CN101143892B - 酶促拆分对映异构体的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及从1-氨基-2-乙烯基环丙基羧酸甲酯或其N-被保护形式的混合物拆分对映异构体的方法,包括用酯酶处理所述的混合物得到期望的1-氨基-2-乙烯基环丙基羧酸甲酯或其N-被保护形式对映异构体的步骤。
Description
本申请是中国发明申请(发明名称:丙型肝炎三肽抑制剂;申请号:99810550.3;申请日:1999年08月09日)的分案申请。
发明领域
本发明涉及用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的化合物、它们的合成方法、组合物和方法。尤其是,本发明提供了新的肽类似物、含这些类似物的药物组合物、以及将这些类似物用于治疗HCV感染的方法。本发明还提供了合成这些肽类似物的方法和中间体。
发明背景
丙型肝炎病毒(HCV)是输血后和群体传染的全球性非A非B肝炎的主要病原物。已证实全球超过150百万人感染有这种病毒。有较高比例的携带者成为慢性感染并且大多数发展为慢性肝病,即所谓的慢性丙型肝炎。这些群体随后有患严重肝病的危险,例如肝硬变、肝细胞癌和晚期肝病而导致死亡。
HCV形成病毒存留和导致慢性肝病高发病率的机制还没有完全得到阐明。还不知道HCV是如何相互作用和离开宿主免疫系统的。另外,细胞免疫应答和体液免疫应答在防止HCV感染和疾病中的作用也还没有得以确立。据报道免疫球蛋白已用于预防与输血相关的病毒性肝炎。但是,疾病控制中心目前还没有推荐用于此目的的免疫球蛋白。
缺乏有效的保护性免疫应答正防碍着对疫苗和照射后的适合预防方法的开发,因此,近期把希望专注于抗病毒方法。
为了确定能有效治疗患有慢性丙型肝炎患者的HCV感染的药剂,已经进行了各种临床研究。这些研究包括α干扰素的使用,单独使用和与其它抗病毒剂联合使用。这类研究表明大多数参与者对这些治疗没有反应,并且发现其中出现有利反应的参与者中,在治疗结束后大部分病情复发。
直到最近,人们认为干扰素(IFN)是唯一能得到的对慢性丙型肝炎有认可的确实临床效果的疗法。但是其持续反应速度慢,且干扰素也可导致严重的降低被治疗患者的生活质量的副作用(即视网膜病、甲状腺炎、急性胰腺炎、抑郁症)。近来,已允许将干扰素和病毒唑联合用于对单独IFN无反应的患者。但是,由IFN导致的这些副作用并没有随着这种联合疗法而得以缓解。
因此,要开发有效治疗HCV感染的抗病毒剂必须解决现有药物疗法局限性的问题。
HCV是Flaviviridae家族中的有包膜正链RNA病毒。单链HCV RNA基因组长度约9500个核苷酸、具有单个开放读框(ORF),编码约3000个氨基酸的单个大的多蛋白。在被感染的细胞中,这种多蛋白通过细胞蛋白酶和病毒蛋白酶在多个位点被切割、以产生结构和非结构(NS)蛋白。在HCV情况中,成熟的非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)是通过两种病毒蛋白酶产生的。第一种蛋白酶,表征还不清楚,它是在NS2-NS3连接处切割;第二种是包含在NS3的N末端区的丝氨酸蛋白酶(以下称作NS3蛋白酶),并介导所有随后的NS3下游的切割,该NS3包括顺式和反式两种,顺式在NS3-NS4A切割位点,反式是指剩下的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NA5B位点。NA4A蛋白具有多种功能,作为NS3蛋白酶的辅因子、能辅助NS3和其它病毒复制酶成分的膜定位。这种NS3蛋白与NS4复合物的形成对于这些过程似乎是需要的,它增强了所有位点上的蛋白酶解的功效。这种NS3蛋白也具有核苷三磷酸酶和RNA解旋酶活性。NS5B是一种涉及HCV复制的RNA依赖性RNA聚合酶。
开发抗病毒剂的总策略是使病毒复制所必需的病毒性编码酶失活。为此,专利申请WO 97/06804描述了作为抗HCV的核苷类似物胞嘧啶-1,3-氧硫烷(oxa thiolane)(也叫做3TC)的(-)对映异构体。此化合物,虽然据报道它在以前的临床抗HIV和HBV试验中是安全的,但临床上还需要证实该化合物具有抗HCV活性,其抗病毒的作用机制也还未见报道。
为找到抑制HCV的NS3蛋白酶或RNA解旋酶的化合物而进行的认真和艰难的尝试已有了如下发现:
·美国专利5,633,388描述了用作抗HCV活性剂的杂环取代的羧酰胺和类似物。这些化合物具有抗病毒的NS3蛋白的解旋酶活性,但临床试验还没有报道。
·Chu等报道了(Tet.快报(1996),7229-7232)菲醌具有抗体外HCV NS3蛋白酶活性。未见对该化合物的进一步开发的报道。
·在第9界国际抗病毒研究会议上Urabandai,Fukyshima,Japan(1996)公 开的一篇论文(抗病毒研究,30,1,1996;A23,(摘要19))报道了噻唑烷衍生物可抑制HCV蛋白酶。
数项研究报道了抑制其它诸如人白细胞弹性蛋白酶的丝氨酸蛋白酶的化合物。这些化合物的其中一组在WO 95/33764(Hoechst Marion Roussel,1995)中有报道。公开在该申请中的肽是吗啉基羰基-苯甲酰基-肽类似物,该类似物在结构上不同于本发明的肽。
Vertex药物公司的WO 98/17679公开了丝氨酸蛋白酶、尤其是丙型肝炎病毒NS3蛋白酶的抑制剂。这些抑制剂是基于NS5A/5B天然底物的肽类似物。虽然公开了几种三肽,但所有这些肽类似物均含有C末端活性羰基功能团作为它的基本特征。还报道了这些类似物具有抗其它丝氨酸蛋白酶活性,因此它对HCV NS3蛋白酶不是特异性的。
Hoffman LaRoche也报道了属于蛋白酶抑制剂的六肽,它可用作治疗HCV感染的抗病毒剂。这些肽在C末端含有醛或硼酸。
Steinkuhla等和Ingallinella等发表了NS4A-4B产物抑制作用(生物化学(1998),37,8899-8905和8906-8914)。但是,其中的肽和肽类似物并不包括也不会导致构思出本发明的肽。
本发明的一大优点是提供了抑制丙型肝炎病毒的NS3蛋白酶的三肽。
本发明的另一个优点是在于这些肽特异地抑制NS3蛋白酶,而它对其它丝氨酸蛋白酶在浓度约300μM时没有显著的抑制活性,例如对人白细胞弹性蛋白酶(HLE)、猪胰弹性蛋白酶(PPE)、或牛胰凝乳蛋白酶、或诸如人肝组织蛋白酶B(Cat B)的半胱氨酸蛋白酶。
本发明还有一个优点是在于提供了一些低分子量的小肽,它能渗透细胞膜,并在细胞培养物中和在体内的活性具有良好的药物动力学性能。
发明概述
包括在本发明范围内的是式(1)化合物的外消旋体、非对映异构体、旋光异构体、或者其药学上可接受的盐或酯
其中
B是H、C6或C10的芳基、C7-16的芳烷基;Het或(低级烷基)-Het,所有这些基团均可被C1-6烷基取代或不取代;C1-6烷氧基;C1-6烷酰基;羟基;羟基烷基;卤素;卤烷基;硝基;氰基;氰基烷基;可被C1-6烷基取代或不取代的氨基;酰氨基;或(低级烷基)酰胺;或者
B是式R4-C(O)-的酰基衍生物;式R4-O-C(O)-的羧基;式R4-N(R5)-C(O)-的酰胺基;式R-N(R5)-C(S)-的硫酰胺基;或式R4-SO2的硫酰基,其中
R4是(i)可被羧基、C1-6烷酰基、羟基、C1-6烷氧基、可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低级烷基)酰胺基取代或不取代的C1-10烷基;
(ii)C3-7环烷基、C3-7环烷氧基、或C4-10烷基环烷基,这些均可被羟基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低级烷基)酰胺基取代或不取代;
(iii)可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低级烷基)酰胺基;
(iv)C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可被C1-6烷基、羟基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、或可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代;或
(v)Het或(低级烷基)-Het,两者均可被C1-6烷基、羟基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、或可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代;
R5是H或C1-6烷基;
条件是当R4是酰胺基或硫酰胺基时,R4不是(ii)的环烷氧基;
以及
Y是H或C1-6烷基;
R3是C1-8烷基、C3-7环烷基、或C4-10烷基环烷基,这些均可被羟基、C1-6烷氧基、C1-6硫烷基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、C6或C10芳基、或C7-16芳烷基取代或不取代;
R2是CH2-R20、NH-R20、O-R20或S-R20,其中R20是饱和或不饱和的C3-7环烷基或C4-10的(烷基环烷基),这些均可不被取代或被R21单取代、二取代或三取代,或者R20是C6或C10芳基、或C7-14芳烷基,这些均可不被取代或被R21单取代、二取代或三取代,或者R20是Het或(低级烷基)-Het,两者均可不被取代或被R21单取代、二取代或三取代,
其中每个R21各自为C1-6烷基;C1-6烷氧基;低级硫烷基;磺酰基;
NO2;OH;SH;卤素;卤烷基;可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-14芳烷基、Het或(低级烷基)-Het单取代或二取代的氨基;可不被取代或被Cx烷基、C6或C10芳基、C7-14芳烷基、Het或(低级烷基)-Het单取代或二取代的酰氨基;羧基;羧基(低级烷基);C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het,所说的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代,
其中R22是C1-6烷基;C3-7环烷基;C1-6烷氧基;可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代;磺酰基;(低级烷基)磺酰基;NO2;OH;SH;卤素;卤烷基;羧基;酰胺基;(低级烷基)酰胺基;或被C1-6烷基取代或不取代的Het;
R1是H、C1-6烷基、C3-7环环烷基、C2-6环烯基、C2-6烷炔基,这些均可被卤素取代或不取代。
包含在本发明范围内的是一种药物组合物,该组合物包括病毒学上有效量的抗丙型肝炎的式I化合物、或其治疗上可接受的盐或酯,以及包括药学上可接受的载体介质或辅助剂。
本发明的一个重要方面是涉及一种治疗哺乳动物丙型肝炎病毒感染的方法,即给予哺乳动物病毒学上有效量的抗丙型肝炎的式I化合物、或其治疗上可接受的盐或酯或上述组合物。
另一重要方面是涉及一种抑制丙型肝炎病毒复制的方法,即通过将该病毒暴露于丙型肝炎病毒的NS3蛋白酶抑制量的式I化合物、或其治疗上可接受的盐或酯、或上述组合物。
还有一方面是涉及一种治疗哺乳动物丙型肝炎病毒感染的方法,即给该哺乳动物使用病毒学上有效量的抗丙型肝炎的式I化合物、或其治疗可接受的盐或酯。按照一种实施方式,本发明的药物组合物含有另一种免疫调变剂。另一种免疫调变剂的实例包括但不限于α-,β-,和δ-干扰素。
优选实施方式的详细说明
定义
除非另有说明,本文使用了下述定义:
在各种情况中所提及的(R)或(S)用于表示基团的构型,例如式I化合物的R1,这种表示是以该化合物而论、不是指单独的基团。
除了甘氨酸外,天然氨基酸包含手性碳原子。除非另有特别指明,优选的是含L-构型的天然氨基酸的化合物。但是,申请人考虑,在特殊情况时,式I的一些氨基酸可以是D-或L-构型、或者可以是D-和L-异构体的混合物,包括外消旋混合物。
本文所用的标记“P1、P2、P3”是指从肽类似物的C末端开始向N末端延伸的氨基酸残基的位置(即P1指从C末端起的位置1,P2指从C末端起的位置2,等)(见Berger A.和Schechter I.,伦敦皇家学会会报汇编(1970),B257,249-264)。
本申请中用的α-氨基酸的缩写列在表A中。
表A
氨基酸 | 符号 |
1-氨基环丙基-羧酸 | Acca |
丙氨酸 | Ala |
天冬氨酸 | Asp |
半胱氨酸 | Cys |
环己基甘氨酸(也叫做2-氨基-2-环己基乙酸) | Chg |
谷氨酸 | Glu |
异亮氨酸 | Ile |
亮氨酸 | Leu |
苯丙氨酸 | Phe |
脯氨酸 | Pro |
缬氨酸 | Val |
叔丁基甘氨酸 | Tbg |
本文所用的术语“1-氨基环丙基-羧酸”(Acca)是指下式化合物:
本文所用的术语“叔-丁基甘氨酸”(Tbg)是指下式化合物:
与氨基酸或氨基酸衍生物相关的术语“残基”意指通过去除羧基的羟基和α-氨基的一个氢从相应的α-氨基酸产生的基团。例如,术语Gln、Ala、Gly、Ile、Arg、Asp、Phe、Ser、Leu、Cys、Asn、Sar和Tyr分别代表L-谷氨酰胺、L-丙氨酸、甘氨酸、L-异亮氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、L-天冬酰胺、肌氨酸和L-酪氨酸。
与氨基酸或氨基酸残基相关的术语“侧链”意指与α-氨基酸的α-碳原子相连的基团。例如,甘氨酸的R-基团侧链是氢,对丙氨酸的是甲基,缬氨酸的是异丙基。对于α-氨基酸的特异性R-基团或侧链,参考A.L.Lehninger的《生物化学》教科书(见第4章)。
本文的术语“卤”意指选自溴基、氯基、氟基或碘基的卤素基。
本文的术语“C1-6烷基”或“(低级)烷基”,单独或与另一个基团结合,都是指含1-6个碳原子的无环、直链或支链烷基基团,包括甲基、乙基、丙基、丁基、叔丁基、己基、1-甲基乙基、1-甲基丙基、2-甲基丙基、1,1-二甲基乙基。
本文的术语“C3-7环烷基”,单独或与另一个基团结合,都是指含3-7个碳原子的环烷基基团,包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
该术语也包括“螺”-环基团,如螺-环丙基或螺环丁基:
术语“不饱和的环烷基”包括,例如环己烯基:
本文的术语“C4-10(烷基环烷基)”意指含3-7个碳原子与烷基基团相连的环烷基基团,被连接的基团含1-10个碳原子;例如,环丙基甲基、环戊基乙基、环己基甲基、环己基乙基或环庚基乙基。
本文的术语“C2-10链烯基”,单独或与另一个基团结合,都是指如上所述的含2-10个碳原子的烷基基团,并且还含至少一个双键。例如链烯基包括烯丙基和乙烯基。
本文的术语“C1-6烷酰基”,单独或与另一个基团结合,都是指含1-6个碳原子的直链或支链1-氧烷基基团,包括甲酰基、乙酰基、1-氧丙基(丙酰基)、2-甲基-1-氧丙基、1-氧己基,等等。
本文的术语“C1-6烷氧基”,单独或与另一个基团结合,都是指-O(C1-6烷基)基团,其中烷基如上所述含1-6个碳原子。烷氧基包括甲氧基、乙氧基、 丙氧基、1-甲基乙氧基、丁氧基和1,1-二甲基乙氧基。后面这一基团通常叫做叔丁氧基。
本文的术语“C3-7环烷氧基”,单独或与另一个基团结合,都是指与一个氧原子连接的C3-7环烷基基团,例如:
本文的术语“C6或C10芳基”,单独或与另一个基团结合,都是指含6个碳原子的芳族单环基团或含10个碳原子的芳族二环基团。例如,芳基包括苯基、1-萘基或2-萘基。
本文的术语“C7-16芳烷基”,单独或与另一个基团结合,都是指上述与一个烷基连接的C6或C10芳基,其中烷基如上所述含1-6个碳原子。C7-16芳烷基包括例如苄基、丁基苯基和1-萘基甲基。
本文的术语“氨基芳烷基”,单独或与另一个基团结合,都是指被C7-16芳烷基取代的氨基基团,例如,氨基芳烷基:
本文的术语“(低级烷基)酰胺基”,单独或与另一个基团结合,都是指被C1-6烷基单取代的酰胺,例如:
本文的术语“羧基(低级)烷基”,单独或与另一个基团结合,都是指通过上述的(低级)烷基连接的羧基(COOH),包括例如酪酸。
本文的术语“杂环”或“Het”,单独或与另一个基团结合,都是指通过从含1-4个杂原子的5-、6-或7-节饱和或不饱和(包括芳族)杂环中去掉一个氢而衍生的一价基团,其中的杂原子选自氮、氧和硫。另外,本文的“Het”意指上述与一个或多个可以是杂环或任何其它环的另外的环稠合的杂环。适合的杂环例如包括:吡咯烷、四氢呋喃、噻唑烷、吡咯、噻吩、二氮杂草、1H-咪唑、异噁唑、噻唑、四唑、哌啶、1,4-二噁烷、4-吗啉、吡 啶、嘧啶、噻唑[4,5-b]-吡啶、喹啉、或吲哚、或下列杂环:
本文的术语“(低级烷基)-Het”,意指通过一种链或支链烷基连接的上述杂环基团,其中烷基如上所述含1-6个碳原子。(低级烷基)-Het的例子包括:
或
本文的术语“药学上可接受的酯”,单独或与另一个基团结合,都是指式I化合物的酯,其中分子的任何羧基官能团、但优选羧基末端,被烷氧基羰基官能团代替:
其中酯的R部分选自烷基(例如甲基、乙基、正丙基、叔丁基、正丁基);烷氧基烷基(例如甲氧基甲基);烷氧基酰基(例如乙氧基甲基);芳烷基(例如苄基);芳氧基烷基(例如苯氧基甲基);芳基(例如苯基),可用卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代或不取代。其它适合的前药酯可以在此引用的《前药设计》,Bundgssrd,H.Ed.Elsevier(1985)中找到。当这些药学上可接受的酯注射在哺乳动物中时它通常在体内水解、并转化为式I化合物的酸形式。
关于上述酯,除非另有说明,任何所出现的烷基部分优选含1-16个碳原子,特别是1-6个碳原子。在这些酯中所出现的任何芳基部分优选包含苯基。
尤其是这些酯可以是C1-16烷基酯,未取代的苄基酯或被至少一种卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、硝基或三氟甲基取代的苄基酯。
本文的术语“药学上可接受的盐”包括那些从药学上可接受的碱衍生的盐。适合的碱例如包括胆碱、乙醇胺和1,2-二乙胺。Na+、K+和Ca++盐也应包含在本发明范围内(也参见“药物盐”,Birge,S.M.等,《药物科学杂志》(1977),66,1-19,将其在此引作参考)。
优选的实施方式
包括在本发明范围内的是式(1)的化合物,其中优选的是,B是C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可不被取代或被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、羟基、羟烷基、卤素、卤烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代;或
B优选的是Het或(低级烷基)-Het,这些均可不被取代或被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、羟基、羟烷基、卤素、卤烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代。
或者,B优选的是R4-SO2,其中R4优选为C1-6烷基;酰氨基;(低级烷基)酰氨基;C6或C10芳基、C7-14芳烷基或,这些均可被C1-6烷基取代或不取代。
或者,B优选的是式R4-C(O)-的酰基衍生物,其中R4优选的是(i)可被羧基、羟基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、或可被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基;
(ii)C3-7环烷基或C4-10烷基环烷基,两者均可被羟基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基单取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低级烷基)酰胺基取代或不取代;
(iv)C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可被C1-6烷基、羟基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代;
(v)Het或(低级烷基)-Het,两者均可不被取代或被C1-6烷基、羟基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代。
或者,B优选的是式R4-O-C(O)-的羧基,其中R4优选的是
(i)可被羧基、C1-6烷酰基、羟基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、或可被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基;
(ii)C3-7环烷基或C4-10烷基环烷基,这些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基单取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低级烷基)酰胺基取代或不取代;
(iv)C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可被C1-6烷基、羟基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代;或
(v)Het或(低级烷基)-Het,两者均可被C1-6烷基、羟基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代。
或者,B优选的是式R4-N(R5)-C(O)-的酰胺基,其中R4优选的是(i)可被羧基、C1-6烷酰基、羟基、C1-6烷氧基、可被C1-6烷基单取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低级烷基)酰胺基取代或不取代的C1-10烷基;
(ii)C3-7环烷基或C4-10烷基环烷基,这些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基单取代或二取代的氨基、酰氨基、或(低级烷基)酰胺基取代或不取代;
(iii)可任意被C1-3烷基单取代或二取代的氨基;
(iv)C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可被C1-6烷基、羟基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代;或
(v)Het或(低级烷基)-Het,两者均可被C1-6烷基、羟基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代;
R5是优选H或甲基。
或者,B优选的是式R4-NH-C(S)-的硫酰基,其中R4优选的是
(i)可被羧基、C1-6烷酰基或C1-6烷氧基取代或不取代的C1-10烷基;
(ii)C3-7环烷基或C4-10烷基环烷基,这些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基或酰氨基取代或不取代。
更优选的是,B是可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、羟基、羟烷基、卤素、卤烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代的C6或C10芳基,因此B的例子如下:
或者B更优选的是可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、羟基、卤素、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、或可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代的Het,因此B的例子如下:
或者,B更优选的是式R4-SO2,其中R4优选的是C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het,这些均可被C1-6烷基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基取代或不取代,因此B的例子如下:
或者,B更优选的是式R4-C(O)-的酰基衍生物,其中R4优选的是
(i)可被羧基、羟基、C1-6烷氧基取代或不取代的C1-10烷基;
(ii)C3-7环烷基或C4-10烷基环烷基,两者均可被羟基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基取代或不取代,因此B的例子如下:
或R4优选的是
(iv)C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可被C1-6烷基、羟基取代或不取代,因此B的例子如下:
或R4优选的是
(v)可被C1-6烷基、羟基、酰氨基取代或不取代的Het,因此B的例子如下:
或者,B更优选的是式R4-O-C(O)-的羧基,其中R4优选的是
(i)可被羧基、C1-6烷酰基、羟基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基;
(ii)C3-7环烷基或C4-10烷基环烷基,这些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代,因此B的例子如下:
或R4优选的是
(iv)C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可被C1-6烷基、羟基、可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代;或
(v)Het或(低级烷基)-Het,两者均可被C1-6烷基、羟基、酰氨基、或可被C1-6烷基不取代或单取代的氨基取代或不取代,因此B的例子如下:
或者,B优选的是式R4-N(R5)-C(O)-的酰胺基,其中R4优选的是
(i)可被羧基、C1-6烷酰基、羟基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基;
(ii)C3-7环烷基或C4-10烷基环烷基,这些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、低级烷基)酰胺基、可被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代;以及
R5是优选H或甲基,因此B的例子如下:
或R4优选的是
(iii)可任意被C1-3烷基单取代或二取代的氨基;因此B的例子如下:
或R4优选的是
(iv)C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可被C1-6烷基、羟基、氨基、可被C1-6烷基取代或不取代的酰氨基取代或不取代;或
(v)可被C1-6烷基、羟基、氨基、酰氨基取代或不取代的Het,因此B的例子如下:
或者,B优选的是式R4-NH-C(S)-的硫酰基,其中R4优选的是(i)C1-10烷基;或(ii)C3-7环烷基,因此B的例子如下:
B更优选的是式R4-NH-C(O)-的酰胺基,其中R4优选的是(i)可被羧基、C1-6烷酰基、羟基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基;
(ii)C3-7环烷基或C4-10烷基环烷基,这些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、低级烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代;
或R4优选的是
(iv)C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可被C1-6烷基、羟基、氨基或酰氨基取代或不取代,因此B的例子如下:
优选的是,Y是H或甲基,更优选的是,Y是H。
优选的是,R3是C1-8烷基、C3-7环烷基、或C4-10烷基环烷基,这些均可被羟基、C1-6烷氧基、C1-6硫烷基、乙酰氨基、C6或C10芳基、或C7-16芳烷基取代或不取代,因此B的例子如下:
更优选的是,R3是叔丁基甘氨酸(Tbg)、Ile、Val、Chg或:
的侧链
最优选的是,R3是Tbg、Chg或Val的侧链
包括在本发明范围内的式1这些化合物中,优选的是,R2是S-R20或O-R20,其中R20优选的是C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或CH2-Het,这些均可不被取代或被R21单取代、二取代或三取代,
优选的是,R21是C1-6烷基;C1-6烷氧基;低级硫烷基;可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或(低级烷基)-Het单取代或二取代的氨基或酰氨基;NO2;OH;卤素;三氟甲基;羧基;
C6或C10芳基、C7-16芳烷基或Het,所说的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代。更优选的是,R21是C1-6烷基;C1-6烷氧基;氨基;二(低级烷基)氨基;(低级烷基)酰胺基;C6或C10芳基、或Het,所说的芳基或Het均可被R22取代或不取代。
