EA018603B1

EA018603B1 - Кристаллические формы 2-тиазолил-4-хинолинилоксипроизводного, активного ингибитора hcv

Info

Publication number: EA018603B1
Application number: EA201100482A
Authority: EA
Inventors: Тило Беркенбуш; Карл Алан Бьюсакка; Буркхард Йэгер; Ричард Дж. Варсолона
Original assignee: Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх
Priority date: 2008-09-16
Filing date: 2009-09-14
Publication date: 2013-09-30
Also published as: ZA201100096B; JP2014062116A; EP2331538A1; HK1156624A1; EA201100482A1; CO6351741A2; IL210345A0; AU2009293494A1; EP2331538B1; JP2012502910A; ME01831B; US20100093792A1; NZ602163A; US8362035B2; MY153093A; UY32119A; SI2331538T1; CL2011000558A1; DK2331538T3; JP5520301B2

Abstract

В изобретении приведены описания новых кристаллических форм соединения (1) и его натриевой соли и способов их получения, содержащих их фармацевтические композиции, и их применение для лечения вирусной инфекции гепатита С (HCV):

Description

По заявке на данное изобретение испрашивается приоритет по следующим предварительным заявкам И8: 61/097291, поданной 16 сентября 2008 г., и 61/150826, поданной 9 марта 2009 г.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новым кристаллическим формам соединения (1) и натриевой соли соединения (1), описанным в настоящем изобретении, способам их получения, содержащим их фармацевтическим композициям и их применению для лечения вирусной инфекции гепатита С (НСУ).

Уровень техники

Соединение (1) известно как селективный и активный ингибитор серинпротеазы НСУ N83

Соединение (1) входит в число серии ациклических пептидных ингибиторов НСУ, раскрытых в патентах И8 6323180 и 7514557 и в публикации заявки на патент И8 № 2005/0020503. Соединение (1), в частности, раскрыто как соединение № 1055 в публикации заявки на патент И8 2005/0020503 и как соединение № 1008 в патенте И8 7514557. Соединение (1) можно получить по общим методикам, приведенным в цитированных выше ссылках, которые включены в настоящее изобретение в качестве ссылки.

Соединение (1) также может быть известно в виде приведенного ниже альтернативного изображения его химической структуры, которая эквивалентна описанной выше структуре:

в которой В обозначает Ь⁰ обозначает МеО-;

Ь¹ обозначает Вг и

К² обозначает

При синтезе по общим методикам, приведенным в указанных выше ссылках, соединение (1) получают в виде аморфного твердого вещества, которое представляет собой форму, обычно менее подходящую для крупномасштабного фармацевтического производства. Таким образом, необходимо получить соединение (1) в кристаллической форме, чтобы приготовить препараты, соответствующие действующим фармацевтическим требованиям и спецификациям. Кроме того, способ, с помощью которого получают соединение (1), должен быть подходящим для крупномасштабного производства. Кроме того, желательно, чтобы продукт находился в форме, которую легко фильтровать и легко сушить. Наконец, с экономической точки зрения желательно, чтобы продукт был стабильным в течение длительных периодов времени и не требовались специальные условия хранения.

- 1 018603

Краткое изложение сущности изобретения

Согласно изобретению неожиданно и непредвиденно впервые было установлено, что соединение (1) можно получить в кристаллической форме, а также в форме его натриевой соли и более предпочтительно натриевой соли в кристаллической форме. Таким образом, настоящее изобретение относится к соединению (1) в кристаллической форме, которое в одном варианте осуществления представляет собой новую кристаллическую полиморфную форму, обозначенную в настоящем изобретении, как тип А, а также новую кристаллическую натриевую соль соединения (1). Эти новые кристаллические формы позволяют преодолеть затруднения при фармацевтической обработке, характерные для использования аморфной формы и формы натриевой соли, в частности они обладают другими характеристиками, делающими их особенно подходящими для обработки фармацевтической композиции, как это подробно описано ниже.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению (1) в кристаллической форме. В более предпочтительном варианте осуществления авторы настоящего изобретения открыли новую кристаллическую полиморфную форму соединения (1), обозначенную ниже в настоящем изобретении как тип А.

Тип А обладает характеристической порошковой рентгенограммой (ΧΚΡΌ) с характеристическими пиками, выраженными в °2θ (±0,2°2θ), при 4,8, 6,8, 9,6, 13,6, 17,3, 19,8 и 24,5, измеренными с использованием излучения СиКа.

Другой вариант осуществления относится к натриевой соли соединения (1), и эту натриевую соль можно получить в кристаллической форме. Кристаллическая натриевая соль соединения (1) обладает характеристической порошковой рентгенограммой (ΧΚΡΌ) с характеристическими пиками, выраженными в °2θ (±0,2°2θ), при 5,4, 6,5, 8,7, 10,1, 11,9, 13,0, 18,2, 20,2 и 24,7, измеренными с использованием излучения СиКа.

Еще один вариант осуществления относится к фармацевтической композиции, содержащей тип А или натриевую соль соединения (1) или их смеси и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

Еще один вариант осуществления относится к способу лечения инфекции НСУ у млекопитающего, включающему введение указанному млекопитающему типа А или натриевой соли соединения (1), или их смесей в терапевтически эффективном количестве.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 приведена характеристическая порошковая рентгенограмма (ΧΚΡΌ) типа А.

На фиг. 2 приведена термограмма ДСК кристаллов типа А, причем ДСК проводят при скорости нагревания, равной 10°С/мин, в закрытом тигле.

На фиг. 3 приведена характеристическая порошковая рентгенограмма (ΧΚΡΌ) кристаллической натриевой соли соединения (1).

На фиг. 4 приведена термограмма ДСК кристаллов кристаллической натриевой соли соединения (1), причем ДСК проводят при скорости нагревания, равной 10°С/мин, в открытой чашке.

На фиг. 5 приведены ΧΚΡΌ для кристаллической формы типа А соединения (1) (внизу); кристаллической формы типа А соединения (1) после диспергирования в пропиленгликоле (в середине) и кристаллической формы типа А соединения (1) после диспергирования в этаноле (вверху).

Подробное описание изобретения

Определения.

Терминам, специально не определенным в настоящем изобретении, следует придавать значения, которые им должен придавать специалист в данной области техники в соответствии с раскрытием и контекстом. Однако если не указано иное, то при использовании в описании и прилагаемой формуле изобретения приведенные ниже термины обладают указанными значениями.

Термин тип А означает кристаллическую полиморфную форму соединения (1), которая обладает порошковой рентгенограммой, содержащей, по меньшей мере, характеристический пик при 9,6°2θ (±0,2°2θ), измеренный с использованием излучения СиКа. Предполагается, что этот характеристический пик отличает тип А от других кристаллических форм соединения (1).

Термин примерно означает с отклонением, составляющим не более 5% и более предпочтительно не более 1% от данного значения или диапазона. Например, примерно 3,7% означает от 3,5 до 3,9%, предпочтительно от 3,66 до 3,74%. Если термин примерно относится к диапазону значений, например, примерно от Χ до Υ%, то термин примерно указывает на изменение и верхнего (Χ) и нижнего (Υ) значений указанного диапазона. Например, выражение примерно от 20 до 40% эквивалентно выражению от примерно 20 до примерно 40%.

Термин фармацевтически приемлемый применительно к веществу при использовании в настоящем изобретении означает, что вещество в соответствии с тщательной медицинской оценкой пригодно для использования при взаимодействии с тканям человека и низших животных без нежелательной токсичности, проявления раздражения, аллергической реакции и т.п., в соответствии с разумным отношением риск/польза и эффективно для предназначенного применения, когда вещество используется в фарма

- 2 018603 цевтической композиции.

Термин лечение применительно к лечению патологического состояния пациента включает:

(ί) подавление или улучшение протекания патологического состояния у пациента, например остановку или замедление его развития; или (й) облегчение патологического состояния у пациента, т.е. обеспечение ремиссии или излечения патологического состояния. В случае НСУ лечение включает уменьшение нагрузки вирусом НСУ у пациента.

Кристаллическое соединение (1).

Соединение (1) выделено в виде кристаллической полиморфной формы, обозначенной в настоящем изобретении как тип А. Обычно тип А обладает характеристической порошковой рентгенограммой (ΧΚΡΌ) с пиками, выраженными в °2θ (±0,2°2θ), при 4,8, 6,8, 9,6, 13,6, 17,3, 19,8 и 24,5.

ΧΚΡΌ типа А приведена на фиг. 1. Положения и относительные интенсивности характеристических пиков на ΧΚΡΌ, приведенной на фиг. 1, представлены в табл. 1.

Таблица 1

Соединение (1) тип А
Угол 2-тета, ⁰	Относительная интенсивность, %
4,8	100
6,8	6
9,6	24
13,6	6
17,3	8
19,8	16
24,5	И

На фиг. 2 приведена полученная с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) термограмма кристаллов типа А, причем ДСК проводят при скорости нагревания 10°С/мин в закрытом тигле.

В одном общем варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению (1) в кристаллической форме.

Другой более предпочтительный вариант осуществления относится к кристаллической полиморфной форме соединения (1), которая обладает, по меньшей мере, следующей характеристикой: порошковой рентгенограммой, содержащей пик при 9,6°2θ (±0,2°2θ), измеренный с использованием излучения СиКа.

