ES2241157T3

ES2241157T3 - Peptidos inhibidores de la hepatitis c.

Info

Publication number: ES2241157T3
Application number: ES98939450T
Authority: ES
Inventors: Montse Llinas-Brunet; Marc-Andre Poupart; Jean Rancourt; Bruno Simoneau; Youla Tsantrizos; Dominik Wernic
Original assignee: Boehringer Ingelheim Canada Ltd
Current assignee: Boehringer Ingelheim Canada Ltd
Priority date: 1997-08-11
Filing date: 1998-08-10
Publication date: 2005-10-16
Anticipated expiration: 2018-08-10
Also published as: EP1003775A2; HUP0004853A3; EP1003775B1; DE69829381T2; WO1999007733A2; AU757783B2; CA2294049A1; AU8795698A; PT1003775E; WO1999007733A3; DK1003775T3; DE69829381D1; HUP0004853A2; JP4354632B2; IL134232A0; NZ503262A; ATE291032T1; JP2001512743A

Abstract

La invención se refiere a un compuesto activo contra el virus de la hepatitis C, el cual corresponde a la fórmula (I) donde Q representa CH{sub,2}, a es igual a =, b es igual a = y B representa un derivado de amido. Cuando Q representa N-Y donde Y representa H o alquilo C{sub,1-6}, B representa un derivado de acilo. R{sup,6}, cuando está presente, representa un alquilo C{sub,1-6} opcionalmente sustituido por un carboxilo. Cuando Q representa CH{sub,2} o N-Y, Z representa oxi o tioxo. R{sup,4} representa un alquilo C{sub,1-10}, un cicloalquielo C{sub,3-7} o un (alquilcicloalquilo) C4-10. R{sup,3} representa un alquilo C1-10 opcionalmente sustituido por un carboxilo, un cicloalquilo C3-/ o un (alquilcicloalquilo) C4-10. W representa un derivado de prolina, mientras que R{sup,1}'' representa hidrógeno y que R{sup,1} representa un alquilo C{sub,1-6} opcionalmente sustituido por un tiol. R{sup,1} también puede representar alquenilo C{sub,1-6}, o R{sup,1}'' y R{sup,1} pueden ambos formar un anilloque comprende de 3 a 6 elementos. A representa finalmente hidroxi. Esta invención se refiere también a una sal o a un éster de este compuesto farmacéuticamente aceptables.

Description

Péptidos inhibidores de la hepatitis C.

Campo del invento

El presente invento se refiere a compuestos, composiciones y métodos para el tratamiento de una infección por el virus de la hepatitis C (HCV). En particular, el presente invento proporciona nuevos péptidos y sus análogos, composiciones farmacéuticas que contienen dichos péptidos, y métodos para usar dichos péptidos en el tratamiento de una infección por HCV.

Antecedentes del invento

El virus de la hepatitis C (HCV) es el agente etiológico principal de la hepatitis no A no B posterior a una transfusión y adquirida en comunidades por todo el mundo. Se estima que más de 100 millones de personas por todo el mundo son infectadas por el virus. Un alto porcentaje de los portadores resultan infectados crónicamente y muchos progresan hasta una enfermedad crónica hepática, la denominada hepatitis C crónica. Este grupo se encuentra a su vez en alto riesgo de contraer una grave enfermedad hepática tal como la cirrosis hepática, el carcinoma hepatocelular y la enfermedad hepática terminal que conduce a la muerte.

El mecanismo mediante el cual el HCV establace la persistencia vírica y causa una alta tasa de enfermedades hepáticas crónicas, no ha sido explicado todavía a fondo. No se conoce cómo el HCV interactúa con el sistema inmunitario de un organismo hospedante y lo evade. Además, los papeles de las respuestas inmunitarias celulares y humorales en la protección frente a una infección y una enfermedad de HCV han de ser todavía demostrados. Se ha informado acerca de inmunoglobulinas adecuadas para la profilaxis de la hepatitis vírica asociada con una transfusión. Sin embargo, el Centro de Control de Enfermedades no recomienda actualmente las inmunoglobulinas para esta finalidad.

La falta de una respuesta inmunitaria protectora eficaz está obstaculizando el desarrollo de una vacuna o de adecuadas medidas de profilaxis posteriores a la exposición, de manera tal que, a corto plazo, las esperanzas están firmemente puestas en las intervenciones antivíricas.

Se han realizado diversos estudios clínicos con la meta de identificar agentes farmacéuticos que sean capaces de tratar eficazmente una infección por HCV en pacientes afligidos con una hepatitis C crónica. Estos estudios han implicado el uso del interferón-alfa, a solas y en combinación con otros agentes antivíricos. Dichos estudios han demostrado que un número sustancial de los participantes en ellos no responden a estas terapias, y entre los que sí responden favorablemente, se encontró que una gran proporción de ellos recaen después de la terminación del tratamiento.

Hasta una época reciente, el interferón (IFN) constituía la única terapia disponible con beneficio demostrado que había sido aprobada a escala clínica para pacientes con hepatitis C crónica. Sin embargo, la tasa de respuestas prolongadas es baja, y un tratamiento con interferón induce también graves efectos colaterales (a saber, retinopatía, tiroiditis, pancreatitis aguda, depresión) que disminuyen la calidad de vida de los pacientes tratados. Recientemente, el interferón en combinación con ribavirina ha sido aprobado para pacientes que no responden al IFN a solas. Sin embargo, los efectos colaterales causados por el IFN no son aliviados con esta terapia combinada.

Por lo tanto, existe una necesidad del desarrollo de eficaces agentes antivíricos para el tratamiento de infecciones causadas por el HCV, que solventen las limitaciones de las terapias farmacéuticas existentes.

El HCV es un virus de ARN de cadena positiva con envoltura de la familia de los Flaviviridae. El genoma del ARN del HCV de una única cadena presenta una longitud de aproximadamente 9.500 nucleótidos y tiene un único cuadro de lectura abierto (ORF, de open reading frame) que codifica una única proteína grande de aproximadamente 3.000 aminoácidos. En células infectadas, esta poliproteína es cortada en sitios múltiples por proteasas celulares y víricas para producir las proteínas estructurales y no estructurales (NS, non-structural). En el caso del HCV, la generación de proteínas no estructurales maduras (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A y NS5B) es efectuada por dos proteasas víricas. La primera de ellas, todavía mal caracterizada, corta en la unión entre NS2 y NS3; la segunda de ellas es una proteasa de serina contenida dentro de la región terminal de N de la NS3 (en lo sucesivo citada como proteasa de NS3) y media en todos los cortes subsiguientes realizados secuencia abajo de la NS3, tanto en cis, en el sitio de corte de NS3-NS4A, como en trans, para restantes sitios de NS4A-NS4B, NSAB-NS5A y NS5A-NS5B. La proteína NS4A manifiesta servir para funciones múltiples, actuando como un cofactor para la proteasa de NS3 y ayudando posiblemente a la localización en membranas de la NS3 y otros componentes de replicasas víricas. La formación de un complejo de la proteína NS3 con NS4 parece ser necesaria para los episodios de tratamiento, intensificando la eficiencia proteolítica en todos los sitios. La proteína NS3 exhibe también actividades de nucleósido-trifosfatasas y de ARN-helicasas. La NS5B es una polimerasa de ARN dependiente de ARN, que está implicada en la replicación del HCV.

Una estrategia general para el desarrollo de agentes antivíricos consiste en desactivar las enzimas codificadas por virus que son esenciales para la replicación de los virus. En este contexto, la solicitud de Patente WO 97/06804 describe al enantiómero (-) del compuesto análogo a nucleósido citosina-1,3-oxatiolano (también conocido como 3TC) como activo contra el HCV. Este compuesto, aunque se ha informado como seguro en pruebas clínicas anteriores contra los HIV y HBV, todavía ha de probarse a escala clínica que es activo contra el HCV y su mecanismo de acción contra el virus ha de ser informado todavía.

Intensos esfuerzos para descubrir compuestos que inhiban a la proteasa de NS3 a a la helicasa de ARN del HCV han conducido a las siguientes descripciones:

\bullet: La Patente de los EE.UU. 5.633.388 describe carboxamidas sustituidas con radicales heterocíclicos y compuestos análogos a ellas como siendo activas contra el HCV. Estos compuestos están dirigidos contra la actividad de helicasa que presenta la proteína NS3 del virus, pero todavía no se ha informado sobre ensayos clínicos.

\bullet: Se ha informado por Chu y colaboradores (Tet. Lett., (1996), 7.229-7.232) acerca de una fenantreno-quinona como poseedora de actividad contra la proteasa NS3 del HCV in vitro. No se ha informada de ningún desarrollo ulterior sobre este compuesto.

\bullet: Un artículo presentado en la Novena Conferencia Internacional sobre Investigación Antivírica, en Urabandai, Fukyshima, Japón (1996) (Antiviral Research, 30, 1, 1996; A23 (resumen 19)) informa de que ciertos derivados de tiazolidina son inhibidores de la proteasa del HCV.

Varios estudios han informado sobre compuestos inhibidores de otras proteasas de serina, tales como la elastasa de leucocitos humanos. Una familia de estos compuestos es informada en el documento de Patente PCT WO 95/33764 (Hoechst Marion Roussel, 1995). Los péptidos descritos en esa solicitud son compuestos análogos a péptidos morfolinilcarbonil-benzoil-péptidos que son estructuralmente diferentes de los péptidos del presente invento.

\bullet: El documento WO 98/17679 de Vertex Pharmaceuticals Inc. describe inhibidores de una proteasa de serina, particularmente la proteasa de NS3 del virus de la hepatitis C. Estos inhibidores son compuestos análogos a péptidos basados en el substrato natural NS5A/5B que contiene una función carbonílica activada en el extremo terminal de C como una característica esencial. Se informó también de que estos péptidos son activos contra otra proteasa de serina y por lo tanto no son específicas para la proteasa de NS3 del HCV.

\bullet: Hoffman LaRoche ha informado también acerca de hexapéptidos que son inhibidores de proteinasas útiles como agentes antivíricos para el tratamiento de una infección por HCV. Estos péptidos contienen un aldehído y un ácido borónico en el extremo terminal de C.

\bullet: Steinkúhler y colaboradores, e Ingallinella y colaboradores han publicado acerca de la inhibición del producto NS4A-4B (Biochemistry (1998), 37, 8.899-8.905 y 8.906-8.914). Estos péptidos y compuestos análogos a péptidos fueron publicados después de la fecha de prioridad de la presente solicitud.

Una ventaja del presente invento consiste en que proporciona péptidos que son inhibidores de la proteasa de NS3 del virus de la hepatitis C.

Una ventaja adicional de un aspecto del presente invento reside en el hecho de que estos péptidos inhiben específicamente a la proteasa de NS3 y no presentan ninguna importante actividad inhibidora en concentraciones hasta de 300 \muM contra otras proteasas de serina tales como la elastasa de leucocitos humanos (HLE, de human leukocyte elastase), la elastasa pancreática porcina (PPE, de porcine pancreatic elastase), o la quimotripsina pancreática bovina, o proteasas de cisteína tales como la catepsina B (Cat B) de hígado humano.

Sumario del invento

Los autores del presente invento hemos investigado sobre péptidos que son potencialmente inhibidores de la proteasa de NS3. El descubrimiento de que el producto de corte en el extremo terminal de N (Ac-D-I-V-P-C-OH) de un compuesto análogo a un substrato natural de la proteasa de NS3 era inhibidor nos condujo a los compuestos análogos a péptidos del presente invento.

Se describen compuestos de la fórmula (I)

1

en que Q es CH_{2} o N-Y en que Y es H o alquilo C_{1-6};

a) cuando Q es CH_{2}, a es 0, y B es un derivado de amida que tiene la fórmula R_{11a}N(R_{11b})-C(O)- en que R_{11a} es H, alquilo C_{1-10},opcionalmente sustituido con carboxilo o di(alquil C_{1}-C_{6})amino; arilo C_{6}; alquilarilo C_{7-10}; cicloalquilo C_{3-7} opcionalmente sustituido con carboxilo; (cicloalquil C_{3-7})-(alquil C_{1-6}); heterociclil-alquilo C_{1-6} tal como

2

y R_{11b} es alquilo C_{1-6} sustituido con carboxilo, (alcoxi C_{1-6})carbonilo o fenilmetoxicarbonilo; o arilalquilo C_{7-16} sustituido en la porción aromática con carboxilo; (alcoxi C_{1-6})carbonilo o fenilmetoxicarbonilo o heterociclil-alquilo C_{1-6};

o R_{11a} y R_{11b} están unidos para formar un anillo que contiene nitrógeno de 3 a 7 miembros, opcionalmente sustituido con carboxilo o (alcoxi C_{1-6})-carbonilo; o

b) cuando Q es N-Y, a es 0 ó 1, b es 0 ó 1, y B es un derivado de acilo que tiene la fórmula R_{11}-C(O)- en que R11 es (i) alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo, alcanoiloxi C_{1-6} (p.ej. AcOCH_{2}) o alcoxi C_{1-6} (p.ej. Boc); (ii) cicloalquilo C_{3-7} opcionalmente sustituido con carboxilo, (alcoxi C_{1-6})carbonilo o fenilmetoxicarbonilo; (iii) cicloalquilo C_{3-7} sustituido con carboxilo y uno a tres sustituyentes del tipo de alquilo C_{1-6}; (iv) (alquilciclo-alquilo) C_{4-10} opcionalmente sustituido en la porción de cicloalquilo con carboxi, (alcoxi C_{1-6})carbonilo o fenil-metoxi-carbonilo; (v)

3

4

arilo C_{6} o C_{10} o arilalquilo C_{7-16} opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-6};

R_{6}, cuando está presente, es alquilo C_{1-6} sustituido con carboxilo;

R_{5}, cuando está presente, es alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con carboxilo;

o

cuando Q es o bien CH_{2} o N-Y;

c) R_{4} es alquilo C_{1-10}, cicloalquilo C_{3-7} o (alquilcicloalquilo) C_{4-10};

Z es oxo o tioxo;

R_{3} es alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo; cicloalquilo C_{3-7} o (alquilcicloalquilo) C_{4-10};

W es un grupo de la fórmula III':

5

en donde R_{13} es OH; SH; NH_{2}; carboxilo; R_{12}; O R_{12}, S R_{12}, NH R_{12}, o N R_{12} R_{12'}, en donde R_{12} y R_{12'} son, independientemente:

: alquilo C_{3-16} cíclico o alquilo C_{1-16} acíclico o alquenilo C_{3-16} cíclico o alquenilo C_{2-16} acíclico, estando dichos alquilo o alquenilo opcionalmente sustituidos con NH_{2}, OH, SH, halo o carboxilo; conteniendo dichos alquilo o alquenilo opcionalmente por lo menos un heteroátomo seleccionado independientemente entre el grupo que consta de: O, S y N;

: o

: R_{12} y R_{12'} son independientemente arilo C_{6} ó C_{10} o arilalquilo C_{7-16} opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, NH_{2}, OH, SH, halo, carboxilo, alquilo C_{1-6} sustituido con carboxilo o caboxi-alquilo (inferior);

: conteniendo dichos arilo o arilalquilo opcionalmente por lo menos un heteroátomo seleccionado independientemente entre el grupo que consta de: 0, S y N;

: estando dichos alquilo cíclico, alquenilo cíclico, arilo o arilalquilo opcionalmente condensados con un segundo anillo de 5, 6 ó 7 miembros para formar un sistema cíclico o un sistema heterocíclico, estando dicho segundo anillo opcionalmente sustituido con NH_{2}, OH, SH, halo, carboxilo o carboxi-alquilo(C_{1-6});

: conteniendo dicho segundo anillo opcionalmente por lo menos un heteroátomo seleccionado independientemente entre el grupo que consta de: 0, S y N;

R_{1}' es hidrógeno, y R_{1} es propilo; o R_{1}' y R_{1} conjuntamente forman un anillo de 3 miembros opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-6}; y

A es hidroxi o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables.

Se incluye dentro del alcance de este invento una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz contra el virus de la hepatitis C de un compuesto de fórmula I, o una de sus sales o ésteres terapéuticamente aceptables, en mezcla con un medio de soporte o agente auxiliar farmacéuticamente aceptable.

Un importante aspecto del invento implica a un método para tratar una infección causada por el virus de la hepatitis C en un mamífero, por administración al mamífero de una cantidad eficaz contra el virus de la hepatitis C del compuesto de fórmula I, o una de sus sales o ésteres terapéuticamente aceptables, o de una composición como antes se ha descrito.

Otro aspecto importante implica a un método para inhibir la replicación del virus de la hepatitis C, exponiendo a este virus a una cantidad inhibidora de la proteasa de NS3 del virus de la hepatitis C del compuesto de formula I, o una de sus sales o ésteres terapéuticamente aceptables, o de una composición como antes se ha descrito.

Todavía otro aspecto implica a un método para tratar una infección causada por el virus de la hepatitis C en un mamífero, por administración a éste de una cantidad eficaz contra el virus de la hepatitis C de una combinación del compuesto de fórmula I, o una de sus sales o ésteres terapéuticamente aceptables, y de un interferón. Una composición farmacéutica que comprende la combinación en mezcla con un medio de soporte o agente auxiliar farmacéuticamente aceptable se encuentra también dentro del alcance de este invento.

Descripción detallada del invento

Como se usa en el presente contexto, se aplican las siguientes definiciones, a menos que se señale otra cosa distinta:

Con referencia a los casos en los que se use (R) o (S) para designar la configuración de un radical, p.ej. R_{4} del compuesto de fórmula I, la designación se hace en el contexto del compuesto y no en el contexto del radical a solas.

Los aminoácidos naturales, con excepción de la glicina, contienen un átomo de carbono quiral. A menos que se indique específicamente otra cosa distinta, se prefieren los compuestos que contienen aminoácidos naturales con la configuración L. Sin embargo, los solicitantes consideran que, cuando se especifique, algunos aminoácidos de la formula I pueden ser de configuración D ó L o pueden ser mezclas de isómeros D y L, inclusive las mezclas racémi-
cas.

La designación "P1, P2, P3, etc." como se usa en el presente contexto, se refiere a la posición de los residuos de aminoácidos comenzando desde el extremo terminal de C de los compuestos análogos a péptidos y extendiéndose hacia el extremo terminal de N (es decir, P1 se refiere a la posición 1 desde el extremo terminal de C; P2 es la segunda posición desde el extremo terminal de C, etc.) (véase Berger A. & Schechter I., Transactions of the Royal Society London series B257, 249-264 (1970)).

Las abreviaturas para los \alpha-aminoácidos se exponen en la Tabla A.

TABLA A

Aminoácido	Símbolo
Alilglicina	AlGly
Ácido aminobutírico	Abu
Ácido 1-amino-ciclopentilcarboxílico	Acpe
Ácido 1-amino-ciclopropilcarboxílico	Acca
Alanina	Ala
Ácido aspártico	Asp
Cisteína	Cys
Ciclohexilalanina	Cha
Ciclohexilglicina (también denominada ácido 2-amino-2-ciclohexil-acético)	Chg
Ácido glutámico	Glu
Isoleucina	Ile
Leucina	Leu
Norvalina	Nva
Fenilalanina	Phe
Ácido pipecólico	Pip
Prolina	Pro
4 (R)-Hidroxi-prolina	Hyp
4 (R)-Benciloxi-prolina	Hyp(4-Bn)
Valina	Val
terc.-Butilglicina	Tbg

Como se usa en el presente contexto, el término "ácido aminobutírico" se refiere a un compuesto de fórmula:

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Como se usa en el presente contexto, el término "alilglicina" se refiere a un compuesto de fórmula:

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Como se usa en el presente contexto, el término "ácido 1-amino-ciclopropilcarboxílico" (Acca) se refiere a un compuesto de fórmula:

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Como se usa en el presente contexto, el término "terc.-butilglicina" se refiere a un compuesto de fórmula:

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El término "residuo" haciendo referencia a un aminoácido o derivado de aminoácido significa un radical derivado del correspondiente \alpha-aminoácido eliminando el hidroxilo del grupo carboxi y un hidrógeno del grupo \alpha-amino. Por ejemplo, los términos Gln, Ala, Gly, Ile, Arg, Asp, Phe, Ser, Leu, Cys, Asn, Sar y Tyr representan a los "residuos" de L-glutamina, L-alanina, glicina, L-isoleucina, L-arginina, L-ácido aspártico, L-fenilalanina, L-serina, L-leucina, L-cisteína, L-asparagina, sarcosina y L-tirosina, respectivamente.

El término "cadena lateral" haciendo referencia a un aminoácido o residuo de aminoácido significa un grupo unido al átomo de carbono del \alpha-aminoácido. Por ejemplo, la cadena lateral grupo R para glicina es hidrógeno, para alanina es metilo, para valina es isopropilo. Para los grupos R o cadenas laterales específicos de los \alpha-aminoácidos se hace referencia al texto de A.L. Lehninger sobre bioquímica (véase el capítulo 4).

El término "halo" como se usa en el presente contexto, significa un radical de halógeno seleccionado entre bromo, cloro, fluoro o yodo.

El término "alquilo C_{1-6}" o "alquilo(inferior)" como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa radicales alquilo de cadena lineal o ramificada que contienen hasta seis átomos de carbono e incluyen, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, butilo, hexilo, 1-metil-etilo, 1-metil-propilo, 2-metil-propilo, 1,1-dimetil-etilo.

Similarmente, los términos "alquilo C_{1-3}", "alquilo C_{1-4}" y "alquilo C_{1-10}" se usan para designar radicales alquilo que contienen hasta tres, cuatro y diez átomos de carbono, respectivamente.

El término "cicloalquilo C_{3-7}", como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa un radical cicloalquilo que contiene de tres a siete átomos de carbono, e incluye ciclopropilo, ciclobutilo, ciclohexilo y cicloheptilo.

El término "(alquilcicloalquilo) C_{4-10}" como se usa en el presente contexto, significa un radical cicloalquilo que contiene de tres a siete átomos de carbono en enlazados a un radical alquilo, conteniendo los radicales enlazados hasta diez átomos de carbono; por ejemplo ciclopropilmetilo, ciclopentiletilo, ciclohexilmetilo, ciclohexiletilo o cicloheptiletilo.