优选的是,R22是C1-6烷基;C3-7环烷基;C1-6烷氧基;氨基;单-或二(低级烷基)氨基;(低级烷基)酰氨基;磺酰基烷基;NO2;OH;卤素;三氟甲基;羧基;或Het。更优选的是,R22是C1-6烷基;C3-7环烷基;C1-6烷氧基;氨基;单-或二(低级烷基)氨基;(低级烷基)酰胺基;卤素;三氟甲基;或Het。最优选的是,R22是C1-6烷基;C1-6烷氧基;卤素;可不被取代或被低级烷基单-或二-取代的氨基;酰氨基;(低级烷基)酰氨基;或Het。甚至最优选的是,R22是甲基;乙基;异丙基;叔丁基;甲氧基;氯代基;可不被取代或被低级烷基单-或二-取代的氨基;酰氨基;(低级烷基)酰胺基;或低级烷基)2-噻唑基。
或者,R2是优选地选自以下这组基
更优选的是,R2是1-萘基甲氧基;2-萘基甲氧基;苄氧基;1-萘基氧基;2-萘基氧基;如上所述未取代、被R21单取代、或二取代的喹啉氧基。最优选的是,R2是1-萘基甲氧基;或如上所述未取代、被R21单取代、或 二取代的喹啉氧基,;因此R2的例子如下:
还更优选的是,R2是:
更优选的是,R21A是C1-6烷基例如异丙基、叔丁基或环已基;
卤素例如氯;
未取代或被C1-6烷基取代的氨基;或C6或C10芳基,因此R21A是例如:二甲基氨基,Ph-N(Me)-;
未取代的C6或C10芳基、C7-16芳烷,例如苯基或(贴p20第5行);或R21A更优选的是被R22取代或不取代的Het其中R22C1-6烷基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、不被取代或被C1-6烷基取代的氨基、或Het,因此R21A是例如:
最优选的是,R21A是C6、C10芳基或Het,这些均可被如上所述的R22取代或不取代,因此R21A是例如:
甚至最优选的是,R2是:
其中R22A优选的是C1-6烷基(如甲基);C1-6烷氧基(如甲氧基);或卤素(如氯);R21B是优选的是C1-6烷基、可被C1-6烷基单取代或不取代的氨基、酰氨基、或(低级烷基)酰胺基;而R21B是优选的是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低级烷基)氨基、(低级烷基)酰氨基、NO2、OH、卤素、三氟甲基、或羧基。更优选的是,R21B是C1-6烷氧基、二(低级烷基)氨基。最优选的是,R21B是甲氧基。
如上所述,式1化合物的P1片段是环丁基或环丙基环,两者均可被R1取代或不取代。
优选的是,R1是H、C1-3烷基、C3-5环烷基、或可被卤素取代或不取代的C2-4烷烯基。更优选的是,R1是乙基、乙烯基、环丙基、1或2溴乙基、或1或2-溴乙烯基。最优选的是,R1是乙烯基。
当R1不是H时,P1优选的是下式的环丙基体系:
其中C1和C2每个代表环丙基环的1和2位上的不对称碳原子。尽管式1化合物的其它片段上有其它可能的不对称中心,但这两种不对称中心的存在意味着式I化合物可以以非对映异构体的外消旋混合物的形式存在。如后面实施例所例证的,可以制备该外消旋混合物、然后将其分离成单个旋光异构体,或者通过手性合成法制备这些旋光异构体。
因此,式I化合物可以在碳1位置上以一种非对映异构体的外消旋混合物的形式存在,但其中碳2上的R1与位置1上的羰基以顺式定向,以下列基团表示:
或者式I化合物可以以一种非对映异构体的外消旋混合物的形式存在,其中位置2上的R1与位置1上的羰基以反式定向,以下列基团表示:
接下来,可以将该外消旋混合物分离成单个光学异构体。
本发明最有趣的发现是有关在碳2上加R1取代基以及P1片段的立体定向。该发现涉及碳1上的不对称碳的构型。一种优选的实施方式是其中R1不是H和碳1R构型。
更明确地说,当R1是以使C1具有R构型的方式引入时,取代基R1在C2上的引入就会对位价有影响。例如,化合物901(1R,2S)和203(1R,2S)分别具有25有82nM的活性。当与未取代的环丙基化合物111(475nM)比较时,可观察到位价有很大提高。而且,正如化合物901和203所示,C1具有R构型时,在环丙基环的碳2上取代基R1(如烷基或烷烯基)的这种构型使HCV NS3蛋白酶的抑制作用进一步提高,例如具有对羧基“顺式”的R1的化合物比“反式”外消旋体的位价更大(25nM)。通过比较化合物801(1R,2S)和它相应的(1S,2S)异构体的位价分别为6nM和>10μM,相差超过1500倍!!我们可以看到R与S构型的不同效果。
因此,最优选的化合物是具有下式绝对构型中顺式取代基R1和羰基的光学异构体:
例如,在R1是乙基的情况下,在1或2位上的不对称碳原子具有R,R构型。
包括在本发明范围内的式1化合是其中:
B是C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、羟基、羟烷基、卤素、卤烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代;或
Het或(低级烷基)-Het,这些均可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、羟基、羟烷基、卤素、卤烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代。或者
B是R4-SO2,其中R4优选为酰氨基;(低级烷基)酰胺基;C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het,这些均可被C1-6烷基取代或不取代。或者
B是式R4-C(O)-的酰基衍生物,其中R4是
(i)C1-10烷基,可被羧基、羟基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代;
(ii)C3-7环烷基或C4-10烷基环烷基,两者均可被羟基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代;
(iv)C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可被C1-6烷基、羟基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代;
(v)Het或(低级烷基)-Het,两者均可被C1-6烷基、羟基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代,
或者
B是式R4-O-C(O)-的羧基,其中R4是
(i)C1-10烷基,可被羧基、C1-6烷酰基、羟基、C1-6烷氧基、酰氨基、
(低级烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的
氨基取代或不取代;
(ii)C3-7环烷基或C4-10烷基环烷基,这些均可被羧基、(C1-6烷氧基)
羰基、可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基、酰氨基、或
(低级烷基)酰胺基取代或不取代;
(iv)C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可被C1-6烷基、羟基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、或可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代;或
(v)Het或(低级烷基)-Het,两者均可或被C1-6烷基、羟基、酰氨基、(低级烷基)氨基、或可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的酰氨基取代或不取代。或者
B是式R4-N(R5)-C(O)-的酰胺基,其中R4是
(i)C1-10烷基,可被羧基、C1-6烷酰基、羟基、C1-6烷氧基酰氨基、
(低级烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的
氨基取代或不取代;
(ii)C3-7环烷基或C4-10烷基环烷基,这些均可被羧基、
(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、可不被取代或被
C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代;
(iii)可不被取代或被C1-3烷基单取代或二取代的氨基;
(iv)C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可被C1-6烷基、羟基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代;或
(v)Het或(低级烷基)-Het,两者均可被C1-6烷基、羟基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代;和
R5是优选H或甲基,或者
B是式R4-NH-C(S)-的硫酰胺基,其中R4是
(i)C1-10烷基,可被羧基、C1-6烷酰基或C1-6烷氧基取代或不取代;
(ii)C3-7环烷基或C4-10烷基环烷基,这些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基或酰氨基取代;
Y是H或甲基;
R3是C1-8烷基、C3-7环烷基、或C4-10烷基环烷基,这些均可被羟基、C1-6烷氧基、C1-6硫烷基、乙酰氨基、C6或C10芳基、或C7-16芳烷基取代或不取代;
R2是S-R20或O-R20,其中R20优选的是C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或CH2-Het,这些均可不被取代或被R21单取代、二取代或三取代,其中
R21是C1-6烷基;C1-6烷氧基;低级硫烷基;可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或(低级烷基)-Het 单取代或二取代的氨基或酰氨基;NO2;OH;卤素;三氟甲基;羧基;C6或C10芳基、C7-16芳烷基或Het,所说的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代,其中
R22是C1-6烷基;C3-7环烷基;C1-6烷氧基;氨基;单-或二(低级烷基)氨基;(低级烷基)酰胺基;磺酰基烷基;
NO2;OH;卤素;三氟甲基;羧基或Het;或者
R2是优选地选自以下这组基团:
或者R2是1-萘基甲氧基;2-萘基甲氧基;苄氧基;1-萘基氧基;2-萘基氧基;如上所述未取代、被R21单取代、或二取代的喹啉氧基;
P1片段是环丁基或环丙基环,两者均可被R1取代或不取代。其中R1是H、C1-3烷基、C3-5环烷基、或可被卤素取代或不取代的C2-4烷烯基,并且所说的在碳2上的R1对1位上的羰基是顺式定向的,由以下基团表示:
包括在本发明范围内的式1化合物是其中B是C6或C10芳基,可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、羟基、羟烷基、卤素、卤烷基、硝基、氰基、氰烷基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代;或者B是可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷酰基、羟基、卤素、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代的Het;或者B是R4-SO2其中R4-是C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het,这些均可被C1-6烷基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基取代或不取代;或者B是式R4-C(O)-的酰基衍生物,其中R4是
(i)C1-10烷基,可被羧基、羟基、C1-6烷氧基取代或不取代;
(ii)C3-7环烷基或C4-10烷基环烷基,两者均可被羟基、羧基、(C1-6 烷氧基)羰基取代或不取代;或
(iv)C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可被C1-6烷基、羟基取代
或不取代;
(v)Het,可被C1-6烷基、羟基、酰氨基或氨基取代或不取代,
或者B是式R4-O-C(O)-的羧基,其中R4是
(i)C1-10烷基,可被羧基、C1-6烷酰基、羟基、C1-6烷氧基、酰氨基、
(低级烷基)酰胺基、或可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代;
(ii)C3-7环烷基或C4-10烷基环烷基,这些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代;
(iv)C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可被C1-6烷基、羟基、或
可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代;或
(v)Het或(低级烷基)-Het,两者均可被C1-6烷基、羟基、酰氨基、或可
不被取代或被C1-6烷基单取代的氨基取代或不取代;
或者B是式R4-N(R5)-C(O)-的酰胺基,其中R4是
(i)C1-10烷基,可被羧基、C1-6烷酰基、羟基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代;
(ii)C3-7环烷基或C4-10烷基环烷基,这些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、可不被取代或被
C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代;和R5是H和甲基;或R4是
(iii)可任意被C1-3烷基单取代或二取代的氨基;
(iv)C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可被C1-6烷基羟基、可被C1-6烷基取代或不取代的氨基或酰氨基取代或不取代;
或
(v)可被C1-6烷基、羟基、氨基或酰氨基取代或不取代的Het;或者
B是式R4-NH-C(S)-的硫酰胺基,其中R4是
(i)C1-10烷基;或(ii)C3-7环烷基;或者
B是式R4-NH-C(O)-的酰胺基,其中R4是
(i)C1-10烷基,可被羧基、C1-6烷酰基、羟基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代或不取代;
(ii)C3-7环烷基或C4-10烷基环烷基,这些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基取代;
(iv)C6或C10芳基或C7-16芳烷基,这些均可被C1-6烷基、羟基、氨基或酰氨基取代或不取代;
Y是H;
R3是叔丁基甘氨酸(Tbg)、Ile、Val、Chg的侧链或:
R2是1-萘基甲氧基;或被如上所述的R21未取代、单取代或二取代的喹啉氧基;或者
R2是:
其中R21A是C1-6烷基;C1-6烷氧基;C6、C10的芳基或Het;低级硫 烷基;卤素;可被C1-6烷基单取代或不取代的氨基;或C6、C10的芳基、C7-16芳烷基或Het,均可被R22取代或不取代,其中R22是C1-6烷基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低级烷基)酰胺基、可被C1-6烷基单取代或二取代的氨基或Het;
P1是环丙基环其中碳1具有R构型,
以及R1是乙基、乙烯基、环丙基、1或2-溴乙基或1或2-溴乙烯基。
包括在本发明范围内的式1化合物还有是其中:
R3是叔丁基甘氨酸(Tbg)、Chg或Val、的侧链;
R2是:
其中R22A是C1-6烷基(如甲基);C1-6烷氧基(如甲氧基);或卤素(如氯);R21B是C1-6烷基、可被C1-6烷基单取代或不取代的氨基、酰氨基、或(低级烷基)酰胺基;而R21B是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低级烷基)氨基、(低级烷基)酰氨基、NO2、OH、卤素、三氟甲基、或羧基;
以及P1是
最后,包含在本发明范围内的是表1-10所列出的每个式I化合物。
根据一种可替代的实施方式,本发明的药物组合物还可以包括另一种抗HCV剂。抗HCV剂的例子包括α或β干扰素、病毒唑和金刚胺。
根据另一种可替代的实施方式,本发明的药物组合物还可包括HCV蛋白酶的其它抑制剂。
还根据另一种可替代的实施方式,本发明的药物组合物还可包括HCV生存期中的其它目标的抑制剂,包括但不限于,例如解旋酶、聚合酶、金属蛋白酶或内部核糖体进入位点(IRES)。
本发明的药物组合物可以口服、非肠道或通过一种植入的贮主给药。优选口服或注射给药。本发明的药物组合物也可含有常规的药学上可接受的无毒载体、辅助剂或赋形剂。在某些情况中,可以用药学上可接受的酸、碱或缓冲液调节制剂的pH,以增强所配制的化合物或其传送形式的稳定性,本文所用的术语非肠道包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、滑液内、胸骨内、鞘内和损害内注射或输注技术。
本药物组合物可以是无菌的可注射制剂形式,例如,无菌的可注射含水悬浮液或油状悬浮液。可根据本领域已知的技术、使用适合的分散剂或润湿剂(例如吐温80)和悬浮剂制备该悬浮液。
本发明的药物组合物可以以任何口服可接受的剂型进行口服给药,它包括但不限于,胶囊、片剂以及含水悬浮液和溶液。在口服使用的片剂中,通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。也可以有代表性地加入诸如硬脂酸镁之类的润滑剂。对于胶囊形式的口服给药,有用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当将含水悬浮液口服给药时,可将活性成分与乳化剂和悬浮液组合使用。如需要,可以加入某些甜味剂和/或调味剂和/或着色剂。
用于上述制剂和组合物的其它适合的赋形剂或载体可以在标准的药物教科书中找到,例如在《药学科学和实践》第19版,Mack出版公司,Easton,Penn.,(1995)的“Remington的药物科学”中。
剂量为大约0.01-100mg/kg体重/天的本文所述的蛋白酶抑制剂化合物可用于预防和治疗HCV介导性疾病的单一疗法,其剂量优选约0.5-75mg/kg体重/天。典型的是,本发明药物组合物可以每天给药约1-5次,或者连续输注。这种给药方法可用于慢性或急性治疗。可与载体物质结合 而产生单一剂型的活性成分的用量将根据所治疗的患者和给药的特殊方式的不同而改变。典型的制剂包含约5%-约95%的活性化合物(w/w)。这种制剂优选包含约20%-约80%活性化合物。
正如本领域熟练技术人员所共知的,可能需要较上述剂量更低或更高的用量。对任何特殊患者的特定剂量和治疗方案是根据各种因素而决定的,该因素包括所用的特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、排泄速度、联合用药、感染的严重程度和过程、患者对感染的处置和主治医生的判断。一般而言,基本上以小于肽的最佳剂量的小剂量开始治疗。此后,按小增量增大剂量直至在该情况下达到最佳效果。总之,最合乎需要的是将该化合物以能达到抗病毒效果而不产生任何有害或造成伤害的副作用的浓度水平进行给药。
当本发明组合物包括式I化合物和一种或多种附加治疗剂或预防剂的组合时,该化合物和附加剂两者应大约占单一治疗方案中的正常给予剂量的10-100%,更优选约10-80%。
当将这些化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体一同进行配制时,所得到的组合物可以对诸如人的哺乳动物体内给药,以抑制HCV NS3蛋白酶或者治疗或预防HCV病毒感染。也可联合使用本发明化合物与包括但不限于下列试剂达到这种治疗:免疫调节剂、例如α-、β-、γ-干扰素;其它抗病毒剂,例如病毒唑、金刚胺;其它HCV NS3蛋白酶抑制剂;HCV生存期的其它目标的抑制剂,它包括但不限于解旋酶、聚合酶、金属蛋白、或内部核糖体进入位点(IRES)、或其组合。也可将附加剂与本发明化合物组合以形成单一剂型。或者将这些附加剂作为复合剂型的一部分单独给哺乳动物服用。
因此,本发明的另一个实施方式是提供通过服用式I化合物(其中取代基如上所述)而抑制哺乳动物的HCV NS3蛋白酶活性的方法。
在一个优选的实施方式中,这些方法用于降低哺乳动物的HCV NS3蛋白酶活性。如果药物组合物仅包括本发明化合物作为活性成分,则这些方法可另外包括下列步骤:给所述哺乳动物服用选自下列的试剂:免疫调节剂,抗病毒剂,HCV蛋白酶抑制剂,或HCV生存期的其它目标的抑制剂,例如解旋酶、聚合酶、金属蛋白、或IRES。这些附加剂可以在给本发明化合物之前、同时、或之后服用。
在一种替代的优选实施方式中,这些方法用于抑制哺乳动物的病毒复制。这类方法用于治疗或预防HCV疾病。如果药物组合物仅包括本发明化合物作为活性成分,则这些方法可另外包括下列步骤:给所述哺乳动物服用选自下列的试剂:免疫调节剂,抗病毒剂,HCV蛋白酶抑制剂,或HCV生存期的其它目标的抑制剂。可以在给予本发明化合物之前、同时、或之后服用这些附加剂。
前面所述化合物也可用作实验室试剂。本发明化合物也可用于治疗或预防物质的病毒污染,因而降低与这些物质(如血液、组织、外科仪器和覆盖物、实验室仪器和覆盖物、以及血液收集装置和物质)接触的实验室人员或医疗人员或患者感染病毒的危险。
前面所述化合物也可用作研究试剂。也可将本发明化合物用作阳性对照以验证基于细胞的代用品测定或者体外或体内病毒复制测定。
方法
根据下列合成方案举例说明的方法合成本发明化合物(其中CPG为羧基保护基团、APG为氨基保护基团):
合成方案I
简言之,P1、P2、和P3可通过公知的肽偶联技术连接。P1、P2、和P3基团可以以任何顺序连接在一起,只要最终化合物与式I的肽一致。例如,P3可与P2-P1相连;P1可与P3-P2相连。
通常,通过使用上述方法、脱保护N-末端残基的α氨基、并通过肽连接偶联下一个适合的N-保护性氨基酸的未保护羧基,从而使肽延长。重复这种脱保护和偶联过程直至得到所需的序列。这种偶联可以用如合成 方案I所述的分段方式中的氨基酸组分来进行,或通过在此引用的Merrifield,《美国化学会杂志》(1963),85,2149-2154中最初所述的方法的固相肽合成来进行。
可以用标准的偶联方法进行两个氨基酸、一个氨基酸和一个肽、或两个肽片段之间的偶联,这些标准的偶联方法例如叠氮化物法、混合碳酸-羧酸酐(氯甲酸异丁酯)法、碳二亚胺(二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺、或水溶性碳二亚胺)法、活性酯(对硝基苯基酯、N-羟基琥珀亚氨基酯)法、Woodward试剂K方法、羰基二咪唑法、磷试剂法或氧化-还原法。通过加入1-羟基苯并三唑使其中一些方法(尤其是碳二亚胺法)增强。这些偶联反应可以在溶液(液相)或固相中进行。
更清楚地说,这种偶联步骤包括在偶联剂存在下一个反应物的游离羧基与另一个反应物的游离氨基的脱水偶联、以形成连接酰胺键。这些偶联剂的说明可在有关肽化学的普通教科书中找到,例如,M.Bodanszky,“肽化学”,第二次修订版,Springer-Verlag,柏林,德国,(1993)。适合的偶联剂例如有N,N′-二环己基碳二亚胺、N,N’-二环己基碳二亚胺中的1-羟基苯并三唑或N-乙基-N’-[(3-二甲基氨基)丙基]碳二亚胺。非常实际且有用的偶联剂是单独形式或存在于1-羟基苯并三唑中的从市售可得到的(苯并三唑-1-基氧)三-(二甲基氨基)六氟磷酸盐。另一种非常实际且有用的偶联剂是市售可得到的2-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基四氟硼酸脲。还有一个非常实际且有用的偶联剂是市售可得到的O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基六氟磷酸脲。
偶联反应是在惰性溶剂中进行的,该惰性溶剂例如二氯甲烷、乙腈或二甲基甲酰胺。加入过量的叔胺例如二异丙基乙基胺、N-甲基吗啉或N-甲基吡咯烷以保持反应混合物pH约为8。反应温度通常是在0℃-50℃的范围内,反应时间通常为15分钟至24小时。
当使用固相合成法时,将C末端羧酸与不溶性载体(通常为聚苯乙烯)相连,这些不溶性载体包括与羧基反应形成一种键的载体,这种键对于延长情况是稳定的、但此后易于裂解。这些载体例如有:氯或溴甲基树脂、羟甲基树脂、三苯基甲基树脂和2-甲基-4-烷氧基-苄基醇树脂。
这些树脂中有许多是市售可得到的、并已经加入了所需的C末端氨基 酸。或者,可以按照Wang,S.-S.,《美国化学会杂志》(1973),95,1328;Atherton,E.,Shepard,R.C.“固相肽合成;一种实用方法”牛津IRL出版社,(1989);131-148中的已知方法将氨基酸加在固体载体上。除了上述以外,其它肽合成方法在Stewart和Young,“固相肽合成”,第二版,Pierce化学公司,Rockford,IL(1984);Gross,Meienhofer,Udenfriend,编辑,“肽:分析、合成、生物学”,卷1、2、3、5和9,Academic出版社,纽约,(1980-1987);Bodansky等,“肽合成实践”Springer-Verlag,纽约(1984)中有描述,这些公开出版物均为本发明参考文献。
在偶联反应过程中通常必须保护组分氨基酸的功能基团、以避免形成不必要的键。可以使用的保护基团列在Greene,“有机化学的保护性基团”,JohnWiley和Sons,纽约(1981)和“肽:分析、合成、生物学”卷3,Academic出版社,纽约,(1981)中,这些公开出版物均为本发明参考文献。
通常将C末端残基的α羧基保护成一种可裂解形成羧酸的酯(CPG)。可以使用的保护性基团包括:1)烷基酯,例如甲基酯、三甲基甲硅烷基乙基酯和叔丁基酯,2)芳烷基酯,例如苄基酯和取代的苄基酯,或3)可以通过弱碱处理或轻度还原方法而被裂解的酯,例如三氯乙基和苯甲酰甲基酯。
必须保护与生长肽链偶联的每个氨基酸的α氨基(APG)。可以使用任何本领域已知的保护性基团。这些基团例如包括:1)酰基,例如甲酰基、三氟乙酰基、邻苯二酰基、和对甲苯磺酰基;2)芳族氨基甲酸酯基团,例如苄氧基羰基(Cbz或Z)和取代的苄氧基羰基,以及9-芴基甲氧基羰基(Fmoc);3)脂族氨基甲酸酯基团,例如叔丁氧基羰基(Boc),乙氧基羰基,二异丙基甲基羰基,和烯丙基羰基;4)环烷基氨基甲酸酯基团,例如环戊氧基羰基和金刚烷氧基羰基;5)烷基,例如三苯基甲基和苄基;6)三烷基甲硅烷基,例如三甲基甲硅烷基;和7)含诸如苯基硫代羰基和二硫琥珀酰基的基团的巯基。优选的α氨基保护基团是Boc或Fmoc。适合用于肽合成保护的许多氨基酸衍生物均可从市售获得。
新近所加的氨基酸残基的α氨基保护基团在下一个氨基酸偶联之前被裂解。当使用Boc基团时,选择的方法是净三氟乙酸或二氯甲烷中的三氟乙酸、或二噁烷或乙酸乙酯中的HCl。然后在偶联之前或在偶联的当时用碱性溶液例如含水缓冲液、或二氯甲烷中的叔胺或乙腈或二甲基甲酰胺中和所得 到的铵盐。当使用Fmoc基团时,选择的试剂是二甲基甲酰胺中的哌啶或取代的哌啶,但是也可使用任何仲胺。脱保护是在0℃-室温(RT)的温度下进行的,通常是20-22℃。
具有侧链官能度的任何氨基酸必须在肽制备过程中用任何上述基团进行保护。本领域熟练技术人员知道用于这些侧链官能度的适合的保护基团的选择和使用是根据氨基酸和肽中的其它保护性基团的存在而决定的。对这些保护性基团的选择的重要性在于该基团在脱保护和α氨基的偶联过程中必须不被去除。
例如,当Boc用作α氨基保护性基团,下列侧链保护性基团是适合的:可用于保护诸如Lys和Arg的氨基酸的氨基侧链的对甲苯磺酰基(甲苯磺酰基)部分;可用于保护半胱氨酸的含硫化物侧链的乙酰氨基甲基、苄基(Bn)、或叔丁基磺酰基部分;可用于保护丝氨酸、苏氨酸或羟基脯氨酸的含羟基侧链的苄基(Bn)醚;以及可用于保护含天门冬氨酸和谷氨酸侧链的羧基的苄基酯。
当选择Fmoc用于α-氨基保护时,通常基于叔丁基的保护性基团是可以接受的。例如,可用于赖氨酸和精氨酸的Boc,用于丝氨酸、苏氨酸或羟基脯氨酸的叔丁基醚;和用于天门冬氨酸和谷氨酸的叔丁基酯。三苯基甲基(三苯甲基)部分可用于保护半胱氨酸的含硫化物侧链。
一旦完成了肽的延长,则去除所有保护性基团。当使用液相合成时,在选择保护性基团所采取的无论什么方法中,应将保护性基团去除。这些方法对于本领域熟练技术人员来说是公知的。
当使用固相合成时,肽从树脂裂解、同时伴有保护性基团的去除。当Boc保护方法用于合成时,用0℃的含HF的无水添加剂例如二甲硫、茴香醚、茴香硫醚或对甲酚进行处理是用于从树脂裂解肽的优选方法。肽的裂解也可通过其它诸如三氟甲烷磺酸/三氟乙酸混合物的酸性试剂而实现。如果使用Fmoc保护方法,则用较早所述的试剂使N末端Fmoc基团裂解。用三氟乙酸溶液和各种添加剂如茴香醚等使其它保护性基团和肽从树脂裂解。
1.封端基团B的合成
各种不同的封端基团B按以下方式引入:
1.1)当B是芳基、芳烷基时:通过以下三种方法之一制备芳基化的氨基 酸:
a)在氟-硝基芳基部分直接亲核取代:
简单地说,4-氟-3-硝基三氟苯甲酸(a)在碱如氢氧化钾存在下在80℃下与L-氨基酸(b)反应,产生所需的N-芳基氨基酸(c);
b)按照Ma et.al.(J.Am.Chem.Soc.1998,120,12459)所述的方式进行铜催化偶联:
简单地说,溴-4-氟苯(d)在碱如氢氧化钾和催化量的铜存在下在90℃下与L-氨基酸(b)反应,产生所需的N-芳基氨基酸(e);或
c)三氟苄酸酯(triflate)用苯胺亲核取代:
简单地说,邻甲氧基苯胺(f)在碱如2,6-二甲基吡啶存在下在90℃下与三氟苄酸酯(triflate)(g)反应,得到苄基酯(h)。用10%Pd/C氢化,产生所需的N-芳基氨基酸(i)。