Другой вариант осуществления относится к кристаллической полиморфной форме соединения (1), обладающей ΧΚΡΌ, содержащей пик при 9,6°2θ (±0,2°2θ), описанный выше, и дополнительно содержащей пик при 19,8°2θ (±0,2°2θ), измеренный с использованием излучения СиКа.

Другой вариант осуществления относится к кристаллической полиморфной форме соединения (1), обладающей ΧΚΡΌ, содержащей пик при 9,6°2θ (±0,2°2θ), описанный выше, и дополнительно содержащей пики при 4,8 и 19,8°2θ (±0,2°2θ), измеренные с использованием излучения СиКа.

Другой вариант осуществления относится к кристаллической полиморфной форме соединения (1), обладающей ΧΚΡΌ, содержащей пик при 9,6°2θ (±0,2°2θ), описанный выше, и дополнительно содержащей пики при 4,8, 6,8, 13,6, 17,3, 19,8 и 24,5°2θ (±0,2°2θ), измеренные с использованием излучения СиКа.

Другой вариант осуществления относится к кристаллической полиморфной форме соединения (1), обладающей ΧΚΡΌ, в основном такой же, как приведенная на фиг. 1.

Другой вариант осуществления относится к кристаллической полиморфной форме соединения (1), обладающей ΧΚΡΌ, содержащей пик при 9,6°2θ (±0,2°2θ), описанный выше, и также обладающей термограммой ДСК, в основном такой же, как приведенная на фиг. 2, при скорости нагревания, равной 10°С/мин, в закрытом тигле.

Другой вариант осуществления относится к количеству соединения (1), в котором не менее 50%, предпочтительно не менее 75%, более предпочтительно не менее 95%, более предпочтительно не менее 99% указанного соединения содержится в кристаллической форме, например в форме типа А кристаллической полиморфной формы, охарактеризованной с помощью любого из описанных выше посредством ΧΚΡΌ вариантов осуществления. Наличие таких количеств типов А в количестве соединения (1) обычно измеримо с помощью проводимого посредством ΧΚΡΌ анализа соединения.

Другой вариант осуществления относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение (1) и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель, в которой не менее 50%, предпочтительно не менее 75%, более предпочтительно не менее 95%, более предпочтительно не менее 99%, соединения (1) в композиции содержится в кристаллической форме, например в форме типа А кристаллической полиморфной формы, охарактеризованной с помощью любого из описанных выше посредством ΧΚΡΌ вариантов осуществления.

- 3 018603

Настоящее изобретение относится к способу получения типа А, который включает кристаллизацию соединения (1) из раствора в растворителях при условиях, которые дают тип А. Точные условия, при которых образуется тип А, можно определить эмпирически и можно привести только методики, которые оказались подходящими при практическом применении.

Согласно изобретению установлено, что тип А соединения (1) можно получить способом, включающим следующие стадии, который также является вариантом осуществления настоящего изобретения:

(ί) растворение соединения (1) в алифатическом спиртовом растворителе, необязательно содержащем воду в качестве сорастворителя, путем нагревания смеси до температуры примерно 65-75°С, с получением раствора;

(ίί) добавление воды к раствору, полученному на стадии (ί), с поддержанием температуры раствора примерно 70-75°С, с получением взвеси;

(ίίί) охлаждение взвеси, полученной на стадии (ίί), с получением твердого вещества;

(ίν) сбор твердого вещества, полученного на стадии (ίίί), и сушка указанного вещества при температуре примерно 65-80°С, с получением соединения (1)типа А.

Алифатические спирты, которые можно использовать в этом способе, включают, например, этанол (например, денатурированный крепостью 100° или 100% чистоты), 1-пропанол, 2-пропанол, 1-бутанол, изобутиловый спирт и изопентиловый спирт, предпочтительно этанол. Полученные кристаллы типа А можно извлечь по любым обычным методикам, известным в данной области техники.

На конечной стадии (ίν) твердые вещества, полученные на стадии (ίίί), можно собрать и высушить при высокой температуре по обычным методикам сбора и высокотемпературной сушки, например фильтрованием и сушкой в вакуумном сушильном шкафу.

В одном предпочтительном варианте осуществления аморфное соединение (1) растворяют в алифатическом спиртовом растворителе (например, этаноле), содержащем примерно до 10% об./об. воды в качестве сорастворителя, путем перемешивания и нагревания смеси до температуры, равной примерно 72-74°С, пока соединение (1) полностью не растворится. Готовят отдельный добавочный водный раствор, содержащий воду и примерно до 10% об./об. алифатического спирта (например, этанола), и этот добавочный водный раствор добавляют примерно с линейной скоростью к раствору соединения (1), поддерживая температуру смеси равной примерно 72-74°С. Тип А соединения (1) начинает кристаллизоваться во время добавления водного раствора. Полученную взвесь кристаллов охлаждают и перемешивают и затем кристаллы отфильтровывают, промывают и сушат при температуре, равной примерно 6575°С, по обычным методикам.

Разумеется, эти стадии способа можно облегчить с помощью обычных методик смешивания, например перемешивания и других обычных методик, для которых хорошо известно, что они облегчают проведение способа.

Натриевая соль соединения (1).

Установлено, что натриевая соль соединения формулы (1) является особенно подходящей для фармацевтической обработки, поскольку ее можно получить в виде стабильной кристаллической формы. Обычно кристаллическая натриевая соль соединения (1) обладает характеристической порошковой рентгенограммой (ΧΚΡΌ) с характеристическими пиками, выраженными в °2θ (±0,2°2θ), при 5,4, 6,5, 8,7, 10,1, 11,9, 13,0, 18,2, 20,2 и 24,7.

ΧΚΡΌ кристаллической натриевой соли соединения (1) приведена на фиг. 3. Положения и относительные интенсивности характеристических пиков на ΧΚΡΌ, приведенной на фиг. 3, представлены в табл. 2.

Таблица 2

Соединение (1) кристаллическая № соль
Угол 2-тета, °	Относительная интенсивность, %
5,4	42
6,5	29
8,7	43
10,1	100
11,9	39
13,0	52
18,2	51
20,2	42
24,7	30

На фиг. 4 приведена полученная с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) термограмма кристаллической натриевой соли соединения (1) кристаллов, причем ДСК проводят при скорости нагревания, равной 10°С/мин, в открытом тигле.

Согласно изобретению неожиданно установлено, что форма натриевой соли обладает особыми характеристиками, делающими ее особенно подходящей для обработки фармацевтической композиции. В частности, форма натриевой соли обладает некоторыми характеристиками, делающими ее особенно подходящей для приготовления системы доставки лекарственного средства на основе липидов (ΌΒΌΌδ).

- 4 018603

Во-первых, согласно изобретению неожиданно установлено, что форма натриевой соли обладает намного улучшенной растворимостью в инертных наполнителях, обычно использующихся для приготовления ΌΒΌΌδ, включая, например, пропиленгликоль и этанол. В приведенной табл. 3 представлены данные, подтверждающие намного улучшенную растворимость формы натриевой соли соединения (1) по сравнению с растворимостью формы типа А соединения (1) в конкретных растворителях.

Таблица 3

Сопоставление растворимости Να соли соединения (1) с растворимостью соединения (1) типа А в различных инертных наполнителях

Инертный наполнитель	Соединение (1) Νβ соль (мг/мл)	Соединение (1) типа А (мг/мл)
ПЭГ 400	233,6 ± 34	136,8 ± 3,2
Пропиленгликоль	>468	1,3 ± <0,01
Этанол	187,0 ± 23,9	0,9 ± 0,1
Сарти! РО8	<169	172,6 ± 8,3
Сарти1 МСМ	262,5 ± 2,6	220,6 ± 7,4
Транскутол Р	430,6 ± 14,7	24,3 ± 0,3
ЬаЬгазо!	174,6 ± 11,8	146,7 ± 5,1

*ПЭГ - полиэтиленгликоль.

Эта намного улучшенная растворимость формы натриевой соли в пропиленгликоле и этаноле делает эту форму особенно подходящей для приготовления ΌΒΌΌδ с использованием одного или большего количества этих обычных инертных наполнителей.

Во-вторых, согласно изобретению неожиданно установлено, что натриевая соль обладает большей стабильностью формы в пропиленгликоле и этаноле по сравнению с формой типа А. В частности, форма типа А соединения (1) испытывает явное изменение формы при диспергировании в этаноле или пропиленгликоле, о чем свидетельствует изменение ее ΧΚΡΌ. На фиг. 5 приведены ΧΚΡΌ кристаллической формы типа А (внизу - Ьо1 А03); формы типа А после диспергирования в пропиленгликоле (в середине пропиленгликоль с твердыми веществами) и после диспергирования в этаноле (вверху - Ε1ΘΗ с твердыми веществами), явно показывающие изменения кристаллической формы. В отличие от этого, когда кристаллическую форму натриевой соли соединения (1) диспергируют в этаноле или пропиленгликоле, для оставшейся твердой фазы не наблюдается изменений ΧΚΡΌ. Это свидетельствует об улучшенной стабильности формы натриевой соли в этих инертных наполнителях, что также делает форму натриевой соли особенно подходящей для приготовления ΌΒΌΌδ с использованием одного или большего количества этих обычных инертных наполнителей. Методики, использованные для получения этих результатов, описаны ниже в разделе Методики исследования.

