KR100629791B1 - Ｃ형 간염 억제제 펩타이드, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 약제학적 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 화학식 I의 화합물, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르, 및 C형 간염 바이러스(HCV) 감염을 치료하는데 있어서의 이의 용도에 관한 것이다.

화학식 I

위의 화학식 I에서,

a는 0 또는 1이고,

b는 0 또는 1이며,

Y는 H 또는 C_1-6 알킬이고,

B는 H, 아실 유도체 또는 설포닐 유도체이며,

W는 하이드록시 또는 N-치환된 아미노이다.

C형 간염 바이러스(HCV), 항바이러스 제제

Description

Ｃ형 간염 억제제 펩타이드, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 약제학적 조성물 {Hepatitis C inhibitor peptides, a process for preparing the same and a pharmaceutical composition comprising the same}

본 발명은 C형 간염 바이러스(HCV) 감염을 치료하기 위한 화합물, 조성물 및 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 신규한 펩타이드, 이의 동족체 및 중간체, 이들 펩타이드를 함유하는 약제학적 조성물 및 이들 펩타이드를 HCV 감염 치료에 사용하는 방법을 제공한다.

C형 간염 바이러스(HCV)는 전세계적으로 만연해 있는 수혈 후 및 집단-후천성 비-A형 및 비-B형 간염의 주요 병원체이다. 전세계적으로 1억 5천만명의 사람들이 이들 바이러스에 감염되어 있을 것으로 추정된다. 높은 비율의 보균자가 만성적으로 감염되어, 다수가 만성 간 질환, 소위 만성 C형 간염으로 진행되게 된다. 이러한 그룹은 또한 사망에 이르는 간경변, 간세포 암종 및 말기 암질환과 같은 심각한 간 질환의 위험이 높다.

HCV가 바이러스 상태로 존속하면서 높은 만성 간질환 발병율을 야기시키는 메카니즘에 대해서는 완전히 해명되지 않았다. 어떻게 HCV가 숙주 면역계와 상호작용하면서 이를 피해가는지에 대해서도 공지된 바 없다. 또한, HCV 감염 및 질환 으로부터 보호하기 위한 세포성 및 체액성 면역 반응의 역할에 대해서도 확립된 바 없다. 면역 글로불린이 수혈과 관련된 바이러스성 간염을 예방하는 것으로 보고되었다. 그러나, 최근 질병 방지 센터(The Center for Disease Control)는 이러한 목적으로 면역 글로불린을 권장하고 있지는 않다.

효과적인 보호 면역 반응의 결핍은 백신 또는 적당한 후-노출 예방 조치의 개발을 방해하므로, 가까운 시일내에 항바이러스 개재가 강력하게 요구되고 있다.

만성 C형 간염을 앓고 있는 환자에서 HCV 감염을 효과적으로 치료할 수 있는 약제의 동정을 목표로 하는 다양한 임상 연구들이 수행되었다. 이러한 연구들은 인터페론-α를 단독으로 또는 다른 항바이러스 제제와 함께 사용함을 포함한다. 이러한 연구에서는, 상당한 수의 참가자들이 이러한 치료법에 반응을 나타내지 않았으며, 우호적인 반응을 보인 참가자들 중에서도 대부분이 치료를 중단한 후에는 재발된 것으로 나타났다.

최근까지도, 인터페론(IFN)이 만성 C형 간염 환자를 위한 클리닉에서 승인되어 유리한 것으로 입증된 유일한 이용가능한 치료법이었다. 그러나, 지속되는 반응 속도가 느리고, 인터페론 치료시에도 치료받은 환자의 삶의 질을 떨어뜨리는 심각한 부작용(예를 들어, 망막증, 갑상선염, 급성 췌장염, 우울증)이 야기된다. 최근, 인터페론과 리바비린과의 병용이 IFN 단독품에는 반응하지 않는 환자들에게 승인되었다. 그러나, IFN에 의해 야기되는 부작용은 이러한 병용 요법에서도 완화되지 않는다.

따라서, 현존 약제학적 치료법의 한계를 극복하여 HCV 감염을 치료하는데 효 과적인 항바이러스 제제의 개발이 여전히 요구되고 있다.

HCV는 플라비비리다에(Flaviviridae) 과의 피막으로 둘러싸인 포지티브 스트랜드 RNA 바이러스이다. 일본쇄 HCV RNA 게놈의 길이는 약 9500개의 뉴클레오타이드에 해당하며, 약 3000개의 아미노산으로 이루어진 단일 거대 폴리단백질을 암호화하는 단일 오픈 리딩 프레임(ORF)을 갖는다. 감염된 세포에서, 이러한 폴리단백질이 세포성 및 바이러스성 프로테아제에 의해 다수 부위에서 절단되어 구조 또는 비-구조(NS) 단백질이 생성된다. HCV의 경우, 성숙한 비-구조 단백질(NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A 및 NS5B)의 생성이 2가지 바이러스성 프로테아제에 의해 영향을 받는다. 아직 충분하게 특성화되지는 않았지만, 제1 바이러스성 프로테아제는 NS2-NS3 접합부를 절단하고, 제2 바이러스성 프로테아제는 NS3의 N-말단 영역내에 함유된 세린 프로테아제(이하, NS3 프로테아제라고 함)로서 NS3 다운스트림의 모든 후속적인 절단을 매개하여 NS3-NS4A 절단 부위에서 시스 형으로, 나머지 NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B 부위에서 트랜스 형으로 절단을 매개한다. NS4A 단백질은, NS3 프로테아제의 조인자로서 작용하고 가능하게는 NS3 및 다른 바이러스성 복제효소 성분의 막 위치결정을 보조하는, 다수의 작용을 수행하는 것으로 보인다. 모든 부위에서의 단백질 분해 효능을 강화시키기 위해 프로세싱하고자 하는 경우에는 NS3 단백질과 NS4A의 복합체 형성이 필요할 것으로 보인다. NS3 단백질은 또한 뉴클레오사이드 트리포스파타제 및 RNA 헬리카제 활성을 나타낸다. NS5B는 HCV의 복제에 관여하는 RNA-의존성 RNA 폴리머라제이다.

항바이러스 제제를 개발하기 위한 일반적인 방법은 바이러스 복제에 필수적인 바이러스에 의해 암호화된 효소를 불활성화시키는 것이다. 이러한 방법으로, 국제공개공보 제97/06804호에는 HCV에 대한 활성 물질로서 뉴클레오사이드 동족체인 시토신-1,3-옥사티올란(3TC로도 공지되어 있음)의 (-) 에난티오머가 기재되어 있다. 이들 화합물이 HIV 및 HBV에 대한 이전의 임상 시험에서 안정한 것으로 보고되기는 하였지만, HCV에 대해 활성을 나타내는지의 여부에 대해서는 아직 임상적으로 판명되지 않았고, 바이러스에 대한 이의 작용 메카니즘도 아직 보고된 바 없다.

HCV의 NS3 프로테아제 또는 RNA 헬리카제를 억제하는 화합물을 발견하기 위한 각고의 노력들이 다음과 같은 문헌들에 기재되어 있다:

미국 특허공보 제5,633,388호에는 HCV에 대해 활성을 나타내는 헤테로사이클릭-치환된 카복스아미드 및 이의 동족체가 기재되어 있다. 이들 화합물은 바이러스의 NS3 단백질의 헬리카제 활성에 직접 작용하지만, 아직 임상 시험에 대한 보고는 없다.

문헌[참조: Chu et al., Tet. Lett., (1996), 7229-7232]에는 페난트렌퀴논이 시험관내에서 HCV NS3 프로테아제에 대해 활성을 나타내는 것으로 보고되어 있다. 이러한 화합물에 대한 추가의 개발은 보고된 바 없다.

제9회 국제 항바이러스 연구 협의회에 제출된 논문[참조: The Ninth International Conference on Antiviral Research, Urabandai, Fukyshima, Japan (1996)(Antiviral Research, 30, 1, 1996, A23(abstract 19)]에서 티아졸리딘 유도체가 HCV 프로테아제를 억제하는 것으로 보고되어 있다.

몇가지 연구에서, 사람 백혈구 엘라스타제와 같은 다른 세린 프로테아제를 억제하는 화합물들이 보고되었다. 이들 화합물의 한가지 그룹이 국제공개공보 제95/33764호(Hoechst Marion Roussel, 1995)에 보고되어 있다. 이들 특허 문헌에 기재되어 있는 펩타이드는 본 발명의 펩타이드와 구조가 상이한 모르폴리닐카보닐-벤조일-펩타이드 동족체이다.

국제공개공보 제98/17679호(Vertex Pharmaceuticals Inc.)에는 세린 프로테아제, 특히 C형 간염 바이러스 NS3 프로테아제의 억제제가 기재되어 있다. 이들 억제제는 NS5A/5B 천연 기재를 기본으로 하는 펩타이드 동족체이다. 이들 펩타이드는 전부 필수적인 특징으로서 C-말단 활성화된 카보닐 작용기를 갖는다. 이들 펩타이드는, 또한 다른 세린 프로테아제에 대해서도 활성을 나타내는 것으로 보고되었기 때문에, HCV NS3 프로테아제에 대해 특이적인 것은 아니다.

호프만 라로슈(Hoffman LaRoche)는 또한 HCV 감염을 치료하기 위한 항바이러스 제제로서 유용한 프로테아제 억제제인 헥사펩타이드를 보고하였다. 이들 펩타이드는 C-말단에 알데히드 또는 보론산을 함유한다.

문헌[참조: Steinkuhler et al., and Ingallinella et al., Biochemistry(1998), 37, 8899-8905 and 8906-8914]에 N-말단 분해 생성물 억제에 대해 발표되어 있다. 그러나, 제시되어 있는 펩타이드 및 펩타이드 동족체는 본 발명의 펩타이드를 포함하지 않을 뿐만 아니라, 본 발명의 펩타이드 구조를 나타내지 않는다.

국제공개공보 제98/46597호(Emory University)에는 세린 프로테아제 억제제, 특히 C형 간염 바이러스 프로테아제가 기재되어 있다. 기재되어 있는 화합물은 모두 본 발명의 펩타이드와 구조가 상이하다.

국제공개공보 제98/46630호(Peptide Therapeutics Ltd.)에는 C형 간염 NS3 프로테아제 억제제가 기재되어 있다. 그러나, 기재되어 있는 펩타이드 중 어떠한 것도 본 발명의 펩타이드와 관련이 없다.

일본 특허공보 제10298151호(Japan Energy Corp.)에는 세린 프로테아제 억제제, 특히 C형 간염 바이러스성 프로테아제 억제제로서 N-(2,3-디하이드록시벤조일)-치환된 세린 유도체가 기재되어 있다. 이들 화합물은 본 발명의 펩타이드 동족체와 구조적 유사성이 전혀 없다.

본 발명의 한가지 잇점은 C형 간염 바이러스의 NS3 프로테아제를 억제하는 펩타이드를 제공하는 것이다.

본 발명의 한가지 양태의 추가의 잇점은, 이들 펩타이드가 특정하게 NS3 프로테아제를 억제하지만, 사람 백혈구 엘라스타제(HLE), 돼지 췌장 엘라스타제(PPE) 또는 소 췌장 키모트립신과 같은 다른 세린 프로테아제 또는 사람 간 카텝신 B(Cat B)와 같은 시스테인 프로테아제에 대해서는 300μM 이하의 농도에서 유의적인 억제 활성을 나타내지 않는다는 점에 있다.

발명의 요지

화학식 I의 화합물, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르의 라세미체, 부분입체 이성체 및 광학 이성체가 본 발명의 범위내에 포함된다.

위의 화학식 I에서,

a는 0 또는 1이고,

b는 0 또는 1이며,

Y는 H 또는 C_1-6 알킬이고,

B는 H, 화학식 R₇-C(O)-의 아실 유도체 또는 화학식 R₇-SO₂의 설포닐(여기서, R₇은 (i) 치환되지 않거나 카복실, C_1-6 알카노일옥시 또는 C_1-6 알콕시로 치환된 C_1-10 알킬, (ii) 치환되지 않거나 카복실, (C_1-6 알콕시)카보닐 또는 페닐메톡시카보닐로 치환된 C_3-7 사이클로알킬, (iii) 치환되지 않거나 C_1-6 알킬, 하이드록시, 또는 치환되지 않거나 C_1-6 알킬로 치환된 아미노로 치환된, C₆ 또는 C₁₀ 아릴 또는 C_7-16 아르알킬, 또는 (iv) 치환되지 않거나 C_1-6 알킬, 하이드록시, 치환되지 않거나 C_1-6 알킬로 치환된 아미노, 또는 치환되지 않거나 C_1-6 알킬로 치환된 아미도로 치환된, Het이다)이며,

R₆은, 존재할 경우, 카복실로 치환된 C_1-6 알킬이고,

R₅는, 존재할 경우, 치환되지 않거나 카복실로 치환된 C_1-6 알킬이며,

R₄는 C_1-10 알킬, C_3-7 사이클로알킬 또는 C_4-10 (알킬사이클로알킬)이고,

R₃은 C_1-10 알킬, C_3-7 사이클로알킬 또는 C_4-10 (알킬사이클로알킬)이며,

R₂는 CH₂-R₂₀, NH-R₂₀, O-R₂₀ 또는 S-R₂₀[여기서, R₂₀은 치환되지 않거나 R₂₁로 일치환, 이치환 또는 삼치환된, 포화 또는 불포화 C_3-7 사이클로알킬 또는 C_4-10 (알킬 사이클로알킬); 치환되지 않거나 R₂₁로 일치환, 이치환 또는 삼치환된, C₆ 또는 C₁₀ 아릴 또는 C_7-16 아르알킬; 또는 치환되지 않거나 R₂₁로 일치환, 이치환 또는 삼치환된, Het 또는 (저급 알킬)-Het{여기서, R₂₁은 각각 독립적으로 C_1-6 알킬; C_1-6 알콕시; 치환되지 않거나 C_1-6 알킬로 일치환 또는 이치환된 아미노; 설포닐; NO₂; OH; SH; 할로; 할로알킬; 치환되지 않거나 C_1-6 알킬, C₆ 또는 C₁₀ 아릴, C_7-16 아르알킬, Het 또는 (저급 알킬)-Het로 일치환된 아미도; 카복실; 카복시(저급 알킬); C₆ 또는 C₁₀ 아릴, C_7-16 아르알킬 또는 Het이고, 여기서, 아릴, 아르알킬 또는 Het는 치환되지 않거나 R₂₂로 치환된다(여기서, R₂₂는 C_1-6 알킬; C_1-6 알콕시; 치환되지 않거나 C_1-6 알킬로 일치환 또는 이치환된 아미노; 설포닐; NO₂; OH; SH; 할로; 할로알킬; 카복실; 아미드; 또는 (저급 알킬)아미드이다)}이다]이고,

R₁은 치환되지 않거나 할로겐으로 치환된 C_1-6 알킬 또는 C_2-6 알케닐이며,

W는 하이드록시 또는 N-치환된 아미노이다.

항-C형 간염 바이러스 유효량의 화학식 I의 화합물, 치료학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르를 약제학적으로 허용되는 담체 매질 또는 보조제와 배합된 상태로 포함하는 약제학적 조성물도 본 발명의 범위내에 포함된다.

본 발명의 중요한 양태는 항-C형 간염 바이러스 유효량의 화학식 I의 화합물, 치료학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르, 또는 상기한 조성물을 포유 동물에게 투여하여, 포유 동물에서 C형 간염 바이러스 감염을 치료하는 방법을 포함한다.

본 발명의 또 다른 중요한 양태는 바이러스를 C형 간염 바이러스성 NS3 프로테아제 억제량의 화학식 I의 화합물, 치료학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르, 또는 상기한 조성물에 노출시켜, C형 간염 바이러스의 복제를 억제하는 방법을 포함한다.

본 발명의 또 다른 양태는 항-C형 간염 바이러스 유효량의 화학식 I의 화합물, 치료학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르와 인터페론의 배합물을 포유 동물에게 투여하여, 포유 동물에서 C형 간염 바이러스 감염을 치료하는 방법을 포함한다. 상기한 배합물을 약제학적으로 허용되는 담체 매질 또는 보조제와 배합된 상태로 포함하는 약제학적 조성물도 본 발명의 범위내에 포함된다.

정의

본원에서 사용되는 용어는 달리 언급하지 않는 한, 다음의 용어에 대해 다음 의 정의를 적용한다.

라디칼, 예를 들어, 화학식 I의 화합물의 R₄의 배위를 나타내기 위해 (R) 또는 (S)를 사용하는 경우, 이는 라디칼만을 기준으로 하는 것이 아니라 화합물을 기준으로 하여 나타낸다.

글리신을 제외한 천연 아미노산은 키랄성 탄소원자를 갖는다. 달리 구체적으로 명시하지 않는 한, 천연 아미노산을 L-배위로 함유하는 화합물이 바람직하다. 그러나, 출원인은, 명시한 경우, 화학식 I의 몇가지 아미노산이 D- 또는 L-배위일 수 있거나, 라세미체 혼합물을 포함한 D- 또는 L-이성체의 혼합물일 수 있다고 간주한다.

본원에서 사용되는 "P1, P2, P3 등"은 펩타이드 동족체의 C-말단으로부터 출발하여 N-말단으로 전개되어 있는 아미노산 잔기의 위치를 나타낸다(즉, P1은 C-말단에서 첫번째 위치, P2는 C-말단에서 2번째 위치 등)[참조: Berger A. & Schechter I., Transactions of the Royal Society London series B257, 249-264(1970)].

α-아미노산의 약자가 표 A에 기재되어 있다.

아미노산	기호
알라닌	Ala
아스파르트산	Asp
시스테인	Cys
사이클로헥실글리신 (2-아미노-2-사이클로헥실아세트산)	Chg
글루탐산	Glu
이소로이신	Ile
로이신	Leu
페닐알라닌	Phe
프롤린	Pro
발린	Val
3급-부틸글리신	Tbg

본원에서 사용되는 용어 "1-아미노사이클로프로필-카복실산"(Acca)은 화학식

의 화합물을 나타낸다.

본원에서 사용되는 용어 "3급-부틸글리신"(Tbg)은 화학식

의 화합물을 나타낸다.

아미노산 또는 아미노산 유도체와 관련하여, 용어 "잔기"는 카복시 그룹의 하이드록실 및 α-아미노 그룹로부터 1개의 수소를 제거함으로써 상응하는 α-아미노산으로부터 유도되는 라디칼을 나타낸다. 예를 들어, 용어 Gln, Ala, Gly, Ile, Arg, Asp, Phe, Ser, Leu, Cys, Asn, Sar 및 Tyr은 각각 L-글루타민, L-알라닌, 글리신, L-이소로이신, L-아르기닌, L-아스파르트산, L-페닐알라닌, L-세린, L-로이신, L-시스테인, L-아스파라긴, 사르코신 및 L-티로신을 나타낸다.

아미노산 또는 아미노산 잔기와 관련하여, 용어 "측쇄"는 α-아미노산의 α-탄소원자에 부착된 그룹을 나타낸다. 예를 들어, 글리신의 경우 R-그룹 측쇄는 수소이고, 알라닌의 경우 메틸이며, 발린의 경우 이소프로필이다. α-아미노산의 특정한 R-그룹 또는 측쇄에 대해서는, 문헌[참조: A.L. Lehninger's text on Biochemistry, chapter 4]을 참조한다.

본원에서 사용되는 용어 "할로"는 브로모, 클로로, 플루오로 또는 요오도로부터 선택되는 할로겐 라디칼을 나타낸다.

본원에서 사용되는 용어 "C_1-6 알킬" 또는 "(저급)알킬"은 단독으로 또는 다른 라디칼과 함께, 탄소수 6 이하의 직쇄 또는 측쇄 알킬 라디칼을 나타내며, 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 헥실, 1-메틸에틸, 1-메틸프로필, 2-메틸프로필 및 1,1-디메틸에틸(예를 들어, 3급-부틸)을 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "C_3-7 사이클로알킬"은 단독으로 또는 다른 라디칼과 함께, 탄소수 3 내지 7의 사이클로알킬 라디칼을 나타내며, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 및 사이클로헵틸을 포함한다.

용어 "불포화 사이클로알킬"는, 예를 들어, 화학식

의 사이클로헥세닐을 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "C_4-10 (알킬사이클로알킬)"은 탄소수 10 이하의 알킬 라디칼에 결합된 탄소수 3 내지 7의 사이클로알킬 라디칼을 나타내며, 예를 들어, 사이클로프로필메틸, 사이클로펜틸에틸, 사이클로헥실메틸, 사이클로헥실에틸 또는 사이클로헵틸에틸이다.

본원에서 사용되는 용어 "C_2-10 알케닐"은 단독으로 또는 다른 라디칼과 함께, 하나 이상의 이중 결합을 추가로 포함하는 위에서 정의한 바와 같은 탄소수 2 내지 10의 알킬 라디칼을 나타낸다. 예를 들어, 알케닐에는 알릴 및 비닐이 포함된다.

본원에서 사용되는 용어 "C_1-6 알카노일"은 단독으로 또는 다른 라디칼과 함께, 탄소수 1 내지 6의 직쇄 또는 측쇄 1-옥소알킬 라디칼을 나타내며, 포르밀, 아세틸, 1-옥소프로필(프로피오닐), 2-메틸-1-옥소프로필, 1-옥소헥실 등을 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "C_1-6 알콕시"는 단독으로 또는 다른 라디칼과 함께, 화학식 -O(C_1-6 알킬)의 라디칼(여기서, 알킬은 탄소원자를 1 내지 6개 함유하는 것으로 위에서 정의한 바와 같다)을 나타낸다. 알콕시에는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 1-메틸에톡시, 부톡시 및 1,1-디메틸에톡시가 포함된다. 후자의 라디칼은 3급-부톡시라고 통상적으로 공지되어 있다.

본원에서 사용되는 용어 "C_3-7 사이클로알콕시"는 단독으로 또는 다른 라디칼과 함께, 예를 들어,

와 같은 산소원자에 결합된 C_3-7 사이클로알킬 그룹을 나타낸다.

본원에서 사용되는 용어 "C₆ 또는 C₁₀ 아릴"은 단독으로 또는 다른 라디칼과 함께, 탄소수 6의 방향족 모노사이클릭 그룹 또는 탄소수 10의 방향족 비사이클릭 그룹을 나타낸다. 예를 들어, 아릴은 페닐, 1-나프틸 또는 2-나프틸을 나타낸다.

본원에서 사용되는 용어 "C_7-16 아르알킬"은 단독으로 또는 다른 라디칼과 함께, 위에서 정의한 바와 같은 탄소수 1 내지 6의 알킬 그룹에 결합되어 있는 상기한 바와 같은 C₆ 또는 C₁₀ 아릴을 나타낸다. C_7-16 아르알킬은, 예를 들어, 벤질, 부틸페닐 및 1-나프틸메틸을 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "아미노 아르알킬"은 단독으로 또는 다른 라디칼과 함께, 예를 들어, 화학식

의 아미노 아르알킬과 같이 C_7-16 아르알킬 그룹으로 치환된 아미노 그룹을 나타낸다.

본원에서 사용되는 용어 "카복시(저급)알킬"은 단독으로 또는 다른 라디칼과 함께, 상기한 바와 같은 (저급)알킬 그룹을 통해 연결된 카복실 그룹(COOH)를 나타내며, 예를 들어, 부티르산을 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "헤테로사이클" 또는 "Het"는 단독으로 또는 다른 라디칼과 함께, 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 1 내지 4개의 헤테로원자를 갖는 5원, 6원 또는 7원 포화 또는 불포화 헤테로사이클로부터 수소를 제거하여 유도되는 1가 라디칼을 나타낸다. 또한, 본원에서 사용되는 "Het"는, 헤테로사이클 또는 임의의 다른 사이클인 하나 이상의 다른 사이클에 융합된 위에서 정의한 바와 같은 헤테로사이클을 의미한다. 적합한 헤테로사이클의 예로는 피롤리딘, 테트라 하이드로푸란, 티아졸리딘, 피롤, 티오펜, 디아제핀, 1H-이미다졸, 이속사졸, 티아졸, 테트라졸, 피페리딘, 1,4-디옥산, 4-모르폴린, 피리딘, 피리미딘, 티아졸로[4,5-b]피리딘, 퀴놀린, 인돌 또는 화학식

의 헤테로사이클이 포함된다.

본원에서 사용되는 용어 "(저급 알킬)-Het"는 쇄 또는 측쇄 알킬 그룹을 통해 연결된 위에서 정의한 바와 같은 헤테로사이클릭 라디칼(여기서, 알킬은 탄소원자를 1 내지 6개 갖는 것으로 위에서 정의한 바와 같다)을 나타낸다. (저급 알킬)-Het의 예로는 화학식

이 포함된다.

본원에서 사용되는 용어 "약제학적으로 허용되는 에스테르"는 단독으로 또는 다른 라디칼과 함께, 분자의 카복실 작용 그룹 중의 어떠한 것, 바람직하게는 카복시 말단이 화학식

의 알콕시카보닐 작용 그룹으로 대체된 화학식 I의 화합물의 에스테르[여기서, 에스테르의 R 잔기는 알킬(예: 메틸, 에틸, n- 프로필, t-부틸, n-부틸), 알콕시알킬(예: 메톡시메틸), 알콕시아실(예: 아세톡시메틸), 아르알킬(예: 벤질), 아릴옥시알킬(예: 페녹시메틸) 및 아릴(예: 페닐)로부터 선택되며, 임의로 할로겐, C_1-4 알킬 또는 C_1-4 알콕시로 치환된다]를 나타낸다. 다른 적합한 프로드럭 에스테르는 본원에 참고로 인용되어 있는 문헌[참조: Design of prodrugs, Bundgaard, H. Ed. Elsevier(1985)]에서 찾아볼 수 있다. 이러한 약제 학적으로 허용되는 에스테르는 포유 동물에게 주사할 경우 생체내에서 통상적으로 가수분해되어 화학식 I의 화합물의 산 형태로 변형된다.

상기한 에스테르와 관련하여, 달리 언급하지 않는 한, 존재하는 모든 알킬 잔기의 탄소수는 유리하게는 1 내지 16, 특히 1 내지 6이다. 이러한 에스테르에 존재하는 모든 아릴 잔기는 유리하게는 페닐 그룹을 포함한다.

