MXPA01002253A - Metodo para tratar o prevenir infecciones virales y enfermedades asociadas. - Google Patents

Abstract

Se proporcionan metodos para el tratamiento y profilaxis de infecciones virales asociadas con tales infecciones.

Description

MÉTODOS PARA TRATAR O PREVENIR INFECCIONES VIRALES Y ENFERMEDADES ASOCIADAS DESCRIPCIÓN Antecedentes y campo de la invención La presente invención se relaciona a métodos para prevenir o tratar infecciones virales y enfermedades asociadas con estas, particularmente aquellas infecciones virales y enfermedades asociadas causadas por virus dentro de la familia de Flaviviridae. La familia de Flaviviridae consiste de tres géneros y varios virus que son actualmente se encuentran sin asignar a géneros específicos. El género del hepacivirus incluye los virus de hepatitis C (HCV) . Virus tales como el virus GB y agentes similares al virus-A GB, virus-B GB y virus GBV-C o virus de hepatitis G, aún cuando en la actualidad no se clasifican formalmente dentro del género de hepacivirus, se relacionan estrechamente con HCV y representan miembros sin asignar de la familia de Flaviviridae. También dentro de Flaviviridae se encuentra el género del pestivirus que incluye virus de diarrea viral en bovinos (BVDV) , virus de enfermedad marginal y virus de fiebre de cerdo clásica, y el género flavivirus, con virus tales como el dengue, fiebre amarilla, encefalitis japonesa y encefalitis de infección por garrapata (tic -borne) . Los virus dentro de esta familia provocan enfermedades importantes en el humano y en poblaciones animales. En general, HCV es la causa principal de la hepatitis humana. La Organización Mundial de la Salud estima que 170 millones de personas alrededor del mundo están infectados actualmente con el virus. La mayoría de las infecciones se tornan resistentes y aproximadamente 60% de los casos desarrollan enfermedad crónica del hígado. La infección crónica de HCV puede conducir al desarrollo de cirrosis, carcinoma hepatocelular e insuficiencia hepática. Se usan interferón e interferón en combinación con ribavirina en los Estados Unidos de América para hepatitis debido a HCV. Estos tratamientos están asociados con respuesta mejorada de enzimas de suero en algunos pacientes. El resto no son sensibles al tratamiento. Para quienes responden, se ha visto una mejora clínica sostenida en sólo un porcentaje pequeño de pacientes; la mayoría de los pacientes recaen cuando se interrumpe el tratamiento. Así, la efectividad de la- terapia para la hepatitis C crónica es variable y su velocidad de cura permanece baja. Es más, se asocia a menudo con efectos secundarios considerables .

Las infecciones de pestivirus de ganado doméstico provocan pérdidas económicas importantes en el ámbito mundial. Los pestivirus provocan una variedad de manifestaciones clínicas incluyen aborto, teratogénesis, problemas respiratorios, enfermedad crónica de cansancio, trastorno del sistema inmunológico y predisposición a infecciones secundarias virales y bacterianas. Ciertas cadenas de BVDV provocan una enfermedad fatal aguda. BVDV también puede establecer infecciones persistentes en fetos. Cuando nacen, éstos animales infectados persistentemente (Pl) siguen siendo virémicos a lo largo de su vida y sirven como depósitos continuos del virus. Los animales Pl sucumben a menudo a enfermedad fatal de mucosa. Los flavivirus son patógenos importantes del hombre y también prevalecen por todo el mundo. Existen por lo menos 38 flavivirus asociados con enfermedad humana, incluyendo virus de fiebre de dengue, virus de fiebre amarilla y virus de encefalitis japonesa. Los flavivirus provocan una variedad de enfermedades febriles agudas y enfermedades encefalíticas y hemorrágicas . Actualmente, no existe ningún fármaco antiviral, para prevenir o tratar pestivirus o infecciones de flavivirus .

Evidentemente se necesitan nuevas terapias y preventivos para infecciones y enfermedades causadas por virus de la familia de Flaviviridae. Puesto que en los métodos de estudio para el diagnóstico, control, prevención y tratamiento de infecciones y enfermedades asociadas causadas por virus, es a menudo deseable identificar funciones específicas del virus que puedan explotarse en tales métodos de estudio. En particular, las actividades enzimáticas de los polipéptidos cifrados por virus son bastante útiles. Éstos componentes especificados por virus son a menudo esenciales para la reproducción del virus y pueden ser blancos convenientes para estrategias de descubrimiento de drogas antivirales . Uno de tales blancos juega un papel central en el ciclo de vida de muchos virus de ARN es la proteína (RdRp) de polimerasa de ARN dependiente de ARN. Con respecto a los virus de flaviviridae, esta proteína es llamada NS5B en el caso de los hepacivirus y pestivirus, y NS5 en el caso de los flavivirus (llamados en conjunto NS5) . Las proteínas RdRp son componentes importantes del complejo de reproducción de virus, que permiten al virus reproducir su genoma de ARN y producir progenie de virus. La RdRp de los virus de ARN es un blanco atractivo para el desarrollo de drogas antivirales.

