ES2361011T3

ES2361011T3 - Inhibidores del virus de la hepatitis c.

Info

Publication number: ES2361011T3
Application number: ES03799806T
Authority: ES
Inventors: Amy Ripka; Jeffrey Allen Campbell; Andrew Charles Good; Paul Michael Scola; Ny Sin; Brian Venables
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2002-05-20
Filing date: 2003-05-20
Publication date: 2011-06-13
Anticipated expiration: 2023-05-20
Also published as: AU2003299519A8; EP1506172A4; PL373547A1; WO2004032827A2; EP1506172B1; IS7533A; NO20044897L; ATE503764T1; WO2004032827A3; PL215228B1; US20040048802A1; EP1506172A2; JP4312718B2; JP2006507264A; US7041698B2; AU2003299519A1; DE60336550D1

Abstract

Un compuesto de Fórmula I:**Fórmula** y enantiómeros, diastereómeros y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la que: (a) R1 es: H, alquilo C1-6, alquenilo C2-1 o arilo C6-10, pudiendo estar todos sustituidos con halo, ciano, nitro, alcoxi C1-6, amido, amino o fenilo; R2 es: (i) alquilo C1-6; alquilo C1-6 sustituido con un carboxi(alquilo C1-6); cicloalquilo C3-7; cicloalquilo C3-6 (arilo C6- 10); alquenilo C2-1; alquilo C1-3 (arilo C6-10); pudiendo estar todos sustituidos de una a tres veces con halo, alquilo C1-3 o alcoxi C1-3; o R2 es heterociclo C5-9, que - puede estar sustituido de una a tres veces con halo, alquilo C1-4, carboxi (alquilo C1-6) o fenilo; o (ii) arilo C6-10, que puede estar sustituido de una a tres veces con los que se indican a continuación: halo; el propio alquilo C1-6 que puede estar sustituido con uno a tres halo; alcoxi C1-6; nitro; tio (alquilo C1-6); fenilo; alcanoílo C1-6; benzoílo; benzoil oxima; carboxi; carboxi (alquilo C1-6); (alquil C1-6) carboxi; fenoxi, (alquil C1- 6) carboxi (alquilo C1-6); o arilo C6-10 que puede estar sustituido con un heterociclo C5-9, incluyendo dicho heterociclo de uno a tres átomos de nitrógeno, oxígeno o azufre, pudiendo estar dicho heterociclo sustituido en sí mismo con alquilo C1-3, alcoxi C1-3, -CF3 o (alquil C1-3) carboxi; o (b) R1 y R2 pueden unirse para formar un heterociclo de 5 ó 6 miembros; o unirse para formar un heterociclo de 5 ó 6 miembros condensados con uno o dos grupos arilo C6; (c) A es alcoxi C1-6, -N(H)SOmR5 en la que p es 1, 2 ó 3 y R8 es trialquilsilano; halo; cicloalquilo C3-7; cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7- 14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenil C4-7 arilo C6-10. alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het; en la que R9 es cicloalquilo C3-7; cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het; en la que R10 es cicloalquilo C3-7; cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15, Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het; en la que cada R11 y R12 son independientemente cicloalquilo C3-7; cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7- 14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het; -SO2R13, en la que R13 es cicloalquilo C3-7; cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C4-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het; o en la que R14 es cicloalquilo C3-7; cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het; (d) R4 es alquilo C1-6, alquenilo C2-6 o cicloalquilo C3-7, cada uno opcionalmente sustituido de una a tres veces con halógeno; o R4 es H; o R4 junto con el carbono al que está unido forma un anillo de 3, 4 ó 5 miembros; (e) R5 es arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; alquilo C1-8; cicloalquilo C3-7 o C4-10 (alquilcicloalquilo) sin sustituir; o Het sin sustituir o sustituido, siendo dichos sustituyentes de Het iguales o diferentes y seleccionándose entre uno a tres de halo, ciano; trifluorometilo, nitro, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, amido, alcanoilamino C1-6, amino, fenilo o feniltio, estando dicha porción de fenilo o fenilo de feniltio sin sustituir o sustituida con uno a tres sustituyentes, iguales o diferentes, seleccionados entre halo, ciano, nitro, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, amido o fenilo ; (f) m es 1 ó 2; (g) n es 1 ó 2; (m) R3 es alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con halo, ciano, amino, dialquilamino C1-6, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, alcoxi C1-16, carboxi, hidroxi, ariloxi, alquilariloxi C7-14, alquiléster C2-6, alquilariléster C8-15; alquenilo C3-12, cicloalquilo C3-7 o alquilcicloalquilo C4-10, en los que el cicloalquilo o alquilcicloalquilo están opcionalmente sustituidos con hidroxi, alquilo C1-6, alquenilo C2-6 o alcoxi C1-6; o R3 junto con el átomo de carbono al que está unido forma un grupo cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido con alquenilo C2-6; (n) Y es H, fenilo sustituido con nitro, piridilo sustituido con nitro o alquilo C1-6 opcionalmente sustituido con ciano, OH o cicloalquilo C3-7; con la condición de que si R4 o R5 es H entonces Yes H; (o) B es H, alquilo C1-6, R6-(C=O)-, R6O(C=O)-, R6-N(R7)-C(=O)-, R6-NR7)-C(=S)-, R6SO2- o R6-N(R7)-SO2-; (p) R6 es (i) alquilo C1-10 opcionalmente sustituido con fenilo, carboxilo, alcanoílo C1-6, 1-3 halógeno, hidroxi, - OC (O)alquilo C1-6, alcoxi C1-6, amino opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, amido o (alquilo inferior) amido; (ii) cicloalquilo C3-7, cicloalcoxi C3-7 o alquilcicloalquilo C4-10, cada uno opcionalmente sustituido con hidroxi, carboxilo, (alcoxi C1-6)carbonilo, amino opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, amido o (alquilo inferior) amido; (iii) arilo C6-10 o arilalquilo C7-16, cada uno opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, halógeno, nitro, hidroxi, amido, (alquilo inferior) amido o amino opcionalmente sustituido con alquilo C1-6; (iv) Het; (v) biciclo(1.1.1)pentano; o (vi) -C(O)Oalquilo C1-6, alquenilo C2-6 o alquinilo C2-6; y (q) R7 es H; alquilo C1-6 opcionalmente sustituido con 1-3 halógenos; o alcoxi C1-6 con la condición de que R6 sea alquilo C1-10; o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Description

La presente invención se refiere en general a compuestos antivirales y más específicamente se refiere a compuestos que inhiben el funcionamiento de la proteasa NS3 codificada por el virus de la Hepatitis C (VHC), composiciones que comprenden tales compuestos y su uso en procedimientos para inhibir el funcionamiento de la proteasa NS3.

El VHC es un patógeno humano principal, que afecta a aproximadamente 170 millones de personas en el mundo entero, casi cinco veces el número infectado por el virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1. Una parte sustancial de estos individuos infectados con VHC desarrollan enfermedad hepática progresiva grave, incluyendo cirrosis y carcinoma hepatocelular (Lauer, G. M.; Walker, B. D. N. Engl. J. Med. (2001), 345, 41-52).

Actualmente, la terapia de VHC más eficaz emplea una combinación de interferón-alfa y ribavirina, conduciendo a una eficacia sostenida en el 40% de los pacientes. (Poynard, T. y col. Lancet (1998), 352, 1426-1432). Resultados clínicos recientes demuestran que el interferón-alfa pegilado es mejor que el interferón-alfa no modificado como monoterapia (Zeuzem, S. y col. N. Engl. J. Med. (2000), 343, 1666-1672). Sin embargo, incluso con regímenes terapéuticos experimentales que implican combinaciones de interferón-alfa pegilado y ribavirina, una parte considerable de pacientes no tiene una reducción sostenida en la carga viral. Por tanto, existe una necesidad clara y que se ha sentido durante mucho tiempo de desarrollar terapéuticos eficaces para el tratamiento de infección por VHC.

VHC es un virus de ARN de cadena positiva. En base a una comparación de la secuencia de aminoácidos deducida y a la similitud amplia en la región no traducida 5’, VHC se ha clasificado como un género separado de la familia Flaviviridae. Todos los miembros de la familia Flaviviridae tienen viriones envueltos que contienen un genoma de ARN de cadena positiva que codifica todas las proteínas específicas de virus conocidas a través de la traducción de un marco de lectura abierto único e ininterrumpido.

Se observa heterogeneidad considerable dentro del nucleótido y la secuencia de aminoácidos codificada a través de todo el genoma de VHC. Al menos seis genotipos principales se han caracterizado y más de 50 subtipos se han descrito. Los genotipos principales de VHC difieren en su distribución en el mundo entero y la significancia clínica de la heterogeneidad genética de VHC sigue siendo difícil a pesar de numerosos estudios del efecto posible de los genotipos sobre la patogénesis y terapia.

El genoma de ARN de VHC de cadena única tiene aproximadamente 9500 nucleótidos de longitud y tiene un marco de lectura abierto único (ORF) que codifica una poliproteína grande única de aproximadamente 3000 aminoácidos. En células infectadas, esta poliproteína se escinde en sitios múltiples mediante proteasas celulares y virales para producir las proteínas estructurales y no estructurales (NS). En el caso de VHC, la generación de proteínas no estructurales maduras (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A y NS5B) se logra mediante dos proteasas virales. La primera, aunque se ha caracterizado muy poco, escinde en la unión NS2-NS3; la segunda es una serina proteasa contenida dentro de la región N terminal de NS3 (denominada en lo sucesivo proteasa NS3) y media todas las escisiones posteriores cadena abajo de NS3, tanto en cis, en el sitio de escisión de NS3-NS4A, como en trans, para los sitios restantes NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B. La proteína NS4A parece tener múltiples funciones, actuando como un cofactor para la proteasa NS3 y posiblemente ayudando en la localización de membrana de NS3 y otros componentes de replicasa virales. La formación de complejo de la proteína NS3 con NS4A parece ser necesaria para los acontecimientos de procesamiento, potenciando la eficacia proteolítica en todos los sitios. La proteína NS3 también muestra actividades nucleósido trifosfatasa y ARN helicasa. NS5B es una ARN polimerasa dependiente de ARN que está implicada en la replicación de VHC.

Entre los compuestos que han demostrado eficacia para inhibir la replicación de VHC, como inhibidores selectivos de la serina proteasa de VHC, están los compuestos peptídicos desvelados en la Patente de Estados Unidos Nº

6.323.180.

La presente invención proporciona compuestos que incluyen sales o solvatos farmacéuticamente aceptables, que tienen la estructura de Fórmula I en la que:

imagen1

5

15

25

35

45

(a): R1 es: H, alquilo C1-6, alquenilo C2-10 o arilo C6-10, pudiendo estar todos sustituidos con halo, ciano, nitro, alcoxi C1-6, amido, amino o fenilo; R2 es:

(i): alquilo C1-6; alquilo C1-6 sustituido con un carboxi (alquilo C1-6); cicloalquilo C3-7; cicloalquilo C3-6 (arilo C610); alquenilo C2-10; alquilo C1-3 (arilo C6-10); pudiendo estar todos sustituidos de una a tres veces con halo, alquilo C1-3 o alcoxi C1-3; o R2 es heterociclo C5-9, que puede estar sustituido de una a tres veces con halo, alquilo C1-4, (alquilo C1-6) carboxi o fenilo; o

(ii): arilo C6-10, que puede estar sustituido de una a tres veces con los siguientes: halo; el propio alquilo C1-6 puede estar sustituido con uno a tres halo; alcoxi C1-6; nitro; tio (alquilo C1-6); fenilo; alcanoílo C1-6; benzoílo; benzoil oxima; carboxi; carboxi (alquilo C1-6); (alquil C1-6) carboxi; fenoxi; (alquil C1-6) carboxi (alquilo C1-6); o arilo C6-10 que puede estar sustituido con un heterociclo C5-9, incluyendo dicho heterociclo de uno a tres átomos de nitrógeno, oxígeno o azufre pudiendo estar dicho heterociclo sustituido en sí mismo con alquilo C1-3, alcoxi C1-3, -CF3 o (alquil C1-3) carboxi; o

(b): R1 y R2 pueden unirse para formar un heterociclo de 5 ó 6 miembros o unirse para formar un heterociclo de 5 ó 6 miembros condensado con uno o dos grupos arilo C6;

(c): A es -OH, alcoxi C1-6, -N(H)SOmR5

imagen1

en la que p es 1, 2 ó 3 y R8 es trialquilsilano; halo; cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C714; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het;

imagen1

en la que R9 es cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het;

imagen1

en la que R10 es cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het;

imagen1

en la que cada R11 y R12 son independientemente cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het; -SO2R13 en el que R13 es cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C210, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het; o

imagen1

en la que R14 es cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het;

(d): R4 es alquilo C1-6, alquenilo C2-6 o cicloalquilo C3-7, cada uno opcionalmente sustituido de una a tres veces con halógeno; o R2 es H; o R2 junto con el carbono al que está unido forma un anillo de 3, 4 ó 5 miembros;

(e): R5 es arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; alquilo C1-8; cicloalquilo C3-7 o C4-10 sin sustituir (alquilcicloalquilo); o Het sin sustituir o sustituido, siendo dichos sustituyentes Het iguales

o diferentes y seleccionándose entre uno a tres de halo, ciano, trifluorometilo, nitro, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, amido, alcanoilamino C1-6, amino, fenilo o feniltio, estando dicho fenilo o porción fenilo de feniltio sin sustituir o sustituida con uno a tres sustituyentes, iguales o diferentes, seleccionados entre halo, ciano, nitro, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, amido o fenilo

(f): m es 1ó 2;

(g): n es 1ó 2;

(h): R3 es alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con halo, ciano, amino, dialquilamino C1-6, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, alcoxi C1-6, carboxi, hidroxi, ariloxi, alquilariloxi C7-14, alquiléster C2-6, alquilariléster C8-15; alquenilo C3-12, cicloalquilo C3-7 o alquilcicloalquilo C4-10, en el que el cicloalquilo o alquilcicloalquilo está opcionalmente sustituido con hidroxi, alquilo C1-6, alquenilo C2-6 o alcoxi C1-6; o R3 junto con el átomo de carbono al que está unido forma un grupo cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido con alquenilo C2-6;

(i): Y es H, fenilo sustituido con nitro, piridilo sustituido con nitro o alquilo C1-6 opcionalmente sustituido con ciano, OH o cicloalquilo C3-7; con la condición de que si R4 o R5 es H entonces Y es H;

(j): B es H, alquilo C1-6, R6-(C=O)-, R6O(C=O)-, R6-N(R7)-C(=O)-, R6-N(R7)-C(=S)-, R6SO2-o R6-N(R7)-SO2-;

(k): R6 es (i) alquilo C1-10 opcionalmente sustituido con fenilo, carboxilo, alcanoílo C1-6, 1-3 halógenos, hidroxi, OC(O)alquilo C1-6, alcoxi C1-6, amino opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, amido o (alquilo inferior)amido;

(ii): cicloalquilo C3-7, cicloalcoxi C3-7 o alquilcicloalquilo C4-10, cada uno opcionalmente sustituido con hidroxi, carboxilo, (alcoxi C1-6)carbonilo, amino opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, amido o (alquilo inferior)amido;

(iii) arilo C6-10 o arilalquilo C7-16, cada uno opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, halógeno, nitro, hidroxi, amido, (alquilo inferior) amido o amino opcionalmente sustituido con alquilo C1-6; (iv) Het; (v) biciclo(1.1.1)pentano; o(vi) -C(O)Oalquilo C1-6, alquenilo C2-6 o alquinilo C2-6; y

(l) R7 es H; alquilo C1-6 opcionalmente sustituido con 1-3 halógenos; o alcoxi C1-6 con la condición de que si R6 sea alquilo C1-10;

: o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mimos.

La presente invención también proporciona composiciones que comprenden los compuestos, sales farmacéuticamente aceptables o solvatos de los mismos y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En particular, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas útiles para inhibir NS3 de VHC que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable

: o solvato del mismo y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La presente invención también proporciona composiciones para su uso en el tratamiento de pacientes infectados con VHC, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. Además, la presente invención proporciona composiciones para su uso en la inhibición de la proteasa NS3 del VHC administrando a un paciente una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención.

En virtud de la presente invención, ahora es posible proporcionar fármacos mejorados que comprenden los compuestos de la invención que pueden ser eficaces en el tratamiento de pacientes infectados con VHC. Específicamente, la presente invención proporciona compuestos peptídicos que pueden inhibir el funcionamiento de la proteasa NS3, por ejemplo, junto con la proteasa NS4A.

Las definiciones estereoquímicas y los convenios que se usan en el presente documento siguen generalmente McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms, S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Book Company, Nueva York (1984) y Stereochemistry of Organic Compounds, Eliel, E. y Wilen, S., John Wiley & Sons, Inc., Nueva York (1994). Muchos compuestos orgánicos existen en formas ópticamente activas, es decir, tienen la capacidad de girar el plano del plano de luz polarizada. En la descripción de un compuesto ópticamente activo, los prefijos D y L o R y S se usan para indicar la configuración absoluta de la molécula en torno a su centro(s) quiral(es). Los prefijos d y 1 o (+) y (-) se usan para designar el sentido de giro del plano de luz polarizada por el compuesto, significando (-) o 1 que el compuesto es levógiro y significando (+) o d que el compuesto es dextrógiro. Para una estructura química dada, estos compuestos, llamados estereoisómeros, son idénticos excepto porque son imágenes especulares del otro. Un estereoisómero específico de un par de imágenes especulares también puede denominarse como enantiómero y una mezcla de dichos isómeros de llama habitualmente una mezcla enantiomérica.

La nomenclatura que se usa para describir radicales orgánicos, por ejemplo, hidrocarburos e hidrocarburos sustituidos, sigue generalmente nomenclaturas convencionales conocidas en la técnica, a menos que se defina específicamente de otra manera. Las combinaciones de grupos, por ejemplo, alquilalcoxiamina, incluyen todas las posibles configuraciones estables, a menos que se indique específicamente lo contrario. A continuación se definen ciertos radicales y combinaciones a modo de ilustración.

Las expresiones "mezcla racémica" y "racemato" se refiere a una mezcla equimolar de dos especies enantioméricas, que carece de actividad óptica.

El término "quiral" se refiere a moléculas que tienen la propiedad de que no puede superponerse al compañero de imagen especular, mientras que el térmico "aquiral" se refiere a moléculas que pueden superponerse sobre su compañero de imagen especular.

El término "estereoisómeros" se refiere a compuestos que tienen una composición química idéntica, pero difieren en cuanto a la disposición de los átomos o grupos en el espacio.

El término "diastereómero" se refiere a un estereoisómero que no es un enantiómero, por ejemplo, un estereoisómero con dos o más centros de quiralidad y cuyas moléculas no son imágenes especulares de las otras. Los diastereómeros tienen propiedades físicas diferentes, por ejemplo puntos de fusión, puntos de ebullición, propiedades espectrales y reactividades. Pueden separarse mezclas de diastereómeros en procedimientos analíticos de alta resolución, tales como electroforesis y cromatografía.

El término "enantiómeros" se refiere a dos estereoisómeros de un compuesto que son imágenes especulares que no pueden superponerse la una a la otra.

La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" se pretende que incluya sales no tóxicas sintetizadas a partir de un compuesto que contiene un resto ácido o básico por procedimientos químicos convencionales. Generalmente, dichas sales pueden prepararse haciendo reaccionar las formas de ácido o base libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido adecuados, en agua, en un disolvente orgánico o en una mezcla de los dos; generalmente, se prefieren medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. Se encuentran listas de sales adecuadas en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1990, pág. 1445. Los compuestos de la presente invención son útiles en la forma de la base o ácido libre o en forma de una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Todas las formas están dentro del alcance de la invención.

La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la cantidad total de cada componente activo que es suficiente para mostrar un beneficio significativo en el paciente, por ejemplo, una reducción prolongada en la carga viral. Cuando se aplica a un ingrediente activo individual, administrado sólo, el término se refiere a ese ingrediente sólo. Cuando se aplica a una combinación, el término se refiere a cantidades combinadas de los ingredientes activos que dan como resultado el efecto terapéutico, si se administran en combinación, en serie o simultáneamente.

La expresión "compuestos de la invención" y expresiones equivalentes, pretenden abarcar compuestos de Fórmula I, sales farmacéuticamente aceptables y solvatos, por ejemplo hidratos. De forma análoga, las referencias a los intermedios, se pretende que abarquen sus sales y solvatos, donde el contexto así lo permita. Las referencias al compuesto de la invención también incluyen los compuestos preferidos de Fórmula II y III.

El término "derivado" se refiere a un compuesto modificado químicamente, en el que la modificación se considera de rutina por el químico experto, tal como un éster o una amida de un ácido, grupos protectores, tales como un grupo bencilo para un alcohol o tiol y un grupo terc-butoxicarbonilo para una amina.

El término "solvato" se refiere a una asociación física de un compuesto de la presente invención con una o más moléculas disolventes, tanto orgánicas como inorgánicas. Esta asociación química incluye enlace de hidrógeno. En ciertos casos el solvato será capaz de aislarse, por ejemplo cuando se incorporan una o más moléculas de disolvente en la red cristalina del sólido cristalino. "Solvato" abarca tanto solvatos aislables como en fase de solución. Los solvatos ejemplares incluyen hidratos, etanolatos, metanolatos y similares.

El término "paciente" incluye seres humanos y otros mamíferos.

El término "composición farmacéutica" se refiere a una composición que comprende un compuesto de la invención junto con al menos un vehículo farmacéutico adicional, es decir, adyuvante, excipiente o transportados, tales como diluyentes, agentes conservantes, cargas, agentes de regulación del flujo, agentes disgregantes, agentes humectantes, agentes emulsificadores, agentes de suspensión, agentes edulcorantes, agentes saporíferos, agentes perfumantes, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos, agentes lubricantes y agentes dispersantes, dependiendo de la naturaleza del modo de administración y formas de dosificación. Pueden usarse, por ejemplos, ingredientes enumerados en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª ed., Mack Publishing Company, Easton, PA (1999).

La expresión "farmacéuticamente aceptable" se emplea en el presente documento para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que son, dentro del alcance del criterio médico, adecuados para su uso en contacto con loe tejidos de pacientes sin toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema excesivo o complicación coherente con una proporción riesgo/beneficio razonable.

El término "tratar" se refiere a: (i) prevenir que una enfermedad, trastorno o afección aparezca en un paciente que puede estar predispuesto a la enfermedad, trastorno y/o afección pero que aún no se ha diagnosticado que la tenga;

(ii) inhibir la enfermedad, trastorno o afección, es decir, detener su desarrollo; y (iii) aliviar la enfermedad, trastorno o afección, es decir, causar retroceso de la enfermedad, trastorno y/o afección.

El término "sustituido" como se usa en el presente documento incluye la sustitución desde uno al número máximo de sitios de unión posibles en el núcleo, por ejemplo, radical orgánico, al que se une el sustituyente, por ejemplo, mono, di-, tri-o tetra-sustituido, a menos que se indique específicamente lo contrario.

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El término "halo" como se usa en el presente documento, se refiere significa un sustituyente de halógeno seleccionado entre bromo, cloro, flúor o yodo. El término "haloalquilo" se refiere a un grupo alquilo que está sustituido con uno o más sustituyentes halo.

El término "alquilo" como se usa en el presente documento se refiere a sustituyentes alquilo acíclicos de cadena lineal o ramificada e incluyen, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, butilo, terc-butilo, hexilo, 1-metiletilo, 1-metilpropilo, 2-metilpropilo, 1,1-dimetiletilo. Por lo tanto, alquilo C1-6 se refiere a un grupo alquilo que tiene de uno a seis átomos de carbono. El término "alquilo inferior" se refiere a un grupo alquilo que tiene de uno a seis, Preferentemente de uno a cuatro átomos de carbono. El término "alquiléster" se refiere a un grupo alquilo que contiene adicionalmente un grupo éster. Generalmente, un intervalo de número de carbonos indicado, por ejemplo, alquiléster C2-6, incluye todos los átomos de carbono en el radical.

El término "alquenilo" como se usa en el presente documento se refiere a un radical alquilo que contiene al menos un doble enlace, por ejemplo, etenil (vinil) y alquilo.

El término "alcoxi" como se usa en el presente documento se refiere a un grupo alquilo con el número indicado de átomos de carbono unidos a un átomo de oxígeno. Alcoxi incluye, por ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, 1-metiletoxi, butoxi y 1,1-dimetiletoxi. El último radical se denomina en la técnica como terc-butoxi. El término "alcoxicarbonilo" se refiere a un grupo alcoxi que contiene adicionalmente un grupo carbonilo.

El término "haloalcoxi" como se usa en el presente documento se refiere al radical -O(haloalquilo) en el que haloalquilo es como se ha definido anteriormente.

El término "alcanoílo" como se usa en el presente documento se refiere a radicales 1-oxoalquilo lineales o ramificados que contienen el número indicado de átomos de carbono e incluyen, por ejemplo, formilo, acetilo, 1oxopropil (propionilo), 2-metil-1-oxopropilo, 1-oxohexilo y similares.

El término "cicloalquilo" como se usa en el presente documento se refiere a un sustituyente cicloalquilo que contiene el número indicado de átomos de carbono e incluye, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y grupos espirocíclicos, tales como espirociclopropilo y como espirociclobutilo. El término "cicloalcoxi" como se usa en el presente documento se refiere a un grupo cicloalquilo unido a un átomo de oxígeno, tal como, por ejemplo, ciclobutiloxi o ciclopropiloxi. El término "alquilcicloalquilo" se refiere a un grupo cicloalquilo unido a un grupo alquilo. El intervalo de número de carbonos indicado incluye el número total de carbonos en el radical, a menos que se indique específicamente otra cosa. Un alquilcicloalquilo C4-10 puede contener de 1-7 átomos de carbono en el grupo alquilo y de 3-9 átomos de carbono en el anillo, por ejemplo, ciclopropilmetilo o ciclohexiletilo.

El término "arilo" como se usa en el presente documento se refiere a un resto aromático que contiene el número indicado de átomos de carbono, tal como fenilo, indanilo o naftilo. Por ejemplo, arilo C6-10 se refiere a un resto aromático que contiene de seis a diez átomos de carbono que pude estar en forma de una estructura monocíclica o bicíclica. El término "haloarilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un arilo, mono, di o tri sustituido con uno o más átomos de halógeno. Las expresiones "alquilarilo", "arilalquilo" y "aralalquilo" se refieren a un arilo sustituido con uno o más grupos alquilo. Por lo tanto, un grupo alquilarilo C7-14 pueden tener de 1-8 átomos de carbono en el grupo alquilo para un aromático monocíclico y de1-4 átomos de carbono en el grupo alquilo para un aromático condensado. Los radicales alquilo incluyen aquellos sustituidos con sustituyentes típicos conocidos para los expertos en la materia, por ejemplo, halo, hidroxi, carboxi, carbonilo, nitro, sulfo, amino, ciano, dialquilamino haloalquilo, CF3, haloalcoxi, tioalquilo, alcanoílo, SH, alquilamino, alquilamida, dialquilamida, carboxiéster, alquilsulfona, alquilsulfonamida y alquil(alcoxi)amina. Los ejemplos de grupos alquilarilo incluyen bencilo, butilfenilo y 1-naftilmetilo. Las expresiones "alquilariloxi" y "alquilariléster" se refieren a grupos alquilarilo que contienen un átomo de oxígeno grupo éster, respectivamente.

El término "carboxialquilo" como se usa en el presente documento se refiere a un grupo carboxilo (COOH) unido a través de un grupo alquilo como se ha definido anteriormente e incluye, por ejemplo, ácido butírico.

El término "alcanoílo" como se usa en el presente documento se refiere a radicales 1-oxoalquilo lineales o ramificados que contienen el número indicado de átomos de carbono e incluye, por ejemplo, formilo, acetilo, 1oxopropil (propionilo), 2-metil-1-oxopropilo y 1-oxohexilo.

El término "amino aralquilo" como se usa en el presente documento se refiere a un grupo amino sustituido con un grupo aralquilo, tal como amino aralquilo

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El término "alquilamida" como se usa en el presente documento se refiere a una amida mono sustituida con un alquilo, tal como

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El término "carboxialquilo" como se usa en el presente documento significa un grupo carboxilo (COOH) unido a 10 través de un grupo alquilo como se ha definido anteriormente e incluye, por ejemplo, ácido butírico.

El término "alquilcarboxialquilo", como se usa en el presente documento, se refiere a radicales, tales como

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Las expresiones "heterociclo" o "Het" como se usan el presente documento se refieren a un radical monovalente

obtenido a partir de la retirada de un hidrógeno de un heterociclo saturado o insaturado (incluyendo aromático) de 15 cinco-, seis-o siete miembros que contiene de uno a cuatro heteroátomos seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y

azufre. Los heterociclos de la presente invención incluyen aquellos sustituidos con sustituyentes típicos conocidos

para los expertos en la materia en cualquiera de los átomos de carbono del anillo, por ejemplo, uno a tres

sustituyentes. Los ejemplos de dichos sustituyentes incluyen alquilo C1-6, cicloalquilo C3-7, alcoxi C1-6, cicloalcoxi C3-7,

haloalquilo C1-6, CF3, mono-o di-haloalcoxi C1-6, ciano, halo, tioalquilo, hidroxi, alcanoílo, NO2, SH, , amino, 20 alquilamino C1-6, dialquilamino (C1-6), dialquilamida (C1-6), carboxilo, carboxiéster (C1-6), alquilsulfona C1-6,

alquilsulfonamida C1-6, alquilsulfóxido C1-6, dialquilamina (C1-6) (alcoxi), arilo C6-10, alquilarilo C7-14, y un heterociclo

monocíclico de 5-7 miembros. Además, el término heterociclo incluye heterociclos, como se ha definido

anteriormente, que se condensan con una o más de otras estructuras. Los ejemplos de heterociclos adecuados

incluyen pirrolidina, tetrahidrofurano, tiazolidina, pirrol, tiofeno, di-azepina, 1H-imidazol, oxazol , pirazina, isoxazol, 25 tiazol, tetrazol, piperidina, 1,4-dioxano, 4-morfolina, piridina, pirimidina, tiazolo[4,5-b]-piridina, quinolina o indol, o los

siguientes heterociclos:

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El término "alquil-heterociclo" como se usa en el presente documento, se refiere a un radical heterocíclico como se ha definido anteriormente unido a través de una cadena o un grupo alquilo ramificado, en el que el alquilo como se 30 ha definido anteriormente contiene el número indicado de átomos de carbono. Los ejemplos de alquil C1-6-Het incluyen:

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Cuando se usan para nombrar compuestos de la presente invención, las designaciones "P1', P1, P2, P3 y P4", como

se usan en el presente documento, mapean las posiciones relativas de los residuos de aminoácido de un inhibidor

de proteasa que se unen en relación con la unión del sustrato de escisión peptídica natural. La escisión aparece en

5 el sustrato natural entre P1 y P1' en las que las posiciones no primas designan aminoácidos que parten del extremo

terminal C del sitio de escisión peptídica natural que se extiende hacia los extremos N; mientras que, las posiciones

primas emanan del extremo del término N de la designación de sitio de escisión y se extienden hacia el extremo C.

Por ejemplo, P1' se refiere a la primera posición alejada del extremo derecho del término C del sitio de escisión (es

decir, primera posición del término N); mientras que P1 comienza la numeración en el extremo izquierdo del sitio de 10 escisión del término C, P2 es la segunda posición del término C, etc.)(véase Berger A. & Schechter I., Transactions

of the Royal Society London Series (1970), B257, 249-264).

De este modo, en los compuestos de fórmula I, las porciones "P1' a P4" de la molécula se indican a continuación:

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Como se usa en el presente documento el término "ácido 1-aminociclopropil-carboxílico " (Acca) se refiere a un 15 compuesto de fórmula:

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Como se usa en el presente documento el término "terc-butilglicina" se refiere a un compuesto de la formula:

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El término "residuo" con referencia a un aminoácido o derivado de aminoácido se refiere a un radical obtenido a partir del α-aminoácido correspondiente por eliminación del hidroxilo del grupo carboxi y un hidrógeno del grupo αaminoácido. Por ejemplo, los términos Gln, Ala, Gly, Ile, Arg, Asp, Phe, Ser, Leu, Cys, Asn, Sar y Tyr representan los "residuos" de L-glutamina, L-alanina, glicina, L-isoleucina, L-arginina, L-ácido aspártico, L-fenilalanina, L-serina, L

5 leucina, L-cisteina, L-asparagina, sarcosina y L-tirosina, respectivamente.

El término "cadena lateral" con referencia a un aminoácido o residuo aminoácido se refiere a un grupo al átomo de carbono α del α-aminoácido. Por ejemplo, la cadena lateral del grupo R para glicina es hidrógeno, para alanina es metilo y para valina es isopropilo. Para las cadenas laterales o grupos R específicos de los α-aminoácidos se hace referencia a A.L. Lehninger's text on Biochemistry (véase capítulo 4).

10 De acuerdo con la presente invención, R1 puede ser H, alquilo C1-6, alquenilo C2-10 o arilo C6-10, pudiendo estar todos los mismos sustituidos con halo, ciano, nitro, alcoxi C1-6, amido, amino o fenilo. Preferentemente, R1 es H, alquilo C16, alquenilo C2-4 o fenilo.