특히, 에스테르는 C_1-6 알킬 에스테르, 비치환된 벤질 에스테르, 또는 하나 이상의 할로겐, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 니트로 또는 트리플루오로메틸로 치환된 벤질 에스테르일 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "약제학적으로 허용되는 염"은 약제학적으로 허용되는 염기에서 유도되는 것이다. 적합한 염기의 예로는 콜린, 에탄올아민 및 에틸렌디아민이 포함된다. Na⁺, K⁺ 및 Ca⁺⁺ 염도 본 발명의 범위내에 포함되는 것으로 간주된다[참조: 본원에 참고로 인용되어 있음; Pharmaceutical salts, Birge, S.M. et al., J. Pharm. Sci. (1977), 66, 1-19].

바람직한 양태

B가 바람직하게는 R₇-SO₂[여기서, R₇은 바람직하게는 C₆ 또는 C₁₀ 아릴, C_7-16 아르알킬 또는 Het(여기서, 이들은 모두 C_1-6 알킬로 임의로 치환될 수 있다)이다]인 화학식 I의 화합물이 본 발명의 범위내에 포함된다.

또한, B는 바람직하게는 H 또는 화학식 R₇C(O)-의 아실 유도체(여기서, R₇은 바람직하게는 C_1-6 알킬; C_1-6 알콕시; 치환되지 않거나 하이드록시로 치환된 C_3-7 사이클로알킬; 치환되지 않거나 C_1-6 알킬 또는 Het로 치환된 아미도; 치환되지 않거나 C_1-6 알킬 또는 하이드록시로 치환된, C₆ 또는 C₁₀ 아릴, C_7-16 아르알킬 또는 Het이다)이다. 보다 바람직하게는, B는 H 또는 화학식 R₇C(O)-(여기서, R₇은 보다 바람직하게는 C_1-6 알킬 또는 화학식

의 헤테로사이클이다)이다.

가장 바람직하게는, B는 H, 아세틸, 화학식

이다.

보다 더 바람직하게는, B는 아세틸이다.

존재할 경우, R₆이 바람직하게는 Asp 또는 Glu의 측쇄인 화학식 I의 화합물이 본 발명의 범위내에 포함된다. R₆이, 존재할 경우, Asp의 측쇄인 것이 가장 바람직하다. 또는, 바람직하게는, a가 0이고, R₆은 존재하지 않는다.

바람직하게는, R₅가, 존재할 경우, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Val, L- Val, D-3급-부틸글리신(Tbg) 및 L-Tbg로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산의 측쇄인 화학식 I의 화합물이 본 발명의 범위내에 포함된다. 보다 바람직하게는, R₅은, 존재할 경우, D-Asp, D-Val 또는 D-Glu의 측쇄이다. 존재할 경우, R₅가 D-Glu의 측쇄인 것이 가장 바람직하다. 또는, a가 0이고, b가 0이며, R₆과 R₅가 둘 다 존재하지 않는다.

바람직하게는, R₄가, Val, 사이클로헥실글리신(Chg), Tbg, Ile 또는 Leu으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산의 측쇄인 화학식 I의 화합물이 본 발명의 범위내에 포함된다. R₄가 Chg 또는 Ile의 측쇄인 것이 보다 바람직하다. R₄가 Chg의 측쇄인 것이 가장 바람직하다.

바람직하게는, Y가 H 또는 Me인 화학식 I의 화합물이 본 발명의 범위내에 포함된다. 가장 바람직하게는, Y는 H이다.

바람직하게는, R₃이, Ile, Chg, Val 또는 Tbg로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산의 측쇄인 화학식 I의 화합물이 본 발명의 범위내에 포함된다. R₃이 Val, Chg 또는 Tbg의 측쇄인 것이 보다 바람직하다. R₃이 Val 또는 Tbg의 측쇄인 것이 가장 바람직하다.

바람직하게는, R₂가 S-R₂₀ 또는 O-R₂₀인 화학식 I의 화합물(여기서, R₂₀은 바람직하게는, 치환되지 않거나 R₂₁로 일치환, 이치환 또는 삼치환된, C₆ 또는 C₁₀ 아릴, C_7-16 아르알킬, Het 또는 -CH₂-Het이다)이 본 발명의 범위내에 포함된다.

바람직하게는, R₂₁은 C_1-6 알킬; C_1-6 알콕시; 아미노; 모노- 또는 디-(저급 알킬)아미노; 치환되지 않거나 C_1-6 알킬, C₆ 또는 C₁₀ 아릴, C_7-16 아르알킬, Het 또는 (저급 알킬)-Het로 일치환된 아미도; NO₂; OH; 할로; 트리플루오로메틸; 카복실; 또는 치환되지 않거나 R₂₂로 치환된, C₆ 또는 C₁₀ 아릴, C_7-16 아르알킬 또는 Het이다. 보다 바람직하게는, R₂₁은 C_1-6 알킬; C_1-6 알콕시; 아미노; 디-(저급 알킬)아미노; (저급 알킬)아미드; C₆ 또는 C₁₀ 아릴, 또는 Het(여기서, 아릴 또는 Het는 R₂₂로 임의로 치환될 수 있다)이다.

바람직하게는, R₂₂는 C_1-6 알킬; C_1-6 알콕시; 아미노; 모노- 또는 디-(저급 알킬)아미노; (저급 알킬)아미드; NO₂; OH; 할로; 트리플루오로메틸; 또는 카복실이다. 보다 바람직하게는, R₂₂는 C_1-6 알콕시; 아미노; 디-(저급 알킬)아미노; (저급 알킬)아미드; 할로; 또는 트리플루오로메틸이다.

보다 바람직하게는, R₂는 치환되지 않거나 상기한 바와 같은 R₂₁로 일치환 또는 이치환된, 1-나프틸메톡시; 2-나프틸메톡시; 벤질옥시; 1-나프틸옥시; 2-나프틸옥시; 또는 퀴놀린옥시이다. 가장 바람직하게는, R₂는 치환되지 않거나 상기한 바와 같은 R₂₁로 일치환 또는 이치환된, 1-나프틸메톡시; 또는 퀴놀린옥시이다.

가장 바람직하게는, R₂는 화학식

이다.

보다 바람직하게는, R_21A는 치환되지 않거나 C_1-6 알킬, C₆ 또는 C₁₀ 아릴, C_7-16 아르알킬 또는 Het로 일치환된 아미도; 또는 치환되지 않거나 R₂₂로 치환된 C₆ 또는 C₁₀ 아릴, 또는 Het이다. 가장 바람직하게는, R_21A는 치환되지 않거나 R₂₂로 치환된, C₆ 또는 C₁₀ 아릴 또는 Het이다. 가장 바람직하게는, R₂₂는 아미노; 디(저급 알킬)아미노; 또는 (저급 알킬)아미드이다. 보다 더 바람직하게는, R₂₂는 아미노; 디메틸아미노; 또는 아세트아미도이다.

보다 더 바람직하게는, R_21A는 치환되지 않은, C₆ 또는 C₁₀ 아릴 또는 Het이다.

바람직하게는, R_21B는 C_1-6 알킬; C_1-6 알콕시; 아미노; 디(저급 알킬)아미노; (저급 알킬)아미드; NO₂; OH; 할로; 트리플루오로메틸; 또는 카복실이다. 보다 바람직하게는, R_21B는 C_1-6 알콕시; 또는 디(저급 알킬)아미노이다. 가장 바람직하게는, R_21B는 메톡시이다.

바람직하게는, R₁이 메틸, 에틸, 프로필 또는 비닐인 화학식 I의 화합물(여기서, 이들 치환체는 모두 할로로 임의로 치환될 수 있다)이 본 발명의 범위내에 포함된다. 보다 바람직하게는, R₁은 에틸, 비닐 또는 브로모비닐이다. 가장 바람직하게는, R₁은 비닐이다.

바람직하게는, W가 하이드록시, (저급 알킬)아미노, 디(저급 알킬)아미노 또는 아미노 아르알킬인 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르가 본 발명의 범위내에 포함된다. 보다 바람직하게는, W는 하이드록시 또는 N(R_13a)R_13b(여기서, R_13a 및 R_13b는 독립적으로 H, 아릴, 또는 치환되지 않거나 하이드록시 또는 페닐로 치환된 C_1-6 알킬이다) 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염이다. 가장 바람직하게는, W는 -OH, -NH-벤질 또는 -NH-CH(Me)Ph이다. 보다 더 바람직하게는, W는 -OH 또는 -NH-(S)CH(Me)-페닐이다.

W가 에스테르인 경우, 이들 에스테르는 바람직하게는 C_1-6 알콕시, 페녹시 또는 아릴(C_1-6 알콕시)로부터 선택된다. 보다 바람직하게는, 이들 에스테르는 메톡시, 에톡시, 페녹시, 벤질옥시 또는 PhCH(Me)-O-이다.

위에 기재한 바와 같이, 화학식 I의 화합물의 P1 단편은 화학식

의 사이클로프로필 환 시스템(여기서, C₁ 및 C₂는 각각 사이클로프로필 환의 1위치 및 2위치의 비대칭 탄소원자를 나타낸다)이다. 화학식 I의 화합물의 다른 단편에 그외의 가능한 비대칭 중심이 존재할 수도 있지만, 이러한 2개의 비대칭 중심의 존재는 화학식 I의 화합물이 부분입체 이성체의 라세미 혼합물로서 존재할 수 있음을 의미한다. 하기 실시예에 예시되어 있는 바와 같이, 라세미 혼합물을 제조한 다음, 이를 각각의 광학 이성체로 분할하거나 이들 광학 이성체를 키랄 합성법에 의해 제조할 수 있다.

따라서, 화학식 I의 화합물은, 2위치의 R₁이 1위치에서 카보닐에 syn으로 배향된 라디칼

의 부분입체 이성체의 라세미 혼합물로서 존재하거나, 2위치의 R₁이 1위치에서 카보닐에 anti로 배향된 라디칼

의 부분입체 이성체의 라세미 혼합물로서 존재할 수 있다.

또한, 라세미 혼합물을 각각의 광학 이성체로 분할할 수 있다.

본 발명의 가장 흥미로운 발견은 P1 단편의 공간 배향이다. 이러한 발견은 1위치에서의 비대칭 탄소의 배위에 관한 것이다. 바람직한 양태 중의 하나는 1위 치의 비대칭 탄소가 R 배위를 갖는 것이다.

보다 명료하게 설명하자면, C₁이 R 배위를 가질 경우, HCV NS3 프로테아제 억제능은 사이클로프로필 환의 C₂에서 치환체 R₁(예를 들어, 알킬 또는 알킬렌)의 위치에 의해 더욱 증강된다. 가장 바람직한 화합물은 아래의 절대 배위에서 syn 배향으로 R₁ 치환체 및 카보닐을 갖는 광학 이성체이다:

R₁이 에틸인 경우, 예를 들어, 1위치 및 2위치의 비대칭 탄소원자는 R,R 배위를 갖는다.

화합물의 효능에 미치는 치환체의 절대 배위의 역할을 설명하면, 절대 배위가 1R,2R인 화합물(112)(표 1 참조)의 IC₅₀은 1.6μM인데 반해, 상응하는 1S,2S 이성체(화합물(113))의 IC₅₀은 27.5μM이다. 따라서, 1R,2R 이성체는 상응하는 1S,2S 이성체보다 효능이 25배 높다.

추가로, B가 H, 저급 알킬-C(O)- 또는 Het-C(O)-이고,

R₆이, 존재할 경우, Asp 또는 Glu의 측쇄이며,

R₅가, 존재할 경우, D- 또는 L-: Asp, Glu, Val 또는 Tbg의 측쇄이고,

Y가 H 또는 메틸이며,

R₄가 Val, Chg, Tbg, Ile 또는 Leu의 측쇄이고,

R₃이 Ile, Chg, Val 또는 Tbg의 측쇄이며,

R₂가 1-나프틸메톡시, 2-나프틸메톡시, O-Bn,

(여기서, R₂₂는 아미노, 디(저급 알킬)아미노, (저급 알킬)아미드, NO₂, OH, 할로, CF₃ 또는 카복시이다)이고,

P1이 화학식

의 사이클로프로필 환 시스템(여기서, R₁은 에틸, 비닐 또는 브로모비닐이다)이며,

W가 하이드록시 또는 N(R_13a)R_13b(여기서, R_13a 및 R_13b는 독립적으로 H, 아릴, 또는 치환되지 않거나 하이드록시 또는 페닐로 치환된 C_1-6 알킬이다)인 화학식 I의 화합물, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르가 본 발명의 범위내에 포함된다.

추가의 바람직한 화합물 그룹은, B가 H, 아세틸 또는 Het-(CO)-이고, R₆이, 존재할 경우, Asp의 측쇄이며, R₅가, 존재할 경우, D-Asp, D-Glu 또는 D-Val의 측쇄이고, Y가 H이며, R₄가 Chg 또는 Ile의 측쇄이고, R₃이 Val, Chg 또는 Tbg의 측쇄이며, R₂가 1-나프틸메톡시, 벤질옥시, 4-퀴놀린옥시, 또는 화학식

이고, P1이 화학식

의 사이클로프로필 환 시스템(여기서, R₁은 Et, -CH=CH₂ 또는 -CH=CHBr이다)이며, W가 하이드록시 또는 -NH-(S)CH(Me)Ph인 화학식 I의 화합물, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르이다.

또 다른 추가의 바람직한 화합물 그룹은, B가 아세틸이고, R₆이, 존재할 경우, Asp의 측쇄이며, R₅가, 존재할 경우, D-Glu의 측쇄이고, Y가 H이고, R₄가 Chg의 측쇄이며, R₃이 Val 또는 Tbg의 측쇄이고, R₂가 화학식

이며, P1이 화학식

이고, W가 하이드록시인 화학식 I의 화합물, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르이다.

마지막으로, 표 1 내지 5에 기재되어 있는 각각의 화학식 I의 화합물도 본 발명의 범위내에 포함된다.

또 다른 양태에 따르면, 본 발명의 약제학적 조성물은 또 다른 항-HCV 제제를 추가로 포함할 수 있다. 항-HCV 제제의 예로는 α- 또는 β-인터페론, 리바비린 및 아만타딘이 포함된다.

또 다른 양태에 따르면, 본 발명의 약제학적 조성물은 HCV 프로테아제의 다른 억제제를 추가로 포함할 수 있다.

또 다른 양태에 따르면, 본 발명의 약제학적 조성물은 HCV 생활주기중의 헬리카제, 폴리머라제, 메탈로프로테아제 또는 내부 리보솜 유입 부위(IRES; internal ribosome entry site)와 같은 다른 표적물에 대한 억제제를 추가로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구적으로, 비경구적으로 또는 이식된 저장기를 통해 투여할 수 있다. 경구 투여 또는 주사에 의한 투여가 바람직하다. 본 발명의 약제학적 조성물은 통상의 약제학적으로 허용되는 무독성 담체, 보조제 또는 부형제를 함유할 수 있다. 몇가지 경우, 약제학적으로 허용되는 산, 염기 또는 완충액으로 제형의 pH를 조절하여 제형화된 화합물 또는 이의 전달 형태의 안정성을 높일 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "비경구"는 피하, 피내, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액내, 흉골내, 초내 및 병소내 주사 또는 주입 기법을 포함한다.

약제학적 조성물은 멸균 주사가능한 제제 형태, 예를 들어, 멸균 주사가능한 수성 또는 유성 현탁제일 수 있다. 이러한 현탁제는 적합한 분산제 또는 습윤제[예를 들어, Tween 80] 및 현탁제를 사용하여 당해 기술분야에 공지된 기법에 따라 제형화시킬 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 캡슐제, 정제 및 수성 현탁제 및 액제를 포함하지만 이에 제한되지 않는 모든 경구적으로 허용되는 투여 형태로 경구 투여할 수 있다. 경구 투여용 정제의 경우, 통상적으로 사용되는 담체로는 락토스 및 옥수수 전분이 포함된다. 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제도 전형적으로 첨가된다. 캡슐 형태로 경구 투여할 경우, 유용한 희석제로는 락토스와 건조된 옥수수 전분이 포함된다. 수성 현탁제를 경구 투여할 경우에는, 활성 성분을 유화제 및 현탁제와 배합시킨다. 경우에 따라, 특정의 감미제 및/또는 풍미제 및/또는 착색제를 가할 수 있다.

상기한 제형 및 조성물에 적합한 기타 부형제 또는 담체는 표준 약제학적 교재[참조: "Remington's Pharmaceutical Sciences", The Science and Practice of Pharmacy, 19^th Ed. Mack Publishing Company, Easton, Penn., (1995)]에서 찾아볼 수 있다.

체중 ㎏당 본원의 프로테아제 억제제 화합물 약 0.01 내지 약 100㎎, 바람직하게는 약 0.5 내지 약 75㎎의 1일 투여량 수준이 HCV 매개된 질환을 예방하고 치료하기 위한 단일요법에서 유용하다. 전형적으로, 본 발명의 약제학적 조성물은 1일 약 1 내지 약 5회 투여하거나, 또는 연속 주입법으로 투여한다. 이러한 투여법은 만성 또는 급성 요법으로서 사용할 수 있다. 담체 물질과 배합하여 1회 용량 형태를 제조할 수 있는 활성 성분의 양은 치료할 숙주 및 특정 투여 방식에 따라 달라진다. 전형적인 제제에는 약 5 내지 약 95%의 활성 화합물(w/w)이 함유되어 있다. 바람직하게는, 이러한 제제는 약 20 내지 약 80%의 활성 화합물을 함유한다.

숙련가들에게는 명백한 바와 같이, 상기한 양보다 낮거나 높은 투여량을 필요로 할 수도 있다. 특정 환자에 대한 특별한 용량 및 치료 섭생은 사용되는 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 전반적인 건강 상태, 성별, 식이, 투여 시간, 배출 속도, 약물 배합, 감염의 중증도 및 경과, 감염에 대한 환자의 소인 및 담당의의 견해를 포함하는 다양한 요인에 따라 좌우된다. 일반적으로, 실질적으로 펩타이드의 최적량보다 적은 양으로 치료를 개시한다. 그후, 치료 환경하에서 최적 효과에 도달할 때까지 투여량을 소량씩 늘린다. 일반적으로, 어떠한 위험하거나 유해한 부작용을 일으키지 않으면서 항바이러스적으로 유효한 결과를 제공하는 농도 수준으 로 화합물을 투여하는 것이 가장 바람직하다.

본 발명의 조성물이 화학식 I의 화합물과 하나 이상의 치료 또는 예방용 첨가제와의 배합물을 포함하는 경우, 당해 화합물과 첨가제는 둘 다 단일 치료 섭생에서 통상적으로 투여되는 용량의 약 10 내지 100%, 보다 바람직하게는 약 10 내지 80%의 수준으로 존재하여야 한다.

이러한 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 제형화시킨 다음, 생성된 조성물을 사람과 같은 포유 동물에게 생체내 투여하여, HCV NS3 프로테아제를 억제하거나 HCV 바이러스 감염을 치료 또는 예방할 수 있다. 이러한 치료는 본 발명의 화합물을, α-, β- 또는 γ-인터페론과 같은 면역조절제; 리바비린 및 아만타딘과 같은 다른 항바이러스 제제; 그외의 HCV NS3 프로테아제의 억제제; 헬리카제, 폴리머라제, 메탈로프로테아제 또는 리보솜 유입 부위(IRES)를 포함하지만 이에 제한되지 않는 HCV 생활주기중의 다른 표적물에 대한 억제제 또는 이들의 배합물을 포함하지만 이에 제한되지 않는 제제와 병용함으로써 성취할 수도 있다. 상기 첨가제를 본 발명의 화합물과 배합하여 1회 용량 형태를 제조할 수 있다. 또는, 이들 첨가제를 다수회 용량 형태의 일부로서 포유 동물에게 별도로 투여할 수도 있다.

따라서, 본 발명의 또 다른 양태는 화학식 I의 화합물(여기서, 치환체는 위에서 정의한 바와 같다)을 투여하여 포유 동물에서 HCV NS3 프로테아제를 억제하는 방법을 제공한다.

바람직한 양태에서, 이러한 방법은 포유 동물에서 HCV NS3 프로테아제 활성 을 감소시키는데 유용하다. 약제학적 조성물이 활성 성분으로서 단지 본 발명의 화합물만을 포함하는 경우에는, 면역조절제, 항바이러스 제제, HCV 프로테아제 억제제, 또는 헬리카제, 폴리머라제, 메탈로프로테아제 또는 IRES와 같은 HCV 생활주기중의 다른 표적물에 대한 억제제로부터 선택된 제제를 포유 동물에게 투여하는 단계를 이러한 방법에 추가로 포함시킬 수 있다. 이러한 첨가제는 본 발명의 조성물을 투여하기 전에, 동시에 또는 이후에 투여할 수 있다.

또 다른 바람직한 양태에서, 이러한 방법은 포유 동물에서 바이러스 복제를 억제하는데 유용하다. 이러한 방법은 HCV 질환을 치료 또는 예방하는데 유용하다. 약제학적 조성물이 활성 성분으로서 단지 본 발명의 화합물만을 포함하는 경우에는, 면역조절제, 항바이러스 제제, HCV 프로테아제 억제제, 또는 HCV 생활주기중의 다른 표적물에 대한 억제제로부터 선택된 제제를 포유 동물에게 투여하는 단계를 이러한 방법에 추가로 포함시킬 수 있다. 이러한 첨가제는 본 발명의 조성물을 투여하기 전에, 동시에 또는 이후에 투여할 수 있다.

상기한 화합물은 실험실용 시약으로서 사용할 수도 있다. 본 발명의 화합물을 사용하여, 물질이 바이러스로 오염되는 것을 치료 또는 예방할 수 있고, 이에 따라 이러한 물질(예를 들어, 혈액, 조직, 외과용 기구 및 의복, 실험 기구 및 실험복, 혈액 수집 장치 및 물질)과 접촉하는 실험원 또는 의료 요원 또는 환자의 바이러스 감염 위험을 낮출 수 있다.

본원에 기재된 화합물을 연구용 시약으로서 사용할 수도 있다. 본 발명의 화합물을 대용 세포계 검정 또는 시험관내 또는 생체내 바이러스 복제 검정의 유효 성을 입증하기 위한 포지티브 대조군으로서 사용할 수 있다.

공정

본 발명의 화합물을 반응식 I에 예시된 바와 같은 공정에 따라 합성한다.

(여기서, CPG는 카복실 보호 그룹이고, APG는 아미노 보호 그룹이다)

요약하면, P1, P2, P3, P4 및 임의로 P5 및 R6은 익히 공지된 펩타이드 커플링 기법으로 결합시킬 수 있다. P1, P2, P3, P4 및 P5와 P6 그룹은, 최종 화합물이 화학식 I의 펩타이드에 상응하는 한, 어떠한 순서로도 함께 결합시킬 수 있다. 예를 들어, P6을 P5에 결합시켜 P5-P6을 수득하고, 이를 P4-P3-P2-P1에 결합시키거나, P6을 P5-P4-P3-P2에 결합시킨 다음, 적합하게 C-말단 보호된 P1에 결합시킬 수 있다.

일반적으로, 펩타이드는 N-말단 잔기의 α-아미노 그룹을 탈보호하여, 다음 의 적합하게 N-보호된 아미노산의 보호되지 않은 카복실 그룹을 기술된 방법을 사용한 펩타이드 결합을 통해 커플링시킴으로써 연장된다. 이러한 탈보호 및 커플링 과정은 목적하는 서열이 수득될 때까지 반복한다. 이러한 커플링 공정은 구성 아미노산을 사용하여 반응식 I에 제시된 바와 같이 단계식으로 수행하거나 단편(2개 또는 수개의 아미노산)의 축합에 의해 수행하거나 이들 2가지 공정을 조합하여 수행하거나 본원에 참고로 인용되어 있는 문헌[참조: Merrifield, J. Am. Chem. Soc. (1963), 85, 2149-2154]에 본래 기재되어 있는 방법에 따라 고체 상 펩타이드 합성법에 의해 수행할 수 있다.

2개의 아미노산, 아미노산과 펩타이드, 또는 2개의 펩타이드 단편간의 커플링은 아지드 방법, 혼합 카본산-카복실산 무수물(이소부틸 클로로포르메이트) 방법, 카보디이미드(디사이클로헥실카보디이미드, 디이소프로필카보디이미드 또는 수용성 카보디이미드) 방법, 활성 에스테르(p-니트로페닐 에스테르, N-하이드록시석신산 이미도 에스테르) 방법, 우드워드(Woodward) 시약 K-방법, 카보닐디이미다졸 방법, 인 시약 또는 산화-환원 방법과 같은 통상의 커플링 과정을 사용하여 수행할 수 있다. 이러한 방법 중의 몇가지(특히, 카보디이미드 방법)를 1-하이드록시벤조트리아졸을 첨가하여 강화시킬 수 있다. 이러한 커플링 반응은 용액(액체 상) 또는 고체 상에서 수행할 수 있다.

보다 명백하게는, 커플링 단계는 어느 한가지 반응물의 유리 카복실을 커플링제의 존재하에서 다른 반응물의 유리 아미노 그룹과 탈수적 커플링시켜 연결 아미드 결합을 형성함을 포함한다. 이러한 커플링제에 대한 설명은 펩타이드 화학 분야의 일반적인 교재[참조: M. Bodanszky, "Peptide Chemistry", 2nd rev ed., Springer-Verlag, Berlin, Germany, (1993)]에서 찾아볼 수 있다. 적합한 커플링제의 예로는 N,N'-디사이클로헥실카보디이미드, N,N'-디사이클로헥실카보디이미드의 존재하의 1-하이드록시벤조트리아졸, 또는 N-에틸-N'-[(3-디메틸아미노)프로필]카보디이미드가 있다. 매우 실용적이고 유용한 커플링제는 시판되는 (벤조트리아졸-1-일옥시)트리스-(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 자체이거나 1-하이드록시벤조트리아졸의 존재하의 (벤조트리아졸-1-일옥시)트리스-(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트이다. 또 다른 매우 실용적이고 유용한 커플링제는 시판되는 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트이다. 그외의 다른 매우 실용적이고 유용한 커플링제는 시판되는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트이다.

