MXPA02009920A - Inhibidores macrociclicos de la ns3-serina proteasa, del virus de la hepatitis c9 que comprenden partes p2 n-ciclicas. - Google Patents

Abstract

La presente invencion describe compuestos macrociclicos novedosos que tienen actividad inhibidora de proteasa de VCH asi como metodos para preparar dichos compuestos; en otra modalidad, la invencion describe composiciones farmaceuticas que comprenden dichos macrociclos asi como metodos para usarlos para tratar trastornos asociados con la proteasa VCH.

Description

INHIBIDORES MACROCIC ICOS DE LA NS3-SERINA PROTEASA. DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C. QUE COMPRENDEN PARTES P2 N- C1C CAS i CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a novedosos inhibidores de la proteasa del virus de la hepatitis C ("VHC"), a composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de dichos inhibidores, y a métodos para preparar dichos inhibidores y métodos para utilizar dichos inhibidores para tratar la hepatitis C y los trastornos relacionados. La. presente invención revela específicamente novedosos compuestos macrocíclicos en calidad de inhibidores de la serina proteasa VHC NS3/NS4a.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El virus de la hepatitis C (VHC) es un virus de ARN monofilamento (+)- sentido que ha sido acusado de ser el principal agente causante de la hepatitis no-A, no-B (NANBH), particularmente en la NANBH asociada con la sangre (BB-NANBH) (ver, Publicación de Patente Internacional No. WO 89/04669 y Solicitud de Patente Europea No. EP 381 216). El NANBH ha de ser distinguido de otros tipos de enfermedades hepáticas inducidas por virus, tales como el virus de la hepatitis A (VHA), virus de la hepatitis B (VHB), virus de la hepatitis delta (VHD), citomegalovirus (CMV) y virus de Epstein-Barr (VEB), como también otras formas de enfermedades hepáticas tales como el alcoholismo y la cirrosis biliar primaria. Recientemente se ha identificado, donado y expresado un VHC proteasa necesario para el procesamiento de polipéptidos y replicación viral (ver por ejemplo la Patente Estadounidense No. 5.712.145). La poliproteina, de 3000 aminoácidos, contiene, desde el terminal amino al terminal carboxi, una proteína nucleocápsido (C), proteínas de envoltura (E1 y E2), y varias proteínas no estructurales (NS1, 2, 3, 4a, 5a y 5b). NS3 es una proteína de aproximadamente 68 kda, codificado por aproximadamente 1893 nucleótidos del genoma del HVC, y tiene dos dominios distintos: (a) un dominio serina proteasa consistente en aproximadamente 200 de los aminoácidos N-term?nales; y: (b) un dominio ATPasa ARN-dependiente en el terminal-C de la proteína. La NS3 proteasa es considerada como un miembro de la familia de las quimotripsinas debido a similitudes en la secuencia de las proteínas, estructura tridimensional general y mecanismo de catálisis. Entre ias otras enzimas similares a la quimiotripsina tenemos la elastasa, el factor Xa, la trombina, tripsina, plasmina, uroquinasa, tPA y PSA. La serina proteasa VHC NS3 es responsable de la proteólisis del polipéptido (poliproteina) en las uniones NS3/NS4a, NS4a/NS4b, NS4b/NS5a y NS5a/NS5b, por lo que es responsable de la generación de cuatro proteínas virales durante la replicación viral. Esto ha hecho que la serina proteasa HCV NS3 sea un objetivo atractivo para la quimioterapia antiviral. Se ha determinado que la proteína NS4a, que es un polipéptido con una longitud de aproximadamente 6 kda, es un co-factor para la actividad de serina proteasa, del NS3. El autodesdoblamiento de ia unión NS3/NS4a por la serina proteasa NS3/NS4a tiene lugar a nivel intramolecular (es decir, cis), mientras que los otros sitios de desdoblamiento son procesados a nivel intermolecular (es decir, trans). El análisis de los sitios de desdoblamiento natural para la VHC proteasa reveló la presencia de cisteina en P1 y de serina en P1\ y que dichos residuos se conservan estrictamente en las uniones NS4a/NS4b, NS4b/NS5a y NS5a/NS5b. La unión NS3/NS4a contiene una treonina en P1 y una serina en P1\ Se considera que la sustitución Cys? Thr en NS3lNS4a explica la necesidad del procesamiento del cis en lugar del trans en esta unión. Ver por ejemplo Pizzi y otros, (1994), Proc. Nati. Acad. Sci. (EE.UU): 91 : 888-892, Failla y otros., (1996), Foldina & Pesian 1 : 35-42. El sitio de desdoblamiento NS3/NS4a es también mas tolerante a la mutagénesis que los otros sitios. Ver por ejemplo Kollykhalov y otros (1994) J. Virol. 68: 7525-7533. También se ha descubierto que los residuos ácidos en la región corriente arriba del sitio de desdoblamiento son necesarios para un desdoblamiento eficiente. Ver por ejemplo Komoda y otros (1994) J. Virol. 68: 7351- 7357.

Los inhibidores de las proteasas de VHC que han sido objeto de informes incluyen los antioxidantes (ver la Publicación de la Solicitud de Patente No WO 98/14181), determinados péptidos y análogos de péptidos (ver la Publicación de Solicitud de Patente No, WO 98/17679, Landro y otros (1997), Biochem 36: 9340-9348, Ingalinnella y otros, (1998), Biochem 37; 8906-8914, Limas-Brunet y otros (1998) Bioora. Med. Chem. Lett.: 8:1713-1718), los inhibidores basados en el eglin c polipéptido de 70 aminoácidos (Martin y otros, (1998), Biochem 37:11459- 11468, de inhibidores de afinidad seleccionados de entre el grupo consistente en el inhibidor de la tripsina secretoria del páncreas humano (hPSTI-C3) y los repertorios de minicuerpos (MBip) (Dimasi y otros, (1997) J. Virol. 71 :7461-7469). cVHE2 (un fragmento de anticuerpo de dominio variable, "camelizado") (Martin y otros, (1997) Protein Eng. 10: 607-614), y la a1-antiquimotripsina (ACT) (Elzouki y otros) (1997) J. Hepat. 27: 42-28). Ha sido recientemente revelada una ribozima diseñada para destruir de manera selectiva el ARN del virus de la hepatitis C (ver: BioWorld Todav 9(217): 4 (noviembre 10,1998)). También se hace referencia a las publicaciones PCT, No. WO 98/17679, publicado el 30 de abril de 1998 (Vértex Pharmaceuticals Incorporated); WO 98/22496, publicado el 28 de mayo de 1998 (F. Hoffman-La Roche AG); y WO 99/07734, publicado el 18 de febrero de 1999 (Boehringer Ingelheim Canadá Ltd).

El VHC ha sido implicado en la cirrosis del hígado y en la inducción del carcinoma hepatocelular. La prognosis de pacientes que sufren de una infección de VHC es actualmente pobre. La infección por VHC es más difícil de tratar que otras formas de hepatitis debido a la falta de inmunidad o remisión asociados con la infección por VHC. Los datos actuales indican un índice de supervivencia de menos del 50 % a los cuatro años después del diagnostico de la cirrosis. Los pacientes con un diagnóstico de carcinoma hepatocelular localizado reseccionabie tienen un índice de supervivencia a los 5 años, del 10-30%, mientras que aquellos pacientes con un carcinoma hepatocelular localizado no reseccionable tienen un índice de supervivencia a los cinco años, de menos del 1%. También se hace referencia al documento WO 00/09558 (cesionario: Boehringer Ingelheim Limited; Publicado el 24 de enero de 2000), que revela derivados péptidos de la siguiente fórmula: en la cual los diversos elementos son como se define en la presente. Un compuesto ilustrativo de dicha serie es el siguiente: Se hace referencia al documento WO 99/09543 (Cesionario: Boehringer Ingelheim Limited; publicado el 24 de febrero de 2000), en el cual se revelan derivados péptidos de la Fórmula: en la cual los diversos elementos son como se define en la presente. Un compuesto ilustrativo de dicha serie es el siguiente: Las terapias actuales para la hepatitis C incluyen el interferon-a (TNFa) y la terapia de combinación con ribavirina e interferon. Ver por ejemplo Beremguer y otros, (1998) Proc. Assoc. Am. Phvsicians 110(2) 98 112. Dichas terapias sufren de un bajo índice de respuesta sostenido y de frecuentes efectos colaterales. Ver por ejemplo: Hoofnagle y otros, (1997) . Enql. J. Med. 336: 347. En la actualidad no hay ninguna vacuna disponible contra la infección por VHC. Existe una necesidad de nuevos tratamientos y terapias para la infección por VHC. Por ello uno de los objetos de la presente intención es el de proveer compuestos que sean útiles en el tratamiento o prevención o mejora de uno o más síntomas de la hepatitis C. Otros objetos de la presente es el de proveer métodos de tratamiento o prevención o mejora de uno o más síntomas de la hepatitis C.

Y otro objeto mas de la presente intención, es el de proveer métodos para modular la actividad de las serina proteasas, particularmente de la serina proteasa VHC NS3/NS4a, mediante la utilización de los compuestos provistos en la presente. Otro de los objetos de la presente, es el de prever métodos para modular el procesamiento del polipéptido del VHC mediante ios compuestos provistos en la presente.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En sus muchas formas de realización, la presente invención provee una novedosa clase de inhibidores macrocíclicos de la VHC proteasa, composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de los compuestos, métodos para preparar formulaciones farmacéuticas que comprenden uno o más de dichos compuestos, y métodos para el tratamiento, prevención o mejora de uno o más síntomas de la hepatitis C. También se proveen métodos para modular la interacción de un polipéptido de HVC con la proteasa de VHC. Entre los compuestos provistos en la presente, se prefieren aquellos compuestos que inhiben la actividad de la serina proteína VHC NS3/NS4a. Los compuestos revelados en la presente contienen por lo general tres o más residuos aminoácidos y menos de aproximadamente 12 residuos aminoácidos.

En su modalidad principal, la presente ¡nvención provee un compuesto macrocíclico de la Fórmula I: Fórmula en la cual: X e Y, independientemente entre si, son seleccionados de entre el grupo consistente en las siguientes partes alquilo, alqul-arilo, heteroalquilo, heteroarilo, aril-eteroarilo, alquil-heteroarilo, cicloalquilo, alquil-éter, alquil-aril éter, aril éter, alquil amino, aril amino, alquil-aril amino, alquil sulfuro, alquil-aril sulfuro, aril sulfuro, alquil sulfona, alquil-aril sulfona, aril sulfona, alquil- alquil sulfóxido, alquil-aril sulfóxido, alquil amida, alquil-aril amida, aril amida, alquil suifonamida, alquil-aril sulfonamida, aril sulfonamida, alquil urea, alquil-aril urea, aril urea, alquil carbamato, alquil-aril carbamato, arilcarbamato, alquil-hidrazida, aiquilaril hidrazida, alquil hidroxamida, aiquil-aril hidroxamida, alquil sulfoniio, arilsulfonilo, heteroalquilsulfonilo, heteroaril sulfonilo, alquil carbonilo, arilcarbonilo, heteroalquilcarbonilo, heteroaril carbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, hetera ariloxicarbonilo, alquilamínocarbonilo, arilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo o una combinación de los mismos, con la condición que X e Y pueden estar opcionalmente sustituidos por partes seleccionadas de entre el grupo consistente en aromático, alquilo, alquilarilo, heteroalquilo, aril-heteroarilo, alquil-heteroarilo, cicloalquilo, alquil éter, alquil-aril éter, alquil sulfuro, alquil-aril sulfuro, alquil sulfona, alquil-aril sulfona, alquil amida, alquil-aril amida, alquil sulfonamida, alquil aminas, alquil-aril aminas, alquil-aril sulfonamida, alquil urea, alquil-aril urea, alquil carbamato y alquil-aril carbamato; R1= COR5 ó B(OR)2, en lo cual R5 = H, OH, OR8, NR9R10, CF3, C2F5, C3F7, CF2R6, R6, COR7, siendo R7 = H, OH, OR8, CHR9R10, ó NR9R10, siendo R6, R8, R9 y R10, independientemente entre sí, seleccionados de entre el grupo consistente en H, alquilo, arilo heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalqullo, arilalquilo, heteroarilalquilo; CH(R1')COOR11, CH(R1')CONR12R13, CH(R1')CONHCH(R2')COOR11, CH(R1')CONH-CH(R2')CONR12R13, CH(Rr)CONHCH(R2')R11, CH(R1')CONHCH(R2')CONHCH(R3')COOR11, CH(R1')CONHCH(R1')CONHCH(R3'D)CONR12R13, CH(R1')CONHCH(R2')CONHCH(R3')CONHCH(R ')COOCR11, CH(R1')CONHCH(R2')CONHCH(R3')CONHCH(R4')CONNR12R13, CH(R1')CONHCH(R ')CONHCH(R3')CONHCH(R ')CONHCH(R5')CONR12R13, en lo cual R1', R2', R3', R4', R5', R11, R12, R13 y .R' son independientemente entre si seleccionados de entre el grupo consistente en H, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, alquil-arilo, aiquil-heteroarilo, aril-alquilo y heteroaralquilo; Z es seleccionado de entre O, N ó CH; W puede hallarse presente o ausente, y si W se halla presente, E es seleccionado de entre C=0, C=S ó S02; Q puede hallarse presente o ausente, y si Q se halla presente, Q es CH, N, P, (CH2)P, (CHR)P, (CRR')P, O, NR, S, ó SO2; y cuando Q se halla ausente, M también falta, y A está directamente unido a X; A es O, CH2, (CHR)P, (CHR-CHR')P, (CRR%, NR, S, S02 o un enlace; E es CH, N o CR, o un doble enlace hacia A, L ó G; G puede estar presente o ausente, y cuando G se halla presente, G es (CH2)P, (CHR)p, o (CRR')P, y cuando G se halla ausente, J se halla presente y E está directamente conectado al átomo de carbono al cual estaba unido G; J puede hallarse presente Q ausente, y si J se halla presente, J es (CH2)P, (CHR)P, o (CRR')P, SO2, NH, NR u O; y cuando J se halla ausente, G se halla presente y E está directamente unido a N; L puede hallarse presente o ausente, y si L se halla presente, L es CH, CR, O, S o NR: y cuando L se halla ausente, entonces M puede hallarse presente o ausente, y si M está presente estando L ausente, entonces M se halla directa e independientemente vinculado a E, y J está directa e independientemente unido a E'; M puede estar presente o ausente, y cuando M se halla presente, M es O, NR, S, SO2, (CH2)p, (CHR)P(CHR-CHR , o (CRR')P; p es un número de 0 a 6; y R, R1, R2, R3 y R4, independientemente entre si, son seleccionados de entre el grupo consistente en H; alquilo de 1 a 10 átomos de carbono; alquenilo de 2 a 10 átomos de carbono; cicloalquilo de 3 a 8 átomos de carbono; C3-C8 cicloalquilo; C3-C8 heterocicloalquilo, alcoxi, ariloxi, alquiltio, ariltio, amino, amido, éster, ácido carboxíiico, carbamato, urea, cetona, aldehido, ciano, nitro; átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre, o fósforo, en una cantidad de uno a seis; (cicloalquii)alquilo y (heterocicloalquil)alquilo, estando dicho cicloaiquiio hecho de 3 a 8 átomos de carbono, y de 0 a 6 átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre, o fósforo; y dicho alquilo es de 1 a 6 átomos de carbono; arilo, heteroarilo, alquil-arilo; y alquil-heteroarilo; pudiendo dichas partes alquilo, heteroalquilo, alquenilo, heteroalquenilo, arilo, hetero arilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo, estar opcionalmente sustituidos, refiriéndose dicho término "sustituido" a una sustitución, opcional y adecuada, con una o mas partes seleccionadas de entre el grupo consistente en alquilo, alquenílo, alquinilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, heterocíclico, halágeno, hidroxi, tio, alcoxi, ariloxi, alquiltio, ariltio, amino, amido, éster, ácido carboxílico, carbamato, urea, cetona, aldehido, ciano, nitro, sulfonamida, sulfóxido, sulfona, sulfonil urea, hidrazida, e hidroxamato.

A menos que se defina de otra manera, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente tienen el mismo significado que el comúnmente entendido por las personas con pericia en el arte al cual se refiere la presente invención. Así por ejemplo la expresión alquilo (que incluye las porciones alquilo de alcoxi) se refiere a un grupo monovalente derivado de un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada mediante la remoción de un único átomo, que tiene de 1 a 8 átomos de carbono, preferiblemente de 1 a 6; arilo- representa un grupo carbocíciico que tiene de 6 a 14 átomos de carbono y que tiene por lo menos un anillo benzenoide, estando todos los átomos de carbono aromáticos sustituibles disponibles destinados como posibles puntos de fijación. Los grupos arilo preferidos incluyen fenilo, 1 -naftilo, 2-naftilo e indanilo, y especialmente fenilo y fenilo sustituido; aralquilo - representa una parte que contiene una parte que contiene un grupo arilo vinculado mediante un alquilo inferior, alquilarilo - representa una parte que contiene un alquilo inferior vinculado mediante un grupo arilo; cicloalquilo - representa un anillo carbocíclico saturado que tiene de 3 a 8 átomos de carbono, preferiblemente 5 ó 6, -opcionalmente sustituidos; heterocíclico -representa, además de los grupos heteroarilo definidos en lo que sigue, grupos orgánicos cíclicos saturados y no saturados que tienen por lo menos un átomo de O, S, y/o N que interrumpe una estructura de anillo carbocíclico que consiste en un anillo o en dos anillos fusionados, teniendo cada uno de los anillos de 3 a 9 miembros que pueden o no tener enlaces dobles que carecen de electrones pi deslocalizados, la cual estructura anillo tiene de 2 a 8, preferiblemente de 3 a 5, átomos de carbono, por ejemplo 2 - ó 3- piperidinilo, 2 - ó 3-piperazinilo, 2- ó 3- morfoiinilo, ó 2 - ó 3-tiormorfolinilo; halógeno - representa flúor, cloro, bromo, e iodo; heteroarilo- representa un grupo orgánico cíclico que tiene por lo menos un átomo de oxigeno, azufre y/o nitrógeno que interrumpe una estructura anillo carbocíclico y que tiene una cantidad suficiente de electrones pi deslocalizados, para proveer un carácter aromático, teniendo el grupo heterocíclico de 2 a 14, preferiblemente 4 ó 5 átomos de carbono, por ejemplo, 2-, 3- ó 4-piridilo, 2- ó 3- furilo, 2- ó 3-tienilo, 2-, 4- ó 5-tiazolllo, 2-o 4-imidazolilo, 2-, 4- ó 5-pírimidinilo, 2-pirazinilo, o 3- o 4-piridazinilo, etc. Los grupos heteroarilo preferidos son 2-, 3- y 4- piridilo. Dichos grupos heteroarilo también pueden estar opcionalmente sustituidos. La presente invención también incluye los tautómeros, enantiómeros y otros isómeros ópticos de los compuestos de la Fórmula I, como también Jas sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de ios mismos.

- Otro de los aspectos de la ¡nvención está dado por las composiciones farmacéuticas que contienen a -título de ingrediente activo un compuesto de la fórmula 1 (o su sal, solvato o isómeros) junto con un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. La presente invención también provee métodos para preparar los compuestos de la Fórmula I, como también métodos para tratar enfermedades tales como por ejemplo el VCH y los trastornos relacionados. Los métodos para tratar comprenden la administración a un paciente que sufre de dicha enfermedad, o enfermedades, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la Fórmula I. En la presente invención también se revela la utilización de un compuesto de la Fórmula I para la manufactura de un medicamento para tratar el VHC y los trastornos relacionados.

DETALLADA DESCRIPCIÓN DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS En una modalidad, la presente ¡nvención revela compuestos de la Fórmula I en calidad de inhibidores de la VHC proteasa, especialmente la serina proteasa RCV NS3/NS4a. Entre los compuestos abarcados por la Fórmula I, los compuestos preferidos son aquellos que tienen la siguiente Fórmula II: Fórmula II o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, siendo las diversas defíniciones como anteriormente mencionadas. Algunas de las modalidades preferidas ¡ncluyen pero no se limitan a las siguientes definiciones de las diversas funcionalidades en las fórmulas generales I y II anteriormente mencionadas. Así por ejemplo, R2 en la Fórmula I puede ser seleccionado entre las siguientes partes: Algunas de las representaciones preferidas para la parte incluyen por ejemplo las siguientes estructuras a, b, ó c: La estructura a puede ser seleccionada de entre los siguientes tipos de estructuras, no limitativas: Entre las otras formas de realización preferidas se incluyen por ejemplo aquellas en las cuales la parte: representa a veces las siguientes estructuras, en las cual las definiciones de ias diversas posiciones son ejemplificados en las estructuras de compuestos mostrados ulteriormente en este capítulo: En algunos compuestos más preferidos, las partes G y J son independientemente entre sí seleccionadas de entre el grupo consistente en (CH2)P, (CHR)p, (CHR-CHR')P, y (CRR')P, y la parte A-E-L-M-Q es un anillo aromático consistente en de dos a ocho átomos de carbono, de 0 a 6 heteroátomos, estando X y J en posición orto, para o meta entre sí. En otras formas de realización preferidas, R3 en la fórmuia l es seleccionado de entre las siguientes estructuras: en las cuales R30 = H, CH3 u otros alquilo; R31 = OH, O-aíquilo, NH2 ó N-alquilo; R32 y R33 pueden ser iguales o diferentes y son independientemente entre si seleccionados de entre el grupo consistente en H, F, CI, Br y CH3; y la parte X-Y es seleccionada de entre las siguientes estructuras: En la sección de las reivindicaciones de la presente solicitud se indican varios otros refinamientos de las definiciones anteriormente mencionadas para los compuestos representados por la Fórmula I. También están representados por los diversos componentes indicados en la especificación y reivindicaciones. Dichos refinamientos, definiciones y limitaciones han de ser considerados como representativos de la totalidad de la invención en esta solicitud. Los compuestos representativos de la invención que presentan una excelente actividad inhibidora sobre la VHC proteasa son enumerados a continuación junto con su actividad (intervalos de valor de K¡ en nanomolar, nM). Los números de los ejemplos se refieren a los números de las diversas estructuras en la sección de ejemplos que se encuentra en las partes posteriores de la presente solicitud.

CUADRO 1 r Resultados de los Ensayos Continuos de la VHC Proteasa 10 15 20 10 15 20 Intervalo continuo del Ki* de los ensayos de VHC: Categoría b = 1 -100 nM; Categoría a = 101 nM-100 µM Algunos de los compuestos inventivos y los métodos para sintetizar los diversos tipos de los compuestos inventivos se enumeran a continuación, después de cual se los describe esquemáticamente, seguido por Ejemplos ilustrativos. 1A 1B '7B 25 27A 10 28ß 29B 10 31 15 32 33 34 35 10 36A 15 42 44 46 47 49 53B 10 57B 58 59A 59B 20 75A 15 77 78 80 82 :ß4 85 20 91 94 97 98 99 20 102 103 w 105 106 107 108 109 110 20 111 En función de su estructura, los compuestos de la invención pueden formar sales farmacéuticamente aceptables junto ácidos orgánicos o inorgánicos, o bases orgánicas e inorgánicas. Los ejemplos de ácidos adecuados para la formación de dichas sales abarcan los siguientes ácidos: ácido clorhídrico, sulfúrico, fosfórico, acético, cítrico, oxálico, malónico, salicílico, málico, fumárico, succínico, ascórbico, maleico, metanosulfónico y otros ácidos minerales y carboxílicos bien conocidos para las personas con pericia en el arte. Para la formación de sales con bases, las bases adecuados ¡ncluyen por ejemplo el NaOH, KOH, NH4OH, el hidróxido de tetraalquilamonio, y similares. En otra modalidad, la presente invención provee composiciones farmacéuticas que comprenden los macrociclos incentivos anteriormente descritos en calidad de ingrediente activo. Las composiciones farmacéuticas por lo general comprenden un vehículo diluyente, excipiente o vehículo, farmacéuticamente aceptables (que en la presente reciben colectivamente la designación de materiales vehículo). Debido a su actividad inhibidora sobre el VHC, dichas composiciones farmacéuticas poseen una utilidad en el tratamiento de la hepatitis C y enfermedades relacionadas. En otra modalidad más, en la presente invención se revelan métodos para preparar composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos macrociclos inventivos a título de ingrediente activo. En las composiciones farmacéuticas y métodos de la presente invención, los ingredientes típicos serán típicamente administrados en forma de una mezcla junto con materiales vehículo adecuados adecuadamente seleccionados con respecto en base a la forma de administración prevista, por ejemplo tabletas orales, cápsulas (sean llenas de un sólido, sea llenas con un semisólido, sea llenas con un líquido), polvos para reconstitución, geles orales, elixires, granulos dispersibles, jarabes, suspensiones, y similares, y compatibles con las prácticas farmacéuticas convencionales. Por ejemplo, para la administración oral en forma de tabletas o cápsulas, el componente droga activa puede ser combinado con cualesquiera vehículos inertes no tóxicos farmacéuticamente aceptables, tales como lactosa, almidón, sucrosa, celulosa, estearato de magnesio, fosfato dicálcico, sulfato de calcio, talco, manitol, alcohol etílico (formas líquidas), y similares. Más aun, en función del deseo o necesidad en la mezcla pueden también incorporarse ligantes, lubricantes, agentes de desintegración y agentes de coloración, adecuados. Los polvos y tabletas pueden integrar la composición inventiva en una cantidad de aproximadamente 5 a aproximadamente 95%.

Los ligantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas tales como acacia, alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilenglicol y ceras. Entre los lubricantes pueden mencionarse para ser utilizados en estas formas de dosificación, el ácido bórico, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio, y similares. Los desintegrantes incluyen almidón, metil celulosa, goma guar y similares. Los agentes edulcorantes, saborizantes y preservativos también pueden ser incluidos cuando sea adecuado. Algunos de los términos mencionados en lo que precede, en especial ios desintegrantes, lubricantes, ligantes y similares, son comentados con más al detalle en lo que sí. Adicionalmente, las composiciones de la presente intención pueden se formuladas en una forma de liberación sostenida a efectos de proveer la liberación de velocidad controlada de uno ó más componentes o de ingredientes activos, a efecto de optimizar sus efectos terapéuticos, es decir su actividad inhibidora sobre el VHC y similares. Las formas de dosificación adecuadas para la liberación sostenida incluyen tabletas estratificadas que contienen capas de distintas velocidades de desintegración con matrices poliméricas de liberación controlada impregnadas con los componentes activos y configuradas en forma de tabletas o cápsulas que contienen dichas matrices poliméricas porosas impregnadas o encapsuladas. Las preparaciones en forma líquida incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. A título de ejemplo pueden mencionarse las soluciones de agua o de agua - propilenglicol para soluciones parenterales o la adición de edulcorantes o opacificadores para soluciones, suspensiones y emulsiones orales. Las preparaciones en formas liquidas ponen también incluir soluciones para la administración ¡ntranasal. Las preparaciones tipo aerosol adecuadas para la inhalación, pueden incluir soluciones y sólidos en forma de polvos, que pueden estar en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable tal como un gas comprimido inerte, por ejemplo nitrógeno. Para preparar supositorios, se empieza por fundir una cera de bajo punto de fusión tal como una mezcla de glicéridos de ácidos grasos tales como manteca de cacao, y el Ingrediente activo es dispersado homogéneamente en la misma mediante su agitación o mediante un mezclado similar. La mezcla homogéneo fundida es seguidamente vertida en moldes de dimensiones adecuadas, se deja enfriar y con ello se solidifica. También se incluyen las preparaciones en forma sólida que están destinadas a ser convertidas, poco antes de su uso, en forma de preparaciones líquidas para la administración sea oral sea parenteral. Dichas formas líquidas ¡ncluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Los compuestos de la invención buena también son entregados transdermalmente. Las composiciones transdermales pueden tomar la forma de cremas, lociones, aerosoles y/o emulsiones y pueden ser incluidos en un parche transdermal de tipo matriz o reservorio, tal como es convencional en el arte para esta finalidad. Es preferible que el compuesto sea administrado oralmente. Es preferible que la preparación farmacéutica se halle en forma de dosis unitaria. En dicha forma, la preparación es subdividida en forma de unidades adecuadamente dimensionadas que contienen cantidades adecuadas de los componente activos, por ejemplo una cantidad efectiva, para lograr el objetivo deseado La cantidad de la composición activa inventiva presente en una dosis unitaria de preparación puede ser generalmente variada o ajustada de aproximadamente 1.0 miligramos a aproximadamente 1.000 miligramos, preferentemente de aproximadamente 1.0 a aproximadamente 950 miligramos, más preferentemente de aproximadamente 1.0 a aproximadamente 500 miligramos, y típicamente de aproximadamente 1 a aproximadamente 250 miligramos, de acuerdo con aplicación particular prevista. Las dosis real utilizada puede ser variada en función de la edad del paciente, su sexo, peso corporal y gravedad de la condición que se desea tratar. Dicha técnicas son bien conocidas por las personas con pericia en el arte. Por lo general, la forma de dosis oral para personas, que contienen los ingredientes activos, puede ser administrada 1 ó 2 veces por día. La cantidad y frecuencia de la administración será regulada de acuerdo con el criterio del médico clínico a cargo. Un régimen de dosificación diaria generalmente recomendado para la administración oral puede variar entre aproximadamente 1.0 miligramos y aproximadamente 1.000 miligramos por día, en una dosis simple o en dosis divididas. A continuación se describen algunos términos útiles: Cápsula- se refiere a un contenedor o cerramiento especial hecho de metil celulosa, alcoholes polivinílicos, o gelatinas o almidones desnaturalizados para contener o sostener composiciones que comprenden los ingredientes activos. Las cápsulas de corteza dura son por lo general hechas de mezclas de gelatina de hueso de alta resistencia y de piel de cerdo. La cápsula propiamente dicha puede contener pequeñas cantidades de tintes, agentes opacificantes, plastificantes y preservativos. Tabletas- se refiere a una forma de dosis sólida, comprimida o moldeada, que contiene los ingredientes activos junto con diluyentes adecuados. La tableta puede ser preparada por compresión de mezclas de granulaciones obtenidas por granulación en húmero, granulación en secó, o por compactación. Gel oral- se refiere a los ingredientes activos dispersados o solubilizados en una matriz hidrófila semisólida. Polvo para reconstitución- se refiera a mezclas de polvo que contienen los ingredientes activos y diluyentes adecuados que puedan ser suspendidos en agua o zumos.

Diluyente - se refiere a sustancias que usualmente constituyen la porción principal de la composición o forma de dosificación. Los diluyentes adecuados incluyen azúcares tales como la lactosa, sucrosa, manitol y sorbitol; los almidones derivados del trigo, maíz, arroz y la papa; y las celulosas tales como, la celulosa microcristalina. La cantidad de diiuyente en la composición puede variar de aproximadamente 10 a aproximadamente 90% en peso de la composición total preferentemente de aproximadamente 25 aproximadamente 75%, más preferentemente de aproximadamente 30 a aproximadamente 60 por ciento en peso, y más preferentemente aún de aproximadamente 12 a aproximadamente 60 por ciento. Desintegrante - se refiere a los materiales adicionados a la composición para ayudarle a desintegrar y liberar los medicamentos. Los desintegrantes adecuados incluyen los almidones, los almidones modificados solubles en agua fría tal como el almidón carboximetil sodio; las gomas naturales y sintéticas tales como la algarroba, la carayá, guar, tragacanto y agar; los derivados de celulosa tales como la metil celulosa y la carboximetilcelulosa; las celulosas microcristalinas y las celulosas microcristalinas reticuladas tales como la croscarmelosa de sodio; los alginatos tales como el ácido algínico y el alginato de sodio; las arcillas tales como las bentonitas; y las mezclas efervescentes. La cantidad desintegrante en la composición puede variar de aproximadamente 2 a aproximadamente 5% por peso de la composición, más preferentemente de aproximadamente 4 a aproximadamente 0% en peso. Ligante - se refiere a sustancias que ligan o "encolan" los polvos entre sí y que los hacen cohesivos mediante la formación de granulos, con lo cual sirven como "adhesivo" en la formación. Los ligantes agregan una resistencia cohesiva ya disponible en el agente diluyente o de masa. Los ligantes adecuados incluyen los azucares tales como la sucrosa; los almidones derivados del trigo, maíz, arroz y papa; las gomas naturales tales como la acacia, gelatina y tragacanto; los derivados de algas marinas tales como el ácido algínico, alginato de sodio y el alginato de amonio calcio; los materiales celulósicos tales como la metllceluiosa y la carboximetilcelulosa de sodio y la hidroxipropilmetilcelulosa de sodio; la polivinilpirroliidona; y los inorgánicos tales como el silicato de magnesio aluminio. La cantidad de ligante en la composición puede variar de aproximadamente 2 a aproximadamente 20% en peso de la composición, más preferentemente de aproximadamente 3 a aproximadamente 0% en peso, y más preferentemente aún de aproximadamente tres a aproximadamente 6 por ciento en peso. Lubricantes- se refiere a una sustancia adicionada a la forma de dosificación a efecto de permitir que la tableta, granulos, etc., liberen del molde o tinte mediante la reducción de la fricción o desgaste. Los lubricantes adecuados incluyeron los estearatos metálicos tales como el estearato de magnesio, el ácido esteárico, las ceras de alto punto de fusión; y los lubricantes solubles en agua tales como el cloruro de sodio, benzoato de sodio, acetato de sodio, oleato de sodio, polietilenglicoles y leucina I. Los lubricantes son usualmente adicionados justo en eluyente último pasó antes de la compresión, ya que deben hallarse presentes en las superficies de los granulos y entre los mismos y las partes de la prensa de tabletas. La cantidad de lubricantes en la composición puede variar entre aproximadamente 0.2 y aproximadamente 5% en pesos de la composición, preferentemente de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 2%, más preferentemente de aproximadamente 0.3 a aproximadamente 1.5% en peso. Deslizante- material que impide la formación de tortas y mejora las características de flujo de ias granulaciones, de manera tal que flujo sea lisa y uniforme. Los deslizantes adecuados incluyen el dióxido de silicio y el talco. La cantidad de deslizante en la composición puede variar entre aproximadamente 0.1 % y aproximadamente 5% en peso de la composición total, preferentemente de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 2% en peso. Agentes colorantes- excipientes que proveen una coloración a la composición o a la forma de dosificación. Dichos excipientes pueden incluir tintes de calidad alimenticia y tintes de calidad alimenticia absorbidos por sobre un absorbente adecuado tal como una arcilla u óxido de aluminio. La cantidad de agente colorantes puede variar entre próximamente 0.1 y aproximadamente 5% en peso de la composición, preferentemente de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 1 %. Biodisponibilidad - se refiere a la velocidad y extensión con las cuales el ingrediente droga o parte terapéutica es absorbida en la circulación sistémica a partir de una forma de dosificación administrada, en comparación con una normal o control. Se conocen métodos convencionales para preparar tabletas. Dichos métodos incluyen métodos secos tales como la compresión directa y la compresión de granulación producida por compactación, o métodos húmedos u otros procedimientos especiales. Los métodos convencionales para preparar otras formas de administración tales como por ejemplo, cápsulas, supositorios y similares, también son muy conocidos. En otra modalidad de la ¡nvención se revela la utilización de las composiciones farmacéuticas recién descritas para el tratamiento de enfermedades tales como por ejemplo la hepatitis C y similares. El método comprende la administración terapéuticamente efectiva de la composición farmacéutica inventiva a un paciente que tiene dicha enfermedad o dichas enfermedades y que necesite un tratamiento de este tipo. Tal como se mencionó a lo que precede, la ¡nvención también incluye los tautómeros, enantiómeros y otros estereoisómeros, de la ¡nvención. Por lo tanto, tal como sabe una persona con pericia en el arte, algunos de los compuestos de la invención pueden existir en forma isómera..

