PL204850B1 - Nowe analogi peptydowe, kompozycje farmaceutyczne je zawierające, sposoby wytwarzania analogów peptydowych, zastosowanie związków pośrednich do ich otrzymywania oraz zastosowanie analogów peptydowych - Google Patents

Nowe analogi peptydowe, kompozycje farmaceutyczne je zawierające, sposoby wytwarzania analogów peptydowych, zastosowanie związków pośrednich do ich otrzymywania oraz zastosowanie analogów peptydowych

Info

Publication number
PL204850B1
PL204850B1 PL346626A PL34662699A PL204850B1 PL 204850 B1 PL204850 B1 PL 204850B1 PL 346626 A PL346626 A PL 346626A PL 34662699 A PL34662699 A PL 34662699A PL 204850 B1 PL204850 B1 PL 204850B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
6alkyl
substituted
amino
optionally substituted
formula
Prior art date
Application number
PL346626A
Other languages
English (en)
Other versions
PL346626A1 (en
Inventor
Montse Llinas-Brunet
Murray D. Bailey
Dale Cameron
Anne-Marie Faucher
Elise Ghiro
Nathalie Goudreau
Teddy Halmos
Marc-André Poupart
Jean Rancourt
Youla S. Tsantrizos
Dominik M. Wernic
Bruno Simoneau
Original Assignee
Boehringer Ingelheim Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Ingelheim Ltd filed Critical Boehringer Ingelheim Ltd
Publication of PL346626A1 publication Critical patent/PL346626A1/xx
Publication of PL204850B1 publication Critical patent/PL204850B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/081—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing O or S as heteroatoms, e.g. Cys, Ser
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C12P41/003—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions
    • C12P41/005—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of carboxylic acid groups in the enantiomers or the inverse reaction