커플링 반응은 불활성 용매, 예를 들어, 디클로로메탄, 아세토니트릴 또는 디메틸포름아미드 중에서 수행한다. 반응 혼합물의 pH를 약 8로 유지하기 위해, 과량의 3급 아민, 예를 들어, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린 또는 N-메틸피롤리딘을 가한다. 반응 온도는 통상적으로 0 내지 50℃이고, 반응 시간은 통상적으로 15분 내지 24시간이다.

고체 상 합성법을 사용할 경우, C-말단 카복실산을 불용성 담체(통상적으로 폴리스티렌)에 결합시킨다. 이들 불용성 담체는 카복실산 그룹과 반응하여 연장 조건에서는 안정하지만 후에 쉽게 절단되는 결합을 형성하는 그룹을 함유한다. 이의 예로는 클로로- 또는 브로모-메틸 수지, 하이드록시메틸 수지 및 아미노메틸 수지가 있다. 이들 수지 중 다수는 목적하는 C-말단 아미노산이 이미 혼입되어 있는 시판품이다. 또는, 아미노산을 공지된 방법으로 고체 지지체에 혼입시킬 수 있다[참조: Wang, S.S., J. Am. Chem. Soc. (1973), 95, 1328; Atherton, E.; Shepard, R.C. "Solid-phase peptide synthesis; a practical approach" IRL Press: Oxford, (1989), 131-148]. 상기한 것 이외에, 다른 펩타이드 합성법이 본원에 참고로 인용되어 있는 문헌[참조: Stewart 및 Young, "Solid Phase Peptide Synthesis", 2nd ed., Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984); Gross, Meienhofer, Udenfriend, Eds., "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", Vol. 1, 2, 3, 5 및 9, Academic Press, New York, (1980-1987); Bodansky et al., "The Practice of Peptide Synthesis" Springer-Verlag, New York (1984)]에 기재되어 있다.

바람직하지 않은 결합이 형성되는 것을 방지하기 위해서는 일반적으로 구성 아미노산의 작용 그룹을 커플링 반응 동안 보호해야 한다. 사용가능한 보호 그룹이 본원에 참고로 인용되어 있는 문헌[참조: Greene, "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley & Sons, New York (1981) 및 "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", Vol. 3, Academic Press, New York (1981)]에 열거되어 있다.

C-말단 잔기의 α-카복실 그룹은 통상적으로 분해될 경우, 카복실산을 제공하는 에스테르(CPG)로서 보호한다. 사용가능한 보호 그룹에는, (1) 메틸, 트리메 틸실릴에틸 및 t-부틸과 같은 알킬 에스테르, (2) 벤질 및 치환된 벤질과 같은 아르알킬 에스테르, 또는 (3) 온화한 염기 처리 또는 온화한 환원 수단에 의해 분해될 수 있는 트리클로로에틸 및 펜아실 에스테르와 같은 에스테르가 포함된다.

성장하는 펩타이드 쇄에 커플링되는 각각의 아미노산의 α-아미노 그룹은 보호해야 한다(APG). 당해 기술분야에 공지된 어떠한 보호 그룹이라도 사용할 수 있다. 이러한 그룹의 예로는, (1) 포르밀, 트리플루오로아세틸, 프탈릴 및 p-톨루엔설포닐과 같은 아실 그룹, (2) 벤질옥시카보닐(Cbz 또는 Z) 및 치환된 벤질옥시카보닐, 및 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc)과 같은 방향족 카바메이트 그룹, (3) 3급-부틸옥시카보닐(Boc), 에톡시카보닐, 디이소프로필메톡시카보닐 및 알릴옥시카보닐과 같은 지방족 카바메이트 그룹, (4) 사이클로펜틸옥시카보닐 및 아다만틸옥시카보닐과 같은 사이클릭 알킬 카바메이트 그룹, (5) 트리페닐메틸 및 벤질과 같은 알킬 그룹, (6) 트리메틸실릴과 같은 트리알킬실릴 그룹 및 (7) 페닐티오카보닐 및 디티오석시노일과 같은 티올 함유 그룹이 포함된다. 바람직한 α-아미노 보호 그룹은 Boc 또는 Fmoc이다. 펩타이드 합성을 위해 적합하게 보호된 다수의 아미노산 유도체들이 시판되고 있다.

새롭게 부가된 아미노산 잔기의 α-아미노 보호 그룹은 다음 아미노산을 커플링하기 전에 절단한다. Boc 그룹을 사용할 경우, 순수한 트리플루오로아세트산 또는 디클로로메탄 중의 트리플루오로아세트산, 또는 디옥산 중의 HCl 또는 에틸 아세테이트 중의 HCl에서 선택한다. 이어서, 생성된 암모늄염을 커플링하기 전에 또는 동일 반응계내에서 수성 완충액, 예를 들어, 디클로로메탄, 아세토니트릴 또 는 디메틸포름아미드 중의 3급 아민과 같은 염기성 용액으로 중화시킨다. Fmoc 그룹을 사용할 경우, 디메틸포름아미드 중의 피페리딘 또는 치환된 피페리딘 시약을 선택하지만, 어떠한 2급 아민이라도 사용할 수 있다. 탈보호는 0℃ 내지 실온(RT), 통상적으로 20 내지 22℃의 온도에서 수행한다.

측쇄 작용 그룹을 갖는 어떠한 아미노산이라도 상기한 그룹을 사용하여 펩타이드 제조 동안 보호해야 한다. 당해 기술분야의 통상의 숙련가들은 이러한 측쇄 작용 그룹에 대해 적합한 보호 그룹의 선택 및 사용이 펩타이드 중의 다른 보호 그룹의 존재 및 아미노산에 따라 좌우된다는 사실을 인지할 것이다. 이러한 보호 그룹을 α-아미노 그룹의 탈보호 및 커플링 동안 제거되지 않아야 한다는 사실에 입각하여 선택하는 것이 중요하다.

예를 들어, Boc를 α-아미노 보호 그룹으로 사용할 경우, 다음의 측쇄 보호 그룹이 적합하다: p-톨루엔설포닐(토실) 잔기는 Lys 및 Arg과 같은 아미노산의 아미노 측쇄를 보호하는데 사용할 수 있고, 아세트아미도메틸, 벤질(Bn) 또는 t-부틸설포닐 잔기는 시스테인의 설파이드 함유 측쇄를 보호하는데 사용할 수 있으며, 벤질(Bn) 에테르는 세린, 트레오닌 또는 하이드록시프롤린의 하이드록시 함유 측쇄를 보호하는데 사용할 수 있고, 벤질 에스테르는 아스파르트산 및 글루탐산의 카복시 함유 측쇄를 보호하는데 사용할 수 있다.

α-아민 보호용으로 Fmoc를 선택한 경우, 통상적으로 3급-부틸계 보호 그룹이 허용가능하다. 예를 들어, 리신 및 아르기닌의 경우에는 Boc를 사용할 수 있고, 세린, 트레오닌 및 하이드록시프롤린의 경우에는 3급-부틸 에테르를 사용할 수 있으며, 아스파르트산 및 글루탐산의 경우에는 3급-부틸 에스테르를 사용할 수 있다. 트리페닐메틸(트리틸) 잔기는 시스테인의 설파이드 함유 측쇄를 보호하는데 사용할 수 있다.

W가 아미드(w)인 경우, P1은 P2에 커플링시키기 전에 적합한 아민에 커플링시킨다. 이러한 아민화는 당해 기술분야의 숙련가들에 의해 쉽게 인지될 것이다. 일단 펩타이드의 연장이 완료되면, 모든 보호 그룹은 제거한다. 액체 상 합성을 사용할 경우, 어떠한 방법으로 보호 그룹을 선택하든간에 보호 그룹은 제거한다. 이러한 과정은 당해 기술분야의 숙련가들에게 익히 공지되어 있다.

고체 상 합성을 사용할 경우, 보호 그룹을 제거하는 것과 동시에 펩타이드가 수지로부터 절단된다. Boc 보호 방법을 합성에 사용할 경우, 0℃에서 무수 HF 함유 첨가제, 예를 들어, 디메틸 설파이드, 아니솔, 티오아니솔 또는 p-크레졸로 처리하는 것이 수지로부터 펩타이드를 절단하는 바람직한 방법이다. 펩타이드의 절단은 트리플루오로메탄설폰산/트리플루오로아세트산 혼합물과 같은 다른 산 시약에 의해서도 성취될 수 있다. Fmoc 보호 방법을 사용할 경우, N-말단 Fmoc 그룹을 앞서 기술한 시약으로 절단한다. 다른 보호 그룹 및 펩타이드는 트리플루오로아세트산 및 아니솔 등과 같은 다양한 첨가제를 사용하여 수지로부터 절단한다.

캡핑 그룹 B 및 P6, P5, P4 및 P3 잔기의 합성

상이한 캡핑 그룹 B를 시판품이거나 합성법이 당해 기술분야에 익히 공지되어 있는 적합한 아실 클로라이드 또는 설포닐 클로라이드를 사용하여 보호된 P4, P5 또는 P6 또는 모든 펩타이드 단편에 도입한다.

상이한 P6 내지 P3 잔기는 시판품이거나 이의 합성법이 당해 기술분야에 익히 공지되어 있다.

1. P2 잔기의 합성

1.1 전구체의 합성

(A) 할로아릴메탄 유도체의 합성

할로메틸-8-퀴놀린(IId)의 제조는 문헌[참조: K.N. Campbell et al., J. Amer. Chem. Soc. (1946), 68, 1844]의 과정에 따라 수행한다.

요약하면, 8-퀴놀린 카복실산(IIa)을, 상응하는 아실 할라이드(IIb)를 수소화알루미늄리튬과 같은 환원제로 환원시켜 상응하는 알콜(IIc)로 전환시킨다. 알콜(IIb)을 적합한 하이드로할로산으로 처리하여 목적하는 할로 유도체(IId)를 수득한다. 이러한 공정에 대한 구체적인 양태가 실시예 1A에 제시되어 있다.

(B) 아릴 알콜 유도체의 합성

2-페닐-4-하이드록시퀴놀린 유도체(IIIc)는 문헌[참조: Giardina et al., J. Med. Chem. (1997), 40, 1794-1807]에 따라 제조한다.

위의 반응식에서,

R₂₂ 및 R_21B는 알킬, OH, SH, 할로, NH₂ 또는 NO₂이다.

벤조일아세트아미드(IIIa)를, 적합한 아닐린(IIIb)과 축합시키고, 수득한 이민을 다가 인산을 사용하여 환화시켜 상응하는 2-페닐-4-하이드록시퀴놀린(IIIc)을 수득한다. 이러한 공정에 대한 구체적인 양태가 실시예 1B 및 IC에 제시되어 있다.

1.2 P2의 합성

(A) 화학식

의 4-치환된 프롤린(여기서, R₂는 탄소원자를 통해 환에 결합된다)(제시된 바와 같은 입체 화학을 가짐)의 합성은 문헌[참조: J. Ezquerra et al., Tetrahedron, (1993), 38, 8665-8678; 및 C. Pedregal et al., Tetrahedron Lett. (1994), 35, 2053-2056]에 기재된 과정에 따라 반응식 IV에 제시된 바와 같이 수행한다.

요약하면, Boc-피로글루탐산을 벤질 에스테르로서 보호한다. 리튬 디이소프로필아미드와 같은 강염기로 처리한 다음, 알킬화제(Br-R²⁰ 또는 I-R²⁰)를 첨가하고, 이어서 아미드의 환원 및 에스테르의 탈보호 후 목적하는 화합물(IVe)을 수득한다.

(B) 화학식

의 O-아르알킬화 4-(R)-하이드록시프롤린(여기서, R²⁰은 아릴, Het, 아르알킬 또는 (저급 알킬)-Het이다)의 합성은 문헌[참조: E. M. Smith et al., J. Med. Chem. (1988), 31, 875-885]에 기재된 과정에 따라 수행할 수 있다. 요약하면, 시판되는 Boc-4(R)-하이드록시프롤린을 수소화나트륨 또는 K-tBuO와 같은 염기로 처리하여, 생성된 알콕사이드를 할로-R²⁰(Br-R²⁰, I-R²⁰ 등)과 반응시켜 목적하는 화합물을 수득한다. 이러한 공정에 대한 구체적인 양태 가 실시예 2, 3 및 4B에 제시되어 있다.

(C) 또는, R²⁰이 아릴 또는 Het인 경우, 화합물은 미쓰노부 반응[참조: Mitsunobu (1981), Synthesis, January, 1-28; Rano et al., (1995), Tet. Lett. 36(22), 3779-3792; Krchnak et al., (1995), Tet. Lett. 36(5), 62193-6196; Richter et al., (1994), Tet. Lett. 35(27), 4705-4706]을 통해 제조할 수도 있다. 요약하면, 시판되는 Boc-4-(S)-하이드록시프롤린 메틸 에스테르를 트리페닐포스핀 및 디에틸아조디카복실레이트(DEAD)의 존재하에 적합한 아릴 알콜 또는 티올로 처리한 다음, 생성된 에스테르를 가수분해하여 산을 형성한다. 이러한 공정에 대한 구체적인 양태가 실시예 4A에 제시되어 있다.

또는, 미쓰노부 반응은 고체 상에서 수행할 수 있다(반응식 V 참조). 모델 396 신터사이저(제조원: Advanced ChemTech)의 96-웰 블럭에 수지-결합된 화합물(Va) 및 각종 아릴 알콜 또는 티올 분취량을 제공하고, 이에 적합한 시약을 가한다. 항온처리한 후, 각각의 수지-결합된 생성물(Vb)을 세척, 건조시켜, 수지로부터 분리한다.

스즈키 반응[참조: Miyaura et al., (1981), Synth. Comm 11, 513; Sato et al., 1989, Chem. Lett., 1405; Watanabe et al., (1992), Synlett., 207; Takayuki et al., (1993), J. Org. Chem. 58, 2201; Frenette et al., (1994), Tet. Lett. 35(49), 9177-9180; Guiles et al., (1996), J. Org. Chem. 61, 5169-5171]을 이용하여 아릴 치환체를 추가로 작용화시킬 수 있다.

2. P1 잔기(2-치환된 1-아미노사이클로프로필 카복실산)의 합성

합성은 반응식 VI에 따라 수행한다.

(a) 요약하면, 이-보호된 말로네이트(VIa)와 1,2-디할로알칸(VIb) 또는 사이클릭 설페이트(VIc)[문헌(참조: K. Burgess 및 Chun-Yen KE, Synthesis, (1996), 1463-1467)에 따라 합성함]를 염기성 조건하에서 반응시켜 디에스테르(VId)를 수득한다.

(b) 다소 덜 차단된 에스테르를 위치선택적으로 가수분해하여 산(VIe)을 수득한다.

(c) 이들 산(VIe)을 쿠르티우스 재배열(Curtius rearrangement)하여 R¹이 카복실 그룹에 대해 syn인 1-아미노사이클로프로필카복실산 유도체(VIf)의 라세미 혼합물을 수득한다. 이러한 공정에 대한 구체적인 양태가 실시예 5에 제시되어 있다.

d, e) 또한, 적합한 할라이드(P^*Cl) 또는 알콜(P^*OH)을 사용하여 산(VIe)으로부터 선택적으로 에스테르를 형성시켜, 디에스테르(VIg)(여기서, P^* 에스테르는 P 에스테르의 선택적 가수분해에 적합하다)를 수득한다. P 에스테르를 가수분해하여 산(VIh)을 수득한다.

(f) 산(VIh)을 쿠르티쿠스 재배열하여, R¹ 그룹이 카복실 그룹에 대해 anti 인 1-아미노사이클로프로필카복실산 유도체(VIi)의 라세미 혼합물을 수득한다. 이러한 합성법에 대한 구체적인 양태가 실시예 10에 제시되어 있다.

유도체(VIf)(여기서, R¹은 비닐이고 카복실 그룹에 대해 syn이다)를 제조하 기 위한 또 다른 합성법이 아래에 기재되어 있다.

시판되는 이민(VIIa)을 염기의 존재하에 1,4-디할로부텐(VIIb)으로 처리한 다음, 생성된 이민(VIIc)을 가수분해시켜 알릴 치환체가 카복실 그룹에 대해 syn인 화합물(VIId)을 제조한다. 이러한 공정이 실시예 11에 제시되어 있다.

탄소 1에서 상기한 모든 에난티오머 혼합물(VIe 및 VIId)의 분할은, (1) 효소적 분리(실시예 9 및 13), (2) 키랄 산을 사용한 결정화(실시예 14) 또는 (3) 화학적 유도체화(실시예 6)를 통해 수행할 수 있다.

분할한 후, 절대 입체화학 결정은 실시예 7에 제시된 바와 같이 수행할 수 있다.

분할 및 입체화학 결정은 탄소 1에서 에난티오머 혼합물과 동일한 방법으로 수행할 수 있다(여기서, C2에서의 치환체는 카복실산 그룹에 대해 anti이다(VIi)).

따라서, 본 발명은, APG-P6-P5-P4-P3-P2, APG-P5-P4-P3-P2, APG-P4-P3-P2, APG-P3-P2 및 APG-P2로 이루어진 그룹으로부터 선택된 펩타이드(여기서, APG는 아미노 보호 그룹이고, P6 내지 P2는 위에서 정의한 바와 같다)를 화학식

의 P1 중간체(여기서, R₁은 할로겐으로 치환 또는 비치환된 C_1-6 알킬 또는 C_2-6 알케닐이고, CPG는 카복실 보호 그룹이다)와 커플링시키는 단계를 포함하여, P1이 치환된 아미노사이클로프로필 카복실산 잔기인 화학식 I의 펩타이드 동족체를 제조하는 방법을 추가로 포함한다.

마지막으로, 본 발명은 또한 위에서 정의한 바와 같은 화학식 I의 화합물을 제조하기 위한, 화학식

의 중간체(여기서, R₁은 할로겐으로 치환 또는 비치환된 C_1-6 알킬 또는 C_2-6 알케닐이다)의 용도를 포함한다.

다음의 비제한적 실시예에 의해 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.

온도는 섭씨로 나타낸다. 달리 언급하지 않는 한, 용액의 %는 중량 대 용적 관계로 나타내고, 용액 비는 용적 대 용적 관계로 나타낸다. 핵자기 공명(NMR) 스펙트럼은 Bruker 400MHz 분광계로 기록하고, 화학적 이동(δ)은 ppm으로 나타낸다. 섬광 크로마토그래피는 문헌[참조: W. C. Still et al., J. Org. Chem. (1978), 43, 2923]의 섬광 크로마토그래피 기법에 따라 실리카 겔(SiO₂) 상에서 수행한다.

실시예에 사용되는 약어는 다음과 같다: Bn: 벤질, Boc: 3급-부틸옥시카보닐{Me₃COC(O)}, BSA: 소 혈청 알부민, CHAPS: 3-[(3-콜라미도프로필)디메틸암모니오]-1-프로판설포네이트, DBU: 1,8-디아자비사이클로[5.4.0]운덱-7-엔, CH₂Cl₂=DCM: 메틸렌 클로라이드, DEAD: 디에틸아조디카복실레이트, DIAD: 디이소프로필아조디카복실레이트, DIPEA: 디이소프로필에틸아민, DMAP: 디메틸아미노피리딘, DCC: 1,3-디사이클로헥실카보디이미드, DME: 1,2-디메틸옥시에탄, DMF: 디메틸포름아미드, DMSO: 디메틸설폭사이드, DTT: 디티오트레이톨 또는 트레오-1,4-디머캅토-2,3-부탄디올, DPPA: 디페닐포스포릴 아지드, EDTA: 에틸렌디아민테트라아세트산, Et: 에틸, EtOH: 에탄올, EtOAc: 에틸 아세테이트, Et₂O: 디에틸 에테르, HATU: O-7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피, MS: 질량 분광계(MALDI-TOF: Matrix Assisted Laser Disorption Ionization-Time of Flight, FAB: Fast Atom Bombardment), LAH: 수소화알루미늄리튬, Me: 메틸, MeOH: 메탄올, MES: (2-{N-모르폴리노})에탄-설폰산), NaHMDS: 나트륨 비스(트리메틸실릴)아미드, NMM: N-메틸모르폴린; NMP: N-메틸피롤리딘, Pr: 프로필, Succ: 3-카복시프로파노일, PNA: 4-니트로페닐아미노 또는 p-니트로아닐린, TBAF: 테트라-n-부틸암모늄 플루오라이드, TBTU: 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트, TCEP: 트리스(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드, TFA: 트리플루오로아세트산, THF: 테트라하이드로푸란, TIS: 트리이소프로필실란, TLC: 박막 크로마토그래피, TMSE: 트리메틸실릴에틸, Tris/HCl: 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 하이드로클로라이드.

P2 빌딩 블록

실시예 1A

브로모메틸-8-퀴놀린(1A)의 합성

시판되는 8-퀴놀린 카복실산(2.5g, 14.4mmol)에 순수한 티오닐 클로라이드(10㎖, 144mmol)를 가하였다. 이들 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 가열한 다음, 과량의 티오닐 클로라이드를 감압하에서 증류 제거하였다. 생성된 갈색 고체에 무수 EtOH(15㎖)를 가하여 80℃에서 1시간 동안 가열한 다음, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc와 포화 수성 NaHCO₃ 사이에 분배하고, 유기 상을 건조(MgSO₄)시키고, 여과하고, 농축시켜 갈색 오일(2.8g)을 수득하였다. 이들 물질(약 14.4mmol)을 35분에 걸쳐 LAH(0.76g, 20.2mmol)/Et₂O 현탁액에 가하여, -60℃로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 1.5시간에 걸쳐 -35℃로 서서히 가온한 다음, 반응을 완료시켰다. 반응물을 30분에 걸쳐 MgSO₄·10H₂O로 서서히 급냉시킨 다음, 습윤 THF로 급냉시켰다. 이들 혼합물을 Et₂O와 10% 수성 NaHCO₃ 사이에 분배시켰다. 유기 상을 건조(MgSO₄)시키고, 여과하고, 농축시켜 알콜에 상응하는 황색 고체(2.31g, 2단계에 걸쳐 80%)를 수득하였다. 알콜(2.3g, 11.44mmol)을 AcOH/HBr(20㎖, 30% 용액, 제조원: Aldrich)에 용해시킨 다음, 70℃에서 2.5시간 동안 가열하였다. 이들 혼합물을 진공하에서 농축 건조시키고, EtOAc(100㎖)와 포화 수성 NaHCO₃ 사이에 분배한 다음, 건조(MgSO₄)시키고, 여과하고, 농축시켜 목적하는 화합물(1A)을 갈색 고체(2.54g, 100%)로서 수득하였다.

실시예 1B

2-페닐-4-하이드록시퀴놀린(1B)의 합성

시판되는 에틸 벤조일아세테이트(6.00g, 31.2mmol)를 30% NH₄OH 75㎖ 중에서 85℃(밀봉 시험관)에서 2시간 동안 가열하였다. 냉각시 형성된 고체를 여과하여, 물 중에서 2시간 동안 환류시켰다. 이들 용액을 CH₂Cl₂로 3회 추출하였다. 유기 층을 합하여 MgSO₄로 건조시키고, 여과하여 농축시켰다. 황색 잔류물을 EtOAc:헥산(3:7)으로 용출시키면서 실리카 겔 상에서 섬광 크로마토그래피하여 상응하는 아미드를 백색 고체(1.60g, 수율 31%)로서 수득하였다.

이들 아미드(250㎎, 1.53mmol)를 딘-스타크(Dean-Stark) 장치를 사용하여, 톨루엔(10㎖) 중의 아닐린(143㎎, 1.53mmol) 및 아닐린·HCl(10㎎, 0.08mmol)과 함께 16시간 동안 환류시켰다. 이들 용액을 농축시켜 갈색 오일을 수득한 다음, 이를 다가 인산(2g)과 혼합하여, 135℃에서 20분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고 5M NaOH를 사용하여 pH 8로 조절하였다. 수성 현탁액을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 유기 층을 합하여 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시켜 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 중의 3% MeOH로 용출시키면서 실리카겔 상에서 섬광 크로마토그래피하여 2-페닐-4-하이드록시퀴놀린(1B)(67mg, 수율 20%)을 수득하였다. ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 8.11 (d, J=7Hz, 1H), 7.86-7.83 (m, 2H), 7.77 (d, J=8Hz, 1H), 7.68 (dd, J=8,7Hz, 1H), 7.61-7.58 (m, 3H), 7.35 (dd, J=8,7Hz, 1H), 6.34 (s, 1H).

실시예 1C

4-하이드록시-2-페닐-7-메톡시퀴놀린(1C)의 합성

4-하이드록시-2-페닐-7-메톡시퀴놀린(e):

톨루엔(1.0ℓ) 중의 에틸 벤조일아세테이트(b)(100.0g, 0.52mol), m-아니시딘(a)(128.1g, 1.04mol) 및 4N HCl/디옥산(5.2㎖)의 용액을 딘-스타크 장치내에서 6.25시간 동안 환류시켰다. 냉각시킨 톨루엔 용액을 수성 10% HCl(2×300㎖), 1N NaOH(2×300㎖), H₂O(300㎖) 및 염수(150㎖)로 연속 세척하였다. 톨루엔 상을 건조(MgSO₄)시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜 에스테르(c)와 아미드(d)의 혼합물(1.2:1.0)(144.6g, 45%/38% 조 수율)을 흑갈색 오일로서 수득하였다. 조 오일을 80분 동안 280℃로 가열하면서, 생성된 EtOH를 증류시켰다. 수득된 흑색 냉각 고체를 CH₂Cl₂(200㎖)로 연마하였다. 이들 현탁액을 여과한 다음, 생성된 고체를 CH₂Cl₂로 세척하여, 생성물(e)(22.6g, (a)로부터의 수율 17%)을 베이지색 고체로서 수득하였다. ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 8.00 (d, J=9.0Hz, 1H), 7.81-7.82 (m, 2H), 7.57-7.59 (m, 3H), 7.20 (d, J=2.2Hz, 1H), 6.94 (dd, J=9.0, 2.2Hz, 1H), 6.26 (s, 1H), 3.87 (s, 3H).