SUMARIO De acuerdo con la invención presente, se proporciona un método para tratar infección viral y enfermedades asociadas con tal infección en un organismo vivo que tenga tal infección, administrando al organismo una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto, o un precursor del mismo, que tiene la fórmula siguiente: en la que X representa una porción seleccionada del grupo que consiste de S, O, o NRa, siendo Ra hidrógeno o alquilo de 1 a 5 átomos de carbono; R? representa un radical seleccionado de aquellos que consisten de un grupo heterocíclico sustituido o insustituido, una porción de anillo bicíclico insustituida o sustituida, un grupo fenilo (C6H5) insustituido o sustituido, un grupo bifenilo (C6H5-C5H4) insustituido o sustituido, un grupo -fenilalquenilo (C6H5 (CH=CH) n) insustituido o sustituido, siendo n un entero de 1 a 5, tal como 2-feniletenilo, un grupo w-fenilalquinilo (C6H5(C=C)P) insustituido o sustituido, siendo p un entero de 1 a 5, o un grupo alquilo insustituido o sustituido de 1 a 5 átomos 5 de carbono que pueden ser de cadena recta o ramificada, seleccionándose el grupo heterocíclico de aquellos que consisten de furano, tiofeno, oxazol, oxadiazol, piridina, pirimidina, pirazol, triazol, piridazina, 1, 3-oxatiolano, álfc tiazol, tiadiazol, imidazol, pirrol, tetrazol y triazina, 10 seleccionándose la porción de anillo bicíclico de aquellos que consisten de benzofurano, isobenzofurano, benzotiofeno, isobenzotiofeno, benzoxazol, benzopirrol, isoindol, benzopirazol, quinolina, isoquinolina, 1, 2-benzodiazina, 1, 3-benzodiazina, 1, 2, 3-benzotriazol, benzotiazol, 15 benzimidazol, 1, 2, 3-benzotriazina y 1, 2, 4-benzotriazina, los sustituyentes de la porción de anillo bicíclico y del O grupo heterocíclico se seleccionan de aquellos que consisten de alquilo de 1 a 5 átomos de carbono, halógeno, alcoxi, hidroxi, nitro, o un grupo fenilo insustituido o 20 sustituido; R2 y R3 representan independientemente hidrógeno, un grupo fenilo insustituido o sustituido, o -(CH2)qCOOH, siendo q un entero de 1 a 5, y siendo hidrógeno por lo menos uno de R2 y R3; siendo los sustituyentes del grupo fenilo, los sustituyentes del grupo bifenilo, los sustituyentes del 5 grupo w-fenilalquenilo y los sustituyentes del grupo w- fenilalquinilo por lo menos uno seleccionado de aquellos que consisten de halógeno, nitro, carboxi, hidroxi, alquilo de 1 a 5 átomos de carbono, trifluorometilo, alcoxi, f|^ aciloci, ciano, amino, alquilamino, dialquilamino, 10 sulfonamido, carboxamido, carbalcoxi, tio, alquiltio, alquilsulfinilo y alquilsulfonilo; siendo los sustituyentes del grupo alquilo por lo menos uno seleccionado de aquellos que consisten de carboxi, hidroxi, alcoxi, amino, alquilamino, dialquilamino, tio o alquiltio, y los isómeros 15 y sales farmacéuticamente aceptables del compuesto. En los compuestos de la fórmula I, anterior, los sustituyentes del grupo heterocíclico, de la porción de anillo bifenilo, del grupo fenilo, del grupo bifenilo, etc. también pueden ser perhaloalquilo, dihaloalquilo, 20 monohaloalquilo, y el grupo heterocíclico y las porciones de anillo bicíclico también pueden sustituirse con los sustituyentes tio, alquiltio, alquilsulfinilo o alquilsulfonilo .

Los compuestos anteriores también pueden usarse para la prevención de infecciones virales y enfermedad asociada con tal infección en un huésped susceptible • administrando al huésped una cantidad profilácticamente 5 eficaz del compuesto descrito anterior o su precursor.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN álfc Pueden prepararse convenientemente los compuestos 10 usados en el método de la invención a partir de materias primas conocidas según el esquema sintético general ilustrado abajo, entre otros métodos. 15 Las preparaciones de compuestos antivirales específicos que pueden usarse en la práctica de esta invención se ejemplifican abajo. Llevando a cabo el esquema sintético general 20 anterior, el aldehido apropiado se hace reaccionar con ácido barbitúrico o ácido 2-tiobarbitúrico en una mezcla de dietilformamida (DMF) y ácido acético a 80°C o en DMF y ácido clorhídrico a temperatura ambiente. Alternativamente, la reacción puede llevarse a cabo usando 5 piperidina en etanol como el medio de reacción. La materia prima de aldehido, o ácidos de los cuales pueden convertirse, por ejemplo, mediante reducción química, se encuentran disponibles de varias fuentes comerciales (por álfc ejemplo, Sigma, St. Louis, MO) . 10 Otros compuestos útiles en la práctica de esta invención pueden prepararse de forma similar, sustituyendo la(s) materia (s) prima (s) apropiada (s) en el esquema de la reacción anterior. Los estudios in vi tro han demostrado la utilidad 15 de los compuestos descritos aquí como agentes antivirales. La actividad antiviral se midió mediante la actividad inhibitoria de los compuestos contra RdRp viral en un ensayo enzimológico para la síntesis de ARN. Todos los isómeros posibles de la fórmula I, 20 anterior, están dentro del alcance de la presente invención. Ejemplos representativos de tales isómeros incluyen, sin limitación, isómeros cis y trans.

