CN114949240A - Il-2缀合物及其使用方法 - Google Patents

Il-2缀合物及其使用方法 Download PDF

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CN114949240A CN202210199055.4A CN202210199055A CN114949240A CN 114949240 A CN114949240 A CN 114949240A CN 202210199055 A CN202210199055 A CN 202210199055A CN 114949240 A CN114949240 A CN 114949240A
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J·普塔辛
C·E·卡法雷尔
M·米拉
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Abstract

本文公开可用于治疗一种或多种适应证的包含白介素(IL)缀合物(例如，IL‑2缀合物)的组合物、试剂盒和方法。本文还描述包含一种或多种白介素缀合物(例如，IL‑2缀合物)的药物组合物和试剂盒。

Description

IL-2缀合物及其使用方法
本申请是申请号为202080027006.1的中国专利申请(申请日：2020年2 月5日，发明名称：IL-2缀合物及其使用方法)的分案申请。
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年2月6日提交的美国临时专利申请号 62/802,191、2019年5月14日提交的美国临时专利申请号62/847,844、2019年7 月3日提交的美国临时专利申请号62/870,581、2019年9月11日提交的美国临 时专利申请号62/899,035和2019年11月25日提交的美国临时专利申请号 62/940,173的权益，将全部所述申请通过引用以其整体并入。
序列表
本申请含有以ASCII格式电子提交并且通过引用以其整体特此 并入的序列表。2020年2月4日创建的所述ASCII副本命名为 46085-729_601_SL.txt并且大小为124,806字节。
背景技术
T细胞的不同种群调节免疫系统，以维持免疫稳态和耐受性。 例如，调节性T(Treg)细胞通过防止病理性自身反应性来防止免疫系统的 不适当反应，而细胞毒性T细胞靶向并破坏感染的细胞和/或癌细胞。在一些 情况下，不同T细胞群的调节为疾病或适应证的治疗提供选择。
发明内容
本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中 所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(I)的结构替代：
Figure BDA0003528433030000011
式(I)；
其中：
Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030000021
Y是CH2并且Z是
Figure BDA0003528433030000022
Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030000023
或者
Y是CH2并且Z是
Figure BDA0003528433030000024
W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、 35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030000025
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030000026
或其药学 上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方 案中，Y是CH2并且Z是
Figure BDA0003528433030000027
或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030000028
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030000029
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，Y是CH2并且Z是
Figure BDA0003528433030000031
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述PEG基团具有选自5kDa、 10kDa、20kDa和30kDa的平均分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述PEG基团具有5kDa的平均分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在 本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述PEG基团具有10kDa的平均 分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述PEG基团具有15kDa的平均分子量，或为其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，所述PEG基团具有20kDa的平均分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述 PEG基团具有25kDa的平均分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或 水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述PEG基团具有30 kDa的平均分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文 所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述PEG基团具有35kDa的平均分子 量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合 物的一些实施方案中，所述PEG基团具有40kDa的平均分子量，或为其药学 上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方 案中，所述PEG基团具有45kDa的平均分子量，或其药学上可接受的盐、溶 剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述PEG基 团具有50kDa的平均分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述PEG基团具有60kDa的平 均分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，式(I)的结构在IL-2缀合物的氨基酸序列中的位 置选自K35、F42、F44、K43、E62、P65、R38、T41、E68、Y45、V69和L72， 其中式(I)的结构在IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1 中的位置，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，式(I)的结构在IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自F42、E62和P65，其中式(I)的结构在IL-2缀合物的氨基酸序列中的 位置是参考SEQID NO:1中的位置，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I)的结构在所述IL-2 缀合物的氨基酸序列中的位置是K35，其中式(I)的结构在所述IL-2缀合物 的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或其药学上可接受的 盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I) 的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是F42，其中式(I)的结构 在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或 其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些 实施方案中，式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是F44， 其中式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸 序列中的位置是K43，其中式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中 的位置是参考SEQID NO:1中的位置，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或 水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I)的结构在所述 IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是E62，其中式(I)的结构在所述IL-2缀合 物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或其药学上可接受 的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I) 的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是P65，其中式(I)的结构 在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或 其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些 实施方案中，式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是R38， 其中式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸 序列中的位置是T41，其中式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中 的位置是参考SEQID NO:1中的位置，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或 水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I)的结构在所述 IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是E68，其中式(I)的结构在所述IL-2缀合 物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或其药学上可接受 的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I) 的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是Y45，其中式(I)的结构 在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或 其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些 实施方案中，式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是V69， 其中式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸 序列中的位置是L72，其中式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中 的位置是参考SEQID NO:1中的位置，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或 水合物。
本文描述包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中 所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(I)的结构替代：
Figure BDA0003528433030000051
式(I)；
其中：
Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030000052
Y是CH2并且Z是
Figure BDA0003528433030000053
Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030000054
或者
Y是CH2并且Z是
Figure BDA0003528433030000055
W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、 35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030000061
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030000062
或其药学 上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方 案中，Y是CH2并且Z是
Figure BDA0003528433030000063
或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030000064
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030000065
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，Y是CH2并且Z是
Figure BDA0003528433030000066
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述PEG基团具有选自5kDa、 10kDa、20kDa和30kDa的平均分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述PEG基团具有5kDa的平均分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在 本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述PEG基团具有10kDa的平均 分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述PEG基团具有15kDa的平均分子量，或为其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，所述PEG基团具有20kDa的平均分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述 PEG基团具有25kDa的平均分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或 水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述PEG基团具有30 kDa的平均分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文 所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述PEG基团具有35kDa的平均分子 量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合 物的一些实施方案中，所述PEG基团具有40kDa的平均分子量，或为其药学 上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方 案中，所述PEG基团具有45kDa的平均分子量，或其药学上可接受的盐、溶 剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述PEG基 团具有50kDa的平均分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述PEG基团具有60kDa的平 均分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中 的位置选自K35、F42、F44、K43、E62、P65、R38、T41、E68、Y45、V69 和L72，其中式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考 SEQ ID NO:1中的位置，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本 文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I)的结构在所述IL-2缀合物的 氨基酸序列中的位置选自F42、E62和P65，其中式(I)的结构在所述IL-2缀 合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或其药学上可接 受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是K35，其中式(I) 的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ IDNO:1中的位 置，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置 是F42，其中式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考 SEQ ID NO:1中的位置，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本 文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I)的结构在所述IL-2缀合物的 氨基酸序列中的位置是F44，其中式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸 序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或其药学上可接受的盐、溶剂 合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I)的结构 在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是K43，其中式(I)的结构在所述 IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或其药学 上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方 案中，式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是E62，其中 式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ IDNO:1 中的位置，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中 的位置是P65，其中式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置 是参考SEQ ID NO:1中的位置，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I)的结构在所述IL-2缀合 物的氨基酸序列中的位置是R38，其中式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨 基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I)的 结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是T41，其中式(I)的结构在 所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是E68， 其中式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ IDNO:1中的位置，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸 序列中的位置是Y45，其中式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中 的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或 水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I)的结构在所述 IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是V69，其中式(I)的结构在所述IL-2缀合 物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或其药学上可接受 的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(I) 的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是L72，其中式(I)的结构 在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或 其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
本文描述包含SEQ ID NO:15-19中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_PEG]具有式(II)或式(III)的结构，或者式(II)与式 (III)的混合物：
Figure BDA0003528433030000091
其中：
W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、 35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030000092
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述[AzK_PEG]是式(II)与式(III)的混 合物，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合 物的一些实施方案中，所述[AzK_PEG]具有式(II)的结构：
Figure BDA0003528433030000093
式(II)；或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:15的氨基酸序 列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、 25kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，W是平均分子量为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2 缀合物具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施 方案中，W是平均分子量选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受 的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为30kDa 的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:17的氨基酸序 列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa和30 kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，W是平均分子量为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2 缀合物具有SEQ IDNO:18的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受 的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W 是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为30kDa 的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、 25kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa和30 kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，W是平均分子量为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述 [AzK_PEG]具有式(III)的结构
Figure BDA0003528433030000111
式(III)；或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:15的氨基酸序 列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、 25kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，W是平均分子量为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2 缀合物具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施 方案中，W是平均分子量选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受 的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为30kDa 的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:17的氨基酸序 列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa和30 kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，W是平均分子量为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2 缀合物具有SEQ IDNO:18的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受 的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W 是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为30kDa 的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、 25kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa和30 kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，W是平均分子量为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是线性 或分支PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是线性PEG基团，或其药学上可接受的 盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是 分支PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的 IL-2缀合物的一些实施方案中，W是甲氧基PEG基团，或其药学上可接受的 盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述 甲氧基PEG基团是线性的或分支的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述甲氧基PEG基团是 线性的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀 合物的一些实施方案中，所述甲氧基PEG基团是分支的，或其药学上可接受 的盐、溶剂合物或水合物。甲氧基PEG基团的示例性结构显示于实施例2的 方案1中的mPEG-DBCO结构中。
在具有选自SEQ ID NO:15、16、17、18和19中任一项的氨基 酸序列的本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_PEG]含有平均分 子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、 45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团。在具有选自SEQ IDNO:15、16、17、 18和19中任一项的氨基酸序列的本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， [AzK_PEG]含有平均分子量为5kDa的PEG基团。在具有选自SEQ ID NO:15、 16、17、18和19中任一项的氨基酸序列的本文所述的IL-2缀合物的一些实施 方案中，[AzK_PEG]含有平均分子量为10kDa的PEG基团。在具有选自SEQ ID NO:15、16、17、18和19中任一项的氨基酸序列的本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，[AzK_PEG]含有平均分子量为15kDa的PEG基团。在具 有选自SEQ ID NO:15、16、17、18和19中任一项的氨基酸序列的本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_PEG]含有平均分子量为20kDa的 PEG基团。在具有选自SEQ ID NO:15、16、17、18和19中任一项的氨基酸 序列的本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_PEG]含有平均分子 量为25kDa的PEG基团。在具有选自SEQ ID NO:15、16、17、18和19中任一 项的氨基酸序列的本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_PEG]含 有平均分子量为30kDa的PEG基团。在具有选自SEQ ID NO:15、16、17、18 和19中任一项的氨基酸序列的本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， [AzK_PEG]含有平均分子量为35kDa的PEG基团。在具有选自SEQ ID NO: 15、16、17、18和19中任一项的氨基酸序列的本文所述的IL-2缀合物的一些 实施方案中，[AzK_PEG]含有平均分子量为40kDa的PEG基团。在具有选自 SEQ ID NO:15、16、17、18和19中任一项的氨基酸序列的本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_PEG]含有平均分子量为45kDa的PEG基团。 在具有选自SEQID NO:15、16、17、18和19中任一项的氨基酸序列的本文 所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_PEG]含有平均分子量为50kDa 的PEG基团。在具有选自SEQ ID NO:15、16、17、18和19中任一项的氨基 酸序列的本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_PEG]含有平均分 子量为60kDa的PEG基团。在具有选自SEQ ID NO:15、16、17、18和19中任 一项的氨基酸序列的本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_PEG] 含有平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35 kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团，其中所述PEG基团是甲 氧基PEG基团、线性甲氧基PEG基团或分支甲氧基PEG基团。
本文描述包含SEQ ID NO:20-24中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_PEG5kD]具有式(II)或式(III)的结构，或者式(II)与 式(III)的混合物：
Figure BDA0003528433030000141
其中：
W是平均分子量为5kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030000151
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:20的氨基 酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀 合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列， 或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一 些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列，或其药学 上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列，或其药学上可接受 的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所 述IL-2缀合物具有SEQ IDNO:24的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶 剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， [AzK_PEG5kD]具有式(II)的结构
Figure BDA0003528433030000152
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQID NO:21的氨基酸序列，或其药学上可 接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_PEG5kD]具有式 (III)的结构
Figure BDA0003528433030000161
式(III)；或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:20的氨基酸序 列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列，或其药学上可 接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2 缀合物具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。
本文描述包含SEQ ID NO:25-29中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_PEG30kD]具有式(II)或式(III)的结构，或者是式(II) 与式(III)的结构的混合物：
Figure BDA0003528433030000162
其中：
W是平均分子量为30kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030000171
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:25的氨基 酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀 合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列， 或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一 些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列，或其药学 上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，IL-2缀合物具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，IL-2缀合 物具有SEQ ID NO:29的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或 水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_PEG30kD]具有 式(II)的结构：
Figure BDA0003528433030000172
式(II)；或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:25的氨基酸序 列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列，或其药学上可 接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2 缀合物具有SEQ ID NO:29的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_PEG30kD] 具有式(III)的结构
Figure BDA0003528433030000181
式(III)；或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:25的氨基酸序 列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列，或其药学上可 接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2 缀合物具有SEQ ID NO:29的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。
本文描述包含SEQ ID NO:15-19中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_PEG]是式(II)与式(III)的结构的混合物：
Figure BDA0003528433030000182
其中：
W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、 35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030000191
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_PEG]的总量 的式(II)结构的量与式(III)结构的量的比率为约1:1。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_PEG]的总量的式(II) 结构的量与式(III)结构的量的比率大于1:1。在本文所述的IL-2缀合物的一 些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_PEG]的总量的式(II)结构的量 与式(III)结构的量的比率小于1:1。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方 案中，W是线性或分支PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合 物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是线性PEG基团，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，W是分支PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是甲氧基PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施 方案中，所述甲氧基PEG基团是线性的或分支的，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述甲氧 基PEG基团是线性的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文 所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述甲氧基PEG基团是分支的，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
本文描述包含SEQ ID NO:20至24中任一项的氨基酸序列的 IL-2缀合物，其中[AzK_PEG5kD]是式(II)与式(III)的结构的混合物：
Figure BDA0003528433030000192
Figure BDA0003528433030000201
其中：
W是平均分子量为5kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030000202
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_PEG5kD]的总 量的式(II)结构的量与式(III)结构的量的比率为约1:1。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_PEG5kD]的总量的 式(II)结构的量与式(III)结构的量的比率大于1:1。在本文所述的IL-2缀 合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_PEG5kD]的总量的式 (II)结构的量与式(III)结构的量的比率小于1:1。
本文描述包含SEQ ID NO:25-29中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_PEG30kD]是式(II)与式(III)的结构的混合物：
Figure BDA0003528433030000203
其中：
W是平均分子量为30kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030000204
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_PEG30kD]的 总量的式(II)结构的量与式(III)结构的量的比率为约1:1。在本文所述的 IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_PEG30kD]的总 量的式(II)结构的量与式(III)结构的量的比率大于1:1。在本文所述的 IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_PEG30kD]的总 量的式(II)结构的量与式(III)结构的量的比率小于1:1。
本文描述包含SEQ ID NO:40-44中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_L1_PEG]具有式(IV)或式(V)的结构，或者式(IV)与 式(V)的混合物：
Figure BDA0003528433030000211
其中：
W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、 35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030000212
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_L1_PEG]是式(IV)与式(V)的混 合物，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合 物的一些实施方案中，[AzK_L1_PEG]具有式(IV)的结构：
Figure BDA0003528433030000221
式(IV)；或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:40的氨基酸序 列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、 25kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，W是平均分子量为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2 缀合物具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施 方案中，W是平均分子量选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受 的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为30kDa 的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:42的氨基酸序 列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa和30 kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，W是平均分子量为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2 缀合物具有SEQ IDNO:43的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受 的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W 是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为30kDa 的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、 25kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa和30 kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，W是平均分子量为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， [AzK_L1_PEG]具有式(V)的结构
Figure BDA0003528433030000231
式(V)；或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文 所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:40的 氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20 kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5 kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在 本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为5kDa的PEG基 团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，W是平均分子量为30kDa的PEG基团，或其药学上可接 受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均 分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团， 或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一 些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上 可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案 中，W是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物 或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为 30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所 述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:42的氨 基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20 kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5 kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在 本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为5kDa的PEG基 团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为30kDa的PEG基团，或其药学上可接 受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:43的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均 分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团， 或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一 些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上 可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案 中，W是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物 或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为 30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:44的氨 基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20 kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量选自5 kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在 本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是平均分子量为5kDa的PEG基 团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，W是平均分子量为30kDa的PEG基团，或其药学上可接 受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， W是线性或分支PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在 本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是线性PEG基团，或其药学上 可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案 中，W是分支PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本 文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是甲氧基PEG基团，或其药学上 可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案 中，所述甲氧基PEG基团是线性的或分支的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述甲氧基PEG 基团是线性的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的 IL-2缀合物的一些实施方案中，所述甲氧基PEG基团是分支的，或其药学上 可接受的盐、溶剂合物或水合物。在具有选自SEQ ID NO:40、41、42、43 和44中任一项的氨基酸序列的本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， [AzK_L1_PEG]含有平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团。在具有选 自SEQ ID NO:40、41、42、43和44中任一项的氨基酸序列的本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，[AzK_L1_PEG]含有平均分子量为5kDa的PEG基 团。在具有选自SEQ ID NO:40、41、42、43和44中任一项的氨基酸序列的 本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_L1_PEG]含有平均分子量 为10kDa的PEG基团。在具有选自SEQ ID NO:40、41、42、43和44中任一项 的氨基酸序列的本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_L1_PEG] 含有平均分子量为15kDa的PEG基团。在具有选自SEQ ID NO:40、41、42、 43和44中任一项的氨基酸序列的本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， [AzK_L1_PEG]含有平均分子量为20kDa的PEG基团。在具有选自SEQ ID NO: 40、41、42、43和44中任一项的氨基酸序列的本文所述的IL-2缀合物的一些 实施方案中，[AzK_L1_PEG]含有平均分子量为25kDa的PEG基团。在具有 选自SEQ IDNO:40、41、42、43和44中任一项的氨基酸序列的本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，[AzK_L1_PEG]含有平均分子量为30kDa的PEG 基团。在具有选自SEQ ID NO:40、41、42、43和44中任一项的氨基酸序列 的本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_L1_PEG]含有平均分子 量为35kDa的PEG基团。在具有选自SEQ ID NO:40、41、42、43和44中任一项的氨基酸序列的本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_L1_PEG] 含有平均分子量为40kDa的PEG基团。在具有选自SEQ ID NO:40、41、42、 43和44中任一项的氨基酸序列的本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， [AzK_L1_PEG]含有平均分子量为45kDa的PEG基团。在具有选自SEQ ID NO: 40、41、42、43和44中任一项的氨基酸序列的本文所述的IL-2缀合物的一些 实施方案中，[AzK_L1_PEG]含有平均分子量为50kDa的PEG基团。在具有选自SEQ ID NO:40、41、42、43和44中任一项的氨基酸序列的本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，[AzK_L1_PEG]含有平均分子量为60kDa的PEG 基团。在具有选自SEQ ID NO:40、41、42、43和44中任一项的氨基酸序列 的本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，[AzK_L1_PEG]含有平均分子 量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、 45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团，其中所述PEG基团是甲氧基PEG基团、 线性甲氧基PEG基团或分支甲氧基PEG基团。
本文描述包含SEQ ID NO:45-49中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_L1_PEG5kD]具有式(IV)或式(V)的结构，或者式(IV) 与式(V)的混合物：
Figure BDA0003528433030000261
Figure BDA0003528433030000271
其中：
W是平均分子量为5kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030000272
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:45的氨基 酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀 合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列， 或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一 些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:47的氨基酸序列，或其药学 上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:48的氨基酸序列，或其药学上可接受 的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所 述IL-2缀合物具有SEQ IDNO:49的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶 剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述 [AzK_L1_PEG5kD]具有式(IV)的结构
Figure BDA0003528433030000273
式(IV)；或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:45的氨基酸序 列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:47的氨基酸序列，或其药学上可 接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:48的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2 缀合物具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述 [AzK_L1_PEG5kD]具有式(V)的结构
Figure BDA0003528433030000281
式(V)；或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:45的氨基酸序 列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:47的氨基酸序列，或其药学上可 接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:48的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2 缀合物具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。
本文描述包含SEQ ID NO:50-54中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_L1_PEG30kD]具有式(IV)或式(V)的结构，或者是式 (IV)与式(V)的结构的混合物：
Figure BDA0003528433030000282
Figure BDA0003528433030000291
其中：
W是平均分子量为30kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030000292
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:50的氨基 酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀 合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:51的氨基酸序列， 或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一 些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:52的氨基酸序列，或其药学 上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列，或其药学上可接受 的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所 述IL-2缀合物具有SEQ IDNO:54的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶 剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述 [AzK_L1_PEG30kD]具有式(IV)的结构：
Figure BDA0003528433030000293
式(IV)；或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:50的氨基酸序 列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:51的氨基酸序列，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:52的氨基酸序列，或其药学上可 接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2 缀合物具有SEQ ID NO:54的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述 [AzK_L1_PEG30kD]具有式(V)的结构
Figure BDA0003528433030000301
式(V)；或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:50的氨基酸序 列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:51的氨基酸序列，或其 药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:52的氨基酸序列，或其药学上可 接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、 溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2 缀合物具有SEQ ID NO:54的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。
本文描述包含SEQ ID NO:40-44中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[Azk_L1_PEG]是式(IV)与式(V)的结构的混合物：
Figure BDA0003528433030000302
Figure BDA0003528433030000311
其中：
W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、 35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030000312
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_L1_PEG]的总 量的式(IV)结构的量与式(V)结构的量的比率为约1:1。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_L1_PEG]的总量的 式(IV)结构的量与式(V)结构的量的比率大于1:1。在本文所述的IL-2缀合 物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_L1_PEG]的总量的式(IV) 结构的量与式(V)结构的量的比率小于1:1。在本文所述的IL-2缀合物的一 些实施方案中，W是线性或分支PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合 物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是线性PEG基 团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，W是分支PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物 或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，W是甲氧基PEG基 团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，所述甲氧基PEG基团是线性的或分支的，或其药学上可 接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 所述甲氧基PEG基团是线性的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述甲氧基PEG基团是分支的， 或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
本文描述包含SEQ ID NO:45至49中任一项的氨基酸序列的 IL-2缀合物，其中[AzK_L1_PEG5kD]是式(IV)与式(V)的结构的混合物：
Figure BDA0003528433030000321
其中：
W是平均分子量为5kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030000322
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_L1_PEG5kD] 的总量的式(IV)结构的量与式(V)结构的量的比率为约1:1。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_L1_PEG5kD] 的总量的式(IV)结构的量与式(V)结构的量的比率大于1:1。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_L1_PEG5kD] 的总量的式(IV)结构的量与式(V)结构的量的比率小于1:1。
本文描述包含SEQ ID NO:50-54中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_L1_PEG30kD]是式(IV)与式(V)的结构的混合物：
Figure BDA0003528433030000323
Figure BDA0003528433030000331
其中：
W是平均分子量为30kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030000332
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_L1_PEG30kD] 的总量的式(IV)结构的量与式(V)结构的量的比率为约1:1。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_L1_PEG30kD] 的总量的式(IV)结构的量与式(V)结构的量的比率大于1:1。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，所述IL-2缀合物中构成[AzK_L1_PEG30kD] 的总量的式(IV)结构的量与式(V)结构的量的比率小于1:1。
本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中 所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(VI)或(VII)的结构或式 (VI)与式(VII)的混合物替代：
Figure BDA0003528433030000333
其中：
n是在约2至约5000范围内的整数；并且
X具有结构：
Figure BDA0003528433030000341
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合 物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VI)和(VII)的化合 物中的n在以下范围内：约5至约4600、或约10至约4000、或约20至约3000、 或约100至约3000、或约100至约2900、或约150至约2900、或约125至约2900、 或约100至约2500、或约100至约2000、或约100至约1900、或约100至约1850、 或约100至约1750、或约100至约1650、或约100至约1500、或约100至约1400、 或约100至约1300、或约100至约1250、或约100至约1150、或约100至约1100、 或约100至约1000、或约100至约900、或约100至约750、或约100至约700、 或约100至约600、或约100至约575、或约100至约500、或约100至约450、或 约100至约350、或约100至约275、或约100至约230、或约150至约475、或约 150至约340、或约113至约340、或约450至约800、或约454至约796、或约454 至约682、或约340至约795、或约341至约682、或约568至约909、或约227至 约1500、或约225至约2280、或约460至约2160、或约460至约2050、或约341 至约1820、或约341至约1710、或约341至约1250、或约225至约1250、或约 341至约1250、或约341至约1136、或约341至约1023、或约341至约910、或 约341至约796、或约341至约682、或约341至约568、或约114至约1000、或 约114至约950、或约114至约910、或约114至约800、或约114至约690、或约 114至约575。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VI)和(VII) 的化合物中的n是选自以下的整数：2、5、10、11、22、23、113、114、227、 228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、 908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、 1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、 1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、 2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、 3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546。在本文所述的 IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VI)、式(VII)或式(VI)与(VII)的混 合物的结构在IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自K34、F41、F43、K42、 E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71，其中式(I)的结构在IL-2缀 合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:3中的位置。在本文所述的 IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VI)、式(VII)或式(VI)与(VII)的混 合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自K34、 F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71。在本文所 述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VI)、式(VII)或式(VI)与(VII) 的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位 置K34。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VI)、式(VII)或 式(VI)与(VII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序 列中的位置是在位置F41。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VI)、式(VII)或式(VI)与(VII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2 缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置F43。在本文所述的IL-2缀合物的一 些实施方案中，式(VI)、式(VII)或式(VI)与(VII)的混合物的结构在 SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置K42。在本文所 述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VI)、式(VII)或式(VI)与(VII) 的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位 置E61。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VI)、式(VII)或 式(VI)与(VII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序 列中的位置是在位置P64。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式 (VI)、式(VII)或式(VI)与(VII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2 缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置R37。在本文所述的IL-2缀合物的一 些实施方案中，式(VI)、式(VII)或式(VI)与(VII)的混合物的结构在 SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置T40。在本文所 述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VI)、式(VII)或式(VI)与(VII) 的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位 置E67。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VI)、式(VII)或 式(VI)与(VII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置Y44。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式 (VI)、式(VII)或式(VI)与(VII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2 缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置V68。在本文所述的IL-2缀合物的一 些实施方案中，式(VI)、式(VII)或式(VI)与(VII)的混合物的结构在 SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置L71。在本文所 述的IL-2缀合物的一些实施方案中，构成IL-2缀合物的总量的式(VI)结构的 量与式(VII)结构的量的比率为约1:1。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，构成IL-2缀合物的总量的式(VI)结构的量与式(VII)结构的量 的比率大于1:1。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，构成IL-2缀 合物的总量的式(VI)结构的量与式(VII)结构的量的比率小于1:1。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (VI)或(VII)的结构或式(VI)与式(VII)的混合物替代，其中SEQ ID NO: 3中被替代的氨基酸残基选自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、 E67、Y44、V68和L71，并且其中n是以下的整数：100至约1150、或约100至约1100、或约100至约1000、或约100至约900、或约100至约750、或约100 至约700、或约100至约600、或约100至约575、或约100至约500、或约100至 约450、或约100至约350、或约100至约275、或约100至约230、或约150至约 475、或约150至约340、或约113至约340、或约450至约800、或约454至约796、 或约454至约682、或约340至约795、或约341至约682、或约568至约909、或 约227至约1500、或约225至约2280、或约460至约2160、或约460至约2050、或约341至约1820、或约341至约1710、或约341至约1250、或约225至约1250、 或约341至约1250、或约341至约1136、或约341至约1023、或约341至约910、 或约341至约796、或约341至约682、或约341至约568、或约114至约1000、 或约114至约950、或约114至约910、或约114至约800、或约114至约690、或 约114至约575。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VI)和(VII) 的化合物中的n是选自以下的整数：2、5、10、11、22、23、113、114、227、 228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、 908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、 1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、 1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、 2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、 3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (VI)或(VII)的结构或式(VI)与式(VII)的混合物替代，其中SEQ ID NO: 3中被替代的氨基酸残基选自F41、F43、K42、E61和P64，并且其中n是以下 的整数：约450至约800、或约454至约796、或约454至约682、或约568至约 909。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VI)和(VII)的化合 物中的n是选自以下的整数：454、455、568、569、680、681、682、794、 795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137和1249。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (VI)或(VII)的结构或式(VI)与式(VII)的混合物替代，其中SEQ ID NO: 3中被替代的氨基酸残基选自E61和P64，并且其中n是以下的整数：约450至 约800、或约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VI)和(VII)的化合物中的n是选自以 下的整数：454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、 909和910。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (VI)或(VII)的结构或式(VI)与式(VII)的混合物替代，其中SEQ ID NO: 3中被替代的氨基酸残基是E61，并且其中n是以下的整数：约450至约800、 或约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀 合物的一些实施方案中，式(VI)和(VII)的化合物中的n是选自以下的整 数：454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910。 在一些实施方案中，n是约500至约1000。在一些实施方案中，n是约550至约 800。在一些实施方案中，n是约681。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (VI)或(VII)的结构或式(VI)与式(VII)的混合物替代，其中SEQ ID NO: 3中被替代的氨基酸残基是P64，并且其中n是以下的整数：约450至约800、 或约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀 合物的一些实施方案中，式(VI)和(VII)的化合物中的n是选自以下的整 数：454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910。 在一些实施方案中，n是约500至约1000。在一些实施方案中，n是约550至约 800。在一些实施方案中，n是约681。
本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中 所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(VI)或(VII)的结构或式 (VI)与式(VII)的混合物替代，其中n是整数使得PEG部分的分子量在以下 范围内：约1,000道尔顿至约200,000道尔顿、或约2,000道尔顿至约150,000道 尔顿、或约3,000道尔顿至约125,000道尔顿、或约4,000道尔顿至约100,000道 尔顿、或约5,000道尔顿至约100,000道尔顿、或约6,000道尔顿至约90,000道 尔顿、或约7,000道尔顿至约80,000道尔顿、或约8,000道尔顿至约70,000道尔 顿、或约5,000道尔顿至约70,000道尔顿、或约5,000道尔顿至约65,000道尔顿、 或约5,000道尔顿至约60,000道尔顿、或约5,000道尔顿至约50,000道尔顿、或 约6,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约7,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 7,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约7,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 8,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约8,500道尔顿至约40,000道尔顿、或约 8,500道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 9,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 9,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约 9,500道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,500道尔顿至约30,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约10,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约10,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 15,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 15,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约20,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约20,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约30,000道尔顿。本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列 的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(VI)或 (VII)的结构或式(VI)与式(VII)的混合物替代，其中n是整数使得PEG部 分的分子量为约5,000道尔顿、约7,500道尔顿、约10,000道尔顿、约15,000道 尔顿、约20,000道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、 约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约60,000道尔顿、约70,000 道尔顿、约80,000道尔顿、约90,000道尔顿、约100,000道尔顿、约125,000道 尔顿、约150,000道尔顿、约175,000道尔顿或约200,000道尔顿。本文描述包 含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少 一个氨基酸残基被式(VI)或(VII)的结构或式(VI)与式(VII)的混合物 替代，其中n是整数使得PEG部分的分子量为约5,000道尔顿、约7,500道尔顿、 约10,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000 道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿或约50,000道尔 顿。
本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中 所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(VIII)或(IX)的结构或 (VIII)与(IX)的混合物替代：
Figure BDA0003528433030000391
其中：
n是在约2至约5000范围内的整数；并且
X具有结构：
Figure BDA0003528433030000392
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合 物。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VIII)和(IX)的化合 物中的n在以下范围内：约5至约4600、或约10至约4000、或约20至约3000、 或约100至约3000、或约100至约2900、或约150至约2900、或约125至约2900、 或约100至约2500、或约100至约2000、或约100至约1900、或约100至约1850、 或约100至约1750、或约100至约1650、或约100至约1500、或约100至约1400、 或约100至约1300、或约100至约1250、或约100至约1150、或约100至约1100、 或约100至约1000、或约100至约900、或约100至约750、或约100至约700、 或约100至约600、或约100至约575、或约100至约500、或约100至约450、或 约100至约350、或约100至约275、或约100至约230、或约150至约475、或约 150至约340、或约113至约340、或约450至约800、或约454至约796、或约454 至约682、或约340至约795、或约341至约682、或约568至约909、或约227至 约1500、或约225至约2280、或约460至约2160、或约460至约2050、或约341 至约1820、或约341至约1710、或约341至约1250、或约225至约1250、或约 341至约1250、或约341至约1136、或约341至约1023、或约341至约910、或 约341至约796、或约341至约682、或约341至约568、或约114至约1000、或 约114至约950、或约114至约910、或约114至约800、或约114至约690、或约 114至约575。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VIII)和(IX) 的化合物中的n是选自以下的整数：2、5、10、11、22、23、113、114、227、 228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、 908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、 1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、 1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、 2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、 3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546。在本文所述的 IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VIII)、式(IX)或式(VIII)与(IX)的 混合物的结构在IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71，其中式(I)的结构在IL-2缀 合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:3中的位置。在本文所述的 IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VIII)、式(IX)或式(VIII)与(IX)的 混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自 K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71。在 本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VIII)、式(IX)或式(VIII)与 (IX)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置 是在位置K34。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VIII)、式(IX) 或式(VIII)与(IX)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基 酸序列中的位置是在位置F41。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 式(VIII)、式(IX)或式(VIII)与(IX)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置F43。在本文所述的IL-2缀合物的 一些实施方案中，式(VIII)、式(IX)或式(VIII)与(IX)的混合物的结构 在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置K42。在本文 所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VIII)、式(IX)或式(VIII)与(IX) 的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位 置E61。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VIII)、式(IX)或 式(VIII)与(IX)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸 序列中的位置是在位置P64。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 式(VIII)、式(IX)或式(VIII)与(IX)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的 IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置R37。在本文所述的IL-2缀合物的 一些实施方案中，式(VIII)、式(IX)或式(VIII)与(IX)的混合物的结构 在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置T40。在本文 所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VIII)、式(IX)或式(VIII)与(IX) 的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位 置E67。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VIII)、式(IX)或 式(VIII)与(IX)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸 序列中的位置是在位置Y44。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 式(VIII)、式(IX)或式(VIII)与(IX)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的 IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置V68。在本文所述的IL-2缀合物的 一些实施方案中，式(VIII)、式(IX)或式(VIII)与(IX)的混合物的结构 在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置L71。在本文 所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，构成IL-2缀合物的总量的式(VIII)结 构的量与式(IX)结构的量的比率为约1:1。在本文所述的IL-2缀合物的一些 实施方案中，构成IL-2缀合物的总量的式(VIII)结构的量与式(IX)结构的 量的比率大于1:1。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，构成IL-2 缀合物的总量的式(VIII)结构的量与式(IX)结构的量的比率小于1:1。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (VIII)或(IX)的结构或(VIII)与(IX)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3 中被替代的氨基酸残基选自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、 E67、Y44、V68和L71，并且其中n是以下的整数：100至约1150、或约100 至约1100、或约100至约1000、或约100至约900、或约100至约750、或约100 至约700、或约100至约600、或约100至约575、或约100至约500、或约100至 约450、或约100至约350、或约100至约275、或约100至约230、或约150至约 475、或约150至约340、或约113至约340、或约450至约800、或约454至约796、 或约454至约682、或约340至约795、或约341至约682、或约568至约909、或 约227至约1500、或约225至约2280、或约460至约2160、或约460至约2050、 或约341至约1820、或约341至约1710、或约341至约1250、或约225至约1250、 或约341至约1250、或约341至约1136、或约341至约1023、或约341至约910、 或约341至约796、或约341至约682、或约341至约568、或约114至约1000、 或约114至约950、或约114至约910、或约114至约800、或约114至约690、或 约114至约575。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VIII)和 (IX)的化合物中的n是选自以下的整数：2、5、10、11、22、23、113、114、 227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、 796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、 1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、 1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、 2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、 2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (VIII)或(IX)的结构或(VIII)与(IX)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3 中被替代的氨基酸残基选自F41、F43、K42、E61和P64，并且其中n是以下 的整数：约450至约800、或约454至约796、或约454至约682、或约568至约 909。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VIII)和(IX)的化 合物中的n是选自以下的整数：454、455、568、569、680、681、682、794、 795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137和1249。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (VIII)或(IX)的结构或(VIII)与(IX)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3 中被替代的氨基酸残基选自E61和P64，并且其中n是以下的整数：约450至约 800、或约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VIII)和(IX)的化合物中的n是选自以 下的整数：454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、 909和910。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (VIII)或(IX)的结构或(VIII)与(IX)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3 中被替代的氨基酸残基是E61，并且其中n是以下的整数：约450至约800、或 约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合 物的一些实施方案中，式(VIII)和(IX)的化合物中的n是选自以下的整数： 454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910。 在一些实施方案中，n是约500至约1000。在一些实施方案中，n是约550至约 800。在一些实施方案中，n是约681。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (VIII)或(IX)的结构或(VIII)与(IX)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3 中被替代的氨基酸残基是P64，并且其中n是以下的整数：约450至约800、或 约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合 物的一些实施方案中，式(VIII)和(IX)的化合物中的n是选自以下的整数： 454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910。 在一些实施方案中，n是约500至约1000。在一些实施方案中，n是约550至约 800。在一些实施方案中，n是约681。
本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中 所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(VIII)或(IX)的结构或 (VIII)与(IX)的混合物替代，其中n是整数使得PEG部分的分子量在以下范 围内：约1,000道尔顿至约200,000道尔顿、或约2,000道尔顿至约150,000道尔 顿、或约3,000道尔顿至约125,000道尔顿、或约4,000道尔顿至约100,000道尔 顿、或约5,000道尔顿至约100,000道尔顿、或约6,000道尔顿至约90,000道尔顿、或约7,000道尔顿至约80,000道尔顿、或约8,000道尔顿至约70,000道尔顿、 或约5,000道尔顿至约70,000道尔顿、或约5,000道尔顿至约65,000道尔顿、或 约5,000道尔顿至约60,000道尔顿、或约5,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 6,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约7,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约7,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约7,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 8,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约8,500道尔顿至约40,000道尔顿、或约 8,500道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 9,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 9,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约 9,500道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,500道尔顿至约30,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约10,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约10,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 15,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 15,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约20,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约20,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约30,000道尔顿。本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列 的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(VIII)或 (IX)的结构或(VIII)与(IX)的混合物替代，其中n是整数使得PEG部分的 分子量为约5,000道尔顿、约7,500道尔顿、约10,000道尔顿、约15,000道尔顿、 约20,000道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000 道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约60,000道尔顿、约70,000道尔顿、约80,000道尔顿、约90,000道尔顿、约100,000道尔顿、约125,000道尔顿、 约150,000道尔顿、约175,000道尔顿或约200,000道尔顿。本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨 基酸残基被式(VIII)或(IX)的结构或(VIII)与(IX)的混合物替代，其中 n是整数使得PEG部分的分子量为约5,000道尔顿、约7,500道尔顿、约10,000 道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔 顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿或约50,000道尔顿。
本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中 所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(X)或(XI)的结构或(X) 与(XI)的混合物替代：
Figure BDA0003528433030000451
其中：
n是在约2至约5000范围内的整数；并且
波浪线指示与SEQ ID NO:3内未被替代的氨基酸残基的共价键，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
在一些实施方案中，式(X)和式(XI)内手性中心的立体化学 是外消旋的，是富含(R)的，是富含(S)的，基本上是(R)，基本上是(S)， 是(R)或者是(S)。在一些实施方案中，式(X)和式(XI)内手性中心的立 体化学是外消旋的。在一些实施方案中，式(X)和式(XI)内手性中心的立 体化学是富含(R)的。在一些实施方案中，式(X)和式(XI)内手性中心 的立体化学是富含(S)的。在一些实施方案中，式(X)和式(XI)内手性 中心的立体化学基本上是(R)。在一些实施方案中，式(X)和式(XI)内手 性中心的立体化学基本上是(S)。在一些实施方案中，式(X)和式(XI)内 手性中心的立体化学是(R)。在一些实施方案中，式(X)和式(XI)内手性 中心的立体化学是(S)。
在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(X)和(XI) 的化合物中的n在以下范围内：约5至约4600、或约10至约4000、或约20至约 3000、或约100至约3000、或约100至约2900、或约150至约2900、或约125至 约2900、或约100至约2500、或约100至约2000、或约100至约1900、或约100 至约1850、或约100至约1750、或约100至约1650、或约100至约1500、或约 100至约1400、或约100至约1300、或约100至约1250、或约100至约1150、或 约100至约1100、或约100至约1000、或约100至约900、或约100至约750、或 约100至约700、或约100至约600、或约100至约575、或约100至约500、或约 100至约450、或约100至约350、或约100至约275、或约100至约230、或约150 至约475、或约150至约340、或约113至约340、或约450至约800、或约454至 约796、或约454至约682、或约340至约795、或约341至约682、或约568至约 909、或约227至约1500、或约225至约2280、或约460至约2160、或约460至 约2050、或约341至约1820、或约341至约1710、或约341至约1250、或约225 至约1250、或约341至约1250、或约341至约1136、或约341至约1023、或约 341至约910、或约341至约796、或约341至约682、或约341至约568、或约114 至约1000、或约114至约950、或约114至约910、或约114至约800、或约114 至约690、或约114至约575。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(X)和(XI)的化合物中的n是选自以下的整数：2、5、10、11、22、23、113、 114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、 795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、 1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、 1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、 2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、 2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(X)和(XI)或式(X)与 (XI)的混合物的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自K34、 F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71，其中式(I) 的结构在IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:3中的位置。
在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(X)和(XI)或式(X)与 (XI)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置 选自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(X)和(XI)或式(X)与 (XI)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置 是在位置K34。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(X)和(XI) 或式(X)与(XI)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸 序列中的位置是在位置F41。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 式(X)和(XI)或式(X)与(XI)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2 缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置F43。在本文所述的IL-2缀合物的一 些实施方案中，式(X)和(XI)或式(X)与(XI)的混合物的结构在SEQ IDNO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置K42。在本文所述的 IL-2缀合物的一些实施方案中，式(X)和(XI)或式(X)与(XI)的混合物 的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置E61。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(X)和(XI)或式(X)与 (XI)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置P64。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(X)和(XI) 或式(X)与(XI)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸 序列中的位置是在位置R37。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 式(X)和(XI)或式(X)与(XI)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2 缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置T40。在本文所述的IL-2缀合物的一 些实施方案中，式(X)和(XI)或式(X)与(XI)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置E67。在本文所述的 IL-2缀合物的一些实施方案中，式(X)和(XI)或式(X)与(XI)的混合物 的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置Y44。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(X)和(XI)或式(X)与 (XI)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置 是在位置V68。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(X)和(XI) 或式(X)与(XI)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸 序列中的位置是在位置L71。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 构成所述IL-2缀合物的总量的式(X)结构的量与式(XI)结构的量的比率 为约1:1。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，构成所述IL-2缀合 物的总量的式(X)结构的量与式(XI)结构的量的比率大于1:1。在本文所 述的IL-2缀合物的一些实施方案中，构成所述IL-2缀合物的总量的式(X)结 构的量与式(XI)结构的量的比率小于1:1。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(X) 或(XI)的结构或(X)与(XI)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3中被替代 的氨基酸残基选自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、 V68和L71，并且其中n是以下的整数：100至约1150、或约100至约1100、或 约100至约1000、或约100至约900、或约100至约750、或约100至约700、或 约100至约600、或约100至约575、或约100至约500、或约100至约450、或约 100至约350、或约100至约275、或约100至约230、或约150至约475、或约150 至约340、或约113至约340、或约450至约800、或约454至约796、或约454至 约682、或约340至约795、或约341至约682、或约568至约909、或约227至约 1500、或约225至约2280、或约460至约2160、或约460至约2050、或约341至 约1820、或约341至约1710、或约341至约1250、或约225至约1250、或约341 至约1250、或约341至约1136、或约341至约1023、或约341至约910、或约341 至约796、或约341至约682、或约341至约568、或约114至约1000、或约114 至约950、或约114至约910、或约114至约800、或约114至约690、或约114至 约575。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(VI)和(VII)的化 合物中的n是选自以下的整数：2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、 340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、 909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、 1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、 1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、 2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、 3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(X) 或(XI)的结构或(X)与(XI)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3中被替代 的氨基酸残基选自F41、F43、K42、E61和P64，并且其中n是以下的整数： 约450至约800、或约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本 文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(X)和(XI)的化合物中的n是 选自以下的整数：454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、 908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137和1249。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(X) 或(XI)的结构或(X)与(XI)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3中被替代 的氨基酸残基选自E61和P64，并且其中n是以下的整数：约450至约800、或 约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合 物的一些实施方案中，式(X)和(XI)的化合物中的n是选自以下的整数： 454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(X) 或(XI)的结构或(X)与(XI)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3中被替代 的氨基酸残基是E61，并且其中n是以下的整数：约450至约800、或约454至 约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合物的一些 实施方案中，式(X)和(XI)的化合物中的n是选自以下的整数：454、455、 568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910。在一些实施 方案中，n是约500至约1000。在一些实施方案中，n是约550至约800。在一 些实施方案中，n是约681。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(X) 或(XI)的结构或(X)与(XI)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3中被替代 的氨基酸残基是P64，并且其中n是以下的整数：约450至约800、或约454至 约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合物的一些 实施方案中，式(X)和(XI)的化合物中的n是选自以下的整数：454、455、 568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910。在一些实施 方案中，n是约500至约1000。在一些实施方案中，n是约550至约800。在一 些实施方案中，n是约681。
