CN101903392A - 丝氨酸蛋白酶的抑制剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及抑制丝氨酸蛋白酶活性，特别是抑制丙型肝炎病毒NS3-NS4A蛋白酶的活性的化合物。作为这类化合物，它们通过干扰丙型肝炎病毒的生命周期起作用，并且还可用作抗病毒剂。本发明还涉及含有这些化合物的组合物，用来以先体外后体内的方式使用，或是施用给感染HCV的患者。本发明还涉及通过施用含有本发明化合物的组合物治疗患者中HCV感染的方法。

Description

丝氨酸蛋白酶的抑制剂

优先权申明

本申请要求2007年2月27日提交的序号为60/903,814的美国临时申请的优先权，该申请因此以参考引用的形式全部并入本文中。

技术领域

本发明涉及抑制丝氨酸蛋白酶活性，特别是丙型肝炎病毒NS3-NS4A蛋白酶活性的化合物。作为此类化合物，其通过干扰丙型肝炎病毒的生命周期起作用，也可以用来作为抗病毒剂。本发明还涉及含有这些化合物的组合物，用来以先体外后体内的方式使用或是对感染HCV的患者施用。本发明还涉及通过施用含有本发明化合物的组合物治疗患者中的HCV感染的方法。

背景技术

被丙型肝炎病毒(“HCV”)感染是一个引人注目的人类医学问题。HCV被认为是大多数非甲、非乙肝炎病例的致病因素，估计全球血清阳性率为3％[A.Alberti等，“Natural History of Hepatitis C”，J.Hepatology，31.，(suppl.1)，pp.17-24(1999)]。仅在美国，就有近四百万人可能被感染[M.J.Alter et al.，″The Epidemiologyof Viral-Hepatitis-in the United-States″，Gastroenterol.Clin.North Am.，23，pp.437-455(1994)；M.J.Alter″Hepatitis C Virus Infection in the United States，″J.Hepatology，31.，(Suppl.1)，pp.88-91(1999)]。

在初次接触HCV时，只有约20％被感染的个体发展成急性临床肝炎，而其它人似乎自发地消除了染感。然而，在几乎70％的情形，这种病毒形成了坚持几十年的慢性感染[S.Iwarson，″The Natural Course of Chronic Hepatitis，″FEMS Microbiology Reviews，14，pp.201-204(1994)；D.Lavanchy，″Global Surveillance and Control of Hepatitis C，″J.ViralHepatitis，6，pp.35-47(1999)]。这通常造成肝部炎症的复发和逐步恶化，常常导致更严重的疾病状态，例如肝硬化和肝细胞癌[M.C.Kew，″Hepatitis C and Hepatocellular Carcinoma″，FEMSMicrobiology Reviews，14，pp.211-220(1994)；I.Saito et.al.，″Hepatitis C Virus Infection isAssociated with the Development of Hepatocellular Carcinoma，″Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87，pp.6547-6549(1990)]。遗憾的是，对于慢性HCV的致人虚弱的发展，还没有广泛有效的治疗方法。

HCV基因组编码一种3010-3033个氨基酸的多蛋白[Q.L.Choo，et.al.，″Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus.″Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88，pp.2451-2455(1991)；N.Kato et al.，″Molecular Cloning of the Human HepatitisC Virus Genome From Japanese Patients with Non-A，Non-B Hepatitis，″Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87，pp.9524-9528(1990)；A.Takamizawa et.al.，″Structure and Organization ofthe Hepatitis C Virus Genome Isolated From Human Carriers，″J.Virol.，65，pp.1105-1113(1991)]。HCV非结构(NS)蛋白被推测提供了病毒复制必需的催化工具。该NS蛋白是由多蛋白经蛋白酶切割而衍生形成的[R.Bartenschlager et.al.，″Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C VirusEncodes a Serine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5 Junctions，″J.Virol.，67，pp.3835-3844(1993)；A.Grakoui et.al.，″Characterization of the Hepatitis CVirus-Encoded Serine Proteinase：Determination of Proteinase-Dependent PolyproteinCleavage Sites，″J.Virol.，67，pp.2832-2843(1993)；A.Grakoui et.al.，″Expression andIdentification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products，″J.Virol.，67，pp.1385-1395(1993)；L.Tomei et.al.，″NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis Cvirus polyprotein″，J.Virol.，67，pp.4017-4026(1993)]。

HCV NS蛋白3(NS3)含有丝氨酸蛋白酶活性，它帮助加工大多数病毒酶，因此被认为对于病毒复制和感染力是必不可少的。已知黄热病毒NS3蛋白酶中的突变会减小病毒的感染力[Chambers，T.J.et.al.，″Evidence that the N-terminal Domain of NonstructuralProtein NS3 From Yellow Fever Virus is a Serine Protease Responsible for Site-SpecificCleavages in the Viral Polyprotein″，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87，pp.8898-8902(1990)]。已经指出，NS3的前181个氨基酸(病毒多蛋白的残基1027-1207)含有NS3的丝氨酸蛋白酶域，它加工HCV多蛋白的所有四个下游位点[C.Lin et al.，″Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase：Trans-Cleavage Requirements and Processing Kinetics″，J.Virol.，68，pp.8147-8157(1994)]。

HCV NS3丝氨酸蛋白酶及其伴随辅因子NS4A帮助加工所有的病毒酶，因此被认为是病毒复制所必需的。这一加工似乎与人免疫缺陷病毒天冬氨酰蛋白酶进行的相似，后者也参与病毒酶的加工。抑制病毒蛋白加工的HIV蛋白酶抑制剂是人类的有强效的抗病毒剂，这表明打断病毒生命周期的这一阶段产生了治疗活性药物。因此HCV NS3丝氨酸蛋白酶也是药物开发的吸引人的目标。

目前还没有任何令人满意的抗HCV药物或治疗方法。直到最近，仅有的被确认的治疗HCV疾病的方法是干扰素治疗。但是，干扰素有明显的副作用[M.A.Walker et al.，″Hepatitis C Virus：AnOverview of Current Approaches and Progress，″DDT，4，pp.518-29(1999)；D.Moradpouret al.，″Current and Evolving Therapies for Hepatitis C，″Eur.J.Gastroenterol.Hepatol.，11，pp.1199-1202(1999)；H.L.A.Janssen et al.″Suicide Associated with Alfa-InterferonTherapy for Chronic Viral Hepatitis，″J.Hepatol.，21，pp.241-243(1994)；P.F.Renault et al.，″Side Effects of Alpha Interferon，″Seminars in Liver Disease，9，pp.273-277.(1989)]，而且只在部分(约25％)病例中产生长期的缓解作用[O.Weiland，“Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection”，FEMSMicrobiol.Rev.，14，pp 279-288(1994)]。近来引入聚乙二醇化的干扰素(PEG-

和

)和利巴韦林与聚乙二醇化干扰素

的联合疗法，只造成缓解率的不太大的提高和副作用的部分减少。另外，有效的抗HCV疫苗的前景仍不明朗。

因此，需要更有效的抗HCV疗法。此类抑制剂应具有作为蛋白酶抑制剂，特别是作为丝氨酸蛋白酶抑制剂，尤其是作为HCV NS3蛋白酶抑制剂的治疗潜力。特别是，此类化合物可用来作为抗病毒剂，尤其是作为抗HCV剂。

发明概要

本发明涉及式I化合物

或其可药用的盐。[0010]R₁是-Z^AR₈，其中各Z^A独立地是一个键或是一个任选取代的支化或直链的C_1-12脂烃链，其中Z^A的最多3个碳单元可任选地和独立地被-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^A-，-C(O)NR^ANR^A-，-C(O)O-，-NR^AC(O)O-，-O-，-NR^AC(O)NR^A-，-NR^ANR^A-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^A-，-SO₂NR^A-，或-NR^ASO₂NR^A-替代，条件是，-O-、-NR^ANR^A、-NR^AC(O)NR^A-或-NR^ASO₂NR^A-不与式I的氮环原子直接键合。各R₈独立地是R^A、卤素、-OH、-CN、-NO₂或-OCF₃。各R^A独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。

R₂和R₃是-Z^BR₉，其中各Z^B独立地是一个键或任选取代的支化或直链C_1-6脂烃链，其中Z^B的最多3个碳单元可任选地和独立地被-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^B-，-C(O)NR^BNR^B-，-C(O)O-，-NR^BC(O)O-，-NR^BC(O)NR^B-，-NR^BNR^B-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^B-，-SO₂NR^B-或-NR^BSO₂NR^B-替代。各R₉独立地是R^B、卤素、-OH、-CN、-NO₂、-NH₂或-OCF₃。各R^B独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

或者是，R₂和R₃合起来形成一个氧基。

A是-O-或-CR₆R₇-，其中各R₆和R₇是-Z^CR₁₀，其中的各Z^C独立地是一个键或是任选取代的支化或直链的C_1-6脂烃链，其中Z^C的最多3个碳单元可任选地和独立地被-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^C，-C(O)NR^CNR^C-，-C(O)O-，-NR^CC(O)O-，-NR^CC(O)NR^C-，-NR^CNR^C-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^C-，-SO₂NR^C或-NR^CSO₂NR^C-替代。各R₁₀独立地是R^C、卤素、-OH、-CN、-NO₂、-NH₂或-OCF₃。各R^C独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

R₄是-Z^DR¹¹，其中各Z^D独立地是一个键或是任选取代的支化或支链的C_1-12脂烃链，其中Z^D的最多3个碳单元可任选地和独立地被-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^D，-C(O)NR^DNR^D-，-C(O)O-，-NR^DC(O)O-，-O-，-NR^DC(O)NR^D-，-NR^DNR^D-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^D-，-SO₂NR^D-或-NR^DSO₂NR^D-替代，条件是，-SO-、-SO₂-或-SO₂NR^D不直接键合到与R₄相邻的羰基上。各R₁₁独立地是R^D、卤素、-OH、-CN、-NO₂、-NH₂或-OCF₃。各R^D独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

R₅是-Z^ER₁₂，其中各Z^E独立地是一个键或是任选取代的支化或支链的C_1-12脂烃链，其中Z^E的最多3个碳单元可任选地和独立地被-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^E-，-C(O)NR^ENR^E-，-C(O)O-，-NR^EC(O)O-，-O-，-NR^EC(O)NR^E-，-NR^ENR^E-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^E-，-SO₂NR^E-或-NR^ESO₂NR^E-替代。各R₁₂独立地是R^E、卤素、-OH、-CN、-NO₂、-NH₂或-OCF₃。各R^E独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

在一些方面，本发明的特征在于一种药物组合物，其中含有能抑制丝氨酸蛋白酶的有效数量的式I化合物或其可药用的盐，以及可药用的载体、辅剂或赋形剂。该组合物可以包含另一种药物，选自免疫调节剂、抗病毒剂、第二种HCV蛋白酶抑制剂、HCV生命周期中其它目标的抑制剂、细胞色素P-450抑制剂，或它们的组合。免疫调节剂是α-、β-或γ-干扰素或胸腺素，所述抗病毒剂是利巴韦林、金刚烷胺或替比夫定；或者所述的HCV生命周期中其它目标的抑制剂是HCV解旋酶、聚合酶或金属蛋白酶的抑制剂。细胞色素P-450抑制剂可以是利托那韦。

在其它方面，一种抑制丝氨酸蛋白酶的活性的方法包括使丝氨酸蛋白酶与式I化合物接触的步骤。该丝氨酸蛋白酶可以是一种HCVNS3蛋白酶。该方法还包括通过施用式I化合物治疗患者中的HCV感染。该方法还可以包括向所述患者施用另一种药物，该药物选自免疫调节剂、抗病毒剂、第二种HCV蛋白酶抑制剂、HCV生命周期中其它目标的抑制剂或它们的组合，其中该另一种药物以与丝氨酸蛋白酶抑制剂相同的剂型或以另外的剂型施用给所述患者。免疫调节剂是α-、β-或γ-干扰素或胸腺素；所述抗病毒剂是利巴韦林或金刚烷胺；或者所述的HCV生命周期中其它目标的抑制剂是HCV解旋酶、聚合酶或金属蛋白酶的抑制剂。

在其它的方面，一种消除或减少生物样品或者医学或实验室设备的HCV污染的方法包括使该生物样品或者医学或实验室设备与式I化合物接触的步骤。所述样品或设备可以选自血液、其它体液、生物组织、手术器械、手术服、实验室仪器、实验服、血液或其它体液收集装置、血液或其它体液储存材料。

本文中所述的本发明化合物还显示出优越的PK性能和/或增强的效力。

本发明还涉及含有以上化合物的组合物及其应用，制备式I化合物的方法，以及测定化合物的丝氨酸蛋白酶活性的方法。这些组合物可以用来对打算插入到患者中的装置进行预处理，处理生物样品，或直接施用给患者。在每种情形，组合物都将被用来减小HCV感染的危险或严重性。

在其它方面，本发明的特色在于以下一般地和具体地描述的某些化合物。这些具体的描述只是说明性的，并不意味着限制化合物或其应用的范围。

发明详述

I.定义

对本发明而言，化学元素是按照元素周期表(CAS版，Handbook of Chemistry and Physics，第75版)确认的。另外，有机化学的一般原理描述在以下专著中：″OrganicChemistry″，Thomas Sorrell，University Science Books，Sausalito：1999，and″March′sAdvanced Organic Chemistry″，5th Ed.，Ed.：Smith，M.B.and March，J.，John Wiley & Sons，New York：2001，这些专著的全部内容都以参考引用的方式并入本文中。

如本文所述，本发明的化合物可以任选地被一个或多个取代基取代，例如以上一般地示例说明的，或作为本发明的特定的类、小类和物种举例说明的。

本文中使用的术语“脂烃基”包括术语烷基、烯基、炔基，它们均可任选地如下所述地被取代。

本文中使用的术语“烷基”指含有1-8个(例如，1-12、1-6或1-4个)碳原子的饱和的脂烃基。烷基可以是直链或支链。烷基的实例包括，但不限于，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正庚基或2-乙基己基。烷基可以被一个或多个取代基取代(即，任选被取代)，例如卤素、磷酰基、脂环基[例如环烷基或环烯基]、杂脂环基[例如杂环烷基或杂环烯基]、芳基、杂芳基、烷氧基、芳酰基、杂芳酰基、酰基[例如，(脂烃)羰基、(脂环)羰基或(杂脂环)羰基]、硝基、氰基、酰氨基[例如，(环烷基烷基)羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(杂环烷基烷基)羰基氨基、杂芳基羰基氨基、杂芳烷基羰基氨基、烷氨基羰基、环烷基氨基羰基、杂环烷基氨基羰基、芳氨基羰基或杂芳基氨基羰基]、氨基[例如，脂烃基胺基、脂环基氨基或杂脂环基氨基]、磺酰基[例如，脂烃基-SO₂-]、亚磺酰基、硫烷基、亚磺酰氧基、脲、硫脲、氨磺酰、磺酰胺、氧基、羧基、氨甲酰、脂环烃氧基、杂脂环烃氧基、芳氧基、杂芳氧基、芳烷氧基、杂芳基烷氧基、烷氧羰基、烷基羰氧基或羟基。取代的烷基的一些实例包括，但不限于，羧烷基(例如HOOC-烷基，烷氧羰基烷基和烷基羰氧基烷基)，氰烷基、羟烷基、烷氧基烷基、酰基烷基、芳烷基、(烷氧基芳基)烷基、(磺酰氨基)烷基(例如(烷基-SO₂-氨基)烷基)、氨基烷基、酰氨基烷基、(脂环基)烷基或卤代烷基。

这里使用的“烯基”一词是指含2-8(例如，2-12、2-6或2-4)个碳原子和至少一个双键的脂烃基。像烷基一样，烯基可以是直链或支链。烯基的实例包括，但不限于，烯丙基、异丙烯基、2-丁烯基和2-己烯基。烯基可以任选地被一个或多个取代基取代，例如卤素、磷酰基、脂环基[例如，环烷基或环烯基]、杂脂环基[例如，杂环烷基或杂环烯基]、芳基、杂芳基、烷氧基、芳酰基、杂芳酰基、酰基[例如，(脂烃基)羰基，(脂环基)羰基或(杂脂环基)羰基]、硝基、氰基、酰氨基[例如，(环烷基烷基)羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(杂环烷基烷基)羰基氨基、杂芳基羰基氨基、杂芳烷基羰基氨基、烷氨基羰基、环烷基氨基羰基、杂环烷基氨基羰基、芳基氨基羰基或杂芳基氨基羰基]、氨基[例如，脂肪氨基、脂环基氨基、杂脂环基氨基或脂烃基磺酰氨基]、磺酰基[例如，烷基-SO₂-，脂环基-SO₂-或芳基-SO₂-]、亚磺酰基、硫烷基、亚磺酰氧基、脲、硫脲、氨磺酰基、磺酰胺基、氧基、羧基、氨甲酰基、脂环烃氧基、杂脂环烃氧基、芳氧基、杂芳氧基、芳烷基氧基、杂芳基烷氧基、烷氧羰基、烷基羰氧基或羟基。取代的烯基的一些实例包括，但不限于，氰基烯基、烷氧基烯基、酰基烯基、羟基烯基、芳基烯基、(烷氧基芳基)烯基、(磺酰氨基)烯基(例如(烷基-SO₂-氨基)烯基)、氨基烯基、酰氨基烯基、(脂环基)烯基或卤代烯基。

这里使用的“炔基”一词指含有2-8(例如2-12、2-6或2-4)个碳原子和至少一个三键的脂烃基。炔基可以是直链或支链。炔基的实例包括，但不限于，炔丙基和丁炔基。炔基可以任选地被一个或多个取代基取代，例如芳酰基、杂芳酰基、烷氧基、环烷氧基、杂环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、芳基烷氧基、硝基、羧基、氰基、卤素、羟基、磺基、巯基、硫烷基[例如，脂烃基硫烷基或脂环基硫烷基]、亚磺酰基[例如，脂烃基亚磺酰基或脂环基亚磺酰基]、磺酰基[例如脂烃基-SO₂-，脂族胺基-SO₂-或脂环基-SO₂-]、酰胺基[例如，氨基羰基、烷氨基羰基、烷基羰基氨基、环烷基氨基羰基、杂环烷基氨基羰基、环烷基羰基氨基、芳氨基羰基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(环烷基烷基)羰基氨基、杂芳烷基羰基氨基、杂芳基羰基氨基或杂芳基氨基羰基]、脲、硫脲、氨磺酰基、磺酰氨基、烷氧羰基、烷基羰氧基、脂环基、杂脂环基、芳基、杂芳基、酰基[例如，(脂环基)羰基或(杂脂环基)羰基]、氨基[例如，脂族胺基]、亚磺酰氧基、氧基、羧基、氨甲酰基、(脂环基)氧基、(杂脂环基)氧基或(杂芳基)烷氧基。

这里使用的术语“酰胺基”包括“氨基羰基”和“羰基氨基”。这些名词在单独使用或是与另一基团一起使用时，当用在末端时，是指诸如-N(R^X)-C(O)-R^Y或-C(O)-N(R^X)₂等酰胺基团；当用在内部时，是指-C(O)-N(R^X)-或-N(R^X)-C(O)-；其中R^X和R^Y的定义如下。酰胺基的实例包括烷基酰胺基(例如烷基羰基氨基或烷基氨基羰基)，(杂脂环基)酰胺基，(杂芳烷基)酰胺基，(杂芳基)酰胺基，(杂环烷基)烷基酰胺基，芳基酰胺基，芳烷基酰胺基，(环烷基)烷基酰胺基或环烷基酰胺基。

本文使用的术语“氨基”指-NR^XR^Y，其中R^X和R^Y均独立地是氢、脂烃基、脂环基、(脂环基)脂烃基、芳基、芳基脂烃基、杂脂环基、(杂脂环基)脂烃基、杂芳基、羧基、硫烷基、亚磺酰基、磺酰基、(脂烃基)羰基、(脂环基)羰基、((脂环基)脂烃基)羰基、芳基羰基、(芳基脂烃基)羰基、(杂脂环基)羰基、((杂脂环基)脂烃基)羰基、(杂芳基)羰基或(杂芳基脂烃基)羰基，它们均为本文中的定义，并可任选地被取代。氨基的实例包括烷氨基、二烷基氨基或芳氨基。当“氨基”一词不是末端基团时(例如烷基羰基氨基)，它表示-NR^X-。R^X具有与以上定义的相同含义。

本文中的术语“芳基”当单独使用或者作为像“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”等更大基团的一部分使用时，是指单环(例如苯基)、双环(例如茚基、萘基、四氢萘基、四氢茚基)和三环(例如芴基、四氢芴基或四氢蒽基、蒽基)环系，其中单环环系是芳香环，或者在双环或三环环系中至少一个环是芳香环。双环和三环基团包括苯并稠合的2-3元碳环环系。例如，苯并稠合基团包括与两个或更多的C_4-8碳环部分稠合的苯基。芳基可任选地被一个或多个取代基取代，包括脂烃基[例如，烷基、烯基或炔基]，脂环基，(脂环基)脂烃基，杂脂环基，(杂脂环基)脂烃基，芳基，杂芳基，烷氧基，(脂环基)氧基，(杂脂环基)氧基，芳氧基，杂芳氧基，(芳基脂烃基)氧基，(杂芳基脂烃基)氧基，芳酰基，杂芳酰基，氨基，氧基(在苯并稠合的双环或三环芳基的非芳族碳环上)，硝基，羧基，酰胺基，酰基[例如，脂烃基羰基、(脂环基)羰基、((脂环基)脂烃基)羰基、(芳基脂烃基)羰基、(杂脂环基)羰基、((杂脂环基)脂烃基)羰基或(杂芳基脂烃基)羰基]，磺酰基[例如，脂烃基-SO₂-或氨基-SO₂-]，亚磺酰基[例如，脂烃基-S(O)-或脂环基-S(O)-]，硫烷基[例如，脂烃基-S-]，氰基，卤素，羟基，巯基，亚磺酰氧基，脲，硫脲，氨磺酰基，磺酰胺基或氨甲酰基。或者是，芳基可以是未被取代的。

取代的芳基的非限制性实例包括卤代芳基[例如一、二(如对，间-二卤代芳基)和三卤代烷基]；(羧基)芳基[例如，(烷氧羰基)芳基、((芳烷基)羰氧基)芳基和(烷氧羰基)芳基]；(酰氨基)芳基[例如，(氨基羰基)芳基，(((烷氨基)烷基)氨基羰基)芳基，(烷基羰基)氨基芳基，(芳氨基羰基)芳基和(((杂芳基)氨基)羰基)芳基]；氨基芳基[例如，((烷磺酰基)氨基)芳基或((二烷基)氨基)芳基]；(氰基烷基)芳基；(烷氧基)芳基；(氨磺酰基)芳基[例如，(氨基磺酰基)芳基]；(烷磺酰基)芳基；(氰基)芳基；(羟烷基)芳基；((烷氧基)烷基)芳基；(羟基)芳基，((羧基)烷基)芳基；(((二烷基)氨基)烷基)芳基；(硝基烷基)芳基；(((烷基磺酰基)氨基)烷基)芳基；((杂脂环基)羰基)芳基；((烷磺酰基)烷基)芳基；(氰基烷基)芳基；(羟烷基)芳基；(烷基羰基)芳基；烷基芳基；(三卤烷基)芳基；对-氨基-间-烷氧羰基芳基；对-氨基-间-氰基芳基；对-卤代-间-氨基芳基；或(间(杂脂环基)-邻(烷基)芳基。

本文中使用的术语“芳基脂烃基”，例如“芳烷基”，是指被芳基取代的脂烃基团(例如C_1-4烷基)。“脂烃基”、“烷基”和“芳基”如本文中定义。芳基脂烃基(如芳烷基)的一个实例是苄基。

在本文中使用时，“芳烷基”是指被芳基取代的烷基(例如C_1-4烷基)。“烷基”和“芳基”均已定义如上。芳烷基的一个实例是苄基。芳烷基可任选地被一个或多个取代基取代，例如脂烃基[如，烷基、烯基或炔基，包括羧烷基、羟烷基或卤烷基，例如三氟甲基]，脂环基[例如，环烷基或环烯基]，(环烷基)烷基，杂环烷基，(杂环烷基)烷基，芳基，杂芳基，烷氧基，环烷氧基，杂环烷氧基，芳氧基，杂芳氧基，芳烷氧基，杂芳基烷氧基，芳酰基，杂芳酰基，硝基，羧基，烷氧羰基，烷基羰氧基，酰胺基[例如，氨基羰基，烷基羰基氨基，环烷基羰基氨基，(环烷基烷基)羰基氨基，芳基羰基氨基，芳烷基羰基氨基，(杂环烷基)羰基氨基，(杂环烷基烷基)羰基氨基，杂芳基羰基氨基，或杂芳烷基羰基氨基]，氰基，卤素，羟基，酰基，巯基，烷基硫烷基，亚磺酰氧基，脲，硫脲，氨磺酰基，磺酰胺基，氧基或氨甲酰基。

本文中使用的术语“双环环系”包括形成两个环的8-12(例如9、10或11)元的结构，其中两个环有至少一个共用的原子(例如共用2个原子)。双环环系包括双环脂烃基(例如，双环烷基或双环烯基)、双环杂脂烃基、双环芳基和双环杂芳基。

当在本文中使用时，“脂环基”包括“环烷基”和“环烯基”，它们均可任选地如下所述地被取代。当用于本文时，“环烷基”指饱和的3-10(例如5-10)个碳原子的碳环单环或双环(稠合或桥接的)环系。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、金刚烷基、降冰片烷基、五环辛基、八氢化茚基、十氢萘基、双环[3.2.1]辛基、双环[2.2.2]辛基、双环[3.3.1]壬基、双环[3.3.2]癸基、双环[2.2.2]辛基、或((氨基羰基)环烷基)环烷基。本文中使用的“环烯基”指有一个或多个双键的非芳族的3-10(例如4-8)个碳原子的碳环。环烯基的实例包括环戊烯基，1，4-环己二烯基，环庚烯基，环辛烯基，六氢化茚基，八氢萘基，环己烯基，环戊烯基，双环[2.2.2]辛烯基或双环[3.3.1]壬烯基。环烷基或环烯基可以任选地被一个或多个取代基取代，例如磷酰基、脂烃基[例如，烷基、烯基或炔基]、脂环基、(脂环基)脂烃基、杂脂环基、(杂脂环基)脂烃基、芳基、杂芳基、烷氧基、(脂环基)氧基、(杂脂环基)氧基、芳氧基、杂芳氧基、(芳基脂烃基)氧基、(杂芳基脂烃基)氧基、芳酰基、杂芳酰基、氨基、酰氨基[例如，(脂烃基)羰基氨基，(脂环基)羰基氨基，((脂环基)脂烃基)羰基氨基、(芳基)羰基氨基、(芳基脂烃基)羰基氨基、(杂脂环基)羰基氨基、((杂脂环基)脂烃基)羰基氨基、(杂芳基)羰基氨基或(杂芳基脂烃基)羰基氨基]、硝基、羧基[例如，HOOC-、烷氧羰基或烷基羰氧基]、酰基[例如，(脂环基)羰基、((脂环基)脂烃基)羰基、(芳基脂烃基)羰基、(杂脂环基)羰基、((杂脂环基)脂烃基)羰基或(杂芳基脂烃基)羰基]、氰基、卤素、羟基、巯基、磺酰基[例如，烷基-SO₂-和芳基-SO₂-]、亚磺酰基[例如，烷基-S(O)-]、硫烷基[例如，烷基-S-]、亚磺酰氧基、脲、硫脲、氨磺酰基、磺酰胺基、氧基或氨甲酰基。

在本文中使用时，术语“杂脂环基”包括杂环烷基和杂环烯基，它们均可任选地如下所述地被取代。

在本文中使用时，“杂环烷基”指3-10元的单或双环(稠合或桥接的)(例如5-10元单环或双环)饱和环结构，其中一个或多个环原子是杂原子(例如，N、O、S或其组合)。杂环烷基的实例包括哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、1，4-二氧杂环戊烷基、1，4-二硫杂环己烷基、1，3-二氧杂环戊烷基、噁唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、硫代吗啉基、八氢苯并呋喃基、八氢苯并吡喃基、八氢硫代苯并吡喃基、八氢吲哚基、八氢吡啶基、十氢喹啉基、八氢苯并[b]噻吩基、2-氧杂双环[2.2.2]辛基、1-氮杂双环[2.2.2]辛基、3-氮杂双环[3.2.1]辛基和2，6-二氧杂三环[3.3.1.0^3.7]壬基。单环的杂环烷基可以与一个苯基部分稠合形成结构，例如四氢异喹啉，它被归入杂芳基一类。在本文中使用时，“杂环烯基”指有一个或多个双键的单环或双环(例如5-10元的单或双环)非芳族环结构，其中一个或多个环原子是杂原子(例如N，O或S)。单环和双环杂脂环基按照标准的化学命名法编号。

杂环烷基或杂环烯基可以任选地被一个或多个取代基取代，例如磷酰基、脂烃基[如，烷基、烯基或炔基]、脂环基、(脂环基)脂烃基、杂脂环基、(杂脂环基)脂烃基、芳基、杂芳基、烷氧基、(脂环基)氧基、(杂脂环基)氧基、芳氧基、杂芳氧基、(芳基脂烃基)氧基、(杂芳基脂烃基)氧基、芳酰基、杂芳酰基、氨基、酰胺基[例如，(脂烃基)羰基氨基、(脂环基)羰基氨基、((脂环基)脂烃基)羰基氨基、(芳基)羰基氨基、(芳基脂烃基)羰基氨基、(杂脂环基)羰基氨基、((杂脂环基)脂烃基)羰基氨基、(杂芳基)羰基氨基、或(杂芳基脂烃基)羰基氨基]、硝基、羧基[例如HOOC-、烷氧羰基或烷基羰氧基]、酰基[例如，(脂环基)羰基、((脂环基)脂烃基)羰基、(芳基脂烃基)羰基、(杂脂环基)羰基、((杂脂环基)脂烃基)羰基或(杂芳基脂烃基)羰基]、硝基、氰基、卤素、羟基、巯基、磺酰基[例如，烷磺酰基或芳磺酰基]、亚磺酰基[例如，烷基亚磺酰基]、硫烷基[例如，烷基硫烷基]、亚磺酰氧基、脲、硫脲、氨磺酰基、磺酰胺基、氧基或氨甲酰基。

本文中使用的“杂芳基”一词，是指有4至15个环原子的单环、双环或三环环系，其中一个或多个环原子是杂原子(例如，N、O、S或其组合)，并且其中的单环环系是芳族环，或者双环或三环环系中至少一个环是芳族环。杂芳基包括有2至3个环的苯并稠合的环。例如，苯并稠合基团包括与1或2个4-8元的杂脂环基苯并稠合基团(例如，吲嗪基、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、二氢吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、喹啉基或异喹啉基)。杂芳基团的一些实例是氮杂环丁烷基、吡啶基、1H-吲唑基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、异喹啉基、苯并噻唑基、呫吨基、噻吨基、吩噻嗪基、二氢吲哚基、苯并[1，3]二氧杂环戊烯基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、噌啉基、喹啉基、喹唑啉基、酞嗪基、喹喔啉基、异喹啉基、4H-喹嗪基、苯并-1，2，5-噻二唑基或1，8-萘啶基。