De acuerdo con la presente invención, R2 puede ser:

(i) alquilo C1-6; alquilo C1-6 sustituido con un carboxi (alquilo C1-6); cicloalquilo C3-7; cicloalquilo C3-6 (arilo C6

15 10); alquenilo C2-10; alquilo C1-3 (arilo C6-10); pudiendo estar todos sustituidos de una a tres veces con halo, alquilo C1-3 o alcoxi C1-3; o R2 es C5-9 heterociclo, que puede estar sustituido de una a tres veces con halo, alquilo C1-4, carboxi(alquil C1-6) o fenilo; o

(ii) arilo C6-10, que puede estar sustituido de una a tres veces con los que se indican a continuación: halo; alquilo C1-6 que puede estar en sí mismo sustituido con uno a tres halo; alcoxi C1-6; nitro; tio(alquilo C1-6);

20 fenilo; alcanoílo C1-6; benzoílo; benzoil oxima; carboxi; carboxi (alquilo C1-6); (alquil C1-6) carboxi; fenoxi; (alquil C1-6) carboxi (alquilo C1-6); o arilo C6-10 que puede estar sustituido con un heterociclo C5-9, incluyendo dicho heterociclo de uno a tres átomos de nitrógeno, oxígeno o azufre, pudiendo estar dicho heterociclo sustituido en sí mismo con alquilo C1-3, alcoxi C1-3, -CF3 o carboxi(alquil C1-3).

Preferentemente, R2 es fenilo, opcionalmente sustituido con alquilo C1-3, uno o a tres cloro uno a tres flúor; o R2 es

25 fenilo, opcionalmente sustituido con fenilo, metoxi, fenoxi, alquiléster C2-4, alcanoílo C2-6, nitro, tio(alquilo C1-4) o carboxi. Más preferentemente, R2 es alquilo C1-6 o cicloalquilo C3-6, pudiendo estar todos los mismos sustituidos con un grupos fenilo. E incluso más preferentemente, R2 es un grupo heterocíclico de seis miembros, opcionalmente sustituido con uno a tres cloros o uno a tres flúor, o sustituido con un carboxi(alquilo C1-6). Más preferentemente, R2 es alquenilo C2-4

30 R1 y R2 pueden unirse para formar un heterociclo de 5 ó 6 miembros, o unirse para formar un heterociclo de 5 ó 6 miembros condensados con uno o dos grupos arilo C6; Preferentemente, R1 y R2 forman un anillo heterocíclico de cinco o seis miembros, que contiene opcionalmente oxígeno.

En un aspecto de la presente invención, A puede ser -OH, alcoxi C1-6, -N(H)SOmR5, o

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35 en la que p es 1, 2 ó 3 y R8 es trialquilsilano; halo; cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het.

En otro aspecto de la presente invención, A puede ser

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en la que R9 es cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C815 o Het.

45 En otro aspecto de la presente invención, A puede ser

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en la que R10 es cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C815 o Het.

En otro aspecto de la presente invención, A puede ser

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en la que cada uno de R11 y R12 con independientemente cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C610, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het.

En otro aspecto de la presente invención, A puede ser -SO2R13 en el que R13 es cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het.

En otro aspecto de la presente invención, A puede ser

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en la que R14 es cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C1-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C815 o Het.

De acuerdo con la presente invención, R3 puede ser alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con halo, ciano, amino, dialquilamino C1-6, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, alcoxi C1-6, carboxi, hidroxi, ariloxi, alquilariloxi C7-14, alquiléster C2-6, alquilariléster C8-15; alquenilo C3-12, cicloalquilo C3-7, o alquilcicloalquilo C4-10, en los que el cicloalquilo o alquilcicloalquilo están opcionalmente sustituidos con hidroxi, alquilo C1-6, C2-6 alquenilo o alcoxi C1-6; o R3 junto con el átomo de carbono al que está unido forma un grupo cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido con alquenilo C2-6. Preferentemente, R3 es alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con arilo C6, alcoxi C1-6, carboxi, hidroxi, ariloxi, alquilariloxi C7-14, alquiléster C2-6, alquilariléster C8-15; alquenilo C3-12, cicloalquilo C3-7 o alquilcicloalquilo C4-10. Más preferentemente, R3 es alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6; o cicloalquilo C3-7. Más preferentemente, R3 es t-butilo

De acuerdo con la presente invención, R4 puede ser alquilo C1-6, alquenilo C2-6 o cicloalquilo C3-7, cada uno opcionalmente sustituido de una a tres veces con halógeno; o R2 es H; o R2 junto con el carbono al que está unido forma un anillo de 3, 4 ó 5 miembros. Preferentemente, R4 es alquilo C1-6, alquenilo C2-6 o cicloalquilo C3-7.

De acuerdo con la presente invención, R5 puede ser arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; alquilo C1-8; cicloalquilo C3-7 o C4-10 sin sustituir (alquilcicloalquilo); o Het sin sustituir o sustituido, siendo dichos sustituyentes Het iguales o diferentes y seleccionándose entre uno a tres de halo, ciano, trifluorometilo, nitro, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, amido, alcanoilamino C1-6, amino, fenilo o feniltio, estando dicho fenilo o porción de fenilo de feniltio sin sustituir o sustituida con uno a tres sustituyentes, iguales o diferentes, seleccionados entre halo, ciano, nitro, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, amido o fenilo.

De acuerdo con la presente invención, Y puede ser H, fenilo sustituido con nitro, piridilo sustituido con nitro, o alquilo C1-6 opcionalmente sustituido con ciano, OH o cicloalquilo C3-7; con la condición de que si R4 o R5 es H entonces Y es H.

De acuerdo con la presente invención, B puede ser H, alquilo C1-6, R6-(C=O)-, R6O(C=O)-, R6-N(R7)-C(=O)-, R6N(R7)-C(=S)-, R6SO2-, o R6-N(R7)-SO2-;

De acuerdo con la presente invención, R6 puede ser (i) alquilo C1-10 opcionalmente sustituido con fenilo, carboxilo, alcanoílo C1-6, 1-3 halógeno, hidroxi, -OC(O)alquilo C1-6, alcoxi C1-6, amino opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, amido o (alquilo inferior) amido; (ii) cicloalquilo C3-7, cicloalcoxi C3-7 o alquilcicloalquilo C4-10, cada uno opcionalmente sustituido con hidroxi, carboxilo, (alcoxi C1-6)carbonilo, amino opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, amido o (alquilo inferior) amido; (iii) arilo C6-10 o arilalquilo C7-16, cada uno opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, halógeno, nitro, hidroxi, amido, (alquilo inferior) amido o amino opcionalmente sustituido con alquilo C1-6; (iv) Het; (v) biciclo(1.1.1)pentano; o (vi) -C(O)Oalquilo C1-6, alquenil C2-6 o alquinilo C2-6. Preferentemente, R6 es (i) alquilo C1-10 opcionalmente sustituido con fenilo, carboxilo, alcanoílo C1-6, 1-3 halógeno, hidroxi, alcoxi C1-6; (ii) cicloalquilo C3-7,

5 cicloalcoxi C3-7 o alquilciloalquilo C4-10; o (iii) arilo C6-10 o arilalquilo C7-16, cada uno opcionalmente sustituido con alquilo C1-6 o halógeno. Más preferentemente, R6 es (i) alquilo C1-10 opcionalmente sustituido con 1-3 halógeno o alcoxi C1-6; o (ii) cicloalquilo C3-7 o alquilcicloalquilo C4-10. Más preferentemente, R6 es t-butilo.

De acuerdo con la presente invención, R7 puede ser H; alquilo C1-6 opcionalmente sustituido con 1-3 halógenos; o alcoxi C1-6 con la condición de que R6 sea alquilo C1-10. Preferentemente, R7 es H o alquilo C1-6 opcionalmente

10 sustituido con 1-3 halógenos.

Los sustituyentes para cada agrupación pueden seleccionarse individualmente y combinarse en cualquier combinación que proporcione un compuesto estable de acuerdo con la presente invención. Además, más de un sustituyente de cada grupo puede estar sustituido grupo central con la condición de que haya suficientes sitios de unión disponibles.

15 Se prefiere que A sea -H(H)SOmR5 en el que R5 es ciclopropilo. Para compuestos de la presente invención, se prefiere que m sea 2. También se prefiere que n sea 1.

En una realización preferida, los compuestos de la presente invención tienen la estructura de Fórmula II:

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y enantiómeros, diastereómeros y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que

20 (a) R1 es: H, alquilo C1-6, alquenilo C2-10 o arilo C6-10, todos los cuales pueden estar sustituidos con halo, ciano, nitro, alcoxi C1-6, amido, amino o fenilo;

R2 es:

(i) alquilo C1-6; alquilo C1-6 sustituido con un carboxi (alquilo C1-6); cicloalquilo C3-7; cicloalquilo C3-6 (arilo C6-10); alquenilo C2-10; alquilo C1-3 (arilo C6-10); pudiendo estar todos sustituidos de una a tres veces con halo, alquilo C1

25 3 o alcoxi C1-3; o R2 es heterociclo C5-9, que puede estar sustituido de una a tres veces con halo, alquilo C1-4, (alquil C1-6)carboxi o fenilo; o

(ii) arilo C6-10, que puede estar sustituido de una a tres veces con los que se indican a continuación: halo; alquilo C1-6 que puede estar en sí mismo sustituido con uno a tres halo; alcoxi C1-6; nitro; tio (alquilo C1-6); fenilo; alcanoílo C1-6; benzoílo; benzoil oxima; carboxi; carboxi (alquilo C1-6); carboxi (alquilo C1-6); fenoxi; (alquil C1-6)

30 carboxi (alquilo C1-6); o arilo C6-10 que puede estar sustituido con un heterociclo C5-9, incluyendo dicho heterociclo de uno a tres átomos de nitrógeno, oxígeno o azufre, pudiendo estar dicho heterociclo sustituido en sí mismo con alquilo C1-3, alcoxi C1-3, -CF3 o carboxi (alquilo C1-3); o (b) R1 y R2 pueden unirse para formar un heterociclo de 5 ó 6 miembros, o unirse para formar un heterociclo de 5 ó 6 miembros condensado con uno o dos grupos arilo C6.

35 En una realización preferida, R1 es H, alquilo C1-6, alquenilo C2-4 o fenilo; y R2 es fenilo, opcionalmente sustituido con alquilo C1-3, uno a tres cloro o flúor, fenilo, metoxi, fenoxi, alquiléster C2-4, alcanoílo C2-6, nitro, tio(alquilo C1-4) o carboxi.

En otra realización preferida, R2 es alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, pudiendo estar todos los mismos sustituidos, por ejemplo, con un grupo fenilo.

En otra realización preferida, R2 es un grupo heterocíclico de 6 miembros, opcionalmente sustituido con uno a tres átomos de cloro o flúor o un carboxi(C1-6 alquilo). En otra realización preferida, R2 es un grupo alquenilo C2-4. En otra realización preferida más, R1 y R2 forman un anillo heterocíclico de cinco o seis miembros, que contiene

opcionalmente oxígeno.

En otra realización más, R1 y R2 forman una estructura de anillo condensado que comprende un anillo de cinco y seis miembros. En otra, la realización preferida es el compuesto que tiene la Fórmula III:

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En otra realización, se prefiere el compuesto que tiene la Fórmula IV:

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En otra realización, se prefiere el compuesto que tiene la Fórmula V: En otra realización, se prefiere el compuesto que tiene la Fórmula VI:

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En otra realización, se prefiere el compuesto que tiene la Fórmula VII: En otra realización, se prefiere el compuesto que tiene la Fórmula VIII:

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En otra realización, se prefiere el compuesto que tiene la Fórmula IX:

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En otra realización, se prefiere el compuesto que tiene la Fórmula X:

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En otra realización, se prefiere el compuesto que tiene la Fórmula XI:

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En otra realización, se prefiere el compuesto que tiene la Fórmula XII:

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En otra realización, se prefiere el compuesto que tiene la Fórmula XIII:

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Los compuestos de la presente invención, cuando están en una forma básica, pueden formar sales mediante la adición de un ácido farmacéuticamente aceptable. Las sales de adición de ácidos se forman a partir de un compuesto de Fórmula I y un ácido inorgánico farmacéuticamente aceptable, incluyendo clorhídrico, bromhídrico,

5 yodhídrico, sulfúrico, fosfórico u ácido orgánico, tal como p-toluenosulfónico, metanosulfónico, acético, benzoico, cítrico, malónico, fumárico, maleico, oxálico, succínico, sulfámico o tartárico. Por lo tanto, los ejemplos de dichas sales farmacéuticamente aceptables incluyen cloruro, bromuro, yoduro, sulfato, fosfato, metanosulfonato, citrato, acetato, malonato, fumarato, sulfamato y tartrato.

Las sales de un grupo amina también pueden comprender sales de amonio cuaternario en las que el nitrógeno del 10 amino porta un grupo orgánico adecuado, tal como un resto alquilo, alquenilo, alquinilo o aralquilo.

Pueden existir compuestos de la presente invención, que están sustituidos con un grupo ácido, como sales formadas mediante la adición de base. Dichas sales de adición de bases incluyen las que se obtienen a partir de bases inorgánicas que incluyen, por ejemplo, sales de metales alcalinos (por ejemplo, sodio y potasio), sales de metales alcalinotérreos (por ejemplo, calcio y magnesio), sales de aluminio y sales de amonio. Además, las sales de adición 15 de bases adecuadas incluyen sales de bases orgánicas fisiológicamente aceptables, tales como trimetilamina, trietilamina, morfolina, piridina, piperidina, picolina, diciclohexilamina, N,N'-dibenciletilenediamina, 2-hidroxietilamina, bis-(2-hidroxietil)amina, tri-(2-hidroxietil)amina, procaína, dibencilpiperidina, N-bencil-β-fenetilamina, deshidroabietilamina, N,N'-bishidroabietilamina, glucamina, N-metilglucamina, colidina, quinina, quinolina, etilendiamina, ornitina, colina, N,N'-bencilfenetilamina, cloroprocaína, dietanolamina, dietilamina, piperazina,

20 tris(hidroximetil)aminometano e hidróxido de tetrametilamonio, y aminoácidos básicos, tales como lisina, arginina y N-metilglutamina. Estas sales pueden prepararse por procedimientos conocidos por los expertos en la materia.

También pueden existir ciertos compuestos de la presente invención y sus sales, en forma de solvatos con agua, por ejemplo hidratos, o con disolventes orgánicos, tales como metanol, etanol o acetonitrilo para formar, respectivamente, un metanolato, etanolato o acetonitrilato. La presente invención cada solvato y mezclas de los

25 mismos.

Además, compuestos de la presente invención o una sal o solvato de los mimos, pueden mostrar polimorfismo. La presente invención también incluye cualquiera de dichas formas polimórficas.

Los compuestos de la presente invención también contienen dos o más centros quirales. Por ejemplo, los compuestos pueden incluir un elemento de ciclopropilo P1 de fórmula

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en la que cada C1 y C2 representa un átomo de carbono asimétrico en las posiciones 1 y 2 del anillo ciclopropilo. Sin soportar otros centros asimétricos posibles en otros segmentos de los compuestos, la presencia de estos dos centros asimétricos significa que los compuestos como mezclas racémicas de diastereómeros, tales como los diastereómeros en los que R2 tiene tanto la configuración syn con la amida como la configuración syn con el carbonilo como se muestra a continuación.

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La presente invención incluye los dos enantiómeros y mezclas de enantiómeros, tales como mezclas racémicas.

10 Los enantiómeros puede resolverse por procedimientos conocidos los expertos en la materia, por ejemplo, por formación de sales diastereoméricas que pueden separarse por cristalización, cromatografía líquida o de gas-líquido, reacción selectiva de un enantiómero con un enantiómero-reactivo específico. Se apreciará que cuando el enantiómero deseado se convierte en una entidad específica mediante una técnica de separación, se necesitará una etapa adicional para formar la forma enantiomérica deseada. Como alternativa, pueden sintetizarse enantiómeros

15 específicos por síntesis asimétrica usando reactivos, sustratos, catalizadores o disolventes ópticamente activos, o convirtiendo un enantiómero en el otro por transformación asimétrica.

Ciertos compuestos de la presente invención también pueden existir en formas conformacionales estables diferentes que pueden separarse. La asimetría de torsión debida a la rotación restringida en torno a un enlace simple asimétrico, por ejemplo por impedimento estérico o tensión anular, pueden permitir la separación de confórmeros

20 diferentes. La presente invención cada isómero conformacional de estos compuestos y mezclas de los mismos.

Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en forma zwitteriónica y la presente invención incluye cada forma zwitteriónica de estos compuestos y mezclas de las mismas.

Los materiales de partida útiles para sintetizar los compuestos de la presente invención se conocen por los expertos en la materia y pueden fabricarse fácilmente o están disponibles en el mercado.

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Los compuestos de la presente invención pueden fabricarse por procedimientos conocidos por los expertos en la materia, véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 6.323.180 y la Sol. de Patente de Estados Unidos 20020111313 A1. Los siguientes procedimientos expuestos a continuación se proporcionan con propósitos ilustrativos. Se reconocerá que puede ser preferente o necesario preparar dicho compuesto en el que un grupo funcional se protege usando un grupo protector convencional y después se retira el grupo protector para proporcionar un compuesto de la presente invención. Los detalles relativos al uso de grupos protectores de acuerdo con la presente invención se conocen por los expertos en la materia.

Los compuestos de la presente invención pueden, por ejemplo, sintetizarse de acuerdo con un procedimiento general como se ilustra en el Esquema I (en el que CPG es un grupo protector carboxilo y APG es un grupo protector amino):

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En resumen, el P1, P2 y P3 pueden unirse por técnicas de acoplamiento de péptidos bien conocidas. Los grupos P1, P2 y P3 pueden unirse entre sí en cualquier orden siempre y cuando el compuesto final se corresponda con los péptidos de la invención. Por ejemplo, P3 puede unirse a P2-P1; o P1 unirse a P3-P2.

Generalmente, se alargan péptidos desprotegiendo el grupo α-amino del residuo N-terminal y acoplando el grupo carboxilo desprotegido del siguiente N-protegido adecuado a través de un enlace peptídico usando los procedimientos descritos. Este procedimiento de desprotección y acoplamiento se repite hasta que se obtiene la secuencia deseada. Este acoplamiento puede realizarse con los aminoácidos constituyentes de una manera por etapas, como se representa en el Esquema I.

El acoplamiento entre dos aminoácidos, un aminoácido y un péptido o dos fragmentos de péptidos puede realizarse usando procedimientos de acoplamiento convencionales, tales como el procedimiento de azida, procedimiento mixto de anhídrido carbónico-ácido carboxílico (cloroformiato de isobutilo), procedimiento de carbodiimida (diciclohexilcarbodiimida, diisopropilcarbodiimida o carbodiimida soluble en agua), procedimiento de éster activo (pnitrofenil éster, imido éster N-hidroxisuccínico), procedimiento de reactivo K de Woodward, procedimiento de carbonildiimidazol, procedimiento de reactivos de fósforo u oxidación-reducción. Algunos de estos procedimientos (especialmente el procedimiento de carbodiimida) puede mejorarse añadiendo 1-hidroxibenzotriazol o 4-DMAP. Estas reacciones de acoplamiento pueden realizarse tanto en fase de solución (fase líquida) como en fase sólida.

Más expresamente, la etapa de acoplamiento implica el acoplamiento deshidratante de un carboxilo libre de un reactivo con el grupo amino libre del otro reactivo en presencia de un agente de acoplamiento para formar un acoplamiento de enlace amida. Se encuentran descripciones de dichos agentes de acoplamiento en libros de texto generales sobre química de péptidos, por ejemplo, M. Bodanszky, "Peptide Chemistry", 2ª ed. rev., Springer-Verlag, Berlín, Alemania, (1993). Son ejemplos de agentes de acoplamiento adecuados N,N'-diciclohexilcarbodiimida, 1hidroxibenzotriazol en presencia de N,N'-diciclohexilcarbodiimida o N-etil-N'-[(3-dimetilamino)propil]carbodiimida. Un agente de acoplamiento práctico y útil es hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi) tris-(dimetilamino)fosfonio disponible en el mercado, tanto por sí mismo como en presencia de 1-hidroxibenzotriazol o 4-DMAP. Otro agente de acoplamiento práctico y útil es tetrafluoroborato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio. Otro agente de

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acoplamiento práctico y útil más es hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotrizol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio. La reacción de acoplamiento se realiza en un disolvente inerte, por ejemplo diclorometano, acetonitrilo o dimetilformamida. Un exceso de una amina terciaria, por ejemplo diisopropiletil-amina, N-metilmorfolina, Nmetilpirrolidina o 4-DMAP se añade para mantener la mezcla de reacción a un pH de aproximadamente 8. La temperatura de reacción varía normalmente entre 0 ºC y 50 ºC y el tiempo de reacción varía normalmente entre 15 min y 24 h.

Los grupos funcionales de los aminoácidos constituyentes deben protegerse generalmente durante las reacciones de acoplamiento para evitar la formación de enlaces indeseados. Se enumeran grupos protectores que pueden usarse, por ejemplo, en Greene, "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley & Sons, Nueva York (1981) y "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", Vol. 3, Academic Press, Nueva York (1981).

El grupo α-amino de cada aminoácido que va a acoplarse a la cadena peptídica creciente debe protegerse (APG). Puede usarse cualquier grupo protector conocido en la técnica. Los ejemplos de dichos grupos incluyen: 1) grupos acilo, tales como formilo, trifluoroacetilo, ftalilo y p-toluenosulfonilo; 2) grupos carbamato aromáticos, tales como benciloxicarbonilo (Cbz o Z) y benciloxicarbonilos sustituidos y 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc); 3) grupos carbamatos alifáticos, tales como terc-butiloxicarbonilo (Boc), etoxicarbonilo, diisopropilmetoxicarbonilo y aliloxicarbonilo; 4) grupos carbamato de alquilo cíclico, tales como ciclopentiloxicarbonilo y adamantiloxicarbonilo; 5) grupos alquilo, tales como trifenilmetilo y bencilo; 6) trialquilsililo, tal como trimetilsililo; y 7) y grupos que contienen alcohol, tales como feniltiocarbonilo y ditiasuccinoílo.

El grupo protector de α-amino preferido es tanto Boc como Fmoc. Muchos derivados de aminoácido adecuadamente protegidos para la síntesis de péptidos están disponibles en el mercado.

El grupo protector de α-amido del residuo de aminoácido recién añadido se escinde antes del acoplamiento del siguiente aminoácido. Cuando se usa el grupo Boc, los procedimientos de elección son ácido trifluoroacético, puro o en diclorometano o HCl en dioxano o en acetato de etilo. Después, la sal de amonio resultante se neutraliza tanto antes del acoplamiento como in situ con soluciones básicas, tales como tampones acuosos o aminas terciarias en diclorometano, acetonitrilo o dimetilformamida. Cuando se usa el grupo Fmoc, los reactivos de elección son piperidina o piperidina sustituida en dimetilformamida, pero puede usarse cualquier amina secundaria. La desprotección se realiza a una temperatura entre 0 ºC y normalmente temperatura ambiente (ta o TA), 20-22 ºC.

Cualquiera de los aminoácidos que tienen funcionalidades de cadena lateral deben protegerse durante la preparación del péptido usando cualquiera de los grupos descritos anteriormente. Los expertos en la materia apreciarán que la selección y uso de grupos protectores adecuados para estas funcionalidades de cadena lateral dependen del aminoácido y de la presencia de otros grupos protectores en el péptido. La selección de dichos grupos protectores es importante porque el grupo no debe retirarse durante la desprotección y acoplamiento del grupo αamino.

Por ejemplo, cuando se usa Boc como el grupo protector de α-amino, son adecuados los siguientes grupos de cadena lateral: pueden usarse restos de p-toluenosulfonilo (tosilo) para proteger la cadena lateral de amino de aminoácidos, tales como Lys y Arg; pueden usarse restos acetamidometilo, bencilo (Bn) o terc-butilsulfonilo para proteger el sulfuro que contiene la cadena lateral de cisteína; pueden usarse benciléteres (Bn) para proteger las cadenas de serina laterales que contienen hidroxi, trionina o hidroxiprolina; y pueden usarse bencilésteres para proteger las cadenas laterales que contienen carboxi de ácido aspártico y ácido glutámico.

Cuando se elige Fmoc para la protección de α-amina, se aceptan normalmente grupos protectores basados en tercbutilo. Por ejemplo, puede usarse Boc para lisina y arginina, terc-butil éter para serina, trionina e hidroxiprolina y terc-butiléster para ácido aspártico y ácido glutámico. Puede usarse resto de trifenilmetilo (Tritilo) para proteger la cadena lateral que contiene azufre de cisteína.

Una vez que se completa el alargamiento del péptido se retiran todos los grupos protectores. Cuando se usa una síntesis en fase líquida, los grupos protectores se retiran de cualquier manera estipulada por la elección de los grupos protectores. Estos procedimientos son bien conocidos para los expertos en la materia.

Además, puede seguirse la siguiente orientación en la preparación de compuestos de la presente invención. Por ejemplo, para formar un compuesto en el que R4-C(O)-, R4-S(O)2, un P3 protegido, todo el péptido o un segmento del péptido se acopla a un cloruro de acilo o cloruro de sulfonilo adecuado respectivamente, que está disponible en el mercado o para el que la síntesis se conoce bien en la técnica.

En la preparación de un compuesto en el que R4OC(O)-, un P3 protegido, todo el péptido o un segmento del péptido se acopla a un cloroformiato adecuado que está disponible en el mercado o para que el la síntesis se conoce bien en la técnica. Para derivados de Boc (Boc)2O se usa.

Por ejemplo: Se trata ciclopentanol con fosgeno para formar el cloroformiato correspondiente.

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El cloroformiato se trata con el tripéptido de NH2 deseado en presencia de una base, tal como trietilamina para proporcionar el carbamato de ciclopentilo.

En la preparación de un compuesto en el que R4-N(R5)-C(O)-o R4-NH-C(S)-, un P3 protegido, todo el péptido o un segmento del péptido se trata con fosgeno seguido de amina como se describe en SynLett. Feb 1995; (2); 142-144 o se hace reaccionar con el isocianato disponible en el mercado y una base adecuada, tal como trietilamina.

En la preparación de un compuesto en el que R4-N(R5)-S(O2), un P3 protegido, todo el péptido o un segmento del péptido se trata con un cloruro de sulfanilo recién preparado o disponible en el mercado seguido de amina como se describe en la solicitud de Patente de Alemania DE 19802350 o WO 98/32748(1998), pág. 84.

El grupo α-carboxilo del residuo C-terminal se protege normalmente como un éster (CPG) que puede escindirse para dar el ácido carboxílico. Los grupos protectores que pueden usarse incluyen: 1) alquil ésteres, tales como metilo, trimetilsililetilo y t-butilo, 2) aralquil ésteres, tales como bencilo y bencilo sustituido o 3) ésteres que pueden escindirse por tratamiento con una base suave o medios reductores suaves, tales como ésteres de tricloroetil y fenacil.

El ácido α-carboxílico resultante (resultante de la escisión por ácido suave, tratamiento con base suave o medios reductores suaves) se acopla con un R1SO2NH2 [preparado por tratamiento de R1SO2Cl en una solución de tetrahidrofurano saturado con amoniaco] en presencia de un agente de acoplamiento de péptidos, tal como CDI o EDAC en presencia de una base, tal como 4-dimetilaminopiridina (4-DMAP) y/o 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU) para incorporar el resto P1', ensamblando de manera eficaz el tripéptido P1'-P1-P2-P3-APG. Típicamente, en procedimiento, se usan 1-5 equivalentes de agentes de acoplamiento P1'.

Además, si el grupo protector P3 APG se retira y se reemplaza por un resto B por los procedimientos descritos anteriormente y el ácido α-carboxílico resultante, que resulta de la escisión (resultante de la escisión por ácido suave, tratamiento con base suave o medios reductores suaves) se acopla con un R1SO2NH2 [preparado por tratamiento de R1SO2Cl en una solución de tetrahidrofurano saturado con amoniaco o procedimientos alternativos descritos en el presente documento] en presencia de un agente de acoplamiento de péptidos, tal como CDI o EDAC en presencia de una base tal como 4-dimetilaminopiridina (4-DMAP) y/o 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU) para incorporar el resto P1', se prepara el tripéptido P1'-P1-P2-P3-B. Típicamente, en este procedimiento, se usan 15 equivalentes de agentes de acoplamiento P1'.

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse por muchos procedimientos, incluyendo los que se describen en los ejemplos, a continuación, y como se describe en la Patente de Estados Unidos Nº. 6.323.180 y la solicitud de Patente de Estados Unidos Nº 10/001.850 presentada el 20 de Noviembre de 2001.

La presente invención también proporciona composiciones que comprenden un compuesto de la presente invención

o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo y un vehículo farmacéuticamente aceptable, con un transportador farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, un excipiente o diluyente de vehículo.

El principio activo, es decir, compuesto, en dichas composiciones comprende típicamente del 0,1 por ciento en peso al 99,9 por ciento en peso de la composición y comprende con frecuencia de aproximadamente 5 a 95 por ciento en peso.

Las composiciones farmacéuticas la presente invención pueden administrarse por vía oral, parental o mediante un depósito implantado. Se prefieren la administración por vía oral o administración por inyección. En algunos casos, el pH de la formulación puede ajustarse con ácidos, bases o tampones farmacéuticamente aceptables para mejorar la estabilidad del compuesto formulado o su forma de liberación. El término parenteral, como se usa en el presente documento, incluye técnicas de inyección o infusión subcutáneas, intracutáneas, intravenosas, intramusculares, intra-articular, intrasinovial, intrasternal, intratecal e intralesional.

Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una preparación inyectable esteril, por ejemplo, como una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable. Esta suspensión puede formularse de acuerdo con técnicas conocidas en la materia usando agentes de dispersión o humectantes y agentes de suspensión. Los detalles concernientes a la preparación de de dichos compuestos se conocen por los expertos en la materia.

Cuando se administra por vía oral, las composiciones farmacéuticas la presente invención pueden administrarse en cualquier forma de dosificación oralmente aceptable, incluyendo cápsulas, comprimidos y suspensiones y soluciones acuosas. En el caso de comprimidos para uso oral, los vehículos que se usan comúnmente incluyen lactosa y almidón de maíz. También se añaden típicamente agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio. Para la administración oral en forma de cápsula, los diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz. Cuando se administran suspensiones acuosas por vía oral, el ingrediente activo se combina con agentes emulsificadores y de suspensión. Si se desea, pueden añadirse ciertos agentes edulcorantes, aromatizantes y/o colorantes.

Otros vehículos adecuados para las composiciones indicadas anteriormente pueden encontrarse en textos farmacéuticos convencionales, por ejemplo en "Remington's Pharmaceutical Sciences", 19ª ed., Mack Publishing Company, Easton, Penn., 1995. Detalles adicionales con respecto al diseño y preparación de formas de liberación adecuadas de las composiciones farmacéuticas de la invención se conocen por los expertos en la materia.

Son típicos niveles de dosificación de entre 0,01 y 1000 miligramos por kilogramo ("mg/kg") de peso corporal por día, preferentemente, entre aproximadamente 0,5 y 250 mg/kg de peso corporal por día de los compuestos de la invención en una monoterapia para la prevención y tratamiento de una enfermedad mediada por VHC. Típicamente, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se administrarán de 1 a 5 veces por día o, como alternativa, como una infusión continua. Dicha administración puede usarse como una terapia aguda o crónica. La cantidad del principio activo que puede combinarse con los materiales de vehículo para producir una sola forma de dosificación variarán dependiendo del hospedador tratado y del modo de administración particular.

Como apreciarán los expertos en la materia, pueden necesitarse dosis mayores o menores que las indicadas anteriormente. Los regímenes de dosificación y tratamiento específicos para cualquier paciente en particular variarán dependiendo de una diversidad de factores, incluyendo la actividad el compuesto específico empleado, la edad, peso corporal, estado de salud general, sexo, dieta, tiempo de administración, tasa de excreción, combinación de fármaco, la gravedad y marcha de la infección, la disposición del paciente a la infección y el juicio del medico que lo trata. Generalmente, el tratamiento se inicia con pequeñas dosis sustancialmente inferiores a la dosis óptima del péptido. Posteriormente, la dosis se incrementa en pequeños incrementos hasta que se alcanza el efecto óptimo en esas circunstancias. En general, el compuesto se administra de manera más deseable a un nivel de concentración que proporcionará generalmente resultados antivirales eficaces sin causar ningún efecto secundario dañino o nocivo.

Cuando las composiciones de la presente invención comprenden una combinación de un compuesto de la invención y uno o más agentes terapéuticos o profilácticos adicionales, el compuesto y el agente adicional se presentan normalmente en niveles de dosificación entre el 10 y 100% y más preferentemente entre el 10 y 80% de la dosis que se administra normalmente en un régimen de monoterapia.

Cuando estos compuestos o sus solvatos o sales farmacéuticamente aceptables de formulan junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable, la composición resultante puede administrarse in vivo a mamíferos, tal como ser humano, para inhibir la proteasa NS3 del VHC o para tratar o prevenir la infección por el virus VHC. Dicho tratamiento también puede conseguirse usando los compuestos de la presente invención junto con agentes que incluyen: agentes inmuno moduladores, tales como interferones; otros agentes antivirales, tales como ribavirina, amantadina; otros inhibidores de la proteasa NS3 de VHC; inhibidores de otras dianas en el ciclo vital del VHC, tales como helicasa, polimerasa, metaloproteasa o sitio de entrada de ribosoma interno; o combinaciones de los mismos. Loas agentes adicionales pueden combinarse con los compuestos la presente invención para crear una sola forma de dosificación. Como alternativa estos agentes adicionales pueden administrarse por separados a un mamífero como parte de una forma de dosificación múltiple.

Por consiguiente, otro aspecto de la presente invención proporciona composiciones para su uso en la inhibición de proteasa NS3 de VHC en pacientes, administrando un compuesto de la presente invención o un solvato o sal farmaceúticamente aceptable del mismo, en el que los sustituyentes son como se han definido anteriormente.

En una realización preferida, éstos son útiles para disminuir la actividad de la proteasa NS3 del VHC en el paciente. Si la composición farmacéutica comprende solo un compuesto de la presente invención como principio activo, dichas composiciones pueden comprender adicionalmente la etapa de administrar a dicho paciente un agente seleccionado entre un agente inmunomodulador, un agente antiviral, un inhibidor de proteasa de VHC o un inhibidor de otras dianas en el ciclo vital del VHC, tal como, por ejemplo, helicasa, polimerasa o metaloproteasa. Dicho agente adicional puede administrarse al paciente antes de, concurrente con o a continuación de la administración de los

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compuestos la presente invención.