本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中 所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(X)或(XI)的结构或(X) 与(XI)的混合物替代，其中n是整数使得PEG部分的分子量在以下范围内： 约1,000道尔顿至约200,000道尔顿、或约2,000道尔顿至约150,000道尔顿、或 约3,000道尔顿至约125,000道尔顿、或约4,000道尔顿至约100,000道尔顿、或 约5,000道尔顿至约100,000道尔顿、或约6,000道尔顿至约90,000道尔顿、或 约7,000道尔顿至约80,000道尔顿、或约8,000道尔顿至约70,000道尔顿、或约 5,000道尔顿至约70,000道尔顿、或约5,000道尔顿至约65,000道尔顿、或约 5,000道尔顿至约60,000道尔顿、或约5,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 6,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约7,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 7,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约7,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约8,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约8,500道尔顿至约40,000道尔顿、或约 8,500道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 9,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约 9,500道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,500道尔顿至约30,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约10,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约10,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 15,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 15,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约20,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约20,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约30,000道尔顿。本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列 的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(X)或 (XI)的结构或(X)与(XI)的混合物替代，其中n是整数使得PEG部分的分 子量为约5,000道尔顿、约7,500道尔顿、约10,000道尔顿、约15,000道尔顿、 约20,000道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000 道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约60,000道尔顿、约70,000道尔 顿、约80,000道尔顿、约90,000道尔顿、约100,000道尔顿、约125,000道尔顿、 约150,000道尔顿、约175,000道尔顿或约200,000道尔顿。本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨 基酸残基被式(X)或(XI)的结构或(X)与(XI)的混合物替代，其中n是 整数使得PEG部分的分子量为约5,000道尔顿、约7,500道尔顿、约10,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、 约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿或约50,000道尔顿。
本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中 所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(XII)或(XIII)的结构或 (XII)与(XIII)的混合物替代：
Figure BDA0003528433030000511
其中：
n是在约2至约5000范围内的整数；并且
波浪线指示与SEQ ID NO:3内未被替代的氨基酸残基的共价键，或 其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
在一些实施方案中，式(XII)和式(XIII)内手性中心的立体 化学是外消旋的，是富含(R)的，是富含(S)的，基本上是(R)，基本上 是(S)，是(R)或者是(S)。在一些实施方案中，式(XII)和式(XIII)内手 性中心的立体化学是外消旋的。在一些实施方案中，式(XII)和式(XIII)内 手性中心的立体化学是富含(R)的。在一些实施方案中，式(XII)和式(XIII)内手性中心的立体化学是富含(S)的。在一些实施方案中，式(XII) 和式(XIII)内手性中心的立体化学基本上是(R)。在一些实施方案中，式 (XII)和式(XIII)内手性中心的立体化学基本上是(S)。在一些实施方案中， 式(XII)和式(XIII)内手性中心的立体化学是(R)。在一些实施方案中，式 (XII)和式(XIII)内手性中心的立体化学是(S)。
在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XII)和 (XIII)的化合物中的n在以下范围内：约5至约4600、或约10至约4000、或约 20至约3000、或约100至约3000、或约100至约2900、或约150至约2900、或 约125至约2900、或约100至约2500、或约100至约2000、或约100至约1900、 或约100至约1850、或约100至约1750、或约100至约1650、或约100至约1500、 或约100至约1400、或约100至约1300、或约100至约1250、或约100至约1150、 或约100至约1100、或约100至约1000、或约100至约900、或约100至约750、 或约100至约700、或约100至约600、或约100至约575、或约100至约500、或 约100至约450、或约100至约350、或约100至约275、或约100至约230、或约 150至约475、或约150至约340、或约113至约340、或约450至约800、或约454 至约796、或约454至约682、或约340至约795、或约341至约682、或约568至 约909、或约227至约1500、或约225至约2280、或约460至约2160、或约460 至约2050、或约341至约1820、或约341至约1710、或约341至约1250、或约 225至约1250、或约341至约1250、或约341至约1136、或约341至约1023、或 约341至约910、或约341至约796、或约341至约682、或约341至约568、或约 114至约1000、或约114至约950、或约114至约910、或约114至约800、或约 114至约690、或约114至约575。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 式(XII)和(XIII)的化合物中的n是选自以下的整数：2、5、10、11、22、 23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、 794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、 1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、 1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、 2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、 2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和 4546。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XII)和(XIII)或式 (XII)与(XIII)的混合物的结构在IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71，其 中式(I)的结构在IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:3中 的位置。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XII)和(XIII)或 式(XII)与(XIII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸 序列中的位置选自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、 V68和L71。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XII)和(XIII) 或式(XII)与(XIII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基 酸序列中的位置是在位置K34。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 式(XII)和(XIII)或式(XII)与(XIII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的 IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置F41。在本文所述的IL-2缀合物的 一些实施方案中，式(XII)和(XIII)或式(XII)与(XIII)的混合物的结构 在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置F43。在本文所 述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XII)和(XIII)或式(XII)与(XIII) 的混合物的结构在SEQ IDNO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位 置K42。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XII)和(XIII)或 式(XII)与(XIII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸 序列中的位置是在位置E61。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 式(XII)和(XIII)或式(XII)与(XIII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的 IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置P64。在本文所述的IL-2缀合物的 一些实施方案中，式(XII)和(XIII)或式(XII)与(XIII)的混合物的结构 在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置R37。在本文 所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XII)和(XIII)或式(XII)与 (XIII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置 是在位置T40。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XII)和 (XIII)或式(XII)与(XIII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物 的氨基酸序列中的位置是在位置E67。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施 方案中，式(XII)和(XIII)或式(XII)与(XIII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置Y44。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，式(XII)和(XIII)或式(XII)与(XIII)的混合 物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置 V68。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XII)和(XIII)或式 (XII)与(XIII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列 中的位置是在位置L71。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，构成 所述IL-2缀合物的总量的式(XII)结构的量与式(XIII)结构的量的比率为 约1:1。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，构成所述IL-2缀合物 的总量的式(XII)结构的量与式(XIII)结构的量的比率大于1:1。在本文所 述的IL-2缀合物的一些实施方案中，构成所述IL-2缀合物的总量的式(XII) 结构的量与式(XIII)结构的量的比率小于1:1。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XII)或(XIII)的结构或(XII)与(XIII)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3 中被替代的氨基酸残基选自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、 E67、Y44、V68和L71，并且其中n是以下的整数：100至约1150、或约100至约1100、或约100至约1000、或约100至约900、或约100至约750、或约100 至约700、或约100至约600、或约100至约575、或约100至约500、或约100至 约450、或约100至约350、或约100至约275、或约100至约230、或约150至约 475、或约150至约340、或约113至约340、或约450至约800、或约454至约796、 或约454至约682、或约340至约795、或约341至约682、或约568至约909、或 约227至约1500、或约225至约2280、或约460至约2160、或约460至约2050、或约341至约1820、或约341至约1710、或约341至约1250、或约225至约1250、 或约341至约1250、或约341至约1136、或约341至约1023、或约341至约910、 或约341至约796、或约341至约682、或约341至约568、或约114至约1000、 或约114至约950、或约114至约910、或约114至约800、或约114至约690、或 约114至约575。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XII)和 (XIII)的化合物中的n是选自以下的整数：2、5、10、11、22、23、113、114、 227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、 796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、 1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、 1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、 2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、 2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XII)或(XIII)的结构或(XII)与(XIII)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3 中被替代的氨基酸残基选自F41、F43、K42、E61和P64，并且其中n是以下 的整数：约450至约800、或约454至约796、或约454至约682、或约568至约 909。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XII)和(XIII)的化 合物中的n是选自以下的整数：454、455、568、569、680、681、682、794、 795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137和1249。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XII)或(XIII)的结构或(XII)与(XIII)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3 中被替代的氨基酸残基选自E61和P64，并且其中n是以下的整数：约450至约 800、或约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的 IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XII)和(XIII)的化合物中的n是选自以 下的整数：454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、 909和910。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XII)或(XIII)的结构或(XII)与(XIII)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3 中被替代的氨基酸残基是E61，并且其中n是以下的整数：约450至约800、或 约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合 物的一些实施方案中，式(XII)和(XIII)的化合物中的n是选自以下的整 数：454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910。 在一些实施方案中，n是约500至约1000。在一些实施方案中，n是约550至约 800。在一些实施方案中，n是约681。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XII)或(XIII)的结构或(XII)与(XIII)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3 中被替代的氨基酸残基是P64，并且其中n是以下的整数：约450至约800、或 约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合 物的一些实施方案中，式(XII)和(XIII)的化合物中的n是选自以下的整 数：454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910。 在一些实施方案中，n是约500至约1000。在一些实施方案中，n是约550至约 800。在一些实施方案中，n是约681。
本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中 所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(XII)或(XIII)的结构或 (XII)与(XIII)的混合物替代，其中n是整数使得PEG部分的分子量在以下 范围内：约1,000道尔顿至约200,000道尔顿、或约2,000道尔顿至约150,000道 尔顿、或约3,000道尔顿至约125,000道尔顿、或约4,000道尔顿至约100,000道 尔顿、或约5,000道尔顿至约100,000道尔顿、或约6,000道尔顿至约90,000道 尔顿、或约7,000道尔顿至约80,000道尔顿、或约8,000道尔顿至约70,000道尔 顿、或约5,000道尔顿至约70,000道尔顿、或约5,000道尔顿至约65,000道尔顿、 或约5,000道尔顿至约60,000道尔顿、或约5,000道尔顿至约50,000道尔顿、或 约6,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约7,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 7,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约7,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 8,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约8,500道尔顿至约40,000道尔顿、或约 8,500道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 9,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 9,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约 9,500道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,500道尔顿至约30,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约10,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约10,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 15,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 15,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约20,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约20,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约30,000道尔顿。本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列 的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(XII)或 (XIII)的结构或(XII)与(XIII)的混合物替代，其中n是整数使得PEG部分 的分子量为约5,000道尔顿、约7,500道尔顿、约10,000道尔顿、约15,000道尔 顿、约20,000道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、 约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约60,000道尔顿、约70,000 道尔顿、约80,000道尔顿、约90,000道尔顿、约100,000道尔顿、约125,000道 尔顿、约150,000道尔顿、约175,000道尔顿或约200,000道尔顿。本文描述包 含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少 一个氨基酸残基被式(XII)或(XIII)的结构或(XII)与(XIII)的混合物 替代，其中n是整数使得PEG部分的分子量为约5,000道尔顿、约7,500道尔顿、 约10,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000 道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿或约50,000道尔 顿。
本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中 所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(XIV)或(XV)的结构或(XIV)与(XV)的混合物替代：
Figure BDA0003528433030000571
其中：
m是0至20的整数；
p是0至20的整数；
n是在约2至约5000范围内的整数；并且
波浪线指示与SEQ ID NO:3内未被替代的氨基酸残基的共价键，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
在一些实施方案中，式(XIV)和式(XV)内手性中心的立体 化学是外消旋的，是富含(R)的，是富含(S)的，基本上是(R)，基本上 是(S)，是(R)或者是(S)。在一些实施方案中，式(XIV)和式(XV)内 手性中心的立体化学是外消旋的。在一些实施方案中，式(XIV)和式(XV) 内手性中心的立体化学是富含(R)的。在一些实施方案中，式(XIV)和式 (XV)内手性中心的立体化学是富含(S)的。在一些实施方案中，式(XIV) 和式(XV)内手性中心的立体化学基本上是(R)。在一些实施方案中，式 (XIV)和式(XV)内手性中心的立体化学基本上是(S)。在一些实施方案中， 式(XIV)和式(XV)内手性中心的立体化学是(R)。在一些实施方案中， 式(XIV)和式(XV)内手性中心的立体化学是(S)。
在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和 (XV)的化合物中的m是0至20、或0至18、或0至16、或0至14、或0至12、或 0至10、或0至9、或0至8、或0至7、或0至6、或0至5、或0至4、或0至3、或0 至2。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化 合物中的m是0。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和 (XV)的化合物中的m是1。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式 (XIV)和(XV)的化合物中的m是2。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方 案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的m是3。在本文所述的IL-2缀合物的 一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的m是4。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的m是5。在本文 所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的m是 6。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合 物中的m是7。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV) 的化合物中的m是8。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV) 和(XV)的化合物中的m是9。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 式(XIV)和(XV)的化合物中的m是10。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的m是11。在本文所述的IL-2缀合 物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的m是12。在本文所 述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的m是 13。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化 合物中的m是14。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和 (XV)的化合物中的m是15。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式 (XIV)和(XV)的化合物中的m是16。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施 方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的m是17。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的m是18。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的m是19。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物 中的m是20。
在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和 (XV)的化合物中的p是0至20、或0至18、或0至16、或0至14、或0至12、或0 至10、或0至9、或0至8、或0至7、或0至6、或0至5、或0至4、或0至3、或0 至2。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化 合物中的p是0。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和 (XV)的化合物中的p是1。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的p是2。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方 案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的p是3。在本文所述的IL-2缀合物的 一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的p是4。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的p是5。在本文 所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的p是 6。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合 物中的p是7。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV) 的化合物中的p是8。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV) 和(XV)的化合物中的p是9。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 式(XIV)和(XV)的化合物中的p是10。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的p是11。在本文所述的IL-2缀合 物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的p是12。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的p是13。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物 中的p是14。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV) 的化合物中的p是15。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV) 和(XV)的化合物中的m是16。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 式(XIV)和(XV)的化合物中的p是17。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的p是18。在本文所述的IL-2缀合 物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的p是19。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的p是20。
在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和 (XV)的化合物中的n在以下范围内：约5至约4600、或约10至约4000、或约 20至约3000、或约100至约3000、或约100至约2900、或约150至约2900、或 约125至约2900、或约100至约2500、或约100至约2000、或约100至约1900、 或约100至约1850、或约100至约1750、或约100至约1650、或约100至约1500、 或约100至约1400、或约100至约1300、或约100至约1250、或约100至约1150、 或约100至约1100、或约100至约1000、或约100至约900、或约100至约750、 或约100至约700、或约100至约600、或约100至约575、或约100至约500、或 约100至约450、或约100至约350、或约100至约275、或约100至约230、或约 150至约475、或约150至约340、或约113至约340、或约450至约800、或约454 至约796、或约454至约682、或约340至约795、或约341至约682、或约568至 约909、或约227至约1500、或约225至约2280、或约460至约2160、或约460 至约2050、或约341至约1820、或约341至约1710、或约341至约1250、或约 225至约1250、或约341至约1250、或约341至约1136、或约341至约1023、或 约341至约910、或约341至约796、或约341至约682、或约341至约568、或约 114至约1000、或约114至约950、或约114至约910、或约114至约800、或约 114至约690、或约114至约575。
在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XIV)和 (XV)的化合物中，m是0至6的整数，p是0至6的整数，并且n是选自以下的 整数：113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、 682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XIV)和(XV)的 化合物中，m是1至6的整数，p是1至6的整数，并且n是选自以下的整数：113、 114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、 795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本 文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XIV)和(XV)的化合物中， m是2至6的整数，p是2至6的整数，并且n是选自以下的整数：113、114、227、 228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、 908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，在式(XIV)和(XV)的化合物中，m是2至4的整数，p是2至4的整数，并且n是选自以下的整数：113、114、227、228、340、 341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、 910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一 些实施方案中，在式(XIV)和(XV)的化合物中，m是1，p是2，并且n是 选自以下的整数：113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、 680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、 1136和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XIV)和 (XV)的化合物中，m是2，p是2，并且n是选自以下的整数：113、114、227、 228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、 908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，在式(XIV)和(XV)的化合物中，m是3，p是2， 并且n是选自以下的整数：113、114、227、228、340、341、454、455、568、 569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XIV) 和(XV)的化合物中，m是4，p是2，并且n是选自以下的整数：113、114、 227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、 796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XIV)和(XV)的化合物中，m是5， p是2，并且n是选自以下的整数：113、114、227、228、340、341、454、455、 568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、 1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在 式(XIV)和(XV)的化合物中，m是6，p是2，并且n是选自以下的整数：113、 114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、 795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本 文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XIV)和(XV)的化合物中， m是7，p是2，并且n是选自以下的整数：113、114、227、228、340、341、 454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、 1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，在式(XIV)和(XV)的化合物中，m是8，p是2，并且n是选自 以下的整数：113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、 681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136 和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XIV)和(XV) 的化合物中，m是9，p是2，并且n是选自以下的整数：113、114、227、228、 340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、 909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2缀合 物的一些实施方案中，在式(XIV)和(XV)的化合物中，m是10，p是2， 并且n是选自以下的整数：113、114、227、228、340、341、454、455、568、 569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、 1135、1136和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XIV) 和(XV)的化合物中，m是11，p是2，并且n是选自以下的整数：113、114、 227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、 796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XIV)和(XV)的化合物中，m是11， p是2，并且n是选自以下的整数：113、114、227、228、340、341、454、455、 568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、 1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在 式(XIV)和(XV)的化合物中，m是2，p是2，并且n是选自以下的整数： 680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、 1136和1137。
在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和 (XV)的化合物中的n是选自以下的整数：2、5、10、11、22、23、113、114、 227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、 796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、 1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、 2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、 2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546。在本文 所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)或式(XIV)与 (XV)的混合物的结构在IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自K34、F41、 F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71，其中式(I)的 结构在IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:3中的位置。在 本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)或式(XIV) 与(XV)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的 位置选自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68 和L71。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)或 式(XIV)与(XV)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置K34。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 式(XIV)和(XV)或式(XIV)与(XV)的混合物的结构在SEQ ID NO:3 的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置F41。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)或式(XIV)与(XV)的混合物的结 构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置F43。在本文 所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)或式(XIV)与 (XV)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置 是在位置K42。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和 (XV)或式(XIV)与(XV)的混合物的结构在SEQID NO:3的IL-2缀合物 的氨基酸序列中的位置是在位置E61。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施 方案中，式(XIV)和(XV)或式(XIV)与(XV)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置P64。在本文所述的 IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)或式(XIV)与(XV)的 混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置 R37。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)或式 (XIV)与(XV)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列 中的位置是在位置T40。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式 (XIV)和(XV)或式(XIV)与(XV)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的 IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置E67。在本文所述的IL-2缀合物的 一些实施方案中，式(XIV)和(XV)或式(XIV)与(XV)的混合物的结构 在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置Y44。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)或式(XIV)与 (XV)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置 是在位置V68。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和 (XV)或式(XIV)与(XV)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物 的氨基酸序列中的位置是在位置L71。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，构成所述IL-2缀合物的总量的式(XIV)结构的量与式(XV)结构 的量的比率为约1:1。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，构成所 述IL-2缀合物的总量的式(XIV)结构的量与式(XV)结构的量的比率大于 1:1。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，构成所述IL-2缀合物的 总量的式(XIV)结构的量与式(XV)结构的量的比率小于1:1。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XIV)或(XV)的结构或(XIV)与(XV)的混合物替代，其中SEQ ID NO: 3中被替代的氨基酸残基选自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、 E67、Y44、V68和L71，并且其中n是以下的整数：100至约1150、或约100 至约1100、或约100至约1000、或约100至约900、或约100至约750、或约100 至约700、或约100至约600、或约100至约575、或约100至约500、或约100至 约450、或约100至约350、或约100至约275、或约100至约230、或约150至约 475、或约150至约340、或约113至约340、或约450至约800、或约454至约796、 或约454至约682、或约340至约795、或约341至约682、或约568至约909、或 约227至约1500、或约225至约2280、或约460至约2160、或约460至约2050、 或约341至约1820、或约341至约1710、或约341至约1250、或约225至约1250、 或约341至约1250、或约341至约1136、或约341至约1023、或约341至约910、 或约341至约796、或约341至约682、或约341至约568、或约114至约1000、 或约114至约950、或约114至约910、或约114至约800、或约114至约690、或 约114至约575。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和 (XV)的化合物中的n是选自以下的整数：2、5、10、11、22、23、113、114、 227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、 796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、 1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、 1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、 2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、 2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XIV)或(XV)的结构或(XIV)与(XV)的混合物替代，其中SEQ ID NO: 3中被替代的氨基酸残基选自F41、F43、K42、E61和P64，并且其中n是以下 的整数：约450至约800、或约454至约796、或约454至约682、或约568至约 909。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化 合物中的n是选自以下的整数：454、455、568、569、680、681、682、794、 795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137和1249。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XIV)或(XV)的结构或(XIV)与(XV)的混合物替代，其中SEQ ID NO: 3中被替代的氨基酸残基选自E61和P64，并且其中n是以下的整数：约450至 约800、或约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的n是选自 以下的整数：454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XIV)或(XV)的结构或(XIV)与(XV)的混合物替代，其中SEQ ID NO: 3中被替代的氨基酸残基是E61，并且其中n是以下的整数：约450至约800、 或约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀 合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的n是选自以下的整 数：454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910。 在一些实施方案中，n是约500至约1000。在一些实施方案中，n是约550至约 800。在一些实施方案中，n是约681。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XIV)或(XV)的结构或(XIV)与(XV)的混合物替代，其中SEQ ID NO: 3中被替代的氨基酸残基是P64，并且其中n是以下的整数：约450至约800、 或约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀 合物的一些实施方案中，式(XIV)和(XV)的化合物中的n是选自以下的整 数：454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910。 在一些实施方案中，n是约500至约1000。在一些实施方案中，n是约550至约 800。在一些实施方案中，n是约681。
本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中 所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(XIV)或(XV)的结构或 (XIV)与(XV)的混合物替代，其中n是整数使得PEG部分的分子量在以下 范围内：约1,000道尔顿至约200,000道尔顿、或约2,000道尔顿至约150,000道 尔顿、或约3,000道尔顿至约125,000道尔顿、或约4,000道尔顿至约100,000道 尔顿、或约5,000道尔顿至约100,000道尔顿、或约6,000道尔顿至约90,000道尔顿、或约7,000道尔顿至约80,000道尔顿、或约8,000道尔顿至约70,000道尔 顿、或约5,000道尔顿至约70,000道尔顿、或约5,000道尔顿至约65,000道尔顿、 或约5,000道尔顿至约60,000道尔顿、或约5,000道尔顿至约50,000道尔顿、或 约6,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约7,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 7,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约7,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 8,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约8,500道尔顿至约40,000道尔顿、或约8,500道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 9,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 9,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约 9,500道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,500道尔顿至约30,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约10,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约10,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 15,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 15,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约20,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约20,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约20,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约30,000道尔顿。本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列 的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(XIV)或 (XV)的结构或(XIV)与(XV)的混合物替代，其中n是整数使得PEG部分 的分子量为约5,000道尔顿、约7,500道尔顿、约10,000道尔顿、约15,000道尔 顿、约20,000道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、 约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约60,000道尔顿、约70,000 道尔顿、约80,000道尔顿、约90,000道尔顿、约100,000道尔顿、约125,000道 尔顿、约150,000道尔顿、约175,000道尔顿或约200,000道尔顿。本文描述包 含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少 一个氨基酸残基被式(XIV)或(XV)的结构或(XIV)与(XV)的混合物 替代，其中n是整数使得PEG部分的分子量为约5,000道尔顿、约7,500道尔顿、 约10,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000 道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿或约50,000道尔 顿。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XIV)或(XV)的结构或(XIV)与(XV)的混合物替代，其中SEQ ID NO: 3中被替代的氨基酸残基选自F41、F43、K42、E61和P64，m是0至6的整数， p是0至6的整数，并且n是以下的整数：约450至约800、或约454至约796、或 约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案 中，在式(XIV)和(XV)的化合物中，m是2，p是2，并且n是选自以下的 整数：454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、 910、1021、1022、1023、1135、1136、1137和1249。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XIV)或(XV)的结构或(XIV)与(XV)的混合物替代，其中SEQ ID NO: 3中被替代的氨基酸残基选自E61和P64，并且其中m是0至6的整数，p是0至6 的整数，并且n是以下的整数：约450至约800、或约454至约796、或约454至 约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式 (XIV)和(XV)的化合物中，m是2，p是2，并且n是选自以下的整数：454、 455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XIV)或(XV)的结构或(XIV)与(XV)的混合物替代，其中SEQ ID NO: 3中被替代的氨基酸残基是E61，并且其中m是0至6的整数，p是0至6的整数， 并且n是以下的整数：约450至约800、或约454至约796、或约454至约682、 或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XIV) 和(XV)的化合物中，m是2，p是2，并且n是选自以下的整数：454、455、 568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910。在一些实施 方案中，n是约500至约1000。在一些实施方案中，n是约550至约800。在一 些实施方案中，n是约681。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XIV)或(XV)的结构或(XIV)与(XV)的混合物替代，其中SEQ ID NO: 3中被替代的氨基酸残基是P64，并且其中m是0至6的整数，p是0至6的整数， 并且n是以下的整数：约450至约800、或约454至约796、或约454至约682、 或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XIV) 和(XV)的化合物中，m是2，p是2，并且n是选自以下的整数：454、455、 568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910。在一些实施 方案中，n是约500至约1000。在一些实施方案中，n是约550至约800。在一 些实施方案中，n是约681。
本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中 所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(XVI)或(XVII)的结构或 (XVI)与(XVII)的混合物替代：
Figure BDA0003528433030000681
其中：
m是0至20的整数；
n是在约2至约5000范围内的整数；并且
波浪线指示与SEQ ID NO:3内未被替代的氨基酸残基的共价键，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
在一些实施方案中，式(XVI)和式(XVII)内手性中心的立体 化学是外消旋的，是富含(R)的，是富含(S)的，基本上是(R)，基本上 是(S)，是(R)或者是(S)。在一些实施方案中，式(XVI)和式(XVII)内 手性中心的立体化学是外消旋的。在一些实施方案中，式(XVI)和式(XVII) 内手性中心的立体化学是富含(R)的。在一些实施方案中，式(XVI)和式(XVII)内手性中心的立体化学是富含(S)的。在一些实施方案中，式(XVI) 和式(XVII)内手性中心的立体化学基本上是(R)。在一些实施方案中，式 (XVI)和式(XVII)内手性中心的立体化学基本上是(S)。在一些实施方案 中，式(XVI)和式(XVII)内手性中心的立体化学是(R)。在一些实施方案 中，式(XVI)和式(XVII)内手性中心的立体化学是(S)。
在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和 (XVII)的化合物中的m是0至20、或0至18、或0至16、或0至14、或0至12、 或0至10、或0至9、或0至8、或0至7、或0至6、或0至5、或0至4、或0至3、 或0至2。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII) 的化合物中的m是0。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI) 和(XVII)的化合物中的m是1。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案 中，式(XVI)和(XVII)的化合物中的m是2。在本文所述的IL-2缀合物的一 些实施方案中，式(XVI)和(XVII)的化合物中的m是3。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)的化合物中的m是4。在本 文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)的化合物中的 m是5。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)的 化合物中的m是6。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)的化合物中的m是7。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 式(XVI)和(XVII)的化合物中的m是8。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，式(XVI)和(XVII)的化合物中的m是9。在本文所述的IL-2缀合 物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)的化合物中的m是10。在本文所 述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)的化合物中的m是 11。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)的化 合物中的m是12。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)的化合物中的m是13。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中， 式(XVI)和(XVII)的化合物中的m是14。在本文所述的IL-2缀合物的一些 实施方案中，式(XVI)和(XVII)的化合物中的m是15。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)的化合物中的m是16。在本 文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)的化合物中的 m是17。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)的 化合物中的m是18。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI) 和(XVII)的化合物中的m是19。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案 中，式(XVI)和(XVII)的化合物中的m是20。
在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和 (XVII)的化合物中的n在以下范围内：约5至约4600、或约10至约4000、或约 20至约3000、或约100至约3000、或约100至约2900、或约150至约2900、或 约125至约2900、或约100至约2500、或约100至约2000、或约100至约1900、 或约100至约1850、或约100至约1750、或约100至约1650、或约100至约1500、 或约100至约1400、或约100至约1300、或约100至约1250、或约100至约1150、 或约100至约1100、或约100至约1000、或约100至约900、或约100至约750、 或约100至约700、或约100至约600、或约100至约575、或约100至约500、或 约100至约450、或约100至约350、或约100至约275、或约100至约230、或约 150至约475、或约150至约340、或约113至约340、或约450至约800、或约454 至约796、或约454至约682、或约340至约795、或约341至约682、或约568至 约909、或约227至约1500、或约225至约2280、或约460至约2160、或约460 至约2050、或约341至约1820、或约341至约1710、或约341至约1250、或约 225至约1250、或约341至约1250、或约341至约1136、或约341至约1023、或 约341至约910、或约341至约796、或约341至约682、或约341至约568、或约 114至约1000、或约114至约950、或约114至约910、或约114至约800、或约 114至约690、或约114至约575。
在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XVI)和 (XVII)的化合物中，m是0至6的整数，并且n是选自以下的整数：113、114、 227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、 796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述 的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XVI)和(XVII)的化合物中，m是1 至6的整数，并且n是选自以下的整数：113、114、227、228、340、341、454、 455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、 1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案 中，在式(XVI)和(XVII)的化合物中，m是2至6的整数，并且n是选自以 下的整数：113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、 681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136 和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XVI)和(XVII) 的化合物中，m是2至4的整数，并且n是选自以下的整数：113、114、227、 228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、 908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，在式(XVI)和(XVII)的化合物中，m是1，并 且n是选自以下的整数：113、114、227、228、340、341、454、455、568、 569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、 1135、1136和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XVI) 和(XVII)的化合物中，m是2，并且n是选自以下的整数：113、114、227、 228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、 908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，在式(XVI)和(XVII)的化合物中，m是3，并 且n是选自以下的整数：113、114、227、228、340、341、454、455、568、 569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、 1135、1136和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XVI) 和(XVII)的化合物中，m是4，并且n是选自以下的整数：113、114、227、 228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、 908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，在式(XVI)和(XVII)的化合物中，m是5，并 且n是选自以下的整数：113、114、227、228、340、341、454、455、568、 569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、 1135、1136和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XVI) 和(XVII)的化合物中，m是6，并且n是选自以下的整数：113、114、227、 228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、 908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，在式(XVI)和(XVII)的化合物中，m是7，并 且n是选自以下的整数：113、114、227、228、340、341、454、455、568、 569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XVI) 和(XVII)的化合物中，m是8，并且n是选自以下的整数：113、114、227、 228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、 908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，在式(XVI)和(XVII)的化合物中，m是9，并 且n是选自以下的整数：113、114、227、228、340、341、454、455、568、 569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、 1135、1136和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XVI) 和(XVII)的化合物中，m是10，并且n是选自以下的整数：113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、 908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2 缀合物的一些实施方案中，在式(XVI)和(XVII)的化合物中，m是11，并 且n是选自以下的整数：113、114、227、228、340、341、454、455、568、 569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、 1135、1136和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XVI) 和(XVII)的化合物中，m是12，并且n是选自以下的整数：113、114、227、 228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、 908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XVI)和(XVII)的化合物中，m是2，并 且n是选自以下的整数：680、681、682、794、795、796、908、909、910、 1021、1022、1023、1135、1136和1137。
在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和 (XVII)的化合物中的n是选自以下的整数：2、5、10、11、22、23、113、114、 227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、 796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、 1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、 2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、 2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546。在本文 所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)或式(XVI)与 (XVII)的混合物的结构在IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自K34、F41、 F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71，其中式(I)的 结构在IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:3中的位置。在 本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)或式(XVI) 与(XVII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的 位置选自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68 和L71。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)或 式(XVI)与(XVII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基 酸序列中的位置是在位置K34。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)或式(XVI)与(XVII)的混合物的结构在SEQ ID NO: 3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置F41。在本文所述的IL-2缀合 物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)或式(XVI)与(XVII)的混合 物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置F43。 在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)或式(XVI)与(XVII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序 列中的位置是在位置K42。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式 (XVI)和(XVII)或式(XVI)与(XVII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3 的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置E61。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)或式(XVI)与(XVII)的混合物 的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置P64。在 本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)或式(XVI) 与(XVII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的 位置是在位置R37。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI) 和(XVII)或式(XVI)与(XVII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀 合物的氨基酸序列中的位置是在位置T40。在本文所述的IL-2缀合物的一些 实施方案中，式(XVI)和(XVII)或式(XVI)与(XVII)的混合物的结构 在SEQ IDNO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置E67。在本文 所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)或式(XVI)与 (XVII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位 置是在位置Y44。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和 (XVII)或式(XVI)与(XVII)的混合物的结构在SEQ ID NO:3的IL-2缀合 物的氨基酸序列中的位置是在位置V68。在本文所述的IL-2缀合物的一些实 施方案中，式(XVI)和(XVII)或式(XVI)与(XVII)的混合物的结构在 SEQ ID NO:3的IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在位置L71。在本文所 述的IL-2缀合物的一些实施方案中，构成所述IL-2缀合物的总量的式(XVI) 结构的量与式(XVII)结构的量的比率为约1:1。在本文所述的IL-2缀合物 的一些实施方案中，构成所述IL-2缀合物的总量的式(XVI)结构的量与式(XVII)结构的量的比率大于1:1。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案 中，构成所述IL-2缀合物的总量的式(XVI)结构的量与式(XVII)结构的量 的比率小于1:1。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XVI)或(XVII)的结构或(XVI)与(XVII)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3中被替代的氨基酸残基选自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、 T40、E67、Y44、V68和L71，并且其中n是以下的整数：100至约1150、或约 100至约1100、或约100至约1000、或约100至约900、或约100至约750、或约 100至约700、或约100至约600、或约100至约575、或约100至约500、或约100 至约450、或约100至约350、或约100至约275、或约100至约230、或约150至 约475、或约150至约340、或约113至约340、或约450至约800、或约454至约 796、或约454至约682、或约340至约795、或约341至约682、或约568至约909、 或约227至约1500、或约225至约2280、或约460至约2160、或约460至约2050、或约341至约1820、或约341至约1710、或约341至约1250、或约225至约1250、 或约341至约1250、或约341至约1136、或约341至约1023、或约341至约910、 或约341至约796、或约341至约682、或约341至约568、或约114至约1000、 或约114至约950、或约114至约910、或约114至约800、或约114至约690、或 约114至约575。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和 (XVII)的化合物中的n是选自以下的整数：2、5、10、11、22、23、113、114、 227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、 796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、 1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、 1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、 2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、 2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XVI)或(XVII)的结构或(XVI)与(XVII)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3中被替代的氨基酸残基选自F41、F43、K42、E61和P64，并且其中n是 以下的整数：约450至约800、或约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII) 的化合物中的n是选自以下的整数：454、455、568、569、680、681、682、 794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137和 1249。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(XVI)或(XVII)的结构或(XVI)与(XVII)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3中被替代的氨基酸残基选自E61和P64，并且其中n是以下的整数：约450 至约800、或约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所 述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)的化合物中的n是 选自以下的整数：454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、 908、909和910。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XVI)或(XVII)的结构或(XVI)与(XVII)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3中被替代的氨基酸残基是E61，并且其中n是以下的整数：约450至约 800、或约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)的化合物中的n是选自 以下的整数：454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、 909和910。在一些实施方案中，n是约500至约1000。在一些实施方案中，n 是约550至约800。在一些实施方案中，n是约681。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XVI)或(XVII)的结构或(XVI)与(XVII)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3中被替代的氨基酸残基是P64，并且其中n是以下的整数：约450至约 800、或约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，式(XVI)和(XVII)的化合物中的n是选自 以下的整数：454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、 909和910。在一些实施方案中，n是约500至约1000。在一些实施方案中，n 是约550至约800。在一些实施方案中，n是约681。
本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中 所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(XVI)或(XVII)的结构或 (XVI)与(XVII)的混合物替代，其中n是整数使得PEG部分的分子量在以下 范围内：约1,000道尔顿至约200,000道尔顿、或约2,000道尔顿至约150,000道 尔顿、或约3,000道尔顿至约125,000道尔顿、或约4,000道尔顿至约100,000道 尔顿、或约5,000道尔顿至约100,000道尔顿、或约6,000道尔顿至约90,000道 尔顿、或约7,000道尔顿至约80,000道尔顿、或约8,000道尔顿至约70,000道尔 顿、或约5,000道尔顿至约70,000道尔顿、或约5,000道尔顿至约65,000道尔顿、 或约5,000道尔顿至约60,000道尔顿、或约5,000道尔顿至约50,000道尔顿、或 约6,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约7,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 7,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约7,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 8,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约8,500道尔顿至约40,000道尔顿、或约 8,500道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 9,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 9,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约 9,500道尔顿至约35,000道尔顿、或约9,500道尔顿至约30,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约10,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约10,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约 10,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约 15,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约 15,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约15,000道尔顿至约30,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约50,000道尔顿、或约20,000道尔顿至约45,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约40,000道尔顿、或约20,000道尔顿至约35,000道尔顿、或约 20,000道尔顿至约30,000道尔顿。本文描述包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列 的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(XVI)或 (XVII)的结构或(XVI)与(XVII)的混合物替代，其中n是整数使得PEG部 分的分子量为约5,000道尔顿、约7,500道尔顿、约10,000道尔顿、约15,000道 尔顿、约20,000道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、 约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约60,000道尔顿、约70,000 道尔顿、约80,000道尔顿、约90,000道尔顿、约100,000道尔顿、约125,000道 尔顿、约150,000道尔顿、约175,000道尔顿或约200,000道尔顿。本文描述包 含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少 一个氨基酸残基被式(XVI)或(XVII)的结构或(XVI)与(XVII)的混合 物替代，其中n是整数使得PEG部分的分子量为约5,000道尔顿、约7,500道尔 顿、约10,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约25,000道尔顿、 约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿或约 50,000道尔顿。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XVI)或(XVII)的结构或(XVI)与(XVII)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3中被替代的氨基酸残基选自F41、F43、K42、E61和P64，m是0至6的整 数，并且n是以下的整数：约450至约800、或约454至约796、或约454至约682、 或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XVI) 和(XVII)的化合物中，m是2，并且n是选自以下的整数：454、455、568、 569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、 1135、1136、1137和1249。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XVI)或(XVII)的结构或(XVI)与(XVII)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3中被替代的氨基酸残基选自E61和P64，并且其中m是0至6的整数，并 且n是以下的整数：约450至约800、或约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XVI)和 (XVII)的化合物中，m是2，并且n是选自以下的整数：454、455、568、569、 680、681、682、794、795、796、908、909和910。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XVI)或(XVII)的结构或(XVI)与(XVII)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3中被替代的氨基酸残基是E61，并且其中m是0至6的整数，并且n是以 下的整数：约450至约800、或约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XVI)和(XVII) 的化合物中，m是2，并且n是选自以下的整数：454、455、568、569、680、 681、682、794、795、796、908、909和910。在一些实施方案中，n是约500 至约1000。在一些实施方案中，n是约550至约800。在一些实施方案中，n是 约681。
在本文所述的一些实施方案中提供包含SEQ ID NO:3的氨基 酸序列的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式 (XVI)或(XVII)的结构或(XVI)与(XVII)的混合物替代，其中SEQ ID NO:3中被替代的氨基酸残基是P64，并且其中m是0至6的整数，并且n是以 下的整数：约450至约800、或约454至约796、或约454至约682、或约568至约909。在本文所述的IL-2缀合物的一些实施方案中，在式(XVI)和(XVII) 的化合物中，m是2，并且n是选自以下的整数：454、455、568、569、680、 681、682、794、795、796、908、909和910。在一些实施方案中，n是约500 至约1000。在一些实施方案中，n是约550至约800。在一些实施方案中，n是 约681。
本文描述药物组合物，其包含有效量的本文所述的IL-缀合物和 一种或多种药学上可接受的赋形剂。
本文描述治疗受试者的癌症的方法，其包括向有需要的受试者 施用有效量的本文所述的IL-2缀合物。在本文所述的治疗癌症的方法的一些 实施方案中，所述受试者的癌症选自肾细胞癌(RCC)、非小细胞肺癌 (NSCLC)、头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)、经典型霍奇金淋巴瘤(cHL)、 原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、尿路上皮癌、微卫星不稳定癌、微 卫星稳定癌、胃癌、宫颈癌、肝细胞癌(HCC)、梅克尔细胞癌(MCC)、黑 色素瘤、小细胞肺癌(SCLC)、食管癌、胶质母细胞瘤、间皮瘤、乳腺癌、 三阴性乳腺癌、前列腺癌、去势抵抗性前列腺癌、转移性去势抵抗性前列腺 癌、具有DNA损伤应答(DDR)缺陷的转移性去势抵抗性前列腺癌、膀胱癌、 卵巢癌、中度至低度突变负担的肿瘤、皮肤鳞状细胞癌(CSCC)、鳞状细胞皮肤癌(SCSC)、低表达至不表达PD-L1的肿瘤、超出其原发解剖学起源部 位全身性播散至肝脏和CNS的肿瘤以及弥漫性大B细胞淋巴瘤。本文描述治 疗受试者的癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的本文所述的 IL-2缀合物。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，所述受试者 的癌症是胆管癌。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，所述受 试者的癌症选自肾细胞癌(RCC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、尿路上皮癌和黑色素瘤。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将所述IL-2缀 合物施用至有需要的受试者，每两周一次、每三周一次、每4周一次、每5周 一次、每6周一次、每7周一次或每8周一次。在本文所述的治疗癌症的方法 的一些实施方案中，将所述IL-2缀合物每周一次或每两周一次施用至有需要 的受试者。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将所述IL-2缀 合物每周一次施用至有需要的受试者。在本文所述的治疗癌症的方法的一些 实施方案中，将所述IL-2缀合物每两周一次施用至有需要的受试者。在本文 所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用 至所述受试者不会引起所述受试者的血管渗漏综合征。在本文所述的治疗癌 症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者 不会引起所述受试者的2级、3级或4级血管渗漏综合征。在本文所述的治疗 癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试 者不会引起所述受试者的2级血管渗漏综合征。在本文所述的治疗癌症的方 法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引 起所述受试者的3级血管渗漏综合征。在本文所述的治疗癌症的方法的一些 实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述受 试者的4级血管渗漏综合征。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案 中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述受试者的血 管张力丧失。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的 所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述受试者的血浆蛋白和流体外 渗至血管外空间。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效 量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述受试者的低血压和器官 灌注减少。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所 述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述受试者的嗜中性粒细胞功能受 损。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者不会引起所述受试者的趋化作用降低。在本文所述 的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所 述受试者与所述受试者增加的播散性感染的风险无关。在本文所述的治疗癌 症的方法的一些实施方案中，所述播散性感染是脓毒症或细菌性心内膜炎。 在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，所述播散性感染是脓毒 症。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，所述播散性感染是细 菌性心内膜炎。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，在施用所 述IL-2缀合物之前，针对任何预先存在的细菌感染治疗所述受试者。在本文 所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，在施用所述IL-2缀合物之前，用 选自苯唑西林、萘夫西林、环丙沙星和万古霉素的抗细菌剂治疗受试者。在 本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物 施用至所述受试者不会加重所述受试者预先存在的或初始呈现的自身免疫 性疾病或炎性障碍。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有 效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会加重所述受试者预先存在的或 初始呈现的自身免疫性疾病。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案 中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会加重所述受试者预先 存在的或初始呈现的炎性障碍。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方 案中，所述受试者的自身免疫性疾病或炎性障碍选自克罗恩病、硬皮病、甲 状腺炎、炎性关节炎、糖尿病、眼球型重症肌无力、新月体性IgA肾小球肾 炎、胆囊炎、脑血管炎、史-约综合征和大疱性类天疱疮。在本文所述的治 疗癌症的方法的一些实施方案中，所述受试者的自身免疫性疾病或炎性障碍 是克罗恩病。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，所述受试者 的自身免疫性疾病或炎性障碍是硬皮病。在本文所述的治疗癌症的方法的一 些实施方案中，所述受试者的自身免疫性疾病或炎性障碍是甲状腺炎。在本 文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，所述受试者的自身免疫性疾病 或炎性障碍是炎性关节炎。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案 中，所述受试者的自身免疫性疾病或炎性障碍是糖尿病。在本文所述的治疗 癌症的方法的一些实施方案中，所述受试者的自身免疫性疾病或炎性障碍是 眼球型重症肌无力。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，所述 受试者的自身免疫性疾病或炎性障碍是新月体性IgA肾小球肾炎。在本文所 述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，所述受试者的自身免疫性疾病或炎 性障碍是胆囊炎。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，所述受 试者的自身免疫性疾病或炎性障碍是脑血管炎。在本文所述的治疗癌症的方 法的一些实施方案中，所述受试者的自身免疫性疾病或炎性障碍是史-约综 合征。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，所述受试者的自身 免疫性疾病或炎性障碍是大疱性类天疱疮。在本文所述的治疗癌症的方法的 一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所 述受试者的精神状态变化、言语困难、皮质盲、肢体或步态共济失调、幻觉、 激越、迟钝或昏迷。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有 效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述受试者的癫痫发作。 在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合 物施用至所述受试者在患有已知癫痫症的受试者中不受禁忌。在本文所述的 治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述 受试者不会引起所述受试者的毛细血管渗漏综合征。在本文所述的治疗癌症 的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不 会引起所述受试者的2级、3级或4级毛细血管渗漏综合征。在本文所述的治 疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受 试者不会引起所述受试者的2级毛细血管渗漏综合征。在本文所述的治疗癌 症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者 不会引起所述受试者的3级毛细血管渗漏综合征。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会 引起所述受试者的4级毛细血管渗漏综合征。在本文所述的治疗癌症的方法 的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会在将 所述IL-2缀合物施用至所述受试者之后引起所述受试者的平均动脉血压下 降。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者不会在将所述IL-2缀合物施用至所述受试者之后引 起所述受试者的低血压。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会在将所述IL-2缀合物施用 至所述受试者之后引起所述受试者经历收缩压低于90mm Hg或从基线收缩 压下降20mm Hg。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效 量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会在将所述IL-2缀合物施用至所述 受试者之后引起所述受试者的水肿。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实 施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会在将所述IL-2 缀合物施用至所述受试者之后引起所述受试者的肾功能或肝功能受损。在本 文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施 用至所述受试者不会在将所述IL-2缀合物施用至所述受试者之后引起所述受 试者的嗜酸性粒细胞增多症。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案 中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会在将所述IL-2缀合物 施用至所述受试者之后引起所述受试者外周血中的嗜酸性粒细胞计数超过 500/μL。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述 IL-2缀合物施用至所述受试者不会在将所述IL-2缀合物施用至所述受试者之 后引起所述受试者外周血中的嗜酸性粒细胞计数超过500/μL至1500/μL。在 本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物 施用至所述受试者不会在将所述IL-2缀合物施用至所述受试者之后引起所述 受试者外周血中的嗜酸性粒细胞计数超过1500/μL至5000/μL。在本文所述的 治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述 受试者不会在将所述IL-2缀合物施用至所述受试者之后引起所述受试者外周 血中的嗜酸性粒细胞计数超过5000/μL。在本文所述的治疗癌症的方法的一 些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者在正在进行精 神药物的现有方案的受试者中不受禁忌。
在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的 所述IL-2缀合物施用至所述受试者在正在进行肾毒性药物、骨髓毒性药物、 心脏毒性药物或肝毒性药物的现有方案的受试者中不受禁忌。在本文所述的 治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述 受试者在正在进行氨基糖苷类、细胞毒性化学疗法、多柔比星、氨甲蝶呤或 天冬酰胺酶的现有方案的受试者中不受禁忌。在本文所述的治疗癌症的方法 的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者在接受含 有抗肿瘤剂的组合方案的受试者中不受禁忌。在本文所述的治疗癌症的方法 的一些实施方案中，所述抗肿瘤剂选自达卡巴嗪、顺铂、他莫昔芬和干扰素 -α。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者不会在将所述IL-2缀合物施用至所述受试者之后引 起受试者的一种或多种4级不良事件。在本文所述的治疗癌症的方法的一些 实施方案中，所述一种或多种4级不良事件选自体温过低；休克；心动过缓； 心室期外收缩；心肌缺血；晕厥；出血；房性心律失常；静脉炎；二度房室 传导阻滞；心内膜炎；心包积液；外周坏疽；血栓形成；冠状动脉障碍；口 炎；恶心和呕吐；肝功能测试异常；胃肠出血；呕血；血性腹泻；胃肠道障 碍；肠穿孔；胰腺炎；贫血；白细胞减少；白细胞增多；低钙血症；碱性磷 酸酶升高；血尿素氮(BUN)升高；高尿酸血症；非蛋白氮(NPN)升高；呼吸性酸中毒；嗜睡；激越；神经病；偏执狂反应；抽搐；癫痫大发作性抽 搐；谵妄；哮喘、肺水肿；通气过度；低氧症；咯血；通气不足；气胸；瞳 孔散大；瞳孔障碍；肾功能异常；肾衰；和急性肾小管坏死。在本文所述的 治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至一组 受试者不会在将所述IL-2缀合物施用至受试者之后在大于1％的受试者中引 起一种或多种4级不良事件。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案 中，一种或多种4级不良事件选自体温过低；休克；心动过缓；心室期外收 缩；心肌缺血；晕厥；出血；房性心律失常；静脉炎；二度房室传导阻滞； 心内膜炎；心包积液；外周坏疽；血栓形成；冠状动脉障碍；口炎；恶心和 呕吐；肝功能测试异常；胃肠出血；呕血；血性腹泻；胃肠道障碍；肠穿孔； 胰腺炎；贫血；白细胞减少；白细胞增多；低钙血症；碱性磷酸酶升高；血 尿素氮(BUN)升高；高尿酸血症；非蛋白氮(NPN)升高；呼吸性酸中毒； 嗜睡；激越；神经病；偏执狂反应；抽搐；癫痫大发作性抽搐；谵妄；哮喘、 肺水肿；通气过度；低氧症；咯血；通气不足；气胸；瞳孔散大；瞳孔障碍； 肾功能异常；肾衰；和急性肾小管坏死。在本文所述的治疗癌症的方法的一 些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至一组受试者不会在将所述IL-2缀合物施用至受试者之后在大于1％的受试者中引起一种或多种不良事 件，其中所述一种或多种不良事件选自十二指肠溃疡形成；肠坏死；心肌炎； 室上性心动过速；继发于视神经炎的永久性或暂时性失明；短暂脑缺血发作； 脑膜炎；脑水肿；心包炎；过敏性间质性肾炎；和气管食管瘘。在本文所述 的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至一 组受试者不会在将所述IL-2缀合物施用至受试者之后在大于1％的受试者中 引起一种或多种不良事件，其中所述一种或多种不良事件选自恶性高热；心 脏停搏；心肌梗死；肺栓塞；脑卒中；肠穿孔；肝或肾衰竭；导致自杀的严 重抑郁症；肺水肿；呼吸停止；呼吸衰竭。在本文所述的治疗癌症的方法的 一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会导致产 生针对所述IL-2缀合物的中和抗体。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实 施方案中，将所述IL-2缀合物施用至所述受试者在不增加所述受试者中外周 CD4+调节性T细胞的数量的情况下增加所述受试者中外周CD8+T和NK细 胞的数量。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将所述IL-2缀 合物施用至所述受试者在不增加所述受试者中外周嗜酸性粒细胞的数量的 情况下增加所述受试者中外周CD8+T和NK细胞的数量。在本文所述的治疗 癌症的方法的一些实施方案中，将所述IL-2缀合物施用至所述受试者在不增 加所述受试者中瘤内CD4+调节性T细胞的数量的情况下增加所述受试者中 瘤内CD8+T和NK细胞的数量。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不需要加强监护设施或 者心肺或加强监护医学方面的熟练专家的可用性。在本文所述的治疗癌症的 方法的一些实施方案中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不需 要加强监护设施的可用性。在本文所述的治疗癌症的方法的一些实施方案 中，将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不需要心肺或加强监护医 学方面的熟练专家的可用性。
附图说明
本发明的新型特征具体陈述于所附的权利要求中。将通过参考 陈述利用本发明原理的说明性实施方案的以下具体描述和附图获得对本发 明的特征和优点的更好的理解，在所述附图中：
图1显示示例性非天然氨基酸。该图是从以下文献的图2修改而 来：Young等人,“Beyond the canonical 20 amino acids:expanding the genetic lexicon,”J.ofBiological Chemistry 285(15):11039-11044(2010)。
图2A-图2B图解说明示例性非天然氨基酸。图2A图解说明示例 性赖氨酸衍生物。图2B图解说明示例性苯丙氨酸衍生物。
图3A-图3D图解说明示例性非天然氨基酸。这些非天然氨基酸 (UAA)已在蛋白质中进行基因编码(图3A-UAA#1-42；图3B-UAA# 43-89；图3C-UAA#90-128；图3D-UAA#129-167)。图3A-图3D采用自 Dumas等人,Chemical Science 2015,6,50-69的表1。
图4A-图4C显示对天然IL-2、P65_30kD、P65_5kD、E62_30kD、 E62_5kD和F42_30kDPEG缀合物的表面等离子体共振(SPR)分析。图4A 显示对与固定的IL-2 Rα结合的IL-2变体的SPR分析。图4B显示对与固定的 IL-2 Rβ结合的IL-2变体的SPR分析。图4C显示对与固定的IL-2 Rα和IL-2 Rβ 结合的重组IL-2和IL-2变体F42_30kD的SPR分析。
图5A-图5F显示人LRS原代细胞群中pSTAT5信号传导的示例 性IL-2变体剂量反应曲线。图5A：天然IL-2；图5B：P65_30kD；图5C： K64_30kD；图5D：K43_30kD；图5E：K35_30kD；以及图5F：F42_30kD。
图6A-图6C显示，PEG和残基取代促进IL-2变体的无α药理学 (no-alphapharmacology)。图6A：天然IL-2；图6B：E62K；图6C：E62_30kD。
图7显示，IL-2变体的无α药理学与PEG大小无关。
图8显示在将单一IV推注剂量的阿地白介素(IL-2)、E62_5、 E62_30和P65_30施用至C57BL/6小鼠后的平均(±SD)血浆浓度与时间曲线。
图9显示在用单一IV推注剂量的P65_30或阿地白介素处理 C57BL/6小鼠后，外周血中pSTAT5+CD8+T细胞的百分比与时间细胞。
图10A-图10C显示在用单一IV推注剂量的P65_30或阿地白介 素(IL-2)处理后，PBMC群体中CD8+T细胞(图10A)、NK细胞(图10B) 和CD4+Treg细胞(图10C)的百分比。在所指示的时间点通过心脏穿刺抽血， 并通过流式细胞术评估免疫细胞群。每个数据点表示来自每个时间点的3次 重复的平均值±SEM。
图11A-图11B显示在用单一IV推注剂量的P65_30或阿地白介素 (IL-2)处理后，对CD3+群体内记忆CD8+CD44+T细胞增殖的刺激在P65_30 与IL-2(阿地白介素)之间的差异。在所指示的时间点通过心脏穿刺抽血， 并通过流式细胞术评估免疫细胞群。使用非配对Student t检验分析数据。*** 指定P值<0.001。图11A显示在72、96和120小时的记忆CD8+CD44+T细胞 增殖。图11B显示在120h时间点对那些细胞的流式细胞术分析。
图12A-图12B显示在用单一IV推注剂量的P65_30处理后，带有 同基因B16F10肿瘤的C57Bl6小鼠中肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)相比于时间的 增加。图12A显示在处理的第5天，P65_30处理的与未处理的(媒介物)动物 中NK细胞、CD8+T细胞和CD4+T reg细胞的百分比。图12B显示P65_30处理 的和对照(媒介物)动物中CD8+/CD4+Treg细胞的比率。使用非配对Student t检验分析数据。***指定P值<0.001。
图13A-图13B显示在用单一IV推注剂量的P65_30或阿地白介 素(IL-2)以递增水平(0.01-5mg/kg)处理后，小鼠IL-2、TNF-α、IFNγ、 IL-5和IL-6的血浆水平。通过ELISA(Abcam，剑桥，英国)确定每种细胞因 子在血浆中的浓度。对于每个剂量组，在给药后4、34和72h收集N＝3的小 鼠和样品。图13A显示给予阿地白介素的动物的细胞因子水平，并且图13B 显示给予P65_30的动物的细胞因子水平。
图14显示在将单一IV剂量的P65_30kD施用至雄性食蟹猴后的 白细胞、淋巴细胞和嗜酸性粒细胞计数(平均值±SD)。
图15A-图15B显示人LRS原代细胞中pSTAT5信号传导的示例 性IL-2变体的剂量反应曲线(图15A)以及小鼠CTLL-2群体中的增殖反应(图 15B)。
图16A-图16B显示如与正常IL-2对照相比，PEG IL-2化合物可 以在原代淋巴细胞中离体特异性扩增免疫细胞群。图16A显示在用IL-2(对 照)处理后的免疫细胞扩增。图16B显示在用P65_30kD处理后的免疫细胞扩 增。
图17A-图17B显示rhIL-2(重组人白介素-2，图17A)和合成缀 合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1(图17B)在IL-2Rα表面上的结合反应 的传感图。在这些条件下，对于IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1未检测到显 著结合反应。
图17C-图17D显示与IL-2Rβ表面结合的rhIL-2(重组人白介素 -2，图17C)和合成缀合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1(图17D)样品的 传感图。
图18显示用于Treg的流式细胞术细胞分选的门控策略。首先使 用FSC-A相对FSC-H针对单态对细胞进行门控，以排除任何聚集体或双态(单 态门，第1面板(panel))。在此门内，针对中至高前向散射(FSC-A)和侧 向散射(SSC-A)对细胞进行门控，以排除红细胞、碎片和粒细胞(淋巴细 胞门，第2面板)。然后将T细胞门控为CD3+、CD56/16阴性群体，第3面板。 将NK细胞鉴定为CD3阴性、高CD56/16群体，第3面板。然后将T细胞分为 CD4+T细胞和CD8+T细胞(第4面板)。然后将Treg从CD4+T细胞门控为 CD25hi x C127lo群体，第5面板。
图19显示在三个浓度下直至168小时，化合物IL-2_P65[AzK_L 1_PEG30kD]-1在人血清中的稳定性，如实施例15中所述。
具体实施方式
细胞因子包括细胞信号传导蛋白的家族，如趋化因子、干扰素、 白介素、淋巴因子、肿瘤坏死因子以及在先天性和适应性免疫细胞稳态中发 挥作用的其他生长因子。细胞因子是由免疫细胞(如巨噬细胞、B淋巴细胞、 T淋巴细胞和肥大细胞、内皮细胞、成纤维细胞和不同的基质细胞)产生的。 在一些情况下，细胞因子调节体液免疫应答与基于细胞的免疫应答之间的平 衡。
白介素是调节以下细胞的发育和分化的信号传导蛋白：T淋巴 细胞和B淋巴细胞、单核细胞谱系的细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、 嗜酸性粒细胞、巨核细胞和造血细胞。白介素是由辅助CD4 T和B淋巴细胞、 单核细胞、巨噬细胞、内皮细胞和其他组织驻留细胞产生的。