El término "alquilo" como se usa aquí se refiere a radicales hidrocarburos alifáticos de uno a cinco átomos de carbono de longitud. De forma similar, el término "alquilo" o cualquier variación de él, usado en forma de 5 combinación para nombrar sustituyentes tales como alcoxi, alquilamino, o similares también se refiere a radicales hidrocarburos alifáticos de uno a cinco átomos de carbono de longitud. flft El término "carboxamido", como se usa aquí, se 10 refiere a un radical o sustituyente de la fórmula -C(=0)- NR"R'", en donde R" y R'" representan hidrógeno o alquilo.

El término "sulfonamido", como se usa aquí, se refiere a un radical o sustituyente de la fórmula -S02NR"R"' o -NR"-S02R'", en donde R" y R'" son como se definió 15 previamente. Particularmente útiles en la práctica de esta invención son los compuestos, que incluyen formas isoméricas, que tienen la fórmula: en la que Y y Z pueden ser hidrógeno, halógeno, nitro, carboxi, hidroxi, alcoxi, alquilo de 1 5 átomos de carbono, trifluorometilo, trifluorometoxi, aciloxi, ciano, sulfonamido, carboxamido, carbalcoxi, tio, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, amino, alquilamino o dialquilamino y W pueden ser -0-, -S- o -N(Rb)-, siendo Rb hidrógeno o alquilo de 1 a 5 átomos de carbono, X es como se definió previamente, y los isómeros y sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos. Los compuestos de las fórmulas I y II anteriores y sus sales farmacéuticamente aceptables muestran actividad antiviral. El método de la invención es particularmente eficaz contra virus de la familia de flaviviridae y es útil en el tratamiento y/o prevención de infecciones y enfermedades asociadas con estos virus en huéspedes vivos. Los compuestos o precursores (por ejemplo, prodrogas) descritos arriba de ellos y sus sales farmacéuticamente aceptables también son útiles en el tratamiento y prevención de infecciones virales y enfermedades en huéspedes vivos cuando se usan en combinación con agentes activos supletorios, incluyendo pero no limitándose a interferones, ribavirina, inhibidores de proteasa, inmunoglobulinas, inmunomoduladores, hepatoprotectantes, agentes antiinflamatorios, antibióticos, antivirales, agentes antiinfecciosos, y similares . • Los compuestos aquí descritos también son útiles 5 para prevenir o reducir infecciones virales en tejido celular, o cultivos de órganos y otras aplicaciones in vi tro. Por ejemplo, la inclusión de compuestos de la invención como un suplemento en medios de crecimiento de ?k cultivos en tejido o células o componentes de cultivo de 10 tejido evitará infecciones virales o contaminaciones de cultivos no previamente infectados con los virus. También pueden usarse los compuestos aquí descritos para eliminar virus de cultivos u otros materiales biológicos infectados o contaminados con virus (por ejemplo, sangre), después de 15 un período de tratamiento conveniente, bajo cualquier variedad de condiciones de tratamiento como se determinan para una persona con conocimientos medios en la materia. Algunos de los compuestos usados en el método de la invención tal como aquellos que contienen sustituyentes 20 básicos pueden formar sales útiles con varios ácidos inorgánicos y orgánicos, incluyendo, sin limitación, ácido clorhídrico o acético, y aquellos compuestos que contienen funcionalidades acidas pueden formar sales con bases inorgánicas y orgánicas, incluyendo, sin limitación, hidróxidos de metales alcalinos, hidróxidos de metales alcalinotérreos, piperidina, hidróxido de amonio, trietilamina o similares. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de las fórmulas I y II se preparan siguiendo procedimientos que son conocidos para las personas con conocimientos medios en la materia. Las composiciones farmacéuticas antivirales usadas en el método de la presente invención consisten de uno o más de los compuestos de fórmula I o II, anteriores, como el ingrediente activo, y, opcionalmente, por lo menos un agente activo supletorio, en combinación con un medio portador o agente auxiliar farmacéuticamente aceptable. La composición puede prepararse de varias formas para administración, incluyendo tabletas, cápsulas reforzadas (caplets) , pildoras o grageas, o puede llenarse en recipientes convenientes, tal como cápsulas, o, en el caso de suspensiones, llenarse en botellas. Como se usa aquí, "medio portador farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera y todos los solventes, diluyentes, u otros vehículos líquidos, dispersiones o auxiliares de suspensión, agentes de superficie activos, agentes isotónicos, agentes de espesado o emulsionado, preservativos, aglutinantes sólidos, lubricantes y similares, según sea adecuado para la forma de dosificación particular deseada. Remington's Pharmaceutical Sciences, Decimoquinta Edición, E.W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, PA, 1975) describe varios portadores usados en la formulación de composiciones farmacéuticas y técnicas conocidas para su preparación. Excepto en la medida en que cualquier medio portador convencional sea incompatible con los compuestos antivirales usados en la puesta en práctica de la invención, tal como en la producción de cualquier efecto biológico indeseable o la interactuación de alguna manera perjudicial con cualquier otro(s) componente (s) de la composición farmacéutica, su uso se contempla como estar dentro del alcance de esta invención. En las composiciones farmacéuticas de la invención, el agente activo puede estar presente en una cantidad de por lo menos 0.5% y generalmente no más de 90% en peso, con base en el peso total de la composición, incluyendo el medio portador y/o el (los) agente (s) activo (s) suplemental (es) , si hubiera. Preferentemente, la proporción de agente activo varía entre 2-50% en peso de la composición.

