CZ302766B6 - Zpusob rozdelení enanciomerní smesi methyl-(1R,2S)/(1S,2R)-t-butoxykarbonyl-1-amino-2-vinylcyklopropylkarboxylátu - Google Patents
Zpusob rozdelení enanciomerní smesi methyl-(1R,2S)/(1S,2R)-t-butoxykarbonyl-1-amino-2-vinylcyklopropylkarboxylátu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ302766B6 CZ302766B6 CZ20090004A CZ20090004A CZ302766B6 CZ 302766 B6 CZ302766 B6 CZ 302766B6 CZ 20090004 A CZ20090004 A CZ 20090004A CZ 20090004 A CZ20090004 A CZ 20090004A CZ 302766 B6 CZ302766 B6 CZ 302766B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- alkyl
- solution
- mmol
- amino
- amido
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/21—Interferons [IFN]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
- C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
- C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
- C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
- C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
- C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
- C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
- C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/081—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing O or S as heteroatoms, e.g. Cys, Ser
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/003—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions
- C12P41/005—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of carboxylic acid groups in the enantiomers or the inverse reaction
Abstract
Rešení poskytuje zpusob rozdelení enanciomerní smesi methylesteru nebo ethylesteru (1R,2S)/(1S,2R)-t-butoxykarbonyl-1-amino-2-vinylcyklopropylkarboxylové kyseliny nebo enanciomerní smesi methylesteru (1R,2R)/(1S,2S)-t-butoxykarbonyl-1-amino-2-ethylcyklopropylkarboxylové kyseliny, který spocívá v tom, že se na smes pusobí esterázou Alcalase®. Tento enzym hydrolyzuje u uvedených esteru pouze ty izomery, které mají v poloze 1 konfiguraci S.
Description
Oblast techniky
Současný vynález se týká sloučenin, způsobu jejich přípravy, přípravků a postupů terapie virové hepatitidy typu C. Vynález se především týká nových peptidových analogů, farmaceutických přípravků obsahujících tyto analoga a postupů jejich použití při terapii virové hepatitidy typu C. Vynález se také týká meziproduktů a způsobu jejich přípravy k syntéze shora uvedených peptidových analog.
Dosavadní stav techniky
Virus způsobující hepatitidu typu C (HIV) je hlavním etiologickým agens post-transfuzní nebo nenozokomíální non A, non B hepatitidv. Přibližně 150 milionů lidí na světě je tímto virem infikováno. Vysoké procento nosičů v populaci je chronicky infikováno a přechází do chronického stadia onemocnění, tzv. chronické hepatitidy typu C. Tato skupina pacientů je ohrožena vážným až smrtelným onemocněním jater, jakými jsou jatemí cirhóza, hepatocelulámí karcinom a jatemí selhání.
Mechanismus vzniku virové perzistence a příčina častého přechodu do chronického stadia jaterního onemocnění nejsou přesně vysvětleny. Není známé jak HCV napadá a poškozuje imunitní systém hostitele. Není ani objasněna role buněčné a humorální imunitní odpovědi proti infekci virem HCV. K profylaxi posttransfúzní virové hepatitidy jsou doporučovány imunoelobuliny. ačkoliv the Centre for Disease Control (Ústava pro kontrolu infekčních chorob) v současné době použití imunoglobulinů k tomuto účelu nedoporučuje. Nedokonale účinná obrana imunitní odpověď znemožňuje vývoj vakcíny nebo zavedení profylaktických opatření pro expozici nákaze. Jedinou možností řešení v blízké budoucnosti jsou intervence namířené proti virům samotným.
Ke zjištění účinných farmaceutických činidel vhodných k terapii infekcí virem HCV u pacientů s chronickou hepatitidou typu C se již provedlo mnoho rozličných klinických studií. Během těchto studií se sledovalo užití interferonu alfa samotného nebo v kombinaci s ostatními antivirovými léčivy. Studie prokázaly, že u podstatné části sledovaných pacientů je tato terapie neúčinná, a pokud účinná je, pak ve velkém procentu případů dochází po ukončení terapie krelapsu onemocnění.
Jedinou a podle klinických studií prokazatelně vhodnou terapií chronické virové hepatitidy C byla donedávna podávání interferonu (IFN). Takové terapie však vede jen u malého procenta případů k podstatnému zlepšení a navíc terapie interferonem má závažné vedlejší účinky (retinopatie, thyroiditis, akutní pankreatitida, deprese), které snižují kvalitu života takto léčených pacientů. Kombinace s ribavirinem má pozitivní účinek u pacientů neodpovídajících na léčbu samotným interferonem, tato kombinace však nesnižuje výskyt vedlejších nežádoucích účinků způsobených interferonem samostatně podaným.
Z uvedeného vyplývá nutnost účinného antivirového činidla k terapii infekce HCV, které překoná současné omezení farmakologické terapie tohoto závažného onemocnění.
HCV patří do skupiny jednořetězcových RNA virů s pozitivní polaritou a lipidovou obálkou, čeleď Flaviviridae. Jediný řetězec RNA genomu HCV tvoří podélně přibližně 9500 nukleotidů s jednoduchým otevřeným čtecím rámcem (open reading frame ORT) k dekódování jediného velkého polyproteinu o přibližně 3000 aminokyselinách, V infikovaných buňkách je tento polyprotein mnohočetně štěpen buněčnými a virovými proteázami za vzniku strukturálních a nestrukturálních (NS) proteinů. V případě HCV je tvorba zralých nestrukturálních proteinů (NS2,
NS3, NS4A, NS4B, NS5A, a NS5B) způsobená dvěmi virovými proteázami. První z nich, velmi špatně popsaná, štěpí místo spojení NS2-NS3. Druhá, serinová proteáza je v N-terminální oblasti molekuly NS3 (proto označovaná jako NS3 proteáza) zprostředkovaná všechna štěpení za NS3 dolů, v cis pro NS3-NS4 štěpení a v trans pro štěpení ve zbývajících místech, tedy NS4A-NS4B,
NS4B-NS5A, NS5A-NS5B. Protein NS4A má zřejmě několik funkcí, je kofaktorem NS3 proteázy a pravděpodobně napomáhá membránové lokalizaci NS3 a ostatních virových replikových komponent. Komplex tvořící NS3 protein a NS4A je zřejmě důležitým mezičlánkem ovlivňujícím proteolytické pochody na popsaných místech štěpení proteinu. NS3 protein vykazuje nukleosíd-trifosfatázovou a RNA-helikázovou aktivitu. Protein NS5B je RNA-dependentní io RNA polymeráza ovlivňující replikaci viru HCV.
Při výzkumu a vývoji antivirového činidla se hlavním cílem stala taková látka, která inaktivuje virem kódované enzymy, které jsou esenciální pro replikaci viru. Zveřejněná přihláška WO 97/06 804 popisuje (-j-enantiomer nukleosidového analoga cytosin-l,3~oxathiolanu (3TC).
který je účinný proti HCV viru. Tato sloučenina, která byla označena předchozími klinickými studiemi za bezpečnou, je prokazatelně účinná proti virům HIV a HBV. Stále ještě zbývá klinicky doložit její účinnost proti HCV a popsat mechanismus antivirového účinku.
Rozsáhlé úsilí objevit sloučeniny, které inhibují NS3-proteázu nebo RNA-helikázu viru HCV vedlo k následujícím odhalením:
Patent US 5 633 388 popisuje heterocykly substituované karboxamidy a jejich analoga účinné proti viru HCV. Účinek těchto sloučenin je namířen proti helikázovému účinku proteinu NS3. Výsledky klinických testů nejsou zatím k dispozici.
Podle studie vedené Chu a spol. (Tet. Lett., 1996, str. 7229-7232) je fenantren-chinon in vitro účinný proti proteáze NS3 proteinu. Výsledky dalšího výzkumu této sloučeniny nebyly zatím zveřejněny.
Studie prezentovaná na deváté mezinárodní konferenci o antivirovém výzkumu (Urabaai, Fukyshima, Japonsko 1996, Antiviral Research, 30. 1. 1996, A23 (článek 19)) popisuje thiazolidinové deriváty jako inhibitory HCV proteázy.
Několik studií se zabývalo sloučeninami inhibujícími jiné serinové proteázy, především lidskou leukocytární elastázu. Jedna skupina z těchto sloučenin je popsána ve zveřejněné přihlášce WO 95/33 764 (Hoechst Marion Rousse, 1995). Peptidy popisované v této přihlášce jsou strukturálně odlišné od peptidů podle současného vynálezu.
Zveřejněná přihláška WO 98/17 679 (Vertex Pharmaceuticals lne.) se týká inhibitorů serinové proteázy, především proteázy NS3 proteinu HCV viru. Tyto inhibitory jsou analoga peptidů odvozená od NS5A/5B. Všechny tyto peptidy obsahují jako svoji základní vlastnost C—konec aktivovaný karbonylovou funkční skupinou. Tyto peptidy jsou podle popisu účinné proti jiným serinovým proteázám a nejsou tudíž specificky účinné proti proteáze NS3 proteinu viru HCV.
Hoffman LaRoche také popisuje hexapeptídy jako antivirová činidla působící jako inhibitory proteináz vhodná k terapii infekcí HCV virem. Tyto peptidy obsahují na svém C-konci aldehyd nebo kyselinu borítou.
Steinkiihler a spol. a Ingallinella a spol. popisují inhibicí produkty štěpení na N-konci (Bio50 chemistry 1998, 37, 8899 až 8905 a 8906 až 8914). Tyto peptidy ajejich analoga nijak nepřipomínají peptidy podle současného vynálezu.
Podstata vynálezu
Podstatu vynálezu tvoří způsob rozdělení enanciomemí směsi methyl~(lR/2S)/(lS,2R)-Z-buto· xy karbony!— 1-am i no-2-v i nyl eyklopropyl kar boxy látu vzorce
H O tak, že se na směs působí esterázou Alcalase® za vzniku produktů vzorce
(S,R)
Obdobným způsobem je možno z methy l-(l R/2R)/(1 S, 2 S)-/-butoxy karbony l- 1-am i no-2-ethyl cyklopropylkarboxyfátu vzorce
získat výsledné produkty vzorce
Dále je stejným způsobem možno z ethy Hl Ry2S)/( 1 S,2R)-/-butoxy karbony I-1-am ίηο-2-vi nyl cyklopropylkarboxylátu
US získat produkty vzorce
Působení esterázy probíhá za podmínek, při nichž se pH udržuje na hodnotě 7,2, 7,5 nebo 8.
Jak již bylo uvedeno svrchu, výsledné enanciomery se používají jako stavební kameny nebo meziprodukty pro výrobu peptidových analogů s účinností proti viru hepatitidy C. Jde o racemáty, diastereoizomery a optické izomery sloučenin obecného vzorce I
S kde B je atom vodíku, C6 nebo Cm aryl, C7. u, aralkyl; heterocyklus nebo (nižší alkylj-Het, vždy eventuálně substituovaný C| ^alkylem; Cj balkoxy, C| 6 alkanoyl, hydroxyskupína, hydroxyalkylová skupina, atom halogenu, haloalkyl, nitroskupina, kyanoskupina, kyano-alkylová skupilo 11a, aminoskupina eventuálně substituovaná C| alkylem; amidoskupina nebo (nižší alkvlf amidoskupina nebo
B je acylový derivát vzorce R4-C(O)~, karboxyl vzorce R4-O-C(O)-, amidoskupina vzorce
R4-N(Rs)-C(O)~, thio-amidoskupina vzorce R4-N(RA-C(S) nebo sulfonyl vzorce R4-SO2, kde R4 je i/C| t() alkyl eventuálně substituovaný karboxy lem, Ci calkanoylem, hydroxyskupinou, C| 6alkoxy, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou CItalky lem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)amidoskupinou nebo ii/C3_7 cykloalkyl, C3 7cykloalkoxy nebo C.t ioalkyl -cykloalkyl, vždy eventuálně 20 substituované hydroxyskupinou, karboxylovou skupinou, (C) 6alkoxy)—karbonylovou skupinou, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C|.Ďalkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkylj-amidoskupinou nebo iii/aminoskupina eventuálně mono- nebo di- substituovaná C, ^alkylem, amidoskupina nebo (nižší alkyl)-amidoskupina nebo i v/ Cft nebo C!0 aryl nebo C7_.|6 aralkyl, vždy eventuálně substituovaný C| ňal kýlem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C|_7)alkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované C|_6alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkylý-amidoskupinou nebo aminoskupi30 nou eventuálně mono- nebo di-substituovanou Cj ftalkylem,
Rs je atom vodíku nebo C^alkyl;
za předpokladu, že pokud R4 je amidoskupina nebo thioamid, pak R4 není ii/ cykloalkoxy;
a
Y je atom vodíku nebo Ct 6alkyl;
R’ je C|„8alkyl, C3 7cykloalkyl nebo C4_|0 alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný hydroxyskupinou, Ci_6alkoxy, C|_6thioalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou, C6 nebo Cjo arylem nebo C7_m araikylem,
Ri je CTL-Rio, NH-Rio, O—R2o nebo S—R2o,
-4CZ 302766 B6 kde R?o je nasycený nebo nenasycený C.-cykloalkyl nebo C4-i0 (alkylcykloalkyl), vždy eventuálně mono-, di- nebo tri-substituované R2| nebo
R20 znamená C6 nebo C10 aryl nebo C7-u aralkyl, vždy eventuálně mono-, di- nebo tri-substituované R2i nebo
R2o je heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně mono-, dt-nebo tri-substituované R21·, kde každé R2] je nezávisle C|.6alkyl, C(_6alkoxy. nižší thioalkyl, sulfonyl, nitroskupina, hydroxyskupina, merkaptoskupina, atom halogenu, haloalkyl, aminoskupina eventuálně mono-nebo di- substituovaná C, Λalky lem, C6 nebo C|Oarylem, C7_!4 aralkylem, heterocy klem nebo (nižší alkylý-Het; karboxylová skupina, karboxy-(nižší alkyl), C6 nebo C10 aryl, C7_i4 aralkyl nebo heterocyklus, shora uvedený aryl, aralkyl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný R22, kde R22 je Ci (,alkyI, Cj.ycykloalkyl, C|_6alkoxy, aminoskupina eventuálně mononebo di- substituovaná Ci^alkylem, sulfony lová skupina, (nižší alkyl)-sulfonylová skupina, nitroskupina, hydroxyskupina, merkaptoskupina, atom halogenu, haloalkyl, karboxylová skupina, amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina nebo heterocyklus eventuálně substituovaný Ct^alkylem,
R1 je atom vodíku, C^alkyl, C3_7cykloalkyi, C2„6alkenyl nebo C? 6 alkynyl, vždy eventuálně substituovaný atomem halogenu, nebo jejich farmaceuticky vhodné soli nebo estery.
Jak již bylo uvedeno svrchu esterázou, použitou při provádění způsobu podle vynálezu je esteráza Alcalase® (Novozymes A/S). Jde o proteázu, získávanou submersní fermentací Bacillus licheniformis s následným čištěním.
Esteráza Alcalase® je dobře známa od roku 1993 a je užívána jako detergent.
Přirozeně se vyskytující aminokyseliny kromě glycinu obsahují chirální atom uhlíku. Pokud není dále uvedeno jinak, pak preferujeme aminokyseliny v L-konfiguraci. V případech blíže určených předkladatelé předpokládají, že některé aminokyseliny obecného vzorce I mohou mít konfiguraci buď D-, nebo L- nebo se mohou vyskytovat ve směsi D~ a L-izomerů, včetně racemických směsí.
Výrazy „Pl, P2, P3...“ se používají k označení pozice zbytku aminokyseliny od C-konce peptidů směrem kN-koncí (Pl označuje pozici 1 od C- konce, P2 označuje druhou pozici od Ckonce...). Literatura: A. Berger & I. Schechter, Transactions of the Royal Society London series B257, 249 až 264 (1970)).
Zkratky pro α-aminokyseliny jsou uvedeny v následující tabulce A:
-5CZ 302766 B6
| aminokyselina | symbol |
| 1 -aminocyklopropylkarboxylová kyselina | Acca |
| Alanin | Ala |
| Aspartová kyselina | l | Asp |
| Cystein | F Cys |
| ! Cyklohexylglycin I t | (2-amino-2-cyklohexyloctová kyselina) | Chg |
| Glutamová kyselina | Glu |
| Izoleucin I | Ile |
| ί Leucin | Leu |
| Fenylalanin | Phe |
| Prolin | Pro i |
| terc-butylglycin | Tbg |
| Valin | Val |
Termín „lam i nocy klopropyl karboxylová kyselina“ (Acca) znamená sloučeninu obecného 5 vzorce:
O
Termín „terc-butylglycin“ (Tbg) znamená sloučeninu obecného vzorce:
-6Termín „zbytek“ aminokyseliny nebo derivátu aminokyseliny znamená radikál odvozený od odpovídající α-aminokyseliny odštěpením hydroxylu karboxylové skupiny a jednoho vodíkové15 ho atomu a -aminoskupiny. Například termíny Gin, Ala, Gly, Ile, Arg, Asp, Phe, Ser, Leu, Cys,
Asn, Sar a Tyr znamenají „zbytky“ L-glutaminu, L-alaninu, glycinu, L-izoleucinu, L-argininu,
L-asparagové kyseliny, L-fenylalaninu, L-serinu, L-leucinu, L-cysteinu, L-asparaginu, sarkosinu a L-tyrosinu,
Termín „vedlejší řetězec“ aminokyseliny nebo zbytku aminokyseliny znamená skupinu vázanou na atom α-uhlíku, α-aminokyseliny. Například, R- vedlejší řetězec u glycinu je atom vodíku, u alaninu je to methyl, u valinu je to izopropyl. Specifické R-skupiny nebo vedlejší řetězce a-aminokyselin jsou uvedeny v učebnici A. L. Lehninger's text on Biochemistry (kapitola 4).
Jako „halogen“ označujeme atom halogenu, a to atom brómu, chlóru, fluóru nebo jódu.
Termín „C i^alkyl“ nebo „(nižší) alkyl“, použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená přímý nebo větvený řetězec alkylových zbytků obsahující až šest atomů uhlíku včetně, například methyl, ethyl, propyl, butyl, hexyl, 1-methylethyl, 1-methylpropyl, 2-methylpropyl, 1,1-dimethylethyl (tj. terc-butyl).
Termín „C^cykloalkyl“, použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená zbytek cykloal kýlu obsahující od tří do sedmi atomů uhlíku a zahrnuje cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl a cykloheptyl.
Termín „spiro“ -cyklická skupina označuje například spiro-cyklopropyl nebo s p iro-cy k I obuty 1:
Termín „C4_io (alkylcykloalkyl)“ znamená zbytek cykloalky lu obsahující od čtyř do deseti atomů uhlíku vázaný na zbytek alkylu. Vázané zbytky obsahují až deset atomů uhlíku, například cyklopropylmethyl, cyklopentylethyl, cyklohexylmethyl, cyklohexyl ethyl nebo cykloheptylethyl.
Termín „C?-io alkenyl“ použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená zbytek alkylu obsahující od 2 do 10 atomů uhlíku a dále obsahující nejméně jednu dvojnou vazbu. Jde například o alkenyl včetně alylu a vinylu.
Termín „C|^ alkanoyl“, použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená přímý nebo větvený zbytek 1-oxoalkylu obsahující jeden až šest atomů uhlíku. Mezi takové alkanyly patří formyl, acetyl, 1-oxopropyl (propionyl), 2-methyl-1-oxopropyl, 1-oxohexyl.
Termín alkoxy“, použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným radikálem, znamená zbytek -O(C|_6alkyl), kde shora definovaný alkyl obsahuje až šest atomů uhlíku. Alkoxy znamená methoxy, ethoxy, propoxy, 1-methylethoxy, butoxy a 1,1-dimethylethoxy (známý jako tercbutoxy).
Termín „C3_7cykloalkoxy“ použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená
Ci.jcykloalkylovou skupinu vázanou na atom kyslíku, například:
-7CZ 302766 B6
OTermín „Có nebo C|«aryl“ použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená buď aromatickou monocykliekou skupinu obsahující 6 atomu uhlíku, nebo aromatickou bicyklickou skupinu obsahující 10 atomů uhlíku. Například aryl znamená fenyl, I-naftyl nebo 2-naftyl.
Termín „C7 )(}aralkyl“ použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená Cf, nebo Cm aryl vázaný na alkylovou skupinu, kde shora definovaný alkyl obsahuje od 1 do 6 atomů uhlíku. Mezi C7 if,aralkyly patří například butylfenyl a I-naftylmethyl.
io
Termín „amino—aralkyl“, použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená aminoskupiny substituované s C7 ^aralkylovou skupinu. Jde například o amino—aralkyl:
NH
Termín „(nižší alkyl)amid“, použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným radikálem znamená amidoskupinu mono-substituovanou C| óalkylem:
O
Termín „karboxy-(nižší)alkyl“, použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená karboxylovou skupinu (COOH) vázanou na (nižší) alkylovou skupinu. Jde například o kyselinu máselnou.
Termín „heterocyklus“ nebo „Het“ použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená monovalentní zbytek odvozený odštěpením atomu vodíku z pěti- šesti- nebo sedmičlenného nasyceného nebo nenasyceného (včetně aromatického) heterocyklu obsahujícího od jednoho do čtyř heteroatomů, a to atomu dusíku, kyslíku a síry. Navíc výraz „Het“, znamená shora definovaný heterocyklus fúzovaný do jednoho nebo více jiných cyklů za vzniku heterocyklu nebo jiného dalšího cyklu. Příkladem vhodných heterocyklů jsou: pyrrolidin, tetrahydrofuran, thiazolidin, pyrol, thiofen, diazepin, IH-imidazol, izoxazol, thiazol, tetrazol, piperidin, 1,4-dioxan, 4morfolín, pyridin, pyrimidin, thiazol-[4,5-b]-pyridin, chinolin nebo indol nebo následující heterocykty:
Termín „(nižší alkyl)-Het“, zde uváděný, znamená heterocyklický zbytek vázaný na řetězec nebo větvenou alkylovou skupinu, kde shora definovaný alkyl obsahuje od I do 6 atomů uhlíku. Příkladem „(nižší alkyl)-Het“ je:
nebo
Termín „farmaceuticky vhodný ester“ použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená estery sloučeniny obecného vzorce l, ve kterém jakákoli karboxylová funkční skupina, ale především karboxy koncová, je nahrazena alkoxykarbonylovou funkční skupinou:
O
ve které R skupina esteru nezávisle znamená alkyl (methyl, ethyl, n-propyl, t-butyl, n-butyl), alkoxyalkyl (methoxymethyl), alkoxyacyl (acetoxymethyl), aralkyl (benzyl), aryloxyalkyl (fenoxymethyl) nebo aryl (fenyl) eventuálně substituovaný halogenem, C|_4 alkylem nebo zbytkem C, 4 alkoxy. Ostatní vhodné farmaceuticky vhodné esteiy lze nalézt v publikaci „Design of prodrugs“ Budngaard, H. Ed. Elsevier (1985). Takové farmaceuticky vhodné estery jsou hydrolyzovány in vivo po injekční aplikaci savcům a přeměněny na kyselinu sloučeniny obecného vzorce 1.
I 5
S odkazem na shora popsané estery a pokud není uvedeno jinak, obsahuje každá alkylová skupina od jednoho do šestnácti atomů uhlíku, především od jednoho do šesti atomů uhlíku. Je vhodné, když každá arylová skupina přítomná v takových esterech obsahuje fenylovou skupinu.
Především jde o tyto estery: Ci_]6alkylester, nesubstituovaný benzylester nebo benzylester substituovaný nejméně jedním atomem halogenu, Ci_6alkylem, zbytkem C|_$alkoxy, nitroskupinou nebo trifluormethylem.
Termín „farmaceuticky vhodné soli“ znamená soli odvozené od farmaceuticky vhodných zásad.
Příkladem vhodných zásad jsou cholin, ethanolamin a ethylendiamin. Podstata tohoto vynálezu se týká i sodných, draselných a vápenatých solí. Literatura: „Pharmaceutical salts“, S. M. Birge a spol., J. Pharm. Sci. (1977), 66, 1 až 19).
Výhodné jsou především sloučeniny obecného vzorce I, kde B je především C6 nebo CiOaryl nebo
C7_|6 aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci_(,alkylem, C|_6alkoxy, Ci^alkanoylem, hydroxyskupinou, hydroxyal kýlem, atomem halogenu, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupina eventuálně substituovanou C| ^alkylem nebo
B je heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, vždy eventuálně substituovaný Ci_6alkylem, Ct ^alkoxy, C] alkanoy lem. hydroxyskupinou, hydroxyalkylem, atomem halogenu, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci-^alkylem nebo
B je především R4-SO2, kde R4 je především Ci^alkyI, amidoskupina, (nižší alkyl)~amidoskupina, Cň nebo C[Oaryl, C7_|4 aralkyl nebo heterocyklus, vždy eventuálně substituovaný C]^ alkylem nebo
B je především acylový derivát vzorce R4-C(O)45
-9CZ 302766 B6 kde Κι je především i/ C, 6alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, hydroxyskupinou nebo Cj f) alkoxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)—amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou Cj (.alkylem;
ii/ CJ 7cykloalkyl nebo C4 |()alkyleykloalkyl, oba eventuálně substituované hydro5 xyskupinou, karboxylovou skupinou, (Cj (,alkoxy)—karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)— amidem nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou C| (.alkylem;
iv/Cf, nebo Cm aryl nebo C7 κ,aralkyl, vždy eventuálně substituovaný C| (.alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší a!kyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ct (.alkylem;
to v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl )-Het, oba eventuálně substituovaný C| alky lem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci f,alkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Cj (.alkylem.
B je především a karboxyl vzorce 1<4-O-C(O)-, kde R4 je především i/Ci io alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, C) 6alkanoylem, hydroxyskupinou, CJ 6alkoxy, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou Ct (.alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem;
i i/ C7 7cykloalkyl, C4 i oalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (CJ (.alkoxy)—karbonylem, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di— substituovanou Chatky lem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem;
i v/ Cj, nebo Cioaryl nebo C7 K,aralkyl eventuálně substituovaný C ^alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkylj-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C| (.alkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het. oba eventuálně substituovaný C| (.alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně mono— nebo di—substituovanou C| b alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidoskupinou.
B je především amid vzorce R4-N(R5)-C(O)kde R4 je především i/C| io alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, C^alkanoylem, hydroxyskupinou, C, 6alkoxy, amidoskupinou, (nižší aikyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di— substituovanou Ci (.alkylem, ii/Ci 7 cykloalkyl nebo C4_ioalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C| 6alkoxy)-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alky!) amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C(-(,alkylem, iii) aminoskupina eventuálně mono- nebo di— substituovaná C]_3 alkylem, iv/ Cf, nebo C]0 aryl nebo C7_|6 aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci_6aíkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou C|.(, alkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované Ct (.alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně substituovanou Cj <, alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem a
R-í je především atom vodíku nebo methyl,
B znamená především thioamid vzorce R4- NH C(S) ,
- 10CZ 302766 B6 kde R4 je především i/ C|_io alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, C|_6 alkanoylem nebo C|^alkoxy;
ii/ C3.7 cykloalkyl nebo C^oalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C|^,alkoxy)-karbonylem, aminoskupinou nebo amidoskupinou.
B především znamená C6 nebo Cjo aryl eventuálně substituovaný Ci_6alkylem, C]_6alkoxy, C, ^alkanoylem, hydroxyskupinou, hydroxy alky lem, atomem halogenu, haloalkylem, nitroskupi10 nou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituo vanou Ci 6alky lem. takže Bje například:
OMe nebo nebo B je především heterocyklus eventuálně substituovaný Cj_6alkylem, C]_6alkoxy, C|.óalkanoylem, hydroxyskupinou, atomem halogenu, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituo vanou C,^alkylem.
takže Bje například:
oO1 nebo
B je především R4-SO2, kde R4 je především Cb nebo Cio aryl, C|_|4aralkvl nebo heterocyklus, vždy eventuálně substituovaný C|_6alkylem, amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina, takže Bje například B:
nebo
B je především acy lovy derivát vzorce R i- -C(O)—, kde K, je především s i/ C| io alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, hydroxyskupinou nebo C| fialkoxy;
ii/ C2 7 cykloalkyl nebo C4 malkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný hydroxyskupinou, karboxylem (Ct 6 alkoxy )-karbonylem, takže Bje například:
nebo R4 je především iv/ C6 nebo C|Oaryl nebo €\|ή aralkyl, vždy eventuálně substituovaný C Italky lem, hydroxyskupinou, takže Bje například:
nebo R4 je především v/ heterocyklus eventuálně substituovaný Ci_6alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupínou nebo aminoskupinou, takže Bje například:
- 12 B je především karboxy! vzorce R4-O-C(O)-, kde R4 je především í/C|_io alkyl eventuálně substituovaný karboxylem. Ci_6alkanoylem, hydroxyskupinou, C]_6 alkoxy nebo amidoskupínou, (nižší alkyl) amidoskupínou, aminoskupinou eventuálně mononebo di-substituovanou Ct-ftalkylem;
ii) C3_7 cykloalkyl, C4 t0 alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem (C(_6 alkoxy)karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)_amidoskupínou, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou Ci^alkylem, takže B je například:
nebo Ki je především io ív/ C6 nebo Cmaryl nebo C7_|6aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci^alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně substituovanou C] 6alkýlem nebo v/ heterocy klus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované C|_6al kýlem, hydroxyskupinou, amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono-substituovanou Ci_6alkylem, takže B je například:
B je především amid vzorce R4-N(R5)-C(O)-, kde R4 je především i/C|_io alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, Cb_6alkanoylem, hydroxyskupinou, C|^alkoxy, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mononebo di—substituovanou C,^alkylem, ii/C3_7 cykloalkyl nebo C.j_|0alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C| alko xy j-karbony lem, amidoskupinou, (nižší alkyl) amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono— nebo di— substituovanou C^alkylem a
R5 je atom vodíku nebo methyl, takže B je například:
I
- 13 nebo R4 je především iii) aminoskupina eventuálně mono- nebo d(-substituovaná C1 alkylem, takže B je například:
N.
O
nebo R.i je především i v/ C6 nebo Cm aryl nebo C7 ^aralkyl, vždy eventuálně substituovaný C u,alky lem, hydroxyskupinou, amínoskupinou nebo amidoskupinou eventuálně substituovanou C, f)alkýlem nebo v/heterocyklus eventuálně substituovaný C| alkylem, hydroxyskupinou, amínoskupinou nebo amidoskupinou, takže B je například:
io nebo
B je především thioamid vzorce R4-NH-C(S)-, kde R.t je především i/ C| |()alkyl nebo ii/ C, 7cykloalkyl, takže B je například:
nebo
Velmi výhodné je, když B znamená amid vzorce R4—NH-C(O)-, kde R4 je především i/ C, malkyl eventuálně substituovaný karboxy lem, Ci_.6alkanoylem, hydroxyskupinou, C|_(,alkoxy, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo amínoskupinou eventuálně mononebo di-substituovanou C| ^alkylem, ii/ C7 7 cykloalkyl nebo C4 loalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem,
3o (C] 6alkoxy)-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl) amidoskupinou nebo amínoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C]_6alkylem,
- 14CZ 302766 B6
nebo Rt je především iv/ C6 nebo C]Oaryl nebo C7._]6aralkyl, vždy eventuálně substituovaný C^alkylem, hydroxy5 skupinou, amidoskupinou nebo aminoskupinou, takže Bje například:
io
Preferujeme, když Bje terc-6 utoxy karbonyl (Boc) nebo
O i? Preferujeme, když Y je atom vodíku nebo methyl. Nejvíce preferujeme, když Y je atom vodíku.
Preferujeme, když R3 je C(_8 alkyl, C3_7 cykloalkyl nebo C^ioalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný hydroxyskupinou, C16alkoxy, Ci_6 thioalkylem, acetamidovou skupinou, C6 nebo Cioarylem nebo C7..|S aralkylem, takže R je například:
- 15 CZ 302766 B6
Preferujeme, když R2 je vedlejší řetězec tercbutvlglycinu (Tbg), Ile, Val, Chg nebo
nebo
Nejvíce preferujeme, když R1 je vedlejší řetězec Tbg, Chg nebo Val.
Podstata současného vynálezu se týká sloučeniny vzorce 1, kde preferujeme, když io R2 je S-R20 nebo O-R20, kde R20 je především Cň nebo Cmaryl, C7_i6 aralkyl, heterocyklus nebo -CHr-Het, vždy eventuálně mono-, di- nebo tri-substituované R2i, kde R2| je C]_6alkyl, C[ 6alkoxy, nižší thioalkyl, amino skupina nebo amidoskupina eventuálně mono- nebo di-substituovaná C,6alkylem. C6 nebo Cioarylem, C7 |Ď aralkylem, heterocyklem nebo (nižší alkyl)-heterocyklem, nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormethyl, karboxylová skupina, C6 nebo C]Oaryl, C7 ]6aralkyl, nebo heterocyklus, shora uvedený aryl, aralkyl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný R22.
Preferujeme, když R2i je C(.6alkyl, Ct 6alkoxy, aminoskupina, aminoskupina, di—(nižší alkyl)-aminoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina, C6 nebo Cmaryl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný pomocí R22.
Preferujeme, když R22 je Ci 6alkyl, Ci 6alkoxy, aminoskupina, mono- nebo di(nižší alkyl)-aminoskupina, (nižší alkylj-amid, sulfonylalkyl, nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormethyl, karboxylová skupina nebo heterocyklus.
Především preferujeme, když R22je Ci^alkyl, C| ύ alkoxy, halogen, aminoskupina eventuálně mono- nebo di- substituovaná nižším alkylem, amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina nebo heterocyklus.
Nejvíce preferujeme, když R22 je methyl, ethyl, izopropyl, terc-butyl, alkyl, amidoskupina (nižší alkyl)amidoskupina nebo (nižší alkyl) 2-thiazol.
Preferujeme, když R2 je jedna z následujících skupin:
Preferujeme, když R2 je 1-nafiylmethoxy-, 2-naftylmethoxy-, benzyloxy-, 1-nafityloxy-, 2naftyloxy- nebo chinolinoxy- nesubstituovaný, mono- nebo di-substituovaný R2].
Nejvíce preferujeme, když R2 je 1-nafty Imethoxy— nebo chinolinoxy, nesubstituovaný, mononebo di-substituovaný R2i (shora definovaný), takže R2 je například:
- 16CZ 302766 B6
OMe
Nejvíce preferujeme, když R2 je:
'2ΛΛ
'21B ^-0
Preferujeme, když R2jA je C|.6alkyl (izopropyl, terc-butyl nebo cyklohexyl), C|_6alkoxy (methoxy) a dále:
Me' nebo
nižší thioalkyl: S— halogen (chlór), aminoskupina eventuálně mono-substituovaná C] alky lem nebo Có nebo Cioaryl, takže R2ia je například dimethylamino, Ph—N(Me)—, dále nesubstituovaný C’t. nebo Cioaryl, C7_i6 arylalkyl (fenyl) nebo nebo R2,a je především heterocyklus eventuálně substituovaný R22, kde R22 je Ci_6alkvl, Ci^ alkoxy, aminoskupina eventuálně mono- nebo di- substituovaná nižším alkylem, amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina nebo heterocyklus, takže R2)A je například:
N-
Me.O
nebo
.N
N ^N
N nebo
- 17 Nejvíce preferujeme, když R2tA je C6, C]Oaryl nebo Het, vždy eventuálně substituovaný R22, takže R2|A je například:
Nejvíce preferujeme, když R? je:
kde R22Aje především C| 6 alkyl (methyl), C| 6alkoxy (methoxy) nebo halogen (chlór),
R22b je především C|.6alkyl, aminoskupina, eventuálně mono- substituovaná C|.Ď alkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou a
R2ib je C|_6alkyl, C|_<,alkoxy, aminoskupina, di fnižší alkyl)~aminoskupina, (nižší alkyl)-amid, nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormethyl nebo karboxyl.
Především preferujeme, když R?ib je Ci a Ikoxy nebo di—(nižší alkyl)-aminoskupina.
Nejvíce preferujeme, když R2ib je methoxy.
Vynález se především týká sloučeniny obecného vzorce I, kde Pl segment (cyklopropylový nebo cyklobutylový kruh) je substituovaný Rh
Je vhodné, když R1 je atom vodíku, C|_3, C2_5cykloalkyl nebo C2 4alkenyl eventuálně substituovaný halogenem.
Preferujeme, když R1 je ethyl, vinyl, eyklopropyl, 1- nebo 2-bromethyl nebo I- nebo 2-bromvinyl.
Nejvíce preferujeme, když R| je vinyl.
Pokud R| není atom vodíku, a pak Pl je především cyklopropylový kruh vzorce:
- 18 CZ 302766 B6
NH o
kde Ci a Ci znamenají asymetrické atomy uhlíku v pozicích 1 a 2 cyklopropylového kruhu. I když nevylučujeme přítomnost ostatních možných center asymetrie v jiných segmentech sloučeniny obecného vzorce I, přítomnost těchto dvou center asymetrie způsobuje, že sloučeniny obecného vzorce I mohou existovat jako racemické směsi diastereoizomerů. Jak je následně popsáno v příkladech provedení vynálezu, tyto racemické směsi se připraví, a pak se rozdělí do jednotlivých optických izomerů nebo lze tyto optické izomery připravit chirální syntézou.
Sloučenina obecného vzorce I se může vyskytovat jako racemická směs diastereoizomerů na uhlíku 1, kde R] na uhlíku 2 je orientována do syn pozice vzhledem ke karbonylu na pozici 1, a zbytek je charakterizován následujícím vzorcem:
nebo sloučenina obecného vzorce I, může být racemiekou směsí diastereoizomerů, kde R| na uhlíku 2 je orientováno do anti pozice ke karbonylu na uhlíku 1, a zbytek je charakterizován následujícím vzorcem:
Racemické směsi lze separovat na individuální optické izomery.