白介素2(IL-2)是一种多效性1型细胞因子，其结构包含15.5 kDa的四α-螺旋束。IL-2的前体形式的长度为153个氨基酸残基，其中前20个 氨基酸形成信号肽，并且残基21-153形成成熟形式。IL-2主要由CD4+T细胞 在抗原刺激后产生，以及由CD8+细胞、自然杀伤(NK)细胞、和自然杀伤 T(NKT)细胞、激活的树突细胞(DC)和肥大细胞以较低程度产生。IL-2 信号传导通过与IL-2受体(IL-2R)亚基、IL-2Rα(也称为CD25)、IL-2Rβ(也 称为CD122)和IL-2Rγ(也称为CD132)的特定组合的相互作用来进行。IL-2 与IL-2Rα的相互作用以约10- 8M的Kd形成“低亲和力”IL-2受体复合物。IL-2 与IL-2Rβ和IL-2Rγ的相互作用以约10-9M的Kd形成“中亲和力”IL-2受体复 合物。IL-2与所有三种亚基IL-2Rα、IL-2Rβ和IL-2Rγ的相互作用以约>10-11M 的Kd形成“高亲和力”IL-2受体复合物。
在一些情况下，经由“高亲和力”IL-2Rαβγ复合物的IL-2信号 传导调节调节性T细胞的激活和增殖。调节性T细胞或CD4+CD25+Foxp3+调节 性T(Treg)细胞通过抑制效应细胞(如CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、 NK细胞和NKT细胞)来介导免疫稳态的维持。在一些情况下，Treg细胞是 从胸腺生成(tTreg细胞)，或者是从外周的幼稚T细胞诱导(pTreg细胞)。在 一些情形中，将Treg细胞视为外周耐受的介体。实际上，在一项研究中，CD25 耗尽的外周CD4+T细胞的转移在裸鼠中产生多种自身免疫性疾病，而 CD4+CD25+T细胞的共转移抑制自身免疫的发展(Sakaguchi,等人, “Immunologic self-tolerance maintained byactivated T cells expressing IL-2 receptor alpha-chains(CD25),”J.Immunol.155(3):1151-1164(1995))。Treg 细胞群的增大下调效应T细胞增殖并抑制自身免疫和T细胞抗肿瘤应答。
经由“中亲和力”IL-2Rβγ复合物的IL-2信号传导调节CD8+效 应T(Teff)细胞、NK细胞和NKT细胞的激活和增殖。CD8+Teff细胞(也称 为细胞毒性T细胞、Tc细胞、细胞毒性T淋巴细胞、CTL、T杀伤细胞、细胞 裂解性T细胞、Tcon或杀伤T细胞)是识别并杀伤受损细胞、癌细胞和病原体 感染的细胞的T淋巴细胞。NK和NKT细胞是与CD8+Teff细胞类似的淋巴细胞 类型，其靶向癌细胞和病原体感染的细胞。
在一些情况下，IL-2信号传导用于调节T细胞应答，且随后用 于治疗癌症。例如，以高剂量形式施用IL-2以诱导用于治疗癌症的Teff细胞 群的扩增。然而，高剂量IL2进一步导致对Treg细胞的伴随刺激，从而减弱抗 肿瘤免疫应答。高剂量IL-2还诱导由脉管系统中的IL-2Rα链表达细胞(包括2 型先天免疫细胞(ILC-2)、嗜酸性粒细胞和内皮细胞)的接合介导的毒性不 良事件。这导致嗜酸性粒细胞增多症、毛细血管渗漏和血管渗漏综合征(VLS)。
过继细胞疗法使得医师能够有效利用患者自身的免疫细胞对 抗疾病，如增殖性疾病(例如，癌症)以及感染性疾病。在一个非限制性例 子中，可以从患者收获T淋巴细胞，将其再工程化以靶向恶性细胞表面上的 特定抗原，并将其再引入患者体内以特异性靶向所述恶性细胞。另外，过继 细胞疗法通过以下方式在体内提供持续反应：信号传导至免疫细胞以在将再 工程化的细胞再引入患者的免疫系统中之后长期生长和分裂。
在某些实施方案中，本文公开一种通过细胞因子/细胞因子受体 信号传导选择性上调一个或多个不同淋巴细胞群(例如，CD4+辅助细胞、 CD8+效应幼稚和记忆细胞、NK细胞或NKT细胞)的方法。在一些情况下， 细胞因子包括白介素、干扰素或肿瘤坏死因子。在一些情形中，细胞因子是 细胞因子缀合物，例如，白介素缀合物、干扰素缀合物或肿瘤坏死因子缀合 物。在另外的情形中，本文描述的包含药物组合物和试剂盒，其包含本文所 述的一种或多种细胞因子缀合物。
在一些实施方案中，本文还描述一种通过IL-2/IL-2R信号传导 选择性上调CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、NK细胞和/或NKT 细胞群的方法。在一些情况下，IL-2是如下IL-2缀合物，其与“中亲和 力”IL-2Rβγ复合物相互作用，任选地效力与IL-2Rαβγ复合物相似，并且具 有相对于野生型IL-2变弱的IL-2Rα相互作用。在一些实施方案中，本文进一 步描述使用本文所述的IL-2缀合物治疗癌症的方法。在另外的实施方案中， 本文描述药物组合物和试剂盒，其包含本文所述的一种或多种IL-2缀合物。 在一些实施方案中，IL-2缀合物包含缀合部分(例如，PEG)，其在不影响药 代动力学(包括所需的细胞因子-受体相互作用和免疫细胞扩增)的情况下 促进在受试者中的“清除速率”或血浆半衰期的增加或降低。
在一些实施方案中，本文公开可以用于开发过继细胞疗法的试 剂，所述过继细胞疗法包含工程化以表达修饰的细胞因子的细胞，从而导致 选择性细胞因子-受体相互作用和免疫细胞扩增。在一些实施方案中，所述 试剂包含编码上述IL-2缀合物的核酸构建体。还公开包含上述IL-2缀合物的 过继细胞疗法，其可以用于治疗本文所述的增殖性或感染性疾病。
在一些实施方案中，本文公开导致选择性细胞因子-受体相互 作用和免疫细胞扩增的组合物。在一些实施方案中，所述试剂包含编码上述 IL-2缀合物的核酸构建体。还公开包含上述IL-2缀合物的药物组合物，其可 以用于治疗本文所述的增殖性或感染性疾病。
细胞因子缀合物
在一些实施方案中，本文描述细胞因子缀合物。在一些情况下， 细胞因子包含白介素、肿瘤坏死因子、干扰素、趋化因子、淋巴因子或生长 因子。在一些情况下，细胞因子是白介素。在一些情形中，细胞因子是干扰 素。在另外的情形中，细胞因子是肿瘤坏死因子。在其他情形中，细胞因子 是生长因子。
在一些实施方案中，本文描述白介素缀合物。示例性白介素包 括但不限于白介素2(IL-2)。
IL-2缀合物
本文描述表20中所示的多肽。在一些实施方案中，本文所述的 IL-2缀合物例示于表20中。
表20
Figure BDA0003528433030000891
Figure BDA0003528433030000901
Figure BDA0003528433030000911
Figure BDA0003528433030000921
Figure BDA0003528433030000931
Figure BDA0003528433030000941
Figure BDA0003528433030000951
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Figure BDA0003528433030000971
Figure BDA0003528433030000981
Figure BDA0003528433030000991
Figure BDA0003528433030001001
X＝包含非天然氨基酸的位点。
[AzK]＝N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸(其结构作为化合物90在 图3C中公开)。所述化合物具有化学文摘社登记号1167421-25-1。
[AzK_PEG]＝经由DBCO介导的点击化学稳定缀合至PEG的N6-((2-叠 氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸，以形成包含式(II)或式(III)的结构的化合 物。例如，如果指定，PEG5kD指示用甲氧基封端的线性聚乙二醇链，其平 均分子量为5千道尔顿。从点击反应生成的位置异构体的比率为约1:1或大于 1:1。术语“DBCO”意指包含二苯并环辛炔基团的化学部分，如包括实施 例2方案1中显示的mPEG-DBCO化合物。甲氧基PEG基团的示例性结构显示 于实施例2的方案1的mPEG-DBCO结构中。
[AzK_L1_PEG]＝经由DBCO介导的点击化学稳定缀合至PEG的 N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸，以形成包含式(IV)或式(V)的结 构的化合物。例如，如果指定，PEG5kD指示用甲氧基封端的线性聚乙二醇 链，其平均分子量为5千道尔顿。从点击反应生成的位置异构体的比率为约1: 1或大于1:1。术语“DBCO”意指包含二苯并环辛炔基团的化学部分，如包 括实施例2方案1中显示的mPEG-DBCO化合物。
在一些实施方案中，本文描述在氨基酸位置被修饰的IL-2缀合 物。在一些情况下，所述修饰是针对天然氨基酸。在一些情况下，所述修饰 是针对非天然氨基酸。在一些情况下，本文描述包含至少一种非天然氨基酸 的分离和修饰的IL-2多肽。在一些情况下，IL-2多肽是分离并纯化的哺乳动 物IL-2，例如，啮齿动物IL-2蛋白或人IL-2蛋白。在一些情形中，IL-2多肽是 人IL-2蛋白。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:1的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽 包含SEQ ID NO:1的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:1的序列 组成。在另外的情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:2的约80％、85％、90％、 95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在另外的情形中，IL-2多肽包含 SEQ ID NO:2的序列。在另外的情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:2的序列组 成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:3的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO: 3的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:3的序列组成。在另外的情 形中，IL-2多肽包含与SEQID NO:4的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、 98％或99％序列同一性。在另外的情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:4的序 列。在另外的情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:4的序列组成。在一些情形中， IL-2多肽包含与SEQ ID NO:5的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％ 或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:5的序列。在 一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:5的序列组成。在另外的情形中，IL-2 多肽包含与SEQ IDNO:6的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或 99％序列同一性。在另外的情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:6的序列。在 另外的情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:6的序列组成。在一些情形中，IL-2 多肽包含与SEQ ID NO:7的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或 99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:7的序列。在一 些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:7的序列组成。在另外的情形中，IL-2多 肽包含与SEQ ID NO:8的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％ 序列同一性。在另外的情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:8的序列。在另外 的情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:8的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽 包含与SEQ ID NO:9的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％ 序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:9的序列。在一些情 形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:9的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含 与SEQ ID NO:10的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列 同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQID NO:10的序列。在一些情形中， IL-2多肽由SEQ ID NO:10的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:11的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。 在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:11的序列。在一些情形中，IL-2多 肽由SEQID NO:11的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO: 12的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一 些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:12的序列。在一些情形中，IL-2多肽由 SEQ ID NO:12的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:13 的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些 情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:13的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:13的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:14的约 80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形 中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:14的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:14的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQID NO:15的约80％、 85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2 多肽包含SEQ ID NO:15的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:15 的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:16的约80％、85％、 90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽 包含SEQ ID NO:16的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:16的序 列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:17的约80％、85％、90％、 95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:17的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:17的序列组成。 在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:18的约80％、85％、90％、95％、 96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO: 18的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:18的序列组成。在一些情 形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:19的约80％、85％、90％、95％、96％、 97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:19 的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:19的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:20的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、 98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:20的序列。 在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:20的序列组成。在一些情形中，IL-2 多肽包含与SEQ ID NO:21的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％ 或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:21的序列。在 一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:21的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:22的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％ 序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:22的序列。在一些情 形中，IL-2多肽由SEQ IDNO:22的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含 与SEQ ID NO:23的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列 同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:23的序列。在一些情形中， IL-2多肽由SEQ ID NO:23的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:24的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。 在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:24的序列。在一些情形中，IL-2多 肽由SEQ ID NO:24的序列组成。在另外的情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:25的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。 在另外的情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:25的序列。在另外的情形中，IL-2 多肽由SEQ ID NO:25的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:26的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。 在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:26的序列。在一些情形中，IL-2多 肽由SEQ ID NO:26的序列组成。在另外的情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:27的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。 在另外的情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:27的序列。在另外的情形中，IL-2 多肽由SEQ ID NO:27的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:28的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。 在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:28的序列。在一些情形中，IL-2多 肽由SEQ ID NO:28的序列组成。在另外的情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:29的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。 在另外的情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:29的序列。在另外的情形中，IL-2 多肽由SEQ ID NO:29的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:30的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。 在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:30的序列。在一些情形中，IL-2多 肽由SEQ ID NO:30的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO: 31的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一 些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:31的序列。在一些情形中，IL-2多肽由 SEQ ID NO:31的序列组成。在另外的情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:32 的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在另外 的情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:32的序列。在另外的情形中，IL-2多肽 由SEQ ID NO:32的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:33 的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些 情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:33的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:33的序列组成。在另外的情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:34的 约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在另外的情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:34的序列。在另外的情形中，IL-2多肽由 SEQ ID NO:34的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:35 的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些 情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:35的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:35的序列组成。在另外的情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:36的 约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在另外的情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:36的序列。在另外的情形中，IL-2多肽由 SEQ ID NO:36的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:37 的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些 情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:37的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:37的序列组成。在另外的情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:38的 约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在另外的情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:38的序列。在另外的情形中，IL-2多肽由 SEQ ID NO:38的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:39 的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些 情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:39的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:39的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQID NO:40的约 80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:40的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:40的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:41的约80％、 85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2 多肽包含SEQ ID NO:41的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:41 的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:42的约80％、85％、 90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:42的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:42的序 列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:43的约80％、85％、90％、 95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:43的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:43的序列组成。 在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:44的约80％、85％、90％、95％、 96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO: 44的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:44的序列组成。在一些情 形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:45的约80％、85％、90％、95％、96％、 97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:45 的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:45的序列组成。在一些情形 中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:46的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、 98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:46的序列。 在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:46的序列组成。在一些情形中，IL-2 多肽包含与SEQ ID NO:47的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％ 或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:47的序列。在 一些情形中，IL-2多肽由SEQ IDNO:47的序列组成。在一些情形中，IL-2多 肽包含与SEQ ID NO:48的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％ 序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:48的序列。在一些情 形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:48的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:49的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列 同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:49的序列。在一些情形中， IL-2多肽由SEQ ID NO:49的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:50的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。 在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:50的序列。在一些情形中，IL-2多 肽由SEQ ID NO:50的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ IDNO: 51的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一 些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:51的序列。在一些情形中，IL-2多肽由 SEQ ID NO:51的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:52 的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些 情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:52的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:52的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:53的约 80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形 中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:53的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:53的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:54的约80％、 85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2 多肽包含SEQ ID NO:54的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:54 的序列组成。在另外的情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:55的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在另外的情形中， IL-2多肽包含SEQID NO:55的序列。在另外的情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:55的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:56的约80％、 85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2 多肽包含SEQ ID NO:56的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQID NO:56 的序列组成。在另外的情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:57的约80％、 85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在另外的情形中， IL-2多肽包含SEQ IDNO:57的序列。在另外的情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:57的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:58的约80％、 85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2 多肽包含SEQ ID NO:58的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ IDNO:58 的序列组成。在另外的情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:59的约80％、 85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在另外的情形中， IL-2多肽包含SEQ IDNO:59的序列。在另外的情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:59的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:60的约80％、 85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2 多肽包含SEQ ID NO:60的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ IDNO:60 的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:61的约80％、85％、 90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽 包含SEQ ID NO:61的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:61的序 列组成。在另外的情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:62的约80％、85％、 90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在另外的情形中，IL-2多 肽包含SEQ ID NO:62的序列。在另外的情形中，IL-2多肽由SEQ IDNO:62 的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:63的约80％、85％、 90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽 包含SEQ ID NO:63的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:63的序 列组成。在另外的情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:64的约80％、85％、 90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在另外的情形中，IL-2多 肽包含SEQ ID NO:64的序列。在另外的情形中，IL-2多肽由SEQ IDNO:64 的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:65的约80％、85％、 90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽 包含SEQ ID NO:65的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:65的序 列组成。在另外的情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:66的约80％、85％、 90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在另外的情形中，IL-2多 肽包含SEQ ID NO:66的序列。在另外的情形中，IL-2多肽由SEQ IDNO:66 的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:67的约80％、85％、 90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽 包含SEQ ID NO:67的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:67的序 列组成。在另外的情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:68的约80％、85％、 90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在另外的情形中，IL-2多 肽包含SEQ ID NO:68的序列。在另外的情形中，IL-2多肽由SEQ IDNO:68 的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:69的约80％、85％、 90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽 包含SEQ ID NO:69的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:69的序 列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:70的约80％、85％、90％、 95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:70的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:70的序列组成。 在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:71的约80％、85％、90％、95％、 96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO: 71的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:71的序列组成。在一些情 形中，IL-2多肽包含与SEQ IDNO:72的约80％、85％、90％、95％、96％、 97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:72 的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:72的序列组成。在一些情形 中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:73的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、 98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:73的序列。 在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:73的序列组成。在一些情形中，IL-2 多肽包含与SEQ ID NO:74的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％ 或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:74的序列。在 一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:74的序列组成。在一些情形中，IL-2多 肽包含与SEQ ID NO:75的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％ 序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:75的序列。在一些情 形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:75的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含 与SEQ ID NO:76的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列 同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:76的序列。在一些情形中， IL-2多肽由SEQ ID NO:76的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:77的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。 在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:77的序列。在一些情形中，IL-2多 肽由SEQ ID NO:77的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO: 78的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一 些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:78的序列。在一些情形中，IL-2多肽由 SEQ ID NO:78的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQID NO:79 的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些 情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:79的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:79的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:80的约 80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形 中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:80的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:80的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:81的约80％、 85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2 多肽包含SEQ ID NO:81的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:81 的序列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:82的约80％、85％、 90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽 包含SEQ ID NO:82的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:82的序 列组成。在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:83的约80％、85％、90％、 95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO:83的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:83的序列组成。 在一些情形中，IL-2多肽包含与SEQ ID NO:84的约80％、85％、90％、95％、 96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情形中，IL-2多肽包含SEQ ID NO: 84的序列。在一些情形中，IL-2多肽由SEQ ID NO:84的序列组成。
在一些情况下，IL-2多肽是截短的变体。在一些情况下，所述 截短是N末端缺失。在其他情况下，所述截短是C末端缺失。在另外的情况 下，所述截短包括N末端和C末端缺失两者。例如，所述截短可以是从N末端 或C末端或两个末端缺失至少或约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、 13、14、15、20或更多个残基。在一些情形中，IL-2多肽包含至少或约1、2、 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20或更多个残基的N末端 缺失。在一些情形中，IL-2多肽包含至少或约1、2、3、4、5、6、7、8、9 或10个残基的N末端缺失。在一些情形中，IL-2多肽包含至少或约2个残基的 N末端缺失。在一些情形中，IL-2多肽包含至少或约3个残基的N末端缺失。 在一些情形中，IL-2多肽包含至少或约4个残基的N末端缺失。在一些情形中， IL-2多肽包含至少或约5个残基的N末端缺失。在一些情形中，IL-2多肽包含 至少或约6个残基的N末端缺失。在一些情形中，IL-2多肽包含至少或约7个 残基的N末端缺失。在一些情形中，IL-2多肽包含至少或约8个残基的N末端 缺失。在一些情形中，IL-2多肽包含至少或约9个残基的N末端缺失。在一些 情形中，IL-2多肽包含至少或约10个残基的N末端缺失。
在一些实施方案中，IL-2多肽是功能活性片段。在一些情形中， 功能活性片段包含IL-2区域10-133、20-133、30-133、10-130、20-130、30-130、 10-125、20-125、30-125、1-130或1-125，其中残基位置是参考SEQ ID NO:1 中的位置。在一些情形中，功能活性片段包含IL-2区域10-133，其中残基位 置是参考SEQ ID NO:1中的位置。在一些情形中，功能活性片段包含IL-2区 域20-133，其中残基位置是参考SEQ ID NO:1中的位置。在一些情形中，功能活性片段包含IL-2区域30-133，其中残基位置是参考SEQ ID NO:1中的位 置。在一些情形中，功能活性片段包含IL-2区域10-125，其中残基位置是参 考SEQ ID NO:1中的位置。在一些情形中，功能活性片段包含IL-2区域 20-125，其中残基位置是参考SEQ ID NO:1中的位置。在一些情形中，功能 活性片段包含IL-2区域1-130，其中残基位置是参考SEQ ID NO:1中的位置。 在一些情形中，功能活性片段包含IL-2区域1-125，其中残基位置是参考SEQID NO:1中的位置。
在一些实施方案中，本文描述IL-2缀合物，其包含分离、纯化 并修饰的IL-2多肽和缀合部分。在一些情况下，相对于野生型IL-2多肽，IL-2 缀合物具有对IL-2受体α(IL-2Rα)亚基降低的亲和力。在一些情形中，缀合 部分结合至与IL-2Rα相互作用的氨基酸残基(例如，在IL-2/IL-2Rα界面处)。 在一些情形中，缀合部分结合至靠近IL-2/IL-2Rα界面(例如，离IL-2/IL-2Rα 界面约
Figure BDA0003528433030001101
约
Figure BDA0003528433030001102
约
Figure BDA0003528433030001103
或约
Figure BDA0003528433030001104
)的氨基酸残基。如本文所用，IL-2/IL-2Rα 界面中涉及的残基包含与来自IL-2Rα亚基的残基形成疏水相互作用、氢键或 离子相互作用的IL-2残基。
在一些情况下，缀合部分与选自以下的氨基酸残基结合：氨基 酸位置Y31、K32、N33、P34、K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、 Y45、P47、K48、Q57、E60、E61、E62、L63、K64、P65、E68、V69、N71、 L72、Q74、S75、K76、N77、M104、C105、E106、Y107、A108、D109、 E110、T111或A112，其中氨基酸残基的编号对应于SEQ ID NO:1。在一些情 况下，氨基酸位置选自Y31、K32、N33、P34、K35、T37、R38、T41、F42、 K43、F44、Y45、P47、K48、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72、Q74、 S75、K76、N77、M104、C105、E106、Y107、A108、D109、E110、T111 和A112。在一些情况下，氨基酸位置选自N33、P34、K35、T37、R38、M39、 T41、F42、K43、F44、Y45、Q57、E60、E61、E62、L63、K64、P65、E68、 V69、N71、L72、M104、C105、E106、Y107、A108、D109、E110、T111 和A112。在一些情况下，氨基酸位置选自K35、T37、R38、T41、F42、K43、 F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72和Y107。在一些情况下， 氨基酸位置选自T37、R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、 P65、V69、L72和Y107。在一些情况下，氨基酸位置选自T37、R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、E68、P65、V69、L72和Y107。在一些情况下， 氨基酸位置选自T37、T41、F42、F44、Y45、P65、V69、L72和Y107。在一 些情况下，氨基酸位置选自R38和K64。在一些情况下，氨基酸位置选自E61、 E62和E68。在一些情形中，氨基酸位置是在K35。在一些情形中，氨基酸位 置是在T37。在一些情形中，氨基酸位置是在R38。在一些情形中，氨基酸位 置是在T41。在一些情形中，氨基酸位置是在F42。在一些情形中，氨基酸位 置是在K43。在一些情形中，氨基酸位置是在F44。在一些情形中，氨基酸位 置是在Y45。在一些情形中，氨基酸位置是在E61。在一些情形中，氨基酸 位置是在E62。在一些情形中，氨基酸位置是在K64。在一些情形中，氨基 酸位置是在E68。在一些情形中，氨基酸位置是在P65。在一些情形中，氨基 酸位置是在V69。在一些情形中，氨基酸位置是在L72。在一些情形中，氨 基酸位置是在Y107。在一些情形中，氨基酸位置是在L72。在一些情形中， 氨基酸位置是在D109。
在一些情况下，IL-2缀合物还包含另外的突变。在一些情形中， 另外的突变位于选自以下的氨基酸位置：K35、T37、R38、T41、F42、K43、 F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72和Y107。在此类情形中， 氨基酸与另外的缀合部分缀合，用于增加血清半衰期、稳定性或其组合。可 替代地，在与另外的缀合部分结合之前，氨基酸首先突变为天然氨基酸，如 赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸 或酪氨酸；或者突变为非天然氨基酸。
在一些实施方案中，相对于不含非天然氨基酸修饰的野生型 IL-2多肽(例如，野生型IL-2多肽)降低的修饰的IL-2多肽对IL-2受体α (IL-2Rα)亚基的亲和力为约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、 80％、90％、95％或99％，或大于99％。在一些情形中，降低的亲和力为约10％。 在一些情形中，降低的亲和力为约20％。在一些情形中，降低的亲和力为约 40％。在一些情形中，降低的亲和力为约50％。在一些情形中，降低的亲和 力为约60％。在一些情形中，降低的亲和力为约80％。在一些情形中，降低 的亲和力为约90％。在一些情形中，降低的亲和力为约99％。在一些情形中， 降低的亲和力大于99％。在一些情形中，降低的亲和力为约80％。在一些情 形中，降低的亲和力为约100％。
在一些实施方案中，相对于不含非天然氨基酸修饰的等效IL-2 多肽(例如，野生型IL-2多肽)降低的修饰的IL-2多肽对IL-2受体α(IL-2Rα) 亚基的亲和力为约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、 30倍、50倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1,000倍或更多倍。在 一些情形中，降低的亲和力为约1倍。在一些情形中，降低的亲和力为约2倍。 在一些情形中，降低的亲和力为约4倍。在一些情形中，降低的亲和力为约5 倍。在一些情形中，降低的亲和力为约6倍。在一些情形中，降低的亲和力 为约8倍。在一些情形中，降低的亲和力为约10倍。在一些情形中，降低的 亲和力为约30倍。在一些情形中，降低的亲和力为约50倍。在一些情形中， 降低的亲和力为约100倍。在一些情形中，降低的亲和力为约300倍。在一些 情形中，降低的亲和力为约500倍。在一些情形中，降低的亲和力为约1000倍。在一些情形中，降低的亲和力是超过1,000倍。
在一些情形中，修饰的IL-2多肽不与IL-2Rα相互作用。在一些 情况下，修饰的IL-2多肽进一步缀合至缀合部分。在一些情形中，IL-2缀合 物不与IL-2Rα相互作用。
在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽展现对IL-2βγ信号传导复 合物的第一受体信号传导效力和对IL-2αβγ信号传导复合物的第二受体信号 传导效力，并且其中第一受体信号传导效力与第二受体信号传导效力之间的 差异小于10倍。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽展现对IL-2βγ信号传导 复合物的第一受体信号传导效力和对IL-2αβγ信号传导复合物的第二受体信 号传导效力，并且其中第一受体信号传导效力与第二受体信号传导效力之间 的差异小于5倍。在一些情况下，所述差异小于9倍、小于8倍、小于7倍、小 于6倍、小于5倍、小于4倍、小于3倍、小于2倍或小于1倍。在一些情况下， 修饰的IL-2多肽是部分激动剂，例如，激活受体(例如，IL-2βγ信号传导复 合物或IL-2αβγ信号传导复合物)但相对于完全激动剂在所述受体处仅具有部 分功效的激动剂。在一些情况下，修饰的IL-2多肽是完全激动剂，例如，以 最大反应激活受体(例如，IL-2βγ信号传导复合物或IL-2αβγ信号传导复合物) 的激动剂。
在一些情况下，依据EC50值来测量受体信号传导效力。在一些 情况下，修饰的IL-2多肽提供激活IL-2βγ信号传导复合物的第一EC50值和激 活IL-2αβγ信号传导复合物的第二EC50值，并且其中第一EC50值与第二EC50 值之间的差异小于10倍。在一些情况下，修饰的IL-2多肽提供激活IL-2βγ信 号传导复合物的第一EC50值和激活IL-2αβγ信号传导复合物的第二EC50值， 并且其中第一EC50值与第二EC50值之间的差异小于5倍。在一些情形中，所 述差异小于9倍、小于8倍、小于7倍、小于6倍、小于5倍、小于4倍、小于3 倍、小于2倍或小于1倍。
在一些情况下，依据ED50值来测量受体信号传导效力。在一 些情况下，修饰的IL-2多肽提供激活IL-2βγ信号传导复合物的第一ED50值和 激活IL-2αβγ信号传导复合物的第二ED50值，并且其中第一ED50值与第二ED50值之间的差异小于10倍。在一些情况下，修饰的IL-2多肽提供激活 IL-2βγ信号传导复合物的第一ED50值和激活IL-2αβγ信号传导复合物的第二 ED50值，并且其中第一ED50值与第二ED50值之间的差异小于5倍。在一些 情形中，所述差异小于9倍、小于8倍、小于7倍、小于6倍、小于5倍、小于4 倍、小于3倍、小于2倍或小于1倍。
在一些实施方案中，缀合部分直接地或经由接头肽间接地与 IL-2多肽的N末端或C末端连接。在一些情形中，缀合部分(例如，聚合物、 蛋白质或肽)在IL-2的N末端或C末端并且直接地或经由接头肽间接地与IL-2 基因融合。在一些情况下，缀合部分与N末端或C末端氨基酸残基连接。在 一些情况下，缀合部分与结合至N末端或C末端氨基酸残基的反应基团连接。
在一些实施方案中，具有对IL-2Rα降低的结合亲和力的IL-2缀 合物能够扩增CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆T细胞、自然杀伤(NK) 细胞或自然杀伤T(NKT)细胞群。在一些情形中，缀合部分削弱或阻断IL-2 与IL-2Rα的结合。
在一些情形中，相对于野生型IL-2多肽，通过修饰的IL-2多肽 经由IL-2Rβγ复合物激活CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、自然 杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞群保留激活所述细胞群的显著效 力。在一些情况下，通过修饰的IL-2多肽进行的激活等效于通过野生型IL-2 多肽进行的激活。在其他情况下，通过修饰的IL-2多肽进行的激活高于通过 野生型IL-2多肽进行的激活。在一些情形中，修饰的IL-2多肽对IL-2Rβγ复合 物的受体信号传导效力高于野生型IL-2多肽对IL-2Rβγ复合物的受体信号传 导效力。在一些情形中，修饰的IL-2多肽的受体信号传导效力比野生型IL-2 多肽的相应效力高至少1倍。在一些情形中，修饰的IL-2多肽的受体信号传导 效力比野生型IL-2多肽的相应效力高约或至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7 倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、 80倍、90倍、100倍、150倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1,000倍或更高。 在此类情形中，用于实现与野生型Il-2多肽类似的激活CD4+辅助细胞、CD8+ 效应幼稚和记忆细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞群的 水平的修饰的IL-2多肽的剂量或浓度低于野生型IL-2多肽所用的剂量或浓 度。
在一些实施方案中，通过修饰的IL-2多肽经由IL-2Rβγ复合物激 活CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、自然杀伤(NK)细胞或自 然杀伤T(NKT)细胞群保留通过野生型IL-2多肽激活所述细胞群的显著效 力。在一些情形中，修饰的IL-2多肽对IL-2Rβγ复合物的受体信号传导效力低 于野生型IL-2多肽对IL-2Rβγ复合物的受体信号传导效力。在一些情形中，修 饰的IL-2多肽的受体信号传导效力比野生型IL-2多肽的相应效力低约或至少 1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍或50倍。
在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽展现对IL-2Rβγ的第一受体 信号传导效力和对IL-2Rαβγ的第二受体信号传导效力。在一些情况下，对 IL-2Rβγ的第一受体信号传导效力是相对于野生型IL-2多肽改进的效力。在一 些情况下，对IL-2Rαβγ的第二受体信号传导效力是相对于野生型IL-2多肽受 损的效力。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽展现对IL-2Rβγ的第一受体信 号传导效力和对IL-2Rαβγ的第二受体信号传导效力，并且其中第一受体信号 传导效力比第二受体信号传导效力高至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、 7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、500倍、1000倍或更高。 在一些情况下，第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高至少1倍 或更高。在一些情况下，第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高 至少2倍或更高。在一些情况下，第一受体信号传导效力比第二受体信号传 导效力高至少5倍或更高。在一些情况下，第一受体信号传导效力比第二受 体信号传导效力高至少10倍或更高。在一些情况下，第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高至少20倍或更高。在一些情况下，第一受体信号 传导效力比第二受体信号传导效力高至少50倍或更高。在一些情况下，第一 受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高至少100倍或更高。在一些情 况下，第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高至少500倍或更高。 在一些情况下，第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高至少1000 倍或更高。在一些情况下，修饰的IL-2多肽的第一受体信号传导效力高于野 生型IL-2多肽对IL-2Rβγ的受体信号传导效力，并且修饰的IL-2多肽的第二受体信号传导效力低于野生型IL-2多肽对IL-2Rαβγ的受体信号传导效力。在一 些情形中，两种受体信号传导效力都低于其在野生型IL-2多肽中的相应效力。 在其他情形中，两种受体信号传导效力都高于其在野生型IL-2多肽中的相应 效力。
在一些实施方案中，IL-2缀合物减少被施用IL-2缀合物的受试 者的毒性不良事件。示例性毒性不良事件包括嗜酸性粒细胞增多症、毛细血 管渗漏和血管渗漏综合征(VLS)。在一些情况下，相对于被施用野生型IL-2 或阿地白介素的第二受试者，IL-2缀合物将受试者的毒性不良事件的发生率 减少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％ 或约100％。在一些情况下，相对于被施用野生型IL-2或阿地白介素的第二受 试者，IL-2缀合物将受试者的毒性不良事件的严重程度降低约10％、20％、 30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或约100％。
在一些情况下，毒性不良事件是嗜酸性粒细胞增多症。在一些 情形中，相对于被施用野生型IL-2或阿地白介素的第二受试者，IL-2缀合物 将受试者的嗜酸性粒细胞增多症的发生率减少约10％、20％、30％、40％、 50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或约100％。在一些情形中，相对 于被施用野生型IL-2或阿地白介素的第二受试者，IL-2缀合物将受试者的嗜 酸性粒细胞增多症的严重程度降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或约100％。
在一些情况下，毒性不良事件是毛细血管渗漏。在一些情形中， 相对于被施用野生型IL-2或阿地白介素的第二受试者，IL-2缀合物将受试者 的毛细血管渗漏的发生率减少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、 80％、90％、95％、99％或约100％。在一些情形中，相对于被施用野生型IL-2 或阿地白介素的第二受试者，IL-2缀合物将受试者的毛细血管渗漏的严重程 度降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或约100％。
在一些情况下，毒性不良事件是VLS。在一些情形中，相对于 被施用野生型IL-2或阿地白介素的第二受试者，IL-2缀合物将受试者的VLS 的发生率减少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、 95％、99％或约100％。在一些情形中，相对于被施用野生型IL-2或阿地白介 素的第二受试者，IL-2缀合物将受试者的VLS的严重程度降低约10％、20％、 30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或约100％。
在一些实施方案中，IL-2缀合物包含大于1小时、2小时、3小时、 4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、18小时、 24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时间的血浆半衰期。在一些 实施方案中，IL-2缀合物包含大于1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6 小时、7小时、8小时、9小时、10小时或更长时间的血浆半衰期。在一些实 施方案中，IL-2缀合物包含大于1小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，IL-2 缀合物包含大于2小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含大 于3小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含大于4小时的血 浆半衰期。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含大于5小时的血浆半衰期。在 一些实施方案中，IL-2缀合物包含大于6小时的血浆半衰期。在一些实施方案 中，IL-2缀合物包含大于7小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，IL-2缀合 物包含大于8小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含大于9 小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含大于10小时的血浆 半衰期。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含大于12小时的血浆半衰期。在 一些实施方案中，IL-2缀合物包含大于18小时的血浆半衰期。在一些实施方 案中，IL-2缀合物包含大于24小时的血浆半衰期。
在一些实施方案中，IL-2缀合物包含至少1小时、2小时、3小时、 4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、 18小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时间的血浆半衰期。 在一些实施方案中，IL-2缀合物包含至少1小时、2小时、3小时、4小时、5 小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、 24小时或更长时间的血浆半衰期。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含至少1 小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含至少2小时的血浆半 衰期。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含至少3小时的血浆半衰期。在一些 实施方案中，IL-2缀合物包含至少4小时的血浆半衰期。在一些实施方案中， IL-2缀合物包含至少5小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，IL-2缀合物包 含至少6小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含至少7小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含至少8小时的血浆半衰期。 在一些实施方案中，IL-2缀合物包含至少9小时的血浆半衰期。在一些实施方 案中，IL-2缀合物包含至少10小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，IL-2 缀合物包含至少12小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含 至少18小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含至少24小时 的血浆半衰期。
在一些实施方案中，IL-2缀合物包含约1小时至约7天、约12小 时至约7天、约18小时至约7天、约24小时至约7天、约1小时至约5天、约12 小时至约5天、约24小时至约5天、约2天至约5天或约2天至约3天的血浆半衰 期。
在一些实施方案中，IL-2缀合物包含约1小时至约18小时、约1 小时至约12小时、约2小时至约10小时、约2小时至约8小时、约4小时至约18 小时、约4小时至约12小时、约4小时至约10小时、约4小时至约8小时、约6 小时至约18小时、约6小时至约12小时、约6小时至约10小时、约6小时至约8 小时、约8小时至约18小时、约8小时至约12小时或约8小时至约10小时的血 浆半衰期。
在一些实施方案中，IL-2缀合物包含能够增殖和/或扩增CD4+ 辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆T细胞、NK细胞、NKT细胞或其组合，但 不会造成有害影响(如细胞凋亡)的血浆半衰期。
在一些实施方案中，相对于野生型IL-2，IL-2缀合物包含延长 的血浆半衰期，例如，延长至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小 时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时、2 天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时间。在一些实施方案中，相对于野 生型IL-2，IL-2缀合物包含延长的血浆半衰期，例如，延长至少1小时、2小 时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小 时、15小时、18小时、24小时或更长时间。
在一些实施方案中，相对于野生型IL-2，IL-2缀合物包含延长 的血浆半衰期，例如，约1小时至约18小时、约1小时至约12小时、约2小时 至约10小时、约2小时至约8小时、约4小时至约18小时、约4小时至约12小时、 约4小时至约10小时、约4小时至约8小时、约6小时至约18小时、约6小时至 约12小时、约6小时至约10小时、约6小时至约8小时、约8小时至约18小时、 约8小时至约12小时或约8小时至约10小时。
在一些实施方案中，相对于阿地白介素，IL-2缀合物包含延长 的血浆半衰期，例如，延长至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小 时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时、2 天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时间。在一些实施方案中，相对于阿 地白介素，IL-2缀合物包含延长的血浆半衰期，例如，延长至少1小时、2小 时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小 时、15小时、18小时、24小时或更长时间。
在一些实施方案中，相对于阿地白介素，IL-2缀合物包含延长 的血浆半衰期，例如，约1小时至约18小时、约1小时至约12小时、约2小时 至约10小时、约2小时至约8小时、约4小时至约18小时、约4小时至约12小时、 约4小时至约10小时、约4小时至约8小时、约6小时至约18小时、约6小时至 约12小时、约6小时至约10小时、约6小时至约8小时、约8小时至约18小时、 约8小时至约12小时或约8小时至约10小时。
在一些实施方案中，IL-2缀合物包含具有降低的毒性的延长的 血浆半衰期。在一些情况下，IL-2缀合物包含具有降低的毒性的至少1小时、 2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12 小时、15小时、18小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时 间的延长的血浆半衰期。在一些情况下，IL-2缀合物包含具有降低的毒性的至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、 10小时、12小时、15小时、18小时、24小时或更长时间的延长的血浆半衰期。 在一些情况下，IL-2缀合物包含具有降低的毒性的约1小时至约18小时、约1 小时至约12小时、约2小时至约10小时、约2小时至约8小时、约4小时至约18 小时、约4小时至约12小时、约4小时至约10小时、约4小时至约8小时、约6 小时至约18小时、约6小时至约12小时、约6小时至约10小时、约6小时至约8 小时、约8小时至约18小时、约8小时至约12小时或约8小时至约10小时的延 长的血浆半衰期。在一些情形中，相对于野生型IL2，降低的毒性降低至少1 倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、 100倍或更多倍。在一些情形中，相对于野生型IL-2，降低的毒性降低至少 10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、 400％、500％或更多。
在一些实施方案中，IL-2缀合物包含具有降低的毒性的延长的 血浆半衰期。在一些情况下，IL-2缀合物包含具有降低的毒性的至少1小时、 2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12 小时、15小时、18小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时 间的延长的血浆半衰期。在一些情况下，IL-2缀合物包含具有降低的毒性的至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、 10小时、12小时、15小时、18小时、24小时或更长时间的延长的血浆半衰期。 在一些情况下，IL-2缀合物包含具有降低的毒性的约1小时至约18小时、约1 小时至约12小时、约2小时至约10小时、约2小时至约8小时、约4小时至约18 小时、约4小时至约12小时、约4小时至约10小时、约4小时至约8小时、约6 小时至约18小时、约6小时至约12小时、约6小时至约10小时、约6小时至约8 小时、约8小时至约18小时、约8小时至约12小时或约8小时至约10小时的延 长的血浆半衰期。在一些情形中，相对于阿地白介素，降低的毒性降低至少 1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50 倍、100倍或更多倍。在一些情形中，相对于阿地白介素，降低的毒性降低 至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％或更多。
在一些实施方案中，IL-2缀合物包含缀合部分，其中所述缀合 部分的大小(例如，体积或长度)增强血浆稳定性但不降低效力。在一些情 况下，缀合部分的大小将血浆半衰期延长至少1小时、2小时、3小时、4小时、 5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、 24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时间。在一些情况下，缀合部分的大小将血浆半衰期延长至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6 小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时 或更长时间。在一些情况下，缀合部分的大小将血浆半衰期延长约1小时至 约18小时、约1小时至约12小时、约2小时至约10小时、约2小时至约8小时、 约4小时至约18小时、约4小时至约12小时、约4小时至约10小时、约4小时至 约8小时、约6小时至约18小时、约6小时至约12小时、约6小时至约10小时、 约6小时至约8小时、约8小时至约18小时、约8小时至约12小时或约8小时至 约10小时。在一些情况下，相对于阿地白介素，缀合部分的大小将效力降低 少于5％、4％、3％、2％、1％或更少。
在一些实施方案中，IL-2缀合物包含缀合部分，其中所述缀合 部分的大小(例如，体积或长度)增强血浆稳定性和效力。在一些情况下， 缀合部分的大小将血浆半衰期延长至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小 时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24 小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时间。在一些情况下，缀合部 分的大小将血浆半衰期延长至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小 时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时或 更长时间。在一些情况下，缀合部分的大小将血浆半衰期延长约1小时至约18小时、约1小时至约12小时、约2小时至约10小时、约2小时至约8小时、约 4小时至约18小时、约4小时至约12小时、约4小时至约10小时、约4小时至约8小时、约6小时至约18小时、约6小时至约12小时、约6小时至约10小时、约 6小时至约8小时、约8小时至约18小时、约8小时至约12小时或约8小时至约 10小时。在一些情况下，相对于阿地白介素，缀合部分的大小将效力进一步 增强超过5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、 200％或更多。
在一些实施方案中，本文描述一种IL-2缀合物，其包含共价附 接至缀合部分的非天然氨基酸，其中所述非天然氨基酸位于区域35-107中， 并且其中所述区域35-107对应于SEQ ID NO:1的残基K35-Y107。
在一些实施方案中，本文描述一种白介素2βγ受体(IL-2Rβγ) 结合蛋白，其中所述结合蛋白对白介素2α受体(IL-2Rα)的结合亲和力小于 野生型人IL-2(hIL-2)的所述结合亲和力，其中所述结合蛋白对白介素2α 受体(IL-2Rα)的结合亲和力小于野生型人IL-2(hIL-2)的所述结合亲和力。 在一些实施方案中，本文描述一种白介素2βγ受体(IL-2Rβγ)结合蛋白，其 中所述结合蛋白对白介素2α受体(IL-2Rα)的结合亲和力小于野生型人IL-2 (hIL-2)的所述结合亲和力，并且其中所述结合蛋白包含至少一种非天然氨 基酸。在一些情况下，所述结合蛋白是修饰的IL-2多肽或其功能活性片段， 其中所述修饰的IL-2多肽包含至少一种非天然氨基酸。在一些情况下，至少 一种非天然氨基酸位于区域35-107中，并且其中所述区域35-107对应于SEQ ID NO:1的残基K35-Y107。
在一些实施方案中，本文描述一种IL-2/IL-2Rβγ复合物，其包 含含有突变的修饰的IL-2多肽和IL-2Rβγ，其中所述修饰的IL-2多肽具有对 IL-2Rα降低的结合亲和力，并且其中所述降低的结合亲和力是与野生型IL-2 多肽与IL-2Rα之间的结合亲和力相比。在一些情况下，修饰的IL-2多肽还包 含共价附接至突变位点的缀合部分。在一些情况下，突变位点包含突变为天 然氨基酸的氨基酸。在一些情形中，突变位点包含突变为半胱氨酸残基的氨 基酸。在其他情形中，突变位点包含突变为赖氨酸残基的氨基酸。
在一些实施方案中，本文描述一种IL-2/IL-2Rβγ复合物，其包 含含有非天然氨基酸的修饰的IL-2多肽和IL-2Rβγ，其中所述修饰的IL-2多肽 具有对IL-2Rα降低的结合亲和力，并且其中所述降低的结合亲和力是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合亲和力相比。在一些情况下，修饰的IL-2多 肽还包含共价附接至非天然氨基酸的缀合部分。
在一些实施方案中，本文描述一种IL-2/IL-2Rβγ复合物，其包 含含有非天然氨基酸的修饰的IL-2多肽和IL-2Rβγ，其中所述修饰的IL-2多肽 具有对IL-2Rα降低的受体信号传导效力，并且其中所述降低的受体信号传导 效力是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的受体信号传导效力相比。在一些情 况下，修饰的IL-2多肽还包含共价附接至非天然氨基酸的缀合部分。
在一些实施方案中，本文描述一种CD4+辅助细胞、CD8+效应 幼稚和记忆T细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞的激活 剂，其选择性扩增细胞群中的CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆T细胞、 NK细胞、NKT细胞或其组合，其中所述激活剂包含含有至少一个突变的修 饰的白介素2(IL-2)多肽。在一些情况下，突变是突变为天然氨基酸。在其他情况下，突变是突变为非天然氨基酸。在一些实施方案中，本文描述一种 CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆T细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然 杀伤T(NKT)细胞的激活剂，其选择性扩增细胞群中的CD4+辅助细胞、CD8+ 效应幼稚和记忆T细胞、NK细胞、NKT细胞或其组合，其中所述激活剂包含 含有至少一种非天然氨基酸的修饰的白介素2(IL-2)多肽。在一些情况下， 当使所述激活剂与所述CD3+细胞群接触时，与接触野生型IL-2多肽的CD3+ 细胞群中CD4+Treg细胞的扩增相比，所述激活剂将CD4+T调节性(Treg) 细胞扩增少于20％、15％、10％、5％、1％或少于0.1％。在一些情况下，所述 激活剂不扩增所述细胞群中的Treg细胞。在一些情况下，所述细胞群是体内 细胞群。在一些情况下，所述细胞群是体外细胞群。在一些情况下，所述细 胞群是离体细胞群。
在一些情况下，本文还描述一种扩增CD4+辅助细胞、CD8+效 应幼稚和记忆T细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞群的 方法，其包括使所述细胞群与治疗有效量的CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚 和记忆T细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞激活剂接触， 其中所述激活剂包含含有至少一个突变的修饰的白介素2(IL-2)多肽，从而扩增所述CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆T细胞、自然杀伤(NK)细 胞或自然杀伤T(NKT)细胞群。在一些情况下，突变是突变为天然氨基酸。 在其他情况下，突变是突变为非天然氨基酸。在一些情况下，本文还描述一 种扩增CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆T细胞、自然杀伤(NK)细胞 或自然杀伤T(NKT)细胞群的方法，其包括使所述细胞群与治疗有效量的 CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆T细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然 杀伤T(NKT)细胞激活剂接触，其中所述激活剂包含含有至少一种非天然 氨基酸的修饰的白介素2(IL-2)多肽，从而扩增所述CD4+辅助细胞、CD8+ 效应幼稚和记忆T细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞群。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的残基位置35的 K35处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置37的残基 T37处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些情况下，缀合部分与选自以下的氨基酸残基结合：氨基 酸位置P2、T3、S4、S5、S6、T7、K8、K9、Q11、L12、E15、H16、L18、 L19、D20、Q22、M23、N26、G27、N29、N30、Y31、K32、K35、T37、 M46、K47、K48、A50、T51、E52、K53、H55、Q57、E60、E67、N71、 Q74、S75、K76、N77、F78、H79、R81、P82、R83、D84、S87、N88、N89、 V91、I92、L94、E95、K97、G98、S99、E100、T101、T102、F103、M104、 C105、E106、Y107、A108、D109、E110、T111、A112、T113、E116、N119、 R120、T123、A125、Q126、S127、S130、T131、L132和T133，其中氨基酸 残基的编号对应于SEQ IDNO:1。在一些情况下，氨基酸位置选自K8、K9、 Q11、L12、E15、H16、L18、L19、D20、Q22、M23、N26、R81、D84、 S87、N88、V91、I92、L94、E95、E116、N119、R120、T123、A125、Q126、 S127、S130、T131、L132和T133。在一些情况下，氨基酸位置选自P2、T3、 S4、S5、S6、T7、G27、N29、N30、Y31、K32、K35、T37、M46、K47、 K48、A50、T51、E52、K53、H55、Q57、E60、E67、N71、Q74、S75、K76、 N77、F78、H79、P82、R83、N89、K97、G98、S99、E100、T101、T102、 F103、M104、C105、E106、Y107、A108、D109、E110、T111、A112和T113。 在一些情况下，氨基酸位置选自K8、K9、L12、E15、H16、L19、D20、Q22、 M23、N26、D84、N88、E95和Q126。在一些情况下，氨基酸位置选自K8、K9和H16。在一些情况下，氨基酸位置选自Q22、N26、N88和Q126。在一 些情况下，氨基酸位置选自E15、D20、D84和E95。在一些情况下，氨基酸 位置选自L12、L19和M23。在一些情况下，氨基酸位置选自Q22和N26。在 一些情形中，氨基酸位置是在K8。在一些情形中，氨基酸位置是在K9。在 一些情形中，氨基酸位置是在Q11。在一些情形中，氨基酸位置是在L12。在 一些情形中，氨基酸位置是在E15。在一些情形中，氨基酸位置是在H16。 在一些情形中，氨基酸位置是在L18。在一些情形中，氨基酸位置是在L19。 在一些情形中，氨基酸位置是在D20。在一些情形中，氨基酸位置是在Q22。 在一些情形中，氨基酸位置是在M23。在一些情形中，氨基酸位置是在N26。 在一些情形中，氨基酸位置是在R81。在一些情形中，氨基酸位置是在D84。在一些情形中，氨基酸位置是在S87。在一些情形中，氨基酸位置是在N88。 在一些情形中，氨基酸位置是在V91。在一些情形中，氨基酸位置是在I92。 在一些情形中，氨基酸位置是在L94。在一些情形中，氨基酸位置是在E95。 在一些情形中，氨基酸位置是在E116。在一些情形中，氨基酸位置是在N119。 在一些情形中，氨基酸位置是在R120。在一些情形中，氨基酸位置是在T123。 在一些情形中，氨基酸位置是在A125。在一些情形中，氨基酸位置是在Q126。 在一些情形中，氨基酸位置是在S127。在一些情形中，氨基酸位置是在S130。 在一些情形中，氨基酸位置是在T131。在一些情形中，氨基酸位置是在L132。 在一些情形中，氨基酸位置是在T133。
在一些情况下，IL-2缀合物还包含另外的突变。在此类情形中， 氨基酸与另外的缀合部分缀合，用于增加血清半衰期、稳定性或其组合。可 替代地，在与另外的缀合部分结合之前，氨基酸首先突变为天然氨基酸，如 赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸 或酪氨酸；或者突变为非天然氨基酸。
在一些实施方案中，相对于野生型IL-2多肽，IL-2缀合物具有 IL-2Rαβγ复合物的对IL-2受体β(IL-2Rβ)亚基、IL-2受体γ(IL-2Rγ)亚基或 其组合降低的结合亲和力。在一些情况下，相对于野生型IL-2多肽，IL-2缀 合物对IL-2受体β(IL-2Rβ)亚基、IL-2受体γ(IL-2Rγ)亚基或其组合降低 的亲和力为约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或大于99％。在一些情形中，降低的亲和力为约10％。在一些情形中，降低的亲和力为约20％。在一些情形中，降低的亲和力为约40％。在一些情 形中，降低的亲和力为约50％。在一些情形中，降低的亲和力为约60％。在 一些情形中，降低的亲和力为约80％。在一些情形中，降低的亲和力为约90％。 在一些情形中，降低的亲和力为约99％。在一些情形中，降低的亲和力大于 99％。在一些情形中，降低的亲和力为约80％。在一些情形中，降低的亲和 力为约100％。
在一些实施方案中，相对于野生型IL-2多肽，IL-2缀合物对IL-2 受体β(IL-2Rβ)亚基、IL-2受体γ(IL-2Rγ)亚基或其组合降低的结合亲和 力为约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、30倍、50 倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1,000倍或更多倍。在一些情形 中，降低的亲和力为约1倍。在一些情形中，降低的亲和力为约2倍。在一些情形中，降低的亲和力为约4倍。在一些情形中，降低的亲和力为约5倍。在 一些情形中，降低的亲和力为约6倍。在一些情形中，降低的亲和力为约8倍。 在一些情形中，降低的亲和力为约10倍。在一些情形中，降低的亲和力为约 30倍。在一些情形中，降低的亲和力为约50倍。在一些情形中，降低的亲和 力为约100倍。在一些情形中，降低的亲和力为约300倍。在一些情形中，降 低的亲和力为约500倍。在一些情形中，降低的亲和力为约1000倍。在一些情形中，降低的亲和力是超过1,000倍。
在一些实施方案中，IL-2缀合物具有减少的至IL-2/IL-2Rβ复合 物的IL-2Rγ亚基募集。在一些情形中，减少的募集是与通过不含非天然氨基 酸的等效IL-2多肽(例如，野生型IL-2多肽)进行的IL-2Rγ亚基募集相比。 在一些情形中，相对于不含非天然氨基酸修饰的等效IL-2多肽，IL-2Rγ亚基 募集的减少为约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、 95％、99％或大于99％减少。在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少为约10％。 在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少为约20％。在一些情形中，IL-2Rγ亚 基募集的减少为约40％。在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少为约50％。 在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少为约60％。在一些情形中，IL-2Rγ亚 基募集的减少为约70％。在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少为约80％。 在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少为约90％。在一些情形中，IL-2Rγ亚 基募集的减少为约99％。在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少大于99％。 在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少为约100％。在一些情况下，IL-2缀合 物进一步具有IL-2Rα亚基募集的增加。
在一些实施方案中，相对于不含非天然氨基酸修饰的等效IL-2 多肽(例如，野生型IL-2多肽)，IL-2Rγ亚基募集的减少为约1倍、2倍、3倍、 4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、30倍、50倍、100倍、200倍、300 倍、400倍、500倍、1,000倍或更多倍。在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减 少为约1倍。在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少为约2倍。在一些情形中， IL-2Rγ亚基募集的减少为约4倍。在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少为约 5倍。在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少为约6倍。在一些情形中，IL-2Rγ 亚基募集的减少为约8倍。在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少为约10倍。 在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少为约30倍。在一些情形中，IL-2Rγ亚 基募集的减少为约50倍。在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少为约100倍。 在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少为约300倍。在一些情形中，IL-2Rγ 亚基募集的减少为约500倍。在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少为约1000 倍。在一些情形中，IL-2Rγ亚基募集的减少超过1,000倍。在一些情况下，IL-2 缀合物进一步具有IL-2Rα亚基募集的增加。
在一些实施方案中，IL-2缀合物具有增加的至IL-2多肽的 IL-2Rα亚基募集。在一些情形中，减少的募集是与通过不含非天然氨基酸的 等效IL-2多肽(例如，野生型IL-2多肽)进行的IL-2Rα亚基募集相比。在一 些情形中，相对于不含非天然氨基酸修饰的等效IL-2多肽，IL-2Rα亚基募集 的增加为约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、 99％或大于99％增加。在一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加为约10％。在 一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加为约20％。在一些情形中，IL-2Rα亚基 募集的增加为约40％。在一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加为约50％。在 一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加为约60％。在一些情形中，IL-2Rα亚基 募集的增加为约70％。在一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加为约80％。在 一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加为约90％。在一些情形中，IL-2Rα亚基 募集的增加为约99％。在一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加大于99％。在 一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加为约100％。在一些情况下，IL-2缀合物 进一步具有IL-2Rβ亚基和/或IL-2Rγ亚基的募集的减少。
在一些实施方案中，相对于不含非天然氨基酸修饰的等效IL-2 多肽(例如，野生型IL-2多肽)，IL-2Rα亚基募集的增加为约1倍、2倍、3倍、 4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、30倍、50倍、100倍、200倍、300 倍、400倍、500倍、1,000倍或更多倍。在一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增 加为约1倍。在一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加为约2倍。在一些情形中， IL-2Rα亚基募集的增加为约4倍。在一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加为 约5倍。在一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加为约6倍。在一些情形中， IL-2Rα亚基募集的增加为约8倍。在一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加为 约10倍。在一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加为约30倍。在一些情形中， IL-2Rα亚基募集的增加为约50倍。在一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加为 约100倍。在一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加为约300倍。在一些情形中， IL-2Rα亚基募集的增加为约500倍。在一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加 为约1000倍。在一些情形中，IL-2Rα亚基募集的增加超过1,000倍。在一些情 况下，IL-2缀合物进一步具有IL-2Rβ亚基和/或IL-2Rγ亚基的募集的减少。
在一些实施方案中，本文所述的IL-2多肽具有对IL-2Rβγ的受体 信号传导效力的降低。在一些情况下，相对于野生型IL-2多肽，对IL-2Rβγ 的受体信号传导效力的降低为约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、 9倍、10倍、30倍、50倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1000倍或 更多倍。在一些情形中，受体信号传导效力的降低为约2倍。在一些情形中， 受体信号传导效力的降低为约5倍。在一些情形中，受体信号传导效力的降 低为约10倍。在一些情形中，受体信号传导效力的降低为约20倍。在一些情 形中，受体信号传导效力的降低为约30倍。在一些情形中，受体信号传导效 力的降低为约40倍。在一些情形中，受体信号传导效力的降低为约50倍。在 一些情形中，受体信号传导效力的降低为约100倍。在一些情形中，受体信 号传导效力的降低为约200倍。在一些情形中，受体信号传导效力的降低为 约300倍。在一些情形中，受体信号传导效力的降低为约400倍。在一些情形 中，受体信号传导效力的降低为约500倍。在一些情形中，受体信号传导效 力的降低为约1000倍。
在一些情况下，依据EC50值来测量受体信号传导效力。在一些 情形中，受体信号传导效力的降低是EC50的增加。在一些情况下，相对于野 生型IL-2多肽，EC50的增加为约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8 倍、9倍、10倍、30倍、50倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1000 倍或更多倍。
在一些情况下，依据ED50值来测量受体信号传导效力。在一 些情形中，受体信号传导效力的降低是ED50的增加。在一些情况下，相对 于野生型IL-2多肽，ED50的增加为约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、 8倍、9倍、10倍、30倍、50倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1000 倍或更多倍。
在一些实施方案中，与野生型IL-2多肽的治疗窗相比，本文所 述的IL-2多肽具有扩大的治疗窗。在一些情况下，扩大的治疗窗是由于以下 所致：IL-2多肽与白介素2受体βγ(IL-2Rβγ)之间的结合的降低、对IL-2Rβγ 的受体信号传导效力的降低、IL-2Rγ亚基至IL-2/IL-2Rβ复合物的募集的减少 或者IL-2Rα亚基至IL-2多肽的募集的增加。在一些情况下，IL-2多肽不具有 受损的白介素2αβγ受体(IL-2Rαβγ)的激活。
在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽展现对IL-2βγ信号传导复 合物的第一受体信号传导效力和对IL-2αβγ信号传导复合物的第二受体信号 传导效力，并且其中第一受体信号传导效力与第二受体信号传导效力之间的 差异为至少1倍。在一些情况下，所述差异为至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、 7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90 倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1000倍或更多倍。在一些情况 下，第一受体信号传导效力小于第二受体信号传导效力。在一些情况下，第 一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力低至少1倍、2倍、3倍、4倍、 5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、500倍、1000 倍或更低。在一些情形中，修饰的IL-2多肽对IL-2βγ信号传导复合物的受体 信号传导效力低于对IL-2αβγ信号传导复合物的第二受体信号传导效力。在一 些情形中，修饰的IL-2多肽的第一受体信号传导效力比野生型IL-2多肽的受 体信号传导效力低至少1倍。在一些情形中，修饰的IL-2多肽的第一受体信号 传导效力比野生型IL-2多肽的受体信号传导效力低至少2倍、3倍、4倍、5倍、 10倍、20倍、50倍、100倍、200倍或500倍。在一些情形中，第一受体信号 传导效力和第二受体信号传导效力都低于野生型IL-2多肽的相应效力，但是 第一受体信号传导效力低于第二受体信号传导效力。在一些情形中，第一受 体信号传导效力与第二受体信号传导效力之间的差异增加修饰的IL-2多肽的 治疗窗。
在一些情况下，缀合部分削弱或阻断IL-2对IL-2Rβγ的受体信号 传导效力，或者减少IL-2Rγ亚基至IL-2/IL-2Rβ复合物的募集。
在一些情况下，对IL-2Rβγ的受体信号传导效力降低的修饰的 IL-2多肽能够扩增CD4+T调节性(Treg)细胞。
在一些实施方案中，通过修饰的IL-2/IL-2Rαβγ复合物进行的 CD4+Treg细胞增殖等效于或大于野生型IL-2多肽的所述增殖。
在一些实施方案中，IL-2/IL-2Rαβγ复合物诱导CD4+Treg细胞 增殖至足以在动物模型中调节病程的群体。
在一些实施方案中，本文描述一种白介素2αβγ受体(IL-2Rαβγ) 结合蛋白，其中所述结合蛋白对白介素2βγ受体(IL-2Rβγ)的受体信号传导 效力小于野生型人IL-2(hIL-2)的所述受体信号传导效力，并且其中所述结 合蛋白包含至少一种非天然氨基酸。在一些情形中，所述结合蛋白是修饰的 IL-2多肽或其功能活性片段，其中所述修饰的IL-2多肽包含至少一种非天然 氨基酸。
在一些实施方案中，本文描述一种白介素2αβγ受体(IL-2Rαβγ) 结合蛋白，其中通过所述结合蛋白进行的IL-2Rγ亚基至IL-2/IL-2Rβ复合物的 募集小于野生型人IL-2(hIL-2)的所述募集，并且其中所述结合蛋白包含至 少一种非天然氨基酸。在一些情形中，所述结合蛋白是修饰的IL-2多肽或其 功能活性片段，其中所述修饰的IL-2多肽包含至少一种非天然氨基酸。
在一些实施方案中，本文描述一种白介素2αβγ受体(IL-2Rαβγ) 结合蛋白，其中所述结合蛋白对白介素2βγ受体(IL-2Rβγ)的结合亲和力小 于野生型人IL-2(hIL-2)的所述结合亲和力，并且其中所述结合蛋白包含至 少一种非天然氨基酸。在此类情形中，所述结合蛋白是修饰的IL-2多肽或其 功能活性片段，其中所述修饰的IL-2多肽包含至少一种非天然氨基酸。
在一些实施方案中，本文描述一种IL-2/IL-2Rαβγ复合物，其包 含含有非天然氨基酸的修饰的IL-2多肽和IL-2Rαβγ，其中所述修饰的IL-2多 肽具有对IL-2Rβγ降低的受体信号传导效力，并且其中所述降低的受体信号 传导效力是与野生型IL-2多肽与IL-2Rβγ之间的结合亲和力相比。在一些情形 中，修饰的IL-2多肽还包含共价附接至非天然氨基酸的缀合部分。
在一些实施方案中，本文描述一种IL-2/IL-2Rαβγ复合物，其包 含含有非天然氨基酸的修饰的IL-2多肽和IL-2Rαβγ，其中通过所述修饰的IL-2多肽进行的IL-2Rγ亚基至IL-2/IL-2Rβ复合物的募集小于野生型IL-2多肽 的所述募集。在一些情形中，修饰的IL-2多肽还包含共价附接至非天然氨基 酸的缀合部分。
在一些实施方案中，本文描述一种IL-2/IL-2Rαβγ复合物，其包 含含有非天然氨基酸的修饰的IL-2多肽和IL-2Rαβγ，其中所述修饰的IL-2多 肽具有对IL-2Rβγ降低的结合亲和力，并且其中所述降低的结合亲和力是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rβγ之间的结合亲和力相比。在一些实施方案中，本文 描述一种IL-2/IL-2Rαβγ复合物，其包含含有非天然氨基酸的修饰的IL-2多肽 和IL-2Rαβγ，其中通过所述修饰的IL-2多肽进行的IL-2Rγ亚基至IL-2/IL-2Rβ 复合物的募集小于野生型IL-2多肽的所述募集。在一些情况下，修饰的IL-2 多肽还包含共价附接至非天然氨基酸的缀合部分。
在一些实施方案中，本文描述一种选择性扩增细胞群中的 CD4+Treg细胞的CD4+Treg细胞激活剂，其中所述激活剂包含含有至少一种 非天然氨基酸的修饰的IL-2多肽。在一些情况下，当使所述激活剂与所述 CD3+细胞群接触时，相对于与野生型IL-2多肽接触的CD3+细胞群中CD8+ 效应T细胞和/或自然杀伤细胞的扩增，所述激活剂将CD3+细胞群中的CD8+ 效应T细胞和/或自然杀伤细胞扩增少于20％、15％、10％、5％、1％或0.1％。 在一些情况下，所述细胞群是体内细胞群。在一些情况下，所述细胞群是体 外细胞群。在一些情况下，所述细胞群是离体细胞群。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置38的残基 R38处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置41的残基 T41处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置42的残基 F42处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置43的残基 K43处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置44的残基 F44处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置45的残基 Y45处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置60残基的 E60处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置61的残基 E61处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置62的残基 E62处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置64的残基 K64处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置65的残基 P65处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置68的残基 E68处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置69的残基 V69处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置71的残基 N71处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置72的残基 L72处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置104的残基 M104处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置105的C105 处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。在 一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分子 量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一些 实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包 含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实施 方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置107的残基 Y107处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
细胞因子缀合物前体
本文描述包含突变体细胞因子(如IL-2)的细胞因子缀合物前 体，其中一个或多个氨基酸已经从野生型氨基酸突变。此类前体通常与本文 所述的方法一起用于治疗疾病或病症。在一些实施方案中，细胞因子前体未 被缀合。此类突变不同地包括添加、缺失或取代。在一些实施方案中，突变 包括取代为不同的天然氨基酸。在一些情况下，突变体细胞因子在以下氨基 酸位置处包含突变：Y31、K32、N33、P34、K35、T37、R38、T41、F42、 K43、F44、Y45、P47、K48、Q57、E60、E61、E62、L63、K64、P65、E68、 V69、N71、L72、Q74、S75、K76、N77、M104、C105、E106、Y107、A108、 D109、E110、T111或A112，其中氨基酸残基的编号对应于SEQID NO:1。 在一些情况下，氨基酸位置选自Y31、K32、N33、P34、K35、T37、R38、 T41、F42、K43、F44、Y45、P47、K48、E61、E62、E68、K64、P65、V69、 L72、Q74、S75、K76、N77、M104、C105、E106、Y107、A108、D109、 E110、T111和A112。在一些情况下，氨基酸位置选自N33、P34、K35、T37、R38、M39、T41、F42、K43、F44、Y45、Q57、E60、E61、E62、L63、K64、 P65、E68、V69、N71、L72、M104、C105、E106、Y107、A108、D109、 E110、T111和A112。在一些情况下，氨基酸位置选自K35、T37、R38、T41、 F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72和Y107。在 一些情况下，氨基酸位置选自T37、R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、 E68、K64、P65、V69、L72和Y107。在一些情况下，氨基酸位置选自T37、 R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、E68、P65、V69、L72和Y107。在 一些情况下，氨基酸位置选自T37、T41、F42、F44、Y45、P65、V69、L72 和Y107。在一些情况下，氨基酸位置选自R38和K64。在一些情况下，氨基 酸位置选自E61、E62和E68。在一些情形中，氨基酸位置是在K35。在一些 情形中，氨基酸位置是在T37。在一些情形中，氨基酸位置是在R38。在一些 情形中，氨基酸位置是在T41。在一些情形中，氨基酸位置是在F42。在一些 情形中，氨基酸位置是在K43。在一些情形中，氨基酸位置是在F44。在一些 情形中，氨基酸位置是在Y45。在一些情形中，氨基酸位置是在E61。在一 些情形中，氨基酸位置是在E62。在一些情形中，氨基酸位置是在K64。在 一些情形中，氨基酸位置是在E68。在一些情形中，氨基酸位置是在P65。在 一些情形中，氨基酸位置是在V69。在一些情形中，氨基酸位置是在L72。 在一些情形中，氨基酸位置是在Y107。在一些情形中，氨基酸位置是在L72。 在一些情形中，氨基酸位置是在D109。在一些实施方案中，细胞因子突变体 包含缀合部分，其中所述缀合部分附接至突变体细胞因子中突变的位点。
本文所述的细胞因子突变体通常包含至天然氨基酸的一个或 多个突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和至少一 个突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和E62K突变。 在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQID NO:1和E62C突变。在一些 实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和E62A突变。在一些实施方 案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和E62I突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和E62L突变。在一些实施方案中，细胞因 子突变体包含SEQ ID NO:1和E62Y突变。在一些实施方案中，细胞因子突变 体包含SEQ ID NO:1和E62W突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包 含SEQ ID NO:1和E62N突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和E62R突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO: 1和E62D突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和E62Q突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和E62G 突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和E62H突变。 在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和E62M突变。在一 些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和E62F突变。在一些实施 方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和E62P突变。在一些实施方案中， 细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和E62S突变。在一些实施方案中，细胞因 子突变体包含SEQ ID NO:1和E62T突变。在一些实施方案中，细胞因子突变 体包含SEQ ID NO:1和E62V突变。
在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和至少 一个突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和P65K 突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和P65C突变。 在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ IDNO:1和P65A突变。在一些 实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和P65I突变。在一些实施方 案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和P65L突变。在一些实施方案中， 细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和P65Y突变。在一些实施方案中，细胞因 子突变体包含SEQID NO:1和P65W突变。在一些实施方案中，细胞因子突 变体包含SEQ ID NO:1和P65N突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包 含SEQ ID NO:1和P65R突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和P65D突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQID NO: 1和P65Q突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和 P65G突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和P65H 突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和P65M突变。 在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQID NO:1和P65F突变。在一些 实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和P65E突变。在一些实施方 案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和P65S突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含SEQ ID NO:1和P65T突变。在一些实施方案中，细胞因 子突变体包含SEQ ID NO:1和P65V突变。
蛋白质或肽融合物