Pueden utilizarse medios portadores farmacéuticos sólidos o líquidos orgánicos o inorgánicos convenientes para administración entérica o parenteral para completar la composición. Gelatina, lactosa, almidón, estearato magnésico, talco, grasas vegetales y animales y aceites, goma, glicol de polialquileno, u otros portadores conocidos o excipientes para medicamentos pueden ser todos convenientes como medios portadores o excipientes. Pueden administrarse los compuestos descritos anteriormente usando cualquier cantidad y cualquier ruta de administración eficaz para atenuar la infectividad del virus. Así, como se utiliza aquí la expresión "cantidad eficaz para atenuar infectividad del virus", se refiere a una cantidad no tóxica pero suficiente del agente antiviral para proporcionar el tratamiento deseado de la infección viral. La cantidad exacta requerida variará de sujeto a sujeto, dependiendo de la especie, edad, y condición general del paciente individual, la severidad de la infección, el agente antiviral particular y su modo de administración, y aspectos similares. Los compuestos antivirales se formulan preferentemente en forma de dosificación unitaria para facilidad de administración y uniformidad de dosificación.

"Forma de dosificación unitaria" como se utiliza aquí se refiere a una unidad físicamente discreta de un agente antiviral apropiado para el paciente a ser tratado. Cada dosificación debe contener la cantidad de material activo calculado para producir el efecto terapéutico deseado tal como, o en asociación con el medio portador farmacéutico seleccionado. Típicamente, los compuestos antivirales se administrarán en unidades de dosificación con de aproximadamente 0.1 mg hasta aproximadamente 500 mg del agente antiviral por peso de la composición, siendo preferida una escala de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 100 mg. Pueden administrarse los compuestos antivirales descritos aquí como tales, o en forma de un precursor a partir del cual puede derivarse el agente activo, tal como una prodroga. Una prodoga es un derivado de un compuesto aquí descrito, cuya acción farmacológica resulta de la conversión por procedimientos químicos o metabólicos in vivo al compuesto activo. Las prodogas incluyen, sin limitación, esteres de los compuestos de las fórmulas I o II, anteriores, teniendo funcionalidades carboxilo o hidroxilo. Tales esteres pueden prepararse a partir de alcoholes simples o alifáticos funcionalizados o ácidos carboxílicos. Pueden prepararse tales prodogas según procedimientos conocidos en el campo de la química medicinal y la ciencia de las formulaciones farmacéuticas. Los compuestos antivirales pueden administrarse oralmente, rectalmente, parenteralmente, tal como por inyección intramuscular, inyección subcutánea, infusión intravenosa o similares, intracisternalmente, intravaginalmente, intraperitonealmente, localmente, tal como por polvos, ungüentos, gotas o similares, o por inhalación, tal como por aerosol o similares, dependiendo de la naturaleza y severidad de la infección que se trata. Dependiendo de la ruta de administración, pueden administrarse los compuestos de la invención a niveles de dosificación de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 120 mg/kg de peso corporal del sujeto por día y preferentemente de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 30 mg/kg de peso corporal del sujeto por día, una o más veces por día, para obtener el efecto terapéutico deseado. A manera de ejemplo, una dosis conveniente para administración oral estaría en el orden de 30 mg/kg de peso corporal por día, en tanto que una dosis típica para administración intravenosa estaría en el orden de 10 mg/kg de peso corporal por día.