Nejzajímavější vlastnost současného vynálezu spočívá v prostorovém uspořádání Pl segmentu a v adici R| substituentu na atomu uhlíku 2. Podstata vynálezu se týká konfigurace asymetrického atomu uhlíku na pozici 1. Preferovanou podstatou vynálezu je sloučenina podle vzorce I, kde R( není atom vodíku a asymetrický atom uhlíku na pozici 1 má R konfiguraci.
- 19CZ 302766 B6
R
R
R nebo S
R
O a
O
- jeden z těchto dvou:
Přítomnost substituentu Rj na uhlíku C2 zvyšuje účinnost sloučeniny, pokud Cl je pak v R konfiguraci. Například sloučeniny 901 (1 R,2S) a 203 (1 R,2R) mají účinnost 25 a 82nM, nesubstituo5 váná cyklopropylová sloučenina 111 má účinnost 475nM.
Pokud atom uhlíku v pozici 1 má R konfiguraci (např. sloučenina 901 a 903), pak inhibice proteázy NS3 viru HCV je dáie zvýšena pozicí substituenta R| (alkylu nebo alkylenu) na uhlíku 2 cyklopropylového kruhu, tzn. že sloučenina, kde R| je syn ke karboxylové skupině, má vyšší io účinnost (25nM) než v případě anti enantiomeru (82nM). Z porovnání účinnosti sloučenin 801 (IR, 2S), která je 6nM a jejího odpovídajícího (1S,2R) izomeru, jehož účinnost je vyšší než μΜ, vyplývá, že izomer (lR,2S)je 1500x účinnější než izomer (1 S,2R)!!
Nejvíce preferovanou sloučeninou je optický izomer s R| substituentem a karbonylem v orientaci 15 syn v následující absolutní konfiguraci:
V případě, že například R| je ethyl, pak asymetrické atomy uhlíku v pozicích 1 a 2 mají R,R kon20 fíguraci.
Podstata současného vynálezu se týká sloučeniny obecného vzorce 1, kde B je především CA nebo CjOaryl nebo C7-i6 aralkyl, vždy eventuálně substituovaný C,^alkylem, C|_6alkoxy, C]_6alkanoyl, hydroxyskupinou, hydroxyalkylem, halogenem, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci 6 alkylem neboje heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, vždy eventuálně substituovaný C|_óalkylem, Ci_Ďalkoxy, Ci_óalkanoylem, hydroxyskupinou, hydroxyalkylem, halogenem, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)— amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou C].6alkýlem nebo
B je R4-SO2, kde R4 je především amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina, C6 nebo CiOaryl, C7_,4 aralkyl nebo heterocyklus, všechny eventuálně substituované C(_6alkylem nebo
B je acylový derivát vzorce R4-C(O)~ kde R4je
- 20i/ C t_jOalky 1 eventuálně substituovaný karboxy lem, hydroxyskupinou nebo C|.6alkoxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mononebo di-substituovanou C[_óalkylem, i t/ C3_7cykloalkyl nebo C^oalkylcyklo-alkyl, oba eventuálně substituované hydroxyskupinou, karboxylovou skupinou, (C]_óalkoxy)-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou Ct^alkylem, iv/ C6 nebo Cio aryl nebo C7_!6aralkyl, vždy eventuálně substituované C^alkylem, hydro5 xyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Cbí,a! kýlem, substituované Ci_6alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně substituovanou C|_óalkýlem, amidoskupinou, (nižší alkylj-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou C ^alkylem nebo
B je karboxy 1 vzorce R4-O-C(O)-, kde R4je i/ Ct-10 alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, Ci ^alkanoy lem, hydroxyskupinou, C].6alkoxy, aminoskupinou eventuálně mono- nebo dí- substituovanou Cj-óalkylem, amidosku15 pinou nebo (nižší alkylj-amidem, ii/C3_7cykloalkyl, C^oalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovanou karboxylem, (Ct^>alkoxyj-karbonylem, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di—substituovaná C|_<,alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkylj-amidem, iv/C6 nebo CiOaryl nebo C7_i6aralkyl eventuálně substituovaný C]óalkylem, hydroxyskupi20 nou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituované C|_6alkylem, nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované C, ^alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou, C^alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkylj-amidoskupinou nebo
B je amid vzorce R4-N(R5)=C(O)-, kde R4je i/ C|_io alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, C, ^alkanoylem. hydroxyskupinou, C|.6alkoxy, amidoskupinou, (nižší alkylj-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono30 nebo di-substituovanou C,_6al kýlem, ii/ C3_7 cykloalkyl nebo C4_ioalkyIcykloalky 1, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C|6alkoxy)—karbony lem, amidoskupinou, (nižší alkyl}-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C ^alkylem;
iii) aminoskupina eventuálně mono- nebo di-substituovaná Ct_3 alkylem;
i v/ Có nebo CHJaryl nebo C7_ ^aralkyl, vždy eventuálně substituovaný C| ^alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci_6alkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované Ct 6alkvlem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně substituovanou C|_6alkylem, amidoskupinou nebo (nižší
4« alkyl)-amidem a
R5 je především atom vodíku nebo methyl nebo
B je thioamid vzorce R4-NH-C(S)-, kde R4 je i/ Ci_!0 alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, Cj_6 alkanoylem nebo Ct Ďalkoxy;
ii/C3_7 cykloalkyl nebo C4_ioalky]cykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C|_óalkoxy)-karbonylem, aminoskupinou nebo amidoskupinou,
-21 CZ 302766 B6
Y je atom vodíku nebo methyl,
R3 je Cj 8 alkyl, C3.7eykloalkyl nebo C4-10 alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituované 5 hydroxyskupinou, C| flalkoxy, Ci 6thioalkylem, acetamidem, C6 nebo C|Oarylem nebo C7.16 araikylem,
R2 je S--R20 nebo O-R20, kde R20 je především Cf, nebo Cm aryl, C7. ]Ďaralkyl, Het nebo -CH2-Het, vždy eventuálně m mono-, di- nebo tri-substituované R2), kde R2i, je C| 6alkyl, Cj ()alkoxy, nižší thioalkyl, aminoskupina nebo amidoskupina eventuálně mono- nebo di-substituovaná C|_6alkylem, Cft nebo C,oarylem, C7_)ó araikylem, heterocyklem nebo (nižší alkyl)-Het, dále nitroskupina, hydroxyskupína, halogen, trifluormethyl, karboxylová skupina, C6 nebo C|()aryl, C7_|6 aralkyl nebo heterocyklus, shora uvedený aryl, aral15 kyl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný pomocí R22, kde
R22 je C| ňalkyl, C3_7cykloalkyl, Cm,alkoxy, aminoskupina, mono- nebo di—(nižší alkylj-aminoskupina, (nižší alkyl)-amid, sulfonylalkyl, nitroskupina, hydroxyskupína, halogen, trifluormethyl, karboxylová skupina nebo heterocyklus nebo
2o R2 je jedna z následujících skupin:
R2 je 1-nafty Imethoxy- 2-naftylmethoxy-, benzyloxy-, 1-naftyloxy-, 2-naftyloxy- nebo 25 cbinolinoxy- nesubstituovaný, mono— nebo di— substituovaný R2i,
Pl segment je cyklopropylový nebo cyklobutylový kruh, oba eventuálně substituované Rj, kde
R1 je atom vodíku, Ci_3alkyl, C3_5cykloalkyl nebo C2.4alkenyl eventuálně substituované halogenem a zároveň R| na atomu uhlíku v pozici 2 je syn vzhledem ke karbonylu v pozici I:
Podstata současného vynálezu se týká sloučeniny obecného vzorce I, kde B je především C6 nebo C|Oaryl, eventuálně substituovaný Ci_f,alkylem, C|-ftalkoxy, Ci_6alkanoyl, hydroxyskupinou, hydroxyalkylem, halogenem, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Cm,alkylem nebo
B je heterocyklus eventuálně substituovaný Ci^alkylem, Cm alkoxy, CMalkanoylem, hydroxyskupinou, halogenem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituo vanou Ci_balkylem nebo
B je R4—SO2, kde R4 je C6 nebo Cl0aiyl, C7_|4 aralkyl nebo heterocyklus, vždy eventuálně substituovaný Ci_b alkylem, amidoskupina, (nižší alkylj-amidoskupina nebo
B je především acylový derivát vzorce R4-C(O)-, kdeRjije i/ Ci_]Oalky 1 eventuálně substituovaný karboxylem, hydroxyskupinou nebo C|.6aikoxyskupinou nebo ii/C3 7cykloalkyl nebo C4_ioalkylcykloalkyl, oba eventuálně substituované hydroxyskupinou, karboxylovou skupinou, (Ci-6alkoxy)-karbonylem nebo iv/C6 nebo C)0 aryl nebo C7_i6aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci-(,alkylem, hydroxyskupinou, v/heterocyklus eventuálně substituovaný C]_6alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou nebo amidoskupinou nebo
B je karboxyl vzorce R4-O-C(O)~, kde R4je i/Ci_,0 alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, Cj ^alkanoylem, hydroxyskupinou, Ci^alkoxy, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou CMalkylem, ii/ C3_7cykloalkyl, C4_i0alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (Ci.625 alkoxy)-karbonylem, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovaná C[.6alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem;
iv/ C6 nebo Cl0aryl nebo C7_t6aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Cb^alkylem, hydroxyskupinou nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Cj ^alkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované CMalkylem, hydroxy30 skupinou, aminoskupinou nebo amidoskupinou eventuálně mono-substituovanou C:_6alkylem nebo
B je amid vzorce R4-N(R5)-C(O}-, kde R4 je i/ C]_iOalkyl eventuálně substituovaný karboxylem, CMalkanoylem, hydroxyskupinou,
C|.6alkoxy, amidoskupinou, (nižší alkyl)-am i došku pinou nebo aminoskupinou eventuálně mononebo di-substituovanou C|_6alkylem, ii/ Cs_7cykloalkyl nebo C4_10alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (Ci_óalkoxy)-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou Ci 6alkýlem, iii) aminoskupína eventuálně mono- nebo d i-substituovaná Ci_3 alkylem, i v/ C6 nebo C10aryl nebo C7_t6aralkyl, vždy eventuálně substituovaný C( ^alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou, nebo amidoskupinou eventuálně substituovanou Cm alkylem nebo v/heterocyklus eventuálně substituovaný C]_6alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou nebo amidoskupinou a
R5 je atom vodíku nebo methyl nebo B je thioamid vzorce R4-NH-C(S)-,
-23CZ 302766 B6 kde R4je i/ C| io alkyl nebo i i/ C3 7cykloalkyl nebo
B je amid vzorce R4-NH-C(O)-, kde R4 je i/ C| π, alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, C| 6alkanoylem, hydroxyskupinou, C|„6alkoxy, amidoskupínou, (nižší alkylý-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mononebo di-substituovanou C| ^alkylem;
io ii/Ci 7 cykloalkyl nebo C4 )0alkyicykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C| 6alkoxy)-karbonylem, amidoskupínou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C| ť,alkylem, iv/C6 nebo C|Oaryl nebo C7_|6aralkyl eventuálně substituovaný Ci ňalkylem, hydroxyskupinou, amidoskupínou nebo aminoskupinou,
Y je atom vodíku nebo methyl,
Ri je vedlejší řetězec terc-butylglycinu (Tbg), Ile, Val, Chg nebo:
nebo
R2 je 1-naftyImethoxy nebo chínolínoxy nesubstituovaný, mono- nebo di- substituovaný R2] (shora uvedený) nebo
R2je:
kde R2ia je Ci_flalkyl, C( 6alkoxy, C6, C10aryl nebo heterocyklus, nižší thioalkyl, halogen, 30 aminoskupina eventuálně mono- substituovaná C[ 6alkylem, nebo C6 nebo Ct0 aryl, C7_|6 arylalkyi nebo heterocyklus eventuálně substituovaný R22, kde R22 je Cm,alkyl, Ct_6 alkoxy, aminoskupina eventuálně mono- nebo di- substituovaná C|_6 alkylem, amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina nebo heterocyklus,
Pl je cyklopropylový kruh, kde atom v pozici 1 má R konfiguraci,
-24CZ 302766 B6 a Rl je ethyl, vinyl, cyklopropyl, 1— nebo 2—bromethyl nebo 1- nebo 2-bromviny!.
Podstata současného vynálezu se týká sloučenin obecného vzorce I, kde B je terc-butoxykarbonyl (Boc)nebo
O
R3 je vedlejší řetězec Tbg, Chg nebo Val;
R2 je:
io
kde R22A je C]_6alkyl (methyl), ČY6alkoxy (methoxy) nebo halogen (chlór),
R22B je C|_6 alkyl, aminoskupina eventuálně mono-substituovaná C, 6 alkylem, amidoskupina nebo (nižší alkyl)amtd a
R2ib je CI talkyI, C|^alkoxy, aminoskupina, di—(nižší alkyl)-aminoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina, nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormethyl nebo karboxyl a
Pl je:
Podstatou současného vynálezu je každá sloučenina obecného vzorce I, která je uvedená v tabulkách 1 až 10.
Podstatou vynálezu je farmaceutický přípravek, který obsahuje další anti-HCV činidla. Příkladem takových látek jsou a- nebo β-interferon, ribavirin a amantadin.
Podstatou současného vynálezu je farmaceutický přípravek podle současného vynálezu, který také obsahuje jiné inhibitory HCV proteázy.
Další podstatou současného vynálezu je farmaceutický přípravek podle současného vynálezu, který obsahuje jiná inhibiční činidla zasahující jiným způsobem do biologických pochodů viru
HCV, včetně například heiíkázy, polymerázy, metaloproteázy nebo IRES.
-25C7 302766 B6
Farmaceutický přípravek podle současného vynálezu lze podat orálně, parenterálně nebo cestou implantovaného zásobníku. Preferujeme podání orální nebo injekční. Součástí farmaceutického přípravku podle současného vynálezu mohou být obvyklé netoxické farmaceuticky vhodné nosiče, pomocné látky a jiné přísady. Ke zvýšení stability některých sloučenin nebo jejich lékových forem, je v některých případech nutná úprava pH přípravku přidáním farmaceuticky vhodných kyselin, zásad nebo pufrů.
Jako parenterální podání označujeme podání subkutánní, intrakutánní, intravenózní, intramuskulámí, intraartikulámí, intrasynoviální, intrastemální, intrathekální, injekční aplikace do leze nebo io infuzní formou.
Jednou z vhodných forem farmaceutického přípravku podle současného vynálezu je sterilní injekční přípravek, respektive sterilní injekční přípravek ve formě vodné nebo olejová suspenze. Tuto suspenzi lze připravit obecně známými postupy za použití vhodných disperzních činidel nebo smáčedel (Tween 80) a suspenzních činidel.
Farmaceutický přípravek podle současného vynálezu lze orálně podat ve formě kapslí, tablet, vodných suspenzí a roztoků. Tablety pro orální podání obsahují nosiče obecně používané pro orální podání, včetně laktózy a kukuřičného škrobu. Obvykle se přidají i lubrikační činidla (stea20 rát hořečnatý). Při výrobě kapslí pro orální podání se použijí ředidla (laktóza) a sušený kukuřičný škrob. V případě vodných suspenzí podávaných orálně se účinná látka sloučí s emulzifikačními a suspenzními činidly. Do přípravku lze přidat i určitá sladidla a/nebo látky pro úpravu chuti a/nebo látky pro úpravu barvy.
Ostatní vhodné přísady a nosiče pro přípravu farmaceutického přípravku podle současného vynálezu jsou uvedeny ve farmaceutické literatuře: „Remington's Pharmaceutical Sciences/ The Science and Practice of Pharmacy, 19,h Ed. Mack Publishing Company, Easton, Penn, (1995).
V případě použití sloučenin podle současného vynálezu jako inhibitorů proteázy HCV k prevenci a k léčbě onemocnění způsobených virem HCV, pak je dávkování v rozmezí od přibližně 0,01 do přibližně 100 mg/kg tělesné hmotnosti a den, především v rozmezí od přibližně 0,5 do přibližně 75 mg/kg tělesné možnosti a den. Farmaceutické přípravky podle současného vynálezu se podávají jedenkrát až pětkrát denně nebo eventuálně jako kontinuální infuze. Tuto formu podání lze použít při léčbě chronického nebo akutního onemocnění. Velikost jediné dávky lékové formy, která obsahuje účinnou složku eventuálně s materiálem nosiče, se liší podle stavu pacienta a způsobu podání léčiva. Obvykle obsahuje od přibližně 5 % hmotnostních do přibližně 95 % hmotnostních účinné složky. Preferujeme, když tyto přípravky obsahují od přibližně 20 % do přibližně 80 % účinné sloučeniny.
Velikost jednotlivých dávek účinné sloučeniny ovlivňuje mnoho v oboru známých okolností. Dávkování a režimy dávkování se u jednotlivých pacientů liší podle věku, tělesné hmotnosti, celkového zdravotního stavu, pohlaví, dietních návyků, době podání a míře vylučování. Závisí také na použité lékové kombinaci, závažnosti a průběhu infekčního onemocnění, a dále na dispozici pacienta k infekčním onemocněním a také na terapeutické zkušenosti lékaře.
Terapie obvykle začíná podáváním malých dávek, podstatně nižších než je optimální dávka peptidu. Dávkování se pak postupně pomalu zvyšuje přidáváním malých množství účinné látky do nastavení optimálního dávkování s požadovaným účinkem. Je důležité, aby dávkování bylo stanoveno tak, aby nezpůsobovalo pacientovi vážné a kvalitu života omezující vedlejší účinky.
Pokud přípravek podle současného vynálezu obsahuje kombinaci sloučeniny obecného vzorce 1 a jedno nebo více dalších terapeutických nebo profylaktických činidel, pak by jednotlivá dávka sloučeniny podle současného vynálezu spolu s dalším činidlem měla být přítomna v množství od do 100 %. Preferujeme množství účinné látky a dalších terapeutických nebo profylaktických činidel podávaných jako monoterapeutikum v rozmezí od přibližně 10 do 80 %.
-26CZ 302766 B6
Pokud se sloučeniny podle současného vynálezu nebo jejich farmaceuticky vhodné soli podávají společně s farmaceuticky vhodným nosičem k inhibici proteáz NS3 viru HCV nebo k terapii nebo prevenci infekce virem HCV, pak lze vytvořený přípravek podávat in vivo savcům (člověku).
Tuto terapii lze provést podáním sloučeniny podle současného vynálezu v kombinaci s činidly, mezi které také patří: iminomodulační činidla (α- β-, nebo γ-ínterferony), jiná antivirová činidla (ribavirin, amantadin), další inhibitory proteáz NS3 viru HCV, inhibitory dalších životně důležitých biologických procesů viru HCV (inhibitory helikázy, polymerázy, metaloproteázy, IRES nebo kombinace těchto činidel). Tyto další terapeutická a profylaktické činidla lze sloučit se io sloučeninami podle současného vynálezu za vzniku jediné účinné dávky. Tyto další složky lze také savcům podat odděleně jako součást mnohočetných jednotlivých dávek.
Podstata současného vynálezu se týká způsobu inhibice NS3 proteázy viru HVC u savců podáním sloučeniny obecného vzorce I, substituované podle shora uvedených definic.
Preferovaná podstata současného vynálezu se týká způsobu snížení proteázové aktivity NS3 viru HCV u savců. Pokud farmaceutický přípravek obsahuje pouze sloučeninu podle současného vynálezu jako účinnou složku, pak tento způsob navíc zahrnuje následné podání imunomodulárních činidel, antivirových činidel, inhibitorů HCV proteáz nebo inhibitoru jiných životně důleži20 tých funkcí viru HCV (inhibitoru helikázy, polymerázy, metaloproteázy nebo IRES). Tato činidla lze podat savcům před, současně nebo následně po podání přípravku podle současného vynálezu.
Jiná podstata současného vynálezu se týká inhibice virové replikace u savců. Tento postup je významný v terapii a prevenci infekčních onemocnění způsobených virem HCV. Pokud farma25 ceutický přípravek obsahuje pouze sloučeninu podle současného vynálezu jako účinnou složku, pak tento způsob navíc zahrnuje následné podání imunomodulačních činidel, antivirových činidel, inhibitorů HCV proteáz nebo inhibitoru jiných životně důležitých funkcí viru HCV (inhibitoru helikázy, polymerázy, metaloproteázy nebo IRES). Tato činidla lze podat savcům před, současně nebo následně po podání přípravku podle současného vynáiezu.
Sloučeniny podle současného vynálezu lze použít jako laboratorní reakční činidla. Sloučeniny podle současného vynálezu lze také použít k terapii nebo prevenci virové kontaminace materiálu, a tak snížit riziko virové infekce laboratorního nebo lékařského personálu, pacientů nebo osob, kteréjsou vystaveny styku s infekčním materiálem (krev, tkáně, chirurgické a laboratorní nástroje a prádlo, zásobníky krve a transfúzních zařízení).
Sloučeniny podle současného vynálezu lze použít jako reakční činidla pro výzkum. Sloučeniny podle současného vynálezu lze také použít jako pozitivní kontrolu při stanoveních za použití náhradních buněk (surrogate cell-based assay) nebo při replikačních in vitro nebo in vivo stano40 veních.
Přehled postupu přípravy
Sloučeniny podle současného vynálezu se připraví podle postupu popsaného schématem 1 (kde
CPG znamená ochrannou skupinu karboxylu a APG znamená ochrannou skupinu aminoskupiny):
-27 CZ 302766 B6
Schéma I a
P1-CPG + APG-P2 ► APG-P2-P1-CPG
Zbytky Pl, P2 a P3 lze navázat obecně známými technikami pro vazbu peptidu. Skupiny Pl, P2 a P3 lze společně spojit jakýmkoli způsobem tak, aby výsledné peptidy odpovídaly sloučenině uvedeného vzorce I. Například, skupinu P3 lze navázat ke P2—Pl nebo Pl navázat na P3—P2.
io Peptidy se obvykle prodlouží odštěpením ochranné skupiny z α-amino skupiny N-konce peptidu a následnou vazbou na nechráněnou karboxylovou skupinu aminokyseliny schráněným N-koncem, a to peptidovou vazbou popsaným způsobem. Tato deprotekce a následná vazba se opakuje do vzniku požadované sekvence. Vazebná reakce se provede metodou postupné syntézy (schéma I) nebo kondenzací fragmentů (o dvou nebo několika aminokyselinách) nebo kombinací obou
I5 metod. Peptidy lze připravit syntézou peptídů na pevné fázi podle popsaného postupu Merrifielda uveřejněného v J. Am. Chem., Soc. (1963), 85, 2149 až 2154.
Vazbu dvou aminokyselin, aminokyseliny a peptidu nebo dvou zbytků peptidu lze provést standardními vazebnými postupy - azidovou metodou, metodou směsných anhydridů kyseliny kar20 bonylové a karboxylové (izobutylchlormravenčan), metodou karbodiimidovou (dícyklohexylkarbodiimid, diizopropylkarbodiimíd nebo ve vodě rozpustný karbodiimid), metodou aktivovaného esteru (p-nitrofeny(ester, imidoester kyseliny N-hydroxysukcinové), K-metodou Woodwardovým činidlem, metodou karbonyldiimidazolovou, metodou s činidly fosforu nebo oxidačne-redukčními metodami. Některé uvedené metody (především karbodiimidovou metodu) lze pozitivně ovlivnit přidáním l-bydoxybenzotriazolu. Uvedené vazebné reakce lze provést buď v roztoku (kapalná fáze), nebo na pevné fázi.
Vazebná reakce, která vede ke vzniku amidové vazby, zahrnuje vazbu volného karboxylu jednoho reakčního činidla s volnou amínoskupinou druhého reakčního činidla za přítomnosti vazebného ho činidla. Popisem vazebných činidel se zabývá učebnice chemie peptidu (M. Bodanszky, „Peptide Chemistry“, druhé upravené vydání, Springer-Verlag, Berlin, Germany, (1993)).
Příkladem vhodných vazebných činidel je Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodiimid, l— hydroxy benzotriazol za přítomnosti Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodiimidu nebo N-ethyl-N'-[(3-dimethylamino)-pro35 pyl]-karbodiimidu. Velmi praktická a použitelná jsou komerčně dostupná vazebná činidla (benzotriazol-l-yl—oxy)tris-(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfát, a to buď samostatný, nebo za přítomnosti 1-hydroxybenzotriazolu. Jiným komerčně dostupným činidlem je 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetramethy i uroni um tetrafluorborát. Dalším komerčně dostupným činidlem je O-(7“azabenzotriazol-l—yl)-N,N,N',N'-tetramethyluroniumhexafluorfosfát.
Vazebná reakce se provede v inertním rozpouštědle (dichlormethanu, acetonitrilu nebo dimethylformamidu). Do reakční směsi se v přebytku přidá terciární amin (diizopropylethylamin, N- 28 CZ 302766 B6 methyl morfolin nebo N-methylpyrrolidin) k pH reakční směsi přibližně 8. Teplota reakční směsi je v rozmezí a 50 °C a reakční doba je v rozmezí 15 minut až 24 hodin.
Pokud se peptid připravuje metodou na pevné fázi, pak karboxylová skupina na C-konci je při5 pevněna na nerozpustný nosič (obvykle polystyren). Tento nerozpustný nosič obsahuje skupinu, která vstoupí do reakce s karboxylovou skupinou za vzniku vazby, která je vůči elongaci stabilní, aleje později štěpena, Lze použít: chlor-nebo brom-methylovou pryskyřici, hydroxymethylovou pryskyřici, tritylovou pryskyřici a 2-methoxy-4-aIkoxybenzylalokonolovou pryskyřici.
io Většina těchto pryskyřic sjiž inkorporovaným C-koncem aminokyseliny je na trhu dostupná.
Aminokyseliny lze eventuálně inkorporovat do pevné fáze obecně známými postupy (S. S.
Wang, J. Am. Chem. Soc., (1973), 95, 1328, E. Atherton, R. C. Shepard „Solid-phase peptide synthesis, a practical approach“ IRL Press: Oxford, (1989), 131 až 148.
Dalšími postupy syntézy peptidů se zabývají následující publikace: Stewart a Young „Solid—
Phase Peptide Synthesis“, druhé vydání, Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984),
Gross, Meienhofer, Udenfriend, Eds., „The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology“, sv. 1,2,3,5, a
9, Academie Press, New-York, (1980-1987), Bodansky a spol., „The Practice of Peptide Synthesis“ Springer-Verlag, New-York (1984).
Funkční skupiny jednotlivých aminokyselin vstupujících do vazebné reakce musí být chráněny tak, aby se zabránilo vzniku nežádoucích vazeb. Popisem ochranných skupin se zabývají publikace Green - „Protective Groups in Organic Chemistry“, John Wiley & Sons, New York (1981) a „The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology“, sv. 3, Academie Press, New York (1981).
Karboxylové skupiny vázané na α-uhlíkový atom C-konce peptidu jsou obvykle chráněny estery (CPG), jejichž oddělením vznikne kyselina karboxylová. Vhodnými ochrannými skupinami jsou:
1) alkylestery (methylu, trimethylsilylethylu a t-butylu),
2) aralkylestery (benzylestery a estery substituovaného benzylu) nebo
3) estery, které lze štěpit mírným působením zásadou nebo mírným redukčním činidlem (trichloethylem a fenacylestery).
Aminoskupina vázaná na a uhlíkový atom každé aminokyseliny musí být pro uvedení do vazeb35 né reakce na narůstajícím peptidovém řetězci chráněná ochrannou skupinou aminokyselin (APG).
Lze použít jakoukoli v oboru známou ochrannou skupinu. Příkladem vhodných skupin jsou:
1) acylové skupiny (formyl, trifluoracetyl, ftalyl, a p-toluensulfonyl),
2) aromatické karbamátové skupiny (benzy loxy karbony lová skupina (Cbz nebo Z), substituované benzy loxy karbony lové skupiny a 9-fluorfenyl-methy loxy karbony 1 (Fmoc),
3) alifatické karbamátové skupiny (terc-b uty loxy kar bony I (Boc), ethoxykarbonyl, diizopropylmeth oxy karbony 1 a ally loxy karbony 1),
4) cyklické alkylkarbamátové skupiny (cyklopentyloxykarbonyl a adamantyloxykarbonyl),
5) alkylové skupiny (trifenylmethyl a benzyl),
6) trialky Isily 1 (trimethylsilyl) a
7) thiol obsahující skupiny (fenylthiokarbonyl a dithiasukcinoyl).
Preferovanou ochrannou skupinou aminoskupiny vázané na a uhlíkovém atomu aminokyseliny je buď Boc, nebo Fmoc. Na trhuje pro syntézu peptidů k dispozici mnoho eventuálně chráněných derivátů aminokyselin.
-29C7 302766 B6
Před uvedením do reakce s další aminokyselinou je nutné odštěpení ochranné skupiny z (iaminoskupiny. Pokud je ochrannou skupinou Boc, pak k odštěpení ochranné skupiny lze zvolit čistou kyselinu trifluoroctovou nebo její roztok v dichlormethanu, dále kyselinou chlorovodíkovou v dioxanu nebo v ethylacetátu. Vytvořená amoniová sůl se pak neutralizuje bud1 před vazeb5 nou reakcí, nebo in sítu přidáním zásaditých roztoků (vodných roztoků pufru, terciárních aminů v dichlormethanu, acetonitrilu nebo dimethylformamidu). Pokud se použije skupina Fmoc, pak činidlem volby je piperidin nebo substituovaný piperidin v dimethylformamidu, ale lze také zvolit některý sekundární amin. Odštěpení ochranných skupin se provede při teplotě v rozmezí od 0 °C do teploty místnosti (RT), obvykle 20 až 22 °C.
Každá funkční skupina vedlejšího řetězce aminokyseliny se během přípravy peptidu musí chránit shora uvedenými ochrannými skupinami. Výběr a použití vhodných ochranných skupin těchto funkčních skupin závisí na druhu aminokyseliny a přítomnosti jiných ochranných skupin v peptidu. Výběr ochranných skupin se řídí také tím, že se tyto skupiny nesmí odstranit během deprotekce a vazebných reakcí a-aminoskupin.
Pokud je Boc ochrannou skupinou α-aminoskupiny, pak jako ochrannou skupinu vedlejšího řetězce lze použít následující skupiny: p-toluensul fony lovou (tosy lovou) skupinu lze použít k ochraně aminoskupiny vedlejšího řetězce lysinu a argininu. Acetamidomethy lovou, benzy lovou
2o nebo t-butylsulfonylovou skupinu lze použít k ochraně sulfidové skupiny vedlejšího řetězce cysteinu. Benzyl-(Bn)-étery jsou vhodné k ochraně hydroxyskupiny vedlejšího řetězce šeřinu, threoninu nebo hydroxyprolinu. Benzylester se používají k ochraně karboxyskupiny vedlejšího řetězce asparagové kyseliny a glutamové kyseliny.
Pokud jako ochrannou skupinu <x-aminoskupiny použijeme Fmoc, pak lze vedlejší řetězce aminokyselin chránit vazbou s ochrannými skupinami založenými na terc-butylu. Pro lysin a arginin lze použít terc-buty loxykarbony I (Boc), terc-butyléter pro serin, threonin a hydroxyprolín a tercbutylester pro kyseliny asparagovou a glutamovou. Trifenylmethylovou (tritylovou) skupinu lze použít k ochraně sulfidové skupiny vedlejšího řetězce cysteinu.
Po elongaci peptidu se všechny ochranné skupiny odstraní. Pokud jsme zvolili metodu syntézy peptidu v roztoku, pak se ochranné skupiny odštěpí sloučeninami typickými pro jednotlivé ochranné skupiny.
Pokud se peptidy připravují metodou syntézy na pevné fázi, pak je vytvořený peptid odštěpen z pryskyřice se současným odstraněním ochranných skupin. V případě použití ochranné tercbuty loxykarbony lové skupiny (Boc), pak preferovaným způsobem odštěpení peptidu z pryskyřice je působení bezvodým roztokem fluorovodíku obsahujícího přísady (dimethy Isulfid, anizol, thioanizol nebo p-kresol) při teplotě 0 °C. Odštěpení peptidu lze dosáhnout i jinými kyselými reakč40 nimi činidly (směsí trifluormethansulfonové kyseliny a kyseliny trifluoroctové). Při použití Fmoc ochranných skupin se skupina Fmoc na N-konci peptidu odštěpí činidly shora popsanými. Ostatní ochranné skupiny a peptidy se z pryskyřice odštěpí za použití roztoku kyseliny trifluoroctové a různých přísad (anizolu atd.).
Syntéza ochranné skupiny B
1.1) Pokud B znamená aryl, aralkyl, pak se arylované aminokyseliny připraví jednou z následujících tří metod:
a) Přímé nukleofilní nahrazení fluomitroskupiny arylu:
-30CZ 302766 B6
4-Fluor-3-nitrobenztrifluorid (a) se pri teplotě 80 °C uvede do reakce s L-aminokyselinou (b) za přítomnosti zásady (uhličitanu draselného) za vzniku požadované N-arylaminokyseli5 ny (c).
b) Vazebná reakce katalyzovaná mědí (podle Ma a spol, J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 12459-12467):
io
(d)
Br
COOH (b)
N COOH
H (e)
Brom-4-fIuorbenzen (d) se uvede do reakce s L-aminokyselinou (b) za přítomnosti zásady (uhličitanu draselného) a katalytického množství jodidu měďného pri teplotě 90 °C za vzniku požadované N-arylaminokyseliny (e) nebo
c) Nukleofilní nahrazení trifluoracetátu anilinem:
Do reakce se uvede o-anisidin (f) s trifl uoracetátem (g) za přítomnosti zásady (2,6-lutidinu) při teplotě 90 °C za vzniku benzylesteru (h). Hydrogenací za přítomnosti 10 % katalyzátoru palladia na aktivním uhlí vznikne požadovaná N-aryiaminokyselina (i).
1.2) Pokud B znamená aminothiazolový derivát:
a) Fmoc-N=C=S
H2N-P3-[P2-P,l-COOMe -Fmoc-NH-C(S)-HN-P3-[P2-P1]-COOMe
R1
b) DBU, DMF
O ró—éf A.
N''^'*NH-C(S)*HN-P3-[P2-P1]-COOMe
R2
-3I CZ 302766 B6
a) Fmoc-thiokyanát (připravený podle Kearney a spol., 1998, J. Org. Chem, 63, 196) se uvede do reakce s chráněným zbytkem P3 nebo celým peptidem nebo peptidového segmentu za vzniku thiomočoviny.
s
b) Derivát thiomočoviny je uveden do reakce s vhodným bromketonem za vzniku odpovídajícího thiazolového derivátu.
1.3) Pokud Bje R4-C(O)-, R4-S(O)2: io
Chráněný P3 nebo celý peptid nebo peptidový segment se naváže na vhodný acylchlorid nebo sulfbnylehlorid, které jsou buď na trhu dostupné, nebo je jejích syntéza v oboru známá.
1.4) Pokud Bje K,OC(O)-:
Chráněný P3, celý peptid nebo peptidový segment se naváže na vhodný chlormravenčan, který je bud' na trhu dostupný, nebo je jeho syntéza v oboru známá. Pro Boc-deriváty se používá (Boc)2O.
Například:
+ H2N-P3-[P2-P1]-COOEt
Λ XHN-P3-[P2-P1l-COOEt
a) Na cyklobutanol se působí fosgenem za vzniku odpovídajícího chlormravenčanu.
b) Na chlormravenčan se působí požadovaným NH2-tripeptidem za přítomnosti zásady (triethylaminu) za vzniku cyklobutylkarbamátu.
1.5) Pokud Bje R4-N (R5)-C(O)-, nebo R4-NH-C(S)-, pak se na chráněný P3 nebo celý peptid nebo peptidový segment působí fosgenem, a následně 30 aminem podle SynLett., únor 1995; (2); 142 až 144.
2. Syntéza P2 zbytků
2.1 Syntéza prekurzorů:
A) Syntéza haloarylmethanových derivátů
Příprava halomethyl-8-chinolinu lid se provede podle postupu K. N. Campbella a spol., J. Amer. Chem. Soc, (1946), 68, 1844.
Schéma 11
Kyselina 8—chinolinkarboxylová Iia se přemění na odpovídající alkohol líc redukcí odpovídajícího acyl-halogenídu lib redukčním Činidlem (lithiumaluminiumhydridem). Působením odpovídající halogen vodí kovou kyselinou vznikne požadovaný derivát lid. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladě 1.
ίο B) Syntéza arylalkoholových derivátů:
2-feny 1—4-hydroxychinolinové deriváty IIIc se připraví podle Giardina a spol.. (J. Med. Chem, (1997),40, 1794 až 1807).
Schéma III
O O
R22 & R2ib = alkyl, hydroxyskupina, merkaptoskupina, atom halogenu, aminoskupina, nitroskupina.
Kondenzací benzoylacetamidu lila s vhodným anilinem 111b vznikne imin, který se cyklizuje působením kyseliny póly fosforečné za vzniku odpovídajícího 2-feny l—4-hydroxychinol inu IIIc.
Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladě 2.
Jiným způsobem přípravy je postup popsaný v příkladě 3: Benzylester lila se kondenzuje odpovídajícím anilinem IIIb za přítomnosti kyseliny nebo iminu získaného cyklizaci zahříváním k teplotě 260 až 280 °C za vzniku odpovídajícího 2-fenyl-4-hydroxychinolinu IIIc. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladě 3 (sloučenina 3e).
2.2. Syntéza P2:
A) Syntéza 4—substÍtuovaného prolinu, kde R2 je s uhlíkovým cyklem spojeno atomem uhlíku 35 podle znázorněného prostorového uspořádání:
Boc
-33 CZ 302766 B6
Sloučenina se připraví podle schématu IV a podle postupů J. Ezquerra a spol. (Tetrahedron, 1993, 38, 8665-8678) a C. Pedregal a spol. (Tetrahedron Lett., 1994, 35, 2053 až 2056).
Schéma IV
io Boc-pyroglutamová kyselina je chráněna za vzniku jejího benzylesteru. Působením silnou zásadou (diizopropylamidem lithným), a následným přidáním alkylačního činidla (Br-R20 nebo IR?,)) se po redukcí amidem a odštěpením esterové ochranné skupiny vytvoří požadovaná sloučenina IVe.