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

Przedmiotem wynalazku są związki chemiczne, nowe analogi peptydowe, kompozycje farmaceutyczne je zawierające, sposoby wytwarzania tych analogów oraz zastosowanie związków pośrednich w procesie otrzymywania analogów peptydowych, a także zastosowanie nowych analogów peptydowych w leczeniu infekcji HCV.
Wirus zapalenia wątroby C (HCV) jest głównym czynnikiem etiologicznym potransfuzyjnego i nabytego w kontaktach społecznych zapalenia wątroby nie-A nie-B na całym świecie. Ocenia się, ż e ponad 150 milionów ludzi na całym świecie jest zakażonych wirusem. U wysokiego odsetka nosicieli zakażenie przechodzi w postać chroniczną i u wielu rozwija się przewlekła choroba wątroby, tzw. przewlekłe zapalenie wątroby C. U tej grupy występuje z kolei wysokie ryzyko poważnej choroby wątroby takiej jak marskość wątroby, rak wątrobowokomórkowy i terminalna choroba wątroby prowadząca do śmierci.
Mechanizm, na drodze, którego HCV uzyskuje stabilność i powoduje częste występowanie przewlekłej choroby wątroby nie został dokładnie ustalony. Nie wiadomo, jak HCV oddziałuje z systemem immunologicznym gospodarza i unika jego działania. Ponadto, role komórkowej i humoralnej odpowiedzi immunologicznej w zabezpieczeniu przeciw infekcji HCV i chorobie pozostały jeszcze do ustalenia. Stwierdzono, że immunoglobuliny znajdują zastosowanie w profilaktyce związanego z transfuzją wirusowego zapalenia wątroby, jednakże Centrum Kontroli Choroby obecnie nie zaleca stosowania immunoglobulin do tego celu. Brak skutecznej ochronnej odpowiedzi immunologicznej hamuje rozwój szczepionki lub adekwatnych środków profilaktycznych po narażeniu, więc w najbliższym okresie nadzieje są związane z interwencją przeciwwirusową.
Przeprowadzono różne badania kliniczne w celu identyfikacji środków farmaceutycznych zdolnych do skutecznego leczenia infekcji HCV u pacjentów dotkniętych przewlekłym zapaleniem wątroby C. Te badania obejmowały zastosowanie interferonu alfa, pojedynczo i w połączeniu z innymi środkami przeciwwirusowymi. Takie badania wykazały, że znaczna liczba uczestników nie odpowiada na te terapie, a z tych, którzy odpowiadają korzystnie, u dużego odsetka wystąpił nawrót choroby po zakończeniu leczenia.
Aż do niedawna, interferon (IFN) był jedynym dostępnym lekiem o udowodnionych korzyściach, zatwierdzonym klinicznie dla pacjentów z przewlekłym zapaleniem wątroby C. Jednakże stopień przedłużonej odpowiedzi jest niski, a leczenie interferonem wywołuje także poważne efekty uboczne (tj. retinopatię, zapalenie tarczycy, ostre zapalenie trzustki, depresję), które obniżają jakość życia leczonych pacjentów. Ostatnio zatwierdzono interferon w połączeniu z rybawiryną dla pacjentów nieodpowiadających na sam IFN. Jednakże, to leczenie skojarzone nie łagodzi efektów ubocznych powodowanych przez IFN.
Istnieje więc potrzeba zapewnienia skutecznych środków przeciwwirusowych do leczenia infekcji HCV, które przezwyciężą ograniczenia istniejących terapii farmaceutycznych.
HCV jest wirusem otoczkowym o zgodnej nici RNA z rodziny Flaviviridae. Pojedyncza nić RNA genomu HCV ma w przybliżeniu 9500 nukleotydów długości i pojedynczą otwartą ramkę odczytu (ORF) kodującą pojedynczy duży polipeptyd składający się z około 3000 aminokwasów. W zakażonych komórkach, ten polipeptyd jest przecinany w wielu miejscach przez komórkowe i wirusowe proteazy, z wytworzeniem białek strukturalnych i nie-strukturalnych (NS). W przypadku HCV, dojrzałe białka nie-strukturalne (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, i NS5B) tworzą dwie wirusowe proteazy. Pierwsza, jeszcze słabo scharakteryzowana, rozszczepia połączenie NS2-NS3; druga jest proteazą serynową zawartą w N-końcowym obszarze NS3 (w dalszej części opisu zwana proteazę NS3) i pośredniczy we wszystkich późniejszych rozszczepieniach wewnątrz łańcucha NS3, zarówno w cis, w miejscu rozerwania NS3-NS4A, jak i w trans, dla pozostał ych miejsc NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B. Wydaje się, że białko NS4A ma liczne funkcje, działa jako kofaktor dla proteazy NS3 i prawdopodobnie wspiera lokalizację na błonie NS3 i innych składników replikacji wirusa. Powstawanie kompleksu białka NS3 z NS4A wydaje się być konieczne do procesów obróbki, wzmacniając wydajność proteolityczną we wszystkich miejscach. Białko NS3 także wykazuje aktywności trifosfatazy nukleozydowej i helikazy RNA. NS5B jest zależną od RNA polimerazą RNA, która jest zaangażowana w replikację HCV.
Ogólna strategia opracowywania środków przeciwwirusowych polega na inaktywowaniu zakodowanych w wirusie enzymów, które mają zasadnicze znaczenie dla replikacji wirusa. W oparciu o powyższe, opis patentowy nr WO97/06804 ujawnia enancjomer (-) analogu nukleozydu cytozyno-1,3-oksatiolanu (także znanego jako 3TC) jako aktywnego środka przeciw HCV. W przypadku tego związku, chociaż był
PL 204 850 B1 on bezpieczny zgodnie z poprzednimi próbami klinicznymi wobec HIV i HBV, powinno się jeszcze klinicznie udowodnić jego aktywność przeciw HCV i zgłosić jego mechanizm działania przeciw wirusowi.
Intensywne wysiłki zmierzające do znalezienia związków, które hamują proteazę NS3 lub helikazę RNA HCV doprowadziły do następujących ujawnień:
Opis patentowy St. Zjedn. Ameryki nr 5633388 ujawnia heterocykliczne podstawione karboksyamidy i analogi jako aktywne wobec HCV. Te związki są ukierunkowane przeciw aktywności helikazy białka NS3 wirusa, ale kliniczne testy nie zostały jeszcze zgłoszone.
Chu i in. Badali fenantrenochinon (Tet. Lett., (1996), 7229-7232), który ma wykazywać aktywność wobec proteazy NS3 HCV in vitro. Brak dalszych opracowań dla tego związku.
Praca przedstawiona na Dziewiątej Międzynarodowej Konferencji na temat Badań Przeciwwirusowych, w Urabandai, Fukyshima, Japonia (1996) (Antiviral Research, (1996), 30, 1, A23 (skrót 19)) przedstawia pochodne tiazolidyny jako inhibitory proteazy HCV.
Kilka badań dotyczyło związków hamujących inne proteazy serynowe, takie jak elastaza ludzkich leukocytów. Jedną rodzinę tych związków ujawniono w opisie patentowym nr W095/33764 (Hoechst Marion Roussel, 1995). Peptydy ujawnione w tym zgłoszeniu są analogami morfolinylokarbonylobenzoilo-peptydu, które różnią się budową od peptydów według niniejszego wynalazku.
Opis patentowy nr W098/17679 przynależny do Vertex Pharmaceuticals Inc. ujawnia inhibitory proteazy serynowej, szczególnie proteazy NS3 wirusowego zapalenia wątroby C. Te inhibitory są analogami peptydów opartymi na naturalnym substracie NS5A/5B. Chociaż ujawniono kilka tripeptydów, wszystkie te analogi peptydów zawierają C-końcową aktywowaną grupę karbonylową jako zasadniczą własność. Stwierdzono, że te analogi są także aktywne wobec innej proteazy serynowej, a wię c nie są one specyficzne dla proteazy NS3 HCV.
W Hoffman LaRoche także badano heksapeptydy, które s ą inhibitorami proteazy, przydatnymi jako środki przeciwwiruso-we do leczenia infekcji HCV. Te peptydy zawierają aldehyd lub kwas boronowy na C-końcu.
Steinkuhler i in. oraz Ingallinella i in. przedstawili publikację na temat hamowania produktu NS4A-4B (Biochemistry (1998), 37, 8899-8905 i 8906-8914). Jednakże, przedstawione peptydy i analogi peptydowe nie obejmują, ani nie prowadzą do opracowania peptydów takich jak w niniejszym wynalazku.
Zakresem wynalazku są objęte nowe analogi peptydów wyrażone związkiem o ogólnym wzorze I, w tym jego racematy, dia-stereoizomery i izomery optyczne
w którym B oznacza H, C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil; Het lub (C1-6alkil)-Het, przy czym wszystkie korzystnie podstawione przez C1-6alkil; C1-6alkoksyl; C1-6alkanoil; hydroksyl; hydroksyalkil; atom chlorowca; chlorowcoalkil; nitro; cyjano; cyjanoalkil; amino wzorze I podstawiony przez C1-6alkil; amido; lub C1-6alkiloamid;
lub B oznacza karboksyl o wzorze R4-O-C(O)-; amid o wzorze R4-N(R5)-C(O)-; tioamid o wzorze R4-N(R5)-C(S)-;lub sulfonyl o wzorze R4-SO2, w których R4 oznacza (i) C1-10alkil wzorze I podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksyl, amino korzystnie mono-lub di-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid;
(ii) C3-7cykloalkil, C3-7cykloalkoksyl lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie korzystnie podstawione przez hydroksyl, karboksyl, (C1-6alkoksy)karbonyl, amino wzorze I mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid;
(iii) amino korzystnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; amido; lub C1-6alkiloamid;
PL 204 850 B1 (iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie korzystnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amido, C1-6alkiloamid lub amino korzystnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba korzystnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amido, C1-6alkiloamid lub amino korzystnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; R5 oznacza H lub C16alkil; lub B oznacza pochodną acylową o wzorze R4-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil korzystnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksyl, lub amino korzystnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil,;
(ii) C3-7cykloalkil, C3-7cykloalkoksyl lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie korzystnie podstawione przez hydroksyl, karboksyl, (C1-6alkoksy)karbonyl, lub amino korzystnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iii) amino korzystnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie korzystnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, lub amino korzystnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba korzystnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, lub amino korzystnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
z ograniczeniem, że gdy B oznacza amid lub tioamid, R4 nie oznacza (ii) cykloalkoksylu;
Y oznacza H lub C1-6alkil;
R3 oznacza C1-6alkil, C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie korzystnie podstawione przez hydroksyl, C1-6alkoksyl, C1-6tioalkil, amido, C1-6alkiloamido, C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil;
R2 oznacza CH2-R20, NH-R20 O-R20 lub S-R20 w których R20 oznacza nasycony lub nienasycony C3-7cykloalkil lub
C4-10(alkilocykloalkil), przy czym wszystkie są korzystnie mono-, di- lub tri-podstawione przez R21, R20 oznacza C6 lub C10aryl lub C7-14aryloalkil, wszystkie korzystnie mono-, di- lub tri-podstawione przez R21, lub R20 oznacza Het lub (C1-6alkil)-Het, oba korzystnie mono-, di- lub tri-podstawione przez R21, przy czym każdy R21 oznacza niezależnie C1-6alkil; C1-6alkoksyl; C1-6tioalkil; sulfonyl; NO2; OH; SH; atom chlorowca; chlorowcoalkil; amino korzystnie mono-lub di-podstawiony przez C1-6alkil, C6 lub C10aryl, C7-14aryloalkil Het lub (C1-6alkil)-Het; amido korzystnie mono-podstawiony przez C1-6alkil, C6 lub C10aryl, C7-14aryloalkil, Het lub (C1-6alkil)-Het; karboksyl; karboksy(C1-6alkil); C6 lub C10aryl, C7-14aryloalkil lub Het, wymieniony aryl, aryloalkil lub Het są korzystnie podstawione przez R22, przy czym R22 oznacza C1-6alkil; C3-7cykloalkil; C1-6alkoksyl; amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; sulfonyl; C1-6alkilosulfonyl; NO2; OH; SH; atom chlorowca; chlorowcoalkil; karboksyl; amid; C1-6alkiloamid; lub Het ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil;
R1 oznacza H; C1-6alkil, C3-7cykloalkil, C2-6alkenyl lub C2-6alkinyl, wszystkie ewentualnie podstawione przez atom chlorowca;
lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól lub ester.
Dla związku o wzorze I według wynalazku korzystne jest, gdy
B oznacza C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil; lub B oznacza pochodną acylową o wzorze R4-C(O)-, w którym R4 oznacza C1-10alkil; amino, C3-7cykloalkiloamino; C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil lub heterocykl, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil;
lub B oznacza sulfonyl o wzorze R4-SO2, w którym R4 oznacza (i) C1-10alkil lub C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil;
R3 oznacza C1-8alkil, C3-7cykloalkil, C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil;
R2 oznacza CH2-R20, NH-R20, O-R20 lub S-R20, w których R20 oznacza nasycony lub nienasycony C3-7cykloalkil, ewentualnie podstawiony przez NO2, OH, SH, halo; ewentualnie zawierający heteroatom wybrany niezależnie z grupy obejmującej O, S i N, lub R20 oznacza C6 lub C10aryl lub C7-14aryloalkil, ewentualnie podstawione przez C1-6alkil; C1-6alkoksyl, NO2; OH; SH; atom chlorowca lub drugi C1-6alkil, gdzie pierwszy aryl lub dowolny aryloalkil ewentualnie zawiera heteroatom wybrany niezależnie z grupy obejmującej O, S i N;
R1 oznacza H; C1-6alkil, C2-6alkenyl, wszystkie ewentualnie podstawione przez atom chlorowca; lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól lub ester.
Dla związku według wynalazku jeszcze korzystniej jest, gdy we wzorze I, B oznacza C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil, ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, hydroksyl, atom chlorowca, chlorowcoalkil, amino; lub B oznacza pochodną acylową o wzorze R4-C(O)-, w którym R4 oznacza C1-10alkil,; C1-10alkiloamino C3-7cykloalkiloamino, C3-7cykloalkoksyl lub C4-10alkilocykloalkiloamino, lub
PL 204 850 B1
R4 oznacza C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, lub heterocykl, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil,
R3 oznacza C1-6alkil, C3-7cykloalkil, C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil;
R2 oznacza CH2-R20, NH-R20, O-R20 lub S-R20, w których R20 oznacza nasycony lub nienasycony C3-7cykloalkil, ewentualnie podstawiony przez NH2, NO2, OH, SH, halo, halogenoalkil; ewentualnie zawierający heteroatom wybrany niezależnie z grupy obejmującej O, S i N, lub R20 oznacza C6 lub C10aryl, lub C7-14aryloalkil, ewentualnie zawierający heteroatom wybrany niezależnie z grupy obejmującej O, S i N; ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, OH, NH2,
R1 oznacza C1-6alkil;
lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól lub ester.
Dla związku o wzorze I według wynalazku jeszcze korzystniej jest, gdy B oznacza C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, hydroksyalkil, atom chlorowca, chlorowcoalkil, nitro, cyjano, cyjanoalkil, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub gdy B oznacza Het lub (C1-6alkil)-Het, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, hydroksyalkil, atom chlorowca, chlorowcoalkil, nitro, cyjano, cyjanoalkil, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil.
Dla związku o wzorze I według wynalazku najkorzystniej jest, gdy B oznacza R4-SO2, w którym R4 oznacza C1-6alkil; amido; C1-6alkiloamid; C6 lub C10aryl, C7-14aryloalkil lub Het, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil.
W alternatywnym rozwią zaniu B korzystnie oznacza pochodną acylową o wzorze R4-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, hydroksyl lub C1-6alkoksyl, lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, oba ewentualnie podstawione przez hydroksyl, karboksyl, (C1-6alkoksy)karbonyl, lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil;
(v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil.
Jeszcze korzystniej jest, gdy B oznacza karboksyl o wzorze R4-O-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksyl, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid;
(ii) C3-7cykloalkil, C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)-karbonyl, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid;
(iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, hydroksyl, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamido.
Alternatywnie, B oznacza amid o wzorze R4-N(R5)-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksyl, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)-karbonyl, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie mono-lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iii) amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-3alkil;
(iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amido, C1-6alkiloamid lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid; i R5 oznacza H lub metyl.
Najkorzystniej, B oznacza tioamid o wzorze R4-NH-C(S)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil lub C1-6alkoksyl;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)-karbonyl, amino lub amido.
W alternatywnym rozwią zaniu wynalazkiem obję ty jest zwią zek o ogólnym wzorze I, w którym B oznacza C6 lub C10aryl ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl,
PL 204 850 B1 hydroksyalkil, atom chlorowca, chlorowcoalkil, nitro, cyjano, cyjanoalkil, amido, C1-6alkiloamid lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil. Korzystnie jest, gdy B oznacza Het ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, atom chlorowca, amido, C1-6alkiloamid lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil. Korzystnie jest również, gdy B oznacza pochodną acylową o wzorze R4-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, hydroksyl lub C1-6alkoksyl; lub (ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, oba ewentualnie podstawione przez hydroksyl, karboksyl, (C1-6alkoksy) karbonyl; lub (iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl lub (v) Het ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, hydroksyl lub amino.
Alternatywnie, B oznacza karboksyl o wzorze R4-O-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksy lub amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil, C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)-karbonyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil lub (iv) C6 lub C1-6aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amido lub amino ewentualnie mono-podstawiony przez C1-6alkil.
Alternatywnie, B oznacza amid o wzorze R4-N(R5)-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)karbonyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iii) amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub (iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino lub amido ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, hydroksyl, amino lub amido, i R5 oznacza H.
W alternatywnym rozwiązaniu B oznacza tioamid o wzorze R4-NH-C(S)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil; lub (ii) C3-7cykloalkil. A najkorzystniej, gdy B oznacza amid o wzorze R4-NH-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksy amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)-karbonyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iv) C6 lub C1-6aryl lub C7-16aryloalkil ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, hydroksyl, amino lub amido.
Korzystnie, gdy B oznacza tert-butoksykarbonyl (Boc) lub korzystnie Y oznacza H lub metyl, a nsjkorzystniej, gdy Y oznacza H.
Korzystnie, R3 oznacza C1-6alkil, C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez hydroksyl, C1-6alkoksyl, C1-6tioalkil, acetamido, C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil. Korzystniej, gdy R3 oznacza łańcuch boczny tert-butyloglicyny (Tbg), Ile, Val, Chg lub lub
Najkorzystniej, R3 oznacza łańcuch boczny Tbg, Chg lub Val.
PL 204 850 B1
Zakresem wynalazku objęte są związki o wzorze I, w którym, korzystnie, R2 oznacza S-R20 lub O-R20, w których R20 oznacza C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil, Het lub -CH2-Het, wszystkie ewentualnie mono-, di- lub tri-podstawione przez R21.
Korzystnie, R21 oznacza C1-6alkil; C1-6alkoksyl; C1-6tioalkil; amino lub amido ewentualnie monolub di-podstawiony przez C1-6alkil, C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil, Het lub (C1-6alkil)-Het; NO2; OH; atom chlorowca; trifluorometyl; karboksyl; C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil lub Het, wymieniony aryl, aryloalkil lub Het są ewentualnie podstawione przez R22.
Korzystnie, R22 oznacza C1-6alkil; C3-7cykloalkil; C1-6alkoksyl; amino; mono- lub di-(C1-6alkiloamino); (C1-6alkiloamid); sulfonyloalkil; NO2; OH; atom chlorowca; trifluorometyl; karboksyl lub Het.
Korzystnie, R21 oznacza C1-6alkil; C1-6alkoksyl; amino; di(C1-6alkilo)amino; C1-6alkiloamid; C6 lub C10aryl lub Het, wymieniony aryl lub Het są ewentualnie podstawione przez R22, przy czym R22 oznacza C1-6alkil; C3-7cykloalkil; C1-6alkoksyl; amino; mono- lub di(C1-6alkilo)amino; amido; C1-6alkiloamid; atom chlorowca; trifluorometyl lub Het. Korzystnie, R22 oznacza C1-6alkil; C1-6alkoksyl; atom chlorowca; amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; amido; C1-6alkiloamid; lub Het. Nawet najkorzystniej, R22 oznacza metyl; etyl; izopropyl; tert-butyl; metoksyl; chloro; amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; amido, C1-6alkiloamid; lub (C1-6alkilo)-2-tiazol. Alternatywnie, R2 jest wybrany z grupy obejmującej:
2
Korzystniej, R2 oznacza 1-naftylometoksyl; 2-naftylometoksyl; benzylooksyl, 1-naftylooksyl; 2-naftylooksyl; lub chinolinooksyl niepodstawiony, mono- lub di-podstawiony przez zdefiniowany poprzednio R21.
2
Najkorzystniej, R2 oznacza 1-naftylometoksyl; lub chinolinooksyl niepodstawiony, mono- lub dipodstawiony przez zdefiniowany poprzednio R21, w taki sposób, że R2 jest wybrany z grupy obejmującej:
2
Wciąż korzystniej, R2 oznacza:
w którym R21A oznacza C1-6alkil; C1-6alkoksyl; C1-6tioalkil; atom chlorowca; amino ewentualnie mono-podstawiony przez C1-6alkil; lub C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil lub Het, wymieniony aryl, aryloalkil lub Het są ewentualnie podstawione przez R22, przy czym R22 oznacza C1-6alkil, C1-6alkoksyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di podstawiony przez C1-6alkil lub Het; i
R21B oznacza C1-6alkil, C1-6alkoksyl, amino, di(C1-6alkilo)amino, C1-6alkiloamid, NO2, OH, atom chlorowca, trifluorometyl lub karboksyl.
Najkorzystniej, R21A oznacza C6, C1-10aryl lub Het wszystkie ewentualnie podstawione przez zdefiniowany wcze śniej R22 w taki sposób, że R21A jest wybrany z grupy obejmującej:
PL 204 850 B1
w którym R22A oznacza C1-6alkil; C1-6alkoksyl; lub atom chlorowca; i R21B oznacza C1-6alkil, C1-6alkoksyl, amino, di(C1-6alkilo)amino, C1-6alkiloamid, NO2, OH, atom chlorowca, trifluorometyl lub karboksyl.
Równie korzystnie, R2 oznacza:
w którym R22B oznacza C1-6alkil, amino ewentualnie mono-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid; i R21B oznacza C1-6alkil, C1-6alkoksyl, amino, di(C1-6alkilo) amino, C1-6alkiloamid, NO2, OH, atom chlorowca, trifluorometyl lub karboksyl. Korzystniej, R21B oznacza C1-6alkoksyl lub di(C1-6alkilo)amino. Najkorzystniej, R21B oznacza metoksyl.
W związku o wzorze I według wynalazku, część P1 oznacza cyklobutyl lub cyklopropyl, oba ewentualnie podstawione przez R1, przy czym R1 oznacza H, C1-6alkil, C3-5cykloalkil lub C2-4alkenyl, wszystkie ewentualnie podstawione przez atom chlorowca. Korzystnie też, część P1 oznacza cyklopropyl i R1 oznacza etyl, winyl, cyklopropyl, 1- lub 2-bromoetyl lub 1-lub 2-bromowinyl. Najkorzystniej, gdy R1 oznacza winyl.
Związek o wzorze I może występować jako racemiczna mieszanina diastereoizomerów przy atomie węgla 1, w którym R1 przy atomie węgla 2 ma orientację syn względem karbonylu w pozycji 1, co reprezentuje rodnik:
PL 204 850 B1
lub, w którym R1 w pozycji 2 ma orientację anti względem karbonylu w pozycji 1, co reprezentuje rodnik:
lub gdy wymieniony podstawnik R1 i karbonyl występują w orientacji syn w następującej konfiguracji bezwzględnej:
W przypadku, gdy R1 oznacza etyl, to asymetryczne atomy węgla w pozycjach 1 i 2 mają konfigurację R,R.
W przypadku, gdy R1 oznacza winyl, asymetryczne atomy wę gla w pozycjach 1 i 2 mają konfigurację R,S.
Zakresem wynalazku objęty jest także związek o ogólnym wzorze I, w którym B oznacza C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, hydroksyalkil, atom chlorowca, chlorowcoalkil, nitro, cyjano, cyjanoalkil, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub Het lub (C1-6alkil)-Het, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, hydroksyalkil, atom chlorowca, chlorowcoalkil, nitro, cyjano, cyjanoalkil, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub B oznacza R4-SO2, w którym R4 oznacza korzystnie amido; C1-6alkiloamid; C6 lub C10aryl, C7-14aryloalkil lub Het, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil; lub B oznacza pochodną acylową o wzorze R4-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, hydroksyl lub C1-6alkoksyl, lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
PL 204 850 B1 (ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, oba ewentualnie podstawione przez hydroksyl, karboksyl, (C1-6alkoksy)karbonyl, lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil;
(v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub
B oznacza karboksyl o wzorze R4-O-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksyl, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid;
(ii) C3-7cykloalkil, C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)karbonyl, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid;
(iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, hydroksyl, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamido lub
B oznacza amid o wzorze R4-N(R5)-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksyl, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)-karbonyl, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie mono-lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iii) amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iv) C6 lub Cigaryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amido, C1-6alkiloamid lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid; i R5 oznacza H lub metyl; lub
B oznacza tioamid o wzorze R4-NH-C(S)-; w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil lub C1-6alkoksyl;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)-karbonyl, amino lub amido;
Y oznacza H lub metyl; R3 oznacza C1-6alkil, C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez hydroksyl, C1-6alkoksyl, C1-6tioalkil, acetamido, C6 lub C1-6aryl lub C7-16aryloalkil; R2 oznacza S-R20 lub O-R20, w których R20 oznacza korzystnie C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil, Het lub -CH2-Het, wszystkie ewentualnie mono-, di- lub tri-podstawione przez R21, przy czym R21 oznacza C1-6alkil; C1-6alkoksyl; C1-6tioalkil; amino lub amido ewentualnie mono-lub dipodstawiony przez C1-6alkil, C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil, Het lub (C C1-6alkil)-Het; NO2; OH; atom chlorowca; trifluorometyl; karboksyl; C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil lub Het, wymieniony aryl, aryloalkil lub Het są ewentualnie podstawione przez R22, przy czym R22 oznacza C1-6alkil; C3-7cykloalky); C1-6alkoksyl; amino; mono- lub di-( C1-6alkilo)amino; C1-6alkiloamid; sulfonyloalkil; NO2; OH; atom chlorowca; trifluorometyl; karboksyl lub Het; lub
R2 jest wybrany z grupy obejmującej:
lub R2 oznacza 1-naftylometoksyl; 2-naftylometoksyl; benzylooksyl, 1-naftylooksyl; 2-naftylooksyl; lub chinolinooksyl niepodstawiony, mono- lub di-podstawiony przez R21 zdefiniowany powyżej; i część P1 oznacza cyklopropyl, oba ewentualnie podstawione przez R1, przy czym R1 oznacza C1-3alkil, C3-5cykloalkil lub C2-4alkenyl ewentualnie podstawiony przez atom chlorowca i wymieniony R1 przy atomie węgla 2 ma orientację syn względem karbonylu w pozycji 1, co reprezentuje rodnik:
PL 204 850 B1
lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól lub ester.
Zakresem wynalazku objęty jest również związek o wzorze I, w którym B oznacza C6 lub C10aryl ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, hydroksyalkil, atom chlorowca, chlorowcoalkil, nitro, cyjano, cyjanoalkil, amido, C1-6alkiloamid lub amino ewentualnie monolub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub B oznacza Het ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, atom chlorowca, amido, C1-6alkiloamid lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub B oznacza R4-SO2, w którym R4 oznacza C6 lub C10aryl, C7-14aryloalkil lub Het, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil; amido, C1-6alkiloamid; B oznacza pochodną acylową o wzorze R4-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, hydroksyl lub C1-6alkoksyl; lub (ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, oba ewentualnie podstawione przez hydroksyl, karboksyl, (C1-6alkoksy)karbonyl; lub (iv) C6 lub C1-6aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl; lub (v) Het ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, hydroksyl, lub amino;
lub B oznacza karboksyl o wzorze R4-O-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksy lub amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil, C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)-karbonyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub (iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amido lub amino ewentualnie mono-podstawiony przez C1-6alkil; lub B oznacza amid o wzorze R4-N(R5)-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)-karbonyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; i
R5 oznacza H lub metyl; lub
R4 oznacza (iii) amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub (iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino lub amido ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, hydroksyl, amino lub amido; lub B oznacza tioamid o wzorze R4-NH-C(S)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil lub (ii) C3-7cykloalkil; lub Y oznacza H;
R3 oznacza łańcuch boczny tert-butylglicyny (Tbg), Ile, Val, Chg lub
R2 oznacza 1-naftylometoksyl; lub chinolinooksyl niepod-stawiony, mono- lub di-podstawiony przez R21 zdefiniowany powyżej; lub R2 oznacza:
PL 204 850 B1
w którym R21A oznacza C1-6alkil; C1-6alkoksyl; C6 lub C10aryl lub Het; C1-6tioalkil; atom chlorowca; amino ewentualnie mono-podstawiony przez C1-6alkil; lub C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil lub Het, ewentualnie podstawiony przez R22, przy czym R22 oznacza C1-6alkil, C1-6alkoksyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil lub Het;
P1 oznacza cyklopropyl, w którym atom węgla 1 ma konfigurację R,
R1 oznacza etyl, winyl, cyklopropyl, 1- lub 2-bromoetyl lub 1- lub 2-bromowinyl.
Zakresem wynalazku objęty jest też związek o ogólnym wzorze I, w którym B oznacza amid o wzorze R4-NH-C(O)-, w którym R4 oznacza
i) C1-10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksy amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy) -karbonyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, hydroksyl, amino lub amido;
R3 oznacza łańcuch boczny Tbg, Chg lub Val;
2
R2 oznacza:
w których R22A oznacza C1-6alkil (taki jak metyl); C1-6alkoksyl (taki jak metoksyl); lub atom chlorowca (taki jak atom chloru); R22B oznacza C1-6alkil, amino ewentualnie mono-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid; i R21B oznacza C1-6alkil, C1-6alkoksyl, amino, di(C1-6alkilo)amino, C1-6alkiloamid, NO2, OH, atom chlorowca, trifluorometyl lub karboksyl; i P1 oznacza:
PL 204 850 B1
Zakresem wynalazku objęty jest każdy związek o wzorze
w którym B, R3, R2 mają zdefiniowane poni ż ej znaczenia:
Tablica 1 nr związku B *3 r2
101 Boc cHex -O-CHp-l-naftyl
102 Οψζ cHex -O-CH2-l-naftyl
104 cHex -0-CH2-l-naftyl
105 cHex -O-CH2~l-naftyl
106 Boc cHex — NO,
107 Cl cHex -O-CH2~l-naftyl
108 Boc iPr
109 acetyl cHex
Korzystnie, gdy związkiem według wynalazku jest związek o wzorze:
PL 204 850 B1
w którym B, R3, R2 mają zdefiniowane poni ż ej znaczenia:
Tablica 1 nr związku B *3 R2
103 / Γ cHex -O-CH2“l-naftyl
110 Boc i-Pr
111 Boc t-Bu / o
Najkorzystniej, gdy związkiem według wynalazku jest związek nr 111 z powyższej tabeli. Korzystnie, gdy związkiem według wynalazku jest związek o wzorze:
w którym B, R3, R2, R1 mają zdefiniowane poniż ej znaczenia:
Tablica 2 nr związku B R3 R2 R1 anti względem karboksylu
201 Boc cykloheksyl -O-CH2-1-naftyl Etyl (jeden izomer)
202 Boc cykloheksyl -O-CH2-1-naftyl Etyl (jeden izomer)
Równie korzystnie, gdy związkiem według wynalazku jest związek o wzorze:
w którym B, R3, R2, R1 mają zdefiniowane poniż ej znaczenia:
PL 204 850 B1
Tablica 2 nr związku B *3 R2 Ri anti względem karboksylu
203 Boc t-Bu winyl IR, 2R
Zakresem wynalazku objęty jest każdy związek reprezentowany poniższym wzorem:
w którym B, R3, R2 i R1 mają zdefiniowane poniż ej znaczenia:
Tablica 3 nr związku B R3 *2 Ri syn względem karboksylu
301 Boc cHex -O-CHp-l-naftyl etyl
302 iPr -O-CH2~l-naftyl etyl
303 cHex -O-CH2“l-naftyl etyl
304 Boc cHex (o® N ^och; etyl
305 Boc cHex -O-CHp-l-naftyl winyl
PL 204 850 B1
Tablica 3 nr związku B R3 R2 Ri syn względem karboksylu
306 Boc cHex winyl
307 Boc cHex \ winyl
308 Boc cHex \ winyl
309 Boc cHex winyl
310 Boc cHex ©ci \ winyl
311 Boc cHex ι©©) winyl
312 Boc cHex Og z° winyl
313 Boc cHex loig 0 / winyl
314 Boc cHex o \ winyl
315 Boc cHex \ winyl
316 acetyl cHex winyl
PL 204 850 B1
Tablica 3 nr związku B *3 *2 Ri syn względem karboksylu
317 Boc cHex klii \ H winyl
Najkorzystniej, gdy są nimi związki o numerach: 307, 314 i 317.
Zakresem wynalazku objęty jest też każdy związek reprezentowany poniższym wzorem:
w którym B, R3, R2 i R1 mają zdefiniowane poniż ej znaczenia:
Tablica 3 nr związku B R3 *2 Rl syn względem karboksylu
318 cf3- C(O)- i-Pr o / winyl
319 / o P cHex winyl
320 cHex ^70 winyl
321 Boc t-Bu o^on O z winyl
PL 204 850 B1
Tablica 3 nr związku B R3 R2 R1 syn względem karboksylu
322 Boc t-Bu Z° winyl
323 Boc t-Bu kzn z
324 Boc t-Bu / o o— O winyl
325 Boc t-Bu 0 / Λ
326 Boc t-Bu / o o— lt 0 winyl
327 i 0 AX t-Bu z winyl
328 Boc t-Bu Ó“W o \ winyl
329 Boc t-Bu CChJO N N \ winyl
330 Boc t-Bu ęcż winyl
PL 204 850 B1
Tablica 3 nr związku B *3 r2 Ri syn względem karboksylu
331 xA t-Bu θχο winyl
332 Boc t-Bu / winyl
333 XX t-Bu N X» winyl
334 t-Bu > N X> winyl
Najkorzystniej, gdy jest nim związek wybrany z grupy obejmującej związki o numerach: 319, 321, 324, 325, 326, 327, 329, 331, 332, 333 i 334.
Korzystnie, gdy związkiem według wynalazku jest związek o wzorze:
w którym B, R3, R2 i R1 mają zdefiniowane poniż ej znaczenia:
PL 204 850 B1
Tablica 4 nr związku B *3 r2 Ri
401 Boc i-Pr igo / H
402 Boc t-Bu l§Tqi z H
403 Boc t-Bu H
Równie korzystnie, gdy związkiem według wynalazku jest związek o wzorze:
w którym B, R3, R2 i R1 mają zdefiniowane poniż ej znaczenia:
Tablica 4 nr związku B R3 R2 Ri
404 Boc t-Bu Z 3-(=CH2)
405 Boc t-Bu t O zk .OMe π 1 z 2-winyl
406 Boc t-Bu z 2-Et
PL 204 850 B1 bardziej korzystnie, gdy jest nim związek o numerze 403:
Najkorzystniej, gdy jest nim związek wybrany z grupy obejmującej związki o numerach 405 i 406. Korzystnie, gdy związkiem według wynalazku jest związek o wzorze::
w którym R3 ma znaczenie zdefiniowane poniżej
Tablica 5 nr związku r3
501 t-Bu
502 H
503 °r
Tablica 5 Nr związku r3
507 Ύ° rN,
508
509 S'
504 1 V
505 —o
506 a, V
510 2
511
PL 204 850 B1
Najkorzystniej, gdy jest nim związek wybrany z grupy obejmującej związki o numerach: 501, 509 i 510.
Korzystnie jest, gdy związkiem według wynalazku jest związek o wzorze:o wzorze:
w którym R3, R21A i R21B mają zdefiniowane poniż ej znaczenia
Tablica 6 nr związku R3 r21A r21B
601 i-Pr Ph 7-OMe
602 t-Bu Ph 8-OMe, 7-OMe
603 i-Pr Ph 7-etyl
604 t-Bu _ 7-OMe
605 t-Bu Ph 7-O-Pr
606 t-Bu — 7-C1
607 iPr — 7-C1
PL 204 850 B1
Tablica 6 nr związku R3 r21A R21B
608 CHp-iPr 7-C1
609 t-Bu -
610 t-Bu Cl
611 t-Bu Ph 7-N(Me)2
612 t-Bu O o-' -
613 t-Bu Q X -
614 t-Bu Q V -
615 t-Bu _ 7-N(Me)2
616 t-Bu η2ν^·ν\^ s— -
617 t-Bu o- -
618 t-Bu Me 1 Me— -
619 t-Bu Ph 1 Me—Ν^^χ· -
620 t-Bu Me^ N / Ck -
621 t-Bu -
622 t-Bu Me
623 t-Bu MeO-
624 t-Bu (Me)?N-
625 t-Bu Ph 7-S(Me)
626 t-Bu Ph 7-Br
PL 204 850 B1
Tablica 6 nr związku R3 R21A r21B
627 t-Bu Ph 7-F
628 t-Bu Ύ ' N _ HNxr 7-N(Me)2
629 t-Bu μ N 7-N(Me)2
630 t-Bu ^=0 N 7-N (Et)2
Najkorzystniej, gdy jest nim związek wybrany z grupy obejmującej związki o numerach: 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 610, 611, 612, 615, 616, 617, 620, 621, 622, 625, 626, 627, 628, 629 i 630.
Korzystnie, gdy związkiem według wynalazku jest związek o wzorze:
w którym R3 i R21A mają zdefiniowane poniż ej znaczenia:
PL 204 850 B1
Tablica 7 nr związku R3 R21A
701 t-Bu W
702 t-Bu
703 t-Bu
704 t-Bu
705 t-Bu o.
706 t-Bu Cr
707 t-Bu cr
708 t-Bu Ph-N(Me)-
709 t-Bu S—
710 t-Bu H00C-
711 t-Bu
712 t-Bu (Me)?N-
713 t-Bu <r
714 t-Bu
715 t-Bu Cu
716 t-Bu a
717 t-Bu Me \J
718 t-Bu nh2
719 t-Bu H »u yrr
PL 204 850 B1
PL 204 850 B1
733 t-Bu Ύ
734 t-Bu
735 t-Bu Yx
736 t-Bu t-Bu
737 t-Bu cHex
Najkorzystniej, gdy jest nim związek wybrany z grupy obejmującej związki o numerach: 701, 702, 703, 704, 705, 706, 707, 708, 709 i 711 do 737.
Korzystnie jest, gdy związkiem według wynalazku jest związek o wzorze:
w którym B, R3 i R22 mają zdefiniowane poniż ej znaczenia:
Tablica 8 nr związku B R3 r22
801 i O t-Bu -
802 ' o ó t-Bu
803 ZA t-Bu -
PL 204 850 B1
Tablica 8 nr związku B R3 r22
804 o t-Bu -
805 Ac t-Bu —
806 0 t-Bu -
807 AA t-Bu
808 CIA t-Bu -
809 a t-Bu -
810 t-Bu -
811 Boc t-Bu 4-C1
812 t-Bu -
813 Ca t-Bu -
814 Boc t-Bu 2-C1
815 Boc t-Bu 3-C1
816 0 -A t-Bu -
817 ..... 0 t-Bu -
818 Oa t-Bu -
819 i-Pr -
920 :xa i-Pr -
PL 204 850 B1
PL 204 850 B1
Tablica 8 nr związku B R3 r22
838 i-Pr -
839 i-Pr -
840 d U- i-Pr -
841 Boc t-Bu 2-Me
842 Boc t-Bu 3-Me
843 Boc t-Bu 4-Me
844 t-Bu 4-OMe
845 ΤΧλ i-Pr -
846 <Xk i-Pr -
847 Boc cHex
848 Boc Λ -
849 Boc Λ -
850 Boc 1 -
851 Boc 1 Τ' -
852 Boc y- —o -
853 Boc V -
PL 204 850 B1
Tablica 8 nr związku B R3 r22
854 og i-Pr -
855 i-Pr -
856 'Tk i-Pr -
857 o t-Bu -
858 ©A 1 Me t-Bu -
859 a i-Pr -
860 ΌΑ i-Pr -
861 Nc\jO^ i-Pr -
862 ,Α. i-Pr -
863 ax i-Pr -
864 a i-Pr -
865 ΟΛ t-Bu -
866 t-Bu -
867 Ο...Λ t-Bu -
868 Q„< t-Bu -
869 A< t-Bu -
870 t-Bu -
PL 204 850 B1
Tablica 8 nr związku B R3 R22
871 t-Bu -
872 t-Bu -
873 t-Bu -
Najkorzystniej, gdy jest nim związek wybrany z grupy obejmującej związki o numerach: 801 do 825, 827 do 858 i 860 do 873.
Korzystnie, gdy związkiem według wynalazku jest związek o wzorze::
w którym B ma znaczenie zdefiniowane poniż ej:
Tablica 9 nr związku B
901 Boc
902 °ó
903 0 γΑ 'ć
PL 204 850 B1
PL 204 850 B1
Korzystnie, gdy związkiem według wynalazku jest związek reprezentowany wzorem:
3 w którym B, X, R3, z i R21B mają zdefiniowane poniżej znaczenia:
Tablica 10 nr związku Β-Χ- R3 Z r21B
1001 Ph-N(Me)- i-Pr 0 H
1002 Boc-NH- t-Bu S OMe
1003 z Me i-Pr 0 -
Zakresem wynalazku objęte są też kompozycje farmaceutyczne.
Kompozycja farmaceutyczna, zawierająca farmaceutycznie dopuszczalny nośnik lub środek pomocniczy, według wynalazku charakteryzuje się tym, że zawiera skuteczną przeciw wirusowemu zapaleniu wątroby C ilość związku według wynalazku o ogólnym wzorze I, lub jego terapeutycznie dopuszczalnej soli lub estru.
Zakresem wynalazku objęte są też sposoby wytwarzania analogu peptydowego.
Sposób wytwarzania analogu peptydowego o wzorze I, określonego w niniejszym wynalazku, w którym P1 jest resztą podstawionego kwasu aminocyklopropylokarboksylowego, charakteryzuje się tym, że peptyd wybrany z grupy obejmującej APG-P3-P2 lub APG-P2, sprzęga się ze związkiem pośrednim P1 o wzorze:
w których R1 oznacza C1-6alkil, cykloalkil lub C2-6alkenyl, wszystkie ewentualnie podstawione przez atom chlorowca, CPG oznacza grupę zabezpieczającą grupę karboksylową i APG oznacza grupę zabezpieczającą grupę aminową oraz P3 i P2 mają określone we wzorze I znaczenia.
Alternatywny sposób wytwarzania analogu peptydowego o wzorze I określonego w niniejszym wynalazku, hamującego proteazę serynową lub hamującego proteazę NS3 HCV, charakteryzuje się tym, że odpowiednio zabezpieczony aminokwas, peptyd lub fragment peptydowy sprzęga się ze związkiem pośrednim P1 o wzorze:
PL 204 850 B1
w których R1 oznacza C1-6alkil, cykloalkil lub C2-6alkenyl, wszystkie korzystnie podstawione przez atom chlorowca, a CPG oznacza grupę zabezpieczającą grupę karboksylową.
Inny alternatywny sposób wytwarzania analogu peptydowego o wzorze I określonego w niniejszym wynalazku, hamującego proteazę serynową lub hamującego proteazę NS3 HCV, charakteryzuje się tym, że odpowiednio zabezpieczony aminokwas, pep-tyd lub fragment peptydowy sprzęga się ze związkiem pośrednim o wzorze:
w którym CPG oznacza grupę zabezpieczającą grupę karboksylową.
Dla sposobów wytwarzania analogu peptydowego według wynalazku korzystne jest, gdy stosuje się wspomnianą grupę zabezpieczającą grupę karboksylową (CPG) wybraną z grupy obejmującej estry alkilowe, estry aryloalkilowe i estry rozpadające się pod wpływem łagodnej zasady lub łagodnych środków redukujących. Równie korzystne jest, gdy stosuje się wspomnianą grupę zabezpieczającą grupę aminową (APG) wybraną z grupy obejmującej grupy acylowe, aromatyczne grupy karbaminianowe, alifatyczne grupy karbaminianowe, cykliczne grupy alkilokarbaminianowe, grupy alkilowe, trialkilosilil i grupy zawierające tiol.
Zakresem wynalazku objęte są też zastosowania związków pośrednich.
Zastosowanie związku pośredniego P1 o wzorze:
w którym R1 oznacza C1-6alkil, cykloalkil lub C2-6alkenyl, wszystkie korzystnie podstawione przez atom chlorowca, a CPG oznacza grupę zabezpieczającą grupę karboksylową, charakteryzuje się tym, że stosuje się go do otrzymywania analogu peptydowego o wzorze I określonego w niniejszym wynalazku, hamującego proteazę serynową lub hamującego proteazę NS3 HCV.
Inne rozwiązanie obejmuje zastosowanie związku pośredniego o wzorze:
w którym CPG oznacza grupę zabezpieczając ą grupę karboksylową, do otrzymywania analogu peptydowego o wzorze I określonego w niniejszym wynalazku.
Jeszcze inne rozwiązanie obejmuje zastosowanie związku pośredniego P1 o wzorze:
PL 204 850 B1
w których R1 oznacza C1-6alkil, cykloalkil lub C2-6alkenyl, wszystkie korzystnie podstawione przez atom chlorowca, a CPG oznacza grupę zabezpieczającą grupę karboksylową, do otrzymywania związku o wzorze I określonego w niniejszym wynalazku.
Jeszcze inne rozwiązanie obejmuje zastosowanie analogu proliny o wzorze:
w którym R21A oznacza C1-6alkil; C1-6alkoksyl; C1-6tioalkil; atom chlorowca; amino korzystnie mono-podstawiony przez C1-6alkil; C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil lub Het, wspomniany aryl, aryloalkil lub Het są ewentualnie podstawione przez R22, przy czym R22 oznacza C1-6alkil, C1-6alkoksyl, amido C1-6alkiloamid, amino korzystnie mono-lub di-podstawiony przez C1-6alkil lub Het; a R21B oznacza C1-6alkil, C1-6alkoksyl, amino, di(C1-6alkilo) amino, C1-6alkiloamid, NO2, OH, atom chlorowca, trifluorometyl lub karboksyl, do otrzymywania analogu peptydowego o wzorze I określonego w niniejszym wynalazku, hamującego proteazę sery-nową lub hamującego proteazę NS3 HCV.
Zakresem wynalazku objęte są też zastosowania nowych związków peptydowych według wynalazku.
Zastosowanie związku o wzorze I określonego w niniejszym wynalazku, lub jego terapeutycznie dopuszczalnej soli lub estru, obejmuje zastosowanie do otrzymywania kompozycji farmaceutycznej do leczenia wirusowego zapalenia wątroby C u ssaków.
Alternatywne zastosowanie obejmuje zastosowanie związku o wzorze I, określonego w zastrz. 1, lub jego terapeutycznie dopuszczalnej soli lub estru, w ilości hamującej protezę NS3, do otrzymywania kompozycji farmaceutycznej do hamowania replikacji wirusa zapalenia wątroby C.
Rozwiązania według wynalazku posiadają szereg wymiernych korzyści i zalet.
Jedną z korzyści niniejszego wynalazku jest to, że ujawnia on analogi peptydowe, tripeptydy, które są inhibitorami proteazy NS3 wirusa zapalenia wątroby C.
Kolejna korzyść zgodnie z jednym aspektem niniejszego wynalazku opiera się na fakcie, że te peptydy specyficznie hamują proteazę NS3 i nie wykazują znaczącej aktywności hamowania w stężeniach do 300 μM wobec innych proteaz serynowych takich jak elastaza ludzkich leukocytów (HLE), świńska elastaza trzustkowa (PPE) lub bydlęca trzustkowa chymotrypsyna lub proteazy cysteinowe takie jak katepsyna B (Cat B) ludzkiej wątroby.
Kolejną korzyścią według niniejszego wynalazku jest to, że ujawnia on krótkie peptydy o małej masie cząsteczkowej, które mogą być zdolne do przenikania przez błony komórkowe i mogą być aktywne w hodowli komórkowej i in vivo z dobrym profilem farmakokinetycznym.
Ważnym aspektem rozwiązań według wynalazku jest ich wykorzystanie do wytwarzania kompozycji farmwceutycznej do leczenia infekcji wirusowej zapalenia wątroby C u ssaków, przez podawanie ssakowi skutecznej przeciw wirusowi zapalenia wątroby C ilości związku o wzorze I lub jego terapeutycznie dopuszczalnej soli lub estru, lub opisanej powyżej kompozycji.
Innym ważnym aspektem właściwości analogów peptydowych według wynalazku jest hamowanie replikacji wirusa zapalenia wątroby C, poprzez poddanie wirusa działaniu inhibitującej proteazę
PL 204 850 B1
NS3 wirusa zapalenia wątroby C ilości związku o wzorze I lub jego terapeutycznie dopuszczalnej soli lub estru, lub opisanej powyżej kompozycji.
Jeszcze innym aspektem właściwości nowych analogów pep-tydowych według wynalazku jest ich wykorzystanie w leczeniu infekcji wirusowej zapalenia wątroby C u ssaków, przez podawanie im skutecznej przeciw wirusowi zapalenia wątroby C ilości kombinacji związku o wzorze I lub jego terapeutycznie dopuszczalnej soli lub estru. Zgodnie z jednym rozwiązaniem, kompozycje farmaceutyczne według wynalazku zawierają dodatkowy immunomodulator. Przykłady dodatkowych immunomodulatorów obejmują, lecz nie ograniczają się do nich, α-, β- i δ-interferony.
Stosowane w niniejszym opisie definicje, jeśli nie wskazano tego inaczej, mają następujące znaczenia:
W odniesieniu do przypadków, gdy do oznaczenia konfiguracji podstawnika stosuje się (R) lub (S), np. podstawnika R1 związku o wzorze I, oznaczenie dotyczy związku, a nie samego podstawnika.
Naturalne aminokwasy, z wyjątkiem glicyny, zawierają chiralny atom węgla. Jeśli nie wyspecyfikowano tego inaczej, korzystne są związki zawierające naturalne aminokwasy o konfiguracji L. Jednakże, należy zauważyć, że gdy to wskazano, niektóre aminokwasy o wzorze I mogą występować albo w konfiguracji D lub L lub mogą stanowić mieszaninę izomerów D i L, w tym mieszaninę racemiczną.
Stosowane tu oznaczenia „P1, P2 i P3” dotyczą pozycji reszt aminokwasów począwszy od Ckońca analogów peptydów w kierunku N-końca [tj. P1 odnosi się do pozycji pierwszej od C-końca, P2: pozycji drugiej od C-końca itd.) (patrz Berger A. i Schlechter I., Transactions of the Royal Society London series (1970), B257, 249-264).
Skróty α-aminokwasów stosowane w tym zgłoszeniu przedstawiono w tablicy A.
T a b l i c a A
Aminokwas Symbol
Kwas 1-aminocyklopropylo-karboksylowy Acca
Alanina Ala
Kwas asparaginowy Asp
Cysteina Cys