El término "alquenilo C_{2-10}", como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa un radical alquilo como se ha definido anteriormente que contiene de 2 a 10 átomos de carbono, y contiene además por lo menos un doble enlace. Por ejemplo, alquenilo incluye el alilo.

El término "alquileno C_{3-4}" como se usa en el presente contexto, significa un radical alquilo divalente obtenido por la eliminación de dos átomos de hidrógeno a partir de un hidrocarburo alifático de cadena lineal o ramificada, que contiene de tres a cuatro átomos de carbono e incluye, por ejemplo, -CH_{2}CH_{2}CH_{2}-, -CH(CH_{3})CH_{2}CH_{2}-, -CH_{2}C
(CH_{3})_{2}- y -CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}-.

El término "alcoxi C_{1-6}", como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa el radical -O-alquilo C_{1-6} en el que el alquilo es como antes se ha definido, que contiene hasta seis átomos de carbono. El alcoxi incluye metoxi, etoxi, propoxi, 1-metil-etoxi, butoxi y 1,1-dimetil-etoxi. Este último radical es conocido corrientemente como terc.-butoxi.

El término "arilo C_{6} ó C_{10}" como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa o bien un sistema monocíclico aromático que contiene 6 átomos de carbono o un sistema cíclico aromático que contiene 10 átomos de carbono. Por ejemplo, arilo incluye fenilo o naftilo.

El término "arilalquilo C_{7-16}" como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa un radical arilo como antes se ha definido enlazado a través de un grupo alquilo, en que el alquilo es como se ha definido anteriormente que contiene de 1 a 6 átomos de carbono. El arilalquilo incluye, por ejemplo, bencilo y butilfenilo.

El término "carboxi-alquilo (inferior)" como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa un grupo carboxilo (COOH) enlazado a través de un grupo alquilo (inferior) como antes se ha definido e incluye por ejemplo ácido butírico o los grupos:

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El término "cíclico" o "sistema cíclico" como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa un radical monovalente obtenido por eliminación de un hidrógeno a partir de un hidrocarburo cíclico saturado o insaturado, que contiene de tres a siete átomos de carbono, a menos que se indique otra cosa distinta, y que opcionalmente contiene uno o más heteroátomos. El término cíclico o sistema cíclico incluye, por ejemplo, ciclopropano, ciclopentano, ciclohexano, ciclohexeno, decalina, tetralina, indeno y naftaleno.

El término "heterociclo" como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa un radical monovalente obtenido por eliminación de un hidrógeno a partir de un heterociclo saturado o insaturado de cinco, seis o siete miembros, que contiene de uno a cuatro heteroátomos seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre. Ejemplos de heterociclos apropiados incluyen: pirrolidina, tetrahidrofurano, tiazolidina, pirrol, tiofeno, diazepina, 1H-imidazol, 1-metil-1H-imidazol, isoxazol, tiazol, 2-metil-tiazol, 2-amino-tiazol, piperidina, 1,4-dioxano, 4-morfolina, piridina, 2-metil-piridina, pirimidina, 4-metil-pirimidina y 2,4-dimetil-pirimidina.

El término "sistema heterocíclico" como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa un heterociclo como antes se ha definido, condensado con uno o más de otros ciclos, ya se trate de un heterociclo o de cualguier otro tipo de ciclo. Ejemplos de sistemas heterocíclicos apropiados incluyen: tiazolo[4,5-b]-piridina, quinolina o indol.

El término "éster farmacéuticamente aceptable" como se usa en el presente contexto, o bien a solas o en combinación con otro radical, significa ésteres del compuesto de formula I en los que cualquiera de las funciones carboxilo de la molécula, pero preferiblemente el extremo terminal de carboxi, se ha reemplazado por una función alcoxicarbonilo:

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en la que el resto R del éster se selecciona entre alquilo (p.ej. metilo, etilo, n-propilo, t-butilo, n-butilo); alcoxialquilo (p.ej. metoximetilo); alcoxiacilo (p.ej. acetoximetilo); arilalquilo (p.ej. bencilo); ariloxialquilo (p.ej. fenoximetilo); arilo (p.ej. fenilo), opcionalmente sustituidos con halógeno, alquilo C_{1-4} o alcoxy C_{1-4}. Otros ésteres profármacos apropiados pueden encontrarse en la obra de Design of produgs, Bundgaard, H., coordinador de edición, Elsevier (1985). Dichos ésteres farmacéuticamente aceptables son usualmente hidrolizados in vivo cuando se inyectan a un mamífero y se transforman a la forma de ácido del compuesto de fórmula I.

El término "sal farmacéuticamente aceptable" como se usa en el presente contexto, incluye las sales que se derivan de bases farmacéuticamente aceptables. Ejemplos de bases apropiadas incluyen colina, etanolamina y etilendiamina. Se considera también que las sales de Na^{+}, K^{+} y Ca^{++} están dentro del alcance del invento (véase también Pharmaceutical salts, Birge, S.M. y colaboradores, J. Pharm. Sci. (1977), 66, 1-19).

Realizaciones preferidas

Un grupo adicionalmente preferido de compuestos lo constituyen los representados por la fórmula Ia:

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en la que Y es H o alquilo C_{1-6};

a es 0 ó 1;

b es 0 ó 1;

B es un derivado de acilo de fórmula R_{11}-C(O)- en la que R_{11} es (i) alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo, alcanoiloxi C_{1-6} o alcoxi C_{1-6}; (ii) cicloalquilo C_{3-7} opcionalmente sustituido con carboxilo, (alcoxi C_{1-6})carbonilo o fenilmetoxicarbonilo; (iii) cicloalquilo C_{3-7} sustituido con carboxilo y uno a tres sustituyentes alquilo C_{1-6} (iv) (alquilcicloalquilo) C_{4-10} opcionalmente sustituido en la porción de cicloalquilo con carboxi, (alcoxi C_{1-6})-carbonilo o fenilmetoxicarbonilo; (v)

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arilo C_{6} ó C_{10} o arilalquilo C_{7-16} opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-6};

R_{6}, cuando está presente, es alquilo C_{1-6} sustituido con carboxilo;

R_{5}, cuando está presente, es alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con carboxilo; y

R_{4}, es alquilo C_{1-10}, cicloalquilo C_{3-7} o (alquilcicloalquilo) C_{4-10};

R_{3}, W, R_{1}, R_{1'} y A son como antes se han definido.

Preferiblemente, B es un derivado de acilo de fórmula R_{11}C(O)- en la que R_{11} es: alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con carboxilo, alcanoiloxi C_{1-6} o alcoxi C_{1-6}; cicloalquilo C_{3-7} opcionalmente sustituido con carboxilo, MeOC(O), EtOC(O) ó BnOC(O);

3-carboxi-propionilo (DAD) o 4-carboxi-butirilo (DAE); o

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Más preferiblemente, B es acetilo, 3-carboxi-propionilo, 4-carboxi-butirilo, AcOCH_{2}C(O), Me_{3}COC(O),

16

17

18

Todavía más preferiblemente, B es acetilo, 3-carboxi-propionilo (DAD), 4-carboxi-butirilo (DAE), AcOCH_{2}C (0),

19

Lo más preferiblemente, B es acetilo.

Preferiblemente, R_{6}, cuando está presente, es la cadena lateral de Asp ó Glu.

Lo más preferiblemente, R_{6}, cuando está presente, es la cadena lateral de Asp.

Alternativamente, de modo preferible, a es 0 y entonces R_{6} está ausente.

Preferiblemente, R_{5}, cuando está presente, es la cadena lateral de un aminoácido seleccionado entre el grupo que consta de: D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Val, L-Val, D-terc.-butilglicina (Tbg) y L-Tbg.

Más preferiblemente, R_{5}, cuando está presente, es laf cadena lateral de D-Asp, D-Val ó D-Glu.

Lo más preferiblemente, R_{5}, cuando está presente, es la cadena lateral de D-Glu.

Alternativamente, de modo preferible a es 0 y b es 0, y entonces están ausentes tanto R_{6} como R_{5}.

Alternativamente, otro grupo preferido de compuestos es el de los representados por la fórmula (Ib)

20

en la que B es preferiblemente una amida de fórmula R_{11a}N(R_{11b})C(O)- en la que R_{11a} es preferiblemente alquilo C_{1-6}, opcionalmente sustituido con carboxi, arilo C_{6}, arilalquilo C_{7-10}, 2-tetrahidrofuranilmetilo o 2-tiazolidilmetilo;

y R_{11b} es preferiblemente alquilo C_{1-4} sustituido con carboxilo.

Lo más preferiblemente, R_{11a} es isopropilo, carboxietilo, bencilmetilo, bencilo, o 2-tetrahidrofuranilmetilo. Lo más preferiblemente R_{11b} es alquilo C_{1-4} sustituido con carboxilo. Lo más preferiblemente R_{11b} es etil-carboxilo.

Los compuestos del invento incluyen compuestos de fórmula I en los que, preferiblemente, R4 se selecciona entre el grupo que consta de: isopropilo, ciclopropilo, ciclohexilo, terc.-butilo, 1-metil-propilo y 2-metil-propilo.

Más preferiblemente, R_{4} es ciclopropilo o 1-metil-propilo.

Lo más preferiblemente, R4 es ciclopropilo.

Los compuestos del invento incluyen compuestos de la fórmula I en la que Z es preferiblemente oxo.

Los compuestos del invento incluyen compuestos de fórmula I en los que, preferiblemente, R_{3} es la cadena lateral de un aminoácido seleccionado entre el grupo que consta de: Ile, alo-Ile, Chg, Cha, Val, Tbg o Glu.

Más preferiblemente, R_{3} es la cadena lateral de Val, Tbg o Chg.

Lo más preferiblemente, R_{3} es la cadena lateral de Val.

En la fórmula III':

21

R_{13} es OH; SH; NH_{2} carboxilo; R_{12};OR_{12}, SR_{12}, NHR_{12} ó NR_{12}R_{12}' en que R_{12} y R_{12}' son independientemente:

: alquilo C_{3-16} cíclico o alquilo C_{1-16} acíclico o alquenilo C_{3-16} cíclico o alquenilo C_{2-16} acíclico, estando dichos alquilo o alquenilo opcionalmente sustituidos con NH_{2}, OH, SH, halo o carboxilo; conteniendo dichos alquilo o alquenilo opcionalmente por lo menos un heteroátomo seleccionado independientemente entre el grupo que consta de: 0, S y N;

: o

: R_{12} y R_{12'} son independientemente arilo C_{6} ó C_{10} o arilalquilo C_{7-16} opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, NH_{2}, OH, SH, halo, carboxilo o carboxi-alquilo (C_{1-6}); conteniendo dichos arilo o arilalquilo opcionalmente por lo menos un heteroátomo seleccionado independientemente entre el grupo que consta de: O, S y N;

: estando dichos alquilo cíclico, alquenilo cíclico, arilo o arilalquilo opcionalmente condensados con un segundo anillo de 5, 6 ó 7 miembros para formar un sistema cíclico o un sistema heterocíclico, estando dicho segundo anillo opcionalmente sustituido con NH_{2}, OH, SH, halo, carboxilo o carboxi-alquilo(inferior); conteniendo dicho segundo anillo opcionalmente por lo menos un heteroátomo seleccionado independientemente entre el grupo que consta de: O, S y N.

Lo más preferiblemente, R_{13} es OR_{12} ó SR_{12} en que R_{12} es un arilo C_{6} ó C_{10} o arilalquilo C_{7-16}, estando dichos primeros arilo o arilalquilo opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-7}, NH_{2}, OH, SH, halo, alcoxi C_{1-6}, carboxilo, carboxi-alquilo(inferior) o un segundo arilo o arilalquilo; conteniendo dichos primeros y segundos arilo o arilalquilo opcionalmente por lo menos un heteroátomo seleccionado independientemente entre el grupo que consta de: O, S y N.

Lo más preferiblemente, R_{13} es Bn; PhCH_{2}CH_{2}; PhCH_{2}CH_{2}CH_{2}; O-Bn; o-tolilmetoxi; m-tolilmetoxi; p-tolilmetoxi; 1-naftilo-xi; 2-naftiloxi; 1-naftalenilmetoxi; 2-naftalenilmetoxi; (4-terc.-butil)metoxi; (3I-Ph)CH_{2}O; (4Br-Ph)O; (2Br-Ph)O; (3Br-Ph)O; (4I-Ph)O; (3Br-Ph)CH_{2}O; (3,5-Br_{2}-Ph)CH_{2}O;

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Todavía lo más preferiblemente, R_{13} es PhCH_{2}CH_{2}CH_{2}; O-Bn; 1-naftiloxi; 2-naftiloxi; 1-naftalenilmetoxi; 2-naftalenilmetoxi;

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29

R_{1'} es hidrógeno y R_{1} es propilo.

Alternativamente, de modo preferible, R_{1'} y R_{1} en conjunto forman un anillo de 3 miembros, estando dicho anillo opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-6}, tal como etilo. Por ejemplo, R_{1'} y R_{1} conjuntamente pueden ser la cadena lateral (mostrada en letra negrita) del siguiente aminoácido:

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citado como ácido 1-amino-ciclopropilcarboxílico (Acca).

Se incluyen además en el presente invento los compuestos de fórmula I en la que A es preferiblemente hidroxi, o una de sus sales o ésteres. Más preferiblemente, A es hidroxi o uno de sus ésteres. Lo más preferiblemente, A es hidroxi.

Más preferiblemente, el éster es de alcoxi C_{1-6} o de (aril-alcoxi C_{1-6}). Lo más preferiblemente, el éster es metoxi, etoxi, fenoxi o benciloxi.

Se incluyen en el alcance del invento los compuestos de formula I en la que Q es CH_{2}, a es 0, b es 0, y entonces B es una amida de fórmula R_{11a}N(R_{11b})-C(O)- en la que R_{11a} es alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-6}, (alquilcicloalquilo) C_{3-7}, opcionalmente sustituido con carboxi, carboxialquilo C_{1-3}, fenilo, arilalquilo C_{7-10}, 2-tetrahidrofuranilmetilo, o 2-tiazolidilmetilo; y R_{11b} es fenilo; o alquilo C_{1-6} sustituido con carboxilo o carboxi-alquilo C_{1-4};

o

Q es N-Y en que Y es H o alquilo C_{1-6}; a es 0 ó 1; b es 0 ó 1; y B es un derivado de acilo de fórmula R_{11}-C(O)- en que R_{11} es (i) alquilo C_{1-6}, alquilo C_{1-6} sustituido con carboxilo, MeC(O)O-, MeO-, EtO-, MeCH_{2}CH_{2}O- ó Me_{3}C-O-; (ii) ciclopentilo o ciclohexilo opcionalmente sustituido con carboxilo; (iv) (alquilcicloalquilo) C_{4-10} opcionalmente sustituido en la porción de cicloalquilo con carboxilo;

(v)

31

(vi) fenilo, bencilo o feniletilo;

R_{6}, cuando está presente, es CH_{2}COOH ó CH_{2}CH_{2}COOH,

R_{5}, cuando está presente, es alquilo C_{1-6} o CH_{2}COOH ó CH_{2}CH_{2}COOH;

y cuando Q es o bien CH_{2} o N-Y,

R_{4} es alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-7} o (alquilcicloalquilo) C_{4-10};

Z es oxo o tio;

R_{3} es alquilo C_{1-6}; cicloalquilo C_{3-7} o (alquilcicloalquilo) C_{4-10};

W es un grupo de fórmula III' tal como se define previamente.

R_{1'} es hidrógeno y R_{1} es propilo; o R_{1'} y R_{1} conjuntamente con el átomo de carbono al que están unidos forman un ciclopropilo que opcionalmente puede estar sustituido con etilo; y

A es hidroxi o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; alcoxi C_{1-6} o (aril-alcoxi C_{1-6}).

Se incluyen en el alcance del invento compuestos de fórmula Ia, en la que B es un derivado de acilo de fórmula R_{11}-C(O)- en que R_{11} es alcoxi C_{1-6}, alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo; cicloalquilo C_{3-7} opcionalmente sustituido con carboxilo o bencilcarboxi; o

32

R_{6} está ausente;

R_{5} está ausente;

R_{4} es alquilo C_{1-10}, cicloalquilo C_{3-7} o (alquilcicloalquilo) C_{4-10};

R_{3} es alquilo C_{1-10}, cicloalquilo C_{3-7} o (alquilcicloalquilo) C_{4-10};

W es un grupo de fórmula III' tal como se define previamente;

y

A es hidroxi o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; metoxi, etoxi, fenoxi o benciloxi.

Se incluyen en el alcance del invento compuestos de fórmula Ia, en la que B es acetilo, 3-carboxi-propionilo, 4-carboxi-butirilo, AcOCH_{2}C(O), Me_{3}COC(O),

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Y es H ó Me, a es 0 ó 1, b es 0 ó 1,

R_{6}, cuando está presente, es la cadena lateral de Asp ó Glu,

R_{5}, cuando está presente, es la cadena lateral de Asp, D-Asp, Glu, D-Glu, Val, D-Val ó Tbg,

R_{4} es la cadena lateral de Val, Chg, Tbg, Ile ó Leu,

Z es oxo o tioxo,

R_{3} es hidrógeno o la cadena lateral de Ile, Chg, Val, Glu;

W es el grupo de fórmula III':

36

en la que R_{13} es Bn, PhCH_{2}CH_{2}, PhCH_{2}CH_{2}CH_{2}, O-Bn, o-tolilmetoxi, m-tolilmetoxi, p-tolilmetoxi, 1-naftalenilmetoxi, 2-naftalenilmetoxi, (4-terc.-butil)benciloxi, (3I-Ph)CH_{2}O, (4Br-Ph)O, (2Br-Ph)O, (3Br-Ph)O, (4I-Ph)O, (3Br-Ph)CH_{2}O, (3,5-Br_{2}-Ph)CH_{2}O,

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R_{1'} es H y R_{1} es propilo; o

R_{1'} y R_{1} conjuntamente con el átomo de carbono al que están unidos forman un ciclopropilo; y A es hidroxilo.

También se incluyen dentro del alcance del invento los compuestos de formula Ib, en la que B es una amida de fórmula R_{11a}N(R_{11b})-C(O)- en la que R_{11a} es alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-6}, (alquilcicloalquilo) C_{3-7} opcionalmente sustituido con carboxi, carboxi-alquilo C_{1-3}, fenilo, arilalquilo C_{7-10}, 2-tetrahidrofuranilmetilo, o 2-tiazolidilmetilo; y R_{11b} es fenilo; o alquilo C_{1-6} sustituido con carboxilo o carboxi-alquilo C_{1-4};

R_{4} es ciclohexilo;

Z es oxo;

R_{3} es hidrógeno o la cadena lateral de Ile, Chg, Val, Glu;

W es un grupo de fórmula III':

43

en que R_{13} es Bn, PhCH_{2}CH_{2}, PhCH_{2}CH_{2}CH_{2}, O-Bn, o-tolilmetoxi, m-tolilmetoxi, p-tolilmetoxi, 1-naftalenilmetoxi, 2-naftalenil-metoxi, (4-terc.-butil)benciloxi, (3I-Ph)CH_{2}O, (4Br-Ph)O,(2Br-Ph)O, (3Br-Ph)O, (4I-Ph)O, (3Br-Ph)CH_{2}O, (3,5-Br_{2}-Ph)CH_{2}O,

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R_{1'} es H y R_{1} es propilo; o

También se describen compuestos de fórmula I:

en la que B es un derivado de acilo de fórmula R_{11}-C(O)-en que R_{11} es alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo; cicloalquilo C_{3-7} opcionalmente sustituido con carboxilo; o un (alquilcicloalquilo) C_{4-10} opcionalmente sustituido en la porción de cicloalquilo con carboxilo; o R11 es arilo C_{6} ó C_{10} o arilalquilo C_{7-16} opcionalmente sustituido con un alquilo C_{1-6};

a es 0 ó 1;

R_{6}, cuando está presente, es alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con carboxilo;

b es 0 ó 1;

Q es N-Y en que Y es H o alquilo C_{1-6};

Z es oxo;

R_{3} es alquilo C_{1-10} cicloalquilo C_{3-7} o (alquilcicloalquilo) C_{4-10};

W es un grupo de fórmula III' tal como se define previamente.

R_{1'} es hidrógeno, y R_{1} es propilo; o

R_{1'} y R_{1} conjuntamente forman un anillo de 3 miembros opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-6}; y

A es OH o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables.

Finalmente, se incluyen en el alcance del invento todos los compuestos de fórmula I presentados en las Tablas 1 a 4.

De acuerdo con una realización alternativa, las composiciones farmacéuticas de este invento pueden comprender adicionalmente un agente antivírico. Ejemplos de agentes antivíricos incluyen ribavirina y amantadina.

De acuerdo con otra realización alternativa, las composiciones farmacéuticas de este invento pueden comprender adicionalmente otros inhibidores de la proteasa de HCV.

De acuerdo con todavía otra realización alternativa, las composiciones farmacéuticas de este invento pueden comprender adicionalmente un inhibidor de otras dianas en el ciclo de vida del HCV, tales como helicasa, polimerasa o metaloproteasa.

Las composiciones farmacéuticas de este invento se pueden administrar por vía oral, parenteral o a través de un reservorio implantado. Nosotros preferimos la administración por vía oral o la administración por inyección. Las composiciones farmacéuticas de este invento pueden contener cualesquiera de los soportes, adyuvantes o vehículos farmacéuticamente aceptables y no tóxicos. En algunos casos, el pH de la formulación se puede ajustar con ácidos, bases a tampones farmacéuticamente aceptables para intensificar la estabilidad del compuesto formulado o de su forma de suministro. El término parenteral incluye, tal como se usa en el presente contexto, técnicas de inyección o infusión subcutáneas, intracutáneas, intravenosas, intramusculares, intraarticulares, intrasinoviales, intraesternales, intratecales e intralesionales.

Las composiciones farmacéuticas pueden estar en la forma de una preparación inyectable estéril, por ejemplo, en la de una suspensión acuosa u oleaginosa inyectabla estéril. Esta suspensión se puede formular de acuerdo con técnicas conocidas en el sector de la tecnología usando apropiados agentes dispersantes a humectantes (tales como, por ejemplo, Tween 80) y agentes suspendedores.