En un aspecto alternativo preferido, estas composiciones son útiles para inhibir la replicación viral en un paciente. Dichos procedimientos pueden ser útiles en el tratamiento o prevención de la enfermedad del VHC.

Los compuestos de la invención también pueden usarse como reactivos de laboratorio. Los compuestos pueden ser pueden ser decisivos para proporcionar herramientas de investigación para el diseño de ensayos de replicación viral, validación de sistemas de ensayo en animales y estudios biológicos estructurales para mejorar además el conocimiento de los mecanismos de la enfermedad por VHC.

Los compuestos la presente invención también pueden usarse para tratar o prevenir la contaminación viral de materiales y por lo tanto reducir el riesgo de infección viral de personar médico o de laboratorio o de pacientes que se ponen en contacto con dichos materiales, por ejemplo, sangre, tejidos, instrumentos y prendas quirúrgicas, instrumentos y prendas de laboratorio e instrumentos o materiales de recolección o transfusión de sangre.

Ejemplos

Los ejemplos específicos que se indican a continuación indican la síntesis de los compuestos de la presente invención.

Los porcentajes expresan una relación peso a volumen y las proporciones de solución expresan una relación volumen a volumen, a menos que se indique otra cosa. Los espectros de resonancia magnética nuclear (RMN) se registraron en un espectrómetro Bruker de 300 o 500 MHz; los desplazamientos químicos (δ) se indican en partes por millón. La cromatografía ultrarrápida se realizó sobre gel de sílice (SiO2) de acuerdo con la técnica cromatográfica de Still (W.C. Still y col., J. Org. Chem.(1978) 43, 2923).

Todos los datos de Cromatografía Líquida (CL) se registraron en un cromatógrafo de líquidos LC-10AS de Shimadzu usando un detector de UV-Vis SPD-10AV y los datos de Espectrometría de Masas (EM) se determinaron con una plataforma para micromasas para CL en modo de electronebulización (ES+).

A menos que se indique otra cosa, cada compuesto se analizó por CLEM, usando una de las siguientes metodologías y condiciones enumeradas para compuesto mientras que CL-EM

A se corresponde con el Procedimiento A, etc.):

Columnas:: Procedimiento A: YMC ODS-A C18 S7 (3,0 x 50 mm)

Procedimiento B: YMC ODS-A (5,0 x 30 mm)

Procedimiento C: Xterra C18 S7 (3,0 x 50 mm)

Procedimiento D: YMC C18 S5 (4,6 x 50 mm)

Procedimiento E: YMC C18 S5 (4,6 x 33 mm)

Procedimiento F: Xterra C 18 S7 (3,0 x 50 mm)

Procedimiento G: Xterra MS C18 (4,6 x 30 mm)

Procedimiento H: Xterra ODS S7 (3,0 x 50 mm)

Gradiente:: disolvente A al 100%/disolvente B al 0% a disolvente A al 0%/disolvente B al 100%

Tiempo de gradiente:: 1,5 min. (H),2 min. (D),3 min. (A, B, C, G), 4 min. (F),15 min. (E)

Tiempo de retención:: 1 min.

Caudal:: 4 ml/min. (A-C, E-G), 5 ml/min. (D,H)

Longitud de onda del receptor:: 220 nm.

Disolventes (A-D, F-H):: Disolvente A: MeOH al 10%/agua al 90%/TFA al 0,1%.

Disolvente B: MeOH al 90%/agua al 10%/TFA al 0,1%.

Disolventes (E):: Disolvente A: MeOH al 10%/agua al 90%/H3PO4 al 0,2%

Disolvente B: MeOH al 90%/agua al 10%/H3PO4 al 0,2%

En la preparación de los siguientes compuestos, se ha descubierto que aparece una epimerización parcial durante la preparación. Por lo tanto, pueden presentarse pequeñas cantidades de diastereómeros más probablemente epiméricos en el centro quiral de la prolina P2.

Los compuestos e intermedios químicos de la presente invención de la presente invención, descritos en los

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siguientes ejemplos, se prepararon de acuerdo con los procedimientos siguientes.

Los ejemplos 1-3 describen los intermedios usados para la formación de los tripéptidos descritos en el ejemplo 4 y de manera específica los Compuestos 1-68.

Ejemplo 1: Preparación de un intermedio P1, éster etílico del ácido N-Boc-(1R/2S)/(1S/2R)-1-amino-2vinilciclopropanocarboxílico racémico.

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Etapa 1a: Preparación de N-bencil imina de éster etílico de glicina, mostrada continuación.

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Se suspendió clorhidrato del éster etílico de glicina (303,8 g, 2,16 moles) en terc-butilmetil éter (1,6 l). Se añadieron benzaldehído (231 g, 2,16 moles) y sulfato sódico anhidro (154,6 g, 1,09 moles) y la mezcla se enfrió a 0 ºC usando un baño de agua enfriada con hielo. Se añadió gota a gota trietilamina (455 ml, 3,26 moles) durante 30 min y la mezcla se agitó durante 48 h a ta. Después, la reacción se interrumpió mediante la adición de agua enfriada con hielo (1 l) y la fase orgánica se separó. La fase acuosa se extrajo con terc-butilmetil éter (0,5 l) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con una mezcla de NaHCO3 acuoso saturado(1 l) y salmuera (1 l). La solución se secó sobre MgSO4 y se concentró al vacío, proporcionando 392,4 g del producto de N-bencil imina en forma de un aceite espeso de color amarillo que se usó directamente en la siguiente etapa. RMN 1H (CDCl3, 300 MHz) δ 1,32 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 4,24 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 4,41 (d, J = 1,1 Hz, 2H), 7,39-7,47 (m, 3H), 7,78-7,81 (m, 2H), 8,31 (s, 1H).

Etapa 1b: Preparación de éster etílico del ácido N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R1)-1-amino-2vinilciclopropanocarboxílico racémico

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A una suspensión de terc-butóxido de litio (100 g, 1,25 mol) en tolueno seco (1,0 l), se le añadió gota a gota una mezcla de de la N-bencil imina de éster etílico de glicina (119,3 g, 0,625 mol) y trans-1,4-dibromo-2-buteno (126,3 g, 0,594 mol) en tolueno seco (0,8 l) durante 60 min. Después de que se completara la adición, la mezcla de color rojo intenso se inactivó mediante la adición de agua (1 l) y terc-butilmetil éter (TBME, 1 l). La fase acuosa se separó y se extrajo una segunda vez con TBME (1 l). Las fases orgánicas se combinaron, se añadió HCl 1 N (1,3 l) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La fase orgánica se separó y se extrajo con agua (1,0 l). Después, las fases acuosas se combinaron, se saturaron son sal (1000 g), se añadió TBME (1 l) y la mezcla se enfrió a 0 ºC. Después, la mezcla agitada se basificó a pH 14 mediante la adición gota a gota de NaOH 10 N, la fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con TBME (2 x 500 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4) y se concentraron hasta un volumen de 1 l. A esta solución de amina libre, se le añadió dicarbonato de di-terc-butilo (124,7 g, 0,714 moles) y la mezcla se agitó 4 días a ta. Se añadió más dicarbonato de di-terc-butilo (65,5 g, 0,375 moles) a la reacción, la mezcla se calentó a reflujo durante 3 h y después se dejó enfriar a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se secó sobre MgSO4 y se concentró al vacío, proporcionando 200 g de un material en bruto. Este residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (2,5 Kg de SiO2, eluyendo con MeOH del 1% al 2%/CH2Cl2), proporcionando 72,5 g (48%) de éster etílico del ácido N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2vinilciclo-propanocarboxílico racémico en forma de un aceite de color amarillo que solidificó mientras se asentaba en el refrigerados. RMN 1H (CDCl3, 300 MHz) δ 1,26 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,46 (s, 9H), 1,43-1,49 (m, 1H), 1,76-1,82 (m a, 1H), 2,14 (c, J = 8,6 Hz, 1H), 4,18 (c, J = 7,2 Hz, 2H), 5,12 (dd, J = 10,3, 1,7 Hz, 1H), 5,25 (s a, 1H), 5,29 (dd, J = 17,6, 1,7 Hz, 1H), 5,77 (ddd, J = 17,6, 10,3, 8,9 Hz, 1H).

Ejemplo 2: Preparación de BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp)-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano:

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Etapa 2a y etapa 2b: Preparación de BocNH-P2(Hyp)-P1(1R,2S)/(1S/2R)VinilAcca)OEt, mostrado a continuación:

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Se disolvió éster etílico del ácido N-Boc-(1R/2S)/(1S/2R)-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico racémico (18,75 g) en HCl 4 N-dioxano (87 ml, 345 mmol). La solución se agitó durante 1,5 horas y después se concentró al vacío para producir la sal HCl de éster etílico del ácido (1R/2S)/(1S/2R)-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico (14 g) en forma de una espuma/aceite de color naranja que se recogió para la siguiente etapa sin purificación. La sal HCl del éster 15 etílico del ácido (1R/2S)/(1S/2R)-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico (14,07 g) se disolvió en 1,30 l de acetonitrilo seco, en una atmósfera de nitrógeno, en un matraz de 5 litros equipado con un agitados mecánico. La solución se enfrió en baño de agua enfriada con hielo a 5 ºC. Se añadió Boc-Hyp-OH (34,0 g, 147 mmol) y la mezcla se dejó en agitación durante 15 minutos. Se añadieron diisopropiletilamina (61,4 ml, 353 mmol), acetonitrilo (100 ml) y finalmente HATU (41,9 g, 110 mmol) a la reacción. Después de 27 horas, la mezcla se concentró al vacío para dar 20 un aceite espeso de color naranja que se diluyó inmediatamente se diluyó con 1,2 l de acetato de etilo y se dividió en tres porciones de 400 ml. Cada porción de 400 ml se lavó con 500 ml de agua, 500 ml solución 1N de bicarbonato sódico, 500 ml de una solución 1 N de ácido clorhídrico, 500 ml una solución 1 N de bicarbonato sódico y 500 ml de salmuera. Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron al vacío. El producto en bruto se disolvió en una cantidad mínima de cloruro de metileno se filtró por gravedad a través de un 25 lecho de sílice (1 kg) eluyendo con 2:1 de acetato de etilo:hexanos, produciendo 17,9 g del producto del título (66%) en forma de una espuma de color blanquecino: RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz, 55 ºC) δ 5,74 (m, 1H), 5,28 (dd, 1H, J =

17, 1,6 Hz), 5,10 (d, 1H, J = 10,4 Hz), 4,39 (m, 1H), 4,26 (t, 1H, J = 7,7 Hz), 4,13 (m, 2H), 3,57 (ddd, 1H, 4,55, 4,45, 3,5 Hz), 3,44 (m, 1H), 2,21 (m, 1H), 2,18 (dt, 1H, 9,1, 8,5 Hz), 2,10 (m, 1H), 1,77 (m a, 2H), 1,42 y 1,44 (9H, s, de diastereómeros), 1,22 (t, 3H, J = 7,1 Hz). CL-EM H (tiempo de retención: 1,09 ; EM m/z 369 (M+H).

Etapa 2c: Preparación de BocNH-P2(Hyp(O-suberil))-Pl(1R,2S VinilAcca)-OEt, y separación de diastereómeros resultantes como se describe a continuación:

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Se disolvió BocNH-P2(Hyp)-P1(1R,2S)/(1S/2R)VinilAcca)-OEt (54,715 g) se disolvió en 500 ml de cloruro de metileno. A esta solución se le añadió en sucesión cloruro de suberilo (37,39 g, 163 mmol) y trietilamina (41,4 ml, 297 mmol) y la reacción se agitó en una atmósfera de nitrógeno durante 39 horas. Después, la mezcla se lavó con 2 10 x 600 ml de agua y 2 x 600 ml de salmuera. Después, la fase orgánica se filtró a través de un lecho de gel de sílice suspendido con cloruro de metileno. Las fracciones de producto se concentraron para producir espuma de color amarillo que se purificó por una columna Biotage Flash150 de gel de sílice, cargándola en 400 ml de éter dietílico y eluyendo con 3:1 de hexanos:acetato de etilo. Las fracciones que contenían el producto se concentraron al vacío para producir el producto del título 21,67 g (26%) en forma del diastereómero Rf superior: RMN 1H (d4-MeOH, 500M)

15 δ 7,33 (m, 2H), 7,15 (m, 6H), 5,73 (m, 1H), 5,45 (m, 1H), 5,28 (m, 1H), 5,08 (m, 1H), 4,21 (m, 2H), 4,07 (m, 3H), 3,48 (m, 4H), 2,94 (m a, 2H), 2,35 (m a, 1H), 2,14 (m, 1H), 1,99 (m, 1H), 1,71 (m, 1H), 1,38 y 1,40 (s, 9H, confórmeros), 1,31 (m,1 H), 1,19 y 1,22 (t, 3H, confórmeros). CL-EM D (tiempo de retención: 1,94 ; EM m/z 561 (M+H).

Etapa 2d: Preparación de BocNH-P2(Hyp(O-suberil))-P1(1R,2S VinilAcca)-OH, mostrado a continuación

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20 Se disolvió BocNH-P2(Hyp(O-suberil))-P1(1R,2S VinilAcca)-OEt (24,02 g) en 50 ml de metanol y 100 ml de tetrahidrofurano en una atmósfera de nitrógeno. Después, se añadió lentamente una solución de NaOH 1 N (51 ml, 51,0 mmol) a la mezcla. La solución se agitó durante 21 horas después se añadieron en porciones 51 ml de una solución 1 N de ácido clorhídrico. La mezcla se concentró al vacío y se dejó en la bomba de vacío durante una noche. Después de 16 horas, el producto en bruto se disolvió en 100 ml de acetato de etilo y se filtró a través de un

25 embudo de sinterizado de dos litros que contenía 42 mm de gel de sílice. El producto se eluyó con acetato de etilo para producir el producto del título 22,4 g (98% en forma de un sólido de color blanco: RMN 1H (DMSO-d6, 500Mz) δ 12,55 (s a, 1H), 7,36 (m, 2H), 7,18 (m, 6H), 5,74 (m, 1H), 5,59 (m a, 1H), 5,22 (d, 1H, 16,8 Hz), 5,05 (d, 1H,J=11 Hz), 4,07 (m, 2H), 3,36-3,43 (m, 4H), 3,00 (m a, 2H), 2,30 (m, 1H), 1,89 (m, 1H), 1,55 (m 1H), 1,31 y 1,34 (s, 9H rotómeros), 1,20 (m, 1H). CL-EM E (tiempo de retención: 3,09 ; EM m/z 533 (M+H).

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Etapa 2e: Preparación de BocNH-P2(Hyp(O-suberil))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano:

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Preparación de resto ciclopropil sulfonamida para su uso en la etapa 2e:

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A una solución de 20 ml de THF enfriada a 0 ºC se le burbujeó amoniaco gaseoso hasta que se alcanzó la

5 saturación. A esta solución se le añadieron 2 g (5,69 mmol) de cloruro de ciclopropilsulfonilo (adquirido de Array Biopharma). La solución se calentó a temperatura ambiente durante dos horas la solución en bruto se filtró a través de un lecho de gel de sílice eluyendo el producto con acetato de etilo. Las fracciones se concentraron al vacío para producir 1,70 g (99%) de ciclopropil sulfonamida en forma de un sólido de color blanco: RMN 1H (d4-MeOH, 500 MHz) δ 0,94-1,07 (m, 4H), 2,52-2,60 (m, 1H).

10 Preparación de BocNH-P2(Hyp(O-suberil))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano mostrado a continuación:

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Se disolvió BocNH-P2(Hyp(O-suberil))-P1-OH (9,7 g) en 50 ml de tetrahidrofurano en un matraz de fondo redondo

de 250 ml en una atmósfera de nitrógeno. Después se añadió carbonildiimidazol (3,54 g, 21,9 mmol) a la solución. 15 La mezcla se calentó a 80 ºC durante una hora y después se retiró del calor pero se dejó que continuara en

agitación durante 1,75 horas más. Se añadió ciclopropil sulfonamida (4,33 g, 45,5 mmol) a la solución seguido de

DBU (5,45 ml, 36,4 mmol) y se agitó durante 16 horas. La reacción se concentró a alto vacío y después se diluyó

con 600 ml de acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con 2 x 300 ml de HCl 1 N. Las fases de HCl se extrajeron

de nuevo con 100 ml de acetato de etilo y esto se combinó con la otra fase orgánica. Después, las fases orgánicas 20 combinadas se lavaron con 2 x 300 ml de agua y 2 x 300 ml de salmuera. La solución se secó sobre sulfato sódico y

se concentró al vacío. Después, el aceite se disolvió en cloruro de metileno y se filtró por gravedad a través de un

lecho de sílice (67mm x 33mm) eluyendo con 1:1 de acetato de etilo:hexanos para dar 8,66 g (75%) de un sólido

cristalino de color blanquecino: RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,34 (m, 2H), 7,18 (m, 6H), 5,75 (m, 1H), 5,47 (m a,

1H), 5,30 (d, 1H, J = 17 Hz), 5,12 (d, 1H, J = 10,4 Hz), 4,21 (m, 2H), 3,49 (m, 3H), 3,39 (dd, 11,6, 3,7 Hz), 2,93 25 (m,2H), 2,18-2,23 (m, 2H), 1,82-1,91 (m, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,36-1,42(m,4H), 1,02-1,15 (m, 2H). CL-EM A (tiempo de

retención: 2,83 ; EM m/z 658 (M+Na).

Etapa 2f y etapa 2g: Preparación de BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp)-P1-CONHSO2Ciclopropano:

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Se trató BocNH-P2(Hyp(O-suberil))-P1-CONHSO2-Ciclopropano (8,66 g, 13,6 mmol) se trató con HCl 4 N en dioxano (34 ml) y se agitó durante 1,5 horas. Después, la reacción se diluyó con éter dietílico (100 ml) y el filtrado se recogió en un embudo de filtro Buchner para producir 4,94 g de una espuma de color amarillo pálido que se llevó a la siguiente etapa sin purificación adicional. La sal HCl de P2(Hyp)-P1-CONHSO2-Ciclopropano (4,94 g, 13,0 mmol) se disolvió después en dimetilformamida (40 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La solución se enfrió en un baño de agua enfriada con hielo a 2 ºC. Se añadieron N-Boc-L-terc-leucina (3,16 g, 13,7 mmol), dietilisopropilamina recién destilada (9,0 ml, 52,0 mmol y HATU (5,44 g, 14,3 mmol). La reacción se agitó durante 18,5 h, momento en el que se concentró al vacío a ~15 ml y se diluyó con acetato de etilo (350 ml). Después, la fase orgánica se lavó con agua (200 ml), una solución 1 N de ácido clorhídrico (2 x 350 ml) y salmuera (2 x 350 ml) y se secó sobre sulfato sódico. La solución se concentró a ~20 ml y después se filtró por gravedad a través de un lecho de sílice eluyendo con 1:1 de acetato de etilo:hexanos para producir el producto del título 4,78 g (66%) en forma de un sólido de color blanco: RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 6,65 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,31 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,13 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,49 (s, 1 H), 4,37 (m, 1 H), 4,30 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 3,81 (m, 2 H), 2,93 (m, 1 H), 2,23 (c, J = 8,9 Hz, 1 H), 2,12 (dd, J = 13,1 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 1,97 (m, 1 H), 1,87 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,44 (s, 9 H), 1,40 (m, 1 H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,07 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,20 ; EM m/z 557 (M+H).

Ejemplo 3: Preparación de isocianatos y cloruros de carbamoílo para su uso en el Ejemplo 4

Los isocianatos y cloruros de carbamilo usados en el Ejemplo 4 estaban disponibles en el mercado excepto los que se muestran en la Tabla 1 que se sintetizaron mediante los siguientes procedimientos.

Procedimientos para la formación de isocianatos y cloruros de carbamilo (véase Tabla 1):

Procedimiento A: Una solución de indolina (2 ml, 17,8 mmol) disuelta en THF (25 ml) se añadió se añadió a una solución preenfriada de fosgeno (20%) en tolueno (38 ml), Et3N (2,5 ml) en tolueno (30 ml) a -78 ºC. Después de agitar durante tres horas a -78 ºC, la solución se calentó en una corriente de N2 y después se concentró al vacío. El producto se recristalizó en acetato de etilo/hexanos.

Procedimiento B: La amina (1,0 equiv.) se suspendió o disolvió en tolueno (0,5M). Después se añadió fosgeno (20%) en tolueno (4,0 equiv.) y la mezcla se calentó durante dos horas. Después, la reacción se enfrió y el producto se filtró

o precipitó en hexanos o acetato de etilo, después se filtró y se secó al vacío.

Procedimiento C: Se suspendió carboxilato de metil-3-amino-5,6-dicloro 2-pirazina (3 g, 13,5 mmol) en tolueno (7 ml) y se calentó a 110 ºC. Después una solución de cloruro de oxalilo (4,7 ml) en tolueno (14 ml) se añadió gota a gota mediante una jeringa. Después de 2-4 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío un aceite de color pardo-negro. El producto se destiló (122 ºC, 0,1mm) para producir un sólido de color amarillo.

Tabla 1

Isocianato/Cloruro de Carbamilo: Procedimiento Temp. Time Procedimiento de Precipitación Rendimiento

imagen1: A véanse detalles de procedimiento recristalizado 5%

B: 80 ºC 4 h EtOAc 46%

B: 80 ºC 2 h Hexanos 89%

B: 100 ºC 2 h filtrado <10%

C: véanse detalles de procedimiento n/a 46%

Ejemplo 4: Procedimiento general para la preparación de carbamatos de tripéptido P2 (Compuestos 1-68) como se muestra a continuación:

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Procedimiento representativo para fabricar carbamatos de tripéptido P2 (BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CONR1R2)-P1(1R, 2S VinilAcca)-CONHSO2-Ciclopropano), Compuestos 1-68, usando isocianatos o cloruros de carbamilo:

Se disolvió BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp)-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2-Ciclopropano (80 mg,0,144 mmol) en 500

10 microlitros de tetrahidrofurano y la solución se enfrió a 2 ºC en un baño de hielo/agua. A esta mezcla fría se le añadió hidruro sódico al 60% en aceite mineral (18 mg, 0,431 mmol) seguido del isocianato o cloruro de carbamilo (1,1 equivalentes). Después de agitar 2 horas, el baño de refrigeración se retiró y después la mezcla se dejó en agitación durante 2 horas más antes de inactivarla con una solución saturada de cloruro de amonio. Después, la reacción se diluyó con 30 ml de acetato de etilo y después se lavó con 30 ml de HCl 1 N y 30 ml de salmuera. La

15 fase orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró al vacío. El aceite/sólido se diluyó con 3 ml de cloruro de metileno y se filtró a través de una suspensión de 50 mm por 38,1 mm (11/2'') de gel de sílice y 1-1 de hexanosacetato de etilo. La elusión adicional con acetato de etilo produjo los carbamatos del tripéptido P2:

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(N-metilo,N-fenil)))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

5 RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,34 (m, 2 H), 7,21 (t, J = 7,3 Hz, 3 H), 6,63 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 5,78 (m, 1 H), 5,31 (s, 1 H), 5,23 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,06 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 4,25 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 4,21 (m, 2 H), 3,90 (m, 1 H), 3,26 (s, 3 H), 2,85 (m, 1 H), 2,12 (m, 3 H), 1,82 (m, 1 H), 1,43 (m, 1 H), 1,40 (s, 9 H), 1,15 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H), 0,96 (m, 2 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,40; EM m/z 691 (M+H).

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10 BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-metilbencil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(94%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,21 (s, 1 H), 7,13 (s, 3 H), 6,63 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,32 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 18,3 Hz, 1 H), 5,11 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,35 (m, 1 H), 4,25 (m, 3 H), 4,07 (m, 1 H), 3,93 (m, 1 H), 2,91 (m, 1 H), 2,34 (m, 1 H), 2,30 (s, 3 H), 2,23 (m, 1 H), 2,13 (m, 1 H), 1,85 (m, 1 H), 1,43 (s, 9 H), 1,35 (s, 1 H), 1,23 (m, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,65 ; EM m/z 704 (M+H).

imagen3

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-2(trans)-fenilciclopropil)))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(93%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,23 (, 2 H), 7,12 (m, 3 H), 5,77 (m, 1 H), 5,30 (d, J = 15,9 Hz, 2 H), 5,12 (d, J =

10,1 Hz, 1 H), 4,35 (m, 1 H), 4,26 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,10 (m, 2 H), 3,93 (m, 1 H), 2,92 (s, 1 H), 2,68 (m, 1 H), 2,33 (m, 1 H), 2,21 (m, 1 H), 2,13 (m, 1 H), 2,03 (, 1 H), 1,86 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,45, 1,42 (s, 10 H, de dos isómeros), 1,23 (m, 2 H), 1,05 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H), 0,88 (m, 2 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,69 ; EM m/z 716 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO-(4-morfolino)))-P1(1R,2S VinilAcca). CONHSO2Ciclopropano (58%): CL-EM A (tiempo de retención: 2,31; EM m/z 670 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(N,N-dialil))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

10 (98%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 6,63 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 5,76 (m, 3 H), 5,30 (m, 2 H), 5,11 (m, 5 H), 4,33 (dd, J = 10,7 Hz, 7,0 Hz, 1H), 4,24 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 4,12 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 3,87 (m, 3H), 3,79 (m, 2H), 2,92 (m, 1 H), 2,33 (dd, J = 14,0 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 2,22 (c, J = 8,8 Hz, 1 H), 2,13 (m, 1 H), 1,86 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1H), 1,42 (s, 10H), 1,23 (m, 2H), 1,06 (m, 2H), 1,01 (s, 9H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,62 ; EM m/z 680 (M+H).

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15 BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-ciclohexil)))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(31%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,00 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,64 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,31 (d, J = 18,6 Hz, 1 H), 5,27 (s, 1 H), 5,12 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 4,33 (m, 1 H), 4,25 (d, J = 9,5 Hz, 1 H). 4,03 (m, 1 H), 3,92 (m, 1 H), 3,34 (s, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,30 (m, 1 H), 2,23 (c, J = 8,6 Hz, 1 H), 2,11 (m, 1 H), 1,86 (m, 3 H), 1,72 (m, 2 H), 1,44 (s, 10 H), 1,31 (m, 2 H), 1,24 (m, 2 H), 1,17 (m, 4 H), 1,06 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,67 ; EM m/z 682 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-fenetil)))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(19%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,27(t,J =7,6Hz,2H),7,19(d,J=7,6Hz,3H),5,77(m,1H),5,30(d,J=

5 17,4 Hz, 1 H), 5,26 (s, 1 H), 5,13 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,32 (m, 1 H), 4,26 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,04 (m, 1 H), 3,92 (m, 1 H), 3,30 (m, 2 H), 2,93 (m, 1 H), 2,76 (m, 2 H), 2,26 (m, 2 H), 2,10 (m, 1 H), 1,87 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,43 (s, 9 H), 1,33 (s, 1 H), 1,24 (m, 2 H), 1,07 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,65 ; EM m/z 704 (M+H).

imagen1

10 BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-bifen-2-il)))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(83%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,67 (m, 1 H), 7,44 (m, 2 H), 7,35 (m, 4 H), 7,25 (m, 2 H), 6,62 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,31 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,26 (s, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,25 (m, 2 H), 4,05 (t, J = 6,7 Hz, 1 H), 3,91 (m, 1 H), 2,92 (m, 1 H), 2,21 (m, 2 H), 2,09 (m, 1 H), 1,86 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,42 (m, 1 H), 1,39 (s, 9 H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,00 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 3,00 ; EM m/z 752

15 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(5-cloro-2-metoxi-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(60%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,98 (s, 1 H), 6,99 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,92 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 6,63 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,40 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 11,6 Hz, 1 H), 4,40 (dd, J = 9,8 Hz, 7,3

5 Hz, 1 H), 4,24 (t, J = 9,2 Hz, 2 H), 3,96 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 3,84 (s, 3 H), 2,93 (m, 1 H), 2,42 (dd, J = 13,7 Hz, 6,7 Hz, 1 H), 2,23 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,43 (m, 1 H), 1,36 (s, 9 H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,76 ; EM m/z 740 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-Benzo[1,3]dioxol-5-il)))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

10 (70%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,08 (s, 1 H), 6,76 (m, 1 H), 6,70 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 6,63 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 5,89 (s, 2 H), 5,77 (m, 1 H), 5,37 (s, 1 H), 5,29 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,11 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,39 (t, J = 8,0 Hz; 1 H), 4,27 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,16 (d, J = 12,2 Hz, 1 H), 3,95 (dd, J = 11,3 Hz, 3,4 Hz, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,40 (dd, J = 14,0 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 2,21 (m, 2 H), 1,86 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,43 (m, 1 H), 1,39 (s, 9 H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,05 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,56 ; EM m/z 720 (M+H).

imagen3

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(4-metoxi-bencil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(89%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,18 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 6,85 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 5,76 (m, 1 H), 5,31 (s, 1 H), 5,29 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,34 (m, 1 H), 4,25 (t, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,19 (m, 2 H), 4,05 (m, 1 H), 3,92 (m, 1 H), 3,75 (s, 3 H), 2,92 (m, 1 H), 2,32 (dd, J = 13,7 Hz, 6,7 Hz, 1 H), 2,22 (c, J = 8,5 Hz, 1 H), 2,13 (m, 1 H), 1,86 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,43 (s, 9 H), 1,36 (m, 1 H), 1,22 (m, 2 H), 1,05 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,55 ; EM m/z 720 (M+H).

imagen1

5 BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-2-[éster metílico del ácido (2S,3S)-3-metilvalérico])))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(68%): RMN 1H (d4-MeOH, 50OMz) δ 6,63 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,30 (m, 2 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,35 (m, 1 H), 4,27 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 4,12 (d, J = 5,8 Hz, 1 H), 4,02 (m, 1 H), 3,96 (m, 1 H), 3,70 (s, 3 H), 2,92 (m, 1 H), 2,33 (dd, J = 13,7 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 2,24 (m, 1 H), 2,13 (m, 1 H), 1,86 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,80 (m,

10 1 H), 1,45 (s, 11 H), 1,24 (m, 3 H), 1,06 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H), 0,90 (m, 6 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,63 ; EM m/z 728 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(N,N-(pirrolidino))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(57%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 6,60 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,30 (m, 2 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1

15 H), 4,37 (dd, J = 10,1 Hz, 7,3 Hz, 1 H), 4,22 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,16 (d, J = 11,6 Hz, 1 H), 3,90 (dd, J = 11,9 Hz, 3,4 Hz, 1 H), 3,34 (s, 4 H), 2,93 (m, 1 H), 2,34 (dd, J = 14,0 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 2,22 (c, J = 8,9 Hz, 1 H), 2,13 (m, 1 H), 1,86 (m, 5 H), 1,43 (s, 10 H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,05(m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,40 ; EM m/z 654 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(N,N-(piperdino))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(77%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 6,61 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,76 (m, 1H), 5,30 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,28 (s, 1 H),5,12(d, J = 10,1 Hz, 1 H), 4,35 (dd, J = 10,3 Hz, 7,3 Hz, 1 H), 4,22 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,14 (d, J = 11,6 Hz, 1 H),

5 3,91 (dd, J = 11,6 Hz, 3,4 Hz, 1 H), 3,40 (s, 4 H), 2,93 (m, 1 H), 2,34 (dd, J = 14,0 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 2,21 (c, J = 8,8 Hz, 1 H), 2,13 (m, 1 H), 1,86 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,60 (m, 2 H), 1,51 (m, 4 H), 1,43 (s, 10 H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,55 ; EM m/z 668 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-metil-5-nitro-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

10 (75%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 8,53 (s, 1 H), 7,89 (d, J = 10,1 Hz, 1 H), 7,40 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 6,63 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,44 (s, 1 H), 5,29 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,11 (d, J = 10,7 Hz, 1 H), 4,44 (m, 1 H), 4,29 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,25 (d, J = 11,3 Hz, 1 H), 4,00 (dd, J = 11,6 Hz, 3,4 Hz, 1 H), 2,92 (m, 1 H), 2,47 (m, 1 H), 2,34 (s, 3 H), 2,22 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,43 (m, 1 H), 1,38 (s, 9 H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,07 (m, 2 H), 1,03 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,61 ; EM m/z 735 (M+H).

imagen3

BocNH-P3(t-BuGly)-P2Hyp(O-CO(NH-(2,3,4-trifluoro-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(49%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,63 (s, 1 H), 7,07 (c, J = 9,8 Hz, 1 H), 6,65 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,42 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 11,6 Hz, 1 H), 4,40 (s, 1 H), 4,26 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,21 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 3,96 (dd, J = 11,9 Hz, 3,9 Hz, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,42 (dd, J = 14,0 Hz, 6,7 Hz, 1 H), 2,22 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,43 (m, 1 H), 1,39 (s, 9 H), 1,23 (m, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,69 ; EM m/z 730 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-terc-butil-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclpropano

(52%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,42 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,20 (m, 3 H), 6,65 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,37 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,44 (s, 1 H), 4,30 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 4,16 (m, 1

10 H), 3,97 (m, 1 H), 2,92 (m, 1 H), 2,39 (m, 1 H), 2,22 (m, 2 H), 1,86 (m, 1 H), 1,50 (m, 1 H), 1,45 (s, 9 H), 1,37 (s, 9 H), 1,23 (m, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,75 ; EM m/z 732 (M+H).