Cykloheksyloglicyna (znana także jako kwas ami-no-2-cykloheksylooctowy) Chg
Kwas glutaminowy Glu
Izoleucyna Ile
Leucyna Leu
Fenyloalanina Phe
Prolina Pro
Walina Val
Tert-butylogiicyna Tbg
Stosowany tu termin, kwas 1-aminocyklopropylokarboksylowy” (Acca) dotyczy związku o wzorze:
H2N
O
Stosowany tu termin „tert-butyloglicyna” dotyczy związku o wzorze:
PL 204 850 B1
Termin „reszta” w odniesieniu do aminokwasu lub pochodnej aminokwasu oznacza rodnik pochodzący od odpowiedniego a-aminokwasu przez usunięcie hydroksylu grupy karboksylowej i jednego atomu wodoru grupy α-aminowej. Na przykład, terminy Gin, Ala, Gly, Ile, Arg, Asp, Phe, Ser, Leu, Cys, Asn, Sar i Tyr oznaczają odpowiednio „reszty” L-glutaminy, L-alaniny, glicyny, L-izoleucyny, L-argininy, kwasu L-asparaginowego, L-fenyloalaniny, L-seryny, L-leucyny, L-cysteiny, L-aspa-raginy, sarkozyny i L-tyrozyny.
Termin „łańcuch boczny” w odniesieniu do aminokwasu lub reszty aminokwasu oznacza grupę przyłączoną do atomu węgla α α-aminokwasu. Np. grupa R łańcucha bocznego glicyny oznacza atom wodoru, alaniny oznacza metyl, waliny oznacza izopropyl. Specyficzne grupy R lub łańcuchy boczne α-aminokwasów można znaleźć w A.L. Lehninger's text on Biochemistry (patrz rozdział 4).
Stosowany tu termin „atom chlorowca” oznacza atom wybrany spośród takich jak atom bromu, chloru, fluoru lub jodu.
Stosowany tu termin „C1-6alkil” samodzielnie lub w połączeniu z innym podstawnikiem, oznacza cykliczny, prostołańcuchowy lub rozgałęziony alkil zawierający od 1 do sześciu atomów węgla i obejmujący, np. metyl, etyl, propyl, butyl, tert-butyl, heksyl, 1-metyloetyl, 1-metylopropyl, 2-metylopropyl, 1,1-dimetyloetyl.
Stosowany tu termin „C3-7cykloalkil”, samodzielnie lub w połączeniu z innym podstawnikiem, oznacza cykloalkil zawierający od trzech do siedmiu atomów węgla i obejmuje cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cykloheksyl i cykloheptyl. Ten termin obejmuje także grupę „spiro”-cykliczną taką jak spiro-cyklopropyl lub spiro-cyklobutyl:
Termin „nienasycony cykloalkil” obejmuje np. cykloheksenyl:
Stosowany tu termin „C4-10(alkilocykloalkil) oznacza cykloalkil zawierający od trzech do siedmiu atomów węgla przyłączonych do alkilu, przyłączone rodniki zawierają aż do dziesięciu atomów węgla, np. cyklopropylometyl, cyklopentyloetyl, cykloheksylometyl, cykloheksyloetyl lub cykloheptyloetyl.
Stosowany tu termin „C2-10alkenyl”, samodzielnie lub w połączeniu z innym rodnikiem, oznacza zdefiniowany powyżej alkil zawierający od 2 do 10 atomów węgla, i zawierający ponadto, co najmniej jedno wiązanie podwójne. Np. termin alkenyl obejmuje allil i winyl.
Stosowany tu termin „C1-6alkanoil”, samodzielnie lub w połączeniu z innym rodnikiem, oznacza prostołańcuchowy lub rozgałęziony 1-oksoalkil zawierający jeden do sześciu atomów węgla i obejmujący formyl, acetyl, 1-oksopropyl (propionyl), 2-metylo-1-oksopropyl, 1-oksoheksyl itp.
Stosowany tu termin „C1-6alkoksyl”, samodzielnie lub w połączeniu z innym rodnikiem, oznacza -O(C1-6alkil), w którym alkil ma znaczenie zdefiniowane powyżej, zawierający do sześciu atomów węgla. Alkoksyl obejmuje metoksyl, etoksyl, propoksyl, 1-metyloetoksyl, butoksyl i 1,1-dimetyloetoksyl. Ostatni rodnik z wymienionych jest znany powszechnie jako tert-butoksyl.
Stosowany tu termin „C3-7cykloalkoksyl”, samodzielnie lub w połączeniu z innym rodnikiem, oznacza C3-7cykloalkil związany z atomem tlenu, taki jak np.:
PL 204 850 B1
Stosowany tu termin „C6 lub C10aryl”, samodzielnie lub w połączeniu z innym rodnikiem, oznacza albo aromatyczną grupę monocykliczną zawierającą 6 atomów węgla lub aromatyczną grupę bicykliczną zawierającą 10 atomów węgla. Np. aryl obejmuje fenyl, 1-naftyl lub 2-naftyl.
Stosowany tu termin „C7-16aryloalkil”, samodzielnie lub w połączeniu z innym rodnikiem, oznacza zdefiniowany powyżej C6 lub C10aryl przyłączony do alkilu, o znaczeniu zdefiniowanym powyżej, zawierającego od 1 do 6 atomów węgla. C7-16aryloalkil obejmuje np. benzyl, butylofenyl i 1-naftylometyl.
Stosowany tu termin „aminoaryloalkil”, samodzielnie lub w połączeniu z innym rodnikiem, oznacza grupę aminową podstawioną przez C7-16aryloalkil, taką jak np. aminoaryloalkil:
Stosowany tu termin „(C1-6alkilo)amid”, samodzielnie lub w połączeniu z innym rodnikiem, oznacza amid mono-podstawiony przez C1-6alkil, taki jak:
Stosowany tu termin „karboksy C1-6alkil”, samodzielnie lub w połączeniu z innym rodnikiem, oznacza karboksyl (COOH) związany poprzez zdefiniowany powyżej alkil C1-6 i obejmuje np. kwas masłowy.
Stosowany tu termin „heterocykl” lub „Het”, samodzielnie lub w połączeniu z innym rodnikiem, oznacza jednowartościowy rodnik powstały przez usunięcie atomu wodoru z pięcio-, sześcio- lub siedmioczłonowego, nasyconego lub nienasyconego (w tym aromatycznego) heterocyklu zawierającego od jednego do sześciu heteroatomów wybranych spośród takich jak atom azotu, atom tlenu i atom siarki. Ponadto, termin „Het” oznacza zdefiniowany powyż ej heterocykl skondensowany z jednym lub więcej innymi pierścieniami heterocyklicznymi lub dowolnymi innymi pierścieniami. Przykłady odpowiednich heterocykli obejmują takie jak: pirolidyna, tetrahydrofuran, tiazolidyna, pirol, tiofen, diazepina, IH-imidazol, izoksazol, tiazol, tetrazol, piperydyna, 1,4-dioksan, 4-morfolina, pirydyna, pirymidyna, tiazolo[4,5-b]-pirydyna, chinolina lub indol, lub następujące heterocykle:
Stosowany tu termin „(C1-6alkil)-Het”, oznacza zdefiniowany powyżej heterocykliczny rodnik związany poprzez prosto-łańcuchowy lub rozgałęziony alkil, o znaczeniu zdefiniowanym powyżej, zawierający od 1 do 6 atomów węgla. Przykłady (C1-6alkil)-Het obejmują:
Stosowany tu termin „farmaceutycznie dopuszczalny ester”, samodzielnie lub w połączeniu z innym podstawnikiem, oznacza estry związku o wzorze I, w którym dowolna karboksylową grupa funkcyjna, lecz korzystnie końcowa grupa karboksylową, jest zastąpiona przez alkoksykarbonylową grupę funkcyjną:
PL 204 850 B1
w której grupa R estru jest wybrana spoś ród takich jak alkil (np. metyl, etyl, n-propyl, t-butyl, n-butyl); alkoksyalkil (np. metoksymetyl); alkoksyacyl (np. acetoksymetyl); aryloalkil (np. benzyl); arylooksyalkil (np. fenoksymetyl); aryl (np. fenyl), ewentualnie podstawiony przez atom chlorowca, C1-4alkil lub C1-4alkoksyl. Inne odpowiednie estry prolekowe można znaleźć w „Design of prodrugs”, Bundgaard, H. Wydwanictwo Elsevier (1985), wprowadzonym tu na zasadzie odsyłacza. Takie farmaceutycznie dopuszczalne estry hydrolizują zazwyczaj in vivo po wstrzyknięciu ssakom i ulegają przekształceniu w kwasową formę związku o wzorze I.
W odniesieniu do opisanych powyżej estrów, jeśli nie wyspecyfikowano tego inaczej, dowolny występujący alkil korzystnie zawiera od 1 do 16 atomów węgla, szczególnie 1 do 6 atomów węgla. Dowolny występujący aryl w takich estrach korzystnie obejmuje fenyl.
W szczególności estry mogą obejmować ester C1-6alkilowy, niepodstawiony ester benzylowy lub ester benzylowy podstawiony, przez co najmniej jeden atom chlorowca, C1-6alkil, C1-6alkoksyl, nitro lub trifluorometyl.
Stosowany tu termin „farmaceutycznie dopuszczalna sól” obejmuje te, które pochodzą od farmaceutycznie dopuszczalnych zasad. Przykłady odpowiednich zasad obejmują takie jak cholina, etanoloamina i etylenodiamina. Sole Na+, K+ i Ca++ są także objęte zakresem wynalazku (patrz także Pharmaceutical salts, Birge, S.M. i in., J. Pharm. Sci., (1977), 66, 1-19, wprowadzony tu na zasadzie odsyłacza).
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku można podawać doustnie, pozajelitowo lub poprzez wszczepiony zbiornik. Korzystne jest podawanie doustnie lub w zastrzyku. Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku mogą zawierać dowolne typowe nietoksyczne farmaceutycznie dopuszczalne nośniki, środki wspomagające lub rozczynniki. W pewnych przypadkach, pH preparatu można uregulować z zastosowaniem farmaceutycznie dopuszczalnych kwasów, zasad lub bufor w celu zwiększenia trwałości związku w preparacie lub jego transportowanej postaci. Stosowany tu termin „pozajelitowo” obejmuje podawanie podskórnie, śródskórnie, dożylnie, domięśniowo, dostawowo, wewnątrzmaziówkowo, domostkowo, dooponowo i w formie zastrzyku w miejscu wystąpienia zmiany patologicznej lub z zastosowaniem technik infuzyjnych.
Kompozycje farmaceutyczne mogą występować w postaci sterylnego preparatu do wstrzykiwania np. w postaci sterylnych wodnych lub olejowych zawiesin do wstrzykiwania. Tę zawiesinę można komponować z zastosowaniem technik znanych w tej dziedzinie, stosując odpowiednie środki emulgujące lub zwilżające (takie jak np. Tween 80) i środki zawieszające.
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku można podawać doustnie w dowolnej dopuszczalnej doustnie postaci dawkowania obejmującej, lecz nieograniczającej się do nich, kapsułki, tabletki i wodne zawiesiny oraz roztwory. W przypadku tabletek do stosowania doustnie, powszechnie stosowane nośniki obejmują laktozę i skrobię kukurydzianą. Typowo dodaje się także środki smarujące takie jak stearynian magnezu. Do podawania doustnie w postaci kapsułki, przydatne rozcieńczalniki obejmują laktozę i sproszkowaną skrobię kukurydzianą. Gdy wodne zawiesiny podaje się doustnie, aktywny składnik łączy się ze środkami emulgującymi i zawieszającymi. Jeśli to pożądane, można dodawać pewne środki słodzące i/lub smakowe i/lub barwiące.
Inne odpowiednie rozczynniki lub nośniki dla powyżej wymienionych preparatów i kompozycji można znaleźć w standardowych publikacjach farmaceutycznych, np. w „Remington's Pharmaceutical Sciences”, The Science and Practice of Pharmacy, wydanie 19, Mack Publishing Company, Easton, Penn., (1995).
Przydatne poziomy dawkowania obejmują pomiędzy około 0,01 i około 100 mg/kg masy ciała dziennie, korzystnie pomiędzy około 0,5 i około 75 mg/kg masy ciała dziennie opisanych tu związków będących inhibitorami proteazy w monoterapii do zapobiegania i leczenia chorób, którym pośredniczy HCV. Typowo, kompozycje farmaceutyczne według wynalazku podaje się od około 1 do około 5 razy dziennie lub alternatywnie, w formie ciągłej infuzji. Takie podawanie można stosować w leczeniu przewlekłym lub ostrym. Ilość aktywnego składnika, którą można połączyć z substancjami nośnika w celu otrzymania pojedynczej postaci dawkowania będzie się zmieniać zależnie od leczonego osobnika i konkretnego sposobu podawania. Typowy preparat będzie zawierać od około 5% do około 95% (wagowych)
PL 204 850 B1 aktywnego związku. Korzystnie, takie preparaty zawierają od około 20% do około 80% aktywnego związku.
Zgodnie z oceną specjalisty w tej dziedzinie, konieczne może być podawanie mniejszych lub większych dawek niż wyszczególnione powyżej. Specyficzne reżimy dawkowania i leczenia dla dowolnego, konkretnego pacjenta będą zależeć od rozmaitych czynników, obejmujących aktywność specyficznego stosowanego związku, wiek, masa ciała, ogólny stan zdrowia, płeć, dieta, okres podawania, szybkość wydalania, kombinację leków, stan zaawansowania i przebieg infekcji, podatność pacjenta na infekcję i zalecenia lekarza prowadzącego. Na ogół, na początku leczenia stosuje się małe dawki, znacznie mniejsze od optymalnych. Następnie dawkowanie zwiększa się stopniowo aż do uzyskania optymalnego efektu zależnie od okoliczności. Na ogół, najbardziej pożądane jest podawanie związku w stężeniu, które będzie na ogół wywoływać efekt przeciwwiruso-wy bez jakichkolwiek szkodliwych lub niepomyślnych efektów ubocznych.
Gdy kompozycje według wynalazku obejmują kombinację związku o wzorze 1 i jednego lub więcej dodatkowych środków terapeutycznych lub profilaktycznych, zarówno związek jak i dodatkowy środek powinny występować w dawkach pomiędzy około 10 do 100%, i korzystniej pomiędzy około 10 i 80% normalnie podawanej dawki w reż imie monoterapii.
Gdy te związki lub ich farmaceutycznie dopuszczalne sole komponuje się razem z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem, uzyskaną kompozycję można podawać in vivo ssakom, takim jak człowiek, w celu hamowania proteazy NS3 HCV lub do leczenia lub zapobiegania infekcjom wirusem HCV. Takie leczenie można także przeprowadzić stosując związki według wynalazku w połączeniu ze środkami, które obejmują, lecz nie ograniczają się do nich: immunomodulatory takie jak α-, β- lub γ-interferony; inne środki przeciwwirusowe takie jak rybawiryna, amantadyna; inne inhibitory proteazy NS3 HCV; inhibitory innych elementów cyklu życiowego HCV, które obejmują, lecz nie ograniczają się do nich, helikazę, polimerazę, metaloproteazę lub miejsce dostępu wewnętrznego rybosomu (IRES); lub ich kombinacje. Dodatkowe środki można połączyć ze związkami według wynalazku w celu otrzymania jednostkowej postaci dawkowania. Alternatywnie te dodatkowe środki można podawać ssakowi jako część dawki wielokrotnej.
Zgodnie z tym, inne rozwiązanie niniejszego wynalazku zapewnia dostarczanie kompozycji farmaceutycznej do hamowania i aktywności proteazy NS3 HCV u ssaków poprzez podawanie związku o wzorze I, w którym podstawniki mają powyżej zdefiniowane znaczenia.
W korzystnym rozwiązaniu, kompozycje te są przydatne do zmniejszenia aktywności proteazy NS3 HCV u ssaków. Jeśli kompozycja farmaceutyczna zawiera tylko związek według wynalazku jako aktywny składnik, to dawkowania mogą ponadto obejmować etap podawania temu ssakowi środka wybranego spośród takich jak immunomodulator, środek przeciwwirusowy, inhibitor proteazy HCV lub inhibitor innego elementu w cyklu życiowym HCV i takiego jak helikaza, polimeraza lub metaloproteaza lub IRES. Taki dodatkowy środek można podawać ssakowi przed, jednocześnie lub po podaniu kompozycji według wynalazku.
W alternatywnym korzystnym rozwiązaniu, te kompozycje są przydatne do hamowania wirusowej replikacji u ssaków. Takie kompozycje są przydatne w leczeniu lub zapobieganiu chorobie HCV. Jeśli kompozycja farmaceutyczna zawiera tylko związek według wynalazku jako aktywny składnik, to dawkowania mogą ponadto obejmować etap podawania temu ssakowi środka wybranego spośród takich jak immunomodulator, środek przeciwwirusowy, inhibitor proteazy HCV lub inhibitor innego elementu w cyklu życiowym HCV. Taki dodatkowy środek można podawać ssakowi przed, jednocześnie lub po podaniu kompozycji według wynalazku.
Związki przedstawione w opisie można także stosować jako odczynnki laboratoryjne. Związki według wynalazku można także stosować do usuwania lub zapobiegania wirusowym zanieczyszczeniom substancji, a więc do zmniejszania ryzyka infekcji wirusowej pracowników laboratorium lub personelu medycznego lub pacjentów, którzy kontaktują się z takimi substancjami (np. krew, tkanka, instrumenty chirurgiczne i ubiory, instrumenty laboratoryjne i ubiory oraz urządzenia i materiały do pobierania krwi).
Związki przedstawione w opisie można stosować jako odczynniki badawcze. Związki według wynalazku można także stosować jako kontrolę dodatnią do walidacji badań surogatów komórkowych lub badań in vitro lub in vivo replikacji wirusowej.
Poniżej przedstawiono procesy otrzymywania związków według wynalazku.
PL 204 850 B1
Związki według niniejszego wynalazku zsyntetyzowano według ogólnego procesu zilustrowanego w Schemacie I (w którym CPG oznacza grupę zabezpieczającą karboksyl i APG oznacza grupę zabezpieczającą grupę aminową):
Schemat I
W skrócie, P1, P2 i P3 można połączyć z zastosowaniem dobrze znanych technik sprzęgania peptydów. Grupy P1, P2 i P3 można połączyć ze sobą w dowolnej kolejności, jeśli tylko końcowy związek odpowiada peptydom o wzorze I. Np. P3 można przyłączyć do P2-P1; lub P1 można przyłączyć do P3-P2.
Na ogół, peptydy przedłuża się metodą odbezpieczania grupy α-aminowej reszty N-końcowej i sprzęgania niezabezpieczonego karboksylu z kolejnym odpowiednio N-zabezpieczonym aminokwasem poprzez wiązanie peptydowe z zastosowaniem opisanych metod. To odbezpieczanie i sprzęganie powtarza się aż do otrzymania pożądanej sekwencji. Sprzęganie można przeprowadzić ze składowymi aminokwasami etapowo, jak to przedstawiono w schemacie I, lub metodą syntezy peptydu w fazie stałej zgodnie ze sposobem opisanym pierwotnie przez Merrifield, J. Am. Chem. Soc., (1963), 85, 2149-2154, który załącza się na zasadzie odsyłacza.
Sprzęganie pomiędzy dwoma aminokwasami, aminokwasem i peptydem lub dwoma fragmentami peptydu można prowadzić stosując standardowe procedury sprzęgania takie jak metoda azydku, metoda mieszanego bezwodnika kwasów węglowego i karboksylowego (chloromrówczan izobutylu), metoda karbodiimidu (dicykloheksylokarbodiimid, diizopropylokarbodiimid lub rozpuszczalny w wodzie karbodiimid), metoda aktywnego estru (ester p-nitrofenylowey, ester imido-N-hydroksybursztynowy), metoda odczynnika K Woodwarda, metoda karbonylodiimidazolu, z zastosowaniem reagentów fosforowych lub metoda utleniania-redukcji. Niektóre z tych metod (szczególnie metodę karbodiimidu) można ulepszyć przez dodanie 1-hydroksybenzotriazolu. Te reakcje sprzęgania można prowadzić albo w roztworze (fazie ciekłej) lub fazie stałej.
Dokładniej, etap sprzęgania wymaga sprzęgania z usunięciem cząsteczki wody wolnego karboksylu jednego reagenta z wolną grupą aminową drugiego reagenta w obecności środka sprzęgającego, z wytworzeniem łączącego wiązania amidowego. Opisy takich środków sprzęgających można na ogół znaleźć w podręczikach do chemii peptydów, np. M. Bodanszky, „Peptide Chemistry”, wydanie 2 przekład, Springer-Verlag, Berlin, Niemcy, (1993). Przykłady odpowiednich środków sprzęgających obejmują N,N'-dicykloheksylokarbodiimid, 1-hydroksybenzotriazol w obecności N,N'-dicykloheksylokarbodiimidu lub N-etylo-N'-[(3-dimetyloamino)propylo]karbodiimidu. Praktycznym i przydatnym środkiem sprzęgającym jest dostępny w handlu heksafluorofosforan (benzotriazol-l-ilooksy)tris-(dimetyloamino) fosfoniowy, albo sam lub w obecności 1-hydroksybenzotriazolu. Innym praktycznym i przydatnym środkiem sprzęgającym jest dostępny w handlu tetrafluoroboran 2-(1H-benzotriazol-1-ilo)-N,N,N',N'-tetrametylouroniowy. Jeszcze innym praktycznym i przydatnym środkiem sprzęgającym jest dostępny w handlu heksafluorofosforan O-(7-azabenzotriazol-1-ylo)-N,N,N',N'-tetrametylouroniowy.
Reakcję sprzęgania prowadzi się w obojętnym rozpuszczalniku, np. dichlorometanie, acetonitrylu lub dimetyloformamidzie. Nadmiar trzeciorzędowej aminy, np. diizopropyloetyloaminy, N-metylomorfoliny lub N-metylopirolidyny, dodaje się w celu utrzymania wartości pH mieszaniny reakcyjnej około 8. Temperatura reakcji zazwyczaj mieści się pomiędzy 0°C i 50°C i czas trwania reakcji zazwyczaj mieści się pomiędzy 15 minutami i 24 godzinami.
PL 204 850 B1
Gdy stosuje się syntezę w fazzie stałej, C-końcowy kwas karboksylowy przyłącza się do nierozpuszczalnego nośnika (zazwyczaj polistyrenu). Te nierozpuszczalne nośniki zawierają grupę, która będzie reagować z grupą karboksylową, z wytworzeniem wiązania, które jest stabilne w warunkach wydłużania, ale łatwe do usunięcia w dalszym etapie. Przykłady obejmują: chloro-lub bromometylożywicę, hydroksymetylo-żywicę, tritylo-żywicę i żywicę z grupami alkoholu 2-metoksy-4-alko-ksylobenzylowego.
Wiele z tych żywic jest dostępnych w handlu z już wprowadzonym pożądanym C-końcowym aminokwasem. Alternatywnie, aminokwas można umieścić na stałym nośniku stosując znane metody (Wang, S.S., J. Am. Chem. Soc., (1973), 95, 1328; Atherton, E.; Shepard, R.C. „Solidphase Peptide Synthesis; a practical approach” IRL Press, Oxford, (1989); 131-148). Oprócz powyższych, inne metody syntezy peptydu opisali Stewart i Young, „Solid-phase Peptide Synthesis”, wydanie 2, Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984); Gross, Meienhofer, Udenfriend, praca zbiorowa „The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology”, tom 1, 2, 3, 5 i 9, Academic Press, New-York, (1980-1987); Bodansky i in. „The Practice of Peptide Synthesis” Springer-Verlag, New-York (1984), które załącza się na zasadzie odsyłacza.
Grupy funkcyjne składowych aminokwasów na ogół muszą być zabezpieczone podczas reakcji sprzęgania w celu uniknięcia powstawania niepożądanych wiązań. Grupy zabezpieczające, które można stosować wymieniono w Greene, „Protective Groups in Organie Chemistry”, John Wiley & Sons, New York (1981) i Peptides: Analysis, Synthesis, Biology”, torn 3, Academic Press, New York (1981), których ujawnienia niniejszym załącza się na zasadzie odsyłacza.
Grupę a-karboksylową reszty C-końcowej zazwyczaj zabezpiecza się w formie estru (CPG), który można rozszczepić z wytworzeniem kwasu karboksylowego. Grupy zabezpieczające, które można stosować obejmują: 1) estry alkilowe takie jak metyl, trimetylosililoetyl i t-butyl, 2) estry aryloalkilowe takie jak benzyl i podstawiony benzyl lub 3) estry, które można rozszczepić metodą traktowania łagodną zasadą lub łagodnymi środkami redukującymi takimi jak trichloroetyl i estry fenacylowe.
Grupa α-aminowa każdego aminokwasu sprzęganego z wydłużającym się łańcuchem peptydowym musi być zabezpieczona (APG). Stosować można dowolną grupę zabezpieczającą znaną w tej dziedzinie. Przykłady takich grup obejmują: 1) grupy acylowe takie jak formyl, trifluoroacetyl, ftalil i p-toluenosulfonyl; 2) aromatyczne grupy karbaminianowe takie jak benzylooksykarbonyl (Cbz lub Z) i podstawione benzylooksykarbonyle, i 9-fluorenylometylooksykarbonyl (Fmoc); 3) alifatyczne grupy karbaminianowe takie jak tert-butylooksykarbonyl (Boc), etoksykarbonyl, diizopropylometoksykarbonyl i allilooksykarbonyl; 4) cykliczne grupy alkilokarbaminianowe takie jak cyklopentylooksykarbonyl i adamantylooksykarbonyl; 5) grupy alkilowe takie jak trifenylometyl i benzyl; 6) trialkilosilil taki jak trimetylosilil; i 7) grupy zawierające tiol takie jak fenylotiokarbonyl i ditiasukcynoil. Korzystna grupą zabezpieczającą grupę α-aminową jest albo Boc lub Fmoc. Wiele odpowiednio zabezpieczonych pochodnych aminokwasów do syntezy peptydów jest dostępnych w handlu.
Grupę zabezpieczającą grupę a-aminową ostatnio dodanej reszty aminokwasu odcina się przed sprzęganiem następnego aminokwasu. Gdy stosuje się grupę Boc, metodami z wyboru są kwas trifluorooctowy, czysty lub w dichlorometanie lub HCl w dioksanie lub w octanie etylu. Uzyskaną sól amoniową następnie zobojętnia się albo przed sprzęganiem lub in situ z zastosowaniem zasadowych roztworów takich jak wodne bufory lub trzeciorzędowe aminy w dichlorometanie lub acetonitrylu, lub dimetyloformamidzie. Gdy stosuje się grupę Fmoc, reagentami z wyboru są piperydyna lub podstawiona piperydyna w dimetyloformamidzie, ale można stosować dowolną drugorzędową aminę. Odbezpieczanie prowadzi się w temperaturze pomiędzy 0°c i temperaturą pokojową (rt), zazwyczaj 20-22°C.
Wszelkie aminokwasy posiadające grupy funkcyjne w łańcuchu bocznym trzeba zabezpieczyć podczas wytwarzania peptydu, stosując dowolne z opisanych powyżej grup. Fachowcy w tej dziedzinie wiedzą, że wybór i zastosowanie odpowiednich grup zabezpieczających grupy funkcyjne w łańcuchu bocznym zależy od aminokwasu i obecności innych grup zabezpieczających w peptydzie. Wybór takich grup zabezpieczających jest ważny, gdyż grup nie można usunąć podczas odbezpieczania i sprzęgania grupy α-aminowej.
Np. gdy jako grupę zabezpieczającą grupę α-aminową stosuje się Boc odpowiednie są następujące grupy zabezpieczające łańcuch boczny: p-toluenosulfonyl (tosyl) można stosować do zabezpieczania grupy aminowej w łańcuchu bocznym aminokwasów takich jak Lys i Arg; acetamidometyl, benzyl (Bn) lub t-buty-losulfonyl można stosować do zabezpieczania łańcucha bocznego cysteiny zawierającego siarczek; etery benzylowe (Bn) można stosować do zabezpieczania hydroksylu w łańcuchach bocznych
PL 204 850 B1 seryny, treoniny lub hydroksyproliny; i estry benzylowe można stosować do zabezpieczania karboksylu w łańcuchach bocznych kwasu asparaginowego i kwasu glutaminowego.
Gdy do zabezpieczenia grupy α-aminowej wybrano Fmoc, zazwyczaj można stosować grupy zabezpieczające na bazie tert-butylu. Na przykład, Boc można stosować dla lizyny i argininy, eter tertbutylowy dla seryny, treoniny i hydroksyproliny, i ester tert-butylowy dla kwasu asparaginowego i kwasu glutaminowego. Trifenylometyl (trityl) można stosować do zabezpieczania cysteiny zawierającej siarczek w łańcuchu bocznym.
Po zakończeniu wydłużenia peptydu wszystkie grupy zabezpieczające usuwa się. Gdy stosuje się syntezę w fazie ciekłej, grupy zabezpieczające usuwa się w dowolny sposób podyktowany wyborem grup zabezpieczających. Te procedury są dobrze znane fachowcom w tej dziedzinie.
Gdy stosuje się syntezę w fazie stałej, peptyd odcina się od żywicy jednocześnie z usunięciem grup zabezpieczających. Gdy w syntezie stosuje się zabezpieczenie Boc, korzystnie traktuje się bezwodnym HF zawierającym dodatki takie jak siarczek dimetylu, anizol, tioanizol lub p-krezol w temperaturze 0°C w celu odłączenia peptydu od żywicy. Odłączenie peptydu można także przeprowadzić z zastosowaniem innych reagentów kwasowych takich jak mieszaniny kwas trifluorometanosulfonowy/kwas trifluorooctowy. Jeśli stosuje się zabezpieczenie Fmoc, N-końcową grupę Fmoc odcina się z zastosowaniem opisanych wcześniej reagentów. Inne grupy zabezpieczające i peptyd usuwa się z żywicy stosując roztwór kwasu trifluorooctowego i różne dodatki takie jak anizol itp.
1. Synteza osłaniającej grupy B
Różne osłaniające grupy B wprowadza się w następujący sposób:
1.1) Gdy B oznacza aryl, aryloalkil: arylowane aminokwasy wytworzono jedną spośród poniższych trzech metod:
a) Bezpośrednie podstawienie nukleofilowe przy grupie fluoro-nitroarylowej:
W skrócie, 4-fluoro-3-nitrobenzotrifluorek (a) poddaje się reakcji z L-aminokwasem (b) w obecności zasady takiej jak węglan potasu, w temperaturze 80°C, z wytworzeniem pożądanego N-aryloaminokwasu (c);
b) Sprzęgania katalizowane przez związki miedzi według Ma i in. (J. Am. Chem. Soc. 1998,
120, 12459-12467):
W skrócie, bromo-4-fluorobenzen (d) poddaje się reakcji z L-aminokwasem (b) w obecności zasady takiej jak węglan potasu i katalitycznej ilości jodku miedzi, w temperaturze 90°C, z wytworzeniem pożądanego N-aryloaminokwasu (e); lub
c) Nukleofilowe podstawienie triflatu przez anilinę:
PL 204 850 B1
W skrócie, o-anizydynę (f) poddaje się reakcji z triflu-orometanosulfonianem (g) w obecności zasady takiej jak 2,6-lutydyna, w temperaturze 90°C, z wytworzeniem estru benzylowego (h). Uwodornianie z zastosowaniem 10% Pd/C daje pożądany N-aryloaminokwas (i).
1.2) Gdy B oznacza pochodną aminotiazolu:
a) Fmoc-tiocyjanian wytworzony według Kearney i in., 1998, J. Org. Chem, 63, 196, poddaje się reakcji z zabezpieczoną resztą P3 lub całym peptydem, lub częścią peptydu, z wytworzeniem tiomocznika.
b) Pochodną tiomocznika poddaje się reakcji z odpowiednim bromoketonem, z wytworzeniem odpowiedniej pochodnej tiazolu.
1.3) Gdy B oznacza R4-C(O)-, R4-S(O)2:
Zabezpieczoną resztę P3 lub cały peptyd, lub część pep-tydu sprzęga się z odpowiednim chlorkiem acylu lub chlorkiem sulfonylu odpowiednio, które są albo dostępne w handlu lub, których synteza jest dobrze znana w tej dziedzinie.
1.4) Gdy B oznacza R4O-C(O)-:
Zabezpieczoną resztę P3 lub cały peptyd, lub część pep-tydu sprzęga się z odpowiednim chloromrówczanem, który jest albo dostępny w handlu lub, którego synteza jest dobrze znana w tej dziedzinie. Dla Boc-pochodnych stosuje się (Boc)2O.
Np.:
a) Cyklobutanol traktuje się fosgenem w celu dostarczenia odpowiedniego chloromrówczanu.
b) Chloromrówczan traktuje się pożądanym NH2-tripeptydem w obecności zasady takiej jak trietyloamina, z wytworzeniem cyklobutylokarbaminianu.
1.5) Gdy B oznacza R4-N(Rs)-C(O)- lub R4-NH-C(S)-, zabezpieczoną resztę P3 lub cały peptyd lub część peptydu traktuje się fosgenem, a następnie aminą jak to opisano w SynLett. Luty 1995; (2); 142-144.
2. Synteza grup P2.
2.1 Synteza prekursorów:
A) Synteza pochodnych chlorowcoarylometanu.
Wytwarzanie chlorowcometylo-8-chinoliny lid prowadzi się zgodnie z procedurą K.N. Campbell i in., J. Amer. Chem. Soc., (1946), 68, 1844.
PL 204 850 B1
Schemat II
W skrócie, kwas 8-chinolinokarboksylowy Ila przekształ ca się w odpowiedni alkohol Ile metodą redukcji odpowiedniego halogenku acylu Ilb środkiem redukującym takim jak wodorek litowoglinowy. Traktowanie alkoholu Ilb odpowiednim kwasem halogenowym daje pożądaną chlorowcopochodną lid. Specyficzne rozwiązanie tego sposobu podano w przykładzie 1.
B) Synteza pochodnych aryloalkoholu:
Pochodne 2-fenylo-4-hydroksychinoliny IIIc wytwarza się według Giardina i in. (J. Med. Chem., (1997), 40, 1794-1807).
Schemat III
R22 i R21B = alkil, OH, SH, atom chlorowca, NH2, NO2 W skrócie, benzoiloacetamid (IlIa) kondensuje się z odpowiednią aniliną (Illb) i otrzymaną iminę poddaje reakcji cyklizacji z kwas polifosforowym, z wytworzeniem odpowiedniej 2-fenylo-4-hydroksychinoliny (IIIc). Specyficzne rozwiązanie tego sposobu podano w przykładzie 2.
Lub alternatywnie, proces można przeprowadzić w inny sposób:
Ester benzoiloetylowy (IlIa) kondensuje się z odpowiednią aniliną (Illb) w obecności kwasu i otrzymaną iminę poddaje reakcji cyklizacji przez ogrzewanie w temperaturze 260-280°C, z wytworzeniem odpowiedniej 2-fenylo-4-hydroksychinoliny (IIIc). Specyficzne rozwiązanie tego sposobu podano w przykładzie 3 (związek 3e).
2.2. Synteza P2:
A) Syntezę 4-podstawionej proliny, (w której podstawnik jest przyłączony do pierścienia poprzez atom węgla) (o wskazanej stereochemii):
prowadzi się według Schematu IV zgodnie z procedurami opisanymi przez J. Ezquerra i in. (Tetrahedron, (1993), 38, 8665-8678) i C. Pedregal i in. (Tetrahedron Lett., (1994), 35, 2053-2056).
PL 204 850 B1
w skrócie, kwas Boc-piroglutaminowy zabezpiecza się w formie estru benzylowego. Traktowa20 nie mocną zasada taka jak diizopropyloamidek litu, a następnie dodanie czynnika alkilującego (Br-R20 lub i R20) daje pożądane związki IVe, po redukcji amidu i odbezpieczeniu estru.
B) Syntezę O-podstawionej-4-(R)-hydroksyproliny:
można przeprowadzić stosując różne sposoby opisane poniżej.
1) Gdy R20 oznacza, aryloalkil, lub (niższy alkil)-Het, proces można prowadzić zgodnie z procedurą opisaną przez E.M. Smith i in. (J. Med. Chem. (1988), 3J., 875-885). w skrócie, dostępną w handlu Boc-4(R)-hydroksyprolinę traktuje się zasadą taką jak wodorek sodu lub tert-butanolan potasu i uzyskany alkoholan poddaje się reakcji z chlorowco-R20 (Br-R20, i R20 itp.), z wytworzeniem pożądanych związków. Specyficzne rozwiązania tego sposobu przedstawiono w przykładach 4, 5 i 7.
2) Gdy R20 oznacza aryl lub Het, związki można także wytworzyć na drodze reakcji Mitsunobu (Mitsunobu (1981), Syn-thesis, Styczeń, 1-28; Rano i in., (1995), Tet. Lett. 36 (22), 3779-3792; Krchnak i in., (1995), Tet. Lett. 36 (5), 62193-6196; Richter i in., (1994), Tet. Lett. 35 (27), 4705-4706) w skrócie, dostępny w handlu ester metylowy Boc-4(S)-hydroksyproliny traktuje się odpowiednim aryloalkoholem lub tiolem w obecności trifenylofosfiny i azodikarboksylanu dietylu (dead) i uzyskany ester poddaje się hydrolizie do kwasu. Specyficzne rozwiązania tego sposobu przedstawiono w przykładach 6 i 8.
Alternatywnie, reakcję Mitsunobu można prowadzić w fazie stałej (schemat V). 96-studzienkową płytkę syntezatora Model 396 (advanced ChemTech) napełnia się próbkami związku związanego na żywicy (Va) i dodaje się rozmaite aryloalkohole lub tiole i odpowiedni reagenty. Po inkubacji, każdy produkt (Vb) związanego na żywicy przemywa się, osusza i odłącza od żywicy.
Reakcję Suzuki (Miyaura i in., (1981), Synth. Comm. 11, 513; Sato i in., (1989), Chem. Lett., 1405; Watanabe i in., (1992), Synlett., 207; Takayuki i in., (1993), J. Org. Chem. 58, 2201; Frenette
PL 204 850 B1 i in., (1994), Tet. Lett. 35(49). 9177-9180; Guiles i in., (1996), J. Org. Chem. 61, 5169-5171) można także stosować w celu dalszej obróbki podstawnika arylowego.
3. Synteza grup P1.
3.1 Synteza 4 możliwych izomerów 2-podstawionego kwasu 1-aminocyklopropylokarboksylowego. Syntezę przeprowadzono według schematu VI.
a) W skrócie, di-zabezpieczony malonian VIa i 1,2-di-chlorowcoalkan VIb lub cykliczny siarczan VIc (zsyntetyzowany według K. Burgess i Chun-Yen KE (Synthesis, (1996), 1463-1467) poddaje się reakcji w warunkach zasadowych, z wytworzeniem diestru VId.
b) Przeprowadza się regioselektywną hydrolizę mniej rozbudowanego przestrzennie estru z wytworzeniem kwasu VIe.
c) Ten kwas Vie poddaje się przegrupowaniu Curtiusa, z wytworzeniem mieszaniny racemicznej pochodnych kwasu 1-aminocyklopropylokarboksylowego Vif z podstawnikiem R1 w położeniu syn do grupy karboksylowej. Specyficzne rozwiązanie tej syntezy przedstawiono w przykładzie 9.
PL 204 850 B1 d,e) Alternatywnie, selektywne otrzymywanie estru z kwasu Vie z zastosowaniem odpowiedniego halogenku (P*CI) lub alkoholu (P*OH) daje diester VIg, przy czym ester P* jest kompatybilny z selektywną hydrolizą estru P. Hydroliza estru P daje kwas VIh.
f) Przegrupowanie Curtiusa na związku VIh daje racemiczną mieszaninę pochodnych kwasu -aminocyklopropylokarboksylowego VII z postawnikiem R1 w położeniu anti do grupy karboksylowej. Specyficzne rozwiązanie tej syntezy przedstawiono w przykładzie 14.
Alternatywną syntezę do otrzymywania pochodnych VIIf (gdy R1 oznacza winyl i jest w położeniu syn do grupy karboksylowej) opisano poniżej.
Schemat VII
Traktowanie dostępnych w handlu lub łatwych do otrzymania imin VIla 1,4-dichlorowcobutenem VIIb w obecności zasady daje, po hydrolizzie uzyskanej iminy VIle, związek VIId posiadający podstawnik allilowy w położeniu syn do grupy karboksylowej. Specyficzne rozwiązania tego sposobu przedstawiono w przykładach 15 i 19.
Rozdzielanie wszystkich powyższych mieszanin enancjome-rów przy atomie węgla 1 (VIe i VIId) można prowadzić poprzez:
1) enzymatyczne rozdzielanie (przykłady 13,17 i 20);
2) krystalizację z chiralnym kwasem (przykład 18); lub
3) chemiczną derywatyzację (przykład 10).
Po rozdzielaniu, określenie bezwzględnej stereochemii można przeprowadzić tak, jak to przedstawiono w przykładzie 11.
Rozdzielanie enancjomerów i określanie stereochemii można prowadzić w taki sam sposób dla mieszanin enancjomerów przy atomie węgla 1, w którym podstawnik przy C2 jest w pozycji anti do grupy karboksylowej (VIi).
3.2 Synteza kwasu 1-aminocyklobutylokarboksylowego.
Syntezę kwasu 1,1-aminocyklobutanokarboksylowego prowadzi się według „Kavin Douglas; Ramaligam Kondareddiar; Woodard Ronald, Synth. Commun. (1985), 15 (4),267-72.
Schemat VIII
X = atom chlorowca
W skrócie, traktowanie związku Villa zasadą w obecności związku VlIIb daje odpowiednią pochodną cyklobutylu Ville. Hydroliza izocyjanianu i grup estrowych związku VIlle w warunkach kwasowych (HCI) daje chlorowodorek kwasu 1-amino-cyklobutylokarboksylowego VlIId. Kwas karboksylowy następnie estryfikuje się z zastosowaniem metanolu w HCI. Specyficzne rozwiązanie tej estryfikacji przedstawiono w przykładzie 21.
3.3 Synteza 2-podstawionego kwasu 1-aminocyklobutylokarboksylowego.
PL 204 850 B1
Schemat IX
a) Zabezpieczoną pochodną estrową glicyny taką jak imi-na IXa alkiluje się z zastosowaniem homoallilowego związku elektrofiłowego Ixb, stosując odpowiednią zasadę taką jak wodorek, wodorotlenek lub alkoholan metalu. Przydatne grupy opuszczające w związku IXb obejmują atomy chlorowca (X = Cl, Br, I) lub estry sulfonianowe (mezylan, tosylan lub trifluorometanosulfonian). Allilową alkoholowa grupę funkcyjną w związku IXb zabezpiecza się grupami zabezpieczającymi grupy hydroksylowe dobrze znanymi w tej dziedzinie (np. octan, silil, acetale).
b) W drugim etapie, hydroksylową grupę funkcyjną monoal-kilowanej pochodnej związku IXc odbezpiecza się i przekształca w odpowiednią elektrofiłową grupę funkcyjną X tak, jak to opisano powyżej dla związku IXb.
c) Cyklizację związku IXd do cyklobutanowej pochodnej związku IXe prowadzi się traktując zasadą (wodorki, alkoholany metali), a następnie poddaje hydrolizie, stosując wodne kwasy mineralne i zobojętnia łagodną zasadą. Na tym etapie, izomery syn i anti związku IXe można rozdzielić metodą szybkiej chromatografii.
d) Ewentualnie, wiązanie podwójne w związku IXe można także uwodornić w standardowych warunkach, z wytworzeniem odpowiedniej nasyconej pochodnej związku IXf.
Wynalazek ponadto obejmuje sposób wytwarzania analogu peptydu o wzorze (I), w którym P1 oznacza podstawioną resztę kwasu aminocyklopropylokarboksylowego, zawierający etap:
sprzęgania peptydu wybranego z grupy obejmującej: APG-P3-P2; lub APG-P2; ze związkiem pośrednim P1 o wzorze:
w których R1 oznacza C1-6alkil, cykloalkil lub C2-6alkenyl, wszystkie ewentualnie podstawione przez atom chlorowca, CPG oznacza grupę zabezpieczającą karboksyl i APG oznacza grupę zabezpieczającą grupę aminową oraz P3 i P2 mają powyżej zdefiniowane znaczenia.
Wynalazek następnie obejmuje sposób wytwarzania: 1) analogu peptydu będącego inhibitorem proteazy serynowej lub 2) analogu peptydu będącego inhibitorem proteazy NS3 HCV, ten sposób zawiera etap:
sprzęgania (odpowiednio zabezpieczonego) aminokwasu, peptydu lub fragmentu peptydu ze związkiem pośrednim P1 o wzorze:
PL 204 850 B1 w których R1 oznacza C1-6alkil, C3-7cykloalkil lub C2-6alkenyl, wszystkie ewentualnie podstawione przez atom chlorowca, i CPG oznacza grupę zabezpieczającą karboksyl.
Wynalazek zatem obejmuje sposób wytwarzania: 1) analogu peptydu będącego inhibitorem proteazy lub 2) analogu peptydu będącego inhibitorem proteazy serynowej, ten sposób zawiera etap:
sprzęgania (odpowiednio zabezpieczonego) aminokwasu, peptydu lub fragmentu peptydu ze związkiem pośrednim o wzorze:
w którym CPG oznacza grupę zabezpieczającą karboksyl.
Wynalazek także obejmuje zastosowanie związku pośredniego P1 o wzorze:
w których R1 oznacza C1-6alkil, cykloalkil lub C2-6alkenyl, wszystkie ewentualnie podstawione przez atom chlorowca, do otrzymywania: 1) analogu peptydu będącego inhibitorem proteazy serynowej lub 2) analogu peptydu będącego inhibitorem proteazy NS3 HCV.
Wynalazek także obejmuje zastosowanie związku pośredniego o wzorze:
w którym CPG oznacza grupę zabezpieczającą karboksyl, do otrzymywania: 1) analogu peptydu będącego inhibitorem proteazy lub 2) analogu peptydu będącego inhibitorem proteazy serynowej .
Wynalazek także obejmuje zastosowanie związku pośredniego P1 o wzorze:
w których R1 oznacza C1-6alkil, cykloalkil lub C2-6alkenyl, wszystkie ewentualnie podstawione przez atom chlorowca, do otrzymywania zdefiniowanego powyżej związku o wzorze I. Na koniec, wynalazek także obejmuje zastosowanie analogu proliny o wzorze:
PL 204 850 B1
w którym R21A oznacza C1-6alkil; C2-6alkoksyl; niż szy tioalkil; atom chlorowca; amino ewentualnie mono-podstawiony przez C1-6alkil; C6, C10aryl, C7-16aryloalkil lub Het, wymieniony aryl, aryloalkil lub Het ewentualnie podstawione przez R22 przy czym R22 oznacza C1-6alkil, C1-6alkoksyl, amido, (niższy alkilo)amid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil lub Het, i R21B oznacza C1-6alkil, C1-6alkoksyl, amino, di(niższy alkilo)amino, (niższy alkilo)amid, NO2, OH, atom chlorowca, trifluorometyl lub karboksyl;
w syntezie 1) analogu peptydu będącego inhibitorem pro-teazy serynowej, 2) analogu peptydu będącego inhibitorem pro-teazy NS3 HCV lub 3) zdefiniowanego powyżej analogu peptydu o wzorze I.
Niniejszy wynalazek ilustrują bardziej szczegółowo następujące nieograniczające przykłady.
Temperatury podano w stopniach Celsjusza. Procenty roztworu odpowiadają stosunkowi wagi do objętości, i proporcje roztworu odpowiadają stosunkowi objętości do objętości, jeśli nie zaznaczono tego inaczej. Widma jądrowego rezonansu magnetycznego (NMR) rejestrowano na spektrometrze Bruker 400 MHz; przesunięcia chemiczne (δ) przedstawiono w częściach na million. Szybką chromatografię prowadzono na żelu krzemionkowym (SiO2) zgodnie z procedurą Still'a (W.C. Still i in., J. Org. Chem., (1978), 43, 2923).
Skróty stosowane w przykładach obejmują Bn: benzyl; Boc: tert-butylooksykarbonyl {Me3COC(O)}; BSA: albumina surowicy bydlęcej; CHAPS: 3-[(3-cholamidopropylo)-dimetyloamonio]-1-propanosulfonian; DBU: 1,8-diazabicyklo[5,4,0]undek-7-en; CH2Cl2=DCM: chlorek metylenu; DEAD: azodikarboksylan dietylu; DIAD: azodikarboksylan diizopropylu; DIEA: diizopropyloetyloamina; DIPEA: diizopropyloetyloamina; DMAP: dimetyloaminopirydyna; DCC: 1,3-dicykloheksylokarbodiimid; DME: 1,2-dimetoksyetan; DMF: dimetyloformamid; DMSO: dimetylosulfotlenek; DTT: ditiotreitol lub treo-1,4-dimerkapto-2,3-butanodiol; DPPA: azydek difenylofosforylu; EDTA: kwas etylenodiaminatetraoctowy;
Et: etyl; EtOH: etanol; EtOAc: octan etylu; Et2O: eter dietylowy; HATU: heksafluorofosforan O-7-azabenzotriazol-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowy; HPLC: wysokociśnieniowa chromatografia cieczowa; MS: spektrometria masowa (MALDI-TOF: Matrix Assisted Laser Dizorption Ionization-Time of Flight); FAB: Bombardowanie szybkimi atomami; LAH: wodorek litowoglinowy; Me: metyl; MeOH: metanol; MES: kwas 2-(N-morfolino)etanosulfonowy; NaHMDS: bis(trimetylosililo)amidek sodu; NMM: N-metylomorfolina; NMP: N-metylopirolidyna; Pr: propyl; Suce: 3-karboksypropanoil; PNA: 4-nitrofenyloamina lub p-nitroanilid; TBAF: fluorek tetra-n-bu-tyloamoniowy; TBTU: tetrafluoroboran 2-(1H-benzotriazol-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowy; TCEP: chlorowodorek tris(2-karboksyetylo)fosfiny; TFA: kwas trifluorooctowy; THF: tetrahydrofuran; TIS: triizopropylosilan; TLC: chromatografia cienkowarstwowa; TMSE: trimetylosililoetyl; Tris/HCl: chlorowodorek tris(hydroksymetylo)aminometanu.
Jednostki budulcowe P2
P r z y k ł a d 1
Synteza bromometylo-8-chinoliny (1)
Do dostępnego w handlu kwasu 8-chinolinokarboksylowego (2,5 g, 14,4 mmol) dodano czysty chlorek tionylu (10 ml, 144 mmola). Tę mieszaninę ogrzewano w temperaturze 80°C przez 1 godzinę
PL 204 850 B1 przed oddestylowaniem nadmiaru chlorku tionylu pod zmniejszonym ciśnieniem. Do uzyskanego brunatnawego ciała stałego dodano absolutny EtOH (15 ml), ogrzewano w temperaturze 80°C przez 1 godzinę, po czym zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość podzielono pomiędzy EtOAc i nasycony wodny NaHCO3 i fazę organiczną osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono, uzyskując brunatnawy olej (2,8 g). Tę substancję (około 14,4 mmola) dodano kroplami w ciągu 35 minut do zawiesiny LAH (0,76 g, 20,2 mmola)/Et2O, ochłodzonej do temperatury -60°C. Mieszaninę reakcyjną ogrzewano powoli do temperatury -35°C przez 1,5 godziny przed zakończeniem reakcji. Reakcję zatrzymano dodając powoli MgSO4 * 10 H2O przez 30 minut i następnie uwodniony THF. Mieszaninę podzielono pomiędzy Et2O i 10% wodny NaHCO3. Fazę organiczną osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono, uzyskując żółtawe ciało stałe (2,31 g, 80% łącznie z 2 etapów) odpowiadające alkoholowi. Alkohol (2,3 g, 11,44 mmola) rozpuszczono w mieszaninie AcOH/HBr (20 ml, 30% roztworu od firmy Aldrich) i ogrzewano w temperaturze 70°C przez 2,5 godziny. Mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem do suchej masy, podzielono pomiędzy EtOAc (100 ml) i nasycony wodny NaHCO3, po czym osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono, uzyskując pożądany związek (1) w postaci brunatnawego ciała stałego (2,54 g, 100%).
P r z y k ł a d 2
Synteza 2-fenylo-4-hydroksychinoliny (2)
OH (2)
Dostępny w handlu benzoilooctan etylu (6,00 g, 31,2 mmola) ogrzewano w temperaturze 85°C (szczelnie zamknięta probówka) w 75 ml 30% NH4OH przez 2 godziny. Ciało stałe uzyskane po oziębieniu przesączono i ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną w wodzie przez 2 godziny. Roztwór ekstrahowano trzy razy z zastosowaniem CH2CI2. Warstwy organiczne połączono, osuszono nad MgSO4, przesączono i zatężono. Żółtą pozostałość poddano szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną EtOAc:heksan (3:7), uzyskując odpowiedni amid w postaci białego ciała stałego, 1,60 g, wydajność 31%.
Ten amid (250 mg, 1,53 mmola) ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną, stosując aparat Deana-Starka, z aniliną (143 mg, 1,53 mmola) i chlorowodorkiem aniliny (10 mg, 0,08 mmola) w toluenie (10 ml) przez 16 godzin. Roztwór zatężono, uzyskując brunatny olej, który zmieszano z kwasem polifostorowym (2 g) i ogrzewano w temperaturze 135°C przez 20 minut. Mieszaninę reakcyjną wylano do wody i wartość pH uregulowań do 8 z zastosowaniem 5 M NaOH. Wodną zawiesinę ekstrahowano dwukrotnie octanem etylu. Warstwy organiczne połączono, przemyto solanką, osuszono nad MgSO4, przesączono i zatężono. Pozostałość poddano szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym, eluując 3% MeOH w octanie etylu, uzyskując 2-fenylo-4-hydroksychinolinę (2), 67 mg, wydajność 20%.
1H NMR (DMSO-d6) δ 8,11 (d, J=7Hz, 1H), 7,86-7,83 (m, 2H), 7,77 (d, J=8Hz, 1H), 7,68 (dd, J=8, 7Hz, 1H), 7,61-7,58 (m, 3H), 7,35 (dd, J=8, 7Hz, 1H), 6,34 (s, 1H).
P r z y k ł a d 3
Synteza 4-hydroksy-2-fenylo-7-metoksychinoliny (3)
PL 204 850 B1
4-hydroksy-2-fenylo-7-metoksychinolina (e).
Roztwór benzoilooctanu etylu (b) (100,0 g, 0,52 mola), m-anizydynę (a) (128,1 g, 1,04 mola) i mieszaninę 4N HCl/dioksan (5,2 ml) w toluenie (1,0 1) ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 6,25 godziny w aparacie Deana-Starka. Ochłodzony roztwór toluenowy przemyto kolejno wodnym 10% HCl (2 x 300 ml), 1N NaOH (2 x 300 ml), H2O (300 ml) i solanką (150 ml). Fazę toluenową osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując mieszaninę 1,2:1,0 estru c i amidu d (144,6 g, wydajność surowego produktu 45%/38%) w postaci ciemnobrunatnego oleju. Surowy olej ogrzewano w temperaturze 280°C przez 80 minut, podczas oddestylowywania EtOH. Otrzymane ciemne ciało stałe po ochłodzeniu roztarto z CH2CI2 (200 ml). Zawiesinę przesączono i uzyskane ciało stałe przemyto CH2CI2, uzyskując związek e (22,6 g, 17% ze związku a) w postaci beżowego ciała stałego.
1H NMR (DMSO-d6) δ 8,00 (d, J=9,0Hz, 1H), 7,81-7,82 (m, 2H), 7,57-7,59 (m, 3H), 7,20 (d, J=2,2Hz, 1H), 6,94 (dd, J=9,0, 2,2Hz, 1H), 6,26 (s, 1H), 3,87(s, 3H).
4-chloro-2-fenylo-7-metoksychinolina (3).
Zawiesinę związku e (8,31 g, 33,1 mmola) w POCI3 (90 ml) ogrzewano w temperaturze wrzenia przez 2 godziny (po ogrzewaniu otrzymano klarowny roztwór). Mieszaninę reakcyjną zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość podzielono pomiędzy 1N NaOH (reakcja egzotermiczna, 10N NaOH dodano w celu utrzymania wysokiej wartości pH) i EtOAc (500 ml). Warstwę organiczną przemyto H2O (100 ml) i solanką (100 ml), następnie osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując związek 3 (8,60 g, 96%) w postaci ja-snożółtego ciała stałego.
