B 림프구, T 림프구 및 비만 세포, 내피 세포, 섬유아세포, 및 다른 기질 세포에 의해 생성된다. 일부 경우에, 사이토카인은 체액성 면역 반응과 세포계 면역 반응 사이의 균형을 조절한다.
인터류킨은 T 및 B 림프구, 단핵구 계통의 세포, 호중구, 호염기구, 호산구, 거핵구, 및 조혈 세포의 발달과 분화를 조절하는 신호전달 단백질이다. 인터류킨은 헬퍼 CD4 T 및 B 림프구, 단핵구, 대식세포, 내피 세포, 및 기타 조직 상주 세포에 의해 생성된다.
인터류킨 2(IL-2)는 구조가 15.5 kDa의 4개 α-나선 다발을 포함하는 다면발현성 1형 사이토카인이다. IL-2의 전구체 형태는 길이가 153개 아미노산 잔기이고, 이때 처음 20개 아미노산이 신호 펩티드를 형성하고 잔기 21~153이 성숙 형태를 형성한다. IL-2는 주로, 항원 자극 후 CD4+ T 세포에 의해, 그리고 더 적은 정도로, CD8+ 세포, 자연 살해(NK) 세포 및 자연 살해 T(NKT) 세포, 활성화 수지상 세포(DC) 및 비만 세포에 의해 생성된다. IL-2 신호전달은 IL-2 수용체(IL-2R) 서브유닛, IL-2Rα(CD25로도 공지됨), IL-2Rβ(CD122로도 공지됨) 및 IL-2Rγ(CD132로도 공지됨)의 특정 조합과의 상호작용을 통하여 일어난다. IL-2와 IL-2Rα의 상호작용은 "저 친화성" IL-2 수용체 복합체를 형성하며, 이때 Kd는 약 10-8 M이다. IL-2와 IL-2Rβ 및 IL-2Rγ의 상호작용은 "중간 친화성" IL-2 수용체 복합체를 형성하며, 이때 Kd는 약 10-9 M이다. IL-2와 모든 3가지 서브유닛, IL-2Rα, IL-2Rβ 및 IL-2Rγ와의 상호작용은 "고 친화성" IL-2 수용체 복합체를 형성하며, 이때 Kd는 약 >10-11 M이다.
일부 예에서, "고 친화성" IL-2Rαβγ 복합체를 통한 IL-2 신호전달은 조절 T 세포의 활성화 및 증식을 조절한다. 조절 T 세포 또는 CD4+CD25+Foxp3+ 조절 T(Treg) 세포는 이펙터 세포, 예컨대 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, B 세포, NK 세포, 및 NKT 세포를 억제함으로써 면역 항상성의 유지를 매개한다. 일부 경우에, Treg 세포는 흉선(tTreg 세포)으로부터 생성되거나 말초의 나이브(
Figure pct00085
) T 세포(pTreg 세포)로부터 유도된다. 일부 경우에, Treg 세포는 말초 내용성의 매개체로 간주된다. 실제로 한 연구에서, CD25-고갈 말초 CD4+ T 세포의 이전은 누드 마우스에서 다양한 자가면역 질환을 생성하였으며, 반면에 CD4+CD25+ T 세포의 공동이전은 자가면역의 발달을 억제하였다(문헌[Sakaguchi, et al., "Immunologic self-tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor alpha-chains (CD25)," J. Immunol. 155(3): 1151-1164 (1995)]). Treg 세포 집단의 증가는 이펙터 T 세포 증식을 하향조절하고 자가면역 및 T 세포 항종양 반응을 억제한다.
"중간 친화성" IL-2Rβγ 복합체를 통한 IL-2 신호전달은 CD8+ 이펙터 T(Teff) 세포, NK 세포 및 NKT 세포의 활성화 및 증식을 조절한다. CD8+ Teff 세포(세포독성 T 세포, Tc 세포, 세포독성 T 림프구, CTL, T-살해 세포, 세포용해 T 세포, Tcon 또는 살해 T 세포로도 공지됨)는 손상된 세포, 암세포 및 병원체-감염 세포를 인식하여 사멸시키는 T 림프구이다. NK 및 NKT 세포는 CD8+ Teff 세포와 유사하게 암세포 및 병원체-감염 세포를 표적화하는 림프구 유형이다.
일부 경우에, IL-2 신호전달은 T 세포 반응을 조절하기 위해 그리고 후속하여 암의 치료를 위해 사용된다. 예를 들어, IL-2는 암 치료를 위해 Teff 세포 집단의 확장을 유도하도록 고용량 형태로 투여된다. 그러나 고용량 IL2는 항종양 면역 반응을 약화시키는 수반되는 Treg 세포 자극을 추가로 초래한다. 고용량 IL-2는 또한 2형 선천성 면역 세포(ILC-2), 호산구 및 내피 세포를 포함한 혈관계에서의 IL-2R 알파 사슬 발현 세포의 관여에 의해 매개되는 독성 이상 사례를 유발한다. 이것은 호산구 증가증, 모세 혈관 누출 및 혈관 누출 증후군(VLS)을 초래한다.
입양 세포 요법은 의사가 환자 자신의 면역 세포를 효과적으로 활용하여 증식성 질환(예를 들어, 암) 및 감염성 질환과 같은 질환에 대항할 수 있게 한다. 하나의 비제한적인 예에서, T 림프구는 환자로부터 수확되고, 악성 세포 표면 상의 특정 항원을 표적화하도록 재조작되고, 악성 세포를 특이적으로 표적화하도록 환자의 체내로 재도입될 수 있다. 또한 입양 세포 요법은 재조작된 세포가 환자의 면역계 내로 재도입된 후 오랫동안 성장 및 분열하도록 면역 세포에 신호를 전달함으로써 체내에서 지속적인 반응을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 사이토카인/사이토카인 수용체 신호전달을 통하여 림프구(예를 들어, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, NK 세포 또는 NKT 세포)의 별개의 집단(들)을 선택적으로 상향조절하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 경우에, 사이토카인은 인터류킨, 인터페론 또는 종양 괴사 인자를 포함한다. 일부 경우에, 사이토카인은 사이토카인 콘쥬게이트, 예를 들어 인터류킨 콘쥬게이트, 인터페론 콘쥬게이트 또는 종양 괴사 인자 콘쥬게이트이다. 추가의 경우에, 본원에 기술된 것은 하나 이상의 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트를 포함하는 제약 조성물 및 키트를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IL-2/IL-2R 신호전달을 통하여 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, NK 세포 및/또는 NKT 세포 집단을 선택적으로 상향조절하는 방법이 또한 본원에 기술된다. 일부 예에서, IL-2는 "중간 친화성" IL-2Rβγ 복합체와 상호작용하고, 선택적으로 IL-2Rαβγ 복합체와 유사한 효력을 갖고, 야생형 IL-2에 비해 약화된 IL-2Rα 상호작용을 갖는 IL-2 콘쥬게이트이다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트를 사용하여 암을 치료하는 방법이 본원에 추가로 기술된다. 추가 실시 형태에서, 하나 이상의 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트를 포함하는 제약 조성물 및 키트가 본원에 기술된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 원하는 사이토카인-수용체 상호작용 및 면역 세포 확장을 포함한 약동학적 특성에 영향을 주지 않으면서 대상체에서 "제거율" 또는 혈장 반감기의 증가 또는 감소에 기여하는 콘쥬게이팅 모이어티(예를 들어, PEG)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 선택적 사이토카인-수용체 상호작용 및 면역 세포 확장을 초래하는 변형된 사이토카인을 발현하도록 조작된 세포를 포함하는 입양 세포 요법을 개발하는 데 사용될 수 있는 시약이 본원에 개시된다. 일부 실시 형태에서, 시약은 상기 기술된 IL-2 콘쥬게이트를 코딩하는 핵산 구축물을 포함한다. 본원에 기술된 증식성 또는 감염성 질환의 치료에 유용할 수 있는 상기 기술된 IL-2 콘쥬게이트를 포함하는 입양 세포 요법이 또한 개시된다.
일부 실시 형태에서, 선택적 사이토카인-수용체 상호작용 및 면역 세포 확장을 초래하는 조성물이 본원에 개시된다. 일부 실시 형태에서, 시약은 상기 기술된 IL-2 콘쥬게이트를 코딩하는 핵산 구축물을 포함한다. 또한, 본원에 기술된 증식성 또는 감염성 질환의 치료에 유용할 수 있는 상기 기술된 IL-2 콘쥬게이트를 포함하는 제약 조성물이 또한 개시된다.
사이토카인 콘쥬게이트
일부 실시 형태에서, 사이토카인 콘쥬게이트가 본원에 기술된다. 일부 경웅에, 사이토카인은 인터류킨, 종양 괴사 인자, 인터페론, 케모카인, 림포카인 또는 성장 인자를 포함한다. 일부 경우에, 사이토카인은 인터류킨이다. 일부 경우에, 사이토카인은 인터페론이다. 추가의 경우에, 사이토카인은 종양 괴사 인자이다. 추가의 경우에, 사이토카인은 성장 인자이다.
일부 실시 형태에서, 인터류킨 콘쥬게이트가 본원에 기술된다. 예시적인 인터류킨은 인터류킨 2(IL-2)를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
IL-2 콘쥬게이트
표 20에 예시된 폴리펩티드가 본원에 기술된다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트가 표 20에 예시되어 있다
[표 20]
Figure pct00086
Figure pct00087
Figure pct00088
Figure pct00089
Figure pct00090
Figure pct00091
Figure pct00092
일부 실시 형태에서, 소정 아미노산 위치에서 변형된 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 기술된다. 일부 경우에, 변형은 천연 아미노산에 대한 것이다. 일부 경우에, 변형은 비천연 아미노산에 대한 것이다. 일부 경우에, 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함하는 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드가 본원에 기술된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 단리되고 정제된 포유류 IL-2, 예를 들어 설치류 IL-2 단백질, 또는 인간 IL-2 단백질이다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 인간 IL-2 단백질이다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 2에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 2의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 2의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 3에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 3의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 3의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 4에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 4의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 4의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 5에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 5의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 5의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 6에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 6의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 6의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 7에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 7의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 7의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 8에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 8의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 8의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 9에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 9의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 9의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 10에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 10의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 10의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 11에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 11의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 11의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 12에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 12의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 12의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 13에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 13의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 13의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 14에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 14의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 14의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 15에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 15의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 15의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 16에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 16의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 16의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 17에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 17의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 17의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 18에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 18의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 18의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 19에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 19의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 19의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 20에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 20의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 20의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 21에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 21의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 21의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 22에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 22의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 22의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 23에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 23의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 23의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 24에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 24의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 24의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 25에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 25의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 25의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 26에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 26의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 26의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 27에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 27의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 27의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 28에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 28의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 28의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 29에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 29의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 29의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 30에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 30의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 30의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 31에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 31의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 31의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 32에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 32의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 32의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 33에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 33의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 33의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 34에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 34의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 34의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 35에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 35의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 35의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 36에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 36의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 36의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 37에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 37의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 37의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 38에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 39에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 40에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 40의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 40의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 41에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 41의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 41의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 42에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 42의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 42의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 43에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 43의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 43의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 44에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 44의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 44의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 45에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 45의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 45의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 46에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 46의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 46의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 47에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 47의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 47의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 48에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 48의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 48의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 49에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 49의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 49의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 50에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 51에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 52에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 52의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 52의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 53에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 53의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 53의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 54에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 54의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 54의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 55에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 55의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 55의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 56에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 56의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 56의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 57에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 57의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 57의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 58에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 58의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 58의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 59에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 59의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 59의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 60에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 60의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 60의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 61에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 61의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 61의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 62에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 62의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 62의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 63에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 63의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 63의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 64에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 64의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 64의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 65에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 65의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 65의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 66에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 66의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 66의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 67에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 67의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 67의 서열로 이루어진다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 68에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 68의 서열을 포함한다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 68의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 69에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 69의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 69의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 70에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 70의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 70의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 71에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 71의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 71의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 72에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 72의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 72의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 73에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 73의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 73의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 74에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 74의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 74의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 75에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 75의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 75의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 76에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 76의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 76의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 77에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 77의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 77의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 78에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 78의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 78의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 79에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 79의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 79의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 80에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 80의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 80의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 81에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 81의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 81의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 82에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 82의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 82의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 83에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 83의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 83의 서열로 이루어진다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 84에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 84의 서열을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 84의 서열로 이루어진다.
일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 절단된 변이체이다. 일부 경우에, 절단은 N-말단 결실이다. 다른 경우에, 절단은 C-말단 결실이다. 추가의 경우에, 절단은 N-말단 결실 및 C-말단 결실 모두를 포함한다. 예를 들어, 절단은 N-말단 또는 C-말단, 또는 두 말단 모두로부터의 적어도 또는 약 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 20개, 또는 그 이상의 잔기의 결실일 수 있다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 적어도 또는 약 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 20개, 또는 그 이상의 잔기의 N-말단 결실을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 적어도 또는 약 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개 잔기의 N-말단 결실을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 적어도 또는 약 2개 잔기의 N-말단 결실을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 적어도 또는 약 3개 잔기의 N-말단 결실을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 적어도 또는 약 4개 잔기의 N-말단 결실을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 적어도 또는 약 5개 잔기의 N-말단 결실을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 적어도 또는 약 6개 잔기의 N-말단 결실을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 적어도 또는 약 7개 잔기의 N-말단 결실을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 적어도 또는 약 8개 잔기의 N-말단 결실을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 적어도 또는 약 9개 잔기의 N-말단 결실을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 적어도 또는 약 10개 잔기의 N-말단 결실을 포함한다.
일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드는 기능적 활성 단편이다. 일부 경우에, 기능적 활성 단편은 IL-2 영역 10~133, 20~133, 30~133, 10~130, 20~130, 30~130, 10~125, 20~125, 30~125, 1~130, 또는 1~125를 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다. 일부 경우에, 기능적 활성 단편은 IL-2 영역 10~133을 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다. 일부 경우에, 기능적 활성 단편은 IL-2 영역 20~133을 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다. 일부 경우에, 기능적 활성 단편은 IL-2 영역 30~133을 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다. 일부 경우에, 기능적 활성 단편은 IL-2 영역 10~125를 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다. 일부 경우에, 기능적 활성 단편은 IL-2 영역 20~125를 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다. 일부 경우에, 기능적 활성 단편은 IL-2 영역 1~130을 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다. 일부 경우에, 기능적 활성 단편은 IL-2 영역 1~125를 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다.
일부 실시 형태에서, 단리되고, 정제되고 변형된 IL-2 폴리펩티드 및 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 기술된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 IL-2 수용체 α(IL-2Rα) 서브유닛에 대하여 감소된 친화도를 갖는다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 IL-2Rα와 상호작용하는 아미노산 잔기(예를 들어, IL-2/ IL-2Rα 경계면에 있음)에 결합된다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 IL-2/ IL-2Rα 경계면에 근접한 아미노산 잔기(예를 들어, IL-2/ IL-2Rα 경계면으로부터 약 5Å, 약 10Å, 약 15Å, 또는 약 20Å 떨어져 있음)에 결합된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, IL-2/IL-2Rα 경계면에 관련된 잔기는 IL-2Rα 서브유닛으로부터의 잔기와 소수성 상호작용, 수소 결합 또는 이온 상호작용을 형성하는 IL-2 잔기를 포함한다.
일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 아미노산 위치 Y31, K32, N33, P34, K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, P47, K48, Q57, E60, E61, E62, L63, K64, P65, E68, V69, N71, L72, Q74, S75, K76, N77, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, 또는 A112로부터 선택되는 아미노산 잔기에 결합되며, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 Y31, K32, N33, P34, K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, P47, K48, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, Q74, S75, K76, N77, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, 및 A112로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 N33, P34, K35, T37, R38, M39, T41, F42, K43, F44, Y45, Q57, E60, E61, E62, L63, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, 및 A112로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 T37, T41, F42, F44, Y45, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 R38 및 K64로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 E61, E62, 및 E68로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 K35이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 T37이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 R38이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 T41이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 F42이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 K43이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 F44이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 Y45이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 E61이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 E62이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 K64이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 E68이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 P65이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 V69이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 L72이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 Y107이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 L72이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 D109이다.
일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 추가 돌연변이를 추가로 포함한다. 일부 경우에, 상기 추가 돌연변이는 K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택되는 아미노산 위치에 있다. 이러한 경우에, 아미노산은 혈청 반감기, 안정성 또는 이들의 조합을 증가시키기 위해 추가 콘쥬게이팅 모이어티에 콘쥬게이팅된다. 대안적으로, 아미노산은 먼저 라이신, 시스테인, 히스티딘, 아르기닌, 아스파르트산, 글루탐산, 세린, 트레오닌 또는 티로신과 같은 천연 아미노산으로 돌연변이되거나; 또는 비천연 아미노산으로 돌연변이된 후 추가 콘쥬게이팅 모이어티에 결합된다.
일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산 변형이 없는 야생형 IL-2 폴리펩티드(예를 들어, 야생형 IL-2 폴리펩티드)에 비해 IL-2 수용체 α(IL-2Rα) 서브유닛에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 친화도의 감소는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%, 또는 99% 초과이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 10%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 20%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 40%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 50%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 60%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 80%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 90%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 99%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 99% 초과이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 80%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 100%이다.
일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산 변형이 없는 등가의 IL-2 폴리펩티드(예를 들어, 야생형 IL-2 폴리펩티드)에 비해 IL-2 수용체 α(IL-2Rα) 서브유닛에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 친화도의 감소는 약 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 30배, 50배, 100배, 200배, 300배, 400배, 500배, 1,000배, 또는 그 이상이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 1배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 2배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 4배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 5배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 6배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 8배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 10배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 30배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 50배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 100배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 300배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 500배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 1000배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 1,000배 초과이다.
일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rα와 상호작용하지 않는다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드가 콘쥬게이팅 모이어티에 추가로 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 IL-2Rα와 상호작용하지 않는다.
일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2βγ 신호전달 복합체에 대한 제1 수용체 신호전달 효력 및 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 제2 수용체 신호전달 효력을 나타내며, 여기서, 제1 수용체 신호전달 효력과 제2 수용체 신호전달 효력의 차이는 10배 미만이다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2βγ 신호전달 복합체에 대한 제1 수용체 신호전달 효력 및 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 제2 수용체 신호전달 효력을 나타내며, 여기서, 제1 수용체 신호전달 효력과 제2 수용체 신호전달 효력의 차이는 5배 미만이다. 일부 경우에, 상기 차이는 9배 미만, 8배 미만, 7배 미만, 6배 미만, 5배 미만, 4배 미만, 3배 미만, 2배 미만, 또는 1배 미만이다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 부분 작용제, 예를 들어 수용체(예를 들어, IL-2βγ 신호전달 복합체 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체)를 활성화하지만, 완전 작용제에 비해 그 수용체에서 단지 부분 효능을 갖는 작용제이다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 완전 작용제, 예를 들어 최대 반응에서 수용체(예를 들어, IL-2βγ 신호전달 복합체 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체)를 활성화하는 작용제이다.
일부 경우에, 수용체 신호전달 효력은 EC50 값에 의해 측정된다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2βγ 신호전달 복합체의 활성화에 대한 제1 EC50 값 및 IL-2αβγ 신호전달 복합체의 활성화에 대한 제2 EC50 값을 제공하며, 여기서, 제1 EC50 값과 제2 EC50 값의 차이는 10배 미만이다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2βγ 신호전달 복합체의 활성화에 대한 제1 EC50 값 및 IL-2αβγ 신호전달 복합체의 활성화에 대한 제2 EC50 값을 제공하며, 여기서, 제1 EC50 값과 제2 EC50 값의 차이는 5배 미만이다. 일부 경우에, 상기 차이는 9배 미만, 8배 미만, 7배 미만, 6배 미만, 5배 미만, 4배 미만, 3배 미만, 2배 미만, 또는 1배 미만이다.
일부 경우에, 수용체 신호전달 효력은 ED50 값에 의해 측정된다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2βγ 신호전달 복합체의 활성화에 대한 제1 ED50 값 및 IL-2αβγ 신호전달 복합체의 활성화에 대한 제2 ED50 값을 제공하며, 여기서, 제1 ED50 값과 제2 ED50 값의 차이는 10배 미만이다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2βγ 신호전달 복합체의 활성화에 대한 제1 ED50 값 및 IL-2αβγ 신호전달 복합체의 활성화에 대한 제2 ED50 값을 제공하며, 여기서, 제1 ED50 값과 제2 ED50 값의 차이는 5배 미만이다. 일부 경우에, 상기 차이는 9배 미만, 8배 미만, 7배 미만, 6배 미만, 5배 미만, 4배 미만, 3배 미만, 2배 미만, 또는 1배 미만이다.
일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 링커 펩티드를 통해 직접적으로 또는 간접적으로 IL-2 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 연결된다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티(예를 들어, 중합체, 단백질 또는 펩티드)는 IL-2의 N-말단 또는 C-말단에서, 링커 펩티드를 통해 직접적으로 또는 간접적으로 IL-2에 유전적으로 융합된다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 N-말단 또는 C-말단 아미노산 잔기에 연결된다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 N-말단 또는 C-말단 아미노산 잔기에 결합되는 반응기에 연결된다.
일부 실시 형태에서, IL-2Rα에 대한 결합 친화도가 감소된 IL-2 콘쥬게이트는 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포 집단을 확장시킬 수 있다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 IL-2와 IL-2Rα의 결합을 손상시키거나 차단한다.
일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드에 의한 IL-2Rβγ 복합체를 통한 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 자연 살해 T(NKT) 세포 집단의 활성화는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 상기 세포 집단의 활성화의 유의한 효력을 유지한다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드에 의한 활성화는 야생형 IL-2 폴리펩티드의 것과 동등하다. 다른 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드에 의한 활성화는 야생형 IL-2 폴리펩티드의 것보다 더 높다. 일부 경우에, IL-2Rβγ 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력은 IL-2Rβγ 복합체에 대한 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 더 높다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력은 야생형 IL-2 폴리펩티드의 각각의 효력보다 적어도 1배 더 높다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력은 야생형 IL-2 폴리펩티드의 각각의 효력보다 약 또는 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 15-folod, 20배, 25배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배, 100배, 150배, 200배, 300배, 400배, 500배, 1,000배 또는 그 이상 더 높다. 이러한 경우, 야생형 IL-2 폴리펩티드와 유사한 수준의 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 자연 살해 T(NKT) 세포 집단 활성화를 달성하기 위해 사용되는 변형된 IL-2 폴리펩티드의 용량 또는 농도는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 사용되는 용량 또는 농도보다 더 낮다.
일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드에 의한 IL-2Rβγ 복합체를 통한 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 자연 살해 T(NKT) 세포 집단의 활성화는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 의한 상기 세포 집단의 활성화의 유의한 효력을 유지한다. 일부 경우에, IL-2Rβγ 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력은 IL-2Rβγ 복합체에 대한 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 더 낮다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력은 야생형 IL-2 폴리펩티드의 각각의 효력보다 약 또는 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 20배, 또는 50배 더 낮다.
일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rβγ에 대한 제1 수용체 신호전달 효력 및 IL-2Rαβγ에 대한 제2 수용체 신호전달 효력을 나타낸다. 일부 경우에, IL-2Rβγ에 대한 제1 수용체 신호전달 효력은 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 개선된 효력이다. 일부 경우에, IL-2Rαβγ에 대한 제2 수용체 신호전달 효력은 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 손상된 효력이다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rβγ에 대한 제1 수용체 신호전달 효력 및 IL-2Rαβγ에 대한 제2 수용체 신호전달 효력을 나타내며, 여기서, 제1 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 50배, 100배, 500배, 1000배, 또는 그 이상 더 높다. 일부 경우에, 제1 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 적어도 1배 또는 그 이상 더 높다. 일부 경우에, 제2 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 적어도 1배 또는 그 이상 더 높다. 일부 경우에, 제1 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 적어도 5배 또는 그 이상 더 높다. 일부 경우에, 제1 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 적어도 10배 또는 그 이상 더 높다. 일부 경우에, 제20 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 적어도 1배 또는 그 이상 더 높다. 일부 경우에, 제1 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 적어도 50배 또는 그 이상 더 높다. 일부 경우에, 제1 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 적어도 100배 또는 그 이상 더 높다. 일부 경우에, 제1 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 적어도 500배 또는 그 이상 더 높다. 일부 경우에, 제1 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 적어도 1000배 또는 그 이상 더 높다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 제1 수용체 신호전달 효력은 IL-2Rβγ에 대하여 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 더 높으며, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 제2 수용체 신호전달 효력은 IL-2Rαβγ에 대하여 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 더 낮다. 일부 경우에, 상기 둘 다의 수용체 신호전달 효력이 야생형 IL-2 폴리펩티드에서의 그의 각각의 효력보다 더 낮다. 다른 경우에, 상기 둘 다의 수용체 신호전달 효력이 야생형 IL-2 폴리펩티드에서의 그의 각각의 효력보다 더 높다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 IL-2 콘쥬게이트가 투여된 대상체에서 독성 이상 사례를 감소시킨다. 예시적인 독성 이상 사례는 호산구 증가증, 모세 혈관 누출 및 혈관 누출 증후군(VLS)을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 대상체에서의 독성 이상 사례의 발생률을 야생형 IL-2 또는 알데스류킨이 투여된 제2 대상체에 비해 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 약 100% 감소시킨다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 대상체에서의 독성 이상 사례의 중증도를 야생형 IL-2 또는 알데스류킨이 투여된 제2 대상체에 비해 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 약 100% 감소시킨다.
일부 경우에, 독성 이상 사례는 호산구 증가증이다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 대상체에서의 호산구 증가증의 발생률을 야생형 IL-2 또는 알데스류킨이 투여된 제2 대상체에 비해 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 약 100% 감소시킨다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 대상체에서의 호산구 증가증의 중증도를 야생형 IL-2 또는 알데스류킨이 투여된 제2 대상체에 비해 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 약 100% 감소시킨다.
일부 경우에, 독성 이상 사례는 모세 혈관 누출이다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 대상체에서의 모세 혈관 누출의 발생률을 야생형 IL-2 또는 알데스류킨이 투여된 제2 대상체에 비해 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 약 100% 감소시킨다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 대상체에서의 모세 혈관 누출의 중증도를 야생형 IL-2 또는 알데스류킨이 투여된 제2 대상체에 비해 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 약 100% 감소시킨다.
일부 경우에, 독성 이상 사례는 VLS이다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 대상체에서의 VLS의 발생률을 야생형 IL-2 또는 알데스류킨이 투여된 제2 대상체에 비해 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 약 100% 감소시킨다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 대상체에서의 VLS의 중증도를 야생형 IL-2 또는 알데스류킨이 투여된 제2 대상체에 비해 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 약 100% 감소시킨다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 18시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일 초과의, 또는 그 이상의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간 초과의, 또는 그 이상의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 1시간 초과의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 2시간 초과의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 3시간 초과의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 4시간 초과의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 5시간 초과의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 6시간 초과의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 7시간 초과의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 8시간 초과의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 9시간 초과의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 10시간 초과의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 12시간 초과의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 18시간 초과의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 24시간 초과의 혈장 반감기를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 15시간, 18시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 또는 그 이상의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 15시간, 18시간, 24시간, 또는 그 이상의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 적어도 1시간의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 적어도 2시간의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 적어도 3시간의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 적어도 4시간의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 적어도 5시간의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 적어도 6시간의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 적어도 7시간의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 적어도 8시간의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 적어도 9시간의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 적어도 10시간의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 적어도 12시간의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 적어도 18시간의 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 적어도 24시간의 혈장 반감기를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 약 1시간 내지 약 7일, 약 12시간 내지 약 7일, 약 18시간 내지 약 7일, 약 24시간 내지 약 7일, 약 1시간 내지 약 5일, 약 12시간 내지 약 5일, 약 24시간 내지 약 5일, 약 2일 내지 약 5일, 또는 약 2일 내지 약 3일의 혈장 반감기를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 약 1시간 내지 약 18시간, 약 1시간 내지 약 12시간, 약 2시간 내지 약 10시간, 약 2시간 내지 약 8시간, 약 4시간 내지 약 18시간, 약 4시간 내지 약 12시간, 약 4시간 내지 약 10시간, 약 4시간 내지 약 8시간, 약 6시간 내지 약 18시간, 약 6시간 내지 약 12시간, 약 6시간 내지 약 10시간, 약 6시간 내지 약 8시간, 약 8시간 내지 약 18시간, 약 8시간 내지 약 12시간, 또는 약 8시간 내지 약 10시간의 혈장 반감기를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 T 세포, NK 세포, NKT 세포 또는 이들의 조합을 증식 및/또는 확장시킬 수 있지만 아폽토시스와 같은 유해한 영향을 끼치지는 않는 혈장 반감기를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 야생형 Il-2에 비해, 예를 들어 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 15시간, 18시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 또는 그 이상만큼 연장된 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 야생형 IL-2에 비해, 예를 들어 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 15시간, 18시간, 24시간, 또는 그 이상만큼 연장된 혈장 반감기를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 야생형 IL-2에 비해, 예를 들어 약 1시간 내지 약 18시간, 약 1시간 내지 약 12시간, 약 2시간 내지 약 10시간, 약 2시간 내지 약 8시간, 약 4시간 내지 약 18시간, 약 4시간 내지 약 12시간, 약 4시간 내지 약 10시간, 약 4시간 내지 약 8시간, 약 6시간 내지 약 18시간, 약 6시간 내지 약 12시간, 약 6시간 내지 약 10시간, 약 6시간 내지 약 8시간, 약 8시간 내지 약 18시간, 약 8시간 내지 약 12시간, 또는 약 8시간 내지 약 10시간의 연장된 혈장 반감기를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 알데스류킨에 비해, 예를 들어 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 15시간, 18시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 또는 그 이상만큼 연장된 혈장 반감기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 알데스류킨에 비해, 예를 들어 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 15시간, 18시간, 24시간, 또는 그 이상만큼 연장된 혈장 반감기를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 알데스류킨에 비해, 예를 들어 약 1시간 내지 약 18시간, 약 1시간 내지 약 12시간, 약 2시간 내지 약 10시간, 약 2시간 내지 약 8시간, 약 4시간 내지 약 18시간, 약 4시간 내지 약 12시간, 약 4시간 내지 약 10시간, 약 4시간 내지 약 8시간, 약 6시간 내지 약 18시간, 약 6시간 내지 약 12시간, 약 6시간 내지 약 10시간, 약 6시간 내지 약 8시간, 약 8시간 내지 약 18시간, 약 8시간 내지 약 12시간, 또는 약 8시간 내지 약 10시간의 연장된 혈장 반감기를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 감소된 독성을 가지고서 연장된 혈장 반감기를 포함한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 감소된 독성을 가지고서 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 15시간, 18시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 또는 그 이상의 연장된 혈장 반감기를 포함한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 감소된 독성을 가지고서 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 15시간, 18시간, 24시간, 또는 그 이상의 연장된 혈장 반감기를 포함한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 감소된 독성을 가지고서 약 1시간 내지 약 18시간, 약 1시간 내지 약 12시간, 약 2시간 내지 약 10시간, 약 2시간 내지 약 8시간, 약 4시간 내지 약 18시간, 약 4시간 내지 약 12시간, 약 4시간 내지 약 10시간, 약 4시간 내지 약 8시간, 약 6시간 내지 약 18시간, 약 6시간 내지 약 12시간, 약 6시간 내지 약 10시간, 약 6시간 내지 약 8시간, 약 8시간 내지 약 18시간, 약 8시간 내지 약 12시간, 또는 약 8시간 내지 약 10시간의 연장된 혈장 반감기를 포함한다. 일부 경우에, 상기 감소된 독성은 야생형 IL2에 비해 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 50배, 100배, 또는 그 이상 감소된 것이다. 일부 경우에, 감소된 독성은 야생형 IL-2에 비해 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500%, 또는 그 이상 감소된 것이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 감소된 독성을 가지고서 연장된 혈장 반감기를 포함한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 감소된 독성을 가지고서 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 15시간, 18시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 또는 그 이상의 연장된 혈장 반감기를 포함한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 감소된 독성을 가지고서 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 15시간, 18시간, 24시간, 또는 그 이상의 연장된 혈장 반감기를 포함한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 감소된 독성을 가지고서 약 1시간 내지 약 18시간, 약 1시간 내지 약 12시간, 약 2시간 내지 약 10시간, 약 2시간 내지 약 8시간, 약 4시간 내지 약 18시간, 약 4시간 내지 약 12시간, 약 4시간 내지 약 10시간, 약 4시간 내지 약 8시간, 약 6시간 내지 약 18시간, 약 6시간 내지 약 12시간, 약 6시간 내지 약 10시간, 약 6시간 내지 약 8시간, 약 8시간 내지 약 18시간, 약 8시간 내지 약 12시간, 또는 약 8시간 내지 약 10시간의 연장된 혈장 반감기를 포함한다. 일부 경우에, 감소된 독성은 알데스류킨에 비해 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 50배, 100배, 또는 그 이상 감소된 것이다. 일부 경우에, 감소된 독성은 알데스류킨에 비해 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500%, 또는 더 이상 감소된 것이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 콘쥬게이팅 모이어티의 크기(예를 들어, 부피 또는 길이)가 혈장 안정성을 향상시키지만 효력을 감소시키지는 않는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티의 크기는 혈장 반감기를 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 15시간, 18시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 또는 그 이상 연장시킨다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티의 크기는 혈장 반감기를 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 15시간, 18시간, 24시간, 또는 그 이상 연장시킨다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티의 크기는 혈장 반감기를 약 1시간 내지 약 18시간, 약 1시간 내지 약 12시간, 약 2시간 내지 약 10시간, 약 2시간 내지 약 8시간, 약 4시간 내지 약 18시간, 약 4시간 내지 약 12시간, 약 4시간 내지 약 10시간, 약 4시간 내지 약 8시간, 약 6시간 내지 약 18시간, 약 6시간 내지 약 12시간, 약 6시간 내지 약 10시간, 약 6시간 내지 약 8시간, 약 8시간 내지 약 18시간, 약 8시간 내지 약 12시간, 또는 약 8시간 내지 약 10시간 연장시킨다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티의 크기는 상기 효력을 알데스류킨에 비해 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 미만, 또는 그 이하만큼 감소시킨다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 콘쥬게이팅 모이어티의 크기(예를 들어, 부피 또는 길이)가 혈장 안정성 및 효력을 향상시키는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티의 크기는 혈장 반감기를 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 15시간, 18시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 또는 그 이상 연장시킨다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티의 크기는 혈장 반감기를 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 15시간, 18시간, 24시간, 또는 그 이상 연장시킨다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티의 크기는 혈장 반감기를 약 1시간 내지 약 18시간, 약 1시간 내지 약 12시간, 약 2시간 내지 약 10시간, 약 2시간 내지 약 8시간, 약 4시간 내지 약 18시간, 약 4시간 내지 약 12시간, 약 4시간 내지 약 10시간, 약 4시간 내지 약 8시간, 약 6시간 내지 약 18시간, 약 6시간 내지 약 12시간, 약 6시간 내지 약 10시간, 약 6시간 내지 약 8시간, 약 8시간 내지 약 18시간, 약 8시간 내지 약 12시간, 또는 약 8시간 내지 약 10시간 연장시킨다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티의 크기는 상기 효력을 알데스류킨에 비해 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200% 초과, 또는 그 이상만큼 추가로 향상시킨다.
일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티에 공유 결합된 비천연 아미노산을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 기술되며, 여기서, 비천연 아미노산은 영역 35~107에 위치하고, 영역 35~107은 서열 번호 1의 잔기 K35~Y107에 상응한다.
인터류킨 2 βγ 수용체(IL-2Rβγ) 결합 단백질이 본원에 기술되며, 여기서, 상기 결합 단백질의 인터류킨 2 α 수용체(IL-2Rα)에 대한 결합 친화성은 야생형 인간 IL-2(hIL- 2)의 결합 친화성보다 더 작고, 상기 결합 단백질의 인터류킨 2 α 수용체(IL-2Rα)에 대한 결합 친화성은 야생형 인간 IL-2(hIL-2)의 결합 친화성보다 더 작다. 일부 실시 형태에서, 인터류킨 2 βγ 수용체(IL-2Rβγ) 결합 단백질이 본원에 기술되며, 여기서, 상기 결합 단백질의 인터류킨 2 α 수용체(IL-2Rα)에 대한 결합 친화성은 야생형 인간 IL-2(hIL- 2)의 결합 친화성보다 더 작고, 상기 결합 단백질은 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함한다. 일부 경우에, 상기 결합 단백질은 변형된 IL-2 폴리펩티드 또는 이의 기능적 활성 단편이며, 여기서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함한다. 일부 경우에, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 영역 35~107에 위치하며, 영역 35~107은 서열 번호 1의 잔기 K35~Y107에 상응한다.
일부 실시 형태에서, 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드 및 IL-2Rβγ를 포함하는 IL-2/IL-2Rβγ 복합체가 본원에 기술되며, 여기서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rα에 대해 감소된 결합 친화도를 가지며, 감소된 결합 친화도는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합 친화도와 비교된다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 돌연변이 부위에 공유적으로 부착된 콘쥬게이팅 모이어티를 추가로 포함한다. 일부 경우에, 돌연변이 부위는 천연 아미노산으로 돌연변이된 아미노산을 포함한다. 일부 경우에, 돌연변이 부위는 시스테인 잔기로 돌연변이된 아미노산을 포함한다. 일부 경우에, 돌연변이 부위는 라이신 잔기로 돌연변이된 아미노산을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산을 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드 및 IL-2Rβγ를 포함하는 IL-2/IL-2Rβγ 복합체가 본원에 기술되며, 여기서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rα에 대해 감소된 결합 친화도를 가지며, 감소된 결합 친화도는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합 친화도와 비교된다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 비천연 아미노산에 공유적으로 부착된 콘쥬게이팅 모이어티를 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산을 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드 및 IL-2Rβγ를 포함하는 IL-2/IL-2Rβγ 복합체가 본원에 기술되며, 여기서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rα에 대해 감소된 수용체 신호전달 효력을 가지며, 감소된 수용체 신호전달 효력은 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 수용체 신호전달 효력과 비교된다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 비천연 아미노산에 공유적으로 부착된 콘쥬게이팅 모이어티를 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포의 활성화제로서, 세포 집단에서 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 T 세포, NK 세포, NKT 세포 또는 이들의 조합을 선택적으로 확장시키는, 활성화제가 본원에 기술되며, 여기서, 상기 활성화제는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는 변형된 인터류킨 2(IL-2) 폴리펩티드를 포함한다. 일부 경우에, 돌연변이는 천연 아미노산으로의 돌연변이이다. 다른 경우에, 돌연변이는 비천연 아미노산으로의 돌연변이이다. 일부 실시 형태에서, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포의 활성화제로서, 세포 집단에서 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 T 세포, NK 세포, NKT 세포 또는 이들의 조합을 선택적으로 확장시키는, 활성화제가 본원에 기술되며, 여기서, 상기 활성화제는 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함하는 변형된 인터류킨 2(IL-2) 폴리펩티드를 포함한다. 일부 경우에, 상기 활성화제는 상기 CD3+ 세포 집단과 접촉되는 경우 CD4+ T 조절(Treg) 세포를, 야생형 IL-2 폴리펩티드와 접촉시킨 CD3+ 세포 집단에서의 CD4+ Treg 세포의 확장과 비교하여, 20%, 15%, 10%, 5%, 1% 미만, 또는 0.1% 미만만큼 확장시킨다. 일부 경우에, 상기 활성화제는 상기 세포 집단에서 Treg 세포를 확장시키지 않는다. 일부 경우에, 상기 세포 집단은 생체 내 세포 집단이다. 일부 경우에, 상기 세포 집단은 시험관 내 세포 집단이다. 일부 경우에, 상기 세포 집단은 생체 외 세포 집단이다.
일부 경우에, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 T 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 자연 살해 T(NKT) 세포 집단을 확장시키는 방법이 또한 본원에 기술되며, 본 방법은 상기 세포 집단을 치료적 유효량의 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 T 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 자연 살해 T(NKT) 세포 활성화제(여기서, 상기 활성화제는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는 변형된 인터류킨 2(IL-2) 폴리펩티드를 포함함)와 접촉시키고, 이에 의해 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포 집단을 확장시키는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 돌연변이는 천연 아미노산으로의 돌연변이이다. 다른 경우에, 돌연변이는 비천연 아미노산으로의 돌연변이이다. 일부 경우에, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 T 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 자연 살해 T(NKT) 세포 집단을 확장시키는 방법이 또한 본원에 기술되며, 본 방법은 상기 세포 집단을 치료적 유효량의 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 T 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 자연 살해 T(NKT) 세포 활성화제(여기서, 상기 활성화제는 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함하는 변형된 인터류킨 2(IL-2) 폴리펩티드를 포함함)와 접촉시키고, 이에 의해 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포 집단을 확장시키는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 잔기 위치 35에 상응하는 K35에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 37에 상응하는 잔기 T37에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 아미노산 위치 P2, T3, S4, S5, S6, T7, K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, R81, P82, R83, D84, S87, N88, N89, V91, I92, L94, E95, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, T113, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, 및 T133으로부터 선택되는 아미노산 잔기에 결합되며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, R81, D84, S87, N88, V91, I92, L94, E95, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, 및 T133으로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 P2, T3, S4, S5, S6, T7, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, P82, R83, N89, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, 및 T113으로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 K8, K9, L12, E15, H16, L19, D20, Q22, M23, N26, D84, N88, E95, 및 Q126으로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 K8, K9, 및 H16으로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 Q22, N26, N88, 및 Q126으로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 E15, D20, D84, 및 E95로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 L12, L19, 및 M23으로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 Q22 및 N26으로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 K8이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 K9이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 Q11이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 L12이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 E15이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 H16이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 L18이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 L19이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 D20이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 Q22이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 M23이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 N26이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 R81이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 D84이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 S87이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 N88이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 V91이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 I92이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 L94이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 E95이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 E116이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 N119이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 R120이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 T123이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 A125이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 Q126이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 S127이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 S130이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 T131이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 L132이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 T133이다.
일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 추가 돌연변이를 추가로 포함한다. 이러한 경우에, 아미노산은 혈청 반감기, 안정성 또는 이들의 조합을 증가시키기 위해 추가 콘쥬게이팅 모이어티에 콘쥬게이팅된다. 대안적으로, 아미노산은 먼저 라이신, 시스테인, 히스티딘, 아르기닌, 아스파르트산, 글루탐산, 세린, 트레오닌 또는 티로신과 같은 천연 아미노산으로 돌연변이되거나; 또는 비천연 아미노산으로 돌연변이된 후 추가 콘쥬게이팅 모이어티에 결합된다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해, IL-2Rαβγ 복합체의 IL-2 수용체 β(IL-2Rβ) 서브유닛, IL-2 수용체 γ(IL-2Rγ) 서브유닛 또는 이들의 조합에 대한 감소된 결합 친화도를 갖는다. 일부 경우에, 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 IL-2 수용체 β(IL-2Rβ) 서브유닛, IL-2 수용체 γ(IL-2Rγ) 서브유닛 또는 이들의 조합에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 친화도의 감소는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 99% 초과이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 10%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 20%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 40%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 50%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 60%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 80%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 90%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 99%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 99% 초과이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 80%이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 100%이다.
일부 실시 형태에서, 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 IL-2 수용체 β(IL-2Rβ) 서브유닛, IL-2 수용체 γ(IL-2Rγ) 서브유닛 또는 이들의 조합에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 결합 친화도의 감소는 약 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 30배, 50배, 100배, 200배, 300배, 400배, 500배, 1,000배, 또는 그 이상이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 1배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 2배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 4배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 5배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 6배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 8배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 10배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 30배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 50배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 100배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 300배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 500배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 약 1000배이다. 일부 경우에, 친화도의 감소는 1,000배 초과이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 IL-2/IL-2Rβ 복합체에 대한 IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소를 갖는다. 일부 경우에, 상기 동원의 감소는 비천연 아미노산이 없는 등가의 IL-2 폴리펩티드(예를 들어, 야생형 IL-2 폴리펩티드)에 의한 IL-2Rγ 서브유닛 동원과 비교된다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 비천연 아미노산 변형이 없는 등가의 IL-2 폴리펩티드에 비해 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 99% 초과의 감소이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 10%이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 20%이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 40%이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 50%이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 60%이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 70%이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 80%이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 90%이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 99%이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 99% 초과이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 100%이다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가를 추가로 갖는다.
일부 실시 형태에서, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 비천연 아미노산 변형이 없는 등가의 IL-2 폴리펩티드(예를 들어, 야생형 IL-2 폴리펩티드)에 비해 약 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 30배, 50배, 100배, 200배, 300배, 400배, 500배, 1,000배, 또는 그 이상이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 1배이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 2배이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 4배이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 5배이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 6배이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 8배이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 10배이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 30배이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 50배이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 100배이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 300배이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 500배이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 약 1000배이다. 일부 경우에, IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소는 1,000배 초과이다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가를 추가로 갖는다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 IL-2 폴리펩티드에 대한 IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가를 갖는다. 일부 경우에, 상기 동원의 감소는 비천연 아미노산이 없는 등가의 IL-2 폴리펩티드(예를 들어, 야생형 IL-2 폴리펩티드)에 의한 IL-2Rα 서브유닛 동원과 비교된다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 비천연 아미노산 변형이 없는 등가의 IL-2 폴리펩티드에 비해 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 99% 초과의 증가이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 10%이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 20%이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 40%이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 50%이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 60%이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 70%이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 80%이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 90%이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 99%이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 99% 초과이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 100%이다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 IL-2Rβ 서브유닛 및/또는 IL-2Rγ 서브유닛의 동원의 감소를 추가로 갖는다.
일부 실시 형태에서, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 비천연 아미노산 변형이 없는 등가의 IL-2 폴리펩티드(예를 들어, 야생형 IL-2 폴리펩티드)에 비해 약 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 30배, 50배, 100배, 200배, 300배, 400배, 500배, 1,000배, 또는 그 이상이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 1배이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 2배이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 4배이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 5배이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 6배이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 8배이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 10배이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 30배이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 50배이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 100배이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 300배이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 500배이다. 일부 경우에, IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가는 약 1000배이다. 일부 경우에, L-2Rα 서버유닛 동원의 증가는 1,000배 초과이다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 IL-2Rβ 서브유닛 및/또는 IL-2Rγ 서브유닛의 동원의 감소를 추가로 갖는다.
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rβγ에 대한 수용체 신호전달 효력의 감소를 갖는다. 일부 경우에, 수용체 신호전달 효력의 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 IL-2Rβγ에 대하여 약 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 30배, 50배, 100배, 200배, 300배, 400배, 500배, 1000배, 또는 그 이상이다. 일부 경우에, 수용체 신호전달 효력의 감소는 약 2배이다. 일부 경우에, 수용체 신호전달 효력의 감소는 약 5배이다. 일부 경우에, 수용체 신호전달 효력의 감소는 약 10배이다. 일부 경우에, 수용체 신호전달 효력의 감소는 약 20배이다. 일부 경우에, 수용체 신호전달 효력의 감소는 약 30배이다. 일부 경우에, 수용체 신호전달 효력의 감소는 약 40배이다. 일부 경우에, 수용체 신호전달 효력의 감소는 약 50배이다. 일부 경우에, 수용체 신호전달 효력의 감소는 약 100배이다. 일부 경우에, 수용체 신호전달 효력의 감소는 약 200배이다. 일부 경우에, 수용체 신호전달 효력의 감소는 약 300배이다. 일부 경우에, 수용체 신호전달 효력의 감소는 약 400배이다. 일부 경우에, 수용체 신호전달 효력의 감소는 약 500배이다. 일부 경우에, 수용체 신호전달 효력의 감소는 약 1000배이다.
일부 경우에, 수용체 신호전달 효력은 EC50 값에 의해 측정된다. 일부 경우에, 수용체 신호전달 효력의 감소는 EC50의 증가이다. 일부 경우에, EC50의 증가는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 대략 약 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 30배, 50배, 100배, 200배, 300배, 400배, 500배, 1000배, 또는 그 이상이다.
일부 경우에, 수용체 신호전달 효력은 ED50 값에 의해 측정된다. 일부 경우에, 수용체 신호전달 효력의 감소는 ED50의 증가이다. 일부 경우에, ED50의 증가는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 대략 약 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 30배, 50배, 100배, 200배, 300배, 400배, 500배, 1000배, 또는 그 이상이다.
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 IL-2 폴리펩티드는 야생형 IL-2 폴리펩티드의 치료 창과 비교하여 확장된 치료 창을 갖는다. 일부 경우에, 확장된 치료 창은 IL-2 폴리펩티드와 인터류킨 2 수용체 βγ(IL-2Rβγ) 사이의 결합의 감소, IL-2Rβγ에 대한 수용체 신호전달 효력의 감소, IL-2/IL-2Rβ 복합체에 대한 IL-2Rγ 서브유닛 동원의 감소, 또는 IL-2 폴리펩티드에 대한 IL-2Rα 서브유닛 동원의 증가로 인한 것이다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 인터류킨 2 αβγ 수용체(IL-2Rαβγ)의 활성화 손상이 없다.
일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2βγ 신호전달 복합체에 대한 제1 수용체 신호전달 효력 및 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 제2 수용체 신호전달 효력을 나타내며, 여기서, 제1 수용체 신호전달 효력과 제2 수용체 신호전달 효력의 차이는 적어도 1배이다. 일부 경우에, 상기 차이는 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배, 100배, 200배, 300배, 400배, 500배, 1000배, 또는 그 이상이다. 일부 경우에, 제1 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 더 적다. 일부 경우에, 제1 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 50배, 100배, 500배, 1000배, 또는 그 이상 더 낮다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2βγ 신호전달 복합체에 대한 수용체 신호전달 효력이 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 제2 수용체 신호전달 효력보다 더 낮다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 제1 수용체 신호전달 효력은 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 적어도 1배 더 낮다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 제1 수용체 신호전달 효력은 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 20배, 50배, 100배, 200배, 또는 500배 더 낮다. 일부 경우에, 제1 수용체 신호전달 효력 및 제2 수용체 신호전달 효력 둘 다는 야생형 IL-2 폴리펩티드의 각각의 효력보다 더 낮지만, 제1 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 더 낮다. 일부 경우에, 제1 수용체 신호전달 효력과 제2 수용체 신호전달 효력 사이의 차이는 변형된 IL-2 폴리펩티드의 치료 창을 증가시킨다.
일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 IL-2Rβγ를 이용한 IL-2의 수용체 신호전달 효력을 손상시키거나 차단하거나, 또는 IL-2/IL-2Rβ 복합체에 대한 IL-2Rγ 서브유닛 동원을 감소시킨다.
일부 경우에, IL-2Rβγ에 대한 수용체 신호전달 효력이 감소된 변형된 IL-2 폴리펩티드는 CD4+ T 조절(Treg) 세포를 확장시킬 수 있다.
일부 실시 형태에서, 변형 IL-2/IL-2Rαβγ 복합체에 의한 CD4+ Treg 세포 증식은 야생형 IL-2 폴리펩티드의 것과 동등하거나 이보다 더 크다.
일부 실시 형태에서, IL-2/IL-2Rαβγ 복합체는 동물 모델에서 질환 과정을 조절하기에 충분한 집단으로의 CD4+ Treg 세포의 증식을 유도한다.
일부 실시 형태에서, 인터류킨 2 αβγ 수용체(IL-2Rαβγ) 결합 단백질이 본원에 기술되며, 여기서, 상기 결합 단백질의 인터류킨 2 βγ 수용체(IL-2Rβγ)의 수용체 신호전달 효력은 야생형 인간 IL-2(hIL- 2)의 수용체 신호전달 효력보다 더 적고, 상기 결합 단백질은 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함한다. 일부 경우에, 상기 결합 단백질은 변형된 IL-2 폴리펩티드 또는 이의 기능적 활성 단편이며, 여기서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 인터류킨 2 αβγ 수용체(IL-2Rαβγ) 결합 단백질이 본원에 기술되며, 여기서, 상기 결합 단백질에 의한 IL-2/IL-2Rβ 복합체에 대한 IL-2Rγ 서브유닛의 동원은 야생형 인간 IL-2(hIL-2)의 것보다 더 적으며, 상기 결합 단백질은 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함한다. 일부 경우에, 상기 결합 단백질은 변형된 IL-2 폴리펩티드 또는 이의 기능적 활성 단편이며, 여기서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 인터류킨 2 αβγ 수용체(IL-2Rαβγ) 결합 단백질이 본원에 기술되며, 여기서, 상기 결합 단백질의 인터류킨 2 βγ 수용체(IL-2Rβγ)에 대한 결합 친화성은 야생형 인간 IL-2(hIL- 2)의 결합 친화성보다 더 작고, 상기 결합 단백질은 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함한다. 이러한 경우에, 상기 결합 단백질은 변형된 IL-2 폴리펩티드 또는 이의 기능적 활성 단편이며, 여기서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산을 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드 및 IL-2Rαβγ를 포함하는 IL-2/IL-2Rαβγ 복합체가 본원에 기술되며, 여기서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rβγ에 대해 감소된 수용체 신호전달 효력을 가지며, 감소된 수용체 신호전달 효력은 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rβγ 사이의 결합 친화성과 비교된다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 비천연 아미노산에 공유적으로 부착된 콘쥬게이팅 모이어티를 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산을 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드 및 IL-2Rαβγ를 포함하는 IL-2/IL-2Rαβγ 복합체가 본원에 기술되며, 여기서, 상기 변형된 IL-2 폴리펩티드에 의한 IL-2/IL-2Rβ 복합체에 대한 IL-2Rγ 서브유닛의 동원은 야생형 IL-2 폴리펩티드의 것보다 더 적다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 비천연 아미노산에 공유적으로 부착된 콘쥬게이팅 모이어티를 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산을 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드 및 IL-2Rαβγ를 포함하는 IL-2/IL-2Rαβγ 복합체가 본원에 기술되며, 여기서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rβγ에 대해 감소된 결합 친화도를 가지며, 감소된 결합 친화도는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rβγ 사이의 결합 친화도와 비교된다. 일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산을 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드 및 IL-2Rαβγ를 포함하는 IL-2/IL-2Rαβγ 복합체가 본원에 기술되며, 여기서, 상기 변형된 IL-2 폴리펩티드에 의한 IL-2/IL-2Rβ 복합체에 대한 IL-2Rγ 서브유닛의 동원은 야생형 IL-2 폴리펩티드의 것보다 더 적다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 비천연 아미노산에 공유적으로 부착된 콘쥬게이팅 모이어티를 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, 세포 집단에서 CD4+ Treg 세포를 선택적으로 확장시키는 CD4+ Treg 세포 활성화제가 본원에 기술되며, 여기서, 상기 활성화제는 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 경우에, 상기 활성화제는 CD3+ 세포 집단과 접촉되는 경우 CD8+ 이펙터 T 세포 및/또는 자연 살해 세포를, 야생형 IL-2 폴리펩티드와 접촉된 CD3+ 세포 집단에서의 CD8+ 이펙터 T 세포 및/또는 자연 살해 세포의 확장에 비해, CD3+ 세포 집단에서 20%, 15%, 10%, 5%, 1% 또는 0.1% 미만만큼 확장시킨다. 일부 경우에, 상기 세포 집단은 생체 내 세포 집단이다. 일부 경우에, 상기 세포 집단은 시험관 내 세포 집단이다. 일부 경우에, 상기 세포 집단은 생체 외 세포 집단이다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 38에 상응하는 잔기 R38에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 41에 상응하는 잔기 T41에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 43에 상응하는 잔기 K43에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 44에 상응하는 잔기 F44에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 45에 상응하는 잔기 Y45에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 60에 상응하는 잔기 E60에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 61에 상응하는 잔기 E61에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 62에 상응하는 잔기 E62에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 64에 상응하는 잔기 K64에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 68에 상응하는 잔기 E68에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 69에 상응하는 잔기 V69에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 71에 상응하는 잔기 N71에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 72에 상응하는 잔기 L72에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 104에 상응하는 잔기 M104에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 105에 상응하는 C105에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 107에 상응하는 잔기 Y107에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
사이토카인 콘쥬게이트 전구체
하나 이상의 아미노산이 야생형 아미노산으로부터 돌연변이된, 돌연변이 사이토카인(예컨대 IL-2)을 포함하는 사이토카인 콘쥬게이트 전구체가 본원에 기술된다. 이러한 전구체는 흔히 질환 또는 병태의 치료를 위한 본원에 기술된 방법과 함께 사용된다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 전구체는 콘쥬게이팅되지 않는다. 이러한 돌연변이는 다양하게 부가, 결실, 또는 치환을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 돌연변이는 다른 천연 아미노산으로의 치환을 포함한다. 일부 경우에, 돌연변이 사이토카인은 아미노산 위치 Y31, K32, N33, P34, K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, P47, K48, Q57, E60, E61, E62, L63, K64, P65, E68, V69, N71, L72, Q74, S75, K76, N77, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, 또는 A112에서의 돌연변이를 포함하며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 Y31, K32, N33, P34, K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, P47, K48, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, Q74, S75, K76, N77, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, 및 A112로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 N33, P34, K35, T37, R38, M39, T41, F42, K43, F44, Y45, Q57, E60, E61, E62, L63, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, 및 A112로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 T37, T41, F42, F44, Y45, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 R38 및 K64로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 E61, E62, 및 E68로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 K35이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 T37이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 R38이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 T41이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 F42이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 K43이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 F44이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 Y45이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 E61이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 E62이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 K64이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 E68이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 P65이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 V69이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 L72이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 Y107이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 L72이다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 D109이다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 콘쥬게이션 모이어티를 포함하며, 콘쥬게이션 모이어티는 돌연변이 사이토카인에서의 돌연변이된 부위에 부착된다.
본원에 기술된 사이토카인 돌연변이체는 흔히 천연 아미노산으로의 돌연변이 하나 이상을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1, 및 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62K 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62C 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62A 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62I 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62L 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62Y 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62W 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62N 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62R 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62D 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62Q 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62G 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62H 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62M 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62F 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62P 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62S 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62T 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 E62V 돌연변이를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1, 및 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65K 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65C 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65A 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65I 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65L 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65Y 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65W 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65N 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65R 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65D 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65Q 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65G 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65H 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65M 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65F 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65E 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65S 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65T 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 돌연변이체는 서열 번호 1 및 P65V 돌연변이를 포함한다.
단백질 또는 펩티드 융합물
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트는 펩티드 또는 단백질에 융합된 사이토카인(예를 들어, IL-2 또는 다른 사이토카인)(융합물)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드 또는 단백질은 항체 또는 항체 단편이다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트는 항체, 또는 이의 결합 단편에 융합된 사이토카인(예를 들어, IL-2 또는 다른 사이토카인)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 사이토카인은 다수의 단백질 또는 펩티드에 융합된다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 콘쥬게이트는 단백질 또는 펩티드에 대한 사이토카인의 융합물 및 적어도 하나의 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 경우에, 항체 또는 이의 결합 단편은 인간화 항체 또는 이의 결합 단편, 쥣과 항체 또는 이의 결합 단편, 키메라 항체 또는 이의 결합 단편, 단클론 항체 또는 이의 결합 단편, 1가 Fab', 2가 Fab2, F(ab)'3 단편, 단쇄 가변 단편(scFv), 비스-scFv, (scFv)2, 디아바디, 미니바디, 나노바디, 트리아바디, 테트라바디, 휴마바디, 디술피드-안정화 Fv 단백질(dsFv), 단일-도메인 항체(sdAb), Ig NAR, 낙타 항체 또는 이의 결합 단편, 이중특이성 항체 또는 이의 결합 단편, 또는 이들의 화학적으로 변형된 유도체를 포함한다. 일부 경우에 이러한 융합 단백질은 번역을 통하여 직접적으로 생성된다. 일부 실시 형태에서, 융합물은 화학적 라이게이션 방법 또는 다른 효소적 라이게이션 방법을 사용하여 생성된다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 콘쥬게이트는 링커에 의해 부착된 융합 펩티드 또는 단백질을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 링커는 펩티드이다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 콘쥬게이트는 N-말단 펩티드 또는 단백질 융합물을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 콘쥬게이트는 C-말단 펩티드 또는 단백질 융합물을 포함한다. 일부 경우에, 펩티드 또는 단백질에 융합된 사이토카인은 아래에 설명된 하나 이상의 콘쥬게이션 모이어티에 추가로 콘쥬게이팅된다.
일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 scFv, 비스-scFv, (scFv)2, dsFv, 또는 sdAb 융합물에 대한 융합물을 포함한다. 일부 경우에, 융합물은 scFv를 포함한다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 비스-scFv에 대한 융합물을 포함한다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 (scFv)2에 대한 융합물을 포함한다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 dsFv에 대한 융합물을 포함한다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 sdAb에 대한 융합물을 포함한다. 일부 경우에, scFv, 비스-scFv, (scFv)2, dsFv, 또는 sdAb에 융합된 사이토카인은 아래에 설명된 하나 이상의 콘쥬게이션 모이어티에 추가로 콘쥬게이팅된다.
일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 항체, 예를 들어 IgG, IgA, IgM, IgE, 또는 IgD의 Fc 부분에 대한 융합물을 포함한다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 IgG(예를 들어, IgG1, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 부분에 대한 융합물을 포함한다. 일부 경우에, Fc 부분에 융합된 사이토카인은 아래에 설명된 하나 이상의 콘쥬게이션 모이어티에 추가로 콘쥬게이팅된다.
일부 경우에, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN, 또는 TNF) 폴리펩티드는 항체, 또는 이의 결합 단편에 융합된다. 일부 경우에, 사이토카인 폴리펩티드는 인간화 항체 또는 이의 결합 단편, 쥣과 항체 또는 이의 결합 단편, 키메라 항체 또는 이의 결합 단편, 단클론 항체 또는 이의 결합 단편, 1가 Fab', 2가 Fab2, F(ab)'3 단편, 단쇄 가변 단편(scFv), 비스-scFv, (scFv)2, 디아바디, 미니바디, 나노바디, 트리아바디, 테트라바디, 휴마바디, 디술피드-안정화 Fv 단백질(dsFv), 단일-도메인 항체(sdAb), Ig NAR, 낙타 항체 또는 이의 결합 단편, 이중특이성 항체 또는 이의 결합 단편, 또는 이들의 화학적으로 변형된 유도체에 융합된다. 추가의 경우에, 사이토카인 폴리펩티드는 항체의 Fc 부분에 융합된다. 추가의 경우에, 사이토카인 폴리펩티드는 IgG(예를 들어, IgG1, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 부분에 융합된다. 일부 경우에, 항체 또는 이의 결합 단편에 융합된 사이토카인은 아래에 설명된 하나 이상의 콘쥬게이션 모이어티에 추가로 콘쥬게이팅된다.
일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 항체 또는 이의 결합 단편에 융합된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 인간화 항체 또는 이의 결합 단편, 쥣과 항체 또는 이의 결합 단편, 키메라 항체 또는 이의 결합 단편, 단클론 항체 또는 이의 결합 단편, 1가 Fab', 2가 Fab2, F(ab)'3 단편, 단쇄 가변 단편(scFv), 비스-scFv, (scFv)2, 디아바디, 미니바디, 나노바디, 트리아바디, 테트라바디, 휴마바디, 디술피드-안정화 Fv 단백질(dsFv), 단일-도메인 항체(sdAb), Ig NAR, 낙타 항체 또는 이의 결합 단편, 이중특이성 항체 또는 이의 결합 단편, 또는 이들의 화학적으로 변형된 유도체에 융합된다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 항체의 Fc 부분에 융합된다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 IgG(예를 들어, IgG1, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 부분에 융합된다. 일부 경우에, 항체 또는 이의 결합 단편에 융합된 IL-2 폴리펩티드는 아래에 설명된 하나 이상의 콘쥬게이션 모이어티에 추가로 콘쥬게이팅된다.