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BOCNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2,6-Dicloro-piridin-4-il))))-P1(1R,2S)VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(20%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,47 (s, 2 H), 5,83 (m, 1 H), 5,40 (s, 1 H), 5,25 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,08 (d, J =

15 9,8 Hz, 1 H), 4,43 (m, 1 H), 4,30 (d, J = 11,6 Hz, 1 H), 4,21 (m, 1 H), 3,96 (dd, J = 12,2 Hz, 3,1 Hz, 1 H), 2,81 (m, 1 H), 2,44 (m, 1 H), 2,39 (m, 1 H), 2,17 (m, 2 H), 1,85 (m, 1 H), 1,37 (m, 1 H), 1,33 (s, 9 H), 1,16 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H), 0,98 (m, 2 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,73 ; EM m/z 768 (M+Na).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(éster etílico del ácido 2-benzoico))))-P1(1R,2S)VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano

(50%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 8,36 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 8,01 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 7,54 (t, J = 7,3 Hz, 1 H), 7,07 (t, J = 7,3 Hz, 1 H), 5,85 (m, 1 H), 5,39 (s, 1 H), 5,24 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,06 (d, J = 10,1 Hz, 1 H), 4,47 (t, J = 8,5 Hz, 1 H), 4,34 (m, 4 H), 4,23 (s, 1 H), 3,98 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 2,83 (m, 1 H), 2,47 (m, 1 H), 2,29 (m, 1 H), 2,16 (m, 1 H), 1,85 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,38 (t, J = 7,0 Hz, 3 H), 1,32 (m, 1 H), 1,28 (s, 9 H), 1,15 (s, 2 H), 1,03 (s, 9 H), 0,99 (m, 2 H). CL-EM F (tiempo de retención: 3,48 ; EM m/z 747 (M+H).

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10 BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(5-cloro-2-metil-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(40%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,60 (s, 1 H), 7,14 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,03 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 5,87 (m, 1 H), 5,37 (s, 1 H), 5,24 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,05 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 4,45 (m, 1 H), 4,26 (s, 1 H), 4,22 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 3,98 (m, 1 H), 2,81 (m, 1 H), 2,44 (m, 1 H), 2,30 (m, 1 H), 2,20 (s, 3 H), 2,16 (m, 1 H), 1,84 (dd, J = 7,6 Hz, 5,2 Hz, 1 H), 1,39 (s, 10 H), 1,13 (s, 2 H), 1,03 (s, 9 H), 0,96 (s, 2 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,76 ; EM m/z 724

15 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-fluoro-5-metilfenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(53%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,69 (s, 1 H), 6,96 (t, J = 8,2 Hz, 1 H), 6,86 (s, 1 H), 5,85 (m, 1 H), 5,38 (s, 1 H), 5,23 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,06 (d, J = 10,1 Hz, 1 H), 4,45 (m, 1 H), 4,25 (s, 1 H), 4,22 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 3,98 (m, 20 1 H), 2,81 (m, 1 H), 2,44 (m, 1 H), 2,28 (s, 4 H), 2,14 (m, 1 H), 1,85 (m, 1 H), 1,37 (s, 10 H), 1,14 (s, 2 H), 1,03 (s, 9 H), 0,96 (s, 2 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,69 ; EM m/z 708 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-etil-6-isopropil-fenilo))))-P1(1R,2S)VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

BMS-557166 (78%): RMN 1H (d6-DMSO, 500Mz) δ 10,40 (s,1 H), 7,22 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,15 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,08 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 6,38 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 5,63 (m, 1 H), 5,34 (s, 1 H), 5,27 (d, J =17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,7 Hz, 1 H), 4,34 (m, 1 H), 4,14 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 3,96 (m, 1 H), 3,85 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 3,09 (m, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,50 (m, 2 H), 2,22 (m, 2 H), 2,13 (m, 1 H), 1,72 (m, 1 H), 1,41 (s, 10 H), 1,21 (m, 9 H), 1,03 (m, 2 H), 0,96 (s, 9 H), 0,90 (s, 2 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,81 ; EM m/z 746 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(3,5-dicloro-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

10 (64%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,44 (s, 2 H), 7,04 (s, 1 H), 6,62 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,40 (s, 1 H), 5,29 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,40 (dd, J = 10,1 Hz, 7,3 Hz, 1 H), 4,25 (m, 2 H), 3,96 (dd, J = 11,9 Hz, 3,6 Hz, 1 H), 2,92 (m, 1 H), 2,42 (dd, J = 14,0 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 2,23 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,42 (m, 1 H), 1,35 (s, 9 H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,05 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,96 ; EM m/z 745 (M+H).

imagen3

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(3-fluoro-bencil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(57%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,32 (m, 1 H), 7,08 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,01 1 (d, J = 10,1 Hz, 1 H), 6,96 (t, J = 8,2 Hz, 1 H), 6,63 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,33 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 18,6 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,35 (m, 1 H), 4,25 (m, 3 H), 4,05 (m, 1 H), 3,95 (m, 1 H), 2,92 (m, 1 H), 2,33 (dd, J = 13,4 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 2,22 (m, 1 H), 2,13 (m, 1 H), 1,86 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,43 (s, 9 H), 1,38 (m, 1 H), 1,23 (m, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,80 ; EM m/z 708 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(3-etil-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(77%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,27 (s, 1 H), 7,21 (s, 1 H), 7,15 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,86 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 6,64 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,39 (s, 1 H), 5,29 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,40 (dd, J

10 =9,7Hz,7,3Hz,1H),4,28(d,J=9,2Hz,1H),4,18(d,J=11,6Hz,1H),3,97(M,1H),2,93(M,1H),2,59(c,J= 7,6 Hz, 2 H), 2,41 (dd, J = 14,0 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 2,22 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,42 (m, 1 H), 1,38 (s, 9 H), 1,23 (m, 2 H), 1,20 (t, J = 7,3 Hz, 3 H), 1,06 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,78 ; EM m/z 704 (M+H).

imagen1

15 BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-cloro-bencil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(62%): RMN 1H (d6-acetona, 500Mz) δ 8,39 (s, 1 H), 7,41 (m, 2 H), 7,32 (m, 2 H), 6,96 (s, 1 H), 5,80 (m, 2 H), 5,36 (s, 1 H), 5,23 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,06 (d, J = 10,7 Hz, 1 H), 4,42 (m, 2 H), 4,29 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 3,99 (s, 1 H), 2,92 (m, 1 H), 2,33 (m, 1 H), 2,23 (m, 2 H), 1,79 (dd, J = 7,6 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,46 (m, 1 H), 1,42 (s, 9 H), 1,16 (m, 2 H), 1,04 (s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,58 ; EM m/z 724 (M+H).

imagen4

BocNH-p3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(3-metoxi-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(47%): RMN 1H (d6-acetona, 500Mz) δ 10,11 (s, 1 H), 8,72 (s, 1 H), 8,40 (s, 1 H), 7,26 (s, 1 H), 7,19 (t, J = 8,2 Hz, 1

H), 7,10 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,61 (d, J = 8,2 Hz, 1 H) 5,77 (m, 2 H), 5,47 (s, 1 H), 5,24 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,08 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,37 (m, 1 H), 4,30 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,06 (m, 2 H), 3,77 (s, 3 H), 2,94 (m, 1 H), 2,40 (m, 1 H), 2,26 (m, 2 H), 1,80 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,50 (m, 1 H), 1,37 (s, 9 H), 1,20 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,07 (m, 2 H), 1,05 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,51 ; EM m/z 706 (M+H).

imagen2

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(éster etílico del ácido 3-benzoico))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano

(43%): RMN 1H (d6-acetona, 500Mz) δ 10,10 (s, 1 H), 9,01 (s, 1 H), 8,40 (s, 1 H), 8,26 (s, 1 H), 7,79 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 7,69 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,44 (t, J = 7,9 Hz, 1 He 5,77 (m, 2 H), 5,49 (s, 1 H), 5,23 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,08 (d,

10 J=10,1Hz,1H),4,41(t,J=7,6Hz,1H),4,35(c,J=7,0Hz,2H),4,29(d,J=9,5Hz,1H),4,16(d.J=11,6Hz,1 H), 4,03 (m, 1 H), 2,94 (m, 1 H), 2,42 (dd, J = 13,7 Hz, 6,7 Hz, 1 H), 2,26 (m, 2 H), 1,80 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,50 (dd, J = 9,5 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,35 (m, 12 H), 1,20 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,07 (m, 2 H), 1,04 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,63 ; EM m/z 748 (M+H).

imagen1

15 BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-metilsulfanilfenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(63%): RMN 1H (d6-acetona, 500Mz) δ 10,13 (s, 1 H), 8,40 (s, 1 H), 7,99 (s, 1 H), 7,90 (s, 1 H), 7,46 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,27 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,12 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 5,79 (m, 2 H), 5,46 (s, 1 H), 5,25 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,08 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,43 (m, 1 H), 4,28 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,20 (d, J = 11,3 Hz, 1 H), 4,03 (m, 1 H), 2,95 (m, 1 H), 2,44 (m, 1 H), 2,40 (s, 3 H), 2,27 (m, 2 H), 1,80 (dd. J=7,9 Hz, 5,2 Hz, 1 H), 1,50 (dd, J = 9,5 Hz, 5,2 Hz, 1 H), 1,36 (s, 9

20 H), 1,20 (t, J = 7,3 Hz, 2 H), 1,05 (s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,57 ; EM m/z 722 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(éster metílico del ácido 2-benzoico))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano

(18%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 8,37 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 8,01 (d, J = 6,7 Hz, 1 H), 7,55 (t, J = 8,6 Hz, 1 H), 7,08 (t, J = 7,3 Hz, 1 H), 5,81 (m, 1 H), 5,39 (s, 1 H), 5,25 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,07 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,46 (m, 1 H), 4,32 (d, J = 12,2 Hz, 1 H), 4,23 (s, 1 H), 3,98(d, J = 12,2 Hz, 1 H), 3,89 (s, 3 H), 2,87 (m, 1 H), 2,46 (m, 1 H), 2,29 (m, 1 H), 2,15 (s, 1 H), 1,85 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,38 (m, 1 H), 1,28 (s, 9 H), 1,15 (s, 2 H), 1,03 (s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,75 ; EM m/z 734 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2,3-dicloro-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

10 (30%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,81 (s, 1 H), 7,27 (m, 2 H), 6,62 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,78 (m, 1 H), 5,41 (s, 1 H), 5,27 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,09 (d, J = 10,6 Hz, 1 H),4,42 (m, 1 H), 4,25 (m, 2 H), 3,97 (m, 1 H), 2,91 (m, 1 H), 2,43 (dd, J = 13,4 Hz, 6,7 Hz, 1 H), 2,20 (m, 2 H), 1,85 (dd, J = 7,9 Hz, 5,2 Hz, 1 H), 1,40 (m, 1 H), 1,37 (s, 9 H), 1,19 (m, 2 H), 1,01 (s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,78 ; EM m/z 744 (M+H).

imagen1

15 BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(N-(9-carbazolil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(27%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 8,18 (s, 2 H), 8,03 (d, J = 7,6 Hz, 2 H), 7,48 (t, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,37 (t, J = 7,3 Hz, 2 H), 5,80 (s, 1 H), 5,75 (m, 1 H), 5,29 (d, J = 17,4, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,63 (m, 2 H), 4,30 (m, 1 H), 4,07 (m, 1 H), 2,94 (m, 1 H), 2,68 (m, 1 H), 2,35 (m, 1 H), 2,24 (m, 1 H), 1,89 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,44 (m, I H), 1,23 (m, 2 H), 1,08 (m, 2 H), 1,05 (s, 9 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,96 ; EM m/z 750

20 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-bromo-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(35%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,75 (m, 1 H), 7,57 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 7,32 (t, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,05 (t, J = 7,9 Hz, 1 H), 6,65 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,41 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,40 (m, 1 H), 4,27 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,23 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 3,97 (dd, J = 11,9 Hz, 3,4 Hz, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,41 (m, 1 H), 2,22 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,43 (m, 1 H), 1,39 (s, 9 H), 1,23 (t, J = 7,3 Hz, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,65 ; EM m/z 754 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(3-trifluorometil-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

10 (29%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,84 (s, 1 H), 7,60 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 7,44 (m, 1 H), 7,29 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 6,63 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,78 (m, 1 H), 5,41 (s, 1 H), 5,28 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,11 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,42 (m, 1 H), 4,25 (m, 2 H), 3,96 (dd, J = 11,9 Hz, 3,4 Hz, 1 H), 2,91 (m, 1 H), 2,43 (dd, J = 13,7 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 2,21 (m, 2 H), 1,86 (dd, J = 8,2 Hz, 5,2 Hz, 1 H), 1,42 (m, 1 H), 1,34 (s, 9 H), 1,22 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H), 1,02 (m, 2 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,79 ; EM m/z 743 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-3-(éster metílico del ácido 5,6-dicloro-pirazin-2-carboxílico))))P1(1R,2S)VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(48%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 6,64 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,45 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,42 (dd, J = 10,3 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 4,23 (m, 2 H), 3,99 (dd, J = 11,6 Hz, 3,6 Hz, 1 H), 3,95 (s, 3 H), 2,93 (m, 1 H), 2,44 (dd, J = 14,0 Hz, 7,0 Hz, 1 H); 2,24 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,41 (m, 1 H), 1,37 (s, 9 H), 1,23 (m, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,67 ; EM m/z 804 (M+H).

imagen2

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(N-(1-indolinil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(78%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,76 (s, 1 H), 7,51 (m, 2 H), 6,94 (m, 1 H), 6,59 (m, 1 H), 5,75 (m, 1 H), 5,41 (s, 1 H), 5,29 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 11,3 Hz, 1 H), 4,44 (s, 1 H), 4,28 (s, 1 H), 4,21 (s, 1 H), 3,96 (m, 3 H), 3,07 (s, 2 H), 2,93 (m, 1 H), 2,46 (s, 1 H), 2,21 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,42 (m, 1 H), 1,31 (s, 9

10 H), 1,22 (m, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,03 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,68 ; EM m/z 702 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(3-metilsulfanil-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(17%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,41 (s, 1 H), 7,15 (m, 2 H), 6,91 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,38 (s, 1 H), 5,28 (d, J = 16,8 Hz, 1 H), 5,10 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,41 (m, 1 H), 4,26 (m, 1 H), 4,20 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 3,96 15 (dd, J = 11,6 Hz, 3,6 Hz, 1 H), 2,69 (m, 1 H), 2,44 (s, 3 H), 2,40 (m, 1 H), 2,20 (s, 2 H), 1,86 (m, 1 H), 1,41 (m, 1 H), 1,37 (s, 9 H), 1,20 (s, 2 H), 1,02 (s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,69 ; EM m/z 622 (M+H-Boc).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-cloro-5-metil-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(27%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,64 (s, 1 H), 7,25 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 6,92 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 6,59 (d, J = 8,5 20 Hz, 1 H), 5,80 (m, 1 H), 5,39 (s, 1 H), 5,26 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,07 (d, J = 10,1 Hz, 1 H), 4,42 (m, 1 H), 4,26 (m, 2 H), 3,98 (d, J = 11,6 Hz, 1 H), 2,89 (m, 1 H), 2,43 (m, 1 H), 2,31 (s, 3 H), 2,24 (m, 1 H), 2,15 (m, 1 H), 1,85 (dd, J =

7,9 Hz, 5,2 Hz, 1 H), 1,39(m, 1 H), 1,37(s,9H), 1,17(m,2H), 1,03(s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,72 ; MS m/z725(M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(N,N-difenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(51%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,33 (m, 4 H), 7,22 (m, 6 H), 6,74 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,72 (m, 1 H), 5,39 (s, 1 H), 5,27 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,10 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,29 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 4,25 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 4,05 (dd, J = 10,3 Hz, 7,3 Hz, 1 H), 3,89 (dd, J = 12,2 Hz, 3,0 Hz, 1 H), 2,92 (m, 1 H), 2,19 (m, 2 H), 2,08 (m, 1 H), 1,83 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,43 (s, 9 H), 1,36 (dd, J = 9,5 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,05 (m, 2 H), 1,03 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,75 ; EM m/z 752 (M+H).

imagen1

10

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(éster metílico del ácido 3-benzoico))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano

(9%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 8,11 (s, 1 H), 7,66 (m, 2 H), 7,37 (t, J = 7,9 Hz, 1 H), 6,60 (s, 1 H), 5,77 (s, 1 H), 5,41 (s, 1 H), 5,29 (d, J = 16,8 Hz, 1 H), 5,11 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 4,42 (m, 1 H), 4,26 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,22 (d, J =

15 12,5 Hz, 1 H), 3,96 (dd, J = 11,6 Hz, 3,4 Hz, 1 H), 3,89 (s, 3 H), 2,90 (s, 1 H), 2,42 (m, 1 H), 2,21 (s, 2 H), 1,86 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,41 (m, 1 H), 1,35 (s, 9 H), 1,22 (m, 2 H), 1,02 (s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,59 ; EM m/z 734 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(4-Metoxi-2-nitro-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(23%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 8,05 (s, 1 H), 7,60 (d, J = 3,1 Hz, 1 H), 7,28 (dd, J = 9,2 Hz, 3,1 Hz, 1 H), 6,60 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,40 (s, 1 H), 5,28 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,10 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,42 (dd, J = 10,1 Hz, 7,3 Hz, 1 H), 4,25 (m, 2 H), 3,97 (dd, J = 11,9 Hz, 3,0 Hz, 1 H), 3,85 (s, 3 H), 2,92 (m, 1 H), 2,42 (dd, J = 13,3 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 2,21 (m, 2 H), 1,85 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,40 (m, 1 H), 1,34 (s, 9 H), 1,22 (m, 2 H), 1,02 (s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,63 ; EM m/z 773 (M+Na).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2,3-Dimetilfenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(18%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,17 (m, 1 H), 7,00 (m, 2 H), 5,77 (m, 1 H), 5,38 (s, 1 H), 5,29 (d, J = 16,8 Hz, 1

10 H), 5,11 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 4,41 (s, 1 H), 4,29 (m, 1 H), 4,16 (d, J = 11,6 Hz, 1 H), 3,97 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 2,91 (s, 1 H), 2,41 (m, 1 H), 2,27 (s, 3 H), 2,21 (m, 2 H), 2,13 (s, 3 H), 1,86 (m, 1 H), 1,43 (s, 10 H), 1,22 (s, 2 H), 1,03 (s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,64 ; EM m/z 704 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(N,N-dimetil)))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

15 (16%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 6,60 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 5,76 (m 1 H), 5,29 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,26 (s, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,38 (dd, J = 10,0 Hz, 7,3 Hz, 1 H), 4,22 (m, 1 H), 4,16 (d, J = 11,6 Hz, 1 H), 3,90 (dd, J = 11,6 Hz, 3,1 Hz, 1 H), 2,92 (m, 1 H), 2,89 (s, 6 H), 2,35 (dd, J = 14,0 Hz, 7,3 Hz, 1 H), 2,21 (m, 1 H), 2,16 (m, 1 H), 1,85 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,42 (s, 10 H), 1,22 (m, 2 H), 1,05 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,28 ; EM m/z 628 (M+H).

imagen4

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(N,N-dietil)))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(27%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 6,59 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,29 (s, 1 H), 5,27 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 5,10 (d, J = 10,7 Hz, 1 H), 4,37 (dd, J = 10,3 Hz, 7,3 Hz, 1 H), 4,23 (m, 1 H), 4,13 (d, J = 12,5 Hz, 1 H), 3,90 (dd, J = 11,3 Hz, 3,4 Hz, 1 H), 3,26 (m, 4 H), 2,91 (m, 1 H), 2,36 (dd, J = 13,7 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 2,18 (m, 2 H), 1,85 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,44 (m, 1 H), 1,42 (s, 9 H), 1,20 (m, 2 H), 1,10 (t, J = 8,2 Hz, 6 H), 1,02 (s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,38 ; EM m/z 678 (M+Na).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(N,N-diisopropil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano.

(43%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 6,59 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,33 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 18,3 Hz, 1 H), 5,13 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,41 (dd, J = 10,7 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 4,27 (m, 1 H), 4,14 (s, 1 H), 3,67 (s, 1 H), 4,10 (d, J =

10 11,9 Hz, 1 H), 3,90 (dd, J = 11,4 Hz, 3,4 Hz, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,37 (dd, J = 14,0 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 2,24 (c, J = 8,6 Hz, 1 H), 2,16 (m, 1 H), 1,87 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,44 (m, 1 H), 1,42 (s, 9 H), 1,23 (m, 2 H), 1,19 (m, 12 H), 1,08 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,65 ; EM m/z 684 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(N,N-dibutil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

15 (39%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 5,83 (m, 1 H), 5,26 (s, 1 H), 5,24 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,06 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,41 (dd, J = 9,8 Hz, 7,6 Hz, 1 H), 4,25 (m, 1 H), 4,09 (d, J = 12,2 Hz, 1 H), 3,91 (dd, J = 11,9 Hz, 3,3 Hz, 1 H), 3,20 (m, 4 H), 2,80 (m, 1 H), 2,38 (dd, J = 13,7 Hz, 7,3 Hz, 1 H), 2,24 (m, 1 H), 2,15 (c, J = 8,9 Hz, 1 H), 1,84 (dd, J = 7,9 Hz, 5,2 Hz, 1 H), 1,53 (m, 2 H), 1,46 (m, 1 H), 1,43 (s, 9 H), 1,35 (m, 2 H), 1,30 (m, 4 H), 1,14 (s, 2 H), 1,02 (s, 9 H), 0,97 (m, 2 H), 0,92 (m, 6 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,78 ; EM m/z 713 (M+H).

imagen4

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(3-acetil-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(54%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 8,05 (m, 1 H), 7,66 (m, 2 H), 7,40 (t, J = 7,9 Hz, 1 H), 5,84 (s, 1 H), 5,39 (s, 1 H), 5,25 (d, J = 15,3 Hz, 1 H), 5,07 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 4,45 (t, J = 7,9 Hz, 1 H), 4,26 (m, 1 H), 4,22 (d, J = 12,5 Hz, 1 H), 3,97 (dd, J = 11,9 Hz, 3,3 Hz, 1 H), 2,81 (s a, 1 H), 2,57 (s, 3 H), 2,44 (dd, J = 13,7 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 2,25 (s, 1 H), 2,16 (s, 1 H), 1,85 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,38 (m, 1 H), 1,34 (s, 9 H), 1,16 (m, 2 H), 1,01 (s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,48 ; EM m/z 718 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(éster isopropílico del ácido 2-benzoico))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano

(34%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 8,38 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 8,00 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,55 (t, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,06

10 (t,J=7,6Hz,1H),6,62(d,J=9,5Hz,1H),5,76(m,1H),5,40(s,1H),5,30(d,J=17,1Hz,1H),5,20(m,1H), 5,12 (d, J = 10,1 Hz, 1 H), 4,44 (m, 1 H), 4,32 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 4,23 (m, 1 H), 3,96 (m, 1 H), 2,94 (m, 1 H), 2,45 (dd, J = 13,7 Hz, 6,7 Hz, 1 H), 2,23 (m, 2 H), 1,88 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,43 (dd; J=9,7 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,37 (m, 6 H), 1,29 (s, 9 H), 1,23 (t. J=7,0 Hz, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM B (tiempo de retención: 2,56 ; EM m/z 763 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-2-(éster etílico del ácido 4,5,6,7-tetrahidro-benzo[b]tiofeno-3carboxílico))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(10%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 5,75 (m, 1 H), 5,42 (s, 1 H), 5,31 (dd, J = 17,1 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 5,13 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,42 (m, 1 H), 4,32 (m, 1 H), 4,28 (m, 2 H), 4,20 (m, 1 H), 3,93 (m, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,74 (s, 2 H),

20 2,62 (s, 2 H), 2,47 (m, 1 H), 2,25 (m, 2 H), 1,79 (m, 5 H), 1,38 (m, 1 H), 1,34 (m, 3 H), 1,31 (s, 9 H), 1,23 (m, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,02, 1,01 (s, total 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 3,08 ; EM m/z 809 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(3,5-dimetil-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(43%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,03 (m, 2 H), 6,67 (s, 1 H), 6,64 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,38 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,11 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,41 (m, 1 H), 4,27 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,18 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 3,97 (dd, J = 11,9 Hz, 3,7 Hz, 1 H), 2,91 (m, 1 H), 2,41 (dd, J = 13,7 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 2,24 (s, 6 H), 2,21 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,42 (m, 1 H), 1,38 (s, 9 H), 1,22 (m, 2 H), 1,05 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,73 ; EM m/z 704 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-fluoro-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2CyClopropano

10 (37%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,86 (s, 1 H), 7,10 (m, 3 H), 6,63 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,42 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,40 (m, 1 H), 4,27 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 4,21 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 3,96 (dd, J = 11,9 Hz, 3,6 Hz, 1 H), 2,92 (m, 1 H), 2,42 (dd, J = 13,7 Hz, 6,7 Hz, 1 H), 2,22 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,42 (dd, J = 9,5 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,38 (s, 9 H), 1,23 (t, J = 7,3 Hz, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,52 ; EM m/z 694 (M+H).

imagen3

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2,6-difluorofenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(34%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,28 (m, 1 H), 7,01 (t, J = 7,9 Hz, 2 H), 6,65 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,41 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,36 (s, 1 H), 4,29 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,10 (m, 1 H), 3,96 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 2,92 (m, 1 H), 2,37 (s, 1 H), 2,21 (m, 2 H), 1,86 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,44 (s, 10

20 H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,38 ; EM m/z 712 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-cloro-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(37%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,81 (s, 1 H), 7,39 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,28 (t, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,10 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,64 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,42 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,41 (m, 1 H), 4,27 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,23 (d, J = 12,5 Hz, 1 H), 3,98 (dd, J = 11,6 Hz, 3,1 Hz, 1 H), 2,92 (m, 1 H), 2,42 (dd, J = 13,4 Hz, 6,7 Hz, 1 H), 2,22 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,42 (dd, J = 9,8 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,38 (s, 9 H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,59 ; EM m/z 711 (M+H).

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10 BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2,6-dicloro-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(37%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,43 (d, J = 7,9 Hz, 2 H), 7,27 (t, J = 7,9 Hz, 1 H), 6,62 (s, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,39 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,1 Hz, 1 H), 4,44 (s, 1 H), 4,29 (s, 1 H), 4,10 (m, 1 H), 4,10 (m, 1 H), 3,99 (m, 1 H), 2,92 (s, 1 H), 2,42 (s, 1 H), 2,22 (s a, 2 H), 1,86 (s, 1 H), 1,48 (s, 1 H), 1,45 (s, 9 H), 1,23 (t, J = 7,3 Hz, 2 H), 1,06 (s, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,49 ; EM m/z 744 (M+H).

imagen3

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-metoxi-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(32%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,85 (s, 1 H), 7,03 (t, J = 7,9 Hz, 1 H), 6,96 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 6,90 (t, J = 7,2 Hz, 1 H), 6,63 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,39 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 11,3 Hz, 1 H), 4,40 (t, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,26 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,21 (d, J = 12,2, 1 H), 3,97 (dd, J = 11,6 Hz, 3,3 Hz, 1 H), 3,84 (s, 20 3 H), 2,92 (m, 1 H), 2,41 (m, 1 H). 2,23 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,42 (dd, J = 9,5 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,37 (s, 9 H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,05 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,56 ; EM m/z 706

(M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-etoxi-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(32%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,87 (s, 1 H), 7,00 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,94 (d, J = 7,9 Hz, I H), 6,88 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,62 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 5,79 (m, 1 H), 5,39 (s, 1 H), 5,27 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,09 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,42 (t, J = 8,8 Hz, 1 H), 4,25 (t, J = 9,8 Hz, 2 H), 4,08 (m, 2 H), 3,98 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 2,91 (m, 1 H), 2,43 (dd, J = 13,4 Hz, 6,7 Hz, 1 H), 2,19 (m, 2 H), 1,85 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,41 (t, J = 6,7 Hz, 4 H), 1,35 (s, 9 H), 1,19 (m, 2 H), 1,02 (s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,67 ; EM m/z 720 (M+H).

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10 BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(o-tolil)))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(40%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,37 (m, 1 H), 7,17 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,14 (t, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,06 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 5,78 (m, 1 H), 5,39 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, 10,4 Hz, 1 H), 4,41 (s, 1 H), 4,29 (m, 1 H), 4,17 (d, J = 11,6 He; 1 H), 3,98 (dd, J = 11,0, 2,8 Hz, 1 H), 2,92 (m, 1 H), 2,40 (m, 1 H), 2,23 (s, 5 H), 1,86 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,43 (s, 10 H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,05 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de

15 retención: 2,54 ; EM m/z 690 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2,6-dimetil-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONKSO2Ciclopropano

(42%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,05 (s, 3 H), 5,78 (m, 1 H), 5,39 (m, 1 H), 5,31 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,13 (d, J = 10,1 Hz, 1 H), 4,44 (dd, J = 9,8 Hz, 7,3 Hz, 1 H), 4,30 (m, 1 H), 4,10 (m, 1 H), 4,01 (m, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,40 20 (dd, J = 13,7 Hz, 6,7 Hz, 1 H), 2,23 (s, 6 H), 2,18 (m,2 H), 1,87 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,48 (m, 1 H), 1,45 (s, 9

H), 1,23 (t, J = 7,3 Hz, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,03 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,55 ; EM m/z 704 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-etil-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(43%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,39 (s a, 1 H), 7,21 (s, J = 7,0 Hz, 1 H), 7,14 (m, 2 H), 5,76 (m, 1 H), 5,39 (s, 1 H), 5,29 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,11 (d, J = 10,1 Hz, 1 H), 4,41 (m, 1 H), 4,29 (m, 1 H), 4,16 (d, J = 11,6 Hz, 1 H), 3,98 (d, J = 11,6, 1 H), 2,92 (m, 1 H), 2,62 (c, J = 7,3 Hz, 2 H), 2,40 (s a, 1 H), 2,20 (m, 2 H), 1,86 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1H). 1,42 (s, 10 H), 1,23 (m, 2 H), 1,17 (t, J = 7,6 Hz, 3 H), 1,03 (s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,61 ; EM m/z 704 (M+H).

imagen1

10 BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-nitro-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(48%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 8,31 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 8,14 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,68 (t, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,24 (t, J = 7,3 Hz, 1 H), 6,61 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,43 (s, 1 H), 5,29 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,11 (d, J = 10,4, 1 H), 4,44 (dd, J = 10,4 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 4,31 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 4,23 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 3,96 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,46 (dd, J = 13,7 Hz, 6,7 Hz, 1 H), 2,22 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,40 (m, 1 H),

15 1,31 (s, 9 H), 1,22 (m, 2 H), 1,02 (s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,56 ; EM m/z 721 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-etil-6-metil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(43%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,08 (m, 3 H), 6,64 9d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,78 (m, 1 H), 5,40 (s, 1 H), 5,31 (d, J = 17,1 Hz, I H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,44 (m, 1 H), 4,31 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,09 (m, 1 H), 4,00 (m, 1 H), 2,93 (m, 20 1 H), 2,60 (c, J = 7,6 Hz, 2 H), 2,39 (m, 1 H), 2,23 (s, 5 H), 1,87 (dd, J = 7,9 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,50 (s, 1 H), 1,46 (s, 9

H), 1,23 (t, J = 7,3 Hz, 2 H), 1,17 (t, J = 7,3 Hz, 3 H), 1,03 (s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,63 ; EM m/z 718 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2,6-dietil-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(51%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,18 (m, 1 H), 7,10 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 6,64 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 5,78 (m, 1 H), 5,41 (s, 1 H), 5,32 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,13 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,44 (dd, J = 10,1 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 4,32 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,08 (m, 1 H), 4,01 (m, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,60 (c, J = 7,6, 4 H), 2,40 (m, 1 H), 2,24 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,51 (s, 1 H), 1,46 (s, 9 H), 1,23 (m, 2 H), 1,18 (t, J = 7,6 Hz, 6 H), 1,06 (m, 2 H), 1,03 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,69 ; EM m/z 732 (M+H).

imagen5

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-cloro-6-metil))))-P14(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(38%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,28 (m, 1 H), 7,18 (m, 2 H), 6,66 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,40 (s, 1 H), 5,32 (d, J = 16,8 Hz, 1 H), 5,12, (d, J = 10,1 Hz, 1 H), 4,44 (m, 1 H), 4,30 (m, 1 H), 4,04 (m, 1 H), 4,01 (m, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,41 (m, 1 H), 2,29 (s, 3 H), 2,25 (m, 2 H), 1,87 (m, 1 H), 1,49 (m, 1 H), 1,45 (s, 9 H), 1,23 (t, J = 7,2, 2

15 H), 1,06 (m, 2 H), 1,02 (S, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,51 ; EM m/z 724 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(éster butílico del ácido 2-benzoico))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano

(35%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 8,39 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,01 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,56 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,09 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,66 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,40 (s, 1 H), 5,31 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,43 (dd, J = 10,1 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 4,31 (m, 3 H), 4,24 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 3,96 (d, J = 11,6 Hz, 1 H), 2,94 (m, 1 H), 2,44 (dd, J = 13,4 Hz, 6,7 Hz, 1 H), 2,24 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,76 (m, 2 H), 1,48 (c, J = 7,6 Hz, 2 H), 1,43 (m, 1 H), 1,29 (s, 9 H), 1,24 (m, 2 H), 1,07 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H), 1,00 (m, 3 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,99 ; EM m/z 776 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-yodo-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(36%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,84 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,57 (s a, 1 H), 7,36 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,93 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,63 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,79 (m, 1 H), 5,38 (s, 1 H), 5,27 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,08 (d, J = 10,1, 1 H),

10 4,41 (s, 1 H), 4,28 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,22 (d, J = 11,6 Hz, 1 H), 3,99 (dd, J = 11,9 Hz, 3,1 Hz, 1 H), 2,90 (m, 1 H), 2,41 (m, 1 H), 2,20 (m, 2 H), 1,85 (J=7,6 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,40 (s, 10 H), 1,18 (s a, 2 H), 1,01 (s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,60 ; EM m/z 802 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-propil-fenil))))-P1(1R,2S vinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

15 (40%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,38 (m, 1 H), 7,19-7,10 (m, 3 H), 6,67 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,39 (s, 1 H), 5,31 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,40 (s a, 1 H), 4,29 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,17 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 3,98 (m, 1 H), 2,91 (m, 1 H), 2,58 (m, 2 H), 2,38 (s a, 1 H), 2,22 (m, 2 H), 1,86 (m, 1 H), 1,58 (c, J = 7,3 Hz, 2 H), 1,42 (s, 10 H), 1,23 (m, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,03 (s, 9 H), 0,93 (t, J = 7,3 Hz, 3 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,71 ; EM m/z 718 (M+H).

imagen4

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(1-Hyp(O-CO(NH-(2-fenoxi-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

5

10

15

20

25

30

(39%): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 7,95 (s a, 1 H), 7,34 (t, J = 8,2 Hz, 2 H), 7,10 (m, 2 H), 7,02 (t, J = 7,9 Hz, 1 H), 6,96 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 6,83 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 6,62 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 5,78 (m, 1 H), 5,35 (s, 1 H), 5,25 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,07 (d,J = 10,4 Hz, 1 H), 4,38 (t, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,24 (d, J =9,2 Hz, 1 H), 4,17 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 3,95 (m, 1 H), 2,89 (m, 1 H), 2,37 (m, 1 H), 2,15 (m, 2 H), 1,84 (m, 1 H), 1,35 (s, 10 H), 1,16 (s, 2 H), 1,01 (s, 11 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,80; EM m/z 769 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(1,3,5-Trimetil-pirazol-4-il))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano:

RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 5,83 (m, 1 H), 5,36 (s, 1 H), 5,27 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,08 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 4,44 (m, 1 H), 4,27 (m, 1 H), 4,10 (m, 1 H), 3,97 (m, 1 H), 3,67 (s, 3 H), 2,84 (m, 1 H), 2,39 (m, 1 H), 2,25 (m, 1 H), 2,18 (m, 1 H), 2,13 (s, 3 H), 2,07 (s, 3 H), 1,85 (m, 1 H), 1,44 (s, 10 H), 1,17 (m, 2 H), 1,03 (m, 11 H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,21 ; EM m/z 708 (M+H).