1.2)当B是氨基噻唑衍生物时:
a)按照Keamey et al.,1998,J.Org.Chem,63,196,所述的方法制备的Fmoc-N=C=S与保护的P3残余片段或全肽或肽片段反应产生硫脲。
b)该硫脲衍生物与合适的溴铜反应产生相应的噻唑衍生物。
1.3)当B是R
4
-C(O)-,R
4
-S(O)
2
时:
保护的P3残余片段或全肽或肽片段分别与合适的酰基氯或磺酰氯偶合,该物质可从市场上买到或用现有技术中已知的方法合成。
1.4)当B是R
4
O-C(O)-时:
保护的P3残余片段或全肽或肽片段与合适的氯甲酸酯或磺酰氯偶合,该磺酰氯可从市场上买到用现有技术中已知的方法合成。至于Boc-衍生物,使用(Boc)2O。
例如:
a)用光气处理氯丁醇产生相应的苯甲酸酯。
b)该苯甲酸酯用合适的NH2-三肽在碱如三乙基胺存在下进行处理得到环丁基氨基甲酸酯。
1.5)当B是R
4
-N(R
5
)-C(O)-,或R
4
-NH-C(S)-时:
保护的P3残余片段或全肽或肽片段如SynLett.Feb1995;(2);142-144所述用光气处理接着用胺处理。
2.P2部分的合成
2.1合成母体:
A)合成卤芳基甲烷衍生物:
按照K.N.Campbell et al.,JAmer.Chem.Soc.,(1946),68,1844中所述的方法制备卤代甲基-8-喹啉IId。
合成方案II
简言之,通过相应的酰基卤化物IIb与诸如氢化铝锂的还原剂的还原反应将8-喹啉羧酸IIa转化为相应的醇IIc。用适当的氢卤酸处理醇IIb得到所需的卤衍生物IId。这种方法的一个特殊实施方式见实施例1。
B)芳基醇衍生物的合成:
根据Giardina等(《美国化学会杂志》,(1997),40,1794-1807)所述的方法制备2-苯基-4-羟基喹啉衍生物IIIc。
合成方案III
R22和R21B=烷基、OH、SH、卤、NH2或NO2。
将苯甲酰基乙酰胺(IIIa)与适合的苯胺(IIIb)缩合、并用聚磷酸使所得到的亚胺环化得到相应的2-苯基-4-羟基喹啉(111c)。这种方法的一个特定实施方式见实施例2。
或者,该方法也可用一种不同的方式进行:
苯甲酰乙基酯(IIIa)在酸存在下与合适的苯胺(IIIb)缩合,所得亚胺在260-280℃下环化得到相应的2-苯基-4-羟基喹啉(IIIc)。该方法特定的实施方式如实施例3(化合物3e)所述。
2.2 P2的合成:
A)4-取代的脯氨酸(其中R2通过碳原子与环相连)(立体化学如下所示)的合成:
根据J.Ezquerra等(《四面体》,(1993),38,8665-8678)和C.Pedregal等(《四面体快报》,(1994),35,2053-2056)所述的方法按合成方案IV所示。进行。
合成方案IV
简言之,将Boc-焦谷氨酸保护为苄基酯。用诸如二异丙基酰胺锂的强碱处理、然后加入烷化剂(Br-R20或I-R20),在酰胺的还原反应和酯的脱保护后,得到所需的化合物IVe。
B)O-芳烷基化4-(R)-羟基脯氨酸的合成:
可用以下不同方法进行。
1)当R20为芳基、Het、芳烷基、或(低级烷基)-Het时,根据E.M.Smith等(《医用化学杂志》(1988),31,875-885)所述的方法进行该合成过程。简言之,用如氢化钠或K-tBuO的碱处理市售获得的Boc-4(R)-羟基脯氨酸, 所得到的醇化物与卤-R20(Br-R20,I-R20,等)反应生成所需的化合物。这种方法的一个特定实施方式见实施例4,5和7。
2)或者,当R20为芳基、Het时,这些化合物也可通过Mitsunobu反应(Mitsunobu(1981),合成,1月,1-28;Rano等(1995),《四面体快报》36(22),3779-3792;Krchnak等,(1995),《四面体快报》36(5),62193-6196;Richter等,(1994),Tet.快报35(27),4705-4706)来制备。简言之,即在三苯基膦和二乙基偶氮二羧酸盐(DEAD)的存在下用适当的芳基醇或硫醇处理Boc-4(S)-羟基脯氨酸甲基酯,将所得到的酯水解成酸。这种方法的特定实施方式见实施例6和8。
合成方案V
或者,可在固相中进行Mitsunobu反应(图解V)。将等分树脂结合化合物(Va)加入396型合成器(高级Chem Tech)的96孔分块(block)中,再加入各种芳基醇或硫醇和适当的试剂。培养后,洗涤、干燥每个树脂结合产品(Vb),并使其从树脂裂解。
Suzuki反应(Miyaura等,(1981),《工业合成》11,513;Sato等,(1989),化学快报》1405;Watanabe等,(1992),Syn快报,207;Takayuki等,(1993),《有机化学杂志》58,2201;Frenette等,(1994),Tet.快报35(49),9177-9180;Guiles等,(1996),《有机化学杂志》61,5169-5171)也可用于进一步使芳基取代基官能化。
3.P1部分的合成
3.1合成2-取代的1-氨基环丙基羧酶的4位上可能的异构体
根据合成方案VI进行合成。
合成方案VI
a)简言之,即在碱条件下使二保护性丙二酸盐VIa和1,2-二卤烷烃Vlb或环硫酸盐VIc(根据K.Burgess和Chun-Yen KE(合成,(1996),1463-1467的方法合成的)反应得到二酯VId。
b)进行较少受阻酯的区域选择性水解得到酸VIe。
c)将这种酸VIe进行Curtius重排得到1-氨基环丙基羧酸衍生物VIf的外消旋混合物,其中R1与羧基顺式定向。这种合成方法的特定实施方式见实施例9。
d,e)或者,从酸VIe选择性形成的酯与适合的卤化物(P*Cl)或醇 (P*OH)形成二酯VIg,其中P*与P酯的选择性水解是相容的。P酯的水解得到酸VIh。
f)VIh的Curtius重排得到1-氨基环丙基羧酸衍生物VIi的外消旋混合物,其中R1基团与羧基反向。这种合成方法的特定实施方式见实施例14。
另一种制备衍生物VIf(当R1为乙烯基并与羧基以顺式定向时)的合成法如下所述。
合成方案VII
用碱中的1,4-二卤丁烯VIIb处理市售获得的亚胺VIIa,所得的亚胺VIIc水解后得到与羧基同向的丙烯基取代基的VIId,这种方法见实施例15和19。
所有上述碳1(VIe和VIId)上的对映异构混合物可通过以下进行拆分:
1)酶分离(实施例13,17和20);
2)用手性酸结晶(实施例18);或
3)化学衍生(实施例10)。
拆分后,可按实施例11所示进行绝对立体化学的判定。
可以以同样的方法对碳1上的对映异构混合物进行拆分和立体化学判定,该混合物中C2上的取代基与羧基反向(VIi)。
3.2)合成1-氨基环丁基羧酸
按照“Kavin Douglas;Ramaligam Kondareddiar;Woodard Ronald,Synth.Commun.(1985),15(4),267-72”所述的方法合成1,1-氨基环丁烷羧酸。
反应式VIII
简单地说,在VIIIb存在下用碱处理化合物VIIIa得到相应的环丁基衍生物VIIIc。式VIIIc的异氰酸酯和酯在酸性条件下水解产生1-氨基-环丁基羧酸的盐酸盐VIIId。后者的羧酸在甲醇的HCl溶液中酯化。实施例21中说明了这种酯化的具体实施方式。
3.3合成2-取代的1-氨基环丁基羧酸
a)保护的甘氨酸酯衍生物如亚胺IXa在合适的碱如金属氢化物、氢氧化物或烷氧化物的存在下与高烯丙基亲电子试剂IXb进行烷基化反应。在IXb中有用的离去基团包括卤素(X=Cl、Br、I)或磺酸酯(甲苯磺酸酯、二甲苯磺酸酯或三甲苯磺酸酯)。IXb中的烯丙醇官能团用本领域已知的羟基保护基(如乙酸酯、甲硅烷基、乙醛)保护。
b)在第二步,将一烷基化衍生物IXc的羟基官能团去保护并转化成合适的亲电子试剂官能团X,如上述的化合物IXb。
c)通过用碱(金属氢化物、烷氧化物)处理,接着用含水无机酸,水解以及用弱碱中和的方法使IXd环化成环丁烷衍生物IXe。在此阶段,可用闪蒸色谱法分离IXe的顺式和反式-异构体。
d)IXe的双键在标准条件下也可以加氢,生成相应的饱和衍生物IXf。这一步可有可无。
本发明还包括式(I)的肽类似物的制备方法,其中P1是取代的氨基环丙 基羧酸残余部分。该方法包括的步骤有:
·将选自APG-P3-P2或APG-P2的肽用下式的P1中间体进行偶合,
其中R1是C1-6烷基、环烷基或C2-6链烯基,这些均可被卤素取代或不取代,CPG是羧基保护基,以及APG是氨基保护基,P3和P2如上定义。
本发明还包括制备1)或2)的方法:1)丝氨酸蛋白酶抑制剂肽类似物,或2)HCV NS3蛋白酶抑制剂肽类似物。该方法包括的步骤有:
·将(适当保护的)氨基、肽或肽片段与下式的P1中间体偶合,
其中R1是C1-6烷基、C3-7环烷基或C2-6链烯基,这些均可被卤素取代或不取代,而CPG是羧基保护基。
本发明因此包括制备1)蛋白酶抑制剂肽类似物或2)丝氨酸蛋白酶抑制剂肽类似物的方法。该方法包括的步骤有:
·将(适当保护的)氨基酸、肽或肽片段与下式的中间体偶合,
其中CPG是羧基保护基。
本发明还包括下式的P1中间体的用途,
其中R1是C1-6烷基、环烷基或C2-6链烯基,这些均可被卤素取代或不取代, 该中间体用于制备:1)丝氨酸蛋白酶抑制剂肽类似物,或2)HCV NS3蛋白酶抑制剂肽类似物。
本发明还包括下式中间体的用途,
其中CPG是羧基保护基,该中间体用于制备:1)蛋白酶抑制剂肽类似物,或2)丝氨酸蛋白酶抑制剂肽类似物。
本发明还包括以下各式P1中间体用于制备上面定义的式1化合物的用途,
其中R1是C1-6烷基、环烷基或C2-6链烯基,这些均可被卤素取代或不取代。
最后,本发明还包括下式脯氨酸类似物的用途,
其中R21A是C1-6烷基;C1-6烷氧基;低级硫烷基;卤素;可被C1-6烷基取代或不取代的氨基;C6、C10芳基、C7-16芳烷基或Het,所述的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代其中R22是C1-6烷基、C1-6烷氧基、酰氨基、(低级烷基)酰氨基、可不被取代或被C1-6烷基单取代或二取代的氨基、或Het,以及R21B是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低级烷基)氨基、(低级烷基)酰氨基、NO2、OH、卤素、三氟甲基、或羧基;
1)丝氨酸蛋白酶抑制剂肽类似物,2)HCV NS3蛋白酶抑制剂肽类似物,或3)式1的肽类似物的合成方法均如上述定义。
实施例
通过下列非限定性实施例对本发明进一步举例说明。
将温度设为摄氏温度。除非另有说明,溶液百分比表示重量与体积关系,溶液比例表示体积与体积关系。在Bruker400MHz分光计上记录核磁共振(NMR)光谱;将化学位移()记作部分/百万。根据Still的闪光色谱技术(W.C.Still等,《有机化学杂志》,(1978),43,2923)在硅胶(SiO2)上进行闪光色谱法。
用于本实施例的缩写包括:Bn:苄基;Boc:叔丁氧基羰基{Me3COC(O)};BSA:牛血清白蛋白;CHAPS:3-[(3-氯酰氨基丙基)-二甲基铵]-1-丙烷磺酸盐;DBU:1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯;CH2Cl2=DCM:二氯甲烷;DEAD:二乙基偶氮二羧酸盐;DIAD:二异丙基偶氮二羧酸盐;DIEA:二异丙基乙基胺;DIPEA:二异丙基乙胺;DMAP:二甲基氨基吡啶;DDC:1,3-二环己基碳二亚胺;DME:1,2-二甲氧乙烷;DMF:二甲基甲酰胺;DMSO:二甲基亚砜;DTT:二硫苏糖醇或苏-1,4-二巯基-2,3-丁二醇;DPPA:二苯基磷酰基叠氮化物;EDTA:乙二胺四乙酸;Et:乙基;EtOH:乙醇;EtOAc:乙酸乙酯;Et2O:二乙醚;HATU:[O-7-(氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基六氟磷酸脲];HPLC:高效液相层析;MS:质谱(MALDI-TOF:基质辅助性激光解吸(disorption)电离-飞行时间,FAB:快速原子轰击);LAH:氢化铝锂;Me:甲基;MeOH:甲醇;MES:(2-{N-吗啉代}乙烷-磺酸);NaHMDS:双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠;NMM:N-甲基吗啉;NMP:N-甲基吡咯烷;Pr:丙基;Succ:3-羧基丙酰基(propanoyl);PNA:4-硝基苯基氨基或对硝基苯胺;TBAF:叔-丁基氟化物铵;TBTU:2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基四氟硼酸脲;TCEP:盐酸三(2-羧乙基)膦;TFA:三氟乙酸;THF:四氢呋喃;TIS:三异丙基硅烷;TLC:薄层色谱法;TMSE:三甲基甲硅烷基乙基;Tris/HCl:盐酸三(羟甲基)氨基甲烷,
P2结构单元
实施例1
溴甲基-8-喹啉(1)的合成:
向市售获得的8-喹啉羧酸(2.5g,14.4mmol)中加入纯亚硫酰氯化物(10ml,144mmol)中。在过量的亚硫酰氯化物在减压下被蒸馏之前将此混合物在80℃加热1小时。将在80℃加热了1小时的无水乙醇(15mL)在真空浓缩之前加入所得到的呈褐色固体中。残余物分配在EtOAc和饱和含水NaHCO3之间,并将有机相干燥(MgSO4)、过滤和浓缩得到呈褐色的油(2.8g)。将该物质(约14.4mmol)在35分钟内滴加到冷却至-60℃的LAH(0.76g,20.2mmol)/Et2O悬浮液中,反应完成之前,将反应混合物在1.5小时内缓慢升温至-35℃。在30分钟内缓慢加入MgSO4·10H2O然后加湿THF使该反应停止。将混合物分配在Et2O和10%含水NaHCO3之间。并将有机相干燥(MgSO4)、过滤和浓缩得到相应的醇呈黄色的固体(2.31g,2步80%)。将该醇(2.3g,11.44mmol)溶解在AcOH/HBr(20M],Aldrich的30%溶液)中并在70℃加热2.5小时。将混合物在真空下浓缩至干燥,分配在EtOAc(100mL)和饱和含水NaHCO3之间,然后干燥(MgSO4)、过滤和浓缩得到呈褐色固体(2.54g,100%)的所需化合物(1A)。
实施例2
2-苯基-4-羟基喹啉(2)的合成:
将市售可获得的苯甲酰乙酸乙酯(6.00g,31.2mmol)于85℃(封闭管)在75mL30%的NH4OH中加热2小时。冷却后的固体过滤并在水中回流2小时,用CH2Cl2萃取该溶液三次。合并有机层、经MgSO4干燥、过滤并浓缩。将黄色残余物在硅胶上进行闪光色谱分析、用EtOAc:己烷(3:7)洗脱,得到1.60g呈白色固体的相应酰胺,得率31%。
使用Dean-Stark装置用苯胺(143mg,1.53mmol)和甲苯(10mL)中的盐酸苯胺(10mg,0.08mmol)回流此酰胺(250mg,1.53mmol)。浓缩该溶液得到棕色油,将这种油与多磷酸(2g)混合并在135℃加热20分钟。将该反应混合物注入水中并用5M NaOH调节pH为8。用乙酸乙酯萃取该含水悬浮液两次。有机层合并、用盐水洗涤、经MgSO4干燥、过滤并浓缩。将残余物在硅胶上进行闪光色谱分析、用乙酸乙酯中的3%MeOH洗脱、得到67mg2-苯基-4-羟基喹啉(2),得率20%。
1H NMR(DMSO-d6)δ8.11(d,J=7Hz,1H),7.86-7.83(m,2H),7.77(d,J=8Hz,1H),7.68(dd,J=8,7Hz,1H),7.61-7.58(m,3H),7.35(dd,J=8,7Hz,1H),6.34(s,1H).
实施例3
4-羟基-2-苯基-7-甲氧喹啉(3)的合成
4-羟基-2-苯基-7-甲氧喹啉(e):
将苯甲酰基乙酸乙酯(b)(100.0g,0.52mol)、间茴香胺(a)(128.1g,1.04mmol)和4N HCl/二噁烷(5.2mL)的甲苯(1.0L)溶液在Dean-Stark装置中回流6.25小时。用含水10%HCl(2×300mL)、1N NaOH(2×300mL)、H2O(300mL)和盐水(15mL)依次洗涤被冷却的甲苯溶液。将甲苯相干燥(MgSO4)、过滤并在减压下浓缩得到1.2:1.0的酯c和酰胺d混合物(144.6g,45%/38%粗制得率),它是一种深棕色油。将该粗的油加热80分钟至280℃、同时蒸馏所产生的乙醇。用CH2Cl2(200mL)研制所得到的冷却暗色固体。过滤悬浮液、用CH2Cl2洗涤所得到的固体,得到浅褐色固体e(22.6g, 由a得到17%): 1H NMR(DMSO-d6)δ8.00(d,J=9.0Hz,1H),7.81-7.82(m,2H),7.57-7.59(m,3H),7.20(d,J=2.2Hz,1H),6.94(dd,J=9.0,2.2Hz,1H),6.26(s,1H),3.87(s,3H).
4-氯-2-苯基-7-甲氧喹啉(3):
将e(8.31g,33.1mmol)的POCl3(90mL)悬浮液加热回流2小时(加热后得到的清亮溶液)。在减压下浓缩该反应混合物。将残余物分配在1NNaOH(加入放热的10N NaOH以保持高pH)和EtOAc(500mL)之间。用H2O(100mL)和盐水(100mL)洗涤有机层、然后干燥(MgSO4)、过滤和在减压下浓缩得到浅黄色固体3(8.60g,96%):1H NMR(DMSO-d6)δ8.28-8.30(m,2H),8.20(s,1H),8.10(d,J=9.1Hz,1H),7.54-7.58(m,3H),7.52(d,J=2.5Hz,1H),7.38(dd,J=9.1,2.5Hz,1H),3.98(s,3H).
该反应重复三次,总是得到96-98%的得率,这明显高于《医用化学杂志》1997,40,1794中所报道的68%得率。
实施例4
Boc-4(R)-(萘-1-基甲氧基)脯氨酸(4)的合成:
将市售的Boc-4(R)-羟基脯氨酸(5.00g,21.6mmol)溶解在THF(100mL)中并冷却至0℃。在10分钟内分批添加氢化钠(60%油悬浮液,1.85g,45.4mmol),将悬浮液在室温搅拌1小时。然后,加入1-(溴甲基)萘(8.00g,36.2mmol)(如E.A.Dixon等,《加拿大化学杂志》(1981),59,2629-2641所述的制备)、将混合物回流加热18小时。将混合物注入水(300mL)中、用己烷洗涤,用10%含水HCl酸化含水层、并用乙酸乙酯提取两次。合并有机层并用盐水洗涤、干燥(MgSO4)、过滤并浓缩。将残余物通过闪蒸色谱法(49:49:2:己烷:乙酸乙酯:乙酸)纯化得到为无色油的标题化合物(4.51g,56%得率)。1H NMR(DMSO-d6)显示存在两种旋转异构体:
δ8.05(m,1H),7.94(m,1H),7.29(d,J=14Hz,1H),7.55-7.45(m,4H),4.96(m,2H),4.26(br.s,1H),4.12(dd,J=J=8Hz,1H),3.54-3.42(m,2H),2.45-2.34(m,1H),2.07-1.98(m,1H)1.36(s,(3/9)9H),1.34(s,(6/9)9H).
实施例5
Boc-4(R)-(8-喹啉-甲氧基)脯氨酸(5)的合成:
将无水THF(20mL)中的Boc-4(R)-羟基脯氨酸(1.96g,8.5mmol)加入THF(100mL)中的NaH(1.4g,60%油,34mmol)悬浮液中。在将实施例1的甲基-8-喹啉(2.54g,11.44mmol)加入THF(30mL)之前搅拌该混合物30分钟。在70℃加热该反应混合物(5小时)后用湿THF仔细去除过量NaH。真空浓缩反应物、并将所得到的物质溶解在EtOAc和水中。分离碱性含水相并在用EtOAc(150mL)提取之前用10%含水HCl酸化至pH约为5。将有机相干燥(MgSO4)、过滤并浓缩得到一种棕色油。通过闪蒸色谱法(洗脱液:10%MeOH/CHCl3)纯化得到为浅黄色固体的所需化合物(2.73g,86%得率)。HPLC(97.5%);1H NMR(DMSO-d6)显示比例为6:4的旋转异构体数: δ12-11.4(bs,1H),8.92(2×d,J=4.14and4.14Hz,1H),8.38(2×d,J=8.27and8.27Hz,1H),7.91(d,J=7.94Hz,1H),7.77(d,J=7.0Hz,1H),7.63-7.54(m,2H),5.14(2×s,2H),4.32-4.29(m,1H),4.14-4.07(m,1H),3.52-3.44(m,2H),2.43-2.27(m,1H),2.13-2.04(m,1H),1.36and1.34(2×s,9H).
实施例6
Boc-4(R)-(7-氯喹啉-4-氧)脯氨酸(6)的制备:
将市售可获得的Boc-4(S)-羟基脯氨酸甲基酯(500mg,2.04mmol)和7-氯-4-羟基喹啉(440mg,2.45mmol)置于0℃的干THF(10mL)中。加入三苯基膦(641mg,2.95mmol),然后缓慢加入DIAD(642mg,2.45mmol)。将混合物在室温搅拌20小时。然后,浓缩该反应混合物,将其溶解在乙酸乙酯中,用1N HCl提取三次。用Na2CO3碱化含水相、并用乙酸乙酯提取两次。混合有机层、经MgSO4干燥、过滤并浓缩得到一种黄色油。将这种油通过闪蒸色谱法纯化得到498mg为白色固体的化合物(6)甲基酯,58%得率。
用甲醇(4mL)中的1M含水氢氧化钠(1.7Ml,1.7mmol)在0℃水解这种甲基酯(400mg,0.986mmol)3小时。浓缩该溶液以去除甲醇,并用1M含水HCl中和。浓缩悬浮液至干、并溶解在甲醇(20mL)中,过滤掉盐、浓缩滤液得到387mg定量得率的所需化合物(6),为白色固体。
1H NMR(DMSO-d6)(约1:1旋光异构体的混合物):
2H NMR(DMSO-d6)(ca.1:1mi×ture of rotamers)δ8.74(d,J=5Hz,1H),8.13-8.09(m,1H),7.99and7.98(s,1H),7.58(d,J=9Hz,1H),7.02(d,J=5Hz,1H),5.26-5.20(m,1H),4.10-4.01(m,1H),3.81-3.72(m,1H),3.59(dd,J=12,10Hz,1H),2.41-2.31(m,2H),1.34 and 1.31(s,9H).
实施例7
Boc-4(R)-(2-苯基-7-甲氧基喹啉-4-氧)脯氨酸(7)的合成:
Boc-4(R)-(2-苯基-7-甲氧基喹啉-4-氧)脯氨酸(7):
将叔丁氧化钾(8.16g,72.7mmol)在15分钟内按分小批加入保持在25℃的DMSO(83mL)中的Boc-4(R)-羟基脯氨酸(6.73g,29.1mmol)中,将混合物在25℃搅拌1.5小时。将氯-2-苯基-7-甲氧基喹啉3(8.61g,32.0mmol)分4批加入该反应混合物中(在15分钟内)。将该反应混合物在25℃搅拌19小时。将所得到的悬浮液注入水(650mL)中、并用 Et2O(3×150mL)洗涤混合物以去除过量的氯喹啉(后来发现EtOAc更有效)。用含水1N HCl(约1.5当量、38mL,需要43.6mL)酸化含水层至pH为4-5。通过过滤回收被沉淀的白色固体。在减压下经P2O5干燥湿的固体得到为浅褐色固体的脯氨酸衍生物7(12.6g,91%,含2.3%w/w DMSO):
1H NMR(DMSO-d6)δ(2:1旋转异构体的混合物):8.27(d,J=7.0Hz,2H),8.00,7.98(2d,J=9.2,-9.2Hz,1H),7.48-7.56(m,3H),7.45,7.43(2s,1H),7.39(d,J=2.5Hz,1H),7.17(dd,J=9.2,2.5Hz,1H),5.53-5.59(m,1H),4.34-4.41(m,1H),3.93(s,3H),3.76(broad s,2H),2.63-2.73(m,1H),2.32-2.43(m,1H),1.36,1.33(2s,9H).
实施例8
合成Boc-4(R)-(2-苯基-6-硝基喹啉-4-氧)脯氨酸(8)
将二乙基偶氮二羧酸酯(0.77ml,4.89mmol)滴加到搅拌的三苯基膦(1.28g,4.88mmol)在15ml四氢呋喃的0℃下的溶液中。在氮气下搅拌30分钟后,将5ml四氢呋喃中加Boc-4(S)-羟基脯氨酸甲酯(1.00g,4.08mmol),接着加市售的6-硝基-2-苯基-4-喹啉醇(1.30g,4.88mmol)在10ml相同溶剂的悬浮液。将该红色的混合物在0℃和室温下搅拌15分钟。真空蒸发溶剂。剩下的油在醋酸乙酯中稀释并用碳酸氢钠洗两次,一次用水,一次用盐水。干燥(MgSO4)有机层,过滤,真空蒸发。残留物经硅胶色谱70:30v/v,己烷-醋酸乙酯)得到所需的甲基酯,为淡黄色固体(1.70g,85%)。
1H NMR(CDCl3)旋转异构体≌3:7δ9.03(d,J=2.5Hz,1H),8.46(dd,J=9,2.5Hz,1H),8.18(d,J=9Hz,1H),8.14-8.07(m,2H),7.59-7.50(m,3H),7.19(s,1H),5.39-5.30(m,1H),4.67(t,J=8Hz,0.3H),4.61(t,J=8Hz,0.7H),4.07-4.01(m,2H),3.81(s,3H),2.89-2.73(m,1H),2.55-2.47(m,1H),1.49(s,2.7H),1.45(s,6.3H).
向上述甲基酯(503mg,1.02mmol)在THF:H2O(10:4ml)的混合物中加 氢氧化锂单水合物(85mg,2.05mmol)。加2ml的MeOH以便得到均匀的溶液。在30分钟内形成白色沉淀。在室温下将所得的悬浮液再搅拌6小时。该反应混合物用10%柠檬酸的水溶液稀释并用乙酸乙酯萃取。有机层用MgSO4干燥,过滤,真空蒸发,得到416mg(85%)所需的酸(8)
1H NMR(DMSO-d6):δ8.92-8.87(m,1H),8.47(dd,J=9,3Hz,1H),8.38-8.32(m,2H),8.19(d,J=9Hz,1H),7.77(s,1H),7.62-7.55(m,3H),5.73-5.66(m,1H),4.41(t,J=8Hz,1H),3.89-3.76(m,2H),2.83-2.72(m,1H),2.47-2.35(m,1H),1.38(s,9H).
实施例9
(1R,2R)/(1S,2R)1-氨基-2-乙基环丙基羧酸的混合物的合成
a)将二叔丁基丙二酸盐(20.0g,92.47mmol)和1,2-二溴丁烷(30.0g,138.93mmol)依次加入50%NaOH水溶液(185mL H2O中含92.4g)中的苄基三乙基氯化铵(21.0g,92.19mmol)中。在室温下用力搅拌该反应混合物过夜,然后加入冰和水的混合物。用CH2Cl2(3x)提取粗制品,接着用水(3x)和盐水洗涤。将有机层干燥(MgSO4)、过滤并浓缩。将残余物通过闪蒸色谱分析(7cm,己烷中含2-4%Et2O)得到所需环丙烷衍生物9c(19.1g,70.7mmol,76%得率)。
1H NMR(CDCl3)δ1.78-1.70(m,1H),1.47(s,9H),1.46(s,9H),1.44-1.39(m,1H),1.26-1.64(m,3H),1.02(t,3H,J=7.6Hz).
b)在0℃干醚(100mL)中的叔丁氧化钾(6.71g,59.79mmol,4.4当量)悬浮液中加入水(270μL,15.00mmol,1.1当量)。5分钟后,将醚(10mL)中的二酯5c(3.675g,13.59mmol)加入悬浮液中。在室温下将反应混合物搅拌过夜,然后加入冰和水的混合物并用醚(3x)洗涤。在0℃用10%柠檬酸水溶液酸化含水层、并用AcOEt(3x)提取。用水(2x)和盐水连续洗涤混合的有机层。常规处理(Na2SO4,过滤,浓缩)后,分离出为浅黄色油的所需酸9d(1.86g,8.68mmol,64%得率)1H NMR(CDCl3)δ2.09-2.01(m,1H),1.98(dd,J=3.8,9.2Hz,1H),1.81-1.70(m,1H),1.66(dd,J=3.0,J=8.2Hz,1H),1.63-1.56(m,1H),1.51(s,9H),1.0(t,J=7.3Hz,3H).
c)在干苯(32mL)中的酸5d(2.017g,9.414mmol)中依次加入Et3N(1.50mL,10.76mmol,1.14当量)和DPPA(2.20mL,10.21mmol,1.08当量)。将反应混合物回流3.5小时,然后加入2-三甲基甲硅烷基乙醇(2.70mL,18.84mmol,2.0当量)。使回流保持过夜,然后用Et2O稀释反应混合物,并依次用10%柠檬酸水溶液、水、饱和含水NaHCO3、水(2x)和盐水连续洗涤。常规处理(MgSO4,过滤,浓缩)后,将残余物通过闪蒸色谱(5cm,10%AcOEt-己烷)纯化得到为浅黄色油的所需氨基甲酸酯9e(2.60g,7.88mmol,84%得率)。MS(FAB)330(MH+);
1H NMR(CDCl3)δ5.1(bs,1H),4.18-4.13(m,2H),1.68-1.38(m,4H),1.45(s,9H),1.24-1.18(m,1H),1.00-0.96(m,5H),0.03(s,9H).
d)在氨基甲酸酯5e(258mg,0.783mmol)中加入THF(940ìL,0.94mmol,0.8当量)中的1.0M TBAF溶液。4.5小时后,另外加入(626ìL,0.63mmol,0.8当量)1.0M TBAF。在室温下将反应混合物搅拌过夜,回流30分钟,然后用AcOEt稀释。用水(2x)和盐水连续洗涤该溶液。常规处理(MgSO,过滤和浓缩)后,分离出(84mg,0.453mmol,58%得率)为浅黄色液体的所需胺9f。 1H NMR(CDCl3)δ1.96(bs,2H),1.60-1.40(m,2H),1.47(s,9H),1.31-1.20(m,1H),1.14(dd,J=4.1,7.3Hz,1H),1.02(dd,J=4.1,9.2Hz,1H)0.94(t,J=7.3Hz,3H).