B) Syntéza 0-substituovaného-4-(R)-hydroxyprolinu:
se provede různými způsoby následně popsanými:
1) Pokud je R20 aryl, heterocyklus, aralkyl nebo (nižší alkyl)-heterocyklus, pak je postup přípravy popsán Ε. M. Smíthem a spol. (J. Med. Chem. (1988), 31, 875 až 885). Na komerčně dostupný Boc—4—(R)hydroxy prolili se působí zásadou (hydridem sodným nebo terc-buty (oxidem draselným) a vytvořený alkoxid se uvede do reakce s halogen-R20 (Br-R2t), I-R20, atd..) za vzniku požadovaných sloučenin. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladech 4,5 a 7.
2) Pokud R20 je aryl nebo heterocyklus, pak lze sloučeniny také připravit Mitsunobuovou reakcí (Mitsunobu 1981, Synthesis. leden, 1 až 28; Ráno a spol., 1995, Tet. Lett. 36 (22), 3779 až 3792; Krchňák a spoi., 1995, Tet. Lett. 36 (5), 62193 až 6196; Richter a spol., (1994), Tet. Lett.
35 (27), 4705 až 4706). Na komerčně dostupný methylester Boc-4(S)-hydroxyprolinu se působí vhodným arylalkoholem nebo thiolem za přítomnosti trifenylfosfinu a diethylazodikarboxylátu (DEAD). Vytvořený ester se hydrolyzuje na kyselinu. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladech 6 a 8.
-34 CZ 302766 B6
Schéma V
Mitsunobuvu reakci lze provést na pevné fázi (Schéma V). Na desku s 96 prohlubněmi pro Model 396 syntetizátoru (advanced ChemTech) vybavené alikvóty pryskyřici vázající sloučeniny Va se přidají arylalkoholy nebo thioly a vhodná reakční činidla. Po inkubaci, se produkt Vb vázaný na pryskyřici promyje, suší a odštěpí z pryskyřice.
io Reakcí podle Suzuki (Miyaura a spol., 1981, Synth. Comm. 11,513, Sáto a spol., 1989, Chem. Lett, 1405, Watanabe a spol., 1992, Synlett, 207, Takayuki a spol., 1993, J. Org. Chem. 58,2201, Frenette a spol., 1994, Tet. Lett. 35 (49), 9177 až 9180, Guiles a spol., (1996), J. Org. Chem. 61, 5169 až 5171) lze k arylovému substituentu vázat další funkční skupiny.
3. Syntéza skupin Pl
3.1 Syntéza 4 možných izomerů 2-substituovaných I-aminocyklopropylkarboxylových kyselin Syntéza se provede podle schématu VI.
-35Schéma VI
PO XT CO,P
Vta haío halo
Vlb or
O
-XS-0 o
Vlc
H1
HO2Cz CO2P Vle
Ri je „syn' k esteru
o
CO,P
RO H 2 Vlf
R, je „syn“ k esteru
O
R1
a)
b) nebo
P*OOC
Vli
OR
Rt je „anti* k esteru P’
-36PO2CZ CO2P vid
R1
P’OOC t COOP Vlg
I e>
P*OOC COOH Vlh
a) Di-chráněný malonát Via a 1,2-dihaloalkan VIb nebo cyklický sulfát Vc (K. Burgess a Chun-Yen KE, Synthesis, 1996, 1463 až 1467) se uvedou do reakce při zásaditém pH za vzniku diesteru Vid.
b) Místně selektivní hydrolýzou méně blokovaného esteru vznikne kyselina Vle.
c) Reakcí podle Curtise se kyselina Vle uspořádá za vzniku racemické směsi derivátů 1aminocyklopropylkarboxylové kyseliny Vlf, kde R1 je syn vzhledem ke karboxylové skupině. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladě 9.
d) e) Alternativním způsobem přípravy je vytvoření selektivního esteru z kyseliny Vle za použití vhodného halogenidu (P*C1) nebo alkoholu (P*OH) za vzniku diesteru Vlg, kde P* ester se io odštěpí selektivní hydrolýzou. Hydrolýzou P esteru vznikne kyselina Vlh.
f) Uspořádáním podle Curtiuse kyseliny Vlh se vytvoří racemická směs derivátů 1-aminocyklopropylkarboxylové kyseliny Vii, kde R1 je v anti ke karboxylové skupině. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladě 14.
Alternativní syntéza přípravy derivátů Vlf, kde Ri je vinyl syn ke karboxylové skupině, je popsána dále.
Schéma VII
Ph N CO2P
Vila
R = H, alkyl, aryl
Na komerčně dostupný nebo snadno vyrobitelný imin Vila se za přítomnosti zásady působí 1,4dihalobutenem Vllb. Po hydrolýze vytvořeného iminu Vile vznikne Vild s alylovým substituen25 tem v poloze syn ke karboxylové skupině. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladech 15 a 19.
Rozdělení shora uvedených směsí enantiomeru s asymetrickým atomem uhlíku v poloze 1 (Vle a Vild) lze provést:
1) Enzymatickou separací (příklady 13, 17 a 20),
2) krystalizaci s chirální kyselinou (příklad 18) nebo
3) chemickou derivatizaci (příklad 10).
Po rozdělení lze absolutní stereochemii izomerů určit postupem podle příkladu 11.
Rozdělení a následné určení absolutní stereochemie izomerů, kde substituent na atomu uhlíku v poloze 2 je v poloze anti ke karboxylové skupině (Vii), lze provést způsobem uvedeným pro směsi enantiomerů na asymetrickém uhlíku v poloze 1.
3.2 Syntéza 1-aminocyklobutylkarboxylové kyseliny
Syntéza 1,1—am i nocyklobutan karboxyl ové kyseliny se provede podle Kavin Douglas; Ramaligam Kondareddiar; Woodared Ronald, Synth. Commun. (1985), 15 (4), 267 až 72.
-37CZ 302766 B6
Schéma Vlil
Vlila V1,lb Vlllc VIlicf hydrochlorid
X - halogen
Na sloučeninu Vlila se působí zásadou za přítomnosti VHIb za vzniku odpovídajícího cykfobutylového derivátu Vlllc. Hydrolýzou izokyanátových a esterových skupin Vlllc za přítomnosti kyseliny (HCl) vznikne hydrochlorid 1-aminocyklobutylkarboxylové kyseliny Vllld. Karboxylová kyselina se následně esterifikuje za přítomnosti methanolu v chlorovodíku. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladě 21.
3.3 Syntéza 2-substituované 1-aminoeyklobutylkarboxylové kyseliny
Schéma IX
IXa
c) 1. zásada
2. hydrolýza
3. neutralizace
X
a) Chráněný glycinesterový derivát (imin IXa) se alkyluje homoalylickým elektrofilem IXb za použití vhodné zásady (hydrid, hydroxid nebo alkoxid kovu). Vhodnými odštěpítelnými sku20 pinami v IXb jsou halogeny (X - atom chlóru, brómu nebo jódu) nebo sulfonátestery (mesylát tosylát nebo trifluoracetát). Funkční skupina alylického alkoholu v IXb je chráněna hydroxylovými ochrannými skupinami (acetát, silyl, acetaly).
b) Druhým krokem přípravy je odstranění ochranné skupiny z hydroxyiu monoalkylovaného derivátu IXc a přeměna na vhodnou elektrofilní funkční skupinu X (podle shora popsaného postupu pro sloučeninu IXb).
c) Cyklizace IXd na cyklobutanový derivát IXe se provede působením zásadou (hydridy, alkoxidy kovu), a následně hydrolýzou za použití vodného roztoku minerální kyseliny a neutralizací mírnou zásadou. Následně lze syn a anti-\zomery IXe oddělit rychlou chromatografii.
d) Eventuálně se dvojná vazba v IXe hydrogenuje za standardních podmínek za vzniku od po viso dajícího nasyceného derivátu IXf.
Další podstatou vynálezu je postup přípravy peptidového analoga obecného vzorce I, kde Pl je substituovaný zbytek aminocyklopropylkarboxylové kyseliny, který má tyto části:
• vazebná reakce APG-P3-P2 nebo APG-P2 · s Pl meziproduktem vzorce:
-38CZ 302766 B6
, kde R| je Ci ňalkyl, cykloalkyl nebo C2 6alkenyl, vždy eventuálně substituované halogenem, CPG je ochranná skupina karboxylové skupiny aminokyseliny a APG znamená ochrannou skupinu aminoskupiny a P3 a P2jsou shora popsány.
Podstata vynálezu se týká postupu přípravy: 1) peptidového analoga inhibitoru serinové proteázy nebo 2) peptidového analoga inhibitoru HCV NS3 proteázy, který zahrnuje:
• vazebnou reakci (vhodně chráněné) aminokyseliny, peptidů 1 nebo peptidového fragmentu io · s Pl meziproduktem vzorce:
, kde R| je C|..6alkyl, C3 7cykloalkyl nebo CJ^alkenvl, vždy eventuálně substituovaný halo15 genem a CPG je ochranná skupina karboxyskupiny.
Podstata vynálezu se týká postupu přípravy: 1) peptidového analoga inhibitoru proteázy nebo 2) peptidového analoga inhibitoru serinové proteázy, který zahrnuje:
• vazebnou reakci (vhodně chráněné) aminokyseliny, peptidů nebo peptidového fragmentu 20 · s meziproduktem vzorce:
, kde CPG je ochranná skupina karboxylu. Podstatou vynálezu je použití Pl meziproduktu vzorce:
-3930 , kde Ri je Ci„alkyL cykloalkyl nebo C^alkenyl, vždy eventuálně substituované halogenem, CPG znamená ochrannou skupinu karboxyskupiny
C/, 302766 B6 pro přípravu l) peptidového anaíoga inhibitoru serinové proteázy nebo 2) peptidového analoga inhibitoru HCV NS3 proteázy.
Podstatou vynálezu je použití Pl meziproduktu vzorce:
, kde CPG znamená ochrannou skupinu karboxyskupiny, pro přípravu I) peptidového analo10 ga inhibitoru proteázy nebo 2) peptidového analoga inhibitoru serinové proteázy.
Podstatou vynálezu je použití Pl meziproduktu vzorce:
, kde R] je Ct 6alkyl, cykloalkyl nebo C2 6alkenyl, vždy eventuálně substituované halogenem, CPG znamená ochrannou skupinu karboxyskupiny pro přípravu sloučeniny obecného vzorce I.
Podstata současného vynálezu se týká použití prolinového analoga vzorce:
R
21B kde R2ía je Ci <,alkyl, Ci 6alkoxy, nižší thioalkyl, halogen, aminoskupina eventuálně monosubstituovaná C^alkylem, dále C6, Cio aryl, C7-16 aralkyl nebo heterocyklus, shora uvedený aryl, aralkyl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný R22, kde R22 je C| ή alky!, Ci_óalkoxy, amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina, aminoskupina eventuálně mono- nebo di-substituovaná C|ft alkylem nebo Het, a kde R2ib je C^alkyl, C, ňalkoxy, aminoskupina, di—(nižší alkylý-aminoskupina, (nižší alkyl)-amid, nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormethylová nebo karboxylová skupina v přípravě: l) peptidového analoga inhibitoru serinové proteázy nebo
2) peptidového analoga inhibitoru HCB NS3 proteázy nebo
3) peptidového analoga shora uvedeného obecného vzorce I.
-40CZ 302766 B6
Příklady provedení vynálezu
Sloučeniny podle současného vynálezu jsou podrobněji popsány následnými nelimitujícími pří5 klady.
Teplota je uvedena ve stupních Celsia. Roztoky jsou vyjádřeny ve hmotnostně objemových procentech, poměry roztoků jsou vyjádřeny ve vztahu objemů, pokud není uvedeno jinak. Hodnoty spektra NMR se odečítají na spektrometru Bruker 400 MHz, hodnoty chemického posunu se io udávají v částicích na milion (ppm). Rychlá chromatografíe se provede na silikagelu (SiO?) podle
Stillovy techniky rychlé chromatografíe (W. C. Still a spol., J. Org. Chem., 1978, 43, 2923).
| Použité zkratky: | |
| Bn | benzyl |
| Boc | terc-butyloxykarbonyl {Me3COC(O)| |
| BSA | hovězí sérový albumin |
| CHAPS | 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylamonio]-l-propansulfonát |
| DBU | 1,8-diazabicyklo-[5,4,0]-undec-7-en |
| CH2C12 = DCM | methylenchlorid |
| DEAD | d iethy 1 azod i karboxy 1 át |
| DIAD | diizopropyfazodikarboxylát |
| DIEA | d i izopropy lethy lam in |
| DIPEA | diizopropylethylamin |
| DMAP | dimethy laminopyridin |
| DCC | 1,3-dicyklohexylkarbodÍÍmid |
| DME | 1,2—dimethyloxyethan |
| DMF | d i methy Iformam id |
| DMSO | dimethylsulfoxid |
| DTT | dithiothreitol nebo threo-l,4-dimerkapto~2,3-butandiol |
| DPPA | difenylfosforylazid |
| EDTA | ethylendiamintetraoctová kyselina |
| Et | ethyl |
| EtOH | ethanol |
| EtOAc | ethylacetát |
| Et2O | d iethy 1 éter |
| HATU | [0-7-azabenzotriazoI-l-yl)-l,l,3,3~tetramethyluroniumhexafluorfosfát] |
| HPLC | kapalinová chromatografíe s vysokou rozlišovací schopností |
| MS | hmotnostní spektrometrie |
| MALDI-TOF | hmotnostní spektrometrie MALDI-TOF |
| FAB | bombardování rychlými atomy |
| LAH | lithiumaluminiumhydrid |
| Me | methyl |
| MeOH | methanol |
| MES | (2-{N~morfolino}-ethansuIfonová kyselina) |
| NaHMDS | bis-(trimethylsilyl)-amid sodný |
| NMM | N-methyl morfolin |
| NMP | N-methy lpyrol idon |
-41 CZ 302766 B6
Pr
Succ
PNA
TBAF
TBTLJ TCEP TFA THF TIS io TLC TMSE Tris/HCI propyl
3- karboxypropanoyl
4- nitroťenylamino- nebo p-nítroanilin tetra-n-butylammoniumfluorid
2-( 1 H-benzotriazol-l-yl)-l,L3,3-tetramethyluroniumtetralluorborát tri s-(2-karboxyethyl)-ťosťinhydroch lorid kyselina trifluoroctová tetrahydrofuran triizopropylsilan chromatografie na tenké vrstvě trimethylsily lethy I tris-(hydroxymethyl)-aminomethanhydrochlorid.
Stavební jednotky P2
Příklad 1
Syntéza brommethyl-8-chinolinu (1):
Do 2,5 g (14,4 mmol) komerčně dostupné 8-chinolinkarboxylové kyseliny se přidá 10 ml (144 mmol) čistého thionylchloridu. Tato směs se 1 hodinu zahřívá na teplotu 80 °C, a pak se přebytek thionylchloridu odstraní destilací za sníženého tlaku. Do vytvořené nahnědlé pevné látky se přidá 15 ml absolutního ethanolu, směs se 1 hodinu zahřívá na teplotu 80 °C, a pak se zahustí ve vakuu. Vytvořený zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organický podíl se suší nad síranem horečnatým, filtruje se a zahustí za vzniku 2,8 g hnědého oleje. Tento materiál (přibližně 14,4 mmol) se po kapkách přidá během io 35 minut do suspenze 0,76 g (20,2 mmol) lithium-aluminiumhydridu v diethyléteru, která se zchladí na teplotu -60 °C. Reakční směs se během 1,5 hodiny pomalu zahřeje -35 °C. Reakce se ukončí pomalým přidáním během 30 minut vodného roztoku síranu horečnatého (MgSO4 . I01-LO), a pak vodného roztoku tetrahydrofuranu. Směs se rozdělí mezi diethyléter a 10% vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za vzniku 2,31 g (výtěžek 80 %) nažloutlé pevné látky odpovídajícího alkoholu. Ve 20 ml 30% roztoku kyseliny octové v bromovodíku (Aldrich) se rozpustí 2,3 g (11,44 mmol) tohoto alkoholu a reakční směs se 2,5 hodiny zahřívá na teplotu 70 °C. Směs se zahustí ve vakuu do sucha, rozdělí se mezi 100 ml ethylacetátu a nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, produkt se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za vzniku 2,54g požado40 váné sloučeniny 1 jako nahnědlé pevné látky s výtěžkem 100 %.
Příklad 2
Syntéza 2-fenyl—t-hydroxychinolinu (2):
-42 CZ 302766 B6
V uzavřené trubici se na teplotu 85 °C 2 hodiny zahřívá roztok 6,00 g (31,2 mmol) komerčně dostupného ethyl benzy lacetátu v 75 ml 30% roztoku hydroxidu amonného. Pevný produkt získa5 ný zchlazením reakční směsi se filtruje a 2 hodiny zahřívá pod refluxem ve vodě. Roztok se třikrát extrahuje methy lench lor idem. Organické podíly se sloučí, suší se nad síranem horečnatým, filtrují se a zahustí. Vytvořený žlutý zbytek se čistí rychlou chromatografií na koloně silikagelu při eluci směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 3 : 7 za vzniku 1,60 g odpovídajícího amidu jako bílé pevné látky s výtěžkem 31%.
io
Směs 250 mg (1,53 mmol) tohoto amidu, 143 mg (1,53 mmol) anilinu a 10 mg (0,08 mmol) anilinhydrochloridu v 10 ml toluenu se 16 hodin zahřívá pod refluxem za použití Dean-Starkova zařízení. Roztok se zahustí za vzniku hnědého oleje, který se smísí se 2 g fosforečné kyseliny a směs se 20 minut zahřívá na teplotu 135 °C. Reakční směs se vlije do vody a přivede se k pH 8 přidáním 5M roztoku hydroxidu sodného. Vodná suspenze se dvakrát extrahuje ethylacetátem. Organické podíly se sloučí, promyjí se nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým, filtrují se a zahustí. Vytvořený zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí rychlou chromatografií při eluci 3% roztokem methanolu v ethylacetátu za vzniku 67 mg (20% výtěžek) 2—fenyl-4-hydroxychinolinu (2).
1H NMR (DMSO-dň): δ 8,11 (d, J = 7 Hz, 1H), 7,86 - 7,83 (m, 2H), 7,77 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,68 (dd, J - 8,7 Hz, 1H), 7,61 - 7,58 (m, 3H), 7,35 (dd, J - 8,7 Hz, 1H), 6,34 (s, IH).
Příklad 3
Syntéza 4—hydroxy—2—fenyl—7-methoxy chinolinu (3)
4—hydroxy-2-fenyI-7-methoxych inol in (e):
Roztok 100,0 g (0,52 mol) ethyl benzy lacetátu (b), 128,1 g (1,04 mol) m-anisidinu (a) a 5,2 ml
4N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu v 1,0 1 toluenu se 6,25 hodin zahřívá pod refluxem za použití Dean-Starkova zařízení. Zchlazený toluenový roztok se postupné promyje dva-43 CZ 302766 B6 krát 300 ml 10% vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové, dvakrát 300 ml IN roztoku hydroxidu sodného, jedenkrát 300 ml vody a jedenkrát 150 ml nasyceného roztoku chloridu sodného. Toluenový podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za sníženého tlaku za vzniku I44,6g smčsi esteru c a amidu d (45% / 38% surový výtěžek) v poměru 1,2 : 1,0 jako tmavě hnědého oleje. Surový olej se 80 minut zahřívá na teplotu 280 °C, přičemž se destilací odstraní ethanol. Zchlazením vytvořená tmavá pevná látka se rozetře s 200 ml methylenchloridu. Suspenze se filtruje a vytvořená pevná látka se promyje methylenchloridem za vzniku 22,6g (17 % z produktu a) produktu e jako béžové pevné látky.
'H NMR (DMSO-dň): δ 8,00 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,81 - 7,82 (m, 2H), 7,57 - 7,59 (m, 3H), 7,20 io (d, J - 2,2 Hz, I H), 6,94 (dd, J = 9,0, 2,2 Hz, 1 H), 6,26 (s, 1H), 3,87 (s, 3H).
4-chloro-2-feny 1-7 -methoxychinofin (3)
Suspenze 8,31 g (33,1 mmol) produktu e v 90 ml chloridu fosfory lu (POCfi) se 2ě hodiny zahřívá i? pod reťluxem. Zahříváním vznikne čirý roztok, který se zahustí za sníženého tlaku. Vytvořený zbytek se rozdělí mezi IN roztok hydroxidu sodného (exotermní reakce, přidá se ION roztok hydroxidu sodného k vysoké hodnotě pH) a 500 ml ethylacetátu. Organický podíl se promyje
100 ml vody a 100 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za sníženého tlaku za vzniku 8,60 g (96%) 4-chloro-2-fenyl-7-methoxy2o chinolinu (3) jako světle žluté pevné látky.
!H NMR (DMSO-dň): δ 8,28 - 8,30 (m, 2H), 8,20 (s, IH), 8,10 (d, J = 9,1 Hz, IH), 7,54-7,58 (m, 3H), 7,52 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 7,38 (dd, J = 9,1, 2,5 Hz, IH), 3,98 (s, 3H).
Tato reakce se opakuje třikrát s 96 až 98% výtěžkem, kterýje významně vyšší než 68% výtěžek podle J. Med. Chem. 1997,40, 1794.
Příklad 4
Syntéza Boc^4(R)-(naftalen-- l-yt-methoxy)prolinu (4):
Ve 100 ml tetrahydrofuranu se rozpustí 5,00 g (21,6 mmol) komerčně dostupného Boc-4(R)~ hydroxyprolinu a roztok se zchladí na teplotu 0 °C. Po částech se během 10 minut přidá 1,85 g (45,4 mmol) 60% disperze hydridu sodného voleji a suspenze se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti. Následně se přidá 8,00 g (36,2 mmol) l-{brommethyl)naftalenu, jehož příprava je popsána v E. A. Dixon a spol. Can. J. Chem, (1981), 59,2629 až 2641. Směs se 18 hodin zahřívá na teplotu refluxu, vlije se do 300 ml vody a promyje se hexanem. Vodný podíl se okyselí přidá-to ním 10% vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové a dvakrát se extrahuje se ethylacetátem. Organické podíly se sloučí a promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým, filtrují se a zahustí. Vytvořený zbytek se čistí rychlou chromatografii při eluci směsí hexanu, ethylacetátu a kyseliny octové v poměru 49:49:2 za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako 4,51 g (56% výtěžek) bezbarvého oleje.
'H NMR (DMSO-d6): zjistila přítomnost dvou rotamerů: δ 8,05 (m, 1 H), 7,94 (m, IH), 7,29 (d,
J = 14 Hz, IH), 7,55 - 7,45 (m, 4H), 4,96 (m, 2H), 4,26 (br s, IH), 4,12 (dd, J = 8 Hz, IH), 3,54 3,42 (m,2H), 2,45-2,34(m, IH), 2,07- 1,98 (m, IH), 1,36 (s, (3/9) 9H), 1,34 (s, (6/9) 9H).
-44CZ 302766 B6
Příklad 5
Syntéza Boc^t(RH8-chinolínmethoxy)-prolinu (5):
Do suspenze 1,4 g (34 mmol) 60% disperze hydridu sodného v oleji ve 100 ml tetrahydrofuranu se přidá 1,96 g (8,5 mmol) Boc-4(R>-hydroxyprolinu v 20 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Tato ío reakční směs se nejprve 30 minut míchá, a pak se přidá roztok 2,54g (11,44 mol) brommethyl-8chinolinu (příklad 1) v 30 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se 5 hodin zahřívá na teplotu 70 °C, přebytek hydridu sodného se opatrně odstraní vodným roztokem tetrahydrofuranu. Reakční směs se zahustí ve vakuu a vytvořený materiál se rozpustí v ethylacetátu a vodě. Zásaditý vodný podíl se oddělí a okyselí k pH přibližně 5 přidáním 10% vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové, a následně se extrahuje 150 ml ethylacetátu. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za vzniku hnědého oleje. Čištění rychlou chromatografií při elucí 10% roztokem methanolu v chloroformu se získá 2,73 g (86%) požadované sloučeniny (5) jako světle žluté pevné látky.
HPLC (97,5%), ]H NMR (DMSO—d6) prokázala rotamery v poměru 6:4: δ 12- 11,4 (bs, IH), 8,92 (dvakrát d, J - 4,14 a 4,14 Hz, IH), 8,38 (dvakrát d, J = 8,27 a 8,27 Hz, IH), 7,91 (d, J = 7,94 Hz, 1 H), 7,77 (d, J = 7,0 Hz, IH), 7,63 - 7,54 (m, 2H), 5,14 (dvakrát s, 2H), 4,32 - 4,29 (m, IH), 4,14 - 4,07 (m, 1H), 3,523,44 (m, 2H), 2,43 -2,27 (m, IH), 2,13-2,04 (m, IH), 1,36 a 1,34 (dvakrát s, 9H).
Příklad 6
Příprava Boc^4(R)-(7-chlorchinolin-4-oxojprolinu (6):
Směs 500 mg (2,04 mmol) komerčně dostupného methylesteru Boc4(S)-hydroxyprolinu a 440 mg (2,45 mmol) 7-chlor~4-hydroxychinolinu se umístí do 10 ml bezvodého tetrahydrofuran u při teplotě 0 °C. Nejprve se přidá 641 mg (2,95 mmol) trifenylfosfinu, a následně se pomalu přidá 426 mg (2,45 mmol) diizopropylazodikarboxylátu DIAD. Směs se 20 hodin míchá při teplotě místnosti. Reakční směs se pak zahustí, zpracuje ethylacetátem a třikrát se extrahuje
IN roztokem kyseliny chlorovodíkové. Vodný podíl se převede na zásadité pH přidáním uhliči-45 CZ 302766 B6 tanu sodného a dvakrát se extrahuje ethylacetátem. Organické podíly se sloučí, suší se nad síranem hořečnatým, filtrují se a zahustí za vzniku zbytku jako žlutého oleje, který se čistí rychlou chromatografií za vzniku 498 mg methylesteru výsledné sloučeniny 6 jako bílé pevné látky s 58% výtěžkem.
Za použití 1,7 ml (1,7 mmol) 1 M vodného roztoku hydroxidu sodného ve 4 ml methanolu se při teplotě 0 °C 3 hodiny hydrolyzuje 400 mg (0,986 mmol) shora vyrobeného methylesteru sloučeniny 6. Roztok se zahustí k odstranění methanolu a neutralizuje se přidáním 1M vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové. Suspenze se zahustí do sucha a zpracuje ve 20 ml methanolu, soli se io odstraní filtrací a filtrát se zahustí za vzniku 387 mg (kvantitativní výtěžek) požadované sloučeniny 6 jako bílé pevné látky.
'H NMR (DMSO-dr,) (směs rotamerů v poměru 1:1): δ 8,74 (d, J = 5 Hz, IH), 8,13 — 8,09 (m, 1H), (s, 1H), 7,58 (d, J = 9 Hz, I H), 7,02 (d, J - 5 Hz, 1H), 5,26 - 5,20 (m, 1 H), 4,10 - 4,01 (m, IH), 3,81 - 3,72 (m, IH), 3,59 (dd, J ’ 12,10 Hz, IH), 2,41 - 2,31 (m, 2H), 1,34 a 1,31 (s, 15 9H).
Příklad 7
2o Syntéza Boc^(R)—(2-feny l-7-methoxychino lin—4-o\o)pro linu (7):
Boc—4(R)-[(7-methoxy-2-fenyl—4-chinol iny l)oxy]—L-prolin (7):
Do roztoku 6,73 g (29,1 mmol) komerčně dostupného 4—(S)-hydroxyprolinu v 83 ml DMSO se při teplotě 25 °C po malých částech během 15 minut přidá 8,16 g (72,7 mmol) terc-butoxidu draselného. Směs se míchá 1,5 hodiny při teplotě 25 °C. Do vytvořené reakční směsi se během 15 minut přidá ve čtyřech částech 8,61 g (32,0 mmol) chlor-2-ťenyl-7-methoxychinolinu (3).
Reakční směs se 19 hodin míchá při teplotě 25 °C. Vytvořená suspenze se vlije do 650 ml vody a směs se třikrát promyje 150 ml diethyléteru k odstranění přebytku chlorchinolinu (účinnější byl následně shledán ethylacetát). Vodný podíl se okyselí k pH 4 až 5 přidáním IN vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové (vypočteno 38 ml 1,5 ekv., požadováno 43,6 ml). Bílá pevná látka jako sraženina se oddělí filtrací. Vlhká pevná látka se suší za sníženého tlaku nad oxidem fosforečným za vzniku 12,6 g (výtěžek 91%, obsahuje 2,3 % hmotnostních DMSO) prolínového derivátu (7) jako béžové pevné látky.
'H NMR (DMSO-d6) (směs rotamerů v poměru 2:1): δ 8,27 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 8,00, 7,98 (2d, J - Hz, 1H), 7,48 - 7,56 (m, 3H), 7,45, 7,43 (2s, 1H), 7,39 (d, J “ 2,5 Hz, 1 H), 7,17 (dd, J “ 9,2, 2,5 Hz. IH), 5,53 - 5,59 (m, IH), 4.34-4,41 (m, 1 H), 3,93 (s, 3H), 3,76 (široké s, 2H), 2,63 40 2,73 (m, 1H), 2,32 - 2,43 (m, 1 Η), 1,36, 1,33 (2s, 9H).
-46CZ 302766 B6
Příklad 8
Syntéza Boc-4(R)-(2-fenyl-6-nitrochínolin-4-oxo)prolinu (8)
Do míchaného roztoku 1,28 g (4,88 mmol) trifenylfosfinu v 15 ml tetrahydrofuranu se pri teplotě 0 °C po kapkách přidá 0,77 ml (4,89 mmol) diethy lazod i karboxy látu. Po 30 minutách míchání v atmosféře dusíku se přidá roztok 1,00 g (4,08 mmol) methylesteru Boc—4(S)-hydroxy pro linu v ml tetrahydrofuranu, a následně suspenze 1,30 g (4,88 mmol) komerčně dostupného 6-nitro—2fctiyl—4—chinolinolu v 10 ml stejného rozpouštědla. Červená směs se pri teplotě 0 °C míchá 15 minut a přes noc při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpařuje ve vakuu.
Olej se zředí ethylacetátem a promyje se dvakrát hydrogenuhličitanem sodným, jedenkrát vodou a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a odpařuje ve vakuu. Vytvořený zbytek se čistí ehromatografií na silikagelu při eluci směsí hexanů a ethylacetátu 70:30 za vzniku 1,70 g (výtěžek 85 %) požadovaného methylesteru jako světle žluté pevné látky.
‘HNMR (CDC13) rotamery = 3 : 7: δ 9,03 (d, J = 2,5 Hz, IH), 8,46 (dd, J = 9,2,5 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 9 Hz, IH), 8,14-8,07 (m, 2H), 7,59- 7,50 (m, 3H), 7,19 (s, IH), 5,39- 5,30 (m, IH), 4,67 (t, J = 8 Hz, 0,3 H), 4,61 (t, J = 8 Hz, 0,7H), 4,07 - 4,01 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 2,89 - 2,73 (m, 1H), 2,55-2,47 (m, IH), 1,49 (s, 2,7 H), 1,45 (s,6,3H).
Do roztoku 503 mg (1,02 mmol) methylesteru ve směsi 10 ml tetrahydrofuranu a 4 ml vody se přidá 85 mg (2,05 mmol) monohydrátu hydroxidu lithného. Do vzniku homogenního roztoku se přidají 2 ml methanolu. Po 30 minutách vznikne bílá sraženina. Vytvořená suspenze se dalších hodin míchá při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí 10% vodným roztokem citrónové kyseliny a extrahuje se ethylacetátem. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a odpařuje ve vakuu za vzniku 416 mg (85 %) požadované kyseliny (8).
'H NMR (DMSO—d6): δ 8,92 - 8,87 (m, IH), 8,47 (dd, J = 9,3 Hz, IH), 8,38-8,32 (m, 2H), 8,19 (d, J - 9 Hz, IH), 7,77 (s, IH), 7,62-7,55 (m, 3H), 5,73 - 5,66 (m, IH), 4,41 (t, J = 8 Hz, IH), 3,89 - 3,76 (m, 2H), 2,83 -2,72 (m, IH), 2,47 -2,35 (m, IH), 1,38 (s, 9H).
Stavební jednotky Pl
Příklad 9
Syntéza směsi (IR, 2R) / (IS, 2S) l-amino-2-ethylcyklopropylkarboxylové kyseliny
-47CZ 302766 B6
3utO2C^ CO2tBu
9a
b)6uOK, H2O
.............. II· fllP·
Et2O
0“C 3ž teplota mistnosri
d) 1.0 M TBAF —;THF teplota místnosti až reflux
H2N CO2tBu 9f etyl syn k esteru smés (RR/SR),
a) Do suspenze 21,0 g (92,19 mmol) benzyltriethylamoniurnchloridu v 50% vodném roztoku 92,4 g hydroxidu sodného v 185 ml vody se postupně přidá 20,0 g (92,47 mmol) diterc-butyl5 malonátu a 30,0 g (138,93 mmol) 1,2-dibrombutanu. Reakční směs se energicky míchá pres noc při teplotě místnosti, pak se přidá směs ledu a vody. Surový produkt se třikrát extrahuje methylenchloridem, a postupně se třikrát promyje vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí. Vytvořený zbytek se čistí rychlou chromatografií (7 cm, 2 až 4% roztok diethyléteru v hexanu) za vzniku 19,1 g io (70,7 mmol, výtěžek 76 %) požadovaného cyklopropanového derivátu 9c.
'H NMR (CDCh): δ 1,78 - 1,70 (m, IH), 1,47 (s, 9H), 1,46 (s, 9H), 1,441,39 (m, IH), 1,261,64 (m, 3 Η), 1,02 (t, 3H, J = 7,6 Hz).
b) Do suspenze 6,71 g (59,79 mmol, 4,4 ekv.) terc-butoxidu draselného v 100 ml bezvodého éteru se při teplotě 0 °C přidá 270 μΐ (15,00 mmol, 1,1 ekv.) vody. Po 5 minutách se do suspenze přidá 3,675 g (13,59 mmol) diesterů 9c v 10 ml éteru. Reakční směs se míchá pres noc pri teplotě místnosti, a pak se vlije do směsi ledu a vody a třikrát se promyje éterem. Vodný podíl se při teplotě 0 °C okyselí přidáním 10% vodného roztoku kyseliny citrónové a třikrát se extrahuje ethyl acetátem. Sloučený organický podíl se postupně dvakrát promyje vodou a nasyceným rozto20 kem chloridu sodného. Po obvyklém zpracování (sušení nad síranem sodným, filtraci a zahuštění) vznikne 1,86 g (8,68 mmol, 64% výtěžek) požadované kyseliny 9d jako světle žlutého oleje.
'H NMR (CDCh): δ 2,09-2,01 (m, 1H). 1,98 (dd, J = 3,8, 9,2 Hz, IH), 1,81 - 1,70 (m, IH), 1,66 (dd, J = 3,0, J = 8,2 Hz, IH), 1,63- 1,56 (m, IH), 1,51 (s, 9H), 1,0 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
c) Do směsi 2,017 g (9,414 mmol) kyseliny 9d ve 32 ml bezvodého benzenu se postupně přidá 1,50 ml (10,76 mmol, 1,14 ekv.) triethylnitritu a 2,20 ml (10,21 mmol, 1,08 ekv.) DPPA. Reakční směs se zahřívá pod refluxem 3,5 hodiny, pak se přidá 2,70 ml (18,84 mmol, 2,0 ekv.) 2-trimethylsilylethanolu. Reakční směs se pod refluxem přes noc zahřívá, pak se reakční směs zředí diethyléterem a postupně se promyje 10% vodným roztokem citrónové kyseliny, vodou, nasyce30 ným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po obvyklém zpracování (sušení nad síranem hořečnatým, filtraci a zahuštění) se
-48 CZ 302766 B6 zbytek čistí rychlou chromatografii (5 cm, 10% roztok ethylacetátu v hexanu) za vzniku 2,60 g (7,88 mmol, 84% výtěžek) požadovaného karbamátu 9e jako světle žlutého oleje.
Hmotnostní spektrometrie (FAB) 330 (MH+), 'HNMR (CDC13): δ 5,1 (bs, IH), 4,18-4,13 (m, 2H), 1,68- 1,38 (m, 4H), 1,45 (s, 9H), 1,245 1,18 (m, IH), 1,00-0,96 (m,5H), 0,03 (s,9H).
d) Do 258 mg (0,783 mmol) karbamátu 9e se přidá roztok 940 μί (0,94 mmol, 1,2 ekv.) l,0M roztoku tetra-n-butylamoniumfluoridu (TBAF) v tetrahydrofuranu. Po 4,5 hodině se přidá dalších 626 μί (0,63 mmol, 0,8 ekv.) l,0M roztoku TBAF. Reakční směs se míchá přes noc pri teplo lote místnosti, 30 minut se refluxuje, a pak se zředí ethylacetátem. Roztok se postupně promyje dvakrát vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po obvyklém zpracování (sušení nad síranem hořečnatým, filtrací a zahuštění) se získá 84 mg (0,453 mmol, výtěžek 58 %) požadovaného aminu 9f jako světle žluté kapaliny.
