RS50798B - Tri-peptidi kao inhibitori hepatitisa c - Google Patents

Tri-peptidi kao inhibitori hepatitisa c

Info

Publication number
RS50798B
RS50798B YUP-94/01A YU9401A RS50798B RS 50798 B RS50798 B RS 50798B YU 9401 A YU9401 A YU 9401A RS 50798 B RS50798 B RS 50798B
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
alkyl
group
substituted
amino
optionally substituted
Prior art date
Application number
YUP-94/01A
Other languages
English (en)
Inventor
Montse Llinas-Brunet
Murray D. Bailey
Dale Cameron
Anne-Marie Faucher
Elise Ghiro
Nathalie Goudreau
Teddy Halmos
Marc-André Poupart
Jean Rancourt
Youla S. Tsantrizos
Dominik M. Wernic
Original Assignee
Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. filed Critical Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd.
Publication of YU9401A publication Critical patent/YU9401A/sh
Publication of RS50798B publication Critical patent/RS50798B/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/081—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing O or S as heteroatoms, e.g. Cys, Ser
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C12P41/003—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions
    • C12P41/005—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of carboxylic acid groups in the enantiomers or the inverse reaction

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

OBLAST PRONALASKA
Ovaj se pronalazak odnosi na jedinjenja, postupak za njihovu sintezu, kompozicije i postupke za lečenje infekcija izazvanih hepatitis C virusom (HCV). Posebno, ovaj pronalazak daje nove peptidne analoge, farmaceutske kompozicije koje sadrže takve analoge i postupke za upotrebu tih analoga u lečenju HCV infekcije. Ovaj pronalazak takođe daje postupke i intermedijere za sintezu tih peptidnih analoga.
OSNOVNI PODACI U VEZI SA PRONALASKOM
Sirom sveta, virus hepatitisa C (HCV) je najznačajniji etiološki uzročnik, ne-A i ne-B hepatitisa, dobijenog posle transfuzije. Smatra se da je preko 150 miliona ljudi širom sveta inficirano tim virusom. Veliki procenat nosilaca postaje hronično inficiran a kod mnogih dolazi do hroničnog oboljenja jetre, takozvanog hroničnog hepatitisa C. Ta grupa je u velikoj opasnosti od ozbiljnih oboljenja jetre, kao što su ciroza jetre, hepatoćelijski karcinomi a završno oboljenje jetre dovodi do smrti.
Mehanizam pomoću koga HCV ostvaruje virusnu istrajnost i izaziva veliku broj hroničnih oboljenja jetre nije podrobno istražen. Nije poznato kako HCV i imunski sistem domaćina utiču jedan na drugi i kako ga HCV izbegava. Osim toga, uloge ćelijskog i humoralnog imunskog odgovora u zaštiti od HCV infekcije i oboljenja treba još da se odrede. Pominjani su imunoglobulini za profilaksu od virusnog hepatitisa vezanog za tranfuziju, međutim, Centar za kontrolu oboljenja još nije preporučio tretman imunoglobulinima za tu svrhu. Nedostatak efikasnog zaštitnog imunskog odgovora ometa razvoj vakcine ili odgovarajućih profilaksnih mera posle izlaganja, tako da su u bliskoj budućnosti nade čvrsto usmerene na antivirusne intervencije.
Različite kliničke studije su obavljene sa ciljem da se identifikuju farmaceutska sredstva koja su u stanju da efikasno leče HCV infekciju kod pacijenata koji imaju problem sa hroničnim hepatitisom C. Te studije su obuhvatile upotrebu interferona alfa, samog ili u kombinaciji sa drugim antivirusnim sredstvima. Takve studije su pokazale da znatan broj lica ne odgovara na te terapije, a kod velikog broja onih koji povoljno reaguju bolest se vraća posle završetka tretmana.
Do nedavno, interferon (IFN) je predstavljao jedinu dostupnu terapiju sa dokazanim povoljnim efektima koja je odobrena za kliničko lečenje pacijenata sa hroničnim hepatitisom C. Međutim, stopa uspešnosti terapije je i dalje niska, a takođe, lečenje inerferonom izaziva ozbiljne neželjene efekte (na primer retinopatiju, tiroiditis, akutni pankreatitis, depresiju) koji umanjuju kvalitet života tretiranih pacijenata. U poslednje vreme odobreno je korišcenje inerferona u kombinaciji sa ribavirinom kod pacijenata koji ne reaguju na sam inerferon. Ipak, neželjeni efekti izazvani inerferonom se ne umanjuju ovom kombinovanom terapijom.
Zbog toga, postoji potreba za razvojem efikasnog antivirusnog agensa za tretman HCV infekcija, koji bi bio u stanju da prebrodi ograničenja postojećih farmaceutskih terapija.
HCV pripada familiji Flaviviridae, a čini ga upakovani pozitivni lanac RNK-a virusa. Jednolančani RNK genom HCV-a ima dužinu od oko 9500 nukleotida i ima jedan otvoreni okvir čitanja (ORF) koji kodira jedan veliki poliprotein od oko 3000 amino kiselina. U inficiranim ćelijama, ovaj protein seku na mnogo mesta ćelijske i virusne proteaze i proizvode se strukturni i nestrukturnu (NS) proteini. U slučaju HCV-a stvaranje zrelih nestrukturnih proteina (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, i NS5B) vrši se pomoću dve virusne proteaze. Prva, još uvek slabo okarakterisana, seče na NS2-NS3 vezi; druga je serinska proteaza koja je sadržana u okviru N-terminalnog regiona NS3 (nadalje označena kao NS3 proteaza) i posreduje u svakom narednom sečenju nizvodno od NS3, u oba, ucls,na NS3-NS4A mestu sečenja, i utrans,za ostala mesta NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B. Izgleda da protein NS4A ima više funkcija, delujući kao kofaktor za NS3 proteazu i verovatno učestvujući u membranskoj lokalizaciji NS3 i ostalih virusnih komponenata za replikaciju. Kompleksna formacija NS3 proteina sa NS4A je izgleda neophodna za obradu, pojačavajući efikasnost proteolize na svim mestima. NS3 protein takođe pokazuje aktivnost nukleozid trifosfataze i RNK helikaze. NS5B je RNK polimeraza zavisna od RNK, koja je uključena u replikacuju HCV-a.
Opšta strategija pri razvoju antivirusnih sredstava je da se inaktivišu enzimi kodirani u virusnom genomu koji su neophodni za replikaciju virusa. U tom smislu, patentna prijava WO 97/06804 opisuje (-) enantiomer nukleozidnog analoga citozin-l,3-oksatiolana (takođe poznatog kao 3TC) kao aktivnog protiv HCV-a. Ovo jedinjenje, iako prijavljeno kao bezbedno u prethodnim kliničkim ispitivanjima protiv HIV i HBV, tek treba da bude odobreno za kliničku primenu protiv HCV-a i njegov mehanizam delovanja
protiv virusa tek treba da bude prikazan.
Intezivni napori u cilju otkrića jedinjenja koja inhibiraju NS3 proteazu ili RNK helikazu HCV-a, dovela su do sledićih zaključaka: • US patent 5,633,388 opisuje heterociklično supstituisane karboksamide i analoge, kao aktivne protiv HCV-a. Ova jedinjenja su uperena protiv helikazne aktivnosti virusnog NS3 proteina, ali klinički testovi još uvek nisu prikazani. • Fenantrenehinon su prikazali Chu i saradnici u (Tet Lett, (1996), 7229-7232) da je aktivan protiv NS3 proteaze HCV-ain vito.Nikakav dalji razvoj ovog jedinjenja nije prikazan. • U radu objavljenom u Ninth International Conference on Antiviral Research, Urabandai, Fukyshima, Japan (1996) (Antiviral Research, (1996), 30,1, A23 (apstrakt 19)) se navode tiazolidin derivati kao inhibitori HCV proteaze.
Nekoliko studija je prikazalo jedinjenja koja su inhibitori drugih serinskih proteaza, kao što je humana leukocitna elastaza. Jedna familija ovih jedinjenja je prikazana u WO 95/33764 (Hoechst Marion Roussel, 1995). Peptidi obuhvaćeni tom prijavom su morfolinilkarbonil-benzoil-peptidni analozi koji se strukturno razlikuju od peptida prema ovom pronalasku. • WO 98/17679 iz Vertex Pharmaceuticals Inc. obelodanjuje inhibitore serinskih proteaza, posebno NS3 proteaze hepatitis C virusa. Ti inhibitori su peptidni analozi zasnovani na prirodnom supstratu za NS5A/5B. Iako je obnarodovano nekoliko tripeptida, svi od tih peptidnih analoga sadrže C-terminalnu aktiviranu karbonil funkciju kao osnovnu karakteristiku. Ovi analozi su takođe prikazani kao aktivni protiv drugih serinskih proteaza, što znači da nisu specifični za NS3 proteazu HCV-a. • Hoffman LaRoche je takođe prikazao heksapeptide koji su inhibitori proteinaze, korisni kao antivirusna sredstva za tretman HCV infekcija. Ovi peptidi sadrže aldehid ili bornu kiselinu na C-terminusu. • Steinkiihleret al.i Ingallinellaet al.su prikazali inhibiciji produkta NS4A-4B (Biochemistry (1998), 37_, 8899-8905 i 8906-8914). Ipak, peptidi i peptidni analozi opisani u tom radu ne uključuju niti dovode
do dizajniranja peptida na osnovu ovog pronalaska.
Jedna od prednosti ovog pronalaska je da daje tripeptide koji su inhibitori NS3 proteaze hepatitis C virusa.
Dalja prednost jednog od aspekata ovog pronalaska leži u činjenici da ovi peptidi specifično inhibiraju NS3 proteazu i ne pokazuju značajnu inhibitorsku aktivnost pri koncentracijama do 300 \ jM u odnosu na ostale serinske proteaze kao što su leukocitna elastaza čoveka (HLE), elastaza pankreasa svinje (PPE), ili himotripsin pankreasa govečeta, ili cisteinske proteaze kao što je katepsin B jetre čoveka (Cat B).
Dalja prednost ovog pronalaska je da daje male peptide male molekulske mase koji mogu biti sposobni da prodiru kroz ćelijske membrane i mogu da budu aktivni u ćelijskoj kulturi, ain vivosa dobrim farmakokinetičkim profilom.
IZVOD PRONALASKA
Predmet pronalaska obuhvata racemate, dijastereoizomere i optičke izomere, jedinjenja formule (I):
u kojoj B jeste H, grupa (odn. radikal) C6ili C?o aril, C7.16aralkil; Het ili (niži alkil)-Het, svaka od njih eventualno supstituisana sa Ci.6alkilom; Ci.g alkoksi; Ci.6alkanoil; hidroksi; hidroksialkil; halogeno; halogenoalkil; nitro; cijano;, cijanoalkil; amino grupa eventualno supstituisana sa C].6alkilom; amido; ili (niži alkil)amid;
ili, B karboksil formule R4-0-C(0)-; amid formule R4-N(R5)-C(0)-; tioamid formule R4-N(R5)-C(S)-; ili sulfonil formule R4-S02gde
R4 jeste grupa, (i) C^oalkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, Ci_6alkanoil, hidroksi, Ci_6alkoksi, amino grupom eventualno mono- ili di-supstituisanom sa grupom Ci_6alkil, amido ili (niži alkil) amid;
(ii) C3.7cikloalkil, C3.7cikloalkoksi, ili C440alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom hidroksi, karboksil, (C^g alkoksi)karbonil, amino eventualno mono- ili di-supsittuisanom sa grupom C1.6alkil, amido, ili (niži alkil) amid; (iii) amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci_g alkilom; amido; ili (niži alkil) amid; (iv) C6ili C10aril ili C7_16aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Cj.6alkil, hidroksi, amido, (niži alkil) amid, ili amino grupa eventualno mono-ili di-supstituisana sa Ci_6alkilom; ili (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom Ci-ealkil, hidroksi, amido, (niži alkil)amid, ili amino grupa eventualno mono- ili di-supstituisana sa Cj.6alkilom;
R5je H ili Cj.<g>alkil;
ili B je acil derivat formule Ri-C(O)-; gde
R4 je grupa, (i) C1.10alkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, Ci_6alkanoil, hidroksi, Ci_g alkoksi, ili amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Ci_6alkilom;
(ii) C3.7cikloalkil,C^ 7cikloalkoksi, ili C^o alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom hidroksi, karboksil, ( C\.& alkoksi) karbonil, ili amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C^g alkilom; (iii) amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci.6alkilom; (iv) Cg ili C1(3 aril ili C7.16aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Ci.6alkil, hidroksi, ili amino eventualno mono- ili di-supstituisanom saC\. qalkilom; ili (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom Ci_6alkil, hidroksi, ili amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C^ alkilom;
uz uslov, da kada B jeste amid ili tioamid, R4nije (ii) cikloalkoksi grupa; a Y jeste H ili Ci_6alkil grupa;
R<3>jeste grupa C^ alkil, C3.7cikloalkil, ili C4.10 alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom hidroksi, Ch6alkoksi, C^gtioalkil, amido, (niži alkil) amido, C6ili C10aril, ili C7_16aralkil;
R2jeste CH2-R2o»NH -R20, O -R20ili S -R2o, gde R2ojeste zasićena ili nezasićena 03.7cikloalkil ili C^o (alkilcikloalkil) grupa, od kojih su sve eventualno mono-, di-ili tri-supstituisane sa R21,
ili, R2ojeste C6ili C10aril ili C7.14aralkil grupa, sve eventualno mono-, di- ili tri-supstituisane sa R21,
ili, R2ojeste Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno mono-, di- ili tri- supstituisane sa R21.
gde svaka R21jeste nezavisno, grupa C^g alkil; Ci.6alkoksi; niži tioalkil;
sulfonil; N02; OH; SH; halogeno; halogenoalkil; amino grupa eventualno mono- ili di-supstituisana sa grupom Ci_g alkil, C6ili C10aril, C7.14aralkil, Het ili (niži alkil)-Het;
amido grupa eventualno mono-supstituisana sa grupom Ci.6alkil, Cg ili C10aril, C7.14aralkil, Het ili (niži alkil)-Het; karboksil; karboksi(niži alkil); C6ili Cjoaril, C7. iA aralkil ili Het, a pomenute aril, aralkil ili Het grupe su eventualno supstituisane sa R22;
gde R22jeste grupa C^g alkil; C3.7cikloalkil; C^g alkoksi; amino even-tualno mono- ili di-supstituisana sa Ci_6alkilom; sulfonil; (niži alkil) sulfonil; N02; OH; SH; halogeno; halogenoalkil; karboksil; amid;
(niži alkil)amid; ili Het eventualno supstituisan sa Ci_ 6 alkilom,
R<1>jeste H, grupa C^g alkil, C3.7cikloalkil, C2.6alkenil, ili C2.6alkinil, sve eventualno supstituisane sa halogenom;
ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili estar.
Predmetom ovog pronalaska obuhvaćen je farmaceutski preparat koji sadrži virusno efikasnu količinu anti-hepatis C jedinjenja formule I, ili terapeutski prihvatljivu njegovu so ili estar, u smeši sa farmaceutski prihvatljivim nosećim medijumom i pomoćnim sredstvom.
Značajan aspekt pronalaska obuhvata postupak za lečenje virusne infekcije hepatitisa C, kod sisara, davanjem sisaru anti-hepatitis C virusno efikasne količine jedinjenja formule I, ili njegove terapeutski prihvatljive soli ili estra, ili kompozicije kao što je gore opisana.
Dalji značajan aspekt obuhvata postupak za inhibiranje replikacije virusa hetapitisa C, izlaganjem virusa količini jedinjenja formule I koja inhibira virusnu NS3 proteazu hepatitisa C, ili njegovoj terapeutski prihvatljivoj soli ili estru ili kompoziciji kao što je gore opisano.
Još jedan dalji aspekt obuhvata postupak za lečenje virusne infekcije hepatitisa C kod sisara, davanjem anti-hepatitis C virusno efikasne količine kombinacije jedinjenja formule I, ili njegove terapeutski prihvatljive soli ili estra. Prema jednom od rešenja, farmaceutske kompozicije prema pronalasku sadrže dodatno imunomodulatorsko sredstvo. Primeri dodatnih imunomodulatorskih sredstava uključuju, ali bez ograničavanja, a-, B- i 5-interferone.
PODROBNI OPIS REŠENJA KOJA IMAJU PREDNOST
Definicije
Kako su ovde upotrebljene, sledeće definicije, ukoliko nije drugo rečeno, označavaju: U vezi sa slučajevima gde su upotrebljeni( R)ili( S)radi označavanja konfiguracije supstituenta, npr. R<1>jedinjenja formule I, značenje je dato u kontekstu jedinjenja a ne u kontekstu samog supstituenta.
Prirodne amino kiseline, sa izusetkom glicina, sadrže hiralni atom ugljenika. Ukoliko ništa drugo posebno nije naznačeno, prednost imaju jedinjenja koja sadrže prirodne amino kiseline sa L -konfiguracijom. Međutim, prijavioci imaju u vidu da kada je specificirano, neke amino kiseline formule I mogu biti ili D - ili L - konfiguracije, ili mogu biti smeše D - i L - izomera, uključujući racemske smeše.
Oznaka "Pl, P2 i P3", kako je ovde upotrebljena, odnosi se na položaj ostataka amino kiseline polazeći od kraja završnog (terminalnog) C atoma peptidnih analoga pa pružajući se ka završnom (terminalnom) N atomu [tj. Pl odnosi se na položaj 1 od završnog C atoma, P2: drugi položaj od završnog C atoma, itd.) (vidi Berger A & Schechter I., Transactions of the Royal Societv London series(1970),
B257,249-264].
Skraćenice za ct-amino kiseline korišćene u ovoj prijavi prikazane su u tabeli A.
Kako je ovde korišćen, izraz "1-aminociklopropil-karboksilna kiselina" (Acca) odgovara jedinjenju formule:
Kako je ovde korišćen, izraz "ferc-butilglicin" odgovara jedinjenju formule:
Izraz "ostatak" kada se odnosi na amino kiselinu ili na derivat amino kiseline predstavlja radikal koji potiče od odgovarajuće a-amino kiseline posle eliminisanja hidroksila karboksi grupe i jednog vodonika iz a-amino grupe. Na primer, oznake Gln, Ala, Gly, Ile, Arg, Asp, Phe, Ser, Leu, Cys, Asn, Sar i Tyr predstavljaju odgova-rajuće "ostatke", L-glutamina, L-alanina, glicina, L-izoleucina, L-arginina, L-asparaginske kiseline, L-fenilalanina, L-serina, L-leucina, L-cisteina, L-asparagina, sarkozina i L -tirozina.
Izraz "bočni lanac", kada se odnosi na amino kiselinu ili na ostatak amino kiseline, predstavlja grupu vezanu za atom a-ugljenika a-amino kiseline. Na primer, bočni lanac R-grupe, za glicin je vodonik, za alanin je metil, za valin izopropil grupa. Za specifične R-grupe ili bočne lance a-amino kiselina referencu daje A. L. Lehnin-ger's text on Biochemistry (vidi glava 4).
Izraz "halogeno", kako je ovde korišćen označava halogeni supstituent odabran između bromo, hloro, fluoro ili jodo naziva.
Izraz " C[. 6 alkil" ili "(niži) alkil", kako je ovde korišćen, bilo sam ili u kombinaciji sa drugim supstituentom, označava aciklične alkil supstituente, sa pravim ili razgranatim nizom (lancem) koji sadrže od 1 do šest atoma, a obuhvataju na primer, metil, etil, propil, butil,te/r.-butil,heksil, 1-metiletil, 1-metilpropil, 2-metilpropil, 1,1-dimetiletil.
Izraz "C3.7cikloalkil" , kako je ovde korišćen, bilo sam ili u kombinaciji sa drugim supstituentima, označava cikloalkil supstituent koji sadrži od tri do sedam atoma ugljenika, a uključuje ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil i cikloheptil grupe. Ovaj izraz takođe obuhvata "spiro"-cikličnu grupu, kao spiro-ciklopropil ili spiro-ciklobutil:
Izraz "nezasićeni cikloalkil" obuhvata, na primer, cikloheksenil:
Izraz "C4.10(alkilcikloalkil)", kako je ovde korišćen, označava cikloalkil radikal koji sadrži od tri do sedam atoma ugljenika, povezanih u alkil radikal, a vezani radikali sadrže do deset atoma ugljenika: na primer, ciklopropilmetil, ciklopentiletil, cikloheksilmetil, cikloheksiletil ili cikloheptiletil.
Izraz "C9-10alkenil", kako je ovde korišćen, bilo sam ili u kombinaciji sa drugim radikalom, označava alkil radikal kao što je gore definisano, koji sadrži od 2 do 10 atoma ugljenika, a sadrži još i bar jednu duplu vezu. Na primer, alkenil uključuje alil i vinil.
Izraz "CU6alkanoil", kako je ovde korišćen, bilo sam ili u kombinaciji sa drugim radikalom, označava prave ili razgranate 1-oksoalkil radikale koji sadrže jedan do šest atoma ugljenika i obuhvata formil, acetil, 1-oksopropil (propionil), 2-metil-l-oksopropil, 1-oksoheksil i slično.
Izraz "Ci_6alkoksi", kako je ovde korišćen, bilo sam ili u kombinaciji sa drugim radikalom, označava radikal -0(Cj.6 alkil), gde alkil kao što je gore definisano sadrži do 6 atoma ugljenika. Alkoksi obuhvata metoksi, etoksi, propoksi, 1-metiletoksi, butoksi i 1,1-dimetiletoksi. Poslednji radikal je obično poznat kao terc.-butoksi. Izraz "C3.7cikloalkoksi", kako je ovde korišćen, bilo sam ili u kombinaciji sa drugim radikalom, označava C3.7cikloalkil grupu vezanu za atom kiseonika, kao što je na primer:
Izraz "C6ili C10aril", kako je ovde korišćen, bilo sam ili u kombinaciji sa drugim radikalom, označava ili aromatsku monocikličnu grupu koja sadrši 6 atoma ugljenika ili aromatsku bicikličnu grupu koja sadrži 10 atoma ugljenika. Na primer, aril uključuje fenil, 1-naftil ili 2-naftil.
Izraz "C7.16aralkil ", kako je ovde korišćen, bilo sam ili u kombinaciji sa drugim radikalom, označava C6ili Ctoaril, kao što je gore definisano, vezan za alkil grupu, gde alkil definisan kao gore sadrži od 1 do 6 atoma ugljenika. C7.iearalkil obuhvata na primer, benzil, butilfenil i 1-naftilmetil.
Izraz "amino aralkil", kako je ovde korišćen, bilo sam ili u kombinaciji sa drugim radikalom, označava amino grupu supstituisanu sa C7.16aralkil grupom, kao na primer, amino aralkil:
Izraz "(niži alkil)amid", kako je ovde korišćen, bilo sam ili u kombinaciji sa drugim radikalom, označava amid, mono-supstituisan sa Cwalkilom, kao što je:
Izraz "karboksi(niži) alkil", kako je ovde korišćen, bilo sam ili u kombinaciji sa drugim radikalom, označava karboksil grupu (COOH) vezanu preko (niži) alkil grupe, kao što je gore definisano a obuhvata na primer buternu kiselinu.
Izraz "heterocikl" ili "Het", kako je ovde korišćen, bilo sam ili u kombinaciji sa drugim radikalom, označava monovalentan radikal dobijen uklanjanjem vodonika iz peto-, šesto- ili sedmo-članog zasićenog ili nezasićenog (uključujući aromat) heterocikla koji sadrži od jedan do četiri hetero-atoma odabranih od azota, kiseonika i sumpora. Dalje, "Het", kako je ovde korišćeno, označava heterociklično jedinjenje kao što je definisano gore, "stopljeno" u jedan ili više drugih prstenova, bili oni hetero-prstenovi ili drugi prstenovi. Primeri pogodnih heterocikla obuhvataju: pirolidin, tetrahidrofuran, tiazolidin, pirol, tiofen, diazepin, lH-imidazol, izoksazol, tiazol, tetrazol, piperidin, 1,4-dioksan, 4-morfolin, piridin, pirimidin, tiazolo[4,5-b]piridin, hinolin ili indol, ili sledeće heterocikle:
Izraz "(niži alkil)-Het", kako je ovde korišćen, označava heterocikličan radikal kao što je gore definisano vezan preko prave ili razgranate alkil grupe, pri čemu alkil, definisan kao gore, sadrži do 1 do 6 atoma ugljenika. Primeri (niži alkil)-Het obuhvataju:
Izraz "farmaceutski prihvatljiv estar", kako je ovde korišćen, bilo sam ili u kombinaciji sa drugi supstituentom, označava estre jedinjenja formule I, u kojoj su karboksilne funkcije molekula, a prvenstveno karboksi zavšetak, zamenjeni alkoksikarbonil funkcijom:
u kojoj je deo R, estra, odabran od alkila (npr. metil, etil,/7-propil, t- butil,n -buni);alkoksialkila (npr. metoksimetil); alkoksiacila (npr. acetoksimetil); aralkila (npr. benzil; ariloksialkila (npr. fenoksimetil); arila (npr. fenil), eventualno supstituisan sa halogenom, Ci_4alkil ili C14alkoksi grupom. Drugi pogodni prolek estri mogu se naći u Design of prodrugs, Bundgaard, H. Ed. Elsevier (1985), uključenim ovim kao referenca. Takvi farmaceutski prihvatljivi estri obično hidrolizujuin vivokada se injektuju u sisara i transformišu se u oblik kiseline jedinjenja formule I.
Sto se tiče gore opisanih estara, ukoliko nije drukčije specificirano, svaki prisutan alkil deo prvenstveno sadrži 1 do 16 atoma ugljenika, naročito 1 do 6 atoma ugljenika. Svaki aril deo u takvim estrima prvenstveno sadrži fenil grupu.
Naročito, estri mogu biti Cj.jsalkil estar, neki nesupstituisani benzil estar ili benzil estar supstituisan sa bar jednom halogenom, Ci_6alkil, Ci_6alkoksi, nitro ili trifluormetil grupom.
Izraz "farmaceutski prihvatljiva so", kako je ovde korišćen, obuhvata one izvedene od farmaceutski prihvatljivih baza. Primeri pogodnih baza obuhvataju holin, etanolamin i etilendiamin. Na<+>, K<+>i Ca<++>soli takođe dolaze u obzir kao predmet pronalaska (vidi takođe Pharmaceutical salts, Birge, S.M. et al., J. Pharm. Sci.,
(1977), 66,1 -19, uključeno ovde kao referenca).
Rešenja koja imaju prednost
Kao predmet ovog pronalaska obuhvaćena su jedinjenja formule I u kojoj
prvenstveno, B jeste grupa Cg ili C?o aril, C7.i6aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Ci_6 alkil, C^g alkoksi, Ci_6alkanoil, hidroksi, hidroksialkil, halogeno, halogenoalkil, nitro, cijano, cijanoalkil, amido, (niži alkil)amido, ili amino grupa, eventualno supstituisana sa Ci.6alkilom;
ili
B je prvenstveno grupa Het ili (niži alkil)-Het, sve eventualno supstituisane sa grupom Cj.g alkil, C^g alkoksi, C^g alkanoil, hidroksi, hidroksialkil, halogeno, halogenoalkil, nitro, cijano, cijanoalkil, amido, (niži alkil) amido, ili amino grupa eventualno supstituisana sa Cj.g alkilom.
Alternativno, B je prvenstveno R4-SO2, gde R4prvenstveno jeste grupa C^g alkil; amido, (niži alkil) amid; C6ili Cioaril, C7.14aralkil ili Het, sve eventualno supstituisane sa C? alkilom.
Alternativno, B je prvenstveno acil derivat formule R4-C(0)-, gde R4prvenstveno jeste grupa
(i) Ci-ioalkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, hidroksi ili C^g alkoksi, ili amino grupa eventualno mono- ili di-supstituisana sa C^g alkilom; (ii) C3.7cikloalkil, ili C^joalkilcikloalkil, obe eventualno supstituisane sa grupom hidroksil, karboksil, (Ci_6alkoksi) karbonil, ili amino grupa, eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci_6alkilom; (iv) Cg ili Cioaril ili C7_i6aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Ci_6alkil, hidroksi, ili amino grupa eventualno supstituisana sa Ci_6alkilom; (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom C^g alkil, hidroksi, amino eventualno supstituisanom sa grupom C^g alkil, ili amino grupa eventualno supstituisana sa Ci_6alkilom. Alternativno, B je prvenstveno karboksil formule R4-0-C(0)-, gde R4prvenstveno jeste grupa (i) Cho alkil eventualno supstituisan sa grupom karboksil, Ci.6alkanoil, hidroksi, C^g alkoksi, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa grupom C? alkil, amido ili (niži alkil) amid; (ii) C3.7cikloalkil, C4.i0alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (Ci.6alkoksi) karbonil, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa grupom Ci-6alkil, amido ili (niži alkil) amid; (iv) C6ili Cioaril iu C7.16aralkil, eventualno supstituisane sa grupom CU6 alkil, hidroksi, amido, (niži alkil) amido, ili amino grupa eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci_6alkilom; ili (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom Ci.6 alkil, hidroksi, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa grupom CL.6alkil, amido ili (niži alkil) amido. Alternativno, B je prvenstveno amid formule R4-N(R5)-C(0)-, gde R4prvenstveno jeste grupa (i) Cho alkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, Ci.6alkanoil, hidroksi, Ci_6alkoksi, amido, (niži alkil) amido, ili amino grupa eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci_g alkilom; (ii) C3.7cikloalkil ili C4.10alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (Ci_6alkoksi)karbonil, amido, (niži alkil) amido, ih amino grupa eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci.6alkilom; (iii) amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa C^?, alkilom; (iv) Cg ili Cioaril ili C7_i6aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom C).g alkil, hidroksi, amido, (niži alkil) amid, ili amino grupa eventualno supstituisana sa Ci_6alkilom; ili (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom C^g alkil, hidroksi, amino eventualno supstituisanom sa grupom Ci.6alkil, amido ili (niži alkil)-amid; a
R5je prvenstveno H ili metil grupa.
Alternativno, B je prvenstveno tioamid formule R4-NH-C(S)-, gde R4prvenstveno jeste grupa (i) Ci_ioalkil eventualno supstituisan sa grupom karboksil, Ci.g alkanoil ili Cj.«alkoksi; (ii) C3.7cikloalkil ili C440 alkilcikloalkil, sve supstituisane sa grupom karboksil, (C1.6alkoksi) karbonil, amino ili amido.
Povoljnije je, da B jeste C6ili Cioaril eventualno supstituisane sa grupom Ci-6alkil, Ch; alkoksi, Ct.6alkanoil, hidroksi, hidroksialkil, halogeno, halogenoalkil, nitro, cijano, cijanoalkil, amido, (niži alkil) amid, ili amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci^alkilom, tako daje B na primer: ili je povoljnije da B jeste Het grupa, eventualno supstituisana sa grupom Ci.g alkil, Ci.6alkoksi, Ci-6alkanoil, hidroksi, halogeno, amido, (niži alkil)amid, ili amino grupa eventualno mono- ili di- supstituisana sa Cj.fi alkilom, tako daje B na primer:
Alternativno, povoljnije je da B jeste R4-SO2, gde R4prvenstveno jeste C6ili Qo aril, C7.14aralkil ili Het, sve eventualno supstituisane sa grupom Ci_6alkil; amido, (niži alkil) amid, tako daje B na primer:
Alternativno, povoljnije je da B jeste acil derivat formule R4-C(0)- gde R4prvenstveno jeste grupa (i) C1.10alkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, hidroksi ili Ci-6alkoksi; ili (ii) C3.7cikloalkil ili C4.10alkilcikloalkil, obe eventualno supstituisane sa grupom hidroksil, karboksil, (Ci_6alkoksi) karbonil, tako da B jeste na primer:
ili, R4 je prvenstveno grupa
(iv) C6ili Cjo aril ili C7.16aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom C^g alkil, hidroksi, tako daje B, na primer:
ili, I^je prvenstveno grupa
(v) Het, eventualno supstituisana sa grupom Ci_6alkil, hidroksi, ili amino, tako da je B, na primer: Alternativno, povoljnije je da B jeste karboksil formule R4-0-C(0)-, gde R4prvenstveno jeste grupa (i) Cj.ioalkil eventualno supstituisan sa grupom karboksil, CL.6alkanoil, hidroksi, Ci.6alkoksi ili amido, (niži alkil) amid, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Ci_6alkilom; (ii) C3.7cikloalkil, C440alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (C1.6alkoksi)karbonil, amido, (niži alkil)amid, amino eventualno mono-ili di-supstituisanom sa C^g alkilom, tako daje B na primer:
ili, R4je prvenstveno grupa
(iv) C6ili Cio ariliu C7-16aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Ct.6alkil, hidroksi, amino eventualno supstituisanom sa Ci_6alkilom; ili (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom Ci_6alkil, hidroksi, amido, ili amino grupa eventualno mono-supstituisana sa C].g alkilom, tako da je B na primer: Alternativno, povoljnije je da B jeste amid formule R4-N(R5)-C(0)-, gde je R4prvenstveno grupa (i) C140 alkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, C^ alkanoil, hidroksi, C^ijalkoksi, amido, (niži alkil)amid, amino eventualno mono- ili di-supsittuisanom sa C i_6 alkilom; (ii) C3.7cikloalkil ili C440alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (Ci.g alkoksi)karbonil, amido, (niži alkil) amid, amino eventualno mono-ili di-supsittuisanom sa Ci_6alkilom; a
R5je H ili metil grupa, tako daje B, na primer:
ili R4je prvenstveno
(iii) amino grupa eventualno mono- ili di-supstituisana sa C1.3alkilom, tako daje B, na primer:
ili R4je prvenstveno grupa
(iv) C6ili Cioaril ili C7.i6aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom C^ alkil, hidroksi, amino ili amido eventualno supstituisana sa Ci.6alkilom; ili (v) Het eventualno supstituisan sa grupom Ci.6alkil, hidroksi, amino ili amido, tako da je B, na primer:
Alternativno, povoljnije je da B jeste tioamid formule R4-NH-C(S)-, gde je R4prvenstveno grupa
(i) Čuo alkil; ili (ii) C3.7cikloalkil, tako daje B, na primer:
Najpovoljnije je da B jeste amid formule R4-NH-C(0)-, gde je R4prvenstveno grupa (i) (440 alkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, Ci.fi alkanoil, hidroksi, Ci_6alkoksi, amido, (niži alkil) amid, amino eventualno mono- ili di-supsittuisanom sa (4.6alkilom; (ii) Ca.7cikloalkil ili C44o alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (Ci_6alkoksi) karbonil, amido, (niži alkil) amid, amino eventualno mono-ili di- supstituisanom sa Ci_6alkilom;
ili R4je prvenstveno grupa
(iv) C6ili Cioaril ili C746 aralkil eventualno supstituisana sa grupom Ci_6alkil, hidroksi, amino ili amido, tako daje B, na primer: Ipak, najpovoljnije je da B jesteterc -butoksikarbonil(Boe) ili
Prvenstveno, Y jeste H ili metil grupa. Poželjnije je da Y jeste H.
Prvenstveno, R<3>je grupa Cw alkil, C3.7cikloalkil, ili C4.10alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom hidroksi, Cw alkoksi, Ci.6tioalkil, acetamido, C6ili Cioaril ili C7.i6aralkil, tako da je B, na primer:
Povoljnije je da R<3>jeste bočni lanacterc-butilglicina (Tbg), Ile, Val, Chg ili:
Najpovoljnije je da R<3>jeste bočni lanac od Tbg, Chg ili Val.
U predmet pronalaska uključena su jedinjenja formule I, gde prvenstveno, R2jeste S-R2o ili 0-R2o, gde R20jeste prvenstveno C6ili Cjoaril, C7.16aralkil, Het ili -CHg-Het, sve grupe eventualno mono-, di- ili tri-supstituisane sa R21.
Prvenstveno, R2ije grupa Ci_6alkil; C1.6alkoksi; niža tioalkil; amino ili amido eventualno mono- ili di-supstituisane sa grupom Ci_g alkil, Cg ili Cioarn,
C7.l6aralkil, Het ili (niži alkil)-Het grupom; NO2; OH; halogeno;
trifluorometil; karboksil; C6ili Qoaril, C7.i6aralkil, ili Het, a pomenute aril, aralkil ili Het eventualno su supstituisane sa R22. Povoljnije je, da R2i jeste Cj.g alkil; Ci.6alkoksi; amino; di (niži alkil) amino; (niži alkil) amid; C6ili Cioaril, ili Het, a pomenute aril ili Het grupe eventualno su supstituisane sa R22.
Prvenstveno, R22je grupa Ci_6alkil; C3.7cikloalkil; Ci.6alkoksi; amino;
mono- ili di-(niži alkil) amino; (niži alkil) amid; sulfonilalkil; N02; OH;
halogeno; trifluorometil; karboksil ili Het. Povoljnije je, da R22jeste grupa C^g alkil; C3.7cikloalkil; Cj.6alkoksi; amino; mono- ili di-(niži alkil)-amino; amido; (niži alkil) amid; halogeno; trifluorometil ili Het. Najpovoljnije je, da R22jeste grupa Cj.fi alkil; Cj.g alkoksi; halogeno; amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa nižim alkilom; amido; (niži alkil) amid; ili Het. Ipak, najpovoljnije je da R22jeste grupa metil; etil; izopropil, terc-butil; metoksi; hloro; amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa nižim alkilom; amido, (niži alkil) amid; ili (niži alkil)2-tiazol.
Alternativno, R2 je prvenstveno odabrana iz grupe koja se sastoji od:
Povoljnije je, da R2jeste 1-naftilmetoksi; 2-nafrilmetoksi; benziloksi, 1-naftiloksi; 2-naftiloksi; ili hinolinoksi, nesupstituisana, mono- ili di-supstituisana sa R2jkao što je gore definisano. Najpovoljnije je, da R2jeste 1-naftilmetoksi; ili hinolinoksi, nesupstituisana, mono- ili di-supstituisana sa R21kao što je gore definisano, tako da je R2na primer:
Još povoljnije je, da R2 jeste:
Povoljnije je, da R21A jeste Cj.6alkil, kao što je izopropil, terc-butil ili cikloheksil;
Cj.fialkoksikao što je metoksi,
niži tioalkil kao što je halogeno kao što je hloro; amino eventualno mono-supsittuisana sa Ci_g alkilom; ili Cg ili Cioaril, tako da R2ia na primer jeste: dimetilamino, Ph -N(Me)-; nesupstituisana Cg ili Qo aril, C7.16aralkil, kao što je na primer fenil ili ili povoljnije je da R2ia jeste Het eventualno supstituisana sa R22, gde R22 jeste grupa Ci_6alkil, Ci_6alkoksi, amido, (niži alkil)amid, amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci_6alkilom, ili Het, tako da R2iana primer jeste:
Najpovoljnije je, da R2iAjeste C6, Cioaril ili Het, sve eventualno supstituisane sa R22kao što je gore definisano, tako da R2iana primer jeste:
Ipak, najpovoljnije je da R2jeste:
gde R22Aprvenstevno jeste Cj.6alkil (kao što je metil); Ci.6alkoksi (kao što je metoksi); ili halogeno (kao što je hloro); R22bprvenstevo jeste grupa Cj_6alkil, amino eventualno mono-supstituisana sa Cj.fi alkilom, amido, ili (niži alkil) amid; a R21Bprvenstveno jeste Cj.fi alkil, Cj.g alkoksi, amino, di (niži alkil) amino, (niži alkil) amid, N02, OH, halogeno, trifluorometil, ili karboksil grupa. Povoljnije je, da R21Bjeste Ci.6alkoksi, ili di(niži alkil) amino. Najpovoljnije je, da R2jg jeste metoksi grupa.
Kao što je prethodno opisano Pl segment jedinjenja formule I jeste ciklobutil ili ciklopropil prsten, oba eventualno supstituisana sa Rj.
Prvenstveno, R<1>je H, grupa Cj_3alkil, C3.5cikloalkil, ili C2^ alkenil, eventualno supstituisana sa halogenom. Povoljnije je, da R<1>jeste etil, vinil, ciklopropil, 1 ili 2-bromoetil ili 1 ili 2-bromovinil. Najpovoljnije je da Rijeste vinil grupa.
Kada Rjnije H, tada Pl jeste prvenstveno ciklopropil sistem formule:
gde svaki od Cji C2predstavlja asimetričan atom ugljenika u položajima 1 i 2, ciklopropil prstena. Uprkos drugim mogućim asimetričnim centrima na drugim segmentima jedinjenja formule I, prisustvo ova dva asimetrična centra znači da jedinjenja formule I mogu da postoje kao racemske smeše dijastereoizomera. Kao što je prikazano na daljim primerima, racemske smeše mogu biti pripremljene a zatim razdvojene u pojedinačne optičke izomere, ili ti optički izomeri mogu biti pripremljeni putem hiralne sinteze.
Otuda, jedinjenje formule I može da postoji kao racemska smeša dijastereoizomera na ugljeniku 1 samo kada je Rina ugljeniku 2 orijentisansynu odnosu na karbonil u položaju 1, stoje prikazano pomoću radikala: ili jedinjenje formule I može da postoji kao racemska smeša dijastereoizomera kada je Ri u položaju 2 orijentisanantiu odnosu na karbonil u položaju 1, što je prikazano pomoću radikala:
Sa druge strane, racemska smeša može da bude razdvojena u pojedinačne optičke izomere.
Najinteresantnije otkriće ovog pronalaska odnosi se na adiciju Risupstituenta na ugljenik 2, kao i na prostornu orijentaciju Pl segmenta. Otkriće se odnosi na konfiguraciju asimetričnog ugljenika 1. Najpovoljnije rešenje je ono gde Rjnije H a ugljenik 1 imaRkonfiguraciju.
Određenije, uvođenje supstituenta (R^ na C2 utiče na potenciju, kada je Riunet tako da Cl imaRkonfiguraciju. Na primer, jedinjenja 901( 1R2S)i 203( 1R2R)imaju aktivnosti od 25, odnosno 82 nM. Ako se uporede sa nesupstituisanim ciklopropil jedinjenjem 111 (475 nM) zapaža se suštinski porast potencije. Šta više, kako se pokazalo za jedinjenja 901 i 203, kada ugljenik 1 imaRkonfiguraciju, inhibicija NS3 proteaze HCV-a je dalje povećana konfiguracijom supstituenta Ri(npr. alkil ili alkilen) na ugljeniku 2 ciklopropil prstena, npr. jedinjenje koje sadrži Rj" syn"u odnosu na karboksil ima veću potencu (25 nM) nego" antfenantiomer (82 nM). EfekatRprema 5 konfiguraciji, može se videti na Cl upoređivanjem jedinjenja 801( 1R, 2S)i njegovog odgovarajućeg( 1S, 2S)izomera koji, respektivno, imaju potence od 6 nM, odnosno >10 uM, razlika preko 1500-struka !!
Zbog toga, jedinjenje koje ima najveću prednost je optički izomer koji sadrži Risupstituent i karbonil usynorijentaciji, sa sledećom apsolutnom konfiguracijom:
U slučaju kada Rijeste etil, na primer, asimetrični atomi ugljenika u položajima 1 i 2 imajuR, Rkonfiguraciju.
Predmetom ovog pronalaska obuhvaćena su jedinjenja formule I gde
B jeste grupa C6ili C1() aril ili G^g aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Cj.6alkil, Cj.6alkoksi, C^g alkanoil, hidroksi, hidroksialkil, halogeno, halogenoalkil, nitro, cijano, cijanoalkil, amido, (niži alkil)amido, ili amino eventualno supstituisana sa C^g alkilom; ili Het ili (niži alkil)-Het, sve eventualno supstisuisane sa grupom C^g alkil, Ci_6alkoksi, C^g alkanoil, hidroksi, hidroksialkil, halogeno, halogenoalkil, nitro, cijano, cijanoalkil, amido, (niži alkil)amido, ili amino eventualno supstituisanom sa C^g alkilom; ili
B je R4-S02gde je R4prvenstveno amido; (niži alkil)amid; C6ili C10aril, C7.14aralkil ili Het, sve eventualno supstituisane sa Cj.g alkilom, ili B je acil derivat formule R4-C(O)- gde R4jeste grupa
(i) Cj.ioalkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, hidroksi ili C^g alkoksi, ili amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C^g alkilom; (ii) C3.7cikloalkil ili C440alkilcikloalkil, obe eventualno supstituisane sa grupom hidroksi, karboksil, (C^g alkoksi)karbonil, ili amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C^g alkilom; (iv) C6ili C10aril ili C7.16aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Cj.6alkil,
X/09 hidroksi, ili amino eventualno supstituisanom sa Ci_g alkilom;
(v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom Ci_g alkil, hidroksi, amino eventualno supstituisanom sa grupom Ci.g alkil, ili amino eventualno supstituisana sa C^g alkilom, ili
B je karboksil formule Rj-O-C(O)-, gde R4 jeste grupa
(i) Cj.joalkil eventualno supstituisan sa grupom karboksil, Cj.g alkanoil, hidroksi, Ci.g alkoksi, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa grupom Ci_6alkil, amido ili (niži alkil)amid; (ii) C3.7cikloalkil, C440alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, ( Ci_ q alkoksi)karbonil, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa grupom Ci_g alkil, amido ili (niži alkil) amid; (iv) Cg ili Cioaril ili C7_i6aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Ci_6alkil, hidroksi, amido, (niži alkil)amido ili amino eventualno supstituisanom sa C^g alkilom; ili (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom Ci_g alkil, hidroksi, amino eventualno mono-supsittuisanom sa grupom C^g alkil, amido ili (niži alkil) amido, ili
B jeste amid formule R4-N (R5)-C(0)-, gde je R4grupa
(i) Cno alkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, C^g alkanoil, hidroksi, Ci.g alkoksi, amido, (niži alkil)amid, ili amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C^g alkilom; (ii) C3.7cikloalkil ili C440alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (Ch6alkoksi)karbonil, amido, (niži alkil)amid, ili amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Ci_6alkilom; (iii) amino grupa eventualno mono- ili di-supstituisana sa C1.3alkilom; (iv) Cg ili Cioaril ili C7_ig aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom C^g alkil, hidroksi, amido (niži alkil) amid, ili amino eventualno supstituisanom sa Ci.g alkilom; ili (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom Ci_6alkil, hidroksi, amino eventualno supstituisanom sa grupom C^g alkil, amido ili (niži alkil) amid; a
R5je prvensteveno H ili metil grupa, ili
B jeste tioamid formule Pv4-NH-C(S)-, gde je R4grupa X/09 (i) Cnoalkil eventualno supstituisana sa grupom Cj.g alkanoil ili Ci.g alkoksi; (ii) C3.7cikloalkil ili C4_i0alkilcikloalkil, sve supstituisane sa grupom karboksil, (C4.6alkoksi) karbonil, amino ili amido;
Y jeste H ili metil grupa;
R<3>je grupa Ci.8alkil, C3_7cikloalkil, ili C4.10alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom hidroksi, Ci.6alkoksi, Ci_6tioalkil, acetamido, C6ili Cioaril ili C7.i6aralkil;
R2jeste S-R2oili O-R20, gde R20jeste prvenstveno C6ili Ci0aril, C7_i6aralkil, Het ili
-CH2-Het, sve grupe eventualno mono-, di- ili tri-supstituisane sa R2i, gde
R21jeste grupa Ci^ alkil; Ci^ alkoksi; niži tioalkil; amino ili amido eventualno mono- ili di-supstituisane sa grupom Ci.g alkil, Cg ili C^ aril, C7.ig aralkil, Het ili (niži alkil)-Het; N02; OH; halogeno; trifluorometil; karboksil; C6ili C10aril, C7_i6aralkil, ili Het, a pomenute aril, aralkil ili Het eventualno su supstituisane sa R22,<g>de
R22jeste grupa Ci_6alkil; C3.7cikloalkil; Ci.6alkoksi; amino; mono- ili di-(niži alkil) amino; (niži alkil) amid; sulfonilalkil; N02; OH; halogeno;
trifluorometil; karboksil ili Het; ili
R2je odabran iz grupe koja se sastoji od:
ili R2jeste 1-naftilmetoksi; 2-naftilmetoksi; benziloksi, 1-naftiloksi; 2-naftiloksi; ili hinolinoksi, nesupstituisana, mono- ili di-supstituisana sa R2ikao što je gore definisano;
Pl segment je ciklobutil ili ciklopropil prsten, oba eventualno supstituisana sa Ri, gde R<1>jeste H, grupa Ct.3alkil, C3.5cikloalkil ili C2.4alkenil eventualno supstituisana sa halogenom, a pomenuti R\na ugljeniku 2 orijentisan jesynu odnosu na karbonil u položaju 1, što je prikazano pomoću radikala:
Predmet ovog pronalaska obuhvata jedinjenja formule I, gde B jeste grupa Cg ili Cioaril, eventualno supstituisane sa grupomC\. qalkil, Ci.6alkoksi, Ci.g alkanoil, hidroksi, hidroksialkil, halogeno, halogenoalkil, nitro, cijano, cijanoalkil, amido, (niži alkil)amid, ili amino grupom eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Ci.6alkilom; ili B je Het eventualno supstituisan sa grupom Ci.fi alkil, Ci_g alkoksi, C^g alkanoil, hidroksi, halogeno, amido, (niži alkil)amid, ili amino grupom eventualno stituisanom sa Ci.6alkilom; ili B jeste R4-SO2gde R4jeste Cg ili Cioarn> C7-14aralkil ili Het svi eventualno supstituisani sa Ci.6alkilom; amido;, (niži alkil) amid; ili B je acil derivat formule R4-C(O)- gde R4jeste grupa (i) Cj.ioalkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, hidroksi ili Ci_6alkoksi; ili (ii) C3.7cikloalkil ili C440alkilcikloalkil, obe eventualno supstituisane sa grupom hidroksi, karboksil, (Ci_g alkoksi)kabonil; ili (iv) C6ili Cioaril ih C7-I6aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom C].g alkil, hidroksi; ili (v) Het eventualno supstituisan sa grupom Ci.6alkil, hidroksi, amido ili amino;
B je karboksil formule R4-O-C(O)-, gde R4jeste grupa
(i) C140 alkil eventualno supstituisan sa grupom karboksil, Ci.6alkanoil, hidroksi, Ci„6alkoksi, ili amido, (niži alkil)amid, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Ci_6alkilom; (ii) C3.7cikloalkil, C4_i0alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (Ci.6alkoksi) karbonil, amido, (niži alkil) amid ili amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Ci_6alkilom; ili (iv) C6ili Cioaril ili C746aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Ci_6alkil, hidroksi, amino eventualno supstituisanom sa Ci.g alkilom; ili (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom Ci.g alkil, hidroksi, amido, ili amino eventualno mono-supstituisanom sa Ci.g alkilom;
ili B jeste amid formule R4-N(R5)-C(0)-, gde je R4grupa
(i) C1.10alkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, Cj.g alkanoil, hidroksi, C^g alkoksi, amido, (niži alkil)amid, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C^g alkilom; (ii) C3.7cikloalkil ili C^oalkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (Ci_6alkoksi)karbonil, amido, (niži alkil)amid, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C^g alkilom;
R4je (iii) amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci_3alkilom; ili (iv) C6ili C10aril ili C7_i6aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom C1.6alkil, hidroksi, amino ili amido eventualno supstituisanom sa Ci_6alkilom; ili (v) Het eventualno supstituisan sa grupom Ci.g alkil, hidroksi, amino ili amido; ili
aRsjeHili metil;
B jeste tioamid formule R4-NH-C(S)-, gde je R4grupa
(i) C^oalkil; ili (ii) C3.7cikloalkil; ili
B jeste amid formule R4-NH-C(0)- gde je R4grupa
(i) C^oalkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, C^g alkanoil, hidroksi, Ci. G alkoksi, amido, (niži alkil) amid, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C^g alkilom; (ii) C3.7cikloalkil ili C440alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (C^g alkoksi)karbonil, amido, (niži alkii)arnid, amino eventualno mono- ili di-supsittuisanom sa Ct.g alkilom; (iv) Cg ili C10aril ili C7.16aralkil, eventualno supstituisane sa grupom C^g alkil, hidroksi, amino ili amido;
Y jeste H;
R3 je bočni lanac u te/r-butilglicinu (Tbg), Ile, Val, Chg, ili:
R2je 1-naftilmetoksi; ili hinolinoksi, nesupstituisan ili mono- ili di-supstituisan sa R21, kao što je definisano gore, ili
R2je:
gde R2ia jeste grupa Cj.6alkil; Cj.6alkoksi; C6, C10aril ili Het; niži tioalkil; halogeno; ainino eventualno mono-supstituisana sa Q_6alkilom; ili Cr, C\ q aril, C7.16aralkil ili Het, eventualno supstituisan sa R22gde R22jeste Ci.6alkil, Cj.6alkoksi, amido, (niži alkil) amid, amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci.6alkilom, ili Het;
Pl je ciklopropil prsten u kome ugljenik 1 imaRkonfiguraciju,
a R<1>je etil, vinil, ciklopropil, 1 ili 2-bromoetil ili 1 ili 2-bromovinil.
Osim toga, predmet pronalaska obuhvata jedinjenja formule I gde:
B jesteterc-butoksikarbonil(Boe) ili
R<3>je bočni lanac u Tbg, Chg ili Val;
R2 je:
gde R22Ajeste Cj.fi alkil (kao što je metil); Cj.6alkoksi (kao što je metoksi); ili halogeno (kao što je hloro); R22g je Ci_6alkil, amino eventualno mono-supstituisan sa grupom Cj.6alkil, amido, ili (niži alkil) amid; a R2jbje Cj.6alkil, Cj.6alkoksi, amino, di(niži alkil) amino, (niži alkil) amid, N02, OH, halogeno, trifluorometil, ili karboksil; aPl je:
Na kraju, predmetom ovog pronalaska obuhvaćeno je svako jedinjenje formule I kao što je prikazano u tabelama 1 do 10.
Prema jednom alternativnom rešenju, farmaceutske kompozicije na osnovu ovog pronalaska mogu dodatno da sadrže i drugo anti-HCV sredstvo. Primeri anti-HCV sredstava obuhvataju, a- ili p-interferon, ribavirin i amantidin.
Prema drugom alternativnom rešenju, farmaceutske kompozicije na osnovu ovog pronalaska mogu dodatno da sadrže i druge proteaze inhibitore HCV.
Prema još jednom drugom alternativnom rešenju, farmaceutske kompozicije na osnovu ovog pronalaska mogu dodatno da sadrže i inhibitore drugih ciljeva u životnom ciklusu HCV-a, uključujući ali ne uz ograničavanje, helikazu, polimerazu, metaloproteazu ili interna mesta ulaženja ribozoma (IRES).
Farmaceutske kompozicije na osnovu ovog pronalaska mogu da se daju oralno, parenteralno ili preko implantiranog rezervoara. Prednost ima oralno davanje ili davanje putem injekcije. Farmaceutske kompozicije na osnovu ovog pronalaska mogu da sadrže bilo koje uobičajene netoksične, farmaceutski prihvatljive nosače, dodatke (adjuvense) ili prenosioce. U nekim slučajevima, pH formulacije može da se podešava sa farmeceutski prihvatljivim kiselinama, bazama ili puferima, da bi se povećala stabilnost jedinjenja u formulaciji ili oblik u kome se daje. Izraz parenteralan, kako je ovde korišćen, obuhvata supkutanu, intrakutanu, intravensku, intramuskularnu, intraartikularnu, intrasinovijalnu, intrasternalnu, intratekalnu i intralezijsku injekciju ili infuzione tehnike.
Farmaceutske kompozicije mogu biti u obliku sterilnog preparata koji se može injektovati, na primer, kao sterilna injekciona vodena ili uljna suspenzija. Takva suspenzija može biti formulisana prema tehnikama poznatim na osnovu stanja tehnike, uz upotrebu pogodnih sredstava za dispergovanje ili kvašenje (takvog kao na primer Tween 80) i sredstava za suspendovanje.
Farmaceutske kompozicije prema ovom pronalasku oralno mogu da se daju u bilo kom obliku prihvatljivom za oralno davanje, uključujući, ali ne uz ograničavanje, kapsule, tablete i vodene suspenzije i rastvore. U slučaju tableta za oralnu upotrebu, nosači koji se obično koriste uključuju laktozu i kukuruzni škrob. Sredstva koja olakšavaju presovanje tableta, kao magnezijum-stearat, takođe se tipično dodaju. Za oralno davanje u obliku kapsule, upotrebljivi razblaživači uključuju laktozu i suvi kukuruzni škrob. Kada se vodene suspenzije daju oralno aktivni sastojak se kombinuje sa sredstvima za emulgovanje i suspendovanje. Po želji, mogu se dodati određena sredstva za zaslađivanje i/ili aromu i/ili bojenje.
Drugi pogodni prenosioci ili nosači za gore navedene formulacije i kompozicije mogu se naći u standardnim farmaceutskim knjigama, npr. "Remington's Pharmaceutical Sciences", The Science and Practice of Pharmacv, 19<th>Ed. Mack Publishing Companv, Easton, Penn., (1995).
Nivoi doziranja, između oko 0,01 i oko 100 mg/kg telesne mase na dan, prvenstveno između oko 0,5 do oko 75 mg/kg telesne mase na dan, jedinjenja inhibitora proteaze opisanih ovde, korisni su u monoterapiji za prevenciju i lečenje oboljenja izavanih HCV-om. Tipično je da se farmaceutske kompozicije prema ovom pronalasku daju od oko 1 do oko 5 puta dnevno, ili alternativno kao kontinualna infuzija. Takvo davanje može da se primeni kao hronična ili akutna terapija. Količina aktivnog sastojka, koja može da se kombinuje sa nosećim materijalima za pripremanje pojedinačnog oblika doziranja, menjaće se u zavisnosti od domaćina koji se tretira a naročito od načina davanja. Tipičan preparat sadrži od oko 5% do oko 95% aktivnog jedinjenja (mas./mas.). Prvenstveno, takvi preparati sadrže od oko 20% do oko 80% aktivnog jedinjenja.
Kao što će stručnjak da proceni, niže ili više doze, od onih gorenavedenih mogu biti neophodne. Specifično doziranje i režimi tretmana za svakog posebnog pacijenta zavisiće od različitih faktora, uključujući aktivnost primenjenog specifičnog jedinjenja, godine, telesnu masu, opšte zdravstveno stanje, pol, ishranu, vreme davanja, brzinu izlučivanja, kombinaciju lekova, ozbiljnost i tok infekcije, predispoziciju pacijenata prema infekciji i procenu lekara koji obavlja lečenje. U principu, lečenje se započinje sa malim dozama znatno manjim od optimalne doze peptida. Posle toga, doza se po malo povećava dok se ne postigne optimalni efekt pod tim okolnostima. Obično, najpoželjnije je da se jedinjenje daje sa nivoom koncentracije koji će uopšte dati efikasne antivirusne rezultate bez izazivanja štetnih ili škodljivih pratećih efekata.
Kada kompozicije prema ovom pronalasku sadrže kombinaciju jedinjenja formule I i jedno ili više dodatnih terapeutskih ili profilaksnih sredstava, i jedinjenje i adiciono sredstvo treba da su uneti na nivoima doze od između oko 10 do 100%, pogodnije je između oko 10 i 80% doze koja se normalno daje u režimima monoterapije.
Kada su ova jedinjenja ili njihove farmaceutski prihvatljive soli formulisani zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, dobijena kompozicija može da se dajein vivusisarima, kao što je čovek, da bi se inhibirala NS3 proteaza HCV-a ili za lečenje ili prevenciju HCV infekcije. Takav tretman može takođe da se postigne upotrebom jedinjenja prema ovom pronalasku u kombinaciji sa sredstvima koja sadrže, ali bez ograničavanja samo na njih: imunomodulatorska sredstva, kao što su a-, B- ili y -interferoni; druga antivirusna sredstva kao što su ribavirin, amantadin; druge inhibitore NS3 proteaze HCV-a; inhibitore drugih ciljeva u životnom ciklusu HCV-a, koji ukljuČiju, ali ne uz ograničavanja, helikazu, polimerazu, metaloproteazu, ili interna mesta ulaska ribozoma (IRES); ili njihove kombinacije. Dodatna sredstva mogu da se kombinuju sa jedinjenjima prema ovom pronalasku radi stvaranja jedinstvenog oblika doziranja. Alternativno, ova dodatna sredstva mogu da se daju odvojeno sisarima kao deo oblika višestrukog doziranja.
Prema tome, drugo rešenje prema ovom pronalasku pruža postupke za inhibiranje aktivnosti NS3 proteaze HCV-a kod sisara, davanjem jedinjenja formule I, čiji su supstituenti definisani kao što je prethodno izneto.
Prema rešenju koje ima prednost, ti postupci su korisni za smanjenje, kod sisara, aktivnosti NS3 proteaze HCV-a. Ako farmaceutska kompozicija sadrži samo komponentu prema ovom pronalasku, kao aktivnu komponentu, takvi postupci mogu dodatno da sadrže i stupanj davanja pomenutom sisaru nekog sredstva odabranog između imunomodulatorskog sredstva, antivirusnog sredstva, inhibitor HCV proteaze, ili inhibitora drugih ciljeva u životnom ciklusu HCV-a, kao što su helikaza, polimeraza, ili metaloproteaza, ili IRES. Takvo dodatno sredstvo može da se da sisaru, pre, jednovremeno sa, ili posle davanja jedinjenja, prema ovom pronalasku.
Prema alternativnom rešenju koje ima prednost, ovi postupvi su korisni za inhibiranje virusne replikacije kod sisara. Takvi postupci su korisni za lečenje i prevenciju HCV oboljenja. Ako farmaceutska kompozicija, kao aktivnu komponentu, sadrži samo jedinjenje prema ovom pronalasku takvi postupci mogu dodatno da sadrže i stupanj davanja pomenutom sisaru nekog sredstva odabranog među imunomodu-lacionim sredstvima, neko antivirusno sredstvo, neki inhibitor HCV proteaze, ili inhibitor drugih ciljeva u životnom ciklusu HCV. Takvo dodatno sredstvo može da se daje sisaru, pre, jednovremeno sa, ili posle davanja kompozicije prema ovom pronalasku.
Jedinjenja koja su ovde prikazana mogu takođe da se koriste kao laboratorijski reagensi. Jedinjenja prema ovom pronalasku mogu takođe da se koriste za tretiranje ili prevenciju virusne kontaminacije materijala pa time da smanje rizik od virusne infekcije laboratorijskog ili medicinskog osoblja ili pacijenata koji dolaze u dodir sa takvim materijalima (npr. krv, tkivo, hirurški instrumenti i opreme, laboratorijski instrumenti i opreme, i aparati i materijali za čuvanje krvi).
Jedinjenja prikazana ovde mogu takođe da se upotrebe kao reagensi u istraživanju. Jedinjenja prema ovom pronalasku mogu takođe da se upotrebe kao pozitivna kontrola valjanosti eksperimenata baziranih na ćelijama koje služe kao zamena, ili uin vitroti' s. in vivoeksperimentima replikacija.
POSTUPAK
Jedinjenja prema ovom pronalasku sintetizuju se prema opštem postupku kao što je prikazano na shemi I (gde CPG jeste karboksilna zaštitna grupa a APG je amino zaštitna grupa):
Ukratko, Pl, P2 i P3 mogu se povezati prema dobro poznatim tehnikama kuplovanja peptida. Pl, P2 i P3 grupe mogu biti povezane jedna za drugu bilo kojim redom dokle god finalno jedinjenje odgovara peptidima formule I. Na primer, P3 može biti vezan za P2-P1; ili Pl vezan za P3-P2.
Uglavno, peptidi se produžavuju putem deprotektovanja (uklanjanja zaštitne grupe) a-amino grupe N-terminalnog ostatka i kuplovanja neprotektovane (nezaštićene) karboksil grupe sledeće pogodono N-protektovane amino kiseline preko peptidne veze korišćenjem opisanih postupaka. Taj postupak deprotektovanja i kuplovanja ponavlja se sve dok se ne dobije željena sekvenca. Kuplovanje može da se izvede sa konstitucionim amino kiselinama, stupnjevito, kao što pokazuje shema I, ili sintezom peptida u čvrstoj fazi, prema postupku koji je originalno opisao Merrifield, u J. Am. Chem. Soc, (1963), 85, 2149 - 2154, čije se otkriće ovim uključuje kao referenca.
Kuplovanje između dveju amino kiselina, amino kiseline i peptida, ili dva peptidna fragmenta, može se izvesti upotrebom standardnih postupaka za kuplovanje, kao što je azidni postupak, postupak mešanja anhidrida karbonske-karboksilne kiseline (izobutil hloroformijat), karbodiimidni (dicikloheksilkarbodiimid, diizopropil-karbodiimid, ili vodo-rastvorni karbodiimid) postupak, postupak aktivnog estra (p-nitrofenil estar, N-hidrosukcinik imido estra), K-postupak sa Woodward-ovim reagensom, karbonildiimidazolni postupak, postupci sa fosfornim reagensima ili oksidaciono-redukcioni. Neki od tih postupaka (naročito karbodiimidni posrupak) mogu biti poboljšani dodavanjem 1-hidroksibenzotriazola. Ove reakcije kuplovanja mogu da se izvode ili u rastvoru (tečna faza) ili u čvrstoj fazi.
Određenije, stupanj kuplovanja obuhvata dehidrativno kuplovanje slobodnog karboksila jednog reaktanta sa slobodnom amino grupom drugog reaktanta, u prisustvu sredstva za kuplovanje, radi stvaranja vezujuće amidne veze. Opisi takvih sredstava za kuplovanje nalaze se u opštim udžbenicima peptidne hernije, na primer, M. Bodanszky, "Peptide Chemistry", 2<nd>rev. ed., Springer-Verlag, Berlin, Nemačka (1993). Primeri pogodnih sredstava za kuplovanje jesuN, N'--dicikloheksilkarbodiimid, 1-hidroksibenzotriazol u prisustvu A^A^-dicikloheksil-karbodiimida ili A<t>etil-A</>'-[(3-imetilamino)-propil]karbodimida. Praktično i obično korišćeno sredstvo za kuplovanje je komercijalno dostupni (benzotriazol-1--iloksi)tris-(dimeitlamino)fosfonijum heksafluorofosfat, bilo sam ili u prisustvu 1-hidroksibenzotriazola. Drugo praktično i korisno sredstvo za kuplovanje je komercijalno dostupan 2-(lH-benzotriazol-l-il)-7V;A';A<r>;A^'-tetrametiluronijum teua-fluoroborat. Još jedno praktično i korisno sredstvo za kuplovanje je komercijalno dostupan 0-(7-azabenzotriazol-l-il)-7V;A^7V;A'''-tetrametiluronijum heksafluorofosfat. Reakcija kuplovanja se izvodi u inertnom rastvaraču, npr. dihlormetanu, acetonitrilu ili dimetilformamidu. Višak tercijarnog amina, npr. diizopropiletilamin, Af-metilmorfolin ili 7V-metilpiroliđin, dodaje se da bi se reakciona smeša održavala na pH oko 8. Temperatura reakcije obično se kreće između 0 °C i 50 °C, a reakcija traje obično između 15 min i 24 h.
Kada se koristi sintezni postupak u čvrstoj fazi, C -terminalno karboksilne kiseline se vezuje za nerastvoran nosač (obično polistiren). Takvi nerastvorni nosači sadrže grupu koja će da reaguje sa karboksilnom grupom stvarajući vezu koja je stabilna pod uslovima elongacije, ali se kasnije lako čepa. Primeri za to su: hloro- ili bromometil smola, hidroksimetil smola, tritil smola i 2-metoksi-4-alkoksi-benzilalokonol smola.
Mnoge od tih smola su komercijalno dostupne uvek sa ugrađenom željenom C-terminalnom amino kiselinom. Alternativno, amino kiselina može da bude ugrađena na čvrst nosač na osnovu poznatih postupaka (Wang, S.-S., /.Am. Chem. Soc,
(1973), 95, 1328; Atherton, E., Shepard, R.C. "Solid-phase peptide svnthesis; a practical approach" IRL Press: Oxford (1989); 131 -148). Pored prethodnih, drugi postupci sinteza peptida su opisani kod Stewart and Young, "Solid Phase Peptide Svnthesis", 2<nd>ed., Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984); Gross, Meinhofer, Udenfriend, Eds., 'The Peptides: Analysis, Svnthesis, Biology", Vol. 1, 2, 3, 5 i 9, Academic Press, New-York, (1980-1987); Bodansky et al., 'The Practice of Peptide Svnthesis", Springer-Verlag, New-York (1984), čiji se objavljeni podaci ovim unose kao referenca.
Funkcionalne grupe konstitucionih amino kiselina obično moraju biti zaštićene za vreme reakcija kuplovanja kako bi se izbegla stvaranja neželjenih veza. Zaštitne grupe koje mogu biti upotrebljene navedene su u Greene, "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley & Sons, New York (1981) i "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", Vol. 3, Academic Press, New Yor (1981), čiji se objavljeni podaci ovim unose kao referenca.
cc-karboksil grupa C-terminalnog ostatka obično se štiti kao estar (CPG) koji može biti razložen dajući karboksilnu kiselinu. Zaštitne grupe koje mogu biti upotrebljene uključuju: 1) alkilestre, kao što je metil, trimetilsililetil it-butik 2) aralkil estre, kao što je benzil i supstituisani benzil, ili 3) estre koji mogu biti razloženi
putem blago baznog tretmana ili blagim redukcionim sredstvima, kao što su trihloroetil i fenacil estri. a-amino grupa svake amino kiseline koja treba da se kuplije u peptidni lanac koji se produžava mora biti zaštićena (APG). Svaka zaštitna grupa poznata na osnovu stanja tehnike može da se upotrebi. Primeri takvih grupa obuhvataju: 1) acil grupe, kao formil, trifluoroacetil, ftalil, i p-toluensulfonil; 2) aromatske karbamatne grupe kao benziloksikarbonil (Cbz ili Z) i supstituisane benziloksikarbonile, i 9-fluoren-ilmetiloksikarbonil (Fmoc); 3) alifatske karbamatne grupe, kaoterc -butiloksikar-bonil (Boe), etoksikarbonil, diizopropilmetoksikarbonil i aliloksikarbonil; 4) cik-lične alkil karbamatne grupe, kao ciklopentiloksikarbonil i adamantiloksikarbonil; 5) alkil grupe, kao trifenilmetii i benzil; 6) trialkilsilil, kao trimetilsilil; i 7) grupe koje sadrže tiol, kao feniltiokarbonil i ditiasukcinoil. Prvenstveno, a-amino zaštitne grupe jesu ili Boe ili Fmoc. Mnogi derivati amino kiselina, pogodno zaštićeni za sinteze peptida, komercijalno su dostupni.
a-amino zaštitna grupa novododatog ostatka amino kiseline, odcepljuje se pre kuplovanja sledeće amino kiseline. Kad se koristi Boe grupa, u obzir dolaze postupci sa trifluorosirćetnom kiselinom, čistom ili u dihlormetanu, ili sa HC1 u dioksanu ili u etilacetatu. Amonijumova so koja nastaje, zatim se neutrališe, ili pre kuplovanjain situ,sa baznim rastvorima kao što su vodeni rastvori pufera, ili tercijarni amini u dihlormetanu ili acetonitrilu ili đimetilformamidu. Kada se koristi grupa Fmoc, kao reagensi se odabiraju piperidin ili supstituisani piperidin u đimetilformamidu, ali može da se upotrebi i svaki sekundarni amin. Deprotektovanje se izvodi na temperaturi između 0 °C i sobne temperature (RT), obično na 20 - 22 °C.
Svaka od amino kiselina koja poseduje funkcionalnosti u bočnom nizu mora biti zaštićena za vreme pripremanja peptida korišćenjem goreopisanih grupa. Oni koji su stručnjaci u ovome znaju da izbor i upotreba odgovarajućih zaštitnih grupa za ove funkcionalnosti u bočnom nizu zavisi od amino kiseline i prisustva drugih zaštitnih grupa u peptidu. Izbor takvih zaštitnih grupa je značajan po tome što zaštitna grupa mora biti uklonjena za vreme deprotektovanja i kuplovanja a-amino grupe.
Na primer, kada se Boe koristi kao a-amino zaštitna grupa, sledeće
pogodne zaštitne grupe bočnog lanca jesu:/?-toluensulfonil (tozil) delovi mogu biti uzeti za zaštitu amino bočnog lanca amino kiselina kao Lys i Arg; acetamidometil, benzil (Bn), ili ^-butilsulfonil delovi mogu biti upotrebljeni za zaštitu bočnog lanca koji sadrži sulfid, cisteina; benzil (Bn) etri mogu biti upotrebljeni za zaštitu bočnih lanaca koji sadrše hidroksi grupe, serina, treonina ili hidroksiprolina; a benzil estri mogu biti upotrebljeni za zaštitu bočnih lanaca koji sadrše karboksi grupe, asparaginske kiseline i glutaminske kiseline.
Kada se Fmoc izabere za a-amin zaštitu, obično su prihvatljive zažtitne grupe na baziterc-butila. Na primer, Boe može da bude upotrebljen za lizin i arginin,terc-butil etar za serin, treonin i hidroksiprolin, aterc-butil estar za asparaginsku kiselinu i glutaminsku kiselinu. Trifenilmetil (Tritil) deo može da se upotrebi za zaštitu bočnog lanca koji sadrži sulfid, cisteina.
Kada je jednom produžavanje (elongacija) peptida završeno sve zaštitne grupe se uklanjaju. Kada se sinteza radi u tečnoj fazi, zaštitne grupe se uklanjaju na bilo koji način koji je određen izborom zaštitnih grupa. Ti postupci su stručnjacima dobro poznati.
Kada se sinteza izvodi sa čvrstom fazom, peptid se uklanja sa smole jednovremeno sa uklanjanjem zaštitnih grupa. Kada je u sintezi upotrebljen zaštitni Boe postupak, postupak koji ima prednost za odvajanje peptida sa smole je tretman sa anhidrovanom HF koja sadrži aditive kao što su dimetilsulfid, anizol, tioanizol, ilip-krezol, na 0 °C. Odvajanje peptida može da se izvede takođe pomoću drugih kiselih reagenasa kao što su smeše trifluorometansulfonske kiseline/-tri-fluorosirćetne kiseline. Ako se koristi Fmoc zaštitni postupak, N-terminalna grupa Fmoc-a se odvaja sa reagensima prethodno opisanim. Druge zaštitne grupe i peptidi se odvajaju sa smole upotrebom rastvora trifluorosirćetne kiseline i različitih aditiva, kao anizol itd.
1. Sinteza čeonih (završnih) grupa B
Različite čeone grupe B uvode se na sledeći način:
1. 1) Kada B jeste aril. aralkil: arilovane amino kiseline se pripremaju po jednom
od tri naredna<p>ostupka:
a) Direktno nukleofilno istiskivanje na fluoro-nitro aril delu: Ukratko, 4-fluoro-3-nitrobenzoiltrifluorid (a) reaguje sa L -amino kiselinom (b), u prisustvu baze kao što je kalijum-karbonat, na 80 °C dajući željenu Naril amino kiselinu (c); b) Kuplovanja katalizovana bakrom, prema Maet al. ( J. Am. Chem. Soc. 1998,120,12459-12467):
Ukratko, bromo-4-fluorobenzen (d) reaguje sa L-amino kiselinom (b) u prisustvu baze kao što je kalijum-karbonat i kataliucke količine bakar-jodida, na 900 C dajući željenuNar/7 aminokiselinu (e); ili
c) Nukleofilno istiskivanje triflata pomoću anilina:
Ukratko, o-anizidin (f) reaguje sa triflatom (g) u prisustvu baze kao što je 2,6-lutidin, na 90 °C dajući benzil estar (h). Hidrogenovanjem sa 10% Pd/C daje željenu Naril amino kiselinu (i).
1. 2) Kada B ieste derivat aminotiazola:
a) Fmoc-tiocijanat pripremljen prema Kearnev et al., 1998, J. Org. Chem,63,196, reaguje sa zaštićenim P3 ostatkom ili celim peptidom ili segmentom
peptida, dajući tioureu.
b) Derivat tiouree reaguje sa pogodnim bromoketonom dajući odgovarajući derivat tiazola.
1. 3) Kada B jeste RA- C( Q)-. R4- S( Q)2:
Zaštićeni P3 ili ceo peptid ili segment peptida kupluje se na pogodan acil hlorid ili sulfonil hlorid, respektivno, koji je komercijalno dostupan ili čija je sinteza dobro poznata na osnovu stanja tehnike.
