RU2412198C2

RU2412198C2 - Ингибиторы сериновых протеаз, в частности нс3-нс4а протеазы

Info

Publication number: RU2412198C2
Application number: RU2006105002/04A
Authority: RU
Inventors: Шон Д. БРИТТ (US); Шон Д. Бритт; Кевин М. КОТТРЕЛЛ (US); Кевин М. Коттрелл; Роберт Б. Перни (US); Роберт Б. Перни; Янош ПИТЛИК (US); Янош ПИТЛИК
Original assignee: Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед
Priority date: 2003-07-18
Filing date: 2004-07-16
Publication date: 2011-02-20
Also published as: ZA200601420B; US20060211629A1; JP2008500265A; AU2004257288A1; AU2010257200A1; CN1852920A; WO2005007681A3; EP1646642A2; NO20060706L; CN102020700A; UY28423A1; WO2005007681A2; EP2368900A3; AU2010257200B2; KR20060052836A; EP2368900A2; AU2004257288A2; US20050107304A1; CA2532664A1; CN101724022A

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, ингибирующим активность сериновой протеазы, в частности активность протеазы вируса гепатита С НС3-НС4А. Данное изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, способу ингибирования активности сериновой протеазы и способу устранения или снижения зараженности вирусом гепатита С. 4 н. и 23 з.п. ф-лы, 1 табл.

Description

Перекрестные ссылки на родственные заявки на изобретение

Данная заявка на изобретение основана на предварительной заявке Соединенных Штатов номер 60/488535, поданной 18 июля 2003 года и озаглавленной "Ингибиторы сериновых протеаз, в частности, НС3-НС4A протеазы HCV", полное содержание которой включено в данный документ в виде ссылки.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение касается соединений, ингибирующих активность сериновой протеазы, в частности активность НС3-НС4A протеазы вируса гепатита С. Как таковые, они действуют, препятствуя жизненному циклу вируса гепатита С, и также применимы в качестве противовирусных агентов. Данное изобретение также касается фармацевтических композиций, включающих эти соединения или для применения ex vivo, или для введения пациенту, страдающему от инфицирования вирусом гепатита С. Данное изобретение также касается способов получения соединений и способов лечения инфекции, вызванной вирусом гепатита С, путем введения фармацевтической композиции, содержащей соединение данного изобретения.

Уровень техники данного изобретения

Инфицирование человека вирусом гепатита С ("HCV") является неразрешимой медицинской проблемой. HCV является признанным возбудителем большинства случаев, отличного от гепатита A и B, с установленной в 3% серологической распространенностью среди людей по всему миру [A. Alberti et al., "Natural History of Hepatitis C," J. Hepatology, 31., (Suppl. 1), pp. 17-24 (1999)]. Могут быть инфицированы почти четыре миллиона человек только в Соединенных Штатах [M.J. Alter et al., “The Epidemiology of Viral Hepatitis in the United States, Gastroenterol. Clin. North Am., 23, pp. 437-455 (1994); M.J. Alter "Hepatitis C Virus Infection in the United States, "J. Hepatology, 31., (Suppl. 1), pp. 88-91 (1999)].

После первого попадания в организм HCV только примерно у 20% инфицированных развивается острая форма клинического гепатита, в то время как у других инфекция спонтанно устраняется. Почти в 70% случаев, однако, вирус продуцирует хроническую инфекцию, персистирующую в течение десятилетий [S. Iwarson, "The Natural Course of Chronic Hepatitis," FEMS Microbiology Reviews, 14, pp. 201-204 (1994); D.Lavanchy, "Global Surveillance and Control of Hepatitis C," J. Viral Hepatitis, 6, pp. 35-47 (1999)]. Это обычно приводит к рецидивирующему и прогрессивно усиливающемуся воспалению печени, что часто ведет к более острым стадиям болезни, таким как цирроз и печеночно-клеточная карцинома [M. C. Kew, "Hepatitis C and Hepatocellular Carcinoma", FEMS Microbiology Reviews, 14, pp. 211-220 (1994); I. Saito et al., "Hepatitis C Virus Infection is Associated with the Development of Hepatocellular Carcinoma," Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, pp. 6547-6549 (1990)]. К сожалению, широко эффективного лечения для ослабления прогрессирования хронического гепатита С не существует.

HCV представляет собой РНК-вирус семейства Flaviviridae. Острое инфицирование HCV вызывает, в основном, легкий, часто бессимптомный острый гепатит. Однако по меньшей мере 85% пациентов, инфицированных HCV, не полностью освобождается от вируса, и у них развивается хроническая инфекция печени. При первоначальном развитии хронического гепатита С спонтанное выведение вируса встречается редко, и у большинства пациентов с хроническим гепатитом С развивается медленно прогрессирующее заболевание печени. Через двадцать лет после инфицирования у большинства пациентов проявляется хронический гепатит и по меньшей мере у 20% - цирроз. Отдаленные осложнения хронического гепатита С включают цирроз, печеночную недостаточность и печеночно-клеточную карциному. По оценкам, HCV поражено 170 миллионов людей по всему миру. Через десять лет ввиду того, что бóльшая часть пациентов, инфицированных в настоящее время, перейдет в третью стадию болезни, число смертей из-за гепатита С, как ожидается, значительно возрастет.

Обычные симптомы инфицирования HCV включают повышенный уровень аланилтрансферазы (АЛТ), положительный тест на наличие анти-HCV антител, присутствие HCV, что подтверждается положительным тестом на РНК HCV, клиническими признаками хронического заболевания печени или повреждением клеток печени.

Геном HCV кодирует полипептид, состоящий из 3010-3033 аминокислот [Q.L. Choo, et al., "Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus." Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, pp. 2451-2455 (1991); N. Kato et al., "Molecular Cloning of the Human Hepatitis C Virus Genome From Japanese Patients with Non-A, Non-B Hepatitis," Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, pp. 9524-9528 (1990); A. Takamizawa et al., "Structure and Organization of the Hepatitis C Virus Genome Isolated From Human Carriers," J. Virol., 65, pp. 1105-1113 (1991)]. Предполагается, что неструктурные белки (НС) HCV обеспечивают важный каталитический комплекс репликации вируса. НС белки образуются протеолитическим расщеплением полипептида [R. Bartenschlager et al., "Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Virus Encodes a Serine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5 Junctions," J. Virol., 67, pp. 3835-3844 (1993); A. Grakoui et al., "Characterization of the Hepatitis C Virus-Encoded Serine Proteinase: Determination of Proteinase-Dependent Polyprotein Cleavage Sites,” J. Virol., 67, pp. 2832-2843 (1993); A. Grakoui et al., "Expression and Identification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products, " J. Virol., 67, pp. 1385-1395 (1993); L. Tomei et al., "NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis C virus polyprotein", J. Virol., 67, pp. 4017-4026 (1993)].

НС белок 3 HCV (НС3) имеет активность сериновой протеазы, что помогает созреванию (процессированию) большинства вирусных ферментов и, таким образом, считается важным для репликации вируса и его способности инфицировать. Известно, что мутации в протеазе вируса желтой лихорадки снижают способность вируса НС3 к инфицированию [Chambers, T. J. et al., "Evidence that the N-terminal Domain of Nonstructural Protein NS3 From Yellow Fever Virus is a Serine Protease Responsible for Site-Specific Cleavages in the Viral Polyprotein", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, pp. 8898-8902 (1990)]. Было показано, что первые 181 аминокислоты НС3 (1027-1207 остатки вирусного полипептида) содержат домен сериновой протеазы НС3, который процессирует все четыре нижележащих сайта полипептида HCV [C. Lin et al., "Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase: Trans-Cleavage Requirements and Processing Kinetics", J. Virol., 68, pp. 8147-8157 (1994)].

Сериновая протеаза НС3 HCV и связанный с ней кофактор, НС4A, помогает процессированию всех вирусных ферментов и рассматривается как важный фактор репликации вируса. Этот процессинг, по-видимому, аналогичен тому, что осуществляется аспартил-протеазой вируса иммунодефицита человека, которая также участвует в процессинге ферментов вируса. Ингибиторы протеазы ВИЧ, ингибирующие процессинг вирусных белков, являются потенциальными противовирусными агентами в организме человека, показывающими, что прекращение этой стадии жизненного цикла вируса приводит к получению терапевтически активных агентов. Следовательно, сериновая протеаза НС3 HCV также является привлекательным объектом для исследования лекарственных препаратов.

Более того, имеющиеся сведения о HCV не привели к появлению любых других удовлетворительных анти-HCV агентов или способов лечения. До недавнего времени единственной установленной терапией заболевания HCV было лечение интерфероном (см., например, публикацию PCT № WO 02/18369, описание которой включено в данный документ в виде ссылки). Однако интерфероны имеют значительные побочные эффекты [M.A. Wlaker et al., "Hepatitis C Virus: An Overview of Current Approaches and Progress," DDT, 4, pp. 518-29 (1999); D. Moradpour et al., "Current and Evolving Therapies for Hepatitis C," Eur. J. Gastroenterol. Hepatol., 11, pp. 1199-1202 (1999); H. L. A. Janssen et al. "Suicide Associated with Alfa-Interferon Therapy for Chronic Viral Hepatitis," J. Hepatol., 21, pp. 241-243 (1994); P. F. Renault et al., "Side Effects of Alpha Interferon," Seminars in Liver Disease, 9, pp. 273-277 (1989)] и индуцируют длительную ремиссию только в части (~25%) случаев [О. Weiland, "Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection", FEMS Microbiol. Rev., 14, pp. 279-288 (1994)]. Рибавирин, антивирусный агент широкого спектра действия, имеет установленную активность в лечении хронического гепатита С. Последние внедрения пегилированных форм интерферона (PEG- Intron® и Pegasys®) и комбинированная терапия рибавирина и пегилированного интерферона (Rebetrol®) привели только к небольшим улучшениям показателей скоростей и только к частичному уменьшению побочных эффектов (см., например, патент Соединенных Штатов 6299872, патент Соединенных Штатов 6387365, патент Соединенных Штатов 6172046, патент Соединенных Штатов 6472373, описания которых включены в данный документ в виде ссылки). Более того, перспективы эффективных вакцин анти-ВИЧ остаются неопределенными.

Таким образом, существует потребность в более эффективной анти-HCV терапии, в частности в соединениях, которые могут применяться в качестве ингибиторов протеаз. Такие ингибиторы имели бы терапевтический потенциал как у ингибиторов протеаз, в частности ингибиторов сериновой протеазы, и более конкретно, как у ингибиторов протеазы НС3 HCV. В частности, такие соединения могут быть применены в качестве противовирусных агентов, в частности в качестве анти-HCV агентов.

Настоящее изобретение обеспечивает соединения, которые являются потенциальными связывающими агентами и ингибиторами сериновой протеазы HCV НС3/НС4A и являются, следовательно, применимыми в качестве анти-HCV агентов.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы I

или его фармацевтически приемлемую соль,

где

X и X' оба являются фтором; или

X и X' независимо представляют собой C(H), N, NH, O или S; и X и X' взяты вместе с атомом углерода, с которым они связаны, с образованием 5-7-членного насыщенного или частично ненасыщенного кольца, имеющего до 4-х гетероатомов, независимо выбранных из N, NH, O, S, SO и SO₂; где любой атом необязательно однократно или многократно замещен заместителями в количестве до 3-х, выбранными независимо из J, и где указанное второе кольцо необязательно конденсировано со вторым кольцом, выбранным из (С6-C10)арила, (C5-C10)гетероарила, (C3-C10)циклоалкила и (C3-C10)гетероциклила, где указанное второе кольцо имеет до 3-х заместителей, выбранных независимо из J;

J представляет собой галоген, -OR', -NO₂, -CN, -CF₃, -OCF₃, -R', оксо, тиоксо, =N(R'), =N(OR'), 1,2-метилендиокси, 1,2-этилендиокси, -N(R')₂, -SR', -SOR', -SO₂R', -SO₂N(R')₂, -SO₃R', -C(O)R', -C(O)C(O)R', -C(O)C(O)OR', -C(O)C(O)NR', -C(O)CH₂C(O)R', -C(S)R', -C(S)OR', -C(O)OR', -OC(O)R', -C(O)N(R')₂, -OC(O)N(R')₂, -C(S)N(R')₂, -(CH₂)_0-2NHC(O)R', -N(R')N(R')COR', -N(R')N(R')C(O)OR', -N(R')N(R')CON(R')₂, -N(R')SO₂R', -N(R')SO₂N(R')₂, -N(R')C(O)OR', -N(R')C(O)R', -N(R')C(S)R', -N(R')C(O)N(R')₂, -N(R')C(S)N(R')₂, -N(COR')COR', -N(OR')R', -C(=NH)N(R')₂, -C(O)N(OR')R', -C(=NOR')R', -OP(O)(OR')₂, -P(O)(R')₂, -P(O)(OR')₂ или -P(O)(H)(OR');

где

R' независимо выбирают из

водорода-,

(C1-C12)-алифатической группы-,

(C3-C10)-циклоалкила- или -циклоалкенила-,

[(C3-C10)-циклоалкил или -циклоалкенил]-(C1-C12)-алифатической группы-,

(C6-C10)-арила-,

(C6-C10)-арил-(C1-C12)-алифатической группы-,

(C3-C10)-гетероциклила-,

(C3-C10)-гетероциклил-(C1-C12)-алифатической группы-,

(C5-C10)-гетероарила- и

(C5-C10)-гетероарил-(C1-C12)-алифатической группы-;

где до 5 атомов в R' необязательно и независимо замещены J;

где две группы R', связанные с тем же атомом, образуют 3-10-членное ароматическое или неароматическое кольцо, имеющее до 3-х гетероатомов, независимо выбранных из N, NH, O, S, SO и SO₂, где указанное кольцо необязательно конденсировано с (C6-C10)-арилом, (C5-C10)-гетероарилом, (C3-C10)-циклоалкилом или (C3-C10)-гетероциклилом, причем любое кольцо имеет до 3-х заместителей, независимо выбранных из J;