Результаты, полученные выше для кристаллической натриевой соли, являются неожиданными, поскольку обычно невозможно предсказать такие различия в растворимости и какие-либо различия физической стабильности свободной формы и разных солевых форм соединения и, в частности соединения (1), даже если такие формы успешно получены.

В одном общем варианте осуществления настоящее изобретение относится к натриевой соли соединения (1).

В более предпочтительном варианте осуществления натриевая соль соединения (1) находится в кристаллической форме.

В еще более предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к кристаллической натриевой соли соединения (1), которая обладает, по меньшей мере, следующей характеристикой: порошковой рентгенограммой, содержащей пик при 10,1°2θ (±0,2°2θ), измеренный с использованием излучения СиКа.

Другой вариант осуществления относится к кристаллической натриевой соли соединения (1), обладающей ΧΚΡΌ, содержащей пик при 10,1°2θ (±0,2°2θ), описанный выше, и дополнительно содержащей пики при 13,0 и 18,2°2θ (±0,2°2θ), измеренные с использованием излучения СиКа.

Другой вариант осуществления относится к кристаллической натриевой соли соединения (1), обладающей ΧΚΡΌ, содержащей пик при 10,1°2θ (±0,2°2θ), описанный выше, и дополнительно содержащей пики при 5,4, 8,7, 13,0 и 18,2°2θ (±0,2°2θ), измеренные с использованием излучения СиКа.

Другой вариант осуществления относится к кристаллической натриевой соли соединения (1), обладающей ΧΚΡΌ, содержащей пик при 10,1°2θ (±0,2°2θ), описанный выше, и дополнительно содержащей пики при 5,4, 6,5, 8,7, 11,9, 13,0, 18,2, 20,2 и 24,7°2θ (±0,2°2θ), измеренные с использованием излучения СиКа.

Другой вариант осуществления относится к кристаллической натриевой соли соединения (1), обладающей ΧΚΡΌ, в основном такой же, как приведенная на фиг. 3.

Другой вариант осуществления относится к кристаллической натриевой соли соединения (1), обладающей ΧΚΡΌ с характеристическим пиком при 10,1°2θ (±0,2°2θ), описанный выше, и также обладающей термограммой ДСК, в основном такой же, как приведенная на фиг. 4, при скорости нагревания рав

- 5 018603 ной 10°С/мин, в открытом тигле.

Другой вариант осуществления относится к количеству соединения (1), в котором не менее 50%, предпочтительно не менее 75%, более предпочтительно не менее 95%, более предпочтительно не менее 99% указанного соединения содержится в форме кристаллической натриевой соли соединения (1), которую можно охарактеризовать с помощью любого из описанных выше посредством ΧΚΡΌ вариантов осуществления. Наличие таких количеств кристаллической натриевой соли соединения (1) в количестве соединения (1) обычно измеримо с помощью проводимого посредством ΧΚΡΌ анализа соединения.

Другой вариант осуществления относится к фармацевтической композиции, содержащей натриевую соль соединения (1) и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. В более предпочтительном варианте осуществления не менее 50%, предпочтительно не менее 75%, более предпочтительно не менее 95%, более предпочтительно не менее 99% соединения (1) натриевой соли в композиции содержится в кристаллической форме, например в форме кристаллической натриевой соли соединения (1), которую можно охарактеризовать с помощью любого из описанных выше посредством ΧΚΡΌ вариантов осуществления.

Настоящее изобретение относится к способу получения кристаллической натриевой соли соединения (1), который включает кристаллизацию соединения (1) из раствора в растворителях при условиях, которые дают кристаллическую натриевую соль. Точные условия, при которых образуется кристаллическая натриевая соль, можно определить эмпирически и можно привести только методики, которые оказались подходящими при практическом применении.

Согласно изобретению установлено, что кристаллическую натриевую соль соединения (1) можно получить способом, включающим следующие стадии, который также является вариантом осуществления настоящего изобретения:

(ί) растворение соединения (1) в кетонах или ацетатах, необязательно содержащих воду в качестве сорастворителя, путем нагревания смеси в виде взвеси или путем получения истинного раствора;

(ίί) добавление воды к раствору, полученному на стадии (ί), с поддержанием температуры раствора равной примерно 50-70°С, с получением раствора или взвеси;

(ίίί) внесение затравки кристаллической натриевой соли соединения (1);

(ίν) охлаждение взвеси, полученной на стадии (ίίί), с получением твердого вещества;

(ίν) сбор твердого вещества, полученного на стадии (ίίί), сушка указанного вещества при температуре, равной примерно 45-75°С, и получение кристаллической натриевой соли соединения (1).

Дополнительные альтернативные способы получения кристаллической натриевой соли соединения (1) приведены в разделе Примеры, каждый из которых является дополнительным вариантом осуществления настоящего изобретения.

Фармацевтические композиции и способы.

С учетом показанной ингибирующей активности соединения (1) по отношению к серинпротеазе НСУ N83 указанные выше формы соединения (1), включая тип А и формы натриевой соли, применимы в качестве средств против НСУ. Поэтому указанные формы применимы для лечения инфекции НСУ у млекопитающего и их можно использовать для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для лечения инфекции НСУ или облегчения одного или более его симптомов у пациента. Кроме того, с помощью клинических исследований показано, что форма натриевой соли соединения (1) эффективна для лечения пациентов, инфицированных НСУ. Подходящие дозы и режимы лечения конкретного пациента можно определить по методикам, известным в данной области техники, и с учетом раскрытия в патенте И8 6323180 В1 и в публикации заявки на патент И8 № 2005/0020503. Обычно для лечения инфекции НСУ у млекопитающего вводят терапевтически эффективное количество. В одном варианте осуществления взрослому человеку вводят примерно от 50 до 1000 мг, более предпочтительно от примерно 120 до примерно 480 мг в сутки в виде одной или нескольких доз.

Разумеется, конкретные оптимальные дозы и режимы лечения любого конкретного пациента зависят от множества факторов, включая возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, диету, время введения, скорость выведения, использующуюся комбинацию лекарственных средств, тяжесть и протекание инфекции, предрасположенность пациента к инфекции и решение лечащего врача. Обычно наиболее желательно вводить соединение при концентрации, которая обычно приводит к противовирусно эффективным результатам без проявления каких-либо опасных или вредных побочных эффектов.

Эти кристаллические формы соединения (1) или его натриевой соли при выбранной дозе обычно вводят пациенту с помощью фармацевтической композиции. Различные типы композиций, которые можно использовать в настоящем изобретении, см., например, описание в патенте И8 6323180 В1 и в публикации заявки на патент И8 № 2005/0020503. Фармацевтическую композицию можно вводить перорально, парентерально или с помощью имплантированного резервуара. Термин парентеральный при использовании в настоящем изобретении методики подкожной, внутривенной, внутримышечной, внутрисуставной, внутрисиновиальной, надчревной, внутриоболочечной и проводимой внутрь пораженных тканей инъекции или вливания. Предпочтительны пероральное введение или введение путем инъекции.

Фармацевтические композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, могут содержать любые обычные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, разбавители, вспомогательные вещества,

- 6 018603 инертные наполнители или растворители. В некоторых случаях значение рН композиции можно отрегулировать фармацевтически приемлемыми кислотами, основаниями или буферами для увеличения стабильности приготовленной композиции соединения или формы его доставки.

Фармацевтические композиции могут находиться в форме стерильного препарата для инъекции, например стерильного водного раствора или масляной суспензии для инъекции. Эту суспензию можно приготовить по методикам, известным в данной области техники, с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих агентов (таких как, например. Т\гееп 80) и суспендирующих агентов.

Фармацевтические композиции также могут находиться в форме пероральной фармацевтической композиции, содержащей тип А или натриевую соль соединения (1) или их смеси и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Пероральные фармацевтические композиции можно вводить перорально в любой перорально приемлемой дозированной форме, включая, но не ограничиваясь только ими, таблетки, капсулы (например, капсулы из твердого или мягкого желатина), включая капсулы, заполненные жидкостью, и водные суспензии и растворы. В случае таблеток для перорального применения обычно использующиеся носители включают лактозу и кукурузный крахмал. Также обычно добавляют смазывающие агенты, такие как стеарат магния. Для перорального введения в форме капсул обычно использующиеся разбавители включают лактозу и сухой кукурузный крахмал. Примеры капсул из мягкого желатина, которые можно использовать, включают раскрытые в ЕР 649651 В1 и патенте И8 5985321. Если водную суспензию вводят перорально, то активные ингредиенты объединяют с эмульгирующими и суспендирующими агентами. При необходимости можно добавить некоторые подсластители и/или красители.

Другие подходящие для указанных выше препаратов и композиций приведены в стандартных фармацевтических публикациях, например в Ветшдоп'к Рйагтасеийса1 Заепсек, 19 ей., Маск РиЬйкЫпд Сотрапу, Еайоп, Репп., 1995.