1. 4) Kada B ieste R^- fO)- :
Zaštićeni P3 ili ceo peptid ili segment peptida kupluje se na pogodan hloroformijat koji je ili komercijalno dostupan ili čija je sinteza dobro poznata na osnovu stanja tehnike. Za Boc-derivate koristi se (Boc^O.
Na primer:
a) Ciklobutanol se tretira sa fozgenom dajući odgovarajući hloroformijat.
b) Hloroformijat se tretira sa željenim NH^tripeptidom u prisustvu baze kao
što je trietilamin da bi se dobio ciklobutilkarbamat.
1. 5) Kada B ieste RrNfR^- CCOV. iliR±- NH- C( S)- :
Zaštićeni P3 ili ceo peptid ili segment peptida tretira se fozgenom pa zatim aminom, kao što je opisano u SvnLett. Feb 1995; (2); 142 -144.
2. Sinteza P2 delova.
2. 1 Sinteza prekurzora:
A) Sinteza derivata halogenoarilmetana:
Pripremanje halogenometil-8-hinolina Ud izvedeno je prema postupku K.N. Campbell et al., J. Amer. Chem. Soc, (1946), 68,1844.
Ukratko, 8-hinolin karboksilna kiselina Ha prevedena je u odgovarajući alkohol IIc putem redukovanja odgovarajućeg acilhalogenidaIlbsa redukcionim sredstvom kao litijum-aluminijum-hidrid. Tretiranje alkohola Ilb sa pogodnom hidrohalogeno kiselinom daje željeni halogeni derivat Hd. Specifičan način izvođenja tog postupka prikazan je u primeru 1.
B) Sinteza derivata aril alkohola:
Derivati 2-fenil-4-hidroksihinolina IIIc pripremljeni su prema Giardina et al, 0. Med. Chem., (1997), 40,1794 -1807).
R22& R2ib= alkil, OH, SH, halogeno, NH2, N02.
Ukratko, benzoilacetamid (lila) kondenzovanje sa pogodnim anilinom (IHb) pa je dobijeni imin ciklizovan sa polifosfornom kiselinom dajući odgovarajući 2-fenil-4-hidroksihinolin (HIc). Specifičan način izvođenja tog postupka prikazan je u primeru 2.
Ili alternativno, postupak može da se izvede na drugi način:
Benzoiletil estar (Ma) kondenzovan je sa pogodnim anilinom (IHb) u prisustvu kiseline pa je dobijeni imin ciklizovan zagrevanjem na 260 - 280 °C dajući odgovarajući 2-fenil-4-hidroksihinolin (IIIc). Specifičan način izvođenja tog postupka prikazan je u primeru 3 (jedinjenje 3e).
2. 2 Sinteza P2:
A) Sinteza 4-supstituisanog prolina (gde je R<2>vezan za prsten preko atoma ugljenika) (sa stereohemijom kao što je pokazano): izvedena je kao što prikazuje shema IV na osnovu postupka opisanog od strane J. Ezquerra et al., (Tetrahedron, (1993), 38, 8665 - 8678) i C. Pedregal et al. (Tetrahedon Lett. (1994), 35,2053 - 2056).
Ukratko, Boc-piroglutaminska kiselina je zaštićena kao benzil estar. Tretman sa jakom bazom, kao litijum-diizopropilamid, pa posle toga adicija sredstva za alkilovanje (Br-R20 ili I-R<20>) daje željena jedinjenja IVe posle redukcije amida i deprotektovanja estra.
B) Sinteza O-supstituisanog-4- (2?>hidroksiprolina:
može da se izvede primenom različitih postupaka niže opisanih.
1) Kada R<20>jeste aril, aralkil, Het ili (niži alkil)-Het, postupak može da se
izvede prema postupku koju su opisali E.M. Smith et al. Q. Med. Chem.
(1988), 31,875 - 885). Ukratko, komercijalno dostupanBoc-4- ( R)-hidroksiprolin tretiran je sa bazom kao što je natrijum-hidrid ili kalijum-te/r-butoksid pa je dobijeni alkoksid reagovao sahalogeno-R<20>(Br-R<20>, I-R20, itd.) dajući željena jedinjenja. Specifični načini izvođenja tog postupka prikazani su u primerima 4, 5 i 7.
2) Alternativno, kada R<20>jeste aril ili Het, jedinjenja mogu takođe da se
pripreme putem Mitsunobu-ove reakcije (Mitsunobu (1981), Svnthesis, januar. 1 - 28; Ranoetal.,(1995), Tet Lett. 36( 22). 3779 - 3792; Krchnaketal,
(1995), Tet. Lett. 36( 5). 6193 - 6196; Richteretal,(1994),Tet. Lett. 35( 27).
4705 - 4706). Ukratko, komercijalno dostupan Boc-4- fS>hidroksiprolin metilestar tretiran je sa pogodnim aril alkoholom ili tiolom, u prisustvu trifenilfosfina i dietilazodikarboksilata (DEAD) pa je dobijeni estar hidrolizovan u kiselinu. Specifični načini izvođenja tog postupka prikazani su u primerima 6 i 8.
Alternativno, Mitsunobu reakcija može da se izvede na čvrstoj fazi (shema V). U ploču sa 96 udubljenja, sintesajzer Model 396 (Advanced ChemTech), uneti su alikvoti jedinjenja (Va) vezanog za smolu, pa su dodati različiti aril alkoholi ili tioli i odgovarajući reagensi. Posle inkubacije, svaki proizvod (Vb) vezan za smolu je opran, osušen i odvojen od smole.
Suzuki reakcija (Mivauraetal.,(1981), Synth. Comm. 11, 513; Satoetal.,
(1989), Chem. Lett., 1405; Watanabeetal.,(1992), Svnlett, 207; Takayukiet
al,(1993), J. Org. Chem. 58, 2201; Frenetteetal.,(1994), Tet. Lett. 35( 49). 9177 - 9180; Guilesetal.,(1996), J. Org. Chem. 61, 5169 -5171) može takođe da se primeni za dalje funkcionalizovanje aril supstituenta.
3. Sinteza Pl delova.
3. 1 Sinteza 4 mo<g>uća izomera 2- supstituisane 1- aminociklopropil- karboksilne
kiseline
Sinteza je izvedena prema shemi VI.
a) Ukratko, di-protektovan malonat Via i 1,2-dihalogenoalkan VIb ili ciklični sulfat Vic (sintetizovano prema K. Burgess i Chun-Yen KE (Svnthesis, (1996), 1463 -
1467), reagovali su pod baznim uslovima dajući diestar Vid.
b) Regioselektivnom hidrolizom manje zaklonjenog estra dobijena je kiselina Vle. c) Ta kiselina Vic je podvrgnuta pregrupisavanju po Curtius-u dajući racemsku
smešu derivata 1-aminociklopropil-karboksilne kiseline Vlf sa R<1>usynpoložaju u
odnosu na karboksilnu grupu. Specifičan način izvođenja te sinteze prikazan je u primeru 9.
d, e) Alternativno, selektivno stvaranje estra od kiselline Vle, sa pogodnim halogenidom (P<*>C1) ili alkoholom (P<*>OH), daje diestar VIg u kome je P<*>estar kompatibilan sa selektivnom hidrolizom P estra. Hidroliza P estra daje kiselinu VIh.
f) Pregrupisavanje VIh, po Curtius-u, daje racemsku smešu derivata 1-aminociklopropil-karboksilne kiseline Vli sa R<1>grupom uautipoložajuu odnosu na
karboksilnu grupu. Specifičan način izvođenja te sinteze prikazanje u primeru 14.
Alternativna sinteza za pripremanje derivata Vllf (kada R<1>jeste vinil, a nalazi se usynpoložaju prema karboksil grupi) opisana je u narednom tekstu.
Tretman komercijalno dostupnih, ili koji se lako mogu pripremiti, imina Vila sa 1,4-dihalogenobutenom Vllb u prisustvu baze, posle hidrolize dobijenog imina VIIc, daje Vlld sa alil supstituentom usynpoložaju u odnosu na karboksilnu grupu. Specifični načini izvođenja tog postupka prikazani su u primeru 15 i 19.
Razdvajanje svih gornjih enantiomernih smeša ugljenika 1 (Vle i Vlld) može da se izvede putem: 1) enzimskog razdvajanja (primeri 13,17 i 20);
2) kristalizacije sa hiralnom kiselinom (primer 18); ili
3) pripremanja hemijskog derivata (primer 10).
Posle razdvajanja, određivanje apsolutne stereohemijske strukture može da se izvede kao što je prikazano u primeru 11.
Razdvajanje enantiomera i određivanje stereohemijske strukture može da se izvede na isti način sa enantiomernim smešama ugljenika 1 kada je supstituent na C2 uanti položajuu odnosu na karboksilnu grupu (Vli).
3. 2 Sinteza 1- aminociklobuitl- karboksilne kiseline
Sinteza 1,1-aminociklobutan-karboksilne kiseline je izvedena prema Kavin Douglas; Ramaligam Kondareddier; Woodard Ronald, Synth. Commun. (1985), 15 (4), 267-72.
Ukratko, tretman jedinjenjaVIHasa bazom u prisustvuVHIbdaje odgovarajući derivat ciklobutila VIIIc. Hidroliza izocijanatnih i estarskih grupa u VIIIc pod kiselim uslovima (HC1) daje hidrohloridnu so 1-amino-ciklobutil-karboksilne kiseline VHId. Karboksilna kiselina se zatim esterifikuje sa metanolom u HC1. Specifičan način esterifikovanja opisan je u primeru 21.
3. 3. Sinteza 2- supstituisane 1- aminociklobuitl- karboksilne kiseline
a) Derivat zaštićenog glicin estra kao što je imin Ka alkilovan je sa homoaliličnim elektrofilnim reagensom Kb uz korišćenje pogodne baze kao što je hidrid,
hidroksid ili alkoksid metala. Korisne grupe koje se odvajaju u Kb obuhvataju halogene (X = Cl, Br, I) ili sulfonat estre (mezilat, tozilat ili triflat). Funkcionalnost alilnog alkohola u Kb zaštićena je zažtitnim grupama za hidroksil, dobro poznatim na osnovu stanja tehnike (npr. acetat, silil, acetali).
b) U drugom stupnju, hidroksilna funkcija monoalkilovanog derivata Kc je deprotektovana i prevedena u pogodnu elektrofilnu funkciju X, kao što je opisano
gore za jedinjenje Kb.
c) Ciklizovanje Kd u ciklobutanski derivat IXe izvedeno je tretmano sa bazom (hidridi, alkoksidi metala), pa zatim hidrolizom uz korišćenje neorganskih kiselina ili neutralizacijom sa blagom bazom. U tom stupnju,synianti-izomeri jedinjenja EXe mogu se razdvojiti fleš hromatografijom.
d) Eventualno, dupla veza u Ke može takođe biti hidrogenovana pod standardnim uslovima dajući odgovarajući zasićeni derivat KL
Dalje, pronalazak obuhvata postupak za pripremanje peptidnih analoga formule (I) gde Pl jeste ostatak supstituisane aminociklopropil-karboksilne kiseline, koji obuhvata stupanj: • kuplovanja peptida odabranog iz grupe koju čine: APG-P3-P2; ili APG-P2;
• sa Pl intermedijerom formule:
u kojoj R( jeste Cw alkil, cikloalkil ili C2.6alkenil, svi eventualno supstituisan! sa halogenom, CPG je zaštitna grupa karboksila, APG je zaštitna grupa amino grupe a P3 i P2 su definisani kao gore.
Dalje, pronalazak obuhvata postupak za pripremanje: 1) peptidnog analoga, inhibitora serinske proteaze, ili 2) peptidnog analoga, inhibitora NS3 proteaze HCV-a a taj postupak obuhvata stupanj:
• kuplovanja (pogodno zaštićene) amino kiseline, peptida ili peptidnog fragmenta sa Pl intermedijerom, formule:
gde Rj jeste C^ alkil, C3.7cikloalkil ili C2.6alkenil, svi eventualno supstituisani sa halogenom, a CPG je zaštitna grupa karboksila.
Pronalazak dakle obuhvata postupak za pripremanje: 1) peptidnog analoga inhibitora proteaze, ili 2) peptidnog analoga, inhibitora serinske proteaze a postupak obuhvata stupanj:
• kuplovanja (pogodno zaštićene) amino kiseline, peptida ili peptidnog fargmenta sa intermedijerom formule:
u kojoj CPG jeste zaštitna grupa karboksila.
Pronalazak takođe obuhvata upotrebu Pl intermedijera, formule:
u kojoj Rjjeste Ci.g alkil, cikloalkil iliC2. qalkenil, svi eventualno supstituisani sa halogenom, za pripremanje: 1) peptidnog analoga, inhibitora serinske proteaze, ili 2) peptidnog analoga inhibitora NS3 proteaze NCV-a.
Pronalazak takođe obuhvata upotrebu intermedijera formule:
u kojoj CPG jeste zaštitna grupa karboksila, za pripremanje: 1) peptidnog analoga inhibitora proteaze, ili 2) peptidnog analoga inhibitora serinske proteaze.
Pronalazak takođe obuhvata upotrebu Pl intermedijera formule:
u kojoj Rtjeste Cw alkil, cikloalkil ili C2-6alkenil, svi eventualno supstituisani sa
halogenom, za pripremanje jedinjenja formule I kao što je gore definisano.
Na kraju, pronalazak obuhvata upotrebu prolinskog analoga, formule:
u kojoje R2ia jeste Ci_6alkil; Ct.g alkoksi; niži tioalkil; halogeno; amino grupa eventualno mono-supstituisana sa C^g alkilom; Cg, Cjoaril, C7.16aralkil ili Het, pomenuti aril, aralkil ili Het eventualno su supstituisani sa R22, gde R22jeste C[. G alkil, Ci_g alkoksi, amido, (niži alkil)amid, amino grupa eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci_6alkilom, ili Het, a
R21Bjeste Ci.6alkil, C^ alkoksi, amino, di (niži alkil) amino, (niži alkil)amid, N02, OH, halogeno, trifluorometil ili karboksil grupa;
za sintezu 1) peptidnog analoga inhibitora serinske proteaze, 2) peptidnog analoga inhibitora NS3 proteaze NCV-a, ili 3) peptidnog analoga formule I, kao što je gore definisano.
PRIMERI
Ovaj pronalazak je ilustrovan podrobnije sledećim primerima kojima se pronalazak ne ograničava.
Temperature su date u stepenima po Celzijusu. Procentni rastvori daju odnos mase prema zapremini, a odnosi rastvora izražavaju odnos zapremine prema zapremini, ukoliko nije drukčije dato. Spektri nuklearne magnetne rezonance (NMR) snimani su na spektrometru Bruker 400 MHz; hemijska pomeranja (5) data su u delovima na 1 milion. Fleš hromatografija je rađena na silikagelu (Si02) prema postupku Still fleš hromatografske tehnike (W.C. Still at al., J. Org. Chem., (1978), 43 2923).
Skraćenice upotrebljene u primerima obuhvataju: Bn: benzil; Boe:terc -butiloksi-karbonil (Me3COC(0)}; BSA: goveđi serumski albumin; CHAPS: 3-[(3-holamido-propil)-dimetilamonio]-l-propansulfonat; DBU: l,8-diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en; CH2C12= DCM: metilenhlorid; DEAD: dietilazodikarboksilat; DIAD: diizopropil-azodikarboksilat; DIEA: diizopropiletilamin; DIPEA: dizipropiletilamin; DMAP: dimetilaminopiridin; DCC: 1,3-dicikloheksilkarbodiimid; DME: 1,2-dimetiloksietan; DMF: dimetilformamid; DMSO: dimetilsulfoksid; DTT: ditiotreitol ili treo-1,4--dimerkapto-2,3-butandiol; DPPA: difenilfosforil azid; EDTA: etilendiamin-tetrasirćetna kiselina; Et: etil; EtOH: etanol; EtOAc: etilacetat; Et20: dietiletar; HATU: [0-7-azabenzotriazol-l-il)-l,l,3,3-tetrametiluronijum heksafluorofosfat]; HPLC: tečna hromatografija pod visokim pritiskom; MS: masena spektrometrija (MALDI-TOF: Matrk Assisted Laser Disorption Ionization-Time od Flight, FAB: bombardovanje brzim atomima); LAH: litijum-aluminjum-hidrid; Me: metil; MeOH: metanol; MES: (2-{N-morfolino}etan-sulfonska kiselina); NaHMDS: natrijum bis(trimetilsilil)-amid; NMM: N-metilmorfolin; NMP: N-metilpirolidin; Pr: propil: Suce: 3-karboksipropanoil; PNA: 4-nitrofenilamino ili p-nitroanilid; TBAF: tetra-n--butilamonijum-fluorid; TBTU: 2(lH-benzotriazol-l-il)-l,l,3,3-tetrametiluronijum tetrafluoroborat; TCEP: tris(2-karboksietil)fosfin hidrohlorid; TFA: trifluoro-sirćetna kiselina; THF: tetrahidrofuran; TIS: triizopropilsilan; TLC: tankoslojna hromatografija; TMSE: trimetilsililetil; Tris/HCl: tris(hidroksimetil)aminometan hidrohlorid.
P2 BLOKOVI ZA IZGRADNJU
PRIMER 1
Sinteza bromometil-8-hinolina (1):
U komercijalno dostupnu 8-hinolin-karboksilnu kiselinu (2,5 g, 14,4 mmol) dodat je čist tionilhlorid (10 ml, 144 mmol). Ova smeša je zagrevana 1 h na 80 °C, pre nego što je pod smanjenim pritiskom oddestilisan višak tionilhlorid a. U dobijenu braonkastu čvrstu supstancu dodat je apsolutni EtOH (15 ml) pa je pre koncentrovanjain vacuo1 h zagrevano na 80 °C. Ostatak je razdeljen između EtOAc i zasićenog vodenog rastvora NaHC03, pa je organska faza osušena (MgS04), profiltriranai uparena dajući braonkasto ulje (2,8 g).Taj meterijal (ca.
14,4 mmol) je 35 min dokapavan u suspenziju LAII (0,76 g, 20,2 mmol)/Et20, ohlađenu na -60 °C. Reakciona smeša je polako, tokom 1,5 h, zagrevana na -35 °C sve dok reakcija nije bila završena. Reakcija je polako, tokom 30 min, prekidana sa MgSO4.10H2O a zatim sa vlažnim THF. Smeša je razdeljena između Et20 i 10% vodenog rastvora NaHC03. Organska faza je osušena (MgS04), profiltrirana i koncentrovana dajući žućkastu čvrstu supstancu (2,31 g, 80% u 2 stupnja), odgo-varajućeg alkohola. Alkohol (2,3 g, 11,41 mmol) je rastvoren u AcOH/HBr (20 ml, 30% Aldrich-ov rastvor) pa je zagrevano 2,5 h na 70 °C. Smeša je do suva koncentrovanain vacuo,razdeljena između EtOAc (100 ml) i zasićenog vodenog rastvora NaHC03, pre sušenja (MgS04) je proceđena i profiltrirana dajući željeno jedinjenje (1) kao braonkastu čvrstu supstancu (2,54 g, 100%).
PRIMER 2
Sinteza 2-fenil-4-hidroksihinolina (2):
Komercijalno dostupan etil benzoilacetat (6,00 g, 31,2 mmol) zagrevan je 2 h, na 85 °C (zatopljena epruveta) u 75 ml 30% NH4OH. Čvrsta supstanca, nastala posle hlađenja, proceđena je pa je 2 sata refluksovana u vodi. Rastvor je triput ekstrahovan sa CH2Cl2. Organski slojevi su sjedinjeni, osušeno je preko MgS04, profiltrirano i upareno. Žuti ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silikagelu, eluiranjem sa EtOAc : heksan (3:7), pa je dobijen odgovarajući amid kao čvrsta bela supstanca, 1,60 g, prinos 31%.
Ovaj amid (250 mg, 1,53 mmol) je 16 h refluksovan u aparaturi po Dean-Stark-u, sa anilinom (143 mg, 1,53 mmol) i anilin-HCl (10 mg, 0,08 mmol) u toluenu (10 ml). Rastvor je uparen dajući braon ulje koje je pomešano sa polifosfornom kiselinom (2 g) pa je 20 min zagrevano na 135 °C. Reakciona smeša je izlivena u vodu i sa 5M NaOH podešeno je pH 8. Vodena suspenzija je dvaput ekstrahovana sa eulace-tatom. Organski slojevi su sjedinjeni, oprano je sa rastvorom soli, osušeno preko MgS04, profiltrirano i upareno. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silikagelu, eluiranjem sa 3% MeOH u etilacetatu, pa je dobijen
2-fenil-4-hidroksihinolin (2), 67 mg, prinos 20%.
<l>H NMR (DMSO-dg) 5 8,11 (d, J = 7 Hz, 1 H), 7,86 - 7,83 (m, 2 H), 7,77 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7,68 (dd, J - 8,7 Hz, IH), 7,61 - 7,58 (m, 3 H), 7,35 (dd, J = 8, 7 Hz, 1 H), 6,34 (s, IH).
PRIMER 3
Sinteza 4-hidroksi-2-fenil-7-metoksihinolina (3)
4-hidroksi-2-fenil-7-metoksihinolin (e):
Rastvor etilbenzoilacetata (b) (100,0 g, 0,52 mol), m-anizidina (a) (128,1 g, 1,04 mol) i 4M HCl/dioksan (5,2 ml) u toluenu (1,0 lit.) refluksovano je 6,25 h u aparaturi po Dean-Stark-u. Ohlađen toluenski rastvor je, jedno za drugim, pran sa 10% vodenim rastvorom HC1 (2 x 300 ml), IM NaOH (2 x 300 ml), H20 (300 ml) i rastvorom soli (150 ml). Toluenska faza je osušena (MgSO^, profiltrirana pa koncentrovana pod smanjenim pritiskom, dajući 1,2 :1,0 smešu estra c i amida d (144,6 g, sirov prinos 45%/38%) kao tamno braon ulja. Sirovo ulje je zagrevano 80 min na 280 °C dok je destilisao stvoreni EtOH. Dobijena tamna čvrsta supstanca je rastrljana sa CH2CI2(200 ml). Suspenzija je profiltrirana a dobijena čvrsta supstanca je oprana sa CH2C12dajući e (22,6 g, 17% od a) kao čvrstu supstancu bež boje:<!>H NMR (DMSO-d6) 5 8,00 (d, J = 9,0 Hz, IH), 7,81 - 7,82 (m, 2H), 7,57 - 7,59 (m, 3H), 7,20 (d, J = 2,2 Hz, IH), 6,94 (dd, J = 9,0,2,2 Hz, IH), 6,26 (s, IH), 3,87 (s, 3H).
4-hloro-2-fenil-7-metoksihinolin (3):
Suspenzija supstance e (8,31 g, 33,1 mmol) u POCl3(90 ml) zagrevana je 2 h uz refluks
(posle zagrevanja dobijen je bistar rastvor). Reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Ostatak je razdeljen između IM NaOH (egzotermno, 10 M NaOH dodavan radi održavanja velikog pH) i EtAOc (500 ml). Organski sloj je opran sa H20 (100 ml) i rastvorom soli (100 ml) pa je osušen (MgS04), profiltriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom dajući supstancu 3 (8,60 g, 96%), kao bledožutu čvrstu supstancu:<*>H NMR (DMSO-d6) 5 8,28 - 8,30 (m, 2H), 8,20 (s, IH), 8,10 (d, J = 9,1 Hz, IH), 7,54 - 7,58 (m, 3H), 7,52 (d, J = 2,5 Hz, IH), 7,38 (dd, J = 9,1,2,5 Hz, IH), 3,98 (s, 3H). Reakcija je ponovljena triput i uvek je dobijan prinos 96 - 98%, što je znatno više od prinosa od 68% koji je dat u J. Med. Chem. 1997, 40,1794.
PRIMER 4
Sinteza Boc-4- (#>(naftalen-l-ilmetoksi) prolina (4):
Komercijalno dostupan Boc-4 (7?>hidroksiprolin (5,00 g, 21,6 mmol) rastvoren je u THF (100 ml) i ohlađen na 0 °C. Natrijum-hidrid (60% disperzija u ulju, 1,85 g, 45,4 mmol) dodavan je u porcijama tokom 10 minuta pa je suspenzija mešana 1 h na sobnoj temperaturi. Zatim je dodat l-(bromomeitl)naftalen (8,00 g, 36,2 mmol)
(pripremljen kao što su opisali EA Dixon et al, Can. J. Chem., (1981), 59, 2629 - 2641) pa je smeša grejana 18 h uz refluks. Smeša je izlivena u vodu (300 ml) i oprana heksanom. Vodeni sloj je zakiseljen sa 10% vodenim rastvorom HC1 pa je dvaput ekstrahovan etilacetatom. Organski slojevi su sjedinjeni, oprano je sa rastvorom soli, osušeno (MgS04), profiltrirano i koncentrovano. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (49 : 49 : 2, heksan : etilacetat: sirćetna kiselina), dajući jedinjenje navedeno u naslovu kao bezbojno ulje (4,51 g, prinos 56%). 'H NMR (DMSO-d6) ukazuje na prisustvo dva rotamera: 5 8,05 (m, IH), 7,94 (m, IH), 7,29 (d, J = 14 Hz, IH), 7,55 - 7,45 (m, 4H), 4,96 (m, 2H), 4,26 (br. s, IH), 4,12 (dd, J = 8 Hz, IH), 3,54 - 3,42 (m, 2H), 2,45 - 2,34 (m, IH), 2,07 - 1,98 (m, IH), 1,36 (s, (3/9) 9H),l,34(s, (6/9) 9H).
PRIMER 5
Sinteza Boc-4-(2?>(8-hinolin-metoksi) prolina (5):
U suspenziju NaH (1,4 g, 60% u ulju, 34 mmol) u THF (100 ml), dodat jeBoc-4 ( R)--hidroksiprolin (1,96 g, 8,5 mmol) u anhidrovanom THF (20 ml). Smeša je mešana 30 min pre nego što je dodat bromometil-8-hinolin, iz primera 1 (2,54 g, 11,44 mmol), u THF (30 ml). Reakciona smeša je grejana na 70 °C (5 h) pe nego što je višak NaH pažljivo razložen sa vlažnim THF. Reakciona smeša je koncentrovanain vacuoa dobijeni materijal je rastvoren u EtOAc i H2O. Bazna vodena faza je odvojena i zakiseljena sa 10% vodenim rastvorom HC1 do pH~5, pre ekstrahovanja sa EtAOc (150 ml). Organska faza je osušena (MgSO^, profiltrirana i koncentrovana dajući braon ulje. Prečišćavanjem pomoću fleš hromatografije (eluent: 10% MeOH/CHCI3) dobijeno je željeno jedinjenje (5) kao bledožuta čvrsta supstanca (2,73 g, 86%). HPLC (97,5%);<*>H-NMR (DMSO-d6) pokazuje dve rotamerske grupacije u odnosu 6 : 4,5 12 -11,4 (bs, IH), 8,92 (2 x d, J = 4,14 i 4,14 Hz, IH), 8,38 (2 x d, J = 8,27 i 8,27 Hz, IH), 7,91 (d, J = 7,94 Hz, IH), 7,77 (d, J = 7,0 Hz, IH), 7,63 - 7,54 (m, 2H), 5,14 (2 x s, 2H), 4,32 - 4,29 (m, IH), 4,14 - 4,07 (m, IH), 3,52 - 3,44 (m, 2H), 2,43 - 2,27 (m, IH), 2,13 - 2,04 (m, IH), 1,36 i 1,34 (2 x s, 9H).
PRIMER 6
Pripremanje Boc-4- (3?>(7-hlorohinolin-4-okso) prolina (6):
Komercijalno dostupan metilestar Boc-4 (S>hidroksiprolina (500 mg, 2,04 mmol) i 7-hloro-4-hidroksihinolin (440 mg, 2,45 mmol) uneti su u suviTHF (10 ml), na0 °C. Dodat je trifenilfosfin (641 mg, 2,95 mmol) a zatim polako DIAD (462 mg, 2,45 mmol). Smeša je mešana 20 h na sobnoj temperaturi. Zatim je reakciona smeša koncentrovana, prebačena u etilacetat pa je triput ekstrahovana sa IM HC1. Vodena faza je zaalkalisana sa Na2CC>3 pa je dvaput ekstrahovana etilacetatom. Organski slojevi su sjedinjeni, osušeni preko MgS04, profiltrirano je, pa koncentrovano i dobijeno je žuto ulje. Ulje je prečišćeno fleš hromatografijom i dobijen je metilestar, kao čvrsta bela supstanca, 498 mg, prinos 58%.
Metilestar (400 mg, 0,986 mmol) je hidrolizovan sa IM vodenim rastvorom natrijum-hidroksida (1,7 ml, 1,7 mmol) u metanolu (4 ml), 3 h na 0 °C. Rastvor je koncentrovan radi uklanjanja metanola pa je neutralisan sa IM vodenim rastvorom HC1. Suspenzija je uparena do suva i prebačena u metanol (20 ml), soli su odfiltrirane a filtrat je uparen dajući željeno jedinjenje (6), kao čvrstu belu supstancu, 387 mg, prinos kvantitativan.
<l>H NMR (DMSO-d6) (smeša rotamera ca. 1:1) 8 8,74 (d, J = 5 Hz, IH), 8,13 - 8,09 (m, IH), 7,99 i 7,98 (s, IH), 7,58 (d, J = 9 Hz, IH), 7,02 (d, J = 5 Hz, IH), 5,26 - 5,20 (m, IH), 4,10 - 4,01 (m, IH), 3,81 - 3,72 (m, IH), 3,59 (dd, J = 12,10 Hz, IH), 2,41 - 2,31 (m, 2H), 1,34 i 1,31 (s, 9H).
PRIMER 7
Sinteza Boc-4 (#>(2-fenil-7-metoksihinolin-4-okso) prolina (7):
Boc-4( R)-(2-fenil-7-metoksihinolin-4-okso) prolin (7):
Tokom 15 min, u malim porcijama je dodavan kalijum-terc-butoksid (8,16 g, 72,7 mmol) u rastvor Boc-4tf?>hidroksiprolina (6,73 g, 29,1 mmol) u DMSO (83 ml), održavan na 25 °C. Na 25 °C smeša je mešana 1,5 h. Hloro-2-fenil-7--metoksihinolin 3 (8,61 g, 32,0 mmol) dodavan je, u reakđonu smešu, u 4 porcije tokom 15 min. Reakciona smeša je mešana 19 h na 25 °C. Dobijena suspenzija je izlivena u H20 (650 ml) pa je smeša oprana sa Et20 (3 x 150 ml) radi uklanjanja viška hlorohinolina (kasnije je utvrđeno da je EtOAc mnogo efikasniji). Vodeni sloj je zakiseljen sa IM HC1 (38 ml od izračunato potrebnog 1,5 ekvivalenta, 43,6 ml) do pH 4 - 5. Čvrsta bela supstanca koja se taloži sakupljena je filtriranjem. Vlažna čvrsta supstanca osušena je pod smanjenim pritiskom preko P205pa je dobijen derivat prolina 7 (12,6 g, 91%, sadrži 2,3% (mas./mas.) DMSO) kao čvrste bež supstance:<[>H NMR (DMSO-d6) 5 (smeša rotamera 2 : 1) 8,27 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 8,00, 7,98 (2d, J = 9,2, -9,2 Hz, IH), 7,48 - 7,56 (m, 3H), 7,45, 7,43 (2s, IH), 7,39 (d, J = 2,5 Hz, IH), 7,17 (dd, J = 9,2, 2,5 Hz, IH), 5,53 - 5,59 (m, IH), 4,34 - 4,41 (m, IH), 3,93 (s, 3H), 3,76 (širok s, 2H), 2,63 - 2,73 (m, IH), 2,32 - 2,43 (m, IH), 1,36,1,33 (2s, 9H).
PRIMER 8
Sinteza Boc-4- (7?>(2-fenil-6-nitrohinolin-4-okso) prolina (8):
U rastvor trifenilfosfina (1,28 g, 4,88 mmol) u 15 ml tetrahidrofurana, na 0 °C, uz mešanje je dokapan dietil azodikarboksilat (0,77 ml, 4,89 mmol). Posle 30 min meš-anja pod azotom, dodat je rastvor metilestra Boc-4 (S>mđroksiprolina (1,00 g, 4,08 mmol) u 5 ml tetrahdrofurana, a zatim suspenzija komercijalno dostupnog 6-nitro-2-fenil-4-hinolinola (1,30 g, 4,88 mmol), u 10 ml istog rastvarača. Crvena smeša je mešana 15 min na 0 °C, a tokom noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je otparenin vacuo.Zaostalo ulje je razblaženo etilacetatom i dvaput oprano sa natrijum-bikar-bonatom, jedanput sa vodom i jedanput sa rastvorom soli. Organski sloj je osušen (MgS04), profiltriran i uparenin vacuo.Ostatak je hromatografisan preko silikagela (70 : 30 v/v, heksan-etilacetat) dajući željeni metilestar kao svetložutu čvrstu supstancu (1,70 g, 85%).
<*>H NMR (CDCI3) rotameri= 3:7 b9,03 (d, J = 2,5 Hz, IH), 8,46 (dd, J = 9, 2,5 Hz, IH), 8,18 (d, J = 9 Hz, IH), 8,14 - 8, 07 (m, 2H), 7,59 - 7,50 (m, 3H), 7,19 (s, IH), 5,39 - 5,30 (m, IH), 4,67 (t, J = 8 Hz, 0,3H), 4,61 (t, J = 8 Hz, 0,7H), 4,07 - 4,01 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 2,89 - 2,73 (m, IH), 2,55 - 2,47 (m, IH), 1,49 (s, 2,7H), 1,45 (s, 6,3H).
U rastvor metilestra (503 mg, 1,02 mmol) u smeši THF : H20 (10 : 4 ml) dodat je litijum-hidroksid-monohidrat (85 mg, 2,05 mmol). Da bi se dobio homogeni rastvor dodato je 2 ml MeOH. Kroz 30 min izdvojio je se beli talog. Dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi još 6 h. Reakciona smeša je razblažena 10% vodenim rastvorom limunske kiseline pa je ekstrahovana sa etilacetatom. Organski sloj je osušen (MgS04), profiltriran i uparenin vacuodajući 416 mg (85%) željene kiseline (8).
<l>ENMR (DMSO-dg): 5 8,92 - 8,87 (m, IH), 8,47 (dd, J = 9,3 Hz, IH), 8,38 - 8,32 (m, 2H), 8,19 (d, J = 9 Hz, IH), 7,77 (s, IH), 7,62- 7,55 (m, 3H), 5,73 - 5,66 (m, IH), 4,41 (t, J = 8 Hz, IH), 3,89 - 3,76 (m, 2H), 2,83 - 2,72 (m, IH), 2,47 - 2,35 (m, IH), 1,38 (s, 9H).
Pl GRADIVNI BLOKOVI
PRIMER 9
A) Sinteza smeše( 1R, 2R)/( 1S, 2R)1 -amino-2-etilciklopropil-karboksilne kiseline
a) U suspenziju benziltrietilaminijum-hlorida (21,0 g, 92,19 mmol) u 50% vodenom rastvoru NaOH (92,4 g u 185 ml H20), jedno za drugim, dodati sudi-te/r-butil-
malonat (20,0 g, 92,47 mmol) i 1,2-dibrombutan (30,0 g, 138,93 mmol). Reakciona smeša je snažno mešana rokom noći na sobnoj temperaturi, pa je dodata smeša leda i vode. Sirovi proizvod je ekstrahovan sa CH2C12(3x), pa jedno za drugim, opran je vodom (3x) i rastvorom soli. Organski sloj je osušen (MgS04), profiltriran pa koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (7 cm, 2 do 4% Et20 u heksanu), dajući željeni derivat ciklopropana 9c (19,1 g, 70,7 mmol, prinos 76%).<!>H NMR (CDCI3) 5 1,78 - 1,70 (m, IH), 1,47 (s, 9H), 1,46 (s, 9H), 1,44 - 1,39 (m, IH), 1,26 -1,64 (m, 3H), 1,02 (t, 3H, J = 7,6 Hz).
b) U suspenzijukalijum-ćerc-butoksida (6,71 g, 59,79 mmol, 4,4 ekv.) u suvom etru (100 ml), na 0 °C dodata je H20 (270 pl, 15,00 mmol, 1,1 ekv.). Posle 5 min, u
suspenziju je dodat diestar 9c (3,675 g, 13,59 mmol) u etru (10 ml). Reakciona smeša je tokom noći mešana na sobnoj temperaturi, zatim je izlivena u smešu leda i vode pa je oprana etrom (3x). Vodeni sloj je zakiseljen sa 10% aq. rastvorom limunske kiseline, na 0 °C pa je ekstrahovan sa AcOEt (3x). Sjedinjeni organski slojevi su, jedno za drugim, oprani vodom (2x) i vodenim rastvorom soli. Posle uobičajenog tretmana (Na2S04, filtriranje, koncentrovanje), željena kiselina 9d je izolovana kao bledožuto ulje (1,86 g, 8,68 mmol, prinos 64%).<*>H NMR (CDCI3) 6 2,09 - 2,01 (m, IH), 1,98 (dd, J = 3,8, 9,2 Hz, IH), 1,81 - 1,70 (m, IH), 1,66 (dd, J = 3,0, J = 8,2 Hz, IH), 1,63 -1,56 (m, IH), 1,51 (s, 9H), 1,0 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
c) U kiselinu 9d (2,017 g, 9,414 mmol) u suvom benzenu (32 ml), jedno za drugim, su dodati Et3N (1,50 ml, 10,76 mmol, 1,14 ekv.) i DPPA (2,20 ml, 10,21 mmol, 1,08
ekv.). Reakciona smeša je refluksovana 3,5 h pa je dodat 2-trimetilsililetanol (2,70 ml, 18,84 mmol, 2,0 ekv.). Refluks je održavan tokom noći, zatim je reakciona smeša razblažena sa Et20 pa je jedno za drugim, prana sa 10% vod. rastvorom limunske kiseline, vodom, zasićenim vodenim rastvorom NaHC03, vodom (2x) i vodenim rastvorom soli. Posle uobičajenog tretmana (MgS04, filtriranje, koncentrovanje) ostatak je
prečišćen fleš hromatografijom (5 cm, 10% AcOEt- heksan) dajući željeni karbamat 9e (2,60 g, 7,88 mmol, prinos 84%) kao bledožuto ulje. MS (FAB) 330 (MH<+>);
'H NMR (CDCI3) 5 5,1 (bs, IH), 4,18 - 4,13 (m, 2H), 1,68 - 1,38 (m, 4H) 1,45 (s, 9H), 1,24-1,18 (m, IH), 1,00 - 0,96 (m, 5H), 0,03 (s, 9H).
d) U karbamat 9e (258 mg, 0,783 mmol) dodat je 1.0M rastvor TBAF u THF (940 ul, 0,94 mmol, 1,2 ekv.). Posle 4,5 h dodata je dodatna količina 1,0M rastvora
TBAF (626 pl, 0,63 mmol, 0,8 ekv.). Reakciona smeša je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi, refluksovano je 30 min, pa je razblaženo sa AcOEt. Rastvor je, jedno za drugim, opran vodom (2x) i rastvorom soli. Posle uobičajenog tretmana (MgS04, filtriranje i koncentrovanje) izolovan je željeni amin 9f (84 mg, 0,453 mmol, prinos 58%), kao bledožuta točnost<*>H NMR (CDCI3) 5 1,96 (bs, 2H), 1,60 - 1,40 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,31 - 1,20 (m, IH), 1,14 (dd, J = 4,1, 7,3 Hz, IH), 1,02 (dd, J = 4,1, 9,2 Hz, IH), 0,94 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
PRIMER 10
Hemijsko razdvajanjeć-butil- ( 1R, 2R)/( 1S, 2R)l-amino-2-etilciklopropil-kar-boksilata (iz primera 9):
Jedinjenje 9e, iz primera 9 (8,50 g, 25,86 mmol) tretirano je sa IM TBAF/THF (26 ml), uz refluks 45 min. Ohlađena reakciona smeša je razblažena sa EtOAc, oprana sa vodom (3x) i rastvorom soli (lx), zatim osušena (MgS04), profiltrirana i uparena dajući slobodni amin, kao svetložuto ulje. Slobodni amin je rastvoren u anhidrovanom CH2C12(120 ml), pa su, jedno za drugim, dodati NMM (8,5 ml, 77,57 mmol), jedinjenje 4 (primer 4) (10,08 g, 27,15 mmol) i HATU (11,79 g, 31,03 mmol). Reakciona smeša je tokom noći mešana na sobnoj temperaturi, pa je dalja obrada izvedena kao što je prethodno opisano. Sirova dijastereomerna smeša je razdvojena pomoću fleš
hromatografije (eluent- heksan : Et20; 25 : 75), dajući dipeptid 10a (manje polaran eluirani deo) kao belu penu (4,42 g; 64 teor.%) i 10b (polarniji eluirani deo) kao penu boje slonovače (4,5 g, 57 teor.%). U tom trenutku su oba izomera bila razdvojena ali apsolutna stereohemijska struktura još nije bila poznata.
PRIMER 11
Određivanje apsolutne stereohemijske strukture jedinjenja 10a i 10b, putem korelacije sa poznatim t-butil (lR-amino-2R-etilciklopropil-karboksilatom
Prof. A. Charette, sa Univerziteta u Montrealu, dobio je jedinjenje 11a sa apsolutnom stereohemijskom strukturom kao što je prikazano, koja je određena pomoću rendgenske kristalografije( J.Am. Chem. Soc, 1995, 117, 12721). Jedinjenje 11a (13,2 mg, 0,046 mmol) rastvoreno je u IM HCl/EtOAc (240 pl) pa je mešano približno 48 sati. Smeša je uparena do suva dajući jedinjenje 11b, kao svetložutu pastu, pa je ono kuplovano sa jedinjenjem 4 (18 mg, 0,049 mmol) kao što je opisano u primeru 10, upotrebom NMM (20,3 ul, 0,185 mmol) i HATU (21,1 mg, 0,056 mmol) u CH2CI2. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom (eluent - heksan : Et20; 50 : 50) dajući dipeptid 11c, kao ulje (7,7 mg; 31%). Upoređivanjem pomoću TLC, HPLC i NMR, nađeno je da je dipeptid 11c identičan sa manje polarnim jedinjenjem 10a, dobijenim u primeru 10, identifikujući tako apsolutnu
stereohemijsku strukturu jedinjenja 10a kao( 1R, 2R).
PRIMER 12
Pripremanje( 1R, 2R)/( 1S, 2R) -l-Boc-amino-2-etilciklopropil-karboksilne kiseline (12a):
Karbamat 9e iz primera 9 (2,6 g, 7,88 mmol) mešan je 40 min u TFA, na 0 °C. Smeša je zatim koncentrovana pa razblažena sa THF (10 ml). Dodat je vodeni rastvor NaOH (700 mg, 17,5 mmol u 8,8 ml H20) pa zatim rastvor (Boc)20 (2,06 g, 9,44 mmol, 1,2 ekv.) u THF (13 ml). Reakciona smeša je mešana tokom noći na sobnoj temperaturi (pH je održavan na 8 dodavanjem 10% vodenog rastvora NaOH, kada je bilo potrebno), onda je razblaženo sa H20, oprano sa Et20 (3x) pa je na 0 °C zakiseljeno sa 10% aq. rastvorom limunske kiseline. Vodeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3x) pa je, jedno za drugim, pran sa H20 (2x) i vodenim rastvorom soli. Posle uobičajenog tretmana (MgS04, filtriranja i koncentrovanja), izolovana je željena amino kiselina zaštićena sa Boe (12a) (788 mg, 3,44 mmol, prinos 44%).<*>H NMR (CDC13) 8 5,18 (bs, IH), 1,64 - 1,58 (m, 2H), 1,55 - 1,42 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,32 -1,25 (m, IH), 0,99 (t, 3H, J = 7,3 Hz).
Pripremanje metilestra( 1R, 2R)/( 1S,^-l-Boc-amino-2-etilciklopropil-karboksilne kiseline (12b):
Boe derivat 12a (0,30 g, 1,31 mmol) rastvoren je u Et20 (10 ml) pa je tretiran sa sveže pripremljenim diazometanom u Et20, na 0 °C, sve dok je bilo žute boje od neznatnog viška diazometana. Posle mešanja 20 min na sobnoj temperaturi, rakciona smeša je uparena do suva dajući 12b kao bistro bezbojno ulje (0,32 g, 100%).<I>H NMR (CDCI3) 5 5,1 (bs, IH), 3,71 (s, 3H), 1,62 - 1,57 (m, 2H), 1,55 (s, 9H), 1,53 -1,43 (m, IH), 1,28 -1,21 (m, 2H), 0,95 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
PRIMER 13
Enzimsko razdvajanje metil( 1R, 2R)/( 1S, 2R)Boc-l-amino-2-eitlciklopropil-karboksilata:
a) Enantiomerna smeša metilestra( 1S, 2R)/( 1R, 2R)l-Boc-amino-2-etilkarboksil-ne kiseline iz primera 10 (0,31 g, 1,27 mmol) rastvorena je u acetonu (3 ml) pa je
onda uz brzo mešanje razblaženo vodom (7 ml). Sa 0,05M vodenim rastvorom NaOH podešeno je pH rastvora na 7,5 pre nego što je dodata Alcalase<®>[2,4L ekstrakt od Novo Nordisk Industrials] (300 mg). Za vreme inkubacije pH je stabilizo-vano pomoću NaOH a pH-metar je priključen da prati dodavanje rastvora NaOH. Posle 40 h smeša je razblažena sa EtOAc i H20 (sa 5 ml zas. NaHC03) pa su faze razdvojene. Vodena faza je zakiseljena sa 10% vodenim rastvorom HC1 pa je ekstrahovana sa EtOAc, osušeno je (MgS04), profiltrirano i koncentrovano, dajući kiselinu 13a (48,5 mg). Apsolutna stereohemijska struktura određena je upotrebom korelacije opisane u primerima 10 i 11.
b) Tretmanom alikvota kiseline 13a sa diazometanom u Et20, radi dobijanja metil estra, a zatim HPLC analizom uz upotrebu hiralne kolone [Chiracel<®>OD-H, 2,5%
izopropanol/heksan, izokratna], dobijen je odnos 51:1 (S,R) izomera.
PRIMER 14
Sinteza( 1R, 2S)/( 1S, 2S)l-amino-2-etilciklopropil-karboksilne kiseline:
Polazeći od kiseline 9d opisane u primeru 9:
c) U 9d (1,023 g, 4,77 mmol) u CH3CN (25 ml), jedno za drugim su dodati DBU (860 pl, 5,75 mmol, 1,2 ekv.) i alilbromid (620 pl, 7,16 mmol, 1,5 ekv.). Reakciona smeša je mešana 4 h na sobnoj temperaturi pa je koncentrovana. Ostatak je razblažen sa Et20 pa je, jedno za drugim, prano sa 10% aq. rastvorom limunske kiseline (2x), H2O, zasićenim vodenim rastvorom NaHC03, H20 (2x) i rastvorom soli. Posle uobičajenog tretmana (MgS04, filtracija i koncentrovanje) izolovan je željeni estar 14a (1,106 g, 3,35 mmol, prinos 91%), kao bezbojno ulje. MS (FAB) 255 (MH<+>);<*>H NMR (CDCI3) 5 5,96 - 5,86 (m, IH), 5,37 - 5,22 (m, 2H), 4,70 - 4,65 (m, IH), 4,57 - 4,52 (m, IH), 1,87 - 1,79 (m, IH), 1,47 (s, 9H), 1,45 - 1,40 (m, IH), 1,33 - 1,24 (m, 3H), 1,03 (t, J = 7,3 Hz, 3H). d) U estar 14a (1,106 g, 4,349 mmol) u suvom CH2C12(5 ml), na sobnoj temperaturi je dodat TFA (5 ml). Reakciona smeša je mešana 1,5 h pa je koncentrovana dajući 14b (854 mg, 4,308 mmol, prinos 99%). MS (FAB) 199 (MH<+>);<l>H NMR (CDCI3) 5 5,99 - 5,79 (m, IH), 5,40 - 5,30 (m, 2H), 4,71 - 4,62 (m, 2H), 2,22 - 2,00 (m, 2H), 1,95 -1,88 (m, IH), 1,84 -1,57 (m, 2H), 0,98 (t, J = 7,3 Hz, 3H). e) U kiselinu 14b (853 mg, 4,30 mmol) u suvom benzenu (14,8 ml), jedno za drugim, dodati su Et3N (684 pl, 4,91 mmol, 1,14 ekv.) i DPPA (992 pl, 4,60 mmol,
1,07 ekv.). Reakciona smeša je 4,5 h refluksovana pa je onda dodat 2-trimetilsililetanol (1,23 ml, 8,58 mmol, 2,0 ekv.). Refluks je održavan tokom noći a onda je
reakciona smeša razblažena sa Et20, pa je, jedno za drugim, prana sa 10% vodenim rastvorom limunske kiseline, vodom, zasićenim vodenim rastvorom NaHC03, vodom (2x) i rastvorom soli. Posle uobičajenog tretmana (MgS04, filtriranje, koncentrovanje), ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (5 cm, 10 do 15% AcOEt - heksan) dajući karbamat 14c (1,212g, 3,866mmol, prinos 90%), kao bledožuto ulje. MS (FAB) 314 (MH<+>);<*>H NMR (CDCI3) 6 5,93 - 5,84 (m, IH), 5,32 - 5,20 (m, 2H), 5,05 (bs, IH), 4,60 - 4,56 (m, 2H), 4,20 - 4,11 (m, 2H), 1,71 -1,60 (m, 3H), 1,39-1,22 (m, IH), 1,03 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 0,96 - 0,86 (m, IH), 0,04 (s, 9H).
f) U karbamat 14c (267 mg, 0,810 mmol) dodat je 1.0M rastvor TBAF u THF (1,62 ml, 1,62 mmol, 2,0 ekv.). Reakciona smeša je mešana tokom noći na sobnoj
temperaturi, refluksovana je 30 min pa je onda razblažena sa AcOEt. Rastvor je, jedno za drugim, pran vodom (2x) i rastvorom soli. Posle uobičajenog tretmana (MgS04, filtriranje, koncentrovanje), izolovan je željeni amin 14d (122 mg, 0,721 mmol, prinos 89%), kao bledožuta tečnost<*>H NMR (CDCI3) 5 5,94 - 5,86 (m, IH), 5,31 - 5,22 (m, 2H), 4,58 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 1,75 (bs, 2H), 1,61 -1,53 (m, 2H), 1,51 - 1,42 (m, 2H), 1,00 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 0,70 - 0,62 (m, IH).
PRIMER 15
Sinteza etil-( 1R, 2S)/( 1S, 2S)-l-amino-2-vinilciklopropil-karboksilata:
a) U rastvor kalijum-terc-butoksida (4,62 g, 41,17 mmol, 1,1 ekv.) u THF (180 ml), na -78 °C je dodat komercijalno dostupni imin 15a (10,0 g, 34,41 mmol) u THF
(45 ml). Reakciona smeša je zagrejana do 0 °C pa je na toj temperaturi mešana 40 min. Smeša je onda opet rashlađena do -78 °C da bi se dodao 1,4-dibromobuten 15b (8,0 g, 37,40 mmol), mešana je 1 h na 0 °C, pa je
ponovo rashlađena na -78 °C radi dodavanja kalijum-ferc-butoksida (4,62 g, 41,17 mmol, 1,1 ekv.). Na kraju je reakciona smeša mešana još jedan sat na 0 °C, pa je posle koncentrovanja dobijeno jedinjenje 15c.
b, c, d) U Et20 (265 ml) uneto je jedinjenje 15c pa je tretirano sa IM aq. rastvorom HC1 (106 ml). Posle 3,5 h na sobnoj temperaturi, slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je opran sa Et20 (2x) pa je zaalkalisan sa zasićenim aq. rastvorom NaHC03. Željeni amin je ekstrahovan sa Et20 (3x) a sjedinjeni organski ekstrakti su oprani sa rastvorom soli. Posle uobičajenog tretmana (MgS04, filtriranje i koncentrovanje) ostatak je tretiran sa 4M rastvorom HC1 u dioksanu (187 ml, 748 mmol). Posle koncentrovanja, hidrohloridna so 15d je izolovana kao braon čvrsta supstanca (2,467 g, 12,87 mmol, prinos 34%).<*>H NMR (CDC13) 5 9,17 (bs, 3H), 5,75 - 5,66 (m, IH), 5,39 (d, J = 17,2 Hz, IH), 5,21 (d, J = 10,2 Hz, IH), 4,35 - 4,21 (m, 2H), 2,77 - 2,70 (m, IH), 2,05 (dd, J = 6,4,10,2 Hz, IH), 1,75 (dd, J = 6,4, 8,3 Hz IH), 1,33 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
PRIMER 16
Pripremanje etilestra( 1R, 2S)/( 1S, 2S)-1-Boc -amino-2-vinilciklopropil-karboksilne kiseline:
Hidrohloridna so 15d (1,0 g, 5,2 mmol) i (Boc)20 (1,2 g, 5,7 mmol) ratsvoreni su u THF (30 ml) i tretirani sa DMAP (0,13 g, 1,04 mmol, 0,2 ekv.) i diizopropiletilami-nom (2,8 ml, 15,6 mmol). Reakciona smeša je mešana 24 h pre nego što je razblažena sa EtOAc (40 ml) pa je, jedno za drugim, prana sa zasićenim NaHCO?(
(aq.), 5% vodenim rastvorom HC1 i zasićenim rastvorom soli. Organska faza je osušena (MgS04), profiltrirana i koncentrovana dajući 16a (0,29 g, 23%), posle prečišćavanja fleš hromatografijom (15% EtOAc/heksan).<l>HNMR (CDC13) 5 5,80-5,72 (m, IH), 5,29 - 5,25 (dd, J = 17,2,17,2 Hz, IH), 5,24 - 5,1 (bs, IH), 5,10 (dd, J = 9,2 9,2 Hz, IH), 4,22 - 4,13 (m, 2H), 2,15 - 2,04 (m, IH), 1,85 - 1,73 (bs, IH), 1,55 - 1,5 (m, IH), 1,49 (s, 9H), 1,26 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
PRIMER 17
Enzimsko razdvajanje etil( 1R, 2S)/( 1S, 2S)l-amino-2-vinilciklopropil-karboksilata:
a) Racemski derivat 17a (0,29 g, 1,14 mmol) rastvoren je u acetonu (5 ml) i raz-blažen sa H20 (10 ml). Sa 0,2M vodenim rastvorom NaOH podešeno je pH na 7,2
pre nego što je dodata Alcalase<®>(300 mg). Da bi se za vreme inkubacije pH održa-valo konstantnim, dodavan je rastvor NaOH pomoću titracionog uređaja dirigova-nog pH-metrom, tokom 9 dana sve dok teorijska količina baze nije bila dodata. Zatim je vršena ekstrakcija kiselinom/bazom, kao što je opisano u primeru 13, pa su izolovani nehidrolizovan estra (0,15 g, 100%) i hidrolizovan materijal (0,139 g, 95%). Analiza nehidrolizovanog estra pomoću HPLC, upotrebom hiralne kolone, ut-vrđen je odnos 43 : 1 željenog jedinjenja 17c, što je pripisano( R, S)stereohemijs-koj strukturi, na osnovu hemijske korelacije kao što je opisano u primerima 10 i 11.
Uslovi za HPLC analizu: Chiralcel<®>OD-H (4,6 mm x 25 cm), izokratni uslovi uz upotrebu mobilne faze sa 2,5% izopropanol/heksana.
PRIMER 18
Razdvajanje( 1R, 2S)/( 1S, 2S)l-amino-2-vinilciklopropil-karboksilata putem kristalizacije sa dibenzoil-D-vinskom kiselinom
U rastvor sirovog racemata (15,25 i 1R25j etil l-amino-2-vinilciklopropil-karbok-silata [dobijen od etilestra N-(difenilmetilen)glicina (25,0 g, 93,5 mol) kao što je opisano u primeru 15] u EtOAc (800 ml) dodata je dibenzoil-D-vinska kiselina (33,5 g, 93,5 mol). Smeša je zagrevana do refluksa, ostavljena 15 min na sobnoj temperaturi a zatim ohlađena na 0 °C. Posle 30 min dobijena je bela čvrsta supstanca. ČVvrsta faza je odvojena filtriranjem, oprana je sa EtOAc (100 ml) pa je osušeno na vazduhu. Čvrsta faza je suspendovana u acetonu (70 ml), sonifikovana, pa profiltrirana (3x), a zatim je dvaput prekristalisana iz vrelog acetona (deo A). Matični lugovi su koncentrovani pa je ostatak prekristalisan triput iz vrelog acetona (deo B). Oba dela amorfne čvrste supstance, soli dibenzoil-D-vinske kiseline su sjedinjena (5,53 g) i suspendovana u smeši Et20 (250 ml) i zasićenog rastvora NaHC03(150 ml). Organski sloj je opran sa rastvorom soli, osušen (MgS04) i profiltriran. Filtrat je razblažen sa IM HCl/Et^O (100 ml) pa je koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Uljasti ostatak je otparen sa CC14, dajući hidrohloridetil i- (2?>amino-2- ( S)- w\ ml-ciklopropan-karboksilata (940 mg, prinos 11%), kao belu čvrstu higroskopnu supstancu: [a]<25>D= +39,5° (c = 1,14 MeOH); [a]<25>365= +88,5°(c = 1,14 MeOH);
<*>H NMR (DMSO-d6) 8 9,07 (bs, 2H), 5,64 (ddd, J = 17,2,10,4,8,7Hz, IH), 5,36 (dd, J = 17,2, 1,6 Hz, IH), 5,19 (dd, J = 10,4, 1,6 Hz, IH), 4,24 - 4,16 (m, 2H), 2,51 - 2,45 (m, pikove ometa DMSO, IH), 1,84 (dd, J = 10,0, 6,0 Hz, IH), 1,64 (dd, J = 8,3, 6,0 Hz, IH), 1,23 (t, J = 7,1 Hz, 3H); MS (ESI) m/z 156 (MH)<+>; pomoću HPLC analize (CHIRALPAK AS® kolona, heks.:/-PrOH) utvrđeno je daje enantiomerna čistoća Boe derivata 91% ee.
PRIMER 19
Pripremanje hidrohlorida metilestra( 1R, ^;/(75,^5>l-amino-2-vinilciklopropan-
-karboksilne kiseline (19f)
Pripremanje imina 19b
Hidrohlorid etilestra glicina 19a (1519,2 g, 10,88 mol, 1,0 ekv.) suspendovan je u fe/r-butilmetil etru (8 lit). Dodati su benzaldehid (1155 g, 10,88 mol, 1 ekv.) i anhi-drovani natrijum-sulfat (773 g, 5,44 mol, 0,5 ekv.) pa je smeša ohlađena na 5 °C u kupatilu led-voda. U toku 15 min dokapan je trietilamin (2275 ml, 16,32 mol, 1,5 ekv.), (upotrebljeno 0,5 lit.terc-butilmetiletra za ispiranje) pa je smeša mešana 40 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je prekinuta dodavanjem ledene vode (5 lit.) pa je organski sloj odvojen. Vodena faza je ekstrahovana saterc--butilmetil etrom (1 lit.), sjedinjene organske faze su oprane smešom zasićenog rastvora NaHC03(400 ml), vode (1,6 lit) a zatim rastvorom soli. Rastvor je osušen preko MgS04, koncentrovan pod smanjenim pritiskom a dobijeno žuto ulje je sušeno do konstantne mase, pod vakuumom. Imin 19b je dobijen kao gusto žuto ulje koje očvršćava na -20 °C (2001 g, prinos 96%):<l>H NMR (CDC13, 400 MHz) 6 8,30 (s, IH), 7,79 (m, 2H), 7,48 - 7,39 (m, 3H), 4,40 (d, J = 1,3 Hz, 2H), 4,24 (q, J = 7 Hz, 2H),1,31 (U = 7 Hz, 3H).
Pripremanje hidrohlorida etilestra racemske N-Boc-( 1R, 2S)/( 1S,2$M-amino-vin-ilciklopropan-karboksilne kiseline 19e: U suvom toluenu (60 ml) suspendovan je titijum-fe/r-butoksid (4,203 g, 52,5 mmol, 2,1 ekv.). U suvom toluenu (30 ml) rastvoreni su imin 19b (5,020 g, 26,3 mmol, 1,05 ekv.) i dibromid 19c (5,348 g, 25 mmol, 1 ekv.), pa je taj rastvor dokapavan 30 min u rastvor LiOtBu, uz mešanje na sobnoj temperaturi. Posle završetka, tamno crvena smeša je mešana još 10 min pa je reakcija prekinuta dodavanjem vode (50 ml) iterc -butilmetiletra (TBME, 50 ml). Vodena faza je odvojena pa je po drugi put ekstrahovana sa TBME (50 ml). Organske faze su sjedinjene, dodata je IM HC1 (60 ml) pa je smeša mešana 2 h na sobnoj temperaturi. Organska faza je odvojena i ekstrahovana sa vodom (40 ml). Vodene faze su sjedinjene, zasićene solju (35 g) pa je dodat TBME (50 ml). Smeša je uz mešanje zaalkalisana do pH 13 - 14, pažljivim dodavanjem 10M NaOH. Organski sloj je odvojen a vodena faza je ekstrahovana sa TBME (2 x 50 ml). Organski ekstrakti koji su sadržavali slobodan amin I9d su sjedinjeni pa je dodat di-ferc-butildikarbonat (5,46 g, 25 mmol, 1 ekv.). Posle mešanja tokom noći na sobnoj temperaturi, TLC je pokazala nešto neproreagovalog slobodnog amina. Dodato je jošdi- terc-butildikarbonata(1,09 g, 5 mmol, 0,2 ekv.) pa je smeša refluksovana 2 h, kada je TLC analizom utvrđena potpuna konverzija 19d u karbamat 19e. Rastvor je ohlađen na sobnu temperaturu, osušen preko MgS04i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom upotrebom kao eluenta 10% pa 20% EtOAc/heksana. Prečišćeni 19e je dobijen kao bistrožuto ulje koje polako očvršćava
pod vakuumom (4,014 g, prinos 63%).
<*>H NMR (CDCI3, 400 MHz) 5 5,77 (ddd, J = 17,10, 9 Hz, 1 H), 5,28 (dd, J = 17, 1,5 Hz, IH), 5,18 (bs, IH), 5,11 (dd, J = 10,1,5 Hz, IH), 4,24-4,09 (m, 2H), 2,13 (q, J = 8,5 Hz, IH), 1,79 (bm, IH); 1,46 (m, IH), 1,45 (s, 9H), 1,26 (t, J = 7 Hz, 3H).
Pripremanje jedinjenja 19f, navedenog u naslovu, putem reesterifikacije estra 19e: Etilestar 19e (10,807 g, 42,35 mmol) rastvoren je u suvom metanol (50 ml) pa je dodat rastvor natrijum-metoksida u MeOH (25% mas./mas., 9,7 ml, 42 mmol, 1 ekv.). Smeša je zagrevana 2 h na 50 °C, u kom trenutku je TLC analizom utvrđena potpuna reesterifikacija (19e Rf0,38,19f Rf0,34, u 20% EtOAc/heksan). Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i zakiseljen do pH 4 korišćenjem 4M HC1 u dioksanu. Istaloženi NaCl je uklonjen filtriranjem (upotrebljenterc-butilmetil etar za ispiranje) pa su isparljivi sastojci uklonjeni pod smanjenim pritiskom. Na ostatak je dodatterc-butilmetil etar (100 ml) pa su čvrste supstance uklonjene filtriranjem. Uparavanjem filtrata pod smanjenim pritiskom i sušenjem pod vakuumom dobijen je čist metilestar 19f (10,11 g, prinos 99%).
<l>E NMR (CDCI3, 400 MHz) 5 5,75 (ddd, J = 17,10, 9 Hz, IH), 5,28 (dd, J = 17,1 Hz, IH), 5,18 (bs, IH), 5,11 (ddd, J = 10,1,5, 0,5 Hz, IH), 3,71 (s, 3H), 2,14 (q, J = 9 Hz, IH), 1,79 (bm, IH), 1,50 (bm, IH), 1,46 (s, 9H).
PRIMER 20
Enzimsko razdvajanje hidrohlorida metilestra( 1R,^5>l-amino-2-vinilciklo-propan-karboksilne kiseline
Pripremanje metilestraN-Boc-(X/?,^S>l-amino-2-vinilpropan-karboksilne
kiseline, 20a:
Racemski estar 19f (0,200 g, 0,83 mmol) rastvoren je u acetonu (3 ml) pa je dodata voda (7 ml). Dodat je 0.05M NaOH (1 kap) da se pH rastvora dovede na~8 pa je onda dodata Alcalase<®>2,4L (Novo Nordisk Biochem, 0,3 g u 1 ml vode). Smeša je energično mešana na sobnoj temperaturi, održavanjem pH rastvora na 8, upotrebom automatskog titratora. Na početku 4. i 5. dana mešanja, pri pH 8, unet je dodatni enzimski rastvor (2 x 0,3 g). Posle ukupno 5 dana, upotrebljeno je ukupno 8,3 ml 0.05M NaOH. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i vodom pa je organska faza odvojena. Posle pranja sa rastvorom soli, organski ekstrakt je osušen (MgS04) i koncentrovan pod vakuumom. Jedinjenje 20a (0,059 g, prinos 30%) dobijeno je kao bistro ulje:<X>H NMR je identičan onom od jedinjenja 19f. HPLC (Chiralcel OD-H, 4,6 x 250 mm, izokratno 1% EtOH u heksanu, protok 0,8 ml/min): (1R, 2S)-2 Rf19,3 min (97%); (1S, 2R)-2 Rf17,0 min (3%).
Pripremanje hidrohlorida metilestra( 1R,2S>l-amino-2-vinilciklopropan-karboksilne kiseline, 20b: Jedinjenje 20a (39,96 g, 165,7 mmol) rastvoreno je u dioksanu (25 ml) pa je rastvor dokapan uz mešanje u 4M HC1 u dioksanu (Aldrich, 250 ml). Posle 45 min, TLC analiza je pokazala da je izvršeno potpuno deprotektovanje. Isparljivi sastojci su uklonjeni pod smanjenim pritiskom, a ostatak je dvaput uparavan sa MeOH (2 x 100 ml). Etar (300 ml) i MeOH (10 ml) dodati su u braon, uljasti ostatak pa je smeša mešana tokom noći na sobnoj temperaturi, dajući polučvrst precipitat. Unet je dodatni MeOH (15 ml) a mešanje je nastavljeno još 6 h, kada je žućkasta čvrsta supstanca sakupljena filtriranjem. Proizvod je opran sa 5% MeOH u etru (50 ml) i sa etrom (2 x 50 ml), osušen jein vacuo,dajući jedinjenje 20b, kao žućkastu čvrstu supstancu (22,60 g, prinos 76%). Filtrati (uključujući tečnosti od pranja), upareni su u vakuumu dajući dodatno 20b kao braon ulje (7,82 g, prinos 26%). Obe frakcije su bile dovoljno čiste za upotrebu u sintezi inhibitora proteaze HCV-a: [a]D<25>= +38,2°
(c = l,0 MeOH).
<l>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6 9,15 (bs, 3H), 5,65 (ddd, J = 17,10,9 Hz, IH), 5,36 (dd, J = 17, 1,5 Hz, IH), 5,19 (dd, J = 10, 1,5 Hz, IH), 3,74 (s, 3H), 2,50 (q, preklapa se sa signalom DMSO, J = 9 Hz, IH), 1,86 (dd, J = 10, 6 Hz, IH), 1,64 (dd, J = 8, 6 Hz, IH).
PRIMER 21
Sinteza metilestra 1-aminocikloburil-karboksilne kiselina
1,1-aminociklobutan-karboksilna kiselina pripremljena je prema Kavin Douglas; Ramaligam Kondareddiar; Woodard Ronald, Synth. Commun. (1985), 15 (4), 267 - 72. So amino kiseline (21a) (l.OOg, 6,6 mmol) mešana je u metanolu (40 ml) na-20 °C pa je smeša zasićena sa suvim hlorovodonikom, dajući (21b). Mešanje ove smeše nastavljeno je još 4 h. Vreo rastvor je profiltriran a filtrat je koncentrovan (rotacioni uparivač, 30 °C), dajući ostatak koji je pošto je rastrljan u etiletru dao beo prah (0,907 g, 83%) posle filtriranja i sušenja.<l>H NMR (400 MHz, D2) 5 CH30 (3H, s, 3,97 ppm); CH2(2H, m, 2,70 - 2,77 ppm); CH2(2H, m, 2,45 - 2,53 ppm) i CH2(2H, m, 2,14-2,29 ppm).
TRIPEPTIDI
PRIMER 22
Opšti postupak za reakcije kuplovanja izvođene na čvrstoj podlozi.
Sinteza je izvođena na uporednom sintesajzer modelu ACT396, proizvođača Adven-ced ChemTech<®>sa 96 udubljenja u bloku. Obično, 24 peptida je sintetizovano upo-redno primenom standardnih tehnika čvrste-faze. Polazna, (Fmoc-amino)ciklo-propan-karboksilna kiselina (eventualno supstituisana) - Wang smola, pripremljeni su putem postupka kuplovanja DCC/DMAP (Atherton, E; Scheppard, R.C.Solid Phase Peptide Synthesis, a Practical Approach;IRL Press: Oxford (1989); str. 131-148).
U svako udubljenje uneto je 100 mg polazne smole (približno 0,05 mmol). Smole su oprane, jedno za drugim, sa porcijama od 1,5 ml NMP (lx) i DMF (3x). Zaštitna grupa Fmoc je uklanjana tretiranjem sa 1,5 ml 25% v/v rastvora piperidina u DMF, tokom 20 min. Smole su prane sa porcijama od 1,5 ml DMF (4x), MeOH (3x) i DMF (3x). Kuplovanje je izvođeno u DMF
(350 ul), upotrebom 400 pl (0,2 mmol) 0,5M rastvora Fmoc-amino kiselina/HOBt hidrata u DMF, 400 pl (0,4 mmol) IM rastvora DIPEA u DMF i 400 pl (0,2 mmol) 0. 5 M rastvora TBTU u DMF. Posle mućkanja od 1 h iz udubljenja je uklonjena tečnost, smola je oprana sa 1,5 ml DMF, pa je kuplovanje ponovljeno još jednom, pod istim uslovima. Smole su zatim prane kao što je gore opisano pa je ciklus pona-vljan sa sledećom amino kiselinom.
Čeone (završne) grupe su uvođene na dva načina:
1. U obliku karboksilne kiseline, prema protokolu gore opisanom (na primer sirćetna kiselina), ili 2. Kao sredstvo za acilovanje, kao što anhidrid ili hlorid kiseline Sleđeći primer ilu-struje uvođenje čeone grupe pomoču anhidrida ćilibarne kiseline: Posle Fmoc-deprotektovanja, a onda pranja prema protokolu, dodat je DMF (350 pl), a zatim po 400 pl svakog od rastvora u DMF-u, anhidrida ćilibarne kiseline (0,5M, 0,2 mmol) i DIPEA (1,0M, 0,4 mmol). Smole su mešane 2 h pa je izveden stupanj rekuplovanja. Na kraju sinteze smola je prana sa porcijama od po 1,5 ml DCM (3x), MeOH (3x), DCM (3x), pa su sušene 2 h pod vakuumom. Odvajanje od smole i deprotektovanje pratećeg bočnog lanca izvođeno je dodavanjem 1,5 ml smeše TFA, H20, DTT i TIS (92,5 : 2,5 : 2,5 : 2,5). Posle mućkanja tokom 2,5 h, smola je filtrirana i prana sa 1,5 ml DCM. Filtrati su sjedinjeni i koncentrovani vakuum centrifugiranjem. Svako jedinjenje je prečišćeno preparativnom HPLC sa reverznom fazom, upotrebom C 18 kolone (22 mm sa 500 mm). Frakcije koje sadrže proizvod identifikovane su pomoću MALDI-TOF masene spektrometrije, a posle sjedinjavanja su liofilizirane.
PRIMER 23
Opšti postupak za reakcije kuplovanja izvođene u rastvoru, {vidi takođe RKnorr et al, Tetrahedron Letters, (1989), 30, 1927.}
Reaktanti, tj. slobodni amin (1 ekv.) (ili njegova hidrohloridna so) i slobodna karboksilna kiselina (1 ekv.) rastvoreni su u CH2C12, CH3CN ili DMF. Pod atmosferom azota, četiri ekvivalenta Af-metilmorfolina i 1,05 ekvalenata sredstva za kuplovanje dodati su u rastvor uz mešanje. Posle 20 min, dodat je jedan ekvivalent drugog reaktanta, tj. slobodne karboksilne kiseline. (Praktični i efikasni reagensi za kuplovanje, za te svrhe jesu (benzotriazol -1 - il - oksi)tris-
(dimetilamino)fosfonium heksaflurofosfat (HOBT), ili pogodnije 2- (lH-benzotriazol4-il)-7v;7vr,A^;7V''-tetrameitluroniurn tetrafluroborat (TBTU) ili 0-(7-azabenzotria-zol-l-ih-A^TV^Metrameitluromum tetrafluroborat (HATU). Reakcija je praćena pomoću TLC. Posle završetka reakcije, rastvarač je otparen pod smanjenim pritiskom. Ostatak je rastvoren u EtOAc. Rastvor je opran, jedno za drugim, sa 10% vodenim rastvorom limunske kiseline, zasićenim vodenim rastvorom NaHCO?, i rastvorom soli. Organska faza je osušena (MgS04), profiltrirana i koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Za prečišćavanja ostatka primenjena je fleš hromatografija, kao što je gore opisano .
PRIMER 24
Sinteza jedinjenja 304
a) (R,R) - izomer od Boc-Et-Acca-OMe 13c (0,12 g, 0,49 mmol) dobijen enzimskim razdvajanjem (primer 13), tretiranje sa 4M HCl/dioksanom (45 min) pre koncentrovanjain vacuo,pri čemu se dobija bela čvrsta supstanca. U tu hidrohloridnu so (ca. 0,49 mmol) dodati su TBTU (0,17 g, 0,54 mmol), Boc-4-tf?>(8-hinolin-metiloksi)prolin 5 (iz primera 5) (0,18 g, 0,49 mmol) i DIPEA (0,3 ml, 1,7 mmol), u MeCN (10 ml). Smeša je mešana 3,5 h na sobnoj temperaturi pre koncentrovanjain vacuo.Dobijeni materijal je rastvoren u EtOAc i opran, jedno za drugim, sa zasićenim vodenim rastvorom NaHC03i rastvorom soli. Posle sušenja (MgS04), filtriranja i koncentrovanja dobijen je 24b kao bela čvrsta supstanca (0,122 g, 50%). b) Jedinjenje 24b (0,12 g, 0,25 mmol) tretirano je na sobnoj temperaturi sa 4M HCl/dioksan (30 min) pre koncentrovanjain vacuo.Dobijena hidrohloridna so (ca. 0,25 mmol) tretirana je sa Boc-Chg-OH-H20 (75 mg, 0,27 mmol),TBTU (87 mg, 0,27 mmol), u MeCN (10 ml) i na kraju na 0 °C sa DIPEA (0,15 ml, 0,87 mmol). Ostatak je razblažen sa EtOAc, jedno za drugim, opran sa zasićenim vodenim rastvorom NaHC03, i rastvorom soli, pa je osušen (MgS04), profiltriran i koncentrovan dajući 24c, kao prljavo-belu čvrstu supstancu (0,2 g). Taj materijal (0,14 g) rastvoren je u DMSO pa prečišćen preparativnom HPLC, dajući 24c kao belu čvrstu supstancu posle liofiliziranja (35 mg, 33%). HPLC (98%); MS (FAB) m/z: 637,3 (MH<+>); HRMS izračunato za C35H48N407(MH<+>) 637,36011: nađeno 637,36250; ^-NMR (DMSO-d6) pokazuje postojanje rotamera, 5 8,91 (2 x d, J = 4,1 i 4,1 Hz, IH), 8,40 - 8,36 (m, 2H), 7,90 (d, J = 7,6 Hz, IH), 7,77 (d, J = 7,0 Hz, IH), 7,6 - 7,54 (m, 2H), 6,80 (d, J = 8,6 Hz, IH), 5,18 i 5,16 (2 x s, 2H), 4,40 (bs, IH), 4,31 (t, J = 8,3 Hz, IH), 4,12 (d, J = 11,44 Hz, IH), 4,03 (t, J = 7,9 Hz, IH), 3,78 - 3,72 (m, IH), 3,56 (s, 3H), 2,35 - 2,27 (m, IH), 2,06 - 1,97 (m, IH), 1,71 -1,55 (m, 10H), 1,53 -1,38 (m, 2H), 1,26 (s, 9H), 1,18-1,06 (m, 2H), 1,02 - 0,93 (m, 2H), 0,89 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
jedinjenje 304:
c) Ujedinjenje 24c (30 mg, ca. 0,047 mmol) dodati su MeOH (1 ml),THF (1 ml), i litijum-hidroksid-monohidrat (12 mg, 0,29 mmol) u H20 (1 ml). Bistar rastvor je
brzo mešan 48 h pre nego što je koncentrovanin vacuo.Sirovi peptid je rastvoren u DMSO i prečišćen preparativnom HPLC dajući jedinjenje 304 kao belu čvrstu supstancu posle liofiliziranja (21 mg, 72%). HPLC (99%); MS (FAB) m/z: (MH<+>) 623,3; HRMS izračunato za C34H46N407(MH<+>) 623,34448, nađeno: 623,34630,
<*>H NMR (DMSO-dg) pokazuje postojanje rotamera sa 1:1, 5 8,90 (2 x d, J = 4,1 Hz, IH), 8,37 (d, J = 8,3 Hz, IH), 8,26 (s, IH), 7,89 (d, J = 8,3 Hz, IH), 7,77 (d, J = 6,7 Hz, IH), 7,6 - 7,53 (m, 2H), 6,88 i 6,79 (2 x d, J = 8,6 i 7,9 Hz, IH), 5,17 i 5,16 (2 x s, 2H), 4,43 - 4,35 (bs, IH), 4,29 (t, J = 8,3 Hz, IH), 3,82 - 3,71 (m, IH), 2,35 - 2,27 (m, IH), 2,06 - 1,97 (m, IH), 1,72 - 1,53 (m, 10H), 1,52 - 1,44 (m, 2H), 1,37 i 1,29 (2 x s, 9H), 1,18 -1,05 (m, 3H), 1,0 - 0,94 (m, IH), 0,91 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
PRIMER 25
Sinteza jedinjenja 301
a) Jedinjenje 25a (=12a) (282 mg, 1,23 mmol) suspendovano je u anhidrovanom CH3CN (6 ml). DBU (221 pl, 1,48 mmol) i benzilbromid (161 pl, 1,35 mmol)
dodavani su postepeno i reakciona smeša je mešana tokom noći na sobnoj temperaturi. Smeša je koncentrovana, d obijeno ulje je razblaženo sa EtOAc i 10% aq. limunske kiseline pa je, jedno za drugim, prano sa 10% limunske kiseline (2x), zasićenim aq. NaHC03(2x), vodom (2x) i rastvorom soli (lx). Sloj EtOAc je osušen (MgSO^, profiltriran i uparen do suva. Sirovo bezbojno ulje je prečišćeno fleš hromatografijom (eluent - heksan : EtOAc; 95 : 5 do 90 : 10) dajući benzilovan proizvod 25b kao bezbojno ulje (368 mg; 93%).
MS (FAB) 318,2 MH- 320,2 MH<+>342,2 (M+Na) +
<l>HNMR (CDC13) 5 7,37 - 7,28 (m, 5H), 5,22 - 5,10 (m, IH), 5,19 (d, J = 12 Hz, IH), 5,16 (d, J = 12 Hz, IH), 1,60 - 1,40 (m, 4H), 1,39 (s, 9H), 1,31 -1,22 (m, IH), 0,91 (t, J = 7,5,14,5 Hz, 3H).
b) Jedinjenje 25b (368 mg, 1,15 mmol) tretirano je sa 4M HCl/dioksan (6 ml) kao što je prethodno opisano. Sirova hidrohloridna so je kuplovana za jedinjenje 4 (iz
primera 4) (470,8 mg, 1,27 mmol) sa NMM (507 pl, 4,61 mmol) i HATU (umesto TBTU, 525,6 mg, 1,38 mmol) u CH2C12(6 ml), kao što je opisano u primeru 22, dajući sirovi racemski dipeptid kao oranž ulje. Sirovi materijal je
prečišćen fleš hromatografijom (eluent - heksan : Et20; 50 : 50) dajući čist dipeptid 25c (manje polaran eluiran deo) kao belu penu (223 mg; 68 teor.%).
MS 571,4 MH"573,3 MH<+>595,3 (M+Na)<+><*>H NMR (CDC13), smeša rotamera ca.l:l, 6 8,03 (bd, J = 8 Hz, IH), 7,86 (bd, J = 7,5 Hz, IH), 7,82 (bd, J = 6,5 Hz, IH), 7,61 (bs, 0,5H), 7,57- 7,40 (m, 4H), 7,31 - 7,21 (m, 5H), 6,48 (bs, 0,5H), 5,22 - 5,11 (m, IH), 5,08 - 4,81 (m, 3H), 4,41 - 3,74 (m, 3H), 3,49 - 3,18 (m, IH), 2,76 -1,90 (m, 2H), 1,69 - 1,48 (m, 3H), 1,40 (s, 9H), 1,40-1,23 (m, 2H), 0,92 (t, J = 7,5,15 Hz, 3H).
c) Dipeptid 25c (170,1 mg, 0,297 mmol) tretiran je sa 4M HCl/dioksan (2 ml) kao što je prethodno opisano. Sirova hidrohloridna so je kuplovana za Boc-Chg-OH
(84,1 mg, 0,327 mmol) sa NMM (130,7 pl, 1,19 mmol) i HATU (umesto TBTU, 135,5 mg, 0,356 mmol) u CH2C12(2 ml), tokom 2,75 h na sobnoj temperaturi, pa je dalje obrađeno kao što je prethodno opisano, dajući sirovi tripeptid 25d kao penu boje slonovače (ca. 211,4 mg, 100%).
MS (FAB) 712,5 MH<+>
jedinjenje 301:
d) Sirovi tripeptid 25d (ca. 15,4 mg, 0,022 mmol) rastvoren je u apsolutnom etanolu (2 ml), pa je dodato, prema proceni (vrh špahtle), i 10% Pd/C katalizatora i
amonijum-acetata. Smeša je hidrogenovana tokom noći pod balonom napunjenim vodonikom, na sobnoj temperaturi i atmosferskom pritisku. Reakciona smeša je profiltrirana kroz Millex® filter od 0,45 pm, uparena je do suva pa razblažena sa EtOAc i 10% aq. limunske kiseline, pa je opet oprana sa 10% aq. limunske kiseline (lx), vodom (2x) i rastvorom soli (lx). Organski sloj je osušen (MgSO^, profiltriran, uparen do suva i liofiliziran, dajući tripeptid 301 kao belu čvrstu amorfnu supstancu (11,0 mg, 82%).
MS (FAB) 622,5 MH<+>644,5 (M+Na)<+>
<L>H NMR (DMSO), smeša rotamera ca. 1 : 4, 5 8,54 & 8,27 (s, IH), 8,06 - 7,99 (m, IH), 7,96- 7,91 (m, IH), 7,87 (d, J = 8 Hz, IH), 7,57 - 7,42 (m, 4H), 6,81 (d, J = 8 Hz, IH), 4,99 (d, J = 12 Hz, IH), 4,88 (d, J = 12 Hz, IH), 4,46 - 4,19 (m, 2H), 4,17 - 4,02 (m, 2H), 3,88 - 3,67 (m, IH), 2,28 - 2,19 (m, IH), 2,05 - 1,93 (m, IH), 1,73 - 1,43 (m, 8H), 1,32 - 1,07 (m, 6H), 1,28 (s, 9H), 1,03 - 0,85 (m, 2H), 0,91 (t, J = 7,5, 15 Hz, 3H).
PRIMER26
Sinteza jedinjenja 306
a) Kiselina 26a (180 mg, 0,500 mmOl) i amin 15d (96 mg, 0,500 mmol) kuplovani su upotrebom TBTU (192 mg, 0,600 mmol) i DIPEA (226 mg, 1,75 mmol) u CH2C12
(10 ml), u toku 20 h. Reakciona smeša je koncentrovana, prebačena u etilacetat, oprana dvaput sa zasićenim NaHCO^i jedanput rastvorom soli. Organski sloj je osušen na MgS04, profiltriran i koncentrovan dajući 26c kao braon ulje, upotrebljeno bez prečišćavanja u sledećem stupnju.
b, c) Sirovo jedinjenje 26c (ca. 0,500 mmol) mešano je 30 min u 4M HCl/dioksanu (4 ml) pa je koncentrovano do suva. Čvrsta supstanca je prebačena u CH2C12(10 ml), dodata je DIPEA (226 mg, 1,75 mmol), a zatim Boc-Chg-OH monohidrat (138 mg, 0,500 mmol) i TBTU (192 mg, 0,600 mmol). Rastvor je 5 h mešan na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je koncentrovana, prebačena u etilacetat, oprana dvaput sa zasićenim NaHCOsi jedanput sa rastvorom soli. Organski sloj je
osušen na MgS04, profiltriran i koncentrovan, dajući braon ulje, prečišćeno fleš hromatografijom, dajući 26d, kao žuto ulje (204 mg, 64%) posle dva kuplovanja.<l>HNMR (CDCI3) 5 8,77 - 8,74 (m, IH), 8,14 (d, J = 8 Hz, IH), 8,02 (d, J = 9 Hz, IH), 7,69 (dd, J = 9, 7 Hz, IH), 7,52 (d, J = 5 Hz, IH), 7,47 (dd, J = 8,7 Hz, IH), 6,78 (d, J = 5 Hz, H), 5,80 - 5,70 (m, 1 H), 5,35 - 5,27 (m, 2H), 5,14 - 5,07 (m, 2H), 4,89 - 4,83 (m, IH), 4,39 - 4,32 (m, IH), 4,30 - 4,24 (m, IH), 4,20 - 4,07 (m, 2H), 4,00 - 3,92 (m, IH), 3,04 - 2,92 (m, IH), 2,39 - 2,29 (m, IH), 2,16 - 2,04 (m, IH), 1,91 -1,83 (m, IH), 1,82 -1,62 (m, 7H), 1,45 -1,35 (m, 9H), 1,27 -1,07 (m, 8H).
d) Jedinjenje 26d (136 mg, 0,214 mmol) rastvoreno je u THF (4 ml) i MeOH (2 ml). Dodat je vodeni rastvor (2 ml) LiOH hidrata (72 mg, 1,72 mmol) pa je reakciona
smeša mešana 20 h na sobnoj temperaturi. Rastvor je koncentrovan i prečišćen preparativnom HPLC dajući jedinjenje 306 (manje polaran izomer), kao čvrstu belu supstancu (25 mg).
jedinjenje 306: MS (FAB) 607,4 (MH<+>)
<l>H NMR (DMSO-d6) 5 9,16 (d, J = 6 Hz, IH), 8,55 (s, IH), 8,35 (d, J = 8 Hz, IH), 8,12 (d, J = 9 Hz, IH), 8,05 (dd, J = 8, 7 Hz, IH), 7,76 (dd, J = 8, 7 Hz, IH), 7,59 (d, J = 6 Hz, IH), 7,02 (d, J = 8 Hz, IH), 5,75 - 5,66 (m, 2H), 5,19 (d, J = 18 Hz, IH), 5,07 (d, J = 10 Hz, IH), 4,55 (d, J = 12 Hz, IH), 4,43 (dd, J = 10, 8 Hz, IH), 4,03 (d, J = 10 Hz, IH), 3,87 - 3,83 (m, IH), 2,66 - 2,59 (m, IH), 2,36 - 2,30 (m, IH), 1,98 (dd, J = 18, 9 Hz, IH), 1,75 -1,56 (m, 8H), 1,38 - 1,35 (m, IH), 1,25 - 1,22 (m, IH), 1,09 (s, 9H), 1,12-0,95 (m, 3H).
PRIMER 27
Sinteza jedinjenja 307
c) Rastvor kiseline (8) iz primera 8 (505 mg, 105 mmol) u 5 ml dihlorometana tretiran je sa TBTU (376 mg, 1,17 mmol). Hidrohloridna so (R,S) vinil AccaOEt (18) (iz primera 18) (279 mg, 1,46 mmol), u 7 ml dihlorometana koji sadrži (0,60 ml, 5,46 mmol) N-metil morfolina, dodata je u prethodni rastvor aktiviranog estra. Dobijeni rastvor je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. Rastvor je uparenin vacuo.Ostatak je razblažen etil acetatom, opran dvaput sa zasićenim rastvorom natrijum-bikarbonata i jedanputa sa rastvorom soli. Organski sloj je osušen (MgS04), profiltriran i uparenin vacuo.Ostatak je hromatografisan preko silikagela (60: 40 v/v, heksan- etilacetata) dajući 173 mg (27%) dipeptida 27c.
d, e) Rastvor dipeptida 27c (70 mg, 0,114 mmol) u 3 ml 4,0 M rastvora hidrogen hlorida u 1,4-dioksanu mešan je 1 h na sobnoj temperaturi (taloženje nastaje 10 min posle početka reakcije). Rastvarač je uklonjenin vacuo.Hidrohloridna so amina 27d (0,114 mmol), rastvorena u 1,5 ml acetonitrila, neutralisana je dodavanjem 65 pl (0,591 mmol) N-metil morfolina. Rastvor
Boe ChgOH H20 (39 mg, 0,142 mmol) u 1,5 ml acetonitrila tretiran je sa TBTU (46 mg, 0,143 mmol) pa je onda dodat u prethodni rastvor amina. Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi (2 dana). Rastvarač je uklonjenin vacuo.Ostatak, razblažen etilacetatom, dvaput je opran sa zasićenim rastvorom natrijum--bikarbonata i jedanputa sa rastvorom soli. Organski sloj je osušen (MgS04), profiltriran i uparenin vacuo.Dobijeno je 86 mg (100%) tripeptida 27e. To sirovo jedinjenje je upotrebljeno u sledećoj reakciji bez daljeg prečišćavanja.
f) U rastvor tripeptida 27e (86 mg, 0,114 mmol) u 5 ml smeše THF : H20 (2,5 : 1) dodat je litijum-hidroksid monohidrat (22 mg, 0,524 mmol). Dodatnih 0,25 ml
MeOH dodato je da bi se dobio homogen rastvor. Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi pre nego što je rastvarač otparenin vacuo.Ostatak je razdeljen između vode i EtOAc. Vodeni sloj je zakišeljen sa IM HC1 pa je dvaput ekstrahovan sa etilacetatom. Željeno jedinjenje je nađeno u etilacetatu koji potiče iz prve bazne ekstrakcije. Organski sloj je osušen (MgS04), profiltriran i uparenin vacuo,dajući 69 mg sirove kiseline, koja je prečišćena preparativnom HPLC. Jedinjenje je rastvoreno u MeOH (4 ml) i injektovano u ekvilibrisanu kolonu C18, sa reverznom fazom, Whatman Partisil 10-ODS-3 (2,2 x 50 cm). (X = 230 nm, ras-tvarač A = 0,06%TFA/H2O, rastvarač B = 0,06%TFA/CH3CN). Program prečišćava-nja: 20% do 70% rastvarača B za 60 min. Frakcije su analizirane analitičkom HPLC. Odgovarajuće frakcije su sakupljene i liofilizirane dajući 50 mg (60%) željenog tripeptida 307, u obliku čvrste bele amorfne supstance.
jedinjenje 307:<l>H NMR (DMSO-d6) rotameri -2:8,8 8,86 (d, J = 2,5 Hz, IH), 8,85 (s, 0,2H), 8,64 (s, 0,8H), 8,49 (dd, J = 9,5, 3 Hz, 0,2H), 8,45 (dd, J = 9,2 Hz, 0.8H), 8.39 - 8,33 (m, 2H), 8,20 (d, J = 9,5 Hz, 0,2H), 8,18 (d, J = 9,5 Hz, 0,8H), 7,81 (s, 0,2H), 7,78 (s, 0,8H), 7,64 - 7,56 (m, 3H), 6,87 (d, J = 8 Hz, 0,8H), 6,36 (d, J = 9 Hz, 0,2H), 5,82 - 5,67 (m, 2H), 5,27 - 5,17 (m, IH), 5,09 - 5,03 (m, IH), 4,73 (t, J = 8 Hz, 0,2H), 4,55 (dd, J = 10, 7,5 Hz, 0,8H), 4,49 - 4,40 (m, IH), 4,00 - 3,95 (m, IH), 3,83 - 3,76 (m, IH), 2,87 - 2,80 (m, 0,2H), 2,69 - 2,62 (m, 0.8H), 2,39 - 2,26 (m, IH), 2,08-2,00 (m, IH), 1,75 -1,41 (m, 7H), 1,37 (s, 1,8H), 1,32-1,27 (m, IH), 1,17-0,82 (m, 5H),0,94 (s, 7,2H).
