ES2344890T3 - Nuevos peptidos como inhibidores de la serina proteasa ns3 del virus de la hepatitis c. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto que presenta actividad inhibidora de la proteasa del VHC, o enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros o racematos de dicho compuesto, o sales o solvatos de dicho compuesto farmacéuticamente aceptables, seleccionándose dicho compuesto de las estructuras listadas a continuación: **(Ver fórmula)** **(Ver fórmula)** **(Ver fórmula)** **(Ver fórmula)** **(Ver fórmula)** **(Ver fórmula)** **(Ver fórmula)** **(Ver fórmula)** **(Ver fórmula)** **(Ver fórmula)** **(Ver fórmula)**
Description
Nuevos péptidos como inhibidores de la serina
proteasa NS3 del virus de la hepatitis C.
La presente invención se refiere a nuevos
inhibidores de proteasa del virus de la hepatitis C ("VHC"), a
composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de dichos
inhibidores, a métodos para preparar dichos inhibidores y al uso de
dichos inhibidores para tratar la hepatitis C y trastornos
relacionados. Esta invención describe específicamente nuevos
compuestos peptídicos como inhibidores de la serina proteasa
NS3/NS4a del VHC.
El virus de la hepatitis C (VHC) es un virus ARN
monocatenario homosentido (+) que se ha implicado como el
principal agente causante de la hepatitis no A, no B (HNANB), en
particular la HNANB asociada con la sangre
(BB-NANBH) (véase, publicación de solicitud
internacional de patente nº WO 89/04669 y publicación de la
solicitud europea de patente nº EP 381216). Hay que diferenciar la
HNANB de otros tipos de enfermedades hepáticas inducidas por virus,
tales como por el virus de la hepatitis A (VHA), virus de la
hepatitis B (VHB), virus de la hepatitis delta (VHD),
citomegalovirus (CMV) y virus de Epstein-Barr (VEB),
así como de otras formas de enfermedades hepáticas tales como
alcoholismo y cirrosis biliar primaria.
Recientemente, se ha identificado, clonado y
expresado una proteasa del VHC necesaria para el procesamiento de
polipéptidos y la replicación vírica; (véase, p. ej., la patente de
EE.UU. 5.712.145). Esta poliproteína de aproximadamente 3000
aminoácidos contiene, desde el extremo amino al extremo carboxi, una
proteína de nucleocápsida (C), proteínas de la envuelta (E1 y E2) y
varias proteínas no estructurales (NS1, 2, 3, 4a, 5a y 5b). NS3 es
una proteína de aproximadamente 68 kda, codificada por
aproximadamente 1893 nucleótidos del genoma del VHC, y tiene dos
dominios distintos: (a) un dominio de serina proteasa que consiste
en aproximadamente 200 de los aminoácidos
N-terminales; y (b) un dominio de ATPasa dependiente
de ARN en el extremo C de la proteína. La proteasa NS3 se considera
un miembro de la familia de quimotripsinas debido a las similitudes
de la secuencia de la proteína, la estructura tridimensional
general y el mecanismo de catálisis. Otras enzimas de tipo
quimotripsina son elastasa, factor Xa, trombina, tripsina,
plasmina, uroquinasa, tPA y PSA. La serina proteasa NS3 del VHC es
responsable de la proteolsis del polipéptido (poliproteína) en las
uniones NS3/NS4a, NS4a/NS4b, NS4b/NS5a y NS5a/NS5b y por lo tanto
es responsable de la generación de 4 proteínas víricas durante la
replicación vírica. Esto ha hecho que la serina proteasa NS3 del VHC
sean un objetivo atractivo para la quimioterapia antivírica.
Se ha determinado que la proteína NS4a, un
polipéptido de aproximadamente 6 kda, es un cofactor para la
actividad de serina proteasa de la NS3. La autoescisión de la unión
NS3/NS4a por la serina proteasa NS3/NS4a se produce de forma
intramolecular (es decir, cis) mientras que los otros sitios
de escisión son procesados de forma intermolecular (es decir,
trans).
El análisis de los sitios de escisión naturales
de la proteasa del VHC puso de manifiesto la presencia de cisteína
en P1 y serina en P1' y que estos restos están estrictamente
conservados en las uniones NS4a/NS4b, NS4b/NS5a y NS5a/NS5b. La
unión NS3/NS4a contiene una treonina en P1 y una serina en P1'. Se
postula que la sustitución Cys\rightarrowThr en NS3/NS4a da
cuenta del requisito de procesamiento en cis en lugar de en
trans en esta unión. Véase, p. ej., Pizzi et al.
