MXPA01003030A - Metodo para tratar o prevenir infecciones virales y enfermedades asociadas - Google Patents

Abstract

Se proporcionan métodos para el tratamiento y profilaxis de infecciones virales y enfermedades asociadas con tales infecciones.

Description

MÉTODO PARA TRATAR O PREVENIR INFECCIONES VIRALES Y ENFERMEDADES ASOCIADAS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona métodos para prevenir y tratar infecciones virales y las enfermedades asociadas con éstas, particularmente aquellas infecciones virales y enfermedades asociadas causadas por virus dentro de la familia Flaviviridae .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La familia Flaviviridae consiste de tres géneros y varios virus que concurrentemente no están asignados a géneros específicos. El género hepacivirus incluye al virus de la hepatitis C (HCV. ) Virus tales como el virus A GB y agentes similares al virus A GB, un virus D GB y GBV-C o virus de la hepatitis G, aunque actualmente no están clasificados formalmente dentro del género hepacivirus, están estrechamente relacionados con el HCV y representan miembros no asignados de la familia Flaviviridae . También dentro de la familia Flaviviridae se encuentra el género pestivirus, el cual incluye el virus de la diarrea viral bovina (BVDV) , virus de enfermedades limitantes y el virus clásico de la fiebre porcina, y el género flavivirus, con virus tales como los virus del dengue, fiebre amarilla, encefalitis japonesa y encefalitis portada por la garrapata. Los virus dentro de esta familiar causan enfermedades significativas en poblaciones humanas y animales. El HCV es una causa principal de hepatitis humana globalmente. La Organización Mundial de la Salud estima que 170 millones de personas en todo el mundo están actualmente infectadas con el virus. La mayoría de las infecciones se vuelven persistentes y aproximadamente el 60% de los casos desarrollan enfermedad hepática crónica. La infección por HCV crónica puede conducir al desarrollo de cirrosis, carcinoma hepatocelular e insuficiencia hepática . El interferon y el interferon en combinación con la ribavirina son utilizados en Estados Unidos para la hepatitis debido al HCV. Esos tratamientos están asociados con respuesta de las enzimas del suero mejorada en algunos pacientes. El resto no responden al tratamiento. Para los que responden, se observa una mejora clínica sustancial en solo un pequeño porcentaje de los pacientes; la mayoría de los pacientes recaen después de cesar el tratamiento. De este modo, la efectividad de la terapia para la hepatitis C crónica es variable y su tasa de curación sigue siendo baja. La terapia de curación con frecuencia está asociada con efectos laterales considerables.

Las infecciones por pestivirus de ganado domesticado causan pérdidas económicas significativas en todo el mundo. Los pestivirus causan una gama de manifestaciones clínicas incluyendo el aborto, teratogénesis, problemas respiratorios, debilitamiento, disfunción del sistema inmune y predisposición a infecciones virales o bacterianas secundarias. Ciertas cepas de BVDV causan una enfermedad fatal aguda. El BVDV también puede establecer infecciones persistentes en fetos. Cuando nacen, esos animales infectados de manera persistente (Pl) siguen siendo virémicos durante su vida y sirven como reservorios de virus continuos. Los animales Pl con frecuencia sucumben a enfermedades de las mucosas fatales. Los flavivirus son patógenos importantes del hombre y también prevalecen en todo el mundo. Existen al menos 38 flavivirus asociados con enfermedades humanas, incluyendo los virus de la fiebre del dengue, el virus de la fiebre amarilla y la encefalitis japonesa. Los flavivirus causan una gama de enfermedades febriles agudas y enfermedades encefalíticas y hemorrágicas . Actualmente, no existen fármacos antivirales para prevenir o tratar las infecciones por pestivirus o flavivirus .