在一些实施方案中，本文所述的细胞因子缀合物包含与肽或蛋 白质融合的细胞因子(例如，IL-2或其他细胞因子)(融合物)。在一些实施 方案中，肽或蛋白质是抗体或抗体片段。在一些实施方案中，本文所述的细 胞因子缀合物包含与抗体或其结合片段融合的细胞因子(例如，IL-2或其他 细胞因子)。在一些实施方案中，本文所述的细胞因子与多种蛋白质或肽融 合。在一些实施方案中，细胞因子缀合物包含与蛋白质或肽的细胞因子融合物以及至少一个缀合部分。在一些情况下，抗体或其结合片段包含人源化抗 体或其结合片段、鼠抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗 体或其结合片段、单价Fab'、二价Fab2、F(ab)'3片段、单链可变片段(scFv)、 双scFv、(scFv)2、双抗体、微抗体、纳米抗体、三抗体、四抗体、humabody、 二硫键稳定的Fv蛋白(dsFv)、单结构域抗体(sdAb)、IgNAR、骆驼科动 物抗体或其结合片段、双特异性抗体或其结合片段或其化学修饰的衍生物。在一些情况下，此类融合蛋白是通过翻译直接生成。在一些实施方案中，融 合物是使用化学或其他酶促连接方法生成。在一些实施方案中，细胞因子缀 合物包含由接头附接的融合的肽或蛋白质。在一些实施方案中，接头是肽。 在一些实施方案中，细胞因子缀合物包含N末端肽或蛋白质融合物。在一些 实施方案中，细胞因子缀合物包含C末端肽或蛋白质融合物。在一些情形中， 与肽或蛋白质融合的细胞因子进一步缀合至下文所述的一个或多个缀合部 分。
在一些情况下，细胞因子缀合物包含与scFv、双scFv、(scFv)2、 dsFv或sdAb融合物的融合物。在一些情形中，融合物包含scFv。在一些情形 中，细胞因子缀合物包含与双scFv的融合物。在一些情形中，细胞因子缀合 物包含与(scFv)2的融合物。在一些情形中，细胞因子缀合物包含与dsFv的融 合物。在一些情形中，细胞因子缀合物包含与sdAb的融合物。在一些情形中， 与scFv、双scFv、(scFv)2、dsFv或sdAb融合的细胞因子进一步缀合至下文所 述的一个或多个缀合部分。
在一些情况下，细胞因子缀合物包含与抗体(例如，IgG、IgA、 IgM、IgE或IgD)的Fc部分的融合物。在一些情况下，细胞因子缀合物包含 与IgG(例如，IgG1、IgG3或IgG4)的Fc部分的融合物。在一些情形中，与Fc 部分融合的细胞因子进一步缀合至下文所述的一个或多个缀合部分。
在一些情形中，细胞因子(例如，白介素、IFN或TNF)多肽 与抗体或其结合片段融合。在一些情形中，细胞因子多肽与以下融合：人源 化抗体或其结合片段、鼠抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克 隆抗体或其结合片段、单价Fab'、二价Fab2、F(ab)'3片段、单链可变片段(scFv)、 双scFv、(scFv)2、双抗体、微抗体、纳米抗体、三抗体、四抗体、humabody、 二硫键稳定的Fv蛋白(dsFv)、单结构域抗体(sdAb)、Ig NAR、骆驼科动 物抗体或其结合片段、双特异性抗体或其结合片段或其化学修饰的衍生物。 在另外的情形中，细胞因子多肽与抗体的Fc部分融合。在另外的情形中，细 胞因子多肽与IgG(例如，IgG1、IgG3或IgG4)的Fc部分融合。在一些情形中， 与抗体或其结合片段融合的细胞因子进一步缀合至下文所述的一个或多个 缀合部分。
在一些情形中，IL-2多肽与抗体或其结合片段融合。在一些情 形中，IL-2多肽与以下融合：人源化抗体或其结合片段、鼠抗体或其结合片 段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价Fab'、二价Fab2、 F(ab)'3片段、单链可变片段(scFv)、双scFv、(scFv)2、双抗体、微抗体、纳 米抗体、三抗体、四抗体、humabody、二硫键稳定的Fv蛋白(dsFv)、单结 构域抗体(sdAb)、Ig NAR、骆驼科动物抗体或其结合片段、双特异性抗体 或其结合片段或其化学修饰的衍生物。在另外的情形中，IL-2多肽与抗体的 Fc部分融合。在另外的情形中，IL-2多肽与IgG(例如，IgG1、IgG3或IgG4) 的Fc部分融合。在一些情形中，与抗体或其结合片段融合的IL-2多肽进一步 缀合至下文所述的一个或多个缀合部分。
天然和非天然氨基酸
在一些实施方案中，在与缀合部分结合(或反应)之前，本文 所述的氨基酸残基(例如，在细胞因子如IL-2内)突变为赖氨酸、半胱氨酸、 组氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸。例如，赖 氨酸、半胱氨酸、组氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸或 酪氨酸的侧链可以与本文所述的缀合部分结合。在一些情况下，氨基酸残基 突变为半胱氨酸、赖氨酸或组氨酸。在一些情形中，氨基酸残基突变为半胱 氨酸。在一些情形中，氨基酸残基突变为赖氨酸。在一些情形中，氨基酸残 基突变为组氨酸。在一些情形中，氨基酸残基突变为酪氨酸。在一些情形中， 氨基酸残基突变为色氨酸。在一些实施方案中，非天然氨基酸不与缀合部分 缀合。在一些实施方案中，本文所述的细胞因子包含非天然氨基酸，其中所 述细胞因子缀合至蛋白质，其中附接点不是非天然氨基酸。
在一些实施方案中，在与缀合部分结合之前，本文所述的氨基 酸残基(例如，在细胞因子如IL-2内)突变为非天然氨基酸。在一些情形中， 突变为非天然氨基酸防止或最小化免疫系统的自身抗原反应。如本文所用， 术语“非天然氨基酸”或“非规范氨基酸”是指除了天然存在于蛋白质中 的20种氨基酸以外的氨基酸。非天然氨基酸的非限制性例子包括：对-乙酰 基-L-苯丙氨酸、对-碘-L-苯丙氨酸、对-甲氧基苯丙氨酸、O-甲基-L-酪氨酸、 对-炔丙氧基苯丙氨酸、对-炔丙基-苯丙氨酸、L-3-(2-萘基)丙氨酸、3-甲基- 苯丙氨酸、O-4-烯丙基-L-酪氨酸、4-丙基-L-酪氨酸、三-O-乙酰基-GlcNAcp- 丝氨酸、L-多巴,氟化苯丙氨酸、异丙基-L-苯丙氨酸、对-叠氮基-L-苯丙氨酸、 对-酰基-L-苯丙氨酸、对-苯甲酰基-L-苯丙氨酸、对-硼苯丙氨酸、O-炔丙基 酪氨酸、L-磷酸丝氨酸、膦酰丝氨酸、膦酰酪氨酸、对-溴苯丙氨酸、硒代半 胱氨酸、对-氨基-L-苯丙氨酸、异丙基-L-苯丙氨酸、N6-(2-叠氮基乙氧基)- 羰基-L-赖氨酸(AzK；其化学结构显示为图3C中的化合物90)、酪氨酸氨基 酸的非天然类似物；谷氨酰胺氨基酸的非天然类似物；苯丙氨酸氨基酸的非 天然类似物；丝氨酸氨基酸的非天然类似物；苏氨酸氨基酸的非天然类似物； 烷基、芳基、酰基、叠氮基、氰基、卤素、肼、酰肼、羟基、烯基、炔基、 醚、硫醇、磺酰基、硒基、酯、硫代酸、硼酸酯(borate)、硼酸酯(boronate)、 磷酸基、膦酰基、膦、杂环、烯酮、亚胺、醛、羟胺、酮基或氨基取代的氨 基酸或其组合；具有光可激活的交联剂的氨基酸；自旋标记的氨基酸；荧光 氨基酸；金属结合氨基酸；含有金属的氨基酸；放射性氨基酸；光笼化和/ 或光可异构的氨基酸；含有生物素或生物素类似物的氨基酸；含有酮基的氨 基酸；包含聚乙二醇或聚醚的氨基酸；重原子取代的氨基酸；化学可裂解或 光可裂解的氨基酸；具有延长侧链的氨基酸；含有毒性基团的氨基酸；糖取 代的氨基酸；碳连接的含糖氨基酸；氧化还原活性氨基酸；含有a-羟基的酸；氨基硫代酸；α,α二取代的氨基酸；β-氨基酸；除了脯氨酸或组氨酸以外的环 状氨基酸；以及除了苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸以外的芳香族氨基酸。
在一些实施方案中，非天然氨基酸包含选择性反应基团，或用 于位点选择性标记靶多肽的反应基团。在一些情况下，化学是双正交反应(例 如，生物相容性和选择性反应)。在一些情形中，化学是Cu(I)催化或“无铜” 炔-叠氮三唑形成反应、施陶丁格连接(Staudinger ligation)、反电子需求的 迪尔斯-阿尔德(inverse-electron-demandDiels-Alder，IEDDA)反应、“光- 点击”化学或金属介导的过程(如烯烃复分解和Suzuki-Miyaura或 Sonogashira交叉偶联)。
在一些实施方案中，非天然氨基酸包含光反应基团，所述光反 应基团在用例如UV辐照时发生交联。
在一些实施方案中，非天然氨基酸包括光笼化氨基酸。
在一些情况下，非天然氨基酸是对位取代、间位取代或邻位取 代的氨基酸衍生物。
在一些情况下，非天然氨基酸包括对-乙酰基-L-苯丙氨酸、对- 叠氮甲基-L-苯丙氨酸(pAMF)、对-碘-L-苯丙氨酸、O-甲基-L-酪氨酸、对- 甲氧基苯丙氨酸、对-炔丙氧基苯丙氨酸、对-炔丙基-苯丙氨酸、L-3-(2-萘基) 丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、O-4-烯丙基-L-酪氨酸、4-丙基-L-酪氨酸、三-O- 乙酰基-GlcNAcp-丝氨酸、L-多巴,氟化苯丙氨酸、异丙基-L-苯丙氨酸、对- 叠氮基-L-苯丙氨酸、对-酰基-L-苯丙氨酸、对-苯甲酰基-L-苯丙氨酸、L-磷 酸丝氨酸、膦酰丝氨酸、膦酰酪氨酸、对-溴苯丙氨酸、对-氨基-L-苯丙氨酸 或异丙基-L-苯丙氨酸。
在一些情形中，非天然氨基酸是3-氨基酪氨酸、3-硝基酪氨酸、 3,4-二羟基-苯丙氨酸或3-碘酪氨酸。
在一些情形中，非天然氨基酸是苯基硒代半胱氨酸。
在一些情况下，非天然氨基酸是含有二苯甲酮、酮、碘化物、 甲氧基、乙酰基、苯甲酰基或叠氮化物的苯丙氨酸衍生物。
在一些情况下，非天然氨基酸是含有二苯甲酮、酮、碘化物、 甲氧基、乙酰基、苯甲酰基或叠氮化物的赖氨酸衍生物。
在一些情况下，非天然氨基酸包含芳香族侧链。
在一些情况下，非天然氨基酸不包含芳香族侧链。
在一些情况下，非天然氨基酸包含叠氮基。
在一些情况下，非天然氨基酸包含Michael受体基团。在一些情 况下，Michael受体基团包含能够通过1,2-加成反应形成共价键的不饱和部 分。在一些情况下，Michael受体基团包含缺电子的烯烃或炔烃。在一些情况 下，Michael受体基团包括但不限于α,β不饱和的：酮、醛、亚砜、砜、腈、 亚胺或芳香族化合物。
在一些情况下，非天然氨基酸是脱氢丙氨酸。
在一些情况下，非天然氨基酸包含醛或酮基团。
在一些情况下，非天然氨基酸是包含醛或酮基团的赖氨酸衍生 物。
在一些情况下，非天然氨基酸是在β、γ或δ位置包含一个或多 个O、N、Se或S原子的赖氨酸衍生物。在一些情况下，非天然氨基酸是在γ 位置包含O、N、Se或S原子的赖氨酸衍生物。
在一些情况下，非天然氨基酸是赖氨酸衍生物，其中εN原子被 氧原子替代。
在一些情况下，非天然氨基酸是赖氨酸衍生物，其并非天然存 在的翻译后修饰的赖氨酸。
在一些情况下，非天然氨基酸是包含侧链的氨基酸，其中从α 位置起的第六个原子包含羰基。在一些情况下，非天然氨基酸是包含侧链的 氨基酸，其中从α位置起的第六个原子包括羰基，并且从α位置起的第五个原 子是氮。在一些情况下，非天然氨基酸是包含侧链的氨基酸，其中从α位置 起的第七个原子是氧原子。
在一些情况下，非天然氨基酸是包含硒的丝氨酸衍生物。在一 些情况下，非天然氨基酸是硒代丝氨酸(2-氨基-3-氢硒代丙酸)。在一些情 况下，非天然氨基酸是2-氨基-3-((2-((3-(苄氧基)-3-氧代丙基)氨基)乙基)硒基) 丙酸。在一些情况下，非天然氨基酸是2-氨基-3-(苯基硒基)丙酸。在一些情 况下，非天然氨基酸包括硒，其中硒的氧化导致形成包含烯烃的非天然氨基 酸。
在一些情况下，非天然氨基酸包含环辛炔基。
在一些情况下，非天然氨基酸包含反式环辛烯基。
在一些情况下，非天然氨基酸包含降冰片烯基。
在一些情况下，非天然氨基酸包含环丙烯基。
在一些情况下，非天然氨基酸包含二氮杂环丙烯基团。
在一些情况下，非天然氨基酸包含四嗪基团。
在一些情况下，非天然氨基酸是赖氨酸衍生物，其中侧链氮被 氨甲酰化。在一些情况下，非天然氨基酸是赖氨酸衍生物，其中侧链氮被酰 化。在一些情况下，非天然氨基酸是2-氨基-6-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}己酸。 在一些情况下，非天然氨基酸是2-氨基-6-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}己酸。在一 些情况下，非天然氨基酸是N6-Boc-N6-甲基赖氨酸。在一些情况下，非天然 氨基酸是N6-乙酰基赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是吡咯赖氨酸。 在一些情况下，非天然氨基酸是N6-三氟乙酰基赖氨酸。在一些情况下，非 天然氨基酸是2-氨基-6-{[(苄氧基)羰基]氨基}己酸。在一些情况下，非天然氨 基酸是2-氨基-6-{[(对-碘代苄氧基)羰基]氨基}己酸。在一些情况下，非天然 氨基酸是2-氨基-6-{[(对-硝基苄氧基)羰基]氨基}己酸。在一些情况下，非天 然氨基酸是N6-脯氨酰基赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是2-氨基 -6-{[(环戊基氧基)羰基]氨基}己酸。在一些情况下，非天然氨基酸是N6-(环 戊烷羰基)赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是N6-(四氢呋喃-2-羰基)赖 氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是N6-(3-乙炔基四氢呋喃-2-羰基)赖氨酸。 在一些情况下，非天然氨基酸是N6-((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)赖氨酸。在一些 情况下，非天然氨基酸是2-氨基-6-{[(2-叠氮基环戊基氧基)羰基]氨基}己酸。 在一些情况下，非天然氨基酸是N6-(2-叠氮基乙氧基)-羰基-赖氨酸。在一些 情况下，非天然氨基酸是2-氨基-6-{[(2-硝基苄氧基)羰基]氨基}己酸。在一些 情况下，非天然氨基酸是2-氨基-6-{[(2-环辛炔基氧基)羰基]氨基}己酸。在一 些情况下，非天然氨基酸是N6-(2-氨基丁-3-炔酰基)赖氨酸。在一些情况下， 非天然氨基酸是2-氨基-6-((2-氨基丁-3-炔酰基)氧基)己酸。在一些情况下， 非天然氨基酸是N6-(烯丙氧基羰基)赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是N6-(丁烯基-4-氧羰基)赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是N6-(戊烯基-5- 氧羰基)赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是N6-((丁-3-炔-1-基氧基)羰 基)-赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是N6-((戊-4-炔-1-基氧基)羰基)- 赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是N6-(噻唑烷-4-羰基)赖氨酸。在一 些情况下，非天然氨基酸是2-氨基-8-氧代壬酸。在一些情况下，非天然氨基 酸是2-氨基-8-氧代辛酸。在一些情况下，非天然氨基酸是N6-(2-氧代乙酰基) 赖氨酸。
在一些情况下，非天然氨基酸是N6-丙酰基赖氨酸。在一些情 况下，非天然氨基酸是N6-丁酰基赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是 N6-(丁-2-烯酰基)赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是N6-((二环[2.2.1] 庚-5-烯-2-基氧基)羰基)赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是N6-((螺[2.3] 己-1-烯-5-基甲氧基)羰基)赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是 N6-(((4-(1-(三氟甲基)环丙-2-烯-1-基)苄基)氧基)羰基)赖氨酸。在一些情况 下，非天然氨基酸是N6-((二环[2.2.1]庚-5-烯-2-基甲氧基)羰基)赖氨酸。在一 些情况下，非天然氨基酸是半胱氨酰基赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基 酸是N6-((1-(6-硝基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙氧基)羰基)赖氨酸。在 一些情况下，非天然氨基酸是N6-((2-(3-甲基-3H-二氮杂环丙烯-3-基)乙氧基) 羰基)赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是N6-((3-(3-甲基-3H-二氮杂环 丙烯-3-基)丙氧基)羰基)赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是N6-((间硝 基苄氧基)N6-甲基羰基)赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是N6-((二环 [6.1.0]壬-4-炔-9-基甲氧基)羰基)-赖氨酸。在一些情况下，非天然氨基酸是 N6-((环庚-3-烯-1-基氧基)羰基)-L-赖氨酸。
在一些情况下，非天然氨基酸是2-氨基-3-(((((苄氧基)羰基)氨 基)甲基)硒基)丙酸。
在一些实施方案中，通过重新目的化的琥珀、蛋白石或赭石终 止密码子将非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，IL多肽)中。
在一些实施方案中，通过4-碱基密码子将非天然氨基酸掺入细 胞因子(例如，IL多肽)中。
在一些实施方案中，通过重新目的化的稀有的有义密码子将非 天然氨基酸掺入细胞因子(例如，IL多肽)中。
在一些实施方案中，通过包含非天然核酸的合成密码子将非天 然氨基酸掺入细胞因子(例如，IL多肽)中。
在一些情况下，通过正交的修饰的合成酶/tRNA对将非天然氨基酸掺入 细胞因子中。此类正交对包含天然合成酶，所述天然合成酶能够用非天然氨 基酸装载非天然tRNA，同时将以下最小化：a)将其他内源氨基酸装载至非 天然tRNA上，以及b)将非天然氨基酸装载至其他内源tRNA上。此类正交对 包含能够通过非天然合成酶进行装载，同时避免通过内源合成酶装载a)其他 内源氨基酸的tRNA。在一些实施方案中，从各种生物体(如细菌、酵母、 古细菌或人来源)鉴定出此类对。在一些实施方案中，正交合成酶/tRNA对 包含来自单一生物体的组分。在一些实施方案中，正交合成酶/tRNA对包含 来自两种不同生物体的组分。在一些实施方案中，正交合成酶/tRNA对包含 在修饰之前促进两种不同氨基酸的翻译的组分。在一些实施方案中，正交合 成酶是修饰的丙氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是修饰的精氨 酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是修饰的天冬酰胺合成酶。在一 些实施方案中，正交合成酶是修饰的天冬氨酸合成酶。在一些实施方案中， 正交合成酶是修饰的半胱氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是修 饰的谷氨酰胺合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是修饰的谷氨酸合成 酶。在一些实施方案中，正交合成酶是修饰的丙氨酸甘氨酸。在一些实施方 案中，正交合成酶是修饰的组氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶 是修饰的亮氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是修饰的异亮氨酸 合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是修饰的赖氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是修饰的甲硫氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交 合成酶是修饰的苯丙氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是修饰的 脯氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是修饰的丝氨酸合成酶。在 一些实施方案中，正交合成酶是修饰的苏氨酸合成酶。在一些实施方案中， 正交合成酶是修饰的色氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是修饰 的酪氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是修饰的缬氨酸合成酶。 在一些实施方案中，正交合成酶是修饰的磷酸丝氨酸合成酶。在一些实施方 案中，正交tRNA是修饰的丙氨酸tRNA。在一些实施方案中，正交tRNA是修 饰的精氨酸tRNA。在一些实施方案中，正交tRNA是修饰的天冬酰胺tRNA。 在一些实施方案中，正交tRNA是修饰的天冬氨酸tRNA。在一些实施方案中， 正交tRNA是修饰的半胱氨酸tRNA。在一些实施方案中，正交tRNA是修饰的 谷氨酰胺tRNA。在一些实施方案中，正交tRNA是修饰的谷氨酸tRNA。在一些实施方案中，正交tRNA是修饰的丙氨酸甘氨酸。在一些实施方案中，正 交tRNA是修饰的组氨酸tRNA。在一些实施方案中，正交tRNA是修饰的亮氨 酸tRNA。在一些实施方案中，正交tRNA是修饰的异亮氨酸tRNA。在一些实 施方案中，正交tRNA是修饰的赖氨酸tRNA。在一些实施方案中，正交tRNA 是修饰的甲硫氨酸tRNA。在一些实施方案中，正交tRNA是修饰的苯丙氨酸 tRNA。在一些实施方案中，正交tRNA是修饰的脯氨酸tRNA。在一些实施方 案中，正交tRNA是修饰的丝氨酸tRNA。在一些实施方案中，正交tRNA是修 饰的苏氨酸tRNA。在一些实施方案中，正交tRNA是修饰的色氨酸tRNA。在 一些实施方案中，正交tRNA是修饰的酪氨酸tRNA。在一些实施方案中，正 交tRNA是修饰的缬氨酸tRNA。在一些实施方案中，正交tRNA是修饰的磷酸 丝氨酸tRNA。
在一些实施方案中，通过氨酰基(aaRS或RS)-tRNA合成酶 -tRNA对将非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，IL多肽)中。示例性aaRS-tRNA 对包括但不限于詹氏甲烷球菌(Methanococcus jannaschii)(Mj-Tyr) aaRS/tRNA对、大肠杆菌(E.coli)TyrRS(Ec-Tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌(B. stearothermophilus)tRNACUA对、大肠杆菌LeuRS(Ec-Leu)/嗜热脂肪芽孢 杆菌tRNACUA对和吡咯赖氨酰基-tRNA对。在一些情况下，通过 Mj-TyrRS/tRNA对将非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，IL多肽)中。可以 通过Mj-TyrRS/tRNA对掺入的示例性UAA包括但不限于对位取代的苯丙氨 酸衍生物，如对-氨基苯丙氨酸和对-甲氧基苯丙氨酸；间位取代的酪氨酸衍 生物，如3-氨基酪氨酸、3-硝基酪氨酸、3,4-二羟基苯丙氨酸和3-碘酪氨酸； 苯基硒代半胱氨酸；对-硼苯丙氨酸；以及邻-硝基苄基酪氨酸。
在一些情况下，通过Ec-Tyr/tRNACUA或Ec-Leu/tRNACUA对将非 天然氨基酸掺入细胞因子(例如，IL多肽)中。可以通过Ec-Tyr/tRNACUA或 Ec-Leu/tRNACUA对掺入的示例性UAA包括但不限于含有苯甲酮、酮、碘化物 或叠氮化物取代基的苯丙氨酸衍生物；O-炔丙基酪氨酸；α-氨基辛酸、O- 甲基酪氨酸、O-硝基苄基半胱氨酸；以及3-(萘-2-基氨基)-2-氨基-丙酸。
在一些情况下，通过吡咯赖氨酰基-tRNA对将非天然氨基酸掺 入细胞因子(例如，IL多肽)中。在一些情形中，PylRS获自古细菌，例如 获自产甲烷的古细菌。在一些情形中，PylRS获自巴氏甲烷八叠球菌 (Methanosarcina barkeri)、马氏甲烷八叠球菌(Methanosarcina mazei)或 乙酸甲烷八叠球菌(Methanosarcina acetivorans)。可以通过吡咯赖氨酰基 -tRNA对掺入的示例性UAA包括但不限于酰胺和氨基甲酸酯取代的赖氨酸， 如2-氨基-6-((R)-四氢呋喃-2-甲酰胺基)己酸、N-ε-D-脯氨酰基-L-赖氨酸和N-ε- 环戊基氧基羰基-L-赖氨酸；N-ε-丙烯酰基-L-赖氨酸；N-ε-[(1-(6-硝基苯并 [d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙氧基)羰基]-L-赖氨酸；和N-ε-(1-甲基环丙-2-烯 甲酰胺基)赖氨酸。在一些实施方案中，本文公开的IL-2缀合物可以通过使用 马氏甲烷八叠球菌(M.mazei)PyltRNA来制备，所述tRNA通过巴氏甲烷八 叠球菌(M.barkeri)吡咯赖氨酰基-tRNA合成酶(MbPylRS)选择性装载非 天然氨基酸，如N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸(AzK)。其他方法是 本领域普通技术人员已知的，如Zhang等人,Nature 2017,551(7682):644-647 中披露的那些。
在一些情况下，通过US 9,988,619和US 9,938,516中披露的合成 酶将非天然氨基酸掺入本文所述的细胞因子(例如，IL多肽)中。可以通过 此类合成酶掺入的示例性UAA包括对-甲基叠氮基-L-苯丙氨酸、芳烷基、杂 环基、杂芳烷基非天然氨基酸和其他氨基酸。在一些实施方案中，此类UAA 包括吡啶基、吡嗪基、吡唑基、三唑基、噁唑基、噻唑基、噻吩基或其他杂 环。在一些实施方案中，此类氨基酸包含叠氮化物、四嗪或能够与偶联配偶 体(如水溶性部分)缀合的其他化学基团。在一些实施方案中，此类合成酶 被表达并用于将UAA在体内掺入细胞因子中。在一些实施方案中，使用无细 胞翻译系统使用此类合成酶将UAA掺入细胞因子中。
在一些情况下，通过天然存在的合成酶将非天然氨基酸掺入本 文所述的细胞因子(例如，IL多肽)中。在一些实施方案中，通过对一种或 多种氨基酸营养缺陷的生物体将非天然氨基酸掺入细胞因子中。在一些实施 方案中，对应于营养缺陷型氨基酸的合成酶能够用非天然氨基酸装载相应 tRNA。在一些实施方案中，非天然氨基酸是硒代半胱氨酸或其衍生物。在 一些实施方案中，非天然氨基酸是硒代甲硫氨酸或其衍生物。在一些实施方 案中，非天然氨基酸是芳香族氨基酸，其中所述芳香族氨基酸包括芳基卤化 物，如碘化物。在实施方案中，非天然氨基酸在结构上与营养缺陷型氨基酸 类似。
在一些情况下，非天然氨基酸包括图1中所示的非天然氨基酸。
在一些情况下，非天然氨基酸包括赖氨酸或苯丙氨酸衍生物或 类似物。在一些情况下，非天然氨基酸包括赖氨酸衍生物或赖氨酸类似物。 在一些情况下，非天然氨基酸包括吡咯赖氨酸(Pyl)。在一些情况下，非天 然氨基酸包括苯丙氨酸衍生物或苯丙氨酸类似物。在一些情况下，非天然氨 基酸是以下文献中所述的非天然氨基酸：Wan等人,“Pyrrolysyl-tRNA synthetase:an ordinary enzyme but an outstanding geneticcode expansion tool,”Biocheim Biophys Aceta 1844(6):1059-4070(2014)。在一些情况下，非 天然氨基酸包括图2(例如，图2A和图2B)中所示的非天然氨基酸。
在一些实施方案中，非天然氨基酸包括图3A-图3D中所示的 非天然氨基酸(采用自Dumas等人,Chemical Science 2015,6,50-69的表1)。
在一些实施方案中，被掺入本文所述的细胞因子(例如，IL多 肽)中的非天然氨基酸披露于以下文献中：US 9,840,493；US 9,682,934；US 2017/0260137；US 9,938,516；或US 2018/0086734。可以通过此类合成酶掺 入的示例性UAA包括对-甲基叠氮基-L-苯丙氨酸、芳烷基、杂环基和杂芳烷 基，以及赖氨酸衍生物非天然氨基酸。在一些实施方案中，此类UAA包括吡 啶基、吡嗪基、吡唑基、三唑基、噁唑基、噻唑基、噻吩基或其他杂环。在 一些实施方案中，此类氨基酸包含叠氮化物、四嗪或能够与偶联配偶体(如 水溶性部分)缀合的其他化学基团。在一些实施方案中，UAA包含经由烷基 接头附接至芳香族部分的叠氮化物。在一些实施方案中，烷基接头是C1-C10接头。在一些实施方案中，UAA包含经由烷基接头附接至芳香族部分的四嗪。 在一些实施方案中，UAA包含经由氨基附接至芳香族部分的四嗪。在一些实 施方案中，UAA包含经由烷基氨基附接至芳香族部分的四嗪。在一些实施方 案中，UAA包含经由烷基链附接至氨基酸侧链的末端氮(例如，赖氨酸衍生 物的N6，或包含较短烷基侧链的衍生物的N5、N4或N3)的叠氮化物。在一 些实施方案中，UAA包含经由烷基链附接至氨基酸侧链的末端氮的四嗪。在 一些实施方案中，UAA包含经由烷基接头附接至酰胺的叠氮化物或四嗪。在 一些实施方案中，UAA是3-氨基丙氨酸、丝氨酸、赖氨酸或其衍生物的含有 叠氮化物或四嗪的氨基甲酸酯或酰胺。在一些实施方案中，将此类UAA在体 内掺入细胞因子中。在一些实施方案中，将此类UAA在无细胞系统中掺入细 胞因子中。
缀合部分
在某些实施方案中，本文公开与上述一种或多种细胞因子(例 如，白介素、IFN或TNF)结合的缀合部分。在一些情况下，缀合部分是扰 乱细胞因子与其受体的相互作用的分子。在一些情况下，缀合部分是在与细 胞因子键合时使得细胞因子缀合物能够调节免疫应答的任何分子。在一些情 况下，缀合部分经由共价键与细胞因子结合。在一些情况下，本文所述的细 胞因子附接至具有三唑基团的缀合部分。在一些情况下，本文所述的细胞因 子附接至具有二氢哒嗪或哒嗪基团的缀合部分。在一些情况下，缀合部分包 括水溶性聚合物。在其他情况下，缀合部分包括蛋白质或其结合片段。在另 外的情况下，缀合部分包括肽。在另外的情况下，缀合部分包括核酸。在另 外的情况下，缀合部分包括小分子。在另外的情况下，缀合部分包括生物缀 合物(例如，TLR激动剂，如TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、 TLR7、TLR8或TLR9激动剂；或合成配体，如Pam3Cys、CFA、MALP2、 Pam2Cys、FSL-1、Hib-OMPC、聚I:C、聚A:U、AGP、MPL A、RC-529、 MDF2β、CFA或鞭毛蛋白)。在一些情形中，缀合部分增加血清半衰期和/或 改进稳定性。在一些情形中，缀合部分降低细胞因子与一个或多个细胞因子 受体结构域或亚基的相互作用。在另外的情形中，缀合部分阻断细胞因子与具有其一种或多种同源受体的一个或多个细胞因子结构域或亚基的相互作 用。在一些实施方案中，本文所述的细胞因子缀合物包含多个缀合部分。在 一些实施方案中，缀合部分附接至细胞因子肽中的非天然或天然氨基酸。在 一些实施方案中，细胞因子缀合物包含附接至天然氨基酸的缀合部分。在一 些实施方案中，细胞因子缀合物附接至细胞因子肽中的非天然氨基酸。在一 些实施方案中，缀合部分附接至细胞因子肽的N或C末端氨基酸。多种组合 位点公开于本文中，例如，第一缀合部分附接至细胞因子肽中的非天然或天 然氨基酸，并且第二缀合部分附接至细胞因子肽的N或C末端氨基酸。在一 些实施方案中，单一缀合部分附接至细胞因子肽(例如，订书钉状物)的多 个残基。在一些实施方案中，缀合部分附接至细胞因子肽的N和C末端氨基 酸二者。
水溶性聚合物
在一些实施方案中，本文所述的缀合部分是水溶性聚合物。在 一些情况下，水溶性聚合物是非肽的、无毒的且生物相容的。如本文所用， 如果如临床医生(例如，医师)毒理学家或临床开发专家所评价，与结合活 组织(例如，施用至患者)单独使用物质或与另一种物质(例如，活性剂， 如细胞因子部分)一起使用所述物质相关的有益效果超过任何有害影响，则 认为所述物质是生物相容的。在一些情况下，水溶性聚合物进一步是非免疫 原性的。在一些情况下，如果如临床医生(例如，医师)、毒理学家或临床 开发专家所评价，物质在体内的计划使用没有产生不期望的免疫应答(例如， 抗体形成)，或者如果产生了免疫应答，但这一应答被认为在临床上不显著 或不重要，则认为所述物质是非免疫原性的。
在一些情况下，水溶性聚合物的特征为具有约2至约300个末 端。示例性水溶性聚合物包括但不限于聚(亚烷基二醇)(如聚乙二醇 (“PEG”)、聚(丙二醇)(“PPG”)、乙二醇与丙二醇的共聚物等)、聚(氧 乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)、 聚(羟烷基甲基丙烯酸酯)、聚(糖)、聚(α-羟酸)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚丙烯酰胺(PAAm)、聚(N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺)(PHPMA)、聚二甲基丙烯 酰胺(PDAAm)、聚磷腈、聚噁唑啉(“POZ”)(其描述于WO 2008/106186 中)、聚(N-丙烯酰基吗啉)及前述任一项的组合物。
在一些情形中，水溶性聚合物并不限于特定结构。在一些情形 中，水溶性聚合物是线性的(例如，封端的，例如，烷氧基PEG或双官能PEG)、 分支的或多臂的(例如，叉状PEG或附接至多元醇核心的PEG)、树枝状(或 星形)架构，其各自具有或不具有一个或多个可降解连接。此外，水溶性聚 合物的内部结构可以以任何数量的不同重复模式来组织，并且可以选自均聚 物、交替共聚物、无规共聚物、嵌段共聚物、交替三聚物、无规三聚物和嵌 段三聚物。
在一些情况下，水溶性聚合物表示为重复聚合单元的长度，例 如，聚乙二醇单元的数量n。在一些情况下，水溶性聚合物具有结构：
Figure BDA0003528433030001571
其中波浪线指示附接至接头、反应基团或非 天然氨基酸，并且n是1-5000。在一些情况下，水溶性聚合物具有结构：
Figure BDA0003528433030001572
其中波浪线指示附接至接头、反应基团 或非天然氨基酸，“封端基(Cap)”指示封端基团(例如，如-OCH3、-O(C1-C6烷基)、-SMe、-S(C1-C6烷基)、-CO2H、-CO2(C1-C6烷基)、-CONH2、-CONH(C1-C6烷基)、-CON(C1-C6烷基)2、-NH2、-SH或OH)，并且n是1-5000。在一些实施 方案中，n是100-2000、200-1000、300-750、400-600、450-550、400-2000、 750-3000或100-750。在一些实施方案中，n为约100、200、300、400、500、 600、700、800、900或约1000。在一些实施方案中，n是至少100、200、300、 400、500、600、700、800、900或至少1000。在一些实施方案中，n不超过 100、200、300、400、500、600、700、800、900或不超过1000。在一些实 施方案中，n表示为水溶性聚合物的平均长度。
在一些实施方案中，IL-2缀合物中水溶性聚合物的重均分子量 为约100道尔顿至约150,000道尔顿。示例性范围包括例如以下重均分子量： 在大于5,000道尔顿至约100,000道尔顿范围内、在约6,000道尔顿至约90,000 道尔顿范围内、在约10,000道尔顿至约85,000道尔顿范围内、在大于10,000 道尔顿至约85,000道尔顿范围内、在约20,000道尔顿至约85,000道尔顿范围 内、在约53,000道尔顿至约85,000道尔顿范围内、在约25,000道尔顿至约 120,000道尔顿范围内、在约29,000道尔顿至约120,000道尔顿范围内、在约 35,000道尔顿至约120,000道尔顿范围内以及在约40,000道尔顿至约120,000 道尔顿范围内。
水溶性聚合物的示例性重均分子量包括约100道尔顿、约200道 尔顿、约300道尔顿、约400道尔顿、约500道尔顿、约600道尔顿、约700道 尔顿、约750道尔顿、约800道尔顿、约900道尔顿、约1,000道尔顿、约1,500 道尔顿、约2,000道尔顿、约2,200道尔顿、约2,500道尔顿、约3,000道尔顿、 约4,000道尔顿、约4,400道尔顿、约4,500道尔顿、约5,000道尔顿、约5,500 道尔顿、约6,000道尔顿、约7,000道尔顿、约7,500道尔顿、约8,000道尔顿、 约9,000道尔顿、约10,000道尔顿、约11,000道尔顿、约12,000道尔顿、约13,000 道尔顿、约14,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约22,500道尔 顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、 约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约55,000道尔顿、约60,000道尔顿、约65,000 道尔顿、约70,000道尔顿和约75,000道尔顿。还可以使用总分子量为上述任 一种的分支形式的水溶性聚合物(例如，由两个20,000道尔顿聚合物构成的 分支的40,000道尔顿水溶性聚合物)。在一个或多个实施方案中，缀合物将不 会直接或间接地附接有PEG的重均分子量小于约6,000道尔顿的任何PEG部 分。
PEG通常将包含许多(OCH2CH2)单体[或(CH2CH2O)单体， 取决于如何定义PEG]。如本文所用，重复单元的数量由“(OCH2CH2)n”中 的下标“n”来标识。因此，(n)的值通常落入一个或多个以下范围中：2至 约3400、约100至约2300、约100至约2270、约136至约2050、约225至约1930、 约450至约1930、约1200至约1930、约568至约2727、约660至约2730、约795 至约2730、约795至约2730、约909至约2730，以及约1,200至约1,900。对于 分子量已知的任何给定聚合物，可以通过用聚合物的总重均分子量除以重复 单体的分子量来确定重复单元的数量(即“n”)。
在一些情况下，水溶性聚合物是封端聚合物，即至少一个末端 用相对惰性的基团(如低碳C1-6烷氧基或羟基)封端的聚合物。在聚合物是 PEG时，例如，可以使用甲氧基-PEG(通常称为mPEG)，其是PEG的线性形 式，其中聚合物的一个末端是甲氧基(—OCH3)基团，而另一个末端是羟 基或可以被任选地化学修饰的其他官能团。
在一些实施方案中，构成本文公开的IL-2缀合物的PEG基团是 线性或分支PEG基团。在一些实施方案中，PEG基团是线性PEG基团。在一 些实施方案中，PEG基团是分支PEG基团。在一些实施方案中，PEG基团是 甲氧基PEG基团。在一些实施方案中，PEG基团是线性或分支甲氧基PEG基 团。在一些实施方案中，PEG基团是线性甲氧基PEG基团。在一些实施方案中，PEG基团是分支甲氧基PEG基团。在一些实施方案中，PEG基团是平均 分子量为约100道尔顿至约150,000道尔顿的线性或分支PEG基团。示例性范 围包括例如以下重均分子量：在大于5,000道尔顿至约100,000道尔顿范围内、 在约6,000道尔顿至约90,000道尔顿范围内、在约10,000道尔顿至约85,000道 尔顿范围内、在大于10,000道尔顿至约85,000道尔顿范围内、在约20,000道尔 顿至约85,000道尔顿范围内、在约53,000道尔顿至约85,000道尔顿范围内、在 约25,000道尔顿至约120,000道尔顿范围内、在约29,000道尔顿至约120,000道 尔顿范围内、在约35,000道尔顿至约120,000道尔顿范围内以及在约40,000道 尔顿至约120,000道尔顿范围内。PEG基团的示例性重均分子量包括约100道 尔顿、约200道尔顿、约300道尔顿、约400道尔顿、约500道尔顿、约600道 尔顿、约700道尔顿、约750道尔顿、约800道尔顿、约900道尔顿、约1,000 道尔顿、约1,500道尔顿、约2,000道尔顿、约2,200道尔顿、约2,500道尔顿、 约3,000道尔顿、约4,000道尔顿、约4,400道尔顿、约4,500道尔顿、约5,000 道尔顿、约5,500道尔顿、约6,000道尔顿、约7,000道尔顿、约7,500道尔顿、 约8,000道尔顿、约9,000道尔顿、约10,000道尔顿、约11,000道尔顿、约12,000 道尔顿、约13,000道尔顿、约14,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔 顿、约22,500道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、 约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约55,000道尔顿、约60,000 道尔顿、约65,000道尔顿、约70,000道尔顿、约75,000道尔顿、约80,000道尔 顿、约90,000道尔顿、约95,000道尔顿和约100,000道尔顿。在一些实施方案 中，PEG基团是具有如上文所公开的平均分子量的线性PEG基团。在一些实 施方案中，PEG基团是具有如上文所公开的平均分子量的分支PEG基团。在 一些实施方案中，构成本文公开的IL-2缀合物的PEG基团是具有限定的分子 量±10％或15％或20％或25％的线性或分支PEG基团。例如，本公开文本的 范围内包括包含分子量为30,000Da±3000Da、或30,000Da±4,500Da、或 30,000Da±6,000Da的PEG基团的IL-2缀合物。
在一些实施方案中，构成本文公开的IL-2缀合物的PEG基团是 平均分子量为约5,000道尔顿至约60,000道尔顿的线性或分支PEG基团。在一 些实施方案中，PEG基团是具有以下平均分子量的线性或分支PEG基团：约 5,000道尔顿、约5,500道尔顿、约6,000道尔顿、约7,000道尔顿、约7,500道尔 顿、约8,000道尔顿、约9,000道尔顿、约10,000道尔顿、约11,000道尔顿、约 12,000道尔顿、约13,000道尔顿、约14,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000 道尔顿、约22,500道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔 顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约55,000道尔顿、 约60,000道尔顿、约65,000道尔顿、约70,000道尔顿、约75,000道尔顿、约80,000 道尔顿、约90,000道尔顿、约95,000道尔顿和约100,000道尔顿。在一些实施 方案中，PEG基团是具有以下平均分子量的线性或分支PEG基团：约5,000道 尔顿、约10,000道尔顿、约20,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿 或约60,000道尔顿。在一些实施方案中，PEG基团是具有以下平均分子量的 线性或分支PEG基团：约5,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿或 约60,000道尔顿。在一些实施方案中，PEG基团是具有以下平均分子量的线 性PEG基团：约5,000道尔顿、约10,000道尔顿、约20,000道尔顿、约30,000 道尔顿、约50,000道尔顿或约60,000道尔顿。在一些实施方案中，PEG基团 是具有以下平均分子量的分支PEG基团：约5,000道尔顿、约10,000道尔顿、 约20,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿或约60,000道尔顿。
在一些实施方案中，构成本文公开的IL-2缀合物的PEG基团是 平均分子量为约5,000道尔顿至约60,000道尔顿的线性甲氧基PEG基团。在一 些实施方案中，PEG基团是具有以下平均分子量的线性甲氧基PEG基团：约 5,000道尔顿、约5,500道尔顿、约6,000道尔顿、约7,000道尔顿、约7,500道尔 顿、约8,000道尔顿、约9,000道尔顿、约10,000道尔顿、约11,000道尔顿、约 12,000道尔顿、约13,000道尔顿、约14,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000 道尔顿、约22,500道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔 顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约55,000道尔顿、 约60,000道尔顿、约65,000道尔顿、约70,000道尔顿、约75,000道尔顿、约80,000 道尔顿、约90,000道尔顿、约95,000道尔顿和约100,000道尔顿。在一些实施 方案中，PEG基团是具有以下平均分子量的线性甲氧基PEG基团：约5,000道 尔顿、约10,000道尔顿、约20,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿 或约60,000道尔顿。在一些实施方案中，PEG基团是具有以下平均分子量的 线性甲氧基PEG基团：约5,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿或 约60,000道尔顿。在一些实施方案中，PEG基团是具有以下平均分子量的线 性甲氧基PEG基团：约5,000道尔顿、约10,000道尔顿、约20,000道尔顿、约 30,000道尔顿、约50,000道尔顿或约60,000道尔顿。在一些实施方案中，PEG 基团是平均分子量为约5,000道尔顿的线性甲氧基PEG基团。在一些实施方案 中，PEG基团是平均分子量为约10,000道尔顿的线性甲氧基PEG基团。在一 些实施方案中，PEG基团是平均分子量为约20,000道尔顿的线性甲氧基PEG 基团。在一些实施方案中，PEG基团是平均分子量为约30,000道尔顿的线性 甲氧基PEG基团。在一些实施方案中，PEG基团是平均分子量为约50,000道 尔顿的线性甲氧基PEG基团。在一些实施方案中，PEG基团是平均分子量为 约60,000道尔顿的线性甲氧基PEG基团。在一些实施方案中，构成本文公开 的IL-2缀合物的PEG基团是具有限定的分子量±10％或15％或20％或25％的 线性甲氧基PEG基团。例如，本公开文本的范围内包括包含分子量为30,000 Da±3000Da、或30,000Da±4,500Da、或30,000Da±6,000Da的线性甲氧 基PEG基团的IL-2缀合物。
在一些实施方案中，构成本文公开的IL-2缀合物的PEG基团是 平均分子量为约5,000道尔顿至约60,000道尔顿的分支甲氧基PEG基团。在一 些实施方案中，PEG基团是具有以下平均分子量的分支甲氧基PEG基团：约 5,000道尔顿、约5,500道尔顿、约6,000道尔顿、约7,000道尔顿、约7,500道尔 顿、约8,000道尔顿、约9,000道尔顿、约10,000道尔顿、约11,000道尔顿、约 12,000道尔顿、约13,000道尔顿、约14,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000 道尔顿、约22,500道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔 顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约55,000道尔顿、 约60,000道尔顿、约65,000道尔顿、约70,000道尔顿、约75,000道尔顿、约80,000 道尔顿、约90,000道尔顿、约95,000道尔顿和约100,000道尔顿。在一些实施 方案中，PEG基团是具有以下平均分子量的分支甲氧基PEG基团：约5,000道 尔顿、约10,000道尔顿、约20,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿 或约60,000道尔顿。在一些实施方案中，PEG基团是具有以下平均分子量的 分支甲氧基PEG基团：约5,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿或 约60,000道尔顿。在一些实施方案中，PEG基团是具有以下平均分子量的分 支甲氧基PEG基团：约5,000道尔顿、约10,000道尔顿、约20,000道尔顿、约 30,000道尔顿、约50,000道尔顿或约60,000道尔顿。在一些实施方案中，PEG 基团是具有以下平均分子量的分支甲氧基PEG基团：约5,000道尔顿、约 10,000道尔顿、约20,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿或约60,000 道尔顿。在一些实施方案中，PEG基团是平均分子量为约5,000道尔顿的分支 甲氧基PEG基团。在一些实施方案中，PEG基团是平均分子量为约10,000道 尔顿的分支甲氧基PEG基团。在一些实施方案中，PEG基团是平均分子量为 约20,000道尔顿的分支甲氧基PEG基团。在一些实施方案中，PEG基团是平 均分子量为约30,000道尔顿的分支甲氧基PEG基团。在一些实施方案中，PEG 基团是平均分子量为约50,000道尔顿的分支甲氧基PEG基团。在一些实施方 案中，PEG基团是平均分子量为约60,000道尔顿的分支甲氧基PEG基团。在 一些实施方案中，构成本文公开的IL-2缀合物的PEG基团是具有限定的分子 量±10％或15％或20％或25％的分支甲氧基PEG基团。例如，本公开文本的 范围内包括包含分子量为30,000Da±3000Da、或30,000Da±4,500Da、或 30,000Da±6,000Da的分支甲氧基PEG基团的IL-2缀合物。
在一些实施方案中，示例性水溶性聚合物包括但不限于来自 Quanta Biodesign,Ltd的线性或分支的离散PEG(dPEG)；来自Nektar Therapeutics的线性、分支或叉状PEG；以及来自JenKem Technology的Y形 PEG衍生物。
在一些实施方案中，本文所述的细胞因子(例如，白介素、IFN 或TNF)多肽缀合至选自以下的水溶性聚合物：聚(亚烷基二醇)(如聚乙二 醇(“PEG”)、聚(丙二醇)(“PPG”)、乙二醇与丙二醇的共聚物等)、聚 (氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(羟烷基甲基丙烯酰 胺)、聚(羟烷基甲基丙烯酸酯)、聚(糖)、聚(α-羟酸)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚 丙烯酰胺(PAAm)、聚二甲基丙烯酰胺(PDAAm)、聚(N-(2-羟丙基)甲基丙 烯酰胺)(PHPMA)、聚磷腈、聚噁唑啉(“POZ”)、聚(N-丙烯酰基吗啉) 及其组合。在一些情况下，细胞因子多肽缀合至PEG(例如，聚乙二醇化)。 在一些情况下，细胞因子多肽缀合至PPG。在一些情况下，细胞因子多肽缀 合至POZ。在一些情况下，细胞因子多肽缀合至PVP。
在一些实施方案中，本文所述的IL-2多肽缀合至选自以下的水 溶性聚合物：聚(亚烷基二醇)(如聚乙二醇(“PEG”)、聚(丙二醇) (“PPG”)、乙二醇与丙二醇的共聚物等)、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、 聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)、聚(羟烷基甲基丙烯酸酯)、 聚(糖)、聚(α-羟酸)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚丙烯酰胺(PAAm)、聚二甲基 丙烯酰胺(PDAAm)、聚(N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺)(PHPMA)、聚磷腈、 聚噁唑啉(“POZ”)、聚(N-丙烯酰基吗啉)及其组合。在一些情况下，IL-2 多肽缀合至PEG(例如，聚乙二醇化)。在一些情况下，IL-2多肽缀合至PPG。 在一些情况下，IL-2多肽缀合至POZ。在一些情况下，IL-2多肽缀合至PVP。
在一些情况下，水溶性聚合物包括聚甘油(PG)。在一些情形 中，聚甘油是超分支PG(HPG)(例如，如Imran,等人“Influence of architecture of high molecular weightlinear and branched polyglycerols on their biocompatibility andbiodistribution,”Biomaterials 33:9135-9147(2012)中所 述)。在其他情形中，聚甘油是线性PG(LPG)。在另外的情形中，聚甘油是 多官能PG、线性-嵌段-超分支PG(例如，如Wurmet.Al.,“Squaric acid mediated synthesis and biological activity of a libraryof linear and hyperbranched poly(glycerol)-protein conjugates,”Biomacromolecules 13:1161-1171(2012)中所述)，或者侧链官能PG(例如，如Li,等人,“Synthesis of linear polyether polyol derivatives as new materials forbioconjugation,” Bioconjugate Chem.20:780-789(2009)中所述)。
在一些情况下，本文所述的细胞因子(例如，白介素、IFN或 TNF)多肽缀合至PG，例如，HPG、LPG、多官能PG、线性-嵌段-超分支PG 或侧链官能PG。在一些情况下，细胞因子是IL-2多肽。在一些情形中，IL-2 多肽缀合至PG、多官能PG、线性-嵌段-超分支PG。
在一些实施方案中，水溶性聚合物是可降解的合成PEG替代 物。示例性可降解的合成PEG替代物包括但不限于聚[低聚(乙二醇)甲基丙烯 酸甲酯](POEGMA)；通过基于遥爪或双末端官能化PEG的大分子单体的聚 合生成的骨架被修饰的PEG衍生物；包含含有可降解连接的共聚单体的PEG 衍生物，如聚[(环氧乙烷)-共-(亚甲基环氧乙烷)][P(EO-共-MEO)]；环烯酮缩 醛，如与OEGMA共聚的5,6-苯并-2-亚甲基-1,3-二氧杂环庚烷(BMDO)、2-亚甲基-1,3-二氧杂环庚烷(MDO)和2-亚甲基-4-苯基-1,3-二氧戊环(MPDL)； 或聚(ε-己内酯)-接枝-聚(环氧乙烷)(PCL-g-PEO)。
在一些情况下，本文所述的细胞因子(例如，白介素、IFN或 TNF)多肽缀合至可降解合成PEG替代物，如例如，POEGM；通过基于遥爪 或双末端官能化PEG的大分子单体的聚合生成的骨架被修饰的PEG衍生物； P(EO-共-MEO)；环烯酮缩醛，如与OEGMA共聚的BMDO、MDO和MPDL； 或者PCL-g-PEO。在一些情况下，细胞因子是IL-2多肽。在一些情形中，IL-2 多肽缀合至可降解合成PEG替代物，如例如，POEGM；通过基于遥爪或双 末端官能化PEG的大分子单体的聚合生成的骨架被修饰的PEG衍生物； P(EO-共-MEO)；环烯酮缩醛，如与OEGMA共聚的BMDO、MDO和MPDL； 或者PCL-g-PEO。
在一些实施方案中，水溶性聚合物包括聚(两性离子)。示例性 聚(两性离子)包括但不限于聚(甲基丙烯酸磺基甜菜碱)(PSBMA)、聚(甲基 丙烯酸羧基甜菜碱)(PCBMA)和聚(2-甲基丙烯酰氧乙基磷酰胆碱)(PMPC)。 在一些情况下，本文所述的细胞因子(例如，白介素、IFN或TNF)多肽缀 合至聚(两性离子)，如PSBMA、PCBMA或PMPC。在一些情形中，细胞因子是IL-2多肽。在一些情形中，IL-2多肽缀合至聚(两性离子)，如PSBMA、 PCBMA或PMPC。
在一些实施方案中，水溶性聚合物包括聚碳酸酯。示例性聚碳 酸酯包括但不限于五氟苯基5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环己烷-5-甲酸酯 (MTC-OC6F5)。在一些情况下，本文所述的细胞因子(例如，白介素、IFN 或TNF)多肽缀合至聚碳酸酯，如MTC-OC6F5。在一些情形中，细胞因子是 IL-2多肽。在一些情形中，IL-2多肽缀合至聚碳酸酯，如MTC-OC6F5。
在一些实施方案中，水溶性聚合物包括聚合物杂合物，如例如， 聚碳酸酯/PEG聚合物杂合物、肽/蛋白质-聚合物缀合物或者含有羟基的和/ 或两性离子衍生的聚合物(例如，含有羟基的和/或两性离子衍生的PEG聚合 物)。在一些情况下，本文所述的细胞因子(例如，白介素、IFN或TNF)多 肽缀合至聚合物杂合物，如聚碳酸酯/PEG聚合物杂合物、肽/蛋白质-聚合物 缀合物或者含有羟基的和/或两性离子衍生的聚合物(例如，含有羟基的和/ 或两性离子衍生的PEG聚合物)。在一些情形中，细胞因子是IL-2多肽。在一 些情形中，IL-2多肽缀合至聚合物杂合物，如聚碳酸酯/PEG聚合物杂合物、 肽/蛋白质-聚合物缀合物或者含有羟基的和/或两性离子衍生的聚合物(例 如，含有羟基的和/或两性离子衍生的PEG聚合物)。
在一些情况下，水溶性聚合物包括多糖。示例性多糖包括但不 限于葡聚糖、聚唾液酸(PSA)、透明质酸(HA)、直链淀粉、肝素、硫酸乙 酰肝素(HS)、糊精或羟乙基淀粉(HES)。在一些情形中，细胞因子(例如， 白介素、IFN或TNF)多肽缀合至多糖。在一些情形中，IL-2多肽缀合至葡聚 糖。在一些情形中，IL-2多肽缀合至PSA。在一些情形中，IL-2多肽缀合至HA。在一些情形中，IL-2多肽缀合至直链淀粉。在一些情形中，IL-2多肽缀 合至肝素。在一些情形中，IL-2多肽缀合至HS。在一些情形中，IL-2多肽缀 合至糊精。在一些情形中，IL-2多肽缀合至HES。
在一些情形中，水溶性聚合物包括聚糖。聚糖的示例性类别包 括N-连接聚糖、O-连接聚糖、糖脂、O-GlcNAc和糖胺聚糖。在一些情形中， 细胞因子(例如，白介素、IFN或TNF)多肽缀合至聚糖。在一些情形中， IL-2多肽缀合至N-连接聚糖。在一些情形中，IL-2多肽缀合至O-连接聚糖。 在一些情形中，IL-2多肽缀合至糖脂。在一些情形中，IL-2多肽缀合至O-GlcNAc。在一些情形中，IL-2多肽缀合至糖胺聚糖。
在一些实施方案中，水溶性聚合物包括聚噁唑啉聚合物。聚噁 唑啉聚合物是线性合成聚合物，并且与PEG相似，包含低多分散性。在一些 情况下，聚噁唑啉聚合物是多分散的聚噁唑啉聚合物，特征是平均分子量。 在一些情形中，聚噁唑啉聚合物的平均分子量包括例如1000、1500、2000、 2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、10,000、12,000、20,000、35,000、40,000、50,000、60,000、100,000、 200,000、300,000、400,000或500,000Da。在一些情况下，聚噁唑啉聚合物 包括聚(2-甲基2-噁唑啉)(PMOZ)、聚(2-乙基2-噁唑啉)(PEOZ)或聚(2- 丙基2-噁唑啉)(PPOZ)。在一些情形中，细胞因子(例如，白介素、IFN 或TNF)多肽缀合至聚噁唑啉聚合物。在一些情形中，IL-2多肽缀合至聚噁 唑啉聚合物。在一些情形中，IL-2多肽缀合至PMOZ。在一些情形中，IL-2 多肽缀合至PEOZ。在一些情形中，IL-2多肽缀合至PPOZ。
在一些情况下，水溶性聚合物包括聚丙烯酸聚合物。在一些情 形中，细胞因子(例如，白介素、IFN或TNF)多肽缀合至聚丙烯酸聚合物。 在一些情形中，IL-2多肽缀合至聚丙烯酸聚合物。
在一些情况下，水溶性聚合物包括多胺。多胺是包含两个或更 多个伯氨基的有机聚合物。在一些实施方案中，多胺包括分支多胺、线性多 胺或环状多胺。在一些情形中，多胺是低分子量线性多胺。示例性多胺包括 腐胺、尸胺、亚精胺、精胺、乙二胺、1,3-二氨基丙烷、六亚甲基二胺、四 乙基亚甲基二胺和哌嗪。在一些情形中，细胞因子(例如，白介素、IFN或 TNF)多肽缀合至多胺。在一些情形中，IL-2多肽缀合至多胺。在一些情形 中，IL-2多肽缀合至腐胺、尸胺、亚精胺、精胺、乙二胺、1,3-二氨基丙烷、 六亚甲基二胺、四乙基亚甲基二胺或哌嗪。
在一些情况下，水溶性聚合物描述于美国专利号7,744,861、 8,273,833和7,803,777中。在一些情况下，细胞因子(例如，白介素、IFN或 TNF)多肽缀合至美国专利号7,744,861、8,273,833或7,803,777中所述的接头。 在一些情形中，IL-2多肽缀合至美国专利号7,744,861、8,273,833或7,803,777 中所述的接头。
脂质
在一些实施方案中，本文所述的缀合部分是脂质。在一些情况 下，脂质是脂肪酸。在一些情形中，脂肪酸是饱和脂肪酸。在其他情形中， 脂肪酸是不饱和脂肪酸。示例性脂肪酸包括但不限于包含约6至约26个碳原 子、约6至约24个碳原子、约6至约22个碳原子、约6至约20个碳原子、约6至 约18个碳原子、约20至约26个碳原子、约12至约26个碳原子、约12至约24个 碳原子、约12至约22个碳原子、约12至约20个碳原子或约12至约18个碳原子 的脂肪酸。在一些情形中，脂质与一种或多种血清蛋白结合，从而增加血清 稳定性和/或血清半衰期。
在一些实施方案中，脂质缀合至IL-2。在一些情况下，脂质是 脂肪酸，例如，饱和脂肪酸或不饱和脂肪酸。在一些情形中，脂肪酸是约6 至约26个碳原子、约6至约24个碳原子、约6至约22个碳原子、约6至约20个 碳原子、约6至约18个碳原子、约20至约26个碳原子、约12至约26个碳原子、 约12至约24个碳原子、约12至约22个碳原子、约12至约20个碳原子或约12至 约18个碳原子。在一些情形中，脂肪酸的长度包含约6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26个碳原子。 在一些情形中，脂肪酸包括己酸(caproic acid)(己酸(hexanoic acid))、庚 酸(enanthic acid)(庚酸(heptanoicacid))、辛酸(caprylic acid)(辛酸(octanoic acid))、壬酸(pelargonic acid)(壬酸(nonanoic acid))、癸酸(capric acid) (癸酸(decanoic acid))、十一酸(十一烷酸)、月桂酸(十二烷酸)、十三 酸(十三烷酸)、肉豆蔻酸(十四烷酸)、十五酸(十五烷酸)、棕榈酸(十 六烷酸)、十七酸(十七烷酸)、硬脂酸(十八烷酸)、十九酸(十九烷酸)、 花生酸(二十烷酸)、二十一酸(二十一烷酸)、山萮酸(二十二烷酸)、二 十三酸(二十三烷酸)、木酚酸(二十四烷酸)、二十五酸(二十五烷酸)或 蜡酸(二十六烷酸)。
在一些实施方案中，IL-2脂质缀合物增加血清稳定性和/或血清 半衰期。
蛋白质
在一些实施方案中，本文所述的缀合部分是蛋白质或其结合片 段。示例性蛋白质包括白蛋白、转铁蛋白或甲状腺素转运蛋白。在一些情况 下，蛋白质或其结合片段包括抗体或其结合片段。在一些情形中，细胞因子 缀合物包含蛋白质或其结合片段。在一些情形中，包含蛋白质或其结合片段 的IL-2缀合物具有增加的血清半衰期和/或稳定性。在一些情形中，包含蛋白 质或其结合片段的IL-2缀合物具有降低的IL-2与一个或多个IL-2R亚基的相 互作用。在另外的情形中，蛋白质或其结合片段阻断IL-2与一个或多个IL-2R 亚基的相互作用。
在一些实施方案中，缀合部分是白蛋白。白蛋白是水溶性球状 蛋白家族。其通常在血浆中发现，占所有血浆蛋白的约55-60％。人血清白蛋 白(HSA)是一种585个氨基酸的多肽，其中三级结构分为三个结构域：结 构域I(氨基酸残基1-195)、结构域II(氨基酸残基196-383)和结构域III(氨 基酸残基384-585)。每个结构域进一步包含结合位点，所述结合位点可以与 内源配体(如长链和中链脂肪酸、胆红素或氯化血红素)或外源化合物(如 杂环或芳香族化合物)可逆或不可逆地相互作用。
在一些情形中，细胞因子(例如，白介素、IFN或TNF)多肽 缀合至白蛋白。在一些情形中，细胞因子多肽缀合至人血清白蛋白(HSA)。 在另外的情形中，细胞因子多肽缀合至白蛋白的功能片段。
在一些情况下，IL-2多肽缀合至白蛋白。在一些情形中，IL-2 多肽缀合至人血清白蛋白(HSA)。在另外的情况下，IL-2多肽缀合至白蛋白 的功能片段。
在一些实施方案中，缀合部分是转铁蛋白。转铁蛋白是一种679 个氨基酸的多肽，其大小为约80kDa，并且包含两个Fe3+结合位点，其中一 个在N末端结构域并且另一个在C末端结构域。在一些情况下，人转铁蛋白 的半衰期为约7-12天。
在一些情况下，细胞因子(例如，白介素、IFN或TNF)多肽 缀合至转铁蛋白。在一些情形中，细胞因子多肽缀合至人转铁蛋白。在另外 的情形中，细胞因子多肽缀合至转铁蛋白的功能片段。
在一些情况下，IL-2多肽缀合至转铁蛋白。在一些情形中，IL-2 多肽缀合至人转铁蛋白。在另外的情况下，IL-2多肽缀合至转铁蛋白的功能 片段。
在一些实施方案中，缀合部分是甲状腺素转运蛋白(TTR)。 甲状腺素转运蛋白是一种位于血清和脑脊液中的转运蛋白，其转运甲状腺激 素甲状腺素(T4)和与视黄醇结合的视黄醇结合蛋白。
在一些情况下，细胞因子(例如，白介素、IFN或TNF)多肽 缀合至甲状腺素转运蛋白(经由其一个末端或经由内部铰链区)。在一些情 形中，细胞因子多肽缀合至甲状腺素转运蛋白的功能片段。
在一些情况下，IL-2多肽缀合至甲状腺素转运蛋白(经由其一 个末端或经由内部铰链区)。在一些情形中，IL-2多肽缀合至甲状腺素转运蛋 白的功能片段。
在一些实施方案中，缀合部分是抗体或其结合片段。在一些情 况下，抗体或其结合片段包含人源化抗体或其结合片段、鼠抗体或其结合片 段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价Fab'、二价Fab2、 F(ab)'3片段、单链可变片段(scFv)、双scFv、(scFv)2、双抗体、微抗体、纳 米抗体、三抗体、四抗体、humabody、二硫键稳定的Fv蛋白(dsFv)、单结 构域抗体(sdAb)、Ig NAR、骆驼科动物抗体或其结合片段、双特异性抗体 或其结合片段或其化学修饰的衍生物。
在一些情况下，缀合部分包括scFv、双scFv、(scFv)2、dsFv或 sdAb。在一些情形中，缀合部分包括scFv。在一些情形中，缀合部分包括双 scFv。在一些情形中，缀合部分包括(scFv)2。在一些情形中，缀合部分包括 dsFv。在一些情形中，缀合部分包括sdAb。
在一些情况下，缀合部分包含抗体(例如，IgG、IgA、IgM、 IgE或IgD)的Fc部分。在一些情况下，所述部分包含IgG(例如，IgG1、IgG3或IgG4)的Fc部分。
在一些情形中，细胞因子(例如，白介素、IFN或TNF)多肽 缀合至抗体或其结合片段。在一些情形中，细胞因子多肽缀合至人源化抗体 或其结合片段、鼠抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体 或其结合片段、单价Fab'、二价Fab2、F(ab)'3片段、单链可变片段(scFv)、 双scFv、(scFv)2、双抗体、微抗体、纳米抗体、三抗体、四抗体、humabody、 二硫键稳定的Fv蛋白(dsFv)、单结构域抗体(sdAb)、Ig NAR、骆驼科动 物抗体或其结合片段、双特异性抗体或其结合片段或其化学修饰的衍生物。 在另外的情形中，细胞因子多肽缀合至抗体的Fc部分。在另外的情形中，细 胞因子多肽缀合至IgG(例如，IgG1、IgG3或IgG4)的Fc部分。
在一些情形中，IL-2多肽缀合至抗体或其结合片段。在一些情 形中，IL-2多肽缀合至人源化抗体或其结合片段、鼠抗体或其结合片段、嵌 合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价Fab'、二价Fab2、F(ab)'3片段、单链可变片段(scFv)、双scFv、(scFv)2、双抗体、微抗体、纳米抗体、 三抗体、四抗体、humabody、二硫键稳定的Fv蛋白(dsFv)、单结构域抗体 (sdAb)、Ig NAR、骆驼科动物抗体或其结合片段、双特异性抗体或其结合 片段或其化学修饰的衍生物。在另外的情形中，IL-2多肽缀合至抗体的Fc部 分。在另外的情形中，IL-2多肽缀合至IgG(例如，IgG1、IgG3或IgG4)的Fc 部分。
在一些实施方案中，IL-2多肽缀合至水溶性聚合物(例如，PEG) 和抗体或其结合片段。在一些情形中，抗体或其结合片段包括人源化抗体或 其结合片段、鼠抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或 其结合片段、单价Fab'、二价Fab2、F(ab)'3片段、单链可变片段(scFv)、双 scFv、(scFv)2、双抗体、微抗体、纳米抗体、三抗体、四抗体、humabody、 二硫键稳定的Fv蛋白(dsFv)、单结构域抗体(sdAb)、Ig NAR、骆驼科动 物抗体或其结合片段、双特异性抗体或其结合片段或其化学修饰的衍生物。 在一些情况下，抗体或其结合片段包括scFv、双scFv、(scFv)2、dsFv或sdAb。 在一些情况下，抗体或其结合片段包括scFv。在一些情况下，抗体或其结合 片段将IL-2缀合物指导至目的靶细胞，并且水溶性聚合物增强稳定性和/或血 清半衰期。
在一些情况下，一种或多种IL-2多肽-水溶性聚合物(例如， PEG)缀合物进一步与抗体或其结合片段结合。在一些情况下，IL-2缀合物 与抗体的比率为约1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、 10:1、11:1或12:1。在一些情形中，IL-2缀合物与抗体的比率为约1:1。在 其他情形中，IL-2缀合物与抗体的比率为约2:1、3:1或4:1。在另外的情形 中，IL-2缀合物与抗体的比率为约6:1或更高。
在一些实施方案中，一种或多种IL-2多肽-水溶性聚合物(例如， PEG)缀合物与抗体或其结合片段直接结合。在其他情况下，IL-2缀合物以 接头与抗体或其结合片段间接结合。示例性接头包括同双官能接头、异双官 能接头、基于马来酰亚胺的接头、零迹线接头、自杀式接头、间隔子等。
在一些实施方案中，抗体或其结合片段与IL-2多肽-水溶性聚合 物(例如，PEG)缀合物的IL-2多肽部分直接或间接结合。在此类情形中， 抗体与IL-2多肽的缀合位点位于不会阻碍IL-2多肽与IL-2Rβγ的结合的位点。 在另外的情形中，抗体与IL-2多肽的缀合位点位于部分阻断IL-2多肽与 IL-2Rβγ的结合的位点。在另外的情形中，抗体与IL-2多肽的缀合位点位于会 阻碍或进一步阻碍IL-2多肽与IL-2Rα的结合的位点。在其他实施方案中，抗体或其结合片段与IL-2多肽-水溶性聚合物(例如，PEG)缀合物的水溶性聚 合物部分直接或间接结合。
肽
在一些实施方案中，本文所述的缀合部分是肽。在一些情况下， 肽是非结构化肽。在一些情形中，细胞因子(例如，白介素、IFN或TNF) 多肽缀合至肽。在一些情形中，包含肽的IL-2缀合物具有增加的血清半衰期 和/或稳定性。在一些情形中，包含肽的IL-2缀合物具有降低的IL-2与一个或 多个IL-2R亚基的相互作用。在另外的情况下，肽阻断IL-2与一个或多个IL-2R 亚基的相互作用。
在一些情况下，缀合部分是XTENTM肽(Amunix Operating Inc.)，并且修饰被称为XTEN化。XTEN化是编码目的多肽的核酸与编码 XTENTM肽(Amunix Operating Inc.)的核酸的基因融合，所述XTENTM肽是 一种非结构化亲水性长肽，其包含不同百分比的六种氨基酸：Ala、Glu、Gly、 Ser和Thr。在一些情况下，XTENTM肽是基于以下特性来选择：如表达、遗 传稳定性、溶解度、抗聚集性、与目的多肽组合时增强的半衰期、增加的效 力和/或增加的体外活性。在一些情形中，细胞因子(例如，白介素、IFN或 TNF)多肽缀合至XTEN肽。在一些情形中，IL-2多肽缀合至XTEN肽。
在一些情况下，缀合部分是富含甘氨酸的高氨基酸聚合物 (HAP)，并且修饰被称为HAP化。HAP化是编码目的多肽的核酸与编码富 含甘氨酸的高氨基酸聚合物(HAP)的核酸的基因融合。在一些情况下，HAP 聚合物包含(Gly4Ser)n重复基序(SEQ ID NO:85)，并且长度有时为约50、100、 150、200、250、300或更多个残基。在一些情形中，细胞因子(例如，白介素、IFN或TNF)多肽缀合至HAP。在一些情形中，IL-2多肽缀合至HAP。
在一些实施方案中，缀合部分是PAS多肽，并且修饰被称为PAS 化。PAS化是编码目的多肽的核酸与编码PAS多肽的核酸的基因融合。PAS 多肽是由Pro、Ala和Ser残基组成的亲水性不带电多肽。在一些情况下，PAS 多肽的长度为至少约100、200、300、400、500或600个氨基酸。在一些情形 中，细胞因子(例如，白介素、IFN或TNF)多肽缀合至PAS多肽。在一些情 形中，IL-2多肽缀合至PAS多肽。
在一些实施方案中，缀合部分是弹性蛋白样多肽(ELP)，并且 修饰被称为ELP化。ELP化是编码目的多肽的核酸与编码弹性蛋白样多肽 (ELP)的核酸的基因融合。ELP包含VPGxG重复基序(SEQ ID NO:86)， 其中x是除了脯氨酸以外的任何氨基酸。在一些情形中，细胞因子(例如， 白介素、IFN或TNF)多肽缀合至ELP。在一些情形中，IL-2多肽缀合至ELP。
在一些实施方案中，缀合部分是CTP肽。CTP肽包含31个氨基 酸残基的肽FQSSSS*KAPPPS*LPSPS*RLPGPS*DTPILPQ(SEQ ID NO:87)， 其中S*表示O-糖基化位点(OPKO)。在一些情况下，CTP肽与细胞因子多肽 (例如，IL-2多肽)基因融合。在一些情形中，细胞因子多肽(例如，IL-2 多肽)缀合至CTP肽。
在一些实施方案中，细胞因子(例如，IL-2多肽)通过谷氨酰 化进行修饰。谷氨酰化(或聚谷氨酰化)是谷氨酸的可逆翻译后修饰，其中 谷氨酸的γ-羧基与游离谷氨酸的氨基形成肽样键，其中α-羧基延伸到聚谷氨 酸链中。
在一些实施方案中，细胞因子(例如，IL-2多肽)通过明胶样 蛋白(GLK)聚合物进行修饰。在一些情况下，GLK聚合物包含Gly-Xaa-Yaa 的多个重复，其中Xaa和Yaa分别主要包含脯氨酸和4-羟基脯氨酸。在一些情 形中，GLK聚合物还包含氨基酸残基Pro、Gly、Glu、Qln、Asn、Ser和Lys。 在一些情形中，GLK聚合物的长度为约20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、150个残基或更长。
另外的缀合部分
在一些情况下，缀合部分包含细胞外生物标记物。在一些情况 下，细胞外生物标记物是肿瘤抗原。在一些情况下，示例性细胞外生物标记 物包括CD19、PSMA、B7-H3、B7-H6、CD70、CEA、CSPG4、EGFRvIII、 EphA3、EpCAM、EGFR、ErbB2(HER2)、FAP、FRα、GD2、GD3、Lewis-Y、 间皮素、Muc1、Muc 16、ROR1、TAG72、VEGFR2、CD11、Gr-1、CD204、 CD16、CD49b、CD3、CD4、CD8和B220。在一些情况下，缀合部分与细胞 因子(例如，IL-2)键合或缀合。在一些情形中，缀合部分基因融合于例如 细胞因子(例如，IL-2)的N末端或C末端。
在一些情况下，缀合部分包含来自翻译后修饰的分子。在一些 情况下，翻译后修饰的例子包括豆蔻酰化、棕榈酰化、异戊烯化 (isoprenylation)(或异戊烯化(prenylation))(例如，法尼基化或香叶酰香 叶酰化)、糖基磷脂酰肌醇化、酰化(例如，O-酰化、N-酰化、S-酰化)、烷 基化(例如，烷基(如甲基或乙基)的添加)、酰胺化、糖基化、羟基化、 碘化、核苷酸添加、氧化、磷酸化、琥珀酰化、硫酸化、糖化、氨甲酰化、 谷氨酰化或脱酰胺。在一些情况下，细胞因子(例如，IL-2)是通过翻译后 修饰进行修饰，所述翻译后修饰例如豆蔻酰化、棕榈酰化、异戊烯化 (isoprenylation)(或异戊烯化(prenylation))(例如，法尼基化或香叶酰香 叶酰化)、糖基磷脂酰肌醇化、酰化(例如，O-酰化、N-酰化、S-酰化)、烷 基化(例如，烷基(如甲基或乙基)的添加)、酰胺化、糖基化、羟基化、 碘化、核苷酸添加、氧化、磷酸化、琥珀酰化、硫酸化、糖化、氨甲酰化、 谷氨酰化或脱酰胺。
缀合
接头
在一些实施方案中，用于将缀合部分缀合或结合至本文所述的 细胞因子多肽(例如，IL-2多肽)的有用的功能性反应基团包括例如零阶或 更高阶接头。在一些情况下，掺入本文所述白介素中的非天然氨基酸包含功 能性反应基团。在一些情况下，接头包含与掺入本文所述白介素中的非天然 氨基酸反应的功能性反应基团。在一些情况下，缀合部分包含与掺入本文所 述白介素中的非天然氨基酸反应的功能性反应基团。在一些情况下，缀合部分包含与本文所述接头(任选地预附接至细胞因子肽)反应的功能性反应基 团。在一些实施方案中，接头包含与本文所述的细胞因子肽中的天然氨基酸 反应的反应基团。在一些情况下，更高阶接头包含双官能接头，如同双官能 接头或异双官能接头。示例性同双官能接头包括但不限于Lomant试剂二硫代 双(琥珀酰亚胺基丙酸酯)DSP、3'3'-二硫代双(磺基琥珀酰亚胺基丙酸酯) (DTSSP)、二琥珀酰亚胺辛二酸酯(DSS)、双(磺基琥珀酰亚胺基)辛二酸 酯(BS)、酒石酸二琥珀酰亚胺酯(DST)、酒石酸二磺基琥珀酰亚胺酯(磺 基DST)、乙二醇双(琥珀酰亚胺基琥珀酸酯)(EGS)、戊二酸二琥珀酰亚胺 酯(DSG)、N,N'-二琥珀酰亚胺碳酸酯(DSC)、己二亚氨酸二甲酯(DMA)、 庚二亚氨酸二甲酯(DMP)、辛二亚氨酸二甲酯(DMS)、3,3'-二硫代双丙亚 氨酸二甲酯(DTBP)、1,4-二-3'-(2'-吡啶基二硫代)丙酰胺基)丁烷(DPDPB)、 双马来酰亚胺基己烷(BMH)、含有芳基卤化物的化合物(DFDNB)(如例 如，1,5-二氟-2,4-二硝基苯或1,3-二氟-4,6-二硝基苯、4,4'-二氟-3,3'-二硝基苯 砜(DFDNPS))、双-[β-(4-叠氮基水杨酰胺基)乙基]二硫化物(BASED)、甲 醛、戊二醛、1,4-丁二醇二缩水甘油醚、己二酸二酰肼、碳酰肼、邻甲苯胺、 3,3'-二甲基联苯胺、联苯胺、α,α'-对-二氨基二苯基、二碘-对-二甲苯磺酸、 N,N'-亚乙基-双(碘乙酰胺)或N,N'-六亚甲基-双(碘乙酰胺)。
在一些实施方案中，双官能接头包括异双官能接头。示例性异 双官能接头包括但不限于胺反应性和巯基交联剂，如N-琥珀酰亚胺基3-(2- 吡啶基二硫)丙酸酯(sPDP)、长链N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯 (LC-sPDP)、水溶性长链N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(磺基 -LC-sPDP)、琥珀酰亚胺基氧羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫)甲苯(sMPT)、 磺基琥珀酰亚胺基-6-[α-甲基-α-(2-吡啶基二硫)甲苯甲酰胺基]己酸酯(磺基-LC-sMPT)、琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-甲酸酯(sMCC)、 磺基琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-甲酸酯(磺基-sMCC)、 间马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBs)、间马来酰亚胺基苯 甲酰基-N-羟基磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-MBs)、N-琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰 基)氨基苯甲酸酯(sIAB)、磺基琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯(磺 基-sIAB)、琥珀酰亚胺基-4-(对-马来酰亚胺基苯基)丁酸酯(sMPB)、磺基琥 珀酰亚胺基-4-(对-马来酰亚胺基苯基)丁酸酯(磺基-sMPB)、N-(γ-马来酰亚 胺基丁酰氧基)琥珀酰亚胺酯(GMBs)、N-(γ-马来酰亚胺基丁酰氧基)磺基 琥珀酰亚胺酯(磺基-GMBs)、琥珀酰亚胺基6-((碘乙酰基)氨基)己酸酯 (sIAX)、琥珀酰亚胺基6-[6-(((碘乙酰基)氨基)己酰基)氨基]己酸酯 (sIAXX)、琥珀酰亚胺基4-(((碘乙酰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸酯(sIAC)、 琥珀酰亚胺基6-((((4-碘乙酰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)氨基)己酸酯 (sIACX)、对-硝基苯基碘乙酸酯(NPIA)；羰基反应性和巯基反应性交联剂，如4-(4-N-马来酰亚胺基苯基)丁酸酰肼(MPBH)、4-(N-马来酰亚胺基甲 基)环己烷-1-羧基-酰肼-8(M2C2H)、3-(2-吡啶基二硫)丙酰基酰肼(PDPH)； 胺反应性和光反应性交联剂，如N-羟基琥珀酰亚胺基-4-叠氮基水杨酸 (NHs-AsA)、N-羟基磺基琥珀酰亚胺基-4-叠氮基水杨酸(磺基-NHs-AsA)、 磺基琥珀酰亚胺基-(4-叠氮基水杨酰胺基)己酸酯(磺基-NHs-LC-AsA)、磺基 琥珀酰亚胺基-2-(对-叠氮基水杨酰胺基)乙基-1,3'-二硫丙酸酯(sAsD)、N- 羟基琥珀酰亚胺基-4-叠氮基苯甲酸酯(HsAB)、N-羟基磺基琥珀酰亚胺基-4- 叠氮基苯甲酸酯(磺基-HsAB)、N-琥珀酰亚胺基-6-(4'-叠氮基-2'-硝基苯基氨 基)己酸酯(sANPAH)、磺基琥珀酰亚胺基-6-(4'-叠氮基-2'-硝基苯基氨基)己 酸酯(磺基-sANPAH)、N-5-叠氮基-2-硝基苯甲酰氧基琥珀酰亚胺 (ANB-NOs)、磺基琥珀酰亚胺基-2-(间-叠氮基-邻-硝基苯甲酰胺基)-乙基 -1,3'-二硫丙酸酯(sAND)、N-琥珀酰亚胺基-4(4-叠氮基苯基)1,3'-二硫丙酸 酯(sADP)、N-磺基琥珀酰亚胺基(4-叠氮基苯基)-1,3'-二硫丙酸酯(磺基 -sADP)、磺基琥珀酰亚胺基4-(ρ-叠氮基苯基)丁酸酯(磺基-sAPB)、磺基琥 珀酰亚胺基2-(7-叠氮基-4-甲基香豆素-3-乙酰胺)乙基-1,3'-二硫丙酸酯 (sAED)、磺基琥珀酰亚胺基7-叠氮基-4-甲基香豆素-3-乙酸酯(磺基 -sAMCA)、ρ-硝基苯基重氮基丙酮酸酯(ρNPDP)、ρ-硝基苯基-2-重氮基-3,3,3- 三氟丙酸酯(PNP-DTP)；巯基反应性和光反应性交联剂，如1-(ρ-叠氮基水 杨酰胺基)-4-(碘乙酰胺基)丁烷(AsIB)、N-[4-(ρ-叠氮基水杨酰胺基)丁 基]-3'-(2'-吡啶基二硫)丙酰胺(APDP)、二苯甲酮-4-碘乙酰胺；二苯甲酮-4- 马来酰亚胺羰基反应性和光反应性交联剂，如ρ-叠氮基苯甲酰基酰肼 (ABH)；羧酸酯反应性和光反应性交联剂，如4-(ρ-叠氮基水杨酰胺基)丁胺 (AsBA)；以及精氨酸反应性和光反应性交联剂，如ρ-叠氮基苯基乙二醛 (APG)。
在一些情况下，反应性官能团包含对存在于结合部分上(例如， 缀合部分上或IL-2上)的亲电基团具有反应性的亲核基团。示例性亲电基团 包括羰基，如醛、酮、羧酸、酯、酰胺、烯酮、酰卤或酸酐。在一些实施方 案中，反应性官能团是醛。示例性亲核基团包括酰肼、肟、氨基、肼、缩氨 基硫脲、肼羧酸酯和芳基酰肼。在一些实施方案中，掺入本文所述白介素中 的非天然氨基酸包含亲电基团。
在一些实施方案中，接头是可切割接头。在一些实施方案中， 可切割接头是二肽接头。在一些实施方案中，二肽接头是缬氨酸-瓜氨酸 (Val-Cit)、苯丙氨酸-赖氨酸(Phe-Lys)、缬氨酸-丙氨酸(Val-Ala)和缬氨 酸-赖氨酸(Val-Lys)。在一些实施方案中，二肽接头是缬氨酸-瓜氨酸。
在一些实施方案中，接头是肽接头，其包含例如至少2、3、4、 5、6、7、8、9、10、11、12、15、20、25、30、35、40、45、50或更多个 氨基酸。在一些情况下，肽接头包含至多2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、15、20、25、30、35、40、45、50个或更少的氨基酸。在另外的情形中， 肽接头包含约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、15、20、25、30、35、40、45或50个氨基酸。
在一些实施方案中，接头包含自杀式接头部分。在一些实施方 案中，自杀式接头部分包含对-氨基苄醇(PAB)、对-氨基苄氧基羰基(PABC) 或者其衍生物或类似物。在一些实施方案中，接头包含二肽接头部分和自杀 式接头部分。在一些实施方案中，自杀式接头部分如美国专利号9089614和 WIPO申请号WO 2015038426中所述。
在一些实施方案中，可切割接头是葡糖苷酸。在一些实施方案 中，可切割接头是酸可切割接头。在一些实施方案中，酸可切割接头是肼。 在一些实施方案中，可切割接头是可还原接头。
在一些实施方案中，接头包含马来酰亚胺基团。在一些情况下， 马来酰亚胺基团也称为马来酰亚胺间隔子。在一些情况下，马来酰亚胺基团 还包含己酸，从而形成马来酰亚胺基己酰基(mc)。在一些情形中，接头包 含马来酰亚胺基己酰基(mc)。在一些情形中，接头是马来酰亚胺基己酰基 (mc)。在其他情况下，马来酰亚胺基团包括马来酰亚胺基甲基，如上述琥 珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(sMCC)或磺基琥珀 酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(磺基-sMCC)。
在一些实施方案中，马来酰亚胺基团是自稳定马来酰亚胺。在 一些情况下，自稳定马来酰亚胺利用二氨基丙酸(DPR)将碱性氨基掺入与 马来酰亚胺相邻处，以提供硫代琥珀酰亚胺环水解的分子内催化，从而使马 来酰亚胺不经历通过反Michael反应进行的消除反应。在一些情况下，自稳定 马来酰亚胺是以下文献中所述的马来酰亚胺基团：Lyon等人，“Self-hydrolyzing maleimides improve the stability and pharmacologicalproperties of antibody-drug conjugates,”Nat.Biotechnol.32(10):1059--1062(2014)。在一些情况下，接头包含自稳定马来酰亚胺。在一些情况下，接头 是自稳定马来酰亚胺。
缀合化学
使用各种缀合反应来缀合接头、缀合部分和掺入本文所述的细 胞因子肽中的非天然氨基酸。此类缀合反应通常与水性条件相容，如“生物 正交”反应。在一些实施方案中，缀合反应由化学试剂(如催化剂)、光或 者在接头、缀合部分或非天然氨基酸上发现的反应性化学基团来介导。在一 些实施方案中，缀合反应由酶介导。在一些实施方案中，本文所用的缀合反 应描述于Gong,Y.,Pan,L.Tett.Lett.2015,56,2123中。在一些实施方案中，本文所用的缀合反应描述于Chen,X.；Wu.Y-W.Org.Biomol.Chem.2016,14, 5417中。
在本文所述的一些实施方案中，缀合反应包括酮或醛与亲核体 的反应。在一些实施方案中，缀合反应包括酮与氨氧基的反应以形成肟。在 一些实施方案中，缀合反应包括酮与芳基胺或杂芳基胺基团的反应以形成亚 胺。在一些实施方案中，缀合反应包括醛与芳基胺或杂芳基胺基团的反应以 形成亚胺。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应产生包含经由肟附接的 接头或缀合部分的细胞因子肽。在一些实施方案中，缀合反应包括醛或酮与 色胺亲核体的Pictet-Spengler反应。在一些实施方案中，缀合反应包括肼基 -Pictet-Spengler反应。在一些实施方案中，缀合反应包括Pictet-Spengler连接。
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括叠氮 化物和膦的反应(施陶丁格连接)。在一些实施方案中，膦是芳基膦。在一 些实施方案中，芳基膦包含原酸酯基团。在一些实施方案中，膦包含结构2-(二 苯基磷烷基)苯甲酸甲酯。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应产生包 含经由芳基酰胺附接的接头或缀合部分的细胞因子肽。在一些实施方案中， 本文所述的缀合反应产生包含经由酰胺附接的接头或缀合部分的细胞因子 肽。
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括1,3- 偶极环加成反应。在一些实施方案中，1,3-偶极环加成反应包括叠氮化物与 膦的反应(“点击”反应)。在一些实施方案中，缀合反应由铜催化。在一 些实施方案中，本文所述的缀合反应产生包含经由三唑附接的接头或缀合部 分的细胞因子肽。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括叠氮化物与 应变烯烃的反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括叠氮化物与应变炔烃的反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括叠氮化物与 环炔(例如OCT、DIFO、DIFBO、DIBO、BARAC、TMTH或其他应变环炔) 的反应，其结构示于Gong,Y.,Pan,L.Tett.Lett.2015,56,2123中。在一些实施 方案中，1,3-偶极环加成反应由光催化(“光点击”)。在一些实施方案中， 本文所述的缀合反应包括末端烯丙基与四唑和光的反应。在一些实施方案 中，本文所述的缀合反应包括末端炔基与四唑和光的反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括O-烯丙基氨基酸与四嗪和光的反应。在一些实 施方案中，本文所述的缀合反应包括O-烯丙基酪氨酸与四嗪和光的反应。
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括：
Figure BDA0003528433030001771
，其中X是包含非天然氨基酸的IL-2缀合物中的位置，如在SEQ ID NO:5、6、 7、8、9、30、31、32、33和34中的任一项中。在一些实施方案中，缀合部 分包括水溶性聚合物。在一些实施方案中，反应基团包括炔烃或叠氮化物。 在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括：
Figure BDA0003528433030001772
，其中X是包含非天然氨基酸的IL-2缀合物中的位置，如在SEQ ID NO:5、6、 7、8、9、30、31、32、33和34中的任一项中。在本文所述的一些实施方案 中，本文所述的缀合反应包括：
Figure BDA0003528433030001773
，其中X是包含非天然氨基酸的IL-2缀合物中的位置，如在SEQ ID NO:5、6、 7、8、9、30、31、32、33和34中的任一项中。在本文所述的一些实施方案 中，本文所述的缀合反应包括：
Figure BDA0003528433030001774
其中X是包含非天然氨 基酸的IL-2缀合物中的位置，如在SEQ ID NO:5、6、7、8、9、30、31、32、 33和34中的任一项中。在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应 包括：
Figure BDA0003528433030001781
，其中X是包含非天然氨基酸的IL-2缀合物中的位置，如在SEQ ID NO:5、6、 7、8、9、30、31、32、33和34中的任一项中。在一些实施方案中，本文所 述的缀合反应产生表20的IL-2变体。
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括叠氮 化物部分(如含于含有衍生自N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸(AzK) 的氨基酸残基的蛋白质中的叠氮化物部分)与应变环炔(如衍生自DBCO的 应变环炔，所述DBCO是包含二苯并环辛炔基团的化学部分)之间的环加成 反应。包含DBCO部分的PEG基团可市售获得或者可以通过本领域普通技术 人员已知的方法来制备。
Figure BDA0003528433030001791
Figure BDA0003528433030001801
本文所述的缀合反应(如点击反应)可以生成单一位置异构体 或位置异构体的混合物。在一些情况下，位置异构体的比率为约1:1。在一 些情况下，位置异构体的比率为约2:1。在一些情况下，位置异构体的比率 为约1.5:1。在一些情况下，位置异构体的比率为约1.2:1。在一些情况下， 位置异构体的比率为约1.1:1。在一些情况下，位置异构体的比率大于1:1。
本文描述具有式(I)的结构的IL-2缀合物：
Figure BDA0003528433030001811
其中：
Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030001812
或者
Y是CH2并且Z是
Figure BDA0003528433030001813
W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、 35kDa、40kDa、45kDa和50kDa的PEG基团；并且
X是重组人IL-2的氨基酸位置，其中所述氨基酸位置是参考SEQ ID NO: 1中的位置；或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在式(I)的IL-2 缀合物的一些实施方案中，Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030001814
在 式(I)的IL-2缀合物的一些实施方案中，Y是CH2并且Z是
Figure BDA0003528433030001815
在式(I)的IL-2缀合物的一些实施方案中，PEG 基团的平均分子量选自5kDa、10kDa和30kDa。在式(I)的IL-2缀合物的一 些实施方案中，PEG基团的平均分子量为5kDa。在式(I)的IL-2缀合物的一 些实施方案中，PEG基团的平均分子量为10kDa。在式(I)的IL-2缀合物的 一些实施方案中，PEG基团的平均分子量为20kDa。在式(I)的IL-2缀合物 的一些实施方案中，PEG基团的平均分子量为30kDa。在式(I)的IL-2缀合 物的一些实施方案中，PEG基团的平均分子量为40kDa。在式(I)的IL-2缀合物的一些实施方案中，PEG基团的平均分子量为50kDa。在式(I)的IL-2 缀合物的一些实施方案中，X是K35。在式(I)的IL-2缀合物的一些实施方案 中，X是F42。在式(I)的IL-2缀合物的一些实施方案中，X是K43。在式(I) 的IL-2缀合物的一些实施方案中，X是E62。在式(I)的IL-2缀合物的一些实 施方案中，X是P65。在式(I)的IL-2缀合物的一些实施方案中，X是R38。 在式(I)的IL-2缀合物的一些实施方案中，X是T41。在式(I)的IL-2缀合物 的一些实施方案中，X是E68。在式(I)的IL-2缀合物的一些实施方案中，X 是Y45。在式(I)的IL-2缀合物的一些实施方案中，X是V69。在式(I)的IL-2 缀合物的一些实施方案中，X选自K35、F42、K43、E62、P65、R38、T41、 E68、Y45和V69。在式(I)的IL-2缀合物的一些实施方案中，X选自F42、 K43、E62和P65。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO: 5-84中任一项的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO.:15-29。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO.: 40-54。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO.:55-69。在 一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO.:70-84。在一些实施 方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:3的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:4的序列。在一些实施方案中，式(I)的 IL-2缀合物包含SEQ ID NO:5的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀 合物包含SEQ ID NO:6的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包 含SEQ ID NO:7的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:8的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:9 的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:10的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:11的序列。在一些 实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:12的序列。在一些实施方 案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:13的序列。在一些实施方案中， 式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:14的序列。在一些实施方案中，式(I) 的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:15的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2 缀合物包含SEQ ID NO:16的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物 包含SEQ ID NO:17的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含 SEQ ID NO:18的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:19的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:20 的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:21的序列。 在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:22的序列。在一些 实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:23的序列。在一些实施方 案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:24的序列。在一些实施方案中， 式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:25的序列。在一些实施方案中，式(I) 的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:26的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2 缀合物包含SEQ ID NO:27的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物 包含SEQ ID NO:28的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含 SEQ ID NO:29的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:30的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:31 的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:32的序列。 在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:33的序列。在一些 实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ IDNO:34的序列。在一些实施方 案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:35的序列。在一些实施方案中， 式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:36的序列。在一些实施方案中，式(I) 的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:37的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2 缀合物包含SEQID NO:38的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物 包含SEQ ID NO:39的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含 SEQ ID NO:40的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:41的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQID NO:42 的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:43的序列。 在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:44的序列。在一些 实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:45的序列。在一些实施方 案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:46的序列。在一些实施方案中， 式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:47的序列。在一些实施方案中，式(I) 的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:48的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2 缀合物包含SEQ ID NO:49的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物 包含SEQ ID NO:50的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含 SEQ ID NO:51的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:52的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:53 的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:54的序列。 在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:55的序列。在一些 实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:56的序列。在一些实施方 案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:57的序列。在一些实施方案中， 式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:58的序列。在一些实施方案中，式(I) 的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:59的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2 缀合物包含SEQ ID NO:60的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物 包含SEQ ID NO:61的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:62的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:63的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:64 的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:65的序列。 在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:66的序列。在一些 实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:67的序列。在一些实施方 案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:68的序列。在一些实施方案中， 式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:69的序列。在一些实施方案中，式(I) 的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:70的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2 缀合物包含SEQ IDNO:71的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物 包含SEQ ID NO:72的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含 SEQ ID NO:73的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:74的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ IDNO:75 的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:76的序列。 在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:77的序列。在一些 实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:78的序列。在一些实施方 案中，式(I)的IL-2缀合物包含SEQID NO:79的序列。在一些实施方案中， 式(I)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:80的序列。在一些实施方案中，式(I) 的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:81的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2 缀合物包含SEQ ID NO:82的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物 包含SEQ ID NO:83的序列。在一些实施方案中，式(I)的IL-2缀合物包含 SEQ ID NO:84的序列。
本文描述具有式(II)的结构的IL-2缀合物：
Figure BDA0003528433030001841
其中W是平均分子量选自5kDa、10kDa和30kDa的PEG基团；并且
X是重组人IL-2中选自F42、K43、E62和P65的具有以下结构的氨基酸位 置：
Figure BDA0003528433030001851
其中所述氨基酸位置对应于SEQ ID NO:1中的位置。
本文描述具有式(III)的结构的IL-2缀合物：
Figure BDA0003528433030001852
其中W是平均分子量选自5kDa、10kDa和30kDa的PEG基团；并且
X是重组人IL-2中选自F42、K43、E62和P65的具有以下结构的氨基酸位 置：
Figure BDA0003528433030001853
其中所述氨基酸对应于SEQ ID NO:1中的位置。
在式(II)或式(III)的IL-2缀合物的一些实施方案中，X是重 组人IL-2的F42位置。在式(II)或式(III)的IL-2缀合物的一些实施方案中，
PEG基团的平均分子量为5kDa并且X是重组人IL-2的F42位置。在式(II) 或式(III)的IL-2缀合物的一些实施方案中，X是重组人IL-2的K43位置。在 式(II)或式(III)的IL-2缀合物的一些实施方案中，PEG基团的平均分子量 为5kDa并且X是重组人IL-2的K43位置。在式(II)或式(III)的IL-2缀合物 的一些实施方案中，X是重组人IL-2的E62位置。在式(II)或式(III)的IL-2 缀合物的一些实施方案中，PEG基团的平均分子量为5kDa并且X是重组人 IL-2的E62位置。在式(II)或式(III)的IL-2缀合物的一些实施方案中，X是 重组人IL-2的P65位置。在式(II)或式(III)的IL-2缀合物的一些实施方案 中，PEG基团的平均分子量为5kDa并且X是重组人IL-2的P65位置。在式(II) 或式(III)的IL-2缀合物的一些实施方案中，X是重组人IL-2的F42位置并且 W是平均分子量为10kDa的PEG基团。在式(II)或式(III)的IL-2缀合物的 一些实施方案中，X是重组人IL-2的K43位置并且W是平均分子量为10kDa 的PEG基团。在式(II)或式(III)的IL-2缀合物的一些实施方案中，X是重 组人IL-2的E62位置并且W是平均分子量为10kDa的PEG基团。在式(II)或 式(III)的IL-2缀合物的一些实施方案中，重组人IL-2的P65位置并且W是平 均分子量为10kDa的PEG基团。在式(II)或式(III)的IL-2缀合物的一些实 施方案中，重组人IL-2的F42位置并且W是平均分子量为30kDa的PEG基团。 在式(II)或式(III)的IL-2缀合物的一些实施方案中，重组人IL-2的K43位置 并且W是平均分子量为30kDa的PEG基团。在式(II)或式(III)的IL-2缀合 物的一些实施方案中，重组人IL-2的E62位置并且W是平均分子量为30kDa 的PEG基团。在式(II)或式(III)的IL-2缀合物的一些实施方案中，重组人 IL-2的P65位置并且W是平均分子量为30kDa的PEG基团。在一些实施方案 中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ NO:3-29和70-84中任一项的序 列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ IDNO:3 的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO: 4的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:5的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:6的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含 SEQ ID NO:7的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物 包含SEQ ID NO:8的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀 合物包含SEQ ID NO:9的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2 缀合物包含SEQ ID NO:10的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的 IL-2缀合物包含SEQ IDNO:11的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III) 的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:12的序列。在一些实施方案中，式(II)或式 (III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:13的序列。在一些实施方案中，式(II)或 式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:14的序列。在一些实施方案中，式(II) 或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:15的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:16的序列。在一些实施方案中， 式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:17的序列。在一些实施方案 中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:18的序列。在一些实施 方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:19的序列。在一些 实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQID NO:20的序列。在 一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:21的序 列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:22 的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO: 23的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:24的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:25的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含 SEQ ID NO:26的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物 包含SEQ ID NO:27的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2 缀合物包含SEQ ID NO:28的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的 IL-2缀合物包含SEQID NO:29的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III) 的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:70的序列。在一些实施方案中，式(II)或式 (III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:71的序列。在一些实施方案中，式(II)或 式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:72的序列。在一些实施方案中，式(II) 或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:73的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:74的序列。在一些实施方案中， 式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:75的序列。在一些实施方案 中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:76的序列。在一些实施 方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:77的序列。在一些 实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQID NO:78的序列。在 一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:79的序 列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:80 的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO: 81的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:82的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:83的序列。在一些实施方案中，式(II)或式(III)的IL-2缀合物包含 SEQ ID NO:84的序列。
本文描述式(I)、式(II)或式(III)的药物组合物。在一些实 施方案中，式(I)、式(II)或式(III)的药物组合物包含含有SEQ ID NO:3-29 和70-84中任一项的序列。在一些实施方案中，式(I)、式(II)或式(III)的 药物组合物包含含有SEQ ID NO:3的序列。在一些实施方案中，式(I)、式(II) 或式(III)的药物组合物包含含有SEQ ID NO:4的序列。
本文描述具有式(IV)的结构的IL-2缀合物：
Figure BDA0003528433030001881
其中W是平均分子量选自5kDa、10kDa和30kDa的PEG基团；并且
X是重组人IL-2中选自F42、K43、E62和P65的具有以下结构的氨基酸位 置：
Figure BDA0003528433030001882
其中所述氨基酸位置对应于SEQ ID NO:1中的位置。
本文描述具有式(V)的结构的IL-2缀合物：
Figure BDA0003528433030001883
其中W是平均分子量选自5kDa、10kDa和30kDa的PEG基团；并且
X是重组人IL-2中选自F42、K43、E62和P65的具有以下结构的氨基酸位 置：
Figure BDA0003528433030001884
其中所述氨基酸对应于SEQ ID NO:1中的位置。
在式(IV)或式(V)的IL-2缀合物的一些实施方案中，X是重 组人IL-2的F42位置。在式(IV)或式(V)的IL-2缀合物的一些实施方案中，
PEG基团的平均分子量为5kDa并且X是重组人IL-2的F42位置。在式(IV) 或式(V)的IL-2缀合物的一些实施方案中，X是重组人IL-2的K43位置。在 式(IV)或式(V)的IL-2缀合物的一些实施方案中，PEG基团的平均分子量 为5kDa并且X是重组人IL-2的K43位置。在式(IV)或式(V)的IL-2缀合物 的一些实施方案中，X是重组人IL-2的E62位置。在式(IV)或式(V)的IL-2 缀合物的一些实施方案中，PEG基团的平均分子量为5kDa并且X是重组人IL-2的E62位置。在式(IV)或式(V)的IL-2缀合物的一些实施方案中，X是 重组人IL-2的P65位置。在式(IV)或式(V)的IL-2缀合物的一些实施方案 中，PEG基团的平均分子量为5kDa并且X是重组人IL-2的P65位置。在式(IV) 或式(V)的IL-2缀合物的一些实施方案中，X是重组人IL-2的F42位置并且W 是平均分子量为10kDa的PEG基团。在式(IV)或式(V)的IL-2缀合物的一 些实施方案中，X是重组人IL-2的K43位置并且W是平均分子量为10kDa的 PEG基团。在式(IV)或式(V)的IL-2缀合物的一些实施方案中，X是重组 人IL-2的E62位置并且W是平均分子量为10kDa的PEG基团。在式(IV)或式 (V)的IL-2缀合物的一些实施方案中，重组人IL-2的P65位置并且W是平均分 子量为10kDa的PEG基团。在式(IV)或式(V)的IL-2缀合物的一些实施方 案中，重组人IL-2的F42位置并且W是平均分子量为30kDa的PEG基团。在式 (IV)或式(V)的IL-2缀合物的一些实施方案中，重组人IL-2的K43位置并且 W是平均分子量为30kDa的PEG基团。在式(IV)或式(V)的IL-2缀合物的 一些实施方案中，重组人IL-2的E62位置并且W是平均分子量为30kDa的PEG 基团。在式(IV)或式(V)的IL-2缀合物的一些实施方案中，重组人IL-2的 P65位置并且W是平均分子量为30kDa的PEG基团。在一些实施方案中，式 (IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ NO:3、4、40-69中任一项的序列。在 一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:3的序 列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:4 的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO: 40的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:41的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:42的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含 SEQ ID NO:43的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合 物包含SEQ ID NO:44的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2 缀合物包含SEQ ID NO:45的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的 IL-2缀合物包含SEQ ID NO:46的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V) 的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:47的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式 (V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:48的序列。在一些实施方案中，式(IV) 或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:49的序列。在一些实施方案中，式 (IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:50的序列。在一些实施方案 中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:51的序列。在一些实 施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:52的序列。在 一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:53的序 列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:54 的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO: 55的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ IDNO:56的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:57的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含 SEQ ID NO:58的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合 物包含SEQ ID NO:59的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2 缀合物包含SEQ ID NO:60的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的 IL-2缀合物包含SEQ ID NO:61的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V) 的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:62的序列。在一些实施方案中，式(IV)或式 (V)的IL-2缀合物包含SEQID NO:63的序列。在一些实施方案中，式(IV) 或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:64的序列。在一些实施方案中，式 (IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:65的序列。在一些实施方案 中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:66的序列。在一些实 施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:67的序列。在 一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:68的序 列。在一些实施方案中，式(IV)或式(V)的IL-2缀合物包含SEQ ID NO:69 的序列。