Y и Y' независимо представляют собой

водород-,

(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-циклоалкил или -циклоалкенил-,

(C3-C10)-циклоалкил-(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C6-C10)-арил-,

(C3-C10)-гетероциклилил- или

(C5-C10)-гетероарил-;

где до трех алифатических атомов углерода в Y и Y' могут быть замещены O, N, NH, S, SO или SO₂; где каждый из Y и Y' независимо и необязательно замещен заместителями в количестве до 3-х, независимо выбранными из J;

R₁ и R₃ независимо представляют собой

(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-циклоалкил или -циклоалкенил-,

[((C3-C10)-циклоалкил или -циклоалкенил-]-(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C6-C10)-арил-(C1-C12)-алифатическую группу- или

(C5-C10)-гетероарил-(C1-C12)-алифатическую группу-;

где до 3-х алифатических атомов углерода в R₁ и R₃ могут быть замещены гетероатомом, выбранным из O, N, NH, S, SO или SO₂ в химически стабильном окружении;

где каждый из R₁ и R₃ независимо и необязательно замещены заместителями в количестве до 3-х, независимо выбранными из J;

R₂, R₄ и R₇ представляют собой, независимо,

водород-,

(С1-С12)-алифатическую группу,

(С3-С10)-циклоалкил-(С1-С12)-алифатическую группу или

(C6-C10)-арил-(C1-C12)-алифатическую группу-;

где до двух алифатических атомов углерода в R₂, R₄ и R₇ могут быть замещены гетероатомом, выбранным из О, N, NH, S, SO и SO₂ в химически стабильном окружении;

где каждый из R₂, R₄ и R₇ независимо и необязательно замещен заместителями в количестве до 3-х, независимо выбранными из J;

R₅ и R_5' независимо представляют собой (C1-C12)-алифатическую группу-, где любой водород необязательно замещен галогеном; где любой концевой атом углерода R₅ необязательно замещен сульфгидрилом или гидрокси; или R₅ представляет собой Ph или -CH₂Ph и R_5' является H, где указанный Ph или группа -CH₂Ph необязательно замещена заместителями в количестве до 3-х, независимо выбранными из J; или R₅ и R_5' вместе с атомом, с которым они связаны, представляет собой 3-6-членное насыщенное или частично ненасыщенное кольцо, имеющее до 2-х гетероатомов, выбранных из N, NH, O, SO и SO₂; где кольцо имеет до 2-х заместителей, выбранных независимо из J;

W представляет собой

где каждый R₆ независимо представляет собой

водород-,

(С1-С12)-алифатическую группу-,

(С6-С10)-арил-,

(C6-C10)-арил-(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-циклоалкил или -циклоалкенил-,

(C3-C10)-гетероциклил-,

(C3-C10)-гетероциклил-(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C5-C10)-гетероарил- или

(C5-C10)-гетероарил-(C1-C12)-алифатическую группу-, или

две R₆ группы, которые связаны с одним тем же атомом азота, образуют вместе с этим атомом азота (C3-C10)-гетероциклическое кольцо;

где R₆ необязательно замещен заместителями J в количестве до 3-х;

где каждый R₈ независимо представляет собой -OR'; или группы R₈ вместе с атомом бора представляет собой (C3-C10)-членное гетероциклическое кольцо, имеющее, кроме атома бора, до 3-х дополнительных гетероатомов, выбранных из N, NH, О, SO и SO₂;

V представляет собой О или валентную связь и

T представляет собой

(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C6-C10)-арил-,

(C6-C10)-арил-(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-циклоалкил или -циклоалкенил-,

[(C3-C10)-циклоалкил или -циклоалкенил]-(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-гетероциклил-,

(C5-C10)-гетероарил- или

(C5-C10)-гетероарил-(C1-C12)-алифатическую группу-,

где до 3-х алифатических атомов углерода в Т могут быть заменены гетероатомом, выбранным из О, N, NH, S, SO или SО₂ в химически стабильном окружении;

где каждый T необязательно замещен заместителями J в количестве до 3-х;

при условии, что исключены следующие соединения:

a) N-ацетил-L-лейцил-(2S)-2-циклогексилглицил-(3S)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбонил-3-амино-2-оксогексаноилглицил-2-фенил-1,1-диметилэтиловый эфир глицина;

b) N-ацетил-L-лейцил-(2S)-2-циклогексилглицил-(3S)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбонил-3-амино-2-оксогексаноилглицил-2-фенилглицин;

c) N-ацетил-L-лейцил-(2S)-2-циклогексилглицил-(3S)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбонил-3-амино-2-оксогексаноилглицил-2-фенилглицинамид;

d) N-ацетил-L-лейцил-(2S)-2-циклогексилглицил-(3S)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбонил-3-амино-2-оксогексаноилглицил-N,N-диметил-2-фенилглицинамид;

e) N-ацетил-L-лейцил-(2S)-2-циклогексилглицил-(3S)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбонил-3-амино-2-оксогексаноилглицил-N-метокси-N-метил-2-фенилглицинамид;

f) (2S)-N-ацетил-L-лейцил-(2S)-2-циклогексилглицил-(3S)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбонил-3-амино-2-оксогексаноилглицил-2-фенил-1,1-диметилэтиловый эфир глицина;

g) (2S)-N-ацетил-L-лейцил-(2S)-2-циклогексилглицил-(3S)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбонил-3-амино-2-оксогексаноилглицил-2-фенилглицин;

h) (2S)-N-ацетил-L-лейцил-(2S)-2-циклогексилглицил-(3S)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбонил-3-амино-2-оксогексаноилглицил-2-фенилглицинамид;

i) (2S)-N-ацетил-L-лейцил-(2S)-2-циклогексилглицил-(3S)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-сарбонил-3-амино-2-оксогексаноилглицил-N,N-диметил-2-фенилглицинамид;

j) (2S)-N-ацетил-L-лейцил-(2S)-2-циклогексилглицил-(3S)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбонил-3-амино-2-оксогексаноилглицил-N-метокси-N-метил-2-фенилглицинамид;

k) N-ацетил-L-α-глутамил-L-α-глутамил-L-валил-L-валил-N-[l-[оксо(2-пропениламино)ацетил]бутил]-,бис(1,1-диметилэтиловый)эфир-(8S)-1,4-дитиа-7-азаспиро[4.4]нонан-8-карбоксамид;

l) N-ацетил-L-α-глутамил-L-α-глутамил-L-валил-L-валил-N-[1-[оксо(2-пропениламино)ацетил]бутил]-,2-(1,1-диметилэтиловый)эфир-(8S)-1,4-дитиа-7-азаспиро[4.4]нонан-8-карбоксамид;

m) N-ацетил-L-α-глутамил-L-α-глутамил-L-валил-L-валил-N-[l-[оксо(2-пропениламино)ацетил]бутил]-(8S)-1,4-дитиа-7-азаспиро[4.4]нонан-8-карбоксамид;

n) N-ацетил-L-α-глутамил-L-α-глутамил-L-валил-2-циклогексилглицил-(8S)-1,4-дитиа-7-азаспиро[4.4]нонан-8-карбонил-3-амино-2-оксогексаноилглицин;

o) N-ацетил-L-α-глутамил-L-α-глутамил-L-валил-2-циклогексилглицил-(8S)-1,4-дитиа-7-азаспиро[4.4]нонан-8-карбонил-3-амино-2-оксогексаноилглицин-2-фенилглицинамид;

p) N-ацетил-L-α-глутамил-L-α-глутамил-L-валил-2-циклогексилглицил-(8S)-1,4-дитиа-7-азаспиро[4.4]нонан-8-карбонил-3-амино-2-оксогексаноил-,1,2-бис(1,1-диметилэтил)-7-(2-пропениловый)эфир глицина и

q) N-ацетил-L-α-глутамил-L-α-глутамил-L-валил-2-циклогексилглицил-(8S)-1,4-дитиа-7-азаспиро[4.4]нонан-8-карбонил-3-амино-2-оксогексаноил-,1,2-бис(1,1-диметилэтиловый)эфир глицина.

Изобретение также относится к способам получения вышеуказанных соединений и к композициям, которые содержат вышеуказанные соединения, и к их применению. Такие композиции могут быть применены для предварительной обработки приспособлений, которые вводят внутрь пациента, для обработки биологических образцов, таких как кровь, до введения пациенту и для непосредственного введения пациенту. В каждом случае композицию используют для ингибирования репликации HCV и для уменьшения риска выраженности инфекции HCV.

Подробное описание изобретения

или его фармацевтически приемлемую соль,

где

X и X' оба являются фтором; или

X и X' независимо представляют собой C(H), N, NH, О или S и X и X' взяты вместе с атомом углерода, с которым они связаны, с образованием 5-7-членного насыщенного или частично ненасыщенного кольца, имеющего до 4-х гетероатомов, независимо выбранных из N, NH, О, S, SO и SO₂; где любой атом необязательно однократно или многократно замещен заместителями в количестве до 3-х, выбранными из J, и где указанное кольцо необязательно конденсировано со вторым кольцом, выбранным из (C6-C10)арила, (С5-С10)гетероарила, (C3-C10)циклоалкила и (С3-С10)гетероциклила, где указанное второе кольцо имеет до 3-х заместителей, выбранных независимо из J;

J представляет собой галоген, -OR', -NO₂, -CN, -CF₃, -OCF₃, -R', оксо, тиоксо, =N(R'), =N(OR'), 1,2-метилендиокси, 1,2-этилендиокси, -N(R')₂, -SR', -SOR', -SO₂R', -SO₂N(R')₂, -SO₃R', -C(O)R', -C(O)C(O)R', -C(O)C(O)OR', -C(O)C(O)NR', -C(O)CH₂C(O)R', -C(S)R', -C(S)OR', -C(O)OR', -OC(O)R', -C(O)N(R')₂, -OC(O)N(R')₂, -C(S)N(R')₂, -(CH₂)_0-2NHC(O)R', -N(R')N(R')COR', -N(R')N(R')C(O)OR', -N(R')N(R')CON(R')₂, -N(R')SO₂R', -N(R')SO₂N(R')₂, -N(R')C(O)OR', -N(R')C(O)R', -N(R')C(S)R', -N(R') C(O)N(R')₂, -N(R')C(S)N(R')₂, -N(COR')COR', -N(OR')R', -C(=NH)N(R')₂, -C(O)N(OR')R', -C(=NOR')R', -OP(O)(OR')₂, -P(O)(R')₂, -P(O)(OR')₂ или -P(O)(H)(OR');

где

R' независимо выбирают из

водорода-,

(C1-C12)-алифатической группы-,

(C3-C10)-циклоалкила- или -циклоалкенила-,

(C6-C10)-арила-,

(C6-C12)-арил-(C1-C12)-алифатической группы-,

(C3-C10)-гетероциклила-,

(C5-C10)-гетероарила- и

где до 5-ти атомов в R' необязательно и независимо замещены J;

где две группы R', связанные с одним и тем же атомом, образуют 3-10-членное ароматическое или неароматическое кольцо, имеющее до 3-х гетероатомов, независимо выбранных из N, NH, O, S, SO и SO₂, где указанное кольцо необязательно конденсировано с (C6-C10)-арилом, (С5-С10)-гетероарилом, (С3-С10)-циклоалкилом или (С3-С10)-гетероциклилом, где любое кольцо имеет до 3-х заместителей, независимо выбранных из J;

Y и Y' независимо представляют собой

водород-,

(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-циклоалкил или -циклоалкенил-,

(C6-C10)-арил-,

(C3-C10)-гетероциклилил- или

(C5-C10)-гетероарил-;

где до трех алифатических атомов углерода в Y и Y' могут быть замещены O, N, NH, S, SO или SO₂;

где каждый из Y и Y' независимо и необязательно замещен заместителями в количестве до 3-х, независимо выбранными из J;

R₁ и R₃ независимо представляют собой

(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-циклоалкил или -циклоалкенил-,

(C6-C10)-арил-(C1-C12)-алифатическую группу- или

где до 3-х алифатических атомов углерода в R₁ и R₃ могут быть замещены гетероатомом, выбранным из О, N, NH, S, SO или SO₂ в химически стабильном окружении;

где каждый из R₁ и R₃ независимо и необязательно замещен заместителями в количестве до 3-х, независимо выбранными из J;

R₂, R₄ и R₇ независимо представляют собой

водород-,

(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-циклоалкил-(C1-C12)-алифатическую группу- или

(C6-C10)-арил-(C1-C12)-алифатическую группу-;

R₅ и R_5' независимо представляют собой водород или (C1-C12)-алифатическую группу-, где любой водород необязательно замещен галогеном; где любой терминальный атом углерода R₅ необязательно замещен сульфгидрилом или гидрокси; или R₅ представляет собой Ph или -CH₂Ph и R_5' является H, где указанный Ph или группа -CH₂Ph необязательно замещена заместителями в количестве до 3-х, независимо выбранными из J; или R₅ и R_5' вместе с атомом, с которым они связаны, представляет собой 3-6-членное насыщенное или частично ненасыщенное кольцо, имеющее до 2-х гетероатомов, выбранных из N, NH, O, SO и SO₂; где кольцо имеет до 2-х заместителей, выбранных независимо из J;

W представляет собой

водород-,

(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C6-C10)-арил-,

(C6-C10)-арил-(C1-C12)-алифатическую группу-,

(С3-С10)-циклоалкил- или циклоалкенил-,

[(С3-С10)-циклоалкил- или циклоалкенил-]-(С1-С12)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-гетероциклил-,

(С3-С10)-гетероциклил-(С1-С12)-алифатическую группу-,

(C5-C10)-гетероарил- или

две R₆ группы, которые связаны с одним и тем же атомом азота, образуют вместе с этим атомом азота (C3-C10)-гетероциклическое кольцо;

T представляет собой

(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C6-C10)-арил-,

(C6-C10)-арил-(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-циклоалкил или -циклоалкенил-,