1H NMR (DMSO-d6) δ 8,28-8,30 (m, 2H), 8,20 (s, 1H), 8,10 (d, J=9,1Hz, 1H), 7,54-7,58 (m, 3H), 7,5 (d, J=2,5Hz, 1H), 7,38 (dd, J=9,1, 2,5Hz, 1H), 3,98 (s, 3H).
Te reakcję powtórzono trzy razy i zawsze uzyskiwano wydajność 96-98%, znacznie większa od 68% wydajności opublikowanej w J. Med. Chem. 1997, 40,1794.
P r z y k ł a d 4
Synteza Boc-4(R)-(naftalen-1-ylometoksy)proliny (4)
Dostępną w handlu Boc-4(R)-hydroksyprolinę (5,00 g, 21,6 mmola) rozpuszczono w THF (100 ml) i ochłodzono do temperatury 0°C. Przez 10 minut dodawano porcjami wodorek sodu (60% dyspersja w oleju, 1,85 g, 45,4 mmola) i zawiesinę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. Następnie dodano 1-(bromometylo)naftalen (8,00 g, 36,2 mmola) (wytworzony zgodnie z opisem podanym
PL 204 850 B1 przez E.A. Dixon i in., Can. J. Chem., (1981), 59, 2629-2641) i mieszaninę ogrzewano w temperaturze wrzenia przez 18 godzin. Mieszaninę wylano do wody (300 ml) i przemyto heksanem. Warstwę wodną zakwaszono 10% wodnym roztworem HCl i ekstrahowano dwukrotnie octanem etylu. Warstwy organiczne połączono i przemyto solanką, osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (heksan:octan etylu:kwas octowy 49:49:2), uzyskując tytułowy związek w postaci bezbarwnego oleju (4,51 g, wydajność 56%).
Analiza 1H NMR (DMSO-d6) wykazała obecność dwóch rotamerów: (8,05 (m, 1H), 7,94 (m, 1H), 7,29 (d, J=14Hz, 1H), 7,55-7,45 (m, 4H), 4,96 (m, 2H), 4,26 (br. s, 1H), 4,12 (dd, J=J=8Hz, 1H), 3,54-3,42 (m, 2H), 2,45-2,34 (m, 1H), 2,07-1,98 (m, 1H) 1,36 (s, (3/9) 9H), 1,34 (s, (6/9) 9H).
P r z y k ł a d 5
Synteza Boc-4(R)-(8-chinolinometoksy)proliny (5)
Boc-4(R)-hydroksyprolinę (1,96 g, 8,5 mmola) w bezwodnym THF (20 ml) dodano do zawiesiny NaH (1,4 g, 60% w oleju, 34 mmole) w THF (100 ml). Tę mieszaninę mieszano 30 minut przed dodaniem bromometylo-8-chinoliny według przykładu 1 (2,54 g, 11,44 mmola) w THF (30 ml). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze 70°C (5 godzin) przed ostrożnym usunięciem nadmiaru NaH z zastosowaniem uwodnionego THF. Mieszaninę reakcyjną zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i uzyskaną substancję rozpuszczono w EtOAc i H2O. Zasadową fazę wodną oddzielono i zakwaszono 10% wodnym roztworem HCl do wartości pH ~5, po czym ekstrahowano EtOAc (150 ml). Fazę organiczną osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono, uzyskując brunatny olej. Oczyszczanie metodą szybkiej chromatografii (eluent: mieszanina 10% MeOH/CHCl3) dało pożądany związek (5) w postaci jasnożółtego ciała stałego (2,73 g, 86%). HPLC (97,5%).
Analiza 1H NMR (DMSO-d6) wykazała obecność rotamerów w stosunku 6:4, δ 12-11,4 (bs, 1H), 8,92 (2 x d, J=4,14 i 4,14Hz, 1H), 8,38 (2 x d, J=8,27 i 8,27Hz, 1H), 7,91 (d, J=7,94Hz, 1H), 7,77 (d, J=7,0Hz, 1H), 7,63-7,54 (m, 2H), 5,14 (2 x s, 2H), 4,32-4,29 (m, 1H), 4,14-4,07 (m, 1H), 3,52-3,44 (m, 2H), 2,43-2,27 (m, 1H), 2,13-2,04 (m, 1H), 1,36 i 1,34 (2 x s, 9H).
P r z y k ł a d 6
Wytwarzanie Boc-4(R)-(7-chlorochinolino-4-okso)proliny (6)
Dostępny w handlu ester metylowy Boc-4(S)-hydroksy-proliny (500 mg, 2,04 mmola) i 7-chloro4-hydroksychinolinę (440 mg, 2,45 mmola) umieszczono w suchym THF (10 ml) o temperaturze 0°C. Dodano trifenylofosfinę (641 mg, 2,95 mmola), a następnie powoli dodano DIAD (426 mg, 2,45 mmola). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 20 godzin. Mieszaninę reakcyjną następnie zatężono, rozpuszczono w octanie etylu i ekstrahowano trzy razy z zastosowaniem 1N HCl. Fazę wodną zalkalizowano stosując Na2CO3 i ekstrahowano dwukrotnie octanem etylu. Warstwy organiczne
PL 204 850 B1 połączono, osuszono nad MgSO4, przesączono i zatężono, uzyskując żółty olej. Olej oczyszczono metodą szybkiej chromatografii, uzyskując ester metylowy w postaci białego ciała stałego, 498 mg, wydajność.
Ten ester metylowy (400 mg, 0,986 mmola) hydrolizowano stosując 1M wodny wodorotlenek sodu (1,7 ml, 1,7 mmola) w metanolu (4 ml), w temperaturze 0°C, przez 3 godziny. Roztwór zatężono w celu usunięcia metanolu i zobojętniono stosując 1m. wodny roztwór HCl. Zawiesinę zatężono do suchej masy i rozpuszczono w metanolu (20 ml), sole odsączono i przesącz zatężono, uzyskując pożądany związek (6) w postaci białego ciała stałego, 387 mg, wydajność ilościowa.
1H NMR (DMSO-d6) (mieszanina rotamerów około 1:1) δ 8,74 (d, J=5Hz, 1H), 8,13-8,09 (m, 1H), 7,99 i 7,98(s, 1H), 7,58 (d, J=9Hz, 1H), 7,02 (d, J=5Hz, 1H), 5,26-5,20 (m, 1H), 4,10-4,01 (m, 1H), 3,81-3,72 (m, 1H), 3,59 (dd, J=12, 10Hz, 1H), 2,41-2,31 (m, 2H), 1,34 i l,31(s, 9H).
P r z y k ł a d 7
Synteza Boc-4(R)-(2-fenylo-7-metoksychinolino-4-okso)proliny (7)
Boc-4(R)-(2-fenylo-7-metoksychinolino-4-okso)prolina (7).
Tert-butanolan potasu (8,16 g, 72,7 mmola) dodawano małymi porcjami, przez 15 minut, do roztworu Boc-4(R)-hydro-ksyproliny (6,73 g, 29,1 mmola) w DMSO (83 ml) utrzymywanego w temperaturze 25°C. Mieszaninę mieszano w temperaturze 25°C przez 1,5 godziny. Do mieszaniny reakcyjnej dodawano chloro-2-fenylo-7-metoksychinolinę 3 (8,61 g, 32,0 mmole) w 4 porcjach, przez 15 minut. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze 25°C przez 19 godzin. Uzyskaną zawiesinę wylano do H2O (650 ml) i mieszaninę przemyto Et2O (3 x 150 ml) w celu usunięcia nadmiaru chlorochinoliny (później stwierdzono, że bardziej efektywny jest EtOAc). Warstwę wodną zakwaszono wodnym 1N HCl (38 ml obliczono dla wymaganego 1,5 równoważnika, 43,6 ml) w celu uzyskania wartości pH 4-5. Białe ciało stałe, które wytrąciło się, odzyskano przez odsączenie. Wilgotne ciało stałe osuszono pod zmniejszonym ciśnieniem nad P2O5, uzyskując pochodną proliny 7 (12,6 g, 91%, zawartość DMSO 2,3% wagowych) w postaci beżowego ciała stałego:
1H NMR (DMSO-d6) δ (mieszanina rotamerów 2:1) 8,27 (d, J=7,0Hz, 2H), 8,00, 7,98 (2d, J=9,2, 9,2Hz, 1H), 7,48-7,56(m, 3H), 7,45, 7,43 (2s, 1H), 7,39 (d, J=2,5Hz, 1H), 7,17 (dd, J=9,2, 2,5Hz, 1H), 5,53-5,59 (m, 1H), 4,34-4,41 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,76 (szeroki s, 2H), 2,63-2,73 (m, 1H), 2,32-2,43 (m, 1H), 1,36, 1,33 (2s, 9H).
P r z y k ł a d 8
Synteza Boc-4(R)-(2-fenylo-6-nitrochinolino-4-okso)proliny (8)
PL 204 850 B1
Azodikarboksylan dietylu (0,77 ml, 4,89 mmola) dodano kroplami do mieszanego roztworu trifenylofosfiny (1,28 g, 4,88 mmola) w 15 ml tetrahydrofuranu, w temperaturze 0°C. Po 30 minutach mieszania w atmosferze azotu, dodano roztwór estru metylowego Boc-4(S)-hydroksyproliny (1,00 g, 4,08 mmola) w 5 ml tetrahydrofuranu, a następnie zawiesinę dostępnego w handlu 6-nitro-2-fenylo-4-chinolinolu (1,30 g, 4,88 mmola) w 10 ml tego samego rozpuszczalnika. Czerwoną mieszaninę mieszano przez 15 minut w temperaturze 0°C i w temperaturze pokojowej przez noc. Rozpuszczalnik odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostały olej rozcieńczono w octanie etylu i przemyto dwukrotnie wodorowęglanem sodu, jednokrotnie wodą i jednokrotnie solanką. Warstwę organiczną osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość poddano chromatografii na żelu krzemionkowym (heksany-octan etylu 70:30 objętościowo), uzyskując pożądany ester metylowy w postaci jasnożółtego ciała stałego (1,70 g, 85%).
1H NMR (CDCl3) rotamery = 3:7 5 9,03 (d, J=2,5Hz, 1H), 8,46 (dd, J=9, 2,5Hz, 1H), 8,18 (d, J=9Hz, 1H), 8,14-8,07 (m, 2H), 7,59-7,50(m, 3H), 7,19(s, 1H), 5,39-5,30(m, 1H), 4,67(t, J=8Hz, 0,3H), 4,61(t, J=8Hz, 0,7H), 4,07-4,01 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 2,89-2,73 (m, 1H), 2,55-2,47 (m, 1H), 1,49 (s, 2,7H), 1,45 (8, 6,3H),
Do roztworu estru metylowego (503 mg, 1,02 mmola) w mieszaninie THF:H2O (10:4 ml) dodano jednowodny wodorotlenek litu (85 mg, 2,05 mmola). 2 ml MeOH dodano w celu uzyskania homogenicznego roztworu. Biały osad uzyskano w czasie 30 minut. Uzyskaną zawiesinę mieszano w temperaturze pokojowej przez dodatkowe 6 godzin. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono 10% roztworem wodnym kwasu cytrynowego i ekstrahowano octanem etylu. Warstwę organiczną osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując 416 mg (85%) pożądanego kwasu (8).
1H NMR (DMSO-d6) δ 8,92-8,87 (m, 1H), 8,47 (dd, J=9, 3Hz, 1H), 8,38-8,32 (m, 2H), 8,19 (d, J=9Hz, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,62-7,55 (m, 3H), 5,73-5,66 (m, 1H), 4,41 (t, J=8Hz, 1H), 3,89-3,76 (m, 2H), 2,83-2,72 (m, 1H), 2,47-2,3 (m, 1H), 1,38(s, 9H).
Jednostki budulcowe P1
P r z y k ł a d 9
A) Synteza mieszaniny izomerów (IR,2R)/(1S,2S) kwasu 1-amino-2-etylocyklopropylokarboksylowego.
a) Do zawiesiny chlorku benzylotrietyloamoniowego (21,0 g, 92,19 mmola) w 50% wodnym roztworze NaOH (92,4 g w 185 ml H2O) dodano kolejno malonian di-tert-butylu (20,0 g, 92, 47 mmola) i 1,2-dibromobutan (30,0 g, 138, 93 mmola). Mieszaninę reakcyjna mieszano energicznie przez noc w temperaturze pokojowej, następnie dodano mieszaninę wody z lodem. Surowy produkt ekstrahowano CH2CI2 (3x) i kolejno przemyto wodą (3x) i solanką. Warstwę organiczną osuszono (MgSO4),
PL 204 850 B1 przesączono i zatężono. Pozostałość poddano szybkiej chromatografii (7 cm, 2 do 4% Et2O w heksanie), uzyskując pożądaną pochodną cyklopropanu 9c (19,1 g, 70,7 mmola, wydajnooeas 76%).
1H NMR (CDCI3) δ 1,78-1,70 (m, 1H), 1,47 (s, 9H), l,46(s, 9H), 1, 4-1, 39 (m, 1H), 1,26-1,64 (m, 3H), 1,02 (t, 3H, J=7,6Hz).
b) Do zawiesiny tert-butanolanu potasu (6,71 g, 59,79 mmola, 4,4 równważnika) w suchym eterze (100 ml) w temperaturze 0°C dodano H2O (270 pl, 15,00 mmoli, 1,1 równoważnika). Po 5 minutach do zawiesiny dodano diester związku 9c (3,675 g, 13,59 mmola) w eterze (10 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc w temperaturze pokojowej, następnie wylano do mieszaniny wody z lodem i przemyto eterem (3x). Warstwę wodną zakwaszono 10% wodnym roztworem kwasu cytrynowego w temperaturze 0°C i ekstrahowano AcOEt (3x). Połączone warstwy organiczne przemyto kolejno wodą (2x) i solanką. Po zwykłej obróbce (Na2SO4, przesączenie, zatężenie) wydzielono pożądany kwas 9d w postaci jasnożółtego oleju (1,86 g, 8,68 mmola, wydaj ność 64%).
1H NMR (CDCI3) δ 2,09-2,01 (m, 1H), 1,98 (dd, J=3,8, 9,2Hz, 1H), 1,81-1,70 (m, 1H), 1,66 (dd, J=3,0, J=8,2Hz, 1H), 1,63-1,56 (m, 1H), 1,51 (8, 9H), 1,0 (t, J=7,3Hz, 3H).
c) Do kwasu 9d (2,017 g, 9,414 mmola) w suchym benzenie (32 ml) dodano kolejno Et3N (1,50 ml, 10,76 mmola, 1,14 równoważnika) i DPPA (2,20 ml, 10,21 mmola, 1,08 równoważnika). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 3,5 godziny, a następnie dodano 2-trimetylosililoetanol (2,70 ml, 18,84 mmola, 2,0 równoważniki). Temperaturę wrzenia utrzymywano przez noc, następnie mieszaninę reakcyjną rozcieńczono Et2O i kolejno przemyto 10% wodnym roztworem kwasu cytrynowego, wodą, nasyconym wodnym NaHCO3, wodą (2x) i solanką. Po zwykłej obróbce (MgSO4, przesączenie, zatężenie) pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (5 cm, mieszanina 10% AcOEt-heksan), uzyskując pożądany karbaminian 9e (2,60 g, 7,88 mmola, wydajność 84%) w postaci jasnożółtego oleju.
MS (FAB) 330 (MH+);
1H NMR (CDCI3) δ 5,1 (bs, 1H), 4,18-4,13 (m, 2H), 1,68-1,38 (m, 4H), 1,45 (s, 9H), 1,24-1,18 (m, 1H), 1,00-0,96 (m, 5H), 0,03 (s, 9H).
d) Do karbaminianu 9e (258 mg, 0, 783 mmola) dodano 1,0M roztwór TBAF w THF (940 pl, 0,94 mmola, 1,2 równoważnika). Po 4,5 godzinach dodano dodatkową ilość 1,0M TBAF (626 pl, 0,63 mmola, 0,8 równoważnika). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc w temperaturze pokojowej, ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 30 minut i następnie rozcieńczono AcOEt. Roztwór przemyto kolejno wodą (2x) i solanką. Po zwykłej obróbce (MgSO4, przesączenie, zatężenie) wydzielono pożądaną aminę 9f (84 mg, 0, 453 mmola, wydajność 58%) w postaci jasnożółtej cieczy.
1H NMR (CDCI3) δ 1,96 (bs, 2H), 1,60-1,40 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,31-1,20(m, 1H), 1,14 (dd, J=4,1, 7,3Hz, 1H), 1,02 (dd, J=4,1, 9,2Hz, 1H), 0,94 (t, J=7,3Hz, 3H).
P r z y k ł a d 10
Chemiczne rozdzielanie izomerów (1R,2R)/(1S,2S) karboksylanu t-butylo-1-amino-2-etylocyklopropylu (według przykładu 9)
izomer RR izomer SS mieszanina izomerów Izomery rozdzielono metodą kolumnowej chromatografii (R,R)/(S,S)
PL 204 850 B1
Związek 9e według przykładu 9 (8,50 g, 25,86 mmola) potraktowano mieszaniną 1M TBAF/THF (26 ml) w temperaturze cieńczono EtOAc, przemyto wodą (3x) i solanką (1x), następnie osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono, uzyskując wolną aminę w postaci jasnożółtego oleju. Wolną aminę rozpuszczono w bezwodnym CH2CI2 (120 ml) i dodano kolejno NMM (8,5 ml, 77,57 mmola), związek 4 (przykład 4) (10,08 g, 27,15 mmola) i HATU (11,79 g, 31,03 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie poddano opisanej uprzednio obróbce. Surową mieszaninę diastereoizomerów rozdzielono metodą szybkiej chromatografii (eluent - mieszanina heksan:Et2O; 25:75), uzyskując dipeptyd 10a (mniej polarna plamka elucyjna) w postaci białej pianki (4,42 g; 64% wydajności teoretycznej) i 10b (bardziej polarna plamka elucyjna) w postaci pianki o barwie kości słoniowej (4 g, 57% wydajności teoretycznej). Na tym eatpie udało się rozdzielić oba izomery, ale ich bezwzględna stereochemia pozostaje nieznana.
P r z y k ł a d 11
Określanie bezwzględnej stereochemii związków 10a i 10b metodą korelacji ze znanym (1R-amino-2R-etylo-cyklopropylokarboksyłanem t-butylu
Bezpośrednie porównanie metodą TLC, HPLC i NMR Prof. A. Charette, z Uniwersytetu w Montrealu, uzyskał związek 11a o bezwzględnej stereochemii przestawionej, powyżej, którą określono metodą krystalografi rentgenowskiej (J. Am. Chem. Soc, 1995, 117, 12721). Związek 11a (13,2 mg, 0,046 mmola) rozpuszczono w mieszaninie 1M HCl/EtOAc (240 μθ i mieszano w przybliżeniu przez 48 godzin. Mieszaninę zatężono do suchej masy, uzyskując związek 11b w postaci jasnożółtej pasty, który sprzężono ze związkiem 4 (18 mg, 0,049 mmola) zgodnie z opisem według przykładu 10, stosując NMM (20,3 μΡΌ,185 mmola) i HATU (21,1 mg, 0,056 mmola) w CH2CI2. Surową substancję oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (eluent - heksan:Et2O; 50:50), uzyskując dipeptyd 11c w postaci oleju (7,7 mg; 31%). Metodą porównania TLC, HPLC i NMR dipeptydu lic stwierdzono, że jest on identyczny jak mniej polarny związek 10a otrzymany według przykładu 10, zatem zidentyfikowano bezwzględną stereochemię związku 10a jako (1R,2R).
P r z y k ł a d 12
Wytwarzanie izomerów (1R,2R)/(1S,2S) kwasu 1-Boc-amino-2-etylocyklopropylokarboksylowego (12a):
PL 204 850 B1
Karbaminian 9e według przykładu 9 (2,6 g, 7,88 mmola) mieszano przez 40 minut w TPA, w temperaturze 0°C. Mieszaninę następnie zatężono i rozcieńczono THF (10 ml). Dodano wodny roztwór NaOH (700 mg, 17,5 mmol w 8,8 ml H2O), a następnie roztwór w THF (13 ml) (Boc)2O (2,06 g, 9,44 mmola, 1,2 równoważnika). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc w temperaturze pokojowej (pH utrzymywano na poziomie 8, dodając, gdy to konieczne 10% wodny roztwór NaOH), następnie rozcieńczono H2O, przemyto Et2O (3x) i zakwaszono w temperaturze 0°C 10% wodnym roztworem kwasu cytrynowego. Warstwę wodną ekstrahowano EtOAc (3X) i kolejno przemyto H2O (2x) i solanką. Po zwykłej obróbce (MgSO4, przesączenie, zatężenie) wydzielono pożądany Boc-zabezpieczony aminokwas (12a) (788 mg, 3,44 mmola, wydajnooeaB 44%).
1H NMR (CDCI3) δ 5,18 (bs, 1H), 1,64-1,58 (m, 2H), 1,55-1,42 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,32-1,25 (m, 1H), 0,99 (t, 3H, J=7,3Hz).
Wytwarzanie izomerów (1R,2R)/(1S,2S) estru metylowego kwasu 1-Boc-amino-2-etylocyklopropylokarboksylowego (12b):
Boc-pochodną związku 12a (0,30 g, 1,31 mmola) rozpuszczono w Et2O (10 ml) i potraktowano świeżo przygotowanym roztworem diazometanu w Et2O, w temperaturze 0°C, aż do uzyskania żółtego zabarwienia nieznacznego nadmiaru diazometanu. Po wymieszaniu przez 20 minut w temperaturze pokojowej mieszaninę reakcyjną zatężono do suchej masy, uzyskując związek 12b w postaci klarownego bezbarwnego oleji (0,32 g, 100%).
1H NMR (CDCI3) δ 5,1 (bs, 1H), 3,71 (s, 3H), 1,62-1,57 (m, 2H), 1,55 (S, 9H), 1,53-1,43 (m, 1H), 1,28-1,21 (m, 2H), 0,95 (t, J=7,3Hz, 3H).
P r z y k ł a d 13
Enzymatyczne rozdzielanie izomerów (1R,2R)/(1S, 2S) Boc-1-amino-2-etylocyklopropylokarboksylanu metylu
*Analiza metodą HPLC z zastosowaniem kolumny Chiralcel® OD-H **Inne estry są także dopuszczalne (np. Et)
a) Mieszaninę enancjomerów (1S,2S)/(1R,2R) estru metylowego kwasu 1-Boc-amino-2-etylokarboksylowego według przykładu 10 (0,31 g, 1,27 mmola) rozpuszczono w acetonie (3 ml) i następnie rozcieńczono wodą (7 ml), szybko mieszając. Wartość pH roztworu uregulowano do 7,5. stosując 0,05 M wodny roztwór NaOH przed dodaniem enzymu Alcalase® [ekstrakt 2.4L z firmy Novo Nordisk Industrials] (300 mg). Podczas inkubacji pH stabilizowano stosując NaOH i do monitorowania dodawania roztworu NaOH zastosowano pH-stat. Po 40 godzinach mieszaninę rozcieńczono EtOAc i H2O (z 5 ml nasyconego roztworu NaHCO3) i fazy rozdzielono. Fazę wodną zakwaszono 10% wodnym roztworem
PL 204 850 B1
HCl i ekstrahowano EtOAc, osuszono (MgSO4), przesączono i za-tężono, uzyskując kwas 13a (48,5 mg). Bezwzględną stereochemię określono z zastosowaniem korelacji opisanej w przykładach 10 i 11.
b) Traktowanie próbki kwasu 13a diazometanem w Et2O dało ester metylowy, a następnie analiza HPLC z zastosowaniem chiralnej kolumny [Chiralcel® OD-H, mieszanina 2,5% izopropanol/heksan, izokratyczna] wykazała obecność izomeru (S,S) w proporcji 51:1.
P r z y k ł a d 14
Synteza izomerów (1R,2S)/(1S,2S) kwasu 1-amino-2-etylo-cyklopropylokarboksylowego
Wychodząc z kwasu 9d opisanego w przykładzie 9:
c) Do związku 9d (1,023 g, 4,77 mmola) w CH3CN (25 ml) dodano kolejno DBU (860 pl, 5,75 mmola, 1,2 równoważnika) i jowej i następnie zatężono. Pozostałość rozcieńczono Et2O i kolejno przemyto 10% wodnym roztworem kwasu cytrynowego (2x), H2O, nasyconym wodnym roztworem NaHCO3, N2O (2x) i solanką. Po zwykłej obróbce (MgSO4, przesączenie, zatężenie) wydzielono pożądany ester 14a (1,106 g, 3,35 mmola, wydajność 91%) w postaci bezbarwnego oleju.
MS (FAB) 255 (MH+); 1H NMR (CDCI3) δ 5,96-5,86 (m, 1H), 5,37-5,22 (m, 2H), 4,70-4,65 (m, 1H), 4,57-4,52 (m, 1H), 1,87-1,79 (m, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,45-1,40(m, 1H), 1,33-1,24 (m, 3H), 1,03 (t, J=7,3Hz, 3H).
d) Do estru 14a (1,106 g, 4,349 mmola) w suchym CH2Cl2 (5 ml) w temperaturze pokojowej dodano TFA (5 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1,5 godziny i następnie zatężono, uzyskując związek 14b (854 mg, 4,308 mmola, wydajność 99%).
MS (FAB) 199 (MH+); 1H NMR (CDCI3) δ 5,99-5,79 (m, 1H), 5,40-5,30 (m, 2H), 4,71-4,62 (m, 2H), 2,22-2,00 (m, 2H), 1,95-1,88 (m, 1H), 1,84-1,57 (m, 2H), 0,98 (t, J=7,3Hz, 3H).
e) Do kwasu 14b (853 mg, 4,30 mmola) w suchym benzenie (14,8 ml) dodano kolejno Et3N (684 pl, 4,91 mmola, 1,14 równoważnika) i DPPA (992 pl, 4,60 mmola, 1,07 równoważnika). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 4,5 godziny, a następnie dodano 2-trimetylosililoetanol (1,23 ml, 8,58 mmola, 2,0 równoważniki). Temperaturę wrzenia utrzymywano przez noc, następnie mieszaninę reakcyjną rozcieńczono Et2O i kolejno przemyto 10% wodnym roztworem kwasu cytrynowego, wodą, nasyconym wodnym roztworem NaHCO3, wodą (2x) i solanką. Po zwykłej obróbce (MgSO4, przesączenie, zatężenie) pozostałość poddano szybkiej chromatografii (5 cm, mieszanina 10 do 15% AcOEt-heksan), uzyskując karbaminian 14c (1,212 g, 3,866 mmola, wydajność 90%) w postaci jasnożółtego oleju.
MS (FAB) 314 (MH+); 1H NMR (CDCI3) δ 5, 93-5,84 (m, 1H), 5,32-5,20 (m, 2H), 5,05 (bs, 1H), 4,60-4,56(m, 2H), 4, 20-4,11(m,2H), 1,71-1,60(m, 3H), 1,39-1,22(m, 1H), 1,03(t, J=7,6Hz, 3H), 0,96-0,86 (m, 1H), 0,04 (s, 9H).
f) Do karbaminianu 14c (267 mg, 0,810 mmola) dodano 1,0M roztwór TBAF w THF (1,62 ml, 1,62 mmola, 2,0 równoważniki). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc w temperaturze pokojowej,
PL 204 850 B1 ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 30 minut i następnie rozcieńczono AcOEt. Roztwór przemyto kolejno wodą (2x) i solanką. Po zwykłej obróbce (MgSO4, przesączenie, zatężenie) wydzielono pożądaną aminę 14d (122 mg, 0,721 mmola, wydajnoceas 89%) w postaci jasnożółtej cieczy.
1H NMR (CDCI3) δ 5,94-5,86 (m,1H), 5,31-5,22 (m, 2H), 4,58 (d, J=5,7Hz, 2H), 1,75(bs, 2H), 1,61-1,53 (m, 2H), 1,51-1,42 (m, 2H), 1,00 (t, J=7,3Hz, 3H), 0,70-0,62 (m, 1H).
P r z y k ł a d 15
Synteza izomerów (IR,2S)/(1S,2R) l-amino-2-winylocyklopropylokarboksylanu etylu
dodano dostępną w handlu iminę 15a (10,0 g, 37,41 mmola) w THF (45 ml). Mieszaninę reakcyjną ogrzano do temperatury 0°C i mieszano w tej temperaturze przez 40 minut. Mieszaninę następnie ochłodzono ponownie do temperatury -78°C w celu dodania 1,4-dibromobutenu związku 15b (8,0 g, 37,40 mmola) i następnie mieszano w temperaturze 0°C przez 1 godzinę i ochłodzono ponownie do temperatury -78°C w celu dodania tert-butanolanu potasu (4,62 g, 41,17 mmola, 1,1 równoważnika). Mieszaninę reakcyjną na koniec mieszano jeszcze przez 1 godzinę w temperaturze 0°C i zatężono, uzyskując związek 15c.
b, c, d) Związek 15c rozpuszczono w Et30 (265 ml) i potraktowano 1N wodnym roztworem HCl (106 ml). Po 3,5 godzinach, w temperaturze pokojowej warstwy rozdzielono i warstwę wodną przemyto Et2O (2x) i zalkalizowano nasyconym wodnym roztworem NaHCO3. Pożądaną aminę ekstrahowano Et2O (3x) i połączone organiczne ekstrakty przemyto solanką. Po zwykłej obróbce (MgSO4, przesączenie, zatężenie) pozostałość potraktowano 4N roztworem HCl w dioksanie (187 ml, 748 mmola). Po zatężeniu chlorowodorek 15d wydzielono w formie brązowego ciała stałego (2, 467 g, 12,87 mmola, wydajność 34%).
1H NMR (CDCI3) δ 9,17 (bs, 3H), 5,75-5,66 (m, 1H), 5,39 (d, J=17,2Hz, 1H), 5,21 (d, J=10,2Hz, 1H), 4,35-4,21 (m, 2H), 2,77-2,70 (m, 1H), 2,05 (dd, J=6,4, 10,2Hz, 1H), 1,75 (dd, J=6,4, 8,3Hz, 1H), 1,33(t, J=7,0Hz, 3H).
P r z y k ł a d 16
Wytwarzanie izomerów (1R,2S/1S,2R) estru etylowego kwasu 1-Boc-amino-2-winylocyklopropylokarboksylowego
PL 204 850 B1
Chlorowodorek 15d (1,0 g, 5,2 mmola) i (Boc)2O (1,2 g, 5,7 mmola) rozpuszczono w THF (30 ml) i potraktowano DMAP (0,13 g, 1,04 mmola, 0,2 równoważnika) i diizopropyloetyloaminą (2,8 ml, 15,6 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano 24 godziny przed rozcieńczeniem EtOAc (40 ml) i przemyto kolejno nasyconym roztworem NaHCO3 (wodnym), 5% wodnym roztworem HCl i nasyconą solanką. Fazę organiczną osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono, uzyskując po oczyszczeniu metodą szybkiej chromatografii (15% EtOAc/heksan) związek 16a (0,29 g, 23%).
1H NMR (CDCI3) δ 5,80-5,72 (m, 1H), 5,29-5,25 (dd, J=17,2, 17,2Hz, 1H), 5,24-5,1 (bs, 1H), 5,10 (dd, J=9,2, 9,2Hz, 1H),4,22-4,13 (m,2H), 2,15-2,04 (m, 1H), 1,85-1,73 (bs, 1H), 1,55-1,5 (m, 1H), 1,49 (s,9H), 1,26 (t, J=7,3Hz, 3H).
P r z y k ł a d 17
Enzymatyczne rozdzielanie izomerów (1R,2S)/(1S,2R) 1-amino-2-winylocyklopropylokarboksylanu etylu
*Analiza metodą HPLC, z zastosowaniem kolumny Chiralcel® OD-H
a) Racemiczną pochodną 17a (0,29 g, 1,14 mmola) rozpuszczono w acetonie (5 ml) i rozcieńczono H2O (10 ml). Przed dodaniem Alcalase® (300 mg) wartość pH uregulowano do 7,2 przy pomocy 0,2N wodnego roztworu NaOH. W celu utrzymania stałej wartości pH podczas inkubacji, roztwór NaOH dodawano przez dozujący pH-stat w czasie 9 dni, aż do dodania teoretycznej ilości zasady. Przeprowadzając ekstrakcję kwas/zasada, zgodnie z opisem według przykładu 13, wydzielono niezhydrolizowa-ny ester (0,15 g, 100%) i zhydrolizowaną substancje (0,139 g, 95%). Analiza niezhydrolizowanego estru metodą HPLC, z zastosowaniem chiralnej kolumny wykazała proporcję 43:1 pożądanego związku 17c o stereochemii (R,S), w oparciu o korelację chemiczną, zgodnie z opisem według przykładów 10 i 11.
Warunki analizy HPLC: Chiralcel® OD-H (4,6 mm x 25 cm), warunki izokratyczne z zastosowaniem jako fazy ruchomej 2,5% roztworu izopropanol/heksan.
P r z y k ł a d 18
Rozdzielanie izomerów (1R,2S)/(1S,2R) karboksylanu 1-amino-2-winylocyklopropylu metodą krystalizacji z kwasu dibenzoilo-D-winowego
Do roztworu surowego racemicznego (1R,2S i 1S,2R) 1-amino-2-winylocyklopropylokarboksylanu etylu [otrzymanego z estru etylowego N-(difenylometyleno)glicyny (25,0 g, 93,5 mola) zgodnie z opisem według przykł adu 15] w EtOAc (800 ml) dodano kwas dibenzoilo-D-winowy (33,5 g, 93,5 mola). Mieszaninę ogrzano do temperatury wrzenia, pozostawiono w temperaturze pokojowej przez 15 minut, a następnie ochłodzono do temperatury 0°C. Białe ciało stałe otrzymano po 30 minutach. Ciało stałe odsączono, przemyto EtOAc (100 ml) i osuszono na powietrzu. Ciało stałe zawieszono w acetonie (70 ml), sonikowano i przesączono (3x). Następnie ciało stałe krystalizowano dwukrotnie z gorącego acetonu (zbiór A). Ługi macierzyste zatężono i pozostałość krystalizowano trzy razy z gorącego acetonu (zbiór B). Te dwa zbiory bezpostaciowych białych ciał stałych soli kwasu dibenzoilo-D-winowego połączono (5,53 g) i zawieszono w mieszaninie Et2O (250 ml) i nasyconego roztworu NaHCO3 (150 ml). Warstwę organiczną przemyto solanką, osuszono (MgSO4) i przesączono. Przesącz rozcieńczono 1N roztworem HCl/Et2O (100 ml) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Oleistą pozostałość zatężono
PL 204 850 B1 z CCI4, uzyskując chlorowodorek 1(R)-amino-2(S)-winylocyklopropanokarboksylanu etylu (940 mg, wydajność 11%) w postaci białego higroskopijnego ciała stałego.
[a]25D +39,5°C (c 1,14 MeOH); [α]25365 + 88,5°C (c 1,14 MeOH); 1H NMR (CDCI3) δ 9,07 (szeroki s, 2H), 5,64 (ddd, J=17,2, 10,4, 8,7Hz, 1H), 5,36 (dd, J=17,2, 1,6Hz, 1H), 5,19 (dd, J=10,4, 1,6Hz, 1H), 4,24-4,16 (m, 2H), 2,51-2,45 (m, piki rozbudowane przestrzennie przez DMSO, 1H), 1,84 (dd, J=10,0, 6,0Hz, 1H), 1,64 (dd, J=8,3, 6,0Hz, 1H), 1,23 (t, J=7,lHz, 3H); MS (ESI) m/z 156 (MH)+; czystość enancjomeryczną określono jako 91% nadmiar enancjomeryczny, metodą analizy HPLC (kolumna CHIRALPAK AS®, Hex:i-PrOH) pochodnej Boc.
P r z y k ł a d 19
Wytwarzanie izomerów (1R,2S)/(1S,2R) chlorowodorku estru metylowego kwasu 1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego
Wytwarzanie iminy 19b
Chlorowodorek estru etylowego glicyny 19a (1519,2 g, 10,88 mola, 1,0 równoważnik) zawieszono w eterze tert-butylowo metylowym (8 1). Dodano benzaldehyd (1155 g, 10,88 mola, 1 równoważnik) i bezwodny siarczan sodu (773 g, 5,44 mola, 0,5 równoważnika) i mieszaninę ochłodzono do temperatury 5°C w łaźni zawierającej wodę z lodem. Kroplami dodano trietyloaminę (2275 ml, 16,32 mola, 1,5 równoważnika) w ciągu 15 minut (zastosowano 0,5 1 eteru tert-butylowometylowego do płukania) i mieszaninę mieszano przez 40 godzin w temperaturze pokojowej. Następnie reakcję zatrzymano przez dodanie wody z lodem (5 l) i warstwę organiczną oddzielono. Fazę wodną ekstrahowano eterem tert-butylowo metylowym (1 l) i połączone fazy organiczne przemyto mieszaniną nasyconego roztworu NaHO3 (400 ml) i wody (1,6 l) i następnie solanką. Roztwór osuszono nad MgSO4, zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostały żółty olej osuszono do stałej wagi pod zmniejszonym ciśnieniem. Iminę 19b otrzymano w postaci gęstego żółtego oleju, który zestalił się w temperaturze -20°C (2001 g, wydajność 96%).
1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8,30 (s, 1H), 7,79 (m, 2H), 7,48-7,39 (m, 3H), 4,40 (d, J=1,3Hz, 2H), 4,24 (q, J=7Hz, 2H), 1,31 (t, J=7Hz, 3H).
Wytwarzanie racemicznego chlorowodorku estru etylowego kwasu N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-winylocyklopropanokar-boksylowego 19e:
Tert-butanolan litu (4,203 g, 52,5 mmola, 2,1 równoważnika) zawieszono w suchym toluenie (60 ml). Iminę 19b (5,020 g, 26,3 mmola, 1,05 równoważnika) i dibromek 19e (5,348 g, 25 mmoli, 1 równoważnik) rozpuszczono w suchym toluenie (30 ml) i ten roztwór dodano kroplami w ciągu 30 minut do mieszanego roztworu LiOtBu, w temperaturze pokojowej. Po zakończeniu ciemnoczerwoną mieszaninę mieszano przez dodatkowe 10 minut i reakcję zatrzymano przez dodanie wody (50 ml) i eteru tertbutylowometylowego (TBME, 50 ml). Fazę wodną oddzielono i ekstrahowano drugi raz TBME (50 ml). Fazy organiczne połączono, dodano 1N HCl (60 ml) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Fazę organiczną oddzielono i ekstrahowano wodą (40 ml). Następnie fazy wodne połączono, nasycono solą (35 g) i dodano TBME (50 ml), następnie mieszaną mieszaninę zalkalizowano do wartości pH 13-14 ostrożnie dodjąc 10N NaOH. Warstwę organiczną oddzielono i fazę wodną ekstrahowano TBME (2 x 50 ml). Ekstrakty organiczne zawierające wolną aminę 19d połączono i dodano diwęglan ditertbutylu (5,46 g, 25 mmoli, 1 równoważnik). Po wymieszaniu przez noc w temperaturze pokojowej, analiza TLC wykazała pewną ilość nieprzereagowanej wolnej aminy. Dodano
PL 204 850 B1 dodatkowo diwęglan ditertbutylu (1,09 g, 5 mmoli, 0,2 równoważnika) i mieszaninę ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 2 godziny i w tym momencie analiza TLC wykazała całkowitą konwersję związku 19d do karbaminianu 19e. Roztwór ochłodzono do temperatury pokojowej, osuszono nad MgSO4 i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii, stosując 10%, a następnie 20% roztwór EtOAc/heksan jako eluent. Oczyszczony związek 19e otrzymano w postaci klarownego żółtego oleju, który powoli zestalił się pod zmniejszonym ciśnieniem (4,014 g, wydajność 63%).
1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 5,77 (ddd, J=17, 10, 9Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17, 1,5Hz, 1H), 5,18 (broads, 1H), 5,11 (dd, J=10, 1,5Hz, 1H), 4,24-4,09 (m, 2H), 2,13 (q, J=8,5Hz, 1H), 1,79 (szeroki m, 1H), 1,46 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,26 (t, J=7Hz, 3H).
Wytwarzanie tytułowego związku 19f poprzez transestryfikację związku 19e:
Ester etylowy 19e (10,807 g, 42,35 mmola) rozpuszczono w suchym metanolu (50 ml) i dodano roztwór matanolanu sodu w MeOH (25% wagowo, 9,7 ml, 42 mmole, 1 równoważnik). Mieszaninę ogrzewano w temperaturze 50°C przez 2 godziny, wówczas analiza TLC wykazała zakończenie transestryfikacji (związek 19e Rf 0,38, związek 19f Rf 0,34 w mieszaninie 20% EtOAc/heksan). Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do temperatury pokojowej i zakwaszono do wartości pH 4, stosując 4N roztwór HCl w dioksanie. Wytrącony NaCl usunięto przez odsączenie (zastosowano eter tert-butylowometylowy do przemywania) i części lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Do pozostałości dodano eter tert-butylowo metylowy (100 ml) i części stałe usunięto przez odsączenie. Zatężenie przesączu pod zmniejszonym ciśnieniem i osuszenie pod zmniejszonym ciśnieniem dało czysty ester metylowy 19f (10,11 g, wydajność 99%).
1H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 5,75 (ddd, J=17,10, 9Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17, 1Hz, 1H), 5,18 (broads, 1H), 5,11 (ddd, J=10, 1,5, 0,5Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 2,14 (q, J=9Hz, 1H), 1,79 (szeroki m, 1H), 1,50 (szeroki m, 1H), 1,46(s, 9H).
P r z y k ł a d 20
Enzymatyczne oddzielanie chlorowodorku estru metylowego kwasu (1R,2S/1S,2R)-1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego
Wytwarzanie estru metylowego kwasu N-Boc-(1R,2S)-1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego 20a:
Racemiczny ester 19f (0,200 g, 0,83 mmola) rozpuszczono w acetonie (3 ml) i dodano wodę (7 ml). Dodano 0,05M roztwór NaOH (1 kropla) w celu doprowadzenia wartości pH roztworu do ~8 i następnie dodano Alcalase® 2.4L (Novo Nordisk Biochem, 0,3 g w jednym ml wody). Mieszaninę mieszano energicznie w temperaturze pokojowej, utrzymując wartość pH roztworu 8, stosując automatyczne urządzenie dozujące. Na początku 4 i 5 dnia mieszania, przy wartości pH 8, dodatkowo dodano roztwór enzymu (2 x 0,3 g). Po łącznie 5 dniach, zużyto ogółem 8,3 ml 0,05M roztworu NaOH. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono EtOAc i wodą, i fazę organiczną oddzielono. Po przemyciu solanką, ekstrakt organiczny osuszono (MgSO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Związek 20a (0,059 g, wydajność 30%) otrzymano w postaci klarownego oleju.
Analiza 1H NMR identyczna jak dla związku 19f; HPLC (Chiralcel ODH, 4,6 x 250 mm, izokratyczny 1% EtOH w heksanie, szybkość przepływu 0,8 ml/minutę): (1R,2S)-2 Rf 19,3 minuty (97%); (1S,2R)-2 Rf 17,0 minut (3%).
PL 204 850 B1
Wytwarzanie chlorowodorku estru metylowego kwasu (1R,2S)-1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego 20b:
Związek 20a (39,96 g, 165,7 mmola) rozpuszczono w dioksanie (25 ml) i roztwór dodano kroplami do mieszanego 4N roztworu HCl w dioksanie (Aldrich, 250 ml). Po 45 minutach analiza TLC wykazała całkowite odbezpieczenie. Części lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość współodparowano dwukrotnie z MeOH (2 x 100 ml). Do brunatnej, oleistej pozostałości dodano eter (300 ml) i MeOH (10 ml) i mieszaninę mieszano przez noc w temperaturze pokojowej, uzyskując w efekcie wytrącenie ciała półstałego. Dodano MeOH (15 ml) i mieszanie prowadzono jeszcze przez 6 godzin i wówczas żółtawe ciało stałe zebrano przez odsączenie. Produkt przemyto 5% MeOH w eterze (50 ml) i eterem (2 x 50 ml) i osuszono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując związek 20b w postaci żółtawego ciała stałego (22,60 g, wydajność 76%). Przesącze (obejmujące popłuczyny) zatężono pod silnie zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując dodatkowo związek 20b w postaci brunatnego oleju (7,82 g, wydajność 26%). Obie frakcje były wystarczająco czyste do zastosowania w syntezie inhibitorów proteazy HCV.
[a]D25 +38,2° (c 1,0, MeOH); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,15 (szeroki s, 3H), 5,65 (ddd, J=17, 10,9Hz, 1H), 5,36 (dd, J=17, 1,5Hz, 1H), 5,19 (dd, J=10, 1,5Hz, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,50 (q, przesłonięty przez sygnał DMSO, J=9Hz, 1H), 1,86 (dd, J=10,6Hz, 1H), 1,64 (dd, J=8, 6Hz, 1H).
P r z y k ł a d 21
Synteza estru metylowego kwasu 1-aminocyklobutylokarboksylowego
Kwas 1,1-aminocyklobutanokarboksylowy wytworzono sposobem opisanym przez Kavina Douglasa; Ramaligam Kondareddiar; Woodard Ronald, Synth. Commun. (1985), 15 (4), 267-72. Sól aminokwasu (21a) (1,00 g, 6,6 mmola) mieszano w suchym metanolu (40 ml) w temperaturze -20°C i mieszaninę nasycono suchym chlorowodorem, uzyskując (21b). Mieszanie tej mieszaniny kontynuowano przez 4 godziny. Gorący roztwór przesączono i przesącz zatężono (wyparka obrotowa, 30°C), uzyskując pozostałość, z której po roztarciu z eterem etylowym uzyskano biały proszek (0,907 g, 83%), po przesączeniu i osuszeniu.
1H NMR (400MHz, D2) δ CH3O (3H, s, 3,97 ppm); CH2 (2H, m, 2,70-2,77 ppm); CH2 (2H, m, 2,45-2,53 ppm) i CH2 (2H, m, 2,14-2,29 ppm).
Tripeptydy
P r z y k ł a d 22
Metody ogólne prowadzenia reakcji sprzęgania na stałym nośniku
Syntezę prowadzono z zastosowaniem równoległego syntezatora, model ACT396 firmy Advanced ChemTech® zaopatrzonego w 96 studzienkową płytkę. Typowo syntetyzowano równolegle 24 peptydy, stosując standardowe techniki prowadzenia reakcji w fazie stałej. Wyjściowy kwas (Fmocamino)cyklopro-pano(ewentualnie podstawiony)karboksylowy na żywicy Wang wytworzono metodą sprzęgania DCC/DMAP (Atherton, E; Scheppard, R.C. Solid Phase Peptide Synthesis, a Practical Approach; IRL Press: Oxford (1989); str. 131-148).
W każdej studzience umieszczono 100 mg wyjściowej żywicy (w przybliżeniu 0,05 mmola). Żywice przemyto kolejno 1,5 ml porcjami NMP (1x) i DMF (3x). Grupę zabezpieczającą Fmoc usunięto przez traktowanie 1,5 ml 25% objętościowo roztworu piperydyny w DMF przez 20 minut. Żywice przemyto 1,5 ml porcjami DMF (4x), MeOH (3x) i DMF (3x). Sprzęganie przeprowadzono w DMF (350 μθ, stosując 400 μl (0,2 mmola) 0,5M roztworu hydratu Fmoc-aminokwas/HOBt w DMF, 400 μl (0,4 mmola) 1M roztworu DIPEA w DMF i 400 μl (0,2 mmola) 0, 5M roztworu TBTU w DMF. Po wytrząsaniu przez 1 godzinę studzienki opróżniono, żywice przemyto 1,5 ml DMF i sprzęganie powtórzono jeszcze raz
PL 204 850 B1 w takich samych warunkach. Następnie żywice przemyto jak opisano powyżej i cykl powtórzono z następnym aminokwasem.
Grupy osłaniające wprowadzano dwoma sposobami:
1. W postaci kwasu karboksylowego, z zastosowaniem protokołu opisanego powyżej (np. kwas octowy) lub,
2. W postaci czynnika acylującego takiego jak bezwodnik lub chlorek kwasowy.
Następujący przykład ilustruje osłanianie z zastosowaniem bezwodnika kwasu bursztynowego: Po odbezpieczeniu Fmoc i późniejszym przemyciu, dodano DMF (350 μθ, a następnie 400 μl każdego z roztworów bezwodnika kwasu bursztynowego w DMF (0,5 M, 0,2 mmola) i DIPEA (1,0 M, 0,4 mmola). Żywice mieszano przez 2 godziny i przeprowadzono ponownie etap sprzęgania. Pod koniec syntezy żywicę przemyto 1,5 ml porcjami DCM (3x), MeOH (3x), DCM (3x) i suszono pod zmniejszonym ciśnieniem przez 2 godziny. Oderwanie od żywicy i odbezpieczenie towarzyszącego łańcucha bocznego prowadzono przez dodanie 1,5 ml mieszaniny TFA, H2O, DTT i TIS (92,5:2,5:2,5:2,5). Po wytrząsaniu przez 2,5 godziny żywicę odsączono i przemyto 1,5 ml DCM. Przesącze połączono i zatę-żono przez odwirowanie pod silnie zmniejszonym ciśnieniem. Każdy związek oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w odwróconym układzie faz, stosując kolumnę C18 (22 mm na 500 mm). Frakcje zawierające produkt identyfikowano metodą spektrometrii masowej MALDI-TOF, połączono i liofilizowano.
P r z y k ł a d 23
Metody ogólne reakcji sprzęgania w roztworze {patrz także R. Knorr i in., Tetrahedron Letters, (1989), 30,1927}.
Reagenty, tj. wolną aminę (1 równoważnik) (albo jej chlorowodorek) i wolny kwas karboksylowy (1 równoważnik) rozpuszczono w CH2CI2, CH3CN lub DMF. W atmosferze azotu do mieszanego roztworu dodano cztery równoważniki N-metylomorfoliny i 1,05 równoważnika środka sprzęgającego. Po 20 minutach dodano jeden równoważnik drugiego reagenta, tj. wolnego kwasu karboksylowego. (Praktycznymi i efektywnymi reagentami sprzęgającymi do tego celu są heksafluorofosforan (benzotriazol-1-ilooksy)tris-(dimetyloamino)fosfoniowy (HOBT) lub korzystnie tetrafluoroboran 2-(1H-benzotriazol-1-ylo)-N,N,N',N'-tetrametylouroniowy (TBTU) lub tetrafluoroboran O-(7-azabenzo-triazol1-ilo)-N,N,N',N'-tetrametylouroniowy (HATU). Przebieg reakcji monitorowano metodą TLC. Po zakończeniu reakcji, rozpuszczalnik odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozpuszczono w EtOAc. Roztwór przemyto kolejno 10% wodnym roztworem kwasu cytrynowego, nasyconym wodnym roztworem NaHCO3 i solanką. Fazę organiczną osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Jeżeli pozostałość oczyszczano, to stosowano metodę szybkiej chromatografii zdefiniowaną powyżej.
P r z y k ł a d 24
Synteza związku 304
związek 304
PL 204 850 B1
a) Izomer (R,R) Boc-Et-Acca-Ome-13c (0,12 g, 0,49 mmola) otrzymany z enzymatycznego rozdzielania (przykład 13) potraktowano 4N roztworem HCl/dioksan (45 min), po czym zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując białe ciało stałe. Do tego chlorowodorku (około 0,49 mmola) dodano TBTU (0,17 g, 0,54 mmola), Boc-4(R)-(8-chinolino-metyloksy)prolinę 5 (według przykładu 5) (0,18 g, 0,49 mmola) i DIPEA (0,3 ml, 1,7 mmola) w MeCN (10 ml). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 3,5 godziny, po czym zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Uzyskaną substancję rozpuszczono w EtOAc i przemyto kolejno nasyconym, wodnym roztworem NaHCO3 i solanką. Osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono, uzyskując związek 24b w postaci białego ciała stałego (0,122 g, 50%).
b) Związek 24b (0,12 g, 0,25 mmola) traktowano w temperaturze pokojowej 4N roztworem HCl/dioksan (30 minut), po czym zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Uzyskany chlorowodorek (około 0,25 mmola) potraktowano Boc-Chg-OH>H2O (75 mg, 0,27 mmola), TBTU (87 mg, 0,27 mmola) w MeCN (10 ml) i na koniec DIPEA (0,15 ml, 0,87 mmola) w temperaturze 0°C. Pozostałość rozcieńczono EtOAc, przemyto kolejno nasyconym, wodnym roztworem NaHCO3 i solanką, osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono, uzyskując związek 24c w postaci białawego ciała stałego (0,2 g). Tę substancję (0,14 g) rozpuszczono w DMSO i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując związek 24c w postaci białego ciała stałego, po liofilizacji (35 mg, 33%).
HPLC (98%); MS (FAB) m/z: 637,3 (MH+); HRMS obliczono dla C35H48N4O7 (MH+) 637,36011: znaleziono 637,36250; 1H-NMR (DMSO-d6) wykazała obecność rotamerów, 8 8,91(2xd, J=4,1 i 4,1Hz, 1H), 8,40-8,36 (m, 2H), 7,90 (d, J=7,6Hz, 1H), 7,77 (d, J=7,0Hz, 1H), 7,6-7,54 (m, 2H), 6,80 (d, J=8,6Hz, 1H), 5,18 i 5,16 (2xs, 2H), 4,40 (bs, 1H), 4,31 (t, J=8,3Hz, 1H), 4,12 (d, J=11,44Hz, 1H), 4,03 (t, J=7,9Hz, 1H), 3,78-3,72 (m, 1H), 3,56 (s, 3H), 2,35-2,27 (m, 1H), 2,06-1,97 (m, 1H), 1,71-1,55 (m, 10H), 1,53-1,38 (m, 2H), 1,26 (s, 9H), 1,18-1,06 (m, 2H), 1,02-0,93 (m, 2H), 0,89 (t, J=7,3Hz, 3H).
Związek 304:
c) Do związku 24c (30 mg, około 0,047 mmola) dodano MeOH (1 ml), THF (1 ml), i monohydrat wodorotlenku litu (12 mg, 0,29 mmola) w H2O (1 ml), Klarowny roztwór mieszano szybko przez 48 godzin po czym zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy peptyd rozpuszczono w DMSO i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując związek 304 w postaci białego ciała stałego, po liofilizacji (21 mg, 72%).
HPLC (99%); MS (FAB) m/z: (MH+) 623,3; HRMS obliczono dla C34H45N4O7 (MH+) 623,34448, znaleziono: 623,34630, 1H NMR (DMSO-d6) wykazała obecność rotamerów w stosunku 1:1, δ 8,90 (2xd, J=4,1Hz, 1H), 8,37 (d, J=8,3Hz, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,89 (d, J=8,3Hz, 1H), 7,77 (d, J=6,7Hz, 1H), 7,6-7,53 (m, 2H), 6,88 i 6,79 (2xd, J=8,6 i 7, 9Hz, 1H), 5,17 i 5,16 (2xs, 2H), 4,43-4,35 (bs, 1H), 4,29 (t, J=8,3Hz, 1H), 3,82-3,71 (m, 1H), 2,35-2,27 (m, 1H), 2,06-1,97 (m, 1H), 1,72-1,53 (m, 10H), 1,52-1,44 (m, 2H), 1,37 i 1,29 (2xs, 9H), 1,18-1,05 (m, 3H), 1,0-0,94 (m,1H), 0,91 (t, J=7,3Hz, 3H).
P r z y k ł a d 25
Synteza związku 301
PL 204 850 B1
a) Związek 25a (=12a) (282 mg, 1,23 mmola) zawieszono w bezwodnym CH3CN (6 ml). Kolejno dodano DBU (221 pl, 1,48 mmola) i bromek benzylu (161 pl, 1,35 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc w temperaturze pokojowej. Mieszaninę zatężono, uzyskany olej rozcieńczono EtOAc i 10% wodnym roztworem kwasu cytrynowego i kolejno przemyto 10% kwasem cytrynowym (2x), nasyconym wodnym roztworem NaHCO3 (2x), wodą (2x) i solanką (1x). Warstwę EtOAc osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono do suchej masy. Surowy bezbarwny olej oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (eluent - heksan:EtOAc; 95:5 do 90:10), uzyskując benzylowany produkt 25b w postaci bezbarwnego oleju (368 mg; 93%).
MS (FAB) 318,2 MH+ 320,2 MH+ 342,2 (M+Na)+; 1H NMR (CDCl3) δ 7,37-7,28 (m, 5H), 5,22-5,10 (m, 1H), 5,19 (d, J=12Hz, 1H), 5,16 (d, J=12Hz, 1H), 1, 60-1,40 (m, 4H), 1,39 (s, 9H), 1,31-1,22 (m, 1H), 0,91 (t, J=7,5, 14,5Hz, 3H).
b) Związek 25b (368 mg, 1,15 mmola) potraktowano 4N roztworem HCl/dioksan (6 ml) tak, jak to opisano uprzednio. Surowy chlorowodorek sprzężono ze związkiem 4 (według przykładu 4) (470,8 mg, 1,27 mmola) z NMM (507 pl/ 4,61 mmola) i HATU (zamiast TBTU, 52 5,6 mg, 1,3 8 mmola) w CH2CI2 (6 ml), zgodnie z opisem według przykładu 22, uzyskując surowy racemiczny di-peptyd w postaci pomarańczowego oleju. Surową substancję oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (eluent - heksan:Et2O; 50:50), uzyskując czysty dipeptyd 25c (mniej polarna plamka elucyjna) w postaci białej pianki (223mg; 68% wydajności teoretycznej).
MS 571,4 MH+ 573,3 MH+ 595,3 (M+Na)+; 1H NMR (CDCI3), mieszanina rotamerów około 1:1, δ 8,03 (bd, J=8Hz, 1H), 7,86 (bd, J= 7,5Hz, 1H), 7,82 (bd, J=6,5Hz, 1H), 7,61 (bs, 0,5H), 7,57-7,40 (m, 4H), 7,317,21 (m, 5H), 6,48 (bs, 0,5H), 5,22-5,11 (m, 1H), 5,08-4,81 (m, 3H), 4,41-3,74 (m, 3H), 3,49-3,18 (m, 1H), 2,76-1,90 (m, 2H), 1,69-1,48 (m, 3H), 1,40 (s, 9H), 1,40-1,23 (m, 2H), 0,92 (t, J=7,5, 15Hz, 3H).
c) Dipeptyd 25c (170,1 mg, 0,297 mmola) potraktowano 4N roztworem HCl/dioksan (2 ml) tak, jak to opisano uprzednio. Surowy chlorowodorek sprzężono z Boc-Chg-OH (84,1 mg, 0,327 mmola) z NMM (130,7 pl/ 1/19 mmola) i HATU (zamiast TBTU, 135,5 mg; 0,356 mmola) w CH2CI2 (2 ml) przez 2,75 godziny, w temperaturze pokojowej, następnie poddano obróbce tak, jak to opisano uprzednio, uzyskując surowy tripeptyd 25d w postaci pianki o barwie kości słoniowej (około 211,4 mg; 100%).
MS (FAB) 712,5 MH+.
Związek 301:
d) Surowy tripeptyd 25d (około 15,4 mg, 0,022 mmola) rozpuszczono w absolutnym etanolu (2 ml) i dodano przybliżone ilości (końcówka szpatułki) zarówno katalizatora 10% Pd/C, jak i octanu amonu. Mieszaninę uwodorniano przez noc stosując gazowy wodór z balonu, w temperaturze pokojowej i pod ciśnieniem atmosferycznym. Mieszaninę reakcyjną przesączono poprzez filtr 0,45 pm Millex®, zatężono do suchej masy następnie rozcieńczono EtOAc i 10% wodnym roztworem kwasu cytrynowego i przemyto ponownie 10% wodnym roztworem kwasu cytrynowego (1x), wodą (2x) i solanką (1x). Warstwę organiczną osuszono (MgSO44), przesączono, zatężono do suchej masy i liofilizowano, uzyskując tripeptyd 301 w postaci białego bezpostaciowego ciała stałego (11,0 mg; 82%).
MS (FAB) 622,5 MH+ 644,5 (M+Na)+; 1H NMR (DMSO), mieszanina rotamerów około 1:4, δ 8,54 & 8,27 (s, 1H), 8,06-7,99 (m, 1H), 7,96-7,91 (m, 1H), 7,87 (d, J=8Hz, 1H), 7,57-7,42 (m, 4H), 6,81 (d, J=8Hz, 1H), 4,99 (d, J=12Hz, 1H), 4,88 (d, J=12Hz, 1H), 4,46-4,19 (m, 2H), 4,17-4,02 (m, 2H), 3,88-3,67 (m, 1H), 2,28-2,19 (m, 1H), 2,05-1,93 (m, 1H), 1,73-1,43 (m, 8H), 1,32-1,07 (m, 6H), 1,28 (s, 9H), 1,03-0,85 (m, 2H), 0,91 (t, J=7,5, 15Hz, 3H).
PL 204 850 B1
P r z y k ł a d 26
Synteza związku 306
a) Kwas 26a (180 mg, 0, 500 mmola) i aminę 15d (96 mg, 0,500 mmola) sprzęgano stosując TBTU (192 mg, 0,600 mmola) i DIPEA (226 mg, 1,75 mmola) w CH2Cl2 (10 ml) przez 20 godzin. Mieszaninę reakcyjną zatężono, pozostałość rozpuszczono w octanie etylu, przemyto dwukrotnie nasyconym roztworem NaHCO3 i jednokrotnie solanką. Warstwę organiczną osuszono MgSO4, przesączono i zatężono, uzyskując zwią zek 26c w postaci brunatnego oleju, który uż yto bez oczyszczania w następnym etapie.
b, c) Surowy związek 26c (około 0,500 mmola) mieszano przez 30 minut w 4N roztworze HCl/dioksan (4 ml) i zatężono do suchej masy. Ciało stałe rozpuszczono w CH2CI2 (10 ml) i dodano DIPEA (226 mg, 1,75 mmola), a następnie monohydrat Boc-Chg-OH (138 mg, 0,500 mmola) i TBTU (192 mg, 0,600 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 5 godzin. Mieszaninę reakcyjną zatężono, rozpuszczono w octanie etylu, przemyto dwukrotnie nasyconym roztworem NaHCO3 i jednokrotnie solanką. Warstwę organiczną osuszono MgSO4, przesączono i zatężono, uzyskując brunatny olej, który oczyszczono metodą szybkiej chromatografii, uzyskując związek 26d w postaci żółtego oleju, 204 mg, 64% dla dwu sprzężeń.