Обычно, когда кристаллическую натриевую соль готовят в жидком разбавителе, например в виде жидкого раствора или суспензии для перорального введения или введения путем инъекции, включая, например, заполненные жидкостью капсулы, натриевая соль теряет свой кристаллический характер. Тем не менее, конечная фармацевтическая композиция на жидкой основе содержит новую натриевую соль соединения (1), и поэтому ее следует считать отдельным вариантом осуществления настоящего изобретения. Только благодаря открытию способа приготовления натриевой соли в стабильной кристаллической форме авторы настоящего изобретения смогли обеспечить эффективную фармацевтическую обработку и приготовление фармацевтического препарата с использованием формы натриевой соли. Поэтому конечная фармацевтическая композиция, содержащая форму натриевой соли, полученную в соответствии с этим открытием, считается другим объектом и вариантом осуществления настоящего изобретения.

Методики исследования.

1. Порошковая рентгенография.

Анализы с помощью порошковой рентгенографии проводили на порошковом дифрактометре Вгикег АХ8 Х-Рау Ро\\йег ЭйТгасЮшеЮг Мойе1 Ό8 Ойсоуег выпускающемся фирмой Вгикег АХ8, 1ис. οί Майкоп, ^1, с использованием излучения СиКа. Прибор снабжен длинной рентгеновской трубкой с тонкой фокусировкой. Для трубки использовали электропитание 40 кВ и 40 мА. Прибор работал в режиме параллельных пучков с зеркалом СоЬе1 с использованием выходной щели 0,6 мм, фокусирующей щели Соллера 0,4°, монохроматора дифрагированного луча на основе плоского кристалла Ь1Р и сцинтилляционного детектора на основе №11. Сканирование детектором проводили при угле трубки, равном 1°2θ. Сканирование проводили от 2 до 40°2θ с шагом 0,05°, длительность шага равна 4 с. Для проверки юстировки прибора использовали кварцевый эталонный стандарт. Образцы готовили для анализа путем закрепления в кварцевом держателе с нулевым фоном.

2. Исследование с помощью ДСК.

Исследование с помощью ДСК проводили на приборе ТА Э8С О 1000. Термограмму дифференциальной сканирующей калориметрии получали для образца, нагреваемого со скоростью, равной 10°С/мин, в закрытом тигле в токе азота.

3. Исследования растворимости и изменения формы.

Растворимость соединения (1) в виде типа А или в виде формы натриевой соли исследовали в различных неводных растворителях. Растворы готовили путем добавления избытка соединения (1) к равному от 0,25 до 1,0 мл объему инертного наполнителя во флаконах коричневого стекла с винтовыми крышками, покрытыми тефлоном. Образцы вращали при комнатной температуре в течение до 4 дней. Образцы обрабатывали путем центрифугирования (14000 об/мин в настольной центрифуге ЕррепйоТ шойе1 5415С) и фильтровали через фильтр из поливинилиденфторида с отверстиями размером 0,45 мкм. Для определения растворимости фильтрат анализировали с помощью ВЭЖХ. Анализ с помощью ВЭЖХ проводили на приборе Ащ1еп1 1100 с использованием градиентного или изократического режима. В обеих методиках использовали смесь ацетонитрил/вода (с добавлением 0,1% трифторуксусной кислоты) и стационарную фазу АСЕ С-18 с нагреванием колонки при 40-45°С. Длину волны детектирования устанавливали равной при 220 или 264 нм. Влажные твердые вещества собирали и анализировали для определе

- 7 018603 ния изменения формы (стабильности) с помощью ΧΒΡΌ.

Анализ с помощью ΧΒΡΌ проводили для определения изменения формы на порошковом дифрактометре Вгикег ΑΧ8 Χ-Вау Ро\\бсг О|ГГгас1отс1сг Мобс1 Ό8 ΩίκοονοΓ или Ό8 Абтапсс. выпускающемся фирмой Вгикег ΑΧ8, 1пс. оГ Маб1кои, ^1, с использованием излучения СиКа. Для трубки использовали электропитание 40 кВ и 40 мА или 40 кВ и 30 мА. Прибор(ы) работал в режиме параллельных пучков с зеркалом СоЬс1 с использованием выходной щели 0,6 мм с фокусирующей щелью Соллера 0,4° и монохроматора дифрагированного луча на основе плоского кристалла Ь1Р или с использованием 1 мм ограничивающей щели с системой фокусирующих щелей Соллера 0,12 мм. Для некоторых анализов также использовали конфигурацию Брэгга-Брентано с Ό8 Абуаисс с 1 мм ограничивающей щелью с системой фокусирующих щелей Соллера 0,12 мм. В каждой конфигурации/приборе использовали сцинтилляционный детектор на основе №11. Сканирование детектором проводили при угле трубки, равном 1°2θ. Сканирование проводили от 2 до 35° или 40°2θ с шагом 0,05°, длительность шага равна 0,6 или 4 с. Для проверки юстировки прибора использовали кварцевый эталонный стандарт. Образцы готовили для анализа путем закрепления в кварцевом держателе с нулевым фоном или в держателе, покрытом с помощью N1.

Для более полного понимания настоящего изобретения ниже приведены примеры. Эти примеры приведены для иллюстрации вариантов осуществления настоящего изобретения и их не следует считать каким-либо образом ограничивающими объем настоящего изобретения. Реагенты, использованные в приведенных ниже примерах, можно получить так, как описано в настоящем изобретении, или, если это не описано в настоящем изобретении, то они имеются в продаже или их можно получить из имеющихся в продаже веществ по методикам, известным в данной области техники. Например, некоторые исходные вещества можно получить по методикам, описанным в заявках на международные патенты \УО 00/09543, \УО 00/09558, \УО 00/59929, патентах И8 6323180, 6608027 и 7514557 и в публикации заявки на патент И8 № 2005/0020503.

Если не указано иное, растворители, температуры, давления и другие параметры реакции легко может подобрать специалист с общей подготовкой в данной области техники. Обычно за протеканием реакции при необходимости можно следить с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и промежуточные и конечные продукты можно очистить с помощью хроматографии на силикагеле и/или с помощью перекристаллизации.

Примеры

Пример 1. Получение исходного вещества, соединения 11 на основе хинолина.

Стадия 4

- 8 018603

Стадия 1.

Дианион амида 1 (получен точно так, как описано выше, из 1,00 г амида 1) охлаждали до -78°С, затем шприцем в течение 5 мин по каплям добавляли 2,19 мл перфтороктилбромид (8,46 ммоль, 1,75 экв.). Затем темную реакционную смесь помещали в баню при -10°С. Через 2 ч осторожно добавляли 10 мл 1н. НС1 и смесь экстрагировали с помощью Е1ОЛс (2x25 мл), сушили (Мд§О₄) и растворители удаляли в вакууме. Затем остаток хроматографировали на силикагеле при элюировании смесью 4:1 гексан: Е1ОЛс и получали 1,13 г бромамида 5 (81%) в виде бесцветного масла.

Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС1₃) δ: 8,12 (Ьг 8, 1Н), 8,04 (бб, 6=1,3, 8,4 Гц, 1Н), 7,24 (ΐ, 1=8,3 Гц, 1Н), 6,63 (бб, 1=1,3, 8,3 Гц, 1Н), 3,87 (8, 3Н), 1,33 (8, 9Н).

¹³С ЯМР (100 МГц, СЭС1₃) δ: 176,57 (8), 155,74 (8), 136,98 (8), 128,34 (б), 113,63 (б), 106,86 (б), 103,07 (8), 56,26 (ф, 40,20 (8), 27,45 (ф.

Стадия 2.

0,25 г бромамида 5 (0,87 ммоль, 1 экв.), 2,0 мл концентрированной НС1 (24 ммоль, 28 экв.) и 1,0 мл диглима нагревали при 100°С в течение 24 ч. Затем смесь охлаждали и отфильтровывали (продукт). Фильтрат выпаривали в вакууме с использованием Н₂О для азеотропного удаления всех растворителей. Остаток растирали с Е1ОЛс для осаждения дополнительного количества продукта, который также отфильтровывали. Объединенные твердые вещества сушили и получали 0,16 г (77%) броманилина 6.НС1 в виде светло-коричневого твердого вещества.

Ή ЯМР (400 МГц, СЭС1_;) δ: 7,09 (ΐ, 1=8,1 Гц, 1Н), 6,61 (б, 1=8,0 Гц, 1Н), 6,47 (б, 1=8,1 Гц, 1Н), 3,84 (Ьг 8, 2Н), 3,77 (8, 3Н).

Стадия 3.

НС1 броманизидина (5,73 г, 24,0 ммоль), трихлорид алюминия (3,52 г) и хлорбензол (15,0 мл) при КТ (комнатная температура) помещали в высушенную в сушильном шкафу трехгорлую колбу объемом 100 мл (температура повышалась до 30°С). Затем полученную смесь перемешивали в течение 10 мин, затем охлаждали до 0-5°С и после этого медленно добавляли ацетонитрил (1,89 мл, 36,0 ммоль), а затем добавляли ВС1₃ (2,82 г), вводимый в реакционную смесь в виде газа (или жидкости), поддерживая температуру ниже 5°С. Затем полученную смесь перемешивали при КТ в течение 20 мин, затем нагревали при 85-100°С в течение 16 ч. ВЭЖХ показывала, что реакция завершилась (8М<0,5% при 220 нм). Смесь охлаждали до 50°С, затем добавляли толуол (15 мл) и после этого при 50°С медленно добавляли ИПС (изопропиловый спирт) (11,1 мл), затем медленно добавляли воду (32 мл). Полученную смесь перемешивали в течение еще 2 ч при этой же температуре, затем добавляли 3 г целита и при перемешивании смесь охлаждали до КТ. Фильтровали, затем органическую фракцию промывали водой 1x15 мл, с помощью 2x15 м: 5% NаНСОз, 1x15 мл воды, затем концентрировали при пониженном давлении и получали 3,92-4,4 г искомого продукта с выходом выделенного вещества, равным 68-72%.

Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС1₃) δ: 7,72 (б, 1=9,0 Гц, 1Н), 7,1 (Ьг 8, 2Н), 6,28 (б, 1=9,1 Гц, 1Н), 3,94 (8, 3Н), 2,55 (8, 3Н).

Стадия 4.

Оксалилхлорид (8,15 мл) в течение ~5 мин по каплям добавляли к холодной смеси (10±5°С) тиазолкарбоновой кислоты 8 (20,18 г), растворенной в ТГФ (тетрагидрофуран) (300 мл) и ДМФ (диметилформамид) (300 мкл), поддерживая внутреннюю температуру равной 10±5°С. Реакционная смесь становилась желтой и гомогенной. Охлаждающую баню удаляли и смеси давали достичь температуры окружающей среды в течение ~30 мин. Наблюдалось выделение газа. Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение от 30 мин до 1 ч. При 10±5°С добавляли раствор анилина 7 (19,8 г), ДМАП (диметиламинопиридин) (140 мг) и ТГФ (35 мл). При 10±5°С в течение 10 мин порциями добавляли Εΐ₃Ν (13,2 мл). Баню со льдом удаляли и смесь нагревали до 65±2°С и перемешивали в течение ночи (18 ч). Смеси давали достичь температуры окружающей среды, разбавляли с помощью Е1ОЛс (150 мл) и промывали водой (150 мл). К органической порции добавляли NаНСО₃ (5%, 225 мл) и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 30 мин. Органическую порцию концентрировали при пониженном давлении примерно при 40°С. К полученному веществу добавляли Е1ОЛс (150 мл) и оставшуюся воду удаляли и смесь концентрировали при пониженном давлении примерно при 40°С (для азеотропной отгонки воды). Добавляли Е1ОЛс (94 мл) и полученную взвесь перемешивали в течение 2-6 ч и фильтровали. Твердое вещество промывали с помощью Е1ОЛс (30 мл), затем гептаном (30 мл) и сушили воздухом в течение 1 ч и получали искомый продукт с выходом 70%.

Ή ЯМР (400 МГц, СЭС1_;) δ: 1,32 (б, 6Н, 1=7,8 Гц), 2,58 (8, 3Н), 2,65-2,72 (т, 1Н), 3,98 (8, 3Н), 6,83 (б, 1Н, 1=8,7 Гц), 7,70 (б, 1Н, 1=8,7 Гц), 7,86 (8, 1Н), 8,98 (Ь8, 1Н), 10,13 (Ь8, 1Н).

Стадия 5.

В колбу объемом 2 л помещали трет-бутоксид калия (112 г). При комнатной температуре добавляли сухой ДМЭ (диметиловый эфир) (экзотермическая реакция: температура повышалась до 35°С). Полученный раствор нагревали примерно до 80°С и 10 порциями медленно добавляли амид (88 г), так чтобы температура поддерживалась равной 80-85°С. После завершения добавления реакционную смесь перемешивали при 85°С в течение 2 ч. Во время протекания реакции осаждалось твердое вещество. Анализ с

- 9 018603 помощью ВЭЖХ показывал, что к этому времени реакция завершилась (степень превращения: 100%). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем до 10°С с помощью охлаждающей бани. Для остановки реакции медленно добавляли водный раствор 2н. НС1 (примерно 500 мл), так чтобы температура поддерживалась ниже 25°С. Значение рН доводили до 4-5. Добавляли примерно 100 мл воды (Примечание: количество воды можно изменить для облегчения фильтрования) и полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 5-10 ч. Продукт выделяли фильтрованием, промывали с помощью ТГФ и сушили в вакууме.

Выход: 81 г, выход 96%.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆ (ДМСО - диметилсульфоксид)): 1,14 (6Н, б, 1=6,8 Гц, ί-Ρτ), 2,48 (1Н, гептет, 1=6,8 Гц, ί-Ρτ), 3,99 (3Н, 8, МеО), 6,75 (1Н, 8, Н-3), 7,24 (1Н, б, 1=8,5 Гц, Н-6), 8,10 (1Н, б, 1=8,5 Гц, Н-5), 8,22 (1Н, 8, Н-5'), 9,87 (1Н, 8, ОН), 12,40 (1Н, 8, амидная группа ΝΉ).

Стадия 6.

В колбу объемом 100 мл помещали исходное вещество, хинолон (4,22 г) и диоксан (40 мл). Добавляли РОС1₃ (4,6 г) и смесь нагревали при 75°С. Через 2 ч ВЭЖХ показывала, что реакция завершилась (степень превращения 99,7%). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем ее выливали в 100 мл насыщенного раствора ИаНСО₃ и 20 мл ЕЮЛс. Полученную суспензию перемешивали в течение 3 ч. Продукт выделяли фильтрованием, промывали с помощью ЕЮЛс и сушили в вакууме.

Выход: 4,0 г, 90,9%.

Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС1₃): 1,14 (6Н, б, 1=6,8 Гц, ί-Ρτ), 2,76 (1Н, гептет, 1=6,8 Гц, ί-Ρτ), 4,05 (3Н, 8, МеО), 7,68 (1Н, б, 1=8,5 Гц, Н-6), 8,07 (1Н, 8, Н-3), 8,13 (1Н, 8, Н-5'), 8,20 (1Н, б, 1=8,5 Гц, Н-5), 12,30 (1Н, 8, амид ΝΉ).

Пример 2. Получение исходного вещества, соединения 13, карбоксипроизводного дипептида.

a) ЭДХ, НОВТ, ДМФ, ДИЭА, 90%;

b) ί) Ь1ОН, Н₂О, ТГФ, МеОН, ίί) перекристаллизация из МТБЭ.

В трехгорлую колбу объемом 250 мл, снабженную термопарой, патрубком для подачи азота и стержнем для магнитной мешали, помещали Ν-циклопентилоксикарбонил-трет-Е-лейцин (20,0 г, 82,2 ммоль, 1,0 экв.), 1-гидроксибензотриазол (12,73 г, 90,42 ммоль, 1,1 экв.) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимидгидрохлорид (17,33 г, 90,42 ммоль, 1,1 экв.). Колбу продували азотом и начинали перемешивание. В колбу добавляли безводный ДМФ (62 мл) и смесь перемешивали в течение 20 мин при комнатной температуре (примерно 24°С). Реакция являлась умеренно экзотермической, внутренняя температура повышалась до 29°С. К реакционной смеси одной порцией добавляли твердый гидрохлорид метилового эфира транс-4-гидроксипролина (14,93 г, 82,2 ммоль, 1,0 экв.). К реакционной смеси по каплям в течение 25 мин шприцем добавляли диизопропилэтиламин (14,36 мл, 82,2 ммоль, 1,0 экв.). Внутренняя температура повышалась от 29 до 34,5°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 1,75 ч и получали соединение 12. Затем реакцию останавливали с помощью 0,1 М НС1 (100 мл), внутренняя температура повышалась до 34°С. Реакционную смесь трижды экстрагировали с помощью 75 мл этилацетата и органические слои объединяли. Органический слой промывали с помощью 75 мл Н₂О и 2x75 мл насыщенного раствора ИаНСО₃. Органический слой (примерно 235 мл) переносили в колбу объемом 500 мл, снабженную механической мешалкой, короткой насадкой для перегонки, внутренней и внешней термопарами и в вакууме, создаваемом лабораторной вакуумной установкой (~110 мм рт. ст.), перегоняли до минимального объема, допускающего перемешивание, при внутренней температуре ниже 35°С и при температуре масляной бани, равной 40°С. Затем к этой неочищенной смеси 12 добавляли тетрагидрофуран (150 мл) и ее перегоняли до минимального объема, допускающего перемешивание. В колбу добавляли тетрагидрофуран (100 мл) и повторно перегоняли до минимального объема, допускающего перемешивание. Насадку для перегонки заменяли на капельную воронку. В колбу добавляли тетрагидрофуран (100 мл) и метанол (50 мл) и раствор перемешивали в течение примерно 15 мин. В капельную воронку помещали 3,2 М раствор Ь1ОН (77 мл, 246,6 ммоль, 3 экв.) и его добавляли

- 10 018603 в течение 45 мин. Температура повышалась от 22 до 29°С и реакционная смесь становилась немного мутной. Смесь охлаждали в бане с холодной водой, затем реакцию останавливали путем медленного (в течение 45 мин) добавления 4 М НС1 (58-65 мл) для доведения рН до 3,5, что вызывало небольшое повышение температуры до 27°С. Колбу снабжали насадкой для перегонки и метанол и тетрагидро фуран удаляли путем перегонки при пониженном давлении при температуре бани, равной 40°С, и при внутренней температуре ниже 30°С. Смесь дважды экстрагировали с помощью 150 мл МТБЭ (метил-трет-бутиловый эфир). Раствор в МТБЭ концентрировали при пониженном давлении (350 мм рт. ст.) до минимального объема, допускающего перемешивание. Добавляли 50 мл МТБЭ, его удаляли с помощью перегонки при внутренней температуре ниже 35°С. Реакционная смесь представляла собой прозрачную вязкую жидкость, добавляли 20 мл МТБЭ, смесь нагревали при 50°С, раствор был прозрачным, масляную баню удаляли и раствор охлаждали до КТ, ~24°С, в течение 1,5 ч. Затем к полученной взвеси добавляли 60 мл МТБЭ, перемешивали в течение 2 ч, затем взвесь фильтровали с использованием ~20 мл МТБЭ для переноса смеси. Затем твердое вещество сушили в вакууме при 35°С до постоянной массы, 16,4 г (52%) и получали содержащий 1/3 МТБЭ сольват соединения 13 в виде бесцветного твердого вещества.