천연 아미노산 및 비천연 아미노산
일부 실시 형태에서, (예를 들어, 사이토카인, 예컨대 IL-2 내의) 본원에 기술된 아미노산 잔기는 콘쥬게이팅 모이어티에 결합하기 전에(또는 이와 반응하기 전에) 라이신, 시스테인, 히스티딘, 아르기닌, 아스파르트산, 글루탐산, 세린, 트레오닌, 또는 티로신으로 돌연변이된다. 예를 들어, 라이신, 시스테인, 히스티딘, 아르기닌, 아스파르트산, 글루탐산, 세린, 트레오닌, 또는 티로신의 측쇄는 본원에 기술된 콘쥬게이팅 모이어티에 결합할 수 있다. 일부 경우에, 아미노산 잔기는 시스테인, 라이신, 또는 히스티딘으로 돌연변이된다. 일부 경우에, 아미노산 잔기는 시스테인으로 돌연변이된다. 일부 경우에, 아미노산 잔기는 라이신으로 돌연변이된다. 일부 경우에, 아미노산 잔기는 히스티딘으로 돌연변이된다. 일부 경우에, 아미노산 잔기는 티로신으로 돌연변이된다. 일부 경우에, 아미노산 잔기는 트립토판으로 돌연변이된다. 일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 콘쥬게이팅 모이어티와 콘쥬게이팅되지 않는다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 사이토카인은 비천연 아미노산을 포함하고, 사이토카인은 단백질에 콘쥬게이팅되고, 여기서 부착점은 비천연 아미노산이 아니다.
일부 실시 형태에서, (예를 들어, 사이토카인, 예컨대 IL-2 내의) 본원에 기술된 아미노산 잔기는 콘쥬게이팅 모이어티에 결합하기 전에 비천연 아미노산으로 돌연변이된다. 일부 경우에, 비천연 아미노산으로의 돌연변이는 면역계의 자가-항원 반응을 방지하거나 최소화한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "비천연 아미노산" 또는 "비정규 아미노산"은 단백질에서 자연 발생하는 20개 아미노산 이외의 아미노산을 지칭한다. 비천연 아미노산의 비제한적 예는 다음을 포함한다: p-아세틸-L-페닐알라닌, p-요오도-L-페닐알라닌, p-메톡시페닐알라닌, O-메틸-L-티로신, p-프로파르길옥시페닐알라닌, p-프로파르길-페닐알라닌, L-3-(2-나프틸)알라닌, 3-메틸-페닐알라닌, O-4-알릴-L-티로신, 4-프로필-L-티로신, 트리-O-아세틸-GlcNAcp-세린, L-도파, 플루오르화 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, p-아지도-L-페닐알라닌, p-아실-L-페닐알라닌, p-벤조일-L-페닐알라닌, p-보로노페닐알라닌, O-프로파르길티로신, L-포스포세린, 포스포노세린, 포스포노티로신, p-브로모페닐알라닌, 셀레노시스테인, p-아미노-L-페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, N6-(2-아지도에톡시)-카르보닐-L-라이신(AzK; 이의 화학 구조는 도 3c에 화합물 90으로 도시되어 있음), 티로신 아미노산의 비천연 유사체; 글루타민 아미노산의 비천연 유사체; 페닐알라닌 아미노산의 비천연 유사체; 세린 아미노산의 비천연 유사체; 트레오닌 아미노산의 비천연 유사체; 알킬, 아릴, 아실, 아지도, 시아노, 할로, 히드라진, 히드라지드, 히드록실, 알케닐, 알키닐, 에테르, 티올, 술포닐, 셀레노, 에스테르, 티오산, 보레이트, 보로네이트, 포스포, 포스포노, 포스핀, 헤테로시클릭, 에논, 이민, 알데히드, 히드록실아민, 케토, 또는 아미노 치환된 아미노산, 또는 이들의 조합; 광활성화성 가교결합제를 갖는 아미노산; 스핀 표지된 아미노산; 형광 아미노산; 금속 결합 아미노산; 금속 함유 아미노산; 방사성 아미노산; 포토케이징된 아미노산 및/또는 광이성질화 아미노산; 비오틴 또는 비오틴-유사체 함유 아미노산; 케토 함유 아미노산; 폴리에틸렌 글리콜 또는 폴리에테르를 포함하는 아미노산; 중원자 치환된 아미노산; 화학절단성 또는 광절단성 아미노산; 긴 측쇄를 갖는 아미노산; 독성 기를 함유하는 아미노산; 당 치환된 아미노산; 탄소 연결된 당 함유 아미노산; 산화환원 활성 아미노산; a-히드록시 함유 산; 아미노 티오산; α,α-이치환 아미노산; β-아미노산; 프롤린 또는 히스티딘 이외의 환형 아미노산, 및 페닐알라닌, 티로신, 또는 트립토판 이외의 방향족 아미노산.
일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 선택적 반응기, 또는 표적 폴리펩티드의 부위 선택적 표지를 위한 반응기를 포함한다. 일부 경우에, 화학은 쌍직교성 반응(예를 들어, 생체적합성 및 선택적 반응)이다. 일부 경우에, 화학은 Cu(I)-촉매 또는 "구리 비함유" 알킨-아지드 트리아졸 형성 반응, Staudinger 라이게이션, 역전자 요구 Diels-Alder(IEDDA) 반응, "포토-클릭" 화학, 또는 금속 매개 공정, 예컨대 올레핀 복분해, 및 Suzuki-Miyaura 또는 Sonogashira 교차-커플링이다.
일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 예를 들어 UV 조사시 가교결합하는 광반응기를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 광 케이징된 아미노산을 포함한다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 파라-치환된, 메타-치환된 또는 오르토-치환된 아미노산 유도체이다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 p-아세틸-L-페닐알라닌, p-아지도메틸-L-페닐알라닌(pAMF), p-요오도-L-페닐알라닌, O-메틸-L-티로신, p-메톡시페닐알라닌, p-프로파르길옥시페닐알라닌, p-프로파르길-페닐알라닌, L-3-(2-나프틸)알라닌, 3-메틸-페닐알라닌, O- 4-알릴-L-티로신, 4-프로필-L-티로신, 트리-O-아세틸-GlcNAcp-세린, L-도파, 플루오르화 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, p-아지도-L-페닐알라닌, p-아실-L-페닐알라닌, p-벤조일-L-페닐알라닌, L-포스포세린, 포스포노세린, 포스포노티로신, p-브로모페닐알라닌, p-아미노-L-페닐알라닌 또는 이소프로필-L-페닐알라닌을 포함한다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 3-아미노티로신, 3-니트로티로신, 3,4-디히드록시-페닐알라닌 또는 3-요오도티로신이다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 페닐셀레노시스테인이다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 벤조페논, 케톤, 요오다이드, 메톡시, 아세틸, 벤조일, 또는 아지드 함유 페닐알라닌 유도체이다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 벤조페논, 케톤, 요오다이드, 메톡시, 아세틸, 벤조일, 또는 아지드 함유 라이신 유도체이다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 방향족 측쇄를 포함한다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 방향족 측쇄를 포함하지 않는다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 아지도기를 포함한다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 마이클(Michael)-억셉터 기를 포함한다. 일부 경우에, 마이클-억셉터 기는 1,2-부가 반응을 통해 공유 결합을 형성할 수 있는 불포화 모이어티를 포함한다. 일부 경우에, 마이클-억셉터 기는 전자 결핍 알켄 또는 알킨을 포함한다. 일부 경우에, 마이클-억셉터 기는 알파,베타 불포화된 다음의 것을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다: 케톤, 알데히드, 술폭시드, 술폰, 니트릴, 이민 또는 방향족.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 데히드로알라닌이다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 알데히드 또는 케톤 기를 포함한다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 알데히드 또는 케톤 기를 포함하는 라이신 유도체이다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 베타, 감마, 또는 델타 위치에 하나 이상의 O, N, Se, 또는 S 원자를 포함하는 라이신 유도체이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 감마 위치에 O, N, Se, 또는 S 원자를 포함하는 라이신 유도체이다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 엡실론 N 원자가 산소 원자로 대체된 라이신 유도체이다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 번역 후 변형된 자연 발생 라이신이 아닌 라이신 유도체이다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 알파 위치로부터 여섯 번째 원자가 카르보닐 기를 포함하는, 측쇄를 포함하는 아미노산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 알파 위치로부터 여섯 번째 원자가 카르보닐 기를 포함하고 알파 위치로부터의 다섯 번째 원자가 질소인, 측쇄를 포함하는 아미노산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 알파 위치로부터 일곱 번째 원자가 산소 원자인, 측쇄를 포함하는 아미노산이다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 셀레늄을 포함하는 세린 유도체이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 셀레노세린(2-아미노-3-히드로셀레노프로판산)이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 2-아미노-3-((2-((3-(벤질옥시)-3-옥소프로필)아미노)에틸)셀라닐)프로판산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 2-아미노-3-(페닐셀라닐)프로판산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 셀레늄을 포함하고, 셀레늄의 산화는 알켄을 포함하는 비천연 아미노산을 형성시킨다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 시클로옥티닐 기를 포함한다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 트랜스시클로옥테닐기를 포함한다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 노보네닐 기를 포함한다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 시클로프로페닐 기를 포함한다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 디아지린 기를 포함한다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 테트라진 기를 포함한다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 측쇄 질소가 카르바밀화된 라이신 유도체이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 측쇄 질소가 아실화된 라이신 유도체이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 2-아미노-6-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}헥산산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 2-아미노-6-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}헥산산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-Boc-N6-메틸라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-아세틸라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 피롤라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-트리플루오로아세틸라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 2-아미노-6-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}헥산산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 2-아미노-6-{[(p-요오도벤질옥시)카르보닐]아미노}헥산산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 2-아미노-6-{[(p-니트로벤질옥시)카르보닐]아미노}헥산산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-프롤릴라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 2-아미노-6-{[(시클로펜틸옥시)카르보닐]아미노}헥산산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-(시클로펜탄카르보닐)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-(테트라히드로푸란-2-카르보닐)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-(3-에티닐테트라히드로푸란-2-카르보닐)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 2-아미노-6-{[(2-아지도시클로펜틸옥시)카르보닐]아미노}헥산산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-(2-아지도에톡시)-카르보닐-라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 2-아미노-6-{[(2-니트로벤질옥시)카르보닐]아미노}헥산산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 2-아미노-6-{[(2-시클로옥티닐옥시)카르보닐]아미노}헥산산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-(2-아미노부트-3-이노일)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 2-아미노-6-((2-아미노부트-3-이노일)옥시)헥산산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-(알릴옥시카르보닐)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-(부테닐-4-옥시카르보닐)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-(펜테닐-5-옥시카르보닐)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-((부트-3-인-1-일옥시)카르보닐)-라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-((펜트-4-인-1-일옥시)카르보닐)-라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-(티아졸리딘-4-카르보닐)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 2-아미노-8-옥소노난산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 2-아미노-8-옥소옥탄산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-(2-옥소아세틸)라이신이다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-프로피오닐라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-부티릴라이신이며, 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-(부트-2-에노일)라이신이며, 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-((바이시클로[2.2.1]헵트-5-엔-2-일옥시)카르보닐)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-((스피로[2.3]헥스-1-엔-5-일메톡시)카르보닐)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-(((4-(1-(트리플루오로메틸)시클로프로프-2-엔-1-일)벤질)옥시)카르보닐)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-((바이시클로[2.2.1]헵트-5-엔-2-일메톡시)카르보닐)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 시스테이닐라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-((1-(6-니트로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에톡시)카르보닐)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-((2-(3-메틸-3H-디아지린-3-일)에톡시)카르보닐)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-((3-(3-메틸-3H-디아지린-3-일)프로폭시)카르보닐)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-((메타 니트로벤질옥시)N6-메틸카르보닐)라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-((바이시클로[6.1.0]논-4-인-9-일메톡시)카르보닐)-라이신이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 N6-((시클로헵트-3-엔-1-일옥시)카르보닐)-L-라이신이다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 2-아미노-3-(((((벤질옥시)카르보닐)아미노)메틸)셀라닐)프로판산이다.
일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 용도 변경된 앰버, 오팔, 또는 오커 종결 코돈에 의해 사이토카인(예를 들어, IL 폴리펩티드)에 통합된다.
일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 4-염기 코돈에 의해 사이토카인(예를 들어, IL 폴리펩티드)에 통합된다.
일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 용도 변경된 희귀 센스 코돈에 의해 사이토카인(예를 들어, IL 폴리펩티드)에 통합된다.
일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 비천연 핵산을 포함하는 합성 코돈에 의해 사이토카인(예를 들어, IL 폴리펩티드)에 통합된다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 직교성 변형 신테타아제/tRNA 쌍에 의해 사이토카인에 통합된다. 이러한 직교성 쌍은, a) 비천연 tRNA에 다른 내인성 아미노산이 차징(charging)되는 것 및 b) 다른 내인성 tRNA에 비천연 아미노산이 차징되는 것을 최소화하면서 비천연 tRNA를 비천연 아미노산으로 차징시킬 수 있는 비천연 신테타아제를 포함한다. 이러한 직교성 쌍은, a) 내인성 신테타아제에 의해 다른 내인성 아미노산으로 차징되는 것을 방지하면서 비천연 신테타아제에 의해 차징될 수 있는 tRNA를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이러한 쌍은 다양한 유기체, 예컨대 박테리아, 효모, 고세균, 또는 인간 원천으로부터 확인된다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제/tRNA 쌍은 단일 유기체로부터의 성분을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제/tRNA 쌍은 2개의 상이한 유기체로부터의 성분을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제/tRNA 쌍은 변형 전에 2개의 상이한 아미노산의 번역을 촉진하는 성분을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 알라닌 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 아르기닌 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 아스파라긴 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 아스파르트산 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 시스테인 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 글루타민 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 글루탐산 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 알라닌 글리신이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 히스티딘 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 류신 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 이소류신 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 라이신 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 메티오닌 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 페닐알라닌 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 프롤린 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 세린 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 트레오닌 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 트립토판 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 티로신 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 발린 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제는 변형된 포스포세린 신테타아제이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 알라닌 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 아르기닌 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 아스파라긴 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 아스파르트산 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 시스테인 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 글루타민 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 글루탐산 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 알라닌 글리신이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 히스티딘 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 류신 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 이소류신 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 라이신 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 메티오닌 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 페닐알라닌 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 프롤린 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 세린 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 트레오닌 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 트립토판 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 티로신 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 발린 tRNA이다. 일부 실시 형태에서, 직교성 tRNA는 변형된 포스포세린 tRNA이다.
일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 아미노아실(aaRS 또는 RS)-tRNA 신테타아제-tRNA 쌍에 의해 사이토카인(예를 들어, IL 폴리펩티드)에 통합된다. 예시적인 aaRS-tRNA 쌍은 메타노코커스 야나스치(Methanococcus jannaschii)(Mj-Tyr) aaRS/tRNA 쌍, 이. 콜라이(E. coli) TyrRS(Ec - Tyr)/비. 스테아로써모필루스(B. stearothermophilus) tRNACUA 쌍, 이. 콜라이 LeuRS(Ec -Leu)/비. 스테아로써모필루스 tRNACUA 쌍 및 피롤리실-tRNA 쌍을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 Mj - TyrRS/tRNA 쌍에 의해 사이토카인(예를 들어, IL 폴리펩티드)에 통합된다. Mj-TyrRS/tRNA 쌍에 의해 통합될 수 있는 예시적인 UAA는 파라-치환된 페닐알라닌 유도체, 예컨대 p-아미노페닐알라닌 및 p-메톡시페닐알라닌; 메타-치환된 티로신 유도체, 예컨대 3-아미노티로신, 3-니트로티로신, 3,4-디히드록시페닐알라닌 및 3-요오도티로신; 페닐셀레노시스테인; p-보로노페닐알라닌; 및 o-니트로벤질티로신을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 Ec - Tyr/tRNACUA 또는 Ec -Leu/tRNACUA 쌍에 의해 사이토카인(예를 들어, IL 폴리펩티드)에 통합된다. Ec - Tyr/tRNACUA 또는 Ec -Leu/tRNACUA 쌍에 의해 통합될 수 있는 예시적인 UAA는 벤조페논, 케톤, 요오다이드, 또는 아지드 치환기를 함유하는 페닐알라닌 유도체; O-프로파르길티로신; α-아미노카프릴산, O-메틸 티로신, O-니트로벤질 시스테인; 및 3-(나프탈렌-2-일아미노)-2-아미노-프로판산을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 피롤리실-tRNA 쌍에 의해 사이토카인(예를 들어, IL 폴리펩티드)에 통합된다. 일부 경우에, PylRS는 고세균, 예를 들어 메탄생성 고세균으로부터 얻어진다. 일부 경우에, PylRS는 메타노사르시나 바르케리(Methanosarcina barkeri), 메타노사르시나 마제이(Methanosarcina mazei) 또는 메타노사르시나 아세티보란스(Methanosarcina acetivorans)로부터 얻어진다. 피롤리실-tRNA 쌍에 의해 통합될 수 있는 예시적인 UAA는 아미드 및 카르바메이트 치환된 라이신, 예컨대 2-아미노-6-((R)-테트라히드로푸란-2-카르복사미도)헥산산, N-ε-D-프롤릴-L-라이신, 및 N-ε-시클로펜틸옥시카르보닐-L-라이신; N-ε-아크릴로일-L-라이신; N-ε-[(1-(6-니트로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에톡시)카르보닐]-L-라이신; 및 N-ε-(1-메틸시클로프로-2-엔카르복사미도)라이신을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트는 엠. 바르케리 피롤리실-tRNA 신테타아제(Mb PylRS)에 의해 N6-((2-아지도에톡시)-카르보닐)-L-라이신(AzK)과 같은 비천연 아미노산으로 선택적으로 차징되는 엠. 마제이 Pyl tRNA를 사용하여 제조될 수 있다. 문헌[Zhang et al., Nature 2017, 551(7682): 644-647]에 개시된 것과 같은 다른 방법들은 당업자에게 알려져 있다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 US 9,988,619 및 US 9,938,516에 개시된 신테타아제에 의해 본원에 기술된 사이토카인(예를 들어, IL 폴리펩티드)에 통합된다. 이러한 신테타아제에 의해 통합될 수 있는 예시적인 UAA는 파라-메틸아지도-L-페닐알라닌, 아랄킬, 헤테로시클릴, 헤테로아랄킬 비천연 아미노산 등을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이러한 UAA는 피리딜, 피라지닐, 피라졸릴, 트리아졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 티오페닐, 또는 다른 복소환을 포함한다. 이러한 아미노산은 일부 실시 형태에서 아지드, 테트라진 또는 커플링 파트너, 예컨대 수용성 모이어티에 콘쥬게이팅될 수 있는 다른 화학 기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이러한 신테타아제는 발현되고 생체 내 사이토카인에 UAA를 통합시키기 위해 사용된다. 일부 실시 형태에서, 이러한 신테타아제는 무세포 번역 시스템을 사용하여 사이토카인에 UAA를 통합시키기 위해 사용된다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 천연 발생 신테타아제에 의해 본원에 기술된 사이토카인(예를 들어, IL 폴리펩티드)에 통합된다. 일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 하나 이상의 아미노산에 영양요구성인 유기체에 의해 사이토카인에 통합된다. 일부 실시 형태에서, 영양요구성 아미노산에 상응하는 신테타아제는 상응하는 tRNA를 비천연 아미노산으로 차징시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 셀레노시스테인 또는 이의 유도체이다. 일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 셀레노메티오닌 또는 이의 유도체이다. 일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 방향족 아미노산이고, 방향족 아미노산은 아릴 할라이드, 예컨대 요오다이드를 포함한다. 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 영양요구성 아미노산과 구조적으로 유사하다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 도 1에 예시된 비천연 아미노산을 포함한다.
일부 경우에, 비천연 아미노산은 라이신 또는 페닐알라닌 유도체 또는 유사체를 포함한다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 라이신 유도체 또는 라이신 유사체를 포함한다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 피롤라이신(Pyl)을 포함한다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 페닐알라닌 유도체 또는 페닐알라닌 유사체를 포함한다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 문헌[Wan, et al., "Pyrrolysyl-tRNA synthetase: an ordinary enzyme but an outstanding genetic code expansion tool," Biocheim Biophys Aceta 1844(6): 1059-4070 (2014)]에 기술된 비천연 아미노산이다. 일부 경우에, 비천연 아미노산은 도 2(예를 들어, 도 2a 및 도 2b)에 예시된 비천연 아미노산을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 (문헌[Dumas et al., Chemical Science 2015, 6, 50-69]의 표 1에서 발췌된) 도 3a 내지 도 3d에 예시된 비천연 아미노산을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 사이토카인(예를 들어, IL 폴리펩티드)에 통합되는 비천연 아미노산은 US 9,840,493; US 9,682,934; US 2017/0260137; US 9,938,516; 또는 US 2018/0086734에 개시되어 있다. 이러한 신테타아제에 의해 통합될 수 있는 예시적인 UAA는 파라-메틸아지도-L-페닐알라닌, 아랄킬, 헤테로시클릴, 헤테로아랄킬, 및 라이신 유도체 비천연 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 이러한 UAA는 피리딜, 피라지닐, 피라졸릴, 트리아졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 티오페닐, 또는 다른 복소환을 포함한다. 이러한 아미노산은 일부 실시 형태에서 아지드, 테트라진 또는 커플링 파트너, 예컨대 수용성 모이어티에 콘쥬게이팅될 수 있는 다른 화학 기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, UAA는 알킬 링커를 통해 방향족 모이어티에 부착된 아지드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 알킬 링커는 C1-C10 링커이다. 일부 실시 형태에서, UAA는 알킬 링커를 통해 방향족 모이어티에 부착된 테트라진을 포함한다. 일부 실시 형태에서, UAA는 아미노 기를 통해 방향족 모이어티에 부착된 테트라진을 포함한다. 일부 실시 형태에서, UAA는 알킬아미노 기를 통해 방향족 모이어티에 부착된 테트라진을 포함한다. 일부 실시 형태에서, UAA는 알킬 사슬을 통해 아미노산 측쇄의 말단 질소(예를 들어, 라이신 유도체의 N6, 또는 더 짧은 알킬 측쇄를 포함하는 유도체의 N5, N4, 또는 N3)에 부착된 아지드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, UAA는 알킬 사슬을 통해 아미노산 측쇄의 말단 질소에 부착된 테트라진을 포함한다. 일부 실시 형태에서, UAA는 알킬 링커를 통해 아미드에 부착된 아지드 또는 테트라진을 포함한다. 일부 실시 형태에서, UAA는 3-아미노알라닌, 세린, 라이신, 또는 이의 유도체의 아지드 또는 테트라진 함유 카르바메이트 또는 아미드이다. 일부 실시 형태에서, 이러한 UAA는 생체 내에서 사이토카인에 통합된다. 일부 실시 형태에서, 이러한 UAA는 무세포 시스템에서 사이토카인에 통합된다.
콘쥬게이팅 모이어티
특정 실시 형태에서, 상기 기술된 하나 이상의 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN, 또는 TNF)에 결합된 콘쥬게이팅 모이어티가 본원에 개시된다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 사이토카인과 이의 수용체의 상호작용을 교란하는 분자이다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 사이토카인에 결합시 사이토카인 콘쥬게이트가 면역 반응을 조절할 수 있게 하는 임의의 분자이다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 공유 결합을 통해 사이토카인에 결합된다. 일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인은 트리아졸 기로 콘쥬게이팅 모이어티에 부착된다. 일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인은 디히드로피리다진 또는 피리다진 기로 콘쥬게이팅 모이어티에 부착된다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 수용성 중합체를 포함한다. 다른 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 단백질 또는 이의 결합 단편을 포함한다. 추가의 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 펩티드를 포함한다. 추가의 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 핵산을 포함한다. 추가의 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 소분자를 포함한다. 추가의 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 바이오콘쥬게이트(예를 들어, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, 또는 TLR9 작용제와 같은 TLR 작용제; 또는 Pam3Cys, CFA, MALP2, Pam2Cys, FSL-1, Hib-OMPC, 폴리 I:C, 폴리 A:U, AGP, MPL A, RC-529, MDF2β, CFA, 또는 플라젤린과 같은 합성 리간드)를 포함한다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 혈청 반감기를 증가시키고/시키거나, 안정성을 향상시킨다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 사이토카인과 하나 이상의 사이토카인 수용체 도메인 또는 서브유닛과의 상호작용을 감소시킨다. 추가의 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 동족 수용체(들)를 갖는 하나 이상의 사이토카인 도메인 또는 서브유닛과의 사이토카인의 상호작용을 차단한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트는 다수의 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 사이토카인 펩티드의 비천연 또는 천연 아미노산에 부착된다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 콘쥬게이트는 천연 아미노산에 부착된 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 콘쥬게이트는 사이토카인 펩티드의 비천연 아미노산에 부착된다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 사이토카인 펩티드의 N 또는 C 말단 아미노산에 부착된다. 다양한 조합 부위가 본원에 개시되고, 예를 들어 제1 콘쥬게이팅 모이어티는 사이토카인 펩티드의 비천연 또는 천연 아미노산에 부착되고, 제2 콘쥬게이팅 모이어티는 사이토카인 펩티드의 N 또는 C 말단 아미노산에 부착된다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 펩티드의 다수의 잔기에 단일 콘쥬게이팅 모이어티가 부착된다(예를 들어, 스테이플). 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 사이토카인 펩티드의 N 말단 아미노산 및 C 말단 아미노산 모두에 부착된다.
수용성 중합체
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이팅 모이어티는 수용성 중합체이다. 일부 경우에, 수용성 중합체는 비펩티드성이고, 비독성이고, 생체적합성이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 생체 조직과 관련하여(예를 들어, 환자에 대한 투여) 물질을 단독으로 또는 다른 물질(예를 들어, 활성제, 예컨대 사이토카인 모이어티)과 함께 사용하는 것과 관련된 유리한 효과가 임상의, 예를 들어 의사, 독성학자, 또는 임상 개발 전문가가 평가할 때 임의의 해로운 효과보다 더 큰 경우, 그 물질은 생체적합성인 것으로 간주된다. 일부 경우에, 수용성 중합체는 추가로 비면역원성이다. 일부 경우에, 물질의 생체 내 의도된 사용이 원치 않는 면역 반응(예를 들어, 항체의 형성)을 생성하지 않는 경우, 또는 면역 반응이 생성되고, 이러한 반응이 임상의, 예를 들어 의사, 독성학자, 또는 임상 개발 전문가가 평가할 때 임상적으로 유의하거나 중요하다고 여겨지지 않는 경우, 그 물질은 비면역원성인 것으로 간주된다.
일부 경우에, 수용성 중합체는 약 2개 내지 약 300개의 말단을 갖는 것을 특징으로 한다. 예시적인 수용성 중합체는 폴리(알킬렌 글리콜), 예컨대 폴리에틸렌 글리콜("PEG"), 폴리(프로필렌 글리콜)("PPG"), 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체 등, 폴리(옥시에틸화 폴리올), 폴리(올레핀 알코올), 폴리(비닐피롤리돈), 폴리(히드록시알킬메타크릴아미드), 폴리(히드록시알킬메타크릴레이트), 폴리(사카라이드), 폴리(α-히드록시산), 폴리(비닐 알코올)(PVA), 폴리아크릴아미드(PAAm), 폴리(N-(2-히드록시프로필) 메타크릴아미드)(PHPMA), 폴리디메틸아크릴아미드(PDAAm), 폴리포스파젠, 폴리옥사졸린("POZ")(WO 2008/106186에 기재된 것), 폴리(N-아크릴로일모르폴린), 및 이들의 임의의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 경우에, 수용성 중합체는 특정 구조로 제한되지는 않는다. 일부 경우에, 수용성 중합체는 선형(예를 들어, 말단 캡핑된, 예컨대 알콕시 PEG 또는 이작용성 PEG), 분지형 또는 다중 아암형(예를 들어, 포크형 PEG 또는 폴리올 코어에 부착된 PEG), 수지상(또는 별) 구조이고, 각각에는 하나 이상의 분해성 연결이 있거나 없다. 또한, 수용성 중합체의 내부 구조는 다양한 반복 패턴으로 구성될 수 있고, 동종중합체, 교번 공중합체, 랜덤 공중합체, 블록 공중합체, 교번 삼원중합체, 랜덤 삼원중합체, 및 블록 삼원중합체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
일부 경우에, 수용성 중합체는 반복 중합체 단위의 길이, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 단위의 수 n으로 표시된다. 일부 경우에, 수용성 중합체는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00093
여기서, 물결선은 링커, 반응기, 또는 비천연 아미노산에 대한 부착을 나타내며, n은 1~5000이다. 일부 경우에, 수용성 중합체는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00094
여기서, 물결선은 링커, 반응기, 또는 비천연 아미노산에 대한 부착을 나타내며, "Cap"는 캡핑기(예를 들어, -OCH3, -O(C1-C6 알킬), -SMe, -S(C1-C6 알킬), -CO2H, -CO2(C1-C6 알킬), -CONH2, -CONH(C1-C6 알킬), -CON(C1-C6 알킬)2, -NH2, -SH, 또는 OH)를 나타내며, n은 1~5000이다. 일부 실시 형태에서, n은 100~2000, 200~1000, 300~750, 400~600, 450~550, 400~2000, 750~3000, 또는 100~750이다. 일부 실시 형태에서, n은 약 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 또는 약 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 적어도 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 또는 적어도 1000이다. 일부 실시 형태에서, n은 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 이하, 또는 1000 이하이다. 일부 실시 형태에서, n은 수용성 중합체의 평균 길이로 표시된다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트에서의 수용성 중합체의 중량 평균 분자량은 약 100 Da 내지 약 150,000 Da이다. 예시적인 범위는 예를 들어 5,000 Da 초과 내지 약 100,000 Da의 범위, 약 6,000 Da 내지 약 90,000 Da의 범위, 약 10,000 Da 내지 약 85,000 Da의 범위, 10,000 Da 초과 내지 약 85,000 Da의 범위, 약 20,000 Da 내지 약 85,000 Da의 범위, 약 53,000 Da 내지 약 85,000 Da의 범위, 약 25,000 Da 내지 약 120,000 Da의 범위, 약 29,000 Da 내지 약 120,000 Da의 범위, 약 35,000 Da 내지 약 120,000 Da의 범위, 및 약 40,000 Da 내지 약 120,000 Da의 범위의 중량 평균 분자량을 포함한다.
수용성 중합체에 대한 예시적인 중량 평균 분자량은 약 100 Da, 약 200 Da, 약 300 Da, 약 400 Da, 약 500 Da, 약 600 Da, 약 700 Da, 약 750 Da, 약 800 Da, 약 900 Da, 약 1,000 Da, 약 1,500 Da, 약 2,000 Da, 약 2,200 Da, 약 2,500 Da, 약 3,000 Da, 약 4,000 Da, 약 4,400 Da, 약 4,500 Da, 약 5,000 Da, 약 5,500 Da, 약 6,000 Da, 약 7,000 Da, 약 7,500 Da, 약 8,000 Da, 약 9,000 Da, 약 10,000 Da, 약 11,000 Da, 약 12,000 Da, 약 13,000 Da, 약 14,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 22,500 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 약 50,000 Da, 약 55,000 Da, 약 60,000 Da, 약 65,000 Da, 약 70,000 Da, 및 약 75,000 Da을 포함한다. 임의의 상기의 총 분자량을 갖는 수용성 중합체의 분지형 형태(예를 들어, 2개의 20,000 Da 중합체로 이루어진 분지형 40,000 Da 수용성 중합체)가 또한 사용될 수 있다. 하나 이상의 실시 형태에서, 콘쥬게이트는 약 6,000 Da 미만의 중량 평균 분자량을 갖는 PEG와 직접 또는 간접적으로 부착된 어떠한 PEG 모이어티도 갖지 않을 것이다.
PEG는 전형적으로 다수의 (OCH2CH2) 단량체[또는 PEG가 어떻게 정의되는지에 따라 (CH2CH2O) 단량체]를 포함할 것이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 반복 단위의 수는 "(OCH2CH2)n"에서 아래 첨자 "n"에 의해 식별된다. 따라서, (n)의 값은 일반적으로 다음 범위 중 하나 이상에 속한다: 2 내지 약 3400, 약 100 내지 약 2300, 약 100 내지 약 2270, 약 136 내지 약 2050, 약 225 내지 약 1930, 약 450 내지 약 1930, 약 1200 내지 약 1930, 약 568 내지 약 2727, 약 660 내지 약 2730, 약 795 내지 약 2730, 약 795 내지 약 2730, 약 909 내지 약 2730, 및 약 1,200 내지 약 1,900. 분자량이 알려진 임의의 소정 중합체에 대해, 중합체의 총 중량 평균 분자량을 반복 단량체의 분자량으로 나누어 반복 단위의 수(즉, "n")를 결정할 수 있다.
일부 경우에, 수용성 중합체는 말단 캡핑된 중합체, 즉 저급 C1- 6 알콕시기 또는 히드록실기와 같은 비교적 불활성인 기로 캡핑된 적어도 하나의 말단을 갖는 중합체이다. 중합체가 PEG인 경우, 메톡시-PEG(일반적으로 mPEG라고 함)가 사용될 수 있으며, 이는 PEG의 선형 형태로서, 중합체의 하나의 말단은 메톡시(-OCH3) 기이고, 다른 말단은 히드록실기 또는 필요에 따라 화학적으로 변형될 수 있는 다른 작용기이다.
일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트에 포함된 PEG 기는 선형 또는 분지형 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 선형 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 분지형 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 선형 또는 분지형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 선형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 분지형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 평균 분자량이 약 100 Da 내지 약 150,000 Da인 선형 또는 분지형 PEG 기이다. 예시적인 범위는 예를 들어 5,000 Da 초과 내지 약 100,000 Da의 범위, 약 6,000 Da 내지 약 90,000 Da의 범위, 약 10,000 Da 내지 약 85,000 Da의 범위, 10,000 Da 초과 내지 약 85,000 Da의 범위, 약 20,000 Da 내지 약 85,000 Da의 범위, 약 53,000 Da 내지 약 85,000 Da의 범위, 약 25,000 Da 내지 약 120,000 Da의 범위, 약 29,000 Da 내지 약 120,000 Da의 범위, 약 35,000 Da 내지 약 120,000 Da의 범위, 및 약 40,000 Da 내지 약 120,000 Da의 범위의 중량 평균 분자량을 포함한다. PEG 기에 대한 예시적인 중량 평균 분자량은 약 100 Da, 약 200 Da, 약 300 Da, 약 400 Da, 약 500 Da, 약 600 Da, 약 700 Da, 약 750 Da, 약 800 Da, 약 900 Da, 약 1,000 Da, 약 1,500 Da, 약 2,000 Da, 약 2,200 Da, 약 2,500 Da, 약 3,000 Da, 약 4,000 Da, 약 4,400 Da, 약 4,500 Da, 약 5,000 Da, 약 5,500 Da, 약 6,000 Da, 약 7,000 Da, 약 7,500 Da, 약 8,000 Da, 약 9,000 Da, 약 10,000 Da, 약 11,000 Da, 약 12,000 Da, 약 13,000 Da, 약 14,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 22,500 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 약 50,000 Da, 약 55,000 Da, 약 60,000 Da, 약 65,000 Da, 약 70,000 Da, 약 75,000 Da, 약 80,000 Da, 약 90,000 Da, 약 95,000 Da, 및 약 100,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 상기에 개시된 바와 같은 평균 분자량을 갖는 선형 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 상기에 개시된 바와 같은 평균 분자량을 갖는 분지형 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트에 포함된 PEG 기는 정의된 분자량 ± 10%, 또는 15% 또는 20% 또는 25%를 갖는 선형 또는 분지형 PEG 기이다. 예를 들어, 30,000 Da ± 3000 Da, 또는 30,000 Da ± 4,500 Da, 또는 30,000 Da ± 6,000 Da의 분자량을 갖는 PEG 기를 포함하는 IL-2 콘쥬게이트는 본 발명의 범주 내에 포함된다.
일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트에 포함된 PEG 기는 평균 분자량이 약 5,000 Da 내지 약 60,000 Da인 선형 또는 분지형 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 5,000 Da, 약 5,500 Da, 약 6,000 Da, 약 7,000 Da, 약 7,500 Da, 약 8,000 Da, 약 9,000 Da, 약 10,000 Da, 약 11,000 Da, 약 12,000 Da, 약 13,000 Da, 약 14,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 22,500 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 약 50,000 Da, 약 55,000 Da, 약 60,000 Da, 약 65,000 Da, 약 70,000 Da, 약 75,000 Da, 약 80,000 Da, 약 90,000 Da, 약 95,000 Da, 및 약 100,000 Da의 평균 분자량을 갖는 선형 또는 분지형 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 5,000 Da, 약 10,000 Da, 약 20,000 Da, 약 30,000 Da, 약 50,000 Da, 또는 약 60,000 Da의 평균 분자량을 갖는 선형 또는 분지형 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 5,000 Da, 약 30,000 Da, 약 50,000 Da, 또는 약 60,000 Da의 평균 분자량을 갖는 선형 또는 분지형 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 5,000 Da, 약 10,000 Da, 약 20,000 Da, 약 30,000 Da, 약 50,000 Da, 또는 약 60,000 Da의 평균 분자량을 갖는 선형 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 5,000 Da, 약 10,000 Da, 약 20,000 Da, 약 30,000 Da, 약 50,000 Da, 또는 약 60,000 Da의 평균 분자량을 갖는 분지형 PEG 기이다.
일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트에 포함된 PEG 기는 평균 분자량이 약 5,000 Da 내지 약 60,000 Da인 선형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 5,000 Da, 약 5,500 Da, 약 6,000 Da, 약 7,000 Da, 약 7,500 Da, 약 8,000 Da, 약 9,000 Da, 약 10,000 Da, 약 11,000 Da, 약 12,000 Da, 약 13,000 Da, 약 14,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 22,500 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 약 50,000 Da, 약 55,000 Da, 약 60,000 Da, 약 65,000 Da, 약 70,000 Da, 약 75,000 Da, 약 80,000 Da, 약 90,000 Da, 약 95,000 Da, 및 약 100,000 Da의 평균 분자량을 갖는 선형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 5,000 Da, 약 10,000 Da, 약 20,000 Da, 약 30,000 Da, 약 50,000 Da, 또는 약 60,000 Da의 평균 분자량을 갖는 선형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 5,000 Da, 약 30,000 Da, 약 50,000 Da, 또는 약 60,000 Da의 평균 분자량을 갖는 선형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 5,000 Da, 약 10,000 Da, 약 20,000 Da, 약 30,000 Da, 약 50,000 Da, 또는 약 60,000 Da의 평균 분자량을 갖는 선형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 5,000 Da의 평균 분자량을 갖는 선형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 대략 약 10,000 Da의 평균 분자량을 갖는 선형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 대략 약 20,000 Da의 평균 분자량을 갖는 선형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 대략 약 30,000 Da의 평균 분자량을 갖는 선형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 대략 약 50,000 Da의 평균 분자량을 갖는 선형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 60,000 Da의 평균 분자량을 갖는 선형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트에 포함된 PEG 기는 정의된 분자량 ± 10%, 또는 15% 또는 20% 또는 25%를 갖는 선형 메톡시 PEG 기이다. 예를 들어, 30,000 Da ± 3000 Da, 또는 30,000 Da ± 4,500 Da, 또는 30,000 Da ± 6,000 Da의 분자량을 갖는 선형 메톡시 PEG 기를 포함하는 IL-2 콘쥬게이트는 본 발명의 범주 내에 포함된다.
일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트에 포함된 PEG 기는 평균 분자량이 약 5,000 Da 내지 약 60,000 Da인 분지형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 5,000 Da, 약 5,500 Da, 약 6,000 Da, 약 7,000 Da, 약 7,500 Da, 약 8,000 Da, 약 9,000 Da, 약 10,000 Da, 약 11,000 Da, 약 12,000 Da, 약 13,000 Da, 약 14,000 Da, 약 15,000 Da, 약 20,000 Da, 약 22,500 Da, 약 25,000 Da, 약 30,000 Da, 약 35,000 Da, 약 40,000 Da, 약 45,000 Da, 약 50,000 Da, 약 55,000 Da, 약 60,000 Da, 약 65,000 Da, 약 70,000 Da, 약 75,000 Da, 약 80,000 Da, 약 90,000 Da, 약 95,000 Da, 및 약 100,000 Da의 평균 분자량을 갖는 분지형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 5,000 Da, 약 10,000 Da, 약 20,000 Da, 약 30,000 Da, 약 50,000 Da, 또는 약 60,000 Da의 평균 분자량을 갖는 분지형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 5,000 Da, 약 30,000 Da, 약 50,000 Da, 또는 약 60,000 Da의 평균 분자량을 갖는 분지형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 5,000 Da, 약 10,000 Da, 약 20,000 Da, 약 30,000 Da, 약 50,000 Da, 또는 약 60,000 Da의 평균 분자량을 갖는 분지형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 5,000 Da, 약 10,000 Da, 약 20,000 Da, 약 30,000 Da, 약 50,000 Da, 또는 약 60,000 Da의 평균 분자량을 갖는 분지형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 5,000 Da의 평균 분자량을 갖는 분지형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 대략 약 10,000 Da의 평균 분자량을 갖는 분지형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 대략 약 20,000 Da의 평균 분자량을 갖는 분지형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 대략 약 30,000 Da의 평균 분자량을 갖는 분지형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 대략 약 50,000 Da의 평균 분자량을 갖는 분지형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, PEG 기는 약 60,000 Da의 평균 분자량을 갖는 분지형 메톡시 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트에 포함된 PEG 기는 정의된 분자량 ± 10%, 또는 15% 또는 20% 또는 25%를 갖는 분지형 메톡시 PEG 기이다. 예를 들어, 30,000 Da ± 3000 Da, 또는 30,000 Da ± 4,500 Da, 또는 30,000 Da ± 6,000 Da의 분자량을 갖는 분지형 메톡시 PEG 기를 포함하는 IL-2 콘쥬게이트는 본 발명의 범주 내에 포함된다.
일부 실시 형태에서, 예시적인 수용성 중합체는 Quanta Biodesign, Ltd의 선형 또는 분지형 이산 PEG(dPEG); Nektar Therapeutics의 선형, 분지형, 또는 포크형 PEG; 및 JenKem Technology의 Y형 PEG 유도체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN, 또는 TNF) 폴리펩티드는 폴리(알킬렌 글리콜), 예컨대 폴리에틸렌 글리콜("PEG"), 폴리(프로필렌 글리콜)("PPG"), 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체 등, 폴리(옥시에틸화 폴리올), 폴리(올레핀 알코올), 폴리(비닐피롤리돈), 폴리(히드록시알킬메타크릴아미드), 폴리(히드록시알킬메타크릴레이트), 폴리(사카라이드), 폴리(α-히드록시산), 폴리(비닐 알코올)(PVA), 폴리아크릴아미드(PAAm), 폴리디메틸아크릴아미드(PDAAm), 폴리(N-(2-히드록시프로필) 메타크릴아미드)(PHPMA), 폴리포스파젠, 폴리옥사졸린("POZ"), 폴리(N-아크릴로일모르폴린), 및 이들의 조합으로부터 선택되는 수용성 중합체에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, 사이토카인 폴리펩티드는 PEG에 콘쥬게이팅(예를 들어, PEG화)된다. 일부 경우에, 사이토카인 폴리펩티드는 PPG에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, 사이토카인 폴리펩티드는 POZ에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, 사이토카인 폴리펩티드는 PVP에 콘쥬게이팅된다.
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 IL-2 폴리펩티드는 폴리(알킬렌 글리콜), 예컨대 폴리에틸렌 글리콜("PEG"), 폴리(프로필렌 글리콜)("PPG"), 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체 등, 폴리(옥시에틸화 폴리올), 폴리(올레핀 알코올), 폴리(비닐피롤리돈), 폴리(히드록시알킬메타크릴아미드), 폴리(히드록시알킬메타크릴레이트), 폴리(사카라이드), 폴리(α-히드록시산), 폴리(비닐 알코올)(PVA), 폴리아크릴아미드(PAAm), 폴리디메틸아크릴아미드(PDAAm), 폴리(N-(2-히드록시프로필) 메타크릴아미드)(PHPMA), 폴리포스파젠, 폴리옥사졸린("POZ"), 폴리(N-아크릴로일모르폴린), 및 이들의 조합으로부터 선택되는 수용성 중합체에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 PEG에 콘쥬게이팅(예를 들어, PEG화)된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 PPG에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 POZ에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 PVP에 콘쥬게이팅된다.
일부 경우에, 수용성 중합체는 폴리글리세롤(PG)을 포함한다. 일부 경우에, 폴리글리세롤은 과다분지형 PG(HPG)이다(예를 들어, 문헌[Imran, et al. "Influence of architecture of high molecular weight linear and branched polyglycerols on their biocompatibility and biodistribution," Biomaterials 33:9135-9147 (2012)]에 기술된 바와 같음). 다른 경우에, 폴리글리세롤은 선형 PG(LPG)이다. 추가의 경우에, 폴리글리세롤은 중작용성 PG, 선형-블록-과다분지형 PG(예를 들어, 문헌[Wurm et. Al., "Squaric acid mediated synthesis and biological activity of a library of linear and hyperbranched poly(glycerol)protein conjugates," Biomacromolecules 13:1161-1171 (2012)에 기술된 바와 같음), 또는 측쇄 작용성 PG(예를 들어, 문헌[Li, et. al., "Synthesis of linear polyether polyol derivatives as new materials for bioconjugation," Bioconjugate Chem. 20:780-789 (2009)]에 의해 기술된 바와 같음)이다.
일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN, 또는 TNF) 폴리펩티드는 PG, 예를 들어 HPG, LPG, 중간작용성 PG, 선형-블록-과다분지형 PG, 또는 측쇄 작용성 PG에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, 사이토카인은 IL-2 폴리펩티드이다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 PG, 중간작용성 PG, 선형-블록-과다분지형 PG에 콘쥬게이팅된다.
일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 분해성 합성 PEG 대안이다. 예시적인 분해성 합성 PEG 대안은 폴리[올리고(에틸렌 글리콜)메틸 메타크릴레이트](POEGMA); 텔레켈릭 또는 디-말단-작용기화 PEG계 마크로단량체의 중합에 의해 생성된 골격 변형된 PEG 유도체; 분해성 연결을 포함하는 공단량체를 포함하는 PEG 유도체, 예컨대 폴리[(에틸렌 옥사이드)-코-(메틸렌 에틸렌 옥사이드)][P(EO-코-MEO)], OEGMA와 공중합된 5,6-벤조-2-메틸렌-1,3-디옥세판(BMDO), 2-메틸렌-1,3-디옥세판(MDO) 및 2-메틸렌-4-페닐-1,3-디옥솔란(MPDL)과 같은 환식 케텐 아세탈; 또는 폴리-(ε-카프로락톤)-그래프트-폴리(에틸렌 옥사이드)(PCL-g-PEO)를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN, 또는 TNF) 폴리펩티드는, 예를 들어 POEGM; 텔레켈릭 또는 디-말단-작용기화 PEG계 마크로단량체의 중합에 의해 생성된 골격 변형된 PEG 유도체; P(EO-co-MEO); OEGMA와 공중합된 BMDO, MDO, 및 MPDL과 같은 환형 케텐 아세탈; 또는 PCL-g-PEO와 같은, 분해성 합성 PEG 대안에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, 사이토카인은 IL-2 폴리펩티드이다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는, 예를 들어 POEGM; 텔레켈릭 또는 디-말단-작용기화 PEG계 마크로단량체의 중합에 의해 생성된 골격 변형된 PEG 유도체; P(EO-co-MEO); OEGMA와 공중합된 BMDO, MDO, 및 MPDL과 같은 환형 케텐 아세탈; 또는 PCL-g-PEO와 같은, 분해성 합성 PEG 대안에 콘쥬게이팅된다.
일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 폴리(쯔비터이온)을 포함한다. 예시적인 폴리(쯔비터이온)은 폴리(술포베타인 메타크릴레이트)(PSBMA), 폴리(카르복시베타인 메타크릴레이트)(PCBMA), 및 폴리(2-메틸아크릴로일옥시에틸 포스포릴콜린)(PMPC)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN, 또는 TNF) 폴리펩티드는 폴리(쯔비터이온), 예컨대 PSBMA, PCBMA, 또는 PMPC에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, 사이토카인은 IL-2 폴리펩티드이다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 PSBMA, PCBMA, 또는 PMPC와 같은 폴리(쯔비터이온)에 콘쥬게이팅된다.
일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 폴리카르보네이트를 포함한다. 예시적인 폴리카본은 펜타플루오로페닐 5-메틸-2-옥소-1,3-디옥산-5-카르복실레이트(MTC-OC6F5)를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN, 또는 TNF) 폴리펩티드는 폴리카르보네이트, 예컨대 MTC-OC6F5에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, 사이토카인은 IL-2 폴리펩티드이다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 MTC-OC6F5와 같은 폴리카르보네이트에 콘쥬게이팅된다.
일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 예를 들어 폴리카르보네이트/PEG 중합체 하이브리드, 펩티드/단백질-중합체 콘쥬게이트, 또는 히드록실 함유 및/또는 쯔비터이온성 유도체화 중합체(예를 들어, 히드록실 함유 및/또는 쯔비터이온성 유도체화 PEG 중합체)와 같은 중합체 하이브리드를 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN, 또는 TNF) 폴리펩티드는 폴리카르보네이트/PEG 중합체 하이브리드, 펩티드/단백질-중합체 콘쥬게이트, 또는 히드록실 함유 및/또는 쯔비터이온성 유도체화 중합체(예를 들어, 히드록실 함유 및/또는 쯔비터이온성 유도체화 PEG 중합체)와 같은 중합체 하이브리드에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, 사이토카인은 IL-2 폴리펩티드이다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 폴리카르보네이트/PEG 중합체 하이브리드, 펩티드/단백질-중합체 콘쥬게이트, 또는 히드록실 함유 및/또는 쯔비터이온성 유도체화 중합체(예를 들어, 히드록실 함유 및/또는 쯔비터이온성 유도체화 PEG 중합체)와 같은 중합체 하이브리드에 콘쥬게이팅된다.
일부 경우에, 수용성 중합체는 폴리사카라이드를 포함한다. 예시적인 폴리사카라이드는 덱스트란, 폴리시알산(PSA), 히알루론산(HA), 아밀로스, 헤파린, 헤파란 술페이트(HS), 덱스트린, 또는 히드록시에틸-스타치(HES)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 경우에, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN 또는 TNF) 폴리펩티드는 폴리사카라이드에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 덱스트란에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 PSA에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 HA에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 아밀로스에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 헤파린에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 HS에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 덱스트린에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 HES에 콘쥬게이팅된다.
일부 경우에, 수용성 중합체는 글리칸을 포함한다. 예시적인 글리칸 부류는 N-연결 글리칸, O-연결 글리칸, 당지질, O-GlcNAc, 및 글리코사미노글리칸을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN 또는 TNF) 폴리펩티드는 글리칸에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 N-연결 글리칸에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 O-연결 글리칸에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 당지질에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 O-GlcNAc에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 글리코사미노글리칸에 콘쥬게이팅된다.
일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 폴리옥사졸린 중합체를 포함한다. 폴리옥사졸린 중합체는 선형 합성 중합체이고, PEG와 유사하고, 낮은 다분산도를 포함한다. 일부 경우에, 폴리옥사졸린 중합체는 평균 분자량을 특징으로 하는 다분산 폴리옥사졸린 중합체이다. 일부 경우에, 폴리옥사졸린 중합체의 평균 분자량은 예를 들어 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500, 7000, 7500, 8000, 10,000, 12,000, 20,000, 35,000, 40,000, 50,000, 60,000, 100,000, 200,000, 300,000, 400,000, 또는 500,000 Da를 포함한다. 일부 경우에, 폴리옥사졸린 중합체는 폴리(2-메틸 2-옥사졸린)(PMOZ), 폴리(2-에틸 2-옥사졸린)(PEOZ), 또는 폴리(2-프로필 2-옥사졸린)(PPOZ)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN 또는 TNF) 폴리펩티드는 폴리옥사졸린 중합체에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 폴리옥사졸린 중합체에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 PMOZ에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 PEOZ에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 PPOZ에 콘쥬게이팅된다.
일부 경우에, 수용성 중합체는 폴리아크릴산 중합체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN 또는 TNF) 폴리펩티드는 폴리아크릴산 중합체에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 폴리아크릴산 중합체에 콘쥬게이팅된다.
일부 경우에, 수용성 중합체는 폴리아민을 포함한다. 폴리아민은 2개 이상의 1차 아미노 기를 포함하는 유기 중합체이다. 일부 실시 형태에서, 폴리아민은 분지형 폴리아민, 선형 폴리아민, 또는 환형 폴리아민을 포함한다. 일부 경우에, 폴리아민은 저분자량 선형 폴리아민이다. 예시적인 폴리아민은 푸트레신, 카다베린, 스퍼미딘, 스퍼민, 에틸렌 디아민, 1,3-디아미노프로판, 헥사메틸렌디아민, 테트라에틸메틸렌디아민, 및 피페라진을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN 또는 TNF) 폴리펩티드는 폴리아민에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 폴리아민에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 푸트레신, 카다베린, 스퍼미딘, 스퍼민, 에틸렌 디아민, 1,3-디아미노프로판, 헥사메틸렌디아민, 테트라에틸메틸렌디아민, 또는 피페라진에 콘쥬게이팅된다.
일부 경우에, 수용성 중합체는 미국 특허 7,744,861호, 8,273,833호, 및 7,803,777호에 기재되어 있다. 일부 경우에, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN, 또는 TNF) 폴리펩티드는 미국 특허 제7,744,861호, 제8,273,833호, 또는 제7,803,777호에 기술된 링커에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 미국 특허 제7,744,861호, 제8,273,833호, 또는 제7,803,777호에 기술된 링커에 콘쥬게이팅된다.
지질
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이팅 모이어티는 지질이다. 일부 경우에, 지질은 지방산이다. 일부 경우에, 지방산은 포화 지방산이다. 다른 경우에, 지방산은 불포화 지방산이다. 예시적인 지방산은 약 6개 내지 약 26개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 24개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 22개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 20개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 18개의 탄소 원자, 약 20개 내지 약 26개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 26개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 24개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 22개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 20개의 탄소 원자, 또는 약 12개 내지 약 18개의 탄소 원자를 포함하는 지방산을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 경우에, 지질은 하나 이상의 혈청 단백질에 결합하여 혈청 안정성 및/또는 혈청 반감기를 증가시킨다.
일부 실시 형태에서, 지질은 IL-2에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, 지질은 지방산, 예를 들어 포화 지방산 또는 불포화 지방산이다. 일부 경우에, 지방산은 약 6개 내지 약 26개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 24개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 22개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 20개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 18개의 탄소 원자, 약 20개 내지 약 26개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 26개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 24개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 22개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 20개의 탄소 원자, 또는 약 12개 내지 약 18개의 탄소 원자이다. 일부 경우에, 지방산은 약 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 또는 26개의 탄소 원자 길이를 포함한다. 일부 경우에, 지방산은 카프로산(헥산산), 에난트산(헵탄산), 카프릴산(옥탄산), 펠라르곤산(노난산), 카프르산(데칸산), 운데실산(운데칸산), 라우르산(도데칸산), 트리데실산(트리데칸산), 미리스트산(테트라데칸산), 펜타데실산(펜타데칸산), 팔미트산(헥사데칸산), 마르가르산(헵타데칸산), 스테아르산(옥타데칸산), 노나데실산(노나데칸산), 아라키드산(에이코산산), 헤네이코실산(헤네이코산산), 베헨산(도코산산), 트리코실산(트리코산산), 리그노세르산(테트라코산산), 펜타코실산(펜타코산산), 또는 세로트산(헥사코산산)을 포함한다.
일부 실시 형태에서, IL-2 지질 콘쥬게이트는 혈청 안정성 및/또는 혈청 반감기를 향상시킨다.
단백질
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이팅 모이어티는 단백질 또는 이의 결합 단편이다. 예시적인 단백질은 알부민, 트랜스페린, 또는 트랜스티레틴을 포함한다. 일부 경우에, 단백질 또는 이의 결합 단편은 항체 또는 이의 결합 단편을 포함한다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 단백질 또는 이의 결합 단편을 포함한다. 일부 경우에, 단백질 또는 이의 결합 단편을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트는 증가된 혈청 반감기 및/또는 안정성을 갖는다. 일부 경우에, 단백질 또는 이의 결합 단편을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트는 하나 이상의 IL-2R 서브유닛과의 감소된 IL-2 상호작용을 갖는다. 추가의 경우에, 단백질 또는 이의 결합 단편은 하나 이상의 IL-2R 서브유닛과의 IL-2 상호작용을 차단한다.
일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 알부민이다. 알부민은 수용성 구상 단백질의 패밀리이다. 이것은 흔히 혈장에서 발견되며, 모든 혈장 단백질의 약 55~60%를 차지한다. 인간 혈청 알부민(HSA)은 3차 구조가 도메인 I(아미노산 잔기 1~195), 도메인 II(아미노산 잔기 196~383), 및 도메인 III(아미노산 잔기 384~585)의 3개의 도메인으로 분할된 585개 아미노산의 폴리펩티드이다. 각각의 도메인은 장쇄 및 중쇄 지방산, 빌리루빈, 또는 헤민과 같은 내인성 리간드, 또는 헤테로시클릭 또는 방향족 화합물과 같은 외인성 화합물과 가역적으로 또는 비가역적으로 상호작용할 수 있는 결합 부위를 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN 또는 TNF) 폴리펩티드는 알부민에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, 사이토카인 폴리펩티드는 인간 혈청 알부민(HSA)에 콘쥬게이팅된다. 추가의 경우에, 사이토카인 폴리펩티드는 알부민의 기능성 단편에 콘쥬게이팅된다.
일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 알부민에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 인간 혈청 알부민(HSA)에 콘쥬게이팅된다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 알부민의 기능성 단편에 콘쥬게이팅된다.
일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 트랜스페린이다. 트랜스페린은 2개의 Fe3 + 결합 부위를(하나는 N-말단 도메인에, 다른 하나는 C-말단 도메인에) 포함하는 크기가 약 80 kDa인 679개 아미노산의 폴리펩티드이다. 일부 경우에, 인간 트랜스페린은 약 7~12일의 반감기를 갖는다.
일부 경우에, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN 또는 TNF) 폴리펩티드는 트랜스페린에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, 사이토카인 폴리펩티드는 인간 트랜스페린에 콘쥬게이팅된다. 추가의 경우에, 사이토카인 폴리펩티드는 트랜스페린의 기능성 단편에 콘쥬게이팅된다.
일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 트랜스페린에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 인간 트랜스페린에 콘쥬게이팅된다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 트랜스페린의 기능성 단편에 콘쥬게이팅된다.
일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 트랜스티레틴(TTR)이다. 트랜스티레틴은 갑상선 호르몬 티록신(T4) 및 레티놀에 결합된 레티놀-결합 단백질을 운반하는 혈청 및 뇌척수액에 있는 운반 단백질이다.
일부 경우에, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN, 또는 TNF) 폴리펩티드는 (말단 중 하나를 통해 또는 내부 힌지 영역을 통해) 트랜스티레틴에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, 사이토카인 폴리펩티드는 트랜스티레틴의 기능성 단편에 콘쥬게이팅된다.
일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 (말단 중 하나를 통해 또는 내부 힌지 영역을 통해) 트랜스티레틴에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 트랜스티레틴의 기능성 단편에 콘쥬게이팅된다.
일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 항체 또는 이의 결합 단편이다. 일부 경우에, 항체 또는 이의 결합 단편은 인간화 항체 또는 이의 결합 단편, 쥣과 항체 또는 이의 결합 단편, 키메라 항체 또는 이의 결합 단편, 단클론 항체 또는 이의 결합 단편, 1가 Fab', 2가 Fab2, F(ab)'3 단편, 단쇄 가변 단편(scFv), 비스-scFv, (scFv)2, 디아바디, 미니바디, 나노바디, 트리아바디, 테트라바디, 휴마바디, 디술피드-안정화 Fv 단백질(dsFv), 단일-도메인 항체(sdAb), Ig NAR, 낙타 항체 또는 이의 결합 단편, 이중특이성 항체 또는 이의 결합 단편, 또는 이들의 화학적으로 변형된 유도체를 포함한다.
일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 scFv, 비스-scFv, (scFv)2, dsFv, 또는 sdAb를 포함한다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 scFv를 포함한다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 비스-scFv를 포함한다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 (scFv)2를 포함한다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 dsFv를 포함한다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 sdAb를 포함한다.
일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 항체, 예를 들어 IgG, IgA, IgM, IgE, 또는 IgD의 Fc 부분을 포함한다. 일부 경우에, 모이어티는 IgG(예를 들어, IgG1, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 부분을 포함한다.
일부 경우에, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN, 또는 TNF) 폴리펩티드는 항체, 또는 이의 결합 단편에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, 사이토카인 폴리펩티드는 인간화 항체 또는 이의 결합 단편, 쥣과 항체 또는 이의 결합 단편, 키메라 항체 또는 이의 결합 단편, 단클론 항체 또는 이의 결합 단편, 1가 Fab', 2가 Fab2, F(ab)'3 단편, 단쇄 가변 단편(scFv), 비스-scFv, (scFv)2, 디아바디, 미니바디, 나노바디, 트리아바디, 테트라바디, 휴마바디, 디술피드-안정화 Fv 단백질(dsFv), 단일-도메인 항체(sdAb), Ig NAR, 낙타 항체 또는 이의 결합 단편, 이중특이성 항체 또는 이의 결합 단편, 또는 이들의 화학적으로 변형된 유도체에 콘쥬게이팅된다. 추가의 경우에, 사이토카인 폴리펩티드는 항체의 Fc 부분에 콘쥬게이팅된다. 추가의 경우에, 사이토카인 폴리펩티드는 IgG(예를 들어, IgG1, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 부분에 콘쥬게이팅된다.
일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 항체 또는 이의 결합 단편에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 인간화 항체 또는 이의 결합 단편, 쥣과 항체 또는 이의 결합 단편, 키메라 항체 또는 이의 결합 단편, 단클론 항체 또는 이의 결합 단편, 1가 Fab', 2가 Fab2, F(ab)'3 단편, 단쇄 가변 단편(scFv), 비스-scFv, (scFv)2, 디아바디, 미니바디, 나노바디, 트리아바디, 테트라바디, 휴마바디, 디술피드-안정화 Fv 단백질(dsFv), 단일-도메인 항체(sdAb), Ig NAR, 낙타 항체 또는 이의 결합 단편, 이중특이성 항체 또는 이의 결합 단편, 또는 이들의 화학적으로 변형된 유도체에 콘쥬게이팅된다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 항체의 Fc 부분에 콘쥬게이팅된다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드는 IgG(예를 들어, IgG1, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 부분에 콘쥬게이팅된다.
일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드는 수용성 중합체(예를 들어, PEG) 및 항체 또는 이의 결합 단편에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, 항체 또는 이의 결합 단편은 인간화 항체 또는 이의 결합 단편, 쥣과 항체 또는 이의 결합 단편, 키메라 항체 또는 이의 결합 단편, 단클론 항체 또는 이의 결합 단편, 1가 Fab', 2가 Fab2, F(ab)'3 단편, 단쇄 가변 단편(scFv), 비스-scFv, (scFv)2, 디아바디, 미니바디, 나노바디, 트리아바디, 테트라바디, 휴마바디, 디술피드 안정화 Fv 단백질(dsFv), 단일-도메인 항체(sdAb), Ig NAR, 낙타 항체 또는 이의 결합 단편, 이중특이성 항체 또는 이의 결합 단편, 또는 이의 화학적으로 변형된 유도체를 포함한다. 일부 경우에, 항체 또는 이의 결합 단편은 scFv, 비스-scFv, (scFv)2, dsFv, 또는 sdAb를 포함한다. 일부 경우에, 항체 또는 이의 결합 단편은 scFv를 포함한다. 일부 경우에, 항체 또는 이의 결합 단편은 IL-2 콘쥬게이트를 관심 표적 세포로 가이드하고, 수용성 중합체는 안정성 및/또는 혈청 반감기를 향상시킨다.