(C3-C10)-гетероциклил-,

(C5-C10)-гетероарил- или

где до 3-х алифатических атомов углерода в Т могут быть замещены гетероатомом, выбранным из О, N, NH, S, SO или SO₂ в химически стабильном окружении;

а) N-ацетил-L-лейцил-(2S)-2-циклогексилглицил-(3S)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбонил-3-амино-2-оксогексаноилглицил-2-фенил-1,1-диметилэтиловый эфир глицина;

i) (2S)-N-ацетил-L-лейцил-(2S)-2-циклогексилглицил-(3S)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбонил-3-амино-2-оксогексаноилглицил-N,N-диметил-2-фенилглицинамид;

j) (2S)-N-ацетил-L-лейцил-(2S)-2-циклогексилглицил-(3S)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбонил-3-амино-2-оксогексаноилглицил-N-метокси-N-метил-2-фенил-глицинамид;

k) N-ацетил-L-α-глутамил-L-α-глутамил-L-валил-L-валил-N-1-[оксо(2-пропениламино)ацетил]бутил]-,бис(1,1-диметилэтиловый) эфир-(8S)-1,4-дитиа-7-азаспиро[4.4]нонан-8-карбоксамид;

l) N-ацетил-L-α-глутамил-L-α-глутамил-L-валил-L-валил-N-[1-[оксо(2-пропениламино)ацетил]бутил]-,2-(1,1-диметилэтиловый) эфир-(8S)-1,4-дитиа-7-азаспиро[4.4]нонан-8-карбоксамид;

m) N-ацетил-L-α-глутамил-L-α-глутамил-L-валил-L-валил-N-[1-[оксо(2-пропениламино)ацетил]бутил]-(8S)-1,4-дитиа-7-азаспиро[4.4]нонан-8-карбоксамид;

o) N-ацетил-L-α-глутамил-L-α-глутамил-L-валил-2-циклогексилглицил-(8S)-1,4-дитиа-7-азаспиро[4.4]нонан-8-карбонил-3-амино-2-оксогексаноилглицил-2-фенилглицинамид;

q) N-ацетил-L-α-глутамил-L-α-глутамил-L-валил-2-циклогексилглицил-(8S)-1,4-дитиа-7-азаспиро[4.4]нонан-8-карбонил-3-амино-2-оксогексаноил-1,2-бис(1,1-диметилэтиловый)эфир глицина.

Определения

Используемый здесь термин "арил" подразумевает моноциклическую или бициклическую ароматическую карбоциклическую кольцевую систему. Фенил является примером моноциклической ароматической кольцевой системы. Бициклическая ароматическая карбоциклическая кольцевая система включает системы, где оба кольца являются ароматическими, например нафтил, и системы, где только одно из двух колец является ароматическим, например тетралин. Понятно, что используемый здесь термин "(C6-C10)-арил-" включает любое из C6, C7, C8, C9 и C10 моноциклических или бициклических карбоциклических ароматических колец.

Используемый здесь термин "гетероциклил" подразумевает моноциклическую или бициклическую неароматическую кольцевую систему, имеющую от 1 до 3-х гетероатомов или гетероатомных групп в каждом кольце, выбранных из O, N, NH, S, SO и SО₂ в химически стабильном окружении. В бициклической неароматической кольцевой системе "гетероциклила" одно или оба кольца могут содержать указанный гетероатом или гетероатомные группы. Понятно, что используемый здесь термин "(C5-C10)-гетероциклил-" включает любую из С5, C6, C7, C8, C9 и C10 моноциклических или бициклических неароматических кольцевых систем, имеющую от 1 до 3-х гетероатомов или гетероатомных групп в каждом кольце, выбранных из O, N, NH и S в химически стабильном окружении.

Используемый здесь термин "гетероарил" подразумевает моноциклическую или бициклическую ароматическую кольцевую систему, имеющую от 1 до 3-х гетероатомов или гетероатомных групп в каждом кольце, выбранных из О, N, NH и S в химически стабильном окружении.

В такой системе бициклического ароматического кольца значение "гетероарила":

- одно или оба кольца могут быть ароматическими; и

- одно или оба кольца могут содержать указанный гетероатом или гетероатомные группы. Понятно, что используемый здесь термин "(C5-C10)-гетероарил-" включает любую из С5, C6, C7, C8, C9 и C10 моноциклических или бициклических ароматических кольцевых систем, имеющую от 1 до 3-х гетероатомов или гетероатомных групп в каждом кольце, выбранных из О, N, NH и S в химически стабильном окружении.

Используемый здесь термин «алифатический» означает прямой или разветвленный алкил, алкенил или алкинил. Понятно, что используемый здесь термин «(C1-C12)-алифатическая группа-» включает любое из C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11 и C12 прямых или разветвленных алкильных цепей углеродных атомов. Также понятно, что воплощения алкенила или алкинила требуют наличия, по меньшей мере, двух углеродных атомов в алифатической цепи. Термин "циклоалкил или циклоалкенил" касается моноциклического, или конденсированной, или мостиковой бициклической карбоциклической кольцевой системы, не являющейся ароматической. Циклоалкенильные кольца имеют одну или более единиц ненасыщенности. Также понятно, что используемый здесь термин "(C3-C10)-циклоалкил- или -циклоалкенил-" включает любое из C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9 и C10 моноциклических или конденсированных или мостиковых бициклических карбоциклических колец. Примеры циклоалкильных групп включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогексенил, циклогептил, циклогептенил, норнборнил, адамантил и декалинил.

Выражение "химически стабильное окружение", применяемое здесь, относится к структуре соединения, которая делает соединение достаточно стабильным для производства и введения млекопитающему способами, известными в данном уровне техники. Обычно такие соединения стабильны при температуре 40ºC или ниже, в отсутствие влаги или других условий, способствующих протеканию химических реакций, по меньшей мере, в течение недели.

Воплощения

В соответствии с одним воплощением соединения настоящего изобретения являются соединениями формулы I

или их фармацевтически приемлемой солью,

где

X и X' оба являются фтором; или

X и X' независимо представляют собой C(H), N, NH, O или S; и X и X' взяты вместе с атомом углерода, с которым они связаны, с образованием 5-7-членного насыщенного или частично ненасыщенного кольца, имеющего до 4-х гетероатомов, независимо выбранных из N, NH, O, S, SO и SO₂; где любой атом необязательно однократно или многократно замещен заместителями в количестве до 3-х, выбранными из J, и где указанное кольцо необязательно конденсировано со вторым кольцом, выбранным из (C6-C10)арила, (С5-С10)гетероарила, (C3-C10)циклоалкила и (C3-C10)гетероциклила, где указанное второе кольцо имеет заместители в количестве до 3-х, независимо выбранные из J;

J представляет собой галоген, -OR', -NO₂, -CN, -CF₃, -OCF₃, -R', оксо, тиоксо, =N(R'), =N(OR'), 1,2-метилендиокси, 1,2-этилендиокси, -N(R')₂, -SR', -SOR', -SO₂R', -SO₂N(R')₂, -SO₃R', -C(O)R', -C(O)C(O)R', -C(O)C(O)OR', -C(O)C(O)NR', -C(O)CH₂C(O)R', -C(S)R', -C(S)OR', -C(O)OR', -OC(O)R', -C(O)N(R')₂, -OC(O)N(R')₂,- C(S)N(R')₂, -(CH₂)_0-2NHC(O)R', -N(R')N(R')COR', -N(R')N(R')C(O)OR', -N(R')N(R')CON(R')₂, -N(R')SO₂R', -N(R')SO₂N(R')₂, -N(R')C(O)OR', -N(R')C(O)R', -N(R')C(S)R', -N(R')CON(R')₂, -N(R')C(S)N(R')₂, -N(COR')COR', -N(OR')R', -C(=NH)N(R')₂, -C(O)N(OR')R', -C(=NOR')R', -OP(O)(OR')₂, -P(O)(R')₂, -P(O)(OR')₂ или -P(O)(H)(OR');

где

R' независимо выбирают из

водорода,

(С1-С12)-алифатической группы-,

(C3-C10)-циклоалкила- или -циклоалкенила-,

(C6-C10)-арила-,

(C6-C10)-арил-(C1-C12)-алифатической группы-,

(C3-C10)-гетероциклила-,

(C5-C10)-гетероарила- и

где две группы R' связанные с тем же атомом образуют 3-10-членное ароматическое или неароматическое кольцо, имеющее до 3-х гетероатомов, независимо выбранных из N, NH, O, S, SO и SO₂, где указанное кольцо необязательно конденсировано с (C6-C10)арилом, (С5-С10)гетероарилом, (C3-C10)циклоалкилом или (C3-C10)гетероциклилом, причем любое кольцо имеет заместители в количестве до 3-х, выбранные независимо из J;

Y и Y' независимо представляют собой

водород-,

(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-циклоалкил или -циклоалкенил-,

(C6-C10)-арил-,

(C3-C10)-гетероциклил- или

(C5-C10)-гетероарил-;

R₁ и R₃ независимо представляют собой

(С1-С12)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-циклоалкил или -циклоалкенил-,

(C6-C10)-арил-(C1-C12)-алифатическую группу- или

R₂, R₄ и R₇ представляют собой, независимо,

водород-,

(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-циклоалкил -(C1-C12)-алифатическую группу- или

(C6-C10)-арил-(C1-C12)-алифатическую группу-;

где до двух алифатических атомов углерода в R₂, R₄ и R₇ могут быть замещены заместителями в количестве до 3-х, независимо выбранными из O, N, NH, S, SO и SO₂ в химически стабильном окружении;

R₅ и R_5' независимо представляют собой водород или (C1-C12)-алифатическую группу-, где любой водород необязательно замещен галогеном; где любой терминальный атом углерода R₅ необязательно замещен сульфгидрилом или гидрокси; или R₅ представляет собой Ph или -CH₂Ph и R_5' является H, где указанный Ph или группа -CH₂Ph необязательно замещена заместителями в количестве до 3-х, независимо выбранными из J; или

R₅ и R_5' вместе с атомом, с которым они связаны, представляет собой 3-6-членное насыщенное или частично ненасыщенное кольцо, имеющее до 2-х гетероатомов, выбранных из N, NH, O, SO и SO₂; где кольцо имеет до 2-х заместителей, выбранных независимо из J;

W представляет собой

водород-,

(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C6-C10)-арил-,

(C6-C10)-арил-(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-циклоалкил- или циклоалкенил-,

[(C3-C10)-циклоалкил- или циклоалкенил]-(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-гетероциклил-,

(C5-C10)-гетероарил- или

(C5-C10)-гетероарил-(C1-C12)-алифатическую группу- или

где каждый R₈ независимо представляет собой -OR'; или группы R₈ вместе с атомом бора представляют собой (C3-C10)-членное гетероциклическое кольцо, имеющее, кроме атома бора, до 3-х дополнительных гетероатомов, выбранных из N, NH, О, SO и SO₂;

V представляет собой О или валентную связь; и

T представляет собой

(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C6-C10)-арил-,

(C6-C10)-арил-(C1-C12)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-циклоалкил или -циклоалкенил-,

(C3-C10)-гетероциклил-,

(C5-C10)-гетероарил- или

где до 3-х алифатических атомов углерода в Т могут быть замещены гетероатомом, выбранным из О, N, NH, S, SO или SО₂ в химически стабильном окружении;

где каждый Т необязательно замещен заместителями J в количестве до 3-х;

k) N-ацетил-L-α-глутамил-L-α-глутамил-L-валил-L-валил-N-[l-[оксо(2-пропениламино)ацетил]бутил]-,бис(1,1-диметилэтиловый) эфир-(8S)-1,4-дитиа-7-азаспиро[4.4]нонан-8-карбоксамид;

o) N-ацетил-L-α-глутамил-L-α-глутамил-L-валил-2-циклогексилглицил-(8S)-1,4-дитиа-7-азаспиро[4.4]нонан-8-карбонил-3-амино-2-оксогексаноил-2-фенилглицинамид;

В соответствии с другим воплощением настоящего изобретения, соединения являются соединениями формулы Iа

или его фармацевтически приемлемой солью,

где

X и X' независимо представляют собой C(H), N, NH, O или S и X и X' взяты вместе с атомом углерода, с которым они связаны, с образованием 5-7-членного насыщенного или частично ненасыщенного спироциклического кольца, имеющего до 4-х гетероатомов, независимо выбранных из N, NH, O, S, SO и SO₂; где любой атом необязательно однократно или многократно замещен заместителями в количестве до 3-х, выбранными независимо из J, и где указанное кольцо необязательно конденсировано со вторым кольцом, выбранным из (C6-C10)арила, (С5-С10)гетероарила, (C3-C10)циклоалкила и (C3-C10)гетероциклила, где указанное второе кольцо имеет заместители в количестве до 3-х, независимо выбранные из J;

J представляет собой галоген, OR', -NO₂, -CN, -CF₃, -OCF₃, -R', оксо, тиоксо, =N(R'), =N(OR'), 1,2-метилендиокси, 1,2-этилендиокси, -N(R')₂, -SR', -SOR', -SO₂R', -SO₂N(R')₂, -SO₃R', -C(O)R', -C(O)C(O)R', -C(O)C(O)OR', -C(O)C(O)NR', -C(O)CH₂C(O)R', -C(S)R', -C(S)OR', -C(O)OR', -OC(O)R', -C(O)N(R')₂, -OC(O)N(R')₂, -C(S)N(R')₂, -(CH₂)_0-2NHC(O)R', -N(R')N(R')COR', -N(R')N(R')C(O)OR', -N(R')N(R')CON(R')₂, -N(R')SO₂R', -N(R')SO₂N(R')₂, -N(R')C(O)OR', -N(R')C(O)R', -N(R')C(S)R', -N(R')CON(R')₂, -N(R')C(S)N(R')₂, -N(COR')COR', -N(OR')R', -C(=NH)N(R')₂, -C(O)N(OR')R', -C(=NOR')R', -OP(O)(OR')₂, -P(O)(R')₂, -P(O)(OR')₂ или -P(O)(H)(OR');