本文描述式(I)、式(IV)或式(V)的药物组合物。在一些实 施方案中，式(I)、式(IV)或式(V)的药物组合物包含含有SEQ ID NO:3、 4和40-69中任一项的序列。在一些实施方案中，式(I)、式(IV)或式(V)的 药物组合物包含含有SEQ ID NO:3的序列。
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括包含 二烯和亲二烯体的逆电子需求环加成反应。在一些实施方案中，二烯包括四 嗪。在一些实施方案中，亲二烯体包括烯烃。在一些实施方案中，亲二烯体 包括炔烃。在一些实施方案中，炔烃是应变炔烃。在一些实施方案中，烯烃 是应变二烯。在一些实施方案中，炔烃是反式环辛炔。在一些实施方案中， 炔烃是环辛烯。在一些实施方案中，烯烃是环丙烯。在一些实施方案中，烯 烃是氟环丙烯。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应导致形成经由环中 包含两个单原子的6元环杂环附接至接头或缀合部分的细胞因子肽。
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括烯烃 复分解反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括烯烃和炔烃与钌 催化剂的反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括两种烯烃与钌 催化剂的反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括两种炔烃与钌 催化剂的反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括烯烃或炔烃与 钌催化剂和包含烯丙基的氨基酸的反应。在一些实施方案中，本文所述的缀 合反应包括烯烃或炔烃与钌催化剂和包含烯丙基硫醚或硒醚的氨基酸的反 应。在一些实施方案中，钌催化剂是Hoveda-Grubbs第二代催化剂。在一些 实施方案中，烯烃复分解反应包括一种或多种应变烯烃或炔烃的反应。
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括交叉 偶联反应。在一些实施方案中，交叉偶联反应包含过渡金属催化剂，如铱、 金、钌、铑、钯、镍、铂或其他过渡金属催化剂和一种或多种配体。在一些 实施方案中，过渡金属催化剂是水溶性的。在本文所述的一些实施方案中， 本文所述的缀合反应包括Suzuki-Miyaura交叉偶联反应。在本文所述的一些 实施方案中，本文所述的缀合反应包括芳基卤化物(或三氟甲磺酸酯或甲苯 磺酸酯)、芳基硼酸或烯基硼酸和钯催化剂的反应。在本文所述的一些实施 方案中，本文所述的缀合反应包括Sonogashira交叉偶联反应。在本文所述的 一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括芳基卤化物(或三氟甲磺酸酯或 甲苯磺酸酯)、炔烃和钯催化剂的反应。在一些实施方案中，交叉偶联反应 导致接头或缀合部分经由碳-碳键附接至细胞因子肽。
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括在缀 合之前反应基团的脱保护或“解笼”反应。在一些实施方案中，本文所述的 缀合反应包括用光使反应基团解笼，随后进行缀合反应。在一些实施方案中， 反应基团被包含一个或多个硝基的芳烷基部分保护。在一些实施方案中，反 应基团的解笼产生游离胺、硫化物或其他反应基团。在一些实施方案中，本 文所述的缀合反应包括用过渡金属催化剂使反应基团解笼，随后进行缀合反 应。在一些实施方案中，过渡金属催化剂包含钯和一种或多种配体。在一些 实施方案中，反应基团被烯丙基部分保护。在一些实施方案中，反应基团被 烯丙基氨基甲酸酯保护。在一些实施方案中，反应基团被炔丙基部分保护。 在一些实施方案中，反应基团被氨基甲酸炔丙酯保护。在一些实施方案中， 反应基团被亲二烯体保护，其中暴露于二烯(如四嗪)导致反应基团的脱保 护。
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括配体 引导的反应，其中配体(任选地附接至反应基团)促进反应基团与细胞因子 肽之间的缀合位点。在一些实施方案中，在细胞因子肽与反应基团反应期间 或之后切割配体。在一些实施方案中，细胞因子肽的缀合位点是天然氨基酸。 在一些实施方案中，细胞因子肽的缀合位点是赖氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。 在一些实施方案中，细胞因子肽的缀合位点是本文所述的非天然氨基酸。在 一些实施方案中，反应基团包括离去基团，如贫电子的芳基或杂芳基。在一 些实施方案中，反应基团包含离去基团，如通过细胞因子肽置换的贫电子烷 基。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括自由基捕获剂与自由基物 质的反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括氧化自由基加成反 应。在一些实施方案中，自由基捕获剂是芳基胺。在一些实施方案中，自由 基物质是酪氨酰自由基。在一些实施方案中，自由基物质由钌催化剂(如 [Ru(bpy)3])和光生成。
酶促反应任选地用于本文所述的缀合反应。示例性酶促缀合包 括SortA介导的缀合、TGs介导的缀合或FGE介导的缀合。在一些实施方案中， 本文所述的缀合反应包括末端1-氨基-2-硫基与硫酯的天然蛋白质连接 (NPL)，以形成酰胺键。
本文中描述多种缀合反应用于使接头或缀合部分与细胞因子 肽反应，其中所述反应是用细胞因子肽中的天然(“规范”)氨基酸来进行。 在一些实施方案中，天然氨基酸在野生型序列中发现的缀合位置处被发现， 或者可替代地，所述位置已发生突变。在一些实施方案中，缀合反应包括在 半胱氨酸残基处形成二硫键。在一些实施方案中，缀合反应包括半胱氨酸或 赖氨酸的1,4Michael加成反应。在一些实施方案中，缀合反应包括半胱氨酸的氰基苯并噻唑连接。在一些实施方案中，缀合反应包括与丙酮部分(如1,3- 二氯-2-丙酮)的交联。在一些实施方案中，缀合反应包括1,4Michael加成至 通过半胱氨酸与O-均三甲苯磺酰基羟胺反应形成的脱氢丙氨酸。在一些实施 方案中，缀合反应包括酪氨酸与三唑啉二酮(TAD)或TAD衍生物的反应。 在一些实施方案中，缀合反应包括色氨酸与类卡宾铑的反应。
使用方法
增殖性疾病或病症
在一些实施方案中，本文描述一种治疗有需要的受试者的增殖 性疾病或病症的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的细胞因 子缀合物(例如，IL-2缀合物)。在一些情况下，细胞因子缀合物包含SEQ ID NO:5-84。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO.:15-29。在一些 实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO.:40-54。在一些实施方案中，IL-2 缀合物包含SEQ ID NO.:55-69。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQID NO.:70-84。在一些情况下，IL-2缀合物包含分离并纯化的IL-2多肽和缀合部 分，其中相对于野生型IL-2多肽，IL-2缀合物具有对IL-2受体α(IL-2Rα)亚 基降低的亲和力。在一些情况下，IL-2缀合物包含分离并纯化的IL-2多肽； 以及在选自以下的氨基酸位置与所述分离并纯化的IL-2多肽结合的缀合部 分：K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E60、E61、E62、K64、 P65、E68、V69、N71、L72、M104、C105和Y107，其中氨基酸残基的编号 对应于SEQID NO:1。在一些情形中，IL-2缀合物优先与IL-2Rβ和IL-2Rβγ 亚基相互作用以形成IL-2/IL-2Rβγ复合物。在一些情形中，IL-2/IL-2Rβγ复合 物刺激和/或增强CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆T细胞、NK细胞和/ 或NKT细胞的扩增。在另外的情况下，Teff细胞的扩增使Teff:Treg比率偏向 Teff群体。在一些实施方案中，包含残基F42处(其中所述残基对应于SEQ ID NO:1的位置42)的突变的IL-2缀合物包含缀合部分，所述缀合部分包含分子 量为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000 Da。在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中， 所述分子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实 施方案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。 在一些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2 多肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰 期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方 案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合 物的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子 量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传 导复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野 生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是 与野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，本文描述一种治疗有需要的受试者的增殖 性疾病或病症的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的表20所述的细胞因 子缀合物(例如，IL-2缀合物)。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO.:1-84。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO.:15-29。在一些 实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO.:40-54。在一些实施方案中，IL-2 缀合物包含SEQ ID NO.:55-69。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO.:70-84。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含式(I)的结构。在一些实 施方案中，IL-2缀合物包含式(II)的结构。在一些实施方案中，IL-2缀合物 包含式(III)的结构。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含式(IV)的结构。 在一些实施方案中，IL-2缀合物包含式(V)的结构。在一些实施方案中，IL-2 缀合物包含SEQ ID NO:1。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO: 2。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:3。在一些实施方案中， IL-2缀合物包含SEQ ID NO:4。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:5。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:6。在一些实施方案 中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:7。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:8。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:9。在一些实施 方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:10。在一些实施方案中，IL-2缀合物包 含SEQ ID NO:11。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:12。在 一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:13。在一些实施方案中，IL-2 缀合物包含SEQ ID NO:14。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO: 15。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:16。在一些实施方案中， IL-2缀合物包含SEQ ID NO:17。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:18。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQID NO:19。在一些实施方 案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:20。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:21。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:22。在一 些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:23。在一些实施方案中，IL-2缀 合物包含SEQ ID NO:24。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO: 25。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:26。在一些实施方案中， IL-2缀合物包含SEQ ID NO:27。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:28。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:24。在一些实施方 案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:25。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含 SEQ IDNO:26。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:27。在一 些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:28。在一些实施方案中，IL-2缀 合物包含SEQ ID NO:29。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO: 30。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:31。在一些实施方案中， IL-2缀合物包含SEQ ID NO:32。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:33。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:34。在一些实施方 案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:35。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含 SEQ ID NO:36。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:37。在一 些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQID NO:38。在一些实施方案中，IL-2缀 合物包含SEQ ID NO:39。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO: 40。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:41。在一些实施方案中， IL-2缀合物包含SEQ ID NO:42。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:43。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:44。在一些实施方 案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:45。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含 SEQ ID NO:46。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:47。在一 些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:48。在一些实施方案中，IL-2缀 合物包含SEQ ID NO:49。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQID NO: 50。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:51。在一些实施方案中， IL-2缀合物包含SEQ ID NO:52。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:53。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:54。在一些实施方 案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:55。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含 SEQ ID NO:56。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:57。在一 些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:58。在一些实施方案中，IL-2缀 合物包含SEQ ID NO:59。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO: 60。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:61。在一些实施方案中， IL-2缀合物包含SEQID NO:62。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:63。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:64。在一些实施方 案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:65。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含 SEQ ID NO:66。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:67。在一 些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:68。在一些实施方案中，IL-2缀 合物包含SEQ ID NO:69。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO: 70。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:71。在一些实施方案中， IL-2缀合物包含SEQ ID NO:72。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:73。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQID NO:74。在一些实施方 案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:75。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含 SEQ ID NO:76。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:77。在一 些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:78。在一些实施方案中，IL-2缀 合物包含SEQ ID NO:79。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO: 80。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:81。在一些实施方案中， IL-2缀合物包含SEQ ID NO:82。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:83。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含SEQ ID NO:84。
在一些实施方案中，增殖性疾病或病症是癌症。在一些情形中， 癌症是实体瘤。示例性实体瘤包括但不限于膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、 结直肠癌、食管癌、眼癌、头颈癌、肾癌、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰腺 癌或前列腺癌。在一些情形中，实体瘤是转移性癌症。在一些情形中，实体 瘤是复发性或难治性癌症。在一些情形中，实体瘤是去势抵抗性前列腺癌、 转移性去势抵抗性前列腺癌或具有DNA损伤应答(DDR)缺陷的转移性去势 抵抗性前列腺癌。
在一些情况下，将本文所述的细胞因子(例如，白介素、IFN 或TNF)缀合物施用至有需要的受试者，用于治疗实体瘤。在此类情形中， 受试者患有膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、结直肠癌、食管癌、眼癌、头颈 癌、肾癌、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰腺癌或前列腺癌。在一些情形中， 实体瘤是转移性癌症。在一些情形中，实体瘤是复发性或难治性癌症。在一些情形中，实体瘤是去势抵抗性前列腺癌、转移性去势抵抗性前列腺癌或具 有DNA损伤应答(DDR)缺陷的转移性去势抵抗性前列腺癌。
在一些情况下，将本文所述的IL-2缀合物施用至有需要的受试 者，用于治疗实体瘤。在此类情况下，受试者患有膀胱癌、骨癌、脑癌、乳 腺癌、结直肠癌、食管癌、眼癌、头颈癌、肾癌、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、 胰腺癌或前列腺癌。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗膀 胱癌。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗乳腺癌。在一些 情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗结直肠癌。在一些情形中，将 IL-2缀合物施用至受试者用于治疗食管癌。在一些情形中，将IL-2缀合物施 用至受试者用于治疗头颈癌。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用 于治疗肾癌。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗肺癌。在 一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗黑色素瘤。在一些情形中， 将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗卵巢癌。在一些情形中，将IL-2缀合物 施用至受试者用于治疗胰腺癌。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗前列腺癌。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗去 势抵抗性前列腺癌、转移性去势抵抗性前列腺癌或具有DNA损伤应答(DDR) 缺陷的转移性去势抵抗性前列腺癌。
在一些实施方案中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗转移 性癌症。在一些情况下，转移性癌症包括转移性膀胱癌、转移性骨癌、转移 性脑癌、转移性乳腺癌、转移性结直肠癌、转移性食管癌、转移性眼癌、转 移性头颈癌、转移性肾癌、转移性肺癌、转移性黑色素瘤、转移性卵巢癌、 转移性胰腺癌或转移性前列腺癌。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试 者用于治疗转移性膀胱癌、转移性骨癌、转移性脑癌、转移性乳腺癌、转移 性结直肠癌、转移性食管癌、转移性眼癌、转移性头颈癌、转移性肾癌、转 移性肺癌、转移性黑色素瘤、转移性卵巢癌、转移性胰腺癌或转移性前列腺 癌。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗去势抵抗性前列腺 癌、转移性去势抵抗性前列腺癌或具有DNA损伤应答(DDR)缺陷的转移性 去势抵抗性前列腺癌。
在一些情况下，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗复发性或 难治性癌症。在一些情况下，复发性或难治性癌症包括复发性或难治性膀胱 癌、复发性或难治性骨癌、复发性或难治性脑癌、复发性或难治性乳腺癌、 复发性或难治性结直肠癌、复发性或难治性食管癌、复发性或难治性眼癌、 复发性或难治性头颈癌、复发性或难治性肾癌、复发性或难治性肺癌、复发 性或难治性黑色素瘤、复发性或难治性卵巢癌、复发性或难治性胰腺癌或复发性或难治性前列腺癌。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治 疗复发性或难治性膀胱癌、复发性或难治性骨癌、复发性或难治性脑癌、复 发性或难治性乳腺癌、复发性或难治性结直肠癌、复发性或难治性食管癌、 复发性或难治性眼癌、复发性或难治性头颈癌、复发性或难治性肾癌、复发 性或难治性肺癌、复发性或难治性黑色素瘤、复发性或难治性卵巢癌、复发 性或难治性胰腺癌或复发性或难治性前列腺癌。
在一些实施方案中，癌症是首次治疗的癌症。在此类情形中， 首次治疗的癌症是从未通过疗法治疗的癌症。在一些情形中，首次治疗的癌 症是实体瘤，如膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、结直肠癌、食管癌、眼癌、 头颈癌、肾癌、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰腺癌或前列腺癌。在一些实施 方案中，本文描述一种治疗有需要的受试者的首次治疗的实体瘤的方法，其 包括向受试者施用本文所述的细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)。
在一些实施方案中，癌症是恶性血液病。在一些情况下，恶性 血液病包括白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一些情形中，恶性血液病是T细胞 恶性肿瘤。在其他情形中，恶性血液病是B细胞恶性肿瘤。示例性恶性血液 病包括但不限于慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、 滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、 华氏巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、结边缘区B 细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非伯基特高级B细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细 胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、 B细胞前淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、浆细 胞骨髓瘤、浆细胞瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴 瘤、原发性渗出性淋巴瘤或淋巴瘤样肉芽肿病。
在一些情形中，恶性血液病是转移性癌症。在一些情形中，转 移性癌症是转移性T细胞恶性肿瘤或转移性B细胞恶性肿瘤。
在一些情形中，恶性血液病是复发性或难治性癌症。在一些情 形中，复发性或难治性癌症是复发性或难治性T细胞恶性肿瘤或者复发性或 难治性B细胞恶性肿瘤。
在一些情况下，将本文所述的细胞因子(例如，白介素、IFN 或TNF)施用至有需要的受试者，用于治疗恶性血液病。在一些情形中，受 试者患有T细胞恶性肿瘤。在一些情形中，受试者患有B细胞恶性肿瘤。在一 些情形中，受试者患有慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴 瘤(SLL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细 胞淋巴瘤(MCL)、华氏巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、结外边缘区B细胞 淋巴瘤、结边缘区B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非伯基特高级B细胞淋巴 瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体 B淋巴母细胞淋巴瘤、B细胞前淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、 脾边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤或淋巴瘤样肉芽肿病。
在一些情况下，将本文所述的IL-2缀合物施用至有需要的受试 者，用于治疗恶性血液病。在一些情形中，受试者患有T细胞恶性肿瘤。在 一些情形中，受试者患有B细胞恶性肿瘤。在一些情形中，受试者患有慢性 淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、 弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、华氏巨球蛋白血 症、多发性骨髓瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、结边缘区B细胞淋巴瘤、伯 基特淋巴瘤、非伯基特高级B细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBL)、 免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、B细胞前淋巴细胞 性白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞 瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性 淋巴瘤或淋巴瘤样肉芽肿病。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗CLL。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗SLL。在 一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗FL。在一些情形中，将IL-2 缀合物施用至受试者用于治疗DLBCL。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至 受试者用于治疗MCL。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗 华氏巨球蛋白血症。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗多 发性骨髓瘤。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗伯基特淋 巴瘤。
在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗转移性恶 性血液病。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗转移性T细 胞恶性肿瘤。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗转移性B 细胞恶性肿瘤。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗转移性 慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、滤泡性淋巴 瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、华氏 巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、结边缘区B细胞 淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非伯基特高级B细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋 巴瘤(PMBL)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、B 细胞前淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞 骨髓瘤、浆细胞瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、 原发性渗出性淋巴瘤或转移性淋巴瘤样肉芽肿病。
在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗复发性或 难治性恶性血液病。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者用于治疗复 发性或难治性T细胞恶性肿瘤。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至受试者 用于治疗复发性或难治性B细胞恶性肿瘤。在一些情形中，将IL-2缀合物施 用至受试者用于治疗复发性或难治性慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋 巴细胞性淋巴瘤(SLL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、华氏巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、 结外边缘区B细胞淋巴瘤、结边缘区B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非伯基 特高级B细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母细胞性大 细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、B细胞前淋巴细胞性白血病、淋巴 浆细胞性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤或淋巴瘤样 肉芽肿病。
另外的治疗剂
在一些实施方案中，将另外的治疗剂进一步施用至受试者。在 一些情形中，另外的治疗剂是与细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)同时 施用。在其他情形中，将另外的治疗剂和IL-2缀合物依序施用，例如，在另 外的治疗剂之前施用细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)，或者在施用另外 的治疗剂之后施用细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)。
在一些情形中，另外的治疗剂包含化学治疗剂、免疫治疗剂、 靶向疗法、放射疗法或其组合。说明性的另外的治疗剂包括但不限于烷基化 剂，如奥曲胺、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、 达卡巴嗪、洛莫司汀、美法仑、奥沙利铂、替莫唑胺或噻替帕；抗代谢物， 如5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巯基嘌呤(6-MP)、卡培他滨、阿糖胞苷、氟尿苷、氟达拉滨、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤或培美曲塞；蒽环类药物，如柔红 霉素、阿霉素、表柔比星或伊达比星；拓扑异构酶I抑制剂，如拓扑替康或 伊立替康(CPT-11)；拓扑异构酶II抑制剂，如依托泊苷(VP-16)、替尼泊 苷或米托蒽醌；有丝分裂抑制剂，如多西他赛、雌莫司汀、伊沙匹隆、紫杉 醇、长春碱、长春新碱或长春瑞滨；或皮质类固醇，如泼尼松、甲基泼尼松 龙或地塞米松。
在一些情形中，另外的治疗剂包括一线疗法。如本文所用，“一 线疗法”包括用于患有癌症的受试者的主要治疗。在一些情况下，癌症是原 发性癌症。在其他情况下，癌症是转移性或复发性癌症。在一些情形中，一 线疗法包括化学疗法。在其他情形中，一线治疗包括放射疗法。技术人员将 容易理解，不同的一线治疗可以适用于不同类型的癌症。
在一些情形中，将细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)与选 自以下的另外的治疗剂一起施用：烷基化剂，如奥曲胺、白消安、卡铂、卡 莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、洛莫司汀、美法仑、奥 沙利铂、替莫唑胺或噻替帕；抗代谢物，如5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巯基嘌呤 (6-MP)、卡培他滨、阿糖胞苷、氟尿苷、氟达拉滨、吉西他滨、羟基脲、 甲氨蝶呤或培美曲塞；蒽环类药物，如柔红霉素、阿霉素、表柔比星或伊达 比星；拓扑异构酶I抑制剂，如拓扑替康或伊立替康(CPT-11)；拓扑异构酶 II抑制剂，如依托泊苷(VP-16)、替尼泊苷或米托蒽醌；有丝分裂抑制剂， 如多西他赛、雌莫司汀、伊沙匹隆、紫杉醇、长春碱、长春新碱或长春瑞滨； 或皮质类固醇，如泼尼松、甲基泼尼松龙或地塞米松。
在一些情况下，本文所述的细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合 物)与酶聚ADP核糖聚合酶(PARP)的抑制剂一起施用。示例性PARP抑制 剂包括但不限于奥拉帕尼(AZD-2281，
Figure BDA0003528433030002011
来自Astra Zeneca)、卢 卡帕尼(PF-01367338，
Figure BDA0003528433030002012
来自ClovisOncology)、尼拉帕尼(MK-4827，
Figure BDA0003528433030002013
来自Tesaro)、他佐帕利(BMN-673，来自BioMarin Pharmaceutical Inc.)、维利帕利(ABT-888，来自AbbVie)、CK-102(原CEP 9722，来自Teva Pharmaceutical Industries Ltd.)、E7016(来自Eisai)、艾尼帕利(BSI 201，来自Sanofi)和帕米帕尼(BGB-290，来自BeiGene)。在一些情形中，将细胞 因子缀合物(例如，IL-2缀合物)与PARP抑制剂(如奥拉帕尼、卢卡帕尼、 尼拉帕尼、他佐帕利、维利帕利、CK-102、E7016、艾尼帕利或帕米帕尼) 组合施用。
在一些情况下，本文所述的细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合 物)与免疫检查点抑制剂一起施用。示例性检查点抑制剂包括：
PD-L1抑制剂，如Genentech的MPDL3280A(RG7446)、来自 BioXcell的抗小鼠PD-L1抗体克隆10F.9G2(Cat#BE0101)、来自 Bristol-Meyer's Squibb的抗PD-L1单克隆抗体MDX-1105(BMS-936559)和 BMS-935559、MSB0010718C、小鼠抗PD-L1克隆29E.2A3、AstraZeneca的 MEDI4736、阿特珠单抗(也称为
Figure BDA0003528433030002021
)、贝伐珠单抗(也称为
Figure BDA0003528433030002022
) 和阿维鲁单抗(也称为
Figure BDA0003528433030002023
)；
PD-L2抑制剂，如GlaxoSmithKline的AMP-224(Amplimmune) 和rHIgM12B7；
PD-1抑制剂，如来自BioXcell的抗小鼠PD-1抗体克隆J43(Cat# BE0033-2)、来自BioXcell的抗小鼠PD-1抗体克隆RMP1-14(Cat#BE0146)、 小鼠抗PD-1抗体克隆EH12、Merck的MK-3475抗小鼠PD-1抗体(Keytruda、 帕博利珠单抗、兰博利珠单抗)、AnaptysBio的称为ANB011的抗PD-1抗体、 抗体MDX-1 106(ONO-4538)、Bristol-Myers Squibb的人IgG4单克隆抗体纳 武单抗(
Figure BDA0003528433030002024
BMS-936558、MDX1106)、AstraZeneca的AMP-514和 AMP-224、来自Regeneron的西米普利单抗和来自CureTech Ltd的匹地利珠单 抗(CT-011)；
CTLA-4抑制剂，如Bristol Meyers Squibb的抗CTLA-4抗体伊匹 单抗(也称为
Figure BDA0003528433030002025
MDX-010、BMS-734016和MDX-101)、来自Millipore 的抗CTLA4抗体克隆9H10、Pfizer的曲美木单抗(CP-675,206、替西木单抗) 和来自Abcam的抗CTLA4抗体克隆BNI3；
LAG3抑制剂，如来自eBioscience的抗Lag-3抗体克隆 eBioC9B7W(C9B7W)、来自LifeSpan Biosciences的抗Lag3抗体LS-B2237、 来自Immutep的IMP321(ImmuFact)、抗Lag3抗体BMS-986016和LAG-3嵌合 抗体A9H12；
B7-H3抑制剂，如MGA271；
KIR抑制剂，如利瑞鲁单抗(IPH2101)；
CD137抑制剂，如乌瑞鲁单抗(BMS-663513，Bristol-Myers Squibb)、PF-05082566(抗4-1BB、PF-2566，Pfizer)或XmAb-5592(Xencor)；
PS抑制剂，如巴维昔单抗；
以及针对以下的抑制剂，如抗体或其片段(例如，单克隆抗体、 人、人源化或嵌合抗体)、RNAi分子或小分子：TIM3、CD52、CD30、CD20、 CD33、CD27、OX40、GITR、ICOS、BTLA(CD272)、CD160、2B4、LAIR1、 TIGHT、LIGHT、DR3、CD226、CD2或SLAM。
在一些情况下，细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)与帕博 利珠单抗、纳武单抗、曲美木单抗或伊匹单抗组合施用。
在一些情况下，本文所述的细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合 物)与抗体一起施用，所述抗体如阿伦珠单抗、曲妥珠单抗、替伊莫单抗、 苯妥昔单抗、恩美曲妥珠单抗(ado-trastuzumab emtansine)或博纳吐单抗。
在一些情况下，细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)与选自 受体激动剂的另外的治疗剂一起施用。在一些情况下，受体激动剂包括Toll 样受体(TLR)配体。在一些情况下，TLR配体包括TLR1、TLR2、TLR3、 TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8或TLR9。在一些情况下，TLR配体包括 合成配体，如例如，Pam3Cys、CFA、MALP2、Pam2Cys、FSL-1、Hib-OMPC、 聚I:C、聚A:U、AGP、MPL A、RC-529、MDF2β、CFA或鞭毛蛋白。在一些 情形中，细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)与选自以下的一种或多种TLR 激动剂一起施用：TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8 和TLR9。在一些情形中，细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)与选自以下 的一种或多种TLR激动剂一起施用：Pam3Cys、CFA、MALP2、Pam2Cys、 FSL-1、Hib-OMPC、聚I:C、聚A:U、AGP、MPL A、RC-529、MDF2β、CFA 和鞭毛蛋白。
在一些实施方案中，细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)与 过继T细胞转移(ACT)疗法结合使用。在一个实施方案中，ACT涉及鉴定 受试者体内具有例如抗肿瘤活性的自体T淋巴细胞，在体外扩增所述自体T 淋巴细胞，以及随后将扩增的T淋巴细胞再输注至受试者体内。在另一个实 施方案中，ACT包括使用具有例如抗肿瘤活性的同种异体T淋巴细胞，在体 外扩增所述T淋巴细胞，以及随后将扩增的同种异体T淋巴细胞输注至有需要 的受试者体内。在一些情况下，本文所述的细胞因子缀合物(例如，IL-2缀 合物)与自体T淋巴细胞结合用作ACT疗法的部分。在其他情况下，本文所 述的细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)与同种异体T淋巴细胞结合用作 ACT疗法的部分。在一些情形中，将细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物) 与ACT疗法同时施用至有需要的受试者。在其他情形中，将细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)与ACT疗法依序施用至有需要的受试者。
在一些实施方案中，细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)用 于自体和/或同种异体T细胞转移的离体激活和/或扩增。在此类情形中，细胞 因子缀合物(例如，IL-2缀合物)用于激活和/或扩增包含自体和/或同种异 体T细胞的样品，并且在将所述样品施用至有需要的受试者之前，任选地从 所述样品去除细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)。
在一些实施方案中，细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)与 疫苗一起施用。在一些情况下，细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)与溶 瘤病毒组合使用。在此类情形中，细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)作 为刺激剂用于调节免疫应答。在一些情况下，细胞因子缀合物(例如，IL-2 缀合物)与溶瘤病毒一起用作辅助疗法的部分。示例性溶瘤病毒包括T-Vec (Amgen)、G47Δ(Todo等人)、JX-594(Sillajen)、CG0070(Cold Genesys) 和Reolysin(Oncolytics Biotech)。在一些情形中，细胞因子缀合物(例如， IL-2缀合物)与溶瘤病毒(如T-Vec、G47Δ、JX-594、CG0070或Reolysin) 组合使用。
在一些实施方案中，细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)与 放射疗法组合施用。
在一些实施方案中，细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)与 手术组合施用。
病原体感染
在一些实施方案中，本文描述一种治疗有需要的受试者的病原 体感染的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的细胞因子缀合 物(例如，IL-2缀合物)。在一些情况下，IL-2缀合物包含分离并纯化的IL-2 多肽和缀合部分，其中相对于野生型IL-2多肽，IL-2缀合物具有对IL-2受体α (IL-2Rα)亚基降低的亲和力。在一些情况下，IL-2缀合物包含分离并纯化 的IL-2多肽；以及在选自以下的氨基酸位置与所述分离并纯化的IL-2多肽结 合的缀合部分：K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E60、E61、 E62、K64、P65、E68、V69、N71、L72、M104、C105和Y107，其中氨基 酸残基的编号对应于SEQ ID NO:1。在一些情形中，IL-2缀合物优先与IL-2Rβ 和IL-2Rβγ亚基相互作用以形成IL-2/IL-2Rβγ复合物，其刺激和/或增强CD4+ 辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、NK细胞和/或NKT细胞的扩增。在另 外的情形中，IL-2缀合物促进CD8+T细胞对病原体库的识别。在一些实施方 案中，包含残基F42处(其中所述残基对应于SEQ ID NO:1的位置42)的突 变的IL-2缀合物包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量为约2,000-50,000 Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。在一些实施方案 中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含15,000 Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含30,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含45,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方案中，PEG的分子 量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较 小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于 修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效 力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2 多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导复合物的维持的结 合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα 之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽 /IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与 IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，病原体感染是病毒感染，其中在用抗病毒 疗法治疗后，病毒库(例如，静息CD4+T细胞)在所治疗宿主中持续存在。 在此类情况下，本文所述的细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)诱导CD8+ T细胞(或细胞毒性T细胞)对病毒库的识别。在一些情形中，细胞因子缀合 物(例如，IL-2缀合物)作为单一疗法用于将CD8+T细胞重引导至感染的静 息细胞以供清除。在一些情形中，细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)与 另外的疗法组合用于将CD8+T细胞重引导至感染的静息细胞以供消除。示例 性的另外的疗法包括抗病毒治疗，如阿昔洛韦、溴夫定、二十二醇、泛昔洛 韦、膦甲酸、碘苷、喷昔洛韦、曲氟尿苷、伐昔洛韦和普瑞利韦。
在一些实施方案中，病毒是DNA病毒或RNA病毒。DNA病毒 包括单链(ss)DNA病毒、双链(ds)DNA病毒或者同时含有ss和ds DNA区 域的DNA病毒。RNA病毒包括单链(ss)RNA病毒或双链(ds)RNA病毒。 在一些情形中，ssRNA病毒被进一步归类为正义RNA病毒或负义RNA病毒。
示例性dsDNA病毒包括来自以下科的病毒：肌病毒科 (Myoviridae)、短尾病毒科(Podoviridae)、管状病毒科(Siphoviridae)、异 疱疹病毒科(Alloherpesviridae)、疱疹病毒科(Herpesviridae)、软体动物疱 疹病毒科(Malacoherpesviridae)、脂毛病毒科(Lipothrixviridae)、棒状DNA 病毒科(Rudiviridae)、腺病毒科(Adenoviridae)、瓶状病毒科 (Ampullaviridae)、鳞翅目昆虫病毒科(Ascoviridae)、非洲猪瘟病毒科(Asfaviridae)、杆状病毒科(Baculoviridae)、双尾病毒科(Bicaudaviridae)、 棒状病毒科(Clavaviridae)、被脂病毒科(Corticoviridae)、福塞尔噬菌体科 (Fuselloviridae)、球状病毒科(Globuloviridae)、古老病毒科(Guttaviridae)、 海曲塞病毒科(Hytrosaviridae)、虹膜病毒科(Iridoviridae)、马塞病毒科 (Marseilleviridae)、拟菌病毒科(Mimiviridae)、线头病毒科(Nimaviridae)、 潘多拉病毒科(Pandoraviridae)、乳头状瘤病毒科(Papillomaviridae)、藻DNA 病毒科(Phycodnaviridae)、原生病毒科(Plasmaviridae)、多DNA病毒、多 瘤病毒科(Polyomaviridae)、痘病毒科(Poxviridae)、球脂状病毒科 (Sphaerolipoviridae)和覆盖层病毒科(Tectiviridae)。
示例性ssDNA病毒包括来自以下科的病毒：指环病毒科 (Anelloviridae)、杆菌状病毒科(Bacillariodnaviridae)、二分DNA病毒科 (Bidnaviridae)、环状构象病毒科(Circoviridae)、双粒病毒科 (Geminiviridae)、丝杆病毒科(Inoviridae)、微病毒科(Microviridae)、矮 化病毒科(Nanoviridae)、细小病毒科(Parvoviridae)和螺旋病毒科(Spiraviridae)。
同时含有ss和ds DNA区域的示例性DNA病毒包括来自多脂病 毒(pleolipovirus)群的病毒。在一些情形中，多脂病毒包括西班牙盐盒菌 (Haloarcula hispanica)多形性病毒1、盐几何菌属(Halogeometricum)多 形性病毒1、盐红菌属(Halorubrum)多形性病毒1、盐红菌属多形性病毒2、 盐红菌属多形性病毒3和盐红菌属多形性病毒6。
示例性dsRNA病毒包括来自以下科的病毒：双RNA病毒科 (Birnaviridae)、金色病毒科(Chrysoviridae)、囊病毒科(Cystoviridae)、内 源RNA病毒科(Endornaviridae)、减毒病毒科(Hypoviridae)、巨型双核糖核 酸病毒科(Megavirnaviridae)、分体病毒科(Partitiviridae)、细小双RNA病 毒科(Picobirnaviridae)、呼肠病毒科(Reoviridae)、轮状病毒(Rotavirus) 和全病毒科(Totiviridae)。
示例性正义ssRNA病毒包括来自以下科的病毒：甲型线形病毒 科(Alphaflexiviridae)、阿尔法四体病毒科(Alphatetraviridae)、囊孢虫RNA 病毒科(Alvernaviridae)、动脉病毒科(Arteriviridae)、星状病毒科 (Astroviridae)、杆状RNA病毒科(Barnaviridae)、乙型线形病毒科 (Betaflexiviridae)、雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)、嵌杯病毒科 (Caliciviridae)、香石竹斑驳病毒样四体病毒科(Carmotetraviridae)、纺锤 病毒科(Closteroviridae)、冠状病毒科(Coronaviridae)、双顺反子病毒科 (Dicistroviridae)、黄病毒科(Flaviviridae)、丙型线形病毒科(Gammaflexiviridae)、传染性软化病毒科(Iflaviridae)、轻病毒科 (Leviviridae)、黄症病毒科(Luteoviridae)、海洋RNA病毒科(Marnaviridae)、 海洋病毒科(Mesoniviridae)、裸露RNA病毒科(Narnaviridae)、野田村病毒 科(Nodaviridae)、复制酶置换四体病毒科(Permutotetraviridae)、细小RNA 病毒科(Picornaviridae)、马铃薯Y病毒科(Potyviridae)、杆套病毒科 (Roniviridae)、逆转录病毒科(Retroviridae)、伴生豇豆病毒科(Secoviridae)、 披膜病毒科(Togaviridae)、番茄丛矮病毒科(Tombusviridae)、芜菁黄花叶 病毒科(Tymoviridae)和帚状病毒科(Virgaviridae)。
示例性负义ssRNA病毒包括来自以下科的病毒：沙粒病毒科 (Arenaviridae)、玻那病毒科(Bornaviridae)、布尼亚病毒科(Bunyaviridae)、 纤丝病毒科(Filoviridae)、尼亚米病毒科(Nyamiviridae)、蛇形病毒科 (Ophioviridae)、正粘病毒科(Orthomyxoviridae)、副粘液病毒科 (Paramyxoviridae)和弹状病毒科(Rhabdoviridae)。
在一些实施方案中，病原体感染是由以下引起：Abelson白血 病病毒、Abelson鼠白血病病毒、Abelson病毒、急性喉气管支气管炎病毒、 阿德莱德河病毒、腺相关病毒群、腺病毒、非洲马瘟病毒、非洲猪瘟病毒、AIDS病毒、艾刘蒂貂病微病毒、α逆转录病毒、甲病毒、ALV相关病毒、 Amapari病毒、口蹄疫病毒、水生动物呼肠孤病毒、虫媒病毒、虫媒病毒C、 虫媒病毒群A、虫媒病毒群B、沙粒病毒群、阿根廷出血热病毒、阿根廷出 血热病毒、动脉病毒、星状病毒、Ateline疱疹病毒群、奥耶斯基氏病病毒、 奥拉病毒(Aura virus)、澳洲杜克病病毒、澳洲蝙蝠狂犬病病毒、禽腺病毒、 禽幼红细胞增多症病毒、禽传染性支气管炎病毒、禽类白血病病毒(avian leukemia virus)、禽类白血病病毒(avian leukosis virus)、禽类淋巴瘤病毒、 禽类髓母细胞白血病病毒、禽类副粘病毒、禽类肺脑炎病毒、禽类网状内皮组织增殖病病毒、禽类肉瘤病毒、禽类C型逆转录病毒群、禽嗜肝DNA病毒 属、禽痘病毒、B型病毒、B19病毒、Babanki病毒、狒狒疱疹病毒、杆状病 毒、Barmah森林病毒、比巴鲁病毒、贝里马病毒、β逆转录病毒、双RNA病 毒、Bittner病毒、BK病毒、黑港渠病毒、蓝舌病毒、玻利维亚出血热病毒、 博尔纳病病毒、羊边境病病毒、博尔纳病毒、牛α疱疹病毒1、牛α疱疹病毒2、牛冠状病毒、牛暂时热病毒、牛免疫缺陷病毒、牛白血病病毒、牛白血病病 毒、牛乳头炎病毒、牛乳头状瘤病毒、牛丘疹性口炎病毒、牛细小病毒、牛 合胞体病毒、牛C型肿瘤病毒、牛病毒性腹泻病毒、马车溪病毒、弹状病毒 群、布尼亚维拉病毒超群、布尼亚病毒、伯基特淋巴瘤病毒、勃旺巴热、CA 病毒、杯状病毒、加利福尼亚脑炎病毒、骆驼痘病毒、金丝雀痘病毒、犬疱 疹病毒、犬冠状病毒、犬瘟热病毒、犬疱疹病毒、犬微小病毒、犬细小病毒、 CanoDelgadito病毒、山羊关节炎病毒、山羊昏睡性脑炎病毒、山羊疱疹病 毒、山羊痘病毒、心病毒、豚鼠疱疹病毒1、猕猴疱疹病毒1、猕猴疱疹病毒 1、猕猴疱疹病毒2、金迪普拉病毒、Changuinola病毒、斑点叉尾鮰病毒、沙 勒维尔病毒、水痘病毒、切昆贡亚病毒、黑猩猩疱疹病毒、白鲑呼肠弧病毒、 马苏鲑病毒、科卡尔病毒、银鲑逆转录病毒、性交疹病毒、科罗拉多壁虱热 病毒、科蜱病毒、哥伦比亚SK病毒、感冒病毒、接触传染性脓疱病毒、接触 传染性脓疱性皮炎病毒、冠状病毒、Corriparta病毒、鼻炎病毒、牛痘病毒、 柯萨奇病毒、CPV(胞浆多角体病毒)、蟋蟀麻痹病毒、克里米亚-刚果出血 热病毒、副流感二号病毒、隐病毒、质型多角体病毒、巨细胞病毒、巨细胞 病毒群、胞浆多角体病毒、鹿乳头瘤病毒、δ逆转录病毒、登革热病毒、浓 核病毒、依赖病毒、佐立病毒、文凭病毒(diploma virus)、果蝇C型病毒、 鸭乙型肝炎病毒、鸭肝炎病毒1、鸭肝炎病毒2、轮状病毒、Duvenhage病毒、 残翅病毒DWV、东方马脑炎病毒、东方马脑脊髓炎病毒、EB病毒、埃博拉 病毒、埃博拉样病毒、艾柯病毒(echovirus)、艾柯病毒(echovirus)、艾柯 病毒10、艾柯病毒28、艾柯病毒9、鼠痘病毒、EEE病毒、EIA病毒、EIA病 毒、昏睡性脑炎病毒、脑心肌炎群病毒、脑心肌炎病毒、肠道病毒、酶升高病毒、酶升高病毒(LDH)、流行性出血热病毒、流行性出血病病毒、EB病 毒、马类α疱疹病毒1、马类α疱疹病毒4、马类疱疹病毒2、马流产病毒、马 动脉炎病毒、马器质性脑病病毒、马感染性贫血病毒、马麻疹病毒、马鼻肺 炎病毒、马鼻病毒、Eubenangu病毒、欧洲麋鹿乳头状瘤病毒、欧洲猪瘟热 病毒、沼泽病毒、Eyach病毒、猫类疱疹病毒1、猫杯状病毒、猫纤维肉瘤病毒、猫疱疹病毒、猫免疫缺陷病毒、猫感染性腹膜炎病毒、猫白血病/肉瘤病 毒、猫白血病病毒、猫泛白细胞减少症病毒、猫细小病毒、猫肉瘤病毒、猫 合胞体病毒、纤丝病毒、弗朗德病毒、黄病毒、口蹄疫病毒、摩根堡病毒、 四角汉坦病毒、家禽腺病毒1、鸡痘病毒、弗林德病毒、γ逆转录病毒、GB 肝炎病毒、GB病毒、德国麻疹病毒、盖塔病毒、长臂猿白血病病毒、腺热 病毒、山羊痘病毒、金体美洲鳊鱼病毒、枯叶蛾病毒、鹅细小病毒、颗粒体 症病毒、格罗斯病毒、地松鼠乙型肝炎病毒、A类虫媒病毒、瓜纳瑞托病毒、 豚鼠巨细胞病毒、豚鼠C型病毒、汉坦病毒(Hantaan virus)、汉坦病毒 (Hantavirus)、文蛤呼肠弧病毒、野兔纤维瘤病毒、HCMV(人巨细胞病毒)、 血细胞吸附病毒2、日本血凝集病毒、出血热病毒、hendra病毒、海尼帕病毒、 嗜肝性DNA病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒群、丙型肝炎病毒、丁型肝 炎病毒、δ肝炎病毒、戊型肝炎病毒、己型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、非甲 非乙型肝炎病毒、肝炎病毒、肝炎病毒(非人)、肝因性脑脊髓炎呼肠弧病 毒3、嗜肝病毒、苍鹭乙型肝炎病毒、乙型疱疹病毒、单纯疱疹病毒、单纯 疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2、疱疹病毒、疱疹病毒7、蜘蛛猴疱疹病毒、人 疱疹病毒、疱疹病毒感染、松鼠猴疱疹病毒、猪疱疹病毒、水痘疱疹病毒、高地J病毒、牙鲆弹状病毒、猪霍乱病毒、人腺病毒2、人α疱疹病毒1、人α 疱疹病毒2、人α疱疹病毒3、人嗜B淋巴细胞病毒、人β疱疹病毒5、人冠状病 毒、人巨细胞病毒群、人泡沫病毒、人γ疱疹病毒4、人γ疱疹病毒6、人甲型 肝炎病毒、人疱疹病毒1群、人疱疹病毒2群、人疱疹病毒3群、人疱疹病毒4 群、人疱疹病毒6、人疱疹病毒8、人免疫缺陷病毒、人免疫缺陷病毒1、人 免疫缺陷病毒2、人乳头状瘤病毒、人T细胞白血病病毒、人T细胞白血病病 毒I、人T细胞白血病病毒II、人T细胞白血病病毒III、人T细胞淋巴瘤病毒I、 人T细胞淋巴瘤病毒II、人嗜T细胞淋巴细胞病毒1型、人嗜T细胞淋巴细胞病 毒2型、人嗜T淋巴细胞病毒I、人嗜T淋巴细胞病毒II、人嗜T淋巴细胞病毒III、 姬蜂病毒、婴儿肠胃炎病毒、传染性牛鼻气管炎病毒、传染性造血坏死病毒、 传染性胰腺坏死病毒、流感病毒A、流感病毒B、流感病毒C、流感病毒D、 流感病毒pr8、昆虫虹彩病毒、昆虫病毒、虹彩病毒、日本B型病毒、日本脑 炎病毒、JC病毒、胡宁病毒、卡波西肉瘤相关疱疹病毒、克麦罗沃病毒、基 勒姆大鼠病毒、克拉马斯病毒、科隆各病毒、朝鲜出血热病毒、孔巴病毒、 Kysanur森林病病毒、Kyzylagach病毒、La Crosse病毒、乳酸脱氢酶升高病毒、 乳酸脱氢酶病毒、拉格斯蝙蝠病毒、叶猴病毒、兔细小病毒、拉沙热病毒、 拉沙病毒、潜伏大鼠病毒、LCM病毒、Leaky病毒、慢病毒、兔病毒、白血病病毒、白血病病毒、粗糙皮肤病病毒、淋巴结病相关病毒、淋巴细胞隐病 毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、淋巴组织增生病毒群、Machupo病毒、 伪狂犬病病毒、哺乳动物B型肿瘤病毒群、哺乳动物B型逆转录病毒、哺乳 动物C型逆转录病毒群、哺乳动物D型逆转录病毒、乳房肿瘤病毒、Mapuera 病毒、马尔堡病毒、马尔堡样病毒、Mason Pfizer猴病毒、肥大腺病毒、马 亚罗病毒、ME病毒、麻疹病毒、梅南高病毒、孟高病毒、门戈病毒、米德 尔堡病毒、挤奶工结节病毒、貂肠炎病毒、小鼠微小病毒、MLV相关病毒、 MM病毒、莫科拉病毒、软疣痘病毒、传染性软疣病毒、猴B型病毒、猴痘 病毒、单负病毒、麻疹病毒、芒特埃尔贡蝙蝠病毒、小鼠巨细胞病毒、小鼠 脑脊髓炎病毒、小鼠肝炎病毒、小鼠K型病毒、小鼠白血病病毒、小鼠乳房 肿瘤病毒、小鼠微小病毒、小鼠肺炎病毒、小鼠脊髓灰质炎病毒、小鼠多瘤 病毒、小鼠肉瘤病毒、小鼠痘病毒、莫桑比克病毒、穆坎布病毒、粘膜病病 毒、腮腺炎病毒、鼠类β疱疹病毒1、鼠类巨细胞病毒2、鼠巨细胞病毒群、 鼠脑脊髓炎病毒、鼠肝炎病毒、鼠白血病病毒、鼠结节诱发病毒、鼠多瘤病 毒、鼠肉瘤病毒、鼠巨细胞病毒、墨累河谷脑炎病毒、粘液瘤病毒、粘病毒、 多形性粘病毒、腮腺炎粘液病毒、内罗毕绵羊病病毒、内罗毕病毒、纳米核 糖核酸病毒、纳里瓦病毒、Ndumo病毒、牛皮肤结节病毒、纳尔逊湾病毒、 嗜神经病毒、新世界沙粒病毒、新生儿肺炎病毒、新城疫病毒、Nipah病毒、 非细胞致病性病毒、诺沃克病毒、核多角体病毒(NPV)、乳头颈病毒、奥 尼永尼永病毒、Ockelbo病毒、致癌病毒、致癌病毒样颗粒、致癌RNA病毒、 环状病毒、羊传染性口疮病毒、奥罗波克病毒、正嗜肝DNA病毒、正粘病毒、 正痘病毒、正呼肠弧病毒、Orungo、羊乳头状瘤病毒、羊卡他热病毒、枭猴 疱疹病毒、巴尼亚姆病毒、乳头状瘤病毒、长毛兔乳头状瘤病毒、乳多空病 毒、副流感病毒、副流感病毒1型、副流感病毒2型、副流感病毒3型、副流 感病毒4型、副粘病毒、副痘病毒、副痘苗病毒、细小病毒、细小病毒B19、 细小病毒群、瘟病毒、白蛉病毒、象海豹瘟热病毒、细小脱氧核糖核酸病毒、 微小核糖核酸病毒、猪巨细胞病毒-鸽痘病毒、皮里病毒、皮春纳病毒、小 鼠肺炎病毒、肺炎病毒、脊髓灰质炎病毒、脊髓灰质炎病毒、多DNA病毒、 多面形病毒、多瘤病毒(polyomavirus)、多瘤病毒(Polyomavirus)、牛多 瘤病毒、猕猴多瘤病毒、人多瘤病毒2、猴多瘤病毒1、鼠多瘤病毒1、鼠多 瘤病毒2、狒狒多瘤病毒1、狒狒多瘤病毒2、兔多瘤病毒、Pongine疱疹病毒1、 猪流行性腹泻病毒、猪血凝性脑脊髓炎病毒、猪细小病毒、猪传播性胃肠炎 病毒、猪C型病毒、痘病毒(pox virus)、痘病毒(poxvirus)、天花病毒、希 望山病毒、原病毒、假牛痘病毒、假性狂犬病病毒、鹦鹉痘病毒、鹌鹑痘病 毒、兔纤维瘤病毒、兔肾空泡病毒、兔乳头状瘤病毒、狂犬病病毒、浣熊细 小病毒、浣熊痘病毒、新城疫病毒、大鼠巨细胞病毒、大鼠细小病毒、大鼠 病毒、劳舍尔病毒、重组痘苗病毒、重组病毒、呼肠弧病毒、呼肠弧病毒1、 呼肠弧病毒2、呼肠弧病毒3、爬虫类C型病毒、呼吸道感染病毒、呼吸道合 胞病毒、呼吸道病毒、网状内皮组织增殖病病毒、弹状病毒、鲤鱼弹状病毒 (Rhabdovirus carpia)、棒状病毒、鼻病毒、根瘤病毒、立夫特山谷热病毒、 莱利病毒、牛瘟病毒、RNA肿瘤病毒、罗斯河病毒、轮状病毒、麻疹病毒、 Rous肉瘤病毒、风疹病毒、麻疹病毒、风疹病毒、俄罗斯秋季脑炎病毒、SA 11猿猴病毒、SA2病毒、Sabia病毒、鹭山病毒、Saimirine疱疹病毒1、唾液 腺病毒、白蛉热病毒群、圣德吉姆巴病毒、SARS病毒、SDAV(大鼠涎泪腺 炎病毒)、海豹痘病毒、塞姆利基森林病毒、汉城型病毒、绵羊痘病毒、Shope 纤维瘤病毒、Shope乳头状瘤病毒、猿猴泡沫病毒、猿猴甲型肝炎病毒、猿 猴人免疫缺陷病毒、猿猴免疫缺陷病毒、猿猴副流感病毒、猿猴T细胞淋巴 营养性病毒、猿猴病毒、猿猴病毒40、单纯疱疹病毒、辛诺瓦病毒、辛德毕斯病毒、天花病毒、南美出血热病毒、麻雀痘病毒、泡沫病毒、松鼠纤维瘤 病毒、松鼠猴逆转录病毒、SSV 1型病毒群、STLV(猿猴嗜T淋巴细胞病毒) I型、STLV(猿猴嗜T淋巴细胞病毒)II型、STLV(猿猴嗜T淋巴细胞病毒) III型、牛丘疹口炎病毒、豚鼠唾腺巨细胞病毒、猪α疱疹病毒1、猪疱疹病毒 2、猪痘病毒、沼泽地热病毒、猪痘病毒、瑞士小鼠白血病病毒、TAC病毒、 塔卡里伯复合病毒、塔卡里伯病毒、塔纳痘病毒、沙鼠痘病毒、丁鲷呼肠弧 病毒、蒂勒脑脊髓炎病毒、蒂勒病毒、索戈托病毒、索托帕拉亚病毒、蜱传 脑炎病毒、刁曼病毒、披膜病毒、环曲病毒、肿瘤病毒、树鼩病毒、火鸡鼻 气管炎病毒、火鸡痘病毒、C型逆转录病毒、D型肿瘤病毒、D型逆转录病毒 群、溃疡病弹状病毒、乌纳病毒、乌孔涅米病毒群、痘苗病毒、空泡形成病 毒、水痘带状疱疹病毒、水痘病毒、天花病毒、重型天花病毒、天花病毒、 VasinGishu病病毒、VEE病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、委内瑞拉马脑脊髓炎 病毒、委内瑞拉出血热病毒、水疱性口炎病毒、水疱病毒、Vilyuisk病毒、 蝰蛇逆转录病毒、病毒性出血性败血症病毒、维斯那-梅迪病毒、绵羊髓鞘 脱落病毒、田鼠痘病毒、VSV(水疱性口炎病毒)、沃勒尔病毒、沃里戈病 毒、疣病毒、WEE病毒、西尼罗河病毒、西方马脑炎病毒、西方马脑脊髓炎 病毒、瓦塔罗阿病毒、冬季呕吐病毒、土拨鼠乙型肝炎病毒、绒毛猴肉瘤病 毒、伤瘤病毒、WRSV病毒、亚巴猴肿瘤病毒、亚巴病毒、亚巴痘病毒、黄 热病毒或尤格波格丹诺夫奇病毒。
在一些实施方案中，病原体感染是由逆转录病毒引起的。示例 性逆转录病毒包括但不限于人免疫缺陷病毒(HIV)、人T细胞白血病病毒 (HTLV)、莫洛尼鼠白血病病毒(MuLV)、鼠乳瘤病毒(MMTV)、禽类白 血病和肉瘤病毒或Mason-Pfizer猴病毒。
在一些实施方案中，将本文所述的细胞因子缀合物(例如，IL-2 缀合物)施用至患有逆转录病毒感染或处于潜伏期期间的受试者，以减少和 /或消除处于静息期中的感染的细胞。在一些情形中，逆转录病毒包括人免疫 缺陷病毒(HIV)、人T细胞白血病病毒(HTLV)、莫洛尼鼠白血病病毒 (MuLV)、鼠乳瘤病毒(MMTV)、禽类白血病和肉瘤病毒或Mason-Pfizer猴病毒。在一些情形中，细胞因子缀合物重引导CD8+T细胞识别和消除处于 静息期中的感染的细胞。
在一些情形中，细胞因子缀合物是IL-2缀合物。在一些情况下， 将IL-2缀合物施用至患有逆转录病毒感染或处于潜伏期期间的受试者，以减 少和/或消除处于静息期中的感染的细胞。在一些情形中，逆转录病毒包括人 免疫缺陷病毒(HIV)、人T细胞白血病病毒(HTLV)、莫洛尼鼠白血病病毒(MuLV)、鼠乳瘤病毒(MMTV)、禽类白血病和肉瘤病毒或Mason-Pfizer 猴病毒。在一些情形中，IL-2缀合物重引导CD8+T细胞识别和消除处于静息 期中的感染的细胞。在另外的情形中，将IL-2缀合物与抗逆转录病毒疗法组 合施用至受试者。
在一些实施方案中，逆转录病毒是HIV。在一些情况下，将本文所述的 细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)施用至患有获得性免疫缺陷综合征 (AIDS)或处于潜伏期期间的受试者，以减少和/或消除处于静息期中的HIV 感染的细胞(例如，CD4+T细胞)。在一些情形中，细胞因子缀合物是IL-2 缀合物。在一些情形中，将IL-2缀合物与抗逆转录病毒疗法组合施用至受试 者。示例性HIV抗逆转录病毒疗法包括：(a)核苷逆转录酶抑制剂(NRTI)， 如阿巴卡韦、恩曲他滨、拉米夫定、富马酸替诺福韦酯和齐多夫定；(b)非 核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)，依法韦伦、依曲韦林、奈韦拉平或利匹韦 林；(c)蛋白酶抑制剂(PI)，如阿扎那韦、地瑞那韦、呋山那韦、利托那韦、 沙奎那韦和替拉那韦；(d)融合抑制剂，如恩夫韦肽；(e)CCR5拮抗剂，如 马拉韦罗；(f)整合酶抑制剂，如度鲁特韦和雷特格韦；(g)后附接抑制剂， 如伊巴珠单抗；(h)药代动力学增强剂，如可比司他；以及(i)合剂，如阿 巴卡韦和拉米夫定；阿巴卡韦、度鲁特韦和拉米夫定；阿巴卡韦、拉米夫定 和齐多夫定；阿扎那韦和可比司他；比替拉韦、恩曲他滨和替诺福韦艾拉酚 胺；地瑞那韦和可比司他；度鲁特韦和利匹韦林；依法韦伦、恩曲他滨和富 马酸替诺福韦酯；依法韦伦、拉米夫定和富马酸替诺福韦酯；依法韦伦、拉 米夫定和富马酸替诺福韦酯；艾替拉韦、可比司他、恩曲他滨和富马酸替诺福韦艾拉酚胺；艾替拉韦、可比司他、恩曲他滨和富马酸替诺福韦酯；恩曲 他滨、利匹韦林和替诺福韦艾拉酚胺；恩曲他滨、利匹韦林和富马酸替诺福 韦酯；恩曲他滨和替诺福韦艾拉酚胺；恩曲他滨和富马酸替诺福韦酯；拉米 夫定和富马酸替诺福韦酯；拉米夫定和齐多夫定；以及洛匹那韦和利托那韦。
在一些情形中，将IL-2缀合物与抗逆转录病毒疗法组合施用至 受试者，所述抗逆转录病毒疗法例如：核苷逆转录酶抑制剂(NRTI)，如阿 巴卡韦、恩曲他滨、拉米夫定、富马酸替诺福韦酯和齐多夫定；非核苷逆转 录酶抑制剂(NNRTI)，如依法韦伦、依曲韦林、奈韦拉平或利匹韦林；蛋 白酶抑制剂(PI)，如阿扎那韦、地瑞那韦、呋山那韦、利托那韦、沙奎那韦和替拉那韦；融合抑制剂，如恩夫韦肽；CCR5拮抗剂，如马拉韦罗；整 合酶抑制剂，如度鲁特韦和雷特格韦；后附接抑制剂，如伊巴珠单抗；药代 动力学增强剂，如可比司他；或者合剂，如阿巴卡韦和拉米夫定；阿巴卡韦、 度鲁特韦和拉米夫定；阿巴卡韦、拉米夫定和齐多夫定；阿扎那韦和可比司 他；比替拉韦、恩曲他滨和替诺福韦艾拉酚胺；地瑞那韦和可比司他；度鲁 特韦和利匹韦林；依法韦伦、恩曲他滨和富马酸替诺福韦酯；依法韦伦、拉 米夫定和富马酸替诺福韦酯；依法韦伦、拉米夫定和富马酸替诺福韦酯；艾 替拉韦、可比司他、恩曲他滨和富马酸替诺福韦艾拉酚胺；艾替拉韦、可比 司他、恩曲他滨和富马酸替诺福韦酯；恩曲他滨、利匹韦林和替诺福韦艾拉 酚胺；恩曲他滨、利匹韦林和富马酸替诺福韦酯；恩曲他滨和替诺福韦艾拉 酚胺；恩曲他滨和富马酸替诺福韦酯；拉米夫定和富马酸替诺福韦酯；拉米 夫定和齐多夫定；以及洛匹那韦和利托那韦。
在一些实施方案中，病毒是肝炎病毒，例如，甲型、乙型、丙 型、丁型或戊型肝炎。在一些情况下，将本文所述的细胞因子缀合物(例如， IL-2缀合物)施用至患有肝炎感染或处于潜伏期期间的受试者，以减少和/ 或消除处于静息期中的感染的细胞。在一些情形中，细胞因子缀合物重引导 CD8+T细胞识别和消除处于静息期中的感染的细胞。
在一些情形中，细胞因子缀合物是IL-2缀合物。在一些情况下， 将IL-2缀合物施用至患有肝炎感染或处于潜伏期期间的受试者，以减少和/ 或消除处于静息期中的感染的细胞。在一些情形中，IL-2缀合物重引导CD8+ T细胞识别和消除处于静息期中的感染的细胞。在一些情形中，将IL-2缀合 物与抗病毒疗法组合施用至受试者。肝炎的示例性抗病毒疗法包括利巴韦 林；NS3/4A蛋白酶抑制剂，如帕利瑞韦、西咪匹韦和格佐匹韦；NS5A蛋白酶抑制剂，如雷迪帕韦、奥比他韦、艾尔巴韦和达卡他韦；NS5B核苷酸/核 苷和非核苷聚合酶抑制剂，如索非布韦和达萨布韦；以及组合，如雷迪帕韦 -索非布韦、达萨布韦-奥比他韦-帕利瑞韦-利托那韦；艾尔巴韦-格佐匹韦、 奥比他韦-帕利瑞韦-利托那韦、索非布韦-维帕他韦、索非布韦-维帕他韦-伏 西瑞韦和格卡瑞韦-哌仑他韦；以及干扰素，如聚乙二醇干扰素α-2a、聚乙二 醇干扰素α-2b和干扰素α-2b。在一些情形中，将IL-2缀合物与抗病毒疗法组 合施用至受试者，所述抗病毒疗法例如利巴韦林；NS3/4A蛋白酶抑制剂，如 帕利瑞韦、西咪匹韦和格佐匹韦；NS5A蛋白酶抑制剂，如雷迪帕韦、奥比 他韦、艾尔巴韦和达卡他韦；NS5B核苷酸/核苷和非核苷聚合酶抑制剂，如 索非布韦和达萨布韦；以及组合，如雷迪帕韦-索非布韦、达萨布韦-奥比他 韦-帕利瑞韦-利托那韦；艾尔巴韦-格佐匹韦、奥比他韦-帕利瑞韦-利托那韦、 索非布韦-维帕他韦、索非布韦-维帕他韦-伏西瑞韦和格卡瑞韦-哌仑他韦； 以及干扰素，如聚乙二醇干扰素α-2a、聚乙二醇干扰素α-2b和干扰素α-2b。
自身免疫性疾病或障碍
在一些实施方案中，本文还描述一种治疗有需要的受试者的自 身免疫性疾病或障碍的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的 细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)。在一些情况下，IL-2缀合物包含分离 并纯化的IL-2多肽和缀合部分，其中相对于野生型IL-2多肽，IL-2缀合物具 有对IL-2受体β(IL-2Rβ)亚基、IL-2受体γ(IL-2Rγ)亚基或其组合降低的 亲和力。在一些情况下，IL-2缀合物包含分离并纯化的IL-2多肽；以及缀合 部分，所述缀合部分在选自以下的氨基酸残基与分离并纯化的IL-2多肽结合： P2、T3、S4、S5、S6、T7、K8、K9、Q11、L12、E15、H16、L18、L19、 D20、Q22、M23、N26、G27、N29、N30、Y31、K32、K35、T37、M46、 K47、K48、A50、T51、E52、K53、H55、Q57、E60、E67、N71、Q74、S75、 K76、N77、F78、H79、R81、P82、R83、D84、S87、N88、N89、V91、I92、 L94、E95、K97、G98、S99、E100、T101、T102、F103、M104、C105、E106、 Y107、A108、D109、E110、T111、A112、T113、E116、N119、R120、T123、 A125、Q126、S127、S130、T131、L132和T133，其中氨基酸残基的编号对 应于SEQID NO:1。在一些情况下，氨基酸残基选自K8、K9、Q11、L12、 E15、H16、L18、L19、D20、Q22、M23、N26、R81、D84、S87、N88、 V91、I92、L94、E95、E116、N119、R120、T123、A125、Q126、S127、S130、T131、L132和T133。在一些情况下，氨基酸残基选自K8、K9、L12、 E15、H16、L19、D20、Q22、M23、N26、D84、N88、E95和Q126。在一些 情形中，IL-2缀合物与IL-2Rαβγ复合物相互作用，但是对IL-2Rβ和IL-2Rγ亚 基的亲和力降低，或者将减少IL-2Rγ亚基至IL-2/IL-2Rβ复合物的募集。在一 些情形中，相对于野生型IL-2多肽，修饰的IL-2多肽维持对IL-2Rα的结合亲 和力。在此类情形中，IL-2/IL-2Rαβγ复合物刺激或增强CD4+Treg细胞的扩 增。在另外的情形中，修饰的IL-2多肽增加经由IL-2Rβγ复合物激活Teff和/ 或NK细胞所需的剂量，从而扩大经由IL-2Rαβγ复合物激活Treg细胞的剂量范 围(或扩大IL-2经由IL-2Rαβγ复合物激活Treg细胞的治疗窗)。
在一些情况下，自身免疫性疾病或障碍包括斑秃、自身免疫性 溶血性贫血、自身免疫性肝炎、皮肌炎、1型糖尿病、幼年特发性关节炎、 肾小球肾炎、格雷夫斯病、吉兰-巴雷综合征、特发性血小板减少性紫癜、 重症肌无力、多发性硬化、天疱疮/类天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、 多发性肌炎、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、类风湿性关节炎、硬皮病、干 燥综合征、系统性红斑狼疮、甲状腺炎、葡萄膜炎、白癜风或韦氏肉芽肿病。
在一些情形中，将细胞因子(例如，白介素、IFN或TNF)缀 合物施用至患有以下疾病的受试者：斑秃、自身免疫性溶血性贫血、自身免 疫性肝炎、皮肌炎、1型糖尿病、幼年特发性关节炎、肾小球肾炎、格雷夫 斯病、吉兰-巴雷综合征、特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、多发性 硬化、天疱疮/类天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多发性肌炎、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、类风湿性关节炎、硬皮病、干燥综合征、系统性红 斑狼疮、甲状腺炎、葡萄膜炎、白癜风或韦氏肉芽肿病。
在一些情形中，将IL-2缀合物施用至患有以下疾病的受试者： 斑秃、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、皮肌炎、1型糖尿病、幼 年特发性关节炎、肾小球肾炎、格雷夫斯病、吉兰-巴雷综合征、特发性血 小板减少性紫癜、重症肌无力、多发性硬化、天疱疮/类天疱疮、恶性贫血、 结节性多动脉炎、多发性肌炎、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、类风湿性关 节炎、硬皮病、干燥综合征、系统性红斑狼疮、甲状腺炎、葡萄膜炎、白癜 风或韦氏肉芽肿病。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至患有1型糖尿病的受 试者。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至患有格雷夫斯病的受试者。在一 些情形中，将IL-2缀合物施用至患有多发性硬化的受试者。在一些情形中， 将IL-2缀合物施用至患有银屑病的受试者。在一些情形中，将IL-2缀合物施 用至患有类风湿性关节炎的受试者。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至患 有干燥综合征的受试者。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至患有系统性红 斑狼疮的受试者。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至患有葡萄膜炎的受试 者。在一些情形中，将IL-2缀合物施用至患有韦氏肉芽肿病的受试者。
在一些情形中，将细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)施用 至受试者用于治疗移植物抗宿主病(GVHD)。
在一些实施方案中，将另外的治疗剂进一步施用至受试者。在 一些情形中，另外的治疗剂与细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)同时施 用。在其他情形中，另外的治疗剂和细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物) 依序施用，例如，在另外的治疗剂之前施用细胞因子缀合物(例如，IL-2缀 合物)，或者在施用另外的治疗剂之后施用细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合 物)。
用于治疗自身免疫性疾病或障碍的示例性另外的治疗剂包括 但不限于皮质类固醇，如泼尼松、布地奈德或泼尼松龙；钙调磷酸酶抑制剂， 如环孢菌素或他罗利姆；mTOR抑制剂，如西罗莫司或依维莫司；IMDH抑 制剂，如硫唑嘌呤、来氟米特或麦考酚酯；生物制品，如阿巴他塞、阿达木 单抗、阿那白滞素、赛妥珠单抗、依那西普、戈利木单抗、英利昔单抗、依 奇珠单抗、那他珠单抗、利妥昔单抗、苏金单抗、托珠单抗、优特克单抗或 维多珠单抗；以及单克隆抗体，如巴利昔单抗、达克珠单抗或莫罗单抗。
在一些情形中，细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)与选自 以下的另外的治疗剂一起施用：皮质类固醇，如泼尼松、布地奈德或泼尼松 龙；钙调磷酸酶抑制剂，如环孢菌素或他罗利姆；mTOR抑制剂，如西罗莫 司或依维莫司；IMDH抑制剂，如硫唑嘌呤、来氟米特或麦考酚酯；生物制 品，如阿巴他塞、阿达木单抗、阿那白滞素、赛妥珠单抗、依那西普、戈利木单抗、英利昔单抗、依奇珠单抗、那他珠单抗、利妥昔单抗、苏金单抗、 托珠单抗、优特克单抗或维多珠单抗；以及单克隆抗体，如巴利昔单抗、达 克珠单抗或莫罗单抗。
过继细胞疗法的开发
在一些实施方案中，本文公开生成可用于治疗有需要的受试者 的本文所述的疾病或病症(例如，增殖性疾病或病症、病原体感染和/或自身 免疫性疾病或病症)的过继细胞疗法组合物的方法，其包括：a)提供从有需 要的受试者获得的免疫细胞；b)工程化所述免疫细胞以表达修饰的IL-2多 肽、IL-2缀合物、IL-2Rβγ结合蛋白或所述免疫细胞的激活剂，其中所述免疫 细胞包括CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、CD8+细胞毒性T细胞、 抑制T细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞。在一些实施 方案中，将免疫细胞工程化以另外表达嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施 方案中，工程化步骤(b)包括使从受试者获得的免疫细胞与编码修饰的IL-2 多肽、IL-2缀合物、IL-2Rβγ结合蛋白或免疫细胞的激活剂的载体(例如，多 核苷酸序列)接触。在一些情况下，载体构成本文公开的制品。在一些情况 下，生成过继细胞疗法的方法是使用本文公开的试剂盒来进行。在一些实施 方案中，通过施用治疗有效量的过继细胞疗法，用过继细胞疗法治疗受试者。 在一些情况下，受试者被诊断患有疾病或病症。在一些情况下，过继细胞疗 法可有效治疗受试者的疾病或病症。在一些实施方案中，疾病或病症包括增 殖性疾病(例如，癌症)。在一些实施方案中，疾病或病症包括病原体感染。 在一些情况下，疾病或病症包括自身免疫性疾病。是癌症，如本文所述的那 些。
在一些实施方案中，本文公开生成可用于治疗有需要的受试者 的本文所述的疾病或病症(例如，增殖性疾病或病症、病原体感染和/或自身 免疫性疾病或病症)的过继细胞疗法组合物的方法，其包括：a)提供从有需 要的受试者获得的免疫细胞；b)使所述免疫细胞与修饰的IL-2多肽、IL-2缀 合物、IL-2Rβγ结合蛋白或所述免疫细胞的激活剂接触，其中所述免疫细胞 包括CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、CD8+细胞毒性T细胞、抑制T细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞。在一些实施方 案中，将免疫细胞工程化以另外表达嵌合抗原受体(CAR)。在一些情况下， 修饰的IL-2多肽、IL-2缀合物、IL-2Rβγ结合蛋白或免疫细胞的激活剂构成本 文公开的制品。在一些情况下，生成过继细胞疗法的方法是使用本文公开的 试剂盒来进行。在一些实施方案中，通过施用治疗有效量的过继细胞疗法， 用过继细胞疗法治疗受试者。在一些情况下，受试者被诊断患有疾病或病症。在一些情况下，过继细胞疗法可有效治疗受试者的疾病或病症。在一些实施 方案中，疾病或病症包括增殖性疾病(例如，癌症)。在一些实施方案中， 疾病或病症包括病原体感染。在一些情况下，疾病或病症包括自身免疫性疾 病。是癌症，如本文所述的那些。
在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽或IL-2缀合物在对应于 SEQ ID NO:1的位置42的残基F42处包含突变，并且包含含有分子量为约 2,000-50,000Da的PEG的缀合部分。在一些实施方案中，所述分子量包含 5,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案 中，所述分子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000 Da。在一些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中， 所述分子量包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。
在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽或IL-2缀合物在对应于 SEQ ID NO:1的位置65的残基P65处包含突变，并且包含含有分子量为约 2,000-50,000Da的PEG的缀合部分。在一些实施方案中，所述分子量包含 5,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案 中，所述分子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000 Da。在一些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中， 所述分子量包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。
在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽或IL-2缀合物在对应于 SEQ ID NO:1的位置62的残基E62处包含突变，并且包含含有分子量为约 2,000-50,000Da的PEG的缀合部分。在一些实施方案中，所述分子量包含 5,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案 中，所述分子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000 Da。在一些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中， 所述分子量包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。
在一些情况下，PEG的分子量有效改进IL-2多肽或IL-2缀合物 作为用于过继细胞疗法的试剂的制造过程。在一些实施方案中，PEG的分子 量改进IL-2多肽或IL-2缀合物的溶解度。在一些情况下，PEG的分子量改进 制造过继细胞疗法的纯化过程。在一些情况下，PEG的分子量改进IL-2多肽 或IL-2缀合物的稳定性。
在一些实施方案中，本文公开治疗有需要的受试者的自身免疫 性疾病或障碍的方法，其包括向受试者施用本文所述的过继细胞疗法。在一 些情况下，使用本文所述的方法开发过继细胞疗法。在一些情况下，除了本 文所述的细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)以外，将过继细胞疗法施用 至受试者。在一些情况下，在过继细胞疗法之前施用细胞因子缀合物。在一 些情况下，在过继细胞疗法之后施用细胞因子缀合物。在一些情况下，过继细胞疗法可有效扩增受试者中免疫细胞的群体(例如，CD4+辅助细胞、CD8+ 效应幼稚和记忆细胞、NK细胞和/或NKT细胞群、Treg细胞群)。
在一些实施方案中，本文公开治疗有需要的受试者的病原体感 染的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的过继细胞疗法。在 一些情况下，使用本文所述的方法开发过继细胞疗法。在一些情况下，除了 本文所述的细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)以外，将过继细胞疗法施 用至受试者。在一些情况下，在过继细胞疗法之前施用细胞因子缀合物。在 一些情况下，在过继细胞疗法之后施用细胞因子缀合物。在一些情况下，过继细胞疗法可有效扩增受试者中免疫细胞的群体(例如，CD4+辅助细胞、 CD8+效应幼稚和记忆细胞、NK细胞和/或NKT细胞群、Treg细胞群)。
在一些实施方案中，本文公开治疗有需要的受试者的增殖性疾 病或障碍(例如，癌症)的方法,其包括向受试者施用本文所述的过继细胞 疗法。在一些情况下，使用本文所述的方法开发过继细胞疗法。在一些情况 下，除了本文所述的细胞因子缀合物(例如，IL-2缀合物)以外，将过继细 胞疗法施用至受试者。在一些情况下，在过继细胞疗法之前施用细胞因子缀 合物。在一些情况下，在过继细胞疗法之后施用细胞因子缀合物。在一些情 况下，过继细胞疗法可有效扩增受试者中免疫细胞的群体(例如，CD4+辅 助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、NK细胞和/或NKT细胞群、Treg细胞群)。
细胞群扩增的方法
在一些实施方案中，本文另外描述扩增淋巴细胞群(例如， CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、NK细胞和/或NKT细胞群)的 方法或扩增Treg细胞群的方法。在一些情况下，所述方法包括使细胞与本文 所述的细胞因子缀合物接触，并使细胞因子与细胞因子受体相互作用以形成 复合物，其中所述复合物刺激不同淋巴细胞群的扩增。
在一些情况下，扩增CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细 胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞群的方法包括使细胞群 与上述分离并修饰的IL-2多肽接触足够时间以诱导与IL-2Rβ的复合物的形 成，从而刺激Teff和/或NK细胞群的扩增。在一些情况下，扩增CD4+辅助细 胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、NK细胞和/或NKT细胞群的方法包括(a)使 细胞群与本文所述的IL-2缀合物接触；以及(b)使IL-2与IL-2Rβ和IL-2Rγ亚 基相互作用以形成IL-2/IL-2Rβγ复合物；其中IL-2缀合物具有对IL-2Rα亚基降 低的亲和力，并且其中IL-2/IL-2Rβγ复合物刺激CD4+辅助细胞、CD8+效应 幼稚和记忆细胞、NK细胞和/或NKT细胞的扩增。如上所述，IL-2缀合物包 含分离并纯化的IL-2多肽；以及在选自以下的氨基酸位置与所述分离并纯化 的IL-2多肽结合的缀合部分：K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、 E60、E61、E62、K64、P65、E68、V69、N71、L72、M104、C105和Y107， 其中氨基酸残基的编号对应于SEQ ID NO:1。在一些情况下，氨基酸位置选 自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、 P65、V69、L72和Y107。在一些情况下，氨基酸位置选自T37、R38、T41、 F42、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72和Y107。在一些 情况下，氨基酸位置选自T37、R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、E68、 P65、V69、L72和Y107。在一些情况下，氨基酸位置选自T37、T41、F42、 F44、Y45、P65、V69、L72和Y107。在一些情况下，氨基酸位置选自R38 和K64。在一些情况下，氨基酸位置选自E61、E62和E68。在一些情形中， 氨基酸位置是在E62。
在一些情况下，IL-2缀合物将细胞群中的CD4+T调节性(Treg) 细胞扩增少于20％、15％、10％、5％或1％。在一些情况下，IL-2缀合物不扩 增细胞群中的CD4+Treg细胞。在一些情况下，在与分离并修饰的IL-2多肽 一起孵育后，细胞群中Teff细胞与Treg细胞的比率是至少2:1、3:1、4:1、 5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、20:1、50:1或100:1。在一些情况下，在与分离并修饰的IL-2多肽一起孵育后，细胞群中Teff细胞与Treg细胞的 比率为约2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、20:1、 50:1或100:1。
在一些情况下，足以诱导与IL-2Rβ的复合物的形成的时间是至 少5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、30分钟、1小时、2小时、3小时、4小 时、5小时、8小时、10小时、12小时、18小时、24小时、2天、3天、4天、5 天、6天或7天。在一些情况下，足以诱导与IL-2Rβ的复合物的形成的时间为 约5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、30分钟、1小时、2小时、3小时、4小 时、5小时、8小时、10小时、12小时、18小时、24小时、2天、3天、4天、5 天、6天或7天。
在一些情况下，所述方法是体内方法。
在一些情况下，所述方法是体外方法。
在一些情况下，所述方法是离体方法。
细胞因子多肽产生
在一些情况下，含有天然氨基酸突变或非天然氨基酸突变的本 文所述的细胞因子(例如，白介素、IFN或TNF)多肽是重组生成的或者是 化学合成的。在一些情况下，本文所述的细胞因子(例如，IL-2)多肽是重 组生成的，例如，由宿主细胞系统生成或在无细胞系统中生成。
在一些情况下，细胞因子(例如，IL-2)多肽是通过宿主细胞 系统重组生成的。在一些情形中，宿主细胞是真核细胞(例如，哺乳动物细 胞、昆虫细胞、酵母细胞或植物细胞)或原核细胞(例如，革兰氏阳性细菌 或革兰氏阴性细菌)。在一些情形中，真核宿主细胞是哺乳动物宿主细胞。 在一些情形中，哺乳动物宿主细胞是稳定的细胞系，或者是将目的遗传物质 掺入其自身基因组中并且具有在多代细胞分裂后表达所述遗传物质的产物 的能力的细胞系。在其他情形中，哺乳动物宿主细胞是瞬时细胞系，或者是 未将目的遗传物质掺入其自身基因组中并且不具有在多代细胞分裂后表达 所述遗传物质的产物的能力的细胞系。
示例性哺乳动物宿主细胞包括293T细胞系、293A细胞系、 293FT细胞系、293F细胞、293H细胞、A549细胞、MDCK细胞、CHO DG44 细胞、CHO-S细胞、CHO-K1细胞、Expi293FTM细胞、Flp-InTM T-RExTM 293 细胞系、Flp-InTM-293细胞系、Flp-InTM-3T3细胞系、Flp-InTM-BHK细胞系、 Flp-InTM-CHO细胞系、Flp-InTM-CV-1细胞系、Flp-InTM-Jurkat细胞系、FreeStyleTM 293-F细胞、FreeStyleTM CHO-S细胞、GripTiteTM 293 MSR细胞系、 GS-CHO细胞系、HepaRGTM细胞、T-RExTM Jurkat细胞系、Per.C6细胞、 T-RExTM-293细胞系、T-RExTM-CHO细胞系和T-RExTM-HeLa细胞系。
在一些实施方案中，真核宿主细胞是昆虫宿主细胞。示例性昆 虫宿主细胞包括果蝇(Drosophila)S2细胞、Sf9细胞、Sf21细胞、High FiveTM细胞和
Figure BDA0003528433030002221
细胞。
在一些实施方案中，真核宿主细胞是酵母宿主细胞。示例性酵 母宿主细胞包括毕赤酵母(Pichia pastoris)酵母菌株，如GS115、KM71H、 SMD1168、SMD1168H和X-33，以及酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 酵母菌株，如INVSc1。
在一些实施方案中，真核宿主细胞是植物宿主细胞。在一些情 况下，植物细胞包括来自藻类的细胞。示例性植物细胞系包括来自莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)137c或细长聚球藻(Synechococcus elongatus) PPC 7942的菌株。
在一些实施方案中，宿主细胞是原核宿主细胞。示例性原核宿 主细胞包括BL21、Mach1TM、DH10BTM、TOP10、DH5α、DH10BacTM、 OmniMaxTM、MegaXTM、DH12STM、INV110、TOP10F'、INVαF、TOP10/P3、 ccdB Survival、PIR1、PIR2、Stbl2TM、Stbl3TM或Stbl4TM。
在一些情况下，用于产生本文所述的IL-2多肽的合适的多核酸 分子或载体包括源自真核或原核来源的任何合适的载体。示例性多核酸分子 或载体包括来自细菌(例如大肠杆菌)、昆虫、酵母(例如毕赤酵母)、藻类 或哺乳动物来源的载体。细菌载体包括例如pACYC177、pASK75、pBAD载 体系列、pBADM载体系列、pET载体系列、pETM载体系列、pGEX载体系 列、pHAT、pHAT2、pMal-c2、pMal-p2、pQE载体系列、pRSET A、pRSET B、pRSET C、pTrcHis2系列、pZA31-Luc、pZE21-MCS-1、pFLAG ATS、pFLAG CTS、pFLAG MAC、pFLAG Shift-12c、pTAC-MAT-1、pFLAG CTC或 pTAC-MAT-2。
昆虫载体包括例如pFastBac1、pFastBac DUAL、pFastBac ET、 pFastBac HTa、pFastBac HTb、pFastBac HTc、pFastBac M30a、pFastBact M30b、 pFastBac、M30c、pVL1392、pVL1393、pVL1393 M10、pVL1393 M11、pVL1393 M12、FLAG载体(如pPolh-FLAG1或pPolh-MAT 2)或MAT载体(如 pPolh-MAT1或pPolh-MAT2)。
酵母载体包括例如
Figure BDA0003528433030002231
pDESTTM 14载体、
Figure BDA0003528433030002232
pDESTTM 15载体、
Figure BDA0003528433030002233
pDESTTM 17载体、
Figure BDA0003528433030002234
pDESTTM 24载体、
Figure BDA0003528433030002235
pYES-DEST52载体、pBAD-DEST49
Figure BDA0003528433030002236
目的载体、pAO815 毕赤酵母属载体、pFLD1毕赤酵母载体、pGAPZA、B和C毕赤酵母载体、 pPIC3.5K毕赤酵母属载体、pPIC6 A、B和C毕赤酵母属载体、pPIC9K毕赤酵 母属载体、pTEF1/Zeo、pYES2酵母载体、pYES2/CT酵母载体、pYES2/NT A、 B和C酵母载体或pYES3/CT酵母载体。
藻类载体包括例如pChlamy-4载体或MCS载体。
哺乳动物载体包括例如瞬时表达载体或稳定表达载体。示例性 哺乳动物瞬时表达载体包括p3xFLAG-CMV 8、pFLAG-Myc-CMV 19、pFL AG-Myc-CMV 23、pFLAG-CMV 2、pFLAG-CMV 6a,b,c、pFLAG-CMV 5. 1、pFLAG-CMV 5a,b,c、p3xFLAG-CMV 7.1、pFLAG-CMV 20、p3xFLAG -Myc-CMV 24、pCMV-FLAG-MAT1、pCMV-FLAG-MAT2、pBICEP-CMV 3或pBICEP-CMV 4。示例性哺乳动物稳定表达载体包括pFLAG-CMV 3、p 3xFLAG-CMV 9、p3xFLAG-CMV 13、pFLAG-Myc-CMV 21、p3xFLAG- Myc-CMV 25、pFLAG-CMV 4、p3xFLAG-CMV 10、p3xFLAG-CMV14、 pFLAG-Myc-CMV 22、p3xFLAG-Myc-CMV 26、pBICEP-CMV 1或pBICEP -CMV 2。
在一些情况下，使用无细胞系统产生本文所述的细胞因子(例 如，IL-2)多肽。在一些情形中，无细胞系统包含来自细胞的胞质和/或核组 分的混合物，并且适合于体外核酸合成。在一些情况下，无细胞系统利用原 核细胞组分。在其他情况下，无细胞系统利用真核细胞组分。核酸合成是在 基于例如果蝇细胞、非洲爪蟾卵、古细菌或HeLa细胞的无细胞系统中获得的。 示例性无细胞系统包括大肠杆菌S30提取系统、大肠杆菌T7 S30系统或
Figure BDA0003528433030002241
XpressCF和XpressCF+。
无细胞翻译系统不同地包含组分，如质粒、mRNA、DNA、 tRNA、合成酶、释放因子、核糖体、伴侣蛋白、翻译起始和延伸因子、天 然和/或非天然氨基酸和/或用于蛋白质表达的其他组分。任选地修饰此类组 分以提高产量、增加合成速率、增加蛋白质产物保真度或掺入非天然氨基酸。 在一些实施方案中，本文所述的细胞因子是使用US 8,778,631；US2017/0283469；US 2018/0051065；US 2014/0315245；或US 8,778,631中描述 的无细胞翻译系统合成的。在一些实施方案中，无细胞翻译系统包含修饰的 释放因子，或者甚至从所述系统去除一种或多种释放因子。在一些实施方案 中，无细胞翻译系统包含降低的蛋白酶浓度。在一些实施方案中，无细胞翻 译系统包含具有重新分配的密码子的修饰的tRNA，所述密码子用于编码非 天然氨基酸。在一些实施方案中，在无细胞翻译系统中使用本文所述的合成 酶用于掺入非天然氨基酸。在一些实施方案中，在将tRNA添加到无细胞翻 译系统之前，使用酶促或化学方法用非天然氨基酸对所述tRNA进行预加载。 在一些实施方案中，用于无细胞翻译系统的组分是从修饰的生物体(如修饰 的细菌、酵母或其他生物体)获得。
在一些实施方案中，细胞因子(例如，IL-2)多肽是作为环状 排列的形式经由表达宿主细胞或通过无细胞系统生成的。
包含非天然氨基酸的细胞因子多肽的产生
正交或扩展的遗传密码可以用于本公开文本中，其中分配细胞 因子(例如，IL-2)多肽的核酸序列中存在的一个或多个特定密码子来编码 非天然氨基酸，使得可以通过使用正交tRNA合成酶/tRNA对将其掺入细胞因 子(例如，IL-2)中。正交tRNA合成酶/tRNA对能够用非天然氨基酸装载tRNA， 并能够响应于所述密码子将所述非天然氨基酸掺入多肽链中。
在一些情况下，密码子是密码子琥珀、赭石、蛋白石或四联体 密码子。在一些情形中，密码子对应于将用于携带非天然氨基酸的正交 tRNA。在一些情形中，密码子是琥珀。在其他情形中，密码子是正交密码 子。
在一些情况下，密码子是四联体密码子，其可以由正交核糖体 ribo-Q1解码。在一些情形中，四联体密码子如以下文献中所述：Neumann 等人,“Encoding multipleunnatural amino acids via evolution of a quadruplet-decoding ribosome,”Nature,464(7287):441-444(2010)。
在一些情况下，本公开文本中使用的密码子是重编码的密码 子，例如，被可替代密码子替代的同义密码子或稀有密码子。在一些情形中， 重编码的密码子如以下文献中所述：Napolitano,等人,“Emergent rules for codon choice elucidated by editingrare argine codons in Escherichia coli,” PNAS,113(38):E5588-5597(2016)。在一些情形中，重编码的密码子如以下 文献中所述：Ostrov等人,“Design,synthesis,andtesting toward a 57-codon genome,”Science 353(6301):819-822(2016)。
在一些情况下，利用非天然核酸导致将一个或多个非天然氨基 酸掺入细胞因子(例如，IL-2)中。示例性非天然核酸包括但不限于尿嘧啶 -5-基、次黄嘌呤-9-基(I)、2-氨基腺嘌呤-9-基、5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、 5-羟甲基胞嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟嘌呤的6- 甲基衍生物和其他烷基衍生物、腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基衍生物和其他烷基 衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶、5-卤代尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶、6-偶氮基尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶 (假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶、8-卤代、8-氨基、8-巯基、8-硫烷基、8-羟基和 其他8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤、5-卤素(具体地，5-溴)、5-三氟甲基和其他 5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤、8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤和7-脱氮腺嘌呤以及3-脱氮鸟嘌呤和3-脱氮腺嘌 呤。某些非天然核酸，如5-取代的嘧啶、6-氮杂嘧啶和N-2取代的嘌呤、N-6取代的嘌呤、O-6取代的嘌呤、2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶、5-丙炔 基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、增加双链体形成稳定性的那些分子、通用核酸、 疏水性核酸、混杂核酸、尺寸扩大的核酸、氟化核酸、5-取代的嘧啶、6-氮 杂嘧啶以及N-2、N-6和0-6取代的嘌呤，包括2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿 嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5-羟甲基胞嘧啶、黄嘌呤、 次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基衍生物和其他烷基衍生物、腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基衍生物和其他烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫 胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶、5-卤代尿嘧啶、5-卤代胞嘧啶、5-丙炔基(-C≡C-CH3) 尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶、嘧啶核酸的其他炔基衍生物、6-偶氮基尿嘧啶、 6-偶氮基胞嘧啶、6-偶氮基胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶、 8-卤素、8-氨基、8-巯基、8-硫烷基、8-羟基和其他8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤、 5-卤素(具体地，5-溴)、5-三氟甲基、其他5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲 基鸟嘌呤、7-甲基腺嘌呤、2-F-腺嘌呤、2-氨基-腺嘌呤、8-氮杂鸟嘌呤、8- 氮杂腺嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤、7-脱氮杂嘌呤、3-脱氮鸟嘌呤、3-脱氮杂嘌呤、 三环嘧啶、吩噁嗪胞苷([5,4-b][l,4]苯并噁嗪-2(3H)-酮)、吩噻嗪胞苷(1H- 嘧啶并[5,4-b][l,4]苯并噻嗪-2(3H)-酮)、G-夹基、吩噁嗪胞苷(例如9-(2-氨基 乙氧基)-H-嘧啶并[5,4-b][l,4]苯并恶噁嗪-2(3H)-酮)、咔唑胞苷(2H-嘧啶并 [4,5-b]吲哚-2-酮)、吡啶并吲哚胞苷(H-吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-2- 酮)、其中嘌呤或嘧啶碱基被其他杂环替代的那些、7-脱氮-腺嘌呤、7-脱氮 鸟嘌呤、2-氨基吡啶、2-吡啶酮、氮杂胞嘧啶、5-溴胞嘧啶、溴尿嘧啶、5- 氯胞嘧啶、氯代胞嘧啶、环胞嘧啶、胞嘧啶阿拉伯糖苷、5-氟胞嘧啶、氟嘧 啶、氟尿嘧啶、5,6-二氢胞嘧啶、5-碘胞嘧啶、羟基脲、碘尿嘧啶、5-硝基胞 嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-氟尿嘧啶和5-碘尿嘧啶、2-氨基-腺嘌呤、 6-硫代-鸟嘌呤、2-硫代-胸腺嘧啶、4-硫代-胸腺嘧啶、5-丙炔基-尿嘧啶、4- 硫代-尿嘧啶、N4-乙基胞嘧啶、7-脱氮鸟嘌呤、7-脱氮-8-氮杂鸟嘌呤、5-羟 基胞嘧啶、2'-脱氧尿苷、2-氨基-2'-脱氧腺苷，以及描述于以下文献中的那些：美国专利号3,687,808；4,845,205；4,910,300；4,948,882；5,093,232；5,130,302； 5,134,066；5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,457,187；5,459,255；5,484,908； 5,502,177；5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,594,121；5,596,091；5,614,617；5,645,985；5,681,941；5,750,692；5,763,588；5,830,653和6,005,096；WO 99/62923；Kandimalla等人,(2001)Bioorg.Med.Chem.9:807-813；The Concise Encyclopedia of Polymer Scienceand Engineering,Kroschwitz,J.I.,编辑,John Wiley&Sons,1990,858-859；Englisch等人,Angewandte Chemie,International Edition,1991,30,613；和Sanghvi,第15章,Antisense Research and Applications, Crookeand Lebleu编,CRC Press,1993,273-288。另外的碱基修饰可以发现于 例如以下文献中：美国专利号3,687,808；Englisch等人,Angewandte Chemie, 国际版,1991,30,613；和Sanghvi,第15章,Antisense Research andApplications,第289-302页,Crooke和Lebleu编辑,CRC Press,1993。
包含各种杂环碱基和各种糖部分(和糖类似物)的非天然核酸 是本领域可获得的，并且在一些情形中，核酸包括除了天然存在的核酸的五 种主要碱基组分以外的一种或几种杂环碱基。例如，在一些情形中，杂环碱 基包括尿嘧啶-5-基、胞嘧啶-5-基、腺嘌呤-7-基、腺嘌呤-8-基、鸟嘌呤-7-基、 鸟嘌呤-8-基、4-氨基吡咯并[2.3-d]嘧啶-5-基、2-氨基-4-氧代吡咯并[2,3-d]嘧 啶5-基、2-氨基-4-氧代吡咯并[2.3-d]嘧啶-3-基，其中嘌呤经由9-位置、嘧啶 经由1-位置、吡咯并嘧啶经由7-位置且吡唑并嘧啶经由1-位置附接至核酸的糖部分。
在一些实施方案中，还在磷酸酯部分修饰核苷酸类似物。修饰 的磷酸酯部分包括但不限于在两个核苷酸之间的连接处具有修饰的那些，并 且含有例如硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基 烷基磷酸三酯、甲基和其他烷基膦酸酯(包括3'-亚烷基膦酸酯和手性膦酸 酯)、次膦酸酯、氨基磷酸酯(包括3'-氨基氨基磷酸酯和氨基烷基膦酰胺酯)、 硫代磷酰胺酯、硫代烷基膦酸酯、硫代烷基磷酸三酯和硼烷磷酸酯。应理解，两个核苷酸之间的这些磷酸酯或修饰的磷酸酯连接是通过3'-5'连接或2'-5'连 接实现的，并且所述连接含有反向极性，如3'-5'至5'-3'或2'-5'至5'-2'。还包括 各种盐、混合盐和游离酸形式。多个美国专利传授如何制备和使用含有修饰 的磷酸酯的核苷酸，并且包括但不限于3,687,808；4,469,863；4,476,301； 5,023,243；5,177,196；5,188,897；5,264,423；5,276,019；5,278,302；5,286,717； 5,321,131；5,399,676；5,405,939；5,453,496；5,455,233；5,466,677；5,476,925； 5,519,126；5,536,821；5,541,306；5,550,111；5,563,253；5,571,799；5,587,361； 和5,625,050。
在一些实施方案中，非天然核酸包括2',3'-二脱氧-2',3'-二脱氢- 核苷(PCT/US2002/006460)、5'-取代的DNA和RNA衍生物(PCT/US2011/0 33961；Saha等人,J.OrgChem.,1995,60,788-789；Wang等人,Bioorgani c&Medicinal Chemistry Letters,1999,9,885-890；以及Mikhailov等人,N ucleosides&Nucleotides,1991,10(1-3),339-343；Leonid等人,1995,14(3- 5),901-905；以及Eppacher等人,Helvetica Chimica Acta,2004,87,3004-3 020；PCT/JP2000/004720；PCT/JP2003/002342；PCT/JP2004/013216；PCT/JP2005/020435；PCT/JP2006/315479；PCT/JP2006/324484；PCT/JP2009/056 718；PCT/JP2010/067560)或者制备为具有修饰的碱基的单磷酸酯的5'-取代 的单体(Wang等人,Nucleosides Nucleotides&Nucleic Acids,2004,23(1 和2),317-337)。
在一些实施方案中，非天然核酸在糖环的5'-位置和2'-位置包括 修饰(PCT/US94/02993)，如5'-CH2-取代的2'-O-保护的核苷(Wu等人, Helvetica Chimica Acta,2000,83,1127-1143；和Wu等人,Bioconjugate Chem. 1999,10,921-924)。在一些情形中，非天然核酸包括酰胺连接的核苷二聚体, 其已经被制备用于掺入寡核苷酸中，其中二聚体中3'连接的核苷(5'至3')包 含2'-OCH3和5'-(S)-CH3(Mesmaeker等人,Synlett,1997,1287-1290)。非天然 核酸可以包括2'-取代的5'-CH2(或O)修饰的核苷(PCT/US92/01020)。非天 然核酸可以包括5'-亚甲基膦酸酯DNA和RNA单体和二聚体(Bohringer等人,Tet.Lett.,1993,34,2723-2726；Collingwood等人,Synlett,1995,7,703-705； 和Hutter等人,Helvetica Chimica Acta,2002,85,2777-2806)。非天然核酸可以 包括具有2'-取代基的5'-膦酸酯单体(US2006/0074035)和其他修饰的5'-膦酸 酯单体(WO1997/35869)。非天然核酸可以包括5'-修饰的亚甲基膦酸酯单体 (EP614907和EP629633)。非天然核酸可以包括在5'和/或6'-位置包含羟基的 5'或6'-膦酸酯核糖核苷的类似物(Chen等人,Phosphorus,Sulfur and Silicon, 2002,777,1783-1786；Jung等人,Bioorg.Med.Chem.,2000,8,2501-2509； Gallier等人,Eur.J.Org.Chem.,2007,925-933；和Hampton等人,J.Med.Chem., 1976,19(8),1029-1033)。非天然核酸可以包括具有5'-磷酸基的5'-膦酸酯脱氧 核糖核苷单体和二聚体(Nawrot等人,Oligonucleotides,2006,16(1),68-82)。 非天然核酸可以包括具有6'-膦酸基的核苷，其中5'或/和6'-位置未取代或被以 下取代：硫代叔丁基(SC(CH3)3)(及其类似物)；亚甲基氨基(CH2NH2)(及 其类似物)或氰基(CN)(及其类似物)(Fairhurst等人,Synlett,2001,4, 467-472；Kappler等人,J.Med.Chem.,1986,29,1030-1038；Kappler等人,J. Med.Chem.,1982,25,1179-1184；Vrudhula等人,J.Med.Chem.,1987,30, 888-894；Hampton等人,J.Med.Chem.,1976,19,1371-1377；Geze等人,J.Am. Chem.Soc,1983,105(26),7638-7640；和Hampton等人,J.Am.Chem.Soc, 1973,95(13),4404-4414)。