1H NMR (CDCI3) δ 8,77-8,74 (m, 1H), 8,14 (d, J=8Hz, 1H), 8,02 (d, J=9Hz, 1H), 7,69 (dd, J=9, 7Hz, 1H), 7,52 (d, J=5Hz, 1H), 7,47 (dd, J=8, 7Hz, 1H), 6,78 (d, J=5Hz, 1H), 5,80-5,70 (m, 1H), 5,35-5,27 (m, 2H), 5,14-5,07 (m, 2H), 4,89-4,83 (m, 1H), 4,39-4,32 (m, 1H), 4,30-4,24 (m, 1H), 4,20-4,07 (m, 2H), 4,00-3,92 (m, 1H), 3,04-2,92 (m, 1H), 2,39-2,29 (m, 1H), 2,16-2,04 (m, 1H), 1,91-1,83 (m, 1H), 1,82-1,62 (m, 7H), 1,45-1,35 (m, 9H), 1,27-1,07 (m, 8H).
d) Związek 26d (136 mg, 0,214 mmola) rozpuszczono w THF (4 ml) i MeOH (2 ml). Dodano roztwór wodny (2 ml) hydratu LiOH (72 mg, 1,72 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 20 godzin. Roztwór zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując związek 306 (mniej polarny izomer) w postaci białego ciała stałego (25 mg).
PL 204 850 B1
Związek 306: MS (FAB) 607, 4 (MH+); 1H NMR (DMSO-d6) δ 9,16 (d, J=6Hz, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,35 (d, J=8Hz, 1H), 8,12 (d, J=9Hz, 1H), 8,05 (dd, J=8, 7Hz, 1H), 7,76 (dd, J=8, 7Hz, 1H), 7,59 (d, J=6Hz, 1H), 7,02 (d, J=8Hz, 1H), 5,75-5,66 (m, 2H), 5,19 (d, J=18Hz, 1H), 5,07 (d, J=10Hz, 1H), 4,55 (d, J=12Hz, 1H), 4,43 (dd, J=10, 8Hz, 1H), 4,03 (d, J=10Hz, 1H), 3,87-3,83 (m, 1H), 2,66-2,59 (m, 1H), 2,36-2,30 (m, 1H), 1,98 (dd, J=18, 9Hz, 1H), 1,75-1,56 (m, 8H), 1,38-1,35 (m, 1H), 1,25-1,22 (m, 1H), 1,09 (s, 9H), 1,12-0,95 (m, 3H).
P r z y k ł a d 27
Synteza związku 307
związek 307
c) Roztwór kwasu (8) według przykładu 8 (505 mg, 105 mmoli) w 5 ml dichlorometanu potraktowano TBTU (37 6 mg, 1,17 mmola). Do poprzedniego roztworu aktywowanego estru dodano
PL 204 850 B1 chlorowodorek (R,S) AccaOEt winylu (18) (według Przykładu 18) (279 mg, 1,46 mmola), w 7 ml dichlorometanu, zawierającego (0,60 ml, 5,46 mmola) N-metylomorfoliny. Uzyskany roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Rozpuszczalnik odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozcieńczono octanem etylu, przemyto dwukrotnie nasyconym roztworem wodorowęglanu sodu i jednokrotnie solanką. Warstwę organiczną osuszono (MgSO4) przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość poddano chromatografii na żelu krzemionkowym (60:40 objętościowo, heksany-octan etylu), uzyskując 173 mg (27%) dipeptydu 27c.
d, e) Roztwór dipeptydu 27c (70 mg, 0,114 mmola) w 3 ml 4,OM roztworu chlorowodoru w 1,4-dioksanie mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę (osad wytrącił się z mieszaniny reakcyjnej po 10 minutach). Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Chlorowodorek aminy 27d (0,114 mmola), rozcieńczono 1,5 ml acetonitrylu, zobojętniono przez dodanie 65 pl (0,591 mmola) N-metylomorfoliny. Roztwór Boc ChgOH^H2O (39 mg, 0,142 mmola) w 1,5 ml acetonitrylu potraktowano TBTU (46 mg, 0,143 mmola) i następnie dodano do poprzedniego roztworu aminy. Uzyskany roztwór mieszano w temperaturze pokojowej (przez 2 dni). Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozcieńczono octanem etylu, przemyto dwukrotnie nasyconym roztworem wodorowęglanu sodu i jednokrotnie solanką. Warstwę organiczną osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Otrzymano 86 mg (100%) tripeptydu 27e. Ten surowy związek użyto w następnej reakcji bez dalszego oczyszczania.
f) Do roztworu tripeptydu 27e (86 mg, 0,114 mmola) w 5 ml mieszaniny THF:H2O (2,5:1) dodano monohydrat wodorotlenku litu (22 mg, 0,524 mmola). Dodatkowo dodano 0,25 ml MeOH w celu uzyskania homogenicznego roztworu. Uzyskany roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc przed odparowaniem rozpuszczalnika pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość podzielono pomiędzy wodę i EtOAc. Warstwę wodną zakwaszono 1M HCl i następnie ekstrahowano dwukrotnie octanem etylu. Obezność pożądanego związku stwierdzono w roztworze octanu etylu z pierwszej ekstrakcji w warunkach zasadowych. Tę warstwę organiczną osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując 69 mg surowego kwasu, który oczyszczono metodą preparatywnej HPLC. Związek rozpuszczono w MeOH (4 ml) i wstrzyknięto do zrównważonej kolumny w odwróconym układzie faz Whatman Partisil 10-ODS-3 (2,2 x 50cm), C18. (A=230 nm, rozpuszczalnik A=0,06% TFA/H2O, rozpuszczalnik B=0,06% TFA/CH3CN). Program oczyszczania: 20% do 70% rozpuszczalnika B w czasie 60 minut. Frakcje zanalizowano metodą analitycznej HPLC. Odpowiednie frakcje zebrano i liofilizowano, uzyskując 50 mg (60%) pożądanego tripeptydu 307, w postaci białego bezpostaciowego ciała stałego.
Związek 307: 1H NMR (DMSO-d6) mieszanina rotamerów w stosunku ~2:8 δ 8,86 (d, J=2,5Hz, 1H), 8,85 (s, 0,2H), 8,64 (s, 0,8H), 8,49 (dd, J=9,5, 3Hz, 0,2H), 8,45 (dd, J=9,2Hz, 0,8H), 8,39-8,33 (m, 2H), 8,20 (d, J=9,5Hz, 0,2H), 8,18 (d, J=9,5Hz, 0,8H), 7,81 (s, 0,2H), 7,78 (s, 0,8H), 7,64-7,56 (m, 3H), 6,87 (d, J=8Hz, 0,8H), 6,36 (d, J=9Hz, 0,2H), 5,82-5,67 (m, 2H), 5,27-5,17 (m, 1H), 5,09-5,03 (m, 1H), 4,73 (t, J=8Hz, 0,2H), 4,55 (dd, J=10, 7,5Hz, 0,8H), 4,49-4,40 (m, 1H), 4,00-3,95 (m, 1H), 3,83-3,76 (m, 1H), 2,87-2,80 (m, 0,2H), 2,69-2,62 (m, 0,8H), 2,39-2,26 (m, 1H), 2,08-2,00 (m, 1H), 1,75-1,41 (m,7H), 1,37 (s, 1,8H), 1,32-1,27 (m, 1H), 1, 17-0,82 (m, 5H), 0,94 (s, 7,2H).
P r z y k ł a d 28
Synteza związku 311
Cl
N
związek 311
PL 204 850 B1
Związek 311 wytworzono zgodnie z opisem według przykładu 24, lecz stosując odpowiednie jednostki budulcowe.
Związek 311 1H NMR (DMSO-d6) δ 8,98 (d, J=6Hz, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,24 (d, J=9Hz, 1H), 8,08 (d, J=2Hz, 1H), 7,63 (d, J=9Hz, 1H), 7,37 (d, J=6Hz, 1H), 6,98 (d, J=8Hz, 1H), 5,75-5,66 (m, 1H), 5,57 (br s, 1H), 5,24-5, 19 (m, 1H), 5,08-5,01 (m, 1H), 4, 57-4, 40 (m, 2H), 4, 00-3, 96 (m, 1H), 3,82 (dd, J=9, 8Hz, 1H), 2,59-2,54 (m, 1H), 2,32-2,26 (m, 1H), 1,99 (dd, J=17, 9Hz, 1H), 1,74-1,55 (m, 8H), 1,37 (s, 1H), 1,26-1,22 (m, 1H), 1,14-1,08 (m, 9H), 1,02-0,91 (m, 3H).
P r z y k ł a d 29
Synteza związku 302
Związek 302 wytworzono zgodnie z opisem według przykładu 27, lecz stosując odpowiednie jednostki budulcowe.
1H NMR (DMSO-d6) δ 8,34 (s, 1H), 8,04-8,01 (m, 1H), 7,94-7,92 (m, 1H), 7,87 (d, J=8Hz, 1H), 7,54-7,50 (m, 3H), 7,45 (dd, J=17, 8Hz, 1H), 7,22 (d, J=8Hz, 1H), 4,94 (dd, J=55, 12Hz, 2H), 4,34 (s, 1H), 4,27 (dd, J=8, 8Hz, 1H), 4,16 (d, J=11Hz, 1H), 4,07 (dd, J=8, 8Hz, 1H), 3,72-3,65 (m, 2H), 3,59-3,54 (m, 1H), 2,24-2,18 (m, 1H), 2,02-1,95 (m, 2H), 1,75-1,70 (m, 1H), 1, 53-1,44 (m, 2H), 1,32-1,27 (m, 1H), 1,21-1,17 (m, 1H), 0,96-0,85 (m, 10H), 0,80-0,77 (m, 5H), 0,62-0,57 (m, 1H).
P r z y k ł a d 30
Synteza związku 308
Związek 308 wytworzono zgodnie z opisem według przykładu 27, lecz stosując odpowiednie jednostki budulcowe.
1H NMR (DMSO-d6) mieszanina rotamerów w stosunku = 2:8 δ 8,77 (s, 0,2H), 8,45 (s, 0,8H), 8,13 (d, J=8,5Hz, 0,8H), 8,03 (d, J=8,5Hz, 0,2H), 7,89-7,83 (m, 1H), 7,55-7,37 (m, 4H), 7,05-6,59 (m, 1H), 6,95 (d, J=8Hz, 0,8H), 6,26 (d, J=8,5Hz, 0,2H), 5,81-5,64 (m, 1H), 5,33-5,28 (m, 1H), 5,26-5,15 (m, 1H), 5,08-5,02 (m, 1H), 4,60 (t, J=7,5Hz, 0,2H), 4,38-4,27 (m, 1,8H), 4,09-3,91 (m, 1,8H), 3,74 (dd, J=12,5, 4Hz, 0,2H), 2,69-2,60 (m, 0,2H), 2,50-2,40 (m, 1H), 2,36-2,28 (m, 0,2H), 2,23-2,14 (m, 0,8H), 2,05-1,97(m, 0,8H), 1,76-1,44 (m,7H), 1,37 (s, 1,8H), 1,29 (s, 7,2H), 1,28-1,20 (m, 1H), 1,16-0,88 (m, 5H).
PL 204 850 B1
P r z y k ł a d 31 Synteza związku 309
Związek 309 wytworzono zgodnie z opisem według przykładu 27, lecz stosując odpowiednie jednostki budulcowe.
1H NMR (DMSO-d6) mieszanina rotamerów w stosunku = 2:8 δ 8, 75 (s, 0,2H), 8,50 (s, 0,8H), 7,89-7,78 (m, 3H), 7,50-7,44 (m, 1H), 7,42-7,32(m, 2H), 7,17-7,09 (m, 0,8H), 7,08-7,03 (m, 0,2H), 6,79 (d, J=8,5Hz, 0,8H), 6,33 (d, J=9Hz, 0,2H), 5,81-5,65 (m, 1H), 5,30-5,16 (m, 2H), 5,10-5,02 (m, 1H), 4,56 (t, J=7,5Hz, 0,2H), 4,33 (t, J=8Hz, 0,8H), 4,10-3,90 (m, 2,8H), 3,74-3,68 (m, 0,2H), 2,45-2,37 (m, 1H), 2,34-2,17 (m, 1H), 2,05-1,97 (m, 1H), 1,76-1,48 (m, 7H), 1,37 (s, 1,8H), 1,23 (s, 7,2H), 1,21-0,88 (m, 6H).
P r z y k ł a d 32
Synteza związku 305
305
Związek 305 wytworzono zgodnie z opisem według przykładu 27, lecz stosując odpowiednie jednostki budulcowe.
1H NMR (DMSO-d6) mieszanina rotamerów (1:9) δ 8,68 (s, 0,1H), 8,43 (s, 0,9H), 8,04-8,00 (m, 1H), 7,95-7,91 (m, 1H), 7,87 (d, J=8,5Hz, 1H), 7,57-7,49 (m, 3H), 7,47-7,42 (m, 1H), 6,82 (d, J=8,5Hz, 0,9H), 6,21 (d, J=8,5Hz, 0,1H), 5,80-5,64 (m, 1H), 5,21 (dd, J=17, 2Hz, 0,1H), 5,18 (dd, J=17, 2Hz, 0,9H), 5,06 (dd, J=10,5, 2Hz, 1H), 5,02-4,85 (m, 2H), 4,43 (t, J=7,5Hz, 0,1H), 4,34 (br s, 1H), 4,23 (t, J=8,5Hz, 0,9H), 4,16-4,05 (m, 1,8H), 3,89-3,82 (m, 0,2H), 3,74 (dd, J=11, 3,5Hz, 0,9H), 3,53 (dd, J=12,5, 4Hz, 0,1H), 2,30-2,21 (m, 1H), 2,02-1,94(m, 2H), 1,74-1,38 (m, 7H), 1,36 (s, 0,9H), 1,28 (s, 8,1H), 1,25-0, 87 (m, 6H).
P r z y k ł a d 33
Synteza związku 303
PL 204 850 B1
303
Związek 303 wytworzono zgodnie z opisem według przykładu 27, lecz stosując odpowiednie jednostki budulcowe.
1H NMR (DMSO-d6) δ 8,29 (s, 1H), 8,04-8,01 (m, 1H), 7,94-7,92 (m, 1H), 7,87 (d, J=8Hz, 1H), 7,56-7,52 (m, 3H), 7,46 (dd, J=8, 7Hz, 1H), 7,19 (d, J=9Hz, 1H), 5,01 (d, J=12Hz, 1H), 4,86 (d, J=12Hz, 1H), 4,34 (br, s, 1H), 4,24 (t, J=8Hz, 1H), 4,18-4,09 (m, 2H), 3,74-3,53 (m, 3H), 2,24-2,18 (m, 1H), 2,04-1,95 (m, 1H), 1,74-1,45 (m, 10H), 1,31-1,13 (m, 4H), 0,96-0,86 (m, 7H), 0,79-0,76 (m, 5H).
P r z y k ł a d 34
Synteza związku 403
a) Sprzęganie związku P2 ze związkiem P1
Pochodną estru metylowego związku 7 (34a) (170 mg, 0,355 mmola) mieszano w 50% mieszaninie THF-metanol (4 ml) i wodnym roztworze LiOH (1M, 1 ml), w temperaturze pokojowej, przez 1 godzinę. Roztwór zatężono (Wyparka obrotowa, 30°C) i pozostałość zakwaszono do wartości pH 6 i roztwór liofilizowano. Uzyskany proszek mieszano w suchym DMF (3 ml) w obecności DIEA (0,4 ml), a następnie ponownie dodano chlorowodorek estru metylowego kwasu 1,1-aminocyklobutylokarboksylowego (34b) (140 mg, 0,845 mmola) i TBTU (134 mg, 0,417 mmola). Po wymieszaniu przez 18 godzin w temperaturze pokojowej, mieszaninę oczyszczono metodą szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym (sito 230-400) stosując mieszaninę octan etylu-heksan o proporcji 1:2, uzyskując pomarańczowy olej (98 mg, czystość 90% określona metodą HPLC).
PL 204 850 B1
b) Sprzęganie związku P1-P2 ze związkiem P3
Dipeptyd 34b (97 mg, 90%, 0,155 mmola) mieszano w 4N roztworze HCl-dioksan (5 ml) w czasie 1 godziny, w temperaturze pokojowej. Następnie roztwór zatężono do suchej masy (Wyparka obrotowa, silnie zmniejszone ciśnienie), uzyskując beżowe ciał stałe. Tę substancję mieszano w suchym DMF (2 ml), w temperaturze pokojowej, w obecności DIEA (0,4 ml), a następnie dodano L-Boc-Tbg (80 mg, 0,35 mmola) i TBTU (112 mg, 0,35 mmola). Po wymieszaniu przez 2 dni w temperaturze pokojowej roztwór wylano do octanu etylu w celu wytworzenia wolnej zasady, stosując 5% wodny roztwór węglanu potasu. Fazę organiczną poddano obróbce, uzyskując żółtą oleistą pozostałość. Tę substancję oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym (sito 230-400), stosując mieszaniny octan etylu:heksan o proporcji 1:2 i 3:1 objętościowo, uzyskując 40 mg oleju, homogenicznego według HPLC.
Na koniec ester metylowy (40 mg) zmydlono w IN roztworze wodorotlenku potasu (2 ml) w metanolu (4 ml), mieszając w temperaturze pokojowej przez 3 godziny. Mieszaninę zatężono (Wyparka obrotowa, 30°C) i zakwaszono do wartości pH 4 stosując 2N roztwór kwasu chlorowodorowego. Tę mieszaninę oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w kolumnie C18, stosując gradient 0-50% wodnego acetonitrylu (0,1% TFA), przy długości fali 220 nm. Frakcje zebrano, zatężono do połowy objętości i liofilizowano, uzyskując związek 403 w postaci białego puszystego ciała stałego (10 mg).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ mieszanina rotamerów: NH+ (1H, s, 8,6 ppm), CH (3H, m, 8,2 ppm), Ph (5H, szeroki s, 7,66 i 7,53 ppm), CH (1H, szeroki, 7,22ppm), NH (1H, d, J=7,6Hz, 6,71 ppm), CHO (1H, szeroki s, 5,76 ppm), CH (2H, m, 4,58-4,49 ppm), CH (1H, m, 4,04 ppm), CH2O (3H, s, 3,97 ppm), CH (1H, d, 3,86 ppm), CH (7H, bardzo szeroki, 1,8-2,6 ppm), grupa Boc (9H, s, 1,25 ppm) i grupa t-butylowa (9H, s, 0,97 ppm); MS wykazała M+H + przy m/e 675 (100%); pik HPLC 98% w 18,9 minuty.
P r z y k ł a d 35
Synteza związku 333 (tablica 3)
Roztwór m-anizydyny (35a) (9,15 ml, 81,4 mmola) i dikarboksylan dimetyloacetylenu (35b) (10,0 ml, 81,3 mmola) w 160 ml metanolu ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 2 godziny. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (heksany-octan etylu 90:10). Związek 35c (17,0 g, wydajność 79%) otrzymano w postaci pomarańczowego oleju.
1H NMR (CDCb) δ 9,62 (szeroki s, 1H), 7,17 (dd, J=7 i 8,5Hz, 1H), 6,66-6,62 (m, 1H), 6,49-6,45 (m, 2H), 5,38 (s, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,71 (s, 3H).
PL 204 850 B1
HO (35c) (35d)
Eter difenylowy (50 ml) ogrzewano w łaźni piaskowej do temperatury wewnętrznej =250°C. Addukt diestru (35c) (7,5 g, 2 8,3 mmola) rozpuszczony w 5 ml eteru difenylowego, dodano w czasie 2 minut do wrzącego rozpuszczalnika. Ogrzewanie utrzymywano przez 5 minut i następnie mieszaninę reakcyjną pozostawiono do ochłodzenia do temperatury pokojowej. Beżowe ciało stałe szybko wytrąciło się. Ciało stałe odsączono i następnie roztarto z metanolem, uzyskując 4,1 g (wydajność 62%) pożądanego związku 35d.
1H NMR (DMSO-d6) δ 7,97 (d, j=9Hz, 1H), 7,40 (d, J=2Hz, 1H), 6,96 (dd, J=9 i 2Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,84 (s, 3H).
Roztwór pochodnej cis-4-hydroksy-1-proliny (35e) (1,71 g, 5,33 mmola), pochodnej 4-hydroksychinoliny (35f) (1,25 g, 5,36 mmola) i trifenylofosfiny (2,80 g, 10,68 mmola) w 75 ml THF ochłodzono do temperatury 0°C przez dodawanie kroplami (» 1 godzinę) DEAD (1,70 ml, 10,80 mmola). Następnie mieszaninę reakcyjną pozostawiono do powolnego ogrzania do temperatury pokojowej i mieszanie kontynuowano przez noc. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (70:30 octan etylu-heksany). Związek 35 g (0,7 g czystego związku 35 g i 1,8 g związku 35 g zanieczyszczonego »50% tlenku trifenylofosforanu) otrzymano w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (CDCI3) mieszanina rotamerów (4:6) δ 8,04 (d, J=9Hz, 1H), 7,54 (d, J=2,5Hz, 1H), 7,40-7,32 (m, 6H), 7,23 (dd, J=9 i 2,5Hz, 1H), 5,33-5,13 (m, 3H), 4,66 (t, J=7,5Hz, 0,4H), 4,54 (t, J=8Hz, 0,6H), 4,07(s, 3H), 3,94 (s, 3H), 4,04=3,80 (m, 2H), 2,78-2,65 (m, 1H), 2,47-2,34 (m, 1H), 1,45 (s, 3,6H), 1,37 (s, 5,4H).
(35g) (35h)
PL 204 850 B1
Do pochodnej estru benzylowego proliny (35g) (0,70 g, 1,31 mmola) w roztworze, w mieszaninie metanol-octan etylu (10 ml-10 ml) dodano 100 mg 10% Pd/C. Uzyskaną zawiesinę mieszano w temperaturze pokojowej w atmosferze wodoru przez 1 ½ godziny. Nastę pnie katalizator odsą czono stosując Millex-HV Millipore (filtr 0,45 pm) i rozpuszczalniki odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Otrzymano pożądany kwas 35 h (0,59 g) z ilościową wydajnością.
1H NMR (CDCI3) mieszanina rotamerów 70:30 δ 8,06 (d, J=9,5Hz, 0,3H), 8,01 (d, J=9Hz, 0,7H), 7,56 (d, J=2Hz, 1H), 7,44 (szeroki s, 0,7H), 7,41 (szeroki s, 0,3H), 7,24 (dd, J=9 i 2,5Hz, 1H), 5,31-5,25 (m, 1H), 4,67 (t, J=7,5Hz, 0,7H), 4,55 (t, J=7,5Hz, 0,3H), 4,08 (s, 3H), 3,95 (s, 3H), 4,04-3,80 (m, 2H), 2,83-2,72 (m, 1H), 2,71-2,47 (m, 1H), 1,46 (s, 9H).
Sól aminy 35i (215 mg, 1,21 mmola) w 7 ml acetonitrylu potraktowano 0,95 ml DIEA (5,45 mmola). Następnie ten roztwór dodano do roztworu kwasu 35 h (590 mg, 1,32 mmola) i TBTU (389 mg, 1,21 mmola) w 5 ml CH3CN i uzyskany roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość rozcieńczono octanem etylu i przemyto dwukrotnie nasyconym roztworem wodorowęglanu sodu, jednokrotnie solanką i osuszono nad MgSO4. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (AcOEt-heksany o proporcji 75:25), uzyskując 527 mg (wydajność 70%) pożądanego dipeptydu (35j).
1H NMR (CDCI3) δ 8,01 (d, J=9Hz, 1H), 7,55 (d, J=2,5Hz, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,22 (dd, J=9 i 2, 5Hz, 1H), 5,81-5,71 (m, 1H), 5,36-5,28 (m, 2H), 5,18-5,12 (m, 1H), 4,61-4,45 (m, 1H), 4,07 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 3,91-3,74 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,99-2,84 (m, 1H), 2,49-2,34 (m, 1H), 2,20-2,08 (m, 1H), 1,97-1,84 (m, 1H), 1,58-1,52 (m, 1H), 1,44 (s,9H).
(35j) <35k)
Diester 35j (716 mg, 1,25 mmola) w roztworze, w mieszaninie THF:MeoH (1,5 ml-1,5 ml) ochłodzono do temperatury 0°C przed potraktowaniem 1M roztworem wodnym NaOH (1,25 ml, 1,25 mmola). Po 1 godzinie mieszania w temperaturze 0°C, dodano 3 krople lodowatego kwasu octowego, w celu zobojętnienia NaOH. Rozpuszczalniki usunięto pod zmniejszonym ciś nieniem i związek suszono z zastosowaniem pompy przez kilka godzin.
PL 204 850 B1
Roztwór soli sodowej kwasu 3 5k (1,25 mmola) i Et3N (0,19 ml, 1,36 mmola) w 8 ml THF ochłodzono do temperatury 0°C i dodano chloromrówczan izobutylu (0,18 ml, 1,39 mmola). Po 40 minutach dodano diazometan (9 ml, 6,30 mmola) i uzyskany roztwór mieszano w temperaturze 0°C przez 30 minut i w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Rozpuszczalniki usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość, rozcieńczono octanem etylu, przemyto dwukrotnie nasyconym roztworem NaHCO3, jednokrotnie solanką i osuszono nad MgSO4, rozpuszczalnik odparowano pod silnie zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (50:50 heksany/AcOEt), uzyskując 378 mg (wydajność 52%) oczekiwanego diazoketonu 351.
1H NMR (CDCI3) δ 8,00 (d, J=9Hz, 1H),7,42 (s, 1H) 7,35 (d, J=2,5Hz, 1H),7,20 (dd, J=9 i 2,5Hz, 1H),6,92 (s, 1H) 5,81-5,71 (m, 1H), 5,35-5,28 (m, 3H), 5,17-5,13 (m, 1H) 4,61-4,40 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,96-3,74 (m, 2H), 3,72 (s, 3H) 2,94-2,38 (m,2H), 2,18-2,06 (m, 1H), 1,98-1,84(m, 1H) 1,57-1,52 (m, 1H), 1,42(s, 9H).
ο ο
ο ο (351) (35πι)
Do ochłodzonego (0°C) roztworu diazoketonu 351 (0,37 g, 0,642 mmola) w 15 ml THF, dodano 0,25 ml HBr 48%. Uzyskany żółty roztwór mieszano w temperaturze 0°C przez 1 godzinę. Mieszaninę reakcyjną podzielono pomiędzy octan etylu i nasycony roztwór NaHCO3. Fazę organiczną przemyto dodatkowo jeden raz NaHCO3 i osuszono NaSO4. Po odparowaniu rozpuszczalników pod zmniejszonym ciśnieniem wydzielono 0,36 g (wydajność 90%) α-bromoketonu 35m.
PL 204 850 B1
(35m) (35η) α-bromoketon 35m (17 0 mg, 0,271 mmola) w 10 ml izopropanolu potraktowano 1-acetylo-2-tiomocznikiem (64 mg, 0,542 mmola). Uzyskany roztwór ogrzewano w temperaturze 75°C przez 1 godzinę. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozcieńczono octanem etylu i przemyto dwukrotnie nasyconym roztworem NaHCO3, jednokrotnie solanką i osuszono nad MgSO4. Odparowanie rozpuszczalnika pod zmniejszonym ciśnieniem dało 182 mg (> 100%) surowej substancji 35n.
Dipeptyd 35n (145 mg, 0,223 mmola) potraktowano 3 ml 4M roztworu HCl w dioksanie. Uzyskany roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. Rozpuszczalniki usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość osuszono z zastosowaniem pompy.
Sól aminy 35o w 5 ml CH3CN potraktowano 195 μl (1,12 mmola) DIEA. Następnie ten roztwór dodano do roztworu Boc-tert-butyloglicyny (103 mg, 0,446 mmola) i HATU (186 mg, 0,489 mmola) w 3 ml CH3CN. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. CH3CN odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozcieńczono octanem etylu, przemyto dwukrotnie nasyconym roztworem NaHCO3, jednokrotnie solanką i osuszono nad MgSO4. Po usunięciu rozpuszczalnika otrzymano 274 mg surowego tripeptydu 35p (> 100%).
PL 204 850 B1
(35q) O
Tripeptyd 35p (56 mg, 0,0733 mmola) w 4 ml 4M roztworu HCl w dioksanie, mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość osuszono z zastosowaniem pompy.
Otrzymaną sól aminy rozpuszczono w 4 ml CH2CI2 i potraktowano 0,13 ml DIEA (0,746 mmola), a nastę pnie 26 mg trifosgenu (0,0876 mmola). Po 3 godzinach inkubacji dodano 1,2,2-trimetylopropyloaminę (20 mg, 0,146 mmola) (zsyntetyzowaną jak opisali Moss N., Gauthier J., Ferland J.M., luty 1995, SynLett. (2), 142-144). Łaźnię lodową usunięto i mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. CH2CI2 odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozcieńczono octanem etylu, przemyto dwukrotnie nasyconym roztworem NaHCO3, jednokrotnie solanką i osuszono nad MgSO4, uzyskując 60 mg («100%) pożądanego mocznika 35q.
Roztwór estru metylowego 35q (57 mg, 0,0721 mmola) w mieszaninie THF:H2O (2,5 ml: 1 ml) potraktowano stałym LiOH»H2O (25 mg, 0,595 mmola) i dodano 1 ml MeOH w celu sklarowania roztworu. Po wymieszaniu przez 4 godziny w temperaturze pokojowej mieszaninę reakcyjną zobojętniono przez dodanie 1M roztworu HCl. Rozpuszczalniki usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej chromatografii. Związek rozpuszczono w 2,5 ml MeOH
PL 204 850 B1 i wstrzyknięto do zrównważonej kolumny w odwróconym układzie faz What-man Partisil 10-ODS-3 (2,2 x 50 cm) C18. Program oczyszczania: gradient liniowy przy przepływie 20 ml/nm, X 220 nm, nastrzyk przy 10% A aż do 60% A w czasie 60 minut. A: 0,06% TFA/CH3CN; B: 0,06%; TFA/H2O. Frakcje zanalizowano metodą analitycznej HPLC. Zebrany produkt liofilizowano, uzyskując 15 mg związku 333 w postaci białawego ciała stałego (wydajność 27%).
1H NMR (DMSO-d6) δ 8,88 (s, 0,2H), 8,84 (d, J=4,5Hz, 0,2H), 8,68 (d, J=8,5Hz, 0.H), 8,56 (s, 0,8H), 8,40-8,13 (m, 1,5H), 7,96 (d, J=9,0Hz, 0,2H), 7,72-7,44 (m, 2,4H), 7,35-7,09 (m, 1,2H), 6,98 (d, J=9Hz, 0,2H), 6,15 (d, J=9Hz, 0,2H), 6,06 (d, J=9Hz, 0,8H), 5,93 (d, J=9,5Hz, 0,24H), 5,86 (d, J=9Hz, 0,8H), 5,79-5,67(m, 1H), 5,69-5,44 (m, 1H), 5,24-5,14 (m, 1H), 5,09-5,01 (m, 1H), 4,50-4,35 (m, 2H), 4,24 (d, J=9,0Hz, 0,2H), 4,20 (d, J=9,0Hz, 0,8H), 4,06-3,98 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,77-3,60 (m, 2H), 2,58-2,50 (m, 1H), 2,33-2,28 (m, 1H), 2,22 (s, 2,4H), 2,21 (s, 0,6H), 2,02 (q, J=9Hz, 1H), 1,56-1,38 (m, 1H), 1,28-1,22 (m, 1H), 0,97 (s, 9H), 0,83 (d, J=6Hz,3H), 0,72 (s, 9H); MS (FAB) 778,3 (m+H)+, 776,3 (M-H)-.
P r z y k ł a d 36
Klonowanie, ekspresja i oczyszczanie rekombinacyjnej protezy NS3 HCV typu 1b
Osocze zakażonego HCV pacjenta otrzymano poprzez zewnętrzną współpracę (Bernard Willems MD, Hopital St-Luc, Montreal, Canada i dr Donald Murphy, Laboratoire de Sante Publique du Quebec, Ste-Anne de Bellevue, Kanada). Pełnej długości matrycowy cDNA genomu HCV skonstruowano z zastoswaniem inżynierii genetycznej z fragmentów DNA otrzymanych techniką odwrotnej transkrypcji-PCR (RT-PCR) RNA osoczowego i z zastosowaniem specyficznych primerów wybranych na podstawie homo-logii pomiędzy innymi szczepami genotypu lb. Z ustalenia całej sekwencji genomu, genotyp lb przypisano do izolatu HCV według klasyfikacji Simmonds i in. (J. Clin. Microbiol., (1993), 31, str. 1493-1503). Wykazano, że sekwencja aminokwasów niestrukturalnego obszaru NS2NS4B jest w ponad 93% identyczna z genotypem 1b HCV (izolaty BK, JK i 483) i w 88% identyczna z genotypem 1a HCV (izolat HCV-1). Fragment DNA kodujący polipeptydowy prekursor (NS3/NS4A/NS4B/NS5A/NS5B) wytworzono techniką PCR i wprowadzono do eukariotycznych wektorów ulegających ekspresji. Po przejściowej transfekcji, obecność dojrzałego białka NS3 dowiodła obróbki polipeptydu, w której pośredniczy proteaza NS3 HCV, co sprawdzono z zastosowaniem analizy bibułowej Westerna. Nie obserwowano dojrzałego białka NS3 przy ekspresji prekursora polipeptydowego zawierającego mutację S1165A, która inaktywuje proteazę NS3, co potwierdza funkcjonalność proteazy NS3 HCV.
Fragment DNA kodujący proteazę rekombinacyjną NS3 HCV (aminokwas 1027 do 1206) sklonowano w bakteryjnym wektorze ulegającyn ekspresji pETlld. Ekspresję proteazy NS3 w E. coli BL21(DE3)pLysS indukowano przez inkubację z 1 mM IPTG przez 3 godziny, W temperaturze 22°C. Typowa fermentacja (18 l) dała w przybliżeniu 100 g mokrej pasty komórkowej. Komórki ponownie zawieszono w buforze lizującym (3,0 ml/g) składającym się z 25 mM fosforanu sodu, pH 7,5, 10% glicerolu (objętościowo), 1 mM EDTA, 0,01% NP-40 i przechowywano w temperaturze -80°C. Komórki rozmrożono i homogenizowano po dodaniu 5 mM DTT. Następnie dodano do homogenatu chlorek magnezu i DNa-zę w końcowych stężeniach odpowiednio 20 mM i 20 μg/ml. Po 25-minutowej inkubacji w temperaturze 4°C, homogenat sonikowano i odwirowywano przy 15000xg, przez 30 minut, w temperaturze 4°C. Następnie wartość pH supernatantu uregulowano do 6,5 z zastosowaniem 1M roztworu fosforanu sodu.
Do 2-etapowej procedury oczyszczania opisanej w opisie patentowym nr W095/22985 (który wprowadza się tu na zasadzie odsyłacza) dodano dodatkowy etap w postaci chromatografii filtracyjnej na żelu. W skrócie, supernatant z bakteryjnego ekstraktu wprowadzono do kolumny SP HiTrap (Pharmacia) uprzednio zrównoważonej przy szybkości przepływu 2 ml/minutę w buforze A (50 mM fosforan sodu, pH 6,5, 10% glicerol, 1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0,01% NP-40). Kolumnę następnie przemyto buforem A zawierającym 0,15M NaCl i proteazę eluowano przez zastosowanie 10 objętości kolumny NaCl w liniowym gradiencie 0,15 do 0,3M. Frakcje zawierające proteazę NS3 zebrano i rozcieńczono do końcowego stężenia NaCl 0,1M. Enzym następnie oczyszczono na kolumnie HiTrap Heparin (Pharmacia) zrównoważonej w buforze B (25 mM fosforan sodu, pH 7,5, 10% glicerol, 5 mM DTT, 0,01% NP-40). Próbkę wprowadzono przy szybkości przepływu 3 ml/minutę. Następnie kolumnę przemyto buforem B zawierającym 0,15M NaCl przy szybkości przepływu 1,5 ml/minutę. Przeprowadzono dwuetapowe przemycie w obecności buforu B zawierającego 0,3 lub IM NaCl. Proteazę odzyskano w 0,3M NaCl, rozcieńczono 3-krotnie buforem B, ponownie wprowadzono do kolumny HiTrap Heparin i eluowano buforem B zawierającym 0,4 M NaCl. Na koniec, frakcje zawierające proteazę
PL 204 850 B1
NS3 wprowadzono do kolumny Superdex 75 HiLoad 16/60 (Pharmacia) zrównoważonej w buforze B zawierającym 0,3M NaCl. Czystość proteazy NS3 HCV otrzymanej ze zgromadzonych frakcji oceniono na więcej niż 95% metodą SDS-PAGE z następującą po niej analizą densytometryczną.
Enzym przechowywano w temperaturze -80°C, rozmrażano na lodzie i rozcieńczano tuż przed użyciem.
P r z y k ł a d 37
Test radiometryczny proteazy rekombinacyjnej NS3 HCWpeptydu kofaktorowego NS4A
Enzym sklonowano, poddano ekspresji i wytworzono według protokołu opisanego w przykładzie 36. Enzym przechowywano w temperaturze -80°C, rozmrożono na lodzie i tuż przed użyciem rozcieńczono w buforze testowym zawierającym peptyd kofaktorowy NS4A.
Substrat użyty w teście radiometrycznym proteazy NS3/peptydu kofaktorowego NS4A, DDIVPC-SMSYTW, jest rozszczepiany przez enzym pomiędzy resztami cysteinową i serynową. Sekwencja DDIVPC-SMSYTW odpowiada naturalnemu miejscu rozerwania NS5A/NS5B, w którym reszta cysteinową w P2 została zastąpiona proliną. Peptydowy substrat DDIVPC-SMSYTW i wskaźnik biotyna-DDIVPC-SMS[125I-Y]TW inkubuje się z rekombinowaną proteazą NS3 i peptydem kofaktorowym NS4A KKGSVVIVGRIILSGRK (stosunek molowy enzym:kofaktor 1:100) bez lub w obecności inhibitorów. Rozdzielanie substratu od produktów przeprowadza się przez dodanie do mieszaniny testowej pokrytych awidyną kulek agarozowych, a następnie mieszaninę przesącza się. Ilość produktu SMS[125I-Y]TW znalezionego w przesączu pozwala na obliczenie procentowej konwersji substratu i procentowego hamowania.
A. Reagenty
Tris i Tris-HCl (UltraPure) otrzymano z firmy Gibco-BRL. Glicerol (ultraczysty), MES i BSA zakupiono od firmy Sigma. TCEP otrzymano z firmy Pierce, DMSO z firmy Aldrich i NaOH z firmy Anachemia.
Bufor testowy: 50 mM Tris HCl, pH 7,5, 30% (waga/objętość) glicerol, 1 mg/ml BSA, 1 mM TCEP (TCEP dodano tuż przed użyciem z 1M roztworu podstawowego w wodzie).
Substrat: DDIVPCSMSYTW, końcowe stężenie 25 pM (z 2 mM roztworu podstawowego w DM -SO przechowywanego w temperaturze -20°C w celu uniknięcia utleniania).
Wskaźnik: zredukowany monojodowany substrat, biotyna DDIVPC SMS[125I Y]TW (stężenie końcowe ~1 nM).
Proteaza NS3 HCV typu lb, stężenie końcowe 25 nM (z roztworu podstawowego w 50 mM fosforanie sodu, pH 7,5, 10% glicerolu, 300 mM NaCl, 5 mM DTT, 0,01% NP-40).
Peptyd kofaktorowy NS4A: KKGSWIVGRIILSGRK, stężenie końcowe 2,5 pM (z 2 mM roztworu podstawowego w DMSO przechowywanego w temperaturze -2 0°C).
B. Protokół
Test prowadzono na 96-studzienkowej płytce polistyrenowej z Costar. Każda studzienka zawierała:
pl substratu/wskaźnika w buforze testowym;
± 10 pi inhibitora w mieszaninie 20% DMSO/bufor testowy;
pl proteazy NS3 lb/peptydu kofaktorowego NS4 (stosunek molowy 1:100).
Przygotowano także próbę ślepą (bez inhibitora i enzymu) i kontrolną (bez inhibitora) na tej samej płytce testowej.
Reakcję enzymatyczną zainicjowano przez dodanie roztworu enzym/peptyd NS4A i mieszaninę testową inkubowano przez 40 minut w temperaturze 23°C, delikatnie mieszając. Dodano dziesięć (10) pl 0,5N NaOH i 10 pl 1M MES, pH 5,8, w celu przerwania reakcji enzymatycznej.
Dodano dwadzieścia (20) ul agarozowych kulek pokrytych awidyną (zakupionych od firmy Pierce) na płytce filtracyjnej Millipore MADP N65. Mieszaninę testową przeniesiono na płytkę filtracyjną i inkubowano przez 60 minut w temperaturze 23°C, delikatnie mieszając.
Zawrtość płytek przesączono z zastosowaniem urządzenia Millipore Multiscreen Vacuum Manifold Filtration i 40 pl przesączu przeniesiono na nieprzezroczystą 96-studzienkową płytkę zawierającą 60 pl płynu scyntylacyjnego na studzienkę.
Przesącze zliczono na przyrządzie Packard TopCount z zastosowaniem protokołu dla ciekłego 125I przez 1 minutę.
% hamowania obliczono z następującego równania:
100-[(liczba impulsówbadana-liczba impulsówślepa)/(liczba impulsówkontrola-liczba impulsówślepa)x100].
PL 204 850 B1
Zastosowano nieliniową krzywą dopasowaną do modelu Hilla dla danych dotyczących hamowanie-stężenia, 50% stężenie skuteczne (IC50) obliczono stosując oprogramowanie SAS (Statistical Software System; SAS Institute, Inc. Cary, N.C.).
P r z y k ł a d 38
Test pełnowymiarowego heterodimeru białkowego NS3-NS4A Obszar niekodujący NS2-NS5B3' sklonowano metodą RT-PCR do wektora pCR®3 (Invitrogen) z zastosowaniem RNA ekstrahowanego z osocza osobnika zakażonego HCV genotyp 1b (dostarczonego przez dr Bernarda Willemsa, Hopital St-Luc, Montreal, Quebec, Kanada). Następnie subklonowano obszar DNA NS3-NS4A metodą PCR do wektora ekspresji bakulowirusa pFastBac™ HTa (Gibco/BRL). Sekwencja wektora obejmowała obszar kodujący 28-resztową N-końcową sekwencję, która zawierała marker hek-sahistydynowy. Do uzyskania rekombinowanego bakulowirusa użyto systemu ekspresji bakulowirusa Bac-to-Bac™ (Gibco/BRL). Pełnowymiarowy dojrzały heterodimer białkowy NS3 i NS4A (His-NS3-NS4AFL) poddano ekspresji przez zainfekowanie 106 komórek Sf21/ml rekombinowanym bakulowirusem przy krotności infekcji 0,1-0,2, w temperaturze 27°C. Zainfekowaną kulturę zebrano 48 do 64 godzin później przez odwirowanie w temperaturze 4°C. Peletkę komórkową homogenizowano w 50 mM NaPO4, pH 7,5, 40% glicerolu (waga/objętość), 2 mM β-merkaptoetanolu, w obecności koktailu inhibitorów proteazy. Następnie ekstrahowano His-NS3-NS4AFL z lizatu komórkowego, traktując go 1,5% NP-40, 0,5% Triton X-100, 0,5M NaCl i DNazą. Po ultrawirowaniu, rozpuszczalny ekstrakt rozcieńczono 4-krotnie i związano w kolumnie chelatującej atomami Ni, Pharmacia Hi-Trap. His-NS3-NS4AFL eluowano w >90% w czystej formie, (co oszacowano przy pomocy SDS-PAGE), z zastosowaniem imidazolu w gradiencie 50 do 400 mM. His-NS3-NS4AFL przechowywano w temperaturze -80°C w 50 mM fosforanie sodu, pH 7,5, 10% (waga/objętość) glicerolu, 0,5 M NaCl, 0,25 M imidazolu, 0,1% NP-40. Rozmrożono go na lodzie i rozcieńczono tuż przed użyciem.
Aktywność proteazową His-NS3-NS4AFL oceniano w 50 mM Tris-HCl, pH 8,0, 0,25 M cytrynianu sodu, 0,01% (waga/objętość) n-dodecylo-p-D-maltozydzie, 1 mM TCEP. Pięć (5) μΜ wewnętrznie unieczynnionego substratu antranililo-DDIVPAbu[C(O)-O]-AMY(3-NO2)TW-OH w obecności inhibitora w różnych stężeniahc inkubowano z 1,5 nM His-NS3-NS4AFL przez 45 minut w temperaturze 23°C. Końcowe stężenie DMSO nie przekraczało 5,25%. Reakcję zakończono przez dodanie 1M MES, pH 5,8. Fluorescencję N-końcowego produktu monitorowano na fluorometrze Perkin-Elmer LS-50B zaopatrzonym w czytnik płyt-kek 96-studzienkowych (długość fali wzbudzenia: 325 nm; długość fali emisji: 423 nm).
% hamowania obliczono z następującego równania:
100-[(liczba impulsówbadana-liczba impulsówślepa)/(liczba impulsówkontrola-liczba impulsówślepa)x100]
Zastosowano nieliniową krzywą dopasowaną do modelu Hilla dla danych dotyczących hamowania-stężenia, 50% stężenie skuteczne (IC50) obliczono stosując oprogramowanie SAS (Statistical Software System; SAS Institute, Inc. Cary, N.C.).
P r z y k ł a d 39
Test komórkowy proteazy NS3 Test prowadzono z komórkami Huh-7, ludzką linią komórkową pochodzącą z raka wątroby, kotransfekowanymi 2 strukturami DNA:
- pierwsza daje ekspresję polipeptydu zawierającego niestrukturalne białka HCV skondensowane z tTA w następującym porządku: NS3-NS4A-NS4B-NS5A-ITA (pod nazwą NS3);
- druga daje ekspresję białka reporterowego, wydzielniczej zasadowej fosfatazy, w warunkach kontroli tTA (pod nazwą SEAP).
Polipeptyd musi być rozszczepiany przez proteazę NS3, aby uwolnić dojrzałe białka. Uważa się, że przy uwalnianiu dojrzałych białek, wirusowe białka tworzą kompleks przy błonie siateczki wewnątrzplazmatycznej, podczas gdy tTA migruje do jądra i transaktywuje gen SEAP. Tak więc, redukcja aktywności proteolitycznej NS3 powinna prowadzić do zmniejszenia ilości dojrzałego tTA i zatem zmniejszenia aktywności SEAP.
W celu kontroli innych wpływów związków, przeprowadzono równoległą transfekcję, w której strukturę, w której ulega ekspresji tylko tTA (pod nazwą tTA) kotransfekowano strukturą SEAP w taki sposób, że aktywność SEAP nie zależała od aktywności proteolitycznej NS3.
Protokół testu: Komórki Huh-7, hodowane w CHO-SFMII + 10% FCS (płodowa surowica bydlęca), kotransfekowano albo NS3 i SEAP albo tTA i SEAP, z zastosowaniem protokołu FuGene (Boehringer Mannheim). Po 5 godzinach w temperaturze 37°C, komórki przemyto, trypsynizowano i osadzono (w ilości 80000 komórek/studzienkę) na 96-studzienkowych płytkach zawierających testowane
PL 204 850 B1 związki w różnych stężeniach. Po 24-godzinnym okresie inkubacji, pobrano próbkę ośrodka i aktywność SEAP w tej próbce zmierzono z zastosowaniem zestawu Phospha-Light (Tropix).
W celu uzyskania EC50 przeprowadzono analizę procentowego hamowania aktywności SEAP w stosunku do stężenia zwią zku przy pomocy oprogramowania SAS.
Następnie oceniano toksyczność związku (TC50) z zastosowaniem testu MTT jak następuje:
μΐ roztworu MTT (5 mg/ml ośrodka) dodano do studzienki i inkubowano w temperaturze 37° przez 4 godziny;
ośrodek usunięto i dodano 50 μl 0,01N HCl + 10% Triton X-100;
po wytrząsaniu w temperaturze pokojowej przez co najmniej 1 godzinę, gęstość optyczną każdej studzienki odczytano przy długości fali 595 nm.
TC50 obliczono w ten sam sposób jak EC50.
P r z y k ł a d 40
Testy specyficzności
Specyficzność związków określono wobec rozmaitych proteaz serynowych: elastazy ludzkich leukocytów, świńskiej elastazy trzustkowej i bydlęcej trzustkowej α-chymotrypsyny i jednej proteazy cysteinowej: katepsyny B wątroby ludzkiej. W wszystkich przypadkach zastosowano protokół dla 96-studzienkowej płytki z użyciem kolorymetrycznego substratu p-nitroaniliny (pNA) specyficznego dla każdego enzymu. Każdy test obejmował 1 godzinną wstępną inkubację enzymu z inhibitorem w temperaturze 30°C, po czym następowało dodanie substratu i hydroliza do =30% konwersji, co zmierzono na czytniku mikropłytek UV Thermomax®. Stężenia substratu utrzymywano na możliwie niskim poziomie w porównaniu z KM w celu zmniejszenia współzawodnictwa substratu. Stężenia związku wahały się od 300 do 0,06 μM zależnie od ich mocy.
Końcowe warunki dla każdego testu były następujące:
mM Tris-HCl pH 8, 0,5 M Na2SO4, 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 3% DMSO, 0,01%Tween-20 z;
[100 μM Succ-AAPF-pNA i 250 pM α-chymotrypsyny], [133 μM Succ-AAA-pNA i 8 nM świńskiej elastazy], [133 μM Succ-AAV-pNA i 8 nM elastazy leukocytów]; lub
[100 mM NaHPO4 pH 6, 0,1 mM EDTA, 3% DMSO, 1 mM TCEP, 0,01%Tween-20, 30 μM Z-FR-pNA i 5 nM katepsyny B (enzym podstawowy był aktywowany w buforze zawierającym 20 mM TCEP przed użyciem)].
Reprezentatywny przykład dla świńskiej elastazy trzustkowej podano poniżej:
Do polistyrenowej 96-studzienkowej płytki o płaskim dnie dodano z zastosowaniem programu obsługi dla cieczy Biomek (Beckman):
μl buforu testowego (50 mM Tris-HCl pH 8, 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA);
μl roztworu enzymu (50 mM Tris-HCl pH 8, 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 0,02% Tween-20, 40 nM świńskiej elastazy trzustkowej); i μl roztworu inhibitora (50 mM Tris-HCl, pH 8, 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 0,02% Tween-20, 1,5 mM-0,3 μM inhibitora, 15% objętościowo DMSO).
Po 60 minutach wstępnrj inkubacji w temperaturze 30°C, dodano do każdej studzienki 20 μl roztworu substratu (50 mM Tris-HCl, pH 8, 0,5 M Na2SO4, 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 665 μM SuccAAA-pNA), a następnie mieszaninę inkubowano w temperaturze 30°C przez 60 minut, po którym to czasie absorbancję odczytano na czytniku płytek UV Thermomax®. Rzędy studzienek przydzielono próbom kontrolnym (bez inhibitora) i ślepym (bez inhibitora i enzymu).
Kolejne 2-krotne rozcieńczenia roztworu inhibitora wykonano na oddzielnej płytce z zastosowaniem programu obsługi dla cieczy, stosując 50 mM Tris-HCl pH 8, 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 0,02% Tween-20, 15% DMSO. Wszystkie inne testy specyficzności przeprowadono podobnym sposobem.
Procent hamowania obliczono z zastosowaniem wzoru:
[1-((UVbadana-UVślepa)/(UVkontrola-UVślepa))]x100
Zastosowano nieliniową krzywą dopasowaną do modelu Hilla dla danych dotyczących hamowania-stężenia, 50% stężenie skuteczne (IC50) obliczono stosując oprogramowanie SAS (Statistical Software System; SAS Institute, Inc. Cary, N.C.).
Tablice związków
Poniższe tablice zawierają związki według wynalazku. Związki według wynalazku poddano albo jednemu lub obu testom według przykładów 37 i 38 i stwierdzono, że są aktywne przy IC50 poniżej 50 μM (A); poniżej 5 μM (B) lub poniżej 0,5 μM (C).
Aktywność w komórkach i specyficzność:
PL 204 850 B1
Reprezentatywne związki według wynalazku badano także z zastosowaniem testu według przykładu 39 dla surogatu komórkowego oraz jednego lub kilku testów według przykładu 40. Np. stwierdzono, że związek 601 z tablicy 6 ma IC50 50 nM w teście według przykładu 37 i 30 nM w teście według przykładu 38. EC50 określone testem według przykładu 39 wynosi 8,2 μM. W testach specyficzności według przykładu 40, ten sam związek wykazał następującą aktywność: HLE >75 μM; PPE >75 μM; α-chymotrypsyna >75 μM; katepsyna B >75 μM. Te wyniki wskazują, że ta rodzina związków jest silnie specyficzna wobec proteazy NS3 i co najmniej niektóre związki z tej rodziny są aktywne w teście surogatu komórkowego.
W poniższych tablicach zastosowano następujące skróty: MS: dane spektometrii masowej; Ac: acetyl; Bn: benzyl; Boc: tert-butylooksykarbonyl; cHex: cykloheksyl; Chg: cykloheksyloglicyna (kwas 2-amino-2-cykloheksylooctowy); IPr: izopropyl; O-Bn: benzylooksyl; Ph: fenyl; t-Bu: tert-butyl; Tbg: tert-butyloglicyna; 1- lub 2-, np. 1- lub 2-naftyl; 1- lub 2-NpCH2O: 1- lub 2-naftylometoksyl.
T a b l i c a 1
R2
Tablica 1 nr związku B r3 r2 MS Zakres aktywności
101 Boc cHex -o-ch2- 1-naftyl 594 A
102 OZ cHex -o-ch2- 1-naftyl 632 A
103 cHex -o-ch2- 1-naftyl 642 A
104 z cHex -o-ch2- 1-naftyl 728 A
105 cHex -O-CH2- 1-naftyl 619 A
PL 204 850 B1
Tablica 1 nr związku B r3 r2 MS Zakres aktywności
106 Boc cHex 702 B
107 Cl cHex -o-ch2- 1-naftyl 720 M+Na+ A
108 Boc i-Pr 662 A
109 acetyl cHex 644 A
110 Boc i-Pr A 575,1 A
111 Boc t-Bu CLiyyk 661,3 C
T a b l i c a 2
R2
Tablica 2 nr związku B r3 r2 R1 anti wobec karboksylu MS Zakres aktywno- ści
201 Boc cyklo- heksyl -o-ch2- 1-naftyl etyl (jeden izomer) 622 A
202 Boc cyklo- heksyl -o-ch2- 1-naftyl etyl (drugi izomer) 622 A
203 Boc t-Bu (Ol O© winyl IR, 2R 687,5 c
PL 204 850 B1
T a b l i c a 3
R2
Tablica 3 nr związku B r3 r2 Rl syn względem karboksylu MS Zakres aktywno- ści
301 Boc cHex -O-CH^-l-naftyl etyl 622 A
302 y-A i-Pr -O-CHg-l-naftyl etyl 582 A
303 cHex -O-CHg-l-naftyl etyl 622 A
304 Boc cHex ty© Y N etyl 623 A
305 Boc cHex -O-CH2-1-nafty1 winyl 620 C
306 Boc cHex winyl 607 B
307 Boc cHex winyl 728 c
308 Boc cHex winyl 606 B
309 Boc cHex ,„T@ winyl 606 B
310 Boc cHex winyl 607 B
PL 204 850 B1
Tablica 3 nr związku B R3 R2 R1 syn względem karboksylu MS Zakres aktywno- ści
311 Boc cHex winyl 641 B
312 Boc cHex ... .. z° winyl 607 A
313 Boc cHex to® 0 / winyl 621 B
314 Boc cHex o \ winyl 683 C
315 Boc cHex \ winyl 698 B
316 acetyl cHex winyl 625 B
317 Boc cHex >ϋθχΛ \ H winyl 740 C
318 cf3- C(0) - i-Pr 0 z winyl 639, 3 B
319 / O 2 cHex 0^0 winyl 732, 3 C
PL 204 850 B1
Tablica 3 nr związku B r3 r2 R1 syn względem karboksylu MS Zakres aktywno- ści
320 Άχ cHex winyl 704, 3 B
321 Boc t-Bu x° winyl 658, 7 C
322 Boc t-Bu CF, CFyNyk z winyl 717, 6 B
323 Boc t-Bu / Z 672, 4 B
324 Boc t-Bu / o o— V7 O winyl 727, 5 C
325 Boc t-Bu 0 X Z 701, 4 C
326 Boc t-Bu /=) VyNyA winyl 708, 3 c
327 i 0 1Λ H t-Bu / winyl 610, 3 c
PL 204 850 B1
Tablica 3 nr związku B r3 R 2 R1 syn względem karboksylu MS Zakres aktywno- ści
328 Boc t-Bu Jo Z Cl 5o N winyl 615, 3 B
329 Boc t-Bu l A. 4¾. JJ N N winyl 685, 3 C
330 Boc t-Bu ęc -A winyl 627, 5 A
331 xA H t-Bu θχο winyl 656, 5 C
332 Boc t-Bu CA»· . ^OMe KA winyl 689, 3 C
333 AA t-Bu χ0 N X» AL·, Cr winyl 778, 3 C
334 AA t-Bu N AA· A xOMe winyl 764, 4 C
PL 204 850 B1
T a b l i c a 4
R2
Tablica 4 nr związku B R3 R2 R1 MS Zakres aktywności
401 Boc i-Pr To© H 589,1 A
402 Boc t-Bu w z H 603,6 A
403 Boc t-Bu / H 675,4 C
404 Boc t-Bu z 3-(=CH2) 687,1 B
405 Boc t-Bu <1 .N. .OMe Z 2-winyl 702,3 C
406 Boc t-Bu z° 2-Et 70,3 C
PL 204 850 B1
T a b l i c a 5
Tablica 5 nr związku r3 MS zakres aktywności
501 t-Bu 581,3 C
502 H 539,2 A
503 A °r 625,3 B
504 1 V 582,6 B
505 —o 583,2 B
506 a, V 659,2 B
507 Ύ° N H 670,2 B
508 Z 703,3 B
509 581,3 C
PL 204 850 B1
Tablica 6 nr związku R3 R21A r21B MS zakres aktywności
601 i-Pr Ph 7-OMe 673,3 C
602 t-Bu Ph 8-OMe, 7-OMe 717,2 C
603 i-Pr Ph 7-etyl 671,2 C
604 t-Bu _ 7-OMe 611,2 C
605 t-Bu Ph 7-O-Pr 715,3 C
606 t-Bu 7-C1 615,2 C
607 iPr 7-C1 601,2 C
608 CH^-iPr 7-C1 615,3 B
609 t-Bu o - 680,2 B
610 t-Bu Cl — 613,3 C
611 t-Bu Ph 7-N(Me)2 700,5 C
PL 204 850 B1
Tablica 7 Nr związku R3 R21A MS zakres aktywności
701 t-Bu N=/ 691,3 C
702 t-Bu 713,4 C
703 t-Bu 655,3 c
704 t-Bu dy 728,4 C
705 t-Bu Cu 696,4 C
706 t-Bu Cr 693,3 c
707 t-Bu cr 694,3 c
PL 204 850 B1
Tablica 7 Nr związku r3 R21A MS zakres aktywności
708 t-Bu Ph-N(Me)- 716,4 C
709 t-Bu w w JT s— 709,2 C
710 t-Bu HOOC- 655,3 B
711 t-Bu 708,2 C
712 t-Bu (Me)?N- 654,3 C
713 t-Bu Z 692,3 (M-H)“ C
714 t-Bu 722,3 C
715 t-Bu Cu 688,3 C
716 t-Bu α 688,3 C
717 t-Bu Me \ N IZ 723,3 C
718 t-Bu nh2 626,3 C
719 t-Bu H ki γχτ 751,2 C
720 t-Bu N=' 733,4 C
721 t-Bu 724,1 C
722 t-Bu 737,3 C
723 t-Bu A N HN^Z^yz*' 751,4 C
724 t-Bu u 708,4 C
PL 204 850 B1
Tablica 7 Nr związku R3 R21A MS zakres aktywności
725 t-Bu 689,4 C
726 t-Bu i-Pr 653,3 C
727 t-Bu [1 688,3 C
728 t-Bu % Zz° Ąy 786,1 C
729 t-Bu h c< 689,3 C
730 t-Bu 669,2 C
731 t-Bu 669,2 C
732 t-Bu .N 791,0 C
733 t-Bu A 765,3 C
734 t-Bu 671,3 C
735 t-Bu \ 683,3 C
736 t-Bu t-Bu 667,4 C
737 t-Bu cHex 693,4 C
PL 204 850 B1
T a b l i c a 8
Tablica 8 nr związku B R3 r22 MS Zakres aktywności
801 AA t-Bu - 686,7 C
802 h°AA ó t-Bu — 727,7 C
803 AA t-Bu - 685,7 C
804 0 OA t-Bu 711,7 C
805 Ac t-Bu — 629, 6 C
806 0 t-Bu - 725,7 C
807 i Hl t-Bu - 672,4 C
808 Aa t-Bu - 712,4 C
809 a t-Bu - 649,3 C
810 t-Bu - 749,3 C
811 Boc t-Bu 4-C1 721,3 C
PL 204 850 B1
Tablica 8 nr związku B R3 R22 MS Zakres aktywności
812 ΟχΆ t-Bu - 706,2 C
813 \) H |S t-Bu - 702,2 C
814 Boc t-Bu 2-C1 721,3 C
815 Boc t-Bu 3-C1 721,3 C
816 t-Bu - 658,3 C
817 (TA t-Bu - 720,2 C
818 Cuj< t-Bu - 728,3 C
819 i-Pr - 762,3 C
920 :xz i-Pr - 732,2 C
921 OMe Ćk i-Pr - 679,1 C
822 Tk i-Pr - 663,3 C
823 Boc t-Bu 2-OMe 717,2 C
824 Boc t-Bu 3-OMe 719,2 C
825 Boc t-Bu 4-OMe 719,2 C
826 Cc- i-Pr - 663,3 B
827 Me 0 t-Bu - 673,2 c
828 0 i-Pr - 691,3 c
829 z Me ęu Me t-Bu - 734,3 c
830 ...........0..... A t-Bu - 645,3 c
100
PL 204 850 B1
Tablica 8 B R3 R22 MS Zakres ak-
nr związku tywności
831 ........ Me .....0..... κ-'Ά„Α o H t-Bu - 701,3 C
832 Me o vA o t-Bu - 801,3 C
833 Me\/Me 1? H?N. JL Π o t-Bu - 715,2 C
834 .XX i-Pr - 663,3 C
835 Me. Me ,9 HOx.Z t-Bu - 702,5 C
836 °tk i-Pr - 694,4 C
837 A i-Pr - 683,3 C
838 i-Pr - 679,1 C
839 i-Pr - 674,5 C
840 Ά i-Pr - 667,4 C
841 Boc t-Bu 2-Me 701,5 C
842 Boc t-Bu 3-Me 701,5 C
843 Boc t-Bu 4-Me 701,5 C
844 , O \L hjl t-Bu 4-OMe 716, 6 C
845 i-Pr - 706, 9 C
846 <xx i-Pr - 693,4 C
847 Boc cHex — 713,4 C
848 Boc Λ - 687,5 C
PL 204 850 B1
101
Tablica 8 nr związku B R3 R22 MS Zakres aktywności
849 Boc Λ - 701,5 C
850 Boc V V - 731,5 C
851 Boc 1 Ύ - 689,5 C
852 Boc 1 Ύ - 689,5 C
853 Boc A Y - 765,5 C
854 i-Pr - 723,4 (M-H)+ C
855 HOxor i-Pr - 693,3 C
856 'O. i-Pr - 688,3 C
857 t-Bu - 716, 4 C
858 j° 1 Me t-Bu - 700,4 C
859 A i-Pr - 655,4 B
860 ΎγΧλ i-Pr - 759,3 C
861 i-Pr - 688,3 C
862 A i-Pr - 685,3 C
863 αχ i-Pr - 699,4 c
102
PL 204 850 B1
Tablica 8 nr związku B R3 r22 MS Zakres aktywności
864 CC i-Pr - 667,3 C
865 ΟχΑ t-Bu - 701,4 C
866 t-Bu - 702,4 C
867 O-A t-Bu - 701,3 C
868 ClA t-Bu - 713,3 C
869 < 1 o t-Bu - 699,4 C
870 t-Bu - 700,4 C
871 ‘ xC.......0..... Am t-Bu - 714,3 C
872 TA t-Bu - 714,4 c
873 - o H t-Bu - 714,3 c
PL 204 850 B1
103
T a b l i c a 9
Tablica 9 nr związku B MS zakres aktywności
901 Boc 685,3 C
902 °ó 825,4 C
903 0 fCyA ”ó 769,3 C
904 0 707,3 C
905 685,2 C
906 0A 728,2 C
907 Z 717,2 C
908 Ż 691,2 C
104
PL 204 850 B1
Tablica 9 nr związku B MS zakres aktywności
909 ........ n 0 c© 727,2 C
910 715,3 C
911 Ά 721,3 C
912 0*/? CA 733,2 C
913 /As j° CAA 713,3 C
914 A A V-nh 805,3 C
915 692,2 C
916 <A H 680,3 C
PL 204 850 B1
105
T a b l i c a 10
Tablica 10 nr związku Β-Χ- R3 Z R21B MS Zakres aktywności
1001 Ph-N(Me)- i-Pr 0 H 663,3 C
1002 Boc-NH- t-Bu S OMe 703,4 C
1003 a(. Me i-Pr 0 - 663,3 C
Zastrzeżenia patentowe