Estos compuestos antivirales se administrarán típicamente de 1 a 4 veces por día para entregar la dosificación diaria arriba mencionada. Sin embargo, el régimen exacto para la administración de los compuestos y composiciones aquí descritos necesariamente será dependiente de las necesidades del huésped individual que se esta tratando, el tipo de tratamiento administrado y el juicio del especialista médico que atiende. Como se utiliza aquí, el término "huésped" incluye tanto humanos como animales. En vista del efecto inhibitorio en la síntesis de ARN viral producido por los compuestos usados en el método de la invención, se prevé que estos compuestos no sólo serán útiles para el tratamiento terapéutico de infección del virus, sino también para la profilaxis de la infección de virus. Las dosificaciones pueden ser esencialmente las mismas, independientemente del tratamiento o profilaxis de infección de virus . Se proporcionan los siguientes ejemplos para describir la invención a mayor detalle. Estos ejemplos, los cuales establecen un modo preferido actualmente contemplado para llevar a cabo la invención, se pretende ilustren y no limiten la invención.

Los ejemplos siguientes ilustran la síntesis química de los compuestos usados en el método de la invención. EJEMPLO 1 5- (2 ,4-Dihidroxifenilmetilen) -2-tioxodihidropirimidina-4 , 6-diona - A una solución de 0.144 g (1 p-mol) de 4,6-dihidroxi-2-mercaptopirimidina y 2 ml de ácido acético en 2 ml de DMF se agregó una solución de 2,4-dihidroxibenzaldehido (1 mmol) en 2 ml de DMF. La suspensión se calentó a 80°C bajo nitrógeno durante 16 horas. Después del enfriamiento hasta temperatura ambiente, la reacción se vació en agua y el precipitado se colectó por filtración. El producto crudo se lavó con agua, y el sólido se hirvió en metanol durante 1 minuto. La filtración proporcionó 2.6 mg de producto. EJEMPLO 2 5- (5- (2-Trifluorometilfenil) furan-2-ilmetilen) -2-tioxodi-hidropirimidina-4 , 6-diona- Una suspensión de 0.242 g (1 minol) de 5- (2-trifluorometilfenilo) furfural, 0.144 g (1 mmol) de 4, 6-dihidroxi-2-mercaptopirimidina, y una gota de piperidina en 6 ml de etanol se agitó con calentamiento a 80°C durante 4 horas. Al enfriarse, la suspensión anaranjada se vació en 50 ml de agua y aplicó ultrasonido durante 10 minutos. La filtración y secado del solvente anaranjado proporcionó 0.204 g del producto como un polvo anaranjado. EJEMPLO 3 5- (5-bromotiofen-2-ilmetilen) -2-tioxodihidropirimidina-4 , 6-diona - En un procedimiento idéntico al del ejemplo 1, 0.144 g (1 mmol) de 4, 6-dihidroxi-2-mercaptopirimidina, y 0.207 g (1 mmol) de 5-bromotiofenocarboxaldehído en una solución de 2 ml de ácido acético glacial y 4 ml de DMF se calentó a 80°C durante 12 horas. Al enfriarse hasta temperatura ambiente, la reacción se vació en agua y el precipitado se colectó por filtración. El producto crudo se lavó con agua, y el sólido se hirvió en metanol durante 1 minuto. La filtración proporcionó 92 mg de producto como un sólido anaranjado. EJEMPLO 4 5- (5- (5- [3,4-diclorofenil]furan-2-il-metileno)pirimidina-2,4, 6-triona a) A una solución de 6.03 gm (0.0273 moles) de dimetilacetal de 5-bromo-2-furancarboxaldehído en 75 mg de TF seco a -78°C bajo argón se agregaron 12 ml (1.1 equiv.) de litio de n-butilo 25 M. Después de 10 minutos, la solución amarilla se amortiguo con 8.88 g (1 equiv.) de cloruro de tributilestaño, y se permitió que se entibiara lentamente la reacción hasta temperatura ambiente. Después de la extracción de la solución con agua, secado de la capa orgánica sobre sulfato de sodio anhidro y eliminación del solvente, se obtuvieron 11.3 g de dimetilacetal de 5-tributilestaño-2-furancarboxaldehído como un aceite rojizo. b) A una solución de 2.38 g (10.5 mmoles) de 1-bromo-3, 4-diclorobenceno y 5.0 g (11.6 mmoles) del producto del paso a) , anterior, en 25 ml de tetrahidrofurano seco se agregaron 356 mg de di (trifenilfosfina) de cloruro de paladio (II) y la solución se calentó a reflujo bajo argón. La solución lentamente se tornó café oscuro y se dejó a temperatura de reflujo durante 12 horas. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la solución se diluyó con éter y se extrajo dos veces con agua. La capa acuosa se extrajo con éter y la capa orgánica combinada se secó y descoloro con carbón de leña. El solvente se eliminó y el residuo se disolvió en acetato etílico y la solución se pasó a través de una columna de gel de sílice. La solución se concentró hasta sequedad y el residuo se disolvió en una solución de 95% de hexano y 5% de acetato etílico y se pasó a través de una columna de HPLC de gel de sílice. Las fracciones se colectaron y aquellas fracciones, las cuales eran puras por tic, se combinaron y recristalizaron a partir de una mezcla de acetato/hexano etílico para dar 245 mg de carboxaldehído de 5- (3, 4-diclorofenil) furan-2-ilo. c) A