单环杂芳基包括，但不限于，呋喃基、噻吩基、2H-吡咯基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、1，3，4-噻二唑基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡唑基、吡嗪基或1，3，5-三嗪基。单环杂芳基按照标准化学命名法编号。

双环杂芳基包括，但不限于，吲嗪基、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、吲哚啉基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、喹啉基、异喹啉基、吲嗪基、异吲哚基、吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-萘啶基或蝶啶基。双环杂芳基按照标准的化学命名法编号。

杂芳基可任选地被一个或多个取代基取代，例如脂烃基[如，烷基、烯基或炔基]，脂环基，(脂环基)脂烃基，杂脂环基，(杂脂环基)脂烃基，芳基，杂芳基，烷氧基，(脂环基)氧基，(杂脂环基)氧基，芳氧基，杂芳氧基，(芳基脂烃基)氧基，(杂芳基脂烃基)氧基，芳酰基，杂芳酰基，氨基，氧基(在双环或三环杂芳基的非芳族碳环或杂环上)，羧基，酰氨基，酰基[例如，脂烃基羰基、(脂环基)羰基、((脂环基)脂烃基)羰基，(脂烃基)羰基、(杂脂环基)羰基，((杂脂环基)脂烃基)羰基，或(杂芳基脂烃基)羰基]，磺酰基[例如，脂烃基磺酰基或氨基磺酰基]，亚磺酰基[例如，脂烃基亚磺酰基]，硫烷基[例如，脂烃基硫烷基]，硝基，氰基，卤素，羟基，巯基，亚磺酰氧基，脲，硫脲，氨磺酰基，磺酰胺基或氨甲酰基。或者，杂芳基可以是未被取代的。

取代的杂芳基的非限制性实例包括(卤)杂芳基[例如，一和二(卤)杂芳基]，(羧基)杂芳基[例如，(烷氧羰基)杂芳基]，氰基杂芳基，氨基杂芳基[例如，((烷磺酰基]氨基)杂芳基和((二烷基)氨基)杂芳基]，(酰氨基)杂芳基[例如，氨基羰基杂芳基，((烷基羰基)氨基)杂芳基，((((烷基)氨基)烷基)氨基羰基)杂芳基，(((杂芳基)氨基)羰基)杂芳基，((杂脂环基)羰基)杂芳基和((烷基羰基)氨基)杂芳基]，(环烷基)杂芳基，(烷氧基)杂芳基，(氨磺酰)杂芳基[例如，(氨磺酰基)杂芳基]，(磺酰基)杂芳基[例如，(烷磺酰基)杂芳基]，(羟烷基)杂芳基，(烷氧基烷基)杂芳基，(羟基)杂芳基，((羧基)烷基)杂芳基，((二烷基)氨基)烷基)杂芳基，(杂脂环基)杂芳基，(脂环基)杂芳基，(硝基烷基)杂芳基，(((烷基磺酰基)氨基)烷基)杂芳基，((烷基磺酰基)烷基)杂芳基，(氰基烷基)杂芳基，(酰基)杂芳基[例如，(烷基羰基)杂芳基]，(烷基)杂芳基，和(卤烷基)杂芳基[例如，三卤烷基杂芳基]。

本文中使用的“杂芳基脂烃基”(例如杂芳烷基)一词，是指被杂芳基取代的脂烃基(例如C_1-4烷基)。“脂烃基”、“烷基”和“杂芳基”的定义如上。

本文中使用的“杂芳烷基”一词，是指被杂芳基取代的烷基(例如C_1-4烷基)。“烷基”和“杂芳基”均已在前面定义。杂芳基可任选地被一个或多个取代基取代，例如烷基(包括羧基烷基、羟烷基和卤代烷基，如三氟甲基)，烯基，炔基，环烷基，(环烷基)烷基，杂环烷基，(杂环烷基)烷基，芳基，杂芳基，烷氧基，环烷氧基，杂环烷氧基，芳氧基，杂芳氧基，芳基烷氧基，杂芳基烷氧基，芳酰基，杂芳酰基，硝基，羧基，烷氧羰基，烷基羰氧基，氨基羰基，烷基羰基氨基，环烷基羰基氨基，(环烷基烷基)羰基氨基，芳基羰基氨基，芳烷基羰基氨基，(杂环烷基)羰基氨基，(杂环烷基烷基)羰基氨基，杂芳基羰基氨基，杂芳烷基羰基氨基，氰基，卤素，羟基，酰基，巯基，烷基硫烷基，亚磺酰氧基，脲，硫脲，氨磺酰基，磺酰胺基，氧基或氨甲酰基。

本文中使用的术语“环形部分”和“环形基团”，是指单、双和三环环系，包括脂环基、杂脂环基、芳基或杂芳基，它们均已在前面定义。

本文中使用的术语“桥接的双环环系”是指其中的环以桥接方式结合的双环杂脂环环系或双环脂环环系。桥接的双环环系的实例包括，但不限于，金刚烷基、降冰片烷基、双环[3.2.1]辛基、双环[2.2.2]辛基、双环[3.3.1]壬基、双环[3.2.3]壬基、2-氧杂双环[2.2.2]辛基、1-氮杂双环[2.2.2]辛基、3-氮杂双环[3.2.1]辛基和2，6-二氧杂三环[3.3.1.0^3.7]壬基。桥接的双环环系可以任选地被一个或多个取代基取代，例如烷基(包括羧基烷基、羟烷基和卤代烷基，如三氟甲基)、烯基、炔基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环烷基、(杂环烷基)烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷氧基、杂环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、芳基烷氧基、杂芳烷氧基、芳酰基、杂芳酰基、硝基、羧基、烷氧羰基、烷基羰氧基、氨基羰基、烷基羧基氨基、环烷基羰基氨基、(环烷基烷基)羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(杂环烷基烷基)羰基氨基、杂芳基羰基氨基、杂芳烷基羰基氨基、氰基、卤素、羟基、酰基、巯基、烷基磺酰基、亚磺酰氧基、脲、硫脲、氨磺酰基、磺酰胺基、氧基或氨甲酰基。

本文中使用的“酰基”一词指甲酰基或R^X-C(O)-(例如烷基-C(O)-，也称作“烷基羰基”)，其中R^X和“烷基”已在前面定义。乙酰基和新戊酰基是酰基的实例。

本文中使用的术语“芳酰基”或“杂芳酰基”指芳基-C(O)-或杂芳基-C(O)-。该芳酰基或杂芳酰基的芳基和杂芳基部分可任选地如先前定义地被取代。

本文中使用的“烷氧基”一词指烷基-O-基团，其中“烷基”已在前面定义。

本文中使用的“氨甲酰基”一词是指结构为-O-CO-NR^XR^Y或-NR^X-CO-O-R^Z的基团，其中R^X和R^Y已在上面定义，R^Z可以是脂烃基、芳基、芳基脂烃基、亲脂环基、杂芳基或杂芳基脂烃基。

本文中使用的“羧基”一词，当作为端基使用时，指-COOH、-COOR^X、-OC(O)H、-OC(O)R^X；当作为内部基团使用时，指-OC(O)-或-C(O)O-。

本文中使用的“卤代脂烃基”一词指被1-3个卤原子取代的脂烃基。例如，术语卤烷基包括基团-CF₃。

本文中使用的术语“巯基”指-SH。

本文中使用的“磺基”一词，当在末端使用时指-SO₃H或-SO₃R^X，当在内部使用时指-S(O)₃-。

本文中的“磺酰胺基”，当在末端使用时指结构-NR^X-S(O)₂-NR^YR^Z，当在内部使用时指-NR^X-S(O)₂-NR^Y，其中R^X、R^Y和R^Z已在上面定义。

本文中的“氨磺酰基”，当在末端使用时，指结构-S(O)₂-NR^XR^Y或-NR^X-S(O)₂-R^Z；当在内部使用时，指-S(O)₂-NR^X-或-NR^X-S(O)₂-，其中R^X、R^Y和R^Z定义如上。

在本文中使用时，“硫烷基”用在末端时指-S-R^X，用在内部时指-S-，其中R^X已在上面定义。硫烷基的实例包括脂烃基-S-，脂环基-S-，芳基-S-等。

在本文中使用时，“亚磺酰基”用在末端时指-S(O)-R^X，用在内部时指-S(O)-，其中R^X已在上面定义。亚磺酰基的实例包括脂烃基-S(O)-，芳基-S(O)-，(脂环基(脂烃基))-S(O)-，环烷基-S(O)-，杂脂环基-S(O)-，杂芳基-S(O)-等。

在本文中使用时，“磺酰基”用在末端时指-S(O)₂-R^X，用在内部时指-S(O)₂-，其中R^X已在上面定义。磺酰基的实例包括脂烃基-S(O)₂-、芳基-S(O)₂-、(脂环基(脂烃基))-S(O)₂-、脂环基-S(O)₂-、杂脂环基-S(O)₂-、杂芳基-S(O)₂-、(脂环基(酰胺基(脂烃基)))-S(O)₂-等。

在本文中使用时，“亚磺酰氧基”用在末端时指-O-SO-R^X或-SO-O-R^X，用在内部时指-O-S(O)-或-S(O)-O-，其中R^X已在上面定义。

在本文中使用时，“卤素”或“卤”基团指氟、氯、溴或碘。

在本文中使用时，“烷氧羰基”被术语羧基所涵盖，当其单独使用或与另一基团联合使用时，指例如烷基-O-C(O)-等基团。

在本文中使用时，“烷氧烷基”指例如一个烷基-O-烷基基团，其中烷基已在上面定义。

在本文中使用时，“羰基”指-C(O)-。

在本文中使用时，“氧基”指＝O。

在本文中使用时，术语“磷酰”指次膦酸根和磷酸根。次膦酸根和膦酸根的实例包括-P(O)(R^P)₂，其中R^P是脂烃基、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、(脂环基)氧基、(杂脂环基)氧基、芳基、杂芳基、脂环基或氨基。

在本文中使用时，“氨基烷基”指结构(R^X)₂N-烷基-。

在本文中使用时，“氰基烷基”指结构(NC)-烷基-。

在本文中使用时，当处于末端时“脲”基团指结构-NR^X-CO-NR^YR^Z，“硫脲”基团指结构-NR^X-CS-NR^YR^Z；当处于内部时，则分别指-NR^X-CO-NR^Y-或-NR^X-CS-NR^Y-；其中R^X、R^Y和R^Z已在上面定义。

在本文中使用时，“胍”基指结构-N＝C(N(R^XR^Y))N(R^XR^Y)或-NR^X-C(＝NR^X)NR^XR^Y，其中R^X和R^Y已定义如上。

在本文中使用时，术语“脒”基指结构-C＝(NR^X)N(R^XR^Y)，其中R^X和R^Y已在上面定义。

一般来说，术语“连位的”是指在一个含有两个或更多碳原子的基团上的取代基的位置，其中该取代基是连接在相邻的碳原子上。

通常，术语“偕的”是指在一个含有两个或更多碳原子的基团上的取代基的位置，其中取代基是连接在同一碳原子上。

术语“末端”和“内部”指取代基内的基团的位置。当该基团处在取代基的末端不再与化学结构的其余部分键合时，基团是端基。羧基烷基，即，R^XO(O)C-烷基，是用在末端的羧基的一个实例。当基团处在化学结构的某个取代基的中间时，它是内部基团。烷基羧基(例如烷基-C(O)O-或烷基-OC(O)-)和烷基羧基芳基(例如烷基-C(O)O-芳基-或烷基-O(CO)-芳基-)是用在内部的羧基实例。

在本文中使用时，“脂烃链”指支化或直的脂烃基团(例如，烷基、烯基或炔基)。直的脂烃链具有结构-[CH₂]_V-，其中V是1-6。支化的脂烃链是被一个或多个脂烃基取代的直的脂烃链。支化的脂烃链具有结构-[CHQ]_V-，其中Q是氢或脂烃基；然而，Q至少在一种情形应该是脂烃基。术语脂烃链包括烷基链、烯基链和炔基链，其中烷基、烯基和炔基在上面定义。

短语“任选被取代”与短语“取代的或未取代的”可交换使用。如本文所述，本发明化合物可任选地被一个或多个取代基取代，例如以上一般性示例说明的，或者作为本发明的特定的类、小类和物种举例的取代基。如本文所述，本文中所述化学式中包含的变量R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、A和其它变量包括特定的基团，例如烷基和芳基。除非另外指出，对于本文中包含的变量R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、A和其它变量，每个特定的基团均可任选地被本文所述的一个或多个取代基取代。特定基团的各个取代基可以进一步任选地被一个至三个卤原子、氰基、氧、烷氧基、羟基、氨基、硝基、芳基、脂环基、杂脂环基、杂芳基、卤烷基和烷基取代。例如，烷基可以被烷基硫烷基取代，而该烷基硫烷基可以任选地被1-3个卤原子、氰基、氧、烷氧基、羟基、氨基、硝基、芳基、卤烷基和烷基取代。作为补充的实例，(环烷基)羰基氨基的环烷基部分可以任选地被1-3个卤原子、氰基、烷氧基、羟基、硝基、卤烷基和烷基取代。当两个烷氧基与同一原子或相邻的原子结合时，这两个烷氧基可以与它们所结合的原子一起形成一个环。

通常，术语“取代的”，不管其前面是否有“任选地”一词，均指给定结构中的氢原子被某个特定的取代基代替。具体的取代基是以上在定义部分和以下在化合物及其实例的描述中所叙述的。除非另外指出，任选取代的基团可以在该基团的每个可取代的位置有一个取代基，当任何给定结构中一个以上的位置可以被选自特定基团的一个以上的取代基取代时，每个位置上的取代基可以相同或不同。环形取代基，例如杂环烷基，可以与另一个环(例如环烷基)结合，形成螺-双环环系，例如，两个环共用一个共同原子。正如本领域普通技术人员会认识到的，本发明预想到的取代基的组合是那些能导致形成稳定的或化学上可实现的化合物的组合。

本文中使用的短语“稳定的或化学上可实现的”，是指在经受对其进行制备、检测以及最好是回收、纯化和用于本文中公开的一种或多种用途的条件时，基本上不发生改变的那些化合物。在一些实施方案中，稳定的化合物或化学上可实现的化合物是在不存在湿气或其它化学反应活性条件之下，于40℃或更低的温度下保持至少一周时，基本上不改变的化合物。

在本文中使用时，有效量被定义为赋予受治疗的患者一定的疗效所需之数量，通常要根据患者的年龄、表面积、体重和状态而定。对于动物和人，剂量(以每平方米身体表面的毫克数为基础)的相互关系描述于Freireich等，Cancer Chemother.Rep.，50：219(1966)。身体表面积可以根据患者的高度和重量近似确定。例如见，ScientificTables，Geigy Pharmaceuticals，Ardsley，New York，537(1970)。本文中使用的“患者”一词指哺乳动物，包括人。

除非另外说明，本文中所述的结构还打算包括所有的异构体(例如，结构的对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构))形式，例如，各不对称中心的R和S构型，(Z)和(E)双键异构体，以及(Z)和(E)构象异构体。因此，本发明化合物的单个立体化学异构体以及对映异构的、非对映异构的和几何异构(或构象异构)的混合物，都属于本发明的范围。除非另外说明，本发明化合物的所有的互变异构形式均属于本发明的范围。另外，除非另外说明的；本文中所述的结构还要包括差别只在于存在一种或多种同位素富集的原子的化合物。例如，具有本发明结构的化合物，但是用氘或氚代替了氢原子，或者用¹³C-或¹⁴C-富集的碳代替了碳，属于本发明的范围。这类化合物可用于例如生物试验中的分析工具或探针，或作为治疗剂。

II.化合物

A.一般化合物

在一些方面，本发明提供可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式I化合物和抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式I化合物包括：

或其可药用的盐。

R₁是-Z^AR₈，其中各Z^A独立地是一个键或是一个任选取代的支化或直链的C_1-12脂烃链，其中Z^A的最多3个碳单元可任选地和独立地被-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^A-，-C(O)NR^ANR^A-，-C(O)O-，-NR^AC(O)O-，-O-，-NR^AC(O)NR^A-，-NR^ANR^A-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^A-，-SO₂NR^A-，或-NR^ASO₂NR^A-替代，条件是，-O-、-NR^ANR^A、-NR^AC(O)NR^A-或-NR^ASO₂NR^A-不与式I的氮环原子直接键合。各R₈独立地是R^A、卤素、-OH、-CN、-NO₂或-OCF₃。各R^A独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。

R₂和R₃是-Z^BR₉，其中各Z^B独立地是一个键或任选取代的支化或直链C_1-6脂烃链，其中Z^B的最多3个碳单元可任选地和独立地被-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^B-，-C(O)NR^BNR^B-，-C(O)O-，-NR^BC(O)O-，-NR^BC(O)NR^B-，-NR^BNR^B-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^B-，-SO₂NR^B-或-NR^BSO₂NR^B-替代。各R₉独立地是R^B、卤素、-OH、-CN、-NO₂、-NH₂或-OCF₃。各R^B独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

或者是，R₂和R₃合起来形成一个氧基。

A是-O-或-CR₆R₇-，其中各R₆和R₇是-Z^CR₁₀，其中的各Z^C独立地是一个键或是任选取代的支化或直链的C_1-6脂烃链，其中Z^C的最多3个碳单元可任选地和独立地被-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^C，-C(O)NR^CNR^C-，-C(O)O-，-NR^CC(O)O-，-NR^CC(O)NR^C-，-NR^CNR^C-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^C-，-SO₂NR^C或-NR^CSO₂NR^C-替代。各R₁₀独立地是R^C、卤素、-OH、-CN、-NO₂、-NH₂或-OCF₃。各R^C独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

R₄是-Z^DR₁₁，其中各Z^D独立地是一个键或是任选取代的支化或支链的C_1-12脂烃链，其中Z^D的最多3个碳单元可任选地和独立地被-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^D，-C(O)NR^DNR^D-，-C(O)O-，-NR^DC(O)O-，-O-，-NR^DC(O)NR^D-，-NR^DNR^D-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^D-，-SO₂NR^D-或-NR^DSO₂NR^D-替代，条件是，-SO-、-SO₂-或-SO₂NR^D不直接键合到与R₄相邻的羰基上。各R₁₁独立地是R^D、卤素、-OH、-CN、-NO₂、-NH₂或-OCF₃。各R^D独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

R₅是-Z^ER₁₂，其中各Z^E独立地是一个键或是任选取代的支化或支链的C_1-12脂烃链，其中Z^E的最多3个碳单元可任选地和独立地被-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^E-，-C(O)NR^ENR^E-，-C(O)O-，-NR^EC(O)O-，-O-，-NR^EC(O)NR^E-，-NR^ENR^E-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^E-，-SO₂NR^E-或-NR^ESO₂NR^E-替代。各R₁₂独立地是R^E、卤素、-OH、-CN、-NO₂、-NH₂或-OCF₃。各R^E独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

或者，R₄和R₅与它们所连接的原子一起形成一个任选取代的杂脂环基。B.具体的化合物1.取代基R ₁

R₁是-Z^AR₈，其中各Z^A独立地是一个键或是一个任选取代的支化或直链的C_1-12脂烃链，其中Z^A的最多3个碳单元可任选地和独立地被-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^A-，-C(O)NR^ANR^A-，-C(O)O-，-NR^AC(O)O-，-O-，-NR^AC(O)NR^A-，-NR^ANR^A-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^A-，-SO₂NR^A-，或-NR^ASO₂NR^A-替代，条件是，-O-、-NR^ANR^A、-NR^AC(O)NR^A-或-NR^ASO₂NR^A-不与式I的氮环原子直接键合。各R₈独立地是R^A、卤素、-OH、-CN、-NO₂或-OCF₃。各R^A独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。

在几个实施方案中，R₁是一个任选取代的脂烃基。例如，R₁是烷基、烯基或炔基，它们均可任选地被独立选自卤素、芳基、杂芳基、脂环基和杂脂环基的1-4个取代基取代。或者是，R₁是任选取代的烷基。例如，R₁是甲基、乙基、丙基或丁基，它们均可任选地被独立选自卤素、芳基、杂芳基、脂环基和杂脂环基的1-4个取代基取代。在其它实例中，R₁是未取代的烷基。或者是，R₁是任选取代的芳烷基。在几个实施例中，R₁是一个芳基甲基、芳基乙基或芳基-丙基，它们均可任选地被取代。或者是，R₁是苯甲基、苯乙基或苯丙基，它们均可任选地被独立选自卤素、芳基、羟基、脂烃基、脂环基、杂脂环基、芳基或杂芳基的1-3个取代基取代。

在几个实施方案中，R₁是任选取代的芳基。例如，R₁是单环或双环的芳基，它们均可任选地被取代。在其它实例中，R₁是任选被1-3个选自卤素、羟基、脂烃基、芳基、杂芳基、脂环基或杂脂环基的取代基取代的苯基。

在其它实施例中，R₁是选自氢、乙基、苯基、对氯苯基和苯甲基的基团。2.取代的R ₂ 和R ₃

R₂和R₃是-Z^BR₉，其中各Z^B独立地是一个键或任选取代的支化或直链C_1-6脂烃链，其中Z^B的最多3个碳单元可任选地和独立地被-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^B-，-C(O)NR^BNR^B-，-C(O)O-，-NR^BC(O)O-，-NR^BC(O)NR^B-，-NR^BNR^B-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^B-，-SO₂NR^B-或-NR^BSO₂NR^B-替代。各R₉独立地是R^B、卤素、-OH、-CN、-NO₂、-NH₂或-OCF₃。各R^B独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

或者是，R₂和R₃合起来形成一个氧基。

在几个实施方案中，R₂和R₃合起来形成一个氧基。3.基团A

A是-O-或-CR₆R₇-，其中各R₆和R₇是-Z^CR₁₀，其中的各Z^C独立地是一个键或是任选取代的支化或直链的C_1-6脂烃链，其中Z^C的最多3个碳单元可任选地和独立地被-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^C，-C(O)NR^CNR^C-，-C(O)O-，-NR^CC(O)O-，-NR^CC(O)NR^C-，-NR^CNR^C-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^C-，-SO₂NR^C或-NR^CSO₂NR^C-替代。各R₁₀独立地是R^C、卤素、-OH、-CN、-NO₂、-NH₂或-OCF₃。各R^C独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

在几个实施方案中，A是-O-。

在其它实施方案中，A是-CR₆R₇-。例如，在一些实施方案中，A是-CR₆R₇-，R₆或R₇中之一是氢。在其它实施例中，A是-CR₆R₇-，R₆或R₇中之一是氢，而R₆或R₇中的另一个是任选取代的C_1-6脂烃基。在其它实施例中，A是-CR₆R₇-，R₆或R₇中的一个是氢，另一个是未取代的C_1-6脂烃基。或者是，A是-CR₆R₇-，R₆或R₇都是氢。4.取代基R ₄

R₄是-Z^DR₁₁，其中各Z^D独立地是一个键或是任选取代的支化或支链的C_1-12脂烃链，其中Z^D的最多3个碳单元可任选地和独立地被-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^D，-C(O)NR^DNR^D-，-C(O)O-，-NR^DC(O)O-，-O-，-NR^DC(O)NR^D-，-NR^DNR^D-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^D-，-SO₂NR^D-或-NR^DSO₂NR^D-替代，条件是，-SO-、-SO₂-或-SO₂NR^D不直接键合到与R₄相邻的羰基上。各R₁₁独立地是R^D、卤素、-OH、-CN、-NO₂、-NH₂或-OCF₃。各R^D独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

在几个实施方案中，R₄是-Z^DR₁₁，其中各Z^D独立地是一个键或是一个任选取代的支化或直的C_1-12脂烃基链，其中Z^D的最多3个碳原子可任选地和独立地被-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NR^D-、-C(O)NR^DNR^D-、-C(O)O-、-NR^DC(O)O-、-NR^DC(O)NR^D-、-NR^DNR^D-、-S-、-SO-、-SO₂-、-NR^D-、-SO₂NR^D-或-NR^DSO₂NR^D-取代，条件是-SO-、-SO₂-或-SO₂NR^D-不与式I的羰基直接键合。各R₁₁独立地是R^D、卤素、-OH、-CN-、-NO₂、-NH₂或-OCF₃。各R^D独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

在另外的实施方案中，R₄是-Z₁-V₁-Z₂-V₂-Z₃-V₃，V₁、V₂和V₃均独立地是一个键，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，或者当V₁、V₂或V₃是R₄的末端基团时为氢；Z₁、Z₂和Z₃均独立地是一个键，-C(O)-，-C(O)C(O)-，-C(S)-，-C(O)N(Q₆)-，-N(Q₆)C(O)-，-C(O)C(O)N(Q₆)-，-O-，，SO-，-SO₂-，-N(Q₆)SO₂-，-N(Q₆)C(O)N(Q₆)-，-N(Q₆)C(S)N(Q₆)-，-N(Q₆)-，-N(Q₆)SO₂-，-SO₂N(Q₆)-，-C(O)N(Q₆)SO₂-，-SO₂N(Q₆)C(O)-，或者当Z₁、Z₂或Z₃是R₄的末端基团时为氢；各Q₆独立地是氢或任选取代的脂烃基。

在另一实施方案中，R₄是任选取代的(脂烃基)氨基，其中R₄的脂烃基部分为-Z₂-V₂-Z₃-V₃或-Z₃-V₃，其中Z₂和Z₃均独立地是一个键，-C(O)-，-N(Q₅)-，-CH(OH)-，-C(O)N(Q₆)-或-C(O)C(O)N(Q₆)-；V₂独立地是一个键，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基；V₃是氢，任选取代的脂烃基，或任选取代的脂环基。

在又一实施方案中，Z₂是-CH(OH)-，V₂是一个键，Z₃是-C(O)N(Q₆)-，于是R₄是-N(Q₆)-CH(OH)-C(O)-N(V₃)(Q₆)。

在某些实施方案中，R₄是任选取代的(脂烃基)氨基，任选取代的(脂环基)氨基，任选取代的烷氧基，或是羟基。

在另一实施方案中，R₄是任选被1-3个卤原子、羟基、脂烃基、脂环基或杂脂环基取代的烷氧基。

在几个实施方案中，R₄是氨基。R₄的实例包括单取代的氨基。R₄的其它实例包括(脂环基(羰基(羰基(烷基))))氨基，(氨基(羰基(羰基(脂烃基))))氨基，脂烃基(羰基(羰基(脂烃基)))氨基，或(芳基(氨基(羰基(羰基(脂烃基)))))氨基，它们均可任选地被1-3个取代基取代。

在几个实施方案中，R₄是-NR_4ZR’_4Z、-SR_4Y或-NR_4Y-CR_4XR’_4X-L₁-NR_4Z-R_4W，其中R_4Y独立地是氢，或是任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基、任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；各R_4W均独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的杂脂环基，或任选取代的脂环基；各R_4X和R’_4X均独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的杂芳基，任选取代的苯基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基；或者R_4X和R’_4X与它们都连接的原子一起形成一个任选取代的3-7元脂环基或杂脂环基环；各L₁是-CH₂，-C(O)-，-CF₂-，-C(O)C(O)-，-C(O)O-，-S(O)-或-SO₂-；R_4Z或R’_4Z均为氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；或者R_4Z和R’_4Z与它们都连接的氮原子一起，可以形成一个任选取代的3-7元杂脂环基环。

在几个实施方案中，R_4X和R’_4X均独立地是氢，或是任选取代的脂烃基、任选取代的脂环基，或任选取代的(脂环基)脂烃基。[00100]在几个实施方案中，L₁是-C(O)C(O)-或-SO₂-。

在其它几个实施方案中，各R_4W均为氢或是任选取代的脂环基。

在几个实施方案中，R₄是-NH-CHR_4X-C(O)-C(O)-N(R_4Z)R_4W。

在几个实施方案中，R₄是-NH-CHR_4X-CH(OH)-C(O)-N(R_4Z)R_4W。

在几个实施方案中，R₄是-NH-CHR_4X-C(O)-C(O)-NHR_4Z，其中-NHR_4Z是NH-环丙基、-NH-甲基、-NH-乙基、-NH-异丙基、-NH-正丙基。

在几个实施方案中，R₄是-NR_4ZR’_4Z、-SR_4Z，其中R_4Z和R’_4Z均独立地是氢、烷基、环烷基或芳烷基。R_4Z的非限制性实例包括甲基、乙基、叔丁基、环戊基、环己基和苄基。

在其它实施方案中，R₄是(-NH-CR_4XR’_4X-L₁-C(O))_i-M，其中各M独立地是-OH、-R_4X、-NR_4ZR’_4Z或-OR_4X，各i是1或2，L₁、R_4Z、R_4X和R’_4Z的定义如上。

在几个实施方案中，R₄是(-NH-CR_4ZR’_4Z-L₁-C(O))_i-M，其中L₁是-C(O)-，i是1，M独立地是-R_4X、-N(R_4XR’_4X)、-OR_4X、-NHSO₂R_4X或-SR_4X。

在一些实施方案中，R’_4Z是H，R_4Z是脂烃基、(芳基)脂烃基或脂环基。R_4X的非限制性实例包括H，

在一些实施方案中，R’_4X是H，R_4X是任选取代的脂烃基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂脂烃基或任选取代的杂芳烷基。R_4X的一些非限制性实例包括：

其中c是0-3。

在几个实施方案中，R₄是：

其中R_4X是

R_4W是

或是氢。

在一些实施方案中，R₄是

其中各R₅₆独立地是任选取代的C_1-6脂烃基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的脂环基，或任选取代的杂脂环基；各R₅₇独立地是任选取代的脂烃基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的脂环基或任选取代的氨基；m是1或2；各R_4X和R’_4X独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；或者R_4X和R’_4X与它们都连接的原子一起形成一个任选取代的3-7元脂环基或杂脂环基环。

在其它一些实施方案中，R₄是

其中R₅₈和R₅₉各自独立地选自任选取代的脂烃基，任选取代的烷氧基，任选取代的芳氧基，任选取代的杂芳氧基，任选取代的(脂环基)氧基，任选取代的(杂脂环基)氧基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的脂环基或任选取代的氨基；各R_4X和R’_4X独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；或者R_4X和R’_4X与它们都连接的原子一起形成一个任选取代的3-7元的脂环基或杂脂环基环。

在几个实施方案中，R₄是选自：

在一些具体的实施方案中，R₄是

其中X₂₀₀是-OX₂₀₂或-X₂₀₂，X₂₀₂是脂烃基、脂环基、杂脂环基、芳基或杂芳基。

在其它实施方案中，R₄是

R₄的其它实例示例说明于PCT出版物WO 2004/103996 A1、WO 2004/72243 A2、WO 03/064456 A1、WO 03/64455 A2、WO 03/064416A1和美国专利出版物US 2005/0090450以及本文中参考引用的其它出版物中，上述各文献均以参考引用的方式全文并入本文中。5.取代基R ₅ ：