где

R' независимо выбирают из

водорода-,

(C1-C12)-алифатической группы-,

(C3-C10)-циклоалкила- или -циклоалкенила-,

(C6-C10)-арила-,

(C6-C10)-арил-(С1-С12)-алифатической группы-,

(C3-C10)-гетероциклила-,

(C5-C10)-гетероарила- и

где до -ти атомов в R' необязательно и независимо замещены J;

где две группы R', связанные с тем же атомом, образуют 3-10-членное ароматическое или неароматическое кольцо, имеющее до 3-х гетероатомов, независимо выбранных из N, NH, O, S, SO и SO₂, где указанное кольцо необязательно конденсировано с (C6-C10)арилом, (С5-С10)гетероарилом, (C3-C10)циклоалкилом или (С3-С10)гетероциклилом, где любое кольцо имеет до 3-х заместителей, выбранных независимо из J;

Y и Y' представляют собой водород,

R₁ и R₃ независимо представляют собой

(C1-C6)-алифатическую группу-,

(C3-C10)-циклоалкил или -циклоалкенил-,

[((C3-C10)-циклоалкил или -циклоалкенил-]-(C1-C6)-алифатическую группу-, или

(C6-C10)-арил-(C1-C6)-алифатическую группу-;

где до трех алифатических атомов углерода в R₁ и R₃ могут быть замещены O, N, NH, S, SO или SO₂ в химически стабильном окружении;

R₂ и R₇ являются водородом;

R₄ выбирают из

водорода-;

(С1-С6)-алкила-,

(C3-C10)-циклоалкил-(C1-C6)-алифатической группы-, или

(C6-C10)-арил-(C1-C6)-алифатической группы-;

где R₄ независимо и необязательно замещен заместителями в количестве до 3-х, независимо выбранными из J;

R_5' является водородом;

R₅ является (C1-C6)-алифатической группой-, где любой водород необязательно замещен галогеном;

W представляет собой

водород-,

(C1-C6)-алкил-,

(C6-C10)-арил-,

(C6-C10)-арил-(C1-C6)-алкил-,

(C3-C10)циклоалкил- или циклоалкенил-,

[(C3-C10)-циклоалкил- или циклоалкенил]-(C1-C6)-алкил-,

(C5-C10)-гетероарил-; или

V представляет собой валентную связь; и

T представляет собой

(C6-C10)-арил-,

(C6-C10)-арил-(C1-C6)-алифатическую группу-,

(C5-C10)-гетероарил- или

(C5-C10)-гетероарил-(C1-C6)-алифатическую группу-,

где каждый Т необязательно замещен заместителями J в количестве до 3;

В соответствии с одним воплощением соединений формулы I

радикалом является

где

n равно 0, 1 или 2;

Y и Y' являются такими, как определено в любом из воплощений данного описания; и

кольцо, содержащее X и X', необязательно замещено заместителями в количестве до 3-х, где J является таким, как определено в любом из воплощений данного описания.

В соответствии с другим воплощением соединений формулы I

радикалом является

где

n равно 0, 1 или 2;

Y и Y' являются такими, как определено выше; и

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы I

радикалом является

где

n равно 0 или 1; и

Y и Y' являются Н.

В другом воплощении соединений формулы I

радикалом является

где

n равно 0 или 1; и

Y и Y' являются Н.

В другом воплощении соединений формулы I

радикалом является

где

n равно 1; и

Y и Y' являются Н.

В соответствии с одним воплощением соединений формулы Iа

радикалом является

где

n равно 0, 1 или 2;

В соответствии с другим воплощением соединений формулы Iа

радикалом является

где

n равно 0, 1 или 2; и

радикалом является

где

n равно 0 или 1.

радикалом является

где

n равно 0 или 1.

В соответствии с другим воплощением соединений формулы I или формулы Ia настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы ID

где

n, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R_5', R₇, V, T, W, Y и Y' являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания.

радикалом является

где

X и X', Y и Y' являются такими, как определено в любом из воплощений данного описания; и

конденсированное бензольное кольцо необязательно замещено заместителями J в количестве до 3-х, где J является таким, как определено в любом из воплощений данного описания.

радикалом является

где

X и X' являются такими, как определено в любом из воплощений данного описания; Y и Y' являются Н; и

В соответствии воплощением соединений формулы Iа

радикалом является

где

X и X' являются такими, как определено в любом из воплощений данного описания; и

радикалом является

где

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы I или формулы Ia настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы IE

где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R_5', R₇, V, T, W, Y, Y', X и X' являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания; и

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы IЕ X и X' являются S, Y и Y' являются Н, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R_5', R₇, V, T и W являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания, и конденсированное бензольное кольцо необязательно замещено заместителями J в количестве до 3-х, где J является таким, как определено в любом из воплощений данного описания.

радикалом является

где

Y и Y' являются Н.

В другом воплощении соединений формулы I

радикалом является

где

Y и Y' являются Н.

В соответствии с еще одним воплощением для соединений формулы I настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы IF

где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R_5', R₇, V, T, W, Y и Y' являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания.

В соответствии с другим воплощением соединений формулы I W представляет собой

где в W, NR₆R₆ выбирают из -NH-(C1-C6 алифатической группы), -NH-(C3-C6 циклоалкила), -NH-CH(CH₃)-арила, или -NH-CH(CH₃)-гетероарила, где указанный арил или указанный гетероарил необязательно замещен галогенами в количестве до 3-х.

где в W, когда NR₆R₆ выбирают из -NH-(C1-C6 алифатической группы), указанная C1-C6-алифатическая группа является С1-С6-алкилом без заместителей J.

где в W, когда NR₆R₆ выбирают либо из (C6-C10)-арил-(C1-C12)-алифатической группы или (C5-C10)-гетероарил-(C1-C12)-алифатической группы-, указанная C1-C12-алифатическая группа является С1-С6-алкильной группой без заместителей J. В другом воплощении указанный С1-С6-алкил замещен заместителями J в количестве до 3-х.

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы I NR₆R₆ в радикале W представляет собой

В соответствии с другим воплощением соединений формулы I в W NR₆R₆ представляет собой

В еще другом воплощении соединений формулы I в W NR₆R₆ представляет собой

В соответствии с воплощением в соединениях формулы I или формулы Ia в W NR₆R₆ представляет собой

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы I или формулы Ia NR₆R₆ в радикале W представляет собой

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы I в W NR₆R₆ представляет собой

где в W NR₆R₆ представляет собой NH₂.

где в W R₆ является таким, как определено в любом из воплощений, описанных в данном документе.

где в W R₈ является таким, как определено в любом из воплощений, описанных в данном документе.

В соответствии с воплощением соединений формулы Iа W представляет собой

где в W NR₆R₆ выбирают из -NH-(C1-C6 алифатической группы), -NH-(C3-C6 циклоалкила), -NH-CH(CH₃)-арила или -NH-CH(CH₃)-гетероарила, где указанный арил или указанный гетероарил необязательно замещен галогенами в количестве до 3-х.

В соответствии с другим воплощением соединений формулы Ia W представляет собой

где в W, когда NR₆R₆ выбирают из -NH-(C1-C6-алкила), указанный C1-C6-алкил не имеет J заместителей.

В соответствии с другим воплощением соединений формулы Iа W представляет собой

где в W, когда NR₆R₆ выбирают либо из (C6-C10)-арил-(C1-C6)-алкила или (C5-C10)-гетероарил-(C1-C6)-алкила-, указанная C1-C6-алкильная группа не имеет заместителей J. В другом воплощении указанный С1-С6-алкил замещен заместителями J в количестве до 3-х.

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы Iа NR₆R₆ в радикале W представляет собой

В другом воплощении соединений формулы Iа в W NR₆R₆ представляет собой

В еще другом воплощении соединений формулы Iа в W NR₆R₆ представляет собой

где в W NR₆R₆ представляет собой NH₂.

В соответствии с другим воплощением для W в соединениях формулы I или Iа, каждый R₈ вместе с атомом бора, представляет собой (С5-С10)-членное гетероциклическое кольцо, не имеющее дополнительных гетероатомов, отличных от бора, и два атома кислорода. В одном воплощении группы выбирают из

где R' представляет собой (С1-С6)-алифатическую группу. В другом воплощении соединений формулы I или формулы Ia, R' представляет собой метил.

В соответствии с другим воплощением соединений формулы I настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы IG

где n, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R_5', R₇, V, T, X, X', Y и Y' являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания.

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы IG X и X' являются S, Y и Y' являются Н, n, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R_5', R₇, V, и T являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания.

В соответствии с другим воплощением соединений формулы I или формулы Ia настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы IG-1

В соответствии с другим воплощением соединений формулы IG-1, X и X' являются S, Y и Y' являются Н, n, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R_5', R₇, V и T являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания.

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы I, R_5' является водородом и R₅ представляет собой

В соответствии с еще другим воплощением в соединениях формулы I R_5' является водородом и R₅ представляет собой

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы I R_5' и R₅ представляют собой

В соответствии с воплощением в соединениях формулы Iа R₅ представляет собой

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы Iа R₅ представляет собой

В соответствии с другим воплощением соединений формулы I или формулы Ia настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы IН

где n, R₁, R₂, R₃, R₄, каждый R₆, R₇, V, T, X, X', Y и Y' являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания.

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы IН n, R₁, R₂, R₃, R₄, R₇, V и T являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания, X и X' являются S, Y и Y' являются Н, и NR₆R₆ представляет собой

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы IН n, R₁, R₂, R₃, R₄, R₇, V и T являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания, X и X' являются S, Y и Y' являются Н и NR₆R₆ представляет собой

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы I R₂, R₄ и R₇, каждый независимо, представляет собой Н, метил, этил или пропил.

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы I R₂, R₄ и R₇, каждый, представляет собой Н.

В соответствии с воплощением в соединениях формулы Iа R₄ представляет собой водород.

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы I или формулы Ia настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы IJ

где n, R₁, R₃, каждый R_6, V, T, X, X', Y и Y' являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания.

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы IJ n, R₁, R₃, V и T являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания, X и X' являются S, Y и Y' являются Н и NR₆R₆ представляет собой

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы I R₃ представляет собой

В другом воплощении в соединениях формулы I R₃ представляет собой

В соответствии с другим воплощением соединений формулы I R₃ представляет собой

В соответствии с воплощением в соединениях формулы Iа R₃ представляет собой

В другом воплощении в соединениях формулы Iа R₃ представляет собой

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы I или формулы Ia настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы IK

где

n, R₁, каждый R₆, V, N, Т, X, X', Y и Y' являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания.

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы IK n, R₁, V и T являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания, X и X' являются S, Y и Y' являются Н, и NR₆R₆ представляет собой

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы IK n, R₁, V и T являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания, X и X' являются S, Y и Y' являются Н и NR₆R₆ представляет собой

В соответствии с воплощением в соединениях формулы I R₁ представляет собой

В другом воплощении соединений формулы I R₁ представляет собой циклогексил.

В соответствии с воплощением в соединениях формулы Iа R₁ представляет собой

В другом воплощении соединений формулы Iа R₁ представляет собой циклогексил.

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы I или формулы Ia настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы IL

где n, каждый R₆, V, T, X, X', Y и Y' являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания.

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы IL n, V, и T являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания, X и X' являются S, Y и Y' являются Н и NR₆R₆ представляет собой

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы IL n, V и T являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания X и X' являются S, Y и Y' являются Н, и NR₆R₆ представляет собой

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы I V представляет собой O.

В соответствии с другим воплощением соединений формулы I настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы IМ

где n, каждый R_6, T, X, X', Y и Y' являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания.

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы IМ n, и T являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания, X и X' являются S, Y и Y' являются Н, и NR₆R₆ представляет собой

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы IМ n и T являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания, X и X' являются S, Y и Y' являются Н, и NR₆R₆ представляет собой

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы I V является валентной связью.

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы I или формулы Ia настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы IN:

где n, каждый R₆, T, X, X', Y и Y' являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания.

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы IN n, и T являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания, X и X' являются S, Y и Y' являются Н, и NR₆R₆ представляет собой

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы IN n и T являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания, X и X' являются S, Y и Y' являются Н и NR₆R₆ представляет собой

В соответствии с воплощением в соединениях формулы I T является (С3-С10)-гетероциклилом или (С5-С10)-гетероарилом-;

где каждый Т необязательно замещен заместителями J в количестве до 3.

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы IТ представляет собой (С5-С6)гетероциклил- или (С5-С6)-гетероарил-;

где каждый Т необязательно замещен заместителями J в количестве до 3-х.

В другом воплощении в соединениях формулы I Т представляет собой

где Z независимо представляет собой О, S, NR' или C(R')_2.

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы I Т представляет собой

В соответствии с воплощением в соединениях формулы Ia T представляет собой (С3-С10)-гетероциклил или (С5-С10)-гетероарил-;

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы Iа Т представляет собой (С5-С6)-гетероциклил- или (С5-С6)-гетероарил-;

В другом воплощении в соединениях формулы Iа Т представляет собой

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы I или формулы Ia настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы IO:

где n, каждый R₆, X, X', Y и Y' являются такими, как определено в любом из воплощений настоящего описания.

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы IN n является таким, как определено в любом из воплощений настоящего описания, X и X' являются S, Y и Y' являются Н и NR₆R₆ представляет собой

В соответствии с другим воплощением соединений формулы I или формулы Ia настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы IР

В соответствии с другим воплощением для соединений формулы IР n является таким, как определено в любом из воплощений настоящего описания, X и X' являются S, Y и Y' являются Н и NR₆R₆ представляет собой

В соответствии с воплощением для соединений формулы I указанная (С1-С12)-алифатическая группа в R', Y, Y', R₁, R₂, R₃, R₄, R₆, R₇, V и T является (С1-С6)-алкилом.