una mezcla de 100 mg (.415 mmoles) del furancarboxaldehído preparado en el paso b) , anterior, y 56 mg (.436 mmoles) de ácido barbitúrico en 10 ml de etanol se agregaron 2 gotas de piperidina y la solución se calentó a reflujo. Se inicio la formación de un sólido anaranjado. La mezcla se mantuvo a reflujo durante 5 minutos y entonces permitió el enfriamiento hasta temperatura ambiente. La mezcla se vació en agua y el sólido se colectó, se lavó con agua y hexano y se secó. Después de secar, se obtuvieron 330 mg del compuesto de título. EJEMPLO 5 Inhibición de Reproducción de ARN Viral El descubrimiento de inhibidores de polimerasas virales y proteínas relacionadas generalmente requiere la evaluación de un gran número de compuestos químicos o mezclas de compuestos químicos. Así, es deseable un ensayo para actividad de polimerasa que sea capaz de filtrado de gran volumen, en otras palabras, un ensayo de alto rendimiento. Existe una variedad de metodologías de ensayos bien conocidas para una persona con conocimientos medios en la materia que permiten un filtrado eficaz de grandes cantidades de muestras. Por ejemplo, ver Colé, JL, Met Enzymology, 275: 310-328 (1996) . Cualquiera de uno de estos ensayos puede ser conveniente en el caso de una actividad de RdRp viral. Un procedimiento para medir la actividad de RdRp viral en el caso de virus de Flaviviridae utiliza una proteína recombinante purificada de NS5 en un ensayo RdRp in vi tro . Por ejemplo, Behrens et al., EMBO J., 15: 12-22 (1996) y Lohmann et al., J. Virol., 71: 8416-8428 (1997), describen la expresión de baculovirus, purificación y actividad enzimática de la proteína RdRp HCV NS5B. La expresión bacteriana, purificación y actividad enzimática de la proteína RdRp HCV NS5B se ha descrito en PCT/US96/15571 [WO 97/12033] y por Yuan et al. [Biochem Biophys Res Comm, 232:231-235 (1997)]. En un ejemplo adicional, Collett, PCT/US99/07404 que se posee comúnmente con la presente solicitud describe composiciones que comprenden secuencias funcionales HCV NS5B y su uso en la identificación de compuestos útiles en el tratamiento de infecciones de hepacivirus. Como con los ejemplos anteriores para el RdRp HCV, ha sido purificada la proteína NS5 del flavivirus del dengue expresado bacterianamente y ha mostrado que exhibe actividad de RdRp [Tan et al., Virology, 216: 317-325 (1996)], como tiene la proteína NS5B del pestivirus BVDV purificado de células infectadas por baculovirus recombinante [Zhong et al., J. Virol., 72 : 9365-9369 (1998)]. A manera de ejemplo, la actividad inhibitoria de compuestos antivirales candidatos puede determinarse usando proteínas de NS5 preparadas esencialmente de acuerdo con Collett, PCT/US99/07404, en ensayos de RdRp in vi tro. Se incubaron proteínas NS5 purificadas en mezclas de reacción RdRp patrón. Tales mezclas de reacción generalmente consisten de soluciones reguladoras, sales, cationes, agentes reductores y similares, así como trifosfatos de nucleósidos y un iniciador-patrón de ARN. Pueden requerirse variaciones en los componentes individuales de tales mezclas de reacción para ajustar las preferencias de reacción particulares de proteínas NS5 individuales. Se conocen bien tales variaciones por personas con conocimientos medios en la materia. Compuestos representativos que caen dentro de la fórmula I, anterior, como se muestran en los ejemplos 1-4 y tablas 1 y 2, se evaluaron para actividad antiviral usando este ensayo. La actividad inhibitoria para compuestos probados se expresó en valores de IC50. Los valores de IC50 representan la concentración del compuesto en el cual se inhibe 50% de la actividad de RdRp. Los resultados del ensayo para inhibición de la actividad de RdRp en por lo menos un virus de la familia de Flaviviridae para los compuestos probados revelaron valores de IC50 que van de 0.1 µM a aproximadamente 30 µM. Las bajas concentraciones de compuestos de prueba requeridos para lograr 50% de inhibición de actividad de HCV de RdRp indican que el método de la invención es eficaz en la inhibición de la síntesis de ARN por las enzimas de RdRp virales involucradas en la reproducción de Flaviviridae . Aunque la presente invención se ha descrito y ejemplificado en función de ciertas modalidades preferidas, otras modalidades serán evidentes para aquellas personas con conocimientos medios en la materia. Por consiguiente, la invención no se limita a las modalidades particulares descritas y ejemplificadas, pero es capaz de modificarse o variarse sin apartarse de la esencia de la invención, cuyo alcance se traza por las reivindicaciones anexas. TABLA 1 R n-propilo Tabla 2 Ri R2 X Y 4-Br-Ph* H S o 4-N02-Ph- H S 0 2-CL-5-N02-PhH 0 0 4-C02H-Ph H S O 2-CF3-Ph- H S O Na03S- H S O Br- H S s 2-Cl-Ph H s O I-CH3-5-CF3- H s s pirazol-3-ilo 3-Cl-Ph- H s O N02- H s s CH3- CH3- s O C2Hs~ H s o o * Ph= fenilo ( C6H5- )