Preparación del Compuesto 69 BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(ácido 2-benzoico))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano por hidrólisis del Compuesto 19, BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2benzoico éster etílico del ácido))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano:

imagen1

Se disolvió BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-( éster etílico del ácido 2-benzoico))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano, compuesto 19 (82 mg, 0,11 mmol) se disolvió en 600 µl de THF y 200 µl de agua. Se añadió LiOH (5,4 mg) y la mezcla se agitó en una atmósfera de N2 durante 24 horas. Después se añadió más LiOH (3,0 mg). La mezcla se agitó durante 5 días y después se añadió más LiOH (5,4 mg). Después de 24 horas más, la reacción se diluyó con acetato de etilo (25 ml) y se lavó secuencialmente con HCl 1 N (25 ml) y salmuera (25 ml). La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío para producir BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH(ácido 2-benzoico))))-P1(1R,2S)VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano 51 mg (63%) en forma de un sólido de color blanquecino: RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 8,38 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 8,04 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,54 (t, J = 7,3 Hz, 1 H), 7,07 (t, J = 7,3 Hz, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,41 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,42 (dd, J = 10,4 Hz, 7,0 Hz, 1 H), 4,31 (d, J = 12,2 Hz, 1 H), 4,22 (d, J = 10,1 Hz, 1 H), 3,96 (d, J = 11,0 Hz, 1 H), 2,94 (m, 1 H), 2,43 (m, 1 H), 2,23 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 8,2 Hz, 5,5 Hz, 1 H), 1,43 (m, 1 H), 1,26 (s, 11H), 1,06 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM A (tiempo de retención: 2,61 ; EM m/z 72 (M+H).

Ejemplo 5 : Preparación de reactivos de carbamato de p-nitrofenilo

El esquema siguiente indica el procedimiento usado para la formación de una serie de carbamatos de p-nitro fenilo, cada uno mostrado en la Tabla 2. Estos carbamatos se usan como reactivos para la síntesis de los carbamatos de tripéptido P2 descritos en el Ejemplo 6 y compuestos específico 70 a 74.

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El siguiente procedimiento general se usó para preparar los reactivos de carbamato de p-nitrofenilo que se encuentran en la en la Tabla 2.

La amina heterocíclica de partida (1,34 mmol) se disolvió en 10 ml de CHCl3. A esta solución se le añadió una solución de cloroformiato de p-NO2 fenilo (270 mg, 1,34 mmol) disuelto en 10 ml de CHCl3 seguido de piridina (108 ml). Después de agitar durante dos horas, la reacción se filtró y después se concentró al vacío. Los carbamatos de p-nitrofenilo heterocíclicos deseados se recogieron para la siguiente etapa sin purificación adicional. Tabla 2:

reactivo de carbamato de p-NO2-fenilo: Rendimiento

85%

98%

82%

77%

97%

Ejemplo 6: Preparación de tripéptido P2, Compuestos 70 a 74.

Los carbamatos de p-nitro fenilo anteriores (reactivos 70-74) enumerados en la tabla 2 se usaron para preparar los tripéptidos de carbamato (Compuestos 70-74) del Ejemplo 6 siguiendo los procedimientos generales que se indican a continuación:

imagen1

Procedimiento general para la formación de Compuestos 70 a 74 de carbamatos de tripéptidos usando reactivos 70-74 que se encuentran en la tabla 2.

Se añadió hidruro sódico (60%, 17 mg, 0,432 mmol) a una solución preenfriada (2 ºC) de BocNH-P3(t-BuGly)

10 P2(Hyp)-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2-Ciclopropano (80 mg, 0,144 mmol) disuelto en 2,0 ml de tetrahidrofurano. En un matraz separado, se añadió NaH al 60% (6,5 mg, 0,165 mmol) a una solución de carbamato de p-NO2 fenilo heterocíclico (0,158 mmol, reactivo 70-74 encontrado en la tabla 2) disuelto en 500 µl de THF y 200 µl de DMF (Procedimiento A) ó 500 µl de DMF (Procedimiento B). Esta solución se agitó durante 5 minutos y después se inyectó directamente en la mezcla de tripéptidos enfriada. La reacción se agitó durante 4 horas y después se

15 interrumpió con una solución saturada de cloruro de amonio (1,0 ml). Después, la reacción se diluyó con 50 ml de acetato de etilo y se lavó con 50 ml de HCl 1 N, 50 ml de NaHCO3 1 N, 50 ml de agua y 50 ml de salmuera. El producto se purificó por TLC Prep. eluyendo con 2:1 de acetato de etilo:hexanos para producir los siguientes carbamatos de tripéptidos:

imagen1

20 BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(3,4-Dimetil-isoxazol-5-il))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHS0O2Ciclopropano

(69%, procedimiento A, usando el reactivo 70): RMN 1H (d4-MeOH, 500Mz) δ 6,59 (m, 1H, NH), 5,83 (m, 1H), 5,40 (m, 1H), 5,26 (d, 1H, J = 16,8 Hz), 5,09 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,18 (d, 1H, J = 11,9 Hz), 3,97 (dd, 1H, J = 12,2, 3,7 Hz), 2,85 (s a, 1H), 2,42 (m, 1H), 2,20-2,30 (m, 2H), 2,18 (s, 3H), 1,87 (s, 3H), 1,86 (m, 2H), 1,42 (s, 9H),

25 1,39 (m, 2H), 1,15-1,21 (m, 2H), 1,03 (s, 9H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,27; EM m/z 695 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-4-(éster metílico del ácido tiofeno-3-carboxílico))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano

(21%, procedimiento B, usando reactivo 71): RMN 1H (d4-MeOH, 300Mz) δ 8,21 (d, 1H, J = 3,7 Hz), 7,62 (s a, 1H). 6,65 (d, 1H, NH, J = 8,8 Hz), 5,81 (m, 1H), 5,40 (s a, 1H), 5,27 (d, 1H, J = 17,2 Hz), 5,09 (d, 1H, J = 10,9 Hz), 4,45 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,22 (m, 1H), 3,95 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 2,87 (m, 1H), 2,46 (m, 1H), 2,21 (m, 2H), 1,87 (m, 1H), 1,30 (s, 9H), 1,26-1,36 (m, 2H), 1,15-1,22 (m, 2H), 1,02 (s, 9H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,62 ; EM m/z 740 (M+H).

imagen1

10 BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-2-(éster etílico del ácido nicotínico))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano

(13%, procedimiento A, usando reactivo 72): RMN 1H(d4-MeOH, 500Mz) δ 8,48 (m, 1H), 8,38 (m, 1H), 7,18 (m, 1H), 5,83 (m, 1H), 5,44 (m, 1H), 5,27 (d, 1H, J = 17,1 Hz), 5,08 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,38 (c, 2H, J = 7,0 Hz), 4,30 (m, 1H), 4,23 (m, 1H), 3,98 (m, 1H), 2,85 (m, 1H). 2,47 (m, 1H), 2,15-2,28 (m, 2H), 2,01 (m, 1H), 1,85 (m, 1H), 1,44 (m,

15 2H), 1,39 (t, 3H, J = 7,0 Hz), 1,32 (s, 9H), 1,18 (m, 2H), 1,03 (s, 9H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,38 ; EM m/z 749 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(5-Metil-2-fenil-4H-pirazol-3-il))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano

20 (4,2%, procedimiento A, usando reactivo 73): RMN 1H (d4-MeOH, 300Mz) δ 7,48 (m, 5H), 6,67 (d, 1H, J = 10,3 Hz), 6,21 (s a, 1H), 5,76 (m, 1H), 5,31 (d, 1H, J = 17,2 Hz), 5,30 (m, 1H), 5,13 (dd, 1H, J = 10,3, 1,5 Hz), 4,19-4,31 (m, 2H), 4,05 (m, 1H), 3,89-3,94 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,18-2,28 (m, 2H), 1,86 (m, 1H), 1,42 (s, 9H), 1,371,44 (m, 2H), 1,23-1,29 (m, 2H), 1,04-1,10 (m, 2H), 1,00 (s, 9H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,40 ; EM m/z 756

5

10

15

20

25

30

(M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-benzofenona))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(37%, usando reactivo 74): RMN 1H (d4-MeOH, 300Mz) δ 8,13 (d, 1H, J = 8,05 Hz, 7,48-7,69 (m, 7H), 7,15 (t, 1H, J = 7,3 Hz), 6,66 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 5,80 (m, 1H), 5,34 (m, 1H), 5,26 (d, 1H, J = 17,2 Hz), 5,08 (d, 1H, J = 10,6 Hz), 4,40 (m, 1H), 4,21 (m, 2H), 3,94 (dd, 1H, J = 11,7, 3,3 Hz), 2,86 (s a, 1H), 2,37 (m, 1H), 2,19 (m, 2H), 1,86 (m, 1H), 1,371,44 (m, 2H), 1,30 (s, 9H), 1,18 (m, 2H), 1,01 (s, 9H), 0,94-1,02 (m, 1H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,76 ; EM m/z 780 (M+H).

Ejemplo 7: Preparación de BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO-Osuccinimidil))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano para su uso como un intermedio en la síntesis de los carbamatos de los péptidos P2 que se encuentran en el Ejemplo 8.

Se usó intermedio de carbonato de succinimidilo P2 para la preparación de los carbamatos que se encuentran en el Ejemplo 8

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Se disolvió BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp)-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2-Ciclopropano (400 mg, 0,710 mmol, 1,0 equiv.) en tetrahidrofurano (10 ml). Se añadió carbonato de N,N'-Disuccinimidilo al 90% (404 mg, 1,42 mmol, 2,0 equiv.) para formar una suspensión. A la suspensión bien agitada, se le añadió NaH al 60% (88 mg, 2,20 mmol, 3,1 equiv.) y la reacción se calentó a reflujo durante 4 horas. Después, la reacción se diluyó con acetato de etilo (125 ml), y se lavó con HCl 1 N (125 ml) y salmuera (125 ml). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y el disolvente se eliminó al vacío para producir el producto del título en forma de una espuma de color blanquecino que se recogió sin purificación. Rendimiento en bruto 100%. CL-EM C (tiempo de retención: 2,01 ; EM m/z 698 (M+H)+.

Ejemplo 8: Preparación de carbamatos de tripéptido P2 (BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO-NHR)-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2-Ciclopropano, Compuestos 75-86 usando los carbamatos de succinimidilo P2 descritos en el Ejemplo 7:

El producto del ejemplo 7, BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO-succinimidil))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano (pureza estimada del 90%, 145 mg, 0,188 mmol, 1,0 equiv.), se disolvió en diclorometano (2,0 ml) y después se añadió una amina, como por ejemplo 2-amino piridina (35,4 mg, 0,376 mmol, 2,0 equiv.). El tubo a presión se cerró herméticamente y se calentó a 50 ºC durante tres días. Debe indicarse que el reactivo de 2amino piridina descrito anteriormente se usó para preparar el compuesto 75 del Ejemplo 8. En la preparación de los compuestos 76-86 del ejemplo 8 se usó la amina necesaria en lugar de dicha 2-amino piridina. El material en bruto se purificó por uno de los dos procedimientos que se indican a continuación:

Procedimiento A: El material en bruto se cargó directamente en una placa de TLC preparativa (Analtech SiO2, 1000 µn) y se eluyó 1:2 de hexanos:EtOAc. El material/SiO2 absorbido se raspó de la placa y se agitó con metanol al 20% en acetato de etilo durante 1 hora. La sílice se retiró por filtración y el líquido se concentró al vacío para producir el producto. Procedimiento B: La mezcla de reacción en bruto se concentró al vacío y el residuo se disolvió en metanol (2,0 ml) y se pasó a través de un filtro de jeringa PTFE de 0,2 µm. Después, esta solución se inyectó directamente en la HPLC preparativa con los siguientes parámetros.

Columna: XTerra Prep MS C18 (19,0 x 100,0 mm) Gradiente: disolvente A al 50%/disolvente B al 50% a disolvente A al 0%/disolvente B al

100%

Tiempo de gradiente: 15 min

Tiempo de retención: 5 min

Caudal: 25 ml/min

Longitud de onda del 220

detector:

Disolventes: Disolvente A: metanol al 10%/agua al 90%/acetato amónico 10 nM. Disolvente B: metanol al 90% /agua al 10% /acetato amónico 10 nM.

Después de este proceso, las fracciones se concentraron para retirar el metanol y después se vertió en volúmenes iguales de agua y acetato de etilo. La fase orgánica se secó con sulfato sódico y se concentró al vacío para producir los productos purificados:

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10 BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(piridin-2-il))))-P1(1R,2S)VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano (purificado por el Procedimiento A, 8%):

RMN 1H (d4-MeOH, 300 MHz) δ 8,20 (d, 1H, J = 4,0 Hz), 7,88 (aprox. d, 1H), 7,74 (t, 1H, J = 6,9 Hz), 7,04 (t, 1H, J = 6,0 Hz), 6,64 (d, 1H, NH, J = 8,8 Hz), 5,78 (m, 1H), 5,43 (m, 1H), 5,27 (d, 1H, J = 17,2 Hz), 5,09 (d, 1H, J = 10,2 Hz), 4,42 (t, 1H), 4,25 (m, 2H), 3,99 (dd, 1H), 2,90 (m, 1H), 2,44 (m, 1H), 2,20 (m, 2H), 1,86 (m, 1H), 1,30-1,43 (m, 3H),

15 1,30 (s, 9H), 1,19 (m, 2H), 1,02 (s, 9H), 1,61-1,82 (m, 1H). CL-EM F (tiempo de retención: 2,66; EM m/z 677 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-2-(1-(éster etílico del ácido 4-acetil-fenil))-piperidin-4-carboxílico)))P1(1R, 2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano (purificado por el Procedimiento B, 32%):

RMN 1H (d4-MeOH, 500 MHz) δ 8,47 (s, 1H), 7,73 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 7,20 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 6,62 (d, 1H, NH, J = 9,2 Hz), 5,77 (m, 1H), 5,44 (m,1 H), 5,31 (d, 1H, J = 17,1 Hz), 5,13 (dd, 1H, J = 10,4, 1,5 Hz), 4,45 (m, 1H), 4,26 (m, 2H), 4,18 (c, 2H, J = 7,0 Hz), 4,01-4,14 (m, 2H), 3,12 (m, 2H), 2,94 (m, 1H), 2,80 (t, 1H, J = 11,4 Hz), 2,72 (t, 1H, J = 11,9 Hz), 2,56 (s, 3H), 2,43-2,53 (m, 2H), 2,18-2,28 (m, 2H), 2,01-2,04 (m, 3H), 1,79-1,91 (m, 3H), 1,44 (m, 2H), 1,32 (s, 9H), 1,21-1,29 (m, 2H), 1,07 (m, 1H), 1,03 (s, 9H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,71; EM m/z 873 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-2-(benzofenona oxima))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(isómero A, purificado por el Procedimiento B, 23%):

RMN 1H (d4-MeOH, 500 MHz) δ 7,43 (m, 3H), 7,33 (m, 3H), 7,21 (t, J = 8,9 Hz), 5,78 (m, 1H), 5,25-5,30 (m, 2H), 5,09

10 (dd, 1H, J = 10,5, 1,7 Hz), 4,56 (m, 1H), 4,32 (m, 1H), 4,24 (m, 1H), 4,12 (m, 1H), 3,94 (m, 1H), 2,89 (m, 1H), 2,29 (m, 1H), 2,16 (m, 2H), 1,95 (d, 1H, J = 12,8 Hz), 1,84 (m, 1H), 1,37 (s, 9H), 1,19 (m, 2H), 1,00 (s, 9H), 0,96-1,04 (m, 2H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,70; EM m/z 795 (M+H).

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-2-(benzofenona oxima))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano (isómero B, purificado por el procedimiento B, 19%):

15 RMN 1H (d4-MeOH, 500 MHz) δ 8,13 (s, 1H, OH), 7,43 (m, 3H), 7,29 (m, 3H), 6,94 (m, 2H), 6,67 (d, 1 H, NH, J = 9,2 Hz), 5,78 (m, 1H), 5,41 (m, 1H), 5,28 (d, 1H, J = 17,1 Hz), 5,10 (d, 1H, J = 11,6 Hz), 4,57 (m, 1H), 4,38 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,17 (aprox. d, 1H), 3,99-4,05 (m, 1H), 2,92 (m, 1H), 2,37 (dd, 1H, J = 14,0, 7,0 Hz), 2,20 (m, 2H), 1,95 (d, 1H, J = 16,8 Hz), 1,87 (m, 1H), 1,40-1,44 (m, 2H), 1,36 (s, 9H), 1,20-1,25 (m, 2H), 1,03 (s, 9H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,83; EM m/z 795 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-1-(4-Cloro-2-(5-metil-2H-pirazol-3-il)fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano (purificado por el Procedimiento B, 11%):

RMN 1H (d4-MeOH, 500 MHz) δ 8,23 (m, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,23 (dd, 1H, J = 8,5, 2,4 Hz), 6,62 (d, 1H, NH, J-7,6 Hz), 6,46 (s, 1H), 5,78 (m, 1H), 5,42 (m, 1H), 5,27 (d, 1H), 5,10 (d, 1H), 4,56 (m, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,24 (m, 2H), 4,04 (dd,

25 1H, J = 12,0, 3,2 Hz), 2,92 (m, 1H), 2,40 (m, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,15-2,27 (m, 2H), 1,86 (dd, 1H, J = 7,9,5,5 Hz), 1,42 (m, 2H), 1,26 (s, 9H), 1,21 (m, 2H), 1,02 (s, 9H). CL-EM G (tiempo de retención: 3,06; EM m/z 790 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-acetofenona))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(purificado por el Procedimiento B, 14%):

RMN 1H(d4-MeOH, 500 MHz) δ 8,40 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 7,9), 7,56 (t, 1H, J = 8,6), 7,17 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 6,62 (d, 1H, NH, J = 9,5 Hz), 5,78 (m, 1H), 5,39 (s, 1H), 5,28 (d, 1H, J = 17,1 Hz), 5,10 (d, 1H, J = 10,4, 1,8 Hz), 4,45 (m, 1H), 4,31 (d, 1H, J = 4,9 Hz), 4,24 (d, 1H, J = 4,3 Hz), 4,05 (m, 1H), 3,97 (m, 1H), 2,91 (m, 1H), 2,63 (s, 3H), 2,45 (dd, 1H, J = 13,7, 7,0 Hz), 2,17-2,28 (m, 2H), 1,87 (m, 1H), 1,38-1,45 (m, 2H), 1,28 (s, 9H), 1,17-1,25 (m, 2H), 1,02 (s, 9H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,62 ; EM m/z 718 (M+H).

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10 BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-1-(2-piperidino-5-acetilfenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano (purificado por el Procedimiento B, 18%):

RMN 1H (d4-MeOH, 500 MHz) δ 8,51 (s a, 1H), 7,70 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 7,18 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 5,85 (m, 1H), 5,42 (s, 1H), 5,23 (d, 1H, J = 17,1 Hz), 5,05 (d, 1H, J = 10,4 Hz), 4,48 (m, 1H), 4,45 (m, 2H), 4,01-4,12 (m, 2H), 2,80-2,92 (m, 4H), 2,55 (s, 3H), 2,50 (m, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,14 (m, 1H), 1,85 (m, 1H), 1,74 (m, 5H), 1,62 (m, 2H), 1,32 (s, 9H),

15 1,13 (m, 2H), 1,02 (s, 9H), 0,95 (m, 2H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,75; EM m/z 801 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-2-[(5-Metil-furan-2-il)-fenil]))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano (purificado por el Procedimiento B, 5%):

RMN 1H (d4-MeOH, 500 MHz) δ 7,63 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 7,24 (t, 1H, J = 7,6), 7,19 (t, 1H, J = 7,2 Hz), 8,58 (d, 1H, J = 3,0 Hz), 6,14 (d, 1H, J = 3,0 Hz), 5,83 (m, 1H), 5,37 (m, 1H), 5,25 (m, 1H), 5,07 (m, 1H), 4,41 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,19 (m, 1H), 3,98 (m, 1H), 2,87 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,15 (m, 1H), 1,84 (m, 1H), 1,37 (s, 9H), 1,29 (m, 2H), 1,16 (m, 2H), 1,03 (s, 9H), 0,90-0,97 (m, 3H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,81; EM m/z 756 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-2-(morfolin-4-il-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano (purificado por el Procedimiento B, 22%):

RMN 1H (d4-MeOH, 300 MHz) δ 7,89 (s a, 1H), 7,20 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 7,03-7,13 (m, 1H), 6,71 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 5,76 (m, 1H), 5,41 (m, 1H), 5,31 (d, 1H, J = 17,2 Hz), 5,13 (d, 1H, J = 10,3 Hz), 4,41 (m, 1H), 4,25 (m, 2H), 3,99 (m,

10 1H), 3,83 (m, 4H), 2,95 (m, 1H), 2,83 (m, 4H), 2,41 (m, 1H), 2,15-2,29 (m, 2H), 1,89 (m, 1H), 1,44 (m, 1H), 1,36 (s, 9H), 1,24 (m, 2H), 1,07 (m, 2H), 1,03 (m, 9H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,71 ; EM m/z 761 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(5-Metil-2-pirrol-1-il-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano (purificado por el Procedimiento B, 18%):

15 RMN 1H (d4-MeOH, 300 MHz) δ 7,59 (s a, 1H), 7,16 (d, 1H, J = 8,05 Hz), 7,06 (dd, 1H, J = , 8,05, 1,1 Hz), 6,80 (m, 2H), 6,67 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 6,26 (m, 2H), 5,77 (m, 1H), 5,28-5,34 (m, 2H), 5,12 (m, 1H), 4,23-4,32 (m, 2H), 4,10 (m, 1H), 3,92 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,23 (m, 2H), 2,10 (m, 1H), 1,87 (m, 1H), 1,40 (s, 9H), 1,21-1,31 (m, 3H), 1,04-1,10 (m, 2H), 1,01 (s, 9H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,84; EM m/z 755 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-Pirrolidin-1-il-5-trifluorometil-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano (purificado por el Procedimiento A, 23%):

RMN 1H (d4-MeOH, 500 MHz) δ 7,59 (s a, 1H), 7,30 (m, 1H), 6,93 (m, 1H), 5,86 (m, 1H). 5,39 (m, 1H), 5,23 (m, 1H), 5,04 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,11-4,29 (m, 2H), 4,01 (m, 1H), 2,66-2,87 (m, 1H), 2,29-2,58 (m, 2H), 2,12 (m, 1H), 1,95 (m, 5H), 1,83 (m, 1H), 1,38-1,44 (m, 2H), 1,39 (s, 9H), 1,12 (m, 2H), 1,02 (s, 9H), 0,86-1,07 (m, 4H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,86; EM m/z 813 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-pirrolidin-1-il-5-trifluorometil-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)10 CONHSO2Ciclopropano (purificado por el Procedimiento A, 25%):

RMN 1H (d4-MeOH, 500 MHz) δ 7,52 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 7,46 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 6,92 (s, 2H), 6,34 (s, 2H), 5,84 (m, 1H), 5,30 (m, 1H), 5,19 (m, 1H), 5,00 (m, 1H), 4,37 (m, 1H), 4,20 (m, 2H), 4,04-4,11 (m, 1H), 3,98 (m, 1H), 3,89 (m, 1H), 2,82 (m, 1H), 2,30-2,36 (m, 2H), 1,80 (m, 1H), 1,44 (m, 2H), 1,35 (s, 9H), 1,28 (m, 2H), 1,01 (s, 9H), 0,81-0,93 (m, 1H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,87; EM m/z 809 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(0-CO(NH-(2-pirrol-1-il-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(purificado por el Procedimiento A, 41%): RMN 1H (d4-MeOH, 300 MHz) δ 7,76 (s a, 1H), 7,21-7,37 (m, 4H), 6,84 (s, 2H), 6,56 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,28 (m, 2H), 5,86 (m, 1H), 5,25 (m, 1H), 5,18 (s a, 1H), 5,03 (d, 1H, J = 10,6 Hz), 4,35 (m, 1H), 4,22 (, 1H), 4,08 (m, 1H), 3,863,96 (m, 1H), 2,79 (m, 1H), 2,25-2,36 (m, 2H), 2,08 (m, 1H), 1,82 (m, 1H), 1,39 (s, 9H), 1,28-1,35 (m, 1H), 1,10 (m, 1H), 1,01 (s, 9H), 0,91 (m, 1H). CL-EM F (tiempo de retención: 3,36; EM m/z 741 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-(5,6-Dimetoxi-benzotriazol-2-il)-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano (Procedimiento A, 29%):

RMN 1H (MeOH) δ 8,30 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 8,07 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,42 (m, 1 H), 7,22 (m, 3 H), 6,58 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,40 (s, 1 H), 5,28 (dd, J = 1,5 Hz, 17,2 Hz, 1 H), 5,10 (dd, J = 1,8 Hz, 10,3 Hz, 1 H), 4,44

10 (dd,1=7,0 Hz, 9,9 Hz, 1 H), 4,25 (m, 2 H), 3,97 (m, 7 H), 2,92 (m, 1 H), 2,43 (m, 1 H), 2,20 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 5,5 Hz, 8,1 Hz, 1 H), 1,43 (m, 1 H), 1,19 (m, 11 H), 1,01 (m, 11 H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,71; EM m/z 853 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-(4H-[1,2,4]Triazol-3-il)-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)15 CONHSO2Ciclopropano (Procedimiento B, 31%): RMN 1H

(MeOH) δ 8,56 (s a, 1 H), 8,34 (s a, 1 H), 8,15 (s a, 1 H), 7,39 (s a, 1 H), 7,13 (s, 1 H), 6,65 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,43 (s, 1 H), 5,31 (dd, J = 1,2 Hz, 17,1 Hz, 1 H), 5,13 (dd, J = 1,5 Hz, 10,4 Hz, 1 H), 4,44 (dd, J = 7,3 Hz, 10,1 Hz, 1 H), 4,30 (d, J = 11,3 Hz, 1 H), 4,25 (m, 1 H), 3,99 (m, 1 H), 2,94 (m, 1 H), 2,43 (c, J = 6,4 Hz, 1 H), 2,22 (m, 2 H), 1,88 (dd, J = 5,5 Hz, 8,2 Hz, 1 H), 1,43 (m, 1 H), 1,24 (m, 11 H), 1,08 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM C

20 (tiempo de retención: 2,45; EM m/z 743 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-Pirazol-1-il-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano

(Procedimiento B, 53%):

RMN 1H (MeOH) δ 8,08 (s a, 1 H), 8,03 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 7,76 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 7,45 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,37 (t, J = 8,6 Hz, 1 H), 7,21 (t, J = 7,9 Hz, 1 H), 6,60 (d, J = 9,2Hz, 1 H), 6,54 (t, J = 2,1 Hz, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,35 (s, 1 H), 5,30 (dd, J = 1,5 Hz, 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,1 Hz, 1 H), 4,36 (m, 1 H), 4,24 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,19 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 3,95 (dd, J = 2,8 Hz, 11,6 Hz, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,36 (m, 1 H), 2,22 (c, J = 8,9 Hz, 1 H), 2,16 (m, 1 H), 1,87 (m, 1 H). 1,44 (m, 1 H), 1,34 (s, 9 H), 1,23 (m, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,44; EM m/z 742 (M+H).

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10

Compuesto 90

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-Piperidin-1-il-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2-Ciclopropano

(Procedimiento B, 49%):

RMN 1H (MeOH) δ 7,91 (s a, 1H), 7,16 (d,J = 7,6 Hz, 1 H), 7,07 (t,J = 7,6 Hz, 1 H), 7,01 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,61 (d,

15 J = 9,2 Hz, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,41 (s, 1 H), 5,30 (dd, J = 1,5 Hz, 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (dd, J = 1,5 Hz, 10,4 Hz, 1 H), 4,42 (m, 1 H), 4,25 (m, 2 H), 3,99 (dd, J = 3,4 Hz, 11,9 Hz, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,76 (m, 4 H), 2,44 (m, 1 H), 2,23 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 5,5 Hz, 8,2 Hz, 1 H), 1,72 (m, 4 H), 1,59 (m, 2 H), 1,43 (m, 1 H), 1,34 (s, 9 H), 1,24 (m, 2 H), 1,07 (m, 2 H), 1,03 (s, 9 H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,37; EM m/z 759 (M+H).

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Compuesto 91

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(5-carboxietil-2-piperidin-1-il-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano (Procedimiento B,43%):

RMN 1H(MeOH) δ 8,53 (s, 1 H), 7,71 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,18 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 6,58 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,43 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,12 (dd, J = 1,8 Hz, 10,4 Hz, 1 H), 4,43 (m, 1 H), 4,34 (dd, J = 7,0 Hz, 14,3 Hz, 2 H), 4,25 (m, 2 H), 4,00 (m, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,84 (m, 4 H), 2,45 (dd, J = 7,0 Hz, 13,7 Hz, 1 H), 2,23 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 5,5 Hz, 8,2 Hz, 1 H), 1,73 (m, 4 H), 1,62 (m, 2 H), 1,44 (m, 1 H), 1,37 (m, 3 H), 1,33 (s, 9 H), 1,24 (m, 2 H), 1,07 (m, 2 H), 1,03 (s, 9 H), CL-EM C (tiempo de retención: 2,81 ; EM m/z 831 (M+H).

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10 Compuesto 92

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(5-Trifluorometil-2-(4-trifluorometil-piperidin-1-il)-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano (Procedimiento B, 8%):

RMN 1H (MeOH) δ 8,28 (s, 1 H), 7,32 (s, 2 H), 6,57 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 5,79 (m, 1 H), 5,42 (s, 1 H), 5,27 (dd, J = 1,2 Hz, 17,4 Hz, 1 H), 5,07 (d, J = 10,1 Hz, 1 H), 4,45 (dd, J = 7,6 Hz, 9,8 Hz, 1 H), 4,30 (d, J = 12,2 Hz, 1 H), 4,25 (d, J

15 = 9,5 Hz, 1 H), 4,03 (m, 1 H), 3,13 (t, J = 15,0 Hz, 2 H), 2,90 (m, 1 H), 2,80 (m, 1 H), 2,70 (t, J = 11,3 Hz, 1 H), 2,47 (dd, J = 7,3 Hz, 14,0 Hz, 1 H), 2,31 (m, 2 H), 2,16 (dd, J = 8,9 Hz, 17,7 Hz, 1 H), 2,00 (s, 1 H), 1,98 (s, 1 H), 1,85 (dd, J = 5,2 Hz, 7,2 Hz, 1 H), 1,79 (m, 2 H), 1,39 (m, 1 H), 1,31 (s, 9 H), 1,18 (m, 2 H), 1,03 (s, 9 H), 1,00 (m, 2 H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,89 ; EM m/z 895 (M+H).

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20 Compuesto 93

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-[1,2,3]Triazol-2-il-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano (Procedimiento B, 42%):

RMN 1H (MeOH) δ 8,24 (s a, 1 H), 7,99 (s, 2 H), 7,94 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,40 (t, 3=7,6 Hz, 1 H), 7,23 (t, J = 7,6 MHz, 1 H), 6,61 (d, J = 8,9, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,39 (s, 1 H), 5,31 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,13 (d, J = 10,4 Hz, 1 H),

25 4,41 (m, 1 H), 4,25 (m, 2 H), 3,96 (dd, J = 2,8 Hz, 11,6 Hz, 1 H), 2,94 (m, 1 H), 2,39 (m, 1 H), 2,24 (c, J = 8,9 Hz, 1 H), 2,15 (m, 1 H), 1,87 (m, 1 H), 1,44 (m, 1 H), 1,29 (s, 9 H), 1,24 (m, 2 H), 1,07 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,52; EM m/z 765 (M+Na).