Claims (47)

1. Związek o wzorze I, w tym jego racematy, diastereoizomery i izomery optyczne, w którym B oznacza H, C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil; Het lub (C1-6alkil)-Het, przy czym wszystkie korzystnie podstawione przez C1-6alkil; C1-6alkoksyl; C1-6alkanoil; hydroksyl; hydroksyalkil; atom chlorowca; chlorowcoalkil; nitro; cyjano; cyjanoalkil; amino wzorze I podstawiony przez C1-6alkil; amido; lub C1-6alkiloamid;
lub B oznacza karboksyl o wzorze R4-O-C(O)-; amid o wzorze R4-N(R5)-C(O)-; tioamid o wzorze R4-N(R5)-C(S)-;lub sulfonyl o wzorze R4-SO2, w których R4 oznacza (i) C1-10alkil wzorze I podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksyl, amino korzystnie mono-lub di-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid;
106
PL 204 850 B1 (ii) C3-7cykloalkil, C3-7cykloalkoksyl lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie korzystnie podstawione przez hydroksyl, karboksyl, (C1-6alkoksy)karbonyl, amino wzorze I mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid;
(iii) amino korzystnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; amido; lub C1-6alkiloamid;
(iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie korzystnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amido, C1-6alkiloamid lub amino korzystnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba korzystnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amido, C1-6alkiloamid lub amino korzystnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; R5 oznacza H lub C1-6alkil; lub B oznacza pochodną acylową o wzorze R4-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil korzystnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksyl, lub amino korzystnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil,;
(ii) C3-7cykloalkil, C3-7cykloalkoksyl lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie korzystnie podstawione przez hydroksyl, karboksyl, (C1-6alkoksy)karbonyl, lub amino korzystnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iii) amino korzystnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie korzystnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, lub amino korzystnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba korzystnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, lub amino korzystnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
z ograniczeniem, że gdy B oznacza amid lub tioamid, R4 nie oznacza (ii) cykloalkoksylu;
Y oznacza H lub C1-6alkil;
R3 oznacza C1-6alkil, C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie korzystnie podstawione przez hydroksyl, C1-6alkoksyl, C1-6tioalkil, amido, C1-6alkiloamido, C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil;
R2 oznacza CH2-R20, NH-R20 O-R20 lub S-R20 w których R20 oznacza nasycony lub nienasycony C3-7cykloalkil lub
C4-10(alkilocykloalkil), przy czym wszystkie są korzystnie mono-, di- lub tri-podstawione przez R21, R20 oznacza C6 lub C10aryl lub C7-14aryloalkil, wszystkie korzystnie mono-, di- lub tri-podstawione przez R21, lub R20 oznacza Het lub (C1-6alkil)-Het, oba korzystnie mono-, di- lub tri-podstawione przez R21, przy czym każdy R21 oznacza niezależnie C1-6alkil; C1-6alkoksyl; C1-6tioalkil; sulfonyl; NO2; OH; SH; atom chlorowca; chlorowcoalkil; amino korzystnie mono-lub di-podstawiony przez C1-6alkil, C6 lub C10aryl, C7-14aryloalkil Het lub (C1-6alkil)-Het; amido korzystnie mono-podstawiony przez C1-6alkil, C6 lub C10aryl, C7-14aryloalkil, Het lub (C1-6alkil)-Het; karboksyl; karboksy(C1-6alkil); C6 lub C10aryl, C7-14aryloalkil lub Het, wymieniony aryl, aryloalkil lub Het są korzystnie podstawione przez R22, przy czym R22 oznacza C1-6alkil; C3-7cykloalkil; C1-6alkoksyl; amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; sulfonyl; C1-6alkilosulfonyl; NO2; OH; SH; atom chlorowca; chlorowcoalkil; karboksyl; amid; C1-6alkiloamid; lub Het ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil;
R1 oznacza H; C1-6alkil, C3-7cykloalkil, C2-6alkenyl lub C2-6alkinyl, wszystkie ewentualnie podstawione przez atom chlorowca;
lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól lub ester.
2. Związek o wzorze I według zastrz. 1,
B oznacza C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil;
lub B oznacza pochodną acylową o wzorze R4-C(O)-, w którym R4 oznacza C1-10alkil; amino, C3-7cykloalkiloamino; C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil lub heterocykl, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil;
lub B oznacza sulfonyl o wzorze R4-SO2, w którym
R4 oznacza (i) C1-10alkil lub C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil;
R3 oznacza C1-8alkil, C3-7cykloalkil, C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil;
R2 oznacza CH2-R20, NH-R20, O-R20 lub S-R20, w których R20 oznacza nasycony lub nienasycony C3-7cykloalkil, ewentualnie podstawiony przez NO2, OH, SH, halo; ewentualnie zawierający heteroatom wybrany niezależnie z grupy obejmującej O, S i N, lub R20 oznacza C6 lub C10aryl lub C7-14aryloalkil, ewentualnie podstawione przez C1-6alkil; C1-6alkoksyl, NO2; OH; SH; atom chlorowca lub drugi C1-6alkil, gdzie pierwszy aryl lub dowolny aryloalkil ewentualnie zawiera heteroatom wybrany niezależnie z grupy obejmującej O, S i N;
R1 oznacza H; C1-6alkil, C2-6alkenyl, wszystkie ewentualnie podstawione przez atom chlorowca; lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól lub ester.
PL 204 850 B1
107
3. Związek według zastrz. 1, w którym B oznacza C6 lub C1-6aryl, C7-16aryloalkil, ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, hydroksyl, atom chlorowca, chlorowcoalkil, amino;
lub B oznacza pochodną acylową o wzorze R4-C(O)-, w którym
R4 oznacza C1-10alkil,; C1-10alkiloamino C3-7cykloalkiloamino, C3-7cykloalkoksyl lub C4-10alkilocykloalkiloamino, lub R4 oznacza C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, lub heterocykl, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil,
R3 oznacza C1-8alkil, C3-7cykloalkil, C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil;
R2 oznacza CH2-R20, NH-R20, O-R20 lub S-R20, w których R20 oznacza nasycony lub nienasycony C3-7cykloalkil, ewentualnie podstawiony przez NH2, NO2, OH, SH, halo, halogenoalkil; ewentualnie zawierający heteroatom wybrany niezależnie z grupy obejmującej O, S i N;
lub R20 oznacza C6 lub C10aryl lub C7-14aryloalkil, ewentualnie zawierający heteroatom wybrany niezależnie z grupy obejmującej O, S i N; ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, OH, NH2
R1 oznacza C1-6alkil;
lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól lub ester.
4. Związek o wzorze I według zastrz. 1, w którym
B oznacza C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, hydroksyalkil, atom chlorowca, chlorowcoalkil, nitro, cyjano, cyjanoalkil, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub
B oznacza Het lub (C1-6alkil)-Het, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, hydroksyalkil, atom chlorowca, chlorowcoalkil, nitro, cyjano, cyjanoalkil, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil.
5. Związek o wzorze I według zastrz. 1, w którym B oznacza R4-SO2, w którym R4 oznacza C1-6alkil; amido; C1-6alkiloamid; C6 lub C10aryl, C7-14aryloalkil lub Het, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil.
6. Związek o wzorze I według zastrz. 1, w którym B oznacza pochodną acylową o wzorze R4-C(O)-, w którym
R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, hydroksyl lub C4-10alkoksyl, lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, oba ewentualnie podstawione przez hydroksyl, karboksyl, (C1-6alkoksy) karbonyl, lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iv) C6 lub C10aryl lub garyloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil;
(v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil.
7. Związek o wzorze I według zastrz. 1, w którym B oznacza karboksyl o wzorze R4-O-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksyl, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid;
(ii) C3-7cykloalkil, C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)-karbonyl, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid;
(iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, hydroksyl, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamido.
8. Związek o wzorze I według zastrz. 1, w którym B oznacza amid o wzorze R4-N(Rs)-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksyl, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)karbonyl, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie mono-lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iii) amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-3alkil;
108
PL 204 850 B1 (iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amido, C1-6alkiloamid lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid; i
R5 oznacza H lub metyl.
9. Związek o wzorze I według zastrz. 1, w którym B oznacza tioamid o wzorze R4-NH-C(S)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil lub C1-6alkoksyl;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)-karbonyl, amino lub amido.
10. Związek o wzorze I według zastrz. 4, w którym B oznacza C6 lub C1-6aryl ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, hydroksyalkil, atom chlorowca, chlorowcoalkil, nitro, cyjano, cyjanoalkil, amido, C1-6alkiloamid lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil.
11. Związek o wzorze I według zastrz. 4, w którym B oznacza Het ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, atom chlorowca, amido, C1-6alkiloamid lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil.
12. Związek o wzorze I według zastrz. 6, w którym B oznacza pochodną acylową o wzorze R4-C(O)-, w którym
R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, hydroksyl lub C1-6alkoksyl; lub (ii) C3-7cykloalkil lub C4-10jalkilocykloalkil, oba ewentualnie podstawione przez hydroksyl, karboksyl, (C1-6alkoksy)karbonyl; lub (iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl lub (v) Het ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, hydroksyl lub amino.
13. Związek o wzorze I według zastrz. 7, w którym B oznacza karboksyl o wzorze R4-O-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksy lub amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil, C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C16alkoksy)-karbonyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil lub (iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amido lub amino ewentualnie mono-podstawiony przez C1-6alkil.
14. Związek o wzorze I według zastrz. 8, w którym B oznacza amid o wzorze R4-N(R5)-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy) -karbonyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iii) amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub (iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino lub amido ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, hydroksyl, amino lub amido, i
R5 oznacza H.
15. Związek o wzorze I według zastrz. 9, w którym B oznacza tioamid o wzorze R4-NH-C(S)-, w którym R4 oznacza (i) C1-6alkil; lub (ii) C3-7cykloalkil.
16. Związek o wzorze I według zastrz. 14, w którym B oznacza amid o wzorze R4-NH-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksy amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
PL 204 850 B1
109 (ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)-karbonyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, hydroksyl, amino lub amido.
17. Związek o wzorze I według zastrz. 1, w którym B oznacza tert-butoksykarbonyl (Boc) lub
18. Związek o wzorze I według zastrz. 1, w którym Y oznacza H lub metyl.
19. Związek o wzorze I według zastrz. 18, w którym Y oznacza H.
20. Związek o wzorze I według zastrz. 1, w którym R3 oznacza C1-6alkil, C3-7cykloalkil lub C4-10alkilo-cykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez hydroksyl, C1-6alkoksyl, C1-6tioalkil, acetamido, C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil.
21. Związek o wzorze I według zastrz. 20, w którym oznacza łańcuch boczny tert-butyloglicyny (Tbg), Ile, Val, Chg lub 3
22. Związek o wzorze I według zastrz. 20, w którym R3 oznacza łańcuch boczny Tbg, Chg lub Val.
23. Związek o wzorze I według zastrz. 1, w którym R2 oznacza S-R20 lub O-R20, w których R20 oznacza C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil, Het lub -CH2-Het, wszystkie ewentualnie mono-, di- lub tripodstawione przez R21, przy czym
R21 oznacza C1-6alkil; C1-6alkoksyl; C1-6tioalkil; amino lub amido ewentualnie mono-lub di-podstawiony przez C1-6alkil, C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil, Het lub (C1-6alkil) -Het; NO2; OH; atom chlorowca; trif luorometyl; karboksyl; C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil lub Het, wymieniony aryl, aryloalkil lub Het są ewentualnie podstawione przez R22, przy czym
R22 oznacza C1-6alkil; C3-7cykloalkil; C1-6alkoksyl; amino; mono- lub di-(C1-6alkiloamino; (C1-6alkiloamid; sulfonyloalkil; NO2; OH; atom chlorowca; trifluorometyl; karboksyl lub Het.
24. Związek o wzorze I według zastrz. 23, w którym R21 oznacza C1-6alkil; C1-6alkoksyl; amino; di(C1-6alkilo) amino; C1-6alkiloamid; C6 lub C10aryl lub Het, wymieniony aryl lub Het są ewentualnie podstawione przez R22, przy czym R22 oznacza C1-6alkil; C3-7cykloalkil; C1-6alkoksyl; amino; mono- lub di(C1-6alkilo) amino; amido; C1-6alkiloamid; atom chlorowca; trifluorometyl lub Het.
25. Związek o wzorze I według zastrz. 24, w którym R22 oznacza C1-6alkil; C1-6alkoksyl; atom chlorowca; amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; amido; C1-6alkiloamid; lub Het.
26. Związek o wzorze I według zastrz. 25, w którym R22 oznacza metyl; etyl; izopropyl; tertbutyl; metoksyl; chloro; amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; amido, C1-6alkiloamid; lub (C1-6alkilo)-2-tiazol.
27. Związek o wzorze I według zastrz. 23, w którym R2 jest wybrany z grupy obejmującej:
28. Związek o wzorze I według zastrz. 23, w którym R2 oznacza 1-naftylometoksyl; 2-naftylometoksyl; benzylooksyl, 1-naftylooksyl; 2-naftylooksyl; lub chinolinooksyl niepodstawiony, mono- lub di-podstawiony przez R21 zdefiniowany według zastrz. 23.
29. Związek o wzorze I według zastrz. 28, w którym R2 oznacza 1-naftylometoksyl; lub chinolinooksyl niepodstawiony, mono- lub di-podstawiony przez R21 zdefiniowany według zastrz. 23.
110
PL 204 850 B1
30. Związek o wzorze I według zastrz. 29, w którym R2 jest wybrany z grupy obejmującej:
31. Związek o wzorze I według zastrz. 28, w którym R2 oznacza:
w którym R21A oznacza C1-6alkil; C1-6alkoksyl; C1-6tioalkil; atom chlorowca; amino ewentualnie mono-podstawiony przez C1-6alkil; lub C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil lub Het, wymieniony aryl, aryloalkil lub Het są ewentualnie podstawione przez R22, przy czym R22 oznacza C1-6alkil, C1-6alkoksyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono-lub di-podstawiony przez C1-6alkil lub Het; i
R21B oznacza C1-6alkil, C1-6alkoksyl, amino, di(C1-6alkilo)amino, C1-6alkiloamid, NO2, OH, atom chlorowca, trifluorometyl lub karboksyl.
32. Związek o wzorze I według zastrz. 31, w którym R21A oznacza C6, C1-6aryl lub Het, wszystkie ewentualnie podstawione przez R22 zdefiniowany według zastrz. 30.
33. Związek o wzorze I według zastrz. 32, w którym R21A jest wybrany z grupy obejmującej:
w którym R22A oznacza C1-6alkil; C1-6alkoksyl; lub atom chlorowca; i R21B oznacza C1-6alkil, C1-6alkoksyl, amino, di(C1-6alkilo) amino, C1-6alkiloamid, NO2, OH, atom chlorowca, trifluorometyl lub karboksyl.
PL 204 850 B1
111
35. Związek o wzorze I według zastrz. 31, w którym R2 oznacza:
w którym R22B oznacza C1-6alkil, amino ewentualnie mono-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid; i R21B oznacza C1-6alkil, C1-6alkoksyl, amino, di(C1-6alkilo) amino, C1-6alkiloamid, NO2, OH, atom chlorowca, trif luorometyl lub karboksyl.
36. Związek o wzorze I według zastrz. 34 albo 35, w którym R21B oznacza C1-6alkoksyl lub di(C1-6alkilo)amino.
37. Związek o wzorze I według zastrz. 34 albo 35, w którym R21B oznacza metoksyl.
38. Związek o wzorze I według zastrz. 1, w którym P1 oznacza cyklobutyl lub cyklopropyl, oba ewentualnie podstawione przez R1, przy czym R1 oznacza H, C1-6alkil, C3-5cykloalkil lub C2-4alkenyl, wszystkie ewentualnie podstawione przez atom chlorowca.
39. Związek o wzorze I według zastrz. 38, w którym P1 oznacza cyklopropyl i R1 oznacza etyl, winyl, cyklopropyl, 1- lub 2-bromoetyl lub 1- lub 2-bromowinyl.
40. Związek o wzorze I według zastrz. 39, w którym R1 oznacza winyl.
41. Związek o wzorze 1 według zastrz. 39, w którym R1 przy atomie węgla 2 ma orientację syn względem karbonylu w pozycji 1, co reprezentuje rodnik:
42. Związek o wzorze I według zastrz. 39, w którym R1 w pozycji 2 ma orientację anti względem karbonylu w pozycji 1, co reprezentuje rodnik:
112
PL 204 850 B1
44. Optyczny izomer związku o wzorze I według zastrz. 43, w którym wymieniony podstawnik R1 i karbony występują w orientacji syn w następującej konfiguracji bezwzględnej:
45. Związek o wzorze I według zastrz. 44, w którym R1 oznacza etyl, zatem asymetryczne atomy węgla w pozycjach 1 i 2 mają konfigurację R,R.
46. Związek o wzorze I według zastrz. 44, w którym R1 oznacza winyl, zatem asymetryczne atomy węgla w pozycjach 1 i 2 mają konfigurację R,S.
47. Związek o wzorze I według zastrz. 1, w którym
B oznacza C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, hydroksyalkil, atom chlorowca, chlorowcoalkil, nitro, cyjano, cyjanoalkil, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub Het lub (C1-6alkil)-Het, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, hydroksyalkil, atom chlorowca, chlorowcoalkil, nitro, cyjano, cyjanoalkil, amido, Ci-galkiloamido lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub
B oznacza R4-SO2, w którym R4 oznacza korzystnie, amido; C1-6alkiloamid; C6 lub C10aryl, C7-14aryloalkil lub Het, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil; lub
B oznacza pochodną acylową o wzorze R4-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, hydroksyl lub C1-6alkoksyl, lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, oba ewentualnie podstawione przez hydroksyl, karboksyl, (C1-6alkoksy)karbonyl, lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil;
(v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub
B oznacza karboksyl o wzorze R4-O-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksyl, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid;
(ii) C3-7cykloalkil, C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)karbonyl, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid;
(iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, hydroksyl, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamido lub
B oznacza amid o wzorze R4-N(R5)-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksyl, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)-karbonyl, amido, C1-6alkiloamido lub amino ewentualnie mono-lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iii) amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iv) C6 lub C1-6aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amido, C1-6alkiloamid lub amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid; i
R5 oznacza H lub metyl; lub
B oznacza tioamid o wzorze R4-NH-C(S)-; w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil lub C1-6alkoksyl;
PL 204 850 B1
113 (ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy)-karbonyl, amino lub amido;
Y oznacza H lub metyl;
R3 oznacza C1-6alkil, C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez hydroksyl, C1-6alkoksyl, C1-6tioalkil, acetamido, C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil;
R2 oznacza S-R20 lub O-R20, w których R20 oznacza korzystnie C6 lub C10aryl, garyloalkil, Het lub -CH2-Het, wszystkie ewentualnie mono-, di- lub tri-podstawione przez R21, przy czym
R21 oznacza C1-6alkil; C1-6alkoksyl; C1-6tioalkil; amino lub amido ewentualnie mono-lub di-podstawiony przez C1-6alkil, C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil, Het lub (C1-6alkil)-Het; NO2; OH; atom chlorowca; trifluorometyl; karboksyl; C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil lub Het, wymieniony aryl, aryloalkil lub Het są ewentualnie podstawione przez R22, przy czym
R22 oznacza C1-6alkil; C3-7cykloalky); C1-6alkoksyl; amino; mono- lub di-(C1-6alkilo)amino; C1-6alkiloamid; sulfonyloalkil; NO2; OH; atom chlorowca; trifluorometyl; karboksyl lub Het; lub
R2 jest wybrany z grupy obejmującej:
lub R2 oznacza 1-naftylometoksyl; 2-naftylometoksyl; benzylooksyl, 1-naftylooksyl; 2-naftylooksyl; lub chinolinooksyl niepodstawiony, mono- lub di-podstawiony przez R21 zdefiniowany powyżej; i część P1 oznacza cyklopropyl, oba ewentualnie podstawione przez R1, przy czym R1 oznacza C1-3alkil, C3-5cykloalkil lub C2-4alkenyl ewentualnie podstawiony przez atom chlorowca i wymieniony R1 przy atomie węgla 2 ma orientację syn względem karbonylu w pozycji 1, co reprezentuje rodnik:
lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól lub ester.
48. Związek o wzorze I według zastrz. 47, w którym B oznacza C6 lub Cigaryl ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, hydroksyalkil, atom chlorowca, chlorowcoalkil, nitro, cyjano, cyjanoalkil, amido, C1-6alkiloamid lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub
B oznacza Het ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, C1-6alkoksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, atom chlorowca, amido, C1-6alkiloamid lub amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub
B oznacza R4-SO2, w którym R4 oznacza C6 lub Cigaryl, C7-14aryloalkil lub Het, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil; amido, C1-6alkiloamid; B oznacza pochodną acylową o wzorze R4-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1-10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, hydroksyl lub C1-6alkoksyl; lub (ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, oba ewentualnie podstawione przez hydroksyl, karboksyl, (C1-6alkoksy) karbonyl; lub (iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl; lub (v) Het ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, hydroksyl, lub amino; lub B oznacza karboksyl o wzorze R4-O-C(O)-, w którym R4 oznacza
114
PL 204 850 B1 (i) C1-10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksy lub amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil, C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C16alkoksy)-karbonyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub (iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het lub (C1-6alkil)-Het, oba ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amido lub amino ewentualnie mono-podstawiony przez C1-6alkil;
lub B oznacza amid o wzorze R4-N(R5)-C(O)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkii ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksyl, C1-6alkoksyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy) -karbonyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez
C1-6alkil; i
R5 oznacza H lub metyl; lub
R4 oznacza (iii) amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil; lub (iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez C1-6alkil, hydroksyl, amino lub amido ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil; lub (v) Het ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, hydroksyl, amino lub amido; lub
B oznacza tioamid o wzorze R4-NH-C(S)-, w którym R4 oznacza (i) C1 -10alkil; lub (ii) C3-7cykloalkil; lub
Y oznacza H;
R3 oznacza łańcuch boczny tert-butylglicyny (Tbg), Ile, Val, Chg lub
R2 oznacza 1-naftylometoksyl; lub chinolinooksyl niepodstawiony, mono- lub di-podstawiony przez R21 zdefiniowany powyżej; lub
R2 oznacza:
w którym R21A oznacza C1-6alkil; C1-6alkoksyl; C6 lub C10aryl lub Het; C1-6tioalkil; atom chlorowca; amino ewentualnie mono-podstawiony przez C1-6alkil; lub C6 lub C10aryl, C7-16aryloalkil lub Het, ewentualnie podstawiony przez R22, przy czym R22 oznacza C1-6alkil, C1-6alkoksyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil lub Het;
P1 oznacza cyklopropyl, w którym atom węgla 1 ma konfigurację R, 1
R1 oznacza etyl, winyl, cyklopropyl, 1- lub 2-bromoetyl lub 1- lub 2-bromowinyl.
49. Związek o wzorze I według zastrz. 48, w którym B oznacza amid o wzorze R4-NH-C(O)-, w którym R4 oznacza
PL 204 850 B1
115
i) C1-10alkil ewentualnie podstawiony przez karboksyl, C1-6alkanoil, hydroksylC1-6alkoksy amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(ii) C3-7cykloalkil lub C4-10alkilocykloalkil, wszystkie ewentualnie podstawione przez karboksyl, (C1-6alkoksy) -karbonyl, amido, C1-6alkiloamid, amino ewentualnie mono- lub di-podstawiony przez C1-6alkil;
(iv) C6 lub C10aryl lub C7-16aryloalkil ewentualnie podstawiony przez C1-6alkil, hydroksyl, amino lub amido;
R3 oznacza łańcuch boczny Tbg, Chg lub Val;
2
R2 oznacza:
w których R22A oznacza C1-6alkil (taki jak metyl); C1-6alkoksyl (taki jak metoksyl); lub atom chlorowca (taki jak atom chloru); R22B oznacza C1-6alkil, amino ewentualnie mono-podstawiony przez C1-6alkil, amido lub C1-6alkiloamid; i R21B oznacza C1-6alkil, C1-6alkoksyl, amino, di(C1-6alkilo)amino, C1-6alkiloamid, NO2, OH, atom chlorowca, trifluorometyl lub karboksyl; i P1 oznacza:
PL346626A 1998-08-10 1999-08-09 Nowe analogi peptydowe, kompozycje farmaceutyczne je zawierające, sposoby wytwarzania analogów peptydowych, zastosowanie związków pośrednich do ich otrzymywania oraz zastosowanie analogów peptydowych PL204850B1 (pl)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US9593198P 1998-08-10 1998-08-10
US13238699P 1999-05-04 1999-05-04
PCT/CA1999/000736 WO2000009543A2 (en) 1998-08-10 1999-08-09 Hepatitis c inhibitor tri-peptides