R₅是-Z^ER₁₂，其中各Z^E独立地是一个键或是任选取代的支化或支链的C_1-12脂烃链，其中Z^E的最多3个碳单元可任选地和独立地被-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^E-，-C(O)NR^ENR^E-，-C(O)O-，-NR^EC(O)O-，-O-，-NR^EC(O)NR^E-，-NR^ENR^E-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^E-，-SO₂NR^E-或-NR^ESO₂NR^E-替代。各R₁₂独立地是R^E、卤素、-OH、-CN、-NO₂、-NH₂或-OCF₃。各R^E独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

在几个实施方案中，R₅可任选地被1-4个取代基取代。

在某些实施方案中，R₅是-Q₄-W₄-Q₃-W₃-Q₂-W₂-Q₁，其中W₂、W₃和W₄均独立地是一个键，-C(O)-，-C(S)-，-C(O)N(Q₅)-，-C(O)O-，-O-，-N(Q₅)C(O)N(Q₅)-，-SO₂-，-N(Q₅)SO₂-，-S-，-N(Q₅)-，-SO-，-OC(O)-，-N(Q₅)C(O)O-或-SO₂N(Q₅)-；Q₁、Q₂、Q₃和Q₄独立地是一个键，任选取代的C_1-4脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，或者当Q₁、Q₂、Q₃或Q₄是R₅的末端基团时为氢；各Q₅独立地是氢或是任选取代的脂烃基。在一些具体的实施方案中，Q₄是一个键。

在几个实施方案中，R₅是任选取代的酰基。在几个实施例中，R₅是任选取代的烷基羰基。R₅的其它实例包括(氨基)烷基羰基、(卤)烷基羰基、(芳基)烷基羰基、(脂环基)烷基羰基或(杂脂环基)烷基羰基。在这些实施例中包括以下实施方案，其中R₅是(杂环烷基(氧(羰基(氨基))))烷基羰基，(杂芳基(羰基(氨基(烷基(羰基(氨基))))))烷基羰基，(双环芳基(磺酰基(氨基)))烷基羰基，(芳基(烷氧基(羰基(氨基))))烷基羰基，(烷基(羰基(氨基)))烷基羰基，(烯基(烷氧基(羰基(氨基))))烷基羰基，(脂环基(烷基(氨基(羰基(氨基)))))烷基羰基，(杂芳基(羰基(氨基(烷基(羰基(氨基))))))烷基羰基，(烷基(氨基(羰基(氨基))))烷基羰基，或(双环芳基(氨基(羰基(氨基))))烷基羰基，它们均可任选地被1-3个取代基取代。

在几个实施方案中，R₅是任选取代的羧基。在一个实施例中，R₅是任选取代的烷氧羰基。R₅的另一实例包括C_1-4烷氧羰基或(三环芳基)烷氧羰基，它们均可任选地被1-3个取代基取代。其它的羧基包括(脂烃(氧))基羰基，(杂芳基烷(氧)基羰基，(杂脂环基(氧)基羰基，(芳烷(氧)基)羰基，它们均可任选地被1-3个卤素、烷氧基、脂烃基、脂环基、杂脂环基、芳基、杂芳基或其组合取代。

在几个实施方案中，R₅是任选取代的氨基羰基。R₅的实例包括(烷氧基(芳基(烷基)))氨基羰基，(烷基)氨基羰基或(芳基(烷氧基(羰基(烷基(氨基(羰基(烷基)))))))氨基羰基，它们均可任选地被1-3个取代基取代。

在几个实施方案中，R₅是任选取代的杂芳基。在一个实施例中，R₅是任选的噁唑基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、三嗪基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基或哒嗪基。

在几个实施方案中，R₅是烷基磺酰基、氨基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、脂环基磺酰基或杂脂环基磺酰基，它们均可任选地被1-4个取代基取代。

在几个实施方案中，R₅是任选取代的烷基磺酰基。R₅的实例包括(芳基)烷磺酰基或(烷基(氨基)烷磺酰基，它们均可任选地被1-3个取代基取代；烷基磺酰基，氨基磺酰基，芳基磺酰基，杂芳基磺酰基，脂环基磺酰基或杂脂环基磺酰基，它们均可任选地被取代。在某些实施方案中，R₅是任选取代的烷基磺酰基。

在其它一些实施方案中，R₅是(芳基)烷磺酰基或(烷基(氨基))烷磺酰基，它们均可任选地被取代。

在一些具体的实施方案中，R₅是(氨基)烷基羰基，(卤)烷基羰基，(芳)烷基羰基，(脂环基)烷基羰基或(杂脂环基)烷基羰基，(杂环烷基(氧(羰基(氨基))))烷基羰基，(杂芳基(羰基(氨基(烷基(羰基(氨基)))))烷基羰基，(双环芳基(磺酰基(氨基)))烷基羰基，(芳基(烷氧基(羰基(氨基))))烷基羰基，(烷基(羰基(氨基)))烷基羰基，(烯基(烷氧基(羰基(氨基))))烷基羰基，(脂环基(烷基(氨基(羰基(氨基)))))烷基羰基，(杂芳基(羰基(氨基(烷基(羰基(氨基))))))烷基羰基，(烷基(氨基(羰基(氨基))))烷基羰基，或(双环芳基(氨基(羰基(氨基))))烷基羰基，它们均可任选地被取代。

在其它具体的实施方安中，R₅是杂芳基羰基，(脂环基(烷基(酰氨基(烷基))))羰基，(杂脂环基(氧(酰氨基(烷基))))羰基，(芳基(磺酰基(氨基(烷基))))羰基，(芳烷基(氧(酰胺基(烷基))))羰基，(脂烃基(氧(酰胺基(烷基))))羰基，(脂环基(烷基(酰胺基(烷基))))羰基，(杂脂环基)羰基或(杂芳基(酰胺基(烷基(酰氨基(烷基))))羰基，它们均任选地被1-4个卤原子、脂烃基、脂环基、酰基、烷氧基或其组合取代。

在另外的实施方案中，R₅是酰胺基。例如，R₅是(烷氧基(芳基(烷基)))氨基羰基，(烷基)氨基羰基或(芳基(烷氧基(羰基(烷基(氨基(羰基(烷基)))))))氨基羰基，它们均任选地被取代。

在几个实施方案中，R₅是

其中T是一个键，-C(O)-，-OC(O)-，-NHC(O)-，-S(O)₂N(H)-，-C(O)C(O)-或-SO₂-；各R独立地是氢，氨基，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基；各R₁₃和R’₁₃独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；和R₁₄独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的杂芳基，任选取代的苯基；或者结合在相邻原子上的R₁₃和R₁₄与它们所连接的原子一起形成一个5-7元任选取代的单环脂环基，或6-12元任选取代的双环杂脂环基；或者R₁₃和R’₁₃与它们所连接的原子一起形成一个任选取代的脂环基或任选取代的杂脂环基。为清楚起见，当R₅是QVI时，在每个亚单元中的R₁₃、R’₁₃和R₁₄均可独立地如上所述地选择。一个亚单元中的R₁₃、R’₁₃和R₁₄变量的设定不必与其它亚单元中R₁₃、R’₁₃和R₁₄变量的设定相同。

在其它实施方案中，R₅是QI或QII。

在一些实施方案中，QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中取代基里的R是

在其它实施方案中，R₅是QVI，R是

在其它实施方案中，QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中取代基里的R是

其中各R₁₅和R’₁₅独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的杂脂环基，或任选取代的脂环基；或者R₁₅和R’₁₅与它们都结合的原子一起形成一个任选取代的脂环基或任选取代的杂脂环基；各个K独立地是一个键，C_1-12脂烃基，-O-，-S-，-S(O)₂，-NR₁₆-，-C(O)-，或-C(O)NR₁₆-，其中R₁₆是氢或任选取代的C_1-12脂烃基；n是3。为清楚起见，当QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中存在一个以上的R₁₅时，各R₁₅可以相同或不同。在几个实施方案中，R₁₅或R’₁₅是[C_3-10环烷基或C_3-10环烯基]-C_1-12脂烃基，(3-10元)杂脂环基，(3-10元)杂脂环基-C_1-12脂烃基，(5-10元)杂芳基，或(5-10元)杂芳基-C_1-12脂烃基。

在另外的实施方案中，QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中取代基的R是

在另外的实施方案中，QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中取代基的R是

其中各个Z独立地是-O-、-S-、-NR₅₀-或-C(R₅₀)₂-，

独立地是单键或双键，各R₅₀独立地是氢、任选取代的脂烃基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂脂环基、或任选取代的脂环基；n是1或2。

在几个实施方案中，R₅是

其中T是一个键，-C(O)-，-OC(O)-，-NHC(O)-，-S(O)₂N(H)-，-C(O)C(O)-或-SO₂-；各R独立地是氢，氨基，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；各R₁₃和R’₁₃均独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；各R₁₃独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的杂芳基，任选取代的苯基，或者结合在相邻原子上的R₁₃和R₁₄与它们连接的原子一起形成一个5-7元任选取代的单环杂脂环基，或6-7元任选取代的双环杂脂环基；其中每一个杂环脂环或者R₁₃和R’₁₃与它们连接的原子一起形成一个任选取代的脂环基或任选取代的杂脂环基；各R₁₅和R’₁₅独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的杂芳基，任选取代的苯基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基；或者R₁₅和R’₁₅与它们都连接的原子一起形成一个任选取代的3-7元脂环基或杂脂环基环；各R₁₆独立地是氢或是一个保护基团。

在一些实施方案中，R₁₅和R’₁₅与它们连接的原子一起形成一个3-7元环。非限限性的实例包括：

R₁₁和R₁₃的非限制性实例包括：

或者是，R₁₃和R₁₅与它们连接的原子一起，可以形成一个任选取代的5-7元单环杂脂环基或任选取代的6-12元双环杂脂环基，其中各杂脂环基或芳基环可任选地含有另一个选自O、S和N的杂原子。

另外，R₁₅和R₁₆与它们连接的原子一起，可以形成一个环。

在几个实施方案中，R₅是：

其中T是-C(O)-，R是

在几个实施方案中，R₅是选自以下结构的基团：

在一些实施方案中，R₅是

其中R的定义如上。

R₅的其它实例示例说明在PCT出版物WO2004/103996A1、WO2004/72242A2、WO03/064456A1、WO03/64455A2、WO03/064416A1和美国专利出版物US2005/0090450以及本文引用的其它出版物中，上述文献均以参考引用的方式全部并入本文中。C.亚属化合物

本发明的另一方面提供了可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式Ia化合物和抑制丝氨酸蛋白酶的方法。式Ia化合物包括：

或其可药用的盐，其中R₁、R₂、R₃和A已在上面式I中定义。

各R_4a是-Z₁-V₁-Z₂-V₂-Z₃-V₃，V₁、V₂和V₃均独立地是一个键，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，或者当V₁、V₂、V₃是R₂的端基时为氢；各Z₁、Z₂和Z₃独立地是一个键，-C(O)-，-C(O)C(O)-，-C(S)-，-C(O)N(Q₅)-，-N(Q₅)C(O)-，-C(O)C(O)N(Q₅)-，-O-，-SO-，-SO₂-，-N(Q₅)SO₂-，-N(Q₅)C(O)N(Q₅)-，-N(Q₅)C(S)N(Q₅)-，-N(Q₅)-，-N(Q₅)SO₂-，-SO₂N(Q₅)-。-C(O)N(Q₅)SO₂-，-SO₂N(Q₅)C(O)-，或者当Z₁、Z₂或Z₃是R₂的端基时为氢；各Q₅独立地是氢，或是任选取代的脂烃基。

各R_5a是-Q₄-W₄-Q₃-W₃-Q₂-W₂-Q₁；其中W₂、W₃和W₄均独立地是一个键，-C(O)-，-C(S)-，-C(O)N(Q₅)-，-C(O)O-，-O-，-N(Q₅)C(O)N(Q₅)-，-SO₂-，-N(Q₅)SO₂-，-S-，-N(Q₅)-，-SO-，-N(Q₅)C(O)-，-OC(O)-，-N(Q₅)C(O)O-或-SO₂N(Q₅)-；各Q₁、Q₂、Q₃和Q₄独立地是一个键，任选取代的C_1-4脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，或者当Q₁、Q₂、Q₃或Q₄是R_5a的端基时为氢；各Q₅独立地是氢或是任选取代的脂烃基。

在几个实施例中，R_4a是任选取代的(脂烃基)氨基，任选取代的烷氧基，或是羟基。

在几个实施例中，R_4a是一个(脂烃基)氨基，其中氮原子可任选地被-Z₂-V₂-Z₃-V₃或-Z₃-V₃取代，各Z₂和Z₃独立地是一个键、-C(O)-、-N(Q₅)-或-C(O)C(O)N(Q₅)-；并且各V₂和V₃独立地是一个键，任选取代的脂烃基，或任选取代的脂环基。

本发明的另一方面提供了可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式Ib化合物及抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式Ib化合物包括：

或其可药用的盐，其中R₁、R₂、R₃、R₁₄、R、T和A已在上面式I中定义。

各G是一个2-15个原子的任选取代的脂烃链，它可任选地含有1-3个选自O、S和N的杂原子。

式Ib的化合物的实例包括：其中R₁、R₂、R₃、R₈、R、T和A在以上式I中定义。

式Ib化合物的其它例是：

其中R₁、R₂、R₃和A在以上式I中定义，各R_4W独立地是

或是氢；各个T独立地是一个键，-C(O)-，-OC(O)-，-NHC(O)-，-S(O)₂N(H)-，-C(O)C(O)-，或-SO₂-；各R独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或是任选取代的杂芳基；各R₁₄独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的杂芳基，任选取代的苯基。

式Ib化合物的进一步的具体实例是

式Ib化合物的其它实例包括

本发明的另一方面提供可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式I化合物及抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式II化合物包括：

或其可药用的盐，其中R_4X、R’_4X、R_4Z、R_4W和A已在上面定义。

各R_1a是任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。

各R_4Y独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

各R₁₄独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的杂脂环基，或任选取代的脂环基。

各R_4X和R’_4X独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的杂芳基，任选取代的苯基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基；或者R_4X和R’_4X与它们都连接的原子一起形成一个任选取代的3-7元脂环基或杂脂环基环，或者R_4X和R_4Y与它们连接的原子一起形成一个任选取代的5-7元杂脂环基环。

各R_5b是-Z^FR₂₁，其中Z^F是-CH₂-、-NH-、-CH(R₂₂)-或-O-，R₂₁是任选取代的6-7元脂环基或任选取代的叔丁基，R₂₂是任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

各R_4Z独立地是氢，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，或任选取代的脂烃基。

另外，各R_4W独立地是氢，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，或任选取代的脂烃基；或者R_4Z和R_4W与它们连接的氮原子一起形成一个任选取代的杂脂环基。

本发明的另一方面提供了可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式III化合物及抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式III化合物包括：或其可药用的盐，其中A在以上式I中定义，R_5e是

R_4e是：

R’_4e是：

或氢；R_1e是任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。

本发明的另一方面提供了可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式IV化合物及抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式IV化合物包括：

或其可药用的盐，其中R_5e是：

R_4e是

R’_4e是

或氢。

另外，各R_1f和R’_1f独立地是氢，磺酰胺，磺酰基，亚磺酰基，任选取代的酰基，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基或任选取代的杂芳基，或者R_1f和R’_1f与它们连接的氮原子一起形成一个任选取代的、饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的5-8元杂脂环基或杂芳基。

本发明的另一方面提供了可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式V化合物和抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式V化合物包括：

或其可药用的盐，其中R_5e、R_4e和R’_4e在以上式III中定义。

各个D独立地是-CR₁₄-、N、S或O，条件是，不超过两个D独立地是S或O；R₁₄在以上式I中定义。

本发明的另一方面提供了可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式VI化合物和抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式VI化合物包括：

或其可药用的盐，其中R_5e、R_4e和R’_4e在以上式III中定义。

各R_1g是取代的芳基或取代的杂芳基。在一些实施方案中，R_1g是D.实施方案的组合

其它的实施方案包括上述取代基R₁、R₂、R₃、R₄、R₅和A的任何组合。E.示例化合物

本发明打算包括其中R₁和R₂含有丝氨酸蛋白酶抑制剂的结构元件的化合物。具有相当于取代基R₁和R₂的丝氨酸蛋白酶抑制剂结构元件的化合物，包括但不限于，以下出版物中的化合物：WO 97/43310，US 20020016294，WO01/81325，WO 01/58929，WO 01/32691，WO 02/08198，WO 01/77113，WO 02/08187，WO 02/08256，WO 02/08244，WO 03/006490，WO 01/74768，WO 99/50230，WO 98/17679，WO 02/48157，WO 02/08251，WO 02/07761，WO 02/48172，WO 02/08256，US20020177725，WO 02/060926，US 20030008828，WO 02/48116，WO 01/64678，WO01/07407，WO 98/46630，WO 00/59929，WO 99/07733，WO 00/09588，US 20020016442，WO 00/09543，WO 99/07734，US 6,018,020，US 6,265,380，US 6,608,027,US20020032175，US 20050080017，WO 98/22496，WO 05/028502，US 5,866,684，WO 02/079234，WO 00/31129，WO 99/38888，WO 99/64442，WO 2004072243，WO02/18369，US2006046956，US2005197301，WO2005058821，WO2005051980，WO2005030796，WO2005021584，WO2005113581，WO2005087731，WO2005087725，WO2005087721，WO2005085275，WO2005085242，US2003216325，WO2003062265，WO2003062228，WO2002008256，WO 2002008198，WO2002008187，WO 2002048172，WO 2001081325，WO 2001077113，US 6251583，US 5990276，US20040224900，US20040229818，WO2004037855，WO2004039833，WO200489974，WO2004103996，WO2004030670，WO2005028501，WO2006007700，WO2005070955，WO2006007708，WO2006000085，WO2005073195，WO2005073216，WO2004026896，WO2004072243，WO2004113365，WO2005010029，US20050153877，WO2004093798，WO2004094452，WO2005046712，WO2005051410，WO2005054430，WO2004032827，WO2005095403，WO2005077969，WO2005037860，WO2004092161，WO2005028502，WO2003087092，和WO2005037214，它们均以参考引用的方式并入本文。

本发明的具体的示例化合物列在下面的表1中。表1：本发明的示例化合物

III.合成方案

式I化合物容易从市场上可买到的起始物利用下面提供的示例性合成路线合成。制备式I化合物的示例性合成路线提供在下面的制备、方法、实施例和方案部分中。

一种制备其中A是0的式I化合物的方法示于方案1中。方案1：

双保护的脯氨酮1a与溴乙酸乙酯在锌和三甲基氯硅烷存在下反应，得到酯中间体1b，为4∶1的非对映体混合物。脂中间体1b与肼反应，形成中间体酰肼(未画出)，它接着用例如亚硝酸钠氧化，然后环化形成取代的螺吡咯烷中间体1c。该取代的螺吡咯烷中间体1c可以用两种方法转化成取代的中间体1d。1c与芳基卤化物(例如取代的溴苯)在钯催化剂(例如Pd₂(dba)₃)、Xantphos(4，5-二(二苯膦基)-9，9-二甲基呫吨)和碳酸钾存在下反应，得到中间体1d，其中R₁是芳基。或者是，中间体1c可以用合适的烷基卤化物(例如苄基溴或乙基碘)在碱(例如氢化钠)存在下烷基化，得到中间体1d，其中R₁是任选取代的烷基。1d的非对映体可以用色谱法分离。

从1d中选择性去除N保护基以得到1e，这可以用HCl在乙酸乙酯中完成。中间体1e通过与R₁₂-C(O)-OH在偶联剂(如EDC、HOBT和DIEA)存在下反应，进一步转化成中间体1f。使用例如TFA在二氯甲烷中除去1f的酯保护基，得到酸中间体1g。1g与R₁₁-N(R^D)NH在偶联剂(例如EDC、HOBT和DIEA)存在下反应，得到其中A为0的本发明化合物。在某些实施方案中，R₁₁可以含有羟基部分-CH(OH)C(O)-，它用例如Des-Martin五价碘氧化剂或次氯酸钠在TEMPO存在下氧化，得到式I化合物，其中R₁₂包含基团-C(O)C(O)-。

方案2：

参看方案2，双保护的脯氨酮1a与(乙氧羰基亚甲基)三苯基膦烷反应，得到不饱和酯2a。2a与硝基甲烷在四甲基胍(TMG)存在下反应，得到中间体硝基化合物2b。2b在10％Pd/C存在下氢化，得到氨基化合物2c。2c在水中用氢氧化锂水解，得到酸2d，它在EDC、HOBT和DIEA存在下环化，得到内酰胺中间体2e。中间体2e像前面对方案1中1c所述地那样，转化成其中A是CH₂的式I化合物。

IV.制剂，给药和用途

本发明的另一实施方案提供了含有式I化合物或其可药用盐或盐混合物的药物组合物。根据另一实施方案，式I化合物以能有效减少样品或患者中病毒承载量的数量存在，其中该病毒编码其生命周期所必需的丝氨酸蛋白酶，还存在一种可药用的载体。

如果在这些组合物中使用本发明化合物的可药用盐，这些盐优选从无机或有机酸及碱衍生形成。这些酸式盐中包括以下的盐：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶脂酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。碱式盐包括铵盐、碱金属盐(例如钠盐和钾盐)、碱土金属盐(例如钙和镁盐)，与有机碱的盐(例如二环己胺盐，N-甲基-D-葡糖胺盐)，以及与氨基酸(例如精氨酸、赖氨酸)的盐等。

另外，含碱性氮的基团可以用以下试剂季胺化，例如低级烷基卤化物(如甲基、乙基、丙基和丁基氯、溴及碘化物)；硫酸二烷基酯，例如硫酸二甲酯、二乙酯、二丁酯和二戊酯；长链卤化物，例如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基卤化物，例如苄基和苯乙基溴化物及其它。由此得到水溶或油溶或者水或油可分散的产物。

本发明的组合物和方法中使用的化合物还可以通过附加合适的官能团进行修饰，以提高选择性生物性能。这类修饰是本领域已知的，包括增强向给定的生物系统(例如，血液、淋巴系统、中枢神经系统)生物渗透、提高口服利用度、增加溶解度以便能注射给药、改变代谢和改变排泄速度的修饰。

可以用在这些组合物中的可药用的载体包括，但不限于，离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白(例如人血清蛋白)，缓冲物质(例如磷酸盐)，甘氨酸，山梨酸，山梨酸钾，饱和的植物脂肪酸的偏甘油酯混合物，水，盐或电解质(例如鱼精蛋白硫酸盐，磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、氯化钠、锌盐)，胶体二氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素基物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜡，聚乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物，羊毛脂。

按照另一实施方案，本发明的组合物被配制成用于向哺乳动物给药。在一项实施方案中，该哺乳动物是人。

本发明的此类药物组合物可以口服、肠道外，吸入喷雾，局部，直肠，经鼻，颊含，阴道或经由植入的贮库给药。这里使用的术语“肠道外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。最好是，本发明组合物以口服或静脉内的形式给药。

本发明组合物的无菌可注射的形式可以是水基或油基混悬剂。这些混悬剂可以按照本领域已知的技术使用合适的分散或润湿剂及悬浮剂配制。无菌的可注射制剂也可以是在无毒的肠道外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌的可注射溶液或悬浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。在可以使用的可药用的稀释剂或溶剂中包括水、Ringer溶液和等渗的氯化钠溶液。此外，无菌的非挥发性油通常被用来作为溶剂或悬浮介质。就此而言，可以使用任何无刺激性的非挥发油，包括合成的甘油单酯或二酯。脂肪酸，例如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂，正如天然的可药用油，例如橄榄油或苧麻油一样，尤其是其聚氧乙烯化的形式。这些油溶液或悬浮液还可以含有长链的醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或在可药用的剂型(包括乳剂和混悬剂)的配制中通常使用的类似的分散剂。其它常用的表面活性剂，例如Tween、Span及在药用的固体、液体或其它剂型的制造中通常使用的其它乳化剂或生物利用度增强剂，也可以用于配制。

在一项实施方案中，剂量水平处在每天每kg体重约0.01至约100mg之间的本文所述的蛋白酶抑制剂化合物，适合在单药治疗中用于病毒介导的(antiviral)、特别是HCV(anti-HCV)介导的疾病的预防和治疗。在另一实施方案中，剂量水平在每天每kg体重约0.5至约75mg之间的本文所述的蛋白酶抑制剂化合物，适合以单药疗法用于病毒(antiviral)、特别是HCV(anti-HCV)介导的疾病的预防和治疗。通常，本发明的药物组合物每天给药约1-5次，或者是以连续输注的形式给药。这种给药可以用来作为慢性或急性治疗。可以与载体材料结合以形成单个剂型的活性成分的数量会随所治疗的宿主和具体的给药方式而变。典型的制剂中含有约5-95％的活性化合物(w/w)。在一项实施方案中，此类制剂中含有约20-80％的活性化合物。

当本发明的组合物含有式I化合物和一种或多种其它治疗或预防药物的组合时，式I化合物和另一药物的剂量水平都应该在单药方案中正常服用剂量的约10-100％之间。在另一实施方案中，另一药物的剂量水平应为单药治疗方案中正常服用剂量的约10-80％。

本发明的药物组合物可以以任何可接受的口服剂型口服用药，包括但不限于，胶囊剂、片剂、水基混悬剂或溶液剂。在口服使用的片剂的情形，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还加入润滑剂，例如硬脂酸镁。对于以胶囊剂形式口服给药，适用的稀释剂包括乳糖和干的玉米淀粉。当需要口服使用水基混悬剂时，活性成分与乳化剂或悬浮剂组合。如果需要，还可以加入某些甜味剂、风味剂或着色剂。

或者是，本发明的药物组合物可以以栓剂形式用于直肠给药。这可以通过将药物与合适的无刺激性赋形剂混合来制备，该赋形剂在室温下是固体，但在直肠温度是液体，因此会在直肠中熔化以释放出药物。此类物质包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。

本发明的药物组合物也可以局部给药，尤其是当治疗的目标包括局部给药容易接近的区域或器官时，包括眼、皮肤或下消化道的疾病。合适的局部用制剂容易针对这些区域或器官制备。

对下消化道的局部施用可以以直肠栓剂(见上)或合适的灌肠剂的形式进行。也可以使用局部透皮贴剂。

为局部施用，可以将药物组合物配制成含有悬浮或溶解在一种或多种载体内的活性组分的软膏剂。用于局部施用本发明化合物的载体包括，但不限于，矿物油、液状石蜡、白凡士林、聚乙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者是，药物组合物可以配制成洗剂或乳膏剂，其中含有悬浮或溶解在一种或多种可药用载体内的活性组分。合适的载体包括，但不限于，矿物油、失水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨酸酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷基醇、苯甲醇和水。

对于眼部使用，可以将药物组合物配制成在等渗、pH调节的无菌盐水内的微粒化混悬剂，或者最好是，配制成在等渗、pH调节的无菌盐水内的溶液，加或不加防腐剂，例如苯扎氯铵。或者是，对于眼部使用，可以将药物组合物配制成软膏，例如凡士林。

本发明的药物组合物也可以利用鼻用气雾剂或吸入法给药。此类组合物按照药物制剂领域众所周知的技术制备，可以制备成在盐水中的溶液，使用苯甲醇或其它合适的防腐剂，提高生物利用度的吸收促进剂，碳氟化合物，以及/或其它常规的增溶剂或分散剂。

在一项实施方案中，药物组合物被配制成用于口服给药。

在另一实施方案中，本发明组合物另外含有其它的抗病毒剂，优选抗HCV剂。这些抗病毒剂包括，但不限于，免疫调节剂，例如α-、β-和γ-干扰素、聚乙二醇化的干扰素-α化合物和胸腺素；其它的抗病毒剂，例如利巴韦林、金刚烷胺和替比夫定；其它的丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂(NS2-NS3抑制剂和NS3-NS4A抑制剂)；HCV生命周期中其它目标的抑制剂，包括解旋酶和聚合酶抑制剂；内部核糖体进入位点的抑制剂；宽谱病毒抑制剂，例如IMPDH抑制剂(例如，美国专利5,807,876、6,498,178、6,344,465和6,054,472，WO 97/40028、WO98/40381、WO 00/56331的化合物，以及酶酚酸及其衍生物，包括但不限于，VX-497、VX-148和/或VX-944)；或以上任何试剂的组合。还参见W.Markland等，Antimicrobial & Antiviral Chemotherapy，44，p.859(2000)和美国专利6,541,496。

本文中使用以下定义(商标指到本申请的提交日为止可得到的产品)。

“Peg-Intron”指PEG-

聚乙二醇化干扰素α-2b，可由Schering Corporation，Kenilworth，NJ得到。

“Intron”指INTRON-

干扰素α-2b，可由ScheringCorporation，Kenilworth，NJ得到。

“Ribavirin”指利巴韦林(1-β-D-呋喃核糖基-1H-1，2，4-三唑-3-甲酰胺，可由ICN pharmaceuticals，Inc.，Costa Mesa，CA得到；在Merck Index第8365条(第12版)中有说明；还可从ScheringCorporation，Kenilworth，NJ作为

或者从Hoffmann-LaRoche，Nutley，NJ作为

得到。

“Pagasys”是指

聚乙二醇化干扰素α-2a，可由Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ得到。

“Roferon”是指

重组干扰素α-2a，可由Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ得到。

“Berefor”指

干扰素α2，可由BoehringerIngelheim Pharmaceutical，Inc.，Ridgefield，CT得到。

一种纯化过的天然α-干扰素的掺混物，例如可由Sumitomo，Japan得到的Sumiferon。

可由Glaxo Wellcome LTd，Great Britain得到的干扰素αn1。

由Interferon Sciences制造的一种天然α-干扰素的混合物，可由Purdue Frederick Co.，CT得到。

本文中使用的术语“干扰素”是指一族高度同源的物种特异性蛋白，它们抑制病毒复制和细胞增殖，并调节免疫响应，例如干扰素α、干扰素β或干扰素γ。Merck Index，第5015条，12版。

按照本发明的一项实施方案，干扰素是α-干扰素。根据另一实施方案，本发明的治疗复合药使用天然α-干扰素2a。或者，本发明的治疗复合药使用天然α-干扰素2b。在另一实施方案中，本发明的治疗复合药使用重组的α-干扰素2a或2b。在又一实施方案中，干扰素是聚乙二醇化的干扰素2a或2b。适合本发明的干扰素包括：(a)INTRON-(干扰素-α2b，Schering plough)，(b)PEG-

(c)

(d)

(e)

(f)

(g)

(h)重组复合α-干扰素，可由Amgen，Inc.，Newbury Park，CA得到，(i)

(j)

(k)(l)ALBUFERON^TM。

正如熟练的专业人员所了解的，蛋白酶抑制剂优选口服给药。干扰素通常不是口服使用。但是，并非是将本发明的方法或复合药限制成任何特定的剂型或方案。因此，本发明复合药中的各个组分可以分别、一起或以其任何组合的方式施用。