В соответствии воплощением для соединений формулы Iа указанная (С1-С12)-алифатическая группа в R' и указанная (С1-С6)-алифатическая группа в R₁, R₃, R₅ и Т представляет собой (С1-С6)-алкил.

В соответствии с другим воплощением в соединениях формулы I или формулы Ia соединение представляет собой

Соединения данного изобретения могут содержать один или более асимметричных атомов углерода и, таким образом, могут быть в виде рацематов и рацемических смесей, отдельных энантиомеров, диастереомерных смесей и индивидуальных диастереомеров. Все такие изомерные формы этих соединений однозначно включены в настоящее изобретение. Каждый стереогенный атом углерода может иметь R или S конфигурации.

В одном воплощении соединения данного изобретения имеют структуру и стереохимию, изображенные в формулах ID-IP.

В другом воплощении соединения данного изобретения имеют структуру и стереохимию, изображенные в соединениях с 2a по 4a. В другом воплощении соединения данного изобретения имеют структуру и стереохимию, изображенные в соединении 7a.

Любые из перечисленных выше воплощений, включая указанные выше варианты, могут быть объединены для получения иного воплощения данного изобретения.

Используемые здесь P1, P2, P3, P4 относятся к остаткам ингибитора протеазы HCV, как определено в данном уровне техники [J. A. Landro et al., "Mechanistic Role of an NS4A Peptide Cofactor with the Truncated NS3 Protease of Hepatitis C Virus: Elucidation of the NS4A Stimulatory Effect via Kinetic analysis and Inhibitor Mapping", Biochemistry, 36, pp. 9340-9348 (1997)], и как таковые хорошо известны квалифицированным практикам.

Настоящее изобретение обеспечивает потенциальные связывающие агенты и ингибиторы сериновой протеазы HCV НС3/НС4a. В определенных воплощениях соединений формул I и Ia настоящего изобретения соединения имеют колпачки P4, которые позволяют образовывать дополнительные водородные связи с остовом фермента. В определенных воплощениях настоящего изобретения атом азота колпачка P4 и карбонил (смежный с радикалом V или T в формулах I или Ia) образуют водородные связи с карбонильными и NH группами главной цепи, соответственно с остатком Cys-158 фермента протеазы. В определенных воплощениях настоящего изобретения образуется другая водородная связь между NH участком (представлен N-R₂ группой в формулах I и Ia, где R₂ является водородом) группы P3 с остовом протеазы. Эти взаимодействия водородных связей Р4 и Р3 оптимизируют позиции боковых цепей Р4 и Р3 с сайтом связывания сериновой протеазы НС3/НС4a HCV. Кроме того, спироциклическая пролиновая группа P2 заполняет карман P2 и обеспечивает Ван-Дер-Ваальсово взаимодействие с боковой цепью Arg-155 в сериновой протеазе HCV НС3/НС4A. Данное изобретение также обеспечивает группы W, которые эффективно связываются с каталитическим сайтом сериновой протеазы HCV НС3/НС4A в кармане P1'.

Аббревиатуры, используемые в схемах, приготовлениях и примерах, следующие:

ТГФ: тетрагидрофуран

ДМФ: N,N-диметилформамид

EtOAc: этилацетат

AcOH: уксусная кислота

ДМАП: диметиламинопиридин

HOBt: 1-гидроксибензотриазолгидрат

HOSu: янтарная кислота

EDC: гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида

Et₂O: диэтиловый эфир

BOC: трет-бутилоксикарбонил

Cbz: бензилоксикарбонил

Chg: циклогексилглицин

t-BG: трет-бутилглицин

DAST: трифторид (диэтиламино)серы

ДМСО: диметилсульфоксид

DCCA: дихлоруксусная кислота

DIEA: диизопропилэтиламин

MeCN: ацетонитрил

TEMPO: 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси, свободный радикал)

DMEM: модифицированная по способу Дульбекко среда Игла

PBS: фосфатный буфер (забуференный фосфатом солевой раствор)

кт или КТ: комнатная температура

ON: в течение ночи

ND: не определено

MS: масс-спектрометрия

LC: жидкостная хроматография

Основная методология синтеза:

Соединения данного изобретения могут быть получены способами, известными специалистам в данной области. Схемы 1A, 1B и 1-6 ниже иллюстрируют пути синтеза соединений настоящего изобретения. Другие эквивалентные схемы, абсолютно ясные для обычного химика органика, могут быть альтернативно использованы для синтеза различных частей молекулы, как это показано на основных схемах ниже и следующих примерах получения.

Схема 1:

Схема 1 выше представляет основной синтетический путь получения соединений формулы IA, где n, T, X, X', R₆, R₅, R₃ и R₁ являются такими, как определено в любом из воплощений данного описания. Промежуточное соединение 11 синтезировали в соответствии с методиками, описанными Schoellkopf, et al., Justus Liebigs Ann. Chem. GE, pp. 183-202 (1976) и Stemple et al., Organic Letters, 2(18), pp. 2769-2772 (2000). Соединения la-7a синтезировали в соответствии с этой схемой или ее вариациями. Как будет понятно квалифицированным практикам, могут быть использованы другие подходящие и коммерчески доступные связующие реагенты для получения промежуточных соединений 5, 7, 9 и 12. Дополнительно следует признать, что коммерчески доступные Boc-защищенные аминокислоты, представленные, например, Boc-R₃-COOH, могут быть альтернативно замещены коммерческими Cbz-защищенными аминокислотами. Подходящие условия снятия защиты для удаления защитных групп Cbz известны специалистам в данной области. Также окисление промежуточного соединения 12 до соединений формулы IA может быть осуществлено с использованием других подходящих условий, известных квалифицированному специалисту.

Схема 1А:

Схема 1A выше обеспечивает синтетический путь получения промежуточного соединения 46 из промежуточного соединения 40. Промежуточное соединение 40 синтезировали в соответствии с методиками, описанными Schoellkopf, et al., Justus Liebigs Ann. Chem. GE, pp. 183-202 (1976) и Stemple et al., Organic Letters, 2(18), pp. 2769-2772 (2000). Этерификацию с получением гидрохлорида этилового эфира 41 осуществляли, используя кислые каталитические условия. Защита амина с помощью Boc с последующим основным гидролизом обеспечивает получение Boc кислоты 43. Конденсация амина HN(R₆)₂ с EDC и янтарной кислотой обеспечивает амид 44, который далее окисляют до дикетоамида 45 с Dess-Martin периодинаном. Удаление Boc в кислых условиях обеспечивает промежуточное соединение 46 в виде гидрохлорида, где R₅ и R₆ являются такими, как определено в любом из воплощений данного описания.

Схема 1В:

Схема 1В выше обеспечивает альтернативный синтетический путь получения промежуточного соединения IA из промежуточного соединения 46.

Схема 2:

Схема 2 выше обеспечивает основной синтетический путь получения соединений формулы IB, где T, R₆, R₅, R₃ и R₁ являются такими, как определено в любом из воплощений данного описания. Как будет понятно квалифицированным практикам, могут быть использованы другие подходящие и коммерчески доступные связующие реагенты для получения промежуточных соединений 15, 17, 19 и 21. Дополнительно будет понятно, что коммерчески доступные Вос-защищенные аминокислоты, представленные, например Boc-R₃-COOH, могут быть альтернативно замещены коммерческими Cbz-защищенными аминокислотами. Подходящие условия снятия защиты для удаления защитных групп Cbz известны специалистам в данной области. Таким же образом окисление промежуточного соединения 21 до соединений формулы IВ может быть осуществлено с использованием других подходящих условий, известных квалифицированному специалисту. Специалисту в данной области также известны соединения формулы IB, которые могут быть также получены из промежуточного соединения 46, используя условия, описанные выше в схеме 1B.

Схема 3:

Схема 3 выше обеспечивает основной синтетический путь получения соединений формулы IC, где X, X', T, R₆, R₅, R₃ и R₁ являются такими, как определено в любом из воплощений данного описания. Специалисту в данной области также известны соединения формулы IС, которые могут быть также получены из промежуточного соединения 46 с использованием условий, описанных выше в схеме 1B.

Схема 4:

Приведенная выше схема 4 обеспечивает путь синтеза для получения промежуточного соединения пиррольной кислоты 5b. Квалифицированным специалистам в данной области следует понимать, что другие интересующие аналоги пиррола могут быть синтезированы с помощью модификаций схемы 4.

Схема 5:

Приведенная выше схема 5 обеспечивает путь синтеза для получения соединения 2a. Соединения 3a, 5a, 6a и 7a также, в основном, в соответствии со схемой 5. Квалифицированному специалисту в данной области следует знать, что 2a, 3a, 5a, 6a, и 7a могут быть также получены из промежуточного соединения 46 с использованием условий, описанных выше в схеме 1B.

Схема 6:

Приведенная выше схема 6 обеспечивает путь синтеза для получения соединения 1a. Соединение 4a было получено также, в основном, в соответствии со схемой 6. Квалифицированному специалисту в данной области также будет понятно, что соединения формулы 1а могут быть также получены из промежуточного соединения 46 с использованием условий, описанных выше в схеме 1B.

Несмотря на то, что конкретные воплощения примеров отображены и описаны ниже, следует понимать, что соединения данного изобретения могут быть получены в соответствии со способами, описанными, в основном, выше, используя подходящие исходные материалы, в основном, доступные обычному специалисту в этой области.

Другое воплощение данного изобретения обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы I или формулы Ia или их фармацевтически приемлемую соль. В соответствии с одним воплощением соединение формулы I или формулы Ia присутствует в количестве, эффективном для снижения вирусной нагрузки в образце или у пациента, где указанный вирус кодирует сериновую протеазу, необходимую для жизненного цикла вируса, и фармацевтически приемлемый носитель.

Если фармацевтически приемлемые соли соединений данного изобретения используются в этих композициях, их соли предпочтительно являются производными неорганических или органических кислот и оснований. В такие соли кислот включены следующие: ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфорат, сульфонат камфоры, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, оксалат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, тартрат, тиоцианат, тозилат и ундеканоат. Основные соли включают соли аммония, соли щелочных металлов, такие как соли натрия и калия, соли щелочноземельных металлов, такие как соли кальция и магния, соли с органическими основаниями, например соли дициклогексиламина, N-метил-D-глюкамин, и соли с аминокислотами, такими как аргинин, лизин и так далее.

Также основные азотсодержащие группы могут быть кватернизованы с такими агентами, как низшие алкилгалиды, такими как метил, этил, пропил и бутилхлорид, бромидами и иодидами; диалкилсульфатами, такими как диметил, диэтил, дибутил и диамилсульфаты, длинноцепочечными галидами, такими как децил, лаурил, миристил и стеарилхлориды, бромидами и иодидами, аралкилгалидами, такими как бензил и фенэтилбромиды, и другими. Таким образом, получают водорастворимые или растворимые в масле или диспергируемые продукты.

Соединения, используемые в композициях и способах данного изобретения, могут быть также модифицированы путем добавления соответствующих функциональностей для усиления селективных биологических свойств. Такие модификации известны в данном уровне техники и включают те, которые повышают биологическое проникновение в данную биологическую систему (например, кровь, лимфатическую систему, центральную нервную систему), повышают пероральную биодоступность, повышают растворимость для введения с помощью инъекции, изменяют метаболизм и изменяют скорость выведения.

Фармацевтически приемлемые носители, которые могут быть использованы в этих композициях, включают, не ограничиваясь ими, ионообменные смолы, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточные белки, такие как альбумин человеческой сыворотки, буферирующие вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновую кислоту, сорбат калия, неполные глицериды насыщенных растительных жирных кислот, или электролиты, такие как протаминсульфат, гидрофосфат динатрия, гидрофосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный кремнезем, трисиликат магния, поливинилпирролидон, субстанции (вещества) на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, натрий-карбоксиметилцеллюлоза, полиакрилаты, воски, полиэтилен-полиоксипропилен-блок-полимеры, полиэтиленгликоль и ланолин.

В соответствии с одним воплощением композиции данного изобретения готовят для фармацевтического введения млекопитающему, предпочтительно, человеку.

Такие фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть введены перорально, парентерально, ингаляционно, местно, ректально, интраназально, буккально, вагинально или посредством имплантированного контейнера. Используемый здесь термин "парентеральный" включает подкожный, внутривенный, внутримышечный, внутрисуставной, внутрисиновиальный, надчревный, спинальный, внутрипеченочный, внутрь поврежденных тканей и внутричерепной пути введения инъекцией или инфузией. Предпочтительно, композиции вводить перорально или внутривенно.

Стерильные инъекционные формы композиций данного изобретения могут быть водными или масляными суспензиями. Эти суспензии могут быть получены в соответствии с методиками, известными в данном уровне техники, с использованием подходящих диспергирующих или увлажняющих агентов и суспендирующих агентов. Стерильный инъекционный препарат может быть также стерильным инъекционным раствором или суспензией в нетоксичном парентерально-приемлемом разбавителе или растворителе, например раствором в 1,3-бутандиоле. Среди приемлемых наполнителей и растворителей, которые могут применяться: вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные жирные масла обычно используются в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели может применяться любое безвкусное жирное масло, включая синтетические моно- и диглицериды. Жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производные, полезны для получения препаратов для инъекции, таких как натуральные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, особенно в его полиоксиэтилированных вариантах. Эти масляные растворы или суспензии могут также содержать длинноцепочечный спирт-разбавитель или диспергатор, такой как карбоксиметилцеллюлоза или похожие диспергирующие агенты, которые обычно используются в рецептуре фармацевтически приемлемых дозированных форм, включая эмульсии и суспензии. Могут использоваться в приготовлении другие обычно используемые поверхностно-активные вещества, такие как Твины, Спаны и другие эмульгирующие агенты или усилители биодоступности, которые обычно используются в производстве фармацевтически приемлемых твердых, жидких или других дозированных форм.