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Un método para tratar infección causada por al menos un virus de la familia de Flaviviridae y enfermedad asociada con la infección en un huésped viviente que tiene la infección, el método comprende administrar al huésped una cantidad eficaz terapéuticamente de un compuesto, o un precursor del compuesto, que tiene la fórmula: en la cual X representa una porción seleccionada del grupo que consiste de S, 0, o N(Ra), siendo Ra hidrógeno o alquilo de 1 5 átomos de carbono; Ri representa un radical seleccionado de aquellos que consisten de un grupo heterocíclico sustituido o insustituido, una porción de anillo bicíclico insustituida o sustituida, un grupo fenilo (CßHs) insustituido o sustituido, un grupo bifenilo insustituido o sustituido (C6H5-C5H4), un grupo w-fenilalquenilo (CH6H5 (CH=CH) n) insustituido o sustituido, siendo n un entero de 1 a 5, un grupo w-fenilalquinilo insustituido o sustituido (C6H5(C=C)p, siendo p un entero de 1 a 5, o un grupo alquilo insustituido o sustituido de 1-5 átomos de carbono que puede ser de cadena recta o ramificada, seleccionándose el grupo heterocíclico de aquellos que consisten de furano, tiofeno, oxazol, oxadiazol, piridina, pirimidina, pirazol, triazol, piridazina, 1,3 oxatiolano, tiazol, tiadiazol, imidazol, pirrol, tetrazol y triazina, siendo la porción de anillo bicíclico seleccionada de aquellas que consisten de benzofurano, isobenzofurano, benzotiofeno, isobenzotiofeno, benzoxazol, benzopirrol, isoindol, benzopirazol, quinolina, isoquinolina, 1,2 benzodiazina, 1,3 benzodiazina, 1,2,3 benzotriazol, benzotiazol, benzimidazol, 1,2,3 benzotriazina y 1,2,4 benzotriazina, los sustituyentes grupo heterocíclico y porción de anillo bicíclica se seleccionan de aquellos que consisten en alquilo de 1 a 5 átomos de carbono, halógeno, alcoxi, hidroxi, nitros, perhaloaíquilo, dihaloalquilo, monohaloalquilo, tio, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo o un grupo fenilo insustituido o sustituido; R2 y R3 independientemente representan hidrógeno, un grupo fenilo insustituido o sustituido, o (CH2)qC00H, siendo q un entero de 1 a 5, y siendo por lo menos uno de R2 y R3 hidrógeno; siendo los sustituyentes del grupo fenilo, los sustituyentes del grupo bifenilo, los sustituyentes del grupo w-fenilalquenilo y los sustituyentes del grupo w-fenilalquinilo por lo menos uno seleccionado de aquellos que consisten en halógeno, nitro, carboxi, hidroxi, alquilo de 1 a 5 átomos de carbono, perhaloalquilo, dihaloalquilo, monohaloalquilo, alcoxi, aciloci, ciano, amino, alquilamino, dialquilamino, sulfonamido, carboxamido, carbalcoxi, tio, alquiltio, alquilsulfinil y alquilsulfonil; siendo los sustituyentes del grupo alquilo por lo menos uno seleccionado de aquellos que consisten en carboxi, hidroxi, alcoxi, amino, alquilamino, dialquilamino, tio o alquiltio, y los isómeros y sales farmacéuticamente aceptables del compuesto.

2. Un método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto se administra en forma de dosificación unitaria que contiene aproximadamente 0.001 a aproximadamente 120 mg del compuesto por kilogramo de peso corporal del paciente por día.

3. Un método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la dosificación unitaria incluye un medio de portador farmacéuticamente aceptable.

4. Un método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque se administra un precursor del compuesto en forma de una prodoga.

5. Un método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque se administra el compuesto o un precursor del compuesto en combinación con por lo menos un agente activo suplemental seleccionado del grupo que consiste de interferones, ribavirina, inhibidores de proteasa, inmunoglobulinas, inmunomoduladores, hepatoprotectantes, agentes antiinflamatorios, antibióticos, antivirales o agentes antiinfecciosos.