4-클로로-2-페닐-7-메톡시퀴놀린(1C):

POCl₃(90㎖) 중의 생성물(e)(8.31g, 33.1mmol)의 현탁액을 2시간 동안 환류하에 가열하였다(가열시 투명한 용액이 수득됨). 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 1N NaOH(발열성, 높은 pH를 유지하기 위해 10N NaOH 첨가)와 EtOAc(500㎖) 사이에 분배시켰다. 유기 층을 H₂O(100㎖)와 염수(100㎖)로 세척한 다음, 건조(MgSO₄)시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜 화합물(1C)(8.60g, 96%)을 담황색 고체로서 수득하였다: ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 8.28-8.30 (m, 2H), 8.20 (s, 1H), 8.10 (d, J=9.1Hz, 1H), 7.54-7.58 (m, 3H), 7.52 (d, J=2.5Hz, 1H), 7.38 (dd, J=9.1, 2.5Hz, 1H), 3.98 (s, 3H). 이러한 반응을 3회 반복하더라도, 항상 96 내지 98%의 수율이 수득되었으며, 이는 문헌[참조: J. Med. Chem. 1997, 40, 1794]에 보고된 68% 수율보다 유의적으로 높은 것이다.

실시예 2

Boc-4(R)-(나프탈렌-1-일메톡시)프롤린(2)의 합성

시판되는 Boc-4(R)-하이드록시프롤린(5.00g, 21.6mmol)을 THF(100㎖)에 용해시켜 0℃로 냉각시켰다. 수소화나트륨(오일 중의 60% 분산액, 1.85g, 45.4mmol)을 10분에 걸쳐 소량씩 나누어 가하여, 생성된 현탁액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 1-(브로모메틸)나프탈렌(8.00g, 36.2mmol)[문헌(참조: E.A. Dixon et al., Can. J. Chem. (1981), 59, 2629-2641)에 기재된 바와 같이 제조함]을 가하여, 혼합물을 18시간 동안 환류하에 가열하였다. 혼합물을 물(300㎖)에 부어 헥산으로 세척하였다. 수성 층을 10% 수성 HCl로 산성화시키고, 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 유기 층을 합하여 염수로 세척하고 건조(MgSO₄)시키고, 여과한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 섬광 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트:아세트산=49:49:2)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 무색 오일(4.51g, 수율 56%)로서 수득하였다. ¹H NMR(DMSO-d₆)은 2개 로타머의 존재를 나타냄: δ 8.05 (m, 1H), 7.94 (m, 1H), 7.29 (d, J=14Hz, 1H), 7.55-7.45 (m, 4H), 4.96 (m, 2H), 4.26 (br.s, 1H), 4.12 (dd, J=J=8Hz, 1H), 3.54-3.42 (m, 2H), 2.45-2.34 (m, 1H), 2.07-1.98 (m, 1H), 1.36 (s, (3/9) 9H), 1.34 (s, (6/9) 9H).

실시예 3

Boc-4(R)-(8-퀴놀린-메톡시)프롤린(3)의 합성

무수 THF(20㎖) 중의 Boc-4(R)-하이드록시프롤린(1.96g, 8.5mmol)을 THF(100㎖) 중의 NaH(1.4g, 오일 중의 60%, 34mmol)의 현탁액에 가하였다. 이들 혼합물을 30분 동안 교반한 다음, 실시예 1A로부터의 브로모메틸-8-퀴놀린(2.54g, 11.44mmol)을 THF(30㎖)에 가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 5시간 동안 가열한 다음, 과량의 NaH를 습윤 THF를 사용하여 조심스럽게 제거하였다. 반응물을 진공하에 농축시켜 생성된 물질을 EtOAc와 H₂O에 용해시켰다. 염기성 수성 상을 분리하여 10% HCl로 pH ~5로 산성화시킨 다음, EtOAc(150㎖)로 추출하였다. 유기 상을 건조(MgSO₄)시키고 여과하고 농축시켜 갈색 오일을 수득하였다. 이를 섬광 크로마토그래피(용출제: 10% MeOH/CHCl₃)에 의해 정제하여, 목적하는 화합물을 담황색 고체(2.73g, 86%)로서 수득하였다. HPLC(97.5%), ¹H NMR(DMSO-d₆)은 로타머가 6:4의 비율로 존재함을 나타냄: δ 12-11.4 (bs, 1H), 8.92 (2 x d, J=4.14 및 4.14Hz, 1H), 8.38 (2 x d, J=8.27 및 8.27 Hz, 1H), 7.91 (d, J=7.94Hz, 1H), 7.77 (d, J=7.0Hz, 1H), 7.63-7.54 (m, 2H), 5.14 (2 x s, 2H), 4.32-4.29 (m, 1H), 4.14-4.07 (m, 1H), 3.52-3.44 (m, 2H), 2.43-2.27 (m, 1H), 2.13-2.04 (m, 1H), 1.36 및 1.34 (2 x s, 9H).

실시예 4A

Boc-4(R)-(7-클로로퀴놀린-4-옥소)프롤린(4A)의 제조

시판되는 Boc-4(S)-하이드록시프롤린 메틸 에스테르(500mg, 2.04mmol)와 7-클로로-4-하이드록시퀴놀린(440mg, 2.45mmol)을 0℃에서 무수 THF(10㎖)에 유입하였다. 트리페닐포스핀(641㎖, 2.95mmol)을 가한 다음, DIAD(426mg, 2.45mmol)을 서서히 가하였다. 이들 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축시키고, 에틸 아세테이트에 용해시킨 다음, 1N HCl로 3회 추출하였다. 수성 상을 Na₂CO₃로 염기성화시키고, 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 유기 상을 합하여, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 황색 오일을 수득하였다. 오일을 섬광 크로마토그래피에 의해 정제하여, 메틸 에스테르 화합물(4A)을 백색 고체(498mg, 수율 58%)로서 수득하였다.

이들 메틸 에스테르(400mg, 0.986mmol)를 0℃에서 3시간 동안 메탄올(4㎖) 중의 1M 수성 수산화나트륨(1.7㎖, 1.7mmol)으로 가수분해시켰다. 이들 용액을 농축시켜 메탄올을 제거하고 1M 수성 HCl로 중화시켰다. 현탁액을 농축 건조시킨 다음, 메탄올(20℃)에 용해시키고, 염을 여과 제거하고, 여액을 농축시켜, 목적하는 화합물(4A)을 백색 고체(387mg, 정량적 수율)로서 수득하였다. ¹H NMR (DMSO-d₆)(로타머의 약 1:1 혼합물) δ 8.74 (d, J=5Hz, 1H), 8.13-8.09 (m, 1H), 7.99 및 7.98 (s, 1H), 7.58 (d, J=9Hz, 1H), 7.02 (d, J=5Hz, 1H), 5.26-5.20 (m, 1H), 4.10-4.01 (m, 1H), 3.81-3.72 (m, 1H), 3.59 (dd, J=12, 10Hz, 1H), 2.41-2.31 (m, 2H), 1.34 및 1.31 (s, 9H).

실시예 4B

Boc-4(R)-(2-페닐-7-메톡시퀴놀린-4-옥소)프롤린(4B)의 합성

1-[(1,1-디메틸에톡시)카보닐]-4(R)-[(7-메톡시-2-페닐-4-퀴놀리닐)옥시]-L-프롤린(4B):

칼륨 3급-부톡사이드(8.16g, 72.7mmol)를, 25℃로 유지시키면서 DMSO(83㎖) 중의 시판되는 4-(S)-하이드록시프롤린(6.73g, 29.1mmol)의 용액에 15분에 걸쳐 소량씩 가하였다. 이들 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 클로로-2-페닐-7-메톡시퀴놀린(1C)(8.61g, 32.0mmol)을 15분에 걸쳐 4회로 나누어 반응 혼합물에 가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 19시간 동안 교반하였다. 생성된 현탁액을 H₂O(650㎖)에 부어, 혼합물을 Et₂O(3×150㎖)로 세척하여 과량의 클로로퀴놀린을 제거하였다(EtOAc가 후에 더욱 효과적인 것으로 밝혀짐). 수성 층을, 수성 1N HCl(필요한 하소시킨 1.5당량 38㎖, 43.6㎖)을 사용하여 pH 4 내지 5로 산성화시켰다. 침전된 백색 고체를 여과하여 회수하였다. 습윤 고체를 감압하에 P₂O₅ 상에서 건조시켜, 프롤린 유도체(4B)(12.6g, 91%, DMSO 2.3%(w/w) 함유)를 베이지색 고체로서 수득하였다. ¹H NMR (DMSO-d₆) δ (로타머의 2:1 혼합물) 8.27 (d, J=7.0Hz, 2H), 8.00, 7.98 (2d, J=9.2, ~9.2Hz, 1H), 7.48-7.56 (m, 3H), 7.45, 7.43 (2s, 1H), 7.39 (d, J=2.5Hz, 1H), 7.17 (dd, J=9.2, 2.5Hz, 1H), 5.53-5.59 (m, 1H), 4.34-4.41 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.76 (broad s, 2H), 2.63-2.73 (m, 1H), 2.32-2.43 (m, 1H), 1.36, 1.33 (2s, 9H).

P1 빌딩 블록

실시예 5

(1R,2R)/(1S,2R)-1-아미노-2-에틸사이클로프로필 카복실산의 혼합물의 합성

(a) 50% NaOH 수용액(H₂O 185㎖ 중의 92.4g) 중의 벤질트리에틸암모늄 클로라이드(21.0g, 92.19mmol)의 현탁액에 디-3급-부틸말로네이트(20.0g, 92.47mmol) 및 1,2-디브로모부탄(30.0g, 138.93mmol)을 연속해서 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 격렬하게 교반하고, 이어서 얼음과 물의 혼합물을 가하였다. 조 생성물을 CH₂Cl₂(3x)로 추출한 다음, 물(3x)과 염수로 세척하였다. 유기 층을 건조(MgSO₄)시키고, 여과하여 농축시켰다. 잔류물을 섬광 크로마토그래피(7cm, 헥산 중의 2 내지 4% Et₂O)하여, 목적하는 사이클로프로판 유도체(5c)(19.1g, 70.7mmol, 수율 76%)를 수득하였다. ¹H NMR (CDCl₃) δ 1.78-1.70 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.46 (s, 9H), 1.44-1.39 (m, 1H), 1.26-1.64 (m, 3H), 1.02 (t, 3H, J=7.6Hz).

(b) 0℃에서 무수 에테르(100㎖) 중의 칼륨 3급-부톡사이드(6.71g, 59.79mmol, 4.4당량)의 현탁액에 H₂O(270㎕, 15.00mmol, 1.1당량)를 가하였다. 5분 후, 에테르(10㎖) 중의 디에스테르(5c)(3.675g, 13.59mmol)를 현탁액에 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 얼음과 물의 혼합물에 부어 에테르(3x)로 세척하였다. 수성 층을 0℃에서 10% 시트르산 수용액으로 산성화시키고, AcOEt(3x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물(2x)과 염수로 연속해서 세척하였다. 통상적으로 처리(Na₂SO₄, 여과, 농축)한 후, 목적하는 산(5d)을 담황색 오일(1.86g, 8.68mmol, 수율 64%)로서 분리하였다. ¹H NMR (CDCl₃) δ 2.09-2.01 (m, 1H), 1.98 (dd, J=3.8, 9.2Hz, 1H), 1.81-1.70 (m, 1H), 1.66 (dd, J=3.0, J=8.2Hz, 1H), 1.63-1.56 (m, 1H), 1.51 (s, 9H), 1.0 (t, J=7.3Hz, 3H).

(c) 무수 벤젠(32㎖) 중의 산(5d)(2.017g, 9.414mmol)에 Et₃N(1.50㎖, 10.76mmol, 1.14당량)과 DPPA(2.20㎖, 10.21mmol, 1.08당량)를 연속해서 가하였다. 반응 혼합물을 3.5시간 동안 환류시킨 다음, 2-트리메틸실릴에탄올(2.70㎖, 18.84mmol, 2.0당량)을 가하였다. 밤새 환류시킨 다음, 반응 혼합물을 Et₂O로 희석시키고, 10% 시트르산 수용액, 물, 포화 수성 NaHCO₃, 물(2x) 및 염수로 연속 세척하였다. 통상적으로 처리(MgSO₄, 여과, 농축)한 후, 잔류물을 섬광 크로마토그래피(5cm, 10% AcOEt-헥산)하여, 목적하는 카바메이트(5e)(2.60g, 7.88mmol, 수율 84%)를 담황색 오일로서 수득하였다. MS(FAB) 330 (MH⁺); ¹H NMR (CDCl₃) δ 5.1 (bs, 1H), 4.18-4.13 (m, 2H), 1.68-1.38 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 1.24-1.18 (m, 1H), 1.00-0.96 (m, 5H), 0.03 (s, 9H).

(d) 카바메이트(5e)(258mg, 0.783mmol)를 THF 중의 1.0M TBAF(940㎕, 0.94mmol, 1.2당량) 용액에 가하였다. 4.5시간 후, 추가량의 1.0M TBAF(626㎕, 0.63mmol, 0.8당량)를 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하여, 30분 동안 환류시키고, 이어서 AcOEt로 희석시켰다. 이들 용액을 물(2x)과 염수로 연속 세척하였다. 통상적으로 처리(MgSO₄, 여과 및 농축)한 후, 목적하는 아민(5f)을 담황색 액체로서 분리하였다(84mg, 0.453mmol, 수율 58%). ¹H NMR (CDCl₃) δ 1.96 (bs, 2H), 1.60-1.40 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.31-1.20 (m, 1H), 1.14 (dd, J=4.1, 7.3Hz, 1H), 1.02 (dd, J=4.1, 9.2Hz, 1H), 0.94 (t, J=7.3Hz, 3H).

실시예 6

(실시예 5로부터의) t-부틸-(1R,2R)/(1S,2R)-1-아미노-2-에틸사이클로프로필 카복 실레이트의 화학적 분할

실시예 5로부터의 화합물(5e)(8.50g, 25.86mmol)을 45분 동안 환류하에 1M TBAF/THF(26㎖)로 처리하였다. 냉각된 반응 혼합물을 EtOAc로 희석시키고, 물(3x)과 염수(1x)로 세척한 다음, 건조(MgSO₄)시키고, 여과하고, 증발시켜 유리 아민을 담황색 오일로서 수득하였다. 유리 아민을 무수 CH₂Cl₂(120㎖)에 용해시키고, NMM(8.5㎖, 77.57mmol), 화합물(2)(실시예 2)(10.08g, 27.15mmol) 및 HATU(11.79g, 31.03mmol)를 연속해서 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 상기한 바와 같이 후처리하였다. 조 부분입체이성체 혼합물을 섬광 크로마토그래피(용출제-헥산:Et₂O=25:75)로 분리하여 디펩타이드(6a)(극성이 덜한 용출 스폿)를 백색 발포체(4.42g, 이론적 수율의 64%)로서 수득하고, 디펩타이드(6b)(극성이 더한 용출 스폿)를 상아색 발포체(4g, 이론적 수율의 57%)로서 수득하였다. 이때, 2가지 이성체가 분리되었지만, 이의 절대 입체화학은 여전히 미지이다.

실시예 7

공지된 t-부틸 (1R-아미노-2R-에틸사이클로프로필 카복실레이트)와의 상관성에 의한 화합물 6a와 6b의 절대 입체화학의 결정

몬트리얼 대학의 교수(Prof. A. Charette)로부터, X선 크리스탈로그래피에 의해 측정되는 것으로서 제시된 바와 같은 절대 입체화학을 갖는 화합물(7a)[참조: J. Am. Chem. Soc., 1995, 117, 12721]을 구입하였다. 화합물(7a)(13.2mg, 0.046mmol)을 1M HCl/EtOAc(240㎕)에 용해시켜 약 48시간 동안 교반하였다. 이들 혼합물을 증발 건조시켜 화합물(7b)을 담황색 페이스트로서 수득하고, CH₂Cl₂ 중의 NMM(20.3㎕, 0.185mmol)과 HATU(21.1mg, 0.056mmol)를 사용하여 실시예 6에 기재된 바와 같이 화합물(2)(18mg, 0.049mmol)에 커플링시켰다. 조 물질을 섬광 크로마토그래피(용출제-헥산:Et₂O=50:50)에 의해 정제하여, 디펩타이드(7c)를 오일(7.7mg, 31%)로서 수득하였다. TLC, HPLC 및 NMR 비교에 의해, 디펩타이드(7c)가 실시예 6에서 수득한 다소 극성이 덜한 화합물(6a)과 동일하다는 것을 밝혀내고, 이에 따라 화합물(6a)의 절대 입체화학을 (1R,2R)로서 확인하였다.

실시예 8

(1R,2R)/(1S,2R)-1-Boc-아미노-2-에틸사이클로프로필카복실산(8a)의 제조:

실시예 5로부터의 카바메이트(5e)(2.6g, 7.88mmol)를 0℃에서 TFA 중에서 40분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 농축시키고 THF(10㎖)로 희석시켰다. NaOH 수용액(700mg, H₂O 8.8㎖ 중의 17.5mmol)을 가한 다음, (Boc)₂O(2.06g, 9.44mmol, 1.2당량)의 THF(13㎖) 용액을 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고(필요에 따라, 10% NaOH 수용액을 가하여 pH를 8로 유지시킴), 이어서 H₂O로 희석시키고, Et₂O(3x)로 세척하여, 0℃에서 10% 시트르산 수용액으로 산성화시켰다. 수성 층을 EtOAc(3x)로 추출하고, H₂O(2x)와 염수로 연속 세척하였다. 통상적으로 처리(MgSO₄, 여과 및 농축)한 후, 목적하는 Boc-보호된 아미노산(8a)(788mg, 3.44mmol, 수율 44%)을 분리하였다. ¹H NMR (CDCl₃) δ 5.18 (bs, 1H), 1.64-1.58 (m, 2H), 1.55-1.42 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.32-1.25 (m, 1H), 0.99 (t, 3H, J=7.3Hz).

(1R,2R)/(1S,2R)-1-Boc-아미노-2-에틸사이클로프로필카복실산 메틸 에스테르(8b)의 제조:

Boc 유도체(8a)(0.30g, 1.31mmol)를 Et₂O(10㎖)에 용해시킨 다음, Et₂O 중의 갓 제조된 디아조메탄을 사용하여 약간 과량의 디아조메탄의 황색이 유지될 때까지 처리하였다. 실온에서 20분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축 건조시켜 화합물(8b)를 투명한 무색 오일(0.32g, 100%)로서 수득하였다. ¹H NMR (CDCl₃) δ 5.1 (bs, 1H), 3.71 (s, 3H), 1.62-1.57 (m, 2H), 1.55 (s, 9H), 1.53-1.43 (m, 1H), 1.28-1.21 (m, 2H), 0.95 (t, J=7.3Hz, 3H).

실시예 9

(1R,2R)/(1S,2R)-Boc-1-아미노-2-에틸사이클로프로필 카복실레이트의 효소적 분할:

(a) 실시예 8의 (1S,2R)/(1R,2R)-1-Boc-아미노-2-에틸카복실산 메틸 에스테르의 에난티오머 혼합물(0.31g, 1.27mmol)을 아세톤(3㎖)에 용해시키고, 이어서 물(7㎖)로 희석시키면서 급속 교반하였다. 0.05M 수성 NaOH를 사용하여 용액의 pH를 7.5로 조절한 다음, Alcalase^R[2.4ℓ 추출액, 제조원: Novo Nordisk Industrials](300mg)를 가하였다. 항온처리하는 동안, NaOH로 pH를 안정화시키고, pH 상태를 설정하여 NaOH 용액의 첨가를 모니터링하였다. 40시간 후, 혼합물을 EtOAc와 H₂O(5㎖ 포화 NaHCO₃ 포함)로 희석시키고 상을 분리하였다. 수성 상을 10% 수성 HCl로 산성화시키고, EtOAc로 추출하여 건조(MgSO₄)시키고, 여과하고, 농축시켜 산(9a)(48.5mg)을 수득하였다. 실시예 6 및 7에 기재된 상관성을 사용하여 절대 입체화학을 결정하였다.

(b) 분취량의 산(9a)을 Et₂O 중의 디아조메탄으로 처리하여, 메틸 에스테르를 수득한 다음, 키랄 컬럼[Chiracel^R OD-H, 2.5% 이소프로판올/헥산, 이소크래틱]을 사용하여 HPLC로 분석한 결과, (1S,2R) 이성체가 51:1의 비율인 것으로 나타났다.

(a') 유기 상을 건조(MgSO₄)시키고, 여과하고, 농축시켜 가수분해되지 않은 에스테르(0.248g)를 수득하였다. 이들 물질을, pH가 안정하게 유지될 때까지(98시간) 상기한 효소 프로토콜에 재적용시켰다. 상기한 바와 같은 추출한 후, 가수분해되지 않은 에스테르 0.146mg(100%)을 회수하였다. 키랄 컬럼을 사용하여 HPLC로 분석한 결과, (1R,2R) 이성체에 유리하게 > 50:1의 비율을 나타내었다.

(b') 수성 상을 10% 수성 HCl로 산성화시키고, EtOAc로 추출한 다음, 건조(MgSO₄)시키고, 농축시켜 산 동족체(82mg)를 수득하였다. 이들 물질의 분획을 디아조메탄으로 처리하고, 이어서 상기한 바와 같은 키랄 컬럼을 사용하여 HPLC로 분석한 결과, (1S,2R) 유도체가 65:1의 비를 나타내었다.

실시예 10

(1R,2S)/(1S,2S)-1-아미노-2-에틸사이클로프로필 카복실산의 합성:

실시예 5에 기재된 바와 같이 산(5d)에서 출발한다:

(c) CH₃CN(25㎖) 중의 산(5d)(1.023g, 4.77mmol)에 DBU(860㎕, 5.75mmol, 1.2당량)와 알릴 브로마이드(620㎕, 7.16mmol, 1.5당량)를 연속해서 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시가 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 Et₂O로 희석시키고, 10% 시트르산 수용액(2x), H₂O, 포화 수성 NaHCO₃, H₂O(2x) 및 염수로 연속해서 세척하였다. 통상적으로 처리(MgSO₄, 여과 및 농축)한 후, 목적하는 에스테르(10a)(1.106g, 3.35mmol, 수율 91%)를 무색 오일로서 분리하였다. MS (FAB) 255 (MH⁺); ¹H NMR (CDCl₃) δ 5.96-5.86 (m, 1H), 5.37-5.22 (m, 2H), 4.70-4.65 (m, 1H), 4.57-4.52 (m, 1H), 1.87-1.79 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.45-1.40 (m, 1H), 1.33-1.24 (m, 3H), 1.03 (t, J=7.3Hz, 3H).

(d) 실온에서 무수 CH₂Cl₂(5㎖) 중의 에스테르(10a)(1.106g, 4.349mmol)에 TFA(5㎖)를 가하였다. 반응 혼합물을 1.5시간 동안 교반한 다음, 농축시켜 화합물(10b)(854mg, 4.308mmol, 수율 99%)을 수득하였다. MS (FAB) 199 (MH⁺); ¹H NMR (CDCl₃) δ 5.99-5.79 (m, 1H), 5.40-5.30 (m, 2H), 4.71-4.62 (m, 2H), 2.22-2.00 (m, 2H), 1.95-1.88 (m, 1H), 1.84-1.57 (m, 2H), 0.98 (t, J=7.3Hz, 3H).

(e) 무수 벤젠(14.8㎖) 중의 산(10b)(853mg, 4.30mmol)에 Et₃N(684㎕, 4.91mmol, 1.14당량)과 DPPA(992㎕, 4.60mmol, 1.07당량)를 연속해서 가하였다. 반응 혼합물을 4.5시간 동안 환류시킨 다음, 2-트리메틸실릴메탄올(1.23㎖, 8.58mmol, 2.0당량)을 가하였다. 밤새 환류시킨 다음, 반응 혼합물을 Et₂O로 희석시키고 10% 시트르산 수용액, 물, 포화 수성 NaHCO₃, 물(2x) 및 염수로 연속해서 세척하였다. 통상적으로 처리(MgSO₄, 여과, 농축)한 후, 잔류물을 섬광 크로마토그래피(5cm, 10 내지 15% AcOEt-헥산)하여, 카바메이트(10c)(1.212g, 3.866mmol, 수율 90%)를 담황색 오일로서 수득하였다. MS (FAB) 314 (MH⁺); ¹H NMR (CDCl₃) δ 5.93-5.84 (m, 1H), 5.32-5.20 (m, 2H), 5.05 (bs, 1H), 4.60-4.56 (m, 2H), 4.20-4.11 (m, 2H), 1.71-1.60 (m, 3H), 1.39-1.22 (m, 1H), 1.03 (t, J=7.6Hz, 3H), 0.96-0.86 (m, 1H), 0.04 (s, 9H).

(f) 카바메이트(10c)(267mg, 0.810mmol)에 THF(1.62㎖, 1.62mmol, 2.0당량) 중의 1.0M TBAF 용액을 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 30분 동안 환류시킨 다음, AcOEt로 희석시켰다. 용액을 물(2x)과 염수로 연속해서 세척하였다. 통상적으로 처리(MgSO₄, 여과 및 농축)한 후, 목적하는 아민(10d)(122mg, 0.721mmol, 수율 89%)을 담황색 액체로서 수득하였다. ¹H NMR (CDCl₃) δ 5.94-5.86 (m, 1H), 5.31-5.22 (m, 2H), 4.58 (d, J=5.7Hz, 2H), 1.75 (bs, 2H), 1.61-1.53 (m, 2H), 1.51-1.42 (m, 2H), 1.00 (t, J=7.3Hz, 3H), 0.70-0.62 (m, 1H).

실시예 11

에틸-(1R,2S)/(1S,2S)-1-아미노-2-비닐사이클로프로필 카복실레이트의 합성:

(a) -78℃에서 칼륨 3급-부톡사이드(4.62g, 41.17mmol, 1.1당량)의 THF 용액(180㎖)에 THF(45㎖) 중의 시판되는 이민(11a)(10.0g, 37.41mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 가온하여, 이 온도에서 40분 동안 교반하였다. 이어서, 1,4-디브로모부텐(11b)(8.0g, 37.40mmol)을 첨가하기 위해, 혼합물을 -78℃로 다시 냉각시킨 다음, 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 칼륨 3급-부톡사이드(4.62g, 41.17mmol, 1.1당량)를 첨가하기 위해 -78℃로 다시 냉각시켰다. 반응 혼합물을 최종적으로 0℃에서 1시간 이상 교반하고 농축시켜 화합물(11c)을 수득하였다.