Las composiciones farmacéuticas de este invento se pueden administrar por vía oral en cualquier forma de dosificación aceptable por vía oral, inclusive, pero sin limitarse a, cápsulas, tabletas, así como suspensiones y soluciones acuosas. En el caso de las tabletas para uso oral, los soportes que se usan corrientemente incluyen lactosa y almidón de maíz. Se añaden también típicamente agentes lubricantes tales como estearato de magnesio. Para la administración por vía oral en la forma de una cápsula, diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz seco. Cuando se administran por vía oral suspensiones acuosas, el ingrediente activo se combina con agentes emulsionantes y suspendedores. Si se desea, se pueden añadir ciertos agentes edulcorantes y/o saboreantes y/o colorantes.

Otros vehículos o soportes apropiados para las formulaciones y composiciones antes señaladas pueden encontrarse en textos farmacéuticos clásicos, p.ej. en la obra "Remington's Pharmaceutical Sciences", The Science and Practice of Pharmacy, 19ª edición Mack Publishing Company, Easton, Penn., (1995).

Unos niveles de dosificación comprendidos entre aproximadamente 0,01 y aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día, con preferencia entre alrededor de 0,5 y alrededor de 75 mg/kg de peso corporal por día de las compuestos inhibidores de proteasas descritos en el presente texto son útiles en una monoterapia para la prevención y el tratamiento de una enfermedad mediada por el HCV. Típicamente, las composiciones farmacéuticas de este invento se administrarán entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5 veces por día, o alternativamente, en forma de una infusión continua. Dicha administración se puede usar como una terapia crónica o aguda. La cantidad del ingrediente activo que se puede combinar con los materiales de soporte para producir una única forma de dosificación variará dependiendo del hospedante tratado y del modo particular de administración. Una preparación típica contendrá entre aproximadamente 5% y aproximadamente 95% de compuesto activo (en peso/peso = p/p). Preferiblemente, tales preparaciones contienen entre aproximadamente 20% y aproximadamente 80% del compuesto activo.

Como lo apreciará un profesional experto, se pueden requerir dosis menores o mayores que las citadas anteriormente. Los específicos regimenes de dosificación y de tratamiento para cualquier paciente particular dependerán de una diversidad de factores, inclusive la actividad del compuesto específico empleado, la edad, el peso corporal, el estado general de salud, el sexo, la dieta, el momento de administración, el régimen de excreción, la combinación de fármacos, la gravedad y el curso de la infección, la disposición del paciente para la infección y el criterio del médico que esté realizando el tratamiento. Generalmente, el tratamiento es iniciado con pequeñas dosificaciones sustancialmente menores que la dosis óptima del péptido. Después de ello, la dosificación es aumentada por pequeños incrementos hasta que se alcance el efecto óptimo dentro de las circunstancias. En general, el compuesto se administra de modo sumamente deseable en un nivel de concentraciones que generalmente proporcionará resultados eficaces antivíricamente sin causar ningún efecto colateral perjudicial o deletéreo.

Cuando las composiciones de este invento comprenden una combinación de un compuesto de fórmula I y uno o más agentes terapéuticos o profilácticos adicionales, tanto el compuesto como el agente adicional deberán estar presentes en unos niveles de dosificación comprendidos entre aproximadamente 10 y 100%, y más preferiblemente entre alrededor de 10 y 80% de la dosificación normalmente administrada en un régimen de monoterapia.

Cuando estos compuestos o sus sales farmacéuticamente aceptables se formulan conjuntamente con un soporte farmacéuticamente aceptable, la composición resultante se puede administrar in vivo a mamíferos, tales como seres humanos, para inhibir a la proteasa de NS3 del HCV o para tratar o prevenir una infección causada por el virus del HCV. Dicho tratamiento se puede conseguir también usando los compuestos de este invento en combinación con agentes que incluyen, pero no se limitan a: agentes moduladores de la inmunidad, tales como interferones \alpha, \beta ó \gamma; otros agentes antivíricos tales como ribavirina, amantadina; otros inhibidores de la proteasa de NS3 del HCV; inhibidores de otras dianas en el ciclo de vida del HCV tales como helicasa, polimerasa, metaloproteasa, o la entrada de ribosomas internos; o combinaciones de éstos. Los agentes adicionales se pueden combinar con los compuestos de este invento para crear una única forma de dosificación. Alternativamente, estos agentes adicionales se pueden administrar por separado a un mamífero como parte de una forma de dosificación múltiple.

Correspondientemente, otra realización de este invento proporciona métodos para inhibir la actividad de la proteasa de NS3 del HCV en mamíferos por administración de un compuesto de la fórmula I, en que los sustituyentes son como se han definido anteriormente.

En una realización preferida, estos métodos son útiles para disminuir la actividad de la proteasa de NS3 del HCV en un mamífero. Si la composición farmacéutica comprende solamente un compuesto de este invento como el componente activo, dichos métodos pueden comprender adicionalmente la operación de administrar a dicho mamífero un agente seleccionado entre un agente modulador de la inmunidad, un agente antivírico, un inhibidor de una proteasa del HCV, o un inhibidor de otras dianas en el ciclo de vida del HCV tales como helicasa, polimerasa o metaloproteasa. Tal agente adicional se puede administrar al mamífero antes de, concurrentemente con, o a continuación de la administración de las composiciones de este invento.

En una realización preferida alternativa, estos métodos son útiles para inhibir la replicación de virus en un mamífero. Dichos métodos son útiles para tratar o prevenir una enfermedad causada por el HCV. Si la composición farmacéutica comprende solamente un compuesto de este invento como el componente activo, dichos métodos pueden comprender adicionalmente la operación de administrar a dicho mamífero un agente seleccionado entre un agente modulador de la inmunidad, un agente antivírico, un inhibidor de una proteasa del HCV, o un inhibidor de otras dianas en el ciclo de vida del HCV. Dicho agente adicional se puede administrar al mamífero antes de, concurrentemente con o a continuación de la administración de la composición de acuerdo con este invento.

Los compuestos que se exponen en el presente texto se pueden usar también como reactivos de laboratorio. Los compuestos de este invento se pueden usar para tratar o prevenir una contaminación por virus de materiales y por lo tanto reducir el riesgo de una infección por virus del personal de laboratorio o medico o de los pacientes que entren en contacto con dichos materiales (p.ej. sangre, tejidos, instrumentos quirúrgicos y prendas de vestir quirúrgicas, instrumentos y prendas de vestir de laboratorios y aparatos y materiales para la recogida de sangre).

Procedimiento

Los compuestos del presente invento se sintetizaron de acuerdo con el procedimiento que se ilustra en el esquema I (en que PG1 es un grupo protector de carboxilo y PG2 es un grupo protector de amino):

Esquema I

50

Brevemente, los P1, P2, P3, P4, y opcionalmente los P5 y P6 se pueden enlazar por técnicas bien conocidas de acoplamiento de péptidos. Los grupos P1, P2, P3, P4 y P5 así como P6 se pueden enlazar conjuntamente en cualquier orden siempre y cuando que el compuesto final corresponda a péptidos de fórmula I. Por ejemplo, P6 puede ser enlazado a P5 para dar P5-P6 que está enlazado a P4-P3-P2-P1; o P6 se puede enlazar a P5-P4-P3-P2 y luego enlazar a un P1 protegido apropiadamente en el extremo terminal de C.

Generalmente, los péptidos son alargados desprotegiendo el grupo \alpha-amino del residuo terminal de N y acoplando el grupo carboxilo sin proteger del siguiente aminoácido apropiadamente protegido en N a través de un enlace peptídico usando los métodos que se han descrito. Este proceso de desprotección y acoplamiento se repite hasta que se obtenga la secuencia deseada. Este acoplamiento se puede realizar con los aminoácidos constituyentes de una manera escalonada, tal como se describe en el Esquema I, o por condensación de fragmentos (de dos o más aminoácidos) o una combinación de ambos procedimientos, o mediante una síntesis de péptidos en fase sólida de acuerdo con el método originalmente descrito en la cita de Merrifield, J. Am. Chem. Soc. (1963), 85, 2.149-2.154.

El acoplamiento entre dos aminoácidos, un aminoácido y un péptido, o dos fragmentos peptídicos se puede llevar a cabo usando procedimientos de acoplamiento clásicos tales como el método de la azida, el método de anhídrido mixto de ácido carbónico y un ácido carboxílico (cloroformiato de isobutilo), el método de una carbodiimida (diciclohexil-carbodiimida, diisopropil-carbodiimida, o una carbodiimida soluble en agua), el método de un éster activo (éster p-nitrofenílico, imido-éster N-hidroxisuccínico), el método del reactivo K de Woodward, el método del carbonil-diimidazol, reactivos con fósforo o métodos de oxidación-reducción. Algunos de estos métodos (especialmente el método de la carbodiimida) se pueden mejorar añadiendo 1-hidroxi-benzotriazol. Estas reacciones de acoplamiento se pueden llevar a cabo o bien en fase de solución (fase líquida) o en fase sólida.

Más explícitamente, la operación de acoplamiento implica el acoplamiento deshidrogenante de un carboxilo libre de un reaccionante con el grupo amino libre del otro reaccionante en la presencia de un agente de acoplamiento para formar un enlace de amida engarzador. Descripciones de dichos agentes de acoplamiento se encuentran en libros de texto generales sobre la química de los péptidos, por ejemplo el de M. Bodanszky, "Peptide Chemistry" 2ª edición revisada, editorial Springer, Berlin, Alemania, (1993). Ejemplos de apropiados agentes de acoplamiento son N,N'-diciclohexil-carbodiimida, 1-hidroxi-benzotriazol en la presencia de N,N'-diciclohexil-carbodiimida o N-etil-N'-[(3-dimetilamino)propil]carbodiimida. Un agente de acoplamiento muy práctico y útil es el hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio comercialmente disponible, o bien por si solo o en la presencia de 1-hidroxi-benzotriazol. Otro agente de acoplamiento muy práctico y útil es el tetrafluoroborato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametil-uronio comercialmente disponible. Todavía otro agente de acoplamiento muy práctico y útil es el hexafluorofosfato de O-(7-azabenzo-triazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametil-uronio comercialmente disponi-
ble.

La reacción de acoplamiento se realiza en el seno de un disolvente inerte, p.ej. diclorometano, acetonitrilo o dimetil-formamida. Un exceso de una amina terciaria, p.ej. diisopropil-etil-amina, N-metil-morfolina o N-metil-pirrolidina, se añade para mantener la mezcla de reacción a un pH de aproximadamente 8. La temperatura de reacción fluctúa usualmente entre 0ºC y 50ºC y el tiempo de reacción fluctúa entre 15 min y 24 h.

Cuando se emplea un enfoque de síntesis en fase sólida, el ácido carboxílico terminal de C es unido a un soporte insoluble (usualmente poliestireno). Estos soportes insolubles contienen un grupo que reaccionará con el grupo carboxílico para formar un enlace que es estable frente a las condiciones de alargamiento pero que se desdobla con facilidad más adelante. Ejemplos de éstos son: una cloro- o bromo-metil-resina, una hidroxi-metil-resina y una amino-metil-resina. Muchas de estas resinas se encuentran comercialmente disponibles con el deseado aminoácido terminal de C ya incorporado. Alternativamente, el aminoácido se puede incorporar sobre el soporte sólido por métodos conocidos, véase Wang, S.-S., J. Am. Chem. Soc., (1973), 95, 1.328; Atherton, E.; Shepard, R.C. "Solid-phase peptide synthesis; a practical approach" IRL Press; Oxford, (1989); 131-148. Además de lo que antecede, otros métodos de síntesis de péptidos están descritos en las citas de Stewart y Young, "Solid Phase Peptide Synthesis", 2ª edición, Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984); Gross, Meienhofer, Udenfriend, coordinadores de edición, "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", volúmenes 1, 2, 3, 5 y 9, Academic Press, Nueva York, (1980-1987); Bodansky y colaboradores, "The Practice of Peptide Synthesis", editorial Springer, Nueva York (1984).

Los grupos funcionales de los aminoácidos constituyentes deben generalmente ser protegidos durante las reacciones de acoplamiento para evitar la formación de enlaces indeseados. Los grupos protectores que se pueden usar se enumeran en las citas de Greene, "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley & Sons, Nueva York (1981) y "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", volumen 3, Academic Press, Nueva York (1981).

El grupo \alpha-carboxilo del residuo terminal de C es protegido usualmente en forma de un éster (PG1) que puede ser desdoblado para dar el ácido carboxílico. Grupos protectores que se pueden usar incluyen: 1) ésteres de alquilo tales como los de metilo, trimetil-silil-etilo y t-butilo, 2) ésteres de arilalquilo tales como los de bencilo y bencilo sustituido, o 3) ésteres que se pueden desdoblar por tratamiento con una base débil o con medios reductores débiles tales como los ésteres de tricloroetilo y fenacilo.

El grupo \alpha-amino de cada aminoácido que se ha de acoplar a la cadena de péptido en crecimiento debe de ser protegido (PG2). Puede usarse cualquier grupo protector conocido en el sector de la tecnología. Ejemplos de dichos grupos incluyen: 1) grupos acilo tales como formilo, trifluoroacetilo, ftalilo y p-toluenosulfonilo; 2) grupos de carbamatos aromáticos tales como benciloxicarbonilo (Cbz ó Z) y benciloxicarbonilos sustituidos, y 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc); 3) grupos de carbamatos alifáticos tales como terc.-butiloxicarbonilo (Boc), etoxicarbonilo, diisopropilmetoxicarbonilo y aliloxicarbonilo; 4) grupos de alquil-carbamatos cíclicos tales como ciclopentiloxicarbonilo y adamantiloxicarbonilo; 5) grupos alquilo tales como trifenilmetilo y bencilo; 6) trialquilsililo tales como trimetilsililo; y 7) grupos que contienen tiol tales como feniltiocarbonilo y ditiasuccinoílo. El grupo protector de \alpha-amino preferido es o bien Boc ó Fmoc. Están comercialmente disponibles para la síntesis de péptidos muchos derivados de aminoácidos apropiadamente protegidos.

El grupo protector de \alpha-amino del residuo de aminoácido que se acaba de añadir es separado antes del acoplamiento del siguiente aminoácido. Cuando se usa el grupo Boc, los métodos a seleccionar son los que usan ácido trifluoroacético, puro o disuelto en diclorometano, o HCl en dioxano o acetato de etilo. La resultante sal de amonio es luego neutralizada o bien antes del acoplamiento o in situ con soluciones de carácter alcalino tales como tampones acuosos, o aminas terciarias en diclorometano o acetonitrilo o dimetilformamida. Cuando se usa el grupo Fmoc, los reactivos a seleccionar son piperidina o una piperidina sustituida en el seno de dimetilformamida, pero se puede usar cualquier amina secundaria. La desprotección se lleva a cabo a una temperatura comprendida entre 0ºC y la temperatura ambiente (TA), usualmente de 20-22ºC.

Cualquiera de los aminoácidos que tengan funcionalidades de cadenas laterales deben de ser protegidos durante la preparación del péptido usando cualesquiera de los grupos antes descritos. Los expertos en el sector de la tecnología apreciarán que la selección y el uso de apropiados grupos protectores para estas funcionalidades de cadenas laterales dependen del aminoácido y de la presencia de otros grupos protectores en el péptido. La selección de tales grupos protectores es importante, puesto que el grupo no debe de ser eliminado durante la desprotección y el acoplamiento del grupo \alpha-amino.

Por ejemplo, cuando se usa Boc como el grupo protector de \alpha-amino, son apropiados los siguientes grupos protectores de cadenas laterales: se pueden usar restos de p-toluenosulfonilo (tosilo) para proteger a la cadena lateral amino de aminoácidos tales como Lys y Arg; se pueden usar restos acetamidometilo, bencilo (Bn), o t-butilsulfonilo para proteger a la cadena lateral que contiene sulfuro de la cisteína; se pueden usar éteres de bencilo (Bn) para proteger a las cadenas laterales que contienen hidroxi de serina, treonina o hidroxi-prolina; y se pueden usar ésteres de bencilo para proteger a las cadenas laterales que contienen carboxi de ácido aspártico y ácido glutámico.

Cuando se escoge Fmoc para la protección de \alpha-amino, usualmente son aceptables grupos protectores basados en terc.-butilo. Por ejemplo, se puede usar Boc para lisina y arginina, terc.-butil-éter para serina, treonina e hidroxi-prolina, y éster terc.-butílico para ácido aspártico y ácido glutámico. Se puede usar el resto trifenilmetilo (tritilo) para proteger a la cadena lateral que contiene sulfuro de la cisteína.

Una vez que se ha completado el alargamiento del péptido se elimina la totalidad de los grupos protectores. Cuando se usa una síntesis en fase líquida, los grupos protectores se eliminan de cualquiera de las maneras que sea dictada por la elección de grupos protectores. Estos procesos son bien conocidos por los expertos en el sector de la tecnolo-
gía.

Cuando se usa una síntesis en fase sólida, el péptido es separado con respecto de la resina simultáneamente con la eliminación de los grupos protectores. Cuando se usa en la síntesis el método de protección con Boc, el tratamiento con HF anhidro que contiene aditivos tales como sulfuro de dimetilo, anisol, tioanisal o p-cresol a 0ºC constituye el método preferido para separar el péptido con respecto de la resina. La separación del péptido se puede conseguir mediante otros reactivos ácidos tales como mezclas de ácido trifluorometanosulfónico y ácido trifluoroacético. Si se usa el método de protección con Fmoc, el grupo Fmoc situado en el extremo terminal de N es separado con los reactivos que se han descrito anteriormente. Los otros grupos protectores y el péptido son separados con respecto de la resina usando una solución de ácido trifluoroacético y diversos aditivos tales como anisol, etc.

Cuando Q es CH_{2}, a es 0, b es 0 y B es R_{11a}N(R_{11b})C(O), los compuestos se prepararon de acuerdo con un método análogo al método general descrito para los péptidos en el Esquema I usando un compuesto intermedio con succinilo fácilmente disponible, t-BuO-C(O)CH_{2}CH(R_{4})-CO-PG1 (p.ej. PG1 es = 2-oxo-oxazolidin-3-ilo sustituido en posición 4). Este compuesto intermedio con succinilo se puede preparar fácilmente de acuerdo con el método de Evans y colaboradores (J. Am. Chem. Soc. (1982), 104, 1.737) usando la apropiada 3-acil-2-oxazalidinona sustituida en posición 4, en la presencia de una base fuerte tal como diisopropil-amiduro de litio o bis(trimetilsilil)amiduro de sodio y bromoacetato de t-butilo. Después de haberse separado el resto de 2-oxazolidinona con LiOOH (Evans y colaboradores, Tetrahedron Lett. (1987), 28, 6.141), el resultante ácido fue acoplado con el segmento P3-P2-P1-PG1 para dar t-BuO-C(O)-CH_{2}CH(R_{4})-CO-P3-P2-P1-PG1. Este último se trató con cloruro de hidrógeno para convertir selectivamente el éster t-butílico terminal en el correspondiente ácido, que finalmente había sido acoplado a R_{11a}NH(R_{11b}) para dar, después de la eliminación del o los grupo(s) protector(es), el deseado derivado de péptidos. Las aminas R_{11a}NH(R_{11b}) están comercialmente disponibles o su síntesis es bien conocida en el sector de la tecnología. Una realización específica de este procedimiento se presenta en el Ejemplo 18.

Alternativamente, partiendo del mismo compuesto intermedio con succinilo (t-BuO-C(O)-CH_{2}CH(R_{4})-CO-PG1), la secuencia de reacciones se puede invertir para introducir en primer lugar R_{11a}NH(R_{11b}) y luego P3-P2-P1-PG1 para dar el deseado derivado de péptido.

Síntesis del grupo de remate B y de restos P6, P5, P4 y P3

Diferentes grupos de remate B se introducen para proteger a P6, P5, P4, a todo el péptido o a cualquier segmento de péptido con un apropiado cloruro de acilo, que o bien está disponible comercialmente o para el que la síntesis es bien conocida en el sector de la tecnología.

Diferentes restos de P6 o P3 están disponibles comercialmente o su síntesis es bien conocida en el sector de la tecnología.

Síntesis de restos P2 1. Síntesis de precursores

A) Síntesis de derivados de haloarilmetano.

La preparación de una halometil-8-quinolina IId se realizó de acuerdo con el procedimiento de K.N. Campbell y colaboradores, J. Amer. Chem. Soc., (1946), 68, 1.844.

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Esquema II

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Dicho brevemente, el ácido 8-quinolina-carboxílico IIa se convirtió en el correspondiente alcohol IIc por reducción del correspondiente haluro de acilo IIb con un agente reductor tal como hidruro de litio y aluminio. El tratamiento del alcohol IIb con el apropiado hidrácido halogenado da el deseado derivado de halo IId. Una realización específica de este procedimiento se presenta en el Ejemplo 1.

2. Síntesis de P2

A) La síntesis de una prolina sustituida en posición 4 (en la que R^{2} está unida al anillo a través de un átomo de carbono) (con la estereoquímica que se muestra):

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se realiza como se muestra en el Esquema III de acuerdo con los procedimientos descritos por J. Ezquerra y colaboradores (Tetrahedron, (1993), 38, 8.665-8.678) y C. Pedregal y colaboradores (Tetrahedron Lett., (1994), 35, 2.053-2.056).

Esquema III

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Dicho brevemente, el ácido Boc-piroglutámico se protege como un éster de bencilo. El tratamiento con una base fuerte tal como diisopropil-amiduro de litio, seguido por la adición de un agente alquilante (Br-R^{2} ó I-R^{2}) da los deseados compuestos IIIe después de reducción de la amida y desprotección del éster.

B) La síntesis de una 4(R)-hidroxi-prolina alquilada en O:

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se puede llevar a cabo usando los diferentes procedimientos que se describen seguidamente.