'HNMR (CDCh): δ 1,96 (bs, 2H), 1,60- 1,40 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,31 - 1,20 (m, 1 H), 1,14 15 (dd, J = 4,1, 7,3 Hz, IH), 1,02 (dd, J = 4,1, 9,2 Hz, IH), 0,94 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
Příklad 10
Chemické rozdělení t-butyl-(lR,2R)/(lS,2S)-l-amino-2-ethylcyklopropylkarboxylátu (výsledné sloučeniny příkladu (9):
(R,R)/(S,S) Wa 10b
Izomery oddělené chromatografii RR izomer ss izomer
Na 8,50 g (25,86 mmol) sloučeniny 9e (příklad 9) se pri teplotě refluxu 45 minut působí 26 ml IM roztoku tetra-n-butylamoniumfluoridu (TBAF) v tetrahydrofuranu. Zchlazená reakění směs se zředí ethylacetátem, třikrát se promyje vodou a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného, a pak se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a odpařuje za vzniku volného aminu jako světle žlutého oleje. Volný amin se rozpustí ve 120 ml bezvodého methylenchloridu a do roztoku se postupně přidá 8,5 ml (77,57 mmol) roztoku N-methylmorfolinu, 10,08 g (27,15 mmol) sloučeniny 4 (příklad 4) a 11,79 g (31,03 mmol) HATU. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, a pak zpracuje podle shora uvedeného postupu. Surová diastereomerická směs se rozdělí rychlou chromatografii při eluci směsí hexanu a diethyléteru v poměru 25:75 za vzniku dipeptidu 10a (méně polární eluční skvrna) jako 4,42 g bílé pěny (64 % teoretického výtěžku) a
10b (méně polární eluční skvrna) jako 4 g nažloutlé pěny (57 % teoretického výtěžku). V tomto případě jsou odděleny oba izomery, i když jejich stereochemické vlastnosti stále nejsou známé.
-49 CZ 302766 B6
Příklad 11
Zjištění stereoehemícké konfigurace sloučeniny 10a a 10b korelaci se známou konfigurací t5 butyl-( 1 R-amino-2R-ethylcyklopropylkarboxylátu
ne
HCI . N H
11b
přune porovnaní pomoci TLC. HPLC a NMR
Prof. A. Charette z University of Montreal popsal přípravu sloučeniny 11 a, jejíž stereochemickou io konfiguraci určil rentgenovou krystalografií (J. Am. Chem. Soc., 1995, 117, 12721). Ve 240 μΐ
1M roztoku kyseliny chlorovodíkové v ethylacetátu se rozpustí 13,2 mg (0,046 mmol) sloučeniny 1 la a směs se míchá přibližně 48 hodin. Směs se odpařuje do sucha za vzniku sloučeniny 1 lb jako světle žluté pasty, která se sloučí se 18 mg (0,049 mmol) sloučeniny 4 (příklad 10) za použití 20,3 μΐ (0,185 mmol) Nmethylmoríolinu a 21, mg (0,056 mmol) HATU v methylen15 chloridu. Surový materiál se čistí rychlou chromatografií při eluci směsí hexanu v diethyléteru v poměru 50:50 za vzniku dipeptídu 11c jako 7,7 mg oleje (výtěžek 31 %). TLC, HPLC a NMR analýzou dipeptidu 1 lc se zjistili, že jde o identickou sloučeninu s méně polární sloučeninou 10a (příklad 10) s konfigurací (1R, 2R).
Příklad 12 (1 R,2R)/( 1 S,2S)-l-Boc-amino-2-ethylcyklopropylkarboxylová kyselina (12a)
1. TFA, O °C
Me3Sl·
O
K <3 h coztBu 2. vodný NaOH, TIIF.
(Boc)2O
CO2H
9e
12a
- 50Roztok 2,6 g (7,88 mmol) karbamátu 9e (příklad 9) v TFA se 40 minut míchá při teplotě 0 °C.
Směs se pak zahustí a zředí 10 ml tetrahydrofuranu. Přidá se 700 mg (17,5 mmol) vodného roztoku hydroxidu sodného v 8,8 ml vody, a následné roztok 2,06 g (9,44 mmol, l ,2 ekv.) (Boc)2O v
13 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti při udržování pH 8 eventuálním přidáváním 10% vodného roztoku hydroxidu sodného, zředí se vodou, třikrát se promyje dietyléterem a při teplotě 0 °C se okyselí přidáním 10% vodného roztoku kyseliny citrónové. Vodný podíl se třikrát extrahuje ethylacetátem a postupně se dvakrát promyje vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad síranem hořečnatým, filtraci a zahuštění vznikne 788 mg (3,44 mmol, výtěžek 44 %) požadované Boc-chráněné aminokyseliny (12a).
lH NMR (CDCb): δ 5,18 (bs, IH), 1,64 1,58 (m, 2H), 1,55- 1,42 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,32 1,25 (m, 1H), 0,99 (t, 3H, J = 7,3 Hz).
Příprava methylesteru (lR,2R)/(lS,2S}-t-Boc~amino-2-ethylcyklopropylkarboxylové kyseliny (12b)
12a
CH^EfyO —--EL.O o°c
V 10 ml diethyléteru se rozpustí 0,30 g (1,31 mmol) Boc-derivátu 12a a na reakční roztok se při teplotě 0 °C působí čerstvě připraveným roztokem diazomethanu v diethyléteru za vzniku žlutého zabarvení roztoku, způsobeného mírným přebytkem roztoku diazomethanu. Po 20 minutách míchání při teplotě místnosti se reakční směs zahustí do sucha za vzniku sloučeniny 12b jako 0,32 g (100 %) čirého bezbarvého oleje.
'H NMR (CDCb): δ 5,1 (bs, IH), 3,71 (s, 3H), 1,62 - 1,57 (m, 2H), 1,55 (s, 9H), 1,53 - 1,43 (m, IH), 1,28-1,21 (m, 2H), 0,95 (t,J = 7,3 Hz,3H).
Příklad 13
Enzymatická rezoluce methyl-( 1 R,2R)/(1 S,2S)-Boc_l~amino-2-ethylcykÍopropylkarboxylátu
* anaiýza pomocí HPLC za použití Chiracel® OD-Hkolony ** ostatní estery jsou také přijatelné (Et)
a) Ve 3 ml acetonu se rozpustí 0,31 g (1,27 mmol) směsi enantiomerů methylesteru (lS,2R)/(lR,2R)-l-Boc-amtno-2-ethylkarboxylové kyseliny (příklad 10), a pak se roztok za energického míchání zředí 7 ml vody. Hodnota pH roztoku se udržuje na 7,5 přidáváním 0,05M vodného roztoku hydroxidu sodného, a následně se přidá 300 mg Alcalase® (2,4 I extraktu vyrobeného v Novo Nordisk Industrials). Během inkubace se
-51 C7 302766 B6 pH stabilizuje přidáváním hydroxidu sodného za použití pHstat tritátoru. Po 40 hodinách se směs zředí ethylacetátem a vodou (obsahujícího 5 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného) a podíly se oddělí. Vodný podíl se okyselí přidáním 10% vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se ethylacetátem, suší se nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za vzniku 48,5 mg kyseliny 13a. Stereochemická konfigurace se určí analýzou popsanou v příkladech 10 a 11.
b) Na podíl kyseliny 13a se působí roztokem diazomethanu v diethyléteru za vzniku methylesteru, který se analyzuje HPLC za použití chirální kolony Chiralcel® OD-H io eluci 2,5% roztokem izopropanolu v hexanu za izokratických podmínek. Z analýzy vyplývá, že jde o směs s přítomností (1S, 2R) izomerů 51:1.
Příklad 14 15 (1R,2S)/(1 S,2R)-l-amino-2-ethylcyklopropylkarboxylová kyselina ho2c
CO2tBu
9d etyl syn k esteru
d) TFA, CK,a teplota místnosti
C) DBU, 8r'
CH:CN teplota místnosti allylO2C
CO2íBu
14a
V aiyooc^co/i
14b
f)1.0MTBAF 'Eh.N. DPPA. benzen a pak 2-trimetylsilyletanol rdlux ailyfOOC
Nx°
14c
THF teplota ^reflux místnosti
ailyfOOC NH2
I4d etyl anti ke kyselině (RS) / (SR)
Výchozí sloučeninou přípravy je sloučenina 9d, jejíž příprava je popsána v příkladě 9:
e) Do roztoku 1,023 g (4,77 mmol) sloučeniny 9d ve 25 ml methylkyanidu se postupně přidá 860 μΙ (5,75 mmol, 1,2 ekv.) DBU a 620 μΐ (7,16 mmol, 1,5 ekv.) allylbromidu. Reakční směs se 4 hodiny míchá při teplotě místnosti, a pak se zahustí. Vytvořený zbytek se zředí diethyléterem a postupně se dvakrát promyje 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad síranem hořečnatým, filtraci a zahuštění se získá 1,106 g (3,35 mmol) esteru sloučeniny 14a s 91 % výtěžkem jako bezbarvého oleje.
Hmotnostní spektrometrie (FAB) 255 (MH+), so ‘H NMR (CDCb): δ 5,95 -5,86 (m, IH), 5,37- 5,22 (m, 2H), 4.70- 4,65 (m, IH),
4,57-4,52 (m, IH), 1,871,79 (m, IH), 1,47 (s, 9H), 1,45 - 1,40 (m, IH), 1,33 - 1,24 (m, 3H), 1,03 (t, J = 7,3 Hz,3H).
-52CZ 302766 B6
d) Do roztoku 1,106 g (4,349 mmol) esteru 14a v 5 ml bezvodého methylenchloridu se při teplotě místnosti přidá 5 ml kyseliny trifluoroctové. Reakční směs se 1,5 hodiny míchá, a pak se zahustí za vzniku 854 mg (4,308 mmol) sloučeniny 14b s 99 % výtěžkem. Hmotnostní spektrometrie (FAB) 199 (MH+), lH NMR (CDCb): δ 5,99-5,79 (m, IH), 5,40 -5,30 (m, 2H), 4,71 - 4,62 (m, 2H),
2,22-2,00 (m, 2H), 1,95 - 1,88 (m, IH), 1,84 - 1,57 (m, 2H), 0,98 (t, J = 7,3 Hz,3H).
e) Do roztoku 853 mg (4,30 mmol) kyseliny 14b v 14,8 ml bezvodého benzenu se postupně přidá 684 μΙ (4,91 mmol, 1,14 ekv.) triethyInitritu a 992 μΙ (4,60 mmol, ío 1,07 ekv.) DPPA. Reakční směs se 4,5 hodiny zahřívá pod refluxem, a pak se přidá
1,23 ml (8,58 mmol, 2,0 ekv.) 2-trimethylsilylethanolu. Směs se pod refluxem zahřívá přes noc, a pak se zředí diethyléterem a postupně se promyje jedenkrát 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, jedenkrát vodou, jedenkrát nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát vodou a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu i? sodného. Po sušení nad síranem hořečnatým, filtraci a zahuštění se zbytek čistí rychlou chromatografii (5 cm) pri eluci 10 až 15% roztokem ethylacetátu v hexanu za vzniku
1,212 g (3,866 mmol) karbamátu 14c jako světle žlutého oleje s 90% výtěžkem. Hmotnostní spektrometrie (FAB) 314 (MH+), 'H NMR (CDCb): δ 5,93 - 5,84 (m, IH), 5,32- 5,20 (m, 2H), 5,05 (bs, IH), 4,6020 4,56 (m, 2H), 4,20 - 4,11 (m, 2H), 1,71 - 1,60 (m,3H), 1,39-1,22 (m, IH), 1,03 (t, J 7,6 Hz, 3H), 0,96 - 0,86 (m, IH), 0,04 (s, 9H).
ť) Do 267 mg (0,810 mmol) karbamátu 14c se přidá 1,62 ml (1,62 mmol, 2,0 ekv.) l,0M roztoku tetra-n-butylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti, refluxuje se 30 minut, a pak se zředí ethylacetátem. Roztok se postupně promyje dvakrát vodou a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad síranem hořečnatým, filtrací a zahuštění se připraví 122 mg (0,721 mmol) požadovaného aminu 14d s 89% výtěžkem jako světle žluté kapaliny.
’H NMR (CDCb): δ 5,94 - 5,86 (m, 1H), 5,31 - 5,22 ( m, 2H), 4,58 (d, J = 5,7 Hz, 2H), so 1,75 (bs,2H), 1,61 - 1,53 (m, 2H), 1,51 - 1,42 (m, 2H), 1,00 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 0,700,62 (m, 1 H).
Příklad 15
Syntéza ethyl—(1 R,2S)/( 1 S,2R)-l-amino-2-vinylcyklopropylkarboxylátu
Ph
a) BuOK
Ph
N CO2Et 15a
15b
THF
-78 až 0 °C
Ph
Ph
‘N CO2Et 15c
b) 1N vodný r. HCI, ELO ej NaHCOj d) 4N HCt/dioxan
HClH2N CO2Et 15d vinyl syn k esteru
-53CZ 302766 B6
a) Do 180 ml tetrahydrofuranového roztoku 4,62 g (41,17 mmol, 1,1 ekv.) terc-butoxidu draselného se pří teplotě -78 °C přidá 10,0 g (37,41 mmol) komerčně dostupného iminu 15a ve 45 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se zahřeje na teplotu 0 °C a 40 minut se míchá při této teplotě. Směs se opět zchladí na teplotu -78 °C a přidá se 8,0 g s (37,40 mmol) 1,4-dibrombutenu 15b. Reakční směs se pak 1 hodinu míchá při teplotě °C, zchladí se na teplotu -78 °C, a pak se přidá 4,62 g (41,17 mmol, 1,1 ekv.) tercbutoxidu draselného. Nakonec se reakční směs míchá další jednu hodinu pri teplotě °C a zahustí se za vzniku sloučeniny 15c.
io b) c) d) Sloučenina 15c se zpracuje 265 ml diethyléteru, a na roztok se působí 106 ml IN vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové. Po 3,5 hodinách pri teplotě místnosti se podíly oddělí a vodný podíl dvakrát se promyje d i ethyl éterem a převede na zásadité pH přidáním nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Požadovaný amin se třikrát extrahuje diethyléterem a kombinovaný organický extrakt se promyje nasyce15 ným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad síranem hořečnatým, filtraci a zahuštění se na vytvořený zbytek působí 187 ml (748 mmol) 4N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu. Po zahuštění se získá hydrochlorid 15d jako 2,467 g (12,87 mmol) hnědé pevné látky s 34% výtěžkem.
1H NMR (CDCIi): δ 9,17 (bs, 3H), 5,75 - 5,66 (m, 1H), 5,39 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,21 (d, J 10,2 Hz, IH), 4,35-4,21 (m, 2H), 2,77 - 2,70 (m, IH), 2,05 (dd, J = 6,4, 10,2
Hz, IH), 1,75 (dd, J = 6,4, 8,3 Hz, IH), 1,33 (t, J “ 7,0 Hz, 3H).
Příklad 16 ethyl-ester (1 R,2S)/(1 S,2R)-l-Boc-amíno-2-vÍnylcyklopropylkarboxylové kyseliny
C!~H3N+ CO2Et
15d (Boc)2O
DIPEA
DMAP
THF
16a vinyl syn k esteru to Ve 30 ml tetrahydrofuranu se rozpustí l,0g (5,2 mmol) hydrochloridu 15d a l,2 g (5,7 mmol) (Boc)iO a na směs se působí 0,13 g (1,04 mmol, 0,2 ekv.) dimethylaminopyridnu a 2,8 ml (15,6 mmol) diizopropylethyiaminu. Reakční směs se 24 hodin míchá, a následně se zředí 40 ml ethylacetátu a postupně se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 5% vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové a nasyceným roztokem chloridu sodného. Orga35 nicky podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí. Zbytek se čistí rychlou chromatografií při eluci 15% roztokem ethylacetátu v hexanu za vzniku 0,29 g výsledné sloučeniny 16a s výtěžkem 23 %.
'HNMR (CDCb): 8 5,80- 5,72 (m, IH), 5,29- 5,25 (dd, J = 17,2 Hz, IH), 5,24-5,1 (bs, IH), 5,10 (dd, J = 9,2, 9,2 Hz, 1H), 4,22 - 4,13 (m, 2H), 2,15 - 2,04 (m, 1 Η), 1,85 - 1,73 (bs, 1H),
1,55 - 1,5 (m, IH), 1,49 (s,9H), 1,26 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
Příklad 17
Enzymatická rozdělení ethyl-(1R, 2 S)/(l S, 2 R)- 1-am Íno-2-v iny I cyklopropyl kar boxy látu
- 54CZ 302766 B6 iV.V“ Η ϋ.
Ο 16a viny! syn k esteru
NaOH
AJcalase
* analýza pomoct HPLC za použití Chiracel® OD-H kolony
a) V 5 ml acetonu se rozpustí 0,29 g (l, 14 mmol) racemického derivátu 17a a směs se zředí 10 ml vody. Hodnota pH se upraví přidáním 0,2N vodného roztoku hydroxidu sodného na pH 7,2, a s následně se přidá 300 mg Alcalase®. Po dobu 9 dní inkubace se roztok hydroxidu sodného přidává pH/stat titrátorem, přičemž se během této doby přidá teoreticky vypočítané množství zásady.
Následná extrakce je popsána v příkladě 13 za vzniku 0,15 g (100 %) nehydrolyzovaného esteru a 0,139 g (95 %) hydro lyžovaného materiálu. Analýzou nehydrolyzovaného esteru pomocí HPLC za použití chirální kolony se prokázala přítomnost požadované sloučeniny 17c v poměru 43:1 to (chemická korelace popsaná v příkladech 10 a 11).
Podmínky HPLC analýzy: kolona Chiralcel® OD-H (4,6 mm x 25 cm), izokratické podmínky, mobilní fáze: 2,5% roztok izopropanolu v hexanu.
Příklad 18
Rozdělení (!R,2S)/(lS,2R)-I-amino-2-vinylcyklopropylkarboxylátu krystalizaci sdibenzyl-D— vinnou kyselinou
Do roztoku surového racemického (1S,2R a lR,2S)~ethyl-l-amÍno-2-vinylcyklopropylkarboxylátu (získaného z 25,0 g (93,5 mol) ethylesteru N-(difenylmethylen)-glycinu podle pos25 tupu příkladu 15) v 800 ml ethylacetátu se přidá 33,5 g (93,5 mol) dibenzyl-D-vínné kyseliny. Směs se zahřívá pod refluxem, nechá se 15 minut při teplotě místnosti, a pak se zchladí na teplotu 0 °C. Po 30 minutách se získá bílá pevná látka. Pevný produkt se filtruje, promyje se 100 ml ethylacetátu a suší se na vzduchu. Pevný produkt se uvede do suspenze v 70 ml acetonu, a po působením ultrazvukem se třikrát filtruje. Pevný produkt se nechá krystalizovat dvakrát z horkého acetonu (získaná část A). Matečné louhy se zahustí a vytvořený zbytek se třikrát krystalizuje z horkého acetonu (získaná část B). Získané amorfní bílé produkty části A a B jako soli kyseliny dibenzyl-D-vinné se sloučí za vzniku 5,53 g produktu, který se uvede do suspenze ve směsi 250 ml diethyléteru a 150 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organický podíl se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem horečnatým a fil35 truje se. Filtrát se zředí 100 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové v diethyléteru a zahustí se za sníženého tlaku. Olej ovitý zbytek se odpařuje s tetrachlórmethanem za vzniku 940 mg ethyl— 1 (R)-am i no-2(S)~v i nylcyk lopropankar boxy láthydrochloridu s 11% výtěžkem jako bílé hygroskopické pevné látky.
[a]25D +39,5 °C (c 1,14 methanol), [a]25D +88,5 °C (c 1,14 methanol),
-55 C7 302766 B6 'HNMR (DMSO-dfi): δ 9,07 (široké s, 2H), 5,64 (ddd, J = 17,2, 10,4, 8,7 Hz, IH), 5,36 (dd, J= 17,2, 1,6 Hz, IH), 5,19 (dd, J= 10,4, 1,6 Hz, 1 H), 4,24- 4,16 (m, 2H), 2,51 - 2,45 (m, vrcholy bráněné DMSO, I H), 1,84 (dd, J = 10,0, 6,0 Hz, I H), 1,64 (dd, J = 8,3, 6,0 Hz, I H), 1,23 (t, J = 7,1 Hz, 3H), hmotnostní spektrometrie (ESI) m/z 156 (MH) +, čistota enantiomerů: 91 % přebytek enantiomerů HPLC analýzou Boc derivátu (kolona CHIRALPAK AS”0, směs hexanu a izopropanolu).
io Příklad 19
Příprava hydrochloridu methylesteru (1 R,2S)/(IS,2R)-l-amino-2-vinylcyklopropankarboxylové kyseliny (19f)
H3N* CO2Et .HCI aCHO “
Να^Ο,/ΤΒΜΕ
N CO2Et
19b
H2N CO2£t
Boc2O
BocHN,CO2Et
19d
TBME
19e
NaOMe
MeOH
19c
LiOtBu (2,1 ekv.) toluen / teplota místnosti a pak HRO*, pak NaOH
BocHN CO2Me
19f
Příprava iminu 19b
Do suspenze se uvede 1519,2 g (10,88 mol, 1,0 ekv.) hydrochloridu ethylesteru glycinu 19a v 8 l terc-butylmethyléteru. Po přidání 1155 g (10,88 mol, 1 ekv.) benzaldehydu a 773 g (5,44 mol, 0,5 ekv.) bezvodého sulfátu sodného se směs zchladí na teplotu 5 °C v lázni ledu a vody. Po kapkách se během 15 minut přidá 2275 ml (16,32 mol, 1,5 ekv.) triethylaminu (za použití 0,5 1 tercbutylmethyléteru). Reakční směs se míchá 40 hodin při teplotě místnosti. Reakce se pak ukončí přidáním 5 1 ledové studené vody a organický podíl se oddělí. Vodný podíl se extrahuje 1 I terc25 buty Imethyl éteru a kombinované organické podíly se promyjí směsí 400 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 1,6 I vody, a pak nasyceným roztokem chloridu sodného. Roztok se suší se nad síranem horečnatým, zahustí za sníženého tlaku a vytvořený žlutý olej se suší ve vakuu do konstantní hmotnosti. Získá se 200Ig (96% výtěžek) iminu 19b jako hustého žlutého oleje, který tuhne při teplotě -20 °C.
lH NMR (CDCb, 400 MHz): δ 8,30 (s, IH), 7,79 (m, 2H), 7,48 - 7,39 (m, 3H), 4,40 (d, J- 1,3 Hz, 2H), 4,24 (q, J - 7 Hz, 2H), 1,31 (t, J = 7 Hz, 3H).
Příprava racemického hydrochloridu ethylesteru N-Boc-(1R,2S)/(1 S,2R)-l-amino-2-vinylcyklopropankarboxylové kyseliny 19e:
Do suspenze se uvede 4,203 g (52,5 mmol, 2,1 ekv.) terc-butoxidu lithného v 60 ml bezvodého toluenu. Ve 30 ml bezvodého toluenu se rozpustí 5,020 g (26,3 mmol, 1,05 ekv.) iminu 19b a 5,348 g (25 mmol, 1 ekv.) dibromidu 19c a tento roztok se při teplotě místnosti během 30 minut po kapkách přidá do míchaného roztoku terc-butoxidu lithného. Vytvořená temně červená směs se míchá dalších 10 minut a reakce se ukončí přidáním 50 ml vody a 50 ml terc-butylmethyléteru (TBME). Vodný podíl se oddělí a podruhé se extrahuje 50 ml TBME. Organické podíly se sloučí, přidá se 60 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové a směs se 2 hodiny míchá při teplotě místnosti. Organický podíl se oddělí a extrahuje se 40 ml vody. Vodné podíly se pak sloučí, sytí se
- 56CZ 302766 B6 g soli a 50 ml TBME. Míchaná směs se pak převede na zásadité pH 13 až 14 opatrným přidáním ION roztoku hydroxidu sodného. Organický podíl se oddělí a vodný podíl dvakrát extrahuje 50 ml TBME. Organické extrakty obsahující volný amin 19d se sloučí a přidá se 5,46 g (25 mmol, 1 ekv.) di terc-buty Idikarbonátu. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, a pak se podle TLC zjistí přítomnost nezpracovaného volného aminu. Po přidání 1,09 g (5 mmol, 0,2 ekv.) diterc—buty Idikarbonátu se směs 2 hodiny zahřívá pod zpětným chladičem. Následná TLC potvrdí úplnou přeměnu sloučeniny 19d na I9e. Roztok se zchladí na teplotu místnosti, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí se za sníženého tlaku. Zbytek se čistí rychlou chromatografií při eluci nejprve 10%, a pak 20% roztokem ethylacetátu v hexanu. Čištěním se vytvoří 4,014g io (63% výtěžek) čirého žlutého oleje sloučeniny I9d, který pomalu tuhne ve vakuu.
'HNMR(CDC13, 400 MHz): δ 5,77 (ddd, J = 17,10,9 Hz, 1H),5,28 (dd,J = 17,1,5 Hz, IH), 5,18 (široké s, IH), 5,11 (dd, J = 10,1,5 Hz, IH), 4,24-4,09 (m, 2H), 2,13 (q, J = 8,5 Hz, IH), 1,79 (široké m, 1H), 1,46 (m, IH), 1,45 (s, 9H), 1,26 (t, J - 7 Hz, 3H).
is Příprava výsledné sloučeniny 19f transesterifikací sloučeniny 19e:
V 50 ml bezvodého methanolu se rozpustí 10,807 g (42,35 mmol) ethylesteru 19e, a následně se přidá 9,7 ml (42 mmol, 1 ekv.) 25 % hmotnostních roztoku methoxidu sodného v methanolu. Směs se 2 hodiny zahřívá na teplotu 50 °C. TLC analýzou se potvrdí zpracování výchozích slou2o čenin transesterifikací (19e: Rf = 0,38, 19f: Rf = 0,34, v 20% roztoku ethylacetátu v hexanu). Reakční směs se zchladí na teplotu místnosti a okyselí k pH 4 za použití 4N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu. Chlorid sodný jako sraženina se odstraní filtrací (promytí terc-butylmethyléterem) a těkavé podíly se odstraní za sníženého tlaku. Do vytvořeného zbytku se přidá 100 ml terc-butylmethyléteru a pevná látka se odstraní filtrací. Odpařováním filtrátu za sníže25 ného tlaku a sušením ve vakuu se získá 10,11 g (99% výtěžek) čistého methyiesteru 19f.
'H NMR (CDCL, 400 MHz): δ 5,75 (ddd, J = 17,10,9 Hz, IH), 5,28 (dd, J = 17, 1 Hz, IH), 5,18 (široké s, IH), 5,11 (ddd, J = 10,1,5,0,5 Hz, IH), 3,71 (s, 3H), 2,14 (q, J - 9 Hz, IH), 1,79 (širokém, IH), 1,50 (široké m, IH), 1,46 (s,9H).
Příklad 20
Enzymatická rezoluce hydrochloridu methyiesteru (IR, 2S)-l-amino-2-vinylcyklopropankarboxylové kyseliny
-57Příprava methyiesteru N-Boc-(lR,2S>-l-amino-2-vinylcyklopropankarboxylové kyseliny 20a:
Ve 3 ml acetonu se rozpustí 0,200 g (0,83 mmol) racemického esteru 19f, a následně se přidá v ml acetonu a 7 ml vody. K hodnotě pH 8 se přidá 1 kapka 0,05M roztoku hydroxidu sodného, a pak se přidá 2,4 I Alcalase® (Novo Nordisk Biochem, 0,3 g v 1 ml vody). Směs se míchá energicky při teplotě místnosti při udržování pH roztoku 8 za použití automatického titračního zařízení. Začátkem 4. a 5. dne míchání při pH 8 se přidají 0,3 g enzymatického roztoku. Po celkem dnech se spotřebuje celkem 8,3 ml 0,05M roztoku hydroxidu sodného. Reakční směs se zředí ethylacetátem a vodou a organický podíl se oddělí. Po promytí nasyceným roztokem chloridu sodného sc organický extrakt suší nad síranem hořečnatým a zahustí vc vakuu. Získá se 0,059 g (30% výtěžek) sloučeniny 20a jako čirého oleje.
IH NMR identická se sloučeninou 19ť.
HPLC (Chiralcel ODH 4,6 x 250 mm, izokratická eluce 1% roztokem ethanolu v hexanu rychio lostí průtoku 0,8 ml/min):
(1R,2S>-2: Rt = 19,3 min (97 %);
(IS, 2R)-2: Rt = 17,0 min (3 %).
Příprava hydrochloridu methylesteru (I R,2S)-l-amino-2-vinylcyklopropankarboxylové kyse15 líny 20b:
Ve 25 ml dioxanu se rozpustí 39,96 g (165,7 mmol) sloučeniny 20a a roztok se za stálého míchání po kapkách přidá do 250 ml 4 N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu (Aldrieh). Po 45 minutách se TLC analýzou potvrdí zpracování výchozích sloučenin. Těkavé podíly se odstraní za sníženého tlaku a zbytek dvakrát odpařuje se 100 ml methanolu. Do hnědého olejovitého zbytku se přidá 300 ml éteru a 10 ml methanolu, směs se míchá přes noc při teplotě místnosti za vzniku sraženiny jako polotuhé látky. Po dalším přidání 15 ml methanolu se v míchání pokračuje hodin, a pak se nažloutlá pevná látka sebere filtrací. Produkt se promyje 50 ml 5% roztokem methanolu v éteru a dvakrát 50 ml éteru. Po sušení ve vakuu vznikne 22,60 g (76% výtěžek)
2.i sloučeniny 20b jako nažloutlé pevné látky. Filtrát (včetně promývacích podílů) se odpařuje ve vakuu za vzniku dalšího podílu sloučeniny 20b jako 7,82 g (26% výtěžek) hnědého oleje. Oba podíly jsou dostatečně čisté pro použití k výrobě inhibitorů HCV proteáz:
[cí]2d +38,2° (c 1,0, methanol).
’H NMR (400 MHz, DMSO-JJ: δ 9,15 (široké s, 3H), 5,65 (ddd, J = 17,10,9 Hz, IH), 5,36 (dd,
J = 17,1,5 Hz, IH), 5,19 (dd, J = 10,1,5 Hz, IH), 3,74 (s, 3H), 2,50 (q, překrytý DMSO, J = 9 Hz,
Η), 1,86 (dd, J = 10,6 Hz, 1 Η), 1,64 (dd, J - 8,6 Hz, 1H).
Příklad 21
Syntéza methylesteru 1-aminocyklobutylkarboxylové kyseliny
HCI / CH3OH hydrochlorid
21a
l,l-Aminoeyklobutankarboxylová kyselina se připraví podle Kavin Douglas; Ramaligam Kondareddiar; Woodard Ronald, Synth. Commun. (1985), 15 (4), 267 až 72. Ve 40 ml bezvodého methanolu se při teplotě - 20 °C míchá 1,00 g (6,6 mmol) sůl aminokyseliny (21a). Směs se sytí bezvodým chlorovodíkem za vzniku sloučeniny (21 b). Míchání této směsi pokračuje další 4 hodiny, horký roztok se filtruje a filtrát se zahustí (Rotavap, 30 °C) za vzniku zbytku, který se čistí rozetřením v ethyléteru. Po filtraci a sušení vznikne 0,907 g (83 %) bílého prášku.
-58CZ 302766 B6 'H NMR (400 MHz, D>): δ CH3O (3H, s, 3,97 ppm); CH2 (2H, m, 2,70 - 2,77 ppm); CH2 (2H, m, 2,45 - 2,53 ppm) a CH2 (2H, m, 2,14 - 2,29 ppm).
Tri peptidy
Příklad 22
Obecný postup vazebných reakcí na pevné fázi.
Syntéza se provede na paralelním syntetizátoru (model ACT396, Advanced ChemTechs) na deskách s 96 prohlubněmi. Obvykle se vyrábí 24 peptidů v paralele za použití standardních technik syntézy na pevné fázi. Výchozí komplex (Fmoc-aminoý-cyklopropan (eventuálně substituovanáj-karboxylová kyselina - pryskyřice Wang se připraví vazebnou reakcí DCC/DMAP (E.
Atherton, R. C. Scheppard, Solid Phase Peptide Synthesis, a Practical Approach; IRL Press: Oxford (1989); str. 131 až 148).
Každá prohlubeň se naplní 100 mg výchozí pryskyřice (přibližně 0,05 mmol). Pryskyřice se promyje postupně 1,5 ml podíly jedenkrát NMP a třikrát dimethylformamidu. Ochranné skupiny
Fmoc se odstraní působením 20 minut 1,5 ml 25% objemových roztoku piperidinu v dimethylformamidu. Pryskyřice se promyje 1,5 ml podíly, a to čtyřikrát dimethylformamidem, třikrát methanolem a třikrát dimethylformamidem. Vazebná reakce se provede v 350 μΐ dimethylformamidu, za použití 400 μΙ (0,2 mmol) 0,5M roztoku Fmoc-aminokyseliny v HOBt-hydrátu v dimethylformamidu, 400 μΐ (0,4 mol) 1M roztoku DIPEA v dimethylformamidu a 400 μΙ (0,2 mmol) 0,5M roztoku TBTU v dimethylformamidu. Po 1 hodině protřepávání se prohlubně vysuší, pryskyřice se promyje 1,5 ml dimethylformamidu a vazebná reakce se opakuje ještě jednou za stejných podmínek. Pryskyřice se pak promyje podle shora uvedeného postupu a cyklus se opakuje pro každou aminokyselinu.
Ochranné skupiny se uvedou do vazby dvěma způsoby:
1. V podobě karboxylové kyseliny, která se naváže podle shora uvedeného postupu nebo
2. jako acylační činidlo (anhydrid nebo kyselý chlorid).
Následující příklad popisuje ochranu anhydridem kyseliny suke i nové:
Po oddělení ochranné skupiny Fmoc a následným promytím se přidá 350 μΙ dimethylformamidu, a následně 400 μΐ (0,2 mmol) 0,5M dimethyIformamidového roztoku anhydridů kyseliny sukcinové a 400 μΐ (0,4 mmol) 1,0M roztoku DIPEA. Pryskyřice se 2 hodiny míchá, a pak se provede vazebná reakce. Nakonec se pryskyřice promyje 1,5 ml podíly, a to třikrát roztokem dichlormethanu, třikrát methanolem, třikrát roztokem dichlormethanu a suší se 2 hodiny ve vakuu.
Odštěpení z pryskyřice a průvodní vazba ochranné skupiny na vedlejší řetězec se provede přidáním 1,5 ml směsi kyseliny trifluoroctové, vody, dithiothreitolu (DTT) a triizopropylsilanu (TIS) v poměru 92,5 : 2,5 : 2,5 : 2,5. Po 2,5 hodinách protřepávání se pryskyřice filtruje a promyje 1,5 ml roztokem dichlormethanu. Filtrát se sloučí a zahustí vakuovou centrifugaci. Každá sloučenina se čistí preparativní HPLC na reverzní fázi za použití kolony C|8 (22 mm x 500 mm). Podíly obsahující produkt se určil hmotnostní spektrometrií MALDI-TOF, sloučí se a lyofilízují.
Příklad 23
Obecný postup vazebných reakcí v kapalné fázi {viz také R. Knorr a spol., Tetrahedron Letters, (1989), 30, 1927.}
-59CZ 302766 B6
Reakční činidla, tj. I ekv. volného aminu (nebo jeho hydrochloridu) a 1 ekv. volné karboxylové kyseliny se rozpustí v methylenchloridu, methyl kyanidu nebo dimethylformamidu. V atmosféře dusíku se do míchaného roztoku přidají 4 ekv. N-methylmorfolinu a 1,05 ekv. vazebného činidla, tj. volné karboxylové kyseliny. (Praktickými a účinnými vazebnými činidly jsou k tomuto účelu:
{benzolriazol-l-yl-oxy)tris-(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfát (HOBT) nebo především 2-(l H-benzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluroniumtetrafluorborát (TBTU) nebo O(7-azabenzotriazol-l-yl)-N.N,N',N'-tetramethyluronÍLimtetrafluorborát (HATU). Průběh reakce se sleduje TLC.
io Po ukončení reakce se rozpouštědlo odpařuje za sníženého tlaku. Vytvořený zbytek se rozpustí v ethylacetátu. Roztok se promyje postupně 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za sníženého tlaku. Pokud se zbytek čistí, pak se čištění provede rychlou chromatografií shora uvedeným postupem.