PRIMER 28
Sinteza jedinjenja 311
Jedinjenje 311 pripremljeno je prema postupku opisanom u primeru 24, ali primenom odgovarajućih blokova za izgradnju.
Jedinjenje 310:<l>ENMR (DMSO-d6) 5 8,98 (d, J = 6 Hz, IH), 8,52 (s, IH), 8,24 (d, J = 9 Hz, IH), 8,08 (d, J = 2 Hz, IH), 7,63 (d, J = 9 Hz, IH), 7,37 (d, J = 6 Hz, IH), 6,98 (d, J - 8 Hz, IH), 5,75 - 5,66 (m, IH), 5,57 (bs, IH), 5,24 - 5,19 (m, IH), 5,08 - 5,01 (m, IH), 4,57 - 4,40 (m, 2H), 4,00 - 3,96 (m, IH), 3,82 (dd, J = 9, 8 Hz, IH), 2,59 - 2,54 (m, IH), 2,32 - 2,26 (m, IH), 1,99 (dd, J = 17, 9 Hz, IH), 1,74 - 1,55 (m, 8H), 1,37 (s, IH), 1,26 -1,22 (m, IH), 1,14-1,08 (m, 9H), 1,02-0,91 (m, 3H).
PRIMER 29
Sinteza jedinjenja 302
Jedinjenje 302 pripremljeno je prema postupku opisanom u primeru 27, ali primenom odgovarajućih blokova za izgradnju.
<*>H NMR (DMSO-d6) 6 8,34 (s, IH), 8,04 - 8,01 (m, IH), 7,94 - 7,92 (m, IH), 7,87 (d, J = 8 Hz, IH), 7,54 - 7,50 (m, 3H), 7,45 (dd, J = 17, 8 Hz, IH), 7,22 (d, J = 8 Hz, IH), 4,94 (dd, J = 55,12 Hz, 2H), 4,34 (s, IH), 4,27 (dd, J = 8, 8 Hz, IH), 4,16 (d, J - 11 Hz, IH), 4,07 (dd, J = 8, 8 Hz, IH), 3,72 - 3,65 (m, 2H), 3,59 - 3,54 (m, IH), 2,24 - 2,18 (m, IH), 2,02 -1, 95 (m, 2H), 1,75 -1,70 (m, IH), 1,53 -1,44 (m, 2H), 1,32 -1,27
(m, IH), 1,21 - 1,17 (m, IH), 0,96 - 0,85 (m, 10H), 0,80 - 0,77 (m, 5H), 0,62 - 0,57 (m, IH).
PRIMER 30
Sinteza jedinjenja 308
Jedinjenje 308 pripremljeno je prema postupku opisanom u primeru 27, ali primenom odgovarajućih blokova za izgradnju.
<l>H NMR (DMSO-d6) rotameri = 2:8, 5 8,77 (s, 0,2H), 8,45 (s, 0,8H), 8,13 (d, J = 8,5 Hz, 0,8H), 8,03 (d, J = 8,5 Hz, 0,2H), 7,89 - 7,83 (m, IH), 7,55- 7,37 (m, 4H), 7,05 - 6,59 (m, IH), 6,95 (d, J = 8 Hz, 0.8H), 6,26 (d, J = 8,5 Hz, 0,2H), 5,81 - 5,64 (m, IH), 5,33 - 5,28 (m, IH), 5,26- 5,15 (m, IH), 5,08- 5,02 (m, IH), 4,60 (t, J = 7,5 Hz, 0,2H), 4,38 - 4,27 (m, 1.8H), 4,09 - 3,91 (m, 1,8H), 3,74 (dd, J = 12,5, 4 Hz, 0,2H), 2,69 - 2,60 (m, 0,2H), 2,50 - 2,40 (m, IH), 2,36 - 2,28 (m, 0,2H), 2,23 - 2,14 (m, 0,8H), 2,05-1,97 (m, 0.8H), 1,76 -1,44 (m, 7H), 1,37 (s, 1,8H), 1,29 (s, 7,2H), 1,28-1,20 (m, III), 1,16 -0,88 (m, 5H).
PRIMER 31
Sinteza jedinjenja 309
Jedinjenje 309 pripremljeno je prema postupku opisanom u primeru 27, ali primenom odgovarajućih blokova za izgradnju.
<l>H NMR (DMSO-d6) rotameri = 2:8, 5 8,75 (s, 0,2H), 8,50 (s, 0,8H), 7,89 - 7,78 (m, 3H), 7,50 - 7,44 (m, IH), 7,42 - 7,32 (m, 2H), 7,17 - 7,09 (m, 0.8H), 7,08 - 7,03 (m, 0,2H), 6,79 (d, J = 8,5 Hz, 0,8H), 6,33 (d, J = 9 Hz, 0,2H), 5,81 - 5,65 (m, IH), 5,30 - 5,16 (m, 2H), 5,10 - 5,02 (m, IH), 4,56 (t, J = 7,5 Hz, 0,2H), 4,33 (t, J = 8 Hz, 0.8H), 4,10 - 3,90 (m, 2.8H), 3,74 - 3,68 (m, 0,2H), 2,45 - 2,37 (m, IH), 2,34 - 2,17 (m, IH), 2,05 - 1,97 (m, IH), 1,76 - 1,48 (m, 7H), 1,37 (s, 1,8H), 1,23 (s, 7,2H), 1,21 - 0,88 (m, 6H).
PRIMER 32
Sinteza jedinjenja 305
Jedinjenje 305 pripremljeno je prema postupku opisanom u primeru 27, ali primenom odgovarajućih blokova za izgradnju.
<l>UNMR (DMSO-d6) rotameri (1:9), 8 8,68 (s, 0,1H), 8,43 (s, 0,9H), 8,04 - 8,00 (m, IH), 7,95 - 7,91 (m, IH), 7,87 (d, J = 8,5 Hz, IH), 7,57 - 7,49 (m, 3H), 7,47 - 7,42 (m, IH), 6,82 (d, J = 8,5 Hz, 0,9H), 6,21 (d, J = 8,5 Hz, 0,1H), 5,80 - 5,64 (m, IH), 5,21 (dd, J = 17, 2 Hz, 0,1H), 5,18 (dd, J = 17, 2 Hz, 0,9H), 5,06 (dd, J = 10,5, 2 Hz, IH), 5,02 - 4,85 (m, 2H), 4,43 (t, J = 7,5 Hz, 0,1H), 4,34 (bs, IH), 4,23 (t, J = 8,5 Hz, 0,9H), 4,16 - 4,05 (m, 1,8H), 3,89 - 3,82 (m, 0,2H), 3,74 (dd, J - 11, 3,5 Hz, 0,9H), 3,53 (dd, J = 12,5, 4 Hz, 0,1H), 2,30 - 2,21 (m, IH), 2,02 - 1,94 (m, 2H), 1,74 - 1,38 (m, 7H), 1,36 (s, 0,9H), 1,28 (s, 8,1H), 1,25 - 0,87 (m, 6H).
PRIMER 33
Sinteza jedinjenja 303
Jedinjenje 303 pripremljeno je prema postupku opisanom u primeru 27, ali primenom odgovarajućih blokova za izgradnju.
<*>H NMR (DMSO-d6) 5 8,29 (s, IH), 8,04-8,01 (m, IH), 7,94-7,92 (m, IH), 7,87 (d, J = 8 Hz, IH), 7,56 - 7,52 (m, 3H), 7,46 (dd, J = 8, 7 Hz, IH), 7,19 (d, J = 9 Hz, IH), 5,01 (d, J = 12 Hz, IH), 4,86 (d, J = 12 Hz, IH), 4,34 (bs, IH), 4,24 (t, J = 8 Hz, IH), 4,18 - 4,09 (m, 2H), 3,74- 3,53 (m, 3H), 2,24 - 2,18 (m, IH), 2,04 - 1,95 (m, IH), 1,74 - 1,45 (m, 10H), 1,31 -1,13 (m, 4H), 0,96 - 0,86 (m, 7H), 0,79 - 0,76 (m, 5H).
PRIMER 34
Sinteza jedinjenja 403
a) Kuplovanje P2 sa Pl
Metilestar derivata jedinjenja 7 (34a) (170 mg, 0,355 mmol) mešanje u 50% THF -
metanol (4 ml) i vodenom rastvoru LiOH (IM, 1 ml), na sobnoj temperaturi 1 h. Rastvor je koncentrovan (Rotavap, 30 °C), ostatak je zakiseljen do pH 6 pa je rastvor liofiliziran. Dobijeni prah je mešan u suvom DMF (3 ml) u prisustvu DIEA (0,4 ml), a zatim uz postepeno dodavanje hidrohlorida metilestra 1,1-aminociklo-butil-karboksilne kiseline (34b) (140 mg, 0,845 mmol) i TBTU (134 mg, 0,417 mmol). Posle mešanja tokom 18 h na sobnoj temperaturi, smeša je prečišćena fleš hromatografijom na
silikagelu (230 - 400 meša), korišćenjem 1:2 etilacetat - heksana, dajući oranž ulje (98 mg, čistoća 90%, prema HPLC).
b) Kuplovanje Pl-P2 sa P3
Dipeptid 34b (97 mg, 90%, 0,155 mmol) mešan je u 4M HC1 - dioksanu (5 ml)
tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Rastvor je koncentrovan do suva (Rotavap, visok vakuum) dajući čvrstu supstancu bež boje. Taj materijal je mešan u suvom DMF (2 ml) na sobnoj temperaturi u prisustvu DIEA (0,4 ml) a zatim uz dodavanje L -Boc-Tbg (80 mg, 0,35 mmol) i TBTU (112 mg, 0,35 mmol). Posle 2 dana mešanja na sobnoj temperaturi rastvor je izliven u etilacetat, kako bi se upotrebom 5% vodenog rastvora kalijum-karbonata dobila slobodna baza. Organska faza je dorađena dajući žut uljasti ostatak. Materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni sa silikagelom (230 - 400 meša), upotrebom 1:2 & 3:1 (v/v) etilacetat: heksana, dajući 40 mg ulja, homogenog na osnovu HPLC.
Na kraju je metilestar (40 mg) saponifikovan u IM kalijum-hidroksidu (2 ml), u metanolu (4 ml), mešanjem 3 h na sobnoj temperaturi . Smeša je koncentrovana (Rotavap, 30 °C) pa zakiseljena do pH 4 sa 2M hlorovodoničnom kiselinom. Ova smeša je prečišćena preparativnom HPLC na koloni C18, upotrebom gradijenta 0 - 50% vodenog rastvora acetonitrila (0,1% TFA), pri 220 nm. Frakcije su sjedinjene, koncentrovane na pola zapremine pa liofilizirane, dajući 403, kao belu paperjastu čvrstu supstancu (10 mg).
<*>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 smeša rotamera: NH+ (IH, s, 8,6 ppm), CH (3H, m, 8,2 ppm), Ph (5H bs, 7,66 & 7,53 ppm), CH (IH, b, 7,22 ppm), NH (IH, d, J = 7,6 Hz, 6,71 ppm), CHO (IH, bs, 5,76 ppm), CH (2H, m, 4,58 - 4,49 ppm), CH (IH, m, 4,04 ppm), CH30 (3H, s, 3,97 ppm), CH (IH, d, 3,86 ppm), CH (7H, veoma širok, 1,8 - 2,6 ppm), Boe grupa (9H, s, 1,25 ppm) i t-butyl grupa (9H, s, 0,97 ppm).
MS. pokazuje M+H + na m/e 675 (100%).
HPLC pik 98% u 18,9 min.
PRIMER 35
Sinteza jedinjenja 333 (tabela 3)
Rastvorm-anizidina (35a) (9,15 ml, 81,4 mmol) i dimetilacetilendikarboksilata (35b) (10,0 ml, 81,3 mmol) u 160 ml metanola, zagrevana je 2 h uz refluks. Rastvarač je uklonjenin vacuoa ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (90 : 10 heksan -etilacetat). Jedinjenje 35c (17,0 g, prinos 79%) dobijeno je kao oranž ulje.
<l>H NMR (CDC13) 8 9,62 (bs, IH), 7,17 (dd, J = 7 i 8,5 Hz, IH), 6,66 - 6,62 (m, IH), 6,49 - 6,45 (m, 2H), 5,38 (s, IH), 3,77 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,71 (s, 3H).
Difeniletar (50 ml) zagrevan je na peščanom kupatilu sve do unutrašnje temperature od « 250 °C. Diestarski adukt (35c) (7,5 g, 28,3 mmol), rastvoren u 5 ml difen-iletra, dodat je u toku 2 min u ključali rastvarač. Grejanje je održavano 5 min, pa je onda ostavljeno da se reakciona smeša ohladi na sobnu temperaturu. Brzo je došlo da izdvajanja bež čvrste supstance. Čvrta supstanca je odvojena filtriranjem pa je onda rastrljana sa metanolom. Dobijen je 4,1 g (prinos 62%) željenog jedinjenja 35d.
<l>H NMR (DMSO-d6) 5 7,97 (d, J = 9 Hz, IH), 7,40 (d, J - 2 Hz, IH), 6,96 (dd, J = 9 i 2 Hz, IH), 6,55 (s, IH), 3,95 (s, 3H), 3,84 (s, 3H).
Rastvor derivata cis-4-hidroksi-L-prolina (35e) (1,71 g, 5,33 mmol), derivata 4-hid-roksihinolina (35f) (1,25 g, 5,36 mmol) i trifenilsfosfina (2,80 g, 10,68 mmol), u 75 ml THF, ohlađen je na 0 °C da bi se dodao kap po kap (* 1 h) DEAD (1,70 ml, 10,80 mmol). Onda je ostavljeno da se reakciona smeša polako zagreje na sobnu temperaturu pa je mešanje nastavljeno tokom noći. Rasrvarač je uklonjenin vacuoa osta-tak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (70 : 30 etilacetat -heksan) Jedinjenje 35g (0,7 g čistog jedinjenja 35g, i 1,8 g jedinjenja 35g kontaminiranog sa~50% trifenilfosfat oksida), dobijeno je kao čvrsta bela supstanca.
mNMR (CDCI3) rotameri (4:6) 5 8,04 (d, J = 9 Hz, IH), 7,54 (d, J = 2,5 Hz, IH), 7,40 - 7,32 (m, 6H), 7,23 (dd, J = 9 i 2,5 Hz, IH), 5,33 - 5,13 (m, 3H), 4,66 (t, J = 7,5 Hz, 0,4 H), 4,54 (t, J = 8 Hz, 0,6 H), 4,07 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 4,04 - 3,80 (m, 2H), 2,78 - 2,65 (m, IH), 2,47 - 2,34 (m, IH), 1,45 (s, 3.6H), 1,37 (s, 5,4H).
U derivat benzilestra prolina (35g) (0,70 g, 1,31 mmol), u rastvoru smeše metanol - etilacetat (10 ml / 10 ml), dodato je 100 mg 10% Pd/C. Stvorena suspenzija je 1,5 h mešana na sobnoj temperaturi pod atmosferom vodonika. Katalizator je odfiltriran preko Millex-HV Millipore (filtraciona jedinica 0,45 pm) a rastvarač je otparenin vacuo.Dobijen je kvantitativan prinos željene kiseline 35h (0,59 g).
<l>HNMR (CDCI3) rotameri 70 : 30, 5 8,06 (d, J = 9,5 Hz, 0,3H), 8,01 (d, J = 9 Hz, 0,7H), 7,56 (d, J - 2 Hz, IH), 7,44 (bs, 0.7H), 7,41 (bs, 0,3H), 7,24 (dd, J = 9 i 2,5 Hz, IH), 5,31 - 5,25 (m, IH), 4,67 (t, J = 7,5 Hz, 0.7H), 4,55 (t, J = 7,5 Hz, 0.3H), 4,08 (s, 3H), 3,95 (s, 3H), 4,04 - 3,80 (m, 2H), 2,83 - 2,72 (m, IH), 2,71 - 2,47 (m, IH), 1,46 (s,9H).
So amina 351 (215 mg, 1,21 mmol), u 7 ml acetonitrila tretirana je sa 0,95 ml DIEA (5,45 mmol). Taj rastvor je zatim dodat u rastvor kiseline 35h (590 mg, 1,32 mmol) i TBTU (389 mg, 1,21 mmol), u 5 ml CH3CN pa je dobijen rastvor mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je uklonjenin vacuo aostatak je razblažen sa etilacetatom, dvaput je opran sa zasićenim rastvorom natrijum-bikarbonata, jedanput sa rastvorom soli, pa je osušen preko MgSO,*. Rastvarač je uklonjenin vacuoa ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (75:25 AcOEt - heksan) dajući 527 mg (prinos 70%) željenog dipeptida (35j).
<»>H NMR (CDCI3) 5 8,01 (d, J = 9 Hz, IH), 7,55 (d, J = 2,5 Hz, IH), 7,45 (s, IH), 7,22 (dd, J = 9 i 2,5 Hz, IH), 5,81 - 5,71 (m, IH), 5,36 - 5,28 (m, 2H), 5,18 - 5,12 (m, IH), 4,61 - 4,45 (m, IH), 4,07 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 3,91 - 3,74 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,99 - 2,84 (m, IH), 2,49 - 2,34 (m, IH), 2,20- 2,08 (m, IH), 1,97 -1,84 (m, IH), 1,58 -1,52 (m, IH), 1,44 (s, 9H).
Diestar 35j (716 mg, 1,25 mmol) u rastvoru smeše THF : MeOH (1,5 ml -1,5 ml), ohlađen je na 0 °C pre tretiranja sa IM vodenim rastvorom NaOH (1,25 ml, 1,25 mmol). Posle 1 h mešanja na 0 °C, dodate su 3 kapi glacijalne sirćetne kiseline radi neutralisanja NaOH. Rastvarači su uklonjeniin vacuoa jedinjenje je osušeno pomoću pumpe (vakuuma) u roku nekoliko sati.
Rastvor natrijumove soli kiseline 35k (1,25 mmol) i Et3N (0,19 ml, 1,36 mmol), u 8 ml THF, ohlađen je na 0 °C pa je dodat izobutil hloroformijat (0,18 ml, 1,39 mmol). Posle 40 min dodat je điazometan (9 ml, 6,30 mmol) pa je dobijeni rastvor mešan 30 min na 0 °C a onda 2 h na sobnoj temperaturi. Rastvarači su uklonjeniin vacuo.Ostatak, razblažen sa etilacetatom, opran je dvaput sa zasićenim rastvorom NaHC03, jedanput sa rastvorom soli, pa je osušen MgS04, rastvarač je otparenin vacuoi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (50 : 50 heksan/- AcOEt) dajući 378 mg (prinos 52%) očekivanog diazoketona 351.
<!>H NMR (CDC13) 5 8,00 (d, J = 9 Hz, IH), 7,42 (s, IH), 7,35 (d, J = 2,5 Hz, IH), 7,20 (dd, J = 9 i 2,5 Hz, IH), 6,92 (s, IH), 5,81 - 5,71 (m, IH), 5,35 - 5,28 (m, 3H), 5,17 -
5,13 (m, IH), 4,61 - 4,40 (m, 1H0, 3,97 (s, 3H), 3,96 - 3,74 (m, 2H), 3,72 (s, 3H) 2,94 - 2,38 (m, 2H), 2,18 - 2,06 (m, IH), 1,98 -1,84 (m, IH), 1,57- 1,52 (m, IH), 1,42 (s, 9H).
U ohlađen (0 °C) rastvor diazoketona 351 (0,37 g, 0,642 mmol), u 15 ml THF, dodato je 0,25 ml 48% HBr. Dobijeni žut rastvor je mešan 1 h na 0 °C. Reakciona smeša je razdeljena između etilacetata i zasićenog rastvora NaHC03. Organska faza je oprana još jednom sa NaHC03pa je osušena sa NaS04- Posle otparavanja rastvararačain vacuo,izolovano je 0,36 g (prinos 90%) a-bromoketona 35m. a-bromoketon 35m (170 mg, 0,271 mmol), u 10 ml izopropanola, tretiran je sa l-acetil-2-tioureom (64 mg, 0,542 mmol). Dobijeni rastvor je zagrevan 1 h na 75 °C. Rastvarč je uklonjenin vacuo.Ostatak je razblažen sa etilacetatom i dvaput opran sa zasićenim rastvorom NaHC03, jedanput sa rastvorom soli pa je osušen preko MgS04. Otparavanjem rastvaračain vacuodobijeno je 182 mg (> 100%) sirovog materijala 35n.
Dipeptid 35n(145 mg, 0,223 mmol) tretiran je sa 3 ml 4M rastvora HC1 u dioksanu. Dobijeni rastvor je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Rastvarači su uklonjeniin vacuo aostatak je sušen pomoću pumpe (vakuuma).
So amina 35o, u 5 ml CH3CN, tretirana je sa 195 pl (1,12 mmol) DIEA. Taj rastvor je zatim dodat u rastvorBoe- terc -butilglicina(103 mg, 0,446 mmol) i HATU (186 mg, 0,489 mmol), u 3 ml CH3CN. Reakciona smeša je mešana tokom noći na sobnoj temperaturi. CH3CN je otparenin vacuo.Ostatak razblažen sa etilacetatom opran je dvaput sa zasićenim rastvorom NaHC03, jedanput sa rastvorom soli pa je osušen sa MgS04. Posle uklanjanja rastvarača, dobijeno je 274 mg sirovog tripeptida 35p (> 100%).
Tripeptid 35p (56 mg, 0,0733 mmol), u 4 ml 4M rastvora HC1 u dioksanu, mešan je 2 h na sobnoj temperaturi. Rastvarač je uklonjenin vacuopa je ostatak osušen pomoću pumpe.
Dobijena so amina rastvorena je u 4 ml CH2CI2pa je tretirana sa 0,13 ml DIEA (0,746 mmol) a zatim sa 26 mg trifozgena (0,0876 mmol). Posle 3 h inkubacije, dodat je 1,2,2-trimetilpropilamin (20 mg, 0,146 mmol) (sintetizovan kao što su opisali Moss N., Gauthier J., Ferland J.M., Feb. 1995, SvnLett.( 2),142 - 144). Ledeno kupatilo je uklonjeno a reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. CH2C12je otparenin vacuo.Ostatak, razblažen sa etilacetatom, opran je dvaput sa zasićenim rastvorom NaHC03, jedanput sa rastvorom soli, pa je osušen sa MgS04dajući 60 mg (« 10%) željene uree 35q.
Rastvor metilestra 35q (57 mg, 0,0721 mmol) u smeši THF : H20 (2,5 ml: 1 ml) tretiran je sa čvrstim LiOHH20 (25 mg, 0,595 mmol) pa je dodat 1 ml MeOH da bi se rastvor izbistrio. Posle 4 h mešanja na sobnoj temperaturi izvršeno je neutralisanje dodavanjem IM rastvora HC1. Rastvarači su uklonjeniin vacuoa ostatak je prečišćen pomoću preparativne hromatografije. Jedinjenje rastvoreno u 2,5 ml MeOH, injektovano je u Cig kolonu sa reverznom fazom, Whatman Partisil 10-ODS-3 (2,2 x 50 cm). Program prečišćavanja: linearni gradijent sa 20 ml/nm,X220 nm, injektovano od 10% A do 60% A za 60 min. A: 0,06% TFA/CH3CN; B: 0,06% TFA/H20. Frakcije su analizirane pomoću analitičke HPLC. Sakupljeni proizvod je liofiliziran, dajući 15 mg jedinjenja 333 kao prljavo-bele čvrste supstance (prinos 27%).
'H NMR: (DMSO-d6) 6 8,88 (s, 0,2H), 8,84 (d, J = 4,5 Hz, 0,2H), 8,68 (d, J = 8,5 Hz, 0, H), 8,56 (s, 0,8H), 8,40 - 8,13 (m, 1,5H), 7,96 (d, J = 9,0 Hz, 0,2H), 7,72 - 7,44 (m, 2,4H), 7,35 - 7,09 (m, 1,2H), 6,98 (d, J = 9 Hz, 0,2H), 6,15 (d, J = 9Hz, 0,2H), 6,06 (d, J = 9 Hz, 0,8H), 5,93 (d, J = 9,5 Hz, 0,24H), 5,86 (d, J = 9 Hz, 0,8H), 5,79 -5,67 (m, IH), 5,69 - 5,44 (m, IH), 5,24 - 5 14 (m, IH), 5,09- 5,01 (m, IH), 4,50 -4,35 (m, 2H), 4,24 (d, J = 9,0 Hz, 0,2H), 4,20 (d, J = 9,0 Hz, 0,8H), 4,06 - 3,98 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,77 - 3,60 (m, 2H), 2,58 - 2,50 (m, IH), 2,33 - 2,28 (m, IH), 2,22 (s, 2,4H), 2,21 (s, 0,6H), 2,02 (q, J = 9 Hz, IH), 1,56 - 1,38 (m, IH), 1,28 -1,22 (m, IH), 0,97 (s, 9H), 0,83 (d, J = 6 Hz, 3H), 0,72 (s, 9H).
MS(FAB) 778,3 (M + H)<+>, 776,3 (M - H)-.
PRIMER 36
Kloniranje, ekspresija i prečišćavanje NS3 proteaze rekombinantnog HCV tipa lb
Serum pacijenta inficiranog HCV-om je nabavljen preko spoljnih saradnika (Bernard Willems MD, Hopital St-Luc, Montreal, Canada i Dr. Donald Murphy, Laboratoire de Sante Publique du Quebec, Ste-Anne de Bellevue, Canada). Napravljena matrica cDNK HCV genoma pune dužine, konstruisana je od fragmenata DNK koji su dobijeni u procesu reverzne transkripcije i reakciji lančanog umnožavanja (RT-PCR), na osnovu RNK iz seruma i korišćenjem specifičnih prajmera selektovanih na osnovu homologije me u ostalim genotipovima lb sojeva. Na osnovu određivanja cele genomske sekvence, genotip lb je svrstan u HCV izolat, prema klasifikaciji Simmondsa sa saradnicima( J.Clin. Microb., (1993), 31, p.1493-1503). Za sekvencu amino kiselina nestrukturnog regiona, NS2-NS4B, pokazano je da je preko 93% identična genotipu lb HCV-a (izolata BK, JK i 483) i 88% identična genotipu la HCV-a (HCV-1 izolat). Fragment DNK koji kodira prekurzorski poliprotein (NS3/NS4A/NS4B/NS5A/NS5B) dobijen je PCR metodom i potom je unet u eukariotski ekspresioni vektor. Nakon prolazne transfekcije, obrada poliproteina koja se vrši posredstvom NS3 proteaze HC virusa, pokazana je prisustvom zrelog NS3 proteina, Western blot analizom. Zreli NS3 protein nije primećen prilikom ekspresije prekurzorskog poliproteina koji sadrži mutaciju S1165A, koja inaktivira NS3 proteazu, što potvrđuje funkcionalnost NS3 proteaze HCV-a.
DNK fragment koji kodira rekombinantnu NS3 proteazu HCV-a (amino kiseline 1027 do 1206) kloniranje u bakterijski ekspresioni vektor pETlld. Ekspresija NS3 proteaze uE. coli BL21(DE3)pLysSje indukovana inkubacijom sa lmM IPTG, 3 h na 22 C. Tipična fermentacija (18 lit) daje odprilike 100 g stelje (wet cell paste). Ćelije su resuspendovane u puferu za lizu (3,0 ml/g) koji sadrži 25 mM natrijum-fosfat, pH 7,5, 10% glicerol (v/v), 1 mM EDTA, 0,01% NP-40 i čuvane su na -80 C. Ćelije su otopljene i homogenizovane a zatim im je dodat 5 mM DTT. Potom su homogenatu dodati magnezijum-hlorid i DNKaza u finalnim koncentracijama od 20 mM, odnosno 20 pg/ml. Nakon inkubacije od 25 minuta na 4 °C, homogenat je sonifikovan i centrifugiran na 15.000 x g 30 minuta na 4 °C. Zatim je pH supernatanta podešena na 6,5 pomoću IM rastvora natrijum-fosfata.
Dodatni stupanj, hromatografija na gelu, uveden je u dvostepenu postupak za prečišćavanje, opisan u WO 95/22985 (ovde uvrštena u reference). Ukratko, supernatant bakterijskog ekstrakta je unet u SP HiTrap kolonu (Pharmacia), koja je predhodno ekvilibrisana pri protoku od 2 ml/min, u puferu A (50 mM natrijum-fosfat, pH 6,5, 10% glicerol, 1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0,01% NP-40). Kolona je potom isprana puferom A koji sadrži 0,15 M NaCl i proteaza je eluirana primenom 10 volumena kolone linearnog gradijenta, od 0,15 do 0,3 M NaCl. Frakcije koje su sadržavale NS3 proteazu su sjedinjene i razblažene tako daje finalna koncentracija NaCl iznosila 0,1 M. Enzim je dalje prečišćen na HiTrap Heparin koloni (Pharmacia) ekvilibrisanoj u puferu B (25 mM natrijum-fosfat, pH 7,5,10% glicerol, 5 mM DTT, 0,01% NP-40) .Uzorak je nanošen pri protoku od 3 ml/min. Kolona je zatim isprana puferom B koji sadrži 0,15 M NaCl, pri brzini protoka od 1,5 ml/min. Dvostepena ispiranja su izvođena u prisustvu pufera B koji je sadržavao 0,3 ili IM NaCl. Proteaza je oporavljena ispiranjem sa 0,3M rastvorom NaCl, trostruko je razblažena rastvorom B, a zatim ponovo naneta na HiTrap Heparin kolonu i eluirana puferom B sa 0.4M NaCl. Konačno, frakcija koja sadrži NS3 proteazu je naneta na Superdex 75 HiLoad 16/60 kolonu (Pharmacia) koja je ekvilibrisana u puferu B sa 0,3M NaCl. Čvistoća NS3 proteaze HC virusa dobijena iz sakupljenih frakcija procenjena je na više od 95%, metodom SDS elektroforeze na poliakrilamidnom gelu, a zatim denzitometrijskom analizom.
Enzim je čuvan na -80 °C a otapan je na ledu neposredno pre upotrebe.
Primer 37
Radiometrijski test, recombinanta NS3 proteaza HCV-a / peptidni NS4A kofaktor
Enzim je kloniran, eksprimiran i pripremljen po protokolu opisanom u primeru 36. Enzim je čuvan na -80 °C a topljen je na ledu i rastvaran neposredno pre upotrebe u puferu za test, koji sadrži peptidni kofaktor NS4A
Supstrat DDrVPC-SMSYTW koji je korišćen u radiometrijskom testu NS3 proteaza/NS4A peptidni kofaktor, sekvencu DDrVPC-SMSYTW, enzim je sekao između cisteinskih i serinskih ostataka. Sekvenca DDrVPC-SMSYTW odgovara normalnom mestu sečenja (obrade) NS5A/NS5B, na kome je cisteinski ostatak u P2 zamenjen prolinom. Peptidni supstrat DDPVPC-SMSYTW i obeleživač biotin-DDIVPC-SMS[<125>I-Y]TW, inkubirani su sa rekombinantnom NS3 proteazom i sa NS4A peptidnim kofaktorom KKGSVVIVGRIILSGRK (molarni odnos, enzim : kofaktor, 1: 100), sa i bez inhibitora. Odvajanje supstrata od proizvoda je izvođeno dodavanjem avidinom obloženih agaroznih kuglica smeši za test, a zatim filtracijom. Količina proizvoda SMS[<125>I-Y]TW nađena u filtratu omogućava izračunavanje
procenta konverzije supstrata i procenta inhibicije.
A. Reagensi
Tris i Tris-HCl (Ultra Pure) su nabavljeni od Gibco-BRL-a. Glicerol (Ultra Pure), MES i BSA su kupljeni u Sigmi. TCEP je nabavljen od Pierce-a, DMSO od Aldrich-a, a NaOH od Anachemia.
Pufer za test: 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 30% (mas./v) glicerol, 1 mg/ml BSA, 1 mM TCEP (TCEP se dodaje neposredno pre upotrebe iz IM osnovnog (stok) rastvora u vodi).
Supstrat: DDIVPC-SMSYTW, 25 uM finalne koncentracije (od 2 mM osnovnog rastvora u DMSO čuvan na -20 °C kako bi se izbegla oksidacija).
Obeleživač: redukovani monojodirani supstrat biotin-DDrVPC-SMS[<125>I-Y]TW (~1 nM finalne koncentracije).
NS3 proteaza tipa lb HCV-a, 25 nM finalne koncentracije (od osnovnog rastvora u 50 mM natrijum-fosfata, pH 7,5, 10% glicerol, 300 mM NaCl, 5 mM DTT, 0,01% NP-40).
NS4A peptidni kofaktor: KKGSVVTVGRIILSGRK, 2,5 mM finalne koncentracije (od 2 mM osnovnog rastvora u DMSO-u, čuvano na -20 °C).
B. Protokol
Test je izveden u polistirenskim mikrotitar pločama sa 96 udubljenja (sudića) od Costar-a. Svako udubljenje je sadržavalo: 20 pl supstrata / obeleživač u puferu za test; 10 pl + inhibitora u 20% DMSO / pufer za test;
10 ul NS3 proteaze lb / NS4 peptidni kofaktor (molarni odnos 1:100).
Šlepa proba (bez inhibitora i bez enzima) i kontrola (bez inhibitora), takođe su pripremljeni na istoj ploči za test.
Enzimska reakcija je otpočela dodavanjem enzima/peptidnog rastvora NS4A a zatim je smeša za test inkubirana 40 minuta na 23 °C, sa blagim mućkanjem. Zatim je dodato deset (10) pl 0.5M NaOH i 10 ul IM MES, pll 5,8, radi prekidanja enzimske reakcije.
Dvadeset (20) pl avidinom obloženih agaroznih kuglica (kupljenog od "Pierce-a") je dodato u filtracionu ploču Milipore MADP N65. Test smeša, predhodno "presečena" (prekinuta), prebačena je u filtracionu ploču i inkubirana 60 minuta na 23 °C, uz blago mešanje.
Ploče su filtrirane korišćenjem Milipore MultiScreen Vacuum Manifold Filtration aparature, i 40 ml filtrata je prebačeno u neprozirne mikrotitar ploče sa 96 udubljenja koje su sadržavale svaka po 60 pl scintilacione tečnosti.
Filtrati su mereni Packard TopCunt instrumentom, korišćenjem postupka za rad sa<125>I, u tečnosti, u trajanju od 1 minuta.
Procenat inhibicije je izračunavan prema sledećoj formuli:
100 - [ (vrednost^ - vrednos<t>siepepr) /(vrednost^ - vrednostslepepr.)<x>100 ]
Nelinearna kriva koja odgovara Hilovom modelu upotrebljena je za podatke inhibicija/koncentracija, a 50% efektivne koncentracije (IC50) je izračunato upotrebom SAS softvera (Statistical Sofhvare System; SAS Institute, Inc. Cary, N.C.).
Primer 38
Test heterodimernog proteina NS3-NS4A pune dužine
Nekodirajući NS2-NS5B-3' region, kloniran je pomoću RT-PCR-om u vektor pCR®3 (Invitrogen), upotrebom RNK izolovane iz seruma individua zaraženih HCV-om genotipa lb (obezbeđenih od Dr. Bernard Willems Hopital St-Luc, Montreal, Quebec, Canada). NS3-NS4A DNK region je zatim PCR-om subkloniran u ekspresioni vektor HTa baculo-virusa pFastBac™ (Gibco/BRL). Vektorska sekvenca sadrži i region koji kodira 28-osta-tak N-terminalne sekvence, koja sadrži heksahistidinski dodatak. Baculovirusni Bac-to-Bac™ ekspresioni sistem (Gibco/BRL) je korišćen za proizvodnju baculovirusnog rekombinanta. Infekcijom IO<6>Sf21 ćelija/ml sa rekombinantom baculovirusa pri višestrukoj infekciji od 0,1 - 0,2 pri 27 °C, bili su eksprimirani zreli NS3 pune dužine i NS4A heterodimerni protein (His-NS3-NS4AFL). Inficirana kultura je pokupljena 48 - 64 časova kasnije centrifugiranjem na 4 °C. Ćelijski talog je homogenizovan u 50 mM NaP04, pH 7,5, 40% glicerola (mas./v), 2 mM p-merkaptoetanola, u prisustvu koktela inhibitora proteaze. His-NS3-NS4AFL je zatim ekstrahovan iz ćelijskog lizata sa 1,5 % NP-40, 0,5 % Triton X-100, 0,5M NaCl, i tretiran DNKazom. Nakon ultracentrifugiranja rastvoreni ekstrakt bio je razblažen 4 puta i nanetna Hi-Trap Ni-helatacionu kolonu (Pharmacia).
His-NS3-NS4AFL je eluiran u >90% čistom obliku (sudeći po SDS elektroforezi na poliakrilamidnom gelu), korišćenjem 50 - 400 mM gradijenta imidazola. His-NS3-NS4AFL je čuvan na -80 °C u 50 mM natrijum-fosfatu, pH 7,5, 10 % (mas./v) glicerolu, 0,5M NaCl, 0,25 mM imidazolu, 0,1 % NP-40. Otopljavan je na ledu i razblaživan neposredno pre upotrebe.
Aktivnost proteaze His-NS3-NS4AFL je bila određena u 50 mM Tris-HCl, pH 8,0, 0,25 M natrijum citrata, 0,01 % (mas./v) n-dodecil-6-D-maltozide, 1 mM TCEP. Po pet (5) pM potpuno "utišanog" supstrata antranilil-DDIVPAbu[C(0)-0]-AMY(3--N02)TW-OH u prisustvu različitih koncentracija inhibitora, inkubirano je sa 1,5 nM His-NS3-NS4AFL u trajanju od 45 minuta na 23 °C. Finalna koncentracija DMSO-a nije prelazila 5,25 %. Reakcija je prekinuta dodavanjem 1 M MES, pH 5,8. Fluorescencija N-terminalnog produkta praćena je na fluorometru (Perkin-Elmer LS-50B), opremljenog sa čitačem za mikrotitar ploče sa 96 udubljenja (talasna dužina pobuđivanja: 325 nm, emisiona dužina talasa: 423 nm).
Procenat inhibicije je računat po sledećoj formuli:
100 - [(vrednostjnh- vrednostsiepepI-)/(vre<d>nostcti- vrednostsiepepr ) x 100 ]
Nelinearna kriva koja odgovara Hilovom modelu upotrebljena je za podatke inhibicija/koncentracija, i 50% efektivne koncentracije (IC50)Je izračunato upotrebom SAS softvera (Statistical Sofhvare Svstem; SAS Institute, Inc. Cary, N.C.).
Primer 39
Test baziran na ćelijama sa NS3 proteazom
Ovaj test je izveden sa sa Huh-7 ćelijama, humane ćelijske linije proizvedene od hepatoma, kotransfektovane sa 2 DNK konstrukta: - jednim koji eksprimira poliprotein koji sadrži nestrukturne proteine HCV-a fuzionisane u tTA sledećim redosledom: NS3-NS4A-NS4B-NS5A-tTA (nazvanim NS3); - drugim koji eksprimira reporter protein luči alkalnu fosfatazu pod kontrolom tTA (nazvanim SEAP).
Poliprotein mora biti isečen NS3 proteazom kako bi zreli proteini bili oslobođeni. Usled oslobađanja zrelih proteina, veruje se da virusni proteini formiraju kompleks na membrani endoplazmatičnog retikuluma, dok tTA migrira u jedro i transaktivira SEAP gen. Zbog toga, smanjenje proteoliričke aktivnosti NS3 poliproteina trebalo bi da dovede do smanjenja nivoa zrelog tTA
i do pratećeg pada aktivnosti SEAP-a.
U cilju kontrole drugih efekata jedinjenja, izvršene su paralelne transfekcije gde je konstrukt koji eksprimira samo tTA (nazvan tTA) bio kotransfektovan sa SEAP konstruktom tako da je aktivnost SEAP-a nezavisna od proteolitičke aktivnosti NS3 poliproteina.
Protokol testa: Huh-7 ćelije gajene u CHO-SFMII + 10% FCS (fetalni goveđi serum) su kotrnsfektovane sa bilo NS3 i SEAP ili tTA i SEAP, korišćenjem FuGene protokola (Boehringer Mannheim). Nakon 5 sati, na 37 °C, ćelije su oprane, fripsinizovane i zasađene (80.000 ćelija/udubljenju) u mikroititar ploče sa 96 udubljenja koja su sadržavala opseg koncentracija jedinjenja koje se testira. Nakon 24-časovne inkubacije uziman je uzorak medijuma pa je u tom alikvotu merena aktivnost SEAP-a, korišćenjem Phospha-Light komercijalnog kompleta (Tropix).
Analiza procenta inhibicije aktivnosti SEAP-a, u zavisnosti od koncentracije jedinjenja, vršena je sa SAS softverom kako bi se dobio EC50.
Toksičnost sastojka (TC50) je tada utvrđena korišćenjem MTT testa na sledeći način: 20 pl MTT rastvora (5 mg/ml medijuma) je dodato u svako udubljenje na mikrotitar ploči i inkubirano je 4 sata, na 37 °C;
medijum je uklonjen i dodato je 50 pl 0.01M HC1 + 10%Triton X-100;
nakon mućkanja na sobnoj temperaturi bar 1 čas, OD svakog udubljenja je očitana pri talasnoj dužini od 595 nm.
TC50je izračunat na isti način kao i EC50
Primer 40
Specifičnost testova
Specifičnost jedinjenja je određivana prema raznolikosti serinskih proteaza: humane leukocitne elastaze, elastaze pankresa svinje i pankreasnog a-himotripsina govečeta i jedne cisteinske proteaze: humanog katepsina B jefre. U svim slučajevima sa mikrotitar pločama sa 96 udubljenja, upotrebljen je protokol koji koristi kolorimetrijski p-nitroanilin (pNA), supstrat specifičan za svaki korišćeni enzim. Svaki test je sadržavao jednočasovnu preinkubaciju sa inhibitorom enzima na 30 °C, praćenu dodavanjem supstrata i hidrolize do * 30% konverzije, merene na UVThermomax<®>čitaču mikrotitar ploča. Koncentracije supstrata su održavane što je niže moguće u poređenju sa KMu cilju smanjenja supstratne kompeticije. Koncentracije jedinjenja su varirale od 300 do 0,6 pM u zavisnosti od njihove potencije.
Konačni uslovi za svaki test su bili:
• 50 mM Tris-HCl pH 8,0,5 M Na2S04, 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 3% DMSO, 0,01%Tween-20 sa; • [100 uM Succ-AAPF-pNA i 250 pM a-himotripsina], [133 pM Succ-AAA-pNA i 8 nM elastaze svinje], [133 pM Succ-AAV-pNA i 8 nM elastaze leukocita]; ili . [100 mM NaHP04pH 6, 0,1 mM EDTA, 3% DMSO, 1 mM TCEP, 0,01% Tween-20, 30 pM Z-FR-pNA i 5 nM katepsina B (enzim iz stoka je pre upotrebe aktiviran u puferu koji sadrži 20 mM TCEP-a)].
Reprezentativni primer prikazanje u sledećem, za elastazu pankreasa svinje:
U polistirenskoj mikrotitar ploči sa 96 udubljenja sa ravnim dnom korišćenjem Biomek poluautomatske pipete (Beckman) dodato je: • 40 pl pufera za test (50 mM Tris-HCl pH 8, 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA); • 20 pl rastvora enzima (50 mM Tris-HCl pH 8, 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 0,02 % Tween-20, 40 nM pankreasne elastaze svinje); i • 20 pl rasvora inhibitora (50 mM Tris-HCl pH 8, 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 0,02%Tween-20,1,5 mM -0,3 pM inhibitora, 15 % (v/v) DMSO).
Nakon preinkubacije od 60 min, pri 30 °C, dodato je 20 pl rastvora supstrata (50 mM Tris-HCl, pH 8, 0,5 M Na2S04, 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 665 pM Succ--AAA-pNA) u svako udubljenje, pa je reakcioni sistem zatim inkubiran na 30 °C u trajanju od 60 min, posle čega je očitana apsorpcija na Thermomax<®>UV čitaču mikrotitar ploča. Redovi udubljenja su određeni kao kontrole (bez inhibitora) i kao slepe probe (bez inhibitora i bez enzima).
Sledeće dvostruko razblaživanje rastvora inhibitora je izvedeno na posebnoj ploči sa 50 mM Tris-HCl pH 8, 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 0,02 % Tween-20, 15 % DMSO, korišćenjem poluautomatske pipete. Svi ostali testovi specifičnosti su izvršeni na sličan način.
Procenat inhibicije je računat prema sledećoj formuli:
Nelinearna kriva koja odgovara Hilovom modelu upotrebljena je za podatke inhibicija/-koncentracija, a 50 % efektivne koncentracije (IC50) je izračunato upotrebom SAS softvera (Statistical Softv/are System; SAS Institute, Inc. Cary,
N.C.).
TABELE JEDINJENJA
U tabelama koje slede prikazana su jedinjenja koja predstavljaju pronalazak. Jedinjenja prema pronalaska su testirana bilo u jednom ili u oba testa, primera 37 i 38, i nađeno je da su aktivna sa IC50ispod 50 pM( A) ;ispod 5 pM( B)ili ispod
0,5 pM ( Q.
Aktivnost u ćelijama i specifičnost.
Reprezentativna jedinjenja prema pronalasku su takođe testirana u surogat testu, primera 39, baziranom na ćelijama i u jednom od nekoliko testova primera 40. Na primer, za jedinjenje 601, iz tabele 6, pokazano je da ima IC50od 50 nM u testu iz primera 37, a 30 nM u testu iz primera 38. EC50kako je određen u testu iz primera 39 iznosi 8,2 pM. Na osnovu specifičnosti testova iz primera 40 nađeno je da isto jedinjenje ima sledeću aktivnost: HLE >75 pM; PPE >75 pM; a-Chim. >75 pM; CatB >75 pM. Ovi rezultati ukazuju na to da je ova familija jedinjenja visokospecifična za NS3 proteazu i da su bar neki članovi ove familije aktivni u surogat testu baziranom na ćelijama.
Sledeće skraćenice korišćene su u okviru prikazanih tabela:
MS: podaci masene spektrometrije; Ac: acetil; Bn: benzil; Boe; te/t-butilo-oksikarbonil; cHex: cikloheksil; Chg: cikloheksilglicin (2-amino-2-cikloheksil-sirćetna kiselina); iPr: izopropil; O-Bn: benziloksi; Ph: fenil;t- Bu: tert-butil:Tbg: te/f-butilglicin; 1- ili 2-Np: 1- ili 2-naftil; 1- ili 2-NpCH20:1, ili 2-naftilmetoksi.