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL346626A1 PL346626A1 (en) 2002-02-25
PL204850B1 true PL204850B1 (pl) 2010-02-26

Family

ID=26790767

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL346626A PL204850B1 (pl) 1998-08-10 1999-08-09 Nowe analogi peptydowe, kompozycje farmaceutyczne je zawierające, sposoby wytwarzania analogów peptydowych, zastosowanie związków pośrednich do ich otrzymywania oraz zastosowanie analogów peptydowych

Country Status (43)

Country Link
US (11) US6323180B1 (pl)
EP (2) EP2028186B1 (pl)
JP (2) JP4485685B2 (pl)
KR (2) KR100631439B1 (pl)
CN (2) CN101143892B (pl)
AR (3) AR020880A1 (pl)
AT (1) ATE430158T1 (pl)
AU (1) AU769738B2 (pl)
BG (1) BG65738B1 (pl)
BR (2) BR9917805B1 (pl)
CA (2) CA2338946C (pl)
CO (1) CO5261542A1 (pl)
CY (2) CY1109291T1 (pl)
CZ (2) CZ301268B6 (pl)
DE (1) DE69940817D1 (pl)
DK (2) DK1105413T3 (pl)
EA (1) EA003906B1 (pl)
EE (1) EE05517B1 (pl)
ES (2) ES2326707T3 (pl)
HK (1) HK1040085B (pl)
HR (1) HRP20010102B1 (pl)
HU (2) HU229262B1 (pl)
ID (1) ID27839A (pl)
IL (3) IL141012A0 (pl)
IN (3) IN211493B (pl)
ME (1) ME00381B (pl)
MX (2) MX257413B (pl)
MY (1) MY127538A (pl)
NO (2) NO328952B1 (pl)
NZ (1) NZ510396A (pl)
PE (1) PE20000949A1 (pl)
PH (1) PH11999002002B1 (pl)
PL (1) PL204850B1 (pl)
PT (2) PT1105413E (pl)
RS (3) RS20090459A (pl)
SA (1) SA99200617B1 (pl)
SI (2) SI1105413T1 (pl)
SK (2) SK288068B6 (pl)
TR (2) TR200100432T2 (pl)
TW (1) TWI250165B (pl)
UA (1) UA75026C2 (pl)
WO (1) WO2000009543A2 (pl)
ZA (1) ZA200100971B (pl)