B.1): Cuando R^{12} es arilalquilo, el proceso se puede llevar a cabo de acuerdo con el procedimiento descrito por E.M. Smith y colaboradores (J. Med. Chem. (1988), 31, 875-885). Dicho brevemente, la Boc-4(R)-hidroxi-prolina comercialmente disponible se trata con una base tal como hidruro de sodio y el alcóxido resultante se hace reaccionar con un agente alquilante (Br-R^{12} ó I-R^{12}) para dar los deseados compuestos. Realizaciones específicas de este procedimiento se presentan en los Ejemplos 3 y 4.

B.2): Cuando R^{12} es arilo, los compuestos se pueden preparar por medio de una reacción de Mitsunobu (Mitsunobu (1981), Synthesis, Enero, 1-28; Rano y colaboradores, (1995), Tet. Lett. 36(22), 3779-3792; Krchnak y colaboradores, (1995), Tet. Lett. 36(5), 62193-6196; Richter y colaboradores, (1994), Tet. Lett. 35(27), 4705-4706). Dicho brevemente, el éster metílico de Boc-4(S)-hidroxi-prolina comercialmente disponible se trata con el apropiado aril-alcohol o -tiol en la presencia de trifenil-fosfina y azodicarboxilato de dietilo (DEAD) y el éster resultante se hidroliza para dar el ácido. Realizaciones específicas de este procedimiento se presentan en los Ejemplos 5 y 6.

Esquema IV

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Alternativamente, la reacción de Mitsunobu se puede realizar en fase sólida (como se muestra en el Esquema IV). El bloque de 96 pocillos del sintetizador Modelo 396 (Advanced ChemTech) es provisto de partes alícuotas del compuesto (IVa) fijado a una resina y se añaden una diversidad de aril-alcoholes o -tioles y apropiados reactivos. Después de la incubación, cada producto (IVb) fijado a una resina se lava, se seca y se separa con respecto de la resina.

B.2.a): Una reacción de Suzuki (Miyaura y colaboradores, (1981), Synth. Comm, 11, 513; Sato y colaboradores, (1989), Chem. Lett., 1405; Watanabe y colaboradores, (1992), Synlett., 207; Takayuki y colaboradores, (1993), J. Org. Chem. 58, 2201; Frenette y colaboradores, (1994), Tet. Lett. 35(49), 9177-9280; Guiles y colaboradores, (1996), J. Org. Chem. 61, 5169-5171) se puede usar también para funcionalizar adicionalmente al sustituyente arilo.

Ejemplos

El presente invento se ilustra con mayor detalle mediante los siguientes Ejemplos no limitativos.

Las temperaturas se dan en grados Celsius. Los porcentajes de las soluciones expresan una relación de peso a volumen, y las relaciones de las soluciones expresan una relación de volumen a volumen, a menos que se señale otra cosa distinta. Los espectros de resonancia magnética nuclear (NMR) se registraran en un espectrómetro Bruker a 400 MHz; los desplazamientos químicos (\delta) se informan en partes por millón. La cromatografía de resolución rápida se llevó a cabo sobre gel de sílice (SiO_{2}) de acuerdo con la técnica de cromatografía de resolución rápida de Still (W.C. Still y colaboradores, J. Org. Chem. (1978), 43, 2923).

Las abreviaturas usadas en los Ejemplos incluyen Bn: bencilo; Boc: terc.-butiloxicarbonilo \{Me_{3}COC(O)\}; BSA: albúmina de suero bovino; CHAPS: 3-[(3-colamido-propil)-dimetilamonio]-1-propano-sulfonato; DBU: 1,8-diazabiciclo [5.4.0]undec-7-eno; CH_{2}Cl_{2}= DCM: cloruro de metileno; DIPEA: diisopropil-etil-amina; DMAP: dimetilamina-piridina; DCC: 1,3-diciclohexil-carbodiimida; DME: 1,2-dimetoxi-etano; DMF: dimetil-formamida; DMSO: dimetil-sulfóxido; DTT: ditiotreitol o treo-1,4-dimercapto-2,3-butanodiol; EDTA: ácido etilendiaminatetraacético; Et: etilo; EtOH: etanol; EtOAc: acetato de etilo; Et_{2}O: dietil-éter; HPLC: cromatografía de líquido de alto rendimiento; MS: espectrometría de masas (MALDITOF: Ionización-Desorción por Láser Asistida por Matriz-Tiempo de Vuelo, FAB: Bombardeo con Átomos Rápidos); LAH: hidruro de litio y aluminio; Me: metilo; MeOH: metanol; MES: ácido (2-{N-morfolino}etano-sulfónico); NaHMDS: bis(trimetil-silil)ami-duro de sodio; NMM: N-metilmorfolina; NMP: N-metil-pirrolidina; Pr: propilo; Succ: 4-hidroxi-1,4-dioxo-butilo; PNA: 4-nitro-fenilamino o p-nitro-anilida; TEAF: fluoruro de tetra-n-butil-amonio; TCEP: hidrocloruro de tris(2-carboxi-etil) fosfina; TFA: ácido trifluoroacético; THF: tetrahidrofurano; TIS: triisopropil-silano; TLC: cromatografía de capa fina; TMSE: trimetil-silil-etilo; Tris/HCl: hidrocloruro de tris(hidroximetil)-aminometano.

Ejemplo 1 Síntesis de bromometil-8-quinolina (1)

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A un ácido 8-quinolina-carboxílico comercialmente disponible (2,5 g, 14,4 mmol) se le añadió cloruro de tionilo puro (10 ml, 144 mmol). Esta mezcla se calentó a 80ºC durante 1 h antes de que el cloruro de tionilo en exceso fuera separado por destilación a presión reducida. Al sólido de color parduzco resultante se le añadió EtOH absoluto (15 ml), lo que se calentó a 80ºC durante 1 h antes de ser concentrado en vacío. El residuo se repartió entre EtOAc y NaHCO_{3} acuoso saturado, y la fase orgánica se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró para dar un aceite de color parduzco (2,8 g). Este material (aproximadamente 14,4 mmol) se añadió gota a gota durante 35 min a una suspensión de LAH (0,76 g, 20,2 mmol)/Et_{2}O que se enfrió a -60ºC. La mezcla de reacción se calentó lentamente a -35ºC durante 1,5 h antes de que la reacción fuese completa. La mezcla de reacción se sofocó con MgSO_{4}.10H_{2}O lentamente en el transcurso de 30 min y luego con THF húmedo. La mezcla se repartió entre Et_{2}O y NaHCO_{3} acuoso al 10%. La fase orgánica se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró para dar un sólido de color amarillento (2,31 g, 80% en el transcurso de dos etapas) correspondiente al alcohol. El alcohol (2,3 g, 11,44 mmol) se disolvió en una mezcla de AcOH y HBr (20 ml, solución al 30% procedente de Aldrich) y se calentó a 70ºC durante 2,5 h. La mezcla se concentró en vacía hasta sequedad, se repartió entre EtOAc (100 ml) y NaHCO_{3} acuoso saturado, antes de ser secada (sobre MgSO_{4}), filtrada y concentrada para dar el compuesto (1) deseado como un sólido de color parduzco (2,54 g, 100%).

Ejemplo 2 Síntesis de Boc-4(R)-(3-fenil-propil)prolina (2d)

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a) Síntesis del compuesto 2b

A una solución del éster bencílico de ácido Boc-piroglutámico (2a) (preparado como se ha descrito por A.L. Johnson y colaboradores, J. Med. Chem. (1985), 28, 1596-1602) (500 mg, 1,57 mmol) en THF (10 ml) a -78ºC, se le añadió lentamente hexametil-disilil-aziduro de litio (1,72 ml, solución 1 M en THF).

Después de haber agitado durante 1 h a -78ºC, se añadió bromuro de cinamilo (278 \mul, 1,88 mmol) y la agitación se continuó durante 2 h adicionales. La mezcla de reacción se sofocó con una solución saturada de cloruro de amonio y se extrajo con dietil-éter (3 x 20 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (sobre MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía en columna de resolución rápida (en una mezcla de hexano y acetato de etilo 8:2) para dar el compuesto 2b como un sólido de color blancuzco (367 mg, rendimiento 54%). ^{1}H NNR (CDCl_{3}): \delta 7,35-7,19 (m, 10H), 6,43 (d, J = 15 Hz, 1H), 6,11 (ddd, J = 15, J' = J'' = 8 Hz, 1H), 5,26 (d, J = 16 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 16 Hz, 1H), 4,59 (dd, J = 9,5, J' = 2 Hz, 1H), 2,83-2.70 (m, 2H), 2,41-2,34 (m, 1H), 2,22-2,16 (m, 1H), 2,10-2.02 (m, 1H) 1,42 (s, 9 H).

b) Síntesis del compuesto 2c

A -78ºC se añadió trietil-borohidruro de litio (solución 1 M en THF, 1,01 ml, 1,01 mmol) a una solución del compuesto 2b (367 mg, 0,843 mmol) en THF (5 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 30 min, la mezcla de reacción se sofocó con NaHCO_{3} acuoso saturado (2 ml) y se calentó a 0ºC. Se añadió H_{2}O_{2} al 30% (5 gotas) y la mezcla se agitó a 0ºC durante 20 min. Los materiales volátiles orgánicos se eliminaron en vacía, y la capa acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (sobre MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron. A una solución fría (a -78ºC) del residuo y trietil-silano (134 \mu1, 0,843 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (3 ml) se le añadió gota a gota trifluoruro de boro-eterato (118 \mul, 0,927 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 30 min se añadieron cantidades adicionales de trietil-silano (134 \mul) y trifluoruro de boro-eterato (118 \mul). Después de haber agitado durante 2 h a -78ºC, la mezcla de reacción se sofocó con NaHCO_{3} acuoso saturado (2 ml) y se extrajo con DCM (3 x 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (sobre MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna de resolución rápida (en una mezcla de hexano y acetato de etilo 8:2) para dar el compuesto 2c como un aceite incolaro (140 mg, rendimiento 40%). La ^{1}H-NMR (CDCl_{3}) indicó la presencia de dos rotámeros: \delta 7,34-7,22 (m, 1OH), 6,38 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 6,15-6,08 (m, 1H), 5,29-5,07 (m, 2H), 4,44 (d, J = 7 Hz, 1/3H), 4,33 (d, J = 7 Hz, 2/3H), 3,76 (dd, J = 10,5, J' = 8,5 Hz, 2/3H), 3.69 (dd, J = 10,5, J' = 8,5 Hz, 1/3H), 3,13 (dd, J = 9, J' = 8,5 Hz, 2/3H), 3,05 (dd, J = 9, J' = 8,5 Hz, 1/3H) 2,47-2,40 (m, 1H), 2,35-2,22 (m, 2H) 2,15-1,85 (m, 2H), 1, 45 (s, (3/9) 9H), 1,33 (s, (6/9) 9H).

c) Síntesis del compuesto 2d

A una solución del compuesto 20 (140 mg, 0,332 mmol) en etanol (4 ml) se le añadió paladio al 10% sobre carbón orgánico (30 mg). La mezcla se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno durante 2 h. El catalizador se eliminó haciendo pasar la mezcla a través de un filtro Millipore: Millex -HV de 0,45 \mum. La solución transparente se concentró para dar el compuesto deseado 2d como un aceite incoloro (115 mg, rendimiento cuantitativo). La ^{1}H-NMR (en DMSO-d_{6}) indicó la presencia de dos rotámeros: \delta 7,28-7,14 (m, 5H), 4,33 (s ancho, 1H), 4,06-4,10, (m, 1H), 3,56-3,42 (m, 3H), 2,89-2,79 (m, 1H), ), 2,53-2,49 (m, 1H, under DMSO-d_{6}), 2,24-2,10 (m, 1H), 2,03-1,93 (m, 1H), 1,87- 1,75 (m, 1H), 1,62-1,45 (m, 2H), 1,38 (s, (3/9) 9H), 1,33 (s, (6/9) 9H).

Ejemplo 3 Síntesis de Boc-4(R)-(naftalen-1-ilmetoxi)prolina (3)

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Una Boc-4(R)-hidroxi-prolina comercialmente disponible (5,00 g, 21,6 mmol) se disolvió en THF (100 ml) y se enfrió a 0ºC. Se añadió en porciones durante 10 minutos hidruro de sodio (dispersión al 60% en un aceite, 1,85 g, 45,4 mmol) y la suspensión se agitó a TA durante 1 h. Luego se añadió 1-(bromometil)naftaleno (8,00 g, 36,2 mmol) (preparado como se ha descrito en E.A. Dixon y colaboradores, Can. J. Chem., (1981), 59, 2629-2641) y la mezcla se calentó a reflujo durante 18 h. La mezcla se vertió en agua (300 ml) y se lavó con hexano. La capa acuosa se acidificó con HCl acuoso al 10% y se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera, se secaron (sobre MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía de resolución rápida (en una mezcla de hexano, acetato de etilo y ácido acético 49:49:2), para dar el compuesto del título como un aceite incoloro (4,51 g, rendimiento 56%). La ^{1}H-NMR (en DMSO-d_{6}) indicó la presencia de dos rotámeros: \delta 8,05 (m, 1H), 7,94 (m, 1H), 7,29 (d, J' = 14 Hz, 1H), 7,55-7,45 (m, 4H), 4,96 (m, 2H), 4,26 (s ancho, 1H), 4,12 (dd, J = J = 8 Hz, 1H), 3,54-3,42 (m, 2H), 2,45-2,34 (m, 1H), 2,07-1,98 (m, 1H) 1,36 (s, (3/9) 9H), 1,34 (s, (6/9) 9H).

Ejemplo 4 Síntesis de Boc-4(R)-(8-quinolina-metiloxi)prolina (4)

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La Boc-4(R)-hidroxi-prolina (1,96 g, 8,5 mmol) en THF anhidro (20 ml) se añadió a una suspensión de NaH (1,4 g, al 60% en un aceite, 34 mmol) en THF (100 ml). Esta mezcla se agitó durante 30 min antes de que se añadiese bromo-metil-8-quinolina procedente del Ejemplo 1 (2,54 g, 11,44 mmol) en THF (30 ml). La mezcla de reacción se calentó a 70ºC (durante 5 h) antes de que el NaH en exceso fuera destruido cuidadosamente con THF húmedo. La mezcla de reacción se concentró en vacío y el material resultante se disolvió en EtOAc y H_{2}O. La fase acuosa alcalina se separó y acidificó con HCl acuoso al 10% a pH -5, antes de ser extraída con EtOAc (150 ml). La fase orgánica se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró para dar un aceite de color pardo. La purificación por cromatografía de resolución rápida (eluyente: mezcla de 10% de MeOH y CHCl_{3}) dio el compuesto deseado como un sólido de color amarillo pálido (2,73 g, 86%). La HPLC (97,5%); y la ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) muestran poblaciones de rotámeros en una relación de 6:4, \delta 12-11,4 (bs, 1H), 8,92 (2 x d, J = 4,14 y 4,14 Hz, 1H), 8,38 (2 x d, J 8,27 y 8,27 Hz, 1H), 7,91 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,63-7,54 (m, 2H), 5,14 (2 x s, 2H), 4,32-4,29 (m, 1H), 4,14-4,07 (m, 1H), 3,52-3,44 (m, 2H), 2,43-2,27 (m, 1H), 2,13-2,04 (m, 1H), 1,36 y 1,34 (2 x s, 9H).

Ejemplo 5 Preparación de Boc-4(R)-(7-cloro-quinolina-4-oxo)prolina (5)

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Un éster metílico de Boc-4-(S)-hidroxi-prolina (500 mg, 2,04 mmol) comercialmente disponible y 7-cloro-4-hidroxi-quinolina (440 mg, 2,45 mmol) se dispusieron en THF seco (10 ml) a 0ºC. Se añadió trifenil-fosfina (641 mg, 2,95 mmol) seguida por una lenta adición de DIAD (426 mg, 2,45 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 20 h. Luego la mezcla de reacción se concentró, se recogió en acetato de etilo y extrajo tres veces con HCl 1 N. La fase acuosa se alcalinizó con Na_{2}CO_{3} y se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron para dar un aceite de color amarillo. El aceite se purificó por cromatografía de resolución rápida para dar el éster metílico del compuesto (5) como un sólido de color blanco, 498 mg, rendimiento 58%.

Este éster metílico (400 mg, 0,986 mmol) se hidrolizó con hidróxido de sodio acuoso 1 N (1,7 ml, 1,7 mmol) en metanol (4 ml), a 0ºC, durante 3 h. La solución se concentró para eliminar el metanol y se neutralizó con HCl acuoso 1 M. La suspensión se concentró hasta sequedad y se recogió el metanol (20 ml), las sales se separaron por filtración y el material filtrado se concentró para dar el compuesto (5) deseado como un sólido de color blanco, 387 mg, rendimiento cuantitativo.

^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) (mezcla aprox. 1:1 de rotámeros) \delta 8,74 (d, J = 5 Hz, 1H), 8,13-8,09 (m, 1H), 7,99 y 7,98 (s, 1H), 7,58 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 5 Hz, 1H), 5,26-5,20 (m, 1H), 4,10-4,01 (m, 1H), 3,81-3,72 (m, 1H), 3,59 (dd, J = 12, 10 Hz, 1H), 2,41-2, 31 (m, 2H), 1,34 y 1,31 (s, 9H).

Ejemplo 6 Procedimiento general para la reacción de Mitsunobu en fase sólida (Esquema IV)

El péptido de estructura general IVa fijado a un polímero (0,327 mmol de péptido por gramo de resina de Wang) se secó bajo alto vacío en un desecador sobre P_{2}O_{5}. El bloque de 96 pocillos del sintetizador de Advanced ChemTech Modelo 396 se suministró con partes alícuotas del péptido IVa (120 mg, 0,04 mmol de péptido por pocillo) y cada muestra se lavó durante 5 min con CH_{2}Cl_{2} anhidro (5 x 1.200 \mul) y luego con THF anhidro (5 x 1.500 \mul). Se añadió a cada muestra THF anhidro (200 \mul) y el sintetizador se detuvo provisionalmente para permitir la adición manual de los reactivos. Se añadieron a cada muestra Ph_{3}P (5 eq. en 400 \mul de THF anhidro) y azo-dicarboxilato de dietilo (DIAD, 5 eq. en 250 \mul de THF anhidro) antes de la adición de un reactivo del tipo de fenol o tiofenol (5 eq. 0,2 mmol, disuelto en 500 de THF anhidro); se usó una colección de reactivos para producir la colección de inhibidores de proteasas del HCV que se describen en esta solicitud de patente. Después de la adición de todos los reactivos las mezclas se agitaron durante un total de 4 h con un retraso de 10 min después de cada hora. Cada producto fijado a una resina se lavó con THF (2 x 1.500 \mul), DMF (4 x 1.500 \mul), isopropanol (4 x 1.500 \mul), CH_{2}Cl_{2} (4 x 1.500 \mul) y finalmente metanol (2 x 1.500 \mul). La muestra se secó bajo vacío y luego se trató con TFA al 40% en CH_{2}Cl_{2} durante 1 h con el fin de separar el producto de péptido (de estructura general IVb) con respecto de la resina. Todos los productos se purificaron por HPLC preparativa sobre una columna de C18 de fase inversa usando un gradiente lineal de disolventes de desde 5% de CH_{3}CN acuoso hasta 100% de CH_{3}CN.

La siguiente descripción es un ejemplo de la elaboración adicional de la cadena lateral R_{12} en P2 por la aplicación de una síntesis de biarilo mediante acoplamiento de Suzuki sobre un soporte sólido (compárese R. Frenette y R.W. Friesen, Tetrahedron Lett. (1994), 35, 9177)

El precursor, el compuesto de bromuro aromático 238 de la Tabla 2, se sintetizó primeramente a partir del tetrapéptido fijado a un polímero que tenía una cis-hidroxi-prolina en la posición P2 y 4-bromo-fenol, usando el protocolo de Mitsunobu que antes se ha descrito.

Ejemplo 7 Colección de Suzuki de reacciones en síntesis de fase sólida

Todas las reacciones se llevaron a cabo en tubos de ensayo con caperuza roscado a alta presión de 16 x 100 mm provistos de caperuzas de teflón, equipados con pequeñas barras agitadoras magnéticas. Para cada reacción, se añadió primeramente al tubo de ensayo una suspensión desgasificada del péptido fijado a un polímero (100 mg de una resina de Wang con 0,033 mmol del péptido fijado), seguida por la adición de DME (2 ml), Pd(Ph_{3}P)_{3} (\sim3 mg, 0,05 eq.), Na_{2}CO_{3} (70 \mul de una solución 2 M en H_{2}O, 2,5 eq.) y uno de los reactivos de ácido fenil-borónico procedentes de nuestra colección. Los tubos de ensayo se barrieron rápidamente con nitrógeno gaseoso, se cerraron herméticamente y se colocaron en un baño de aceite a 80ºC. Todas las mezclas de reacción se agitaron suavemente y se dejaron progresar durante 15-18 h. Cada producto de péptido fijado a una resina se transfirió subsiguientemente a un tubo para filtración de material plástico, se lavó con una mezcla de DME y H_{2}O (1:1, 5 x 2 ml), DME (5 x 2 ml), metanol (5 x 2 ml), CH_{3}CN (5 x 2 ml), CH_{2}Cl_{2} (5 x 2 ml) y se secó bajo alto vacío. Cada producto se separó con respecto de la resina tratando la muestra con 45% de TFA en CH_{2}Cl_{2} (1 ml) durante 1 hora. Todos los productos se purificaron por HPLC preparativa sobre una columna C18 de fase inversa usando un gradiente lineal de disolventes de desde 5% de CH_{3}CN acuoso hasta 100% de CH_{3}CN.

Ejemplo 8 Preparación de una colección de Ac-Chg-Val-Hyp(aril)-Acca-OH

Este compuesto se sintetizó de acuerdo con el protocolo del Ejemplo 6 donde se usaron péptidos apropiados.

Ejemplo 9 Síntesis del compuesto Nº 246 fijado a un polímero de la Tabla 2

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La síntesis del compuesto 246 se realizó de acuerdo con el Ejemplo de procedimiento 7.