Claims (79)

1. Jedinjenje formule (I), njegovi racemati, dijastereoizomeri i optički izomeri formule u kojoj B je H, grupa Cg ili C^ aril, C746aralkil; Het ili (niži alkil)-Het, svaka od njih eventualno supstituisana sa C^g alkilom; Ci_6alkoksi; Cj.g alkanoil; hidroksi; hidroksialkil; halogeno; halogenoalkil; nitro; cijano; cijanoalkil; amino grupa eventualno supstituisana sa Ci_6alkilom; amido; ili (niži alkil) amid; ili, B je karboksil formule R4-0-C(0)-; amid formule R4-N(Rs)-C(0)-; tioamid formule R4-N(R5)-C(S)-; ili sulfonil formule R^SC^gde R4je grupa, (i) C^oalkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, Cj.g alkanoil, hidroksi, Ci_g alkoksi, amino eventualno mono-ili di-supstituisanom sa Ci_6alkilom, amido ili (niži alkil) amid; (ii) C3.7cikloalkil, C3.7cikloalkoksi, ili C4.10alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom hidroksi, karboksil, (C^g alkoksi)karbonil, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Cj_6alkilom, amido, ili (niži alkil)amid; (iii) amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa C^g alkilom; amido; ili (niži alkil) amid; (iv) Cg ili Cjoaril ili C7_ig aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Ci.6alkil, hidroksi, amido, (niži alki!)amid, ili amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C^g alkilom; ili (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom C^g alkil, hidroksi, amido, (niži alkil) amid, ili amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Ci.g alkilom; R5je H ili C^g alkil; ili B je acil derivat formule R4-C(0)-; gde R4je grupa, (i) C^o alkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, Ci_g alkanoil, hidroksi, C^g alkoksi, ili amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Cj_g alkilom; (ii) C3.7cikloalkil, C3.7cikloalkoksi, ili C^oalkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom hidroksi, karboksil, (C^g alkoksi) karbonil, ili amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C^g alkilom; (iii) amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci_g alkilom; (iv) Cg ili Cioaril ili C7.16aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Ci.g alkil, hidroksi, ili amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C^g alkilom; ili (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom Cj.6alkil, hidroksi, ili amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Ci-6alkilom; uz uslov, da kada B jeste amid ili tioamid, R4nije cikloalkoksi grupa; a Yje H ili C^g alkil grupa; R<3>jeCh8alkil, C3.7cikloalkil, ili C440alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom hidroksi, C^g alkoksi, C^g tioalkil, amido, (niži alkil)amido, Cg ili Ci0 aril, ili C7.16aralkil; R2je CH2-R20, NH -R2o>0 -R2o ili S -R20, gde R20jeste zasićena ili nezasićena C3.7cikloalkil ili C4.10(alkilcikloalkil) grupa, od kojih su sve eventualno mono-, di- ili tri-supstituisane sa R21, ili, R20 je C6ili C10aril ili C7.14aralkil grupa, sve eventualno mono-, di- ili tri-supstituisane sa R2i, ili, R2oje Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno mono-, di- ili tri- supstituisane sa R2i, gde je svaka R2inezavisno, grupa Cj.6alkil; C^g alkoksi; niži tioalkil; sulfonil; N02; OH; SH; halogeno; halogenoalkil; amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa grupom Ci.g alkil, Cg ili Cioaril, C744aralkil, Het ili (niži alkil)-Het; amido eventualno mono-supstituisana sa grupom Ci_6alkil, C6ili C10aril, C7.14aralkil, Het ili (niži alkil)-Het; karboksil; karboksi(niži alkil); C6ili Cioaril, C7.14aralkil ili Het, a pomenute aril, aralkil ili Het grupe su eventualno supstituisane sa R22; gde R22je grupa Ci_6alkil; C3.7cikloalkil; C^g alkoksi; amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci_6alkilom; sulfonil; (niži alkil) sulfonil; N02; OH; SH; halogeno; halogenoalkil; karboksil; amid; (niži alkil) amid; ili Het eventualno supstituisan sa Ci_6alkilom, R<1>je H; grupa Ci_6alkil, C3_7cikloalkil, C? alkenil, ili C? alkinil, sve eventualno supstituisane sa halogenom; gde (niži) alkil, ili sam ili u kombinaciji sa drugim substituentom, označava aciklični, pravi ili razgranati lanac alkil supstituenata koji sadrže od 1 do 6 atoma ugljenika; amino aralkil, ili sam ili u kombinaciji sa drugim radikalom, označava amino grupu supstituisanu sa C^g aralkil grupom; (niži alkil) amid, ili sam ili u kombinaciji sa drugim radikalom, označava mono supstituisani amid sa Ci_g alkilom; karboksi(niži)alkil, ili sam ili u kombinaciji sa drugim radikalom, označava karboksilnu grupu (COOH) povezanu sa (nižom) alkil grupom kao što je gore definisano; Het je monovalentni radikal izveden uklanjanjem vodonika iz peto-, šesto- ili sedmočlanog zasićenog ili ne zasićenog (uključujući aromatičnog) heterocikla koji sadrži od jednog do četiri heteroatoma odabrana od azota, kiseonika ili sumpora, ili heterocikla kao što je gore definisano spojenog na jedan iE više drugih cikli; i (niži alkil)-Het je heterociklični radikal kao stoje gore definisano za Het vezan preko ravne ili razgranate alkil grupe, gde alkil kao što je gore definisano sadrži od 1 do 6 atoma ugljenika; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar.
2. Jedinjenjeformule I,prema zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde B je grupa C6ili C10aril,C7. l6aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Q.6 alkil, Ci.6alkoksi, Ci_g alkanoil, hidroksi, hidroksialkil, halogeno, halogenoalkil, nitro, cijano, cijanoalkil, amido, (niži alkil) amido, ili amino, eventualno supstituisana sa C^g alkilom; ili Bje grupa Het ili (niži alkil)-Het, sve eventualno supstituisane sa grupom Cw alkil, Ci? alkoksi, C? alkanoil, hidroksi, hidroksialkil, halogeno, halogenoalkil, nitro, cijano, cijanoalkil, amido, (niži alkil) amido, ili amino grupa eventualno supstituisana sa C^ alkilom.
3. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde B je R4-SO2, gde R4 jeste CM alkil; amido; (niži alkil) amid; C6ili Cjoaril C7-14aralkil ili Het, sve eventualno supstituisane sa C^ alkilom.
4. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde B je acil derivat formule Rj-CtO)-, gde je R4grupa (i) Ci.ioalkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, hidroksi ili Cj.6alkoksi, ili amino grupom eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Cj.6alkilom; (ii) C3.7cikloalkil, ili C440alkilcikloalkil, obe eventualno supstituisane sa grupom hidroksi, karboksil, (C^g alkoksi)karbonil, ili amino grupom eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Ci.6alkilom; (iv) Cg ili C10aril ili C7.16aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Cj.6alkil, hidroksi, ili amino grupom eventualno supstituisanom sa C^g alkilom; (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom C1.6alkil, hidroksi, ili amino grupa eventualno supstituisana sa Ci_6alkilom.
5. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde Bje karboksil formule I?4-0-C(0)-, gde je R4grupa (i) Cj.ioalkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, C^g alkanoil, hidroksi, C^g alkoksi, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa grupom C^g alkil, amido ili (niži alkil) amid; (ii) C3.7cikloalkil, C440alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (C^g alkoksi) karbonil, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa grupom Ci_6alkil, amido ili (niži alkil)amid; (iv) C6ili Cioaril ili C7_i6aralkil, eventualno supstituisane sa grupom C^g alkil, hidroksi, amido, (niži alkil)amido, ili amino grupom eventualno mono- ili di-supsti-tuisanom sa C^g alkilom; ili (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom C^g alkil, hidroksi, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa grupom Ci.6alkil, amido ili (niži alkil) amido.
6. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde B je amid formule R4-N(Rs)-C(0)-, gde je R4grupa (0 C1.10alkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, C^g alkanoil, hidroksi, Cj.g alkoksi, amido, (niži alkil) amido, ili amino grupom eventualno mono- ili di-supsittuisanom sa C^g alkilom; (ii) C3.7cikloalkil ili C440alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (Ci_6alkoksi)karbonil, amido, (niži alkil) amido, ili amino grupom even-tualno mono- ili di-supstituisanom sa C^g alkilom; (iii) amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci_3alkilom; (iv) C6ili C10aril ili C7.16aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Ci_6alkil, hidroksi, amido, (niži alkil)amid, ili amino grupom eventualno supstituisanom sa Ci_6alkilom; ili (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom Ci_g alkil, hidroksi, amino eventualno supstituisanom sa grupom Ci_6alkil, amido ili (niži alkil) amid; a Rsje H ili metil grupa.
7. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde B je tioamid formule R4-NH-C(S)-, gde je R4grupa (i) Cj.joalkil eventualno supstituisan sa grupom karboksil, Ci_6alkanoil ili C^g alkoksi; (ii) C3.7cikloalkil ili C4.10alkilcikloalkil, sve supstituisane sa grupom karboksil, (Ci_6alkoksi)karbonil, amino ili amido.
8. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 2, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde B je grupa C6ili C10aril eventualno supstituisana sa grupom Ci.g alkil, C^e alkoksi, Ci_6alkanoil, hidroksi, hidroksialkil, halogeno, halogenoalkil, ni<p>-o, cijano, cijanoalkil, amido, (niži alkil) amid, ili amino grupom eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Ci_6alkilom.
9. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 2, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde B je Het grupa, eventualno supstituisana sa grupom Cj.g alkil, Cj.6alkoksi, Ci.g alkanoil, hidroksi, halogeno, amido, (niži alkil) amid, ili amino grupom eventualno mono- ili di- supstituisanom sa C1.6alkilom.
10. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 4, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde B je acil derivat formule R4-C(0)- gde je R4grupa (i) C140alkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, hidroksi ili Ci_e alkoksi; ili (ii) C3_7cikloalkil iliC^ 1Qalkilcikloalkil, obe eventualno supstituisane sa grupom hidroksil, karboksil, (C^ alkoksi)karbonil, ili (iv) C6ili Cioaril ili C7.i6aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom C^g alkil, hidroksi, ili (v) Het, eventualno supstituisana sa grupom Ci_6alkil, hidroksi, amido ili amino.
11. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 5, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde B je karboksil formule R4-0-C(0)-, gde je R4grupa (i) C^o alkil eventualno supstituisan sa grupom karboksil, C1.6alkanoil, hidroksi, Ci_6alkoksi ili amido, (niži alkil) amid, amino grupom eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Ci.6alkilom; (ii) C3.7cikloalkil, C440alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (CiSalkoksi)karbonil, amido, (niži alkil)amid, amino grupom eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Cj.g alkilom, ili (iv) C6ili Cioaril ili C7.i6aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Cj.6alkil, hidroksi, amino grupom eventualno supstituisanom sa C^g alkilom; ili (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom Ci_g alkil, hidroksi, amido, ili amino grupom eventualno mono-supstituisanom sa Ci_g alkilom.
12. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 6, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde B je amid formule R4-N(R5)-C(0)-, gde je R4grupa (i) Cj^oalkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, Cj.g alkanoil, hidroksi, Cx.6alkoksi, amido, (niži alkil)amid, amino grupom eventualno mono- ili di-supsittuisanom sa C^g alkilom; (ii) C3.7cikloalkil ili C4.10alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (C^g alkoksi)karbonil, amido, (niži alkil)amid, amino grupom eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C^g alkilom; (iii) amino grupa eventualno mono- ili di-supstituisana sa C1.3alkilom, ili (iv) Cg ili C10aril ili C7.16aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Cj.g alkil, hidroksi, amino ili amido eventualno supstituisanom sa Cj.g alkilom; ili (v) Het eventualno supstituisan sa grupom Ci.6alkil, hidroksi, amino ili amido, aRs jeH.
13. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 7, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde B je tioamid formule R4-NH-C(S)-; gde je R4grupa (i) CM0 alkil; ili (ii) C3.7cikloalkil.
14. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 12, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde B je amid formule R4-NH-C(0)-, gde je R4grupa (i) Ci. iq alkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, C^g alkanoil, hidroksi, C^g alkoksi, amido, (niži alkil) amid, amino grupom eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Cj.g alkilom; (ii) Cj.7cikloalkil ili C440alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (C^g alkoksi)karbonil, amido, (niži alkil)amid, amino grupom eventualno mono- ili di- supstituisanom sa Cj.g alkilom; (iv) C6ili C10aril ili C7.16aralkil eventualno supstituisana sa grupom Ci.g alkil, hidroksi, amino ili amido.
15. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde Bje terc-butoksikarbonil (Boe) ili
16. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde Y je H ili metil.
17. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 16, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde Y je H.
18. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde R<3>je grupa Ci_ 8 alkil, C3.7cikloalkil, ili C^ioalkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom hidroksi, Ci_g alkoksi, C1.6tioalkil, acetamido, Cg ili Cio aril ^ C7-16 aralkil.
19. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 18, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde R<3>je bočni lanac ferobutii-glicina (Tbg), Ile, Val, Chg ili:
20. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 19, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde R<3>je bočni lanac Tbg, Chg ili Val.
21. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde R2je S-R2o ili O-R20, gde R20 jeste Cg ili C^ aril, C7.16aralkil, Het ili -CH2-Het, sve grupe eventualno mono-, di- ili tri-supstituisane sa R21, gde R21je grupa C^g alkil; Ci_6alkoksi; niži tioalkil; amino eventualno mono-ili di-supstituisane sa grupom Ci.g alkil, amido eventualno mono-supstituisan sa grupom C1.6alkil, Cg ili C10aril, C744 aralkil, Het ili (niži alkil)-Het grupom; N02; OH; halogeno; uifluorometil; karboksil; Cg ili Ciq aril, C7.14aralkil, ili Het, a pomenute aril, aralkil ili Het eventualno su supstituisane sa R22, gde R22 je grupa Cj.g alkil; C3.7cikloalkil; C^ alkoksi; amino eventualno mono- ili di-supstituisane sa C^g alkilom; (niži alkil) amid; sulfonilalkil; NO2; OH; halogeno; trifluorometil; karboksil ili Het.
22. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 21, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde R21jeste grupa C^alkil; Ci.g alkoksi; amino; di-(niži alkil)amino; (niži alkil)amid; C6ili C10aril, ili Het, a pomenute aril ili Het eventualno su supstituisane sa R22, gde R22jeste grupa C^g alkil; C3.7 cikloalkil; C^g alkoksi; amino; mono- ili di (niži alkil) amino; amido; (niži alkil) amid; halogeno; trifluorometil ili Het.
23. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 22, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde R22jeste grupa Cj.6alkil; C^g alkoksi; halogeno; amino > eventualno mono- ili di- supstituisana sa nižim alkilom; amido; (niži alkil)amid; ili Het.
24. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde R22jeste grupa metil; etil; izopropil, terc-butil; metoksi; hloro; amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa nižim alkilom; amido, (niži ) alkil) amid; ili (niži alkil) 2-tiazol.
25. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 21, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde R2 je odabran iz grupe koju čine:
26. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 21, ili njegova farmaceutski prihvatljiva i so ili estar, gde R2je grupa 1-naftilmetoksi; 2-naftilmetoksi; benziloksi, 1- naftiloksi; 2-naftiloksi; ili hinolinoksi, nesupstituisana, mono- ili di-supstituisana sa R2ikao što je definisano u zahtevu 21.
27. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 26, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde R2je grupa 1-naftilmetoksi; ili hinolinoksi, nesupstituisana,1mono- ili di-supstituisana sa R2ikao što je definisano u zahtevu 21.
28. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 27, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde R2je odabran iz grupe koja se sastoji od:
29. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 26, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde R2je: gde je R21Agrupa Ci_6alkil; Ci_6alkoksi; niži tioalkil; halogeno; amino eventualno mono-supsittuisana sa Cj.fialkilom; ili Cg ili Cjoaril, C7_i6aralkil, ili Het, a pomenuti aril, aralkil ili Het eventualno su supstituisani sa R22, gde je R22grupa C^g alkil, Ci.g alkoksi, amido, (niži alkil)amid, amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa C1.6alkilom, ili Het; a R21Bje grupa C^g alkil, C^g alkoksi, amino, di(Ci_6alkil)amino, (niži alkil)amid, N02, OH, halogeno, trifluorometil ili karboksil.
30. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 29, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde je R21Agrupa Cg ili Cioaril ili Het, sve eventualno supstituisane sa R22kao što je definisano u zahtevu 29.
31. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 30, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde je R21Aodabran iz grupe koju čine:
32. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 29, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde R2je: gde R22Aje C^ alkil; Ci_6alkoksi; ili halogeno; a R2ibje C^g alkil, C^g alkoksi, amino, di(niži alkil) amino, (niži alkil)amid, N02, OH, halogeno, trifluorometil, ili karboksil grupa.
33. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 29, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde R2je: gde je R22Bgrupa C^g alkil, amino grupa eventualno mono-supstituisana sa grupom C^g alkil, amido, ili (niži alkil) amidom; a R21Bje grupa C^g alkil, C^g alkoksi, amino, difniži alkil)amino, (niži alkil)amid, NO2, OH, halogeno, trifluorometil ili karboksil.
34. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 32 ili 33, ili njegova farmaceutski prihvatijiva so ili estar, gde R21Bje grupa C\. q alkoksi, ili di(niži alkil)amino.
35. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 32 ili 33, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde R21Bje metoksi.
36. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde Pl je ciklobutil ili ciklopropil prsten, oba eventualno supstituisana sa Ri, gde Rije H, Ci? alkil, C3.5cikloalkil, ili C2.4alkenil, sve eventualno supstituisane sa halogenom.
37. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 36, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde Pl je ciklopropil a Rjje etil, vinil, ciklopropil, 1 ili 2-bromoetil ili 1 ili 2-bromovinil.
38. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 37, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde Rjje vinil.
39. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 37, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde je Rjna ugljeniku 2 orijentisansynu odnosu na karbonil u položaju 1, prikazano pomoću radikala:
40. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 37, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde je Riu položaju 2 orijentisanantiu odnosu na karbonil u položaju 1, prikazano pomoću radikala:
41. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 37, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde ugljenik 1 imaRkonfiguraciju:
42. Optički izomer jedinjenja formule I, prema zahtevu 41, ili njegova farmaceutski prihvaujiva so ili estar, gde pomenuti Rjsupstituent i karbonil jesu usynorijentaciji sa sledećom apsolutnom konfiguracijom:
43. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 42, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde Rije etil, stoga asimetrični atomi ugljenika u položajima 1 i 2 imajuR, Rkonfiguraciju.
44. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 42, ili njegova farmaceutski prihvaujiva so ili estar, gde Rjje vinil, stoga asimetrični atomi ugljenika u položajima 1 i 2 imajuR, Skonfiguraciju.
45. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar, gde B je grupa Cg ili Cjoaril ili C7_16aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom C^g alkil, Ci_6alkoksi, Ci_6alkanoil, hidroksi, hidroksialkil, halogeno, halogenoalkil, nitro, cijano, cijanoalkil, amido, (niži alkil) amido, ili amino grupom eventualno supstituisanom sa Ci_6alkilom; ili Het ili (niži alkil)-Het, sve eventualno supstisuisane sa grupom Ci.fi alkil, Cx.g alkoksi, Ci.g alkanoil, hidroksi, hidroksialkil, halogeno, halogenoalkil, nifro, cijano, cijanoalkil, amido, (niži alkil) amido, ili amino eventualno supstituisanom sa Ci_6alkilom; ili B je R4-SO2gde je R4prvenstveno grupa amido; (niži alkil)amid; C6ili Cioaril, C744aralkil ili Het, sve eventualno supstituisane sa Ci_g alkilom, ili B je acil derivat formule R4-C(O)- gde R4 jeste grupa (i) Cj.joalkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, hidroksi ili Cj.6alkoksi, ili amino grupom eventualno mono- ili di-supsittuisanom sa Cj.6alkilom; (ii) C3.7cikloalkil ili C440alkilcikloalkil, obe eventualno supstituisane sa grupom hidroksi, karboksil, (Ci.g alkoksi)kabonil, ili amino grupom eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Ch6alkilom; (iv) Cg ili Cioaril ili C7.ig aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom C^g alkil, hidroksi, ili amino grupom eventualno supstituisanom sa Cj.g alkilom; (v) Het ili (niži alkii)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom Ci_g alkil, hidroksi, amino grupom eventualno supstituisanom sa grupom Ci_6alkil, ili amino grupa eventualno supstituisana sa C^g alkilom, ili B je karboksil formule R4-O-C(O)-, gde R4jeste grupa (i) C140 alkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, Ci_6alkanoil, hidroksi, C^g alkoksi, amino grupom eventualno mono- ili di-supstituisanom sa grupom Ci_6alkil, amido ili (niži alkil) amid; (ii) C3.7cikloalkil, C^o alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (Ci_6alkoksi) karbonil, amino grupom eventualno mono- ili di-supsittuisanom sa grupom C^g alkil, amido ili (niži alkil) amid; (iv) C6ili Cioaril ili C7.i6aralkil, eventualno supstituisane sa grupom Ci_g alkil, hidroksi, amido, (niži alkil)amido, ili amino grupom eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C^g alkilom; ili (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom Cj.g alkil, hidroksi, amino grupom eventualno mono- ili di-supsittuisanom sa grupom C^g alkil, amido ili (niži alkil)amido, ili Bje amid formule R4-N(R5)-C(0)-, gde R4je grupa (i) Ci_ioalkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, Ci.6alkanoil, hidroksi, Ci_6alkoksi, amido, (niži alkil)amido, ili amino grupom eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Ci_6alkilom; (ii) C3.7cikloalkil ili C440alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (Ci_6alkoksi) karbonil, amido, (niži alkil) amido, ili amino grupom eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Ci_6alkilom; (iii) amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci_3alkilom; (iv) C6ili C10aril ili C7.16aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom C^g alkil, hidroksi, amido, (niži alkil) amid, ili amino grupom eventualno supstituisanom sa Ci.g alkilom; ili (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupom C^g alkil, hidroksi, amino grupom eventualno supstituisanom sa grupom C^g alkil, amido ili (niži alkil)amid; a R5je H ili metil grupa, ili B je tioamid formule R4-NH-C(S)-, gde R4je grupa (i) Čuoalkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, Cj.g alkanoil ili Q.g alkoksi; (ii) C3.7cikloalkil ili C440alkilcikloalkil, sve supstituisane sa grupom karboksil, (Cj.g alkoksi)karbonil, amino ili amido; Y jeste H ili metil grupa; R<3>je grupa C^.g alkil, C3.7cikloalkil, ili C440 alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom hidroksi, Ci_g alkoksi, Ci_6tioalkil, acetamido, Cg ili Cjo aril ili C7.i6 aralkil; R2je S-R20ili O-R20, gde R20jeste prvenstveno C6ili C10aril, C7_16aralkil, Het ili -CH2-Het, sve grupe eventualno mono-, di- ili tri-supstituisane sa R21, gde R21je grupa Ci_g alkil; C^g alkoksi; niži tioalkil; amino ili amido eventualno mono- ili di-supstituisane sa grupom Ci_6alkil, C6ili C10aril, C7.16aralkil, Het ili (niži alkil)-Het; N02; OH; halogeno; trifluorometil; karboksil; C6ili Cioaril, C7.!g aralkil, ili Het, a pomenute aril, aralkil ili Het eventualno su supstituisane sa R22, gde R22 je grupa C^g alkil; C^ cikloalkil; Ci.g alkoksi; amino; mono- ili di-(niži alkil)amino; (niži alkil)amid; sulfonilalkil; N02; OH; halogeno; trifluorometil; karboksil ili Het; ili R2je odabran iz grupe koja se sastoji od: ili R2je 1-naftilmetoksi; 2-naftilmetoksi; benziloksi, 1-naftiloksi; 2-naftiloksi; ili hinolinoksi, nesupstituisana, mono- ili di-supstituisana sa R2ikao što je gore definisano; a Pl segment je ciklobutil ili ciklopropil prsten, oba eventualno supstituisana sa Ri, gde Ri je grupa C1.3alkil, C3.5cikloalkil ili C2.4alkenil eventualno supstituisana sa halogenom, a pomenuti Rjna ugljeniku 2 orijentisan jesynu odnosu na karbonil u položaju 1, što je prikazano pomoću radikala: ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili estar.
46. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 45, ili njegova farmaceutski prihvatijiva so ili estar, gde je B grupa C6ili C^ aril, eventualno supstituisane sa grupom Cj_6alkil, Ci-g alkoksi, C^g alkanoil, hidroksi, hidroksialkil, halogeno, halogenoalkil, nitro, cijano, cijanoalkil, amido, (niži alkil)amid, ili amino grupom eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C]_6alkilom; ili B je Het eventualno supstituisan sa grupom C].6alkil, Ci.6alkoksi, Ci_6alkanoil, hidroksi, halogeno, amido, (niži alkil) amid, ili amino grupom eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C^g alkilom; ili B je R4-SO2gde R4je Cg ili C10aril, C7.14aralkil ili Het svi eventualno supstituisani sa C^g alkilom; amido; (niži alkil) amid; B je acil derivat formule R4 -C (0)- gde je R4grupa (i) Cj.joalkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, hidroksi ili C^g alkoksi; ili (ii) C3.7cikloalkil ili C440alkilcikloalkil, obe eventualno supstituisane sa grupom hidroksi, karboksil, (Cj.g alkoksi)kabonil; ili (iv) Cg ili Cioaril ili C7.i6aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Ci_6alkil, hidroksi; ili (v) Het eventualno supstituisan sa grupom C^g alkil, hidroksi ili amino; ili B je karboksil formule R4 -O-C(O)-, gde je R4grupa 0) Ci-ioalkil eventualno supstituisan sa grupom karboksil, Ci_g alkanoil, hidroksi, C^g alkoksi, ili amido, (niži alkil)amid, amino eventualno mono- ili di-supsittuisanom sa C^g alkilom; (ii) C3.7cikloalkil, C440alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (C^g alkoksi)karbonil, amido, (niži alkil) amid, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C^g alkilom; ili (iv) Cg ili Cio aril ili C7.ig aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Ci_6alkil, hidroksi, amino eventualno supstituisanom sa Ci.g alkilom; ili (v) Het ili (niži alkil)-Het, obe eventualno supstituisane sa grupomChQalkil, hidroksi, amido, ili amino eventualno mono-supstituisanom sa Ci_g alkilom; ili Bje amid formule R4-N(R5)-C(0)-, gde je R4grupa (i) Cj.joalkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, Ci_ealkanoil, hidroksi, Ci.g alkoksi, amido, (niži alkil) amid, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Ci_6alkilom; (ii) C3.7cikloalkil ili C440alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (Ci.6alkoksi)karbonil, amido, (niži alkil)amid, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Cj.g alkilom; a R5je H ili metil; ili R4 je (iii) amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci.g alkilom; ili (iv) C6ili Cioaril ili C7.16aralkil, sve eventualno supstituisane sa grupom Ci_6alkil, hidroksi, amino ili amido eventualno supstituisanom sa Ci_ealkilom; ili (v) Het eventualno supstituisan sa grupom Ci_6 alkil, hidroksi, amino ili amido; ili Bje tioamid formule Rj-NH-CfS)-, gde je R4grupa (i) C140 alkil; ili (ii) C3.7cikloalkil; ili YjeH; R3 je bočni lanac uterc-buitlglicinu(Tbg), Ile, Val, Chg, ili: R2je 1-naftilmetoksi; ili hinolinoksi, nesupstituisan, mono- ili di-supstituisan sa R21, kao što je definisano gore, ili R2 je: gde R2iAje grupa Ci_6alkil; Ci_6alkoksi; C6, C10aril ili Het; niži tioalkil; halogeno; amino eventualno mono-supstituisana sa Cj.6 alkilom; ili C6, Cioaril, C746 aralkil ili Het, eventualno supstituisan sa R22gde R22je Ci_6alkil, Ci.6alkoksi, amido, (niži alkil) amid, amino eventualno mono- ili di-supstituisana sa Ci_6alkilom, ili Het; Pl je ciklopropil prsten u kome ugljenik 1 imaRkonfiguraciju, a R<1>je etil, vinil, ciklopropil, 1 ili 2-bromoetil ili 1 ili 2-bromovinil.
47. Jedinjenje formule I, prema zahtevu 46, ili njegova farmaceutski prihvaujiva so ili estar, gde B je amid formule R4-NH-C(O)- gde je R4grupa (i) Cj.ioalkil eventualno supstituisana sa grupom karboksil, Ci_ 6alkanoil, hidroksi, C^g alkoksi, amido, (niži alkil) amid, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa C^g alkilom; (ii) C3.7cikloalkil ili C4.10alkilcikloalkil, sve eventualno supstituisane sa grupom karboksil, (Cj.g alkoksi)karbonil, amido, (niži alkil)amid, amino eventualno mono- ili di-supstituisanom sa Ci.g alkilom; (iv) C6ili C10aril ili C7_16aralkil, eventualno supstituisane sa grupom Ci_6alkil, hidroksi, amino ili amido; R<3>je bočni lanac u Tbg, Chg ili Val; R2je: gde R22Aje grupa C^ alkil (kao što je metil); C^g alkoksi (kao što je metoksi); ili halogeno (kao što je hloro); R22Bje grupa Cj.g alkil, amino grupa eventualno mono-supstituisana sa grupom C^alkil, amido ili (niži alkil) amid; a R2ibje C^g alkil, Cj.g alkoksi, amino, di(niži alkil) amino, (niži alkil) amid, N02, OH, halogeno, trifluorometil, ili karboksil; a Pije:
48. Jedinjenje prema zahtevu 45, prikazano formulom u kojoj B, R3, R.2, imaju značenje kao što je niže definisano:
49. Jedinjenje # 111, prema zahtevu 48.
50. Jedinjenje prema zahtevu 45, prikazano formulom: u kojoj B, R3, R2, Riimaju značenje kao što je niže definisano:
51.Jedinjenje # 203 prema zahtevu 50.
52. Jedinjenje prema zahtevu 45, prikazano formulom: u kojoj B, R3, R2i Rjimaju značenje kao što je niže definisano:
53. Jedinjenje prema zahtevu 52, odabrano iz grupe koju sačinjavaju jedinjenja #: 307,314, 317, 319, 321,324, 325, 326, 327,329, 331, 332, 333 i 334.
54. Jedinjenje prema zahtevu 1, prikazano formulom: u kojoj B, R3, R2i Riimaju značenje kao što je niže definisano:
55. Jedinjenje prema zahtevu 54, odabrano iz grupe koju sačinjavaju jedinjenja #: 403,405 i 406.
56. Jedijenje prema zahtevu 45, prikazano formulom: u kojoj R3ima značenje kao što je niže definisano:
57. Jedinjenje prema zahtevu 56, odabrano iz grupe koju sačinjavaju jedinjenja #: 501, 509 i 510.
58. Jedinjenje prema zahtevu 46, prikazano formulom: u kojoj R3, R21AI R21Bimaju značenje kao što je niže definisano:
59. Jedinjenje prema zahtevu 58, odabrano iz grupe koju sačinjavaju jedinjenja #: 601, 602, 603, 604, 605, 606,607, 610, 611, 612, 615, 616, 617, 620, 621, 622, 625,626, 627,628,629 i 630.
60. Jedinjenje prema zahtevu 46, prikazano formulom: u kojoj R3i R21Aimaju značenje kao što je definisano dole:
61. Jedinjenje prema zahtevu 60, izabrano iz grupe koju sačinjavaju jedinjenja #: 701, 702, 703, 704, 705, 706, 707, 708, 709 i 711 do 737.
62. Jedinjenje prema zahtevu 45, prikazano formulom: u kojoj B, R3i R22imaju značenje kao što je definisano dole:
63. Jedinjenje prema zahtevu 62, izabrano iz grupe koju sačinjavaju jedinjenja #: 801 do 825,827 do 858 i 860 do 873.
64. Jedinjenje prema zahtevu 45, prikazano formulom: u kojoj B ima značenje kao što je definisano dole:
65. Jedinjenje prema zahtevu 45, prikazano formulom: u kojoj B, X, R3, z i R21Bimaju značenje kao što je definisano dole:
66. Farmaceutska kompozicija koja sadrži anti-hepatitis C virusno efikasnu količinu jedinjenja formule I, prema zahtevu 1, ili njegovu terapeutski prihvatljivu so ili estar, u smeši sa farmaceutski prihvatljivim nosećim medijumom ili pomoćnim sredstvom.
67. Jedinjenje formule I prema jednom od zahteva 1 do 65, kao medikament.
68. Primena jedinjenje formule I prema zahtevu 1, ili njegove terapeutski prihvatljive soli ili estra ili farmaceutske kompozicije prema zahtevu 66 za pripremanje medikamenta za lečenje virusne infekcije hepatitisa C kod sisara.
69. Primena jedinjenje formule I prema zahtevu 1, ili njegove terapeutski prihvatljive soli ili estra za pripremu farmaceutske kompozicije za inhibiranje replikacije virusa hepatitisa C.
70. Primena kombinacije jedinjenja formule I prema zahtevu 1, ili njegove terapeutski prihvatijive soli ili estra sa drugim anti-HCV sredstvom za pripemanje medikamenta za lečenje virusne infekcije hepatitisa C kod sisara.
71. Primena prema zahtevu 70, gde navedeno drugo anti-HCV sredstvo je interferon.
72. Primena prema zahtevu 70 ili 71, gde je navedeno drugo anti-HCV sredstvo odabrano iz grupe koju čine: a- ili [3-interferon, ribavirin i amantadin.
73. Primena prema zahtevu 70, gde navedeno drugo anti-HCV sredstvo sadrži inhibitor drugih ciljeva u životnom ciklusu HCV-a, odabranom između: helikaze, polimeraze, metaloproteaze ili IRES.
74. Postupak za pripremanje jedinjenja prema zahtevu 1, gde Pl jeste ostatak supstituisane aminociklopropil-karboksilne kiseline, što sadži stupanj: kuplovanja peptida odabranog iz grupe koju čine: APG-P3-P2; ili APG-P2; sa intermedijerom Pl, formule: u kojoj Rijeste grupa Ci. 6 alkil, cikloalkil iliC2. qalkenil, sve eventualno supstituisane sa halogenom, CPG je zaštitna grupa karboksila, APG je zaštitna grupa amino radikala, a P3 i P2 imaju značenje kao što je gore definisano.
75. Primena Pl intermedijera formule: u kojoj Rxjeste grupa C^ alkil, cikloalkil ili C2.6alkenil, sve eventualno supstituisane sa halogenom a CPG je zaštitna grupa karboksila za pripremanje jedinjenja formule I kao što je gore definisano.
76. Amino kiselina analognog jedinjenja formule:
77. Postupak prema zahtevu 74, gde pomenuta zaštitna grupa karboksila (CPG) jeste izabrana iz grupe koju čine: alkil estri, aralkil estri, a estri koji se razlazu tretmanom pomoću blage baze ili blagog redukcionog sredstva
78. Postupak prema zahtevu 74, gde pomenuta zaštitna grupa amino radikala (APG) jeste izabrana iz grupe koju čine: acil grupe, aromatične karbamatne grupe, alifatične karbamatne grupe, ciklične alkilkarbamatne grupe, alkil grupe, trialkilsilil, i grupe koje sadrže tiol.
79. Primena prolinskog analoga formule: gde R2ia je grupa CIS alkil; C^ alkoksi; niži tioalkil; halogeno; amino eventualno mono-supsittuisana sa Ci^alkilom; C6, C10aril, C7_16aralkil ili Het, pomenuti aril, aralkil ili Het eventualno supstituisan sa R22, gde R22 je C!_g alkil, C^alkoksi, amido, (niži alkil) amid, amino eventualno mono-ili di-supstituisana sa grupom C1.6alkil ili Het; a R2iBje grupa Ci.ealkil, C^ alkoksi, amino, di(niži alkil)amino, (niži alkil) amid, N02>OH, halogeno, trifluorometil ili karboksil; za sintezu peptidnog analoga formule I prema zahtevu 29.
YUP-94/01A 1998-08-10 1999-08-09 Tri-peptidi kao inhibitori hepatitisa c RS50798B (sr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US9593198P 1998-08-10 1998-08-10
US13238699P 1999-05-04 1999-05-04