在一项实施方案中，蛋白酶抑制剂和干扰素以分别的剂型给药。在一项实施方案中，任何另外的药物均作为单一剂型的一部分和蛋白酶抑制剂一起给药，或作为分别的剂型给药。当本发明涉及化合物的复合药时，各化合物的具体数量可以随该复合药中化合物彼此的具体数量而变。正如熟练的技术人员所了解的，干扰素的剂量一般用IU量度(例如，约400万IU至约1200万IU)。

因此，可以与本发明的化合物联合使用的药剂(作为免疫调节剂或其它试剂起作用)包括，但不限于，可由Human GenomeSciences得到的Albuferon^TM(白蛋白-干扰素α)；PEG-(聚乙二醇化干扰素α-2b，可由Schering Corporation，Kenilworth，NJ得到)；INTRON-

(干扰素α-2b，可由Schering Corporation，Kenilworth，N得到)；利巴韦林(1-β-D-呋喃核糖基-1H-1，2，4-三唑-3-甲酰胺，可由ICNpharmaceuticals，Inc.，Costa Mesa，CA得到；在Merck Index(第12版)8365条有说明)；

(Schering Corporation，Kenilworth，NJ)，

(Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ)；

(聚乙二醇化干扰素α-2a，可由Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ得到)；

(重组干扰素α-2a，可由Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ得到)；

(干扰素α2，可由Boehringer IngelheimPharmaceutical，Inc.，Ridgefield，CT得到)；

(一种纯化的天然α-干扰素的掺混物，例如Sumitomo，Japan的Sumiferon)；

(Glaxo Wellcome Ltd.，Great Britain的干扰素αn1)；

(Interferon Sciences制造的一种天然α-干扰素的混合物，可由Purdue Frederick Co.，CT得到)；α-干扰素；天然α-干扰素2a；天然α-干扰素2b；聚乙二醇化α-干扰素2a或2b；重组复合α-干扰素(Amgen，Inc.，Newbury Park，CA)；

(Schering plough，干扰素-α2b+利巴韦林)；聚乙二醇化干扰素-α(Reddy，K.R.等“Efficacy and Safety of Pegalated(40-kd)Interferon alpha-2a Compound with Interferon alpha-2a in NoncirrhoticPatients with Chronic Hepatitis C(Hepatology，33，pp.433-438(2001)；重组复合α-干扰素(Kao，J.H.等.，“Efficacy of Consensus Interferon inthe Treatment of Chronic Hepatitis”J.Gastroenterol.Hepatol.15，pp.1418-1423(2000))；成淋巴细胞干扰素或“天然”干扰素；干扰素tau(Clayette，P等，“IFN-tau，A New Interferon Type I with Antiretroviralactivity”Pathol.Biol.(Paris)47，pp.553-559(1999))；白介素-2(Davis，G.L.等，“Future Options for the Management of Hepatitis C”，Seminarsin Liver Disease，19，pp.103-112(1999))；白介素-6(Davis等，“FutureOptions for the Management of Hepatitis C”，Seminars in Liver Disease，19，pp.103-112(1999))；白介素-12(Davis，G.L.等，“Future Optionsfor the Management of Hepatitis C”，Seminars in Liver Disease，19，pp.103-112(1999))；和增强I型辅助性T细胞响应的化合物(Davis等，“Future Options for the Management of Hepatitis C”，Seminar in LiverDisease，19，pp.103-112(1999))。还包括刺激细胞中干扰素合成的化合物(Tazulakhova，E.B.等，“Russian Experience in Screening，Analysis，and Clinical Application of Novel Interferon Inducers”J.Interferon Cytokine Res.，21 pp.65-73)，包括但不限于，单独的或与妥布拉霉素组合的双键RNA，以及咪喹莫德(3M Pharmaceuticals；Sauder，D.N.“Immunomodulatory and Pharmacologic Properties of Imiquimod”J.Am.Acad.Dermatol.，43 pp.S6-11(2000)。

刺激细胞中干扰素合成的化合物(Tazulakhova，E.B.等，“Russian Experience in Screening，Analysis and Clinical Application ofNovel Interferon Inducers”，J.Interferon Cytokine Res.，21 pp.65-73)包括，但不限于，单独或与妥布拉霉素组合的双链RNA，以及咪喹莫德(3M pharmaceticals；Sauder，D.N.“Immunodulatory and PharmacologicProperties of Imiquimod”，J.Am.Acad.Dermatol.，43 pp.S6-11(2000))。

可以与本发明化合物联合使用的其它非免疫调节或免疫调节化合物包括，但不限于，在WO 02/18369中详细说明的化合物，该专利以参考引用的方式并入本文中(例如见第273页9-22行，和274页第4行至第276页第11行)。

其它药剂包括在已公布的各个美国专利申请中描述的那些。这些出版物提供了关于可以与N-(3-(3-(3-甲氧基-4-(噁唑-5-基)苯基)脲基)苄基)四氢呋喃-3-甲酰胺(VX950)联合用于本发明方法，特别是用于治疗肝炎的化合物和方法的更多说明。任何这类方法和组合物预期都可与本发明的方法和组合物联合使用。为简便起见，这些出版物公开的内容以引用公布号的方式被作为参考文献，但是应当指出，公开的化合物特别以引用参考的方式专门并入本文。这些出版物的实例包括U.S.20040058982；U.S.20050192212；U.S.20050080005；U.S.20050062522；U.S.20050020503；U.S.20040229818；U.S.20040229817；U.S.20040224900；U.S.20040186125；U.S.20040171626；U.S.20040110747；U.S.20040072788；U.S.20040067901；U.S.20030191067；U.S.20030187018；U.S.20030186895；U.S.20030181363；U.S.20020147160；U.S.20040082574；U.S.20050192212；U.S.20050187192；U.S.20050187165；U.S.20050049220；和US2005/0222236。

本发明还可以包括施用细胞色素P450单加氧酶抑制剂。CYP抑制剂可用于增加被CYP抑制的化合物的肝浓度和/或血液浓度。

如果本发明的实施方案涉及CYP抑制剂，则任何改善相关的NS3/4A蛋白酶的药物动力学的CYP抑制剂均可用在本发明的方法中。这些CYP抑制剂包括，但不限于，利托那韦(WO 94/14436)、酮康唑、醋竹桃霉素、4-甲基吡唑、环孢素、氯美噻唑、西咪替丁、伊曲康唑、氟康唑、咪康唑、氟伏沙明、氟西汀、奈法唑酮、含曲林、茚地那韦、奈非那韦、氨普那韦、呋山那韦、沙奎那韦、洛匹那韦、地位韦啶、红霉素、VX-944和VS-497。优选的CYP抑制剂包括利托那韦、酮康唑、醋竹桃霉素、4-甲基吡唑、环孢素和氯美噻唑。对于优选的利托那韦剂型，参见美国专利6,037,157以及其中引用的文献：美国专利5,484,801和美国专利申请08/402,690、WO 95/07696和WO 95/09614。

测定化合物抑制细胞色素P450单加氧酶活力的能力的方法是已知的。例如见，美国专利6,037,157和Yun等，Drug Metabolism &Disposition，21，pp.403-407(1993)。

当患者的状况改善时，如果需要，可以施用维持剂量的本发明化合物、组合物或复合药。随后，视症状的情况，可以将施用的剂量或频率，或者二者一起，减少到改善的状况得以保持的水平，当症状已经减轻至所希望的水平时，应停止治疗。但是，患者可能因为疾病症状的任何复发而需要长期的间歇性治疗。

还应该清楚，对于任何特定的患者，具体的剂量和治疗方案会与多种因素有关，包括所用的具体化合物、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、用药时间、排泄速度、药物联合，以及主治医师的判断和所治疗的具体疾病的严重程度。活性成分的量也取决于所述的具体化合物和该组合物中是否存在另外的抗病毒剂及其性质。

根据另一实施方案，本发明提供一种治疗受病毒感染的患者的方法，该病毒以一种病毒编码的丝氨酸蛋白酶为特征，它是病毒的生命周期所必需的，所述方法是向患者施用本发明的可药用的组合物。在一项实施方案中，本发明的方法被用来治疗受HCV感染的患者。这种治疗可以完全消除病毒感染或降低其严重性。在另一实施方案中，患者是人。

在另一实施方案中，本发明的方法另外包含向患者施用抗病毒剂、优选抗HCV剂的步骤。这种抗病毒剂包括，但不限于，免疫调节剂，例如α-、β-和γ-干扰素，聚乙二醇化干扰素-α化合物，和胸腺素；其它的抗病毒剂，例如利巴韦林、金刚烷胺和替比夫定；其它的丙型肝炎病毒蛋白酶(NS2-NS3抑制剂和NS3-NS4A抑制剂)；HCV生命周期中其它目标的抑制剂，包括但不限于，解旋酶和聚合酶抑制剂；内部核糖体进入抑制剂；宽谱病毒抑制剂，例如IMPDH抑制剂(例如VX-497和在美国专利5,807,876和6,498,178中公开的其它IMPDH抑制剂，酶酚酸及其衍生物)；细胞色素P-450的抑制剂，例如利托韦尔，或以上任何的组合。

这些另外的药剂可以作为含有本发明化合物和另一种抗病毒剂的单一剂型的一部分施用。或者是，另一种抗病毒剂可以作为多重剂型的一部分，与本发明化合物分开施用，其中该另一种药剂在含本发明化合物的组合物之前、同时或之后服用。

药物组合物也可以以“患者包”的形式向患者开处方，其中在单一的包装(经常是泡罩包装)里包括了整个治疗过程。患者包比传统的处方优越，因为药剂师从大量的供料中分出一份患者的配药，这时患者总有机会见到患者包里装的包装插页，而在传统的处方里通常是见不到的。包含一份包装插页已显示出会改善患者对医生指导的顺应。

当然，利用其中包含一个指导患者正确使用本发明的包装插页的单个患者包或各制剂的患者包来施用本发明的复合药，是本发明另一个吸引人的特点。

本发明的另一方面是一种包装，其中含有至少一种式I化合物(按照本发明的剂量)和一份包含使用本发明的复合药的指南的信息插页。本发明的任何组合物、剂型、治疗方案或其它实施方案均可展示在药物包装中。在本发明的另一实施方案中，该药物包装还含有本文所述的一种或多种另外的药剂。该另外的一种或多种药剂可以在同一包装或不同的包装内提供。

本发明的另一方面涉及一种包装的试剂盒，供患者用来治疗HCV感染或预防HCV感染(或用于本发明的另一方法)，其中包含：各药物组分的单个或多个药物制剂；在储存期间和给药前盛放该药物制剂的容器；和关于以有效治疗或预防HCV感染的方式用药的使用指南。

因此，本发明提供用于同时或顺序地服用一定剂量的至少一种式I化合物(以及任选地另一种药剂)的试剂盒。通常，这样一种试剂盒应包含在可药用载体(以及在一种或多种药物制剂)中的各化合物的组合物及任选的其它药剂，以及用于同时或顺序给药的书面指南。

在另一实施方案中，提供了一种包装的试剂盒，其中含有用于自我服药的一种或多种剂型，一个用来在存放期间和使用之前盛放该剂型的容器装置，优选密封装置；以及供患者进行服药的使用指南。使用指南通常是在包装插页、标签和/或试剂盒的其它组件上的书面说明，剂型或形式如本文中所述。各个剂型可以分别地盛放，例如在金属箔-塑料层压材料的片材中，每种剂型在单独的小槽或泡孔中与其它剂型分开，或者各剂型可以盛放在单独的容器(如塑料瓶)中。本发明试剂盒通常还包括用来包装各个试剂盒组件(即，剂型、容器及书面的使用指南)的设备。这些包装设备通常采用硬纸板或纸盒、塑料或箔袋等形式。

本发明的试剂盒可以包含本发明的任何方面，例如任何组合物、剂型、治疗方案或药物包。本发明的包装和试剂盒任选地含有多种组合物或剂型。因此，本发明包括装有一种或多种组合物的包装和试剂盒。

在另一实施方案中，本发明提供一种对于打算向患者施用的生物物质进行预处理的方法，其步骤包括使该生物物质与含有本发明化合物的可药用组合物接触。这类生物物质包括，但不限于，血液及其组分，例如血浆、血小板、亚群血细胞等；器官，例如肾、肝、心、肺等；精子和卵子；骨髓及其组分，以及要输注给患者的其它流体，例如盐水、葡萄糖等。

根据另一实施方案，本发明提供处理任何有可能与病毒接触的材料的方法，所述病毒以其生命周期必需的病毒编码的丝氨酸蛋白酶为特征。该方法包括使所述材料与本发明化合物接触的步骤。这些材料包括，但不限于，手术器械和服装(例如手术服、手套、围裙、罩衣、面罩、眼镜、鞋类等)；实验室仪器和服装(例如实验服、手套、围裙、罩衣、面罩、眼镜、鞋类等)；血液收集装置和材料；以及侵入性装置，例如分流器和支架。

在另一实施方案中，本发明化合物可以作为实验室工具用于帮助分离病毒编码的丝氨酸蛋白酶。此方法的步骤包括提供一种附着在固体载体上的本发明化合物，使该固体载体与含有病毒的丝氨酸蛋白酶的样品在引起该蛋白酶与固体载体结合的条件下接触，和从该固体载体上洗脱该丝氨酸蛋白酶。在一项实施方案中，用此方法分离的病毒丝氨酸蛋白酶是HCV NS3-NS4A蛋白酶。

本文件中引用的所有参考文献均以参考引用的方式并入本文中。

V.制备例和实施例

为了可以更全面地理解本文所述的发明，提供以下制备例和实施例。应该理解，这些方法和实施例只是为了示例说明，而不要认为是以任何方式限制本发明。A.用于式I化合物的中间体的制备

下面陈述的是用来制备能用于合成式I化合物的中间体的各种方法。

下面陈述的是制备能用来合成式I化合物的中间体的各种方法。3-(苄氧羰基氨基)-4-环丁基-2-羟基丁酸的制备。

将按照WO 04/113294中所述方法制备的氰醇(1g，3.65mmol)在浓盐酸(12mL)中的溶液加热回流18小时。将反应混合物减压浓缩，得到盐酸盐形式的所要的氨基酸(1.7g)，它在用于下一步骤前不作进一步纯化。将以上的盐酸盐在THF中的溶液用DIPEA(2.68g)和Z-OSu(5.16g)处理。室温下搅拌反应混合物8小时。将反应混合物用甲苯和盐酸(12N，直至pH＝1)稀释。分离后，有机层用NaHCO₃饱和溶液萃取(50mL，2次)。水层用HCl(6N)调节至酸性，直至pH＝1，用乙酸乙酯(200mL)萃取。将合并的有机层干燥，减压浓缩，得到标题化合物(0.6g)。(M+1)308。

1-环丁基-3-羟基-4-(甲氨基)-4-氧丁烷-2-基氨基甲酸苄酯的制备

向3-(苄氧羰基氨基)-4-环丁基-2-羟基丁酸(250mg，0.81mmol)在DCM(20mL)中的溶液加入HOSu(140mg，1.22mmol)、EDC(234mg，1.22mmol)。搅拌1小时后，向以上混合物加入甲胺/THF溶液(2N，0.81mL)。将反应混合物搅拌18小时，然后减压浓缩。残留物用Gilson Prep纯化，得到标题化合物(135mg)。¹H-NMR(CDCl₃)：δ7.54-7.28(m，5H)，6.67(NH，1H)，5.03(dd，2H)，3.68(m，1H)，2.73(m，3H)，2.26(m，1H)，1.97-1.31(m，9H).(M+1)321.

1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧丁烷-2-基氨基甲酸苄酯的制备

向3-(苄氧羰基氨基)-4-环丁基-2-羟基丁酸(600mg，1.95mmol)在DCM(20mL)中的溶液加入HOSu(377mg，2.93mmol)、EDC(562mg，2.93mmol)。搅拌1小时后，向以上混合物中加入环丙胺(223mg，3.9mmol)。用EtOAc萃取产物。然后将合并的有机层用HCl(1N)、水、NaHCO₃和盐水洗，减压浓缩，得到1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧丁烷-2-基氨基甲酸苄酯(530mg)。(M+1)347。

3-氨基-4-环丁基-N-环丙基-2-羟基丁酰胺的制备

向CBz酰胺(530mg，1.53mmol)在MeOH(30mL)中的溶液加入Pd(OH)₂/C(106mg)。将混合物在H₂(1atm)下搅拌18小时。过滤后，将滤液减压浓缩，得到标题化合物(300mg)。¹H-NMR(CDCl₃)：δ3.29(m，1H)，2.74(m，1H)，2.37-1.66(m，9H)，1.40(m，1H)，0.78(m，2H)，0.51(m，2H).(M+1)213.

以下化合物按照与制备3-氨基-4-环丁基-N-环丙基-2-羟基丁酰胺相似的方式，利用合适的胺制备：

3-氨基-N-环丙基-2-羟基庚-6-炔酰胺的制备

3-氨基-N-环丙基-2-羟基庚-6-炔酰胺按照N.Kobayashi等在US 2003/153788中所述制备，该专利的全部内容以参考引用的方式并入本文。¹H-NMR(500MHz，DMSO-d₆)：8.18(s)，6.34(s)，4.22(s)，3.45(s)，3.17(s)，2.84(s)，2.69(d，J＝3.2Hz)，2.30(m)，2.24(m)，1.70(m)，1.59(m)，0.62(d，J＝5.0Hz)，0.53(s)ppm；FIA m/z 197.01ES⁺.Cbz-保护的(3S)-3-氨基-4-环丙基-2-羟基-N-甲基丁酰胺的制备

步骤1：(2S)-1-氰基-3-环丙基-1-羟基丙-2-基氨基甲酸苄酯的制备

在10℃下向醛(7.9g，32mmol)在MeOH(50mL)中的溶液加入Na₂S₂O₄(6.13g，35.2mmol)，将形成的混合物温热至室温，搅拌2小时后冷却至10℃。向此反应混合物中加入KCN在水(50mL)中的溶液。室温下搅拌18小时后，该混合物用TBME萃取(100mL，2次)。合并的有机层用水和盐水洗，干燥并减压浓缩，得到标题化合物(8g)。(M+1)275。步骤2：(3S)-3-(苄氧羰基氨基)-4-环丙基-2-羟基丁酸甲酯的制备

在-20℃向氰醇(1g，3.65mmol)在MeOH(15mL)中的溶液鼓入干燥的HCl气流30分钟。形成的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用氮气吹洗30分，然后浓缩。残留物在0℃用冰水中止反应，然后在室温下搅拌1小时。产物用EtOAc萃取。合并的有机层用NaHCO₃、水、盐水洗，减压浓缩，得到标题化合物(0.5g)。¹H-NMR(CDCl₃)δ：7.31-7.30(m，5H)，5.09(d，2H)，4.44-4.14(m，2H)，3.78(d，3H)，1.58-1.42(m，2H)，0.70(m，1H)，0.47(t，2H)，0.11-0.01(m，2H).(M+1)308.步骤3：(3S)-3-(苄氧羰基氨基)-4-环丙基-2-羟基丁酸的制备

向步骤2的甲酯(400mg，1.3mmol)在THF(8mL)和水(6.63mL)中的溶液加入LiOH(1N，1.37mL)。将反应混合物搅拌30分，然后用1.0N HCl酸化至pH＝3-4。该混合物用EtOAc萃取(20mL，2次)。合并的有机层用水、盐水洗，然后减压浓缩，得到标题化合物(370mg)。(M+1)294。步骤4：(2S)-1-环丙基-3-羟基-4-(甲氨基)-4-氧丁烷-2-基氨基甲酸苄酯的制备

向(3S)-3-(苄氧羰基氨基)-4-环丙基-2-羟基丁酸(180mg，0.26mmol)在DCM(20mL)中的溶液加入HOSu(105mg，0.92mmol)和EDC(175mg，0.92mmol)。搅拌30分钟后，向以上混合物中加入甲胺的THF溶液(2N，0.92mL)。将反应混合物搅拌18小时，然后减压浓缩。残留物用Gilson Prep纯化，得到标题化合物(50mg)。¹H-NMR(CDCl₃)：δ7.53-7.26(m，5H)，6.83(NH，1H)，5.25(NH，1H)，5.05(m，2H)，4.25-3.89(m，3H)，2.70(m，3H)，1.4(m，1H)，0.86(m，1H)，0.61(m，1H)，0.38(m，2H)，0.33(m，2H).(M+1)307.

以下化合物可以用类似的方式，通过使用合适的胺然后氢化来制备。

以下化合物可以按照Perni，R等在WO 01/74768中所述方法制备，该专利的全部内容以参考引用的方式并入本文。

(S)-2-(环戊氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酸的制备

在一只5L的RB烧瓶中将甘氨酸叔丁酯(74g，0.56mol，1.02当量)溶在碳酸氢钠饱和溶液(11倍体积)中。将环戊基2，5-二氧吡咯烷-1-基碳酸酯(126g，0.55mol，1当量)溶于丙酮(5.5vol)，将该溶液经由加液漏斗在室温下慢慢加到该甘氨酸的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌直至反应完全(约4小时)。减压除去丙酮，余下的水溶液用30％的乙酸乙酯/己烷萃取(3次，每次5.5体积)。倒出有机层。用2N HCl将水层的pH调节至2，然后用乙酸乙酯萃取(3次，5.5体积)。合并的有机层用Na₂SO₄干燥，过滤，减压除去溶剂，得到透明的油状物，其慢慢晶化。粗产物自己烷/乙酸乙酯中结晶，得到(S)-2-(环戊氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酸，为白色固体(82g)。提取母液，得到第二批晶体(总产量105.54g)。磺酰基化合物的制备

以上所示的化合物S1、S2、S3和S4按照WO 2005/095403和PCT/US 2005/010494中所述步骤制备，其全部内容以参考引用的方式并入本文中。具体地说，在0℃向氯磺酰异氰酸酯(10mL，115mmol)在CH₂Cl₂(200mL)中的溶液加入叔丁醇(11mL，1当量)。将该混合物搅拌60分，然后在0℃下经由导管加入到环丙胺(6.6g)在含三乙胺(30mL)的CH₂Cl₂(200mL)中的溶液里，同时经由加液漏斗加入三乙胺(50mL)在CH₂Cl₂(100mL)中的溶液。内温保持低于8℃。加完后在室温下搅拌4小时。然后用CH₂Cl₂稀释反应混合物并转移到分液漏斗中，用1N HCl(2次，各400mL)和盐水(300mL)洗，干燥(MgSO₄)，过滤和浓缩。产物自乙酸乙酯/己烷中重结晶，得到16.8g(71.3mmol，62％)S3。用三氟乙酸在CH₂Cl₂中将化合物S3去保护，以定量产率得到化合物S4。

将氨气经由气体分散管鼓入冷却至0℃的THF(40ml)5分钟。在0℃下向此溶液中加入环丙基磺酰氯(1g，7.1mmol)。室温下搅拌反应混合物过夜，然后经硅胶塞过滤，随后用EtOAc洗脱，得到750mg(6.19mmol，87％)环丙基磺酰胺。¹H-NMR(500MHz，Methanol-d₄)：4.79(s，2H)，2.59-2.54(m，1H)，1.06-0.96(m，4H).

在0℃下向化合物XX5(1.37g，6.41mmol)在THF(30ml)中的溶液逐滴加入硼烷-二甲基硫醚(3.85ml，7.8mmol，2.0M甲苯溶液)。将反应混合物搅拌1小时并逐渐温热至室温，用水(20ml)中止反应，用乙酸乙酯萃取(3次，每次30ml)。将合并的有机层干燥，减压浓缩，得到1.3g无色油状物，使用前不作进一步纯化。在-78℃和惰性气氛下向草酰氯(2.24ml，25.6mmol)在CH₂Cl₂(15ml，无水)中的溶液逐滴加入DMSO(2.73ml，38.5mmol)在CH₂Cl₂(8ml)中的溶液。搅拌10分钟后，逐滴加入醇(1.3g，6.41mmol)的CH₂Cl₂(6ml)溶液。再过10分钟后，加入三乙胺(7.15ml，51.3mmol)的CH₂Cl₂溶液，将反应混合物再搅拌30分，同时温热至0℃。该反应混合物依次用1M HCl(20ml)和盐水(20ml)洗。有机层用MgSO₄干燥，减压浓缩。得到的油状物经硅胶色谱法纯化，得到748mg(2步59％)醛XX6。¹H-NMR(500MHz，CDCl3)：9.75(s，1H)，3.67(s，3H)，2.91-2.85(m，1H)，2.78-2.74(m，1H)，2.56-2.52(m，1H)，1.74-1.71(m，2H)，1.66-1.58(m，4H)，1.27-0.95(m，5H).

向化合物XX6(581mg，2.9mmol)和K₂CO₃(811mg，5.9mmol)在MeOH(15ml)中的溶液加入1-重氮基-2-氧代丙基磷酸二甲酯(676mg，3.5mmol，Synlett 1996，p.521)。室温下搅拌反应混合物1小时，用乙醚(20ml)稀释，用NaHCO₃饱和溶液(10ml，水溶液)洗。有机层用MgSO₄干燥，减压浓缩，得到600mg(100％)炔烃XX7，它在使用前不作进一步纯化。¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：3.69(s，3H)，2.48-2.37(m)，1.95(s，H)，1.73-1.60(m)，1.30-0.94(m).

向化合物XX7(600mg，2.9mmol)在THF/水/MeOH(25ml，2∶1∶2)中的溶液加入一水合LiOH(850mg，20.3mmol)。室温下搅拌反应混合物2小时，用1N HCl(25ml)酸化，用EtOAc萃取(3次，每次15ml)。合并的有机层用MgSO₄干燥并浓缩，得到533mg(99％)羧酸XX8，它在使用前不再纯化。

向化合物XX5(100mg，0.5mmol)在CH₂Cl₂(2.5ml)中的溶液加入EDC(107mg，0.6mmol)、HOBt(76mg，0.6mmol)和三乙胺(195μL，1.4mmol)。向此活化的酸溶液中加入甲胺盐酸盐(38mg，0.6mmol)，室温下搅拌反应混合物12小时。将反应混合物用H₂O(2ml)、1N HCl(2ml)和NaHCO₃饱和溶液(2ml)洗。有机层用MgSO₄干燥，浓缩后得到100mg酰胺XX9，它在使用前不再纯化。¹H-NMR(500MHz，CDCl3)3.61(s，3H)，2.75-2.70(m，4H)，2.48-2.42(m，1H)，2.28-2.24(m，1H)，1.66-1.48(m，6H)，1.35-0.90(m，5H).

向化合物XX9(100mg，0.5mmol)在THF/H₂O/MeOH(3ml，2∶1∶2)中的溶液加入一水合LiOH(124mg，3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，用1N HCl(4ml)酸化，用EtOAc萃取(3×5ml)。合并的有机相用MgSO₄干燥并浓缩，得到87mg羧酸XX10，它在使用前不再纯化。¹H-NMR(500MHz，CDCl3)11.32(s，H)，2.75-2.64(m，H)，2.52-2.46(m，H)，2.37-2.33(m，H)，2.25(td，J＝8.7，2.9Hz，H)，1.97(s，H)，1.79(s，H)，1.74-1.62(m，H)，1.59-1.49(m，H)，1.23-1.12(m，H)，1.08-0.81(m，H).

中间体XX12按照上述制备中间体XX10的步骤制备，只是使用吡咯烷代替甲胺盐酸盐作为反应试剂。¹H-NMR(500MHz，CDCl3)11.47(s，1H)，3.45-3.32(m，4H)，2.76-2.72(m，1H)，2.64-2.59(m，1H)，2.37-2.33(m，1H)，1.92-1.76(m，4H)，1.71-1.57(m)，1.22-0.84(m).

在回流下向化合物XX5(1g，4.7mmol)和氧化汞黄(1.01g，4.7mmol)在CCl₄(23ml)中的溶液于30分钟内逐滴加入溴(264μL，5.1mmol)在CCl₄(5ml)中的溶液。将反应混合物搅拌回流1小时，冷却至室温，用CH₂Cl₂(20ml)稀释，用1N HCl(10ml)、H₂O(10ml)和盐水(10ml)洗。有机层用MgSO₄干燥，减压浓缩，得到1.3g化合物XX13，为无色油状物，使用前不再纯化。¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：3.67(s，3H)，3.52-3.44(m，2H)，2.63-2.58(m，1H)，1.70-1.64(m，3H)，1.60-1.54(m，3H)，1.24-0.92(m，5H).

向化合物XX13(578mg，2.3mmol)在DMSO(12ml)中的溶液加入硼氢化钠(177mg，4.7mmol)。将反应混合物在90℃搅拌1小时，用水(10ml)稀释，用己烷(3×15ml)萃取。合并的有机相用MgSO₄干燥，减压浓缩。经硅胶色谱法纯化，用EtOAc/石油醚洗脱，得到204mg化合物XX14。¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：3.59(s，3H)，2.18(m，1H)，1.69-1.43(m，6H)，1.21-0.83(m，8H).

中间体XX15按照制备中间体XX10的步骤b的程序制备，只是用反应物XX14代替XX9。

向(S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酸(787mg，6.0mmol)、溴苯(632μL，6.0mmol)、K₂CO₃(1.24g，9.0mmol)和CuI(114mg，0.6mmol)的溶液加入N，N-二甲基乙酰胺(7.5ml)。将该混合物在一只密封的高压容器中于90℃搅拌16小时。反应混合物用H₂O(15ml)稀释，冷却至0℃，用1N HCl酸化至pH约5。该混合物用EtOAc(3×20ml)萃取，合并的有机相用盐水(1×15ml)洗，用MgSO₄干燥，减压浓缩。得到的残留物用硅胶色谱法纯化，得到150mg(12％)化合物XX16。¹H-NMR(500MHz，CDCl3)：7.11-7.09(m，2H)，6.69(t，J＝7.3Hz，1H)，6.60-6.59(m，2H)，3.69(s，1H)，1.02(s，9H).

中间体XX17按照制备XX16的步骤制备，只是用1-溴-3-甲氧基苯代替溴苯作为反应试剂。¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：6.98(t，J＝8.1Hz，1H)，6.24-6.18(m，2H)，6.14(s，1H)，3.69(s，1H)，3.66(s，3H)，1.00(s，9H).

向(S)-3-(甲氧羰基)-4-甲基戊酸(200mg，1.2mmol)在CH₂Cl₂(6ml)中的溶液加入EDC(264mg，1.4mmol)、HOBt(186mg，1.4mmol)和三乙胺(481μL，3.5mmol)。向此活化的酸溶液中加入环己胺(158μL，1.4mmol)，将反应混合物搅拌4小时。用H₂O(3ml)、1N HCl(3ml)和NaHCO₃饱和溶液(3ml)洗反应混合物。有机层用MgSO₄干燥，减压浓缩。得到290mg化合物XX18，它在使用前不再纯化。¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：5.78(d，J＝7.5Hz，1H)，3.69-3.61(m，4H)，2.73-2.69(m，1H)，2.45-2.40(m，1H)，2.24-2.20(m，1H)，1.85(m，1H)，1.82-1.76(m，2H)，1.63-1.60(m，2H)，1.54-1.50(m，1H)，1.31-1.22(m，2H)，1.12-1.00(m，3H)，0.90-0.85(m，6H).