Claramente son necesarias nuevas terapias y preventivos para infecciones y enfermedades causadas por virus de la familia Flaviviridae Considerando los métodos de diagnóstico, control o prevención, el tratamiento de las infecciones y enfermedades asociadas causadas por virus, con frecuencia es deseable identificar las funciones específicas del virus que puedan ser explotadas en tales métodos. En particular, las actividades enzimáticas de los polipéptidos codificados por virus son muy útiles. Esos componentes especificados de los virus con frecuencia son esenciales para la reproducción del virus y pueden ser blancos adecuados para estrategias de descubrimiento de fármacos antivirales. Uno de tales blancos u objetivos que juega un papel central en el ciclo de vida de muchos ARN virus es la proteína ARN polimerasa dependiente del ARN codificado por el virus (RdRp.) Con respecto a los virus de la familia Flaviviridae, esta proteína es la llamada NS5B en el caso de los hepacivirus y pestivirus, y NS5 en el caso de los flavivirus (referida de manera colectiva como NS5.) Las proteínas RdRp son un componente clave del complejo de reproducción de los virus, que permiten que el virus reproduzca su genoma de ARN y produzca una progenie viral. La RdRp de los ARN virus es un blanco atractivo para el desarrollo de fármacos antivirales.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN De acuerdo con la presente invención, se proporciona un método para tratar infecciones virales y enfermedades asociadas con tales infecciones en un huésped viviente que tiene tal infección, administrando a tal huésped una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto, o un precursor del mismo, que tiene la siguiente fórmula: donde W representa 0, S, o N(Ra), siendo Ra hidrógeno o un grupo alquilo de 1-5 átomos de carbono; X, Y y Z pueden ser el mismo o diferentes y cada uno representa hidrógeno o un sustituyente seleccionado del grupo que consiste de halógeno, nitro, carboxi, hidroxi, alquilo de 1-5 átomos de carbono, trifluorometilo, alcoxi, aciloxi, ciano, amino, alquilamino, dialquilamino, sulfonamido, carboxamido, carbalcoxi, tio, alquiltio, alquilsulfinilo y alquilsulfonilo; Ri representa un radical seleccionado de aquéllos que consisten de un grupo heterocíclico no sustituido o sustituido, una porción anular bicíclica no sustituida o sustituida, un grupo fenilo (C6H5) no sustituido o sustituido, un grupo bifenilo (C6H5-C5H4) , no sustituido o sustituido, un grupo ?-fenilalquenilo (C6H5 (CH=CH) n) no sustituido o sustituido, siendo n un número entero de 1 a 5, tal como feniletenilo, un grupo ?-fenilalquinilo (C6H5 (CH=CH) p) no sustituido o sustituido, siendo p un número entero de 1 a 5, o un grupo alquilo no sustituido o sustituido de 1-5 átomos de carbono el cual puede ser de cadena lineal o ramificada, siendo el grupo heterocíclico seleccionado de aquellos que consisten de furano, tiofeno, oxazol, oxadiazol, piridina, pirimidina, pirazol, triazol, piridacina, 1, 3-oxatiolano, tiazol, tiadiazol, imidazol, pirrol, tetrazol y triacina, siendo la porción anular bicíclica seleccionada de aquéllos que consisten de benzofurano, isobenzofurano, benzotiofeno, isobenzotiofeno, benzoxazol, benzopirrol (indol) , isoindol, benzopirazol, quinolina, isoquinolina, 1, 2-benzodiacina, 1,3-benzodiacina, 1, 2, 3-benzotriazol, benzotiazol, bencimidazol, 1, 2, 3-benzotriacina y 1, 2, 4-benzotriacina, siendo el grupo heterocíclico y la porción anular bicíclicas seleccionadas de aquéllas que consisten de alquilo de 1-5 átomos de carbono, halógeno, alcoxi, hidroxi, nitro o un grupo fenilo no sustituido o sustituido; siendo los sustituyentes del grupo fenilo, los sustituyentes del grupo bifenilo, los sustituyentes del grupo ?-fenilalquenilo y los sustituyentes del grupo ?-fenilalquinilo al menos uno seleccionado de aquéllos que consisten de halógeno, nitro, carboxi, hidroxi, alquilo de 1-5 átomos de carbono, trifluorometilo, alcoxi, aciloxi, ciano, amino, alquilamino, dialquilamino, sulfonamido, carboxamido, carbalcoxi, tio, alquiltio, alquilsulfinilo y alquilsulfonilo; siendo los sustituyentes del grupo alquilo al menos uno seleccionado de aquéllos que consisten de carboxi, hidroxi, amino, alquilamino, dialquilamino, tio o alquiltio, y los isómeros y sales farmacéuticamente aceptables de tal compuesto. En los compuestos de fórmula I, anteriores, los sustituyentes del grupo heterocíclico, la porción anular heterocíclica, el grupo fenilo, el grupo bifenilo, etc., también pueden ser perhaloalquilo, dihaloalquilo, monohaloalquilo y el grupo heterocíclico y las porciones anulares bicíclicas también pueden estar sustituidas con sustituyentes carboxi, carbalcoxi, sulfo, sulfonato (es decir, esteres de ácido sulfónico) tio, alquiltio y alquilsulfinilo o alquilsulfonilo. Los compuestos anteriores también pueden ser utilizados para la prevención de infecciones virales y enfermedades asociadas con tales infecciones en un huésped susceptible administrando al huésped una cantidad profilácticamente efectiva del compuesto descrito anteriormente o precursor del mismo.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los compuestos utilizados en el método de la invención pueden ser preparados de manera conveniente a partir de materiales iniciales conocidos de acuerdo al esquema sintético general ilustrado a continuación.

Pueden utilizarse preparaciones de compuestos anti-hepacivirus específicos los cuales en la práctica de esta invención se ejemplifican más adelante. Para llevar a cabo el esquema sintético general anterior, el ácido 2-mercaptobenzoico sustituido de manera apropiada, o un análogo de ácido O-tioico o imídico, en los cuales X, Y y Z son como se definieron anteriormente (preparados por los métodos conocidos en la literatura) , se hacen reaccionar con acetoacetato de etilo con una cantidad catalítica de ácido sulfúrico concentrado a 45-50°C para dar la benzotiofenona sustituida. Véase, por ejemplo, Craik y Mcbeth, J. Chem. Soc., 127: 1638 (1925); Smiles y McClelland, J. Chem. Soc, 119: 1813 (1921); Hutchison y Smiles, J. Chem. Soc., 101 : 573 (1912.) De manera alternativa, el análogo del tionobenzotiofeno puede ser preparado por la reacción del benzotiofeno apropiado con yodo en presencia de óxido mercúrido, utilizando benceno como medio de reacción, para producir 3-yodobenzotiofeno, el cual se hace reaccionar además con magnesio y azufre en presencia de yodo. Véase, por ejemplo, Ghaisas y Tilak, J. Sci. Ind. Res., 16B: 345-46 (1957.) El iminobenzotiofeno puede ser preparado a partir del mismo 3-yodobenzotiofeno por tratamiento con amoniaco acuoso. Los dos últimos intermediarios mencionados pueden existir en formas tautoméricas. La reacción de esos intermediarios con cualquiera de una variedad de aldehidos, en los cuales Ri es como se definió anteriormente, en presencia de piridina como base, proporciona el producto deseado. Otros compuestos útiles en la práctica de esta invención pueden ser preparados de manera similar, sustituyendo los materiales iniciales apropiados en el esquema de reacción anterior.