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Compuesto 94

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(5-Metil-2-tiazol-2-il-fenil))))-P1(1R,2S ViniliAcca)-CONHSO2Ciclopropano (Procedimiento B, 76%):

RMN 1H (MeOH) δ 8,22 (s, 1 H), 7,83 (s, 1 H), 7,70 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,55 (s, 1 H), 6,94 (d, J = 7,6 Hz 1 H), 6,58 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,40 (s, 1 H), 5,29 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,11 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,46 (m, 1 H), 4,32 (d, J = 11,3 Hz, 1 H), 4,25 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 4,00 (d, J = 10,7 Hz, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,44 (m, 1 H), 2,37 (s, 3 H), 2,23 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 5,5 Hz, 7,6 Hz, 1 H), 1,44 (m, 1 H), 1,23 (s, 11 H), 1,02 (s, 11 H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,75; EM m/z 773 (M+H).

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Compuesto 95

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(5-Metoxi-2-pirazol-1-il-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano (Procedimiento B, 22%):

RMN 1H (MeOH) δ 7,92 (s, 1 H), 7,72 (s, 2 H), 7,33 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 6,76 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 6,62 (d, J = 8,6 Hz,

15 1 H), 6,51 (s, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,35 (s, 1 H), 5,31 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,35 (m, 1 H), 4,23 (m, 2 H), 3,96 (m, 1 H), 3,84 (s, 3 H), 2,93 (m, 1 H), 2,36 (m, 1 H), 2,24 (m, 1 H), 2,15 (m, 1 H), 1,86 (m, 1 H), 1,44 (m, 1 H), 1,35 (s, 9 H), 1,24 (m, 2 H), 1,07 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,43; EM m/z 772 (M+H).

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Compuesto 96

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(5-Metil-2-pirazol-1-il-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CONHSO2Ciclopropano (Procedimiento B, 13%):

RMN 1H (MeOH) δ 7,97 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 7,91 (s a, 1 H), 7,74 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 7,31 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,03 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 6,60 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 6,51 (t, J = 2,1 Hz, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,33 (s, 1 H), 5,29 (dd, J = 1,5 Hz, 17,1 Hz, 1 H), 5,11 (dd, J = 1,5 Hz, 10,4 Hz, 1 H), 4,36 (dd, J = 7,6 Hz, 9,8 Hz, 1 H), 4,24 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 4,20 (d, J = 12,2 Hz, 1 H), 3,95 (dd, J = 3,1 Hz, 11,6 Hz, 1 H), 2,92 (m, 1 H), 2,38 (s, 3 H), 2,35 (m, 1 H), 2,20 (m, 2 H), 1,86 (dd, J = 5,5 Hz, 7,9 Hz, 1 H), 1,44 (m, 1 H), 1,34 (s, 9 H), 1,22 (m, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,49 ; EM m/z 756 (M+H).

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Compuesto 97

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(5-Metil-2-[1,2,3]triazol-2-il-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano (Procedimiento B, 50%):

RMN 1H (MeOH) δ 8,05 (s a, 1 H), 7,96 (s, 2 H), 7,80 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,05 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 6,60 (d, J = 9,5

15 Hz, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,37 (s, 1 H), 5,30 (dd, J = 1,5 Hz, 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (dd, J = 1,5 Hz, 10,1 Hz, 1 H), 4,40 (m, 1 H), 4,25 (m, 2 H), 3,96 (dd, J = 3,1 Hz, 11,9 Hz, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,40 (m, 4 H), 2,20 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 5,5 Hz, 8,2 Hz, 1 H), 1,43 (m, 1 H), 1,29 (s, 9 H), 1,24 (m, 2 H), 1,07 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,59; EM m/z 657 (M-Boc+H).

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20 Compuesto 98

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(5-Ciano-2-pirazol-1-il-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)CONHSO2Ciclopropano (Procedimiento B, 34%):

RMN 1H (MeOH) δ 8,63 (s, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,84 (s, 1 H), 7,70 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,54 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,62 (m, 2 H), 5,76 (m, 1 H), 5,39 (s, 1 H), 5,31 (d, 17,1 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,40 (m, 1 H), 4,31 (d, J =

25 11,6 Hz, 1 H), 4,23 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 3,96 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,41 (m, 1 H), 2,22 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 5,5 Hz, 7,9 Hz, 1 H), 1,43 (m, 1 H), 1,29 (s, 9 H), 1,23 (m, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,02 (s, 9 H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,39; EM m/z 789 (M+Na).

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Compuesto 99

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(5-Fluoro-2-pirazol-1-il-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CON

HSO2Ciclopropano (Procedimiento B, 12%):

5 RMN 1H (MeOH) δ 8,02 (s, 2 H), 7,76 (s, 1 H), 7,46 (m, 1 H), 6,94 (m, 1 H), 6,61 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,54 (s, 1 H), 5,76 (m, 1 H), 5,38 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 4,37 (m, 1 H), 4,24 (m, 2 H), 3,97 (m, 1 H), 2,92 (m, 1 H), 2,38 (m, 1 H), 2,20 (m, 2 H), 1,86 (m, 1 H), 1,44 (m, 1 H), 1,32 (s, 9 H), 1,23 (m, 2 H), 1,06 (m, 2 H), 1,01 (s, 9 H). CL-EM C (tiempo de retención: 2,50 ; EM m/z 760 (M+H).

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(5-trifluorometil-2-pirazol-1-il-fenil))))-P1(1R,2S VinilAcca)-CON10 HSO2Ciclopropano

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BMS-593177 (29%): RMN 1H (MeOH) δ 8,62 (s, 1 H), 8,21 (s, 1 H), 7,83 (s, 1 H), 7,69 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,48 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,60 (s, 1 H), 5,77 (m, 1 H), 5,38 (s, 1 H), 5,29 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,11 (d, J = 10,4, 1 H), 4,40 (m, 1 H), 4,31 (d, J = 12,2, 1 H), 4,23 (d, J = 9,2, 1 H), 3,97 (d, J = 10,4, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,41 (m, 1 H), 2,21 (m, 2 H),

15 1,87 (m, 1 H), 1,44 (s, 1 H), 1,39 (s, 9 H), 1,16 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 1,02 (m, 11 H); EM m/z 810 (M+H).

Preparación del compuesto 101

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Etapa 1:

Se disolvió el Intermedio 1 del esquema 1 (1,51 g, 2,71 mmol) en una mezcla de TFA (50 ml) y DCM (50 ml), y la solución resultante se agitó a ta durante 30 min. La mezcla se concentró al vacío y se colocó a alto vacío durante una noche. El producto deseado se obtuvo de forma cuantitativa y se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación: EM m/z 457 (M+H).

Etapa 2:

El producto de la etapa 1 (1,54 g, 2,71 mmol) se combinó con DIEA (1,75 g, 13,6 mmol), ácido ciclopropilacético (0,363 g, 3,52 mmol) y DCM (25 ml). La mezcla se trató con HATU (1,34 g, 3,52 mmol) y HOAT (0,479 g, 3,52 mmol) y la solución resultante se agitó a ta durante 8 h. La mezcla se diluyó con DCM (50 ml) y se lavó con agua (2 x 25 ml). Los lavados acuosos se extrajeron de nuevo con DCM (2 x 50 ml) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron al vacío para dar un aceite viscoso. La purificación por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (30:1 de DCM:MeOH) dio el producto deseado en forma de un sólido de color blanco: EM m/z 539 (M+H).

Etapa 3:

El producto de la Etapa 2 (50 mg, 0,093 mmol) se disolvió en THF (1 ml) y la solución se trató con NaH (dispersión en aceite al 60%, 12 mg, 0,28 mmol). La mezcla se agitó durante 5 min a ta, después se añadió DSC (80 mg, 0,28 mmol) y la mezcla resultante se calentó a 70 ºC durante 18h. La mezcla se diluyó con acetato de etilo y se lavó con bicarbonato sódico acuoso saturado. El lavado acuoso se extrajo cuatro veces más con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido ceroso de color blanco. Este material en bruto se disolvió de nuevo en THF (1 ml) y la mezcla se trató con 1,2,3,4-tetrahidroiso-quinolina (37 mg, 0,28 mmol) y PS-DIEA (73 mg, 0,28 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 72 h, después se trató con HCl 4 M en 1,4-dioxano (1 ml) y MeOH (2 ml) y se filtró para retirar los sólidos. El filtrado se concentró al vacío y se purificó por HPLC preparativa de fase inversa para dar el Compuesto 101 en forma de un sólido de color amarillo (24 mg, rendimiento del 37%): RMN 1H (CD3OD) δ 0,15 (s, 2 H), 0,47 (s, 2 H), 0,92-0,98 (m, 1 H), 1,05 (s, 9 H), 1,08-1,09 (m, 1 H), 1,22-1,26 (m, 2 H), 1,43 (dd, J = 9,46, 5,49 Hz, 1 H), 1,87 (dd, J = 8,24, 5,49 Hz, 1 H), 2,05-2,26 (m, 5 H), 2,39 (dd, J = 13,28, 7,17 Hz, 1 H), 2,83 (s, 2 H), 2,912,95 (m, 1 H), 3,62-3,66 (m, 2 H), 3,95 (dd, J-11,90, 3,66 Hz, 1 H),4,21 (d, J = 11,60 Hz, 1 H), 4,38-4,42 (m, 1 H), 4,55-4,61 (m, 3 H), 5,13 (dd, J = 10,38, 1,22 Hz, 1 H), 5,30 (dd, J = 16,79, 0,92 Hz, 1 H), 5,36 (s, 1 H), 5,76 (ddd, J = 17,32, 9,99, 9,31 Hz, 1 H), 7,15 (s, 4 H); EM m/z 698 (M+H).

Ejemplo 9: Preparación de BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp)-P1((1R,2S)/(1S,2R) VinilAcca)-CO2H, un intermedio para la preparación de los carbamatos de tripéptido P2, ácidos carboxílicos P1 del Ejemplo 10:

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Etapa 9a y 9b: Preparación de BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp)-P1((1R,2S)/(1S,2R)VinilAcca)-CO2Et mostrada a continuación:

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10 Se disolvió BocNH-P2(Hyp)-P1((1R,2S)/(1S/2R) VinilAcca)-OEt (5,218 g) en HCl 4 N dioxano. La solución resultante se agitó durante 90 minutos y después se concentró al vacío para producir una espuma de color amarillo que se recogió para la siguiente etapa sin purificación adicional. Después, la sal HCl de P2(Hyp)-P1((1R/2S)/(1S,2R) VinilAcca)-CO2Et y N-Boc-L-terc-leucina (3,60 g, 15,6 mmol) y 1,5 ml diisopropiletilamina se disolvieron en acetonitrilo anhidro (500 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se enfrió a 0 ºC en un baño de

15 hielo/agua. Se añadió más diisopropiletilamina (7,13 ml, 41 mmol) a la solución seguido de HATU (7,0 g, 18,4 mmol). La reacción se agitó durante 31 horas y después se concentró al vacío. El residuo se diluyó con acetato de etilo (500 ml) y se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico 1 N (500 ml), bicarbonato sódico 1 N (500 ml) y salmuera (500 ml). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico se filtró a través de sílice. La solución se concentró y después se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con 2:1 de acetato de etilo:hexanos, produciendo

20 3,22 g (32%) del producto del título en forma de un sólido de color blanco: RMN 1H (d4-MeOH, 500 MHz) δ 5,73 (m, 1 H), 5,28 (m, 1H), 5,08 (aprox. t, J = 10 Hz, 1H), 4,47 (m, 2H), 4,26 (m, 1H), 4,07-4,17 (m, 2H), 3,80 (m, 2H), 2,33 (m, 1H), 2,16-2,23 (m, 2H), 2,09 (m, 1H), 1,67-1,79 (m, 1H), 1,43 (s, 9H), 1,22 (t, J = 6,85 Hz, 3H), 1,02 y 1,00 (diastereotópico, 2s, 9H). CL-EM D (tiempo de retención: 1,65; EM m/z 482 (M+H).

Etapa 9c: Preparación de BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp)-P1((1R,2S)/(1S,2R) VinilAcca)-CO2H mostrada a 25 continuación:

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Se disolvió BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp)-P1((1R,2S)/(1S,2R) VinilAcca)-CO2Et (2,705 g, 5,62 mmol) en metanol (18 ml) y tetrahidrofurano (50 ml). La solución se enfrió a 2 ºC en un baño de hielo/agua. Después, se añadió NaOH 1 N (16,9 ml) a la solución fría. Después de agitar durante tres horas, la solución se concentró a ~20 ml y se añadieron 30 bicarbonato sódico 0,5 N (60 ml) y acetato de etilo (60 ml). Las fases se separaron y después la fase acuosa básica

se acidificó a pH 1 con ácido clorhídrico 1 N. Después, la fase acuosa acidificada se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 ml) y estos productos orgánicos se secaron con sulfato sódico y se concentraron al vacío, produciendo 2,11 g (83%) del compuesto del título en forma de un polvo de color blanco que se recogió para la siguiente etapa sin purificación adicional.

5 Ejemplo 10: Procedimiento general para la preparación de tripéptido P2-ácidos de carbamato P1 (Compuestos 102-109), como se muestra a continuación de forma general, a partir del intermedio preparado en el Ejemplo 9:

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Procedimiento representativo para fabricar tripéptido P2-ácidos de carbamato P1 (BocNH-P3(t-BuGly)10 P2(Hyp(O-CO-NR1R2)-Pl((1R,2S)/(1S,2R) VinilAcca)-CO2H) usando isocianatos:

Se disolvió BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp)-P1((1R,2S)/(1S,2R) VinilAcca)-CO2H (150 mg, 0,33 mmol) en tetrahidrofurano (1,6 ml). La solución resultante se enfrió en un baño de CH3CN/CO2 a -39 ºC. Se añadió NaH al 60% (40 mg, 0,99 mmol) a la reacción seguido de adición lenta del isocianato deseado (0,38 mmol) durante 30 minutos. Después, los lados del matraz se lavaron con tetrahidrofurano (500DL) y la reacción se dejó calentar en el

15 baño de refrigeración durante una noche. Después de agitar durante 22 horas, la reacción se interrumpió con bicarbonato sódico 0,5 N (10 ml). Se añadieron acetato de etilo (20 ml) y bicarbonato sódico 0,5 N (20 ml) y las fases se separaron. La fase acuosa se acidificó con ácido clorhídrico 1 N hasta pH 1 y después se extrajo con acetato de etilo (2 x 30 ml). Estas fases de acetato de etilo se secaron con sulfato sódico, se filtraron y se concentraron al vacío para producir los siguientes ácidos de carbamato de tripéptido P2:

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2,6-difluoro-fenil))))-P1((1R,2S)/(1S,2R) VinilAcca)-CO2H:

(57%): RMN 1H (d4-MeOH, 500 MHz) δ 7,27 (m, 1H), 7,00 (m, 2H), 6,00 (m, 1H), 5,37 (d, J = 13,4 Hz), 1H), 5,21 (dd, J = 17,4 y 17,1 Hz, 1H), 4,99 (dd, J = 10,7 y 10,1 Hz, 1H), 4,50-4,57 (m, 1H), 4,32 (m, 1H), 4,09 (m, 1H), 3,94 (m, 1H), 2,43 (m, 1H), 2,18-2,29 (m, 1H), 1,96-2,11 (m, 1H), 1,56-1,69 (m, 1H), 1,44 y 1,43 (diastereotópico, 2s, 9H),

25 1,28 (m, 1H), 0,99 y 0,98 (diastereotópico, 2s, 9H). CL-EM D (tiempo de retención: 1,63; EM m/z 609 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-metil-bencil))))-P1((1R,2S)/(1S,2R) ViniliAcca)-CO2H:

(48%): RMN 1H (d4-MeOH, 500 MHz) δ 7,20 (m, 1H), 7,12 (m, 3H), 5,97 (m, 1H), 5,28 (m, 1H), 5,21 (dd, J = 17,7 y 17,1 Hz, 1H), 4,97 (dd, J = 11,3 y 11,0 Hz, 1H), 4,47 (m, 1H), 4,21-4,31 (m, 3H), 4,01 (m, 1H), 3,89 (m, 1H), 2,252,40 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,07-2,16 (m, 1H), 1,97 (m, 1H), 1,51-1,69 (m, 1H), 1,43 y 1,42 (diastereotópico, 2s, 9H), 1,28 (m, 1H), 0,99 y 0,98 (diastereotópico, 2s, 9H). CL-EM D (tiempo de retención: 1,77; EM m/z 601 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-2-[éster metílico del ácido (2S,3S)-3-metilvalérico])))-P1((1R,2S)/(1S,2R) VinilAcca)-CO2H:

10 (59%): CL-EM D (tiempo de retención: 1,76; EM m/z 625 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-1-(R)-1-naftil etil)))-P1((1R,2S)/(1S,2R) VinilAcca)-CO2H:

(9%): CL-EM D (tiempo de retención: 1,87; EM m/z 651 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-fenil)))-P1((1R,2S)/(1S,2R) VinilAcca)-CO2H:

(42%): CL-EM D (tiempo de retención: 1,72 ; EM m/z 573 (M+H).

imagen1

BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(5-metil-2-fluoro-fenil)))-P1((1R,2S)/(1S,2R) VinilAcca)-CO2H:

(25%): CL-EM D (tiempo de retención: 1,78; EM m/z 605 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(2-tiofen-2-il-etil))))-P1((1R,2S)/(1S,2R) VinilAcca)-CO2H:

(50%): CL-EM D (tiempo de retención: 1,73; EM m/z 607 (M+H).

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BocNH-P3(t-BuGly)-P2(Hyp(O-CO(NH-(3-trifluorometil-fenil))))-P1((1R,2S)/(1S,2R) VinilAcca)-CO2H:

(18%): CL-EM D (tiempo de retención: 1,87 ; EM m/z 641 (M+H).

Ejemplo 11

Los compuestos 110 y 111 se prepararon a partir del Compuesto 19 usando la química descrita en el presente ejemplo.

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El Compuesto 19 (88 mg, 0,12 mmol) se disolvió en HCl 4 N en dioxano (0,29 ml, 1,20 mmol). Después de agitar a 25 ºC durante 1 hora, se añadió éter dietílico (10 ml) y el disolvente se eliminó al vacío, produciendo la sal de HCl 10 desbloqueada, que se llevó a la siguiente etapa sin purificación adicional.

La sal de HCl del análogo desbloqueado del Compuesto 19 (0,12 mmol) se disolvió en cloruro de metileno (6 ml). Se añadió 4,8-diazabiciclo[5.4.0]non-5-eno (356 mg, 0,24 mmol) a la solución, seguido inmediatamente de cloroformiato de metilo (11 mg, .12 mmol). La mezcla de color amarillo se agitó a 25 ºC durante 18 horas. La reacción se diluyó con acetato de etilo (50 ml) y HCl 1 N (50 ml). La porción orgánica se separó y se lavó con HCl 1 N (1 x 50 ml) y

15 salmuera (1 x 50 ml). La porción orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró al vacío. El producto se purificó por TLC Prep., eluyendo con 1:1 de acetato de etilo:hexanos, para dar el compuesto 110 (67%).

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El Compuesto 111 se preparó a partir del Compuesto 19 usando el procedimiento que se ha mostrado anteriormente para la preparación del Compuesto 110 excepto que se usó cloroformiato de etilo en lugar de cloroformiato de 20 metilo.

Ejemplo12 Sección 1 del Ejemplo 12:

Preparación de Elementos de P1: Los siguientes elementos de P1 y P1 adicionales se prepararon como se describe a continuación.

1. Resolución de éster etílico del ácido N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico

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Resolución A

A una solución acuosa de tampón de fosfato sódico (0,1 M, 4,25 litros ("l"), pH 8) alojada en un reactor con camisa de 12 litros, mantenido a 39 ºC y agitado a 300 rpm, se le añadieron 511 gramos de Acalase 2,4 l (aproximadamente 425 ml) (Novozymes North America Inc.). Cuando la temperatura de la mezcla alcanzó 39 ºC, el pH se ajustó a 8,0 10 mediante la adición de NaOH al 50% en agua. Después, se añadió una solución del éster etílico del ácido N-Boc(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico racémico (85 g) en 850 ml de DMSO durante un periodo de 40 min. Después, la temperatura de reacción se mantuvo a 40 ºC durante 24,5 h, tiempo durante el cual el pH de la mezcla se ajustó a 8,0 en los puntos de tiempo a las 1,5 h y 19,5 h, usando NaOH al 50% en agua. Después de 24,5 h, se determinó que el exceso enantiomérico del éster era del 97,2%, la reacción se enfrió a temperatura ambiente 15 (26 ºC) y se agitó durante una noche (16 h), tiempo después del cual se determinó que el exceso enantiomérico del éster era del 100%. Después, el pH de la mezcla de reacción se ajustó a 8,5 con NaOH al 50% y la mezcla resultante se extrajo con MTBE (2 x 2 l). Después, el extracto MTBE combinado se lavó con NaHCO3 al 5% (3 x 100 ml), agua (3 x 100 ml) y se evaporó al vacío para el éster etílico del ácido N-Boc-(1R,2S)/-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico enantiomericamente puro en forma de un sólido de color amarillo (42,55 g; pureza: 97% @

20 210 nm, no contenía ácido; 100% de exceso enantiomérico ("ee").

Después, la fase acuosa del procedimiento de extracción se acidificó a pH 2 con H2SO4 al 50% y se extrajo con MTBE (2 x 2 l). El extracto MTBE se lavó con agua (3 x 100 ml) y se evaporó, dando el ácido en forma de un sólido de color amarillo (42,74 g; pureza: 99% @ 210 nm, no contenía éster).

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Éster: Ácido

Espec. de Masas de Alta Resolución: (+) ESI, C13H22NO4 [M+H]+, calc. 256,1549, encontrado 256,1542 (-) ESI, C11H16NO4, [M-H], calc. 226,1079, encontrado 226,1089

RMN: Desplazamiento químico observado Disolvente: CDCl3 (protón δ 7, 24 ppm, C-13 δ 77,0 ppm) Bruker DRX-500C: protón 500,0,32 MHz, carbono 125,746 MHz

(continuación)

Posición: Protón (patrón) ppm C-13 ppm Protón (patrón) ppm C-13 ppm

1: --- 40,9 --- 40,7

2: 2,10 (c, J = 9,0 Hz) 34,1 2,17 (c, J = 9,0 Hz) 35,0

3a: 1,76 (a) 23,2 1,79 (a) 23,4

3b: 1,46 (a) 1,51, (a)

4: --- 170,8 --- 175,8

5: 5,74 (ddd, J = 9,0, 10,0, 17,0 Hz) 133,7 5,75 (m) 133,4

6a: 5,25 (d, J = 17,0 Hz) 117,6 5,28 (d, J = 17,0 Hz) 118,1

6b: 5,08 (dd, J = 10,0, 1,5 Hz) 5,12 (d, J = 10,5 Hz)

7: --- 155,8 --- 156,2

8: --- 80,0 --- 80,6

9: 1,43 (s) 28,3 1,43 (s) 28,3

10: 4,16 (m) 61,3 --- ---

11: 1,23 (t, J = 7,5 Hz) 14,2 --- ---

Resolución B

A 0,5 ml de un tampón Heps·Na 100 mM (pH 8,5) en una placa de 24 pocillos (capacidad: 10 ml/pocillo), se le añadieron 0,1 ml de Savinasa16.0 L (proteasa de Bacillus clausii) (Novozymes North America Inc.) y una solución 5 del éster etílico del ácido N-Boc-(1R 2S)/(1S,2R)-1-amino-2-vinilciclopropano carboxílico racémico (10 mg) en 0,1 ml de DMSO. La placa se cerró herméticamente y se incubó a 250 rpm a 40 ºC. Después de 18h, se determinó que exceso enantiomérico del éster era 44,3% como se indica a continuación: se retiraron 0,1 ml de la mezcla de reacción y se mezclaron bien con 1 ml de etanol; después de la centrifugación, se analizaron 10 microlitros (“µl") del sobrenadante con la HPLC quiral. A la mezcla de reacción restante, se le añadieron 0,1 ml de DMSO y la placa se

10 incubó durante 3 días más a 250 rpm a 40 ºC, después de lo cual se añadieron cuatro ml de etanol a la placa. Después de la centrifugación, se analizaron 10 µl del sobrenadante con la HPLC quiral y se determinó que el exceso enantiomérico del éster era del 100%.

Resolución C

A 0,5 ml de tampón Heps·Na 100 mM (pH 8,5) en una placa de 24 pocillos (capacidad: 10 ml/pocillo), se le

15 añadieron 0,1 ml de Esperasa 8,0 L, (proteasa de Bacillus halodurans) (Novozymes North America Inc.) y una solución de del éster etílico del ácido N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-vinilciclopropano carboxílico racémico (10 mg) en 0,1 ml de DMSO. La placa se cerró herméticamente y se incubó a 250 rpm a 40 ºC. Después de 18 horas, se determinó que el exceso enantiomérico del éster era 39,6% como se indica a continuación: se retiraron 0,1 ml de la mezcla de reacción y se mezclaron bien con 1 ml de etanol; Después de la centrifugación, se analizaron 10 µl del

20 sobrenadante con la HPLC quiral. A la mezcla de reacción restante, se le añadieron 0,1 ml de DMSO y la placa se incubó durante 3 días más a 250 rpm a 40 ºC, después de lo cual se añadieron cuatro ml de etanol a la placa. Después de la centrifugación, se analizaron 10 µl del sobrenadante con la HPLC quiral y se determinó que el exceso enantiomérico del éster era 100%.

Los análisis de las muestras se realizaron de la siguiente manera:

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1) Preparación de la muestra: Aproximadamente 0,5 ml de la mezcla de reacción se mezclaron bien con 10 volúmenes de EtOH. Después de la centrifugación, se inyectaron 10 µL del sobrenadante en la columna de HPLC.

2) Determinación de conversión:

Columna: YMC ODS A, 4,6 x 50 mm, S-5 µm Disolvente: A, HCl 1 mM en agua; B, MeCN Gradiente: B al 30% durante 1 min; B del 30% al 45% durante 0,5 min; B al 45% durante 1,5 min; B del 45% al 30% durante 0,5 min. Caudal: 2 ml/min Detección UV: 210 nm Tiempo de retención: ácido, 1,2 min; éster, 2,8 min.

3) Determinación del exceso enantiomérico para el éster:

Columna: CHIRACEL OD-RH, 4,6 x 150 mm, S-5 µm Fase móvil: MeCN/HClO4 50 mM en agua (67/33) Caudal: 0,75 ml/min. Detección UV: 210 nm. Tiempo de retención:

isómero (1S,2R) como ácido: 5,2 min; Racemato: 18,5 min y 20,0 min; isómero (1R, 2S) como éster: 18,5 min.

2. Preparación de éster etílico del ácido N-Boc-(1R,2S)-1-amino-2-ciclopropilciclopropanocarboxílico

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Una solución de ácido N-Boc-(1R,2S)-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico (255 mg, 1,0 mmol) en éter (10 ml) se trató con acetato de paladio (5 mg, 0,022 mmol). La solución de color naranja/rojo se puso en una atmósfera de N2. Se añadió gota a gota un exceso de diazometano en éter durante el transcurso de 1 h. La solución resultante se agitó a ta durante 18 h. El exceso de diazometano se retiró usando a corriente de nitrógeno. La solución resultante se concentró por evaporación rotatoria para dar el producto en bruto. La cromatografía ultrarrápida (EtOAc al 10%/hexano) proporcionó 210 mg (78%) de éster etílico del ácido N-Boc-(1R,2S)-1-amino-2-ciclopropilciclopropano carboxílico en forma de un aceite incoloro. CL-EM (tiempo de retención: 2,13, similar al procedimiento A excepto: tiempo de gradiente 3 min, columna Xterra MS C18 S7, 3,0 x 50 mm), EM m/e270 (M++1).

3.: ácido 1-terc-butoxicarbonilamino-ciclopropano-carboxílico está disponible en el mercado

4.: Preparación de clorhidrato del éster metílico del ácido 1-aminociclobutanocarboxílico

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Se disolvió ácido 1-aminociclobutanocarboxílico (100 mg, 0,869 mmol)(Tocris) en 10 ml de MeOH, se burbujeó dentro HCl gas durante 2 h. La mezcla de reacción se agitó durante 18 h y después se concentró al vacío para dar 144 mg de un aceite de color amarillo. La trituración con 10 ml de éter proporcionó 100 mg del producto del título en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (CDCl3) δ 2,10-2,25 (m, 1H), 2,28-2,42 (m, 1H), 2,64-2,82 (m, 4H), 3,87 (s, 3H), 9,21 (s a, 3H).

5. Preparación de éster terc-butílico del ácido (1R,2R)/(1S,2S) 1-Amino-2etilciclopropanocarboxílicoracémico, mostrado a continuación.

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Etapa 1: Preparación de éster di-terc-butílico del ácido 2-etilciclopropano-1,1-dicarboxílico, mostrado a continuación.

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A una suspensión de cloruro de benciltrietilamonio (21,0 g, 92,2 mmol) en una solución acuosa al 50% de NaOH (92,4 g en 185 ml de H2O) se le añadió 1,2-dibromobutano (30,0 g, 138,9 mmol) y malonato de di-terc-butilo (20,0 g,

10 92,5 mmol). La mezcla de reacción se agitó vigorosamente durante 18 h a ta y después se añadió una mezcla de hielo y agua. El producto en bruto se extrajo con CH2Cl2 (3 x) y se lavó secuencialmente con agua (3 x) y salmuera, y los extractos orgánicos se combinaron. La fase orgánica se secó (MgSO4), se filtró y se concentró al vacío. El residuo resultante se sometió a cromatografía ultrarrápida (100 g de SiO2, Et2O al 3% en hexano), proporcionando el producto del título (18,3 g, 67,8 mmol, rendimiento del 73%) que se usó directamente en la siguiente reacción.

15 Etapa 2: Preparación de éster terc-butílico del ácido 2-etilciclopropano-1,1-dicarboxílico racémico, mostrada a continuación.

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El producto de la Etapa 1 (18,3 g, 67,8 mmol) se añadió a una suspensión de terc-butóxido potásico (33,55 g, 299,0 mmol) en éter seco (500 ml) a 0 ºC, seguido de H2O (1,35 ml, 75,0 mmol) y se agitó vigorosamente durante una

20 noche a ta. La mezcla de reacción se vertió en una mezcla de hielo y agua, y se lavó con éter (3 x). La fase acuosa se acidificó con una solución ac. al 10% de ácido cítrico a 0 ºC y se extrajo con EtOAc (3 x). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (2 x) y salmuera, se secaron (MgSO4) y se concentraron al vacío, proporcionando el producto del título en forma de un aceite de color amarillo pálido (10 g, 46,8 mmol, rendimiento del 69%).

Etapa 3: Preparación de éster terc-butílico del ácido (1R,2R)/(1S,2S)2-etil-1-(225 trimetilsilaniletoxicarbonilamino)ciclopropano-carboxilílico, mostrada a continuación.

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A una suspensión del producto de la Etapa 2 (10 g, 46,8 mmol) y 3 g de tamices moleculares 4 A recién activados en benceno seco (160 ml), se le añadió Et3N (7,50 ml, 53,8 mmol) y DPPA (11 ml, 10,21 mmol). La mezcla de reacción 5

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se calentó a reflujo durante 3,5 h, después, se añadió 2-trimetilsilil-etanol (13,5 ml, 94,2 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante una noche. La mezcla de reacción se filtró, se diluyó con Et2O, se lavó con a una solución acuosa al 10% de ácido cítrico, agua, NaHCO3 acuoso saturado, agua (2 x) y salmuera (2 x), se secó (MgSO4) y se concentró al vacío. El residuo se suspendió con 10 g de resina de limpieza de poliisocianato de Aldrich en 120 ml de CH2Cl2, se agitó a ta durante una noche y se filtró, proporcionando el producto del título (8 g, 24,3 mmol; 52%) en forma de un aceite de color amarillo pálido: RMN 1H (CDCl3) δ 0,03 (s, 9H), 0,97 (m, 5H), 1,20 (m a, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,40-1,70 (m, 4H), 4,16 (m, 2H), 5,30 (s a, 1H).

Etapa 4: Preparación de éster terc-butílico del ácido (1R,2R/(1S,2S) 1-Amino-2-etilciclopropanocarboxílico racémico, mostrada a continuación.

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Al producto de la Etapa 3 (3 g, 9 mmol) se le añadió una solución 1,0 M de TBAF en THF (9,3 ml, 9,3 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo durante 1,5 h, se enfrió a ta y después se diluyó con 500 ml de EtOAc. La solución se lacó sucesivamente con agua (2 x 100 ml) y salmuera (2 x 100 ml), se secó (MgSO4) y se concentró al vacío para proporcionar el intermedio del título.

6. Preparación de sal clorhidrato del éster metílico del ácido 1-amino-espiro[2.3]hexano-1-carboxílico

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Etapa 1 Preparación de éster dimetílico del ácido [2.3]hexano-1,1-dicarboxílico, mostrada a continuación.

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A una mezcla de metileno-ciclobutano (1,5 g, 22 mmol) y Rh2(OAc)4 (125 mg, 0,27 mmol) en CH2Cl2 anhidro (15 ml) se le añadieron 3,2 g (20 mmol) de diazomalonato de dimetilo (preparado de acuerdo con J. Lee y col. Synth. Comm., 1995, 25, 1511-1515) a 0 ºC durante un periodo de 6 h. Después, la mezcla de reacción se calentó a ta y se agitó durante 2 h más. La mezcla se concentró y se purificó por cromatografía ultrarrápida (eluyendo con 10:1 de hexano/Et2O a 5 1 de hexano/Et2O) para dar 3,2 g (72%) de éster dimetílico del ácido [2.3]hexano-1,1-dicarboxílico en forma de un aceite de color amarillo. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,78 (s, 6 H), 2,36 (m, 2 H), 2,09 (m, 3 H), 1,90 (m, 1H), 1,67 (s, 2 H). CL-EM: EM m/z 199 (M++1).