(b, c, d) 화합물(11c)을 Et₂O(265㎖)에 용해시켜, 1N HCl 수용액(106㎖)으로 처리하였다. 실온에서 3.5시간 후, 층을 분리하고, 수성 층을 Et₂O(2x)로 세척한 다음, 포화 NaHCO₃ 수용액으로 염기성화시켰다. 목적하는 아민을 Et₂O(3x)로 추출하고, 합한 유기 추출물을 염수로 세척하였다. 통상적으로 처리(MgSO₄, 여과 및 농축)한 후, 잔류물을 디옥산(187㎖, 748mmol) 중의 4N HCl 용액으로 처리하였다. 농축시킨 후, 하이드로클로라이드 염(11d)을 갈색 고체(2.467g, 12.87mmol, 수율 34%)로서 분리하였다. ¹H NMR (CDCl₃) δ 9.17 (bs, 3H), 5.75-5.66 (m, 1H), 5.39 (d, J=17.2Hz, 1H), 5.21 (d, J=10.2Hz, 1H), 4.35-4.21 (m, 2H), 2.77-2.70 (m, 1H), 2.05 (dd, J=6.4, 10.2Hz, 1H), 1.75 (dd, J=6.4, 8.3Hz, 1H), 1.33 (t, J=7.0Hz, 3H).

실시예 12

(1R,2S/1S,2S)-1-Boc-아미노-2-비닐사이클로프로필 카복실산 에틸 에스테르의 제조:

하이드로클로라이드 염(11d)(1.0g, 5.2mmol)과 (Boc)₂O(1.2g, 5.7mmol)를 THF(30㎖)에 용해시킨 다음, DMAP(0.13g, 1.04mmol, 0.2당량)와 디이소프로필에틸아민(2.8㎖, 15.6mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 24시간 동안 교반한 다음, EtOAc(40㎖)로 희석시키고 포화 NaHCO₃(수성), 5% 수성 HCl 및 포화 염수로 연속해서 세척하였다. 유기 상을 건조(MgSO₄)시키고, 여과하고, 농축시킨 다음, 섬광 크로마토그래피(15% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 화합물(12a)(0.29g, 23%)을 수득하였다. ¹H NMR (CDCl₃) δ 5.80-5.72 (m, 1H), 5.29-5.25 (dd, J=17.2, 17.2Hz, 1H), 5.24-5.1 (bs, 1H), 5.10 (dd, J=9.2, 9.2Hz, 1H), 4.22-4.13 (m, 2H), 2.15-2.04 (m, 1H), 1.85-1.73 (bs, 1H), 1.55-1.5 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.26 (t, J=7.3Hz, 3H).

실시예 13

에틸(1R,2S)/(1S,2S)-1-아미노-2-비닐사이클로프로필 카복실레이트의 효소적 분할:

(a) 라세미 유도체(12a)(0.29g, 1.14mmol)를 아세톤(5㎖)에 용해시키고, H₂O(10㎖)로 희석시켰다. 0.2N 수성 NaOH를 사용하여 pH를 7.2로 조절한 다음, Alcalase^R(300mg)를 가하였다. 항온처리하는 동안 pH를 일정하게 유지하기 위해, 이론적 양의 염기가 첨가될 때까지 9일에 걸쳐 pH 정전 적정기로 NaOH 용액을 가하였다. 실시예 9에 기재된 바와 같이 산/염기 추출한 후, 가수분해되지 않은 에스테르(0.15g, 100%)와 가수분해된 물질(0.139g, 95%)을 분리하였다. 가수분해되지 않은 에스테르를 키랄 컬럼을 사용하여 HPLC로 분석한 결과, 목적하는 화합물(13c)이 43:1의 비율인 것으로 나타났다. 화합물(206)(여기서, R₁은 비닐이다, 표 2 참조)을 H₂ 1atm하에서 45분 동안 수소첨가(10.8mg, 20% Pd(OH)₂ 1㎖와 함께 EtOH 1㎖ 중의 0.015mmol)하여, 화합물(214)(여기서, R₁은 에틸이다, 표 2 참조)을 수득하였다. 화합물(214)은 실시예 6 및 7에 기재된 바와 같은 화학적 상관성을 기초로 하여 (1R,2R) 입체화학을 나타내는 것으로 입증되었으며, 이는 화합물(206)(여기서, R₁은 비닐이다)이 화합물(13c)에 의해 나타나는 바와 같이 동일한 절대 배위를 가짐을 보여준다(R₁이 비닐이기 때문에 1R,2S이기는 하나).

HPLC 분석 조건: Chiralcel^R OD-H(4.6mm×25cm), 2,5% 이소프로판올/헥산의 고정 상을 사용하는 이소크래틱 조건.

실시예 14

디벤조일-D-타르타르산을 사용한 결정화에 의한 (1R,2S)/(1S,2S)-1-아미노-2-비닐사이클로프로필 카복실레이트의 분할:

EtOAc(800㎖) 중의 조 라세미체 (1S,2S 및 1R,2S) 에틸 1-아미노-2-비닐사이클로프로필 카복실레이트[실시예 13에 기재된 바와 같이 N-(디페닐메틸렌)글리신 에틸 에스테르(25.0g, 93.5mol)로부터 수득함]의 용액에 디벤조일-D-타르타르산(33.5g, 93.5mol)을 가하였다. 이들 혼합물을 환류하에 가열하여, 실온에서 15분 동안 방치한 다음, 0℃로 냉각시켰다. 30분 후, 백색 고체가 수득되었다. 고체를 여과하고, EtOAc(100㎖)로 세척하여, 공기-건조시켰다. 고체를 아세톤(70㎖)에 현탁시키고 초음파 처리하여 여과(3x)시켰다. 이어서, 고체를 뜨거운 아세톤에서 2회 재결정화시켰다(생성물 A). 모액을 농축시키고, 잔류물을 뜨거운 아세톤에서 3회 재결정화시켰다(생성물 B). 디벤조일-D-타르타르산 염의 무정형 백색 고체의 2가지 생성물을 합하여(5.53g,) Et₂O(250㎖)와 포화 NaHCO₃ 용액(150㎖)의 혼합물에 현탁시켰다. 유기 층을 염수로 세척하여, 건조(MgSO₄)시키고 여과시켰다. 여액을 1N HCl/Et₂O(100㎖)로 희석시키고 감압하에 농축시켰다. 유성 잔류물을 CCl₄로 증발시켜, 에틸 1(R)-아미노-2(S)-비닐 사이클로프로판카복실레이트 하이드로클로라이드(940mg, 수율 11%)를 백색 흡습성 고체로서 수득하며, 이를 실시예 13의 화합물(13c)과의 상관성에 의해 절대 입체화학을 결정하였다. [α]_D ²⁵ +39.5℃ (c 1.14 MeOH); [α]₃₆₅ ²⁵ +88.5℃ (c 1.14 MeOH); ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 9.07 (broad s, 2H), 5.64 (ddd, J=17.2, 10.4, 8.7Hz, 1H), 5.36 (dd, J=17.2, 1.6Hz, 1H), 5.19 (dd, J=10.4, 1.6Hz, 1H), 4.24-4.16 (m, 2H), 2.51-2.45 (m, DMSO에 의해 차단된 피크, 1H), 1.84 (dd, J=10.0, 6.0Hz, 1H), 1.64 (dd, J=8.3, 6.0Hz, 1H), 1.23 (t, J=7.1Hz, 3H); MS(ESI) m/z 156 (MH)⁺; 에난티오머의 순도는 Boc 유도체(실시예 13)의 HPLC 분석(CHIRALPAK AS^R 칼럼, Hex:i-PrOH)에 의해 91% ee로 측정되었다.

P4-P2 빌딩 블록

실시예 15

단편 Ac-Chg-Chg-Pro(4(R)-나프탈렌-1-일메톡시)-OH(15g)의 합성:

화합물(15a)(실시예 2로부터의 화합물(2)과 동일함)(4.45g, 11.98mmol)을 무수 CH₃CN(60㎖)에 용해시키고, DBU(2.2㎖, 14.38mmol) 및 알릴 브로마이드(1.1㎖, 13.18mmol)를 연속적으로 가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시켜, 생성된 오일을 EtOAc와 물로 희석시키고, 물(2x)과 염수(1x)로 연속해서 세척하였다. EtOAc 층을 건조(MgSO₄)시키고, 여과한 다음, 증발 건조시켰다. 황색 오일을 섬광 크로마토그래피(용출제-헥산:EtOAc=90:10 내지 85:15)에 의해 정제하여, 생성물(15b)을 황색 오일(2, 4.17g, 수율 85%)로서 수득하였다. MS(FAB) 412 MH⁺. ¹H NMR (CDCl₃), 로타머의 약 1:2 혼합물, δ (d, J=8Hz, 1H), 7.87 (d, J=8Hz, 1H), 7.82 (d, J=8Hz, 1H), 7.55-7.41 (m, 4H), 5.95-5.85 (m, 1H), 5.34-5.21 (m, 2H), 5.03-4.88 (m, 2H), 4.70-4.56 (m, 2H), 4.48 & 4.39 (t, J=8, 15Hz, 1H), 4.28-4.23 (m, 1H), 3.81-3.55 (m, 2H), 2.46-2.36 (m, 1H), 2.13-2.05 (m, 1H), 1.44 & 1.41 (s, 9H).

화합물(15b)(2.08g, 5.05mmol)을 4N HCl/디옥산으로 실온에서 30분 동안 처리하였다. 이를 증발 건조시켜, 상응하는 아민-HCl을 오일로서 수득하였다. 아민-HCl(15c)을 무수 DCM(25㎖)과 NMM(2.2㎖, 20.22mmol)에 용해시키고, Boc-Chg-OH·H₂O(1.53g, 5.56mmol)와 TBTU(1.95g, 6.07mmol)를 연속해서 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, EtOAc로 희석시키고 10% 수성 시트르산(2x), 포화 수성 NaHCO₃(2x), 물(2x) 및 염수(1x)로 연속해서 세척하였다. EtOAc 층을 건조(MgSO₄)시키고, 여과하고, 증발 건조시켜, 조 생성물(15d)을 황백색 발포체(약 2.78g, 수율 100%)로서 수득하였다. MS (FAB) 551.4 MH⁺. ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.03 (d, J=8Hz, 1H), 7.86 (b d, J=8.5Hz, 1H), 7.84 (d, J=8Hz, 1H), 7.56-7.40 (m, 4H), 5.92-5.85 (m, 1H), 5.31 (dd, J=1, 17Hz, 1H), 5.22 (dd, J=1, 10Hz, 1H), 5.17 (d, J=9Hz, 1H), 5.05 (d, J=12Hz, 1H), 4.91 (d, J=12Hz, 1H), 4.67-4.60 (m, 3H), 4.31-4.27 (m, 2H), 4.16 (b d, J=11Hz, 1H), 3.71 (dd, J=4, 11Hz, 1H), 2.47-2.41 (m, 1H), 2.08-1.99 (m, 1H), 1.85-1.63 (m, 5H), 1.44-1.40 (m, 1H), 1.36 (s, 9H), 1.28-1.00 (m, 5H).

조 디펩타이드(15d)(약 5.05mmol)를 화합물(15c)의 합성법에서 기재한 바와 같이 4N HCl/디옥산(25㎖)으로 처리하였다. 조 하이드로클로라이드 염을, 화합물(15d)의 합성법에서 기재한 바와 같이 DCM(25㎖) 중의 NMM(2.22㎖, 20.22mmol)과 TBTU(1.95g, 6.07mmol)를 사용하여, Boc-Chg-OH·H₂O(1.53g, 5.55mmol)에 커플링시켜, 조 트리펩타이드(15e)를 황색 오일 발포체로서 수득하였다. 조 물질을 섬광 크로마토그래피(용출제-헥산:EtOAc=80:20 내지 75:25)에 의해 정제하여, 트리펩타이드(15e)를 백색 발포체(2.75g, 2단계에 걸친 수율 79%)를 수득하였다. MS (FAB) 690.5 MH⁺. ¹H NMR (CDCl₃) δ 대부분 1개 로타머, δ 8.06 (d, J=8Hz, 1H), 7.87 (b d, J=8.5Hz, 1H), 7.82 (d, J=8Hz, 1H), 7.57-7.40 (m, 4H), 6.41 (d, J=8.5Hz, 1H), 5.92-5.84 (m, 1H), 5.31 (dd, J=1, 17Hz, 1H), 5.23 (dd, J=1, 10.5Hz, 1H), 5.04 (d, J=12Hz, 1H), 4.98 (b d, J=7Hz, 1H), 4.93 (d, J=12Hz, 1H), 4.63-4.58 (m, 4H), 4.29-4.25 (m, 1H), 4.10-4.07 (m, 1H), 3.90-3.84 (m, 1H), 3.72 (dd, J=4, 11Hz, 1H), 2.48-2.40 (m, 1H), 2.07-1.99 (m, 1H), 1.83-1.55 (m, 12H), 1.43 (s, 9H), 1.23-0.89 (m, 10H).

트리펩타이드(15e)(2.75g, 3.99mmol)를 화합물(15c)의 합성법에서 기재한 바와 같이 4N HCl/디옥산(20㎖)으로 처리하였다. 조 하이드로클로라이드 염을 무수 DCM(20㎖)에 용해시켰다. NMM(1.75㎖, 15.94mmol)과 아세트산 무수물(752㎕, 7.97mmol)을 연속해서 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 EtOAc로 희석시켰다. 유기 층을 10% 수성 시트르산(2x), 포화 수성 NaHCO₃(2x), 물(2x) 및 염수(1x)로 연속해서 세척한 다음, 건조(MgSO₄)시키고, 여과하고, 증발 건조시켜, 조 트리펩타이드(15f)를 백색 발포체(2.48g, 수율 98%)로서 수득하였다. MS (FAB) 632.4 MH+I. ¹H NMR (CDCl₃), 대부분 1개 로타머, δ 8.06 (b d, J=8Hz, 1H), 7.87 (b d, J=8Hz, 1H), 7.83 (d, J=8Hz, 1H), 7.58-7.40 (m, 4H), 6.36 (d, J=9Hz, 1H), 6.01 (d, J=9Hz, 1H), 5.94-5.83 (m, 1H), 5.34-5.28 (m, 1H), 5.25-5.21 (m, 1H), 5.05 (d, J=12Hz, 1H), 4.94 (d, J=12Hz, 1H), 4.64-4.57 (m, 4H), 4.30-4.23 (m, 2H), 4.12-4.08 (m, 1H), 3.73 (dd, J=4, 11Hz, 1H), 2.49-2.42 (m, 1H), 2.08-2.01 (m, 1H), 1.99 (s, 3H), 1.85-1.53 (m, 1H), 1.25-0.88 (m, 11H).

조 트리펩타이드(15f)(2.48g, 3.93mmol)를 CH₃CN:DCM(20㎖)의 무수 혼합물에 용해시켰다. 트리페닐포스핀(53.5mg, 0.200mmol)과 테트라키스(트리페닐포스핀)-팔라듐(O) 촉매(117.9mg, 0.102mmol)을 연속해서 가한 다음, 피롤리딘(353.9㎕, 4.24mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 그후, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc와 10% 수성 시트르산에 용해시키고, 10% 수성 시트르산, 물(2x) 및 염수(1x)로 2회 이상 추가로 세척하였다. 유기 층을 건조(MgSO₄)시키고, 여과한 다음, 증발시켰다. 조 생성물을 Et₂O:DCM(85:15) 중에서 연마하여 여과한 후, 트리펩타이드(15g)를 백색 고체(2.09g, 수율 90%)로서 수득하였다. MS (FAB) 592.4 MH⁺ 614.3 (M+Na)⁺. ¹H NMR (CDCl₃) 대부분 1개 로타머, δ 8.08 (d, J=8Hz, 1H), 7.93 (b d, J=9Hz, 1H), 7.88 (b d, J=8Hz, 1H), 7.82 (d, J=8Hz, 1H), 7.57-7.41 (m, 4H), 6.47 (d, J=8.5Hz, 1H), 5.05 (d, J=12.5Hz, 1H), 4.94 (d, J=12.5Hz, 1H), 4.73 (t, J=9.5, 19Hz, 1H), 4.44-4.35 (m, 2H), 4.26 (b s, 1H), 4.19 (d, J=11.5Hz, 1H), 3.75 (dd, J=4, 11Hz, 1H), 2.47 (b dd, J=7.5, 13.5Hz, 1H), 2.20-2.11 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 1.88-1.41 (m, 11H), 1.30-0.80 (11H).

실시예 16

단편 Ac-Chg-Val-Pro(4(R)-나프탈렌-1-일메톡시)-OH(16e)의 합성

화합물(16a)(2.89g, 7.02mmol)을 화합물(15c)의 합성법에서 기재한 바와 같이 4N HCl/디옥산(30㎖)으로 처리하였다. 조 하이드로클로라이드 염을, 화합물(15d)의 합성법에서 기재한 바와 같이 3.5시간 동안 DCM(35㎖) 중의 NMM(3.1㎖, 28.09mmol)과 TBTU(2.71g, 8.43mmol)를 사용하여, Boc-Val-OH(1.53g, 7.73mmol)에 커플링시켜 조 디펩타이드(16b)를 상아색 오일-발포체(약 3.60g, 수율 100%)로서 수득하였다. MS (FAB) 509.3 MH^- 511.3 MH⁺ 533.2 (M+Na)⁺. ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.04 (b d, J=8Hz, 1H), 7.87 (b d, J=7Hz, 1H), 7.82 (d, J=8Hz, 1H), 7.56-7.40 (m, 4H), 5.93-5.85 (m, 1H), 5.34-5.28 (m, 1H), 5.24-5.19 (m, 2H), 5.04 (d, J=12Hz, 1H), 4.92 (d, J=12Hz, 1H), 4.67-4.60 (m, 3H), 4.31-4.26 (m, 2H), 4.11-4.09 (m, 1H), 3.72 (dd, J=4, 11Hz, 1H), 2.48-2.41 (m, 1H), 2.07-1.99 (m, 1H), 1.44-1.36 (m, 1H), 1.37 (s, 9H), 1.01 (d, J=7Hz, 3H), 0.93 (d, J=7Hz, 3H).

조 디펩타이드(16b)(약 7.02mmol)를 화합물(15c)의 합성법에서 기재한 바와 같이 4N HCl/디옥산(30㎖)으로 처리하였다. 조 하이드로클로라이드 염을, 화합물(15d)의 합성법에서 기재한 바와 같이 CH₂Cl₂(35㎖) 중의 NMM(3.1㎖, 28.09mmol)과 TBTU(2.71g, 8.43mmol)를 사용하여, Boc-Val-OH·H₂O(2.13g, 7.73mmol)에 커플링시켜 조 트리펩타이드(16c)를 상아색 발포체(약 4.6g, 수율 100%)로서 수득하였다. MS (FAB) 648.5 MH^- 672.4 (M+Na)⁺. ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.06 (b d, J=8Hz, 1H), 7.87 (b d, J=7.5Hz, 1H), 7.82 (b d, J=8Hz, 1H), 7.57-7.40 (m, 4H), 6.46 (b d, J=8.5Hz, 1H), 5.94-5.84 (m, 1H), 5.31 (dd, J=1, 17Hz, 1H), 5.23 (dd, J=1, 10.5Hz, 1H), 5.03 (d, J=12Hz, 1H), 5.00-4.97 (m, 1H), 4.93 (d, J=12Hz, 1H), 4.63-4.59 (m, 4H), 4.29-4.27 (m, 1H), 4.10-4.07 (m, 1H), 3.92-3.86 (m, 1H), 3.72 (dd, J=5, 11Hz, 1H), 2.48-2.41 (m, 1H), 2.10-1.99 (m, 1H), 1.76-1.57 (m, 6H), 1.43 (s, 9H), 1.20-0.92 (m, 6H), 1.00 (d, J=7Hz, 3H), 0.93 (d, J=7Hz, 3H).

조 트리펩타이드(16c)(약 7.02mmol)를 화합물(15c)의 합성법에서 기재한 바와 같이 4N HCl/디옥산(30㎖)으로 처리하였다. 조 하이드로클로라이드 염을 화합물(15d)의 합성법에서 기재한 바와 같이 CH₂Cl₂(35㎖) 중의 아세트산 무수물(1.33㎖, 14.05mmol)과 NMM(3.1㎖, 28.09mmol)으로 추가로 처리하였다. 조 생성물을 섬광 크로마토그래피(용출제-헥산:EtOAc=30:70)하여, 아세틸화되고 보호된 트리펩타이드(16d)를 백색 발포체(약 3.39g, 3단계에 걸친 수율 81%)로서 수득하였다. MS(FAN) 590.3 MH^- 592.4 NH⁺ 614.4 (M+Na)⁺. ¹H NMR (CDCl₃), 대부분 1개 로타머, δ 8.06 (d, J=8Hz, 1H), 7.88 (b d, J=8Hz, 1H), 7.83 (d, J=8Hz, 1H), 7.58-7.41 (m, 4H), 6.37 (d, J=9Hz, 1H), 5.97 (d, J=8.5Hz, 1H), 5.94-5.84 (m, 1H), 5.31 (dd, J=1, 17Hz, 1H), 5.24 (dd, J=1, 10.5Hz, 1H), 5.05 (d, J=12Hz, 1H), 4.94 (d, J=12Hz, 1H), 4.66-4.57 (m, 4H), 4.31-4.22 (m, 2H), 4.11-4.05 (m, 1H), 3.73 (dd, J=4.5, 11Hz, 1H), 2.50-2.43 (m, 1H), 2.09-2.01 (m, 2H), 2.00 (s, 3H), 1.68-1.55 (m, 5H), 1.15-0.89 (m, 6H), 0.99 (d, J=7Hz, 3H), 0.91 (d, J=7Hz, 3H).

아세틸화된 트리펩타이드(16d)(3.39g, 5.73mmol)를 화합물(15g)의 합성법에서 기재한 바와 같이 무수 CH₃CN:DCM(30㎖)의 1:1 혼합물 중의 트리페닐포스핀(78.1mg, 0.298mmol)과 피롤리딘(516㎕, 6.19mmol)과 함께, 테트라키스(트리페닐포스핀)-팔라듐(O) 촉매(172.1mg, 0.149mmol)에 의해 탈보호시켰다. 조 담황색 발포체 생성물을 Et₂O:DCM(85:15)으로 연마하여 여과한 후 트리펩타이드(16e)를 회백색 고체(3.0g, 수율 95%)로서 수득하였다. MS(FAB) 550.3 MH^-. ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.08 (d, J=8Hz, 1H), 8.04 (b d, J=9Hz, 1H), 7.88 (b d, J=7.5Hz, 1H), 7.82 (d, J=8Hz, 1H), 7.58-7.37 (m, 5H), 5.05 (d, J=12Hz, 1H), 4.94 (d, J=12Hz, 1H), 4.61 (t, J=19.5Hz, 1H), 4.46-4.37 (m, 2H), 4.27 (b s, 1H), 4.17 (d, J=11Hz, 1H), 3.74 (dd, J=4, 11Hz, 1H), 2.49 (b dd, J=7.5, 13Hz, 1H), 2.17-2.09 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 2.03-1.94 (m, 1H), 1.79 (b d, J=12.5Hz, 1H), 1.62-1.43 (m, 5H), 1.08-0.85 (m, 5H), 1.00 (d, J=7Hz, 3H), 0.90 (d, J=7Hz, 3H).

표 1 내지 4의 화합물들

실시예 17

표 1의 화합물(104)의 합성

화합물(17a)(4.27g, 7.93mmol, 실시예 6에서 화합물(6a)로서 기재함)을 화합물(15c)에 대해 기재한 바와 바와 같이 5시간 동안 4N HCl/디옥산(40㎕)으로 처리하였다. 조 하이드로클로라이드 염을 THF(10㎖)에 용해시켜, H₂O(5㎖) 중의 NaOH(348.7mg, 8.72mmol)의 용액을 가하고, 이어서 THF(13㎖)에 용해된 (Boc)₂O(1.73g, 7.93mmol)을 적가하였다. 필요에 따라, 10% 수성 NaOH를 첨가하여 pH를 8로 유지시켰다. 반응 혼합물을 격렬하게 교반한 다음, Et₂O와 H₂O로 희석시키고, Et₂O로 1회 이상 추출하였다. 수층을 10% 수성 시트르산을 사용하여 pH 3으로 산성화시켰다. 혼합물을 EtOAc(3x)로 추출하였다. 합한 EtOAc 추출물을 H₂O(2x)와 염수(1x)로 세척하고, 건조(MgSO₄)시키고, 여과하고, 증발 건조시켜, 조 화합물(17b)을 상아색 발포체(약 7.93mmol)로서 수득하였다. MS (FAB) 481.3 MH^-. ¹H NMR (CDCl₃), 로타머의 약 1:1 혼합물, δ 8.04 (b d, J=7.5Hz, 1H), 7.87(b d, J=7.5Hz, 1H), 7.82 (d, J=7.5Hz, 1H), 7.56-7.40 (m, 5H), 4.96 (b s, 2H), 4.33 (t, J=7.5, 14.5Hz, 1H), 4.21-4.09 (m, 0.5H), 3.99-3.84 (m, 0.5H), 3.78-3.75 (m, 0.5H), 3.68-3.62 (m, 0.5H), 3.61-3.42 (m, 1H), 2.55-2.41 (m, 1H), 2.22-2.11 (m, 1H), 1.61-1.52 (m, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.40-1.31 (m, 1H), 1.25-1.19 (m, 1H), 0.99 (t, J=7.5, 14.5Hz, 3H).