Families Citing this family (423)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU227742B1 (en) 1996-10-18 2012-02-28 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus ns3 protease
US6767991B1 (en) 1997-08-11 2004-07-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C inhibitor peptides
US6323180B1 (en) * 1998-08-10 2001-11-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Hepatitis C inhibitor tri-peptides
UA74546C2 (en) * 1999-04-06 2006-01-16 Boehringer Ingelheim Ca Ltd Macrocyclic peptides having activity relative to hepatitis c virus, a pharmaceutical composition and use of the pharmaceutical composition
US6608027B1 (en) 1999-04-06 2003-08-19 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
SK18862001A3 (sk) * 1999-06-25 2002-11-06 Basf Aktiengesellschaft Gény Corynebacterium glutamicum kódujúce proteíny metabolických dráh
DE60137207D1 (de) 2000-04-05 2009-02-12 Schering Corp Makrozyklische inhibitoren der ns3-serinprotease des hepatitis c-virus mit stickstoffhaltigen zyklischen p2-gruppen
SK14952002A3 (sk) 2000-04-19 2003-03-04 Schering Corporation Makrocyklické zlúčeniny, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie
WO2001085720A1 (en) * 2000-05-05 2001-11-15 Smithkline Beecham Corporation Novel anti-infectives
PE20011350A1 (es) 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
AR034127A1 (es) * 2000-07-21 2004-02-04 Schering Corp Imidazolidinonas como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c, composicion farmaceutica, un metodo para su preparacion, y el uso de las mismas para la manufactura de un medicamento
AR029851A1 (es) 2000-07-21 2003-07-16 Dendreon Corp Nuevos peptidos como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c
NZ523781A (en) 2000-07-21 2004-10-29 Corvas Int Inc Novel peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
RU2355700C9 (ru) 2000-07-21 2010-03-20 Шеринг Корпорейшн Новые пептиды как ингибиторы ns3-серинпротеазы вируса гепатита с
SV2003000617A (es) 2000-08-31 2003-01-13 Lilly Co Eli Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m
US6846806B2 (en) 2000-10-23 2005-01-25 Bristol-Myers Squibb Company Peptide inhibitors of Hepatitis C virus NS3 protein
AU2002248147B2 (en) * 2000-11-20 2006-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C tripeptide inhibitors
HUP0303436A2 (hu) 2000-12-12 2004-01-28 Schering Corp. Diaril-peptidek mint a hepatitis C vírus NS3-szerin proteáz inhibitorai, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk
CN1267446C (zh) 2001-01-22 2006-08-02 默克公司 作为依赖于rna的rna病毒聚合酶的抑制剂的核苷衍生物
KR100926244B1 (ko) 2001-07-11 2009-11-12 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 브릿지된 바이사이클릭 세린 프로테아제 억제제
CN1289338C (zh) 2001-09-14 2006-12-13 本田技研工业株式会社 用于车辆的前格栅碰撞缓冲结构
EP1441720B8 (en) * 2001-10-24 2012-03-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine protease, particularly hepatitis c virus ns3-ns4a protease, incorporating a fused ring system
EP1440068A1 (en) * 2001-11-02 2004-07-28 Glaxo Group Limited Acyl dihydro pyrrole derivatives as hcv inhibitors
US6867185B2 (en) * 2001-12-20 2005-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
KR20040077767A (ko) 2002-01-23 2004-09-06 쉐링 코포레이션 Ｃ형 간염 바이러스 감염 치료용 ｎｓ3-세린 프로테아제억제제로서의 프롤린 화합물
US7119072B2 (en) * 2002-01-30 2006-10-10 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
CA2370396A1 (en) * 2002-02-01 2003-08-01 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor tri-peptides
CA2369970A1 (en) * 2002-02-01 2003-08-01 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor tri-peptides
US7091184B2 (en) * 2002-02-01 2006-08-15 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US6642204B2 (en) * 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
MXPA04009938A (es) 2002-04-11 2004-12-13 Vertex Pharma Inhibidores de serina proteasas, en particular la proteasa ns3-ns4a del hcv.
JP4312711B2 (ja) * 2002-05-20 2009-08-12 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー ヘテロ環式スルホンアミドｃ型肝炎ウイルス阻害剤
ES2361011T3 (es) * 2002-05-20 2011-06-13 Bristol-Myers Squibb Company Inhibidores del virus de la hepatitis c.
MY140680A (en) * 2002-05-20 2010-01-15 Bristol Myers Squibb Co Hepatitis c virus inhibitors
ES2315568T3 (es) * 2002-05-20 2009-04-01 Bristol-Myers Squibb Company Inhibidores del virus de la hepatitis c basados en cicloalquilo p1' sustituido.
KR100457857B1 (ko) * 2002-05-23 2004-11-18 (주) 비엔씨바이오팜 2-[2-(3-인돌릴)에틸아미노]피리딘 유도체, 그 제조방법및 이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물
PT1523489E (pt) 2002-06-28 2014-06-24 Centre Nat Rech Scient Profármacos de nucleósido modificado em 2' e 3' para tratamento de infecções por flaviridae
US20040033959A1 (en) * 2002-07-19 2004-02-19 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions for hepatitis C viral protease inhibitors
US7183302B2 (en) * 2002-08-12 2007-02-27 Bristol-Myers Squibb Company Iminothiazolidinones as inhibitors of HCV replication
EP1408031A1 (en) * 2002-10-09 2004-04-14 3 D Gene Pharma Pyrolidine derivatives useful in treatment of hepatitis C virus infection
PL376454A1 (pl) * 2002-10-24 2005-12-27 Glaxo Group Limited Pochodne 1-acylo-pirolidynowe do leczenia zakażeńwirusowych
US20050075279A1 (en) * 2002-10-25 2005-04-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US7601709B2 (en) 2003-02-07 2009-10-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
EP1601685A1 (en) * 2003-03-05 2005-12-07 Boehringer Ingelheim International GmbH Hepatitis c inhibiting compounds
WO2004101602A2 (en) * 2003-03-05 2004-11-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
KR100960802B1 (ko) * 2003-03-08 2010-06-01 주식회사유한양행 씨형 간염바이러스 감염 치료용 엔에스3 프로테아제 억제제
JP4231524B2 (ja) * 2003-04-10 2009-03-04 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 大環状化合物の製造方法
ATE422895T1 (de) * 2003-04-16 2009-03-15 Bristol Myers Squibb Co Makrocyclische isochinolinpeptidinhibitoren des hepatitis-c-virus
US7176208B2 (en) 2003-04-18 2007-02-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
US6846836B2 (en) 2003-04-18 2005-01-25 Bristol-Myers Squibb Company N-substituted phenylurea inhibitors of mitochondrial F1F0 ATP hydrolase
DE602004023924D1 (en) 2003-04-18 2009-12-17 Enanta Pharm Inc Ease-hemmer
CL2004001161A1 (es) * 2003-05-21 2005-04-08 Boehringer Ingelheim Int Compuestos describe compuestos derivados de quinolina; composicion farmaceutica; y su uso para tratar una enfermedad causada por el virus de la hepatitis c.
SI2604620T2 (sl) 2003-05-30 2024-10-30 Gilead Pharmasset Llc Modificirani fluorirani nukleozidni analogi
US7273851B2 (en) 2003-06-05 2007-09-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Tri-peptide hepatitis C serine protease inhibitors
WO2004113365A2 (en) * 2003-06-05 2004-12-29 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis c serine protease tri-peptide inhibitors
US7125845B2 (en) * 2003-07-03 2006-10-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Aza-peptide macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
US20050075309A1 (en) 2003-07-25 2005-04-07 Richard Storer Purine nucleoside analogues for treating Flaviviridae including hepatitis C
US7449447B2 (en) 2003-08-26 2008-11-11 Schering Corporation Peptidomimetic NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
US8025899B2 (en) 2003-08-28 2011-09-27 Abbott Laboratories Solid pharmaceutical dosage form
US8377952B2 (en) 2003-08-28 2013-02-19 Abbott Laboratories Solid pharmaceutical dosage formulation
PE20050374A1 (es) 2003-09-05 2005-05-30 Vertex Pharma Inhibidores de proteasas de serina, en particular proteasa ns3-ns4a del vhc
US7642235B2 (en) * 2003-09-22 2010-01-05 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
CN1894274A (zh) * 2003-09-26 2007-01-10 先灵公司 丙肝病毒ns3丝氨酸蛋白酶的大环抑制剂
EP1692157B1 (en) 2003-10-10 2013-04-17 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
US7491794B2 (en) * 2003-10-14 2009-02-17 Intermune, Inc. Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication
EP1680137B1 (en) 2003-10-14 2012-11-21 F. Hoffmann-La Roche Ltd. Macrocyclic carboxylic acid and acylsulfonamide compound as inhibitor of HCV replication
CN1894276B (zh) 2003-10-27 2010-06-16 威特克斯医药股份有限公司 Hcv ns3-ns4a蛋白酶抗药性突变体
EP1944042A1 (en) 2003-10-27 2008-07-16 Vertex Pharmceuticals Incorporated Combinations for HCV treatment
US8187874B2 (en) 2003-10-27 2012-05-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Drug discovery method
US20050119318A1 (en) * 2003-10-31 2005-06-02 Hudyma Thomas W. Inhibitors of HCV replication
US7132504B2 (en) 2003-11-12 2006-11-07 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2005051980A1 (en) * 2003-11-20 2005-06-09 Schering Corporation Depeptidized inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
US7135462B2 (en) 2003-11-20 2006-11-14 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7309708B2 (en) * 2003-11-20 2007-12-18 Birstol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
ATE424926T1 (de) * 2003-12-08 2009-03-15 Boehringer Ingelheim Int Abtrennung von ruthenium-nebenprodukten durch behandlung mit überkritischen flüssigkeiten
CA2549660A1 (en) 2003-12-15 2005-06-30 Japan Tobacco Inc. Cyclopropane compounds and pharmaceutical use thereof
GB0500020D0 (en) 2005-01-04 2005-02-09 Novartis Ag Organic compounds
CA2549851C (en) * 2004-01-21 2012-09-11 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus
EP1713822B1 (en) * 2004-01-30 2010-03-17 Medivir AB Hcv ns-3 serine protease inhibitors
SE0400199D0 (sv) * 2004-01-30 2004-01-30 Medivir Ab HCV Protease inhbitors
CN1938332B (zh) 2004-02-04 2011-10-19 沃泰克斯药物股份有限公司 丝氨酸蛋白酶、特别是hcv ns3-ns4a蛋白酶的抑制剂
US20050182252A1 (en) 2004-02-13 2005-08-18 Reddy K. R. Novel 2'-C-methyl nucleoside derivatives
KR20120091276A (ko) 2004-02-20 2012-08-17 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 바이러스 폴리머라제 억제제
US20070049593A1 (en) 2004-02-24 2007-03-01 Japan Tobacco Inc. Tetracyclic fused heterocyclic compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor
PT1719773E (pt) 2004-02-24 2009-06-03 Japan Tobacco Inc Compostos heterotetracíclicos fundidos e a sua utilização como inibidores da polimerase do hcv
CN1946692A (zh) 2004-02-27 2007-04-11 先灵公司 作为丙型肝炎病毒ns3丝氨酸蛋白酶抑制剂的3,4－(环戊基)－稠合的脯氨酸化合物
BRPI0508186A (pt) 2004-02-27 2007-08-14 Schering Corp compostos como inibidores de ns3 serina protease de vìrus da hepatite c
ATE470660T1 (de) * 2004-02-27 2010-06-15 Schering Corp Schwefelverbindungen als inhibitoren der ns3- serinprotease des hepatitis-c-virus
CN1946691A (zh) 2004-02-27 2007-04-11 先灵公司 作为丙型肝炎病毒ns3丝氨酸蛋白酶抑制剂的化合物
US7816326B2 (en) 2004-02-27 2010-10-19 Schering Corporation Sulfur compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
TW200536528A (en) 2004-02-27 2005-11-16 Schering Corp Novel inhibitors of hepatitis C virus NS3 protease
US7635694B2 (en) 2004-02-27 2009-12-22 Schering Corporation Cyclobutenedione-containing compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
CN1946690A (zh) * 2004-02-27 2007-04-11 先灵公司 用作丙型肝炎病毒ns3丝氨酸蛋白酶抑制剂的含环丁烯二酮基团化合物
CA2768700C (en) * 2004-03-12 2014-04-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates for the preparation of aspartic acetal caspase inhibitors
AU2005224092A1 (en) * 2004-03-15 2005-09-29 Boehringer Ingelheim International, Gmbh Process for preparing macrocyclic dipeptides which are suitable for the treatment of hepatitis C viral infections
GEP20104926B (en) * 2004-03-30 2010-03-25 Intermune Inc Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication
CN1980657A (zh) 2004-05-05 2007-06-13 耶鲁大学 新颖的抗病毒赛菊宁黄质类似物
US7399749B2 (en) 2004-05-20 2008-07-15 Schering Corporation Substituted prolines as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
US7514557B2 (en) * 2004-05-25 2009-04-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Process for preparing acyclic HCV protease inhibitors
CA2568379A1 (en) 2004-06-15 2005-12-29 Merck & Co., Inc. C-purine nucleoside analogs as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
AU2005267421B2 (en) 2004-06-24 2010-06-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Nucleoside aryl phosphoramidates for the treatment of RNA-dependent RNA viral infection
CA2556669C (en) * 2004-06-28 2012-05-01 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
AR050174A1 (es) * 2004-07-16 2006-10-04 Gilead Sciences Inc Derivados de fosfonatos con actividad antiviral. composiciones farmaceuticas
UY29016A1 (es) * 2004-07-20 2006-02-24 Boehringer Ingelheim Int Analogos de dipeptidos inhibidores de la hepatitis c
WO2006007708A1 (en) * 2004-07-20 2006-01-26 Boehringer Engelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
CN101023094B (zh) * 2004-07-21 2011-05-18 法莫赛特股份有限公司 烷基取代的2-脱氧-2-氟代-d-呋喃核糖基嘧啶和嘌呤及其衍生物的制备
US7597884B2 (en) 2004-08-09 2009-10-06 Alios Biopharma, Inc. Hyperglycosylated polypeptide variants and methods of use
WO2006020580A2 (en) * 2004-08-09 2006-02-23 Alios Biopharma Inc. Synthetic hyperglycosylated, protease-resistant polypeptide variants, oral formulations and methods of using the same
ATE513844T1 (de) 2004-08-27 2011-07-15 Schering Corp Acylsulfonamidverbindungen als inhibitoren der ns3-serinprotease des hepatitis-c-virus
US8492539B2 (en) * 2004-09-14 2013-07-23 Gilead Pharmasset Llc Preparation of 2′-fluoro-2′-alkyl-substituted or other optionally substituted ribofuranosyl pyrimidines and purines and their derivatives
WO2006030892A1 (ja) * 2004-09-17 2006-03-23 Nippon Shinyaku Co., Ltd. 複素環化合物の製造方法
CN102160891A (zh) 2004-10-01 2011-08-24 威特克斯医药股份有限公司 Hcv ns3-ns4a蛋白酶抑制
US7659263B2 (en) 2004-11-12 2010-02-09 Japan Tobacco Inc. Thienopyrrole compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor
US7323447B2 (en) * 2005-02-08 2008-01-29 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
PL1863833T3 (pl) 2005-03-08 2014-03-31 Boehringer Ingelheim Int Sposób otrzymywania związków makrocyklicznych
AU2006242475B2 (en) * 2005-05-02 2011-07-07 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
US7592336B2 (en) * 2005-05-10 2009-09-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
MX2007014117A (es) 2005-05-13 2008-02-05 Virochem Pharma Inc Compuestos y metodos para el tratamiento o prevencion de infecciones de flavivirus.
EP1891089B1 (en) 2005-06-02 2014-11-05 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV protease inhibitors in combination with food
JP5160415B2 (ja) * 2005-06-02 2013-03-13 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション 医薬処方物およびそれを用いる治療方法
US20060276404A1 (en) * 2005-06-02 2006-12-07 Anima Ghosal Medicaments and methods combining a HCV protease inhibitor and an AKR competitor
US20070237818A1 (en) * 2005-06-02 2007-10-11 Malcolm Bruce A Controlled-release formulation of HCV protease inhibitor and methods using the same
AR054778A1 (es) 2005-06-17 2007-07-18 Novartis Ag Uso de sangliferina en hcv
US7608592B2 (en) 2005-06-30 2009-10-27 Virobay, Inc. HCV inhibitors
CN101242816B (zh) * 2005-06-30 2012-10-31 维罗贝股份有限公司 Hcv抑制剂
US7601686B2 (en) 2005-07-11 2009-10-13 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2007009227A1 (en) * 2005-07-20 2007-01-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
AR057456A1 (es) * 2005-07-20 2007-12-05 Merck & Co Inc Inhibidores de la proteasa ns3 del vhc
CN101263156A (zh) 2005-07-25 2008-09-10 因特蒙公司 C型肝炎病毒复制的新颖大环抑制剂
PE20070211A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
BRPI0614696A2 (pt) 2005-07-29 2011-04-12 Tibotec Pharm Ltd inibidores macrocìclicos de vìrus da hepatite c
JP5426164B2 (ja) 2005-07-29 2014-02-26 ヤンセン・アールアンドデイ・アイルランド Ｃ型肝炎ウイルスの大環式インヒビター
AR055361A1 (es) 2005-07-29 2007-08-22 Medivir Ab Inhibidores macrociclicos del virus de la hepatitis c
PE20070210A1 (es) 2005-07-29 2007-04-16 Tibotec Pharm Ltd Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
DE602006019883D1 (de) 2005-07-29 2011-03-10 Medivir Ab Makrocyclische inhibitoren des hepatitis-c-virus
PE20070343A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Inhibidores macrociclicos del virus de la hepatitis c
MY141245A (en) 2005-07-29 2010-03-31 Tibotec Pharm Ltd Macrocylic inhibitors of hepatitis c virus
CN101273030B (zh) 2005-07-29 2012-07-18 泰博特克药品有限公司 丙型肝炎病毒的大环抑制剂
RU2008107972A (ru) * 2005-08-01 2009-09-10 Мерк энд Ко., Инк. (US) Макроциклические пептиды в качестве ингибиторов ns3-протеазы hcv
RU2441020C2 (ru) 2005-08-02 2012-01-27 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед Ингибиторы серинпротеазы
CA2618560A1 (en) 2005-08-09 2007-02-22 Merck & Co., Inc. Ribonucleoside cyclic acetal derivatives for the treatment of rna-dependent rna viral infection
EP1915378A4 (en) 2005-08-12 2009-07-22 Boehringer Ingelheim Int VIRUS POLYMERASE INHIBITORS
PT1934179E (pt) 2005-08-19 2010-07-12 Vertex Pharma PROCESSOS E INTERMEDIáRIOS
US8399615B2 (en) 2005-08-19 2013-03-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates
AR055395A1 (es) 2005-08-26 2007-08-22 Vertex Pharma Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c
US7964624B1 (en) 2005-08-26 2011-06-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
CA2621360C (en) 2005-09-09 2013-12-24 Boehringer Ingelheim International Gmbh Ring-closing metathesis process for the preparation of macrocyclic peptides
CN101415705B (zh) 2005-10-11 2011-10-26 因特蒙公司 抑制丙型肝炎病毒复制的化合物和方法
US7772183B2 (en) 2005-10-12 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7741281B2 (en) 2005-11-03 2010-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
JP5409008B2 (ja) 2005-11-11 2014-02-05 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｃ型肝炎ウイルス改変体
US7705138B2 (en) 2005-11-11 2010-04-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hepatitis C virus variants
WO2007081517A2 (en) 2005-12-21 2007-07-19 Abbott Laboratories Anti-viral compounds
EP2345652A1 (en) 2005-12-21 2011-07-20 Abbott Laboratories Antiviral compounds
ES2378473T3 (es) * 2005-12-21 2012-04-12 Abbott Laboratories Compuestos antivirales
DE602006015861D1 (de) 2005-12-21 2010-09-09 Abbott Lab Antivirale verbindungen
US7816348B2 (en) 2006-02-03 2010-10-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
EP1991229A2 (en) 2006-02-27 2008-11-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same
EP1996565A2 (en) 2006-03-08 2008-12-03 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Substituted aminothiazole derivatives with anti-hcv activity
EP2194039A1 (en) 2006-03-16 2010-06-09 Vertex Pharmceuticals Incorporated Process for preparing optically enriched compounds
WO2007133865A2 (en) 2006-04-11 2007-11-22 Novartis Ag Hcv/hiv inhibitors an their uses
GB0609492D0 (en) * 2006-05-15 2006-06-21 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
EP2027143A2 (en) 2006-05-23 2009-02-25 Irm Llc Compounds and compositions as channel activating protease inhibitors
US20080187516A1 (en) * 2006-06-06 2008-08-07 Ying Sun Acyclic oximyl hepatitis c protease inhibitors
US7728148B2 (en) * 2006-06-06 2010-06-01 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Acyclic oximyl hepatitis C protease inhibitors
US8268776B2 (en) 2006-06-06 2012-09-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocylic oximyl hepatitis C protease inhibitors
US9526769B2 (en) 2006-06-06 2016-12-27 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocylic oximyl hepatitis C protease inhibitors
GB0612423D0 (en) * 2006-06-23 2006-08-02 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
PE20080992A1 (es) * 2006-06-26 2008-08-06 Enanta Pharm Inc Quinoxalinil macrociclicos inhibidores de serina proteasa del virus de la hepatitis c
KR20090024834A (ko) * 2006-07-05 2009-03-09 인터뮨, 인크. Ｃ형 간염 바이러스 복제의 신규 억제제
WO2008008776A2 (en) 2006-07-11 2008-01-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US7635683B2 (en) * 2006-08-04 2009-12-22 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl tripeptide hepatitis C virus inhibitors
US20090035267A1 (en) * 2007-07-31 2009-02-05 Moore Joel D Acyclic, pyridazinone-derived hepatitis c serine protease inhibitors
US7718612B2 (en) * 2007-08-02 2010-05-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Pyridazinonyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
EP1886685A1 (en) 2006-08-11 2008-02-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods, uses and compositions for modulating replication of hcv through the farnesoid x receptor (fxr) activation or inhibition
US7582605B2 (en) * 2006-08-11 2009-09-01 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Phosphorus-containing hepatitis C serine protease inhibitors
US20080038225A1 (en) * 2006-08-11 2008-02-14 Ying Sun Triazolyl acyclic hepatitis c serine protease inhibitors
US7687459B2 (en) * 2006-08-11 2010-03-30 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Arylalkoxyl hepatitis C virus protease inhibitors
WO2008022006A2 (en) * 2006-08-11 2008-02-21 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Arylalkoxyl hepatitis c virus protease inhibitors
US20090098085A1 (en) * 2006-08-11 2009-04-16 Ying Sun Tetrazolyl acyclic hepatitis c serine protease inhibitors
US7605126B2 (en) * 2006-08-11 2009-10-20 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Acylaminoheteroaryl hepatitis C virus protease inhibitors
CA2660555A1 (en) 2006-08-17 2008-02-21 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
CA2666814A1 (en) * 2006-08-21 2008-05-29 United Therapeutics Corporation Combination therapy for treatment of viral infections
AU2007309546A1 (en) * 2006-10-24 2008-05-02 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. HCV NS3 protease inhibitors
US8309540B2 (en) * 2006-10-24 2012-11-13 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
US8138164B2 (en) * 2006-10-24 2012-03-20 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
EP2083844B1 (en) * 2006-10-27 2013-11-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Hcv ns3 protease inhibitors
EP2086982B1 (en) * 2006-10-27 2018-08-29 Merck Sharp & Dohme Corp. Hcv ns3 protease inhibitors
US8343477B2 (en) 2006-11-01 2013-01-01 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
WO2008057995A2 (en) * 2006-11-02 2008-05-15 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
US7772180B2 (en) 2006-11-09 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
AP2579A (en) 2006-11-15 2013-01-29 Virochem Pharma Inc Thiophene analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
US7888464B2 (en) 2006-11-16 2011-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8003604B2 (en) 2006-11-16 2011-08-23 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7763584B2 (en) 2006-11-16 2010-07-27 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
ES2470568T3 (es) 2006-11-17 2014-06-24 Janssen R&D Ireland Inhibidores macroc�clicos del virus de la hepatitis C
WO2008073282A2 (en) * 2006-12-07 2008-06-19 Schering Corporation Ph sensitive matrix formulation
GB0625345D0 (en) * 2006-12-20 2007-01-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic compounds
EP2094276A4 (en) * 2006-12-20 2011-01-05 Abbott Lab ANTIVIRAL COMPOUNDS
GB0625349D0 (en) * 2006-12-20 2007-01-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic compounds
CN103224506A (zh) * 2006-12-20 2013-07-31 P.安杰莱蒂分子生物学研究所 抗病毒的吲哚
WO2008074035A1 (en) * 2006-12-27 2008-06-19 Abbott Laboratories Hcv protease inhibitors and uses thereof
US20080207528A1 (en) * 2007-02-01 2008-08-28 Syaulan Yang Hcv protease inhibitors
CN101903392A (zh) 2007-02-27 2010-12-01 弗特克斯药品有限公司 丝氨酸蛋白酶的抑制剂
BRPI0807907A2 (pt) 2007-02-27 2017-05-16 Vertex Pharma co-cristais e composições farmacêuticas compreendendo os mesmos.
WO2008106167A1 (en) * 2007-02-28 2008-09-04 Conatus Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy comprising matrix metalloproteinase inhibitors and caspase inhibitors for the treatment of liver diseases
PL2144604T3 (pl) 2007-02-28 2012-02-29 Conatus Pharmaceuticals Inc Sposoby leczenia przewlekłego zapalenia wątroby typu C z zastosowaniem RO 113-0830
MX2009010205A (es) * 2007-03-23 2009-10-19 Schering Corp Inhibidores de cetoamida p1-no epimerizables de proteasa ns3 de virus de hepatitis c.
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
US7910587B2 (en) * 2007-04-26 2011-03-22 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl dipeptide hepatitis C virus inhibitors
US20080317712A1 (en) * 2007-04-26 2008-12-25 Deqiang Niu Arylpiperidinyl and arylpyrrolidinyl tripeptide hepatitis c serine protease inhibitors
US8377872B2 (en) 2007-04-26 2013-02-19 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Cyclic P3 tripeptide hepatitis C serine protease inhibitors
US20080292587A1 (en) * 2007-04-26 2008-11-27 Ying Sun Oximyl dipeptide hepatitis c protease inhibitors
US20080267917A1 (en) * 2007-04-26 2008-10-30 Deqiang Niu N-functionalized amides as hepatitis c serine protease inhibitors
EP2160392A2 (en) * 2007-05-03 2010-03-10 Intermune, Inc. Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication
CN102872461A (zh) 2007-05-04 2013-01-16 弗特克斯药品有限公司 用于治疗hcv感染的组合治疗
CA2685888A1 (en) * 2007-05-09 2008-11-20 Pfizer Inc. Substituted heterocyclic derivatives and their pharmaceutical use and compositions
WO2008141227A1 (en) * 2007-05-10 2008-11-20 Intermune, Inc. Novel peptide inhibitors of hepatitis c virus replication
GB0709791D0 (en) * 2007-05-22 2007-06-27 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
AP2874A (en) 2007-06-29 2014-03-31 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds
AP2009005073A0 (en) 2007-06-29 2009-12-31 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds
AU2008277442A1 (en) * 2007-07-17 2009-01-22 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti Spa Macrocyclic indole derivatives for the treatment of hepatitis C infections
WO2009010804A1 (en) * 2007-07-19 2009-01-22 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Macrocyclic compounds as antiviral agents
JP2010535156A (ja) 2007-08-03 2010-11-18 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウイルスポリメラーゼ阻害剤
TW200922933A (en) 2007-08-30 2009-06-01 Vertex Pharma Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same
GB0718575D0 (en) 2007-09-24 2007-10-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Nucleoside derivatives as inhibitors of viral polymerases
US8419332B2 (en) * 2007-10-19 2013-04-16 Atlas Bolt & Screw Company Llc Non-dimpling fastener
US20090111757A1 (en) * 2007-10-25 2009-04-30 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
US8383583B2 (en) 2007-10-26 2013-02-26 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic, pyridazinone-containing hepatitis C serine protease inhibitors
US8304385B2 (en) 2007-11-14 2012-11-06 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic tetrazolyl hepatitis C serine protease inhibitors
US8263549B2 (en) * 2007-11-29 2012-09-11 Enanta Pharmaceuticals, Inc. C5-substituted, proline-derived, macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
WO2009070689A1 (en) * 2007-11-29 2009-06-04 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic, c5-substituted proline derivatives as inhibitors of the hepatitis c virus ns3 protease
US8361958B2 (en) * 2007-12-05 2013-01-29 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Oximyl HCV serine protease inhibitors
MX2010006210A (es) * 2007-12-05 2010-08-10 Enanta Pharm Inc Inhibidores de serina proteasa de hcv de tripeptido fluorado.
US8193346B2 (en) 2007-12-06 2012-06-05 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Process for making macrocyclic oximyl hepatitis C protease inhibitors
US8273709B2 (en) 2007-12-14 2012-09-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Triazole-containing macrocyclic HCV serine protease inhibitors
MX2010006313A (es) 2007-12-19 2010-06-25 Boehringer Ingelheim Int Inhibidores de la polimerasa virica.
US8202996B2 (en) 2007-12-21 2012-06-19 Bristol-Myers Squibb Company Crystalline forms of N-(tert-butoxycarbonyl)-3-methyl-L-valyl-(4R)-4-((7-chloro-4-methoxy-1-isoquinolinyl)oxy)-N- ((1R,2S)-1-((cyclopropylsulfonyl)carbamoyl)-2-vinylcyclopropyl)-L-prolinamide
US8101567B2 (en) * 2008-01-24 2012-01-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Heteroaryl-containing tripeptide HCV serine protease inhibitors
WO2009094443A1 (en) * 2008-01-24 2009-07-30 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Difluorinated tripeptides as hcv serine protease inhibitors
CN101977915B (zh) 2008-02-04 2014-08-13 埃迪尼克斯医药公司 大环丝氨酸蛋白酶抑制剂
MX2010008371A (es) * 2008-02-07 2010-10-04 Virobay Inc Inhibidores de catepsina b.
EP2268285B1 (en) 2008-02-25 2018-06-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Therapeutic compounds
CN102015652A (zh) * 2008-03-20 2011-04-13 益安药业 作为丙型肝炎病毒抑制剂的氟化大环化合物
TW200946541A (en) * 2008-03-27 2009-11-16 Idenix Pharmaceuticals Inc Solid forms of an anti-HIV phosphoindole compound
BRPI0911260A2 (pt) 2008-04-15 2015-09-29 Intermune Inc composto, composição farmacêutica, método de inibição de atividade da protease de ns3/ns4 in, vitro e usos de compostos
US8163921B2 (en) * 2008-04-16 2012-04-24 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CA2720850A1 (en) * 2008-04-28 2009-11-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Hcv ns3 protease inhibitors
US8211891B2 (en) * 2008-04-30 2012-07-03 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Difluoromethyl-containing macrocyclic compounds as hepatitis C virus inhibitors
US20090285774A1 (en) * 2008-05-15 2009-11-19 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
CN101580535B (zh) * 2008-05-16 2012-10-03 太景生物科技股份有限公司 丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂
WO2009148923A1 (en) 2008-05-29 2009-12-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US7964560B2 (en) * 2008-05-29 2011-06-21 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
EP2307434B1 (en) 2008-07-02 2014-02-12 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
PL2310095T3 (pl) 2008-07-22 2013-03-29 Msd Italia Srl Makrocykliczne związki chinoksaliny jako inhibitory proteazy NS3 HCV
CN102099335A (zh) 2008-07-23 2011-06-15 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 杂环抗病毒化合物
US8207341B2 (en) 2008-09-04 2012-06-26 Bristol-Myers Squibb Company Process or synthesizing substituted isoquinolines
UY32099A (es) 2008-09-11 2010-04-30 Enanta Pharm Inc Inhibidores macrocíclicos de serina proteasas de hepatitis c
EA018603B1 (ru) 2008-09-16 2013-09-30 Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх Кристаллические формы 2-тиазолил-4-хинолинилоксипроизводного, активного ингибитора hcv
EA019965B1 (ru) * 2008-09-17 2014-07-30 Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх Комбинация ингибитора протеазы ns3 hcv с интерфероном и рибавирином
MX2011002846A (es) 2008-09-26 2011-04-07 Hoffmann La Roche Derivados de pirina o pirazina para tratar el virus de la hepatitis c.
US8044087B2 (en) 2008-09-29 2011-10-25 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8563505B2 (en) 2008-09-29 2013-10-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP3025727A1 (en) 2008-10-02 2016-06-01 The J. David Gladstone Institutes Methods of treating liver disease
KR20110075019A (ko) * 2008-10-15 2011-07-05 인터뮨, 인크. 치료용 항바이러스성 펩티드
AU2009309813A1 (en) 2008-10-30 2010-05-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterocyclic antiviral arylpyridone derivatives
HRP20140097T1 (hr) * 2008-11-21 2014-03-14 Boehringer Ingelheim International Gmbh Farmaceutski sastav jakog hcv-inhibitora za oralnu primjenu
HK1203929A1 (en) 2008-12-03 2015-11-06 普雷西迪奥制药公司 Inhibitors of hcv ns5a
JP2012510523A (ja) 2008-12-03 2012-05-10 プレシディオ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｈｃｖｎｓ５ａの阻害剤
US20100272674A1 (en) * 2008-12-04 2010-10-28 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
US8283310B2 (en) 2008-12-15 2012-10-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
TW201034663A (en) * 2008-12-19 2010-10-01 Gilead Sciences Inc HCV NS3 protease inhibitors
US20100173939A1 (en) 2008-12-22 2010-07-08 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
AU2009331660A1 (en) 2008-12-22 2011-06-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterocyclic antiviral compounds
US8716263B2 (en) 2008-12-23 2014-05-06 Gilead Pharmasset Llc Synthesis of purine nucleosides
PA8855601A1 (es) 2008-12-23 2010-07-27 Forformidatos de nucleósidos
US8551973B2 (en) 2008-12-23 2013-10-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside analogs
JP2012514605A (ja) 2009-01-07 2012-06-28 サイネクシス，インコーポレーテッド Ｈｃｖおよびｈｉｖ感染の治療への使用におけるシクロスポリン誘導体
WO2010082050A1 (en) 2009-01-16 2010-07-22 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Macrocyclic and 7-aminoalkyl-substituted benzoxazocines for treatment of hepatitis c infections
GB0900914D0 (en) 2009-01-20 2009-03-04 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
US8102720B2 (en) * 2009-02-02 2012-01-24 Qualcomm Incorporated System and method of pulse generation
AR075584A1 (es) 2009-02-27 2011-04-20 Intermune Inc COMPOSICIONES TERAPEUTICAS QUE COMPRENDEN beta-D-2'-DESOXI-2'-FLUORO-2'-C-METILCITIDINA Y UN DERIVADO DE ACIDO ISOINDOL CARBOXILICO Y SUS USOS. COMPUESTO.
JP5690286B2 (ja) 2009-03-04 2015-03-25 イデニク プハルマセウティカルス，インコーポレイテッド ホスホチオフェン及びホスホチアゾールｈｃｖポリメラーゼ阻害剤
JP2012519661A (ja) 2009-03-06 2012-08-30 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 抗ウイルス性複素環化合物
WO2010107739A2 (en) 2009-03-18 2010-09-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions of treating a flaviviridae family viral infection
CA2755658A1 (en) 2009-03-27 2010-09-30 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Fused ring inhibitors of hepatitis c
US8927576B2 (en) 2009-04-06 2015-01-06 PTC Therpeutics, Inc. HCV inhibitor and therapeutic agent combinations
JP2012523419A (ja) 2009-04-08 2012-10-04 イデニク プハルマセウティカルス，インコーポレイテッド 大環状セリンプロテアーゼ阻害剤
US20110182850A1 (en) 2009-04-10 2011-07-28 Trixi Brandl Organic compounds and their uses
US8512690B2 (en) 2009-04-10 2013-08-20 Novartis Ag Derivatised proline containing peptide compounds as protease inhibitors
SG175774A1 (en) 2009-04-25 2011-12-29 Hoffmann La Roche Heterocyclic antiviral compounds
CN102458444A (zh) 2009-05-13 2012-05-16 英安塔制药有限公司 用作丙型肝炎病毒抑制剂的大环化合物
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
TWI598358B (zh) 2009-05-20 2017-09-11 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
AR077004A1 (es) * 2009-06-09 2011-07-27 Hoffmann La Roche Compuestos heterociclicos antivirales
BRPI1011744A2 (pt) 2009-06-24 2016-03-22 Hoffmann La Roche composto antiviral heterocíclico.
US8232246B2 (en) * 2009-06-30 2012-07-31 Abbott Laboratories Anti-viral compounds
JP2012532146A (ja) * 2009-07-02 2012-12-13 ドクター・レディーズ・ラボラトリーズ・リミテッド アミノビニルシクロプロパンカルボン酸誘導体の分割のための酵素および方法
EA023433B1 (ru) 2009-07-07 2016-06-30 Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх Фармацевтическая композиция ингибитора протеазы вируса гепатита c
WO2011014487A1 (en) 2009-07-30 2011-02-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Hepatitis c virus ns3 protease inhibitors
JP2013501068A (ja) 2009-08-05 2013-01-10 アイディニックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 大環状セリンプロテアーゼ阻害剤
US8742162B2 (en) 2009-08-10 2014-06-03 Sumitomo Chemical Company, Limited Method for producing optically active 1-amino-2-vinylcyclopropanecarboxylic acid ester
US8324417B2 (en) 2009-08-19 2012-12-04 Virobay, Inc. Process for the preparation of (S)-2-amino-5-cyclopropyl-4,4-difluoropentanoic acid and alkyl esters and acid salts thereof
HUE030402T2 (en) * 2009-09-15 2017-05-29 Taigen Biotechnology Co Ltd HCV protease inhibitors
WO2011038293A1 (en) * 2009-09-28 2011-03-31 Intermune, Inc. Cyclic peptide inhibitors of hepatitis c virus replication
WO2011049908A2 (en) * 2009-10-19 2011-04-28 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bismacrokyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors
BR112012010110A2 (pt) 2009-10-30 2019-09-24 Boehringer Ingelheim Int regimes de dosagem para terapia combinada para hcv compreendendo bi201335, interferon alfa e ribavirina
US20110117055A1 (en) 2009-11-19 2011-05-19 Macdonald James E Methods of Treating Hepatitis C Virus with Oxoacetamide Compounds
EP2504329A1 (en) 2009-11-25 2012-10-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated 5-alkynyl-thiophene-2-carboxylic acid derivatives and their use for the treatment or prevention of flavivirus infections
US8362068B2 (en) 2009-12-18 2013-01-29 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis C virus inhibitors
KR20120130173A (ko) 2009-12-24 2012-11-29 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 플라비바이러스 감염을 치료 또는 예방하기 위한 유사체들
US20110178107A1 (en) * 2010-01-20 2011-07-21 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
CN102140100B (zh) 2010-01-27 2014-06-11 爱博新药研发(上海)有限公司 高效抑制丙型肝炎病毒的多环化合物及其制备方法和用途
US8530497B2 (en) 2010-03-11 2013-09-10 Boehringer Ingelheim International Gmbh Crystalline salts of a potent HCV inhibitor
TW201141857A (en) 2010-03-24 2011-12-01 Vertex Pharma Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
WO2011119870A1 (en) 2010-03-24 2011-09-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
CA2794145A1 (en) 2010-03-24 2011-09-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
TW201139438A (en) 2010-03-24 2011-11-16 Vertex Pharma Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
WO2011123668A2 (en) 2010-03-31 2011-10-06 Pharmasset, Inc. Stereoselective synthesis of phosphorus containing actives
PL3290428T3 (pl) 2010-03-31 2022-02-07 Gilead Pharmasset Llc Tabletka zawierająca krystaliczny (S)-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-diokso-3,4-dihydropirymidyn-1(2H)-ylo)-4-fluoro-3-hydroksy-4-metylotetrahydrofuran-2-ylo)metoksy)(fenoksy)fosforylo)amino)propanian izopropylu
WO2011123586A1 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
EP2575866A4 (en) 2010-05-24 2013-10-16 Presidio Pharmaceuticals Inc HCV NS5A INHIBITORS
WO2011156545A1 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Viral dynamic model for hcv combination therapy
EP2582717A2 (en) 2010-06-15 2013-04-24 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hcv ns5b polymerase mutants
CA2803248A1 (en) 2010-06-28 2012-01-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
WO2012006070A1 (en) 2010-06-28 2012-01-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
JP2013531011A (ja) 2010-06-28 2013-08-01 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド フラビウイルス感染の処置または予防のための化合物および方法
WO2012024363A2 (en) 2010-08-17 2012-02-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flaviviridae viral infections
KR101894704B1 (ko) 2010-09-21 2018-09-05 이난타 파마슈티칼스, 인코포레이티드 매크로사이클릭 프롤린 유도된 ｈｃｖ 세린 프로테아제 억제제
CN103228278A (zh) * 2010-09-30 2013-07-31 贝林格尔.英格海姆国际有限公司 治疗hcv感染的组合疗法
JP5909495B2 (ja) 2010-10-08 2016-04-26 ノバルティス アーゲー スルファミドｎｓ３阻害剤のビタミンｅ製剤
EP2646453A1 (en) 2010-11-30 2013-10-09 Gilead Pharmasset LLC Compounds
EP2651885A1 (en) * 2010-12-16 2013-10-23 Abbvie Inc. Anti-viral compounds
MX2013007677A (es) 2010-12-30 2013-07-30 Abbvie Inc Inhibidores macrociclicos de serina proteasa de hepatitis.
US8951964B2 (en) 2010-12-30 2015-02-10 Abbvie Inc. Phenanthridine macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
TW201309690A (zh) 2011-02-10 2013-03-01 Idenix Pharmaceuticals Inc 巨環絲胺酸蛋白酶抑制劑，其醫藥組合物及其於治療ｈｃｖ感染之用途
WO2012107589A1 (en) 2011-02-11 2012-08-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of hcv infections
WO2012123298A1 (en) 2011-03-11 2012-09-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral compounds
US20120252721A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating drug-resistant hepatitis c virus infection with a 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitor
EP2691409B1 (en) 2011-03-31 2018-02-21 Idenix Pharmaceuticals LLC. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US8957203B2 (en) 2011-05-05 2015-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US10201584B1 (en) 2011-05-17 2019-02-12 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating HCV
US8691757B2 (en) 2011-06-15 2014-04-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2012171332A1 (zh) 2011-06-16 2012-12-20 爱博新药研发(上海)有限公司 抑制丙型肝炎病毒的大环状杂环化合物及其制备和应用
WO2012176715A1 (ja) 2011-06-21 2012-12-27 三菱瓦斯化学株式会社 １－アミノ－２－ビニルシクロプロパンカルボン酸アミドおよびその塩、ならびにその製造方法
US20120328565A1 (en) 2011-06-24 2012-12-27 Brinkman John A Antiviral compounds
CN102807607B (zh) * 2011-07-22 2013-10-23 爱博新药研发(上海)有限公司 抑制丙肝病毒的稠环杂环类化合物、其中间体及其应用
WO2013016499A1 (en) 2011-07-26 2013-01-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods for preparation of thiophene compounds
TW201317223A (zh) 2011-07-26 2013-05-01 Vertex Pharma 噻吩化合物
DE202012012998U1 (de) 2011-08-31 2014-06-13 Daniel Elias Bioaktive, regenerative Mischung zur Herstellung eines Ergänzungsnahrungsmittels
AU2012308900A1 (en) 2011-09-12 2013-05-09 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
AR088441A1 (es) 2011-09-12 2014-06-11 Idenix Pharmaceuticals Inc Compuestos de carboniloximetilfosforamidato sustituido y composiciones farmaceuticas para el tratamiento de infecciones virales
US9180193B2 (en) 2011-10-10 2015-11-10 Hoffmann-La Roche Inc. Antiviral compounds
EP2768838A1 (en) 2011-10-14 2014-08-27 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Substituted 3',5'-cyclic phosphates of purine nucleotide compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US8466159B2 (en) 2011-10-21 2013-06-18 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
EP2583680A3 (en) 2011-10-21 2013-06-12 Abbvie Inc. Mono (PSI-7977) or combination treatment of DAAs for use in treating HCV
AU2013201406B2 (en) 2011-10-21 2014-10-02 Abbvie Ireland Unlimited Company Methods for treating HCV
US8492386B2 (en) 2011-10-21 2013-07-23 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
EP2780026B1 (en) 2011-11-15 2019-10-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Hcv ns3 protease inhibitors
US8889159B2 (en) 2011-11-29 2014-11-18 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis C virus
US9089574B2 (en) 2011-11-30 2015-07-28 Emory University Antiviral JAK inhibitors useful in treating or preventing retroviral and other viral infections
AU2012347785B2 (en) 2011-12-06 2017-03-16 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for treating viral diseases
MX2014006745A (es) 2011-12-16 2014-10-15 Hoffmann La Roche Inhibidores de hcv ns5a.
LT2794628T (lt) 2011-12-20 2017-07-10 Riboscience Llc 4`-azido-3`-fluoro pakeistieji nukleozido dariniai kaip hcv replikacijos inhibitoriai
PE20141423A1 (es) 2011-12-20 2014-10-16 Hoffmann La Roche Derivados nucleosidos con sustitucion 2',4'-difluoro-2'-metilo como inhibidores de la replicacion del arn del vhc
AP2014007760A0 (en) 2012-01-12 2014-07-31 Boehringer Ingelheim Int Stabilized pharmaceutical formulations of a potentHCV inhibitor
US20140356325A1 (en) 2012-01-12 2014-12-04 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Novel 2'-c-methyl nucleoside derivative compounds
US20130217644A1 (en) 2012-02-13 2013-08-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical Compositions of 2'-C-Methyl-Guanosine, 5'-[2[(3-Hydroxy-2,2-Dimethyl-1-Oxopropyl)Thio]Ethyl N-(Phenylmethyl)Phosphoramidate]
BR112014015582A8 (pt) 2012-02-24 2017-07-04 Hoffmann La Roche compostos antivirais
WO2013137869A1 (en) 2012-03-14 2013-09-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy for treating hcv infection in an hcv-hiv coinfected patient population
EP2827876A4 (en) 2012-03-22 2015-10-28 Alios Biopharma Inc PHARMACEUTICAL COMBINATIONS WITH A THIONUCLEOTIDE ANALOG
WO2013147750A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient sub-population
WO2013147749A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient subgenotype populations
JP2015512900A (ja) 2012-03-28 2015-04-30 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 特別な患者の遺伝子亜型分集団のｈｃｖ感染症を治療するための併用療法
EP2852604B1 (en) 2012-05-22 2017-04-12 Idenix Pharmaceuticals LLC 3',5'-cyclic phosphoramidate prodrugs for hcv infection
BR112014029115A8 (pt) 2012-05-22 2018-04-03 Idenix Pharmaceuticals Inc Composto, composição farmacêutica, e, uso de um composto ou composição
EP2852605B1 (en) 2012-05-22 2018-01-31 Idenix Pharmaceuticals LLC 3',5'-cyclic phosphate prodrugs for hcv infection
US20140010783A1 (en) 2012-07-06 2014-01-09 Hoffmann-La Roche Inc. Antiviral compounds
BR112015007698A2 (pt) 2012-10-08 2017-08-22 Idenix Pharmaceuticals Inc Centre National De La Recherche Scientifique E Univ Montpellier 2 Science Composto, composição farmacêutica, e, uso de um composto
SI2909205T1 (sl) 2012-10-19 2017-02-28 Bristol-Myers Squibb Company 9-metil substituiran heksadekahidrociklopropa(e)pirolo(1,2-A)(1,4)diazaciklopentadecinil karbamat derivati kot nestrukturalni 3 (NS3) proteazni inhibitorji za zdravljenje hepatitis C virusnih infekcij
WO2014063019A1 (en) 2012-10-19 2014-04-24 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Dinucleotide compounds for hcv infection
EP2909222B1 (en) 2012-10-22 2021-05-26 Idenix Pharmaceuticals LLC 2',4'-bridged nucleosides for hcv infection
WO2014071007A1 (en) 2012-11-02 2014-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US9598433B2 (en) 2012-11-02 2017-03-21 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US9643999B2 (en) 2012-11-02 2017-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2014070974A1 (en) 2012-11-05 2014-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
CN103804208B (zh) * 2012-11-14 2016-06-08 重庆博腾制药科技股份有限公司 一种丙肝药物中间体的制备方法
WO2014078427A1 (en) 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of rp-nucleoside analog
WO2014078436A1 (en) 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of sp-nucleoside analog
WO2014099941A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
CN105073726B (zh) 2013-01-23 2017-05-31 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗病毒三唑衍生物
WO2014121418A1 (en) 2013-02-07 2014-08-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of hepatitis c
WO2014121417A1 (en) 2013-02-07 2014-08-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of hepatitis c
US20150065439A1 (en) 2013-02-28 2015-03-05 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical compositions
WO2014137926A1 (en) 2013-03-04 2014-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3'-deoxy nucleosides for the treatment of hcv
WO2014137930A1 (en) 2013-03-04 2014-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Thiophosphate nucleosides for the treatment of hcv
CA2900319A1 (en) 2013-03-05 2014-09-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral compounds
US9580463B2 (en) 2013-03-07 2017-02-28 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2014138374A1 (en) 2013-03-08 2014-09-12 Boehringer Ingelheim International Gmbh Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient sub-population
WO2014152928A2 (en) * 2013-03-14 2014-09-25 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Novel processes for producing sovaprevir
EP2981542B1 (en) 2013-04-01 2021-09-15 Idenix Pharmaceuticals LLC 2',4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
MA38678A1 (fr) 2013-05-16 2017-07-31 Riboscience Llc Dérivés nucléosidiques 4'-azido, 3'désoxy-3'-fluoro substitués
CA2912682C (en) 2013-05-16 2021-07-06 Riboscience Llc 4'-fluoro-2'-methyl substituted nucleoside derivatives
US20180200280A1 (en) 2013-05-16 2018-07-19 Riboscience Llc 4'-Fluoro-2'-Methyl Substituted Nucleoside Derivatives as Inhibitors of HCV RNA Replication
US10005779B2 (en) 2013-06-05 2018-06-26 Idenix Pharmaceuticals Llc 1′,4′-thio nucleosides for the treatment of HCV
EP3027636B1 (en) 2013-08-01 2022-01-05 Idenix Pharmaceuticals LLC D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease
PL3038601T3 (pl) 2013-08-27 2020-08-24 Gilead Pharmasset Llc Formulacja złożona dwóch związków przeciwwirusowych
WO2015042375A1 (en) 2013-09-20 2015-03-26 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis c virus inhibitors
WO2015061683A1 (en) 2013-10-25 2015-04-30 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate and d-alanine thiophosphoramidate pronucleotides of nucleoside compounds useful for the treatment of hcv
US20160271162A1 (en) 2013-11-01 2016-09-22 Idenix Pharmacueticals, Llc D-alanine phosphoramide pronucleotides of 2'-methyl 2'-fluro guanosine nucleoside compounds for the treatment of hcv
EP3074399A1 (en) 2013-11-27 2016-10-05 Idenix Pharmaceuticals LLC 2'-dichloro and 2'-fluoro-2'-chloro nucleoside analogues for hcv infection
US9717797B2 (en) 2013-12-05 2017-08-01 International Business Machines Corporation Polycarbonates bearing aromatic N-heterocycles for drug delivery
US10683321B2 (en) 2013-12-18 2020-06-16 Idenix Pharmaceuticals Llc 4′-or nucleosides for the treatment of HCV
WO2015103490A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 Abbvie, Inc. Solid antiviral dosage forms
EP2899207A1 (en) 2014-01-28 2015-07-29 Amikana.Biologics New method for testing HCV protease inhibition
WO2015134561A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions comprising a 5,5-fused heteroarylene flaviviridae inhibitor and their use for treating or preventing flaviviridae infection
WO2015134780A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Solid prodrug forms of 2'-chloro-2'-methyl uridine for hcv
EP3114122A1 (en) 2014-03-05 2017-01-11 Idenix Pharmaceuticals LLC Solid forms of a flaviviridae virus inhibitor compound and salts thereof
WO2015161137A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3'-substituted methyl or alkynyl nucleosides for the treatment of hcv
WO2017189978A1 (en) 2016-04-28 2017-11-02 Emory University Alkyne containing nucleotide and nucleoside therapeutic compositions and uses related thereto
AU2018335411B2 (en) 2017-09-21 2024-06-27 Riboscience Llc 4'-fluoro-2'-methyl substituted nucleoside derivatives as inhibitors of HCV RNA replication
CN113167802B (zh) 2018-12-04 2025-02-07 百时美施贵宝公司 通过多同位素体反应监测使用样品内校准曲线的分析方法

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0475255A3 (en) * 1990-09-12 1993-04-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for the preparation of optically pure (s)-alpha-((tert-butylsulfonyl)methyl)hydro cinnamic acid
JPH05155827A (ja) * 1991-12-09 1993-06-22 Banyu Pharmaceut Co Ltd ｃｉｓ−２−アミノシクロプロパンカルボン酸誘導体の製造法
IT1272179B (it) 1994-02-23 1997-06-16 Angeletti P Ist Richerche Bio Metodologia per riprodurre in vitro l'attivita' proteolitica della proteasi ns3 del virus hcv.
CN1141591A (zh) * 1994-02-23 1997-01-29 布·安格莱荻公司分子生物学研究所 体外再生丙型肝炎病毒(hcv)ns3蛋白酶的解蛋白活性的方法
US5500208A (en) 1994-06-07 1996-03-19 The Procter & Gamble Company Oral compositions comprising a novel tripeptide
GB9517022D0 (en) 1995-08-19 1995-10-25 Glaxo Group Ltd Medicaments
IT1277914B1 (it) * 1995-08-22 1997-11-12 Angeletti P Ist Richerche Bio Procedimento per produrre - in forma pura e in quantita' elevate - polipeptidi con l'attivita' proteolitica della proteasi ns3 di hcv, e
CA2165996C (en) * 1995-12-22 2002-01-29 Murray Douglas Bailey Stereoselective preparation of 2-substituted succinic derivatives
DE19600034C2 (de) 1996-01-02 2003-12-24 Degussa 1,1,2-Trisubstituierte Cyclopropanverbindungen, Verfahren zu deren Herstellung und Dihydroxyethyl-substituierte 1-Amino-cyclopropan-1-carbonsäure
US5633388A (en) 1996-03-29 1997-05-27 Viropharma Incorporated Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C
HU227742B1 (en) 1996-10-18 2012-02-28 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus ns3 protease
EP1001764A4 (en) 1997-05-29 2005-08-24 Merck & Co Inc HETEROCYCLIC AMIDE COMPOUNDS AS INHIBITORS OF CELL ADHESION
JP4354632B2 (ja) 1997-08-11 2009-10-28 ベーリンガー インゲルハイム （カナダ） リミテッド Ｃ型肝炎抑制剤ペプチド
US6767991B1 (en) 1997-08-11 2004-07-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C inhibitor peptides
SE9704543D0 (sv) * 1997-12-05 1997-12-05 Astra Ab New compounds
US6455571B1 (en) * 1998-04-23 2002-09-24 Abbott Laboratories Inhibitors of neuraminidases
DE19835120C1 (de) * 1998-08-04 1999-10-21 Westfalia Separator Ag Verfahren und Vorrichtung zum Einstellen des Flüssigkeitsgehalts des aus einer selbstentleerenden Schleudertrommel eines Separators ausgetragenen Feststoffes
US6323180B1 (en) * 1998-08-10 2001-11-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US6277830B1 (en) * 1998-10-16 2001-08-21 Schering Corporation 5′-amino acid esters of ribavirin and the use of same to treat hepatitis C with interferon
US6608027B1 (en) 1999-04-06 2003-08-19 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US6642204B2 (en) * 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US7091184B2 (en) * 2002-02-01 2006-08-15 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
WO2004101602A2 (en) * 2003-03-05 2004-11-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
EP1601685A1 (en) * 2003-03-05 2005-12-07 Boehringer Ingelheim International GmbH Hepatitis c inhibiting compounds

Also Published As

Publication number Publication date
CZ301268B6 (cs) 2009-12-30
IN2001MU00127A (pl) 2005-03-04
PT2028186E (pt) 2013-03-27
EA200100228A1 (ru) 2001-10-22
KR100672229B1 (ko) 2007-02-28
BR9913646B1 (pt) 2014-12-02
CN1323316A (zh) 2001-11-21
HRP20010102B1 (en) 2010-07-31
USRE41894E1 (en) 2010-10-26
AR020880A1 (es) 2002-06-05
HK1040085B (zh) 2008-05-30
TR200100432T2 (tr) 2001-09-21
SK286994B6 (sk) 2009-09-07
JP2010043124A (ja) 2010-02-25
BG105232A (en) 2001-11-30
EE05517B1 (et) 2012-02-15
WO2000009543A2 (en) 2000-02-24
TWI250165B (en) 2006-03-01
JP2002522554A (ja) 2002-07-23
ES2405930T3 (es) 2013-06-04
BRPI9913646B8 (pt) 2021-05-25
UA75026C2 (en) 2006-03-15
MXPA01001423A (es) 2001-08-01
MY127538A (en) 2006-12-29
DE69940817D1 (en) 2009-06-10
CO5261542A1 (es) 2003-03-31
YU9401A (sh) 2003-02-28
JP4485685B2 (ja) 2010-06-23
IL196545A0 (en) 2011-07-31
CA2445938A1 (en) 2000-02-24
PL346626A1 (en) 2002-02-25
SK2062001A3 (en) 2001-10-08
EP1105413A2 (en) 2001-06-13
PH11999002002B1 (en) 2007-10-19
KR20060083992A (ko) 2006-07-21
ME00381B (me) 2011-10-10
BG65738B1 (bg) 2009-09-30
US6329379B1 (en) 2001-12-11
US6534523B1 (en) 2003-03-18
ATE430158T1 (de) 2009-05-15
KR20010085363A (ko) 2001-09-07
MX257413B (es) 2008-05-27
SI1105413T1 (sl) 2009-10-31
CY1113935T1 (el) 2016-07-27
US6329417B1 (en) 2001-12-11
NO20100004L (no) 2001-04-02
IN2007MU00706A (pl) 2007-07-20
USRE42164E1 (en) 2011-02-22
AR073428A2 (es) 2010-11-03
HUP0105144A2 (hu) 2002-04-29
CA2338946C (en) 2010-10-12
CN101143892A (zh) 2008-03-19
EP2028186A3 (en) 2009-04-01
MX261584B (es) 2008-10-22
US20020037998A1 (en) 2002-03-28
CY1109291T1 (el) 2014-07-02
IL141012A (en) 2009-09-01
TR200200129T2 (tr) 2002-06-21
BR9917805B1 (pt) 2014-06-17
US6268207B1 (en) 2001-07-31
DK1105413T3 (da) 2009-08-17
AR069583A2 (es) 2010-02-03
MEP58508A (en) 2011-05-10
KR100631439B1 (ko) 2006-10-09
CA2338946A1 (en) 2000-02-24
NO20010683D0 (no) 2001-02-09
ZA200100971B (en) 2002-06-26
HK1040085A1 (zh) 2002-05-24
SK288068B6 (sk) 2013-05-03
DK2028186T3 (da) 2013-03-25
IN211493B (pl) 2008-01-25
EP2028186A2 (en) 2009-02-25
US20020016442A1 (en) 2002-02-07
CN100339389C (zh) 2007-09-26
US6323180B1 (en) 2001-11-27
CN101143892B (zh) 2010-12-08
HRP20010102A2 (en) 2002-02-28
SI2028186T1 (sl) 2013-06-28
EP2028186B1 (en) 2013-01-23
WO2000009543A3 (en) 2000-05-25
CZ302766B6 (cs) 2011-10-26
AU769738B2 (en) 2004-02-05
SA99200617A (ar) 2005-12-03
RS50798B (sr) 2010-08-31
PE20000949A1 (es) 2000-09-26
ID27839A (id) 2001-04-26
NO328952B1 (no) 2010-06-28
RS53562B1 (sr) 2015-02-27
AU5273199A (en) 2000-03-06
NO20010683L (no) 2001-04-02
ES2326707T3 (es) 2009-10-16
IL141012A0 (en) 2002-02-10
BR9913646A (pt) 2001-06-05
NZ510396A (en) 2004-02-27
US6420380B2 (en) 2002-07-16
US6410531B1 (en) 2002-06-25
EP1105413B1 (en) 2009-04-29
PT1105413E (pt) 2009-06-30
SA99200617B1 (ar) 2006-06-24
RS20090459A (sr) 2010-06-30
USRE40525E1 (en) 2008-09-30
EA003906B1 (ru) 2003-10-30
EE200100081A (et) 2002-08-15
HUP0105144A3 (en) 2002-11-28
CZ2001516A3 (cs) 2001-08-15
IL196545A (en) 2012-06-28
HK1113164A1 (en) 2008-09-26
USRE41356E1 (en) 2010-05-25
HU229262B1 (en) 2013-10-28
HUP1300080A2 (pl) 2002-04-29
HU230701B1 (hu) 2017-10-30
JP5021711B2 (ja) 2012-09-12
NO336663B1 (no) 2015-10-12
CA2445938C (en) 2012-10-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6534523B1 (en) Hepatitis C inhibitor tri-peptides
PL199419B1 (pl) Peptydy będące inhibitorami zapalenia wątroby C, kompozycja farmaceutyczna je zawierająca, ich zastosowanie, sposób wytwarzania i związki pośrednie
CA2370396A1 (en) Hepatitis c inhibitor tri-peptides
MXPA01001422A (en) Hepatitis c inhibitor peptides