Dichas variaciones también se han incluidas dentro de los alcances de la invención. En otra modalidad de la invención se revela un método para preparar los compuestos macrocíclicos revelados en la presente. Los compuestos pueden ser preparados mediante varias térmicas conocidas en el arte. Los procedimientos ilustrativos representativos se destacan en los siguientes esquemas reactivos. Debe entenderse que si bien en los siguientes esquemas ilustrativos se describe la preparación de macrociclos predominantemente derivados de la 4-c/s-hidroxiprolina ("c/s-HYP") o del ácido 7-hidroxitetrahidroisoquinolin-3-carboxíl¡co ('TIC"), la adecuada sustitución de cualquiera de los aminoácidos, naturales o no, tendrá como resultado la formación de los macrociclos basados en dicha sustitución. Siguen las abreviaturas utilizadas en la descripciones de los Esquemas, Preparaciones y Ejemplos: THF: tetrahidrofurano DMF: /V,/V-dimetilformamida EtOAc: acetato de etilo AcOH: Acido acético HOOBt 3-hidroxi-1 ,2,3-benzotriazin4(3H)-ona EDCl: clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida NMM: /V-metilmorfolina ADDP: 1 ,1'-(azodicarboni DEAD: azodicarboxilato d MeOH: metanol EtOH: etanol Et20: éter dietílico Bn: bencilo Boc: ter-butiloxicarbonil Cbz: benciloxicarbonilo Cp: ciclopentildienilo Ts: p-toluensulfonilo Me: metilo PyBrOP: hexafluorfosfato de tris(plrolidino)bromofosfonio DMSO: sulfóxido de dimetilo TFA: ácido trifluoracético HOBt: hidroxibenzotriazol Base de Hünings: diisopropiletii amina BOP: hexafluorofosfato de benzotriazol-1 • iloxitris(dimetilamino)fosfonio LDA: liltio diisopropil amida Ph3P: trifenilfosfina LAH: hidruro de litio y aluminio DMAP: 4-dimetil aminopiridina DCC: diciciohexilcarbodiimida MCPA: ácido meta-cloroperbenzoico BINAP: 2,2'-bis(difenilfosfino)-1 ,1 '-binaftol MeCN: acetonltrilo Pr: propilo Ac: acetilo Ph: feniio ESQUEMAS PREPARATIVOS GENERALES La preparación del compuesto de la Fórmula lh, en la cual R\ R2, R3 son como anteriormente definidos, R' es alquilo, heteroalquilo (OR", SR'", siendo R" y R" grupos alquilo), halo sustituido en la posición orto, meta, o para con respecto al átomo de oxígeno, R es alquilo, arilo o alquilarilo; n vale de 0 a 5; X es (CH2)m, siendo m un número entero de 1 a 5, átomo de oxígeno, NY siendo Y un átomo de hidrógeno, alquilo, arilo; y PG1 y PG2 son grupos protectores adecuados (PG1 = t-boc, cbz y PG2 = H, Bn, etc.), ha sido descrito a grandes rasgos en ei Esquema 1. El ácido 4-hidroxiprolina (la), protegido es alquilado en la posición 4 por un alquil bromuro en la presencia de hidruro de sodio. El producto Ib es seguidamente convertido en un éster sea con un alcohol bajo condiciones acidas, o con trimetilsilildiazametano. Después de la desprotección, la amina resultante es acoplado a un aminoácido Boc-protegido en la presencia de HOOBt, EDCI-HCI y NMM. Después de la remoción del grupo Boc del producto Id, el dipéptido es hecho reaccionar con un ácido hidroxifenil acético sustituido utilizándose las mismas condiciones de acoplamiento. La hidrogenación catalítica del bencil éter permite obtener el precursor para la macrociclización. La macrociclización es lograda bajo condiciones de Mitsunobu mediante la utilización de trifenilfosfina y ADPP (la reacción de Mitsonubu ha sido objeto de una revisión por D. L. Hughes, Organic Reactions, 42 (1992), 335, John Wiley & Sons, New York, L. Paquette. Ed). Una vez que el éster ha sido hidrolizado en forma de un ácido mediante hidróxido de litio, es acoplado a un compuesto Intermedio amina, con lo cual se obtiene 1 h.

ESQUEMA 1 l La preparación del compuesto de La Fórmula 2e, en la cual R1, R2, R3, R y R' son como anteriormente definidos, ha sido señalada en el Esquema 2. La 3,4-dehidroprolina, 2a, desprotegida, es diastereoselectivamente dihidroxilada de manera de obtener c/s-diol 2b. La formación de acetal entre 2b y un aldehido puede ser llevada a cabo en la presencia de una cantidad catalítica de ácido p-toluensulfónico. El derivado bicíclico de la prolina, 2c, es convertido en el éster macrocíclico 2d y subsiguientemente en el inhibidor del VHC, 2e, de acuerdo con la secuencia señalada en el Esquema 1.

ESQUEMA 2 2S La preparación del compuesto de la Fórmula Sf, en la cual R\ R2, R3, R, R y n son como anteriormente definidos, ha sido señalada en el Esquema 3. Al ser tratada con dietileterato de trifluoroboro, la 4-hidroxiprolina protegida, 3a y alqueno, 3b, son convertidos en éter de prolina, 3c, que experimenta la misma secuencia de transformaciones destacada en el Esquema 1 obteniéndose éster macrocíclico 3e y subsiguientemente en el producto final deseado.

ESQUEMA 3 Sf La preparación del compuesto de la Fórmula 4f, en la cual R1, R2, R3, R y n son como anteriormente definidos, ha sido señalada en el Esquema 4. El acoplamiento entre al amino éster 4a y el aminoácido Boc-protegido, fue llevado a cabo en la presencia de NMM, HOOBt, y EDCI-HCI.

Después de la remoción de grupo Boc de 4b, el dipéptido es acoplado a un terminal ácido alquen carboxílico con lo cual se obtiene 4c. El enlace doble fue seguidamente convertido en un alcohol mediante hidroboración. La macrociclización del alcohol fenol es llevada a cabo bajo condiciones de Mitsonubu mediante la utilización de trifenilfosfina y ADDP. Una vez que el éster resultante 4e se ha hidrolizado obteniéndose un ácido mediante hidróxido de litio el ácido es acoplado a un compuesto intermedio amino con lo cual se obtiene 4f.

ESQUEMA 4 La preparación del compuesto de la Fórmula 5h en el Esquema 5 en la cual R1, R2, R3 y R' son como anteriormente definidos en el Esquema 1, R4 es alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, y heteroalquilo y R5 es OR, NR2 o OH. El compuesto 5b fue obtenido mediante una reacción de Wittig de 5a con fosfonoacetato de fer-butilo y NaH. El compuesto 5b fue convertido en 5c mediante tratamiento de MCPBA. El epóxido 5c fue abierto más aún con NaN3, con lo cual se obtuvo el compuesto 5d que fue reducido con Pd/C/H2 con lo cual se obtuvo la amina y Cbz-protegido mediante la utilización de Cbz- Ci, Et3BN, con lo cual se obtuvo el compuesto de la Fórmula 5e. El compuesto 5e fue desprotegido con TFA y sometido a elaboración final, obteniéndose 5f. El grupo Cbz de 5f fue hidrogenolizado y seguidamente acoplado con el compuesto de la Fórmula lg utilizándose EDCl, HÓOBt, NMM con lo cual se obtuvo 5g El compuesto del tipo 5g es oxidado con reactivo de Dess-Martin con lo cual se obtuvieron los compuestos de la Fórmula 5h.

ESQUEMA 5 J?. R. _ ^ 8 CbzHH ?OR OH OH SÚ 5s El compuesto de la Fórmula 6m es sintetizado tal como se señala en el Esquema 6 en la cual R1, R2, R y n son como anteriormente definidos en el Esquema 1 y R6 es alquilo, arilo, éster, ácido carboxílico y carboxilamidas. El compuesto de tipo 6b es sintetizado a partir de 6a mediante una olefinación de Wittig en la cual se utiliza Ph3PCH3l y BuLi. El compuesto 6b es objeto de mayor aminohidroxilación de manera de sintetizar el compuesto del tipo 6c que fue reducido mediante Rh/C, y H2, con lo cual se obtuvo el compuesto de tipo 6d- El compuesto 6d fue oxidado en forma de compuesto de tipo 6e, para lo cual se utilizó RuCI3 y H5IO6. El compuesto 6d fue elaborado en forma de compuesto 6i mediante su acoplamiento con 6h desprotegido para lo cual se utilizó NMM, EDCl y HOOBt. La extensión del compuesto 6J a 6¡ fue nuevamente lograda mediante el acoplamiento del 6J desprotegido con ácido fenil acético adecuadamente sustituido para lo cual se utilizó EDCl, HOOBt y NMM: El compuesto 6k obtenido después de hidrogenólisis del grupo bencilo en 6j, fue ciclizado en 6k, para lo cual se utilizaron las condiciones de Mitsonubu. 6J fue sometido a elaboración posterior con lo cual se obtuvieron los compuestos de tipo 6m, tal como se señala en el Esquema 1.

ESQUEMA 6 es Sd Sm Los compuestos de tipo 7d son sintetizados mediante la misma química de areno rutenio en la cual los sustituyentes R\ R2, R3, R', son como se define en el Esquema 1 y n = 0 a 3. La síntesis del compuesto de la Fórmula 7b fue obtenida a partir del compuesto de tipo 7a mediante un acoplamiento de base de Hünigs, EDCl, y HOBt. El tratamiento de 7b con Cs2C03 y remoción protolítica del rutenio, convirtió el compuesto del tipo 7b en tipo 7c, que fue sometido a elaboración ulterior con lo cual se obtuvieron los compuestos 7d tal como se señala en el Esquema 1.

ESQUEMA 7 zc M La preparación del compuesto de la Fórmula 8e en la cual R1, R2, R3 son como anteriormente definidos, R es alquilo, heteroalquilo (OR", SR'", NR"R"' siendo R" y R"' grupos alquilo), halo sustituido en la posición orto, meta o para ai átomo de oxígeno; R es alquilo, arilo o alquilarilo; n vale de 0 a 5; y X es (CH2)m, m vale de 1 a 5, átomo de oxígeno, NY siendo Y un átomo de hidrógeno, alquilo, arilo, ha sido señalada en el Esquema 8. El derivado c/s-4-hidroxiprolina protegido 8a es convertido en el derivado brosilato (Bs = 4-bromobencensulfonilo) 8b, que fue desplazado con el adecuado mercaptoalcohol bajo condiciones de hidróxido de sodio con lo cual se obtuvo 8c. La conversión al éster macrociclico 8d y subsiguientemente al objetivo 8e deseado, fue llevado a cabo tal como se destaca en el Esquema 1.

ESQUEMA 8 La preparación del compuesto de la Fórmula 9d, en la cual R\ R2, R3 son como anteriormente definidos, R' es alquilo, heteroalquilo (OR", SRm, NR"R'" siendo R" y R"', grupos alquilo), halo sustituido en la posición orto, meta o para al átomo de oxígeno; R es alquilo, arilo o alquilarilo; n vale de 0 a 5; y X es (CH2)m, m vale de 1 a 5, átomo de oxígeno, NY siendo Y un átomo de hidrógeno, alquilo, arilo, y LG es un general saliente (por ejemplo, OTs, Br), ha sido señalada en el Esquema 9. El derivado 4-hidroxiprolina protegido, la, es convertido en 9a, mediante la formación de Id (que ha sido descrita en el Esquema 1). La remoción del bencil éter seguido por la conversión en un adecuado grupo saliente y despejando el grupo N protector permitió obtener 9b. La conversión al éster macrocíclico 9c fue llevada a cabo mediante tratamiento con carbonato de sodio/yoduro de sodio en acetona bajo reflujo. El subsiguiente procesamiento de manera de obtener el objetivo 9d deseado fue llevado a cabo de acuerdo con el Esquema 1.

ESQUEMA 9 ae La preparación del compuesto de la Fórmula lOe, en la cual R1, R2, R3 son como anteriormente definidos, R' es alquilo, heteroalquilo (OR", SR"', NR"R"', siendo R" y R'" grupos alquilo), halo sustituido en la posición orto, meta o para al átomo de oxígeno; R es alquilo, arilo o alquilarilo; n y q son cualquier combinación de 0 a 5; V es un átomo de oxígeno, NY siendo Y un átomo de hidrógeno, alquilo, arilo, W es alquilo, arilo, alquilarilo, heteroarilo; PG1 y PG2 son grupos protectores adecuados (PG1 = t-boc, cbz y PG2 = H, Bn, etc.), ha sido señalada en el Esquema 10. El derivado 4-hidroxiprolina protegido, la, es convertido en 10b. tal como se describe en el Esquema 1. La remoción del grupo protector (10c) seguido por tratamiento con fosgeno, tiene como resultado el éster macrocíclico lOd. La conversión al objeto 10e deseado, fue llevado a cabo de acuerdo con el Esquema 1.

ESQUEMA 10 Iflb 10c ifld 10e La preparación del compuesto de La Fórmula 11g. en la cual R\ R2, R3 son como anteriormente definidos, R es alquilo, arilo o alquilarilo; X es (CH2)m, (CH2)mO, (CH2)mNY, m vale de 1 a 5, e Y es un átomo de hidrógeno, alquilo, arilo; A es un átomo de hidrógeno o un átomo de halógeno adecuadamente posicionado; PG1 es un grupo protector adecuado (PG1 = t-boc, cbz, etc.), ha sido señalada en el Esquema 11. El derivado 4- amínoprolina protegido, 11a. es convertido en 11 b. mediante su tratamiento con un cloruro de bencenonitrilo adecuado y una base. La remoción del grupo protector seguido por acoplamiento con un derivado aminoácido protegido permitió obtener He. El mismo fue convertido en 11d utilizando una desprotección similar. La estrategia de acoplamiento, ciclización catalizada por paladio (0) permitió obtener 11e como una mezcla de isómeros que fue hidrogenada con lo cual se obtuvo el éster macrocíclico I f. La subsiguiente conversión en el objeto deseado 11g, fue llevada a cabo tal como se destaca en el Esquema 1.

ESQUEMA 11 i lia La preparación del compuesto de la Fórmula 12d, en la cual R1, R2, R3 son como anteriormente definidos, R es alquilo, arilo o alquiiarilo; n vale de O a 5; X es (CH2)m, m vale de 1 a 5, átomo de oxígeno, NY en lo cual Y es un átomo de hidrógeno, alquilo, arilo; A es un átomo de hidrógeno o un átomo de halógeno adecuadamente posicionado; y PG1 y PG2 son grupos protectores adecuados (PG1 = t-boc, cbz, y PG2 = H, Bn, etc.), ha sido señalada en el Esquema 12. El derivado 4-aminoprolina protegido, 11a, es convertido en 11c, tal como se describe en el Esquema 12. La conversión de 11c en el éster macrocíclico 12c; y la subsiguiente conversión en el objeto deseado 12d, fue llevada a cabo tal como se destaca en el Esquema 1.

ESQUEMA 12 12E 12ri PREPARACIÓN DE LOS COMPUESTOS INTERMEDIOS Compuesto Intermedio A Paso 1 A una solución sometida a agitación de 1 -nitrobutano (16.5g, 0.16 moles) y ácido glioxílico en H2O (28.1 g, 0.305 moles) y MeOH (122 ml) a 0°C-5°C, fue adicionada gota a gota trietilamina (93ml, 0.667moles) a lo largo de 2 horas. La solución fue calentada a temperatura ambiente, sometida a agitación durante la noche y concentrada a sequedad, quedando un aceite. El aceite fue seguidamente disuelto en H2O y acidificado a pH = 1 mediante HCl al 10%, seguido por extracción con EtOAc. La solución orgánica combinada fue lavada con salmuera, secada sobre sulfato de sodio, filtrada y concentrada al vacío, con lo cual se obtuvo el producto ii (28.1 g, rendimiento 99%).

Paso 2 A una solución sometida a agitación de material de partida ii (240 g, 1.35 moles) en ácido acético (1.25 I) fue adicionado Pd/C al 10% (37 g). La solución resultante fue hidrogenada a 4.15 kg/cm2 (59 psi) durante 3 horas y seguidamente a 4.22 kg/cm2 (60 psi) durante la noche. El ácido acético fue seguidamente evaporado y barrido bajo nitrógeno tres veces con tolueno, y seguidamente triturado con MeOH y éter. La solución fue seguidamente filtrada y sometida a nitrógeno dos veces con tolueno, con lo cual se obtuvo un sólido blanco (131 g, 0.891 moles, 66%).

Paso 3 III IV A una solución sometida a agitación del aminoácido iii (2.0 g, 13.6 mmoles) en dioxano (10 ml) y H20 (5 ml) a 0°C, fue adicionado una solución de NaOH 1N (4.3 ml, 14.0 mmoles). La solución resultante fue sometida a agitación durante diez minutos, seguido por adición de di-f-butildicarbonato (0.110 g, 14.0 mmoles) y sometida a agitación a 0°C durante 15 minutos. La solución fue seguidamente calentada a temperatura ambiente, sometida a agitación durante 45 minutos y mantenida en refrigerador durante la noche y concentrada hasta sequedad con lo cual se obtuvo un material bruto. A la solución de este material crudo en EtOAc (100 mi) e hielo, fue adicionado sulfato de potasio (2.36 g) y agua (32 ml), y se sometió a agitación durante 4-6 minutos. La capa orgánica fue separada y la capa acuosa fue extraída dos veces con EtOAc, y la capa orgánica fue lavada con agua, secada sobre sulfato de sodio, filtrada y concentrada hasta sequedad con lo cual se obtuvo una goma clara (3.0 g, rendimiento 89 %).

Paso 4.

A una solución sometida a agitación del material de partida (3.00 g, 12.0 mmoles) en DMF (15 ml) y CH2CI2 (15 ml) a -20°C fue adicionado HOOBt (1.97 g, 12.09 mmoles), N-metil morfolina (4.0 ml, 36.0 mmoles) y EDCl (2.79 g, 14.5 mmoles), y se sometió a agitación durante 10 minutos, seguido por adición de HCI-H2N-Gly- OBn (2.56 g, 13.0 mmoles). La solución resultante fue sometida a agitación a -20°C durante dos horas, seguidamente mantenida en refrigeradora durante la noche y concentrada hasta sequedad, seguido por dilución con EtOAc (150 ml). La solución de acetato de etilo fue seguidamente lavada dos veces con bicarbonato de sodio, agua, H3P04 al 5%, salmuera, secada sobre sulfato de sodio, filtrada y concentrada hasta sequedad con lo cual se obtuvo el producto (4.5 g, 94%). LRMS m/z MH+ = 395.1.

Paso 5: La solución de material de partida v (7.00 g, 17.8 mmoles) en etanol absoluto (300 ml) fue sometida a agitación a temperatura ambiente bajo una atmósfera de hidrógeno en la presencia de Pd-C (300 mg, 10%). El progreso de la reacción fue supervisado por CLF. Al cabo de dos horas, la mezcla fue filtrada a través de una almohadilla de celite, y la solución resultante fue concentrada al vacío con lo cual se obtuvo vi (5.40 g, cuantitativo). LRMS m/z MH+ =305.1.

Paso 6: vil VIII A una solución de clorhidrato de dimetilformamida (1.61 g, 19.7 mmoles), N-Boc-fenilglicina (4.50 g, 17.9 mmoles), HOOBt (3.07 g; 18.8 mmoles) y EDCl (4.12 g, 21.5 mmoles) en DMF anhidro (200 ml) y CH2CI2 (150 ml) a -20°C fue adicionado NMM (5.90 ml, 53.7 mmoles). Después de haber sido sometida a agitación a esta temperatura durante 30 minutos, la mezcla reactiva fue mantenida en refrigeradora durante la noche (18 horas). Seguidamente se la dejó calentarse a temperatura ambiente, y se la adicionó acetato de etilo (450 ml), salmuera (100 ml), y H3PO4 al 5%, (100 ml). Una vez separadas las capas, la solución orgánica fue lavada con H3PO4 al 5 % (100 ml), una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (2 x 150 ml), agua (150 ml), y salmuera (150 ml), secada (sulfato de magnesio), filtrada y concentrada al vacío con lo cual se obtuvo el producto crudo viii (4.86 g), en forma de un sólido blanco, que fue utilizado sin purificación ulterior.

Paso 7 La ?-Boc-fenilgiicina dimetilamida viii (4.70 g, bruto), fue disuelto en HCl 4 N (60 ml, 240 mmoles), y la solución resultante fue sometida a agitación a temperatura ambiente. El desarrollo de la reacción fue supervisado por CLF. Al cabo de 4 horas, la solución fue concentrada al vacío con lo cual se obtuvo un sólido blanco que fue utilizado en la siguiente reacción sin purificación ulterior. LRMS m/z MH+ = 179.0.

Paso 8 El compuesto deseado x fue preparado de acuerdo con el procedimiento de acoplamiento descrito en el Paso 4. LMRS m/z MH+ = 465.1.

Paso 9 El compuesto intermedio A deseado fue preparado a partir del tripéptido x de acuerdo con los procedimientos descritos en el Paso 7. LMRS m/z MH+ = 365.1.

COMPUESTO INTERMEDIO B Paso 1 : >r I O O ? ?r? n ?i El producto xii deseado fue obtenido mediante el procedimiento descrito para el compuesto intermedio A, Paso 8, utilizándose el xi, disponible en el comercio, a título de socio de acoplamiento. El material bruto fue lo suficientemente puro para estudios ulteriores. Una porción del producto fue purificado mediante cromatografía instantánea para lo cual se utilizó 97/3 diclorometano/MeOH HRMS (FAB) Calculado para C25H40N3O7:494.2866 (M +H)+. Hallado: 494.2863.

Paso 2: El producto B deseado fue obtenido mediante el procedimiento descrito para el compuesto intermedio A, Paso 7. El material bruto era lo suficientemente puro para estudios ulteriores.

COMPUESTO INTERMEDIO C Paso 1 El producto xiii deseado fue obtenido de manera similar a los procedimientos de acoplamiento descritos en el Paso 6 para el compuesto intermedio A, salvo que en lugar de dimetilamina se utilizó metilamina.

Paso 2 El producto xiv deseado fue preparado a partir de xii de acuerdo con los procedimientos descritos en el Paso 7 para el compuesto intermedio A.

Paso 3 El producto xv deseado fue obtenido de manera similar a los procedimientos de acoplamiento descritos en el Paso 6 para el compuesto intermedio A, salvo que en lugar de la amina iv se utilizó amina ix. LRMS m/z MH+=451.1.

Paso 4 El compuesto intermedio C deseado fue obtenido de manera similar a los procedimientos descritos en el Paso 7 para el compuesto intermedio A. LRMS m/z MH+ = 351.1. Fue utilizado sin purificación ulterior.

COMPUESTO INTERMEDIO D El compuesto intermedio D deseado fue preparado a partir del compuesto v de acuerdo con los procedimientos descritos en el Paso 7 para el compuesto intermedio A. Fue utilizado sin purificación ulterior.

COMPUESTO INTERMEDIO E Paso 1 A una solución de xvi (5g) en diclorometano (20 ml) fue adicionado TFA (20 mi) y se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 4 horas. Otra porción de TFA (10 ml) fue adicionada y dejada en reposo durante 3 horas más. Todos los volátiles fueron evaporados y fue secado al vacío con lo cual se obtuvo un rendimiento cuantitativo de xvii. Este material fue utilizado ulteriormente (Nota: el material de partida xvi fue obtenido mediante un protocolo similar descrito para B, utilizándose el nitropentano como precursor).

Paso 2: El compuesto xviii deseado fue obtenido mediante el método descrito para el compuesto intermedio A, Paso 3. Se utilizó carbonato de sodio como base en jugar de NaOH. El material crudo xviii fue utilizado sin purificación ulterior.

Paso 3 A una solución fría (a -20°C) de xviii (4.8 g, 10.7 mmoles) en dimetilformamida/DMF (4/1 , 25 ml), fue adicionada clorhidrato de dimetilamina (959 mg, 11.77 mmoles), diisopropiletilamina (4.2 ml, 24.1 mmoles) y BOP (6.14 g, 13.89 mmoles). Fue dejada en reposo a -8°C durante la noche. La mezcla reactiva fue diluida con diclorometano y lavada con una solución acuosa de ácido cítrico al 10%, solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y salmuera. La capa orgánica fue secada (sulfato de sodio) y concentrada. El residuo fue purificado mediante cromatografía de columna flash para lo cual se utilizó 97.5/2.5 diciorometano/MeOH, con lo cual se obtuvo 2.4 g de xix (rendimiento: 47%). HRMS (FAB). HRMS (FAB) Cale, para C24H39N406: 479.2870 (M +H)+. Hallado: 479.2862.

Paso 4 Ei producto E deseado fue obtenido mediante el procedimiento descrito para el compuesto intermedio A, Paso 7. El material bruto fue utilizado sin purificación ulterior.

COMPUESTO INTERMEDIO F Paso 1 A una solución fría (O°C) de xx (20.0 g, 86.5 mmoles) en benceno (300 ml) y MeOH (50 ml), fue adicionado trimetrilsilil diazometano (2M en hexanos, 56 ml, 112 mmoles) gota a gota hasta que la solución permaneció amarillo. La mezcla reactiva fue concentrada, con lo cual se obtuvo 21 g de xxi (rendimiento 99%) que era lo suficientemente puro para ser utilizado en el paso siguiente. HRMS (FAB). HRMS (FAB) Cale, para 246.1341 (M +H)+. Hallado: 246.1347.

Paso 2: xxl xxii A una solución fría (-5°C) sometida a agitación mecánicamente de trifenilfosfina (31.97 g, 121.9 mmoles) y ácido metanosulfónico (7.66 ml, 118.1 mmoles) en tolueno, fue adicionado DEAD (26.47 g, 152 mmoles) lentamente sin dejar de mantenerla temperatura de ia reacción debajo de los 35°C. Una vez completada la adición, la mezcla reactiva fue enfriada a 20°C y se le adicionó una solución de xxi (23.71 g, .96.8 mmoles) en tolueno, seguido por trietilamina (5.39 ml, 38.7 mmoles). La mezcla fue calentada a 70 - 75°C durante 6 horas y seguidamente enfriada a 5 - 10°C durante 1 hora. Todo el material sólido fue retirado por filtración, y el material filtrado fue lavado con KH2PO4 al 5 % y salmuera. La capa orgánica fue secada (sulfato de sodio) y concentrada. La cromatografía de columna Instantánea del residuo mediante 95/5 diclorometano/acetato de etilo permitió obtener 26 g de xxii (rendimiento 83%). HRMS (FAB) Cale, para C^H^NO.S: 324.117 (M+H)+. Hallado: 324.1115.

Paso S El mesilato xxii (26 g, 80.4 mmoles) fue disuelto en DMF, y la totalidad de los volátiles fueron evaporados al vacío (Precaución: mediante este procedimiento deben removerse las cantidades vestigiales de diclorometano). A la solución restante fue adicionado azida de sodio (5.75 g, 88.4 mmoles), y se calentó a 70°C durante 5 horas. La mezcla reactiva fue enfriada, diluida con acetato de etilo y lavada con bicarbonato de sodio saturado. La capa orgánica fue secada (sulfato de sodio) y concentrada, con lo cual se obtuvo 18 g (rendimiento 83 %) de xxiii que era lo suficientemente puro para estudios ulteriores.

Paso 4 xxlll El producto F deseado fue obtenido mediante el procedimiento descrito para el compuesto intermedio A, Paso 5. El material bruto fue utilizado sin mayor purificación.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Preparación de Compuestos de las Fórmulas 1A y 1B 1A 1B Paso A 1a 1b A una solución de Boc-Hyp-OH (7.0 g, 30.3 mmoles) y bencil 3-bromopropil éter (7.8 g, 34.0 mmoles) en DMF anhidro (400 ml) a temperatura ambiente fue adicionado hidruro de sodio (3.5 g, dispersión al 60% en aceite mineral, 87,5 mmoles) e ioduro de sodio (0.5 g, 3.33 mmoles) bajo agitación. La suspensión resultante fue sometida a agitación enérgicamente a temperatura ambiente durante la noche (18 horas). La reacción fue apagada cuidadosamente mediante la adición lenta de agua (50 ml) y acidificada con una solución HCl 6N (20 ml). Después de la adición de acetato de etilo (800 ml), salmuera (150 ml) y mas agua (150 ml), las dos capas formadas fueron separadas y la capa orgánica fue lavada con H3PO4 al 5% (3x200 ml). Fue seguidamente secada con sulfato de magnesio, filtrada y concentrada al vacío con lo cual se obtuvo 1 b en forma de un aceite que fue utilizado en el Paso B sin purificación ulterior.

Paso B El ácido 1b del Paso B fue disuelto en benceno (25 ml) y metanol (28 ml). A esta solución a temperatura ambiente fue adicionada una solución de trimetilsilil diazometano (27 ml, 2.0 M en ciciohexano) con cuidado. Después de haber sido sometida a agitación a temperatura ambiente durante 1 hora, fue concentrado al vacío con lo cual se obtuvo el metil éster. La cromatografía instantánea (de 8 a 20% de acetato de etilo/CH2CI2) permitió obtener 1c (5.14 g, 13.1 mmoles, 43%, 2 pasos), en forma de un aceite.

Paso C: 1c 1d El Boc-amino metil éster 1c (5.83 g, 14.8 mmoles) fue disuelto en HCl 4 N en dioxano (80 ml, 320 mmoles), y la solución resultante fue sometida a agitación a temperatura ambiente. El desarrollo de la reacción fue supervisado mediante CLF. Al cabo de 5 horas, la solución fue concentrada al vacío y el residuo fue mantenido bajo vacío durante la noche con lo cual se obtuvo un sólido blanco que fue utilizado en la siguiente reacción de acoplamiento sin una purificación adicional.

Paso D 1d 1e A una solución del amina éster 1d (del Paso 1B), N-Boc-ciclohexilglicina (4.10 g, 14.9 mmoles), HOOBT (2.60 g, 15.9 mmoles) y EDCl (3.41 g, 17.8 mmoles) en THF anhidro (150 ml) y CH2CI2 a -20°C, fue adicionado NMM (6.50 ml, 59.1 mmoles). Después de haber sido sometida a agitación a esta temperatura durante 30 mm, la mezcla reactiva fue guardada en una refrigeradora durante la noche (18 h). Fue seguidamente sometida a agitación al aire y se la dejó calentarse a temperatura ambiente durante una hora. Se adicionaron EtOAc (450 ml), salmuera (100 ml) y H3P04 al 5% (100 ml). La solución orgánica separada fue lavada con H3PO4 al 5% (100 ml), una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (2 X 150 mi), agua (150 ml), y salmuera (150 ml), secada con sulfato de magnesio, filtrada y concentrada al vacío. La cromatografía instantánea (EtOAc-CH2CI2 del 10 al 20%) permitió obtener le (6.60 g, 84% 2 pasos) en forma de un solido blanco. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 7.36-7.25 (m, 5 H), 6.87 (d, J = 8.9 Hz, 1 H), 4.46-4.40 (m, 2 H), 4.25 (t, J = 8.3 Hz, 1 H), 4.11 (s, 1 H), 4.05-4.04 (m, 1 H), 4.03-3.94 (m, 1 H), 3.60 (s, 3 H), 3.5-3.41 (m, 4 H), 2.25-2.20 (m, 1 H), 1.95-1.88 (m, 1 H), 1.77-1.55 (m, 9 H), 1.35 (s, 9 H), 1.19-0.90 (m, 4 H); 13C RMN (100 MHz, d6-DMSO) d 172.0, 170.7, 155.6, 138.8, 128.2, 127.4, 127.3, 78.0, 77.1 , 71.9, 66.6, 65.1 , 57.4, 56.3, 51.8, 34.5, 29.6, 28.6, 28.2, 25.9, 25.6, 25.5.

Paso E El Boc-aminometil ester 1e (6.53g, 12.3 mmoles) fue disuelto en HCl 4 N (60 ml, 240 mmoles) y la solución resultante fue sometida a agitación a temperatura ambiente. El desarrollo de la reacción fue seguido por CLF. Al cabo de 4 horas, la solución fue concentrada al vacío y el residuo fue mantenido bajo vacío con lo cuai se obtuvo un sólido blanco que fue utilizado en la siguiente reacción de acoplamiento sin una purificación adicional. . 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 7.36- 7.27 (m, 5 H), 4.43 (s, 2 H), 4.35-4.31 (m, 1 H), 3.86 (d, J = 11.7 Hz, 1 H), 3.62(5, 3 H), 3.62-3.57 (m, 2 H), 3.5-3.41 (m, 3 H), 2.32-2.27 (m, 1 H), 1.97-1.91 (m, 1 H), 1.79-1.60 (m, 8 H), 1.17-1.07 (m, 5 H); 13C RMN (100 MHz, d6-DMSO) d 171.5, 167.4, 138.6, 133.3, 129.1 , 128.8, 128.2, 127.4, 77.1 , 71.9, 66.5, 65.3, 57.8, 54.9, 52.4, 52.0, 34.0, 29.6, 27.7, 27.0, 25.6, 25.5, 25.48; HRMS m/z 433.2702 [calculado para Cj^N ;, 433.2702].

Paso F 1f ig A una solución de la amina 1f (del Paso 1 D), ácido 3-hidroxi fenil acético (1.90 g,12.5 mmoles), HOOBt (2.10 g,12.9 mmoles) y EDCl (2.85 g, 14.9 mmoles) en DMF anhidro (250 ml) y CH2CI2 (100 ml) a -20°C, fue adicionado NMM (4.20 ml, 38.2 mmoles). Después de haber sido sometida a agitación a esta temperatura durante 30 min, la mezcla reactiva fue mantenida en un refrigerador durante la noche (18 h). Fue seguidamente sometida a agitación al- aire y dejada calentarse a temperatura durante 1 hora. Se adicionó acetato de etilo (500 ml), salmuera (100 ml) y H3P04 al 5 % (100 ml). La solución orgánica fue lavada con H3PO4 al 5% (100 ml), una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (2 X 1 50 ml), agua (150 mi), y salmuera (150 ml), secada con sulfato de sodio, filtrada y concentrada al vacío. La cromatografía instantánea (de 10 a 20% de ÉtOAc-CH2CI2) permitió obtener 1g (6,30 g, 1111 mmoles, 90% (2 pasos)) en forma de un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, dß-DMSO) d 9.26 (s, 1 H), 8.19 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 7.36-7.25 (m, 5 H), 7.0-7.01 (m, 1 H), 6.66-6.64 (m, 1 H), 6.60-6.57 (m, 1 H), 4.46-4.39 (m, 2 H), 4.34 (t, J = 8.3 Hz, 1 H), 4.29-4.25 (m, 1 H), 4.09-4.08 (m, 1 H), 3.91 (d, J = 11.0 Hz, 1 H), 3.66-3-58 (m, 1 H), 3.61 (5, 3 H), 3.50-3.39 (m, 5 H), 3.30 (d, J = 13.7 Hz, 1 H), 2.24-2.18 (m, 1 H), 1.95-1.89 (m, 1 H), 1.74-1.57 (m, 8 H), 1.1-0.89 (m, 5H); 13C RMN (100 MHz, d6-DMSO) d 172.0,170.3,170.0,157.1 , 138.6, 137.6, 128.9, 128.2, 127.4, 127.3, 119.6, 116.1 , 113.2, 76.9, 71.8, 66.6, 65.2, 57.4, 54.7, 51.9, 51.8, 41.8, 34.4, 296, 28.5, 28.0, 25.5, 25.5; HRMS m/z 567.3073 [calculado para C32H42N2O7, 567.3070].