(1994) Proc. Natl. Acad. Sci (USA)
91:888-892, Failla et al. (1996) Folding
& Design 1:35-42. El sitio de escisión
NS3/NS4a también es más tolerante a la mutagénesis que los otros
sitios. Véase, p. ej., Kollykhalov et al. (1994) J. Virol.
68:7525-7533. También se ha encontrado que los
restos ácidos en la región secuencia arriba del sitio de escisión
son necesarios para una escisión eficaz. Véase, p. ej., Komoda
et al. (1994) J. Virol. 68:7351-7357.
Los inhibidores de la proteasa del VHC que se
han descrito incluyen antioxidantes (véase, la publicación de
solicitud internacional de patente nº WO 98/14181), algunos péptidos
y análogos de péptidos (véase, la publicación de solicitud
internacional de patente nº WO 98/17679, Landro et al. (1997)
Biochem. 36:9340-9348, Ingallinella et
al. (1998) Biochem. 37:8906-8914,
Llinàs-Brunet et al. (1998) Bioorg. Med.
Chem. Lett. 8:1713-1718), inhibidores basados
en el polipéptido eglina c de 70 aminoácidos (Martin et al.
(1998) Biochem. 37:11459-11468, inhibidores
de afinidad seleccionados del inhibidor del secretor pancreático de
tripsina humana (hPSTI-C3) y repertorios de
minicuerpos (MBip) (Dimasi et al. (1997) J. Virol.
71:7461-7469), cV_{H}E2 (un fragmento de
anticuerpo de dominio variable "camelizado") (Martin et
al.(1997) Protein Eng. 10:607-614), y
\alpha1-antiquimotripsina (ACT) (Elzouki et
al.) (1997) J. Hepat. 27:42-28).
Recientemente se ha descrito un ribozima diseñado para destruir
selectivamente el ARN del virus de la hepatitis C (véase,
BioWorld Today 9(217): 4 (10 de noviembre, 1998)).
También se hace referencia a las publicaciones
PCT nº WO 98/17679, publicada el 30 de abril, 1998 (Vertex
Pharmaceuticals Incorporated); WO 98/22496, publicada el 28 de mayo,
1998 (F. Hoffmann-La Roche AG); y WO 99/07734,
publicada el 18 de febrero, 1999 (Boehringer Ingelheim Canada
Ltd.).
El VHC se ha implicado en la cirrosis del hígado
y en la inducción del carcinoma hepatocelular. El pronóstico para
pacientes que padecen de infección por el VHC actualmente es pobre.
La infección por el VHC es más difícil de tratar que otras formas
de hepatitis debido a la falta de inmunidad o de remisión asociada
con la infección por el VHC. Los datos actuales indican una tasa de
supervivencia menor del 50% para los cuatro años posteriores al
diagnóstico de la cirrosis. Los pacientes diagnosticados de
carcinoma hepatocelular localizado operable tienen una tasa de
supervivencia de 5 años de 10-30%, mientras que los
de carcinoma hepatocelular localizado no operable tienen una tasa de
supervivencia de 5 años menor de 1%.
Se hace referencia a A. Marchetti et al.,
Synlett, S1, 1000-1002 (1999) que describen la
síntesis de análogos bicíclicos de un inhibidor de la proteasa NS3
del VHC. Un compuesto descrito en el mismo tiene la fórmula:
Se hace referencia a W. Han et al.,
Bioorganic & Medicinal Chem. Lett, (2000) 10,
711-713, que describen la preparación de
determinadas \alpha-cetoamidas,
\alpha-cetoésteres y
\alpha-dicetonas que contienen los grupos
funcionales alilo y etilo.
También se hace referencia al documento WO
00/09558 (Cesionario: Boehringer Ingelheim Limited; publicada el 24
de febrero, 2000) que describe derivados peptídicos de fórmula:
en la que se definen en la misma
los diferentes elementos. Un compuesto ilustrativo de esta serie
es:
También se hace referencia al documento WO
00/09543 (Cesionario: Boehringer Ingelheim Limited; publicada el 24
de febrero, 2000) que describe derivados peptídicos de fórmula:
en la que se definen en la misma
los diferentes elementos. Un compuesto ilustrativo de esta serie
es:
Las terapias actuales para la hepatitis C
incluyen el interferón-\alpha (INF_{\alpha}) y
la terapia de combinación con ribavirina e interferón. Véase, p.
ej., Beremguer et al. (1998) Proc. Assoc. Am.