В монотерапии для предотвращения и антивирусного лечения, в частности, анти-HCV обусловленного заболевания применяются описанные здесь уровни дозирования между примерно 0,01 и примерно 100 мг/кг массы тела в день, предпочтительно, между примерно 0,5 и примерно 75 мг/кг массы тела в день соединений ингибиторов протеаз. Обычно фармацевтические композиции данного изобретения вводят от примерно 1 до примерно 5 раз в день или, альтернативно, в виде длительной инфузии. Такое введение может применяться в качестве хронической или экстренной терапии. Количество активного ингредиента, которое может быть объединено с материалами-носителями для получения стандартной дозированной формы, варьируется в зависимости от пациента и конкретного пути введения. Обычный препарат содержит от примерно 5% до примерно 95% активного соединения (масс./масс.). Предпочтительно, такие препараты содержат от примерно 20% до примерно 80% активного соединения.

Когда композиции данного изобретения содержат комбинацию соединения формулы I или формулы Iа и один или несколько дополнительных терапевтических или профилактических агентов, и соединение, и дополнительный агент должны присутствовать в уровнях дозирования от примерно 10 до 100%, и более предпочтительно, между примерно от 10 до 80% дозы, обычно вводимой в режиме монотерапии.

Фармацевтические композиции данного изобретения могут быть введены перорально в любой лекарственной форме, принимаемой перорально, включая, не ограничиваясь ими, капсулы, таблетки, водные суспензии или растворы. В случае таблеток для перорального применения обычно используемые носители включают лактозу и кукурузный крахмал. Также обычно добавляют смазывающие агенты, такие как стеарат магния. Для перорального введения в форме капсул применяемые разбавители включают лактозу и высушенный кукурузный крахмал. Когда для перорального применения необходимы водные суспензии, активный ингредиент комбинируют с эмульгирующим и суспендирующим агентами. Если требуется, могут быть также добавлены определенные подсластители, ароматизаторы или красители.

Альтернативно, фармацевтические композиции данного изобретения могут быть введены в форме суппозиториев для ректального применения. Они могут быть получены смешиванием агента с подходящим, не раздражающим эксципиентом, который является твердым при комнатной температуре, но жидким при ректальной температуре и, следовательно, плавится в прямой кишке с высвобождением лекарства. Такие материалы включают масло какао, пчелиный воск и полиэтиленгликоли.

Фармацевтические композиции данного изобретения могут быть также введены наружно, особенно, когда мишень для воздействия включает зоны или органы, легко доступные для поверхностного нанесения, включая заболевания глаза, кожи, или нижнего отдела кишечника. Подходящие для наружного применения препараты приготовлены для каждой из этих зон или органов.

Поверхностное применение для нижнего отдела кишечника может осуществляться в ректальной суппозиторной лекарственной форме (смотри выше) или в подходящей лекарственной форме для введения с помощью клизмы. Могут также использоваться наружные трансдермальные пластыри.

Для местного применения фармацевтические композиции могут быть приготовлены в подходящей мази, содержащей активный компонент, суспендированный или растворенный в одном или более носителей. Носители для местного применения соединений данного изобретения включают, не ограничиваясь ими, минеральное масло, вазелиновое масло, медицинский вазелин, пропиленгликоль, полиоксиэтилен, полиоксипропилен, эмульгирующий воск и воду. Альтернативно, фармацевтические композиции могут входить в состав подходящего лосьона или крема, содержащего активные компоненты, суспендированные или растворенные в одном или более фармацевтически приемлемых носителях. Подходящие носители включают, не ограничиваясь ими, минеральное масло, сорбитанмоностеарат, полисорбат 60, цетиловые эфиры воска, цетиариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и воду.

Для офтальмологического применения фармацевтические композиции могут быть получены в виде микронизированных суспензий в изотоническом стерильном солевом растворе с установленным значением рН или, предпочтительнее, в виде раствора в изотоническом стерильном солевом растворе с усиановленным значением рН, с или без консерванта, такого как бензалконийхлорид. Альтернативно, для офтальмологических целей, фармацевтические композиции могут входить в состав мази, такой как вазелиновая мазь.

Фармацевтические композиции данного изобретения могут быть также введены с помощью назального аэрозоля или ингаляции. Такие композиции готовят в соответствии с методиками, хорошо известными в данном уровне техники фармацевтического приготовления лекарственных средств, и могут быть приготовлены как раствор в физиологическом растворе, используя бензиловый спирт или другие подходящие консерванты, абсорбционные промоторы для увеличения биодоступности, фторуглероды и/или другие обычные солюбилизирующие или диспергирующие агенты.

В другом воплощении фармацевтические композиции готовят для перорального введения.

В одном воплощении композиции данного изобретения дополнительно содержат другой агент, такой как ингибитор цитохрома P-450. Такие ингибиторы цитохрома P-450 включают, не ограничиваясь, ритонавир.

Если воплощение данного изобретения включает ингибитор CYP, то в способе данного изобретения может применяться любой ингибитор CYP, который улучшает относительную фармакокинетику протеазы НС3/4A. Данные ингибиторы CYP включают, не ограничиваясь ими, ритонавир (WO 94/14436), кетоконазол, тролеандомицин, 4-метилпиразол, циклоспорин, клометиазол, циметидин, итраконазол, флуконазол, миконазол, флувоксамин, флуоксетин, нефазодон, сертралин, индинавир, нельфинавир, ампренавир, фозампренавир, саквинавир, лопинавир, делавирдин, эритромицин, VX-944 и VX-497. В соответствии с одним воплощением ингибиторы CYP включают ритонавир, кетоконазол, тролеандомицин, 4-метилпиразол, циклоспорин и клометиазол.

Известны способы измерения способности соединения ингибировать активность цитохром-P50-монооксигеназы (смотри патент США № 6037157 и Yun, et al. Drug Metabolism & Disposition, vol. 21, pp. 403-407 (1993).

Применяемый в этом изобретении ингибитор CYP может быть ингибитором только одного изофермента или более чем одного изофермента. Если ингибитор CYP ингибирует больше изоферментов, ингибитор может, тем не менее, ингибировать на один изофермент больше, нежели другой изофермент. Любые такие ингибиторы CYP могут применяться в способе согласно данному изобретению.

В способе данного изобретения ингибитор CYP может быть введен совместно с ингибитором протеазы НС3/4A вируса гепатита С в той же лекарственной форме или в отдельных лекарственных формах.

Если ингибитор CYP и ингибитор протеазы вводят в раздельных лекарственных формах, каждый из ингибиторов может быть введен примерно одновременно. Альтернативно, ингибитор CYP может быть введен в любой период времени, близко ко времени введения ингибитора протеазы. То есть ингибитор CYP может быть введен до, совместно с, и после введения ингибитора протеазы НС3/4A. Период времени введения должен быть таким, чтобы ингибитор CYP влиял на метаболизм ингибитора протеазы. Например, если ингибитор протеазы вводится сначала, ингибитор CYP должен быть введен до того, как ингибитор протеазы в значительной мере метаболизируется и/или выведется (например, в пределах периода полувыведения ингибитора протеазы).

В другом воплощении композиции данного изобретения дополнительно содержат другой противовирусный агент, предпочтительно, анти-HCV агент. Такие противовирусные агенты включают, не ограничиваясь ими, иммуномодулирующие агенты, такие как α-, β-, и γ-интерфероны, пегилированные производные α-интерферона и тимозин; другие противовирусные агенты, такие как рибавирин, амантадин и телбивудин; другие ингибиторы протеаз гепатита С (ингибиторы НС2-НС3 и НС3-НС4A); ингибиторы других мишеней в жизненном цикле HCV, включая ингибиторы металлопротеазы, геликазы и полимеразы; ингибиторы внутреннего проникновения рибосом; ингибиторы вирусов широкого спектра, такие как ингибиторы IMPDH (например, соединения патентов США №№ 5807876, 6498178, 6344465, 6054472, WO 97/40028, WO 98/40381, WO 00/56331, и микофенольные кислоты и их производные, и включают, не ограничиваются ими, VX-497, VX-148, и/или VX-944); или комбинации любых ингибиторов указанных выше.

Используемый здесь термин "интерферон" подразумевает члена семейства высокогомологичных видоспецифичных белков, которые ингибируют репликацию вируса и клеточную пролиферацию и модулируют иммунный ответ, например интерферон альфа, интерферон бета или интерферон гамма. Merck Index, entry 5015, двенадцатое издание.

После улучшения состояния пациента может быть введена, если необходимо, поддерживающая доза соединения, композиции или их комбинации по данному изобретению. Впоследствии дозировка или частота введения, или и то и другое, могут быть снижены, в зависимости от симптомов, до уровня, при котором улучшенное состояние сохраняется, когда устраняются симптомы до желаемого уровня, лечение должно быть прекращено. Пациентам может, однако, требоваться длительное периодическое лечение после устранения симптомов заболевания.

Следует понимать, что конкретная дозировка и режим лечения для конкретного пациента будут зависеть от ряда факторов, включая активность применяемого конкретного соединения, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, питание, время введения, скорость выведения, комбинацию лекарств, решение лечащего врача и выраженность конкретного излечиваемого заболевания. Количество активных ингредиентов также зависит от конкретно описанного соединения и присутствия или отсутствия и природы дополнительного противовирусного агента в композиции.

В соответствии с другим воплощением данное изобретение обеспечивает способ лечения пациента, инфицированного вирусом, характеризующимся кодируемой вирусом сериновой протеазой, которая необходима для жизненного цикла вируса введением указанному пациенту фармацевтически приемлемой композиции данного изобретения. Предпочтительно, способы данного изобретения используются для лечения пациента страдающего от HCV-инфекции. Такое лечение может полностью устранить вирусную инфекцию или снизить ее выраженность. Более предпочтительно, если пациентом является человек.

В альтернативном воплощении способы данного изобретения дополнительно содержат стадию введения указанному пациенту противовирусного агента, предпочтительно, анти-HCV агента. Такие противовирусные агенты включают, не ограничиваясь ими, иммуномодулирующие агенты, такие как α-, β-, и γ-интерфероны, пегилированные производные α-интерферона и тимозин; другие противовирусные агенты, такие как рибавирин, амантадин и телбивудин; другие ингибиторы протеаз гепатита С (ингибиторы НС2-НС3 и НС3-НС4A); ингибиторы других мишеней в жизненном цикле HCV, включая ингибиторы металлопротеазы, геликазы и полимеразы; ингибиторы внутреннего рибосомного проникновения; ингибиторы вирусов широкого спектра, такие как ингибиторы IMPDH (например, соединения патентов США №№ 5807876, 6498178, 6344465, 6054472, WO 97/40028, WO 98/40381, WO 00/56331 и микофеноловая кислота и ее производные, и включая, не ограничиваясь, VX-497, VX-148 и/или VX-944); или комбинации любых ингибиторов, указанных выше.

Такой дополнительный агент может быть введен указанному пациенту как часть стандартной лекарственной формы, содержащей соединение данного изобретения и дополнительный противовирусный агент. Альтернативно, дополнительный агент может быть введен отдельно от соединения данного изобретения как часть многократной лекарственной формы, где указанный дополнительный агент вводится до, вместе с или после композиции, содержащей соединение данного изобретения.

В другом воплощении настоящее изобретение обеспечивает способ предварительной обработки субстанции, которую собираются вводить пациенту, включающий стадию контакта указанной биологической субстанции с фармацевтически приемлемой композицией, содержащей соединение данного изобретения. Такие биологические субстанции включают, не ограничиваясь ими, кровь и ее компоненты, такие как плазма, тромбоциты, субпопуляции клеток крови и тому подобные; органы, такие как почка, печень, сердце, легкое и т.д., сперма и яйцеклетка; костный мозг и его компоненты и другие жидкости, вводимые (инфузируемые) пациенту, такие как изотонический раствор, декстроза и т.д.

В соответствии с другим воплощением данное изобретение обеспечивает способы обработки материалов, которые могут потенциально контактировать с вирусом, характеризующимся кодируемой вирусом сериновой протеазой, необходимой для его жизненного цикла. Этот способ включает стадию контактирования указанного материала с соединением в соответствии с данным изобретением. Такие материалы включают, не ограничиваясь ими, хирургические инструменты и одежду (например, униформа, перчатки, фартуки, халаты, очки, обувь и т.д.); лабораторные инструменты и одежду (например, униформа, перчатки, фартуки, халаты, очки, обувь и т.д.); аппараты сбора крови и материалы; и инвазивные приспособления, такие как шунты и стенты и т.д.

В другом воплощении соединения данного изобретения могут быть использованы в качестве лабораторных инструментов для достижения изоляции кодируемой вирусом сериновой протеазы. Этот способ включает стадии обеспечения соединения данного изобретения, прикрепленного к твердой подложке; контактирование указанной твердой подложки с образцом, содержащим вирусную сериновую протеазу, в условиях, обеспечивающих связывание указанной протеазы с данной твердой подложкой; и элюирование указанной сериновой протеазы с указанной твердой подложки. Предпочтительно, вирусная сериновая протеаза, выделенная данным способом, представляет собой НС3-НС4A протеазу HCV.

Для более полного понимания данного изобретения далее представлены следующие препаративные примеры и примеры испытаний. Эти примеры приведены только с целью иллюстрации и не должны быть в любом случае интерпретированы как ограничивающие объем данного изобретения.

ПРИМЕРЫ

Спектры ¹H-ЯМР записывались при 500 мГц с использованием прибора Bruker AMX 500. Масс-спектральные образцы анализировались на MicroMass ZQ или Quattro II масс-спектрометре, установленном в одном MS-режиме с электрораспылительной ионизацией. Образцы вводили в масс-спектрометр проточно-инжекционно (FIA) или с помощью хроматографии. Подвижная фаза для всех масс-спектральных анализов состояла из смесей ацетонитрил-вода с 0,2% муравьиной кислотой в качестве модификатора.