实施例10
叔丁基-(1R,2R)/(1S,2R)1-氨基-2-乙基环丙基羧酸盐(来自实施例9)的化学拆分:
用1M TBAF/THF(26mL)回流处理由实施例5得到的混合物9e(8.50g,25.86mmol)45分钟。用AcOEt稀释冷却的反应混合物,用水(3x)和盐水(1x)洗涤,然后干燥(MgSO4)、过滤并蒸发得到为浅黄色油的游离胺。将该游离胺溶解在无水CH2Cl2(120mL)中,依次加入NMM(8.5mL,77.57mmol)、化合物4(实施例4)(10.08g,27.15mmol)和HATU(11.79g,31.03mmol)。将反应混合物搅拌过夜,然后按前面所述逐步进行。通过闪蒸色谱(洗脱液-己烷:Et2O;25:75)分离粗制非对映异构体混合物得到白色泡沫(4.42g,64%理论得率)的二肽10a(较少极性洗脱斑)和为乳白色泡沫(4g,57%理论得率)的10b(较多极性洗脱斑)。此时分离出两种异构体,但绝对的立体化学仍是未知的。
实施例11
通过与已知的叔丁基(1R-氨基-2R-乙基环丙基)羧酸盐的相互关系确定化合物10a和10b的绝对立体化学
TLC、HPLC和NMR的直接比较
Montreal大学的A.Charette教授提供了具有所示绝对立体化学的化合物11a,它是通过X线结晶学(《美国化学会杂志》1995,117,12721)确定的。将化合物11a(13.2mg,0.046mmol)溶解在1M HCl/EtOAc(240iL)中,并搅拌约48小时。蒸发该混合物至干得到呈浅黄色膏的化合物11b,再按实施例10所述、使用CH2Cl2中的NMM(20.3i L,0.185mmol)和HATU(21.1mg,0.056mmol)将该化合物与化合物4(18mg,0.049mmol)偶联。通过闪蒸色谱(洗脱液-己烷:Et2O;50:50)纯化该粗制物质得到二肽11c为一种油(7.7mg,31%)。通过TLC、HPLC和NMR对比,发现二肽11c与实施例10所得到的较低极性化合物10a是相同的,由此确定10a的绝对立体化学为(1R,2R)。
实施例12
(1R,2R)/(1S,2R)1-Boc-氨基-2-乙基环丙基羧酸(12a)的制备:
将实施例9的氨基甲酸酯9e(2.6g,7.88mmol)在TFA中于0℃搅拌40分钟。然后浓缩该混合物,用THF(10mL)稀释。加入NaOH水溶液 (700mg,8.8mL水中含17.5mmol)、再加入(Boc)2O(2.06g,9.44mmol,1.2当量)的THF(13mL)溶液。在室温下搅拌该反应混合物过夜(需要时通过加入10%NaOH水溶液保持pH为8),然后用水稀释,用Et2O(3X)洗涤,再在0℃用10%柠檬酸水溶液酸化。用EtOAc(3x)提取含水层,再用水(2x)和盐水连续洗涤。常规处理(MgSO4,过滤和浓缩)后,分离出所需的Boc-保护性氨基酸(12a)(788mg,3.44mmol,44%得率)。 1H NMR(CDCl3)δ5.18(bs,1H),1.64-1.58(m,2H),1.55-1.42(m,2H),1.45(s,9H),1.32-1.25(m,1H),0.99(t,3H,J=7.3Hz).
(1R,2R)/(1S,2R)1-Boc-氨基-2-乙基环丙基羧酸甲基酯(12b)的制备:
将Boc衍生物12a(0.30g,1.31mmol)溶解在Et2O(10mL)中,并在0℃用刚刚制备的Et2O中的二偶氮甲烷处理,直至留下黄色稍过量的二偶氮甲烷。在室温下搅拌20分钟后,浓缩该反应混合物至干得到为澄清无色油的12b(0.32g,100%)。1H NMR(CDCl3)δ5.1(bs,1H),3.71(s,3H).1.62-1.57(m,2H),1.55(s,9H),1.53-1.43(m,1H),1.28-1.21(m,2H),0.95(t,J=7.3Hz,3H).
实施例13
甲基(1R,2R)/(1S,2R)Boc-1-氨基-2-乙基环丙基羧酸盐的酶促拆分:
**也可接受的其它酯(如Et)
a)将实施例10的(1R,2R)/(1S,2R)1-Boc-氨基-2-乙基环丙基羧酸甲基酯(0.31g,1.27mmol)的对映异构体混合物溶解在丙酮(3mL)中,然后用水(7mL)稀释,同时快速搅拌。在加入阿卡酶[2.4L从NovoNordisk工业公司提取](300mg)之前用0.05M含水NaOH将溶液的pH调至7.5。培养过程中用NaOH稳定pH,设立pH稳定计以监控NaOH溶液的加入。40小时后用EtOAc和水(含5mL饱和NaCO3)稀释混合物,并分离该相。用10%含水HCl酸化含水相、并用EtOAc提取、干燥(MgSO4)、过滤并浓缩得到酸13a(48.5mg)。使用实施例10和11所述的相互关系确定绝对立体化学。
实施例14
(1R,2S)/(1S,2S)1-氨基-2-乙基环丙基羧酸的合成:
从实施例9所述的酸9d起始:
c)向CH3CN(25mL)中的9d(1.023g,4.77mmol)中依次加入DBU(860μL,5.75mmol,1.2当量)和烯丙基溴化物(620μL,7.16mmol,1.5当量)。在室温下搅拌该反应混合物4小时,然后浓缩。用Et2O稀释残余物,并依次用10%柠檬酸水溶液(2X)、水、饱和含水NaHCO3、水(2x)和盐水洗涤。常规处理 (MgSO4,过滤和浓缩)后,分离出为无色油的所需酯14a(1.106g,3.35mmol,91%得率)。MS(FAB)255(MH+);1H NMR(CDCl3)δ5.96-5.86(m,1H),5.37-5.22(m,2H),4.70-4.65(m,1H),4.57-4.52(m,1H),1.87-1.79(m,1H),1.47(s,9H),1.45-1.40(m,1H),1.33-1.24(m,3H),1.03(t,J=7.3Hz,3H).
d)将TFA(5mL)加入室温的干CH2Cl2(5mL)中的酯14a(1.106g,4.349mmol)中。搅拌该反应混合物1小时,然后浓缩得到14b(854mg,4.308mmol,99%得率)。MS(FAB)199(MH+);1H NMR(CDCl3)δ5.99-5.79(m,1H),5.40-5.30(m,2H),4.71-4.62(m,2H),2.22-2.00(m,2H),1.95-1.88(m,1H),1.84-1.57(m,2H),0.98(t,J=7.3Hz,3H).
e)在干苯(14.8mL)中的酸14b(853mg,4.30mmol)中依次加入Et3N(684μL,4.91mmol,1.14当量)和DPPA(992μL,4.60mmol,1.07当量)。将反应混合物回流4.5小时,然后加入2-三甲基甲硅烷基乙醇(1.23mL,8.58mmol,2.0当量)。使回流保持过夜,然后用Et2O稀释反应混合物,并依次用10%柠檬酸水溶液、水、饱和含水NaHCO3、水(2x)和盐水连续洗涤。常规处理(MgSO4,过滤,浓缩)后,将残余物通过闪蒸色谱(5cm,10-15%AcOEt-己烷)纯化得到为浅黄色油的所需氨基甲酸酯14c(1.212g,3.866mmol,90%得率)。MS(FAB)314(MH+);1HNMR(CDCl3)δ5.93-5.84(m,1H),5.32-5.20(m,2H),5.05(bs,1H),4.60-4.56(m,2H),4.20-4.11(m,2H),1.71-1.60(m,3H),1.39-1.22(m,1H),1.03(t,J=7.6Hz,3H),0.96-0.86(m,1H),0.04(s,9H).
f)在氨基甲酸酯14c(267mg,0.810mmol)中加入THF(1.62mL,1.62mmol,2.0当量)中的1.0M TBAF溶液。在室温下将反应混合物搅拌过夜,回流30分钟,然后用AcOEt稀释。用水(2x)和盐水依次洗涤该溶液。常规处理(MgSO4,过滤和浓缩)后,分离出(122mg,0.721mmol,89%得率)为浅黄色液体的所需胺14d。 1H NMR(CDCl3)δ5.94-5.86(m,1H),5.31-5.22(m,2H),4.58(d,J=5.7Hz,2H),1.75(bs,2H),1.61-1.53(m,2H),1.51-1.42(m,2H),1.00(t,J=7.3Hz,3H),0.70-0.62(m,1H).
实施例15
乙基-(1R,2S)/(1S,2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙基羧酸盐的合成:
与酯顺式的乙烯基
a)将市售可获得的THF(45mL)中的亚胺15a(10.0g,37.41mmol)加到-78℃的叔丁氧化钾(4.62g,41.17mmol,1.1当量)的THF溶液(180mL)中。将反应混合物升温至0℃,并在此温度下搅拌40分钟。然后加入1,4-二溴丁烯15b(8.0g,37.40mmol)将混合物冷却至-78℃,再在0℃搅拌1小时,加入叔丁氧化钾(4.62g,41.17mmol,1.1当量)使之冷却回到-78℃。最后再在0℃将反应混合物搅拌1小时、并浓缩得到化合物15c。
b,c,d)将15c溶解在Et2O(265mL)中、并用1N HCl水溶液(106mL)处理。在室温下3.5小时后,分离各层,用Et2O(2X)洗涤含水层,并用饱和NaHCO3水溶液使之碱化。用Et2O(3X)提取所需的胺,并用盐水洗涤混合的有机提取物。常规处理(MgSO4、过滤并浓缩)后,用二噁烷(187mL,748mmol)中的4N HCl溶液处理残余物。浓缩后,分离出棕色固体的盐酸盐15d(2.467g,12.87mmol,34%得率)。
1H NMR(CDCl3)δ9.17(bs,3H),5.75-5.66(m,1H),5.39(d,J=17.2Hz,1H),5.21(d,J=10.2Hz,1H),4.35-4.21(m,2H),2.77-2.70(m,1H),2.05(dd,J=6.4,10.2Hz,1H),1.75(dd,J=6.4,8.3Hz,1H),1.33(t,J=7.0Hz,3H).
实施例16
(1R,2R)/(1S,2R)-1-Boc-氨基-2-乙烯基环丙基羧酸乙基酯的制备:
将盐酸盐15d(1.0g,5.2mmol)和(Boc)2O(1.2g,5.7mmol)溶解在THF(30mL)中,并用DMAP(0.13g,1.04mmol,0.2当量)和二异丙基乙基胺(2.8mL,15.6mmol)处理。在用EtOAc(40mL)稀释前搅拌该反应化合物24小时,依次用饱和NaHCO3(含水)、5%含水HCl和饱和盐水洗涤。将有机相干燥(MgSO4)、过滤和浓缩,通过闪蒸色谱(15%EtOAc/己烷)得到16a(0.29g,23%)。 1H NMR(CDCl3)δ5.80-5.72(m,1H),5.29-5.25(dd,J=17.2,17.2Hz,1H),5.24-5.1(bs,1H),5.10(dd,J=9.2,9.2Hz,1H),4.22-4.13(m,2H),2.15-2.04(m,1H),1.85-1.73(bs,1H),1.55-1.5(m,1H),1.49(s,9H),1.26(t,J=7.3Hz,3H).
实施例17
(1R-2S)/(1S,2S)1-氨基-2-乙烯基环丙基羧酸乙酯的酶促拆分:
a)将外消旋衍生物17a(0.29g,1.14mmol)溶解在丙酮(5mL)中,再用水(10mL)稀释。在加入(300mg)之前用0.2N含水NaOH将pH调至7.2。为了在培养过程中保持pH恒定,通过pH稳定滴定计加入NaOH溶液9天以上,直至加入了理论数量的碱。接着按实施例13所述进行酸/碱提取,分离出未水解酯(0.15g,100%)和水解物质(0.139g,95%)。通过使用手性柱的HPLC对未水解酯分析显示所需化合物17c的比例为43:1,其(R,S)立体化学排布是基于如实施例10和11所述的化学上相互关系,
实施例18
用二苯甲酰基-D-酒石酸结晶对(1R-2S)/(1S,2S)1-氨基-2-乙烯基环丙基羧酸盐进行拆分:
将二苯甲酰基-D-酒石酸(33.5g,93.5mmol)加到EtOAc(800mL)中的粗制外消旋(1S,2S和1R,2S)1-氨基-2-乙烯基环丙基羧酸乙酯[按实施例15所述从N-(二苯基亚甲基)甘氨酸乙基乙酯(25.0g,93.5mmol)获得]溶液中。将混合物加热回流,在室温下放置15分钟,然后冷却至0℃。30分钟后得到白色固体。过滤该固体,用EtOAc(100mL)洗涤并风干。将固体悬浮在丙酮(70mL)中,超声(sonicated)并过滤(3x)。在热丙酮中将该固体再结晶两次(A批)。浓缩母液、在热丙酮中将该残余物再结晶三次(B批)。混合(5.53g)二苯甲酰基-D-酒石酸盐的两批无水白色固体,并将其悬浮在Et2O(250mL)和饱和NaHCO3溶液(150mL)的混合物中。用盐水洗涤有机层,干燥(MgSO4)并过滤。用1N HCl/Et2O(100mL)稀释滤液,并在减压下浓缩。用CCl4蒸发油性残余物得到为白色吸湿性固体的盐酸1(R)-氨基-2(R)-乙烯基环丙烷羧酸乙酯(940mg,11%得率)。
+39.5℃(c1.14MeOH);+88.5℃(c1.14MeOH);1H NMR(DMSO-d6)δ9.07(broad s,2H),5.64(ddd,J=17.2,10.4,8.7Hz,1H),5.36(dd,J=17.2,1.6Hz,1H),5.19(dd,J=10.4,1.6Hz,1H),4.24-4.16(m,2H),2.51-2.45(m,peakshindered by DMSO,1H),1.84(dd,J=10.0,6.0Hz,1H),1.64(dd,J=8.3,6.0Hz,1H),1.23(t,J=7.1Hz,3H);MS(ESI)m/z156(MH)+;
通过Boc衍生物的HPLC分析(CHIRALPAK AS Column,Hex:I-PrOH) 确定对映体的纯度约为91%。
实施例19
制备(1R,2S)/(1S,2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸甲基-盐酸化物(19f)
制备亚胺19b:
将甘氨酸乙基酯盐酸化物19a(1519.2g,10.88mol,1.0当量)悬浮在叔丁基甲基醚(8L)中。加苯甲醛(1155g,10.88mol,1当量)和无水硫酸钠(773g,5.44mole,0.5当量),将该混合物在冰-水浴中冷却到5℃。在15分钟内滴加三乙胺(2275ml,16.32mol,1.5当量)(用0.5L叔丁基甲基醚漂洗)并在室温下将该混合物搅拌40小时。然后加冰冷水(5L)使反应停止,分离有机层。水相用叔丁基甲基醚(1L)萃取,合并的有机相用饱和NaHCO3(400ml)和水(1.6L)混合物洗涤,然后漂洗。溶液经MgSO4干燥,减压浓缩,将残留的黄色油状物真空干燥至恒重。得到的亚胺19b为深黄色油,在-20℃下固化(2001g,产率96%):1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.30(s,1H),7.79(m,2H),7.48-7.39(m,3H),4.40(d,J=1.3Hz,2H),4.24(q,J=7Hz,2H),1.31(t,J=7Hz,3H).
制备外消旋的N-Boc-(1R,2S)/(1S,2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙基-酯盐酸化物19e:
将叔丁氧基锂悬浮在无水甲苯(60ml)中。在无水甲苯(30ml)中溶解亚胺19b(5.020g,26.3mmol,1.05当量)和二溴酰胺19c(5.348g,25mmol,1当量),并将该溶液在30分钟内滴加到室温搅拌的LiOtBu溶液中。滴完后,将该深红色混合物再搅拌10分钟,加水(50ml)和叔丁基甲基醚(TBME,50ml)骤冷。水相分出,用TBME(50ml)萃取两次。合并有机相,加1NHCl(60ml),并将该混合物在室温下搅拌2小时。分离有机相,用水(40ml)萃取。然后合并水相,用盐(35g)饱和,并加TBME(50ml)。然后将该搅拌的混合物小心加10N NaOH 使其呈碱性至pH13-14。用TBME(2×50ml)分离有机相并萃取水相。将含游离胺19d的有机萃取物合并,并加二叔丁基二碳酸酯(5.46g,25mmol,1当量)。室温下搅拌过夜后,TLC表明有些未反应的游离胺存在。再加二叔丁基二碳酸酯(1.09g,5mmol,0.2当量)并在该温度下回流2小时,TLC分析显示19d已完全转化为氨基甲酸酯19e。将溶液冷却到室温,经MgSO4干燥,减压浓缩。剩留物用10%再用20%EtOAc/己烷作稀释剂通过闪蒸色谱法纯化。纯的19e是在真空下经缓慢固化得到清亮的黄色油状物(4.014g,产率63%)。 1H NMR(CDCl3,400MHz)δ5.77(ddd,J=17,10,9Hz,1H),5.28(dd,J=17,1.5Hz,1H),5.18(broad s,1H),5.11(dd J=10,1.5Hz,1H),4.24-4.09(m,2H),2.13(q,J=8.5Hz,1H),1.79(broad m,1H),1.46(m,1H),1.45(s,9H),1.26(t,J=7Hz,3H).19e经过酯转移而制备标题化合物19f:
将乙酯19e(10.807g,42.35mmol)溶解在无水甲醇中,并加甲醇钠在MeOH(25%w/w,9.7ml,42mmol,1当量)中的溶液。混合物在50℃下加热2小时,此时的TLC分析表明已完成酯转移(19e,Rf 0.38,19f Rf 0.34,在20%EtOAc/己烷中)。反应混合物冷却到室温,并用4N HCl的二噁烷溶液酸化至pH4。过滤除去沉淀的NaCl(用叔丁基甲基醚洗涤)并减压蒸发除去。在残留物中加叔丁基甲基醚(100ml),过滤除去固体。滤液在减压下蒸发并真空干燥,得到纯的甲基醚19f(10.11g,产率99%)。
1HNMR(CDCl3,400MHz)δ5.75(ddd,J=17,10,9Hz,1H),5.28(dd,J=17,1Hz,1H),5.18(broad s,1H),5.11(ddd,J=10,1.5,0.5Hz,1H),3.71(s,3H),2.14(q,J=9Hz,1H),1.79(broad m,1H),1.50(broad m,1H),1.46(s,9H).
实施例20
(1R,2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸甲基-酯盐酸化物的酶催化拆分
制备N-Boc-(1R,2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸甲基酯20a:
将外消旋的酯19f(0.200g,0.83mmol)溶解在丙酮(3ml)中,加水(7ml)。加0.05M NaOH(1滴)使溶液的pH至~8,然后加2.4L(NovoNordisk Biochem,0.3g在1ml水中)。在室温下强烈搅拌该混合物,用自动滴定器使溶液pH维持在8。在此pH下搅拌的开始4天和5天时再加(2×0.3g)酶溶液。5天后,共消耗8.3ml的0.05M NaOH。将此反应混合物用EtOAc和水稀释,分离有机相。用盐水洗涤后,用MgSO4干燥有机萃取物,并真空浓缩。得到的化合物20a(0.059g,30%产率)为清亮的油:
1HNMR与化合物19f相同。HPLC(手性的细胞ODH,4.6x250mm,在已烷中无梯度洗脱,流速0.8mL/min)(1R,2S)-2Rt19.3min(97%);(1S,2R)-Rt17.0min(3%)。
制备(1R,2S)-1-氨基-2-乙烯基丙烷羧酸甲酯盐酸化物20b:
将化合物20a(39.36g,165.7mmol)溶于二噁烷(25ml)中,将该溶液滴加到搅拌的4NHCl的二噁烷(Aldrich,250ml)中。45分钟后,TLC分析表明已完全去保护。减压下除去蒸发物,残留物用MeOH(2×100ml)共蒸发两次。在棕色的油状残留物中加乙醚(300ml)和MeOH(10ml),该混合物在室温下搅拌过夜,形成半固体沉淀。再加MeOH(15ml)并继续搅拌6分钟,此时过滤收集黄色固体。产物用5%MeOH的乙醚(50ml)清洗再用乙醚(2×50ml)洗,然后真空干燥,得到的化合物20b为黄色固体(22.60g,产率76%)。滤液(包括洗涤液)在真空下蒸发得到另外的20b为棕色油(7.82g,产率26%)。这两部分产物的纯度对于用在合成HCV蛋白抑制剂上是足够的。 [α]D 25+38.2°(c1.0,MeOH)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.15(broad s,3H),5.65(ddd,J=17,10,9Hz,1H),5.36(dd,J=17,1.5Hz,1H),5.19(dd,J=10,1.5Hz,1H),3.74(s,3H),2.50(q,overlap with DMSO signal,J=9Hz,1H),1.86(dd,J=10,6Hz,1H),1.64(dd,J=8,6Hz,1H).
实施例21
合成1-氨基环丁基羧酸甲酯
按照Kavin Douglas;Ramaligam Konareddiar;Woodard Ronald,Synth.Commun.(1985),15(4),267-72的方法制备1,1-氨基环丁基羧酸。将氨基酸盐(21a)(1.00g,6.6mmol)在-20℃的无水甲醇中搅拌并将混合物用无水盐酸饱和,生成21b。将此混合物继续搅拌4小时。过滤热的溶液并将滤液浓缩(Rotavap,30℃),残留物在乙醚中研制,在过滤和干燥后得到白色粉末(0.907g,83%)。
1H NMR(400MHz,D2)δCH3O(3H,s,3.97ppm);CH2(2H,m,2.70-2.77ppm);CH2(2H,m,2.45-2.53ppm)and CH2(2H,m,2.14-2.29ppm).
三肽
实施22
在固相载体上进行偶合反应的一般方法
该合成是在一个有96孔板的由Advanced Chem 出品的平行合成器模型中进行的。通常,用标准固相技术平行合成24肽。原料(Fmoc-氨基)环丙基(取代或不取代的)羧酸-Wang树脂是通过DCC/DMAP偶合方法制备的(Atherton,E;Scheppard,R.C.Solid Phase Peptide Synthesis,a PracticalApproach;IRL Press:Oxford(1989);pp131-148)。
每孔装有100mg原料树脂(大约0.05mmol)。该树脂相继用1.5ml NMP洗一次,再用1.5ml DMF洗3次。用1.5ml,25%v/v的哌啶在DMF中的溶液处理20分钟除去Fmoc保护基。再用1.5ml DMF(4X)、MeOH(3X)和DMF(3X)清洗。在DMF(350μl)中进行偶合,使用的是400μl(0.2mmol)Fmoc-氨基酸/HOBt水合物在DMF中的0.5M溶液、400μl(0.4mmol)DIPEA在DMF中的1M溶液、和400μl(0.2mmol)TBTU在DMF中的0.5M溶液。振摇1小时后,取出孔中的树脂,用1.5ml DMF清洗,在相同条件下将该偶合重复一次。然后如上所述清洗树脂,用下一批氨基酸重复这样的循环。
用两种方法引入端基:
1.羧酸形式的端基,用上面所述的方法(如乙酸),或
2.用酰化剂如酸酐或酸性氯化物。下面的例子说明用琥珀酸酐封端:在Fmoc脱保护并接着洗涤后,加DMF(350μl),接着每次用400μl琥珀酸酐的DMF溶液(0.5M,0.2mmol)和DIPEA的DMF溶液(1.0M,0.4mmol)。将树脂搅拌2小时,再进行偶合。在合成结束时,用1.5ml分次洗涤该树脂:DCM(3X)、MeOH(3X)、DCM(3X),并在真空下干燥2小时。加1.5ml的TFA、H2O、DTT和TIS(92.5:2.5:2.5:2.5)混合物使树脂裂解并使伴随产生的侧链脱保护。振动2.5小时后,将树脂过滤,用1.5ml DCM清洗。合并滤液并通过真空离心方法浓缩。通过制备反相HPLC,用C18柱(22mm×500mm)纯化每种化合物。用MALD1-TOF质谱鉴定每种含产物的馏份,合并和冻干。
实施例23
在溶液中进行偶合反应的一般方法(亦见R.Knorr et al.,TetrahedronLetters,(1989),30,1927.)
将反应试剂,即游离胺(1当量)(或它的盐酸盐)和游离羧酸(1当量)溶解在CH2Cl2,CH3CN或DMF中。在氮气氛下向该搅拌的溶液中加4当量N-甲基吗啉和1.05当量偶合剂。20分钟后,加1当量第二种反应试剂,即游离羧酸。常用和有效的偶合剂为此目的用的是(苯并三唑-1-基氧)三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(HOBT)或优选的是2-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基尿四氟硼酸盐(TBTU)或0-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基尿四氟硼酸盐(HATU)。该反应用TLC控制。反应完成后,减压蒸发溶剂。残留物溶于EtOAc。用10%柠檬酸水溶液,饱和NaHCO3水溶液和盐水相继清洗上述溶液。将有机相用MgSO4干燥、过滤及减压浓缩。纯化残留物是用上述的闪蒸色谱方法进行。
实施例24
合成化合物304
化合物304
a)将酶催化拆分所得的(实施例13)(R,R)异构体Boc-Et-Acca-Ome13c(0.12g,0.49mmol)用4N HCl/二烷处理45分钟后真空浓缩得到白色固体。在该HCl盐(约0.49mmol)中加TBTU(0.17g,0.54mmol),Boc-4(R)-(8-喹啉-甲氧)脯氨酸5(实施例5制得)(0.18g,0.49mmol)和DIPEA(0.3ml,1.7mmol)的10ml MeCN。该混合物在室温下搅拌3.5小时后真空浓缩。将所得物质溶于EtOAc并用饱和NaHCO3水溶液和盐水清洗。干燥(MgSO4)过滤和浓缩,得到24b白色固体(0.122g,50%)。
b)在室温下用4N HCl/二烷处理24b(0.12g,0.25mmol)(30分钟),然后真空浓缩。所得的盐酸盐(大约0.25mmol)用Boc-Chg-OH·H2O(75mg,0.27mmol)和MeCN(10ml)中的TBTU(87mg,0.27mmol),最后在0℃用DIPEA(0.15ml,0.87mmol)处理。残留物用EtOAc稀释,接着用饱和NaHCO3水溶液和盐水清洗,干燥(MgSO4),过滤和浓缩,得到24c是灰白色固体(0.2g)。将该物质(0.14g)溶于DMSO并用制备HPLC纯化冻干后得到24c为白色固体(35mg,33%)。HPLC(98%);MS(FAB)m/z:637.8(MH+);HRMS的C35H48N4O7(MH+)计算值637.36011;实测值637.36250;1H-NMR(DMSO-d6)表示旋转异构体的总体,91(2×d,J=4.1和4.1Hz,1H), δ8.91(2×d,J=4.1and4.1Hz,1H),8.40-8.36(m,2H),7.90(d,J=7.6Hz,1H),7.77(d,J=7.0Hz,1H),7.6-7.54(m,2H),6.80(d,J=8.6Hz,1H),5.18and5.16(2×s,2H),4.40(bs,1H),4.31(t,J=8.3Hz,1H),4.12(d,J=11.44Hz,1H),4.03(t,J=7.9Hz,1H),3.78-3.72(m,1H),3.56(s,3H),2.35-2.27(m,1H),2.06-1.97(m,1H),1.71-1.55(m,10H),1.53-1.38(m,2H),1.26(s,9H),1.18-1.06(m,2H),1.02-0.93(m,2H),0.89(t,J=7.3Hz,3H).
化合物304:
c)向24c(30mg,大约0.047mmol)中加MeOH(1ml)、THF(1ml)、和1ml水中的氢氧化锂一水合物(12mg,0.29mmol)。将此清亮的溶液快速搅拌48小时,然后真空浓缩。将粗肽溶于DMSO中并用制备HPLC纯化,冻干后得到化合物304为白色固体(21mg,72%)。HPLC(99%);MS(FAB)m/z:(MH+)623.3;HRMS的C34H46N4O7(MH+)计算值623.3448,实测值623.34630, 1HNMR(DMSO-d6)表示旋转异构体总体为1:1,δ8.90(2×d,J=4.1Hz,1H),8.37(d,J=8.3HZ,1H),8.26(s,1H),7.89(d,J=8.3Hz,1H),7.77(d,J=6.7Hz,1H),7.6-7.53(m,2H),6.88 and 6.79(2×d,J=8.6and7.9Hz,1H),5.17 and 5.16(2×s,2H),4.43-4.35(bs,1H),4.29(t,J=8.3Hz,1H),3.82-3.71(m,1H),2.35-2.27(m,1H),2.06-1.97(m,1H),1.72-1.53(m,10H),1.52-1.44(m,2H),1.37and1.29(2×s,9H),1.18-1.05(m,3H),1.0-0.94(m,1H),0.91(t,J=7.3Hz,3H).