Compuesto 246:

ES^{-} MS m/z 675,3 [(M-H)^{-}]; puro en \sim95% según una HPLC de fase inversa C18; mezcla de dos rotámeros en una relación de \sim1:3 basándose en la ^{1}H NMR.

^{1}H NMR del rotámero principal (400 MHz, DMSO): \delta 8,44 (s, 1H), 7,84 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,82 (d, J = -8,6 Hz, 1H), 7,54 (bd, J = 8,3 Hz, 4H), 6,99 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 6,98 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 5,11 (bs, 1H), 4,29-4,34 (m, 2H) 4,21 (bt, J = 7,8 Hz, 1H), 3,94-4,02 (m, 2H), 3,78 (s, 3H), 2,29-2,33 (m, 2H), 2,15-2,21 (m, 1H), 1,95-1,99 (m, 1H), 1,83 (s, 3H), 1,45-1,70 (m, 8H), 1,33-1,40 (m, 1H) 1,20-1,28 (m, 1H), 1,02-1,18 (m, 2H), \sim0,9-1,02 (m, 2H), 0,90 (d, J = 6,7 Hz, 3H) 0,84 (d, J = 6,7 Hz, 3H).

Ejemplo 10 Procedimiento general para reacciones de acoplamiento realizadas en solución {véase también R. Knorr y colaboradores, Tetrahedron Letters, 30, 1927 (1989).}

Los reaccionantes, es decir una amina libre (1 eq.) (o su sal hidrocloruro) y el ácido carboxílico libre (1 eq.) se disolvieron en CH_{2}C_{2}, CH_{3}CN ó DMF. Bajo una atmósfera de nitrógeno, se añadieron a la solución agitada cuatro equivalentes de N-metil-morfolina y 1,05 equivalentes del agente de acoplamiento. Después de 20 min, se añadió un equivalente del segundo reaccionante, a saber un ácido carboxílico libre. (Reactivos de acoplamiento prácticos y eficientes para esta finalidad son hexafluorofosfato de (benzotriazol-l-iloxi)tris-(dimetilamino)fosfonio (HOBT) o preferiblemente tetrafluoroborato de 2-(1H-benzotriazol-1-il) -N,N,N',N'-tetrametil-uronio (TBTU) o tetrafluoroborato de O-(7-aza-benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametil-uronio (HATU). La reacción se vigiló por TLC. Después de haberse completado la reacción, el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc. La solución se lavó consecutivamente con ácido cítrico acuoso al 10%, con NaHCO_{3} acuoso saturado y con salmuera. La fase orgánica se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró bajo presión reducida. Cuando el residuo había sido purificado, esto se realizó por cromatografía de resolución rápida como antes se ha definido.

Ejemplo 11 Síntesis del "segmento de tripéptido": Ac-Chg-Chg-Pro-(4(R)-naftalen-1-ilmetoxi)-OH (11g)

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El compuesto 11a (4,45 g, 11,98 mmol) se disolvió en CH_{3}CN anhidro (60 ml). Se añadieron consecutivamente DBU (2,2 ml, 14,38 mmol) y bromuro de alilo (1,1 ml, 13,18 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 24 h a TA. La mezcla se concentró, el aceite resultante se diluyó con EtOAc y con agua y se lavó consecutivamente con agua (2x = 2 veces) y con salmuera (1x = 1 vez). La capa de EtOAc se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se evaporó hasta sequedad. El aceite de color amarillo se purificó por cromatografía de resolución rápida (eluyente: mezclas de hexano y EtOAc desde 90:10 hasta 85:15) para proporcionar el producto 11b como un aceite de color amarillo (2 ml, 4,17 g, rendimiento 85%); MS (FAB) 412 MH^{+}.

^{1}H NMR (CDCl_{3}), mezcla de rotámeros aprox. 1:2, \delta (d, J = 8 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 8Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8Hz, 1H), 7,55-7,41 (m, 4H), 5,95-5,85 (m, 1H), 5,34-5,21 (m, 2H), 5,03-4,88 (m, 2H), 4,70-4,56 (m, 2H), 4,48 y 4,39 (t, J = 8,15 Hz, 1H), 4,28-4,23 (m, 1H), 3,81-3,55 (m, 2H), 2,46- 2,36 (m, 1H), 2,13-2,05 (m, 1H), 1,44 y 1,41 (s,
9H).

El compuesto 11b (2,08 g, 5,05 mmol) se trató durante 30 min a TA con una mezcla de HCl 4 N y dioxano. La evaporación hasta sequedad proporcionó el correspondiente compuesto amina\cdotHCl en forma de un aceite. Se añadieron consecutivamente el amina\cdotHCl 11c se disolvió en DCM anhidro (25 ml), NMM (2,2 ml, 20,22 mmol), Boc-Chg-OH H_{2}O (1,53 g, 5,56 mmol) y TBTU (1,95 g, 6,07 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante una noche, y luego se diluyó con EtOAc y se lavó consecutivamente con ácido cítrico acuoso al 10% (2x), con NaHCO_{3} acuoso saturado (2x), con agua (2x) y con salmuera (1x). La capa de EtOAc se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se evaporó hasta sequedad para proporcionar el producto bruto 11d como una espuma de color blanco-amarillento (aproximadamente 2,78 g, rendimiento 100%). MS (FAB) 551,4 MH^{+}. ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 8,03 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,86 (b d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 8 Hz, 1), 7,56-7,40 (m, 4H), 5,92-5,85 (m, 1H) 5,31 (dd, J = 1,17 Hz, 1H), 5,22 (dd, J = 1,10 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 9 Hz, 1H), 5,05 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,91 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,67-4,60 (m, 3H), 4,31-4,27 (m, 2H), 4,16 (b d, J = 11 Hz, 1H), 3,71 (dd, J= 4,11 Hz, 1H), 2,47-2,41 (m, 1H), 2,08-1,99 (m, 1H), 1,85-1,63 (m, 5H), 1,44-1,40 (m, 1H), 1,36 (s, 9H), 1,28-1,00 (m, 5H).

El dipéptido bruto 11d (aproximadamente 5,05 mmol) se trató con una mezcla de HCl 4 N y dioxano (25 ml) como se ha descrito para el compuesto 11c. La sal hidrocloruro bruta se acopló a Boc-Chg-OH\cdotH_{2}O (1,53 g, 5,55 mmol) con NMM (2,22 ml, 20,22 mmol) y TBTU (1,95 g, 6,07 mmol) en DCM (25 ml) como se ha descrito para el compuesto 11d con el fin de proporcionar el tripéptido bruto en forma de una espuma oleosa de color amarillo. El material bruto se purificó por cromatografía de resolución rápida (eluyente: mezclas de hexano y EtOAc desde 80:20 hasta 75:25) para proporcionar el tripéptido 11e como una espuma de color blanco (2,75 g; rendimiento 79%) en el transcurso de 2 etapas). MS (FAB) 690,5 MH^{+}, ^{1}H NMR (CDCl_{3}), principalmente un rotámero, \delta 8,06 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,87 (b d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,57-7,40 (m, 4H) 6,41 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,92-5,84 (m, 1H), 5,31 (dd, J = 1,17 Hz, 1H), 5,23 (dd, J = 1,10,5 Hz, 1H), 5,04 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,98 (b d, J = 7 Hz, 1H), 4,93 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,63-4,58 (m, 4H), 4,29-4,25 (m, 1H), 4,10-4,07 (m, 1H), 3,90-3,84 (m, 1H), 3,72 (dd, J = 4,11 Hz, 1H), 2,48-2,40 (m, 1H), 2,07-1,99 (m, 1H), 1,83-1,55 (m, 12H), 1,43 (s, 9H), 1,23-0,89 (m, 1OH).

El tripéptido 11e (2,75 g, 3,99 mmol) se trató con una mezcla de HCl 4 N y dioxano (20 ml) como se ha descrito para el compuesto 11c. La sal hidrocloruro bruta se disolvió en DCM anhidro (20 ml). Se añadieron consecutivamente NMM (1,75 ml, 15,94 mmol) y anhídrido acético (752 \mul, 7,97 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante una noche a TA, y luego se diluyó con EtOAc. La capa orgánica se lavó consecutivamente con ácido cítrico acuoso al 10% (2x), con NaHCO_{3} acuoso saturado (2x), con agua (2x) y con salmuera (1x), se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se evaporó hasta sequedad para proporcionar el tripéptido bruto 11f como una espuma de color blanco (2,48 g, rendimiento 98%). MS (FAB) 632,4 MH^{+1}. ^{1}H NMR (CDCl_{3}), principalmente un rotámero, \delta 8,06(b d, J = 8 Hz, 1H), 7,87 (b d, J = 8 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,58-7,40 (m, 4H), 6,36 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,01 (d, J = 9 Hz, 1H), 5,94-5,83 (m, 1H), 5,34-5,28 (m, 1H), 5,25-5,21 (m, 1H), 5,05 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,94 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,64-4,57 (m, 4H), 4,30-4,23 (m, 2H), 4,12-4,08 (m, 1H), 3,73 (dd, 4, 11 Hz, 1H), 2,49-2,42 (m, 1H), 2,08-2,01 (m, 1H), 1,99 (s, 3H), 1,85-1,53 (m, 11H), 1,25-0,88 (m, 11H).

El tripéptido bruto 11f (2,48 g, 3,93 mmol) se disolvió en una mezcla anhidra de CH_{3}CN y DCM (20 ml). Se añadieron consecutivamente trifenil-fosfina (53,5 mg, 0,200 mmol) y un catalizador de tetraquis(trifenil-fosfina)-paladio(0) (117,9 mg, 0,102 mmol), seguidos por pirrolidina (353,9 \mul, 4,24 mmol). La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 18 h. Posteriormente, el disolvente se evaporó. El residuo se disolvió en EtOAc y ácido cítrico acuoso al 10%, luego se realizaron lavados adicionales dos veces más con ácido cítrico acuoso al 10%, con agua (2x) y con salmuera (1x) La capa orgánica se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se evaporó. El producto bruto se trituró en una mezcla de Et_{2}O y DCM (85:15) para proporcionar después de filtración el tripéptido 11g como un sólido de color blanco (2,09 g, rendimiento 90%). MS (FAB) 592,4 MH^{+} 614,3 (M+Na)^{+}. ^{1}H NMR (CDCl_{3}), principalmente un rotámero, \delta 8,08 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,93 (b d, J = 9 Hz, 1H), 7,88 (b d, J = 8 Hz, 1H) 7,82 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,57-7,41 (m, 4H), 6,47 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,05 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,94 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,73 (t, J = 9,5, 19 Hz, 1H), 4,44-4,35 (m, 2H) 4,26 (b s, 1H), 4,19 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 3,75 (dd, J = 4, 11 Hz, 1H), 2,47 (b dd, J = 7,5, 13,5 Hz, 1H), 2,20-2,11 (m, 1H), 2,04 (s, 3H), 1,88-1,41 (m, 11H), 1,30-0,80 (11H).

Ejemplo 12 Síntesis del "segmento de tripéptido" -Ac-Chg-Val-Pro(4(R)-naftalen-1-ilmetoxi)-OH (12e)

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El compuesto 12a (2,89 g, 7,02 mmol) se trató con una mezcla de HCl 4 N y dioxano (30 ml) como se ha descrito para el compuesto 11c. La sal hidrocloruro bruta se acopló a Boc-Val-OH (1,53 g, 7,73 mmol) con NMM (3,1 ml, 28,09 mmol) y TBTU (2,71 g, 8,43 mmol) en DCM (35 ml) durante 3,5 h como se ha descrito para el compuesto 3 con el fin de proporcionar el dipéptido bruto 12b como una espuma oleosa de color marfil (aproximadamente 3,60 g, rendimiento 100%). MS (FAB) 509,3 MH^{-} 511,3 MH^{+} 533,2 (M+Na)^{+}. ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 8,04 (b d, J = 8 Hz, 1H), 7,87 (b d, J = 7 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,56-7,40 (m, 4H), 5,93-5,85 (m, 1H), 5,34-5,28 (m, 1H), 5,24-5,19 (m, 2H), 5,04 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,92 (d, J = 12 Hz, 1H) 4,67-4,60 (m, 3H), 4,31-4,26 (m, 2H), 4,11-4,09 (m, 1H) 3,72 (dd, J = 4, 11 Hz, 1H), 2,48- 2,41 (m, 1H), 2,07-1,99 (m, 1H), 1,44-1,36 (m, 1H), 1,37 (s, 9H), 1,01 (d, J = 7 Hz, 3H), 0,93 (d, J = 7 Hz, 3H).

El dipéptido bruto 12b (aproximadamente 7,02 mmol) se trató con una mezcla de HCl 4 N y dioxano (30 ml) como se ha descrito para el compuesto 11c. La sal hidrocloruro bruta se acopló a Boc-Chg-OH\cdotH_{2}O (2,13 g, 7,73 mmol) con NMM (3,1 ml, 28,09 mmol) y TBTU (2,71 g, 8,43 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (35 ml) como se ha descrito para el compuesto 3 con el fin de proporcionar el tripéptido bruto 12c como una espuma de color marfil (aproximadamente 4,6 g, rendimiento 100%). MS (FAB) 648,5 MH^{-} 672,4 (M+Na)^{+}. ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 8,06 (b d, J= 8Hz, 1H), 7,87 (b d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,82 (b d, J = 8 Hz, 1H), 7,57-7,40 (m, 4H), 6,46 (b d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,94-5,84 (m, 1H), 5,31 (dd, J = 1, 17 Hz, 1H) 5,23 (dd, J' = 1, 10,5 Hz, 1H), 5,03 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,00-4,97 (m, 1H), 4,93 (d, J =, 12 Hz, 1H), 4,63-4,59 (m, 4H), 4,29-4,27 (m, 1H), 4,10-4,07 (m, 1H), 3,92-3,86 (m, 1H), 3,72 (dd, J = 5, 11 Hz, 1H), 2,48-2,41 (m, 1H), 2,10-1,99 (m, 1H), 1,76-1,57 (m, 6H), 1,43 (s, 9H), 1,20-0,92 (m, 6H), 1,00 (d, J = 7 Hz, 3H), 0,93 (d, J = 7 Hz, 3H).

El tripéptido bruto 12c (aproximadamente 7,02 mmol) se trató con una mezcla de HCl 4 N y dioxano (30 ml) como se ha descrito para el compuesto 11c. La sal hidrocloruro bruta se trató adicionalmente con anhídrido acético (1,33 ml, 14,05 mmol) y NMM (3,1 ml, 28,09 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (35 ml) como se ha descrito para el compuesto 11f. El producto bruto se purificó por resolución rápida (eluyente: mezcla de hexano y EtOAc 30:70) para proporcionar el tripéptido protegido acetilado 12d como una espuma de color blanco (3,39 g, rendimiento 81% en el transcurso de 3 etapas). MS (FAB) 590,3 MH^{-}, 592,4 MH^{+} 614,4 (M+Na)^{+}.

^{1}H NMR (CDCl_{3}), principalmente un rotámero, \delta 8,06 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,88 (b d, J = 8 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,58-7,41 (m, 4H), 6,37 (d, J = 9 Hz, 1H), 5,97 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,94-5,84 (m, 1H), 5,31 (dd, J = 1, 17 Hz, 1H), 5,24 (dd, J = 1, 10,5 Hz, 1H), 5,05 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,94 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,66-4,57 (m, 4H), 4,31-4,22 (m, 2H), 4,11-4,05 (m, 1H), 3,73 (dd, J = 4,5, 11 Hz, 1H) 2,50-2,43 (m, 1H), 2,09-2,01 (m, 2H), 2,00 (s, 3H), 1,68-1,55 (m, 5H), 1,15-0,89 (m, 6H), 0,99 (d, J = 7 Hz, 3H), 0,91 (d, J = 7 Hz, 3H).

El tripéptido acetilado 12d (3,39 g, 5,73 mmol) se desprotegió mediante el catalizador tetraquis(trifenil-fosfina)-paladio(0) (172,1 mg, 0,149 mmol) con trifenil-fosfina (78,1 mg, 0,298 mmol) y pirrolidina (516 \mul, 6,19 mmol) en una mezcla 1:1 de CH_{3}CN anhidro y DCM (30 ml) como se ha descrito para el compuesto 11g. El producto bruto en forma de espuma de color amarillo clara se trituró en una mezcla de Et_{2}O y DCM (85:15) para proporcionar después de filtración el tripéptido 12e como un sólido de color blancuzco (3,0 g; rendimiento 95%). MS (FAB) 550,3 MH^{-}. ^{1}H NMR (CDCl_{3}) ó 8,08 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,04 (b d, J = 9Hz, 1H), 7,88 (b d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,58-7,37 (m, 5H), 5,05 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,94 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,61 (t, J = 9,5, 19,5 Hz, 1H), 4,46- 4,37 (m, 2H), 4,27 (b s, 1H), 4,17 (d, J = 11 Hz, 1H), 3,74 (dd, J = 4, 11 Hz, 1H), 2,49 (b dd, J = 7,5, 13 Hz, 1H), 2,17-2,09 (m, 1H), 2,04 (s, 3H), 2,03-1,94 (m, 1H), 1,79 (b d, J = 12,5 Hz, 1H), 1,62-1,43 (m, 5H), 1,08-0,85 (m, 5H), 1,00 (d, J = 7 Hz, 3H), 0,90 (d, J = 7Hz, 3H).

Ejemplo 13 Procedimiento general para reacciones de acoplamiento realizadas sobre un soporte sólido

La síntesis se realizó en un sintetizador paralelo del Modelo ACT396 procedente de Advanced ChemTech® con el bloque de 96 pocillos. Típicamente, se sintetizaron en paralelo 24 péptidos usando técnicas clásicas en fase sólida. La Fmoc-Nva-resina Wang de partida y la ácido 1-(Fmoc-amino)-ciclopropano-carboxílico-resina de Wang se prepararon por el método de acoplamiento con DCC y DMAP (Atherton, E; Scheppard, R.C. Solid Phase Peptide Synthesis, a Practical Approach; IRL Press; Oxford (1989); páginas 131-148). Se obtuvieron otros aminoácido-resinas de Wang a partir de fuentes comerciales.

Cada pocillo se cargó con 100 mg de la resina de partida (aproximadamente 0,05 mmol). Las resinas se lavaron consecutivamente con porciones de 1,5 ml de NMP (1x) y de DMF (3x). El grupo protector Fmoc se eliminó por tratamiento con 1,5 ml de una solución al 25% v/v de piperidina en DMF durante 20 min. Las resinas se lavaron con porciones de 1,5 ml de DMF (4x), MeOH (3x) y DMF (3x). El acoplamiento se realizó en DMF (350 \mul), usando 400 \mul (0,2 mmol) de una solución 0,5 M de una mezcla de Fmoc-aminoácido y HOBt hidrato en DMF, 400 \mul (0,4 mmol) de una solución 0,5 M de DIPEA en DMF y 400 \mul (0,2 mmol) de una solución 0,5 M de TBTU en DMF. Después de haber agitado durante 1 h, los pocillos se vaciaron, las resinas se lavaron con 1,5 ml de DMF y se repitió el acoplamiento una vez más en las mismas condiciones. Luego las resinas se lavaron como antes se ha descrito y el ciclo se repitió con el siguiente aminoácido.

Los grupos de remate se introdujeron de dos maneras:

1. En la forma de un ácido carboxílico usando el protocolo antes descrito (par ejemplo ácido acético), o

2. Como un agente acilante tal como un anhídrido o un cloruro de ácido. El siguiente Ejemplo ilustra el remate con anhídrido succínico: Después de la desprotección respecto del Fmoc y del subsiguiente protocolo de lavado, se añadió DMF (350 \mul), seguida por 400 \mul de una solución en DMF de anhidrido succínico (0,5 M, 0,2 mmol) y DIPEA (1,0 M, 0,4 mmol). Las resinas se agitaron durante 2 h y se realizó una operación de reacoplamiento.

Al final de la síntesis la resina se lavó con porciones de 1,5 ml de DCM (3x), de MeOH (3x), de DCM (3x) y éstas se secaron bajo vacío durante 2 h.

La separación con respecto de la resina y la desprotección concomitante de cadenas laterales se efectuaron mediante la adición de 1,5 ml de una mezcla de TFA, H_{2}O, DTT y TIS (92,5:2,5:2,5:2,5). Después de haber agitado durante 2,5 h, la resina se filtró y se lavó con 1,5 ml de DCM. Los materiales filtrados se combinaron y se concentraron por centrifugación en vacío.

Cada compuesto se purificó mediante HPLC de fase inversa preparativa usando una columna de C18 (de 22 mm por 500 mm). Las fracciones que contenían productos se identificaron por espectrometría de masas MALDI-TOF, se combinaron y se liofilizaron.

Ejemplo 14 Síntesis del compuesto 210 (Tabla 2); no es parte de este invento

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70

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Usando el protocolo experimental descrito en el Ejemplo 11 y partiendo de una Fmoc-Cys(tritil)-resina de Wang se obtuvo el anterior compuesto como un sólido de color blanco (15,7 mg). MS (FAB) 849,2 (MH^{+}), ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 12, 8 (S ancho, 1H), 12,1 (s ancho, 2H), 8,27 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 8,07 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,00 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,34-7,27 (m, 5H), 4,54-4,39 (m, 5H), 4,31-4,18 (m, 4H), 4,10 (d, J = 11 Hz, 1H), 3,68 (dd, J = 3,9 Hz, J' 10,8 Hz, 1H), 2,90-2,82 (m, 1H), 2,78-2,70 78 (m, 1H), 2,67-2,42 (m, 4H), 2,21-2,17 (m, 3H), 2,00- 1,85 (m, 3H) 1,83 (s, 3H), 1,80-1,67 (m, 1H), 1,67-1,42 (m, 6H), 1,15-0,95 (m, 4H), 0,88 (dd, J = 6,9 Hz, J' = 8,9 Hz, 6H).