Physicians 110(2):98-112. Estas terapias
tienen una velocidad de respuesta sostenida baja y efectos
secundarios frecuentes. Véase, p. ej., Hoofnagle et al.
(1997) N. Engl. J. Med. 336:347. Actualmente no hay vacuna
disponible para la infección por el VHC.
Los documentos US 2002107181, US 2002016294, US
2002102235, US 2003036501, US 2002160962,
US 2002147139 y US 2002068702 describen diferentes tipos de péptidos y/u otros compuestos como inhibidores de la serina proteasa NS-3 del virus de la hepatitis C.
US 2002147139 y US 2002068702 describen diferentes tipos de péptidos y/u otros compuestos como inhibidores de la serina proteasa NS-3 del virus de la hepatitis C.
El documento WO 01/40262 describe compuestos de
cetoamida y cetoéster que se dice que son útiles como inhibidores de
la proteasa NS3 del VHC.
Son necesarios nuevos tratamientos y terapias
para la infección por el VHC. Por lo tanto, un objeto de esta
invención es proporcionar compuestos útiles en el tratamiento o
prevención o mejora de uno o más síntomas de la hepatitis C.
Un objeto adicional de la presente invención es
proporcionar compuestos útiles para modular la actividad de serina
proteasas del VHC, en particular la serina proteasa NS3/NS4a del
VHC.
Otro objeto en la presente memoria es
proporcionar compuestos útiles para modular el procesamiento del
polipéptido del VHC.
En sus muchas realizaciones, la presente
invención proporciona nuevos inhibidores de la proteasa del VHC,
composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de los
compuestos, y métodos para preparar formulaciones farmacéuticas que
comprenden uno o más de dichos compuestos, también se describen
métodos de tratamiento, prevención o mejora de uno o más de los
síntomas de la hepatitis C. También se describen métodos para
modular la interacción de un polipéptido del VHC con la proteasa
del VHC. Entre los compuestos proporcionados en esta memoria, se
prefieren los compuestos que inhiben la actividad de la serina
proteasa NS3/NS4a del VHC. La presente solicitud proporciona un
compuesto que presenta actividad inhibidora de la proteasa del VHC,
o enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros o racematos
de dicho compuesto, o sales o solvatos de dicho compuesto
farmacéuticamente aceptables, seleccionándose dicho compuesto de los
compuestos de las estructuras listadas a continuación:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En la invención también están incluidos
tautómeros, rotámeros, enantiómeros y otros isómeros ópticos de
compuestos de la invención, así como las sales, solvatos y derivados
de los mismos farmacéuticamente aceptables.
Otra característica de la invención son
composiciones farmacéuticas que contienen como principio activo un
compuesto de la invención (o su sal, solvato o isómeros) junto con
un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.
La invención también proporciona métodos para
preparar compuestos de la invención, y también describe métodos
para tratar enfermedades asociadas con el VHC. Los métodos de
tratamiento comprenden administrar a un paciente que padece dicha
enfermedad o enfermedades una cantidad terapéuticamente eficaz de un
compuesto de la invención, o composiciones farmacéuticas que
comprenden un compuesto de la invención.
También se describe el uso de un compuesto de la
invención para fabricar un medicamento para tratar un trastorno
asociado con el VHC.
También se describe un método de tratamiento de
un trastorno asociado con el virus de la hepatitis C, que comprende
administrar una cantidad eficaz de uno o más de los compuestos de la
invención.
También se describe un método para modular la
actividad de la proteasa del virus de la hepatitis C (VHC), que
comprende poner en contacto la proteasa del VHC con uno o más
compuestos de la invención, en el que dicho método es un método
distinto de un método de tratamiento por terapia del cuerpo humano o
animal.
También se describe un método para tratar,
prevenir o mejorar uno o más síntomas de la hepatitis C, que
comprende administrar una cantidad eficaz de uno o más de los
compuestos de la invención. La proteasa del VHC es la proteasa NS3
o NS4a. Los compuestos de la invención inhiben dicha proteasa.
También modulan el procesamiento del polipéptido del virus de la
hepatitis C (VHC).