Etapa 2: Preparación de éster metílico del ácido espiro[2.3]hexano-1,1-dicarboxílico, mostrada a continuación.

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A la mezcla de éster dimetílico del ácido espiro[2.3]hexano-1,1-dicarboxílico (200 mg, 1,0 mmol) en 2 ml de MeOH y 0,5 ml de agua, se le añadió KOH (78 mg, 1,4 mmol). Esta solución se agitó a ta durante 2 días. Después, se acidificó con HCl diluido y se extrajo dos veces con éter. Las fases orgánicas combinadas se secaron (MgSO4) y se concentraron para producir 135 mg (73%) de 2 en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,78 (s, 3 H), 2,36-1,90 (m, 8 H). CL-EM: EM m/z 185 (M++1)

Etapa 3: Preparación del producto del título, sal clorhidrato del éster metílico del ácido 1-amino-espiro[2.3]hexano-1carboxílico.

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A una mezcla de éster metílico del ácido espiro[2.3]hexano-1,1-dicarboxílico (660 mg, 3,58 mmol) en 3 ml de t-BuOH anhidro, se le añadieron 1,08 g (3,92 mmol) de DPPA y 440 mg (4,35 mmol) de Et3N. La mezcla se calentó a reflujo durante 21 h y después se repartió entre H2O y éter. La fase de éter se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró al vacío para producir un aceite. A este aceite se le añadieron 3 ml de una solución de HCl 4 M/dioxano. Esta solución ácida se agitó a ta durante 2 h y después se concentró al vacío. El residuo se trituró con éter para dar 400 mg (58%) del producto deseado en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (300 MHz, d6-DMSO) δ 8,96 (s a, 3 H), 3,71 (s, 3 H), 2,41 (m, 1 H), 2,12 (m, 4 H), 1,93 (m, 1 H), 1,56 (c, 2 H, J = 8 Hz). CL-EM de amina libre: EM m/z 156 (M++1).

7. Preparación de sal clorhidrato del éster metílico del ácido 1-amino-espiro[2.4]heptano-1-carboxílico, mostrada a continuación, se preparó como se indica a continuación.

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Etapa 1: Éster dimetílico del ácido espiro[2.4]heptano-1,1-dicarboxílico, mostrado a continuación, se preparó de la siguiente manera.

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Usando el mismo procedimiento que se ha descrito en la preparación de sal clorhidrato del éster metílico del ácido 1amino-espiro[2.3]hexano-1-carboxílico

Se hicieron reaccionar 1,14 g (13,9 mmol) de metilenociclopentano y 2,0 g (12,6 mmol) de diazomalonato de dimetilo para producir 1,8 g (67%) del éster dimetílico. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,73 (s, 6 H), 1,80 (m, 2 H), 1,70 (m, 4 H), 1,60 (m, 4 H). CL-EM: EM m/z 213 (M++1).

Etapa 2: Preparación de éster metílico del ácido espiro[2.4]heptano-1,1-dicarboxílico, mostrado a continuación, se de la siguiente manera.

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Usando el mismo procedimiento que se ha descrito en la preparación de sal clorhidrato del éster metílico de 1amino-espiro[2.3]hexano-1-carboxílico

1,7 g (8,0 mmol) del producto de la Etapa 1 y 493 mg (8,8 mmol) de KOH dieron 1,5 g (94%) de éster metílico del ácido espiro[2.4]heptano-1,1-dicarboxílico. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,80 (s, 3 H), 2,06 (d, 1 H, J = 5 Hz), 1,99 (d, 1 H, J = 5 Hz), 1,80-1,66 (m, 8 H). CL-EM: EM m/z 199 (M++1).

Etapa 3: Preparación de sal clorhidrato del éster metílico del ácido 1-amino-espiro[2.4]heptano-1-carboxílico, mostrado a continuación, se preparó de la siguiente manera.

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Usando el mismo procedimiento que se ha descrito anteriormente en la preparación de sal clorhidrato del éster metílico del ácido 1-amino-espiro[2.3]hexano-1-carboxílico, 500 mg (2,5 mmol) del producto de la Etapa 2, 705 mg (2,5 mmol) de DPPA y 255 mg (2,5 mmol) de Et3N dieron 180 mg (35%) de esta sal clorhidrato. RMN 1H (300 MHz, d6-DMSO) δ 8,90 (s a, 3 H), 3,74 (s, 3 H), 1,84 (m, 1 H), 1,69 (m, 4 H), 1,58 (m, 4 H), 1,46 (d, 1 H, J = 6 Hz). CL-EM de amina libre: EM m/z 170 (M++1).

8. Preparación de sal clorhidrato del éster metílico del ácido 1-amino-espiro[2.2]pentano-1-carboxílico, mostrado a continuación, se preparó de la siguiente manera.

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Etapa 1: Éster dimetílico del ácido espiro[2.2]pentano-1,1-dicarboxílico, mostrado a continuación, se preparó de la siguiente manera.

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A una mezcla de metilenociclopropano (1,0 g, 18,5 mmol) (preparada de acuerdo con la Patente de Estados Unidos Nº de serie. 5.723.714 de P. Binger) y Rh2(OAc)4 (82 mg, 0,185 mmol) en CH2Cl2 anhidro (10 ml), se añadió

10 diazomalonato de dimetilo (2,9 g, 18,3 mmol) a 0 ºC. En la parte superior del matraz se instaló un dedo frío, la temperatura del mismo se mantuvo a -10 ºC. La mezcla de reacción se calentó a ta y se agitó durante 2 h. La mezcla se concentró al vacío y se purificó por cromatografía ultrarrápida (eluyendo con 10:1 de hexano/Et2O a 5:1 de hexano/Et2O) para dar 0,85 g (25%) del éster dimetílico en forma de un aceite de color amarillo. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,73(s,6 H), 1,92 (s,2 H), 1,04 (d,4 H, J = 3 Hz).

15 Etapa 2: Éster metílico del ácido espiro[2.2]pentano-1,1-dicarboxílico, mostrado a continuación, se preparó de la siguiente manera.

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Usando el mismo procedimiento que se ha descrito anteriormente en la preparación de sal clorhidrato del éster metílico del ácido 1-amino-espiro[2.3]hexano-1-carboxílico, 800 mg (4,3 mmol) del producto de la etapa 1 y 240 mg

20 (4,3 mmol) de KOH dieron 600 mg (82%) de éster metílico del ácido espiro[2.2]pentano-1,1-dicarboxílico. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,82 (s, 6 H), 2,35 (d, 1 H, J = 3 Hz), 2,26 (d, 1 H, J = 3 Hz), 1,20 (m, 1 H), 1,15 (m, 1 H), 1,11 (m, 1 H), 1,05 (m, 1 H). LRMS: EM m/z 169 (M+-1) (Procedimiento D).

Etapa 3: Sal clorhidrato del éster metílico del ácido 1-amino-espiro[2.2]pentano-1-carboxílico, mostrado a continuación, se preparó de la siguiente manera.

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25 Usando el mismo procedimiento que se ha descrito anteriormente para la preparación de sal clorhidrato del éster metílico del ácido 1-amino-espiro[2.3]hexano-1-carboxilílico, 400 mg (2,3 mmol) del producto de la etapa 2, 700 mg (2,5 mmol) de DPPA y 278 mg (2,7 mmol) de Et3N dieron 82 mg (20%) de la sal clorhidrato. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 9,19 (s a, 3 H), 3,81 (s, 3 H), 2,16, (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 2,01 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 1,49 (m, 1 H), 1,24, (m, 1

30 H), 1,12 (m, 2 H). LRMS de amina libre: EM m/z 142 (M++1).

9. Preparación de éster etílico del ácido 5-amino-espiro[2.3]hexano-5-carboxílico, mostrado a continuación, se preparó de la siguiente manera.

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Se combinó espiro[2.3]hexan-4-ona (500 mg, 5 mmol), que se preparó a partir de biciclopropilideno (A. Meijere y col. Org. Syn. 2000, 78, 142-151) de acuerdo con A. Meijere y col. J. Org. Chem. 1988, 53, 152-161, con carbamato de amonio (1,17 g, 15 mmol) y cianuro potásico (812 mg, 12,5 mmol) en 50 ml de EtOH y 50 ml de agua. La mezcla se calentó a 55 ºC durante 2 días. Después, se añadió NaOH (7 g, 175 mmol) y la solución se calentó a reflujo durante una noche. Después, la mezcla se enfrió a 0 ºC, se acidificó a pH 1 con HCl concentrado y se concentró al vacío. Se añadió EtOH a la mezcla de aminoácido en bruto y después se concentró a sequedad (5 x) para retirar el agua residual. El residuo se disolvió en 100 ml de EtOH y se enfrió a 0 ºC. Después, se trató con 1 ml de SOCl2 y se calentó a reflujo durante 3 días. Los sólidos se retiraron por filtración y el filtrado se concentró al vacío para dar el producto en bruto. El producto en bruto se repartió entre NaOH 3 N, NaCl y EtOAc. La fase orgánica se secó sobre carbonato potásico y se concentró. El residuo se purificó usando cromatografía en columna C18 sobre gel de sílice (eluyendo con MeOH/H2O), produciendo 180 mg (21%) de 15 en forma de un aceite. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 8,20 (s a, 2 H), 4,27 (s, 2 H), 2,80 (s, 1 H), 2,54 (s, 1 H), 2,34 (m, 2 H), 1,31 (s, 3 H), 1,02 (s, 1 H), 0,66 (m, 3 H). RMN 13C (300 MHz, CDCl3) δ 170,2 (s), 63,0 (s), 62,8 (s), 26,1 (s), 26,0 (s), 24,9 (s), 13,9 (s), 11,4 (s), 10,9 (s). CLEM: EM m/z 170 (M++1).

10. Preparación de sal clorhidrato del éster metílico del ácido 1-amino-espiro[2.2]pentano-1-carboxílico, mostrado a continuación, se preparó de la siguiente manera.

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Etapa 1 Preparación de éster dimetílico del ácido espiro[2.2]pentano-1,1-dicarboxílico, mostrado a continuación.

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A una mezcla enfriada (0 ºC) de metilenociclopropano (3,89 g, 72 mmol) (preparada de acuerdo con la Patente de Estados Unidos Nº de serie. 5.723.714 de P. Binger) y Rh2(OAc)4 (3,18 g, 7,2 mmol) en CH2Cl2 anhidro(40 ml), se le añadió diazomalonato de dimetilo (11,38 g, 72 mmol). En la parte superior del matraz se instaló un dedo frío mantenido a -78 ºC. La mezcla de reacción de color verde se calentó a ta, momento en el que el burbujeo debido al desprendimiento de N2 fue evidente. Una reacción exotérmica provocó un reflujo leve durante 15 minutos. La reacción se agitó durante 4 h más. La mezcla se concentró al vacío y se purificó por cromatografía ultrarrápida (eluyendo con 10:1 de hexano/Et2O a 5:1 de hexano/Et2O), dando 10,5 g (79%) del éster dimetílico en forma de un aceite de color amarillo. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,73 (s, 6 H), 1,92 (s, 2 H),1,04 (d,4 H, J = 3 Hz).

Etapa 2: Éster metílico del ácido espiro[2.2]pentano-1,1-dicarboxílico, mostrado a continuación, se preparó de la siguiente manera.

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A la mezcla de éster dimetílico del ácido espiro[2.2]pentano-1,1-dicarboxílico 800 mg (4,3 mmol) en 8 ml de MeOH y 2 ml de agua se le añadió KOH (240 mg, 4,3 mmol). Esta solución se agitó a ta durante 2 días. Después, se acidificó con HCl diluido a pH 3 y se extrajo dos veces con éter. Las fases orgánicas combinadas se secaron (MgSO4) y se concentraron, produciendo 600 mg (82%) de éster metílico del ácido espiro[2.2]pentano-1,1-dicarboxílico en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,82 (s, 6 H), 2,35 (d, 1 H, J = 3 Hz), 2,26 (d, 1 H, J = 3 Hz), 1,20 (m, 1 H), 1,15 (m, 1 H), 1,11 (m, 1 H), 1,05 (m, 1 H). LRMS: EM m/z 169 (M+-1).

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A una mezcla de éster metílico del ácido espiro[2.2]pentano-1,1-dicarboxílico (400 mg, 2,30 mmol) en 3 ml de t

5 BuOH anhidro, se le añadieron 700 mg (2,50 mmol) de DPPA y 278 mg (2,70 mmol) de Et3N. La mezcla se calentó a reflujo durante 21 h y después se repartió entre H2O y éter. La fase de éter se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró al vacío para producir un aceite. A este aceite se le añadieron 3 ml de una solución de HCl 4 M/dioxano. Esta solución ácida se agitó a ta durante 2 h y después se concentró al vacío. El residuo se trituró con éter para dar 82 mg (20%) de sal clorhidrato del éster metílico del ácido 1-amino-espiro[2.2]pentano-1-carboxílico en

10 forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 9,19 (s a, 3 H), 3,81 (s, 3 H), 2,16, (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 2,01 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 1,49 (m, 1 H), 1,24, (m, 1 H), 1,12 (m, 2 H). LRMS de amina libre: EM m/z 142 (M++1).

Sección 2 del Ejemplo 12

Los siguientes intermedios de P1 se prepararon como se describe:

1. Preparación de ciclopropilsulfonamida (Ruta alternativa):

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Etapa 1: Preparación de N-terc-butil-(3-cloro)propilsulfonamida

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Se disolvió terc-butilamina (3,0 mol, 315,3 ml) en THF (2,5 l). La solución se enfrió a -20 ºC. Se añadió lentamente cloruro de 3-cloropropanosulfonilo (1,5 mol, 182,4 ml). La mezcla de reacción se dejó calentar a ta y se agitó durante

20 24 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se disolvió en CH2Cl2 (2,0 l). La solución resultante se lavó con HCl 1 N (1,0 l), agua (1,0 l) y salmuera (1,0 l) y se secó sobre Na2SO4. Se filtró y se concentró al vacío para dar un sólido de color ligeramente amarillo, que se cristalizó en hexano, proporcionando el producto en forma de un sólido de color blanco (316,0 g, 99%). RMN 1H (CDCl3) 1,38 (s, 9H), 2,30-2,27 (m, 2H), 3,22 (t, J= 7,35 Hz, 2H), 3,68 (t, J= 6,2 Hz, 2H), 4,35 (a, 1H).

25 Etapa 2: Preparación de terc-butilamida del ácido ciclopropanosulfónico

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A una solución de N-terc-butil-(3-cloro)propilsulfonamida (2,14 g, 10,0 mmol) en THF (100 ml) se le añadió n-BuLi (2,5 M en hexano, 8,0 ml, 20,0 mmol) a -78 ºC. La mezcla de reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente durante un periodo de 1 h. Los volátiles se retiraron al vacío. El residuo se repartió entre EtOAC y agua (200 ml, 200

30 ml). La fase orgánica separada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se recristalizó en hexano para producir el producto deseado en forma de un sólido de color blanco (1,0 g, 56%). RMN 1H (CDCl3) δ 0,98-1,00 (m, 2H), 1,18-1,19 (m, 2H), 1,39 (s, 9H), 2,48-2,51 (m, 1H), 4,19 (a, 1H).

Etapa 3: preparación de ciclopropilsulfonamida

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Una solución de terc-butilamida del ácido ciclopropanosulfónico (110,0 g, 0,62 mol) en TFA (500 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Los volátiles se retiraron al vacío. El residuo se recristalizó en EtOAC/hexano (60 ml/240 ml) para producir el producto deseado en forma de un sólido de color blanco (68,5 g, 91%). RMN 1H (DMSO-d6) 0,84-0,88 (m, 2H), 0,95-0,98 (m, 2H), 2,41-2,58 (m, 1H), 6,56 (a, 2H).

2. Preparación de ciclobutil sulfonamida

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A una solución de 5,0 g (37,0 mmol) de bromuro de ciclobutilo en 30 ml de éter dietílico anhidro (Et2O) se enfrió a 78 ºC, se añadieron 44 ml (74,8 mmol) de terc-butil-litio 1,7 M en pentanos y la solución se calentó lentamente a -35 ºC durante 1,5 h. Esta mezcla se introdujo lentamente mediante una cánula en una solución de 5,0 g (37,0 mmol) de cloruro de sulfurilo recién destilado en 100 ml de hexanos enfriada -40 ºC, se calentó a 0 ºC durante 1 h y se concentró cuidadosamente al vacío. Esta mezcla se disolvió de nuevo en Et2O, se lavó una vez con algo de hielo-agua fría, se secó (MgSO4) y se concentró cuidadosamente. Esta mezcla se disolvió de nuevo en 20 ml de THF, se añadió gota a gota a 500 ml de NH3 saturado en THF y se dejó en agitación durante una noche. La mezcla se concentró al vacío para dar un sólido en bruto de color amarillo y se recristalizó en la cantidad mínima de CH2Cl2 en hexanos con 1-2 gotas de MeOH para proporcionar 1,90 g (38%) de ciclobutilsulfonamida en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (CDCl3) δ 1,95-2,06 (m, 2H), 2,30-2,54 (m, 4H), 3,86 (p, J = 8 Hz, 1H), 4,75 (s a, 2H); RMN 13C (CDCl3) δ 16,43, 23,93, 56,29, HREM m/z (M-H)-calc. para C4H8NSO2: 134,0276, encontrado 134,0282.

3. Preparación de ciclopentilsulfonamida

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Una solución de 18,5 ml (37,0 mmol) de cloruro de ciclopentil-magnesio 2 M en éter se añadió gota a gota a una solución de 3,0 ml (37,0 mmol) de cloruro de sulfurilo recién destilado (obtenido de Aldrich) en 100 ml de hexanos enfriada a -78 ºC. La mezcla se calentó a 0 ºC durante 1 h y después se concentró cuidadosamente al vacío. Esta mezcla se disolvió de nuevo en Et2O (200 ml), se lavó una vez con algo de hielo-agua fría (200 ml), se secó (MgSO4) y se concentró cuidadosamente. Esta mezcla se disolvió de nuevo en 35 ml de THF, se añadió gota a gota a 500 ml de NH3 saturado en THF y se dejó en agitación durante una noche. La mezcla se concentró al vacío para dar un sólido en bruto de color amarillo, el residuo se filtró a través de 50 g de gel de sílice usando EtOAc 70%-hexanos como eluyente y después la solución se concentró. El residuo se recristalizó en la cantidad mínima de CH2Cl2 en hexanos con 1-2 gotas de MeOH, proporcionando 2,49 g (41%) de ciclopentilsulfonamida en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (CDCl3) δ 1,58-1,72 (m, 2H), 1,74-1,88 (m, 2H), 1,94-2,14 (m, 4H), 3,48-3,59 (m, 1H), 4,80 (s a, 2H); RMN 13C (CDCl3) δ 25,90, 28,33, 63,54; EM m/e 148 (M-H)-.

4. Preparación de ciclohexil sulfonamida

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Una solución de 18,5 ml (37,0 mmol) de cloruro de ciclohexilmagnesio 2 M (TCI Americas) en éter se añadió gota a gota a una solución de 3,0 ml (37,0 mmol) cloruro de sulfurilo recién destilado en 100 ml de hexanos enfriada a -78 ºC. La mezcla se calentó a 0 ºC durante 1 h y después se concentró cuidadosamente al vacío. Esta mezcla se disolvió de nuevo en Et2O (200 ml), se lavó una vez con algo de hielo-agua fría (200 ml), se secó (MgSO4) y se concentró cuidadosamente. Esta mezcla se disolvió de nuevo en 35 ml de THF, se añadió gota a gota a 500 ml de NH3 saturado en THF y se dejó en agitación durante una noche. La mezcla se concentró al vacío para dar un sólido en bruto de color amarillo, el residuo se filtró a través de 50 g de gel de sílice usando EtOAc al 70%-hexanos como eluyente y se concentró. El residuo se recristalizó en la cantidad mínima de CH2Cl2 en hexanos con 1-2 gotas de MeOH, proporcionando 1,66 g (30%) de ciclohexilsulfonamida en forma de un sólido de color blanco: RMN 1H (CDCl3) δ 1,11-1,37 (m, 3H), 1,43-1,56 (m, 2H), 1,67-1,76 (m, 1H), 1,86-1,96 (m, 2H), 2,18-2,28 (m, 2H), 2,91 (tt, J = 12, 3,5 Hz, 1H), 4,70 (s a, 2H); RMN 3CH (CDCl3) δ 25,04, 25,04, 26,56, 62,74; EM m/e 162 (M-1)-.

5. Preparación de Neopentilsulfonamida

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Siguiendo el procedimiento para la preparación de ciclohexil sulfonamida, se convirtieron 49 ml (37 mmol) de cloruro de neopentilmagnesio 0,75 M (Alfa) en éter, en 1,52 g (27%) de neopentilsulfonamida en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (CDCl3) δ 1,17 (s, 9H), 3,12 (s, 2H), 4,74 (s a, 2H); RMN 13C (CDCl3) δ 29,46, 31,51, 67,38; EM m/e 150 (M=1)-.

6. Preparación de ciclobutilcarbinil-sulfonamida

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Una solución de 12,3 g (83 mmol) de bromuro de ciclobutilcarbinilo (Aldrich) y 13,7 g (91 mmol) de yoduro sódico en 150 ml de acetona se calentó a reflujo durante una noche y después se enfrió a ta. Los sólidos inorgánicos se retiraron por filtración y la acetona y el yoduro de ciclopropilcarbinilo (8,41 g, 46%) se retiraron por destilación a temperatura ambiente y a 0,2 atm (150 torr) a 80 ºC, respectivamente.

Una solución de 4,0 g (21,98 mmol) de yoduro de ciclobutil carbinilo en 30 ml de éter dietílico anhidro (Et2O) se enfrió a -78 ºC, se introdujo mediante una cánula en una solución de 17 ml (21,98 mmol) de sec-butil-litio 1,3 M en ciclohexanos y la solución se agitó durante 5 min. A esta mezcla se le introdujo mediante una cánula una solución de 3,0 g (21,98 mmol) de cloruro de sulfurilo recién destilado en 110 ml de hexanos enfriada -78 ºC, la mezcla se calentó a ta durante 1 h y después se concentró cuidadosamente al vacío. Esta mezcla se disolvió de nuevo en Et2O, se lavó una vez con algo de hielo-agua fría, se secó (MgSO4) y se concentró cuidadosamente. Esta mezcla se disolvió de nuevo en 30 ml de THF, se añadió gota a gota a 500 ml de NH3 saturado en THF y se dejó en agitación durante una noche. La mezcla se concentró al vacío para dar un sólido en bruto de color amarillo y se recristalizó en la cantidad mínima de CH2Cl2 en hexanos con 1-2 gotas de MeOH, proporcionando 1,39 g (42%) de ciclobutil carbinilsulfonamida en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (CDCl3) δ 1,81-2,03 (m, 41-17, 2,14-2,28 (m, 2H), 2,81-2,92 (m, 1H), 3,22 (d, J = 7 Hz, 2H), 4,74 (s a, 2H); RMN 13C (CDCl3) δ 19,10, 28,21, 30,64, 60,93; EM m/e 148 (M-1)-. time: 1,73, procedimiento B), 818 (M++H)

7. Preparación de ciclopropilcarbinil-sulfonamida

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Usando el procedimiento empleado para la preparación de ciclobutilcarbinil-sulfonamida, se preparó ciclopropilcarbinil sulfonamida a partir de bromuro de ciclopropilcarbinilo (Aldrich) (véase también JACS 1981, p.442445). RMN 1H (CDCl3) δ 0,39-0,44 (m, 2H), 0,67-0,76 (m, 2H), 1,13-1,27 (m, 1H), 3,03 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 4,74 (s a, 2H); RMN 13C (CDCl3) δ 4,33, 5,61, 59,93; EM m/e 134 (M-1).

8. Preparación de 2-tiofeno sulfonamida

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Se preparó a partir de cloruro de 2-tiofeno sulfonilo que se adquirió de Aldrich, usando el procedimiento de Steinkopf y Hoepner, Justus Liebigs Ann. Chem., 501, 1933, págs.174-182.

9. Preparación de 4-Bromobencenosulfonamida

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Se preparó 4-bromofenilsulfonamidasa por tratamiento de cloruro de 4-bromosulfonilo disponible en el mercado con amoniaco saturado en THF

10. Preparación de Ciclopropanosulfonamidas 1-sustituidas

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Etapa 1 Preparación de N-terc-butil-(3-cloro)propilsulfonamida

(Descrita anteriormente)

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Etapas 2 Preparación de N-terc-butil-(1-metil)ciclopropil-sulfonamida.

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Una solución de N-terc-butil-(3-cloro)propilsulfonamida (4,3 g, 20 mmol) se disolvió en THF seco (100 ml) y se enfrió a -78 ºC. A esta solución se le añadió lentamente n-BuLi (17,6 ml, 44 mmol, 2,5 M en hexano). El baño de hielo seco se retiró y la mezcla de reacción se dejó calentar a ta durante un periodo de 1,5 h. Después, esta mezcla se enfrió a -78 ºC y una solución de n-BuLi (20 mmol, 8 ml, 2,5 M en hexano) se añadió. La mezcla de reacción se calentó a ta, 15 se enfrió de nuevo a -78 ºC durante un periodo de 2 h y se añadió una solución pura de yoduro de metilo (5,68 g, 40 mmol). La mezcla de reacción se dejó calentar a ta durante una noche, se inactivó con NH4Cl saturado (100 ml) a ta. Se extrajo con EtOAc (100 ml). La fase orgánica se lavó con salmuera (100 ml), se secó (MgSO4) y se concentró al vacío para dar un aceite de color amarillo que se cristalizó en hexano, proporcionando el producto en forma de un sólido de color ligeramente amarillo (3,1 g, 81%): RMN 1H (CDCl3) δ 0,79 (m, 2H), 1,36 (s, 9H), 1,52 (m, 2H), 1,62 (s,

20 3H), 4,10 (s a, 1H)

Etapa 3 Preparación de Ejemplo 3, 1-metilciclopropilsulfonamida.

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Una solución de N-terc-butil-(1-metil)ciclopropilsulfonamida (1,91 g, 10 mmol) se disolvió en TFA (30 ml), y la mezcla de reacción se agitó a ta durante16 h. El disolvente se retiró al vacío para dar un aceite de color amarillo que se

25 cristalizó en EtOAc/hexano (1:4,40 ml) para producir el Ejemplo 3, 1-metilciclopropilsulfonamida, en forma de un sólido de color blanco (1,25 g, 96%): RMN 1H (CDCl3) δ 0,84 (m, 2H), 1,41 (m, 2H), 1,58 (s, 3H), 4,65 (s a, 2H). Analizado. Calculado para C4H9NO2S: C, 35,54; H, 6,71; N, 10,36, Encontrado: C, 35,67; H, 6,80; N, 10,40.

Preparación de N-terc-butil-(1-alil)ciclopropilsulfonamida.

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Etapa 1. Este compuesto, N-terc-butil-(1-alil)ciclopropilsulfonamida, se obtuvo en un rendimiento del 97% de acuerdo con el procedimiento descrito en la síntesis de N-terc-butil-(1-metil)ciclopropilsulfonamida excepto porque se usaron 1,25 equivalentes de bromuro de alilo como electrófilo. El compuesto se recogió directamente en la siguiente reacción sin purificación: RMN 1H (CDCl3) δ 0,83 (m, 2H), 1,34 (s, 9H), 1,37 (m, 2H), 2,64 (d, J= 7,3 Hz, 2H), 4,25 (s a, 1H), 5,07-5,10 (m, 2H), 6,70-6,85 (m, 1H).

Etapa 2 Preparación de Ejemplo 4,1-alilciclopropilsulfonamida.

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Este compuesto, 1-alilciclopropilsulfonamida, se obtuvo con un rendimiento del 40% a partir de N-terc-butil-(1

10 alil)ciclopropilsulfonamida de acuerdo con el procedimiento descrito en la síntesis de 1-Metilciclopropilsulfonamida. El compuesto se purificó por cromatografía en columna sobre SiO2, usando MeOH al 2% en CH2Cl2 como eluyente: RMN 1H (CDCl3) δ 0,88 (m, 2 H), 1,37 (m, 2 H), 2,66 (d, J = 7,0 Hz, 2 H), 4,80 (s, 2 H), 5,16 (m, 2 H), 5,82 (m, 1 H); RMN 13C (CDCl3) δ 11,2, 35,6, 40,7, 119,0, 133,6.

Preparación de N-terc-butil-[1-(1-hidroxi)ciclohexil]-ciclopropilsulfonamida.

15

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Etapa 1 Este compuesto se obtuvo con un rendimiento del 84% usando el procedimiento descrito para la síntesis de N-terc-butil-(1-metil)ciclopropilsulfonamida excepto porque se usaron 1,30 equivalentes de ciclohexanona, seguido de recristalización en la cantidad mínima de EtOAc al 20% en hexano: RMN 1H (CDCl3) δ 1,05 (m, 4H), 1,26 (m, 2H), 1,37 (s, 9H), 1,57-1,59 (m, 6H), 1,97 (m, 2H), 2,87 (s a, 1H), 4,55 (s a, 1H).

20 Etapas 2 Preparación de 1-(1-ciclohexenil)ciclopropil-sulfonamida.

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Este compuesto, 1-(1-ciclohexenil)-ciclopropilsulfonamida, se obtuvo con un rendimiento del 85% a partir de N-tercbutil-[1-(1-hidroxi)ciclohexil]-ciclopropilsulfonamida usando el procedimiento descrito para la síntesis de 1metilciclopropilsulfonamida, seguido de recristalización en la cantidad mínima de EtOAc y hexano: RMN 1H (DMSO

25 d6) δ 0,82 (m, 2 H), 1,28 (m, 2 H), 1,51 (m, 2 H), 1,55 (m, 2 H), 2,01 (s, 2 H), 2,16 (s, 2 H), 5,89 (s, 1 H), 6,46 (s, 2 H); RMN 13C (DMSO-d6) δ 11,6, 21,5, 22,3, 25,0, 27,2, 46,9, 131,6, 132,2; LR-EM (ESI): 200 (M+-1).

Preparación de N-terc-butil-(1-benzoil)ciclopropil-sulfonamida.

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Etapa 1. Este compuesto se obtuvo con un rendimiento del 66% usando el procedimiento descrito para la síntesis de 30 N-terc-butil-(1-metil)ciclopropilsulfonamida excepto porque se usaron 1,2 equivalentes de benzoato de metilo como electrófilo. El compuesto se purificó por cromatografía en columna sobre SiO2 usando CH2Cl2 del 30% al 100% en

hexano: RMN 1H (CDCl3) δ 1,31 (s, 9H), 1,52 (m, 2H), 1,81 (m, 2H), 4,16 (s a, 1H), 7,46 (m, 2H), 7,57 (m, 1H), 8,05 (d, J= 8,5 Hz, 2H).

Etapa 2 Preparación 1-benzoilciclo-propilsulfonamida.

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5 Etapa 2. Este compuesto, 1-benzoilciclopropil-sulfonamida, se obtuvo con un rendimiento del 87% a partir de N-tercbutil(1-benzoil)ciclopropilsulfonamida, usando el procedimiento descrito para la síntesis de 1Metilciclopropilsulfonamida, seguido de recristalización en la cantidad mínima de EtOAc en hexano: RMN 1H (DMSO-d6) δ 1,39 (m, 2 H), 1,61 (m, 2 H), 7,22 (s, 2 H), 7,53 (t, J = 7,6 Hz, 2 H), 7,65 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 8,06 (d, J = 8,2 Hz, 2 H); RMN 13C (DMSO-d6) δ 12,3, 48,4, 128,1, 130,0, 133,4, 135,3, 192,0.

10 Preparación de N-terc-butil-(1-bencil)ciclopropil-sulfonamida.

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Etapa 1. Este compuesto se obtuvo con un rendimiento del 60% usando el procedimiento descrito para la síntesis de N-terc-butil-(1-metil)ciclopropilsulfonamida excepto porque se usaron 1,05 equivalentes de bromuro de bencilo, seguido de trituración con EtOAc al 10% en hexano: RMN 1H (CDCl3) δ 0,92 (m, 2H), 1,36 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 3,25

15 (s, 2H), 4,62 (s a, 1H), 7,29-7,36 (m, 5H).

Etapas 2 Preparación de 1-Bencilciclo-propilsulfonamida.

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Este compuesto, Ejemplo 7, 1-bencilciclopropilsulfonamida, se obtuvo con un rendimiento del 66% a partir de N-tercbutil(1-bencil)ciclopropilsulfonamida usando el procedimiento descrito para la síntesis de 1

20 metilciclopropilsulfonamida, seguido de recristalización en la cantidad mínima de EtOAc al 10% en hexano: RMN 1H (CDCl3) δ 0,90 (m, 2H), 1,42 (m, 2 H), 3,25 (s, 2 H), 4,05 (s, 2H), 7,29 (m, 3 H), 7,34 (m, 2 H); RMN 13C (CDCl3) δ 11,1, 36,8, 41,9, 127,4, 128,8, 129,9, 136,5.

Preparación de N-terc-butil-(1-fenilaminocarboxi)-ciclopropilsulfonamida.

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25 Etapa 1. Este compuesto se obtuvo con un rendimiento del 42% usando el procedimiento descrito para la síntesis de N-terc-butil-(1-metil)ciclopropilsulfonamida, usando 1 equivalente de isocianato de fenilo, seguido de recristalización en la cantidad mínima de EtOAc en hexano RMN 1H (CDCl3) δ 1,38 (s, 9H), 1,67-1,71 (m, 4H), 4,30 (s a, 1H). 7,10 (t, J= 7,5 Hz, 1H), 7,34 (t, J= 7,5 Hz, 2H), 7,53 (t, J= 7,5 Hz, 2H).

Etapas 2 Preparación de Ejemplo 8, 1-(Fenilamino-carboxi)ciclopropilsulfonamida.