6. Un método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el compuesto o precursor del compuesto y el por lo menos un agente activo suplemental se administran simultáneamente.

7. Un método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la ruta de administración se selecciona del grupo que consiste de oralmente, rectalmente, parenteralmente, intracisternalmely, intravaginalmente, intraperitonealmente, localmente o por inhalación.

8. Un método para prevenir la infección causada por al menos un virus de la familia de Flaviviridae y la enfermedad asociada con la infección en un huésped viviente susceptible a la infección, el método comprende administrar al huésped una cantidad eficaz profilácticamente de un compuesto, o un precursor del compuesto, que tiene la fórmula : en la cual X representa una porción seleccionada del grupo que consiste de S, 0, o N(Ra), siendo Ra hidrógeno o alquilo de 1 a 5 átomos de carbono; Ri representa un radical seleccionado de aquellos que consisten de un grupo heterocíclico sustituido o insustituido, una porción de anillo bicíclico insustituida o sustituida, un grupo fenilo (C6H5) insustituido o sustituido, un grupo bisfenilo (C6H5-C5H4) insustituido o sustituido, un grupo w-fenilalquenilo (C6H5 (CH=CH) n) insustituido o sustituido, siendo n un entero de 1 a 5, un grupo w-fenilalquinilo (C6H5(C=C)P) insustituido o sustituido, siendo p un entero de 1 a 5, o un grupo alquilo de 1 a 5 átomos de carbono insustituido o sustituido que pueden ser de cadena recta o ramificada, siendo seleccionado el grupo heterocíclico de aquellos que consisten de furano, tiofeno, oxazol, oxadiazol, piridina, pirimidina, pirazol, triazol, piridazina, 1,3 oxatiolano, tiazol, tiadiazol, imidazol, pirrol, tetrazol y triazina, seleccionándose la porción de anillo bicíclica de aquellos que consisten de benzofurano, isobenzofurano, benzotiofeno, isobenzotiofeno, benzoxazol, benzopirrol, isoindol, benzopirazol, quinolina, isoquinolina, 1, 2-benzodiazina, 1, 3-benzodiazina, 1, 2, 3-benzotriazol, benzotiazol, benzimidazol, 1, 2, 3-benzotriazina y 1, 2, 4-benzotriazina, seleccionándose los sustituyentes del grupo heterocíclico y la porción de anillo bicíclica de aquellos que consisten en alquilo de 1 a 5 átomos de carbono, halógeno, alcoxi, hidroxi, nitros, perhaloalquilo, dihaloalquilo, monohaloalquilo, tio, alquiltio, alquilsulfinil, alquilsulfonilo o un grupo fenilo insustituido o sustituido; R2 y R3 independientemente representan hidrógeno, grupo fenilo -(CH2)nC00H insustituido o sustituido, siendo n un entero de 1 a 5, y siendo hidrógeno por lo menos uno de R2 y R3; siendo los sustituyentes del grupo fenilo, los sustituyentes del grupo bifenilo, los sustituyentes del grupo w-fenilalquenilo y los sustituyentes del grupo w-fenilalquinilo por lo menos uno seleccionado de aquellos que consisten en halógeno, nitro, carboxi, hidroxi, alquilo de 1 a 5 átomos de carbono, perhaloalquilo, dihaloalquilo, monohaloalquilo, alcoxi, aciloci, ciano, amino, alquilamino, dialquilamino, sulfonamido, carboxamido, carbalcoxi, tio, alquiltio, alquilsulfinil y alquilsulfonilo; siendo los sustituyentes del grupo alquilo por lo menos uno seleccionado de aquellos que consisten en carboxi, hidroxi, alcoxi, amino, alquilamino, dialquilamino, tio o alquiltio, e isómeros y sales farmacéuticamente aceptables del compuesto.

9. Un método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el compuesto se administra en forma de dosificación unitaria que contiene aproximadamente 0.001 a aproximadamente 120 mg del compuesto por kilogramo de peso corporal del paciente por día.

10. Un método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la dosificación unitaria incluye un medio portador farmacéuticamente aceptable.

11. Un método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque se administra un precursor del compuesto en forma de una prodoga.

12. Un método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el compuesto o un precursor del compuesto se administran en combinación con por lo menos un agente activo suplemental seleccionado del grupo que consiste de interferones, ribavirina, inhibidores de proteasa, inmunoglobulinas, inmunomoduladores, hepatoprotectantes, agentes antiinflamatorios, antibióticos, antivirales o agentes antiinfecciosos.

13. Un método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el compuesto o precursor del compuesto y el por lo menos un agente activo suplemental se administran simultáneamente.

14. Un método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la ruta de administración se selecciona del grupo que consiste de, rectalmente, parenteralmente, intracisternamente, intravaginalmente, intraperitonealmente, localmente o por inhalación.