En una realización, la presente invención
describe compuestos de la invención como inhibidores de la proteasa
del VHC, en especial la serina proteasa NS3/NS4a del VHC, o una de
sus derivados farmacéuticamente aceptable.
Dependiendo de su estructura, los compuestos de
la invención pueden formar sales farmacéuticamente aceptables con
ácidos orgánicos o inorgánicos, o bases orgánicas o inorgánicas. Los
ejemplos de ácidos adecuados para dicha formación de sal son ácidos
clorhídrico, sulfúrico, fosfórico, acético, cítrico, malónico,
salicílico, málico, fumárico, succínico, ascórbico, maleico,
metanosulfónico y otros ácidos minerales y carboxílicos conocidos
para los expertos en la técnica. Para la formación de sales con
bases, las bases adecuadas son, por ejemplo, NaOH, KOH, NH_{4}OH,
hidróxido de tetraalquilamonio, y similares.
En otra realización, esta invención proporciona
composiciones farmacéuticas que comprenden los péptidos de la
invención como un principio activo. Las composiciones farmacéuticas
en general comprenden además un diluyente, excipiente o vehículo
farmacéuticamente aceptable (denominados de forma colectiva en esta
memoria como materiales vehículo). Debido a su actividad inhibidora
del VHC, dichas composiciones farmacéuticas tienen utilidad en el
tratamiento de la hepatitis C y trastornos relacionados.
En otra realización más, la presente invención
describe métodos para preparar composiciones farmacéuticas que
comprenden los compuestos de la invención como un principio activo.
En las composiciones farmacéuticas y métodos de la presente
invención, los principios activos normalmente se administrarán
mezclados con materiales vehículo adecuados seleccionados
adecuadamente con respecto a la forma pretendida de administración,
es decir, comprimidos orales, cápsulas (cargadas de sólido,
cargadas de semisólido o cargadas de líquido), polvos para
constituir, geles orales, elixires, gránulos dispersables, jarabes,
suspensiones y similares, de acuerdo con las prácticas
farmacéuticas. Por ejemplo, para la administración oral en forma de
comprimidos o cápsulas, el componente de fármaco activo se puede
combinar con cualquier vehículo oral inerte no tóxico
farmacéuticamente aceptable, tal como lactosa, almidón, sacarosa,
celulosa, estearato magnésico, fosfato dicálcico, sulfato de
calcio, talco, manitol, alcohol etílico (formas líquidas) y
similares. Además cuando se desee o sea necesario, también se
pueden incorporar a la mezcla aglutinantes, lubricantes, agentes
disgregantes y colorantes adecuados. Los polvos y comprimidos
pueden comprender de aproximadamente 5 a aproximadamente 95% de la
composición de la invención. Los aglutinantes adecuados incluyen
almidón, gelatina, azúcares naturales, edulcorantes de maíz, gomas
naturales y sintéticas tales como goma arábiga, alginato sódico,
carboximetilcelulosa, polietilenglicol y ceras. Entre los
lubricantes para usar en estas formas de dosificación se pueden
mencionar el ácido bórico, benzoato sódico, acetato sódico, cloruro
sódico, y similares. Los disgregantes incluyen almidón,
metilcelulosa, goma guar y similares.
También se pueden incluir agentes edulcorantes y
de sabor y conservantes cuando sea adecuado. Algunos de los términos
indicados antes, en concreto disgregantes, diluyentes, lubricantes,
aglutinantes y similares, se discuten con más detalle a
continuación.
Además, las composiciones de la presente
invención se pueden formular en una forma de liberación sostenida
para proporcionar la liberación de velocidad controlada o uno o más
de los componentes o principios activos para optimizar los efectos
terapéuticos, es decir actividad inhibidora del VHC y similares. Las
formas de dosificación adecuadas para la liberación sostenida
incluyen comprimidos de capas que contienen capas de diferentes
velocidades de disgregación o matrices poliméricas de liberación
controlada impregnadas con los componentes activos y moldeadas en
forma de comprimido o cápsulas que contienen dichas matrices
poliméricas porosas impregnadas o encapsuladas.
Las preparaciones de forma líquida incluyen
disoluciones, suspensiones y emulsiones. Como ejemplo, pueden
mencionarse agua o disoluciones en
agua-propilenglicol para inyecciones parenterales o
la adición de edulcorantes y opacificantes para disoluciones,
suspensiones y emulsiones orales. Las preparaciones de forma líquida
pueden incluir también disoluciones para administración
intranasal.