일부 경우에, 하나 이상의 IL-2 폴리펩티드 - 수용성 중합체(예를 들어, PEG) 콘쥬게이트는 항체 또는 이의 결합 단편에 추가로 결합된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트 대 항체의 비는 약 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 11:1 또는 12:1이다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트 대 항체의 비는 약 1:1이다. 다른 경우에, IL-2 콘쥬게이트 대 항체의 비는 약 2:1, 3:1 또는 4:1이다. 추가의 경우에, IL-2 콘쥬게이트 대 항체의 비는 약 6:1 이상이다.
일부 실시 형태에서, 하나 이상의 IL-2 폴리펩티드 - 수용성 중합체(예를 들어, PEG) 콘쥬게이트는 항체 또는 이의 결합 단편에 직접적으로 결합된다. 다른 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 링커로 항체 또는 이의 결합 단편에 간접적으로 결합된다. 예시적인 링커는 동종이작용성 링커, 이종이작용성 링커, 말레이미드계 링커, 제로-트레이스 링커, 자가-희생 링커, 스페이서 등을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 결합 단편은 IL-2 폴리펩티드 - 수용성 중합체(예를 들어, PEG) 콘쥬게이트의 IL-2 폴리펩티드 부분에 직접적으로 또는 간접적으로 결합된다. 이러한 경우에, IL-2 폴리펩티드에 대한 항체의 콘쥬게이션 부위는 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rβγ의 결합을 방해하지 않는 부위에 있다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드에 대한 항체의 콘쥬게이션 부위는 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rβγ의 결합을 부분적으로 차단하는 부위에 있다. 추가의 경우에, IL-2 폴리펩티드에 대한 항체의 콘쥬게이션 부위는 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα의 결합을 방해하거나 추가로 방해하는 부위에 있다. 다른 실시 형태에서, 항체 또는 이의 결합 단편은 IL-2 폴리펩티드 - 수용성 중합체(예를 들어, PEG) 콘쥬게이트의 수용성 중합체 부분에 직접 또는 간접적으로 결합된다.
펩티드
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이팅 모이어티는 펩티드이다. 일부 경우에, 펩티드는 비구조화된 펩티드이다. 일부 경우에, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN 또는 TNF) 폴리펩티드는 펩티드에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, 펩티드를 포함하는 IL-2 콘쥬게이트는 증가된 혈청 반감기 및/또는 안정성을 갖는다. 일부 경우에, 펩티드를 포함하는 IL-2 콘쥬게이트는 하나 이상의 IL-2R 서브유닛과의 감소된 IL-2 상호작용을 갖는다. 추가의 경우에, 펩티드는 하나 이상의 IL-2R 서브유닛과의 IL-2 상호작용을 차단한다.
일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 XTEN™ 펩티드(Amunix Operating Inc.)이고, 변형은 XTEN화로 지칭된다. XTEN화는 관심 폴리펩티드를 코딩하는 핵산과 상이한 백분율의 6개 아미노산 Ala, Glu, Gly, Ser, 및 Thr을 포함하는 긴 비구조화된 친수성 펩티드인 XTEN™ 펩티드(Amunix Operating Inc.)를 코딩하는 핵산의 유전자 융합이다. 일부 경우에, XTEN™ 펩티드는 관심 폴리펩티드와 조합하여 발현, 유전자 안정성, 용해도, 응집 저항, 향상된 반감기, 증가된 효력, 및/또는 증가된 시험관 내 활성과 같은 특성에 기초하여 선택된다. 일부 경우에, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN 또는 TNF) 폴리펩티드는 XTEN 펩티드에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 XTEN 펩티드에 콘쥬게이팅된다.
일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 글리신-농후 호모아미노산 중합체(HAP)이고, 변형은 HAP화로 지칭된다. HAP화는 관심 폴리펩티드를 코딩하는 핵산과 글리신-농후 호모아미노산 중합체(HAP)를 코딩하는 핵산의 유전자 융합이다. 일부 경우에, HAP 중합체는 (Gly4Ser)n 반복 모티프(서열 번호 85)를 포함하고, 때로는 약 50개, 100개, 150개, 200개, 250개, 300개, 또는 그 이상의 잔기 길이이다. 일부 경우에, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN 또는 TNF) 폴리펩티드는 HAP에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 HAP에 콘쥬게이팅된다.
일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 PAS 폴리펩티드이고, 변형은 PAS화로 지칭된다. PAS화는 관심 폴리펩티드를 코딩하는 핵산과 PAS 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 유전자 융합이다. PAS 폴리펩티드는 Pro, Ala, 및 Ser 잔기로 이루어진 친수성 비하전 폴리펩티드이다. 일부 경우에, PAS 폴리펩티드의 길이는 적어도 약 100개, 200개, 300개, 400개, 500개 또는 600개의 아미노산이다. 일부 경우에, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN 또는 TNF) 폴리펩티드는 PAS 폴리펩티드에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 PAS 폴리펩티드에 콘쥬게이팅된다.
일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 엘라스틴-유사 폴리펩티드(ELP)이고, 변형은 ELP화로 지칭된다. ELP화는 관심 폴리펩티드를 코딩하는 핵산과 엘라스틴-유사 폴리펩티드(ELP)를 코딩하는 핵산의 유전자 융합이다. ELP는 VPGxG 반복 모티프(서열 번호 86)를 포함하고, 여기서 x는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이다. 일부 경우에, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN 또는 TNF) 폴리펩티드는 ELP에 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, IL-2 폴리펩티드는 ELP에 콘쥬게이팅된다.
일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 CTP 펩티드이다. CTP 펩티드는 31개 아미노산 잔기 펩티드 FQSSSS*KAPPPS*LPSPS*RLPGPS*DTPILPQ(서열 번호 87)를 포함하고, 여기서 S*는 O-글리코실화 부위(OPKO)를 나타낸다. 일부 경우에, CTP 펩티드는 사이토카인 폴리펩티드(예를 들어, IL-2 폴리펩티드)에 유전자 융합된다. 일부 경우에, 사이토카인 폴리펩티드(예를 들어, IL-2 폴리펩티드)는 CTP 펩티드에 콘쥬게이팅된다.
일부 실시 형태에서, 사이토카인(예를 들어, IL-2 폴리펩티드)은 글루타밀화에 의해 변형된다. 글루타밀화(또는 폴리글루타밀화)는 글루타메이트의 가역적인 번역후 변형이고, 여기서 글루타메이트의 γ-카르복시 기는 유리 글루타메이트의 아미노 기와 펩티드-유사 결합을 형성하고, 여기서 α-카르복시 기는 폴리글루타메이트 사슬로 확장된다.
일부 실시 형태에서, 사이토카인(예를 들어, IL-2 폴리펩티드)는 젤라틴-유사 단백질(GLK) 중합체에 의해 변형된다. 일부 경우에, GLK 중합체는 Gly-Xaa-Yaa의 다중 반복을 포함하고, 여기서 Xaa 및 Yaa는 각각 프롤린 및 4-히드록시프롤린을 주로 포함한다. 일부 경우에, GLK 중합체는 아미노산 잔기 Pro, Gly, Glu, Qln, Asn, Ser, 및 Lys를 추가로 포함한다. 일부 경우에, GLK 중합체의 길이는 약 20개, 30개, 40개, 50개, 60개, 70개, 80개, 90개, 100개, 110개, 120개, 150개 잔기 이상이다.
추가의 콘쥬게이팅 모이어티
일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 세포외 바이오마커를 포함한다. 일부 경우에, 세포외 바이오마커는 종양 항원이다. 일부 경우에, 예시적인 세포외 바이오마커는 CD19, PSMA, B7-H3, B7-H6, CD70, CEA, CSPG4, EGFRvIII, EphA3, EpCAM, EGFR, ErbB2 (HER2), FAP, FRα, GD2, GD3, 루이스-Y, 메소텔린, Muc1, Muc 16, ROR1, TAG72, VEGFR2, CD11, Gr-1, CD204, CD16, CD49b, CD3, CD4, CD8, 및 B220을 포함한다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 사이토카인(예를 들어, IL-2)에 결합되거나 콘쥬게이팅된다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 예를 들어 사이토카인(예를 들어, IL-2)의 N-말단 또는 C-말단에서 유전자 융합된다.
일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 번역후 변형으로부터의 분자를 포함한다. 일부 경우에, 번역후 변형의 예는 미리스토일화, 팔미토일화, 이소프레닐화(또는 프레닐화)(예를 들어, 파르네실화 또는 게라닐게라닐화), 글리피화, 아실화(예를 들어, O-아실화, N-아실화, S-아실화), 알킬화(예를 들어, 메틸 기 또는 에틸 기와 같은 알킬 기의 첨가), 아미드화, 글리코실화, 히드록실화, 요오드화, 뉴클레오티드 부가, 산화, 인산화, 숙시닐화, 황화, 당화, 카르바밀화, 글루타밀화, 또는 탈아미드화를 포함한다. 일부 경우에, 사이토카인(예를 들어, IL-2)은 미리스토일화, 팔미토일화, 이소프레닐화(또는 프레닐화)(예를 들어, 파르네실화 또는 게라닐게라닐화), 글리피화, 아실화(예를 들어, O-아실화, N-아실화, S-아실화), 알킬화(예를 들어, 메틸 기 또는 에틸 기와 같은 알킬 기의 첨가), 아미드화, 글리코실화, 히드록실화, 요오드화, 뉴클레오티드 부가, 산화, 인산화, 숙시닐화, 황화, 당화, 카르바밀화, 글루타밀화, 또는 탈아미드화와 같은 번역후 변형에 의해 변형된다.
콘쥬게이션
링커
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 사이토카인 폴리펩티드(예를 들어, IL-2 폴리펩티드)에 콘쥬게이팅 모이어티를 콘쥬게이팅하거나 결합시키는 데 유용한 작용성 반응기는, 예를 들어 0차 또는 고차의 링커를 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기술된 인터류킨에 통합되는 비천연 아미노산은 작용성 반응기를 포함한다. 일부 경우에, 링커는 본원에 기술된 인터류킨에 통합된 비천연 아미노산과 반응하는 작용성 반응기를 포함한다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 본원에 기술된 인터류킨에 통합된 비천연 아미노산과 반응하는 작용성 반응기를 포함한다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 본원에 기술된 링커(선택적으로 사이토카인 펩티드에 미리 부착됨)와 반응하는 작용성 반응기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 링커는 본원에 기술된 사이토카인 펩티드의 천연 아미노산과 반응하는 반응기를 포함한다. 일부 경우에, 고차 링커는 동종이작용성 링커 또는 이종이작용성 링커와 같은 이작용성 링커를 포함한다. 예시적인 동종이작용성 링커는 Lomant 시약 디티오비스(숙신이미딜프로피오네이트) DSP, 3'3'-디티오비스(술포숙신이미딜 프로피오네이트)(DTSSP), 디숙신이미딜 수버레이트(DSS), 비스(술포숙신이미딜)수버레이트(BS), 디숙신이미딜 타르트레이트(DST), 디술포숙신이미딜 타르트레이트(술포 DST), 에틸렌 글리코비스(숙신이미딜숙시네이트)(EGS), 디숙신이미딜 글루타레이트(DSG), N,N'-디숙신이미딜 카르보네이트(DSC), 디메틸 아디피미데이트(DMA), 디메틸 피멜리미데이트(DMP), 디메틸 수베르이미데이트(DMS), 디메틸-3,3'-디티오비스프로피온이미데이트(DTBP), 1,4-디-(3'-(2'-피리딜디티오)프로피온아미도)부탄(DPDPB), 비스말레이미도헥산(BMH), 예를 들어 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠 또는 1,3-디플루오로-4,6-디니트로벤젠과 같은 아릴 할라이드 함유 화합물(DFDNB), 4,4'-디플루오로-3,3'-디니트로페닐술폰(DFDNPS), 비스-[β-(4-아지도살리실아미도)에틸]디술피드(BASED), 포름알데히드, 글루타르알데히드, 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르, 아디프산 디히드라지드, 카보히드라지드, o-톨루이딘, 3,3'-디메틸벤지딘, 벤지딘, α,α'-p-디아미노디페닐, 디요오도-p-자일렌 술폰산, N,N'-에틸렌-비스(요오도아세트아미드) 또는 N,N'-헥사메틸렌-비스(요오도아세트아미드)를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
일부 실시 형태에서, 이작용성 링커는 이종이작용성 링커를 포함한다. 예시적인 이종이작용성 링커는 아민 반응성 및 설프히드릴 가교결합제, 예컨대 N-숙신이미딜 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(sPDP), 장쇄 N-숙신이미딜 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(LC-sPDP), 수용성-장쇄 N-숙신이미딜 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(술포-LC-sPDP), 숙신이미딜옥시카르보닐-α-메틸-α-(2-피리딜디티오)톨루엔(sMPT), 술포숙신이미딜-6-[α-메틸-α-(2-피리딜디티오)톨루아미도]헥사노에이트(술포-LC-sMPT), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트(sMCC), 술포숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트(술포-sMCC), m-말레이미도벤조일-N-히드록시숙신이미드 에스테르(MB), m-말레이미도벤조일-N-히드록시술포숙신이미드 에스테르(술포-MB), N-숙신이미딜(4-요오도아세틸)아미노벤조에이트(sIAB), 술포숙신이미딜(4-요오도아세틸)아미노벤조에이트(술포-sIAB), 숙신이미딜-4-(p-말레이미도페닐)부티레이트(sMPB), 술포숙신이미딜-4-(p-말레이미도페닐)부티레이트(술포-sMPB), N-(γ-말레이미도부티릴옥시)숙신이미드 에스테르(GMB), N-(γ-말레이미도부티릴옥시)술포숙신이미드 에스테르(술포-GMB), 숙신이미딜 6-((요오도아세틸)아미노)헥사노에이트(sIAX), 숙신이미딜 6-[6-(((요오도아세틸)아미노)헥사노일)아미노]헥사노에이트(sIAXX), 숙신이미딜 4-(((요오도아세틸)아미노)메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트(sIAC), 숙신이미딜 6-((((4-요오도아세틸)아미노)메틸)시클로헥산-1-카르보닐)아미노)헥사노에이트(sIACX), p-니트로페닐 요오도아세테이트(NPIA), 카르보닐 반응성 및 설프히드릴 반응성 가교결합제, 예컨대 4-(4-N-말레이미도페닐)부티르산 히드라지드(MPBH), 4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실-히드라지드-8(M2C2H), 3-(2-피리딜디티오)프로피오닐 히드라지드(PDPH), 아민 반응성 및 광반응성 가교결합제, 예컨대 N-히드록시숙신이미딜-4-아지도살리실산(NHs-AsA), N-히드록시술포숙신이미딜-4-아지도살리실산(술포-NHs-AsA), 술포숙신이미딜-(4-아지도살리실아미도)헥사노에이트(술포-NHs-LC-AsA), 술포숙신이미딜-2-(ρ-아지도살리실아미도)에틸-1,3'-디티오프로피오네이트(sAsD), N-히드록시숙신이미딜-4-아지도벤조에이트(HsAB), N-히드록시술포숙신이미딜-4-아지도벤조에이트(술포-HsAB), N-숙신이미딜-6-(4'-아지도-2'-니트로페닐아미노)헥사노에이트(sANPAH), 술포숙신이미딜-6-(4'-아지도-2'-니트로페닐아미노)헥사노에이트(술포-sANPAH), N-5-아지도-2-니트로벤조일옥시숙신이미드(ANB-NO), 술포숙신이미딜-2-(m-아지도-o-니트로벤즈아미도)-에틸-1,3'-디티오프로피오네이트(sAND), N-숙신이미딜-4(4-아지도페닐)1,3'-디티오프로피오네이트(sADP), N-술포숙신이미딜(4-아지도페닐)-1,3'-디티오프로피오네이트(술포-sADP), 술포숙신이미딜 4-(ρ-아지도페닐)부티레이트(술포-sAPB), 술포숙신이미딜 2-(7-아지도-4-메틸쿠마린-3-아세트아미드)에틸-1,3'-디티오프로피오네이트(sAED), 술포숙신이미딜 7-아지도-4-메틸쿠마린-3-아세테이트(술포-sAMCA), ρ-니트로페닐 디아조피루베이트(ρNPDP), ρ-니트로페닐-2-디아조-3,3,3-트리플루오로프로피오네이트(PNP-DTP), 설프히드릴 반응성 및 광반응성 가교결합제, 예컨대 1-(ρ-아지도살리실아미도)-4-(요오도아세트아미도)부탄(AsIB), N-[4-(ρ-아지도살리실아미도)부틸]-3'-(2'-피리딜디티오)프로피온아미드(APDP), 벤조페논-4-요오도아세트아미드, 벤조페논-4-말레이미드 카르보닐 반응성 및 광반응성 가교결합제, 예컨대 ρ-아지도벤조일 히드라지드(ABH), 카르복실레이트 반응성 및 광반응성 가교결합제, 예컨대 4-(ρ-아지도살리실아미도)부틸아민(AsBA), 및 아르기닌 반응성 및 광반응성 가교결합제, 예컨대 ρ-아지도페닐 글리옥살(APG)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 경우에, 반응성 작용기는 결합 모이어티(예를 들어, 콘쥬게이팅 모이어티 또는 IL-2)에 존재하는 친전자성 기에 반응성인 친핵성 기를 포함한다. 예시적인 친전자성 기는 카르보닐 기, 예컨대 알데히드, 케톤, 카르복실산, 에스테르, 아미드, 에논, 아실 할라이드 또는 산 언히드라이드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 반응성 작용기는 알데히드이다. 예시적인 친핵성 기는 히드라지드, 옥심, 아미노, 히드라진, 티오세미카바존, 히드라진 카르복실레이트 및 아릴히드라지드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 인터류킨에 통합된 비천연 아미노산은 친전자성 기를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 절단 가능한 링커이다. 일부 실시 형태에서, 절단 가능한 링커는 디펩티드 링커이다. 일부 실시 형태에서, 디펩티드 링커는 발린-시트룰린(Val-Cit), 페닐알라닌-라이신(Phe-Lys), 발린-알라닌(Val-Ala), 및 발린-라이신(Val-Lys)이다. 일부 실시 형태에서, 디펩티드 링커는 발린-시트룰린이다.
일부 실시 형태에서, 링커는 예를 들어 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 15개, 20개, 25개, 30개, 35개, 40개, 45개, 50개, 또는 그 이상의 아미노산을 포함하는 펩티드 링커이다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 최대 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 15개, 20개, 25개, 30개, 35개, 40개, 45개, 50개, 또는 그 이하의 아미노산을 포함한다. 추가의 경우에, 펩티드 링커는 약 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 15개, 20개, 25개, 30개, 35개, 40개, 45개, 또는 50개의 아미노산을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 자가-희생 링커 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 자가-희생 링커 모이어티는 p-아미노벤질 알코올(PAB), p-아미노벤지옥시카르보닐(PABC), 또는 이의 유도체 또는 유사체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 링커는 디펩티드 링커 모이어티 및 자가-희생 링커 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 자가-희생 링커 모이어티는 미국 특허 제9089614호 및 WIPO 출원 WO2015038426호에 기술된 것과 같다.
일부 실시 형태에서, 절단 가능한 링커는 글루쿠로나이드이다. 일부 실시 형태에서, 절단 가능한 링커는 산-절단 가능한 링커이다. 일부 실시 형태에서, 산-절단 가능한 링커는 히드라진이다. 일부 실시 형태에서, 절단 가능한 링커는 환원성 링커이다.
일부 실시 형태에서, 링커는 말레이미드 기를 포함한다. 일부 경우에, 말레이미드 기는 말레이미드 스페이서로 지칭되기도 한다. 일부 경우에, 말레이미드 기는 카프로산을 추가로 포함하여, 말레이미도카프로일(mc)을 형성한다. 일부 경우에, 링커는 말레이미도카프로일(mc)을 포함한다. 일부 경우에, 링커는 말레이미도카프로일(mc)이다. 다른 경우에, 말레이미드 기는 상기 기술된 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트(sMCC) 또는 술포숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트(술포-sMCC)와 같은 말레이미도메틸 기를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 말레이미드 기는 자가-안정화 말레이미드이다. 일부 경우에, 자가-안정화 말레이미드는 티오숙신이미드 고리 가수분해의 분자내 촉매작용을 제공하기 위해 말레이미드에 인접한 염기성 아미노 기를 통합하기 위해 디아미노프로피온산(DPR)을 사용하여 레트로-마이클(retro-Michael) 반응을 통해 제거 반응을 겪는 것에 의해 말레이미드를 제거한다. 일부 경우에, 자가-안정화 말레이미드는 문헌[Lyon, et al., "Self-hydrolyzing maleimides improve the stability and pharmacological properties of antibody-drug conjugates," Nat. Biotechnol. 32(10):1059-1062 (2014)]에 기술된 말레이미드 기이다. 일부 경우에, 링커는 자가-안정화 말레이미드를 포함한다. 일부 경우에, 링커는 자가-안정화 말레이미드이다.
콘쥬게이션 화학
다양한 콘쥬게이션 반응을 사용하여 링커, 콘쥬게이션 모이어티, 및 본원에 기술된 사이토카인 펩티드에 통합된 비천연 아미노산을 콘쥬게이팅한다. 이러한 콘쥬게이션 반응은 대개 "생물직교" 반응과 같은 수성 조건에 적합하다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 촉매와 같은 화학 시약; 광; 또는 링커, 콘쥬게이션 모이어티, 또는 비천연 아미노산에서 발견되는 반응성 화학 기에 의해 매개된다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 효소에 의해 매개된다. 일부 실시 형태에서, 본원에 사용된 콘쥬게이션 반응은 문헌[Gong, Y., Pan, L. Tett. Lett. 2015, 56, 2123.]에 기술되어 있다. 일부 실시 형태에서, 본원에 사용된 콘쥬게이션 반응은 문헌[Chen, X.; Wu. Y-W. Org. Biomol. Chem. 2016, 14, 5417.]에 기술되어 있다.
본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 케톤 또는 알데히드와 친핵체의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 옥심을 형성하기 위한 케톤과 아미녹시 기의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 이민을 형성하기 위한 케톤과 아릴 또는 헤테로아릴 아민 기의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 이민을 형성하기 위한 알데히드와 아릴 또는 헤테로아릴 아민 기의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 옥심을 통해 부착된 링커 또는 콘쥬게이션 모이어티를 포함하는 사이토카인 펩티드를 생성한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 알데히드 또는 케톤과 트립타민 친핵체의 Pictet-Spengler 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 히드라지노-Pictet-Spengler 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 Pictet-Spengler 라이게이션을 포함한다.
본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 아지드와 포스핀의 반응(Staudinger 라이게이션)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 포스핀은 아릴 포스핀이다. 일부 실시 형태에서, 아릴 포스핀은 오르토 에스테르 기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 포스핀은 구조 메틸 2-(디페닐포스판일)벤조에이트를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 아릴아미드를 통해 부착된 링커 또는 콘쥬게이션 모이어티를 포함하는 사이토카인 펩티드를 생성한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 아미드를 통해 부착된 링커 또는 콘쥬게이션 모이어티를 포함하는 사이토카인 펩티드를 생성한다.
본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 1,3-쌍극 고리화첨가 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 1,3-쌍극 고리화첨가 반응은 아지드와 포스핀의 반응("클릭" 반응)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 구리에 의해 촉매된다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 트리아졸을 통해 부착된 링커 또는 콘쥬게이션 모이어티를 포함하는 사이토카인 펩티드를 생성한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 아지드와 변형된 올레핀의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 아지드와 변형된 알킨의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 아지드와 시클로알킨, 예를 들어 OCT, DIFO, DIFBO, DIBO, BARAC, TMTH, 또는 기타 변형된 시클로알킨의 반응을 포함하며, 이들의 구조는 문헌[Gong, Y., Pan, L. Tett. Lett. 2015, 56, 2123.]에 예시되어 있다. 일부 실시 형태에서, 1,3-쌍극 고리화첨가 반응은 광에 의해 촉매된다("포토클릭"). 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 말단 알릴 기와 테트라졸 및 광의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 말단 알키닐 기와 테트라졸 및 광의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 O-알릴 아미노산과 테트라진 및 광의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 O-알릴 티로신과 테트라진 및 광의 반응을 포함한다.
본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 다음을 포함한다:
Figure pct00095
여기서, X는, 서열 번호 5, 6, 7, 8, 9, 30, 31, 32, 33, 및 34 중 어느 하나에서와 같이, 비천연 아미노산을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트에서의 위치이다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 수용성 중합체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 반응기는 알킨 또는 아지드를 포함한다. 본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 다음을 포함한다:
Figure pct00096
여기서, X는, 서열 번호 5, 6, 7, 8, 9, 30, 31, 32, 33, 및 34 중 어느 하나에서와 같이, 비천연 아미노산을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트에서의 위치이다. 본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 다음을 포함한다:
Figure pct00097
여기서, X는, 서열 번호 5, 6, 7, 8, 9, 30, 31, 32, 33, 및 34 중 어느 하나에서와 같이, 비천연 아미노산을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트에서의 위치이다. 본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 다음을 포함한다:
Figure pct00098
여기서, X는, 서열 번호 5, 6, 7, 8, 9, 30, 31, 32, 33, 및 34 중 어느 하나에서와 같이, 비천연 아미노산을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트에서의 위치이다. 본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 다음을 포함한다:
Figure pct00099
여기서, X는, 서열 번호 5, 6, 7, 8, 9, 30, 31, 32, 33, 및 34 중 어느 하나에서와 같이, 비천연 아미노산을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트에서의 위치이다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 표 20의 IL-2 변이체를 생성한다.
본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 아지드 모이어티, 예컨대 N6-((2-아지도에톡시)-카르보닐)-L-라이신(AzK)로부터 유도된 아미노산 잔기를 함유하는 단백질에 포함된 것과, 변형된 시클로알킨, 예컨대 디벤조시클로옥틴 기를 포함하는 화학적 모이어티인 DBCO로부터 유도된 것 사이의 고리화첨가 반응이다. DBCO 모이어티를 포함하는 PEG 기는 구매가능하거나, 당업자에게 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다.
Figure pct00100
Figure pct00101
본원에 기술된 클릭 반응과 같은 콘쥬게이션 반응은 단일 위치이성질체, 또는 위치이성질체들의 혼합물을 생성할 수 있다. 일부 경우에, 위치이성질체들의 비는 약 1:1이다. 일부 경우에, 위치이성질체들의 비는 약 2:1이다. 일부 경우에, 위치이성질체들의 비는 약 1.5:1이다. 일부 경우에, 위치이성질체들의 비는 약 1.2:1이다. 일부 경우에, 위치이성질체들의 비는 약 1.1:1이다. 일부 경우에, 위치이성질체들의 비는 1:1보다 크다.
하기 화학식 I의 구조를 갖는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 기술된다:
[화학식 I]
Figure pct00102
여기서,
Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00103
이거나; 또는
Y는 CH2이고 Z는
Figure pct00104
이며;
W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa 및 50 kDa로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 재조합 인간 IL-2의 아미노산 위치로서, 상기 아미노산 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련된다(또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물). 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, Z는 CH2이며, Y는
Figure pct00105
이다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, Y는 CH2이며, Z는
Figure pct00106
이다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 5 kDa, 10 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 10 kDa의 평균 분자량을 갖는다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 20 kDa의 평균 분자량을 갖는다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 40 kDa의 평균 분자량을 갖는다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 50 kDa의 평균 분자량을 갖는다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 K35이다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 F42이다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 K43이다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 E62이다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 P65이다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 R38이다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 T41이다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 E68이다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 Y45이다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 V69이다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 K35, F42, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, 및 V69로부터 선택된다. 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 F42, K43, E62, 및 P65로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 5~84 중 어느 하나의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 15~29를 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 40~54를 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 55~69를 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 70~84를 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 3의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 4의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 5의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 6의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 7의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 8의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 9의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 10의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 11의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 12의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 13의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 14의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 15의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 16의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 17의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 18의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 19의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 20의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 21의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 22의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 23의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 24의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 25의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 26의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 27의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 28의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 29의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 30의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 31의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 32의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 33의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 34의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 35의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 36의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 37의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 38의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 39의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 40의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 41의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 42의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 43의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 44의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 45의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 46의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 47의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 48의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 49의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 50의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 51의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 52의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 53의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 54의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 55의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 56의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 57의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 58의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 59의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 60의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 61의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 62의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 63의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 64의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 65의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 66의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 67의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 68의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 69의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 70의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 71의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 72의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 73의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 74의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 75의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 76의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 77의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 78의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 79의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 80의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 81의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 82의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 83의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 I의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 84의 서열을 포함한다.
하기 화학식 II의 구조를 갖는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 기술된다:
[화학식 II]
Figure pct00107
여기서, W는 5 kDa, 10 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 재조합 인간 IL-2의 구조:
Figure pct00108
를 갖고 F42, K43, E62, 및 P65로부터 선택되는 아미노산 위치이며, 상기 아미노산 위치는 서열 번호 1에서의 위치에 상응한다.
하기 화학식 III의 구조를 갖는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 기술된다:
[화학식 III]
Figure pct00109
여기서, W는 5 kDa, 10 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 재조합 인간 IL-2의 구조:
Figure pct00110
를 갖고 F42, K43, E62, 및 P65로부터 선택되는 아미노산 위치이며, 상기 아미노산은 서열 번호 1에서의 위치에 상응한다.
화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 재조합 인간 IL-2의 F42 위치이다. 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서,
PEG 기는 5 kDa의 평균 분자량을 가지며, X는 재조합 인간 IL-2의 F42 위치이다. 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 재조합 인간 IL-2의 K43 위치이다. 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 5 kDa의 평균 분자량을 가지며, X는 재조합 인간 IL-2의 K43 위치이다. 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 재조합 인간 IL-2의 E62 위치이다. 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 5 kDa의 평균 분자량을 가지며, X는 재조합 인간 IL-2의 E62 위치이다. 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 재조합 인간 IL-2의 P65 위치이다. 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 5 kDa의 평균 분자량을 가지며, X는 재조합 인간 IL-2의 P65 위치이다. 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 재조합 인간 IL-2의 F42 위치이며, W는 10 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다. 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 재조합 인간 IL-2의 K43 위치이며, W는 10 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다. 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 재조합 인간 IL-2의 E62 위치이며, W는 10 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다. 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 재조합 인간 IL-2의 P65 위치이며, W는 10 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다. 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 재조합 인간 IL-2의 F42 위치이며, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다. 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 재조합 인간 IL-2의 K43 위치이며, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다. 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 재조합 인간 IL-2의 E62 위치이며, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다. 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 재조합 인간 IL-2의 P65 위치이며, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 3~29 및 70~84 중 어느 하나의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 3의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 4의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 5의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 6의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 7의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 8의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 9의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 10의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 11의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 12의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 13의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 14의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 15의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 16의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 17의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 18의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 19의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 20의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 21의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 22의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 23의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 24의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 25의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 26의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 27의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 28의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 29의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 70의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 71의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 72의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 73의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 74의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 75의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 76의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 77의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 78의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 79의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 80의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 81의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 82의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 83의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서 화학식 II 또는 화학식 III의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 84의 서열을 포함한다.
화학식 I, 화학식 II, 또는 화학식 III의 제약 조성물이 본원에 기술된다. 일부 실시 형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 또는 화학식 III의 제약 조성물은 서열 번호 3~29 및 70~84 중 어느 하나를 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 또는 화학식 III의 제약 조성물은 서열 번호 3을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 또는 화학식 III의 제약 조성물은 서열 번호 4를 포함하는 서열을 포함한다.
하기 화학식 IV의 구조를 갖는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 기술된다:
[화학식 IV]
Figure pct00111
여기서, W는 5 kDa, 10 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 재조합 인간 IL-2의 구조:
Figure pct00112
를 갖고 F42, K43, E62, 및 P65로부터 선택되는 아미노산 위치이며, 상기 아미노산 위치는 서열 번호 1에서의 위치에 상응한다.
하기 화학식 V의 구조를 갖는 IL-2 콘쥬게이트가 본원에 기술된다:
[화학식 V]
Figure pct00113
여기서, W는 5 kDa, 10 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 재조합 인간 IL-2의 구조:
Figure pct00114
를 갖고 F42, K43, E62, 및 P65로부터 선택되는 아미노산 위치이며, 상기 아미노산은 서열 번호 1에서의 위치에 상응한다.
화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 재조합 인간 IL-2의 F42 위치이다. 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서,
PEG 기는 5 kDa의 평균 분자량을 가지며, X는 재조합 인간 IL-2의 F42 위치이다. 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 재조합 인간 IL-2의 K43 위치이다. 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 5 kDa의 평균 분자량을 가지며, X는 재조합 인간 IL-2의 K43 위치이다. 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 재조합 인간 IL-2의 E62 위치이다. 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 5 kDa의 평균 분자량을 가지며, X는 재조합 인간 IL-2의 E62 위치이다. 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 재조합 인간 IL-2의 P65 위치이다. 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, PEG 기는 5 kDa의 평균 분자량을 가지며, X는 재조합 인간 IL-2의 P65 위치이다. 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 재조합 인간 IL-2의 F42 위치이며, W는 10 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다. 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 재조합 인간 IL-2의 K43 위치이며, W는 10 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다. 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, X는 재조합 인간 IL-2의 E62 위치이며, W는 10 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다. 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 재조합 인간 IL-2의 P65 위치이며, W는 10 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다. 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 재조합 인간 IL-2의 F42 위치이며, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다. 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 재조합 인간 IL-2의 K43 위치이며, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다. 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 재조합 인간 IL-2의 E62 위치이며, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다. 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트의 일부 실시 형태에서, 재조합 인간 IL-2의 P65 위치이며, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 3, 4, 40~69 중 어느 하나의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 3의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 4의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 40의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 41의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 42의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 43의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 44의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 45의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 46의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 47의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 48의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 49의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 50의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 51의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 52의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 53의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 54의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 55의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 56의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 57의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 58의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 59의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 60의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 61의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 62의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 63의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 64의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 65의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 66의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 67의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 68의 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 IV 또는 화학식 V의 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 69의 서열을 포함한다.
화학식 I, 화학식 IV, 또는 화학식 V의 제약 조성물이 본원에 기술된다. 일부 실시 형태에서, 화학식 I, 화학식 IV, 또는 화학식 V의 제약 조성물은 서열 번호 3, 4, 및 40~69 중 어느 하나를 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화학식 I, 화학식 IV, 또는 화학식 V의 제약 조성물은 서열 번호 3을 포함하는 서열을 포함한다.
본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 디엔 및 친디엔체를 포함하는 역전자 요구 고리화첨가 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 디엔은 테트라진을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 친디엔체는 알켄을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 친디엔체는 알킨을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 알킨은 변형된 알킨이다. 일부 실시 형태에서, 알켄은 변형된 디엔이다. 일부 실시 형태에서, 알킨은 트랜스-시클로옥틴이다. 일부 실시 형태에서, 알킨은 시클로옥텐이다. 일부 실시 형태에서, 알켄은 시클로프로펜이다. 일부 실시 형태에서, 알켄은 플루오로시클로프로펜이다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 고리에 2개의 질소 원자를 포함하는 6원 고리 복소환을 통해 링커 또는 콘쥬게이션 모이어티에 부착된 사이토카인 펩티드의 형성으로 이어진다.
본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 올레핀 복분해 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 알켄 및 알킨과 루테늄 촉매의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 2개의 알켄과 루테늄 촉매의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 2개의 알킨과 루테늄 촉매의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 알켄 또는 알킨과 루테늄 촉매 및 알릴 기를 포함하는 아미노산의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 알켄 또는 알킨과 루테늄 촉매 및 알릴 술피드 또는 셀레나이드를 포함하는 아미노산의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 루테늄 촉매는 Hoveda-Grubbs 2세대 촉매이다. 일부 실시 형태에서, 올레핀 복분해 반응은 하나 이상의 변형된 알켄 또는 알킨의 반응을 포함한다.
본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 교차-커플링 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 교차-커플링 반응은 전이 금속 촉매, 예컨대 이리듐, 금, 루테늄, 로듐, 팔라듐, 니켈, 백금, 또는 기타 전이 금속 촉매 및 하나 이상의 리간드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 전이 금속 촉매는 수용성이다. 본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 Suzuki-Miyaura 교차-커플링 반응을 포함한다. 본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 아릴 할라이드(또는 트리플레이트 또는 토실레이트), 아릴 또는 알케닐 보론산, 및 팔라듐 촉매의 반응을 포함한다. 본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 Sonogashira 교차-커플링 반응을 포함한다. 본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 아릴 할라이드(또는 트리플레이트 또는 토실레이트), 알킨, 및 팔라듐 촉매의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 교차-커플링 반응은 탄소-탄소 결합을 통해 사이토카인 펩티드에 링커 또는 콘쥬게이팅 모이어티를 부착시킨다.
본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 콘쥬게이션 전에 반응기의 탈보호 또는 "언케이징(uncaging)" 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 광에 의한 반응기의 언케이징에 이은 콘쥬게이션 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 반응기는 하나 이상의 니트로 기를 포함하는 아랄킬 모이어티로 보호된다. 일부 실시 형태에서, 반응기의 언케이징은 유리 아민, 술피드, 또는 다른 반응기를 생성한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 전이 금속 촉매에 의한 반응기의 언케이징에 이은 콘쥬게이션 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 전이 금속 촉매는 팔라듐 및 하나 이상의 리간드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 반응기는 알릴 모이어티로 보호된다. 일부 실시 형태에서, 반응기는 알릴 카르바메이트로 보호된다. 일부 실시 형태에서, 반응기는 프로파르길 모이어티로 보호된다. 일부 실시 형태에서, 반응기는 프로파르길 카르바메이트로 보호된다. 일부 실시 형태에서, 반응기는 친디엔체로 보호되고, 여기서 디엔(예컨대, 테트라진)에 대한 노출은 반응기를 탈보호시킨다.
본원에 기술된 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 리간드(필요에 따라 반응기에 부착됨)가 반응기와 사이토카인 펩티드 간의 콘쥬게이션 부위를 촉진하는 리간드-유도 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 리간드는 사이토카인 펩티드와 반응기의 반응 중에 또는 후에 절단된다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 펩티드의 콘쥬게이션 부위는 천연 아미노산이다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 펩티드의 콘쥬게이션 부위는 라이신, 시스테인, 또는 세린이다. 일부 실시 형태에서, 사이토카인 펩티드의 콘쥬게이션 부위는 본원에 기술된 비천연 아미노산이다. 일부 실시 형태에서, 반응기는 전자-부족 아릴 또는 헤테로아릴 기와 같은 이탈기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 반응기는 사이토카인 펩티드에 의해 대체되는 전자-부족 알킬 기와 같은 이탈기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 라디칼 포획제와 라디칼 화학종의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 산화성 라디칼 부가 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 라디칼 포획제는 아릴아민이다. 일부 실시 형태에서, 라디칼 화학종은 티로실 라디칼이다. 일부 실시 형태에서, 라디칼 화학종은 루테늄 촉매(예컨대, [Ru(bpy)3]) 및 광에 의해 생성된다.
효소 반응은 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응에 선택적으로 사용된다. 예시적인 효소적 콘쥬게이션은 SortA 매개 콘쥬게이션, TG 매개 콘쥬게이션, 또는 FGE 매개 콘쥬게이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 콘쥬게이션 반응은 아미드 결합을 형성하기 위한 말단 1-아미노-2-티오 기와 티오에스테르의 천연 단백질 라이게이션(NPL)을 포함한다.
링커 또는 콘쥬게이팅 모이어티를 사이토카인 펩티드와 반응시키기 위한 다양한 콘쥬게이션 반응이 본원에 기술되고, 여기서 반응은 사이토카인 펩티드의 천연("정규") 아미노산과 일어난다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 위치에서 발견되는 천연 아미노산은 야생형 서열에서 발견되거나, 대안적으로 상기 위치는 돌연변이되었다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 시스테인 잔기에서의 디술피드 결합의 형성을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 시스테인 또는 라이신의 1,4 마이클 부가 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 시스테인의 시아노벤조티아졸 라이게이션을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 1,3-디클로로-2-프로피오논과 같은 아세톤 모이어티와의 가교결합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 시스테인과 O-메시틸렌술포닐히드록실아민의 반응에 의해 형성된 데히드로알라닌에 대한 1,4 마이클 부가를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 티로신과 트리아졸린디온(TAD) 또는 TAD 유도체의 반응을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이션 반응은 트립토판과 로듐 카르베노이드의 반응을 포함한다.
사용 방법
증식성 질환 또는 병태
일부 실시 형태에서, 증식성 질환 또는 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하는 방법으로서, 본원에 기술된 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 기술된다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 서열 번호 5~84를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 15~29를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 40~54를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 55~69를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 70~84를 포함한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 단리되고 정제된 IL-2 폴리펩티드 및 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하고, 여기서 IL-2 콘쥬게이트는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 IL-2 수용체 α(IL-2Rα) 서브유닛에 대한 친화도가 감소한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 단리되고 정제된 IL-2 폴리펩티드; 및 K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, 및 Y107로부터 선택되는 아미노산 위치에서 상기 단리되고 정제된 IL-2 폴리펩티드에 결합하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 우선적으로 IL-2Rβ 및 IL-2Rβγ 서브유닛과 상호작용하여 IL-2/IL-2Rβγ 복합체를 형성한다. 일부 경우에, IL-2/IL-2Rβγ 복합체는 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 T 세포, NK 세포, 및/또는 NKT 세포의 확장을 자극하고/하거나 향상시킨다. 추가의 경우에, Teff 세포의 확장은 Teff:Treg 비가 Teff 집단 쪽으로 기울어지게 한다. 일부 실시 형태에서, 잔기 F42(여기서, 이 잔기는 서열 번호 1의 위치 42에 상응함)에서의 돌연변이를 포함하는 IL-2 콘쥬게이트는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 증식성 질환 또는 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하는 방법으로서, 표 20에 기술된 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 기술된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1~84를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 15~29를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 40~54를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 55~69를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 70~84를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 화학식 I의 구조를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 화학식 II의 구조를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 화학식 III의 구조를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 화학식 IV의 구조를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 화학식 V의 구조를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 2를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 4를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 5를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 6을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 7을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 8를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 9를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 10을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 11을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 12를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 13을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 14를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 15를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 16을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 17을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 18을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 19를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 20을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 21을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 22를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 23을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 24를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 25를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 26을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 27을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 28를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 24를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 25를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 26을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 27을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 28을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 29를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 30을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 31을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 32를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 33을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 34를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 35를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 36을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 37을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 38을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 39를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 40을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 41을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 42를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 43을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 44를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 45를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 46을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 47을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 48을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 49를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 50을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 51을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 52를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 53을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 54를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 55를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 56을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 57을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 58을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 59를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 60을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 61을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 62를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 63을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 64를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 65를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 66을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 67을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 68을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 69를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 70을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 71을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 72를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 73을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 74를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 75를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 76을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 77을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 78을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 79를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 80을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 81을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 82를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 83을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 84를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 증식성 질환 또는 병태는 암이다. 일부 경우에, 암은 고형 종양이다. 예시적인 고형 종양은 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 결장직장암, 식도암, 안암, 두경부암, 신장암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 또는 전립선암을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 경우에, 고형 종양은 전이성 암이다. 일부 경우에, 고형 종양은 재발성 또는 불응성 암이다. 일부 경우에, 고형 종양은 거세 저항성 전립선암, 전이성 거세 저항성 전립선암 또는 DNA 손상 반응(DDR) 결함이 있는 전이성 거세 저항성 전립선암이다.
일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN, 또는 TNF) 콘쥬게이트는 고형 종양을 치료하기 위해 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, 대상체는 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 결장직장암, 식도암, 안암, 두경부암, 신장암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 또는 전립선암을 갖는다. 일부 경우에, 고형 종양은 전이성 암이다. 일부 경우에, 고형 종양은 재발성 또는 불응성 암이다. 일부 경우에, 고형 종양은 거세 저항성 전립선암, 전이성 거세 저항성 전립선암 또는 DNA 손상 반응(DDR) 결함이 있는 전이성 거세 저항성 전립선암이다.
일부 경우에, 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트는 고형 종양의 치료를 위해 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 이러한 경우에, 대상체는 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 결장직장암, 식도암, 안암, 두경부암, 신장암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암 또는 전립선암을 갖는다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 방광암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 유방암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 결장직장암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 식도암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 두경부암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 신장암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 폐암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 흑색종의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 난소암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 췌장암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 전립선암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 거세 저항성 전립선암, 전이성 거세 저항성 전립선암 또는 DNA 손상 반응(DDR) 결함이 있는 전이성 거세 저항성 전립선암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 전이성 암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, 전이성 암은 전이성 방광암, 전이성 골암, 전이성 뇌암, 전이성 유방암, 전이성 결장직장암, 전이성 식도암, 전이성 안암, 전이성 두경부암, 전이성 신장암, 전이성 폐암, 전이성 흑색종, 전이성 난소암, 전이성 췌장암 또는 전이성 전립선암을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 전이성 방광암, 전이성 골암, 전이성 뇌암, 전이성 유방암, 전이성 결장직장암, 전이성 식도암, 전이성 안암, 전이성 두경부암, 전이성 신장암, 전이성 폐암, 전이성 흑색종, 전이성 난소암, 전이성 췌장암 또는 전이성 전립선암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 거세 저항성 전립선암, 전이성 거세 저항성 전립선암 또는 DNA 손상 반응(DDR) 결함이 있는 전이성 거세 저항성 전립선암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다.
일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 재발성 또는 불응성 암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, 재발성 또는 불응성 암은 재발성 또는 불응성 방광암, 재발성 또는 불응성 골암, 재발성 또는 불응성 뇌암, 재발성 또는 불응성 유방암, 재발성 또는 불응성 결장직장암, 재발성 또는 불응성 식도암, 재발성 또는 불응성 안암, 재발성 또는 불응성 두경부암, 재발성 또는 불응성 신장암, 재발성 또는 불응성 폐암, 재발성 또는 불응성 흑색종, 재발성 또는 불응성 난소암, 재발성 또는 불응성 췌장암 또는 재발성 또는 불응성 전립선암을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 재발성 또는 불응성 암은 재발성 또는 불응성 방광암, 재발성 또는 불응성 골암, 재발성 또는 불응성 뇌암, 재발성 또는 불응성 유방암, 재발성 또는 불응성 결장직장암, 재발성 또는 불응성 식도암, 재발성 또는 불응성 안암, 재발성 또는 불응성 두경부암, 재발성 또는 불응성 신장암, 재발성 또는 불응성 폐암, 재발성 또는 불응성 흑색종, 재발성 또는 불응성 난소암, 재발성 또는 불응성 췌장암 또는 재발성 또는 불응성 전립선암의 치료를 위해 대상체에게 투여된다.
일부 실시 형태에서, 암은 치료-나이브 암이다. 이러한 경우에, 치료-나이브 암은 치료법으로 치료를 받은 적이 없는 암이다. 일부 경우에, 치료-나이브 암은 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 결장직장암, 식도암, 안암, 두경부암, 신장암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 또는 전립선암과 같은 고형 종양이다. 일부 실시 형태에서, 치료-나이브 고형 종양의 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하는 방법으로서, 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 기술된다.
일부 실시 형태에서, 암은 혈액 악성종양이다. 일부 경우에, 혈액 악성종양은 백혈병, 림프종, 또는 골수종을 포함한다. 일부 경우에, 혈액 악성종양은 T 세포 악성종양이다. 다른 경우에, 혈액 악성종양은 B 세포 악성종양이다. 예시적인 혈액 악성종양은 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소형 림프구성 림프종(SLL), 소포성 림프종(FL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 다발성 골수종, 결절외 변연부 B 세포 림프종, 결절 변연부 B 세포 림프종, 버킷 림프종, 비버킷 고등급 B 세포 림프종, 원발성 종격 B 세포 림프종(PMBL), 면역모구성 대세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, B 세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포 림프종, 비장 변연부 림프종, 형질세포 골수종, 형질세포종, 종격(흉선) 거대 B 세포 림프종, 혈관내 거대 B 세포 림프종, 원발성 삼출 림프종, 또는 림프종양 육아종증(lymphomatoid granulomatosis)을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
일부 경우에, 혈액 악성종양은 전이성 암이다. 일부 경우에, 전이성 암은 전이성 T 세포 악성종양 또는 전이성 B 세포 악성종양이다.
일부 경우에, 혈액 악성종양은 재발성 또는 불응성 암이다. 일부 경우에, 재발성 또는 불응성 암은 재발성 또는 불응성 T 세포 악성종양 또는 재발성 또는 불응성 B 세포 악성종양이다.
일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN, 또는 TNF)은 혈액 악성종양을 치료하기 위해 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, 대상체는 T 세포 악성종양이 있다. 일부 경우에, 대상체는 B 세포 악성종양이 있다. 일부 경우에, 대상체는 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소형 림프구성 림프종(SLL), 소포성 림프종(FL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 다발성 골수종, 결절외 변연부 B 세포 림프종, 결절 변연부 B 세포 림프종, 버킷 림프종, 비버킷 고등급 B 세포 림프종, 원발성 종격 B 세포 림프종(PMBL), 면역모구성 대세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, B 세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포 림프종, 비장 변연부 림프종, 형질세포 골수종, 형질세포종, 종격(흉선) 거대 B 세포 림프종, 혈관내 거대 B 세포 림프종, 원발성 삼출 림프종, 또는 림프종양 육아종증이 있다.
일부 경우에, 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트는 혈액 악성종양의 치료를 위해 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, 대상체는 T 세포 악성종양이 있다. 일부 경우에, 대상체는 B 세포 악성종양이 있다. 일부 경우에, 대상체는 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소형 림프구성 림프종(SLL), 소포성 림프종(FL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 다발성 골수종, 결절외 변연부 B 세포 림프종, 결절 변연부 B 세포 림프종, 버킷 림프종, 비버킷 고등급 B 세포 림프종, 원발성 종격 B 세포 림프종(PMBL), 면역모구성 대세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, B 세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포 림프종, 비장 변연부 림프종, 형질세포 골수종, 형질세포종, 종격(흉선) 거대 B 세포 림프종, 혈관내 거대 B 세포 림프종, 원발성 삼출 림프종, 또는 림프종양 육아종증이 있다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 CLL의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 SLL의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 FL의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 DLBCL의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 MCL의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 발덴스트롬 마크로글로불린혈증의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 다발성 골수종의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 버킷 림프종의 치료를 위해 대상체에게 투여된다.
일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 전이성 혈액 악성종양의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 전이성 T 세포 악성종양의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 전이성 B 세포 악성종양의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 전이성 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소형 림프구성 림프종(SLL), 소포성 림프종(FL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 다발성 골수종, 결절외 변연부 B 세포 림프종, 결절 변연부 B 세포 림프종, 버킷 림프종, 비버킷 고등급 B 세포 림프종, 원발성 종격 B 세포 림프종(PMBL), 면역모구성 대세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, B 세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포 림프종, 비장 변연부 림프종, 형질세포 골수종, 형질세포종, 종격(흉선) 거대 B 세포 림프종, 혈관내 거대 B 세포 림프종, 원발성 삼출 림프종, 또는 전이성 림프종양 육아종증의 치료를 위해 대상체에게 투여된다.
일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 재발성 또는 불응성 혈액 악성종양의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 재발성 또는 불응성 T 세포 악성종양의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 재발성 또는 불응성 B 세포 악성종양의 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 재발성 또는 불응성 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소형 림프구성 림프종(SLL), 소포성 림프종(FL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 다발성 골수종, 결절외 변연부 B 세포 림프종, 결절 변연부 B 세포 림프종, 버킷 림프종, 비버킷 고등급 B 세포 림프종, 원발성 종격 B 세포 림프종(PMBL), 면역모구성 대세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, B 세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포 림프종, 비장 변연부 림프종, 형질세포 골수종, 형질세포종, 종격(흉선) 거대 B 세포 림프종, 혈관내 거대 B 세포 림프종, 원발성 삼출 림프종, 또는 림프종양 육아종증의 치료를 위해 대상체에게 투여된다.
추가 치료제
일부 실시 형태에서, 대상체에게 추가 치료제가 추가로 투여된다. 일부 경우에, 추가 치료제는 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)와 동시에 투여된다. 다른 경우에, 추가 치료제와 IL-2 콘쥬게이트는 순차적으로 투여되고, 예를 들어 추가 치료제 전에 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)가 투여되거나, 추가 치료제의 투여 후에 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)가 투여된다.
일부 경우에, 추가 치료제는 화학치료제, 면역치료제, 표적 치료, 방사선 치료, 또는 이들의 조합을 포함한다. 예시적인 추가 치료제는 알트레타민, 부설판, 카보플라틴, 카무스틴, 클로르암부실, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 다카바진, 로무스틴, 멜팔란, 옥살라플라틴, 테모졸로마이드, 또는 티오테파와 같은 알킬화제; 5-플루오로우라실(5-FU), 6-머캅토퓨린(6-MP), 카페시타빈, 시타라빈, 플록수리딘, 플루다라빈, 겜시타빈, 히드록시우레아, 메토트렉세이트, 또는 페메트렉시드와 같은 항대사물질; 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 또는 이다루비신과 같은 안트라사이클린; 토포테칸 또는 이리노테칸(CPT-11)과 같은 토포이소머라아제 I 억제제; 에토포시드(VP-16), 테니포시드, 또는 미톡산트론과 같은 토포이소머라아제 II 억제제; 도세탁셀, 에스트라무스틴, 익사베필론, 파클리탁셀, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 또는 비노렐빈과 같은 유사분열 억제제; 또는 프레드니손, 메틸프레드니솔론, 또는 덱사메타손과 같은 코르티코스테로이드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 경우에, 추가의 치료제는 일차 치료(first-line therapy)를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "일차 치료"는 암을 갖는 대상체에 대한 일차적인 치료를 포함한다. 일부 경우에, 암은 원발성 암이다. 다른 경우에, 암은 전이성 또는 재발성 암이다. 일부 경우에, 일차 치료는 화학요법을 포함한다. 다른 경우에, 일차 치료는 방사선 치료를 포함한다. 당업자는 상이한 일차 치료들이 상이한 유형의 암에 적용가능할 수 있음을 쉽게 이해할 것이다.
일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 알트레타민, 부설판, 카보플라틴, 카무스틴, 클로르암부실, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 다카바진, 로무스틴, 멜팔란, 옥살라플라틴, 테모졸로마이드, 또는 티오테파와 같은 알킬화제; 5-플루오로우라실(5-FU), 6-머캅토퓨린(6-MP), 카페시타빈, 시타라빈, 플록수리딘, 플루다라빈, 겜시타빈, 히드록시우레아, 메토트렉세이트, 또는 페메트렉시드와 같은 항대사물질; 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 또는 이다루비신과 같은 안트라사이클린; 토포테칸 또는 이리노테칸(CPT-11)과 같은 토포이소머라아제 I 억제제; 에토포시드(VP-16), 테니포시드, 또는 미톡산트론과 같은 토포이소머라아제 II 억제제; 도세탁셀, 에스트라무스틴, 익사베필론, 파클리탁셀, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 또는 비노렐빈과 같은 유사분열 억제제; 또는 프레드니손, 메틸프레드니솔론, 또는 덱사메타손과 같은 코르티코스테로이드로부터 선택되는 추가 치료제와 함께 투여된다.
일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 효소 폴리 ADP 리보스 폴리머라아제(PARP)의 억제제와 함께 투여된다. 예시적인 PARP 억제제는 올라파립(AZD-2281, Lynparza®, Astra Zeneca에서 제공), 루카파립(PF-01367338, Rubraca®, Clovis Oncology에서 제공), 니라파립(MK-4827, Zejula®, Tesaro에서 제공), 탈라조파립(BMN-673, BioMarin Pharmaceutical Inc.에서 제공), 벨리파립(ABT-888, AbbVie에서 제공), CK-102(이전 명칭 CEP 9722, Teva Pharmaceutical Industries Ltd.에서 제공), E7016(Eisai에서 제공), 이니파립(BSI 201, Sanofi에서 제공), 및 파미파립(BGB-290, BeiGene에서 제공)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 올라파립, 루카파립, 니라파립, 탈라조파립, 벨리파립, CK-102, E7016, 이니파립, 또는 파미파립과 같은 PARP 억제제와 조합되어 투여된다.
일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 면역 관문 억제제와 함께 투여된다. 예시적인 관문 억제제는 다음을 포함한다:
PD-L1 억제제, 예컨대 Genentech의 MPDL3280A(RG7446), BioXcell의 항-마우스 PD-L1 항체 클론 10F.9G2(카탈로그 번호 BE0101), Bristol-Meyer's Squibb의 항-PD-L1 단클론 항체 MDX-1105(BMS-936559) 및 BMS-935559, MSB0010718C, 마우스 항-PD-L1 클론 29E.2A3, AstraZeneca의 MEDI4736, 아테졸리주맙(Tecentriq®로도 공지됨), 바벨리주맙(Imfinzi®로도 공지됨), 및 아벨루맙(Bavencio®로도 공지됨);
PD-L2 억제제, 예컨대 GlaxoSmithKline의 AMP-224(Amplimmune), 및 rHIgM12B7;
PD-1 억제제, 예컨대 BioXcell의 항-마우스 PD-1 항체 클론 J43(카탈로그 번호 BE0033-2), BioXcell의 항-마우스 PD-1 항체 클론 RMP1-14(카탈로그 번호 BE0146), 마우스 항-PD-1 항체 클론 EH12, Merck의 MK-3475 항-마우스 PD-1 항체(Keytruda, 펨브롤리주맙, 람브롤리주맙), AnaptysBio의 항-PD-1 항체(ANB011로 공지됨), 항체 MDX-1 106(ONO-4538), Bristol-Myers Squibb의 인간 IgG4 단클론 항체 니볼루맙(Opdivo®, BMS-936558, MDX1106), AstraZeneca의 AMP-514 및 AMP-224, Regeneron의 세미플리맙, 및 CureTech Ltd의 피딜리주맙(CT-011);
CTLA-4 억제제, 예컨대 Bristol Meyers Squibb의 항-CTLA-4 항체 이필리무맙(Yervoy®, MDX-010, BMS-734016 및 MDX-101로도 공지됨), Millipore의 항-CTLA4 항체 클론 9H10, Pfizer의 트레멜리무맙(CP-675,206, 티실리무맙), 및 Abcam의 항-CTLA4 항체 클론 BNI3;
LAG3 억제제, 예컨대 eBioscience의 항-Lag-3 항체 클론 eBioC9B7W(C9B7W), LifeSpan Biosciences의 항-Lag3 항체 LS-B2237, Immutep의 IMP321(ImmuFact), 항-Lag3 항체 BMS-986016, 및 LAG-3 키메라 항체 A9H12;
B7-H3 억제제, 예컨대 MGA271;
KIR 억제제, 예컨대 리릴루맙(Lirilumab)(IPH2101);
CD137 억제제, 예컨대 우렐루맙(BMS-663513, Bristol-Myers Squibb), PF-05082566(항-4-1BB, PF-2566, Pfizer), 또는 XmAb-5592(Xencor);
PS 억제제, 예컨대 바비툭시맙;
및 TIM3, CD52, CD30, CD20, CD33, CD27, OX40, GITR, ICOS, BTLA (CD272), CD160, 2B4, LAIR1, TIGHT, LIGHT, DR3, CD226, CD2, 또는 SLAM에 대한 소분자, RNAi 분자, 또는 항체 또는 이의 단편(예를 들어, 단클론 항체, 인간, 인간화, 또는 키메라 항체)과 같은 억제제.
일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 트레멜리무맙, 또는 이필리무맙과 조합되어 투여된다.
일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 알렘투주맙, 트라스투주맙, 이브리투모맙 튜세탄, 브렌툭시맙 베도틴, 아도-트라스투주맙 엠탄신, 또는 블리나투모맙과 같은 항체와 함께 투여된다.
일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 수용체 작용제로부터 선택되는 추가 치료제와 함께 투여된다. 일부 경우에, 수용체 작용제는 톨-유사 수용체(TLR) 리간드를 포함한다. 일부 경우에, TLR 리간드는 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, 또는 TLR9를 포함한다. 일부 경우에, TLR 리간드는 예를 들어 Pam3Cys, CFA, MALP2, Pam2Cys, FSL-1, Hib-OMPC, 폴리 I:C, 폴리 A:U, AGP, MPL A, RC-529, MDF2β, CFA, 또는 플라젤린과 같은 합성 리간드를 포함한다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, 및 TLR9로부터 선택되는 하나 이상의 TLR 작용제와 함께 투여된다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 Pam3Cys, CFA, MALP2, Pam2Cys, FSL-1, Hib-OMPC, 폴리 I:C, 폴리 A:U, AGP, MPL A, RC-529, MDF2β, CFA, 및 플라젤린으로부터 선택되는 하나 이상의 TLR 작용제와 함께 투여된다.
일부 실시 형태에서, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 입양 T 세포 전달(ACT) 치료와 함께 사용된다. 일 실시 형태에서, ACT는 예를 들어 항종양 활성을 갖는 대상체에서 자가유래 T 림프구를 확인하는 단계, 시험관 내에서 자가유래 T 림프구를 확장시키는 단계, 및 확장된 T 림프구를 대상체에 후속 재주입하는 단계를 포함한다. 다른 실시 형태에서, ACT는 예를 들어 항종양 활성을 갖는 동종이계 T 림프구의 사용, 시험관 내 T 림프구의 확장 및 후속하여 주입을 필요로 하는 대상체로의 확장된 동종이계 T 림프구의 주입을 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 ACT 치료의 일부로서 자가유래 T 림프구와 함께 사용된다. 다른 경우에, 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 ACT 치료의 일부로서 동종이계 T 림프구와 함께 사용된다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 치료를 필요로 하는 대상체에게 ACT 치료와 동시에 투여된다. 다른 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 치료를 필요로 하는 대상체에게 ACT 치료와 함께 순차적으로 투여된다.
일부 실시 형태에서, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 자가유래 및/또는 동종이계 T 세포 전달의 생체 외 활성화 및/또는 확장에 사용된다. 이러한 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 자가유래 및/또는 동종이계 T 세포를 포함하는 샘플을 활성화하고/하거나 확장하는 데 사용되고, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 이를 필요로 하는 대상체에게 샘플을 투여하기 전에 샘플로부터 선택적으로 제거된다.
일부 실시 형태에서, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 백신과 함께 투여된다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 암용해 바이러스와 조합되어 사용된다. 이러한 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는는 면역 반응을 조절하는 자극제로서 작용한다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 아쥬반트 치료의 일부로서 암용해 바이러스와 함께 사용된다. 예시적인 암용해 바이러스는 T-Vec(Amgen), G47Δ(Todo et al.), JX-594(Sillajen), CG0070(Cold Genesys), 및 Reolysin(Oncolytics Biotech)을 포함한다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 T-Vec, G47Δ, JX-594, CG0070, 또는 Reolysin과 같은 암용해 바이러스와 조합되어 사용된다.
일부 실시 형태에서, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 방사선 치료와 조합되어 투여된다.
일부 실시 형태에서, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 수술과 조합되어 투여된다.