화합물(17b)(약 7.93mmol)을 화합물(15b)에 대해 기재한 바와 같이 48시간 동안 무수 CH₃CN(40㎖) 중의 DBU(1.18㎖, 93mmol) 및 알릴브로마이드(4.12㎖, 47.61mmol)로 처리하여, 알릴화된 디펩타이드(17c)를 상아색 발포체(3.54g, 2단계에 걸친 수율 86%)로서 수득하였다. MS (FAB) 521.3 MH^- 542.2 (M+Na)⁺. ¹H NMR (CDCl₃), 로타머의 약 1:1 혼합물, δ 8.05 (b d, J=8Hz, 1H), 7.86 (b d, J=7.5Hz, 1H), 7.82 (d, J=8Hz, 1H), 7.55-7.40 (m, 5H), 5.88-5.79 (m, 1H), 5.27 (b d, J=17.5Hz, 1H), 5.18 (b d, J=10Hz, 1H), 5.03-4.89 (m, 2H), 4.63-4.50 (m, 2H), 4.44-4.19 (m, 2H), 4.00-3.40 (m, 2H), 2.70-2.02 (m, 2H), 1.66-1.35 (m, 5H), 1.44 (s, 9H), 0.95 (t, J=7.5, 14.5Hz, 3H).

조 디펩타이드(17c)(1.18g, 2.26mmol)를 화합물(15c)에 대해 기재한 바와 같이 4N HCl/디옥산(35㎖)으로 처리하였다. 조 하이드로클로라이드 염을, 화합물(15d)에 대해 기재한 바와 같이 DCM(11㎖) 중의 NMM(993㎕, 9.03mmol)과 TBTU(870mg, 2.71mmol)를 사용하여, Boc-Chg-OH·H₂O(684mg, 2.48mmol)에 커플링시켜 조 트리펩타이드(17d)를 상아색 발포체(1.41g, 95%)로서 수득하였다. MS (FAB) 660.4 MH^- 662.3 MH⁺. ¹H NMR (CDCl₃), 대부분 1개 로타머, δ 8.03 (b d, J=8Hz, 1H), 7.85 (b d, J=8Hz, 1H), 7.81 (d, J=8Hz, 1H), 7.56-7.39 (m, 5H), 5.88-5.77 (m, 1H), 5.26 (dd, J=1.5, 17Hz, 1H), 5.15 (dd, J=1.5, 10.5Hz, 1H), 5.12 (s, 1H), 5.02-4.92 (m, 2H), 4.72-4.59 (m, 1H), 4.57-4.46 (m, 1H), 4.42-4.35 (m, 1H), 4.33-4.20 (m, 1H), 4.02-3.90 (m, 1H), 3.78-3.70 (m, 1H), 3.67-3.51 (m, 1H), 2.71-2.61 (m, 1H), 2.12-2.02 (m, 1H), 1.79-1.48 (m, 10H), 1.45-1.39 (m, 1H), 1.38 (s, 9H), 1.25-1.01 (m, 5H), 0.94 (t, J=7.5, 14Hz, 3H).

조 트리펩타이드(17d)(265mg, 0.400mmol)를 화합물(15c)에 대해 기재한 바와 같이 4N HCl/디옥산(3㎖)으로 처리하였다. 조 하이드로클로라이드 염을, 화합물(15d)에 대해 기재한 바와 같이 DCM(3㎖) 중의 NMM(176㎕, 1.60mmol)과 TBTU(154.3mg, 0.481mmol)를 사용하여, Boc-Chg-OH·H₂O(143.3mg, 0.521mmol)에 커플링시켜 조 테트라펩타이드(17e)를 상아색 발포체(약 0.400mmol, 100%)로서 수득하였다. MS (FAB) 799.5 MH^- 801.5 MH⁺ 823 (M+Na)⁺. ¹H NMR (CDCl₃), 로타머의 약 1:1 혼합물, δ 8.05 (b d, J=8.5Hz, 1H), 7.87 (b d, J=7.5Hz, 1H), 7.81 (d, J=8.5Hz, 1H), 7.55-7.40 (m, 4H), 7.37 (s, 1H), 6.58-6.41 (m, 1H), 5.89-5.78 (m, 1H), 5.26 (b dd, J=1.5, 17Hz, 1H), 5.16 (b dd, J=1.5, 10.5Hz, 1H), 5.20-4.92 (m, 3H), 4.68-4.58 (m, 2H), 4.57-4.47 (m, 1H), 4.43-4.26 (m, 1H), 3.99-3.81 (m, 2H), 3.78-3.60 (m, 2H), 2.67-2.60 (m, 1H), 2.11-2.02 (m, 1H), 1.78-1.42 (m, 14H), 1.44 & 1.43 (s, 9H), 1.25-0.91 (m, 13H), 0.95 (t, J=7.5, 15Hz, 3H).

조 테트라펩타이드(17e)(약 0.400mmol)를 화합물(15c)에 대해 기재한 바와 같이 4N HCl/디옥산(3㎖)으로 처리하였다. 조 하이드로클로라이드 염을, 화합물(15f)에 대해 기재한 바와 같이 DCM(3㎖) 중의 아세트산 무수물(83㎕, 0.884mmol)과 NMM(194㎕, 1.77mmol)으로 추가로 처리하여, 조 아세틸화된 테트라펩타이드(17f)를 상아색 발포체(약 0.400mmol)로서 수득하였다. MS (FAB) 741.5 MH^- 743.4 MH⁺ 765.4 (M+Na)⁺. ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.05 (b d, J=8.5Hz, 1H), 7.87 (b d, J=7.5Hz, 1H), 7.82 (d, J=8.5Hz, 1H), 7.55-7.41 (m, 4H), 7.39 (s, 1H), 6.63-6.48 (m, 1H), 6.01 (d, J=8.5Hz, 1H), 5.90-5.79 (m, 1H), 5.27 (b dd, J=1.5, 17Hz, 1H), 5.16 (b dd, J=1.5, 10.5Hz, 1H), 5.01 (d, J=12Hz, 1H), 4.96 (d, J=12Hz, 1H), 4.69-4.48 (m, 3H), 4.44-4.37 (m, 1H), 4.36-4.22 (m, 1H), 3.96 (dd, J=4, 11Hz, 1H), 3.78-3.60 (m, 2H), 2.67-2.59 (m, 1H), 2.10-2.00 (m, 1H), 2.01 (s, 3H), 1.78-1.48 (m, 13H), 1.45-1.35 (m, 1H), 1.26-0.89 (m, 13H), 0.95 (t, J=7.5, 15Hz, 3H).

아세틸화된 테트라펩타이드(17f)(약 0.400mmol)를, 화합물(15g)에 대해 기재한 바와 같이 무수 CH₃CN:DCM(2㎖)의 1:1 혼합물 중의 트리페닐포스핀(5.12mg, 0.020mmol)과 피롤리딘(34㎕, 0.406mmol)을 사용하여, 테트라키스(트리페닐포스핀)-팔라듐(O) 촉매(11.3mg, 0.010mmol)에 의해 탈보호시켰다. 조 생성물을 섬광 크로마토그래피(용출제-1차 EtOAc, 2차 DCM 중의 1.92% HOAc, 3.85% MeOH)에 의해 정제한 다음, 동결건조시킨 후, 표 1의 테트라펩타이드 화합물(104)을 회백색 무정형 고체(193.1mg, 5단계에 걸친 수율 73%)로서 수득하였다. MS (FAB) 701.4 MH^- 703.4 MH⁺ 725.4 (M+Na)⁺. ¹H NMR (DMSO), 로타머의 1:5 혼합물, δ 8.57 δ 8.32 (s, 1H), 8.04 (d, J=7.5Hz, 1H), 7.94 (b d, J=7.5Hz, 1H), 7.88 (d, J=8Hz, 1H), 7.83-7.78 (m, 2H), 7.58-7.30 (m, 4H), 4.99 (d, J=12Hz, 1H), 4.90 (d, J=12Hz, 1H), 4.44-4.29 (m, 2H), 4.29-4.05 (m, 3H), 3.87-3.73 (m, 1H), 2.23-2.13 (m, 1H), 2.05-1.95 (m, 1H), 1.91 & 1.84 (s, 3H), 1.75-1.40 (m, 15H), 1.29-0.84 (m, 12H), 0.91 (t, J=7.5, 14.5Hz, 3H).

실시예 18

표 1의 화합물(105)의 합성

화합물(18b), 즉 실시예 5의 화합물(5f)에 상응하는 화합물을 실시예 15에 이미 기재한 예비형성된 트리펩타이드(18a)에 커플링시켰다. 보다 구체적으로는, 화합물(18b)(약 0.521mmol)을 DCM(3㎖) 중의 화합물(18a)(323.6mg, 0.547mmol)과 NMM(172㎕, 1.562mmol)과 합한 다음, HATU(237.6mg, 0.625mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한 후, 화합물(15d)에 대해 기재한 바와 같이 후처리하여, 조 테트라펩타이드를 P1에서의 라세미 혼합물로서 수득하였다. 두 가지 이성체를 섬광 크로마토그래피(용출제-톨루엔:EtOAc=40:60)에 의해 부분적으로 분리하였다. 초반부 용출 분획을 합하면 9:1 혼합물이 수득되며, 이의 주성분은 화합물(17f)의 유사한 3급-부틸 에스테르(58mg)이다. 중반부 분획은 화합물(17f)의 상응하는 3급-부틸 에스테르와 화합물(105)의 t-부틸 에스테르(163mg)를 상이한 비율로 함유하였다. 후반부 용출 분획은 화합물(105)의 상응하는 3급-부틸 에스테르를 주 이성체(75.8mg)로서 제공하였다.

후반부의 에스테르(74mg, 0.0975mmol)를 4N HCl/디옥산(2㎖)에 용해시켜, 실온에서 5.5시간 동안 교반한 다음, 증발 건조시켜 오일을 수득하였다. 이를 섬광 크로마토그래피(용출제-1차 EtOAc, 2차 DCM 중의 1.92% HOAc, 3.85% MeOH)에 의해 정제하여 동결건조시킨 후, 화합물(105)를 백색 무정형 고체(38.7mg, 수율 56%)로서 수득하였다. HPLC 분석한 결과, 화합물(105)과 화합물(104)의 비가 3:1인 것으로 나타났다. MS (FAB) 701.5 MH^- 703.5 MH⁺ 725.6 (M+Na)⁺. ¹H NMR (DMSO), 로타머의 1:2.5 혼합물, δ 8.76 & 8.34 (s, 1H), 8.05 (b d, J=7.5Hz, 1H), 7.94 (b d, J=8Hz, 1H), 7.88 (d, J=8.5Hz, 1H), 7.85-7.78 (m, 2H), 7.59-7.43 (m, 4H), 4.99 (d, J=12Hz, 1H), 4.89 (d, J=12Hz, 1H), 4.41-4.05 (m, 5H), 3.82-3.66 (m, 1H), 2.25-2.11 (m, 1H), 2.11-1.98 (m, 1H), 1.90 & 1.84 (s, 3H), 1.78-1.40 (m, 15H), 1.39-0.82 (m, 12H), 0.90 (t, J=7, 14Hz, 3H).

실시예 19

표 1의 화합물(103)의 합성

실시예 17의 화합물(104)의 합성법에 기재된 과정에 따라, 실시예 10에서 제조된 중간체 화합물(10d)의 1(R),2(R) 및 1(R),2(S) 이성체의 혼합물을 화합물(2)과 커플링시켜, 이성체성 중간체 화합물(19a)와(19b)의 혼합물을 수득하였다.

실시예 18의 과정에 따라, 이성체성 화합물(19a)와 (19b)를 분리하여 상응하는 화학식 I의 화합물로 전환시켜, 표 1의 상응하는 화합물(103)을 분리하였다.

스펙트럼 데이터:

화합물(103): NMR에 의한 로타머의 비율(약 1:8.7)

MS (FAB) m/z: 703 (MH+); ¹H NMR (DMSO-d₆) δ 8.21-8.09 (bs, 1H), 8.05 (b d, J=7.63Hz, 1H), 7.94 (b d, J=7.0Hz, 1H), 7.91-7.83 (m, 2H), 7.83-7.76 (m, 1H), 7.59-7.5 (m, 3H), 7.5-7.43 (m, 1H), 4.99 (d, J=11.8Hz, 1H), 4.89 (d, J=11.8Hz, 1H), 4.43-4.30 (m, 3H), 4.23-4.16 (m, 1H), 4.13 (b d, J=10.8Hz, 1H), 3.71 (dd, J=11.1, 4Hz, 1H), 2.2-2.02 (m, 2H), 1.87 및 1.84 (2 x s, 3H), 1.81-1.71 (m, 2H), 1.70-1.40 (m, 12H), 1.26-1.06 (m, 4H), 1.04-0.83 (m, 11H), 0.59 (m, 1H).

실시예 20

표 1의 화합물(108)의 합성

실시예 17로부터의 조 테트라펩타이드(17e)(약 0.963mmol)를 화합물(15c)에 대해 기재한 바와 같이 4N HCl/디옥산 용액(5㎖)으로 처리하였다. 조 하이드로클로라이드 염을, 화합물(15d)에 대해 기재한 바와 같이 실온에서 3시간 동안 DCM(5㎖) 중의 NMM(423㎕, 3.850mmol)과 TBTU(370.8mg, 1.155mmol)를 사용하여, Boc-(D)Glu(O-알릴)-OH(331.9mg, 1.155mmol)에 커플링시켰다. 조 펜타펩타이드(20b)를 상아색 발포체(약 933.9mg, 0.963mmol)로서 수득하였다. MS (FAB) 968.6 MH^- 970.6 MH⁺ 992.5 (M+Na). ¹H NMR (CDCl₃), 로타머의 약 1:4 혼합물, δ 8.05 (d, J=8.5Hz, 1H), 7.87 (b d, J=7.5Hz, 1H), 7.81 (d, J=8.5Hz, 1H), 7.58-7.34 (m, 5H), 6.77-6.25 (m, 2H), 5.98-5.77 (m, 2H), 5.38-5.21 (m, 4H), 5.16 (dd, J=1.5, 10.5Hz, 1H), 5.06-4.89 (m, 2H), 4.68-4.13 (m, 7H), 3.96-3.52 (m, 4H), 2.69-2.38 (m, 3H), 2.23-1.87 (m, 2H), 1.78-1.37 (m, 17H), 1.46 & 1.44 (s, 9H), 1.22-0.87 (m, 11H), 0.95 (t, J=7, 14.5Hz, 3H).

조 펜타펩타이드(20b)(약 0.963mmol)를 화합물(15c)에 대해 기재한 바와 같이 4N HCl/디옥산 용액(5㎖)으로 처리하였다. 조 하이드로클로라이드 염을, 화합물(15d)에 대해 기재한 바와 같이 DCM(5㎖) 중의 NMM(423㎕, 3.850mmol)과 TBTU(370.8mg, 1.155mmol)를 사용하여, Boc-Asp(O-알릴)-OH(315.6mg, 1.155mmol)에 커플링시켰다. 조 헥사펩타이드(20c)를 상아색 발포체(약 1.083g, 0.963mmol)로서 수득하였다. MS (FAB) 1147.6 (M+Na)⁺. ¹H NMR (CDCl₃), 로타머의 약 1:1 혼합물, δ 8.06 (b d, J=8Hz, 1H), 7.86 (d, J=8Hz, 1H), 7.81 (d, J=8Hz, 1H), 7.59-7.39 (m, 5H), 7.39-6.34 (m, 4H), 5.98-5.76 (m, 3H), 5.38-5.10 (m, 6H), 5.10-4.89 (m, 2H), 4.66-4.05 (m, 10H), 3.87-3.58 (m, 4H), 3.30-2.65 (m, 2H), 2.65-1.89 (m, 3H), 1.79-1.33 (m, 19H), 1.47 & 1.45 (s, 9H), 1.33-0.86 (m, 14H).

조 헥사펩타이드(20c)(약 0.963mmol)를 화합물(15c)에 대해 기재한 바와 같이 4N HCl/디옥산 용액(5㎖)으로 처리하였다. 조 하이드로클로라이드 염을, 화합물(15f)에 대해 기재한 바와 같이 DCM(5㎖) 중의 아세트산 무수물(182㎕, 1.193mmol)과 NMM(423.5㎕, 3.850mmol)을 사용하여, 아세틸화시켜, 조 아세틸화된 테트라펩타이드를 수득하였다. 발포체 잔류물을 섬광 크로마토그래피(용출제-1차 헥산:EtOAc 20:80 내지 10:90, 2차 순수한 EtOAc)에 의해 정제하여, 아세틸화된 헥사펩타이드(20d)를 상아색 발포체(528mg, 4단계에 걸친 수율 51%)로서 수득하였다. MS (FAB) 1067.6 (MH+) 1089.6 (M+Na).

아세틸화된 헥사펩타이드(20d)(528mg, 0.495mmol)를 DCM(3㎖)에 용해시킨 다음, DCM(3㎖) 중의 테트라키스(트리페닐포스핀)-팔라듐(O) 촉매(90mg, 0.078mmol)와 피롤리딘(134㎕, 1.603mmol)을 예비혼합하여 15분간 교반한 용액으로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 48시간 동안 교반한 후, 용매를 증발시켰다. 조 생성물을 Et₂O:DCM(85:15) 중에서 연마하여 부분 정제하고, 이어서 분취 HPLC로 2개의 배취로 정제하였다. 부분 정제된 물질의 절반을 빙초산(5㎖)에 용해시켜 Millipore^R:Millex^R-HV 0.45㎛를 통해 여과시키고, 평형화된 Whatman Partisil^R 10-ODS-3(2.2x50cm) C18 역상 컬럼에 주입하였다. 정제 프로그램: 15㎖/분의 직선 구배, 230㎛, 5% A에서 주입; 일단 모든 HOAc가 용출되면, 프로그램이 개시된다 - 5% A에서 10분, 5 내지 58% A에서 70분 이내; A: 0.06% TFA/CH₃CN; B: 0.06% TFA/H₂O. 분획을 분석용 HPLC로 분석하고, 양쪽 HPLC 정제로부터 수득한 적합한 분획을 회수한 다음, 동결건조시켜, 목적하는 헥사펩타이드 화합물(108)을 백색 무정형 고체(218.3mg, 수율 47%)로서 수득하였다. MS (FAB) 945.5 MH^- 947.4 MH⁺ 969.5 (M+Na)⁺ 985.4 (M+K)⁺. ¹H NMR (DMSO), 로타머의 약 1:9 혼합물, δ 8.55 & 8.31 (s, 1H), 8.16 (d, J=7.5Hz, 1H), 8.11 (d, J=8Hz, 1H), 8.05 (d, J=8.5Hz, 1H), 7.97-7.85 (m, 2H), 7.88 (d, J=8.5Hz, 1H), 7.75 (d, J=9Hz, 1H), 7.59-7.39 (m, 4H), 4.99 (d, J=12Hz, 1H), 4.89 (d, J=12Hz, 1H), 4.53 (dd, J=7, 14Hz, 1H), 4.08-4.45 (m, 6H), 3.77 (b dd, J=4, 11Hz, 1H), 2.64 (dd, J=6.5, 16.5Hz, 1H), 2.48-2.41 (m, 1H), 2.25-2.12 (m, 3H), 2.07 & 1.82 (s, 3H), 2.04-1.86 (m, 2H), 1.80-1.35 (m, 14H), 1.32-0.80 (m, 14H), 0.91 (t, J=7.5, 14.5Hz, 3H).

실시예 21

표 3의 화합물(301)의 합성

H₂O(4㎖) 중의 수산화리튬 일수화물(23mg, 0.56mmol)의 용액을 MeOH(3.5㎖) 및 THF(3.5㎖) 중의 에스테르 화합물(21a)(45mg, 0.185mmol, (R,R) 이성체(9c)로서 앞서 기재함)의 용액에 가하였다. 생성된 용액을 16시간 동안 격렬하게 교반한 다음, EtOAc(60㎖)와 10% 수성 HCl(20㎖) 사이에 분배하였다. 유기 상을 분리하여 건조(MgSO₄)시키고, 여과하고, 농축시켜 상응하는 산을 정량적 수율로 수득하였다.

이들 물질(약 0.185mmol)을 DMF(5㎖) 중의 (S)-(-)-α-메틸벤질아민(27mg, 0.22mmol), HATU(77mg, 0.20mmol) 및 DIPEA(0.11㎖, 0.65mmol)와 합하였다. 20시간 후, 반응물을 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc에 용해시키고, 용액을 포화 수성 NaHCO₃, 10% 수성 HCl 및 염수로 연속해서 세척한 다음, 건조(MgSO₄)시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 이를 섬광 크로마토그래피(용출제-35% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여, 커플링된 생성물(21b) 11mg(28%)을 수득하였다. 이들 물질(11mg, 0.033mmol)을 4N HCl/디옥산으로 35분 동안 처리하였다. 그후, 반응 혼합물을 농축 건조시켜 상응하는 아민의 하이드로클로라이드 염을 수득하였다. 최종 생성물을 DMF(4㎖) 중의 화학식

의 화합물(33mg, 0.036mmol, 실시예 15와 20에서와 유사한 과정으로 제조함), HATU(14mg, 0.036mmol) 및 DIPEA(0.116㎖, 0.02mmol)와 커플링시켰다. 반응 혼합물을 16시간 동안 교반한 후, 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc에 용해시켰다. 용액을 포화 수성 NaHCO₃, 10% 수성 HCl 및 염수로 연속해서 세척한 다음, 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켜, 백색 고체를 수득하였다. 이들 물질(약 0.033)을 EtOH(6㎖)에 용해시키고, 수소 가스 대기하에서 암모늄 아세테이트(7mg, 0.09mmol) 및 10% Pd/C(10mg)로 처리하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과시켰다. 여액을 농축 건조시켰다. 이어서, 잔류물을 DMSO에 용해시키고 분취 HPLC에 의해 정제하여 동결건조시킨 후, 백색 고체(17.6mg, 2단계에 걸친 수율 57%)를 수득하였다.

스펙트럼 데이터: MS (FAB) ES^- 932.6 (M-H)^-, 954.5 (M-Na)^-; HRMS C₄₈ H₆₇N₇O₁₂ (MH⁺) 계산치: 934.49261; 실측치: 934.49010; ¹H-NMR (DMSO, d₆) δ 8.90 (s, 1H), 8.24 (d, J=7.95Hz, 1H), 8.14 (d, J=7.63Hz, 1H), 7.99 (d, J=8.26Hz, 1H), 7.79 (d, J=8.9Hz, 1H), 7.75 (d, J=8.26Hz, 1H), 7.42-7.17 (m, 10H), 5.00 (quintet, J=7.63Hz, 1H), 4.7 (m, 1H), 4.52 (d, J=11.76Hz, 1H), 4.43 (d, J=11.4Hz, 1H), 4.33-4.2 (m, 6H), 3.70 (dd, J=11.4 및 11.1Hz, 2H), 2.63 (dd, J=5.7 및 5.7Hz, 1H), 2.45 (dd, J=7.95 및 7.95Hz, 1H), 2.21-2.11 (m, 3H), 2.07-1.97 (m, 1H), 1.93-1.83 (m, 2H), 1.81 (s, 3H), 1.78-1.63 (m, 2H), 1.54-1.41 (m, 2H), 1.39 (d, J=7.0Hz, 3H), 1.29 (dd, J=7.94 및 7.63Hz, 1H), 1.15 (quintet, J=7.0Hz, 1H), 1.05 (m, 1H), 0.90 (d, J=6.36Hz, 6H), 0.88-0.83 (m, 1H), 0.71 (m, 9H).

실시예 22

표 1의 화합물(107)은 실시예 17에 기재된 프로토콜에 따라 합성하였다.

NMR에 의한 로타머의 비율(1:7.6): MS (FAB) m/z: 675 (MH+); ¹H-NMR (DMSO-D₆) δ 8.35-8.19 (bs, 1H), 8.04 (d, J=7.63Hz, 1H), 7.93 (b d, J=7.31Hz, 1H), 7.88 (d, J=8.27Hz, 1H), 7.86-7.79 (m, 2H), 7.59-7.49 (m, 3H), 7.46 (dd, J=7.95, 7.95Hz, 1H), 4.98 (d, J=11.8Hz, 1H), 4.89 (d, J=11.8Hz, 1H), 4.40-4.34 (m, 1H), 4.32 (bs, 1H), 4.29-4.24 (m, 1H), 4.22-4.15 (m, 1H), 4.09 (d, J=11.8Hz, 1H), 3.74 (dd, J=11.1, 4Hz, 1H), 2.20-2.12 (m, 1H), 2.05-1.94 (m, 2H), 1.84 (s, 3H), 1.72-1.42 (m, 7H), 1.20-1.13 (m, 1H), 1.08-0.87 (m, 13H), 0.85 (d, J=6.68Hz, 6H).

실시예 23

표 1의 화합물(114)은 실시예 17에 기재된 프로토콜에 따라 합성하였다.

NMR에 의한 로타머의 비율(1:7.5): MS (FAB) m/z: 747 (M+Na⁺); ¹H-NMR (DMSO-D₆ ) δ 8.40-8.24 (bs, 1H), 8.07-8.01 (m, 1H), 7.96-7.91 (m, 1H), 7.87 (d J=8.26Hz, 1H), 7.85-7.78 (m, 2H), 7.58-7.49 (m, 3H), 7.46 (dd, J=7.95, 7.95Hz, 1H), 7.30-7.21 (m, 4H), 7.20-7.14 (m, 1H), 4.98 (d, J=11.8Hz, 1H), 4.89 (d, J=11.8Hz, 1H), 4.40-4.34 (m, 1H), 4.34-4.29 (m, 1H), 4.29-4.25 (m, 1H), 4.22-4.15 (m, 1H), 4.09 (d, J=11.8Hz, 1H), 3.74 (dd, J=11.1, 4Hz, 1H), 2.95-2.79 (m, 2H), 2.21-2.11 (m, 1H), 2.05-1.94 (m, 2H), 1.89-1.83 (2 x s, 3H), 1.63-1.41 (m, 7H), 1.38-1.30 (m, 1H), 1.27-1.22 (m, 1H), 1.12-0.94 (m, 5H), 0.89 (d, J=6.4Hz, 3H), 0.84 (d, J=6.4Hz, 3H).

실시예 24

표 1의 화합물(118)은 실시예 17에 기재된 프로토콜에 따라 합성하였다.