实施例25
合成化合物301
化合物301
a)将化合物25a(=12a)(282mg,1.23mmol)悬浮于无水CH3CN(6ml)中。相继加DBU(221μl,1.48mmol)和苄基溴化物(161μl,1.35mmol)并将该反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物浓缩,用EtOAc和10%含水 柠檬酸稀释所得的油,并相继用10%柠檬酸(2X)、饱和NaHCO3水溶液(2X)、水(2X)和盐水(1X)清洗。用MgSO4干燥EtOAc层,过滤和蒸干。无色油粗产品用闪蒸色谱纯化(洗脱液:EtOAc;95:5-90:10),得到无色油MS(FAB)318.2 MH- 320.2MH+ 342.2(M+Na)+
1H NMR(CDCl3)δ7.37-7.28(m,5H),5.22-5.10(m,1H),5.19(d,J=12Hz,1H),5.16(d,J=12Hz,1H),1.60-1.40(m,4H),1.39(s,9H),1.31-1.22(m,1H),0.91(t,J=7.5,14.5Hz,3H).
b)化合物25b(368mg,1.15mmol)用4N Hcl/二噁烷(6ml)按前面所述的方法处理。粗的盐酸盐用CH2Cl2(6ml)中的NMM(507μl,4.61mmol)和HATU(代替TBTU,525.6mg,1.38mmol)与化合物4(实施例4)(470.8mg,1.27mmol)偶合(如实施例22所述),得到橙色油状的外消旋二肽。该粗产物用闪蒸色谱(洗脱液-己烷:Et2O=50∶50)得到纯的二肽25c(无极性洗脱斑)白色泡沫(223mg;68%理论产率)。
MS 571.4MH- 573.3 MH- 595.3(M+Na)+
1H NMR(CDCl3),ca.1:1旋转异构体混合物,δ8.03(b d,J=8Hz,1H),7.86(b d,J=7.5Hz,1H),7.82(b d,J=6.5Hz,1H),7.61(b s,0.5H),7.57-7.40(m,4H),7.31-7.21(m,5H),6.48(b s,0.5H),5.22-5.11(m,1H),5.08-4.81(m,3H),4.41-3.74(m,3H),3.49-3.18(m,1H),2.76-1.90(m,2H),1.69-1.48(m,3H),1.40(s,9H),1.40-1.23(m,2H),0.92(t,J=7.5,15Hz,3H).
c)将二肽25c(170.1mg,0.297mmol)用4N HCl/二噁烷(2ml)按前面所述的方法处理。在室温下用NMM(130μl,1.19mmol)和HATU(代替TBTU,135.5mg;0.356mmol)在CH2Cl2(2ml)中的溶液将粗的盐酸盐与Boc-Chg-OH(84.1mg,0.327mmol)偶合2.75小时,然后按前面所述处理得到粗的三肽25d为象牙色泡沫(约211.4mg;100%)。MS(FAB)712.5MH+
化合物301:
d)将粗的三肽25d(约15.4mg,0.022mmol)溶于无水乙醇(2ml)中,加10%Pd/C催化剂和乙酸铝(两者均估计为刮勺尖的量)。将该混合物在室温和大气压下的充氢气球形瓶中氢化过夜。反应混合物通过一个0.45μM 过滤器过滤,蒸干,然后用EtOAc和10%含水柠檬酸稀释,再用10%含水柠檬酸(1X)、水(2X)和盐水(1X)清洗。有机层用MgSO4干燥,过滤,蒸干及冻干,得到三肽301白色无水固体(11.0mg;82%)。
MS(FAB)622.5MH+644.5(M+Na)+
1H NMR(DMSO),ca.1:4 旋转异构体混合物,δ8.54 & 8.27(s,1H),8.06-7.99(m,1H),7.96-7.91(m,1H),7.87(d,J=8Hz,1H),7.57-7.42(m,4H),6.81(d,J=8Hz,1H),4.99(d,J=12Hz,1H),4.88(d,J=12Hz,1H),4.46-4.19(m,2H),4.17-4.02(m,2H),3.88-3.67(m,1H),2.28-2.19(m,1H),2.05-1.93(m,1H),1.73-1.43(m,8H),1.32-1.07(m,6H),1.28(s,9H),1.03-0.85(m,2H),0.91(t,J=7.5,15Hz,3H)
实施例26
合成化合物306
a)酸26a(180mg,0.500mmol)与胺15d(96mg,0.500mmol)用CH2Cl2(10ml)中的TBTU(192mg,0.600mmol)和DIPEA(226mg,1.75mmol)偶合20小时。浓缩该反应混合物,放入乙酸乙酯,用饱和NaHCO3洗两次,盐水洗一次。有机层在MgSO4上干燥,过滤,浓缩,得到26c棕色油,不纯化用于下一步。
b,c)粗的化合物26c(约0.500mmol)在HCl 4N/二噁烷(4ml)中搅拌30分钟并浓缩至干燥。将该固体物放入CH2Cl2(10ml)中,加DIPEA(226mg,1.75mmol),接着加Boc-Chg-OH的一水合物(138mg,0.500mmol)和 TBTU(192mg,0.600mmol)。在室温搅拌溶液5小时。浓缩反应混合物,放入乙酸乙酯,用饱和NaHCO3洗两次,盐水洗一次。有机层在MgSO4上干燥,过滤和浓缩,得到棕色油,用闪蒸色谱纯化得到26d黄色油,204mg,64%(两种偶合)。
1H NMR(CDCl3)δ8.77-8.74(m,1H),8.14(d,J=8Hz,1H),8.02(d,J=9Hz,1H),7.69(dd,J=9,7Hz,1H),7.52(d,J=5Hz,1H),7.47(dd,J=8,7Hz,1H),6.78(d,J=5Hz,1H),5.80-5.70(m,1H),5.35-5.27(m,2H),5.14-5.07(m,2H),4.89-4.83(m,1H),4.39-4.32(m,1H),4.30-4.24(m,1H),4.20-4.07(m,2H),4.00-3.92(m,1H),3.04-2.92(m,1H),2.39-2.29(m,1H),2.16-2.04(m,1H),1.91-1.83(m,1H),1.82-1.62(m,7H),1.45-1.35(m,9H),1.27-1.07(m,8H).
d)将26d(136mg,0.214mmol)溶于THF(4ml)和MeOH(2ml)中。加LiOH水合物(72mg,1.72mmol)的含水溶液(2ml),在室温下将该反应混合物搅拌20小时。溶液经浓缩和制备HPLC纯化,得到化合物306(无极性异构体)白色固体(25mg)。
化合物306:MS(FAB)607.4(MH+)
1H NMR(DMSO-d6)δ9.16(d,J=6Hz,1H),8.55(s,1H),8.35(d,J=8Hz,1H),8.12(d,J=9Hz,1H),8.05(dd,J=8,7Hz,1H),7.76(dd,J=8,7Hz,1H),7.59(d,J=6Hz,1H),7.02(d,J=8Hz,1H),5.75-5.66(m,2H),5.19(d,J=18Hz,1H),5.07(d,J=10Hz,1H),4.55(d,J=12Hz,1H),4.43(dd,J=10,8Hz,1H),4.03(d,J=10Hz,1H),3.87-3.83(m,1H),2.66-2.59(m,1H),2.36-2.30(m,1H),1.98(dd,J=18,9Hz,1H),1.75-1.56(m,8H),1.38-1.35(m,1H),1.25-1.22(m,1H),1.09(s,9H),1.12-0.95(m,3H).
实施例27
合成化合物307
c)从实施8得到的酸8(505mg,105mmol)在5ml二氯甲烷中的溶液,用TBTU(376mg,1.17mmol)处理。将在7ml含(0.60ml,5.46mmol)N-甲基吗啉的二氯甲烷中该(R,S)乙烯基AccaOEt(18)(实施例18)(279mg,1.46mmol)的HCl盐加到前述的活化酯溶液中。所得溶液在室温下搅拌过夜。真空蒸发溶剂。残留物用乙酸乙酯清洗,用饱和的碳酸氢钠溶液洗两次,用盐水洗一次。有机层在MgSO4上干燥,真空蒸发。残留物经硅胶色谱纯化(60:40v/v,己烷-乙酸乙酯)得到173mg(27%)二肽27c。
d,e)将二肽27c(70mg,0.114mmol)在3ml盐酸在1,4-二噁烷中的4.0M溶液中的溶液在室温下搅拌1小时(10分钟后从反应中取出沉淀)。真空除去溶剂。将1.5ml乙腈中稀释的胺的盐酸盐(0.114mmol)通过加 65μl(0.591mmol)N-甲基吗啉使其中和。将该Boc Chg·H2O(39mg,0.142mmol)在1.5ml乙腈中的溶液用TBTU(46mg,0.143mmol)处理,然后将其加到前面的胺溶液中。所得溶液在室温下搅拌(2天)。真空除去溶剂。用乙酸乙酯稀释的残留物,用饱和的碳酸氢钠溶液洗两次,盐水洗一次。有机层在MgSO4上干燥,过滤并真空蒸发。得到86mg(100%)三肽27e。该粗化合物不经进一步处理用于下一步。
f)向三肽27e(86mg,0.114mmol)在5ml THF:H2O(2.5:1)混合物的溶液中加氢氧化锂一水合物(22mg,0.524mmol)。再加0.25ml MeOH,得到均匀的溶液。将所得溶液在室温下搅拌过夜,然后真空蒸发溶剂。残留物在水和EtOAc之间分配。含水层用1MHCl酸化,然后用乙酸乙酯萃取两次。从第一次萃取出来的乙酸乙酯中已检查出有所需的化合物。将该有机层干燥(MgSO4),过滤和真空蒸发,得到69mg粗酸,用制备HPLC方法将它纯化。将该化合物溶于MeOH(4ml)并注射在平衡的Whatman Partisil 10-ODS-3(2.2×50cm)C18反相柱上(λ=230nm,溶剂A=0.06%TFA/H2O,溶剂B=0.06%TFA/CH3CN)。纯化程序:20%-70%溶剂B,60分钟。用分析的HPLC分析各级份。收集所需的级份,冻干得到50mg(60%)所需的三肽307,白色非晶形固体。
化合物307:1H NMR(DMSO-d6)旋转异构体~2:8δ8.86(d,J=2.5Hz,1H),8.85(s,0.2H),8.64(s,0.8H),8.49(dd,J=9.5,3Hz,0.2H),8.45(dd,J=9.2Hz,0.8H),8.39-8.33(m,2H),8.20(d,J=9.5Hz,0.2H),8.18(d,J=9.5Hz,0.8H),7.81(s,0.2H),7.78(s,0.8H),7.64-7.56(m,3H),6.87(d,J=8Hz,0.8H),6.36(d,J=9Hz,0.2H),5.82-5.67(m,2H),5.27-5.17(m,1H),5.09-5.03(m,1H),4.73(t,J=8Hz,0.2H),4.55(dd,J=10,7.5Hz,0.8H),4.49-4.40(m,1H),4.00-3.95(m,1H),3.83-3.76(m,1H),2.87-2.80(m,0.2H),2.69-2.62(m,0.8H),2.39-2.26(m,1H),2.08-2.00(m,1H),1.75-1.41(m,7H),1.37(s,1.8H),1.32-1.27(m,1H),1.17-0.82(m,5H),0.94(s,7.2H).
实施例28
合成化合物311
化合物310
化合物311是用实施例24的方法、用相应的结构单元制备的。
化合物310 1H NMR(DMSO-d6)δ8.98(d,J=6Hz,1H),8.52(s,1H),8.24(d,J=9Hz,1H),8.08(d,J=2Hz,1H),7.63(d,J=9Hz,1H),7.37(d,J=6Hz,1H),6.98(d,J=8Hz,1H),5.75-5.66(m,1H),5.57(br s,1H),5.24-5.19(m,1H),5.08-5.01(m,1H),4.57-4.40(m,2H),4.00-3.96(m,1H),3.82(dd,J=9.8Hz.1H)2.59-2.54(m,1H),2.32-2.26(m,1H),1.99(dd,J=17,9Hz,1H),1.74-1.55(m,8H),1.37(s,1H),1.26-1.22(m,1H),1.14-1.08(m,9H),1.02-0.91(m,3H).
实施例29
合成化合物302
化合物302是用实施例27的方法,用相应的结构单元制备的。
1H NMR(DMSO-d6)δ8.34(s,1H),8.04-8.01(m,1H),7.94-7.92(m,1H),7.87(d,J=8Hz,1H),7.54-7.50(m,3H),7.45(dd,J=17,8Hz,1H),7.22(d,J=8Hz,1H),4.94(dd,J=55,12Hz,2H),4.34(s,1H),4.27(dd,J=8,8Hz,1H),4.16(d,J=11Hz,1H),4.07(dd,J=8,8Hz,1H),3.72-3.65(m,2H),3.59-3.54(m,1H),2.24-2.18(m,1H),2.02-1.95(m,2H),1.75-1.70(m,1H),1.53-1.44(m,2H),1.32-1.27(m,1H),1.21-1.17(m,1H),0.96-0.85(m,10H)0.80-0.77(m,5H)0.62-0.57(m,1H).
实施例30
合成化合物308
化合物308是用实施例27方法,用相应的结构单元制备的。
1H NMR(DMSO-d6)旋转异构体2:8δ8.77(s,0.2H),8.45(s,0.8H),8.13(d,J=8.5Hz,0.8H),8.03(d,J=8.5Hz,0.2H),7.89-7.83(m,1H),7.55-7.37(m,4H),7.05-6.59(m,1H),6.95(d,J=8Hz,0.8H),6.26(d,J=8.5Hz,0.2H),5.81-5.64(m,1H),5.33-5.28(m,1H),5.26-5.15(m,1H),5.08-5.02(m,1H),4.60(t,J=7.5Hz,0.2H),4.38-4.27(m,1.8H),4.09-3.91(m,1.8H),3.74(dd,J=12.5,4Hz,0.2H),2.69-2.60(m,0.2H),2.50-2.40(m,1H),2.36-2.28(m,0.2H),2.23-2.14(m,0.8H),2.05-1.97(m,0.8H),1.76-1.44(m,7H),1.37(s,1.8H),1.29(s,7.2H),1.28-1.20(m,1H),1.16-0.88(m,5H).
实施例31
合成化合物309
化合物309是用实施例27方法,用相应的结构单元制备的。
1H NMR(DMSO-d6)旋转异构体2:8δ8.75(s,0.2H),8.50(s0.8H),7.89-7.78(m,3H),7.50-7.44(m,1H),7.42-7.32(m,2H),7.17-7.09(m,0.8H)7.08-7.03(m,0.2H),6.79(d,J=8.5Hz,0.8H),6.33(d,J=9Hz,0.2H),5.81-5.65(m,1H),5.30-5.16(m,2H),5.10-5.02(m,1H),4.56(t,J=7.5Hz,0.2H),4.33(t,J=8Hz,0.8H),4.10-3.90(m,2.8H),3.74-3.68(m,0.2H),2.45-2.37(m,1H),2.34-2.17(m,1H),2.05-1.97(m,1H),1.76-1.48(m,7H),1.37(s,1.8H),1.23(s,7.2H),1.21-0.88(m,6H).
实施例32
合成化合物305
化合物305是用实施例27方法,用相应的结构单元制备的。
1H NMR(DMSO-d6)旋转异构体(1:9)δ8.68(s,0.1H),8.43(s,0.9H),8.04-8.00(m,1H),7.95-7.91(m,1H),7.87(d,J=8.5Hz,1H),7.57-7.49(m,3H),7.47-7.42(m,1H),6.82(d,J=8.5Hz,0.9H),6.21(d,J=8.5Hz,0.1H),5.80-5.64(m,1H),5.21(dd,J=17,2Hz,0.1H),5.18(dd,J=17,2Hz,0.9H),5.06(dd,J=10.5,2Hz,1H),5.02-4.85(m,2H),4.43(t,J=7.5Hz,0.1H),4.34(br s,1H),4.23(t,J=8.5Hz,0.9H),4.16-4.05(m,1.8H),3.89-3.82(m,0.2H),3.74(dd,J=11,3.5Hz,0.9H),3.53(dd,J=12.5,4Hz,0.1H),2.30-2.21(m,1H),2.02-1.94(m,2H),1.74-1.38(m,7H),1.36(s,0.9H),1.28(s,8.1H),1.25-0.87(m,6H).
实施例33
合成化合物303
化合物303是用实施例27方法,用相应的结构单元制备的。
1H NMR(DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.04-8.01(m,1H),7.94-7.92(m,1H),7.87(d,J=8Hz,1H),7.56-7.52(m,3H),7.46(dd,J=8,7Hz,1H),7.19(d,J=9Hz,1H),5.01(d,J=12Hz,1H),4.86(d,J=12Hz,1H),4.34(br.s,1H),4.24(t,J=8Hz,1H),4.18-4.09(m,2H),3.74-3.53(m,3H),2.24-2.18(m,1H),2.04-1.95(m,1H),1.74-1.45(m,10H),1.31-1.13(m,4H),0.96-0.86(m,7H),0.79-0.76(m,5H).
实施例34
合成化合物403
a)P2与P1偶合
将7(34a)(170mg,0.355mmol)的甲基酯衍生物在50%THF甲醇(4ml)和含水LiOH(1M,1ml)在室温下搅拌1小时。浓缩该溶液(旋转蒸发,30℃),将残留物酸化到pH6,冻干溶液。所得的粉末在无水DMF(3ml)在DIEA(0.4ml)存在下搅拌,接着依次加1,1-氨基环丁基羧酸甲酯盐酸化物(34b)(140mg,0.845mmol)和TBTU(134mg,0.417mmol)。室温下搅拌18小时后,通过闪蒸色谱,在硅胶(230-400目)上用1:2乙酸乙酯-己烷进行,得到橙色油(98mg,经HPLC后纯度90%)。
b)P1-P2与P3偶合
将二肽34b(97mg,90%,0.155mmol)在室温下在4N HCl-二噁烷(5ml)中搅拌1小时。然后将溶液浓缩到干(旋转蒸发,高真空)得到米黄色固体。将该物质在室温干燥DMF(2ml)中在DIEA(0.4ml)存在下搅拌,接着加L-Boc-Tbg(80mg,0.35mmol)和TBTU(112mg,0.35mmol)。室温下搅拌2天后,将溶液倒在乙酸乙酯中,用5%含水碳酸钾产生游离碱。处理有机相得到黄色油状残留物。将此物质在硅胶柱(230-400目)上用1:2&3:1v/v乙酸乙酯:己烷的闪蒸色谱纯化,得到40mg油,经HPLC匀化。
最后,将该甲基酯(40mg)在1N氢氧化钾(2ml)的甲醇(4ml)中在RT下搅拌3小时。混合物浓缩(旋转蒸发,30℃),酸化至pH4(用2N盐酸)。在C18柱上用梯度为0-50%含水乙腈(0.1%TFA)在220nm上通过制备HPLC进行纯化。收集各级份,浓缩至一半体积,冻干,得到403化合物,白色松散的固体(10mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ旋转异构体混合物:NH+(1H,s,8.6ppm),CH(3H,m,8.2ppm),Ph(5H,宽s,7.66&7.53ppm),CH(1H,宽,7.22ppm),NH(1H,d,J=7.6Hz,6.71ppm),CHO(1H,宽s,5.76ppm),CH(2H,m,4.58-4.49ppm),CH(1H,m,4.04ppm),CH3O(3H,s,3.97ppm),CH(1H,d,3.86ppm),CH(7H,非常宽,1.8-2.6ppm),Boc基(9H,s,1.25ppm)和叔丁基(9H,s,0.97ppm).
MS在m/e675处显示M+H+(100%)。
HPLC在18.9分钟时峰值为98%。
实施例35
合成化合物333(表3)
将间甲氧基苯胺(35a)(9.15ml,81.4mmol)和二甲基乙炔基二羧酸酯(35b)(10.0ml,81.3mmol)在160ml甲醇中的溶液回流加热2小时。真空除去溶剂,残留物用闪蒸柱色谱(90:10己烷-乙酸乙酯)纯化。得到化合物35c(17.0g,79%产率),橙色油。
1H NMR(CDCl3)δ9.62(broad s,1H),7.17(dd,J=7and8.5Hz,1H),6.66-6.62(m,1H),6.49-6.45(m,2H),5.38(s,1H),3.77(s,3H),3.74(s,3H),3.71(s,3H).
将二苯基醚(50ml)在砂浴中加热至内部温度约250℃。将二醚加成物 (35c)(7.5g,28.3mmol)(溶在5ml二苯醚中)在2分钟内加到沸腾的溶剂中。加热维持5分钟,然后使反应混合物冷却到室温。迅速沉淀出米黄色固体。将该固体过滤,用甲醇研制,得到4.1g(62%产率)的所需化合物35d。
1H NMR(DMSO-d6)δ7.97(d,J=9Hz,1H),7.40(d,J=2Hz,1H),6.96(dd,J=9和2Hz,1H),6.55(s,1H),3.95(s,3H),3.84(s,3H).
将顺式4-羟基-左旋-脯氨酸衍生物(35e)(1.71g,5.33mmol)、4-羟基喹啉衍生物(35f)(1.25g,5.36mmol)和三苯基膦(2.8g,10.68mmol)在75ml THF中的溶液冷却至0℃,滴加(约用1小时)DEAD(1.70ml,10.80mmol)。然后将该反应混合物缓慢温热至室温并连续搅拌过夜。真空蒸去溶剂,残留物用闪蒸色谱(70:30乙酸乙酯-己烷)纯化。得到化合物35g(0.7纯的化合物35g和1.8g沾污了大约50%三苯基磷酸盐氧化物的化合物35g),白色固体。
1H NMR(CDCl3)旋转异构体(4:6)δ8.04(d,J=9Hz,1H),7.54(d,J=2.5Hz,1H),7.40-7.32(m,6H),7.23(dd,J=9和2.5Hz,1H),5.33-5.13(m,3H),4.66(t,J=7.5Hz,0.4H),4.54(t,J=8Hz,0.6H),4.07(s,3H),3.94(s,3H),4.04=3.80(m,2H),2.78-2.65(m,1H),2.47-2.34(m,1H),1.45(s,3.6H),1.37(s,5.4H).
向脯氨酸苄基酯衍生物(35g)(0.70g,1.31mmol)在甲醇-乙酸乙酯(10ml-10ml)混合物溶液中加100mg的10%Pd/C。所得悬浮液在室温下和氢气氛下搅拌11/2小时。然后在Millex-Hv Millipore(0.45μm过滤器单元)上过滤,真空蒸发溶剂。得到所需化合物酸35h(0.59g)的定量产率。
1H NMR:(CDCl3)旋转异构体70:30δ8.06(d,J=9.5Hz,0.3H)8.01(d,J=9Hz,0.7H),7.56(d,J=2Hz,1H)7.44(宽s,0.7H),7.41(宽s,0.3H),7.24(dd,J9and2.5Hz,1H),5.31-5.25(m,1H),4.67(t,J=7.5Hz,0.7H),4.55(t,J=7.5Hz,0.3H),4.08(s,3H),3.95(s,3H),4.04-3.80(m,2H),2.83-2.72(m,1H),2.71-2.47(m,1H),1.46(s,9H).
将胺35i(215mg,1.21mmol)在7ml乙腈中的盐用0.95ml DIEA(5.45mmol)处理。然后将该溶液加到酸35h(590mg,1.32mmol)和TBTU(389mg,1.21mmol)在5ml CH3CN的溶液中,在室温下将所得溶液搅拌过夜。真空蒸发溶剂,残留物用乙酸乙酯稀释,用饱和碳酸氢钠溶液洗两次,用盐水洗一次,然后用MgSO4干燥。真空除去溶剂,残留物通过闪蒸柱色谱(75:25AcOEt-己烷)纯化,得到527mg(70%产率)所需的二肽(35j)。
1H NMR:(CDCl3)δ8.01(d,J=9Hz,1H),7.55(d,J=2.5Hz,1H),7.45(s,1H),7.22(dd,J=9 and 2.5Hz,1H),5.81-5.71(m,1H),5.36-5.28(m,2H),5.18-5.12(m,1H),4.61-4.45(m,1H),4.07(s,3H),3.94(s,3H),3.91-3.74(m,2H),3.72(s,3H),2.99-2.84(m,1H),2.49-2.34(m,1H),2.20-2.08(m,1H),1.97-1.84(m,1H),1.58-1.52(m,1H),1.44(s,9H).
将双酯35j(716mg,1.25mmol)在THF:MeOH=1.5ml:1.5ml混合物中的溶液冷却至0℃,然后用NaOH水溶液1M(1.25ml,1.25mmol)处理。0℃下搅拌1小时后,加三滴冰醋酸中和NaOH。真空蒸发溶剂,在泵上干 燥几小时。
将酸35k的钠盐(1.25mmol)和Et3N(0.19ml,1.36mmol)在8ml THF中的溶液冷却到0℃,加异丁酸氯甲酸酯(0.18ml,1.39mmol)。40分钟后,加重氮甲烷(9ml,6.30mmol)并将所得溶液在0℃搅拌30分钟,在室温搅拌2小时。真空除去溶剂,残留物用乙酸乙酯稀释,用饱和NaHCO3洗两次,盐水洗一次,用MgSO4干燥,真空蒸去溶剂,残留物经闪蒸柱色谱(50:50己烷/AcOEt)纯化得到378mg(52%产率)所需的重氮丙酮351。
1H NMR:(CDCl3)δ8.00(d,J=9Hz,1H),7.42(s,1H),7.35(d,J=2.5Hz,1H),7.20(dd,J=9and2.5Hz,1H),6.92(s,1H),5.81-5.71(m,1H),5.35-5.28(m,3H),5.17-5.13(m,1H),4.61-4.40(m,1H),3.97(s,3H),3.96-3.74(m,2H),3.72(s,3H),2.94-2.38(m,2H),2.18-2.06(m,1H),1.98-1.84(m,1H),1.57-1.52(m,1H),1.42(s,9H).
向冷却(0°)的重氮酮351(0.37g,0.642mmol)在15ml THF溶液中加0.25ml HBr48%。所得黄色溶液在0°搅拌1小时。反应混合物在乙酸乙酯与饱和NaHCO3之间分配。有机相用NaHCO3洗一次以上,用MgSO4干燥。真空蒸发溶剂后,分离0.36g(90%产率)α-溴酮35m。
将上述α-溴酮35m(170mg,0.271mmol)在10ml异丙醇的倍液用1-乙酰基-2-硫脲(64mg,0.542mmol)。所得溶液在75℃下加热1小时。真空除去溶剂。残留物用乙酸乙酯稀释并用NaHCO3饱和溶液洗两次,用盐水洗一次,用MgSO4干燥。真空蒸发溶剂,得到182mg(>100%)粗物质35n。
将二肽35n(145mg,0.223mmol)用3ml的HCl在二噁烷中溶液处理。所得溶液在室温下搅拌1小时。真空除去溶剂,残留物用泵干燥。
将胺35O在5ml CH3CN中的盐用195μl(1.12mmol)DIEA处理。然后将此溶液加到Boc-叔丁基甘氨酸(103mg,0.446mmol)和HATU(186mg, 0.489mmol)在3ml CH3CN中的溶液中。反应混合物在室温中搅拌过夜。真空蒸发CH3CN。残留物用乙酸乙酯稀释,用饱和NaHCO3溶液洗两次,盐水洗一次,用MgSO4干燥。除去溶剂后,得到274mg粗的三肽35P(>100%)。
将三肽35P(56mg,0.0733mmol)在4ml的4M HCl的二噁烷溶液搅拌2小时。真空除去溶剂,残留物用泵抽干。
得到的胺盐溶于4ml CH2Cl2中,用0.13ml DIEA(0.746mmol)处理接着用26mg三光气(0.0876mmol)处理。孵育3小时后,加1,2,2-三甲基丙基胺(20mg,0.146mmol)(用Moss N.,Gauthier J.,Ferland J.M.,Feb.1995,Synlett.(2),142-144所述方法合成)。移去冰浴,在室温下将反应混合物搅拌过夜。真空除去CH2Cl2。残留物用乙酸乙酯稀释,用NaHO3饱和溶液洗两次,盐水洗一次,MgSO4干燥,得到60mg(≈100%)所需脲35g。
将甲基酯35g(57mg,0.0721mmol)在THF:H2O(2.5ml:1ml)混合物中的溶液用固体LiOH·H2O(25mg,0.595mmol)处理并加1ml MeOH使溶液澄清。室温下搅拌4小时后,加1M HCl溶液使反应中和。真空除去溶剂,残留物用制备色谱纯化。该化合物溶于2.5ml MeOH,注射到平衡的Whatman Partisil10-ODS-3(2.2×50cm)C18反相柱。纯化程序:20ml/nm线性梯度,λ220nm,在10%A注射至60%A,60分钟,A:0.06%TFA/CH3CN;B:0.06%;TFA/H2O。各级份用分析HPLC进行了分析。将收集的产物冻干,得到15mg化合物333,灰白色固体(27%产率)。
1H NMR:(DMSO-d6)δ8.88(s,0.2H),8.84(d,J=4.5Hz,0.2H),8.68(d,J=8.5Hz,0.H),8.56(s,0.8H),8.40-8.13(m,1,5H),7.96(d,J=9.0Hz,0.2H),7.72-7.44(m,2.4H),7.35-7.09(m,1.2H),6.98(d,J=9Hz,0.2H),6.15(d,J=9Hz,0.2H),6.06(d,J=9Hz,0.8H),5.93(d,J=9.5Hz,0.24H),5.86(d,J=9Hz,0.8H),5.79-5.67(m,1H),5.69-5.44(m,1H),5.24-5.14(m,1H),5.09-5.01(m,1H),4.50-4.35(m,2H),4.24(d,J=9.0Hz,0.2H),4.20(d,J=9.0Hz,0.8H),4.06-3.98(m,2H),3.95(s,3H),3.77-3.60(m,2H),2.58-2.50(m,1H),2.33-2.28(m,1H),2.22(s,2.4H),2.21(s,0.6H),2.02(q,J-9Hz,1H),1.56-1.38(m,1H),1.28-1.22(m,1H),0.97(s,9H),0.83(d,J=6Hz,3H),0.72(s,9H).