병원성 감염
일부 실시 형태에서, 병원성 감염의 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하는 방법으로서, 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 기술된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 단리되고 정제된 IL-2 폴리펩티드 및 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하고, 여기서 IL-2 콘쥬게이트는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 IL-2 수용체 α(IL-2Rα) 서브유닛에 대한 친화도가 감소한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 단리되고 정제된 IL-2 폴리펩티드; 및 K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, 및 Y107로부터 선택되는 아미노산 위치에서 상기 단리되고 정제된 IL-2 폴리펩티드에 결합하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 우선적으로 IL-2Rβ 및 IL-2Rβγ 서브유닛과 상호작용하여 IL-2/IL-2Rβγ 복합체를 형성하며, 이는 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, NK 세포, 및/또는 NKT 세포의 확장을 자극하고/하거나 향상시킨다. 추가의 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 CD8+ T 세포에 의한 병원성 저장소의 인식을 용이하게 한다. 일부 실시 형태에서, 잔기 F42(여기서, 이 잔기는 서열 번호 1의 위치 42에 상응함)에서의 돌연변이를 포함하는 IL-2 콘쥬게이트는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 병원성 감염은 바이러스 감염으로, 항바이러스 요법제로 치료시 바이러스 저장소(예를 들어, 휴지 CD4+ T 세포)는 치료받은 숙주에서 지속된다. 이러한 경우에, 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 CD8+ T 세포(또는 세포독성 T 세포)에 의한 바이러스 저장소의 인식을 유도한다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 제거를 위해 CD8+ T 세포를 감염된 휴지 세포로 재지향시키는 단일요법제로 사용된다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 제거를 위해 CD8+ T 세포를 감염된 휴지 세포로 재지향시키는 추가 요법제와 조합되어 사용된다. 예시적인 추가 요법제는 아시클로비르, 브리부딘, 도코사놀, 팜시클로비르, 포스카넷, 이독수리딘, 펜시클로비르, 트리플루리딘, 발라시클로비르 및 프리텔리비르와 같은 항바이러스 치료제를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 바이러스는 DNA 바이러스 또는 RNA 바이러스이다. DNA 바이러스는 단일 가닥(ss) DNA 바이러스, 이중 가닥(ds) DNA 바이러스 또는 ss 및 ds DNA 영역 둘 다를 포함하는 DNA 바이러스를 포함한다. RNA 바이러스는 단일 가닥(ss) RNA 바이러스 또는 이중 가닥(ds) RNA 바이러스를 포함한다. 일부 경우에, ssRNA 바이러스는 포지티브-센스 RNA 바이러스 또는 네거티브-센스 RNA 바이러스로 추가로 분류된다.
예시적인 dsDNA 바이러스는 다음 과의 바이러스를 포함한다: 마이오비리데(Myoviridae), 포도비리데(Podoviridae), 시포비리데(Siphoviridae), 알로헤르페스비리데(Alloherpesviridae), 헤르페스비리데(Herpesviridae), 말라코헤르페스비리데(Malacoherpesviridae), 리포트릭스비리데(Lipothrixviridae), 루디비리데(Rudiviridae), 아데노비리데(Adenoviridae), 암풀라비리데(Ampullaviridae), 아스코비리데(Ascoviridae), 아스파르비리데(Asfarviridae), 바쿨로비리데(Baculoviridae), 비카우다비리데(Bicaudaviridae), 클라바비리데(Clavaviridae), 코르티코비리데(Corticoviridae), 푸셀로비리데(Fuselloviridae), 글로불로비리데(Globuloviridae), 구타비리데(Guttaviridae), 히트로사비리데(Hytrosaviridae), 이리도비리데(Iridoviridae), 마르세이유비리데(Marseilleviridae), 미미비리데(Mimiviridae), 니마비리데(Nimaviridae), 판도라비리데(Pandoraviridae), 파필로마비리데(Papillomaviridae), 피코드나비리데(Phycodnaviridae), 플라스마비리데(Plasmaviridae), 폴리드나바이러스(Polydnavirus), 폴리오마비리데(Polyomaviridae), 폭스비리데(Poxviridae), 스페로리포비리데(Sphaerolipoviridae), 및 텍티비리데(Tectiviridae).
예시적인 ssDNA 바이러스는 다음 과의 바이러스를 포함한다: 아넬로비리데(Anelloviridae), 바실라리오드나비리데(Bacillariodnaviridae), 비드나비리데(Bidnaviridae), 시르코비리데(Circoviridae), 제미니비리데(Geminiviridae), 이노비리데(Inoviridae), 미크로비리데(Microviridae), 나노비리데(Nanoviridae), 파보비리데(Parvoviridae), 및 스피라비리데(Spiraviridae).
ss 및 ds DNA 영역을 모두 포함하는 예시적인 DNA 바이러스에는 플레올리포바이러스(pleolipovirus) 그룹의 바이러스가 포함된다. 일부 경우에, 플레올리포바이러스는 할로아르쿨라 히스패니카 다형성 바이러스 1(Haloarcula hispanica pleomorphic virus 1), 할로게오메트리컴(Halogeometricum) 다형성 바이러스 1, 할로루브룸(Halorubrum) 다형성 바이러스 1, 할로루브룸 다형성 바이러스 2, 할로루브룸 다형성 바이러스 3, 및 할로루브룸 다형성 바이러스 6을 포함한다.
예시적인 dsRNA 바이러스는 다음 과의 바이러스를 포함한다: 비르나비리데(Birnaviridae), 크리소비리데(Chrysoviridae), 시스토비리데(Cystoviridae), 엔도르나비리데(Endornaviridae), 히포비리데(Hypoviridae), 메가비르나비리데(Megavirnaviridae), 파르티티비리데(Partitiviridae), 피코비르나비리데(Picobirnaviridae), 레오비리데(Reoviridae), 로타바이러스(Rotavirus), 및 토티비리데(Totiviridae).
예시적인 포지티브 센스 ssRNA 바이러스는 다음 과의 바이러스를 포함한다: 알파플렉시비리데(Alphaflexiviridae), 알파테트라비리데(Alphatetraviridae), 알베르나비리데(Alvernaviridae), 아르테리비리데(Arteriviridae), 아스트로비리데(Astroviridae), 바르나비리데(Barnaviridae), 베타플렉시비리데(Betaflexiviridae), 브로모비리데(Bromoviridae), 칼리시비리데(Caliciviridae), 카르모테트라비리데(Carmotetraviridae), 클로스테로비리데(Closteroviridae), 코로나비리데(Coronaviridae), 디시스트로비리데(Dicistroviridae), 플라비비리데(Flaviviridae), 감마플렉시비리데(Gammaflexiviridae), 이플라비리데(Iflaviridae), 레비비리데(Leviviridae), 루테오비리데(Luteoviridae), 마르나비리데(Marnaviridae), 메소니비리데(Mesoniviridae), 나르나비리데(Narnaviridae), 노다비리데(Nodaviridae), 페르무토테트라비리데(Permutotetraviridae), 피코르나비리데(Picornaviridae), 포티비리데(Potyviridae), 로니비리데(Roniviridae), 레트로비리데(Retroviridae), 세코비리데(Secoviridae), 토가비리데(Togaviridae), 톰부스비리데(Tombusviridae), 티모비리데(Tymoviridae), 및 비르가비리데(Virgaviridae).
예시적인 네거티브 센스 ssRNA 바이러스는 다음 과의 바이러스를 포함한다: 아레나비리데(Arenaviridae), 보르나비리데(Bornaviridae), 분야비리데(Bunyaviridae), 필로비리데(Filoviridae), 니아미비리데(Nyamiviridae), 오피오비리데(Ophioviridae), 오르토믹소비리데(Orthomyxoviridae), 파라믹소비리데(Paramyxoviridae), 및 랍도비리데(Rhabdoviridae).
일부 실시 형태에서, 병원성 감염은 아벨슨(Abelson) 백혈병 바이러스, 아벨슨 쥣과 백혈병 바이러스, 아벨슨 바이러스, 급성 후두기관 기관지염 바이러스, 애들레이드 리버(Adelaide River) 바이러스, 아데노 연관 바이러스 그룹, 아데노바이러스(Adenovirus), 아프리카 마역(African horse sickness) 바이러스, 아프리카 돼지 열병 바이러스, AIDS 바이러스, 알류샨 밍크병 파보바이러스(Aleutian mink disease parvovirus), 알파레트로바이러스(Alpharetrovirus), 알파바이러스(Alphavirus), ALV 관련 바이러스, 아마파리(Amapari) 바이러스, 아프토바이러스(Aphthovirus), 아쿠아레오바이러스(Aquareovirus), 아르보바이러스(Arbovirus), 아르보바이러스 C, 아르보바이러스 그룹 A, 아르보바이러스 그룹 B, 아레나바이러스 그룹(Arenavirus group), 아르헨티나 출혈열 바이러스, 아르헨티나 출혈열 바이러스, 아테리바이러스(Arterivirus), 아스트로바이러스(Astrovirus), 아텔라인 헤르페스바이러스 그룹(Ateline herpesvirus group), 오제스키병(Aujezky's disease) 바이러스, 아우라 바이러스(Aura virus), 오스덕병 바이러스(Ausduk disease virus), 오스트레일리아 박쥐 리사바이러스(lyssavirus), 아비아데노바이러스(Aviadenovirus), 조류 적아세포증 바이러스, 조류 전염성 기관지염 바이러스, 조류 백혈병 바이러스, 조류 백혈증 바이러스, 조류 림프종증 바이러스, 조류 골수아세포증 바이러스, 조류 파라믹소바이러스, 조류 폐뇌염 바이러스, 조류 세망내피증 바이러스, 조류 육종 바이러스, 조류 C형 레트로바이러스 그룹, 아비헤파드나바이러스(Avihepadnavirus), 아비폭스바이러스, B 바이러스, B19 바이러스, 바반키 바이러스(Babanki virus), 바분 헤르페스바이러스(baboon herpesvirus), 바큘로바이러스(baculovirus), 바마 포레스트(Barmah Forest) 바이러스, 베바루(Bebaru) 바이러스, 베리마(Berrimah) 바이러스, 베타레트로바이러스(Betaretrovirus), 버나바이러스(Birnavirus), 비트너(Bittner) 바이러스, BK 바이러스, 블랙 크릭 캐널(Black Creek Canal) 바이러스, 청설병(bluetongue) 바이러스, 볼리비아 출혈열 바이러스, 보르나병 바이러스, 양의 보더병(border disease of sheep) 바이러스, 보르나(borna) 바이러스, 소 알파헤르페스바이러스 1, 소 알파헤르페스바이러스 2, 소 코로나바이러스, 소 유행열 바이러스, 소 면역결핍 바이러스, 소 백혈병 바이러스, 소 백혈증 바이러스, 소 유두염 바이러스, 소 유두종바이러스, 소 구진성 구내염 바이러스, 소 파보바이러스, 소 합포성(bovine syncytial) 바이러스, 소 C형 온코바이러스(oncovirus), 소 바이러스성 설사증 바이러스, 부기 크릭(Buggy Creek) 바이러스, 탄환형 바이러스 그룹(bullet shaped virus group), 분얌웨라(Bunyamwera) 바이러스 수퍼그룹, 분야바이러스, 버킷 림프종 바이러스, 브왐바 열(Bwamba Fever), CA 바이러스, 칼리시바이러스(Calicivirus), 캘리포니아 뇌염 바이러스, 낙타두창(camelpox) 바이러스, 카나리아두창(canarypox) 바이러스, 개 헤르페스바이러스, 개 코로나바이러스, 개 디스템퍼(canine distemper) 바이러스, 개 헤르페스바이러스, 개 미소(canine minute) 바이러스, 개 파보바이러스, 카노 델가디토(Cano Delgadito) 바이러스, 염소 관절염 바이러스, 염소 뇌염 바이러스, 염소 헤르페스 바이러스, 염소 두창 바이러스, 카디오바이러스(Cardiovirus), 카비이드(caviid) 헤르페스바이러스 1, 긴꼬리원숭이 헤르페스바이러스 1, 세르코피테신(cercopithecine) 헤르페스바이러스 1, 세르코피테신 헤르페스바이러스 2, 찬디푸라(Chandipura) 바이러스, 창귀놀라(Changuinola) 바이러스, 얼룩메기(channel catfish) 바이러스, 샤를빌(Charleville) 바이러스, 수두 바이러스, 치쿤군야(Chikungunya) 바이러스, 침팬지 헤르페스바이러스, 처브 레오바이러스(chub reovirus), 백연어(chum salmon) 바이러스, 코칼 바이러스(Cocal virus), 은연어 레오바이러스(Coho salmon reovirus), 구진(coital exanthema) 바이러스, 콜로라도 진드기열 바이러스, 콜티바이러스(Coltivirus), 컬럼비아 SK 바이러스, 감기 바이러스, 전염성 양두(contagious ecthyma) 바이러스, 전염성 농포성 피부염 바이러스, 코로나바이러스, 코리파타(Corriparta) 바이러스, 코리자(coryza) 바이러스, 우두 바이러스, 콕사키(coxsackie) 바이러스, CPV(세포질 다각체병 바이러스), 귀뚜라미 마비병 바이러스, 크림-콩고 출혈열 바이러스, 크루프(croup) 관련 바이러스, 크립토바이러스(Cryptovirus), 사이포바이러스(Cypovirus), 거대세포바이러스, 거대세포바이러스 그룹, 세포질 다각체병 바이러스, 사슴 유두종바이러스, 델타레트로바이러스, 뎅기열 바이러스(dengue virus), 덴소바이러스(Densovirus), 데펜도바이러스(Dependovirus), 도리(Dhori) 바이러스, 디플로마(diploma) 바이러스, 초파리 C형 바이러스, 오리 B형 간염 바이러스, 오리 간염 바이러스 1, 오리 간염 바이러스 2, 듀오바이러스(duovirus), 두벤하게(Duvenhage) 바이러스, 날개 변형(Deformed wing) 바이러스 DWV, 동부 말 뇌염 바이러스, 동부 말 뇌척수막염 바이러스, EB 바이러스, 에볼라(Ebola) 바이러스, 에볼라-유사 바이러스, 에코(echo) 바이러스, 에코바이러스(echovirus), 에코바이러스 10, 에코바이러스 28, 에코바이러스 9, 사지부전증 바이러스, EEE 바이러스, EIA 바이러스, EIA 바이러스, 뇌염 바이러스, 뇌척수 심근염 그룹 바이러스, 뇌척수 심근염 바이러스, 엔테로바이러스, 효소 상승(enzyme elevating) 바이러스, 효소 상승 바이러스(LDH), 유행성 출혈열 바이러스, 유행성 출혈병(epizootic hemorrhagic disease) 바이러스, 엡스타인-바(Epstein-Barr) 바이러스, 얼룩말(equid) 알파헤르페스바이러스 1, 얼룩말 알파헤르페스바이러스 4, 얼룩말 헤르페스바이러스 2, 말 유산(equine abortion) 바이러스, 말 동맥염 바이러스, 말 뇌증 바이러스, 말 전염성 빈혈 바이러스, 말 모빌리바이러스, 말 비강폐렴 바이러스, 말 리노바이러스, 유베난구(Eubenangu) 바이러스, 유럽 엘크 유두종바이러스, 유럽 돼지열 바이러스, 에버글레이즈(Everglades) 바이러스, 이야크(Eyach) 바이러스, 고양잇과 헤르페스바이러스 1, 고양잇과 칼리시바이러스, 고양잇과 섬유육종 바이러스, 고양잇과 헤르페스바이러스, 고양잇과 면역결핍 바이러스, 고양잇과 전염성 복막염 바이러스, 고양잇과 백혈병/육종 바이러스, 고양잇과 백혈병 바이러스, 고양잇과 범백혈구감소증 바이러스, 고양잇과 파보바이러스, 고양잇과 육종 바이러스, 고양잇과 세포융합 바이러스, 필로바이러스(Filovirus), 플란더스(Flanders) 바이러스, 플라비바이러스(Flavivirus), 구제역 바이러스, 포트모건(Fort Morgan) 바이러스, 포 코너스(Four Corners) 한타바이러스(hantavirus), 가금 아데노바이러스 1, 계두(fowlpox) 바이러스, 프렌드(Friend) 바이러스, 감마레트로바이러스, GB 간염 바이러스, GB 바이러스, 풍진(German measles) 바이러스, 게타(Getah) 바이러스, 기본 원숭이(gibbon ape) 백혈병 바이러스, 선열(glandular fever) 바이러스, 산양두창(goatpox) 바이러스, 골든 샤이너(golden shinner) 바이러스, 고노메타(Gonometa) 바이러스, 거위 파보바이러스, 그라눌로시스(granulosis) 바이러스, 그로스 바이러스(Gross' virus), 얼룩다람쥐 B형 간염 바이러스, A그룹 아르보바이러스, 구아나리토 바이러스, 기니피그 거대세포바이러스, 기니피그 C형 바이러스, 한탄 바이러스(Hantaan virus), 한타바이러스, 대합 레오바이러스, 토끼 섬유종(hare fibroma) 바이러스, HCMV(인간 거대세포바이러스), 혈구흡착 바이러스 2, 일본 혈구응집 바이러스, 출혈열 바이러스, 헨드라 바이러스(hendra virus), 헤니파바이러스(Henipaviruses), 헤파드나바이러스, A형 간염 바이러스, B형 간염 바이러스 그룹, C형 간염 바이러스, D형 간염 바이러스, 델타형 간염 바이러스, E형 간염 바이러스, F형 간염 바이러스, G형 간염 바이러스, 비A 비B형 간염 바이러스, 간염 바이러스, 간염 바이러스(비인간), 간뇌척수염 레오바이러스 3, 헤파토바이러스, 왜가리(heron) B형 간염 바이러스, B형 헤르페스 바이러스, 단순 헤르페스 바이러스, 단순 헤르페스 바이러스 1, 단순 헤르페스 바이러스 2, 헤르페스바이러스, 헤르페스바이러스 7, 헤르페스바이러스 아틀레스(ateles), 헤르페스바이러스 호미니스(hominis), 헤르페스바이러스 감염, 헤르페스바이러스 사이미리(saimiri), 헤르페스바이러스 수이스(suis), 헤르페스바이러스 바리셀라(varicellae), 하이랜즈(Highlands) J 바이러스, 넙치 랍도바이러스(Hirame rhabdovirus), 돼지(hog) 콜레라 바이러스, 인간 아데노바이러스 2, 인간 알파헤르페스바이러스 1, 인간 알파헤르페스바이러스 2, 인간 알파헤르페스 바이러스 3, 인간 B형 림프친화성 바이러스, 인간 베타헤르페스바이러스 5, 인간 코로나바이러스, 인간 거대세포바이러스 그룹, 인간 포미(foamy) 바이러스, 인간 감마헤르페스바이러스 4, 인간 감마헤르페스바이러스 6, 인간 A형 간염 바이러스, 인간 헤르페스바이러스 1 그룹, 인간 헤르페스바이러스 2 그룹, 인간 헤르페스바이러스 3 그룹, 인간 헤르페스바이러스 4 그룹, 인간 헤르페스바이러스 6, 인간 헤르페스바이러스 8, 인간 면역결핍 바이러스, 인간 면역결핍 바이러스 1, 인간 면역결핍 바이러스 2, 인간 유두종바이러스, 인간 T 세포 백혈병 바이러스, 인간 T 세포 백혈병 바이러스 I, 인간 T 세포 백혈병 바이러스 II, 인간 T 세포 백혈병 바이러스 III, 인간 T 세포 림프종 바이러스 I, 인간 T 세포 림프종 바이러스 II, 인간 T 세포 림프친화성 바이러스 1형, 인간 T 세포 림프친화성 바이러스 2형, 인간 T 림프친화성 바이러스 I, 인간 T 림프친화성 바이러스 II, 인간 T 림프 친화성 바이러스 III, 이크노바이러스(Ichnovirus), 영아 위장염 바이러스, 전염성 소 비강기관염 바이러스, 전염성 조혈 괴사 바이러스, 전염성 췌장 괴사 바이러스, 인플루엔자 바이러스 A, 인플루엔자 바이러스 B, 인플루엔자 바이러스 C, 인플루엔자 바이러스 D, 인플루엔자 바이러스 pr8, 곤충 무지개(insect iridescent) 바이러스, 곤충 바이러스, 이리도바이러스, 일본 B 바이러스, 일본 뇌염 바이러스, JC 바이러스, 후닌 바이러스, 카포시 육종-연관 헤르페스바이러스, 케메로보(Kemerovo) 바이러스, 킬함 래트(Kilham's rat) 바이러스, 클라매스(Klamath) 바이러스, 코롱고(Kolongo) 바이러스, 한국형 출혈열 바이러스, 쿰바(kumba) 바이러스, 키아사누르 포레스트병(Kyasanur forest disease) 바이러스, 키질라가크(Kyzylagach) 바이러스, 라 크로스(La Crosse) 바이러스, 락트산 탈수소효소 상승(lactic dehydrogenase elevating) 바이러스, 락트산 탈수소효소 바이러스, 라고스(Lagos) 박쥐 바이러스, 랑구르(Langur) 바이러스, 거세토끼(lapine) 파보바이러스, 라사열 바이러스, 라사 바이러스, 잠복성 래트 바이러스, LCM 바이러스, 리키(Leaky) 바이러스, 렌티바이러스(Lentivirus), 레포리폭스바이러스(Leporipoxvirus), 백혈병 바이러스(leukemia virus), 류코바이러스(leukovirus), 피부사상균 바이러스(lumpy skin disease virus), 림프절종창 연관 바이러스(lymphadenopathy associated virus), 림포크립토바이러스(Lymphocryptovirus), 림프구성 맥락수뇌막염(lymphocytic choriomeningitis) 바이러스, 림프증식성 바이러스 그룹, 마추포(Machupo) 바이러스, 유사 광견병(mad itch) 바이러스, 포유류 B형 온코바이러스 그룹, 포유류 B형 레트로바이러스, 포유류 C형 레트로바이러스 그룹, 포유류 D형 레트로바이러스, 유방 종양 바이러스, 마푸에라(Mapuera) 바이러스, 마르부르크 바이러스(Marburg virus), 마르부르크-유사 바이러스, 마손 화이자 몽키(Mason Pfizer monkey) 바이러스, 매스트아데노바이러스, 마야로(Mayaro) 바이러스, ME 바이러스, 홍역(measles) 바이러스, 메낭글(Menangle) 바이러스, 멘고(Mengo) 바이러스, 멘고바이러스(Mengovirus), 미델부르크(Middelburg) 바이러스, 밀커스 노듈(milkers nodule) 바이러스, 밍크 장염(mink enteritis) 바이러스, 마우스의 미소 바이러스(minute virus of mice), MLV 관련 바이러스, MM 바이러스, 모콜라(Mokola) 바이러스, 몰루시폭스바이러스(Molluscipoxvirus), 전염성 연속종(Molluscum contagiosum) 바이러스, 원숭이 B 바이러스, 원숭이폭스 바이러스, 모노네가비랄레스(Mononegavirales), 모빌리바이러스, 마운트 엘곤(Mount Elgon) 박쥐 바이러스, 마우스 거대세포바이러스, 마우스 뇌척수염 바이러스, 마우스 간염 바이러스, 마우스 K 바이러스, 마우스 백혈병 바이러스, 마우스 유방 종양 바이러스, 마우스 미소 바이러스(mouse minute virus), 마우스 폐렴 바이러스, 마우스 회백수염 바이러스, 마우스 폴리오마바이러스, 마우스 육종 바이러스, 마우스폭스 바이러스, 모잠비크(Mozambique) 바이러스, 무캄보(Mucambo) 바이러스, 뮤코잘병(mucosal disease) 바이러스, 볼거리 바이러스, 무리드(murid) 베타헤르페스바이러스 1, 무리드 거대세포바이러스 2, 쥣과 거대세포바이러스 그룹, 쥣과 뇌척수염 바이러스, 쥣과 간염 바이러스, 쥣과 백혈병 바이러스, 쥣과 결절 유도 바이러스(murine nodule inducing virus), 쥣과 폴리오마바이러스, 쥣과 육종 바이러스, 무로메갈로바이러스(Muromegalovirus), 머레이 계곡(Murray Valley) 뇌염 바이러스, 점액종 바이러스, 믹소바이러스(Myxovirus), 믹소바이러스 멀티폼(Myxovirus multiforme), 믹소바이러스 파로티티디스(Myxovirus parotitidis), 나이로비 면양병(Nairobi sheep disease) 바이러스, 나이로바이러스(Nairovirus), 나니르나바이러스(Nanirnavirus), 나리바(Nariva) 바이러스, 은두모(Ndumo) 바이러스, 니틀링(Neethling) 바이러스, 넬슨 베이(Nelson Bay) 바이러스, 향신경성(neurotropic) 바이러스, 신세계 아레나바이러스(New World Arenavirus), 신생아 간질성 폐렴(newborn pneumonitis) 바이러스, 뉴캐슬병(Newcastle disease) 바이러스, 니파(Nipah) 바이러스, 비세포병원성(noncytopathogenic) 바이러스, 노워크(Norwalk) 바이러스, 핵다각체병(nuclear polyhedrosis) 바이러스(NPV), 니플 넥(nipple neck) 바이러스, 오니옹니옹 바이러스(O'nyong'nyong virus), 옥켈보(Ockelbo) 바이러스, 발암성 바이러스, 발암성 바이러스유사 입자, 온코르나바이러스(oncornavirus), 오르비바이러스(Orbivirus), 오르프(Orf) 바이러스, 오로퓨스(Oropouche) 바이러스, 오르토헤파드나바이러스, 오르토믹소바이러스(Orthomyxovirus), 오르토폭스바이러스, 오르토레오바이러스, 오룬고(Orungo), 양(ovine) 유두종바이러스, 양 카타르 열(ovine catarrhal fever) 바이러스, 올빼미원숭이 헤르페스바이러스, 팔리암(Palyam) 바이러스, 유두종바이러스, 유두종바이러스 실빌라기(sylvilagi), 파포바바이러스(Papovavirus), 파라인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스 1형, 파라인플루엔자 바이러스 2형, 파라인플루엔자 바이러스 3형, 파라인플루엔자 바이러스 4형, 파라믹소바이러스, 파라폭스바이러스, 파라백시니아 바이러스, 파보바이러스, 파보바이러스 B19, 파보바이러스 그룹, 페스티바이러스(Pestivirus), 플레보바이러스(Phlebovirus), 물범 디스탬퍼(phocine distemper) 바이러스, 피코드나바이러스(Picodnavirus), 피코르나바이러스(Picornavirus), 돼지 거대세포바이러스 - 구두(pigeonpox) 바이러스, 피리(Piry) 바이러스, 픽수나(Pixuna) 바이러스, 마우스의 폐렴 바이러스, 뉴모바이러스(Pneumovirus), 회백수염 바이러스, 폴리오바이러스, 폴리드나바이러스(Polydnavirus), 다각체(polyhedral) 바이러스, 폴리오마 바이러스, 폴리오마바이러스, 폴리오마바이러스 보비스(bovis), 폴리오마바이러스 세로피테시(Polyomavirus cercopitheci), 폴리오마바이러스 호미니스(hominis) 2, 폴리오마바이러스 마카카애(maccacae) 1, 폴리오마바이러스 무리스(muris) 1, 폴리오마바이러스 무리스 2, 폴리오마바이러스 파피오니스(papionis) 1, 폴리오마바이러스 파피오니스 2, 폴리오마바이러스 실빌라기, 폰진(Pongine) 헤르페스바이러스 1, 돼지 유행성 설사증 바이러스, 돼지 혈구응집성 뇌척수염 바이러스, 돼지 파보바이러스, 돼지 전염성 위장염 바이러스, 돼지 C형 바이러스, 폭스 바이러스, 폭스바이러스, 폭스바이러스 바리올라에(variolae), 프로스펙트 힐(Prospect Hill) 바이러스, 프로바이러스(Provirus), 가성우두 바이러스(pseudocowpox virus), 가성광견병(pseudorabies) 바이러스, 앵무새폭스(psittacinepox) 바이러스, 퀘일폭스(quailpox) 바이러스, 토끼 섬유종 바이러스, 토끼 신장 공포성(rabbit kidney vaculolating) 바이러스, 토끼 유두종바이러스, 광견병 바이러스, 라쿤 파보바이러스, 라쿤폭스(raccoonpox) 바이러스, 라니케트(Ranikhet) 바이러스, 래트 거대세포바이러스, 래트 파보바이러스, 래트 바이러스, 라우셔 바이러스(Rauscher's virus), 재조합 종두증 바이러스, 재조합 바이러스, 레오바이러스, 레오바이러스 1, 레오바이러스 2, 레오바이러스 3, 파충류 C형 바이러스, 호흡기 감염 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 호흡기 바이러스, 세망내피증 바이러스, 랍도바이러스(Rhabdovirus), 랍도바이러스 카피아(Rhabdovirus carpia), 라디노바이러스(Rhadinovirus), 리노바이러스(Rhinovirus), 리지디오바이러스(Rhizidiovirus), 리프트 계곡열(Rift Valley fever) 바이러스, 라일리 바이러스(Riley's virus), 우역(rinderpest) 바이러스, RNA 종양 바이러스, 로스 리버(Ross River) 바이러스, 로타바이러스, 홍역(rougeole) 바이러스, 라우스 육종(Rous sarcoma) 바이러스, 풍진 바이러스, 루베올라(rubeola) 바이러스, 루비바이러스(Rubivirus), 러시아 가을(Russian autumn) 뇌염 바이러스, SA 11 유인원(simian) 바이러스, SA2 바이러스, 사비아(Sabia) 바이러스, 사기야마(Sagiyama) 바이러스, 사이미린(Saimirine) 헤르페스바이러스 1, 침샘 바이러스, 모래파리열(sandfly fever) 바이러스 그룹, 산드짐바(Sandjimba) 바이러스, SARS 바이러스, SDAV(타액선누선염 바이러스), 물개폭스(sealpox) 바이러스, 셈리키 삼림(Semliki Forest) 바이러스, 서울(Seoul) 바이러스, 양폭스(sheeppox) 바이러스, 쇼프 섬유종(Shope fibroma) 바이러스, 쇼프 유두종(Shope papilloma) 바이러스, 유인원 포미(simian foamy) 바이러스, 유인원 A형 간염 바이러스, 유인원 인간 면역결핍 바이러스, 유인원 면역결핍 바이러스, 유인원 파라인플루엔자 바이러스, 유인원 T 세포 림프친화 바이러스, 유인원 바이러스, 유인원 바이러스 40, 심플렉스바이러스(Simplexvirus), 신 놈브레(Sin Nombre) 바이러스, 신드비스(Sindbis) 바이러스, 천연두 바이러스, 남아메리카 출혈열 바이러스, 스패로폭스(sparrowpox) 바이러스, 스푸마바이러스(Spumavirus), 다람쥐 섬유종 바이러스, 다람쥐 원숭이 레트로바이러스, SSV 1 바이러스 그룹, STLV(유인원 T 림프친화성 바이러스) I형, STLV(유인원 T 림프친화성 바이러스) II형, STLV(유인원 T 림프친화성 바이러스) III형, 구진성 구내염(stomatitis papulosa) 바이러스, 하악(submaxillary) 바이러스, 수이드 알파헤르페스바이러스 1(suid alphaherpesvirus 1), 수이드 헤르페스바이러스 2, 수이폭스바이러스, 렙토스피라증(swamp fever) 바이러스, 돼지폭스 바이러스, 스위스 마우스(Swiss mouse) 백혈병 바이러스, TAC 바이러스, 타카리브 컴플렉스(Tacaribe complex) 바이러스, 타카리브(Tacaribe) 바이러스, 타나폭스(Tanapox) 바이러스, 타테라폭스(Taterapox) 바이러스, 텐크 레오바이러스(Tench reovirus), 테일러 뇌척수염 바이러스(Theiler's encephalomyelitis virus), 테일러 바이러스(Theiler's virus), 토고토(Thogoto) 바이러스, 토타팔라얌(Thottapalayam) 바이러스, 진드기 매개 뇌염 바이러스, 티오만(Tioman) 바이러스, 토가바이러스(Togavirus), 토로바이러스(Torovirus), 종양 바이러스, 튜파이아(Tupaia) 바이러스, 칠면조 비강기관염 바이러스, 칠면조폭스(turkeypox) 바이러스, C형 레트로바이러스, D형 온코바이러스, D형 레트로바이러스 그룹, 궤양성 질환 랍도바이러스, 우나(Una) 바이러스, 운쿠니에미(Uukuniemi) 바이러스 그룹, 종두증 바이러스, 공포성(vacuolating) 바이러스, 수두-대상포진 바이러스(varicella zoster virus), 바리셀로바이러스(Varicellovirus), 바리콜라(Varicola) 바이러스, 대두창 바이러스, 두창 바이러스, 바신 기수병(Vasin Gishu disease) 바이러스, VEE 바이러스, 베네수웰라 말 뇌염 바이러스, 베네수엘라 말 뇌척수염 바이러스, 베네수엘라 출혈열 바이러스, 수포성 구내염 바이러스, 베시쿨로바이러스(Vesiculovirus), 빌류이스크(Vilyuisk) 바이러스, 독사(viper) 레트로바이러스, 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스, 비스나 매디(Visna Maedi) 바이러스, 비스나(Visna) 바이러스, 볼폭스(volepox) 바이러스, VSV(vesicular stomatitis virus: 수포성 구내염 바이러스), 왈랄(Wallal) 바이러스, 와레고(Warrego) 바이러스, 사마귀(wart) 바이러스, WEE 바이러스, 웨스트 나일 바이러스, 서부 말 뇌염 바이러스, 서부 말 뇌척수염 바이러스, 화타로아(Whataroa) 바이러스, 겨울 구토 바이러스(Winter Vomiting Virus), 마멋 B형 간염 바이러스, 양털원숭이 육종 바이러스, 상처 종양 바이러스, WRSV 바이러스, 야바 원숭이 종양 바이러스(Yaba monkey tumor virus), 야바(Yaba) 바이러스, 야타폭스바이러스, 황열 바이러스, 및 육 보그다노박(Yug Bogdanovac) 바이러스에 의해 유발된다.
일부 실시 형태에서, 병원성 감염은 레트로바이러스에 의해 유발된다. 예시적인 레트로바이러스는 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 인간 T 세포 백혈병 바이러스(HTLV: human T-cell leukemia virus), 몰로니 쥐 백혈병 바이러스(MuLV: Mmoloney murine leukemia virus), 쥣과 유방 종양 바이러스(MMTV: murine mammary tumor virus), 조류 백혈증 및 육종 바이러스, 또는 마손 화이자 원숭이(Mason-Pfizer monkey) 바이러스를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 레트로바이러스 감염이 있거나 또는 잠복기 동안의 대상체에게 투여되어 휴지기에 있는 감염된 세포를 감소시키고/시키거나 제거한다. 일부 경우에, 레트로바이러스는 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 인간 T 세포 백혈병 바이러스(HTLV), 몰로니 쥐 백혈병 바이러스(MuLV), 쥣과 유방 종양 바이러스(MMTV), 조류 백혈증 및 육종 바이러스 또는 마손 화이자 원숭이 바이러스를 포함한다. 일부 경우에 사이토카인 콘쥬게이트는 CD8+ T 세포가 휴지기에 있는 감염된 세포를 인식하고 제거하도록 재지시한다.
일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 IL-2 콘쥬게이트이다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 휴지기에 있는 감염된 세포를 감소시키고/시키거나 제거하기 위해 레트로바이러스 감염이 있거나 잠복기 동안의 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, 레트로바이러스는 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 인간 T 세포 백혈병 바이러스(HTLV), 몰로니 쥐 백혈병 바이러스(MuLV), 쥣과 유방 종양 바이러스(MMTV), 조류 백혈증 및 육종 바이러스 또는 마손 화이자 원숭이 바이러스를 포함한다. 일부 경우에 IL-2 콘쥬게이트는 CD8+ T 세포가 휴지기에 있는 감염된 세포를 인식하고 제거하도록 재지시한다. 추가의 경우, IL-2 콘쥬게이트는 항레트로바이러스 요법제와 조합되어 대상체에게 투여된다.
일부 실시 형태에서, 레트로바이러스는 HIV이다. 일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 휴지기에 있는 HIV-감염 세포(예를 들어, CD4+ T 세포)를 감소시키고/시키거나 제거하기 위해 후천성 면역결핍 증후군(AIDS)을 앓고 있거나 잠복기 동안의 대상체에게 투여된다. 일부 경우에 사이토카인 콘쥬게이트는 IL-2 콘쥬게이트이다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 항레트로바이러스 요법제와 조합되어 대상체에게 투여된다. 예시적인 HIV 항레트로바이러스 요법제는 다음을 포함한다: (a) 아바카비르, 엠트리시타빈, 라미부딘, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 및 지도부딘과 같은 뉴클레오시드 역전사효소 억제제(NRTI); (b) 에파비렌츠, 에트라비린, 네비라핀, 또는 릴피비린과 같은 비-뉴클레오시드 역전사효소 억제제(NNRTI); (c) 아타자나비르, 다루나비르, 포삼프레나비르, 리토나비르, 사퀴나비르 및 티프라나비르와 같은 프로테아제 억제제(PI); (d) 엔푸비르티드와 같은 융합 억제제; (e) 마라비록과 같은 CCR5 길항제; (f) 돌루테그라비르 및 랄테그라비르와 같은 인테그라아제 억제제; (g) 이발리주맙과 같은 부착 후 억제제; (h) 코비시스타트와 같은 약동학적 증강제; 및 (i) 칵테일, 예컨대 아바카비르 및 라미부딘; 아바카비르, 돌루테그라비르 및 라미부딘; 아바카비르, 라미부딘 및 지도부딘; 아타자나비르 및 코비시스타트; 빅테그라비르, 엠트리시타빈 및 테노포비르 알라페나미드; 다루나비르 및 코비시스타트; 돌루테그라비르 및 릴피비린; 에파비렌츠, 엠트리시타빈 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 에파비렌츠, 라미부딘 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 에파비렌츠, 라미부딘 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 엘비테그라비르, 코비시스타트, 엠트리시타빈 및 테노포비르 알라페나미드 푸마레이트; 엘비테그라비르, 코비시스타트, 엠트리시타빈 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 엠트리시타빈, 릴피비린 및 테노포비르 알라페나미드; 엠트리시타빈, 릴피비린 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 엠트리시타빈 및 테노포비르 알라페나미드; 엠트리시타빈 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 라미부딘 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 라미부딘 및 지도부딘; 및 로피나비르 및 리토나비르.
일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 아바카비르, 엠트리시타빈, 라미부딘, 테노포비르 디소프록실 푸마레이트, 및 지도부딘과 같은 뉴클레오시드 역전사효소 억제제(NRTI); 에파비렌츠, 에트라비린, 네비라핀, 또는 릴피비린과 같은 비-뉴클레오시드 역전사효소 억제제(NNRTI); 아타자나비르, 다루나비르, 포삼프레나비르, 리토나비르, 사퀴나비르 및 티프라나비르와 같은 프로테아제 억제제(PI); 엔푸비르티드와 같은 융합 억제제; 마라비록과 같은 CCR5 길항제; 돌루테그라비르 및 랄테그라비르와 같은 인테그라아제 억제제; 이발리주맙과 같은 부착 후 억제제; 코비시스타트와 같은 약동학적 증강제; 또는 칵테일, 예컨대 아바카비르 및 라미부딘; 아바카비르, 돌루테그라비르 및 라미부딘; 아바카비르, 라미부딘 및 지도부딘; 아타자나비르 및 코비시스타트; 빅테그라비르, 엠트리시타빈 및 테노포비르 알라페나미드; 다루나비르 및 코비시스타트; 돌루테그라비르 및 릴피비린; 에파비렌츠, 엠트리시타빈 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 에파비렌츠, 라미부딘 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 에파비렌츠, 라미부딘 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 엘비테그라비르, 코비시스타트, 엠트리시타빈 및 테노포비르 알라페나미드 푸마레이트; 엘비테그라비르, 코비시스타트, 엠트리시타빈 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 엠트리시타빈, 릴피비린 및 테노포비르 알라페나미드; 엠트리시타빈, 릴피비린 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 엠트리시타빈 및 테노포비르 알라페나미드; 엠트리시타빈 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 라미부딘 및 테노포비르 디소프록실 푸마레이트; 라미부딘 및 지도부딘; 및 로피나비르 및 리토나비르와 같은 항레트로바이러스 요법제와 조합되어 대상체에게 투여된다.
일부 실시 형태에서, 바이러스는 간염 바이러스, 예를 들어 A형, B형, C형, D형 또는 E형 간염이다. 일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 휴지기에 있는 감염된 세포를 감소시키고/시키거나 제거하기 위해 간염 감염이 있거나 잠복기 동안의 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 CD8+ T 세포가 휴지기에 있는 감염된 세포를 인식하고 제거하도록 재지시한다.
일부 경우에 사이토카인 콘쥬게이트는 IL-2 콘쥬게이트이다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 휴지기에 있는 감염된 세포를 감소시키고/시키거나 제거하기 위해 간염 감염이 있거나 잠복기 동안의 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 CD8+ T 세포가 휴지기에 있는 감염된 세포를 인식하고 제거하도록 재지시한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 항레트로바이러스 요법제와 조합되어 대상체에게 투여된다. 간염에 대한 예시적인 항바이러스 요법제는 리바비린; 파리타프레비르, 시메프레비르 및 그라조프레비르와 같은 NS3/4A 프로테아제 억제제; 레디파스비르, 옴비타스비르, 엘바스비르 및 다클라타스비르와 같은 NS5A 프로테아제 억제제; NS5B 뉴클레오티드/뉴클레오시드 및 비뉴클레오시드 폴리머라아제 억제제, 예컨대 소포스부비르 및 다사부비르; 및 조합, 예컨대 레디파스비르-소포스부비르, 다 사부비르-옴비타스비르-파리타프레비르-리토나비르; 엘바스비르-그라조프레비르, 옴비타스비르-파리타프레비르-리토나비르, 소포스부비르-벨파타스비르, 소포스부비르-벨파타스비르-복실라프레비르 및 글레카프레비르-피브렌타스비르; 및 페그인터페론 알파-2a, 페그인터페론 알파-2b 및 인터페론 알파-2b와 같은 인터페론을 포함한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 리바비린; 파리타프레비르, 시메프레비르 및 그라조프레비르와 같은 NS3/4A 프로테아제 억제제; 레디파스비르, 옴비타스비르, 엘바스비르 및 다클라타스비르와 같은 NS5A 프로테아제 억제제; NS5B 뉴클레오티드/뉴클레오시드 및 비뉴클레오시드 폴리머라아제 억제제, 예컨대 소포스부비르 및 다사부비르; 및 조합, 예컨대 레디파스비르-소포스부비르, 다사부비르-옴비타스비르-파리타프레비르-리토나비르; 엘바스비르-그라조프레비르, 옴비타스비르-파리타프레비르-리토나비르, 소포스부비르-벨파타스비르, 소포스부비르-벨파타스비르-복실라프레비르, 및 글레카프레비르-피브렌타스비르; 및 페그인터페론 알파-2a, 페그인터페론 알파-2b 및 인터페론 알파-2b와 같은 인터페론과 같은 항바이러스 요법제와 조합되어 대상체에게 투여된다.
자가면역 질환 또는 장애
일부 실시 형태에서, 자가면역 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하는 방법으로서, 본원에 기술된 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 또한 본원에 기술된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 단리되고 정제된 IL-2 폴리펩티드 및 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하고, 여기서 IL-2 콘쥬게이트는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 IL-2 수용체 β(IL-2Rβ) 서브유닛, IL-2 수용체 γ(IL-2Rγ) 서브유닛, 또는 이들의 조합에 대한 친화도가 감소한다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 단리되고 정제된 IL-2 폴리펩티드; 및 P2, T3, S4, S5, S6, T7, K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, R81, P82, R83, D84, S87, N88, N89, V91, I92, L94, E95, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, T113, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, 및 T133으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 단리되고 정제된 IL-2 폴리펩티드에 결합하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하고, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 경우에, 아미노산 잔기는 K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, R81, D84, S87, N88, V91, I92, L94, E95, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, 및 T133으로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 잔기는 K8, K9, L12, E15, H16, L19, D20, Q22, M23, N26, D84, N88, E95, 및 Q126으로부터 선택된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 IL-2Rαβγ 복합체와 상호작용하지만 IL-2Rβ 및 IL-2Rγ 서브유닛에 대해 감소된 친화도로 상호작용하거나, 또는 IL-2/IL-2Rβ 복합체에 대한 IL-2Rγ 서브유닛의 동원을 감소시킬 것이다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 IL-2Rα에 대한 결합 친화도를 유지한다. 이러한 경우 IL-2/IL-2Rαβγ 복합체는 CD4+ Treg 세포의 확장을 자극하거나 향상시킨다. 추가의 경우, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rβγ 복합체를 통한 Teff 및/또는 NK 세포의 활성화에 요구되는 용량을 증가시키고, 이에 의해 IL-2Rαβγ 복합체를 통한 Treg 세포의 활성화를 위한 용량 범위를 확장시킨다(또는 IL-2Rαβγ 복합체를 통한 Treg 세포의 활성화를 위한 IL-2의 치료 창을 확장시킨다).
일부 경우에, 자가면역 질환 또는 장애는 원형 탈모증, 자가면역성 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 피부근염, 1형 당뇨병, 소아 특발성 관절염, 사구체신염, 그레이브스병, 길랭-바레 증후군, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 중증 근무력증, 다발성 경화증, 천포창/유천포창, 악성 빈혈, 결절성 다발성 동맥염, 다발성 근염, 원발성 담즙성 간경변, 건선, 류마티스 관절염, 경피증, 쇼그렌 증후군, 전신성 홍반성 루푸스, 갑상선염, 포도막염, 백반증, 또는 베게너 육아종증을 포함한다.
일부 경우에, 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN, 또는 TNF) 콘쥬게이트는 원형 탈모증, 자가면역성 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 피부근염, 1형 당뇨병, 소아 특발성 관절염, 사구체신염, 그레이브스병, 길랭-바레 증후군, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 중증 근무력증, 다발성 경화증, 천포창/유천포창, 악성 빈혈, 결절성 다발성 동맥염, 다발성 근염, 원발성 담즙성 간경변, 건선, 류마티스 관절염, 경피증, 쇼그렌 증후군, 전신성 홍반성 루푸스, 갑상선염, 포도막염, 백반증, 또는 베게너 육아종증을 갖는 대상체에게 투여된다.
일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 원형 탈모증, 자가면역성 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 피부근염, 1형 당뇨병, 소아 특발성 관절염, 사구체신염, 그레이브스병, 길랭-바레 증후군, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 중증 근무력증, 다발성 경화증, 천포창/유천포창, 악성 빈혈, 결절성 다발성 동맥염, 다발성 근염, 원발성 담즙성 간경변, 건선, 류마티스 관절염, 경피증, 쇼그렌 증후군, 전신성 홍반성 루푸스, 갑상선염, 포도막염, 백반증, 또는 베게너 육아종증을 갖는 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 1형 당뇨병을 갖는 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 그레이브스병을 갖는 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 다발성 경화증을 갖는 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 건선을 갖는 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 류마티스 관절염을 갖는 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 쇼그렌 증후군을 갖는 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 전신성 홍반성 루푸스를 갖는 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 포도막염을 갖는 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 베게너 육아종증을 갖는 대상체에게 투여된다.
일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 이식편 대 숙주 질환(GVHD)의 치료를 위해 대상체에게 투여된다.
일부 실시 형태에서, 대상체에게 추가 치료제가 추가로 투여된다. 일부 경우에, 추가 치료제는 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)와 동시에 투여된다. 다른 경우에, 추가 치료제와 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 순차적으로 투여되고, 예를 들어 추가 치료제 전에 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)가 투여되거나, 추가 치료제의 투여 후에 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)가 투여된다.
자가면역 질환 또는 장애의 치료를 위한 예시적인 추가 치료제는 코르티코스테로이드, 예컨대 프레드니손, 부데소니드 또는 프레드니솔론; 칼시뉴린 억제제, 예컨대 시클로스포린 또는 타크롤리무스; mTOR 억제제, 예컨대 시롤리무스 또는 에베롤리무스; IMDH 억제제, 예컨대 아자티오프린, 레플루노미드 또는 마이코페놀레이트; 생물학적 제제, 예컨대 아바타셉트, 아달리무맙, 아나킨라, 세르톨리주맙, 에타네르셉트, 골리무맙, 인플릭시맙, 익세키주맙, 나탈리주맙, 리툭시맙, 세쿠키누맙, 토실리주맙, 우스테키누맙, 또는 베돌리주맙; 및 단클론 항체, 예컨대 바실릭시맙, 다클리주맙 또는 무로모납을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)는 코르티코스테로이드, 예컨대 프레드니손, 부데소니드 또는 프레드니솔론; 칼시뉴린 억제제, 예컨대 시클로스포린 또는 타크롤리무스; mTOR 억제제, 예컨대 시롤리무스 또는 에베롤리무스; IMDH 억제제, 예컨대 아자티오프린, 레플루노미드 또는 마이코페놀레이트; 생물학적 제제, 예컨대 아바타셉트, 아달리무맙, 아나킨라, 세르톨리주맙, 에타네르셉트, 골리무맙, 인플릭시맙, 익세키주맙, 나탈리주맙, 리툭시맙, 세쿠키누맙, 토실리주맙, 우스테키누맙, 또는 베돌리주맙; 및 단클론 항체, 예컨대 바실릭시맙, 다클리주맙 또는 무로모납으로부터 선택되는 추가 치료제와 함께 투여된다.
입양 세포 요법의 개발
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 질환 또는 병태(예를 들어, 증식성 질환 또는 병태, 병원성 감염 및/또는 자가면역 질환 또는 병태)의 치료(이를 필요로 하는 대상체에서)에 유용한 입양 세포 요법 조성물을 생성하는 방법이 본원에 개시되며, 본 방법은 하기 단계를 포함한다: a) 이를 필요로 하는 대상체로부터 얻은 면역 세포를 제공하는 단계; b) 변형된 IL-2 폴리펩티드, IL-2 콘쥬게이트, IL-2Rβγ 결합 단백질 또는 면역 세포의 활성화제를 발현하도록 면역 세포를 조작하는 단계(여기서, 면역 세포는 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, CD8+ 세포독성 T 세포, 억제자 T 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 자연 살해 T(NKT) 세포를 포함함). 일부 실시 형태에서, 면역 세포는 키메라 항원 수용체(CAR)를 추가로 발현하도록 조작된다. 일부 실시 형태에서, 조작 단계 (b)는 대상체로부터 수득된 면역 세포를 변형된 IL-2 폴리펩티드, IL-2 콘쥬게이트, IL-2Rβγ 결합 단백질, 또는 면역 세포의 활성화제를 코딩하는 벡터(예를 들어, 폴리뉴클레오티드 서열)에 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 경우에, 벡터는 본원에 개시된 제조 물품을 포함한다. 일부 경우에, 입양 세포 요법제를 생성하는 방법은 본원에 개시된 키트를 사용하여 수행된다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 치료적 유효량의 입양 세포 요법제를 투여함으로써 입양 세포 요법제로 치료받는다. 일부 경우에, 대상체는 질환 또는 병태로 진단된다. 일부 경우에, 입양 세포 요법은 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하는 데 효과적이다. 일부 실시 형태에서, 질환 또는 병태는 증식성 질환(예를 들어, 암)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 질환 또는 병태는 병원성 감염을 포함한다. 일부 경우에, 질환 또는 병태는 자가면역 질환을 포함하며, 이는 암, 예컨대 본원에 기술된 것이다.
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 질환 또는 병태(예를 들어, 증식성 질환 또는 병태, 병원성 감염 및/또는 자가면역 질환 또는 병태)의 치료(이를 필요로 하는 대상체에서)에 유용한 입양 세포 요법 조성물을 생성하는 방법이 본원에 개시되며, 본 방법은 하기 단계를 포함한다: a) 이를 필요로 하는 대상체로부터 얻은 면역 세포를 제공하는 단계; b) 면역 세포를 변형된 IL-2 폴리펩티드, IL-2 콘쥬게이트, IL-2Rβγ 결합 단백질 또는 면역 세포의 활성화제와 접촉시키는 단계(여기서, 면역 세포는 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, CD8+ 세포독성 T 세포, 억제자 T 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 자연 살해 T(NKT) 세포를 포함함). 일부 실시 형태에서, 면역 세포는 키메라 항원 수용체(CAR)를 추가로 발현하도록 조작된다. 일부 경우에, 변형된 IL-2 폴리펩티드, IL-2 콘쥬게이트, IL-2Rβγ 결합 단백질 또는 면역 세포의 활성화제는 본원에 개시된 제조 물품을 포함한다. 일부 경우에, 입양 세포 요법제를 생성하는 방법은 본원에 개시된 키트를 사용하여 수행된다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 치료적 유효량의 입양 세포 요법제를 투여함으로써 입양 세포 요법제로 치료받는다. 일부 경우에, 대상체는 질환 또는 병태로 진단된다. 일부 경우에, 입양 세포 요법은 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하는 데 효과적이다. 일부 실시 형태에서, 질환 또는 병태는 증식성 질환(예를 들어, 암)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 질환 또는 병태는 병원성 감염을 포함한다. 일부 경우에, 질환 또는 병태는 자가면역 질환을 포함하며, 이는 암, 예컨대 본원에 기술된 것이다.
일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이를 포함하며, 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이를 포함하며, 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 위치 62에 상응하는 잔기 E62에서의 돌연변이를 포함하며, 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다.
일부 경우에, 상기 PEG의 분자량은 입양 세포 요법용 시약으로서 IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트의 제조 공정을 개선하는 데 효과적이다. 일부 실시 형태에서, 상기 PEG의 분자량은 IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트의 용해도를 개선시킨다. 일부 경우에, 상기 PEG의 분자량은 입양 세포 요법제를 제조하는 정제 공정을 개선시킨다. 일부 경우에, 상기 PEG의 분자량은 IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트의 안정성을 개선시킨다.
일부 실시 형태에서, 자가면역 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하는 방법이 본원에 개시되며, 본 방법은 본원에 기술된 입양 세포 요법제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 입양 세포 요법제는 본원에 기술된 방법을 사용하여 개발된다. 일부 경우에, 입양 세포 요법제는 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)에 더하여 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 입양 세포 요법제 전에 투여된다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 입양 세포 요법제 후에 투여된다. 일부 경우에, 입양 세포 요법제는 대상체에서 면역 세포의 집단(예를 들어, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, NK 세포 및/또는 NKT 세포 집단, Treg 세포 집단)을 확장하는 데 효과적이다.
일부 실시 형태에서, 병원성 감염의 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하는 방법이 본원에 개시되며, 본 방법은 본원에 기술된 입양 세포 요법제의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 입양 세포 요법제는 본원에 기술된 방법을 사용하여 개발된다. 일부 경우에, 입양 세포 요법제는 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)에 더하여 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 입양 세포 요법제 전에 투여된다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 입양 세포 요법제 후에 투여된다. 일부 경우에, 입양 세포 요법제는 대상체에서 면역 세포의 집단(예를 들어, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, NK 세포 및/또는 NKT 세포 집단, Treg 세포 집단)을 확장하는 데 효과적이다.
일부 실시 형태에서, 증식성 질환 또는 장애(예를 들어, 암)의 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하는 방법이 본원에 개시되며, 본 방법은 본원에 기술된 입양 세포 요법제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 입양 세포 요법제는 본원에 기술된 방법을 사용하여 개발된다. 일부 경우에, 입양 세포 요법제는 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)에 더하여 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 입양 세포 요법제 전에 투여된다. 일부 경우에, 사이토카인 콘쥬게이트는 입양 세포 요법제 후에 투여된다. 일부 경우에, 입양 세포 요법제는 대상체에서 면역 세포의 집단(예를 들어, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, NK 세포 및/또는 NKT 세포 집단, Treg 세포 집단)을 확장하는 데 효과적이다.
세포 집단 확장 방법
일부 실시 형태에서, 림프구 집단, 예를 들어 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, NK 세포, 및/또는 NKT 세포 집단의 확장 방법, 또는 Treg 세포 집단의 확장 방법이 본원에 추가로 기술된다. 일부 경우에, 본 방법은 세포를 본원에 기술된 사이토카인 콘쥬게이트와 접촉시키는 단계, 및 사이토카인을 사이토카인 수용체와 상호작용시켜 복합체를 형성하는 단계를 포함하고, 여기서 복합체는 별개의 림프구 집단의 확장을 자극한다.
일부 경우에, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 자연 살해 T(NKT) 세포 집단을 확장시키는 방법은 세포 집단을, IL-2Rβ와의 복합체의 형성을 유도하기에 충분한 시간 동안 상기 기술된 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드와 접촉시키고, 이에 의해 Teff 및/또는 NK 세포 집단의 확장을 자극하는 단계를 포함한다. 일부 경우에, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, NK 세포 또는 NKT 세포 집단을 확장시키는 방법은 (a) 세포 집단을 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트와 접촉시키는 단계; 및 (b) IL-2를 IL-2Rβ 및 IL-2Rγ 서브유닛과 상호작용시켜 IL-2/IL-2Rβγ 복합체를 형성하는 단계를 포함하며; 여기서, IL-2 콘쥬게이트는 IL-2Rα 서브유닛에 대하여 감소된 친화도를 갖고, IL-2/IL-2Rβγ 복합체는 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, NK 세포 및/또는 NKT 세포의 확장을 자극한다. 상기에 기술된 바와 같이, IL-2 콘쥬게이트는 단리되고 정제된 IL-2 폴리펩티드; 및 K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, 및 Y107로부터 선택되는 아미노산 위치에서 상기 단리되고 정제된 IL-2 폴리펩티드에 결합하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 T37, T41, F42, F44, Y45, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 R38 및 K64로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 E61, E62, 및 E68로부터 선택된다. 일부 경우에, 아미노산 위치는 E62이다.
일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 CD4+ T 조절(Treg) 세포를 세포 집단에서 20%, 15%, 10%, 5%, 또는 1% 미만만큼 확장시킨다. 일부 경우에, IL-2 콘쥬게이트는 세포 집단에서 CD4+ Treg 세포를 확장시키지 않는다. 일부 경우에, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드와 함께 인큐베이션한 후 세포 집단에서의 Teff 세포:Treg 세포의 비는 적어도 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 20:1, 50:1, 또는 100:1이다. 일부 경우에, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드와 함께 인큐베이션한 후 세포 집단에서의 Teff 세포:Treg 세포의 비는 약 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 20:1, 50:1, 또는 100:1이다.
일부 경우에, IL-2Rβ와의 복합체의 형성을 유도하기에 충분한 시간은 적어도 5분, 10분, 15분, 20분, 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 8시간, 10시간, 12시간, 18시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일이다. 일부 경우에, IL-2Rβ와의 복합체의 형성을 유도하기에 충분한 시간은 약 5분, 10분, 15분, 20분, 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 8시간, 10시간, 12시간, 18시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일이다.
일부 경우에, 방법은 생체 내 방법이다.
일부 경우에, 방법은 시험관 내 방법이다.
일부 경우에, 방법은 생체 외 방법이다.
사이토카인 폴리펩티드 생산
일부 경우에, 천연 아미노산 돌연변이 또는 비천연 아미노산 돌연변이를 포함하는 본원에 기술된 사이토카인(예를 들어, 인터류킨, IFN, 또는 TNF) 폴리펩티드는 재조합으로 생성되거나 화학적으로 합성된다. 일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드는, 예를 들어 숙주 세포 시스템에 의해 또는 무세포 시스템에서, 재조합으로 생성된다.
일부 경우에, 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드는 숙주 세포 시스템을 통해 재조합으로 생성된다. 일부 경우에, 숙주 세포는 진핵 세포(예를 들어, 포유류 세포, 곤충 세포, 효모 세포, 또는 식물 세포) 또는 원핵 세포(예를 들어, 그람 양성 박테리아 또는 그람 음성 박테리아)이다. 일부 경우에, 진핵 숙주 세포는 포유류 숙주 세포이다. 일부 경우에, 포유류 숙주 세포는 안정한 세포주이거나, 관심 유전 물질을 자신의 게놈에 통합하고 여러 세대의 세포 분열 후 유전 물질의 산물을 발현하는 능력을 가진 세포주이다. 다른 경우에, 포유류 숙주 세포는 일시적 세포주이거나, 관심 유전 물질을 자신의 게놈에 통합하지 않고 여러 세대의 세포 분열 후 유전 물질의 산물을 발현하는 능력이 없는 세포주이다.
예시적인 포유류 숙주 세포는 293T 세포주, 293A 세포주, 293FT 세포주, 293F 세포, 293 H 세포, A549 세포, MDCK 세포, CHO DG44 세포, CHO-S 세포, CHO-K1 세포, Expi293F™ 세포, Flp-In™ T-REx™ 293 세포주, Flp-In™-293 세포주, Flp-In™-3T3 세포주, Flp-In™-BHK 세포주, Flp-In™-CHO 세포주, Flp-In™-CV-1 세포주, Flp-In™-Jurkat 세포주, FreeStyle™ 293-F 세포, FreeStyle™ CHO-S 세포, GripTite™ 293 MSR 세포주, GS-CHO 세포주, HepaRG™ 세포, T-REx™ Jurkat 세포주, Per.C6 세포, T-REx™-293 세포주, T-REx™-CHO 세포주, 및 T-REx™-HeLa 세포주를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 진핵 숙주 세포는 곤충 숙주 세포이다. 예시적인 곤충 숙주 세포는 드로소필라(Drosophila) S2 세포, Sf9 세포, Sf21 세포, High Five™ 세포 및 expresSF+® 세포를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 진핵 숙주 세포는 효모 숙주 세포이다. 예시적인 효모 숙주 세포는 피치아 파스토리스(Pichia pastoris) 효모 균주, 예컨대 GS115, KM71H, SMD1168, SMD1168H 및 X-33, 및 사카로마이세스 세레비시아에(Saccharomyces cerevisiae) 효모 균주, 예컨대 INVSc1을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 진핵 숙주 세포는 식물 숙주 세포이다. 일부 경우에, 식물 세포는 조류의 세포를 포함한다. 예시적인 식물 세포주는 클라미도모나스 레인하티(Chlamydomonas reinhardtii) 137c 또는 시네초코쿠스 이롱가투스(Synechococcus elongatus) PPC 7942로부터의 균주를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 숙주 세포는 원핵 숙주 세포이다. 예시적인 원핵 숙주 세포는 BL21, Mach1™, DH10B™, TOP10, DH5α, DH10Bac™, OmniMax™, MegaX™, DH12S™, INV110, TOP10F', INVαF, TOP10/P3, ccdB Survival, PIR1, PIR2, Stbl2™, Stbl3™, 또는 Stbl4™를 포함한다.
일부 경우에, 본원에 기술된 IL-2 폴리펩티드의 생산에 적합한 폴리핵산 분자 또는 벡터는 진핵생물 또는 원핵생물 원천으로부터 유래된 임의의 적합한 벡터를 포함한다. 예시적인 다중핵산 분자 또는 벡터는 박테리아(예를 들어, E. 콜라이), 곤충, 효모(예를 들어, 피치아 파스토리스), 조류 또는 포유류 원천으로부터의 벡터를 포함한다. 박테리아 벡터는 예를 들어 pACYC177, pASK75, pBAD 벡터 시리즈, pBADM 벡터 시리즈, pET 벡터 시리즈, pETM 벡터 시리즈, pGEX 벡터 시리즈, pHAT, pHAT2, pMal-c2, pMal-p2, pQE 벡터 시리즈, pRSET A, pRSET B, pRSET C, pTrcHis2 시리즈, pZA31-Luc, pZE21-MCS-1, pFLAG ATS, pFLAG CTS, pFLAG MAC, pFLAG Shift-12c, pTAC-MAT-1, pFLAG CTC 또는 pTAC-MAT-2를 포함한다.
곤충 벡터는 예를 들어 pFastBac1, pFastBac DUAL, pFastBac ET, pFastBac HTa, pFastBac HTb, pFastBac HTc, pFastBac M30a, pFastBact M30b, pFastBac, M30c, pVL1392, pVL1393, pVL1393 M10, pVL1393 M11, pVL1393 M12, FLAG 벡터, 예컨대 pPolh-FLAG1 또는 pPolh-MAT 2, 또는 MAT 벡터, 예컨대 pPolh-MAT1 또는 pPolh-MAT2를 포함한다.