Estudios in vi tro han demostrado la utilidad de los compuestos descritos aquí como agentes antivirales. La actividad antiviral se midió por medio de la actividad inhibidora de los compuestos contra la RdRp viral en un ensayo enzimológico para la síntesis de ARN. Todos los isómeros posibles de fórmulas I, anteriores, están dentro del alcance de la presente invención. Los ejemplos representativos de tales isómeros incluyen, sin limitación, los isómeros cis y trans. El término "alquilo" como se utiliza aquí se refiere a radicales de hidrocarburo alifáticos de 1 a 5 átomos de carbono de longitud. De manera similar, el término "alquilo", o cualquier variación del mismo, utilizado en forma combinada para nombrar sustituyentes, tales como alcoxi, alquilamino, o similares también se refiere a radicales de hidrocarburo alifático de 1 a 5 átomos de carbono de longitud. El término "carboxamido", como se utiliza aquí, se refiere a un radical o sustituyente de fórmula -C (=0) -NR"R"' , donde R" y R"' representan hidrógeno o alquilo. El término "sulfonamino", como se utiliza aquí, se refiere a un radical o sustituyente de fórmula -S02-NR"R"' o NR"-S02R'" , donde R" y R"' son como se definieron anteriormente .

Particularmente útiles en la práctica de esta invención son los compuestos, incluyendo las formas isoméricas, que tienen la fórmula: en la cual W, X, Y y Z son como se definieron anteriormente, W representa -0-, -S-, o N(Rb), siendo Rb hidrógeno o alquilo de 1-5 átomos de carbono y R2 representa H o fenilo no sustituido o sustituido, siendo los sustituyentes del fenilo al menos uno seleccionado de aquellos que consisten de halógeno, nitro, carboxi, hidroxi, alquilo de 1-5 átomos de carbono, trifluorometilo, trifluorometoxi, aciloxi, alcoxi, ciano, amino, alquilamino, dialquilamino, sulfonamido, carbalcoxi, tio, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo o carboxamido y los isómeros y sales farmacéuticamente aceptables de tales compuestos. R2 en la fórmula II también puede ser un sustituyente sulfo. Los compuestos de las fórmulas I y II anteriores y sus sales farmacéuticamente aceptables se exhiben actividad antiviral. El método de la invención es particularmente efectivo contra virus de la familia Flaviviridae y son útiles para el tratamiento y/o prevención de infecciones y enfermedades asociadas con esos virus en huéspedes vivientes . Los compuestos de la invención o precursores (por ejemplo, profármacos) de los mismos y sus isómeros y sales farmacéuticamente aceptables también son útiles para tratar y prevenir infecciones y enfermedades virales en huéspedes vivientes cuando se utilizan en combinación con agentes activos suplementarios, incluyendo, pero sin limitarse a interferones, ribavirina, inhibidores de la proteasa, inmunoglobulinas, inmunomoduladores, hepatoprotectores, agentes antiinflamatorios, antibióticos, antivirales, agentes antiinfecciosos y similares. Los compuestos descritos aquí también son útiles para prevenir o resolver infecciones virales en cultivos de células, tejidos u órganos y otras aplicaciones in vi tro . Por ejemplo, la inclusión de los compuestos de la invención como suplemento en medios de crecimiento del cultivo celular o tisular y componentes de cultivos celulares o tisulares prevendrán infecciones o contaminaciones virales de cultivos previamente no infectados con virus. Los compuestos descritos anteriormente también pueden ser utilizados para eliminar virus de cultivos u otro material biológico infectado o contaminado con virus (por ejemplo, sangre), después de un periodo de tratamiento adecuado, bajo cualquier número de condiciones de tratamiento de acuerdo a lo determinado por un experto en la técnica. Algunos de los compuestos utilizados en el método de la invención, tales como aquellos que contienen sustituyentes básicos pueden formar sales útiles con varios ácidos inorgánicos y orgánicos, incluyendo, sin limitación, ácido clorhídrico o acético, y aquellos compuestos que contienen funcionalidades acidas que pueden formar sales con bases orgánicas e inorgánicos incluyendo, sin limitación, hidróxidos de metal alcalino, hidróxidos de metal alcalinotérreo, piperidina, hidróxido de amonio, trietilamina o similares. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmulas I y II se preparan siguiendo los siguientes procedimientos que son familiares a aquellos expertos en la técnica. Las composiciones farmacéuticas antivirales utilizadas en el método de la presente invención comprenden uno o más compuestos de las fórmulas I y II, anteriores, como el ingrediente activo, y, opcionalmente, al menos un agente activo suplementario en combinación con un medio portador o agente auxiliar farmacéuticamente aceptable. La composición puede ser preparada en varias formas para la administración, incluyendo tabletas, cápsulas, pildoras o grageas, o puede ser llenada en recipientes adecuados, tales como cápsulas, o, en el caso de suspensiones, llenadas en botellas. Como se utiliza aquí, "medio portador farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera y todos los solventes, díluentes, u otro vehículo líquido, ayudas de dispersión o suspensión, agentes tensoactivos, agentes isotónicos, agentes espesantes o emulsificantes, preservativos, aglutinantes sólidos, lubricantes y similares, adecuados para la forma de dosificación particular deseada. Remington's Pharmaceutical Sciences, Fifteenth Edition, E.W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, PA, 1975) describe varios portadores utilizados en la formulación de composiciones farmacéuticas y las técnicas conocidas para la preparación de las mismas. Excepto en la medida en que cualquier medio portador convencional sea incompatible con los compuestos antivirales utilizados en la práctica de la invención, tal como el de producir cualquier efecto biológico indeseable o interactuar de otro modo en una forma dañina con cualesquier otros componentes de la composición farmacéutica, su uso se contempló dentro del alcance de esta invención. En las composiciones farmacéuticas de la invención, el agente activo puede estar presente en una cantidad de al menos 0.5% y de manera general no mayor de 90% en peso, en base al peso total de la composición, incluyendo el medio portador y/o los agentes auxiliares si los hay. De manera preferible, la proporción de agente activo varía entre 2-50% en peso de la composición. Pueden utilizarse medios portadores sólidos o líquidos, orgánicos o inorgánicos, farmacéuticos, adecuados para la administración enteral o palenteral para hacer la composición. La gelatina, lactosa, almidón, estearato de magnesio, talco, grasas y aceites vegetales y animales, goma, polialquilen glicol, u otros componentes de medicamentos conocidos pueden todos ser adecuados como medios portadores o excipientes. Los compuestos descritos anteriormente pueden ser administrados utilizando cualquier cantidad y cualquier ruta de administración efectiva para atenuar la infectividad del virus. De este modo, la expresión "cantidad efectiva para atenuar la infectividad del virus", como se utiliza aquí, se refiere a una cantidad no tóxica pero suficiente del agente antiviral para proporcionar el tratamiento deseado de la infección viral. La cantidad exacta variará de sujeto a sujeto, dependiendo de la especie, edad y condición general del sujeto, la severidad de la infección, el agente antiviral particular y su modo de administración, y similares. Los componentes antivirales son formulados de manera preferible en forma unitaria de dosificación para facilitar la administración y uniformidad de la dosis. "Forma unitaria de dosificación" como se utiliza aquí se refiere a una unidad físicamente discreta de agente antiviral apropiada para el paciente a ser tratado. Cada dosis deberá contener la cantidad de material activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado como tal, o en asociación con el medio portador farmacéutico seleccionado. Típicamente, los compuestos antivirales de la invención serán administrados en unidades de dosificación que contienen de aproximadamente 0.1 mg hasta aproximadamente 500 mg del agente antiviral en peso de la composición, con un intervalo de aproximadamente 1 mg hasta aproximadamente 100 mg siendo el preferido. Los compuestos antivirales descritos aquí pueden ser administrados como tales, o en forma de un precursor del cual pueda derivarse el agente activo, tal como un profármaco. Un profármaco es un derivado de un compuesto descrito aquí, la acción farmacológica del cual resulta de la conversión por procesos químicos o metabólicos in vivo al compuesto activo. Los profármacos incluyen, sin limitación, esteres de los compuestos de fórmulas I o II, anteriores, que tienen funcionalidades carboxilo o hidroxilo. Tales esteres pueden ser preparados a partir de alcoholes o ácidos carboxílicos alifáticos simples o funcionalizados. Tales profarmacos pueden ser preparados de acuerdo a procedimientos bien conocidos en el campo de la química medicinal y la ciencia de la formulación farmacéutica.