中间体XX19按照上述制备化合物XX10的步骤制备，但是用XX18代替化合物XX9作为反应试剂。ES(+)MS：m/e 256(M+H)⁺。

中间体XX20按照上述制备化合物XX18或XX19的步骤制备，但是用异丙胺代替环己烷作为反应试剂。ES(+)MS：m/e 216(M+H)⁺。

中间体XX21按照上述制备XX18或XX19的步骤制备，但是用苄胺代替环己胺作为反应试剂。ES(+)MS：m/e 264(M+H)⁺。

室温下将甘氨酸甲酯(50.0g)悬浮在MTBE(300ml)中。向其中加入苯甲醛(40.5ml)和无水Na₂SO₄(33.9g)。将该悬浮液在冰水浴中冷却20分钟，然后于15分钟内逐滴加入三乙胺(80ml)。5分钟后，从冰浴中取出反应混合物，在室温下搅拌24小时。用200ml冰水混合物中止反应，分离有机层。水层用MTBE(200ml)萃取。将有机层合并，用盐水和NaHCO₃饱和水溶液的1∶1混合物洗，干燥(MgSO₄)，浓缩，得到62.83g N-苄胺，为黄色油状物。¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：8.30(s，1H)，7.78-7.77(m，2H)，7.45-7.40(m，3H)，4.42(s，2H)，3.78(s，3H).

室温下将叔丁醇锂(15.13g)悬浮在无水甲苯(200ml)中。于40分钟内向其中逐滴加入甘氨酸甲酯的N-苄胺(16.89g)和1，4-二溴-2-丁烯(19.28g)在甲苯(100ml)中的溶液。将该红色溶液搅拌100分钟，然后用水(200ml)中止反应。将内容物转移到一只分液漏斗中，用MTBE(200ml)稀释。分离各层，水层用MTBE萃取。合并的有机层与1N HCl水溶液(500ml)一起搅拌3小时。分离各层，有机层用H₂O(100ml)萃取。将水层合并，加入NaCl(250g)和MTBE(700ml)，用10N NaOH水溶液调节至约pH 13。分离有机层，水层用MTBE萃取(2次，每次300ml)。将有机层合并，干燥(MgSO₄)，浓缩至体积约400ml。向此溶液中加入二碳酸二叔丁酯(25.0g)，将反应混合物搅拌3天。加入另一份二碳酸二叔丁酯(5.6g)，随后将反应混合物在60℃浴中加热1小时。反应混合物用快速硅胶柱色谱法纯化，用EtOAc/己烷(1∶9)作洗脱剂，得到10.89g外消旋的N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸甲酯。参见例如WO 00/09558和Beaulieu，P.L.等，J.Org.Chem.，70(15)，5869-5879，2005。¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：5.78-5.71(m，1H)，5.29-5.26(m，1H)，5.11(dd，J＝1.2，10.3Hz，1H)，3.71(s，3H)，2.14(q，J＝8.8Hz，1H)，1.79(s，1H)，1.53-1.45(m，10H).

将外消旋的N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸甲酯(4.2g)溶于丙酮(80ml)，然后用水(160ml)稀释。用0.2N NaOH水溶液将pH调节至7.8。向溶液中加入枯草杆菌蛋白酶A(Sigma，St.Louis，MO，USA的产品P-5380)。逐滴加入0.1N NaOH水溶液使其pH值在7.4-8.7之间保持3天。当反应混合物的HPLC分析(Chiralpak AD，Daicel Chemical Industries，Tokyo，4.6mm×250mm，0.5ml/分，10-85％2-丙醇/己烷10分钟，监测器215.4nm)指示只有(1R，2S)-对映体存在((1R，2S)的保留时间＝6.2分，(1S，2R)＝5.9分)时，用2N NaOH水溶液将pH调节至8.5。将反应混合物转移到分液漏斗中，用MTBE(3×400ml)萃取。萃取液用NaHCO₃饱和水溶液(3×150ml)、水(2×200ml)洗，干燥(MgSO₄)。将溶液过滤，浓缩，用CH₂Cl₂稀释，干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩，得到1.95g N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸甲酯。

将N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸甲酯(125mg，0.52mmol)在CH₂Cl₂/TFA(1∶1，2ml)中于室温下搅拌90分钟。减压除去溶剂，得到(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸甲酯三氟乙酸盐。

将化合物XX1(2.34g，9.71mmol)与LiOH·H₂O(0.45g，10.7mmol)一起在室温下于THF/H₂O/THF(3∶1∶0.5，22ml)中搅拌过夜。蒸除溶剂，残留的固体置于CH₂Cl₂/EtOAc和1N盐酸中。水层用CH₂Cl₂萃取，合并的有机萃取液用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将此物质在室温下溶于CH₂Cl₂(10ml)中，用三氟乙酸(10ml)处理。在70分时HPLC分析表明起始物不再存在。减压除去溶剂，得到粘稠的浅色油状物。将其溶在另外的CH₂Cl₂(30ml)中，在旋转蒸发仪上蒸发，得到棕色固体。将此固体溶在饱和NaHCO₃水溶液和丙酮(1∶1，50ml)中，用Fmoc-Cl(2.65g，10.2mmol)处理。4小时后，将烧瓶内容物用CH₂Cl₂转移到分液漏斗中，用2N盐酸酸化。水层用CH₂Cl₂萃取，合并的有机层用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到1.86g(5.3mmol)XX2，为浅黄色固体。(M+1)＝350.1。

PS-Wang树脂(2.0g，1.0当量)在DMF(足够覆盖)中溶胀。将(1R，2S)-1-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-乙烯基环丙烷羧酸(XX3)(922mg，1.1当量)在DCM中搅拌。向该DCM溶液中加入二异丙基碳化二亚胺(409μL，1.1当量)并在4℃搅拌2小时，然后加到树脂和DMF中。将二甲基氨基吡啶(29mg，0.1当量)在DMF中的溶液加到树脂溶液中，摇动5小时。排出液体，用DMF(3次)和DCM(2次)洗，得到化合物XX4。

2-(二环[4.1.0]庚-1-基)乙酸X2的制备：

按照E.J.Kantorowski等在J.Org.Chem.，1999，64，570-580中所述方法，将市售的化合物X1(Aldrich Chemical Co.，Milwaukee，Wisconsin，USA)转化成X2。¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)：9.2(br s，1H)，2.23(m，2H)，1.92(m，1H)，1.76(m，2H)，1.58(m，1H)，1.34(m，1H)，1.18(m，4H)，0.85(m，1H)，0.52(dd，1H)，0.31(t，1H)ppm.

2-(1-羟基环己基)乙酸X5的制备：

化合物X4基本上使用Bull.Chem.Soc.Jpn.，1971，44，1090中所述步骤制备。具体地说，在80℃于30分钟内，向环己酮X3(4.9g)和锌粉(4.9g)在甲苯中的混合物于充分搅拌下逐滴加入溴乙酸乙酯(8.3ml)(Aldrich Chemical Co.，Milwaukee，Wiscosin，USA)的甲苯溶液。小心地监测加入过程，温度保持在80℃。加完后，将混合物回流90分，冷却，用1N盐酸分解，并用乙醚萃取。有机相用水和NaHCO₃水溶液洗，干燥(MgSO₄)，减压浓缩，得到X4(5.9g)。¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)4.16(t，2H)，3.0(br s，1H)，2.46(s，2H)，1.40-1.69(m，10H)，1.27(t，3H)ppm；FIA m/z 187.1ES⁺.

向X4(510mg)在MeOH中的溶液加入1N NaOH水溶液。将反应混合物在60℃搅拌1小时，然后减压浓缩。残留物用水稀释，用Et₂O洗，水层用1N柠檬酸水溶液酸化，用EtOAc萃取。有机相用MgSO₄干燥，减压浓缩，重结晶后得到化合物X5(200mg)：¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)3.63(s，1H)，2.45(s，2H)，1.22-1.64(m，10H)ppm；FIA m/z 157.2ES^-.2-(1-甲基环己基)乙酸(X8)的制备

市售的化合物X6(Aldrich Chemical Co.，Milwaukee，Wisconsin，USA)按照N.Asao等在Tetrahedron Lett.，2003，44，4265中所述方法转化成化合物X7。¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)：4.12(q，2H)，2.22(s，2H)，1.30-1.48(m，10H)，1.25(t，3H)，1.01(s，3H)ppm.

向化合物X7在EtOH中的溶液加入1N NaOH水溶液。将反应混合物在50℃搅拌3小时，然后减压浓缩。残留物用水稀释，用Et₂O洗，水层用1N柠檬酸水溶液酸化，用CH₂Cl₂萃取。将有机相干燥(MgSO₄)，减压浓缩，得到化合物X8。¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)：11.7(s，1H)，2.26(s，2H)，1.32-1.49(m，10H)，1.05(s，3H)ppm.

2-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(X12)的制备

向二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮(X9)(3.13g，Aldrich)在甲苯中的溶液加入(乙氧羰基亚甲基)三苯基磷烷(12.0g，Aldrich)。将该溶液在110℃搅拌3天。得到的黑色溶液减压浓缩，残留物直接在硅胶柱上纯化，得到化合物X10(4.54g)，为透明液体。¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)：5.66(s，1H)，4.16(q，2H)，3.98(s，4H)，3.00(t，2H)，2.38(m，2H)，1.77(m，4H)，1.27(t，3H)ppm.

化合物X11和X12按照与对化合物X7和X8相似的方式得到。¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)：3.64-3.73(m，4H)，2.35(s，2H)，1.65(ddd，2H)，1.50(ddt，2H)，1.17(s，3H)ppm.

2-(顺-2，6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(X16)的制备

中间体X13由市售的2，6-二甲基-g-吡喃酮(AldrichChemical Co.，Milwaukee，Wisconsin，USA)制备。将g-吡喃酮溶于乙醇，用10％Pd/C氢化(2atm，H₂)2小时。随后滤出催化剂，将溶液减压浓缩，得到粗制的X13，将其用柱色谱法纯化，得到纯化合物X13。¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)：3.72(m，2H)，2.35(m，2H)，2.21(dd，2H)，1.32(d，6H)ppm.

化合物X14随后按照与对化合物X10所述的相似方式由化合物X13得到。¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)：5.65(s，1H)，4.15(q，2H)，3.80(dt，1H)，3.49(m，2H)，2.17(dt，1H)，2.07(dd，1H)，1.79(dt，1H)，1.28(m，9H)ppm.LC-MSm/z 199.126ES⁺.

将化合物X14在EtOAc中的溶液用10％湿Pd/C氢化(1atm，H₂)1小时。滤除催化剂，将溶液减压浓缩，得到粗制的化合物X15，将其用于下一步骤，不作进一步纯化。随后按照对化合物X8所述的类似方式，从化合物X15制备化合物X16。¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)主要非对映体：3.50(m，2H)，2.27(d，2H)，2.07(m，1H)，1.71(m，2H)，1.19(d，6H)0.92(m，2H)ppm；次要非对映体：3.64(m，2H)，2.56(d，2H)，2.47(m，1H)，1.49(m，2H)，1.15(d，6H)，0.86(m，2H)ppm.

2-(1，4-二氧杂螺[4，5]癸-8-基)乙酸(X20)的制备

化合物X20按照以上对制备化合物X16所述的步骤由化合物X17(得自Aldrich)制备。

化合物X18：¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)：5.66(s，1H)，4.15(q，2H)，3.98(s，4H)，3.00(m，2H)，2.38(m，2H)，1.77(m，4H)，1.27(t，3H)ppm.

化合物X19：¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)：4.12(q，2H)，3.93(s，4H)，(d，2H)，1.83(m，1H)，1.72(m，4H)，1.56(dt，2H)，1.33(m，2H)，1.30(m，3H)ppm.

化合物X20：¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)：3.93(s，4H)，2.28(d，2H)，1.73-1.86(m，4H)，1.57(dt，2H)，1.35(m，2H)ppm.

2-(反-2，6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(X25)的制备：

化合物X21和X22分别按照S.Danishefsky等在J.Org.Chem.1982，47，1597-1598和D.S.Reddy等在J.Org.Chem.2004，69，1716-1719中所述方法制备。化合物X25由化合物X22按照以上对制备X16所述方法制备。

化合物X23：¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)：5.72(s，1H)，4.16(q，2H)，4.08(q，2H)，3.06(dd，1H)，2.75(dd，1H)，2.39(dd，1H)，2.05(dd，1H)，1.28(t，3H)，1.19(m，6H)ppm.

化合物X25：¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)4.24(m，1H)，3.78(m，1H)，2.25(m，3H)，1.71(m，1H)，1.53(m，1H)，1.46(m，1H)，1.29(d，3H)，1.13(d，3H)，0.90(m，1H)ppm.

2-(4-羟基-4-甲基环己基)乙酸(X27)的制备：

将化合物X20在二氧六环中的溶液用4N的HCl/二氧六环处理。将反应溶液在室温下搅拌4小时，减压浓缩，得到粗制的化合物X26，它不经进一步纯化直接用于下一步骤。在搅拌下向化合物X26在THF中的溶液慢慢加入MeMgBr(3N THF溶液)。形成的混合物在40℃搅拌3小时，用1N柠檬酸水溶液中止反应，用EtOAc稀释。分离各相，有机相用MgSO₄干燥，减压浓缩，在硅胶上用色谱法纯化，得到化合物X27，为两种非对映体的混合物：异构体1：¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)：4.50(br s)，2.27(m，2H)，1.75(m，1H)，1.65(m，4H)，1.39(m，4H)，1.22(s，3H)ppm；异构体2：¹H-NMR(CDCl₃，500MHz)：2.12(m，2H)，1.69(m，3H)，1.56(m，2H)，1.39(m，2H)，1.12(s，3H)，1.05(m，2H)ppm.

2-(2，2-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸的制备

向上述甲酯(500mg，2.69mmol)在THF(21.5ml)、MeOH(21.5ml)和水(10.75ml)中的溶液加入LiOH(1N，10.75ml)。将反应混合物搅拌3小时，用HCl(1N)酸化至pH 5。产物用EtOAc萃取(2次，每次20ml)。合并的有机层随后用水、盐水洗，减压浓缩，得到420mg 2-(2，2-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸。¹H-NMR(CDCl₃)：δ3.76-3.67(m，2H)，2.56-2.19(m，3H)，1.63(m，2H)，1.26-1.10(m，8H).(M+1)173.

向化合物X30(64g，237mmol)和EDC(226g，1.19mmol)在EtOAc(1.5L)中的溶液加入DMSO(400ml)，将形成的悬浮液冷却到0℃。向此混合物中加入二氯乙酸在EtOAc中的溶液(1∶1，v/v，130ml)，并保持内部反应温度低于25℃。将反应混合物温热至室温，搅拌15分，冷却至0℃，用1N HCl(1L)中止反应。分离出有机层，用水(2×500ml)洗，用MgSO₄干燥，减压浓缩。得到的油状物经硅胶塞过滤，用EtOAc/己烷洗脱，得到48g(76％)化合物X31，为白色固体。

向树脂X32(按照WO 00/23421中所述步骤制备)(100g，0.88mmol/g)中加入X31(48g，179mmol)在THF(650ml)中的溶液，随后加入AcOH(30ml)。将混合物摇动16小时，滤出树脂，用THF(4次，每次400ml)和CH₂Cl₂(4次，每次400ml)洗，真空干燥。滤液和洗液合并后浓缩，重复以上的步骤，得到负载为约0.4mmol/g的树脂X33。醛化合物的制备

按照D.L.Comins等在Hetereocycles，1987，26(8)，pp.2159-2164中所述方法制备5-氯烟碱醛。

一些其它的醛，例如2-氟-5-氯苯甲醛、2-甲氧基-3-甲基苯甲醛、2-甲氧基烟碱醛、2，3-二氢苯并呋喃-7-甲醛可以按照以下步骤从相应的酸制备：

2，3-二氢苯并呋喃-7-甲醛的制备

将2，3-二氢苯并呋喃-7-羧酸(820mg，5mmol)溶于THF(10ml)。向该溶液中加入TEA(0.7ml，5mmol)和氯甲酸甲酯(0.43ml，5mmol)。将溶液搅拌0.5小时。过滤除去白色沉淀，将滤液加到NaBH₄(437mg，12.5mmol)的水(5ml)溶液中。将形成的溶液搅拌过夜。反应混合物用2M盐酸中和，然后用EtOAc萃取。有机层用盐水洗，用无水Na₂SO₄干燥，减压浓缩。将粗制的醇溶于DCM，向该溶液中加PCC(1.83g，7.5mmol)。室温下搅拌该混合物2小时，用乙醚稀释，然后倒出醚层。合并的有机层经硅藻土层过滤。将滤液浓缩得到粗产物。粗产物用柱纯化，使用10％EtOAc/己烷洗脱，得到450mg 2，3-二氢苯并呋喃-7-甲醛，为浅黄色固体。HPLC 4.3分。

4-氯吡啶甲醛的制备

将MnO₂(7.3g，84mmol)和(4-氯吡啶-2-基)甲醇(1g，7mmol)在CHCl₃中的悬浮液加热回流90分。混合物经一层硅藻土过滤，减压浓缩，得到520mg 4-氯吡啶甲醛，为白色固体。HPLC 1.8分，MS 142为M＝1峰。

3-氯-5-甲氧基苯甲醛的制备

将3-氯-5-甲氧基苯甲醇(5.0g，28.9mmol)和氯铬酸吡啶鎓盐(20％，氧化铝上，40g，37.8mmol)的混合物搅拌1.25小时。接着加入乙醚(200ml)，滤出沉淀。将滤液减压浓缩，得到的残留物用硅胶色谱法纯化，使用40％二氯甲烷、60％石油醚作为洗脱剂，得到3.8g 3-氯-5-甲氧基苯甲醛(78％)。¹H-NMR(CDCl₃)：3.84(s，3H)7.13(s，1H)，7.28(s，1H)，7.41(s，1H)，9.89(s，1H).

1-(溴甲基)-3-氯-5-甲基苯的制备

在回流下向间氯二甲苯(0.96g，6.8mmol)在四氯化碳中的溶液依次加入N-溴丁二酰亚胺(1.4g，7.5mmol)和过氧化苯甲酰(1.6g，6.8mmol)。将反应混合物搅拌20分钟，冷却至室温，滤除沉淀，将滤液减压浓缩，得到的残留物经硅胶色谱法纯化，使用石油醚作为洗脱剂，得到0.89g 1-(溴甲基)-3-氯-5-甲基苯(60％)。NMR(CDCl₃)：2.31(s，3H)4.37(s，2H)7.09(s，1H)7.12(s，1H)7.20(s，1H).3-氯-5-甲基苯甲醛的制备

向金属钠(52mg，2.3mmol)的乙醇溶液依次加入2-硝基丙烷(0.23g，2.4mmol)和3-氯-5-甲基苄基溴(0.5g，2.3mmol)。将反应混合物搅拌3小时，滤除形成的沉淀。将滤液减压浓缩，重新溶在乙醚中，用1N氢氧化钠(2次)和水洗，用硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。得到的残留物经硅胶色谱法纯化，使用10％二氯甲烷和90％石油醚洗脱，得到0.15g 3-氯-5-甲基苯甲醛(42％)。¹H-NMR(CDCl₃)：2.46(s，3H)7.43(s，1H)7.56(s，1H)7.68(s，1H)，9.92(s，1H).

将3-氯-5-氟-4-羟基苯甲醛(1.0g，5.7mmol)在THF(40ml)中的溶液与KOH(534mg，9.5mmol，1.7当量)的水(5ml)溶液和碘乙烷(1ml，2.2当量)一起加热回流17小时。然后将反应混合物用水转移至分液漏斗中，用二氯甲烷萃取(3次，每次150ml)。合并的有机层用10％盐酸(40ml)洗，干燥(MgSO₄)，浓缩后形成粘稠的橙色液体，得到1.13g 3-氯-4-乙氧基-5-氟苯甲醛(98％)。¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：9.84(d，J＝1.9Hz，1H)，7.71(t，J＝1.6Hz，1H)，7.53(dd，J＝1.9，10.7Hz，1H)，4.37-4.32(m，2H)，1.47-1.40(m，3H).

4-乙氧基-3，5-二甲基苯甲醛按照与3-氯-4-乙氧基-5-氟苯甲醛相似的方式制备。¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)：9.89(s，1H)，7.56(s，2H)，3.91(q，7Hz，1H)，2.34(s，6H)，1.44(t，J＝7Hz，6H).

4-异丙氧基-3，5-二甲基苯甲醛按照与4-乙氧基-3，5-二甲基苯甲醛相似的方式制备。¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)：9.88(s，1H)，7.55(s，2H)，4.31(q，J＝6Hz，1H)，2.32(s，6H)，1.32(d，J＝6Hz，6H).

4-(环丙基甲氧基)-3，5-二甲基苯甲醛按照与4-乙氧基-3，5-二甲基苯甲醛相似的方式制备。¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)：9.87(s，1H)，7.55(s，2H)，3.69(d，J＝7Hz，2H)，2.35(s，6H)，1.35-1.23(m，1H)，0.67-.060(m，2H)，0.35-0.30(m，2H).(S)-1-(叔丁氧羰基)-4-氧代吡咯烷-2-羧酸的制备

将(2S，4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(1.0当量)在乙酸异丙酯(5倍体积)中的溶液冷却至0℃，加入TEMPO(0.05当量)。然后在1小时内慢慢加入漂白剂溶液(12.5wt％，1.2当量，2.6体积)，同时维持温度在0-5℃。搅拌该混合物并用HPLC监测反应的完成，然后加入10％KHSO₄(2.5体积)，搅拌10分钟，分离各相。有机相用5％Na₂SO₃水溶液(2倍体积)和盐水(1倍体积)洗，然后共沸干燥，浓缩，得到标题化合物固体。将该固体用乙腈(1.0体积)湿磨，除去残留的颜色和杂质。¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ4.54(m，1H)，3.82(m，1H)，3.67(m，1H)；3.15(m，1H)；≈2.50(m，1H，与DMSO重合)；1.42和1.39(2s旋转异构体，9H)。(S)-1-(叔丁氧羰基)-4-亚甲基吡咯烷-2-羧酸的制备

向溴化甲基三苯膦鎓盐(2.2当量)在2-甲基四氢呋喃(3体积)中的悬浮液快速加入固体叔丁醇钾(2.3当量)，并保持温度在0℃左右。将温度在+20℃保持2小时(保持悬浮液)，重新冷却到0℃。在保持温度低于6℃的条件下，于40分钟内加入(S)-1-(叔丁氧羰基)-4-氧代吡咯烷-2-羧酸(1当量)。将反应混合物温热至室温并搅拌16小时，然后冷却至0℃。用NaHCO₃饱和溶液(5体积)和水(2体积)中止反应，分离水层。有机层用饱和NaHCO₃溶液/水(1.8体积/1.8体积)萃取，合并的水层经硅藻土过滤。将水层在环境温度下用6N HCl(2.6体积)酸化，用乙酸异丙酯(16体积，然后8体积)萃取2次。将有机相干燥(MgSO₄)，除去溶剂。粗产物溶在乙酸异丙酯(10体积)中，用0.5M NaOH(10体积，然后1体积)萃取。合并的水层在环境温度下用6N HCl酸化至pH＝3，用乙酸乙酯萃取2次(10体积，然后8体积)。将合并的萃取液干燥(Na₂SO₄)，除去溶剂，粗产物自环己烷(5体积)中重结晶，得到标题化合物。¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ12.9，(broad，1H)；5.00(m，2H)；4.24(dt，J＝1.9H，J＝7.3Hz，1H)，3.91(m，2H)；2.98(m，1H)；≈2.50(m，1H，与DMSO重合)；1.41和1.36(2s旋转异构体，9H)。

B.示例性式I化合物的合成

一些示例性的式I化合物可以如以下说明地用方法1制备。

所有以下的反应，除非另外指出，均在氮气下进行并使用无水溶剂。实施例1：(5S，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁 酰)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基)-2-氧-3-苯基-1- 氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物No.8)

步骤A：(2S)-4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-4-羟基吡咯烷-1，2-二羧酸二叔丁酯(A1)

将锌粉(1.05g，16mmol，1.6当量)在烧瓶中用空气加热枪加热2次。向该烧瓶中加入无水THF(10ml)和三甲基氯硅烷(0.405ml，3.2mmol，0.32当量)。室温下搅拌该悬浮液15分钟，加热至回流，然后撤除热源。将(S)-4-氧代吡咯烷-1，2-二羧酸二叔丁酯(2.85g，10mmol，1当量)和2-溴乙酸乙酯(1.77ml，16mmol，1.6当量)与无水THF(10ml)混合，以观察到温和回流的速度慢慢加到锌悬浮液中。将反应混合物回流2小时并用TLC监测。反应完成后将反应混合物浓缩。使用己烷和乙酸乙酯进行色谱分离，得到2.64g(7.3mmol)(2S)-4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-4-羟基吡咯烷-1，2-二羧酸二叔丁酯(A1)，是4∶1(2S，4S：2S，4R)的非对映体混合物。¹H NMR(300MHz，DMSO)4.97(m，1H)，4.14-4.01(m，3H)，3.48-3.33(m，2H)，2.56(m，2H)，2.35-2.19(m，1H)，2.03(dd，1H)，1.40-1.35(m，18H)，1.18(t，3H).

步骤B：(8S)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(B1)

将(2S)-4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-4-羟基吡咯烷-1，2-二羧酸二叔丁酯(A1)(1.58g，4.42mmol，1当量)在甲醇(6ml)中稀释。向此混合物中加肼(0.417ml，13.26mmol，3当量)。室温下搅拌反应混合物过夜，然后浓缩。向残留物中加入0.5N HCl(22.1ml，11.05mmol，2.5当量)，将混合物超声直至残留物溶于酸中。将溶液在冰水浴中冷却，慢慢加入1.0M NaNO₂溶液(5.3ml，5.3mmol，1.2当量)并搅拌15分钟。加入1∶1的苯∶氯仿混合物，分离出有机层，慢慢加到回流的苯(2X)中。将反应混合物回流1小时，然后浓缩。使用DCM和20％的甲醇/DCM进行色谱分离，得到0.978g(2.86mmol)(8S)-2-氧代-1-氧杂-3，7-氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(B1)，为4∶1(5S，8S：5S，8R)的非对映体混合物。¹H NMR(300MHz，DMSO)7.63(m，1H)，4.29-4.09(m，1H)，3.65-3.39(m，4H)，2.5-2.0(m，2H)，1.43-1.18(m，18H).

步骤C：(5S，8S)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(C1)

(8S)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(B1)(0.189g，0.55mmol，1当量)，Xantphos(4，5-二(二苯膦基)-9，9-二甲基呫吨)(17.4mg，0.03mmol，0.06当量)，K₃PO₄(148.6mg，0.7mmol，1.4当量)在密封的管中混合，抽真空，用氮气吹洗3次。加入无水1，4-二氧六环(20ml)，将该悬浮液脱气0.5小时。加入Pd(dba)₃(9.1mg，0.01mmol，0.02当量)，将密封管再脱气15分钟。加入溴苯(53μL，0.5mmol，1当量)，将反应混合物密封并在95℃加热72小时(随后的最优化显示24小时已足够，并且更多当量的溴苯(最多达3当量)会得到更高的产率)。将反应物冷却，过滤，用DCM冲洗。使用恒定梯度的己烷和乙酸乙酯对有机层进行层析，分离出非对映体，得到50mg(0.12mmol)(5S，8S)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(C1)。¹H NMR(300MHz，DMSO)7.52(d，2H)，7.43-7.37(m，2H)，7.14(t，1H)，4.22-4.07(m，3H)，3.85(d，1H)，3.60-3.46(m，1H)，2.8-2.65(m，1H)，2.27-2.19(m，1H)，1.42(m，18H).

步骤D：(5S，8S)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(D1)

将(5S，8S)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(C1)(0.262g，0.626mmol，1当量)加到烧瓶中于冰水浴内冷却。将1.0M的HCl/无水乙酸乙酯(6.26ml，6.26mmol，10当量)加到该冷却的中间体中，室温下搅拌该混合物过夜。在混合物还冷时蒸发溶剂。利用DCM和20％甲醇/DCM色谱分离，得到148mg(466μmol)(5S，8S)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(D1)。LCMS+：在1.76分为319.17(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤E：(5S，8S)-7-((S)-2-(苄氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(E1)

将L-cbz-t-leu-OH(284mg，0.642mmol，1.4当量)、EDC(123mg，0.642mmol，1.4当量)和HOBt(98mg，0.642mmol，1.4当量)在DMF(0.9ml)中混合并于室温下搅拌半小时。向该室温混合物加入(5S，8S)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(D1)(146mg，0.459mmol，1当量)和DIEA(240μL，1.377mmol，3当量)，将形成的混合物在室温下搅拌24小时。向该混合物中加1.0M组胺(水溶液，230μL，0.5当量)，将形成的混合物搅拌半小时。加入乙酸乙酯，该混合物依次用1N HCl和1M K₂CO₃洗。使用乙酸乙酯进行萃取，重复此萃取过程一次。合并的有机层用Na₂SO₄干燥并浓缩。使用己烷和乙酸乙酯色谱分离，得到(5S，8S)-7-((S)-2-(苄氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(E1)。LCMS+：在3.61分，566.44(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤F：(5S，8S)-7-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(F1)

将碳(100mg)载钯(10％)用MeOH(2.5ml)湿润并加到(5S，8S)-7-((S)-2-(苄氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(E1)(323mg，411μmol，1当量)中。反应混合物在室温和50psi下氢化过夜，然后过滤并浓缩，以定量产率得到(5S，8S)-7-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(F1)。LCMS+：在1.94分为432.39(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤G：(5S，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(G1)

将环己基乙酸(48mg，337mmol，1.4当量)、EDC(65mg，337μmol，1.4当量)和HOBt(52mg，337μmol，1.4当量)在DMF(0.3ml)中混合并在室温下搅拌0.5小时。向此混合物中加入(5S，8S)-7-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(F1)(105mg，243μmol，1当量)和DIEA(118μL，675μmol，2.8当量)，将形成的混合物在室温下搅拌24小时。加入1.0M组胺水溶液(120μL，0.5当量)，搅拌0.5小时。加入乙酸乙酯，依次用1N HCl和1M K₂CO₃洗，用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机层浓缩，用己烷和乙酸乙酯色谱分离，得到50mg(5S，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(G1)¹H NMR(300MHz，DMSO)7.90(d，1H)，7.53(d，2H)，7.44-7.37(m，2H)，7.14(m，1H)，4.47(d，1H)，4.30-3.99(m，3H)，3.89-3.83(m，1H)，3.18(d，1H)，2.79-2.67(m，1H)，2.27-2.00(m，3H)，1.7-1.55(m，5H)，1.45-1.39(m，11H)，1.2-1.1(m，4H)，0.98-0.91(m，9H)。随后的最优化表明，步骤E至G可以用在E1上进行与(S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酸的单个偶合反应代替。NMR证实未发生差向立体异构化。

步骤H：(5S，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(H1)

(5S，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(G1)(70mg，126μmol，1当量)在1∶1的DCM∶TFA(2ml)中稀释并在室温下搅拌过夜，然后浓缩，得到(5S，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(H1)，定量产率。LCMS+/-：在3.09分为500.41/498.55(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤I：(5S，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(I1)

将(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基己酰胺(20mg，87μmol，1.4当量)、EDC(17mg，87μmol，1.4当量)和HOBt(13mg，87μmol，1.4当量)在DMF(0.3ml)中混合并在室温下搅拌0.5小时。向此混合物中加入(5S，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(H1)(31mg，62μmol，1当量)和DIEA(33μL，186μmol，3当量)，在室温下搅拌过夜。加入1.0M组胺(水溶液，31μL，0.5当量)，将形成的混合物搅拌0.5小时。加入乙酸乙酯，该混合物依次用1N HCl和1M K₂CO₃洗，然后用乙酸乙酯萃取。合并的有机层浓缩后用DCM和20％MeOH/DCM色谱分离，得到20mg(30μmol)(5S，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(I1)。LCMS+/-：在3.24分，668.56/666.64(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤J：(5S，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己基-3-基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物No.3)

化合物No.3

将(5S，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(I1)(20mg，30mmol，1当量)在DCM中稀释。加入Dess Martin试剂(38mg，90μmol，3当量)，将混合物在室温下搅拌3小时。加入Na₂S₂O₃(水溶液，5当量)，将混合物再搅拌0.5小时。产物用DCM萃取。合并的有机层用己烷和乙酸乙酯进行色谱分离，得到15.9mg(24μmol)(5S，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物No.3)。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)7.5(d，2H)，7.4-7.32(m，2H)，7.2-7.12(m，2H)，6.9(m，1H)，6.17(d，1H)，5.4-5.3(m，1H)，4.77(t，1H)，4.65(d，1H)，4.42(d，1H)，4.15-3.98(m，2H)，3.76(d，1H)，2.83-2.75(m，1H)，2.6(m，2H)，2.2-0.8(m，31H)，0.6(m，2H).实施例2：(5R，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁 酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基)-2-氧代-3-苯 基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物No.5)

步骤A：(5R，8S)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(A2)

按照与实施例1步骤C相同的步骤，使用(8S)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(B1)(1.044g，3.05mmol)，得到475mg(5R，8S)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(A2)。¹H NMR(300MHz，DMSO)7.52(d，2H)，7.43-7.37(m，2H)，7.14(t，1H)，4.37-4.3(m，1H)，4.18-4.07(m，2H)，3.77-3.6(m，2H)，2.6-2.55(m，1H)，2.45-2.35(m，1H)，1.42(m，18H).