MS(FAB)778.3(m+H)+,776.3(M-H).
实施例36
重组HCV NS3蛋白酶1b型的克隆、表达和纯化
通过外部合作(Bernard Willems MD,Hópital St-Luc,Montr殚1,Canada和Dr.Donald Murphy,Laboratoire de SantéPublique du Qu bec,Ste-Anna deBellevue,Canada)获得感染HCV的患者的血清。从通过血清RNA的逆转录-PCR(RT-PCR)获得的DNA片段并使用根据其它1b系基因型之间的同源性所选择的特异性引物,构建HCV基因组的基因工程全长cDNA模板。由整个基因组序列的确定,根据Simmonds等(《临床微生物学杂志》 (1993),31,1493-1503)的分类将1b基因型排布于HCV分离物。非结构区域NS2-NS4B的氨基酸序列显示93%以上与HCV1b基因型(BK、JK和483分离物)相同,88%与HCV1a基因型(HCV-1分离物)相同。通过PCR产生编码多蛋白前体(NS3/NS4A/NS4B/NS5A/NS/5B)DNA片段,并将其引入真核生物表达载体。瞬时转染后,通过成熟NS3蛋白的存在、使用蛋白质印迹分析说明由HCV NS3蛋白酶介导的多蛋白加工。没有观察到成熟NS3蛋白伴有含突变S1165A的多蛋白前体的表达,其中的突变S1165A可使NS3蛋白酶失活,这一发现进一步证实了HCV NS3蛋白酶的功能。
在pET11的细菌表达载体中克隆编码重组HCV NS3蛋白酶(氨基酸1027-1206)的DNA片段。通过在20℃用1mM IPTG培养3小时诱导大肠杆菌BL21(DE3)pLys中的NS3蛋白酶表达。典型的发酵(18L)得到约100g湿细胞糊。将该细胞再悬浮在由25mM磷酸钠、pH7.510%甘油(v/v)、1mM EDTA、0.01%NP-40的裂解缓冲液(3.0mL/g)中、并于-80℃储藏。加入5mM DTT使细胞解冻和均化。然后在最后浓度分别为20mM和20μg/mL匀浆中加入氯化镁和DN酶。在4℃培养25分钟后,将匀浆在4℃超声并以15000×g离心30分钟。然后用1M磷酸钠溶液调节上清液的pH至6.5。
将另外一种凝胶过滤层析步骤加到WO 95/22985(本发明参考文献)所述的2步纯化方法中。简言之,即将从细菌提取物得到的上清液载在SPHiTrap柱(Pharmacia)上,此柱在缓冲液A(50mM磷酸钠、pH6.510%甘油、1mM EDTA、0.01%NP-40)中以2mL/分钟的流速预先进行了平衡。然后用含0.15M NaCl的缓冲液A洗涤该柱,通过使用10柱体积的线性0.15-0.3M NaCl梯度洗脱蛋白酶。合并含蛋白酶的NS3组分并稀释至0.1M的最终NaCl浓度。将酶在HiTrap肝素柱(Pharmacia)上进一步纯化,该柱在缓冲液B(25mM磷酸钠、pH7.510%甘油、5mM DTT、0.01%NP-40)中进行了平衡。以3mL/分钟的流速加样。然后用含0.15M NaCl的缓冲液B以1.5mL/分钟的流速洗涤该柱。两步洗涤是在含0.3或1M NaCl的缓冲液B存在时进行的。在0.3M NaCl洗涤中回收蛋白酶,并用缓冲液B稀释3倍,再将其用于HiTrap肝素柱上、并用含0.4M NaCl的缓冲液B洗脱。最后,将含蛋白酶的NS3组分用于Superdex75HiLoad16/60柱(Pharmacia)上,该柱在含0.3M NaCl的缓冲液B中进行了平衡。通过SDS-PAGE、 再通过光密度测定分析判定从混合组分获得的HCV NS3蛋白酶的纯度大于95%。
该酶在-80℃下贮存并在冰上冻干,在使用前稀释。
实施例37
重组HCV NS3蛋白酶/NS4A辅因子肽放射分析测定.
根据实施例30所述的方案对酶进行克隆、表达和制备。将酶储藏在-80℃,在用于含NS4A辅因子肽的测定缓冲液中之前将其在冰上解冻并稀释。
将用于NS3蛋白酶/NS4A辅因子肽放射测定的底物,DDIVPC-SMSYTW,在半胱氨酸和丝氨酸残基之间通过酶进行裂解。序列DDIVPC-SMSYTW相应于NS5A/NS5B天然裂解位点,其中P2中的半胱氨酸残基取代了脯氨酸。在有或无抑制剂时,用重组NS3蛋白酶和NS4A肽辅因子KKGSVVIVGRIILSGRK(酶与辅因子的摩尔比1:100)培养肽底物DDIVPC-SMSYTW和示踪生物素-DDIVPC-SMS[125I-Y]TW。通过在过滤后的测定混合物中加入包覆亲和素的琼脂糖珠而从产品分离底物。在滤液中出现的SMS[125I-Y]TW产品数量可用于计算底物转化的百分比和抑制百分比。
A.试剂
从Gibco-BRL获得Tris和Tris-HCl(超纯的)。甘油(超纯的)、MES和BSA是从Sigma购得。从Pierce获得TCEP,DMSO来自Aldrich,NaOH来自Anachemia。
测定缓冲液:50mM TrisHCl,pH7.5,30%(w/v)甘油,1mg/mL BSA,1mM TCEP(使用前所加入的TCEP是来自水中的1M贮存液)。
底物:DDIVPCSMSYTW,最终浓度25μM(来自储藏在-20℃的DMSO中的2mM贮存液,以避免氧化)。
示踪物:还原的单碘化底物生物素DDIVPC SMS[125I-Y]TW(终浓度约1nM)。
HCV NS3蛋白酶1b型,最终浓度25nM(来自50mM磷酸钠、pH7.510%甘油、300mM NaOH,5mM DTT、0.01%NP-40中的贮存液)。
NS4A辅因子肽:KKGSVVIVGRIILSGRK,最终浓度2.5μM(来自 储藏于-20℃的DMSO中的2mM贮存液)。
B.方法
测定是在Coster的96孔聚丙烯平板上进行的,每个孔包含:
测定缓冲液中的20μL底物/示踪物;
10μL±20%DMSO/测定缓冲液中的抑制剂;
10μLNS3蛋白酶1b/NS4辅因子肽(摩尔比例1:100)。
空白(无抑制剂和酶)和对照(无抑制剂)在同样的测定平板上进行制备。
通过加入酶/NS4A肽溶液开始酶促反应,将测定混合物在23℃在温和的振荡下培养40分钟。加入10μL0.5NaOH,再加入10μL MES pH5.8以使酶促反应猝停。
在Millipore MADP N65过滤板上加入20μL包覆亲和素的琼脂糖珠(从Pierce购得)。将猝停的测定混合物转移至过滤板,并在23℃在温和的振荡下培养60分钟。
用Milipore Multiscreen Vacuum Manifold过滤装置过滤该平板,将40μL滤液转移在不透明的96孔平板上,每孔含60μL闪烁液。
用125I液体方法在Packard TopCount仪对滤液进行计数1分钟。
采用下列等式计算抑制%:
100-[(抑制数-空白数)/(对照数-空白数)×100]
将与希尔模型拟合的非线性曲线用于抑制-浓度数据,通过使用SAS软件(数据软件系统;SAS协会,Inc.Cary,N.C.)计算50%有效浓度(IC50)。
实施例38
全长NS3-NS4A异二聚体蛋白测定
使用从HCV1b基因型感染个体的血清(由Dr.Bernard Wilems,HōpitalSt-Luc,Montr ē al,Qu ē bec,Canada提供)提取的RNA、通过RT-PCR将NS2-NS5B-3’非编码区克隆在载体(Invitrogen)上。然后通过PCR将NS3-NS4A DNA区亚克隆在pFastBacTMHTa杆状病毒表达载体(Gibol/BRL)上。该载体序列包括编码含六组氨酸tag的28-残基N-末端序列的区域。将Bac-to-BacTM杆状病毒表达系统(Gibol/BRL)用于制备重组杆 状病毒。通过在27℃以0.1-0.2感染复数用重组杆状病毒感染106Sf21细胞/mL,来对全长成熟NS3和NS4A异二聚体蛋白(His-NS3-NS4AFL)进行表达。收获感染的培养物48-64小时后在4℃离心。在蛋白酶抑制剂混合物存在下,将细胞粒状沉淀在50mM NaPO4、pH7.5、40%甘油(w/v)、2mM β-氢硫基乙醇中匀浆。然后用1.5%NP-40、0.5%Triton X-100、0.5M NaCl和DN酶处理从细胞裂解物中提取His-NS3-NS4AFL。超离心后,将可溶性提取物稀释4倍,并结合在Pharmacia Hi-Trap Ni-螯合柱上。使用50-400mM咪唑梯度,将His-NS3-NS4AFL在>90%纯形式(如SDS-PAGE所判定)中洗脱。将His-NS3-NS4AFL在-80℃贮存在50mM磷酸钠、pH7.5、10%(w/v)甘油、0.5M NaCl、0.25M咪唑、0.1%NP-40中。将其在冰上解冻、并在使用前稀释。
在50mM Tris-HCl、pH8.0、0.25M柠檬酸钠、0.01%(w/v)n-十二烷基-β-D-麦芽糖甙、1mM TCEP中测定His-NS3-NS4AFL的蛋白酶活性。在23℃用1.5nM His-NS3-NS4AFL对各种浓度的抑制剂中的内部骤冷的底物氨茴内酐基-DDIVPAbu[C(O)-O]-AMY(3-NO2)TW-OH进行培养45分钟。最终的DMSO浓度没有超过5.25%。加入pH5.8的1M MES使反应终止。在装有96孔平板读数器的Perkin-Elmer LS-50B荧光计(激发波长:325nm;发射波长:423nm)上监测N-末端产品的荧光。
采用下列等式计算抑制%:
100-[(抑制数-空白数)/(对照数-空白数)×100]
将与希尔模型拟合的非线性曲线用于抑制-浓度数据,通过使用SAS软件(数据软件系统;SAS协会,Inc.Cary,N.C.)计算50%有效浓度(IC50)。
实施例39
基于NS3蛋白酶细胞的测定
用Huh-7细胞进行该测定,此细胞来源于肝癌的人细胞系,用2DNA构件共转染:
-一种表达多蛋白的构件(叫做NS3),该蛋白包含与按下列顺序NS3-NS4A-NS4B-NS5A-tTA的tTA融合的HCV非结构蛋白;
-另一种在tTA控制下表达报道蛋白、分泌碱性磷酸酶的构件(叫做 SEAP)。
必须通过用于成熟蛋白酶释放的NS3蛋白酶使多蛋白裂解。在成熟蛋白释放时,一般认为病毒蛋白会在内质网的膜上形成一种复合体,同时tTA将向核迁移并反式激活SEAP基因。因此,NS3蛋白酶解活性的降低将导致成熟tTA水平下降和伴随SEAP活性降低。
为了控制化合物的其它作用,进行了平行转染,而将仅表达tTA的构件(叫做tTA)与SEAP构件共转染以便SEAP活性不依赖于NS3蛋白酶解活性。
测定方法:使用FuGene方法(Boehringer Mannheim)将Huh-7细胞(生长在CHO-SFMII+10%FCS(胎牛血清)中)与NS3和SEAP或者与tTA和SEAP共转染。在37℃放置5小时后,洗涤细胞,进行胰蛋白酶消化、并在含一定浓度范围的试验化合物的96孔平板中制板(80000细胞/孔)。为期24小时的培养后,抽取等份培养基,并用Phospha-Light试剂盒(Ttopix)测定此等份中的SEAP活性。
用SAS软件分析关于化合物浓度的SEAP活性的百分抑制得到EC50。
然后用下列MTT测定法测定化合物的毒性(TC50)。
每孔中加入20μL MTT溶液(5mg/ml培养基)并在37℃培养4小时;
去除培养基,并加入50μL0.01N HCl+10%Triton X-100;在室温下摇动至少1小时后在595nm波长处读取每个孔的OD。
按与EC50同样的方法计算TC50。
实施例40
特异性测定
测定化合物对抗各种丝氨酸蛋白酶的特异性,这些蛋白酶为:人白细胞弹性蛋白酶、猪胰腺弹性蛋白酶和牛胰腺α糜蛋白酶和一种半胱氨酸蛋白酶:人肝脏B组织蛋白酶。在所有情况下均使用对每种酶特异的比色的对硝基苯胺(pNA)底物的96孔平板式方法,每种测定包括1小时于30℃的酶抑制剂预培养、然后加入底物并水解至UV 微板读数器所测定的约30%转化。尽可能使底物浓度保持可与KM相比的低水平、以减少底物的竞争。根据化合物的效价,其浓度可在300-0.06μM不等。每种测定的最终条件如下:
·50mM Tris-HCl pH8,0.5M Na2SO4,50mM NaCl,0.1mM EDTA,3%DMSO,0.01%Tween-20与;
·[100mM Succ-AAPF-pNA和250pMα糜蛋白酶],[133μM Succ-AAA-pNA和8nM猪弹性蛋白酶],[133μM Succ-AAA-pNA和8nM白细胞弹性蛋白酶];或
·[100mM NaHPO4pH6,0.1mM EDTA,3%DMSO,1mM TCEP,0.01%Tween-20,30μM Z-FR-pNA和5nM B组织蛋白酶(使用前在含20mMTCEP的缓冲液中激活贮存酶)]。
有关猪胰腺弹性蛋白酶的代表性例子总结如下:
用Biomek液体操作器(handler)(Beckman)在聚苯乙烯平底96孔平板中加入:
·40μL测定缓冲液(50mM Tris-HCl pH8,50mM NaCl,0.1mM EDTA)
·20μL酶溶液(50mM Tris-HCl pH8,50mM NaCl,0.1mMEDTA,0.02%Tween-20,40nM猪胰腺弹性蛋白酶);和
·20μL抑制剂溶液(50mM Tris-HCl pH8,50mM NaCl,0.1mMEDTA,0.02%Tween-20,1.5mM-0.3μM抑制剂,15%v/v DMSO)。
在30℃预培养60分钟后,在每孔中加入20μL底物溶液(50mMTris/HCl pH8,0.5M Na2SO4,50mM NaCl,0.1mM EDTA,655μM Succ-AAA-pNA),并将该反应在30℃进一步培养60分钟,然后在UV 板读数器上读取吸光度。将各排孔分配为对照(无抑制剂)和空白(无抑制剂和酶)。
通过液体操作器、用50mM Tris-HCl pH8,50mM NaCl,0.1mMEDTA,0.02%Tween-20,15%DMSO在分离平板上对抑制剂溶液依序进行的2倍稀释。所有其它特异性测定按同样方式进行。
采用下式计算抑制百分比:
[1-((UV抑制-UV空白)/(UV对照-UV空白)×100]
将与希尔模型拟合的非线性曲线用于抑制-浓度数据,通过使用SAS软件(数据软件系统;SAS协会,Inc.Cary,N.C.)计算50%有效浓度(IC50)。
化合物表
下表列出了本发明的代表性化合物。在实施例37测定法和实施例 38测定法之一或两者中对本发明化合物进行了测定,发现本发明化合物小于50μM(A)、5μM(B)或0.5μM(C)的IC50具有活性。
细胞中的活性和特异性:
本发明的一些有代表性化合物也在实施例39的基于替代细胞测定法和实施例40的一种或几种测定法中进行了测试。例如,发现表6的化合物601的IC50在实施例37的测定法中测得50nM和实施例38的测定法中测得30nM。通过实施例39的测定法所测定的EC50为8.2μM。在实施例40的特异性测定中,发现同一化合物具有下列活性:
HLE>75μM;PPE>75μM;α-Chym.>75μM;Cat.B>75μM.
这些结果显示此化合物族对NS3蛋白酶具有高度特异性并且该族化合物中某些化合物在替代细胞基测定中具有活性。
下表列出了本发明的代表性化合物。使用了下列缩写:MS:质谱数据;Ac:乙酰基;Bn:苄基;Boc:叔丁氧羰基;cHex:环己基;Chg:环己基甘氨酸(2-氨基-2-环己基-乙酸);iPr:异丙基;O-Bn:苄氧基;Ph:苯基;t-Bu:叔丁基;Tbg:叔丁基甘氨酸。1-or2-Np:1-或2-萘基;1-or2-NpcH2O:1-或2-萘甲氧基。
表1
表2
表3
表4
表5
表6
表7
表8
表9
表10
Claims (8)
1.一种从1-氨基-2-乙烯基环丙基羧酸甲酯或其N-被保护形式的混合物拆分对映异构体的方法,包括用酯酶处理所述的混合物得到期望的1-氨基-2-乙烯基环丙基羧酸甲酯或其N-被保护形式对映异构体的步骤。
6.权利要求5的方法,其中所述的混合物用在控制pH的条件下进行处理。
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EP2409985A3 (en) | 1996-10-18 | 2013-05-01 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors de serine proteases, especially of the NS3 protease of the hepatitis C virus |
US6767991B1 (en) | 1997-08-11 | 2004-07-27 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. | Hepatitis C inhibitor peptides |
US6323180B1 (en) * | 1998-08-10 | 2001-11-27 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd | Hepatitis C inhibitor tri-peptides |
US6608027B1 (en) | 1999-04-06 | 2003-08-19 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd | Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus |
UA74546C2 (en) * | 1999-04-06 | 2006-01-16 | Boehringer Ingelheim Ca Ltd | Macrocyclic peptides having activity relative to hepatitis c virus, a pharmaceutical composition and use of the pharmaceutical composition |
KR100878334B1 (ko) * | 1999-06-25 | 2009-01-14 | 백광산업 주식회사 | 대사 경로 단백질을 코딩하는 코리네박테리움 글루타미쿰유전자 |
KR20030036152A (ko) | 2000-04-05 | 2003-05-09 | 쉐링 코포레이션 | N-사이클릭 p2 잔기를 포함하는 c형 간염 바이러스의매크로사이클릭 ns3-세린 프로테아제 억제제 |
NZ521456A (en) | 2000-04-19 | 2004-07-30 | Schering Corp | Macrocyclic NS3-Serine protease inhibitors of hepatitis C virus comprising alkyl and aryl alanine P2 moieties |
JP2003532726A (ja) | 2000-05-05 | 2003-11-05 | スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション | 新規抗感染症薬 |
PE20011350A1 (es) | 2000-05-19 | 2002-01-15 | Vertex Pharma | PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE) |
HUP0303358A3 (en) | 2000-07-21 | 2005-10-28 | Schering Corp | Novel peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus and pharmaceutical compositions containing them |
AR034127A1 (es) | 2000-07-21 | 2004-02-04 | Schering Corp | Imidazolidinonas como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c, composicion farmaceutica, un metodo para su preparacion, y el uso de las mismas para la manufactura de un medicamento |
DK1385870T3 (da) | 2000-07-21 | 2010-07-05 | Schering Corp | Peptider som inhibitorer af NS3-serinprotease fra hepatitis C-virus |
AR029851A1 (es) | 2000-07-21 | 2003-07-16 | Dendreon Corp | Nuevos peptidos como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c |
SV2003000617A (es) * | 2000-08-31 | 2003-01-13 | Lilly Co Eli | Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m |
US6846806B2 (en) | 2000-10-23 | 2005-01-25 | Bristol-Myers Squibb Company | Peptide inhibitors of Hepatitis C virus NS3 protein |
EP1337550B1 (en) * | 2000-11-20 | 2006-05-24 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis c tripeptide inhibitors |
CN1301994C (zh) | 2000-12-12 | 2007-02-28 | 先灵公司 | 作为c型肝炎病毒ns3-丝氨酸蛋白酶抑制剂的二芳基肽 |
EP1539188B1 (en) | 2001-01-22 | 2015-01-07 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase |
WO2003006490A1 (en) | 2001-07-11 | 2003-01-23 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Bridged bicyclic serine protease inhibitors |
CA2455683C (en) | 2001-09-14 | 2010-06-08 | Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha | Front grill impact-absorbing structure for a vehicle |
EP1441720B8 (en) | 2001-10-24 | 2012-03-28 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors of serine protease, particularly hepatitis c virus ns3-ns4a protease, incorporating a fused ring system |
JP2005511572A (ja) * | 2001-11-02 | 2005-04-28 | グラクソ グループ リミテッド | Hcv阻害剤としてのアシルジヒドロピロール誘導体 |
US6867185B2 (en) * | 2001-12-20 | 2005-03-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Inhibitors of hepatitis C virus |
WO2003062228A1 (en) | 2002-01-23 | 2003-07-31 | Schering Corporation | Proline compounds as ns3-serine protease inhibitors for use in treatment of hepatites c virus infection |
US7119072B2 (en) * | 2002-01-30 | 2006-10-10 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. | Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus |
CA2369970A1 (en) * | 2002-02-01 | 2003-08-01 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. | Hepatitis c inhibitor tri-peptides |
US7091184B2 (en) * | 2002-02-01 | 2006-08-15 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Hepatitis C inhibitor tri-peptides |
CA2370396A1 (en) * | 2002-02-01 | 2003-08-01 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. | Hepatitis c inhibitor tri-peptides |
US6642204B2 (en) * | 2002-02-01 | 2003-11-04 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Hepatitis C inhibitor tri-peptides |
PL373399A1 (en) | 2002-04-11 | 2005-08-22 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease |
AU2003299519A1 (en) * | 2002-05-20 | 2004-05-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis c virus inhibitors |
WO2003099316A1 (en) * | 2002-05-20 | 2003-12-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Heterocyclicsulfonamide hepatitis c virus inhibitors |
MY140680A (en) | 2002-05-20 | 2010-01-15 | Bristol Myers Squibb Co | Hepatitis c virus inhibitors |
AU2003301959A1 (en) * | 2002-05-20 | 2004-06-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Substituted cycloalkyl p1' hepatitis c virus inhibitors |
KR100457857B1 (ko) * | 2002-05-23 | 2004-11-18 | (주) 비엔씨바이오팜 | 2-[2-(3-인돌릴)에틸아미노]피리딘 유도체, 그 제조방법및 이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물 |
TW200500374A (en) | 2002-06-28 | 2005-01-01 | Idenlx Cayman Ltd | 2' and 3' -nucleoside produrgs for treating flavivridae infections |
US20040033959A1 (en) * | 2002-07-19 | 2004-02-19 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. | Pharmaceutical compositions for hepatitis C viral protease inhibitors |
AU2003261434A1 (en) * | 2002-08-12 | 2004-02-25 | Bristol-Myers Squibb Company | Iminothiazolidinones as inhibitors of hcv replication |
EP1408031A1 (en) * | 2002-10-09 | 2004-04-14 | 3 D Gene Pharma | Pyrolidine derivatives useful in treatment of hepatitis C virus infection |
ATE418554T1 (de) | 2002-10-24 | 2009-01-15 | Glaxo Group Ltd | 1-acyl-pyrrolidin-derivate für die behandlung von viralen infektionen |
US20050075279A1 (en) * | 2002-10-25 | 2005-04-07 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus |
US7601709B2 (en) | 2003-02-07 | 2009-10-13 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors |
ATE486889T1 (de) * | 2003-03-05 | 2010-11-15 | Boehringer Ingelheim Int | Peptidanaloga mit inhibitorischer wirkung auf hepatitis c |
WO2004101605A1 (en) * | 2003-03-05 | 2004-11-25 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Hepatitis c inhibiting compounds |
KR100960802B1 (ko) * | 2003-03-08 | 2010-06-01 | 주식회사유한양행 | 씨형 간염바이러스 감염 치료용 엔에스3 프로테아제 억제제 |
US7148347B2 (en) * | 2003-04-10 | 2006-12-12 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Process for preparing macrocyclic compounds |
US7173004B2 (en) * | 2003-04-16 | 2007-02-06 | Bristol-Myers Squibb Company | Macrocyclic isoquinoline peptide inhibitors of hepatitis C virus |
CA2522561C (en) | 2003-04-18 | 2012-07-17 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors |
US7176208B2 (en) * | 2003-04-18 | 2007-02-13 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors |
US6846836B2 (en) | 2003-04-18 | 2005-01-25 | Bristol-Myers Squibb Company | N-substituted phenylurea inhibitors of mitochondrial F1F0 ATP hydrolase |
UY28323A1 (es) * | 2003-05-21 | 2004-12-31 | Boehringer Ingelheim Int | Compuestos inhibidores de la hepatitis c |
WO2005003147A2 (en) | 2003-05-30 | 2005-01-13 | Pharmasset, Inc. | Modified fluorinated nucleoside analogues |
WO2004113365A2 (en) * | 2003-06-05 | 2004-12-29 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Hepatitis c serine protease tri-peptide inhibitors |
US7273851B2 (en) | 2003-06-05 | 2007-09-25 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Tri-peptide hepatitis C serine protease inhibitors |
US7125845B2 (en) * | 2003-07-03 | 2006-10-24 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Aza-peptide macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors |
WO2005009418A2 (en) * | 2003-07-25 | 2005-02-03 | Idenix (Cayman) Limited | Purine nucleoside analogues for treating diseases caused by flaviviridae including hepatitis c |
CN1867579A (zh) | 2003-08-26 | 2006-11-22 | 先灵公司 | 丙肝病毒的新的肽模拟物ns3-丝氨酸蛋白酶抑制剂 |
US8377952B2 (en) | 2003-08-28 | 2013-02-19 | Abbott Laboratories | Solid pharmaceutical dosage formulation |
US8025899B2 (en) | 2003-08-28 | 2011-09-27 | Abbott Laboratories | Solid pharmaceutical dosage form |
MY148123A (en) | 2003-09-05 | 2013-02-28 | Vertex Pharma | Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease |
PE20050431A1 (es) * | 2003-09-22 | 2005-07-19 | Boehringer Ingelheim Int | Peptidos macrociclicos activos contra el virus de la hepatitis c |
BRPI0414814A (pt) * | 2003-09-26 | 2006-11-14 | Schering Corp | inibidores macrocìclicos de protease de serina ns3 de vìrus de hepatite c |
KR20060130027A (ko) | 2003-10-10 | 2006-12-18 | 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 세린 프로테아제, 특히 hcv ns3-ns4a 프로테아제의억제제 |
NZ546347A (en) | 2003-10-14 | 2009-11-27 | Intermune Inc | Macrocyclic carboxylic acids and acylsulfonamides as inhibitors of HCV replication |
US7491794B2 (en) * | 2003-10-14 | 2009-02-17 | Intermune, Inc. | Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication |
KR20060120166A (ko) | 2003-10-27 | 2006-11-24 | 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 | Hcv ns3-ns4a 단백질분해효소 저항성 돌연변이 |
WO2005043118A2 (en) | 2003-10-27 | 2005-05-12 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Drug discovery method |
EP1944042A1 (en) | 2003-10-27 | 2008-07-16 | Vertex Pharmceuticals Incorporated | Combinations for HCV treatment |
US20050119318A1 (en) * | 2003-10-31 | 2005-06-02 | Hudyma Thomas W. | Inhibitors of HCV replication |
US7132504B2 (en) | 2003-11-12 | 2006-11-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
CA2546290A1 (en) * | 2003-11-20 | 2005-06-09 | Schering Corporation | Depeptidized inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease |
US7135462B2 (en) | 2003-11-20 | 2006-11-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
US7309708B2 (en) | 2003-11-20 | 2007-12-18 | Birstol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
JP2007513200A (ja) * | 2003-12-08 | 2007-05-24 | ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 超臨界流体処理によるルテニウム副生物の除去 |
CA2549660A1 (en) | 2003-12-15 | 2005-06-30 | Japan Tobacco Inc. | Cyclopropane compounds and pharmaceutical use thereof |
GB0500020D0 (en) | 2005-01-04 | 2005-02-09 | Novartis Ag | Organic compounds |
ES2358333T3 (es) * | 2004-01-21 | 2011-05-09 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Péptidos macrocíclicos con acción contra el virus de la hepatitis c. |
SE0400199D0 (sv) * | 2004-01-30 | 2004-01-30 | Medivir Ab | HCV Protease inhbitors |
WO2005073195A2 (en) * | 2004-01-30 | 2005-08-11 | Medivir Ab | Hcv ns-3 serine protease inhibitors |
AU2005212257A1 (en) | 2004-02-04 | 2005-08-25 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease |
US20050182252A1 (en) | 2004-02-13 | 2005-08-18 | Reddy K. R. | Novel 2'-C-methyl nucleoside derivatives |
TWI368507B (en) | 2004-02-20 | 2012-07-21 | Boehringer Ingelheim Int | Viral polymerase inhibitors |
US20070049593A1 (en) | 2004-02-24 | 2007-03-01 | Japan Tobacco Inc. | Tetracyclic fused heterocyclic compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor |
SI1719773T1 (sl) | 2004-02-24 | 2009-08-31 | Japan Tobacco Inc | Kondenzirane heterotetraciklične spojine in njihova uporaba kot inhibitorji polimeraze HCV |
CA2557247A1 (en) | 2004-02-27 | 2005-09-22 | Schering Corporation | Compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease |
US7635694B2 (en) | 2004-02-27 | 2009-12-22 | Schering Corporation | Cyclobutenedione-containing compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease |
ES2349328T3 (es) | 2004-02-27 | 2010-12-30 | Schering Corporation | Nuevos compuestos como inhibidores de la serina proteasa ns3 del virus de la hepatitis c. |
US7816326B2 (en) | 2004-02-27 | 2010-10-19 | Schering Corporation | Sulfur compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease |
CA2557301A1 (en) * | 2004-02-27 | 2005-09-15 | Schering Corporation | Cyclobutenedione groups-containing compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease |
DE602005015834D1 (de) | 2004-02-27 | 2009-09-17 | Schering Corp | 3,4-(cyclopentyl)kondensierte prolinverbindungen als inhibitoren der ns3-serinprotease des hepatitis-c-virus |
EP1730165A1 (en) | 2004-02-27 | 2006-12-13 | Schering Corporation | Inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease |
CA2557495C (en) | 2004-02-27 | 2014-04-15 | Schering Corporation | Sulfur compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease |
WO2005090334A2 (en) * | 2004-03-12 | 2005-09-29 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Processes and intermediates for the preparation of aspartic acetal caspase inhibitors |
CA2556917C (en) * | 2004-03-15 | 2013-07-09 | Boehringer Ingelheim International, Gmbh | Process for preparing macrocyclic compounds |
CA2560897C (en) * | 2004-03-30 | 2012-06-12 | Intermune, Inc. | Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication |
CN1980657A (zh) | 2004-05-05 | 2007-06-13 | 耶鲁大学 | 新颖的抗病毒赛菊宁黄质类似物 |
EP1773868B1 (en) | 2004-05-20 | 2009-07-15 | Schering Corporation | Substituted prolines as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease |
JP5156374B2 (ja) * | 2004-05-25 | 2013-03-06 | ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 非環式hcvプロテアーゼインヒビターの調製方法 |
AU2005254057B2 (en) | 2004-06-15 | 2011-02-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | C-purine nucleoside analogs as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase |
US20070265222A1 (en) | 2004-06-24 | 2007-11-15 | Maccoss Malcolm | Nucleoside Aryl Phosphoramidates for the Treatment of Rna-Dependent Rna Viral Infection |
WO2006000085A1 (en) * | 2004-06-28 | 2006-01-05 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Hepatitis c inhibitor peptide analogs |
NZ552405A (en) | 2004-07-16 | 2011-04-29 | Gilead Sciences Inc | Pyrrolidine containing antiviral compounds |
WO2006007708A1 (en) * | 2004-07-20 | 2006-01-26 | Boehringer Engelheim International Gmbh | Hepatitis c inhibitor peptide analogs |
UY29016A1 (es) * | 2004-07-20 | 2006-02-24 | Boehringer Ingelheim Int | Analogos de dipeptidos inhibidores de la hepatitis c |
CN101023094B (zh) * | 2004-07-21 | 2011-05-18 | 法莫赛特股份有限公司 | 烷基取代的2-脱氧-2-氟代-d-呋喃核糖基嘧啶和嘌呤及其衍生物的制备 |
US7597884B2 (en) * | 2004-08-09 | 2009-10-06 | Alios Biopharma, Inc. | Hyperglycosylated polypeptide variants and methods of use |
AU2005273968A1 (en) * | 2004-08-09 | 2006-02-23 | Alios Biopharma Inc. | Synthetic hyperglycosylated, protease-resistant polypeptide variants, oral formulations and methods of using the same |
JP2008511633A (ja) | 2004-08-27 | 2008-04-17 | シェーリング コーポレイション | C型肝炎ウィルスns3セリンプロテアーゼの阻害因子としてのアシルスルホンアミド化合物 |
SI3109244T1 (sl) * | 2004-09-14 | 2019-06-28 | Gilead Pharmasset Llc | Priprava 2'fluoro-2'-alkil-substituiranih ali drugih neobvezno substituiranih ribofuranozil pirimidinov in purinov in njihovih derivatov |
WO2006030892A1 (ja) * | 2004-09-17 | 2006-03-23 | Nippon Shinyaku Co., Ltd. | 複素環化合物の製造方法 |
CN101072575A (zh) | 2004-10-01 | 2007-11-14 | 威特克斯医药股份有限公司 | Hcv ns3-ns4a蛋白酶抑制 |
US7659263B2 (en) | 2004-11-12 | 2010-02-09 | Japan Tobacco Inc. | Thienopyrrole compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor |
US7323447B2 (en) * | 2005-02-08 | 2008-01-29 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
PL1863833T3 (pl) | 2005-03-08 | 2014-03-31 | Boehringer Ingelheim Int | Sposób otrzymywania związków makrocyklicznych |
CA2606195C (en) * | 2005-05-02 | 2015-03-31 | Merck And Co., Inc. | Hcv ns3 protease inhibitors |
US7592336B2 (en) | 2005-05-10 | 2009-09-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