Los compuestos antivirales pueden ser administrados oral, rectal, palenteralmente, tal como por inyección intramuscular, inyección subcutánea, infusión intravenosa o similar, intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, localmente, tal como por polvos, ungüentos, gotas, o similares, o por inhalación, tal como por medio de un aerosol o similar, dependiendo de la naturaleza y severidad de la infección que esté siendo tratada. Dependiendo de la ruta de administración, los compuestos de la invención pueden ser administrados a niveles de dosificación de aproximadamente 0.001 hasta aproximadamente 120 mg/kg de peso corporal del sujeto por día y de manera preferible de aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 30 mg/kg de peso corporal del sujeto por día, una o más veces al día, para obtener el efecto terapéutico deseado. A manera de ejemplo, una dosis adecuada para la administración oral será del orden de 30 mg/kg de peso corporal por día, mientras que una dosis de administración intravenosa típica sería del orden de 10 mg/kg por día. Esos compuestos antivirales típicamente serán administrados de 1 a 4 veces al día, de modo que se libere la dosis diaria mencionada anteriormente. Sin embargo, el régimen exacto para la administración de los compuestos y composiciones descritas aquí necesariamente dependerá de las necesidades del huésped o paciente individual que esté siendo tratado, el tipo de tratamiento administrado y el juicio del especialista médico que preste la atención.

Como uso aquí, el término "huésped" incluye ambos de humanos y animales. En vista del efecto inhibidor de la síntesis de ARN viral producido por los compuestos de la invención, se anticipó que esos compuestos serán útiles no únicamente para el tratamiento terapéutico de infecciones por virus, sino para la profilaxis de infecciones por virus, también. Las dosis pueden ser esencialmente las mismas, ya será para tratamiento o para profilaxis de infecciones virales . Los siguientes ejemplos se proporcionan para describir la invención con mayor detalle. Esos ejemplos, los cuales se exponen en el modo actual contemplado para llevar a cabo la invención, pretenden ilustrar y no limitar la invención . Los siguientes ejemplos ilustran la síntesis química de los compuestos utilizados en el método de la invención.