步骤B：(5R，8S)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(B2)

按照与实施例1步骤D相同的步骤，使用(5R，8S)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(A2)(145mg，0.346mmol)，得到92mg(0.289mmol)(5R，8S)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(B2)。¹H NMR(300MHz，DMSO)7.54(d，2H)，7.41-7.36(m，2H)，7.15-7.10(m，1H)，4.08(dd，2H)，3.75-3.70(m，1H)，2.90(m，1H)，2.31-2.26(m，1H)，1.44-1.39(m，9H).

步骤C：(5R，8S)-7-((S)-2-(苄氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(C2)

按照与实施例1步骤E相同的步骤，使用(5R，8S)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(B2)(130mg，411μmol)，得到(5R，8S)-7-((S)-2-(苄氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(C2)。LCMS+：3.61分566.44(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤D：(5R，8S)-7-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氮杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(D2)

按照实施例1步骤F的相同步骤，使用(5R，8S)-7-((S)-2-(苄氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(C2)得到(5R，8S)-7-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(D2)。LCMS+：1.94分，432.39(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤E：(5R，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(E2)

按照与实施例1步骤G相同的步骤，使用(5R，8S)-7-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(94mg，218μmol)得到70mg(126μmol)(5R，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(E2)¹H NMR(300MHz，DMSO)7.85(d，1H)，7.55(d，2H)，7.44-7.37(m，2H)，7.13(m，1H)，4.52(m，1H)，4.38(d，1H)，4.2-3.99(m，2H)，3.18(d，1H)，2.6(m，1H)，2.4(m，1H)，2.2-1.94(m，3H)，1.7-0.8(m，29H).

步骤F：(5R，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(F2)

按照与实施例1步骤H相同的步骤，使用(5R，8S)-7-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(70mg，126μmol)得到(5R，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(F2)。LCMS+/-：500.41/498.55，在3.09分(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤G：(5R，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(G2)

按照与实施例1步骤9相同的步骤，使用(5R，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(49mg，98μmol)和(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基己酰胺(31mg，137μmol，1.4当量)得到20mg(30μmol)的(5R，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(G2)。LCMS+/-：668.56/666.64，3.24分(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤H：(5R，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物No.5)

化合物No.5

按照与实施例1步骤10相同的步骤，使用(5R，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(20mg，30μmol)得到14.4mg(22μmol)的(5R，8S)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物No.5)。¹H NMR(300MHz，CDCl3)7.6-7.37(m，4H)，7.2-7.12(m，2H)，6.95(m，1H)，6.17(d，1H)，5.45-5.35(m，1H)，4.75(m，1H)，4.45(d，1H)，4.35(d，1H)，4.25(d，1H)，4.15-3.98(m，2H)，3.05-2.97(m，1H)，2.85-2.73(m，1H)，2.3(m，1H)，2.15-0.8(m，31H)，0.6(m，2H).实施例3：(S)-1-((5S，8S)-3-(3-氯苯基)-8-((S)-1-(环丙基 氨基)-1，2-二氧代己-3-基氨甲酰基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4] 壬-7-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸环戊酯(化合物No.7)

步骤A：(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(A3)

按照与实施例1步骤3相同的步骤，使用(8S)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(B1)(224mg，0.654mmol)和3-氯溴苯(230μL，1.962mmol，3当量)得到107mg(0.236mmol)(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(A3)。¹HNMR(300MHz，DMSO)7.68(m，1H)，7.55-7.38(m，2H)，7.2(m，1H)，4.23-4.05(m，3H)，3.8-3.7(m，1H)，3.5(m，1H)，2.7-2.6(m，1H)，2.25-2.1(m，1H)，1.4(m，18H).

步骤B：(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸甲酯(B3)

向(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(107mg，0.236mmol)中加入饱和的HCl/MeOH溶液(5ml)，并在室温下搅拌过夜。将溶液浓缩，用DCM和20％MeOH/DCM色谱分离，得到60mg(0.193mmol)(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸甲酯(B3)。¹HNMR(300MHz，DMSO)7.68(s，1H)，7.6-7.4(m，2H)，7.23(m，1H)，4.62(m，1H)，4.22(m，2H)，3.85-3.68(m，4H)，3.6-3.5(m，1H)，2.9-2.7(m，2H)。LCMS+：311.14，1.65分(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤C：(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(环戊氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸甲酯(C3)。

按照与实施例1步骤G相同的步骤，使用(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸甲酯(30mg，97μmol)和(S)-2-(环戊氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酸(28mg，116μmol，1.2当量)，得到22mg(41mmol)(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(环戊氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸甲酯(C3)。¹H NMR(300MHz，CDCl3)7.35-6.8(m，4H)，5.21-5.06(m，1H)，4.86(m，1H)，4.55-3.56(m，8H)，2.65-2.48(m，1H)，2.0(m，1H)，1.7-1.1(m，9H)，0.9-0.7(m，9H).

步骤D：(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(环戊氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(D3)。

将(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(环戊氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸甲酯(C3)(22mg，41mmol，1当量)用无水THF(0.5ml)稀释，然后加入1M LiOH(82μL，82μmol，2当量)和MeOH(20μL)。将反应混合物于室温下搅拌过夜，浓缩，得到10mg(19μmol)(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(环戊氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(D3)。LCMS+：522.35，3.14分(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤E：2-((5S，8S)-3-(3-氯苯基)-8-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基氨基甲酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬-7-基)-2-氧代乙基氨基甲酸环戊酯(D4)

按照与实施例1步骤1相同的步骤，使用(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(环戊氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(D3)(10mg，20μmol)和(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基己酰胺(7mg，28μmol)，得到5mg(7.2μmol)的(2S)-1-((5S，8S)-3-(3-氯苯基)-8-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基氨基甲酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬-7-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸环戊酯(E3)。LCMS+：690.38，3.31分(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤F：2-((5S，8S)-3-(3-氯苯基)-8-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基氨甲酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬-7-基)-2-氧代乙基氨基甲酸环戊酯(化合物No.7)。化合物No.7

按照与实施例1步骤10的相同步骤，使用2-((5S，8S)-3-(3-氯苯基)-8-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基氨基甲酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬-7-基)-2-氧代乙基氨基甲酸环戊酯(D4)(5mg，7.2μmol)得到6.9mg(1.3μmol)的2-((5S，8S)-3-(3-氯苯基)-8-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基氨甲酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬-7-基)-2-氧代乙基氨基甲酸环戊酯(化合物No.7)。LCMS+/-：688.4/686.6，3.6分(10-90％，3-5分，甲酸)。实施例4：(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨 基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3- 基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物No.9)

步骤A：(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(A4)

按照实施例1步骤C的步骤，使用(8S)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(2)(189mg，0.55mmol，1当量)和3-氯溴苯(60μL，0.55mmol，1当量)，得到54mg(119mmol)(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(A4)。¹H NMR(300MHz，DMSO)7.68(m，1H)，7.55-7.38(m，2H)，7.2(m，1H)，4.38-4.28(m，1H)，4.2-4.05(m，2H)，3.75-3.6(m，2H)，2.7-2.4(m，2H)，1.4(m，18H).

步骤B：(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(B4)

按照实施例1步骤D的程序，使用(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(A4)(54mg，120μmol)得到20mg(57μmol)(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(B4)。

步骤C：(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(C4)

按照实施例1步骤G的程序，使用(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(B4)(20mg，54μmol，1当量)和(S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酸(16mg，63μmol，1.2当量)，得到16mg(27μmol)(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(C4)。LCMS+/-：590.31/589.47，3.95分(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤D：(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(D4)

按照实施例1步骤H的程序，使用(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(C4)(16mg，27μmol)得到(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(D4)。LCMS+/-：534.32/532.53，3.35分(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤E：(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(E4)

按照实施例1步骤1的程序，用(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(D4)(12mg，22μmol)和(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基己酰胺(7.3mg，33μmol)得到10mg(14μmol)(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(E4)。LCMS+/-：702.54/700，3.68分(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤F：(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(F4)化合物No.9

按照实施例1步骤J的程序，使用(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(E4)(10mg，14μmol)得到2mg(2.9μmol)(5R，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物No.9)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)7.62(m，1H)，7.55-7.35(m，2H)，7.14(m，1H)，6.9(m，1H)，5.98(m，1H)，5.4(m，1H)，4.75(m，1H)，4.5-4.25(m，3H)，4.0-3.8(m，2H)，3.05(m，1H)，2.8(m，1H)，2.3(m，1H)，2.15-1.9(m，2H)1.7-0.8(m，30H)，0.6(m，2H).实施例5：(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨 基)-3，3-二甲基丁酰)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基) -2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物No.8)

步骤A：(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(A5)

按照实施例1步骤C的程序，使用(8S)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(B2)(189mg，0.55mmol，1当量)和3-氯溴苯(60μL，0.55mmol，1当量)得到48mg(0.106mmol)(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(A5)。¹HNMR(300MHz，DMSO)7.68(m，1H)，7.55-7.38(m，2H)，7.2(m，1H)，4.23-4.05(m，3H)，3.8-3.7(m，1H)，3.5(m，1H)，2.7-2.6(m，1H)，2.25-2.1(m，1H)，1.4(m，18H).

步骤B：(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(32)。

按照实施例1步骤4的程序，由(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-7，8-二羧酸二叔丁酯(A5)(48mg，106μmol)得到34mg(96μmol)(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(B5)。

步骤C：(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(33)

按照实施例1步骤G的程序，使用(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(B5)(32mg，91μmol，1当量)和(S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酸(25mg，100μmol，1.2当量)得到25mg(42mmol)(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(C5)。LCMS+/-：590.31/589.47，3.95分(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤D：(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(D5)。

按照实施例1步骤H的程序，使用(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(C5)(25mg，42μmol)得到(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(D5)。LCMS+/-：534.32/532.53，3.39分(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤E：(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-N-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(E5)

按照实施例1步骤1的程序，使用(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(D5)(23mg，43μmol)和(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基己酰胺(15mg，65μmol)得到10mg(14μmol)(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-N-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(E5)。LCMS+/-：702.54/700.62，3.63分(10-90％，3-5分，甲酸)。

步骤F：(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物No.8)

化合物No.8

按照实施例1步骤J的程序，使用(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-N-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(E5)(10mg，14μmol)得到1.3mg(1.9μmol)(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物No.8)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)7.6-7.28(m，3H)，7.13(m，2H)，6.9(m，1H)，6.03(m，1H)，5.33(m，1H)，4.8-4.75(m，1H)，4.61(m，1H)，4.46-4.4(m，1H)，4.25-3.7(m，3H)，2.8(m，1H)，2.68-2.52(m，1H)，2.2-1.9(m，2H)，1.9-0.8(m，30H)，0.6(m，2H).实施例6：(S)-1-((3S，5R)-3-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二 氧代己-3-基氨甲酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3，3-二甲 基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸环戊酯(化合物No.1)和(S)-1-((3S， 5S)-3-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基氨甲酰)-8-氧代-7- 苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸环戊 酯(化合物No.4)

步骤A：(S)-4-(2-乙氧基-2-氧代亚乙基)吡咯烷-1，2-二羧酸二叔丁酯(A6)

向(S)-4-氧代吡咯烷-1，2-二羧酸二叔丁酯(A1)(2.43g，8.5mmol)在甲苯(20ml)中的溶液加入(乙氧羰基亚甲基)三苯膦烷(4.52g，1.3mmol，1.5当量)。将反应混合物回流过夜，浓缩成油状物。将其在硅胶(120g，己烷/乙酸乙酯梯度)上纯化，得到(S)-4-(2-乙氧基-2-氧代亚乙基)吡咯烷-1，2-二羧酸二叔丁酯(A6)(1.00g，2.8mmol)，为无色油状物。¹H NMR(DMSO)

1.20(t，3H)，1.40(m，18H)，2.54(m，2H)，3.30(m，2H)，4.10(m，3H)，4.71(m，0.5H)，5.62(m，0.5H).

步骤B：(2S)-4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-4-(硝基甲基)吡咯烷-1，2-二羧酸二叔丁酯(B6)

将(S)-4-(2-乙氧基-2-氧代亚乙基)吡咯烷-1，2-二羧酸二叔丁酯(A6)(1.00g，2.8mmol)在硝基甲烷(5ml)中的溶液用四甲基胍(TMG，0.35g，3.0mmol，1.1当量)处理。将反应混合物回流3小时，浓缩成黄色油状物。将该油在硅胶上纯化(己烷/乙醚梯度)，得到(2S)-4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-4-(硝基甲基)吡咯烷-1，2-二羧酸二叔丁酯(B6)(0.46g，1.1mmol)，为非对映体混合物。¹H NMR(DMSO)

1.15(t，3H)，1.35(m，18H)，1.95(m，1H)，2.40(m，1H)，2.54(m，8H)，2.70(s，1.5H)，3.30(s，8.6H)，3.5-3.6(m，1H)，4.0-4.2(m，3H)，4.7-4.85(m，2H).

步骤C：(2S)-4-(氨基甲基)-4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)吡咯烷-1，2-二羧酸二叔丁酯(C6)

将硝基甲烷加成物(2S)-4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-4-(硝基甲基)吡咯烷-1，2-二羧酸二叔丁酯(B6)(1.24g，3.0mmol)溶于乙酸乙酯(20ml)，向其中加入10％Pd/C(75mg，催化剂)。将反应混合物在氢气氛下搅拌2天，经硅藻土过滤，浓缩成油状物。该粗产物在硅胶上纯化(1-20％MeOH/CH₂Cl₂梯度)，得到(2S)-4-(氨基甲基)-4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)吡咯烷-1，2-二羧酸二叔丁酯(C6)(566mg，1.5mmol)，为白色泡沫体。¹H NMR(DMSO)1.20(t，1H)，1.4(m，18H)，1.8-1.9(m，1H)，2.1-2.6(m，11H)，3.0-3.5(m，5H)，3.9-4.2(m，2H)，7.61(m，0.5H).

步骤D：2-((5S)-3-(氨基甲基)-1，5-二(叔丁氧羰基)吡咯烷-3-基)乙酸(D6)

将(2S)-4-(氨基甲基)-4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)吡咯烷-1，2-二羧酸二叔丁酯(C6)(560mg，1.45mmol)溶于THF(12ml)。向其中加入1N氢氧化锂水溶液(2.9ml，2.9mmol，2.0当量)。室温下搅拌混合物过夜。将反应混合物冷却至0℃，用1N盐酸中止反应。用N₂气将混合物吹干，用乙腈提取几次，得到2-((5S)-3-(氨基甲基)-1，5-二(叔丁氧羰基)吡咯烷-3-基)乙酸(D6)(1.45mmol)，为玻璃状固体。¹H NMR(DMSO)

1.35(m，18H)，2.00(m，2H)，2.35(m，2H)，2.80(m，1H)，3.65(m，1H)，4.00(m，1H)；LCMS(C₁₇H₃₀N₂O₆)358.21[M]，实验值ES⁺359.21[M+H]⁺，ES^-357.21[M-H]^-，1.8分保留时间，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲液)梯度，5分钟。

步骤E：(3S)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2，3-二羧酸二叔丁酯(E6)

向氨基酸2-((5S)-3-(氨基甲基)-1，5-(叔丁氧羰基)吡咯烷-3-基)乙酸(D6)(1.45mmol)在CH₂Cl₂(32ml)中的溶液加入1-羟基苯并三唑(HOBT，196mg，1.45mmol，1当量)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC，418mg，2.2mmol，1.5当量)和N，N-二异丙基乙胺(DIEA，756μL，4.4mmol，3.0当量)。将反应混合物在室温下老化过夜，然后用CH₂Cl₂(100ml)稀释，用水(100ml)、1N NaOH水溶液(100ml)和盐水(100ml)洗。有机相用硫酸钠干燥，过滤，与第二份萃取液一起浓缩，得到粗产物。将其在硅胶上纯化(1-20％MeOH/CH₂Cl₂梯度)，得到螺内酰胺(3S)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2，3-二羧酸二叔丁酯(E6)(295mg，868μmol)。¹H NMR(CDCl₃)

1.35(m，18H)，1.91(m，2H)，2.3(m，3H)，3.2(m，2H)，3.3-3.5(m，2H)，4.10(m，1H)，6.21(m，1H)；LCMS(C₁₇H₂₈N₂O₅)340.20[M]，实验值ES⁺341.2[M+H]⁺，285.2[M+H，减叔丁基]⁺，285.2[M+H，减叔丁基，减BOC]⁺，保留时间2.6分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲液)梯度，5分钟。

步骤F：(3S，5S)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2，3-二羧酸二叔丁酯(F6)

将螺内酰胺(3S)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2，3-二羧酸二叔丁酯(E6)(34mg，100μmol)与CsCO₃(56mg，172μmol，1.7当量)、Pd₂dba₃(3.0mg，3.2μmol，3.2％)及Xanthphos配体(5.7mg，9.8μmol，9.8％)一起置于管中。经注射器加入二氧六环(1.0ml)，随后加入溴苯(21mg，134μmol，1.3当量)。将密封的反应混合物在有效的磁搅拌下加热至100℃并保持16小时。反应混合物用CH₂Cl₂(10ml)稀释，经硅藻土过滤并浓缩。粗产物在硅胶上纯化(1-6％MeOH/CH₂Cl₂梯度)，得到苯基化的内酰胺(3S，5S)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2，3-二羧酸二叔丁酯(F6)(32mg，77μmol)，为白色泡沫体。¹H NMR(CDCl₃)

1.45(m，18H)，2.10(m，1H)，2.45(m，1H)，2.6-2.8(m，2H)，3.55(m，1H)，3.75(m，2H)，4.25(m，1H)，7.15(m，1H)，7.35(m，2H)，7.55(m，2H)；LCMS(C₂₃H₃₂N₂O₅)416.23[M]，实验值ES⁺417.23[M+H]⁺，保留时间3.5分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲液)梯度5分钟。

步骤G：(3S，5R)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸叔丁酯(Gla)和(3S，5R)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸叔丁酯(Glb)

将苯基化的内酰胺(3S，5S)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2，3-二羧酸二叔丁酯(F6)(29mg，70μmol)溶于无水乙酸乙酯(1.0ml)中，用1M HCl/乙酸乙酯(1.0ml，1000μmol，14当量)处理。将反应混合物在室温下老化24小时，向其中鼓入N₂气，直至干燥。该产物用乙酸乙酯和饱和的碳酸氢钠水溶液萃取。有机相用盐水洗，用Na₂SO₄干燥，过滤，与第二份萃取液一起浓缩，得到粗产物。该粗产物在硅胶上纯化(1-20％MeOH/CH₂Cl₂梯度)，得到(3S，5R)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸叔丁酯(G6a)(6.1mg，19μmol，27％)。¹HNMR(CDCl₃)

1.45(s，9H)，2.00(m，1H)，2.40(m，1H)，2.5-2.8(m，4H)，3.0-3.2(m，2H)，3.88(m，3H)，7.20(m，1H)，7.38(m，-2H)，7.6(m，-2H)。从柱中还得到次要的非对映体(3S，5R)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸叔丁酯(G6b)(0.5mg，1.6μmol，2.2％)。¹H NMR(CDCl₃)

1.45(s，9H)，2.25(m，1H)，2.45(m，1H)，2.6-2.9(m，2H)，3.37(m，1H)，3.5-3.8(m，2H)，3.91(m，1H)，4.25(m，1H)，7.15(m，1H)，7.32(m，2H)，7.55(m，2H).

步骤H：(3S，5R)-2-((S)-2-(环戊氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸叔丁酯(H6a)和(3S，5S)-2-((S)-2-(环戊氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸叔丁酯(H6b)

将胺(3S，5R)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸叔丁酯(6.1mg，19μmol)在DMF(200μL)中用(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(环戊氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸甲酯(C3)(40μmol，2当量)、1-羟基苯并三唑(HOBT，25μmol，1当量)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC，40μmol，2当量)和N，N-二异丙基乙胺(DIEA，80μmol，4当量)处理。将反应混合物在室温下老化过夜，用1M的组胺水溶液(40μL，2当量)中止反应，鼓入N₂气吹干。残留物用乙酸乙酯(2×5ml)和0.5N盐酸(2×2ml)萃取，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到(3S，5R)-2-((S)-2-(环戊氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸叔丁酯(H6a)(9.2mg，17μmol)。¹H NMR(CDCl₃)

1.08(s，9H)，1.4-1.9(m，20H)，2.09(m，1H)，2.40(m，1H)，2.70(s，2H)，3.61(m，2H)，3.91(m，1H)，4.20(m，2H)，4.45(m，1H)，5.00(m，1H)，5.20(m，1H)，7.15(m，1H)，7.35(m，2H)，7.60(m，2H)；LCMS(C₃₀H₄₃N₃O₆)541.32[M]，实验值ES⁺564.3[M+Na]⁺，542.32[M+H]⁺，保留时间3.7分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度5分钟。次要的非对映体(3S，5S)-2-((S)-2-(环戊氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸叔丁酯(H6b)(5μmol)以类似的方式得到。LCMS(C₃₀H₄₃N₃O₆)541.32[M]，实验值542.32[M+H]⁺，保留时间3.7分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度5分钟。

步骤I：(3S，5R)-2-((S)-2-(环戊氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸(16a)和(3S，5S)-2-((S)-2-(环戊氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸(16b)

将被保护的脯氨酸(3S，5R)-2-((S)-2-(环戊氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸叔丁酯(H6a)(9.2mg，17μmol)溶在CH₂Cl₂(1.0ml)中，用三氟乙酸(0.3ml)在室温下处理4小时。将反应混合物在高真空下浓缩至干，得到(3S，5R)-2-((S)-2-(环戊氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸(16a)(17μmol)。次要的对映体(3S，5S)-2-((S)-2-(环戊氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸(16b)(5μmol)以类似的方式得到。

步骤J：(S)-1-((3S，5R)-3-((S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基氨基甲酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸环戊酯(J6a)和(S)-1-((3S，5S)-3-((S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基氨基甲酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸环戊酯(J6b)

将羧酸(3S，5R)-2-((S)-2-(环戊氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸(I6a)(17μmol)和(2R，3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基己酰胺盐酸盐(弹头(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(环戊氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(D3)，(7.6mg，34μmol，2当量)溶于DMF(1.0ml)中。向其中加入1-羟基苯并三唑(HOBT，4.6mg，34μmol，2当量)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC，6.5mg，34μmol，2当量)和N，N-二异丙基乙胺(DIEA，12μL，68μmol，4当量)。将反应混合物在室温下老化过夜，浓缩至干，用CH₂Cl₂(2×5ml)和水(2ml)萃取。有机相用硫酸钠干燥，过滤并浓缩成粗产物。该粗产物在硅胶上纯化(1％MeOH/CH₂Cl₂至20％MeOH/CH₂Cl₂梯度)，得到(S)-1-((3S，5R)-3-((S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基氨甲酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸环戊酯(J6a)(4.1mg，6.3μmol)。LCMS(C₃₅H₅₁N₅O₇)653.38[M]，实验值ES⁺654.5[M+H]⁺和ES^-652.6[M-H]^-，保留时间3.0分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度5分钟。次要的非对映体(S)-1-((3S，5S)-3-((S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基氨甲酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸环戊酯(J6b)(3μmol)以类似的方法得到。LCMS(C₃₅H₅₁N₅O₇)653.38[M]，实验值ES⁺654.5[M+H]⁺和ES^-652.6[M-H]^-，保留时间3.0分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度5分钟。

步骤K：(S)-1-((3S，5R)-3-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基氨甲酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸环戊酯(化合物No.1)和(S)-1-((3S，5S)-3-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基氨甲酰)-8-氧代-7-苯基-2，7二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸环戊酯(化合物No.4)

化合物No.1                                   化合物No.4

将羟基酰胺(S)-1-((3S，5R)-3-((S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基氨甲酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸环戊酯(J6a)(4.1mg，6.3μmol)溶于CH₂Cl₂(1.0ml)并用Dess-Martin五价碘氧化剂(DMP，8.0mg，18.9μmol，3当量)于室温下处理3小时。用1M硫代硫酸钠水溶液(32μL，5当量)中止反应。将反应混合物加到硅胶上(用乙酸乙酯/己烷梯度洗脱)，得到(S)-1-((3S，5R)-3-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基氨甲酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸环戊酯(化合物No.1)(3.1mg，4.8μmol)，为白色固体。¹H NMR(CDCl₃)

46H)，1.96(m，1H)，2.25(m，1H)，2.61(m，2H)，2.80(s，2H)，3.60(dd，2H)，4.00(d，1H)，4.22(m，2H)，4.70(m，1H)，4.90(m，1H)，5.20(d，1H)，5.35(m，1H)，6.90(s，1H)，7.19(m，1H)，7.38(m，2H)，7.65(d，1H)。LCMS(C₃₅H₄₉N₅O₇)651.36[M]，实验值ES⁺652.5[M+H]⁺和ES^-650.6[M-H]^-，保留时间3.2分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲液)梯度5分钟。次要非对映体(S)-1-((3S，5S)-3-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基氨甲酰)-8-氧代-7-苯基-2，7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸环戊酯(化合物No.4)(1.4mg，2μmol)以类似的方式得到。¹H NMR(CDCl₃)0.52(m，2H)

14H)，1.0-2.0(m，22H)，2.10(m，1H)，2.45-2.75(m，4H)，3.64(t，2H)，3.90(d，2H)，4.15(d，1H)，4.60(m，1H)，5.00(m，1H)，5.13(d，1H)，5.25(m，1H)，6.80(m，1H)，7.10(m，2H)，7.30(m，4H)，7.50(m，2H)，7.90(m，1H)；LCMS(C₃₅H₄₉N₅O₇)651.36[M]，实验值ES⁺652.5[M+H]⁺和ES^-650.6[M-H]^-，保留时间3.2分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度5分钟。实施例7：(3S，5R)-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基) 7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8- 氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸酯(化合物No.2)和(3S，5S)-((S) -1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基)7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧 酸酯(化合物No.6)

步骤A：(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2，3-二羧酸二叔丁酯(A7a)和(3S，5R)7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2，3-二羧酸二叔丁酯(A7b)

将螺内酰胺(5S，8S)-7-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰)-2-氧代-3-苯基-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸叔丁酯(F1)(51mg，150μmol)与CsCO₃(70mg，215μmol，1.4当量)、Pd₂dba₃(6.6mg，7.2μmol，4.8％)和Xanthphos配体(13.5mg，23.3μmol，15.5％)一起置于管中。经注射器加入二氧六环(1.5ml)，随后加入1-溴-3-氯苯(46mg，240μmol，1.6当量)。将密封的反应混合物在100℃加热17小时，并施加有效的磁搅拌。将反应混合物用CH₂Cl₂(10ml)稀释，经硅藻土过滤后浓缩。粗产物在硅胶上纯化(1-6％MeOH/CH₂Cl₂梯度)，得到作为非对映体混合物的产物。将该非对映体在硅胶上分离(10-50％乙醚/己烷)，得到(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2，3-二羧酸二叔丁酯(A7a)(45.7mg，101μmol)。¹H NMR(CDCl₃)1.48(m，18H)，2.09(m，1H)，2.45(m，1H)，2.70(q，2H)，3.50(m，1H)，3.70(m，3H)，4.28(m，1H)，7.15(d，1H)，7.30(m，1H)，7.50(d，1H)，7.65(d，1H)；LCMS(C₂₃H₃₁N₂O₅Cl)450.19[M]，实验值ES⁺451.19[M+H]⁺，保留时间3.7分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度5分钟。还得到了次要非对映体(3S，5R)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2，3-二羧酸二叔丁酯(A7b)(15.2mg，34μmol)。¹H NMR(CDCl₃)

1.48(m，18H)，2.09(m，1H)，2.45(m，1H)，2.65(s，2H)，3.4-3.95(m，4H)，4.25(m，1H)，7.15(d，1H)，7.1-7.7(m，4H)；LCMS(C₂₃H₃₁N₂O₅Cl)450.19[M]，实验值ES⁺451.19[M+H]⁺，保留时间3.8分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度5分钟。

步骤B：(3S，5R)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(B7a)和(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(B7b)。