KR20080016597A (ko) | 2005-05-13 | 2008-02-21 | 바이로켐 파마 인코포레이티드 | 플라비바이러스 감염의 예방 또는 치료용 화합물 및 그의예방 또는 치료 방법 |
US20060276404A1 (en) * | 2005-06-02 | 2006-12-07 | Anima Ghosal | Medicaments and methods combining a HCV protease inhibitor and an AKR competitor |
JP5160415B2 (ja) * | 2005-06-02 | 2013-03-13 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション | 医薬処方物およびそれを用いる治療方法 |
US20070237818A1 (en) * | 2005-06-02 | 2007-10-11 | Malcolm Bruce A | Controlled-release formulation of HCV protease inhibitor and methods using the same |
NZ563361A (en) | 2005-06-02 | 2011-02-25 | Schering Corp | HCV protease inhibitors in combination with food |
AU2006259348B2 (en) | 2005-06-17 | 2010-07-22 | Novartis Ag | Use of sanglifehrin in HCV |
TWI449711B (zh) * | 2005-06-30 | 2014-08-21 | Virobay Inc | C型肝炎病毒(hcv)抑制劑 |
US7608592B2 (en) | 2005-06-30 | 2009-10-27 | Virobay, Inc. | HCV inhibitors |
US7601686B2 (en) | 2005-07-11 | 2009-10-13 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
AR057456A1 (es) * | 2005-07-20 | 2007-12-05 | Merck & Co Inc | Inhibidores de la proteasa ns3 del vhc |
EP1910378B1 (en) * | 2005-07-20 | 2012-06-20 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Hepatitis c inhibitor peptide analogs |
US20090148407A1 (en) * | 2005-07-25 | 2009-06-11 | Intermune, Inc. | Novel Macrocyclic Inhibitors of Hepatitis C Virus Replication |
MY141245A (en) | 2005-07-29 | 2010-03-31 | Tibotec Pharm Ltd | Macrocylic inhibitors of hepatitis c virus |
CN101273042B (zh) * | 2005-07-29 | 2013-11-06 | 泰博特克药品有限公司 | 丙型肝炎病毒的大环抑制剂 |
PE20070211A1 (es) | 2005-07-29 | 2007-05-12 | Medivir Ab | Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c |
PE20070343A1 (es) | 2005-07-29 | 2007-05-12 | Medivir Ab | Inhibidores macrociclicos del virus de la hepatitis c |
PE20070210A1 (es) | 2005-07-29 | 2007-04-16 | Tibotec Pharm Ltd | Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c |
BRPI0614242A2 (pt) | 2005-07-29 | 2011-03-15 | Medivir Ab | inibidores macrocìclicos do vìrus da hepatite c, combinação e composição farmacêutica compreendendo os mesmos, bem como uso e processo para a preparação dos referidos inibidores |
PL1913015T3 (pl) | 2005-07-29 | 2014-04-30 | Janssen R&D Ireland | Makrocykliczne inhibitory wirusa zapalenia wątroby typu C |
TW200745061A (en) | 2005-07-29 | 2007-12-16 | Tibotec Pharm Ltd | Macrocylic inhibitors of hepatitis C virus |
MY139988A (en) | 2005-07-29 | 2009-11-30 | Tibotec Pharm Ltd | Macrocylic inhibitors of hepatitis c virus |
BRPI0614205A2 (pt) * | 2005-08-01 | 2016-11-22 | Merck & Co Inc | composto, composição farmacêutica, e, uso de composto |
CN101277950B (zh) * | 2005-08-02 | 2013-03-27 | 弗特克斯药品有限公司 | 丝氨酸蛋白酶抑制剂 |
WO2007021610A2 (en) | 2005-08-09 | 2007-02-22 | Merck & Co., Inc. | Ribonucleoside cyclic acetal derivatives for the treatment of rna-dependent rna viral infection |
US8076365B2 (en) | 2005-08-12 | 2011-12-13 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Viral polymerase inhibitors |
US8399615B2 (en) | 2005-08-19 | 2013-03-19 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Processes and intermediates |
ES2449268T3 (es) * | 2005-08-19 | 2014-03-19 | Vertex Pharmaceuticals Inc. | Procesos |
AR055395A1 (es) | 2005-08-26 | 2007-08-22 | Vertex Pharma | Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c |
US7964624B1 (en) | 2005-08-26 | 2011-06-21 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors of serine proteases |
ES2364426T3 (es) | 2005-09-09 | 2011-09-02 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Proceso de metátesis con cerrado del anillo para la preparación de péptidos macrocíclicos. |
ATE493409T1 (de) | 2005-10-11 | 2011-01-15 | Intermune Inc | Verbindungen und verfahren zur inhibierung der replikation des hepatitis-c-virus |
US7772183B2 (en) | 2005-10-12 | 2010-08-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
US7741281B2 (en) | 2005-11-03 | 2010-06-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
RU2008123606A (ru) | 2005-11-11 | 2009-12-20 | Вертекс Фармасьютикалз, Инк (Us) | Варианты вируса гепатита с |
US7705138B2 (en) | 2005-11-11 | 2010-04-27 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Hepatitis C virus variants |
US7910595B2 (en) * | 2005-12-21 | 2011-03-22 | Abbott Laboratories | Anti-viral compounds |
EP2345652A1 (en) | 2005-12-21 | 2011-07-20 | Abbott Laboratories | Antiviral compounds |
CN102702194A (zh) | 2005-12-21 | 2012-10-03 | 雅培制药有限公司 | 抗病毒化合物 |
EP1971611B1 (en) | 2005-12-21 | 2012-10-10 | Abbott Laboratories | Anti-viral compounds |
US7816348B2 (en) | 2006-02-03 | 2010-10-19 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Viral polymerase inhibitors |
CN102614490A (zh) | 2006-02-27 | 2012-08-01 | 弗特克斯药品有限公司 | 包含vx-950的共晶体和包含所述共晶体的药物组合物 |
JP2009529059A (ja) | 2006-03-08 | 2009-08-13 | アキリオン ファーマシューティカルズ,インコーポレーテッド | 抗c型肝炎ウイルス活性を有する置換アミノチアゾール誘導体 |
WO2007109080A2 (en) | 2006-03-16 | 2007-09-27 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Deuterated hepatitis c protease inhibitors |
RU2448976C2 (ru) | 2006-04-11 | 2012-04-27 | Новартис Аг | Ингибиторы hcv/вич и их применение |
GB0609492D0 (en) * | 2006-05-15 | 2006-06-21 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Therapeutic agents |
KR101069051B1 (ko) | 2006-05-23 | 2011-09-29 | 아이알엠 엘엘씨 | 채널 활성화 프로테아제 억제제로서의 화합물 및 조성물 |
US20080187516A1 (en) * | 2006-06-06 | 2008-08-07 | Ying Sun | Acyclic oximyl hepatitis c protease inhibitors |
US7728148B2 (en) * | 2006-06-06 | 2010-06-01 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Acyclic oximyl hepatitis C protease inhibitors |
US8268776B2 (en) | 2006-06-06 | 2012-09-18 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Macrocylic oximyl hepatitis C protease inhibitors |
US9526769B2 (en) | 2006-06-06 | 2016-12-27 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Macrocylic oximyl hepatitis C protease inhibitors |
GB0612423D0 (en) * | 2006-06-23 | 2006-08-02 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Therapeutic agents |
UY30437A1 (es) * | 2006-06-26 | 2008-01-31 | Enanta Pharm Inc | Quinoxalinil macroceclicos inhibidores de serina proteasa del virus de la hepatitis c |
RU2008152171A (ru) * | 2006-07-05 | 2010-08-10 | Интермьюн, Инк. (Us) | Новые ингибиторы вирусной репликации гепатита с |
EP2049474B1 (en) | 2006-07-11 | 2015-11-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis c virus inhibitors |
US7635683B2 (en) * | 2006-08-04 | 2009-12-22 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Quinoxalinyl tripeptide hepatitis C virus inhibitors |
US7718612B2 (en) * | 2007-08-02 | 2010-05-18 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Pyridazinonyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors |
US20090035267A1 (en) * | 2007-07-31 | 2009-02-05 | Moore Joel D | Acyclic, pyridazinone-derived hepatitis c serine protease inhibitors |
US7605126B2 (en) * | 2006-08-11 | 2009-10-20 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Acylaminoheteroaryl hepatitis C virus protease inhibitors |
US7687459B2 (en) * | 2006-08-11 | 2010-03-30 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Arylalkoxyl hepatitis C virus protease inhibitors |
US7582605B2 (en) * | 2006-08-11 | 2009-09-01 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Phosphorus-containing hepatitis C serine protease inhibitors |
EP1886685A1 (en) | 2006-08-11 | 2008-02-13 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods, uses and compositions for modulating replication of hcv through the farnesoid x receptor (fxr) activation or inhibition |
WO2008022006A2 (en) * | 2006-08-11 | 2008-02-21 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Arylalkoxyl hepatitis c virus protease inhibitors |
US20080038225A1 (en) * | 2006-08-11 | 2008-02-14 | Ying Sun | Triazolyl acyclic hepatitis c serine protease inhibitors |
US20090098085A1 (en) * | 2006-08-11 | 2009-04-16 | Ying Sun | Tetrazolyl acyclic hepatitis c serine protease inhibitors |
CA2660555A1 (en) | 2006-08-17 | 2008-02-21 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Viral polymerase inhibitors |
CA2666814A1 (en) * | 2006-08-21 | 2008-05-29 | United Therapeutics Corporation | Combination therapy for treatment of viral infections |
CA2667165A1 (en) * | 2006-10-24 | 2008-05-02 | Merck & Co., Inc. | Hcv ns3 protease inhibitors |
WO2008051514A2 (en) * | 2006-10-24 | 2008-05-02 | Merck & Co., Inc. | Hcv ns3 protease inhibitors |
EP2079479B1 (en) * | 2006-10-24 | 2014-11-26 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Hcv ns3 protease inhibitors |
KR101615500B1 (ko) * | 2006-10-27 | 2016-04-27 | 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 | Hcv ns3 프로테아제 억제제 |
CA2667032A1 (en) * | 2006-10-27 | 2008-05-15 | Merck & Co., Inc. | Hcv ns3 protease inhibitors |
US8343477B2 (en) | 2006-11-01 | 2013-01-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Inhibitors of hepatitis C virus |
TW200827364A (en) * | 2006-11-02 | 2008-07-01 | Taigen Biotechnology Co Ltd | HCV protease inhibitors |
US7772180B2 (en) | 2006-11-09 | 2010-08-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
KR20090086081A (ko) | 2006-11-15 | 2009-08-10 | 바이로켐 파마 인코포레이티드 | 플라비바이러스 감염의 치료 또는 예방용 티오펜 유사체 |
US7763584B2 (en) | 2006-11-16 | 2010-07-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
US7888464B2 (en) | 2006-11-16 | 2011-02-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
US8003604B2 (en) | 2006-11-16 | 2011-08-23 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
EA200970493A1 (ru) | 2006-11-17 | 2009-10-30 | Тиботек Фармасьютикалз Лтд. | Макроциклические ингибиторы вируса гепатита с |
MX2009006056A (es) * | 2006-12-07 | 2009-06-16 | Schering Corp | Formulacion de matriz sensible al ph. |
WO2008133753A2 (en) * | 2006-12-20 | 2008-11-06 | Abbott Laboratories | Anti-viral compounds |
GB0625345D0 (en) * | 2006-12-20 | 2007-01-31 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Therapeutic compounds |
GB0625349D0 (en) * | 2006-12-20 | 2007-01-31 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Therapeutic compounds |
JP2010513450A (ja) * | 2006-12-20 | 2010-04-30 | イステイチユート・デイ・リチエルケ・デイ・ビオロジア・モレコラーレ・ピ・アンジエレツテイ・エツセ・ピー・アー | 抗ウイルス性インドール |
WO2008074035A1 (en) * | 2006-12-27 | 2008-06-19 | Abbott Laboratories | Hcv protease inhibitors and uses thereof |
WO2008095058A1 (en) * | 2007-02-01 | 2008-08-07 | Taigen Biotechnology Co. Ltd. | Hcv protease inhibitors |
ATE542815T1 (de) | 2007-02-27 | 2012-02-15 | Vertex Pharma | Kokristalle und pharmazeutische zusammensetzungen damit |
CA2679426A1 (en) | 2007-02-27 | 2008-09-04 | Luc Farmer | Inhibitors of serine proteases |
WO2008106167A1 (en) * | 2007-02-28 | 2008-09-04 | Conatus Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy comprising matrix metalloproteinase inhibitors and caspase inhibitors for the treatment of liver diseases |
ATE525068T1 (de) | 2007-02-28 | 2011-10-15 | Conatus Pharmaceuticals Inc | Verfahren zur behandlung von chronischer viraler hepatitis c mithilfe von ro 113-0830 |
MX2009010205A (es) * | 2007-03-23 | 2009-10-19 | Schering Corp | Inhibidores de cetoamida p1-no epimerizables de proteasa ns3 de virus de hepatitis c. |
US7964580B2 (en) | 2007-03-30 | 2011-06-21 | Pharmasset, Inc. | Nucleoside phosphoramidate prodrugs |
US7910587B2 (en) * | 2007-04-26 | 2011-03-22 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Quinoxalinyl dipeptide hepatitis C virus inhibitors |
US20080317712A1 (en) * | 2007-04-26 | 2008-12-25 | Deqiang Niu | Arylpiperidinyl and arylpyrrolidinyl tripeptide hepatitis c serine protease inhibitors |
US20080267917A1 (en) * | 2007-04-26 | 2008-10-30 | Deqiang Niu | N-functionalized amides as hepatitis c serine protease inhibitors |
US8377872B2 (en) | 2007-04-26 | 2013-02-19 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Cyclic P3 tripeptide hepatitis C serine protease inhibitors |
US20080292587A1 (en) * | 2007-04-26 | 2008-11-27 | Ying Sun | Oximyl dipeptide hepatitis c protease inhibitors |
US20090155209A1 (en) * | 2007-05-03 | 2009-06-18 | Blatt Lawrence M | Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication |
MX2009011930A (es) | 2007-05-04 | 2009-11-18 | Vertex Pharma | Terapia de combinacion para el tratamiento de infeccion de virus de hepatitis c. |
MX2009012117A (es) * | 2007-05-09 | 2009-11-23 | Pfizer | Composiciones y derivados heterociclicos sustituidos y su uso farmaceutico como antibacterianos. |
EP2185524A1 (en) | 2007-05-10 | 2010-05-19 | Intermune, Inc. | Novel peptide inhibitors of hepatitis c virus replication |
GB0709791D0 (en) * | 2007-05-22 | 2007-06-27 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Antiviral agents |
WO2009005677A2 (en) * | 2007-06-29 | 2009-01-08 | Gilead Sciences, Inc. | Antiviral compounds |
KR101596524B1 (ko) * | 2007-06-29 | 2016-02-22 | 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 | 항바이러스 화합물 |
AU2008277442A1 (en) * | 2007-07-17 | 2009-01-22 | Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti Spa | Macrocyclic indole derivatives for the treatment of hepatitis C infections |
JP5433573B2 (ja) * | 2007-07-19 | 2014-03-05 | イステイチユート・デイ・リチエルケ・デイ・ビオロジア・モレコラーレ・ピ・アンジエレツテイ・エツセ・エルレ・エルレ | 抗ウイルス剤としての大環状化合物 |
CA2693997C (en) | 2007-08-03 | 2013-01-15 | Pierre L. Beaulieu | Viral polymerase inhibitors |
JP5443360B2 (ja) | 2007-08-30 | 2014-03-19 | バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 共結晶体およびそれを含む医薬組成物 |
GB0718575D0 (en) | 2007-09-24 | 2007-10-31 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Nucleoside derivatives as inhibitors of viral polymerases |
US8419332B2 (en) * | 2007-10-19 | 2013-04-16 | Atlas Bolt & Screw Company Llc | Non-dimpling fastener |
US20090111757A1 (en) * | 2007-10-25 | 2009-04-30 | Taigen Biotechnology Co., Ltd. | Hcv protease inhibitors |
US8383583B2 (en) | 2007-10-26 | 2013-02-26 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Macrocyclic, pyridazinone-containing hepatitis C serine protease inhibitors |
JP2011503201A (ja) | 2007-11-14 | 2011-01-27 | エナンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 大環状テトラゾリルc型肝炎セリンプロテアーゼ阻害剤 |
US8030307B2 (en) * | 2007-11-29 | 2011-10-04 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic, C5-substituted proline derivatives as inhibitors of the hepatitis C virus NS3 protease |
US8263549B2 (en) * | 2007-11-29 | 2012-09-11 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | C5-substituted, proline-derived, macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors |
EP2224942A4 (en) * | 2007-12-05 | 2012-01-25 | Enanta Pharm Inc | FLUORATED TRIPEPTIDE HCV SERINE PROTEASE INHIBITORS |
WO2009076166A2 (en) * | 2007-12-05 | 2009-06-18 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Oximyl hcv serine protease inhibitors |
US8193346B2 (en) | 2007-12-06 | 2012-06-05 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Process for making macrocyclic oximyl hepatitis C protease inhibitors |
WO2009079353A1 (en) | 2007-12-14 | 2009-06-25 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Triazole-containing macrocyclic hcv serine protease inhibitors |
EP2234977A4 (en) | 2007-12-19 | 2011-04-13 | Boehringer Ingelheim Int | VIRAL POLYMERASE INHIBITORS |
US8202996B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-06-19 | Bristol-Myers Squibb Company | Crystalline forms of N-(tert-butoxycarbonyl)-3-methyl-L-valyl-(4R)-4-((7-chloro-4-methoxy-1-isoquinolinyl)oxy)-N- ((1R,2S)-1-((cyclopropylsulfonyl)carbamoyl)-2-vinylcyclopropyl)-L-prolinamide |
MX2010008109A (es) * | 2008-01-24 | 2010-09-22 | Enanta Pharm Inc | Tripéptidos difluorizados como inhibidores de proteasa de serina de virus de hepatitis c (hcv). |
US8101567B2 (en) * | 2008-01-24 | 2012-01-24 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Heteroaryl-containing tripeptide HCV serine protease inhibitors |
AU2009210789B2 (en) | 2008-02-04 | 2014-01-30 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Macrocyclic serine protease inhibitors |
MX2010008371A (es) * | 2008-02-07 | 2010-10-04 | Virobay Inc | Inhibidores de catepsina b. |
US8591878B2 (en) | 2008-02-25 | 2013-11-26 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Therapeutic compounds |
US8372802B2 (en) * | 2008-03-20 | 2013-02-12 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Fluorinated macrocyclic compounds as hepatitis C virus inhibitors |
TW200946541A (en) * | 2008-03-27 | 2009-11-16 | Idenix Pharmaceuticals Inc | Solid forms of an anti-HIV phosphoindole compound |
AP2010005416A0 (en) | 2008-04-15 | 2010-10-31 | Intermune Inc | Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication. |
US8163921B2 (en) * | 2008-04-16 | 2012-04-24 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
AU2009241445A1 (en) * | 2008-04-28 | 2009-11-05 | Merck Sharp & Dohme Corp. | HCV NS3 protease inhibitors |
US8211891B2 (en) * | 2008-04-30 | 2012-07-03 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Difluoromethyl-containing macrocyclic compounds as hepatitis C virus inhibitors |
US20090285774A1 (en) * | 2008-05-15 | 2009-11-19 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C Virus Inhibitors |
CN101580535B (zh) * | 2008-05-16 | 2012-10-03 | 太景生物科技股份有限公司 | 丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂 |
US7964560B2 (en) | 2008-05-29 | 2011-06-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
US8044023B2 (en) | 2008-05-29 | 2011-10-25 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
US8173621B2 (en) | 2008-06-11 | 2012-05-08 | Gilead Pharmasset Llc | Nucleoside cyclicphosphates |
EP2476690A1 (en) | 2008-07-02 | 2012-07-18 | IDENIX Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections |
ES2491090T3 (es) | 2008-07-22 | 2014-09-05 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Combinaciones de un compuesto de quinoxalina macrocíclica que es un inhibidor de la proteasa NS3 del VHC con otros agentes del VHC |
ES2383273T3 (es) | 2008-07-23 | 2012-06-19 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Compuestos heterocíclicos antivíricos |
US8207341B2 (en) | 2008-09-04 | 2012-06-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Process or synthesizing substituted isoquinolines |
UY32099A (es) | 2008-09-11 | 2010-04-30 | Enanta Pharm Inc | Inhibidores macrocíclicos de serina proteasas de hepatitis c |
EP2687526A1 (en) * | 2008-09-16 | 2014-01-22 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Crystalline forms of a 2-thiazolyl- 4-quinolinyl-oxy derivative, a potent HCV inhibitor |
MY152824A (en) * | 2008-09-17 | 2014-11-28 | Boehringer Ingelheim Int | Combination of hcv ns3 protease inhibitor with interferon and ribavirin. |
WO2010034671A1 (en) | 2008-09-26 | 2010-04-01 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Pyrine or pyrazine derivatives for treating hcv |
US8563505B2 (en) | 2008-09-29 | 2013-10-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
US8044087B2 (en) | 2008-09-29 | 2011-10-25 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
EP2341924A4 (en) | 2008-10-02 | 2013-01-23 | David Gladstone Inst | METHOD FOR THE TREATMENT OF HEPATITIS C VIRUS INFECTIONS |
AU2009303483A1 (en) * | 2008-10-15 | 2010-04-22 | Intermune, Inc. | Therapeutic antiviral peptides |
MX2011004133A (es) | 2008-10-30 | 2011-05-24 | Hoffmann La Roche | Derivados de arilpiridona antiviral heterociclica. |
CA2738732A1 (en) * | 2008-11-21 | 2010-05-27 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Pharmaceutical composition of a potent hcv inhibitor for oral administration |
PT2373172E (pt) | 2008-12-03 | 2013-10-21 | Presidio Pharmaceuticals Inc | Inibidores de ns5a de hcv |
WO2010065668A1 (en) | 2008-12-03 | 2010-06-10 | Presidio Pharmaceuticals, Inc. | Inhibitors of hcv ns5a |
US20100272674A1 (en) * | 2008-12-04 | 2010-10-28 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C Virus Inhibitors |
US8283310B2 (en) | 2008-12-15 | 2012-10-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
KR20110114582A (ko) | 2008-12-19 | 2011-10-19 | 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 | Hcv ns3 프로테아제 억제제 |
AU2009330333A1 (en) | 2008-12-22 | 2011-07-07 | Gilead Sciences, Inc. | Antiviral compounds |
KR20110094352A (ko) | 2008-12-22 | 2011-08-23 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 헤테로사이클릭 항바이러스 화합물 |
SG172363A1 (en) | 2008-12-23 | 2011-07-28 | Pharmasset Inc | Synthesis of purine nucleosides |
WO2010075517A2 (en) | 2008-12-23 | 2010-07-01 | Pharmasset, Inc. | Nucleoside analogs |
CL2009002207A1 (es) | 2008-12-23 | 2011-02-18 | Gilead Pharmasset Llc | Compuestos derivados de 3-hidroxi-5-(9h-purin-9-il)tetrahidrofuran-2-il, inhibidor de la replicacion de arn viral dependiente de arn; composicion farmaceutica; uso para el tratamiento de hepatitis c. |
MX2011007195A (es) | 2009-01-07 | 2013-07-12 | Scynexis Inc | Derivado de ciclosporina para el uso en el tratamiento de infección de virus de hepatitis c (vhc) y virus de inmunodeficiencia humana (vih). |
WO2010082050A1 (en) | 2009-01-16 | 2010-07-22 | Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. | Macrocyclic and 7-aminoalkyl-substituted benzoxazocines for treatment of hepatitis c infections |
GB0900914D0 (en) | 2009-01-20 | 2009-03-04 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Antiviral agents |
US8102720B2 (en) * | 2009-02-02 | 2012-01-24 | Qualcomm Incorporated | System and method of pulse generation |
AR075584A1 (es) | 2009-02-27 | 2011-04-20 | Intermune Inc | COMPOSICIONES TERAPEUTICAS QUE COMPRENDEN beta-D-2'-DESOXI-2'-FLUORO-2'-C-METILCITIDINA Y UN DERIVADO DE ACIDO ISOINDOL CARBOXILICO Y SUS USOS. COMPUESTO. |
US8193372B2 (en) | 2009-03-04 | 2012-06-05 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Phosphothiophene and phosphothiazole HCV polymerase inhibitors |
WO2010100178A1 (en) | 2009-03-06 | 2010-09-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Heterocyclic antiviral compounds |
WO2010107739A2 (en) | 2009-03-18 | 2010-09-23 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and compositions of treating a flaviviridae family viral infection |
KR20110131312A (ko) | 2009-03-27 | 2011-12-06 | 프레시디오 파마슈티칼스, 인코포레이티드 | 융합된 고리 c형 간염 억제제 |
US8927576B2 (en) | 2009-04-06 | 2015-01-06 | PTC Therpeutics, Inc. | HCV inhibitor and therapeutic agent combinations |
TW201040181A (en) | 2009-04-08 | 2010-11-16 | Idenix Pharmaceuticals Inc | Macrocyclic serine protease inhibitors |
US20110182850A1 (en) | 2009-04-10 | 2011-07-28 | Trixi Brandl | Organic compounds and their uses |
US8512690B2 (en) | 2009-04-10 | 2013-08-20 | Novartis Ag | Derivatised proline containing peptide compounds as protease inhibitors |