Paso G A una solución del bencil éter 1g (6.23 g, 11.0 mmoles) en etanol (200 ml) bajo nitrógeno a temperatura ambiente fue adicionado Pd-C al 10% (1.5 g) con precaución. La suspensión resultante fue vigorosamente sometida a agitación a temperatura ambiente bajo hidrógeno durante 23 h. Después de una cuidadosa filtración, la solución fue concentrada al vacío. La cromatografía instantánea (MeOH-CH2CI2 de 2 a 5%) permitió obtener 1h (4.54 g, 9.52 mmoles, 87%) en forma de un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 9.26 (s, 1 H), 8.22 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 7.06-7.02 (m, 1 H), 6.666.58 (m, 3 H), 4.42-4.40 (m, 1 H), 4.35-4.31 (s, 1 H), 4.27 (t, J = 8.3 Hz, 1 H), 4.10-4.09 (m, 1 H), 3.92 (d, J = 11.2 Hz, 1 H), 3.64 (dd, J = 11.2, 4.3 Hz, 1 H), 3.61 (s, 3 H), 3.59-3.43 (m, 5 H), 3.40-3.38 (m, 1 H), 2.26-2.21 (m, 1 H), 1.97-1.90 (m; 1 H), 1.74-1.55 (m, 8 H), 1.18-0.89 (m, 5 H); 13C RMN (100 MHz, d6-DMSO) d 172.0, 170.3, 170.1 , 157.1 , 137.6, 129.0, 119.6, 116.0, 113.3, 76.9, 65.2, 57.6, 57.4, 54.8, 51.9, 51.8, 41.7, 34.4, 32.6, 28.5, 28.0, 25.9, 25.52, 25.49; HRMS m/z 477.2606 [calculado para 0^36^07, 477.2601].

Paso H: 1h II Una solución del alcohol fenólico 1h (4.50 g, 9.43 mmoles) y ADPP (6.60 g, 26.2 mmoles) en CH2CI2 anhidro fue hecho burbujear con argón a través de un burbujeador de frita de vidrio durante 20 mm. A esta solución a 0°C fue adicionado trifenilfosfina (4.10 g, 16.3 mmoles). Después de agitación a 0°C durante 20 minutos, se adicionó una segunda porción de trifenilfosfina (3.40 g, 13.5 mmoles). La solución fue seguidamente calentada a temperatura ambiente y sometida a agitación durante la noche (24 h) bajo nitrógeno hasta que la CLF indicó el consumo total del material de partida. Después de la remoción del solvente al vacío, el residuo fue parcialmente purificado mediante cromatografía instantánea (MeOH de 1 a 2 % en CH2CI2), con lo cual se obtuvo una mezcla de macrociclo 1i y óxido de trifenilfosfina. 1H RMN (400 MHz, d6, DMSO) d 8.47 (d, J = 9.7 Hz, 1 H), 7.17-7.13 (m, 1 H), 6.79 (s, 1 H), 6.73 (d, J =1.8 Hz, 1 H), 6.71 (d, J =1.8 Hz, 1 H), 4.50-4.45 (m, 1 H), 4.24 (dd, J = 10.3, 7.6 Hz, 1 H), 4.17-4.06 (m, 4 H), 3.68 (d, J = 15.1 Hz, 1 H), 3.63 (s, 3 H), 3.60-3.51 (m, 2 H), 3.37 (d, J = 15.1 Hz, 1 H), 3.35-3.27 (m, 1 H), 2.51-2.43 (m, 1 H), 1.85-1.47 (m, 9 H), 1.22-1.12 (m, 3 H), 0.97-0.88 (m, 2 H); 13C RMN (100 MHz, de-DMSO) d 172.0,170.0,169.8,158.4, 138.1 , 129.1 , 121.8, 115.4, 112.2, 77.0, 64.9, 63.6, 57.0, 54.3, 53.4, 51.8, 41.3, 33.2, 28.9, 28.5, 28.2, 26.0, 25.2; HRMS m/z 459.2495 [calculado para Cj^N^, 459.2495].

Paso I: j Una solución acuosa de hidróxido de litio (0.45 g en 30 ml de agua) fue adicionada a una solución a 0°C del metil éster 1i en THF (30 ml) y metanol (30 ml). La mezcla fue sometida a agitación en un baño de hielo y calentada a temperatura ambiente junto con el mismo durante 4 horas. El desarrollo de la reacción fue supervisado por CLF. Una vez que los volátiles fueron retirados al vacío, se adicionaron EtOAc (150 ml) y agua (30 ml), y las dos capas fueron separadas. La solución acuosa fue extraída nuevamente con CH2CI2 (150 ml), después de lo cual fue acidificado a pH = 1. Seguidamente se adicionó acetato de etilo (200 ml) y la solución acuosa fue saturada con cloruro de sodio sólido. Después de separación de las capas, la capa acuosa fue extraída con acetato de etilo (2 x 150 mi), La soluciones orgánicas fueron combinadas, secadas con sulfato de magnesio, filtradas y concentradas al vacío, con lo cual se obtuvo 1j (1.45 g, 3.26 mmoles, 35%, 2 pasos) en forma de una espuma amarillenta. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSD) d 12.32 (s ancho, 1H), 8.45 (d, J = 9.5 Hz, 1 H), 7.17-7.13 (m, 1 H), 6.73-6.70 (m, 1 H), 6.79 (s, 1 H), 6.73-6.70 (m, 2 H), 4.47 (t, J =9!7 Hz, 1 H), 4.17-4.00 (m, 5 H), 3.68 (d, J = 15.1 Hz, 1 H), 3.58-3.45 (m, 2 H), 3.39-3.21 (m, 2 H), 2.47-2.41 (dd, J=13.4, 7.6Hz, 1 H), 1.85-1.56 (m, 9 H), 1.1 9-1.11 (m, 3 H), 0.93-0.87 (m, 2 H); 13C RMN (100 MHz, d6-DMSO) d 173.2, 170.2, 170.0, 158.4, 138.1 , 129.3, 122.0, 115.5, 112.2, 77.3, 65.163.8, 57.3, 54.2, 53.7, 41.5, 33.6, 29.0, 28.6,28.4, 26.1 , 25.4; HRMS m/z 445.2335 [calculado para C24H32N2O6, 445.23391].

Paso J 1) 1k A una solución del ácido 1j (0.59 g, 1.33 mmoles), amina A (H2N-NVa- CH(OH)-CO-Gly-Phg-Nme2, 0.5 g, 1.37 mmoles), HOOBt (250 mg, 1.53 mmoles) y EDCl (315 mg, 1.64 mmoles) en DMF anhidro (50 ml) y CH2CI2 (50 mi) a -20°C fue adicionado NMM (0.50 ml, 4.55 mmoles). Después de sometida a agitación a esta temperatura durante 30 mm, la mezcla reactiva fue mantenida en un congelador durante 40 horas. Seguidamente se adicionaron acetato de etilo (200 ml), salmuera (50 ml) y H3P04 al 5% (50 ml). La solución orgánica fue lavada sucesivamente con H3PO4 al 5% (80 ml), solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (2 X 80 ml), agua (80 ml), y salmuera (80 ml), secada sobre sulfato de magnesio, filtrada y concentrada al vacío. La cromatografía instantánea (MeOH-CH2CI2 de 4 a 7.5%) permitió obtener 1k en forma de una mezcla de cuatro diastereómeros (0.59 g, 0.75 mmoles, 56%) como sólido blanco 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 8-54-8.35 (m, 2 H), 7.95-6.98 (m, 8 H), 6.79-6.77 (m, 1 H), 6.72-6.70 (m, 2 H), 5.9-5.73 (m, 2 H), 4.53-4.45 (m, 1 H), 4-35-3-61 (m, 11 H), 3.54-3.41 (m, 1 H), 3.40-3.22 (m, 1 H), 2.93-2.92 (m, 3 H), 2.84 (s, 3 H), 2.42- 2.17 (m, 1 H), 1.87- 1.55 (m, 10 H), 1.49-1.06 (m, 7 H), 0.98-0.75 (m, 5 H); 13C RMN (100 MHz, d6- DMSO) d 172.1 , 171.9, 171.8, 170.8, 170.7, 170.4, 170.4, 170.3, 170.0, 169.8, 169.7, 169.6, 169.2, 169.2, 167.9, 167.8, 167.8, 158.4, 158.3, 138.2, 138.15, 138.11 , 138.07, 137.6, 137.50, 137.48.129.1, 128.5, 128.3, 127.8, 127.7, 121.7, 121.6, 115.4, 115.3, 112.09, 112.07, 112.0, 111.9.76.9, 76.8, 73.3, 72.1 , 71.9, 64.9, 64.8, 63.2, 58.7, 58.5, 57.9, 57.8, 54.6, 54.5, 54.48, 53.8, 53.78, 53.7, 53.66, 53.0, 52.9, 51.0, 50.8, 50.7, 41.6, 41.5, 41.4, 41.3, 36.6, 35.3, 33.9, 33.86, 33.5, 32.9, 32.1 , 29.9, 29.0, 28.9, 28.5, 28.4, 28.3, 26.0, 25.9, 25.3, 25.25, 25.2, 18.6, 18.56, 18.5, 13.8, 13.7; HRMS m/z 791.4339 [calculado para C42H58N6O9, 791.4344, error = 1 ppm].

Paso K 1B A una mezcla de la hidroxi amida 1k (0.57 g, 0.72 mmoles) en reactivo de Des-Martin (0.76 g, 1.8 mmoles) a 0°C fue adicionado CH2CI2 anhidro. La suspensión blanca resultante fue vigorosamente sometida a agitación a 0°C y calentada a temperatura ambiente junto con un baño de hielo durante 4 horas. Se adicionaron una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y de bisulfito de sodio (50 ml cada una), y la mezcla fue enérgicamente sometida a agitación durante 10 minutos antes de separar las capas. La solución acuosa fue extraída con (2 x 150 ml). La solución orgánica combinada fue secada con sulfato de magnesio, filtrada y concentrada al vacío. La cromatografía instantánea (MeOH-CH2CI2 de 2 a 4%) permitió obtener dos diastereómeros 1A (250 mg, 0.32 mmoles) y 1 B (217 mg, 0.28 mmoles, rendimiento combinado 82%) en forma de sólidos blancos.

EJEMPLO 2 Preparación del Compuesto 2 P390 A 11 2a El compuesto deseado 2a fue preparado de acuerdo con el método del Ejemplo 1 , Paso J, con la salvedad de sustituir la amina B por la amina A. La hidroxi amina fue obtenida en forma de una mezcla de diastereómeros inseparables en forma de un sólido blanco con un rendimiento del 60 %.

Paso B 2a La cetoamida deseada fue preparada a partir de la hidroxi amida 2a de acuerdo con el método del Ejemplo 1 , Paso K. El producto fue obtenido en forma de una mezcla de diastereómeros inseparables en forma de un sólido blanco con un rendimiento del 78%. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 8.69-8.57 (m, 1 H), 8.45 - 8.36 (m, 1 H), 7.9.7.72 (m, 1H), 7.64-7.53 (m, H), 7.41-7.31 (m, 5 H), 7.16-6.97 (m, 1 H), 6.79-6.70 (m, 3 H), 5.97-5.75 (m, 1 H), 5.31-5.27 (m, 1 H), 4.52-4.44 (m, 1 H), 4.3-3.61 (m, 11 H), 3.54-3.41 (m, 1 H), 3.39-3.21 (m, 1 H), 2.42-2.16 (m, 1 H), 1.8-1.54 (m, 9 H), 1.49-1.05 (m, 16 H), 0.95-0.70 (m, 5 H); 13C RMN (100 MHz, de-DMSO) d 172.3, 172.2, 172.0, 171.9, 170.9.170.7, 170.5, 170.5, 170.4, 170.1 , 169.9, 169.7, 169.5, 168.6, 168.5, 158.5, 158.4, 136.2.138.2, 138.1 , 136.7, 132.1 , 131.6, 131.5, 129.2, 129.1 , 128.8, 128.7, 128.1, 127.7, 127.6, 127.6, 127.5, 127.4, 127.4, 121.7, 116.4, 115.4, 115.4, 113.3, 112.1 , 112.1 , 112.0, 81.3, 77.0, 76.9, 76.9, 73.4, 72.3, 72.0, 64.9, 64.8, 63.3, 58.8, 56.9, 56.8, 54.7,.54.6, 54.6, 53.9, 53.9, 53.8, 51.1 , 50.8, 41.6, 41.4, 41.3, 34.0, 33.9, 29.1 , 29.0, 28.6, 28.5, 28.4, 28.4, 28.3, 27.5, 26.0, 26.0, 25.4, 25.3, 25.2, 18.7, 18.6, 18.5, 13.9.13.9, 13.8: HRMS m/z 820.4493 [calculado. para 820.4497].

EJEMPLO 3 Preparación del Compuesto de la Siguiente Fórmula 3 Paso A Una solución del t-butil éster 2 (26 mg, 0.032 mmoles) en ácido trifluoracético (2 mi) y CH2CI2 (2 ml) fue sometida a agitación a temperatura ambiente durante 3 horas. Una vez que los volátiles fueron retirados al vacío, el residuo fue disuelto en MeOH-CH2CI2 al 50% y concentrado al vacío, con lo cual se obtuvo un sólido blancuzco (24 mg, 0.032 mmoles, cuant.) 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 8.7-8.65 (m, 2 H), 8.40 (dd, J = 9.51 2.6 Hz, 1 H), 8.24-8.05 (1 H)1 7.64-7.55 (m, 1 H), 7.41-7.32 (m, 5 H), 7.15 (t, J = 7.8 Hz, 1 H), 6.80-6.71 (m, 3 H), 5.35 (dd, J = 7.5, 1.9Hz, 1 H), 5.04-4.96 (m, 1 H), 4.48-4.43 (m, 1 H), 4.37-4.22 (m, 1 H), 4.1-3.27 (m, 11 H), 2.35-2.1 (m, 1 H), 1.84-0.70 (m, 21 H); 13C RMN (100 MHz, d6-DMSO) d 196.7, 171.7, 171.4, 171.3, 170.0, 169.7, 167.5, 161.0, 160.7.158.5, 158.5.158.4, 138.2, 138.2, 137.1, 137.0, 132.1 , 132.1 , 131.6, 131.5, 131.5, 129.2, 128.8, 128.7.128.7.128.6, 128.0, 127.7, 127.5, 127.5, 121.8, 115.4, 112.2, 76.9, 76.8, 65.0, 64.9, 63.4, 63.3, 58.2, 5 7.4, 56.3, 56.2, 56.2, 54.6, 54.5, 53.8, 53.4, 53.2, 41.5, 41.5, 41.4, 40.2, 33.9, 33.7, 31.9, 31.7, 29.2, 29.0, 28.6, 28.3, 26.1 , 25.3, 18.7, 18.6, 13.5, HRMS m/z 762.3705 [calculado para C?N5O10, 762.3714].

EJEMPLO 4 Preparación de ios Compuestos de las Fórmulas 4A y 4B Paso A El producto 4a deseado fue obtenido mediante el método descrito para el Ejemplo 1 , Paso A, El material bruto fue utilizado tal cual en el paso siguiente.

Paso B 4a 4b El producto 4b deseado fue obtenido mediante el método descrito para el Ejemplo 1 Paso B El material fue purificado mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 80/20 a 75/25 hexanos/acetato obteniéndose 4b con un rendimiento del 50% en forma de un aceite incoloro.

Paso C 4b 4c El producto 4c deseado fue obtenido mediante el protocolo descrito para el Ejemplo 1 Paso C. El material bruto fue utilizado tal cual en el paso siguiente.

El producto 4d deseado fue obtenido mediante el método descrito para el Ejemplo 1 , Paso D. Después de su tratamiento final el material era lo suficientemente puro para ser utilizado en el paso siguiente. HRMS (FAB) Calculado para C^H^N : 547.3383 (M+H)+; hallado 547.3372.

Paso E El producto 4e deseado fue obtenido mediante el método descrito para el Ejemplo 1 Paso E. El material bruto fue utilizado tal cual en el paso siguiente Paso F El producto 4f deseado fue obtenido mediante el método descrito para el Ejemplo 11 Paso F. El material bruto fue purificado mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 80120 a 60/40 de diclorometano/acetato de etilo con lo cual se obtuvo 4f con un rendimiento del 85%. HRMS (FAB) Calculado para 581.3227 (M+H)+; hallado 581.3222.

Paso G El producto 4g deseado fue obtenido mediante el método descrito para el Ejemplo 1 Paso G. El material bruto fue utilizado tal cual en el paso siguiente. HRMS (FAB) Calculado para C26H3gN2O7: 491.2757 (M+H)+; hallado 491.2761.

Paso H: El producto 4h deseado fue obtenido mediante el método descrito para el Ejemplo 1 , Paso H. La purificación mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 99/1 de diclorometano/metanol permitió obtener 4h junto con óxido de trifenilfosfina. Esta mezcla fue tomada en el paso siguiente.

Paso I El producto deseado fue obtenido mediante el método descrito para el Ejemplo 1 , Paso I. Rendimiento de 4i (para dos pasos): 24%. 1H RMN (DMSO-d6) d 0.90-0.95 (m, 2H), 1.10-1.16 (m, 3H), 1.51-1.79 (m, 11H), 2.43 (dd, 1 H), 3.29-3.32 (m, 2H), 3.50-3.54 (m, 1 H), 3.62-3.68 (m- 2H), 3.91-3.99 (m, 3H), 4.04-4.08 (m, 2H), 4.46 (t, 1 H), 6.67-6.72 (m, 3H), 7.13 (t app, 1 H), 8.36 (d, 1 H), 12.40 (s ancho, 1 H); 13C RMN (DMSO-d6) d 25.26, 25.31 , 25.97, 26.62, 28.42, 33.28, 39.75, 41.49, 53.50, 54.28, 57.45, 67.57, 67.98, 77.25, 111.07, 115.23, 121.48, 129.11 , 137.99, 158.33, 170.07, 172.92; HRMS (FAB) Calculado para C25H35N2?6: 459.2495 (M+H)+. Hallado; 459.2494.

Paso J El producto 4j previsto fue sintetizado como anteriormente descrito para el Ejemplo 1 Paso J. Después de su tratamiento final, el material tenia la pureza suficiente para ser utilizado en el siguiente paso HRMS (FAB) Calculado para C^H^N ,: 805.4500 (M+H)+; hallado: 805.4492.

Paso K Los productos 4a y 4b deseados fueron obtenidos mediante el protocolo de oxidación anteriormente descrito para el Ejemplo 1 Paso K La purificación mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 100/0 a 99/1 de diclorometano/metanol permitió obtener los isómeros separados 4A y 4B y alguna mezcla. Rendimiento combinado: 34% (para dos pasos). HRMS (FAB) Calculado para C43H59N609: 803.4344 (M+H)+; hallado 803.4339 (4A), 803.4347 (4B).

EJEMPLO 5 Preparación del compuesto 5 Paso A El producto 5a previsto fue sintetizado como anteriormente descrito para el Ejemplo 2 Paso A. Después de su tratamiento final, el material tenia la pureza suficiente para ser utilizado en el siguiente paso. HRMS (FAB) Calculado para 834.4653 (M+H)+; Hallado 834.4648.

Paso B: El producto 5 deseado fue obtenido mediante el protocolo de oxidación anteriormente descrito para el Ejemplo 1 Paso K. La purificación mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó 99/1 de diclorometano/metanol permitió obtener 5 en forma de diastereómeros con un rendimiento del 31 % (para dos pasos). HRMS (FAB) Calculado para 832.4497 (M+H)+; hallado 832.4497.

EJEMPLO 6 Preparación del compuesto 6 Paso 6 El producto 6 previsto fue sintetizado como anteriormente descrito para el Ejemplo 3 Paso A, con un rendimiento cuantitativo. HRMS (FAB) Calculado para C41H54N5O10: 776.3871 (M+R)+; hallado 776.3865.

EJEMPLO 7 Preparación de los compuestos 7A v 7B Paso A El producto 7a previsto fue preparado a partir de 1 c de acuerdo dimiento del Ejemplo 1 , Paso A. El producto bruto fue utilizado en in purificación adicional.

Paso B El producto 7b deseado fue obtenido a partir de 7a mediante el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso B.

Paso C El producto 7c deseado fue obtenido a partir de 7b mediante el procedimiento descrito para el Ejemplo 1 , Paso C. El material fue utilizado en el Paso D sin purificación adicional.

Paso D 7c 7d El producto 7d deseado fue obtenido a partir de 1c de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 Paso D.

Paso E El producto 7e deseado fue obtenido a partir de 7d de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 Paso E. El producto fue utilizado en el Paso F sin purificación adicional.

Paso F El producto 7f deseado fue obtenido a partir de 7e de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 Paso F. 10 Paso H 15 El producto 7g deseado fue obtenido a partir de 7f de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 Paso F.

Paso H Una solución del alcohol fenólico 7g (830 mg, 1.79 mmoles) y ADPP (1.36 g, 5.39 mmoles) en CH2CI2 anhidro (200 ml) fue hecho burbujear con argón a través de un burbujeador de frita de vidrio durante 20 mm A esta solución a 0°C fue adicionado trifenilfosfina (1.41 g, 5.38 mmoles). Después de agitación a 0°C durante 20 minutos, la solución fue calentada a temperatura ambiente y sometida a agitación durante la noche (20 h) bajo nitrógeno Después de la remoción del solvente al vacío, el residuo fue purificado mediante cromatografía instantánea (MeOH a de 1 a 3 % en CH2CI2) con lo cual se obtuvo una mezcla del producto deseado 7h y óxido de trifenilfosfina que fue utilizada en el Paso I sin purificación.

Paso I El compuesto 7i deseado fue preparado a partir de 7h con un rendimiento del 36% (2 pasos) de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso I.

Paso J 71 7J El compuesto 7j deseado fue preparado a partir de 7i y A con un rendimiento del 56% de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1, Paso J.

Paso K Los compuestos 7A y 7B deseados fueron preparados a partir de ] de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso K.

EJEMPLO 8 Preparación del Compuesto de ia Fórmula 8 Paso A El compuesto 8a deseado fue preparado de manera análoga al método del Ejemplo 1 Paso J, con la salvedad que la amina A fue reemplazada por la amina B. El producto fue obtenido como una mezcla de diastereómeros inseparables en la forma de un sólido blanco con un rendimiento del 57%.

Paso B: 10 El compuesto 8 deseado fue preparado con un rendimiento del 72% a partir de 8a de acuerdo con el método del Ejemplo 1 Paso K.

EJEMPLO 9 Preparación dei Compuesto de la Fórmula 9 Paso A El compuesto 9 deseado fue preparado en forma cuantitativa a partir de 8 de acuerdo con el método del Ejemplo 3, Paso K.

EJEMPLO 10 Preparación del Compuesto de las Fórmulas 10A y 10B Paso A 10a 10b A una solución a 0°C de 10a (10 g, 41 mmoles) en diclorometano (60 mi) fue adicionado trietilamina (28.68 mi, 204 mmoles), lentamente. Seguidamente se adicionaron cloruro de 4-bromobencensulfonilo (20.91 g, 82 mmoles) y DMAP (unos pocos cristales), y se mantuvo la temperatura a 0°C durante 30 minutos. La mezcla reactiva fue dejada en reposo en el refrigerador (aproximadamente -5°C) durante ia noche seguido por un lento calentamiento a temperatura ambiente durante dos horas. En este momento el análisis por CLF reveló el consumo completo dei material de partida. La mezcla reactiva fue diluida con diclorometano, lavada con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, y una solución acuosa de ácido clorhídrico al 10%. La capa orgánica fue secada (sulfato de sodio) y concentrada. La mezcla cruda fue purifícada mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 100/0 a 95/5 diclorometanolacetato de etilo y se obtuvo 1 8.4g(rendimiento 97%) del brosilato lOb en forma de un sólido blanco. 1H RMN (mezcla de rotámeros, CDCI3) d 1.41 y 1.45 (2s, 9H), 2.40-2.50 (m, 2H), 3.59-3.69 (m, 5H), 4.33-4.37 y 4.46 (2dd, 1 H), 5.11 (m, 1 H), 7.72-7.74 (m, 4H); 13C RMN (mezcla de rotámeros, CDCI3) d 28.18, 28.27, 36.01 36.98, 51.59, 52.03, 52.20, 52.35, 56.95, 57.22, 57.28, 78.35, 79.53, 80.66, 129.10, 129.26.132.66, 135.66, 135.81 , 153.25, 153.64, 171.45, 171.78; HRMS (FAB) Calculado para C17H23NO7SBr: 464.0379 (M+H)+. Hallado. 464.0375.

Paso B: 10b 10c A una suspensión de hidruro de sodio (dispersión al 60% en aceite mineral, 187 mg, 4.68 mmoles) en DM F a 0°C fue adicionado 3-mercaptopropanol (0.42 ml, 4.85 mmoles) bajo atmósfera de argón. La mezcla fue sometida a agitación durante 30 min mientras se mantenía la temperatura. Una solución de brosilato 10b (1.5 g, 3.23 mmoles) en DMF (volumen total = 10 mi) fue adicionado lentamente y la mezcla fue calentada a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción fue apagada vertiéndola en una solución acuosa fría de ácido clorhídrico al 10%). La capa acuosa fue extraída con acetato de etilo, la capa orgánica fue secada (sulfato de magnesio) y concentrada. El material bruto fue purificado mediante cromatografía de columna flash para lo cual se utilizó 85115 de diclorometanolacetato de etilo y se obtuvo 800 mg (rendimiento 78%) del sulfuro 10c en forma de un aceite; 1H RMN (mezcla de rotámeros, CDCI3) d 1.41 y 1.47 (2s, 9H), 1.8-1.89 (m, 2H), 2.13-2.34 (m, 2H), 2.69 (t, 2H), 3.23-3.49 (m, 2H), 3.73-3.78 (m, 5H), 3.86-3.95 (m, 1 H), 4.33-4.37 y 4.42-4.46 (2dd, 1 H); 13C RMN (mezcla de rotámeros CDCI3) d 28.21 , 28.30, 32.15, 32.23, 36.65, 37.27, 40.45, 40.89, 52.16, 52.35, 52.50, 52.84, 58.32, 58.55, 61.22, 61.41 , 80.35, 153.49, 153.99, 173.05.173.23; HRMS (FAB) Calculado para C14H26N05S: 320.1532 (M+H)+. Hallado 320.1528.

Paso C: 10c 10d El compuesto 10b fue preparado mediante el protocolo descrito para el Ejemplo 1 , Paso C. Condiciones de la reacción: 0°C, 1 hora. El material fue utilizado tal cual a la etapa siguiente.

Paso D: El compuesto 10e fue preparado mediante el protocolo descrito para el Ejemplo 1 , Paso D. La reacción de acoplamiento fue llevado a cabo a -8°C durante dos días. Después del tratamiento final el presente 10e fue suficientemente puro según CLF, y fue obtenido con un rendimiento del 80%; HRMS (FAB) Cale, para 459.2529 (M+H)+. Hallado: 49.2523.

Paso E: 10í El compuesto 10f deseado fue preparado mediante el protocolo descrito para el Ejemplo 1 , Paso E. El material fue llevado a la reacción siguiente tal cual.

Paso F 10g El producto 10g deseado fue obtenido mediante el procedimiento descrito para el Ejemplo 1 Paso F, La purificación mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó 98/2 de diclorometano/metanol permitió obtener 10g con un rendimiento del 40% en forma de un sólido blanco: 'H RMN (mezcla de rotámeros, CDCI3) d 0.90-1.26 (m), 1.66-1.88 (m), 2.22-2.31 (m, 2H), 2.73 (t, 2H), 3.47 (5), 3.5-3.55 (m), 3.65-3.75 (m), 3.88-3.94 (dd, 1 H), 4.074.12 (dd, 1 H), 4.53 (t, 1 H), 4.62 (t, 1 H)1 6.73-6.80 (m, 4H), 7.17 (t, 1 H); 3C RMN (mezcla de rotámeros, CDCI3) d 25.80, 25.89, 26.14, 27.71.28.55, 29.22, 31.88, 35.46.40.58, 42.44, 43.16, 52.32, 52.90, 55.49, 58.46, 60.30, 114.59, 116.27, 121.01, 130.02, 135.90, 156.73, 171.25, 171.87, 171.96; HRMS (FAB) Calculado para C25H37N2O6S: 493.2371 (M+H)+. Hallado 493.2364.

Paso G: El producto 10h fue preparado de acuerdo con el protocolo descrito para el Ejemplo 1 , Paso G. El producto bruto fue suspendido en 80/20 acetato de etiio/hexano, y el material sólido fue retirado por filtración. El material filtrado fue concentrado y purificado mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó 80/20 hexano/acetona y se obtuvo un rendimiento del 22% de 10h en forma de un sólido. 1H RMN (CDCI3) d 0.98-1.30 (m), 1.64-1.90 (m), 2.06-214 (m, 1 H), 2.16-2.21 (dd, 2H), 2.62-2.70 (m, 2H), 3.3-3.46 (m, 2H), 3.60-3.66 (m, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.8-3.94 (dd, 1 H), 4.07-4.15 (m, 1 H), 4.22-4.29 (m, 1 H), 4.48 (t, 1 H), 4.60 (t, 1 H), 5.97 (t ancho, 1 H), 6.76-6.81 (m, 2H), 6.99 (s ancho, 1 H), 7.20 (dd, 1 H); HRMS (FAB) Calculado para 475.2267 (M+H)+. Hallado 475.2260.

Paso H 10b 10f El compuesto intermedio avanzado 10i fue sintetizado como se describe en el Ejemplo 1 Paso H, con rendimiento cuantitativo en forma de un sólido; 1H RMN (DMDSO-de) d 0.88-4.96 (m, 2H), 1.10-1.14 (m, 3H), 1.59-1.76 (m, 7H), 1.88-1.94 (m, 1H), 2.09 (t app, 1H), 2.61 (dd 1 H), 3.32 (d app, 1H) 3.40-345 (m, 2H), 3.61 (d app, 1 H), 3.83 (q, 1 H), 4.13 (t app, 1 H), 4.19 (1 , J = 7.32 Hz, 1 H), 4.40 (t, J = 9.52 Hz, 1 H), 6.76 -6.79 (m, 2H), 6.89(s, 1H), 7.16 (t app, 1H), 8.39 (d, 1 H), 12.5 (5 ancho, 1 H); 13C RMN (DMSO-d6) d 25.53, 25.41, 26.01 , 36.44, 28.09, 28.62, 29.24, 34.90, 39.50, 41.40, 42.30, 53.18, 54.44, 58.06, 66.94, 114.88, 115.25, 2129.20.137.84, 157.90, 169.25, 170.29, 172.59; HRMS (FAB) Calculado, para 461.2110 (M+H)+. Hallado 461.2104.

El compuesto 10j deseado fue obtenido como anteriormente descrito para el Ejemplo 1 Paso I, con un rendimiento cuantitativo en forma de un sólido amarillo. El material obtenido después de un tratamiento final era lo suficientemente puro según CLF para manipuleos ulteriores. HRMS (FAB) Calculado para C42H5gN608S: 807.4115 (M+H)+. Hallado 807.4103.

Paso J A una solución de 10j (180 mg, 0.22 mmoles) en diclorometano fueron adicionados consecutivamente DMSO (0.313 ml, 4.4 mmoles), DCC (908 mg, 4.4 mmoles), ácido dicloroacético (36.4 µl, 0.44 mmoles). La mezcla reactiva fue sometida a agitación durante la noche a temperatura ambiente Fue apagada mediante la adición de una solución acuosa fría de ácido clorhídrico al 5% (5ml), y MeOH (1 ml), y se sometió a agitación durante 30 mm. El material sólido fue retirado por filtración, y el material filtrado fue lavado con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y salmuera. La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio y el solvente fue retirado al vacío. El material bruto fue purificado mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó 98/2 de diclorometano/metanol y se obtuvo 105 mg (60%) de 10A y 10B como una mezcla de diastereómeros. Una parte de la mezcla (36 mg) fue nuevamente sometida a cromatografía de columna de manera de obtener el isómero 10A puro (mas polar, sólido blanco, 8 mg) y el isómero 10B puro (menos polar, sólido blanco, 6 mg), siendo el resto, una mezcla. HRMS (FAB) Calculado, para C42H57N6O8S: 805.3959 (M+H)+. Hallado: 805.3950 (10A), 805.3950 (10B).

EJEMPLO 11 Preparación del Compuesto de la Fórmula 11 Paso A 10h A una sojución fría (0°C)_de 10h (200 mg, 0.42 mmoles) en diclorometano (10 ml) fue adicionado MCPBA (60%, 364 mg, 1.26 mmoles). La mezcla reactiva fue calentada lentamente a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla reactiva fue diluida con diclorometano y lavada con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y bisulfito de sodio. La capa orgánica fue secada (sulfato de sodio) y concentrada. La purificación mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó 98/2 diclorometano/metanol permitió obtener 11a (138 mg, rendimiento 65%). HRMS (FAB) Calculado, para C25H35NA7S: 507.2165 (M+H)+. Hallado 507.2158.

Paso B 11a 11b El producto previsto 11b fue sintetizado de acuerdo con el Ejemplo 1 , Paso con un rendimiento del 90%, en la forma de un sólido blanco, HRMS (FAB) Calculado para C24H33N2?7S: 493.2008 (M+H)+. Hallado 493.2012.

Paso C El compuesto 11c deseado fue preparado como anteriormente descrito para el Ejemplo 1 , Paso J con un rendimiento cuantitativo. El material obtenido después del tratamiento fínal era lo suficientemente puro según CLF para manipuleos ulteriores. HRMS (FAB) Calculado, para C42H59N6O10S: 839.4013 (M+H)+. Hallado: 839.4019.

Paso D El compuesto 11 deseado fue preparado mediante el protocolo de oxidación anteriormente descrito para el Ejemplo 1 Paso K. La purificación mediante cromatografía de columna flash para lo cual se utilizó 98/2 diclorometano/metanol permitió obtener 11 con un rendimiento del 4% (dos pasos). HRMS (FAB) Calculado para C42H57N6O10S: 837.3857 (M+H)+. Hallado 837.3865.

EJEMPLO 12 Preparación de Compuestos de las Fórmulas 12A y 12B Paso A 12a 1d El producto 12a fue obtenido mediante el método anteriormente descrito para el Ejemplo 1 , Paso D, para lo cual se utilizó la N-boc-ter-butilglicina como compuesto de acoplamiento. El material fue purificado mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó 90/10 diclorometano/acetato de etilo y se obtuvo 12a con un rendimiento del 73%. 13C RMN (Mezcla de rotámeros, CDCI3) d 26.20, 28.31 , 29.07, 30.06, 34.94, 36.86, 37.06, 51.21, 52.16, 52.84, 57.78, 58.33, 65.95, 66.92, 72.97, 75.48, 79.45, 127.55, 127.66, 128.35.138.45, 155.62, 165.95, 171.13, 172.54; HRMS (FAB) Calculado, para C^H^NA : 507.3070: (M+H)+. Hallado: 507.3077.

Paso B 12a El producto previsto 12b fue preparado de acuerdo con el protocolo anteriormente descrito para el Ejemplo 1 , Paso E. El material fue utilizado tal cual en el paso siguiente.

Paso C: 12a 12b El compuesto 12c deseado fue preparado mediante el procedimiento descrito para el Ejemplo 1 , Paso F. La purificación mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó 99/1 de diciorometano/metanol permitió obtener 12c con un rendimiento del 91 %. 13C RMN (CDCI3) d 26324, 29.93, 34.95, 43.48, 52.18, 53.09, 57.06, 58.06, 66.10, 66.92, 72.93, 77.43, 114.59, 116.14, 120.57, 127.58, 127.64, 127.74, 128.37, 130.02, 135.95., 8.39, 156.90, 170.65, 171.06, 172.38; HRMS (FAB) Calculado, para C30H41N2O7. 541.2914 (M+H)+. Hallado 541.2921.