EJEMPLO 1 Preparación del Acido 4- (5- (3-oxo-3H-benzo [b] tiofen-2- ilidenmetil) furan-2-il) benzoico a.) Benzo-2 , 4-dihidrotiofen-3-ona Una mezcla de 646 mg (4.19 mmoles) de ácido tiosalicílico, 680 mg (5.24 mmoles) de acetoacetato de etilo y una cantidad catalítica de ácido sulfúrico se calentó a 45°C a 50°C durante 4 horas. La mezcla se vertió sobre hielo y se separó como un sólido rosa. El sólido fue recolectado y lavado con agua y hexano. El sólido fue entonces lavado con acetato de etil y la mezcla pasada a través del filtro. El filtrado fue concentrado hasta 557 mg de sólido color rosa. b.) 5-Bromo-2-furancarboxaldehido dimetil acetal Una solución de 5.0 g (28.6 mmoles) de 5-bromo-2-furaldehído, 4 ml de trimetilortoformiato y 10 mg de p-toluensulfonato de piridilo en 20 ml de metanol seco se calentó a reflujo bajo argón durante 18 horas. La solución fue concentrada hasta sequedad y el aceite amarillo crudo fue pasado a través de alúmina básica, y eluído con hexano : acetato de etilo 4:1, para proporcionar 6.03 g de producto . c. ) 5-Tri-n-butilestanil-2-furancarboxaldehído dimetil acetal A una solución de 6.03 gm (0.0273 mmoles) de 5-bromo-2-furancarboxaldehído dimetilacetal, preparado como en el paso b, anteriormente, en 75 ml de THF seco a -78°C bajo argón sé agregaron 12 ml (1.1 eq) de n-butil litio 2.5 M. 10 minutos después, la solución amarilla fue enfriada con 8.88 g (1 eq) de cloruro de tributilestaño, y la reacción se dejó calentar lentamente hasta temperatura ambiente. Después de la extracción de la solución con agua, el secado de la capa orgánica sobre sulfato de sodio anhidro y la remoción del solvente, se obtuvieron 11.3 g de producto como un aceite roj izo . d.) 5- (4-Carbetoxifenil) -2-furancarboxaldehido dimetil acetal Una suspensión de 2.72 g (5.7 mmoles) del producto obtenido en el paso c, anteriormente, 1.5 g (5.7 mmoles) de 4-yodobenzoato de metilo y 204 mg (5 mol%) de ditrifenilfosfina de cloruro de paladio (II) en 5 ml de tetrahidrofurano seco se calentó a reflujo bajo argón durante 24 horas. Después de enfriar, la solución marrón oscuro solidificó y el sólido fue lavado con hexanos. El sólido fue disuelto en acetato de i-propilo, filtrado a través de alúmina básica y la solución concentrada hasta un aceite anaranjado el cual fue retirado con hexanos. Se formó un sólido el cual fue recolectado, lavado con hexano y secado para dar 1.0 g del producto. e . ) 5- (4-Carboxifenil) -2-furancarboxaldehido dimetil acetal Una suspensión de 865 mg (3.1 mmoles) del derivado de éster del paso d, anterior, y 0.5 g de hidróxido de potasio en 15 ml de metanol y 5 ml de agua se calentó a reflujo bajo nitrógeno durante 48 horas. Tras enfriar, la mezcla verde oscuro fue concentrada hasta 5 ml, disuelta en acetato de etilo y se le agregó agua. La mezcla fue acidificada con 1 ml de ácido acético glacial y la mezcla fue filtrada a través de celita. El filtrado orgánico fue lavado varias veces con agua y secado sobre sulfato de sodio. Después de la filtración, la solución fue concentrada hasta sequedad para proporcionar 690 mg de un sólido verde olivo. f.) 5- (4-Carboxifenil) -2-furancarboxaldehido dimetil acetal Una solución de 690 mg del derivado ácido obtenido del paso e, anteriormente, y 10 mg de p-toluensulfonato de piridinio en 100 ml de acetona se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 48 horas. La suspensión se concentró hasta sequedad y el residuo se suspendió en una mezcla de acetato de etilo y hexano, se filtró y secó para proporcionar 569 mg de un polvo marrón. d.) Acido 4- (5-(3-oxo-3H-benzo[b] tiofen-2-ilidenmetil) furan-2-il) benzoico Una mezcla de 295 mg (1.96 mmoles) de la benzo-2,4-dihidrotiofen-3-ona preparada de acuerdo a lo descrito en el paso a., anteriormente, 119 mg (0.55 mmoles) del furancarboxaldehído del paso f.), anterior, 2 gotas de piperidina y 10 ml de etanol se calentaron bajo argón a 85°C durante 12 horas. La mezcla fue enfriada a temperatura ambiente y se le agregó ácido clorhídrico 1 N a pH 1-2. Se agregaron 10 ml de t-butil metiléter y la solución se vertió en 15 ml de agua. Se separó un sólido anaranjado el cual se recolectó, se lavó con agua y hexano y se secó para dar 175 mg del producto.

EJEMPLO 2 Preparación del Acido 4- (3-oxo-3H-benzo [b] tiofen-2- ilidenmetil) benzoico Una suspensión de 73 mg (0.48 mmol) de benzo-2,4-dihidrotiofen-3-ona, 56 mg (0.37 mmol) de 4- carboxibenzaldehído, y una gota de piperidina en 2 ml de etanol absoluto se calentó a 80°C bajo argón durante 18 horas. Tras enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se ajustó a pH 2 con HCl ÍN, y se le agregó t-butil metil éter y agua, el precipitado marrón amarillo fue recolectado por filtración, y secado al aire para producir 73 mg del producto como un sólido amarillo-marrón.