Příklad 24
Syntéza sloučeniny 304
a) Na 0,12 g (0,49 mmol) (R,R)-izomeru Boc-Et-Acca-OMe 13c získaného enzymatickou rezolucí (příklad 13) se 45 minut působí 4N roztokem kyseliny chlorovodíkové v dioxanu, a pak se směs zahustí ve vakuu za vzniku bílé pevné látky. Do přibližně 0,49 mmol hydrochloridu se přidá 0,17 g (0,54 mmol) TBTU, 0,18 g (0,49 mmol) Boc-^t(R)-(8-chinolinmethyloxy)prolinu 5 (příklad 5) a 0,3 ml (1,7 mmol) DIPEA v 10 ml methylkyanidu. Směs se 3,5 hodiny míchá při teplotě místnosti, a pak se zahustí ve vakuu. Vytvořený materiál se rozpustí v ethylacetátu a promyje postupně nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného. Suší se nad síranem horečnatým, filtruje se a zahustí za vzniku sloučeniny 24b jako 0,122 g (50% výtěžek) bílé pevné látky.
b) Na 0,12 g (0,25 mmol) sloučeniny 24b se 30 minut působí pří teplotě místnosti 4N roztokem kyseliny chlorovodíkové v dioxanu, a pak se zahustí ve vakuu. Na přibližně 0,25 mmol vytvořeného hydrochloridu se působí 75 mg (0,27 mmol) Boc-Chg-OH · H?O, 87 mg (0,27 mmol) TBTU v 10 ml methylkyanidu, a nakonec při teplotě 0 °C 0,15 ml (0.87 mmol) DIPEA. Zbytek se zředí ethylacetátem, postupně se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za vzniku 0,2 g sloučeniny 24c jako špinavě bílé pevné látky. Vznikne 0,14g produktu, který se rozpustí v dimethylsulfoxidu a čistí se preparativní
-6035
HPLC. Po lyofilizaci vznikne 35 mg (33% výtěžek) sloučeniny 24c jako bílé pevné látky. HPLC (98%);
Hmotnostní spektrum (FAB) m/z: 637,3 (MH+);
HRMS vypočteno pro C^HoN^ (MH+): 637,36011: nalezeno: 637,36250;
‘H-NMR (DMSO-d6) výskyt rotamerů: δ 8,91 (dvakrát d, J = 4,1 a 4,1 Hz, 1H), 8,40 -· 8,36 (m, 2H), 7,90 (d, J - 7,6 Hz, IH), 7,77 (d, J - 7,0 Hz, IH), 7,6 - 7,54 (m, 2H), 6,80 (d, J = 8,6 Hz, IH), (dvakrát s, 2H), 4,40 (bs, IH), 4,31 (t, J= 8,3 Hz, IH), 4,12 (d, J11,44 Hz, IH), 4,03 (t, J - 7,9 Hz, IH), 3,78-3,72 (m, IH), 3,56 (s, 3H), 2,35 - 2,27 (m, IH), 2,06- 1,97 (m, IH), 1,71 - 1,55 (m, 10H), 1,53 - 1,38 (m, 2H), 1,26 (s, 9H), 1,Ιδιο 1,06 (m, 2H), 1,02 - 0,93 (m, 2H), 0,89 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
sloučenina 304:
c) Do 30 mg (přibližně 0,047 mmol) sloučeniny 24c se přidá 1 ml methanolu, 1 ml tetrahvdro15 furanu a 12 mg (0,29 mmol) monohydrátu hydroxidu lithného v 1 ml vody. Čirý roztok se energicky míchá 48 hodin, a pak se zahustí ve vakuu. Surový peptid se rozpustí v dimethylsulfoxidu a čistí se preparativní HPLC. Po lyofilizaci vznikne 21 mg (72% výtěžek) sloučeniny 304 jako bílé pevné látky. HPLC (99%);
Hmotnostní spektrum (FAB) m/z: (MH+) 623,3;
HRMS vypočteno pro C34H46N4O7 (MH+): 623,34448, nalezeno: 623,34630, 'HNMR (DMSO-dó) výskyt rotamerů 1:1: δ 8,90 (dvakrát d, J = 4,1 Hz, IH), 8,37 (d, J = 8,3 Hz, IH), 8,26 (s, IH), 7,89 (d, J = 8,3 Hz, IH), 7,77 (d, J = 6,7 Hz, IH), 7,67,53 (m, 2H), 6,88 a 6,79 (dvakrát d, J = 8,6 a 7,9 Hz, IH), 5,17 a 5,16 (dvakrát s, 2H), 4,43 - 4,35 (bs, IH), 4,29 (t,J = 8,3 Hz, IH), 3,82-3,71 (m, IH). 2,35-2,27 (m, IH), 2,06- 1,97 (m,
1 H), 1,72- 1,53 (m, 10 H), 1,52 - 1,44 (m, 2H), 1,37 a 1,29 (dvakrát s, 9H), 1,18- 1,05 (m,
3H), 1,0 - 0,94 (m, IH), 0,91 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
Příklad 25
Syntéza sloučeniny 301
sloučenina 301
-61 CZ 302766 B6
a) Do suspenze se uvede 282 mg (1,23 mmol) sloučeniny 25a (12a) v 6 ml bezvodého melhylkyanidu. Postupně se přidá 221 μΙ (1,48 mmol) DBU a 161 μΙ (1,35 mmol) benzylbromidu a vytvořená reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Směs se zahustí, vytvořený olej se zředí ethylacetátem a 10% vodným roztokem citrónové kyseliny a postupně dvakrát se promyje 10% roztokem citrónové kyseliny, dvakrát nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát vodou a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Ethyl acetátový podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a odpařuje se do sucha. Surový bezbarvý olej se čistí rychlou chromatografii při eluci gradientem poměrů io směsi hexanů a ethylacetátu od 95 : 5 do 90 : 10 za vzniku 368 mg (93 %) benzylovaného produktu 25b jako bezbarvého oleje.
Hmotnostní spektrum (FAB): 318,2 MH , 320,2 MH+, 342,2 (M+Na)+, 1 HNMR (CDCh): δ 7,37-7,28 (m, 5H), 5,22-5,l0(m, IH), 5,19 (d,J= 12 Hz, IH), 5,16 (d, J= 12 Hz, IH), 1,60- 1,40 (m, 4H), 1,39 (s, 9H), 1,31 - 1,22 (m, IH), 0,91 (t, J = 7,5, i? 14,5 Hz, 3H).
b) Na 368 mg (1,15 mmol) sloučeniny 25b se působí 6 ml 4N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu podle shora uvedeného postupu. Surový hydrochlorid se naváže na 470,8 mg (1,27 mmol) sloučeniny 4 (příklad 4) za použití 507 μΐ (4,61 mmol) NMM a 525,6 mg (1,38 mmol) HATU (namísto TBTU) v 6 ml methylenchloridu podle postupu popsaného v příkladě 22 za vzniku surového racemického dipeptidu jako oranžového oleje. Surový materiál se čistí rychlou chromatografii při eluci směsí hexanu a diethyléteru v poměru 50 : 50 za vzniku 223 mg (teoretický výtěžek 68 %) Čistého dipeptidu 25c (méně polární skvrna) jako bílé pěny.
Hmotnostní spektrum 571,4 MH-, 573,3 MH+, 595,3 (M+Na)+, 'H NMR (CDCU) směs rotamerů přibližně 1:1: δ 8,03 (b d, J = 8 Hz, IH), 7.86 (b d, J = 7,5 Hz, IH), 7,82 (b d, J = 6,5 Hz, IH), 7,61 (bs, 0,5 H), 7,57-7,40 (m, 4H), 7,31 - 7,21 (m, 5H), 6,48 (bs, 0,5H), 5,22-5,11 (m, 1 H), 5,08-4,81 (m, 3H), 4,41 - 3,74 (m, 3H), 3,493,18 (m, IH), 2,76- 1,90 (m, 2H), 1,69- 1,48 (m, 3H), 1,40 (s, 9H), 1,40- 1,23 (m, 2H), jo 0,92 (t, J = 7,5, 15 Hz, 3H).
c) Na 170,1 mg (0,297 mmol) dipeptidu 25c se působí 2 ml 4N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu podle shora uvedeného postupu. Surový hydrochlorid se naváže na 84,1 mg (0,327 mmol) Boc-Chg-OH za použití 130,7 μί (1,19 mmol) NMM a 135,5 mg (0,356 mmol) HATU (namísto TBTU) v 2 ml methylenchloridu během 2,75 hodin pri teplotě místnosti, a pak se zpracuje podle shora uvedeného postupu za vzniku přibližně 211,4 mg surového tripeptidu 25d jako bílé pěny s výtěžkem 100 %.
Hmotnostní spektrum (FAB): 712,5 MH+.
sloučenina 301:
d) Ve 2 ml absolutního ethanolu se rozpustí přibližně 15,4 mg (0,022 mmol) surového tripeptidu 25d, a následně se přidá odhadnuté množství (špička špachtle) 10% roztoku palladia na aktivním uhlí a octanu amonného. Směs se hydrogenuje přes noc v atmosféře vodíku při teplotě místnosti a při atmosférickém tlaku. Reakční směs se filtruje přes 0,45pm Millex® filtr, odpařuje se do sucha, zředí se ethylacetátem a 10% vodným roztokem kyseliny citrónové a promyje se znovu jedenkrát 10% vodným roztokem citrónové kyseliny, dvakrát vodou a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se, odpařuje do sucha a lyofilizuje za vzniku 11,0 mg (výtěžek
82 %) tripeptidu 301 bílé pevné látky.
Hmotnostní spektrum (FAB): 622,5 MH+, 644,5 (M+Na)+,
- 62 CZ 302766 B6 'Η NMR (DMSO), směs rotamerů přibližně 1:4: δ 8,54 & 8,27 (s, 1H), 8,06 - 7,99 (m, 1H), 7,96 - 7,91 (m, 1 H), 7,87 (d, J - 8 Hz, IH), 7,57 - 7,42 (m, 4H), 6,81 (d, J = 8 Hz, IH), 4,99 (d, J = 12 Hz, IH), 4,88 (d, J = 12 Hz, IH), 4,46-4,19 (m, 2H), 4,17-4,02 (m, 2H), 3,88- 3,67 (m, IH), 2,28-2,19 (m, IH), 2,05- 1,93 (rn, IH), 1,73- 1,43 (m, 8H), 1,321,07 (m, 6H), 1,28 (s, 9H), 1,03-0,85 (m,2H), 0,91 (t,J = 7,5, 15 Hz, 3H).
Příklad 26 io Syntéza sloučeniny 306
a) Za použití 192 mg (0,600 mmol) TBTU a 226 mg (1,75 mmol) DIPEA v 10 ml methy leníš chloridu se během 20 hodin sloučí 180 mg (0,500 mmol) kyseliny 26a a 96 mg (0,500 mmol) aminu I5d. Reakční směs se zahustí, zpracuje se ethylacetátem, promyje se dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za vzniku 26c jako hnědého oleje, který se použije v následujícím kroku syntézy bez dalšího zo čištění.
b) c) Přibližně 0,500 mmol surového sloučeniny 26c se 30 minut míchá v 4 ml chlorovodíku v dioxanu a zahustí se do sucha. Pevný produkt se zpracuje 10 ml methylenchloridu, a pak se postupně přidá 226 mg (1,75 mmol) DIPEA, 138 mg (0,500 mmol) monohydrátu Boc25 Chg-ΌΗ a 192 mg (0,600 mmol) TBTU. Roztok se 5 hodin míchá při teplotě místnosti.
Reakční směs se zahustí, zpracuje se ethylacetátem, promyje se dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Orga-63CZ 302766 B6 nicky podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za vzniku hnědého oleje, který se čistí rychlou chromatografií za vzniku 204 mg (výtěžek 64 % během dvou vazebných reakcí) sloučeniny 26d jako žlutého oleje.
'HNMR (CDCb): δ 8,77 - 8,74 (m, 1H), 8,14 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,69 (dd, J -9, 7 Hz. IH), 7,52 (d, J = 5 Hz, IH), 7,47 (dd, J - 8,7 Hz, 1 H), 6,78 (d, J - 5 Hz,
IH), 5,80-5,70 (m, 1 H), 5,35 - 5,27 (m, 2H), 5,14- 5,07 (m, 2H), 4,89- 4,83 (m, IH), 4,39 - 4,32 (m, IH), 4,30 - 4,24 (m, J H), 4,20 - 4,07 (m, 2H), 4,00 - 3,92 (m, 1H), 3,04 2.92 (m, 1H), 2,39-2,29 (m, 1H), 2,16 - 2,04 (m, IH), 1,91 - l,83(m, IH), 1,82- 1,62 (m, 7H), 1,45-1,35 (m, 9H), 1,27- 1,07 (m, 8H).
io
c) Ve 4 ml tetrahydrofuranu a 2 ml methanolu se rozpustí 136 mg (0,214 mmol) sloučeniny 26d. Přidají se 2 ml vodného roztoku 72 mg (1,72 mmol) hydrátu hydroxidu lithného a reakční směs se 20 hodin míchá při teplotě místnosti. Roztok se zahustí a čistí preparativní HPLC za vzniku 25 mg sloučeniny 306 (méně polární izomer) jako bílé pevné látky.
sloučenina 306:
Hmotnostní spektrum (FAB) 607,4 (MH+), lH NMR (DMSO-d6): δ 9,16 (d, J = 6 Hz, IH), 8,55 (s, IH), 8,35 (d, J “ 8 Hz, IH), 8,12 (d, J - 9 Hz, 1H), 8,05 (dd, J - 8,7 Hz, 1H), 7,76 (dd, J = 8,7 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 6 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 8 Hz, IH), 5,75 - 5,66 (m, 2H), 5,19 (d, J - 18 Hz, 1 H), 5,07 (d, J - 10 Hz, IH),
4,55 (d, J= 12 Hz, IH), 4,43 (dd, J = 10,8 Hz, IH), 4,03 (d, J ‘ 10 Hz, IH), 3,87- 3.83 (m,
IH). 2,66- 2,59 (m, IH), 2,36 - 2,30 (m, IH), 1,98 (dd, J = 18,9 Hz, IH), 1,75- 1,56 (m, 8 H), 1,38- 1,35 (m, IH), 1,25- 1,22 (m, 1 H), 1,09 (s, 9 H), 1,12-0,95 (m, 3H).
Příklad 27
Syntéza sloučeniny 307
-64CZ 302766 B6
c) Na roztok 505 mg (105 mmol) kyseliny (8) (příklad 8) v 5 mf dichlormethanu se působí 376 mg (1,17 mmol) TBTU. Do roztoku aktivovaného esteru se přidá 279 mg (1,46 mmol) hydrochloridu (R,S)-vinyl—AccaOEt (18) (příklad 18) v 7 ml dichlormethanu obsahující 0,60 ml (5,46 mmol) N-methylmorfolinu. Vytvořený roztok se přes noc míchá pri teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpařuje ve vakuu. Vytvořený zbytek se zředí ethylacetátem, dvakrát se promyje io nasyceným roztokem bikarbonátu sodného a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a odpařuje ve vakuu. Vytvořený zbytek se čistí chromatografií na silikagelu pri eluci směsí hexanů a ethylacetátu v poměru 60:40 za vzniku 173 mg dipeptidu 27c s výtěžkem 27 %.
-65CZ 302766 B6 d, e) Při teplotě místnosti se I hodinu míchá roztok 70 mg (0,1 14 mmol) dipeptidu 27c v 3 ml 4,0M roztoku chlorovodíku v 1,4-dioxanu (po 10 minutách vznikne sraženina). Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a vytvořených 0,114 mmol aminhydrochloridu 27d se zředí 1,5 ml acetonitrilu. Roztok se neutralizuje přidáním 65 μΙ (0,591 mmol) N-methylmorťolinu. Na roztok 39 mg (0,142 mmol) Bpc—ChgOH · FhO v 1,5 ml acetonitrilu se působí 46 mg (0,143 mmol) TBTU, a pak se vytvořený roztok přidá do shora uvedeného roztoku aminu. Vytvořený roztok se 2 dny míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu. Vytvořený zbytek se zředí ethylacetátem, dvakrát se promyje nasyío eeným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a odpařuje ve vakuu. Vznikne 86 mg (výtěžek 100 %) tripeptídu 27e. Surová výsledná sloučenina se použije v následujícím postupu syntézy bez dalšího čištění.
d) Do roztoku 86 mg (0,114 mmol) tripeptídu 27e v 5 ml směsi tetrahydrofuranu a vody v poměru 2,5 : 1 se přidá 22 mg (0,524 mmol) monohydrátu hydroxidu lithného. Přidá se dalších 0,25 ml methanolu za vzniku homogenního roztoku, který se přes noc míchá při teplotě místnosti, a pak se rozpouštědlo odpařuje ve vakuu. Vytvořený zbytek se rozdělí mezi vodu a ethylacetát. Vodný podíl se okyselí přidáním 1M roztoku kyseliny chlorovodí20 kové, a pak extrahuje dvakrát ethylacetátem. Požadovaná sloučenina se vyskytuje v ethylacetátu z první zásadité extrakce. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a odpařuje ve vakuu za vzniku 69 mg surové kyseliny, která se čistí preparativní HPLC. Sloučenina se rozpustí ve 4 ml methanolu a nastřikuje se na ekvilíbrovaný sorbent Whatman Partisil 10-ODS-3 (2,2 x 50cm) 08 reversní fáze kolony, (λ = 230 nm, rozpouštědlo A =
0,06% roztok kyseliny trifluoroctové ve vodě, rozpouštědlo B = 0,06% roztok kyseliny triťluoroctovč v methylkyanidu). Program čištění: od 20 do 70% rozpouštědla B během 60 minut. Podíly se analyzují analytickou HPLC. Podíly obsahující výsledný produkt se seberou a lyofiIizují za vzniku 50 mg (60%) požadovaného tripeptídu 307 jako bílé pevné látky, sloučenina 307:
lH NMR (DMSO-d6) rotamery: δ 8,86 (d, J = 2,5 Hz, IH), 8,85 (s, 0,2H), 8,64 (s, 0,8H),
8,49 (dd, J = 9,5, 3 Hz, 0,2H), 8,45 (dd, J = 9,2 Hz, 0,8H), 8,39 - 8,33 (m, 2H), 8,20 (d, J 9,5 Hz, 0,2H), 8,18 (d, J - 9,5 Hz, 0,8H), 7,81 (s, 0,2H), 7,78 (s, 0,8H), 7,64 - 7,56 (m, 3H), 6,87 (d, J = 8 Hz, 0,8H), 6,36 (d, J = 9 Hz, 0,2H), 5,82 - 5,67 (m, 2H), 5,27 - 5,17 (m, 1H), 5,09 - 5,03 (m, 1H), 4,73 (t, J - 8 Hz, 0,2H), 4,55 (dd, J - 10,7,5 Hz, 0,8H), 4,49 - 4,40 (m,
1H), 4,00 - 3,95 (m, 1H), 3,83 - 3,76 (m, 1H), 2,87 - 2,80 (m, 0,2H), 2,69 - 2,62 (m, 0,8H),
2,39- 2,26 (m, IH), 2,08- 2,00 (m, IH), 1,75- 1,41 (m, 7H), 1,37 (s, 1,8H), 1,32- 1,27 (m, 1H), 1,17 - 0,82 (m, 5H), 0,94 (s, 7,2H).
4o Příklad 28
Syntéza sloučeniny 311
-66 CZ 302766 B6
Sloučenina 311 se připraví podle postupu popsaného v příkladě 24, ale za použití odpovídajících stavebních jednotek.
Sloučenina 311: 'HNMR (DMSO-dó): δ 8,98 (d, J = 6 Hz, IH), 8,52 (s, IH), 8,24 (d, J = 9 Hz, 5 IH), 8,08 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 6 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 8 Hz, 1H),
5,75- 5,66 (m, IH), 5,57 (br s, IH), 5,24- 5,19 (m, IH), 5,08- 5,01 (m, IH), 4,57- 4,40 (m, 2H), 4,00 - 3,96 (m, i H), 3,82 (dd, J = 9,8 Hz, 1H), 2,59 - 2,54 (m, 1H), 2,32 - 2,26 (m, 1H), 1,99 (dd, J= 17,9 Hz, IH), 1,74 - 1,55 (m, 8 H), 1,37 (s, IH), 1,26- 1,22 (m, IH), 1,14- 1,08 (m,9H), 1,02-0,91 (m,3H).
o
Příklad 29
Syntéza sloučeniny 302
Sloučenina 302 se připraví podle postupu popsaného v příkladě 27, ale za použití odpovídajících stavebních jednotek.
'H NMR (DMSO-dé): δ 8,34 (s, IH), 8,04 - 8,01 (m, IH), 7,94- 7,92 (m, IH), 7,87 (d, J = 8 Hz, IH), 7,54 - 7,50 (m, 3H), 7,45 (dd, J= 17,8 Hz, 1H), 7,22 (d, J= 8 Hz, IH), 4,94 (dd, J = 55,12 Hz, 2H), 4,34 (s, IH), 4,27 (dd, J= 8,8 Hz, IH), 4,16 (d, J= 11 Hz, IH), 4,07 (dd, J = 8,8 Hz, 1H), 3,72 - 3,65 (m, 2H), 3,59 - 3,54 (m, 1H), 2,24 - 2,18 (m, 1H), 2,02 - 1,95 (m,2H), 1,75- 1,70 (m, IH), 1,53- 1,44 (m, 2H), 1,32 - 1,27 (m, IH), 1,21 - 1,17 (m, IH),
2? 0,96 - 0,85 (m, 10 H), 0,80 - 0,77 (m, 5 H), 0,62 - 0,57 (m, 1 H).
Příklad 30
Syntéza sloučeniny 308
308
-67Sloučenina 308 se připraví podle postupu popsaného v příkladě 27, ale za použití odpovídajících 35 stavebních jednotek.
'HNMR (DMSO—d6) rotamery » 2 : 8: δ 8,77 (s, 0,2H), 8,45 (s, 0,8H), 8,13 (d, J = 8,5 Hz,
0,8H), 8,03 (d, J = 8,5 Hz, 0,2H), 7,89-7,83 (m, IH), 7,55 - 7,37 (m, 4H), 7,05 - 6,59 (m, IH),
CZ. 302766 B6
6,95 (d, J = 8 Hz, 0,8H), 6,26 (d, J - 8,5 Hz, 0,2H), 5,81 - 5,64 (m, IH), 533 - 5,28 (m, IH), 5,26 - 5,15 (m, I H), 5,08 - 5,02 (m, 1H), 4,60 (t, J - 7,5 Hz, 0,2H), 4,38 - 4,27 (m, 1,8H), 4,09 3,91 (m, l,8H), 3,74 (dd, J~ 12,5. 4 Hz, 0,2H), 2,69- 2,60 (m, 0,211), 2,50- 2,40 (m, IH), 236 - 2,28 (m, 0,2H), 2,23 - 2,14 (m, 0,8H), 2,05 - 1,97 (m, 0,8H), 1.76 - 1,44 (m, 7H), 1,37 (s,
1.8H), 1,29 (s. 7,2H), 1,28- 1,20 (m, IH), 1,16 -0,88 (m, 5H).
Příklad 31 ío Syntéza sloučeniny 309
Sloučenina 309 se připraví podle postupu popsaného v příkladě 27, ale za použití odpovídajících 15 stavebních jednotek.
'HNMR (DMSO-dft) rotamery « 2 : 8: δ 8,75 (s, 0,2H), 8,50 (s, 0,8H), 7,89-7,78 (m, 3H), 7,50-7,44 (m, IH), 7,42 - 7,32 (m, 2H), 7,17-7,09 (m, 0,8H), 7,08- 7,03 (m, 0,2H), 6,79 (d, J = 8,5 Hz, 0,8H), 6,33 (d, J - 9 Hz, 0,2H), 5,81 -5,65 (m, IH), 5,30-5,16 (m, 2H), 5,10-5,02 (m, IH), 4,56 (t, J - 7,5 Hz, 0,2H), 433 (t, J = 8 Hz, 0,8H), 4,10-3,90 (m, 2,8H), 3,74-3,68 (m, 0,2H), 2,45 - 2,37 (m, IH), 2,34 - 2,17 (m, IH), 2,05 - 1,97 (m, IH), 1,76- 1,48 (m,7H),
1,37 (s, 1,8H), 1,23 (s, 7,2H), 1,21 -0,88 (m, 6H).
Příklad 32
Syntéza sloučeniny 305
O o
305
Sloučenina 305 se připraví podle postupu popsaného v příkladě 27, ale za použití odpovídajících stavebních jednotek.
' H NMR (DMSO-d6) rotamery (1:9): δ 8,68 (s, 0,1H), 8,43 (s, 0,9H), 8,04 - 8,00 (m, I H), 7,95 7,91 (m, IH), 7,87 (d, J= 8,5 Hz, IH), 7.57 -7,49 (m, 3H), 7,47 - 7,42 (m, IH), 6,82 (d,
J - 8,5 Hz, 0,9H), 6,21 (d, J = 8,5 Hz, 0,1 H), 5,80- 5,64 (m, IH), 5,21 (dd, J = 17,2 Hz, 0,lH),
5,18 (dd, J= 17,2 Hz, 0,9H), 5,06 (dd, J= 10,5, 2 Hz, IH), 5,02 - 4,85 (m, 2H), 4,43 (t,
-68 CZ 302766 B6
J = 7,5 Hz, 0,lH), 4,34 (brs, IH), 4,23 (t, J = 8,5 Hz, 0,9H), 4,16-4,05 (m, 1,8H), 3,89-3,82 (m, 0,2H), 3,74 (dd, J = 11, 3,5 Hz, 0,9H), 3,53 (dd, J = 12, 5,4 Hz, 0,1 H), 2,30-2,21 (m, IH), 2,02- 1,94 (ιη, 2H), 1,74- 1,38 (m, 7H), 1,36 (s, 0,9H), 1,28 (s, 8, I Η), 1,25 - 0,87 (m, 6H).
Příklad 33
Syntéza sloučeniny 303
303
Sloučenina 303 se připraví podle postupu popsaného v příkladě 27, ale za použití odpovídajících stavebních jednotek.
‘HNMR (DMSO-dé): δ 8,29 (s, IH), 8,04 - 8,01 (m, IH), 7,94 - 7,92 (m, 1 H), 7,87 (d, 15 J 8 Hz, IH), 7,56- 7,52 (m, 3H), 7,46 (dd, J = 8,7 Hz, IH), 7,19 (d, J = 9 Hz, 1H), 5,01 (d,
J = 12 Hz, IH), 4,86 (d, J - 12 Hz, IH), 4,34 (brs, 1H), 4,24 (t, J = 8 Hz, l H), 4,18-4,09 (m,2H), 3,74 - 3,53 (m, 3H), 2,24- 2,18 (m, IH), 2,04- 1,95 (m, IH), 1,74- 1,45 (m, 10 H), 1,31 - 1, 13 (m, 4 H), 0,96 - 0,86 (m, 7 H), 0,79 - 0,76 (m, 5 H).
Příklad 34
Syntéza sloučeniny 403
1, vodný LiOH vodný CH3OH
2. TBTU DIEA
COjCH,
DMF (I9e)
NHrHCl
-69a) Vazebná reakce P2 s Pl
Při teplotě místnosti se 1 hodinu míchá 170 mg (0,355 mmol) methylesterového derivátu 7 (34a) ve 4 ml 50% roztoku tetrahydrofuranu v methanolu a 1 ml 1M vodného roztoku hydroxidu lithného. Roztok se zahustí (Rotavap, 30 °C), zbytek se okyselí k pH 6 a roztok se lyofilizuje.
Vytvořený prášek se míchá v 3 ml bezvodého dimethylformamidu za přítomnosti 0,4 ml DIEA, a následně se postupně přidá 140 mg (0,845 mmol) hydrochloridu methyiesteru 1,1-aminocyklobutylkarboxylové kyseliny 34b a 134 mg (0,417 mmol) TBTU. Po 18 hodinách míchání pri teplotě místnosti se směs čistí rychlou chromatografií na silikagelu (230-400 Mesh) při eluci směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 1:2 za vzniku 98 mg (čistota podle HPLC 90%) oranžového oleje.
b) Vazebná reakce P1-P2 s P3
1. HCI/dioxan 2- ΒοοΝΗ^χΟ,Η
Τ'
TBTU /DIEA/DMF
3. vodný KOH
4. vodný TFA
403
IO
V 5 ml 4N roztoku chlorovodíkové v dioxanu se l hodinu míchá 97 mg (90 %, 0,155 mmol) dipeptidu 34b pri teplotě místnosti. Roztok se pak zahustí do sucha (Rotavap, vysoké vakuum) za vzniku béžové pevné látky. Tento materiál se míchá ve 2 ml bezvodého dimethylformamidu pri teplotě místnosti za přítomnosti 0,4 ml DIEA, a následně se přidá 80 mg (0,35 mmol) L-Boe15 Tbg a 112 mg (0,35 mmol) TBTU. Po 2 dnech míchání při teplotě místnosti se roztok vlije do ethylacetátu k získání volných bází za použití 5% vodného roztoku uhličitanu draselného. Organický podíl se zpracuje za vzniku žlutého olejovítého zbytku. Materiál se čistí rychlou chromatografií na silikagelu (230 až 400 Mesh) za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 1:2 a 3:1. Získá se 40 mg oleje, podle HPLC homogenního.
Mícháním při teplotě místnosti se během 3 hodin saponifikuje 40 mg methyiesteru ve 2 ml IN roztoku hydroxidu draselného ve 4 ml methanolu. Reakční směs se zahustí (Rotavap, 30 °C) a kpH 4 se okyselí přidáním 2N roztoku kyseliny chlorovodíkové. Směs se čistí preparativní HPLC na Cl8 koloně při eluci gradientem koncentrací vodného roztoku acetonitrilu od 0 do
50 % obsahujícího 0,1 % roztok kyseliny trifluoroctové pri 220 nm. Podíly obsahující požadovaný produkt se oddělí, zahustí na poloviční objem a lyofilizuje se za vzniku 10 mg sloučeniny 403 bílé pevné látky.
'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ směs rotamerů: NH+ (IH, s, 8,6 ppm), CH (3H, m, 8,2 ppm), Ph (5H, široké s, 7,66 a 7,53 ppm), CH (IH, široké, 7,22 ppm), NH (IH, d, J= 7,6 Hz,
6,71 ppm), CHO (1H, široké s, 5,76 ppm), CH (2H, m, 4,58 - 4,49 ppm), CH (1H, m, 4,04 ppm),
CH3O (3H, s, 3,97 ppm), CH (1 H, d, 3,86 ppm), CH (7H, velmi široké, 1,8 - 2,6 ppm), Boc skup. (9H, s, 1,25 ppm) a t -butyl skup. (9H, s, 0,97 ppm).
Hmotnostní spektrometrie: M+H+ pri m/e 675 (100 %),
HPLC vrchol 98 % pri teplotě 18,9 minut.
Příklad 35
Syntéza sloučeniny 333 (tabulka 3)
- 70CZ 302766 B6
Roztok 9,15 ml (81,4 mmol) m-anisidinu 35a a 10,0 ml (81,3 mmol) dimethylacetylendikarboxylátu 35b ve 160 ml methanolu se 2 hodiny zahřívá pod refluxem. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se čistí rychlou chromatografií na koloně při eiuei směsí hexanů a ethylacetátu v poměru 90:10. Získá se 17,0 g (79% výtěžek) sloučeniny 35c jako oranžového oleje.
'HNMR (CDCb): δ 9,62 (široké s, IH), 7,17 (dd, J = 7 a 8,5 Hz, I H), 6,66- 6,62 (m, IH), 6,49 - 6,45 (m, 2H), 5,38 (s, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,71 (s, 3H).
io
V lázni písku při vnitřní teplotě přibližně 250 °C se zahřívá 50 ml difenyléteru. V 5 ml difenyléteru se rozpustí 7,5 g (28,3 mmol) sloučeniny 35c a roztok se během 2 minut přidá do vroucího rozpouštědla. Směs se 5 minut zahřívá, a reakční směs se pak nechá zchladit na teplotu místnosti. Rychle se vytvoří béžová pevná látka jako sraženina, která se oddělí filtrací, a pak se rozetře s methanolem. Vznikne 4,Ig (62% výtěžek) požadované sloučeniny 35d.
Ή NMR (DMSO—d6): δ 7,97 (d, J = 9 Hz, IH), 7,40 (d, J = 2 Hz, IH), 6,96 (dd, J - 9 a 2 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,84 (s, 3H).
(35g)
- 71 Roztok 1,71 g (5,33 mmol) derivátu cis-4-hydroxy-L-prolinu 35e, 1,25 g (5,36 mmol) derivátu 4-hydroxychinolinu 35f a 2,80 g (10,68 mmol) trifenylfosfinu v 75 ml tetrahydrofuranu se zchladí na teplotu 0 °C, pomalu po kapkách se během 1 hodiny přidá 1,70 ml (10,80 mmol) DEAD.
Reakční směs se pak nechá zahřát pomalu na teplotu místnosti a v míchání se pokračuje přes noc.
Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se čistí rychlou chromatografií při eluci směsí ethylacetátu a hexanů v poměru 70:30. Vznikne 0,7 g čisté sloučeniny 35g a 1,8 g sloučeniny 35g kontaminované přibližně 50% trifenylfosfátoxidem jako bílé pevné látky.
'HNMR (CDCh) rotamery v poměru 4: 6: Ó 8,04 (d, J - 9 Hz, IH), 7,54 (d, J = 2,5 Hz, IH), 7,40-7,32 (m,6H), 7,23 (dd, J = 9 a 2,5 Hz, IH), 5,33-5,13 (m, 3H), 4,66 (t, J = 7,5 Hz, 0,4H), 4,54 (t, J = 8 Hz, 0,6H), 4,07 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 4,04 - 3,80 (m, 2H), 2,78 - 2,65 (m, IH), 2,47 -2,34(m, IH), 1.45 (s, 3,6H), 1,37 (s, 5,4H).
Do roztoku 0,70 g (1,31 mmol) benzylesteru derivátu prolinu 35g ve směsi 10 ml methanolu a 10 ml ethylacetátu se přidá 100 mg 10% katalyzátoru palladia na aktivním uhlí. Vytvořená susm penze se míchá pri teplotě místnosti v atmosféře vodíku 1,5 hodiny. Katalyzátor se pak filtruje na filtrační jednotce Millex-HV Millipore (0,45 pm) a rozpouštědlo se odpařuje ve vakuu. Vytvoří se kvantitativní výtěžek 0,59 g požadované kyseliny 35h.
'H NMR (CDCh) rotamery v poměru 70:30: δ 8,06 (d, J - 9,5 Hz, 0,3H), 8,01 (d, J = 9 Hz, 0,7 H), 7,56 (d, J = 2 Hz, IH), 7,44 (široké s, 0,7 H), 7,41 (široké s, 0,3 H), 7,24 (dd, J = 9 H),
4,08 (s, 3H), 3,95 (s, 3H), 4,04 - 3,80 (m, 2H), 2,83 -2,72 (m, IH), 2,71 - 2,47 (m, IH), 1,46 (s, 9H).
Na 215 mg (1,21 mmol) soli aminu 35i v 7 ml acetonitrilu se působí 0,95 ml (5,45 mmol) D1EA. Tento roztok se pak přidá do roztoku 590 mg (1,32 mmol) kyseliny 35h a 389 mg (1,21 mmol) TBTU v 5 ml methylkyanidu. Vytvořený roztok se přes noc míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se zředí ethylacetátem a promyje dvakrát nasyceným roztokem bikarbonátu sodného, jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného a suší se nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se čistí rychlou chromatografií na koloně pri eluci směsí ethylacetátu a hexanů v poměru 75:25 za vzniku 527 mg (70% výtěžek) požadovaného dipeptidu 35j, 'HNMR (CDCh): δ 8,01 (d, J “ 9 Hz, IH), 7,55 (d, J = 2,5 Hz, IH), 7,45 (s, IH), 7,22 (dd, J = 9 a 2,5 Hz, IH), 5,81 -5,71 (m, IH), 5,36- 5,28 (m, 2H), 5,18-5,12 (m, 1H), 4,61-4,45 (m,
IH), 4,07 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 3,91 - 3,74 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,99- 2,84 (m, IH), 2,492,34 (m, IH), 2,20-2,08 (m, IH), 1,97- 1,84 (m, IH), 1,58- 1,52 (m, IH), 1.44(s,9H).
- 72 CZ 302766 B6
(350 (35k)
Roztok 716 mg (1,25 mmol) diesteru 35j ve směsi 1,5 ml tetrahydrofuranu a 1,5 ml methanolu se zchladí na teplotu 0 °C, a pak se na zchlazený reakční roztok působí 1,25 ml (1,25 mmol) 1M vodného roztoku hydroxidu sodného. Po l hodině míchání při teplotě 0 °C se směs neutralizuje přidáním 3 kapek ledové kyseliny octové. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a sloučenina se suší několikahodinovým odčerpáváním.
(35k) (351)
Roztok 1,25 mmol sodné soli kyseliny 35k a 0,19 ml (1,36 mmol) triethylnitritu v 8 ml tetrahydrofuranu se zchladí na teplotu 0 °C a přidá se 0,18 ml (1,39 mmol) izobutylchlormravenčanu. Po 40 minutách se přidá 9 ml (6,30 mmol) diazomethanu a vytvořený roztok se 30 minut míchá při teplotě 0 °C a 2 hodiny při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu.
Vytvořený zbytek se zředí ethylacetátem, dvakrát se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného a suší se nad síranem hořečnatým, rozpouštědlo se odpařuje ve vakuu a zbytek se čistí rychlou chromatografií na koloně při eluci směsí hexanů a ethylacetátu v poměru 50:50 za vzniku 378 mg (52% výtěžek) požadovaného diazoketonu 351.
!H NMR (CDCI3): δ 8,00 (d, J = 9 Hz, IH), 7,42 (s, IH), 7,35 (d, J = 2,5 Hz, IH), 7,20 (dd, J = 9 a 2,5 Hz, IH), 6,92 (s, IH), 5,81 - 5,71 (m, IH), 5,35 - 5,28 (m, 3H), 5,17-5,13 (m, IH), 4,61 4,40 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,96 - 3,74 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,94 - 2,38 (m, 2H), 2,18- 2,06 (m, IH), 1,98- 1,84 (m, IH), 1,57-1,52 (m, IH), 1,42 (s, 9H).
-73 CZ 302766 B6
Do zchlazeného (0 °C) roztoku 0,37 g (0,642 mmol) diazoketonu 351 v 15 ml tetrahydrofuranu se přidá 0,25 ml 48 % bromovodíku. Vytvořený žlutý roztok se 1 hodinu míchá při teplotě 0 °C.
Reakční směs se rozdělí mezi ethylacetát a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organický podílí se ještě jednou promyje hydrogenuhličitanem sodným a suší se nad síranem sodným. Po odpařování rozpouštědla ve vakuu vznikne 0,36 g (90% výtěžek) α-bromketonu 35m.
(3Sm)
Na roztok 170 mg (0,271 mmol) u-bromketonu 35m v 10 ml izopropanolu se působí 64 mg (0,542 mmol) l-acetyl-2-thiomočoviny. Vytvořený roztok se 1 hodinu zahřívá na teplotu 75 °C. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Vytvořený zbytek se zředí ethylacetátem a dvakrát se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného a suší se nad síranem hořečnatým. Odpařováním rozpouštědla ve vakuu vznikne 182 mg (výtěžek vyšší než 100 %) surového produktu 35n.
- 74 CZ 302766 B6
Na 145 mg (0,223 mmol) dipeptidu 35n se působí 3 ml 4M roztoku chlorovodíku v dioxanu. Vytvořený roztok se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se suší odčerpáváním. Na sůl aminu 35o v 5 ml methylkyanidu se působí 195 μΐ (1,12 mmol) DIEA. Tento roztok se pak přidá do roztoku 103 mg (0,446 mmol) Boc-terc— butylglycinu a 186 mg (0,489 mmol) HATU v 3 ml methylkyanidu. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti. Methylkyanid se odpaří ve vakuu a vytvořený zbytek se zředí ethylacetátem, dvakrát se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, jedenkrát nasytí ceným roztokem chloridu sodného a suší nad síranem horečnatým. Po odstranění rozpouštědla se získá 274 mg (> 100 %) surového tripeptidu 35p.