Температура плавления 117-124°С;

α -58.6 (с 2,17, МеОН);

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО, главный описанный поворотный изомер) δ: 6,76 (ά, 1=9,3 Гц, 1Н), 5,15 (8, 1Н), 4,92 (т, 1Н), 4,31 (Ьг 8, 1Н), 4,26 (ΐ, 1=8,3 Гц, 1Н), 4,19 (ά, 1=9,3 Гц, 1Н), 3,63 (т, 2Н), 3,06 (8, 1Н, (МТБЭ)), 2,08 (т, 1Н), 1,87-1,48 (т, 9Н), 1,09 (8, 3Н, (МТБЭ)), 0,92 (8, 9Н).

Пример 3. Получение исходного вещества, соединения 16, карбоксипроизводного трипептида.

Ь) Ь1ОН, Н₂О, ТГФ, МеОН.

В колбе объемом 25 мл соединение 14 растворяли в 3 мл ДМФ. В указанном порядке при комнатной температуре добавляли НОВ! (149 мг, 1,1 ммоль), ЭДХ (№(3-диметиламинопропил)-№этилкарбодиимидгидрохлорид) (211 мг, 1,1 ммоль), 13 (290 мг, 1,0 ммоль) и ί-Ρτ₂ΝΕΐ (129 мг, 1,0 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь выливали в 15 мл водного раствора NаНСОз и экстрагировали этилацетатом (20 мл). Органический слой промывали с помощью НС1 (0,5н., 2x10 мл) и насыщенным водным раствором NаНСОз (10 мл). После удаления растворителя в роторном испарителе получали соединение 15 в виде белого твердого вещества, 0,46 г (выход 95%).

Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС1₃): 0,96 (8, 9Н), 1,35 (1Н, άά, 1=3,0, 4,5 Гц), 1,45-1,90 (т, 9Н), 1,77 (1Н, άά, 1=3,0, 4,0 Гц), 2,00-2,09 (1Н, т), 2,45-2,52 (1Н, т), 3,02 (1Н, Ьг), 3,50 (1Н, άά, 1=11,0, 3,0 Гц), 3,58 (3Н, 8), 3,99 (1Н, ά, 1=11,0 Гц), 4,18 (1Н, ά, 1=9,0 Гц), 4,43 (1Н, Ьг), 4,63 (1Н, ΐ, 1=8,0 Гц), 4,93-5,00 (1Н, т), 5,04 (1Н, άά, 1=10,5, 2,0 Гц), 5,20 (1Н, ά, 1=18,0 Гц), 5,20-5,25 (1Н, т), 5,65-5,77 (1Н, άάά, 1=18,0, 10,5, 2,0 Гц), 7,78 (1Н, Ьг) част./млн.

320 мг сложного эфира 15 (0,667 ммоль, 1 экв.) растворяли в 6,7 мл ТГФ + 3,4 мл МеОН при температуре окружающей среды в атмосфере Ν₂. Затем к этому раствору по каплям в течение 5 мин добавляли 3,34 мл 1,6 М Ь1ОН (5,34 ммоль, 8 экв.). Через 1,5 ч растворители удаляли в вакууме и остаток разбавляли с помощью 15 мл ЕЮЛе + 10 мл насыщенного раствора №С1, затем добавляли 1н. НС1 до установления рН 3,45. Фазы разделяли и водную фазу повторно экстрагировали с помощью 15 мл ЕЮЛе. Объединенные слои, содержащие ЕЮЛе, промывали с помощью Н₂О (1x50 мл), сушили (Мд§О₄) и растворители удаляли в вакууме и получали масло. Масло подвергали азеотропной перегонке с МТБЭ (1x15 мл) и остаток сушили в высоком вакууме и получали 320 мг соединения 16 (100%) в виде бесцветного вспененного вещества. Точная масса, рассчитано для С/зНз^зО-: 465,25; найдено (ИЭ - (ионизация электрораспылением)): 464,29;

- 11 018603 'Η-ЯМР (400 МГц, ДМСО, главный описанный поворотный изомер) δ: 12,40 (Ьг 5. 1Н), 8,49 (δ, 1Н), 6,77 (б, 1=8,2 Гц, 1Н), 5,71 (т, 1Н), 5,22-4,85 (т, 4Н), 4,36-4,10 (т, 3Н), 3,80-3,21 (т, 4Н), 2,00-1,42 (т, 11Н), 0,92 (5, 9Н).

Пример 4. Получение аморфного соединения (1) по реакции δ_ΝΛτ с использованием дипептида.

Методика 8_ΝΆτ 1.

В трехгорлую круглодонную колбу объемом 100 мл помещали 1,93 г соединения 13 (5,00 ммоль, 1 экв.), затем ее откачивали/заполняли с помощью Аг (3х), затем шприцем добавляли 17,0 мл ДМСО и получали прозрачный бесцветный раствор. Затем колбу повторно откачивали/заполняли с помощью Аг (3х), затем одной порцией добавляли 2,53 г неразбавленного 1-ВиОК (22,5 ммоль, 4,5 экв.). Наблюдали повышение температуры максимально до 31,5°С. Колбу откачивали/заполняли с помощью Аг (3х), затем перемешивали в вакууме, создаваемом лабораторной вакуумной установкой (~60 мм), в течение 1 ч и наблюдали небольшое вспенивание (-ΐ-ВиОН). Откачанную колбу заполняли с помощью Аг, затем одной порцией добавляли 2,20 г неразбавленного 11 (5,00 ммоль, 1 экв.). Наблюдали повышение температуры до 28,6°С. Колбу откачивали/заполняли с помощью Аг (3х), затем при температуре окружающей среды перемешивали в вакууме, создаваемом лабораторной вакуумной установкой, при защите от воздействия света. Через 6,5 ч откачанную колбу заполняли с помощью Аг и отбирали образец для ВЭЖХ, в котором обнаруживалось <2% непрореагировавшего соединения 11. Затем колбу охлаждали в бане с холодной водой до 18°С и затем шприцем в течение ~10 мин добавляли 1,72 мл ледяной НОАс (30 ммоль, 6 экв.). Наблюдали повышение температуры до 20,5°С. Смесь перемешивали в течение 10 мин, затем в течение 15 мин по каплям добавляли во вторую колбу, содержащую тщательно перемешанный раствор 30 мл рН 3,5 Н₂О (~0,001 М НС1) при 18°С, что сразу приводило к образованию осадка, и наблюдали повышение температуры до 21,0°С. 2,0 мл ДМСО использовали для смывания остатка в водную смесь, затем промывали с помощью 5,0 мл ~0,001 М НС1. Полученную суспензию перемешивали в течение 15 мин, затем добавляли 30 мл смеси 1:1 Е1ОАс:МТБЭ и смесь энергично перемешивали в течение 15 мин. Перемешивание останавливали и фазам давали разделиться. Наблюдали быстрое разделение фаз и образование 2 прозрачных фаз без образования загрязненного слоя. Затем нижнюю водную фазу повторно экстрагировали с помощью 30 мл смеси 1:1 Е1ОАе:МТБЭ (также быстрое разделение) и органические экстракты объединяли и сохраняли. Водную фазу отбрасывали, как отход.

Затем органический раствор промывали с помощью Н₂О (3х30 мл) и опять все повторные экстракции приводили к быстрому разделению фаз без образования загрязненного слоя, затем ЕЮАс отгоняли до минимального объема, допускающего перемешивание. Затем остаток подвергали азеотропной перегонке с 30 мл ТГФ (2х), повторно перегоняли до минимального объема, допускающего перемешивание. Полученную взвесь неочищенного соединения 18 сразу использовали для реакции сочетания пептида. Точная масса, рассчитано для С₃₄Н₄₂ВтХ₅О₈8: 759,19; найдено (МС - (масс-спектроскопия)): 757,92.

- 12 018603

Методика 8_νΆγ 2.

1,00 г соединения 13 (2,59 ммоль, 1 экв.) и 1,35 г соединения 11 (2,59 ммоль, 1 экв.) помещали в сухую колбу. Затем колбу откачивали/заполняли с помощью Аг (3х), затем шприцем добавляли 10 мл сухого ДМСО. Колбу повторно откачивали/заполняли с помощью Аг (3х), затем охлаждали до 19°С в бане с холодной водой. Затем к этой смеси по каплям в течение 30 мин добавляли 2 М раствор КЭМО/гептан (5,71 мл, 11,7 ммоль, 4,5 экв.). Через 6 ч ВЭЖХ показывала, что реакция завершилась. Реакцию останавливали с помощью 0,89 мл НОАс (6 экв.) и при перемешивании медленно добавляли Н₂О до 25 мл, что приводило к образованию осадка. Затем смесь экстрагировали с помощью ИПАЦ (изопропилацетат) (2x25 мл). Объединенные фазы, содержащие ИПАЦ, промывали с помощью Н₂О (1x25 мл), сушили (Мд8О₄) и растворители удаляли в вакууме и получали твердое вещество, которое подвергали азеотропной перегонке с МеСЫ (1x25 мл) и затем разбавляли гептаном и получали взвесь. Взвесь фильтровали и сушили и получали 1,80 г соединения 18 (91%).