Las preparaciones de aerosol adecuadas para
inhalación pueden incluir disoluciones y sólidos en forma de polvo,
que pueden estar en combinación con un vehículo farmacéuticamente
aceptable, tal como un gas comprimido inerte, por ejemplo,
nitrógeno.
Para preparar supositorios, primero se funde una
cera de bajo punto de fusión tal como una mezcla de glicéridos de
ácidos grasos tal como manteca de cacao, y se dispersa el principio
activo de forma homogénea en la misma por agitación o mezclamiento
similar. Después, la mezcla homogénea fundida es vierte en moldes de
tamaño conveniente, se deja enfriar y de esta forma solidificar.
Se incluyen también preparaciones de forma
sólida que se pretenden convertir, poco antes del uso, en
preparaciones de forma líquida para administración oral o
parenteral. Dichas formas líquidas incluyen disoluciones,
suspensiones y emulsiones.
Los compuestos de la invención pueden ser
también suministrables por vía transdérmica. Las composiciones
transdérmicas pueden tomar la forma de cremas, lociones, aerosoles
y/o emulsiones, y pueden incluirse en un parche transdérmico de tipo
matriz o depósito como son convencionales en la técnica con este
fin.
Preferiblemente, el compuesto se administra por
vía oral, intravenosa o subcutánea.
Preferiblemente, la preparación farmacéutica
está en una forma de dosificación unitaria. En dicha forma, se
subdivide la preparación en dosis unitarias adecuadamente
dimensionadas que contienen cantidades apropiadas de los
componentes activos, por ejemplo, una cantidad eficaz para conseguir
el fin deseado.
La cantidad de la composición activa de la
invención en una dosis unitaria en general se puede variar o ajustar
de aproximadamente 1,0 mg a aproximadamente 1.000 mg,
preferiblemente de aproximadamente 1,0 a aproximadamente 950 mg,
más preferiblemente de aproximadamente 1,0 a aproximadamente 500 mg,
y típicamente de aproximadamente 1 a aproximadamente 250 mg, de
acuerdo con la aplicación particular. La dosificación real empleada
puede variar dependiendo de la edad, sexo, peso del paciente y de
la gravedad de la afección que se esté tratando. Dichas técnicas son
conocidas para los expertos en la materia.
En general, la forma de dosificación oral humana
que contiene los principios activos se puede administrar 1 ó 2
veces al día. La cantidad y frecuencia de la administración se
regulará de acuerdo con el criterio del médico que atiende. Un
régimen de dosificación diario recomendado en general para la
administración oral puede variar de aproximadamente 1,0 mg a
aproximadamente 1.000 mg al día, en una dosis o en dosis
divididas.
A continuación se describen algunos términos
útiles:
Cápsula - se refiere a un receptáculo o envase
especial hecho de metilcelulosa, poli(alcoholes vinílicos),
o gelatinas desnaturalizadas o almidón para mantener o contener
composiciones que comprenden los principios activos. Las cápsulas
de cubierta dura normalmente se hacen de mezclas de gelatinas de
piel de cerdo y hueso de resistencia de gel relativamente alta. La
propia cápsula puede contener cantidades pequeñas de colorantes,
agentes opacificantes, plastificantes y conservantes.
Comprimido - se refiere a una forma de
dosificación sólida comprimida o moldeada que contiene los
principios activos con diluyentes adecuados. El comprimido se puede
preparar por compresión de mezclas o granulaciones obtenidas por
granulación en húmedo, granulación en seco o por compactación.
Gel oral - se refiere a principios acticos
dispersados o solubilizados en una matriz semisólida hidrófila.
El polvo para constituir se refiere a mezclas de
polvos que contienen los principios activos y diluyentes adecuados
que se pueden suspender en agua o zumos.
Diluyente - se refiere a sustancias que
normalmente componen la porción principal de la composición o la
forma de dosificación. Los diluyentes adecuados incluyen azúcares
tales como lactosa, sacarosa, manitol y sorbitol; almidones
derivados de trigo, maíz, arroz y patata; y celulosas tales como
celulosa microcristalina. La cantidad de diluyente en la
composición puede variar de aproximadamente 10 a aproximadamente 90%
en peso de la composición total, preferiblemente de aproximadamente
25 a aproximadamente 75%, más preferiblemente de aproximadamente 30
a aproximadamente 60% en peso, incluso más preferiblemente de
aproximadamente 12 a aproximadamente 60%.