Publications (2)

Publication Number Publication Date
YU9401A YU9401A (sh) 2003-02-28
RS50798B true RS50798B (sr) 2010-08-31

Family

ID=26790767

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RSP-2009/0459A RS20090459A (sr) 1998-08-10 1999-08-09 Tripeptidi, inhibitori hepatitisa c
YU20090459A RS53562B1 (sr) 1998-08-10 1999-08-09 Tripeptidi, inhibitori hepatitisa c
YUP-94/01A RS50798B (sr) 1998-08-10 1999-08-09 Tri-peptidi kao inhibitori hepatitisa c

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RSP-2009/0459A RS20090459A (sr) 1998-08-10 1999-08-09 Tripeptidi, inhibitori hepatitisa c
YU20090459A RS53562B1 (sr) 1998-08-10 1999-08-09 Tripeptidi, inhibitori hepatitisa c

Country Status (43)

Country Link
US (11) US6323180B1 (sr)
EP (2) EP2028186B1 (sr)
JP (2) JP4485685B2 (sr)
KR (2) KR100631439B1 (sr)
CN (2) CN101143892B (sr)
AR (3) AR020880A1 (sr)
AT (1) ATE430158T1 (sr)
AU (1) AU769738B2 (sr)
BG (1) BG65738B1 (sr)
BR (2) BR9917805B1 (sr)
CA (2) CA2338946C (sr)
CO (1) CO5261542A1 (sr)
CY (2) CY1109291T1 (sr)
CZ (2) CZ301268B6 (sr)
DE (1) DE69940817D1 (sr)
DK (2) DK1105413T3 (sr)
EA (1) EA003906B1 (sr)
EE (1) EE05517B1 (sr)
ES (2) ES2326707T3 (sr)
HK (1) HK1040085B (sr)
HR (1) HRP20010102B1 (sr)
HU (2) HU229262B1 (sr)
ID (1) ID27839A (sr)
IL (3) IL141012A0 (sr)
IN (3) IN211493B (sr)
ME (1) ME00381B (sr)
MX (2) MX257413B (sr)
MY (1) MY127538A (sr)
NO (2) NO328952B1 (sr)
NZ (1) NZ510396A (sr)
PE (1) PE20000949A1 (sr)
PH (1) PH11999002002B1 (sr)
PL (1) PL204850B1 (sr)
PT (2) PT1105413E (sr)
RS (3) RS20090459A (sr)
SA (1) SA99200617B1 (sr)
SI (2) SI1105413T1 (sr)
SK (2) SK288068B6 (sr)
TR (2) TR200100432T2 (sr)
TW (1) TWI250165B (sr)
UA (1) UA75026C2 (sr)
WO (1) WO2000009543A2 (sr)
ZA (1) ZA200100971B (sr)