MX2011011112A (es) | 2009-04-25 | 2011-11-18 | Hoffmann La Roche | Compuestos antivirales heterociclicos. |
US8936781B2 (en) | 2009-05-13 | 2015-01-20 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Macrocyclic compounds as hepatitis C virus inhibitors |
US8618076B2 (en) | 2009-05-20 | 2013-12-31 | Gilead Pharmasset Llc | Nucleoside phosphoramidates |
TWI583692B (zh) | 2009-05-20 | 2017-05-21 | 基利法瑪席特有限責任公司 | 核苷磷醯胺 |
TWI428332B (zh) | 2009-06-09 | 2014-03-01 | Hoffmann La Roche | 雜環抗病毒化合物 |
CA2762675A1 (en) | 2009-06-24 | 2010-12-29 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Heterocyclic antiviral compound |
US8232246B2 (en) * | 2009-06-30 | 2012-07-31 | Abbott Laboratories | Anti-viral compounds |
EP2448912A4 (en) * | 2009-07-02 | 2014-05-28 | Reddys Lab Ltd Dr | ENZYMES AND METHODS FOR DEDOLDING AMINOVINYL-CYCLOPROPANECARBOXYLIC ACID DERIVATIVES |
ME01718B (me) | 2009-07-07 | 2014-09-20 | Boehringer Ingelheim Int | Farmaceutska kompozicija za inhibitor proteaze virusnog Hepatitis C |
WO2011014487A1 (en) | 2009-07-30 | 2011-02-03 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Hepatitis c virus ns3 protease inhibitors |
TW201117812A (en) | 2009-08-05 | 2011-06-01 | Idenix Pharmaceuticals Inc | Macrocyclic serine protease inhibitors |
CN102471239A (zh) | 2009-08-10 | 2012-05-23 | 住友化学株式会社 | 光学活性的1-氨基-2-乙烯基环丙甲酸酯的制造方法 |
US8324417B2 (en) | 2009-08-19 | 2012-12-04 | Virobay, Inc. | Process for the preparation of (S)-2-amino-5-cyclopropyl-4,4-difluoropentanoic acid and alkyl esters and acid salts thereof |
SI2477980T1 (sl) * | 2009-09-15 | 2017-01-31 | Taigen Biotechnology Co., Ltd. | Inhibitorji HCV proteaze |
CN102741270B (zh) * | 2009-09-28 | 2015-07-22 | 英特穆恩公司 | C型肝炎病毒复制的环肽抑制剂 |
WO2011049908A2 (en) * | 2009-10-19 | 2011-04-28 | Enanta Pharmaceuticals, Inc. | Bismacrokyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors |
EA201200650A1 (ru) | 2009-10-30 | 2012-12-28 | Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх | Курсы комбинированного лечения вируса гепатита с, включающие bi201335, интерферон-альфа и рибавирин |
US20110117055A1 (en) | 2009-11-19 | 2011-05-19 | Macdonald James E | Methods of Treating Hepatitis C Virus with Oxoacetamide Compounds |
CA2781614A1 (en) | 2009-11-25 | 2011-06-09 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | 5-alkynyl-thiophene-2-carboxylic acid derivatives and their use for the treatment or prevention of flavivirus infections |
MX2012006877A (es) | 2009-12-18 | 2012-08-31 | Idenix Pharmaceuticals Inc | Inhibidores de virus de hepatitis c de arileno o heteroarileno 5, 5 - fusionado. |
US20130072523A1 (en) | 2009-12-24 | 2013-03-21 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections |
US20110178107A1 (en) * | 2010-01-20 | 2011-07-21 | Taigen Biotechnology Co., Ltd. | Hcv protease inhibitors |
CN102140100B (zh) | 2010-01-27 | 2014-06-11 | 爱博新药研发(上海)有限公司 | 高效抑制丙型肝炎病毒的多环化合物及其制备方法和用途 |
US8530497B2 (en) | 2010-03-11 | 2013-09-10 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Crystalline salts of a potent HCV inhibitor |
CA2794145A1 (en) | 2010-03-24 | 2011-09-29 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections |
MX2012010919A (es) | 2010-03-24 | 2013-02-01 | Vertex Pharma | Analogos para el tratamiento o prevencion de infecciones por flavivirus. |
TW201141857A (en) | 2010-03-24 | 2011-12-01 | Vertex Pharma | Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections |
TW201139438A (en) | 2010-03-24 | 2011-11-16 | Vertex Pharma | Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections |
US8563530B2 (en) | 2010-03-31 | 2013-10-22 | Gilead Pharmassel LLC | Purine nucleoside phosphoramidate |
AP3515A (en) | 2010-03-31 | 2016-01-11 | Gilead Pharmasset Llc | Nucleoside phosphoramidates |
WO2011123586A1 (en) | 2010-04-01 | 2011-10-06 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections |
CA2800509A1 (en) | 2010-05-24 | 2011-12-01 | Presidio Pharmaceuticals, Inc. | Inhibitors of hcv ns5a |
WO2011156545A1 (en) | 2010-06-09 | 2011-12-15 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Viral dynamic model for hcv combination therapy |
WO2011159826A2 (en) | 2010-06-15 | 2011-12-22 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Hcv ns5b protease mutants |
WO2012006070A1 (en) | 2010-06-28 | 2012-01-12 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections |
AR081691A1 (es) | 2010-06-28 | 2012-10-10 | Vertex Pharma | Derivados de tiofeno, metodos para su preparacion y su uso en el tratamiento o la prevencion de infecciones por flavivirus |
WO2012006060A1 (en) | 2010-06-28 | 2012-01-12 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections |
WO2012024363A2 (en) | 2010-08-17 | 2012-02-23 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Compounds and methods for the treatment or prevention of flaviviridae viral infections |
NZ608720A (en) | 2010-09-21 | 2015-03-27 | Enanta Pharm Inc | Macrocyclic proline derived hcv serine protease inhibitors |
MX2013003060A (es) * | 2010-09-30 | 2013-05-30 | Boehringer Ingelheim Int | Terapia de combinacion para tratar infeccion por hcv. |
EA201390532A1 (ru) | 2010-10-08 | 2013-09-30 | Новартис Аг | Композиции сульфамидых ингибиторов ns3, содержащие витамин е |
JP6069215B2 (ja) | 2010-11-30 | 2017-02-01 | ギリアド ファーマセット エルエルシー | 化合物 |
MX2013006951A (es) * | 2010-12-16 | 2013-10-03 | Abbvie Inc | Compuestos antivirales. |
CN103380132B (zh) | 2010-12-30 | 2016-08-31 | 益安药业 | 菲啶大环丙型肝炎丝氨酸蛋白酶抑制剂 |
CA2822556A1 (en) | 2010-12-30 | 2012-07-05 | Enanta Pharmaceuticals, Inc | Macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors |
WO2012109398A1 (en) | 2011-02-10 | 2012-08-16 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Macrocyclic serine protease inhibitors, pharmaceutical compositions thereof, and their use for treating hcv infections |
WO2012107589A1 (en) | 2011-02-11 | 2012-08-16 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of hcv infections |
WO2012123298A1 (en) | 2011-03-11 | 2012-09-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antiviral compounds |
US20120252721A1 (en) | 2011-03-31 | 2012-10-04 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating drug-resistant hepatitis c virus infection with a 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitor |
EP2691409B1 (en) | 2011-03-31 | 2018-02-21 | Idenix Pharmaceuticals LLC. | Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections |
US8957203B2 (en) | 2011-05-05 | 2015-02-17 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
US10201584B1 (en) | 2011-05-17 | 2019-02-12 | Abbvie Inc. | Compositions and methods for treating HCV |
US8691757B2 (en) | 2011-06-15 | 2014-04-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
WO2012171332A1 (zh) | 2011-06-16 | 2012-12-20 | 爱博新药研发(上海)有限公司 | 抑制丙型肝炎病毒的大环状杂环化合物及其制备和应用 |
JPWO2012176715A1 (ja) | 2011-06-21 | 2015-02-23 | 三菱瓦斯化学株式会社 | 1−アミノ−2−ビニルシクロプロパンカルボン酸アミドおよびその塩、ならびにその製造方法 |
WO2012175581A1 (en) | 2011-06-24 | 2012-12-27 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antiviral compounds |
CN102807607B (zh) * | 2011-07-22 | 2013-10-23 | 爱博新药研发(上海)有限公司 | 抑制丙肝病毒的稠环杂环类化合物、其中间体及其应用 |
TW201317223A (zh) | 2011-07-26 | 2013-05-01 | Vertex Pharma | 噻吩化合物 |
WO2013016499A1 (en) | 2011-07-26 | 2013-01-31 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Methods for preparation of thiophene compounds |
DE202012012998U1 (de) | 2011-08-31 | 2014-06-13 | Daniel Elias | Bioaktive, regenerative Mischung zur Herstellung eines Ergänzungsnahrungsmittels |
US9403863B2 (en) | 2011-09-12 | 2016-08-02 | Idenix Pharmaceuticals Llc | Substituted carbonyloxymethylphosphoramidate compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections |
WO2013039855A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-03-21 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections |
CN103917541B (zh) | 2011-10-10 | 2016-08-17 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 抗病毒化合物 |
EP2768838A1 (en) | 2011-10-14 | 2014-08-27 | IDENIX Pharmaceuticals, Inc. | Substituted 3',5'-cyclic phosphates of purine nucleotide compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections |
ES2527544T1 (es) | 2011-10-21 | 2015-01-26 | Abbvie Inc. | Tratamiento mono (PSI-7977) o de combinación con AAD para su uso en el tratamiento del VHC |
US8466159B2 (en) | 2011-10-21 | 2013-06-18 | Abbvie Inc. | Methods for treating HCV |
AR088463A1 (es) | 2011-10-21 | 2014-06-11 | Abbvie Inc | Metodos para el tratamiento de hcv |
US8492386B2 (en) | 2011-10-21 | 2013-07-23 | Abbvie Inc. | Methods for treating HCV |
WO2013074386A2 (en) | 2011-11-15 | 2013-05-23 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Hcv ns3 protease inhibitors |
US8889159B2 (en) | 2011-11-29 | 2014-11-18 | Gilead Pharmasset Llc | Compositions and methods for treating hepatitis C virus |
CA3131037A1 (en) | 2011-11-30 | 2013-06-06 | Emory University | Antiviral jak inhibitors useful in treating or preventing retroviral and other viral infections |
AU2012347785B2 (en) | 2011-12-06 | 2017-03-16 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and compositions for treating viral diseases |
CN103987723B (zh) | 2011-12-16 | 2017-03-01 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | Hcv ns5a 的抑制剂 |
AU2012357986B2 (en) | 2011-12-20 | 2017-02-02 | Riboscience Llc | 4'-Azido, 3'-fluoro substituted nucleoside derivatives as inhibitors of HCV RNA replication |
AU2012357940B2 (en) | 2011-12-20 | 2017-02-16 | Riboscience Llc | 2',4'-difluoro-2'-methyl substituted nucleoside derivatives as inhibitors of HCV RNA replication |
US20140356325A1 (en) | 2012-01-12 | 2014-12-04 | Ligand Pharmaceuticals Incorporated | Novel 2'-c-methyl nucleoside derivative compounds |
CN104244926A (zh) | 2012-01-12 | 2014-12-24 | 勃林格殷格翰国际有限公司 | 作为强效的hcv 抑制剂的稳定的药物制剂 |
WO2013133927A1 (en) | 2012-02-13 | 2013-09-12 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Pharmaceutical compositions of 2'-c-methyl-guanosine, 5'-[2-[(3-hydroxy-2,2-dimethyl-1-oxopropyl)thio]ethyl n-(phenylmethyl)phosphoramidate] |
EP2817291A1 (en) | 2012-02-24 | 2014-12-31 | F. Hoffmann-La Roche AG | Antiviral compounds |
WO2013137869A1 (en) | 2012-03-14 | 2013-09-19 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Combination therapy for treating hcv infection in an hcv-hiv coinfected patient population |
US9012427B2 (en) | 2012-03-22 | 2015-04-21 | Alios Biopharma, Inc. | Pharmaceutical combinations comprising a thionucleotide analog |
WO2013147750A1 (en) | 2012-03-27 | 2013-10-03 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient sub-population |
WO2013147749A1 (en) | 2012-03-27 | 2013-10-03 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient subgenotype populations |
WO2013143581A1 (en) | 2012-03-28 | 2013-10-03 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Combination therapy for treating hcv infection in specific patient subgenotype sub-population |
US9109001B2 (en) | 2012-05-22 | 2015-08-18 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | 3′,5′-cyclic phosphoramidate prodrugs for HCV infection |
WO2013177195A1 (en) | 2012-05-22 | 2013-11-28 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | 3',5'-cyclic phosphate prodrugs for hcv infection |
AU2013266393B2 (en) | 2012-05-22 | 2017-09-28 | Idenix Pharmaceuticals Llc | D-amino acid compounds for liver disease |
US20140010783A1 (en) | 2012-07-06 | 2014-01-09 | Hoffmann-La Roche Inc. | Antiviral compounds |
US10513534B2 (en) | 2012-10-08 | 2019-12-24 | Idenix Pharmaceuticals Llc | 2′-chloro nucleoside analogs for HCV infection |
EP2909223B1 (en) | 2012-10-19 | 2017-03-22 | Idenix Pharmaceuticals LLC | Dinucleotide compounds for hcv infection |
EA025560B1 (ru) | 2012-10-19 | 2017-01-30 | Бристол-Майерс Сквибб Компани | Ингибиторы вируса гепатита с |
US10723754B2 (en) | 2012-10-22 | 2020-07-28 | Idenix Pharmaceuticals Llc | 2′,4′-bridged nucleosides for HCV infection |
US9643999B2 (en) | 2012-11-02 | 2017-05-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis C virus inhibitors |
WO2014070964A1 (en) | 2012-11-02 | 2014-05-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis c virus inhibitors |
WO2014071007A1 (en) | 2012-11-02 | 2014-05-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis c virus inhibitors |
EP2914614B1 (en) | 2012-11-05 | 2017-08-16 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis c virus inhibitors |
CN103804208B (zh) * | 2012-11-14 | 2016-06-08 | 重庆博腾制药科技股份有限公司 | 一种丙肝药物中间体的制备方法 |
US20140140951A1 (en) | 2012-11-14 | 2014-05-22 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | D-Alanine Ester of Rp-Nucleoside Analog |
EP2938624A1 (en) | 2012-11-14 | 2015-11-04 | IDENIX Pharmaceuticals, Inc. | D-alanine ester of sp-nucleoside analog |
EP2935304A1 (en) | 2012-12-19 | 2015-10-28 | IDENIX Pharmaceuticals, Inc. | 4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv |
KR20150109451A (ko) | 2013-01-23 | 2015-10-01 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 항바이러스성 트라이아졸 유도체 |
WO2014121418A1 (en) | 2013-02-07 | 2014-08-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of hepatitis c |
WO2014121417A1 (en) | 2013-02-07 | 2014-08-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of hepatitis c |
US20150065439A1 (en) | 2013-02-28 | 2015-03-05 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Pharmaceutical compositions |
EP2970358B1 (en) | 2013-03-04 | 2021-06-30 | Idenix Pharmaceuticals LLC | 3'-deoxy nucleosides for the treatment of hcv |
WO2014137930A1 (en) | 2013-03-04 | 2014-09-12 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Thiophosphate nucleosides for the treatment of hcv |
RU2015136256A (ru) | 2013-03-05 | 2017-04-10 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Противовирусные соединения |
WO2014137869A1 (en) | 2013-03-07 | 2014-09-12 | Bristol-Myers Squibb Company | Hepatitis c virus inhibitors |
WO2014138374A1 (en) | 2013-03-08 | 2014-09-12 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient sub-population |
EP2970195B1 (en) * | 2013-03-14 | 2017-08-02 | Achillion Pharmaceuticals, Inc. | Processes for producing sovaprevir |
WO2014165542A1 (en) | 2013-04-01 | 2014-10-09 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | 2',4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv |
MA46490A1 (fr) | 2013-05-16 | 2021-04-30 | Riboscience Llc | Dérivés de nucléosides 4'- fluoro-2' - méthyle substitués |
EA201592185A1 (ru) | 2013-05-16 | 2016-05-31 | Рибосайенс Ллк | 4'-азидо, 3'-дезокси-3'-фторзамещенные нуклеозидные производные |
US20180200280A1 (en) | 2013-05-16 | 2018-07-19 | Riboscience Llc | 4'-Fluoro-2'-Methyl Substituted Nucleoside Derivatives as Inhibitors of HCV RNA Replication |
WO2014197578A1 (en) | 2013-06-05 | 2014-12-11 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | 1',4'-thio nucleosides for the treatment of hcv |
WO2015017713A1 (en) | 2013-08-01 | 2015-02-05 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease |
ES2900570T3 (es) | 2013-08-27 | 2022-03-17 | Gilead Pharmasset Llc | Formulación de combinación de dos compuestos antivirales |
EP3046924A1 (en) | 2013-09-20 | 2016-07-27 | IDENIX Pharmaceuticals, Inc. | Hepatitis c virus inhibitors |
WO2015061683A1 (en) | 2013-10-25 | 2015-04-30 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | D-amino acid phosphoramidate and d-alanine thiophosphoramidate pronucleotides of nucleoside compounds useful for the treatment of hcv |
WO2015066370A1 (en) | 2013-11-01 | 2015-05-07 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | D-alanine phosphoramidate pronucleotides of 2'-methyl 2'-fluoro guanosine nucleoside compounds for the treatment of hcv |
WO2015081297A1 (en) | 2013-11-27 | 2015-06-04 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | 2'-dichloro and 2'-fluoro-2'-chloro nucleoside analogues for hcv infection |
US9717797B2 (en) | 2013-12-05 | 2017-08-01 | International Business Machines Corporation | Polycarbonates bearing aromatic N-heterocycles for drug delivery |
EP3083654A1 (en) | 2013-12-18 | 2016-10-26 | Idenix Pharmaceuticals LLC | 4'-or nucleosides for the treatment of hcv |
WO2015103490A1 (en) | 2014-01-03 | 2015-07-09 | Abbvie, Inc. | Solid antiviral dosage forms |
EP2899207A1 (en) | 2014-01-28 | 2015-07-29 | Amikana.Biologics | New method for testing HCV protease inhibition |
WO2015134561A1 (en) | 2014-03-05 | 2015-09-11 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Pharmaceutical compositions comprising a 5,5-fused heteroarylene flaviviridae inhibitor and their use for treating or preventing flaviviridae infection |
WO2015134560A1 (en) | 2014-03-05 | 2015-09-11 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Solid forms of a flaviviridae virus inhibitor compound and salts thereof |
EP3113763A1 (en) | 2014-03-05 | 2017-01-11 | Idenix Pharmaceuticals LLC | Solid prodrug forms of 2'-chloro-2'-methyl uridine for hcv |
EP3131914B1 (en) | 2014-04-16 | 2023-05-10 | Idenix Pharmaceuticals LLC | 3'-substituted methyl or alkynyl nucleosides for the treatment of hcv |
WO2017189978A1 (en) | 2016-04-28 | 2017-11-02 | Emory University | Alkyne containing nucleotide and nucleoside therapeutic compositions and uses related thereto |
AR112702A1 (es) | 2017-09-21 | 2019-11-27 | Riboscience Llc | Derivados de nucleósidos sustituidos con 4-fluoro-2-metilo como inhibidores de la replicación de hcv arn |
US20220099637A1 (en) | 2018-12-04 | 2022-03-31 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of analysis using in-sample calibration curve by multiple isotopologue reaction monitoring |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1141591A (zh) * | 1994-02-23 | 1997-01-29 | 布·安格莱荻公司分子生物学研究所 | 体外再生丙型肝炎病毒(hcv)ns3蛋白酶的解蛋白活性的方法 |
CN1193997A (zh) * | 1995-08-22 | 1998-09-23 | 布·安格莱荻公司分子生物学研究所 | 产生和纯化并测定具有hcvns3蛋白酶蛋白水解活性的多肽的方法 |
Family Cites Families (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0475255A3 (en) * | 1990-09-12 | 1993-04-14 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Process for the preparation of optically pure (s)-alpha-((tert-butylsulfonyl)methyl)hydro cinnamic acid |
JPH05155827A (ja) * | 1991-12-09 | 1993-06-22 | Banyu Pharmaceut Co Ltd | cis−2−アミノシクロプロパンカルボン酸誘導体の製造法 |
IT1272179B (it) | 1994-02-23 | 1997-06-16 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Metodologia per riprodurre in vitro l'attivita' proteolitica della proteasi ns3 del virus hcv. |
GB9517022D0 (en) | 1995-08-19 | 1995-10-25 | Glaxo Group Ltd | Medicaments |
CA2165996C (en) * | 1995-12-22 | 2002-01-29 | Murray Douglas Bailey | Stereoselective preparation of 2-substituted succinic derivatives |
DE19600034C2 (de) | 1996-01-02 | 2003-12-24 | Degussa | 1,1,2-Trisubstituierte Cyclopropanverbindungen, Verfahren zu deren Herstellung und Dihydroxyethyl-substituierte 1-Amino-cyclopropan-1-carbonsäure |
US5633388A (en) | 1996-03-29 | 1997-05-27 | Viropharma Incorporated | Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C |
EP2409985A3 (en) | 1996-10-18 | 2013-05-01 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors de serine proteases, especially of the NS3 protease of the hepatitis C virus |
JP2002512625A (ja) | 1997-05-29 | 2002-04-23 | メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド | 細胞接着阻害薬としての複素環アミド化合物 |
ES2241157T3 (es) * | 1997-08-11 | 2005-10-16 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. | Peptidos inhibidores de la hepatitis c. |
US6767991B1 (en) | 1997-08-11 | 2004-07-27 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. | Hepatitis C inhibitor peptides |
SE9704543D0 (sv) * | 1997-12-05 | 1997-12-05 | Astra Ab | New compounds |
US6455571B1 (en) * | 1998-04-23 | 2002-09-24 | Abbott Laboratories | Inhibitors of neuraminidases |
DE19835120C1 (de) * | 1998-08-04 | 1999-10-21 | Westfalia Separator Ag | Verfahren und Vorrichtung zum Einstellen des Flüssigkeitsgehalts des aus einer selbstentleerenden Schleudertrommel eines Separators ausgetragenen Feststoffes |
US6323180B1 (en) * | 1998-08-10 | 2001-11-27 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd | Hepatitis C inhibitor tri-peptides |
US6277830B1 (en) * | 1998-10-16 | 2001-08-21 | Schering Corporation | 5′-amino acid esters of ribavirin and the use of same to treat hepatitis C with interferon |
US6608027B1 (en) | 1999-04-06 | 2003-08-19 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd | Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus |
US7091184B2 (en) * | 2002-02-01 | 2006-08-15 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Hepatitis C inhibitor tri-peptides |
US6642204B2 (en) * | 2002-02-01 | 2003-11-04 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Hepatitis C inhibitor tri-peptides |
WO2004101605A1 (en) * | 2003-03-05 | 2004-11-25 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Hepatitis c inhibiting compounds |
ATE486889T1 (de) * | 2003-03-05 | 2010-11-15 | Boehringer Ingelheim Int | Peptidanaloga mit inhibitorischer wirkung auf hepatitis c |
-
1999
- 1999-08-05 US US09/368,866 patent/US6323180B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 DE DE69940817T patent/DE69940817D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 HU HU1300080A patent/HU230701B1/hu unknown
- 1999-08-09 SK SK206-2001A patent/SK286994B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1999-08-09 WO PCT/CA1999/000736 patent/WO2000009543A2/en active Application Filing
- 1999-08-09 CA CA2445938A patent/CA2445938C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 CN CN2007101407405A patent/CN101143892B/zh not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 PH PH11999002002A patent/PH11999002002B1/en unknown
- 1999-08-09 CA CA2338946A patent/CA2338946C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 EP EP99938084A patent/EP1105413B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-09 RS YUP-94/01A patent/RS50798B/sr unknown
- 1999-08-09 RS RSP-2009/0459A patent/RS20090459A/sr unknown
- 1999-08-09 HU HU0105144A patent/HU229262B1/hu unknown
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-
2009
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-
2010
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-
2013
- 2013-04-18 CY CY20131100317T patent/CY1113935T1/el unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1141591A (zh) * | 1994-02-23 | 1997-01-29 | 布·安格莱荻公司分子生物学研究所 | 体外再生丙型肝炎病毒(hcv)ns3蛋白酶的解蛋白活性的方法 |
CN1193997A (zh) * | 1995-08-22 | 1998-09-23 | 布·安格莱荻公司分子生物学研究所 | 产生和纯化并测定具有hcvns3蛋白酶蛋白水解活性的多肽的方法 |
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