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Etapa 2. Se obtuvo 1-(fenilaminocarboxi)ciclopropilsulfonamida, con un rendimiento del 75% a parir de N-tercbutil(1-fenilaminocarboxi)ciclopropilsulfonamida usando el procedimiento descrito para la síntesis de 1metilciclopropilsulfonamida, seguido de recristalización en la cantidad mínima de EtOAc en hexano: RMN 1H (CDCl3) δ 1,70 (m, 2 H), 1,75 (m, 2 H), 4,85 (s, 2 H), 7,16 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,35 (t, J = 7,6 Hz, 2 H), 7,53 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 9,25 (s, 1H).

Sección tres del Ejemplo 12

Los siguientes compuestos pueden fabricarse usando los intermedios descritos en el presente documento y por analogía con los procedimientos y experimentos descritos en el presente documento.

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Ejemplo 13

Estudios Biológicos

Ensayo de péptido FRET de complejo de proteasa NS3/4A de VHC recombinante

El fin de este ensayo in vitro era medir la inhibición de complejos de proteasa NS3 de VHC, obtenidos a partir de las cepas BMS, H77C o J416S, como se ha descrito más adelante, mediante compuestos de la presente invención. Este ensayo proporciona un indicio de cuán eficaces serían los compuestos de la presente invención para inhibir la actividad proteolítica de VHC.

Suero de un paciente infectado con VHC se obtuvo del Doctor T. Wright, del Hospital de San Francisco. Se construyó un molde de ADNc (ácido desoxirribonucleico de complemento) de cadena completa mediante ingeniería genética del genoma de VHC (cepa BMS) a partir de fragmentos de ADN obtenidos mediante transcripción inversa-PCR (RT-PCR) de ARN (ácido ribonucleico) de suero y usando cebadores seleccionados en base a la homología entre otras cepas de genotipo 1a. A partir de la determinación de la secuencia completa del genoma, se asignó un genotipo 1a al aislado de VHC de acuerdo con la clasificación de Simmonds y col. (véase P Simmonds, KA Rose, S Graham, SW Chan, F McOmish, BC Dow, EA Follett, PL Yap y H Marsden, J. Clin. Microbiol., 31(6), 1493-1503 (1993)). La secuencia de aminoácidos de la región no estructural, NS2-5B, demostró ser > 97% idéntica al genotipo 1a de VHC (H77C) y el 87% idéntica al genotipo 1b (J4L6S). Los clones infecciosos, H77C (genotipo 1a) y J4L6S (genotipo 1b) se obtuvieron de R. Purcell (NIH) y las secuencias están publicadas en Genbank (AAB67036, véase Yanagi, M., Purcell, R.H., Emerson, S.U. y Bukh, J. Proc. Natl. Acad. Sci. EE. UU. 94(16), 8738-8743 (1997); AF054247, véase Yanagi, M., St Claire, M., Shapiro, M., Emerson, S.U., Purcell, R.H. y Bukh, J, Virology 244 (1), 161-172. (1998)).

Las cepas BMS, H77C y J4L6S se usaron para producción de complejos de proteasa NS3/4A recombinantes. Los ADN que codifican el complejo de proteasa NS3/4A de VHC recombinante (aminoácidos 1027 a 1711) para estas cepas se manipularon como se ha descrito por P. Gallinari y col. (véase Gallinari P, Paolini C, Brennan D, Nardi C, Steinkuhler C, De Francesco R. Biochemistry. 38(17): 5620-32, (1999)). En resumen, se añadió una cola solubilizante de tres lisinas en el extremo 3’ de la región codificante de NS4A. La cisteína en la posición P1 del sitio de escisión NS4A-NS4B (aminoácido 1711) se cambió a una glicina para evitar la escisión proteolítica de la etiqueta de lisina. Adicionalmente, se introdujo una mutación de cisteína a serina mediante PCR en la posición de aminoácido 1454 para evitar la escisión autolítica en el dominio de helicasa de NS3. El fragmento de ADN variante se clonó en el vector de expresión bacteriana pET21b (Novagen) y el complejo de NS3/4A se expresó en Escherichia coli cepa BL21 (DE3) (Invitrogen) siguiendo el protocolo descrito por P. Gallinari y col. (véase Gallinari P, Brennan D, Nardi C, Brunetti M, Tomei L, Steinkuhler C, De Francesco R., J Virol. 72(8): 6758-69 (1998)) con modificaciones. En resumen, se indujo la expresión de NS3/4A con isopropil β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG) 0,5 mM durante 22 h a 20ºC. Una fermentación típica (10 l) produjo aproximadamente 80 g de pasta celular húmeda. Las células se resuspendieron en tampón de lisis (10 ml/g) que consistía en ácido N-(2-Hidroxietil)Piperazina-N’-(2Etano Sulfónico) (HEPES) 25 mM, pH 7,5, glicerol al 20%, Cloruro de Sodio (NaCl) 500 mM, Triton-X100 al 0,5%, 1 µg/ml de lisozima, Cloruro de Magnesio (MgCl2) 5 mM, 1 µg/ml de DnasaI, β-Mercaptoetanol (βME) 5 mM, inhibidor de Proteasa, ácido Etilenodiamina Tetraacético (EDTA) libre (Roche), se homogeneizaron e incubaron durante 20 min a 4ºC. El homogenado se sometió a ultrasonido y se aclaró mediante ultracentrifugcación a 235000 g durante 1 h a 4ºC. Se añadió imidazol al sobrenadante hasta una concentración final de 15 m y el pH se ajustó a 8,0. El extracto de proteína bruto se cargó en una columna de Níquel-ácido Nitrilotriacético (Ni-NTA) preequilibrada con tampón B (HEPES 25 mM, pH 8,0, glicerol al 20%, NaCl 500 mM, Triton-X100 al 0,5%, imidazol 15 m, βME 5 mM). La muestra se cargó a un caudal de 1 ml/min. La columna se lavó con 15 volúmenes de columna de tampón C (igual que el tampón B con la excepción de Triton-X100 al 0,2%). La proteína se eluyó con 5 volúmenes de columna de tampón D (igual al tampón C con la excepción de Imidazol 200 mM).

Las fracciones que contenían complejo de proteasa NS3/4A se combinaron y cargaron en una columna de desalación Superdex-S200 preequilibrada con tampón D (HEPES 25 mM, pH 7,5, glicerol al 20%, NaCl 300 mM, Triton-X100 al 0,2%, βME 10 mM). La muestra se cargó a un caudal de 1 ml/min. Las fracciones que contenían complejo de proteasa NS3/4A se combinaron y concentraron hasta aproximadamente 0,5 mg/ml. La pureza de los complejos de proteasa NS3/4A, obtenidos a partir de las cepas BMS, H77C y J4L6S, se consideró que era mayor del 90% mediante análisis de SDS-PAGE y espectrometría de masas.

La enzima se almacenó a -80ºC, se descongeló en hielo y se diluyó antes del uso en tampón de ensayo. El sustrato usado para el ensayo de proteasa NS3/4A fue RET S 1 (Sustrato Depsipéptido de Trasnferencia de Energía de Resonancia; AnaSpec, Inc. Nº de cat 22991) (péptido FRET), descrito por Taliani y col. en Anal. Biochem. 240(2): 60-67 (1996). La secuencia de este péptido se basa aproximadamente en el sitio de escisión natural de NS4A/NS4B con la excepción de que existe un enlace éster en lugar de una unión amida en el sitio de escisión. El sustrato peptídico se incubó con uno de los tres complejos NS3/4A recombinantes, en ausencia o presencia de un compuesto de la presente invención y la formación del producto de reacción fluorescente se siguió en tiempo real usando un Cytofluor Series 4000.

Los reactivos fueron los siguientes: HEPES y Glicerol (Ultrapuro) se obtuvieron en GIBCO-BRL. Dimetil Sulfóxido

5

10

15

20

25

30

35

40

45

(DMSO) se obtuvo en Sigma. β-Mercaptoetanol se obtuvo en Bio Rad.

Tampón de ensayo: HEPES 50 mM, pH 7,5; NaCl 0,15 M; Triton al 0,1%; Glicerol al 15%; βME 10 mM. Sustrato: concentración final 2 µM (a partir de una solución madre 2 mM en DMSO almacenada a -20ºC). NS3/4A de VHC de tipo 1a (1b), concentración final 2-3 nM (a partir de una solución madre 5 µM en HEPES 25 mM, pH 7,5, glicerol al 20%, NaCl 300 mM, Triton-X100 al 0,2%, βME 10 mM). Para compuestos con potencias que se aproximan al límite de ensayo, el ensayo se hizo más sensible añadiendo 50 µg/ml de BSA al tampón de ensayo y reduciendo la concentración de proteasa final hasta 300 pM.

El ensayo se realizó en una placa negra de poliestireno de 96 pocillos de Falcon. Cada pocillo contenía 25 µl de complejo de proteasa NS3/4A en tampón de ensayo, 50 µl de un compuesto de la presente invención en DMSO al 10%/tampón de ensayo y 25 µl de sustrato en tampón de ensayo. También se preparó un control (sin compuesto) en la misma placa de ensayo. El complejo enzimático se mezcló con compuesto o solución de control durante 1 min antes de iniciar la reacción enzimática mediante la adición de sustrato. Las placa de ensayo se leyó inmediatamente usando el Cytoflour Series 4000 (Perspective Biosystems). El instrumento se ajustó para leer una emisión de 340 nm y una excitación de 490 nm a 25ºC. Las reacciones se siguieron generalmente durante aproximadamente 15 minutos.

El porcentaje de inhibición se calculó con la siguiente ecuación:

100 – [(imagen6 Finh/imagen6 Fcon)x100]

donde δF es el cambio en fluorescencia a lo largo del intervalo lineal de la curva. Se aplicó un ajuste de curva no lineal a los datos de inhibición-concentración y se calculó la concentración eficaz del 50% (CI50) mediante el uso del software Excel XI-fit usando la ecuación, y=A+((B-A)/(1+((C/x)^D))).

Se observó que todos los compuestos ensayados tenían CI50 de 2,3 µM o menos. Además, los compuestos de la presente invención, que se ensayaron frente a más de un tipo de complejo NS3/4A, se observó que tenían propiedades inhibidoras similares aunque los compuestos demostraron uniformemente una potencia mayor frente a las cepas 1b en comparación con las cepas 1a.

Ensayos de Especificidad

Los ensayos de especificidad se realizaron para demostrar la selectividad de los compuestos de la presente invención para inhibir la proteasa NS3/4A de VHC en comparación con otras serina o cisteína proteasas.

Las especifidades de los compuestos de la presente invención se determinaron frente a una diversidad de serina proteasas: elastasa de esputo humano (HS), elastasa pancreática porcina (PPE) y quimotripsina pancreática humana y una cisteína proteasa: catepsina B hepática humana. En todos los casos se usó un protocolo de formato de placa de 96 pocillos usando sustrato de p-nitroanilina colorimétrico (pNA) específico para cada enzima como se ha descrito previamente (Patente WO 00/09543) con algunas modificaciones a los ensayos de serina proteasa. Todas las enzimas se adquirieron en Sigma mientras que los sustratos se adquirieron en Bachem.

Cada ensayo incluyó una preincubación de enzima-inhibidor de 2 h a TA seguido por la adición de sustrato e hidrólisis hasta una conversión de ∼30% medida en un lector de microplacas Spectramax Pro. Las concentraciones de compuesto variaron de 100 a 0,4 µM dependiendo de su potencia.

Las condiciones finales para cada ensayo fueron las siguientes:

Clorhidrato de Tris(hidroximetil)aminometano 50 mM (Tris-HCl) pH 8, Sulfato de Sodio (Na2SO4) 0,5 M, NaCl 50 mM, EDTA 0,1 mM, DMSO al 3%, Tween-20 al 0,01% con:

succ-AAA-pNA 133 µM y HS 20 nM o PPE 8 nM; succ-AAPF-pNA 100 µM y Quimotripsina 250 pM.

NaHPO4 (Fosfato de Hidrógeno de Sodio) 100 mM, pH 6, EDTA 0,1 mM, DMSO al 3%, TCEP (Clorhidrato de Tris(2-carboxietil)fosfina), Tween-20 al 0,01%, Z-FR-pNA 30 µM y Catepsina B 5 nM (reserva de enzima activada en tampón que contiene TCEP 20 mM antes del uso).

El porcentaje de inhibición se calculó usando la fórmula:

[1-((Uvinh-Uvblanco)/(Uvctl-Uvblanco))] x 100

Se aplicó un ajuste de curva no lineal a los datos de concentración de inhibición y se calculó la concentración eficaz del 50% (CI50) mediante el uso del software Excel XI-fit.

Ensayo basado en Células de Replicón de VHC

Se estableció un sistema de células enteras de replicón de VHC como se ha descrito por Lohmann V, Korner F, Koch J, Herian U, Theilmann L, Bartenschlager R., Science 285(5424): 110-3 (1999). Este sistema permitió evaluar los efectos de los presentes compuestos de Proteasa de VHC sobre la replicación de ARN de VHC. En resumen, usando la secuencia de la cepa 1B de VHC descrita en el artículo de Lohmann (número de Registro: AJ238799), se generó un ADNc de VHC que codificaba el sitio de entrada a ribosoma interno 5’ (IRES), el gen de resistencia a neomicina, el IRES de EMCV (virus de encefalomiocarditis) y las proteínas no estructurales de VHC, NS3-NS5B, y la región no traducida 3’ (NTR). Los transcritos in vitro del ADNc se transfectaron en la línea de células de hepatoma humano, Huh7. La selección de las células que expresan de forma constitutiva el replicón de VHC se consiguió en presencia del marcador seleccionable, neomicina (G418). Las líneas celulares resultantes se caracterizaron para la producción de ARN de cadena positiva y negativa y la producción de proteína a lo largo del tiempo.

Las células Huh7, que expresan de forma constitutiva el replicón de VHC, se cultivaron en Medio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) que contenía Suero fetal bovino al 10% (SFB) y 1 mg/ml de G418 (Gibco-BRL). Las células se sembraron la noche anterior (1,5 104 células/pocillo) en placas estériles de cultivo de tejido de 96 pocillos. Se prepararon controles con compuesto y sin compuesto en DMEM que contenía SFB al 4%, 1:100 Penicilina / Estreptomicina, 1:100 L-glutamina y DMSO al 5% en la placa de dilución (concentración final de DMSO al 0,5% en el ensayo). Se añadieron mezclas de compuesto / DMSO a las células y se incubaron durante 4 días a 37ºC. Después de 4 días, las placas se enjuagaron abundantemente con Solución Salina Tamponada con Fosfato (PBS) (150 µl3 veces). Las células se lisaron con 25 µl de un reactivo de ensayo de lisis que contenía el péptido FRET (RET S1, como se ha descrito para el ensayo enzimático in vitro). El reactivo de ensayo de lisis se preparó a partir de un reactivo de lisis de cultivo celular de Luciferasa de células 5X (Promega Nº E153A) diluido hasta 1X con agua destilada, con NaCl añadido hasta 150 mM final, el péptido FRET diluido hasta 10 µM final a partir de una reserva 2 mM en DMSO al 100%. Después la placa se colocó en el instrumento Cytofluor 4000 que se había ajustado a una excitación de 340 nm / emisión de 490, modo automático durante 21 ciclos y la placa se leyó en un modo cinético. Las determinaciones de CE50 se realizaron como se ha descrito para las determinaciones de CI50.

Como un ensayo secundario, las determinaciones de CI50 a partir del ensayo FRET de replicón se confirmaron en un ensayo de ARN cuantitativo. Las células se lisaron usando el kit Rneasy (Qiagen). El ARN total purificado se normalizó usando RiboGreen (Jones LJ, Yue ST, Cheung CY, Singer VL, Anal. Chem., 265(2): 368-74 (1998)) y la cuantificación relativa de expresión de ARN de VHC se evaluó usando el procedimiento de Taqman (Kolykhalov AA, Mihalik K, Feinstone SM, Rice CM, Journal of Virology 74, 2046-2051 (2000)) y el kit Platinum Quantitative RT-PCR Thermoscript One-Step (Invitrogen Nº de cat 11731-015). En resumen, ARN preparado hasta un volumen de 5 µl(≤1 ng) se añadió a 20 µl de Ready-Mix que contiene lo siguiente: mezcla de reacción Thermoscript 1,25X (que contiene Sulfato de Magnesio y 2-desoxinucleósido 5’-trifosfatos (dnNTP)), dNTP 3 mM, cebador directo 200 nM (secuencia: 5’-gggagagccatagtggtctgc-3’), cebador inverso 600 nM (5’-cccaaatctccaggcattga-3’), sonda 100 nM (5’-6-FAMcggaattgccaggacgaccgg-BHQ-1-3’) (FAM: Fluoresceína-aminohexil amidita; BHQ: Black Hole Quencher), colorante de referencia Rox 1 µM (Invitrogen Nº de cat 12223-012) y mezcla de Taq polimerasa Thermoscript Plus Platinum. Todos los cebadores se diseñaron con software ABI Prism 7700 y se obtuvieron en Biosearch Technologies, Novato, CA. Las muestras que contienen concentraciones conocidas de transcrito de ADN de VHC se desarrollaron como patrones. Usando el siguiente protocolo de ciclado (50ºC, 30 min; 95ºC, 5 min; 40 ciclos de 95º, 15 s, 60ºC, 1 min), se cuantificó la expresión de ARN de VHC como se ha descrito en el manual de Perkin Elmer usando el Detector de Secuencia ABI Prism 7700.

También se usó el ensayo de informador de luciferasa para confirmar la potencia del compuesto en el replicón. La utilización de un ensayo informador de luciferasa de replicón se describió en primer lugar por Krieger y col (Krieger N, Lohmann V, y Bartenschlager R, J. Virol. 75(10): 4614-4624 (2001)). La construcción de replicón descrita para el presente ensayo FRET se modificó reemplazando el gen de resistencia a la neomicina con un gen de resistencia a la Blasticidina fusionado al extremo N de la forma humanizada de luciferasa de Renilla (sitios de restricción Asc1 / Pme1 usados para la subclonación). También se introdujo la mutación adaptativa en la posición 1179 (serina a isoleucina) (Blight KJ, Kolykhalov, AA, Rice, CM, Science 290(5498): 1972-1974). El ensayo de informador de luciferasa se ajustó sembrando células huh7 la noche anterior a una densidad de 2 x 106 células por matraz T75. Las células se lavaron al día siguiente con 7,5 ml de Opti-MEM. Siguiendo el protocolo de Invitrogen, 40 µl de DMRIE-C se agitaron vorticialmente con 5 ml de Opti-MEM antes de añadir 5 µg de ARN de replicón informador de VHC. La mezcla se añadió a las células huh7 lavadas y se dejó durante 4 horas a 37ºC. Mientras tanto, se prepararon diluciones en serie de compuesto y controles sin compuesto en DMEM que contenía SFB al 10% y DMSO al 5% en la placa de dilución (concentración final de DMSO al 0,5% en el ensayo). Mezclas de compuesto / DMSO se añadieron a cada pocillo de una placa de 24 pocillos. Después de 4 horas, la mezcla de transfección se aspiró y las células se lavaron con 5 ml de Opti-MEM antes del tratamiento con tripsina. Las células tratadas con tripsina se resuspendieron en DMEM al 10% y se sembraron a 2 x 104 células/pocillo en las placas de 24 pocillos que contenían compuesto o controles sin compuesto. Las placas se incubaron durante 4 días. Después de 4 días, se retiró el medio y las células se lavaron con PBS. Inmediatamente se añadieron 100 µl de Tampón de Lisis de Luciferasa Renilla 1X (Promega) a cada pocillo y las placas o bien se congelaron a -80ºC para análisis posterior o se ensayaron después de 15 min de lisis. El lisado (40 µl) de cada pocillo se transfirió a una placa negra de 96 pocillos (de fondo transparente) seguido por 200 µl de sustrato de ensayo de Luciferasa de Renilla 1X. Las placas se leyeron inmediatamente en un Packard TopCount NXT usando un programa de luminiscencia.

El porcentaje de inhibición se calculó usando la fórmula dada más adelante:

% de control = señal de luciferasa promedio en pocillos experimentales (compuesto +) señal de luciferasa promedio en pocillos de control con DMSO (compuesto -)

Los valores se graficaron y analizaron XLFit para obtener el valor de CE50.

Ejemplos Biológicos

5 Los compuestos representativos de la invención se ensayaron en el ensayo celular de replicón de VHC y/o en varios de los ensayos de especificidad descritos. Por ejemplo, se observó que el Compuesto 8 tenía una CI50 de 51 nM frente a la cepa BMS de NS3/4A en el ensayo enzimático. Se obtuvieron valores de potencia similares con las cepas publicadas H77C (CI50 de 11 nM) y J4L6S (CI50 de 9,5 nM). El valor de CE50 en el ensayo de replicón fue 284 nM.

En los ensayos de especificidad, se observó que el mismo compuesto tenía la siguiente actividad: HS > 100 µM;

10 PPE >100 µM; Quimotripsina > 100 µM; Catepsina B > 100 µM. Estos resultados indican que esta familia de compuestos es altamente específica para la proteasa NS3 y muchos de estos miembros inhiben la replicación del replicón de VHC.

Los compuestos de la presente invención se ensayaron usando los ensayos descritos anteriormente y se observó que tenían actividades en los siguientes intervalos:

15 Intervalos de Actividad de CI50: A es > 10 micromolar (µM); B es 1-10 µM; C es 0,1-1 µM, D es <0,1 µM

Intervalos de Actividad de EC50: A es > 10 micromolar (µM); B es 1-10 µM; C es 0,1-1 µM, D es <0,1 µM

Las estructuras de los compuestos usados en estos ensayos se pueden encontrar a partir del número de compuesto de Patente mostrado en la Tabla de Actividad más adelante.

De acuerdo con la presente invención, los compuestos preferidos tienen una actividad biológica (CE50) de 10 µMo 20 menos, más preferentemente 1 µM o menos y lo más preferente es que sea 0,1 µM o menos.

Tabla de actividad

Número de Compuesto: Intervalo de CI50 Intervalo de CE50

1: C B

2: C B

3: D B

4: C A

5: C B

6: D B

7: C B

8: D C

9: D C

10: C A

11: C B

12: B A

13: C A

14: C B

15: D B

16: C B

17: C B

18: C A

19: D D

(cont.) (cont.) (cont.) 5

Tabla de actividad

Número de Compuesto: Intervalo de CI50 Intervalo de CE50

20: D B

21: D C

22: B

23: D C

24: C A

25: D B

26: D B

27: D B

28: C B

29: D C

30: D D

31: D C

32: D D

33: C C

34: C B

35: D A

36: D C

37: D B

38: D C

39: D C

40: D B

41: D B

42: D B

43: C A

44: D B

45: D C

46: C B

47: C A

48: D C

49: C B

50: D B

51: C B

52: C A

53: D B

54: C B

55: D C

Tabla de actividad

Número de Compuesto: Intervalo de CI50 Intervalo de CE50

56: D C

57: C B

58: B

59: C B

60: D C

61: B

62: B

63: C B

64: D C

65: D C

66: D B

67: D C

68: B

69: C A

70: C A

71: D C

72: D B

73: D A

74: D C

75: C A

76: D C

77a: C B

77b: C A

78: C A

79: D C

80: D D

81: D D

82: D C

83: D D

84: D C

85: D C

86: D C

87: D D

88: D A

89: D C

90: D D

Tabla de actividad

Número de Compuesto: Intervalo de CI50 Intervalo de CE50

91: D C

92: D D

93: D C

94: D D

95: D C

96: D D

97: D D

98: D D

99: D D

100: D D

101: D B

102: A

103: A

104: B

105: A

106: A

107: A

108: A

109: A

110: D C

111: D C

10

15

20

25

30

35

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de Fórmula I:

imagen1

y enantiómeros, diastereómeros y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la que:

(a) R1 es: H, alquilo C1-6, alquenilo C2-1 o arilo C6-10, pudiendo estar todos sustituidos con halo, ciano, nitro, alcoxi C1-6, amido, amino o fenilo;

R2 es:

(i)

alquilo C1-6; alquilo C1-6 sustituido con un carboxi(alquilo C1-6); cicloalquilo C3-7; cicloalquilo C3-6 (arilo C610); alquenilo C2-1; alquilo C1-3 (arilo C6-10); pudiendo estar todos sustituidos de una a tres veces con halo, alquilo C1-3 o alcoxi C1-3; o R2 es heterociclo C5-9, que – puede estar sustituido de una a tres veces con halo, alquilo C1-4, carboxi (alquilo C1-6) o fenilo; o

(ii)

arilo C6-10, que puede estar sustituido de una a tres veces con los que se indican a continuación: halo; el propio alquilo C1-6 que puede estar sustituido con uno a tres halo; alcoxi C1-6; nitro; tio (alquilo C1-6); fenilo; alcanoílo C1-6; benzoílo; benzoil oxima; carboxi; carboxi (alquilo C1-6); (alquil C1-6) carboxi; fenoxi, (alquil C16) carboxi (alquilo C1-6); o arilo C6-10 que puede estar sustituido con un heterociclo C5-9, incluyendo dicho heterociclo de uno a tres átomos de nitrógeno, oxígeno o azufre, pudiendo estar dicho heterociclo sustituido en sí mismo con alquilo C1-3, alcoxi C1-3, -CF3 o (alquil C1-3) carboxi; o

(b)

R1 y R2 pueden unirse para formar un heterociclo de 5 ó 6 miembros; o unirse para formar un heterociclo de 5 ó 6 miembros condensados con uno o dos grupos arilo C6;

(c)

A es alcoxi C1-6, -N(H)SOmR5

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en la que p es 1, 2 ó 3 y R8 es trialquilsilano; halo; cicloalquilo C3-7; cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C714; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenil C4-7 arilo C6-10. alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het;

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en la que R9 es cicloalquilo C3-7; cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het;

imagen1

en la que R10 es cicloalquilo C3-7; cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15, Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het;

imagen1

en la que cada R11 y R12 son independientemente cicloalquilo C3-7; cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C714; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het; -SO2R13, en la que R13 es cicloalquilo C3-7; cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C4-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het; o

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en la que R14 es cicloalquilo C3-7; cicloalquenilo C4-7; arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; Het; o alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6, hidroxi, halo, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, cicloalquilo C3-7, cicloalquenilo C4-7, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, ariloxi C6-10, alquilariloxi C7-14, alquilariléster C8-15 o Het;

(d)

R4 es alquilo C1-6, alquenilo C2-6 o cicloalquilo C3-7, cada uno opcionalmente sustituido de una a tres veces con halógeno; o R4 es H; o R4 junto con el carbono al que está unido forma un anillo de 3, 4 ó 5 miembros;

(e)

R5 es arilo C6-10; alquilarilo C7-14; ariloxi C6-10; alquilariloxi C7-14; alquilariléster C8-15; alquilo C1-8; cicloalquilo C3-7 o C4-10 (alquilcicloalquilo) sin sustituir; o Het sin sustituir o sustituido, siendo dichos sustituyentes de Het iguales o diferentes y seleccionándose entre uno a tres de halo, ciano; trifluorometilo, nitro, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, amido, alcanoilamino C1-6, amino, fenilo o feniltio, estando dicha porción de fenilo o fenilo de feniltio sin sustituir o sustituida con uno a tres sustituyentes, iguales o diferentes, seleccionados entre halo, ciano, nitro, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, amido o fenilo ;

(f)

m es 1ó 2;

(g)

n es 1ó 2;

(m)

R3 es alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con halo, ciano, amino, dialquilamino C1-6, arilo C6-10, alquilarilo C7-14, alcoxi C1-16, carboxi, hidroxi, ariloxi, alquilariloxi C7-14, alquiléster C2-6, alquilariléster C8-15; alquenilo C3-12, cicloalquilo C3-7 o alquilcicloalquilo C4-10, en los que el cicloalquilo o alquilcicloalquilo están opcionalmente sustituidos con hidroxi, alquilo C1-6, alquenilo C2-6 o alcoxi C1-6; o R3 junto con el átomo de carbono al que está unido forma un grupo cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido con alquenilo C2-6;

(n)

Y es H, fenilo sustituido con nitro, piridilo sustituido con nitro o alquilo C1-6 opcionalmente sustituido con ciano, OH o cicloalquilo C3-7; con la condición de que si R4 o R5 es H entonces Yes H;

(o)

B es H, alquilo C1-6, R6-(C=O)-, R6O(C=O)-, R6-N(R7)-C(=O)-, R6-NR7)-C(=S)-, R6SO2-o R6-N(R7)-SO2-;

(p)

R6 es (i) alquilo C1-10 opcionalmente sustituido con fenilo, carboxilo, alcanoílo C1-6, 1-3 halógeno, hidroxi, OC (O)alquilo C1-6, alcoxi C1-6, amino opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, amido o (alquilo inferior) amido;

(ii)

cicloalquilo C3-7, cicloalcoxi C3-7 o alquilcicloalquilo C4-10, cada uno opcionalmente sustituido con hidroxi, carboxilo, (alcoxi C1-6)carbonilo, amino opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, amido o (alquilo inferior) amido; (iii) arilo C6-10 o arilalquilo C7-16, cada uno opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, halógeno, nitro, hidroxi, amido, (alquilo inferior) amido o amino opcionalmente sustituido con alquilo C1-6; (iv) Het; (v) biciclo(1.1.1)pentano; o (vi) -C(O)Oalquilo C1-6, alquenilo C2-6 o alquinilo C2-6; y

(q)

R7 es H; alquilo C1-6 opcionalmente sustituido con 1-3 halógenos; o alcoxi C1-6 con la condición de que R6 sea alquilo C1-10;

o su sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos.
2.

El compuesto de la reivindicación 1, en el que R1 es H, alquilo C1-6, alquenilo C2-4 o fenilo.
3.

El compuesto de la reivindicación 1, en el que R2 es fenilo, opcionalmente sustituido con alquilo C1-3, uno a tres cloros o un a tres flúor; o R2 es fenilo, opcionalmente sustituido con fenilo, metoxi, fenoxi, alquiléster C2-4, alcanoílo C2-6, nitro, tio (alquilo C1-4) o carboxi.
4.

El compuesto de la reivindicación 1, en el que R2 es alquilo C1-6 o cicloalquilo C3-6, pudiendo estar todos opcionalmente sustituidos con un grupo fenilo.
5.

El compuesto de la reivindicación 1, en el que R2 es un grupo heterocíclico de seis miembros, opcionalmente sustituido con uno a tres cloro o uno a tres flúor, o sustituido con un (alquil C1-6) carboxi.
6.

El compuesto de la reivindicación 1, en el que R2 es alquenilo C2-4.
7.

El compuesto de la reivindicación 1, en el que R2 y R2 forman un anillo heterocíclico de cinco o seis miembros, que contiene opcionalmente oxígeno.
8.

El compuesto de la reivindicación 1, en el que R1 y R2 forman una estructura de anillo condensado que comprende un anillo de cinco y seis miembros.
9.

El compuesto de la reivindicación 1, en el que R4 es alquilo C1-6, alquenilo C2-6 o cicloalquilo C3-7.
10.

El compuesto de la reivindicación 1, en el que R3 es alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con arilo C6, alcoxi C1-6, carboxi, hidroxi, ariloxi, alquilariloxi C7-14, alquiléster C2-6, alquilariléster C8-15, alquenilo C3-12, cicloalquilo C3-7 o alquilcicloalquilo C4-10.

5 11. El compuesto de la reivindicación 10, en el que R3 es alquilo C1-8 opcionalmente sustituido con alcoxi C1-6; o cicloalquilo C3-7.
12.

El compuesto de la reivindicación 11, en el que R3 es t-butilo.
13.

El compuesto de la reivindicación 1, en el que Y es H.
14.

El compuesto de la reivindicación 1, en el que R6 es (i) alquilo C1-10 opcionalmente sustituido con fenilo,

10 carboxilo, alcanoílo C1-6; 1-3 halógeno, hidroxi, alcoxi C1-6; (ii) cicloalquilo C3-7, cicloalcoxi C3-7 o alquilcicloalquilo C410; o (iii) arilo C6-10 o arilalquilo C7-16, cada uno opcionalmente sustituido con alquilo C1-6 o halógeno.
15. El compuesto de la reivindicación 14, en el que R6 es (i) alquilo C1-10 opcionalmente sustituido con 1-3 halógeno

o alcoxi C1-6; o (ii) cicloalquilo C3-7 o alquilcicloalquilo C4-10.
16. El compuesto de la reivindicación 15, en el que R6 es t-butilo. 15 17. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R7 es H o alquilo C1-6 opcionalmente sustituido con 1-3 halógenos.
18.

El compuesto de la reivindicación 17 en el que R7 es H.
19.

Un compuesto que tiene la fórmula:

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o

o o

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o o

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20. Uso del compuesto de la reivindicación 1 o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para la

preparación de un medicamento para tratar una infección por VHC en un paciente o para inhibir la proteasa NS3 de 5 VHC.
21.

Una composición que comprende el compuesto de la reivindicación 1 o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
22.

La composición de la reivindicación 21 comprendiendo además un agente inmunomodulador adicional.
23.

La composición de la reivindicación 22 en la que el agente inmunomodulador adicional se selecciona entre el 10 grupo que consiste en interferones α-, β-y-δ.
24.

La composición de la reivindicación 21 comprendiendo además un agente antiviral.
25.

La composición de la reivindicación 24 en la que el agente antiviral se selecciona entre el grupo que consiste en ribavirina y amantadina.
26.

La composición de la reivindicación 21 comprendiendo además un inhibidor de proteasa de VHC diferente al 15 compuesto de la reivindicación 1.
27.

La composición de la reivindicación 26 comprendiendo además un inhibidor de una diana en el ciclo de vida de VHC diferente a la proteasa NS3 de VHC.
28.

La composición de la reivindicación 27 en la que la otra diana se selecciona entre el grupo que consiste en helicasa, polimerasa, metaloproteasa y mezclas de las mismas.

20 29. Uso de la composición de la reivindicación 21 para la fabricación de un medicamento para tratar una infección viral de hepatitis C en un paciente.