Disgregante - se refiere a materiales añadidos a
la composición para ayudar a que se desmenuce (disgregue) y libere
los medicamentos. Los disgregantes adecuados incluyen almidones;
almidones modificados "solubles en agua fría" tales como
carboximetilalmidón sódico; gomas naturales y sintéticas tales como
goma de algarrobilla, karaya, tragacanto y agar; derivados de
celulosa tales como metilcelulosa y carboximetilcelulosa sódica;
celulosas microcristalinas y celulosas microcristalinas reticuladas
tales como croscarmelosa sódica; alginatos tales como ácido
algínico y alginato sódico; arcillas tal como bentonitas; y mezclas
efervescentes. La cantidad de disgregante en la composición puede
variar de aproximadamente 2 a aproximadamente 15% en peso de la
composición, más preferiblemente de aproximadamente 4 a
aproximadamente 10% en peso.
Aglutinante - se refiere a sustancias que unen o
"pegan" polvos entre sí y los hacen cohesivos formando
gránulos, sirviendo así como el "adhesivo" en la formulación.
Los aglutinantes añaden fuerza de cohesión que ya está disponible
en el diluyente o agente de carga. Los aglutinantes adecuados
incluyen azúcares tales como sacarosa; almidones derivados de
trigo, maíz, arroz y patata; gomas naturales tal como goma arábiga,
gelatina y tragacanto; derivados de algas tales como ácido
algínico, alginato sódico y alginato de amonio y calcio; materiales
celulósicos tales como metilcelulosa y carboximetilcelulosa sódica
e hidroxipropilmetilcelulosa; polivinilpirrolidona; y compuestos
inorgánicos tales como silicato de aluminio y magnesio. La cantidad
de aglutinante en la composición puede variar de aproximadamente 2
a aproximadamente 20% en peso de la composición, más preferiblemente
de aproximadamente 3 a aproximadamente 10% en peso, incluso más
preferiblemente de aproximadamente 3 a aproximadamente 6% en
peso.
Lubricante - se refiere a una sustancia añadida
a la forma de dosificación para permitir que después de haber
comprimido los comprimidos, gránulos, etc., se desprenda del molde o
la boquilla reduciendo la fricción o desgaste. Los lubricantes
adecuados incluyen estearatos metálicos tales como estearato
magnésico, estearato de calcio o estearato de potasio; ácido
esteárico; ceras de alto punto de fusión; y lubricantes solubles en
agua tales como cloruro sódico, benzoato de sodio, acetato de sodio,
oleato de sodio, polietilenglicoles y d'I-leucina.
Los lubricantes normalmente se añaden en la última etapa antes de la
compresión, puesto que deben estar presentes en las superficies de
los gránulos y entre ellos y las piezas de la prensa de comprimidos.
La cantidad de lubricante en la composición puede variar de
aproximadamente 0,2 a aproximadamente 5% en peso de la composición,
preferiblemente de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2%, más
preferiblemente de aproximadamente 0,3 a aproximadamente 1,5% en
peso.
Deslizante - material que previene que se
apelmace y mejora las características de flujo de las granulaciones,
de modo que el flujo es suave y uniforme. Los deslizantes adecuados
incluyen dióxido de silicio y talco. La cantidad de deslizante en
la composición puede variar de aproximadamente 0,1% a
aproximadamente 5% en peso de la composición total, preferiblemente
de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2% en peso.
Agentes colorantes - excipientes que
proporcionan coloración a la composición o la forma de dosificación.
Dichos excipientes pueden incluir colorantes de calidad alimentaria
y colorantes de calidad alimentaria adsorbidos en un adsorbente
adecuado tal como arcilla u óxido de aluminio. La cantidad de agente
colorante puede variar de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 5%
en peso de la composición, preferiblemente de aproximadamente 0,1 a
aproximadamente 1%.
Biodisponibilidad - se refiere a la velocidad y
extensión a la que el fármaco activo o resto terapéutico es
absorbido en la circulación sistémica a partir de la forma de
dosificación administrada, comparado con una referencia o
control.
Los métodos convencionales para preparar
comprimidos son conocidos. Dichos métodos incluyen métodos en seco
tales como la compresión directa y la compresión de la granulación
producida por compactación, o métodos en húmedo u otros
procedimientos especiales. Los métodos convencionales para hacer
otras formas para la administración, tales como por ejemplo,
cápsulas, supositorios y similares también son bien conocidos.