Paso D 12c 12d El producto 12d deseado fue preparado de acuerdo con el procedimiento descrito para el Ejemplo 1 , Paso G. El producto obtenido después de retirar por filtración el catalizador era lo suficientemente puro para manipuleos ulteriores. 13C RMN (CDCI3) d 26.27, 32.09, 35.44, 35.67, 43.19, 52.21 , 52.74, 57.60, 58.21, 58.75, 65.78, 77.74, 114.74, 116.02, 120.68, 130.07, 135.66, 157.11 , 170.59, 172.05.172.51; HRMS (FAS) Calculado para C^NA.,: 451.2444 (M+H)+. Hallado 451.2436.

Paso E: El compuesto 12e deseado fue obtenido como anteriormente descrito para el Ejemplo 1 , Paso H. El material bruto fue suspendido en acetato de etilo/hexano (aproximadamente 1/1), y el material sólido no disuelto fue retirado por filtración. Se repitió el procedimiento, el material filtrado fue concentrado y aplicado en la columna en forma de una solución en diclorometano. La columna fue eluida con 75/25 hexano/acetona, rendimiento 29% de 12e. HRMS (FAB) Calculado para 433.2330 (M+H)+. Hallado 433.2339.

Paso F 12e 12f El compuesto intermedio avanzado 12f fue sintetizado como anteriormente descrito para el Ejemplo 1 , Paso I, con un rendimiento cuantitativo. H RMN (DMSO-d6) d 0.96 (s, 9H), 1.66-1.70 (m, 1 H), 1.75-1.82 (m, 2H), 2.43 (dd, 1 H), 3.32-3.36 (m, 2H), 3.48-3.52 (m, 1 H), 3.55 (dd, 1 H), 3.84 (d app., 1 H), 3.99 (d app., 1 H), 4.06-4.1 0 (m, 3H), 4.16 (dd, 1 H), 4.69 (d, 1 H), 6.70-6.72 (m, 3H), 7.15 (t app., 1 H), 8.42 (d, 1 H), 12.43 (s ancho, 1 H); 13C RMN (DMSO-dd) d 26.25, 28.54, 33.31 , 34.97, 41.22, 53.96, 56.11 , 56.97, 63.36, 64.96 76.84, 111.94, 115.25, 121.73, 129.13.138.36, 158.27, 169.85, 170.15, 173.04; HRMS (FAB) Calculado para 419.2182 (M+H)t. Hallado: 419.2180.

Paso G El compuesto 12g deseado fue sintetizado tal como anteriormente descrito para el Ejemplo 1 Paso J. Después de su tratamiento final, el material tenía la suficiente pureza para ser utilizado en el paso siguiente. HRMS (FAB) Calculado para 765.4187 (M+H)+.

Hallado 765.4175.

Paso H El producto 12A y 12B fueron obtenidos mediante el protocolo de oxidación anteriormente descrito para el Ejemplo 11 Paso K. El material fue purificado mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 98/2 a 96/4 diclorometano/metanol y se obtuvieron isómeros separados de 12A y 12 B, y alguna mezcla. Rendimiento combinado: 57% (para dos pasos) HRMS (FAB) Calculado, para 763.4031 (M+H)+ Hallado: 763.4040 (12A), 763.4047 (12B).

EJEMPLO 13 Preparación de Compuestos de Fórmulas 13A y 13B 12f El producto previsto 13a fue sintetizado como anteriormente descrito para el Ejemplo 1 , Paso J. Después de su tratamiento final, el material tenía suficiente pureza para ser llevado al paso siguiente. HRMS (FAB) Calculado, para C41H59N6Og: 779.4344 (M+H)+.

Hallado 779.4350.

Paso B Los productos deseados 13A y 13B fueron obtenidos mediante el protocolo de oxidación anteriormente descrito para el Ejemplo 1 Paso K. La purificación mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 100/0 a 96/4 de diclorometano/metanol permitió obtener los isómeros 13A y 13B separados, y alguna mezcla. Rendimiento combinado 50% (para dos pasos). HRMS (FAB) Calculado, para C41H57N609: 777.4187 (M+H)+. Hallado: 777.4177 (13A), 777.4185 (13B).

EJEMPLO 14 Preparaci i dei Compuesto 14 Paso A Una solución de ácido vinil benzoico 14a (10g, 68 mmoles) en benceno secuencia codificadora (150 ml) fue tratada con diter-butilacetal de DMF (69 g, 340 mmoles, 5.0 equiv.), y calentada a reflujo durante 4 horas. La mezcla reactiva fue concentrada al vacío y diluida con solución acuosa de hidróxido de sodio (1M, 300 ml). La mezcla reactiva fue extraída en éter dietílico (3x 100 ml). La capa orgánica, combinada, fue extraída con hidróxido de sodio acuoso (1 M, 100 ml), agua (2x100 mi) salmuera (1x10 ml), secada (sulfato de sodio)1 filtrada y concentrada al vacío. El residuo fue destilado bajo presión reducida con lo cual se obtuvo 14b (9.2 g, rendimiento 66.2%), en forma de un aceite incoloro.

Paso B Una solución de ter-butilcarbamato (5.96 g, 50.9 mmoles) en 1-PrOH (68 ml) fue tratada con una solución acuosa de hidróxido de sodio (128 ml, 0.41 M) e hipoclorito de terbutilo (5.5 g, 50.9 mmoles). La mezcla reactiva fue enfriada a 0°C y se adicionó (DHQ)2Phal (780 mg, 1.00 mmoles) en 1-PrOH (64 mi). Una solución de terbutil-4-vinilbenzoato 14b en 1-PrOH (199 ml) fue adicionada, seguido por K2OsO4?2O (248 mg, 0.7 mmoles), y la mezcla reactiva fue sometida a agitación a 0°C durante 4-5 horas. La reacción se volvió verde y todo el material de partida desaparece con el nuevo producto formado. La mezcla reactiva fue concentrada al vacío, y el residuo fue diluido con agua (300 ml) y extraído con acetato de etilo (3x100 ml). La capa orgánica combinada fue extraída con un a solución acuosa de HCl (200 ml), salmuera (100 ml), secada (sulfato de sodio), filtrada y concentrada al vacío, y purificada mediante cromatografía (SiO2, acetato de etilo/hexanos 1:2) con lo cual se obtuvo 14c en forma de un sólido incoloro (4.6 g, 82%). 1H RMN (CD3OD, d) 7.90-(d, 2 H, J=6.0 Hz), 7.40 (d, 2 H, J=6.3 Hz), 7.22 (bd, 1 H, J = 5.7 Hz), 4.69 (s ancho, 1 H), 3.71-3.62 (m, 2 H) 1.58 (s, 9 H), 1.39 (s, 9 Hz); 13C RMN (CD3OD, 75 MHZ) 169.7, 160.5, 149.8, 134.5, 132.9, 130.4, 84.7, 82.9, 68.7, 60.7, 31.25, 30.9 MS (FAB) 675.2 ([2M+1]+, 15), 338 ([M+1 ]+, 15), 282(65), 225 (50), 165 (100); HRMS calculado para C15H28N05 (M+1): 338.1887; hallado 338.1967.

Paso C Bo c 14d Una solución del compuesto aromático 14c (1.0 g, 2.96 mmoles) en CH3OH (20 ml), fue tratada con Rh/C (10% peso/peso con 100 mg) e hidrogenada (5 kg/cm2, 60 psi) durante dos días. La mezcla reactiva fue filtrada a través de un tapón de celite y el residuo fue concentrado al vacío con lo cual se obtuvo 14d. El producto bruto fue purificado mediante cromatografía (SiO2, acetato de etilo/hexano 2:3), con lo cual se obtuvo el compuestos cis 1d (830 mg, 83%) que fue sometido a purificación ulterior mediante cristalización a partir de hexanos. 1H RMN (CD3OD, d) 6.31 (d, 1 H, J = 6.9 Hz), 3.58-3.49 (s, 2 H), 3.40 (bd, 1 H, J= 4.8 Hz), 2.48-2.46 (m, 1 H), 2.1-1.98 (m, 2 H), 1.61-1.2 (m, 7 H), 1.45 (s, 9 H), 1.42 (s, 9 H); 13C RMN (CD3OD, 75 MHz) 176.2, 158.5, 81.2, 79.8, 63.1.57.2, 41.8, 38.8, 28.8, 28.3, 27.7, 27.5, 25.9. MS (FAB) 687.2 ([2M+1]+, 5), 344 (IM+1]+, 20), 232 (40), 188(100), 107 (13); HRMS calculado para C18H33NO5 (M+1): 344.2437; hallado 344.2444. CHN calculado para C=64.07%, H= 8.07%, N= 4.15% Hallado C = 64.32%, H=8.21%, N =4.32 %.

Paso E 14d 14e Una solución de amino alcohol 14d (3.3 g, 11.08 mmoles) en THF seco (200 ml), fue enfriada a -78°C (hielo seco/acetona, temperatura interna -68°C) fue tratada con LDA (44 ml, solución 2M en heptanos, 88 mmoles, 8.0 equiv.). La mezcla reactiva fue sometida a agitación a -78°C durante dos horas y apagada con CH3OH (20 mi). La mezcla reactiva fue tratada con una solución acuosa de HCl (150 ml, 1M) y extraída con éter (3x100 ml). La capa de éter, combinada, fue extraída con salmuera (50 mi), secada (sulfato de magnesio), concentrada al vacío y purificada por cristalización a partir de heptanos hirvientes. El sólido que se separó del licor madre era predominantemente estereoisómero cis, mientras que la concentración del licor madre dio el isómero trans puro. La secuencia anteriormente mencionada fue repetida dos veces mas con lo cual se obtuvo 2.7 g del compuesto trans y 600 mg de una mezcla cis/trans. 13C RMN (CDCI3, 75 MHz) 175.3, 156.6, 79.8, 63.6, 57.0, 44.1 , 38.3, 37.7, 28.9, 28.6, 28.4, 28.1, 26.6, 26.1.

MS (rociado de electrones) 34 (M+, 50), 288 (50) 232 (90), 188 (100).

Paso F Boc 14e 14f Una solución de alcohol 14e (2.6 g, 7.6 mmoles) en CH-CN (150 ml) y CCI4 (150 ml) fue tratada con agua (22 ml), enfriada a 0°C, tratada con ácido periódico (7.05 g, 30.92 mmoles, 4.0 equiv.) y RuCl33H20 (60 mg, 0.3 mmoles, 3 % mol). La mezcla reactiva fue sometida a agitación a temperatura ambiente durante 3 horas, y concentrada al vacío. El residuo fue diluido con agua (150 ml) y extraído con acetato de etilo (3x100 ml). La capa orgánica combinada fue extraída con agua (1000 ml) y con una solución acuosa de NaOH (1M, 3x100 ml). Las capas acuosas combinadas fueron acidificadas con HCl (6M, pH = aproximadamente 1) y extraídas con acetato de etilo (3 x 100 ml). Las capas de acetato de etilo fueron reunidas, extraídas con salmuera (100 ml), secadas (sulfato de sodio), filtradas concentradas al vacío con lo cual se obtuvo el ácido 14f (1.8 g, 66%) que fue utilizado para acoplamientos ulteriores sin mayor purificación. MS (FAB) 308.2 ([M+Na]+, 30) 358 ([M+1]+, 5), 302 (20), 258 (20), 246 (100), 202(70), 200(20).

Paso G U-COOCH3 14g Una solución de Boc-fraps-terbutilcarboxil-cicloghexilglicina 14f (1.9 g, 5.3 mmoles) en CH2CI2 (30 ml) fue tratada con el compuesto prolina 1d (1.92 g, 5.85 mmoles, 1 equiv.)1 y enfriada a 0°C. La mezcla reactiva fue tratada con base de Hünigs (1.51 g, 11.7 mmoles, 2.2 equiv., 2.14 ml) seguido por la adición de reactivo BOP (2.6 g, 5.85 mmoles, 1.1 equiv.). La mezcla reactiva fue sometida a agitación a temperatura ambiente durante 12 horas diluida con una solución acuosa de HCl (1 M, 100 ml), extraída con acetato de etilo (3x100 ml). Las capas combinadas de acetato de etilo fueron extraídas con una solución acuosa de hidróxido de sodio (1 M, 100 ml), salmuera (100 ml), secadas (sulfato de sodio), filtradas concentradas al vacío y purificadas mediante cromatografía (S¡02, acetato de etilo/hexanos 2:3) con lo cual se obtuvo 14g en forma de una espuma incolora (1.8 g, 54%). 1H RMN (CD3OD, d, mezcla de rotámeros) 7.32-7.23 (m, 5 H), 6.64 (d, 1 H, J =9.0 Hz), 4.47-4.39 (m, 3H), 4.19-4.04 (m, 3H), 3.74 (s, 3H), 3.66-3.56 (m, 4H), 2.55-2.10 (m, 2H), 1.99-1.00 (m, 12 H), 1.42 (s, 9H), 1.40 (s, 9H), 13C RMN (CD3OD, d, mezcla de rotámeros), 175.6.174.6, 172.4, 172.0, 156.4, 138.5, 128.1 , 127.5, 127.4.127.3, 79.8, 79.7, 79.0, 77.5, 72.5, 66.7, 65.4, 58.1 : 56.6, 52.1 , 51.3, 43.9, 40.4, 39.4, 38.6, 34.6, 29.8, 28.4, 27.9, 27.3, 261 , 25.4, 24.5; MS (FAB) 633 ([M+1]+, 11), 533 (55), 477(24), 428(5), 294(100), 234(12)156(40), 128 (39); CHN Calculado, para C 64.53% H 8.28% N 4.43%; Hallado C 64.41 % H 8.00% N 4.19%.

Paso H Una solución de Boc-fraps-terbutilcarboxicicloghexilglicina 14g (1.8 g) en HCl (solución 4M en dioxano, 60 ml), fue sometida a agitación a temperatura ambiente durante 4 - 5 horas. La reacción fue seguida por PTL (acetato de etilo/hexano 3.7) para hacer desaparecer el material de partida y lograr la aparición del producto línea de base. La mezcla reactiva fue concentrada al vacío, y el residuo fue secado en la bomba durante la noche. El sólido 14h fue utilizado para los acoplamientos sin otra purificación.

Paso Una solución del ácido 3-hidroxifenilacético 14i (501 mg, 3.29 mmoles, 1.8 equiv.) y clorhidrato de amina 14h (1.79 g, 2.99 mmoles) en CH2CI2 seco (30 ml) fue tratada con base de Hünigs (850 mg, 6.59 mmoles, 2.20 equiv., 1.2 ml) y reactivo BOP (1.5 g, 3.29 mmoles, 1.1 equiv.) a 0°C y sometida a agitación a temperatura ambiente durante 24 horas. La mezcla reactiva fue concentrada al vacío y diluida con una solución acuosa de HCl (1 M, 250 ml). La capa acuosa fue extraída con acetato de etilo (3x100 ml). Las capa orgánicas combinadas fueron extraídas con una solución acuosa de hidróxido de sodio (1 x 1000 ml), salmuera (1 x100 ml), secadas (sulfato de sodio), filtradas concentradas al vacío y purificadas mediante cromatografía (acetato de etilo/hexanos 1 :1) con lo cual se obtuvo 14j en forma de un sólido incoloro (710 mg, 36%).

Paso J Una solución del compuesto acopiado 14j (710 mg, 1.1 mmoles) en CH3OH (50 ml) fue tratada con catalizador de Pearlman (Pd(O)2 al 10 % sobre C) e hidrogenada (H2, 3 kg/cm2, 40 psi), el Pd/G fue retirado por filtración a través de un tapón de celite y utilizado para la siguiente ciclización sin mayor purificación. R, 0.12 (acetona/hexanos 3:7). 1H RMN (CD3OD, d, mezcla de rotámeros) 8.25 (s ancho, 1H), 7.01 (bt, 1 H, J=7.2 Hz), 6.72 (s ancho, 1 H), 6.65 (d, 2 H, J=7.8 Hz), 4.79-4.70 (s ancho, 3 H), 4.55-4.41 (s ancho, 2 H), 4.20-4.12 (s ancho, 2 H), 3.77 (s, 3 H), 3.66-3.44 (bm, 6 H) 2.43-1.04 (bm, 14 H) 1.40 (s, 9 H); 13C RMN (CD3OD, d, mezcla de rotámeros); 175.5, 174.6, 172.6, 172.4, 171.3.161.1 , 157.3, 136.8, 136.7, 129.3, 120.0, 115.7.113.6.100.0, 94.8, 79.9, 79.8, 77.5, 65.1 , 58.5, 58.2, 55.6, 55.5, 54.3, 52.2, 51.5, 43.9, 42.1 , 39.4, 35.0, 32.4, 28.6, 28.4, 27.5, 27.2, 27.1, 26.1 , 25.2, 25.0; MS (FAB): 577 ([M+1]+, 70), 521(10), 443 (10), 387 (10), 374 (10), 318 (15), 290 (100), 248 (30); HRMS calculado para (M+H)+: 577.3125; hallado 577.3133.

Paso K Una solución de alcohol 14k (600 m g, 1.05 mmoles) y ADDP (787 mg, 3.12 mmoles, 310 equiv.) en CH2CI2 (30 ml), fue tratada con Ph3P (818 mg, 3.12 mmoles, 3.0 equiv.) bajo una presión positiva de N2 seco a 0°C. La mezcla reactiva fue sometida a agitación a temperatura ambiente durante 24 horas concentrada al vacío y el residuo fue purificado mediante cromatografía (SiO2, acetona/hexanos 2:3) con lo cual se obtuvo el 141 sólido incoloro (120 mg, 22%) de producto cíclico. Rf 0.73 (acetona/hexanos 1 :1). Rf RMN (CD3OD, d) 7.13 (t, 1 H J=7.8 Hz), 6.76 (s, 1 H), 6.71 (t, 2 H, J=8.1 Hz), 4.58 (d, 1 H, J = 9.9Hz), 4.37 (dd, 1 H, J=7.8, 2.7 Hz), 4.23-4.11 (m, 4 H), 3.74-3.61 (m, 2 H), 3.66 (s, 3 H), 3.5-3.40 (m, 2 H), 2.54- 2.41 (m, 1 H)1 2.19-2.10 (m, 1H), 1.98-1.42 (m, 10 H), 1.43 (5, 9 H); 13C RMN (CD3OD, d) 175.6, 172.4, 172.1 , 170.8, 159.0, 137.0, 129.1 , 121.7, 115.7, 112.2, 94.8, 79.8, 77.4, 65.2, 64.0, 57.6, 55.2, 53.8, 51.3, 44.0, 41.5, 39.1 , 33.3, 28.7, 28.1 , 26.9; MS (rociado de electrones) 559 ([M+1]+, 100) 327 (10), 189 (20); HRMS calculado, para C3oH43N208 (M+1)+: 559.3019; hallado: 559.3025; CHN calculado para C = 63.47%; H = 7.63 %; N =4.94%; hallado C=63.57%, H=7.46%, N=4.93 %.

Paso L 141 14m Una solución del metil éster 141 (120 mg, 0.22 mmoles) en THF (5.0 mi) y H20 (1 -0 ml) fue tratada con LiOH (20 m g, 0.5 mmoles, 2.0 equiv.). La mezcla reactiva fue sometida a agitación a temperatura ambiente durante 3 horas y se le adicionó CH3OH (110 mi), y se sometió a agitación durante una hora adicional. La mezcla reactiva fue sometida a agitación con HCl (4.0 M en dioxano, 1 ml), y concentrada al vacío, y el agua fue liofilizada, con lo cual se obtuvo un sólido incoloro 14m que fue utilizado para el acoplamiento siguiente.

Paso M Una solución del ácido carboxílico 14m (110 mg, 0.21 mmoles) en DMF (3.0 ml) y CH2CI2 (5.0 ml) fue tratada con base de Hünigs (109 mg, 0.84 mmoles, 4.0 equiv. 155.0 µl) y HOOBt (52 mg, 0.4315 mmoles, 1.5 equiv.) La mezcla reactiva fue enfriada a 0°C y tratada con EDCl (61 mg, 0.31 mmoles, 1.5 equiv.). La mezcla reactiva fue sometida a agitación a 0°C y tratada con clorhidrato de amina A después de 30 mm. La mezcla reactiva fue sometida a agitación a temperatura ambiente durante 24 horas y concentrada al vacío de manera de retirar el DMF y el CH2CI2. El residuo fue diluido con HO acuoso (100 ml) y extraída con CH2CI2 (3x75 ml) Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con hidróxido de sodio acuoso (1 M, 3x50 ml), salmuera (100 mi) y concentradas al vacío. El residuo 14n (79 mg) fue oxidado sin mayor purificación.

Paso N Una solución de alcohol 14n (79 mg, 88 mmoles) en CH2CI2 (4.0 ml) fue tratada con reactivo de Dess-Martin (110 mg, 0.25 mmoles, 2.5 equiv.). La mezcla reactiva fue sometida a agitación a temperatura ambiente durante 3 horas, y la mezcla fue concentrada al vacío. El residuo fue purificado cromatografía (S¡O2, acetona/hexanos 1 :1), con lo cual se obtuvo el producto fí4 oxidado (29 mg, 38%) en la forma de un sólido incoloro. MS (FAB) 889 [(M+1 H)+, 100), 844 (20), 833 (60); 788 (30), 760 (10), 655 (10), 527 (20), HRMS calculado, para 889.4711; hallado 889.47432.

EJEMPLO 15 Preparación del Compuesto 15 Paso A Una solución de ter-butil éster 14 (20.0 mg, 22.0 mmoles) fue tratada con TFA/CH2CI2 (1 :1 , 4 ml) y sometida a agitación a temperatura ambiente durante 2 horas. La desaparición del éster de la línea de base fue seguida por CLF (C^OH/CHAy. Una vez completada la desprotección, la mezcla reactiva fue concentrada al vacío, y el residuo fue repetidamente tratado con CHAl2/hexanos y concentrado, con io cual se obtuvo un sólido blanco 15 (19 mg, 100%), MS (rociado de electrones) 833 ([M+1]+, 60, 661(10), 530 (40), 391 (75), 279(100).

EJEMPLO 16 Preparación del Compuesto 16 16 Paso A 14d 1ßa Ei compuesto 16a deseado fue preparado a partir de 14d con un rendimiento del 70% de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 14, Paso F. Fue utilizado para los acoplamientos sin mayor purificación; MS (FAB): 380.2 ([ +Na]+, 30), 358 ([M+1]+ 5), 302 (20), 258 (20), 246 (100), 202 (70), 200 (20), HRMS calculado para C18H32NO6 (M+1)+: 358.2230. Hallado 358.2237.

Paso B El compuesto 16b deseado fue preparado a partir de 16a con un rendimiento del 41 % de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 14, Paso G; [a]D -52.7 (c 0.3 CHCI3, 25); 1H RMN (CDCI3, d) 7.35-7.21 (m, 5 H), 6.63 (d, 1 H, J =9.3 Hz), 4.46 (d, 2 H, J=4.3 Hz), 4.41 (t, 1 H, J = 9.3 Hz), 4.38-4.07 (m, 3 H), 3.68 (s, 3 H), 3.66-3.43 (m, 5 H), 2.45 (p, 1 H, J=4.2 Hz), 2.32 (dd, 1 H, J=7.8, 5.7 Hz), 2.02-1.90 (m, 3 H), 1.90-1.56 (m, 3 H), 1.5-1.24 (m, 24 H); 13C RMN (CD3OD, d) 174.7, 172.4.172.0.156.4, 138.4, 128.0.127.5, 127.4, 79.8, 79.0, 77.5, 72.5, 66.6, 65.3, 58.0, 55.3, 52.1, 51.3, 40.4, 38.6, 34.7, 29.7, 27.4, 27.03, 26.1 , 24.5. MS (FAB) 633.2 [(M+1)+, 100]; HRMS caled, para ( +1)+: 633.3751 ; hallado 633.3759.

Paso C 16b 16c El compuesto 16c deseado fue preparado a partir de 16b de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 14, Paso H. Fue utilizado sin purificación ulterior.

Paso D El compuesto 16d deseado fue preparado a partir de 16c con un rendimiento del 41% de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 14, Paso J.

? RMN (CHCI3; d) 734 - 7.26 (m, 5H), 7.12 (t,1H, J=7.5 Hz), 6.72-6.67 (m, 3H), 4.76-4.64 (m, 1 H), 4.47 (s, 2H), 4.51-4.42 (m, 1 H), 4.11 - 4.02 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.70-3.65 (m, H), 3.55-3.43 (m, 6 H), 2.54-2.42 (m, 1 H), 2.28-2.39 (m, 1 H), 2.1-1.9 (m, 3 H), 1.86-1.64 (4 H), 1.50-1.38 (m, 14 H); 13C RMN (CDCI3, d) 175.0, 172.4, 171.5, 171.1 , 157.1 , 138.5, 136.0, 130.1 , 128.5, 127.9, 127.7, 121.0, 116.0, 114.8, 80.5, 77.6, 73.0, 66.9, 66.2, 58.2, 54.3, 52.5, 52-3, 43.4, 39.4, 39-9, 34.9, 30.0," 28.2, 26.8, 26.6, 26.0, 24.0; MS (FAB) 689 [(M+Na)+, 35), 667 [(M+H)+, 23), 633(5), 294(100), 204 (39),156(63).

Paso E 16d 16e El compuesto 16e deseado fue preparado a partir de 16d de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 143 Paso J. El producto fue utilizado sin purificación ulterior.

Paso F 16f El compuesto 16f deseado fue preparado a partir de 16e con un rendimiento del 20% de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 14, Paso . H RMN (CDCI3, d) 8.56 (d, 1 H, J= 7.2 Hz), 7.14 (t, 1 H, J=6 Hz), 6.86 (s, 1 H), 6.66 (d, 1 H, J=6 Hz), 6.73 (dd, 1 H3 J=6.3, 15 Hz), 4.86-4.77 (m, 1 H), 4.40 (dd, 1H, J=3.01 2.7 Hz), 4.24-4.13 (m, 4 H), 3.70 (s, 3 H), 3.70-3.66 (m, 2 H), 3.66-3.32 (m, 3 H), 2.53 (dd, 1 H, J=5.7, 3.9 Hz), 2.45-2.42 (m, 1 H), 1.99-1.80 (m, 6 H), 1.60-1.57 (m, 4 H), 1.4-1.43 (m, H); 13C RMN (CDCI3, d) 175.8, 173.3, 173.0, 171.7, 160.0, 138.0, 130.1, 122.7, 116.8, 113.3, 81.0, 78.6, 66.3, 65.2, 58.8, 55.1 , 52.5, 42.6, 42.4, 38.9, 34.6, 30.0 28.2, 28.0, 27.0, 26.9, 26.8, 26.2; MS (FAB) 559 (M+, 33), 327 (33), 225 (100).

Paso G ?ef 16g El compuesto 16g deseado fue preparado a partir de 16f de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 14, Paso H. El producto fue utilizado sin mayor purificación.

Paso H El compuesto 16h deseado fue preparado a partir de 16g y A de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 14, Paso L. El producto fue utilizado sin mayor purificación.

Paso El compuesto 16 deseado fue preparado en la forma de un sólido incoloro a partir de 16h con un rendimiento del 40% de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 14, Paso N MS (spray de electrones) 889 [(M+1 )+, 85), 637 (20), 530 (75), 265 (100), HRMS calculado, para 889.4711. Hallado 889.4699.

EJEMPLO 17 Preparación del Compuesto 17 C 17 10 Paso A 20 El compuesto 17 deseado fue preparado a partir de 16 con un rendimiento cuantitativo de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 15, Paso A. MS (FAB) 833 [(M+1)+, 100), 788 (10), 723 (5), 308(100).

EJEMPLO 18 Preparación del Compuesto de la fórmula 18 Paso A A una suspensión fría (0°C) de 18a (15.9 mg, 90 mmoles) en dioxano (100 mi), agua (100 mi) y una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (100 ml), fue adicionada una solución de anhídrido ter-butilcarbonilo (7.2 g, 33 mmoies) en dioxano (100 ml). La mezcla reactiva fue lentamente calentada a temperatura ambiente durante 6 horas. El residuo fue diluido con agua y extraído con éter dietílico (2 x 150ml). La capa de éter fue descartada. La capa acuosa fue acidificada lentamente con ácido cítrico sólido (pH aproximadamente 4) y extraída con acetato de etilo (3x150 mi). La capa orgánica fue secada (sulfato de sodio), y concentrada al vacío con lo cual se obtuvo 18b (14.6 g, rendimiento 61%) en forma de una espuma blanca. Paso B 18b 18c A una solución a 80°C de 18b (14.6 g, 54.68 mmoles) en tolueno (230 ml) fue adicionado DMFdi-ter-butil acetal (53 ml, 218.72 mmoles) gota a gota durante 2 horas. La mezcla reactiva fue mantenida a la misma temperatura durante 1 hora después de haberse completado la adición. Fue seguidamente enfriada a temperatura ambiente y concentrada. El residuo fue purificado mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se 19 utilizó de 96/4 a 90/10 de acetato de diclorometano y se obtuvo el compuesto 18c requerido (7.53 g, rendimiento 43%). HRMS (FAB) calculado para C17H26NO5324.1811 (M+1)+. Hallado 324.1807.

Paso C 18c 18d A una solución fría (0°C) de 18c (7.5 g, 23.22 mmoles) en diclorometano (100 ml) fue adicionado trietilamina (7.12 ml, 51.08 mmoles) seguido por anhídrido tríflico (4.30 ml, 25.54 mmoles), gota a gota. La mezcla reactiva fue lentamente calentada a temperatura ambiente durante 4 horas. Fue apagada mediante una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y extraída con diclorometano. La capa orgánica combinada fue lavada con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y salmuera, secada (sulfato de sodio) y concentrada. El residuo marrón fue purificado mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó diclorometano y se obtuvo 7.74 g de 18d (rendimiento 73%).

Paso D I8d 18e En un frasco secado al horno fue adicionado THF (75 mL; previamente desoxigenado mediante argón burbujeante), acetato de paladio (74 mg, 0.33 mmoles), R-(+)-BINAP (311 mg, 0.495 mmoles) y carbonato de cesio (5.38 g, 16.5 mmól) bajo atmósfera de argón. A esta mezcla fue adicionado 18d (5.0 g, 11 mmoles) seguido por difenilcetimina (2.77 ml; 16.5 mmoles). El frasco fue barrido con argón y calentado a reflujo durante 12 horas durante la noche. Se enfrió la mezcla reactiva a temperatura ambiente y se diluyó con éter (500 ml). La capa orgánica es lavada con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (2x300 ml), secada (sulfato de sodio) y concentrada. La purificación mediante cromatografía de columna para lo cual se utilizó de 100/0 a 90/10 de diclorometano/acetato de etilo permitió obtener el producto 18e deseado (3.58 g) con un rendimiento del 67%.

Paso E A una solución de 18e (3.0 g 6.17 mmoles) en metanol (62 ml) fue adicionado acetato de sodio (1.218 g, 14.8 mmoles) y clorhidrato de hidroxilamina (0.774 g, 11.11 mmoles). La mezcla reactiva fue sometida a agitación a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla reactiva fue concentrada, diluida con diclorometano y lavada con una solución acuosa de NaOH 0.1 N. La capa orgánica fue secada (sulfato de sodio) y concentrada. La purificación mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 95/5 a 92/8 de diclorometano/acetato de etilo permitió obtener 18f (1.31 g) con un rendimiento del 66%.

Paso F 18f 18g A una solución fría (-20°C) de diclorometano (2 ml) fue adicionado isocianato de clorosulfonilo (0.16 mi, 1.87 mmoles). A esto fue adicionado ter-butanol (0.18 ml, 1.87 mmoles) en diclorometano (2 ml) y se calentó lentamente a 0°C durante 2.5 horas En este momento se adicionó gota a gota una solución de 18f (0.6 g, 1.87 mmoles) en diclorometano (6 ml) que contenía trietilamina (0.52 ml, 3.73 mmoles) La mezcla reactiva fue calentada a temperatura ambiente durante 12 horas (durante la noche). Se adicionó una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y díclorometano, y la capa orgánica fue separada, secada (sulfato de sodio), y concentrada La purificación mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 95/5 a 90/10 de diclorometano/acelato de etilo permitió obtener 18g (0.59 g) con un rendimiento del 63%.

Paso G El compuesto 18h deseado fue sintetizado de acuerdo a los descrito en el Ejemplo 1 , Paso C. El producto fue utilizado sin mayor purificación.

Paso H El compuesto 18i deseado fue sintetizado de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso D. Ei producto fue purificado mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 98/2 a 90/10 diclorometano/metanol y se obtuvo 18i con un rendimiento del 34%.

Paso 181 El compuesto 1 8j previsto fue sintetizado de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso C. El material fue utilizado en el paso siguiente sin mayor purificación.

Paso J 12f 18/ El compuesto 18k previsto fue sintetizado de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso J. Después de su tratamiento final el material era lo suficientemente puro para ser utilizado en el paso siguiente.

Paso K El compuesto 18 fue obtenido mediante el protocolo de oxidación anteriormente descrito para el Ejemplo 1 Paso K. La purificación mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 98/2 a 92/8 de diclorometano/MeOH permitió obtener el compuesto 11 en la forma de un una mezcla de diastereómeros con un rendimiento del 13% (dos etapas).

EJEMPLO 19 Preparación del Compuesto de la fórmula 19 Paso A El compuesto 19 previsto fue sintetizado como anteriormente descrito para el Ejemplo 3, Paso A con un rendimiento cuantitativo.

EJEMPLO 20 Preparación de compuestos de fórmulas 20A y 20B 20B Paso A 7e 20a El producto 20a deseado fue sintetizado de acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 1 Paso F. El producto fue purificado mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó 98/2 diclorometano/metanol y se obtuvo 20a con un rendimiento del 97%. HRMS (FAB) calculado, para C32 3N207: 567.3070 (M+H). Hallado: 567.3073.

Paso B 20a 20b El compuesto 20b previsto fue obtenido de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 Paso G. El producto fue purificado mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 98/2 a 96/4 diclorometano/metanol y se obtuvo 20b con un rendimiento del 81 %. HRMS (FAB) calculado para C25H37N207: 477.2601 (M+H)+. Hallado: 477.2006.

Paso C 20b 20c El compuesto 20c deseado fue sintetizado de acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 1 Paso H. La purificación mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó 99/1 de diclorometano/metanol permitió obtener el compuesto 20c junto con óxido de trifenilfosfina. Esta mezcla fue utilizada en el paso siguiente. HRMS (FAB) calculado para 459.2495 (M+H). Hallado: 459.2490.

Paso D 20c 20d El producto 20d deseado fue obtenido mediante el método descrito para ei Ejemplo 1 Paso 1. Rendimiento de 20d (para dos pasos) =23%. H RMN (DMSO-d6) 0.84 (m, 2H), 1.10 (m, 3H), 1.56-1.67 (m, 6H), 1.75-1.81 (m, 1 H), 2.32-2.49 (m, 3H), 2.55-2.59 (m, 1H), 2.94 (dt, 1H), 3.50 (dd, 1 H), 3.56-3.65 (m, 2H), 3.99 (dd, 1 H), 4.064.23 (m, 4H), 4.37 (t, 1 H), 6.64-6.74 (m, 3H), 7.08 (t app, 1 H), 7.95 (d, 1 H), 12.30 (s ancho, 1 H); 13C RMN d (DMSO-d6) 25.25, 25.97, 28.30, 28.55, 30.61 , 33.77, 36.04, 39.41 , 52.52, 54.02, 57.22, 66.38, 68.03, 77.49, 114.75, 115.37, 121.14, 128.86, 142.66, 1.58.92, 169.87, 170.83, 172.99; HRMS (FAB) Calculado para C24H33N2O6: 445.2343; hallado 445.2339.

. Paso E El compuesto 20e previsto fue obtenido de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 Paso J. Después de su tratamiento final el material era lo suficientemente puro para ser utilizado en el paso siguiente.

Paso F Los productos deseados 20A y 20B fueron obtenidos mediante ei protocolo de oxidación anteriormente descrito para el Ejemplo 1 Paso K. La purificación mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 100/0 a 98/2 de diclorometano/MeOH permitió obtener los isómeros 20A y 20B, separados y alguna mezcla. Rendimiento combinado =50% (para dos pasos). HRMS (FAB) calculado para 789.4187 (M+H)+.