- 75 CZ 302766 B6
Roztok 56 mg (0,0733 mmol) tripeptidu 35p ve 4 ml 4M roztoku chlorovodíku v dioxanu se 2 hodiny míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se suší odčerpáváním.
Získaná sůl aminu se rozpustí ve 4 ml methylenehlorídu a na roztok se působí 0,13 ml (0,746 mmol) DIEA, a následně 26 mg (0,0876 mmol) trifosgenu. Po 3 hodinách inkubace se přidá 20 mg (0,146 mmol) 1,2,2-trimethylpropylaminu (jehož syntéza je popsaná vN. Moss, J. io Gauthier, J. M. Ferla, Feb. 1995, SynLett, (2), str. 142-144). Ledová lázeň se odstraní a reakční směs se přes noc míchá pri teplotě místnosti. Po odpaření methylenehlorídu ve vakuu se vytvořený zbytek zředí ethylacetátem, dvakrát se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného a suší se nad síranem hořečnatým za vzniku 60 mg (výtěžek 100 %) požadované močoviny 35q.
-76CZ 302766 B6
Na roztok 57 mg (0,721 mmol) methylesteru 35q ve směsi 2,5 ml tetrahydrofuranu a 1 ml vody se působí 25 mg (0,595 mmol) pevného hydrátu hydroxidu lithného (LiOH - H?O), a následně se přidá 1 ml methanolu k vytvoření čirého roztoku. Po 4 hodinách míchání při teplotě místnosti se reakční směs neutralizuje přidáním IM roztoku chlorovodíku. Rozpouštědlo se odstraní odpařo5 váním ve vakuu a zbytek se čistí preparativní chromatografií. Sloučenina se rozpustí v 2,5 ml methanolu, vstříkne se na ekvilibrovaný sorbent Whatman Partisil 10-ODS-3 (2,2 x 50 cm) CI8kolony v reverzní fázi. Postup čistění: lineární gradient rychlosti průtoku 20 ml/min, λ 220 nm, vstříknuto pri 10% A do 60% A během 60 minut. A: 0,06% roztok kyseliny trifluoroctové v methylkyanidu; B: 0,06% kyseliny trifluoroctové ve vodě. Podíly se analyzují analytickou io HPLC. Produkt sebere a lyofilizuje za vzniku 15 mg sloučeniny 333 jako špinavě bílé pevné látky s 27 % výtěžkem.
‘H NMR (DMSO-dfi): δ 8,88 (s, 0,2H), 8,84 (d, J = 4,5 Hz, 0,2H), 8,68 (d, J = 8,5 Hz, 0. H), 8,56 (s, 0,8H), 8,40-8,13 (m, l,5H), 7,96 (d, J = 9,0 Hz, 0,2H), 7,72 - 7,44 (m, 2,4H), 7,35 - 7,09 (m, 1,2H), 6,98 (d, J = 9 Hz, 0,2H), 6,15 (d, J = 9 Hz, 0,2H), 6,06 (d, J - 9 Hz, 0,8H), 5,93 (d, J = i? 9,5 Hz. 0,24H), 5,86 (d, J = 9 Hz, 0,8H), 5,79- 5,67 (m, IH), 5,69 -5,44 (m, IH), 5,24 - 5,14 (m, 1H), 5,09 - 5,01 (m, 1H), 4,50 - 4,35 (m, 2H), 4,24 (d, J = 9,0 Hz, 0,2H), 4,20 (d, J - 9,0 Hz,
0,8H), 4,06 - 3,98 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,77 - 3,60 (m, 2H), 2,58 - 2,50 (m, 1H), 2,33 - 2,28 (m, IH), 2,22 (s, 2,4H), 2,21 (s, 0,ÓH), 2,02 (q, J = 9 Hz, IH), 1,56- 1,38 (m, JH), 1,28- 1,22 (m, 1H), 0,97 (s, 9H), 0,83 (d, J - 6 Hz, 3H), 0,72 (s, 9H). zo Hmotnostní spektrum (FAB) 778,3 (m + H) +, 776,3 (M-H)-.
Příklad 36
Klonování, exprese a čistění rekombinantní proteázy NS3 viru HCV typu 1 b.
Sérum virem HCV infikovaného pacienta se získá širší spoluprací vědeckých týmů (Bernard Willems MD, Hópital St-Luc, Montreal, Kanada a Dr. Donald Murfy, Laboratoire de Santé Publique du Québec, Ste-Anne de Bellevue, Canada). Kopie HCV genomu, resp. cDNA v celé délce, která se získá reverzní tran skřípe i-polymerázo vou řetězovou reakcí (RT-PCR) sérové RNA za použití specifických primerů vybraných na základě homologie mezi ostatními liniemi genotypu lb. Tento HCV izolát byl zařazen do genotypové skupiny lb (Simmonds a spol., J. Clin. Microbiol., (1993), 31, str. 1493 až 1503) na základě stanovení jeho kompletní genom ické sekvence. Sekvence aminokyselin nestrukturální oblastí NS2-NS4B se ukázala z více než 93 % identická s HCV genotypem 1 b (BK, JK a 483 izolantů) a z 88 % identická s HCV genotypem 1 a (HCV1 izolát). DNA fragment kódující póly proteinový prekurzor (NS3/NS4A/NS4B/NS5A/ /NS5B) se vyrobí pomocí PCR a zavede se do eukaryontního expresního vektoru. Po přechodné transfekci se zpracování polyproteinu zprostředkované proteázou NS3 viru HCV projeví při Westem-blot analýze přítomnosti kompletního funkčního NS3 proteinu. Tento NS3 protein se neprojevil expresí polyproteinového prekurzorů s mutací Sl 165A, která inaktivuje NS3 proteázu, čímž se potvrzuje funkční schopnost proteázy NS3 víru HCV.
DNA fragment kódující rekombinantní proteázu NS3 viru HCV (aminokyseliny 1027 až 1206) se klonuje v bakteriálním expresním vektoru pETl ld. Exprese NS3 proteázy v E. coli BL21 (DE3) pLysS se navodí 3 hodinovou inkubací lmM roztokem iPTG pri teplotě 22 °C. Fermentací (18 I) vznikne přibližně 100 g vlhké buněčné pasty. Buňky se znovu uvedou do suspenze v 3,0 ml/g lyzátového pufru obsahujícího 25mM roztok fosfátu sodného o pH 7,5, 10% objemových glycerolu, lmM roztok EDTA a 0,01% NP-40 a uskladní se při teplotě -80 °C . Buňky se rozmrazí a homogenizují s následným přidáním 5mM roztoku DTT. Přidá se chlorid hořečnatý a DNáza do konečné koncentrace homogenátu 20mM a 20 gg/ml. Po 25 minutách inkubace při teplotě 4 °C se homogenát zpracuje působením ultrazvuku a centrifuguje se 30 minut při 15000xg při teplotě °C. Hodnota pH supematantu se pak upraví na 6,5 za použití 1M roztoku fosfátu sodného.
-77CZ 302766 B6
K postupu čištění ve dvou krocích popsanému ve zveřejněné přihlášce WO 95/22 985 se přidá ještě gelová filtrace. Supernatant z bakteriálního extraktu vstříkne na sorbent kolony SP H i Trap (Pharmacia), který se předem ekvilibruje v pufru A o rychlosti průtoku 2 ml/min (50mM roztok fosfátu sodného o pH 6,5, 10% glycerol, ImM roztok EDTA, 5mM roztok DTT, 0,01 % NP-40).
Kolona se promyje pufrem A obsahujícím 0,15M roztok chloridu sodného a proteáza se eluuje deseti objemy kolony lineárním gradientem od 0,15 do 0,3M roztoku chloridu sodného. Podíly obsahující NS3 proteázu se spojí a zředí do konečné koncentrace 0,lM chloridu sodného. Enzym se dále čistí na koloně HiTrap Heparin (Pharmacia), jejíž sorbent se ekvilibruje pufrem B (25mM roztok fosfátu sodného o pH 7,5, 10% glycerol, 5mM roztok DTT, 0,01 % NP-40). Vzorek io nastřikuje při průtokové rychlosti 3 ml/min. Kolona se pak promyje pufrem B obsahujícím 0,15M roztok chloridu sodného průtokovou rychlostí 1,5 ml/min. Promytí se provede ve dvou krocích za přítomnosti pufru B obsahujícího 0,3 nebo ÍM roztok chloridu sodného. Proteáza se promyje 0,3M roztokem chloridu sodného, trojnásobně se zředí pufrem B, a znovu se umístí na kolonu HiTrap Heparin při eluci pufrem B obsahujícím 0,4M roztok chloridu sodného. Podíly obsahující
NS3 proteázu se umístí na kolonu Superdex 75 HiLoad 16/60 (Pharmacia) ekvilibrované pufrem B obsahujícím 0,3 M roztok chloridu sodného. Podle SDS-PAGE a následná denzitometrické analýzy je čistota proteázy NS3 viru HCV získané ze spojených podílů vyšší než 95 %. Enzym se uskladní při teplotě -80 °C, a před použitím se rozmrazí na ledu a zředí.
Příklad 37
Radiometrické hodnocení působení komplexu rekombinantní proteázy NS3 viru HCV a NS4A
2? peptidového kofaktorů
Enzym se klonuje, exprimuje a připraví podle postupu popsaného v příkladě 30. Enzym se uskladní při teplotě -80 °C, rozmrazí se na ledu a před zkouškou se zředí pufrem pro zkoušku obsahujícím peptidový NS4A kofaktor.
Mezi cysteinovými a serinovými zbytky se enzymaticky štěpí substrát pro radiometrickou zkoušku DDIVPC-SMSYTW. Sekvence DDIBPC-SMSYTW odpovídá přirozenému místu štěpení NS5A/NS5B, kde cysteinový zbytek v segmentu P2 se nahradil prolinem. Peptidový substrát DDIVPC-SMSYTW a indikátor biotin-DDIVPC-SMS['25l-Y]TW se inkubují s rekombinantní
N3 proteázou a NS4A peptidovým kofaktorem KKGSVVIVGRIILSGRK (molární poměr enzym : kofaktor = 1:100) bez nebo s použitím inhibitorů. Oddělení substrátu z produktu se provede přidáním kuliček avidinem obalené agarózy, a následně filtrací. Z množství SMS[125I-Y]TW produktu ve filtrátu lze vypočítat přeměnu substrátu v procentech a procenta inhibice.
A. Činidla
Tris a Tris-HCl (UltraPure) vyrábí firma Gibco-BRL. Glycerol (UltraPure), MES a BSA vyrábí firma Sigma. TCEP lze získat od firmy Pierce, DMSO z Aldrich a hydroxid sodný z Anachemia.
Pufr pro zkoušku: 50mM roztok Tris HCI o pH 7,5, 30% hmotnostně/objemová glycerolu, 1 mg/ml BSA, ImM roztok TCEP (TCEP se přidá před použitím z 1M zásobního roztoku ve vodě).
Substrát: DDIVPCSMSYTW, konečná koncentrace 25μΜ (k zabránění oxidace se používá z
2rnM zásobního roztoku v DMSO uskladněného při teplotě -20 °C).
Indikátor: redukovaný monojodovaný substrát biotin DDIVPC SMS[I25I Y]TW o výsledné koncentraci přibližně lnM.
- 78 CZ 302766 B6
Proteáza NS3 viru HCV typu 1b o konečné koncentraci 25nM (ze zásobního roztoku 50mM fosfátu sodného o pH 7,5 10% glycerolu, 300mM roztoku chloridu sodného, 5mM DTT, 0,01 %NP40).
Peptidový NS4A kofaktor: KKGSVVIVGRIILSGRK, konečná koncentrace roztoku 2,5μΜ (ze
2mM zásobního roztoku v DMSO uskladněného při teplotě -20 °C).
B. Protokol postupu io Zkouška se provede na polypropylenové plotně s 96 prohlubněmi firmy Costar. Každá prohlubeň obsahuje:
μΐ substrátu / indikátoru v pufru pro zkoušku μΐ ± inhibitoru v 20% roztoku DMSO / pufru pro zkoušku μΙ NS3 proteázy typu 1 b / NS4 peptidový kofaktor 15 (molární poměr = 1 : 100).
Slepý vzorek (žádný inhibitor a žádný enzym) a kontrolní vzorek (žádný inhibitor) se také připraví na stejné plotně zkoušky.
2o Enzymatická reakce se zahájí přidáním roztoku komplexu enzymu a NS4A peptidů a zkoumaná směs se 40 minut ínkubuje při teplotě 23 °C při mírné agitaci. K ukončení enzymatické reakce se přidá 10 μΐ 0,5N roztoku hydroxidu sodného a 10 μΙ ÍM roztoku MES o pH 5,8.
Na filtrační desku Millipore MADP N65 se přidá 20 μΐ kuliček avidinem obalené agarózy (Pierce). Po ukončení enzymatické reakce se zkoumaná směs přenese na filtrační desku a při mírné agitací se ínkubuje 60 minut při teplotě 23 °C.
Desky se filtrují za použití filtračního zařízení Millipore MultiScreen Vacuum Manífold Filtration. Na neprůhlednou desku s 96 prohlubněmi obsahující 60 μΙ scintilačního kokteílu v každé prohlubni se přenese 40 μΐ filtrátu.
Radioaktivita filtrátu se měří na zařízení TopCount firmy Packard s použitím protokolu pro Ikapalinaza 1 minutu.
Procenta inhibice se vypočítají podle následující rovníce:
100-[(poěetmh-početsiep)/(početkontr - početslep) x 100]
Výsledky experimentu s různými koncentracemi inhibitoru byly proloženy nelineární křivkou na základě Hillova modelu a byla určena IC50 (koncentrace vedoucí k 50% inhibicí) za použití SAS softwarového programu (Statistical Software System, SAS Institute, lne. C Cary, N. C.).
Příklad 38
Sledování aktivity NS3-NS4A heterodi měrového proteinu (o celé délce)
Nekódující segment NS2-NS5B-3' se klonuje pomocí RT-PCR ve vektoru pCR®3 (Invitrogen) za použití RNA extrahované ze séra infikovaného jedince virem HCV genotypem 1b (poskytnulo tého Dr. Bernardem Willemsem, Hópital St-Luc, Montreal, Québec, Canada). DNA oblast NS3NS4A se nejprve klonuje pomocí PCR ve vektoru exprese bakuloviru pFastBac HTa (Gibco/BRL). Vektorová sekvence obsahuje oblast kódující 28-zbytek N-terminální sekvenci o zbytcích se značkou z 6 hístidinů. Systém exprese bakuloviru Bac-to-Bac™ (Gibco/BRL) se
-79CZ 302766 B6 použije k přípravě rekombinantního bakuloviru. I leterodimerový zralý protein NS3 a NS4A o plné délce (His-NS3-NS4AFE) se exprimuje 0.1 až 0,2 násobnou infekcí 0ft Sf21 buněk / ml rekombinantním bakuloviretn při teplotě 27 °C. Infikovaná kultura buněk se sklidí po 48 až 64 hodinách odstředěním při teplotě 4 °C.
Buněčná peleta se homogenizuje v 50mM roztoku NaPO4 o pH 7,5, 40% hmotnostně objemových glycerolu a 2mM roztoku β-merkaptoethanolu za přítomnosti směsi proteázových inhibitorů. His-NS3-NS4AFL se z buněčného lyzátu extrahuje za použití 1.5%NP-40, 0,5% TritonX100, 0,5M chloridu sodného a DNázy. Po odstředění ultracentrifugou se rozpustný extrakt ío čtyřnásobně zředí a absorbuje na chelatační kolonu Pharmacia Hi-Trap Ni-, kde se His-NS3NS4AFL eluuje ve více než 90% formě (podle SDS-PAGE) gradientem 50 až 400mM roztoku imidazolu. Tento produkt. His-NS3-NS4AFL se uskladní při teplotě -80 °C v 50mM roztoku fosfátu sodného o pH 7,5, 10% (hmotnostně/objemových) glycerol, 0,5M roztok chloridu sodného, 0.25M roztok imidazolu, 0,1% NP-40. Produkt se před použitím rozmrazí na ledu a is zředí.
Aktivita proteázy His-NS3-NS4AFL se sleduje v 50mM roztoku Tris-HCI o pH 8,0, 0,25M roztoku citrátu sodného, 0,01 % (hmotnostně/objemových) n-dodecyl-j3-D-maltosidu a lmM roztoku TCEP. Roztok l,5nM Hís-NS3-NS4AFL se 45 minut inkubuje při teplotě 23 °C s 5μΜ roztokem vnitřně zhašeného substrátu antranilyl-DDIVPAbu[C(0)-01-AMY(3-N02)TW-OH za přítomnosti různých koncentrací inhibitoru. Konečná koncentrace DMSO nepřesáhla 5,25 %. Reakce se ukončí přidáním 1 M roztoku MES o pH 5,8. Fluorescence N-koncového produktu se odečítá fiuorimetrem Perkin-Elmer LS-50B vybaveném čtečkou plotny s 96 prohlubněmi (vlnová délka excitačního záření: 325 nm, vlnová délka emisního záření: 423 nm). Výsledky experi25 mentu s různými koncentracemi inhibitoru byly proloženy nelineární křivkou na základě Hillova modelu a byla určena IC50 (koncentrace vedoucí k 50% inhibici) za použití SAS softwarového programu (Statistical Software System, SAS Institute, lne. Cary, N. C.).
Příklad 39
Sledování účinku NS3 proteázy v buňkách
Sledování se provede na linii lidských buněk získaných z hepatomu označovaných jako Huh-7. 35 Do buněk byly současně transfekci zavedeny 2 DNA systémy:
1. systém exprimující polyprotein obsahující nestrukturální proteiny viru HCV ve fúzi s tTA v následujícím pořadí: NS3—NS4A—NS4B—NS5A—tTA (označovaný jako NS3),
2. systém exprimující re porte rový protein, sekreční alkalickou fosfatázu, pod kontrolou tTA (označovaný jako SEAP).
K uvolnění zralých proteinů se polyprotein musí štěpit NS3 proteázou. Po uvolnění zralých proteinů se předpokládá, že virové proteiny vytvoří komplex na membráně endoplazmatického retikula, zatímco tTA migruje do jádra a změní aktivitu SEAP genu. Z toho vyplývá, že by snížení NS3 proteolytické aktivity mělo vést ke snížení hladiny zralého tTA a k průvodnímu snížení
SEAP aktivity.
Ke kontrole ostatních účinků sloučenin se provede paralelní transfekce, kde se systém exprimujíct samotný tTA (označovaný tTA) současně transfekuje systémem SEAP tak, aby aktivita SEAP byla nezávislá na NS3 proteolytické aktivitě.
Protokol postupu zkoušky:
Buňky Huh-7 se pěstují na CHO-SFMII + 10% FCS (fetální telecí sérum), transfekují se buď
NS3 a SEAP, nebo tTA a SEAP za použití protokolu FuGen (Boehringer, Mannheim). Po hodinách při teplotě 37 °C se buňky promyjí, natráví trypsinem a umístí se na plotnu s 96 pro- 80CZ 302766 B6 hlubněmi (80 000 buněk / prohlubeň) obsahující různé koncentrace zkoumaných sloučenin. Po 24 hodinách inkubace se podíl živného prostředí oddělí a aktivita SEAP v tomto podílu se měří pomocí kitu Phosfa-Light (Tropix).
Výpočet procent inhibice SEAP aktivity v závislosti na koncentraci sloučeniny se provede SAS softwarovým programem, kterým se vypočítá hodnota EC50.
Toxický účinek sloučeniny (TC50) se následně hodnotí zkouškou MTT : 20 μί MTT roztoku (5 mg/ml živného prostředí) se přidá do každé prohlubně a 4 hodiny se inkubuje při teplotě 37 °C, živné prostředí se odstraní a přidá se 50 μί 0,01N roztoku kyseliny chlorovodíkové + 10% Triton X-100. Směs se protřepává nejméně 1 hodinu při teplotě místnosti, absorbance každé prohlubně se odečítá při vlnové délce 595 nm.
Hodnota TC50 se vypočítá podle stejného postupu jako při výpočtu EC50.
Příklad 40
Stanovení specifity sloučenin
Specifita zkoumaných sloučenin se stanoví porovnáním jejich účinku na několik proteáz: lidskou leukocytární elastázu, prasečí pankreatickou elastázu a hovězí pankreatický α-chymotrypsin a na jednu cystěinovou proteázou: lidským jaterním katepsínem B. Ve všech případech se použije postup s plotnou s 96 prohlubněmi za použití kolorimetrického p-nitroanilinového (pNA) substrátu specifického pro každý enzym. Každá série se předem inkubuje 1 hodinu s inhibitorem enzymu při teplotě 30 °C, a následně se přidá substrát. Hydrolýza se sleduje do 30% konverze čtečkou mikroploten UV Thermomax®. Koncentrace substrátu se udržuje na nejnižší možné hodnotě vzhledem k KM k zamezení kompetice se substrátem. Koncentrace sloučenin se pohybuje od 300 do 0,06μΜ v závislosti na jejich účinnosti.
Podmínky každé zkoušky:
50mM Tris-HCl o pH 8, 0,5M síran sodný, 50 mM chlorid sodný, 0,lmM EDTA, 3% DMSO, 0,01 % Tween-20 s, [ΙΟΟμΜ Succ-AAPF-pNA a 250pM a-ehymotrypsin], [133 μΜ Succ-AAA-pNA a 8nM prasečí elastáza], [133 μΜ Succ-AAV-pNA a 8mM leukocytární elastáza], nebo [lOOmM hydrogen fosforečnan sodný o pH 6, 0,lmM EDTA, 3% DMSO, ImM TCEP, 0,01% Tween-20, 30μΜ Z-FR-pNA a 5nM katepsin B (enzym v zásobním roztoku se před použitím aktivuje v pufru obsahujícím 20mM TCEP)].
Znázorňující příklad užití prasečí pankreatické elastázy:
Na polystyrénovou plotnu s plochým dnem a s 96 prohlubněmi se za použití pipeto vací ho automatu Biomek (Beckman) přidá:
* 40 μί pufru pro zkoušku (50mM Tris-HCl o pH 8, 50mM chlorid sodný, 0,lmM EDTA), * 20 μΙ roztoku enzymu (50mM Tris-HCl o pH 8, 50mM chlorid sodný, 0,1 mM EDTA, 0,02% Tween-20, 40nM prasečí pankreatická elastáza) a * 20 μί roztoku inhibitoru (50mM Tris-HCl o pH 8, 50mM chlorid sodný, 0,lmM EDTA, 0,02% Tween-20, l,5mM-0,3pM inhibitoru, 15 % objemových DMSO).
Po 60 minutách předběžné inkubace při teplotě 30 °C se do každé prohlubně přidá 20 μI roztoku substrátu (50 mM Tris/HCI o PH 8, 0,5M síran sodný, 50mM chlorid sodný, 0,lmM EDTA,
-81 CZ 302766 B6
665 μΜ Succ-AAA-pNA) a reakční směs se dále inkubuje 60 minut pri teplotě 30 °C. Hodnota absorbance se odečítá na čtečce destiček UV Thermomax*’. Na několik řad prohlubní se umístí kontrolní vzorky (bez inhibitoru) a slepé vzorky (bez inhibitoru a bez enzymu).
Následné dvojnásobné zředění roztoku inhibitoru se provede na separované plotně pipetovacím automatem za použití 50mM Tris-HCl o pH 8, 50mM chloridu sodného, OJmM EDTA, 0,02% Tween-20, 15% DMSO. Všechny ostatní stanovení speciťity se provedou obdobným způsobem. Procenta inhibice se vypočítají za použití rovnice:
[H(HV„l(l-UVslcp)/(UVkllIll-UVslL.p))l X 100
Výsledky experimentu s různými koncentracemi inhibitoru byly proloženy nelineární křivkou na základě Hillova modelu a byla určena ICSo (koncentrace vedoucí k 50% inhibici) za použití SAS is softwarového programu (Statistical Software System, SAS Institute, lne. Cary, N. C.).
Tabulky sloučenin
Sloučeniny podle současného vynálezu se podrobily stanovením podle příkladů 37 a 38. Míra
2o jejich účinku byla rozdělena do skupin podle hodnoty ICsjgskupina A - hodnota IC nižší než 50μΜ, skupina B — hodnota IC nižší než 5μΜ, skupina C - hodnota IC nižší než 0,5μΜ,
Aktivita v buňkách a specifita zkoumaných sloučenin:
Reprezentativní sloučeniny podle současného vynálezu se sledují zkouškou podle příkladu 39 a jednou nebo více zkouškami příkladu 40. Například sloučenina 601 tabulky 6 má podle zkoušky příkladu 37 hodnotu IC5() = 50nM a 30nM podle zkoušky příkladu 38. Hodnota EC5o = 8,2μΜ se určí zkouškou podle příkladu 39. Stanovením specifity podle v příkladu 40 se získají následující hodnoty pro uvedenou sloučeninu: HLE > 75μΜ, PPE > 75μΜ, α-chym. > 75μΜ, kat.B > 75μΜ.
Uvedené výsledky potvrzují, že tato skupina sloučenin je vysoce specifická pro NS3 proteázu.
Seznam uvedený v tabulkách znázorňuje vlastnosti sloučenin podle současného vynálezu.
| Použité zkratky: | |
| MS | výsledky hmotnostní spektrometrie. |
| Ac | acetyl, |
| Bn | benzyl, |
| Boc | terc-butyloxykarbonyl, |
| cHex | cyklohexyl, |
| Chg | cyklohexyl-glycin (2-amino-2-cyklohexyloctová kyselina), |
| iPr | izopropyl. |
| O-Bn | benzyloxy, |
| Ph | fenyl. |
| t-Bu | terc-butyl, |
| Tbg | terc-butylglycin, |
| 1- nebo 2 Np | 1-nebo 2-naftyl, |
| 1-nebo 2-NpCH2O | 1- nebo 2—nafty Imethoxy. |
- 82 50
Tabulka 1
Tab i * “ B .....A R3 slouč. č. _ '_
101 Boc cHex
102 0 cHex
R2~
ZoZch2-1-naftyl·” -Ó-ČH2-I-naftyl.
účinnost
594 ...... A '
632 Λ
103 f? cHex -0-CH2-I-naftyl 'c'
642 A
104
-O-C H 2-1 -naftyl
728” ...... A
-83 CZ 302766 B6
Tab 1 ’ B siouč. č. ____ _
109 acetyl
110 ' Boc
111 Boc
Tabulka 2
Tab 2 B R3 slouč č.
2Ó1 Boc cyklohexyl
202 Boc cyklohexyl
203 Boc f-Bu
R2
-O-CHz-1-nafty!
-Ó-CH2-1-nafty I
- 84 Rj anti ke.
karboxylu etyl (jeden izomer)
MS
622’ účinnost etyl 622
Giny izomer) vinyl 687.5 C
1R,2R
Tabulka 3
OH
O
| Tab 3 | B | r3 |
| slouč. č. | ||
| 301 | Boc | cHex |
| 302 | iPr | |
| 303 | 0 | cHex |
| 304 | Bac | cHex |
| 305~ | Boc | cHex |
| 306 | Boc | cHex |
| “307 | Boc | cHex |
| 308 ~ | Boc | cHex |
| 309 | Boc | cHex |
| “310 | Boc | cHex |
-O-CHi-l-naftyl -O-CH:-Tňáftyl I
Ri syn ke karboxylu ethyl
MS ethyl 582 účinnost <O-CH2-bnaftyí eW 622 A ethyl 623 A
OO
I N ^cch,1
-O-CH2-I -naftyl 4
010 vinyi vinyl
620
607
B ~B
vinyl 728
MO,
-85vinyl 606 vinyl 606 B vinyl 607 B
Tab _ 3 slouč. č.
Boc
B R3 R2
cHex
Rt syn ke karboxy! u vinyl
MS účinnost
641 B
312
Boc
313
Boc
314
Boc cHex cHex
vinyl 607 Á vinyl 621 B vinyí 683 C
315
Boc cHex
316
Acetyt cHex
[ vinyt 698 B vinyl 625 B
317
Boc cHex vinyl 740 Č
318
CF’3-C(O)- ” i-Pr
- 86 CZ 302766 B6
Table 3 slouč. č. _3Ϊ9-“ “ 320
321
322
323
324
325
326
B R3
cHex cHex
Boc ř-Bu
R2
o
R, syn ke karboxylu vinyl vinyl vinyl
f-Bu
Boc
Boc ř-Bu
Boc t-Bu
MS * účinnost
732?3 C
704.3 ' B
658.7 C
717.6 B
o z
vinyl 708.3 C
- 87C7 302766 B6
Tab 3 slouč. č?
327
328’
329
330
331
332
vinyl . 778.3 C vinyl 764.4 C
- 88 CZ 302766 B6
Tabulka 4
Ri
H
MS účinnost
5897 Á~
H ' 603.6 Á
Η 675.4 C
3-<=CH2) 687\ϊ B
2-vinyi.......702.3 C
2-Ět 703*3 C
-89CZ 302766 B6
Tabulka 5
-90CZ 302766 B6
Tabulka 6
| Tab 6 slouč. č | r3 | R21A | 1^21 B | MS~~ | účinnost |
| 601 | APr | Ph | 7-OMe | 673.3” | c |
| 602 | t-Bu | Ph | S-OMe, | ~717.2 “ | c |
| 7-OMe . | |||||
| 603 | i-Pr | Ph | 7-ethy! | 67Ϊ2 | c |
| 604 | t-Bu | — | 7-ÓMe“ | ”61122“ | c |
| 605 | t-Bu | Ph | 7-0-zPr | 7Ϊ5.3” | c |
| 606 | ř-Bu | 7-CI | 615.2 | ||
| 607 | W’ | — | 7-CI | 601.2 | ' “Č...... |
| 608 | CH^/Pr | — | 7-CI | 615.3 | Ts |
| 609 | ř-Bu | .....TY | — | 680.2 | B |
| 610 | ř-Bu | či | -- | 613.3 | c |
| 611 | ř-Bu ~ | Ph ”...... | ' 7-N(Me)2 | 700.5’“ | “C |
| 612 | ř-Bu“ | — | 666.4 | č | |
| 613 | ř-Bu | 650.4 | ~~s | ||
| 614 | “ř-Bu” | — | 664,5 “ | ~B | |
| 615 | . - — | 7-N(Me)2 | 624.5 |
-92 CZ 302766 B6
Tab - 6 slouč. č.
616 ř-Bu
R
21A
H2NKt
617 f-Bu
618 ř-Bu
OMe“
I
Me—N.
619 ř-Bu
Ph t
Me—N.
Rí18
MS
678.4 (M-H)* ’ 664.5*
638.5
70Ó.5“
679Ϊ5 účinnost
620 ř-Bu
Me.
| 621 | ř-Bu | 678.3 | C | ||
| 622 | FBu | — | 625.4 | č | |
| 623 | ř-Bu | MeO- | — | 611.3 | |
| 624 ~ | ř-Bu | (Me)2Ň- | 624.4 ~ | B | |
| 625 | ř-Bu | Ph | 7-S(Me) | 703.4 | C~ |
| 626 | ř-Bu | Ph | 7-Br | 737.3 ' | c |
| 627 | ř-Bu | Ph | 7-F | 675.3 | c |
| 628 | ř-Bu | v yr | _7-N(Me)2 | 764.2 | č |
| 629 | ř-Bu | v | ~7-N(Me)2 | 764.3 | ...... c |
| N /^?N | |||||
| 630 | ř-Bu | ío | 7-N(Et)2 | 792.3” | č |
:N
-93 CZ 302766 B6
Tabulka 7
| Tab 7 slouč. č. 701 | r3 ř-Bu |
| 702 | ”7βϊΓ |
| 703 | ř-Bu |
| 704 | ř-Bu |
| 705 | ř-Bu |
R21A
o
MS účinnost
691.3 ’ C ~
713.4 .........Č
655-3 C
728.4 ~ C“'
696.4 C
| 706 ‘707 708~ | ř-Bu ř-Bu ř-Bu | <r <r ' Ph-N(Me)- | 693.3 694.3 716.4 | C c ~C~ |
| 709 | ř-Bu | s—“ | 709.2 | c |
| , _________ | _____... . __ | |||
| 710 | ř-Bu | HOOC- | 655.3 | B |
| 71Í | ř-Bu | V | 708.2 | C |
| 712 | rBu ~ | (Me)2N- | 654.3 | c |
| — . | _— ......— . _ | — |
-94 CZ 302766 B6
Ťab 7 siouč. č,
713
714
715“
716
717 “TIS
719
720
721
722
723““
MS
692.3 (M-H)'
722Ϊ3
688.3
688.3
723-3’
626.3
751.2
733Ϊ4
724.1
737J3
75T.4“708.4 účinnost
C '
ČT~
C c “ c ~
Č~ č~ c
c
.....“č”
-95 CZ 302766 B6
Tab 7 R3 síouč._č._ ______
725 VBu
R21A
MS
689.4 účinnost
653.3’ C
688.3' C
786.1 ’ Č
689.3 ’ C
669.2 C
669.2 ” Č
791.0 ' Č
765.3 C
671.3 C
683.3
667Λ ' Č
693.4 ~Č
-96CZ 302766 B6
Tabulka 8
Tab 8 B R3 siouč_ č.__
801 i .? ř-Bu
802
803
804
805
806
807
808
ř-Bu
R22 MS
686.7
727/7
685.7
711.7
629.6
725Ϊ7
672.4
712.4 účinnost
C ~ c~ c
— c“ c“
-97 CZ 302766 B6
Tab 8 slouč. č.
809
810~~
8ΪΪ “8Ϊ2- ”813
814
815
816
817
818
819
820
821
822
823
824
825
účinnost
649.3 ' C~~
749.3 Č
72Ϊ.
706L2” Č
702.2 Č
| Boc | ř-Bu | 2-Cl | 721.3 | C |
| ________„ „ ____ | .. | |||
| Boc | ř-Bu | ~ 3-CÍ - | '721 Š ' | ~ C |
| o | ř-Bu | _ | 658.3 | c |
“Xi
CF.
H,N
CF
OMe
ř-Bu ř-Bu
APr
APr
APr
720.2 C
728.3 C
762.3 ’ C
732.2......C
679.1 C
APr ........663.3 Č
| Boc | ř-Bu | 2-OMe | 717.2 | C |
| Boc | ř-Bu | 3-OMe | 719.2 ~ | C |
| Boc | ř-Bu | 4-ÓMe | 719.2 ' | ~c |
-98 CZ 302766 B6
Tab .8 siouč. č.
826
827
828
o
MS
663.3
673.2
69Ϊ.3-
o
734.3
645.3
701.3
801.3
715.Σ
663.3
702.5
694.4
683.3
679J účinnost
B
C~ ~ ~cf.
— C “ c
č
- c
--' Č“
-99 CZ 302766 B6
Tab 6 B slouč. č.
^22 MS účinnost ‘/-Pr ' „ 674?5~ <Γ
APr ' 667.4 C
841 Boc
| ‘842’ ~ | Boc |
| 843 | Boc |
| '‘844 ' | |
| 845 ” | |
| 846 | <XX |
| 847 | Boc |
| 848 | Boc |
/-Bu /-Bu /-Bu /-Bu /-Pr /-Pr cHex
| 2-Me ' | 70 LŠ | C |
| 3-Me | ~Ó1?5 | C |
| 4-Me | 701.5 | c |
| 4-OMe | 716.6 | |
| — | ~ 706Ϊ9 | c |
| - | 693.4 | ~c~ |
| — | 7Ϊ3Λ | c |
| “ 687.5 | ~c - |
849 Boc
.....701 ?5 C
850 Boc
851 Boc
852' Boc
731.5 ...... C
689.5 C
689?5 Č
Cl·
100
Tab * 8 slouč. č’ '853
854 ’ ””'855”
856
85/
858
859
860
861
862
863 ”Š64~
865
B
Boc
R3
/-Př
APr
HO
Rzi
MS účinnost 765.5...... C”
723.4 C (M-H)*
693Ϊ3 C
688.3 C
7164-..... ' C
700.4 C
655.4 B
759.3..... C
APr - 688.3 C
NC
685.3 C
6994 C
667.3 C
7014 “ ~C
- ΙΟΙ CZ 302766 B6
| Tab 8 slouč. č. | B | r3 | ^22 | MS |
| 866 | f-Bu | 70274 | ||
| 867 | Ο,Λ | “f-Bu' | 7OÍ73 | |
| 868 | qa | f-Bu | 71373 | |
| 869 | Aa | f-Bu | 699.4 | |
| 870 | ΆΛ | f-Bu“” | — | 700.4 |
| 871 | “AT | í-Bu“ | - | ΎΪ4.3 |
| 872“ | 0 1 11 | f-Bu ’ | — | 714.4 |
účinnost c
873 f-Bu
714.3
- I02 CZ 302766 B6
Tabulka 9
Tab 9 slouč. č.