Методика сочетания пептида 1.

К взвеси в ТГФ неочищенного соединения 18, полученного по методике 8_ЫАг 1 (5,00 ммоль, 1 экв.) в атмосфере Аг при температуре окружающей среды в колбе, защищенной от воздействия света, добавляли 1,72 г соединения 14 (5,5 ммоль, 1,1 экв.) и 25 мл ТГФ. Затем раствор охлаждали до 5°С в атмосфере Аг, затем шприцем в течение 5 мин по каплям добавляли 0,958 мл ДИЭА (диизопропилэтиламин) (5,50 ммоль, 1,1 экв.). Через 5 мин после завершения добавления ДИЭА добавляли 0,85 г гидрата НОВТ (6,00 ммоль, 1,2 экв.) и затем одной порцией добавляли 1,05 г неразбавленного ЭДХ (5,50 ммоль, 1,1 экв.). Затем колбу снимали с охлаждающей бани и затем полученную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в атмосфере Аг в течение 4 ч. Отбирали образец для ВЭЖХ, в котором обнаруживалось <2% непрореагировавшего соединения 18. Смесь охлаждали до 5°С, затем через капельную воронку в течение 5 мин по каплям добавляли 40 мл 0,1н. НС1, затем 40 мл ЕЮАс. Смесь энергично перемешивали в течение 15 мин, затем перемешивание прекращали и фазам давали разделиться. Затем нижнюю водную фазу повторно экстрагировали с помощью 40 мл ЕЮАс и органические фазы объединяли и сохраняли. Водную фазу отбрасывали, как отход. Затем органический раствор промывали с помощью Н₂О (1x40 мл), насыщенным раствором ЫаНСО₃ (2x40 мл) и повторно с помощью Н₂О (1x40 мл), затем перегоняли до минимального объема, допускающего перемешивание. Затем остаток подвергали азеотропной перегонке с МТБЭ (2x40 мл) и повторно перегоняли до минимального объема, допускающего перемешивание. Остаток сушили в высоком вакууме и получали 4,70 г неочищенного соединения 19 в виде оранжевого твердого вещества, по данным ВЭЖХ обладающего чистотой, составляющей 78,3%. Затем это вещество хроматографировали на силикагеле при элюировании смесью 2:1 ЕЮАс:гексан и получали 3,01 г (68% за 2 стадии) чистого соединения 19 в виде желтого порошкообразного вещества.

Точная масса, рассчитано для С^ЩВгЫЮдЗ: 882,26, МС+: 883,30.

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО, главный описанный поворотный изомер) δ: 12,32 (8, 1Н), 8,69 (8, 1Н), 8,14 (й, 1=9,2 Гц, 1Н), 8,03 (8, 1Н), 7,45 (8, 1Н), 7,33 (й, 1=9,4 Гц, 1Н), 6,97 (й, 1=8,6 Гц, 1Н), 5,65 (т, 1Н), 5,40 (8, 1Н), 5,20 (йй, 1=1,5, 17 Гц, 1Н), 5,06 (йй, 1=1,6, 10,2 Гц, 1Н), 5,56 (8, 1Н), 4,46 (т, 1Н), 4,37 (й, 1=9 Гц, 1Н), 4,08 (т, 1Н), 3,99 (8, 3Н), 3,90 (т, 1Н), 3,56 (8, 3Н), 2,81 (т, 1Н), 2,51 (т, 1Н), 2,25 (т, 1Н), 2,07 (т, 1Н), 1,70-1,32 (т, 7Н), 1,30 (т, 3Н), 1,15 (й, 1=8,1 Гц, 6Н), 0,95 (8, 9Н).

Методика сочетания пептида 2.

В 4-горлую круглодонную колбу объемом 5 л, снабженную механической мешалкой, капельной воронкой и термопарой, помещали 69,57 г соединения 14 (222 ммоль, 1,3 экв.), затем откачивали/заполняли с помощью Аг (3x1. Затем к этой смеси добавляли 200 мл ТГФ раствора соединения 18 (содержал 129,85 г, 171 ммоль, 1 экв.), затем добавляли 523 мл ТГФ для доведения конечного объема ТГФ до 1 л. Затем смесь охлаждали до 4,0°С в атмосфере Аг. Затем через капельную воронку в течение 10 мин по каплям добавляли 38,67 мл ДИЭА (222 ммоль, 1,3 экв.), и внутренняя температура снижалась до 2,4°С. Смесь выдерживали в течение 5 мин, затем добавляли 29,98 г НОВТ Н₂О (222 ммоль, 1,3 экв.), затем 42,57 г ЭДХ (222 ммоль, 1,3 экв.). После этого внутренняя температура становилась равной 3,6°С. Затем баню удаляли. Внутренняя температура повышалась до 20,5°С за 90 мин. Через 4 ч после завершения добавления ЭДХ ВЭЖХ показывала, что реакция завершилась. Смесь охлаждали до 4,0°С, затем в течение 30 мин через капельную воронку добавляли 750 мл 0,1н. НС1, что приводило к повышению температуры до 9,5°С. Затем к этой смеси добавляли 250 мл насыщенного раствора ЫаС1, затем 1 л ИПАЦ. После 5 мин энергичного перемешивания смесь помещали в делительную воронку и фазы разделяли. Затем нижнюю водную фазу повторно экстрагировали с помощью 500 мл ИПАЦ и фазы, содержащие ИПАЦ, объединяли. Затем их последовательно промывали с помощью Н₂О (1x1 л), насыщенным раствором ЫаНСО₃ (1x1 л) и затем с помощью Н₂О (1x1 л). Затем смесь механически перемешивали в течение 12 ч для осаждения хинолона 7. Затем смесь фильтровали через воронку с фильтром средней пористости и фильтрат перегоняли до минимального объема, допускающего перемешивание. Затем остаток подвергали азеотропной перегонке с МТБЭ (2x400 мл) и повторно перегоняли до минимального объема, допускающего перемешивание. Остаток сушили в высоком вакууме и получали 128 г соединения 19 в виде желтого твердого вещества, по данным ВЭЖХ обладающего чистотой, составляющей 89%.

- 13 018603

140 мг соединения 19 (0,158 ммоль, 1 экв.) растворяли в 1,6 мл ТГФ + 0,80 мл МеОН при температуре окружающей среды в атмосфере N2. Затем к этому раствору по каплям в течение 5 мин добавляли 0,79 мл 1,6 М ЫОН (1,27 ммоль, 8 экв.). Через 1,5 ч органические растворители удаляли в вакууме и остаток разбавляли с помощью 10 мл ЕЮАс + 10 мл насыщенного раствора №1С1. Затем значение рН доводили до 5,75 с помощью 1н. НС1. Смесь энергично перемешивали в течение 1 ч, затем фазы разделяли. Водную фазу повторно экстрагировали с помощью 10 мл ЕЮАс. Затем объединенные фазы, содержащие ЕЮАс, затем промывали с помощью Н₂О (2x25 мл), сушили (Мд8О₄) и растворители удаляли в вакууме и получали 125 мг соединения (1) (91%) в виде аморфного желтого порошкообразного вещества.

Пример 5. Получение аморфного соединения (1) по реакции 8₄Аг с использованием трипептида.

В колбу помещали 233 мг карбоксипроизводного трипептида 16 (0,50 ммоль), затем колбу откачивали/заполняли с помощью Аг (3х). Затем добавляли 1,7 мл ДМСО и колбу откачивали/заполняли с помощью Аг (3х). Затем смесь охлаждали в бане с холодной водой, затем добавляли 317 мг 1-ВиОК (2,82 ммоль, 5,63 экв.). Колбу повторно откачивали/заполняли с помощью Аг (3х), затем перемешивали в вакууме 60 мм в течение 1 ч. Затем добавляли 220 мг хинолина 11 (0,50 ммоль, 1 экв.) и колбу откачивали/заполняли с помощью Аг (3х), затем перемешивали в вакууме 60 мм в темноте при температуре окружающей среды в течение 3 ч. Затем добавляли 0,30 мл НОАс, затем полученный раствор добавляли с помощью 25 мл 0,001 М НС1, что приводило к образованию осадка. Взвесь фильтровали, твердые вещества промывали с помощью 25 мл Н₂О. Твердое вещество сушили в атмосфере Ν₂ в течение 2 ч, затем хроматографировали на силикагеле при элюировании с помощью ЕЮАс и получали 226 мг (52%) соединения (1) в виде аморфного желтого твердого вещества.

Дополнительные методики получения аморфного соединения (1) приведены в патенте И8 6323180 В1 и в публикациях заявок на патенты И8 № 2005/0020503 и 2005/0267151, которые включены в настоящее изобретение в качестве ссылки.