Hallado: 789.4179 (20A) y 789.4187 (20B).

EJEMPLO 21 Preparación del Compuesto de la fórmula 21 Paso A 20d El producto 21a previsto fue sintetizado como anteriormente descrito para el Ejemplo 2, Paso K. Después de su tratamiento final, el material era lo suficientemente puro para ser utilizado en el paso siguiente.

Paso B El producto deseado 21 fue obtenido mediante el protocolo de oxidación anteriormente descrito para el Ejemplo 2 Paso B. La purificación mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 100/0 a 98/2 de diclorometano/MeOH permitió obtener 21 con un rendimiento del 38%. HRMS (FAB) calculado para 818.4340 (M+H)+ Hallado: 818.4329.

EJEMPLO 22 Preparación del Compuesto de la fórmula 22 Paso A El producto 22 previsto fue sintetizado como anteriormente descrito para el Ejemplo 3 Paso A con un rendimiento cuantitativo HRMS (FAB) calculado para 762.3714 (M+H)+. Hallado 762.3722.

EJEMPLO 23 Preparación dei Compuesto de la fórmula 23 Paso A 23a El producto 23a previsto fue preparado con un rendimiento del 58% a partir de 11 y D como anteriormente descrito para el Ejemplo 1 , Paso J.

Paso B El producto 23 previsto fue preparado con un rendimiento del 79% a partir de 23a como anteriormente descrito para el Ejemplo 1 , Paso K.

EJEMPLO 24 Preparación del Compuesto de la fórmula 24 Paso A La solución del bencil éster 23 (80 mg, 0.11 mmoles) en etanol (30 ml) y metanol (15 ml) fue sometida a agitación a temperatura ambiente durante 3 horas bajo hidrógeno en la presencia de paladio sobre carbón (50 mg). El desarrollo de la reacción fue supervisado por CLF. Después de una cuidadosa filtración a través de una almohadilla de celite, los solventes fueron retirados al vacío con lo cual se obtuvo un sólido blanco (67 mg, rendimiento cuantitativo).

EJEMPLO 25 Preparación dei Compuesto de la fórmula 25 Paso A El compuesto 25 deseado fue preparado a partir de 24 con un rendimiento del 53% de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso J. con la salvedad que se usó bencilamina en Jugar de la amina A.

EJEMPLO 26 Preparación de compuestos de fórmulas 16A y 26B Paso A 26a 26b A una solución fría (0°C) de 26a (4.0 g, 20 mmoles) en THF/MeCN (35/5 ml), fue adicionado cloroformato de 4-nitrofenilo (4.86 g, 24 mmoles) y seguidamente piridina (1.9 ml, 24 mmoles). La mezcla reactiva fue calentada a temperatura ambiente durante 4.5 horas. La reacción fue supervisada hasta consumo total de 26a (fue necesario adicionar algo mas de ambos reactivos). La reacción fue apagada mediante la adición de agua, los materiales orgánicos fueron separados, lavados con salmuera, secados (sulfato de sodio) y evaporados al vacío con lo cual se obtuvo el producto 26b. Este material era lo suficientemente puro para estudios ulteriores.

Paso B 1f c A una solución fría (0°C) de If (2.3 g, 5.1 mmoles) en dicIorometano/DMF (25/5) a 0°C fue adicionado 26b (2.24 g, 6.1 mmoles) seguido por trietilamina (0.86 ml, 6.1 mmoles). Se adicionaron algunos cristales de imidazoi y la mezcla reactiva fue guardada a 0°C durante 16 horas. La mezcla reactiva fue diluida con diclorometano lavada con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, una solución acuosa de ácido cítrico al 10 %, secada (sulfato de sodio), y evaporada al vacío. El material bruto fue purificado mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 10010 a 70/30 de diclorometano/acetato de etilo y se obtuvo 26c (1.2 g, rendimiento 38%). HRMS (FAB) calculado para 658.3492 (M+H)+. Hallado: 658.3483.

Paso C El compuesto 2&d previsto fue obtenido de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 Paso G. El material bruto fue llevado tal cual al paso siguiente. HRMS (FAB) calculado para C^Ha^O 478.2553 (M+H)+. Hallado: 478.2547.

Paso D 2dd 26e El compuesto 26e deseado fue obtenido de acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 1 Paso H. La purificación mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó 99/1 de diclorometano/metanol permitió obtener el compuesto 26e junto con óxido de trifeniifosfina. Esta mezcla fue utilizada en el paso siguiente.

Paso E 26e 2ßf El producto 26f deseado fue obtenido mediante el método descrito para el Ejemplo 1 Paso 1. HRMS (FAB) Calculado para 446.2291; hallado 446.2290.

Paso F El compuesto 26g previsto fue obtenido de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 Paso J. La purificación del producto bruto mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 98/2 de diclorometano/metanol permitió obtener 26g con un rendimiento del 31% (3 pasos). HRMS (FAB) calculado para C41H58NA9* 792.42967 (M+H)+ Hallado: 792.4284.

Paso G Los productos deseados 26A y 268 fueron obtenidos mediante el protocolo anteriormente descrito para el Ejemplo 1 Paso K. La purificación mediante cromatografía de columna instantánea para lo cual se utilizó de 99/1 a 95/5 de diclorometano/metanol permitió obtener 26A (en la forma de una mezcla) y 268 (isómero R, inferior puro). Rendimiento combinado = 25%.

EJEMPLO 27 Preparación del Compuesto 27 Paso A 27a 27b A una mezcla de Boc-3,4-didehidroprolina-OMe (27a, 5.30 g, 23.4 mmoles), N-metilmorfolina-N-óxido (4.75 g, 35.1 mmoles) en acetona (10 ml) y agua (15 mi) a temperatura ambiente fue adicionado una solución de tetróxído de osmio en ter-butanol (2.5% agua/agua, 3.5 ml, 0.344 mmoles). A esta suspensión nebulosa fue adicionado THF hasta que la solución se hizo mayormente homogénea. Después de agitación a temperatura ambiente durante la noche, se adicionó una solución acuosa saturada de tiosulfato de sodio (30 ml), y 10 minutos después, seguido por la adición de acetato de etilo (300 ml) y salmuera (80 ml) Una vez separadas las capas, la solución acuosa fue extraída con acetato de etilo (2x100 ml), Las soluciones orgánicas fueron combinadas, secadas (sulfato de sodio), filtradas y concentradas al vacío con lo cual se obtuvo un líquido oscuro. La cromatografía instantánea (MeOH/CH2CI2 de 4 al 8%) permitió obtener 27b (4.73 g, 18.1 mmoles, 77%) en la forma de un aceite.

Paso B 27b 27c A una suspensión del diol 27b (1.6 g, 6.12 mmoles), sulfato de magnesio (4.0 g, 33.2 mmoles) y 3-benciloxipropionaldehido (2.32 g, 13.0 mmoles) en CH2CI2 anhidro (60 mi) a 0°C fue adicionado ácido p-toiuensulfónico (150 mg, 1.01 mmoles). La mezcla reactiva fue sometida a agitación enérgicamente y dejada calentarse a temperatura ambiente junto con el baño de hielo durante la noche (18 horas) Se adicionó una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (30 ml) y CH2CI2 (100 ml), y las capas fueron separadas. La solución acuosa fue extraída con CH2CI2 (2x100 ml) y la solución orgánica fue secada (sulfato de magnesio), filtrada y concentrada a vacío con lo cual se obtuvo un aceite incoloro. La cromatografía instantánea (EtOAc/CH2CI2 de 5 a 15%) permitió obtener 27c (2.35 g, 5,S7mmoles, 91 %) en la forma de un aceite.

Paso C 27c 27d El compuesto 27d previsto fue obtenido a partir de 27c de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 Paso C. El material bruto fue llevado al paso siguiente sin mayor purificación.

Paso D 27d 27e El compuesto deseado fue obtenido a partir de 27d de acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 1 Paso D. La purificación mediante cromatografía de columna instantánea (8 a 20% de acetato de etilo/CH2CI2) permitió obtener el 27e.

Paso E El producto 27f deseado fue obtenido a partir de 27e mediante el método descrito para el Ejemplo 1 , Paso E. Fue utilizado en la reacción siguiente sin mayor purificación.

Paso F 27f . 27g El compuesto deseado fue obtenido a partir de 27f de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso F. La purificación del producto bruto mediante cromatografía de columna instantánea (8 a 20% de acetato de etilo (CH2CI2)) permitió obtener 27g con un rendimiento del 36% (4 pasos). HRMS m/z 595.3014 [calculado para C33H42N2O8, 595.3019].

Paso G 27g 27h El compuesto deseado fue obtenido cuantitativamente a partir de 27g de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso G. La cromatografía instantánea (de 3 a 50% de MeOH/CH2CI2) permitió obtener 27h en la forma de un sólido blanco. HRMS m/z 595.2663 [calculado para C26H36N2O8: 595.2550].

Paso H 27h 27? El compuesto deseado fue preparado a partir de 27h de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 Paso H. La purificación mediante cromatografía instantánea (de 3 a 5 % de MeOH/CH2CI2) permitió obtener el 27¡ en ia forma de un óxido de trifenilfosfina que fue hidrolizado.

Paso El producto deseado fue obtenido (72%, dos pasos) a partir de el método descrito para el Ejemplo 1 Paso 1.

Paso J 27k El compuesto deseado fue obtenido a partir de 27j de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 11 Paso J. La purificación del producto bruto mediante cromatografía instantánea (de 3 a 6% de MeOH/CH2CI2) permitió obtener 27k (69%) en la forma de una mezcla de diastereómeros.

Paso K 27k 27A 27B El compuesto deseado fue obtenido a partir de 27k de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 Paso K. La cromatografía instantánea (de 2 a 5% de MeOH/CH2CI2) permitió obtener 27A y 27B puros.

EJEMPLO 28 Preparación del Compuesto 28 Paso A 28a 20 El compuesto deseado fue obtenido a partir de 27j de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 2, Paso A. La purificación mediante cromatografía instantánea (de 3 a 6% de MeOH/CH2CI2) permitió obtener 28a (50%) en la forma de una mezcla de diastereómeros inseparables.

Paso B 28a 28B El compuesto deseado fue obtenido a partir de 28a de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 2, Paso B. La cromatografía instantánea (de 2 a 5% de MeOH/CHAy permitió obtener 28A y 28B.

EJEMPLO 29 Preparación del Compuesto 29 29B Paso A 28A 29A El compuesto deseado 29A fue preparado a partir de 28A de acuerdo con el método del Ejemplo 3, Paso A.

Paso B 28A 29A El producto deseado 29B fue obtenido a partir de 28B mediante descrito para el Ejemplo 3, Paso A.

EJEMPLO 30 Preparación del Compuesto 30 30 Paso A 30c A una solución del Cbz-HYP-OMe (30a) (3.0 g, 10.7 mmoles) y 4-benciloxi-2-metil-1 -buteno 30b (5.30 g, 30.0 mmoles) en CH2CI2 anhidro (80 ml) a 0°C fue adicionado trifluorborodietii eterato (0.25 ml, 1.97 mmoles). La mezcla resultante fue sometida a agitación a temperatura ambiente durante la noche (18 h). Se adicionaron una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (30 ml), salmuera (50 ml) y acetato de etilo (300 ml), y las capas fueron separadas. La solución acuosa fue extraída con acetato de etilo (2x100 ml), y la solución orgánica combinada fue secada (sulfato de magnesio), filtrada y concentrada al vacío con lo cual se obtuvo un aceite amarillo. La cromatografía instantánea (de 5 a 20% de acetato de etilo/CH2CI2) permitió obtener 30c (2.00 g, 4.39 mmoles, 41 %) en la forma de un aceite.

Paso B El compuesto deseado 30d fue obtenido a partir de 30c con un rendimiento cuantitativo de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 Paso G.

Paso C 30e El compuesto deseado 30e fue obtenido a partir de 30d y Boc-cicIohexilglicina-OH de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso D. La cromatografía instantánea (de 3 a 5% de MeOH/CH2C12) permitió obtener 30e (61 %).

Paso D 30e 30f La solución de 30e y HCl 2N en dioxano y acetato de etilo (1:1) fue sometida a agitación a temperatura ambiente durante 3 horas, después de lo cual fue concentrada al vacío El producto fue utilizado en la siguiente reacción, sin purificación adicional.

Paso E 30f 30g El compuesto deseado 30g fue preparado a partir del 30f de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso F. La cromatografía instantánea (del 2 al 5% MeOH/CH2CI2) permitió obtener 30g (48%, dos pasos).

Paso F 30g 30h La mezcla de 30g (700 mg, 1.28 mmoles) y carbonato de potasio (530 mg, 3.84 moles) en metanol anhidro (80 mi) fue vigorosamente agitada a temperatura ambiente El progreso de la reacción fue monitoreado por CLF. Luego de tres horas, fue concentrada al vacío antes de agregarle EtOAc (200 mi), agua (100 ml), y se separaron las capas. La solución acosa fue sometida a extracción con EtOAc (2 X 100 ml). Las soluciones orgánicas fueron combinadas, secadas (MgSO4), filtradas y concentradas al vacío. El producto fue utilizado en la siguiente reacción sin otra purificación.

Paso G 30h 30Í El compuesto deseado 30i fue preparado a partir del 30h de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso H.

Paso H 30i 30j El compuesto deseado 30j fue preparado a partir del 30i de acuerdo cuantitativamente con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso I (23%, 3 pasos).

Paso 30j 30k El compuesto deseado fue preparado a partir del 30j de acuerdo 15 con el procedimiento del Ejemplo 1, Paso J. La cromatografía instantánea (del 3 al 6% MeOH/CH2CI2) permitió obtener 30k (58%).

Paso J 30 El compuesto deseado 30 fue preparado a partir del 30k de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 Paso K. La cromatografía instantánea (del 3 al 5% MeOH/CH2CI2) permitió obtener 30 en forma de una mezcla de diasteómeros inseparables.

EJEMPLO 31 Preparación del Compuesto 31 31 Paso A 30j 31a El compuesto deseado fue preparado a partir del 30j y B de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso J. La cromatografía t instantánea (del 2 al 5% MeOH/CH2CI2) permitió obtener 31a (73%).

Paso B 31 El compuesto deseado fue preparado a partir del 31a de acuerdo con e! procedimiento del Ejemplo 1 Paso K. La cromatografía instantánea (del 2 al 5% MeOH/CH y permitió obtener 31 en la forma de una mezcla de diastereómeros inseparables.

EJEMPLO 32 Preparación del Compuesto 32 32 Paso A 32 El compuesto deseado 32 fue preparado a partir del 31 de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 3, Paso A.

EJEMPLO 33 Preparación del Compuesto 33 Paso A 33a 33b La suspensión de metil 3,5-dihidroxifenilacetato (33a) (5.0 g, 27.4 mmoles), yoduro de metilo (4.6 g, 32.9 mmoles), carbonato de potasio (5.69 g, 41.2 mmoles) en DMF (30 ml) fue calentada a 55°C y sometida a agitación a lo largo de la noche. Luego de enfriar a temperatura ambiente, se le agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio acuoso (100 ml) y EtOAc (200 mi) y se separaron las capas La solución acuosa fue sometida a extracción con EtOAc (2X1 00 ml) La solución orgánica combinada fue secada (MgS04), filtrada y concentrada al vacío. La cromatografía instantánea (del 3 al 5% MeOH/CH2CI2) permitió obtener 33b (1.11g, 29%) en forma de un líquido blanco.

Paso B 33b 33 c Una solución de hidróxido de litio acuoso (0.342g en 10 ml de H2O) fue agregada a una solución del éster metílico 33b en THF (10ml) y metanol (10 mi) a temperatura ambiente. El progreso de la reacción fue monitoreado por CLF Luego de cuatro horas, los volátiles fueron removidos al vacío, se agregaron EtOAc (150 mi) y agua (30 ml) y la solución acosa fue acidificada hasta pH=1 y saturada con cloruro de sodio sólido. Luego de ia separación de las capas, la capa acuosa fue sometida a extracción con EtOAc (2 X 150 ml). Se combinaron soluciones orgánicas, secadas sobre sulfato es obvio, se las filtró y concentró al vacío con lo cual se obtuvo 33c (1.6 g).

Paso C 33c 1f 33 El compuesto deseado 33d fue preparado a partir del 33c y 1f de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 Paso F. La cromatografía instantánea (del 2 al 5% MeOH/CH2CI2) permitió obtener 33d con un rendimiento del 90%. 5 Paso D 33d El compuesto deseado 33e fue preparado a partir del 33d de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 Paso G. La cromatografía instantánea (del 2 al 5% MeOHICH2Cl2) permitió obtener 33e con un rendimiento del 56%.

Paso E 33e 33f El compuesto deseado 33f fue preparado a partir del 33e de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso H. La cromatografía instantánea (dei 2 al 5% MeOH/CH2CI2) permitió obtener 33e en la forma de una mezcla con óxido de trifenilfosfina el cual fue utilizado en la siguiente reacción sin otra purificación.

Paso F 33f 33S El compuesto deseado 33g fue preparado a partir del 33f con un rendimiento de 45% (2 pasos) de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso 1.

Paso G 33g El compuesto deseado 33h fue preparado a partir del 33g y A de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso J.

Paso H 33 B Los compuestos deseados son preparados a partir del 33h de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso K.

EJEMPLO 34 Preparación de compuesto 34 34 Paso A 34a El compuesto deseado 34a fue preparado de acuerdo con el método del Ejemplo 1 , Paso J, con la salvedad que se utilizó amina A en lugar de amina B para amina A. El producto es obtenido como una mezcla de diastereómeros inseparables.

Paso B 34 El compuesto deseado es preparado a partir del 34a de acuerdo on el método del Ejemplo 1 , Paso K.

EJEMPLO 35 Preparación del Compuesto 35 Paso A 35 Ei compuesto deseado 35 fue preparado a partir del 34 de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1 , Paso A.

EJEMPLO 36 Preparación del Compuesto 36 Paso A 36a 36b -Una solución de ter-butilo de fosfonoacetato (15.1 g, 50.0 mmoles) en THF seco fue enfriada hasta los 0°C y tratada con NaH (60%, 2.5g, 62.5 mmoles, 1.25 equivalencias) y agitada durante 20 minutos. La mezcla de reacción fue tratada con 2-pentanona (4.3 g, 50 mmoles) y agitada a temperatura ambiente durante 24 horas. La mezcla de reacción fue diluida con NaHCO3 acuoso y sometida a extracción en éter (3X1 00 mi). La capa de éter combinada fue sometida a extracción con salmuera, secada (MgSO4), concentrada al vacío y destilada con lo cual se obtuvo 8.2 g (88%) del 36b (relación estereoquímica 2:1).

Paso B oateu Una solución de 36b (5.0 g, 27.1 mmoles) fue disuelta en dicloroetano y tratada con 4,4'-tiobis-(2-ter-butil-5-metilfenol) (100 mg) y MCPBA (60-80%, 7.76 g, 27.1 mmoles) y fue calentada a reflujo durante 4 horas. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo fue diluido con éter (200 mi). La capa de éter fue lavada dos veces con una solución acuosa saturada de Na2S2?3> una solución acuosa de NaOH y salmuera (100 mi). La mezcla de reacción fue concentrada al vacío con lo cual se obtuvo 4.2 g (77%) de 36c el cual fue utilizado en su estado original en el siguiente paso.

Paso C 3Sc 3Sd 36 d" Una solución de epóxido (4.0 g, 18.4 mmoles) en etanol seco (100 mi) fue tratado con NaN3 (12 g, 184 mmoles) y NH4CI (9.6 g, 184 mmoles) y calentada a reflujo durante 36 horas. La mezcla de reacción fue diluida con agua y la mezcla de reacción fue sometida a extracción con éter (300 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas con NaSO4 y fueron concentradas. El residuo fue purificado por medio de una cromatografía SiO2 (EtOAc/hex 1 :19) con lo cual se obtuvo 1.1 g (28%) de 36d y 731 mg (18%) de 36d' en forma de un líquido incoloro.

Paso D 36d 36e Una solución de azida 36d (2.1 g, 8.7 mmoles) fue disuelta en CH3OH (100 ml) y fue tratada con Pd/C (50 mg) e hidrogenada (2.8 kg/cm2) durante 24 horas. La mezcla de reacción fue filtrada por medio de un tapón de Celite y el material filtrado fue concentrado al vacío. El residuo fue utilizado para la siguiente reacción sin otra purificación. Una solución de Cbz-CI (1.48g, 8.7 mmoles, 1.23 ml) fue agregada en forma de gotas a una mezcla de amina y Et3N (878mg, 1.25 ml) a -78°C en CH2Cl2 (30 ml). La mezcla de reacción fue entibiada hasta temperatura ambiente y fue concentrada al vacío. El residuo fue sometido a cromatografía sobre S¡O2 (EtOAc/Hex 8:2) con lo cual se obtuvo 36e (450mg, 15%) en forma de un sólido incoloro.

Paso E Una solución de 36e (450 mg, 1.29 mmoles) en CH2CI2/TFA (10 ml, 1 :1) fue agitada a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío con lo cual se obtuvo el ácido (250 mg) el cual utilizado en el paso siguiente sin otra purificación. El ácido obtenido por hidrólisis 36e fue disuelto en CH2CI2 (10 ml) a -20°C y fue tratado con H-Glicil-Fenilgl¡cil-N(CH3)2 (281 mg, 0.93 mmoles), HOOBt (208 mg, 1.27mol, 1.25 equiv.) EDCl (244mg, 1.27 mmoles) y NMM (343 mg, 3.4 mmoles, 490 µl) EDCl (244 mg, 1.27 mmoles) y NMM (343 mg, 3.4 mmoles, 490 µl). La mezcla de reacción fue almacenada en el congelador durante 24 horas y fue diluida con HCl acuoso. (1 M, 40 ml). La mezcla de reacción fue sometida a extracción con CH2CI2 (3X50 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron sometida a extracción con HCl acuoso. (1 M, 100 ml), NaHC04 acuoso, (1 M, 100 ml), salmuera (100 ml), secadas (MgS04), filtradas y concentradas al vacío y sometidas a cromatografía sobre SiO2 (acetona/Hexanos 1 :3) con lo cual se obtuvo 36f (330 mg, 75%) en forma de un sólido incoloro. Paso F Una solución de 36f fue disuelta en CH3OH (20 ml) y fue tratada con Pd/C (10 moles, 20 mg). La mezcla de reacción será hidrogenada a 2.8 kg/cm2 (40ps¡) durante 12 horas. La mezcla de reacción es filtrada por medio de un tapón de Celite y el filtrado fue concentrado al vacío y utilizado directamente en el siguiente paso.

Paso G El producto esperado 36h es sintetizado como se describe en el Ejemplo 1 Paso J. El material acoplado será utilizado directamente en el siguiente paso para sintetizar 36A y 36B.

Paso H Los productos deseados 36A y 36B son obtenidos por medio del protocolo de oxidación que se describió anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso K.

EJEMPLO 37 Preparación del Compuesto 37 Paso A 37a A una solución fría (0°C) de F (2.3 g, 9.43 mmoles) en diclorometano (20 ml) se le agregó trietilamina (3.97 ml, 2828 mmoles), DMAP (algunos cristales) y cloruro 3-bromobencensulfonllo (3.61 g, 14.14 mmoles). La mezcla de reacción fue dejada en posición en reposo en el refrigerador (0°-5°C) a lo largo de la noche. La mezcla de reacción fue lavada con NaHC03 saturado, y una solución de ácido cítrico al 10%. La capa orgánica fue secada (Na2S04) y concentrada. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea utilizando 95/5 a 90/10 diclorometano/EtOAc con lo cual se obtuvo 2.7 g (rendimiento del 62%) de 37a. HRMS (FAB) Calculado para C17H24N2O6SBr: 465.0518 (M+H)+. Halíado:465.0497.

Paso B 3 37b 37a El producto deseado 37b fue obtenido por el método describe en el Ejemplo 1 , Paso C. El material bruto fue utilizado en el siguiente sin purificación.

Paso C El producto deseado 37c fue obtenido por el método describe en el Ejemplo 1 , Paso D con un rendimiento del 97%. El material luego del procedimiento fue lo suficientemente puro como para ser utilizado más adelante.

Paso D 37c 37d El producto deseado 37d fue obtenido por el método describe en el Ejemplo 1 Paso E. El material bruto fue utilizado en el siguiente sin purificación.

Paso E 37d 37e El producto deseado 37e fue obtenido por el método describe en el Ejemplo 1 Paso F, utilizando ácido pentenoico como el acompañante de acoplamiento. La purificación del residuo por cromatografía de columna utilizando 90/10 a 80/20 diclorometano/EtOAc dio un rendimiento del 35% de 37e. HRMS (FAB) Calculado para 586.1409 (M+H)+ Hallado: 586.1423.

Paso F e A una solución sometida a agitación de 37e (660 mg, 1.13 mmoles) en DMF (10 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno se le agregó trietilamina (3.61 ml, 32.77 mmoles), carbonato de potasio (780 mg, 6.65 mmoles), bromuro de tetrabutilamonio (730 mg, 2.26 mmoles) y acetato (II) paladio (33 mg, 0.15 mmoles). La mezcla fue calentada a 100°C durante 2 horas. La mezcla de reacción fue enfriada hasta temperatura ambiente, diluida con EtOAC lavada con una solución de ácido fosfórico al 5%. La capa orgánica fue separada, secada (Na2S04) y concentrada para proveer 280 mg (rendimiento del 49%) de 37f como una mezcla de diastereómeros. Este material fue lo suficientemente puro como para ser utilizado en el siguiente paso. HRMS (FAB) Calculado para C^B^OeS. 504.2168 (M+H)+. Hallado: 504.2155.

Paso G 37f 37g El producto deseado 37g fue obtenido por medio del procedimiento de hidrogenación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1, Paso G, con un rendimiento del 73%. El material fue lo suficientemente puro para otros estudios. HRMS (FAB) Calculado para 506.2325 (M+H)+. Hallado: 506.2314.

Paso H 37g 37h El producto deseado 37h fue obtenido por medio del procedimiento que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso H, con un rendimiento del 84%. HRMS (FAB) Calculado para 492.2168 (M+H)+. Hallado: 492.2175.

Paso Ei producto esperado 37i fue obtenido por medio del procedimiento que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 2, Paso A, con un rendimiento del 90%. El material fue lo suficientemente puro para otros estudios. HRMS (FAB) Calculado para 867.4326 (M+H)+. Hallado: 867.4342.

Paso J Los materiales deseados 37A y 37B fueron sintetizados por medio del protocolo de oxidación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 2, Paso B. La purificación del residuo por cromatografía instantánea utilizando 98/2 a 96/4 diclorometano/EtOAc permitió obtener 37A (61%. Menos polar) y 37B (15%, más polar) como una mezcla de diastereómeros. HRMS (FAB) Calculado para C^N ^S: 865.4170(M+H)+. Hallado: 865.4190 (37A), 865.4181 (37B).

EJEMPLO 38 Preparación del Compuesto 38 Paso A El material deseado 38A fue sintetizado como se describe anteriormente para el Ejemplo 3, Paso A con un rendimiento del 91%.

Paso B El material deseado 38B fue sintetizado como se describe anteriormente para el Ejemplo 3, Paso A con un rendimiento del 83%. HRMS (FAB) Calculado para 809.3544 (M+H)+. Hallado: 809.3547.

EJEMPLO 39 Preparación del Compuesto 39 Paso A 39a El producto esperado 39a fue obtenido por medio del método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 37, Paso A, utilizando cloruro de pipsilo en lugar de 3-bromobencilosuifonil. La purificación del residuo por cromatografía de columna utilizando 95/5 a 90/10 diclorometano/EtOAc permitió obtener un rendimiento del 75% de 39a. HRMS (FAB) Calculado para C17H24N2O6SI: 511.0400 (M+H)+. Hallado: 511.0386.

Paso B 39b 39a El producto deseado 39b fue obtenido por medio de método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 11 Paso C. El material bruto fue utilizado en el siguiente paso sin purificación.

Paso C Ei producto deseado 39c fue obtenido por medio del método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso D. La purificación del residuo por cromatografía de columna utilizando 90/10 a 80/20 diclorometano/EtOAc produjo un rendimiento del 68% de 39c HRMS (FAB) Calculado para C^Hs^O^I: 650.1397 (M+H)+ Hallado: 650.1398.

Paso D 39d 39c El producto deseado 39d fue obtenido por medio del método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso E. El material bruto fue utilizado en el siguiente paso sin purificación.

Paso E 39d 39e El producto deseado 39e fue obtenido por medio del método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso F. La purificación del residuo por cromatografía de columna para lo cual se utilizó 98/2 diciorometano/MeOH produjo un rendimiento del 76% de 39e Paso F 39e 39f El producto deseado 39f fue obtenido por medio del método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 37, Paso F. La purificación del residuo por cromatografía de columna utilizando 9812 diciorometano/EtOAc produjo un rendimiento del 28% de 39f como una mezcla de diastereómeros. HRMS (FAB) Calculado para C Hs^OeS: 504.2168 (M+H)+. Hallado: 504.2160.

Paso G 39f 39g El producto deseado 39g fue obtenido por medio del procedimiento de hidrogenación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso G. El material fue lo suficientemente puro para otros estudios. HRMS (FAB) Calculado para C^H^NsOeS: 506.2325 (M+H)*. Hallado: 506.2314.

Paso H 39g 39h El producto deseado 39h fue obtenido por medio de! hoy bien que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso H con un rendimiento cuantitativo. HRMS (FAB) Calculado para 492.2168 (M+H)+. Hallado: 492.2175.

Paso El producto esperado 39i fue obtenido por medio dei método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 2, Paso A con un rendimiento de 36%. El material fue lo suficientemente puro para otros estudios. HRMS (FAB) Calculado para 867.4326 (M+H)+. Hallado: 867.4342.

Paso J El material deseado 39 fue obtenido por medio del protocolo de oxidación que se describe para el Ejemplo 2, Paso B. La purificación del residuo utilizando 98/2 diclorometano/MeOH permitió obtener al material 39 con un rendimiento del 24% en forma de una mezcla de diastereómeros. HRMS (FAB) Calculado para 865.4170 (M+H)+. Hallado: 865.4181.

EJEMPLO 40 Preparación del Compuesto 40 Paso A El material deseado 40 fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 3, Paso A con un rendimiento del 93% HRMS (FAB) Calculado para C^H^NAIOS: 809.3544 (M+H)+. Hallado: 809.3544.

EJEMPLO 41 Preparación del Compuesto 41 Paso A ; 39d 41a A un embudo de adición de 25 ml se le agregó benceno (5 ml), DMF (0.32 ml, 4.1 mmoles), y cloruro de tionilo (0.33 ml, 4.5 mmoles) Luego de 5 minutos, aparecieron dos capas. La capa inferior fue separada y fue agregada lentamente a una solución enfriada (0-5°C) de ácido acrílico (0.19 ml, 2.8 mmoles) en diclorometano. La mezcla fue mantenida a esa temperatura durante diez minutos. Seguidamente, se agregó trietilamina (0.77 ml, 5.5 mmoles) seguida por 39d (1.13 g, 2.1 mmoles). La mezcla de reacción de fue calentada hasta llegar a temperatura ambiente a lo largo de 5 horas y fue aplacada con NaHC03 saturado. La capa orgánica fue separada, lavada con una solución de H3PO4 al 5% y salmuera. La capa de diclorometano fue secada (Na2SO4), y concentrada. El material bruto fue purificado por cromatografía de columna utilizando 98/2 diclorometano/EtOAc con lo cual se obtuvo 870 mg de 4fla (rendimiento del 67%). HRMS (FAB) Calculado para C23H31N306SI: 604.0978 (M+H)+. Hallado: 604.0964.

Paso B 3 41a 41b El producto deseado 41b fue obtenido por medio del método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 37, Paso F. El residuo fue purificado utilizando 97/3 diclorometano/MeOH con lo cual se obtuvo 41 b con un rendimiento del 26%.

HRMS (FAB) Calculado para 476.1855 (M+H)+. Hallado: 476.1858.

Paso C 41b 41c El producto deseado 41c fue obtenido por medio del método de hidrogenación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso D con un rendimiento del 75%. El material fue lo suficientemente puro para ser utilizado en otros estudios.

Paso D 41c 4", d El producto deseado 41 d fue obtenido por medio dei método que se describe para el Ejemplo 1 , Paso E. Ei material bruto fue utilizado en el siguiente paso sin purificación.

Paso E El producto deseado 41 e fue obtenido por medio del método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 2, Paso A con un rendimiento del 63%. El material fue lo suficientemente puro para ser utilizado en otros estudios.

Paso F El material deseado 41 fue obtenido por medio del protocolo de oxidación que se describe para el Ejemplo 2, Paso B. La purificación del residuo utilizando 98/2 a 95/5 diclorometano/MeOH permitió obtener 41 en un rendimiento de 52% en forma de una mezcla de diastereómeros.

EJEMPLO 42 Preparación del Compuesto 42 Paso A El material deseado 42 fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 3, Paso A con un rendimiento cuantitativo en forma de una mezcla de diastereómeros. HRMS (FAB) Calculado para 781.3231 (M+H)J Hallado: 781.3233.

EJEMPLO 43 Preparación del Compuesto 43 Paso A 43a A una solución fría (0°C) de F (5.4g, 22.1 mmol) en diclorometano (50 ml) se ie agregó trietilamina (6.8 ml, 48.6 mmoles), DMAP (algunos cristales) y cloruro bencensulfonilo (3.29g, 24.1 mmoles). La mezcla de reacción fue dejada en reposo en el refrigerador (0-5°C) a lo largo de la noche. La mezcla de reacción fue lavada con NaHCOs saturado, y una solución de ácido cítrico al 10% La capa orgánica fue secada (Na2S04) y concentrada. El residuo fue purifícado por cromatografía instantánea utilizando 95/5 diciorometanol/EtOAc con lo cual se obtuvo 5.0 g (rendimiento de 59%) de 43a.

Paso B 43a 43b El producto deseado 43b fue obtenido por medio del método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso O El material bruto fue utilizado en el siguiente paso sin purificación.

Paso C El producto deseado 43c fue obtenido por medio del método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso D. La purificación del residuo por cromatografía de columna utilizando 99/1 diclorometano/MeOH produjo un rendimiento del 60% de 43c.

Paso D 43c 43d Se hizo burbujear gas argón en una solución fría (0°C) de 43c (1.72 g 3.28 mmoles) en diciorometano (40 ml) durante 20-30 minutos. Se agregó ADDP (2.5 g, 9.84 mmoles) seguido por trifenilfosfina (2.6 g, 9.84 mmoles) y benziloxoipropanol (0.57 ml, 3.61 mmoles). La reacción fue dejada calentarse hasta llegar a temperatura ambiente y dejada en reposo durante dos días. La mezcla de reacción fue concentrada y sé le agregó Et20 (50 ml). El material sólido precipitado fue eliminado por filtración. Esta operación se repitió dos veces para eliminar la mayor parte de los productos secundarios. El material filtrado fue concentrado y purificado por cromatografía instantánea utilizando dielorornetano/EtOAc 90/10 a 85/15 para proveer 330 mg de 43d. Los materiales de partida fueron recuperados, junto con algo de óxido de trifenilfosfina, fueron sometidos nuevamente a las condiciones descritas anteriormente con lo cual se obtuvieron 420 mg adicionales de 43d. Rendimiento combinado = 34%. HRMS (FAB) Calculado para Ca^^OsS: 672.3319 (M+H)+. Hallado: 672.3330.

Paso E El producto deseado 43e fue obtenido por medio del método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso E. El material bruto fue utilizado en el siguiente paso.