在一些实施方案中，非天然核酸还包括糖部分的修饰。在一些 情形中，核酸含有其中糖基团已被修饰的一种或多种核苷。此类糖修饰的核 苷可以赋予增强的核酸酶稳定性、增加的结合亲和力或一些其他有益的生物 学特性。在某些实施方案中，核酸包含化学修饰的呋喃核糖环部分。化学修 饰的呋喃核糖环的例子包括但不限于添加取代基(包括5'和/或2'取代基；两 个环原子桥接形成二环核酸(BNA)；用S、N(R)或C(R1)(R2)替代核糖基环氧 原子(R＝H、C1-C12烷基或保护基团)；及其组合。化学修饰的糖的例子可 以发现于WO2008/101157、US 2005/0130923和WO 2007/134181中。
在一些情况下，修饰的核酸包含修饰的糖或糖类似物。因此， 除了核糖和脱氧核糖以外，糖部分可以是戊糖、脱氧戊糖、己糖、脱氧己糖、 葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、来苏糖或糖“类似物”环戊基。糖可以呈吡喃糖 基或呋喃糖基形式。糖部分可以是核糖、脱氧核糖、阿拉伯糖或2'-O-烷基核 糖的呋喃糖苷，并且糖可以附接至呈[α]或[β]异头构型的相应杂环碱基。糖 修饰包括但不限于2'-烷氧基-RNA类似物、2'-氨基-RNA类似物、2'-氟-DNA、 和2'-烷氧基-或氨基-RNA/DNA嵌合体。例如，糖修饰可以包括2'-O-甲基-尿 苷或2'-O-甲基-胞苷。糖修饰包括2'-O-烷基-取代的脱氧核糖核苷和2'-O-乙二 醇样核糖核苷。这些糖或糖类似物以及相应“核苷”(其中此类糖或类似物 附接至杂环碱基(核酸碱基))的制备是已知的。还可以进行糖修饰并将其 与其他修饰组合。
对糖部分的修饰包括核糖和脱氧核糖的天然修饰以及非天然 修饰。糖修饰包括但不限于在2'位置处的以下修饰：OH；F；O-、S-或N-烷 基；O-、S-或N-烯基；O-、S-或N-炔基；或O-烷基-O-烷基，其中烷基、烯 基和炔基可以是取代或未取代的C1至C10烷基或C2至C10烯基和炔基。2'糖修饰 还包括但不限于-O[(CH2)nO]m CH3、-O(CH2)nOCH3、-O(CH2)nNH2、 -O(CH2)nCH3、-O(CH2)nONH2和-O(CH2)nON[(CH2)n CH3)]2，其中n和m是1至 约10。
2'位置处的其他修饰包括但不限于：C1至C10低级烷基、取代的 低级烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基、O-芳烷基、SH、SCH3、OCN、Cl、 Br、CN、CF3、OCF3、SOCH3、SO2 CH3、ONO2、NO2、N3、NH2、杂环烷 基、杂环烷芳基、氨基烷基氨基、聚烷基氨基、取代的甲硅烷基、RNA切割 基团、报告基团、嵌入剂、用于改善寡核苷酸药代动力学特性的基团或用于 改善寡核苷酸的药效学特性的基团，以及具有类似特性的其他取代基。还可 以在糖的其他位置(特别是在3'末端核苷酸或2'-5'连接的寡核苷酸中糖的3' 位置和5'末端核苷酸的5'位置)处进行类似的修饰。修饰的糖还包括在桥环 氧处含有修饰(如CH2和S)的那些糖。核苷酸糖类似物也可以具有糖模拟物， 如环丁基部分代替戊呋喃糖基糖。多个美国专利传授此类修饰的糖结构的制 备，并且它们详述并描述一系列碱基修饰，如美国专利号4,981,957； 5,118,800；5,319,080；5,359,044；5,393,878；5,446,137；5,466,786；5,514,785； 5,519,134；5,567,811；5,576,427；5,591,722；5,597,909；5,610,300；5,627,053； 5,639,873；5,646,265；5,658,873；5,670,633；4,845,205；5,130,302；5,134,066； 5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,457,187；5,459,255；5,484,908；5,502,177； 5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,594,121；5,596,091；5,614,617；5,681,941； 和5,700,920，所述专利各自通过引用以其整体并入本文。
具有修饰的糖部分的核酸的例子包括但不限于包含5'-乙烯基、 5'-甲基(R或S)、4'-S、2'-F、2'-OCH3和2'-O(CH2)2OCH3取代基的核酸。2'位 置处的取代基还可以选自烯丙基、氨基、叠氮基、硫基、O-烯丙基、O-(C1-C1O烷基)、OCF3、O(CH2)2SCH3、O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)和O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)， 其中Rm和Rn各自独立地是H或者取代或未取代的C1-C10烷基。
在某些实施方案中，本文所述的核酸包括一种或多种二环核 酸。在某些此类实施方案中，二环核酸包含4'与2'核糖基环原子之间的桥。 在某些实施方案中，本文提供的核酸包括一种或多种二环核酸，其中所述桥 包含4'至2'二环核酸。此类4'至2'二环核酸的例子包括但不限于以下式中的一 种：4'-(CH2)-O-2'(LNA)；4'-(CH2)-S-2'；4'-(CH2)2-O-2'(ENA)；4'-CH(CH3)-O-2' 和4'-CH(CH2OCH3)-O-2'及其类似物(参见美国专利号7,399,845)； 4'-C(CH3)(CH3)-O-2'及其类似物(参见WO 2009/006478、WO 2008/150729、 US2004/0171570、美国专利号7,427,672；Chattopadhyaya等人,J.Org.Chem., 209,74,118-134；和WO 2008/154401)。还参见例如：Singh等人,Chem. Commun.,1998,4,455-456；Koshkin等人,Tetrahedron,1998,54,3607-3630； Wahlestedt等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,2000,97,5633-5638；Kumar等 人,Bioorg.Med.Chem.Lett.,1998,8,2219-2222；Singh等人,J.Org.Chem., 1998,63,10035-10039；Srivastava等人,J.Am.Chem.Soc.,2007,129(26) 8362-8379；Elayadi等人,Curr.Opinion Invens.Drugs,2001,2,558-561； Braasch等人,Chem.Biol,2001,8,1-7；Oram等人,Curr.OpinionMol.Ther., 2001,3,239-243；美国专利号4,849,513；5,015,733；5,118,800；5,118,802；7,053,207；6,268,490；6,770,748；6,794,499；7,034,133；6,525,191；6,670,461； 和7,399,845；国际公开号WO 2004/106356、WO 1994/14226、WO 2005/021570、WO 2007/090071和WO 2007/134181；美国专利公开号US 2004/0171570、US 2007/0287831和US 2008/0039618；美国临时申请号 60/989,574、61/026,995、61/026,998、61/056,564、61/086,231、61/097,787 和61/099,844；以及国际申请号PCT/US2008/064591、PCT US2008/066154、 PCT US2008/068922和PCT/DK98/00393。
在某些实施方案中，核酸包含连接的核酸。核酸可以使用任何 核酸间连接而连接在一起。核酸间连接基团的两个主要类别是通过磷原子的 存在或不存在来定义的。代表性含磷核酸间连接包括但不限于磷酸二酯、磷 酸三酯、甲基膦酸酯、氨基磷酸酯和硫代磷酸酯(P＝S)。代表性无磷核酸 间连接基团包括但不限于亚甲基甲基亚氨基(-CH2-N(CH3)-O-CH2-)、硫代 二酯(-O-C(O)-S-)、硫代氨基甲酸酯(-O-C(O)(NH)-S-)；硅氧烷 (-O-Si(H)2-O-)；和N,N*-二甲基肼(-CH2-N(CH3)-N(CH3))。在某些实施方 案中，可以将具有手性原子的核酸间连接制备为外消旋混合物，制备为单独 的对映体，例如，烷基膦酸酯和硫代磷酸酯。非天然核酸可以含有单一修饰。 非天然核酸可以在一个部分内或在不同部分之间含有多个修饰。
对核酸的骨架磷酸酯修饰包括但不限于甲基膦酸酯、硫代磷酸 酯、氨基磷酸酯(桥连或非桥连)、磷酸三酯、二硫代磷酸酯、硫代磷酸酯 和硼烷磷酸酯，并且可以以任何组合使用。还可以使用其他非磷酸酯连接。
在一些实施方案中，骨架修饰(例如，甲基膦酸酯、硫代磷酸 酯、氨基磷酸酯和二硫代磷酸酯核苷酸间连接)可以赋予修饰的核酸免疫调 节活性和/或增强其体内稳定性。
在一些情况下，磷衍生物(或修饰的磷酸酯基团)附接至糖或 糖类似物部分，并且可以是单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、烷基膦酸酯、 硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、氨基磷酸酯等。含有修饰的磷酸酯连接或非磷 酸酯连接的示例性多核苷酸可以发现于以下文献中：Peyrottes等人,1996, Nucleic Acids Res.24:1841-1848；Chaturvedi等人,1996,Nucleic Acids Res. 24:2318-2323；和Schultz等人,(1996)Nucleic Acids Res.24:2966-2973； Matteucci,1997,“Oligonucleotide Analogs:an Overview”inOligonucleotides as Therapeutic Agents,(Chadwick和Cardew,编辑)John Wiley andSons,纽约, 纽约州；Zon,1993,“Oligonucleoside Phosphorothioates”in Protocolsfor Oligonucleotides and Analogs,Synthesis and Properties,Humana Press,第165-190页；Miller等人,1971,JACS 93:6657-6665；Jager等人,1988,Biochem. 27:7247-7246；Nelson等人,1997,JOC 62:7278-7287；美国专利号5,453,496； 和Micklefield,2001,Curr.Med.Chem.8:1157-1179。
在一些情况下，骨架修饰包括用可替代部分(如阴离子、中性 或阳离子基团)替代磷酸二酯连接。此类修饰的例子包括：阴离子核苷间连 接；N3'至P5'氨基磷酸酯修饰；硼烷磷酸酯DNA；前寡核苷酸；中性核苷间 连接，如甲基膦酸酯；酰胺连接的DNA；亚甲基(甲基亚氨基)连接；甲缩醛 和硫代甲缩醛连接；含有磺酰基的骨架；吗啉代寡核苷酸；肽核酸(PNA)； 以及带正电荷的脱氧核糖核酸胍(DNG)寡聚物(Micklefield,2001,CurrentMedicinal Chemistry 8:1157-1179)。修饰的核酸可以包含含有一种或多种修 饰的嵌合或混合骨架，所述修饰例如磷酸酯连接的组合，如磷酸二酯与硫代 磷酸酯连接的组合。
磷酸酯的取代基包括例如短链烷基或环烷基核苷间连接、混合 的杂原子和烷基或环烷基核苷间连接，或者一个或多个短链杂原子或杂环核 苷间连接。这些包括具有以下的那些：吗啉代连接(部分地由核苷的糖部分 形成)；硅氧烷骨架；硫化物、亚砜和砜骨架；甲酰乙酰基和硫代甲酰乙酰 基骨架；亚甲基甲酰乙酰基和硫代甲酰乙酰基骨架；含烯烃的骨架；氨基磺 酸酯骨架；亚甲基亚胺基和亚甲基肼基骨架；磺酸酯和磺酰胺骨架；酰胺骨架；以及具有混合N、O、S和CH2组成部分的其他骨架。多个美国专利披露 如何制备和使用这些类型的磷酸酯替代，并且包括但不限于美国专利号 5,034,506；5,166,315；5,185,444；5,214,134；5,216,141；5,235,033；5,264,562；5,264,564；5,405,938；5,434,257；5,466,677；5,470,967；5,489,677；5,541,307； 5,561,225；5,596,086；5,602,240；5,610,289；5,602,240；5,608,046；5,610,289； 5,618,704；5,623,070；5,663,312；5,633,360；5,677,437；和5,677,439。还应 理解，在核苷酸取代物中，核苷酸的糖和磷酸部分二者都可以被替代，例如 被酰胺型连接(氨乙基甘氨酸)(PNA)替代。美国专利号5,539,082；5,714,331； 和5,719,262传授如何制备和使用PNA分子，所述专利各自通过引用并入本 文。还参见Nielsen等人,Science,1991,254,1497-1500。还可能将其他类型的 分子(缀合物)连接至核苷酸或核苷酸类似物，以增强例如细胞摄取。缀合 物可以与核苷酸或核苷酸类似物化学连接。此类缀合物包括但不限于脂质部 分，如胆固醇部分(Letsinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1989,86, 6553-6556)；胆酸(Manoharan等人,Bioorg.Med.Chem.Let.,1994,4, 1053-1060)；硫醚，例如，己基-S-三苯甲基硫醇(Manoharan等人,Ann.KY. Acad.Sci.,1992,660,306-309；Manoharan等人,Bioorg.Med.Chem.Let.,1993, 3,2765-2770)；硫代胆固醇(Oberhauser等人,Nucl.AcidsRes.,1992,20, 533-538)；脂肪族链，例如，十二烷二醇或十一烷基残基(Saison-Behmoaras 等人,EM5OJ,1991,10,1111-1118；Kabanov等人,FEBS Lett.,1990,259, 327-330；Svinarchuk等人,Biochimie,1993,75,49-54)；磷脂，例如，二-十六 烷基-rac-甘油或l-二-O-十六烷基-rac-甘油-S-H-膦酸三乙铵(Manoharan等人, Tetrahedron Lett.,1995,36,3651-3654；Shea等人,Nucl.Acids Res.,1990,18, 3777-3783)；多胺或聚乙二醇链(Manoharan等人,Nucleosides&Nucleotides, 1995,14,969-973)；或金刚烷乙酸(Manoharan等人,Tetrahedron Lett.,1995,36, 3651-3654)；棕榈基部分(Mishra等人,Biochem.Biophys.Acta,1995,1264, 229-237)；或者十八烷胺或己基氨基-羰基-氧基胆固醇部分(Crooke等人,J. Pharmacol.Exp.Ther.,1996,277,923-937)。多个美国专利传授此类缀合物的 制备，并且包括但不限于美国专利号4,828,979；4,948,882；5,218,105； 5,525,465；5,541,313；5,545,730；5,552,538；5,578,717,5,580,731；5,580,731； 5,591,584；5,109,124；5,118,802；5,138,045；5,414,077；5,486,603；5,512,439； 5,578,718；5,608,046；4,587,044；4,605,735；4,667,025；4,762,779；4,789,737； 4,824,941；4,835,263；4,876,335；4,904,582；4,958,013；5,082,830；5,112,963； 5,214,136；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,245,022；5,254,469；5,258,506； 5,262,536；5,272,250；5,292,873；5,317,098；5,371,241,5,391,723；5,416,203, 5,451,463；5,510,475；5,512,667；5,514,785；5,565,552；5,567,810；5,574,142； 5,585,481；5,587,371；5,595,726；5,597,696；5,599,923；5,599,928和5,688,941。
在一些情形中，非天然核酸进一步形成非天然碱基对。能够在 体内条件下形成非天然DNA或RNA碱基对(UBP)的示例性非天然核苷酸包 括但不限于TPT3、dTPT3、5SICS、d5SICS、NaM、dNaM、CNMO、dCNMO 及其组合。
在一些情形中，非天然核酸进一步形成非天然碱基对。能够在 体内条件下兴成非天然DNA或RNA碱基对(UBP)的示例性非天然核苷酸包 括但不限于5SICS、d5SICS、NAM、dNaM及其组合。可以用于制备本文公 开的IL-2缀合物的能够形成非天然UBP的非天然核苷酸的其他例子可以发现 于以下文献中：Dien等人,J Am Chem Soc.,2018,140:16115-16123；Feldman 等人,J Am Chem Soc,2017,139:11427-11433；Ledbetter等人,J Am Chem Soc.,2018,140:758-765；Dhami等人,Nucleic Acids Res.2014,42:10235-10244； Malyshev等人,Nature,2014,509:385-388；Betz等人,J Am Chem Soc.,2013, 135:18637-18643；Lavergne等人,J Am Chem Soc.2013,135:5408-5419；以及 Malyshev等人Proc Natl AcadSci USA,2012,109:12005-12010。在一些实施 方案中，非天然核苷酸包括：
Figure BDA0003528433030002341
在一些实施方案中，可以用于制备本文公开的IL-2缀合物的非 天然核苷酸可能衍生自下式的化合物：
Figure BDA0003528433030002351
其中R2选自氢、烷基、烯基、炔基、甲氧基、甲硫醇、甲烷硒基、卤素、 氰基和叠氮基；并且
波浪线指示与核糖基或2'-脱氧核糖基的键，其中核糖基或2'-脱氧核糖基 部分的5'-羟基呈游离形式，或者任选地键合至单磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸 酯基。
在一些实施方案中，可以用于制备本文公开的IL-2缀合物的非 天然核苷酸可能衍生自
Figure BDA0003528433030002352
Figure BDA0003528433030002353
在一 些实施方案中，可以用于制备本文公开的IL-2缀合物的非天然核苷酸包括
Figure BDA0003528433030002354
Figure BDA0003528433030002361
或其盐。
在一些实施方案中，非天然碱基对生成非天然氨基酸，如以下 文献中所述：Dumas等人,“Designing logical codon reassignment–Expanding the chemistry inbiology,”Chemical Science,6:50-69(2015)。
在合适的培养基中培养或维持引入了本文公开的构建体或载 体的宿主细胞，使得产生tRNA、tRNA合成酶和目的蛋白质。培养基还包含 一种或多种非天然氨基酸，使得目的蛋白质掺入所述一种或多种非天然氨基 酸。在一些实施方案中，来自细菌、植物或藻类的三磷酸核苷转运蛋白(NTT) 也存在于宿主细胞中。在一些实施方案中，本文公开的IL-2缀合物是通过使 用表达NTT的宿主细胞来制备。在一些实施方案中，用于宿主细胞中的核苷 酸三磷酸核苷转运蛋白可以选自TpNTT1、TpNTT2、TpNTT3、TpNTT4、 TpNTT5、TpNTT6、TpNTT7、TpNTT8(假微型海链藻(T.pseudonana))、 PtNTT1、PtNTT2、PtNTT3、PtNTT4、PtNTT5、PtNTT6(三角褐指藻(P. tricornutum))、GsNTT(嗜硫原始红藻(Galdieriasulphuraria))、AtNTT1、 AtNTT2(拟南芥(Arabidopsis thaliana))、CtNTT1、CtNTT2(沙眼衣原体 (Chlamydia trachomatis))、PamNTT1、PamNTT2(嗜阿米巴原衣原体(Protochlamydia amoebophila))、CcNTT(石竹杀手杆菌(Caedibacter caryophilus))、RpNTT1(普氏立克次体(Rickettsia prowazekii))。在一些实 施方案中，NTT选自PtNTT1、PtNTT2、PtNTT3、PtNTT4、PtNTT5和PtNTT6。 在一些实施方案中，NTT是PtNTT1。在一些实施方案中，NTT是PtNTT2。 在一些实施方案中，NTT是PtNTT3。在一些实施方案中，NTT是PtNTT4。 在一些实施方案中，NTT是PtNTT5。在一些实施方案中，NTT是PtNTT6。 可以使用的其他NTT披露于以下文献中：Zhang等人,Nature 2017,551(7682): 644-647；Malyshev等人Nature 2014(509(7500),385-388；以及Zhang等人 Proc Natl Acad Sci USA,2017,114:1317-1322。
正交tRNA合成酶/tRNA对用非天然氨基酸装载tRNA，并响应 于所述密码子将所述非天然氨基酸掺入多肽链中。示例性aaRS-tRNA对包括 但不限于詹氏甲烷球菌(Mj-Tyr)aaRS/tRNA对、大肠杆菌(E.coli)TyrRS (Ec-Tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌tRNACUA对、大肠杆菌LeuRS(Ec-Leu)/嗜热 脂肪芽孢杆菌tRNACUA对和吡咯赖氨酰基-tRNA对。可以根据本公开文本使 用的其他aaRS-tRNA对包括源自马氏甲烷八叠球菌的那些，描述于以下文献 中的那些：Feldman等人,J Am Chem Soc.,2018 140:1447-1454；以及Zhang 等人Proc Natl AcadSci USA,2017,114:1317-1322。
在一些实施方案中提供在表达NTT和tRNA合成酶的细胞系统 中制备本文公开的IL-2缀合物的方法。在本文所述的一些实施方案中，NTT 选自PtNTT1、PtNTT2、PtNTT3、PtNTT4、PtNTT5和PtNTT6，并且tRNA合 成酶选自詹氏甲烷球菌、大肠杆菌TyrRS(Ec-Tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌和马 氏甲烷八叠球菌。在一些实施方案中，NTT是PtNTT1，并且tRNA合成酶源 自詹氏甲烷球菌、大肠杆菌TyrRS(Ec-Tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌或马氏甲烷 八叠球菌。在一些实施方案中，NTT是PtNTT2，并且tRNA合成酶源自詹氏 甲烷球菌、大肠杆菌TyrRS(Ec-Tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌或马氏甲烷八叠球 菌。在一些实施方案中，NTT是PtNTT3，并且tRNA合成酶源自詹氏甲烷球 菌、大肠杆菌TyrRS(Ec-Tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌或马氏甲烷八叠球菌。在 一些实施方案中，NTT是PtNTT3，并且tRNA合成酶源自詹氏甲烷球菌、大 肠杆菌TyrRS(Ec-Tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌或马氏甲烷八叠球菌。在一些实 施方案中，NTT是PtNTT4，并且tRNA合成酶源自詹氏甲烷球菌、大肠杆菌 TyrRS(Ec-Tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌或马氏甲烷八叠球菌。在一些实施方案 中，NTT是PtNTT5，并且tRNA合成酶源自詹氏甲烷球菌、大肠杆菌TyrRS (Ec-Tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌或马氏甲烷八叠球菌。在一些实施方案中，NTT 是PtNTT6，并且tRNA合成酶源自詹氏甲烷球菌、大肠杆菌TyrRS(Ec-Tyr) /嗜热脂肪芽孢杆菌或马氏甲烷八叠球菌。
包含一个或多个非天然氨基酸的细胞因子(例如，IL-2)多肽 是通过将本文所述的核酸构建体引入宿主细胞中来制备，所述核酸构建体包 含tRNA和tRNA合成酶并且包含具有一个或多个框内正交(终止)密码子的 目的核酸序列。使宿主细胞暴露于包含一种或多种非天然氨基酸的生理溶 液，然后将宿主细胞维持在允许表达目的蛋白质的编码序列的条件下。响应 于所述密码子，将一个或多个非天然氨基酸掺入多肽链中。例如，将一个或多个非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，IL-2)多肽中。可替代地，可以在 蛋白质中的两个或更多个位点将两个或多个非天然氨基酸掺入细胞因子(例 如，IL-2)多肽中。
在一些实施方案中，本文公开的IL-2缀合物可以在细胞(如大 肠杆菌)中制备，其包含(a)三磷酸核苷转运蛋白PtNTT2(包括截短的变 体，其中全长蛋白质的前65个氨基酸残基缺失)，(b)包含双链寡核苷酸的质 粒，所述双链寡核苷酸编码具有所需氨基酸序列的IL-2变体并且含有包含第 一非天然核苷酸和第二非天然核苷酸的非天然碱基对，以在所需位置提供密 码子，将在所述位置掺入非天然氨基酸，如N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L- 赖氨酸(AzK)，(c)编码源自马氏甲烷八叠球菌的tRNA的质粒，并且其包 含非天然核苷酸以提供公认的反密码子(针对IL-2变体的密码子)来代替其 天然序列，以及(d)编码巴氏甲烷八叠球菌来源的吡咯赖氨酰基-tRNA合成 酶(Mb PylRS)的质粒，其可以是编码所述tRNA的相同质粒或不同质粒。 在一些实施方案中，细胞进一步补充有包含一种或多种非天然碱基的脱氧核 糖三磷酸酯。在一些实施方案中，细胞进一步补充有包含一种或多种非天然 碱基的核糖三磷酸酯。在一些实施方案中，细胞进一步补充有一种或多种非 天然氨基酸，如N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸(AzK)。在一些实施 方案中，编码所需IL-2变体的氨基酸序列的双链寡核苷酸在例如编码具有 SEQ ID NO:4的蛋白质(IL-2_C125S)的序列的位置35、42、43、62或65， 或者在编码具有SEQ ID NO:3的蛋白质(阿地白介素)的序列的位置34、41、 42、61或64含有密码子AXC，其中X是非天然核苷酸。在一些实施方案中，细胞还包含质粒，所述质粒可以是蛋白质表达质粒或另一种质粒，其编码来 自马氏甲烷八叠球菌的正交tRNA基因，所述正交tRNA基因包含AXC匹配的 反密码子GYT代替其天然序列，其中Y是互补的并且可以与所述密码子中的 非天然核苷酸相同或不同的非天然核苷酸。在一些实施方案中，密码子中的 非天然核苷酸与反密码子中的非天然核苷酸不同且互补。在一些实施方案 中，密码子中的非天然核苷酸与反密码子中的非天然核苷酸相同。在一些实施方案中，双链寡核苷酸中非天然碱基对的第一和第二非天然核苷酸可能衍 生自
Figure BDA0003528433030002381
在一些实施方案 中，双链寡核苷酸中非天然碱基对的第一和第二非天然核苷酸可能衍生自
Figure BDA0003528433030002391
在一些实施方案中，第一和第二非天 然核苷酸的三磷酸酯包括
Figure BDA0003528433030002392
Figure BDA0003528433030002393
或其盐。在一 些实施方案中，第一和第二非天然核苷酸的三磷酸酯包括
Figure BDA0003528433030002394
或其盐。在一些实施方案中，源自包含第一非天然核苷酸和第二非天然核苷酸的双链寡 核苷酸的mRNA可以包含含有衍生自
Figure BDA0003528433030002395
Figure BDA0003528433030002401
的非天然核苷酸的密码子。在一些实施方案中，马氏甲烷八 叠球菌tRNA可以包含含有非天然核苷酸的反密码子，其识别包含所述mRNA 的非天然核苷酸的密码子。马氏甲烷八叠球菌tRNA中的反密码子可以包含 衍生自
Figure BDA0003528433030002402
的非天然核苷 酸。在一些实施方案中，mRNA包含衍生自
Figure BDA0003528433030002403
的非天然核苷 酸。在一些实施方案中，mRNA包含衍生自
Figure BDA0003528433030002404
的非天然核苷酸。 在一些实施方案中，mRNA包含衍生自
Figure BDA0003528433030002405
的非天然核苷酸。在 一些实施方案中，tRNA包含衍生自
Figure BDA0003528433030002411
的非天然核苷酸。在 一些实施方案中，tRNA包含衍生自
Figure BDA0003528433030002412
的非天然核苷酸。在一些 实施方案中，tRNA包含衍生自
Figure BDA0003528433030002413
的非天然核苷酸。在一些实施 方案中，mRNA包含衍生自
Figure BDA0003528433030002414
的非天然核苷酸，并且tRNA 包含衍生自
Figure BDA0003528433030002415
的非天然核苷酸。在一些实施方案中，mRNA包 含衍生自
Figure BDA0003528433030002416
的非天然核苷酸，并且tRNA包含衍生自
Figure BDA0003528433030002421
的非天然核苷酸。将宿主细胞在含有适当营养素的培养基 中培养，并补充以下物质：(a)包含一种或多种非天然碱基的脱氧核糖核苷 三磷酸酯，所述非天然碱基是编码具有密码子的细胞因子基因的一种或多种 质粒的复制所需的，(b)包含一种或多种非天然碱基的核糖核苷三磷酸酯， 所述非天然碱基是以下的转录所需的：(i)对应于细胞因子的编码序列并且 含有包含一种或多种非天然碱基的密码子的mRNA，和(ii)含有包含一种或 多种非天然碱基的反密码子的tRNA，以及(c)要掺入目的细胞因子的多肽 序列中的一种或多种非天然氨基酸。然后将宿主细胞维持在允许目的蛋白质 表达的条件下。
在一些情形中，包含非天然碱基的密码子和包含非天然碱基的 反密码子可以选自以下对，其中X和Y各自包含独立地选自以下的碱基：
Figure BDA0003528433030002422
Figure BDA0003528433030002423
其中R2选自氢、烷基、烯基、炔基、甲 氧基、甲硫醇、甲烷硒基、卤素、氰基和叠氮基；并且在每种情形中，波浪 线在X和Y包含mRNA或tRNA时指示与核糖基的键，或者在X和Y包含DNA 时指示2'-脱氧核糖基。
Figure BDA0003528433030002424
Figure BDA0003528433030002431
所表达的包含一种或多种非天然氨基酸(例如Azk)的所得蛋 白质可以通过本领域普通技术人员已知的方法来纯化，然后可以允许其与炔 烃(如包含如本文所公开的具有所需平均分子量的PEG链的DBCO)在本领 域普通技术人员已知的条件下反应，以提供本文公开的IL-2缀合物。其他方 法是本领域普通技术人员已知的，如以下文献中披露的那些：Zhang等人, Nature 2017,551(7682):644-647；WO 2015157555；WO 2015021432；WO2016115168；WO 2017106767；WO 2017223528；WO 2019014262；WO 2019014267；WO2019028419；和WO 2019/028425。
可替代地，包含一种或多种非天然氨基酸的细胞因子(例如， IL-2)多肽是通过将本文所述的核酸构建体引入宿主细胞中来制备，所述核 酸构建体包含tRNA和氨酰基tRNA合成酶并且包含具有一个或多个框内正交 (终止)密码子的目的核酸序列。将宿主细胞在含有适当营养素的培养基中 培养，补充以下物质：(a)包含一种或多种非天然碱基的脱氧核糖核苷三磷 酸酯，所述非天然碱基是编码具有新密码子和反密码子的细胞因子基因的一 种或多种质粒的复制所需的，(b)mRNA的转录所需的核糖核苷三磷酸酯， 所述mRNA对应于(i)含有所述密码子的细胞因子序列，和(ii)含有反密码 子的正交tRNA，以及(c)所述一种或多种非天然氨基酸。然后将宿主细胞 维持在允许目的蛋白质表达的条件下。响应于非天然密码子，将一个或多个 非天然氨基酸掺入多肽链中。例如，将一个或多个非天然氨基酸掺入细胞因 子(例如，IL-2)多肽中。可替代地，可以在蛋白质中的两个或更多个位点 将两个或多个非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，IL-2)多肽中。
一旦在宿主细胞中产生了掺入一个或多个非天然氨基酸的细 胞因子(例如，IL-2)多肽，就可以通过本领域中已知的多种技术(包括酶 促、化学和/或渗透裂解和物理破坏)从所述宿主细胞提取所述多肽。细胞因 子(例如，IL-2)多肽可以通过本领域中已知的标准技术来纯化，所述标准 技术例如制备型离子交换色谱、疏水色谱、亲和色谱或者本领域普通技术人 员已知的任何其他合适的技术。
合适的宿主细胞可以包括细菌细胞(例如，大肠杆菌、 BL21(DE3))，但是最合适的宿主细胞是真核细胞，例如昆虫细胞(例如果蝇， 如黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster))、酵母细胞、线虫(例如线虫 (Celegans))、小鼠(例如小家鼠(Musmusculus))或哺乳动物细胞(如中 国仓鼠卵巢细胞(CHO)或COS细胞、人293T细胞、HeLa细胞、NIH 3T3细 胞和小鼠红白血病(MEL)细胞)或人细胞或其他真核细胞。其他合适的宿 主细胞是本领域技术人员已知的。合适地，宿主细胞是哺乳动物细胞，如人 细胞或昆虫细胞。在一些实施方案中，合适的宿主细胞包括大肠杆菌。
通常可以在本发明的实施方案中使用的其他合适的宿主细胞 是在实施例部分中提到的那些。可以经由常规转化或转染技术将载体DNA 引入宿主细胞中。如本文所用，术语“转化”和“转染”旨在指用于将外来 核酸分子(例如，DNA)引入宿主细胞中的多种公认的技术，包括磷酸钙或 氯化钙共沉淀、DEAE-葡聚糖介导的转染、脂质转染或电穿孔。用于转化或 转染宿主细胞的合适方法是本领域熟知的。
当创建细胞系时，通常优选地制备稳定细胞系。例如，对于哺 乳动物细胞的稳定转染，已知根据所使用的表达载体和转染技术，只有一小 部分细胞可以将外来DNA整合到其基因组中。为了鉴定和选择这些组成部 分，通常将编码可选择标记物(例如，对抗生素的抗性)的基因与目的基因 一起引入宿主细胞中。优选的可选择标记物包括赋予对药物(如G418、潮霉 素或甲氨蝶呤)的抗性的那些可选择标记物。可以将编码可选择标记物的核 酸分子在相同载体上引入宿主细胞中，或者可以引入单独的载体上。可以通 过药物选择来鉴定被引入的核酸分子稳定转染的细胞(例如，已掺入可选择 标记基因的细胞将存活，而其他细胞死亡)。
在一个实施方案中，将本文所述的构建体整合到宿主细胞的基 因组中。稳定整合的优点是实现了各个细胞或克隆之间的均匀性。另一个优 点是可以进行最佳生产者的选择。因此，希望创建稳定的细胞系。在另一个 实施方案中，将本文所述的构建体转染到宿主细胞中。将构建体转染到宿主 细胞中的优点是可以使蛋白质产量最大化。在一个方面，描述了包含本文所 述的核酸构建体或载体的细胞。
当将多个非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，IL-2)多肽中时， 应理解，需要将多个密码子在所需位置掺入编码核酸序列中，使得tRNA合 成酶/tRNA对可以响应于一个或多个密码子引导非天然氨基酸的掺入。可以 将至少1、2、3、4或更多个密码子编码核酸掺入目的核酸序列中。
当需要将超过一种类型的非天然氨基酸掺入目的蛋白质成为 单一蛋白质时，可以使用第二或另外的正交tRNA-tRNA合成酶对来掺入第二 或另外的非天然氨基酸；合适地，所述第二或另外的正交tRNA-tRNA合成酶 对识别编码目的蛋白质的核酸中的不同密码子，使得可以在单一制造步骤中 将两个或更多个非天然氨基酸特异性地掺入蛋白质中的不同定义位点中。在 某些实施方案中，因此可以使用两个或更多个正交tRNA-tRNA合成酶对。
一旦在宿主细胞中产生了掺入一个或多个非天然氨基酸的细 胞因子(例如，IL-2)多肽，就可以通过本领域中已知的多种技术(包括酶 促、化学和/或渗透裂解和物理破坏)从所述宿主细胞提取所述多肽。细胞因 子(例如，IL-2)多肽可以通过本领域已知的标准技术来纯化，所述标准技 术例如制备型色谱、亲和纯化或任何其他合适的技术。
合适的宿主细胞可以包括细菌细胞(例如，大肠杆菌、BL21(DE3))，但是最合适的宿主细胞是真核细胞，例如昆虫细胞(例如果蝇， 如黑腹果蝇)、酵母细胞、线虫(例如线虫)、小鼠(例如小家鼠)或哺乳动 物细胞(如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)或COS细胞、人293T细胞、HeLa细 胞、NIH 3T3细胞和小鼠红白血病(MEL)细胞)或人细胞或其他真核细胞。 其他合适的宿主细胞是本领域技术人员已知的。合适地，宿主细胞是哺乳动 物细胞，如人细胞或昆虫细胞。
通常可以在本发明的实施方案中使用的其他合适的宿主细胞 是在实施例部分中提到的那些。可以经由常规转化或转染技术将载体DNA 引入宿主细胞中。如本文所用，术语“转化”和“转染”旨在指用于将外来 核酸分子(例如，DNA)引入宿主细胞中的多种公认的技术，包括磷酸钙或 氯化钙共沉淀、DEAE-葡聚糖介导的转染、脂质转染或电穿孔。用于转化或 转染宿主细胞的合适方法是本领域熟知的。
当创建细胞系时，通常优选地制备稳定细胞系。例如，对于哺 乳动物细胞的稳定转染，已知根据所使用的表达载体和转染技术，只有一小 部分细胞可以将外来DNA整合到其基因组中。为了鉴定和选择这些组成部 分，通常将编码可选择标记物(例如，对抗生素的抗性)的基因与目的基因 一起引入宿主细胞中。优选的可选择标记物包括赋予对药物(如G418、潮霉 素或甲氨蝶呤)的抗性的那些可选择标记物。可以将编码可选择标记物的核 酸分子在相同载体上引入宿主细胞中，或者可以引入单独的载体上。可以通 过药物选择来鉴定被引入的核酸分子稳定转染的细胞(例如，已掺入可选择 标记基因的细胞将存活，而其他细胞死亡)。
在一个实施方案中，将本文所述的构建体整合到宿主细胞的基 因组中。稳定整合的优点是实现了各个细胞或克隆之间的均匀性。另一个优 点是可以进行最佳生产者的选择。因此，希望创建稳定的细胞系。在另一个 实施方案中，将本文所述的构建体转染到宿主细胞中。将构建体转染到宿主 细胞中的优点是可以使蛋白质产量最大化。在一个方面，描述了包含本文所 述的核酸构建体或载体的细胞。
药物组合物和配制品
在一些实施方案中，通过多个施用途径将本文所述的药物组合 物和配制品施用至受试者，所述施用途径包括但不限于肠胃外、口服、经颊、 直肠、舌下或透皮施用途径。在一些情况下，肠胃外施用包括静脉内、皮下、 肌内、脑内、鼻内、动脉内、关节内、皮内、玻璃体内、骨内输注、腹膜内 或鞘内施用。在一些情况下，将药物组合物配制用于局部施用。在其他情况 下，将药物组合物配制用于全身施用。在一些实施方案中，通过静脉内、皮 下和肌内施用将本文所述的药物组合物和配制品施用至受试者。在一些实施 方案中，通过静脉内施用将本文所述的药物组合物和配制品施用至受试者。 在一些实施方案中，通过施用将本文所述的药物组合物和配制品施用至受试 者。在一些实施方案中，通过肌内施用将本文所述的药物组合物和配制品施 用至受试者。
在一些实施方案中，药物配制品包括但不限于水性液体分散 液、自乳化分散液、固体溶液、脂质体分散液、气溶胶、固体剂型、粉末、 速释配制品、控释配制品、速融配制品、片剂、胶囊、丸剂、延迟释放配制 品、延长释放配制品、脉冲式释放配制品、多颗粒配制品(例如，纳米颗粒 配制品)和混合式速释与控释配制品。
在一些实施方案中，药物配制品包括基于与本文公开的组合物 的相容性和所需剂型的释放曲线特性而选择的载体或载体材料。示例性载体 材料包括例如粘合剂、悬浮剂、崩解剂、填充剂、表面活性剂、增溶剂、稳 定剂、润滑剂、润湿剂、稀释剂等。药学上相容的载体材料包括但不限于阿 拉伯胶、明胶、胶体二氧化硅、甘油磷酸钙、乳酸钙、麦芽糊精、甘油、硅 酸镁、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、胆固醇、胆固醇酯、酪蛋白酸钠、大豆卵 磷脂、牛磺胆酸、磷脂酰胆碱、氯化钠、磷酸三钙、磷酸氢二钾、纤维素和 纤维素缀合物、糖硬脂酰乳酸钠、角叉菜胶、甘油单酯、甘油二酯、预胶化 淀粉等。参见例如，Remington:The Scienceand Practice of Pharmacy,第十九 版(Easton,Pa.:Mack Publishing Company,1995),Hoover,John E.,Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania 1975, Liberman,H.A.和Lachman,L.,编辑,PharmaceuticalDosage Forms,Marcel Decker,纽约,纽约州,1980,以及Pharmaceutical Dosage Formsand Drug Delivery Systems,第七版(Lippincott Williams&Wilkins1999)。
在一些情形中，将药物组合物配制为免疫脂质体，其包含与脂 质体的脂质双层直接或间接结合的多个IL-2缀合物。示例性脂质包括但不限 于脂肪酸；磷脂；甾醇类，如胆固醇；鞘脂，如鞘磷脂；糖鞘脂，如神经节 苷脂、红细胞糖苷脂和脑苷脂；表面活性剂胺，如硬脂酰胺、油酰胺和亚油 酰胺。在一些情况下，脂质包括阳离子脂质。在一些情况下，脂质包括磷脂。 示例性磷脂包括但不限于磷脂酸(“PA”)、磷脂酰胆碱(“PC”)、磷脂 酰甘油(“PG”)、磷脂酰乙醇胺(“PE”)、磷脂酰肌醇(“PI”)和磷 脂酰丝氨酸(“PS”)、鞘磷脂(包括脑鞘磷脂)、卵磷脂、溶血卵磷脂、溶 血磷脂酰乙醇胺、脑苷脂、二花生酰基磷脂酰胆碱(“DAPC”)、二癸酰基 -L-α-磷脂酰胆碱(“DDPC”)、二反油酰基磷脂酰胆碱(“DEPC”)、二 月桂酰基磷脂酰胆碱(“DLPC”)、二亚油酰基磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰基 磷脂酰胆碱(“DMPC”)、二油酰基磷脂酰胆碱(“DOPC”)、二棕榈酰 基磷脂酰胆碱(“DPPC”)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(“DSPC”)、1-棕榈 酰基-2-油酰基-磷脂酰胆碱(“POPC”)、二花生酰基磷脂酰甘油 (“DAPG”)、二癸酰基-L-α-磷脂酰甘油(“DDPG”)、二反油酰基磷脂 酰甘油(“DEPG”)、二月桂酰基磷脂酰甘油(“DLPG”)、二亚油酰基磷 脂酰甘油、二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油(“DMPG”)、二油酰基磷脂酰甘油 (“DOPG”)、二棕榈酰基磷脂酰甘油(“DPPG”)、二硬脂酰基磷脂酰甘 油(“DSPG”)、1-棕榈酰基-2-油酰基-磷脂酰甘油(“POPG”)、二花生 酰基磷脂酰乙醇胺(“DAPE”)、二癸酰基-L-α-磷脂酰乙醇胺(“DDPE”)、 二反油酰基磷脂酰乙醇胺(“DEPE”)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺 (“DLPE”)、二亚油酰基磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺 (“DMPE”)、二油酰基磷脂酰乙醇胺(“DOPE”)、二棕榈酰基磷脂酰 乙醇胺(“DPPE”)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(“DSPE”)、1-棕榈酰基 -2-油酰基-磷脂酰乙醇胺(“POPE”)、二花生酰基磷脂酰肌醇(“DAPI”)、 二癸酰基-L-α-磷脂酰肌醇(“DDPI”)、二反油酰基磷脂酰肌醇(“DEPI”)、 二月桂酰基磷脂酰肌醇(“DLPI”)、二亚油酰基磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰 基磷脂酰肌醇(“DMPI”)、二油酰基磷脂酰肌醇(“DOPI”)、二棕榈酰 基磷脂酰肌醇(“DPPI”)、二硬脂酰基磷脂酰肌醇醇(“DSPI”)、1-棕榈 酰基-2-油酰基-磷脂酰肌醇(“POPI”)、二花生酰基磷脂酰丝氨酸 (“DAPS”)、二癸酰基-L-α-磷脂酰丝氨酸(“DDPS”)、二反油酰基磷脂 酰丝氨酸(“DEPS”)、二月桂酰基磷脂酰丝氨酸(“DLPS”)、二亚油酰 基磷脂酰丝氨酸(“DMPS”)、二油酰基磷脂酰丝氨酸(“DOPS”)、二棕 榈酰基磷脂酰丝氨酸(“DPPS”)、二硬脂酰基磷脂酰丝氨酸(“DSPS”)、 1-棕榈酰基-2-油酰基-磷脂酰丝氨酸(“POPS”)、二花生酰基鞘磷脂、二癸 酰基鞘磷脂、二反油酰基鞘磷脂、二月桂酰基鞘磷脂、二亚油酰基鞘磷脂、 二肉豆蔻酰基鞘磷脂、鞘磷脂、二油酰基鞘磷脂、二棕榈酰基鞘磷脂、二硬 脂酰基鞘磷脂以及1-棕榈酰基-2-油酰基-鞘磷脂。
在一些情况下，药物配制品还包括pH调节剂或缓冲剂，其包括 酸，如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱，如氢氧化钠、磷酸钠、 硼酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠和三羟甲基氨基甲烷；以及缓冲液，如 柠檬酸盐/葡萄糖、碳酸氢钠和氯化铵。以使组合物的pH维持在可接受范围 内所需的量包括此类酸、碱和缓冲液。
在一些情况下，药物配制品以使组合物的渗透压在可接受范围 内所需的量包括一种或多种盐。此类盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯离子、 柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根 或亚硫酸氢根阴离子的那些盐，合适的盐包括氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、 亚硫酸氢钠和硫酸铵。
在一些实施方案中，药物配制品包括但不限于糖(如海藻糖、 蔗糖、甘露醇、麦芽糖、葡萄糖)或盐(如磷酸钾、柠檬酸钠、硫酸铵)和 /或其他药剂(如肝素)，以增加多肽的溶解度和体内稳定性。
在一些情况下，药物配制品还包括用于稳定化合物的稀释剂， 因为它们可以提供更稳定的环境。溶解于缓冲溶液中的盐(其也可以提供pH 控制或维持)在本领域中用作稀释剂，包括但不限于磷酸盐缓冲盐溶液。在 某些情况下，稀释剂增加组合物的体积以促进压缩，或者产生足够体积用于 均匀共混物，以供胶囊填充。此类化合物可以包括例如乳糖、淀粉、甘露醇、 山梨醇、右旋糖、微晶纤维素(如
Figure BDA0003528433030002491
)、磷酸氢钙、磷酸氢钙二水合物、磷酸三钙、磷酸钙、无水乳糖、喷雾干燥的乳糖、预胶化淀粉、可压缩糖(如
Figure BDA0003528433030002492
(Amstar))、甘露醇、羟丙基甲基纤维素、醋酸硬脂酸羟丙基甲基纤 维素、基于蔗糖的稀释剂、糖果剂的糖、硫酸二氢钙一水合物、硫酸钙二水 合物、乳酸钙三水合物、葡聚糖结合剂、谷物水解固形物、直链淀粉、粉状 纤维素、碳酸钙、甘氨酸、高岭土、甘露醇、氯化钠、肌醇、膨润土等。在 一些实施方案中，本文公开的IL-2缀合物可以用于药物配制品中，所述药物配制品包含组氨酸、山梨醇和聚山梨醇酯80，或者提供稳定配制品且可以施 用至有需要的受试者的任何组合。在一个实施方案中，本文公开的IL-2缀合 物可以呈现为合适的容器(如小瓶)中的成品药，如下：IL-2缀合物(约2mg 至约10mg)；L-组氨酸(约0.5mg至约2mg)；L-组氨酸盐酸盐(约1mg至约 2mg)；山梨醇(约20mg至约80mg)；以及聚山梨醇酯80(约0.1mg至约0.2 mg)；具有足量的注射用水以提供适用于所公开方法中的液体配制品。
在一些情形中，药物配制品包括崩解剂(disintegration agent) 或崩解剂(disintegrant)以促进物质的分解或崩解。术语“崩解”包括剂型 在与胃肠液接触时的溶解和分散二者。崩解剂的例子包括淀粉，例如，天然 淀粉(如玉米淀粉或马铃薯淀粉)、预胶化淀粉(如National 1551或
Figure BDA0003528433030002501
) 或羟基乙酸淀粉钠(如
Figure BDA0003528433030002502
或
Figure BDA0003528433030002503
)；纤维素，如木制品、甲基结 晶纤维素(例如，
Figure BDA0003528433030002504
PH101、
Figure BDA0003528433030002505
PH102、
Figure BDA0003528433030002506
PH105、
Figure BDA0003528433030002507
P100、
Figure BDA0003528433030002508
Ming
Figure BDA0003528433030002509
和
Figure BDA00035284330300025010
)、甲基纤维素、 交联羧甲纤维素或交联纤维素(如交联羧甲纤维素钠
Figure BDA00035284330300025011
交联羧甲基纤维素或交联交联羧甲纤维素)；交联淀粉，如羟基乙酸淀粉钠；交联 聚合物，如交聚维酮、交联聚乙烯基吡咯烷酮；海藻酸盐，如海藻酸或海藻 酸的盐(如海藻酸钠)；黏土，如
Figure BDA00035284330300025012
HV(硅酸镁铝)；胶质，如琼脂、 瓜尔胶、槐豆胶、卡拉牙胶、果胶或黄蓍胶；羟基乙酸淀粉钠；膨润土；天 然海绵；表面活性剂；树脂，如阳离子交换树脂；柑橘渣；十二烷基硫酸钠； 与淀粉组合的十二烷基硫酸钠等。
在一些情况下，药物配制品包括填充剂，如乳糖、碳酸钙、磷 酸钙、磷酸氢钙、硫酸钙、微晶纤维素、纤维素粉、右旋糖、葡聚糖结合剂、 葡聚糖、淀粉、预胶化淀粉、蔗糖、木糖醇、乳糖醇、甘露醇、山梨醇、氯 化钠、聚乙二醇等。
润滑剂和助流剂也任选地包括在本文所述的药物配制品中，用 于防止、减少或抑制材料的粘附或摩擦。示例性润滑剂包括例如硬脂酸、氢 氧化钙、滑石粉、硬脂酰富马酸钠、烃(如矿物油，或氢化植物油，如氢化 大豆油
Figure BDA00035284330300025013
)、高级脂肪酸及其碱金属和碱土金属盐(如铝、钙、镁、 锌、硬脂酸、硬脂酸钠)、甘油、滑石粉、蜡、
Figure BDA00035284330300025014
硼酸、苯甲酸钠、 乙酸钠、氯化钠、亮氨酸、聚乙二醇(例如，PEG-4000)或甲氧基聚乙二醇 (如CarbowaxTM)、油酸钠、苯甲酸钠、山嵛酸甘油酯、聚乙二醇、十二烷 基硫酸镁或十二烷基硫酸钠、胶体二氧化硅(如SyloidTM、
Figure BDA00035284330300025015
)、淀 粉(如玉米淀粉)、硅油、表面活性剂等。
增塑剂包括用于软化微囊化材料或薄膜涂层以使其脆性降低 的化合物。合适的增塑剂包括例如聚乙二醇(如PEG 300、PEG 400、PEG 600、 PEG 1450、PEG 3350和PEG800)、硬脂酸、丙二醇、油酸、三乙基纤维素 和三醋汀。增塑剂也可以起分散剂或润湿剂的作用。
增溶剂包括化合物，如三醋汀、柠檬酸三乙酯、油酸乙酯、辛 酸乙酯、十二烷基硫酸钠、多库酯钠、维生素E TPGS、二甲基乙酰胺、N- 甲基吡咯烷酮、N-羟乙基吡咯烷酮、聚乙烯基吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、 羟丙基环糊精、乙醇、正丁醇、异丙醇、胆固醇、胆汁盐、聚乙二醇200-600、 糖原质、还氧二元醇、丙二醇和二甲基异山梨醇酯等。
稳定剂包括化合物，如任何抗氧化剂、缓冲剂、酸、防腐剂等。 示例性稳定剂包括L-精氨酸盐酸盐、氨基丁三醇、白蛋白(人)、柠檬酸、 苯甲醇、苯酚、磷酸二氢二钠脱水、丙二醇、间甲酚(metacresol)或间甲 酚(m-cresol)、乙酸锌、聚山梨酯-20或
Figure BDA0003528433030002511
20或氨丁三醇。
悬浮剂包括化合物，如聚乙烯基吡咯烷酮，例如，聚乙烯基吡 咯烷酮K12、聚乙烯基吡咯烷酮K17、聚乙烯基吡咯烷酮K25或聚乙烯基吡咯 烷酮K30；乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物(S630)；聚乙二醇，例如， 聚乙二醇的分子量可以为约300至约6000、或约3350至约4000、或约7000至 约5400；羧甲纤维素钠；甲基纤维素；羟丙基甲基纤维素；醋酸硬脂酸羟甲 基纤维素；聚山梨醇酯-80；羟乙基纤维素；海藻酸钠；胶质，如例如，黄 蓍胶和阿拉伯胶、瓜尔胶、黄原胶类(包括黄原胶)；糖；纤维质，如例如， 羧甲纤维素钠、甲基纤维素、羧甲纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤 维素；聚山梨醇酯-80；海藻酸钠；聚乙氧基化脱水山梨糖醇单月桂酸酯、 聚乙氧基化脱水山梨糖醇单月桂酸酯；聚维酮等。
表面活性剂包括化合物，如十二烷基硫酸钠、多库酯钠、吐温 60或80、三醋精、维生素E TPGS、脱水山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯脱水山 梨糖醇单油酸酯、聚山梨酸酯、聚山梨醇酯、胆汁盐、单硬脂酸甘油酯、环 氧乙烷与环氧丙烷的共聚物(例如，
Figure BDA0003528433030002512
(BASF))等。另外的表面活 性剂包括聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和植物油(例如聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油) 以及聚氧乙烯烷基醚和烷基苯基醚(例如辛苯聚醇10、辛苯聚醇40)。有时，包括表面活性剂以增强物理稳定性或用于其他目的。
粘度增强剂包括例如甲基纤维素、黄原胶、羧甲基纤维素、羟 丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、醋酸硬脂酸羟丙基甲基纤维素、邻苯二甲 酸羟丙基甲基纤维素、卡波姆、聚乙烯醇、海藻酸盐、阿拉伯胶、壳聚糖及 其组合。
润湿剂包括化合物，如油酸、单硬脂酸甘油酯、脱水山梨糖醇 单油酸酯、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、聚氧乙烯脱水山梨 糖醇单油酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯、多库酯钠、油酸钠、十 二烷基硫酸钠、多库酯钠、三醋汀、吐温80、维生素ETPGS、铵盐等。
治疗方案
在一些实施方案中，施用本文所述的药物组合物用于治疗应 用。在一些实施方案中，将药物组合物每天施用一次、每天施用两次、每天 施用三次或更多次。将药物组合物每日施用、每天施用、每隔一天施用、每 周施用五天、每周施用一次、每隔一周施用、每月施用两周、每月施用三周、 每月施用一次、每月施用两次、每月施用三次或更多次。将药物组合物施用 至少1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、 10个月、11个月、12个月、18个月、2年、3年或更久。
在其中患者状况确实有所改善的情形中，根据医生的判断，连 续施用组合物，可替代地，将施用的组合物的剂量暂时减少或暂时中止一定 时间(即“药物假期”)。在一些情况下，药物假期的长度在2天与1年之间 变化，包括(仅举例)2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、 20天、28天、35天、50天、70天、100天、120天、150天、180天、200天、 250天、280天、300天、320天、350天或365天。药物假期期间的剂量减少为 10％-100％，包括(仅举例)10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、 45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
在一些实施方案中，将有效量的IL-2缀合物施用至有需要的受 试者，每周一次、每两周一次、每三周一次、每4周一次、每5周一次、每6 周一次、每7周一次、每8周一次、每9周一次、每10周一次、每11周一次、 每12周一次、每13周一次、每14周一次、每15周一次、每16周一次、每17周 一次、每18周一次、每19周一次、每20周一次、每21周一次、每22周一次、每23周一次、每24周一次、每25周一次、每26周一次、每27周一次或每28周 一次。在一些实施方案中，将有效量的IL-2缀合物施用至有需要的受试者， 每周一次。在一些实施方案中，将有效量的IL-2缀合物施用至有需要的受试 者，每两周一次。在一些实施方案中，将有效量的IL-2缀合物施用至有需要 的受试者，每三周一次。在一些实施方案中，将有效量的IL-2缀合物施用至 有需要的受试者，每4周一次。在一些实施方案中，将有效量的IL-2缀合物施 用至有需要的受试者，每5周一次。在一些实施方案中，将有效量的IL-2缀合 物施用至有需要的受试者，每6周一次。在一些实施方案中，将有效量的IL-2 缀合物施用至有需要的受试者，每7周一次。在一些实施方案中，将有效量 的IL-2缀合物施用至有需要的受试者，每8周一次。在一些实施方案中，将有 效量的IL-2缀合物施用至有需要的受试者，每9周一次。在一些实施方案中， 将有效量的IL-2缀合物施用至有需要的受试者，每10周一次。在一些实施方 案中，将有效量的IL-2缀合物施用至有需要的受试者，每11周一次。在一些 实施方案中，将有效量的IL-2缀合物施用至有需要的受试者，每12周一次。 在一些实施方案中，将有效量的IL-2缀合物施用至有需要的受试者，每13周 一次。在一些实施方案中，将有效量的IL-2缀合物施用至有需要的受试者， 每14周一次。在一些实施方案中，将有效量的IL-2缀合物施用至有需要的受 试者，每15周一次。在一些实施方案中，将有效量的IL-2缀合物施用至有需 要的受试者，每16周一次。在一些实施方案中，将有效量的IL-2缀合物施用 至有需要的受试者，每17周一次。在一些实施方案中，将有效量的IL-2缀合 物施用至有需要的受试者，每18周一次。在一些实施方案中，将有效量的IL-2 缀合物施用至有需要的受试者，每19周一次。在一些实施方案中，将有效量 的IL-2缀合物施用至有需要的受试者，每20周一次。在一些实施方案中，将 有效量的IL-2缀合物施用至有需要的受试者，每21周一次。在一些实施方案 中，将有效量的IL-2缀合物施用至有需要的受试者，每22周一次。在一些实 施方案中，将有效量的IL-2缀合物施用至有需要的受试者，每23周一次。在 一些实施方案中，将有效量的IL-2缀合物施用至有需要的受试者，每24周一 次。
在一些实施方案中，对应于这种量的给定药剂的量根据多种因 素而变化，所述因素如特定化合物、疾病的严重程度、需要治疗的受试者或 宿主的特性(例如，体重)，然而根据围绕病例的特定情况(包括例如所施 用的具体药剂、施用途径和所治疗的受试者或宿主)以本领域已知的方式常 规地确定。在一些情况下，所需剂量方便地以单一剂量或作为分开的剂量存 在，所述分开的剂量是同时(或在短时间段内)或以适当的间隔(例如每天两个、三个、四个或更多个子剂量)施用。
在一些实施方案中，所述方法包括将IL-2缀合物以以下范围的 剂量给予有需要的受试者：1μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀 合物/kg受试者体重、或约2μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合 物/kg受试者体重、或约4μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约6μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约8μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约10μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约12μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约14μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约16μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约18μgIL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约20μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约22μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约24μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约26μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约28μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约32μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约34μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约36μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约40μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约45μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约50μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约55μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约60μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约65μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约70μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约75μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约80μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约85μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约90μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约95μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物/kg受试者体重、或约100μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约110μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约120μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约130μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约140μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约150μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约160μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约170μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约180μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、或约190μg IL-2缀合物/kg受试者体重至约200μg IL-2缀合物 /kg受试者体重。前述范围仅仅是提示性的，因为关于单一治疗方案的变量数 量很大，并且相对于这些推荐值的显著偏差并不罕见。此类剂量根据许多变 量而改变，不限于所使用化合物的活性、要治疗的疾病或病症、施用方式、 单独受试者的需求、所治疗疾病或病症的严重程度以及执业医师的判断。在 一些实施方案中，此类治疗方案的毒性和治疗功效通过细胞培养物或实验动 物中的标准制药学程序来确定，所述标准制药学程序包括但不限于LD50(对 50％的群体致死的剂量)和ED50(对50％的群体具有治疗效果的剂量)的确 定。毒性与治疗效果之间的剂量比是治疗指数，并且其表示为LD50与ED50 之间的比率。展现出高治疗指数的化合物是优选的。将从细胞培养测定和动 物研究获得的数据用于制定用于人的剂量范围。此类化合物的剂量优选地在 循环浓度的范围内，所述循环浓度包括具有最小毒性的ED50。所述剂量根 据所采用的剂型和所利用的施用途径而在这个范围内变化。
在一些实施方案中，所述方法包括将IL-2缀合物以以下剂量给 予有需要的受试者：约1μg IL-2缀合物/kg受试者体重、或约2μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、约4μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约6μg IL-2缀合物/kg受 试者体重、约8μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约10μg IL-2缀合物/kg受试者 体重、约12μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约14μgIL-2缀合物/kg受试者体重、 约16μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约18μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约20 μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约22μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约24μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约26μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约28μg IL-2 缀合物/kg受试者体重、约30μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约32μg IL-2缀合 物/kg受试者体重、约34μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约36μg IL-2缀合物/kg 受试者体重、约38μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约40μg IL-2缀合物/kg受试 者体重、约42μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约44μg IL-2缀合物/kg受试者体 重、约46μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约48μgIL-2缀合物/kg受试者体重、 约50μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约55μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约60 μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约65μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约70μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约75μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约80μg IL-2 缀合物/kg受试者体重、约85μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约90μg IL-2缀合 物/kg受试者体重、约95μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约100μg IL-2缀合物 /kg受试者体重、约110μgIL-2缀合物/kg受试者体重、约120μg IL-2缀合物/kg 受试者体重、约130μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约140μg IL-2缀合物/kg 受试者体重、约150μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约160μg IL-2缀合物/kg 受试者体重、约170μg IL-2缀合物/kg受试者体重、约180μgIL-2缀合物/kg 受试者体重、约190μg IL-2缀合物/kg受试者体重或约200μg IL-2缀合物/kg 受试者体重。前述范围仅仅是提示性的，因为关于单一治疗方案的变量数量 很大，并且相对于这些推荐值的显著偏差并不罕见。此类剂量根据许多变量 而改变，不限于所使用化合物的活性、要治疗的疾病或病症、施用方式、单 独受试者的需求、所治疗疾病或病症的严重程度以及执业医师的判断。在一 些实施方案中，此类治疗方案的毒性和治疗功效通过细胞培养物或实验动物 中的标准制药学程序来确定，所述标准制药学程序包括但不限于LD50(对 50％的群体致死的剂量)和ED50(对50％的群体具有治疗效果的剂量)的确 定。毒性与治疗效果之间的剂量比是治疗指数，并且其表示为LD50与ED50 之间的比率。展现出高治疗指数的化合物是优选的。将从细胞培养测定和动 物研究获得的数据用于制定用于人的剂量范围。此类化合物的剂量优选地在 循环浓度的范围内，所述循环浓度包括具有最小毒性的ED50。所述剂量根 据所采用的剂型和所利用的施用途径而在这个范围内变化。
一旦患者病症得到改善，必要时施用维持剂量。随后，可以根 据症状将施用的剂量或频率或二者降低至保持改善的疾病、障碍或病症的水 平。
在一些实施方案中，对应于这种量的给定药剂的量根据多种因 素而变化，所述因素如特定化合物、疾病的严重程度、需要治疗的受试者或 宿主的特性(例如，体重)，然而根据围绕病例的特定情况(包括例如所施 用的具体药剂、施用途径和所治疗的受试者或宿主)以本领域已知的方式常 规地确定。在一些情况下，所需剂量方便地以单一剂量或作为分开的剂量存 在，所述分开的剂量是同时(或在短时间段内)或以适当的间隔(例如每天两个、三个、四个或更多个子剂量)施用。
前述范围仅仅是提示性的，因为关于单一治疗方案的变量数量 很大，并且相对于这些推荐值的显著偏差并不罕见。此类剂量根据许多变量 而改变，不限于所使用化合物的活性、要治疗的疾病或病症、施用方式、单 独受试者的需求、所治疗疾病或病症的严重程度以及执业医师的判断。
在一些实施方案中，此类治疗方案的毒性和治疗功效通过细胞 培养物或实验动物中的标准制药学程序来确定，所述标准制药学程序包括但 不限于LD50(对50％的群体致死的剂量)和ED50(对50％的群体具有治疗 效果的剂量)的确定。毒性与治疗效果之间的剂量比是治疗指数，并且其表 示为LD50与ED50之间的比率。展现出高治疗指数的化合物是优选的。将从 细胞培养测定和动物研究获得的数据用于制定用于人的剂量范围。此类化合物的剂量优选地在循环浓度的范围内，所述循环浓度包括具有最小毒性的 ED50。所述剂量根据所采用的剂型和所利用的施用途径而在这个范围内变 化。
试剂盒/制品
在某些实施方案中，本文公开了与本文所述的一种或多种方法 和组合物一起使用的试剂盒和制品。此类试剂盒包括载体、包装或容器，其 被分隔以容纳一个或多个容器，如小瓶、管等，所述一个或多个容器各自包 含要在本文所述方法中使用的单独要素之一。合适的容器包括例如瓶子、小 瓶、注射器和试管。在一个实施方案中，容器由各种材料(如玻璃或塑料) 形成。
在一些实施方案中，试剂盒包含用于开发过继细胞疗法的制 品。在一些实施方案中，试剂盒包含一种或多种本文公开的细胞因子(例如， IL-2)多肽或细胞因子(例如，IL-2)缀合物，以及任选地一种或多种本文 所述的药物赋形剂，以促进细胞因子(例如，IL-2)多肽或细胞因子(例如， IL-2)缀合物的递送。此类试剂盒可以任选地包括一种或多种辅助组分，包 括T细胞受体信号传导或调节的诱导物(例如，检查点抗体、CD3/CD28抗体、 主要组织相容性复合物(MHC)等)，或者替代性细胞因子或细胞因子受体 激动剂。此类试剂盒任选地还包括与其在本文所述的方法中的使用有关的识 别描述或标签或说明。在一些实施方案中，试剂盒包含编码本文公开的IL-2 缀合物的一个或多个多核酸序列、CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细 胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞的激活剂和/或其药物 组合物。
增殖性和感染性疾病试剂盒和制品
在一些实施方案中，本文公开包含分离并修饰的白介素2(IL-2) 多肽的试剂盒，所述白介素2多肽在所述多肽上的位置处包含至少一种非天 然氨基酸，其降低修饰的IL-2多肽与白介素2受体α(IL-2Rα)之间的结合， 但保留与白介素2βγ受体(IL-2Rβγ)信号传导复合物的显著结合，以形成 IL-2/IL-2Rβγ复合物，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα 之间的结合相比。在一些实施方案中，相对于野生型IL-2多肽，对IL-2Rα的 结合的降低包含结合亲和力降低约30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、 95％、99％或100％。在一些实施方案中，相对于野生型IL-2多肽，对IL-2Rα 的结合的降低包含降低3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多。
在一些实施方案中，本文公开包含分离并修饰的白介素2(IL-2) 多肽的试剂盒，所述白介素2多肽包含至少一种非天然氨基酸，其中所述分 离并修饰的IL-2多肽展现对IL-2βγ信号传导复合物的第一受体信号传导效力 和对IL-2αβγ信号传导复合物的第二受体信号传导效力，并且其中第一受体信 号传导效力与第二受体信号传导效力之间的差异小于10倍。在一些实施方案 中，受体信号传导效力的差异小于5倍、小于4倍、小于3倍、小于2倍或小于 1倍。
在一些实施方案中，本文公开包含编码修饰的白介素2(IL-2) 多肽的多核苷酸序列的试剂盒，所述白介素2多肽在所述多肽上的位置处包 含至少一种非天然氨基酸，其降低修饰的IL-2多肽与白介素2受体α(IL-2Rα) 之间的结合，但保留与白介素2βγ受体(IL-2Rβγ)信号传导复合物的显著结 合，以形成IL-2/IL-2Rβγ复合物，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2 多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，本文公开包含编码修饰的白介素2(IL-2) 多肽的多核苷酸序列的试剂盒，所述白介素2多肽包含至少一种非天然氨基 酸，其中所述分离并修饰的IL-2多肽展现对IL-2βγ信号传导复合物的第一受 体信号传导效力和对IL-2αβγ信号传导复合物的第二受体信号传导效力，并且 其中第一受体信号传导效力与第二受体信号传导效力之间的差异小于10倍。 在一些实施方案中，受体信号传导效力的差异小于5倍、小于4倍、小于3倍、 小于2倍或小于1倍。
自身免疫试剂盒和制品
在一些实施方案中，本文公开包含分离并修饰的白介素2(IL-2) 多肽的试剂盒，所述白介素2多肽在所述多肽上的位置处包含至少一种非天 然氨基酸，其降低对白介素2受体βγ(IL-2Rβγ)的受体信号传导效力或减少 IL-2Rγ亚基至IL-2/IL-2Rβ复合物的募集，但保留白介素2αβγ受体(IL-2Rαβγ) 的显著激活，其中降低的受体信号传导效力是与野生型IL-2多肽与IL-2Rβγ 之间的受体信号传导效力相比，并且其中所述募集是与野生型IL-2多肽对 IL-2Rγ亚基的募集相比。
在一些实施方案中，本文公开包含分离并修饰的白介素2(IL-2) 多肽的试剂盒，所述白介素2多肽在所述多肽上的位置处包含至少一种非天 然氨基酸，其增加IL-2Rα亚基至IL-2多肽的募集，从而导致白介素2αβγ受体 (IL-2Rαβγ)的激活，其中募集的增加是与野生型IL-2多肽对IL-2Rα亚基的 募集相比。
在一些实施方案中，对IL-2Rβγ的受体信号传导效力降低的修 饰的IL-2多肽能够扩增CD4+T调节性(Treg)细胞。在一些实施方案中，缀 合部分削弱或阻断IL-2与IL-2Rβγ的受体信号传导效力，或者减少IL-2Rγ亚基 至IL-2/IL-2Rβ复合物的募集。在一些实施方案中，通过修饰的IL-2/IL-2Rαβγ 复合物进行的CD4+Treg细胞增殖等效于或大于野生型IL-2多肽的所述增 殖。在一些实施方案中，修饰的IL-2/IL-2Rαβγ复合物诱导CD4+Treg细胞增 殖至足以在动物模型中调节病程的群体。在一些实施方案中，修饰的IL-2多 肽展现对IL-2Rβγ的第一受体信号传导效力和对IL-2Rαβγ的第二受体信号传 导效力，其中第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力低至少1倍、2 倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100 倍、500倍、1000倍或更低。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽的第一受体 信号传导效力低于野生型IL-2多肽对IL-2Rβγ的受体信号传导效力。在一些实 施方案中，修饰的IL-2多肽的第二受体信号传导效力低于野生型IL-2多肽对IL-2Rαβγ的受体信号传导效力。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽进一步 提供IL-2Rα亚基至IL-2多肽的募集的增加，从而导致白介素2αβγ受体 (IL-2Rαβγ)的激活，其中募集的增加是与野生型IL-2多肽对IL-2Rα亚基的 募集相比。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽进一步提供IL-2Rγ亚基至 IL-2/IL-2Rβ复合物的募集的减少，其中减少的募集是与野生型IL-2多肽对 IL-2Rβ亚基和/或IL-2Rγ亚基的募集相比。
在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸在上文修饰的IL-2 多肽中的位置选自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E60、E61、 E62、K64、P65、E68、V69、N71、L72、M104、C105和Y107，其中残基 位置对应于如SEQ ID NO:1中所示的位置35、37、38、41、42、43、44、45、 61、62、64、65、68、69、71、72、104、105和107。在一些实施方案中， 至少一种非天然氨基酸的位置选自T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、 E61、E62、P65、E68和L72，其中残基位置对应于如SEQ ID NO:1中所示的 位置37、38、41、42、43、44、45、61、62、65、68和72。在一些实施方案 中，至少一种非天然氨基酸的位置选自K35、K64、V69、N71、M104、C105 和Y107，其中残基位置对应于如SEQ ID NO:1中所示的位置35、64、69、71、 104、105和107。在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸的位置选自T37、 R38、T41、Y45、E61、E68和L72，其中残基位置对应于如SEQ ID NO:1中 所示的位置37、38、41、45、61、68和72。在一些实施方案中，至少一种非 天然氨基酸的位置选自F42、K43、F44、E62和P65，其中残基位置对应于如 SEQ ID NO:1中所示的位置42、43、44、62和65。在一些实施方案中，至少 一种非天然氨基酸的位置选自P2、T3、S4、S5、S6、T7、K8、K9、Q11、 L12、E15、H16、L18、L19、D20、Q22、M23、N26、G27、N29、N30、Y31、K32、K35、T37、M46、K47、K48、A50、T51、E52、K53、H55、 Q57、E60、E67、N71、Q74、S75、K76、N77、F78、H79、R81、P82、R83、 D84、S87、N88、N89、V91、I92、L94、E95、K97、G98、S99、E100、T101、 T102、F103、M104、C105、E106、Y107、A108、D109、E110、T111、A112、 T113、E116、N119、R120、T123、A125、Q126、S127、S130、T131、L132 和T133，其中氨基酸残基的编号对应于SEQID NO:1。在一些实施方案中， 至少一种非天然氨基酸的位置选自K8、K9、Q11、L12、E15、H16、L18、 L19、D20、Q22、M23、N26、R81、D84、S87、N88、V91、I92、L94、E95、E116、N119、R120、T123、A125、Q126、S127、S130、T131、L132和T133， 其中氨基酸残基的编号对应于SEQ IDNO:1。在一些实施方案中，至少一种 非天然氨基酸的位置选自P2、T3、S4、S5、S6、T7、G27、N29、N30、Y31、 K32、K35、T37、M46、K47、K48、A50、T51、E52、K53、H55、Q57、 E60、E67、N71、Q74、S75、K76、N77、F78、H79、P82、R83、N89、K97、 G98、S99、E100、T101、T102、F103、M104、C105、E106、Y107、A108、 D109、E110、T111、A112和T113，其中氨基酸残基的编号对应于SEQID NO: 1。在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸的位置选自K8、K9、L12、 E15、H16、L19、D20、Q22、M23、N26、D84、N88、E95和Q126，其中氨 基酸残基的编号对应于SEQ ID NO:1。在一些实施方案中，至少一种非天然 氨基酸的位置选自K8、K9和H16，其中氨基酸残基的编号对应于SEQ ID NO: 1。在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸的位置选自Q22、N26、N88 和Q126，其中氨基酸残基的编号对应于SEQ ID NO:1。在一些实施方案中， 至少一种非天然氨基酸的位置选自E15、D20、D84和E95，其中氨基酸残基 的编号对应于SEQ ID NO:1。在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸的 位置选自L12、L19和M23，其中氨基酸残基的编号对应于SEQ ID NO:1。在 一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸的位置选自Q22和N26，其中氨基 酸残基的编号对应于SEQ ID NO:1。
试剂盒和制品通常
在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸：是赖氨酸类似物； 包含芳香族侧链；包含叠氮基；包含炔基；或者包含醛或酮基。在一些实施 方案中，至少一种非天然氨基酸不含芳香族侧链。在一些实施方案中，至少 一种非天然氨基酸包括N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸(AzK；其化学 结构显示为图3C中的化合物90)、N6-(炔丙氧基)-羰基)-L-赖氨酸(PraK；其 化学结构显示为图3C中的化合物112)、BCN-L-赖氨酸、降冰片烯赖氨酸、TCO-赖氨酸、甲基四嗪赖氨酸、烯丙氧基羰基赖氨酸、2-氨基-8-氧代壬酸、 2-氨基-8-氧代辛酸、对-乙酰基-L-苯丙氨酸、对-叠氮基甲基-L-苯丙氨酸 (pAMF)、对-碘-L-苯丙氨酸、间乙酰基苯丙氨酸、2-氨基-8-氧代壬酸、对- 炔丙氧基苯丙氨酸、对-炔丙基-苯丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、L-多巴、氟化 苯丙氨酸、异丙基-L-苯丙氨酸、对-叠氮基-L-苯丙氨酸、对-酰基-L-苯丙氨 酸、对-苯甲酰基-L-苯丙氨酸、对-溴苯丙氨酸、对-氨基-L-苯丙氨酸、异丙基-L-苯丙氨酸、O-烯丙基酪氨酸、O-甲基-L-酪氨酸、O-4-烯丙基-L-酪氨酸、 4-丙基-L-酪氨酸、膦酰酪氨酸、三-O-乙酰基-GlcNAcp-丝氨酸、L-磷酸丝氨 酸、膦酰丝氨酸、L-3-(2-萘基)丙氨酸、2-氨基-3-((2-((3-(苯甲氧基)-3-氧代丙 基)氨基)乙基)硒基)丙酸、2-氨基-3-(苯基硒基)丙酸或硒代半胱氨酸。在一些 实施方案中，至少一种非天然氨基酸包括N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖 氨酸(AzK；其化学结构显示为图3C中的化合物90)或N6-(炔丙氧基)-羰基)-L- 赖氨酸(PraK；其化学结构显示为图3C中的化合物112)。在一些实施方案中， 至少一种非天然氨基酸包括N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸(AzK；其 化学结构显示为图3C中的化合物90)。在一些实施方案中，至少一种非天然 氨基酸包括N6-(炔丙氧基)-羰基)-L-赖氨酸(PraK；其化学结构显示为图3C 中的化合物112)。
在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸包含被允许与缀合 部分反应的炔烃，所述缀合部分包含水溶性聚合物，所述水溶性聚合物包括 聚乙二醇(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、乙二醇与丙二醇的共聚物、聚(氧乙 基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)、 聚(羟烷基甲基丙烯酸酯)、聚(糖)、聚(α-羟酸)、聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚噁 唑啉(POZ)、聚(N-丙烯酰基吗啉)或其组合。在一些实施方案中，水溶性聚 合物包括PEG分子。
在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽包含缀合部分。在一些实 施方案中，缀合部分包含水溶性聚合物、脂质、蛋白质和/或肽。在一些实施 方案中，水溶性聚合物包括聚乙二醇(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、乙二醇 与丙二醇的共聚物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、 聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)、聚(羟烷基甲基丙烯酸酯)、聚(糖)、聚(α-羟酸)、 聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚噁唑啉(POZ)、聚(N-丙烯酰基吗啉)或其组合。在 一些实施方案中，水溶性聚合物包括PEG分子。
在一些实施方案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多 肽的体内血浆半衰期。在一些情况下，如与小于缀合部分的PEG的体内血浆 半衰期相比，缀合部分包含对应于修饰的IL-2多肽的较长体内血浆半衰期的 PEG分子。在一些情况下，如与大于缀合部分的PEG的体内血浆半衰期相比， 缀合部分包含对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期的PEG分子。
在一些实施方案中，PEG的分子量不影响对IL-2βγ或IL-2αβγ信 号传导复合物的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中， PEG的分子量不影响对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导复 合物的维持的结合，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα 之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的 IL-2/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与 IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，PEG分子是线性PEG。在游戏IE实施方案 中，其中PEG分子是分支PEG。在一些实施方案中，PEG包含约2,000-50,000 道尔顿(Da)。在一些实施方案中，PEG的分子量包含约5,000Da、10,000Da、 15,000Da、20,000Da、25,000Da、30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000 Da或50,000Da。在一些情况下，PEG是5,000Da。在一些情况下，PEG是10,000 Da。在一些情况下，PEG是15,000Da。在一些情况下，PEG是20,000Da。在 一些情况下，PEG是25,000Da。在一些情况下，PEG是30,000Da。在一些情 况下，PEG是35,000Da。在一些情况下，PEG是40,000Da。在一些情况下， PEG是45,000Da。在一些情况下，PEG是50,000Da。
本文提供的制品含有包装材料。药物包装材料的例子包括但不 限于泡罩包装、瓶子、管、袋、容器、瓶子以及适合于所选配制品以及预期 施用方式和治疗的任何包装材料。
例如，一个或多个容器包括一种或多种修饰的IL-2多肽，所述 IL-2多肽包含K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E60、E61、E62、 K64、P65、E68、V69、N71、L72、M104、C105或Y107，其中残基位置对 应于如SEQ ID NO:1中所示的35、37、38、41、42、43、44、45、61、62、64、65、68、69、71、72、104、105和107。在一些实施方案中，包含T37 (其中残基位置对应于如SEQ ID NO:1中所示的位置35、37、38、41、42、 43、44、45、61、62、64、65、68、69、71、72、104、105和107)的修饰 的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量为约2,000-50,000Da的 PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。在一些实施方案中， 所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含15,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含30,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方案中，PEG的分子量至 少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较小PEG 的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较长体内血浆半衰期。 在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2 多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰 的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，或具有 最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导复合物的维持的结合，或具有最 小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合 相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复 合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的 结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置38的残基 R38处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置41的残基 T41处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置42的残基 F42处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置43的残基 K43处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置44的残基 F44处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置45的残基 Y45处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置60的残基 E60处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置61的残基 E61处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置62的残基 E62处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置64的残基 K64处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置65的残基 P65处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置68的残基 E68处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置69的残基 V69处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置71的残基 N71处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置72的残基 L72处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期 相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与 野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置104的残基 M104处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置105的残基 C105处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:1的位置107的残基 Y107处包含突变的修饰的IL-2多肽包含缀合部分，所述缀合部分包含分子量 为约2,000-50,000Da的PEG。在一些实施方案中，所述分子量包含5,000Da。 在一些实施方案中，所述分子量包含10,000Da。在一些实施方案中，所述分 子量包含15,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含20,000Da。在一 些实施方案中，所述分子量包含25,000Da。在一些实施方案中，所述分子量 包含30,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含35,000Da。在一些实 施方案中，所述分子量包含40,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含 45,000Da。在一些实施方案中，所述分子量包含50,000Da。在一些实施方 案中，PEG的分子量至少部分决定修饰的IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一 些情况下，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些情况下，如与较大PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物 的受体信号传导效力，或具有最小影响。在一些实施方案中，PEG的分子量 不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或者与IL-2Rβγ信号传导 复合物的维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生 型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不 影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。
试剂盒通常包含列出内容物和/或使用说明的标签、以及包含使 用说明的包装说明书。通常还将包括一组指令。
在一个实施方案中，标签在容器上或与容器相关。在一个实施 方案中，当形成标签的字母、数字或其他字符被贴附、模制或蚀刻到容器本 身中时，标签在容器上；当标签存在于也容纳容器的插座或载体内时，标签 与容器相连，例如作为包装说明书。在一个实施方案中，标签用于指示，内 容物要被用于特定治疗应用。标签还指示如在本文所述的方法中使用内容物 的指导。
在某些实施方案中，药物组合物存在于包装或分配器装置中， 所述装置含有一个或多个含有本文所提供化合物的单位剂型。包装例如含有 金属或塑料箔，如泡罩包装。在一个实施方案中，包装或分配器装置附有施 用说明书。在一个实施方案中，包装或分配器还附有与容器相连的通知，所 述通知的形式由管理药物制造、使用或销售的政府机构规定，所述通知反映 了所述机构对用于人或兽医施用的药物形式的批准。例如，此类通知是由美 国食品和药物监督管理局批准的药物标签，或批准的产品插页。在一个实施 方案中，还制备在相容的药物载体中配制的含有本文所提供化合物的组合 物，将其放置在适当的容器中，并标记用于治疗所指示病症。
实施方案
在某些实施方案中，本文公开细胞因子缀合物和在一种或多种 适应证的治疗中的用途。在一些实施方案中，本文还描述的包括白介素2 (IL-2)缀合物和在一种或多种适应证的治疗中的用途。在一些情况下，一 种或多种适应证包括癌症、病原体感染或自身免疫性疾病。在一些情形中， 本文描述调节IL-2与IL-2受体之间的相互作用以刺激或扩增特定T细胞、自然 杀伤(NK)细胞和/或自然杀伤T(NKT)细胞群的方法。在一些实施方案 中，IL-2缀合物包含缀合部分(例如，PEG)，其在不影响药代动力学(包括 所需细胞因子-受体相互作用和免疫细胞扩增)的情况下促进体内血浆半衰 期的增加或减少。在另外的情形中，本文进一步描述包含一种或多种本文所 述的白介素缀合物(例如，IL-2缀合物)的药物组合物和试剂盒，所述白介 素缀合物可以用作用于开发过继细胞疗法以治疗本文所述的一种或多种适 应证的试剂。
本文公开的方面提供分离并修饰的白介素2(IL-2)多肽，所述 白介素2多肽在所述多肽上的位置处包含至少一种非天然氨基酸，其降低修 饰的IL-2多肽与白介素2受体α(IL-2Rα)之间的结合，但保留与白介素2βγ 受体(IL-2Rβγ)信号传导复合物的显著结合，以形成IL-2/IL-2Rβγ复合物， 其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在 一些实施方案中，受体信号传导效力的差异小于5倍、小于4倍、小于3倍、小于2倍或小于1倍。在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸的位置选自 K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E60、E61、E62、K64、P65、 E68、V69、N71、L72、M104、C105、Y107，其中残基位置对应于如SEQ ID NO:1中所示的位置35、37、38、41、42、43、44、45、61、62、64、65、68、69、71、72、104、105和107。在一些实施方案中，至少一种非天然氨 基酸的位置选自T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、P65、 E68和L72，其中残基位置对应于如SEQ ID NO:1中所示的位置37、38、41、 42、43、44、45、61、62、65、68和72。在一些实施方案中，至少一种非天 然氨基酸的位置选自K35、K64、V69、N71、M104、C105和Y107，其中残 基位置对应于如SEQID NO:1中所示的位置35、64、69、71、104、105和107。 在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸的位置选自T37、R38、T41、Y45、 E61、E68和L72，其中残基位置对应于如SEQ ID NO:1中所示的位置37、38、 41、45、61、68和72。在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸的位置选 自F42、K43、F44、E62和P65，其中残基位置对应于如SEQ ID NO:1中所示 的位置42、43、44、62和65。在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸： 是赖氨酸类似物；包含芳香族侧链；包含叠氮基；包含炔基；或者包含醛或 酮基。在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸不含芳香族侧链。在一些 实施方案中，至少一种非天然氨基酸包括N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖 氨酸(AzK；其化学结构显示为图3C中的化合物90)、N6-(炔丙氧基)-羰基-L- 赖氨酸(PraK)、BCN-L-赖氨酸、降冰片烯赖氨酸、TCO-赖氨酸、甲基四嗪 赖氨酸、烯丙氧基羰基赖氨酸、2-氨基-8-氧代壬酸、2-氨基-8-氧代辛酸、对 -乙酰基-L-苯丙氨酸、对-叠氮基甲基-L-苯丙氨酸(p MF)、对-碘-L-苯丙氨 酸、间乙酰基苯丙氨酸、2-氨基-8-氧代壬酸、对-炔丙氧基苯丙氨酸、对-炔 丙基-苯丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、L-多巴、氟化苯丙氨酸、异丙基-L-苯丙 氨酸、对-叠氮基-L-苯丙氨酸、对-酰基-L-苯丙氨酸、对-苯甲酰基-L-苯丙氨 酸、对-溴苯丙氨酸、对-氨基-L-苯丙氨酸、异丙基-L-苯丙氨酸、O-烯丙基酪氨酸、O-甲基-L-酪氨酸、O-4-烯丙基-L-酪氨酸、4-丙基-L-酪氨酸、膦酰酪 氨酸、三-O-乙酰基-GlcNcp-丝氨酸、L-磷酸丝氨酸、膦酰丝氨酸、L-3-(2- 萘基)丙氨酸、2-氨基-3-((2-((3-(苯甲氧基)-3-氧代丙基)氨基)乙基)硒基)丙酸、 2-氨基-3-(苯基硒基)丙酸或硒代半胱氨酸。在一些实施方案中，通过正交 tRNA合成酶/tRNA对将至少一种非天然氨基酸掺入修饰的IL-2多肽中。在一 些实施方案中，正交合成酶/tRNA对的正交tRNA包含至少一种非天然核碱 基。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽经由至少一种非天然氨基酸共价附接至缀合部分。在一些实施方案中，缀合部分包含水溶性聚合物、脂质、蛋 白质和/或肽。在一些实施方案中，水溶性聚合物包括聚乙二醇(PEG)、聚(丙 二醇)(PPG)、乙二醇与丙二醇的共聚物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、 聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)、聚(羟烷基甲基丙烯酸酯)、 聚(糖)、聚(α-羟酸)、聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚噁唑啉(POZ)、聚(N-丙烯酰 基吗啉)或其组合。在一些实施方案中，水溶性聚合物包括PEG分子。在一些 实施方案中，PEG分子是线性PEG。在一些实施方案中，PEG分子是分支PEG。 在一些实施方案中，PEG包含约2,000-50,000道尔顿(Da)。在一些实施方案 中，PEG的分子量包含约5,000Da、10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000 Da、30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施 方案中，分子量至少部分决定IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一些实施方案 中，水溶性聚合物包含多糖。在一些实施方案中，多糖包括葡聚糖、聚唾液酸(PSA)、透明质酸(HA)、直链淀粉、肝素、硫酸乙酰肝素(HS)、糊精 或羟乙基淀粉(HES)。在一些实施方案中，脂质包括脂肪酸。在一些实施 方案中，脂肪酸包含约6至约26个碳原子、约6至约24个碳原子、约6至约22 个碳原子、约6至约20个碳原子、约6至约18个碳原子、约20至约26个碳原子、 约12至约26个碳原子、约12至约24个碳原子、约12至约22个碳原子、约12至 约20个碳原子或约12至约18个碳原子。在一些实施方案中，脂肪酸是饱和脂 肪酸。在一些实施方案中，蛋白质包括白蛋白、转铁蛋白或甲状腺素转运蛋 白。在一些实施方案中，缀合部分包括TLR激动剂。在一些实施方案中，蛋 白质包括抗体或其结合片段。在一些实施方案中，抗体或其结合片段包括抗 体的Fc部分。在一些实施方案中，肽包括XTEN肽、富含甘氨酸的高氨基酸 聚合物(HAP)、PAS多肽、弹性蛋白样多肽(ELP)、CTP肽或明胶样蛋白(GLK)聚合物。在一些实施方案中，缀合部分经由接头与修饰的IL-2的至 少一种非天然氨基酸间接结合。在一些实施方案中，接头包括同双功能接头、 异双功能接头、零长度接头、可切割或不可切割的二肽接头、马来酰亚胺基 团、间隔子或其组合。在一些实施方案中，相对于野生型IL-2多肽，结合亲 和力的降低是对IL-2Rα的结合亲和力的约30％、40％、50％、60％、70％、80％、 90％、95％、99％或100％降低。在一些实施方案中，相对于野生型IL-2多肽，结合亲和力的降低是对IL-2Rα的约3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、 10倍或更多。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽是：全长IL-2多肽的功能 活性片段；重组IL-2多肽；或重组人IL-2多肽。在一些实施方案中，修饰的 IL-2多肽包含N末端缺失、C末端缺失或其组合。在一些实施方案中，N末端 缺失包含N末端的前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 20、25或30个残基的缺失，其中残基位置是参考SEQ ID NO:1中的位置。在 一些实施方案中，C末端缺失包含C末端的最后1、2、3、4、5、6、7、8、9、 10、11、12、13、14、15、20或更多个残基的缺失，其中残基位置是参考SEQ ID NO:1中的位置。在一些实施方案中，功能活性片段包含IL-2区域10-133、 20-133、30-133、10-130、20-130、30-130、10-125、20-125、30-125、1-130或1-125，其中残基位置是参考SEQ ID NO:1中的位置。在一些实施方案中， 修饰的IL-2多肽包含与SEQ ID NO:1的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、 98％或99％序列同一性。在一些实施方案中，对IL-2Rα的结合亲和力降低的 修饰的IL-2多肽能够扩增CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、CD8+ T细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞群或其组合。在一 些实施方案中，缀合部分非天然氨基酸削弱或阻断IL-2与IL-2Rα的结合。在 一些实施方案中，相对于野生型IL-2多肽，通过修饰的IL-2多肽经由IL-2Rβγ 复合物激活CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、自然杀伤(NK) 细胞或自然杀伤T(NKT)细胞群保留激活所述细胞群的显著效力。在一些 实施方案中，修饰的IL-2多肽对IL-2Rβγ复合物的受体信号传导效力高于野生 型IL-2多肽对IL-2Rβγ复合物的受体信号传导效力。在一些实施方案中，修饰 的IL-2多肽对IL-2Rβγ复合物的受体信号传导效力低于野生型IL-2多肽对IL-2Rβγ复合物的受体信号传导效力。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽展 现对IL-2Rβγ的第一受体信号传导效力和对IL-2Rαβγ的第二受体信号传导效 力，并且其中第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高至少1倍、2 倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100 倍、500倍或更高。其中修饰的IL-2多肽的第一受体信号传导效力高于野生型 IL-2多肽对IL-2Rβγ的受体信号传导效力，并且修饰的IL-2多肽的第二受体信 号传导效力低于野生型IL-2多肽对IL-2Rαβγ的受体信号传导效力。在一些实 施方案中，修饰的IL-2多肽的第一受体信号传导效力比野生型IL-2多肽的受 体信号传导效力低至少1倍。
本文公开的方面提供包含至少一种非天然氨基酸的分离并修 饰的白介素2(IL-2)多肽，其中所述分离并修饰的IL-2多肽展现对IL-2βγ信 号传导复合物的第一受体信号传导效力和对IL-2αβγ信号传导复合物的第二 受体信号传导效力，并且其中第一受体信号传导效力与第二受体信号传导效 力之间的差异小于10倍。在一些实施方案中，受体信号传导效力的差异小于 5倍、小于4倍、小于3倍、小于2倍或小于1倍。在一些实施方案中，至少一 种非天然氨基酸的位置选自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、 E60、E61、E62、K64、P65、E68、V69、N71、L72、M104、C105、Y107， 其中残基位置对应于如SEQ ID NO:1中所示的位置35、37、38、41、42、43、 44、45、61、62、64、65、68、69、71、72、104、105和107。在一些实施 方案中，至少一种非天然氨基酸的位置选自T37、R38、T41、F42、K43、F44、 Y45、E61、E62、P65、E68和L72，其中残基位置对应于如SEQ ID NO:1中 所示的位置37、38、41、42、43、44、45、61、62、65、68和72。在一些实 施方案中，至少一种非天然氨基酸的位置选自K35、K64、V69、N71、M104、 C105和Y107，其中残基位置对应于如SEQ ID NO:1中所示的位置35、64、 69、71、104、105和107。在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸的位 置选自T37、R38、T41、Y45、E61、E68和L72，其中残基位置对应于如SEQ ID NO:1中所示的位置37、38、41、45、61、68和72。在一些实施方案中， 至少一种非天然氨基酸的位置选自F42、K43、F44、E62和P65，其中残基位置对应于如SEQ ID NO:1中所示的位置42、43、44、62和65。在一些实施方 案中，至少一种非天然氨基酸：是赖氨酸类似物；包含芳香族侧链；包含叠 氮基；包含炔基；或者包含醛或酮基。在一些实施方案中，至少一种非天然 氨基酸不含芳香族侧链。在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸包括 N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸(AzK；其化学结构显示为图3C中的 化合物90)、N6-(炔丙氧基)-羰基-L-赖氨酸(PraK)、BCN-L-赖氨酸、降冰片 烯赖氨酸、TCO-赖氨酸、甲基四嗪赖氨酸、烯丙氧基羰基赖氨酸、2-氨基-8- 氧代壬酸、2-氨基-8-氧代辛酸、对-乙酰基-L-苯丙氨酸、对-叠氮基甲基-L- 苯丙氨酸(pAMF)、对-碘-L-苯丙氨酸、间乙酰基苯丙氨酸、2-氨基-8-氧代 壬酸、对-炔丙氧基苯丙氨酸、对-炔丙基-苯丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、L- 多巴、氟化苯丙氨酸、异丙基-L-苯丙氨酸、对-叠氮基-L-苯丙氨酸、对-酰基 -L-苯丙氨酸、对-苯甲酰基-L-苯丙氨酸、对-溴苯丙氨酸、对-氨基-L-苯丙氨酸、异丙基-L-苯丙氨酸、O-烯丙基酪氨酸、O-甲基-L-酪氨酸、O-4-烯丙基 -L-酪氨酸、4-丙基-L-酪氨酸、膦酰酪氨酸、三-O-乙酰基-GlcNAcp-丝氨酸、 L-磷酸丝氨酸、膦酰丝氨酸、L-3-(2-萘基)丙氨酸、2-氨基-3-((2-((3-(苯甲氧 基)-3-氧代丙基)氨基)乙基)硒基)丙酸、2-氨基-3-(苯基硒基)丙酸或硒代半胱 氨酸。在一些实施方案中，通过正交tRNA合成酶/tRNA对将至少一种非天然 氨基酸掺入修饰的IL-2多肽中。在一些实施方案中，正交合成酶/tRNA对的 正交tRNA包含至少一种非天然核碱基。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽经由至少一种非天然氨基酸共价附接至缀合部分。在一些实施方案中，缀合 部分包含水溶性聚合物、脂质、蛋白质和/或肽。在一些实施方案中，水溶性 聚合物包括聚乙二醇(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、乙二醇与丙二醇的共聚 物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(羟烷基甲基 丙烯酰胺)、聚(羟烷基甲基丙烯酸酯)、聚(糖)、聚(α-羟酸)、聚(乙烯醇)、聚 磷腈、聚噁唑啉(POZ)、聚(N-丙烯酰基吗啉)或其组合。在一些实施方案中，水溶性聚合物包括PEG分子。在一些实施方案中，PEG分子是线性PEG。在 一些实施方案中，PEG分子是分支PEG。在一些实施方案中，PEG包含约 2,000-50,000道尔顿(Da)。在一些实施方案中，PEG的分子量包含约5,000Da、 10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000Da、30,000Da、35,000Da、40,000 Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施方案中，分子量至少部分决定IL-2 多肽的体内血浆半衰期。在一些实施方案中，水溶性聚合物包含多糖。在一 些实施方案中，多糖包括葡聚糖、聚唾液酸(PSA)、透明质酸(HA)、直链 淀粉、肝素、硫酸乙酰肝素(HS)、糊精或羟乙基淀粉(HES)。在一些实施 方案中，脂质包括脂肪酸。在一些实施方案中，脂肪酸包含约6至约26个碳 原子、约6至约24个碳原子、约6至约22个碳原子、约6至约20个碳原子、约6 至约18个碳原子、约20至约26个碳原子、约12至约26个碳原子、约12至约24 个碳原子、约12至约22个碳原子、约12至约20个碳原子或约12至约18个碳原 子。在一些实施方案中，脂肪酸是饱和脂肪酸。在一些实施方案中，蛋白质 包括白蛋白、转铁蛋白或甲状腺素转运蛋白。在一些实施方案中，缀合部分 包括TLR激动剂。在一些实施方案中，蛋白质包括抗体或其结合片段。在一 些实施方案中，抗体或其结合片段包括抗体的Fc部分。在一些实施方案中， 肽包括XTEN肽、富含甘氨酸的高氨基酸聚合物(HAP)、PAS多肽、弹性蛋 白样多肽(ELP)、CTP肽或明胶样蛋白(GLK)聚合物。在一些实施方案中， 缀合部分经由接头与修饰的IL-2的至少一种非天然氨基酸间接结合。在一些 实施方案中，接头包括同双功能接头、异双功能接头、零长度接头、可切割 或不可切割的二肽接头、马来酰亚胺基团、间隔子或其组合。在一些实施方 案中，相对于野生型IL-2多肽，结合亲和力的降低是对IL-2Rα的结合亲和力 的约30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或100％降低。 在一些实施方案中，相对于野生型IL-2多肽，结合亲和力的降低是对IL-2Rα 的约3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多。在一些实施方案 中，修饰的IL-2多肽是：全长IL-2多肽的功能活性片段；重组IL-2多肽；或 重组人IL-2多肽。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽包含N末端缺失、C末 端缺失或其组合。在一些实施方案中，N末端缺失包含N末端的前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或30个残基的缺失， 其中残基位置是参考SEQ IDNO:1中的位置。在一些实施方案中，C末端缺 失包含C末端的最后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 20或更多个残基的缺失，其中残基位置是参考SEQ ID NO:1中的位置。在一 些实施方案中，功能活性片段包含IL-2区域10-133、20-133、30-133、10-130、 20-130、30-130、10-125、20-125、30-125、1-130或1-125，其中残基位置是 参考SEQ ID NO:1中的位置。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽包含与SEQ ID NO:1的约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。 在一些实施方案中，对IL-2Rα的结合亲和力降低的修饰的IL-2多肽能够扩增 CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、CD8+T细胞、自然杀伤(NK) 细胞、自然杀伤T(NKT)细胞群或其组合。在一些实施方案中，缀合部分 非天然氨基酸削弱或阻断IL-2与IL-2Rα的结合。在一些实施方案中，相对于 野生型IL-2多肽，通过修饰的IL-2多肽经由IL-2Rβγ复合物激活CD4+辅助细 胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT) 细胞群保留激活所述细胞群的显著效力。在一些实施方案中，修饰的IL-2多 肽对IL-2Rβγ复合物的受体信号传导效力高于野生型IL-2多肽对IL-2Rβγ复合 物的受体信号传导效力。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽对IL-2Rβγ复合 物的受体信号传导效力低于野生型IL-2多肽对IL-2Rβγ复合物的受体信号传 导效力。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽展现对IL-2Rβγ的第一受体信号 传导效力和对IL-2Rαβγ的第二受体信号传导效力，并且其中第一受体信号传 导效力比第二受体信号传导效力高至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7 倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、500倍或更高。其中修饰 的IL-2多肽的第一受体信号传导效力高于野生型IL-2多肽对IL-2Rβγ的受体信号传导效力，并且修饰的IL-2多肽的第二受体信号传导效力低于野生型 IL-2多肽对IL-2Rαβγ的受体信号传导效力。在一些实施方案中，修饰的IL-2 多肽的第一受体信号传导效力比野生型IL-2多肽的受体信号传导效力低至少 1倍。