Используемый здесь термин "Rt(мин)" относится ко времени удерживания соединения в ВЭЖХ, в минутах. Приведенные времена удерживания ВЭЖХ были получены или из данных масс-спектров, или с использованием следующего метода:

Прибор: Hewlett Packard HP-1050;

Колонка: YMC C₁₈ (Cat. No. 326289C46);

Градиент/Градиент время: 10-90% CH₃CN/H₂О более 9 минут, затем 100% CH₃CN в течение 2 минут;

Скорость потока: 0,8 мл/мин;

Длина волны детектора: 215 нм и 245 нм.

Присвоение химического наименования для выбранных соединений здесь осуществляли с помощью программы, обеспеченной CambridgeSoft Corporations ChemDraw Ultra^®, версия 7.0.1.

Пример 1

3-Ацетил-4,5-диметил-2-пирролкарбоновая кислота (5b)

Раствор нитрита натрия (36,9 г, 0,534 моль) в 70 мл воды добавляли по каплям к перемешиваемому раствору этилацетоацетата (70 г, 0,538 моль) в 1401 мл ледяной уксусной кислоты при 0ºC. После того как добавление было завершено, слегка желтую реакционную смесь оставляли для нагрева до комнатной температуры. После 30 минут весь исходный материал был израсходован, реакционную смесь гасили 350 мл воды и экстрагировали этилацетатом (2×125 мл). Органические экстракты объединяли и промывали водой (2×125 мл) и насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (2×105 мл). Органический слой высушивали с помощью сульфата натрия и концентрировали в вакууме для получения 84,2 г (98%) этил-2-гидроксиимино-3-оксобутаноата 1b в виде бледно-желтого масла.

¹Н ЯМР (CDCl₃) δ: 10,3 (с, 1H), 4,2 (кв, 2H) , 2,3 (с, 3H), 1,3 (т, 3H) ч./млн.

Измельченный натрий (12,4 г, 0,540 моль) добавляли к раствору 2-бутанона (48,2 мл, 0,538 моль) и этилформиата (43,47 мл, 0,538 моль) в сухом эфире (540 мл) с интенсивным механическим перемешиванием в течение периода в 1 ч, в течение которого смесь охлаждали на ледяной бане с солью. Смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 14 часов. После охлаждения смеси до 4ºC в течение нескольких часов осажденную соль натрия получали фильтрацией и промывали тщательно холодным сухим эфиром для получения 49,3 г (75%) желаемой натриевой соли 2-метил-3-оксобутиральдегида 2b.

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) δ: 9,1 (с, 1H), 1,9 (с, 3H), 1,3 (с, 3H) ч./млн.

Натриевую соль 2b (49,3 г, 0,404 моль) и оксим 1b (64,23 г, 0,404 моль) перемешивали в 300 мл смеси 70% уксусной кислоты/30% воды и нагревали до 50ºC. Порционно добавляли порошок цинка (42,21 г, 0,646 моль) в течение 30 минут, сохраняя температуру ниже 100ºC. Когда добавление было завершено, суспензию кипятили с обратным холодильником в течение 15 минут, затем выливали в 4 л воды со льдом. После короткого времени продукт осаждали для получения, после фильтрации, 30,1 г (45%) желаемого этил-4,5-диметил-2-пирролкарбоксилата 3b.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ: 9,0 (ушир.с, 1H), 6,7 (с, 1H), 4,3 (кв, 2H), 2,3 (с, 3H), 2,0 (с, 3H), 1,3 (т, 3H) ч./млн.

К раствору хлорида алюминия (50,19 г, 0,376 моль) в сухом дихлорэтане (580 мл) при 25ºC медленно добавляли уксусный ангидрид (17,75 мл, 0,188 моль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут, затем добавляли раствор пиррола 3b (10,49 г, 0,0627 моль) в дихлорэтане (30 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. После дополнительных 3 часов при 80ºC смесь вливали в воду со льдом и экстрагировали дихлорметаном. Органический слой высушивали с помощью безводного сульфата натрия и концентрировали в вакууме до оранжевого остатка. Фильтрация через небольшой слой силикагеля (30% этилацетат/70% гексан) давала 7,5 г (60%) этил-3-ацетил-4,5-диметил-2-пирролкарбоксилат 4b.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ: 9,0 (ушир.с, 1H) , 4,3 (кв, 2H), 2,7 (с, 3H), 2,1 (с, 3H), 1,9 (с, 3H), 1,3 (т, 3H) ч./млн.

Смесь эфира пиррола 4b (8,2 г, 0,0392 моль) в этаноле и 100 мл 10% гидроксида калия кипятили с обратным холодильником в течение 1 часа. Смесь охлаждали и концентрировали в вакууме до образования масла. Воду добавляли к маслу, смесь подкисляли разбавленной HCl и экстрагировали эфиром. Органическую фазу высушивали с безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме до твердого остатка. Соединение повторно кристаллизовали в 80 мл этанола, получая 5,8 г чистой 3-ацетил-4,5-диметил-2-пирролкарбоновой кислоты 5b в виде твердого вещества.

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) δ: 2,5 (с, 3H) , 2,2 (с, 3H), 2,0 (с, 3H) ч./млн.

Пример 2

2-(2-{2-Циклогексил-2-[(пиразин-2-карбонил)амино]ацетиламино}-3,3-диметилбутирил)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбоновой кислоты (1-циклопропиламинооксалилбутил)амид (2a)

К раствору 1-бензилового эфира 2-метилового эфира L-4-гидроксипирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты 1 (3,0 г, 1,0 экв., Advanced Chem Tech) в смеси толуол (30 мл)/этилацетат (30 мл) добавляли NaBr (1,28 г, 1,14 экв.) в воде (5 мл). Добавляли TEMPO (17 мг), смесь охлаждали до 4ºC и добавляли в течение 30 минут раствор Clorox®; (18 мл), бикарбонат натрия (2,75 г) и воду (до общего объема 40 мл). Полученную суспензию перемешивали 10 минут до добавления изопропанола (0,2 мл). Органическую фазу, отделяли и водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали 0,3 н. раствором тиосульфата натрия и затем насыщенным солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме до янтарного масла. Очистка с помощью элюирования через слой силикагеля с градиентом EtOAc/гексан (100% гексан до 40% EtOAc/гексан в 10% steps) давала 2,85 г (96%) 4-оксопирролидин-1,2-дикарбоновой кислоты 1-бензиловый эфир 2-метиловый эфир 2 в виде чистого масла.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ: 7,35 (м, 5H), 5,15-5,30 (м, 2H), 4,80-4,90 (м, 1H), 3,95-4,05 (м, 2H), 3,80 (с, 3/5 3H), 3,65 (с, 2/5 3H), 3,0 (м, 1H), 2,65 (д, 3/5 1H), 2,60 (д, 2/5 1H) ч./млн.

Кетон 2 (250 мг) в СН₂Сl₂ при температуре 15ºС обрабатывали 1,3-пропандитиолом (100 мл), затем по каплям BF₃ОEt₂ (119 мкл). Смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакцию гасили добавлением 1 мл водного раствора карбоната калия (2 г/30 мл) и далее 321 мкл насыщенного раствора бикарбоната калия до достижения pH 7-8. Промывали органическую фазу водой, насыщенным солевым раствором, затем высушивали над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очистка с помощью элюирования через слой силикагеля толуолом→смесью гексан/этиловый эфир (2:3→0:1) приводила к получению 200 мг (60%) желаемого 6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-2,3-дикарбоновой кислоты-2-бензилового эфира 3-метилового эфира 26 в виде чистого масла.

¹H HMR (CDCl₃) δ: 7,30 (м, 5H), 5,05-5,25 (м, 2H), 4,6 (т, 0,5H), 4,55 (т, 0,5H), 3,8 (с, 1,5H), 3,75 (м, 1H), 3,6 (с, 1,5H), 2,95 (м, 1H), 2,85 (м, 3H), 2,75 (м, 1H), 2,4 (м, 0,5H), 2,35 (м, 0,5H), 2,0 (м, 2H) ч./млн.

Cbz-защищенный дитиан (50 мг) 26 в AcOH (140 мкл) обрабатывали 30% HBr/AcOH (210 мкл) и перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Добавляли этиловый эфир (20 мл), суспензию перемешивали, растворитель декантировали и затем процедуру повторяли еще дважды для получения 40 мг (95%) желаемого метилового эфира 6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбоновой кислоты 27 в виде красно-коричневого твердого вещества и в виде HBr соли.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ: 4,75 (т, 1H), 3,8 (с, 3H), 3,65 (д, 2H), 2,9-3,1 (м, 4H), 2,7 (м, 1H), 2,55 (м, 1H), 1,95 (м, 1H), 1,85 (м, 1H) ч./млн.

L-Boc-трет-бутил глицин (243 мг, Bachem), EDC (201 мг), HOBt (161 мг) и DIEA (502 мкл) в ДМФ (3 мл) обрабатывали солью амина 27 (300 мг) в ДМФ (1 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разделяли между этилацетатом и 1,0 н. HCl, органический слой промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия, 1,0 н. раствором глицин-натриевой соли, раствором 10% карбоната калия и насыщенный солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очисткой с помощью элюирования через слой силикагеля смесью 30% EtOAc/гексан получали 300 мг (70%) желаемого метилового эфира 2-(2-трет-бутоксикарбониламино-3,3-диметилбутирил)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбоновой кислоты 28 в виде белого твердого вещества.

¹Н ЯМР (CDCl₃) δ: 5,2 (д, 1H), 4,7 (т, 1H), 4,65 (с, 1H), 4,3 (д, 1H), 3,8 (д, 1H), 3,75 (с, 3H), 3,1 (м, 1H), 3,0 (м, 1H), 2,8 (м, 1H), 2,75 (м, 1H), 2,6 (м, 1H), 2,2 (м, 1H), 2,1 (м, 1H), 1,95 (м, 1H), 1,45 (с, 9H), 1,05 (с, 9H) ч./млн.

Boc-защищенный амин 28 (243 мг) в диоксане (1 мл) обрабатывали раствором 4,0 н. HCl/диоксан (2 мл) и перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Смесь концентрировали в вакууме, суспендировали в CH₂C1₂ и выпаривали в вакууме с получением 208 мг (100%) желаемого 2-(2-амино-3,3-диметилбутирил)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбоновой кислоты метилового эфира 29 в виде белого твердого вещества и в виде соли HCl. Масс-спектр MH⁺ = 347,1.

L-Boc-циклогексил глицин (154 мг, Bachem), EDC (115 мг), HOBt (81 мг) и DIEA (284 мг) в CH₂C1₂ (1 мл) обрабатывали солью амина 29 (189 мг) в CH₂Cl₂ (2 мл) и смесь перемешивали в течение 2 часов. Смесь разделяли между этилацетатом и 1,0 н. HCl, органический слой промывали бикарбонатом натрия, 1,0 н. раствором глицин-натриевой соли, 10% раствором карбоната калия и насыщенным солевым раствором, затем высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очисткой с помощью элюирования через слой силикагеля смесью 30% EtOAc/гексан получали 221 мг (70%) метилового эфира 2-[2-трет-бутоксикарбониламино-2-циклогексилацетиламино)-3,3-диметилбутирил]-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбоновой кислоты 30 в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ: 6,4 (д, 1H), 5,0 (д, 1H), 4,7 (м, 2H), 4,6 (д, 1H), 3,9 (м, 1H), 3,8 (д, 1H), 3,7 (с, 1H), 3,0 (м, 2H), 2,8 (м, 1H), 2,7 (м, 1H), 2,6 (м, 1H), 2,2 (м, 1H), 2,15 (м, 1H), 2,0 (м, 1H), 1,65 (м, 7H), 1,45 (с, 9H), 1,15 (м, 4H), 1,05 (с, 9H) ч./млн.

Boc-защищенный амин 30 (221 мг) в диоксане (1 мл) обрабатывали раствором 4,0 н. HCl/диоксан (2 мл) и перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Смесь концентрировали в вакууме, суспендировали в CH₂Cl₂ и выпаривали, процедуру повторяли и смесь выпаривали в вакууме с получением 197 мг (100%) желаемого метилового эфира 2-[2-(2-амино-2-циклогексилацетиламино)-3,3-диметилбутирил]-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбоновой кислоты 31 в виде белого твердого вещества и в виде соли HCl. Масс-спектр. MH⁺ = 486,2.

Кислоту пиразина 32 (26 мг, Aldrich Chem Co.), EDC (40 мг), HOBt (32 мг) и DIEA (99 мкл) в CH₂C1₂ (2 мл) обрабатывали солью амина (98 мг) в CH₂C1₂ (2 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Смесь разделяли между EtOAc и 1,0 н. HCl, промывали насыщенным солевым раствором, затем высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очисткой с помощью элюирования через слой силикагеля 100% EtOAc получали 50 мг (45%) желаемого 2-[2-{2-циклогексил-2-[(пиразин-2-карбонил)амино]ацетиламино}-3,3-диметилбутирил)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбоновой кислоты метилового эфира 33 в виде белого твердого вещества. Масс-спектр. MH⁺ = 592,1, MH^- = 590,2.

Эфир 33 (50 мг) в смеси ТГФ-вода (400 мкл-100 мкл) обрабатывали LiOH (7 мг) и смесь перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. Смесь выпаривали, разбавляли EtOAc, промывали 1,0 н. HCl и насыщенным солевым раствором и затем высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 2-[2-{2-циклогексил-2-[(пиразин-2- карбонил)амино]ацетиламино}-3,3-диметилбутирил)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбоновой кислоты 34 в виде белого твердого вещества, которое использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки. Масс-спектр. МН⁺ = 578,0, МН^- = 576,2.