Paso F 43d 43e El producto deseado 43f fue preparado de acuerdo con el protocolo que se describe para el Ejemplo 1 , Paso F. La purificación por cromatografía instantánea fue llevada a cabo utilizando 60/40 a 50/50 diclorometano/EtOAc con lo cual se obtuvo 43F en un rendimiento cuantitativo. HRMS (FAB) Calculado para CgeHtgNgOgS: 706.3162 (M+H)+. Hallado: 706.3157.

Paso G 43g 43f El producto deseado 43g fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 1 , Paso G. El material fue lo suficientemente puro para otros estudios.

Paso H 43g 43h El producto deseado 43h fue obtenido por medio del procedimiento que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso H. Luego de completarse la reacción, el soivente fue evaporado. Se agregó Et20 (50 ml) y los sólidos fueron filtrados. El filtrado fue concentrado y se agregó (50 ml, 50 ml) Et20/EtOAc. Los sólidos precipitados fueron limitados por filtración y el filtrado fue concentrado. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea utilizando 85/15 a 80/20 diclorometano/EtOAc con lo cual se obtuvo 43h puro con un rendimiento del 20%. NRMS (FAB) Calculado para C31H40N3O7S: 598.2587 (M+H)+. Hallado: 598.2581.

Paso 43h 43i El producto esperado 43i fue obtenido por medio del método que para el Ejemplo 1 , Paso J con un rendimiento del 92%.

Paso J El material deseado 43j fue sintetizado como se describe en el Ejemplo 1 , Paso J. El producto bruto fue lo suficientemente puro como para ser utilizado en forma directa.

Paso K El producto deseado 43 fue obtenido por medio del protocolo de oxidación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso K. La purificación por cromatografía instantánea fue llevada a cabo utilizando 97/3 diclorometano/MeOH con lo cual se obtuvo 43 en forma de una mezcla de diastereómeros. HRMS (FAB) Calculado para 928.4279 (M+H)+. Hallado: 928.4290.

EJEMPLO 44 Preparación del Compuesto 44 Paso A 4c 44a El producto deseado 44a fue obtenido por medio del método que o descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso D utilizando N-boc-ter- butilglicina como co-reactivo de acoplamiento. El material luego del procedimiento fue lo suficientemente puro como para ser utilizado en el siguiente paso.

Paso B El producto deseado 44b fue obtenido por medio del método que se describe para el Ejemplo 1 , Paso E. el material bruto fue utilizado en el siguiente paso sin purificación.

Paso C El producto deseado fue obtenido por medio del método que se describe para ei Ejemplo 1 , Paso F utilizando ácido 3-hidroxibenzoico. El material fue purificado por cromatografía de columna utilizando 85/15 a 65/35 diclorometano/acetato etilo con lo cual se obtuvo 44c con un rendimiento dei 84%.

Paso D 44c 44d El producto deseado 44d fue obtenido por medio del método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso G. El residuo luego del procedimiento fue lo suficientemente puro para una manipulación ulterior.

Paso E 44e El producto deseado 44e fue obtenido por medio del método que se describe para el Ejemplo 1 , Paso H. El residuo bruto luego de la T concentración fue tomado en hexanos/EtOAc (1/1) y el material sólido fue eliminado por filtración. Esta operación fue llevada a cabo nuevamente para eliminar algunos de los productos secundarios. La purificación por cromatografía de columna fue llevada a cabo utilizando 80/20 diclorometano/EtOAc con lo cual se obtuvo 44e junto con óxido de trifenilfosfina. Esta mezcla fue utilizada en el siguiente paso.

Paso F 44e 44f El producto deseado 44f fue obtenido por medio del método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso 1. Rendimiento de 44f (para 2 pasos) 11 %.

Paso G c? prouucio ueseauo ¿w- TUT sipienzaao como se describe anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso J. El material luego del procedimiento fue utilizado en el siguiente paso.

Paso H Los productos deseados 44A y 44B fueron obtenidos por medio del protocolo de oxidación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso K. La purificación por cromatografía instantánea fue llevada a cabo utilizando 97/3 a 96/4 diclorometanolmetanol con lo cual se obtuvo una cantidad equivalente de isómeros separados 44a y 44b. Rendimiento combinado = 58% (para 2 pasos) EJEMPLO 45 Preparación del Compuesto 45 Paso A BnO-^^^^^OH 45b La alquilación de 45a con 45b fue llevada a cabo utilizando el procedimiento que se describe para el Ejemplo 1 , Paso A. El producto bruto fue purificado utilizando 85/0/15 a 85/5/10 hexanos/EtOAc/diclorometano para proveer 45c con un rendimiento del 37%. HRMS (FAB) Calculado para C18H2g04: 309.2066 (M+H)+. Hallado: 309.2060.

Paso B 45c 45d A una solución de 45c (4.8g, 15.5 mmoles) en MeOH (30 ml) se le agregó p-toluensulfonato de piridinio (780mg, 3.1 mmoles) y se la sometió a reflujo durante tres horas cuando se consumieron todos los materiales de partida. En la mezcla de reacción fue concentrada. El residuo fue disuelto en EtOAc, lavado con NaHCOs saturado, secado (Na2S04) y ia capa orgánica fue concentrada con lo cual se obtuvo 3.2 g de 45d (rendimiento del 95%). Este material fue lo suficientemente puro para otros estudios HRMS (FAB) Calculado para C13H2103: 225.1491 (M+H)+. Hallado: 225.1486.

Paso C El producto deseado 45e fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 10, Paso A utilizando 45d como el material de partida. El producto bruto fue purificado utilizando 90/10 hexanos/EtOAc con lo cual se obtuvo 45e con un rendimiento del 70%.

HRMS (FAB) Calculado para C19H2405SBr: 443.0528 (M+H)+ Hallado: 443.0552.

Paso D El producto deseado 45f fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 1 , Paso A utilizando 45e como el material de partida. El material bruto fue utilizado en el siguiente paso sin purificación.

Paso E 451 45g El producto deseado 45g fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 18, Paso B utilizando 45f como el material de partida. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea utilizando 90/10 dlclorometano/EtOAc con lo cual se obtuvo 45g con un rendimiento 61 % (para 2 pasos).

HRMS (FAB) Calculado para C^H^NO,: 494.3118 (M+H)+ Hallado: 494.3107.

Paso F El compuesto deseado 45h fue obtenido por medio del protocolo que se describe para el Ejemplo 1 , Paso O El material bruto fue utilizada directamente.

Paso G El producto deseado 45i fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 1 Paso D. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea utilizando 90/10 a 85/15 diclorometano/EtOAc con lo cual se obtuvo 45i con un rendimiento de 41 %.

Paso H El producto deseado 45j es obtenido por medio del protocolo de hidrogenación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 Paso G.

Paso El producto deseado 45k fue obtenido por medio del procedimiento que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso O Paso J A una solución fría (0°C) de 45k en dic etano se le agregó trietilamina seguida por carbonilimidazol. Se espera que el calentamiento lento hasta la temperatura ambiente a lo largo de noche provea el producto 45! requerido. Este producto puede ser purificado utilizando una cromatografía de columna instantánea de modo de obtener 45! puro.

Paso K El producto deseado 45m es obtenido por medio del productor que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 3, paso A.

Paso L El producto esperado 45n es sintetizado como se describe anteriormente para el Ejemplo 1 Paso J.

Paso M El producto deseado 45 es obtenido por medio del protocolo de oxidación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso K. La purificación por cromatografía instantánea permite obtener 45 puro EJEMPLO 46 Preparación del Compuesto 46 Paso A 46b 46a A una solución de 46a (10.0 g, 42.9 mmoles) en diciorometano (190 ml) se le agregó BOP (22.75 g, 51.5 mmoles) y se la sometió a agitación durante 10 minutos a temperatura ambiente. Se le agregó clorhidrato N,0-dimetilhidroxiiamina (18.1 ml, 128.7 mmoies). La mezcla de reacción fue agitada temperatura ambiente durante 3 horas y fue lavada con 3N HCl, NaHC03 saturado, y salmuera. La capa orgánica fue secada (NaS04) y concentrada El material bruto, 46b, fue utilizado en el siguiente paso sin purificación.

Paso B A una solución fría (0°C) de THF (60 mi) en diclorometano (50 ml) se le agregó una solución de LAH (1 M en THF, 50 ml, 50.6 mmoles), bajo una atmósfera de nitrógeno. La reacción fue mantenida a esa temperatura durante 30 minutos. La mezcla de reacción fue neutralizada (adición lenta) con una solución acuosa de fosfato de hidrógeno potasio al 10% (30 ml). La mezcla fue sometida a extracción dos veces con EtOAc, La capa orgánica fue lavada con HCl 3N, NaHC03 saturado, y salmuera. Se seco la capa de EtOAc sobre sulfato de sodio, y fue concentrada. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en columna utilizando 10/90 a 30170 EtOAc/diclorometano para proveer 4.2 g de 46c (rendimiento del 62% - para 2 pasos).

HRMS (FAB) Calculado para C10H20NO3S: 234.1164 (M+H)+. Hallado: 234.1168.

Paso C 46c 46d A una solución fría (-15°C) de 46c (4.2 g, 19.4 mmoles) en diclorometano se le agregó ácido acético (2.14 ml, 38.8mmoles), seguido por isocianoacetato de metilo (1.76 ml, 19.4 mmoles). La reacción fue calentada hasta temperatura ambiente y se dejó en reposo durante 16 horas. La mezcla de reacción fue diluida con EtOAc y lavada con NaHC03 saturado, salmuera y agua. La capa orgánica fue secada (Na2S04) y concentrada. La purificación por cromatografía de columna instantánea fue llevada a cabo utilizando 30170 diclorometano/EtOAc con lo cual se obtuvo 46d puro (6.5 g) en la forma de un sólido blanco con un rendimiento del 92%. HRMS (FAB) Calculado para C^H^NA^: 393.1695 (M+H)+. Hallado: 393.1692.

Paso D A µna solución de 46d (6.5g, 16.16 mmoles) en MeOH (30 mL) se le agregó una solución de hidróxido de litio (1.19g, 50 mmoles) en agua (30 mi). Luego de 45 minutos la mezcla de reacción fue concentrada- Se agregó solución cítrica acida hasta lograr un pH ácido (3) y el producto fue sometido a -* extracción en EtOAc. La concentración de la capa orgánica permitió obtener el ácido 46e (5.6g, rendimiento del 90%). ' HRMS (FAB) Calculado para C13H20N2O6S: 337.1433 (M+M)+.

Hallado: 337.1430.

Paso E El producto deseado 46f fue obtenido por medio del método que se describe para el Intermediario A, Paso 3. La purificación del residuo por cromatografía de columna fue llevada a cabo utilizando 20/0/80 a 50/5/45 de EtOAc/NH3 en MeOH/diclorometano permitió obtener 3.0 g de 46f (51 %). HRMS (FAB) Calculado para C23H37N4Ú6S: 497.2434 (M+H)+. Hallado: 497.2439.

Paso F El compuesto deseado 46g fue preparado por medio del protocolo que se describe el compuesto intermedio A, Paso 4. El material fue utilizado para otros estudios.

Paso G 12f El producto deseado 48h fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 1 , Paso J. El material bruto fue lo suficientemente puro para ser utilizado en otras manipulaciones. HRMS (FAB) Calculado para C40H57N6O9S: 797.3908 (M+H)+. Hallado: 797.3896.

Paso H El producto deseado 46 fue obtenido por medio del protocolo de oxidación que ha sido descrito anteriormente para ei Ejemplo 10, Paso J. Fueron necesarios 4 días para que se complete la reacción. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea fue llevada a cabo (dos veces) y el preparado CLF utilizando 98/2 diclorometano/MeOH permitió obtener 46 como una mezcla de diastereómeros con un rendimiento del 12% (para 2 pasos). HRMS (FAB) Calculado para 795.3751 (M+H)+. Hallado: 795.3761.

EJEMPLO 47 Preparación del Compuesto 47 Paso A El producto deseado 47 fue obtenido por medio del protocolo de oxidación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 11 , Paso A.

EJEMPLO 48 Preparación del Compuesto 48 Paso A 12f EJ producto deseado 48b fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 1 , Paso J. El material bruto fue lo suficientemente puro para ser utilizado en otras manipulaciones. (Nota: El precursor 48a fue obtenido a partir de La Nboc-S-metilcesteina, disponible en el mercado, con procedimientos similares a lo que se describe para 46g).

Paso B El producto deseado 48 fue obtenido por medio del protocolo de oxidación que se describe anteriormente para el Ejemplo 10, Paso J. La purificación por cromatografía de columna instantánea utilizando 98/2 diclorometano/MeOH permitió obtener 48 en forma de una mezcla de diastereómeros con un rendimiento dei 21% (para 2 pasos).

EJEMPLO 49 Preparación del Compuesto 49 Paso A El producto deseado 49 fue obtenido por medio del protocolo de oxidación que se describe anteriormente para el Ejemplo 11 , Paso A.

EJEMPLO 50 Preparación del Compuesto 50 Paso A El producto deseado 50a fue obtenido por medio del método que se describe para el Ejemplo 1 , Paso F, utilizando ácido imidazol-4-acético como el co-reactivo de acoplamiento.

Paso B B El producto deseado 50b fue obtenido por medio del método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso G.

Paso C El producto deseado 50c fue obtenido por medio del método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 10, Paso A, utilizando cloruro de p-toluensulfonilo como el material de partida.

Paso D Ei producto deseado 50d es obtenido tratando al 50c con HOBt en THF a temperatura ambiente durante varias horas.

Paso E " El producto esperado 50e es sintetizado calentando 50d con carbonato de sodio, y ioduro de sodio en acetona a 50°C durante varias horas. El producto puede ser purificado por cromatografía convencional instantánea.

Paso F El producto deseado 50f es obtenido por medio dei protocolo de hidrólisis que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso I.

Paso G El producto deseado 50g es sintetizado como se describe anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso J.

Paso M El producto deseado 50 fue obtenido por medio del protocolo de oxidación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso K. La purificación por cromatografía de columna instantánea dará como resultado 50 puro.

EJEMPLO 51 Preparación del Compuesto 51 Paso A El producto esperado 51a es sintetizado como se describe anteriormente para ei Ejemplo 1 , Paso A.

Paso A El producto deseado 51 es obtenido por medio del protocolo de oxidación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso B. La purificación por cromatografía de columna instantánea dará como resultado 51 puro.

EJEMPLO 52 Preparación del Compuesto 52 Paso A El producto deseado 52 es obtenido por medio del procedimiento que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 3, Paso A.

EJEMPLO 53 Preparación de Compuestos de Fórmulas 53A y 53B 53A 53 B Paso A 44b 53a El producto deseado 53a fue obtenido por medio del método que scrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso F. El material fue purificado por cromatografía de columna instantánea utilizando 80/20 a 60/40 diclorometano/acetato de etilo para proveer 53a.

Paso B 53b 53a El producto deseado 53b fue obtenido por medio del método que se describe para ei Ejemplo 1 , Paso G. El material bruto fue utilizado en el siguiente paso tal como fue obtenido.

Paso C 53b 53c El producto deseado 53c fue obtenido por medio del método que se describe para el Ejemplo 1 , Paso H. La purificación por cromatografía de columna utilizando 99/1 diclorometano/metanol permitió obtener 53F junto con óxido de trifenilfosfina. 53c 53d El producto deseado fue obtenido por medio del método que se describe para el Ejemplo 1 , Paso I.

Paso E 53d El producto deseado 53e fue sintetizado como se describe anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso J. El material luego del procedimiento fue lo suficientemente puro para ser utilizado en el siguiente paso.

Paso F 53B Los productos deseados 53a y 53b fueron obtenidos por medio del protocolo de oxidación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1, Paso K. La purificación por cromatografía de columna instantánea utilizando 100/0 a 99/1 diclorometano/metanol permitió obtener los isómeros separados 53a y 53b, y algo de mezcla.

EJEMPLO 54 Preparación del Compuesto 54 Paso A 54a 54b El producto disponible en el mercado 54a fue convertido al producto deseado 54b utilizando el procedimiento que se describe para el Intermediario A, Paso 3, con un rendimiento cuantitativo.

Paso B 54c 54b A una solución fría (0°C) de 54b (8g, 26.8 mmoles) en DMF (100 ml) se le agregó hidruro de sodio (dispersión el 60% en aceite, 1.3 g, 32.16 mmoles). Luego de diez minutos, se agregó iodometano (2.8 ml, 42.8 mmoles) y la reacción fue calentada hasta temperatura ambiente a lo largo de 2 horas. La mezcla de reacción fue localizado con una solución de NH4CI acuoso y fue sometida a extracción con EtOAC. La capa orgánica fue separada, secada (Na2S04) y concentrada con lo cual se obtuvo 54c, el cual fue lo suficientemente puro para otros estudios.

Paso C 54 54c El producto deseado 54d fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 1 , Paso C. El material bruto fue utilizado en el siguiente paso sin purificación.

Paso D 54e 54f El producto deseado 54f fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 26, Paso A. El material bruto fue purificado por cromatografía instantánea utilizando 80/20 a 100/0 diclorometano/hexanos con lo cual se obtuvo 54f.

Paso E 54f 54d El producto deseado 54g fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 26, Paso B, utilizando 54d y 54f como materiales de partida. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea utilizando 85/15 hexanos/EtOAc para optará 54g con un rendimiento del 56%. HRMS (FAB) Calculado para C25H33NA4: 425.2440 (M+H)+. Hallado: 425.2424.

Paso F El compuesto deseado 54h fue obtenido por medio del método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1, Paso I, utilizando EtOH como solvente.

Paso G El compuesto deseado 54i fue preparado por medio del protocolo con que se describe para el Ejemplo 18, Paso B.

Paso H El producto deseado 54j fue obtenido por medio del procedimiento que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso O El material bruto fue utilizado sin purificación.

Paso I El producto deseado 54k fue obtenido por medio del protocolo de acoplamiento que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso D.

Paso J El producto deseado 54j fue obtenido por medio del procedimiento de hidrogenación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso G.

Paso K El producto deseado 54m fue obtenido por medio del protocolo de ciclización que se describe para el Ejemplo 1 , Paso H.

Paso L El producto deseado 54n fue obtenido por medio del productor que ha sido descrito anteriormente para el Ejempio 3, Paso A.

Paso M El producto deseado 54o es sintetizado como se describe anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso J.

Paso N El producto deseado 54 es obtenido por medio del protocolo de oxigenación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso K. La purificación por cromatografía de columna instantánea dará como resultado 54 puro.

EJEMPLO 55 Preparación del Compuesto 55 Paso A 55a 55b El producto 55a, disponible de mercado, fue convertido al producto deseado 55b utilizando el procedimiento que se describe para Ejemplo 26 paso A con un rendimiento del 41 %.

Paso B El producto deseado 55c fue obtenido por medio del protocolo de acoplamiento que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso D utilizando N-boc-butilglicina como el co-reactivo de acoplamiento. La purificación utilizando 95/5 diclorometano/EtOAc permitió obtener 55c con un rendimiento de 57%.

Paso C El producto deseado 55d fue obtenido por medio del procedimiento que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso O El material bruto fue utilizado directamente.

Paso D r- 55d El producto deseado 55e fue obtenido por medio del protocolo que se describe para el ejemplo 26 paso B. La purificación utilizando 80/20 diciorometano/EOAc permitió obtener 55e con un rendimiento del 20%. HRMS (FAB) Calculado para 585.3176 (M+H)+. Hallado: 585.3177.

Paso E El producto deseado 55f fue obtenido por medio del procedimiento que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso O. HRMS (FAB) Calculado para 495.2706 (M+H)+. Hallado: 495.2704.

Paso F El producto deseado 55g fue sintetizado como se describe anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso H. La purificación por cromatografía instantánea utilizando 85/15 diclorometano/EtOAc permitió obtener 55g con un rendimiento del 10%.

Paso G El producto deseado 55h fue obtenido por medio del método que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 3, Paso A. El material bruto fue utilizado sin purificación.

Paso H El producto deseado 55I fue sintetizado por como se describe anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso J. El material bruto fue utilizado sin purificación.

Paso El producto deseado 55 fue obtenido por medio del protocolo de oxidación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso K. La purificación por cromatografía de columna instantánea utilizando 98/2 diclorometano/MeOH permitió obtener 55.

EJEMPLO 56 Preparación del Compuesto 56 Paso A 10a 56a A una solución de éster metílico disponible en el mercado 10a (5.0g, 20.4 mmoles) en MeOH (20 ml) se le agregó una solución de LiOH (730 mg, 30.6 mmoles) en agua (20 ml). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 2 horas. La CLF indicó el consumo del material de partida. La mezcla de reacción fue concentrada y acidificada con una solución de ácido cítrico al 10%. Se agregó NaCI sólido y la capa acuosa fue sometida a extracción varias veces con EtOAc. La capa combinada EtOAc fue secada (Na2S04) y concentrada para proveer 56a en un rendimiento cuantitativo. HRMS (FAB) Calculado para C10H18N - 232.1185 (M+H)+. Hallado: 232.1189.

Paso B 56a 56b El producto deseado 56b fue obtenido por medio del método que se describe para el Ejemplo 1, Paso A. El material bruto fue convertido en éster metí iico sin purificación.

Paso C 56c 56b El producto deseado 56c fue obtenido por medio del método que se describe para ei Ejemplo 1 , Paso B. La purificación del residuo por cromatografía de columna utilizando 80/20 a 50/50 hexanos/EtOAc y seguidamente 40/60 diclorometano/EtOAc permitió obtener un 13% de 56c. HRMS (FAB) Calculado para C21H31N06: 394.2230 (M+H)S Hallado: 394.2224.

Paso D 56c 56d El producto deseado 56d fue obtenido por medio del método que se describe para el Ejemplo 1 , Paso C. El material bruto fue utilizado sin purificación.

Paso E El producto deseado 56e fue obtenido por medio del método que se describe para el Ejemplo 1 , Paso D, utilizando N-boc-ter-butiiglicina como el co-reactivo de acoplamiento. La purificación del residuo por cromatografía de columna utilizando 90/10 díclorometano/EtOAc permitió obtener un 86% de 56e. HRMS (FAB) Calculado para C27H43N2Ó7: 507.3070 (M+H)+. Hallado: 507.3072.

Paso F SSe 56f El compuesto deseado 56f fue preparado por medio del protocolo que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso E. El material fue utilizado de la forma que fue obtenido.

Paso G 56f 56g El producto deseado 56g fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 1 , Paso F. El material bruto fue purifícado por cromatografía instantánea utilizando 98/2 diclorometano/MeOH con lo cual se obtuvo 56g en un rendimiento del 78%. HRMS (FAB) Calculado para C23H41N207: 541.2914 (M+H)+ Hallado: 541.2916.

Paso H El producto deseado 56h fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 1 , Paso G. El producto obtenido luego del filtrado del catalizador fue lo suficientemente puro para manipulaciones subsecuentes. HRMS (FAB) Calculado para G^NA,: 451.2444 (M+H)+. Hallado: 451.2449.

Paso 5Sh 56i El producto deseado 56i fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 1 , Paso H. La purificación del residuo puro utilizando 75/25 hexanos/acetona permitió obtener 561 junto con óxido de trifenilfosfina. HRMS (FAB) Calculado para 433.2339 (M+H)J Hallado: 433.2343.

Paso J 55]^ .

El producto esperado 56j fue sintetizado como se describe para emplo 1 , Paso I. Rendimiento para dos pasos=16%. HRMS (FAB) Calculado para C^H^ N206: 419.2182 (M+H)+. Hallado: 419.2176.

Paso K 56j El producto esperado 56k fue sintetizado como se describe anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso J. El material luego de procedimiento fue lo suficientemente puro para ser utilizado el siguiente paso. HRMS (FAB) Calculado para C^H^N J»: 765.4187 (M+R)+. Hallado: 765.4198.

Paso L Los productos deseados 56A y 56B fueron obtenidos por medio del protocolo de oxidación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1, Paso K. La purificación por cromatografía de columna instantánea utilizando 98/2 a 96/4 diciorometano/MeOH permitió obtener los isómeros separados 56A y 56B, y algo de mezcla. HRMS (FAB) Calculado para C^HKN 763.4031 (M+H)+. Hallado: 763.4025 (56A). 763.4040 (56B).

EJEMPLO 57 Preparación de los Compuestos de las Fórmulas 57A y 57B 57A 57B Paso A A la solución disponible en el mercado, del aminoácido (3S)-7-hídroxi-1 ,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-3-carboxíIico 57a (5.0 g, 21.9 mmoles) en metanol (180 ml) se le agregó ácido clorhídrico (5.0 ml, 60 mmoles). La solución despejada resultante fue seguidamente tratada a reflujo en un baño de aceite durante 18 horas. Los solventes fueron eliminados al vacío con lo cual se obtuvo éster metílico 57b como un sólido blanco, el cual fue utilizado en la siguiente reacción sin más purificación.

Paso B A una solución de clorhidrato de amina 57b, N-Boc-ciciohexilglicina (5.95g, 21.8 mmoies), HOOBt (3.73g, 22.9 mmoles) y EDCl (5.0 g, 26.1 mmoles) en DMF anhidro (200 rml) y CH2CI2 (200 ml) a -20°C se agregó NMM (7.20 ml, 65.5 mmoies). Luego de ser agitada a esta temperatura durante 30 minutos, la mezcla de reacción fue mantenida en un congelador a lo largo de la noche (18 horas), luego de los cuales se le agregaron EtOAc (600 ml), sal muera (150 ml) y H3P04 al 5% (150 ml). La solución orgánica separada fue lavada con H3P04 (200 ml), solución acuosa de bicarbonato de sodio (2x200 ml), agua (200 mi), y salmuera (200 ml), secada sobre sulfato de magnesio, filtrada y concentrada al vacío con lo cual se obtuvo 57c (10.3g, cantidad 2 pasos) en la forma de un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 9.32 (s, 1 H), 8.35-9.32 (m, 1 H), 6.99 (d, J=8.3Hz, 1 H), 6.65-5.54 (m, 1 H), 4.92 (d, J=15.5Hz, 1 H), 4.50 (d, J=15.5Hz, 1H), 4.43-4.36 (m, 1 H), 4.29-4.19 (m, 1 H), 3.53 (s, 3H), 3.02-2.81 (m, 2H), 1.98-1.62 (m, 8H) , 1.42-1.11 (m, 14H); 13C RMN (100 MHz, d6-DMSO) d 171.6, 171.2, 162.3, 156.0, 133.7, 128.8, 125.3, 114.1, 112.6, 78.0, 54.8, 52.4, 51.9, 45.0, 29.5.18.1, 28.0, 25.9, 25.5; HRMS m/z 447.2492 [calculado para C24H34N206. 447.2495].

Paso C 57c 57d El Boc-amino metil éster 57c (7.20 g, 16.1 mmoles) fue disuelto en HCl 4 N (100 ml, 400 mmoles) y la solución resultante fue agitada a temperatura ambiente. El progreso de la reacción fue monitoreado por CLF.

Luego de cuatro horas, la solución fue concentrada al vacío y el residuo fue sometido al vacío a lo largo de la noche con lo cual se obtuvo 57d con la forma de un sólido blanco, el cual fue utilizado en la siguiente reacción de acoplamiento sin otra purificación.

Paso D 57d A una solución de clorhidrato de amina 57d (del Paso D). ácido 6- heptenóico (2.90 g, 22.6 moles), HOOBt (3.7 g, 22.7 mmoles) y CH2CI2 a -20°C se le agregó NMM (7.50 ml, 68.2 mmoles). Luego de ser agitada a esta temperatura durante 30 minutos, la mezcla de reacción fue mantenida en un congelador durante dos días. La misma fue seguidamente agitada al aire y se permitió que tome la temperatura ambiente en una hora. Se agregaron EtOAc (500 ml), salmuera (100 mi) y H3P04 al 5% (100 ml). La solución orgánica separada fue lavada con H3P04 al 5% (100 mi), solución acusa de bicarbonato de sodio suturado (2X150 ml), agua (150 ml) y salmuera (150 ml), secada sobre sulfato de magnesio, filtrada y concentrada al vacío. La cromatografía instantánea (5 a 30% EtOAc-CH2CI2) permitió obtener 57e (2.30 g, 5.04 mmoles, 31 % (dos pasos)) con la forma de un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 9.32 (s,1 H), 8.06-8.01 (m, 1 H), 7.00-6.96 (m, 1 H), 6.63-6.54 (m, 2H), 5.78-5.70 (m, 1H), 5.04-4.89 (m, 4H), 4.73-4.69 (m, 1H), 4.53 (d, J=15.5 Hz, 1 H), 3.54 (s, 3H), 3.01-2.91 (m, 2H), 2.15-1.93 (m, 4H), 1.76-0.97 (m, 15H); 13C RMN (100 MHz, d6-DMSO) d 172.0, 171.5, 171.1 , 156.0, 138.6, 134.0, 128.7, 122.5, 114.6, 114.1 , 112.5, 52.9, 52.2, 51.9, 45.0, 34.5, 32.8, 32.7, 29.4, 28.7, 28.1 , 27.7, 25.9, 25.5, 24.8; HRMS m/z 457.1 [calculado para 456.6].

Paso E 57e 57f A la solución de 57e (2.20 g, 4.82 mmoles) en THF anhidro (100 ml) bajo nitrógeno a 0°C se le agrega cautelosamente una solución de borano-THF (20 mi, 1.0 M, 20 mmoles). La solución resultante fue agitada a 0°C bajo hidrógeno durante 1 hora y 40 minutos. Seguidamente, se agregó etanol (10 ml) y un suavizador de pH 7 (15 ml), seguido por una solución de H202 al 30% (15 mi). Luego de ser agitada a 0°C durante 20 minutos, la solución fue calentada hasta llegar a temperatura ambiente, y fue agitada durante dos horas. Se agregaron EtOAc (400 ml) y salmuera, y las capas fueron separadas. La solución acuosa fue sometida a extracción con EtOAc (2X50 ml). La solución orgánica combinada fue secada con sulfato de magnesio, filtrada y concentrada al vacío. La cromatografía instantánea (MeOH-CH2CI2 del 3 al 5%) permitió obtener 57F (2.18 g, 4.47 mmoles, 93%) (2.18 g, 4.47 mmoles, 93%) en la forma de un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 9.32 (s, 1 H), 8.04-8.00 (m,1 H), 6.99-6.96 (m,1 H), 6.63-6.51 (m, 2H), 5.05-5.00 (m, 1 H), 4.73-4.21 (m, 3H), 4.51 (d, J=15.5 Hz,1H), 3.54 (s, 3H), 3.03-2.90 (m, 2H), 2.15-2.00 (m, 2H), 1.75-1.56 (m, 6H), 1.49-0.97 (m, 1 3H); 13C RMN (100 MHz, d6-DMSO) d 172.2, 171.6, 171.2, 156.0, 143.1, 128.7, 122.6, 114.2, 112.5, 60.7, 52.9, 52.3, 51.9, 45.1 , 34.8, 32.4, 29.5, 28.7, 28.53, 28.47, 28.10, 25.9, 25.6, 25.5, 25.4, 25.2; HRMS m/z 475.2812 [calculado para 475.2808].

Paso F 57f 57g Una solución de alcohol fenol 57f (2.08g, 4.38 mmoles) y ADDP (3.00 g, 11.9 mmoles) en CH2CI2 fue burbujeada con argón a través de un burbujeador de frita de vidrio durante 20 minutos. A esta solución a 0°C se le agregó trifenilfosfina (3.45g, 13.2 mmoles). Luego de la agitación a 0°C durante 20 minutos, la solución fue calentada hasta alcanzar la temperatura ambiente y fue agitada a lo largo de ia noche (18 horas) bajo nitrógeno. La CLF indicó la presencia de una cantidad substancial del material de partida. Un segundo lote de ADDP (3.00 g, 11.9 mmoles) y trifenilfosfina (3.45 g, 13.2 mmoles) fueron agregados, y la mezcla fue agitada bajo nitrógeno durante dos días y 16 horas. La CLF mostró el consumo total dei material de partida. Luego de la eliminación del solvente al vacío, el residuo fue parcialmente purificado por cromatografía instantánea (de 1 a 2% MeOH en CH2CI2) con lo cual se obtuvo una mezcla del macrociclo 57g y oxido de trifenilfosfina. El 57g macrocíclico fue hidrolizado para el ácido correspondiente sin mas purificación. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 8.00 (d, J= 10.0 Hz, 1 H), 7.17 (d, J= 8.2 HZ 1 H), 6.82-6.76 (m, 2H), 5.14 (d, J= 14.5 HZ 1H), 4.79-4.74 (m, 1H), 4.39 (dd, J=11.5, 6.4 Hz, 1H), 4.25 (d, J=14.7 Hz, 1H). 4.22-4.18 (m, 1H), 4.08-4.02 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.18 (dd, J=15.1 , 6.4 Hz, 1 H), 2.85 (dd, J=14.7, 11.5 Hz, 1H) , 2.07-2.04 (m, 2H), 1.81-1.40 (m, 10H), 1.32-0.85 (m, 9H); 13C RMN (100 MHz, d6-DMSO) d 171.9, 171.5, 170.2, 157.1 , 137.0, 131.5, 126.4, 115.9, 112.6, 66.5, 54.4, 52.2, 51.9, 46.8, 44.9, 44.4, 33.6, 29.4, 29.1 , 28.0, 27.3, 27.0, 26.0, 25.3, 25.2, 24.3, 24.2, 23.9; HRMS m/z 457.2707 [calculado para C26H36NA5. 457.2702].

Paso G 57g 57h Una solución acuosa de hidróxido de litio (0.21 g, 30 ml de H20, 8.75 mmoles) fue agregada a una solución a 0°C de éster metílico 57g (del paso 1 F) en THF (30 ml) y metano (30 ml). La mezcla fue agitada en un baño del hielo y fue calentada hasta alcanzar temperatura ambiente a lo largo de cuatro horas. El progreso de la reacción fue monitoreado por CLF. Luego de que los volátiles fueron eliminados al vacío, se agregó EtOAc (100 ml) y agua (30 ml), hígado capaz con o separadas. La solución acuosa fue sometida a extracción nuevamente con CH2CI2 (100 ml),luego del cual es fue acidificada hasta alcanzar pH=1. Seguidamente, se agregó EtOAc (150 ml) y la solución acuosa fue saturada con cloruro de sodio sólido. Luego de la separación de las capas, la capa acuosa fue sometida a extracción con EtOAc (2X100 mi). Las soluciones orgánicas fueron combinadas, secadas con sulfato de magnesio, filtradas y concentradas al vacío con lo cual se obtuvo 57h (1.23 g, 2.78 mmoles, 63% (dos pasos)) con la forma de un sólido blanco.