本文公开的方面提供白介素2(IL-2)缀合物，其包含共价附接 至缀合部分的非天然氨基酸，其中所述非天然氨基酸位于区域35-107中，并 且其中所述区域35-107对应于SEQ ID NO:1的残基K35-Y107。在一些实施方 案中，非天然氨基酸位于区域42中，并且其中所述区域42对应于残基F42。 在一些实施方案中，缀合部分包含分子量为2,000-50,000道尔顿(Da)的水 溶性聚合物。在一些实施方案中，缀合部分包含分子量为5,000Da、10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000Da、30,000Da、35,000Da、40,000Da、 45,000Da或50,000Da的水溶性聚合物。在一些实施方案中，水溶性聚合物 包括聚乙二醇(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、乙二醇与丙二醇的共聚物、聚(氧 乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)、 聚(羟烷基甲基丙烯酸酯)、聚(糖)、聚(α-羟酸)、聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚噁 唑啉(POZ)、聚(N-丙烯酰基吗啉)或其组合。在一些实施方案中，分子量至 少部分决定IL-2缀合物的体内血浆半衰期。在一些实施方案中，IL-2缀合物 包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置65的残基P65处的突变，以及包含 PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、 15,000Da、20,000Da、25,000Da、30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000 Da或50,000Da。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含在对应于SEQID NO:1 的残基位置61的残基E61处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的 分子量包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000 Da、30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施 方案中，IL-2缀合物包含在对应于SEQ IDNO:1的残基位置42的残基F42处的 突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约5,000道尔顿(Da)、 10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000Da、30,000Da、35,000Da、40,000 Da、45,000Da或50,000Da。
本文公开的方面提供白介素2βγ受体(IL-2Rβγ)结合蛋白，其 中所述结合蛋白对白介素2α受体(IL-2Rα)的结合亲和力小于野生型人IL-2 (hIL-2)的所述结合亲和力，并且其中所述结合蛋白包含至少一种非天然氨 基酸。在一些实施方案中，所述结合蛋白是修饰的IL-2多肽或其功能活性片 段，其中所述修饰的IL-2多肽包含至少一种非天然氨基酸。在一些实施方案 中，至少一种非天然氨基酸位于区域35-107中，并且其中所述区域35-107对 应于SEQ ID NO:1的残基K35-Y107。
本文公开的方面提供IL-2/IL-2Rβγ复合物，其包含含有非天然 氨基酸的修饰的IL-2多肽和IL-2Rβγ，其中所述修饰的IL-2多肽具有对IL-2Rα 降低的结合亲和力，并且其中所述降低的结合亲和力是与野生型IL-2多肽与 IL-2Rα之间的结合亲和力相比。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽还包含 共价附接至非天然氨基酸的缀合部分。
本文公开的方面提供CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细 胞、CD8+T细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞的激活 剂，其选择性扩增细胞群中的CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、 自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞，其中所述激活剂包含含有 至少一种非天然氨基酸的修饰的白介素2(IL-2)多肽。在一些实施方案中， 当所述激活剂与所述细胞群接触时，所述激活剂将CD4+T调节性(Treg)细 胞扩增少于20％、15％、10％、5％、1％或0.1％。在一些实施方案中，所述激 活剂不扩增所述细胞群中的Treg细胞。在一些实施方案中，所述细胞群是体 内细胞群。在一些实施方案中，所述细胞群是体外细胞群。在一些实施方案 中，所述细胞群是离体细胞群。
本文公开的方面提供药物组合物，其包含：本文所述的分离并 修饰的IL-2多肽、本文所述的IL-2缀合物、本文所述的IL-2Rβγ结合蛋白或者 本文所述的CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、自然杀伤(NK) 细胞或自然杀伤T(NKT)细胞的激活剂；以及药学上可接受的赋形剂。在 一些实施方案中，将药物组合物配制用于全身递送。在一些实施方案中，将 药物组合物配制用于肠胃外施用。在一些实施方案中，IL-2多肽或IL-2缀合 物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置42的残基F42处的突变，以及包含 PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约5,000道尔顿(Da)。在一些实施 方案中，其中IL-2多肽或IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置 42的残基F42处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含 约10,000道尔顿(Da)。在一些实施方案中，IL-2多肽或IL-2缀合物包含在对 应于SEQ ID NO:1的残基位置42的残基F42处的突变，以及包含PEG的缀合 部分，所述PEG的分子量包含约15,000道尔顿(Da)。在一些实施方案中，IL-2 多肽或IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置42的残基F42处的 突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约20,000道尔顿 (Da)。在一些实施方案中，IL-2多肽或IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO: 1的残基位置42的残基F42处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的 分子量包含约25,000道尔顿(Da)。在一些实施方案中，IL-2多肽或IL-2缀合 物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置42的残基F42处的突变，以及包含 PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约30,000道尔顿(Da)。在一些实施 方案中，IL-2多肽或IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置65的 残基P65处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约5,000 道尔顿(Da)。在一些实施方案中，IL-2多肽或IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置65的残基P65处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约10,000道尔顿(Da)。在一些实施方案中，IL-2多肽或IL-2 缀合物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置65的残基P65处的突变，以及 包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约15,000道尔顿(Da)。在一些 实施方案中，IL-2多肽或IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置 65的残基P65处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含 约20,000道尔顿(Da)。在一些实施方案中，IL-2多肽或IL-2缀合物包含在对 应于SEQ ID NO:1的残基位置65的残基P65处的突变，以及包含PEG的缀合 部分，所述PEG的分子量包含约25,000道尔顿(Da)。在一些实施方案中，IL-2 多肽或IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置65的残基P65处的 突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约30,000道尔顿 (Da)。在一些实施方案中，IL-2多肽或IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO: 1的残基位置62的残基E62处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的 分子量包含约5,000道尔顿(Da)。在一些实施方案中，IL-2多肽或IL-2缀合 物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置62的残基E62处的突变，以及包含 PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约10,000道尔顿(Da)。在一些实施 方案中，IL-2多肽或IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置62的 残基E62处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约 15,000道尔顿(Da)。在一些实施方案中，IL-2多肽或IL-2缀合物包含在对应 于SEQ ID NO:1的残基位置62的残基E62处的突变，以及包含PEG的缀合部 分，所述PEG的分子量包含约20,000道尔顿(Da)。在一些实施方案中，IL-2 多肽或IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置62的残基E62处的 突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约25,000道尔顿 (Da)。在一些实施方案中，IL-2多肽或IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO: 1的残基位置62的残基E62处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的 分子量包含约30,000道尔顿(Da)。
本文公开的方面提供治疗有需要的受试者的疾病或病症的方 法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的分离并修饰的IL-2多 肽、本文所述的IL-2缀合物、本文所述的IL-2Rβγ结合蛋白、本文所述的CD4+ 辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T (NKT)细胞的激活剂或者本文所述的药物组合物。在一些实施方案中，疾 病或病症是癌症。在一些实施方案中，癌症是实体瘤癌症。在一些实施方案 中，实体瘤癌症是膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、结直肠癌、食管癌、眼癌、 头颈癌、肾癌、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰腺癌或前列腺癌。在一些实施 方案中，癌症是恶性血液病。在一些实施方案中，恶性血液病是慢性淋巴细 胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、 弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、华氏巨球蛋白血 症、多发性骨髓瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、结边缘区B细胞淋巴瘤、伯 基特淋巴瘤、非伯基特高级B细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBL)、 免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、B细胞前淋巴细胞 性白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞 瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤或淋巴瘤样肉芽肿病。在一些实施方案中，疾病或病症包括病原体感 染。在一些实施方案中，病原体感染包括逆转录病毒、病毒、脱氧核糖核酸 (DNA)病毒或核糖核酸(RNA)病毒或其组合。在一些实施方案中，RNA 病毒包括负义单链(ss)RNA病毒、正义ssRNA病毒或双链(ds)RNA病毒。 在一些实施方案中，DNA病毒包括单链(ss)DNA病毒或双链(ds)DNA 病毒。在一些实施方案中，疾病或病症包括自身免疫性疾病。在一些实施方 案中，疾病或病症包括斑秃、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、皮 肌炎、1型糖尿病、幼年特发性关节炎、肾小球肾炎、格雷夫斯病、吉兰-巴 雷综合征、特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、多发性硬化、天疱疮/ 类天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多发性肌炎、原发性胆汁性肝硬化、 银屑病、类风湿性关节炎、硬皮病、干燥综合征、系统性红斑狼疮、甲状腺 炎、葡萄膜炎、白癜风或韦氏肉芽肿病或其组合。在一些实施方案中，所述 方法还包括施用另外的治疗剂。在一些实施方案中，分离并修饰的IL-2多肽、 IL-2缀合物、IL-2Rβγ结合蛋白、CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、 自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞的激活剂或者药物组合物和 另外的治疗剂是同时施用。在一些实施方案中，分离并修饰的IL-2多肽、IL-2 缀合物、IL-2Rβγ结合蛋白、CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、 自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞的激活剂或者药物组合物和 另外的治疗剂是依序施用。在一些实施方案中，在另外的治疗剂之前施用分 离并修饰的IL-2多肽、IL-2缀合物、IL-2Rβγ结合蛋白、CD4+辅助细胞、CD8+ 效应幼稚和记忆细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞的激 活剂或者药物组合物。在一些实施方案中，在施用另外的治疗剂之后施用分 离并修饰的IL-2多肽、IL-2缀合物、IL-2Rβγ结合蛋白、CD4+辅助细胞、CD8+ 效应幼稚和记忆细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞的激 活剂或者药物组合物。
本文公开的方面提供扩增CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记 忆细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞群的方法，其包括： 使细胞群与本文所述的分离并修饰的IL-2多肽、本文所述任一种的IL-2缀合 物、本文所述的IL-2缀合物、本文所述的IL-2Rβγ结合蛋白、本文所述的CD4+ 辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、CD8+T细胞、自然杀伤(NK)细胞 或自然杀伤T(NKT)细胞的激活剂或者本文所述的药物组合物接触足够时 间，以诱导与IL-2Rβγ的复合物的形成，从而刺激Teff/CD8+T细胞和/或NK 细胞群的扩增。在一些实施方案中，与接触野生型IL-2多肽的CD3+细胞群中 CD4+Treg细胞的扩增相比，分离并修饰的IL-2多肽、IL-2缀合物、IL-2Rβγ 结合蛋白、CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、自然杀伤(NK) 细胞或自然杀伤T(NKT)细胞的激活剂或者药物组合物将CD3+细胞群中的 CD4+T调节性(Treg)细胞扩增少于20％、15％、10％、5％或1％。在一些 实施方案中，分离并修饰的IL-2多肽、IL-2缀合物、IL-2Rβγ结合蛋白、CD4+ 辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T (NKT)细胞的激活剂或者药物组合物不扩增细胞群中的CD4+Treg细胞。 在一些实施方案中，在与分离并修饰的IL-2多肽、IL-2缀合物、IL-2Rβγ结合 蛋白、CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、自然杀伤(NK)细胞 或自然杀伤T(NKT)细胞的激活剂或者药物组合物一起孵育后，细胞群中 Teff细胞与Treg细胞的比率为约或至少2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、 8:1、9:1、10:1、20:1、50:1或100:1。在一些实施方案中，所述方法是 体内方法。在一些实施方案中，所述方法是体外方法。在一些实施方案中， 所述方法是离体方法。在一些实施方案中，受试者是人。
本文公开的方面提供试剂盒，其包含以下中的一种或多种：本 文所述的分离并修饰的IL-2多肽、本文所述的IL-2缀合物、本文所述的 IL-2Rβγ结合蛋白、本文所述的CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、 自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞的激活剂和/或本文所述的 药物组合物。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽包含在对应于SEQ IDNO: 1的残基位置42的残基F42处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的 分子量包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000 Da、30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施 方案中，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽 的较长体内血浆半衰期。在一些实施方案中，如与较大PEG的体内血浆半衰 期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方 案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合 物的受体信号传导效力。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2 多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或与IL-2Rβγ信号传导复合物的所需维持的 结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与 IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2 多肽/IL-2Rβγ复合物的形成。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含在对应于 SEQ ID NO:1的残基位置42的残基F42处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、20,000 Da、25,000Da、30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。 在一些实施方案中，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰 的IL-2多肽的较长体内血浆半衰期。在一些实施方案中，如与较大PEG的体 内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在 一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信 号传导复合物的受体信号传导效力。在一些实施方案中，PEG的分子量不影 响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或与IL-2Rβγ信号传导复合物 的所需维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型 IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不影 响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成。在一些实施方案中，修饰的IL-2 多肽包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置62的残基E62处的突变，以及包 含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、 15,000Da、20,000Da、25,000Da、30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000 Da或50,000Da。在一些实施方案中，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比， PEG对应于修饰的IL-2多肽的较长体内血浆半衰期。在一些实施方案中，如 与较大PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内 血浆半衰期。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力。在一些实施方案中， PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或与 IL-2Rβγ信号传导复合物的所需维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα 降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成。在一些实 施方案中，IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置62的残基E62 处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约5,000道尔顿 (Da)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000Da、30,000Da、35,000Da、 40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施方案中，如与较小PEG的体 内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较长体内血浆半衰期。在 一些实施方案中，如与较大PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力。在 一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低 的结合或与IL-2Rβγ信号传导复合物的所需维持的结合，或具有最小影响， 其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在 一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形 成。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽包含在对应于SEQ IDNO:1的残基 位置65的残基P65处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量 包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000Da、 30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施方案 中，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较 长体内血浆半衰期。在一些实施方案中，如与较大PEG的体内血浆半衰期相 比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案中， PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物的受 体信号传导效力。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽 对IL-2Rα的所需降低的结合或与IL-2Rβγ信号传导复合物的所需维持的结 合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα 之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽 /IL-2Rβγ复合物的形成。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置65的残基P65处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述 PEG的分子量包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、 25,000Da、30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一 些实施方案中，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2 多肽的较长体内血浆半衰期。在一些实施方案中，如与较大PEG的体内血浆 半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实 施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导 复合物的受体信号传导效力。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰 的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或与IL-2Rβγ信号传导复合物的所需 维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多 肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰 的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成。
本文公开的方面提供试剂盒，其包含编码以下的一种或多种多 核酸序列：本文所述的IL-2多肽、本文所述的IL-2缀合物、本文所述的IL-2Rβγ 结合蛋白、本文所述的CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆细胞、自然杀 伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞的激活剂和/或本文所述的药物组 合物。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽包含在对应于SEQ IDNO:1的残 基位置42的残基F42处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子 量包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000Da、 30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施方案 中，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较 长体内血浆半衰期。在一些实施方案中，如与较大PEG的体内血浆半衰期相 比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案中， PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物的受 体信号传导效力。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽 对IL-2Rα的所需降低的结合或与IL-2Rβγ信号传导复合物的所需维持的结 合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα 之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽 /IL-2Rβγ复合物的形成。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置42的残基F42处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述 PEG的分子量包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、 25,000Da、30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一 些实施方案中，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2 多肽的较长体内血浆半衰期。在一些实施方案中，如与较大PEG的体内血浆 半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实 施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导 复合物的受体信号传导效力。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰 的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或与IL-2Rβγ信号传导复合物的所需 维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多 肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰 的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽包含 在对应于SEQ ID NO:1的残基位置62的残基E62处的突变，以及包含PEG的 缀合部分，所述PEG的分子量包含约5,000道尔顿(Da，例如，5kD或5kDa)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000Da、30,000Da、35,000Da、40,000 Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施方案中，如与较小PEG的体内血浆半 衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较长体内血浆半衰期。在一些实施 方案中，如与较大PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽 的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2 多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力。在一些实施方 案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或与 IL-2Rβγ信号传导复合物的所需维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα 降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案 中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成。在一些实 施方案中，IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置62的残基E62 处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约5,000道尔顿 (Da)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000Da、30,000Da、35,000Da、 40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施方案中，如与较小PEG的体 内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较长体内血浆半衰期。在 一些实施方案中，如与较大PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的 IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响 修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力。在 一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低 的结合或与IL-2Rβγ信号传导复合物的所需维持的结合，或具有最小影响， 其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα之间的结合相比。在 一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形 成。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽包含在对应于SEQ ID NO:1的残基 位置65的残基P65处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量 包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000Da、30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施方案 中，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较 长体内血浆半衰期。在一些实施方案中，如与较大PEG的体内血浆半衰期相 比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施方案中， PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复合物的受 体信号传导效力。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽 对IL-2Rα的所需降低的结合或与IL-2Rβγ信号传导复合物的所需维持的结 合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多肽与IL-2Rα 之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽 /IL-2Rβγ复合物的形成。在一些实施方案中，IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置65的残基P65处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述 PEG的分子量包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、 25,000Da、30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一 些实施方案中，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2 多肽的较长体内血浆半衰期。在一些实施方案中，如与较大PEG的体内血浆 半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实 施方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导 复合物的受体信号传导效力。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰 的IL-2多肽对IL-2Rα的所需降低的结合或与IL-2Rβγ信号传导复合物的所需维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rα降低的结合是与野生型IL-2多 肽与IL-2Rα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰 的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成。
本文公开的方面提供细胞培养系统，其包含免疫细胞和本文所 述的分离并修饰的IL-2多肽和/或本文所述的IL-2缀合物。在一些实施方案 中，免疫细胞包括CD4+辅助细胞、CD8+效应幼稚和记忆T细胞、CD8+细胞、 自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T(NKT)细胞。在一些实施方案中，修饰 的IL-2多肽或IL-2缀合物有效增强免疫细胞的扩增。
本文公开的方面提供用于制造过继细胞疗法的试剂，本文所述 的分离并修饰的IL-2多肽,和/或本文所述的IL-2缀合物。在一些实施方案中， 分离并修饰的IL-2多肽和/或IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位 置65的残基P65处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包 含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000Da、 30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施方案 中，分离并修饰的IL-2多肽和/或IL-2缀合物包含在对应于SEQ ID NO:1的残 基位置61的残基E61处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子 量包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000Da、 30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施方案 中，分离并修饰的IL-2多肽和/或IL-2缀合物包含在对应于SEQ IDNO:1的残 基位置42的残基F42处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子 量包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000Da、 30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施方案 中，PEG的分子量有效改进分离并修饰的IL-2多肽和/或IL-2缀合物的溶解度。 在一些实施方案中，PEG的分子量有效增加分离并修饰的IL-2多肽和/或IL-2 缀合物的稳定性。在一些实施方案中，PEG的分子量有效改进制造分离并修 饰的IL-2多肽和/或IL-2缀合物的过继细胞疗法的效率。
本文公开的方面提供分离并修饰的白介素2(IL-2)多肽，所述 白介素2多肽在一位置包含至少一种非天然氨基酸，其降低对白介素2受体βγ (IL-2Rβγ)的受体信号传导效力或减少IL-2Rγ亚基至IL-2/IL-2Rβ复合物的募 集，但保留白介素2αβγ受体(IL-2Rαβγ)的显著激活，其中降低的受体信号 传导效力是与野生型IL-2多肽与IL-2Rβγ之间的受体信号传导效力相比，并且 其中所述募集是与野生型IL-2多肽对IL-2Rγ亚基的募集相比。
本文公开的方面提供分离并修饰的白介素2(IL-2)多肽，所述 白介素2多肽在一位置包含至少一种非天然氨基酸，其增加IL-2Rα亚基至IL-2 多肽的募集，从而导致白介素2αβγ受体(IL-2Rαβγ)的激活，其中募集的增 加是与野生型IL-2多肽对IL-2Rα亚基的募集相比。在一些实施方案中，至少 一种非天然氨基酸的位置选自A108、D109、E110、T111、A112、T113、E116、 N119、R120、T123、A125、Q126、S127、S130、T131、L132和T133，其 中氨基酸残基的编号对应于SEQ ID NO:1。在一些实施方案中，至少一种非 天然氨基酸的位置选自K8、K9、Q11、L12、E15、H16、L18、L19、D20、 Q22、M23、N26、R81、D84、S87、N88、V91、I92、L94、E95、E116、 N119、R120、T123、A125、Q126、S127、S130、T131、L132和T133，其 中氨基酸残基的编号对应于SEQ ID NO:1。在一些实施方案中，至少一种非 天然氨基酸的位置选自P2、T3、S4、S5、S6、T7、K8、K9、Q11、L12、E15、 H16、L18、L19、D20、Q22、M23、N26、G27、N29、N30、Y31、K32、 K35、T37、M46、K47、K48、A50、T51、E52、K53、H55、Q57、E60、 E67、N71、Q74、S75、K76、N77、F78、H79、R81、P82、R83、D84、S87、 N88、N89、V91、I92、L94、E95、K97、G98、S99、E100、T101、T102、 F103、M104、C105、E106、Y107。在一些实施方案中，至少一种非天然氨 基酸的位置选自K8、K9、Q11、L12、E15、H16、L18、L19、D20、Q22、 M23、N26、R81、D84、S87、N88、V91、I92、L94、E95、E116、N119、 R120、T123、A125、Q126、S127、S130、T131、L132和T133，其中氨基酸 残基的编号对应于SEQ ID NO:1。在一些实施方案中，至少一种非天然氨基 酸的位置选自P2、T3、S4、S5、S6、T7、G27、N29、N30、Y31、K32、K35、 T37、M46、K47、K48、A50、T51、E52、K53、H55、Q57、E60、E67、 N71、Q74、S75、K76、N77、F78、H79、P82、R83、N89、K97、G98、S99、E100、T101、T102、F103、M104、C105、E106、Y107、A108、D109、E110、 T111、A112和T113，其中氨基酸残基的编号对应于SEQ ID NO:1。在一些实 施方案中，至少一种非天然氨基酸的位置选自K8、K9、L12、E15、H16、 L19、D20、Q22、M23、N26、D84、N88、E95和Q126，其中氨基酸残基的 编号对应于SEQ ID NO:1。在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸的位 置选自K8、K9和H16，其中氨基酸残基的编号对应于SEQ ID NO:1。在一些 实施方案中，至少一种非天然氨基酸的位置选自Q22、N26、N88和Q126， 其中氨基酸残基的编号对应于SEQ ID NO:1。在一些实施方案中，至少一种 非天然氨基酸的位置选自E15、D20、D84和E95，其中氨基酸残基的编号对 应于SEQ ID NO:1。在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸的位置选自 L12、L19和M23，其中氨基酸残基的编号对应于SEQ ID NO:1。在一些实施 方案中，至少一种非天然氨基酸的位置选自Q22和N26，其中氨基酸残基的 编号对应于SEQ ID NO:1。在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸：是 赖氨酸类似物；是半胱氨酸类似物或组氨酸类似物；包含芳香族侧链；包含 叠氮基；包含炔基；或者包含醛或酮基。在一些实施方案中，至少一种非天 然氨基酸不含芳香族侧链。在一些实施方案中，至少一种非天然氨基酸包括 N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸(AzK；其化学结构显示为图3C中的 化合物90)、N6-(炔丙氧基)-羰基-L-赖氨酸(PraK)、BCN-L-赖氨酸、降冰片 烯赖氨酸、TCO-赖氨酸、甲基四嗪赖氨酸、烯丙氧基羰基赖氨酸、2-氨基-8- 氧代壬酸、2-氨基-8-氧代辛酸、对-乙酰基-L-苯丙氨酸、对-叠氮基甲基-L- 苯丙氨酸(AMF)、对-碘-L-苯丙氨酸、间乙酰基苯丙氨酸、2-氨基-8-氧代壬 酸、对-炔丙氧基苯丙氨酸、对-炔丙基-苯丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、L-多巴、 氟化苯丙氨酸、异丙基-L-苯丙氨酸、对-叠氮基-L-苯丙氨酸、对-酰基-L-苯 丙氨酸、对-苯甲酰基-L-苯丙氨酸、对-溴苯丙氨酸、对-氨基-L-苯丙氨酸、 异丙基-L-苯丙氨酸、O-烯丙基酪氨酸、O-甲基-L-酪氨酸、O-4-烯丙基-L-酪 氨酸、4-丙基-L-酪氨酸、膦酰酪氨酸、三-O-乙酰基-GlcNA、cp-丝氨酸、L- 磷酸丝氨酸、膦酰丝氨酸、L-3-(2-萘基)丙氨酸、2-氨基-3-((2-((3-(苯甲氧基)-3- 氧代丙基)氨基)乙基)硒基)丙酸、2-氨基-3-(苯基硒基)丙酸或硒代半胱氨酸。 在一些实施方案中，通过正交tRNA将至少一种非天然氨基酸掺入修饰的IL-2 多肽中。在一些实施方案中，本文公开的正交tRNA包含至少一种非天然核 碱基。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽经由至少一种非天然氨基酸共价 附接至缀合部分。在一些实施方案中，缀合部分包括水溶性聚合物、脂质、 蛋白质或肽。在一些实施方案中，水溶性聚合物包括聚乙二醇(PEG)、聚(丙 二醇)(PPG)、乙二醇与丙二醇的共聚物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、 聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)、聚(羟烷基甲基丙烯酸酯)、 聚(糖)、聚(α-羟酸)、聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚噁唑啉(POZ)、聚(N-丙烯酰 基吗啉)或其组合。在一些实施方案中，水溶性聚合物包括PEG分子。在一些 实施方案中，PEG分子是线性PEG。在一些实施方案中，PEG分子是分支PEG。 在一些实施方案中，PEG包含约2,000-50,000道尔顿(Da)之间。在一些实 施方案中，PEG的分子量包含约5,000Da、10,000Da、15,000Da、20,000Da、 25,000Da、30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施方案中，非天然氨基酸在SEQ ID NO:1的残基位置42包含F42。在一 些实施方案中，非天然氨基酸在SEQ:1的残基位置65包含P65。在一些实施 方案中，非天然氨基酸在SEQ IDNO:1的残基位置62包含E62。在一些实施 方案中，本文中分子量至少部分决定IL-2多肽的体内血浆半衰期。在一些实 施方案中，如与较小PEG的体内血浆半衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多 肽的较长体内血浆半衰期。在一些实施方案中，如与较大PEG的体内血浆半 衰期相比，PEG对应于修饰的IL-2多肽的较短体内血浆半衰期。在一些实施 方案中，PEG的分子量不影响修饰的IL-2多肽对IL-2βγ或IL-2αβγ信号传导复 合物的受体信号传导效力。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响修饰的 IL-2多肽对IL-2Rβγ的所需降低的结合或与IL-2Rβγα信号传导复合物的所需 维持的结合，或具有最小影响，其中对IL-2Rβγ降低的结合是与野生型IL-2 多肽与IL-2Rβγα之间的结合相比。在一些实施方案中，PEG的分子量不影响 修饰的IL-2多肽/IL-2Rβγ复合物的形成。在一些实施方案中，水溶性聚合物 包含多糖。在一些实施方案中，多糖包括葡聚糖、聚唾液酸(PSA)、透明 质酸(HA)、直链淀粉、肝素、硫酸乙酰肝素(HS)、糊精或羟乙基淀粉(HES)。 在一些实施方案中，脂质包括脂肪酸。在一些实施方案中，脂肪酸包含约6 至约26个碳原子、约6至约24个碳原子、约6至约22个碳原子、约6至约20个 碳原子、约6至约18个碳原子、约20至约26个碳原子、约12至约26个碳原子、 约12至约24个碳原子、约12至约22个碳原子、约12至约20个碳原子或约12至 约18个碳原子。在一些实施方案中，脂肪酸是饱和脂肪酸。在一些实施方案 中，蛋白质包括白蛋白、转铁蛋白或甲状腺素转运蛋白。在一些实施方案中， 蛋白质包括抗体或其结合片段。在一些实施方案中，本文中抗体或其结合片 段包括抗体的Fc部分。在一些实施方案中，肽包括XTEN肽、富含甘氨酸的 高氨基酸聚合物(HAP)、PAS多肽、弹性蛋白样多肽(ELP)、CTP肽或明胶样蛋白(GLK)聚合物。在一些实施方案中，缀合部分经由接头与修饰的 IL-2的至少一种非天然氨基酸间接结合。在一些实施方案中，接头包括同双 功能接头、异双功能接头、零长度接头、可切割或不可切割的二肽接头、马 来酰亚胺基团、间隔子或其组合。在一些实施方案中，相对于野生型IL-2多 肽，分离并修饰的IL-2多肽具有对IL-2Rβγ的受体信号传导效力降低，并且对 IL-2Rβγ的受体信号传导效力的降低为约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、30倍、50倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、 1000倍或更多。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽是：全长IL-2多肽的功 能活性片段；重组IL-2多肽；或重组人IL-2多肽。在一些实施方案中，修饰 的IL-2多肽包含N末端缺失、C末端缺失或其组合。在一些实施方案中，N末 端缺失包含N末端的前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、 15、20、25或30个残基的缺失，其中残基位置是参考SEQ ID NO:1中的位置。 在一些实施方案中，C末端缺失包含C末端的最后1、2、3、4、5、6、7、8、 9、10、11、12、13、14、15、20或更多个残基的缺失，其中残基位置是参 考SEQ ID NO:1中的位置。在一些实施方案中，功能活性片段包含IL-2区域 10-133、20-133、30-133、10-130、20-130、30-130、10-125、20-125、30-125、 1-130或1-125，其中残基位置是参考SEQ ID NO:1中的位置。在一些实施方 案中，修饰的IL-2多肽包含与SEQ ID NO:1的约80％、85％、90％、95％、96％、 97％、98％或99％序列同一性。在一些实施方案中，对IL-2Rβγ的受体信号传 导效力降低的修饰的IL-2多肽能够扩增CD4+T调节性(Treg)细胞。在一些 实施方案中，缀合部分削弱或阻断IL-2与IL-2Rβγ的受体信号传导效力，或者 减少IL-2Rγ亚基至IL-2/IL-2Rβ复合物的募集。在一些实施方案中，通过修饰 的IL-2/IL-2Rαβγ复合物进行的CD4+Treg细胞增殖等效于或大于野生型IL-2 多肽的所述增殖。在一些实施方案中，修饰的IL-2/IL-2Rαβγ复合物诱导CD4+ Treg细胞增殖至足以在动物模型中调节病程的群体。在一些实施方案中，修 饰的IL-2多肽展现对IL-2Rβγ的第一受体信号传导效力和对IL-2Rαβγ的第二 受体信号传导效力，其中第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力低 至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、 50倍、100倍、500倍、1000倍或更低。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽的第一受体信号传导效力低于野生型IL-2多肽对IL-2Rβγ的受体信号传导效 力。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽的第二受体信号传导效力低于野生 型IL-2多肽对IL-2Rαβγ的受体信号传导效力。在一些实施方案中，其中修饰 的IL-2多肽进一步提供IL-2Rα亚基至IL-2多肽的募集的增加，从而导致白介 素2αβγ受体(IL-2Rαβγ)的激活，其中募集的增加是与野生型IL-2多肽对 IL-2Rα亚基的募集相比。在一些实施方案中，修饰的IL-2多肽进一步提供 IL-2Rγ亚基至IL-2/IL-2Rβ复合物的募集的减少，其中减少的募集是与野生型IL-2多肽对IL-2Rβ亚基和/或IL-2Rγ亚基的募集相比。
本文公开的方面提供白介素2αβγ受体(IL-2Rαβγ)结合蛋白， 其中所述结合蛋白对白介素2βγ受体(IL-2Rβγ)的受体信号传导效力小于野 生型人IL-2(hIL-2)的所述结合亲和力，并且其中所述结合蛋白包含至少一 种非天然氨基酸。
本文公开的方面提供白介素2αβγ受体(IL-2Rαβγ)结合蛋白， 其中通过所述结合蛋白进行的IL-2Rγ亚基至IL-2/IL-2Rβ复合物的募集小于 野生型人IL-2(hIL-2)的所述募集，并且其中所述结合蛋白包含至少一种非 天然氨基酸。在一些实施方案中，所述结合蛋白是修饰的IL-2多肽或其功能 活性片段，其中所述修饰的IL-2多肽包含至少一种非天然氨基酸。
本文公开的方面提供IL-2/IL-2Rαβγ复合物，其包含含有非天然 氨基酸的修饰的IL-2多肽和IL-2Rαβγ，其中所述修饰的IL-2多肽具有对 IL-2Rβγ降低的受体信号传导效力，并且其中所述降低的受体信号传导效力 是与野生型IL-2多肽与IL-2Rβγ之间的结合亲和力相比。在一些实施方案中， 相对于与野生型IL-2多肽接触的CD3+细胞群中CD8+效应T细胞和/或自然杀 伤细胞的扩增，当使所述激活剂与所述CD3+细胞群接触时，所述激活剂将CD3+细胞群中的CD8+效应T细胞和/或自然杀伤细胞扩增少于20％、15％、 10％、5％、1％或0.1％。在一些实施方案中，所述激活剂不扩增CD8+效应T 细胞和/或自然杀伤细胞。在一些实施方案中，所述细胞群是体内细胞群。在 一些实施方案中，所述细胞群是体外细胞群。在一些实施方案中，所述细胞 群是离体细胞群。
本文公开的方面提供IL-2/IL-2Rαβγ复合物，其包含含有非天然 氨基酸的修饰的IL-2多肽和IL-2Rαβγ，其中通过所述修饰的IL-2多肽进行的 IL-2Rγ亚基至IL-2/IL-2Rβ复合物的募集小于野生型IL-2多肽的所述募集。在 一些实施方案中，修饰的IL-2多肽还包含共价附接至非天然氨基酸的缀合部 分。在一些实施方案中，相对于与野生型IL-2多肽接触的CD3+细胞群中CD8+ 效应T细胞和/或自然杀伤细胞的扩增，当使所述激活剂与所述CD3+细胞群 接触时，所述激活剂将CD3+细胞群中的CD8+效应T细胞和/或自然杀伤细胞扩增少于20％、15％、10％、5％、1％或0.1％。在一些实施方案中，所述激活 剂不扩增CD8+效应T细胞和/或自然杀伤细胞。在一些实施方案中，所述细 胞群是体内细胞群。在一些实施方案中，所述细胞群是体外细胞群。在一些 实施方案中，所述细胞群是离体细胞群。
本文公开的方面提供选择性扩增细胞群中的CD4+Treg细胞的 CD4+Treg细胞激活剂，其中所述激活剂包含含有至少一种非天然氨基酸的 修饰的IL-2多肽。在一些实施方案中，相对于与野生型IL-2多肽接触的CD3+ 细胞群中CD8+效应T细胞和/或自然杀伤细胞的扩增，当使所述激活剂与所 述CD3+细胞群接触时，所述激活剂将CD3+细胞群中的CD8+效应T细胞和/ 或自然杀伤细胞扩增少于20％、15％、10％、5％、1％或0.1％。在一些实施方 案中，所述激活剂不扩增CD8+效应T细胞和/或自然杀伤细胞。在一些实施 方案中，所述细胞群是体内细胞群。在一些实施方案中，所述细胞群是体外 细胞群。在一些实施方案中，所述细胞群是离体细胞群。
本文公开的方面提供药物组合物，其包含：本文所述的分离并 修饰的IL-2多肽、本文所述的IL-2Rαβγ结合蛋白或本文所述的CD4+Treg；以 及药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，将药物组合物配制用于全身 递送。在一些实施方案中，将药物组合物配制用于肠胃外施用。在一些实施 方案中，自身免疫性疾病或障碍包括斑秃、自身免疫性溶血性贫血、自身免 疫性肝炎、皮肌炎、1型糖尿病、幼年特发性关节炎、肾小球肾炎、格雷夫斯病、吉兰-巴雷综合征、特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、多发性 硬化、天疱疮/类天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多发性肌炎、原发性 胆汁性肝硬化、银屑病、类风湿性关节炎、硬皮病、干燥综合征、系统性红 斑狼疮、甲状腺炎、葡萄膜炎、白癜风或韦氏肉芽肿病。在一些实施方案中， 所述方法还包括施用另外的治疗剂。在一些实施方案中，IL-2缀合物和另外 的治疗剂是同时施用。在一些实施方案中，IL-2缀合物和另外的治疗剂是依 序施用。在一些实施方案中，在另外的治疗剂之前施用IL-2缀合物。在一些 实施方案中，在施用另外的治疗剂之后施用IL-2缀合物。在一些实施方案中， 受试者是人。
本文公开的方面提供治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病 或障碍的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的分离并修 饰的IL-2多肽、本文所述的IL-2Rαβγ结合蛋白、本文所述的CD4+Treg细胞或 本文所述的药物组合物。在一些实施方案中，自身免疫性疾病或障碍包括斑 秃、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、皮肌炎、1型糖尿病、幼年 特发性关节炎、肾小球肾炎、格雷夫斯病、吉兰-巴雷综合征、特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、多发性硬化、天疱疮/类天疱疮、恶性贫血、结 节性多动脉炎、多发性肌炎、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、类风湿性关节 炎、硬皮病、干燥综合征、系统性红斑狼疮、甲状腺炎、葡萄膜炎、白癜风 或韦氏肉芽肿病。在一些实施方案中，所述方法还包括施用另外的治疗剂。 在一些实施方案中，IL-2缀合物和另外的治疗剂是同时施用。在一些实施方 案中，IL-2缀合物和另外的治疗剂是依序施用。在一些实施方案中，在另外 的治疗剂之前施用IL-2缀合物。在一些实施方案中，在施用另外的治疗剂之 后施用IL-2缀合物。在一些实施方案中，受试者是人。
本文公开的方面提供扩增CD4+调节性T(Treg)细胞群的方 法，其包括：使细胞与本文所述的分离并修饰的IL-2多肽、本文所述的 IL-2Rαβγ结合蛋白、本文所述的CD4+Treg细胞或本文所述的药物组合物接触 足够时间，以诱导与IL-2Rαβγ的复合物的形成，从而刺激Treg细胞群的扩增。 在一些实施方案中，所述方法是体内方法。在一些实施方案中，所述方法是 体外方法。在一些实施方案中，所述方法是离体方法。
本文公开的方面提供试剂盒，其包含本文所述的分离并修饰的 IL-2多肽、本文所述的IL-2Rαβγ结合蛋白、本文所述的CD4+Treg细胞或本文 所述的药物组合物。在一些实施方案中，分离并修饰的IL-2多肽包含在对应 于SEQ ID NO:1的残基位置65的残基P65处的突变，以及包含PEG的缀合部 分，所述PEG的分子量包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、20,000 Da、25,000Da、30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。 在一些实施方案中，分离并修饰的IL-2多肽包含在对应于SEQ ID NO:1的残 基位置61的残基E61处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子 量包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000Da、 30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施方案 中，分离并修饰的IL-2多肽包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置42的残基 F42处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约5,000道 尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000Da、30,000Da、35,000 Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施方案中，PEG的分子量 有效改进分离并修饰的IL-2多肽和/或IL-2缀合物的溶解度。在一些实施方案 中，PEG的分子量有效增加分离并修饰的IL-2多肽和/或IL-2缀合物的稳定性。 在一些实施方案中，PEG的分子量有效改进制造分离并修饰的IL-2多肽和/ 或IL-2缀合物的过继细胞疗法的效率。
本文公开的方面提供用于制造过继细胞疗法的试剂，其包含本 文所述的分离并修饰的IL-2多肽、本文所述的IL-2Rαβγ结合蛋白、本文所述 的CD4+Treg细胞或本文所述的药物组合物。在一些实施方案中，分离并修 饰的IL-2多肽包含在对应于SEQ ID NO:1的残基位置65的残基P65处的突变， 以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的分子量包含约5,000道尔顿(Da)、 10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000Da、30,000Da、35,000Da、40,000 Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施方案中，分离并修饰的IL-2多肽包含 在对应于SEQ IDNO:1的残基位置61的残基E61处的突变，以及包含PEG的 缀合部分，所述PEG的分子量包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、 20,000Da、25,000Da、30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000 Da。在一些实施方案中，分离并修饰的IL-2多肽包含在对应于SEQ ID NO:1 的残基位置42的残基F42处的突变，以及包含PEG的缀合部分，所述PEG的 分子量包含约5,000道尔顿(Da)、10,000Da、15,000Da、20,000Da、25,000 Da、30,000Da、35,000Da、40,000Da、45,000Da或50,000Da。在一些实施 方案中，PEG的分子量有效改进分离并修饰的IL-2多肽和/或IL-2缀合物的溶 解度。在一些实施方案中，PEG的分子量有效增加分离并修饰的IL-2多肽和/ 或IL-2缀合物的稳定性。在一些实施方案中，PEG的分子量有效改进制造分 离并修饰的IL-2多肽和/或IL-2缀合物的过继细胞疗法的效率。
某些术语
除非另外定义，否则本文中使用的所有技术术语和科学术语具 有与要求保护的主题所属领域的技术人员通常所理解的相同的含义。应理 解，详细描述仅是示例性和解释性的，并不是对所要求保护的任何主题的限 制。在本申请中，除非另外特别说明，否则单数的使用包括复数。必须指出， 如在说明书中所使用，单数形式“一个/一种(a/an)”和“该(the)”包括 复数指示物，除非上下文另外清楚地规定。在本申请中，除非另外陈述，否 则“或”的使用意指“和/或”。此外，术语“包括(including)”以及其他 形式如“包括(include)”、“包括(includes)”和“包括(included)” 的使用是非限制性的。
尽管本发明的各种特征可以在单一实施方案的上下文中描述， 但所述特征也可以单独提供或以任何合适的组合提供。相反，尽管为了清楚 起见，本文可以在分开的实施方案的背景下描述本发明，但是本发明也可以 在单一实施方案中实现。
在说明书中对“一些实施方案”、“实施方案”、“一个实施 方案”或“其他实施方案”的提及意指结合实施方案描述的特定特征、结构 或特性包括在本公开文本的至少一些实施方案中，但不必包括在本发明的所 有实施方案中。
如本文所用，范围和量可以表示为“约”特定值或范围。约也 包括确切的量。因此，“约5μL”意指“约5μL”以及“5μL”。通常，术 语“约”包括预期在实验误差内的量，如例如，在15％、10％或5％内。
本文使用的章节标题仅用于组织目的，而不应解释为限制所描 述的主题。
如本文所用，术语“一个或多个个体”、“一名或多名受试 者”和“一名或多名患者”意指任何哺乳动物。在一些实施方案中，哺乳动 物是人。在一些实施方案中，哺乳动物是非人。所述术语均不要求或不限于 以卫生保健工作者(例如医生、注册护士、执业护士、医师助理、护理员或 临终关怀工作者)进行监督(例如持续或间断)为特征的情况。
如本文所用，关于结合亲和力的术语“显著的”或“显著地” 意指细胞因子(例如，IL-2多肽)的结合亲和力的足以影响细胞因子(例如， IL-2多肽)与靶受体的结合的变化。在一些情况下，所述术语是指至少10％、 20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更大的变化。在 一些情况下，所述术语意指至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、 10倍、50倍、100倍、500倍、1000倍或更大的变化。
在一些情况下，关于经由细胞因子信号传导复合物激活一种或 多种细胞群的术语“显著的”或“显著地”意指足以激活细胞群的变化。在 一些情况下，将激活细胞群的变化测量为受体信号传导效力。在此类情况下， 可以提供EC50值。在其他情况下，可以提供ED50值。在另外的情况下，可 以提供细胞因子的浓度或剂量。
如本文所用，术语“效力”是指产生靶效应所需的细胞因子 (例如，IL-2多肽)的量。在一些情况下，术语“效力”是指激活靶细胞因 子受体(例如，IL-2受体)所需的细胞因子(例如，IL-2多肽)的量。在其 他情况下，术语“效力”是指激活靶细胞群所需的细胞因子(例如，IL-2多 肽)的量。在一些情况下，将效力测量为ED50(有效剂量50)或产生50％最 大效应所需的剂量。在其他情况下，将效力测量为EC50(有效浓度50)或在 50％群体中产生靶效应所需的剂量。
编号实施方案
本公开文本提供以下非限制性编号实施方案：
实施方案1.一种包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中 所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(I)的结构替代：
Figure BDA0003528433030003031
其中：
Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030003032
Y是CH2并且Z是
Figure BDA0003528433030003041
Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030003042
或者
Y是CH2并且Z是
Figure BDA0003528433030003043
W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、 35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003044
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案2.一种包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中 所述IL-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(I)的结构替代：
Figure BDA0003528433030003045
式(I)；
其中：
Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030003046
Y是CH2并且Z是
Figure BDA0003528433030003047
Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030003048
或者
Y是CH2并且Z是
Figure BDA0003528433030003049
W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团；
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003051
并且
其中式(I)的结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置；或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案3.根据实施方案1或2所述的IL-2缀合物，其中Z是CH2并且Y 是
Figure BDA0003528433030003052
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案4.根据实施方案1或2所述的IL-2缀合物，其中Y是CH2并且Z 是
Figure BDA0003528433030003053
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案5.根据实施方案1或2所述的IL-2缀合物，其中Z是CH2并且Y 是
Figure BDA0003528433030003054
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案6.根据实施方案1或2所述的IL-2缀合物，其中Z是CH2并且Y 是
Figure BDA0003528433030003055
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案7.根据实施方案1或2所述的IL-2缀合物，其中Y是CH2并且Z 是
Figure BDA0003528433030003056
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案8.根据实施方案1或2所述的IL-2缀合物，其中所述PEG基团 具有选自5kDa、10kDa、20kDa和30kDa的平均分子量，或为其药学上可接 受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案9.根据实施方案8所述的IL-2缀合物，其中所述PEG基团具有 5kDa的平均分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案10.根据实施方案8所述的IL-2缀合物，其中所述PEG基团具有 30kDa的平均分子量，或为其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案11.根据实施方案1或2所述的IL-2缀合物，其中式(I)的结构 在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自K35、F42、F44、K43、E62、 P65、R38、T41、E68、Y45、V69和L72，其中式(I)的结构在所述IL-2缀合 物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位置，或其药学上可接受 的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案12.根据实施方案11所述的IL-2缀合物，其中式(I)的结构所 述在IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自F42、E62和P65，其中式(I)的 结构在所述IL-2缀合物的氨基酸序列中的位置是参考SEQ ID NO:1中的位 置，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案13.一种包含SEQ ID NO:15-19中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_PEG]具有式(II)或式(III)的结构，或者式(II)与式 (III)的混合物：
Figure BDA0003528433030003061
其中：
W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、 35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003062
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案14.根据实施方案13所述的IL-2缀合物，其中所述[AzK_PEG] 是式(II)与式(III)的混合物，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案15.根据实施方案13所述的IL-2缀合物，其中所述[AzK_PEG] 具有式(II)的结构：
Figure BDA0003528433030003071
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案16.根据实施方案15所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:15的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案17.根据实施方案16所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案18.根据实施方案17所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案19.根据实施方案17所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案20.根据实施方案17所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案21.根据实施方案15所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:16的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案22.根据实施方案21所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案23.根据实施方案22所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案24.根据实施方案23所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案25.根据实施方案23所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案26.根据实施方案15所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:17的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案27.根据实施方案26所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案28.根据实施方案27所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案29.根据实施方案27所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案30.根据实施方案27所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案31.根据实施方案15所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:18的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案32.根据实施方案31所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案33.根据实施方案32所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案34.根据实施方案33所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案35.根据实施方案33所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案36.根据实施方案15所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:19的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案37.根据实施方案36所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案38.根据实施方案37所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案39.根据实施方案38所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案40.根据实施方案38所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案41.根据实施方案13所述的IL-2缀合物，其中所述[AzK_PEG] 具有式(III)的结构
Figure BDA0003528433030003091
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案42.根据实施方案41所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:15的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案43.根据实施方案42所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案44.根据实施方案43所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案45.根据实施方案44所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案46.根据实施方案44所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案47.根据实施方案41所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:16的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案48.根据实施方案47所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案49.根据实施方案48所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案50.根据实施方案49所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案51.根据实施方案49所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案52.根据实施方案41所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:17的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案53.根据实施方案52所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案54.根据实施方案53所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案55.根据实施方案54所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案56.根据实施方案54所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案57.根据实施方案41所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:18的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案58.根据实施方案57所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案59.根据实施方案58所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案60.根据实施方案59所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案61.根据实施方案59所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案62.根据实施方案41所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:19的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案63.根据实施方案62所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案64.根据实施方案63所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案65.根据实施方案64所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案66.根据实施方案64所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案67.根据实施方案1至66中任一项所述的IL-2缀合物，其中W是 线性或分支PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案68.根据实施方案1至66中任一项所述的IL-2缀合物，其中W是 线性PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案69.根据实施方案1至66中任一项所述的IL-2缀合物，其中W是 分支PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案70.根据实施方案1至66中任一项所述的IL-2缀合物，其中W是 甲氧基PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案71.根据实施方案70所述的IL-2缀合物，其中所述甲氧基PEG 基团是线性的或分支的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案72.根据实施方案71所述的IL-2缀合物，其中所述甲氧基PEG 基团是线性的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案73.根据实施方案71所述的IL-2缀合物，其中所述甲氧基PEG 基团是分支的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案74.一种包含SEQ ID NO:20-24中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_PEG5kD]具有式(II)或式(III)的结构，或者式(II)与 式(III)的混合物：
Figure BDA0003528433030003121
其中：
W是平均分子量为5kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003122
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案75.根据实施方案74所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:20的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案76.根据实施方案74所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:21的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案77.根据实施方案74所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:22的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案78.根据实施方案74所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:23的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案79.根据实施方案74所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:24的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案80.所述的IL-2缀合物根据实施方案74，其中所述 [AzK_PEG5kD]具有式(II)的结构
Figure BDA0003528433030003131
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案81.根据实施方案80所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:20的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案82.根据实施方案80所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:21的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案83.根据实施方案80所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:22的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案84.根据实施方案80所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:23的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案85.根据实施方案80所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:24的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案86.根据实施方案74所述的IL-2缀合物，其中所述 [AzK_PEG5kD]具有式(III)的结构
Figure BDA0003528433030003132
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案87.根据实施方案86所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:20的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案88.根据实施方案86所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:21的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案89.根据实施方案86所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:22的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案90.根据实施方案86所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:23的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案91.根据实施方案86所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:24的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案92.一种包含SEQ ID NO:25-29中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_PEG30kD]具有式(II)或式(III)的结构，或者是式(II) 与式(III)的结构的混合物：
Figure BDA0003528433030003141
其中：
W是平均分子量为30kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003151
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案93.根据实施方案92所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:25的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案94.根据实施方案92所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:26的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案95.根据实施方案92所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:27的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案96.根据实施方案92所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:28的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案97.根据实施方案92所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:29的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案98.根据实施方案92所述的IL-2缀合物，其中所述 [AzK_PEG30kD]具有式(II)的结构：
Figure BDA0003528433030003152
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案99.根据实施方案98所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:25的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案100.根据实施方案98所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:26的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案101.根据实施方案98所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:27的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案102.根据实施方案98所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:28的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案103.根据实施方案98所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQID NO:29的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案104.根据实施方案92所述的IL-2缀合物，其中所述 [AzK_PEG30kD]具有式(III)的结构
Figure BDA0003528433030003161
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案105.根据实施方案104所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案106.根据实施方案104所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案107.根据实施方案104所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案108.根据实施方案104所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案109.根据实施方案104所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:29的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案110.一种包含SEQ ID NO:15-19中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_PEG]是式(II)与式(III)的结构的混合物：
Figure BDA0003528433030003171
其中：
W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、 35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003172
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案111.根据实施方案110所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_PEG]的总量的式(II)结构的量与式(III)结构的量的比率为 约1:1。
实施方案112.根据实施方案110所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_PEG]的总量的式(II)结构的量与式(III)结构的量的比率大 于1:1。
实施方案113.根据实施方案110所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_PEG]的总量的式(II)结构的量与式(III)结构的量的比率小 于1:1。
实施方案114.根据实施方案110至113中任一项所述的IL-2缀合物，其中W是线性或分支PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案115.根据实施方案110至113中任一项所述的IL-2缀合物，其中 W是线性PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案116.根据实施方案110至113中任一项所述的IL-2缀合物，其中 W是分支PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案117.根据实施方案110至113中任一项所述的IL-2缀合物，其中 W是甲氧基PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案118.根据实施方案117所述的IL-2缀合物，其中所述甲氧基PEG 基团是线性的或分支的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案119.根据实施方案118所述的IL-2缀合物，其中所述甲氧基PEG 基团是线性的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案120.根据实施方案118所述的IL-2缀合物，其中所述甲氧基PEG 基团是分支的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案121.一种包含SEQ ID NO:20至24中任一项的氨基酸序列的 IL-2缀合物，其中[AzK_PEG5kD]是式(II)与式(III)的结构的混合物：
Figure BDA0003528433030003181
其中：
W是平均分子量为5kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003182
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案122.根据实施方案121所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_PEG5kD]的总量的式(II)结构的量与式(III)结构的量的比率 为约1:1。
实施方案123.根据实施方案121所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_PEG5kD]的总量的式(II)结构的量与式(III)结构的量的比率 大于1:1。
实施方案124.根据实施方案121所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_PEG5kD]的总量的式(II)结构的量与式(III)结构的量的比率 小于1:1。
实施方案125.一种包含SEQ ID NO:25-29中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_PEG30kD]是式(II)与式(III)的结构的混合物：
Figure BDA0003528433030003191
其中：
W是平均分子量为30kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003192
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案126.根据实施方案125所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_PEG30kD]的总量的式(II)结构的量与式(III)结构的量的比 率为约1:1。
实施方案127.根据实施方案125所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_PEG30kD]的总量的式(II)结构的量与式(III)结构的量的比 率大于1:1。
实施方案128.根据实施方案125所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_PEG30kD]的总量的式(II)结构的量与式(III)结构的量的比 率小于1:1。
实施方案129.一种包含SEQ ID NO:40-44中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_L1_PEG]具有式(IV)或式(V)的结构，或者式(IV)与 式(V)的混合物：
Figure BDA0003528433030003201
其中：
W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、 35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003202
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案130.根据实施方案129所述的IL-2缀合物，其中所述 [AzK_L1_PEG]是式(IV)与式(V)的混合物，或其药学上可接受的盐、溶 剂合物或水合物。
实施方案131.根据实施方案129所述的IL-2缀合物，其中所述 [AzK_L1_PEG]具有式(IV)的结构：
Figure BDA0003528433030003211
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案132.根据实施方案131所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:40的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案133.根据实施方案132所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案134.根据实施方案133所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案135.根据实施方案133所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案136.根据实施方案133所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案137.根据实施方案131所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案138.根据实施方案137所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案139.根据实施方案138所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案140.根据实施方案139所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案141.根据实施方案139所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案142.根据实施方案129所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案143.根据实施方案142所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案144.根据实施方案143所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案145.根据实施方案144所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案146.根据实施方案144所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案147.根据实施方案129所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:43的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案148.根据实施方案147所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案149.根据实施方案148所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案150.根据实施方案149所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案151.根据实施方案149所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案152.根据实施方案129所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案153.根据实施方案152所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案154.根据实施方案153所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案155.根据实施方案154所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案156.根据实施方案155所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案157.根据实施方案129所述的IL-2缀合物，其中所述 [AzK_L1_PEG]具有式(V)的结构
Figure BDA0003528433030003231
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案158.根据实施方案157所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:40的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案159.根据实施方案158所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案160.根据实施方案159所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案161.根据实施方案160所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案162.根据实施方案160所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案163.根据实施方案157所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案164.根据实施方案163所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案165.根据实施方案164所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案166.根据实施方案165所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案167.根据实施方案165所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案168.根据实施方案157所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案169.根据实施方案168所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案170.根据实施方案169所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案171.根据实施方案170所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案172.根据实施方案170所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案173.根据实施方案157所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:43的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案174.根据实施方案173所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案175.根据实施方案174所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案176.根据实施方案175所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案177.根据实施方案175所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案178.根据实施方案157所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案179.根据实施方案178所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa的PEG基团，或其药 学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案180.根据实施方案179所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 选自5kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案181.根据实施方案180所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案182.根据实施方案180所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量 为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案183.根据实施方案129至182中任一项所述的IL-2缀合物，其中 W是线性或分支PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案184.根据实施方案129至182中任一项所述的IL-2缀合物，其中 W是线性PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案185.根据实施方案129至182中任一项所述的IL-2缀合物，其中 W是分支PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案186.根据实施方案129至182中任一项所述的IL-2缀合物，其中 W是甲氧基PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案187.根据实施方案186所述的IL-2缀合物，其中所述甲氧基PEG 基团是线性的或分支的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案188.根据实施方案187所述的IL-2缀合物，其中所述甲氧基PEG 基团是线性的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案189.根据实施方案187所述的IL-2缀合物，其中所述甲氧基PEG 基团是分支的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案190.一种包含SEQ ID NO:45-49中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_L1_PEG5kD]具有式(IV)或式(V)的结构，或者式(IV) 与式(V)的混合物：
Figure BDA0003528433030003251
Figure BDA0003528433030003261
其中：
W是平均分子量为5kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003262
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案191.根据实施方案190所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案192.根据实施方案190所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案193.根据实施方案190所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:47的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案194.根据实施方案190所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:48的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案195.根据实施方案190所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案196.根据实施方案190所述的IL-2缀合物，其中所述 [AzK_L1_PEG5kD]具有式(IV)的结构
Figure BDA0003528433030003271
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案197.根据实施方案196所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案198.根据实施方案196所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案199.根据实施方案196所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:47的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案200.根据实施方案196所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:48的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案201.根据实施方案196所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案202.根据实施方案190所述的IL-2缀合物，其中所述 [AzK_L1_PEG5kD]具有式(V)的结构
Figure BDA0003528433030003272
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案203.根据实施方案202所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案204.根据实施方案202所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案205.根据实施方案202所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:47的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案206.根据实施方案202所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:48的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案207.根据实施方案202所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案208.一种包含SEQ ID NO:50-54中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_L1_PEG30kD]具有式(IV)或式(V)的结构，或者是式 (IV)与式(V)的结构的混合物：
Figure BDA0003528433030003281
其中：
W是平均分子量为30kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003282
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案209.根据实施方案208所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:50的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案210.根据实施方案208所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:51的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案211.根据实施方案208所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:52的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案212.根据实施方案208所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案213.根据实施方案208所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:54的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案214.根据实施方案208所述的IL-2缀合物，其中所述 [AzK_L1_PEG30kD]具有式(IV)的结构：
Figure BDA0003528433030003291
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案215.根据实施方案214所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:50的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案216.根据实施方案214所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:51的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案217.根据实施方案214所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:52的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案218.根据实施方案214所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案219.根据实施方案214所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:54的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案220.根据实施方案214所述的IL-2缀合物，其中所述 [AzK_L1_PEG30kD]具有式(V)的结构
Figure BDA0003528433030003301
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案221.根据实施方案220所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:50的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案222.根据实施方案220所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:51的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案223.根据实施方案220所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:52的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案224.根据实施方案220所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案225.根据实施方案220所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 具有SEQ ID NO:54的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水 合物。
实施方案226.一种包含SEQ ID NO:40-44中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[Azk_L1_PEG]是式(IV)与式(V)的结构的混合物：
Figure BDA0003528433030003311
其中：
W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、 35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003312