Ejemplo 15 Síntesis del compuesto 215 (Tabla 2)

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71

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La síntesis se realizó tal como se muestra seguidamente:

72

75

76

a) Síntesis del compuesto 15b

Se disolvió ácido 1-(N-t-Boc-amino)ciclopropanocarboxílico (15a) (997 mg, 4,96 mmol) en una mezcla de CH_{2}Cl_{2} anhidro (25 ml) y THF (10 ml). La solución se enfrió a 0ºC, se añadieron consecutivamente 2-(trimetil-silil)-etanol (0,852 ml, 5,95 mmol), DMAP (121,1 mg, 0,991 mmol) y una solución de DCC en CH_{2}Cl_{2} (3,65 N; 1,63 ml, 5,95 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante aproximadamente 4 h y luego a TA durante una noche. La suspensión de color blanco se filtró a través de una almohadilla de tierra de diatomeas. La almohadilla se lavó y enjuagó con CH_{2}Cl_{2}. Los materiales filtrados y lavados se evaporaron hasta sequedad. El residuo se diluyó con EtOAc y se lavó consecutivamente con ácido cítrico acuoso al 10% (2x), con NaHCO_{3} saturado (2x), con agua (2x) y con salmuera (1x). La capa orgánica se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se evaporó para proporcionar el éster 15b como un aceite (aproximadamente 1,5 g, 100%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 5,08 (s, 1H), 4,20-4,16 (m, 2H), 1,57-1,43 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,17-1,12 (m, 2H), 1,00-0,94 (m, 2H), 0,04 (s, 9H).

b) Síntesis del compuesto 15c

El éster 15b (aproximadamente 700 mg, 2,33 mmol) se trató durante 40 mm a TA con una mezcla de HCl 4 N y dioxano (11 ml). La solución se concentró hasta sequedad para proporcionar el hidrocloruro de amina como un sólido de color blanco, que luego se sometió a las condiciones de reacción descritas en el Ejemplo 6. La sal hidrocloruro bruta (950 mg, 2,55 mmol) y Boc-4(R)-(naftalen-1-ilmetoxi)-prolina (3) se disolvieron en CH_{2}Cl_{2} anhidro. Se añadieron consecutivamente NMM (1,02 ml, 9,30 mmol) y HATU (1,06 g, 2,79 mmol) y la mezcla se agitó a TA. Después de 1,75 h, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó consecutivamente con ácido cítrico acuoso al 10% (2x), con NaHCO_{3} acuoso saturado (2x), con agua (2x) y con salmuera (1x). La capa de EtOAc se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró hasta sequedad para proporcionar el dipéptido bruto 15c como una espuma de color blancuzco (1,22 g). MS (FAB) 555,4 (MH^{+}), ^{1}H NMR (CDCl_{3}); mezcla de rotámeros, \delta 8,06-8,04 (m, 1H), 7,87-7,80 (m, 2H), 7,55-7,41 (m, 5H), 4,99-4,93 (m, 2H), 4,45-4,21 (m, 2H), 4,16-4,11 (m, 2H), 3,97- 3,45 (m, 2H), 2,70-1,80 (m, 2H), 1,73-1,40 (m, 2H), 1,53 (s, (6/9) 9H), 1,44 (s, (3/9) 9H), 1,20-1,05 (m 2H), 0,97-0,93 (m, 2H), 0,02 (s, 9H).

c) Síntesis del compuesto 15d

El dipéptido bruto 15d (aproximadamente 2,20 mmol) se trató con una mezcla de HCl 4 N y dioxano (11 ml) durante 40. min a TA y la resultante sal hidrocloruro se acopló a Boc-Val-OH (525 mq, 2,42 mmol) con NMM (968 ml, 8,80 mmol) y HATU (1,00 g, 2,64 mmol) como se ha descrito para el compuesto 15c (con la modificación de un tiempo de acoplamiento de 2,5 h). El tripéptido bruto 15d se obtuvo como una espuma de color blancuzco (1,5 g). MS (FAB) 654,4 (MH^{+}). ^{1}H NMR (CDCl_{3}), \delta 8,05-8,02 (m, 1H), 7,87-7,80 (m, 2H), 7,55-7,40 (m, 5H), 7,30-7,28 (m, 1H), 5,19-4,62 (m, 4H), 4,41- 3,70 (m, 1H), 4,35- 4,27 (m, 1H), 4,09-3,95 (m, 1H) 3,73-3,62 (m, 2H), 2,69-2,60 (m, 1H), 2,14-1,94 (m, 2H), 1,55-1,38 (m, 2H), 1,39 (s, 9H), 1,22-1,18 (m, 1H) 1,11-1,07 (m, 1H), 0,98-0,90 (m, SH), 0,02 (s, 9H).

d) Síntesis del compuesto 15e

El tripéptido bruto 15d (aproximadamente 2,20 mmol) se trató con una mezcla de HCl 4 N y dioxano (11 ml) durante 40 min a TA y la resultante sal hidrocloruro se acopló a Boc-Chg-OH (622 mg, 2,42 mmol) con NMM (968 ml, 8,80 mmol) y TBTU (847 mg, 2,64 mmol) como se ha descrito para el compuesto 15c (con las modificaciones de usar TBTU como un agente de acoplamiento y agitar a TA durante aproximadamente 64 h antes de efectuar el tratamiento). El residuo a modo de espuma se purificó por cromatografía de resolución rápida (eluyente: mezcla de hexano y EtOAc 6:4) para proporcionar el tetrapéptido 15e como una espuma de color blanco (710,8 mg; rendimiento de 41% en el transcurso de 3 etapas). MS (FAB) 793,4 (MH^{+}). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 8,07-8,05 (m, 1H), 7,87-7,80 (m, 2H), 7,57-7,41 (m, 4H), 7,35 (s, 1H), 6,72-6,64 (m, 1H), 5,02-4,95 (m, 3H), 4,68-4,62 (m, 2H), 4,43-4,40 (m, 1H), 4,15-4,00 (m, 2H), 3,96-3,93 (m, 2H), 3,68 (dd, J = 11, J' = 5 Hz, 1H), 2,62-2,56 (m, 1H), 2,16-2,00 (m, 2H), 1,70-1,54 (m, 6H), 1,49-1,42 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,14-1,02 (m, 5H), 0,95-0,88 (m, 1OH), 0,02 (s, 9 H).

e) Síntesis del compuesto 15f

El tetrapéptido 15e (168,1 mg, 0,212 mmol) se trató con una solución de HCl 4 N y dioxano (2 ml) y la sal hidrocloruro resultante se acopló a Boc-(D)Glu(OTMSE)-OH (81,0 mg, 0,233 mmol) con NMM (94 ml, 0,848 mmol) y TBTU (81,7 mg, 0,254 mmol) tal como se ha descrito para el compuesto 15e (con la modificación de un tiempo de acoplamiento de 17 h). El pentapéptido bruto 15f se obtuvo como una espuma de color blancuzco (220 mg, 0,212 mmol). MS (FAB) 1022,8 (MH^{+}) 1044,8 (MNa^{+}). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 8,07-8,05 (m, 1H), 7,88-7,81 (m, 2H), 7,57-7,41 (m, 4H), 7,29 (s, 1H), 6,70-6,55 (m, 2H), 5,45-5,35 (m, 1H), 4,99-4,98 (m, 2H), 4,66-4,57 (m, 2H), 4,44-4,40 (m, 1H), 4,30-4,01 (m, 5H), 3,91 (dd, J = 11, J' = 4 Hz, 1H), 3,76-3,62 (m, 2H), 2,62-2,56 (m, 1H), 2,50-2,30 (m, 3H), 2,18-2,09 (m, 2H), 2,06-1,90 (m, 2H), 1,67-1,53 (m, 4H), 1,50-1,42 (m, 4H), 1,43 (s, 9H), 1,14-0,86 (m, 1OH), 0,93 (d, J = 7 Hz, 3H), 0,87 (d, J' = 7 Hz, 3H), 0,04 (s, 9H), 0,02 (s, 9H).

f) Síntesis del compuesto 15g

El pentapéptido bruto 15f (aproximadamente 0,212 mmol) se trató con una solución de HCl 4 N en dioxano (2,5 ml) durante 40 mm a TA y la sal hidrocloruro resultante se acopló a Boc-Asp(OTMSE)-OH (77,8 mg, 0,233 mmol) con NMM (93 ml, 0,848 mmol) y TBTU (81,7 mg, 0, 254 mmol) como se ha descrito para el compuesto 15e (con la modificación de un tiempo de acoplamiento de 2,5 h). El hexapéptido bruto 15g se obtuvo como una espuma de color marfil (278 mg, 0,212 mmol). MS (FAB) 1237,5 (MH^{+}) 1259 (MNa^{+}).

g) Síntesis del compuesto 15h

El hexapéptido bruto 15g (aproximadamente 0,2 mmol) se trató durante 40 mm a TA con 2,5 ml de una solución de HCl 4 N en dioxano. La concentración hasta sequedad proporcionó el hidrocloruro de amina como un sólido de color blanco. La sal hidrocloruro bruta se disolvió en DMF anhidra (2,5 ml) y se trató consecutivamente con piridina (377 \mul, 4,66 mmol) y anhídrido acético (378 \mul, 4,01 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante una noche a TA, luego se vertió en salmuera y se extrajo con EtOAc (3x). La capa orgánica combinada se lavó consecutivamente con ácido cítrico acuoso al 10% (2x), con NaHCO_{3} saturado (2x), con agua (2x) y con salmuera (1x). La capa orgánica se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se evaporó hasta sequedad. El residuo espumoso se purificó por cromatografía de resolución rápida (eluyente: mezcla de hexano y EtOAc 3:7) para proporcionar el hexapéptido acetilado 15h como una espuma de color blancuzco (78,5 mg, rendimiento 31% en el transcurso de 3 etapas). MS (FAB) 1179,6 (MH^{+}) 1201,5 (MNa^{+}). ^{1}H NMR (CDC_{3}) \delta 8,11-8,09 (m, 1H), 7,86-7,79 (m, 2H), 7,55-7,41 (m, 5H), 7,28 (s, 1H), 7,02-6,96 (m, 2H) 6,70-6,68 (m, 1H), 5,13-5,10 (m, 1H), 4,96-4,91 (m, 2H) 4,58-4,41 (m, 4H), 4,22-4,08 (m, 8H), 3,77 (dd, J = 10,5, J' = 5 Hz, 1H), 3,09 (dd, J = 18, J' = 4 Hz, 1H), 2,76 (dd, J = 17,5, J' = 8 Hz, 1H), 2,51-2,20 (m, 3H), 2,12-2,08 (m, 2H), 2,09 (s, 3H), 1,73-1,53 (m, 8H), 1,27-1,09 (m, 7H), 1,01-0,85 (m, 8H), 0,98 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 0,97 (d, J = 6 Hz, 3H), 0,04 (s, 9H), 0,03 (s, 9H), 0,01 (s, 9H).

h) Síntesis del compuesto 215

El hexapéptido acetilado 15h (76,5 mg, 0,065 mmol) se disolvió en THF anhidro (2 ml) se añadió una solución de TBAF (1 M en THF; 389 \mul, 0,389 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 16 h. La solución se concentró en vacío y el residuo se disolvió en ácido acético glacial, se filtró a través de una unidad de filtración Millipore® Millex®-HV 0,45 \mum y se inyectó sobre una columna de fase inversa C18 Whatman Partisil® 10-ODS-3 (2,2 x 50 cm) Programa de purificación: Gradiente Lineal a 15 ml/min, \lambda 230 nm, programa a 5% de A durante 10 min, 5-30% de A en 10 min, a 30% de A durante 10 min, 30-60% de A en 90 min. A: 0,06% de TFA en CH_{3}CN; B: 0,06% de TFA en H_{2}O. Las fracciones se analizaron mediante una HPLC analítica. El producto recogido se liofilizó para proporcionar el ácido hexapéptido 215 como un sólido amorfo de color blanco (26,9 mg; que contiene 41% en peso de sales de tetrabutilamonio, rendimiento 28%). MS (FAB) 879,4 (MH^{+}), 901,3 (MNa^{+}). Con el fin de eliminar la sal de tetrabutil-amonio, el producto anterior (aproximadamente 18 mg) se disolvió en EtOAc y se lavó con HCl al 10% (2x). La capa de EtOAc se evaporó, luego se liofilizó con agua para proporcionar el producto exento de sal como un sólido amorfo de color blanco (3,8 mg, rendimiento 36%). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 8,39 (s, 1H), 8,10-7,81 (m, 7H), 7,57-7,45 (m, 4H), 5,07-4,87 (m, 2H), 4,55-4,00 (m, 7H), 3,76-3,71 (m, 1H), 2,67-2,62 (m, 1H), 2,33-2,10 (m, 3H), 2,05-1,42 (m, 8H), 1,79 (s, 3H) 1,38-0,71 (m, 1H), 0,89 (d, J = 6,68 Hz, 3H), 0,86 (d, J = 6,36 Hz, 3H).

Ejemplo 16 Síntesis del compuesto 214 (Tabla 2)

77

Para la síntesis del compuesto 214 se siguió el procedimiento descrito en el Ejemplo 15, usando Boc-4(R)-(naftalen-2-ilmetoxi)prolina para la introducción del fragmento P2 y con diferentes grupos protectores en los residuos de ácidos carboxílicos de las cadenas laterales.

La síntesis se describe seguidamente:

78

a) Síntesis del compuesto 16b

A 0ºC, se añadió bromuro de bencilo (5,74 ml, 48,3 mmol) a una mezcla de Boc-norvalina (16a) (10,0 g, 46,0 mmol) y DBU (7,57 ml, 50,6 mmol) en acetonitrilo (200 ml) Después de haber agitado a TA durante 20 h, la solución se concentró y el residuo se disolvió en éter. La solución orgánica se lavó consecutivamente con ácido cítrico acuoso al 10% (2x), con NaHCO_{3} acuoso saturado (2x) y con salmuera (1x), se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró para dar el éster bencílico 16b deseado como un aceite incoloro (13,7 g, rendimiento 97%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,40-7,32 (m, 5H), 5,16 (dd, J = 26,7, J' = 12,4 Hz, 2H), 4,99 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 4,35-4,32 (m, 1H), 1,82-1,73 (m, 1H) 1,66-1,57 (m, 1H), 1,43 (s, 9H), 1,41-1,32 (m, 2H), 0,90 (t, J = 7,3 Hz, 3H).

b, c, d, e, f, g) Síntesis del compuesto 16h

El anterior éster bencílico de Boc-Nva (121 mg, 0,48 mmol) se sometió a la misma secuencia de reacciones que se describe en el Ejemplo 7. No obstante, para la introducción de P2 (operación b) se usó Boc-4(R)-(naftalen-2-ilmetoxi)-prolina. También para la introducción de P5 (operación e) y de P6 (operación f), los correspondientes residuos Boc-D-Glu-OH y Boc-Asp-OH se protegieron en forma de ésteres de bencilo en la cadena lateral de ácido carboxílico.

h) Síntesis del compuesto 214

A una solución del hexapéptido 16h (aproximadamente 0,210 mmol) en etanol (3 ml) se le añadieron paladio al 10% sobre carbón orgánico (10 mg) y acetato de amonio (10 mg). La mezcla se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno durante 5 h, luego se filtró a través de una unidad de filtración de Millipore®: Millex®-HV 0,45 \mum y se inyectó sobre una columna de fase inversa C18 Whatman Partisil® 10-ODS-3 (2,2 x 50 cm) equilibrada. Programa de purificación: gradiente lineal a 15 ml/min, \lambda 230 nm, a 5% hasta 50% de A en 60 mm A: 0,06% de TFA en CH_{3}CN; B: 0,06% de TFA en H_{2}0. Las fracciones se analizaron por HPLC. El producto recogido se liofilizó para proporcionar el compuesto 214 como un sólido de color blanco (20 mg, 0,02 mmol). MS (FAB) 895,5 (MH^{+}), ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 8,16 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,91-7,88 (m, 3H), 7,85 (s, 1H), 7,77 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,51-7,46 (m, 3H), 4,70 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,60 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,53-4,45 (m, 2H), 4,33-4,10 (m, 6H), 3,69 (dd, J = 19, J' = 4,4 Hz, 1H), 2,66-2,60 (m, 1H), 2,49-2,43 (m, 1H), 2,21-2,18 (m, 3H) 2,07-1,94 (m, 3H), 1,82 (s, 3H), 1,76-1,33 (m, 1OH), 1,04-0,86 (m, 15H).

Ejemplo 17 Síntesis del compuesto 221 (Tabla 2)

82

El ácido mono-bencil-succínico (preparado como se ha descrito en: Bischoff, V. y colaboradores, Chem. Ber. (1902) 35, 4078) (27 mg, 0,134 mmol) se agitó en acetonitrilo (2 ml) con TBTU (52 mg, 0,160 mmol) y NMM (47 mg, 0,469 mmol) durante 5 min. A esta mezcla se le añadió la sal hidrocloruro del apropiado tetrapéptido (preparado como se ha descrito para el compuesto 16e pero usando isoleucina en lugar de ciclohexilglicina y 4(R)-(naftalen-1-ilmetoxi)prolina en lugar de 4(R)-(naftalen-2-ilmeto-xi)prolina (97,0 mg, 0,134 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 2,5 h. Se añadió acetato de etilo y la mezcla se lavó con ácido cítrico acuoso al 10% (2x) con NaHCO_{3} acuoso saturado (2x) y con salmuera (1x), se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró para proporcionar el tetrapéptido protegido como un aceite de color amarillo.

El anterior compuesto (aproximadamente 0,134 mmol) se disolvió en etanol (3 ml) y acetato de amonio (10 mg) y se añadieron hidróxido de paladio al 20% sobre carbón activado (30 mg). La mezcla se agitó bajo 1 atmósfera de hidrógeno durante 18 h, luego se filtró a través de una unidad de filtración Millipore®: Millex®-HV 0,45 \mum y se inyectó sobre una columna de fase inversa C18 Whatman Partisil 10-ODS-3 equilibrada (de 2,2 x 50 cm). Programa de purificación: Gradiente Lineal a 15 ml/min, \lambda 230 nm, 5% de A durante 10 mm, 5-60% de A en 60 min (A: 0,06% de TFA en CH_{3}CN; B: 0,06% de TFA en H_{2}O). Las fracciones se analizaron por HPLC. El producto recogido se liofilizó para proporcionar el compuesto 221 como un sólido de color blanco (21 mg). MS (FAB) 683 (MH^{+}). ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 8,12 (d, 7,6 Hz, 1H), 8,07-8,03 (m, 1H), 7,96-7,81 (m, 4H), 7,59-7,51 (m, 3H), 7,55 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 4,90 (d, J = 8 Hz, 1H), 4,82 (d, J = 8 Hz, 1H), 4,45 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 4,36-4,31 (m, 2H), 4,24-4,12 (m, 3H), 3,74-3,68 (m, 1H), 2,43-2,31 (m, 4H), 2,24-2,18 (m, 1H), 2,01-1,92 (m, 2H), 1,67-1,51 (m, 3H), 1,42-1,32 (m, 3H), 1,14-0,96 (m, 1H), 0,93-0,67 (m, 15H).

Ejemplo 18

La siguiente descripción es un ejemplo de un compuesto de fórmula I en la que Q es CH_{2}C(O).

Preparación del compuesto 413 (Tabla 4)

83

84

Compuesto 18b

1) Al ácido ciclohexilacético (18a) (8 g, 56,25 mmol) en DCM (160 ml) a temperatura ambiente se le añadieron el cloruro de oxalilo (6,4 ml, 73,14 mmol) y 2 gotas de DMF. La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 1 h, luego se concentró bajo presión reducida para dar el cloruro de ciclohexilacetilo.

2) El compuesto auxiliar quiral, (4S)-(-)-4-isopropil-2-oxazolidinona (7,63 g, 59,06 mmol) se disolvió en THF (200 ml) y se enfrió a -78ºC. Se añadió lentamente (durante un periodo de tiempo de 10 min) N-butil-litio (1,6 M) en hexano (36,9 ml, 59,06 mmol). La mezcla se agitó a -78ºC durante 30 min (se formó un gel). El cloruro de ciclohexilacetilo antes mencionado se añadió a THF (50 ml) a -78ºC. La mezcla de reacción se agitó a -78ºC durante 30 min y luego a 0ºC durante 1 h. La mezcla de reacción se sofocó añadiendo una solución acuosa de NH_{4}Cl (16 ml). La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. Se añadió Et_{2}0 (300 ml). La fase orgánica se separó y se lavó con una solución acuosa al 10% de ácido cítrico (2 x 200 ml), con una solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (2 x 200 ml) y con salmuera (200 ml), se secó, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía de resolución rápida (gel de sílice, 40-60 \mu, 60 x 100 mm, mezclas de hexano y EtOAc 9/1 \rightarrow 8/2 para dar el compuesto 18b como un aceite incoloro (11,3 g, rendimiento 79%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta4,40-4,36 (m, 1H), 4,20 (dd, J = 8,3 Hz, J = 9,1 Hz, 1H), 4,13 (dd, J = 2,9 Hz, 9,1 Hz, 1H), 2,86 (dd, J = 6,4 Hz, 15,7 Hz, 1H), 2,65 (dd, J = 7,1 Hz, 15,7 Hz, 1H), 2,35-2,27 (m, 1H), 1,83-1,76 (m, 1H), 1,70-1,57 (m, 5H), 1,26-0,90 (m, 5H), 0,85 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 0,81 (d, J = 6,7 Hz, 3H)

Compuesto 18c

A una solución del compuesto 18b (11,3 g, 44,68 mmol) en THF (125 ml) a -78ºC se le añadió una solución de NaHMDS (1 M en THF, 49,2 ml, 49,15 mmol). La mezcla de reacción se agitó a -78ºC durante 1,5 h. Se añadió a -78ºC una solución de bromoacetato de terc.-butilo (8,67 ml, 53,62 mmol) en THF (25 ml). La mezcla se agitó a esa temperatura durante 3 h. Se añadió lentamente una solución acuosa saturada de una solución de NH_{4}Cl (33 ml). El baño frío se retiró y la mezcla se agitó a la temperatura ambiente durante 10 min. Se eliminó el THF. Se añadió EtOAc (200 ml). La fase orgánica se separó, se lavó en serie con una solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (200 ml), con H_{2}O (200 ml), con una solución acuosa de 1 N de HCl (200 ml) y. con salmuera (200 ml), se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó por trituración con Et_{2}O, dando el compuesto 18c como un sólido de color blanco (12,5 g, rendimiento 77%).