EJEMPLO 3 Preparación de la 2- (5- (2-cloro-nitrofenil) tiofen-2- ilmetiliden) benzo [b] tiofen-3-ona a. ) 5-Tri-n-butilestaniltiofen-2-carboxaldehido dimetil acetal - Este compuesto se preparó de manera similar al 5-bromo-2-tiofencarboxaldehído dimetil acetal como se describe en los pasos b y c del Ejemplo 1, anteriormente, partiendo de 5-bromo-tiofencarboxaldehído comercialmente disponible para producir 10.15 g del producto como un aceite anaranjado . b . ) 5- (2-cloro-5-nitrofenil) tiofen-2-carboxaldehido dimetil acetal - Una suspensión de 2.0 g (8.4 mmol) de 3-bromo-4-cloronitrobenceno, 4.16 g (9,2 mmol) de 5-tri-n-butilestaniltiofen-2-carboxaldehído dimetil acetal, preparado como en el paso a. de este ejemplo, y 0.297 g de di-trifenilfosfina de cloruro de paladio (II) (5 mol%) en 20 ml de THF seco se sometió a reflujo bajo argón durante 20 horas. Tras enfriar a temperatura ambiente, la reacción fue concentrada in vacuo para proporcionar un aceite rojo, el cual se hizo pasar primero a través de un tapón de alúmina neutra. El aceite rojo resultante fue sometido a CLAP preparatoria (gel de sílice; 20% de acetato de etilo/80% de hexano como eluyentes) y proporcionó 1.93 g del producto como un aceite amarillo viscoso. c . ) 5- (2-cloro-5-nitrofenil) tiofen-2-carboxaldehido - Una solución de 1.93 g de 5-(2-cloro-nitrofenil) tiofen-2-carboxaldehído dimetil acetal, preparado como en el paso b. de este ejemplo, y 10 mg de p-toluensulfonato de piridinio en 100 ml de acetona se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 20 horas. La solución amarilla fue concentrada in va cuo, y el producto crudo disuelto en acetato de etilo. La fase orgánica fue lavada con agua (2 x 100 ml) antes de secar sobre sulfato de sodio anhidro. La concentración proporcionó 1.46 g del producto como un polvo amarillo. d. ) 2- (5- (2-Cloro-5-nitrofenil) tiofen-2-il-metiliden) benzo [b] tiofen-3-ona - Una suspensión de 73 mg (0,48 mmol) de benzo-2, 4-dihidrotiofen-3-ona, 100 mg (0.37 mmol) de 5- (2-cloro-5-nitrofenil) tiofen-2-carboxaldehído, preparado como en el paso c. de este ejemplo, y una gota de piperidina en 2 ml de etanol absoluto se calentó a 80°C bajo argón durante 18 horas. Tras enfriar, se agregó agua y t-butil metiléter, y el precipitado anaranjado se recolectó por filtración. El sólido se lavó con agua seguida por t-butil metil éter para proporcionar 0.145 g del producto como un sólido anaranjado, pf 215-216°C. Otros compuestos útiles en la práctica de esta invención pueden ser preparados de manera similar sustituyendo de manera alternativa ácido 2-mercaptobenzoico y reactivos de aldehido como aquéllos descritos en el Ejemplo 1, anteriormente.

EJEMPLO 4 Inhibición de la Reproducción del ARN Viral El descubrimiento de inhibidores de polimerasas virales y proteínas relacionadas requiere de manera general la evaluación de un gran número de compuestos químicos o mezclas de compuestos químicos. De este modo, es deseable un ensayo para la actividad de la polimerasa que sea capaz de seleccionar un alto volumen, en otras palabras, un ensayo de alto rendimiento. Existe una variedad de metodologías de ensayo bien conocidas por los expertos capacitados que permiten la selección eficiente de un gran número de muestras. Véase, por ejemplo, Colé, JL, Meth Enzymology, 275 : 310-328 (1996.) Cualquiera de esos ensayos puede ser adecuado en el caso de una actividad de RdRp viral. Un método para medir la actividad RdRp viral en el caso de virus de la familia Flavirididae utiliza una proteína NS5 recombinante purificada en un ensayo de RdRp in vi tro . Por ejemplo, Behrens, et al., EMBO J. , 15: 12-22 (1996)] y Lohmann et al. (J Virolm 71:8416-8428 (1997)] describen la expresión, purificación y actividad enzimática de HCV B85B RdRp de baculovirus. La expresión, purificación y actividad enzimática bacteriana de la proteína HCV NS5B RdRp, ha sido descrita en la PCT/US96/15571 [WO 97/12033] y por Yuan et al.