효모 벡터는 예를 들어 Gateway® pDEST™ 14 벡터, Gateway® pDEST™ 15 벡터, Gateway® pDEST™ 17 벡터, Gateway® pDEST™ 24 벡터, Gateway® pYES-DEST52 벡터, pBAD-DEST49 Gateway® 지칭 벡터, pAO815 피치아 벡터, pFLD1 피치아 파스토리스 벡터, pGAPZA, B 및 C 피치아 파스토리스 벡터, pPIC3.5K 피치아 벡터, pPIC6 A, B 및 C 피치아 벡터, pPIC9K 피치아 벡터, pTEF1/Zeo, pYES2 효모 벡터, pYES2/CT 효모 벡터, pYES2/NT A, B 및 C 효모 벡터, 또는 pYES3/CT 효모 벡터를 포함한다.
조류 벡터는 예를 들어 pChlamy-4 벡터 또는 MCS 벡터를 포함한다.
포유류 벡터는 예를 들어 일시적 발현 벡터 또는 안정한 발현 벡터를 포함한다. 예시적인 포유류 일시적 발현 벡터는 p3xFLAG-CMV 8, pFLAG-Myc-CMV 19, pFLAG-Myc-CMV 23, pFLAG-CMV 2, pFLAG-CMV 6a,b,c, pFLAG-CMV 5.1, pFLAG-CMV 5a,b,c, p3xFLAG-CMV 7.1, pFLAG-CMV 20, p3xFLAG-Myc-CMV 24, pCMV-FLAG-MAT1, pCMV-FLAG-MAT2, pBICEP-CMV 3 또는 pBICEP-CMV 4를 포함한다. 예시적인 포유류 안정한 발현 벡터는 pFLAG-CMV 3, p3xFLAG-CMV 9, p3xFLAG-CMV 13, pFLAG-Myc-CMV 21, p3xFLAG-Myc-CMV 25, pFLAG-CMV 4, p3xFLAG-CMV 10, p3xFLAG-CMV 14, pFLAG-Myc-CMV 22, p3xFLAG-Myc-CMV 26, pBICEP-CMV 1 또는 pBICEP-CMV 2를 포함한다.
일부 경우에, 본원에 기술된 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드의 생산을 위해 무세포 시스템이 사용된다. 일부 경우에, 무세포 시스템은 세포로부터의 세포질 및/또는 핵 성분의 혼합물을 포함하고, 시험관 내 핵산 합성에 적합하다. 일부 경우에, 무세포 시스템은 원핵 세포 성분을 사용한다. 다른 경우에, 무세포 시스템은 진핵 세포 성분을 사용한다. 핵산 합성은 예를 들어 초파리 세포, 제노프스 알, 고세균, 또는 HeLa 세포에 기초한 무세포 시스템에서 얻어진다. 예시적인 무세포 시스템은 E. 콜라이 S30 Extract 시스템, E. 콜라이 T7 S30 시스템 또는 PURExpress®, XpressCF 및 XpressCF+를 포함한다.
무세포 번역 시스템은 플라스미드, mRNA, DNA, tRNAs, 신테타아제, 방출 인자, 리보솜, 샤페론 단백질, 번역 개시 및 신장 인자, 천연 및/또는 비천연 아미노산과 같은 성분, 및/또는 단백질 발현에 사용되는 기타 성분을 다양하게 포함한다. 이러한 성분은 수율 향상, 합성 속도 증가, 단백질 산물 신뢰도 증가, 또는 비천연 아미노산 통합을 위해 필요에 따라 변형된다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 사이토카인은 US 8,778,631; US 2017/0283469; US 2018/0051065; US 2014/0315245; 또는 US 8,778,631에 기술된 무세포 번역 시스템을 사용하여 합성된다. 일부 실시 형태에서, 무세포 번역 시스템은 변형된 방출 인자, 또는 심지어 시스템으로부터의 하나 이상의 방출 인자의 제거를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 무세포 번역 시스템은 감소된 프로테아제 농도를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 무세포 번역 시스템은 비천연 아미노산을 코딩하는 데 사용되는 재할당된 코돈을 갖는 변형된 tRNA를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산의 통합을 위한 본원에 기술된 신테타아제는 무세포 번역 시스템에 사용된다. 일부 실시 형태에서, tRNA는 무세포 번역 시스템에 첨가되기 전에 효소적 또는 화학적 방법을 사용하여 비천연 아미노산으로 예비로딩된다. 일부 실시 형태에서, 무세포 번역 시스템을 위한 성분은 변형된 유기체, 예컨대 변형된 박테리아, 효모, 또는 기타 유기체로부터 얻어진다.
일부 실시 형태에서, 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드는 발현 숙주 시스템을 통해 또는 무세포 시스템을 통해 원형으로 재배치된 형태로 생성된다.
비천연 아미노산을 포함하는 사이토카인 폴리펩티드의 생산
직교성 또는 확장된 유전 코드가 본 발명에 사용될 수 있으며, 여기서 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드의 핵산 서열에 존재하는 하나 이상의 특정 코돈은 비천연 아미노산을 코딩하도록 할당되어 직교성 tRNA 신테타아제/tRNA 쌍을 사용하여 사이토카인(예를 들어, IL-2)에 유전적으로 통합될 수 있다. 직교성 tRNA 신테타아제/tRNA 쌍은 tRNA를 비천연 아미노산으로 하전시킬 수 있고, 코돈에 반응하여 비천연 아미노산을 폴리펩티드 사슬에 통합시킬 수 있다.
일부 경우에, 코돈은 코돈 앰버, 오커, 오팔, 또는 쿼드러플렛 코돈이다. 일부 경우에, 코돈은 비천연 아미노산을 운반하는 데 사용될 직교성 tRNA에 해당한다. 일부 경우에, 코돈은 앰버이다. 다른 경우에, 코돈은 직교성 코돈이다.
일부 경우에, 코돈은 직교성 리보솜 리보-Q1에 의해 디코딩될 수 있는 쿼드러플렛 코돈이다. 일부 경우에, 쿼드러플렛 코돈은 문헌[Neumann, et al., "Encoding multiple unnatural amino acids via evolution of a quadruplet-decoding ribosome," Nature, 464(7287): 441-444 (2010)]에 예시되어 있다.
일부 경우에, 본 발명에 사용되는 코돈은 재코딩된 코돈, 예를 들어 대체 코돈으로 대체된 동의 코돈 또는 희귀 코돈이다. 일부 경우에, 재코딩된 코돈은 문헌[Napolitano, et al., "Emergent rules for codon choice elucidated by editing rare argine codons in Escherichia coli," PNAS, 113(38): E5588-5597 (2016)]에 기술되어 있다. 일부 경우에, 재코딩된 코돈은 문헌[Ostrov et al., "Design, synthesis, and testing toward a 57-codon genome," Science 353(6301): 819-822 (2016)]에 기술되어 있다.
일부 경우에, 비천연 핵산이 사용되어 하나 이상의 비천연 아미노산이 사이토카인(예를 들어, IL-2)에 통합된다. 예시적인 비천연 핵산은 우라실-5-일, 하이포잔틴-9-일(I), 2-아미노아데닌-9-일, 5-메틸시토신(5-me-C), 5-히드록시메틸 시토신, 잔틴, 하이포잔틴, 2-아미노아데닌, 아데닌 및 구아닌의 6-메틸 및 기타 알킬 유도체, 아데닌 및 구아닌의 2-프로필 및 기타 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신, 5-할로우라실 및 시토신, 5-프로피닐 우라실 및 시토신, 6-아조 우라실, 시토신 및 티민, 5-우라실(슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-히드록실 및 기타 8-치환된 아데닌 및 구아닌, 5-할로, 구체적으로 5-브로모, 5-트리플루오로메틸 및 기타 5-치환된 우라실 및 시토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌 및 7-데아자아데닌, 및 3-데아자구아닌 및 3-데아자아데닌을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 특정 비천연 핵산, 예컨대 5-치환된 피리미딘, 6-아자피리미딘 및 N-2 치환된 퓨린, N-6 치환된 퓨린, O-6 치환된 퓨린, 2-아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실, 5-프로피닐시토신, 5-메틸시토신, 듀플렉스 형성의 안정성을 증가시키는 것, 보편적 핵산, 소수성 핵산, 무차별 핵산, 크기 확대된 핵산, 플루오르화 핵산, 5-치환된 피리미딘, 6-아자피리미딘 및 N-2, N-6 및 0-6 치환된 퓨린, 예를 들어 2-아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐시토신. 5-메틸시토신(5-me-C), 5- 히드록시메틸 시토신, 잔틴, 하이포잔틴, 2-아미노아데닌, 아데닌 및 구아닌의 6-메틸, 기타 알킬 유도체, 아데닌 및 구아닌의 2-프로필 및 기타 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신, 5-할로우라실, 5-할로시토신, 5-프로피닐(-C≡C-CH3) 우라실, 5-프로피닐 시토신, 피리미딘 핵산의 기타 알키닐 유도체, 6-아조 우라실, 6-아조 시토신, 6-아조 티민, 5-우라실(슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-히드록실 및 기타 8-치환 아데닌 및 구아닌, 5 -할로, 구체적으로 5-브로모, 5-트리플루오로메틸, 기타 5-치환 우라실 및 시토신, 7-메틸구아닌, 7- 메틸아데닌, 2-F-아데닌, 2-아미노-아데닌, 8-아자구아닌, 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌, 7- 데아자아데닌, 3-데아자구아닌, 3-데아자아데닌, 삼환식 피리미딘, 페녹사진 시티딘( [5,4-b][l,4]벤족사진-2(3H)-온), 페노티아진 시티딘(1H- 피리미도[5,4-b][l,4]벤조티아진-2(3H)-온), G-클램프, 페녹사진 시티딘(예를 들어 9-(2-아미노에톡시)-H-피리미도[5,4-b][l,4]벤족사진-2(3H)-온), 카르바졸 시티딘(2H-피리미도[4,5- b]인돌-2-온), 피리도인돌 시티딘(H-피리도[3',2':4,5]피롤로[2,3-d]피리미딘-2-온), 퓨린 또는 피리미딘 염기가 다른 복소환으로 대체된 것, 7-데아자-아데닌, 7-데아자구아노신, 2-아미노피리딘, 2-피리돈, 아자시토신, 5-브로모시토신, 브로모우라실, 5-클로로시토신, 염소화 시토신, 시클로시토신, 시토신 아라비노사이드, 5- 플루오로시토신, 플루오로피리미딘, 플루오로우라실, 5,6-디히드로시토신, 5-요오도시토신, 히드록시우레아, 요오도우라실, 5-니트로시토신, 5- 브로모우라실, 5-클로로우라실, 5- 플루오로우라실, 및 5-요오도우라실, 2-아미노-아데닌, 6-티오-구아닌, 2-티오-티민, 4-티오-티민, 5-프로피닐-우라실, 4-티오-우라실, N4-에틸시토신, 7-데아자구아닌, 7-데아자-8- 아자구아닌, 5-히드록시시토신, 2'-데옥시우리딘, 2-아미노-2'-데옥시아데노신, 및 미국 특허 제3,687,808호; 미국 특허 제4,845,205호; 미국 특허 제4,910,300호; 미국 특허 제4,948,882호; 미국 특허 제5,093,232호; 미국 특허 제5,130,302호; 미국 특허 제5,134,066호; 미국 특허 제5,175,273호; 미국 특허 제5,367,066호; 미국 특허 제5,432,272호; 미국 특허 제5,457,187호; 미국 특허 제5,459,255호; 미국 특허 제5,484,908호; 미국 특허 제5,502,177호; 미국 특허 제5,525,711호; 미국 특허 제5,552,540호; 미국 특허 제5,587,469호; 미국 특허 제5,594,121호; 미국 특허 제5,596,091호; 미국 특허 제5,614,617호; 미국 특허 제5,645,985호; 미국 특허 제5,681,941호; 미국 특허 제5,750,692호; 미국 특허 제5,763,588호; 미국 특허 제5,830,653호 및 미국 특허 제6,005,096호; 국제 공개 제99/62923호; 문헌[Kandimalla et al., (2001) Bioorg. Med. Chem. 9:807-813]; 문헌[The Concise Encyclopedia of Polymer Science and Engineering, Kroschwitz, J.I., Ed., John Wiley & Sons, 1990, 858- 859]; 문헌[Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613]; 및 문헌[Sanghvi, Chapter 15, Antisense Research and Applications, Crookeand Lebleu Eds., CRC Press, 1993, 273-288]에 기술된 것. 추가의 염기 변형은 예를 들어 미국 특허 제 3,687,808호; 문헌[Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613]; 및 문헌[Sanghvi, Chapter 15, Antisense Research and Applications, pages 289-302, Crooke and Lebleu ed., CRC Press, 1993]에서 발견될 수 있다.
다양한 헤테로시클릭 염기 및 다양한 당 모이어티(및 당 유사체)를 포함하는 비천연 핵산은 당업계에서 이용 가능하고, 일부 경우에 핵산은 자연 발생 핵산의 주요 5가지 염기 성분 이외의 하나 또는 여러 헤테로시클릭 염기를 포함한다. 예를 들어, 일부 경우에 복소환식 염기는 우라실-5-일, 시토신-5-일, 아데닌-7-일, 아데닌-8-일, 구아닌-7-일, 구아닌-8-일, 4- 아미노피롤로 [2.3-d] 피리미딘-5-일, 2-아미노-4-옥소피롤로 [2, 3-d] 피리미딘-5-일, 2- 아미노-4-옥소피롤로 [2.3-d] 피리미딘-3-일 기를 포함하며, 여기서 퓨린은 9-위치를 통하여, 피리미딘은 1-위치를 통하여, 피롤로피리미딘은 7-위치를 통하여, 그리고 피라졸로피리미딘은 1-위치를 통하여 핵산의 당 모이어티에 부착된다.
일부 실시 형태에서, 뉴클레오티드 유사체는 또한 포스페이트 모이어티에서 변형된다. 변형된 포스페이트 모이어티는 2개의 뉴클레오티드 사이의 연결에서 변형을 갖는 것을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않으며, 예를 들어 포스포로티오에이트, 키랄 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포트리에스테르, 아미노알킬포스포트리에스테르, 메틸 및 다른 알킬 포스포네이트, 예를 들어 3'-알킬렌 포스포네이트 및 키랄 포스포네이트, 포스피네이트, 포스포르아미데이트, 예를 들어 3'-아미노 포스포르아미데이트 및 아미노알킬포스포르아미데이트, 티오노포스포르아미데이트, 티오노알킬포스포네이트, 티오노알킬포스포트리에스테르 및 보라노포스페이트를 함유한다. 2개의 뉴클레오티드 사이의 이러한 포스페이트 또는 변형된 포스페이트 연결은 3'-5' 연결 또는 2'-5' 연결을 통한 것이며, 연결은 3'-5'에서 5'-3', 또는 2'-5'에서 5'-2'와 같은 반전 극성을 포함하는 것으로 이해된다. 다양한 염, 혼합염 및 유리산 형태가 또한 포함된다. 다수의 미국 특허는 변형된 포스페이트를 함유하는 뉴클레오티드의 제조 및 사용 방법을 교시하며, 3,687,808호; 4,469,863호; 4,476,301호; 5,023,243호; 5,177,196호; 5,188,897호; 5,264,423호; 5,276,019호; 5,278,302호; 5,286,717호; 5,321,131호; 5,399,676호; 5,405,939호; 5,453,496호; 5,455,233호; 5,466,677호; 5,476,925호; 5,519,126호; 5,536,821호; 5,541,306호; 5,550,111호; 5,563,253호; 5,571,799호; 5,587,361호; 및 5,625,050호를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 실시 형태에서, 비천연 핵산은 2',3'-디데옥시-2',3'-디데히드로-뉴클레오시드(PCT/US2002/006460), 5'-치환된 DNA 및 RNA 유도체(PCT/US2011/033961; Saha et al., J. Org Chem., 1995, 60, 788-789; Wang et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 1999, 9, 885-890; 및 Mikhailov et al., Nucleosides & Nucleotides, 1991, 10(1-3), 339-343; Leonid et al., 1995, 14(3-5), 901-905; 및 Eppacher et al., Helvetica Chimica Acta, 2004, 87, 3004-3020; PCT/JP2000/004720; PCT/JP2003/002342; PCT/JP2004/013216; PCT/JP2005/020435; PCT/JP2006/315479; PCT/JP2006/324484; PCT/JP2009/056718; PCT/JP2010/067560), 또는 변형된 염기를 갖는 모노포스페이트로서 제조된 5'-치환된 단량체(Wang et al., Nucleosides Nucleotides & Nucleic Acids, 2004, 23 (1 & 2), 317-337)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 비천연 핵산은 당 고리의 5'-위치 및 2'-위치에서의 변형(PCT/US94/02993), 예컨대 5'-CH2-치환 2'-O-보호 뉴클레오시드(문헌[Wu et al., Helvetica Chimica Acta, 2000, 83, 1127-1143] 및 문헌[Wu et al., Bioconjugate Chem. 1999, 10, 921-924])를 포함한다. 일부 경우에, 비천연 핵산은 아미드 연결 뉴클레오시드 이량체가 올리고뉴클레오티드 내로의 혼입을 위하여 제조된 것을 포함하며, 여기서, 이량체 중 3' 연결 뉴클레오시드(5'→3')는 2'-OCH3 및 5'-(S)-CH3을 포함한다(문헌[Mesmaeker et al., Synlett, 1997, 1287-1290]). 비천연 핵산은 2'-치환 5'-CH2(또는 O) 변형 뉴클레오시드를 포함할 수 있다(PCT/US92/01020). 비천연 핵산은 5'-메틸렌포스포네이트 DNA 및 RNA 단량체 및 이량체를 포함할 수 있다(문헌[Bohringer et al., Tet. Lett., 1993, 34, 2723-2726]; 문헌[Collingwood et al., Synlett, 1995, 7, 703-705]; 및 문헌[Hutter et al., Helvetica Chimica Acta, 2002, 85, 2777-2806]). 비천연 핵산은 2'-치환을 갖는 5'-포스포네이트 단량체(US2006/0074035) 및 기타 변형된 5'-포스포네이트 단량체(WO1997/35869)를 포함할 수 있다. 비천연 핵산은 5'-변형된 메틸렌포스포네이트 단량체를 포함할 수 있다(EP614907 및 EP629633). 비천연 핵산은 5' 및/또는 6'-위치에 히드록실 기를 포함하는 5' 또는 6'-포스포네이트 리보뉴클레오시드의 유사체를 포함할 수 있다(문헌[Chen et al., Phosphorus, Sulfur and Silicon, 2002, 777, 1783-1786]; 문헌[Jung et al., Bioorg. Med. Chem., 2000, 8, 2501-2509]; 문헌[Gallier et al., Eur. J. Org. Chem., 2007, 925-933]; 및 문헌[Hampton et al., J. Med. Chem., 1976, 19(8), 1029-1033]). 비천연 핵산은 5'-포스페이트 기를 갖는 5'-포스포네이트 데옥시리보뉴클레오시드 단량체 및 이량체를 포함할 수 있다(문헌[Nawrot et al., Oligonucleotides, 2006, 16(1), 68-82]). 비천연 핵산은 6'-포스포네이트 기를 갖는 뉴클레오시드를 포함할 수 있으며, 여기서, 5' 및/또는 6'-위치는 비치환되거나 티오-tert-부틸 기(SC(CH3)3)(및 이의 유사체); 메틸렌아미노 기(CH2NH2)(및 이의 유사체) 또는 시아노 기(CN)(및 이의 유사체)로 치환된다(문헌[Fairhurst et al., Synlett, 2001, 4, 467-472]; 문헌[Kappler et al., J. Med. Chem., 1986, 29, 1030-1038]; 문헌[Kappler et al., J. Med. Chem., 1982, 25, 1179-1184]; 문헌[Vrudhula et al., J. Med. Chem., 1987, 30, 888-894]; 문헌[Hampton et al., J. Med. Chem., 1976, 19, 1371-1377]; 문헌[Geze et al., J. Am. Chem. Soc, 1983, 105(26), 7638-7640]; 및 문헌[Hampton et al., J. Am. Chem. Soc, 1973, 95(13), 4404-4414]).
일부 실시 형태에서, 비천연 핵산은 또한 당 모이어티의 변형을 포함한다. 일부 경우에, 핵산은 당 기가 변형된 하나 이상의 뉴클레오시드를 함유한다. 이러한 당 변형 뉴클레오시드는 향상된 뉴클레아제 안정성, 증가된 결합 친화성, 또는 일부 다른 유익한 생물학적 특성을 부여할 수 있다. 특정 실시 형태에서, 핵산은 화학적 변형 리보푸라노스 고리 모이어티를 포함한다. 화학적으로 변형된 리보푸라노스 고리의 예는 치환기(5' 및/또는 2' 치환기 포함)의 부가; 이환식 핵산(BNA)을 형성하기 위한 2개의 고리 원자의 가교; S, N(R), 또는 C(R1)(R2) (R = H, C1-C12 알킬 또는 보호기)에 의한 리보실 고리 산소 원자의 대체; 및 이들의 조합을 제한 없이 포함한다. 화학적으로 변형된 당의 예는 WO2008/101157, US2005/0130923, 및 WO2007/134181에서 확인할 수 있다.
일부 경우에, 변형된 핵산은 변형된 당 또는 당 유사체를 포함한다. 따라서, 리보스 및 데옥시리보스 이외에, 당 모이어티는 펜토스, 데옥시펜토스, 헥소스, 데옥시헥소스, 글루코스, 아라비노스, 자일로스, 릭소스, 또는 당 "유사체" 시클로펜틸기일 수 있다. 당은 피라노실 또는 푸라노실 형태일 수 있다. 당 모이어티는 리보스, 데옥시리보스, 아라비노스 또는 2'-O-알킬리보스의 푸라노시드일 수 있고, 당은 [알파] 또는 [베타] 아노머 입체배치로 각각의 헤테로시클릭 염기에 부착될 수 있다. 당 변형은 2'-알콕시-RNA 유사체, 2'-아미노-RNA 유사체, 2'-플루오로-DNA, 및 2'-알콕시- 또는 아미노-RNA/DNA 키메라를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, 당 변형은 2'-O-메틸-우리딘 또는 2'-O-메틸-시티딘을 포함할 수 있다. 당 변형은 2'-O-알킬-치환 데옥시리보뉴클레오시드 및 2'-O-에틸렌글리콜 유사 리보뉴클레오시드를 포함한다. 이러한 당 또는 당 유사체, 및 이러한 당 또는 유사체가 헤테로시클릭 염기(핵산 염기)에 부착된 각각의 "뉴클레오시드"의 제조는 알려져 있다. 당 변형이 또한 이루어지고 다른 변형과 조합될 수 있다.
당 모이어티에 대한 변형은 리보스 및 데옥시리보스의 천연 변형, 및 비천연 변형을 포함한다. 당 변형은 2' 위치에서의 다음과 같은 변형을 포함하나, 이에 한정되지 않는다: OH; F; O-, S-, 또는 N-알킬; O-, S-, 또는 N-알케닐; O-, S-, 또는 N-알키닐; 또는 O-알킬-O-알킬(알킬, 알케닐, 및 알키닐은 치환 또는 비치환 C1 내지 C10 알킬 또는 C2 내지 C10 알케닐 및 알키닐일 수 있음). 2' 당 변형은 또한 -O[(CH2)nO]m CH3, -O(CH2)nOCH3, -O(CH2)nNH2, -O(CH2)nCH3, -O(CH2)nONH2, 및 -O(CH2)nON[(CH2)n CH3)]2를 포함하나, 이에 한정되지 않는다(n 및 m은 1 내지 약 10임).
2' 위치에서의 다른 변형은 다음을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다: C1 내지 C10 저급 알킬, 치환된 저급 알킬, 알카릴, 아랄킬, O-알카릴, O-아랄킬, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, CF3, OCF3, SOCH3, SO2 CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알카릴, 아미노알킬아미노, 폴리알킬아미노, 치환된 실릴, RNA 절단 기, 리포터 기, 인터컬레이터, 올리고뉴클레오티드의 약동학적 특성을 개선하기 위한 기, 또는 올리고뉴클레오티드의 약력학적 특성을 개선하기 위한 기, 및 유사한 특성을 갖는 다른 치환기. 유사한 변형이 또한 당 상의 다른 위치, 구체적으로, 3' 말단 뉴클레오티드 상의 또는 2'-5' 연결 올리고뉴클레오티드들 내의 당의 3' 위치 및 5' 말단 뉴클레오티드의 5' 위치에서 이루어질 수 있다. 변형 당은 또한 CH2 및 S와 같은 가교 고리 산소에서의 변형을 함유하는 것을 포함한다. 뉴클레오티드 당 유사체는 또한 당 모방체, 예컨대 시클로부틸 모이어티를 펜토푸라노실 당 대신 가질 수 있다. 이러한 변형 당 구조를 교시하고 일련의 염기 변형을 상술 및 기술하는 다수의 미국 특허, 예컨대 미국 특허 제4,981,957호; 미국 특허 제5,118,800호; 미국 특허 제5,319,080호; 미국 특허 제5,359,044호; 미국 특허 제5,393,878호; 미국 특허 제5,446,137호; 미국 특허 제5,466,786호; 미국 특허 제5,514,785호; 미국 특허 제5,519,134호; 미국 특허 제5,567,811호; 미국 특허 제5,576,427호; 미국 특허 제5,591,722호; 미국 특허 제5,597,909호; 미국 특허 제5,610,300호; 미국 특허 제5,627,053호; 미국 특허 제5,639,873호; 미국 특허 제5,646,265호; 미국 특허 제5,658,873호; 미국 특허 제5,670,633호; 미국 특허 제4,845,205호; 미국 특허 제5,130,302호; 미국 특허 제5,134,066호; 미국 특허 제5,175,273호; 미국 특허 제5,367,066호; 미국 특허 제5,432,272호; 미국 특허 제5,457,187호; 미국 특허 제5,459,255호; 미국 특허 제5,484,908호; 미국 특허 제5,502,177호; 미국 특허 제5,525,711호; 미국 특허 제5,552,540호; 미국 특허 제5,587,469호; 미국 특허 제5,594,121호, 미국 특허 제5,596,091호; 미국 특허 제5,614,617호; 미국 특허 제5,681,941호; 및 미국 특허 제5,700,920호가 있으며, 이들 각각은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
변형된 당 모이어티를 갖는 핵산의 예는 5'-비닐, 5'-메틸(R 또는 S), 4'-S, 2'-F, 2'-OCH3, 및 2'-O(CH2)2OCH3 치환기를 포함하는 핵산을 제한 없이 포함한다. 2' 위치에서의 치환기는 또한 알릴, 아미노, 아지도, 티오, O-알릴, O-(C1-C1O 알킬), OCF3, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), 및 O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn)으로부터 선택될 수 있으며, 여기서 각각의 Rm 및 Rn은 독립적으로 H 또는 치환된 또는 비치환된 C1-C10 알킬이다.
소정의 실시 형태에서, 본원에 기술된 핵산은 하나 이상의 이환식 핵산을 포함한다. 소정의 이러한 실시 형태에서, 이환식 핵산은 4' 및 2' 리보실 고리 원자 사이의 가교체를 포함한다. 소정의 실시 형태에서, 본원에 제공된 핵산은 하나 이상의 이환식 핵산을 포함하며, 여기서 가교체는 4'→2' 이환식 핵산을 포함한다. 이러한 4'→2' 이환식 핵산은 화학식 4'-(CH2)-O-2'(LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2'(ENA); 4'-CH(CH3)-O-2' 및 4'-CH(CH2OCH3)-O-2', 및 이들의 유사체(미국 특허 제7,399,845호 참조); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2' 및 이의 유사체(국제 공개 제2009/006478호, 국제 공개 제2008/150729호, 미국 특허 출원 공개 공보 제2004/0171570호, 미국 특허 제7,427,672호, 문헌[Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 209, 74, 118-134], 및 국제 공개 제2008/154401호 참조) 중 하나를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 또한 예를 들어 다음을 참조한다: 문헌[Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456]; 문헌[Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630]; 문헌[Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638]; 문헌[Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222]; 문헌[Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039]; 문헌[Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26) 8362-8379]; 문헌[Elayadi et al., Curr. Opinion Invens. Drugs, 2001, 2, 558-561]; 문헌[Braasch et al., Chem. Biol, 2001, 8, 1-7]; 문헌[Oram et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243]; 미국 특허 제4,849,513호; 미국 특허 제5,015,733호; 미국 특허 제5,118,800호; 미국 특허 제5,118,802호; 미국 특허 제7,053,207호; 미국 특허 제6,268,490호; 미국 특허 제6,770,748호; 미국 특허 제6,794,499호; 미국 특허 제7,034,133호; 미국 특허 제6,525,191호; 미국 특허 제6,670,461호; 및 미국 특허 제7,399,845호; 국제 공개 제2004/106356호, 국제 공개 제1994/14226호, 국제 공개 제2005/021570호, 국제 공개 제2007/090071호, 및 국제 공개 제2007/134181호; 미국 특허 출원 공개 공보 제2004/0171570호, 미국 특허 출원 공개 공보 제2007/0287831호, 및 미국 특허 출원 공개 공보 제2008/0039618호; 미국 가출원 제60/989,574호, 미국 가출원 제61/026,995호, 미국 가출원 제61/026,998호, 미국 가출원 제61/056,564호, 미국 가출원 제61/086,231호, 미국 가출원 제61/097,787호, 및 미국 가출원 제61/099,844호; 및 국제 출원 PCT/US2008/064591, PCT US2008/066154, PCT US2008/068922, 및 PCT/DK98/00393.
특정 실시 형태에서, 핵산은 연결된 핵산을 포함한다. 핵산은 임의의 핵산간 연결을 사용하여 서로 연결될 수 있다. 핵산간 연결기의 두 가지 주요 부류는 인 원자의 존재 또는 부재에 의해 정의된다. 대표적인 인 함유 핵산간 연결은 포스포디에스테르, 포스포트리에스테르, 메틸포스포네이트, 포스포라미데이트, 및 포스포로티오에이트(P=S)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 대표적인 인 비함유 핵산간 연결기는 메틸렌메틸이미노(-CH2-N(CH3)-O-CH2-), 티오디에스테르(-O-C(O)-S-), 티오노카르바메이트(-O-C(O)(NH)-S-); 실록산(-O-Si(H)2-O-); 및 N,N*-디메틸히드라진(-CH2-N(CH3)-N(CH3))을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 특정 실시 형태에서, 키랄 원자를 갖는 핵산간 연결은 라세미 혼합물, 별개의 거울상이성체, 예를 들어, 알킬포스포네이트 및 포스포로티오에이트로서 제조될 수 있다. 비천연 핵산은 단일 변형을 포함할 수 있다. 비천연 핵산은 모이어티 중 하나 내에 또는 서로 다른 모이어티 사이에 다수의 변형을 포함할 수 있다.
핵산에 대한 골격 포스페이트 변형은 메틸 포스포네이트, 포스포로티오에이트, 포스포라미데이트(가교 또는 비가교), 포스포트리에스테르, 포스포로디티오에이트, 포스포디티오에이트, 및 보라노포스페이트를 포함하나, 이에 한정되지 않으며, 임의의 조합으로 사용될 수 있다. 다른 비포스페이트 연결도 사용될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 골격 변형(예를 들어, 메틸포스포네이트, 포스포로티오에이트, 포스포로아미데이트, 및 포스포로디티오에이트 뉴클레오티드간 연결)은 변형된 핵산에 면역조절 활성을 부여하고/하거나 이의 생체 내 안정성을 향상시킬 수 있다.
일부 경우에, 인 유도체(또는 변형된 포스페이트기)는 당 또는 당 유사체 모이어티에 부착되며, 모노포스페이트, 디포스페이트, 트리포스페이트, 알킬포스포네이트, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포라미데이트 등일 수 있다. 변형 포스페이트 연결 또는 비-포스페이트 연결을 포함하는 예시적인 폴리뉴클레오티드가 문헌[Peyrottes et al., 1996, Nucleic Acids Res. 24: 1841-1848]; 문헌[Chaturvedi et al., 1996, Nucleic Acids Res. 24:2318-2323]; 및 문헌[Schultz et al., (1996) Nucleic Acids Res. 24:2966-2973]; 문헌[Matteucci, 1997, "Oligonucleotide Analogs: an Overview" in Oligonucleotides as Therapeutic Agents, (Chadwick and Cardew, ed.) John Wiley and Sons, New York, NY]; 문헌[Zon, 1993, "Oligonucleoside Phosphorothioates" in Protocols for Oligonucleotides and Analogs, Synthesis and Properties, Humana Press, pp. 165-190]; 문헌[Miller et al., 1971, JACS 93:6657-6665]; 문헌[Jager et al., 1988, Biochem. 27:7247-7246]; 문헌[Nelson et al., 1997, JOC 62:7278-7287]; 미국 특허 제5,453,496호; 및 문헌[Micklefield, 2001, Curr. Med. Chem. 8: 1157-1179]에서 발견될 수 있다.
일부 경우에, 골격 변형은 포스포디에스테르 연결이 대안적인 모이어티, 예컨대 음이온성, 중성 또는 양이온성 기로 대체된 것을 포함한다. 이러한 변형의 예는 다음을 포함한다: 음이온성 뉴클레오시드간 연결; N3'→P5' 포스포르아미데이트 변형; 보라노포스페이트 DNA; 프로올리고뉴클레오티드; 중성 뉴클레오시드간 연결, 예컨대 메틸포스포네이트; 아미드 연결된 DNA; 메틸렌(메틸이미노) 연결; 포름아세탈 및 티오포름아세탈 연결; 술포닐 기를 함유하는 골격; 모르폴리노 올리고; 펩티드 핵산(PNA); 및 양으로 하전된 데옥시리보핵산 구아니딘(DNG) 올리고(문헌[Micklefield, 2001, Current Medicinal Chemistry 8: 1157-1179]). 변형 핵산은 하나 이상의 변형, 예를 들어 포스페이트 연결들의 조합, 예컨대 포스포디에스테르 및 포스포로티오에이트 연결의 조합을 포함하는 키메라 또는 혼합 골격을 포함할 수 있다.
포스페이트의 치환기는, 예를 들어 단쇄 알킬 또는 시클로알킬 뉴클레오시드간 연결, 혼합된 헤테로원자 및 알킬 또는 시클로알킬 뉴클레오시드간 연결, 또는 하나 이상의 단쇄 헤테로원자 또는 헤테로시클릭 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 이들은 (뉴클레오시드의 당 부분으로부터 부분적으로 형성된) 모르폴리노 연결을 갖는 것; 실록산 골격; 술피드, 술폭시드 및 술폰 골격; 포름아세틸 및 티오포름아세틸 골격; 메틸렌 포름아세틸 및 티오포름아세틸 골격; 알켄 함유 골격; 술파메이트 골격; 메틸렌이미노 및 메틸렌히드라지노 골격; 술포네이트 및 술폰아미드 골격; 아미드 골격; 및 혼합된 N, O, S, 및 CH2 성분 부분을 갖는 그 외의 것들을 포함한다. 다수의 미국 특허는 이러한 유형의 포스페이트 대체물의 제조 및 사용 방법을 개시하며, 미국 특허 5,034,506호; 5,166,315호; 5,185,444호; 5,214,134호; 5,216,141호; 5,235,033호; 5,264,562호; 5,264,564호; 5,405,938호; 5,434,257호; 5,466,677호; 5,470,967호; 5,489,677호; 5,541,307호; 5,561,225호; 5,596,086호; 5,602,240호; 5,610,289호; 5,602,240호; 5,608,046호; 5,610,289호; 5,618,704호; 5,623,070호; 5,663,312호; 5,633,360호; 5,677,437호; 및 5,677,439호를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 뉴클레오티드 치환에서 뉴클레오티드의 당 및 포스페이트 모이어티 모두가, 예를 들어 아미드 유형 연결(아미노에틸글리신)(PNA)에 의해 대체될 수 있다는 것이 이해된다. 미국 특허 제5,539,082호; 미국 특허 제5,714,331호; 및 미국 특허 제5,719,262호는 PNA 분자의 제조 및 사용 방법을 교시하며, 이들 각각은 본원에 참고로 포함된다. 또한 문헌[Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500]을 참조한다. 다른 유형의 분자(콘쥬게이트)를 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유사체에 연결하여 예를 들어 세포 흡수를 향상시키는 것이 또한 가능하다. 콘쥬게이트는 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유사체에 화학적으로 연결될 수 있다. 이러한 콘쥬게이트는 지질 모이어티, 예컨대 콜레스테롤 모이어티(문헌[Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556]), 콜산(문헌[Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1994, 4, 1053-1060]), 티오에테르, 예를 들어, 헥실-S-트리틸티올(문헌[Manoharan et al., Ann. KY. Acad. Sci., 1992, 660, 306-309]; 문헌[Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3, 2765-2770]), 티오콜레스테롤(문헌[Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533-538]), 지방족 사슬, 예를 들어, 도데칸디올 또는 운데실 잔기(문헌[Saison-Behmoaras et al., EM5OJ, 1991, 10, 1111-1118]; 문헌[Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259, 327-330]; 문헌[Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75, 49-54]), 인지질, 예를 들어, 디-헥사데실-rac-글리세롤 또는 트리에틸암모늄 l-디-O-헥사데실-rac-글리세로-S-H-포스포네이트(문헌[Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654]; 문헌[Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783]), 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글리콜 사슬(문헌[Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969-973]), 또는 아다만탄 아세트산(문헌[Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654]), 팔미틸 모이어티(문헌[Mishra et al., Biochem. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229-237]), 또는 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카르보닐-옥시콜레스테롤 모이어티(문헌[Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923-937])를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 다수의 미국 특허는 이러한 콘쥬게이트의 제조를 교시하며, 다음을 포함하지만 이에 한정되지 않는다: 미국 특허 제4,828,979호; 미국 특허 제4,948,882호; 미국 특허 제5,218,105호; 미국 특허 제5,525,465호; 미국 특허 제5,541,313호; 미국 특허 제5,545,730호; 미국 특허 제5,552,538호; 미국 특허 제5,578,717호, 미국 특허 제5,580,731호; 미국 특허 제5,580,731호; 미국 특허 제5,591,584호; 미국 특허 제5,109,124호; 미국 특허 제5,118,802호; 미국 특허 제5,138,045호; 미국 특허 제5,414,077호; 미국 특허 제5,486,603호; 미국 특허 제5,512,439호; 미국 특허 제5,578,718호; 미국 특허 제5,608,046호; 미국 특허 제4,587,044호; 미국 특허 제4,605,735호; 미국 특허 제4,667,025호; 미국 특허 제4,762,779호; 미국 특허 제4,789,737호; 미국 특허 제4,824,941호; 미국 특허 제4,835,263호; 미국 특허 제4,876,335호; 미국 특허 제4,904,582호; 미국 특허 제4,958,013호; 미국 특허 제5,082,830호; 미국 특허 제5,112,963호; 미국 특허 제5,214,136호; 미국 특허 제5,082,830호; 미국 특허 제5,112,963호; 미국 특허 제5,214,136호; 미국 특허 제5,245,022호; 미국 특허 제5,254,469호; 미국 특허 제5,258,506호; 미국 특허 제5,262,536호; 미국 특허 제5,272,250호; 미국 특허 제5,292,873호; 미국 특허 제5,317,098호; 미국 특허 제5,371,241호, 미국 특허 제5,391,723호; 미국 특허 제5,416,203호, 미국 특허 제5,451,463호; 미국 특허 제5,510,475호; 미국 특허 제5,512,667호; 미국 특허 제5,514,785호; 미국 특허 제5,565,552호; 미국 특허 제5,567,810호; 미국 특허 제5,574,142호; 미국 특허 제5,585,481호; 미국 특허 제5,587,371호; 미국 특허 제5,595,726호; 미국 특허 제5,597,696호; 미국 특허 제5,599,923호; 미국 특허 제5,599,928호 및 미국 특허 제5,688,941호.
일부 경우에, 비천연 핵산은 비천연 염기쌍을 추가로 형성한다. 생체 내 조건하에서 비천연 DNA 또는 RNA 염기쌍(UBP)을 형성할 수 있는 예시적인 비천연 뉴클레오티드는 TPT3, dTPT3, 5SICS, d5SICS, NaM, dNaM, CNMO, dCNMO, 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 경우에, 비천연 핵산은 비천연 염기쌍을 추가로 형성한다. 생체 내 조건하에서 비천연 DNA 또는 RNA 염기쌍(UBP)을 형성할 수 있는 예시적인 비천연 뉴클레오티드는 5SICS, d5SICS, NAM, dNaM, 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트를 제조하는 데 사용될 수 있는 비천연 UBP를 형성할 수 있는 비천연 뉴클레오티드의 다른 예는 문헌[Dien et al., J Am Chem Soc., 2018, 140:16115-16123]; 문헌[Feldman et al., J Am Chem Soc, 2017, 139:11427-11433]; 문헌[Ledbetter et al., J Am Chem Soc., 2018, 140:758-765]; 문헌[Dhami et al., Nucleic Acids Res. 2014, 42:10235-10244]; 문헌[Malyshev et al., Nature, 2014, 509:385-388; Betz et al., J Am Chem Soc., 2013, 135:18637-18643]; 문헌[Lavergne et al., J Am Chem Soc. 2013, 135:5408-5419]; 및 문헌[Malyshev et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2012, 109:12005-12010]에서 발견될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 비천연 뉴클레오티드는 다음을 포함한다:
Figure pct00115
.
일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트를 제조하는 데 사용될 수 있는 비천연 뉴클레오티드는 하기 화학식의 화합물로부터 유도될 수 있다:
Figure pct00116
식 중 R2는 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 메톡시, 메탄티올, 메탄셀레노, 할로겐, 시아노, 및 아지도로 이루어진 군으로부터 선택되고;
물결선은 리보실 또는 2'-데옥시리보실에 대한 결합을 나타내고, 리보실 또는 2'-데옥시리보실 모이어티의 5'-히드록시 기는 유리 형태이거나, 선택적으로 모노포스페이트, 디포스페이트, 또는 트리포스페이트 기에 결합된다.
일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트를 제조하는 데 사용될 수 있는 비천연 뉴클레오티드는
Figure pct00117
Figure pct00118
로부터 유도될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트를 제조하는 데 사용될 수 있는 비천연 뉴클레오티드는
Figure pct00119
Figure pct00120
Figure pct00121
및
Figure pct00122
또는 이들의 염을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 비천연 염기쌍은 문헌[Dumas et al., "Designing logical codon reassignment - Expanding the chemistry in biology," Chemical Science, 6: 50-69 (2015)]에 기술된 비천연 아미노산을 생성한다.
본원에 개시된 구축물 또는 벡터가 도입된 숙주 세포는 관심 tRNA, tRNA 신테타아제 및 단백질이 생산되도록 적합한 배지에서 배양되거나 유지된다. 배지는 또한 관심 단백질이 비천연 아미노산(들)을 통합시키도록 비천연 아미노산(들)을 포함한다 . 일부 실시 형태에서, 박테리아, 식물, 또는 조류의 뉴클레오시드 트리포스페이트 수송체(NTT)가 숙주 세포에 또한 존재한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트는 NTT를 발현하는 숙주 세포를 사용하여 제조된다. 일부 실시 형태에서, 숙주 세포에 사용되는 뉴클레오티드 뉴클레오시드 트리포스페이트 수송체는 TpNTT1, TpNTT2, TpNTT3, TpNTT4, TpNTT5, TpNTT6, TpNTT7, TpNTT8(티. 슈도나나(T. pseudonana)), PtNTT1, PtNTT2, PtNTT3, PtNTT4, PtNTT5, PtNTT6(피. 트리코르누툼(P. tricornutum)), GsNTT(갈디에리아 설퍼라리아(Galdieria sulphuraria)), AtNTT1, AtNTT2(아라비돕시스 탈리아나(Arabidopsis thaliana)), CtNTT1, CtNTT2(클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis)), PamNTT1, PamNTT2(프로토클라미디아 아모에보필라(Protochlamydia amoebophila)), CcNTT(카에디박터 카리오필루스(Caedibacter caryophilus)), RpNTT1(리케챠 프로와제키이(Rickettsia prowazekii))로부터 선택될 수 있다. 일부 실시 형태에서, NTT는 PtNTT1, PtNTT2, PtNTT3, PtNTT4, PtNTT5, 및 PtNTT6으로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, NTT는 PtNTT1이다. 일부 실시 형태에서, NTT는 PtNTT2이다. 일부 실시 형태에서, NTT는 PtNTT3이다. 일부 실시 형태에서, NTT는 PtNTT4이다. 일부 실시 형태에서, NTT는 PtNTT5이다. 일부 실시 형태에서, NTT는 PtNTT6이다. 사용될 수 있는 다른 NTT는 문헌[Zhang et al., Nature 2017, 551(7682): 644-647]; 문헌[Malyshev et al. Nature 2014 (509(7500), 385-388]; 및 문헌[Zhang et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2017, 114:1317-1322]에 개시되어 있다.
직교성 tRNA 신테타아제/tRNA 쌍은 tRNA를 비천연 아미노산으로 차징하고, 코돈에 반응하여 비천연 아미노산을 폴리펩티드 사슬에 통합시킨다. 예시적인 aaRS-tRNA 쌍은 메타노코커스 야나스치(Mj - Tyr) aaRS/tRNA 쌍, 이. 콜라이 TyrRS(Ec-Tyr)/비. 스테아로써모필루스 tRNACUA 쌍, 이. 콜라이 LeuRS(Ec -Leu)/비. 스테아로써모필루스 tRNACUA 쌍 및 피롤리실-tRNA 쌍을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 본 발명에 따라 사용될 수 있는 다른 aaRS-tRNA 쌍은 문헌[Feldman et al., J Am Chem Soc., 2018 140:1447-1454]; 및 문헌[Zhang et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2017, 114:1317-1322]에 기술된 것, 엠. 마제이로부터 유래된 것을 포함한다.
일부 실시 형태에서, NTT 및 tRNA 신테타아제를 발현하는 세포 시스템에서 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트를 제조하는 방법이 제공된다. 본원에 기술된 일부 실시 형태에서, NTT는 PtNTT1, PtNTT2, PtNTT3, PtNTT4, PtNTT5, 및 PtNTT6으로부터 선택되고, tRNA 신테타아제는 메타노코커스 야나스치, 이. 콜라이 TyrRS(Ec-Tyr)/비. 스테로써모필루스, 및 엠. 마제이로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, NTT는 PtNTT1이고, tRNA 신테타아제는 메타노코커스 야나스치, 이. 콜라이 TyrRS(Ec - Tyr)/비. 스테로써모필루스, 또는 엠. 마제이로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, NTT는 PtNTT2이고, tRNA 신테타아제는 메타노코커스 야나스치, 이. 콜라이 TyrRS(Ec - Tyr)/비. 스테로써모필루스, 또는 엠. 마제이로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, NTT는 PtNTT3이고, tRNA 신테타아제는 메타노코커스 야나스치, 이. 콜라이 TyrRS(Ec - Tyr)/비. 스테로써모필루스, 또는 엠. 마제이로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, NTT는 PtNTT3이고, tRNA 신테타아제는 메타노코커스 야나스치, 이. 콜라이 TyrRS(Ec - Tyr)/비. 스테로써모필루스, 또는 엠. 마제이로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, NTT는 PtNTT4이고, tRNA 신테타아제는 메타노코커스 야나스치, 이. 콜라이 TyrRS(Ec - Tyr)/비. 스테로써모필루스, 또는 엠. 마제이로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, NTT는 PtNTT5이고, tRNA 신테타아제는 메타노코커스 야나스치, 이. 콜라이 TyrRS(Ec - Tyr)/비. 스테로써모필루스, 또는 엠. 마제이로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, NTT는 PtNTT6이고, tRNA 신테타아제는 메타노코커스 야나스치, 이. 콜라이 TyrRS(Ec - Tyr)/비. 스테로써모필루스, 또는 엠. 마제이로부터 유래된다.
비천연 아미노산(들)을 포함하는 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드는, tRNA 및 tRNA 신테타아제를 포함하고 하나 이상의 인-프레임 직교성 (종결) 코돈과 함께 관심 핵산 서열을 포함하는 본원에 기술된 핵산 구축물을 숙주 세포에 도입함으로써 제조된다. 숙주 세포는 비천연 아미노산(들)을 포함하는 생리학적 용액에 노출되고, 숙주 세포는 이후 관심 코딩 서열의 단백질의 발현을 허용하는 조건하에 유지된다. 비천연 아미노산(들)은 코돈에 반응하여 폴리펩티드 사슬에 통합된다. 예를 들어, 하나 이상의 비천연 아미노산이 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드에 통합된다. 대안적으로, 2개 이상의 비천연 아미노산이 단백질의 2개 이상의 부위에서 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드에 통합될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트는 (a) 뉴클레오시드 트리포스페이트 수송체 PtNTT2(전장 단백질의 처음 65개 아미노산 잔기가 결실된 절단된 변이체 포함), (b) 원하는 아미노산 서열을 갖는 IL-2 변이체를 코딩하고, N6-((2-아지도에톡시)-카르보닐)-L-라이신(AzK)과 같은 비천연 아미노산이 통합될 원하는 위치에 코돈을 제공하기 위해 제1 비천연 뉴클레오티드 및 제2 비천연 뉴클레오티드를 포함하는 비천연 염기쌍을 함유하는 이중 가닥 올리고뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드, (c) 엠. 마제이로부터 유래된 tRNA를 코딩하고, 천연 서열 대신 (IL-2 변이체의 코돈에 대한) 인식된 안티코돈을 제공하기 위해 비천연 뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드, 및 (d) tRNA를 코딩하는 동일한 플라스미드 또는 상이한 플라스미드일 수 있는, 엠. 바케리 유래 피롤리실-tRNA 신테타아제(Mb PylRS)를 코딩하는 플라스미드를 포함하는, 이. 콜라이와 같은 세포에서 제조될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 세포는 하나 이상의 비천연 염기를 포함하는 데옥시리보 트리포스페이트가 추가로 보충된다. 일부 실시 형태에서, 세포는 하나 이상의 비천연 염기를 포함하는 리보 트리포스페이트가 추가로 보충된다. 일부 실시 형태에서, 세포는 하나 이상의 비천연 아미노산, 예컨대 N6-((2-아지도에톡시)-카르보닐)-L-라이신(AzK)이 추가로 보충된다. 일부 실시 형태에서, 원하는 IL-2 변이체의 아미노산 서열을 코딩하는 이중 가닥 올리고 뉴클레오티드는 예를 들어 서열 번호 4를 갖는 단백질을 코딩하는 서열의 위치 35, 42, 43, 62 또는 65에서(IL-2_C125S), 또는 서열 번호 3을 갖는 단백질을 코딩하는 서열의 위치 34, 41, 42, 61 또는 64에서(알데스류킨) 코돈 AXC를 포함하며, 여기서 X는 비천연 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 세포는 천연 서열 대신 AXC-매칭 안티코돈 GYT를 포함하는 엠. 마제이로부터의 직교성 tRNA를 코딩하는, 단백질 발현 플라스미드 또는 다른 플라스미드일 수 있는 플라스미드를 추가로 포함하고, 여기서 Y는 코돈의 비천연 뉴클레오티드와 동일하거나 상이할 수 있고 상보성인 비천연 뉴클레오티드이다. 일부 실시 형태에서, 코돈의 비천연 뉴클레오티드는 안티코돈의 비천연 뉴클레오티드와 상이하고 상보적이다. 일부 실시 형태에서, 코돈의 비천연 뉴클레오티드는 안티코돈의 비천연 뉴클레오티드와 동일하다. 일부 실시 형태에서, 이중 가닥 올리고뉴클레오티드에서의 비천연 염기쌍의 제1 및 제2 비천연 뉴클레오티드는
Figure pct00123
Figure pct00124
로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 이중 가닥 올리고뉴클레오티드에서의 비천연 염기쌍의 제1 및 제2 비천연 뉴클레오티드는
Figure pct00125
로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제1 및 제2 비천연 뉴클레오티드의 트리포스페이트는
Figure pct00126
Figure pct00127
, 또는 이들의 염을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 및 제2 비천연 뉴클레오티드의 트리포스페이트는
Figure pct00128
, 또는 이들의 염을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 비천연 뉴클레오티드 및 제2 비천연 뉴클레오티드를 포함하는 mRNA 유래 이중 가닥 올리고뉴클레오티드는
Figure pct00129
, 및
Figure pct00130
로부터 유래된 비천연 뉴클레오티드를 포함하는 코돈을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 엠. 마제이 tRNA는 mRNA의 비천연 뉴클레오티드를 포함하는 코돈을 인식하는 비천연 뉴클레오티드를 포함하는 안티코돈을 포함할 수 있다. 엠. 마제이 tRNA의 안티코돈은
Figure pct00131
로부터 유래된 비천연 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, mRNA는
Figure pct00132
로부터 유도된 비천연 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, mRNA는
Figure pct00133
로부터 유도된 비천연 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, mRNA는
Figure pct00134
로부터 유도된 비천연 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, tRNA는
Figure pct00135
로부터 유도된 비천연 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, tRNA는
Figure pct00136
로부터 유도된 비천연 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, tRNA는
Figure pct00137
로부터 유도된 비천연 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, mRNA는
Figure pct00138
로부터 유도된 비천연 뉴클레오티드를 포함하고, tRNA는
Figure pct00139
로부터 유도된 비천연 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, mRNA는
Figure pct00140
로부터 유도된 비천연 뉴클레오티드를 포함하고, tRNA는
Figure pct00141
로부터 유도된 비천연 뉴클레오티드를 포함한다. 숙주 세포는 적절한 영양소가 포함된 배지에서 배양되며, (a) 코돈을 포함하는 사이토카인 유전자를 코딩하는 플라스미드(들)의 복제에 필요한 하나 이상의 비천연 염기를 포함하는 데옥시리보 뉴클레오시드의 트리포스페이트, (b) (i) 하나 이상의 비천연 염기를 포함하는 코돈을 포함하고 사이토카인의 코딩 서열에 상응하는 mRNA, 및 (ii) 하나 이상의 비천연 염기를 포함하는 안티코돈을 포함하는 tRNA의 전사에 필요한 하나 이상의 비천연 염기를 포함하는 리보 뉴클레오시드의 트리포스페이트, 및 (c) 관심 사이토카인의 폴리펩티드 서열에 통합될 비천연 아미노산(들)으로 보충된다. 이어서, 숙주 세포는 관심 단백질의 발현을 허용하는 조건하에서 유지된다.
일부 경우에, 비천연 염기를 포함하는 코돈 및 비천연 염기를 포함하는 안티코돈은 하기 쌍으로부터 선택될 수 있으며, 여기서 X 및 Y는 각각 독립적으로 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 염기를 포함한다:
Figure pct00142
Figure pct00143
Figure pct00144
여기서, R2는 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 메톡시, 메탄티올, 메탄셀레노, 할로겐, 시아노 및 아지도로 이루어진 군으로부터 선택되고; 각각의 경우에 물결선은 X 및 Y가 mRNA 또는 tRNA를 포함하는 경우 리보실에 대한 결합을 나타내거나, X 및 Y가 DNA를 포함하는 경우 2'-데옥시리보실에 대한 결합을 나타낸다.
Figure pct00145
예를 들어 발현된, 상기 하나 이상의 비천연 아미노산, AzK를 포함하는 생성 단백질은 당업자에게 알려진 방법에 의해 정제될 수 있고, 이어서, 당업자에게 알려진 조건하에서, 본원에 개시된 바와 같은 원하는 평균 분자량을 갖는 PEG 사슬을 포함하는 DBCO와 같은 알킨과 반응하도록 하여 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트를 제공할 수 있다. 문헌[Zhang et al., Nature 2017, 551(7682): 644-647; WO 2015157555; WO 2015021432; WO 2016115168; WO 2017106767; WO 2017223528; WO 2019014262; WO 2019014267; WO 2019028419; 및 WO2019/028425]에 개시된 것과 같은 다른 방법은 당업자에게 알려져 있다.
대안적으로, 비천연 아미노산(들)을 포함하는 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드는, tRNA 및 아미노아실 tRNA 신테타아제를 포함하고 하나 이상의 인-프레임 직교성 (종결) 코돈과 함께 관심 핵산 서열을 포함하는 본원에 기술된 핵산 구축물을 숙주 세포에 도입함으로써 제조된다. 숙주 세포는 적절한 영양소가 포함된 배지에서 배양되며, (a) 새로운 코돈 및 안티코돈을 포함하는 사이토카인 유전자를 코딩하는 플라스미드(들)의 복제에 필요한 하나 이상의 비천연 염기를 포함하는 데옥시리보 뉴클레오시드의 트리포스페이트, (b) (i) 코돈을 포함하는 사이토카인 서열, 및 (ii) 안티코돈을 포함하는 직교성 tRNA에 상응하는 mRNA의 전사에 필요한 리보 뉴클레오시드의 트리포스페이트, 및 (c) 비천연 아미노산(들)으로 보충된다. 이어서, 숙주 세포는 관심 단백질의 발현을 허용하는 조건하에서 유지된다. 비천연 아미노산(들)은 비천연 코돈에 반응하여 폴리펩티드 사슬에 통합된다. 예를 들어, 하나 이상의 비천연 아미노산이 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드에 통합된다. 대안적으로, 2개 이상의 비천연 아미노산이 단백질의 2개 이상의 부위에서 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드에 통합될 수 있다.
비천연 아미노산(들)을 포함하는 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드가 숙주 세포에서 생성되면, 효소적, 화학적, 및/또는 삼투적 용해 및 물리적 파괴를 포함하여 당업계에 알려진 다양한 기법에 의해 숙주 세포로부터 추출될 수 있다. 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드는 당업계에 알려진 표준 기법, 예컨대 분취 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 또는 당업자에게 알려진 임의의 다른 적합한 기법에 의해 정제될 수 있다.
적합한 숙주 세포는 박테리아 세포(예를 들어, 이. 콜라이, BL21(DE3))를 포함할 수 있지만, 가장 적합하게는 숙주 세포는 진핵 세포, 예를 들어 곤충 세포(예를 들어, 드로소필라 멜라노가스테르(Drosophila melanogaster)와 같은 초파리), 효모 세포, 선충(예를 들어, 씨. 엘레간스(C. elegans)), 마우스(예를 들어, 무스 무스쿨루스(Mus musculus)), 또는 포유류 세포(예컨대, 중국 햄스터 난소 세포(CHO) 또는 COS 세포, 인간 293T 세포, Hela 세포, NIH 3T3 세포, 및 마우스 적백혈병(MEL) 세포) 또는 인간 세포 또는 기타 진핵 세포이다. 다른 적합한 숙주 세포는 당업자에게 알려져 있다. 적합하게는, 숙주 세포는 포유류 세포, 예컨대 인간 세포 또는 곤충 세포이다. 일부 실시 형태에서, 적합한 숙주 세포는 이. 콜라이를 포함한다.
본 발명의 실시 형태에서 일반적으로 사용될 수 있는 다른 적합한 숙주 세포는 실시예 부문에 언급된 것들이다. 벡터 DNA는 통상적인 형질전환 또는 형질감염 기법을 통해 숙주 세포에 도입될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "형질전환" 및 "형질감염"은 인산칼슘 또는 염화칼슘 동시침전, DEAE-덱스트란-매개 형질감염, 리포펙션, 또는 전기천공을 포함하여, 외부 핵산 분자(예를 들어, DNA)를 숙주 세포에 도입하기 위한 잘 알려진 다양한 기법을 의미하는 것이다. 숙주 세포를 형질전환 또는 형질감염하기 위한 적합한 방법은 당해 분야에 잘 알려져 있다.
세포주를 생성할 때, 안정한 세포주가 제조되는 것이 일반적으로 바람직하다. 예를 들어, 포유류 세포의 안정한 형질감염을 위해, 사용된 발현 벡터 및 형질감염 기법에 따라 오직 작은 분획의 세포가 외래 DNA를 이의 게놈으로 통합시킬 수 있다는 것이 알려져 있다. 이 통합체를 확인하고 선택하기 위해, (예를 들어, 항생제에 대한 내성에 대해) 선발 가능한 마커를 코딩하는 유전자는 관심 유전자와 함께 일반적으로 숙주 세포로 도입된다. 바람직한 선발 가능한 마커는 G418, 하이그로마이신 또는 메토트렉세이트와 같은 약물에 내성을 부여하는 것을 포함한다. 선발 가능한 마커를 코딩하는 핵산 분자는 동일한 벡터에서 숙주 세포로 도입될 수 있거나, 별개의 벡터에서 도입될 수 있다. 도입된 핵산 분자로 안정하게 형질감염된 세포는 약물 선택에 의해 확인될 수 있다(예를 들어, 선발 가능한 마커 유전자가 통합된 세포는 생존하는 반면에, 다른 세포는 죽는다).
일 실시 형태에서, 본원에 기술된 구축물은 숙주 세포의 게놈으로 통합된다. 안정한 통합의 장점은 개별 세포 또는 클론 사이의 균일성이 달성된다는 점이다. 다른 장점은 최고의 생산자의 선택이 수행될 수 있다는 점이다. 따라서, 안정한 세포주를 생성하는 것이 바람직하다. 다른 실시 형태에서, 본원에 기술된 구축물은 숙주 세포를 형질감염시킨다. 숙주 세포를 구축물로 형질감염시키는 것의 장점은 단백질 수율이 최대화될 수 있다는 것이다. 일 양태에서, 본원에 기술된 핵산 구축물 또는 벡터를 포함하는 세포가 기술된다.
다수의 비천연 아미노산이 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드에 통합되는 경우, tRNA 신테타아제/tRNA 쌍이 코돈(들)에 반응하여 비천연 아미노산의 통합을 지시할 수 있도록 다수의 코돈이 원하는 위치에서 코딩 핵산 서열에 통합될 필요가 있음이 이해될 것이다. 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 그 이상의 코돈 코딩 핵산이 관심 핵산 서열에 통합될 수 있다.
하나 초과의 유형의 비천연 아미노산을 단일 단백질로 관심 단백질에 통합하는 것이 요구되는 경우, 제2의 또는 추가의 직교성 tRNA-tRNA 신테타아제 쌍이 제2의 또는 추가의 비천연 아미노산을 통합하도록 사용될 수 있고; 적합하게는 2개 이상의 비천연 아미노산이 단일 제조 단계에서 단백질의 다른 정의된 부위에 특이적으로 통합될 수 있도록 상기 제2의 또는 추가의 직교성 tRNA-tRNA 신테타아제 쌍은 관심 단백질을 코딩하는 핵산에서 다른 코돈을 인식한다. 따라서 특정 실시 형태에서, 2개 이상의 직교성 tRNA-tRNA 신테타아제 쌍이 사용될 수 있다.
비천연 아미노산(들)을 포함하는 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드가 숙주 세포에서 생성되면, 효소적, 화학적, 및/또는 삼투적 용해 및 물리적 파괴를 포함하여 당업계에 알려진 다양한 기법에 의해 숙주 세포로부터 추출될 수 있다. 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드는 당업계에 알려진 표준 기법, 예컨대 분취 크로마토그래피, 친화성 정제, 또는 임의의 다른 적합한 기법에 의해 정제될 수 있다.
적합한 숙주 세포는 박테리아 세포(예를 들어, 이. 콜라이, BL21(DE3))를 포함할 수 있지만, 가장 적합하게는 숙주 세포는 진핵 세포, 예를 들어 곤충 세포(예를 들어, 드로소필라 멜라노가스테르와 같은 초파리), 효모 세포, 선충(예를 들어, 씨. 엘레간스), 마우스(예를 들어, 무스 무스쿨루스), 또는 포유류 세포(예컨대, 중국 햄스터 난소 세포(CHO) 또는 COS 세포, 인간 293T 세포, Hela 세포, NIH 3T3 세포, 및 마우스 적백혈병(MEL) 세포) 또는 인간 세포 또는 기타 진핵 세포이다. 다른 적합한 숙주 세포는 당업자에게 알려져 있다. 적합하게는, 숙주 세포는 포유류 세포, 예컨대 인간 세포 또는 곤충 세포이다.