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta4,61-4,53 (m, 3H), 4,27-4,25 (m, 1H) 2,84-2,66 (m, 2H), 2,55-2,41 (m, 1H), 1,89-1,76 (m, 6H) 1,58 (s, 9H), 1,35-1,31 (m, 4H), 1,14-1,04 (m, 7H)

Compuesto 18d

A una solución enfriada por hielo del compuesto 18c (12,2 g, 33,28 mmol) en una mezcla de THF y H_{2}O (mezcla 3/1, 495 ml/165 ml) se le añadió H_{2}O_{2} (al 30%, 15,1 ml, 133,1 mmol), seguida por una lenta adición de LiOH-H_{2}O (2,79 g, 66,56 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 1 h y luego a TA durante una noche. La mezcla se enfrió a 0ºC y se añadió lentamente una solución acuosa 1,5 N de Na_{2}SO_{3} para descomponer el peróxido de exceso (vigilado por un papel de KI). La mezcla se concentró bajo presión reducida, la solución acuosa residual se lavó con DCM (2 x 150 ml). La capa acuosa se hizo ácida con una solución acuosa al 10% de ácido cítrico. La mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 200 ml). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (200 ml), se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró bajo presión reducida. El compuesto 18d se obtuvo como un aceite incoloro (8,38 g, rendimiento
98%).

^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta2,71-2,66 (m, 1H), 2,59 (dd, J = 10,8 Hz, 16,0 Hz, 1H), 2,36 (dd, J = 3,8 Hz, 16,0 Hz, 1H), 1,78-1,57 (m, 6H), 1,41 (s, 9H), 1,30-0,98 (m, 5H)

Compuesto 18f

1) El correspondiente derivado con Boc del compuesto 18e (1,63 g, 2,74 mmol) se trató con una mezcla de HCl 4 N y dioxano (14 ml, 54,91 mmol) a TA durante 1 h. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. Se añadió al residuo una solución acuosa al 5% de Na_{2}CO_{3} (25 ml) y la solución resultante se agitó enérgicamente durante 5 min. Se añadió EtOAc (75 ml). Las dos fases resultantes se separaron. La fase orgánica se lavó con salmuera (50 ml), se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto 18e que se usó tal como estaba para la siguiente operación.

2) Al amino-tripéptido en DMF (5 ml) a TA se le añadió el compuesto 18d (739 mg, 288 mmol) en DMF (5 ml), seguido por DIPEA (1,43 ml, 8,24 mmol) y TBTU (502 mg, 2,88 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante una noche. Se añadió EtOAc (125 ml). La fase orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (100 ml), H_{2}O (100 ml) y salmuera (100 ml), se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía de resolución rápida (en gel de sílice, 40-60 \mu, 40 x 125 mm, mezclas de hexano y EtOAc 6/4 \rightarrow 5/5) para dar el compuesto éster terc.-butílico 18f como una espuma de color blanco (1,18 g, rendimiento 59%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 8,06 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,55-7,40 (m, 4H), 7,35 (s, 1H), 6,28 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 5,86-5,79 (m, 1H), 5,24 (dd, J = 1,6 Hz, 17,2 Hz, 1H), 5,17 (dd, J = 1,3 Hz, J = 10,5 Hz, 1H), 4,98 (ABq, \deltaí =18,7 Hz, J = 12,1 Hz, 2H), 4,67-4,51 (m, 4H), 4,41-4,38 (m, 1H), 3,99 (dd, J = 3,8 Hz, 10,8 Hz, 1H), 2,64-2,59 (m, 2H), 2,42-2,38 (m, 2H), 2,10-1,95 (m, 2H), 1,68-1,53 (m, 9H), 1,43-1,41 (m, 1H), 1,42 (s, 9H), 1,15-1,04 (m, 4H) 0,97-0,91 (m, 8H).

Compuesto 18h

Al éster metílico de ácido 3-[(bencil-2-metoxi-carbanil-etil)amino]propiónico comercialmente disponible (18g) (2 g, 7,16 mmol) en MeCH (24 ml) se le añadió el catalizador de paladio (Pd/C al 10%, 500 mg, 25% p/p). La mezcla de reacción se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno (un globo) durante 18 h. La mezcla se filtró a través de tierra de diatomeas y la almohadilla de filtro se lavó con MeOH (20 ml). El MeOH (material filtrado más material lavado) se evaporó para dar 1,2 g (rendimiento 89%) del compuesto 18h como un aceite de color amarillo pálido. Este producto se usó tal como estaba para la siguiente operación.

Compuesto 18i

1) El compuesto éster t-butílico 18f, (1,18 g, 1,62 mmol) se trató con HCl 4 N en dioxano (8,5 ml, 32,4 mol) a TA durante 6 h. La mezcla se concentró bajo presión reducida y luego se evaporó conjuntamente con una mezcla de benceno y Et_{2}O para dar 1,04 g del correspondiente ácido como una espuma de color beige (rendimiento 95%).

2) Al último ácido (200 mg, 0,29 mmol) en DMF (1 ml) a TA se le añadió la amina (compuesto 18h, 59 mg, 0,31 mmol) en DMF (2 ml), seguida por DIPEA (154 \mul, 0,89 mmol) y TBTU (100 mg, 0,31 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 72 h. Se añadió EtOAc (125 ml). La fase orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (75 ml), con H_{2}O (75 ml) y con salmuera (75 ml), se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró bajo presión reducida. El producto se purificó por cromatografía de resolución rápida (gel de sílice, 40-60 \mu, 20 x 100 mm, mezcla de EtOAc y hexano 8/2 para dar el compuesto 18i como un aceite de color amarillo (82 mg, rendimiento 33%).

MS (ESI) 869,3 (M+Na)^{+}, 8,45,4 (M-H)^{-}.

Compuesto 413

Una solución acuosa 1 M de NaOH (774 \mul, 0,774 mmol) se añadió a una solución del compuesto 18i (82 mg, 0,097 mmol) en una mezcla de THF y MeOH (1/1, 1 ml de cada uno). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 18 h. Se añadió H_{2}O (15 ml). La fase acuosa se separó y se lavó con DCM (3 x 15 ml). La fase acuosa se hizo ácida (a pH 3) añadiendo una solución acuosa de HCl 1 N. La mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 15 ml). La fase orgánica se lavó con salmuera (25 ml), se secó (sobre MgSO_{4}), se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó por HPLC preparativa (en MeCN al 5% \rightarrow 53% en 60 min) para dar el compuesto 413 como un material sólido liafilizado de color blanco (31 mg, rendimiento 41%).

MS (ESI) 779,3 (M+H)^{+}, 801,3 (M+Na)^{+}, 777,3 (M-H)^{-}

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 8,38 (S, 1H), 8,06 (d, J = 8,3 Hz, 1H) 7,93 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,57-7,44 (m, 5H), 5,01 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,89 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,35-4,31 (m, 2H) 4,25 (dd, J = 7,9 Hz, 8,3 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 3,80-3,49 (m, 3H), 3,37-3,34 (m, 2H), 2,63-2,61 (m, 2H), 2,56-2,52 (m, 1H), 2,39-2,35 (m, 2H), 2,25-2,20 (m, 2H), 2,05-1,91 (m, 2H), 1,62-1,59 (m, 1H), 1,41-1,22 (m, 5H), 0,96-0,73 (m, 16H)

Ejemplo 19 Análisis radiométrico de la proteasa de NS3 del HCV recombinante a) Clonación, expresión y purificación de la proteasa tipo 1 de NS3 del HCV recombinante

Se obtuvo el suero de un paciente infectada por HCV mediante una colaboración externa (Bernard Willems MD, Hôpital St-Luc, Montréal, Canada y Dr. Donald Murphy, Laboratoire de Santé Publique du Quebec, Ste-Anne de Bellevue, Canada). Se construyó un molde de ADNc de plena longitud tratado por ingeniería genética del genoma del HCV a partir de fragmentos de ADN obtenidos mediante una reacción en cadena de polimerasa de transcripción inversa (RT-PCR, de reverse transcription-polymerase chain reaction) de un ARN de suero y usando cebadores específicas seleccionados sobre la base de la homología entre otras cepas del genotipo 1b. A partir de la determinación de toda la secuencia genómica, se asignó un genotipo 1b al material aislado de HCV de acuerdo con la clasificación de Simmonds y colaboradores (J. Clin. Microbiol. (1993), 31, 1493-1503.). Se mostró que la secuencia de aminoácidos de la región no estructural NS2-NS4B era idéntica en más de 93% al genotipo 1b del HCV (materiales aislados BK, JK y 483) e idéntica en un 88% al genotipo la del HCV (material aislado del HCV-l). Se generó por PCR un fragmento de ADN que codificaba el precursor de poliproteína (NS3/NS4A/NS4B/NS5A/NS5B) y se introdujo en vectores de expresión eucarióticas. Después de una transfección transitoria, se demostró el tratamiento de una poliproteína mediado por la proteasa de NS3 del HCV por la presencia de la proteína NS3 madura usando un análisis por transferencia Western. La proteína NS3 madura no fue observada con expresión de un precursor de poliproteína que contenía la mutación S1165A, que desactiva a la proteasa de NS3, confirmando la funcionalidad de la proteasa de NS3 del HCV. El fragmento de ADN que codificaba la proteasa de NS3 del HCV recombinante (aminoácidos 1.027 a 1.206) fue clonado en el vector de expresión bacteriano pET11d. La expresión de la proteasa de NS3 en E. coli BL(DE3)pLysS se indujo por incubación con IPTG 1 mM durante 3 h a 22ºC. Una típica fermentación (de 18 l) proporcionó aproximadamente 100 g de una pasta celular húmeda. Las células se volvieron a suspender en un tampón para lisis (3,0 ml/g) que consistía en fosfato de sodio 25 mM, pH 7,5, glicerol al 10% (v/v), EDTA 1 mM y NP-40 al 0,01%, y se almacenó a -80ºC. Las células se descongelaron y homogeneizaron a continuación de la adición de DTT 5 mM. Se añadieron luego cloruro de magnesio y DNasa al material homogeneizado en concentraciones finales de 20 mM y 20 \mug/ml respectivamente. Después de una incubación durante 25 min a 4ºC, el material homogeneizado se trató con ultrasonidos y se centrifugó a 15.000 x g durante 30 min a 4ºC. El pH del material sobrenadante se ajustó luego a 6,5 usando una solución 1 M de fosfato de sodio.

Una etapa adicional de cromatografía con filtración a través de gel se añadió al proceso de purificación de 2 etapas que se ha descrito en el documento de patente mundial WO 95/22985. Dicho brevemente, el material sobrenadante procedente del extracto bacteriano se cargó sobre una columna con SP HiTrap® (Pharmacia) previamente equilibrada a un caudal de 2 ml/min en el tampón A (fosfato de sodio 50 mM, pH 6,5, glicerol al 10%, EDTA 1 mM, DTT 5 mM, NP-40 al 0,01%). Luego la columna se lavó con el tampón A que contenía NaCl 0,15 M y la proteasa se eluyó aplicando 10 volúmenes de columna de un gradiente lineal de NaCl desde 0,15 hasta 0,3 M. Las fracciones que contenían la proteasa de NS3 se agruparon y se diluyeron hasta una concentración final de NaCl de 0,1 N. La enzima se purificó adicionalmente en una columna con HiTrap® Heparin (Pharmacia) equilibrada en el tampón B (fosfato de sodio 25 mM, pH 7,5, glicerol al 10%, DTT 5 mM, NP-40 al 0,01%). La muestra se cargó a un caudal de 3 ml/min. Luego la columna se lavó con el tampón B que contenía NaCl 0,15 M a un caudal de 1,5 ml/min. Se realizaron lavados en dos etapas en la presencia del tampón B que contenía NaCl 0,3 ó 1 M. La proteasa se recuperó en el material lavado con NaCl 0,3 M, se diluyó a 3 veces con el tampón B, se volvió a aplicar sobre la columna con HiTrap® Heparin y se eluyó con el tampón B que contenía NaCl 0,4 M. Finalmente, las fracciones que contenían la proteasa de NS3 se aplicaron sobre una columna con Superdex 75 HiLoad® 16/60 (Pharmacia) equilibrada en el tampón B que contenía NaCl 0,3 M. Se estimó que la pureza de la proteasa de NS3 del HCV, obtenida a partir de las fracciones agrupadas era mayor que 95% por un SDS-PAGE seguido por un análisis densitométrico.

La enzima se almacenó a -80ºC y se descongeló sobre hielo, y se diluyó justamente antes de su uso.

b) Análisis radiométrico de la proteasa de NS3 del HCV recombinante

El substrato usado para el análisis radiométrico de la proteasa de NS3 del HCV, DDIVPC-SMSYTW, es cortado entre los residuos de cisteína y serina por la enzima. La secuencia DDIVPC-SNSYTW corresponde al sitio de corte natural de NS5A/NS5B en que el residuo de cisteína en P2 ha sido reemplazado por una prolina. El substrato de péptido DDIVPC-SMSYTW y el trazador biotina-DDIVPC-SMS[^{125}I-Y]TW se incubaron con la proteasa de NS3 recombinante en la ausencia o en la presencia de inhibidores. La separación del substrato a partir de los productos se realizó añadiendo glóbulos de agarosa revestidos con avidina a la mezcla de análisis, seguido por una filtración. La cantidad del producto SMS[^{125}I-Y]TW encontrado en el material filtrado (con o sin inhibidor) permitió el calculo del porcentaje de conversión del substrato y del porcentaje de inhibición.

A. Reactivos

El Tris y el Tris-HCl (UltraPure) se obtuvieron de Life Technologies. El glicerol (UltraPure), el MES y el BSA se adquirieron de Sigma®. El TCEP se obtuvo de Pierce, el DMSO se obtuvo de Aldrich® y el NaOH se obtuvo de Anachemia®.

Tampón de análisis: Tris-HCl 50 mM, pH 7,5, glicerol al 30% (p/v), CHAPS al 2% (p/v), BSA 1 mg/ml, TCEP 1 mM (el TECP se añadió justamente antes de su uso a partir de una solución de reserva 1 M en agua)

Substrato: DDIVPC-SMSYTW, concentración final 25 \muM (a partir de una solución de reserva 2 mM en DMSO almacenada a -20ºC para evitar la oxidación).

Trazador: Substrato mono-yodado reducido (biotina-DDIVPC-SMS[^{125}I-Y]TW) (concentración final \approx 1 nM)

Proteasa de tipo 1b de NS3 del HCV, concentración final 25 nM (a partir de una solución de reserva 2 mM en fosfato de sodio 50 mM, pH 7,5, glicerol al 10%, NaCl 300 mM, DTT 5 mM, NP-40 al 0,01%)

B. Protocolo

El análisis se realizó en una placa de polipropileno de 96 pocillos. Cada pocillo contenía:

\bullet: 20 \mul de una mezcla de substrato y trazador en tampón de análisis;

\bullet: 10 \mul \pm inhibidor en una mezcla de 20% de DMSO y tampón de análisis;

\bullet: 10 \mul de proteasa 1 b de NS3.

Se prepararon también una muestra en vacía (sin inhibidor y sin enzima) y una muestra testigo (sin inhibidor) sobre la misma placa de análisis.

La reacción enzimática se inició por la adición de la solución de enzima, y la mezcla de análisis se incubó durante 60 min a 23ºC mediando suave agitación. Se añadieron veinte (20) \mul de NaOH 0,025 N para sofocar la reacción enzimática.

Se añadieron veinte (20) \mul de glóbulos de agarosa revestidos con avidina (adquiridos de Pierce®) en una placa de filtración de Millipore® MADP N65. La mezcla de análisis sofocada se transfirió a la placa de filtración, y se incubó durante 60 min a 23ºC mediando suave agitación.

Las placas se filtraron usando un aparato de filtración en múltiple distribuidor de vacío Millipore® MultiScreen Vacuum Manifold Filtration y se transfirieron 40 \mul del material filtrado a una placa opaca de 96 pocillos que contenía 60 \mul de un fluido de escintilación por pocillo.

Los materiales filtrados se recontaron en un instrumento Packard® TopCount usando un protocolo de ^{125}I-líquido durante 1 minuto. El % de inhibición se calculó con la siguiente ecuación:

100 -- [(cómputo_{inh} -- cómputo_{\text{vacío}})/(cómputo_{inh} -- cómputo_{\text{vacío}}) x 100]

Se aplicó un ajuste de curva no lineal con el modelo de Hill a los datos de inhibición y concentración y se calculó la concentración efectiva de 50% (IC_{50}) por el uso de un programa lógico de SAS (Statistical Software Systems, SAS Institute, Inc., Cary, N.C.)

Ejemplo 20 Análisis radiométrico de una mezcla de la proteasa de NS3 del HCV recombinante y del péptido cofactor de NS4A

La enzima se clonó, expresó y preparó de acuerdo con el protocolo descrito en el Ejemplo 19. La enzima se almacenó a -80ºC, se descongeló sobre hielo y se diluyó justamente antes de su uso en el tampón de análisis que contenía el péptido cofactor de NS4A.

El substrato usado para el análisis radiométrico de la mezcla de proteasa de NS3 y el péptido cofactor de NS4A, DDIVPC-SMSYTW, es cortado por la enzima entre los residuos de cisteína y de serina. La secuencia DDIVPC-SMSYTW corresponden al sitio de corte natural en NS5A/NS5B en el que el residuo de cisteína en P2 ha sido reemplazada por una prolina. El substrato de péptido DDIVPC-SMSYTW y el trazador biotina-DDIVPC-SMS[^{125}I-Y]TW se incuban con la proteasa de NS3 recombinante y el péptido cofactor de NS4A KKGSVVIVGRIILSGRK (relación molar de enzima a cofactor 1:100) en la ausencia o presencia de inhibidores. La separación del substrato con respecto de los productos se realiza añadiendo glóbulos de agarosa revestidos con avidina a la mezcla de análisis, seguida por filtración. La cantidad del producto SMS[^{125}I-Y]TW encontrado en el material filtrado permite el cálculo del porcentaje de conversión del substrato y del porcentaje de inhibición.

A. Reactivos

El Tris y el Tris-HCl (UltraPure) se obtuvieron de Life Technologies. El glicerol (UltraPure), el MES y el BSA se adquirieron de Sigma®. El TCEP se obtuvo de Pierce, el DMSO se abtuvo de Aldrich® y el NaOH se obtuvo de Anachemia®.

Tampón de analisis: Tris-HCl 50 mM, pH 7,5, glicerol al 30% (p/v), CHAPS al 2% (p/v), BSA 1 mg/ml, TCEP 1 mM (el TECP se añadió justamente antes de su uso a partir de una solución de reserva 1 M en agua)

Substrato: DDIVPCSMSYTW, concentración final 25 \muM (a partir de una solución de reserva 2 mM en DMSO almacenada a -20ºC para evitar la oxidación).

Trazador: Substrato mono-yodado reducido (biotina-DDIVPC-SMS[^{125}I-Y]TW) (concentración final 1 nN)

Proteasa de tipo 1b de NS3 del HCV, concentración final 25 nM (a partir de una solución de reserva en fosfato de sodia 50 mM, pH 7,5, glicerol al 10%, NaCl 300 mM, DTT 5 mM, NP-40 al 0,01%)

Péptido cofactor de NS4A: KKGSVVIVGRIILSGRK, concentración final 2,5 \muM (procedente de una solución de reserva 2 mM en DMSO almacenada a -20ºC).

B. Protocolo

El análisis se realizó en una placa de poliprapilena de 9 pocillos. Cada pocillo contenía:

\bullet: 10 \mul \pm inhibidor en una mezcla de 20% de DMSO y tampón de análisis

\bullet: 10 \mul de proteasa 1 b de NS3.

Se prepararon también una muestra en vacío (sin inhibidor y sin enzima) y una muestra testigo (sin inhibidor) sobre la misma placa de análisis.

La reacción enzimática se inició por la adición de la solución de enzima y péptida de NS4A, y la mezcla de análisis se incubó durante 60 mm a 23ºC mediando suave agitación. Se añadieron diez (10) \mul de NaOH 0,05 N y 10 \mul de MES 1 M, de pH 5,8 para sofocar la reacción enzimática.

Se añadieran veinte (20), \mul de glóbulos de agarosa revestidos con avidina (adquiridos de Pierce®) en una placa de filtración de Millipare® MADP N65. La mezcla de analisis sofocada se transfirió a la placa de filtración, y se incubó durante 60 min a 23ºC mediante suave agitación.

Las placas se filtraron usando un aparato de filtración en múltiple distribuidor de vacío Miilipore® MultiScreen Vacuum Manifold Filtration y se transfirieron 40 \mul del material filtrado a una placa apaca de 96 pocillos que contenía 60 \mul de un fluido de escintilación por pocillo.

Los materiales filtrados se recontaron en un instrumento Packard® TopCount usando un pratacolo de ^{125}I-líquido durante 1 minuto.

El valor de la IC_{50} se calculó de la misma manera que en el Ejemplo 19.

Ejemplo 21 Análisis de la especificidad

Se determinó la especificidad de las compuestos frente a una diversidad de proteasas de serina: elastasa de leucocitos humanos, elastasa pancreática porcina y \alpha-quimotripsina pancreática bovina y una proteasa de cisteína: catepsina B de hígado humano. En todos los casos se usó un protocolo con el formato de placas de 96 pocillos usando un substrato colorimétrico de p-nitroanilida (pNA) específica para cada enzima. Cada análisis incluía una pre-incubación a 30ºC de la mezcla de enzima e inhibidor durante 1 h a 30ºC, seguida por adición del substrato e hidrólisis a una conversión
\approx 30%, como se midió en un lector de microplacas UV Thermomax®. Las concentraciones del substrato se mantuvieron lo más bajas que fuera posible en comparación con K_{m} para reducir la competencia del substrato. Las concentraciones del compuesto variaron entre 300 y 0,06 \muM dependiendo de su potencia. Las condiciones finales para cada análisis fueron como sigue:

Tris-HCl 50 mM, pH 8, Na_{2}SO_{4} 0,5 N, NaCl 50 mM, EDTA 0,1 mM, DM90 al 3%, Tween-20 al 0,01% con:

[Succ-AAPF-pNA 100 \muM y \alpha-quimotripsina 250 pM], [Succ-AAA-pNA 133 \muM y elastasa porcina 8 nM], [Succ-AAV-pNA 133 \muM y elastasa de leucocitos 8 nM], o [NaHPO_{4} 100 \muM, pH 6, EDTA 0,1 mM, DMSO al 3%, TCEP 1 mM, Tween-20 al 0,01%, Z-FR-pNA 30 \muM y catepsina B 5 nM (la enzima de reserva fue activada en un tampón que contenía TCEP 20 mM antes del uso)]

Se resume seguidamente un ejemplo representativo para la elastasa pancreática porcina.