Paso H 57h 571 A una solución del ácido 57h (0.390 g, 0.991 mmoles), amina A (0.360 g, 0.898 mmoles), HOOBt (100 mg, 0.981 mmoles) y EDCl (210 mg, 1.10 mmoles) en DMF anhidro (50 ml) y CH2CI2 (30 mf) a -200° se le agregó NMM (0.40 mi, 3.64 mmoles). Luego de ser agitada a esta temperatura durante 30 minutos, la mezcla de reacción fue mantenida en un congelador durante 66 horas. Se agregaron EtOAc (200 ml), salmuera (50 ml) y H3P04 al 5% (50 mi). La solución orgánica separada fue lavada, sucesivamente, con H3P04 al 5% (80 ml), solución acusa de bicarbonato dé sodio suturado (2X80 mi), agua (80 mi) y salmuera (80 ml), secada sobre sulfato de magnesio, filtrada y concentrada al vacío. La cromatografía instantánea (2 a 5% MeOH- CH2CI2) permitió obtener 57i en forma de una mezcla de cuatro diastereómeros (0.340 g, 0.431 mmoles, 49%). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 8.56-8.46 (m, 1 H), 7.96-7.82 (m, 2 H), 7.40-7.25 (m, 6 H), 7.15-6.99 (m, 2 H), 6.81-6.74 (m, 2 H), 6.05-5.71 (m, 2 H), 5.11-5.02 (m, 1 H), 4.85-4.68 (m, 1H), 4.40-3.70 (m, 8 H), 3.14-3.02 (m, 1 H), 2.95-2.73 (m, 7 H), 2.06-2.05(m, 2H), 1.81-1.39 (m, 10 H), 1.30-1.05 (m, 11 H), 0.89-0.75 (m, 5 H), 13C RMN (100 MHz, d6-DMSO) d 172.24, 172.21 , 171.87, 171.81 , 171.78, 171.7, 170.8, 170.77, 170.74, 170.5, 170.4, 170.0, 169.97, 169.24, 169.22, 169.1 , 169.0, 168.0, 167.9, 167.82, 167.78, 157.2, 156.9, 137.61 , 137.57, 137.54, 137.47, 137.43, 137.38, 133.2, 132.2, 128.9, 128.44, 128.41 , 128.37, 128.0, 127.96.127.6.127.4, 127.3, 127.19, 127.16, 115.7, 115.6, 115.5, 112.8, 112.77, 112.7, 112.6, 73.6, 73.39, 73.37, 72.4, 71.7, 66.9, 66.7, 55.8, 55.6, 55.09, 55.07, 53.02, 52.95, 52.9, 52.6, 51.0, 50.96, 50.91 , 50.86, 50.76, 45.6, 45.5, 45.44, 45.36, 41.7, 41.6, 41.5, 41.4, 36.6, 36.55, 36.49, 35.3, 33.7, 33.6, 33.5, 33.0, 32.4, 30.7, 30.3, 30.1 , 30.0, 29.8, 29.48, 29.45, 29.41, 28.3, 28.2, 28.1 , 27.3, 27.2, 27.13, 27.09, 27.0, 26.9, 26.85, 26.82, 26.1, 25.4, 25.2, 24.1 , 24.08, 24.03, 24.0, 23.9, 23.8, 18.8, 18.7, 18.6, 18.4, 13.9, 13.8, 13.7; HRMS m/z 789.4560 [calculado para 789.4551 , error = 1 ppm].

Paso I S7B A la mezcla de hidroxi amida 57i (0.320 g, 0.406 mmoles) y reactivo Des-Martin (0.400 g, 0.943 mmoles) a 0°C se le agrego CH2CI2 anhidro (80 ml) La suspensión blanca resultante fue agitada vigorosamente a 0°C y calentada hasta alcanzar la temperatura ambiente junto con el baño de hielo en 4 horas Se agregaron solución saturada acuosa de bicarbonato de sodio y una solución de bisulfito de sodio (30 ml cada una) y la mezcla fue agitada vigorosamente durante 10 minutos antes de que las capas fueran separadas. La solución acusa fue sometida a extracción con CH2CI2 (2X80 mi). La solución orgánica combinada fue secada sobre sulfato de magnesio, filtrada y concentrada nacido. La cromatografía instantánea (2 a 5% MeOH-CH2C'2) permitió obtener dos estereoisómeros 57A (109 mg, 0.139 mmoles) y 57B (102 mg, 0.130 mmoles, 66% rendimiento combinado) en forma de sólidos blancos.

EJEMPLO 58 Preparación del Compuesto 58: Paso A 57h B 58a El producto deseado 58a fue preparado por medio del método del Ejemplo 1 , Paso J, con la excepción de la sustitución del clorhidrato de amina B por el A. Ha hidroxi amida 58a fue obtenida como una mezcla de diastereámeros inseparables en la forma de un sólido blanco con un rendimiento del 53%.

Paso B 58a 58 El compuesto deseado 58 fue preparado a partir de hidroxi amida de acuerdo con el Ejemplo 1 , Paso B. El mismo se obtuvo como una mezcla de diastereómeros inseparables en la forma de un sólido blanco con un rendimiento del 88%.

EJEMPLO 59 Preparación de los Compuestos de Fórmulas 59A y 59B 59A 59B Paso A 59B Una solución de t-butil éster 58 (18 mg, 0.022 mmoles) en ácido trifluoracético (2 mi) y CH2CI2 (2 mi) fue agitada a temperatura ambiente durante tres horas. Luego de que los volátiles fueron eliminados al vacío, el residuo fue disuelto en MeOR-CH2Cl2 al 50% (3 ml), y concentrado en seco al vacío con lo cual se obtuvo un sólido blanco. La cromatografía instantánea (8-15% MeOR, 0.3-0.5% AcOR en CHA2) permitió obtener dos estereoisómeros 59A (6.5 mg, 0.0086 mmoles) y 59B (6.1 mg, 0.008 mmoles, 75% rendimiento combinado) en forma de sólidos blancos. Información analítica para 59A: 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 8.75-8.72 (m, 1 H), 8.60-8.57 (m, 1 H), 8.10-8.08 (m, 1 H), 7.91-7.88 (m, 1 H), 7.38-7.27 (m, 5 H), 7.12 (d, J = 8.14 Hz, 1 H), 6.81-6.73 (m, 2 H), 5.24-5.22 (m, 1 H), 5.06-5.01 (m, 1 H), 4.774.73 (m, 1 H), 4.39-4.17 (m, 3 H), 4.074.01 (m, 1 H), 3.92-3.79 (m, 3 H), 3.15-3.05 (m, 1 H), 2.78-2.72 (m, 1 H), 2.08-2.05 (m, 1 H), 1.78-1.45 (m, 13 H), 1.41-1.22 (m, 4 H), 1 , 1 8-1.03 (m, 4 H), 0.93-0.81 (m, 5 H}; 13C RMN (100 MHz, d6-DMSO) d 196.6.171.8.171.5, 171.9, 170.3, 167.2, 161.0, 157.1 , 137.4, 128.4, 128, 1 , 127.7, 127.5, 127.4, 126.9, 115.6, 112.6, 66.8, 56.6, 55.1 , 53.4, 52.7, 52.6, 45.4, 41.6, 33.5, 31.7, 30.0, 29.6, 28.2, 27.2, 27.1 , 26.1, 25.42, 25.36, 24.0, 23.8, 18.7, 13.5; HRMS m/z 760.3915 [Calculado para C41H53NA9. 760.3922]; Datos analíticos para 59B: 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d 8.76-8.73 (m, 1 H), 8.55 (dd, J =6.9, 3.2 Hz, 1 H), 8.24 (d, J = 7.11 Hz, 1 H), 7.93-7.88 (m, 1 H), 7.37-7.25 (m, 1 H), 7.15-7.11 (m, 1 H), 6.82-6.74 (m, 2 H), 5.23-5.20 (m, 1 H), 5.09-5.01 (m, H), 4.75-4.71 (m, 1 H), 4.38 4.29 (m, 1 H), 4.244.17 (m, 2R), 4.07-4.02 (m, 1 H), 3.92-3.78 (m, 2H), 3.13-3.08 (m, 1 H), 2.78-2.70 (m, 1 H), 2.08-2.05 (m, 2 H), 1.75-1.13 (m, 21 H), 0.89-0.85 (m, 5H); 13C RMN (100 MHz, d6-DMSO) d 196.7, 171.6, 171.2, 169.9, 167.1 , 160.8, 157.0, 137.5, 128.3, 128.2, 128.0, 127.97, 127.9, 127.4, 127.3, 127.1 , 115.7, 115.6, 112.7, 112.6, 66.7, 56.8, 53.3, 45.5, 41.6, 33.6, 31.8, 29.5, 28.1 , 27.3, 27.0, 26.1, 25.4, 24.2, 8.6, 13.5; HRMS m/z 760.3915 [calculado para C41H53N509, 760.3922].

EJEMPLO 60 Preparación del Compuesto 60 Paso A Una solución de [CpRu(ácido ?d-clorofenilpropiónico)]PF6 (4.14 g moles) en DMF seco (20 ml) fue tratada con HOBt (1.69 g, 12.54 mmoles, 1.5 equiv.) y base de Hünig (6.47 gramos, 9.20 ml, 50.16 mmoles, 6.0 equiv.). La mezcla de reacción fue refrigerada hasta alcanzar los 0°C durante 30 minutos y se agregó la sal Tic-amonio 57d (2.90 g, 7.6 mmoles, 1.0 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 12 horas y el DMF fue destilado al vacío. El residuo fue diluido con HCl acuoso (1 , 100 ml) y fue sometido a extracción con NaHC03 acuoso (1x100 ml), salmuera (100 mi), secado (Na2S04), filtrado, concentrado al vacío con lo cual se obtuvo un sólido marrón 60a ei cual fue utilizado para la ciclización. MS (rociado de electrones). 647 [(M-CH3OH-PF6)+, 100] HMRS calculado, para ((M-CH3OR-PF6)+ 647.1256; Hallado 647.1241.

Paso B: 60a Una solución de complejo de rutenio 60a (5.0 g, 6.01 mmoles) en DMF (300 mi) fue desgasificada con N2 seco a temperatura ambiente y se agregó Cs2C03 (10.0 g, 30 mmoles, 5.0 equiv), y se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 24 horas. El solvente DMF fue destilado y el residuo fue diluido con agua (100 ml) y fue sometido a extracción con CH2CI2 (3X100 ml) y propionitrilo (3X100 mi). Las capas orgánicas combinadas fueron sometida a extracción con salmuera (100 mi), filtradas, concentradas ¡n vacuo y secadas al vacío a lo largo de anoche con lo cual se obtuvo un sólido marrón (5.1 g). El mismo de utilizado para ia eliminación fotolítica de Ru sin otra purificación. MS. (Rociado de electrones): 643 [(M-PF6)+, 100]. El compuesto ciclizado del paso anterior fue disueito en CH3CN y fue filtrado en un tubo de cuarzo. La solución fue desgasificada y fotolizada en un instrumento Raynot (?=350 mm) durante 48 horas. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el recibo fue purificada por cromatografía (Si02, EtOAc/Hexanos 3:2) con lo cual se obtuvo un sólido de color bronceado 60b (289 mg, 20%). Rf: 0.73 (acetona/hexanos 3:7) 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 7.18 (d, 2 H, J=8.1 Hz), 7.20-7.09 (m, 2 H), 6.92 (d, 2 H, J = 7.8 Hz), 6.86 (dd, 1 H, J=2.1 , 7.2 Hz), 6.76 (s, 1 H), 5.43 (d, 1 H, J=17.4 Hz), 4.23-4.18 A2H), 4.00 (s ancho, 1 H), 3.68 (s, 3 H), 3.41 (dd, 1 H J=12, 3.9 Hz), 3.01-2.86 (m, 1 H), 1.9-1.62 (m, 4 H), 1.52 (bd, 1 H, J=9.3 Hz), 1.36-1.07 (m, 5 H); 13C RMN (CDCI3, 100 MHz, d) 173.2, 167.2, 163.8, 156.5, 155.1 , 135.8, 132.7, 130.2, 129.6, 126.2, 119.1 , 117.5, 115.8, 60.2, 55.5, 51.6, 44.2, 42.0, 35.7, 30.2, 29.3, 26.5, 26.2, 25.8, 25.7 MS: (rociado de electrones): 477 [(M+1)\ 100], 315 (20); ' HRMS calculado para C28H32N205(M+1)+: 477.2389; Hallado 477.2375; CHN calculado para Ca^NaOs 0.5 H20: C 69.26% H 6.85% N 5.77%; Hallado C 69.62% H 6.59% N 5.77%.

Paso C Una solución de éster metílico 60b (235 mg, 0.5 mmoles) de Tic-macrociclo en dioxano (10.0 ml), H20 (10.0 ml), CH3OH (50.0 ml) fue tratada con LiOH-HA (41 mg, 1.0 mmoles, 2.0 equiv.) y fue agitada a temperatura ambiente durante tres horas. La mezcla de reacción fue acidificada y (HCl 4 M en Dioxano). La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el resto de agua fue congelado y liofilizado con lo cual se obtuvo un sólido incoloro 60c utilizado para el acoplamiento.

Paso D 60c Una solución del ácido hidrolizado 60c (0.5 mmoles) en DMF seco (5.0 ml) y CH2CI2 (5.0 ml) fue tratada con HOOBt (132 mg, 0.75 mmoles, 1.5 equiv.) y fue enfriada hasta los 0°C, y se agregó base de Hünig (258 mg, 2.0 mmoles, 4.0 equiv., 139 µl). A esta mezcla se le agregó secuencialmente EDCl (143 mg, 0.75 mmoles, 1.5 equiv) y clorhidrato de amina B (214 mg, 0.5 mmoles, 1.0 equiv). La mezcla de reacción fue almacenada en un congelador durante 48 horas y fue concentrada al vacío para eliminar el DMF y el CH2CI2. El residuo fue diluido con HCl acuoso. (2M, 50 mi) y fue sometido a extracción con CH2CI2 (3X30 mi). La capa orgánica combinada fue sometida a extracción con HCl acuoso. (1 M, 2x50 ml), NaOH acuoso. (2M 2X30), salmuera, secada (Na2S04) y concentrada al vacío. El residuo 60d (172 mg) fue oxidado sin otra purificación; MS: (rociado de electrones): 838 [(M+1)+, 50], 490 (100); HRMS cale, para C47H60N5Og (M+1 )+: 838:4391 ; Encontrado 838.4398.

Paso E Una solución de alcohol 60d (171 mg, 0.20 mmoles) en CH2CI2 (6.0 mi) fue tratada con el reactivo Dess-Martin (175 mg, 0.41 mmoles, 2.0 equív.). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 4 horas, y fue diluida con NaHC03 acuoso y Na2S2?3 acuoso. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 20 minutos y la mezcla de reacción fue sometida a extracción con CH2CI2 (3X30 ml). Las capas orgánicas combinadas con sometida a extracción con Na2C03, secadas (Na2S04), filtrados y concentradas al vacío, y el residuo fue purificado por cromatografía (Si02, CH3OH (NH3 2M)/CH2CI2 1 :20) con lo cual se obtuvo cetoamida 60 (56 mg, 32%) en forma de un sólido incoloro. MS (rociado de electrones, m/z intensidad relativa); ([M+1]+, 90), 490 (100), HRMS calculado para C47H58N509 (M+1)+ 836.4235; Hallado 836.4269.

EJEMPLO 61 Preparación del Compuesto 61 Paso A Una solución de éster ter-butílico 60 (50 mg, 0.059 mmoles) en CH2CI2 seco (10.0 ml) fue trataba con TFA (10.0 mi) y fue agitada a temperatura ambiente durante 4 horas, la desaparición del éster a la base fue seguida por CLF (CH3OH/CH2CI2, 1 :19). La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo fue disuelto repetidamente en heptanos/CH2CI2 y f e concentrada al vacío con lo cual se obtuvo un sólido incoloro fino 61 (51 mg) el cual fue secado al vacío. MS (FAB) 780 [(M+1)+, 85], 516 (20), 417 (20), 403 (100), 321 (20), 248 (40), 236 (40), HMRS calculado, para C43H50N5O9 (M+1)+: 780.3609; Hallado 780.3618.

EJEMPLO 62 Preparación del Compuesto 62 Paso A Una solución del ácido 61 (30 mg, 0.038 mmoles), clorhidrato de dimetilamina (6.2 mg, 0.076 mmoles, 2.0 equív.) en CH2Cl2 (10 ml) fue tratada con base de Hünig (9.1 mg, 0.076 mmoles, 2.0 equiv. 15 µl), PyBrOP (35 mg, 0.076 mmoles, 2.0 equiv.) y fue agitada a temperatura ambiente durante 24 horas. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y fue purifícada por cromatografía (Si02, acetona/Hexanos 1 :1). MS (FAB) 807 [(M+1)S 100], 805 (60), 794 (60), 747 (40), 629 (40), 589 (62).

EJEMPLO 63 Preparación del Compuesto63 Paso A Una solución de [CpRu(ácido ?6-clorofeniiopentanóico)]PF6 (2.2 g, 4.0 mmoles) en DMF seco (10 ml) fue tratado con HOBt (810 mg, 5.99 mmoles, 1.5 equiv.) y base de Hünig (2.58 g, 3.6 ml, 19.9 mmoles, 5.0 equiv.).

La mezcla de reacción fue enfriada hasta alcanzar los 0°C y fue tratada con EDCl (1.14 g, 6.0 mmoies, 1.5 equiv). La mezcla de reacción que agitada a 0°C durante 30 minutos, y se agregó la sal Tic-amonio 57d (1.60 g, 4.0 mmoles, 1.0 equiv.). La mezcla la reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 12 y el DMF fue destinada al vacío. El residuo fue diluido con HCl acuoso (1 M, 100 ml) y fue sometido a extracción en CH2CI2 (3X100 mi). Las capas orgánicas combinadas fueron sometida a extracción con NaHC03 (1X40 ml), salmuera (100 ml), secadas (Na2S04), filtradas, concentradas al vacío, para obtener un sólido marrón 63a (2.41 g, 75%), el cual se utilizado para la ciclización.

Paso B Una solución de complejo de rutenio 63a (2.40 g, 2.8 mmoles) en DMF seco (250 mi) fue desgasificada con N2 seco a temperatura ambiente y se agregó Cs2C03 (4.6 g, 14 mmoles, 5.0 equiv), y se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 14 horas. El solvente DMF fue destilado y el residuo fue diluido con agua (100 ml) y fue sometido a extracción con CH2CI2 (3X100 mi) y propionitrilo (3X100 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron sometida a extracción con HCl acuoso. (1 M, 100 ml), NaHC03 (100 ml), salmuera (100 ml), secadas (Na2S04, filtradas, concentradas in vacuo y secadas al vacío a lo largo de anoche con lo cual se obtuvo un sólido marrón (1.9 g, 79%). El mismo de utilizado para la eliminación fotolítica de Ru sin otra purificación. MS: (Rociado de electrones): 671 [(M-PF6)+, 40]. El compuesto ciclizado del paso anterior fue disuelto en CH3CN (60 ml) y fue filtrado en un tubo de cuarzo. La solución fue desgasificada y fotolizada en un instrumento Raynot (?=350 mm) durante 48 horas. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo fue purifícado por cromatografía (Si02, acetona/Hexanos. 3:7) con lo cual se obtuvo un sólido de color bronceado 63b (140 mg, 13%) Rf: 0.73 (acetona/hexanos 3:7) MAS: (FAB): 505 [(M+1)+, 80], 232 (40); HRMS calculado para CH37N205 (M+1)+; 505.2702: Hallado 505.2698.

Paso C 63b 63c Una solución de éster metílico 63b (235 mg, 0.5 mmoles) de Tic-macrociclo en dioxano (10.0 ml), H20 (10.0 ml), CH3OH (50.0 ml) fue tratada con LiOH H20 (41 mg, 1.0 mmoles, 2.0 equiv.) y fue agitada a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción fue acidificada y (HCl 4 M en dioxano). La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el resto de agua fue congelado y liofilizado con lo cual se obtuvo un sólido incoloro 63c utilizado para el acoplamiento.

Paso D Una solución del ácido hidrolizado 63c (100 mg, 0.21 mmoles) en DMF seco (4.0 ml) y CH2CI2 (2.0 ml) fue enfriada hasta los 0°C y tratada con HOOBt (53 mg, 0.32 mmoles, 1.5 equiv.), base de Hünigs (122 mg, 0.95 mmoles, 4.5 equiv, 175 µl), EDCO (61.0 mg, 0.32 mmoles, 1.5 equiv.) y fue agitada durante 0.5 h y fue tratada con el clorhidrato A (100 mg, 0.25 mmoles, 1 equív.) La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 16 horas y fue concentrada al vacío para eliminar el DMF y el CH2CI2. El residuo fue diluido con HCl acuoso (2M, 50 ml) y fue sometido a extracción mediante CH2CI2 (3X50 ml). La capa orgánica combinada fue sometida a extracción con HCl acuoso (1 M, 100 ml), NaOH acuoso (2M 100), salmuera, secada (Na2S04) y concentrada al vacío. El residuo 63d (72 mg) fue oxidado sin otra purificación.

Paso E Una solución de alcohol 63d (72mg, 0.86 µmol) en CH2CI2 (5.0 mi) fue tratada con el reactivo Dess-Martin (125mg, 0.28 mmoles, 3.2 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 3h y fue concentrada al vacío, y el residuo fue purificado por cromatografía (Si 02, CH3OH/CHA'2 1 :19) con lo cual se obtuvo cetoamido 63 (11 mg, 15%) de un sólido incoloro; MS (FAB) 835 ([M+1]+, 90), 490 (100).

EJEMPLO 64 Preparación del Compuesto 64 Paso A If 64a El producto deseado 64a fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 1 , Paso E. El material fue purifícado por cromatografía de columna instantánea utilizándose EtQAcIHex (7:3) con lo cual se obtuvo 64a en un 80%.; H RMN (CDCI3, d): 7.35-7.29 (m, 5 H), 7.02 (d, 2H, J=8.4 Hz) 6.72 (d, 2 H, J= 6.9 Hz), 6.01 (d, 1 H), 4.60 (t, 1 H), 4.52 (s, 1 H), 3.8-3.61 (m, 2 H), 3.72 (s, 3 H), 3.54-3.51 (m, 4 H), 2.83 (t, 2 H, J=7.5 Hz), 2.39 (t, 2 H, J= 8.1 Hz) 2.41-2.20 (m, 1 H), 2.05-1.83 (m, 1 H), 1.85-1.58 (m, 8 H), 1.26-1.24 (m, 5 H); 13C RMN (CDCI3, d): 172.2, 171.9, 171.0, 154.4, 138.3, 132.2, 129.4, 128.4, 127.7, 127.6, 115.4, 73.0, 66.9, 66.2, 57.9, 54.9, 52.5, 52.3, 41.0, 38.5, 34.7, 30.8, 30.0, 29.4, 27.9, 26.1 , 26.0, 25.9.

Paso B 64a El producto deseado 64b fue obtenido por medio del procedimiento que se describe para el Ejemplo 1 , Paso G. El producto obtenido nuevo del filtrado de catalizador fue lo suficientemente puro para el siguiente paso.

Paso C El producto deseado 64c fue obtenido por medio del procedimiento que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso H. La mezcla de reacción cruda fue purificada por cromatografía por gel Si02 (acetona/Hexanos 3;7) con lo cual se obtuvo 64c (64 mg, 16%) en forma de un sólido incoloro. 13C RMN (CDCI3) 172.1 , 171.1 , 171.0, 157.7, 131.0, 129.9, 114.3, 78.1, 64.7, 63.3, 58.7, 55.3, 52.2, 52.0, 42.1 , 37.9, 36.1 , 30.8, 30.7, 29.7, 28.7, 28.5, 26.2, 26.0; MS (FAB) (M + 1)+; (100), 327 (20).

Paso D 64c 64d El ácido fue sintetizado como se describe para el Ejemplo 1 , Paso I con un rendimiento cuantitativo. La mezcla cruda luego de la evaporación fue utilizada directamente en el siguiente paso.

Paso E El producto esperado 64e fue sintetizado como se describe anteriormente para el Ejemplo 1 Paso J. Ei material acoplado fue utilizado directamente el siguiente paso para sintetizar 64 Paso F El producto deseado es obtenido por medio del protocolo de oxidación que ha sido descrito anteriormente para el Ejemplo 1 , Paso K.

EJEMPLO 65 Preparación del Compuesto 65 La síntesis del Ejemplo 65 fue idéntica a la síntesis del Ejemplo 14, con la excepción de que la síntesis fue iniciada con ácido 3-vinilbenzóico La reducción de la parte fenilo fue similar a la del Ejemplo 14, Paso C. Sin embargo, se obtuvo una mezcla de diástereómeros.

EJEMPLO 66 Preparación de los Compuestos de Fórmulas 66A y 66B Las secuencias sintéticas para el Ejemplo 66 siguieron las que se describieron para el Ejemplo 54 utilizando materiales de partida apropiados con modificaciones apropiadas. Los isómeros 66A y 66B fueron separados luego de la oxidación utilizando cromatografía de columna. Datos LCMS: 818.2 (M+H)+ (para 66A y 66B).

EJEMPLO 67 Preparación de los Compuestos de Fórmulas 67A y 67B Las secuencias sintéticas para el Ejemplo 67 siguieron las que se describieron para el Ejemplo 54 utilizando materiales de partida apropiados con modificaciones apropiadas. Los isómeros 67A y 67B fueron separados luego de la oxidación utilizando cromatografía de columna. HRMS (FAB) Calculado para C^H^ 846.4766 (M+H)+, Hallado 846.4782 (para 67A) y 846.4774 (para 67B).

EJEMPLO 68 Preparación del Compuesto de Fórmula 68 ' Las secuencias sintéticas para el Ejemplo 68 siguieron las que se describieron para el Ejemplo 30 utilizando materiales de partida apropiados con modificaciones apropiadas. Luego de la oxidación, el producto deseado 68 fue obtenido en forma de una mezcla de isómeros utilizando cromatografía de columna. HRMS (FAB) calculado para C47H59N609: 851.433 {M+H)+ hallado 851.4149.

EJEMPLO 69 Preparación de ios Compuestos de Fórmulas 69A y 69B Las secuencias sintéticas para el Ejemplo 69 siguieron las que describieron para el Ejemplo 1 utilizando materiales de partida apropiados n modificaciones apropiadas. Luego de la oxidación, ios isómeros 69A y B fueron separados utilizando cromatpgrafía de columna. Datos LCMS: 9.2 (M+H)+ (para 69A y 69B).

EJEMPLO 70 Preparación de los Compuestos de Fórmulas 70a y 70b Las secuencias sintéticas para el Ejemplo 70 siguieron las que se describieron para el Ejemplo 4 utilizando materiales de partida apropiados con modificaciones apropiadas. Luego de la oxidación, los isómeros 70A y 7DB fueron separados utilizando cromatografía de columna. Datos LCMS: 843.2 (M+H)+ (para 70A y 70B).

EJEMPLO 71 Preparación del Compuesto de Fórmula 71 Las secuencias sintéticas para el Ejemplo 71 siguieron las que se describieron para el Ejemplo 5 utilizando materiales de partida apropiados con modificaciones apropiadas. Luego de la oxidación, el producto deseado 71 fue obtenido en forma de una mezcla de isómeros utilizando cromatografía de columna. Datos LCMS: 818.2 (M+H)+.

EJEMPLO 72 Preparación del Compuesto de Fórmula 72 Las secuencias sintéticas para el Ejemplo 72 siguieron las que se describieron para el Ejemplo 6 utilizando materiales de partida apropiados con modificaciones apropiadas. Luego de la oxidación el producto deseado 72 fue obtenido en forma de una mezcla de Isómeros utilizando cromatografía de columna. Datos LCMS, 762.2 (M+H)+.

EJEMPLO 73 Preparación del Compuesto de Fórmula 73 Las secuencias sintéticas para el Ejemplo 73 siguieron las que se describieron para el Ejemplo 10 utilizando materiales de partida apropiados con modificaciones apropiadas. Luego de la oxidación, el producto deseado 73 fue obtenido en forma de una mezcla de isómeros utilizando cromatografía de columna. Datos LCMS: 659.2 (M+H)S EJEMPLO 74 Preparación de los Compuestos 74A y 74B 74B Los compuestos deseados 74A y 74B fueron preparados por el mismo método que se describe en la preparación de los compuestos 1A y 1B en el Ejemplo 1 , con la excepción de que se utilizó ácido 5-metiI-3-hidroxi para sustituir ei ácido 3-hidroxi fenilacético en el Paso F. LRMS (M+H)+ m/z 803.1 [calculado para C43H58N6?9, 802.4].

EJEMPLO 75 Preparación de los Compuestos 75A y 75B 75A 75B Los compuestos deseados 75A y 75B fueron preparados por el mismo método que se describe en la preparación de los compuestos 1A y 1 B en el Ejemplo 1 , con la excepción de que se utilizó ácido 4-metil-3-hidroxi fenilacético para sustituir el ácido 3-hidroxi-fenilacético en el Paso F. LRMS (M+H)+ m/z 803.1 [calculado para 802.4].

EJEMPLO 76 Preparación del Compuesto 76 El compuesto deseado 76 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación de los compuestos 27A y 27B en el Ejemplo 27, con excepción de que la amina E fue utilizada para sustituir a la amina A en el Paso J LRMS (M+H)+ m/z 831.1 [calculado para 830.41].

EJEMPLO 77 Preparación del Compuesto 77 77 El compuesto deseado 77 fue preparado por el mismo método que se describe para ia preparación de los compuestos 27A y 27B en el Ejemplo 27, con excepción de que se utilizó un compuesto intermedio amina diferente para sustituir a la amina A en el Paso J. LRMS (M+H)+ m/z 761.1 [calculado para C41H52N4O?o. 760.4].

EJEMPLO 78 Preparación del Compuesto 78 78 El compuesto deseado 78 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación de los compuestos 27A y 27B en el Ejemplo 27, con excepción de que se utilizó un compuesto intermedio amina diferente para sustituir a la amina A en el Paso J LRMS (M+H)+ m/z 653.1 [calculado para 652.4].

EJEMPLO 79 Preparación del Compuesto 79 79 El compuesto deseado 79 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 30 en el Ejemplo 30, con excepción de que se utilizó un compuesto intermedio amina diferente para sustituir a la amina A en el Paso I. LRMS (M+H)+ m/z 7461 [calculado para C41 H55N508, 745.4].

EJEMPLO 80 Preparación del Compuesto 80 80 El compuesto deseado 80 fue preparado por el mismo método que se describe para fa preparación dei compuesto 30 en el Ejemplo 30 con excepción de que se utilizó una amina D para sustituir a la amina A en el Paso LRMS (M+H)+ m/z 746.1 [calculado para C41H55N508, 745.5].

EJEMPLO 81 Preparación del Compuesto 81 81 El compuesto deseado 81 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto intermedio A, Paso 5. LRMS (M+H)+ m/z 6571 [calculado para 656.3].

EJEMPLO 82 Preparación del Compuesto 82 82 El compuesto deseado 82 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 30, en el ejempio 30, con la excepción de que se utilizó una amina diferente para sustituir a la amina A en e! Paso I. LRMS (M+H)+ m/z 639.1 [calculado para CggHgoN ,., 638.4].

EJEMPLO 83 Preparación del Compuesto 83 S3 El compuesto deseado 83 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 30, en el ejemplo 30, con la excepción de que se utilizó la amina E para sustituir a la amina A en el Paso I. LRMS (M+H)+ m/z 831.1 [calculado para 830.5].

EJEMPLO 84 Preparación del Compuesto 84 84 El compuesto deseado 84 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 30, en el ejemplo 30, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A en el Paso I LRMS (M+H)+ m/z 653.1 [calculado para 652.4].

EJEMPLO 85 Preparación del Compuesto 85 85 El compuesto deseado 85 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 30, en el ejemplo 30, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A en el Paso I, y que la oxidación fue llevada a cabo de acuerdo con el procedimiento de del Ejemplo 10, Paso J. LRMS (M+H)+ m/z 613.1 [calculado para 612.4].

EJEMPLO 86 Preparación del Compuesto 86 85 El compuesto deseado 86 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 30, en el ejemplo 30, con la excepción de que se utilizó una amina apropiado para sustituir a ia amina A en el Paso I. LRMS (M+H)+ m/z 651.1 [calculado para C36H50N4O7, 650.4].

EJEMPLO 87 Preparación del Compuesto 87 87 El compuesto deseado 87 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 30, en el ejemplo 30, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A en el Paso I, y que la oxidación fue llevada a cabo de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 10, Paso J. LRMS (M+H)+ m/z 611.1 [calculado para C33H46N4?7. 610.3].

EJEMPLO 88 Preparación del Compuesto 88 88 El compuesto deseado 88 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 30, en el ejemplo 30, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A en el Paso I, y que la oxidación fue llevada a cabo de acuerdo con el procedimiento de del Ejemplo 10, Paso J. LPMS (M+H)+ m/z 611.1 [calculado para 610.3].

EJEMPLO 89 Preparación del Compuesto 89 89 El compuesto deseado 89 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 30, en el ejemplo 30, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A en el Paso I. LRMS (M+H)+ m/z 637.1 [calculado para C^H^N ?-. 636.4].

EJEMPLO 90 Preparación del Compuesto 90 90 El compuesto deseado 90 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 30, en el ejemplo 30, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A en el Paso I. LRMS (M+H)+ m/z 725.1 [calculado para C3gH56N409, 724.4].

EJEMPLO 91 Preparación del Compuesto 91 91 El compuesto deseado 91 fue preparado por el mismo método que se describe para ia preparación del compuesto 30, en el ejemplo 30, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A en el Paso I LRMS (M+H)+ m/z 727.1 [calculado para C3gH58N409, 726.4].

EJEMPLO 92 Preparación del Compuesto 92 92 El compuesto deseado 92 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 30, en el ejemplo 30, con la excepción de que se utilizó Boc-ter-butilglicina para sustituir a la Boc-cíclohexilglicina en el Paso C. LRMS (M+H)+ m/z 791.1 [calculado para C42H58N6Og, 790.4].

EJEMPLO 93 Preparación del Compuesto 93 93 El compuesto deseado 93 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 92, en el ejemplo 92, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A en el Paso 1. LRMS (M+H)+ m/z 613.1 [calculado para 612.4].

EJEMPLO 94 Preparación del Compuesto 94 94 El compuesto deseado 94 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 92, en el ejemplo 92, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A, y que la oxidación fue llevada a cabo de acuerdo con el procedimiento en el Ejemplo 10, Paso J. LRMS (M+H)+ m/z 573.1 [calculado para 572.3].

EJEMPLO 95 Preparación del Compuesto 95 95 El compuesto deseado 95 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 92, en el ejemplo 92, con la excepción de que se utilizó Boc-valina para sustituir a la Boc-cíclohexiiglicina en el Paso C. LRMS (M+H)+ m/z 777.1 [calculado para C41H56N609, 776.4].

EJEMPLO 96 Preparación del Compuesto 96 96 El compuesto deseado 96 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 95, en el ejemplo 95, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A. LRMS (M+H)+ m/z 599.1 [calculado para C^ ^Or, 598.3].

EJEMPLO 97 Preparación del Compuesto 97 97 El compuesto deseado 97 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 95, en el ejemplo 95, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A, y ia oxidación fue llevada a cabo de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 10, Paso J. LRMS (M+H)+ m/z 559.1 [calculado para C29H42N4O7, 558.3].

EJEMPLO 98 Preparación del Compuesto 98 98 El compuesto deseado 98 fue preparado por el mismo método que se describe para ia preparación del compuesto 30, en el ejempio 30, con la excepción de que se utilizó Boc-fenllglicina para sustituir a la Boc-ciclohexilgiicina en el Paso O LRMS (M+H)+ m/z 811.1 [calculado para C^H^N Ao. 810.4].

EJEMPLO 99 Preparación del Compuesto 99 99 El compuesto deseado 99 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 98, en el ejemplo 98, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A LRMS (M+H)+ m/z 633.1 [calculado para C35H44N 7. 632.3].

EJEMPLO 100 Preparación del Compuesto 100 100 El compuesto deseado 100 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 98, en el ejemplo 98, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a ia amina A, y la oxidación fue llevada a cabo de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 10, Paso J. LRMS (M+H)+ m/z 593.1 [calculado para C35H40N4O7, 592.3].

EJEMPLO 101 Preparación del Compuesto 101 101 El compuesto deseado 98 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 30, en el ejemplo 30 con la excepción de que se utilizó Boc-isoleucina para sustituir a la Boc-ciclohexílglicina en el Paso C. LRMS (M+H)+ m/z 791.1 [calculado para C42H56N609 790.4].

EJEMPLO 102 Preparación dei Compuesto 102 102 El compuesto deseado 102 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 101 , en el ejemplo 101 con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A LRMS (M+H)+ m/z 613.1 [calculado para C^H^N ? 612.3].

EJEMPLO 103 Preparación del Compuesto 103 103 El compuesto deseado 103 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 101 , en el ejemplo 10, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A5 y la oxidación fue llevada a cabo de acuerdo con ei procedimiento del Ejemplo 10, Paso J. LRMS (M+H)+ m/z 573.1 [calculado para 572.3].