본 발명의 실시 형태에서 일반적으로 사용될 수 있는 다른 적합한 숙주 세포는 실시예 부문에 언급된 것들이다. 벡터 DNA는 통상적인 형질전환 또는 형질감염 기법을 통해 숙주 세포에 도입될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "형질전환" 및 "형질감염"은 인산칼슘 또는 염화칼슘 동시침전, DEAE-덱스트란-매개 형질감염, 리포펙션, 또는 전기천공을 포함하여, 외부 핵산 분자(예를 들어, DNA)를 숙주 세포에 도입하기 위한 잘 알려진 다양한 기법을 의미하는 것이다. 숙주 세포를 형질전환 또는 형질감염하기 위한 적합한 방법은 당해 분야에 잘 알려져 있다.
세포주를 생성할 때, 안정한 세포주가 제조되는 것이 일반적으로 바람직하다. 예를 들어, 포유류 세포의 안정한 형질감염을 위해, 사용된 발현 벡터 및 형질감염 기법에 따라 오직 작은 분획의 세포가 외래 DNA를 이의 게놈으로 통합시킬 수 있다는 것이 알려져 있다. 이 통합체를 확인하고 선택하기 위해, (예를 들어, 항생제에 대한 내성에 대해) 선발 가능한 마커를 코딩하는 유전자는 관심 유전자와 함께 일반적으로 숙주 세포로 도입된다. 바람직한 선발 가능한 마커는 G418, 하이그로마이신 또는 메토트렉세이트와 같은 약물에 내성을 부여하는 것을 포함한다. 선발 가능한 마커를 코딩하는 핵산 분자는 동일한 벡터에서 숙주 세포로 도입될 수 있거나, 별개의 벡터에서 도입될 수 있다. 도입된 핵산 분자로 안정하게 형질감염된 세포는 약물 선택에 의해 확인될 수 있다(예를 들어, 선발 가능한 마커 유전자가 통합된 세포는 생존하는 반면에, 다른 세포는 죽는다).
일 실시 형태에서, 본원에 기술된 구축물은 숙주 세포의 게놈으로 통합된다. 안정한 통합의 장점은 개별 세포 또는 클론 사이의 균일성이 달성된다는 점이다. 다른 장점은 최적의 생산자가 선택될 수 있다는 것이다. 따라서, 안정한 세포주를 생성하는 것이 바람직하다. 다른 실시 형태에서, 본원에 기술된 구축물은 숙주 세포를 형질감염시킨다. 숙주 세포를 구축물로 형질감염시키는 것의 장점은 단백질 수율이 최대화될 수 있다는 것이다. 일 양태에서, 본원에 기술된 핵산 구축물 또는 벡터를 포함하는 세포가 기술된다.
제약 조성물 및 제형
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 제약 조성물 및 제형은, 비경구, 경구, 협측, 직장, 설하 또는 경피 투여 경로를 비제한적인 예로서 포함하는 다수의 투여 경로에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, 비경구 투여는 정맥내, 피하, 근육내, 뇌내, 비강내, 동맥내, 관절내, 진피내, 유리체내, 골내 주입, 복강내 또는 척수강내 투여를 포함한다. 일부 경우에, 제약 조성물은 국소 투여용으로 제형화된다. 다른 경우에, 제약 조성물은 전신 투여용으로 제형화된다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 제약 조성물 및 제형은 정맥내, 피하 및 근육내 투여에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 제약 조성물 및 제형은 정맥내 투여에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 제약 조성물 및 제형은 투여에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 제약 조성물 및 제형은 근육내 투여에 의해 대상체에게 투여된다.
일부 실시 형태에서, 제약 제형은 수성 액체 분산액, 자가-유화 분산액, 고체 용액, 리포솜 분산액, 에어로졸, 고체 투여 형태, 산제, 속방형 제형, 제어방출형 제형, 신속 용융 제형, 정제, 캡슐, 알약, 서방형 제형, 지속방출형 제형, 박동방출형 제형, 다중미립자 제형(예를 들어, 나노입자 제형), 및 속방 및 제어방출 혼합형 제형을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 실시 형태에서, 제약 제형은 본원에 개시된 조성물과의 상용성 및 원하는 투여 형태의 방출 프로파일 특성에 기초하여 선택된 담체 또는 담체 물질을 포함한다. 예시적인 담체 물질은 예를 들어 결합제, 현탁제, 붕해제, 충전제, 계면활성제, 가용화제, 안정화제, 활택제, 습윤제, 희석제 등을 포함한다. 약학적 상용성 담체 물질은 아카시아, 젤라틴, 콜로이드성 이산화규소, 칼슘 글리세로포스페이트, 락트산칼슘, 말토덱스트린, 글리세린, 규산마그네슘, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르, 나트륨 카제이네이트, 대두 레시틴, 타우로콜산, 포스포티딜콜린, 염화나트륨, 인산삼칼슘, 인산이칼륨, 셀룰로스 및 셀룰로스 콘쥬게이트, 당 나트륨 스테아로일 락틸레이트, 카라기난, 모노글리세라이드, 디글리세라이드, 전호화분 녹말 등을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995), Hoover, John E., Remington' s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975, Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980, and Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins1999)]을 참조한다.
일부 경우에, 제약 조성물은 리포솜의 지질 이중층에 직접 또는 간접적으로 결합된 복수의 IL-2 콘쥬게이트를 포함하는 면역리포솜으로서 제형화된다. 예시적인 지질은 지방산; 인지질; 콜레스테롤과 같은 스테롤; 스핑고미엘린과 같은 스핑고지질; 강글리오시드, 글로보시드, 및 세레브로시드와 같은 글리코스핑고지질; 스테아릴, 올레일, 및 리놀레일 아민과 같은 계면활성제 아민을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 경우에, 지질은 양이온성 지질을 포함한다. 일부 경우에, 지질은 인지질을 포함한다. 예시적인 인지질은 포스파티드산("PA"), 포스파티딜콜린("PC"), 포스파티딜글리세롤("PG"), 포파티딜에탄올아민("PE"), 포파티딜이노시톨("PI"), 및 포스파티딜세린("PS"), 스핑고미엘린(뇌 스핑고미엘린 포함), 레시틴, 리소레시틴, 리소포스파티딜에탄올아민, 세레브로시드, 디아라키도일포스파티딜콜린("DAPC"), 디데카노일-L-알파-포스파티딜콜린("DDPC"), 디엘라이도일포스파티딜콜린("DEPC"), 디라우로일포스파티딜콜린("DLPC"), 디리놀레오일포스파티딜콜린, 디미리스토일포스파티딜콜린("DMPC"), 디올레오일포스파티딜콜린("DOPC"), 디팔미토일포스파티딜콜린("DPPC"), 디스테아로일포스파티딜콜린("DSPC"), 1-팔미토일-2-올레오일-포스파티딜콜린("POPC"), 디아라키도일포스파티딜글리세롤("DAPG"), 디데카노일-L-알파-포스파티딜글리세롤("DDPG"), 디엘라이도일포스파티딜글리세롤("DEPG"), 디라우로일포스파티딜글리세롤("DLPG"), 디리놀레오일포스파티딜글리세롤, 디미리스토일포스파티딜글리세롤("DMPG"), 디올레오일포스파티딜글리세롤("DOPG"), 디팔미토일포스파티딜글리세롤("DPPG"), 디스테아로일포스파티딜글리세롤("DSPG"), 1-팔미토일-2-올레오일-포스파티딜글리세롤("POPG"), 디아라키도일포스파티딜에탄올아민("DAPE"), 디데카노일-L-알파-포스파티딜에탄올아민("DDPE"), 디엘라이도일포스파티딜에탄올아민("DEPE"), 디라우로일포스파티딜에탄올아민("DLPE"), 디리놀레오일포스파티딜에탄올아민, 디미리스토일포스파티딜에탄올아민("DMPE"), 디올레오일포스파티딜에탄올아민("DOPE"), 디팔미토일포스파티딜에탄올아민("DPPE"), 디스테아로일포스파티딜에탄올아민("DSPE"), 1-팔미토일-2-올레오일-포스파티딜에탄올아민("POPE"), 디아라키도일포스파티딜이노시톨("DAPI"), 디데카노일-L-알파-포스파티딜이노시톨("DDPI"), 디엘라이도일포스파티딜이노시톨("DEPI"), 디라우로일포스파티딜이노시톨("DLPI"), 디리놀레오일포스파티딜이노시톨, 디미리스토일포스파티딜이노시톨("DMPI"), 디올레오일포스파티딜이노시톨("DOPI"), 디팔미토일포스파티딜이노시톨("DPPI"), 디스테아로일포스파티딜이노시톨("DSPI"), 1-팔미토일-2-올레오일-포스파티딜이노시톨("POPI"), 디아라키도일포스파티딜세린("DAPS"), 디데카노일-L-알파-포스파티딜세린("DDPS"), 디엘라이도일포스파티딜세린("DEPS"), 디라우로일포스파티딜세린("DLPS"), 디리놀레오일포스파티딜세린, 디미리스토일포스파티딜세린("DMPS"), 디올레오일포스파티딜세린("DOPS"), 디팔미토일포스파티딜세린("DPPS"), 디스테아로일포스파티딜세린("DSPS"), 1-팔미토일-2-올레오일-포스파티딜세린("POPS"), 디아라키도일 스핑고미엘린, 디데카노일 스핑고미엘린, 디엘라이도일 스핑고미엘린, 디라우로일 스핑고미엘린, 디리놀레오일 스핑고미엘린, 디미리스토일 스핑고미엘린, 스핑고미엘린, 디올레오일 스핑고미엘린, 디팔미토일 스핑고미엘린, 디스테아로일 스핑고미엘린, 및 1-팔미토일-2-올레오일-스핑고미엘린을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 경우에, 제약 제형은 아세트산, 붕산, 시트르산, 락트산, 인산, 및 염산과 같은 산, 수산화나트륨, 인산나트륨, 붕산나트륨, 시트르산나트륨, 아세트산나트륨, 락트산나트륨, 및 트리스-히드록시메틸아미노메탄과 같은 염기, 시트레이트/덱스트로스, 중탄산나트륨, 및 염화암모늄과 같은 완충액을 포함하는 pH 조정제 또는 완충제를 추가로 포함한다. 이러한 산, 염기, 및 완충액은 조성물의 pH를 허용 가능한 범위로 유지하는 데 필요한 양으로 포함된다.
일부 경우에, 제약 제형은 조성물의 삼투압 농도를 허용 가능한 범위로 만드는 데 필요한 양의 하나 이상의 염을 포함한다. 이러한 염은 나트륨, 칼륨, 또는 암모늄 양이온 및 클로라이드, 시트레이트, 아스코르베이트, 보레이트, 포스페이트, 바이카르보네이트, 술페이트, 티오술페이트, 또는 바이술파이트 음이온을 갖는 것들을 포함하고, 적합한 염은 염화나트륨, 염화칼륨, 티오황산나트륨, 중아황산나트륨, 및 황산암모늄을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제약 제형은 트레할로스, 수크로스, 만니톨, 말토스, 글루코스와 같은 당, 또는 인산칼륨, 시트르산나트륨, 황산암모늄과 같은 염, 및/또는 폴리펩티드의 용해도 및 생체 내 안정성을 증가시키기 위한 헤파린과 같은 기타 제제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 경우에, 제약 제형은 보다 안정한 환경을 제공할 수 있으므로 화합물을 안정화시키기 위해 사용되는 희석제를 추가로 포함한다. (pH 제어 또는 유지를 제공할 수도 있는) 완충 용액에 용해된 염은 당업계에서 희석제(인산염 완충 식염수 용액을 포함하나, 이에 한정되지 않음)로서 사용된다. 특정한 경우에, 희석제는 압축을 용이하게 하거나 캡슐 충전을 위한 균질한 블렌드를 위한 충분한 벌크를 생성하도록 조성물의 벌크를 증가시킨다. 이러한 화합물은 예를 들어 락토스, 전분, 만니톨, 소르비톨, 덱스트로스, Avicel®과 같은 미정질 셀룰로오스, 인산일수소칼슘, 인산이칼슘 이수화물, 인산삼칼슘, 인산칼슘, 무수 락토스, 분무 건조된 락토스, 전호화 전분, 압축성 당, 예컨대 Di-Pac®(Amstar), 만니톨, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스 아세테이트 스테아레이트, 수크로스 기반 희석제, 제과 설탕, 일염기성 황산칼슘 일수화물, 황산칼슘 이수화물, 락트산칼슘 삼수화물, 덱스트레이트, 가수분해된 시리얼 고체, 아밀로스, 분말 셀룰로오스 , 탄산칼슘, 글리신, 카올린, 만니톨, 염화나트륨, 이노시톨, 벤토나이트 등을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트는 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있고 히스티딘, 소르비톨 및 폴리소르베이트 80, 또는 안정한 제형을 제공하는 임의의 조합을 포함하는 제약 제형에서 사용될 수 있다. 일 실시 형태에서, 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트는 다음과 같이 바이알과 같은 적합한 용기에 완제 의약품으로 제공될 수 있다: IL-2 콘쥬게이트(약 2 mg 내지 약 10 mg); L-히스티딘(약 0.5 mg 내지 약 2 mg); L-히스티딘 히드로클로라이드(약 1 mg 내지 약 2 mg); 소르비톨(약 20 mg 내지 약 80 mg); 및 폴리소르베이트 80(약 0.1 mg 내지 약 0.2 mg); 개시된 방법에 사용하기에 적합한 액체 제형을 제공하기에 충분한 양의 주사용 물.
일부 경우에, 제약 제형은 물질의 분해 또는 붕해를 촉진하기 위한 붕해 제제 또는 붕해제를 포함한다. 용어 "붕해하다"는 위액과 접촉하는 경우의 투여 형태의 용해 및 분산 둘 다를 포함한다. 붕해제의 예에는 전분, 예를 들어 천연 전분, 예컨대 옥수수 전분 또는 감자 전분, 전호화 전분, 예컨대 National 1551 또는 Amijel®, 또는 소듐 스타치 글리콜레이트, 예컨대 Promogel® 또는 Explotab®, 셀룰로오스, 예컨대 목재 제품, 메틸크리스탈린 셀룰로오스, 예를 들어 Avicel®, Avicel® PH101, Avicel® PH102, Avicel® PH105, Elcema® P100, Emcocel®, Vivacel®, Ming Tia®, 및 Solka-Floc®, 메틸셀룰로오스, 크로스카르멜로스, 또는 가교결합된 셀룰로오스, 예컨대 가교결합된 소듐 카르복시메틸셀룰로오스(Ac-Di-Sol®), 가교결합된 카르복시메틸셀룰로오스, 또는 가교결합된 크로스카르멜로스, 가교결합된 전분, 예컨대 소듐 스타치 글리콜레이트, 가교결합된 중합체, 예컨대 크로스포비돈, 가교결합된 폴리비닐피롤리돈, 알기네이트, 예컨대 알긴산 또는 알킨산의 염, 예컨대 알긴산나트륨, 점토, 에컨대 Veegum® HV(마그네슘 알루미늄 실리케이트), 검, 예컨대 한천, 구아, 로커스트 빈, 카라야, 펙틴 또는 트래거캔스, 소듐 스타치 글리콜레이트, 벤토나이트, 천연 스폰지, 계면활성제, 수지, 예컨대 양이온 교환 수지, 시트러스 펄프, 소듐 라우릴 술페이트, 소듐 라우릴 술페이트가 전분과 조합된 것 등을 포함한다.
일부 경우에, 제약 제형은 충전제, 예컨대 락토스, 탄산칼슘, 인산칼슘, 이염기성 인산칼슘, 황산칼슘, 미정질 셀룰로오스, 셀룰로오스 분말, 덱스트로스, 덱스트레이트, 덱스트란, 전분, 전호화 전분, 수크로스, 자일리톨, 락티톨, 만니톨, 소르비톨, 염화나트륨, 폴리에틸렌 글리콜 등을 포함한다.
활택제 및 글리단트가 또한 재료의 부착 또는 마찰을 방지, 감소 또는 억제하기 위해 본원에 기술된 제약 제형에 선택적으로 포함된다. 예시적인 활택제는 예를 들어 스테아르산, 수산화칼슘, 활석, 나트륨 스테아릴 푸마레이트, 탄화수소, 에컨대 광유, 또는 수소화 식물유, 예컨대 수소화 대두유(Sterotex®), 고급 지방산 및 이들의 알칼리 금속 및 알칼리 토금속 염, 예컨대 알루미늄, 칼슘, 마그네슘, 아연, 스테아르산, 스테아르산나트륨, 글리세롤, 활석, 왁스, Stearowet®, 붕산, 벤조산나트륨, 아세트산나트륨, 염화나트륨, 류신, 폴리에틸렌 글리콜(예를 들어 PEG-4000) 또는 메톡시폴리에틸렌글리콜, 에컨대 Carbowax™, 나트륨 올레에이트, 벤조산나트륨, 글리세릴 베헤네이트, 폴리에틸렌 글리콜, 마그네슘 또는 나트륨 라우릴 술페이트, 콜로이드성 실리카, 예컨대 Syloid™, Cab-O-Sil®, 전분, 예컨대 옥수수 전분, 실리콘 오일, 계면활성제 등을 포함한다.
가소제는 미세캡슐화 재료 또는 필름 코팅을 연화하여 이들이 덜 취성이 되게 하는 화합물을 포함한다. 적합한 가소제는 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 예컨대 PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 1450, PEG 3350 및 PEG 800, 스테아르산, 프로필렌 글리콜, 올레산, 트리에틸 셀룰로오스 및 트리아세틴을 포함한다. 가소제는 분산제 또는 습윤제로도 기능할 수 있다.
가용화제는 트리아세틴, 트리에틸시트레이트, 에틸 올레에이트, 에틸 카프릴레이트, 나트륨 라우릴 술페이트, 나트륨 도큐세이트, 비타민 E TPGS, 디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈, N-히드록시에틸피롤리돈, 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 시클로덱스트린, 에탄올, n-부탄올, 이소프로필 알코올, 콜레스테롤, 담즙 염, 폴리에틸렌 글리콜 200~600, 글리코푸롤, 트랜스쿠톨, 프로필렌 글리콜 및 디메틸 이소소르비드 등과 같은 화합물을 포함한다.
안정화제는 임의의 항산화제, 완충액, 산, 보존제 등과 같은 화합물을 포함한다. 예시적인 안정화제는 L-아르기닌 히드로클로라이드, 트로메타민, 알부민(인간), 시트르산, 벤질 알코올, 페놀, 이인산이나트륨 이수화물, 프로필렌 글리콜, 메타크레솔 또는 m-크레솔, 아세트산아연, 폴리소르베이트-20 또는 Tween® 20, 또는 트로메타몰을 포함한다.
현탁제는 폴리비닐피롤리돈, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈 K12, 폴리비닐피롤리돈 K17, 폴리비닐피롤리돈 K25 또는 폴리비닐피롤리돈 K30, 비닐 피롤리돈/비닐 아세테이트 공중합체(S630), 폴리에틸렌 글리콜(예를 들어 폴리에틸렌 글리콜은 약 300 내지 약 6000, 또는 약 3350 내지 약 4000, 또는 약 7000 내지 약 5400의 분자량을 가질 수 있음), 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 히드록시메틸셀룰로오스 아세테이트 스테아레이트, 폴리소르베이트-80, 히드록시에틸셀룰로오스, 알긴산나트륨, 검, 예를 들어 검 트래거캔스 및 검 아카시아, 구아 검, 잔탄(잔탄 검 포함), 당, 셀룰로오스계 물질, 예를 들어 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 폴리소르베이트-80, 알긴산나트륨, 폴리에톡실화 소르비탄 모노라우레이트, 폴리에톡실화 소르비탄 모노라우레이트, 포비돈 등과 같은 화합물을 포함한다.
계면활성제는 나트륨 라우릴 술페이트, 도쿠세이트 나트륨, Tween 60 또는 80, 트리아세틴, 비타민 E TPGS, 소르비탄 모노올레에이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트, 폴리소르베이트, 폴록사머, 담즙염, 글리세릴 모노스테아레이트, 에틸렌 옥사이드와 프로필렌 옥사이드의 공중합체, 예를 들어 Pluronic®(BASF) 등과 같은 화합물을 포함한다. 추가의 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 지방산 글리세리드 및 식물유, 예를 들어 폴리옥시에틸렌(60) 경화 캐스터 오일, 및 폴리옥시에틸렌 알킬에테르 및 알킬페닐 에테르, 예를 들어 옥톡시놀 10, 옥톡시놀 40을 포함한다. 때때로, 계면활성제는 물리적 안정성을 향상시키기 위해 또는 다른 목적을 위해 포함된다.
점도 향상제는 예를 들어, 메틸 셀룰로오스, 잔탄 검, 카르복시메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 셀룰로오스, 히드록시프로필메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필메틸 셀룰로오스 아세테이트 스테아레이트, 히드록시프로필메틸 셀룰로오스 프탈레이트, 카보머, 폴리비닐 알코올, 알기네이트, 아카시아, 키토산 및 이들의 조합을 포함한다.
습윤제는 올레산, 글리세릴 모노스테아레이트, 소르비탄 모노올레에이트, 소르비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레에이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트, 나트륨 도쿠세이트, 나트륨 올레에이트, 나트륨 라우릴 술페이트, 나트륨 도쿠세이트, 트리아세틴, 트윈 80, 비타민 E TPGS, 트윈 80, 비타민 E TPGS, 암모늄 염 등과 같은 화합물을 포함한다.
치료 요법
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 제약 조성물은 치료 용도로 투여된다. 일부 실시 형태에서, 제약 조성물은 1일 1회, 1일 2회, 1일 3회 이상 투여된다. 제약 조성물은 매일, 일마다, 격일로, 1주 5일, 1주 1회, 격주로, 달마다 2주, 달마다 3주, 달마다 1회, 달마다 2회, 달마다 3회 이상 투여된다. 제약 조성물은 적어도 1달, 2달, 3달, 4달, 5달, 6달, 7달, 8달, 9달, 10달, 11달, 12달, 18달, 2년, 3년 이상 동안 투여된다.
환자의 상태가 개선하는 경우에, 의사의 결정에 의해 조성물의 투여는 연속적으로 주어지고, 대안적으로, 투여되는 조성물의 용량은 소정의 기간(즉, "약물 휴약") 동안 일시적으로 감소하거나 일시적으로 중지된다. 일부 경우에, 휴약기의 기간은 단지 예로서 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 10일, 12일, 15일, 20일, 28일, 35일, 50일, 70일, 100일, 120일, 150일, 180일, 200일, 250일, 280일, 300일, 320일, 350일, 또는 365일을 포함하여, 2일에서 1년 사이로 다양하다. 휴약기 동안 용량 감소는 단지 예로서 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%를 포함하여, 10%~100%이다.
일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 주 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 5주에 1회, 6주에 1회, 7주에 1회, 8주에 1회, 9주에 1회, 10주에 1회, 11주에 1회, 12주에 1회, 13주에 1회, 14주에 1회, 15주에 1회, 16주에 1회, 17주에 1회, 18주에 1회, 19주에 1회, 20주에 1회, 21주에 1회, 22주에 1회, 23주에 1회, 24주에 1회, 25주에 1회, 26주에 1회, 27주에 1회, 또는 28주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 주 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 2주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 3주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 4주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 5주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 6주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 7주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 8주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 9주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 10주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 11주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 12주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 13주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 14주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 15주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 16주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 17주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 18주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 19주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 20주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 21주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 22주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 23주에 1회 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트의 유효량은 이를 필요로 하는 대상체에게 24주에 1회 투여된다.
일부 실시 형태에서, 이러한 양에 상응하는 주어진 제제의 양은 특정 화합물, 질환의 중증도, 치료가 필요한 대상체 또는 숙주의 독자성(예를 들어, 체중)과 같은 인자에 따라 다르지만, 그럼에도 불구하고, 예를 들어 투여되는 특정 제제, 투여 경로, 및 치료받는 대상체 또는 숙주를 비롯한 사례 주변의 특정 상황에 따라 당업계에 알려진 방식으로 통상적으로 결정된다. 일부 경우에, 원하는 용량은 단일 용량으로, 또는 동시에(또는 단기간에 걸쳐) 또는 적절한 간격으로 투여되는 분할 용량으로, 예를 들어 매일 2회, 3회, 4회 이상의 하위용량으로 편리하게 제시된다.
일부 실시 형태에서, 방법들은 이를 필요로 하는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 1 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 2 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 4 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 6 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 8 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 10 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 12 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg)¸ or 약 14 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 16 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 18 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 20 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 22 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 24 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 26 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 28 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 32 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 34 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 36 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 40 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 45 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg)¸ or 약 50 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 55 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg)¸ or 약 60 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 65 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 70 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 75 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 80 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg)¸ or 약 85 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 90 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 95 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 100 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 110 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 120 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 130 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 140 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 150 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 160 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 170 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 180 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 190 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg) 내지 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg)의 범위의 용량으로 투약하는 것을 포함한다. 개별 치료 요법과 관련된 변수의 수가 많고 이러한 권장 값에서 상당한 편차가 드물지 않기 때문에, 상기 범위는 제안적일 뿐이다. 이러한 투여량은 사용된 화합물의 활성, 치료할 질환 또는 병태, 투여 방식, 개별 대상체의 요건, 치료되는 질환 또는 병태의 중증도, 및 의사의 판단을 비롯한 여러 변수에 따라 달라진다. 일부 실시 형태에서, 이러한 치료 요법의 독성 및 치료 효능은 세포 배양 또는 실험 동물의 표준 제약 절차에 의해 결정된다(LD50(집단의 50%에 치사인 용량) 및 ED50(집단의 50%에 치료 효과적인 용량)의 결정을 포함하나, 이에 한정되지 않음). 독성과 치료 효과 간의 용량비는 치료 지수이며, LD50과 ED50 간의 비로 표시된다. 높은 치료 지수를 나타내는 화합물이 바람직하다. 세포 배양 분석 및 동물 연구로부터 얻은 데이터는 인간에게 사용하기 위한 투여량의 범위를 정하는 데 사용된다. 이러한 화합물의 투여량은 바람직하게는 최소 독성으로 ED50을 포함하는 순환 농도의 범위 내에 있다. 투여량은 사용된 투여 형태 및 사용된 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 다양하다.
일부 실시 형태에서, 방법들은 IL-2 콘쥬게이트를 이를 필요로 하는 대상체에게 약 1 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 2 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 4 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 6 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 8 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 10 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 12 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 14 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 16 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 18 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 20 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 22 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 24 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 26 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 28 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 30 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 32 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 34 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 36 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 38 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 40 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 42 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 44 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 46 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 48 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 50 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 55 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 60 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 65 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 70 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 75 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 80 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 85 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 90 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 95 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 100 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 110 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 120 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 130 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 140 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 150 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 160 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 170 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 180 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 약 190 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg), 또는 약 200 μg의 IL-2 콘쥬게이트/대상체의 체중(kg)의 용량으로 투약하는 것을 포함한다. 개별 치료 요법과 관련된 변수의 수가 많고 이러한 권장 값에서 상당한 편차가 드물지 않기 때문에, 상기 범위는 제안적일 뿐이다. 이러한 투여량은 사용된 화합물의 활성, 치료할 질환 또는 병태, 투여 방식, 개별 대상체의 요건, 치료되는 질환 또는 병태의 중증도, 및 의사의 판단을 비롯한 여러 변수에 따라 달라진다. 일부 실시 형태에서, 이러한 치료 요법의 독성 및 치료 효능은 세포 배양 또는 실험 동물의 표준 제약 절차에 의해 결정된다(LD50(집단의 50%에 치사인 용량) 및 ED50(집단의 50%에 치료 효과적인 용량)의 결정을 포함하나, 이에 한정되지 않음). 독성과 치료 효과 간의 용량비는 치료 지수이며, LD50과 ED50 간의 비로 표시된다. 높은 치료 지수를 나타내는 화합물이 바람직하다. 세포 배양 분석 및 동물 연구로부터 얻은 데이터는 인간에게 사용하기 위한 투여량의 범위를 정하는 데 사용된다. 이러한 화합물의 투여량은 바람직하게는 최소 독성으로 ED50을 포함하는 순환 농도의 범위 내에 있다. 투여량은 사용된 투여 형태 및 사용된 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 다양하다.
환자의 상태가 호전되면, 필요에 따라 유지 용량이 투여된다. 이후, 증상에 따라 투여량 또는 투여 빈도, 또는 둘 모두가, 호전된 질환, 장애, 또는 병태가 유지되는 수준으로 감소될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 이러한 양에 상응하는 주어진 제제의 양은 특정 화합물, 질환의 중증도, 치료가 필요한 대상체 또는 숙주의 독자성(예를 들어, 체중)과 같은 인자에 따라 다르지만, 그럼에도 불구하고, 예를 들어 투여되는 특정 제제, 투여 경로, 및 치료받는 대상체 또는 숙주를 비롯한 사례 주변의 특정 상황에 따라 당업계에 알려진 방식으로 통상적으로 결정된다. 일부 경우에, 원하는 용량은 단일 용량으로, 또는 동시에(또는 단기간에 걸쳐) 또는 적절한 간격으로 투여되는 분할 용량으로, 예를 들어 매일 2회, 3회, 4회 이상의 하위용량으로 편리하게 제시된다.
개별 치료 요법과 관련된 변수의 수가 많고 이러한 권장 값에서 상당한 편차가 드물지 않기 때문에, 상기 범위는 제안적일 뿐이다. 이러한 투여량은 사용된 화합물의 활성, 치료할 질환 또는 병태, 투여 방식, 개별 대상체의 요건, 치료되는 질환 또는 병태의 중증도, 및 의사의 판단을 비롯한 여러 변수에 따라 달라진다.
일부 실시 형태에서, 이러한 치료 요법의 독성 및 치료 효능은 세포 배양 또는 실험 동물의 표준 제약 절차에 의해 결정된다(LD50(집단의 50%에 치사인 용량) 및 ED50(집단의 50%에 치료 효과적인 용량)의 결정을 포함하나, 이에 한정되지 않음). 독성과 치료 효과 간의 용량비는 치료 지수이며, LD50과 ED50 간의 비로 표시된다. 높은 치료 지수를 나타내는 화합물이 바람직하다. 세포 배양 분석 및 동물 연구로부터 얻은 데이터는 인간에게 사용하기 위한 투여량의 범위를 정하는 데 사용된다. 이러한 화합물의 투여량은 바람직하게는 최소 독성으로 ED50을 포함하는 순환 농도의 범위 내에 있다. 투여량은 사용된 투여 형태 및 사용된 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 다양하다.
키트 /제조 물품
특정 실시 형태에서, 본원에 기술된 하나 이상의 방법 및 조성물과 함께 사용하기 위한 키트 및 제조 물품이 본원에 개시된다. 이러한 키트는 바이알, 튜브 등과 같은 하나 이상의 용기를 수용하도록 구획화된 캐리어, 패키지, 또는 용기를 포함하고, 각각의 용기는 본원에 기술된 방법에 사용될 개별 요소들 중 하나를 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 주사기, 및 시험관을 포함한다. 일 실시 형태에서, 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로부터 형성된다.
일부 실시 형태에서, 키트는 입양 세포 요법을 개발하는 데 유용한 제조 물품을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키트는 본원에 개시된 하나 이상의 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드 또는 사이토카인(예를 들어, IL-2) 콘쥬게이트, 및 선택적으로, 사이토카인(예를 들어, IL-2) 폴리펩티드 또는 사이토카인(예를 들어, IL-2) 콘쥬게이트의 전달을 용이하게 하기 위한 본원에 기술된 하나 이상의 제약 부형제를 포함한다. 이러한 키트는 선택적으로, T 세포 수용체 신호전달 또는 조절의 유도제(예를 들어, 관문 항체, CD3/CD28 항체, 주요 조직적합성 복합체(MHC) 등), 또는 대안적인 사이토카인 또는 사이토카인 수용체 작용제를 포함하는 하나 이상의 보조 성분을 포함할 수 있다. 이러한 키트는 또한 필요에 따라, 본원에 기술된 방법에서의 사용과 관련된 식별 표시 또는 라벨 또는 설명서를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 키트는 본원에 개시된 IL-2 콘쥬게이트를 코딩하는 하나 이상의 다중핵산 서열, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 메모리 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포 및/또는 이의 제약 조성물을 포함한다.
증식성 및 감염성 질환용 키트 및 제조 물품
일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드와 인터류킨 2 수용체 α(IL-2Rα) 사이의 결합을 감소시키지만, IL-2/IL-2Rβγ 복합체를 형성하도록 인터류킨 2 βγ 수용체(IL-2Rβγ) 신호전달 복합체와의 상당한 결합을 보유하는, 폴리펩티드 상의 소정 위치에서 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함하는 단리되고 변형된 인터류킨 2(IL-2) 폴리펩티드를 포함하는 키트가 본원에 개시되며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, IL-2Rα에 대한 결합의 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 100%의 결합 친화도 감소를 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2Rα에 대한 결합의 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 또는 그 이상의 감소를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함하는 단리되고 변형된 인터류킨 2(IL-2) 폴리펩티드를 포함하는 키트가 본원에 개시되며, 여기서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2βγ 신호전달 복합체에 대한 제1 수용체 신호전달 효력 및 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 제2 수용체 신호전달 효력을 나타내며, 제1 수용체 신호전달 효력과 제2 수용체 신호전달 효력의 차이는 10배 미만이다. 일부 실시 형태에서, 상기 수용체 신호전달 효력 차이는 5배 미만, 4배 미만, 3배 미만, 2배 미만, 또는 1배 미만이다.
일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드와 인터류킨 2 수용체 α(IL-2Rα) 사이의 결합을 감소시키지만, IL-2/IL-2Rβγ 복합체를 형성하도록 인터류킨 2 βγ 수용체(IL-2Rβγ) 신호전달 복합체와의 상당한 결합을 보유하는, 폴리펩티드 상의 소정 위치에서 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함하는 변형된 인터류킨 2(IL-2) 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 키트가 본원에 개시되며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함하는 변형된 인터류킨 2(IL-2) 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 키트가 본원에 개시되며, 여기서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2βγ 신호전달 복합체에 대한 제1 수용체 신호전달 효력 및 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 제2 수용체 신호전달 효력을 나타내며, 제1 수용체 신호전달 효력과 제2 수용체 신호전달 효력의 차이는 10배 미만이다. 일부 실시 형태에서, 상기 수용체 신호전달 효력 차이는 5배 미만, 4배 미만, 3배 미만, 2배 미만, 또는 1배 미만이다.
자가면역 키트 및 제조 물품
일부 실시 형태에서, 인터류킨 2 수용체 βγ(IL-2Rβγ)에 대한 수용체 신호전달 효력을 감소시키거나 IL-2/IL-2Rβ 복합체에 대한 IL-2Rγ 서브유닛의 동원을 감소시키지만, 인터류킨 2 αβγ 수용체(IL-2Rαβγ)의 상당한 활성화를 보유하는, 폴리펩티드 상의 소정 위치에서 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함하는 단리되고 변형된 인터류킨 2(IL-2) 폴리펩티드를 포함하는 키트가 본원에 개시되며, 여기서, 수용체 신호전달 효력의 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rβγ 사이의 수용체 신호전달 효력과 비교되고, 상기 동원은 야생형 IL-2 폴리펩티드에 의한 IL-2Rγ 서브유닛의 동원과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 인터류킨 2 αβγ 수용체(IL-2Rαβγ)의 활성화를 초래하는 IL-2 폴리펩티드로의 IL-2Rα 서브유닛의 동원을 증가시키는, 폴리펩티드 상의 소정의 위치에서 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함하는 단리되고 변형된 인터류킨 2(IL-2) 폴리펩티드를 포함하는 키트가 본원에 개시되며, 여기서, 상기 동원의 증가는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 의한 IL-2Rα 서브유닛의 동원과 비교된다.
일부 실시 형태에서, IL-2Rβγ에 대한 수용체 신호전달 효력이 감소된 변형된 IL-2 폴리펩티드는 CD4+ T 조절(Treg) 세포를 확장시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 IL-2Rβγ를 이용한 IL-2의 수용체 신호전달 효력을 손상시키거나 차단하거나, 또는 IL-2/IL-2Rβ 복합체에 대한 IL-2Rγ 서브유닛 동원을 감소시킨다. 일부 실시 형태에서, 변형 IL-2/IL-2Rαβγ 복합체에 의한 CD4+ Treg 세포 증식은 야생형 IL-2 폴리펩티드의 것과 동등하거나 이보다 더 크다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2/IL-2Rαβγ 복합체는 동물 모델에서 질환 과정을 조절하기에 충분한 집단으로의 CD4+ Treg 세포의 증식을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rβγ에 대한 제1 수용체 신호전달 효력 및 IL-2Rαβγ에 대한 제2 수용체 신호전달 효력을 나타내며, 여기서, 제1 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 50배, 100배, 500배, 1000배, 또는 그 이하로 더 낮다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 제1 수용체 신호전달 효력은 IL-2Rβγ에 대하여 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 더 낮다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 제2 수용체 신호전달 효력은 IL-2Rαβγ에 대하여 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 더 낮다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 인터류킨 2 αβγ 수용체(IL-2Rαβγ)의 활성화를 초래하는 IL-2 폴리펩티드로의 IL-2Rα 서브유닛의 동원을 추가로 증가시키며, 여기서, 상기 동원의 증가는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 의한 IL-2Rα 서브유닛의 동원과 비교된다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2/IL-2Rβ 복합체에 대한 IL-2Rγ 서브유닛의 동원을 추가로 감소시키며, 여기서, 상기 동원의 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 의한 IL-2Rβ 서브유닛 및/또는 IL-2Rγ 서브유닛의 동원과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 상기 변형된 IL-2 폴리펩티드에서의 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, 및 Y107로부터 선택되며, 여기서, 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 위치 35, 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 64, 65, 68, 69, 71, 72, 104, 105, 및 107에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, P65, E68, 및 L72로부터 선택되고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 위치 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 65, 68, 및 72에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 K35, K64, V69, N71, M104, C105, 및 Y107로부터 선택되고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 위치 35, 64, 69, 71, 104, 105, 및 107에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 T37, R38, T41, Y45, E61, E68, 및 L72로부터 선택되고, 여기서, 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 위치 37, 38, 41, 45, 61, 68, 및 72에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 F42, K43, F44, E62, 및 P65로부터 선택되고, 여기서, 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 위치 42, 43, 44, 62, 및 65에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 P2, T3, S4, S5, S6, T7, K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, R81, P82, R83, D84, S87, N88, N89, V91, I92, L94, E95, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, T113, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, 및 T133으로부터 선택되고, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, R81, D84, S87, N88, V91, I92, L94, E95, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, 및 T133으로부터 선택되고, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 P2, T3, S4, S5, S6, T7, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, P82, R83, N89, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, 및 T113으로부터 선택되고, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 K8, K9, L12, E15, H16, L19, D20, Q22, M23, N26, D84, N88, E95, 및 Q126으로부터 선택되고, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 K8, K9, 및 H16으로부터 선택되고, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 Q22, N26, N88, 및 Q126으로부터 선택되며, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 E15, D20, D84, 및 E95로부터 선택되며, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 L12, L19, 및 M23으로부터 선택되며, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 Q22 및 N26으로부터 선택되며, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다.
키트 및 제조 물품(일반적)
일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 라이신 유사체이거나; 방향족 측쇄를 포함하거나; 아지도 기를 포함하거나; 알킨 기를 포함하거나; 알데히드 또는 케톤 기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 방향족 측쇄를 포함하지 않는다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 N6-((2-아지도에톡시)-카르보닐)-L-라이신(AzK; 이의 화학 구조는 도 3c에 화합물 90으로 예시됨), N6-(프로파르길옥시)-카르보닐)-L-라이신(PraK; 이의 화학 구조는 도 3c에 화합물 112로 예시됨), BCN-L-라이신, 노르보르넨 라이신, TCO-라이신, 메틸테트라진 라이신, 알릴옥시카르보닐라이신, 2-아미노-8-옥소노난산, 2-아미노-8-옥소옥탄산, p-아세틸-L-페닐알라닌, p-아지도메틸-L-페닐알라닌(pAMF), p-요오도-L-페닐알라닌, m-아세틸페닐알라닌, 2-아미노-8-옥소노난산, p-프로파르길옥시페닐알라닌, p-프로파르길-페닐알라닌, 3-메틸-페닐알라닌, L-도파, 플루오르화 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, p-아지도-L-페닐알라닌, p-아실-L-페닐알라닌, p-벤조일-L-페닐알라닌, p-브로모페닐알라닌, p-아미노-L- 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, O-알릴티로신, O-메틸-L-티로신, O-4-알릴-L-티로신, 4-프로필-L-티로신, 포스포노티로신, 트리-O-아세틸-GlcNAcp-세린, L-포스포세린, 포스포노세린, L-3-(2-나프틸)알라닌, 2-아미노-3-((2-((3-(벤질옥시)-3-옥소프로필)아미노)에틸)셀라닐)프로판산, 2-아미노-3-(페닐셀라닐)프로판산, 또는 셀레노시스테인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 N6-((2-아지도에톡시)-카르보닐)-L-라이신(AzK; 이의 화학 구조는 도 3c에 화합물 90으로 예시됨) 또는 N6-(프로파르길옥시)-카르보닐)-L-라이신(PraK; 이의 화학 구조는 도 3c에 화합물 112로 예시됨)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 N6-((2-아지도에톡시)-카르보닐)-L-라이신(AzK; 이의 화학 구조는 도 3c에 화합물 90으로 예시됨)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 N6-(프로파르길옥시)-카르보닐)-L-라이신(PraK; 이의 화학 구조는 도 3c에 화합물 112로 예시됨)을 포함한다.
일부 실시 형태에서에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 수용성 중합체를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티와의 반응을 허용하는 알킨을 포함하며, 수용성 중합체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리(프로필렌 글리콜)(PPG), 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체, 폴리(옥시에틸화 폴리올), 폴리(올레핀 알코올), 폴리(비닐피롤리돈), 폴리(하이드록시알킬메타크릴아미드), 폴리(하이드록시알킬메타크릴레이트), 폴리(사카라이드), 폴리(α-하이드록시산), 폴리(비닐 알코올), 폴리포스파젠, 폴리옥사졸린(POZ), 폴리(N-아크릴로일모르폴린), 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 PEG 분자를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 수용성 중합체, 지질, 단백질, 및/또는 펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리(프로필렌 글리콜)(PPG), 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체, 폴리(옥시에틸화 폴리올), 폴리(올레핀 알코올), 폴리(비닐피롤리돈), 폴리(히드록시알킬메타크릴아미드), 폴리(히드록시알킬메타크릴레이트), 폴리(사카라이드), 폴리(α-히드록시산), 폴리(비닐 알코올), 폴리포스파젠, 폴리옥사졸린(POZ), 폴리(N-아크릴로일모르폴린), 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 PEG 분자를 포함한다.
일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 콘쥬게이팅 모이어티보다 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합되는 PEG 분자를 포함한다. 일부 경우에, 콘쥬게이팅 모이어티는 콘쥬게이팅 모이어티보다 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합되는 PEG 분자를 포함한다.
일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, PEG 분자는 선형 PEG이다. 일부 실시 형태에서, PEG 분자는 분지형 PEG이다. 일부 실시 형태에서, PEG는 약 2,000~50,000 달톤(Da)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG는 약 5,000 Da, 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000 Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 경우에, PEG는 5,000 Da이다. 일부 경우에, PEG는 10,000 Da이다. 일부 경우에, PEG는 15,000 Da이다. 일부 경우에, PEG는 20,000 Da이다. 일부 경우에, PEG는 25,000 Da이다. 일부 경우에, PEG는 30,000 Da이다. 일부 경우에, PEG는 35,000 Da이다. 일부 경우에, PEG는 40,000 Da이다. 일부 경우에, PEG는 45,000 Da이다. 일부 경우에, PEG는 50,000 Da이다.
본원에 제공된 제조 물품은 패키징 재료를 포함한다. 약학적 패키징 재료의 예는 블리스터 팩, 병, 튜브, 백, 용기, 병, 및 선택된 제형 및 의도된 투여 및 치료 방식에 적합한 임의의 패키징 재료를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
예를 들어, 용기(들)는 K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, 또는 Y107을 포함하는 하나 이상의 변형된 IL-2 폴리펩티드를 포함하며, 이때 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 35, 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 64, 65, 68, 69, 71, 72, 104, 105, 및 107에 부합된다. 일부 실시 형태에서, T37(이때 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 위치 35, 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 64, 65, 68, 69, 71, 72, 104, 105, 및 107에 상응함)을 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 38에 상응하는 잔기 R38에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 41에 상응하는 잔기 T41에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 43에 상응하는 잔기 K43에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 44에 상응하는 잔기 F44에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 45에 상응하는 잔기 Y45에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 60에 상응하는 잔기 E60에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 61에 상응하는 잔기 E61에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 62에 상응하는 잔기 E62에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 64에 상응하는 잔기 K64에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 68에 상응하는 잔기 E68에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 69에 상응하는 잔기 V69에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 71에 상응하는 잔기 N71에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 72에 상응하는 잔기 L72에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 104에 상응하는 잔기 M104에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 105에 상응하는 잔기 C105에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 1의 위치 107에 상응하는 잔기 Y107에서의 돌연변이를 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드는 분자량이 약 2,000~50,000 Da인 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 5,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 10,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 15,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 20,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 25,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 30,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 35,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 40,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 45,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 분자량은 50,000 Da을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 경우에, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않으며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다.
전형적으로 키트는 내용물을 열거한 라벨 및/또는 사용 설명서, 및 사용 설명서가 있는 패키지 인서트를 포함한다. 전형적으로 설명서 세트도 포함될 것이다.
일 실시 형태에서, 라벨은 용기 상에 있거나 이와 결부된다. 일 실시 형태에서, 라벨을 형성하는 철자, 숫자 또는 다른 부호가 용기 자체에 부착되거나 성형되거나 에칭될 때 라벨은 용기 상에 있는 것이고, 라벨이 예를 들어 패키지 인서트로서 용기를 또한 보유하는 리셉터클 또는 캐리어 내에 존재할 때 라벨은 용기와 결부된 것이다. 일 실시 형태에서, 라벨은 내용물이 특정 치료 분야에 사용된다는 것을 나타내도록 사용된다. 라벨은 또한 예컨대 본원에 기술된 방법에서 내용물의 사용을 위한 지시를 나타낸다.
특정 실시 형태에서, 제약 조성물은 본원에 제공된 화합물을 함유하는 하나 이상의 단위 투여 형태를 함유하는 팩 또는 디스펜서 장치 형태로 제공된다. 팩은 예를 들어 금속 또는 플라스틱 호일, 예컨대 블리스터 팩을 함유한다. 일 실시 형태에서, 팩 또는 디스펜서 장치는 투여 설명서를 동반한다. 일 실시 형태에서, 팩 또는 디스펜서는 또한 의약품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관이 정한 형태의 용기와 결부된 안내문이 동반되고, 이 안내문은 인간 또는 수의학적 투여를 위한 약물의 형태의 기관에 의한 허가를 반영한다. 이러한 안내문은 예를 들어 미국 식품의약청이 허가한 라벨링 또는 허가된 제품 인서트이다. 일 실시 형태에서, 상용성 약학적 담체에서 제형화된 본원에 제공된 화합물을 함유하는 조성물이 또한 제조되고 적절한 용기에 배치되고 표시된 병태의 치료에 대해 라벨링된다.
실시 형태
특정 실시 형태에서, 사이토카인 콘쥬게이트 및 하나 이상의 적응증의 치료에서의 용도가 본원에 개시된다. 일부 실시 형태에서, 또한 본원에 기술된 것은 인터류킨 2(IL-2) 콘쥬게이트 및 하나 이상의 적응증의 치료에서의 용도를 포함한다. 일부 경우에, 상기 하나 이상의 적응증은 암, 병원성 감염, 또는 자가면역 질환을 포함한다. 일부 경우에, IL-2와 IL-2 수용체 사이의 상호작용을 조절하여 특정 T 세포, 자연 살해(NK) 세포 및/또는 자연 살해 T(NKT) 세포 집단을 자극하거나 확장하는 방법이 본원에 기술된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 원하는 사이토카인-수용체 상호작용 및 면역 세포 확장을 포함한 약동학적 특성에 영향을 주지 않으면서 생체 내 혈장 반감기의 증가 또는 감소에 기여하는 콘쥬게이팅 모이어티(예를 들어, PEG)를 포함한다. 추가의 경우, 본원에 기술된 상기 하나 이상의 적응증을 치료하기 위한 입양 세포 요법제를 개발하기 위한 시약으로서 유용할 수 있는 본원에 기술된 하나 이상의 인터류킨 콘쥬게이트(예를 들어, IL-2 콘쥬게이트)를 포함하는 제약 조성물 및 키트가 본원에 추가로 기술된다.
본원에 개시된 양태는 변형된 IL-2 폴리펩티드와 인터류킨 2 수용체 α(IL-2Rα) 사이의 결합을 감소시키지만, IL-2/IL-2Rβγ 복합체를 형성하도록 인터류킨 2 βγ 수용체(IL-2Rβγ) 신호전달 복합체와의 상당한 결합을 보유하는, 폴리펩티드 상의 소정 위치에서 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함하는 단리되고 변형된 인터류킨 2(IL-2) 폴리펩티드를 제공하며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, 상기 수용체 신호전달 효력 차이는 5배 미만, 4배 미만, 3배 미만, 2배 미만, 또는 1배 미만이다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, Y107로부터 선택되며, 여기서, 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 위치 35, 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 64, 65, 68, 69, 71, 72, 104, 105, 및 107에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, P65, E68, 및 L72로부터 선택되고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 위치 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 65, 68, 및 72에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 K35, K64, V69, N71, M104, C105, 및 Y107로부터 선택되고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 위치 35, 64, 69, 71, 104, 105, 및 107에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 T37, R38, T41, Y45, E61, E68, 및 L72로부터 선택되고, 여기서, 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 위치 37, 38, 41, 45, 61, 68, 및 72에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 F42, K43, F44, E62, 및 P65로부터 선택되고, 여기서, 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 위치 42, 43, 44, 62, 및 65에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 라이신 유사체이거나; 방향족 측쇄를 포함하거나; 아지도 기를 포함하거나; 알킨 기를 포함하거나; 알데히드 또는 케톤 기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 방향족 측쇄를 포함하지 않는다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 N6-((2-아지도에톡시)-카르보닐)-L-라이신(AzK; 이의 화학 구조는 도 3c에 화합물 90으로 예시됨), N6-(프로파르길옥시)-카르보닐-L-라이신(PraK), BCN-L-라이신, 노르보르넨 라이신, TCO-라이신, 메틸테트라진 라이신, 알릴옥시카르보닐라이신, 2-아미노-8-옥소노난산, 2-아미노-8-옥소옥탄산, p-아세틸-L-페닐알라닌, p-아지도메틸-L-페닐알라닌(p MF), p-요오도-L-페닐알라닌, m-아세틸페닐알라닌, 2-아미노-8-옥소노난산, p-프로파르길옥시페닐알라닌, p-프로파르길-페닐알라닌, 3-메틸-페닐알라닌, L-도파, 플루오르화 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, p-아지도-L-페닐알라닌, p-아실-L-페닐알라닌, p-벤조일-L-페닐알라닌, p-브로모페닐알라닌, p-아미노-L- 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, O-알릴티로신, O-메틸-L-티로신, O-4-알릴-L-티로신, 4-프로필-L-티로신, 포스포노티로신, 트리-O-아세틸-GlcNcp-세린, L-포스포세린, 포스포노세린, L-3-(2-나프틸)알라닌, 2-아미노-3-((2-((3-(벤질옥시)-3-옥소프로필)아미노)에틸)셀라닐)프로판산, 2-아미노-3-(페닐셀라닐)프로판산, 또는 셀레노시스테인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 직교성 tRNA 신테타아제/tRNA 쌍에 의해, 변형된 IL-2 폴리펩티드에 통합된다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제/tRNA 쌍의 직교성 tRNA는 적어도 하나의 비천연 핵염기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 적어도 하나의 비천연 아미노산을 통해 콘쥬게이팅 모이어티에 공유 부착된다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 수용성 중합체, 지질, 단백질, 및/또는 펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리(프로필렌 글리콜)(PPG), 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체, 폴리(옥시에틸화 폴리올), 폴리(올레핀 알코올), 폴리(비닐피롤리돈), 폴리(히드록시알킬메타크릴아미드), 폴리(히드록시알킬메타크릴레이트), 폴리(사카라이드), 폴리(α-히드록시산), 폴리(비닐 알코올), 폴리포스파젠, 폴리옥사졸린(POZ), 폴리(N-아크릴로일모르폴린), 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 PEG 분자를 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG 분자는 선형 PEG이다. 일부 실시 형태에서, PEG 분자는 분지형 PEG이다. 일부 실시 형태에서, PEG는 약 2,000~50,000 달톤(Da)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG는 약 5,000 Da, 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000 Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 상기 분자량은 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 폴리사카라이드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 폴리사카라이드는 덱스트란, 폴리시알산(PSA), 히알루론산(HA), 아밀로스, 헤파린, 헤파란 술페이트(HS), 덱스트린, 또는 히드록시에틸-스타치(HES)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 지질은 지방산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 지방산은 약 6개 내지 약 26개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 24개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 22개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 20개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 18개의 탄소 원자, 약 20개 내지 약 26개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 26개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 24개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 22개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 20개의 탄소 원자, 또는 약 12개 내지 약 18개의 탄소 원자를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 지방산은 포화 지방산이다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 알부민, 트랜스페린, 또는 트랜스티레틴을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 TLR 작용제를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 항체 또는 이의 결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 결합 단편은 항체의 Fc 부분을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드는 XTEN 펩티드, 글리신-농후 호모아미노산 중합체(HAP), PAS 폴리펩티드, 엘라스틴-유사 폴리펩티드(ELP), CTP 펩티드, 또는 젤라틴-유사 단백질(GLK) 중합체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 링커를 통해 변형된 IL-10의 적어도 하나의 비천연 아미노산에 간접적으로 결합된다. 일부 실시 형태에서, 링커는 동종이작용성 링커, 이종이작용성 링커, 제로-길이 링커, 절단 가능한 또는 절단 불가능한 디펩티드 링커, 말레이미드 기, 스페이서, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 결합 친화도의 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 IL-2Rα에 대한 결합 친화도의 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 95% 또는 100%의 감소이다. 일부 실시 형태에서, 결합 친화도의 감소는 IL-2Rα에 대해 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 약 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 9배, 10배, 또는 그 이상이다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 전장 IL-2 폴리펩티드의 기능적 활성 단편; 재조합 IL-2 폴리펩티드; 또는 재조합 인간 IL-2 폴리펩티드이다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 N-말단 결실, C-말단 결실, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, N-말단 결실은 N-말단으로부터의 처음 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 20개, 25개, 또는 30개 잔기의 결실을 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다. 일부 실시 형태에서, C-말단 결실은 C-말단으로부터의 마지막 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 20개, 또는 그 이상의 잔기의 결실을 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다. 일부 실시 형태에서, 기능적 활성 단편은 IL-2 영역 10~133, 20~133, 30~133, 10~130, 20~130, 30~130, 10~125, 20~125, 30~125, 1~130, 또는 1~125를 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1에 대하여 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2Rα에 대한 결합 친화도가 감소된 변형 IL-2 폴리펩티드는 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, CD8+ T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 자연 살해 T(NKT) 세포 집단, 또는 이들의 조합을 확장시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티 또는 비천연 아미노산은 IL-2와 IL-2Rα의 결합을 손상시키거나 차단한다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드에 의한 IL-2Rβγ 복합체를 통한 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 자연 살해 T(NKT) 세포 집단의 활성화는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 상기 세포 집단의 활성화의 유의한 효력을 유지한다. 일부 실시 형태에서, IL-2Rβγ 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력은 IL-2Rβγ 복합체에 대한 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 더 높다. 일부 실시 형태에서, IL-2Rβγ 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력은 IL-2Rβγ 복합체에 대한 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 더 낮다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rβγ에 대한 제1 수용체 신호전달 효력 및 IL-2Rαβγ에 대한 제2 수용체 신호전달 효력을 나타내며, 제1 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 50배, 100배, 500배, 또는 그 이상 더 높고, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 제1 수용체 신호전달 효력은 IL-2Rβγ에 대해 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 더 높고, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 제2 수용체 신호전달 효력은 IL-2Rαβγ에 대해 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 더 낮다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 제1 수용체 신호전달 효력은 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 적어도 1배 더 낮다.
본원에 개시된 양태는 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함하는 단리되고 변형된 인터류킨 2(IL-2) 폴리펩티드를 제공하며, 여기서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2βγ 신호전달 복합체에 대한 제1 수용체 신호전달 효력 및 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 제2 수용체 신호전달 효력을 나타내며, 제1 수용체 신호전달 효력과 제2 수용체 신호전달 효력의 차이는 10배 미만이다. 일부 실시 형태에서, 상기 수용체 신호전달 효력 차이는 5배 미만, 4배 미만, 3배 미만, 2배 미만, 또는 1배 미만이다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, Y107로부터 선택되며, 여기서, 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 위치 35, 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 64, 65, 68, 69, 71, 72, 104, 105, 및 107에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, P65, E68, 및 L72로부터 선택되고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 위치 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 65, 68, 및 72에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 K35, K64, V69, N71, M104, C105, 및 Y107로부터 선택되고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 위치 35, 64, 69, 71, 104, 105, 및 107에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 T37, R38, T41, Y45, E61, E68, 및 L72로부터 선택되고, 여기서, 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 위치 37, 38, 41, 45, 61, 68, 및 72에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 F42, K43, F44, E62, 및 P65로부터 선택되고, 여기서, 잔기 위치는 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 위치 42, 43, 44, 62, 및 65에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 라이신 유사체이거나; 방향족 측쇄를 포함하거나; 아지도 기를 포함하거나; 알킨 기를 포함하거나; 알데히드 또는 케톤 기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 방향족 측쇄를 포함하지 않는다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 N6-((2-아지도에톡시)-카르보닐)-L-라이신(AzK; 이의 화학 구조는 도 3c에 화합물 90으로 예시됨), N6-(프로파르길옥시)-카르보닐-L-라이신(PraK), BCN-L-라이신, 노르보르넨 라이신, TCO-라이신, 메틸테트라진 라이신, 알릴옥시카르보닐라이신, 2-아미노-8-옥소노난산, 2-아미노-8-옥소옥탄산, p-아세틸-L-페닐알라닌, p-아지도메틸-L-페닐알라닌(pAMF), p-요오도-L-페닐알라닌, m-아세틸페닐알라닌, 2-아미노-8-옥소노난산, p-프로파르길옥시페닐알라닌, p-프로파르길-페닐알라닌, 3-메틸-페닐알라닌, L-도파, 플루오르화 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, p-아지도-L-페닐알라닌, p-아실-L-페닐알라닌, p-벤조일-L-페닐알라닌, p-브로모페닐알라닌, p-아미노-L- 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, O-알릴티로신, O-메틸-L-티로신, O-4-알릴-L-티로신, 4-프로필-L-티로신, 포스포노티로신, 트리-O-아세틸-GlcNAcp-세린, L-포스포세린, 포스포노세린, L-3-(2-나프틸)알라닌, 2-아미노-3-((2-((3-(벤질옥시)-3-옥소프로필)아미노)에틸)셀라닐)프로판산, 2-아미노-3-(페닐셀라닐)프로판산, 또는 셀레노시스테인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 직교성 tRNA 신테타아제/tRNA 쌍에 의해, 변형된 IL-2 폴리펩티드에 통합된다. 일부 실시 형태에서, 직교성 신테타아제/tRNA 쌍의 직교성 tRNA는 적어도 하나의 비천연 핵염기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 적어도 하나의 비천연 아미노산을 통해 콘쥬게이팅 모이어티에 공유 부착된다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 수용성 중합체, 지질, 단백질, 및/또는 펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리(프로필렌 글리콜)(PPG), 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체, 폴리(옥시에틸화 폴리올), 폴리(올레핀 알코올), 폴리(비닐피롤리돈), 폴리(히드록시알킬메타크릴아미드), 폴리(히드록시알킬메타크릴레이트), 폴리(사카라이드), 폴리(α-히드록시산), 폴리(비닐 알코올), 폴리포스파젠, 폴리옥사졸린(POZ), 폴리(N-아크릴로일모르폴린), 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 PEG 분자를 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG 분자는 선형 PEG이다. 일부 실시 형태에서, PEG 분자는 분지형 PEG이다. 일부 실시 형태에서, PEG는 약 2,000~50,000 달톤(Da)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG는 약 5,000 Da, 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000 Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 상기 분자량은 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 폴리사카라이드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 폴리사카라이드는 덱스트란, 폴리시알산(PSA), 히알루론산(HA), 아밀로스, 헤파린, 헤파란 술페이트(HS), 덱스트린, 또는 히드록시에틸-스타치(HES)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 지질은 지방산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 지방산은 약 6개 내지 약 26개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 24개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 22개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 20개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 18개의 탄소 원자, 약 20개 내지 약 26개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 26개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 24개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 22개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 20개의 탄소 원자, 또는 약 12개 내지 약 18개의 탄소 원자를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 지방산은 포화 지방산이다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 알부민, 트랜스페린, 또는 트랜스티레틴을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 TLR 작용제를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 항체 또는 이의 결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 결합 단편은 항체의 Fc 부분을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드는 XTEN 펩티드, 글리신-농후 호모아미노산 중합체(HAP), PAS 폴리펩티드, 엘라스틴-유사 폴리펩티드(ELP), CTP 펩티드, 또는 젤라틴-유사 단백질(GLK) 중합체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 링커를 통해 변형된 IL-10의 적어도 하나의 비천연 아미노산에 간접적으로 결합된다. 일부 실시 형태에서, 링커는 동종이작용성 링커, 이종이작용성 링커, 제로-길이 링커, 절단 가능한 또는 절단 불가능한 디펩티드 링커, 말레이미드 기, 스페이서, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 결합 친화도의 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 IL-2Rα에 대한 결합 친화도의 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 95% 또는 100%의 감소이다. 일부 실시 형태에서, 결합 친화도의 감소는 IL-2Rα에 대해 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 약 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 9배, 10배, 또는 그 이상이다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 전장 IL-2 폴리펩티드의 기능적 활성 단편; 재조합 IL-2 폴리펩티드; 또는 재조합 인간 IL-2 폴리펩티드이다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 N-말단 결실, C-말단 결실, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, N-말단 결실은 N-말단으로부터의 처음 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 20개, 25개, 또는 30개 잔기의 결실을 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다. 일부 실시 형태에서, C-말단 결실은 C-말단으로부터의 마지막 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 20개, 또는 그 이상의 잔기의 결실을 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다. 일부 실시 형태에서, 기능적 활성 단편은 IL-2 영역 10~133, 20~133, 30~133, 10~130, 20~130, 30~130, 10~125, 20~125, 30~125, 1~130, 또는 1~125를 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1에 대하여 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2Rα에 대한 결합 친화도가 감소된 변형 IL-2 폴리펩티드는 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, CD8+ T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 자연 살해 T(NKT) 세포 집단, 또는 이들의 조합을 확장시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티 또는 비천연 아미노산은 IL-2와 IL-2Rα의 결합을 손상시키거나 차단한다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드에 의한 IL-2Rβγ 복합체를 통한 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 자연 살해 T(NKT) 세포 집단의 활성화는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 상기 세포 집단의 활성화의 유의한 효력을 유지한다. 일부 실시 형태에서, IL-2Rβγ 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력은 IL-2Rβγ 복합체에 대한 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 더 높다. 일부 실시 형태에서, IL-2Rβγ 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력은 IL-2Rβγ 복합체에 대한 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 더 낮다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rβγ에 대한 제1 수용체 신호전달 효력 및 IL-2Rαβγ에 대한 제2 수용체 신호전달 효력을 나타내며, 제1 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 50배, 100배, 500배, 또는 그 이상 더 높고, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 제1 수용체 신호전달 효력은 IL-2Rβγ에 대해 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 더 높고, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 제2 수용체 신호전달 효력은 IL-2Rαβγ에 대해 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 더 낮다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 제1 수용체 신호전달 효력은 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 적어도 1배 더 낮다.