901 ’ 902
B
Boc
MS
685.3
825.4
769.3
707.3
685.2
728 2
717.2 účinnost ........C ~ č
~c
- 103 CZ 302766 B6
Tab ? 9 slouč. č
MS účinnost
908
B
69Γ2 ' C
727.2 C
715.3 ' C
721.3 C
733.2 C
713.3 C
805.3 C
692.2 C
680.3 C
- 104 CZ 302766 B6
Tabulka 10
| Tab o 10 slouč. č. | B-X- | r3 | Z | R21B | MS | účinnost |
| 1001 | Ph-N(Me)- | APr | “~Ó | H | 663.3 | C |
| 1002 | BÓc-NH- ’ | ř-Bu ~ | s | OMe | 703.4 | C |
| 1003 | A | APr | 'o | — | 663.3 _ | - ~ c |
| Me | ||||||
| PATENTOVÉ | NÁROKY | |||||
| , Způsob | rozdělení enanciomemí | směsi | methyH I R,2S)/( l S,2R)-ř-butoxykarbonyl~ |
amino-2-vínylcyklopropylkarboxylátu vzorce
Claims (3)
-
Tab o 10 slouč. č. B-X- r3 Z R21B MS účinnost 1001 Ph-N(Me)- APr “~Ó H 663.3 C 1002 BÓc-NH- ’ ř-Bu ~ s OMe 703.4 C 1003 A APr 'o — 663.3 _ - ~ c Me PATENTOVÉ NÁROKY , Způsob rozdělení enanciomemí směsi methyH I R,2S)/( l S,2R)-ř-butoxykarbonyl~ amino-2-vínylcyklopropylkarboxylátu vzorce vyznačující se tím, že se na směs působí esterázou Alcalase® za vzniku produktu vzorce- 105CZ 302766 B6 - 2. Způsob rozdělení enanciomerní směsí methyl-( 1 R,2R)/(lS,2S)-/--butoxykarbonyl-lamino-2-ethyleyklopropylkarboxylátu vzorce vyznačující se tím, že se na směs působí esterázou Alcalase”’ za vzniku produktů vzorcůOH lY.SJO (XX)
- 3. Způsob rozdělení enanciomerní směsi ethyl-{J S,2R)/(1 R,2S)-/-butoxykarbonyl-l-annino2-vinylcyklopropylkarboxylátu vzorce i?vyznačující se tím, vzorcůCL že se na směs působí esterázou Alcalase” za vzniku produktů
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US9593198P | 1998-08-10 | 1998-08-10 | |
| US13238699P | 1999-05-04 | 1999-05-04 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ302766B6 true CZ302766B6 (cs) | 2011-10-26 |
Family
ID=26790767
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20090004A CZ302766B6 (cs) | 1998-08-10 | 1999-08-09 | Zpusob rozdelení enanciomerní smesi methyl-(1R,2S)/(1S,2R)-t-butoxykarbonyl-1-amino-2-vinylcyklopropylkarboxylátu |
| CZ20010516A CZ301268B6 (cs) | 1998-08-10 | 1999-08-09 | Peptidové inhibitory viru hepatitidy typu C |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20010516A CZ301268B6 (cs) | 1998-08-10 | 1999-08-09 | Peptidové inhibitory viru hepatitidy typu C |
Country Status (43)
Families Citing this family (423)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4080541B2 (ja) | 1996-10-18 | 2008-04-23 | バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | セリンプロテアーゼ、特にｃ型肝炎ウイルスｎｓ３プロテアーゼの阻害因子 |
| US6767991B1 (en) | 1997-08-11 | 2004-07-27 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. | Hepatitis C inhibitor peptides |
| US6323180B1 (en) * | 1998-08-10 | 2001-11-27 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd | Hepatitis C inhibitor tri-peptides |
| US6608027B1 (en) | 1999-04-06 | 2003-08-19 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd | Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus |
| UA74546C2 (en) * | 1999-04-06 | 2006-01-16 | Boehringer Ingelheim Ca Ltd | Macrocyclic peptides having activity relative to hepatitis c virus, a pharmaceutical composition and use of the pharmaceutical composition |
| CA2383865A1 (en) * | 1999-06-25 | 2001-01-04 | Basf Aktiengesellschaft | Corynebacterium glutamicum genes encoding metabolic pathway proteins |
| AR029903A1 (es) | 2000-04-05 | 2003-07-23 | Schering Corp | Inhibidores macrociclicos de la ns3-serina proteasa, del virus de la hepatitis c, que comprenden partes p2 n-ciclicas, composiciones farmaceuticas y utilizacion de los mismos para la manufactura de un medicamento |
| CN1432022A (zh) | 2000-04-19 | 2003-07-23 | 先灵公司 | 含有烷基和芳基丙氨酸p2部分的丙型肝炎病毒的大环ns3－丝氨酸蛋白酶抑制剂 |
| US6713502B2 (en) | 2000-05-05 | 2004-03-30 | Smithkline Beecham Corporation | Anti-infectives |
| PE20011350A1 (es) | 2000-05-19 | 2002-01-15 | Vertex Pharma | PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE) |
| AR034127A1 (es) | 2000-07-21 | 2004-02-04 | Schering Corp | Imidazolidinonas como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c, composicion farmaceutica, un metodo para su preparacion, y el uso de las mismas para la manufactura de un medicamento |
| AR029851A1 (es) | 2000-07-21 | 2003-07-16 | Dendreon Corp | Nuevos peptidos como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c |
| US7012066B2 (en) | 2000-07-21 | 2006-03-14 | Schering Corporation | Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus |
| CZ2003195A3 (cs) | 2000-07-21 | 2003-04-16 | Schering Corporation | Peptidové inhibitory serinové proteázy NS3 a farmaceutický prostředek |
| SV2003000617A (es) * | 2000-08-31 | 2003-01-13 | Lilly Co Eli | Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m |
| US6846806B2 (en) | 2000-10-23 | 2005-01-25 | Bristol-Myers Squibb Company | Peptide inhibitors of Hepatitis C virus NS3 protein |
| HUP0500456A3 (en) * | 2000-11-20 | 2012-05-02 | Bristol Myers Squibb Co | Hepatitis c tripeptide inhibitors, pharmaceutical compositions comprising thereof and their use |
| MXPA03005219A (es) | 2000-12-12 | 2003-09-25 | Schering Corp | Peptidos diarilicos como inhibidores de ns3-serina proteasa en hepatitis de virus c. |
| WO2002057287A2 (en) | 2001-01-22 | 2002-07-25 | Merck & Co., Inc. | Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase |
| ATE349463T1 (de) | 2001-07-11 | 2007-01-15 | Vertex Pharma | Verbrückte bizyklische serinproteaseinhibitoren |
| US7108092B2 (en) | 2001-09-14 | 2006-09-19 | Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha | Front grill impact-absorbing structure for a vehicle |
| NZ531681A (en) * | 2001-10-24 | 2007-05-31 | Vertex Pharma | Inhibitors of serine protease, particularly hepatitis C virus NS3-NS4A protease, incorporating a fused ring system |
| US20050009873A1 (en) * | 2001-11-02 | 2005-01-13 | Gianpaolo Bravi | Acyl dihydro pyrrole derivatives as hcv inhibitors |
| US6867185B2 (en) * | 2001-12-20 | 2005-03-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Inhibitors of hepatitis C virus |
| PE20030857A1 (es) | 2002-01-23 | 2003-10-25 | Schering Corp | Compuestos como inhibidores de la proteasa serina ns3 del virus de la hepatitis c |
| US7119072B2 (en) * | 2002-01-30 | 2006-10-10 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. | Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus |
| US6642204B2 (en) * | 2002-02-01 | 2003-11-04 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Hepatitis C inhibitor tri-peptides |
| US7091184B2 (en) * | 2002-02-01 | 2006-08-15 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Hepatitis C inhibitor tri-peptides |
| CA2370396A1 (en) * | 2002-02-01 | 2003-08-01 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. | Hepatitis c inhibitor tri-peptides |
| CA2369970A1 (en) * | 2002-02-01 | 2003-08-01 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. | Hepatitis c inhibitor tri-peptides |
| NZ561851A (en) | 2002-04-11 | 2009-05-31 | Vertex Pharma | Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis C virus NS3 - NS4 protease |
| EP1506172B1 (en) * | 2002-05-20 | 2011-03-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis c virus inhibitors |
| ATE481106T1 (de) | 2002-05-20 | 2010-10-15 | Bristol Myers Squibb Co | Heterocyclische sulfonamid-hepatitis-c-virus- hemmer |
| MY140680A (en) | 2002-05-20 | 2010-01-15 | Bristol Myers Squibb Co | Hepatitis c virus inhibitors |
| ES2315568T3 (es) * | 2002-05-20 | 2009-04-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Inhibidores del virus de la hepatitis c basados en cicloalquilo p1' sustituido. |
| KR100457857B1 (ko) * | 2002-05-23 | 2004-11-18 | (주) 비엔씨바이오팜 | 2-[2-(3-인돌릴)에틸아미노]피리딘 유도체, 그 제조방법및 이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물 |
| JP2005533817A (ja) | 2002-06-28 | 2005-11-10 | イデニクス（ケイマン）リミテツド | フラビウィルス科ウィルス感染治療用の修飾２′および３′−ヌクレオシドプロドラッグ |
| US20040033959A1 (en) * | 2002-07-19 | 2004-02-19 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. | Pharmaceutical compositions for hepatitis C viral protease inhibitors |
| WO2004014313A2 (en) * | 2002-08-12 | 2004-02-19 | Bristol-Myers Squibb Company | Combination pharmaceutical agents as inhibitors of hcv replication |
| EP1408031A1 (en) * | 2002-10-09 | 2004-04-14 | 3 D Gene Pharma | Pyrolidine derivatives useful in treatment of hepatitis C virus infection |
| WO2004037818A1 (en) | 2002-10-24 | 2004-05-06 | Glaxo Group Limited | 1-acyl-pyrrolidine derivatives for the treatment of viral infections |
| US20050075279A1 (en) * | 2002-10-25 | 2005-04-07 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus |
| US7601709B2 (en) | 2003-02-07 | 2009-10-13 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors |
| EP1601685A1 (en) * | 2003-03-05 | 2005-12-07 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Hepatitis c inhibiting compounds |
| DE602004029866D1 (de) * | 2003-03-05 | 2010-12-16 | Boehringer Ingelheim Pharma | Peptidanaloga mit inhibitorischer wirkung auf hepatitis c |
| KR100960802B1 (ko) * | 2003-03-08 | 2010-06-01 | 주식회사유한양행 | 씨형 간염바이러스 감염 치료용 엔에스3 프로테아제 억제제 |
| WO2004092203A2 (en) * | 2003-04-10 | 2004-10-28 | Boehringer Ingelheim International, Gmbh | Process for preparing macrocyclic compounds |
| ATE422895T1 (de) * | 2003-04-16 | 2009-03-15 | Bristol Myers Squibb Co | Makrocyclische isochinolinpeptidinhibitoren des hepatitis-c-virus |
| US7176208B2 (en) * | 2003-04-18 | 2007-02-13 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors |
| US6846836B2 (en) | 2003-04-18 | 2005-01-25 | Bristol-Myers Squibb Company | N-substituted phenylurea inhibitors of mitochondrial F1F0 ATP hydrolase |
| PT1615613E (pt) * | 2003-04-18 | 2010-02-09 | Enanta Pharm Inc | Inibidores da serina protease da hepatite c macrocíclicos de quinoxalinilo |
| PT1654261E (pt) * | 2003-05-21 | 2008-01-18 | Boehringer Ingelheim Int | Compostos inibidores da hepatite c |
| ES2726998T3 (es) | 2003-05-30 | 2019-10-11 | Gilead Pharmasset Llc | Análogos de nucleósidos fluorados modificados |
| US7273851B2 (en) * | 2003-06-05 | 2007-09-25 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Tri-peptide hepatitis C serine protease inhibitors |
| WO2004113365A2 (en) * | 2003-06-05 | 2004-12-29 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Hepatitis c serine protease tri-peptide inhibitors |
| US7125845B2 (en) * | 2003-07-03 | 2006-10-24 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Aza-peptide macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors |
| BRPI0412849A (pt) | 2003-07-25 | 2006-09-26 | Idenix Cayman Ltd | compostos, composições e usos de análogos de nucleosìdeo de purina para o tratamento de flaviviridae, incluindo hepatite c |
| CA2536570A1 (en) | 2003-08-26 | 2005-03-10 | Schering Corporation | Novel peptidomimetic ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus |
| US8377952B2 (en) | 2003-08-28 | 2013-02-19 | Abbott Laboratories | Solid pharmaceutical dosage formulation |
| US8025899B2 (en) | 2003-08-28 | 2011-09-27 | Abbott Laboratories | Solid pharmaceutical dosage form |
| TW201127828A (en) | 2003-09-05 | 2011-08-16 | Vertex Pharma | Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease |
| DE602004031645D1 (de) * | 2003-09-22 | 2011-04-14 | Boehringer Ingelheim Pharma | Makrozyklische peptide mit wirkung gegen das hepatitis-c-virus |
| KR20060085248A (ko) * | 2003-09-26 | 2006-07-26 | 쉐링 코포레이션 | Ｃ형 간염 바이러스 ｎｓ3 세린 프로테아제의마크로사이클릭 억제제 |
| CA2541634A1 (en) | 2003-10-10 | 2005-04-28 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease |
| DK1680137T3 (da) | 2003-10-14 | 2013-02-18 | Hoffmann La Roche | Makrocyklisk carboxylsyre- og acylsulfonamidforbindelse som inhibitor af HCV-replikation |
| US7491794B2 (en) * | 2003-10-14 | 2009-02-17 | Intermune, Inc. | Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication |
| US8187874B2 (en) | 2003-10-27 | 2012-05-29 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Drug discovery method |
| EP1944042A1 (en) | 2003-10-27 | 2008-07-16 | Vertex Pharmceuticals Incorporated | Combinations for HCV treatment |
| KR20060120166A (ko) | 2003-10-27 | 2006-11-24 | 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 | Ｈｃｖ ｎｓ３－ｎｓ４ａ 단백질분해효소 저항성 돌연변이 |
| US20050119318A1 (en) * | 2003-10-31 | 2005-06-02 | Hudyma Thomas W. | Inhibitors of HCV replication |
| US7132504B2 (en) | 2003-11-12 | 2006-11-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| EP1689770A1 (en) * | 2003-11-20 | 2006-08-16 | Schering Corporation | Depeptidized inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease |
| US7309708B2 (en) | 2003-11-20 | 2007-12-18 | Birstol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| US7135462B2 (en) | 2003-11-20 | 2006-11-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| JP2007513200A (ja) * | 2003-12-08 | 2007-05-24 | ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 超臨界流体処理によるルテニウム副生物の除去 |
| ZA200605248B (en) | 2003-12-15 | 2007-10-31 | Japan Tobacco Inc | Cyclopropane compounds and pharmaceutical use thereof |
| GB0500020D0 (en) | 2005-01-04 | 2005-02-09 | Novartis Ag | Organic compounds |
| CA2549851C (en) * | 2004-01-21 | 2012-09-11 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus |
| AR048401A1 (es) * | 2004-01-30 | 2006-04-26 | Medivir Ab | Inhibidores de la serina-proteasa ns3 del vhc |
| SE0400199D0 (sv) * | 2004-01-30 | 2004-01-30 | Medivir Ab | HCV Protease inhbitors |
| AU2005212257A1 (en) | 2004-02-04 | 2005-08-25 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease |
| US20050182252A1 (en) | 2004-02-13 | 2005-08-18 | Reddy K. R. | Novel 2'-C-methyl nucleoside derivatives |
| US7582770B2 (en) | 2004-02-20 | 2009-09-01 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Viral polymerase inhibitors |
| PT1719773E (pt) | 2004-02-24 | 2009-06-03 | Japan Tobacco Inc | Compostos heterotetracíclicos fundidos e a sua utilização como inibidores da polimerase do hcv |
| US20070049593A1 (en) | 2004-02-24 | 2007-03-01 | Japan Tobacco Inc. | Tetracyclic fused heterocyclic compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor |
| CA2557301A1 (en) * | 2004-02-27 | 2005-09-15 | Schering Corporation | Cyclobutenedione groups-containing compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease |
| WO2005087721A2 (en) | 2004-02-27 | 2005-09-22 | Schering Corporation | Compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease |
| US7635694B2 (en) | 2004-02-27 | 2009-12-22 | Schering Corporation | Cyclobutenedione-containing compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease |
| RU2006134002A (ru) | 2004-02-27 | 2008-04-10 | Шеринг Корпорейшн (US) | Новые соединения, действующие как ингибиторы сериновой протеазы ns3 вируса гепатита с |
| TW200536528A (en) | 2004-02-27 | 2005-11-16 | Schering Corp | Novel inhibitors of hepatitis C virus NS3 protease |
| ATE438622T1 (de) | 2004-02-27 | 2009-08-15 | Schering Corp | 3,4-(cyclopentyl)kondensierte prolinverbindungen als inhibitoren der ns3-serinprotease des hepatitis-c-virus |
| TWI314927B (en) | 2004-02-27 | 2009-09-21 | Schering Corporatio | Sulfur compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease |
| US7816326B2 (en) | 2004-02-27 | 2010-10-19 | Schering Corporation | Sulfur compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease |
| KR101135765B1 (ko) * | 2004-03-12 | 2012-04-23 | 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 아스파르트산 아세탈 카스파아제 억제제의 제조를 위한방법 및 중간체 |
| RU2006136084A (ru) * | 2004-03-15 | 2008-04-27 | БЕРИНГЕР ИНГЕЛЬХАЙМ ИНТЕРНАЦИОНАЛЬ ГмбХ (DE) | Способ получения микроциклических соединений |
| BRPI0509467A (pt) * | 2004-03-30 | 2007-09-11 | Intermune Inc | compostos macrocìclicos como inibidores de replicação viral |
| US7754718B2 (en) | 2004-05-05 | 2010-07-13 | Yale University | Antiviral helioxanthin analogs |
| WO2005113581A1 (en) | 2004-05-20 | 2005-12-01 | Schering Corporation | Substituted prolines as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease |
| JP5156374B2 (ja) * | 2004-05-25 | 2013-03-06 | ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 非環式ｈｃｖプロテアーゼインヒビターの調製方法 |
| AU2005254057B2 (en) | 2004-06-15 | 2011-02-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | C-purine nucleoside analogs as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase |
| US20070265222A1 (en) | 2004-06-24 | 2007-11-15 | Maccoss Malcolm | Nucleoside Aryl Phosphoramidates for the Treatment of Rna-Dependent Rna Viral Infection |
| CA2556669C (en) * | 2004-06-28 | 2012-05-01 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Hepatitis c inhibitor peptide analogs |
| AR050174A1 (es) | 2004-07-16 | 2006-10-04 | Gilead Sciences Inc | Derivados de fosfonatos con actividad antiviral. composiciones farmaceuticas |
| EP1771454B1 (en) * | 2004-07-20 | 2011-06-15 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Hepatitis c inhibitor peptide analogs |
| UY29016A1 (es) * | 2004-07-20 | 2006-02-24 | Boehringer Ingelheim Int | Analogos de dipeptidos inhibidores de la hepatitis c |
| CN101023094B (zh) * | 2004-07-21 | 2011-05-18 | 法莫赛特股份有限公司 | 烷基取代的2-脱氧-2-氟代-d-呋喃核糖基嘧啶和嘌呤及其衍生物的制备 |
| US7597884B2 (en) | 2004-08-09 | 2009-10-06 | Alios Biopharma, Inc. | Hyperglycosylated polypeptide variants and methods of use |
| EP1789074A4 (en) * | 2004-08-09 | 2009-08-12 | Alios Biopharma Inc | PROTEASE-RESISTANT HYPERGLYCOSYL SYNTHETIC POLYPEPTIDE VARIANTS, ORAL FORMULATIONS AND METHODS OF USING THE SAME |
| US7550559B2 (en) | 2004-08-27 | 2009-06-23 | Schering Corporation | Acylsulfonamide compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease |
| PT3109244T (pt) * | 2004-09-14 | 2019-06-04 | Gilead Pharmasset Llc | ¿preparação de ribofuranosil pirimidinas e purinas 2¿-fluoro-2¿-alquil substituídas ou outras opcionalmente substituídas e os seus derivados |
| WO2006030892A1 (ja) * | 2004-09-17 | 2006-03-23 | Nippon Shinyaku Co., Ltd. | 複素環化合物の製造方法 |
| CN102160891A (zh) | 2004-10-01 | 2011-08-24 | 威特克斯医药股份有限公司 | Hcv ns3-ns4a蛋白酶抑制 |
| US7659263B2 (en) | 2004-11-12 | 2010-02-09 | Japan Tobacco Inc. | Thienopyrrole compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor |
| US7323447B2 (en) * | 2005-02-08 | 2008-01-29 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| CN101160317B (zh) | 2005-03-08 | 2013-03-27 | 贝林格尔·英格海姆国际有限公司 | 制备大环化合物的方法 |
| US7879797B2 (en) * | 2005-05-02 | 2011-02-01 | Merck Sharp & Dohme Corp. | HCV NS3 protease inhibitors |
| US7592336B2 (en) * | 2005-05-10 | 2009-09-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| AP2007004245A0 (en) | 2005-05-13 | 2007-12-31 | Virochem Pharma Inc | Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections |
| NZ563365A (en) * | 2005-06-02 | 2011-02-25 | Schering Corp | Combination of HCV protease inhibitors with a surfactant |
| US20070237818A1 (en) * | 2005-06-02 | 2007-10-11 | Malcolm Bruce A | Controlled-release formulation of HCV protease inhibitor and methods using the same |
| US20060276404A1 (en) * | 2005-06-02 | 2006-12-07 | Anima Ghosal | Medicaments and methods combining a HCV protease inhibitor and an AKR competitor |
| US8119602B2 (en) | 2005-06-02 | 2012-02-21 | Schering Corporation | Administration of HCV protease inhibitors in combination with food to improve bioavailability |
| AU2006259348B2 (en) | 2005-06-17 | 2010-07-22 | Novartis Ag | Use of sanglifehrin in HCV |
| US7608592B2 (en) | 2005-06-30 | 2009-10-27 | Virobay, Inc. | HCV inhibitors |
| CN101242816B (zh) * | 2005-06-30 | 2012-10-31 | 维罗贝股份有限公司 | Hcv抑制剂 |
| US7601686B2 (en) | 2005-07-11 | 2009-10-13 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| TWI387603B (zh) * | 2005-07-20 | 2013-03-01 | Merck Sharp & Dohme | Ｈｃｖ ｎｓ３蛋白酶抑制劑 |
| EP1910378B1 (en) * | 2005-07-20 | 2012-06-20 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Hepatitis c inhibitor peptide analogs |
| JP5249028B2 (ja) | 2005-07-25 | 2013-07-31 | インターミューン・インコーポレーテッド | Ｃ型肝炎ウイルス複製の新規大環状阻害剤 |
| ATE496042T1 (de) | 2005-07-29 | 2011-02-15 | Tibotec Pharm Ltd | Makrocyclische inhibitoren des hepatitis-c-virus |
| TW200745061A (en) | 2005-07-29 | 2007-12-16 | Tibotec Pharm Ltd | Macrocylic inhibitors of hepatitis C virus |
| PE20070210A1 (es) | 2005-07-29 | 2007-04-16 | Tibotec Pharm Ltd | Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c |
| TWI375670B (en) | 2005-07-29 | 2012-11-01 | Tibotec Pharm Ltd | Macrocylic inhibitors of hepatitis c virus |
| CN101273042B (zh) | 2005-07-29 | 2013-11-06 | 泰博特克药品有限公司 | 丙型肝炎病毒的大环抑制剂 |
| PE20070211A1 (es) | 2005-07-29 | 2007-05-12 | Medivir Ab | Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c |
| MX2008001402A (es) | 2005-07-29 | 2008-04-04 | Tibotec Pharm Ltd | Inhibidores macrociclicos del virus de la hepatitis c. |
| PE20070343A1 (es) | 2005-07-29 | 2007-05-12 | Medivir Ab | Inhibidores macrociclicos del virus de la hepatitis c |
| CN101273030B (zh) | 2005-07-29 | 2012-07-18 | 泰博特克药品有限公司 | 丙型肝炎病毒的大环抑制剂 |
| KR20080036598A (ko) * | 2005-08-01 | 2008-04-28 | 머크 앤드 캄파니 인코포레이티드 | Ｈｃｖ ｎｓ３ 프로테아제 억제제로서의 마크로사이클릭펩티드 |
| AU2006275413B2 (en) | 2005-08-02 | 2012-07-19 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors of serine proteases |
| EP1915054A4 (en) | 2005-08-09 | 2010-09-01 | Merck Sharp & Dohme | CYCLIC ACETAL DERIVATIVES OF RIBONUCLEOSIDES FOR THE TREATMENT OF RNA-DEPENDENT RNA VIRUS INFECTIONS |
| EP1915378A4 (en) | 2005-08-12 | 2009-07-22 | Boehringer Ingelheim Int | VIRUS POLYMERASE INHIBITORS |
| US8399615B2 (en) | 2005-08-19 | 2013-03-19 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Processes and intermediates |
| EP2357170A1 (en) * | 2005-08-19 | 2011-08-17 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Processes and intermediates |
| US7964624B1 (en) | 2005-08-26 | 2011-06-21 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors of serine proteases |
| AR055395A1 (es) | 2005-08-26 | 2007-08-22 | Vertex Pharma | Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c |
| CA2621360C (en) | 2005-09-09 | 2013-12-24 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Ring-closing metathesis process for the preparation of macrocyclic peptides |
| DE602006019323D1 (de) | 2005-10-11 | 2011-02-10 | Intermune Inc | Verbindungen und verfahren zur inhibierung der replikation des hepatitis-c-virus |
| US7772183B2 (en) | 2005-10-12 | 2010-08-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| US7741281B2 (en) | 2005-11-03 | 2010-06-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| US7705138B2 (en) | 2005-11-11 | 2010-04-27 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Hepatitis C virus variants |
| EP1951748B1 (en) | 2005-11-11 | 2013-07-24 | Vertex Pharmaceuticals, Inc. | Hepatitis c virus variants |
| WO2007081517A2 (en) | 2005-12-21 | 2007-07-19 | Abbott Laboratories | Anti-viral compounds |
| KR20080080395A (ko) * | 2005-12-21 | 2008-09-03 | 아보트 러보러터리즈 | 항바이러스 화합물 |
| EP2345652A1 (en) | 2005-12-21 | 2011-07-20 | Abbott Laboratories | Antiviral compounds |
| RU2467007C2 (ru) * | 2005-12-21 | 2012-11-20 | Эбботт Лэборетриз | Производные [1,8]нафтиридина, полезные в качестве ингибиторов репликации вируса hcv |
| US7816348B2 (en) | 2006-02-03 | 2010-10-19 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Viral polymerase inhibitors |
| JP5436864B2 (ja) | 2006-02-27 | 2014-03-05 | バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | Ｖｘ−９５０を含む共結晶体およびそれを含む医薬組成物 |
| JP2009529059A (ja) | 2006-03-08 | 2009-08-13 | アキリオン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド | 抗ｃ型肝炎ウイルス活性を有する置換アミノチアゾール誘導体 |
| EP1993994A2 (en) | 2006-03-16 | 2008-11-26 | Vertex Pharmceuticals Incorporated | Deuterated hepatitis c protease inhibitors |
| ES2543840T3 (es) | 2006-04-11 | 2015-08-24 | Novartis Ag | Inhibidores espirocíclicos del VHC/VIH y sus usos |
| GB0609492D0 (en) * | 2006-05-15 | 2006-06-21 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Therapeutic agents |
| BRPI0712021A2 (pt) | 2006-05-23 | 2012-01-03 | Irm Llc | composto e composiÇÕes como inibidores da protease ativadora de canal |
| US7728148B2 (en) * | 2006-06-06 | 2010-06-01 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Acyclic oximyl hepatitis C protease inhibitors |
| US9526769B2 (en) | 2006-06-06 | 2016-12-27 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Macrocylic oximyl hepatitis C protease inhibitors |
| US8268776B2 (en) | 2006-06-06 | 2012-09-18 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Macrocylic oximyl hepatitis C protease inhibitors |
| US20080187516A1 (en) * | 2006-06-06 | 2008-08-07 | Ying Sun | Acyclic oximyl hepatitis c protease inhibitors |
| GB0612423D0 (en) * | 2006-06-23 | 2006-08-02 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Therapeutic agents |
| UY30437A1 (es) * | 2006-06-26 | 2008-01-31 | Enanta Pharm Inc | Quinoxalinil macroceclicos inhibidores de serina proteasa del virus de la hepatitis c |
| KR20090024834A (ko) * | 2006-07-05 | 2009-03-09 | 인터뮨, 인크. | Ｃ형 간염 바이러스 복제의 신규 억제제 |
| WO2008008776A2 (en) | 2006-07-11 | 2008-01-17 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis c virus inhibitors |
| US20090035267A1 (en) * | 2007-07-31 | 2009-02-05 | Moore Joel D | Acyclic, pyridazinone-derived hepatitis c serine protease inhibitors |
| US7718612B2 (en) * | 2007-08-02 | 2010-05-18 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Pyridazinonyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors |
| US7635683B2 (en) * | 2006-08-04 | 2009-12-22 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Quinoxalinyl tripeptide hepatitis C virus inhibitors |
| US20080038225A1 (en) * | 2006-08-11 | 2008-02-14 | Ying Sun | Triazolyl acyclic hepatitis c serine protease inhibitors |
| US7605126B2 (en) | 2006-08-11 | 2009-10-20 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Acylaminoheteroaryl hepatitis C virus protease inhibitors |
| WO2008022006A2 (en) * | 2006-08-11 | 2008-02-21 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Arylalkoxyl hepatitis c virus protease inhibitors |
| US7582605B2 (en) * | 2006-08-11 | 2009-09-01 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Phosphorus-containing hepatitis C serine protease inhibitors |
| US20090098085A1 (en) * | 2006-08-11 | 2009-04-16 | Ying Sun | Tetrazolyl acyclic hepatitis c serine protease inhibitors |
| US7687459B2 (en) * | 2006-08-11 | 2010-03-30 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Arylalkoxyl hepatitis C virus protease inhibitors |
| EP1886685A1 (en) | 2006-08-11 | 2008-02-13 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods, uses and compositions for modulating replication of hcv through the farnesoid x receptor (fxr) activation or inhibition |
| RU2009109355A (ru) | 2006-08-17 | 2010-09-27 | БЕРИНГЕР ИНГЕЛЬХАЙМ ИНТЕРНАЦИОНАЛЬ ГмбХ (DE) | Ингибиторы вырусной полимеразы |
| WO2008063727A2 (en) * | 2006-08-21 | 2008-05-29 | United Therapeutics Corporation | Combination therapy for treatment of viral infections |
| US8138164B2 (en) * | 2006-10-24 | 2012-03-20 | Merck Sharp & Dohme Corp. | HCV NS3 protease inhibitors |
| AU2007309546A1 (en) * | 2006-10-24 | 2008-05-02 | Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. | HCV NS3 protease inhibitors |
| WO2008051514A2 (en) * | 2006-10-24 | 2008-05-02 | Merck & Co., Inc. | Hcv ns3 protease inhibitors |
| CA2667031C (en) * | 2006-10-27 | 2013-01-22 | Merck & Co., Inc. | Hcv ns3 protease inhibitors |
| CN101568346B (zh) * | 2006-10-27 | 2015-11-25 | 默沙东公司 | Hcv ns3蛋白酶抑制剂 |
| US8343477B2 (en) | 2006-11-01 | 2013-01-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Inhibitors of hepatitis C virus |
| US20080108632A1 (en) * | 2006-11-02 | 2008-05-08 | Taigen Biotechnology Co., Ltd. | Hcv protease inhibitors |
| US7772180B2 (en) | 2006-11-09 | 2010-08-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| NZ576780A (en) | 2006-11-15 | 2011-12-22 | Virochem Pharma Inc | Thiophene analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections |
| US7888464B2 (en) | 2006-11-16 | 2011-02-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| US8003604B2 (en) | 2006-11-16 | 2011-08-23 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| US7763584B2 (en) | 2006-11-16 | 2010-07-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| WO2008059046A1 (en) | 2006-11-17 | 2008-05-22 | Tibotec Pharmaceuticals Ltd. | Macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus |
| WO2008073282A2 (en) | 2006-12-07 | 2008-06-19 | Schering Corporation | Ph sensitive matrix formulation |
| GB0625349D0 (en) * | 2006-12-20 | 2007-01-31 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Therapeutic compounds |
| AU2007335962B2 (en) * | 2006-12-20 | 2012-09-06 | Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti Spa | Antiviral indoles |
| US8236950B2 (en) * | 2006-12-20 | 2012-08-07 | Abbott Laboratories | Anti-viral compounds |
| GB0625345D0 (en) * | 2006-12-20 | 2007-01-31 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Therapeutic compounds |
| WO2008074035A1 (en) * | 2006-12-27 | 2008-06-19 | Abbott Laboratories | Hcv protease inhibitors and uses thereof |
| WO2008095058A1 (en) * | 2007-02-01 | 2008-08-07 | Taigen Biotechnology Co. Ltd. | Hcv protease inhibitors |
| ES2379905T3 (es) | 2007-02-27 | 2012-05-04 | Vertex Pharmceuticals Incorporated | Co-cristales y composiciones farmacéuticas que los comprenden |
| NZ579295A (en) | 2007-02-27 | 2012-03-30 | Vertex Pharma | Inhibitors of serine proteases |
| WO2008106167A1 (en) * | 2007-02-28 | 2008-09-04 | Conatus Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy comprising matrix metalloproteinase inhibitors and caspase inhibitors for the treatment of liver diseases |
| EP2144604B1 (en) | 2007-02-28 | 2011-09-21 | Conatus Pharmaceuticals, Inc. | Methods for the treatment of chronic viral hepatitis C using RO 113-0830 |
| CN101679240A (zh) * | 2007-03-23 | 2010-03-24 | 先灵公司 | Hcv ns3蛋白酶的p1-非可差向异构化酮酰胺抑制剂 |
| US7964580B2 (en) | 2007-03-30 | 2011-06-21 | Pharmasset, Inc. | Nucleoside phosphoramidate prodrugs |
| US20080267917A1 (en) * | 2007-04-26 | 2008-10-30 | Deqiang Niu | N-functionalized amides as hepatitis c serine protease inhibitors |
| US20080317712A1 (en) * | 2007-04-26 | 2008-12-25 | Deqiang Niu | Arylpiperidinyl and arylpyrrolidinyl tripeptide hepatitis c serine protease inhibitors |
| US20080292587A1 (en) * | 2007-04-26 | 2008-11-27 | Ying Sun | Oximyl dipeptide hepatitis c protease inhibitors |
| US8377872B2 (en) | 2007-04-26 | 2013-02-19 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Cyclic P3 tripeptide hepatitis C serine protease inhibitors |
| US7910587B2 (en) * | 2007-04-26 | 2011-03-22 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Quinoxalinyl dipeptide hepatitis C virus inhibitors |
| EP2177523A1 (en) * | 2007-05-03 | 2010-04-21 | Intermune, Inc. | Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication |
| CN102872461A (zh) | 2007-05-04 | 2013-01-16 | 弗特克斯药品有限公司 | 用于治疗hcv感染的组合治疗 |
| WO2008139288A2 (en) * | 2007-05-09 | 2008-11-20 | Pfizer Inc. | Substituted heterocyclic derivatives and compositions and their pharmaceutical use as antibacterials |
| JP2010526834A (ja) | 2007-05-10 | 2010-08-05 | インターミューン・インコーポレーテッド | Ｃ型肝炎ウイルス複製の新規ペプチド阻害剤 |
| GB0709791D0 (en) * | 2007-05-22 | 2007-06-27 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Antiviral agents |
| EP2162431B1 (en) | 2007-06-29 | 2017-06-07 | Gilead Sciences, Inc. | Antiviral compounds |
| US8513186B2 (en) | 2007-06-29 | 2013-08-20 | Gilead Sciences, Inc. | Antiviral compounds |
| EP2178885A1 (en) * | 2007-07-17 | 2010-04-28 | Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. | Macrocyclic indole derivatives for the treatment of hepatitis c infections |
| WO2009010804A1 (en) * | 2007-07-19 | 2009-01-22 | Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. | Macrocyclic compounds as antiviral agents |
| US8242140B2 (en) | 2007-08-03 | 2012-08-14 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Viral polymerase inhibitors |
| CL2008002549A1 (es) | 2007-08-30 | 2010-09-03 | Vertex Pharma | Cocristal que comprende vx-950 y un formador de cocristal seleccionado de acido 3-metoxi-4hidroxibenzoico,acido 2,4-dihidroxibenzoico y acido 2,5-dihidroxibenzoico; metodo de preparacion; composicion farmaceutica que comprende el cocristal, util como agente antiviral en el tratamiento del hcv. |
| GB0718575D0 (en) | 2007-09-24 | 2007-10-31 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Nucleoside derivatives as inhibitors of viral polymerases |
| US8419332B2 (en) * | 2007-10-19 | 2013-04-16 | Atlas Bolt & Screw Company Llc | Non-dimpling fastener |
| WO2009055335A2 (en) * | 2007-10-25 | 2009-04-30 | Taigen Biotechnology Co., Ltd. | Hcv protease inhibitors |
| US8383583B2 (en) | 2007-10-26 | 2013-02-26 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Macrocyclic, pyridazinone-containing hepatitis C serine protease inhibitors |
| WO2009064955A1 (en) | 2007-11-14 | 2009-05-22 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Macrocyclic tetrazolyl hepatitis c serine protease inhibitors |
| WO2009070689A1 (en) * | 2007-11-29 | 2009-06-04 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic, c5-substituted proline derivatives as inhibitors of the hepatitis c virus ns3 protease |
| WO2009070692A1 (en) * | 2007-11-29 | 2009-06-04 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | C5-substituted, proline-derived, macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors |
| WO2009076173A2 (en) | 2007-12-05 | 2009-06-18 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Fluorinated tripeptide hcv serine protease inhibitors |
| US8361958B2 (en) * | 2007-12-05 | 2013-01-29 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Oximyl HCV serine protease inhibitors |
| CA2708047A1 (en) | 2007-12-06 | 2009-06-11 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Process for making macrocyclic oximyl hepatitis c protease inhibitors |
| WO2009079353A1 (en) | 2007-12-14 | 2009-06-25 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Triazole-containing macrocyclic hcv serine protease inhibitors |
| US8476257B2 (en) | 2007-12-19 | 2013-07-02 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Viral polymerase inhibitors |
| US8202996B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-06-19 | Bristol-Myers Squibb Company | Crystalline forms of N-(tert-butoxycarbonyl)-3-methyl-L-valyl-(4R)-4-((7-chloro-4-methoxy-1-isoquinolinyl)oxy)-N- ((1R,2S)-1-((cyclopropylsulfonyl)carbamoyl)-2-vinylcyclopropyl)-L-prolinamide |
| CN102036966A (zh) * | 2008-01-24 | 2011-04-27 | 益安药业 | 作为hcv丝氨酸蛋白酶抑制剂的二氟化三肽 |
| US8101567B2 (en) * | 2008-01-24 | 2012-01-24 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Heteroaryl-containing tripeptide HCV serine protease inhibitors |