[Biochem Biophys Res Comm, 232:231-235 (1997)]. En un ejemplo adicional, Collen, PCT/US99/07404, la cual es poseída de manera común con la presente solicitud, describe composiciones que comprenden secuencias de HCV NS5B funcionales y su uso en la identificación de compuestos útiles en el tratamiento de hepacivirus. Como con los ejemplos anteriores para HCV RdRp, la proteína NS5 de flavivirus del dengue expresada bacterialmente ha sido purificada y se ha demostrado que exhibe una actividad de RdRp [Tan et al., Virology, 216:317-325 (1996)], como la tiene la proteína NS5B del pestivirus BVDV purificado de células infectadas con baculovirus recombinante [Zhong et al., J. Virol, 72: 9365-9369 (1998)]. A manera de ejemplo, la actividad inhibidora de los compuestos de la invención fue demostrada utilizando proteínas NS5 preparadas esencialmente de acuerdo a Collett, PCT/US99/07404, en ensayos de RdRp in vi tro . Las proteínas NS5 purificadas fueron incubadas en mezclas de reacción de RdRp estándar. Tales mezclas de reacción consisten generalmente de amortiguadores, sales, cationes, agentes reductores y similares, así como trifosfatos de nucleósido y un cebador de patrón de ARN. Pueden requerirse variaciones en los componentes individuales de tales mezclas de reacción para acomodar las preferencias de reacción particulares de proteínas NS5 individuales. Tales variaciones son bien conocidas por los expertos capacitados. Los compuestos representativos dentro de la fórmula I, anterior, como se muestra en los Ejemplos 1-3 y en la Tabla 1, se evaluaron para determinar la actividad antiviral utilizando este ensayo. La actividad inhibidora de los compuestos probados puede expresarse como valores de CI50. Los valores de la CI50 representan la concentración del compuesto a la cual al 50% de la actividad de RdRp es inhibida. Los resultados del ensayo para la inhibición de la actividad de la RdRp en al menos un virus de la familia Flavividae para los compuestos probados reveló valores de CI50 que fluctúan de 0.02 hasta aproximadamente 30 µM. Esas bajas concentraciones de compuestos de prueba capaces de lograr la inhibición del 50% de la actividad de la HCV RdRp indican que los compuestos de la invención son efectivos para inhibir la síntesis de ARN por enzimas RdRp virales involucradas en la duplicación de Flaviviridae . Aunque la presente invención ha sido descrita y ejemplificada en términos de ciertas modalidades preferidas, otras modalidades serán evidentes a aquellos expertos en la técnica. La invención por lo tanto, no se limita a las modalidades particulares descritas y ejemplificadas, sino que es capaz de modificaciones o variaciones sin apartarse del espíritu de la invención, el alcance completo de la cual es delineado por las reivindicaciones anexas.

TABLA 1 (continuación) halógeno* TABLA 1 (continuación) * o-cloro, m-cloro, p-cloro y p-bromo.

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Un método para tratar infecciones causadas por al menos un virus de la familia Flaviviridae y enfermedades asociadas con tales infecciones en un huésped viviente que tiene tal infección, el método se caracteriza porque comprende administrar al huésped una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto, o un precursor del compuesto, que tiene la fórmula: donde W representa O, S, o N(Ra), siendo Ra hidrógeno o un grupo alquilo de 1-5 átomos de carbono; X, Y y Z pueden ser el mismo o diferentes y cada uno representa hidrógeno o un sustituyente seleccionado del grupo que consiste de halógeno, nitro, carboxi, hidroxi, alquilo de 1-5 átomos de carbono, trifluorometilo, alcoxi, aciloxi, ciano, amino, alquilamino, dialquilamino, sulfonamido, carboxamido, carbalcoxi, tio, alquiltio, alquilsulfinilo y alquilsulfonilo; Ri representa un radical seleccionado de aquéllos que consisten de un grupo heterocíclico no sustituido o sustituido, una porción anular bicíclica no sustituida o sustituida, un grupo fenilo (CeHs) no sustituido o sustituido, un grupo bifenilo (C6H5-C5H4) , no sustituido o sustituido, un grupo ?-fenilalquenilo (C6H5 (CH=CH) n) no sustituido o sustituido, siendo n un número entero de 1 a 5, un grupo ?-fenilalquinilo (C6H5 (CH=CH) p) no sustituido o sustituido, siendo p un número entero de 1 a 5, o un grupo alquilo no sustituido o sustituido de 1-5 átomos de carbono el cual puede ser de cadena lineal o ramificada, siendo el grupo heterocíclico seleccionado de aquéllos que consisten de furano, tiofeno, oxazol, oxadiazol, piridina, pirimidina, pira'zol, triazol, piridacina, 1, 3-oxatiolano, tiazol, tiadiazol, imidazol, pirrol, tetrazol y triacina, siendo la porción anular bicíclica seleccionada de aquellos que consisten de benzofurano, isobenzofurano, benzotiofeno, isobenzotiofeno, benzoxazol, benzopirrol, isoindol, benzopirazol, quinolina, isoquinolina, 1, 2-benzodiacina, 1,3-benzodiacina, 1, 2, 3-benzotriazol, benzotiazol, bencimidazol, 1, 2, 3-benzotriacina y 1, 2, 4-benzotriacina, siendo el grupo heterocíclico y la porción anular bicíclicas seleccionadas de aquellas que consisten de alquilo de 1-5 átomos de carbono, halógeno, alcoxi, hidroxi, nitro, perhaloalquilo, dihaloalquilo, monohaloalquilo, carboxi, carbalcoxi, sulfo, sulfonato, tio, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo o un grupo fenilo no sustituido o sustituido; siendo los sustituyentes del grupo fenilo, los sustituyentes del grupo bifenilo, los sustituyentes del grupo ?-fenilalquenilo y los sustituyentes del grupo ?-fenilalquinilo al menos uno seleccionado de aquéllos que consisten de halógeno, nitro, carboxi, hidroxi, alquilo de 1-5 átomos de carbono, perhaloalquilo, dihaloalquilo, monohaloalquilo, alcoxi, aciloxi, ciano, amino, alquilamino, dialquilamino, sulfonamido, carboxamido, carbalcoxi, tio, alquiltio, alquilsulfinilo y alquilsulfonilo; los sustituyentes del grupo alquilo siendo al menos uno seleccionado de aquellos que consisten de carboxi, hidroxi, alcoxi, amino, alquilamino, dialquilamino, tio o alquiltio, y los isómeros y sales farmacéuticamente aceptables de tal compuesto .

2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto se administra en forma de dosis unitaria que contiene de aproximadamente 0.001 hasta aproximadamente 120 mg del compuesto por kilogramo de peso corporal del paciente por día.

3. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la dosis unitaria incluye un medio portador farmacéuticamente aceptable.

4. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el precursor del compuesto es administrado en forma de un profármaco.

5. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto o un precursor del compuesto es administrado en combinación con al menos un agente activo suplementario seleccionado del grupo que consiste de ínterferones, ribavirina, inhibidores de la proteasa, inmunoglobulínas, inmunomoduladores, hepatoprotectores, agentes antiinflamatorios, antibióticos, agentes antivirales o antiinfecciosos.

6. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el compuesto o precursor del compuesto y al menos un agente activo suplementario son administrados simultáneamente.

7. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la ruta de administración se selecciona del grupo que consiste de la administración oral, rectal, parenteral, intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, local o por inhalación.

8. Un ' método para prevenir infecciones causadas por al menos un virus de la familia Flaviviridae y enfermedades asociadas con tales infecciones en huéspedes vivientes que tiene tal infección, el método se caracteriza porque comprende administrar al huésped una cantidad profilácticamente efectiva de un compuesto, o un precursor de tal compuesto, que tiene la fórmula: donde W representa 0, S, o N(Ra), siendo Ra hidrógeno o un grupo alquilo de 1-5 átomos de carbono; X, Y y Z pueden ser el mismo o diferentes y cada uno representa hidrógeno o un sustituyente seleccionado del grupo que consiste de halógeno, nitro, carboxi, hidroxi, alquilo de 1-5 átomos de carbono, trifluorometilo, alcoxi, aciloxi, ciano, amino, alquilamino, dialquilamino, sulfonamido, carboxamido, carbalcoxi, tio, alquiltio, alquilsulfinilo y alquilsulfonilo; Ri representa un radical seleccionado de aquéllos que consisten de un grupo heterocíclico no sustituido o sustituido, una porción anular bicíclica no sustituida o sustituida, un grupo fenilo (CeH5) no sustituido o sustituido, un grupo bifenilo (C6H5-C5H4) , no sustituido o sustituido, un grupo ?-fenilalquenilo (CeH5 (CH=CH) n) no sustituido o sustituido, siendo n un número entero de 1 a 5, un grupo ?-fenilalquinilo (C6H5 (CH=CH) p) no sustituido o sustituido, siendo p un número entero de 1 a 5, o un grupo alquilo no sustituido o sustituido de 1-5 átomos de carbono el cual puede ser de cadena lineal o ramificada, siendo el grupo heterocíclico seleccionado de aquellos que consisten de furano, tiofeno, oxazol, oxadiazol, piridina, pirimidina, pirazol, triazol, piridacina, 1, 3-oxatiolano, tiazol, tiadiazol, imidazol, pirrol, tetrazol y triacina, siendo la porción anular bicíclica seleccionada de aquéllos que consisten de benzofurano, isobenzofurano, benzotiofeno, isobenzotiofeno, benzoxazol, benzopirrol, isoindol, benzopirazol, quinolina, isoquinolina, 1, 2-benzodiacina, 1,3-benzodiacina, 1, 2, 3-benzotriazol, benzotiazol, bencimidazol, 1, 2, 3-benzotriacina y 1, 2, 4-benzotriacina, siendo el grupo heterocíclico y la porción anular bicíclicas seleccionadas de aquéllas que consisten de alquilo de 1-5 átomos de carbono, halógeno, alcoxi, hidroxi, nitro, perhaloalquilo, dihaloalquilo, monohaloalquilo, carboxi, carbalcoxi, sulfo, sulfonato, tio, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo o un grupo fenilo no sustituido o sustituido; siendo los sustituyentes del grupo fenilo, los sustituyentes del grupo bifenilo, los sustituyentes del grupo ?-fenilalquenilo y los sustituyentes del grupo ?-fenilalquinilo al menos uno seleccionado de aquéllos que consisten de halógeno, nitro, carboxi, hidroxi, alquilo de 1-5 átomos de carbono, perhaloalquilo, dihaloalquilo, monohaloalquilo, alcoxi, aciloxi, ciano, amino, alquilamino, dialquilamino, sulfonamido, carboxamido, carbalcoxi, tio, alquiltio, alquilsulfinilo y alquilsulfonilo; los sustituyentes del grupo alquilo siendo al menos uno seleccionado de aquéllos que consisten de carboxi, hidroxi, alcoxi, amino, alquilamino, dialquilamino, tio o alquiltio, y los isómeros y sales farmacéuticamente aceptables de tal compuesto .

9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el compuesto se administra en forma de dosis unitaria que contiene de aproximadamente 0.001 hasta aproximadamente 120 mg del compuesto por kilogramo de peso corporal del paciente por día.

10. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la dosis unitaria incluye un medio portador farmacéuticamente aceptable.

11. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el precursor del compuesto es administrado en forma de un profármaco.

12. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el compuesto o un precursor del compuesto es administrado en combinación con al menos un agente activo suplementarios seleccionado del grupo que consiste de interferones, ribavirina, inhibidores de . la proteasa, inmunoglobulinas, inmunomoduladores, hepatoprotectores, agentes antiinflamatorios, antibióticos, agentes antivirales o antiinfecciosos.

13. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el compuesto o precursor del compuesto y al menos un agente activo suplementario son administrados simultáneamente.

14. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la ruta de administración se selecciona del grupo que consiste de la administración oral, rectal, parenteral intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, local o por inhalación. / ?&® o RESUMEN DE LA INVENCIÓN Se proporcionan métodos para el tratamiento y profilaxis de infecciones virales y enfermedades asociadas con tales infecciones.