NMR에 의한 로타머의 비율 (약 1:6.3): MS (FAB) m/z: 677.4 (MH⁺); ¹H-NMR (DMSO-D₆) δ 8.58 및 8.38 (2 x bs, 1H), 8.04 (d, J=7.63Hz, 1H), 7.93 (d, J=7.63Hz, 1H), 7.91-7.81 (m, 3H), 7.59-7.49 (m, 3H), 7.49-7.43 (m, 1H), 4.98 (d, J=12.1Hz, 1H), 4.89 (d, J=12.1Hz, 1H), 4.41-4.29 (m, 2H), 4.29-4.14 (m, 2H), 4.1 (d, J=10.8Hz, 1H), 3.74 (b d, J=7.63Hz, 1H), 2.21-2.12 (m, 1H), 2.04-1.92 (m, 2H), 1.90 및 1.84 (2 x s, 3H), 1.63-1.41 (m, 9H), 1.39-1.26 (m, 3H), 1.21-1.15 (m, 1H), 1.06-0.92 (m, 5H), 0.92-0.80 (m, 9H).

실시예 25

표 1의 화합물(116)은 실시예 17에 기재된 프로토콜에 따라 합성하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ 8.36 (s, 1H), 8.14 (d, J=8Hz, 1H), 8.O4 (d, J=8Hz, 1H), 7.99 (d, J=9Hz, 1H), 7.79 (d, J=9Hz, 1H), 7.33-7.26 (m, 5H), 4.54-4.42 (m, 3H), 4.30-4.21 (m, 5H), 4.06 (d, J=11Hz, 1H), 3.69 (dd, J= Hz, 1H), 2.62 (dd, J=16, 10Hz, 1H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.18-2.14 (m, 3H), 2.02-1.87 (m, 2H), 1.82 (s, 3H), 1.74-1.66 (m, 2H), 1.54-1.47 (m, 2H), 1.38-1.27 (m, 2H), 1.21-1.18 (m, 1H), 0.97-0.85 (m, 11H), 0.80-0.70 (m, 7H).

실시예 26

표 1의 화합물(121)은 실시예 17에 기재된 프로토콜에 따라 합성하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ 9.12 (d, J=6Hz, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.30 (d, J=8Hz, 1H), 8.12 (d, J=9Hz, 1H), 8.05 (dd, J=8, 7Hz, 1H), 7.97 (d, J=8Hz, 1H), 7.80 (dd, J=8, 7Hz, 1H), 7.66 (d, J=9Hz, 1H), 7.54 (d, J=6Hz, 1H), 5.70-5.61 (m, 2H), 5.26 (d, J=17Hz, 1H), 5.07 (d, J=12Hz, 1H), 4.52 (d, J=12Hz, 1H), 4.39 (dd, J=9, 8Hz, 1H), 4.23-4.12 (m, 2H), 4.03-3.99 (m, 1H), 2.66-2.54 (m, 1H), 2.35-2.28 (m, 1H), 2.08 (dd, J=9, 17Hz, 1H), 2.01-1.93 (m, 1H), 1.83 (s, 3H), 1.65-1.46 (m, 5H), 1.41-1.38 (m, 1H), 1.24-1.20 (dd, J=9, 5Hz, 1H), 01.05-0.78 (m, 12H).

실시예 27

표 2의 화합물(205)은 실시예 17에 기재된 프로토콜에 따라 합성하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ 9.14 (d, J=6Hz, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.32 (d, J=8Hz, 1H), 8.14-8.06 (m, 2H), 7.98 (d, J=8Hz, 1H), 7.82 (dd, J=8, 7Hz, 1H), 7.66 (d, J=9Hz, 1H), 7.55 (d, J=8Hz, 1H), 5.75-5.66 (m, 2H), 5.22 (d, J=17Hz, 1H), 5.07 (d, J=10Hz, 1H), 4.50 (d, J=12Hz, 1H), 4.39 (dd, J=9, 9Hz, 1H), 4.23-4.08 (m, 3H), 2.56-2.50 (m, 1H), 2.36-2.28 (m, 1H), 2.04-1.97 (m, 1H), 1.82 (s, 3H), 1.62-1.41 (m, 7H), 1.24 (dd, J=5, 4Hz, 1H), 0.94-0.75 (m, 12H).

실시예 28

표 1의 화합물(117)은 실시예 20에 기재된 프로토콜에 따라 합성하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ 8.36 (s, 1H), 8.17 (d, J=8Hz, 1H), 8.09 (d, J=8Hz, 1H), 8.04 (d, J=8Hz, 1H), 7.96-7.92 (m, 2H), 7.87 (d, J=8Hz, 1H), 7.77 (d, J=9Hz, 1H), 7.56-7..45 (m, 4H), 4.99 (d, J=12Hz, 1H), 4.89 (d, J=12Hz, 1H), 4.52 (dd, J=14, 7Hz, 1H), 4.37-4.12 (m, 6H), 3.78-3.73 (m, 1H), 2.63 (dd, J=17, 6Hz, 1H), 2.47-2.42 (m, 1H), 2.22-2.16 (m, 3H), 2.04-1.86 (m, 2H), 1.82 (s, 3H), 1.77-1.71 (m, 1H), 1.69-1.42 (m, 8H), 1.30 (quint., J=8Hz, 1H), 1.20 (dd, J=12, 8Hz, 1H), 1.10-0.85 (m, 15H), 0.76-0.72 (m, 1H).

실시예 29

표 1의 화합물(120)은 실시예 20에 기재된 프로토콜에 따라 합성하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ 8.34 (s, 1H), 8.12 (d, J=8Hz, 1H), 8.05 (d, J=8Hz, 1H), 7.95-7.87 (m, 3H), 7.81 (d, J=9Hz, 1H), 7.64-7.52 (m, 4H), 7.46 (dd, J=8, 7Hz, 1H), 4.99 (d, J=12Hz, 1H), 4.89 (d, J=12Hz, 1H), 4.63 (dd, J=14, 7Hz, 1H), 4.37-4.14 (m, 4H), 3.74 (dd, J=11, 4Hz, 1H), 3.41-3.35 (m, 2H), 2.61 (dd, J=16, 7Hz, 1H), 2.44 (dd, J=16, 8Hz, 1H), 2.20-2.15 (m, 1H), 2.04-1.96 (m, 3H), 1.82 (s, 3H), 1.70-1.64 (m, 1H), 1.56-1.43 (m, 7H), 1.30 (quint., J=8Hz, 1H), 1.20 (dd, J=8, 5Hz, 1H), 0.99-0.72 (m, 21H).

실시예 30

재조합 HCV NS3 프로테아제 유형 1b의 클로닝, 발현 및 정제

HCV-감염 환자의 혈청을 외부 조력책(Bernard Willemas MD, Hopital St-Luc, Montreal, Canada 및 Dr. Donald Murphy, Laboratoire de Sante Publique du Quebec, Ste-Anne de Bellevue, Canada)을 통해 입수하였다. HCV 게놈의 조작된 전장 cDNA 주형을, 다른 유전자형 1b 균주간의 상동성을 기본으로 하여 선택한 특정한 프라이머를 사용하여, 혈청 RNA의 역전사-PCR(RT-PCR)에 의해 수득되는 DNA 단편으로부터 작제하였다. 전체 게놈 서열을 결정함으로써, 유전자형 1b가 문헌[참조: Simmonds et al., J. Clin. Microbiol., (1993), 31, p. 1493-1503]의 분류에 따라 HCV 분리균으로 지정하였다. 비-구조 영역인 NS2-NS4B의 아미노산 서열은 HCV 유전자형 1b(BK, JK 및 483 분리균)와 93% 이상 동일하고, HCV 유전자형 1a와 88% 동일하였다(HCV-1 분리균). 폴리단백질 전구체를 암호화하는 DNA 단편(NS3/NS4A/NS4B/NS5A/NS5B)을 PCR에 의해 생성시켜, 진핵생물의 발현 벡터에 도입하였다. 일시적인 형질감염 후, HCV NS3 프로테아제에 의해 매개된 폴리단백질 프로세싱을, 웨스턴 블롯 분석을 이용하여 성숙한 NS3 단백질의 존재에 의해 입증하였다. NS3 프로테아제를 불활성화시키는 변이 S1165A를 함유하는 폴리단백질 전구체는 발현하였지만, 성숙한 NS3 단백질은 관찰되지 않았으며, 이는 HCV NS3 프로테아제의 작용성을 입증한다.

재조합 HCV NS3 프로테아제를 암호화하는 DNA 단편(아미노산 1027 내지 1206)을 pET11d 세균성 발현 벡터내에서 클로닝시켰다. 이. 콜라이(E. coli) BL21(DE3)pLysS내에서의 NS3 프로테아제 발현은 22℃에서 3시간 동안 1mM IPTG와 함께 항온처리함으로써 유도되었다. 전형적인 발효(18L)에 의해 습윤 세포 페이스트 약 100g을 수득하였다. 세포를 25mM 인산나트륨(pH 7.5), 10% 글리세롤(v/v), 1mM EDTA 및 0.01% NP-40으로 이루어진 용해 완충액(3.0㎖/g)에 재현탁시켜 -80℃에서 저장하였다. 세포를 해동시켜 균질화시킨 다음, 5mM DTT를 가하였다. 이어서, 염화마그네슘과 DNase를 각각 최종 농도 20mM 및 20㎍/㎖로 하여 균질물에 가하였다. 4℃에서 25분 동안 배양한 후, 균질물을 초음파 처리하여, 4℃에서 30분 동안 15000xg에서 원심분리하였다. 이어서, 1M 인산나트륨 용액을 사용하여 상청액의 pH를 6.5로 조절하였다.

부가적인 겔 여과 크로마토그래피 단계를 국제공개공보 제95/22985호(본원에 참고로 인용되어 있음)에 기재되어 있는 2단계 정제 과정에 추가한다. 요약하면, 세균 추출물로부터의 상청액을 완충액 A(50mM 인산나트륨, pH 6.5, 10% 글리세롤, 1mM EDTA, 5mM DTT, 0.01% NP-40) 중에서 2㎖/분의 유속으로 미리 평형화시킨 SP HiTrap 컬럼(제조원: Pharmacia) 상에 부하시켰다. 이어서, 컬럼을 0.15M NaCl을 함유하는 완충액 A로 세척하고 0.15 내지 0.3M NaCl 선형 농도 구배의 10컬럼 용적을 사용하여 프로테아제를 용출시켰다. NS3 프로테아제-함유 분획을 풀링시켜 최종 NaCl 농도가 0.1M로 되도록 희석시켰다. 효소를 완충액 B(25mM 인산나트륨, pH 7.5, 10% 글리세롤, 5mM DTT, 0.01% NP-40) 중에서 평형화시킨 HiTrap 헤파린 컬럼(제조원: Pharmacia) 상에서 추가로 정제하였다. 샘플을 3㎖/분의 유속으로 부하시켰다. 이어서, 컬럼을 0.15M NaCl을 함유하는 완충액 B로 1.5㎖/분의 유속으로 세척하였다. 2단계 세척 공정을 0.3M 또는 1M NaCl을 함유하는 완충액 B의 존재하에서 수행하였다. 0.3M NaCl 세척액에서 프로테아제를 수거하여 완충액 B로 3배 희석시키고, HiTrap 헤파린 컬럼 상에 재적용시켜 0.4M NaCl을 함유하는 완충액 B로 용출시켰다. 최종적으로, NS3 프로테아제-함유 분획을 0.3M NaCl을 함유하는 완충액 B에서 평형화시킨 Superdex 75 HiLoad 16/60 컬럼(제조원: Pharmacia) 상에 적용시켰다. SDS-PAGE에 이은 사진농도계 분석에 의해, 풀링시킨 분획으로부터 수득한 HCV NS3 프로테아제의 순도가 95% 이상인 것으로 판명되었다.

효소를 -80℃에서 저장하여, 사용 직전에 얼음 상에서 해동시키고 희석시켰다.

실시예 31

재조합 HCV NS3 프로테아제/NS4A 조인자 펩타이드 방사계 검정

효소를 실시예 30에 기재된 프로토콜에 따라 클로닝, 발현 및 제조하였다. 효소를 -80℃에서 저장하여, 사용 직전에 얼음 상에서 해동시켜, NS4A 조인자 펩타이드를 함유하는 검정용 완충액으로 희석시켰다.

NS3 프로테아제/NS4A 조인자 펩타이드 방사계 검정에 사용되는 기질(DDIVPC-SMSYTW)을 효소에 의해 시스테인과 세린 잔기 사이에서 절단하였다. 서열 DDIVPC-SMSYTW는 P2내의 시스테인 잔기가 프롤린으로 대체되어 있는 NS5A/NS5B 천연 절단 부위에 상응하였다. 펩타이드 기질 DDIVPC-SMSYTW와 트레이서 비오틴-DDIVPC-SMS[¹²⁵I-Y]TW를 억제제의 존재 또는 부재하에서 재조합 NS3 프로테아제 및 NS4A 펩타이드 조인자 KKGSVVIVGRIILSGRK(효소:조인자의 몰비=1:100)와 함께 항온처리하였다. 아비딘-피복된 아가로스 비즈를 검정 혼합물에 가한 다음, 여과하여, 생성물로부터 기질을 분리하였다. 여액에서 발견되는 SMS[¹²⁵I-Y]TW 생성물의 양으로부터 기질의 전환율과 억제율 %를 계산할 수 있다.

A. 시약

Tris 및 Tris-HCl(UltraPure)은 지브코-BRL(Gibco-BRL: UltraPure)로부터 입수하였다. 글리세롤(UltraPure), MES 및 BSA는 시그마(Sigma)로부터 구입하였다. TCEP는 피어스(Pierce)로부터 구입하고, DMSO는 알드리히(Aldrich)로부터 구입하며, NaOH는 아나케미아(Anachemia)로부터 구입하였다.

검정용 완충액: 50mM Tris-HCl, pH 7.5, 30%(w/v) 글리세롤, 1mg/㎖ BSA, 1mM TCEP(TCEP는 물 중의 1M 스톡 용액으로부터 사용 직전에 첨가함).

기질: DDIVPCSMSYTW, 25μM 최종 농도(산화를 방지하기 위해 -20℃에서 저장한 DMSO 중의 2mM 스톡 용액으로부터).

트레이서: 환원된 모노요오드화 기질 비오틴 DDIVPC SMS[¹²⁵I Y]TW(~1nM 최종 농도).

HCV NS3 프로테아제 유형 1b, 25nM 최종 농도(50mM 인산나트륨, pH 7.5, 10% 글리세롤, 300mM NaCl, 5mM DTT, 0.01% NP40 중의 스톡 용액으로부터).

NS4A 조인자 펩타이드: KKGSVVIVGRIILSGRK, 2.5μM 최종 농도(-20℃에서 저장한 DMSO 중의 2mM 스톡 용액으로부터).

B. 프로토콜

96웰 폴리프로필렌 플레이트(제조원: Costar)에서 검정을 수행하였다. 각각의 웰은 검정용 완충액 중의 20㎕ 기질/트레이스, 20% DMSO/검정용 완충액 중의 10㎕±억제제, 10㎕ NS3 프로테아제 1b/NS4 조인자 펩타이드(몰비 1:100)를 함유하였다.

또한, 블랭크(억제제 및 효소 비함유)와 대조군(억제제 비함유)을 동일한 검정 플레이트 상에 제조하였다.

효소/NS4A 펩타이드 용액을 가하여 효소 반응을 개시하고, 이들 검정 혼합물을 적당하게 교반하면서 23℃에서 40분 동안 배양하였다. 0.5N NaOH 10㎕를 가하고, 1M MES(pH 5.8) 10㎕를 가하여 효소 반응을 종결시켰다.

아비딘-피복된 아가로스 비즈(구입원: Pierce) 20㎕를 Millipore MADP N65 여과 플레이트에 가하였다. 급냉시킨 검정 혼합물을 여과 플레이트로 옮겨, 적당하게 교반하면서 23℃에서 60분 동안 배양하였다.

밀리포어 멀티스크린 진공 복합 여과(Millipore Multiscreen Vacuum Manifold Filtration) 장치를 사용하여 플레이트를 여과하고, 여액 40㎕를 웰 1개당 60㎕의 신틸레이션액을 함유하는 불투명한 96웰 플레이트에 옮겼다.

¹²⁵I-액체 프로토콜을 사용하여 1분 동안 팩커드 탑카운트(Packard TpoCount instrument) 계기 상에서 여액을 계수하였다.

억제율(%)은 다음 식 100-[(계수_억제제-계수_블랭크)/계수_대조군-계수_블랭크)×100]에 의해 계산하였다.

Hill 모델을 적의화시킨 비선형 곡선을 억제-농도 데이터에 적용시키고, SAS 소프트웨어(Statistical Software System; SAS institute, Inc. Cary, N.C.)를 사용하여 50% 유효 농도(IC₅₀)를 계산하였다.

실시예 32

전장 NS3-NS4A 이질이량체 단백질 검정

NS2-NS5B-3의 비암호화 영역을 HCV 유전자형 1b 감염된 개체의 혈청(제공처: Dr. Bernard Willems, Hopital St-Luc, Montreal, Quebec, Canada)으로부터 추출한 RNA를 사용하여 RT-PCR에 의해 pCR^R3 벡터(Invitrogen)로 클로닝하였다. 이어서, NS3-NS4A DNA 영역을 PCR에 의해 pFastBac™ HTa 바쿨로바이러스 발현 벡터(구입원: Gibco/BRL)로 서브클로닝하였다. 벡터 서열에는 헥사히스티딘 tag를 함유하는 28개 잔기 N-말단 서열을 암호화하는 영역이 포함된다. Bac-to-Bac^TM 바쿨로바이러스 발현 시스템(구입원: Gibco/BRL)을 사용하여, 재조합 바쿨로바이러스를 제조하였다. 10⁶개 Sf21 세포/㎖를 27℃에서 0.1 내지 0.2의 감염 다중도로 재조합 바쿨로바이러스로 감염시켜 전장의 성숙한 NS3 및 NS4A 이종이량체 단백질(His-NS3-NS4AFL)을 발현시켰다. 48 내지 64시간 후, 감염된 배양균을 회수하여, 4℃에서 원심분리하였다. 세포 펠렛을 프로테아제 억제제 반응 혼합액의 존재하에서 50mM NaPO₄, pH 7.5, 40% 글리세롤(w/v), 2mM β-머캅토에탄올 중에서 균질화시켰다. 이어서, His-NS3-NS4AFL을 1.5% NP-40, 0.5% Triton X-100, 0.5M NaCl 및 DNae 처리를 사용하여 세포 용해물으로부터 추출하였다. 초원심분리한 후, 가용성 추출물을 4배 희석시켜 Pharmacia Hi-Trap Ni-킬레이트화 컬럼에 결합시켰다. 50 내지 400mM 농도 구배의 이미다졸을 사용하여, His-NS3-NS4AFL을 90% 이상의 순수한 형태(SDS-PAGE에 의해 판명)로 용출시켰다. His-NS3-NS4AFL을 50mM 인산나트륨, pH 7.5, 10%(w/v) 글리세롤, 0.5M NaCl, 0.25M 이미다졸, 0.1% NP-40 중에서 -80℃로 저장하였다. 이를 사용 직전에 얼음 상에서 해동시켜 희석시켰다.

His-NS3-NS4AFL의 프로테아제 활성은 50mM Tris-HCl, pH 80, 0.25M 나트륨 시트레이트, 0.01%(w/v) n-도데실-β-D-말토사이드, 1mM TCEP 중에서 검정하였다. 다양한 농도의 억제제의 존재하에서 5μM 내부 켄칭된 기질 안트라닐릴-DDIVPAbu[C(O)-O]-AMY(3-NO₂)TW-OH를 1.5nM His-NS3-NS4AFL과 함께 23℃에서 45분 동안 항온처리하였다. 최종 DMSO 농도는 5.25%를 초과하지 않았다. 1M MES(pH 5.8)를 가하여 반응을 종결시켰다. N-말단 생성물의 형광을 96웰 플레이트 판독기가 장착된 Perkin-Elmer LS-50B 형광정량기(여기 파장: 325nm, 방출 파장: 423nm)에서 모니터링하였다. Hill 모델을 적의화시킨 비선형 곡선을 억제-농도 데이터에 적용시키고, SAS 소프트웨어(Statistical Software System; SAS institute, Inc. Cary, N.C.)를 사용하여 50% 유효 농도(IC₅₀)를 계산하였다.

실시예 33

NS3 프로테아제 세포계 검정

당해 검정은 2가지 DNA 작제물[하나는 NS3-NS4A-NS4B-NS5A-tTA의 순서로 tTA에 융합된 HCV 비-구조 단백질을 포함하는 폴리단백질을 발현시키고(NS3라고 함), 다른 하나는 tTA 조절하에서 리포터 단백질, 분비된 알칼리성 포스파타제를 발현시킨다(SEAP라 함)]로 공형질감염된, 간종양에서 유도된 사람 세포주인 Huh-7 세포를 사용하여 수행하였다.

방출시키고자 하는 성숙한 단백질에 대한 NS3 프로테아제에 의해 폴리단백질을 절단해야 한다. 성숙한 단백질이 방출되자마자, 바이러스 단백질이 내질 세망의 막에서 복합체를 형성하면서, tTA가 핵으로 이동하여 SEAP 유전자를 전사활성화시키는 것으로 여겨진다. 따라서, NS3 단백질 분해 활성의 감소로 인해 성숙한 tTA 수준이 감소하는 동시에 SEAP 활성이 감소하였다.

화합물의 다른 작용을 제어하기 위해, tTA만을 발현시키는 작제물(tTA라고 함)이 SEAP 작제물로 공형질감염되어 SEAP 활성이 NS3 단백질 분해 활성과는 무관해지도록 대응하는 형질감염을 수행하였다.

검정 프로토콜: CHO-SFMII+10% FCS(송아지 태아 혈청)에서 성장한 Huh-7 세포를, FuGene 프로토콜(Boehringer Mannheim)을 사용하여 NS3과 SEAP 또는 tTA와 SEAP 둘 중 하나로 공형질감염시켰다. 37℃에서 5시간 후, 세포를 세척하고, 트립신 처리한 다음, 시험하고자 하는 화합물을 다양한 농도로 함유하는 96웰 플레이트에 플레이팅(80000개 세포/웰)시켰다. 24시간 동안 배양한 후, 분취량의 배지를 배출하여, 이들 분취량에서의 SEAP 활성을, Phospha-Light 키트(제조원: Tropix)를 사용하여 측정하였다.

화합물 농도에 따른 SEAP 활성의 억제율(%)을 SAS 소프트웨어로 분석하여, EC₅₀을 수득하였다.

이어서, 다음과 같은 MTT 검정법을 이용하여 화합물의 독성(TC₅₀)을 평가하였다:

MTT 용액(5mg/㎖ 배지) 20㎕를 각 웰에 가하여, 37℃에서 4시간 동안 배양하고;

배지를 제거하여 0.01N HCl+10% Triton X-100 50㎕를 가하고;

실온에서 1시간 이상 진탕한 후, 각 웰의 OD를 595nm 파장에서 판독하였다.

TC₅₀을 EC₅₀과 동일한 방법으로 계산하였다.

실시예 34

특이성 검정

각종 세린 프로테아제: 사람 백혈구 엘라스타제, 돼지 췌장 엘라스타제 및 소 췌장 α-키모트립신과 1개의 시스테인 프로테아제: 사람 간 카텝신 B에 대한 화합물의 특이성을 측정하였다. 모든 경우에, 각각의 효소에 특이적인 비색정량 p-니트로아닐린(pNA) 기질을 사용하는 96웰 플레이트 포맷 프로토콜을 사용하였다. 각각의 검정에는 효소-억제제를 30℃에서 1시간 동안 예비-항온처리한 다음, 기질을 첨가하여, UV Thermomax^R 마이크로플레이트 판독기로 측정하여 ~30% 전환율로 가수분해시키는 공정이 포함되었다. 기질 경쟁을 감소시키기 위해, 기질 농도는 K_M과 비교하여 가능한 한 낮게 유지시켰다. 화합물 농도는 이들의 효능에 따라 300 내지 0.06μM로 다양하였다. 각각의 검정에 대한 최종 조건은 다음과 같다:

50mM Tris-HCl(pH 8), 0.5M Na₂SO₄, 50mM NaCl, 0.1mM EDTA, 3% DMSO, 0.01% Tween-20;

[100μM Succ-AAPF-pNA 및 250pM α-키모트립신], [133μM Succ-AAA-pNA 및 8nM 돼지 엘라스타제], [133μM Succ-AAV-pNA 및 8nM 백혈구 엘라스타제]; 또는

[100mM NaHPO₄(pH 6), 0.1mM EDTA, 3% DMSO, 1mM TCEP, 0.01% Tween-20, 30μM Z-FR-pNA 및 5nM 카텝신 B(스톡 효소를 사용하기 전에 20mM TCEP를 함유하는 완충액 중에서 활성화시킴)].

돼지 췌장 엘라스타제에 대한 대표적인 예가 아래에 요약되어 있다:

Biomek 액체 핸들러(제조원: Beckman)를 사용하여 평저 폴리스티렌 96웰 플레이트에 다음의 물질을 가하였다;

· 검정용 완충액(50mM Tris-HCl(pH 8), 50mM NaCl, 0.1mM EDTA) 40㎕;

· 효소액(50mM Tris-HCl(pH 8), 50mM NaCl, 0.1mM EDTA, 0.02% Tween-20, 40nM 돼지 췌장 엘라스타제) 20㎕; 및

· 억제제 용액(50mM Tris-HCl(pH 8), 50mM NaCl, 0.1mM EDTA, 0.02% Tween-20, 1.5mM-0.3μM 억제제, 15% v/v DMSO) 20㎕.

30℃에서 60분 동안 예비배양한 후, 기질 용액(50mM Tris-HCl(pH 8), 0.5M Na₂SO₄, 50mM NaCl, 0.1mM EDTA, 665μM Succ-AAA-pNA) 20㎕를 각 웰에 가하고, 반응물을 30℃에서 60분 동안 추가로 배양한 후, UV Thermomax^R 플레이트 판독기 상에서 흡광도를 판독하였다. 일련의 웰을 대조군(억제제 비함유)과 블랭크(억제제 및 효소 비함유)용으로 배분하였다.