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案227.根据实施方案226所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_L1_PEG]的总量的式(IV)结构的量与式(V)结构的量的比率 为约1:1。
实施方案228.根据实施方案226所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_L1_PEG]的总量的式(IV)结构的量与式(V)结构的量的比率 大于1:1。
实施方案229.根据实施方案226所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_L1_PEG]的总量的式(IV)结构的量与式(V)结构的量的比率 小于1:1。
实施方案230.根据实施方案226至229中任一项所述的IL-2缀合物，其中 W是线性或分支PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案231.根据实施方案226至229中任一项所述的IL-2缀合物，其中 W是线性PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案232.根据实施方案226至229中任一项所述的IL-2缀合物，其中 W是分支PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案233.根据实施方案226至229中任一项所述的IL-2缀合物，其中 W是甲氧基PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案234.根据实施方案233所述的IL-2缀合物，其中所述甲氧基PEG 基团是线性的或分支的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案235.根据实施方案234所述的IL-2缀合物，其中所述甲氧基PEG 基团是线性的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案236.根据实施方案234所述的IL-2缀合物，其中所述甲氧基PEG 基团是分支的，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案237.一种包含SEQ ID NO:45至49中任一项的氨基酸序列的 IL-2缀合物，其中[AzK_L1_PEG5kD]是式(IV)与式(V)的结构的混合物：
Figure BDA0003528433030003321
其中：
W是平均分子量为5kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003322
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案238.根据实施方案237所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_L1_PEG5kD]的总量的式(IV)结构的量与式(V)结构的量的 比率为约1:1。
实施方案239.根据实施方案237所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_L1_PEG5kD]的总量的式(IV)结构的量与式(V)结构的量的 比率大于1:1。
实施方案240.根据实施方案237所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_L1_PEG5kD]的总量的式(IV)结构的量与式(V)结构的量的 比率小于1:1。
实施方案241.一种包含SEQ ID NO:50-54中任一项的氨基酸序列的IL-2 缀合物，其中[AzK_L1 PEG30kD]是式(IV)与式(V)的结构的混合物：
Figure BDA0003528433030003331
其中：
W是平均分子量为30kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003332
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
实施方案242.根据实施方案241所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_L1_PEG30kD]的总量的式(IV)结构的量与式(V)结构的量 的比率为约1:1。
实施方案243.根据实施方案241所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_L1_PEG30kD]的总量的式(IV)结构的量与式(V)结构的量 的比率大于1:1。
实施方案244.根据实施方案241所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物 中构成[AzK_L1_PEG30kD]的总量的式(IV)结构的量与式(V)结构的量 的比率小于1:1。
实施方案245.一种治疗受试者癌症的方法，其包括向有需要的受试者施 用有效量的根据实施方案1至244中任一项所述的IL-2缀合物。
实施方案246.所述的治疗受试者的癌症的方法根据实施方案245，其中 所述受试者的癌症选自肾细胞癌(RCC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、头颈部 鳞状细胞癌(HNSCC)、经典型霍奇金淋巴瘤(cHL)、原发性纵隔大B细胞 淋巴瘤(PMBCL)、尿路上皮癌、微卫星不稳定癌、微卫星稳定癌、胃癌、 宫颈癌、肝细胞癌(HCC)、梅克尔细胞癌(MCC)、黑色素瘤、小细胞肺癌(SCLC)、食管癌、胶质母细胞瘤、间皮瘤、乳腺癌、三阴性乳腺癌、前列 腺癌、膀胱癌、卵巢癌、中度至低度突变负担的肿瘤、皮肤鳞状细胞癌 (CSCC)、鳞状细胞皮肤癌(SCSC)、低表达至不表达PD-L1的肿瘤、超出 其原发解剖学起源部位全身性播散至肝脏和CNS的肿瘤和弥漫性大B细胞淋 巴瘤。
实施方案247.根据实施方案246所述的治疗受试者的癌症的方法，其中 所述受试者的癌症选自肾细胞癌(RCC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、尿路上 皮癌和黑色素瘤。
实施方案248.根据实施方案245至247中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将所述IL-2缀合物施用至所述有需要的受试者，每两周一次、 每三周一次、每4周一次、每5周一次、每6周一次、每7周一次或每8周一次。
实施方案249.根据实施方案248所述的治疗受试者的癌症的方法，其中 将所述IL-2缀合物每周一次或每两周一次施用至所述有需要的受试者。
实施方案250.根据实施方案249所述的治疗受试者的癌症的方法，其中 将所述IL-2缀合物每周一次施用至所述有需要的受试者。
实施方案251.根据实施方案249所述的治疗受试者的癌症的方法，其中 将所述IL-2缀合物每两周一次施用至所述有需要的受试者。
实施方案252.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述 受试者的血管渗漏综合征。
实施方案253.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述 受试者的2级、3级或4级血管渗漏综合征。
实施方案254.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述 受试者的2级血管渗漏综合征。
实施方案255.根据实施方案253所述的治疗受试者的癌症的方法，其中 将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述受试者的3级血 管渗漏综合征。
实施方案256.根据实施方案253所述的治疗受试者的癌症的方法，其中 将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述受试者的4级血 管渗漏综合征。
实施方案257.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述 受试者的血管张力丧失。
实施方案258.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述 受试者的血浆蛋白和流体外渗至血管外空间。
实施方案259.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述 受试者的低血压和器官灌注减少。
实施方案260.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述 受试者的嗜中性粒细胞功能受损。
实施方案261.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述 受试者的趋化作用降低。
实施方案262.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者与所述受试者 增加的播散性感染的风险无关。
实施方案263.根据实施方案262所述的方法，其中所述播散性感染是脓 毒症或细菌性心内膜炎。
实施方案264.根据实施方案263所述的方法，其中所述播散性感染是脓 毒症。
实施方案265.根据实施方案262所述的方法，其中所述播散性感染是细 菌性心内膜炎。
实施方案266.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中在施用所述IL-2缀合物之前，针对任何预先存在的细菌感染 治疗所述受试者。
实施方案267.根据实施方案266所述的方法，其中在施用所述IL-2缀合物 之前，用选自苯唑西林、萘夫西林、环丙沙星和万古霉素的抗细菌剂治疗所 述受试者。
实施方案268.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会加重所述 受试者预先存在的或初始呈现的自身免疫性疾病或炎性障碍。
实施方案269.根据实施方案268所述的方法，其中将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者不会加重所述受试者预先存在的或初始呈现的自 身免疫性疾病。
实施方案270.根据实施方案268所述的方法，其中将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者不会加重所述受试者预先存在的或初始呈现的炎 性障碍。
实施方案271.根据实施方案268所述的方法，其中所述受试者的自身免 疫性疾病或炎性障碍选自克罗恩病、硬皮病、甲状腺炎、炎性关节炎、糖尿 病、眼球型重症肌无力、新月体性IgA肾小球肾炎、胆囊炎、脑血管炎、史- 约综合征和大疱性类天疱疮。
实施方案272.根据实施方案271所述的方法，其中所述受试者的自身免 疫性疾病或炎性障碍是克罗恩病。
实施方案273.根据实施方案271所述的方法，其中所述受试者的自身免 疫性疾病或炎性障碍是硬皮病。
实施方案274.根据实施方案271所述的方法，其中所述受试者的自身免 疫性疾病或炎性障碍是甲状腺炎。
实施方案275.根据实施方案271所述的方法，其中所述受试者的自身免 疫性疾病或炎性障碍是炎性关节炎。
实施方案276.根据实施方案271所述的方法，其中所述受试者的自身免 疫性疾病或炎性障碍是糖尿病。
实施方案277.根据实施方案271所述的方法，其中所述受试者的自身免 疫性疾病或炎性障碍是眼球型重症肌无力。
实施方案278.根据实施方案271所述的方法，其中所述受试者的自身免 疫性疾病或炎性障碍是新月体性IgA肾小球肾炎。
实施方案279.根据实施方案271所述的方法，其中所述受试者的自身免 疫性疾病或炎性障碍是胆囊炎。
实施方案280.根据实施方案271所述的方法，其中所述受试者的自身免 疫性疾病或炎性障碍是脑血管炎。
实施方案281.根据实施方案271所述的方法，其中所述受试者的自身免 疫性疾病或炎性障碍是史-约综合征。
实施方案282.根据实施方案271所述的方法，其中所述受试者的自身免 疫性疾病或炎性障碍是大疱性类天疱疮。
实施方案283.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述 受试者的精神状态变化、言语困难、皮质盲、肢体或步态共济失调、幻觉、 激越、迟钝或昏迷。
实施方案284.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述 受试者的癫痫发作。
实施方案285.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者在患有已知癫 痫症的受试者中不受禁忌。
实施方案286.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会引起所述 受试者的毛细血管渗漏综合征。
实施方案287.根据实施方案286所述的方法，其中将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者不会引起所述受试者的2级、3级或4级毛细血管渗 漏综合征。
实施方案288.根据实施方案287所述的方法，其中将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者不会引起所述受试者的2级毛细血管渗漏综合征。
实施方案289.根据实施方案287所述的方法，其中将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者不会引起所述受试者的3级毛细血管渗漏综合征。
实施方案290.根据实施方案287所述的方法，其中将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者不会引起所述受试者的4级毛细血管渗漏综合征。
实施方案291.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会在将所述 IL-2缀合物施用至所述受试者之后引起所述受试者的平均动脉血压下降。
实施方案292.根据实施方案291所述的方法，其中将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者不会在将所述IL-2缀合物施用至所述受试者之后引 起所述受试者的低血压。
实施方案293.根据实施方案292所述的方法，其中将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者不会在将所述IL-2缀合物施用至所述受试者之后引 起所述受试者经历收缩压低于90mm Hg或从基线收缩压下降20mm Hg。
实施方案294.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会在将所述 IL-2缀合物施用至所述受试者之后引起所述受试者的水肿。
实施方案295.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会在将所述 IL-2缀合物施用至所述受试者之后引起所述受试者的肾功能或肝功能受损。
实施方案296.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会在将所述 IL-2缀合物施用至所述受试者之后引起所述受试者的嗜酸性粒细胞增多症。
实施方案297.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会在将所述 IL-2缀合物施用至所述受试者之后引起所述受试者外周血中的嗜酸性粒细胞 计数超过500/μL。
实施方案298.根据实施方案297所述的方法，其中将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者不会在将所述IL-2缀合物施用至所述受试者之后引 起所述受试者外周血中的嗜酸性粒细胞计数超过500/μL至1500/μL。
实施方案299.根据实施方案297所述的方法，其中将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者不会在将所述IL-2缀合物施用至所述受试者之后引 起所述受试者外周血中的嗜酸性粒细胞计数超过1500/μL至5000/μL。
实施方案300.根据实施方案297所述的方法，其中将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者不会在将所述IL-2缀合物施用至所述受试者之后引 起所述受试者外周血中的嗜酸性粒细胞计数超过5000/μL。
实施方案301.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者在正在进行精 神药物的现有方案的受试者中不受禁忌。
实施方案302.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者在正在进行肾 毒性药物、骨髓毒性药物、心脏毒性药物或肝毒性药物的现有方案的受试者 中不受禁忌。
实施方案303.根据实施方案302所述的方法，其中将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者在正在进行氨基糖苷类、细胞毒性化学疗法、多柔 比星、氨甲蝶呤或天冬酰胺酶的现有方案的受试者中不受禁忌。
实施方案304.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者在接受含有抗 肿瘤剂的组合方案的受试者中不受禁忌。
实施方案305.根据实施方案304所述的方法，其中所述抗肿瘤剂选自达 卡巴嗪、顺铂、他莫昔芬和干扰素-α。
实施方案306.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会在将所述 IL-2缀合物施用至所述受试者之后引起所述受试者的一种或多种4级不良事 件。
实施方案307.根据实施方案306所述的方法，其中所述一种或多种4级不 良事件选自体温过低；休克；心动过缓；心室期外收缩；心肌缺血；晕厥； 出血；房性心律失常；静脉炎；二度房室传导阻滞；心内膜炎；心包积液； 外周坏疽；血栓形成；冠状动脉障碍；口炎；恶心和呕吐；肝功能测试异常； 胃肠出血；呕血；血性腹泻；胃肠道障碍；肠穿孔；胰腺炎；贫血；白细胞 减少；白细胞增多；低钙血症；碱性磷酸酶升高；血尿素氮(BUN)升高； 高尿酸血症；非蛋白氮(NPN)升高；呼吸性酸中毒；嗜睡；激越；神经病； 偏执狂反应；抽搐；癫痫大发作性抽搐；谵妄；哮喘、肺水肿；通气过度； 低氧症；咯血；通气不足；气胸；瞳孔散大；瞳孔障碍；肾功能异常；肾衰； 和急性肾小管坏死。
实施方案308.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至一组受试者不会在将所述 IL-2缀合物施用至所述受试者之后在大于1％的所述受试者中引起一种或多 种4级不良事件。
实施方案309.根据实施方案307所述的方法，其中所述一种或多种4级不 良事件选自体温过低；休克；心动过缓；心室期外收缩；心肌缺血；晕厥； 出血；房性心律失常；静脉炎；二度房室传导阻滞；心内膜炎；心包积液； 外周坏疽；血栓形成；冠状动脉障碍；口炎；恶心和呕吐；肝功能测试异常； 胃肠出血；呕血；血性腹泻；胃肠道障碍；肠穿孔；胰腺炎；贫血；白细胞 减少；白细胞增多；低钙血症；碱性磷酸酶升高；血尿素氮(BUN)升高； 高尿酸血症；非蛋白氮(NPN)升高；呼吸性酸中毒；嗜睡；激越；神经病； 偏执狂反应；抽搐；癫痫大发作性抽搐；谵妄；哮喘、肺水肿；通气过度； 低氧症；咯血；通气不足；气胸；瞳孔散大；瞳孔障碍；肾功能异常；肾衰； 和急性肾小管坏死。
实施方案310.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至一组受试者不会在将所述 IL-2缀合物施用至所述受试者之后在大于1％的所述受试者中引起一种或多 种不良事件，其中所述一种或多种不良事件选自十二指肠溃疡形成；肠坏死； 心肌炎；室上性心动过速；继发于视神经炎的永久性或暂时性失明；短暂脑 缺血发作；脑膜炎；脑水肿；心包炎；过敏性间质性肾炎；和气管食管瘘。
实施方案311.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至一组受试者不会在将所述 IL-2缀合物施用至所述受试者之后在大于1％的所述受试者中引起一种或多 种不良事件，其中所述一种或多种不良事件选自恶性高热；心脏停搏；心肌 梗死；肺栓塞；脑卒中；肠穿孔；肝或肾衰竭；导致自杀的严重抑郁症；肺 水肿；呼吸停止；呼吸衰竭。
实施方案312.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不会导致产生 针对所述IL-2缀合物的中和抗体。
实施方案313.根据实施方案245至256中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将所述IL-2缀合物施用至所述受试者在不增加所述受试者中 外周CD4+调节性T细胞的数量的情况下增加所述受试者中外周CD8+T和 NK细胞的数量。
实施方案314.根据实施方案245至256中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将所述IL-2缀合物施用至所述受试者在不增加所述受试者中 外周嗜酸性粒细胞的数量的情况下增加所述受试者中外周CD8+T和NK细胞 的数量。
实施方案315.根据实施方案245至256中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将所述IL-2缀合物施用至所述受试者在不增加所述受试者中 瘤内CD4+调节性T细胞的数量的情况下增加所述受试者中瘤内CD8+T和 NK细胞的数量。
实施方案316.一种药物组合物，其包含有效量的根据实施方案1至244中 任一项所述的IL-缀合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
实施方案317.根据实施方案245至251中任一项所述的治疗受试者的癌 症的方法，其中将有效量的所述IL-2缀合物施用至所述受试者不需要加强监 护设施或者心肺或加强监护医学方面的熟练专家的可用性。
实施方案318.根据实施方案317所述的方法，其中将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者不需要加强监护设施的可用性。
实施方案319.根据实施方案317所述的方法，其中将有效量的所述IL-2 缀合物施用至所述受试者不需要心肺或加强监护医学方面的熟练专家的可 用性。
实施例
这些实施例仅仅出于说明性目的提供，并且不限制本文提供的 权利要求的范围。
实施例2至12中公开的化合物的每一种利用SEQ ID NO:4和 [AzK_PEG]部分，其中取代的氨基酸在IL-2缀合物中的位置是参考SEQ ID NO:4中的位置。
例如，表2A和表2B中标记“P65_5kD”的化合物是使用类似于 实施例2中所公开的那些方法的方法来制备，其中首先制备具有SEQ ID NO: 4的蛋白质，其中位置65的脯氨酸被AzK替代。然后允许含有AzK的蛋白质在 点击化学条件下与包含平均分子量为5kDa的甲氧基线性PEG基团的DBCO 反应，以提供包含式(II)、式(III)或式(II)与(III)的混合物的具有SEQ ID NO:20的产物，其中W是平均分子量为5kDa的甲氧基线性PEG基团。
在另一实施例中，表2A和表2B中标记“P65_30kD”的化合物 是通过以下方式来制备：首先制备具有SEQ ID NO:4的蛋白质，其中位置65 的脯氨酸被AzK替代。然后允许含有AzK的蛋白质在点击化学条件下与包含 平均分子量为30kDa的甲氧基线性PEG基团的DBCO反应，以提供包含式 (II)、式(III)或式(II)与(III)的混合物的具有SEQ ID NO:25的产物，其 中W是平均分子量为30kDa的甲氧基线性PEG基团。
类似地，标记“P65_30kD”的化合物是通过以下方式来制备： 制备具有SEQ ID NO:4的蛋白质，其中位置65的脯氨酸被N6-((2-叠氮基乙氧 基)-羰基)-L-赖氨酸(AzK)(SEQID NO:10)替代。还可以将所述化合物定 义为包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，其中位置65的脯氨酸(P65)被式(VI) 或(VII)的结构或式(VI)与(VII)的混合物替代，并且其中n是使得PEG 基团的分子量为约30kDa的整数。还可以将所述化合物定义为包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，其中位置65的脯氨酸(P65)被式(X)或(XI)的结构 或式(X)与(XI)的混合物替代，并且其中n是使得PEG基团的分子量为约 30kDa的整数。化合物P65_30kD用于实施例5、6、7和8中。
在另一实施例中，表2A和表2B中标记“E62_5kD”的化合物是 通过以下方式来制备：首先制备具有SEQ ID NO:4的蛋白质，其中位置62的 谷氨酸被AzK替代。然后允许含有AzK的蛋白质在点击化学条件下与包含平 均分子量为5kDa的甲氧基线性PEG基团的DBCO反应，以提供包含式(II)、 式(III)或式(II)与(III)的混合物的具有SEQ ID NO:21的产物，其中W是 平均分子量为5kDa的甲氧基线性PEG基团。
类似地，标记“E62_5kD”的化合物是通过以下方式来制备： 首先制备具有SEQ IDNO:4的蛋白质，其中位置62的谷氨酸(E62)被N6-((2- 叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸AzK(SEQ ID NO:11)替代。然后允许含有 AzK的蛋白质在点击化学条件下与包含平均分子量为5kDa的甲氧基线性 PEG基团的DBCO反应，以提供包含式(II)、式(III)或式(II)与(III)的混 合物的具有SEQ ID NO:21的产物，其中W是平均分子量为5kDa的甲氧基线 性PEG基团。化合物E62_5kD用于实施例9中。
在另一实施例中，表2A和表2B中标记“E62_30kD”的化合物 是通过以下方式来制备：首先制备具有SEQ ID NO:4的蛋白质，其中位置62 的谷氨酸被AzK替代。然后允许含有AzK的蛋白质在点击化学条件下与包含 平均分子量为30kDa的甲氧基线性PEG基团的DBCO反应，以提供包含式 (II)、式(III)或式(II)与(III)的混合物的具有SEQ ID NO:26的产物，其 中W是平均分子量为30kDa的甲氧基线性PEG基团。
类似地，标记“E62_30kD”的化合物是通过以下方式来制备： 首先制备具有SEQ IDNO:4的蛋白质，其中位置62的谷氨酸(E62)被N6-((2- 叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸(AzK)(SEQ ID NO:11)替代。然后允许含 有AzK的蛋白质在点击化学条件下与包含平均分子量为30kDa的甲氧基线 性PEG基团的DBCO反应，以提供包含式(II)、式(III)或式(II)与(III)的 混合物的具有SEQ ID NO:26的产物，其中W是平均分子量为30kDa的甲氧基 线性PEG基团。还可以将所述化合物定义为包含SEQ ID NO:4的氨基酸序 列，其中位置62的谷氨酸(E62)被式(VI)或(VII)的结构或式(VI)与 (VII)的混合物替代，并且其中n是使得PEG基团的分子量为约30kDa的整 数。还可以将所述化合物定义为包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，其中位置 62的谷氨酸(E62)被式(X)或(XI)的结构或式(X)与(XI)的混合物替 代，并且其中n是使得PEG基团的分子量为约30kDa的整数。化合物E62_30kD 用于实施例3、5和9中。
在另一实施例中，标记“K35_30kD”且用于实施例12中的化 合物是通过以下方式来制备：首先制备具有SEQ ID NO:4的蛋白质，其中位 置35的赖氨酸被N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸(AzK)(SEQ ID NO: 14)替代。然后允许含有AzK的蛋白质在点击化学条件下与包含平均分子量 为30kDa的甲氧基线性PEG基团的DBCO反应，以提供包含式(II)、式(III) 或式(II)与(III)的混合物的具有SEQ ID NO:29的产物，其中W是平均分 子量为30kDa的甲氧基线性PEG基团。还可以将所述化合物定义为包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，其中位置35的赖氨酸(K35)被式(VI)或(VII)的 结构或式(VI)与(VII)的混合物替代，并且其中n是使得PEG基团的分子量 为约30kDa的整数。还可以将所述化合物定义为包含SEQ IDNO:4的氨基酸 序列，其中位置35的赖氨酸(K35)被式(X)或(XI)的结构或式(X)与(XI) 的混合物替代，并且其中n是使得PEG基团的分子量为约30kDa的整数。
实施例13和14中公开的标记 “IL2_P65_[AzK_L1_PEG30kD]-1”的化合物是使用类似于实施例2中所公 开的那些方法的方法来制备，其中首先制备具有SEQ ID NO:3的蛋白质，其 中位置64的脯氨酸被AzK替代。然后允许含有AzK的蛋白质在点击化学条件 下与包含平均分子量为30kDa的甲氧基线性PEG基团的DBCO反应，以提供 包含式(IV)、式(V)或式(IV)与(V)的混合物的具有SEQ ID NO:50的产 物，其中W是平均分子量为30kDa的甲氧基线性PEG基团。
类似地，标记“IL2_P65_[AzK_L1_PEG30kD]-1”的化合物是 使用类似于实施例2中所公开的那些方法的方法来制备，其中首先制备具有 SEQ ID NO:3的蛋白质，其中位置64的脯氨酸被N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰 基)-L-赖氨酸AzK(SEQ ID NO:35)替代。然后允许含有AzK的蛋白质在点 击化学条件下与包含平均分子量为30kDa的甲氧基线性PEG基团的DBCO反 应。还将化合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1定义为包含SEQ ID NO:3的 化合物，其中位置64的脯氨酸残基(P64)被式(VIII)或(IX)的结构或式 (VIII)与(IX)的混合物替代，并且其中n是使得PEG基团的分子量为约30 kDa的整数。还将化合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1定义为包含SEQ ID NO:3的化合物，其中位置64的脯氨酸残基(P64)被式(XII)或(XIII)的 结构或式(XII)与(XIII)的混合物替代，并且其中n是使得PEG基团的分子 量为约30kDa的整数。化合物IL2_P65_[AzK_L1_PEG30kD]-1用于实施例13、 14和15中。
实施例1
激酶和细胞因子受体二聚化测定
细胞处理
根据标准程序从冷冻器原液扩增PathHunter细胞系。将细胞以 20μL总体积接种至白色壁的384孔微量板中，并且在测试之前孵育适当时 间。
激动剂形式
对于激动剂确定，将细胞与样品一起孵育以诱导应答。对样品 原液进行中间稀释以生成测定缓冲液中的5X样品。将约5μL的5X样品添加 至细胞并在37℃下孵育6至16小时，根据测定而定。媒介物浓度为1％。
信号检测
通过以下方式生成测定信号：单次添加分别用于激动剂和拮抗 剂测定的12.5或15μL(50％v/v)的PathHunter检测试剂合剂，之后在室温 下孵育一小时。对于一些测定，使用高灵敏度检测试剂(PathHunter Flash试 剂盒)检测活性，以改进测定的性能。在这些测定中，将等体积的检测试剂 (25或30uL)添加至孔中，之后在室温下孵育一小时。在信号生成后以用 于化学发光信号检测的PerkinElmer EnvisionTM仪器读取微量板。
数据分析
使用CBIS数据分析套件(ChemInnovation，加利福尼亚州)分 析化合物活性。对于激动剂模式测定，使用下式计算活性百分比：
活性％＝100％x(测试样品的平均RLU-媒介物对照的平均RLU)/(平 均MAX RLU对照配体-媒介物对照的平均RLU)。
对于拮抗剂模式测定，使用下式计算抑制百分比：
抑制％＝100％x(1-(测试样品的平均RLU-媒介物对照的平均RLU)/ (EC80对照的平均RLU-媒介物对照的平均RLU))。
实施例2
用于鉴定没有IL-2Rα接合的聚乙二醇化IL-2化合物的基于细 胞的筛选
使用IL-2/异三聚受体信号传导复合物(PDB:2ERJ)的结构数 据来指导nAA-聚乙二醇化位点的设计，以特异性消除IL-2与IL-2受体α亚基 (IL-2Rα)的相互作用。使示例性IL-2缀合物经历功能分析：K35、F42、K43、 E62和P65。将IL-2缀合物在大肠杆菌中表达为包涵体，使用标准程序纯化并 再折叠，之后使用DBCO介导的无铜点击化学将IL-2产物位点特异性聚乙二 醇化，以将稳定的共价mPEG部分附接至AzK(方案1)。
方案1.AzK_PEG白介素变体的示例性合成(其中n指示重复 PEG单元的数量)。位置异构体
Figure BDA0003528433030003461
方案2.AzK_PEG白介素变体的示例性合成(其中n指示重复 PEG单元的数量)。可以产生位置异构体的混合物。
Figure BDA0003528433030003471
在Discoverx(加利福尼亚州费利蒙市)使用PathHunter IL-2细 胞因子受体测定针对功能活性筛选IL-2缀合物。该测定使用重组人U2OS细胞 系，其表达IL-2受体β(IL-2Rβ)和γ(IL-2Rγ)亚基，所述亚基各自与分裂 报告酶β-半乳糖苷酶的一半融合。已经进一步工程化第二细胞系以表达 IL-2Rα亚基。用这两种细胞系进行的平行测试允许评估IL-2受体αβγ以及 基础βγ复合物的变体激活。对IL-2βγ受体复合物的IL-2激动剂活性刺激受体 二聚化和报告β-半乳糖苷酶重构，从而产生化学发光信号。以激动剂模式运 行所述测定以确定每种测试品的EC50，并且对IL2Rα阳性与阴性细胞类型之 间的剂量反应曲线谱的比较允许确定IL2Rα对所观察到的活性的贡献。
表1显示在针对10kD(除非另有说明)聚乙二醇化IL-2缀合物 的基于细胞的筛选中对于IL-2受体激动的EC50数据。
Figure BDA0003528433030003481
*指示30kD聚乙二醇化IL-2缀合物。
聚乙二醇化IL-2与人IL-2受体亚基的生物化学相互作用
使用Biosensor Tools LLC(盐湖城，犹他州)的表面等离子体 共振(SPR)测量聚乙二醇化IL-2化合物与人IL-2受体亚基的相互作用的动 力学。对于这些研究，在Biacore蛋白A涂布的CM4传感器芯片的表面上捕获 人IgG1 Fc融合的IL-2Rα(Sino Biological#10165-H02H)和IL-2Rβ(Sino Biological#10696-H02H)细胞外结构域。使用Biacore 2000SPR仪器用从2μM 开始的天然IL-2(野生型IL-2；Thermo#PHC0021)、P65_30kD、P65_5kD、E62_30kD或E62_5kD的两倍稀释系列一式两份地探测这些表面。注射测试样 品60秒以允许测量缔合，之后仅注射缓冲液(洗涤)30s以测量解离。绘制 反应单位(RU，Y轴)相对于时间(s，X轴)的曲线。
为了评价IL-2受体α亚基对IL-2与β结合的作用，以相对于β约两 倍过量捕获α。以从2.5μM开始的三倍稀释系列向这些表面施加天然IL-2(野 生型IL-2)、P65_30kD、P65_5kD、E62_30kD或E62_5kD。将结合数据拟合 至包括批量转换的1:1相互作用模型，并且将所提取的动力学参数归纳于表 2A和表2B中。如表2A和表2B以及图4A-图4B中所示，小PEG消除IL2Rα接合， 但是对IL2Rβ接合的非特异性作用较小。
表2A：IL-2变体与单独IL-2受体亚基表面-IL-2受体α表面的相互作用 的动力学 参数
k<sub>a</sub>(M<sup>-1</sup>s<sup>-1</sup>) k<sub>d</sub>(s<sup>-1</sup>) K<sub>D</sub>(μM)
IL-2天然 4.5±0.3x10<sup>7</sup> 0.410±0.01 0.009±0.002
P65_30kD 114±36x10<sup>7</sup> 0.018±0.008 158±21
P65_5kD 797±226x10<sup>7</sup> 0.033±0.004 42±7
E62_30kD 333±88x10<sup>7</sup> 0.050±0.01 162±7
E62_5kD 1010±41x10<sup>7</sup> 0.035±0.002 34.4±0.3
表2B：IL-2变体与单独IL-2受体亚基表面-IL-2受体β表面的相互作用 的动力学 参数
k<sub>a</sub>(M<sup>-1</sup>s<sup>-1</sup>) k<sub>d</sub>(s<sup>-1</sup>) K<sub>D</sub>(μM)
IL-2天然 1.3±0.2x10<sup>6</sup> 0.185±0.009 0.145±0.005
P65_30kD 1.8±0.2x10<sup>5</sup> 0.370±0.01 2.09±0.09
P65_5kD 9.0±0.4x10<sup>5</sup> 0.270±0.01 0.305±0.002
E62_30kD 1.8±0.4x10<sup>5</sup> 0.208±0.006 1.14±0.01
E62_5kD 6.6±0.8x10<sup>5</sup> 0.281±0.004 0.428±0.00
在含有固定的IL-2Rα的传感器表面上，天然IL-2显示快速缔合 和缓慢解离动力学，表明高亲和力结合(图4A)。相比之下，P65_30kD和 E62_30kD都不与IL-2Rα表面相互作用，即使在2μM的最高测试浓度下(图 4A)。类似地，F42_30kD未与IL-2IL-2Rα表面相互作用(图4C)。含有固定 的IL-2Rβ的表面显示与天然IL-2(野生型IL-2)和IL-2P65_30kD二者(图4B) 以及F42_30kD(图4C)的可比较的缔合和解离反应。根据此聚乙二醇化化 合物(较低扩散系数)的流体动力学半径的变化以及大PEG部分对远距离结 合表面的非特异性屏蔽作用所预期，在化合物之间观察到的对β亚基的KD的中度差异是由于IL-2P65_30kD相对于天然IL-2降低的缔合率所致。这些结 果表明，P65_30kD、E62_30kD和F42_30kD在IL-2Rα相互作用方面有缺陷， 同时在很大程度上保留与IL-2Rβ的结合。
对原代人白细胞减少系统(LRS)来源的PBMC样品中的IL-2 化合物的离体免疫应答谱分析
为了确定IL-2P65_30kD、K64_30kD、K43_30kD、K35_30kD 和F42_30kD的差异性受体特异性如何实现原代免疫细胞子群体的激活，在人 LRS来源的外周血单核细胞(PBMC)样品中使用多色流式细胞术进行淋巴 细胞激活的浓度-反应谱分析。这些研究是在PrimityBio LLC(加利福尼亚州 费利蒙)进行的。用天然IL-2、L-2P65_30kD、K64_30kD、K43_30kD、 K35_30kD和F42_30kD以从30μg/mL的最高浓度开始的5倍稀释系列处理新 鲜LRS来源的样品。在45min孵育后，将样品固定并用抗体染色以检测转录 因子STAT5的磷酸化形式(pSTAT5)(IL-2受体信号传导复合物的上游接合 和激活的标记物)，以及用于跟踪特定T细胞和自然杀伤(NK)细胞子群体 中pSTAT5形成的一组表面标记物。用于LRS来源的PBMC样品的流式细胞术 研究的染色组包括针对效应T细胞(Teff：CD3+、CD4+、CD8+、CD127+)、 NK细胞(CD3-、CD16+)和调节性T细胞(Treg：CD3+、CD4+、CD8-、IL-2Rα+、 CD127-1)的标记物。
针对在浓度-反应模式中不同T和NK细胞子集的激活来分析流 式细胞术数据，在用天然IL-2(图5A)、E62_30kD(图6C)、P65_30kD(图 5B)、K64_30kD(图5C)、K43_30kD(图5D)、K35_kDa(图5E)和F42_30 kDa(图5F)处理后，读取pSTAT5积累。由于IL-2Rα的Treg特异性表达，与 CD8 Teff和NK细胞相比，天然IL-2在Treg中显示增加的针对pSTAT5刺激的效力。与天然化合物相比，图5B-图5F中所示的聚乙二醇化变体显示中度降低 的对CD8 T细胞和NK细胞群的效力，但是在表达IL-2Rα的Treg细胞中关于天 然IL-2显示效力的差异性降低。
表3提供在用所指示IL-2变体处理的人LRS样品或CTLL-2增殖 中，pSTAT5信号传导的剂量反应EC50(EC50)。
表3.在用所指示IL-2变体处理的人LRS样品或CTLL-2增殖中，pSTAT5 信号传导(EC50)的剂量反应EC50
Figure BDA0003528433030003501
Figure BDA0003528433030003511
根据从MFI图生成的剂量反应曲线计算EC50值(pg/mL)。
实施例3
PEG和残基取代促进无α药理学
为了确定PEG和残基取代是否影响IL-2E62的无α药理学，在人 LRS来源的外周血单核细胞(PBMC)样品中使用多色流式细胞术进行淋巴 细胞激活的浓度-反应谱分析。这些研究是在PrimityBio LLC(加利福尼亚州 费利蒙)进行的。用天然IL-2、E62K或E62_30kD以从30μg/mL的最高浓度 开始的5倍稀释系列处理新鲜LRS来源的样品。在45min孵育后，将样品固定 并用抗体染色以检测转录因子STAT5的磷酸化形式(pSTAT5)(IL-2受体信 号传导复合物的上游接合和激活的标记物)，以及用于跟踪特定T细胞和自然 杀伤(NK)细胞子群体中pSTAT5形成的一组表面标记物。用于LRS来源的 PBMC样品的流式细胞术研究的染色组包括标记物CD4、CD4+记忆中枢、 CD4+记忆效应、CD4+记忆T细胞、CD4+天然T细胞、CD4+T细胞、CD8、 CD8+记忆中枢、CD8+记忆效应、CD8+记忆T细胞、CD8+天然T细胞、CD8+ T细胞、NK细胞和T调节细胞。
针对IL-2(图6A)、E62K(图6B)或E62_30kD(图6C)中不 同T和NK细胞子集的激活分析流式细胞术数据。这些结果证实，在位置62 的氨基酸残基取代以及在修饰的位置的AzK-聚乙二醇化可以促进IL-2Rα接 合的降低并导致对表达这些受体的原代淋巴细胞的差异性效力。
表4.用所指示IL-2变体处理的人LRS样品增殖中pSTAT5信号传导的剂 量反应EC50(EC50)
Figure BDA0003528433030003512
Figure BDA0003528433030003521
实施例4
无α药理学与PEG大小无关
在Discoverx(加利福尼亚州费利蒙市)使用PathHunter IL-2细 胞因子受体测定针对功能活性筛选IL-2缀合物。该测定使用重组人U2OS细胞 系，其表达IL-2受体β(IL-2Rβ)和γ(IL-2Rγ)亚基，所述亚基各自与分裂 报告酶β-半乳糖苷酶的一半融合。已经进一步工程化第二细胞系以表达 IL-2Rα亚基。用这两种细胞系进行的平行测试允许评估IL-2受体αβγ以及 基础βγ复合物的变体激活。对IL-2βγ受体复合物的IL-2激动剂活性刺激受体 二聚化和报告β-半乳糖苷酶重构，从而产生化学发光信号。以激动剂模式运 行所述测定以确定每种测试品的EC50，并且对IL2Rα阳性与阴性细胞类型之 间的剂量反应曲线谱的比较允许确定IL2Rα对所观察到的活性的贡献。
图7显示，所观察到的用5kD和30kD PEG聚乙二醇化的化合物 的效力对表达IL-2Rα的细胞以及仅表达IL-2Rβγ的那些细胞是类似的。这些 结果表明，这些化合物对IL-2Rα接合的降低对PEG缀合物的分子量不敏感。
实施例5
在幼稚(E3826-U1704)和带有B16-F10肿瘤的(E3826-U1803) C57BL/6小鼠中的PK/PD研究
研究设计归纳于表5和表6中，其中通过参照不包括PEG部分的 质量的蛋白质组分的质量来计算剂量。在所指示的点通过心脏穿刺收集终末 血样。研究E3826-U1704包括13个时间点(0.13、0.25、0.5、1、2、4、8、 12、24、48、72、96和120h)，每个时间点处死3只小鼠，并且研究E3826-U1803 包括9个时间点(2、8、12、24、48、72、120、168和240h)，每个时间点处死4-7只小鼠。收集血浆和血细胞(两项研究中)以及研究E3826-U1803中的 肿瘤用于PK和PD分析。
使用合格的人IL-2ELISA测定(Abcam，剑桥，英国)来进行 血浆样品的生物分析。使用ELISA测定来确定源自血浆的样品中阿地白介 素、E62_30kD和P65_30kD以及内标的浓度。在NW Solutions(华盛顿州西雅 图)进行PK数据分析。将PK数据导入PhoenixWinNonlin v6.4 (Certara/Pharsight，新泽西州普林斯顿)进行分析。以非分室方法使用IV推 注施用模型来分析组平均血浆浓度相对于时间的数据。
表5：PK/PD研究编号E3826-U1704-幼稚C57/BL6小鼠中的对照和测试 处理组
Figure BDA0003528433030003531
*剂量是指P65_30kD IL-2多肽的量，其中参照不包括PEG部分的质量的蛋白质组分 的质量来计算剂量。
表6：PK/PD研究编号E3826-U1803-对照和测试处理组-带有 B16F-10黑色素瘤肿 瘤的小鼠(其中参照不包括PEG部分的质量的蛋白质组 分的质量来计算剂量)
处理 剂量(mg/kg) 途径，方案 时间点 N
无(给药前) 0mg/kg 无 1 6
媒介物对照 0mg/kg IV，单一剂量 9 3
P65_30kD 1mg/kg IV，单一剂量 9 4
P65_30kD 3mg/kg IV，单一剂量 9 4
0.3mg/kg的P65_30kD、E62_30kD、E62_5kD和阿地白介素的 血浆浓度谱绘制于图8中。
在研究E3826-U1704中，P65_30kD和E62_30kD二者展现相对于 阿地白介素更优越的PK谱，如表5中所归纳。在阿地白介素的单一IV推注剂 量后，在给药后0.03h(给药后的第一个测量时间点)观察Tmax，并且直至 给药后4h，平均血浆浓度是可测量的。在P65_30kD和E62_30kD的单一IV推 注给药后，在给药后0.03h观察Tmax，并且直至给药后120h(最后一个测量 时间点)，平均血浆浓度是可测量的。在单独研究中，在E62_5kD的IV给药 后，在给药后0.133hr观察Tmax，并且直至给药后12hr，平均血浆浓度是可测 量的。
基于Cmax和AUC0-t的暴露如下：P65_30kD>E62_30kD>> E62_5kD>阿地白介素。具有较小PEG的E62_5kD的PK谱更接近rIL-2。基于 Cmax和AUC0-t，P65_30kD暴露分别比阿地白介素高5.5倍和200倍。另外， 与阿地白介素相比，P65_30kD显示延长23倍的t1/2(13.3h相对于0.57h)以 及减少约198倍的CL(6.58相对于1300mL/h/Kg)。对于P65_30kD和E62_30kD二者，分布体积(分别为82.4mL/Kg和92.3mL/Kg)相对于阿地白介素减小 约4.2至4.7倍，并且类似于小鼠中的血液体积(85mL/Kg；[Boersen 2013])。 这表明，P65_30kD和E62_30kD在全身循环内分布最多。
表7：C57BL/6雌性小鼠中的P65_30kD PK参数
参数 单位 P65_30kD E62_30kD E62_5kD 阿地白介素
T<sub>max</sub> h 0.030 0.030 0.133 0.030
C<sub>max</sub> ng/mL 4,870 4,230 936 884
AUC<sub>0-t</sub> h*ng/mL 45,600 37,100 798 229
R<sup>2</sup> 0.992 0.986 0.851 0.900
AUC<sub>INF</sub> h*ng/mL 45,600 37,100 807 230
t<sub>1/2</sub> h 13.300 14.500 2.56 0.573
CL mL/h/Kg 6.580 8.07 372 1300
V<sub>ss</sub> mL/Kg 82.4 92.3 404 390
注意：R2是每个浓度与时间曲线中末期的拟合优度参数。
所有参数显示3位有效数字。
实施例6
在外周血隔室中的药效学观察
使用STAT5磷酸化和细胞增殖的诱导(早期分子标记物Ki-67 和细胞计数)作为药效学读数，以评估P65_30kD相对于其药代动力学的药理 学谱。在CD8+效应T细胞中，pSTAT5PD标记物显示与P65_30kD和阿地白介 素二者的PK的良好相关性(表7)。在Treg中，直至72h以及直至24h，在NK 和CD8+T细胞二者中观察到pSTAT5的持续升高。在给予阿地白介素的小鼠 中，仅在2h后，pSTAT5诱导返回基线(图8)。STAT5磷酸化转换为CD8+效 应T细胞(图9)和NK细胞的增殖性反应(72-120h)，但对于T reg并非如此。 CD8+效应T细胞的表型分析揭示此群体内的CD44+记忆细胞显著扩增(图 10A-图10B)。
在带有B16-F10肿瘤的(E3826-U1803)C57BL/6小鼠的肿瘤隔 室中的药效学观察
表8显示在带有B16-F10肿瘤的小鼠中在3mg/kg单一剂量的 P65_30kD后的血浆和肿瘤药物浓度，其中通过参照不包括PEG部分的质量的 蛋白质组分的质量来计算剂量。肿瘤半衰期是血浆半衰期的两倍(24.4相对 于12.6)，表明P65_30kD渗透肿瘤并保留在肿瘤中。曲线的尾端交叉，显示 血浆消除快于肿瘤(数据未显示)。对于1mg/kg和3mg/kg剂量，肿瘤:血浆 AUC比率分别为9.7％和8.4％。
表8：带有B16-F10肿瘤的C57BL/6雌性小鼠的P65_30kD血浆和肿瘤PK 参数
Figure BDA0003528433030003551
图11A-图11B显示通过P65_30kD在B16F10肿瘤中对NK和CD+ T细胞的扩增。图11A显示在用3g/kg单一IV推注剂量的P65_30kD处理后，肿 瘤CD3+T细胞群中NK细胞、CD8+细胞和Treg的百分比。在处理后5天，通 过流式细胞术分析肿瘤样品的免疫细胞群。每个数据点表示来自每个时间点 的3次重复的平均值±SEM。所表示的细胞群数据来自第5天肿瘤样品，并 且从第7天样品计算CD8/Treg比率。图11B显示在用3mg/kg单一IV推注剂量 的P65_30kD处理后7天，CD8+效应与CD4+调节性T细胞的比率。每个数据点 表示来自每个时间点的3次重复的平均值±SEM。
在Balb/c小鼠E3826-U1802中的MTD研究
在Crown Biosciences,Inc.(加利福尼亚州圣地亚哥)的幼稚雌 性Balb/c小鼠中进行P65_30kD的剂量范围研究。研究设计显示于表9中，其 中通过参照不包括PEG部分的质量的蛋白质组分的质量来计算剂量。在7个 时间点(0.25、1、4、12、24、34、48和72h)经由下颌下静脉抽取血样。 收集血浆和血细胞二者用于PK和PD分析。
采用市售ELISA试剂盒分析所有血浆样品的人IL-2以及小鼠 IL-2、TNF-α、IFNγ、IL-5和IL-6细胞因子。
表9：PK/PD和MTD研究编号E3826-U1802-在幼稚Balb/C小鼠中的对 照和测试处理 组
处理 剂量(mg/kg) 途径，方案 时间点 N
幼稚 0mg/kg 0 3
媒介物对照 0mg/kg IV,BID x 3 3 3
阿地白介素 0.01mg/kg IV,BID x 3 3 3
阿地白介素 0.03mg/kg IV,BID x 3 3 3
阿地白介素 0.1mg/kg IV,BID x 3 3 3
阿地白介素 1.0mg/kg IV,BID x 3 3 3
阿地白介素 3.0mg/kg IV,BID x 3 3 3
阿地白介素 5.0mg/kg IV,BID x 3 3 3
P65_30kD 0.01mg/kg IV，单一剂量 3 3
P65_30kD 0.03mg/kg IV，单一剂量 3 3
P65_30kD 0.1mg/kg IV，单一剂量 3 3
P65_30kD 1.0mg/kg IV，单一剂量 3 3
P65_30kD 3.0mg/kg IV，单一剂量 3 3
P65_30kD 5.0mg/kg IV，单一剂量 3 3
#P65_30kD 0.3mg/kg IV，单一剂量 8 3
*除了72hr时间点以外的所有时间点的血液收集都是经由下颌下静脉进行。在72hr 时间点收集末梢血。
#仅使用0.3mg/kg剂量的P65_30kD进行PK/PD评价
在使用Balb/c小鼠的MTD研究中的毒理学观察
与高剂量阿地白介素相关的主要毒性是血管渗漏综合征和相 关的细胞因子释放综合征(CRS)。为了评价这种作用在小鼠中的潜力，进 行以剂量范围为0.01-5.0mg/kg剂量的单一剂量IV P65_30kD施用(表10)，其 中通过参照不包括PEG部分的质量的蛋白质组分的质量来计算剂量。进行的 分析是血液学、组织病理学、器官重量和细胞因子分析。使用P65_30kD或阿 地白介素时，相对于媒介物对照小鼠，对于血液学、组织病理学或体重未观察到异常。关于细胞因子分析，观察到从1mg/kg开始至5mg/kg，阿地白介 素升高血浆IL-5水平(图12A)。使用P65_30kD时，仅在5mg/kg剂量下观察 到IL-5的中度增加(但与阿地白介素相比较低)(图12B)。使用阿地白介素 和P65_30kD二者时，观察到IFNγ的全身水平的短暂升高。
实施例7
食蟹猴中的PK/PD-研究编号：20157276
在施用0.3mg/kg的单一静脉内剂量后，在非幼稚食蟹猴中评价 P65_30kD的药代动力学和药效学谱，其中通过参照不包括PEG部分的质量的 蛋白质组分的质量来计算剂量。研究是在Charles River Laboratories,Inc.(内 华达州雷诺市)进行，并且PK数据分析是在NW Solutions(华盛顿州西雅图) 进行。在给药前以及在给药后的21个时间点(0.5、1、2、4、8、12、24、36、 48、72、120、144、168、192和240h)收集血样。收集血浆和血细胞二者用于PK和PD分析。使用所选时间点进行PK、PD、细胞群和血液学分析。
采用市售ELISA试剂盒分析所有血浆样品的人IL-2(PK读数)。
表10显示食蟹猴中的P65_30kD PK参数。
表10
Figure BDA0003528433030003571
Figure BDA0003528433030003581
在单一IV推注给药后，在给药后0.5h(给药后的第一个测量时 间点)观察Tmax，并且直至给药后168h(最后一次测量)，平均血浆浓度是 可测量的。P65_30kD的t1/2和AUC分别为13.6h和121000hr*ng/mL。
血液学参数-食蟹猴-研究编号：20157276
对于血液学参数，评价时间点对应于给药前第-1天以及给药后 第1天、第3天、第6天、第8天、第10天、第12天、第14天、第17天、第19天、 第21天。
图13显示绝对白细胞和差异性计数。数据表示平均值±SD (N＝2只动物/剂量组)。
对白细胞(WBC)子群体的分析揭示，WBC计数的显著增加 是由于淋巴细胞细胞群的扩增所致，这与P65_30kD的机制一致。嗜酸性粒细 胞没有升高。
实施例8
用多种PEG IL-2化合物处理的原代淋巴细胞中Treg扩增的标 记物
从新鲜人白细胞减少系统(LRS)收获原代淋巴细胞，进行蔗 聚糖准备，并在4C下静置过夜。第二天，使用FACS分选淋巴细胞群，包括 CD8阳性T细胞、NK细胞和Treg。用板结合的抗CD8/CD28将分离的群体刺 激两天。在37C下孵育天然IL-2和K9_30kD的剂量曲线。在第三天，更新培 养基并再次添加化合物的剂量曲线。在第6天，收获细胞并使用流式细胞术分析，以对作为增殖量度的CD25水平和Ki-67进行谱分析。图16显示如与正 常IL-2对照相比，PEG IL-2化合物可以在原代淋巴细胞中离体特异性扩增免 疫细胞群。图16A显示在用IL-2(对照)处理后，免疫细胞扩增的标记物Ki67。 图16B显示在用P65_30kD处理后，免疫细胞扩增的标记物Ki67。
实施例9
可以改变(dial)PEG大小以调整体内清除速率的药代动力学
研究与参考化合物阿地白介素(Proleukin)相比，用5kD和30kD mPEG修饰的聚乙二醇化IL-2变体E62的PK/PD关系。有4组6-8周龄C57/Bl6 小鼠，范围为16-22g，每组含有12只小鼠。小鼠在第0天的0时刻通过单一IV 注射接受剂量。在所指示的时间点，在EDTA管中收集大约100ul全血以供加 工：将50ul在缓冲液中固定用于流式细胞术，并从剩余样品提取血浆用于 ELISA分析。对于末梢血收集，固定大约300ul全血，将剩余样品旋转沉降 以获得血浆并用于ELISA。
将测试品在PBS中配制为37.5ug/ml，之后以10mL/kg进行IV给药，并且 在给药后t＝8min、15min、30min以及1、2、4、8、12、24、48、72、96和 120小时收集100μL样品。表11说明治疗方案，其中参照不包括PEG部分的质 量的蛋白质组分的质量来计算剂量。表12说明多种体内清除速率。
表11说明用IL2变体在体内处理小鼠
组 处理 剂量(mg/kg)
1 媒介物 0.0
2 阿地白介素 0.3
3 E62(30kDa PEG) 0.3
4 E62(5kDa PEG) 0.3
表12说明与阿地白介素对照相比的IL变体的清除速率
处理 阿地白介素 E62(30kDa PEG) E62(5kDa PEG)
Cmax,n/g/mL 745 8,450 936
AUC<sub>0-t</sub>(ng*h/mL) 432 81,900 807
t<sub>1/2</sub>(h) 0.576 10.4 2.56
Vss(mL/Kg) 232 48.9 404
CL(mL/g/Kg) 694 3.66 373
实施例10
表11说明本文所述的IL-2序列和化合物。
Figure BDA0003528433030003601
实施例11
原代人白细胞减少系统(LRS)来源的PBMC样品中的示例性 IL-2化合物的离体免疫应答谱分析
为了确定示例性IL-2化合物的差异性受体特异性如何影响原代 免疫细胞子群体的激活，在人LRS来源的外周血单核细胞(PBMC)样品中 使用多色流式细胞术进行淋巴细胞激活的浓度-反应谱分析。表13的缀合物 是通过SEQ NO.1的修饰来合成的。这些研究是在PrimityBio LLC(加利福尼 亚州费利蒙)进行的。用示例性IL-2化合物的稀释系列处理源自人LRS样品 的原代淋巴细胞，并基于每个淋巴细胞细胞类型中的pSTAT5信号传导使用表12中所示的组进行定量。
表12.指示细胞群的关键
Figure BDA0003528433030003602
Figure BDA0003528433030003611
针对在浓度-反应模式中不同T和NK细胞子集的激活来分析流 式细胞术数据，在用示例性IL-2变体K9_30kD处理后读取pSTAT5积累。
图15A-图15B显示人LRS原代细胞中pSTAT5信号传导的剂量 反应曲线(图15A)以及小鼠CTLL-2群体中的增殖反应(图15B)。
表13显示在用所指示IL-2变体处理的人LRS样品或CTLL-2增 殖中，pSTAT5信号传导(EC50)的剂量反应EC50。
表13在用所指示IL-2变体处理的人LRS样品或CTLL-2增殖中， pSTAT5信号传导(EC50)的剂量反应EC50
Figure BDA0003528433030003612
Figure BDA0003528433030003621
根据从MFI图生成的剂量反应曲线来计算EC50值(pg/ml)。
*在每次单独实验中，Treg效力与天然IL-2(野生型IL-2)运 行相比的变化。
实施例12
在C57BL/6小鼠中的PK研究
实验详情归纳于表14中，其中参照不包括PEG部分的质量的蛋 白质组分的质量来计算剂量。
表14.
Figure BDA0003528433030003622
评价示例性聚乙二醇化IL-2化合物K35_30kD在两个剂量水平 下的药代动力学特性。将冻干的测试品在PBS中重构，并且每个剂量组通过 静脉内尾静脉注射以0.3mg/kg和3mg/kg对九只雄性C57BL/6小鼠给药(参见 下文收集详情)。在给药后0.08、0.25、0.5、1、2、4、8、12和24小时收集血 样。使用来自Abcam的hIL-2ELISA试剂盒(ab100566)进行测试品的检测和 定量，所述试剂盒不与天然小鼠IL-2交叉反应。为了调整天然和聚乙二醇化 化合物的试剂盒检测灵敏度的ELISA特异性差异，使用测试品稀释剂缓冲液 生成天然IL-2和K35_30kD测试品标准曲线，并且关于相应的标准曲线分析数 据。所绘制的数据表示如上所述三个单独样品(生物学复制品)的平均值和 SEM，并且提取K35_30kD测试品的PK参数并归纳于表15中。
表15.
Figure BDA0003528433030003631
实施例13
与人IL-2Rα和IL-2Rβ的结合的表征
进行研究以表征示例性IL-2缀合物IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1与人IL-2Rα和IL-2Rβ的结合。
与IL-2Rα结合的测试品样品。测试溶液中的测试品样品在 IL-2Rα受体表面上的结合。使用Scrubber-2(Biologic Software Pty Ltd)通过 减去来自不含受体的参考表面的信号以及缓冲液注射物的平均值来处理反 应数据。将rhIL-2浓度系列的反应总体上拟合至1:1相互作用模型，包括用于 质量运输的步骤(图17A-图17B)。结合常数的总结提供于表16中。
表16
Figure BDA0003528433030003641
在蛋白质涂布的CM4传感器芯片上捕获Fc标记的IL-2Rβ。将 CM4传感器芯片对接至Biacore 4000光学生物传感器，并用HBS-P运行缓冲液 (HBS-P是添加有0.005％吐温-20的1X HBS-N)将仪器启动三次。使用标准 NHS/EDC偶联条件来偶联蛋白A。将IL-2Rβ-Fc溶解于水中至浓度为0.1 mg/ml，然后以1/1000稀释至HBS-P运行缓冲液中。将IL-2Rβ-Fc注射不同时 间长度以产生2种不同密度的受体表面(约750RU和1500RU，数据未显示)。
与IL-2Rβ结合的样品的表征。测试溶液中的测试品样品在 IL-2Rβ受体表面上的结合。使用Scrubber-2(Biologic Software Pty Ltd)通过 减去来自不含受体的参考表面的信号以及缓冲液注射物的平均值来处理反 应数据。将一式两份测试的rhIL-2(4uM最高浓度2倍稀释液)和 IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1样品(8uM最高浓度2倍稀释液)的反应总体上拟合至1:1相互作用模型，包括用于质量运输的步骤，如图17C-图17D中 所示。结合常数的总结提供于表16中。
结果。在Biacore SPR生物传感器系统内的镍带电NTA传感器芯 片上以不同密度捕获His标记的IL-2Rα。在蛋白A涂布的CM4传感器芯片上以 不同密度捕获Fc标记的IL-2Rβ。将反应数据拟合至1:1相互作用模型以确定每 种相互作用的结合常数。重组人IL-2(rhIL-2)以约11nM的亲和力与IL-2Rα 结合，而未检测到IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1样品与IL-2Rα的结合。在 这些测试条件下，rhIL-2以约700nM的亲和力与IL-2Rβ结合，并且IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1以约3uM的亲和力与IL-2Rβ结合。
实施例14
进行研究以确定IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1与重组人白介 素-2(hIL-2)对转录因子STAT5的磷酸化形式(pSTAT5)信号传导效力人原 代免疫细胞类型的效力和差异性细胞类型特异性。
人PBMC样品处理方法。将IL-2(对照，1mg/mL)和 IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1(“第1批”：1.27mg/mL；“第2批”：2.29 mg/mL)的原液储存为在-20℃下冷冻的原液溶液。
将IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1第1批和第2批化合物稀释于 PBS中，并使用PBS+0.1％BSA稀释IL-2以产生10X原液。10X IL-2原液浓度 为5ug/ml，并且GLP-1和GLP-2原液在6-300μg/ml之间，根据实验而定。10X 原液稀释于连续5倍稀释液中，以产生10点剂量滴定。IL-2的最高剂量为5 ug/ml，并且第1批和第2批原液在6-300μg/ml之间，根据实验而定。将10ul 的每种原液添加至90μl细胞样品中，以实现对于IL-2而言500ng/ml的最终最 高剂量以及对于第1批和第2批中的每一种而言0.6-30μg/ml的最终最高剂量。
样品刺激。为了刺激，将上文概述的10μl的剂量滴定添加至预 先平衡至37℃的90μl血样。将样品在37℃下孵育45分钟。在孵育期结束时， 裂解红细胞并同时固定细胞，如下：
将100μl细胞转移至900μl的BD裂解/固定缓冲液(Beckton Dickinson，Cat#558049)中并立即涡旋。BD裂解/固定缓冲液是通过将原液 在即将添加前用细胞培养水以1:5稀释来制备。将样品在室温下孵育10分钟， 然后以450x g离心5分钟以使细胞沉淀。用PBS+0.5％BSA洗涤沉淀的细胞并 在-37℃下储存直至分析。
染色方案。
步骤1.在室温下使细胞解冻。步骤2.添加Fc阻断剂(Fc Block)(TruStain FcXTM)。步骤3.在室温下孵育5分钟。步骤4.添加来自表17的以下抗体：
表17
人用抗体组。
Figure BDA0003528433030003651
Figure BDA0003528433030003661
步骤5.在室温下孵育20分钟。步骤6.用PBS+0.5％BSA将细胞 洗涤两次。步骤7.通过添加10体积的甲醇至一体积的细胞对细胞进行渗透化 处理。步骤8.将细胞在4℃下孵育10分钟。步骤9.用PBS洗涤。步骤10.用含有 0.5％BSA的PBS洗涤细胞。步骤11.添加Fc阻断剂(TruStain FcXTM)。步骤12. 添加来自表18的以下渗透化处理后染色组：
表18
染色试剂。
荧光团
CD3 PE-Cy7
STAT5 Ax647
链霉亲和素 BV421
FOXp3 PE
流式细胞术和数据分析。在具有五个激光器(372nM、405nM、 488nM、561nM和640nM)的Becton Dickinson Fortessa和LSR II仪器上运行 样品。仪器配备有20个检测器，包括散射参数。使用Becton Dickinson细胞计 数器设定和跟踪珠定期校准仪器。使用96孔高通量采样器以低于8,000个细胞 /秒运行含有染色样品的96孔板。
数据以.fcs文件输出至网络驱动器，并补偿以解释荧光团的溢 出，并且注释fcs文件。然后根据图18所述的策略对fcs文件进行门控。首先 使用FSC-A相对FSC-H针对单态对细胞进行门控，以排除任何聚集体或双态 (图18，单态门，第1面板)。在此门内，针对中至高前向散射(FSC-A)和 侧向散射(SSC-A)对细胞进行门控，以排除红细胞、碎片和粒细胞(图18， 淋巴细胞门，第2面板)。然后将T细胞门控为CD3+、CD56/16阴性群体，第3 面板。将NK细胞鉴定为CD3阴性、高CD56/16群体，第3面板。然后将T细胞 分为CD4+T细胞和CD8+T细胞(图18，第4面板)。然后将Treg从CD4+T细 胞门控为CD25hi x C127lo群体，图18，第5面板。
用于推导EC50值的统计学和绘图。根据检测磷酸化的通道中 的信号计算细胞群、供体和化合物处理中的每一者的中值荧光强度(MFI)。 使用Spotfire分析统计学。在Spotfire内，针对化合物剂量在对数标度上以及 针对MFI读数在线性标度上绘制数据。使用4参数逻辑回归方程来拟合这些数 据。将EC50计算为曲线的拐点。
结果。针对如上所述的三个单独供体中的每一个，以一式三份 稀释并测试人IL-2和IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1样品。计算的半最大有效 浓度(EC50)值列于表19中。结果证实，IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1在 来自人的淋巴细胞中是IL-2受体信号传导的强效激动剂。与显示 IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1特异性接合IL-2Rβ亚基而不特异性接合IL2Rα的先前体外结合研究一致，证实与不会组成型地表达高水平IL-2Rα的 Teff和NK细胞相比，在对于效力依赖于IL-2Rα接合的Treg细胞中特异性地降 低了信号传导效力。
表19
hIL-2和IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1批次针对来自人供体 的原代CD8+T细胞、NK细胞和Treg细胞子群体的效力特征。
Figure BDA0003528433030003671
数据是根据来自三个独立供体的样品的一式三份测试计算的平均值± 平均值的标准误差(SEM)。*IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1。
实施例15：IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1在人血清中的稳定 性
进行研究以评价化合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1在人血 清中随时间的稳定性。
使用以下材料进行研究：
Figure BDA0003528433030003672
Figure BDA0003528433030003681
在PCR管中，将化合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1以三(3) 个浓度(2590ng/mL、847ng/mL和212ng/mL)加标至人A/B合并血清中。 每个浓度时间点以一式三份制备。以25900ng/mL、8470ng/mL和2120ng/mL 的原液浓度制备化合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1，并且将20μL的每种 原液溶液添加至180μL人合并血清中，充分混合，并在37℃下孵育长达168 小时。在对应于孵育后0、6、24、48、72、96、120和168小时的时间点收集 样品，将其分为两个等分样品，并在-80℃下冷冻用于分批分析。在一天分 析第一组样品，并且在另一天分析第二组样品。
在测定当天在室温下将样品解冻，所述测定使用定制的ELISA 形式，利用山羊抗人IL-2和PEG多克隆抗体。将ELISA板用1μg/mLα-人IL2 抗体在4℃下涂布过夜，并用洗板器以1xPBS洗涤3x300μL。用PBS中的1％酪 蛋白将测定板封闭一(1)小时。将测试样品用人血清预稀释以使其达到 ELISA的检测范围。还用人血清基质将校准标准品和QC样品制备为纯浓度。 将所有样品在测定缓冲液(1％酪蛋白)中稀释25倍至MRD(最低要求稀释 度)。将样品添加至板并在室温下在板振荡器上密封两(2)小时，并用洗板 器以1x PBS洗涤3x 300μL。以100μL/孔添加1μg/mL二级检测抗体α-PEG (兔)，并在室温下在板振荡器上密封一(1)小时，并用洗板器以1x PBS 洗涤3x300μL。将最终检测抗体α-兔-HRP制备为1:5000稀释液并以100μL/ 孔添加，并在室温下在板振荡器上密封45分钟，并且用洗板器以1x PBS洗涤3x 300μL。以100μL/孔添加底物并在不进行密封或振荡的情况下避光放置 30分钟。最后，将50μL终止溶液添加至每孔，并立即在Spectramax iD5读板 器中读取板，以获得所有样品的OD450值。使用4参数逻辑拟合曲线法将原 始读数内插至相应浓度，以确定样品浓度。图19中表示的数据是两次重复 ELISA运行的结果。这些结果证实，化合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 在人血清基质中稳定，直至所分析的最后一个时间点(即168小时)。
虽然在本文已经显示和描述了本发明的优选实施方案，但对于 本领域技术人员而言将明显的是，此类实施方案仅通过举例的方式来提供。 在不背离本发明的情况下，本领域技术人员现在将想到许多变化、改变和替 换。应该理解的是，本文所述的本发明的实施方案的各种替代方案可以用于 实践本发明。以下权利要求旨在限定本发明的范围，并且由此覆盖这些权利 要求及其等同物范围内的方法和结构。
综上所述，本申请包括但不限于以下各项：
1.一种包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中参考SEQ ID NO:1内的氨基酸位置，所述IL-2缀合物中在选自K35、F42、F44、K43、 E62、P65、R38、T41、E68、Y45、V69和L72的氨基酸位置的至少一个
氨基酸残基被式(I)的结构替代：
Figure BDA0003528433030003691
其中：
Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030003692
Y是CH2并且Z是
Figure BDA0003528433030003693
Z是CH2并且Y是
Figure BDA0003528433030003694
或者
Y是CH2并且Z是
Figure BDA0003528433030003695
W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30 kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003701
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
2.根据项1所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量选自5kDa、10kDa、 20kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合 物。
3.根据项2所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量为5kDa的PEG基团， 或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
4.根据项2所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量为30kDa的PEG基团， 或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
5.根据项1所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物包含SEQ ID NO:45-49 中任一项的氨基酸序列，其中[AzK_L1_PEG5kD]具有式(IV)或式(V) 的结构，或者式(IV)与式(V)的混合物：
Figure BDA0003528433030003702
其中：
W是平均分子量为5kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003703
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
6.根据项5所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:45的 氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
7.根据项5所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:46的 氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
8.根据项1所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物包含SEQ ID NO:50-54 中任一项的氨基酸序列，其中[AzK_L1_PEG30kD]具有式(IV)或式(V) 的结构，或者式(IV)与式(V)的混合物：
Figure BDA0003528433030003711
其中：
W是平均分子量为30kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure BDA0003528433030003712
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
9.根据项8所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:50的 氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
10.根据项8所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:51的 氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
11.根据项8所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:52的 氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
12.根据项8所述的IL-2缀合物，其中所述[AzK_L1_PEG30kD]具有式(IV) 的结构：
Figure BDA0003528433030003721
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
13.根据项8所述的IL-2缀合物，其中所述[AzK_L1_PEG30kD]具有式(V) 的结构：
Figure BDA0003528433030003722
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
14.一种治疗受试者的癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的 根据项1-13中任一项所述的IL-2缀合物。
15.根据项14所述的方法，其中所述癌症选自肾细胞癌(RCC)、黑色素瘤、 非小细胞肺癌(NSCLC)、头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)、尿路上皮癌 (UC)、梅克尔细胞癌(MCC)、卵巢癌、胃癌和乳腺癌。
序列表
<110> 新索思股份有限公司
<120> IL-2缀合物及其使用方法
<130> 46085-729.601
<140>
<141>
<150> 62/940,173
<151> 2019-11-25
<150> 62/899,035
<151> 2019-09-11
<150> 62/870,581
<151> 2019-07-03
<150> 62/847,844
<151> 2019-05-14
<150> 62/802,191
<151> 2019-02-06
<160> 87
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 133
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 2
<211> 153
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 2
Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu
1 5 10 15
Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu
20 25 30
Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe
50 55 60
Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu
65 70 75 80
Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
85 90 95
Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile
100 105 110
Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala
115 120 125
Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe
130 135 140
Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr
145 150
<210> 3
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 3
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 4
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 4
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 5
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (65)..(65)
<223> 任何非天然氨基酸
<400> 5
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Xaa Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 6
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (62)..(62)
<223> 任何非天然氨基酸
<400> 6
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Xaa Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 7
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> 任何非天然氨基酸
<400> 7
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Xaa Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 8
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (43)..(43)
<223> 任何非天然氨基酸
<400> 8
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Xaa Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 9
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (35)..(35)
<223> 任何非天然氨基酸
<400> 9
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Xaa Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 10
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (65)..(65)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<400> 10
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Lys Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 11
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (62)..(62)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<400> 11
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
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Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 12
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<400> 12
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 13
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (43)..(43)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<400> 13
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 14
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (35)..(35)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<400> 14
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 15
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (65)..(65)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 15
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Lys Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 16
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (62)..(62)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 16
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 17
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 17
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 18
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (43)..(43)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 18
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
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130
<210> 19
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (35)..(35)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 19
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1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
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65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
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115 120 125
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130
<210> 20
<211> 133
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
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<222> (65)..(65)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 20
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1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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<211> 133
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
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<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 21
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1 5 10 15
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20 25 30
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<220>
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<220>
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<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 22
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1 5 10 15
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20 25 30
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65 70 75 80
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<211> 133
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (43)..(43)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 23
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
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<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (35)..(35)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 24
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (65)..(65)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 25
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
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<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (62)..(62)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 26
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
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<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 27
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
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<210> 28
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (43)..(43)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 28
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
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130
<210> 29
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (35)..(35)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 29
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
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130
<210> 30
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (64)..(64)
<223> 任何非天然氨基酸
<400> 30
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1 5 10 15
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115 120 125
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<210> 31
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (61)..(61)
<223> 任何非天然氨基酸
<400> 31
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Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
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115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 32
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (41)..(41)
<223> 任何非天然氨基酸
<400> 32
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
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Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
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Ser Thr Leu Thr
130
<210> 33
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> 任何非天然氨基酸
<400> 33
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> 任何非天然氨基酸
<400> 34
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130
<210> 35
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (64)..(64)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<400> 35
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130
<210> 36
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (61)..(61)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<400> 36
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
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130
<210> 37
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (41)..(41)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<400> 37
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
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115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 38
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<400> 38
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
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115 120 125
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130
<210> 39
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<400> 39
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1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
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115 120 125
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130
<210> 40
<211> 132
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (64)..(64)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 40
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1 5 10 15
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20 25 30
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65 70 75 80
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
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<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 41
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
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<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 42
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
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<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 43
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
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<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 44
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
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<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 45
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<210> 46
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (61)..(61)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 46
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (41)..(41)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 47
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 48
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<210> 49
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 49
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1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
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<210> 50
<211> 132
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (64)..(64)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 50
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<211> 132
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
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<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 51
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<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (41)..(41)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 52
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130
<210> 53
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 53
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<210> 54
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 54
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130
<210> 55
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (65)..(65)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 55
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
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100 105 110
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Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 56
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (62)..(62)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 56
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
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100 105 110
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115 120 125
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130
<210> 57
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 57
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
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Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 58
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (43)..(43)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 58
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1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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<210> 59
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (35)..(35)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 59
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1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
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65 70 75 80
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<211> 133
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (65)..(65)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 60
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<211> 133
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
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<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 61
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<220>
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<220>
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<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 62
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (43)..(43)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 63
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
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<222> (35)..(35)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 64
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (65)..(65)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 65
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1 5 10 15
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (62)..(62)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 66
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 67
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (43)..(43)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 68
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (35)..(35)
<223> 稳定缀合至PEG的N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 69
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 70
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 71
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Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
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<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 72
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 73
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<210> 74
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 74
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
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130
<210> 75
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (64)..(64)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 75
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
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Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Lys
50 55 60
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130
<210> 76
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (61)..(61)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 76
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
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130
<210> 77
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (41)..(41)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 77
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 78
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 78
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 79
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 79
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 80
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (64)..(64)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 80
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Lys
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 81
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (61)..(61)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 81
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Lys Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 82
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (41)..(41)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 82
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 83
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 83
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 84
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> N6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-L-赖氨酸
<220>
<223> 取代和优选实施方案的详细描述参见如所提交的说明书
<400> 84
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 85
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 85
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 86
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> 除了Pro以外的任何氨基酸
<400> 86
Val Pro Gly Xaa Gly
1 5
<210> 87
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 87
Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro
1 5 10 15
Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln
20 25 30

Claims (10)

1.一种包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的IL-2缀合物，其中参考SEQ ID NO:1内的氨基酸位置，所述IL-2缀合物中在选自K35、F42、F44、K43、E62、P65、R38、T41、E68、Y45、V69和L72的氨基酸位置的至少一个氨基酸残基被式(I)的结构替代：
Figure FDA0003528433020000011
其中：
Z是CH2并且Y是
Figure FDA0003528433020000012
Y是CH2并且Z是
Figure FDA0003528433020000013
Z是CH2并且Y是
Figure FDA0003528433020000014
或者
Y是CH2并且Z是
Figure FDA0003528433020000015
W是平均分子量选自5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure FDA0003528433020000016
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
2.根据权利要求1所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量选自5kDa、10kDa、20kDa和30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
3.根据权利要求2所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量为5kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
4.根据权利要求2所述的IL-2缀合物，其中W是平均分子量为30kDa的PEG基团，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
5.根据权利要求1所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物包含SEQ ID NO:45-49中任一项的氨基酸序列，其中[AzK_L1_PEG5kD]具有式(IV)或式(V)的结构，或者式(IV)与式(V)的混合物：
Figure FDA0003528433020000021
其中：
W是平均分子量为5kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure FDA0003528433020000022
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
6.根据权利要求5所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
7.根据权利要求5所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
8.根据权利要求1所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物包含SEQ ID NO:50-54中任一项的氨基酸序列，其中[AzK_L1_PEG30kD]具有式(IV)或式(V)的结构，或者式(IV)与式(V)的混合物：
Figure FDA0003528433020000031
其中：
W是平均分子量为30kDa的PEG基团；并且
X具有以下结构：
Figure FDA0003528433020000032
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
9.根据权利要求8所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:50的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
10.根据权利要求8所述的IL-2缀合物，其中所述IL-2缀合物具有SEQ ID NO:51的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。
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