Пример 6. Получение соединения (1) типа А.

Аморфное соединение (1) (партия 7, 13,80 г) помещали в трехгорлую колбу объемом 1000 мл. В колбу добавляли абсолютный этанол (248,9 г). При перемешивании содержимое колбы нагревали со скоростью 60°С/ч до ~74°С (твердые вещества не растворяются при 74°С). Затем к полученной взвеси при перемешивании и поддерживая температуру равной 74°С с постоянной скоростью в течение 4 ч добавляли воду (257,4 г). После завершения добавления воды температуру с постоянной скоростью, равной 8°С/ч, доводили до температуры окружающей среды, затем при перемешивании выдерживали при температуре окружающей среды в течение 6 ч. Полученное твердое вещество собирали фильтрованием и промывали с помощью 50 мл смеси 1/1 (мас./мас.) ЕЮН/вода. Влажные твердые вещества сушили в воронке в течение 30 мин, проводя отсасывание осадка на фильтре в токе Ν₂. (Анализ этого образца с помощью ΧΚΡΌ показал, что рентгенограмма сходна с рентгенограммой сольвата с ЕЮН). Затем твердые вещества сушили при 65-70°С в вакууме (Р=25 дюймов рт. ст.) и продували азотом в течение 1,5 ч. С помощью ΧΚΡΌ подтверждали, что полученные твердые вещества (12,6 г, скорректированный выход 95,5%) представляют собой соединение (1) типа А.

Специфическая ΧΚΡΌ и термограмма ДСК соединения (1) типа А приведены на фиг. 1 и 2.

Пример 7. Получение натриевой соли соединения (1) - методика 1.

2,1 г аморфной натриевой соли соединения (1) и 8,90 г ацетона помещали в колбу и перемешивали при температуре окружающей среды в течение 3 ч. Взвесь отфильтровывали от маточного раствора и полученное твердое вещество в течение 20 мин сушили в токе азота. Собирали 1,51 г кристаллической натриевой соли соединения (1) в виде твердого вещества.

- 14 018603

Пример 8. Получение натриевой соли соединения (1) - методика 2.

15,6 г соединения (1) типа А, 175 мл ацетона и 3,6 мл воды помещали в реактор объемом 250 мл и нагревали при 53°С для растворения твердых веществ. В реактор добавляли 900 мкл 10н. ΝαΟΗ и в раствор вносили затравку типа А. Раствор с затравкой перемешивали при 53°С в течение 10 мин. Добавляли вторую порцию 10н. ΝαΟΗ объемом 900 мкл и смесь перемешивали при 53°С в течение 30 мин и за это время образовывалась взвесь. Взвесь охлаждали до 19°С при скорости охлаждения, равной 15°С/ч, и выдерживали в течение ночи при 19°С. Конечную полученную взвесь фильтровали и влажные твердые вещества промывали с помощью 15 мл ацетона. Твердые вещества сушили в течение 1 ч при 52°С в вакууме с током азота и затем в течение 1 ч твердые вещества выдерживали на воздухе в лаборатории. Собирали 12,1 г кристаллической натриевой соли соединения (1) в виде твердого вещества.

Пример 9. Получение натриевой соли соединения (1) - методика 3.

В реактор помещали 25,4 кг аморфного соединения (1), 228 л ТГФ и 11,1 кг 10 мас.% раствора ΝαΟΗ (водного). Компоненты перемешивали при 25°С для растворения всех твердых веществ. Полученный раствор фильтровали и реактор и фильтр промывали с помощью 23 л ТГФ. 180 л растворителя удаляли путем отгонки при атмосферном давлении при 65°С. Добавляли 195 л МИБК (метилизобутилкетон) и 166 л растворителя удаляли с помощью перегонки в вакууме при ~44°С. В реактор добавляли 161 л МИБК и 0,41 кг воды и содержимое нагревали до 70°С. Добавляли 255 г затравки натриевой соли соединения (1) при 70°С и в течение 1,5 ч добавляли 1,42 л воды. После завершения добавления воды взвесь выдерживали при 70°С в течение 45 мин и затем охлаждали до 45°С в течение 1 ч. Полученную взвесь фильтровали и промывали с помощью 64 л МИБК, содержащего ~0,8 мас.% воды. Влажный осадок на фильтре сушили при 55°С и получали ~25 кг кристаллической натриевой соли соединения (1).

Пример 10. Получение натриевой соли соединения (1) - методика 4.

В реактор помещали 2,00 г аморфного соединения (1), 9,96 г ТГФ и 0,11 г воды и перемешивали при температуре окружающей среды для растворения твердых веществ. При перемешивании по каплям добавляли 0,820 мл 21 мас.% раствора ΝηΟΕί в этаноле и получали раствор А. Во второй реактор помещали 15,9 г п-ВиАс и 160 мкл воды и нагревали при 65°С (раствор В). 2,56 г раствора А добавляли к раствору В при 65°С и в полученную смесь вносили 40 мг затравки натриевой соли соединения (1). Смесь с затравкой выдерживали при 65°С в течение 45 мин. К раствору А добавляли 2,56 г раствора В и выдерживали в течение 45 мин в течение 4 отдельных интервалов. После завершения добавления и выдерживания взвесь охлаждали до 50°С в течение 1 ч и фильтровали. Влажный осадок на фильтре промывали с помощью 6 мл п-ВиАс, содержащего 0,5 мас.% воды. Конечные твердые вещества сушили при 50°С в вакууме при продувании азотом. Собирали кристаллическую натриевую соль соединения (1) в виде твердого вещества.

Пример 11. Получение натриевой соли соединения (1) - методика 5.

При комнатной температуре раствор этоксида натрия в этаноле (21 мас.%; 306 мл) при перемешивании добавляли к раствору соединения (1) (745 г) в ТГФ (2000 мл) и воде (76,5 мл). После перемешивания в течение 30 мин смесь фильтровали и фильтр промывали с помощью ТГФ (85 мл). Полученный раствор нагревали до 65°С и в течение 30 мин обрабатывали профильтрованным бутилацетатом (6640 мл, необязательно предварительно нагретым до 65°С). Добавляли затравочные кристаллы (0,50 г) и смесь перемешивали при 65°С в течение 2 ч, причем кристаллизация начиналась примерно через 30 мин. Суспензию охлаждали до 50°С в течение 1 ч и перемешивали при этой же температуре в течение еще 1 ч. Искомое соединение выделяли фильтрованием, промывали профильтрованным бутилацетатом (765 мл, необязательно предварительно нагретым до 50°С) и сушили при 65°С в течение примерно 16 ч и получали кристаллическую натриевую соль соединения (1) (~ 725 г).

Специфическая ΧΚΡΌ и термограмма ДСК кристаллической натриевой соли соединения (1) приведены на фиг. 3 и 4.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы (1) в кристаллической форме <Г <*> .
2. Кристаллическое соединение формулы (1) по п.1, обладающее порошковой рентгенограммой, содержащей пик при 9,6°2θ (±0,2°2θ), измеренный с использованием излучения СиКа.
3. Кристаллическое соединение по п.2, для которого порошковая рентгенограмма дополнительно содержит пик при 19,8°2θ (±0,2°2θ), измеренный с использованием излучения СиКа.
4. Кристаллическое соединение формулы (1) по п.1, обладающее порошковой рентгенограммой, содержащей пики при 4,8, 6,8, 9,6, 13,6, 17,3, 19,8 и 24,5°2θ (±0,2°2θ), измеренные с использованием излучения СиКа.
5. Натриевая соль соединения формулы (1)
6. Натриевая соль по п.5 в кристаллической форме.
7. Кристаллическая натриевая соль по п.6, обладающая порошковой рентгенограммой, содержащей пик при 10,1°2θ (±0,2°2θ), измеренный с использованием излучения СиКа.
8. Кристаллическая натриевая соль по п.7, для которой порошковая рентгенограмма дополнительно содержит пики при 13,0 и 18,2°2θ (±0,2°2θ), измеренные с использованием излучения СиКа.
9. Кристаллическая натриевая соль по п.8, для которой порошковая рентгенограмма дополнительно содержит пики при 5,4 и 8,7°2θ (±0,2°2θ), измеренные с использованием излучения СиКа.
10. Кристаллическая натриевая соль по п.6, обладающая порошковой рентгенограммой, содержащей пики при 5,4, 6,5, 8,7, 10,1, 11,9, 13,0, 18,2, 20,2 и 24,7°2θ (±0,2°2θ), измеренные с использованием излучения СиКа.
11. Кристаллическая натриевая соль по п.6, обладающая порошковой рентгенограммой, полученной с использованием излучения СиКа, которая в основном такая, как приведенная на фиг. 3.
12. Смесь соединения формулы (1) и его натриевой соли

- 16 018603 где не менее 50% указанного соединения содержится в форме натриевой соли соединения по пп.510 или 11.
13. Фармацевтическая композиция, содержащая натриевую соль по пп.5-10 или 11 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
14. Фармацевтическая композиция по п.13, в которой не менее 50% натриевой соли соединения формулы (1) в композиции содержится в форме кристаллического соединения по пп.6-10 или 11.
15. Применение кристаллического соединения формулы (1) по п.1 или натриевой соли соединения формулы (1) по п.5 или их смесей для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для лечения вирусной инфекции гепатита С у млекопитающего.