将芳基化内酰胺(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2，3-二羧酸二叔丁酯(A7a)(45.7mg，101μmol)溶于1M HCl/乙酸乙酯(1.0ml，10当量)中。在室温下老化反应混合物过夜，向其中鼓入N₂气吹洗直至干燥。将产物溶在HCl的饱和甲醇溶液(2ml)中，室温下老化过夜。用氮气将反应混合物吹干并在真空下干燥，得到(3S，5R)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(B7a)(35.2mg，102μmol)。LCMS(C₁₅H₁₇N₂O₃Cl)308.09[M]，实验值ES⁺309.2[M+H]⁺和311.1[M+H]⁺(对于氯同位素)，保留时间2.0分，使用5-45％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度7分钟。次要的非对映体(3S，5R)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2，3-二羧酸二叔丁酯(A7b)(15.2mg，34μmol)类似地进行处理，得到(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(B7b)(12.4mg，36μmol)。LCMS(C₁₅H₁₇N₂O₃Cl)308.09[M]，实验值ES⁺309.2[M+H]⁺和311.1[M+H]⁺(对于氯同位素)，保留时间2.2分，使用5-45％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度7分钟。

步骤C：(3S，5R)-2-((S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(C7a)和(3S，5S)-2-((S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(C7b)

将脯氨酸(3S，5R)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(B7a)(35.2mg，102μmol)在DMF(0.7ml)中用(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酸(33.3mg，144μmol，1.2当量)、1-羟基苯并三唑(HOBT，16.5mg，122μmol，1.2当量)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC，63.3mg，330μmol，3.2当量)和N，N-二异丙基乙胺(DIEA，86μL，68mmol，4当量)于室温下处理3天。用1M组胺水溶液(381μL，3.7当量)中止反应，并用N₂气吹至干燥。残留物用乙酸乙酯(2×10ml)和0.5N盐酸(2×5ml)萃取。有机相用1M碳酸钾水溶液(2×2ml)洗，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。产物在硅胶上纯化(乙酸乙酯/己烷梯度)，得到(3S，5R)-2-((S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(C7a)(36.9mg，70.6μmol)。¹H NMR(CDCl₃)

1.07(s，9H)，1.39(s，9H)，1.60(s，1H)，2.10(m，1H)，2.45(m，1H)，2.71(s，2H)，3.60(m，2H)，3.75(s，3H)，3.99(d，1H)，4.13(d，1H)，4.30(d，1H)，4.60(t，1H)，5.08(d，1H)，7.15(m，1H)，7.29(m，2H)，7.60(m，2H)；LCMS(C₂₆H₃₆N₃O₆Cl)521.23[M]，实验值ES⁺522.23[M+H]⁺和422.23[M+H-Boc]⁺，保留时间3.5分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度5分钟。次要非对映体(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(B7b)(12.4mg，36μmol)类似地进行反应，得到(3S，5S)-2-((S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(C7b)(9.4mg，18μmol，50％)。LCMS(C₂₆H₃₆N₃O₆Cl)521.23[M]，实验值ES⁺522.23[M+H]⁺和422.23[M+H-Boc]⁺，保留时间3.5分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度5分钟。

步骤D：(3S，5R)-2-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(D7a)和(3S，5S)-2-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(D7b)

将化合物(3S，5R)-2-((S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(C7a)(36.9mg，70.6μmol)溶于CH₂Cl₂(1.0ml)中并在室温下用三氟乙酸(0.3ml)处理6小时。将反应混合物浓缩至干，得到(3S，5R)-2-((S)-2-氨基-3，3-二甲基苯甲酰)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(D7a)(70.6μmol)。次要非对映体(3S，5S)-2-((S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(C7b)(9.4mg，18μmol)类似地处理，得到(3S，5S)-2-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(D7b)(18μmol，100％)。

步骤E：(3S，5R)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(E7a)和(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(E7b)

将胺(3S，5R)-2-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(D7a)(70.6μmol)溶于CH₂Cl₂(2.0ml)中并在室温下用2-环己基乙酸(20.0mg，141μmol，2.0当量)、1-羟基苯并三唑(HOBT，9.5mg，70μmol，1.0当量)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC，27.1mg，141μmol，2.0当量)和N，N-二异丙基乙胺(DIEA，74μL，424μmol，6当量)处理过夜。反应混合物用CH₂Cl₂(2×10ml)和水(5ml)萃取。有机相用盐水洗，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物。该产物在二氧化硅上纯化(乙酸乙酯/己烷梯度)，得到(3S，5R)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(E7a)(12.8mg，23μmol)。¹H NMR(CDCl₃)

0.85-1.4(m，17H)，1.67(m，8H)，2.10(m，4H)，2.45(m，1H)，2.70(d，2H)，3.65dd，2H)，3.79(s，3H)，3.92(d，1H)，4.30(d，1H)，4.50(d，1H)，4.60(t，1H)，6.00(d，1H)，7.15(d，1H)，7.30(m，2H)，7.50(m，1H)，7.70(s，1H)；LCMS(C₂₉H₄₀N₃O₅Cl)545.26[M]，实验值ES⁺546.3[M+H]⁺和548.4[M+H]⁺(对于氯同位素)和ES^-544.3[M-H]^-，保留时间3.6分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度5分钟。次要非对映体(3S，5S)-2-((S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-7-(3-氯苯基)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(C7b)(18μmol)类似地处理，得到(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(E7b)(6.6mg，12μmol)。LCMS(C₂₉H₄₀N₃O₅Cl)545.26[M]，实验值ES⁺546.3[M+H]⁺，保留时间3.6分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度5分钟。

步骤F：(3S，5R)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸(F7a)和(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸(F7b)

将(3S，5R)-甲基-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(E7a)(12.8mg，23μmol)溶于THF(1.0ml)中，加入MeOH(50μL)。向其中加入1N LiOH水溶液(46μL，2.0当量)。将反应混合物于室温下搅拌过夜，在0℃下用1N盐酸(46μL，2.0当量)中止反应。将反应混合物浓缩至干，得到(3S，5R)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸(F7a)(23μmol)。LCMS(C₂₈H₃₈N₃O₅Cl)531.25[M]，实验值ES⁺532.3[M+H]⁺和ES-530.5[M-H]^-，保留时间3.2分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度5分钟。次要的非对映体(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸甲酯(E7b)(6.6mg，12μmol)类似地处理，得到(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸(F7b)(12μmol)。LCMS(C₂₈H₃₈N₃O₅Cl)531.25[M]，实验值ES⁺532.25[M+H]⁺和ES^-530.25[M-H]^-，3.3分保留时间，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度5分钟。

步骤G：(3S，5R)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)酯(G7a)和(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)酯(G7b)

将羧酸(3S，5R)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸(F7a)(23μmol)和(2R，3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基己酰胺盐酸盐(弹头(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(环戊氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰)-2-氧代-1-氧杂-3，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-羧酸(D3)，20.6mg，92μmol，4当量)溶在CH₂Cl₂(2.0ml)中。向其中加入1-羟基苯并三唑(HOBT，12.2mg，46μmol，2当量)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC，17.6mg，92μmol，4当量)和N，N-二异丙基乙胺(DIEA，50μL，288μmol，12.5当量)。将反应混合物在室温下老化过夜，用CH₂Cl₂(2×10ml)和水(2ml)萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并浓缩成粗产物。将粗产物在硅胶上纯化(1％MeOH/CH₂Cl₂至20％MeOH/CH₂Cl₂梯度)，得到(3S，5R)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)酯(G7a)(12.2mg，17.4μmol)。LCMS(C₃₇H₅₄ClN₅O₆)699.38[M]，实验值ES⁺700.5[M+H]⁺和ES^-698.7[M-H]^-，保留时间3.3分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度5分钟。次要的非对映体(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸(F7b)(12μmol)经类似处理，得到(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)酯(G7b)(8.5mg，12μmol)。LCMS(C₃₇H₅₄ClN₅O₆)699.38[M]，实验值ES⁺700.5[M+H]⁺和ES^-698.7[M-H]^-，保留时间3.3分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度5分钟。

步骤H：(3S，5R)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基)酯(化合物No.2)和(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基)酯(化合物No.6)

化合物No.2                                     化合物No.6

将羟基酰胺(3S，5R)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)酯(G7a)(12.2mg，17.4μmol)溶在CH₂Cl₂(2.0ml)中，室温下用Dess-Martin五价碘氧化剂(DMP，22.0mg，52μmol，3当量)处理3小时。用1M硫代硫酸钠水溶液(87μL，5当量)中止反应。将反应混合物加到硅胶上，用乙酸乙酯/己烷梯度洗脱，得到(3S，5R)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基)酯(化合物No.2)(12.1mg，17.3μmol)，为白色固体。¹H NMR(CDCl₃)

44H)，3.51(d，2H)，3.91(d，1H)，4.21(d，1H)，4.44(d，1H)，4.59(m，1H)，5.22(m，1H)，5.92(d，1H)，6.81(s，1H)，7.09(m，1H)，7.20(m，4H)，7.50(d，1H)，7.60(s，1H)；LCMS(C₃₇H₅₂ClN₅O₆)697.36[M]，实验值ES⁺698.5[M+H]⁺和ES^-696.6[M-H]^-，保留时间3.6分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸)梯度5分钟。次要非对映体(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)酯(G7b)(8.5mg，12μmol)类似地处理，得到(3S，5S)-7-(3-氯苯基)-2-((S)-2-(2-环己基乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰)-8-氧代-2，7-二氮杂螺[4.4]壬烷-3-羧酸-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己-3-基)酯(化合物No.6)(7.6mg，11μmol，93％)。¹H NMR(CDCl₃)

45H)，3.65(m，2H)，3.90(m，2H)，4.49(m，2H)，4.60(m，1H)，5.28(m，1H)，5.95(m，1H)，6.81(s，1H)，7.0-7.8(m，10H)；LCMS(C₃₇H₅₂ClN₅O₆)697.36[M]，实验值ES⁺698.5[M+H]⁺和ES^-696.6[M-H]^-，保留时间3.6分，使用10-90％乙腈/水(含0.1％甲酸缓冲剂)梯度5分钟。

试剂和条件：(l)1-溴-3-氯苯，Pd₂dba₃/Xanthphos/CsCO₃，二氧六环，100℃，16小时，90％(3∶1混合物)；(m)HCl气，EtOAc，18小时，然后HCl气，MeOH，24小时，100％；(n)(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酸，HOBT/EDC/DIEA，DMF，3天，69％；(O)TFA，CH₂Cl₂，6小时，100％；(p)2-环己基乙酸，HOBT/EDC/DIEA，CH₂Cl₂，18小时，67％；(q)LiOH，THF，MeOH，18小时，100％；(r)(2R，3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基己酰胺盐酸盐，HOBT/EDC/DIEA，CH₂Cl₂，18小时，76％；(S)Dess-Martin五价碘氧化剂，CH₂Cl₂，3小时，99％。VI.检验和测定化合物的抑制性能的试验A.HCV酶试验1.HCV NS3丝氨酸蛋白酶域的构建和表达

利用PCR由HCV Con 1复制子质粒I₃₇₇neo/NS3-3′/wt(在此研究中重新命名为pBR322-HCV-Neo)[V.Lohmann等，Science，285，pp.110-113(1999)]得到编码HCV NS3蛋白酶(GenBank CAB 46913)的残基Ala¹-Ser¹⁸¹的DNA片段，并将其插入pBEV11(S.Chamber等，私人通信)以便表达大肠杆菌中具有C端六组氨酸标签的HCV蛋白质。所有构建物均通过测序来证实。

将用于HCV NS3丝氨酸蛋白酶域的表达构建物转移到BL21/DE3 pLys S大肠肝菌细胞(Stratagene)中。刚转移的细胞在补充了100μg/ml羧苄青霉素和35μg/ml氯霉素的BHI培养基(DifcoLaboratories)中于37℃生长至光密度(600nm)为0.75。用1mM IPTG在24℃进行诱导4小时。利用离心收取细胞浆，并在蛋白质纯化前于-80℃急骤冷冻。所有的纯化步骤均在4℃进行。然后，将100g细胞浆在1.5L的缓冲液A(50mM HEPES(pH 8.0)，300mM NaCl，0.1％正辛基-β-D-吡喃葡糖苷，5mM β-巯基乙醇，10％(v/v)甘油)中裂解并搅拌30分钟。将裂解物用Microfluidizer(Microfluidics，Newton，Mass.)均化，随后在54000×g下超离心45分。向上清液中加入咪唑至最终浓度为5mM，同时加入2mL用含5mM咪唑的缓冲液A预平衡的Ni-NTA树脂。将该混合物摇动3小时，并用20倍柱体积的缓冲液A加5mM咪唑洗。将HCV NS3蛋白在含300mM咪唑的缓冲液A中洗脱。将洗脱物浓缩，加在一只预先用缓冲液A预平衡的Hi-Load 16/60Superdex 200柱上。收集合适的纯化过的HCV蛋白级分并在-80℃储存。2.HCV NS3蛋白酶域肽切割试验

此试验是Landro等所述试验(Landro JA，Raybuck SA，Luong YC，O’Malley ET，Harbeson SL，Morgenstern KA，Rao G和Livingston DL.，Biochemistry 1997，36，9340-9348)的改良，在对于基因型1a HCV的NS5A/NS5B切割位点的基础上使用肽底物(NS5AB)。底物的储备溶液(25mM)在含0.2M DTT的DMSO中制备并在-20℃储存。使用一种合成的肽辅因子(KK4A)作为NS4A的中央核心区的替代物。肽序列示于下面的表中。反应以96孔微量滴板格式在含50mMHEPES pH 7.8、100mM NaCl、20％甘油、5mM DTT和25μM KK4A的缓冲液中使用25-50ηM HCV NS3蛋白酶域进行。最终的DMSO浓度不超过2％v/v。加入三氟乙酸(TFA)使反应中止，最终浓度为2.5％。和HCV NS3蛋白酶域一起使用的肽序列

利用微内径柱分离法将SMSY产物与底物和KK4A分离。使用的仪器是Agilent 1100，带有G1322A脱气装置，G1312A二元泵或G1311A四元泵，G1313A自动进样器，G1316A柱恒温箱和G1315A二极管阵列检测器。柱子是一只Phenomenex Jupiter，5μm C18，150×2mm，P/O 00F-4053-B0，流速0.2mL/分。柱恒温浴为40℃。流动相是HPLC级的H₂O/0.1％TFA(溶剂A)和HPLC级CH₃CN/0.1％TFA(溶剂B)。利用在210ηM收集的数据定量表示SMSY产物峰。NS3·4A蛋白酶的构建和表达

利用标准重组DNA技术，将编码NS3和NS4A的序列的包含一个N端六组氨酸序列的cDNA片段-得自HCV亚型系1a的残基Ala₁₀₂₇至Cys₁₇₁₁，克隆到杆状病毒转移载体pVL1392(Webb NR和Summers MD(1990)Expression of Proteins using recombinantbaculoviruses，Techniques 2：173-188)。含NS3·4A的重组杆状病毒通过pVL1392-His-NS3·4A与线型化的苜蓿银纹夜娥多核型多角体病毒(AcMNPV)DNA共转染到草地夜娥(Sf9)昆虫细胞中来制备。被转染的含重组杆状病毒克隆的细胞随后利用蚀斑纯化法分离。高效价的克隆杆状病毒通常用于感染Sf9昆虫细胞供制备蛋白质用。在制备时，使Sf9细胞在27℃生长，直至密度达到2.0×10⁶细胞/ml。此时用病毒感染该昆虫细胞。72小时后或者当细胞生存力处于70-80％时，收取培养物，备好细胞用于纯化。3.NS3·4A蛋白质的纯化

NS3·4A蛋白(SEQ ID NO：1)纯化如下。将细胞浆在每g细胞至少5体积的裂解缓冲液(50mM Na₂PO₄ pH 8.0，10％甘油，300mM NaCl，5mM β-巯基乙醇，0.2mM PMSF，2.5μg/ml亮抑蛋白酶肽，1.0μg/ml E64，2.0μg/ml抑胃酶肽)中解冻。然后将细胞浆在冰上用Dounce均化器均化，再使细胞通过一台Microfluidizer(MicrofluidicsCorporation，Newton，MA)进行机械破碎，将细胞裂解物收集在冰上，于4℃在100,000×g下离心30分钟，倒走上清液。任选地，可以将粒状沉淀再悬浮于洗涤缓冲液(裂解缓冲液+0.1％β-辛基吡喃葡糖苷)中，用Dounce均化器均化，在4℃于100000×g下离心30分钟。不溶性的NS3·4A通过重新悬浮在萃取缓冲液(裂解缓冲液+0.5％十二烷基麦芽糖苷)中从粒状沉淀中提取，每g细胞浆用2.5ml。将混合物用一台Dounce均化器均化，并在4℃混合3小时或更长。将该混合物在4℃于100,000g下离心30分钟。倒出和收集上清液。

利用Ni-NTA金属亲和层析法将NS3·4A蛋白进一步纯化。向收集的上清液中加入取自2M储备液(pH 8.0)的咪唑，使得咪唑的最终浓度为10mM。将上清液分批在4℃与Ni-NTA亲和树脂(己用裂解缓冲液+10mM咪唑预平衡)温育过夜。每5μg预期的NS3·4A用1ml树脂。随后利用重力或在500g下离心5分钟使树脂沉降。将树脂倒入重力流动柱中，用10倍或更多柱体积的Ni洗涤缓冲液(裂解缓冲液+0.1％十二烷基麦芽糖苷+10mM咪唑)洗涤。随后用3-4倍柱体积的Ni洗脱缓冲液(Ni洗涤缓冲液+300mM咪唑)洗脱。将洗脱的级分收集在冰上，用SDS-PAGE鉴定。为防止NS3·4A蛋白酶解，在加入SDS样品缓冲液和沸腾之前，先向凝胶样品中加入100μM DFP蛋白酶抑制剂。收集峰值级分，通过测定在280nm处的吸光度并除以NS3·4A的消光系数(e)1.01，确定蛋白质浓度。

NS3·4A用凝胶过滤色谱法进一步纯化。一只Superdex 20026/60柱与Superdex缓冲液(20nM HEPES pH 8.0，10％甘油，300mMNaCl，10mM β-巯基乙醇，0.05％十二烷基麦芽糖苷)以3ml/分的速度平衡。如果需要，将Ni纯化的NS3·4A在一台Centriprep 30中浓缩至高于2mg/ml，经过0.2μm的注射过滤器过滤，在Superdex 200柱上加上最多达10ml。在通过0.3柱体积后，收集4-5ml级分。各级分用SDS-PAGE鉴定。NS3·4A蛋白以两个峰洗脱。峰1含聚结的NS3·4A，峰2含有活性蛋白质。收集峰2的级分，分成小份并在-70℃冷冻。NS3·4A蛋白质的分析分析                    全蛋白长度                    695个氨基酸分子量                  74,347.781微克                   13.450皮摩尔摩尔消光系数            734301A₂₈₀相当于             1.01mg/ml等电点                  6.50pH 7时的电荷            -3.584.NS3肽切割试验

此试验跟踪肽底物被全长丙型肝炎病毒蛋白NS3·4A的切割。使用基于基因型1a HCV的HS5A/HS5B切割位点的三种肽底物之一测定酶活性。所有的底物储备溶液(25mM)均在含0.2M DTT的DMSO中配制并在-20℃下储存。用一种合成的肽辅因子(NS4A肽)补充NS4A。肽序列列在下面。水解反应按照96孔微量滴定板格式，用100-125ηMHCV NS3·4A在含50mM HEPES pH 7.8、100mM NaCl、20％甘油、5mMDTT和25μM NS4A肽的缓冲液中进行。最终的DMSO浓度不超过2％v/v。使用NS5AB或NS5AB-EDANS作为底物的反应通过加入10％三氟乙酸(TFA)达到最终TFA浓度为2.5％使其中止。使用FITC-NS5AB-1作为底物的反应则通过加入0.4M甲酸达到0.08M的最终酸浓度使反应中止。

酶活性通过用反相HPLC法分离底物和产物来鉴定。使用的仪器是Agilent 1100，带有G1322A脱气装置，G1312A二元泵或G1311A四元泵，G1313A自动进样器，G1316A柱恒温室，G1321A荧光检测器和G1315A二极管阵列检测器。柱恒温浴为40℃。对于底物NS5AB，柱子是Phenomenex Jupiter，5μm C18，

150×2mm，P/O 00F-4053-B0，流速2.0mL/分，使用HPLC级H₂O/0.1％TFA(溶剂A)和HPLC级CH₃CN/0.1％TFA(溶剂B)作为流动相。C-端产物峰(NH2-SMSY-COOH)利用在210nm收集的吸光度数据定量表示。对于底物NS5AB-EDANS，柱子是Phenomenex Aqua，5μm C18，

50×4.6mm，P/O 00B-4299-E0，流速1.0ml/分，使用HPLC级H₂O/0.1％TFA(溶剂A)和HPLC级CH₃CN/0.1％TFA(溶剂B)作为流动相。C-端产物峰(NH₂-SMSYT-Asp(EDANS)-KKK-COOH)使用收集的350nm处的激发/490nm处的发射数据定量表示。对于底物FITC-NS5AB-1，柱子是Phenomenex Prodigy，5μm ODS(2)，

50×4.6mm，P/O00B-3300-E0，流速1.0ml/分，使用10mM磷酸钠pH 7.0在HPLC级H₂O中(溶剂A)和65％HPLC级CH₃CN/35％10mM磷酸钠pH 7.0在HPLC级水中(溶剂B)作为流动相。N-端产物峰(FITC-Ahx-EDVV-(α)Abu-C-COOH)使用收集的440nm激发/520nm发射荧光数据定量表征。或者是，N-端产物与未反应的FITC-NS5AB-1底物之比使用一只Caliper Lab Chip 3000测定，检测488nm激发/530nm发射，使用的芯片缓冲液含100nM Tris pH 7.0，10mM EDTA，0.01％(v/v)Brij-35和0.1％(v/v)CR-3。和HCV NS3一起使用的肽序列5.Km和Vmax的测定

为测定动力学参数Km和Vmax，使HCV NS3蛋白酶域或HCV NS3·4A与肽底物在上述试验条件下反应。肽底物浓度在3μM和200μM之间变化，在所有的底物浓度下，转化均小于20％。产物峰面积(由反相HPLC测定)与反应时间之比得到酶催化的水解速率。这些速率与底物浓度数据点利用非线性回归法与Michaelis-Menten公式拟合。使用标称的蛋白酶浓度和全切割的底物肽作为仪器校正标准，由Vmax得到k_cat值。具有HCV NS3或NS3蛋白酶域的肽底物的动力学参数

6.化合物效力的测定

为评价表观Ki值，将除试验化合物和底物之外的所有组分在室温下预培养5-10分钟。然后向该混合物中加入溶在DMSO内的试验化合物并在30℃培养15或60分钟。培养纯净的DMSO作为无抑制剂的对照样。加入浓度等于Km或1/2Km的肽底物引发切割反应，并令其在30℃进行20分钟。反应结束时使混合物骤停反应，如上所述地测定反应程序。使用11个化合物浓度来滴定酶抑制活性。将活性和对应的抑制剂浓度数据点利用非线性回归法与描述竞争性紧密结合酶抑制作用的Morrison公式(Sculley MJ和Morrison JF.，Biochim.Biophys.Acta.1986，874，44-53)拟合。

试验的式I化合物一般显示出Ki值从约0.100至约5μM。在某些实施方案中，式I化合物的Ki值为约0.170-3.7μM。在另一些实施方案中，式I化合物的Ki值为约0.150-3.50μM。在其它一些实施方案中，式I化合物的Ki值为0.140至约3.200μM。

式(I、Ia或Ib)化合物抑制丝氨酸蛋白酶受体的活性的实例示于下面的表3中。对于用HCV酶试验法测得的化合物对丝氨酸蛋白酶的活性，如果测得的活性低于0.41μM，则丝氨酸蛋白酶活性用“+++”表示；如果测得的活性为0.41μM至0.7μM，则用“++”表示；如果测得的活性大于0.7μM，则用“+”表示；如果无数据可以得到，则表示成“-”。应当注意，效力0％是只用DMSO对照样得到的最小响应。酶试验1指HCV NS3蛋白酶域肽切割试验，酶试验2指HCV NS3肽切割试验。表3：HCV酶试验活性和示例性式I化合物的效力

B.HCV细胞试验

Huh-7细胞在补充了10％热失活的FBS(胎牛血清)、2mML-谷氨酰胺和非必需氨基酸(JRH)的Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM，JRH Biosciences，Lenexa，Kansas)中增殖。将细胞用体外转录的HCV复制子RNA转染，其如Lohmann等(1999)所述与复制子I377neo/NS3-3′/wt相同。选择稳定的细胞克隆并在250μg/mL G418(Invitrogen，Carlsbad，California)存在下保存。在随后的HCV复制子试验中使用该克隆之一24-2。使复制子细胞在补充了10％FBS、2mML-谷氨酰胺、非必需氨基酸和250μg/mL G418的DMEM培养基中增殖。将细胞在新鲜的培养基中每周分裂2次，直至达到融合。每个复制子细胞中有大约200-300个HCV RNA拷贝。

细胞中的HCV复制子RNA用Quantigene Discover XL试剂盒(Panomics Inc.，Fremont California)按照制造商的说明测定。简言之，将化合物处理过的复制子细胞裂解并使用HCV特异性寡核苷酸固定在捕捉板上过夜，按照制造商的说明使用寡核苷酸探针测定捕捉的RNA的相对数量。1.2天HCV复制子IC ₅₀ 试验

在试验的前一天，在96孔板的每个孔中植入104个复制子细胞并令其在补充了10％热失活FBS(JRH Biosciences，Lenexa，Kansas)、2mM L-谷氨酰胺(Invitrogen)、非必需氨基酸(Invitrogen)和250μg/mL G418(Invitrogen)的DMEM(Invitrogen，Carlsbad，California)中附着和生长过夜。将化合物在加有2％FBS和0.5％DMSO，但不含G418的DMEM(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO)中系列稀释。细胞中的HCV复制子RNA用Quantigene Discover XL试剂盒(Panomics Inc.，Fremont California)按照制造商的说明测定。简言之，将化合物处理过的复制子细胞裂解并利用HCV特异性寡核苷酸固定在捕捉板上过夜，并用寡核苷酸探针装置按照制造商的说明测定捕捉的RNA的相对数量。除非另外指明，各数据点均代表3个重复样的平均值。IC₅₀是细胞中HCV复制子RNA浓度与未经处理的复制子细胞对照样相比减少50％时的化合物浓度。为监测化合物对细胞增殖或细胞生存力的影响，将复制子细胞用系列稀释的化合物处理48小时，然后利用CellTiter Glo试验(Promega，Madison，Wisconsin)测定细胞的生存力。各CC₅₀均由三个重复样得出，代表生存的细胞数目与未处理的细胞对照样相比减少50％时的化合物浓度。IC₅₀和CC₅₀利用按Soft Max Pro程序(Molecular Derices，Sunnyvale，California)拟合的四参数曲线测定。2.5天HCV复制子IC ₉₉ 试验

在试验的前一天，在96孔板中以每孔2500个细胞的低密度植入HCV复制子细胞，使得细胞在5天的培养期间达不到融合。将化合物在含10％FBS和0.5％DMSO、但不含G418的DMEM中系列稀释。在第1天和第3天向细胞中加入新鲜培养基和化合物。在细胞用抗病毒化合物处理5天后，使用Quantigene Discover XL试剂盒(PanomicsInc.，Fremont California)按照制造商的说明测定细胞中的HCV复制子RNA。简言之，将化合物处理过的复制子细胞裂解并用HCV特异性寡核苷酸固定在捕捉板上过夜，使用寡核苷酸探针装置(Panomics)按照制造商的说明测定被捕捉的复制子RNA的相对数量。各数据点代表2个重复样的平均值。IC₉₉是细胞中HCV复制子RNA浓度与未处理的细胞对照样比较减少2个对数值时的化合物浓度。为监测化合物对细胞增殖或细胞生存力的影响，将复制子细胞用系列稀释的化合物处理5天，然后利用CellTiter Glo试验(Promega，Madison，Wisconsin)测定细胞生存力。各CC₅₀值均得自2个重复样，是生存的细胞与未处理的细胞对照样相比减少50％时的化合物浓度。IC₉₉和CC₅₀利用Prism软件(Graphpad Software Inc.，San Diego，California)和Excel程序(MicrosoftCorporation，Radmand，Washington)，通过4参数拟合法确定。

利用以上的试验，确定了本发明化合物可作为丝氨酸蛋白酶抑制剂使用。

其它实施方案

应当清楚，虽然已结合详细的说明对本发明作了描述，但以上描述目的在于示例说明而不是限制发明的范围，后者由所附权利要求的范围限定。其它的方法、优点和修改都属于以下权利要求的范围。

序列表

 

<110>Vertex Pharmaceuticals，Inc.