본원에 개시된 양태는 콘쥬게이팅 모이어티에 공유 결합된 비천연 아미노산을 포함하는 인터류킨 2(IL-2) 콘쥬게이트를 제공하며, 여기서, 비천연 아미노산은 영역 35~107에 위치하고, 영역 35~107은 서열 번호 1의 잔기 K35~Y107에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 영역 42에 위치하며, 영역 42는 잔기 F42에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 2,000~50,000 달톤(Da)의 분자량을 갖는 수용성 중합체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 5,000 Da, 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000 Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da의 분자량을 갖는 수용성 중합체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리(프로필렌 글리콜)(PPG), 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체, 폴리(옥시에틸화 폴리올), 폴리(올레핀 알코올), 폴리(비닐피롤리돈), 폴리(히드록시알킬메타크릴아미드), 폴리(히드록시알킬메타크릴레이트), 폴리(사카라이드), 폴리(α-히드록시산), 폴리(비닐 알코올), 폴리포스파젠, 폴리옥사졸린(POZ), 폴리(N-아크릴로일모르폴린), 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 분자량은 IL-2 콘쥬게이트의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 61에 상응하는 잔기 E61에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다.
본원에 개시된 양태는 인터류킨 2 βγ 수용체(IL-2Rβγ) 결합 단백질을 제공하며, 여기서, 상기 결합 단백질의 인터류킨 2 α 수용체(IL-2Rα)에 대한 결합 친화성은 야생형 인간 IL-2(hIL- 2)의 결합 친화성보다 더 작고, 상기 결합 단백질은 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 결합 단백질은 변형된 IL-2 폴리펩티드 또는 이의 기능적 활성 단편이며, 여기서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 영역 35~107에 위치하며, 영역 35~107은 서열 번호 1의 잔기 K35~Y107에 상응한다.
본원에 개시된 양태는 비천연 아미노산을 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드 및 IL-2Rβγ를 포함하는 IL-2/IL-2Rβγ 복합체를 제공하며, 여기서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rα에 대해 감소된 결합 친화도를 가지며, 감소된 결합 친화도는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합 친화도와 비교된다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 비천연 아미노산에 공유적으로 부착된 콘쥬게이팅 모이어티를 추가로 포함한다.
본원에 개시된 양태는 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포의 활성화제로서, 세포 집단에서 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포를 선택적으로 확장시키는, 활성화제를 제공하며, 여기서, 상기 활성화제는 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함하는 변형된 인터류킨 2(IL-2) 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 활성화제는, 상기 활성화제를 상기 세포 집단과 접촉시키는 경우, CD4+ T 조절(Treg) 세포를 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, 또는 0.1% 미만만큼 확장시킨다. 일부 실시 형태에서, 상기 활성화제는 상기 세포 집단에서 Treg 세포를 확장시키지 않는다. 일부 실시 형태에서, 상기 세포 집단은 생체 내 세포 집단이다. 일부 실시 형태에서, 상기 세포 집단은 시험관 내 세포 집단이다. 일부 실시 형태에서, 상기 세포 집단은 생체 외 세포 집단이다.
본원에 개시된 양태는 다음을 포함하는 제약 조성물을 제공한다: 본원에 기술된 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트, 본원에 기술된 IL-2Rβγ 결합 단백질 또는 본원에 기술된 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포의 활성화제; 및 제약상 허용가능한 부형제. 일부 실시 형태에서, 제약 조성물은 전신 전달용으로 제형화된다. 일부 실시 형태에서, 제약 조성물은 비경구 투여용으로 제형화된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 10,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 15,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 20,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 25,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 30,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 10,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 15,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 20,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 25,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 30,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 62에 상응하는 잔기 E62에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 62에 상응하는 잔기 E62에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 10,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 62에 상응하는 잔기 E62에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 15,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 62에 상응하는 잔기 E62에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 20,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 62에 상응하는 잔기 E62에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 25,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 62에 상응하는 잔기 E62에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 30,000 달톤(Da)을 포함하는 분자량을 갖는다.
본원에 개시된 양태는 질환 또는 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하는 방법을 제공하며, 본 방법은 본원에 기술된 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트, 본원에 기술된 IL-2Rβγ 결합 단백질, 본원에 기술된 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포의 활성화제, 또는 본원에 기술된 제약 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 질환 또는 병태는 암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 고형 종양 암이다. 일부 실시 형태에서, 고형 종양 암은 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 결장직장암, 식도암, 안암, 두경부암, 신장암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 또는 전립선암이다. 일부 실시 형태에서, 암은 혈액 악성종양이다. 일부 실시 형태에서, 혈액 악성종양은 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소형 림프구성 림프종(SLL), 소포성 림프종(FL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 다발성 골수종, 결절외 변연부 B 세포 림프종, 결절 변연부 B 세포 림프종, 버킷 림프종, 비버킷 고등급 B 세포 림프종, 원발성 종격 B 세포 림프종(PMBL), 면역모구성 대세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, B 세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포 림프종, 비장 변연부 림프종, 형질세포 골수종, 형질세포종, 종격(흉선) 거대 B 세포 림프종, 혈관내 거대 B 세포 림프종, 원발성 삼출 림프종, 또는 림프종양 육아종증이다. 일부 실시 형태에서, 질환 또는 병태는 병원성 감염을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 병원성 감염은 레트로바이러스, 바이러스, 데옥시리보핵산(DNA) 바이러스 또는 리보핵산(RNA) 바이러스, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, RNA 바이러스는 네거티브 센스 단일 가닥(ss) RNA 바이러스, 포지티브 센스 ssRNA 바이러스 또는 이중 가닥(ds) RNA 바이러스를 포함한다. 일부 실시 형태에서, DNA 바이러스는 단일 가닥(ss) DNA 바이러스 또는 이중 가닥(ds) DNA 바이러스를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 질환 또는 병태는 자가면역 질환을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 질환 또는 병태는 원형 탈모증, 자가면역성 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 피부근염, 1형 당뇨병, 소아 특발성 관절염, 사구체신염, 그레이브스병, 길랭-바레 증후군, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 중증 근무력증, 다발성 경화증, 천포창/유천포창, 악성 빈혈, 결절성 다발성 동맥염, 다발성 근염, 원발성 담즙성 간경변, 건선, 류마티스 관절염, 경피증, 쇼그렌 증후군, 전신성 홍반성 루푸스, 갑상선염, 포도막염, 백반증, 또는 베게너 육아종증, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 방법은 추가 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, IL-2 콘쥬게이트, IL-2Rβγ 결합 단백질, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 자연 살해 T(NKT) 세포의 활성화제, 또는 제약 조성물 및 추가 치료제가 동시에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, IL-2 콘쥬게이트, IL-2Rβγ 결합 단백질, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 자연 살해 T(NKT) 세포의 활성화제, 또는 제약 조성물 및 추가 치료제가 순차적으로 투여된다. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, IL-2 콘쥬게이트, IL-2Rβγ 결합 단백질, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 자연 살해 T(NKT) 세포의 활성화제, 또는 제약 조성물이 추가 치료제 전에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, IL-2 콘쥬게이트, IL-2Rβγ 결합 단백질, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포 또는 자연 살해 T(NKT) 세포의 활성화제, 또는 제약 조성물이 추가 치료제의 투여 후에 투여된다.
본원에 개시된 양태는 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포 집단을 확장시키는 방법을 제공하며, 본 방법은 하기 단계를 포함한다: 세포 집단을, IL-2Rβγ와의 복합체의 형성을 유도하기에 충분한 시간 동안, 본원에 기술된 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, 본원에 기술된 것 중 어느 하나의 IL-2 콘쥬게이트, 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트, 본원에 기술된 IL-2Rβγ 결합 단백질, 본원에 기술된 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, CD8+ T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포의 활성화제, 또는 본원에 기술된 제약 조성물과 접촉시키고, 이에 의해 Teff, CD8+ T 세포 및/도는 NK 세포 집단의 확장을 자극하는 단계. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, IL-2 콘쥬게이트, IL-2Rβγ 결합 단백질, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포의 활성화제, 또는 제약 조성물은 CD4+ T 조절(Treg) 세포를, 야생형 IL-2 폴리펩티드와 접촉된 CD3+ 세포 집단에서의 CD4+ Treg 세포의 확장과 비교하여, CD3+ 세포 집단에서 20%, 15%, 10%, 5%, 또는 1% 미만만큼 확장시킨다. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, IL-2 콘쥬게이트, IL-2Rβγ 결합 단백질, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포의 활성화제, 또는 제약 조성물은 세포 집단에서 CD4+ Treg 세포를 확장시키지 않는다. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, IL-2 콘쥬게이트, IL-2Rβγ 결합 단백질, CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포의 활성화제, 또는 제약 조성물과 함께 인큐베이션한 후의 Teff 세포:Treg 세포의 비는 대략 또는 적어도 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 20:1, 50:1, 또는 100:1이다. 일부 실시 형태에서, 방법은 생체 내 방법이다. 일부 실시 형태에서, 방법은 시험관 내 방법이다. 일부 실시 형태에서, 방법은 생체 외 방법이다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 인간이다.
본원에 개시된 양태는 본원에 기술된 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트, 본원에 기술된 IL-2Rβγ 결합 단백질, 본원에 기술된 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포의 활성화제, 및/또는 본원에 기술된 제약 조성물 중 하나 이상을 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1의 잔기 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 원하는 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 원하는 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1의 잔기 위치 62에 상응하는 잔기 E62에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 원하는 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 62에 상응하는 잔기 E62에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 원하는 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1의 잔기 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 원하는 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 원하는 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않는다.
본원에 개시된 양태는 본원에 기술된 IL-2 폴리펩티드, 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트, 본원에 기술된 IL-2Rβγ 결합 단백질, 본원에 기술된 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포의 활성화제를 코딩하는 하나 이상의 폴리핵산 서열, 및/또는 본원에 기술된 제약 조성물을 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1의 잔기 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 원하는 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 원하는 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1의 잔기 위치 62에 상응하는 잔기 E62에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da, 예를 들어, 5 kD 또는 5 kDa), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 원하는 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 62에 상응하는 잔기 E62에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 원하는 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1의 잔기 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 원하는 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rα에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγ 신호전달 복합체와의 원하는 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rα에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않는다.
본원에 개시된 양태는 면역 세포 및 본원에 기술된 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, 및/또는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트를 포함하는 세포 배양 시스템을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 면역 세포는 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 이펙터 나이브 및 기억 T 세포, CD8+ 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 자연 살해 T(NKT) 세포를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드 또는 IL-2 콘쥬게이트는 면역 세포의 확장을 향상시키는 데 효과적이다.
본원에 개시된 양태는 입양 세포 요법제, 본원에 기술된 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, 및/또는 본원에 기술된 IL-2 콘쥬게이트의 제조를 위한 시약을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, 및/또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, 및/또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 61에 상응하는 잔기 E61에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, 및/또는 IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 1의 잔기 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 상기 PEG의 분자량은 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드 및/또는 IL-2 콘쥬게이트의 용해도를 개선시키는 데 효과적이다. 일부 실시 형태에서, 상기 PEG의 분자량은 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드 및/또는 IL-2 콘쥬게이트의 안정성을 증가시키는 데 효과적이다. 일부 실시 형태에서, 상기 PEG의 분자량은 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드 및/또는 IL-2 콘쥬게이트의 입양 세포 요법제의 제조 효율을 향상시키는 데 효과적이다.
본원에 개시된 양태는 인터류킨 2 수용체 βγ(IL-2Rβγ)에 대한 수용체 신호전달 효력을 감소시키거나 IL-2/IL-2Rβ 복합체에 대한 IL-2Rγ 서브유닛의 동원을 감소시키지만, 인터류킨 2 αβγ 수용체(IL-2Rαβγ)의 상당한 활성화를 보유하는, 소정 위치에서 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함하는 단리되고 변형된 인터류킨 2(IL-2) 폴리펩티드를 제공하며, 여기서, 수용체 신호전달 효력의 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rβγ 사이의 수용체 신호전달 효력과 비교되고, 상기 동원은 야생형 IL-2 폴리펩티드에 의한 IL-2Rγ 서브유닛의 동원과 비교된다.
본원에 개시된 양태는 인터류킨 2 αβγ 수용체(IL-2Rαβγ)의 활성화를 초래하는 IL-2 폴리펩티드로의 IL-2Rα 서브유닛의 동원을 증가시키는, 소정의 위치에서 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함하는 단리되고 변형된 인터류킨 2(IL-2) 폴리펩티드를 제공하며, 여기서, 상기 동원의 증가는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 의한 IL-2Rα 서브유닛의 동원과 비교된다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 A108, D109, E110, T111, A112, T113, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, 및 T133으로부터 선택되며, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, R81, D84, S87, N88, V91, I92, L94, E95, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, 및 T133으로부터 선택되고, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 P2, T3, S4, S5, S6, T7, K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, R81, P82, R83, D84, S87, N88, N89, V91, I92, L94, E95, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107로부터 선택되며, 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, R81, D84, S87, N88, V91, I92, L94, E95, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, 및 T133으로부터 선택되며, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 P2, T3, S4, S5, S6, T7, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, P82, R83, N89, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, 및 T113으로부터 선택되고, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 K8, K9, L12, E15, H16, L19, D20, Q22, M23, N26, D84, N88, E95, 및 Q126으로부터 선택되고, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 K8, K9, 및 H16으로부터 선택되고, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 Q22, N26, N88, 및 Q126으로부터 선택되며, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 E15, D20, D84, 및 E95로부터 선택되며, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 L12, L19, 및 M23으로부터 선택되며, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산의 위치는 Q22 및 N26으로부터 선택되며, 여기서, 아미노산 잔기의 넘버링은 서열 번호 1에 상응한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 라이신 유사체이거나; 시스테인 유사체 또는 히스티딘 유사체이거나; 방향족 측쇄를 포함하거나; 아지도 기를 포함하거나; 알킨 기를 포함하거나; 알데히드 또는 케톤 기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 방향족 측쇄를 포함하지 않는다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 N6-((2-아지도에톡시)-카르보닐)-L-라이신(AzK; 이의 화학 구조는 도 3c에 화합물 90으로 예시됨), N6-(프로파르길옥시)-카르보닐-L-라이신(PraK), BCN-L-라이신, 노르보르넨 라이신, TCO-라이신, 메틸테트라진 라이신, 알릴옥시카르보닐라이신, 2-아미노-8-옥소노난산, 2-아미노-8-옥소옥탄산, p-아세틸-L-페닐알라닌, p-아지도메틸-L-페닐알라닌( AMF), p-요오도-L-페닐알라닌, m-아세틸페닐알라닌, 2-아미노-8-옥소노난산, p-프로파르길옥시페닐알라닌, p-프로파르길-페닐알라닌, 3-메틸-페닐알라닌, L-도파, 플루오르화 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, p-아지도-L-페닐알라닌, p-아실-L-페닐알라닌, p-벤조일-L-페닐알라닌, p-브로모페닐알라닌, p-아미노-L- 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, O-알릴티로신, O-메틸-L-티로신, O-4-알릴-L-티로신, 4-프로필-L-티로신, 포스포노티로신, 트리-O-아세틸-GlcNAcp-세린, L-포스포세린, 포스포노세린, L-3-(2-나프틸)알라닌, 2-아미노-3-((2-((3-(벤질옥시)-3-옥소프로필)아미노)에틸)셀라닐)프로판산, 2-아미노-3-(페닐셀라닐)프로판산, 또는 셀레노시스테인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 적어도 하나의 비천연 아미노산은 직교성 tRNA에 의해, 변형된 IL-2 폴리펩티드에 통합된다. 일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 직교성 tRNA는 적어도 하나의 비천연 핵염기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 적어도 하나의 비천연 아미노산을 통해 콘쥬게이팅 모이어티에 공유 부착된다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 수용성 중합체, 지질, 단백질, 또는 펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리(프로필렌 글리콜)(PPG), 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체, 폴리(옥시에틸화 폴리올), 폴리(올레핀 알코올), 폴리(비닐피롤리돈), 폴리(히드록시알킬메타크릴아미드), 폴리(히드록시알킬메타크릴레이트), 폴리(사카라이드), 폴리(α-히드록시산), 폴리(비닐 알코올), 폴리포스파젠, 폴리옥사졸린(POZ), 폴리(N-아크릴로일모르폴린), 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 PEG 분자를 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG 분자는 선형 PEG이다. 일부 실시 형태에서, PEG 분자는 분지형 PEG이다. 일부 실시 형태에서, PEG는 약 2,000~50,000 달톤(Da)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, PEG는 약 5,000 Da, 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000 Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 서열 번호 1의 잔기 위치 42에서 F42를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 서열 번호 1의 잔기 위치 65에서 P65를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 비천연 아미노산은 서열 번호 1의 잔기 위치 62에서 E62를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에서 상기 분자량은 IL-2 폴리펩티드의 생체 내 혈장 반감기를 적어도 부분적으로 결정한다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 작은 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 긴 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, 이 PEG는 더 큰 PEG의 생체 내 혈장 반감기와 비교하여 변형된 IL-2 폴리펩티드의 더 짧은 생체 내 혈장 반감기와 부합된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2βγ 또는 IL-2αβγ 신호전달 복합체에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 IL-2Rβγ에 대한 변형된 IL-2 폴리펩티드의 원하는 결합 감소 또는 IL-2Rβγα 신호전달 복합체와의 원하는 결합 유지에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치며, 여기서, IL-2Rβγ에 대한 결합 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rβγα 사이의 결합과 비교된다. 일부 실시 형태에서, PEG의 분자량은 변형된 IL-2 폴리펩티드/IL-2Rβγ 복합체의 형성에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시 형태에서, 수용성 중합체는 폴리사카라이드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 폴리사카라이드는 덱스트란, 폴리시알산(PSA), 히알루론산(HA), 아밀로스, 헤파린, 헤파란 술페이트(HS), 덱스트린, 또는 히드록시에틸-스타치(HES)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 지질은 지방산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 지방산은 약 6개 내지 약 26개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 24개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 22개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 20개의 탄소 원자, 약 6개 내지 약 18개의 탄소 원자, 약 20개 내지 약 26개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 26개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 24개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 22개의 탄소 원자, 약 12개 내지 약 20개의 탄소 원자, 또는 약 12개 내지 약 18개의 탄소 원자를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 지방산은 포화 지방산이다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 알부민, 트랜스페린, 또는 트랜스티레틴을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단백질은 항체 또는 이의 결합 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에서 항체 또는 이의 결합 단편은 항체의 Fc 부분을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 펩티드는 XTEN 펩티드, 글리신-농후 호모아미노산 중합체(HAP), PAS 폴리펩티드, 엘라스틴-유사 폴리펩티드(ELP), CTP 펩티드, 또는 젤라틴-유사 단백질(GLK) 중합체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 링커를 통해 변형된 IL-10의 적어도 하나의 비천연 아미노산에 간접적으로 결합된다. 일부 실시 형태에서, 링커는 동종이작용성 링커, 이종이작용성 링커, 제로-길이 링커, 절단 가능한 또는 절단 불가능한 디펩티드 링커, 말레이미드 기, 스페이서, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rβγ에 대한 수용체 신호전달 효력의 감소를 가지며, 상기 수용체 신호전달 효력의 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 IL-2Rβγ에 대하여 약 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 30배, 50배, 100배, 200배, 300배, 400배, 500배, 1000배, 또는 그 이상이다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 전장 IL-2 폴리펩티드의 기능적 활성 단편; 재조합 IL-2 폴리펩티드; 또는 재조합 인간 IL-2 폴리펩티드이다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 N-말단 결실, C-말단 결실, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 형태에서, N-말단 결실은 N-말단으로부터의 처음 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 20개, 25개, 또는 30개 잔기의 결실을 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다. 일부 실시 형태에서, C-말단 결실은 C-말단으로부터의 마지막 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 20개, 또는 그 이상의 잔기의 결실을 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다. 일부 실시 형태에서, 기능적 활성 단편은 IL-2 영역 10~133, 20~133, 30~133, 10~130, 20~130, 30~130, 10~125, 20~125, 30~125, 1~130, 또는 1~125를 포함하고, 여기서 잔기 위치는 서열 번호 1에서의 위치를 참조한다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2Rβγ에 대한 수용체 신호전달 효력이 감소된 변형된 IL-2 폴리펩티드는 CD4+ T 조절(Treg) 세포를 확장시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 콘쥬게이팅 모이어티는 IL-2Rβγ를 이용한 IL-2의 수용체 신호전달 효력을 손상시키거나 차단하거나, 또는 IL-2/IL-2Rβ 복합체에 대한 IL-2Rγ 서브유닛 동원을 감소시킨다. 일부 실시 형태에서, 변형 IL-2/IL-2Rαβγ 복합체에 의한 CD4+ Treg 세포 증식은 야생형 IL-2 폴리펩티드의 것과 동등하거나 이보다 더 크다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2/IL-2Rαβγ 복합체는 동물 모델에서 질환 과정을 조절하기에 충분한 집단으로의 CD4+ Treg 세포의 증식을 유도한다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rβγ에 대한 제1 수용체 신호전달 효력 및 IL-2Rαβγ에 대한 제2 수용체 신호전달 효력을 나타내며, 여기서, 제1 수용체 신호전달 효력은 제2 수용체 신호전달 효력보다 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 50배, 100배, 500배, 1000배, 또는 그 이하로 더 낮다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 제1 수용체 신호전달 효력은 IL-2Rβγ에 대하여 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 더 낮다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드의 제2 수용체 신호전달 효력은 IL-2Rαβγ에 대하여 야생형 IL-2 폴리펩티드의 수용체 신호전달 효력보다 더 낮다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 인터류킨 2 αβγ 수용체(IL-2Rαβγ)의 활성화를 초래하는 IL-2 폴리펩티드로의 IL-2Rα 서브유닛의 동원을 추가로 증가시키며, 여기서, 상기 동원의 증가는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 의한 IL-2Rα 서브유닛의 동원과 비교된다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2/IL-2Rβ 복합체에 대한 IL-2Rγ 서브유닛의 동원을 추가로 감소시키며, 여기서, 상기 동원의 감소는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 의한 IL-2Rβ 서브유닛 및/또는 IL-2Rγ 서브유닛의 동원과 비교된다.
본원에 개시된 양태는 인터류킨 2 αβγ 수용체(IL-2Rαβγ) 결합 단백질을 제공하며, 여기서, 상기 결합 단백질의 인터류킨 2 βγ 수용체(IL-2Rβγ)의 수용체 신호전달 효력은 야생형 인간 IL-2(hIL- 2)의 수용체 신호전달 효력보다 더 적고, 상기 결합 단백질은 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함한다.
본원에 개시된 양태는 인터류킨 2 αβγ 수용체(IL-2Rαβγ) 결합 단백질을 제공하며, 여기서, 상기 결합 단백질에 의한 IL-2/IL-2Rβ 복합체에 대한 IL-2Rγ 서브유닛의 동원은 야생형 인간 IL-2(hIL-2)의 것보다 더 적으며, 상기 결합 단백질은 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 결합 단백질은 변형된 IL-2 폴리펩티드 또는 이의 기능적 활성 단편이며, 여기서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함한다.
본원에 개시된 양태는 비천연 아미노산을 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드 및 IL-2Rαβγ를 포함하는 IL-2/IL-2Rαβγ 복합체를 제공하며, 여기서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 IL-2Rβγ에 대해 감소된 수용체 신호전달 효력을 가지며, 감소된 수용체 신호전달 효력은 야생형 IL-2 폴리펩티드와 IL-2Rβγ 사이의 결합 친화성과 비교된다. 일부 실시 형태에서, 상기 활성화제는 CD3+ 세포 집단과 접촉되는 경우 CD8+ 이펙터 T 세포 및/또는 자연 살해 세포를, 야생형 IL-2 폴리펩티드와 접촉된 CD3+ 세포 집단에서의 CD8+ 이펙터 T 세포 및/또는 자연 살해 세포의 확장에 비해, CD3+ 세포 집단에서 20%, 15%, 10%, 5%, 1% 또는 0.1% 미만만큼 확장시킨다. 일부 실시 형태에서, 상기 활성화제는 CD8+ 이펙터 T 세포 및/또는 자연 살해 세포를 확장시키지 않는다. 일부 실시 형태에서, 상기 세포 집단은 생체 내 세포 집단이다. 일부 실시 형태에서, 상기 세포 집단은 시험관 내 세포 집단이다. 일부 실시 형태에서, 상기 세포 집단은 생체 외 세포 집단이다.
본원에 개시된 양태는 비천연 아미노산을 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드 및 IL-2Rαβγ를 포함하는 IL-2/IL-2Rαβγ 복합체를 제공하며, 여기서, 상기 변형된 IL-2 폴리펩티드에 의한 IL-2/IL-2Rβ 복합체에 대한 IL-2Rγ 서브유닛의 동원은 야생형 IL-2 폴리펩티드의 것보다 더 적다. 일부 실시 형태에서, 변형된 IL-2 폴리펩티드는 비천연 아미노산에 공유적으로 부착된 콘쥬게이팅 모이어티를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 활성화제는 CD3+ 세포 집단과 접촉되는 경우 CD8+ 이펙터 T 세포 및/또는 자연 살해 세포를, 야생형 IL-2 폴리펩티드와 접촉된 CD3+ 세포 집단에서의 CD8+ 이펙터 T 세포 및/또는 자연 살해 세포의 확장에 비해, CD3+ 세포 집단에서 20%, 15%, 10%, 5%, 1% 또는 0.1% 미만만큼 확장시킨다. 일부 실시 형태에서, 상기 활성화제는 CD8+ 이펙터 T 세포 및/또는 자연 살해 세포를 확장시키지 않는다. 일부 실시 형태에서, 상기 세포 집단은 생체 내 세포 집단이다. 일부 실시 형태에서, 상기 세포 집단은 시험관 내 세포 집단이다. 일부 실시 형태에서, 상기 세포 집단은 생체 외 세포 집단이다.
본원에 개시된 양태는 세포 집단에서 CD4+ Treg 세포를 선택적으로 확장시키는 CD4+ Treg 세포 활성화제를 제공하며, 여기서, 상기 활성화제는 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함하는 변형된 IL-2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 활성화제는 CD3+ 세포 집단과 접촉되는 경우 CD8+ 이펙터 T 세포 및/또는 자연 살해 세포를, 야생형 IL-2 폴리펩티드와 접촉된 CD3+ 세포 집단에서의 CD8+ 이펙터 T 세포 및/또는 자연 살해 세포의 확장에 비해, CD3+ 세포 집단에서 20%, 15%, 10%, 5%, 1% 또는 0.1% 미만만큼 확장시킨다. 일부 실시 형태에서, 상기 활성화제는 CD8+ 이펙터 T 세포 및/또는 자연 살해 세포를 확장시키지 않는다. 일부 실시 형태에서, 상기 세포 집단은 생체 내 세포 집단이다. 일부 실시 형태에서, 상기 세포 집단은 시험관 내 세포 집단이다. 일부 실시 형태에서, 상기 세포 집단은 생체 외 세포 집단이다.
본원에 개시된 양태는 다음을 포함하는 제약 조성물을 제공한다: 본원에 기술된 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, 본원에 기술된 IL-2Rαβγ 결합 단백질, 또는 본원에 기술된 CD4+ Treg; 및 제약상 허용가능한 부형제. 일부 실시 형태에서, 제약 조성물은 전신 전달용으로 제형화된다. 일부 실시 형태에서, 제약 조성물은 비경구 투여용으로 제형화된다. 일부 실시 형태에서, 자가면역 질환 또는 장애는 원형 탈모증, 자가면역성 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 피부근염, 1형 당뇨병, 소아 특발성 관절염, 사구체신염, 그레이브스병, 길랭-바레 증후군, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 중증 근무력증, 다발성 경화증, 천포창/유천포창, 악성 빈혈, 결절성 다발성 동맥염, 다발성 근염, 원발성 담즙성 간경변, 건선, 류마티스 관절염, 경피증, 쇼그렌 증후군, 전신성 홍반성 루푸스, 갑상선염, 포도막염, 백반증, 또는 베게너 육아종증을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 방법은 추가 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 및 추가 치료제는 동시에 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 및 추가 치료제는 순차적으로 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 추가 치료제 전에 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 추가 치료제의 투여 후에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 인간이다.
본원에 개시된 양태는 자가면역 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하는 방법을 제공하며, 본 방법은 본원에 기술된 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, 본원에 기술된 IL-2Rαβγ 결합 단백질, 본원에 기술된 CD4+ Treg 세포, 또는 본원에 기술된 제약 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 자가면역 질환 또는 장애는 원형 탈모증, 자가면역성 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 피부근염, 1형 당뇨병, 소아 특발성 관절염, 사구체신염, 그레이브스병, 길랭-바레 증후군, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 중증 근무력증, 다발성 경화증, 천포창/유천포창, 악성 빈혈, 결절성 다발성 동맥염, 다발성 근염, 원발성 담즙성 간경변, 건선, 류마티스 관절염, 경피증, 쇼그렌 증후군, 전신성 홍반성 루푸스, 갑상선염, 포도막염, 백반증, 또는 베게너 육아종증을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 방법은 추가 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 및 추가 치료제는 동시에 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트 및 추가 치료제는 순차적으로 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 추가 치료제 전에 투여된다. 일부 실시 형태에서, IL-2 콘쥬게이트는 추가 치료제의 투여 후에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 인간이다.
본원에 개시된 양태는 CD4+ 조절 T(Treg) 세포 집단을 확장시키는 방법을 제공하며, 본 방법은 하기 단계를 포함한다: IL-2Rαβγ와의 복합체의 형성을 유도하기에 충분한 시간 동안 세포를 본원에 기술된 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, 본원에 기술된 IL-2Rαβγ 결합 단백질, 본원에 기술된 CD4+ Treg 세포, 또는 본원에 기술된 제약 조성물과 접촉시키고, 이에 의해 Treg 세포 집단의 확장을 자극하는 단계. 일부 실시 형태에서, 방법은 생체 내 방법이다. 일부 실시 형태에서, 방법은 시험관 내 방법이다. 일부 실시 형태에서, 방법은 생체 외 방법이다.
본원에 개시된 양태는 본원에 기술된 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, 본원에 기술된 IL-2Rαβγ 결합 단백질, 본원에 기술된 CD4+ Treg 세포, 또는 본원에 기술된 제약 조성물을 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1의 잔기 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1의 잔기 위치 61에 상응하는 잔기 E61에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1의 잔기 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 상기 PEG의 분자량은 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드 및/또는 IL-2 콘쥬게이트의 용해도를 개선시키는 데 효과적이다. 일부 실시 형태에서, 상기 PEG의 분자량은 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드 및/또는 IL-2 콘쥬게이트의 안정성을 증가시키는 데 효과적이다. 일부 실시 형태에서, 상기 PEG의 분자량은 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드 및/또는 IL-2 콘쥬게이트의 입양 세포 요법제의 제조 효율을 향상시키는 데 효과적이다.
본원에 개시된 양태는 본원에 기술된 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드, 본원에 기술된 IL-2Rαβγ 결합 단백질, 본원에 기술된 CD4+ Treg 세포, 또는 본원에 기술된 제약 조성물을 포함하는 입양 세포 요법제의 제조를 위한 시약을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1의 잔기 위치 65에 상응하는 잔기 P65에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1의 잔기 위치 61에 상응하는 잔기 E61에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드는 서열 번호 1의 잔기 위치 42에 상응하는 잔기 F42에서의 돌연변이, 및 PEG를 포함하는 콘쥬게이팅 모이어티를 포함하며, PEG는 약 5,000 달톤(Da), 10,000 Da, 15,000 Da, 20,000 Da, 25,000 Da, 30,000Da, 35,000 Da, 40,000 Da, 45,000 Da, 또는 50,000 Da을 포함하는 분자량을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 상기 PEG의 분자량은 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드 및/또는 IL-2 콘쥬게이트의 용해도를 개선시키는 데 효과적이다. 일부 실시 형태에서, 상기 PEG의 분자량은 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드 및/또는 IL-2 콘쥬게이트의 안정성을 증가시키는 데 효과적이다. 일부 실시 형태에서, 상기 PEG의 분자량은 단리되고 변형된 IL-2 폴리펩티드 및/또는 IL-2 콘쥬게이트의 입양 세포 요법제의 제조 효율을 향상시키는 데 효과적이다.
특정 용어
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 청구된 요지가 속하는 분야의 당업자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 상세한 설명은 단지 예시적이고 설명적이며, 청구된 임의의 대상을 제한하는 것이 아님이 이해되어야 한다. 본 출원에서, 단수형의 사용은 구체적으로 달리 진술되지 않는 한 복수형을 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 단수형은 달리 문맥에서 명확하게 표시되지 않는 한 복수의 지시어를 포함한다는 것이 주지되어야 한다. 본 출원에서, "또는"의 사용은 달리 진술되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 더욱이, 용어 "포함하는" 및 다른 형태, 예컨대 "포함하다", "포함하는" 및 "포함된"의 사용은 한정하는 것이 아니다.
본 발명의 다양한 특징이 단일 실시 형태의 맥락에서 기재될 수 있지만, 그 특징은 또한 별개로 또는 임의의 적합한 조합으로 제공될 수 있다. 반대로, 명확성을 위해 별개의 실시 형태의 맥락에서 본 발명이 본원에 기술될 수 있지만, 본 발명은 단일 실시 형태로 구현될 수도 있다.
명세서에서 "일부 실시 형태", "일 실시 형태", "하나의 실시 형태", 또는 "다른 실시 형태"에 대한 언급은 실시 형태와 관련하여 설명된 특정 특징, 구조, 또는 특성이 본 발명의, 반드시 모든 실시 형태에 포함되지는 않지만, 적어도 일부 실시 형태에 포함된다는 것을 의미한다.
본원에 사용된 범위 및 양은 "대략적인" 특정 값 또는 범위로 표현될 수 있다. 약은 정확한 양도 포함한다. 따라서, "약 5 μL"는 "약 5 μL" 뿐만 아니라 "5 μL"를 의미한다. 일반적으로, 용어 "약"은 예를 들어 15%, 10%, 또는 5% 이내와 같은 실험 오차 내에 있을 것으로 예상되는 양을 포함한다.
본원에 사용된 섹션 제목은 구성 목적만으로 사용된 것으로, 기술된 요지를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
본원에 사용된 용어 "개체(들)", "대상체(들)", 및 "환자(들)"는 임의의 포유류를 의미한다. 일부 실시 형태에서, 포유류는 인간이다. 일부 실시 형태에서, 포유류는 비-인간이다. 어떠한 용어도 의료 종사자(예를 들어, 의사, 공인 간호사, 실무 간호사, 의사 보조원, 잡역 또는 호스피스 종사자)의 감독을 특징으로 하는 상황을 요하거나 그러한 상황으로 제한되지 않는다.
본원에 사용될 때, 결합 친화도와 관련하여 용어 "유의한" 또는 "유의하게"는 표적 수용체에 대한 사이토토카인(예컨대, IL-2 폴리펩티드)의 결합에 영향을 주기에 충분한 사이토카인(예컨대, IL-2 폴리펩티드)의 결합 친화도의 변화를 의미한다. 일부 경우에, 상기 용어는 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 그 이상의 변화를 의미한다. 일부 경우에, 상기 용어는 적어도 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 50배, 100배, 500배, 1000배, 또는 그 이상의 변화를 의미한다.
일부 경우에, 사이토카인 신호전달 복합체를 통한 하나 이상의 세포 집단의 활성화와 관련하여 용어 "유의한" 또는 "유의하게"는 세포 집단을 활성화하기에 충분한 변화를 의미한다. 일부 경우에, 세포 집단을 활성화하기 위한 변화는 수용체 신호전달 효력으로서 측정된다. 이러한 경우에, EC50 값이 제공될 수 있다. 다른 경우에, ED50 값이 제공될 수 있다. 추가의 경우에, 사이토카인의 농도 또는 투여량이 제공될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "효력"은 표적 효과를 생성하는 데 필요한 사이토카인(예를 들어, IL-2 폴리펩타이드)의 양을 지칭한다. 일부 경우에, 용어 "효력"은 표적 사이토카인 수용체(예를 들어, IL-2 수용체)를 활성화하는 데 필요한 사이토카인(예를 들어, IL-2 폴리펩타이드)의 양을 지칭한다. 다른 경우에, 용어 "효력"은 표적 세포 집단을 활성화하는 데 필요한 사이토카인(예를 들어, IL-2 폴리펩타이드)의 양을 지칭한다. 일부 경우에, 효력은 ED50(유효 용량 50), 또는 최대 효과의 50%를 생성하는 데 필요한 용량으로서 측정된다. 다른 경우에, 효력은 EC50(유효 농도 50), 또는 집단의 50%에서 표적 효과를 생성하는 데 필요한 용량으로서 측정된다.
넘버링된 실시 형태
본 발명은 하기 비제한적인 넘버링된 실시 형태를 제공한다:
실시 형태 1. IL-2 콘쥬게이트에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 하기 화학식 I의 구조로 대체된 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 I]
Figure pct00146
(여기서,
Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00147
이거나;
Y는 CH2이고 Z는
Figure pct00148
이거나;
Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00149
이거나; 또는
Y는 CH2이고 Z는
Figure pct00150
이며;
W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00151
를 가짐).
실시 형태 2. IL-2 콘쥬게이트에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 하기 화학식 I의 구조로 대체된 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 I]
Figure pct00152
(여기서,
Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00153
이거나;
Y는 CH2이고 Z는
Figure pct00154
이거나;
Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00155
이거나; 또는
Y는 CH2이고 Z는
Figure pct00156
이며;
W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00157
를 갖고;
IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련됨).
실시 형태 3. Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00158
인, 실시 형태 1 또는 2의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 4. Y는 CH2이고 Z는
Figure pct00159
인, 실시 형태 1 또는 2의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 5. Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00160
인, 실시 형태 1 또는 2의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 6. Z는 CH2이고 Y는
Figure pct00161
인, 실시 형태 1 또는 2의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 7. Y는 CH2이고 Z는
Figure pct00162
인, 실시 형태 1 또는 2의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 8. PEG 기는 5 kDa, 10 kDa, 20 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는, 실시 형태 1 또는 2의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 9. PEG 기는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는, 실시 형태 8의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 10. PEG 기는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는, 실시 형태 8의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 11. IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69, 및 L72로부터 선택되며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련되는, 실시 형태 1 또는 2의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 12. IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 F42, E62, 및 P65로부터 선택되며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트의 아미노산 서열에서의 화학식 I의 구조의 위치는 서열 번호 1에서의 위치와 관련되는, 실시 형태 11의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 13. 서열 번호 15~19 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, [AzK_PEG]는 하기 화학식 II 또는 화학식 III의 구조, 또는 화학식 II와 화학식 III의 조합을 갖는 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 II]
Figure pct00163
[화학식 III]
Figure pct00164
(여기서,
W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00165
를 가짐).
실시 형태 14. [AzK_PEG]는 화학식 II와 화학식 III의 조합인, 실시 형태 13의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 15. [AzK_PEG]는 하기 화학식 II의 구조를 갖는, 실시 형태 13의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 II]
Figure pct00166
.
실시 형태 16. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 15의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 17. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 16의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 18. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 17의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 19. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 17의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 20. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 17의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 21. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 15의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 22. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 21의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 23. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 22의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 24. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 23의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 25. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 23의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 26. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 15의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 27. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 26의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 28. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 27의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 29. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 27의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 30. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 27의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 31. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 15의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 32. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 31의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 33. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 32의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 34. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 33의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 35. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 33의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 36. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 15의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 37. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 36의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 38. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 37의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 39. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 38의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 40. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 38의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 41. [AzK_PEG]는 하기 화학식 III의 구조를 갖는, 실시 형태 13의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 III]
Figure pct00167
.
실시 형태 42. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 41의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 43. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 42의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 44. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 43의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 45. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 44의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 46. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 44의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 47. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 41의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 48. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 47의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 49. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 48의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 50. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 49의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 51. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 49의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 52. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 41의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 53. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 52의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 54. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 53의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 55. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 54의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 56. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 54의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 57. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 41의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 58. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 57의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 59. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 58의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 60. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 59의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 61. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 59의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 62. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 41의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 63. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 62의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 64. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 63의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 65. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 64의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 66. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 64의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 67. W는 선형 또는 분지형 PEG 기인, 실시 형태 1 내지 66 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 68. W는 선형 PEG 기인, 실시 형태 1 내지 66 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 69. W는 분지형 PEG 기인, 실시 형태 1 내지 66 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 70. W는 메톡시 PEG 기인, 실시 형태 1 내지 66 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 71. 메톡시 PEG 기는 선형 또는 분지형인, 실시 형태 70에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 72. 메톡시 PEG 기는 선형인, 실시 형태 71에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 73. 메톡시 PEG 기는 분지형인, 실시 형태 71에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 74. 서열 번호 20~24 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, [AzK_PEG5kD]는 하기 화학식 II 또는 화학식 III의 구조, 또는 화학식 II와 화학식 III의 조합을 갖는 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 II]
Figure pct00168
[화학식 III]
Figure pct00169
(여기서,
W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00170
를 가짐).
실시 형태 75. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 74의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 76. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 74의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 77. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 74의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 78. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 74의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 79. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 74의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 80. [AzK_PEG5kD]는 하기 화학식 II의 구조를 갖는, 실시 형태 74의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 II]
Figure pct00171
.
실시 형태 81. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 80의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 82. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 80의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 83. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 80의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 84. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 80의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 85. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 80의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 86. [AzK_PEG5kD]는 하기 화학식 III의 구조를 갖는, 실시 형태 74의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 III]
Figure pct00172
.
실시 형태 87. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 86의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 88. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 86의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 89. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 86의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 90. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 86의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 91. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 86의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 92. 서열 번호 25~29 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, [AzK_PEG30kD]는 하기 화학식 II 또는 화학식 III의 구조를 갖거나, 또는 화학식 II 및 화학식 III의 구조의 조합인 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 II]
Figure pct00173
[화학식 III]
Figure pct00174
(여기서,
W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00175
를 가짐).
실시 형태 93. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 92의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 94. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 26의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 92의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 95. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 92의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 96. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 92의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 97. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 92의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 98. [AzK_PEG30kD]는 하기 화학식 II의 구조를 갖는, 실시 형태 92의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 II]
Figure pct00176
.
실시 형태 99. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 98의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 100. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 26의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 98의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 101. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 98의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 102. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 98의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 103. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 98의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 104. [AzK_PEG30kD]는 하기 화학식 III의 구조를 갖는, 실시 형태 92의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 III]
Figure pct00177
.
실시 형태 105. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 104의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 106. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 26의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 104의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 107. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 104의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 108. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 104의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 109. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 104의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 110. 서열 번호 15~19 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, [AzK_PEG]는 화학식 II 및 화학식 III의 구조의 조합인 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 II]
Figure pct00178
[화학식 III]
Figure pct00179
(여기서,
W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00180
를 가짐).
실시 형태 111. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG] 양을 포함함)의 비는 약 1:1인, 실시 형태 110에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 112. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG] 양을 포함함)의 비는 1:1 초과인, 실시 형태 110에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 113. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG] 양을 포함함)의 비는 1:1 미만인, 실시 형태 110에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 114. W는 선형 또는 분지형 PEG 기인, 실시 형태 110 내지 113 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 115. W는 선형 PEG 기인, 실시 형태 110 내지 113 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 116. W는 분지형 PEG 기인, 실시 형태 110 내지 113 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 117. W는 메톡시 PEG 기인, 실시 형태 110 내지 113 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 118. 메톡시 PEG 기는 선형 또는 분지형인, 실시 형태 117에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 119. 메톡시 PEG 기는 선형인, 실시 형태 118에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 120. 메톡시 PEG 기는 분지형인, 실시 형태 118에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 121. 서열 번호 20~24 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, [AzK_PEG5kD]는 화학식 II 및 화학식 III의 구조의 조합인 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 II]
Figure pct00181
[화학식 III]
Figure pct00182
(여기서,
W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00183
를 가짐).
실시 형태 122. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG5kD] 양을 포함함)의 비는 약 1:1인, 실시 형태 121에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 123. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG5kD] 양을 포함함)의 비는 1:1 초과인, 실시 형태 121에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 124. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG5kD] 양을 포함함)의 비는 1:1 미만인, 실시 형태 121에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 125. 서열 번호 25~29 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, [AzK_PEG30kD]는 화학식 II 및 화학식 III의 구조의 조합인 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 II]
Figure pct00184
[화학식 III]
Figure pct00185
(여기서,
W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00186
를 가짐).
실시 형태 126. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG30kD] 양을 포함함)의 비는 약 1:1인, 실시 형태 125에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 127. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG30kD] 양을 포함함)의 비는 1:1 초과인, 실시 형태 125에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 128. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 II의 구조의 양:화학식 III의 구조의 양(총 [AzK_PEG30kD] 양을 포함함)의 비는 1:1 미만인, 실시 형태 125에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 129. 서열 번호 40~44 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, [AzK_L1_PEG]는 하기 화학식 IV 또는 화학식 V의 구조, 또는 화학식 IV와 화학식 V의 조합을 갖는 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 IV]
Figure pct00187
[화학식 V]
Figure pct00188
(여기서,
W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00189
를 가짐).
실시 형태 130. [AzK_L1_PEG]는 화학식 IV와 화학식 III의 조합인, 실시 형태 129의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 131. [AzK_L1_PEG]는 하기 화학식 IV의 구조를 갖는, 실시 형태 129의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 IV]
Figure pct00190
.
실시 형태 132. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 40의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 131의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 133. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 132의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 134. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 133의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 135. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 133의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 136. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 133의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 137. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 131의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 138. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 137의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 139. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 138의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 140. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 139의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 141. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 139의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 142. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 129의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 143. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 142의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 144. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 143의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 145. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 144의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 146. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 144의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 147. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 129의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 148. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 147의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 149. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 148의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 150. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 149의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 151. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 149의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 152. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 129의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 153. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 152의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 154. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 153의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 155. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 154의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 156. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 155의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 157. [AzK_L1_PEG]는 하기 화학식 V의 구조를 갖는, 실시 형태 129의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 V]
Figure pct00191
.
실시 형태 158. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 40의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 157의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 159. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 158의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 160. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 159의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 161. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 160의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 162. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 160의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 163. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 41의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 157의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 164. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 163의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 165. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 164의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 166. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 165의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 167. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 165의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 168. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 157의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 169. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 168의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 170. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 169의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 171. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 170의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 172. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 170의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 173. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 157의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 174. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 173의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 175. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 174의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 176. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 175의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 177. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 175의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 178. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 157의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 179. W는 5 kDa, 10 kDa, 15k Da, 20 kDa, 25 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 178의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 180. W는 5 kDa 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 179의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 181. W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 180의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 182. W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, 실시 형태 180의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 183. W는 선형 또는 분지형 PEG 기인, 실시 형태 129 내지 182 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 184. W는 선형 PEG 기인, 실시 형태 129 내지 182 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 185. W는 분지형 PEG 기인, 실시 형태 129 내지 182 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 186. W는 메톡시 PEG 기인, 실시 형태 129 내지 182 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 187. 메톡시 PEG 기는 선형 또는 분지형인, 실시 형태 186에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 188. 메톡시 PEG 기는 선형인, 실시 형태 187에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 189. 메톡시 PEG 기는 분지형인, 실시 형태 187에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 190. 서열 번호 45~49 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, [AzK_L1_PEG5kD]는 하기 화학식 IV 또는 화학식 V의 구조, 또는 화학식 IV와 화학식 V의 조합을 갖는 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 IV]
Figure pct00192
[화학식 V]
Figure pct00193
(여기서,
W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00194
를 가짐).
실시 형태 191. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 190의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 192. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 190의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 193. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 190의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 194. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 190의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 195. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 190의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 196. [AzK_L1_PEG5kD]는 하기 화학식 IV의 구조를 갖는, 실시 형태 190의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 IV]
Figure pct00195
.
실시 형태 197. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 196의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 198. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 196의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 199. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 196의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 200. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 196의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 201. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 196의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 202. [AzK_L1_PEG5kD]는 하기 화학식 V의 구조를 갖는, 실시 형태 190의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 V]
Figure pct00196
.
실시 형태 203. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 202의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 204. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 202의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 205. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 202의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 206. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 202의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 207. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 202의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 208. 서열 번호 50~54 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, [AzK_L1_PEG30kD]는 하기 화학식 IV 또는 화학식 V의 구조를 갖거나, 또는 화학식 IV 및 화학식 V의 구조의 조합인 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 IV]
Figure pct00197
[화학식 V]
Figure pct00198
(여기서,
W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00199
를 가짐).
실시 형태 209. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 208의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 210. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 208의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 211. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 208의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 212. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 208의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 213. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 208의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 214. [AzK_L1_PEG30kD]는 하기 화학식 IV의 구조를 갖는, 실시 형태 208의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 IV]
Figure pct00200
.
실시 형태 215. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 214의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 216. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 214의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 217. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 214의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 218. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 214의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 219. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 214의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 220. [AzK_L1_PEG30kD]는 하기 화학식 V의 구조를 갖는, 실시 형태 214의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 V]
Figure pct00201
.
실시 형태 221. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 220의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 222. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 220의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 223. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 220의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 224. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 53의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 220의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 225. IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 220의 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 226. 서열 번호 40~44 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, [Azk_L1_PEG]는 화학식 IV 및 화학식 V의 구조의 조합인 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 IV]
Figure pct00202
[화학식 V]
Figure pct00203
(여기서,
W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00204
를 가짐).
실시 형태 227. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_PEG] 양을 포함함)의 비는 약 1:1인, 실시 형태 226에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 228. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_PEG] 양을 포함함)의 비는 1:1 초과인, 실시 형태 226에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 229. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_PEG] 양을 포함함)의 비는 1:1 미만인, 실시 형태 226에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 230. W는 선형 또는 분지형 PEG 기인, 실시 형태 226 내지 229 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 231. W는 선형 PEG 기인, 실시 형태 226 내지 229 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 232. W는 분지형 PEG 기인, 실시 형태 226 내지 229 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 233. W는 메톡시 PEG 기인, 실시 형태 226 내지 229 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 234. 메톡시 PEG 기는 선형 또는 분지형인, 실시 형태 233에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 235. 메톡시 PEG 기는 선형인, 실시 형태 234에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 236. 메톡시 PEG 기는 분지형인, 실시 형태 234에 따른 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
실시 형태 237. 서열 번호 45~49 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, [AzK_L1_PEG5kD]는 화학식 IV 및 화학식 V의 구조의 조합인 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 IV]
Figure pct00205
[화학식 V]
Figure pct00206
(여기서,
W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00207
를 가짐).
실시 형태 238. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_ PEG5kD] 양을 포함함)의 비는 약 1:1인, 실시 형태 237에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 239. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_PEG5kD] 양을 포함함)의 비는 1:1 초과인, 실시 형태 237에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 240. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_PEG5kD] 양을 포함함)의 비는 1:1 미만인, 실시 형태 237에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 241. 서열 번호 50~54 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, [AzK_L1 PEG30kD]는 화학식 IV 및 화학식 V의 구조의 조합인 IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
[화학식 IV]
Figure pct00208
[화학식 V]
Figure pct00209
(여기서,
W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
X는 하기 구조:
Figure pct00210
를 가짐).
실시 형태 242. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_PEG30kD] 양을 포함함)의 비는 약 1:1인, 실시 형태 241에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 243. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_PEG30kD] 양을 포함함)의 비는 1:1 초과인, 실시 형태 241에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 244. IL-2 콘쥬게이트 중 화학식 IV의 구조의 양:화학식 V의 구조의 양(총 [AzK_L1_PEG30kD] 양을 포함함)의 비는 1:1 미만인, 실시 형태 241에 따른 IL-2 콘쥬게이트.
실시 형태 245. 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 이를 필요로 하는 대상체에게 실시 형태 1 내지 실시 형태 224 중 어느 한 실시 형태의 IL-2 콘쥬게이트의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
실시 형태 246. 대상체에서의 암은 신장 세포 암종(RCC), 비소세포 폐암(NSCLC), 두경부 편평 세포 암(HNSCC), 고전적 호지킨 림프종(cHL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBCL), 요로상피 암종, 현미부수체 불안정 암, 현미부수체 안정 암, 위암, 자궁경부암, 간세포 암종(HCC), 메르켈 세포 암종(MCC), 흑색종, 소세포폐암(SCLC), 식도암, 교모세포종, 중피종, 유방암, 삼중 음성 유방암, 전립선암, 방광암, 난소암, 중등도 내지 저 돌연변이 부담 종양, 피부 편평 세포 암종(CSCC), 편평 세포 피부암(SCSC), 저 발현 내지 비-발현 PD-L1 종양, 해부학적 원발 기원 부위를 넘어 간 및 CNS에 전신적으로 파종된 종양, 및 미만성 거대 B 세포 림프종으로부터 선택되는, 실시 형태 245에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 247. 대상체에서의 암은 신장 세포 암종(RCC), 비소세포 폐암(NSCLC), 요로상피 암종 및 흑색종으로부터 선택되는, 실시 형태 246에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 248. IL-2 콘쥬게이트는 이를 필요로 하는 대상체에게 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 5주에 1회, 6주에 1회, 7주에 1회 또는 8주에 1회 투여되는, 실시 형태 245 내지 247 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 249. IL-2 콘쥬게이트는 이를 필요로 하는 대상체에게 주 1회 또는 2주에 1회 투여되는, 실시 형태 248에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 250. IL-2 콘쥬게이트는 이를 필요로 하는 대상체에게 주 1회 투여되는, 실시 형태 249에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 251. IL-2 콘쥬게이트는 이를 필요로 하는 대상체에게 2주에 1회 투여되는, 실시 형태 249에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 252. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 혈관 누출 증후군을 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 253. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 등급 2, 등급 3 또는 등급 4 혈관 누출 증후군을 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 254. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 등급 2 혈관 누출 증후군을 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 255. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 등급 3 혈관 누출 증후군을 야기하지 않는, 실시 형태 253에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 256. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 등급 4 혈관 누출 증후군을 야기하지 않는, 실시 형태 253에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 257. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 혈관 긴장도의 손실을 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 258. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 혈관외 공간으로의 혈장 단백질 및 유체의 유출을 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 259. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 저혈압 및 감소된 기관 관류를 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 260. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 손상된 호중구 기능을 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 261. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 감소된 주화성을 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 262. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 파종성 감염의 증가된 위험과 관련이 없는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 263. 파종성 감염은 패혈증 또는 세균성 심내막염인, 실시 형태 262의 방법.
실시 형태 264. 파종성 감염은 패혈증인, 실시 형태 263의 방법.
실시 형태 265. 파종성 감염은 세균성 심내막염인, 실시 형태 262의 방법.
실시 형태 266. 대상체는 IL-2 콘쥬게이트의 투여 전에 임의의 기존 세균 감염에 대하여 치료를 받는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 267. 대상체는 IL-2 콘쥬게이트의 투여 전에 옥사실린, 나프실린, 시프로플록사신 및 반코마이신으로부터 선택되는 항균제로 치료를 받는, 실시 형태 266에 따른 방법.
실시 형태 268. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 자가면역 질환 또는 염증성 장애의 기존 또는 초기 증상을 악화시키지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 269. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 자가면역 질환의 기존 또는 초기 증상을 악화시키지 않는, 실시 형태 268에 따른 방법.
실시 형태 270. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 염증성 장애의 기존 또는 초기 증상을 악화시키지 않는, 실시 형태 268에 따른 방법.
실시 형태 271. 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 크론병, 경피증, 갑상선염, 염증성 관절염, 진성 당뇨병, 안구-구근 중증 근무력증, 반월상 IgA 사구체신염, 담낭염, 뇌혈관염, 스티븐스-존슨 증후군 및 수포성 유천포창으로부터 선택되는, 실시 형태 268에 따른 방법.
실시 형태 272. 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 크론병인, 실시 형태 271에 따른 방법.
실시 형태 273. 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 경피증인, 실시 형태 271에 따른 방법.
실시 형태 274. 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 갑상선염인, 실시 형태 271에 따른 방법.
실시 형태 275. 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 염증성 관절염인, 실시 형태 271에 따른 방법.
실시 형태 276. 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 진성 당뇨병인, 실시 형태 271에 따른 방법.
실시 형태 277. 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 안구-구근 중증 근무력증인, 실시 형태 271에 따른 방법.
실시 형태 278. 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 반월상 IgA 사구체신염인, 실시 형태 271에 따른 방법.
실시 형태 279. 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 담낭염인, 실시 형태 271에 따른 방법.
실시 형태 280. 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 뇌혈관염인, 실시 형태 271에 따른 방법.
실시 형태 281. 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 스티븐스-존슨 증후군인, 실시 형태 271에 따른 방법.
실시 형태 282. 대상체에서의 자가면역 질환 또는 염증성 장애는 수포성 유천포창인, 실시 형태 271에 따른 방법.
실시 형태 283. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 정신 상태의 변화, 언어 장애, 피질맹, 사지 또는 보행 실조증, 환각, 동요, 둔감 또는 혼수 상태를 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 284. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 발작을 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 285. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 공지된 발작 장애를 갖는 대상체에서 금기 사항이 아닌, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 286. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 모세혈관 누출 증후군을 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 287. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 등급 2, 등급 3 또는 등급 4 모세혈관 누출 증후군을 야기하지 않는, 실시 형태 286에 따른 방법.
실시 형태 288. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 등급 2 모세혈관 누출 증후군을 야기하지 않는, 실시 형태 287에 따른 방법.
실시 형태 289. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 등급 3 모세혈관 누출 증후군을 야기하지 않는, 실시 형태 287에 따른 방법.
실시 형태 290. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에서 등급 4 모세혈관 누출 증후군을 야기하지 않는, 실시 형태 287에 따른 방법.
실시 형태 291. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체에서 평균 동맥 혈압의 저하를 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 292. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체에서 저혈압을 야기하지 않는, 실시 형태 291에 따른 방법.
실시 형태 293. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 IL-2 콘쥬게이트를 대상체에게 투여한 후 대상체가 90 mm Hg 미만의 수축기 혈압 또는 기준 수축기 혈압으로부터의 20 mm Hg 저하를 경험하는 것을 야기하지 않는, 실시 형태 292에 따른 방법.
실시 형태 294. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체에서 부종을 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 295. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체에서 신장 또는 간 기능의 손상을 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 296. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체에서 호산구 증가증을 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 297. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체의 말초 혈액 중 호산구 카운트가 μL 당 500개를 초과하도록 하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 298. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체의 말초 혈액 중 호산구 카운트가 μL 당 500개 내지 μL 당 1500개를 초과하도록 하지 않는, 실시 형태 297의 방법.
실시 형태 299. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체의 말초 혈액 중 호산구 카운트가 μL 당 1500개 내지 μL 당 5000개를 초과하도록 하지 않는, 실시 형태 297의 방법.
실시 형태 300. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체의 말초 혈액 중 호산구 카운트가 μL 당 5000개를 초과하도록 하지 않는, 실시 형태 297의 방법.
실시 형태 301. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 기존의 향정신성 약물 요법에 대한 대상체에서의 금기 사항이 아닌, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 302. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 기존의 신독성, 골수 독성, 심장 독성 또는 간독성 약물 요법에 대한 대상체에서의 금기 사항이 아닌, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 303. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 기존의 아미노글리코시드, 세포독성 화학요법, 독소루비신, 메토트렉세이트 또는 아스파라기나아제 요법에 대한 대상체에서의 금기 사항이 아닌, 실시 형태 302에 따른 방법.
실시 형태 304. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 항신생물제를 함유하는 병용 요법을 받는 대상체에서 금기 사항이 아닌, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 305. 항신생물제는 다카르바진, 시스-백금, 타목시펜 및 인터페론-알파로부터 선택되는, 실시 형태 304의 방법.
실시 형태 306. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 대상체에서 하나 이상의 등급 4 이상 사례를 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 307. 하나 이상의 등급 4 이상 사례는 저체온증; 쇼크; 서맥; 심실 주기외수축; 심근 허혈; 실신; 출혈; 심방 부정맥; 정맥염; 2도 AV 차단; 심내막염; 심낭 삼출; 말초 괴저; 혈전증; 관상 동맥 장애; 구내염; 오심 및 구토; 간 기능 검사 비정상; 위장관 출혈; 토혈; 혈성 설사; 위장 장애; 장 천공; 췌장염; 빈혈; 백혈구 감소증; 백혈구 증가증; 저칼슘혈증; 알칼리 포스파타아제 증가; 혈액 요소 질소(BUN) 증가; 고요산혈증; 비-단백질 질소(NPN) 증가; 호흡성 산증; 졸림; 동요; 신경병증; 편집병양 반응; 경련; 대발작 경련; 섬망; 천식, 폐 부종; 과호흡; 저산소증; 객혈; 저호흡; 기흉; 산동; 동공 장애; 신장 기능 이상; 신부전; 및 급성 세뇨관 괴사로부터 선택되는, 실시 형태 306에 따른 방법.
실시 형태 308. 대상체 군에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 1% 이하의 대상체에서 하나 이상의 등급 4 이상 사례를 야기하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 309. 하나 이상의 등급 4 이상 사례는 저체온증; 쇼크; 서맥; 심실 주기외수축; 심근 허혈; 실신; 출혈; 심방 부정맥; 정맥염; 2도 AV 차단; 심내막염; 심낭 삼출; 말초 괴저; 혈전증; 관상 동맥 장애; 구내염; 오심 및 구토; 간 기능 검사 비정상; 위장관 출혈; 토혈; 혈성 설사; 위장 장애; 장 천공; 췌장염; 빈혈; 백혈구 감소증; 백혈구 증가증; 저칼슘혈증; 알칼리 포스파타아제 증가; 혈액 요소 질소(BUN) 증가; 고요산혈증; 비-단백질 질소(NPN) 증가; 호흡성 산증; 졸림; 동요; 신경병증; 편집병양 반응; 경련; 대발작 경련; 섬망; 천식, 폐 부종; 과호흡; 저산소증; 객혈; 저호흡; 기흉; 산동; 동공 장애; 신장 기능 이상; 신부전; 및 급성 세뇨관 괴사로부터 선택되는, 실시 형태 307에 따른 방법.