| EP2250174B1 (en) | 2008-02-04 | 2013-08-28 | IDENIX Pharmaceuticals, Inc. | Macrocyclic serine protease inhibitors |
| WO2009100225A1 (en) | 2008-02-07 | 2009-08-13 | Virobay, Inc. | Inhibitors of cathepsin b |
| WO2009108507A1 (en) | 2008-02-25 | 2009-09-03 | Merck & Co., Inc. | Therapeutic compounds |
| CN102015652A (zh) * | 2008-03-20 | 2011-04-13 | 益安药业 | 作为丙型肝炎病毒抑制剂的氟化大环化合物 |
| TW200946541A (en) * | 2008-03-27 | 2009-11-16 | Idenix Pharmaceuticals Inc | Solid forms of an anti-HIV phosphoindole compound |
| SG175692A1 (en) | 2008-04-15 | 2011-11-28 | Intermune Inc | Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication |
| US8163921B2 (en) * | 2008-04-16 | 2012-04-24 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| CA2720850A1 (en) * | 2008-04-28 | 2009-11-05 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Hcv ns3 protease inhibitors |
| WO2009134987A1 (en) * | 2008-04-30 | 2009-11-05 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Difluoromethyl-containing macrocyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors |
| US20090285774A1 (en) * | 2008-05-15 | 2009-11-19 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C Virus Inhibitors |
| CN101580535B (zh) * | 2008-05-16 | 2012-10-03 | 太景生物科技股份有限公司 | 丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂 |
| US7964560B2 (en) | 2008-05-29 | 2011-06-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| JP5529120B2 (ja) | 2008-05-29 | 2014-06-25 | ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー | Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤 |
| US8173621B2 (en) | 2008-06-11 | 2012-05-08 | Gilead Pharmasset Llc | Nucleoside cyclicphosphates |
| TW201004632A (en) | 2008-07-02 | 2010-02-01 | Idenix Pharmaceuticals Inc | Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections |
| PL2310095T3 (pl) | 2008-07-22 | 2013-03-29 | Msd Italia Srl | Makrocykliczne związki chinoksaliny jako inhibitory proteazy NS3 HCV |
| JP2011528686A (ja) | 2008-07-23 | 2011-11-24 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | ヘテロ環式抗ウイルス性化合物 |
| US8207341B2 (en) * | 2008-09-04 | 2012-06-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Process or synthesizing substituted isoquinolines |
| UY32099A (es) | 2008-09-11 | 2010-04-30 | Enanta Pharm Inc | Inhibidores macrocíclicos de serina proteasas de hepatitis c |
| PE20110388A1 (es) * | 2008-09-16 | 2011-07-01 | Boehringer Ingelheim Int | Formas cristalinas de un derivado de peptido como inhibidores de hcv |
| NZ591030A (en) * | 2008-09-17 | 2012-10-26 | Boehringer Ingelheim Int | Combination of hcv ns3 protease inhibitor with interferon and ribavirin |
| BRPI0920513A2 (pt) | 2008-09-26 | 2019-09-24 | F Hoffamann La Roche Ag | derivados de pirina ou pirazina para tratar hcv |
| US8044087B2 (en) | 2008-09-29 | 2011-10-25 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| US8563505B2 (en) | 2008-09-29 | 2013-10-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| EP3025727A1 (en) | 2008-10-02 | 2016-06-01 | The J. David Gladstone Institutes | Methods of treating liver disease |
| EA201170441A1 (ru) * | 2008-10-15 | 2012-05-30 | Интермьюн, Инк. | Терапевтические противовирусные пептиды |
| BRPI0919973A2 (pt) | 2008-10-30 | 2015-12-08 | Hoffmann La Roche | derivados de arilpiridona antivirais heterocíclicos |
| MX2011005151A (es) * | 2008-11-21 | 2011-05-30 | Boehringer Ingelheim Int | Composicion farmaceutica de un potente inhibidor de hvc para su administracion oral. |
| PE20150939A1 (es) | 2008-12-03 | 2015-07-19 | Presidio Pharmaceuticals Inc | Inhibidores de la proteina no estructural 5a del virus de la hepatitis c |
| NZ593806A (en) | 2008-12-03 | 2014-04-30 | Presidio Pharmaceuticals Inc | Inhibitors of hcv ns5a |
| US20100272674A1 (en) * | 2008-12-04 | 2010-10-28 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C Virus Inhibitors |
| US8283310B2 (en) | 2008-12-15 | 2012-10-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| EP2379579A1 (en) | 2008-12-19 | 2011-10-26 | Gilead Sciences, Inc. | Hcv ns3 protease inhibitors |
| JP2012513397A (ja) | 2008-12-22 | 2012-06-14 | ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド | 抗ウイルス化合物 |
| BRPI0924121A2 (pt) | 2008-12-22 | 2019-09-24 | Hoffmann La Roche | compostos antivirais heterocíclicos |
| JP5793084B2 (ja) | 2008-12-23 | 2015-10-14 | ギリアド ファーマセット エルエルシー | プリンヌクレオシドの合成 |
| CA2748057C (en) | 2008-12-23 | 2018-07-03 | Pharmasset, Inc. | Nucleoside phosphoramidates |
| BRPI0922508A8 (pt) | 2008-12-23 | 2016-01-19 | Pharmasset Inc | Análogos de nucleosídeo |
| SG172848A1 (en) | 2009-01-07 | 2011-08-29 | Scynexis Inc | Cyclosporine derivative for use in the treatment of hcv and hiv infection |
| WO2010082050A1 (en) | 2009-01-16 | 2010-07-22 | Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. | Macrocyclic and 7-aminoalkyl-substituted benzoxazocines for treatment of hepatitis c infections |
| GB0900914D0 (en) | 2009-01-20 | 2009-03-04 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Antiviral agents |
| US8102720B2 (en) * | 2009-02-02 | 2012-01-24 | Qualcomm Incorporated | System and method of pulse generation |
| AR075584A1 (es) | 2009-02-27 | 2011-04-20 | Intermune Inc | COMPOSICIONES TERAPEUTICAS QUE COMPRENDEN beta-D-2'-DESOXI-2'-FLUORO-2'-C-METILCITIDINA Y UN DERIVADO DE ACIDO ISOINDOL CARBOXILICO Y SUS USOS. COMPUESTO. |
| JP5690286B2 (ja) | 2009-03-04 | 2015-03-25 | イデニク プハルマセウティカルス，インコーポレイテッド | ホスホチオフェン及びホスホチアゾールｈｃｖポリメラーゼ阻害剤 |
| EP2403844A1 (en) | 2009-03-06 | 2012-01-11 | F. Hoffmann-La Roche AG | Heterocyclic antiviral compounds |
| EP2408449A4 (en) | 2009-03-18 | 2012-08-08 | Univ Leland Stanford Junior | METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING INFECTION WITH A FLAVIVIRIDAE FAMILY VIRUS |
| BRPI1012282A2 (pt) | 2009-03-27 | 2015-09-22 | Presidio Pharmaceuticals Inc | inibidores de anel fundidos da hepatite c. |
| US8927576B2 (en) | 2009-04-06 | 2015-01-06 | PTC Therpeutics, Inc. | HCV inhibitor and therapeutic agent combinations |
| US8377962B2 (en) | 2009-04-08 | 2013-02-19 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Macrocyclic serine protease inhibitors |
| US20110182850A1 (en) | 2009-04-10 | 2011-07-28 | Trixi Brandl | Organic compounds and their uses |
| US8512690B2 (en) | 2009-04-10 | 2013-08-20 | Novartis Ag | Derivatised proline containing peptide compounds as protease inhibitors |
| EP2421831A1 (en) | 2009-04-25 | 2012-02-29 | F. Hoffmann-La Roche AG | Heterocyclic antiviral compounds |
| EP2429568B1 (en) | 2009-05-13 | 2016-08-17 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Macrocyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors |
| TWI598358B (zh) | 2009-05-20 | 2017-09-11 | 基利法瑪席特有限責任公司 | 核苷磷醯胺 |
| US8618076B2 (en) | 2009-05-20 | 2013-12-31 | Gilead Pharmasset Llc | Nucleoside phosphoramidates |
| AR077004A1 (es) | 2009-06-09 | 2011-07-27 | Hoffmann La Roche | Compuestos heterociclicos antivirales |
| EP2445875A2 (en) | 2009-06-24 | 2012-05-02 | F. Hoffmann-La Roche AG | Heterocyclic antiviral compound |
| US8232246B2 (en) * | 2009-06-30 | 2012-07-31 | Abbott Laboratories | Anti-viral compounds |
| JP2012532146A (ja) * | 2009-07-02 | 2012-12-13 | ドクター・レディーズ・ラボラトリーズ・リミテッド | アミノビニルシクロプロパンカルボン酸誘導体の分割のための酵素および方法 |
| CA2767692C (en) | 2009-07-07 | 2017-03-07 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Pharmaceutical composition for a hepatitis c viral protease inhibitor |
| WO2011014487A1 (en) | 2009-07-30 | 2011-02-03 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Hepatitis c virus ns3 protease inhibitors |
| AR077712A1 (es) | 2009-08-05 | 2011-09-14 | Idenix Pharmaceuticals Inc | Inhibidores de serina proteasa macrociclica |
| WO2011019066A1 (ja) * | 2009-08-10 | 2011-02-17 | 住友化学株式会社 | 光学活性な１－アミノ－２－ビニルシクロプロパンカルボン酸エステルの製造方法 |
| US8324417B2 (en) | 2009-08-19 | 2012-12-04 | Virobay, Inc. | Process for the preparation of (S)-2-amino-5-cyclopropyl-4,4-difluoropentanoic acid and alkyl esters and acid salts thereof |
| US8389560B2 (en) * | 2009-09-15 | 2013-03-05 | Taigen Biotechnology Co., Ltd. | HCV protease inhibitors |
| CA2775697A1 (en) * | 2009-09-28 | 2011-03-31 | Intermune, Inc. | Cyclic peptide inhibitors of hepatitis c virus replication |
| WO2011049908A2 (en) * | 2009-10-19 | 2011-04-28 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Bismacrokyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors |
| KR20120106942A (ko) | 2009-10-30 | 2012-09-27 | 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 | Ｂｉ２０１３３５, 인터페론 알파 및 리바비린을 포함하는 ｈｃｖ 병용 치료요법을 위한 투여 용법 |
| WO2011063076A1 (en) | 2009-11-19 | 2011-05-26 | Itherx Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating hepatitis c virus with oxoacetamide compounds |
| JP2013512247A (ja) | 2009-11-25 | 2013-04-11 | バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | フラビウイルス感染症の治療または予防のための５−アルキニル−チオフェン−２−カルボン酸誘導体およびそれらの使用 |
| MY159958A (en) | 2009-12-18 | 2017-02-15 | Idenix Pharmaceuticals Inc | 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitors |
| EP2515902A1 (en) | 2009-12-24 | 2012-10-31 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections |
| US20110178107A1 (en) * | 2010-01-20 | 2011-07-21 | Taigen Biotechnology Co., Ltd. | Hcv protease inhibitors |
| AU2011209051B2 (en) | 2010-01-27 | 2015-01-15 | AB Pharma Ltd. | Polyheterocyclic compounds highly potent as HCV inhibitors |
| US8530497B2 (en) | 2010-03-11 | 2013-09-10 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Crystalline salts of a potent HCV inhibitor |
| CA2794145A1 (en) | 2010-03-24 | 2011-09-29 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections |
| EP2550278A1 (en) | 2010-03-24 | 2013-01-30 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections |
| EP2550268A1 (en) | 2010-03-24 | 2013-01-30 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections |
| TW201139438A (en) | 2010-03-24 | 2011-11-16 | Vertex Pharma | Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections |
| US8563530B2 (en) | 2010-03-31 | 2013-10-22 | Gilead Pharmassel LLC | Purine nucleoside phosphoramidate |
| CN102858790A (zh) | 2010-03-31 | 2013-01-02 | 吉利德制药有限责任公司 | 核苷氨基磷酸酯 |
| EP2552203B1 (en) | 2010-04-01 | 2017-03-22 | Idenix Pharmaceuticals LLC. | Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections |
| US8877707B2 (en) | 2010-05-24 | 2014-11-04 | Presidio Pharmaceuticals, Inc. | Inhibitors of HCV NS5A |
| WO2011156545A1 (en) | 2010-06-09 | 2011-12-15 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Viral dynamic model for hcv combination therapy |
| WO2011159826A2 (en) | 2010-06-15 | 2011-12-22 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Hcv ns5b protease mutants |
| WO2012006070A1 (en) | 2010-06-28 | 2012-01-12 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections |
| EP2585448A1 (en) | 2010-06-28 | 2013-05-01 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections |
| UY33473A (es) | 2010-06-28 | 2012-01-31 | Vertex Pharma | Compuestos y métodos para el tratamiento o la prevencion de infecciones por flavivirus |
| AU2011292040A1 (en) | 2010-08-17 | 2013-03-07 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Compounds and methods for the treatment or prevention of Flaviviridae viral infections |
| PE20140015A1 (es) | 2010-09-21 | 2014-02-16 | Enanta Pharm Inc | Inhibidores de las proteasas de serina del vhc derivados de prolinas macrociclicas |
| KR20130116245A (ko) * | 2010-09-30 | 2013-10-23 | 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 | Ｈｃｖ 감염 치료용 병용 요법 |
| BR112013008510A2 (pt) | 2010-10-08 | 2016-07-05 | Novartis Ag | vitamina e formulações de inibidores de sulfamida ns3 |
| PT3042910T (pt) | 2010-11-30 | 2019-04-16 | Gilead Pharmasset Llc | 2'-espiro-nucleósidos para utilização na terapia da hepatite c |
| MX2013006951A (es) * | 2010-12-16 | 2013-10-03 | Abbvie Inc | Compuestos antivirales. |
| MX2013007677A (es) | 2010-12-30 | 2013-07-30 | Abbvie Inc | Inhibidores macrociclicos de serina proteasa de hepatitis. |
| AU2011352145A1 (en) | 2010-12-30 | 2013-07-18 | Abbvie Inc. | Phenanthridine macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors |
| WO2012109398A1 (en) | 2011-02-10 | 2012-08-16 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Macrocyclic serine protease inhibitors, pharmaceutical compositions thereof, and their use for treating hcv infections |
| WO2012107589A1 (en) | 2011-02-11 | 2012-08-16 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of hcv infections |
| WO2012123298A1 (en) | 2011-03-11 | 2012-09-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antiviral compounds |
| EP2691409B1 (en) | 2011-03-31 | 2018-02-21 | Idenix Pharmaceuticals LLC. | Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections |
| US20120252721A1 (en) | 2011-03-31 | 2012-10-04 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating drug-resistant hepatitis c virus infection with a 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitor |
| US8957203B2 (en) | 2011-05-05 | 2015-02-17 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| US10201584B1 (en) | 2011-05-17 | 2019-02-12 | Abbvie Inc. | Compositions and methods for treating HCV |
| US8691757B2 (en) | 2011-06-15 | 2014-04-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| WO2012171332A1 (zh) | 2011-06-16 | 2012-12-20 | 爱博新药研发(上海)有限公司 | 抑制丙型肝炎病毒的大环状杂环化合物及其制备和应用 |
| JPWO2012176715A1 (ja) | 2011-06-21 | 2015-02-23 | 三菱瓦斯化学株式会社 | １−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸アミドおよびその塩、ならびにその製造方法 |
| WO2012175581A1 (en) | 2011-06-24 | 2012-12-27 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antiviral compounds |
| CN102807607B (zh) * | 2011-07-22 | 2013-10-23 | 爱博新药研发(上海)有限公司 | 抑制丙肝病毒的稠环杂环类化合物、其中间体及其应用 |
| WO2013016499A1 (en) | 2011-07-26 | 2013-01-31 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Methods for preparation of thiophene compounds |
| WO2013016492A1 (en) | 2011-07-26 | 2013-01-31 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Thiophene compounds |
| DE202012012998U1 (de) | 2011-08-31 | 2014-06-13 | Daniel Elias | Bioaktive, regenerative Mischung zur Herstellung eines Ergänzungsnahrungsmittels |
| US8951985B2 (en) | 2011-09-12 | 2015-02-10 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections |
| EP2755983B1 (en) | 2011-09-12 | 2017-03-15 | Idenix Pharmaceuticals LLC. | Substituted carbonyloxymethylphosphoramidate compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections |
| CN103917541B (zh) | 2011-10-10 | 2016-08-17 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 抗病毒化合物 |
| US8507460B2 (en) | 2011-10-14 | 2013-08-13 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Substituted 3′,5′-cyclic phosphates of purine nucleotide compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections |
| EA201490836A1 (ru) | 2011-10-21 | 2014-11-28 | Эббви Инк. | Комбинационное лечение (например, с abt-072 или abt-333) с помощью daa для применения при лечении hcv |
| US8466159B2 (en) | 2011-10-21 | 2013-06-18 | Abbvie Inc. | Methods for treating HCV |
| US8492386B2 (en) | 2011-10-21 | 2013-07-23 | Abbvie Inc. | Methods for treating HCV |
| GB2515941A (en) | 2011-10-21 | 2015-01-07 | Abbvie Inc | Methods for treating HCV comprising at least two direct acting antiviral agent, ribavirin but not interferon |
| EP2780026B1 (en) | 2011-11-15 | 2019-10-23 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Hcv ns3 protease inhibitors |
| US8889159B2 (en) | 2011-11-29 | 2014-11-18 | Gilead Pharmasset Llc | Compositions and methods for treating hepatitis C virus |
| EP2785184B1 (en) | 2011-11-30 | 2020-06-10 | Emory University | Compositions comprising jak inhibitors and haart drugs for use in the prevention or treatment of hiv |
| MX349036B (es) | 2011-12-06 | 2017-07-07 | Univ Leland Stanford Junior | Metodos y composiciones para tratar enfermedades virales. |
| EP2791161B1 (en) | 2011-12-16 | 2016-02-10 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Inhibitors of hcv ns5a |
| DK2794628T3 (en) | 2011-12-20 | 2017-07-10 | Riboscience Llc | 4'-AZIDO-3'-FLUORO-SUBSTITUTED NUCLEOSIDE DERIVATIVES AS INHIBITORS OF HCV RNA REPLICATION |
| PT2794629T (pt) | 2011-12-20 | 2017-07-20 | Riboscience Llc | Derivados de nucleósidos substituídos em 2¿-4¿-difluor-2¿-metilo, como inibidores da replicação do arn de vhc (vírus da hepatite c) |
| US20140356325A1 (en) | 2012-01-12 | 2014-12-04 | Ligand Pharmaceuticals Incorporated | Novel 2'-c-methyl nucleoside derivative compounds |
| KR20140109433A (ko) | 2012-01-12 | 2014-09-15 | 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 | 강력한 hcv 억제제의 안정화된 약제학적 제형 |
| WO2013133927A1 (en) | 2012-02-13 | 2013-09-12 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Pharmaceutical compositions of 2'-c-methyl-guanosine, 5'-[2-[(3-hydroxy-2,2-dimethyl-1-oxopropyl)thio]ethyl n-(phenylmethyl)phosphoramidate] |
| RU2014137052A (ru) | 2012-02-24 | 2016-04-10 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Противовирусные соединения |
| WO2013137869A1 (en) | 2012-03-14 | 2013-09-19 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Combination therapy for treating hcv infection in an hcv-hiv coinfected patient population |
| WO2013142157A1 (en) | 2012-03-22 | 2013-09-26 | Alios Biopharma, Inc. | Pharmaceutical combinations comprising a thionucleotide analog |
| WO2013147749A1 (en) | 2012-03-27 | 2013-10-03 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient subgenotype populations |
| WO2013147750A1 (en) | 2012-03-27 | 2013-10-03 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient sub-population |
| JP2015512900A (ja) | 2012-03-28 | 2015-04-30 | ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 特別な患者の遺伝子亜型分集団のｈｃｖ感染症を治療するための併用療法 |
| US9296778B2 (en) | 2012-05-22 | 2016-03-29 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | 3′,5′-cyclic phosphate prodrugs for HCV infection |
| AU2013266393B2 (en) | 2012-05-22 | 2017-09-28 | Idenix Pharmaceuticals Llc | D-amino acid compounds for liver disease |
| EP2852604B1 (en) | 2012-05-22 | 2017-04-12 | Idenix Pharmaceuticals LLC | 3',5'-cyclic phosphoramidate prodrugs for hcv infection |
| US20140010783A1 (en) | 2012-07-06 | 2014-01-09 | Hoffmann-La Roche Inc. | Antiviral compounds |
| ES2674980T3 (es) | 2012-10-08 | 2018-07-05 | Idenix Pharmaceuticals Llc | Análogos de 2'-cloro nucleósidos para infección por VHC |
| MX360452B (es) | 2012-10-19 | 2018-11-01 | Bristol Myers Squibb Co | Inhibidores del virus de la hepatitis c. |
| EP2909223B1 (en) | 2012-10-19 | 2017-03-22 | Idenix Pharmaceuticals LLC | Dinucleotide compounds for hcv infection |
| US10723754B2 (en) | 2012-10-22 | 2020-07-28 | Idenix Pharmaceuticals Llc | 2′,4′-bridged nucleosides for HCV infection |
| US9598433B2 (en) | 2012-11-02 | 2017-03-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| WO2014071007A1 (en) | 2012-11-02 | 2014-05-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis c virus inhibitors |
| US9643999B2 (en) | 2012-11-02 | 2017-05-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
| WO2014070974A1 (en) | 2012-11-05 | 2014-05-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis c virus inhibitors |
| WO2014078436A1 (en) | 2012-11-14 | 2014-05-22 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | D-alanine ester of sp-nucleoside analog |
| US20140140951A1 (en) | 2012-11-14 | 2014-05-22 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | D-Alanine Ester of Rp-Nucleoside Analog |
| CN103804208B (zh) * | 2012-11-14 | 2016-06-08 | 重庆博腾制药科技股份有限公司 | 一种丙肝药物中间体的制备方法 |
| EP2935304A1 (en) | 2012-12-19 | 2015-10-28 | IDENIX Pharmaceuticals, Inc. | 4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv |
| KR20150109451A (ko) | 2013-01-23 | 2015-10-01 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 항바이러스성 트라이아졸 유도체 |
| WO2014121417A1 (en) | 2013-02-07 | 2014-08-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of hepatitis c |
| WO2014121418A1 (en) | 2013-02-07 | 2014-08-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of hepatitis c |
| WO2014134251A1 (en) | 2013-02-28 | 2014-09-04 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Pharmaceutical compositions |
| US9309275B2 (en) | 2013-03-04 | 2016-04-12 | Idenix Pharmaceuticals Llc | 3′-deoxy nucleosides for the treatment of HCV |
| US9339541B2 (en) | 2013-03-04 | 2016-05-17 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Thiophosphate nucleosides for the treatment of HCV |
| US9428469B2 (en) | 2013-03-05 | 2016-08-30 | Hoffmann-La Roche | Antiviral compounds |
| WO2014137869A1 (en) | 2013-03-07 | 2014-09-12 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis c virus inhibitors |
| WO2014138374A1 (en) | 2013-03-08 | 2014-09-12 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient sub-population |
| EA201591722A1 (ru) | 2013-03-14 | 2016-02-29 | Ачиллион Фармасьютикалз, Инк. | Новые способы получения совапревира |
| WO2014165542A1 (en) | 2013-04-01 | 2014-10-09 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | 2',4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv |
| MY186547A (en) | 2013-05-16 | 2021-07-26 | Riboscience Llc | 4?-fluoro-2?-methyl substituted nucleoside derivatives |
| US20180200280A1 (en) | 2013-05-16 | 2018-07-19 | Riboscience Llc | 4'-Fluoro-2'-Methyl Substituted Nucleoside Derivatives as Inhibitors of HCV RNA Replication |
| MA38678A1 (fr) | 2013-05-16 | 2017-07-31 | Riboscience Llc | Dérivés nucléosidiques 4'-azido, 3'désoxy-3'-fluoro substitués |
| US10005779B2 (en) | 2013-06-05 | 2018-06-26 | Idenix Pharmaceuticals Llc | 1′,4′-thio nucleosides for the treatment of HCV |
| EP3027636B1 (en) | 2013-08-01 | 2022-01-05 | Idenix Pharmaceuticals LLC | D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease |
| MX2016002185A (es) | 2013-08-27 | 2016-06-06 | Gilead Pharmasset Llc | Formulacion combinada de dos compuestos antivirales. |
| US20160229866A1 (en) | 2013-09-20 | 2016-08-11 | Idenix Pharmaceuticals Inc. | Hepatitis c virus inhibitors |
| WO2015061683A1 (en) | 2013-10-25 | 2015-04-30 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | D-amino acid phosphoramidate and d-alanine thiophosphoramidate pronucleotides of nucleoside compounds useful for the treatment of hcv |
| EP3063165A1 (en) | 2013-11-01 | 2016-09-07 | Idenix Pharmaceuticals LLC | D-alanine phosphoramidate pronucleotides of 2'-methyl 2'-fluoro guanosine nucleoside compounds for the treatment of hcv |
| EP3074399A1 (en) | 2013-11-27 | 2016-10-05 | Idenix Pharmaceuticals LLC | 2'-dichloro and 2'-fluoro-2'-chloro nucleoside analogues for hcv infection |
| US9717797B2 (en) | 2013-12-05 | 2017-08-01 | International Business Machines Corporation | Polycarbonates bearing aromatic N-heterocycles for drug delivery |
| WO2015095419A1 (en) | 2013-12-18 | 2015-06-25 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | 4'-or nucleosides for the treatment of hcv |
| EP3089757A1 (en) | 2014-01-03 | 2016-11-09 | AbbVie Inc. | Solid antiviral dosage forms |
| EP2899207A1 (en) | 2014-01-28 | 2015-07-29 | Amikana.Biologics | New method for testing HCV protease inhibition |
| EP3114122A1 (en) | 2014-03-05 | 2017-01-11 | Idenix Pharmaceuticals LLC | Solid forms of a flaviviridae virus inhibitor compound and salts thereof |
| WO2015134780A1 (en) | 2014-03-05 | 2015-09-11 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Solid prodrug forms of 2'-chloro-2'-methyl uridine for hcv |
| WO2015134561A1 (en) | 2014-03-05 | 2015-09-11 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Pharmaceutical compositions comprising a 5,5-fused heteroarylene flaviviridae inhibitor and their use for treating or preventing flaviviridae infection |
| WO2015161137A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | 3'-substituted methyl or alkynyl nucleosides for the treatment of hcv |
| CN109689063A (zh) | 2016-04-28 | 2019-04-26 | 埃默里大学 | 含有炔烃的核苷酸和核苷治疗组合物及其相关用途 |
| TW201919649A (zh) | 2017-09-21 | 2019-06-01 | 美商里伯賽恩斯有限責任公司 | 作為ｈｃｖ ｒｎａ複製抑制劑之經４′－氟－２′－甲基取代之核苷衍生物 |
| JP2022510407A (ja) | 2018-12-04 | 2022-01-26 | ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー | 多重反応同位体分子種反応モニタリングによる、サンプル内検量線を用いた分析方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2028186A2 (en) * | 1998-08-10 | 2009-02-25 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. | Hepatitis C inhibitor tri-peptides |
Family Cites Families (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0475255A3 (en) * | 1990-09-12 | 1993-04-14 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Process for the preparation of optically pure (s)-alpha-((tert-butylsulfonyl)methyl)hydro cinnamic acid |
| JPH05155827A (ja) * | 1991-12-09 | 1993-06-22 | Banyu Pharmaceut Co Ltd | ｃｉｓ−２−アミノシクロプロパンカルボン酸誘導体の製造法 |
| IT1272179B (it) | 1994-02-23 | 1997-06-16 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Metodologia per riprodurre in vitro l'attivita' proteolitica della proteasi ns3 del virus hcv. |
| CN1141591A (zh) * | 1994-02-23 | 1997-01-29 | 布·安格莱荻公司分子生物学研究所 | 体外再生丙型肝炎病毒(hcv)ns3蛋白酶的解蛋白活性的方法 |
| US5500208A (en) | 1994-06-07 | 1996-03-19 | The Procter & Gamble Company | Oral compositions comprising a novel tripeptide |
| GB9517022D0 (en) | 1995-08-19 | 1995-10-25 | Glaxo Group Ltd | Medicaments |
| IT1277914B1 (it) * | 1995-08-22 | 1997-11-12 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Procedimento per produrre - in forma pura e in quantita' elevate - polipeptidi con l'attivita' proteolitica della proteasi ns3 di hcv, e |
| CA2165996C (en) * | 1995-12-22 | 2002-01-29 | Murray Douglas Bailey | Stereoselective preparation of 2-substituted succinic derivatives |
| DE19600034C2 (de) | 1996-01-02 | 2003-12-24 | Degussa | 1,1,2-Trisubstituierte Cyclopropanverbindungen, Verfahren zu deren Herstellung und Dihydroxyethyl-substituierte 1-Amino-cyclopropan-1-carbonsäure |
| US5633388A (en) | 1996-03-29 | 1997-05-27 | Viropharma Incorporated | Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C |
| JP4080541B2 (ja) | 1996-10-18 | 2008-04-23 | バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | セリンプロテアーゼ、特にｃ型肝炎ウイルスｎｓ３プロテアーゼの阻害因子 |
| JP2002512625A (ja) | 1997-05-29 | 2002-04-23 | メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド | 細胞接着阻害薬としての複素環アミド化合物 |
| US6767991B1 (en) | 1997-08-11 | 2004-07-27 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. | Hepatitis C inhibitor peptides |
| ES2241157T3 (es) | 1997-08-11 | 2005-10-16 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. | Peptidos inhibidores de la hepatitis c. |
| SE9704543D0 (sv) * | 1997-12-05 | 1997-12-05 | Astra Ab | New compounds |
| US6455571B1 (en) * | 1998-04-23 | 2002-09-24 | Abbott Laboratories | Inhibitors of neuraminidases |
| DE19835120C1 (de) * | 1998-08-04 | 1999-10-21 | Westfalia Separator Ag | Verfahren und Vorrichtung zum Einstellen des Flüssigkeitsgehalts des aus einer selbstentleerenden Schleudertrommel eines Separators ausgetragenen Feststoffes |
| US6277830B1 (en) * | 1998-10-16 | 2001-08-21 | Schering Corporation | 5′-amino acid esters of ribavirin and the use of same to treat hepatitis C with interferon |
| US6608027B1 (en) | 1999-04-06 | 2003-08-19 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd | Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus |
| US7091184B2 (en) * | 2002-02-01 | 2006-08-15 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Hepatitis C inhibitor tri-peptides |
| US6642204B2 (en) * | 2002-02-01 | 2003-11-04 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Hepatitis C inhibitor tri-peptides |
| EP1601685A1 (en) * | 2003-03-05 | 2005-12-07 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Hepatitis c inhibiting compounds |
| DE602004029866D1 (de) * | 2003-03-05 | 2010-12-16 | Boehringer Ingelheim Pharma | Peptidanaloga mit inhibitorischer wirkung auf hepatitis c |
-
1999
- 1999-08-05 US US09/368,866 patent/US6323180B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 IL IL14101299A patent/IL141012A0/xx unknown
- 1999-08-09 RS YUP-94/01A patent/RS50798B/sr unknown
- 1999-08-09 KR KR1020017001786A patent/KR100631439B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-08-09 HU HU0105144A patent/HU229262B1/hu unknown
- 1999-08-09 EA EA200100228A patent/EA003906B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-08-09 BR BRPI9913646A patent/BRPI9913646B8/pt not_active IP Right Cessation
- 1999-08-09 ES ES08169026T patent/ES2405930T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 PT PT81690265T patent/PT2028186E/pt unknown
- 1999-08-09 TR TR2002/00129T patent/TR200200129T2/xx unknown
- 1999-08-09 DK DK99938084T patent/DK1105413T3/da active
- 1999-08-09 SK SK50026-2009A patent/SK288068B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1999-08-09 EP EP99938084A patent/EP1105413B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 TW TW088113586A patent/TWI250165B/zh not_active IP Right Cessation
- 1999-08-09 SI SI9931071T patent/SI2028186T1/sl unknown
- 1999-08-09 PE PE1999000800A patent/PE20000949A1/es not_active IP Right Cessation
- 1999-08-09 AT AT99938084T patent/ATE430158T1/de active
- 1999-08-09 JP JP2000564993A patent/JP4485685B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 CZ CZ20090004A patent/CZ302766B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-08-09 PT PT99938084T patent/PT1105413E/pt unknown
- 1999-08-09 TR TR2001/00432T patent/TR200100432T2/xx unknown
- 1999-08-09 CZ CZ20010516A patent/CZ301268B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-08-09 CA CA2338946A patent/CA2338946C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 CN CN2007101407405A patent/CN101143892B/zh not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 BR BRPI9917805-2B1A patent/BR9917805B1/pt active IP Right Grant
- 1999-08-09 NZ NZ510396A patent/NZ510396A/xx not_active IP Right Cessation
- 1999-08-09 SI SI9931033T patent/SI1105413T1/sl unknown
- 1999-08-09 CA CA2445938A patent/CA2445938C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 MY MYPI99003397A patent/MY127538A/en unknown
- 1999-08-09 EE EEP200100081A patent/EE05517B1/xx unknown
- 1999-08-09 ID IDW20010316A patent/ID27839A/id unknown
- 1999-08-09 AU AU52731/99A patent/AU769738B2/en not_active Expired
- 1999-08-09 IN IN127MUN2001 patent/IN211493B/en unknown
- 1999-08-09 PL PL346626A patent/PL204850B1/pl unknown
- 1999-08-09 DE DE69940817T patent/DE69940817D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 SK SK206-2001A patent/SK286994B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1999-08-09 ME MEP-2008-585A patent/ME00381B/me unknown
- 1999-08-09 KR KR1020067010736A patent/KR100672229B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-08-09 EP EP08169026A patent/EP2028186B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 CN CNB998105503A patent/CN100339389C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 HU HU1300080A patent/HU230701B1/hu unknown
- 1999-08-09 RS YU20090459A patent/RS53562B1/sr unknown
- 1999-08-09 ES ES99938084T patent/ES2326707T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 PH PH11999002002A patent/PH11999002002B1/en unknown
- 1999-08-09 DK DK08169026.5T patent/DK2028186T3/da active
- 1999-08-09 WO PCT/CA1999/000736 patent/WO2000009543A2/en active Application Filing
- 1999-08-09 RS RSP-2009/0459A patent/RS20090459A/sr unknown
- 1999-08-10 CO CO99050714A patent/CO5261542A1/es active IP Right Grant
- 1999-08-10 AR ARP990103977A patent/AR020880A1/es active IP Right Grant
- 1999-09-08 UA UA2001031603A patent/UA75026C2/uk unknown
- 1999-09-28 SA SA99200617A patent/SA99200617B1/ar unknown
-
2000
- 2000-09-12 US US09/660,030 patent/US6268207B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-29 US US09/675,398 patent/US6329379B1/en not_active Ceased
- 2000-11-01 US US09/703,751 patent/US6329417B1/en not_active Ceased
-
2001
- 2001-01-22 IL IL141012A patent/IL141012A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-02-05 ZA ZA200100971A patent/ZA200100971B/en unknown
- 2001-02-07 IN IN127MU2001 patent/IN2001MU00127A/en unknown
- 2001-02-07 MX MXPA06004222 patent/MX257413B/es unknown
- 2001-02-07 MX MXPA01001423 patent/MX261584B/es active IP Right Grant
- 2001-02-08 HR HR20010102A patent/HRP20010102B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-02-08 BG BG105232A patent/BG65738B1/bg unknown
- 2001-02-09 NO NO20010683A patent/NO328952B1/no not_active IP Right Cessation
- 2001-04-06 US US09/827,976 patent/US6420380B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-04 US US09/849,057 patent/US6410531B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-02-25 HK HK02101407.3A patent/HK1040085B/zh not_active IP Right Cessation
- 2002-03-05 US US10/091,293 patent/US6534523B1/en not_active Ceased
-
2005
- 2005-09-30 US US11/241,899 patent/USRE40525E1/en not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-05-11 IN IN706MU2007 patent/IN2007MU00706A/en unknown
-
2008
- 2008-03-05 US US12/042,627 patent/USRE41894E1/en not_active Expired - Lifetime
- 2008-05-12 US US12/118,926 patent/USRE41356E1/en not_active Expired - Lifetime
- 2008-05-13 US US12/119,609 patent/USRE42164E1/en not_active Expired - Lifetime
- 2008-08-12 HK HK08108883.5A patent/HK1113164A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2008-12-05 AR ARP080105301A patent/AR069583A2/es active IP Right Grant
-
2009
- 2009-01-15 IL IL196545A patent/IL196545A/en not_active IP Right Cessation
- 2009-07-23 CY CY20091100795T patent/CY1109291T1/el unknown
- 2009-11-18 JP JP2009262835A patent/JP5021711B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2009-11-27 AR ARP090104583A patent/AR073428A2/es not_active Application Discontinuation
-
2010
- 2010-01-05 NO NO20100004A patent/NO336663B1/no not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-04-18 CY CY20131100317T patent/CY1113935T1/el unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2028186A2 (en) * | 1998-08-10 | 2009-02-25 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. | Hepatitis C inhibitor tri-peptides |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Chen a kol. (1986) J. Chem. Soc., Chem. Commun. 20, 1514-1516 * |
| Chen a kol. (1994) Chirality 6, 572-576 * |
| Fliche a kol. (1994) Synth. Commun. 24 (20), 2873-2876 * |
| JimÚnez a kol. (1994) Tetrahedron Lett. 35 (32), 5945-5948 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ302766B6 (cs) | Zpusob rozdelení enanciomerní smesi methyl-(1R,2S)/(1S,2R)-t-butoxykarbonyl-1-amino-2-vinylcyklopropylkarboxylátu | |
| KR100629791B1 (ko) | Ｃ형 간염 억제제 펩타이드, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 약제학적 조성물 | |
| CA2370396A1 (en) | Hepatitis c inhibitor tri-peptides |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20190809 |