Families Citing this family (423)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU227742B1 (en) 1996-10-18 2012-02-28 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus ns3 protease
US6767991B1 (en) 1997-08-11 2004-07-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C inhibitor peptides
US6323180B1 (en) * 1998-08-10 2001-11-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Hepatitis C inhibitor tri-peptides
UA74546C2 (en) * 1999-04-06 2006-01-16 Boehringer Ingelheim Ca Ltd Macrocyclic peptides having activity relative to hepatitis c virus, a pharmaceutical composition and use of the pharmaceutical composition
US6608027B1 (en) 1999-04-06 2003-08-19 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
SK18862001A3 (sk) * 1999-06-25 2002-11-06 Basf Aktiengesellschaft Gény Corynebacterium glutamicum kódujúce proteíny metabolických dráh
DE60137207D1 (de) 2000-04-05 2009-02-12 Schering Corp Makrozyklische inhibitoren der ns3-serinprotease des hepatitis c-virus mit stickstoffhaltigen zyklischen p2-gruppen
SK14952002A3 (sk) 2000-04-19 2003-03-04 Schering Corporation Makrocyklické zlúčeniny, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie
WO2001085720A1 (en) * 2000-05-05 2001-11-15 Smithkline Beecham Corporation Novel anti-infectives
PE20011350A1 (es) 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
AR034127A1 (es) * 2000-07-21 2004-02-04 Schering Corp Imidazolidinonas como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c, composicion farmaceutica, un metodo para su preparacion, y el uso de las mismas para la manufactura de un medicamento
AR029851A1 (es) 2000-07-21 2003-07-16 Dendreon Corp Nuevos peptidos como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c
NZ523781A (en) 2000-07-21 2004-10-29 Corvas Int Inc Novel peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
RU2355700C9 (ru) 2000-07-21 2010-03-20 Шеринг Корпорейшн Новые пептиды как ингибиторы ns3-серинпротеазы вируса гепатита с
SV2003000617A (es) 2000-08-31 2003-01-13 Lilly Co Eli Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m
US6846806B2 (en) 2000-10-23 2005-01-25 Bristol-Myers Squibb Company Peptide inhibitors of Hepatitis C virus NS3 protein
AU2002248147B2 (en) * 2000-11-20 2006-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C tripeptide inhibitors
HUP0303436A2 (hu) 2000-12-12 2004-01-28 Schering Corp. Diaril-peptidek mint a hepatitis C vírus NS3-szerin proteáz inhibitorai, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk
CN1267446C (zh) 2001-01-22 2006-08-02 默克公司 作为依赖于rna的rna病毒聚合酶的抑制剂的核苷衍生物
KR100926244B1 (ko) 2001-07-11 2009-11-12 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 브릿지된 바이사이클릭 세린 프로테아제 억제제
CN1289338C (zh) 2001-09-14 2006-12-13 本田技研工业株式会社 用于车辆的前格栅碰撞缓冲结构
EP1441720B8 (en) * 2001-10-24 2012-03-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine protease, particularly hepatitis c virus ns3-ns4a protease, incorporating a fused ring system
EP1440068A1 (en) * 2001-11-02 2004-07-28 Glaxo Group Limited Acyl dihydro pyrrole derivatives as hcv inhibitors
US6867185B2 (en) * 2001-12-20 2005-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
KR20040077767A (ko) 2002-01-23 2004-09-06 쉐링 코포레이션 Ｃ형 간염 바이러스 감염 치료용 ｎｓ3-세린 프로테아제억제제로서의 프롤린 화합물
US7119072B2 (en) * 2002-01-30 2006-10-10 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
CA2370396A1 (en) * 2002-02-01 2003-08-01 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor tri-peptides
CA2369970A1 (en) * 2002-02-01 2003-08-01 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor tri-peptides
US7091184B2 (en) * 2002-02-01 2006-08-15 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US6642204B2 (en) * 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
MXPA04009938A (es) 2002-04-11 2004-12-13 Vertex Pharma Inhibidores de serina proteasas, en particular la proteasa ns3-ns4a del hcv.
JP4312711B2 (ja) * 2002-05-20 2009-08-12 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー ヘテロ環式スルホンアミドｃ型肝炎ウイルス阻害剤
ES2361011T3 (es) * 2002-05-20 2011-06-13 Bristol-Myers Squibb Company Inhibidores del virus de la hepatitis c.
MY140680A (en) * 2002-05-20 2010-01-15 Bristol Myers Squibb Co Hepatitis c virus inhibitors
ES2315568T3 (es) * 2002-05-20 2009-04-01 Bristol-Myers Squibb Company Inhibidores del virus de la hepatitis c basados en cicloalquilo p1' sustituido.
KR100457857B1 (ko) * 2002-05-23 2004-11-18 (주) 비엔씨바이오팜 2-[2-(3-인돌릴)에틸아미노]피리딘 유도체, 그 제조방법및 이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물
PT1523489E (pt) 2002-06-28 2014-06-24 Centre Nat Rech Scient Profármacos de nucleósido modificado em 2' e 3' para tratamento de infecções por flaviridae
US20040033959A1 (en) * 2002-07-19 2004-02-19 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions for hepatitis C viral protease inhibitors
US7183302B2 (en) * 2002-08-12 2007-02-27 Bristol-Myers Squibb Company Iminothiazolidinones as inhibitors of HCV replication
EP1408031A1 (en) * 2002-10-09 2004-04-14 3 D Gene Pharma Pyrolidine derivatives useful in treatment of hepatitis C virus infection
PL376454A1 (en) * 2002-10-24 2005-12-27 Glaxo Group Limited 1-acyl-pyrrolidine derivatives for the treatment of viral infections
US20050075279A1 (en) * 2002-10-25 2005-04-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US7601709B2 (en) 2003-02-07 2009-10-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
EP1601685A1 (en) * 2003-03-05 2005-12-07 Boehringer Ingelheim International GmbH Hepatitis c inhibiting compounds
WO2004101602A2 (en) * 2003-03-05 2004-11-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
KR100960802B1 (ko) * 2003-03-08 2010-06-01 주식회사유한양행 씨형 간염바이러스 감염 치료용 엔에스3 프로테아제 억제제
JP4231524B2 (ja) * 2003-04-10 2009-03-04 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 大環状化合物の製造方法
ATE422895T1 (de) * 2003-04-16 2009-03-15 Bristol Myers Squibb Co Makrocyclische isochinolinpeptidinhibitoren des hepatitis-c-virus
US7176208B2 (en) 2003-04-18 2007-02-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
US6846836B2 (en) 2003-04-18 2005-01-25 Bristol-Myers Squibb Company N-substituted phenylurea inhibitors of mitochondrial F1F0 ATP hydrolase
DE602004023924D1 (en) 2003-04-18 2009-12-17 Enanta Pharm Inc Ease-hemmer
CL2004001161A1 (es) * 2003-05-21 2005-04-08 Boehringer Ingelheim Int Compuestos describe compuestos derivados de quinolina; composicion farmaceutica; y su uso para tratar una enfermedad causada por el virus de la hepatitis c.
SI2604620T2 (sl) 2003-05-30 2024-10-30 Gilead Pharmasset Llc Modificirani fluorirani nukleozidni analogi
US7273851B2 (en) 2003-06-05 2007-09-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Tri-peptide hepatitis C serine protease inhibitors
WO2004113365A2 (en) * 2003-06-05 2004-12-29 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis c serine protease tri-peptide inhibitors
US7125845B2 (en) * 2003-07-03 2006-10-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Aza-peptide macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
US20050075309A1 (en) 2003-07-25 2005-04-07 Richard Storer Purine nucleoside analogues for treating Flaviviridae including hepatitis C
US7449447B2 (en) 2003-08-26 2008-11-11 Schering Corporation Peptidomimetic NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
US8025899B2 (en) 2003-08-28 2011-09-27 Abbott Laboratories Solid pharmaceutical dosage form
US8377952B2 (en) 2003-08-28 2013-02-19 Abbott Laboratories Solid pharmaceutical dosage formulation
PE20050374A1 (es) 2003-09-05 2005-05-30 Vertex Pharma Inhibidores de proteasas de serina, en particular proteasa ns3-ns4a del vhc
US7642235B2 (en) * 2003-09-22 2010-01-05 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
CN1894274A (zh) * 2003-09-26 2007-01-10 先灵公司 丙肝病毒ns3丝氨酸蛋白酶的大环抑制剂
EP1692157B1 (en) 2003-10-10 2013-04-17 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
US7491794B2 (en) * 2003-10-14 2009-02-17 Intermune, Inc. Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication
EP1680137B1 (en) 2003-10-14 2012-11-21 F. Hoffmann-La Roche Ltd. Macrocyclic carboxylic acid and acylsulfonamide compound as inhibitor of HCV replication
CN1894276B (zh) 2003-10-27 2010-06-16 威特克斯医药股份有限公司 Hcv ns3-ns4a蛋白酶抗药性突变体
EP1944042A1 (en) 2003-10-27 2008-07-16 Vertex Pharmceuticals Incorporated Combinations for HCV treatment
US8187874B2 (en) 2003-10-27 2012-05-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Drug discovery method
US20050119318A1 (en) * 2003-10-31 2005-06-02 Hudyma Thomas W. Inhibitors of HCV replication
US7132504B2 (en) 2003-11-12 2006-11-07 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2005051980A1 (en) * 2003-11-20 2005-06-09 Schering Corporation Depeptidized inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
US7135462B2 (en) 2003-11-20 2006-11-14 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7309708B2 (en) * 2003-11-20 2007-12-18 Birstol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
ATE424926T1 (de) * 2003-12-08 2009-03-15 Boehringer Ingelheim Int Abtrennung von ruthenium-nebenprodukten durch behandlung mit überkritischen flüssigkeiten
CA2549660A1 (en) 2003-12-15 2005-06-30 Japan Tobacco Inc. Cyclopropane compounds and pharmaceutical use thereof
GB0500020D0 (en) 2005-01-04 2005-02-09 Novartis Ag Organic compounds
CA2549851C (en) * 2004-01-21 2012-09-11 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus
EP1713822B1 (en) * 2004-01-30 2010-03-17 Medivir AB Hcv ns-3 serine protease inhibitors
SE0400199D0 (sv) * 2004-01-30 2004-01-30 Medivir Ab HCV Protease inhbitors
CN1938332B (zh) 2004-02-04 2011-10-19 沃泰克斯药物股份有限公司 丝氨酸蛋白酶、特别是hcv ns3-ns4a蛋白酶的抑制剂
US20050182252A1 (en) 2004-02-13 2005-08-18 Reddy K. R. Novel 2'-C-methyl nucleoside derivatives
KR20120091276A (ko) 2004-02-20 2012-08-17 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 바이러스 폴리머라제 억제제
US20070049593A1 (en) 2004-02-24 2007-03-01 Japan Tobacco Inc. Tetracyclic fused heterocyclic compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor
PT1719773E (pt) 2004-02-24 2009-06-03 Japan Tobacco Inc Compostos heterotetracíclicos fundidos e a sua utilização como inibidores da polimerase do hcv
CN1946692A (zh) 2004-02-27 2007-04-11 先灵公司 作为丙型肝炎病毒ns3丝氨酸蛋白酶抑制剂的3,4－(环戊基)－稠合的脯氨酸化合物
BRPI0508186A (pt) 2004-02-27 2007-08-14 Schering Corp compostos como inibidores de ns3 serina protease de vìrus da hepatite c
ATE470660T1 (de) * 2004-02-27 2010-06-15 Schering Corp Schwefelverbindungen als inhibitoren der ns3- serinprotease des hepatitis-c-virus
CN1946691A (zh) 2004-02-27 2007-04-11 先灵公司 作为丙型肝炎病毒ns3丝氨酸蛋白酶抑制剂的化合物
US7816326B2 (en) 2004-02-27 2010-10-19 Schering Corporation Sulfur compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
TW200536528A (en) 2004-02-27 2005-11-16 Schering Corp Novel inhibitors of hepatitis C virus NS3 protease
US7635694B2 (en) 2004-02-27 2009-12-22 Schering Corporation Cyclobutenedione-containing compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
CN1946690A (zh) * 2004-02-27 2007-04-11 先灵公司 用作丙型肝炎病毒ns3丝氨酸蛋白酶抑制剂的含环丁烯二酮基团化合物
CA2768700C (en) * 2004-03-12 2014-04-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates for the preparation of aspartic acetal caspase inhibitors
AU2005224092A1 (en) * 2004-03-15 2005-09-29 Boehringer Ingelheim International, Gmbh Process for preparing macrocyclic dipeptides which are suitable for the treatment of hepatitis C viral infections
GEP20104926B (en) * 2004-03-30 2010-03-25 Intermune Inc Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication
CN1980657A (zh) 2004-05-05 2007-06-13 耶鲁大学 新颖的抗病毒赛菊宁黄质类似物
US7399749B2 (en) 2004-05-20 2008-07-15 Schering Corporation Substituted prolines as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
US7514557B2 (en) * 2004-05-25 2009-04-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Process for preparing acyclic HCV protease inhibitors
CA2568379A1 (en) 2004-06-15 2005-12-29 Merck & Co., Inc. C-purine nucleoside analogs as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
AU2005267421B2 (en) 2004-06-24 2010-06-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Nucleoside aryl phosphoramidates for the treatment of RNA-dependent RNA viral infection
CA2556669C (en) * 2004-06-28 2012-05-01 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
AR050174A1 (es) * 2004-07-16 2006-10-04 Gilead Sciences Inc Derivados de fosfonatos con actividad antiviral. composiciones farmaceuticas
UY29016A1 (es) * 2004-07-20 2006-02-24 Boehringer Ingelheim Int Analogos de dipeptidos inhibidores de la hepatitis c
WO2006007708A1 (en) * 2004-07-20 2006-01-26 Boehringer Engelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
CN101023094B (zh) * 2004-07-21 2011-05-18 法莫赛特股份有限公司 烷基取代的2-脱氧-2-氟代-d-呋喃核糖基嘧啶和嘌呤及其衍生物的制备
US7597884B2 (en) 2004-08-09 2009-10-06 Alios Biopharma, Inc. Hyperglycosylated polypeptide variants and methods of use
WO2006020580A2 (en) * 2004-08-09 2006-02-23 Alios Biopharma Inc. Synthetic hyperglycosylated, protease-resistant polypeptide variants, oral formulations and methods of using the same
ATE513844T1 (de) 2004-08-27 2011-07-15 Schering Corp Acylsulfonamidverbindungen als inhibitoren der ns3-serinprotease des hepatitis-c-virus
US8492539B2 (en) * 2004-09-14 2013-07-23 Gilead Pharmasset Llc Preparation of 2′-fluoro-2′-alkyl-substituted or other optionally substituted ribofuranosyl pyrimidines and purines and their derivatives
WO2006030892A1 (ja) * 2004-09-17 2006-03-23 Nippon Shinyaku Co., Ltd. 複素環化合物の製造方法
CN102160891A (zh) 2004-10-01 2011-08-24 威特克斯医药股份有限公司 Hcv ns3-ns4a蛋白酶抑制
US7659263B2 (en) 2004-11-12 2010-02-09 Japan Tobacco Inc. Thienopyrrole compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor
US7323447B2 (en) * 2005-02-08 2008-01-29 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
PL1863833T3 (pl) 2005-03-08 2014-03-31 Boehringer Ingelheim Int Sposób otrzymywania związków makrocyklicznych
AU2006242475B2 (en) * 2005-05-02 2011-07-07 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
US7592336B2 (en) * 2005-05-10 2009-09-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
MX2007014117A (es) 2005-05-13 2008-02-05 Virochem Pharma Inc Compuestos y metodos para el tratamiento o prevencion de infecciones de flavivirus.
EP1891089B1 (en) 2005-06-02 2014-11-05 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV protease inhibitors in combination with food
JP5160415B2 (ja) * 2005-06-02 2013-03-13 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション 医薬処方物およびそれを用いる治療方法
US20060276404A1 (en) * 2005-06-02 2006-12-07 Anima Ghosal Medicaments and methods combining a HCV protease inhibitor and an AKR competitor
US20070237818A1 (en) * 2005-06-02 2007-10-11 Malcolm Bruce A Controlled-release formulation of HCV protease inhibitor and methods using the same
AR054778A1 (es) 2005-06-17 2007-07-18 Novartis Ag Uso de sangliferina en hcv
US7608592B2 (en) 2005-06-30 2009-10-27 Virobay, Inc. HCV inhibitors
CN101242816B (zh) * 2005-06-30 2012-10-31 维罗贝股份有限公司 Hcv抑制剂
US7601686B2 (en) 2005-07-11 2009-10-13 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2007009227A1 (en) * 2005-07-20 2007-01-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
AR057456A1 (es) * 2005-07-20 2007-12-05 Merck & Co Inc Inhibidores de la proteasa ns3 del vhc
CN101263156A (zh) 2005-07-25 2008-09-10 因特蒙公司 C型肝炎病毒复制的新颖大环抑制剂
PE20070211A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
BRPI0614696A2 (pt) 2005-07-29 2011-04-12 Tibotec Pharm Ltd inibidores macrocìclicos de vìrus da hepatite c
JP5426164B2 (ja) 2005-07-29 2014-02-26 ヤンセン・アールアンドデイ・アイルランド Ｃ型肝炎ウイルスの大環式インヒビター
AR055361A1 (es) 2005-07-29 2007-08-22 Medivir Ab Inhibidores macrociclicos del virus de la hepatitis c
PE20070210A1 (es) 2005-07-29 2007-04-16 Tibotec Pharm Ltd Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
DE602006019883D1 (de) 2005-07-29 2011-03-10 Medivir Ab Makrocyclische inhibitoren des hepatitis-c-virus
PE20070343A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Inhibidores macrociclicos del virus de la hepatitis c
MY141245A (en) 2005-07-29 2010-03-31 Tibotec Pharm Ltd Macrocylic inhibitors of hepatitis c virus
CN101273030B (zh) 2005-07-29 2012-07-18 泰博特克药品有限公司 丙型肝炎病毒的大环抑制剂
RU2008107972A (ru) * 2005-08-01 2009-09-10 Мерк энд Ко., Инк. (US) Макроциклические пептиды в качестве ингибиторов ns3-протеазы hcv
RU2441020C2 (ru) 2005-08-02 2012-01-27 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед Ингибиторы серинпротеазы
CA2618560A1 (en) 2005-08-09 2007-02-22 Merck & Co., Inc. Ribonucleoside cyclic acetal derivatives for the treatment of rna-dependent rna viral infection
EP1915378A4 (en) 2005-08-12 2009-07-22 Boehringer Ingelheim Int VIRUS POLYMERASE INHIBITORS
PT1934179E (pt) 2005-08-19 2010-07-12 Vertex Pharma PROCESSOS E INTERMEDIáRIOS
US8399615B2 (en) 2005-08-19 2013-03-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates
AR055395A1 (es) 2005-08-26 2007-08-22 Vertex Pharma Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c
US7964624B1 (en) 2005-08-26 2011-06-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
CA2621360C (en) 2005-09-09 2013-12-24 Boehringer Ingelheim International Gmbh Ring-closing metathesis process for the preparation of macrocyclic peptides
CN101415705B (zh) 2005-10-11 2011-10-26 因特蒙公司 抑制丙型肝炎病毒复制的化合物和方法
US7772183B2 (en) 2005-10-12 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7741281B2 (en) 2005-11-03 2010-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
JP5409008B2 (ja) 2005-11-11 2014-02-05 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｃ型肝炎ウイルス改変体
US7705138B2 (en) 2005-11-11 2010-04-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hepatitis C virus variants
WO2007081517A2 (en) 2005-12-21 2007-07-19 Abbott Laboratories Anti-viral compounds
EP2345652A1 (en) 2005-12-21 2011-07-20 Abbott Laboratories Antiviral compounds
ES2378473T3 (es) * 2005-12-21 2012-04-12 Abbott Laboratories Compuestos antivirales
DE602006015861D1 (de) 2005-12-21 2010-09-09 Abbott Lab Antivirale verbindungen
US7816348B2 (en) 2006-02-03 2010-10-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
EP1991229A2 (en) 2006-02-27 2008-11-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same
EP1996565A2 (en) 2006-03-08 2008-12-03 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Substituted aminothiazole derivatives with anti-hcv activity
EP2194039A1 (en) 2006-03-16 2010-06-09 Vertex Pharmceuticals Incorporated Process for preparing optically enriched compounds
WO2007133865A2 (en) 2006-04-11 2007-11-22 Novartis Ag Hcv/hiv inhibitors an their uses
GB0609492D0 (en) * 2006-05-15 2006-06-21 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
EP2027143A2 (en) 2006-05-23 2009-02-25 Irm Llc Compounds and compositions as channel activating protease inhibitors
US20080187516A1 (en) * 2006-06-06 2008-08-07 Ying Sun Acyclic oximyl hepatitis c protease inhibitors
US7728148B2 (en) * 2006-06-06 2010-06-01 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Acyclic oximyl hepatitis C protease inhibitors
US8268776B2 (en) 2006-06-06 2012-09-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocylic oximyl hepatitis C protease inhibitors
US9526769B2 (en) 2006-06-06 2016-12-27 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocylic oximyl hepatitis C protease inhibitors
GB0612423D0 (en) * 2006-06-23 2006-08-02 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
PE20080992A1 (es) * 2006-06-26 2008-08-06 Enanta Pharm Inc Quinoxalinil macrociclicos inhibidores de serina proteasa del virus de la hepatitis c
KR20090024834A (ko) * 2006-07-05 2009-03-09 인터뮨, 인크. Ｃ형 간염 바이러스 복제의 신규 억제제
WO2008008776A2 (en) 2006-07-11 2008-01-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US7635683B2 (en) * 2006-08-04 2009-12-22 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl tripeptide hepatitis C virus inhibitors
US20090035267A1 (en) * 2007-07-31 2009-02-05 Moore Joel D Acyclic, pyridazinone-derived hepatitis c serine protease inhibitors
US7718612B2 (en) * 2007-08-02 2010-05-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Pyridazinonyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
EP1886685A1 (en) 2006-08-11 2008-02-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods, uses and compositions for modulating replication of hcv through the farnesoid x receptor (fxr) activation or inhibition
US7582605B2 (en) * 2006-08-11 2009-09-01 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Phosphorus-containing hepatitis C serine protease inhibitors
US20080038225A1 (en) * 2006-08-11 2008-02-14 Ying Sun Triazolyl acyclic hepatitis c serine protease inhibitors
US7687459B2 (en) * 2006-08-11 2010-03-30 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Arylalkoxyl hepatitis C virus protease inhibitors
WO2008022006A2 (en) * 2006-08-11 2008-02-21 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Arylalkoxyl hepatitis c virus protease inhibitors
US20090098085A1 (en) * 2006-08-11 2009-04-16 Ying Sun Tetrazolyl acyclic hepatitis c serine protease inhibitors
US7605126B2 (en) * 2006-08-11 2009-10-20 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Acylaminoheteroaryl hepatitis C virus protease inhibitors
CA2660555A1 (en) 2006-08-17 2008-02-21 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
CA2666814A1 (en) * 2006-08-21 2008-05-29 United Therapeutics Corporation Combination therapy for treatment of viral infections
AU2007309546A1 (en) * 2006-10-24 2008-05-02 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. HCV NS3 protease inhibitors
US8309540B2 (en) * 2006-10-24 2012-11-13 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
US8138164B2 (en) * 2006-10-24 2012-03-20 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
EP2083844B1 (en) * 2006-10-27 2013-11-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Hcv ns3 protease inhibitors
EP2086982B1 (en) * 2006-10-27 2018-08-29 Merck Sharp & Dohme Corp. Hcv ns3 protease inhibitors
US8343477B2 (en) 2006-11-01 2013-01-01 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
WO2008057995A2 (en) * 2006-11-02 2008-05-15 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
US7772180B2 (en) 2006-11-09 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
AP2579A (en) 2006-11-15 2013-01-29 Virochem Pharma Inc Thiophene analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
US7888464B2 (en) 2006-11-16 2011-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8003604B2 (en) 2006-11-16 2011-08-23 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7763584B2 (en) 2006-11-16 2010-07-27 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
ES2470568T3 (es) 2006-11-17 2014-06-24 Janssen R&D Ireland Inhibidores macroc�clicos del virus de la hepatitis C
WO2008073282A2 (en) * 2006-12-07 2008-06-19 Schering Corporation Ph sensitive matrix formulation
GB0625345D0 (en) * 2006-12-20 2007-01-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic compounds
EP2094276A4 (en) * 2006-12-20 2011-01-05 Abbott Lab ANTIVIRAL COMPOUNDS
GB0625349D0 (en) * 2006-12-20 2007-01-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic compounds
CN103224506A (zh) * 2006-12-20 2013-07-31 P.安杰莱蒂分子生物学研究所 抗病毒的吲哚
WO2008074035A1 (en) * 2006-12-27 2008-06-19 Abbott Laboratories Hcv protease inhibitors and uses thereof
US20080207528A1 (en) * 2007-02-01 2008-08-28 Syaulan Yang Hcv protease inhibitors
CN101903392A (zh) 2007-02-27 2010-12-01 弗特克斯药品有限公司 丝氨酸蛋白酶的抑制剂
BRPI0807907A2 (pt) 2007-02-27 2017-05-16 Vertex Pharma co-cristais e composições farmacêuticas compreendendo os mesmos.
WO2008106167A1 (en) * 2007-02-28 2008-09-04 Conatus Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy comprising matrix metalloproteinase inhibitors and caspase inhibitors for the treatment of liver diseases
PL2144604T3 (pl) 2007-02-28 2012-02-29 Conatus Pharmaceuticals Inc Sposoby leczenia przewlekłego zapalenia wątroby typu C z zastosowaniem RO 113-0830
MX2009010205A (es) * 2007-03-23 2009-10-19 Schering Corp Inhibidores de cetoamida p1-no epimerizables de proteasa ns3 de virus de hepatitis c.
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
US7910587B2 (en) * 2007-04-26 2011-03-22 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl dipeptide hepatitis C virus inhibitors
US20080317712A1 (en) * 2007-04-26 2008-12-25 Deqiang Niu Arylpiperidinyl and arylpyrrolidinyl tripeptide hepatitis c serine protease inhibitors
US8377872B2 (en) 2007-04-26 2013-02-19 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Cyclic P3 tripeptide hepatitis C serine protease inhibitors
US20080292587A1 (en) * 2007-04-26 2008-11-27 Ying Sun Oximyl dipeptide hepatitis c protease inhibitors
US20080267917A1 (en) * 2007-04-26 2008-10-30 Deqiang Niu N-functionalized amides as hepatitis c serine protease inhibitors
EP2160392A2 (en) * 2007-05-03 2010-03-10 Intermune, Inc. Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication
CN102872461A (zh) 2007-05-04 2013-01-16 弗特克斯药品有限公司 用于治疗hcv感染的组合治疗
CA2685888A1 (en) * 2007-05-09 2008-11-20 Pfizer Inc. Substituted heterocyclic derivatives and their pharmaceutical use and compositions
WO2008141227A1 (en) * 2007-05-10 2008-11-20 Intermune, Inc. Novel peptide inhibitors of hepatitis c virus replication
GB0709791D0 (en) * 2007-05-22 2007-06-27 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
AP2874A (en) 2007-06-29 2014-03-31 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds
AP2009005073A0 (en) 2007-06-29 2009-12-31 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds
AU2008277442A1 (en) * 2007-07-17 2009-01-22 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti Spa Macrocyclic indole derivatives for the treatment of hepatitis C infections
WO2009010804A1 (en) * 2007-07-19 2009-01-22 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Macrocyclic compounds as antiviral agents
JP2010535156A (ja) 2007-08-03 2010-11-18 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウイルスポリメラーゼ阻害剤
TW200922933A (en) 2007-08-30 2009-06-01 Vertex Pharma Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same
GB0718575D0 (en) 2007-09-24 2007-10-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Nucleoside derivatives as inhibitors of viral polymerases
US8419332B2 (en) * 2007-10-19 2013-04-16 Atlas Bolt & Screw Company Llc Non-dimpling fastener
US20090111757A1 (en) * 2007-10-25 2009-04-30 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
US8383583B2 (en) 2007-10-26 2013-02-26 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic, pyridazinone-containing hepatitis C serine protease inhibitors
US8304385B2 (en) 2007-11-14 2012-11-06 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic tetrazolyl hepatitis C serine protease inhibitors
US8263549B2 (en) * 2007-11-29 2012-09-11 Enanta Pharmaceuticals, Inc. C5-substituted, proline-derived, macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
WO2009070689A1 (en) * 2007-11-29 2009-06-04 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic, c5-substituted proline derivatives as inhibitors of the hepatitis c virus ns3 protease
US8361958B2 (en) * 2007-12-05 2013-01-29 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Oximyl HCV serine protease inhibitors
MX2010006210A (es) * 2007-12-05 2010-08-10 Enanta Pharm Inc Inhibidores de serina proteasa de hcv de tripeptido fluorado.
US8193346B2 (en) 2007-12-06 2012-06-05 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Process for making macrocyclic oximyl hepatitis C protease inhibitors
US8273709B2 (en) 2007-12-14 2012-09-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Triazole-containing macrocyclic HCV serine protease inhibitors
MX2010006313A (es) 2007-12-19 2010-06-25 Boehringer Ingelheim Int Inhibidores de la polimerasa virica.
US8202996B2 (en) 2007-12-21 2012-06-19 Bristol-Myers Squibb Company Crystalline forms of N-(tert-butoxycarbonyl)-3-methyl-L-valyl-(4R)-4-((7-chloro-4-methoxy-1-isoquinolinyl)oxy)-N- ((1R,2S)-1-((cyclopropylsulfonyl)carbamoyl)-2-vinylcyclopropyl)-L-prolinamide
US8101567B2 (en) * 2008-01-24 2012-01-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Heteroaryl-containing tripeptide HCV serine protease inhibitors
WO2009094443A1 (en) * 2008-01-24 2009-07-30 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Difluorinated tripeptides as hcv serine protease inhibitors
CN101977915B (zh) 2008-02-04 2014-08-13 埃迪尼克斯医药公司 大环丝氨酸蛋白酶抑制剂
MX2010008371A (es) * 2008-02-07 2010-10-04 Virobay Inc Inhibidores de catepsina b.
EP2268285B1 (en) 2008-02-25 2018-06-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Therapeutic compounds
CN102015652A (zh) * 2008-03-20 2011-04-13 益安药业 作为丙型肝炎病毒抑制剂的氟化大环化合物
TW200946541A (en) * 2008-03-27 2009-11-16 Idenix Pharmaceuticals Inc Solid forms of an anti-HIV phosphoindole compound
BRPI0911260A2 (pt) 2008-04-15 2015-09-29 Intermune Inc composto, composição farmacêutica, método de inibição de atividade da protease de ns3/ns4 in, vitro e usos de compostos
US8163921B2 (en) * 2008-04-16 2012-04-24 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CA2720850A1 (en) * 2008-04-28 2009-11-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Hcv ns3 protease inhibitors
US8211891B2 (en) * 2008-04-30 2012-07-03 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Difluoromethyl-containing macrocyclic compounds as hepatitis C virus inhibitors
US20090285774A1 (en) * 2008-05-15 2009-11-19 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
CN101580535B (zh) * 2008-05-16 2012-10-03 太景生物科技股份有限公司 丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂
WO2009148923A1 (en) 2008-05-29 2009-12-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US7964560B2 (en) * 2008-05-29 2011-06-21 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
EP2307434B1 (en) 2008-07-02 2014-02-12 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
PL2310095T3 (pl) 2008-07-22 2013-03-29 Msd Italia Srl Makrocykliczne związki chinoksaliny jako inhibitory proteazy NS3 HCV
CN102099335A (zh) 2008-07-23 2011-06-15 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 杂环抗病毒化合物
US8207341B2 (en) 2008-09-04 2012-06-26 Bristol-Myers Squibb Company Process or synthesizing substituted isoquinolines
UY32099A (es) 2008-09-11 2010-04-30 Enanta Pharm Inc Inhibidores macrocíclicos de serina proteasas de hepatitis c
EA018603B1 (ru) 2008-09-16 2013-09-30 Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх Кристаллические формы 2-тиазолил-4-хинолинилоксипроизводного, активного ингибитора hcv
EA019965B1 (ru) * 2008-09-17 2014-07-30 Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх Комбинация ингибитора протеазы ns3 hcv с интерфероном и рибавирином
MX2011002846A (es) 2008-09-26 2011-04-07 Hoffmann La Roche Derivados de pirina o pirazina para tratar el virus de la hepatitis c.
US8044087B2 (en) 2008-09-29 2011-10-25 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8563505B2 (en) 2008-09-29 2013-10-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP3025727A1 (en) 2008-10-02 2016-06-01 The J. David Gladstone Institutes Methods of treating liver disease
KR20110075019A (ko) * 2008-10-15 2011-07-05 인터뮨, 인크. 치료용 항바이러스성 펩티드
AU2009309813A1 (en) 2008-10-30 2010-05-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterocyclic antiviral arylpyridone derivatives
HRP20140097T1 (hr) * 2008-11-21 2014-03-14 Boehringer Ingelheim International Gmbh Farmaceutski sastav jakog hcv-inhibitora za oralnu primjenu
HK1203929A1 (en) 2008-12-03 2015-11-06 普雷西迪奥制药公司 Inhibitors of hcv ns5a
JP2012510523A (ja) 2008-12-03 2012-05-10 プレシディオ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｈｃｖｎｓ５ａの阻害剤
US20100272674A1 (en) * 2008-12-04 2010-10-28 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
US8283310B2 (en) 2008-12-15 2012-10-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
TW201034663A (en) * 2008-12-19 2010-10-01 Gilead Sciences Inc HCV NS3 protease inhibitors
US20100173939A1 (en) 2008-12-22 2010-07-08 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
AU2009331660A1 (en) 2008-12-22 2011-06-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterocyclic antiviral compounds
US8716263B2 (en) 2008-12-23 2014-05-06 Gilead Pharmasset Llc Synthesis of purine nucleosides
PA8855601A1 (es) 2008-12-23 2010-07-27 Forformidatos de nucleósidos
US8551973B2 (en) 2008-12-23 2013-10-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside analogs
JP2012514605A (ja) 2009-01-07 2012-06-28 サイネクシス，インコーポレーテッド Ｈｃｖおよびｈｉｖ感染の治療への使用におけるシクロスポリン誘導体
WO2010082050A1 (en) 2009-01-16 2010-07-22 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Macrocyclic and 7-aminoalkyl-substituted benzoxazocines for treatment of hepatitis c infections
GB0900914D0 (en) 2009-01-20 2009-03-04 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
US8102720B2 (en) * 2009-02-02 2012-01-24 Qualcomm Incorporated System and method of pulse generation
AR075584A1 (es) 2009-02-27 2011-04-20 Intermune Inc COMPOSICIONES TERAPEUTICAS QUE COMPRENDEN beta-D-2'-DESOXI-2'-FLUORO-2'-C-METILCITIDINA Y UN DERIVADO DE ACIDO ISOINDOL CARBOXILICO Y SUS USOS. COMPUESTO.
JP5690286B2 (ja) 2009-03-04 2015-03-25 イデニク プハルマセウティカルス，インコーポレイテッド ホスホチオフェン及びホスホチアゾールｈｃｖポリメラーゼ阻害剤
JP2012519661A (ja) 2009-03-06 2012-08-30 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 抗ウイルス性複素環化合物
WO2010107739A2 (en) 2009-03-18 2010-09-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions of treating a flaviviridae family viral infection
CA2755658A1 (en) 2009-03-27 2010-09-30 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Fused ring inhibitors of hepatitis c
US8927576B2 (en) 2009-04-06 2015-01-06 PTC Therpeutics, Inc. HCV inhibitor and therapeutic agent combinations
JP2012523419A (ja) 2009-04-08 2012-10-04 イデニク プハルマセウティカルス，インコーポレイテッド 大環状セリンプロテアーゼ阻害剤
US20110182850A1 (en) 2009-04-10 2011-07-28 Trixi Brandl Organic compounds and their uses
US8512690B2 (en) 2009-04-10 2013-08-20 Novartis Ag Derivatised proline containing peptide compounds as protease inhibitors
SG175774A1 (en) 2009-04-25 2011-12-29 Hoffmann La Roche Heterocyclic antiviral compounds
CN102458444A (zh) 2009-05-13 2012-05-16 英安塔制药有限公司 用作丙型肝炎病毒抑制剂的大环化合物
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
TWI598358B (zh) 2009-05-20 2017-09-11 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
AR077004A1 (es) * 2009-06-09 2011-07-27 Hoffmann La Roche Compuestos heterociclicos antivirales
BRPI1011744A2 (pt) 2009-06-24 2016-03-22 Hoffmann La Roche composto antiviral heterocíclico.
US8232246B2 (en) * 2009-06-30 2012-07-31 Abbott Laboratories Anti-viral compounds
JP2012532146A (ja) * 2009-07-02 2012-12-13 ドクター・レディーズ・ラボラトリーズ・リミテッド アミノビニルシクロプロパンカルボン酸誘導体の分割のための酵素および方法
EA023433B1 (ru) 2009-07-07 2016-06-30 Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх Фармацевтическая композиция ингибитора протеазы вируса гепатита c
WO2011014487A1 (en) 2009-07-30 2011-02-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Hepatitis c virus ns3 protease inhibitors
JP2013501068A (ja) 2009-08-05 2013-01-10 アイディニックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 大環状セリンプロテアーゼ阻害剤
US8742162B2 (en) 2009-08-10 2014-06-03 Sumitomo Chemical Company, Limited Method for producing optically active 1-amino-2-vinylcyclopropanecarboxylic acid ester
US8324417B2 (en) 2009-08-19 2012-12-04 Virobay, Inc. Process for the preparation of (S)-2-amino-5-cyclopropyl-4,4-difluoropentanoic acid and alkyl esters and acid salts thereof
HUE030402T2 (en) * 2009-09-15 2017-05-29 Taigen Biotechnology Co Ltd HCV protease inhibitors
WO2011038293A1 (en) * 2009-09-28 2011-03-31 Intermune, Inc. Cyclic peptide inhibitors of hepatitis c virus replication
WO2011049908A2 (en) * 2009-10-19 2011-04-28 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bismacrokyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors
BR112012010110A2 (pt) 2009-10-30 2019-09-24 Boehringer Ingelheim Int regimes de dosagem para terapia combinada para hcv compreendendo bi201335, interferon alfa e ribavirina
US20110117055A1 (en) 2009-11-19 2011-05-19 Macdonald James E Methods of Treating Hepatitis C Virus with Oxoacetamide Compounds
EP2504329A1 (en) 2009-11-25 2012-10-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated 5-alkynyl-thiophene-2-carboxylic acid derivatives and their use for the treatment or prevention of flavivirus infections
US8362068B2 (en) 2009-12-18 2013-01-29 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis C virus inhibitors
KR20120130173A (ko) 2009-12-24 2012-11-29 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 플라비바이러스 감염을 치료 또는 예방하기 위한 유사체들
US20110178107A1 (en) * 2010-01-20 2011-07-21 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
CN102140100B (zh) 2010-01-27 2014-06-11 爱博新药研发(上海)有限公司 高效抑制丙型肝炎病毒的多环化合物及其制备方法和用途
US8530497B2 (en) 2010-03-11 2013-09-10 Boehringer Ingelheim International Gmbh Crystalline salts of a potent HCV inhibitor
TW201141857A (en) 2010-03-24 2011-12-01 Vertex Pharma Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
WO2011119870A1 (en) 2010-03-24 2011-09-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
CA2794145A1 (en) 2010-03-24 2011-09-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
TW201139438A (en) 2010-03-24 2011-11-16 Vertex Pharma Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
WO2011123668A2 (en) 2010-03-31 2011-10-06 Pharmasset, Inc. Stereoselective synthesis of phosphorus containing actives
PL3290428T3 (pl) 2010-03-31 2022-02-07 Gilead Pharmasset Llc Tabletka zawierająca krystaliczny (S)-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-diokso-3,4-dihydropirymidyn-1(2H)-ylo)-4-fluoro-3-hydroksy-4-metylotetrahydrofuran-2-ylo)metoksy)(fenoksy)fosforylo)amino)propanian izopropylu
WO2011123586A1 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
EP2575866A4 (en) 2010-05-24 2013-10-16 Presidio Pharmaceuticals Inc HCV NS5A INHIBITORS
WO2011156545A1 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Viral dynamic model for hcv combination therapy
EP2582717A2 (en) 2010-06-15 2013-04-24 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hcv ns5b polymerase mutants
CA2803248A1 (en) 2010-06-28 2012-01-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
WO2012006070A1 (en) 2010-06-28 2012-01-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
JP2013531011A (ja) 2010-06-28 2013-08-01 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド フラビウイルス感染の処置または予防のための化合物および方法
WO2012024363A2 (en) 2010-08-17 2012-02-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flaviviridae viral infections
KR101894704B1 (ko) 2010-09-21 2018-09-05 이난타 파마슈티칼스, 인코포레이티드 매크로사이클릭 프롤린 유도된 ｈｃｖ 세린 프로테아제 억제제
CN103228278A (zh) * 2010-09-30 2013-07-31 贝林格尔.英格海姆国际有限公司 治疗hcv感染的组合疗法
JP5909495B2 (ja) 2010-10-08 2016-04-26 ノバルティス アーゲー スルファミドｎｓ３阻害剤のビタミンｅ製剤
EP2646453A1 (en) 2010-11-30 2013-10-09 Gilead Pharmasset LLC Compounds
EP2651885A1 (en) * 2010-12-16 2013-10-23 Abbvie Inc. Anti-viral compounds
MX2013007677A (es) 2010-12-30 2013-07-30 Abbvie Inc Inhibidores macrociclicos de serina proteasa de hepatitis.
US8951964B2 (en) 2010-12-30 2015-02-10 Abbvie Inc. Phenanthridine macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
TW201309690A (zh) 2011-02-10 2013-03-01 Idenix Pharmaceuticals Inc 巨環絲胺酸蛋白酶抑制劑，其醫藥組合物及其於治療ｈｃｖ感染之用途
WO2012107589A1 (en) 2011-02-11 2012-08-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of hcv infections
WO2012123298A1 (en) 2011-03-11 2012-09-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral compounds
US20120252721A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating drug-resistant hepatitis c virus infection with a 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitor
EP2691409B1 (en) 2011-03-31 2018-02-21 Idenix Pharmaceuticals LLC. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US8957203B2 (en) 2011-05-05 2015-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US10201584B1 (en) 2011-05-17 2019-02-12 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating HCV
US8691757B2 (en) 2011-06-15 2014-04-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2012171332A1 (zh) 2011-06-16 2012-12-20 爱博新药研发(上海)有限公司 抑制丙型肝炎病毒的大环状杂环化合物及其制备和应用
WO2012176715A1 (ja) 2011-06-21 2012-12-27 三菱瓦斯化学株式会社 １－アミノ－２－ビニルシクロプロパンカルボン酸アミドおよびその塩、ならびにその製造方法
US20120328565A1 (en) 2011-06-24 2012-12-27 Brinkman John A Antiviral compounds
CN102807607B (zh) * 2011-07-22 2013-10-23 爱博新药研发(上海)有限公司 抑制丙肝病毒的稠环杂环类化合物、其中间体及其应用
WO2013016499A1 (en) 2011-07-26 2013-01-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods for preparation of thiophene compounds
TW201317223A (zh) 2011-07-26 2013-05-01 Vertex Pharma 噻吩化合物
DE202012012998U1 (de) 2011-08-31 2014-06-13 Daniel Elias Bioaktive, regenerative Mischung zur Herstellung eines Ergänzungsnahrungsmittels
AU2012308900A1 (en) 2011-09-12 2013-05-09 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
AR088441A1 (es) 2011-09-12 2014-06-11 Idenix Pharmaceuticals Inc Compuestos de carboniloximetilfosforamidato sustituido y composiciones farmaceuticas para el tratamiento de infecciones virales
US9180193B2 (en) 2011-10-10 2015-11-10 Hoffmann-La Roche Inc. Antiviral compounds
EP2768838A1 (en) 2011-10-14 2014-08-27 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Substituted 3',5'-cyclic phosphates of purine nucleotide compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US8466159B2 (en) 2011-10-21 2013-06-18 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
EP2583680A3 (en) 2011-10-21 2013-06-12 Abbvie Inc. Mono (PSI-7977) or combination treatment of DAAs for use in treating HCV
AU2013201406B2 (en) 2011-10-21 2014-10-02 Abbvie Ireland Unlimited Company Methods for treating HCV
US8492386B2 (en) 2011-10-21 2013-07-23 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
EP2780026B1 (en) 2011-11-15 2019-10-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Hcv ns3 protease inhibitors
US8889159B2 (en) 2011-11-29 2014-11-18 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis C virus
US9089574B2 (en) 2011-11-30 2015-07-28 Emory University Antiviral JAK inhibitors useful in treating or preventing retroviral and other viral infections
AU2012347785B2 (en) 2011-12-06 2017-03-16 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for treating viral diseases
MX2014006745A (es) 2011-12-16 2014-10-15 Hoffmann La Roche Inhibidores de hcv ns5a.
LT2794628T (lt) 2011-12-20 2017-07-10 Riboscience Llc 4`-azido-3`-fluoro pakeistieji nukleozido dariniai kaip hcv replikacijos inhibitoriai
PE20141423A1 (es) 2011-12-20 2014-10-16 Hoffmann La Roche Derivados nucleosidos con sustitucion 2',4'-difluoro-2'-metilo como inhibidores de la replicacion del arn del vhc
AP2014007760A0 (en) 2012-01-12 2014-07-31 Boehringer Ingelheim Int Stabilized pharmaceutical formulations of a potentHCV inhibitor
US20140356325A1 (en) 2012-01-12 2014-12-04 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Novel 2'-c-methyl nucleoside derivative compounds
US20130217644A1 (en) 2012-02-13 2013-08-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical Compositions of 2'-C-Methyl-Guanosine, 5'-[2[(3-Hydroxy-2,2-Dimethyl-1-Oxopropyl)Thio]Ethyl N-(Phenylmethyl)Phosphoramidate]
BR112014015582A8 (pt) 2012-02-24 2017-07-04 Hoffmann La Roche compostos antivirais
WO2013137869A1 (en) 2012-03-14 2013-09-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy for treating hcv infection in an hcv-hiv coinfected patient population
EP2827876A4 (en) 2012-03-22 2015-10-28 Alios Biopharma Inc PHARMACEUTICAL COMBINATIONS WITH A THIONUCLEOTIDE ANALOG
WO2013147750A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient sub-population
WO2013147749A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient subgenotype populations
JP2015512900A (ja) 2012-03-28 2015-04-30 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 特別な患者の遺伝子亜型分集団のｈｃｖ感染症を治療するための併用療法
EP2852604B1 (en) 2012-05-22 2017-04-12 Idenix Pharmaceuticals LLC 3',5'-cyclic phosphoramidate prodrugs for hcv infection
BR112014029115A8 (pt) 2012-05-22 2018-04-03 Idenix Pharmaceuticals Inc Composto, composição farmacêutica, e, uso de um composto ou composição
EP2852605B1 (en) 2012-05-22 2018-01-31 Idenix Pharmaceuticals LLC 3',5'-cyclic phosphate prodrugs for hcv infection
US20140010783A1 (en) 2012-07-06 2014-01-09 Hoffmann-La Roche Inc. Antiviral compounds
BR112015007698A2 (pt) 2012-10-08 2017-08-22 Idenix Pharmaceuticals Inc Centre National De La Recherche Scientifique E Univ Montpellier 2 Science Composto, composição farmacêutica, e, uso de um composto
SI2909205T1 (sl) 2012-10-19 2017-02-28 Bristol-Myers Squibb Company 9-metil substituiran heksadekahidrociklopropa(e)pirolo(1,2-A)(1,4)diazaciklopentadecinil karbamat derivati kot nestrukturalni 3 (NS3) proteazni inhibitorji za zdravljenje hepatitis C virusnih infekcij
WO2014063019A1 (en) 2012-10-19 2014-04-24 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Dinucleotide compounds for hcv infection
EP2909222B1 (en) 2012-10-22 2021-05-26 Idenix Pharmaceuticals LLC 2',4'-bridged nucleosides for hcv infection
WO2014071007A1 (en) 2012-11-02 2014-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US9598433B2 (en) 2012-11-02 2017-03-21 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US9643999B2 (en) 2012-11-02 2017-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2014070974A1 (en) 2012-11-05 2014-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
CN103804208B (zh) * 2012-11-14 2016-06-08 重庆博腾制药科技股份有限公司 一种丙肝药物中间体的制备方法
WO2014078427A1 (en) 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of rp-nucleoside analog
WO2014078436A1 (en) 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of sp-nucleoside analog
WO2014099941A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
CN105073726B (zh) 2013-01-23 2017-05-31 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗病毒三唑衍生物
WO2014121418A1 (en) 2013-02-07 2014-08-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of hepatitis c
WO2014121417A1 (en) 2013-02-07 2014-08-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of hepatitis c
US20150065439A1 (en) 2013-02-28 2015-03-05 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical compositions
WO2014137926A1 (en) 2013-03-04 2014-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3'-deoxy nucleosides for the treatment of hcv
WO2014137930A1 (en) 2013-03-04 2014-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Thiophosphate nucleosides for the treatment of hcv
CA2900319A1 (en) 2013-03-05 2014-09-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral compounds
US9580463B2 (en) 2013-03-07 2017-02-28 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2014138374A1 (en) 2013-03-08 2014-09-12 Boehringer Ingelheim International Gmbh Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient sub-population
WO2014152928A2 (en) * 2013-03-14 2014-09-25 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Novel processes for producing sovaprevir
EP2981542B1 (en) 2013-04-01 2021-09-15 Idenix Pharmaceuticals LLC 2',4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
MA38678A1 (fr) 2013-05-16 2017-07-31 Riboscience Llc Dérivés nucléosidiques 4'-azido, 3'désoxy-3'-fluoro substitués
CA2912682C (en) 2013-05-16 2021-07-06 Riboscience Llc 4'-fluoro-2'-methyl substituted nucleoside derivatives
US20180200280A1 (en) 2013-05-16 2018-07-19 Riboscience Llc 4'-Fluoro-2'-Methyl Substituted Nucleoside Derivatives as Inhibitors of HCV RNA Replication
US10005779B2 (en) 2013-06-05 2018-06-26 Idenix Pharmaceuticals Llc 1′,4′-thio nucleosides for the treatment of HCV
EP3027636B1 (en) 2013-08-01 2022-01-05 Idenix Pharmaceuticals LLC D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease
PL3038601T3 (pl) 2013-08-27 2020-08-24 Gilead Pharmasset Llc Formulacja złożona dwóch związków przeciwwirusowych
WO2015042375A1 (en) 2013-09-20 2015-03-26 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis c virus inhibitors
WO2015061683A1 (en) 2013-10-25 2015-04-30 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate and d-alanine thiophosphoramidate pronucleotides of nucleoside compounds useful for the treatment of hcv
US20160271162A1 (en) 2013-11-01 2016-09-22 Idenix Pharmacueticals, Llc D-alanine phosphoramide pronucleotides of 2'-methyl 2'-fluro guanosine nucleoside compounds for the treatment of hcv
EP3074399A1 (en) 2013-11-27 2016-10-05 Idenix Pharmaceuticals LLC 2'-dichloro and 2'-fluoro-2'-chloro nucleoside analogues for hcv infection
US9717797B2 (en) 2013-12-05 2017-08-01 International Business Machines Corporation Polycarbonates bearing aromatic N-heterocycles for drug delivery
US10683321B2 (en) 2013-12-18 2020-06-16 Idenix Pharmaceuticals Llc 4′-or nucleosides for the treatment of HCV
WO2015103490A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 Abbvie, Inc. Solid antiviral dosage forms
EP2899207A1 (en) 2014-01-28 2015-07-29 Amikana.Biologics New method for testing HCV protease inhibition
WO2015134561A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions comprising a 5,5-fused heteroarylene flaviviridae inhibitor and their use for treating or preventing flaviviridae infection
WO2015134780A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Solid prodrug forms of 2'-chloro-2'-methyl uridine for hcv
EP3114122A1 (en) 2014-03-05 2017-01-11 Idenix Pharmaceuticals LLC Solid forms of a flaviviridae virus inhibitor compound and salts thereof
WO2015161137A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3'-substituted methyl or alkynyl nucleosides for the treatment of hcv
WO2017189978A1 (en) 2016-04-28 2017-11-02 Emory University Alkyne containing nucleotide and nucleoside therapeutic compositions and uses related thereto
AU2018335411B2 (en) 2017-09-21 2024-06-27 Riboscience Llc 4'-fluoro-2'-methyl substituted nucleoside derivatives as inhibitors of HCV RNA replication
CN113167802B (zh) 2018-12-04 2025-02-07 百时美施贵宝公司 通过多同位素体反应监测使用样品内校准曲线的分析方法

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0475255A3 (en) * 1990-09-12 1993-04-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for the preparation of optically pure (s)-alpha-((tert-butylsulfonyl)methyl)hydro cinnamic acid
JPH05155827A (ja) * 1991-12-09 1993-06-22 Banyu Pharmaceut Co Ltd ｃｉｓ−２−アミノシクロプロパンカルボン酸誘導体の製造法
IT1272179B (it) 1994-02-23 1997-06-16 Angeletti P Ist Richerche Bio Metodologia per riprodurre in vitro l'attivita' proteolitica della proteasi ns3 del virus hcv.
CN1141591A (zh) * 1994-02-23 1997-01-29 布·安格莱荻公司分子生物学研究所 体外再生丙型肝炎病毒(hcv)ns3蛋白酶的解蛋白活性的方法
US5500208A (en) 1994-06-07 1996-03-19 The Procter & Gamble Company Oral compositions comprising a novel tripeptide
GB9517022D0 (en) 1995-08-19 1995-10-25 Glaxo Group Ltd Medicaments
IT1277914B1 (it) * 1995-08-22 1997-11-12 Angeletti P Ist Richerche Bio Procedimento per produrre - in forma pura e in quantita' elevate - polipeptidi con l'attivita' proteolitica della proteasi ns3 di hcv, e
CA2165996C (en) * 1995-12-22 2002-01-29 Murray Douglas Bailey Stereoselective preparation of 2-substituted succinic derivatives
DE19600034C2 (de) 1996-01-02 2003-12-24 Degussa 1,1,2-Trisubstituierte Cyclopropanverbindungen, Verfahren zu deren Herstellung und Dihydroxyethyl-substituierte 1-Amino-cyclopropan-1-carbonsäure
US5633388A (en) 1996-03-29 1997-05-27 Viropharma Incorporated Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C
HU227742B1 (en) 1996-10-18 2012-02-28 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus ns3 protease
EP1001764A4 (en) 1997-05-29 2005-08-24 Merck & Co Inc HETEROCYCLIC AMIDE COMPOUNDS AS INHIBITORS OF CELL ADHESION
JP4354632B2 (ja) 1997-08-11 2009-10-28 ベーリンガー インゲルハイム （カナダ） リミテッド Ｃ型肝炎抑制剤ペプチド
US6767991B1 (en) 1997-08-11 2004-07-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C inhibitor peptides
SE9704543D0 (sv) * 1997-12-05 1997-12-05 Astra Ab New compounds
US6455571B1 (en) * 1998-04-23 2002-09-24 Abbott Laboratories Inhibitors of neuraminidases
DE19835120C1 (de) * 1998-08-04 1999-10-21 Westfalia Separator Ag Verfahren und Vorrichtung zum Einstellen des Flüssigkeitsgehalts des aus einer selbstentleerenden Schleudertrommel eines Separators ausgetragenen Feststoffes
US6323180B1 (en) * 1998-08-10 2001-11-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US6277830B1 (en) * 1998-10-16 2001-08-21 Schering Corporation 5′-amino acid esters of ribavirin and the use of same to treat hepatitis C with interferon
US6608027B1 (en) 1999-04-06 2003-08-19 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US6642204B2 (en) * 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US7091184B2 (en) * 2002-02-01 2006-08-15 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
WO2004101602A2 (en) * 2003-03-05 2004-11-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
EP1601685A1 (en) * 2003-03-05 2005-12-07 Boehringer Ingelheim International GmbH Hepatitis c inhibiting compounds

Also Published As

Publication number Publication date
CZ301268B6 (cs) 2009-12-30
IN2001MU00127A (sr) 2005-03-04
PT2028186E (pt) 2013-03-27
EA200100228A1 (ru) 2001-10-22
KR100672229B1 (ko) 2007-02-28
BR9913646B1 (pt) 2014-12-02
CN1323316A (zh) 2001-11-21
HRP20010102B1 (en) 2010-07-31
USRE41894E1 (en) 2010-10-26
AR020880A1 (es) 2002-06-05
HK1040085B (zh) 2008-05-30
TR200100432T2 (tr) 2001-09-21
SK286994B6 (sk) 2009-09-07
JP2010043124A (ja) 2010-02-25
BG105232A (en) 2001-11-30
EE05517B1 (et) 2012-02-15
WO2000009543A2 (en) 2000-02-24
TWI250165B (en) 2006-03-01
JP2002522554A (ja) 2002-07-23
ES2405930T3 (es) 2013-06-04
BRPI9913646B8 (pt) 2021-05-25
UA75026C2 (en) 2006-03-15
MXPA01001423A (es) 2001-08-01
MY127538A (en) 2006-12-29
DE69940817D1 (en) 2009-06-10
CO5261542A1 (es) 2003-03-31
YU9401A (sh) 2003-02-28
JP4485685B2 (ja) 2010-06-23
IL196545A0 (en) 2011-07-31
CA2445938A1 (en) 2000-02-24
PL346626A1 (en) 2002-02-25
SK2062001A3 (en) 2001-10-08
EP1105413A2 (en) 2001-06-13
PH11999002002B1 (en) 2007-10-19
KR20060083992A (ko) 2006-07-21
ME00381B (me) 2011-10-10
BG65738B1 (bg) 2009-09-30
US6329379B1 (en) 2001-12-11
US6534523B1 (en) 2003-03-18
ATE430158T1 (de) 2009-05-15
KR20010085363A (ko) 2001-09-07
MX257413B (es) 2008-05-27
SI1105413T1 (sl) 2009-10-31
CY1113935T1 (el) 2016-07-27
US6329417B1 (en) 2001-12-11
NO20100004L (no) 2001-04-02
IN2007MU00706A (sr) 2007-07-20
USRE42164E1 (en) 2011-02-22
AR073428A2 (es) 2010-11-03
HUP0105144A2 (hu) 2002-04-29
CA2338946C (en) 2010-10-12
CN101143892A (zh) 2008-03-19
EP2028186A3 (en) 2009-04-01
MX261584B (es) 2008-10-22
US20020037998A1 (en) 2002-03-28
CY1109291T1 (el) 2014-07-02
IL141012A (en) 2009-09-01
TR200200129T2 (tr) 2002-06-21
BR9917805B1 (pt) 2014-06-17
US6268207B1 (en) 2001-07-31
DK1105413T3 (da) 2009-08-17
AR069583A2 (es) 2010-02-03
MEP58508A (en) 2011-05-10
KR100631439B1 (ko) 2006-10-09
CA2338946A1 (en) 2000-02-24
NO20010683D0 (no) 2001-02-09
ZA200100971B (en) 2002-06-26
HK1040085A1 (zh) 2002-05-24
SK288068B6 (sk) 2013-05-03
DK2028186T3 (da) 2013-03-25
IN211493B (sr) 2008-01-25
EP2028186A2 (en) 2009-02-25
US20020016442A1 (en) 2002-02-07
CN100339389C (zh) 2007-09-26
US6323180B1 (en) 2001-11-27
CN101143892B (zh) 2010-12-08
HRP20010102A2 (en) 2002-02-28
SI2028186T1 (sl) 2013-06-28
EP2028186B1 (en) 2013-01-23
WO2000009543A3 (en) 2000-05-25
CZ302766B6 (cs) 2011-10-26
AU769738B2 (en) 2004-02-05
SA99200617A (ar) 2005-12-03
PE20000949A1 (es) 2000-09-26
ID27839A (id) 2001-04-26
PL204850B1 (pl) 2010-02-26
NO328952B1 (no) 2010-06-28
RS53562B1 (sr) 2015-02-27
AU5273199A (en) 2000-03-06
NO20010683L (no) 2001-04-02
ES2326707T3 (es) 2009-10-16
IL141012A0 (en) 2002-02-10
BR9913646A (pt) 2001-06-05
NZ510396A (en) 2004-02-27
US6420380B2 (en) 2002-07-16
US6410531B1 (en) 2002-06-25
EP1105413B1 (en) 2009-04-29
PT1105413E (pt) 2009-06-30
SA99200617B1 (ar) 2006-06-24
RS20090459A (sr) 2010-06-30
USRE40525E1 (en) 2008-09-30
EA003906B1 (ru) 2003-10-30
EE200100081A (et) 2002-08-15
HUP0105144A3 (en) 2002-11-28
CZ2001516A3 (cs) 2001-08-15
IL196545A (en) 2012-06-28
HK1113164A1 (en) 2008-09-26
USRE41356E1 (en) 2010-05-25
HU229262B1 (en) 2013-10-28
HUP1300080A2 (sr) 2002-04-29
HU230701B1 (hu) 2017-10-30
JP5021711B2 (ja) 2012-09-12
NO336663B1 (no) 2015-10-12
CA2445938C (en) 2012-10-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6323180B1 (en) Hepatitis C inhibitor tri-peptides
JP4312711B2 (ja) ヘテロ環式スルホンアミドｃ型肝炎ウイルス阻害剤
RS49819B (sr) Inhibitorski peptidi hepatitisa c
CA2370396A1 (en) Hepatitis c inhibitor tri-peptides