 

<120>丝氨酸蛋白酶抑制剂

 

<130>125805/00463

 

<160>6

 

<170>PatentIn版本3.3

 

<210>1

<211>695

<212>PRT

<213>丙型肝炎病毒

 

<220>

<221>MISC特点

<222>(1)..(10)

<223>丝氨酸标记

 

<400>1

Met Ser His His His His His His Ala Met Ala Pro Ile Thr Ala Tyr

1                5                   10                    15

Ala Gln Gln Thr Arg Gly Leu Leu Gly Cys Ile Ile Thr Ser Leu Thr

            20                   25                    30

Gly Arg Asp Lys Asn Gln Val Glu Gly Glu Val Gln Ile Val Ser Thr

        35                   40                    45

Ala Thr Gln Thr Phe Leu Ala Thr Cys Ile Asn Gly Val Cys Trp Thr

    50                   55                    60

Val Tyr His Gly Ala Gly Thr Arg Thr Ile Ala Ser Pro Lys Gly Pro

65                   70                   75                  80

Val Ile Gln Met Tyr Thr Asn Val Asp Gln Asp Leu Val Gly Trp Pro

                 85                  90                    95

Ala Pro Gln Gly Ser Arg Ser Leu Thr Pro Cys Thr Cys Gly Ser Ser

            100                  105                   110

Asp Leu Tyr Leu Val Thr Arg His Ala Asp Val Ile Pro Val Arg Arg

        115                  120                  125

Arg Gly Asp Ser Arg Gly Ser Leu Leu Ser Pro Arg Pro Ile Ser Tyr

    130                  135                  140

Leu Lys Gly Ser Ser Gly Gly Pro Leu Leu Cys Pro Ala Gly His Ala

145                  150                 155                  160

Val Gly Leu Phe Arg Ala Ala Val Cys Thr Arg Gly Val Thr Lys Ala

                 165                 170                   175

Val Asp Phe  Ile Pro Val Glu Asn Leu Glu Thr Thr Met Arg Ser Pro

              180                 185                   190

Val Phe Thr Asp Asn Ser Ser Pro Pro Ala Val Pro Gln Ser Phe Gln

        195                  200                  205

Val Ala His Leu His Ala Pro Thr Gly Ser Gly Lys Ser Thr Lys Val

    210                  215                  220

Pro Ala Ala Tyr Ala Ala Gln Gly Tyr Lys Val Leu Val Leu Asn Pro

225                  230                 235                  240

Ser Val Ala Ala Thr Leu Gly Phe Gly Ala Tyr Met Ser Lys Ala His

                 245                  250                  255

Gly Val Asp Pro Asn Ile Arg Thr Gly Val Arg Thr Ile Thr Thr Gly

             260                 265                  270

Ser Pro Ile Thr Tyr Ser Thr Tyr Gly Lys Phe Leu Ala Asp Gly Gly

        275                  280                  285

Cys Ser Gly Gly Ala Tyr Asp Ile Ile Ile Cys Asp Glu Cys His Ser

    290                  295                  300

Thr Asp Ala Thr Ser Ile Leu Gly Ile Gly Thr Val Leu Asp Gln Ala

305                  310                  315                 320

Glu Thr Ala Gly Ala Arg Leu Val Val Leu Ala Thr Ala Thr Pro Pro

                 325                 330                  335

Gly Ser Val Thr Val Ser His Pro Asn Ile Glu Glu Val Ala Leu Ser

             340                 345                  350

Thr Thr Gly Glu Ile Pro Phe Tyr Gly Lys Ala Ile Pro Leu Glu Val

        355                  360                  365

Ile Lys Gly Gly Arg His Leu Ile Phe Cys His Ser Lys Lys Lys Cys

    370                  375                  380

Asp Glu Leu Ala Ala Lys Leu Val Ala Leu Gly Ile Asn Ala Val Ala

385                  390                  395                 400

Tyr Tyr Arg Gly Leu Asp Val Ser Val Ile Pro Thr Asn Gly Asp Val

                 405                 410                  415

Val Val Val Ser Thr Asp Ala Leu Met Thr Gly Phe Thr Gly Asp Phe

             420                 425                  430

Asp Ser Val Ile Asp Cys Asn Thr Cys Val Thr Gln Thr Val Asp Phe

        435                  440                  445

Ser Leu Asp Pro Thr Phe Thr Ile Glu Thr Thr Thr Leu Pro Gln Asp

    450                  455                  460

Ala Val Ser Arg Thr Gln Arg Arg Gly Arg Thr Gly Arg Gly Lys Pro

465                  470                 475                  480

Gly Ile Tyr Arg Phe Val Ala Pro Gly Glu Arg Pro Ser Gly Met Phe

                 485                 490                  495

Asp Ser Ser Val Leu Cys Glu Cys Tyr Asp Ala Gly Cys Ala Trp Tyr

            500                  505                  510

Glu Leu Met Pro Ala Glu Thr Thr Val Arg Leu Arg Ala Tyr Met Asn

        515                  520                  525

Thr Pro Gly Leu Pro Val Cys Gln Asp His Leu Glu Phe Trp Glu Gly

    530                  535                  540

Val Phe Thr Gly Leu Thr His Ile Asp Ala His Phe Leu Ser Gln Thr

545                  550                 555                  560

Lys Gln Ser Gly Glu Asn Phe Pro Tyr Leu Val Ala Tyr Gln Ala Thr

                 565                 570                  575

Val Cys Ala Arg Ala Gln Ala Pro Pro Pro Ser Trp Asp Gln Met Trp

            580                  585                  590

Lys Cys Leu Ile Arg Leu Lys Pro Thr Leu His Gly Pro Thr Pro Leu

        595                  600                  605

Leu Tyr Arg Leu Gly Ala Val Gln Asn Glu Val Thr Leu Thr His Pro

    610                  615                  620

Ile Thr Lys Tyr Ile Met Thr Cys Met Ser Ala Asp Leu Glu Val Val

625                  630                 635                  640

Thr Ser Thr Trp Val Leu Val Gly Gly Val Leu Ala Ala Leu Ala Ala

                645                  650                  655

Tyr Cys Leu Ser Thr Gly Cys Val Val Ile Val Gly Arg Ile Val Leu

            660                  665                  670

Ser Gly Lys Pro Ala Ile Ile Pro Asp Arg Glu Val Leu Tyr Gln Glu

        675                  680                  685

Phe Asp Glu Met Glu Glu Cys

    690                  695

 

<210>2

<211>10

<212>PRT

<213>人造的

 

<220>

<223>合成产生的肽

 

<220>

<221>MOD RES

<222>(5)..(5)

<223>α-氨基丁酸

 

<400>2

Glu Asp Val Val Xaa Cys Ser Met Ser Tyr

1                5                   10

 

<210>3

<211>16

<212>PRT

<213>人造的

 

<220>

<223>合成产生的肽

 

<400>3

Lys Lys Gly Ser Val Val Ile Val Gly Arg Ile Val Leu Ser Gly Lys

1                5                    10                   15

 

<210>4

<211>23

<212>PRT

<213>人造的

 

<220>

<223>合成产生的肽

 

<400>4

Lys Lys Gly Ser Val Val Ile Val Gly Arg Ile Val Leu Ser Gly Lys

1                5                    10                   15

Pro Ala Ile Ile Pro Lys Lys

             20

 

<210>5

<211>15

<212>PRT

<213>人造的

 

<220>

<223>合成产生的肽

 

<220>

<221>MOD RES

<222>(5)..(5)

<223>α-氨基丁酸

 

<220>

<221>MOD_RES

<222>(12)..(12)

<223>Asp(EDANS)

 

<400>5

Glu Asp Val Val Xaa Cys Ser Met Ser Tyr Thr Asp Lys Lys Lys

1                5                   10                   15

 

<210>6

<211>14

<212>PRT

<213>人造的

 

<220>

<223>合成产生的肽

 

<220>

<221>MOD_RES

<222>(1)..(1)

<223>FITC-2-氨基己酸

 

<220>

<221>MOD_RES

<222>(6)..(6)

<223>α-氨基丁酸

 

<400>6

Xaa Glu Asp Val Val Xaa Cys Ser Met Ser Tyr Thr Lys Lys

1                5                   10

Claims (87)

1.一种式I化合物：

或其可药用盐，其中

R₁是-Z^AR_B，其中各Z^A独立地是一个键或是任选取代的支化或直链的C_1-12脂烃链，其中Z^A的最多3个碳单元任选地和独立地被

-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^A-，-C(O)NR^ANR^A，-C(O)O-，-NR^AC(O)O-，-O-，-NR^AC(O)NR^A-，-NR^ANR^A-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^A-，-SO₂NR^A-，或-NR^ASO₂NR^A-替代，条件是，-O-、-NR^ANR^A-、-NR^AC(O)NR^A-或-NR^ASO₂NR^A-不与式I的氮环原子直接键合，

各R₈独立地是R^A、卤素、-OH、-CN、-NO₂、-NH₂或-OCF₃，

各R^A独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；

R₂和R₃是-Z^BR₉，其中各Z^B独立地是一个键或是任选取代的支化或直链的C_1-6脂烃基链，其中Z^B的最多3个碳单元任选地或独立地被

-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^B-，-C(O)NR^BNR^B-，-C(O)O-，-NR^BC(O)O-，-NR^BC(O)NR^B-，-NR^BNR^B-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^B-，-SO₂NR^B-，或-NR^BSO₂NR^B-，

替代，

各R₉独立地是R^B、卤素、-OH、-CN、-NO₂、-NH₂或-OCF₃，

各R^B独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基，

或者R₂和R₃合起来形成一个氧基；

A是-O-或-CR₆R₇-，其中R₆和R₇均为-Z^CR₁₀，各Z^C独立地是一个键或是任选取代的支化或直链的C_1-6脂烃链，Z^C中最多3个碳单元任选地和独立地被-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^C-，-C(O)NR^CNR^C-，-C(O)O-，-NR^CC(O)O-，-NR^CC(O)NR^C-，-NR^CNR^C-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^C-，-SO₂NR^C-，或-NR^CSO₂NR^C-，

替代，

各R₁₀独立地是R^C、卤素、-OH、-CN、-NO₂、-NH₂或-OCF₃，

各R^C独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；

R₄是-Z^DR₁₁，其中各Z^D独立地是一个键，或是任选取代的支化或直链的C_1-12脂烃基链，其中Z^D的最多3个碳单元任选地和独立地被

-C(O)-，-C(S)-，-C(O)NR^D-，-C(O)NR^DNR^D-，-C(O)O-，-NR^DC(O)O-，-O-，-NR^DC(O)NR^D-，-NR^DNR^D-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^D-，-SO₂NR^D-，或-NR^DSO₂NR^D-替代，条件是，-SO-、-SO₂-或-SO₂NR^D-不与邻近R₄的羰基直接结合，

各R₁₁独立地是R^D、卤素、-OH、-CN、-NO₂、-NH₂或-OCF₃，

各R^D独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基；和

R₅是-Z^ER₁₂，其中各Z^E独立地是一个键或是任选取代的支化或直链的C_1-12脂烃链，其中Z^E的最多3个碳单元任选地和独立地被-C(O)-。-C(S)-，-C(O)NR^E-，-C(O)NR^ENR^E-，-C(O)O-，-NR^EC(O)O-，-O-，-NR^EC(O)NR^E-，-NR^ENR^E-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^E-，-SO₂NR^E-或-NR^ESO₂NR^E-替代，

各R₁₂独立地是R^E，卤素，-OH，-CN，-NO₂，-NH₂或-OCF₃，和

各R^E独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；

或者，R₄和R₅与它们连接的原子一起形成一个任选取代的杂脂环基环。

2.权利要求1的化合物，其中R₁是任选取代的脂烃基。

3.权利要求1-2中任一项的化合物，其中R₁是烷基、烯基或炔基，它们均任选地被1-4个独立选自卤素、芳基、杂芳基、脂环基和杂脂环基的取代基取代。

4.权利要求1-3中任一项的化合物，其中R₁是任选被1-4个独立选自卤素、芳基、杂芳基、脂环基和杂脂环基的取代基取代的烷基。

5.权利要求1-4中任一项的化合物，其中R₁是甲基、乙基、丙基或丁基，它们均任选地被独立选自卤素、芳基、杂芳基、脂环基和杂脂环基的1-4个取代基取代。

6.权利要求1-5中任一项的化合物，其中R₁是未取代的烷基。

7.权利要求1-6中任一项的化合物，其中R₁是任选取代的芳烷基。

8.权利要求1-7中任一项的化合物，其中R₁是芳基甲基、芳基乙基或芳基丙基，它们均任选地被取代。

9.权利要求1-8中任一项的化合物，其中R₁是苯甲基、苯乙基或苯丙基，它们均任选地被独立选自卤素、芳基、羟基、脂羟基、脂环基、杂脂环基、芳基和杂芳基的1-3个取代基取代。

10.权利要求1-9中任一项的化合物，其中R₁是任选取代的芳基。

11.权利要求1-10中任一项的化合物，其中R₁是单环或双环的芳基，它们均任选地被取代。

12.权利要求1-11中任一项的化合物，其中R₁是任选被选自卤素、羟基、脂烃基、芳基、杂芳基、脂环基和杂脂环基的1-3个取代基取代的苯基。

13.权利要求1-12中任一项的化合物，其中R₂和R₃合起来形成一个氧基。

14.权利要求1-13中任一项的化合物，其中A是-O-或-CH₂-。

15.权利要求1-14中任一项的化合物，其中各R₄是-Z₁-V₁-Z₂-V₂-Z₃-V₃，V₁、V₂和V₃均独立地是一个键，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，或者当V₁、V₂、V₃是R₄的端基时为氢；Z₁、Z₂和Z₃均独立地是一个键，

-C(O)-，-C(O)C(O)-，-C(S)-，-C(O)N(Q₆)-，-N(Q₆)C(O)-，-C(O)C(O)N(Q₆)-，-O-，，SO-，-SO₂-，-N(Q₆)SO₂-，-N(Q₆)C(O)N(Q₆)-，-N(Q₆)C(S)N(Q₆)-，-N(Q₆)-，-N(Q₆)SO₂-，-SO₂N(Q₆)-，-C(O)N(Q₆)SO₂-，-SO₂N(Q₆)C(O)-，或者当Z₁、Z₂和Z₃是R₂的端基时为氢；各Q₆独立地是氢或任选取代的脂烃基。

16.权利要求1-15中任一项的化合物，其中R₄是任选取代的(脂烃基)氨基，任选取代的(脂环基)氨基，任选取代的烷氧基，或是羟基。

17.权利要求1-16中任一项的化合物，其中R₄是任选取代的(脂烃基)氨基，R₄的脂烃基部分是-Z₂-V₂-Z₃-V₃或-Z₃-V₃，其中Z₂和Z₃均独立地是一个键，-C(O)-，-N(Q₅)-，-CH(OH)-，-C(O)N(Q₆)-或-C(O)C(O)N(Q₆)-；V₂独立地是一个键，任选取代的脂烃基，或任选取代的脂环基；V₃是氢，任选取代的脂烃基，或任选取代的脂环基。

18.权利要求1-17中任一项的化合物，其中Z₂是-CH(OH)-，V₂是一个键，Z₃是-C(O)N(Q₆)-，于是R₄是-N(Q₆)-CH(OH)-C(O)-N(V₃)(Q₆)。

19.权利要求1-18中任一项的化合物，其中R₄是任选被1-3个卤原子、羟基、脂烃基、脂环基或杂脂环基取代的烷氧基。

20.权利要求1-19中任一项的化合物，其中R₄是氨基。

21.权利要求1-20中任一项的化合物，其中R₄是一个

(脂环基(羰基(羰基(烷基))))氨基，

(氨基(羰基(羰基(脂烃基))))氨基，

(脂烃基(羰基(羰基(脂烃基))))氨基，或

(芳基(氨基(羰基(羰基(脂烃基)))))氨基，它们均任选地被取代。

22.权利要求1-21中任一项的化合物，其中R₄是-NR_4ZR′_4Z、-SR_4Y或-NR_4Y-CR_4XR′_4X-L₁-NR_4Z-R_4W，其中R_4Y独立地是氢、任选取代的脂烃基、任选取代的脂环基、任选取代的杂脂环基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；各R_4W独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的杂脂环基，或任选取代的脂环基；R_4X和R′_4X均独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的杂芳基，任选取代的苯基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基；或者R_4X和R′_4X与它们都连接的原子一起形成一个任选取代的3-7元脂环基或杂脂环基环；各L₁是-CH₂-，-C(O)-，-CF₂-，-C(O)C(O)-，-C(O)O-，-S(O)-或-SO₂-；各R_4Z或R′_4Z是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；或者R_4Z和R′_4Z与它们都连接的氮一起可以形成一个任选取代的3-7元的杂脂环基环。

23.权利要求1-22中任一项的化合物，其中R_4X和R′_4X均独立地是氢，或是任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，或任选取代的(脂环基)脂烃基。

24.权利要求1-23中任一项的化合物，其中L₁是-C(O)C(O)-或-SO₂-。

25.权利要求1-24中任一项的化合物，其中各R_4W是氢或是任选取代的脂环基。

26.权利要求1-25中任一项的化合物，其中R₄是-NH-CHR_4X-C(O)-C(O)-N(R_4Z)-R_4W。

27.权利要求1-26中任一项的化合物，其中R₄是-NH-CHR_4X-CH(OH)-C(O)-N(R_4Z)R_4W。

28.权利要求1-27中任一项的化合物，其中R₄是-NH-CHR_4X-C(O)-C(O)-NH-环丙基。

29.权利要求1-28中任一项的化合物，其中R₄是

其中的R_4X是

或

R_4W是

或是氢。

30.权利要求1-29中任一项的化合物，其中R₄是

或

其中各R₅₆独立地是任选取代的C_1-6脂烃基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的脂环基，或任选取代的杂脂环基；各R₅₇独立地是任选取代的脂烃基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的脂环基，或任选取代的氨基，m是1或2；R_4X和R′_4X均独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；或者R_4X和R′_4X与它们都连接的原子一起形成一个任选取代的3-7元脂环基或杂脂环基环。

31.权利要求1-30中任一项的化合物，其中R₄是

其中R₅₈和R₅₉彼此独立地选自任选取代的脂烃基，任选取代的烷氧基，任选取代的芳氧基，任选取代的杂芳氧基，任选取代的(脂环基)氧基，任选取代的(杂脂环基)氧基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的脂环基，或任选取代的氨基；R_4X和R′_4X均独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；或者R_4X和R′_4X与它们都连接的原子一起形成一个任选取代的3-7元脂环基或杂脂环基环。

32.权利要求1-31中任一项的化合物，其中R₄是选自以下基团：

或

其中X₂₀₀是-OX₂₀₂OR-X₂₀₂，X₂₀₂是脂烃基、脂环基、杂脂环基、芳基或杂芳基。

33.权利要求1的化合物，其中R₄是

或

34.权利要求1-33中任一项的化合物，其中R₄是

或

35.权利要求1-34中任一项的化合物，其中R₅是-Q₄-W₄-Q₃-W₃-Q₂-W₂-Q₁；其中W₂、W₃和W₄均独立地是一个键，-C(O)-，-C(S)-，-C(O)N(Q₅)-，-C(O)O-，-O-，-N(Q₅)C(O)N(Q₅)-，-SO₂-，-N(Q₅)SO₂-，-S-，-N(Q₅)-，-SO-，-OC(O)-，-N(Q₅)C(O)O-，或-SO₂N(Q₅)-；Q₁、Q₂、Q₃和Q₄均独立地是一个键，任选取代的C_1-4脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，或者当Q₁、Q₂、Q₃或Q₄是R₅的端基时为氢；各Q₅独立地是氢或任选取代的脂烃基。

36.权利要求1-35中任一项的化合物，其中Q₄是一个键。

37.权利要求1-36中任一项的化合物，其中R₅是任选取代的酰基。

38.权利要求1-37中任一项的化合物，其中R₅是(氨基)烷基羰基，(卤)烷基羰基，(芳基)烷基羰基，(脂环基)烷基羰基，或(杂脂环基)烷基羰基，(杂环烷基(氧(羰基(氨基))))烷基羰基，(杂芳基(羰基(氨基(烷基(羰基(氨基)))))烷基羰基，(双环烷基(磺酰基(氨基)))烷基羰基，(芳基(烷氧基(羰基(氨基))))烷基羰基，(烷基(羰基(氨基)))烷基羰基，(烯基(烷氧基(羰基(氨基))))烷基羰基，(脂环基(烷基(氨基(羰基(氨基)))))烷基羰基，(杂芳基(羰基(氨基(烷基(羰基(氨基))))))烷基羰基，(烷基(氨基(羰基(氨基))))烷基羰基，或(双环芳基(氨基(羰基(氨基))))烷基羰基，它们均任选地被取代。

39.权利要求1-38中任一项的化合物，其中R₅是杂芳基羰基，(脂环基(烷基(酰氨基(烷基))))羰基，(杂脂环基(氧(酰氨基(烷基))))羰基，(芳基(磺酰基(氨基(烷基))))羰基，(芳烷基(氧(酰氨基(烷基))))羰基，(脂烃基(氧(酰氨基(烷基))))羰基，(脂环基(烷基(酰氨基(烷基))))羰基，(杂脂环基)羰基，或(杂芳基(酰氨基(烷基(酰氨基(烷基))))羰基，它们均任选地被1-4个卤原子、脂烃基、脂环基、酰基、烷氧基或其组合取代。

40.权利要求1-39中任一项的化合物，其中R₅是任选取代的羧基。

41.权利要求1-40中任一项的化合物，其中R₅是(脂烃(氧)基)羰基，(杂芳基烷(氧)基)羰基，(杂脂环烃(氧)基羰基，(芳烷基(氧))羰基，它们均任选地被1-3个卤原子、烷氧基、脂烃基、脂环基、杂脂环基、芳基、杂芳基或其组合取代。

42.权利要求1-41中任一项的化合物，其中R₅是酰氨基。

43.权利要求1-42中任一项的化合物，其中R₅是(烷氧基(芳基(烷基)))氨基羰基，(烷基)氨基羰基，或(芳基(烷氧基(羰基(烷基(氨基(羰基(烷基)))))))氨基羰基，它们均任选地被取代。

44.权利要求1-43中任一项的化合物，其中R₅是烷磺酰基，氨基磺酰基，芳基磺酰基，杂芳基磺酰基，脂环基磺酰基，或杂脂环基磺酰基，它们均任选地被取代。

45.权利要求1-44中任一项的化合物，其中R₅是任选被取代的烷磺酰基。

46.权利要求1-45中任一项的化合物，其中R₅是(芳基)烷磺酰基或(烷基(氨基))烷磺酰基，它们均任选地被取代。

47.权利要求1-46中任一项的化合物，其中R₅是

或

其中T是一个键，-C(O)-，-OC(O)-，-NHC(O)-，-S(O)₂N(H)-，-C(O)C(O)-或-SO₂-；各R独立地是氢，氨基，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基，R₁₃和R′₁₃独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；各R₁₄独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的杂芳基，任选取代的苯基，或者，结合在相邻原子上的R₁₃和R₁₄与它们连接的原子一起形成一个5-7元的任选取代的单环杂脂环基，或6-12元的任选取代的双环杂脂环基；或者R₁₃和R′₁₃与它们连接的原子一起形成一个任选取代的脂环基或任选取代的杂脂环基。

48.权利要求1-47中任一项的化合物，其中QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中的取代基内的R是

或

49.权利要求1-48中任一项的化合物，其中R₅是QVI，R是

或

50.权利要求1-49中任一项的化合物，其中在QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中的取代基中的R是

或

其中R₁₅和R′₁₅均独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的杂脂环基，或任选取代的脂环基，或者R₁₅和R′₁₅与它们都连接的原子一起形成一个任选取代的脂环基或任选取代的杂脂环基；各个K独立地是一个键，C_1-12脂烃基，-O-，-S-，-S(O)₂-，-NR₁₆-，-C(O)-或-C(O)NR₁₆-，其中R₁₆是氢或任选取代的C_1-12脂烃基；n是1-3。为清楚起见，当QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中存在一个以上R₁₅时，各R₁₅可以相同或不同。

51.权利要求1-50中任一项的化合物，其中R₁₅是[C_3-10环烷基或环烯基]-C_1-12脂烃基，(3-10元)杂脂环基，(3-10元)杂脂环基-C_1-12脂烃基，(5-10元)杂芳基或(5-10元)杂芳基-C_1-12脂环基。

52.权利要求1-51中任一项的化合物，其中QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中取代基里的R是

或

53.权利要求1-52中任一项的化合物，其中QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI内的取代基中的R是

或

其中各Z独立地是-O-、-S-、-NR₅₀-或-C(R₅₀)₂-；独立地是一个单键或双键；各R₅₀独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的杂脂环基，或任选取代的脂环基；n是1或2。

54.权利要求1-53中任一项的化合物，其中R₅是

或

其中T是一个键，-C(O)-，-OC(O)-，-NHC(O)-，-S(O)₂N(H)-，-C(O)C(O)-或-SO₂-；各R独立地是氢，氨基，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基，R₁₃和R′₁₃独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；各R₁₄独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的杂芳基，任选取代的苯基，或者，结合在相邻原子上的R₁₃和R₁₄与它们连接的原子一起形成一个5-7元的任选取代的单环杂脂环基，或6-12元的任选取代的双环杂脂环基；或者R₁₃和R′₁₃与它们连接的原子一起形成一个任选取代的脂环基或任选取代的杂脂环基；R₁₅和R′₁₅独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的杂芳基，任选取代的苯基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基；或者R₁₅和R′₁₅与它们都连接的原子一起形成一个任选取代的3-7元脂环基或杂脂环基环；各R₁₂独立地是氢或保护基团。

55.权利要求1-54中任一项的化合物，其中R₁₅和R′₁₅与它们连接的原子一起形成一个3-7元环。

56.权利要求1-55中任一项的化合物，其中R₁₅和R′₁₅与它们连接的原子一起形成

或

57.权利要求21中任一项的化合物，其中R₁₃和R₁₅均独自地是氢，

或

58.权利要求1-57中任一项的化合物，其中R₁₃和R₁₅与它们连接的原子一起可以形成一个任选取代的5-7元单环杂脂环基或任选取代的6-12元双环杂脂环基。

59.权利要求1-58中任一项的化合物，其中R₅是：

其中T是-C(O)-，R是

或

60.权利要求1-59中任一项的化合物，其中R₅是：

其中R₁₃是

或

T是-C(O)-，和R是

或

61.权利要求1-61中任一项的化合物，其中R₅选自以下基团：

或，

其中X₉₉＝OR，OC(NH)R)或

各R独立地是氢，氨基或任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

62.权利要求1-61中任一项的化合物，其中R₄和R₅与它们连接的原子一起形成一个任选取代的具有1-3个选自N、O和S的杂原子的杂脂环基。

63.权利要求1-62中任一项的具有以下结构的化合物

或

其中各R_4W独立地是

或是氢；各T独立地是一个键，-C(O)-，-OC(O)-，-NHC(O)-，-S(O)₂N(H)-，-C(O)C(O)-或-SO₂-；各R独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基；各R₁₄独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的杂芳基，任选取代的苯基。

64.权利要求1-63中任一项的具有以下结构的化合物

或

65.式II化合物：

或其可药用的盐，其中

R_1a是任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；

R_4Y独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；

R_4W独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的杂脂环基，或任选取代的脂环基；

R_4X和R′_4X独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的杂芳基，任选取代的苯基，任选取代的脂环基，或任选取代的杂脂环基，

或者R_4X和R′_4X与它们共同连接的原子一起形成一个任选取代的3-7元脂环基或杂脂环基环；

R_4Z是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基，

或者R_4Z和R_4W与它们共同连接的氮原子一起，可以形成一个任选取代的3-7元杂脂环基环；

R₁₄独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的杂脂环基，或任选取代的脂环基；

R_5b是-Z^FR₂₁，其中Z^F是-CH₂-，-NH-，-CH(R₂₂)-或-O-，

R₂₁是任选取代的6-7元脂环基或任选取代的叔丁基，和

R₂₂是任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的杂脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；

A是-O-或-CR₆R₇，其中R₆和R₇均为-Z^CR₁₀，各Z^C独立地是一个键或任选取代的支化或直链C_1-6脂烃链，其中Z^C的最多达3个碳单元任选地和独立地被以下基团替代：-C(O)--C(S)-，-C(O)NR^C-，-C(O)NR^CNR^C-，-C(O)O-，-NR^CC(O)O-，-NR^CC(O)NR^C，-NR^CNR^C-，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^C，-SO₂NR^C，或-NR^CSO₂NR^C-；

各R₁₀独立地是R^C，卤素，-OH，-CN，-NO₂，-NH₂或-OCF₃；和

各R^C独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

66.式III化合物

或其可药用的盐，其中

R_5e是：

或

R_4e是：

或

R′_4e是：

或氢；

R_1e是任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；

A是-O-，或-CR₆R₇-，其中R₆和R₇均是-Z^CR₁₀，各Z^C独立地是一个键或是任选取代的支化或直链C_1-6脂烃基链，其中Z^C的最多达3个碳单元任选地和独立地被以下基团替换：-C(O)--C(S)-，-C(O)NR^C-，-C(O)NR^CNR^C-，-C(O)O-，-NR^CC(O)O-，-NR^CC(O)NR^C-，-NR^CNR^C，-S-，-SO-，-SO₂-，-NR^C-，-SO₂NR^C-，或-NR^CSO₂NR^C-；

各R₁₀独立地是R^C，卤素，-OH，-CN，-NO₂，-NH₂或-OCH₃；

各R^C独立地是氢，任选取代的脂烃基，任选取代的脂环基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基。

67.一种具有选自化合物No.1至9的化合物的结构的化合物。

68.一种药物组合物，其中含有其数量对抑制丝氨酸蛋白酶有效的权利要求1的化合物或其可药用盐，以及可药用的载体、辅剂或赋形剂。

69.一种药物组合物，其中含有其数量对抑制丝氨酸蛋白酶有效的权利要求67的化合物或其可药用盐，以及可药用的载体、辅剂或赋形剂。

70.权利要求68的组合物，其中所述组合物另含一种药剂，选自免疫调节剂、抗病毒剂、第二种HCV蛋白酶抑制剂、HCV生命周期中另一目标的抑制剂、和细胞色素P-450抑制剂，或它们的组合。

71.权利要求69的组合物，其中该组合物含有另一种药剂，选自免疫调节剂、抗病毒剂、第二种HCV蛋白酶抑制剂、HCV生命周期中另一目标的抑制剂、细胞色素P-450抑制剂，或它们的组合。

72.权利要求70的组合物，其中所述的免疫调节剂是α-、β-或γ-干扰素或胸腺素；抗病毒剂是利巴韦林、金刚烷胺或替比夫定；HCV生命周期中另一目标的抑制剂是HCV解旋酶、聚合酶或金属蛋白酶的抑制剂。

73.权利要求71的组合物，其中所述的免疫调节剂是α-、β-或γ-干扰素或胸腺素；抗病毒剂是利巴韦林、金刚烷胺或替比夫定；HCV生命周期中另一目标的抑制剂是HCV解旋酶、聚合酶或金属蛋白酶的抑制剂。

74.权利要求70的组合物，其中的细胞色素P-450抑制剂是利托那韦。

75.权利要求71的组合物，其中的细胞色素P-450抑制剂是利托那韦。

76.一种抑制丝氨酸蛋白酶的活性的方法，其中包括使丝氨酸蛋白酶与权利要求1的化合物接触的步骤。

77.一种抑制丝氨酸蛋白酶的活性的方法，其中包括使丝氨酸蛋白酶与权利要求67的化合物接触的步骤。

78.权利要求76的方法，其中所述的丝氨酸蛋白酶是HCV NS3蛋白酶。

79.权利要求77的方法，其中所述的丝氨酸蛋白酶是HCV NS3蛋白酶。

80.一种治疗HCV在患者中感染的方法，其中包括向该患者施用权利要求1的化合物的步骤。

81.一种治疗HCV在患者中感染的方法，其中包括向该患者施用权利要求67的化合物的步骤。

82.权利要求80的方法，其中还包括向该患者施用另一药剂，该药剂选自免疫调节剂、抗病毒剂、第二种HCV蛋白酶抑制剂、HCV生命周期中另一目标的抑制剂，或它们的组合；其中该另一药剂是与丝氨酸蛋白酶抑制剂在同一剂型中或作为单独的剂型施用给患者。

83.权利要求81的方法，其中还包括向该患者施用另一药剂，该药剂选自免疫调节剂、抗病毒剂、第二种HCV蛋白酶抑制剂、HCV生命周期中另一目标的抑制剂，或它们的组合；其中该另一药剂是与丝氨酸蛋白酶抑制剂在同一剂型中或作为单独的剂型施用给患者。

84.权利要求82的方法，其中所述的免疫调节剂是α-、β-或γ-干扰素或胸腺素；抗病毒剂是利巴韦林或金刚烷胺，HCV生命周期中另一目标的抑制剂是HCV解旋酶、聚合酶或金属蛋白酶的抑制剂。

85.权利要求83的方法，其中所述的免疫调节剂是α-、β-或γ-干扰素或胸腺素；抗病毒剂是利巴韦林或金刚烷胺，HCV生命周期中另一目标的抑制剂是HCV解旋酶、聚合酶或金属蛋白酶的抑制剂。

86.一种消除或减少生物样品或者医学或实验室设备的HCV感染的方法，包括使所述生物样品或者医学或实验室设备与权利要求1的化合物接触的步骤。

87.一种消除或减少生物样品或者医学或实验室设备的HCV感染的方法，包括使所述生物样品或者医学或实验室设备与权利要求67的化合物接触的步骤。