억제제 용액을, 50mM Tris-HCl(pH 8), 50mM NaCl, 0.1mM EDTA, 0.02% Tween-20, 15% DMSO를 사용하여, 액체 핸들러에 의해 별도의 플레이트 상에서 연속 2배 희석시켰다. 모든 다른 특이성 검정도 유사한 방식으로 수행하였다.

억제율(%)을 다음 식: [1-((UV_억제제-UV_블랭크)/(UV_대조군-UV_블랭크))×100]으로 계산하였다.

Hill 모델을 적의화시킨 비선형 곡선을 억제-농도 데이터에 적용시키고, SAS 소프트웨어(Statistical Software System; SAS institute, Inc. Cary, N.C.)를 사용하여 50% 유효 농도(IC₅₀)를 계산하였다.

화합물의 표

본 발명의 화합물을 실시예 31 및 32 중의 어느 하나 또는 둘 다의 검정법으로 평가한 결과, IC₅₀ 50μM 미만(A), 5μM 미만(B) 또는 0.5μM 미만(C)에서 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌다.

세포에서의 활성 및 특이성:

대표적인 본 발명의 화합물을 또한 실시예 33의 대용 세포계 검정법 및 실시예 34의 한가지 또는 몇가지 검정법으로 시험하였다. 예를 들어, 표 2의 화합물(233)은 실시예 32의 검정에서 IC₅₀이 1nM인 것으로 밝혀졌다. 실시예 33의 검정법에 의해 측정한 EC₅₀은 5.4μM인 반면, 120μM 이하의 농도에서는 다른 효과(tTA)는 검출되지 않았다. 화합물(233)을 MTT 검정으로도 시험하였으며, 이의 TC₅₀은 120μM 이상인 것으로 관찰되었으며, 이는 이러한 화합물이 유효 농도에서 무독성임을 나타낸다. 실시예 34의 특이성 검정에서, 동일한 화합물이 다음의 활성을 나타내는 것을 밝혀졌다: HLE > 7μM; PPE > 75μM; α-Chym. > 75μM; Cat. B > 75μM.

이들 결과는 상기 부류의 화합물이 NS3 프로테아제에 대해 매우 특이적임을 나타낸다.

하기 표에 본 발명의 대표적인 화합물들이 열거되어 있다. 다음과 같은 약어가 사용된다: MS: 질량 분광계 데이터; Ac: 아세틸; Bn: 벤질; Chg: 사이클로헥실글리신(2-아미노-2-사이클로헥실-아세트산); Dnl: 단실; O-Bn: 벤질옥시; Pip: 피페콜산; Tbg: 3급-부틸글리신.

Claims (70)

1. 라세미체, 부분입체 이성체 및 광학 이성체를 포함하는 화학식 I의 화합물, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르.

   화학식 I

   

   위의 화학식 I에서,

   a는 0 또는 1이고,

   b는 0 또는 1이며,

   Y는 H 또는 C_1-6 알킬이고,

   B는 H, 화학식 R₇-C(O)-의 아실 유도체 또는 화학식 R₇-SO₂의 설포닐(여기서, R₇은 (i) 치환되지 않거나 카복실, C_1-6 알카노일옥시 또는 C_1-6 알콕시로 치환된 C_1-10 알킬, (ii) 치환되지 않거나 카복실, (C_1-6 알콕시)카보닐 또는 페닐메톡시카보닐로 치환된 C_3-7 사이클로알킬, (iii) 치환되지 않거나 C_1-6 알킬, 하이드록시, 또는 치환되지 않거나 C_1-6 알킬로 치환된 아미노로 치환된, C₆ 또는 C₁₀ 아릴 또는 C_7-16 아르알킬 또는 (iv) 치환되지 않거나 C_1-6 알킬, 하이드록시, 치환되지 않거나 C_1-6 알킬로 치환된 아미노, 또는 치환되지 않거나 C_1-6 알킬로 치환된 아미도로 치환된, Het이고, 여기서, Het는 각각 1 또는 2개의 질소원자를 함유하는 6-원 모노사이클릭 헤테로사이클 또는 10-원 비사이클릭 헤테로사이클이다)이며,

   R₆은, 존재할 경우, 카복실로 치환된 C_1-6 알킬이고,

   R₅는, 존재할 경우, 치환되지 않거나 카복실로 치환된 C_1-6 알킬이며,

   R₄는 C_1-10 알킬, C_3-7 사이클로알킬 또는 C_4-10 (알킬사이클로알킬)이고,

   R₃은 C_1-10 알킬, C_3-7 사이클로알킬 또는 C_4-10 (알킬사이클로알킬)이며,

   R₂는 CH₂-R₂₀, NH-R₂₀, O-R₂₀ 또는 S-R₂₀[여기서, R₂₀은 치환되지 않거나 R₂₁로 일치환, 이치환 또는 삼치환된, 포화 또는 불포화 C_3-7 사이클로알킬 또는 C_4-10 (알킬 사이클로알킬); 치환되지 않거나 R₂₁로 일치환, 이치환 또는 삼치환된, C₆ 또는 C₁₀ 아릴 또는 C_7-16 아르알킬; 또는 치환되지 않거나 R₂₁로 일치환, 이치환 또는 삼치환된, Het 또는 (C_1-6 알킬)-Het{여기서, Het는 1개의 질소원자를 함유하는 6-원 모노사이클릭 헤테로사이클 또는 1 내지 4개의 질소원자를 함유하는 10-원 비사이클릭 헤테로사이클이고, R₂₁은 각각 독립적으로 C_1-6 알킬; C_1-6 알콕시; 치환되지 않거나 C_1-6 알킬로 일치환 또는 이치환된 아미노; 설포닐; NO₂; OH; SH; 할로; 할로알킬; 치환되지 않거나 C_1-6 알킬, C₆ 또는 C₁₀ 아릴, C_7-16 아르알킬, Het 또는 (C_1-6 알킬)-Het로 일치환된 아미도; 카복실; 카복시(C_1-6 알킬); C₆ 또는 C₁₀ 아릴, C_7-16 아르알킬 또는 Het이고, 여기서 아릴, 아르알킬 또는 Het는 치환되지 않거나 R₂₂로 치환된다(여기서, Het는 각각의 경우 독립적으로 피리딜, 모르폴리닐, 테트라졸릴 및 벤조디옥솔릴로부터 선택되고, R₂₂는 C_1-6 알킬; C_1-6 알콕시; 치환되지 않거나 C_1-6 알킬로 일치환 또는 이치환된 아미노; 설포닐; NO₂; OH; SH; 할로; 할로알킬; 카복실; 아미드; 또는 (C_1-6 알킬)아미드이다)}이다]이고,

   R₁은 치환되지 않거나 할로겐으로 치환된, C_1-6 알킬 또는 C_2-6 알케닐이며,

   W는 하이드록시 또는 N-치환된 아미노이다.
2. 제1항에 있어서, B가 H 또는 화학식 R₇C(O)-의 아실 유도체(여기서, R₇은 C_1-6 알킬; C_1-6 알콕시; 치환되지 않거나 하이드록시로 치환된 C_3-7 사이클로알킬; 치환되지 않거나 C_1-6 알킬 또는 Het로 치환된 아미도; 치환되지 않거나 C_1-6 알킬 또는 하이드록시로 치환된, C₆ 또는 C₁₀ 아릴, C_7-16 아르알킬 또는 Het이고, 여기서, Het는 각각 1 또는 2개의 질소원자를 함유하는 6-원 모노사이클릭 헤테로사이클 또는 10-원 비사이클릭 헤테로사이클이다)인 화합물.
3. 청구항 3은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

   제2항에 있어서, R₇이 C_1-6 알킬 또는 Het이고, 여기서, Het는 각각 1 또는 2개의 질소원자를 함유하는 6-원 모노사이클릭 헤테로사이클 또는 10-원 비사이클릭 헤테로사이클인 화합물.
4. 청구항 4은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

   제3항에 있어서, Het가 화학식

   

   로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화합물.
5. 청구항 5은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

   제2항에 있어서, B가 H, 아세틸, 화학식

   

   로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화합물.
6. 청구항 6은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

   제5항에 있어서, B가 아세틸인 화합물.
7. 제1항에 있어서, B가 R₇-SO₂이고, R₇이 치환되지 않거나 C_1-6 알킬로 치환된, C₆ 또는 C₁₀ 아릴, C_7-16 아르알킬 또는 Het이고, 여기서, Het는 각각 1 또는 2개의 질소원자를 함유하는 6-원 모노사이클릭 헤테로사이클 또는 10-원 비사이클릭 헤테로사이클인 화합물.
8. 제1항에 있어서, R₆이, 존재하는 경우, Asp 또는 Glu의 측쇄인 화합물.
9. 청구항 9은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

   제8항에 있어서, R₆이, 존재하는 경우, Asp의 측쇄인 화합물.
10. 제1항에 있어서, a가 0이고, R₆이 존재하지 않는 화합물.
11. 제1항에 있어서, R₅가, 존재하는 경우, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Val, L-Val, D-3급-부틸글리신(Tbg) 및 L-Tbg로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산의 측쇄인 화합물.
12. 청구항 12은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제11항에 있어서, R₅가, 존재하는 경우, D-Asp, D-Val 또는 D-Glu의 측쇄인 화합물.
13. 청구항 13은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제12항에 있어서, R₅가, 존재하는 경우, D-Glu의 측쇄인 화합물.
14. 제1항에 있어서, a가 0이고, b가 0이며, R₅와 R₆이 둘 다 존재하지 않는 화합물.
15. 제1항에 있어서, R₄가 Val, 사이클로헥실글리신(Chg), Tbg, Ile 및 Leu로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산의 측쇄인 화합물.
16. 청구항 16은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제15항에 있어서, R₄가 Chg 또는 Ile의 측쇄인 화합물.
17. 청구항 17은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제16항에 있어서, R₄가 Chg의 측쇄인 화합물.
18. 제1항에 있어서, Y가 H 또는 Me인 화합물.
19. 청구항 19은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제18항에 있어서, Y가 H인 화합물.
20. 제1항에 있어서, R₃이 Ile, Chg, Val 및 Tbg로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산의 측쇄인 화합물.
21. 청구항 21은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제20항에 있어서, R₃이 Val, Chg 또는 Tbg의 측쇄인 화합물.
22. 청구항 22은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제21항에 있어서, R₃이 Val 또는 Tbg의 측쇄인 화합물.
23. 제1항에 있어서, R₂가 S-R₂₀ 또는 O-R₂₀[여기서, R₂₀은 치환되지 않거나 R₂₁로 일치환, 이치환 또는 삼치환된, C₆ 또는 C₁₀ 아릴, C_7-16 아르알킬, Het 또는 -CH₂-Het{여기서, Het는 1개의 질소원자를 함유하는 6-원 모노사이클릭 헤테로사이클 또는 1 내지 4개의 질소원자를 함유하는 10-원 비사이클릭 헤테로사이클이고, R₂₁은 C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시; 아미노, 모노- 또는 디-(C_1-6 알킬)아미노; 치환되지 않거나 C_1-6 알킬, C₆ 또는 C₁₀ 아릴, C_7-16 아르알킬, Het 또는 (C_1-6 알킬)-Het로 일치환된 아미도; NO₂; OH; 할로; 트리플루오로메틸; 카복실; C₆ 또는 C₁₀ 아릴, C_7-16 아르알킬 또는 Het이고, 여기서, Het는 각각의 경우 독립적으로 피리딜, 모르폴리닐, 테트라졸릴 및 벤조디옥솔릴로부터 선택되고, 아릴, 아르알킬 또는 Het는 치환되지 않거나 R₂₂(여기서, R₂₂는 C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 아미노, 모노- 또는 디-(C_1-6 알킬)아미노, (C_1-6 알킬)아미드, NO₂, OH, 할로, 트리플루오로메틸 또는 카복실이다)로 치환된다}이다]인 화합물.
24. 청구항 24은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제23항에 있어서, R₂₁이 C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 아미노, 디(C_1-6 알킬)아미노, (C_1-6 알킬)아미드, C₆ 또는 C₁₀ 아릴 또는 Het이고, 여기서, Het는 각각의 경우 독립적으로 피리딜, 모르폴리닐, 테트라졸릴 및 벤조디옥솔릴로부터 선택되고, 아릴 또는 Het는 치환되지 않거나 R₂₂(여기서, R₂₂는 C_1-6 알콕시, 아미노, 디(C_1-6 알킬)아미노, (C_1-6 알킬)아미드, 할로 또는 트리플루오로메틸이다)로 치환되는 화합물.
25. 청구항 25은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제23항에 있어서, R₂가 치환되지 않거나 제23항에서 정의한 바와 같은 R₂₁로 일치환 또는 이치환된, 1-나프틸메톡시, 2-나프틸메톡시, 벤질옥시, 1-나프틸옥시, 2-나프틸옥시 또는 퀴놀린옥시인 화합물.
26. 청구항 26은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제23항에 있어서, R₂가 치환되지 않거나 제23항에서 정의한 바와 같은 R₂₁로 일치환 또는 이치환된, 1-나프틸메톡시 또는 퀴놀린옥시인 화합물.
27. 청구항 27은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제26항에 있어서, R₂가 화학식

    

    의 그룹[여기서, R_21A는 치환되지 않거나 C_1-6 알킬, C₆ 또는 C₁₀ 아릴, C_7-16 아르알킬 또는 Het로 치환된 아미도; 치환되지 않거나 R₂₂로 치환된, C₆ 또는 C₁₀ 아릴 또는 Het(여기서, Het는 각각의 경우 독립적으로 피리딜, 모르폴리닐, 테트라졸릴 및 벤조디옥솔릴로부터 선택되고, R₂₂는 아미노, 디(C_1-6 알킬)아미노 또는 (C_1-6 알킬)아미드이다)이고, R_21B는 C_1-6 알킬; C_1-6 알콕시; 아미노; 디(C_1-6 알킬)아미노; (C_1-6 알킬)아미드, NO₂, OH, 할로, 트리플루오로메틸 또는 카복실이다]인 화합물.
28. 청구항 28은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제27항에 있어서, R_21A가 치환되지 않거나 R₂₂로 치환된, C₆ 또는 C₁₀ 아릴 또는 Het(여기서, Het는 각각의 경우 독립적으로 피리딜, 모르폴리닐, 테트라졸릴 및 벤조디옥솔릴로부터 선택되고, R₂₂는 아미노, 디메틸아미노 또는 아세트아미도이다)인 화합물.
29. 청구항 29은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제27항에 있어서, R_21B가 C_1-6 알콕시 또는 디(C_1-6 알킬)아미노인 화합물.
30. 청구항 30은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제29항에 있어서, R_21B가 메톡시인 화합물.
31. 제1항에 있어서, 1위치의 비대칭 탄소가

    

    의 절대 배위(여기서, R₁은 제1항에서 정의한 바와 같다)로 표시되는 R 배위를 갖는 화합물.
32. 청구항 32은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제31항에 있어서, P1 상의 R₁ 치환체가

    

    의 절대 배위(여기서, R₁은 치환되지 않거나 할로로 치환된, 메틸, 에틸, 프로필 또는 비닐이다)로 표시되는 바와 같이 카보닐 그룹에 대해 syn 배향되어 있는 화합물.
33. 청구항 33은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제32항에 있어서, R₁이 에틸, 비닐 또는 브로모비닐인 화합물.
34. 청구항 34은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제33항에 있어서, R₁이 비닐인 화합물.
35. 제1항에 있어서, W가 하이드록시, (C_1-6 알킬)아미노, 디(C_1-6 알킬)아미노 또는 아미노 아르알킬인 화합물, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르.
36. 청구항 36은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제33항에 있어서, W가 하이드록시 또는 N(R_13a)R_13b(여기서, R_13a 및 R_13b는 독립적으로 H, 아릴, 또는 치환되지 않거나 하이드록시 또는 페닐로 치환된 C_1-6 알킬이다)인 화합물, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염.
37. 청구항 37은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제36항에 있어서, W가 -OH, -NH-벤질 또는 -NH-CH(Me)Ph인 화합물.
38. 청구항 38은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제37항에 있어서, W가 -OH 또는 -NH-(S)CH(Me)-페닐인 화합물.
39. 청구항 39은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제38항에 있어서, W가, C_1-6 알콕시, 페녹시 또는 아릴(C_1-6 알콕시)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 에스테르인 화합물.
40. 청구항 40은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제39항에 있어서, 에스테르가 메톡시, 에톡시, 페녹시, 벤질옥시 또는 PhCH(Me)-0-인 화합물.
41. 제1항에 있어서,

    B가 H, C_1-6 알킬-C(O)- 또는 Het-C(O)-(여기서, Het는 각각 1 또는 2개의 질소원자를 함유하는 6-원 모노사이클릭 헤테로사이클 또는 10-원 비사이클릭 헤테로사이클이다)이고,

    R₆이, 존재하는 경우, Asp 또는 Glu의 측쇄이며,

    R₅가, 존재하는 경우, D- 또는 L-Asp, D- 또는 L-Glu, D- 또는 L-Val, 또는 D- 또는 L-Tbg의 측쇄이고,

    Y가 H 또는 메틸이며,

    R₄가 Val, Chg, Tbg, Ile 또는 Leu의 측쇄이고,

    R₃이 수소이거나 Ile, Chg, Val 또는 Tbg의 측쇄이며,

    R₂가 1-나프틸메톡시, 2-나프틸메톡시, O-Bn,

    

    

    (여기서, Het는 각각의 경우 독립적으로 피리딜, 모르폴리닐, 테트라졸릴 및 벤조디옥솔릴로부터 선택되고, R₂₂는 아미노, 디(C_1-6 알킬)아미노, (C_1-6 알킬)아미드, NO₂, OH, 할로, CF₃ 또는 COOH이다)이고,

    P1이 화학식

    

    의 사이클로프로필 환 시스템(여기서, R₁은 에틸, 비닐 또는 브로모비닐이다)이며,

    W가 하이드록시 또는 N(R_13a)R_13b(여기서, R_13a 및 R_13b는 독립적으로 H, 아릴, 또는 치환되지 않거나 하이드록시 또는 페닐로 치환된 C_1-6 알킬이다)인 화학식 I의 화합물, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르.
42. 제1항에 있어서,

    B가 H, 아세틸 또는 Het-C(O)-(여기서, Het는 각각 1 또는 2개의 질소원자를 함유하는 6-원 모노사이클릭 헤테로사이클 또는 10-원 비사이클릭 헤테로사이클이다)이고,

    R₆이, 존재하는 경우, Asp의 측쇄이며,

    R₅가, 존재하는 경우, D-Asp, D-Glu 또는 D-Val의 측쇄이고,

    Y가 H이며,

    R₄가 Chg 또는 Ile의 측쇄이고,

    R₃이 Val, Chg 또는 Tbg의 측쇄이며,

    R₂가 1-나프틸메톡시, 벤질옥시, 4-퀴놀린옥시 또는

    

    이고,

    P1이 화학식

    

    의 사이클로프로필 환 시스템(여기서, R₁은 Et, CH=CH₂ 또는 CH=CHBr이다)이며,

    W가 하이드록시 또는 NH-(S)-CHMePh인 화학식 I의 화합물, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염.
43. 제1항에 있어서,

    B가 아세틸이고,

    R₆이, 존재하는 경우, Asp의 측쇄이며,

    R₅가, 존재하는 경우, D-Glu의 측쇄이고,

    Y가 H이며,

    R₄가 Chg의 측쇄이고,

    R₃이 Val 또는 Tbg의 측쇄이며,

    R₂가

    

    이고,

    P1이

    

    이며,

    W가 하이드록시인 화학식 I의 화합물, 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르.
44. 청구항 44은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제41항에 있어서, 화학식

    

    의 화합물.

    위의 화학식에서,

    B, P6, P5, P4, P3, R₂ 및 R₁은 아래에서 정의하는 바와 같다.

    

    
45. 청구항 45은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제41항에 있어서, 화학식

    

    의 화합물.

    위의 화학식에서,

    P6, P5, P4, P3, R₂ 및 R₁은 아래에서 정의하는 바와 같다.

    

    

    

    

    

    
46. 청구항 46은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제41항에 있어서, 화학식

    

    의 화합물.

    위의 화학식에서,

    B, P6, P5, P4, P3, R₂, R₁ 및 W는 아래에서 정의하는 바와 같다.

    
47. 청구항 47은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제41항에 있어서, 화학식

    

    의 화합물.

    위의 화학식에서,

    B, Y, P4, P3, R₂ 및 R₁은 아래에서 정의하는 바와 같다.

    
48. 청구항 48은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제41항에 있어서, 화학식

    

    의 화합물.

    위의 화학식에서,

    B 및 R₂₀은 아래에서 정의하는 바와 같다.

    

    

    
49. 청구항 49은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제44항에 있어서, 화합물(108), (116), (117) 및 (120)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화학식 I의 헥사펩타이드.
50. 청구항 50은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제45항에 있어서, 화합물(212), (222), (236) 및 (238)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화학식 I의 헥사펩타이드.
51. 청구항 51은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제46항에 있어서, 화합물(301) 및 (302)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화학식 I의 헥사펩타이드.
52. 청구항 52은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제44항에 있어서, 화합물(122) 및 (123)으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화학식 I의 테트라펩타이드.
53. 청구항 53은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제45항에 있어서, 화합물(202), (203), (205), (206), (207), (208), (209), (210), (211), (214), (215), (216), (218), (219), (220), (221), (223), (224), (225), (226), (228), (229), (230), (231), (232), (233), (234) 및 (235)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화학식 I의 테트라펩타이드.
54. 청구항 54은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제47항에 있어서, 화합물(401)인 화학식 I의 테트라펩타이드.
55. 청구항 55은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제48항에 있어서, 화합물(501), (502), (503), (504), (505), (506), (507), (508), (509), (510) 및 (511)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화학식 I의 테트라펩타이드.
56. 항-C형 간염 바이러스 유효량의 제1항에 따르는 화학식 I의 화합물, 또는 치료학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르를 약제학적으로 허용되는 담체 매질 또는 보조제와 배합된 상태로 포함하는, C형 간염 바이러스 감염 치료용 약제학적 조성물.
57. 삭제
58. 청구항 58은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    C형 간염 바이러스를 C형 간염 바이러스 NS3 프로테아제 억제량의 제1항에 따르는 화학식 I의 화합물, 또는 치료학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르, 또는 제56항에 따르는 조성물에 노출시켜 C형 간염 바이러스의 복제를 억제하는 방법.
59. 항-C형 간염 바이러스 유효량의 제1항에 따르는 화학식 I의 화합물, 또는 치료학적으로 허용되는 이의 염 또는 에스테르와 인터페론과의 배합물을 포함하는, C형 간염 바이러스 감염 치료용 약제학적 조성물.
60. 청구항 60은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제56항에 있어서, 제2 항바이러스 제제를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
61. 청구항 61은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제60항에 있어서, 제2 항바이러스 제제가 리바비린 또는 아만타딘인 약제학적 조성물.
62. 청구항 62은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    제56항에 있어서, HCV 프로테아제의 다른 억제제를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
63. 제56항에 있어서, 헬리카제, 폴리머라제, 메탈로프로테아제 또는 IRES로부터 선택된, HCV 생활주기 중의 다른 표적물에 대한 억제제를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
64. 청구항 64은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    APG-P6-P5-P4-P3-P2, APG-P5-P4-P3-P2, APG-P4-P3-P2, APG-P3-P2 및 APG-P2로 이루어진 그룹으로부터 선택된 펩타이드(여기서, P6 내지 P2는 제1항에서 정의한 바와 같다)를 화학식

    

    의 P1 중간체(여기서, R₁은 치환되지 않거나 할로겐으로 치환된, C_1-6 알킬 또는 C_2-6 알케닐이고, CPG는 카복실 보호 그룹이다)와 커플링시키는 단계를 포함하여, P1이 치환된 아미노사이클로프로필 카복실산 잔기인 제1항에 따르는 화학식 I의 펩타이드 동족체를 제조하는 방법.
65. 청구항 65은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    APG-P6-P5-P4-P3-P2, APG-P5-P4-P3-P2, APG-P4-P3-P2, APG-P3-P2 및 APG-P2로 이루어진 그룹으로부터 선택된 펩타이드(여기서, P6 내지 P2는 제1항에서 정의한 바와 같다)를 화학식

    

    의 P1 중간체(여기서, R₁은 에틸, 비닐 또는 브로모비닐이고, CPG는 카복실 보호 그룹이다)와 커플링시키는 단계를 포함하여, P1이 치환된 아미노사이클로프로필 카복실산 잔기인 제1항에 따르는 화학식 I의 펩타이드 동족체를 제조하는 방법.
66. 청구항 66은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    APG-P6-P5-P4-P3-P2, APG-P5-P4-P3-P2, APG-P4-P3-P2, APG-P3-P2 및 APG-P2로 이루어진 그룹으로부터 선택된 펩타이드(여기서, P6 내지 P2는 제1항에서 정의한 바와 같다)를 화학식

    

    의 P1 중간체(여기서, CPG는 카복실 보호 그룹이다)와 커플링시키는 단계를 포함하여, P1이 치환된 아미노사이클로프로필 카복실산 잔기인 제1항에 따르는 화학식 I의 펩타이드 동족체를 제조하는 방법.
67. 제64항 내지 제66항 중의 어느 한 항에 있어서, 카복실 보호 그룹(CPG)이 알킬 에스테르, 아르알킬 에스테르, 및 온화한 염처리 또는 온화한 환원 수단에 의해 분해될 수 있는 에스테르로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
68. 청구항 68은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    화학식

    

    의 아미노산 동족체(여기서, R₁은 치환되지 않거나 할로겐으로 치환된, C_1-6 알킬 또는 C_2-6 알케닐이다)를 사용함을 특징으로 하는, 제1항에 따르는 화학식 I의 화합물의 제조방법.
69. 청구항 69은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    화학식

    

    의 아미노산 동족체(여기서, R₁은 에틸, 비닐 또는 브로모비닐이다)를 사용함을 특징으로 하는, 제1항에 따르는 화학식 I의 화합물의 제조방법.
70. 청구항 70은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.

    화학식

    

    의 아미노산 동족체를 사용함을 특징으로 하는, 제1항에 따르는 화학식 I의 화합물의 제조방법.