실시 형태 310. 대상체 군에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 1% 이하의 대상체에서 하나 이상의 이상 사례를 야기하며, 여기서, 상기 하나 이상의 이상 사례는 십이지장 궤양; 장 괴사; 심근염; 심실상빈맥; 시신경염에 이차적인 영구적 또는 일시적 실명; 일과성 허혈 발작; 수막염; 뇌 부종; 심낭염; 알러지성 간질성 신염; 및 기관식도 누공으로부터 선택되는, 실시 형태 245 내지 실시 형태 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 311. 대상체 군에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 대상체에게 IL-2 콘쥬게이트를 투여한 후 1% 이하의 대상체에서 하나 이상의 이상 사례를 야기하며, 여기서, 상기 하나 이상의 이상 사례는 악성 고열증; 심정지; 심근 경색증; 폐색전; 뇌졸중; 장 천공; 간부전 또는 신부전; 자살로 이어지는 중증 우울증; 폐 부종; 호흡 정지; 호흡 부전으로부터 선택되는, 실시 형태 245 내지 실시 형태 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 312. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 IL-2 콘쥬게이트에 대한 중화 항체의 생성을 초래하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 313. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 투여는 대상체에서 말초 CD4+ 조절 T 세포의 수를 증가시키지 않으면서 대상체에서 말초 CD8+ T 및 NK 세포의 수를 증가시키는, 실시 형태 245 내지 256 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 314. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 투여는 대상체에서 말초 호산구의 수를 증가시키지 않으면서 대상체에서 말초 CD8+ T 및 NK 세포의 수를 증가시키는, 실시 형태 245 내지 256 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 315. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 투여는 대상체에서 종양내 CD4+ 조절 T 세포의 수를 증가시키지 않으면서 대상체에서 종양내 CD8+ T 및 NK 세포의 수를 증가시키는, 실시 형태 245 내지 256 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 316. 실시 형태 1 내지 244 중 어느 한 실시 형태에 따른 IL-콘쥬게이트의 유효량 및 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제를 포함하는 제약 조성물.
실시 형태 317. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 집중 치료 시설 또는 심폐 또는 집중 치료 의학 분야의 숙련된 전문가의 가용성을 필요로 하지 않는, 실시 형태 245 내지 251 중 어느 한 실시 형태에 따른 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시 형태 318. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 집중 치료 시설의 가용성을 필요로 하지 않는, 실시 형태 317에 따른 방법.
실시 형태 319. 대상체에 대한 IL-2 콘쥬게이트의 유효량의 투여는 심폐 또는 집중 치료 의학 분야의 숙련된 전문가의 가용성을 필요로 하지 않는, 실시 형태 317에 따른 방법.
실시예
이들 실시예는 예시 목적으로만 제공되고, 본원에 제공된 청구범위의 범주를 제한하기 위한 것이 아니다.
실시예 2 내지 12에 개시된 각각의 화합물은 서열 번호 4 및 [AzK_PEG] 모이어티를 사용하였으며, 여기서, IL-2 콘쥬게이트에서의 치환된 아미노산의 위치는 서열 번호 4에서의 위치를 참조한다.
예를 들어, 실시예 2에 개시된 방법과 유사한 방법을 사용하여 표 2A 및 2B에서 "P65_5kD"로 라벨링된 화합물을 제조하였으며, 여기서, 위치 65에서의 프롤린이 AzK로 대체된 서열 번호 4를 갖는 단백질을 먼저 제조하였다. 그 후 AzK-함유 단백질을 클릭 화학 조건 하에서 평균 분자량이 5 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기를 포함하는 DBCO와 반응시켜 화학식 II, 화학식 III, 또는 화학식 II와 III의 조합을 포함하는 서열 번호 20을 갖는 생성물을 수득 하였으며, 여기서, W는 평균 분자량이 5 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기이다.
또 다른 예에서, 표 2A 및 2B에서 "P65_30kD"로 라벨링된 화합물은 위치 65에서의 프롤린이 AzK로 대체된 서열 번호 4를 갖는 단백질을 먼저 제조함으로써 제조하였다. 그 후 AzK-함유 단백질을 클릭 화학 조건 하에서 평균 분자량이 30 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기를 포함하는 DBCO와 반응시켜 화학식 II, 화학식 III, 또는 화학식 II와 III의 조합을 포함하는 서열 번호 25을 갖는 생성물을 수득 하였으며, 여기서, W는 평균 분자량이 30 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기이다.
이와 유사하게, "P65_30kD"로 라벨링된 화합물인 화합물은 위치 65에서의 프롤린이 N6-((2-아지도에톡시)-카르보닐)-L-라이신 (AzK)로 대체된 서열 번호 4를 갖는 단백질(서열 번호 10)을 제조함으로써 제조하였다. 이 화합물은 또한 위치 65에서의 프롤린(P65)이 화학식 VI 또는 VII의 구조, 또는 VI와 VII의 조합으로 대체된 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 것으로 정의될 수 있으며, 여기서, n은 PEG 기가 약 30 kDa의 분자량을 갖도록 하는 정수이다. 이 화합물은 또한 위치 65에서의 프롤린(P65)이 화학식 X 또는 XI의 구조, 또는 X와 XI의 조합으로 대체된 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 것으로 정의될 수 있으며, 여기서, n은 PEG 기가 약 30 kDa의 분자량을 갖도록 하는 정수이다. 화합물 P65_30kD를 실시예 5, 6, 7, 및 8에서 사용하였다.
또 다른 예에서, 표 2A 및 2B에서 "E62_5kD"로 라벨링된 화합물은 위치 62에서의 글루탐산이 AzK로 대체된 서열 번호 4를 갖는 단백질을 먼저 제조함으로써 제조하였다. 그 후 AzK-함유 단백질을 클릭 화학 조건 하에서 평균 분자량이 5 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기를 포함하는 DBCO와 반응시켜 화학식 II, 화학식 III, 또는 화학식 II와 III의 조합을 포함하는 서열 번호 21을 갖는 생성물을 수득 하였으며, 여기서, W는 평균 분자량이 5 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기이다.
이와 유사하게, "E62_5kD"로 라벨링된 화합물은 위치 62에서의 글루탐산(E62)이 N6-((2-아지도에톡시)-카르보닐)-L-라이신 (AzK)로 대체된 서열 번호 4를 갖는 단백질(서열 번호 11)을 먼저 제조함으로써 제조하였다. 그 후 AzK-함유 단백질을 클릭 화학 조건 하에서 평균 분자량이 5 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기를 포함하는 DBCO와 반응시켜 화학식 II, 화학식 III, 또는 화학식 II와 III의 조합을 포함하는 서열 번호 21을 갖는 생성물을 수득 하였으며, 여기서, W는 평균 분자량이 5 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기이다. 화합물 E62_5kD를 실시예 9에서 사용하였다.
또 다른 예에서, 표 2A 및 2B에서 "E62_30kD"로 라벨링된 화합물은 위치 62에서의 글루탐산이 AzK로 대체된 서열 번호 4를 갖는 단백질을 먼저 제조함으로써 제조하였다. 그 후 AzK-함유 단백질을 클릭 화학 조건 하에서 평균 분자량이 30 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기를 포함하는 DBCO와 반응시켜 화학식 II, 화학식 III, 또는 화학식 II와 III의 조합을 포함하는 서열 번호 26을 갖는 생성물을 수득 하였으며, 여기서, W는 평균 분자량이 30 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기이다.
이와 유사하게, "E62_30kD"로 라벨링된 화합물은 위치 62에서의 글루탐산(E62)이 N6-((2-아지도에톡시)-카르보닐)-L-라이신(AzK)로 대체된 서열 번호 4를 갖는 단백질(서열 번호 11)을 먼저 제조함으로써 제조하였다. 그 후 AzK-함유 단백질을 클릭 화학 조건 하에서 평균 분자량이 30 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기를 포함하는 DBCO와 반응시켜 화학식 II, 화학식 III, 또는 화학식 II와 III의 조합을 포함하는 서열 번호 26을 갖는 생성물을 수득 하였으며, 여기서, W는 평균 분자량이 30 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기이다. 이 화합물은 또한 위치 62에서의 글루탐산(E62)이 화학식 VI 또는 VII의 구조, 또는 VI와 VII의 조합으로 대체된 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 것으로 정의될 수 있으며, 여기서, n은 PEG 기가 약 30 kDa의 분자량을 갖도록 하는 정수이다. 이 화합물은 또한 위치 62에서의 글루탐산(E62)이 화학식 X 또는 XI의 구조, 또는 X와 XI의 조합으로 대체된 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 것으로 정의될 수 있으며, 여기서, n은 PEG 기가 약 30 kDa의 분자량을 갖도록 하는 정수이다. 화합물 E62_30kD를 실시예 3, 5, 및 9에서 사용하였다.
또 다른 예에서, "K35_30kD"로 라벨링되고 실시예 12에서 사용된 화합물은 위치 35에서의 라이신이 N6-((2-아지도에톡시)-카르보닐)-L-라이신 (AzK)로 대체된 서열 번호 4를 갖는 단백질(서열 번호 14)을 먼저 제조함으로써 제조하였다. 그 후 AzK-함유 단백질을 클릭 화학 조건 하에서 평균 분자량이 30 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기를 포함하는 DBCO와 반응시켜 화학식 II, 화학식 III, 또는 화학식 II와 III의 조합을 포함하는 서열 번호 29을 갖는 생성물을 수득 하였으며, 여기서, W는 평균 분자량이 30 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기이다. 이 화합물은 또한 위치 35에서의 라이신(K35)이 화학식 VI 또는 VII의 구조, 또는 VI와 VII의 조합으로 대체된 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 것으로 정의될 수 있으며, 여기서, n은 PEG 기가 약 30 kDa의 분자량을 갖도록 하는 정수이다. 이 화합물은 또한 위치 35에서의 라이신(K35)이 화학식 X 또는 XI의 구조, 또는 X와 XI의 조합으로 대체된 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 것으로 정의될 수 있으며, 여기서, n은 PEG 기가 약 30 kDa의 분자량을 갖도록 하는 정수이다.
"IL2_P65_[AzK_L1_PEG30kD]-1"로 라벨링된 실시예 13 및 14에 개시된 화합물을 실시예 2에 개시된 것과 유사한 방법을 사용하여 제조하였으며, 여기서, 위치 64에서의 프롤린이 AzK로 대체된 서열 번호 3을 갖는 단백질을 먼저 제조하였다. 그 후 AzK-함유 단백질을 클릭 화학 조건 하에서 평균 분자량이 30 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기를 포함하는 DBCO와 반응시켜 화학식 IV, 화학식 V, 또는 화학식 IV와 V의 조합을 포함하는 서열 번호 50을 갖는 생성물을 수득 하였으며, 여기서, W는 평균 분자량이 30 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기이다.
이와 유사하게, "IL2_P65_[AzK_L1_PEG30kD]-1"로 표지된 화합물을 실시예 2에 개시된 것과 유사한 방법을 사용하여 제조하였으며, 여기서, 위치 64에서의 프롤린이 N6-((2-아지도에톡시)-카르보닐)-L-라이신 AzK로 대체된 서열 번호 3을 갖는 단백질(서열 번호 35)을 먼저 제조하였다. 그 후, AzK-함유 단백질은 클릭 화학 조건 하에서 평균 분자량이 30 kDa인 메톡시, 선형 PEG 기를 포함하는 DBCO와 반응시켰다. 화합물 IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1은 또한 위치 64에서의 프롤린 잔기(P64)가 화학식 VIII 또는 IX의 구조 또는 VIII과 IX의 조합으로 대체된 서열 번호 3을 포함하는 화합물로 정의되며, 여기서, n은 PEG 기의 분자량이 약 30 kDa이도록 하는 정수이다. 화합물 IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1은 또한 위치 64에서의 프롤린 잔기(P64)가 화학식 XII 또는 XIII의 구조 또는 XII과 XIII의 조합으로 대체된 서열 번호 3을 포함하는 화합물로 정의되며, 여기서, n은 PEG 기의 분자량이 약 30 kDa이도록 하는 정수이다. 화합물 IL2_P65_[AzK_L1_PEG30kD]-1을 실시예 13, 14, 및 15에서 사용하였다.
실시예 1
키나아제 및 사이토카인 수용체 이량체화 분석
세포 취급
PathHunter 세포주는 표준 절차에 따라 냉동 스톡으로부터 확장시켰다. 세포를 총 부피 20 μL로 흰 벽의 384웰 마이크로플레이트에 접종하고 테스트 전에 적절한 시간 동안 인큐베이션하였다.
작용제 형식
작용제 결정을 위해, 세포를 샘플과 함께 인큐베이션하여 반응을 유도하였다. 샘플 스톡의 중간 희석을 수행하여 분석 완충액 중 5X 샘플을 생성하였다. 약 5 μL의 5X 샘플을 세포에 첨가하고 분석에 따라 37℃에서 6 내지 16시간 동안 인큐베이션하였다. 비히클 농도는 1%였다.
신호 검출
각각 작용제 및 길항제 분석을 위한 PathHunter Detection 시약 칵테일의 12.5 또는 15 μL(50% v/v)의 단회 첨가, 이어서 실온에서의 1시간 인큐베이션을 통해 분석 신호를 생성하였다. 일부 분석의 경우, 분석 성능을 개선하기 위해 고감도 검출 시약(PathHunter Flash Kit)을 사용하여 활성을 검출하였다. 이 분석에서 동일한 부피의 검출 시약(25 또는 30 uL)을 웰에 첨가한 다음 실온에서 1시간 인큐베이션하였다. 화학 발광 신호 검출을 위해 PerkinElmer Envision™ 기기로 신호 생성 후 마이크로플레이트를 판독하였다.
데이터 분석
CBIS 데이터 분석 스위트(ChemInnovation, CA)를 사용하여 화합물 활성을 분석하였다. 작용제 모드 분석의 경우, 다음 공식을 사용하여 활성 백분율을 계산하였다.
활성(%) = 100% x (테스트 샘플의 평균 RLU - 비히클 대조군의 평균 RLU)/(평균 MAX RLU 대조군 리간드 - 비히클 대조군의 평균 RLU).
길항제 모드 분석의 경우, 다음 공식을 사용하여 억제 백분율을 계산하였다.
억제(%) = 100% x (1-(테스트 샘플의 평균 RLU - 비히클 대조군의 평균 RLU)/(EC80 대조군의 평균 RLU - 비히클 대조군의 평균 RLU)).
실시예 2
IL-2Rα 결합이 없는 PEG화된 IL-2 화합물의 확인을 위한 세포 기반 스크리닝
IL-2 및 IL-2 수용체 α 서브유닛(IL-2Rα)의 상호작용을 특이적으로 없애기 위한 nAA-PEG화 부위의 설계를 안내하기 위해 IL-2/이종삼량체 수용체 신호전달 복합체(PDB : 2ERJ)의 구조 데이터를 사용하였다. 예시적인 IL-2 콘쥬게이트를 다음과 같이 기능 분석에 적용하였다: K35, F42, K43, E62 및 P65. IL-2 콘쥬게이트를 이. 콜라이에서 봉입체로서 발현시키고, 정제하고 다시 폴딩시키고(표준 절차를 사용), 그 후 DBCO 매개 구리 무함유 클릭 화학을 사용하여 IL-2 생성물을 부위 특이적으로 PEG화하여 안정한 공유 mPEG 모이어티를 AzK에 부착하였다(반응식 1).
반응식 1. AzK_PEG 인터류킨 변이체의 예시적인 합성(여기서 n은 반복되는 PEG 단위의 수를 나타냄). 위치이성질체
Figure pct00211
반응식 2. AzK_PEG 인터류킨 변이체의 예시적인 합성(여기서 n은 반복되는 PEG 단위의 수를 나타냄). 위치이성질체의 혼합물이 생성될 수 있다.
Figure pct00212
IL-2 콘쥬게이트는 PathHunter IL-2 사이토카인 수용체 분석을 사용하여 Discoverx (Fremont CA)에서 기능적 활성에 대해 스크리닝하였다. 이 분석은 각각 분할 리포터 효소 β-갈락토시다아제의 절반에 융합된 IL-2 수용체 β(IL-2Rβ) 및 γ(IL-2Rγ) 서브유닛을 발현하는 재조합 인간 U2OS 세포주를 사용한다. 두 번째 세포주는 IL-2Rα 서브유닛을 발현하도록 추가로 조작하였다. 이 두 세포주를 사용한 동시 테스트를 통해 IL-2 수용체 αβγ 및 기저 βγ 복합체의 변이체 활성화를 평가할 수 있다. IL-2 βγ 수용체 복합체에 대한 IL-2 작용제 활성은 수용체 이량체화 및 리포터 β-갈락토시다아제 재구성을 자극하여 화학 발광 신호를 생성한다. 분석은 각 테스트 물품의 EC50을 결정하기 위해 작용제 모드에서 실행하였으며, IL2Rα 양성 세포 유형과 음성 세포 유형 사이의 용량 반응 곡선 프로파일을 비교하면 관찰된 활성에 대한 IL2Rα의 기여도를 결정할 수 있다.
Figure pct00213
인간 IL-2 수용체 서브유닛과 PEG화된 IL-2의 생화학적 상호작용
인간 IL-2 수용체 서브유닛과 PEG화된 IL-2 화합물의 상호작용의 동역학은 Biosensor Tools LLC(Salt Lake City, UT)에서 표면 플라즈몬 공명(SPR: Surface Plasmon Resonance)를 사용하여 측정하였다. 이 연구를 위해, 인간 IgG1 Fc-융합된 IL-2 Rα(Sino Biological # 10165-H02H) 및 β(Sino Biological # 10696-H02H) 세포외 도메인을 Biacore 단백질 A-코팅된 CM4 센서 칩의 표면에서 포획하였다. 이러한 표면은 Biacore 2000 SPR 기기를 사용하여 천연 IL-2(야생형 IL-2; Thermo # PHC0021), P65_30kD, P65_5kD, E62_30kD, 또는 E62_5kD의 2μM에서 시작하는 2배 희석 시리즈로 이중으로 프로빙하였다. 결합을 측정하기 위해 테스트 샘플을 60초 동안 주입한 다음, 해리를 측정하기 위해 30초 동안 완충액만(세척)을 주입하였다. 반응 단위(RU, Y축)는 시간(s, X축)에 대해 플로팅한다.
β에 대한 IL-2 결합에 미치는 IL-2 수용체 α 서브유닛의 효과를 평가하기 위해, α를 β에 비해 약 2배 과량으로 포획하였다. 이러한 표면에, 천연 IL-2(야생형 IL-2), P65_30kD, P65_5kD, E62_30kD, 또는 E62_5kD를 2.5μM에서 시작하는 3배 희석 시리즈에 적용하였다. 결합 데이터는 벌크 이동을 포함하는 1:1 상호작용 모델에 피팅시켰으며 추출된 동역학 파라미터는 표 2A 및 표 2B에 요약되어 있다. 표 2A 및 표 2B와, 도 4a~4b에 나타낸 바와 같이, 작은 PEG는 IL2R 알파 결합을 없애지만 IL2R 베타 결합에 대한 비특이적 영향이 더 적다.
[표 2A]
Figure pct00214
[표 2B]
Figure pct00215
고정화된 IL-2Rα를 포함하는 센서 표면에서, 천연 IL-2는 빠른 결합과 느린 해리의 동역학을 보였으며, 이는 높은 친화성 결합을 보여준다(도 4a). 대조적으로, P65_30kD와 E62_30kD는 2μM의 최고 테스트 농도에서도 IL-2Rα 표면과 상호작용하지 않는다(도 4a). 유사하게, F42_30kD는 IL-2 IL-2Rα 표면과 상호작용하지 않았다(도 4c). 고정화된 IL-2 Rβ를 포함하는 표면은 천연 IL-2(야생형 IL-2) 및 IL-2 P65_30kD(도 4b)뿐만 아니라 F42_30kD(도 4c)와도 비슷한 결합 및 해리 반응을 보였다. β 서브유닛에 대해 화합물 사이에서 관찰된 KD의 적당한 차이는 이 PEG화된 화합물의 유체 역학적 반경의 변화(더 낮은 확산 계수)뿐만 아니라 먼 결합 표면에 대한 큰 PEG 모이어티의 비특이적 차폐 효과에서도 예상되는, 천연 IL-2에 비해 IL-2 P65_30kD의 온-레이트(on-rate) 감소 때문이다. 이러한 결과는 P65_30kD, E62_30kD, 및 F42_30kD가 IL-2Rβ에 대한 결합을 대체로 유지하는 반면 IL-2Rα 상호작용에 결함이 있음을 시사한다.
1차 인간 백혈구 제거 시스템(LRS: leukocyte reduction system) 유래 PBMC 샘플에서 IL-2 화합물의 생체 외 면역 반응 프로파일링
IL-2 P65_30kD, K64_30kD, K43_30kD, K35_30kD, 및 F42_30kD의 차별적 수용체 특이성이 어떻게 1차 면역 세포 하위 집단의 활성화에 영향을 미치는지 결정하기 위해, 인간 LRS 유래 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 샘플에서 림프구 활성화의 농도-반응 프로파일링을 다색 유세포 분석법을 사용하여 수행하였다. 이 연구는 PrimityBio LLC(Fremont, CA)에서 수행하였다. 신선한 LRS 유래 샘플은 30 μg/mL의 최고 농도로 시작하는 5배 희석 시리즈의 천연 IL-2, L-2 P65_30kD, K64_30kD, K43_30kD, K35_30kD, 및 F42_30kD로 처리하였다. 45분 인큐베이션 후 샘플을 고정하고 항체로 염색하여 IL-2 수용체 신호전달 복합체의 상류 결합 및 활성화 마커인 전사 인자 STAT5(pSTAT5)의 인산화된 형태, 및 특정 T 세포 및 자연 살해(NK) 세포 하위 집단에서 pSTAT5 형성을 추적하는 표면 마커 패널을 검출하였다. LRS 유래 PBMC 샘플의 유세포 분석 연구를 위한 염색 패널에는 마커에는 이펙터 T 세포(Teff: CD3+, CD4+, CD8+, CD127+), NK 세포(CD3-, CD16+) 및 조절 T 세포(Treg: CD3+, CD4+, CD8-, IL-2Rα+, CD127-1)에 대한 마커가 포함된다.
농도-반응 모드에서 상이한 T 및 NK 세포 서브세트의 활성화에 대해 유세포 분석 데이터를 분석하여, 천연 IL-2(도 5a 및 5g), E62_30kD(도 5h), P65_30kD(도 5b 및 5i), K64_30kD(도 5c), K43_30kD(도 5d), K35_kDa(도 5e), 및 F42_30kDa(도 5f)로 처리 후 pSTAT5 축적을 판독하였다. IL-2 Rα의 Treg-특이적 발현의 결과, 천연 IL-2는 CD8 Teff 및 NK 세포에 비해 Treg에서 pSTAT5 자극에 대한 증가된 효력을 보여주었다. 천연 화합물과 비교하여, 도 5b~5f에 표시된 PEG화된 변이체는 CD8 T 세포 및 NK 세포 집단에서 적당하게 감소된 효력을 보여주지만, 천연 IL-2에 대해 IL-2 Rα 발현 Treg 세포에서 효력의 차별적 감소를 보여준다.
표 3은 표시된 IL-2 변이체로 처리된 인간 LRS 샘플 또는 CTLL-2 증식에서의 pSTAT5 신호전달에 대한 용량 반응 EC50(EC50)을 제공한다.
[표 3]
Figure pct00216
EC50 값(pg/mL)은 MFI 플롯에서 생성된 용량 반응 곡선으로부터 계산하였다.
실시예 3
PEG 및 잔기 치환은 무-알파 약리학에 기여한다
PEG 및 잔기 치환이 IL-2 E62의 무-알파 약리학에 영향을 미치는지의 여부를 결정하기 위해, 인간 LRS 유래 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 샘플에서 림프구 활성화의 농도-반응 프로파일링을 다색 유세포 분석법을 사용하여 수행하였다. 이 연구는 PrimityBio LLC(Fremont, CA)에서 수행하였다. 신선한 LRS 유래 샘플을 30 μg/mL의 최고 농도로 시작하는 5배 희석 시리즈의 천연 IL-2, E62K, 또는 E62_30kD로 처리하였다. 45분 인큐베이션 후, 샘플을 고정하고 항체로 염색하여 IL-2 수용체 신호전달 복합체의 상류 결합 및 활성화 마커인 전사 인자 STAT5(pSTAT5)의 인산화된 형태, 및 특정 T 세포 및 자연 살해(NK) 세포 하위 집단에서 pSTAT5 형성을 추적하는 표면 마커 패널을 검출하였다. LRS 유래 PBMC 샘플의 유세포 분석 연구를 위한 염색 패널에는 마커인 CD4, CD4+ 기억 중심, CD4+ 기억 이펙터, CD4+ 기억 T 세포, CD4+ 나이브 T 세포, CD4+ T 세포, CD8, CD8+ 기억 중심, CD8+ 기억 이펙터, CD8+ 기억 T 세포, CD8+ 나이브 T 세포, CD8+ T 세포, NK 세포, 및 T 조절 세포가 포함된다.
IL-2(도 6a), E62K(도 6b), 또는 E62_30kD(도 6c)에서 상이한 T 및 NK 세포 서브세트의 활성화에 대해 유세포 분석 데이터를 분석하였다. 이러한 결과는 위치 62에서의 아미노산 잔기 치환 및 변형된 위치에서의 AzK-PEG화가 IL-2 Rα 결합의 감소에 기여할 수 있고 이들 수용체를 발현하는 1차 림프구에서 차별적 효력을 초래할 수 있음을 입증한다.
[표 4]
Figure pct00217
실시예 4
무-알파 약리학은 PEG 크기와 무관하다
IL-2 콘쥬게이트는 PathHunter IL-2 사이토카인 수용체 분석을 사용하여 Discoverx(Fremont CA)에서 기능적 활성에 대해 스크리닝하였다. 이 분석은 각각 분할 리포터 효소 β-갈락토시다아제의 절반에 융합된 IL-2 수용체 β(IL-2Rβ) 및 γ(IL-2Rγ) 서브유닛을 발현하는 재조합 인간 U2OS 세포주를 사용한다. 두 번째 세포주는 IL-2Rα 서브유닛을 발현하도록 추가로 조작하였다. 이 두 세포주를 사용한 동시 테스트를 통해 IL-2 수용체 αβγ 및 기저 βγ 복합체의 변이체 활성화를 평가할 수 있다. IL-2 βγ 수용체 복합체에 대한 IL-2 작용제 활성은 수용체 이량체화 및 리포터 β-갈락토시다아제 재구성을 자극하여 화학 발광 신호를 생성한다. 분석은 각 테스트 물품의 EC50을 결정하기 위해 작용제 모드에서 실행하였으며, IL2Rα 양성 세포 유형과 음성 세포 유형 사이의 용량 반응 곡선 프로파일을 비교하면 관찰된 활성에 대한 IL2Rα의 기여도를 결정할 수 있다.
도 7은 5kD 및 30kD PEG로 PEG화된 화합물의 관찰된 효력이 IL-2 Rα를 발현하는 세포뿐만 아니라 IL-2 Rβγ만을 발현하는 세포에서도 유사하였음을 보여준다. 이러한 결과는 이들 화합물에 의한 IL-2 Rα 결합의 감소가 PEG 콘쥬게이트의 분자량에 민감하지 않음을 시사한다.
실시예 5
나이브(E3826-U1704) 및 B16-F10 종양 보유(E3826-U1803) C57BL/6 마우스에서의 PK/PD 연구
연구 설계는 표 5 및 6에 요약되어 있으며, 여기서 용량은 PEG 모이어티의 질량을 포함하지 않는 단백질 성분의 질량을 참조하여 계산하였다. 표시된 지점에서 심장 천자를 통해 말기 혈액 샘플을 수집하였다. 연구 E3826-U1704는 각 시점당 3마리의 마우스를 희생시키는 13개 시점(0.13, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96 및 120시간)을 포함하였으며 시켰으며, 연구 E3826-U1803은 각 시점당 4~7마리의 마우스를 희생시키는 9개 시점(2, 8, 12, 24, 48, 72, 120, 168 및 240시간)을 포함하였다. PK 및 PD 분석을 위해 혈장 및 혈액 세포(두 연구 모두에서)를 수집하고, 연구 E3826-U1803에서 종양을 수집하였다.
적격 인간 IL-2 ELISA 분석(Abcam, Cambridge, UK)을 사용하여 혈장 샘플의 생물 분석을 수행하였다. 알데스류킨, E62_30kD 및 P65_30kD와 혈장으로부터 유래된 샘플의 내부 표준의 농도는 ELISA 분석을 사용하여 결정하였다. PK 데이터 분석은 NW Solutions(Seattle, WA)에서 수행하였다. PK 데이터는 분석을 위해 Phoenix WinNonlin v6.4(Certara/Pharsight, Princeton, NJ)로 임포트하였다. 군 평균 혈장 농도 대 시간 데이터는 IV 볼루스 투여 모델을 사용하여 비구획 방법으로 분석하였다.
[표 5]
Figure pct00218
[표 6]
Figure pct00219
0.3 mg/kg의 P65_30kD, E62_30kD, E62_5kD 및 알데스류킨의 혈장 농도 프로파일은 도 8에 플로팅되어 있다.
연구 E3826-U1704에서, P65_30kD 및 E62_30kD는 모두 표 5에 요약된 바와 같이 알데스류킨에 비해 우수한 PK 프로파일을 나타낸다. 알데스류킨의 단회 IV 볼루스 투여 후, Tmax는 투약 후 0.03시간(투약 후 최초 측정 시점)에 관찰되었고 평균 혈장 농도는 투약 후 4시간까지 측정할 수 있었다. P65_30kD 및 E62_30kD의 단회 IV 볼루스 투약 후, Tmax는 투여 후 0.03시간에 관찰하였고 평균 혈장 농도는 투여 후 120시간까지 측정할 수 있었다(마지막 측정 시점). 별개의 연구에서, E62_5kD의 IV 투약 후 Tmax는 투약 후 0.133시간에 관찰되었고 평균 혈장 농도는 투약 후 12시간까지 측정 가능하였다.
Cmax 및 AUC0-t를 기준으로 한 노출은 다음과 같다: P65_30kD >E62_30kD >> E62_5kD> 알데스류킨. PEG가 더 작은 E62_5kD는 rIL-2에 더 가까운 PK 프로파일을 가졌다. P65_30kD 노출은 각각 Cmax와 AUC0-t를 기준으로 알데스류킨보다 5.5배 및 200배 높았다. 또한, P65_30kD는 알데스류킨에 비해 23배 확장된 t1/2(13.3 h 대 0.57 h) 및 약 198배 감소된 CL(6.58 대 1300 mL/h/Kg)을 보였다. P65_30kD 및 E62_30kD 둘 모두의 경우, 분포 부피(각각 82.4 및 92.3 mL/Kg)는 알데스류킨에 비해 약 4.2 내지 4.7배 감소했으며 마우스의 혈액 부피와 유사하였다(85 mL/Kg; [Boersen 2013]). 이는 P65_30kD와 E62_30kD가 대부분 전신 순환에 분포되어 있음을 시사한다.
[표 7]
Figure pct00220
실시예 6
말초 혈액 구획에서의 약력학적 관찰
STAT5 인산화 및 세포 증식 유도(초기 분자 마커 Ki-67 및 세포 카운트)를 약력학 판독값으로 사용하여 P65_30kD의 약동학에 대한 그의 약리학적 프로파일을 평가하였다. pSTAT5 PD 마커는 CD8+ 이펙터 T 세포에서 P65_30kD 및 알데스류킨 둘 다에 대해 PK와 좋은 상관관계를 나타냈다(표 7). pSTAT5의 지속적인 상승은 NK 및 CD8+ T 세포에서 72시간까지, Treg에서 24시간까지 관찰되었다. pSTAT5 유도는 알데스류킨을 투약한 마우스에서 단지 2시간 후에 기준선으로 돌아왔다(도 8). STAT5 인산화는 CD8+ 이펙터 T 세포 및 NK 세포의 증식 반응(72~120시간)으로 번역되었지만 T reg에서는 그렇지 않았다(도 9a~9c), CD8+ 이펙터 T 세포의 표현형 분석에 의하면 이 집단 내에서 CD44+ 기억 세포의 상당한 확장이 나타났다(도 10a~10b).
B16-F10 종양-보유(E3826-U1803) C57BL/6 마우스의 종양 구획에서의 약력학적 관찰
표 8은 B16-F10 종양 보유 마우스에서 3 mg/kg의 P65_30kD 단회 용량 후 혈장 및 종양 약물 농도를 보여주며, 여기서 용량은 PEG 모이어티의 질량을 포함하지 않는 단백질 성분의 질량을 참조하여 계산하였다. 종양 반감기는 혈장 반감기(24.4 대 12.6)의 2배였으며, 이는 P65_30kD가 종양을 투과하고 종양 내에 유지됨을 나타낸다. 곡선의 꼬리 끝 교차는 혈장이 종양보다 빠르게 제거함을 보여준다(데이터는 미제시). 종양:혈장 AUC 비는 각각 1 및 3 mg/kg 용량에 대해 9.7% 및 8.4%였다.
[표 8]
Figure pct00221
도 11a~도 11b는 B16F10 종양에서 P65_30kD에 의한 NK 및 CD+ T 세포의 확장을 보여준다. 도 11a는 3 g/kg의 P65_30kD의 단회 IV 볼루스 용량으로 처리한 후 종양 CD3+ T 세포 집단에서 NK 세포, CD8+ 세포 및 Treg의 백분율을 보여준다. 종양 샘플은 유세포 분석법에 의해 처리 5일 후 면역 세포 집단에 대해 분석하였다. 각 데이터 포인트는 각 시점에서 3회 반복의 평균 ± SEM을 나타낸다. 표시된 세포 집단 데이터는 제5일 종양 샘플에서 얻은 것이며 CD8/Treg 비는 제7일 샘플로부터 계산하였다. 도 11b는 3 mg/kg의 P65_30kD의 단회 IV 볼루스 용량으로 처리한 후 7일에 CD4+ 조절 T 세포에 대한 CD8+ 이펙터의 비를 보여준다. 각 데이터 포인트는 각 시점에서 3회 반복의 평균 ± SEM을 나타낸다.
Balb/c 마우스 E3826-U1802에서의 MTD 연구
P65_30kD의 용량 범위 연구는 Crown Biosciences, Inc.(미국 캘리포니아 주 샌디에고)의 나이브 암컷 Balb/c 마우스에서 수행하였다. 연구 설계는 표 9에 나타내며, 여기서 용량은 PEG 모이어티의 질량을 포함하지 않는 단백질 성분의 질량을 참조하여 계산하였다. 혈액 샘플은 7개의 시점(0.25, 1, 4, 12, 24, 34, 48 및 72시간)에 하악 정맥을 통해 채취하였다. PK 및 PD 분석을 위해 혈장 및 혈액 세포를 모두 수집하였다.
모든 혈장 샘플은 시판되는 ELISA 키트를 사용하여 인간 IL-2뿐만 아니라 마우스 IL-2, TNF-α, IFNγ, IL-5, 및 IL-6 사이토카인에 대해서도 분석하였다.
[표 9]
Figure pct00222
Balb/c 마우스를 사용한 MTD 연구에서의 독성 관찰
고용량 알데스류킨과 관련된 독성의 대다수는 혈관 누출 증후군 및 관련 사이토카인 방출 증후군(CRS: Cytokine Release Syndrome)이다. 마우스에서 이 효과의 가능성을 평가하기 위해, 0.01~5.0 mg/kg 용량 범위의 용량으로 P65_30kD의 단회 용량 IV 투여를 수행하였으며(표 10), 여기서 용량은 PEG 모이어티의 질량을 포함하지 않는 단백질 성분의 질량을 참조하여 계산하였다. 수행한 분석은 혈액학, 조직병리학, 장기 중량, 및 사이토카인 분석이었다. P65_30kD 또는 알데스류킨 둘 다에 의해 비히클 대조군 마우스에 비해 혈액학, 조직병리학 또는 체중에서 이상이 관찰되지 않았다. 사이토카인 분석과 관련하여, 알데스류킨이 1 mg/kg 내지 5 mg/kg으로 시작하여 혈장 IL-5 수준을 상승시키는 것으로 관찰되었다(도 12a). P65_30kD의 경우, IL-5의 중간 정도의 증가(그러나 알데스류킨에 비해 적음)는 5 mg/kg 용량에서만 나타났다(도 12b). 알데스류킨과 P65_30kD 모두에서 IFNγ의 전신 수준의 일시적인 상승이 관찰되었다.
실시예 7
시노몰구스 원숭이의 PK/PD - 연구 번호: 20157276
P65_30kD의 약동학적 및 약력학적 프로파일은 0.3 mg/kg의 단회 정맥내 용량을 투여한 후 비-나이브 시노몰구스 원숭이에서 평가하였으며, 여기서 용량은 PEG 모이어티의 질량을 포함하지 않는 단백질 성분의 질량을 참조하여 계산하였다. 이 연구는 Charles River Laboratories, Inc.(Reno, NV)에서 수행하였으며 PK 데이터 분석은 NW Solutions(Seattle, WA)에서 수행하였다. 혈액 샘플은 투여 전과 21개의 시점(투약 후 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 36, 48, 72, 120, 144, 168, 192 및 240시간)에 수집하였다. PK 및 PD 분석을 위해 혈장 및 혈액 세포 모두를 수집하였다. PK, PD, 세포 집단 및 혈액학적 분석에 선택한 시점을 사용하였다.
모든 혈장 샘플은 시판되는 ELISA 키트를 사용하여 인간 IL-2(PK 판독)에 대해 분석하였다.
표 10은 시노몰구스 원숭이에서의 P65_30kD PK 파라미터를 보여준다.
[표 10]
Figure pct00223
단회 IV 볼루스 투약 후 Tmax는 투약 후 0.5 시간(투약 후 처음 측정된 시점)에서 관찰하였고 평균 혈장 농도는 투약 후 168시간까지 측정 가능하였다(마지막 측정). P65_30kD에 대한 t1/2 및 AUC는 각각 13.6 h 및 121000 hr*ng/mL이었다.
혈액학적 파라미터 - 시노몰구스 원숭이-연구 번호: 20157276
혈액학적 파라미터의 경우 평가 시점은 투약 전 제-1일 및 투약 후 제1일, 제3일, 제6일, 제8일, 제10일, 제12일, 제14일, 제17일, 제19일, 제21일에 해당 해당한다.
도 13은 절대 백혈구 및 감별 카운트를 보여준다. 데이터는 평균 ± SD(N = 2마리 동물/용량 군)를 나타낸다.
백혈구(WBC) 하위 집단의 분석은 WBC 카운트가 크게 증가한 것이 P65_30kD의 메커니즘과 일치하는 림프구 세포 집단의 확장 때문이었음 보였다. 호산구의 상승은 없다.
실시예 8
다양한 PEG IL-2 화합물로 처리된 1차 림프구에서의 Treg 확장 마커
신선한 인간 백혈구 제거 시스템(LRS)으로부터의 1차 림프구를 수확하고, 피콜로 프렙하고(prepped), 4℃에서 하룻밤 휴지시켰다. 다음날, FACS를 사용하여 CD8 양성 T 세포, NK 세포 및 Treg를 포함한 림프구 집단을 분류하였다. 단리된 집단을 2일 동안 플레이트 결합된 항-CD8/CD28로 자극하였다. 천연 IL-2 및 K9_30kD의 용량 곡선은 37℃에서 인큐베이션하였다. 셋째 날, 배지를 다시 채우고 화합물의 용량 곡선을 다시 추가하였다. 제6일에, 세포를 수확하고 유세포 분석을 사용하여 분석하여 CD25 수준과 Ki-67을 증식 척도로서 프로파일링하였다. 도 16은 PEG IL-2 화합물이 정상 IL-2 대조군과 비교하여 1차 림프구에서 생체 외에서 면역 세포 집단을 특이적으로 확장시킬 수 있음을 보여준다. 도 16a는 IL-2 (대조군)로 처리한 후 면역 세포 확장에 대한 마커 Ki67을 보여준다. 도 16b는 P65_30kD로 처리한 후 면역 세포 확장에 대한 마커 Ki67을 보여준다.
실시예 9
PEG 크기를 조절하여 생체 내 제거율에 대한 약동학을 조정할 수 있다
참조 화합물인 알데스류킨(Proleukin)과 비교하여 5kD 및 30kD mPEG로 변형된 PEG화된 IL-2 변이체 E62의 PK/PD 관계를 조사하였다. 16~22 g 범위의 6~8주령 C57/Bl6 마우스의 4개 군이 있었으며, 각 군은 12마리의 마우스를 포함하였다. 마우스에 제0일, 시간 0에 단회 IV 주사를 통해 용량을 제공하였다. 표시된 시점에서, 처리를 위해 약 100 ul의 전혈을 EDTA 튜브에 수집하였다. 50 ul를 유세포 분석을 위해 완충액에서 고정하고 ELISA 분석을 위해 나머지 샘플로부터 혈장을 추출하였다. 말기 채혈을 위해, 약 300 ul의 전혈을 고정하고, 나머지 샘플은 혈장을 위해 스핀 다운하여 ELISA에 사용하였다.
10 mL/kg으로 IV 투약하기 전에 테스트 물품을 PBS에서 37.5 ug/ml로 제형화하고, 100 μL 샘플을 투약 후 t = 8분, 15분, 30분, 및 1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96 및 120시간에 수집하였다. 표 11은 치료 요법을 예시하며, 여기서 용량은 PEG 모이어티의 질량을 포함하지 않는 단백질 성분의 질량을 참조하여 계산하였다. 표 12는 생체 내에서의 다양한 제거율을 보여준다.
Figure pct00224
Figure pct00225
실시예 10
Figure pct00226
실시예 11
1차 인간 백혈구 제거 시스템(LRS) 유래 PBMC 샘플에서 예시적인 IL-2 화합물의 생체 외 면역 반응 프로파일링
예시적인 IL-2 화합물의 차별적 수용체 특이성이 1차 면역 세포 하위 집단의 활성화에 어떻게 영향을 미치는지 결정하기 위해, 인간 LRS 유래 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 샘플에서 림프구 활성화의 농도-반응 프로파일링을 다색 유세포 분석법을 사용하여 수행하였다. 표 13의 콘쥬게이트는 서열 번호 1을 변형하여 합성하였다. 이 연구는 PrimityBio LLC(Fremont CA)에서 수행하였다. 인간 LRS 샘플로부터 유래된 1차 림프구를 예시적인 IL-2 화합물의 희석 시리즈로 처리하고 표 12에 제시된 패널을 사용하여 각 림프구 세포 유형에서 pSTAT5 신호전달에 기초하여 정량화하였다.
[표 12]
Figure pct00227
예시적인 IL-2 변이체 K9_30kD로 처리한 후 pSTAT5 축적을 판독하면서 농도-반응 모드에서 상이한 T 및 NK 세포 서브세트의 활성화에 대해 유세포 분석 데이터를 분석하였다.
도 15a~도 15b는 인간 LRS 1차 세포에서 pSTAT5 신호전달(도 15a) 및 마우스 CTLL-2 집단에서 증식 반응(도 15b)에 대한 용량 반응 곡선을 보여준다.
표 13은 표시된 IL-2 변이체로 처리된 인간 LRS 샘플 또는 CTLL-2 증식에서 pSTAT5 신호전달에 대한 용량 반응 EC50(EC50)을 보여준다.
[표 13]
Figure pct00228
EC50 값(pg/ml)은 MFI 플롯에서 생성된 용량 반응 곡선에서 계산하였다.
* 각 개별 실험에서 실행된 천연 IL-2(야생형 IL-2)와 비교한 Treg 효력 변화.
실시예 12
C57BL/6 마우스에서의 PK 연구
실험 세부 사항은 표 14에 요약되어 있으며, 여기서 용량은 PEG 모이어티의 질량을 포함하지 않는 단백질 성분의 질량을 참조하여 계산하였다.
[표 14]
Figure pct00229
2가지 용량 수준에서 예시적인 PEG화된 IL-2 화합물 K35_30kD의 약동학적 특성을 평가하였다. 동결건조된 테스트 물품을 PBS에서 재구성하고, 9마리의 수컷 C57BL/6 마우스에게 각 용량 군에 대해 정맥내 꼬리 정맥 주사를 통해 0.3 및 3 mg/kg을 투약하였다(아래 수집 세부 사항 참조). 혈액 샘플은 투약 후 0.08, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 12 및 24시간에 수집하였다. 천연 마우스 IL-2와 교차 반응하지 않는 Abcam(ab100566)의 hIL-2 ELISA 키트를 테스트 물품의 검출 및 정량화에 사용하였다. 천연 및 PEG화 화합물의 키트 검출 민감도의 ELISA 특이적 차이를 조정하기 위해, 테스트 물품 희석 완충액을 사용하여 천연 IL-2 및 K35_30kD 테스트 물품 표준 곡선을 생성하고 각 표준 곡선에 대한 데이터를 분석하였다. 플로팅된 데이터는 전술한 3개의 개별 샘플(생물학적 복제)의 평균 및 SEM을 나타내며, K35_30kD 테스트 물품에 대한 PK 파라미터를 추출하여 표 15에 요약하였다.
[표 15]
Figure pct00230
실시예 13
인간 IL-2R 알파 및 IL-2R 베타에 대한 결합의 특성화
예시적인 IL-2 콘쥬게이트 IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1의 인간 IL-2R 알파 및 IL-2R 베타에 대한 결합을 특성화하기 위한 연구를 수행하였다.
IL-2R 알파에 결합하는 테스트 물품 샘플. 용액의 테스트 물품 샘플을 IL-2R 알파 수용체 표면에 대한 결합에 대해 테스트하였다. 반응 데이터는 Scrubber-2(Biologic Software Pty Ltd)를 사용하여 완충액 주입의 평균뿐만 아니라 수용체가 없는 참조 표면에서 신호를 차감하여 처리하였다. rhIL-2 농도 시리즈에 대한 반응을 매스 수송을 위한 단계를 포함하여 1:1 상호작용 모델에 전체적으로 피팅하였다(도 17a~17b). 결합 상수에 대한 요약은 표 16에 제공한다.
[표 16]
Figure pct00231
단백질 코팅된 CM4 센서 칩 상의 Fc-태그된 IL-2R 베타의 포획. CM4 센서 칩을 Biacore 4000 광학 바이오 센서에 도킹하고 기기를 HBS-P 실행 완충액으로 3회 프라이밍하였다(HBS-P는 0.005% Tween-20이 추가된 1X HBS-N임). 단백질 A는 표준 NHS/EDC 커플링 조건을 사용하여 커플링하였다. IL-2R 베타-Fc를 물에 0.1 mg/ml의 농도로 용해시킨 다음 1/1000으로 HBS-P 실행 완충액에 희석하였다. IL-2R 베타-Fc는 2개의 다른 밀도 수용체 표면을 생성하기 위해 다른 기간 동안 주입하였다(대략 750 RU 및 1500 RU, 데이터는 미제시).
IL-2R 베타에 결합하는 샘플의 특성화. 용액의 테스트 물품 샘플을 IL-2R 베타 수용체 표면에 대한 결합에 대해 테스트하였다. 반응 데이터는 Scrubber-2(Biologic Software Pty Ltd)를 사용하여 완충액 주입의 평균뿐만 아니라 수용체가 없는 참조 표면에서도 신호를 차감하여 처리하였다. 이중으로 테스트된 rhIL-2(4 uM 최고 농도 2배 희석) 및 IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1 샘플(8 uM 최고 농도 2배 희석)에 대한 반응을 도 17c~17d에서 나타낸 바와 같이 매스 수송을 위한 단계를 포함하여 1:1 상호작용 모델에 전체적으로 피팅시켰다. 결합 상수에 대한 요약은 표 16에 제공한다.
결과. His-태그된 IL-2R 알파는 Biacore SPR 바이오센서 시스템 내의 니켈 충전 NTA 센서 칩 상에서 상이한 밀도로 포획되었다. Fc-태그된 IL-2R 베타는 단백질 A 코팅된 CM4 센서 칩 상에서 상이한 밀도로 포획되었다. 반응 데이터를 1:1 상호작용 모델에 피팅시켜 각 상호작용에 대한 결합 상수를 결정하였다. 재조합 인간 IL-2(rhIL-2)는 대략 11 nM의 친화도로 IL-2R 알파에 결합된 반면, IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 샘플의 결합은 IL-2R 알파에 대해 검출할 수 없었다. rhIL-2는 대략 700 nM의 친화도로 IL-2R 베타에 결합하였고, IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1은 대략 3 uM의 친화도로 IL-2R 베타에 결합하였다(이 테스트 조건 하에서).
실시예 14
전사 인자 STAT5(pSTAT5) 신호전달 효력 인간 1차 면역 세포 유형의 인산화된 형태에 대한 IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1 대 재조합 인간 인터류킨-2(hIL-2)의 효력 및 차별적인 세포 유형 특이성을 결정하기 위한 연구를 수행하였다. .
인간 PBMC 샘플 처리 방법. IL-2(대조군, 1 mg/mL) 및 IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1("로트 1": 1.27 mg/mL; "로트 2": 2.29 mg/mL)의 스톡은 동결 된 스톡 용액으로 -20℃에 보관하였다.
IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1 로트 1 및 로트 2 화합물을 PBS에 희석하고 IL-2를 PBS + 0.1% BSA를 사용하여 희석하여 10X 스톡을 생성하였다. 10X IL-2 스톡 농도는 5 ug/ml이었고 GLP-1 및 GLP-2 스톡은 실험에 따라 6~300 μg/ml 사이였다. 10X 스톡을 연속 5배 희석으로 희석하여 10 포인트 용량 적정을 생성하였다. IL-2의 최고 용량은 5 ug/ml이었고 로트 1 및 로트 2 스톡은 실험에 따라 6~300 μg/ml 사이였다. 각 스톡의 10 ul를 90 μl의 세포 샘플에 첨가하여 500 ng/ml의 IL-2에 대한 최종 최고 용량 및 로트 1 및 로트 2 각각에 대해 0.6~30 μg/ml을 달성하였다.
샘플 자극. 자극을 위해, 위에서 개략적으로 설명한 용량 적정의 10 μl를 37℃까지 미리 평형화된 혈액 샘플 90 μl에 첨가하였다. 샘플을 37℃에서 45분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 기간 마지막에 적혈구를 용해시키고 세포를 다음과 같이 동시에 고정하였다.
100 μl의 세포를 900 μl의 BD Lyse/Fix 완충액(Beckton Dickinson, 카탈로그 번호 558049)로 옮기고 즉시 볼텍싱하였다. BD Lyse/Fix는 첨가 직전에 스톡을 세포 배양수로 1:5로 희석하여 준비하였다. 샘플을 실온에서 10분 동안 인큐베이션한 다음, 450 x g에서 5분 동안 원심 분리하여 세포를 펠렛화하였다. 펠렛화 세포를 PBS+0.5% BSA로 세척하고 분석할 때까지 -37℃에서 보관하였다.
염색 프로토콜.
단계 1. 실온에서 세포를 해동시킨다. 단계 2. Fc Block(TruStain FcX™)을 첨가한다. 단계 3. 실온에서 5분 동안 인큐베이션한다. 단계 4. 표 17의 다음 항체를 첨가한다.
[표 17]
Figure pct00232
단계 5. 실온에서 20분 동안 인큐베이션한다. 단계 6. PBS + 0.5% BSA로 세포를 2회 세척한다. 단계 7. 10 부피의 메탄올을 1 부피의 세포에 첨가하여 세포를 투과화시킨다. 단계 8. 세포를 4℃에서 10분 동안 인큐베이션한다. 단계 9. PBS로 세척한다. 단계 10. PBS w/0.5% BSA로 세포를 세척한다. 단계 11. Fc Block(TruStain FcX ™)을 첨가한다. 단계 12. 표 18의 다음 투과화 후 염색 패널을 첨가한다.
[표 18]
Figure pct00233
유세포 분석 및 데이터 분석. 5개의 레이저(372 nM, 405 nM, 488 nM, 561 nM, 및 640 nM)를 사용하여 Becton Dickinson Fortessa 및 LSR II 기기에서 샘플을 실행시켰다. 기기에는 산란 파라미터를 포함하여 20개의 검출기가 장착되어 있다. 기기는 Becton Dickinson Cytometer Setup 및 Tracking Beads를 사용하여 정기적으로 보정하였다. 염색된 샘플을 포함하는 96웰 플레이트를 96웰 고 처리량 샘플러를 사용하여 초당 8,000개 세포 미만으로 실행시켰다.
데이터를 네트워크 드라이브에 .fcs 파일로서 엑스포트하고 형광단의 유출을 설명하기 위해 보상하고 fcs 파일에 주석을 추가한다. 그 후 fcs 파일을 도 18에 도시된 전략에 따라 게이팅한다. 세포를 먼저 FSC-A x FSC-H를 사용하여 단일선에 게이팅하여 모든 응집체 또는 이중선을 제외시킨다(도 18, 단일선 게이트, 첫 번째 패널). 이 게이트 내에서 세포를 중간에서 높은 전방 산란(FSC-A) 및 측면 산란(SSC-A)으로 게이트하여 적혈구, 파편 및 과립구를 제외시킨다(도 18, 림프구 게이트, 두 번째 패널). 그 후 T 세포를 CD3+, CD56/16 음성 집단 세 번째 패널로 게이팅한다. NK 세포를 CD3 음성, CD56/16 고 집단, 세 번째 패널로 식별한다. 그 후 T 세포를 CD4+ T 세포와 CD8+ T 세포로 나눈다(도 18, 네 번째 패널). 그 후 Treg를 CD25hi x C127lo 집단(도 18, 다섯 번째 패널)으로 CD4+ T 세포로부터 게이팅한다.
EC50 값의 유도를 위한 통계 및 플로팅. 각 세포 집단, 공여자, 및 화합물 처리에 대한 중앙 형광 강도(MFI)를 인산화 검출 채널의 신호로부터 계산하였다. 통계는 Spotfire를 사용하여 분석하였다. Spotfire 내에서, 데이터는 화합물 용량에 대한 로그 스케일과 MFI 판독값에 대한 선형 스케일로 플로팅하였다. 이 데이터는 4-파라미터 로지스틱 회귀 방정식을 사용하여 피팅시켰다. 곡선의 변곡점으로 EC50을 계산하였다.
결과. 인간 IL-2 및 IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1 샘플을 희석하고 전술한 바와 같이 3명의 개별 공여자 각각에 대해 삼중으로 테스트하였다. 계산된 최대 절반 유효 농도(EC50) 값은 표 19에 나열한다. 결과는 IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1이 인간의 림프구에서의 IL-2 수용체 신호전달의 강력한 작용제임을 입증한다. IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1이 IL2Rα가 아닌 IL-2Rβ 서브유닛에 특이적으로 결합한다는 것을 보여준 이전의 시험관 내 결합 연구와 일치하여, 이것은 높은 수준의 IL-2Rα를 구성적으로 발현하지 않는 Teff 및 NK 세포와 비교하여 효력에 대해 IL-2Rα 결합에 의존하는 Treg 세포에서의 특이적으로 감소된 신호전달 효력을 입증하였다.
[표 19]
Figure pct00234
실시예 15: 인간 혈청에서 IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1의 안정성
인간 혈청 내 화합물 IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1의 시간 경과에 따른 안정성을 평가하기 위한 연구를 수행하였다. 연구를 위해 다음 재료를 사용하였다.
Figure pct00235
화합물 IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1을 PCR 튜브에서 3가지 농도(2590 ng/mL, 847 ng/mL 및 212 ng/mL)로 인간 A/B 풀링 혈청에 스파이킹하였다. 각 농도 시점은 삼중으로 준비하였다. 화합물 IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1을 25900 ng/mL, 8470 ng/mL, 및 2120 ng/mL의 스톡 농도로 제조하고 각 스톡 용액의 20 μL를 180 μL의 인간 풀링 혈청에 첨가하고, 잘 혼합하고, 37℃에서 최대 168시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후 0, 6, 24, 48, 72, 96, 120, 및 168시간에 해당하는 시점에 샘플을 수집하고, 2개의 분취량으로 나누고 배치 분석을 위해 -80℃에서 냉동시켰다. 첫 번째 샘플 세트는 제1일에 분석하였고 두 번째 샘플 세트는 다른 날에 분석하였다.
염소 항-인간 IL-2 및 PEG 다클론 항체를 사용하는 맞춤형 ELISA 형식을 사용하여 분석 당일에 샘플을 실온에서 해동시켰다. ELISA 플레이트를 1 μg/mL α-인간 IL2 항체로 4℃에서 하룻밤 코팅하고 플레이트 워셔를 사용하여 1xPBS로 3x300μL로 세척하였다. 분석 플레이트를 PBS 중 1% 카제인으로 1시간 동안 차단 하였다. 테스트 샘플을 인간 혈청으로 미리 희석하여 ELISA의 검출 범위가 되게 하였다. 또한, 보정 표준 및 QC 샘플을 인간 혈청 매트릭스를 사용하여 니트(neat) 농도로 준비하였다. 모든 샘플을 분석 완충액(1% 카제인)에 MRD(최소 요구 희석)로 25배 희석하였다. 샘플을 플레이트에 첨가하고 플레이트 셰이커에서 실온에서 2시간 동안 밀봉하고 플레이트 워셔를 사용하여 1 x PBS로 3x300 μL로 세척하였다. 2차 검출 항체인 α-PEG(토끼)를 1 μg/mL로 웰당 100 μL로 첨가하고 플레이트 쉐이커에서 실온에서 1시간 동안 밀봉하고 플레이트 워셔로 1 x PBS로 3x300μL로 세척하였다. 최종 검출 항체인 α-토끼-HRP를 1:5000 희석액으로 준비하고 웰당 100 μL로 첨가하고 플레이트 셰이커에서 실온에서 45분 동안 밀봉하고 플레이트 워셔로 1 x PBS로 3 x 300 μL로 세척하였다. 기질을 웰당 100 μL로 첨가하고 밀봉 또는 쉐이킹 없이 30분 동안 빛으로부터 멀리 두었다. 마지막으로 50 μL의 정지 용액을 각 웰에 첨가하고 Spectramax iD5 플레이트 판독기에서 플레이트를 즉시 판독하여 모든 샘플에 대한 OD450 값을 얻었다. 4-파라미터 로지스틱 피팅 곡선 방법을 사용하여 원시 판독 값을 해당 농도로 내삽하여 샘플 농도를 결정하였다. 도 19에 나타낸 데이터는 2회 반복 ELISA 실행의 결과이다. 이 결과는 화합물 IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1이 마지막 분석 시점인 168시간까지 인간 혈청 매트릭스에서 안정하다는 것을 입증한다.
본 발명의 바람직한 실시 형태가 본원에 예시되고 설명되었지만, 이러한 실시 형태가 단지 예로서 제공된다는 것은 당업자에게 명백할 것이다. 이제, 본 발명으로부터 벗어나지 않으면서 여러 변형, 변경, 및 대체가 당업자에 의해 이루어질 것이다. 본원에 기술된 본 발명의 실시 형태에 대한 다양한 대안이 본 발명을 실시하는 데 사용될 수 있음을 이해해야 한다. 다음의 청구범위는 본 발명의 범주를 정의하고 이러한 청구범위 내의 방법과 구조 및 그 균등물은 청구범위에 포함되는 것으로 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> SYNTHORX, INC. <120> IL-2 CONJUGATES AND METHODS OF USE THEREOF <130> 46085-729.601 <140> <141> <150> 62/940,173 <151> 2019-11-25 <150> 62/899,035 <151> 2019-09-11 <150> 62/870,581 <151> 2019-07-03 <150> 62/847,844 <151> 2019-05-14 <150> 62/802,191 <151> 2019-02-06 <160> 87 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 133 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 2 <211> 153 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 20 25 30 Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 35 40 45 Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe 50 55 60 Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 65 70 75 80 Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 85 90 95 Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 100 105 110 Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 115 120 125 Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 130 135 140 Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 145 150 <210> 3 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 3 Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu 1 5 10 15 Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn 20 25 30 Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys 35 40 45 Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro 50 55 60 Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg 65 70 75 80 Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys 85 90 95 Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr 100 105 110 Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile 115 120 125 Ser Thr Leu Thr 130 <210> 4 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 4 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 5 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (65)..(65) <223> Any unnatural amino acid <400> 5 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Xaa Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 6 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (62)..(62) <223> Any unnatural amino acid <400> 6 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Xaa Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 7 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (42)..(42) <223> Any unnatural amino acid <400> 7 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Xaa Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 8 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (43)..(43) <223> Any unnatural amino acid <400> 8 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Xaa Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 9 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> Any unnatural amino acid <400> 9 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Xaa Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln 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Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (61)..(61) <223> N6-((2-azidoethoxy)-carbonyl)-L-lysine stably-conjugated to PEG <220> <223> See specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 51 Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu 1 5 10 15 Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn 20 25 30 Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys 35 40 45 Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys Pro 50 55 60 Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg 65 70 75 80 Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys 85 90 95 Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr 100 105 110 Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile 115 120 125 Ser Thr Leu Thr 130 <210> 52 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 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Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (61)..(61) <223> N6-((2-azidoethoxy)-carbonyl)-L-lysine <220> <223> See specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 76 Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu 1 5 10 15 Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn 20 25 30 Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys 35 40 45 Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys Pro 50 55 60 Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg 65 70 75 80 Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys 85 90 95 Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr 100 105 110 Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile 115 120 125 Ser Thr Leu Thr 130 <210> 77 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> 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Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu 1 5 10 15 Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn 20 25 30 Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys 35 40 45 Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys Pro 50 55 60 Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg 65 70 75 80 Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys 85 90 95 Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr 100 105 110 Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile 115 120 125 Ser Thr Leu Thr 130 <210> 82 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (41)..(41) <223> N6-((2-azidoethoxy)-carbonyl)-L-lysine <220> <223> See specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 82 Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu 1 5 10 15 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Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 20 25 30

Claims (15)

  1. 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 IL-2 콘쥬게이트로서, K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69, 및 L72(서열 번호 1 내의 아미노산 위치 참조)로부터 선택되는 아미노산 위치에서의 IL-2 콘쥬게이트에서의 하나 이상의 아미노산 잔기가 하기 화학식 I의 구조로 대체된, IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
    [화학식 I]
    Figure pct00236

    (여기서,
    Z는 CH2이고 Y는
    Figure pct00237
    이거나;
    Y는 CH2이고 Z는
    Figure pct00238
    이거나;
    Z는 CH2이고 Y는
    Figure pct00239
    이거나; 또는
    Y는 CH2이고 Z는
    Figure pct00240
    이며;
    W는 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 및 60 kDa로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
    X는 하기 구조:
    Figure pct00241
    를 가짐).
  2. 제1항에 있어서, W는 5 kDa, 10 kDa, 20 kDa, 및 30 kDa으로부터 선택되는 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
  3. 제2항에 있어서, W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
  4. 제2항에 있어서, W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기인, IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
  5. 제1항에 있어서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 45~49 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하며, [AzK_L1_PEG5kD]는 하기 화학식 IV 또는 화학식 V의 구조, 또는 화학식 IV와 화학식 V의 조합을 갖는, IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
    [화학식 IV]
    Figure pct00242

    [화학식 V]
    Figure pct00243

    (여기서,
    W는 5 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
    X는 하기 구조:
    Figure pct00244
    를 가짐).
  6. 제5항에 있어서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는, IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
  7. 제5항에 있어서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는, IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
  8. 제1항에 있어서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 50~54 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하며, [AzK_L1_PEG30kD]는 하기 화학식 IV 또는 화학식 V의 구조, 또는 화학식 IV와 화학식 V의 조합을 갖는, IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
    [화학식 IV]
    Figure pct00245

    [화학식 V]
    Figure pct00246

    (여기서,
    W는 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 PEG 기이며;
    X는 하기 구조:
    Figure pct00247
    를 가짐).
  9. 제8항에 있어서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는, IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
  10. 제8항에 있어서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는, IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
  11. 제8항에 있어서, IL-2 콘쥬게이트는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는, IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물.
  12. 제8항에 있어서, [AzK_L1_PEG30kD]는 하기 화학식 IV의 구조를 갖는, IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
    [화학식 IV]
    Figure pct00248
    .
  13. 제8항에 있어서, [AzK_L1_PEG30kD]는 하기 화학식 V의 구조를 갖는, IL-2 콘쥬게이트, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물, 또는 수화물:
    [화학식 V]
    Figure pct00249
    .
  14. 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 이를 필요로 하는 대상체에게 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 IL-2 콘쥬게이트의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  15. 제14항에 있어서, 암은 신장 세포 암종(RCC), 흑색종, 비소세포 폐암(NSCLC), 두경부 편평 세포 암(HNSCC), 요로상피 암종(UC), 메르켈 세포 암종(MCC), 난소암, 위암 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
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