Кислоту 34 (49 мг), EDC (14,2 мг), HOBt (17,8 мг) и DIEA (44 мкл) в CH₂Cl₂ (1 мл) обрабатывали циклопропиламином 3-амино-2-гидроксигексановой кислоты 35 (17,3 мг, готовили в соответствии со способами, описанными U. Schoellkopf et al., Justus Liebigs Ann. Chem. GE, 1976, 183-202, и J. Stemple et al., Organic Letters 2000, 2 (18), 2769-2772) в CH₂Cl₂ (1 мл) и смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли EtOAc, органический слой промывали 1,0 н. HCl и насыщенным солевым раствором, затем высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Очисткой на слое силикагеля, элюируя 2% MeOH/CH₂Cl₂, получали 31 мг (50%) желаемого [1-(циклопропиламинооксалилбутил)амида 2-[2-{2-циклогексил-2-[(пиразин-2-карбонил)амино]ацетиламино}-3,3-диметилбутирил)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбоновой кислоты 36 в виде белого твердого вещества. Масс-спектр MH⁺ = 746,1, MH^- = 744,3.

Гидроксиамид 36 (31 мг) в EtOAc (620 мкл) обрабатывали EDC (120 мг), далее ДМСО (233 мкл), затем дихлоруксусной кислотой (34 мкл) и смесь перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли 1,0 н. HCl (620 мкл), органический слой промывали водой, затем концентрировали в вакууме и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением 14 мг (45%) желаемого ([1-(циклопропиламинооксалилбутил)амида 2-[2-{2-циклогексил-2-[(пиразин-2-карбонил)амино]ацетиламино}-3,3-диметилбутирил)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбоновой кислоты 2а в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ: 9,4 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,65 (с, 1H), 8,3 (с, 1H), 7,45 (д, 1H), 6,8 (д, 1H), 5,4 (д, 1H), 4,8 (м, 2H), 4,6 (м, 1H), 4,5 (м, 1H), 3,7 (д, 1H), 3,1 (м, 2H), 2,8 (м, 2H), 2,65 (м, 2H), 2,3 (м, 1H), 2,2 (м, 1H), 1,95 (м, 3H), 1,7 (м, 6H), 1,4 (м, 2H), 1,15 (м, 4Н), 1,05 (с, 9Н), 0,9 (м, 4Н), 0,85 (м, 2Н), 0,65 (м, 2Н) ч./млн.

Пример 3

2-(2-{2-[(3-Ацетил-4,5-диметил-1H-пиррол-2-карбонил)амино]-2-циклогексилацетиламино}-3,3-диметилбутирил)-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбоновой кислоты (1-циклопропиламинооксалилбутил)амид (1a)

Это соединение получали из метилового эфира 2-[2-(2-амино-2-циклогексилацетиламино)-3,3-диметилбутирил]-6,10-дитиа-2-азаспиро[4.5]декан-3-карбоновой кислоты 31 (полученного, как описано выше в примере 2) и 3-ацетил-4,5-диметил-2-пирролкарбоновой кислоты 5b (полученной, как описано выше в примере 1) используя методики, аналогичные тем, что описаны в примере 2. Соединение заголовка выделяли в виде белого твердого вещества (11% для последней стадии). ЖХМС: время удерживания = 4,8 мин, M+H = 801,2.

Пример 4

Протокол теста репликации HCV в клетке:

Клетки, содержащие репликон вируса гепатита С (HCV), хранили в DMEM, содержащем 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS), 0,25 мг на мл G418, с соответствующими добавками (среда A).

В день 1 монослой клеток, содержащих репликоны, обрабатывали смесью трипсин:ЭДТА, удаляли, затем среду A разбавляли до конечной концентрации, равной 100000 клеток на мл, то есть 10000 клеток в 100 мкл поместили в каждую лунку 96-луночного планшета для культивирования ткани и культивировали в течение ночи в инкубаторе для тканевых культур при 37ºC.

В день 2 соединения (в 100% ДМСО) серийно разводили в DMEM, содержащем 2% FBS, 0,5% ДМСО, с подходящим добавлением (среда В). Конечная концентрация ДМСО поддерживалась при 0,5% посредством сериных разведений.

Среду на монослое клеток с репликонами удаляли и добавляли среду B, содержащую различные концентрации соединений. Среду B без какого-либо соединения добавляли в другие лунки в качестве контроля.

Клетки инкубировали с соединением или 0,5% ДМСО в среде B в течение 48 часов в инкубаторе для тканевых культур при 37ºC. В конце 48-часовой инкубации среду удаляли и монослой клеток с репликонами промывали один раз PBS и сохраняли при -80ºC до экстракции РНК.

Культуральные планшеты с обработанными монослоями клеток, содержащих репликоны, оттаивали и в каждую лунку добавляли фиксированное количество другого РНК-вируса, такого как вирус бычьей вирусной диареи (BVDV). К клеткам немедленно добавляли реагенты для экстракции РНК (такие как реагенты из наборов RNeasy) во избежание разрушения РНК. Всю РНК экстрагировали в соответствии с инструкцией производителя с модификацией для улучшения эффективности экстракции и стабильности. В конечном итоге всю клеточную РНК, включая РНК репликона HCV, элюировали и хранили при -80ºC до следующей обработки.

Количественный анализ ОT-ПЦР по Такману проводили с двумя наборами специфических праймеров и пробы. Один был для HCV, другой для BVDV. Общую РНК экстрагентов из обработанных клеток, содержащих репликоны HCV, добавляли к ПЦР-смесям для количественной оценки РНК HCV и РНК BVDV в одной и той же лунке планшета. Экспериментальную неудачу помечали и отбрасывали, основываясь на уровне РНК BVDV в каждой лунке. Уровень РНК HCV в каждой лунке подсчитывали в соответствии с калибровочной кривой в том же планшете ПЦР. Процент ингибирования или снижения уровня РНК HCV, вследствие обработки соединением, высчитывали, используя ДМСО либо отсутствие контроля соединением в качестве 0% ингибирования. IC₅₀ (концентрация, при которой наблюдается 50% ингибирование уровня РНК HCV) подсчитывали по кривой титрования любого взятого соединения.

Пример 5

Протокол анализа Ki HCV:

ВЭЖХ на микроколонке для разделения субстрата 5AB и продуктов

Субстрат:

NH₂-Glu-Asp-Val-Val-(альфа)Abu-Cys-Ser-Met-Ser-Tyr-COOH

Исходный раствор 20 мМ 5AB (или концентрация по выбору) готовили в ДМСО w/0,2M DTT. Хранили в аликвотах при -20ºC.

Буфер: 50 мМ HEPES, pH 7,8; 20% глицерин; 100 мМ NaCl

Общий объем составил 100 мкл

	Х1 (мкл)	Концентрация в анализе
Буфер	86,5	См. выше
5 мМ КК4А	0,5	25 мкМ
1М DTT	0,5	5 мМ
ДМСО или ингибитор	2,5	2,5% об./об.
5 мкМ tHC3	0,05	25 нМ
250 мкМ 5 АВ (начальная)	20	25 мкМ

Буфер, КК4А, DТТ и tNS3 объединяли, распределяли 78 мкл каждого в лунки 96-луночного планшета. Смесь инкубировали при 30ºC в течение ~5-10 мин.

2,5 мкл соответствующей концентрации проверяемого соединения растворяли в ДМСО (только ДМСО для контроля) и добавляли в каждую лунку. Смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 15 мин.

Инициировали взаимодействие добавлением 20 мкл 250 мкМ субстрата 5AB (концентрация, равная 25 мкМ, эквивалентна или немного ниже, чем Km для 5AB).

Инкубировали в течение 20 мин при 30ºC.

Завершали реакцию добавлением 25 мкл 10% ТФА.

Переносили 120 мкл аликвот в пробирки для ВЭЖХ.

Отделяли продукт SMSY от субстрата и KK4A следующим способом:

Способ разделения на микроколонке:

Инструментарий: Agilent 1100

Дегазатор G1322A

Двойной насос G1312A

Автосэмплер G1313A

Камера с термостатируемой колонкой G1316A

Детектор диодной матрицы G1315A

Колонка:

Phenomenex Jupiter; 5 микрон C18; 300 ангстрем; 150×2 мм; P/О 00F-4053-B0

Колоночный термостат: 40ºC

Вводимый объем: 100 мкл

Растворитель А = вода марки для ВЭЖХ + 0,1% ТФА

Растворитель B = ацетонитрил марки для ВЭЖХ + 0,1% ТФА

Время (мин)	% В	Поток (мл/мин)	Максимальное давление
0	5	0,2	400
12	60	0,2	400
13	100	0,2	400
16	100	0,2	400
17	5	0,2	400

Время остановки: 17 мин

Время после старта: 10 мин.

Таблица 1 внизу отображает данные масс-спектров (M-H, M+H, набл.=наблюдаемый), ВЭЖХ, ¹H-NMR ("Да", если получены спектральные данные), Ki, и IC₅₀ для конкретных соединений данного изобретения.

Соединения со значениями Ki, варьирующимися от 1 мкМ до 5 мкМ, обозначены A. Соединения со значениями Ki, варьирующимися от 1 мкМ до 0,5 мкМ, обозначены B. Соединения со значениями Ki ниже 0,5 мкМ обозначены C. Соединения со значениями IC₅₀, варьирующимися от 1 мкМ до 5 мкМ, обозначены A. Соединения со значениями IC₅₀, варьирующимися от 1 мкМ до 0,5 мкМ, обозначены B. Соединения со значениями IC₅₀ ниже 0,5 мкМ обозначены C.

Таблица 1
Соединение	MS+ (набл.)	MS- (набл.)	ВЭЖХ, время удерживания (мин)	Ki	IC₅₀	¹H-ЯМР (CDCl₃)
1а	801,2	799,2	4,80	С	С	Да
2а	744,0	742,2	4,0	С	С	Да
3а	704,4	702,6	3,63	С	С	Да
4а	761,1	759,3	3,77	С	С	Да
5а	744,2	742,1	4,05	С	-	Да
6а	744,2	742,3	3,94	С	-	Да
7а	730,2	728,3	3,90	С	С	Да

Все документы, цитируемые здесь, включены в данный документ в качестве ссылки.

Claims

1. Соединение формулы I:

или его фармацевтически приемлемая соль,
где X и X' независимо представляют собой С(Н) или S; и X и X' взяты вместе с атомом углерода, с которым они связаны, образуют 5-7-членное насыщенное кольцо, имеющее до 2 гетероатомов, представляют собой S;
Y и Y' независимо представляют собой водород,
R₁ и R₃ независимо представляют собой
(С1-С6)-алкильную группу,
(С3-С10)-циклоалкил-,
R₂, R₄ и R₇ представляют собой, независимо, водород-,
R₅ и R_5' независимо представляют собой водород или (С1-С6)-алкильную группу;
W представляет собой

,
где каждый R₆ независимо представляет собой
водород-,
(С3-С10)циклоалкил-;
V представляет собой валентную связь; и
Т представляет собой (С5-С6)-гетероарил-, представляющий собой моноциклическую кольцевую ароматическую систему, имеющую до 4 гетероатомов, представляющих собой N;
где каждый Т необязательно замещен заместителями J в количестве до 3;
где J представляет собой -C(O)R', R';
R' представляет собой (С1-С6)-алкильную группу.

2. Соединение по п.1, где

радикалом является

,
где n является 0, 1 или 2;
X, X', Y и Y' являются такими, как определено в п.1; и
кольцо, содержащее X и X', необязательно замещено заместителями J в количестве до 3, где J является таким, как определено в п.1.

3. Соединение по п.2, где

радикалом является

;

где n является 0, 1 или 2;
Y и Y' являются такими, как определено в п.1; и
кольцо, содержащее X и X', необязательно замещено заместителями J в количестве до 3, где J является таким, как определено в п.1.

4. Соединение по п.3, где

радикалом является

где n является 0 или 1; и
Y и Y' являются Н.

5. Соединение по п.4, где

радикалом является

где n является 0 или 1; и
Y и Y' являются H.

6. Соединение по любому из пп.1-5, где W представляет собой

,
где в W NR₆R₆ выбирают из -NH2 или -NH-(C3-C10циклоалкила).

7. Соединение по п.6, где в W NR₆R₆ представляет собой

8. Соединение по п.1, где R_5' представляет собой Н, и R₅ представляет собой

или

.

9. Соединение по п.1, где R₂, R₄ и R₇ независимо представляют собой Н.

10. Соединение по п.1, где R₃ представляет собой

,

или

.

11. Соединение по п.10, где R₃ представляет собой

,

или

.

12. Соединение по п.11, где R₃ представляет собой

или

.

13. Соединение по п.1, где R₁ представляет собой

,

,
или

.

14. Соединение по п.13, где R₁ представляет собой

,

, или

.

15. Соединение по п.14, где R₁ является циклогексилом.

16. Соединение по п.1, где V является валентной связью.

17. Соединение по п.16, где Т представляет собой (С5-С6)гетероарил-, и где каждый Т необязательно замещен заместителями J в количестве до 3.

18. Соединение по п.17, где Т представляет собой

,

,
где Z независимо представляет собой NR' или C(R')₂.

19. Соединение по п.18, где Т представляет собой

или

.

20. Соединение по п.1, где соединение представляет

,

,

,

,

,

или

.

21. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль в количестве, эффективном для ингибирования сериновой протеазы; и приемлемый носитель, адъювант или наполнитель.

22. Композиция по п.21, где указанная композиция сформулирована для введения пациенту.

23. Способ ингибирования активности сериновой протеазы, включающий стадию контактирования указанной сериновой протеазы с соединением по п.1.

24. Способ по п.23, где указанная сериновая протеаза представляет собой HCV НС3 протеазу.

25. Способ по пп.23 и 24, где стадия контактирования включает стадию введения пациенту соединения по пп.1-20 в форме композиции по пп.21 и 22.

26. Способ устранения или снижения зараженности вирусом HCV биологического образца или медицинского или лабораторного оборудования, включающий стадию контактирования указанного биологического образца или медицинского или лабораторного оборудования с композицией по п.21.

27. Способ по п.26, где указанный образец или оборудование выбраны из крови, других жидкостей организма, биологических тканей, хирургического инструмента, хирургической одежды, лабораторного инструмента, лабораторной одежды, аппаратов для сбора крови или других жидкостей организма, и материалов для хранения крови или других жидкостей организма.