EJEMPLO 104 Preparación del Compuesto 104 104 El compuesto deseado 104 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 30, en el ejemplo 30, con la excepción de que se utilizó Boc-ciclopentiglicina para sustituir a ia Boc-ciclohexilglicina en el Paso C, y una amina apropiada fue utilizada para sustituir a ia amina A en el Paso I LRMS (M+H)+ m/z 625.1 [calculado para 624.4].

EJEMPLO 105 Preparación del Compuesto 105 El compuesto deseado 105 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 104, en el ejemplo 104, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A, y la oxidación fue llevada a cabo de acuerdo con ei procedimiento del Ejemplo 10, Paso J. LRMS (M+H)+ m/z 585.1 [calculado para C31H42H407, 584.3].

EJEMPLO 106 Preparación del Compuesto 106 06 El compuesto deseado 106 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 30, en el ejemplo 30, con las siguientes excepciones: (a) se utilizó S-benziloxi-2-metil-penteno para sustituir el 4-benziloxi-2-metil-buteno en el Paso A; (b) una amina apropiada fue utilizada para sustituir a la amina A en el Paso I. LRMS (M+H)+ m/z 653.1 [calculado para C36H52NA7, 652.4].

EJEMPLO 107 Preparación del Compuesto 107 107 El compuesto deseado 107 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 106, en el ejemplo 106, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A, y la oxidación fue llevada a cabo de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 10, Paso J LRMS (M+H)+ m/z 613.1 [calculado para 612.4].

EJEMPLO 108 Preparación del Compuesto 108 108 El compuesto deseado 108 fue preparado por el mismo método que se describe para la preparación del compuesto 106, en el ejemplo 106, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para sustituir a la amina A. LRMS (M+H)+ m/z 665.1 [calculado para C37H52N407, 664.3].

EJEMPLO 109 Preparación del Compuesto 109 109 El compuesto deseado 109 fue preparado con el mismo método como el descrito en la preparación del compuesto 106 Ejemplo 106, con la excepción de que se utilizó una amina apropiada para substituir la amina A en eí Paso I, y que se realizó la oxidación de acuerdo al procedimiento en el Ejemplo 10, Paso J. LRMS (M+H)+ m/z) 625.1 [calculado para C^H^N -,, 624.4].

EJEMPLO 110 Preparación del Compuesto 110 110 El compuesto deseado 110 fue preparado con el mismo método como el descrito en la preparación de los compuestos 1A y 1B Ejemplo 1 con ia excepción de que se utilizó Boc-3-hidroxiprolina para substituir la prolina 1A en el Paso A, y que se utilizó Boc-ter-bulilglicina para sustituir a la Boc-ciclohexilglicina en el Paso D LRMS (M+H)+ m/z) 763.1 [calculado para 762.4].

EJEMPLO 111 Preparación del Compuesto 111 111 El compuesto deseado 110 fue preparado con el mismo método como el descrito en la preparación de los compuestos 4A y 4B, Ejemplo 4 con la excepción de que se utilizó Boc-3-hidroxiprolina para substituir la prolina la en el Paso A, y que se utilizó Boc-ter-butilglicina para sustituir a ia Boc-ciclohexilglicina en el Paso D LRMS (M+H)+ m/z) 777.1 [calculado para C41H56N609, 776.4].

Ensavo de la Actividad Inhibidora sobre la Proteasa VHC Ensavo Espectrofotométrico Se han realizado ensayos espectrofotométricos para la proteasa serina VHC en los compuestos de la ¡nvención siguiendo ei procedimiento descrito por R. Zhang y otros, Analytical Biochemistrv, 270 (1999) 268-2757 cuya revelación se ha incorporado en la presente a modo de referencia. El ensayo basado en la proteóiisis de substratos esteres cromógenos es apropiado para el monitoreo continuo de la actividad de la proteasa VHC NS3. Los substratos fueron derivados desde el lado P de la secuencia de unión NS5A - NS5B (Ac-DTEDWX(Nva), donde X = A o P) cuyos grupos carboxilos C - terminales fueron esterificados con uno de cuatro diferentes alcoholes cromóforos (3- ó 4-nitrofenol, 7-hidroxi-4-metil-cumarina, ó 4- fenilazofenol). A continuación se presentan la síntesis, caracterización y aplicación de éstos novedosos substratos esteres espectrofotométricos para un filtrado de alto rendimiento total y una evaluación cinética detallada de los inhibidores de proteasa VHC N53.

Materiales v métodos: Materiales: Los reactivos químicos para tampones relacionados con los ensayos fueron provistos por Sigma Chemical Company (St. Louis, Missouri). Los reactivos para la síntesis de péptidos fueron provistos por Aldrich Chemicals, Novabiochem (San Diego, California), Applied Biosystems (Foster City, California) y Perseptive Biosystems (Framingham, Massachusetts). Los péptidos fueron sintetizados manualmente o en un sintetizador automatizado ABl modelo 431A (de Applied Biosystems). El espectrómetro UV 1 VIS modelo LAMBDA 12 era de Perkin Elmer (Norwalk, Connecticut) y las placas UV 96-fuente fueron provistas por Corning (Corning, New York). El bloque de precalentado fue de USA Sclentific (Ocala, Florida) y la placa agitadora 96-fuente fue de Labilne Instruments (Melrose Park, Illinois). Un lector de placa de microtituiación Spectramax Plus con monocrómetro fue provisto por Molecular Devices (Sunnyvale, California).

Preparación de la Enzima La proteasa recombinante heterodimérica VHC N53 / NS4A (filtrado la) fue preparada utilizando procedimientos previamente publicados (D.L. Sai y otros, Biochemistry, 37 (1998) 3392 - 3401). Las concentraciones I de la proteína fueron determinadas mediante el método de tintura Biorad usándose normales de proteasa recombinante VHC cuantificados previamente mediante análisis de aminoácidos. Antes del inicio de los ensayos el tampón de almacenamiento de las enzimas (50 mM de fosfato de sodio pH 8.0, NaCI 300 mM, glicerol ai 10%, lauril maltosa al 0.05 % y DTT 10 mM) fue cambiado por la solución reguladora de ensayo (25 mM de MOPS pH 6.5, 300 mM de NaCI, 10% de glicerol, iauril maltosa al 0.05 %, 5 µM de EDTA y 5 µM de DTT) utilizando una columna preempacada Biorad Bio-Spin P-6.

Síntesis v Purificación del Substrato :La síntesis de los substratos fue realizada y reportada por R. Zhang y otros, (ibid.) y fue iniciada anclando Emoc-Na-OH a resma de cloruro 2-cIorotritilo, para lo cual se utilizó un protocolo normal (K. Barios y otros, int. J Pept. Protein Pes., 37 (1991), 513 - 520). Los péptidos fueron subsecuentemente ensamblados, usando química Fmoc, de forma tanto manual como con un sintetizador de péptidos automático ABl modelo 431. Los fragmentos N-acetliados y totalmente protegidos fueron separados de la resma tanto mediante ácido acético (HOAc) como trifluoretanol (TE E) al 10% en diclorometano (DCM) durante 30 minutos, o por ácido trifluoracético (TEA) al 2% en DCM durante 10 minutos. El filtrado combinado y ei lavado DCM fueron evaporados de forma azeotrópica (o fue sometido a extracción de forma repetida mediante una solución acuosa de Na2C03) para remover el ácido usado en la división. La fase DCM fue secada con Na2S04 y luego evaporada. Los substratos esteres fueron ensamblados usando procedimientos estándar de acopiamiento de ácido - alcohol (k. Holmber y otros, Acta Chem. Scand., B33_(1979) 410 -412. Los fragmentos de péptidos fueron disueltos en piridina anhidra (30 - 60 mg/ml) a la cual se le agregaron 10 equivalentes molar de cromóforo y una cantidad catalítica (0.1 eq.) de ácido para-toluensulfónico (pTSA). Se agregó diciciohexilcarbodiimida (DCC, 3 eq.) para iniciar las reacciones de acoplamiento. La formación del producto fue monitoreada por CLAR y se encontró completa siguiendo la reacción de 12 - 72 horas a temperatura ambiente. El solvente de piridina fue evaporado en vacío y luego removido por evaporación azeotrópica con tolueno. El éster péptido fue desprotegido con TEA al 95% en DCM durante dos horas y fue sometido a extracción tres veces con éter etilo anhidro para remover el cromóforo excedente. El substrato desprotegido fue purificado por fase reversa CLAR en una columna C3 o C8 con un 30% a 60% de gradiente de acetonitrilo (usando seis volúmenes de columna). El rendimiento general siguiente a la purificación de CLAR fue de aproximadamente un 20 - 30%. La masa molecular fue confirmada por espectroscopia en electro-rociado de ionización de masa. Los substratos fueron almacenados en la forma de polvo seco, por desecación.

Espectro de ios Substratos y Productos Los espectros de los substratos y los correspondientes productos cromóforos fueron obtenidos en el tampón de ensayo de pH 6.5. Los coeficientes de extinción fueron determinados con la longitud de onda óptima fuera de pico en cubetas de 1 cm (340 nm para 3-Np y HMC, 370 nm para PAP y 400 nm para 4-Np), utilizándose múltiples diluciones. La longitud de onda óptima fuera de pico fue definida como aquella longitud de onda que tenga como resultado la máxima fracción diferencial en absorción entre substrato y producto (producto OD - substrato OD/substrato OD).

Ensavo de la Proteasa Los ensayos de proteasa de VHC fueron llevados a cabo mediante una mezcla de reacción de 200 µl en una placa de microtitulación de 96 depresiones. Las condiciones para el tampón de ensayo (MOPS 25 mM pH 6.5, NaCI 300 mM, glicerol al 10%, lauril maltósido al 0.05 %, EDTA 5 pM y DTT 5 pM) fueron optimizados para el heterodímero N53/NS4A (D.L: Sail y otros., ibid.). Típicamente, unas mezclas de 150 µl de tampón, substrato e inhibidor fueron colocadas en depresiones a 30°C durante aproximadamente 5 minutos. Cincuenta µl de proteasa precalentada (12 nM, 30°C) en tampón de ensayo, fueron seguidamente utilizadas para dar inicio a fa reacción (volumen final 200 µl). Las placas fueron supervisadas durante el desarrollo del ensayo (60 minutos) para detectar los cambios de absorción con ia longitud de onda adecuada (340 nm para 3-Np y HMC, 370 nm para PAP, y 400 nm para 4-Np), para lo cual se utilizó una lectora de placas de microtitulación Spectromax Plus equipada con un monocrómetro (es posible obtener resultados aceptables con lectoras de placa que utilizan filtros de corte). El desdoblamiento proteolítico entre el Nva y el cromóforo fue supervisado con la longitud de onda adecuada en comparación con un patrón sin enzima a título de control de la hidrólisis no enzimática. La evaluación de los parámetros cinéticos del substrato fue llevada a cabo en un intervalo de concentraciones de substrato de 30 veces (aproximadamente 6 a 200 µM). Las velocidades iniciales fueron obtenidas ajustando los datos a la ecuación de Michaelis-Menten para lo cual se utilizó un análisis de regresión no lineal (Mac Curve Fit 1.1 K. Raner). Los números de inversión (k^ fueron calculados suponiendo que la enzima estaba completamente activa.

Evaluación de Inhibidores e Inactivadores Las constantes de inhibición (K,) para los inhibidores competitivos Ac-D-(D-Gla)-L-l-(Cha)-C-OH (27), Ac-DTEDWA(Nva)-OH y Ac-DTEDWP( Nva)-OD fueron determinados experimentalmente con concentraciones determinadas de enzima y substrato v^ vs. Concentración del inhibidor ([l]0) de acuerdo con la ecuación, reordenada de Michealis-Menten para la cinética competitiva de la inhibición: vjv-, = 1 + [l]0 / (K, (1 +[S]C/Km)), siendo v0 la velocidad inicial no inhibida, v0 es la velocidad inicial en la presencia de inhibidor con cualquier concentración dada ([l]0) y [S]0 es la concentración utilizada para el substrato. Los datos resultantes fueron ajustados mediante regresión lineal, y la pendiente resultante, 1/(K¡(1 + (SyK .fue utilizada para calcular el valor de K¡. Los valores de K¡ obtenidos para los diversos macrociclos de la presente invención han sido indicados en el Cuadro 1 anteriormente mencionado, en la cual los compuestos han sido dispuestos en el orden de los intervalos de los valores de k(. En base a estos resultados experimentales, se desprende que para la persona con pericia en el arte será evidente que los compuestos de la presente invención tienen una excelente utilidad como inhibidores de la serina proteasa NS3.

Método del Bioensavo de las Células Los bioensayos de las células para la serina proteasa VHC fue llevada a cabo siguiendo el procedimiento descrito por S. Agrawal y otros, "Development and Charactrerization of Hepatitis C Virus Serme Protease Celi-based Trans-CIeavage Assay", Hepatology Supplement to Volumen 30 (No. 4, Parte 2, Oct. 1999), Abstract No. 615 (Proceedings of AASLD 50th Annual Meeting, Dallas, Texas, Nov. 5-9, 1999), cuya revelación es incorporada n la presente a título de referencia. El ensayo fue llevado a cabo en células HeLa/Huh7 que fueron co-transfectadas con un plásmido que expresa un substrato proteína informante que contiene la secuencia de reconocimiento de desdoblamiento NS5A/5B y un vector de expresión 1 BNS4A21.32 117K e YFPnl como una proteína normal interior para controlar la citotoxicidad. La actividad de la proteasa fue medida por el SDS-PAGE de los lisatos totales de las células seguido por detección de Western blot para lo cual se utilizó un anticuerpo monoclonal dirigido contra el substrato informante. La cuantificación del desdoblamiento de los substratos fue llevada a cabo escaneando la inmunomancha en el "fosfoimager".

Materiales ADNs de Plásmidos pBFP-5A/58-GFP El gen informante que expresa el substrato codifica una proteína de fusión que comprende un dominio de proteína fluorescente azul (BFP) N-terminal y un dominio de proteína fluorescente verde (GFP) C terminal, separados por 25 aminoácidos derivados de la secuencia de reconocimiento del desdoblamiento NS5A/5B. Tanto el GFP como el BFP son proteínas autofluorescentes esencialmente homologas, que emiten luz verde o azul, respectivamente, cuando sin excitadas por luz UV de la longitud de onda adecuada. Cuatro sustituciones de aminoácidos en el cromóforo de la GEP alteran la longitud de onda de la emisión y convierten a la proteína en BFP. El substrato y los productos GFP y BEP resultantes pueden ser detectados en lisatos de células mediante métodos inmunológicos mediante la utilización de un anticuerpo monoclonal que reconozca ambas proteínas. El gen informante BFP-5N/5B-GFP contiene las secuencias codificadoras de las proteínas autofluorescentes BFP y GFP (Quantum Bíotechnologies, Inc., Montreal, Canadá) separadas por la secuencia de reconocimiento de desdoblamiento NS5N/5B, donada entre ios sitios endonucleasa de restricción Nhe I y Bam Hl del vector donante pQB125 (Quantum Biotechnologies, Inc.). La expresión de la proteína de fusión se halla bajo el control de promotor-acentuador CMV IE. La secuencia p(A) de la hormona bovina del crecimiento, del vector, provee la señal de poliadenilación para el mARN. La secuencia de desdoblamiento NS5N/5B es: SSGADTEDWCCSMSYTWTGALVTP. Se utilizó el secuenciado de ADN para validar el clon. PIBOO2: lbNS4A2l -32GS-GS NS 3-81 117K: la proteasa subtipo 1b fue donada como fragmento Xba1/Not1 detrás del promotor CMV en el vector pCl neo.

YFPnl El YFPnl fue provisto por CLONTECH (Palo Alto, California). La adición de un tercer plásmido a la transfección provee una proteína normal interior para el control de la citotoxicidad y no afecta el porcentaje del desdoblamiento de la proteasa. Las ADNs de plásmidos fueron mantenidos y propagados en células DH5a (provistas por Life Technologies) en medio LB bajo la adecuada selección de antibióticos, y purificados mediante QIAfilter Plasmid Kits (Qiagen, Valencia, California).

Cultivo de Células Las células HeLa fueron mantenidas y propagadas en medio mínimo esencial de Dulbecco (DMEM; BioWhittaker) suplementado con suero bovino fetal al 10% (ECS), glutamina 2mM, y 100 µ/ml de penicilina-estreptomicina (BioWhittaker), NaHC03 al 2 %. Las células Huh7 fueron mantenidas y propagadas en medio modificado de Dulbecco (DMEM; BioWhittaker) suplementado con suero bovino fetal al 10% (FCS), 100u/ml de penicilina-estreptomicina (BioWhittaker) y en 5 ml de NEAA (100x; BioWhittaker)/L Procedimiento SOP Día antes de la Transfección Unas células HeLa fueron sembradas en placas de 24 depresiones (placas Falcon 3047) con una densidad de 6x104 células/depresión y cultivadas durante la noche a 37°C en una incubadora de C02 al 5%.

Día de la Transfección: Los ADN de plásmido fueron diluidos hasta una concentración final de 0.05 µg/µl en agua exenta de nucleasa (Promega, Wisconsin, cat No. P119C). 0.75 µg de BFP-5A/5B GFP fueron combinados y mezclados con 0.175 µg de P1 B002 (0.23X) y 0.02 µg de YFPnl . Los ADN fueron llevados a un volumen final de 60 µl con EMEM carente de FBS, glutamina, y antibióticos. Fue adicionada una relación de volúmenes de 5 µl de SuperFect Reagent (Qiagen, cat. No. 30 1305) por µg totales de ADN, y la mezcla fue sometida a vórtex durante aproximadamente 10 segundos y sometida a incubación durante 10 minutos a temperatura ambiente para permitir la formación del complejo. Mientras tenia lugar la formación del complejo, el medio de cultivo de las placas de cultivo de las células fue aspirado y las células fueron lavadas IX con 1 ml de PBS sin Ca2+, Mg2+ (BioWhilaker). Fueron adicionados 350 µl de EMEM (suplementado con suplementos adecuados- medio completo) al tubo que contenía los complejos de transfección, y el medio fue extraído y redepositado 2-3 veces. El volumen total fue transferido a una depresión de la piaca de cultivo de 24 depresiones. Las células HeLa fueron sometidas a incubación junto con los complejos de transfección durante aproximadamente 3 horas a 37°C y C02 al 5%. Los medios que contenían los complejos de transfección fueron retirados de ias células por aspiración. Las células fueron lavadas una vez en aproximadamente 1 ml de PBS, el PBS fue aspirado y fueron adicionados 495 µl de EMEM completo seguido por 5 µl de compuesto/pozo. Las células fueron incubadas durante 22-24 horas a 37°C y C02 al 5%.

Preparación de los Lisatos de Células El medio de cada una de las depresiones fue aspirado y lavado una vez con DBPS. Las células fueron cosechadas en 100µl de 1x tampón de muestra de Tris-SDS-BME (OWL Separation System, Portsmouth, New Hampshire, cat. No. ER33) y transferidas a tubos de microcentrifugado. Fue seguidamente hervido durante 3-5 mm, a efectos de lisar las células. La carga fue hecha a razón de 10 µl/depresión en gel SDS-PAGE. Los lisatos fueron resueltos por electroforésis en SDS-PAGE 10 cm x 10 cm 12.5% (Owl Scientific, cat. No. OG-D125B) hecho funcionar a 30 mamp en tampón Tris-Glicina-SDS (Owl Scientific). Antes de su utilización, una membrana PVDE (Immobilion-P, tamaño de ios poros 45 µm; Millipore, Bedford, Massachusetts), fue empapada en metanol al 100 % durante 10 segundos y seguidamente el biot fue colocado en agua destilada. Las proteínas fueron transferidas a membranas de filtro PVDE (0.45 µm, Millipore) a 108 mamp por gel durante 90 minutos, para lo cual se utilizó en electrobloteador semi- seco.

Detección de Proteínas mediante el ECE Western Blot (Amersham Pharmacia Biotech, Little Chalfomt, RU), catálogo No.RPN 5780). Las membranas de filtro PVDE fueron bloqueadas con reactivo de bloqueo al 5% (tomado de equipo transportable) en aproximadamente 10 ml de PBS que contiene Tween 20 al 0.05%, pH 7.4 (Sigma Chemicals, St. Louis, Missouri, cat. No.3563) durante la noche a 2-4°C en un refrigerador. Ei día siguiente, las membranas fueron enjuagadas brevemente, dos veces con TPBS que contenía tampón de lavado Tween 20 al 0.05%, seguidamente lavadas tres veces cada vez durante 10 minutos en PBS que contenía Tween 20 al 0.O5%, pH 7.4. Las membranas fueron sometidas a incubación en 12 ml de una dilución 1 :3000 de anticuerpo monoclonal anti-GFP durante 30 minutos (Clontech, Palo Alto, California) en PBS que contenía Tween 20 al 0.05%, pH7.4, y al mismo tiempo se adicionó BSA al 1% (Albumin, bovine cat No. A-2153 de Sigma), para reducir el segundo plano. Las membranas fueron lavadas brevemente dos veces con TPBS, y seguidamente tres veces, durante 5 minutos cada vez, en tampón de lavado TPBS. Las membranas fueron sometidas a incubación en 12 ml de una dilución 1 :600 de Ig anti ratón ligada a anti fluoresceína en TPBS durante 30 minutos. Las membranas fueron lavadas brevemente con TPBS dos veces, seguidamente durante 5 minutos en tampón de lavado TPBS, dos veces, Para la ampliación de señal con ECE, las membranas de substrato fueron sometidas a incubación en ID ml de conjugado antifluoresceina fosfatasa alcalina 1 :2500 durante 30 minutos. Las membranas fueron enjuagadas brevemente con TPBS dos veces, y seguidamente durante 5 minutos con tampón de lavado TPBS, tres veces. La solución del substrato para el ECF fue preparada siguiendo las instrucciones del fabricante (alícuota y congelar), las membranas fueron sometidas a incubación durante 2-3 minutos, el exceso de reactivo fue retirado por drenado, seguidamente fueron bloteadas con papeles de filtro, secadas al aire durante 9-10 minutos y seguidamente escaneadas.

Escaneo de la membrana El blot fue colocado sobre el vidrio del Phosphoimager Storm 860. Fue establecida la quimioluminescencia azul, de 200 pixel de magnitud, 700 volt PI/IT. El archivo fue abierto en ImageQuant y cuantificado mediante la creación de cuadrados alrededor de las bandas representativas del substrato (S), el producto(P) y el control interno (IC). El desdoblamiento porcentual del substrato fue medido en forma de. P/(S +P)x 1 DO. La inhibición del desdoblamiento debida a la droga fue medida comparando el duplicado con las drogas control incluidas sobre cada una de las manchas. Fue creado un in forme en Excel. Los resultados se muestran en el Cuadro 2. A partir de estos resultados del ensayo, sería evidente a la persona con pericia en el arte que los compuestos de la ¡nvención tienen una excelente utilidad como inhibidores de la N53-serina proteasa.

CUADRO 2 Resultados de los ensayos basadas en células de VHC: Será evidente para aquellas personas con pericia en el arte que es posible llevar a la práctica muchas modificaciones, variaciones y alteraciones en la presente revelación, tanto en cuanto a materiales como en cuanto a métodos. Dichas modificaciones, variaciones y alteraciones, están destinadas a recaer dentro del espíritu y alcances de la presente invención.

Claims (34)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1. Un compuesto macrocíclico, incluyendo enantiómeros, estereoisómeros, rotómeros y tautómeros de dicho compuesto, y sales o soivatos farmacéuticamente aceptables de dicho compuesto, dicho compuesto caracterizado porque tiene la estructura general mostrada en la Fórmula I: Fórmula I en la cual: X e Y, independientemente entre si, son seleccionados de entre el grupo consistente en las siguientes partes alquilo, alqul-arilo, heteroalquilo, heteroarilo, aril-eteroarilo, alquil-heteroarilo, cicloalquüo, alquil-éter, alquil-aril éter, aril éter, alquil amino, aril amino, alquil-aril amino, alquil sulfuro, alquil-aril sulfuro, aril sulfuro, alquil sulfona, alquil-aril sulfona, aril sulfona, alquil- alquil sulfóxido, alquil-aril sulfóxido, alquil amida, alquil-aril amida, aril amida, alquil suifonamida, alquü-arii sulfonamida, aril sulfonamida, alquil urea, alquil-aril urea, aril urea, alquil carbamato, alquil-aril carbamato, arilcarbamato, alquil-hidrazida, alquilarll hidrazida, alquil hidroxamida, aiquil-aril hidroxamida, alquil sulfonilo, arilsulfonilo, heteroalquilsulfonilo, heteroaril sulfonilo, alquil carbonilo, arilcarbonilo, heteroalquilcarbonilo, heteroaril carbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, hetero ariloxicarbonilo, alquilamínocarbonilo, arilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo o una combinación de los mismos, con la condición que X e Y pueden estar opcionalmente sustituidos por partes seleccionadas de entre el grupo consistente en aromático, alquilo, alquilarilo, heteroalquilo, aril-heteroarilo, alquil-heteroarilo, cicloalquilo, alquil éter, alquil-aril éter, alquil sulfuro, alquil-aril sulfuro, alquil sulfona, alquil-aril sulfona, alquil amida, alquil-aril amida, alquil sulfonamida, alquil aminas, alquil-aril aminas, alquil-aril sulfonamida, alquil urea, alquil-aril urea, alquil carbamato y alquil-aril carbamato; R1= COR5 ó B(OR)2, en lo cual R5 = H, OH, OR8, NR9R10, CF3, C2F5, C3F7, CF2R6, R6, COR7, siendo R7 = H, OH, OR8, CHR9R10, ó NR9R10, siendo R6, R8, R9 y R10, independientemente entre sí, seleccionados de entre el grupo consistente en H, alquilo, arilo heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo; CH(R1')COOR11, CH(R1')CONR12R13, CH(R1')CONHCH(R2')COOR1\ CH(Rr)CONH-CH(R2')CONR12R13, CH(R1')CONHCH(R2')R11, CH(R1')CONHCH(R2')CONHCH(R3')COOR11, CH(R1')CONHCH(R1')CONHCH(R3'D)CONR12R13, CH(R1')CONHCH(R2')CONHCH(R3')CONHCH(R4')COOCR11, CH(R1')CONHCH(R2')CONHCH(R3')CONHCH(R4')CONNR12R13, CH(R1')CONHCH(R2)CONHCH(R3')CONHCH(R ')CONHCH(R5')CONR12R13, en lo cual R1', R2', R3', R4', R5', R11, R12, R13 y .R' son independientemente entre sí seleccionados de entre el grupo consistente en H, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, alquil-arilo, alquii-heteroarilo, aril-alquilo y heteroaralquilo; Z es seleccionado de entre O, N ó CH; W puede hallarse presente o ausente, y si W se halla presente, E es seleccionado de entre C=0, C=S ó S02; Q puede hallarse presente o ausente, y si Q se halla presente, Q es CH, N, P, (CH2)P, (CHR)P, (CRR')P, O, NR, S, ó S02; y cuando Q se halla ausente, M también falta, y A está directamente unido a X; A es O, CH2, (CHR)P, (CHR-CHR'Jp, (CRR')P, NR, S, S02 o un enlace; E es CH, N o CR, o un doble enlace hacia A, L ó G; G puede estar presente o ausente, y cuando G se halla presente, G es (CH2)P, (CHR)P, o (CRR')P, y cuando G se halla ausente, J se halla presente y E está directamente conectado al átomo de carbono al cual estaba unido G; J puede hallarse presente Q ausente, y si J se halla presente, J es (CH2)P, (CHR)P, o (CRR')P, S02, NH, NR u O; y cuando J se halla ausente, G se halla presente y E está directamente unido a N; L puede hallarse presente o ausente, y si L se halla presente, L es CH, CR, O, S o NR: y cuando L se halla ausente, entonces M puede hallarse presente o ausente, y si M está presente estando L ausente, entonces M se halla directa e independientemente vinculado a E, y J está directa e independientemente unido a E; M puede estar presente o ausente, y cuando M se halla presente, M es O, NR, S, S02, (CH2)p, (CHR)p(CHR-CHR')p, o (CRR')P; p es un número de 0 a 6; y R, R1, R2, R3 y R4, independientemente entre si, son seleccionados de entre el grupo consistente en H; alquilo de 1 a 10 átomos de carbono; alquenilo de 2 a 10 átomos de carbono; cicloalquilo de 3 a 8 átomos de carbono; C3-C8 cicloalquilo; C3-C8 heterocicloalquilo, alcoxi, ariloxi, alquiltio, ariltio, amino, amido, éster, ácido carboxíiico, carbamato, urea, cetona, aldehido, ciano, nitro; átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre, o fósforo, en una cantidad de uno a seis; (cicioalquil)alquilo y (heterocicloalquil)alquilo, estando dicho cicloalquilo hecho de 3 a 8 átomos de carbono, y de 0 a 6 átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre, o fósforo; y dicho alquilo es de 1 a 6 átomos de carbono; arilo, heteroarilo, alquil-arilo; y alquilheteroarilo; pudiendo dichas partes alquilo, heteroalquilo, alqueniio, heteroalquenilo, arilo, hetero arilo, cicloalquilo y heterocicloalqullo, estar opcionalmente sustituidos, refiriéndose dicho término "sustituido" a una sustitución, opcional y adecuada, con una o mas partes seleccionadas de entre el grupo consistente en alquilo, alquenílo, alquiniio, arilo, aralquilo, cicioalquilo, heterocíclico, haiágeno, hidroxi, tio, alcoxi, ariloxi, alquiltio, ariltio, amino, amido, éster, ácido carboxílico, carbamato, urea, cetona, aldehido, ciano, nitro, sulfonamlda, sulfóxido, sulfona, sulfonil urea, hidrazida, e hidroxamato.

2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1=COR5, y R5 es H, OH, COOR8, CONR9R10.

3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque R1=COCONR9R5, y R9 es H, R10 es H, CH(R ')COOR11, CH(R1')CONR12R13, CH(R1')CONHCH(R2')COOR11,

CH(R1')CONHCH(R2')CONR12R13, CH(R )CONHCH(R2')(R). 4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque R10=CH(R1 )CONHCH(R2')COOR11, CH(R1')CONHCH(R2')CONR12R13, CH(Rr)CONHCH(R2')(R'), en donde R1' es H o alquilo, y R2' es fenilo, fenilo sustituido, fenilo sustituido en el heteroátomo, tíofenilo, ciciohexilo, ciclopentilo, ciclopropilo, piperidilo, piridilo y 2-indanilo.

5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque R1' es H.

6. El compuesto de conformidad con ia reivindicación 5, caracterizado además porque R2 -fenilo, tiofenilo, ciciohexilo, 2-indanilo, ciclopentilo, piridilo, fenil(4-HNS02NH2), R11 es H o ter-butilo, R12 y R13 son metilo, y R' es hidroximetilo o ter-butoximetilo.

7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2 se selecciona del grupo que consiste de las siguientes porciones:

8. El compuesto de conformidad con ia reivindicación 7, caracterizado además porque R1=C0R5, y R5 es H, OH, COOR8, CONR9R10.

9. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque L y M están ausentes, J está ligado directamente a E.

10. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque L, J y M están ausentes, E está ligado directamente a N.

11. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque G y M están ausentes.

12. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque la porción: incluyen por ejemplo las siguientes estructuras a, b, ó c: ia estructura a puede ser seleccionada de entre los siguientes.

13. El compuesto de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado además porque la estructura a se selecciona de las siguientes estructuras:

14. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque i en donde M puede estar ausente o presente y si M está ausente, Q está ligado a E.

15. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque: en donde G y J se seleccionan independientemente del grupo que consiste de (CH2)P, (CHR)pt (CHR-CHR')p, y (CRR')P; A y M se seleccionan independientemente del grupo que consiste de O, S, SOz, NR, (CH2)P, (CHR)P, (CHR-CHR')P y (CRR')P; y Q es CH, CR, o N.

16. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque G y J se seleccionan independientemente del grupo que consiste de (CH2)P, (CHR)P, (CHR-CHR')P y (CRR')P; y la porción A- E-L-M-Q es un anillo aromático que consiste de dos a ocho átomos de carbono, de cero a seis heteroátomos con X y J siendo orto, para o meta entre sí.

17. El compuesto de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque: en donde R14 se selecciona del grupo que consiste de H, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, alquil-arilo, alquil-heteroarilo, aril-alquilo y heteroalquilo.

18. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R3 se selecciona del grupo que consiste de: en donde R30=H, CH3 u otros grupos alquilo; R31=OH, O-alquilo, NH2, N-alquilo; y R32 y R33 pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente de H, F, Cl, Br y CH3.

19. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque R3 se selecciona del grupo que consiste de: en donde R30=H, CH3 u otros grupos alquilo; R31=OH, O-alquilo, NH2, N-alquilo; y R32 y R33 pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente de H, F, Cl, Br y CH3; y la porción se selecciona de una de las siguientes estructuras a, b, c, d, e, y f: en donde M puede estar ausente o presente, y si M está ausente, Q está unido a E: en donde G y J se seleccionan independientemente dei grupo que consiste de (CH2)P, (CHR)p, (CHR-CHR')p, y (CRR')P; A y M se seleccionan independientemente del grupo que consiste de O, S, S02, NR, (CHaJp, (CHR)P, (CHR-CHR')P, o (CRR')P, Q es CH, CR, o N; y

20. El compuesto^de conformidad con ia reivindicación 19, caracterizado además porque Z=N y R4=H.

21. El compuesto de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado además porque W es C=0.

22. Ei compuesto de conformidad con ia reivindicación 21 , caracterizado además porque la porción X-Y se selecciona del grupo que consiste de: alquilo de CAß. O-alquilo, NR-alquilo.

23. El compuesto de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado además porque: en donde Rb se conecta directamente a Q si Q está presente y a A si Q está ausente, R° se conecta a W; U1 a U6 puede ser parte de un anillo de carbono de seis miembros, o anillo de cinco o seis miembros con uno o más heteroátomos; Ra=H, alquilo, alcoxi, hidroxi, tio, halógeno, nitro, ciano, ácido carboxílico, éster, amida, amino, nitrilo o CF3; Rb es un enlace, alquilo de C,-C6, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, O, S, S02, NH, O(alquilo), S(alquilo), S02(alquilo) o N(alquilo); y Rc es un enlace, alquilo de alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, O, S, S02, NH, O(alqullo), S(alquilo), S02(alquiio), N(alquilo) o CH2-N(alquilo) con el CH2 estando enlazado al anillo aromático.

24. El compuesto de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado además porque la porción X-Y se selecciona del grupo que consiste de las siguientes estructuras:

25. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende como un ingrediente activo un compuesto de la reivindicación 1.

26. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 25, caracterizada además porque comprende adicionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable.

27. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 , para la manufactura de un medicamento para tratar trastornos asociados con la proteasa de VCH.

28. Un método para preparar una composición farmacéutica para tratar los trastornos asociados con la proteasa de VCH, dicho método caracterizado porque comprende poner en contacto íntimo un compuesto de la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

29. Un compuesto que exhibe actividad inhibidora de proteasa de VCH, incluyendo enantiómeros, estereoisómeros y tautómeros de dicho compuesto, y sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de dicho compuesto, dicho compuesto siendo seleccionado de los compuestos de las estructuras listados más adelante: 20 20 20 20

30. Una composición farmacéutica para tratar trastornos asociados con la proteasa de VCH, dicha composición caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos de la reivindicación 29 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

31. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 30, caracterizada además porque contiene adicionalmente un agente antiviral.

32. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 30 o la reivindicación 31 , caracterizada además porque contiene además un interferón.

33. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 32, caracterizada además porque dicho agente antiviral es ribavirina y dicho interferón es a-interferon.

34. Un compuesto de la fórmula: en donde V=OR o NHR, con R siendo H o alquilo; y X, Y, Q, A, M, W, L, E, G, J, Z, R3 y R4 son como se definió en la reivindicación 1. á