En una placa de 96 pocillos de fondo plano de poliestireno se añadieron usando un manipulador de líquidos Biomek® (de Beckman):

\bullet: 40 \mul del tampón de análisis (Tris-HCl 50 mM, de pH 8, NaCl 50 mM, EDTA 0,01 mM);

\bullet: 20 \mul de una solución de enzima (Tris/HCl 50 mM, de pH 8, NaCl 50 mM, EDTA 0,01 mM, Tween-20 al 0,02%, elastasa pancreática porcina 40 nM; y

\bullet: 20 \mul de una solución del inhibidor (Tris-HCl 50 mM, de pH 8, NaCl 50 mM, EDTA 0,01 mM, Tween-20 al 0,02%, inhibidor 1,5 mM-0,3 \muM, DMSO al 15% v/v).

Después de una pre-incubación durante 60 min a 30ºC, se añadieron a cada pocillo 20 \mul de una solución de substrato (Tris-HCl 50 mM, de pH 8, Na_{2}SO_{4} 0,5 M, NaCl 50 mM, EDTA 0,01 mM, Succ-AAA-pNa 665 \muM) y la mezcla de reacción se incubó adicionalmente a 30ºC durante 60 min, tiempo después del cual se leyó la absorbancia en el lector de placas UV Thermomax®. Se asignaron filas de pocillos para muestras testigos (sin inhibidor) y para muestras en vacía (sin inhibidor y sin enzima)

Las diluciones a 2 veces secuenciales de la solución de inhibidor se realizaron sobre una placa dispuesta por separado mediante el manipulador de líquidos, usando Tris-HCl 50 mM de pH 8, NaCl 50 mM, EDTA 0,01 mM, Tween-20 al 0,02%, DMSO al 15%. Todos los otros análisis de especificidad se realizaron de una manera similar.

El porcentaje de inhibición se calculó usando la fórmula:

[1 -- ((UV_{inh}UV_{\text{vacío}})/(UV_{ctl}UV_{\text{vacío}}))] X 100

Un ajuste de curva no lineal con el modelo de Hill se aplicó a los datos de inhibición y concentración, y la concentración efectiva de 50% (IC_{50}) se calculó por el uso de un programa lógico de SAS (Statistical Software Systems; SAS Institute, Inc., Cary, N.C.)

Ejemplo 22 Tablas de compuestos

Las siguientes Tablas enumeran en lista los valares de IC_{50} de los compuestos representativos del invento. Los compuestos marcados con un asterisco (*) son parte de este invento.

Se usan las siguientes abreviaturas:

IC_{50}: La concentración requerida para obtener una inhibición del 50% en el análisis radiométrico de la mezcla de proteasa de NS3 y péptido cofactor de NS4, de acuerdo con el Ejemplo 11; los resultados marcados con un * indican ur valor de IC_{50} obtenido en el análisis radiométrico de la proteasa de NS3 del HCV recombinante de acuerdo con el Ejemplo 10;

HLE: La concentración requerida para obtener una inhibición de 50% en el análisis de elastasa de leucocitos humanos; PPE: La concentración requerida para obtener una inhibición del 50% en el analisis de elastasa pancreática porcina; Otros: Los datas sin marcar indican la concentración requerida para obtener una inhibición del 50% en el análisis de \alpha-quimotripsina pancreática bovina; las datos marcados con ** indican la concentración requerida para obtener una inhibición del 50% en el análisis de catepsina B de hígado humano; MS: Datos de espectrometría de masas (MH^{+} a partir de FAB); AAA: Datos de análisis de aminoácidos expresados en % de recuperación de péptidos; Acca: ácido 1-amino-ciclopropilcar-boxílico; Acpe: ácido 1-amino-ciclopentilcarboxílico; Abu: ácido 2-amino-butírico; Chg: ciclohexilglicina (ácido 2-amino-2-ciclohexil-acético); Hyp: 4(R)-hidroxi-prolina; Hyp(4-Bn): 4(R)-benciloxiprolina; Pip: ácido pipecólico (es decir, homaprolilo); Tbg: terc.-butilglicina; Ac: acetilo; Bn: bencilo; O-Bn: benciloxi; DAD: 3-carboxi-propionilo; y DAE: 4-carboxi-butirilo; AlGly: alil-glicina (ácido 2-amino-4-pentenoico); tioxoIle: L-tiono-isoleucina; Ph: fenilo; 3I-Ph: 3-yodo-fenilo; 4I-Ph: 4-yodo-fenilo; 2Br-Ph: 2-bromofenilo; 3Br-Ph: 3-bromo-fenilo; 4Br-Ph:
4-bromo-fenilo; 1-NpCH_{2}O: naftalen-1-ilmetoxi; 2-NpCH_{2}O: naftalen-2-ilmetoxi; 3,5-Br_{2}Ph: 3,5-dibromo-fenilo.

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Claims

1. Un compuesto de fórmula (I):

107

en que Q es CH_{2} o N-Y en que Y es H o alquilo C_{1-6};

a) cuando Q es CH_{2}, a es 0, b es 0, y B es un derivado de amida que tiene la fórmula R_{11a}N(R_{11b-})C(O)- en que R_{11a} es H; alquilo C_{1-10},opcionalmente sustituido con carboxilo o di(alquil C_{1}-C_{6})amino; cicloalquilo C_{3-7}; arilo C_{6}; alquilarilo C_{7-10}; (cicloalquil C_{3-7})-(alquil C_{1-6}); heterociclil-alquilo C_{1-6};

y R_{11b} es alquilo C_{1-6} sustituido con carboxilo, (alcoxi C_{1-6})carbonilo o fenilmetoxicarbonilo; o arilalquilo C_{7-16} sustituido en la porción aromática con carboxilo; (alcoxi C_{1-6})carbonilo, fenilmetoxicarbonilo o heterociclil-alquilo C_{1-6};

o R_{11a} y R_{11b} están unidos para formar un anillo que contiene nitrógeno de 3 a 7 miembros, opcionalmente sustituido con carboxilo o (alcoxi C_{1-6})-carbonilo;

o

b) cuando Q es N-Y, a es 0 ó 1, b es 0 ó l, y B es un derivado de acilo que tiene la fórmula R_{11}-C(O)- en que R11 es (i) alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo, alcanoiloxi C_{1-6} (p.ej. AcOCH_{2}) o alcoxi C_{1-6} (p.ej. Boc); (ii) cicloalquilo C_{3-7} opcionalmente sustituido con carboxilo, (alcoxi C_{1-6})carbonilo o fenilmetoxicarbonilo; (iii) cicloalquilo C_{3-7} sustituido con carboxilo y uno a tres sustituyentes alquilo C_{1-6}; (iv) (alquilcicloalquilo) C_{4-10} opcionalmente sustituido en la porción de cicloalquilo con carboxi, (alcoxi C_{1-6})carbonilo o fenilmetoxi-carbonilo; (v)

108

109

(vi) arilo C_{6} o C_{10} o arilalquilo C_{7-16} opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-6};

R_{6}, cuando está presente, es alquilo C_{1-6} sustituido con carboxilo; y

o

c) cuando Q es o bien CH_{2} o N-Y;

Z es oxo o tioxo;

R_{3} es alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo, cicloalquilo C_{3-7} o (alquilcicloalquilo) C_{4-10};

W es un grupo de la fórmula III':

110

en donde R_{13} es OH; SH; NH_{2} carboxilo; R_{12}; O R_{12}, S R_{12}, NH R_{12}, o N R_{12}R_{12'}, en donde R_{12} y R_{12'} son, independientemente:

: o

: R_{12} y R_{12'} son independientemente arilo C_{6} ó C_{10} o arilalquilo C_{7-16} opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, NH_{2}, OH, SH, halo, carboxilo o carboxialquilo C_{1-6}; conteniendo dichos arilo o arilalquilo opcionalmente por lo menos un heteroátomo seleccionado independientemente entre el grupo que consta de: O, S y N;

: estando dichos alquilo cíclico, alquenilo cíclico, arilo o arilalquilo opcionalmente condensados con un segundo anillo de 5, 6 ó 7 miembros para formar un sistema cíclico o un sistema heterocíclico, estando dicho segundo anillo opcionalmente sustituido con NH_{2}, OH, SH, halo, carboxilo o carboxi-alquilo(C_{1-6}); conteniendo dicho segundo anillo opcionalmente por lo menos un heteroátomo seleccionado independientemente entre el grupo que consta de: O, S y N;

R_{1'} es hidrógeno, y R_{1} es propilo; o

A es hidroxi o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables.

2. Un compuesto de la reivindicación 1 de fórmula (Ia):

111

en la que Y es H o alquilo C_{1-6};

a es 0 ó 1;

b es 0 ó 1;

B es un derivado de acilo de fórmula R_{11}-C(O)- en la que

R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{11}, W, R_{1}, R_{1'} y A son como se han definido en la reivindicación 1.

3. Un compuesto de fórmula Ia de acuerdo con la reivindicación 2,

en el que B es un es un derivado de acilo de fórmula R_{11}C(O)- en la que R_{11} es:

alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con carboxilo, alcanoiloxi C_{1-6} o alcoxi C_{1-6};

cicloalquilo C_{3-7} opcionalmente sustituido con carboxilo, MeOC(O), EtOC(O) ó BnOC(O);

3-carboxi-propionilo (DAD) o 4-carboxi-butirilo (DAE); o

112

4. Un compuesto de fórmula Ia de acuerdo con la reivindicación 3, en el que B es acetilo, 3-carboxi-propionilo, 4-carboxi-butirilo, AcOCH_{2}C(O), Me_{3}COC(O),

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113

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114

115

5. Un compuesto de fórmula Ia de acuerdo con la reivindicación 4, en el que B es acetilo, 3-carboxi-propionilo (DAD), 4-carboxi-butirilo (DAE), AcOCH_{2}C (0),

116

6. Un compuesto de fórmula Ia de acuerdo con la reivindicación 5, en el que B es acetilo.

7. Un compuesto de fórmula Ia de acuerdo con la reivindicación 2, en el que R_{6}, cuando está presente, es la cadena lateral de Asp ó Glu.

8. Un compuesto de fórmula Ia de acuerdo con la reivindicación 7, en el que R_{6}, cuando está presente, es la cadena lateral de Asp.

9. Un compuesto de fórmula Ia de acuerdo con la reivindicación 2, en el que R_{5}, cuando está presente, es la cadena lateral de un aminoácido seleccionado entre el grupo que consta de: D-Asp, Asp, D-Glu, Glu, D-Val, Val, D-Tbg y Tbg.

10. Un compuesto de fórmula Ia de acuerdo con la reivindicación 9, en el que R_{5}, cuando está presente, es la cadena lateral de D-Asp, D-Val ó D-Glu.

11. Un compuesto de fórmula Ia de acuerdo con la reivindicación 10, en el que R_{5}, cuando está presente, es la cadena lateral de D-Glu.

12. Un compuesto de la reivindicación 1 de fórmula (Ib)

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117

en la que B es una amida de fórmula R_{11a}N(R_{11b})C(O)- en la que R_{11a} es preferiblemente alquilo C_{1-6}, opcionalmente sustituido con carboxi, o R_{11a} es arilo C_{6}, arilalquilo C_{7-10}, 2-tetrahidrofuranilmetilo ó 2-tiazolidilmetilo; y R_{11b} es preferiblemente alquilo C_{1-4} sustituido con carboxilo.

13. Un compuesto de fórmula (Ib) de acuerdo con la reivindicación 12, en el que R_{11a} es isopropilo, carboxietilo, bencilmetilo, bencilo, ó 2-tetrahidrofuranilmetilo.

14. Un compuesto de fórmula (Ib) de acuerdo con la reivindicación 13, en el que R_{11b} es alquilo C_{1-4} sustituido con carboxilo.

15. Un compuesto de formula (Ib) de acuerdo con la reivindicación 13, en el que R_{11b} es etil-carboxilo.

16. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 14, en el que R_{4} se selecciona entre el grupo que consta de: isopropilo, ciclopropilo, terc.-butilo, 1-metilpropilo ó 2-metil-propilo.

17. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 16, en el que R_{4} es ciclopropilo ó l-metil-propilo.

18. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 17, en el que R_{4} es ciclopropilo.

19. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en el que Z es preferiblemente oxo.

20. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R_{3} es la cadena lateral de Ile, alo-Ile, Chg, Cha, Val, Tbg o Glu.

21. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 20, en el que R_{3} es la cadena lateral de Val, Tbg o Chg.

22. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 21, en el que R_{3} es la cadena lateral de Val.

23. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 26, en el que R_{13} es OR_{12} ó SR_{12} en que R_{12} es un arilo C_{6} ó C_{10} o arilalquilo C_{7-16}, estando dichos primeros arilo o arilalquilo opcionalmente sustituidos con alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-7}, NH_{2}, OH, SH, halo, alcoxi C_{1-6}, carboxilo, carboxi-alquilo(C_{1-6}) o un segundo arilo o arilalquilo; conteniendo dichos primeros y segundos arilo o arilalquilo opcionalmente por lo menos un heteroátomo seleccionado independientemente entre el grupo que consta de: O, S y N.

24. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 23, en el que R_{13} es Bn; PhCH_{2}CH_{2}; PhCH_{2}CH_{2}CH_{2}; O-Bn; o-tolilmetoxi; m-tolilmetoxi; p-tolilmetoxi; 1-naftiloxi; 2-naftiloxi; 1-naftalenilmetoxi; 2-naftalenilmetoxi; (4-terc.-butil)metoxi; (3I-Ph)CH_{2}O; (4Br-Ph)O; (2Br-Ph)O; (3Br-Ph)O; (4I-Ph)O; (3Br-Ph)CH_{2}O; (3,5-Br_{2}-Ph)CH_{2}O;

118

119

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122

123

25. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 24, en el que R_{13} es O-Bn; PhCH_{2}CH_{2}CH_{2}; 1-naftiloxi; 2-naftiloxi; 1-naftalenilmetoxi; 2-naftalenilmetoxi;

124

125

26. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en el que

a) Q es CH_{2}, a es 0, b es 0, y B es una amida de fórmula R_{11a}N(R_{11b})-C(O)-, en la que R_{11a} es alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con carboxilo, o R_{11a} es fenilo, arilalquilo C_{7-10}, 2-tetrahidrofuranilmetilo, ó 2-tienilmetilo;

y R_{11b} es (alquil C_{0-2})fenilo opcionalmente sustituido con carboxilo o (alcoxi C_{1-4})carbonilo; o alquilo C_{1-6} sustituido con carboxilo o (alcoxi C_{1-4})carbonilo; o

R_{11a} y R_{11b} están unidos para formar un anillo de piperidina, opcionalmente sustituido con carboxilo o (alcoxi C_{1-6})carbonilo; o

b) Q es N-Y en que Y es H o alquilo C_{1-6}; a es 0 ó 1; b es 0 ó 1; y B es un derivado de acilo de fórmula R_{11}-C(O)- en que R_{11} es (i) alquilo C_{1-6}, alquilo C_{1-6} sustituido con carboxilo, MeC(O)O-, MeO-, EtO-, MeCH_{2}CH_{2}O- ó Me_{3}C-O-; (ii) ciclopentilo o ciclohexilo opcionalmente sustituidos con carboxilo; (iv) (alquilcicloalquilo) C_{4-10} opcionalmente sustituido en la porción de cicloalquilo con carboxilo;

(v)

126

(vi) fenilo, bencilo o feniletilo;

R_{6}, cuando está presente, es CH_{2}COOH ó CH_{2}CH_{2}COOH,

R_{5}, cuando está presente, es alquilo C_{1-6} o CH_{2}COOH ó CH_{2}CH_{2}COOH; o

c) cuando Q es o bien CH_{2} o N-Y,

R_{4} es alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-7} o (alquilcicloalquilo) C_{4-10};

Z es oxo o tio;

R_{3} es alquilo C_{1-6}; cicloalquilo C_{3-7} o (alquilcicloalquilo) C_{4-10};

R_{1'} es hidrógeno y R_{1} es propilo; o

R_{1'} y R_{1} conjuntamente con el átomo de carbono al que están unidos forman un ciclopropilo que opcionalmente puede estar sustituido con etilo; y

W es como se define en la reivindicación 1; y

A es hidroxi o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; metoxi, etoxi, fenoxi o benciloxi

27. Un compuesto de fórmula Ia de acuerdo con la reivindicación 2, en la que B es un derivado de acilo de fórmula R_{11}-C(O)- en que R_{11} es alcoxi C_{1-6}, alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo; cicloalquilo C_{3-7} opcionalmente sustituido con carboxilo o bencilcarboxi; o

127

R_{6} está ausente;

R_{5} está ausente;

W es como se define en la reivindicación 1; y

A es hidroxi o una de sus sales farmacéuticamente aceptable; metoxi, etoxi, fenoxi o benciloxi.

28. Un compuesto de fórmula Ia de acuerdo con la reivindicación 2, en la que B es acetilo, 3-carboxi-propionilo, 4-carboxi-butirilo, AcOCH_{2}C(O), Me_{3}COC(O),

128

129

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130

Y es H ó Me, a es 0 ó 1, b es 0 ó 1,

R_{6}, cuando está presente, es la cadena lateral de Asp ó Glu,

R_{4} es la cadena lateral de Val, Chg, Tbg, Ile ó Leu,

R_{3} es hidrógeno o la cadena lateral de Ile, Chg, Val, Glu;

W es el grupo de fórmula III':

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R_{1'} es H y R_{1} es propilo; o

29. Un compuesto de fórmula Ib de acuerdo con la reivindicación 12, en la que B es una amida de fórmula R_{11a}N(R_{11b})-C(O)- en la que R_{11a} es alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con carboxilo, o R_{11a} es 2-tetrahidrofuranilmetilo;

R_{11a} y R_{11b} están unidos para formar un anillo de piperidina, opcionalmente sustituido con carboxilo o (alcoxi C_{1-6})carbonilo;

R_{4} es ciclohexilo;

Z es oxo;

R_{3} es hidrógeno o la cadena lateral de Ile, Chg, Val, Glu;

W es un grupo de fórmula III':

138

en que R_{13} es Bn, PhCH_{2}CH_{2}, PhCH_{2}CH_{2}CH_{2}, O-Bn, o-tolilmetoxi, m-tolilmetoxi, p-tolilmetoxi, 1-naftalenilmetoxi, 2-naftalenil-metoxi, (4-terc.-butil)metoxi, (3I-Ph)CH_{2}O, (4Br-Ph)O, (2Br-Ph)O, (3Br-Ph)O, (4I-Ph)O, (3Br-Ph)CH_{2}O, (3,5-Br_{2}-Ph)CH_{2}O,

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142

143

144

R_{1'} es H y R_{1} es propilo; o

30. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en la que B es un derivado de acilo de fórmula R_{11}-C(O)-, en que R_{11} es alquilo C_{1-10} opcionalmente sustituido con carboxilo; cicloalquilo C_{3-7} opcionalmente sustituido con carboxilo; o un (alquilcicloalquilo) C_{4-10} opcionalmente sustituido en la porción de cicloalquilo con carboxilo;

o R_{11} es arilo C_{6} ó C_{10} o arilalquilo C_{7-16} opcionalmente sustituido con un alquilo C_{1-6};

a es 0 ó 1;

b es 0 ó 1;

Q es N-Y en que Y es H o alquilo C_{1-6};

Z es oxo;

R_{3} es alquilo C_{1-10} cicloalquilo C_{3-7} o (alquilcicloalquilo) C_{4-10};

W, R_{1'} y R_{1} son como se definen en la reivindicación 1;

A es hidróxido o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables.

31. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz contra el virus de la hepatitis C de un compuesto de fórmula I de la reivindicación 1, o una de sus sales o ésteres terapéuticamente aceptables, en mezcla con un medio de soporte o agente auxiliar farmacéuticamente aceptable.

32. Un método in vitro para inhibir la replicación del virus de la hepatitis C por exposición del virus a una cantidad inhibidora de la proteasa de NS3 del virus de la hepatitis C del compuesto de fórmula I de la reivindicación 1, o una de sus sales o ésteres terapéuticamente aceptables.

33. El uso de un compuesto de fórmula I de la reivindicación 1, para la fabricación de un medicamente destinado al tratamiento de una infección por hepatitis C en un mamífero.

34. Un compuesto seleccionado entre el grupo que consta de: un compuesto de fórmula

145

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en la que B, P6, P5, P4, P3, W y P1 son como se definen seguidamente:

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146

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35. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, seleccionado entre el grupo que consta de: un compuesto de fórmula

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en la que B, P6, P5, P4, P3, R_{13} y P1 son como se definen seguidamente:

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150

151

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36. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, seleccionado entre el grupo que consta de: un compuesto de fórmula

153

en la que B, P6, P5, P4, P3, W y P1 son como se define seguidamente:

154

37. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, seleccionado entre el grupo que consta de: un compuesto de fórmula:

155

en la que B, R4, P3, R_{13} y P1 son como se define seguidamente:

156

157

158

159

38. Uso de un compuesto intermedio de formula:

160

en la que R_{1} y R_{1'} forman un anillo de 3 miembros opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-6} para la síntesis de un compuesto de formula I de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes.

39. El uso de acuerdo con la reivindicación 38, en el que dicho grupo protector de carboxilo (PG1) se selecciona entre el grupo que consta de: ésteres de alquilo, ésteres de arilalquilo y ésteres que son desdoblables mediante tratamiento con una base débil o medios reductores débiles.