Las composiciones farmacéuticas descritas
anteriormente se pueden usar para el tratamiento de la hepatitis C.
El método comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz
de la composición farmacéutica de la invención a un paciente que
tiene dicha enfermedad o enfermedades y que necesiten dicho
tratamiento.
Los compuestos de la invención se pueden usar
para el tratamiento de la hepatitis C en seres humanos en modo de
monoterapia o en una terapia de combinación (p. ej., combinación
dual, combinación triple, etc.) tal como, por ejemplo, en
combinación con agentes antivíricos y/o inmunomoduladores. Los
ejemplos de dichos agentes antivíricos y/o inmunomoduladores
incluyen Ribavirina (de Schering-Plough Corporation,
Madison, New Jersey) y Levovirina^{TM} (de ICN Pharmaceuticals,
Costa Mesa, California), VP 50406^{TM} (de Viropharma,
Incorporated, Exton, Pennsylvania), ISIS 14803^{TM} (de ISIS
Pharmaceuticals, Carlsbad, California), Heptazyme^{TM} (de
Ribozyme Pharmaceuticals, Boulder, Colorado), VX 497^{TM} (de
Vertex Pharmaceuticals, Cambridge, Massachusetts), Thymosin^{TM}
(de SciClone Pharmaceuticals, San Mateo, California),
Maxamine^{TM} (Maxim Pharmaceuticals, San Diego, California),
micofenolato de mofetilo (de Hoffman-LaRoche,
Nutley, New Jersey), interferón (tal como, por ejemplo,
interferón-alfa, conjugados de
PEG-interferón alfa) y similares. Los "conjugados
de PEG-interferón alfa" son moléculas de
interferón alfa unidas de forma covalente a una molécula de PEG.
Los conjugados de PEG-interferón alfa ilustrativos
incluyen interferón alfa-2a (Roferon^{TM}, de
Hoffman La-Roche, Nutley, New Jersey) en forma de
interferón alfa-2a pegilado (p. ej., vendido con el
nombre comercial de Pegasys^{TM}), interferón
alfa-2b (Intron^{TM}, de
Schering-Plough Corporation) en forma de interferón
alfa-2b pegilado (p. ej., vendido con el nombre
comercial de PEG-Intron^{TM}), interferón
alfa-2c (Berofor Alpha^{TM}, de Boehringer
Ingelheim, Ingelheim, Alemania) o interferón de consenso definido
por determinación de una secuencia consenso de interferones alfa
naturales (Infergen^{TM}, de Amgen, Thousand Oaks,
California).
Como se ha expuesto antes, la invención también
incluye tautómeros, rotámeros, enantiómeros y otros estereoisómeros
de los compuestos de la invención. Por lo tanto, como observará un
experto en la técnica, algunos de los compuestos de la invención
pueden existir en formas isómeras adecuadas. Se contempla que dichas
variaciones están dentro del alcance de la invención.
Los compuestos de la invención son un
subconjunto de la clase más amplia de compuestos representados por
la estructura general mostrada en la fórmula I:
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\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
Y se selecciona del grupo que consiste en
alquilo, alquilarilo, heteroalquilo, heteroarilo, arilheteroarilo,
alquilheteroarilo, cicloalquilo, alquiloxi,
alquil-ariloxi, ariloxi, heteroariloxi,
heterocicloalquiloxi, cicloalquiloxi, alquilamino, arilamino,
alquil-arilamino, arilamino, heteroarilamino,
cicloalquilamino y heterocicloalquilamino, con la condición de que Y
puede estar opcionalmente sustituido con X^{11} o X^{12};
X^{11} es alquilo, alquenilo, alquinilo,
cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo,
heterociclilalquilo, arilo, alquilarilo, arilalquilo, heteroarilo,
alquilheteroarilo, o heteroarilalquilo, con la condición de que
X^{11} puede estar además opcionalmente sustituido con
X^{12};
X^{12} es hidroxi, alcoxi, ariloxi, tio,
alquiltio, ariltio, amino, alquilamino, arilamino, alquilsulfonilo,
arilsulfonilo, alquilsulfonamido, arilsulfonamido, carboxi,
carbalcoxi, carboxamido, alcoxicarbonilamino, alcoxicarboniloxi,
alquilureido, arilureido, halógeno, ciano o nitro, con la condición
de que dicho alquilo, alcoxi y arilo pueden estar opcionalmente
sustituidos con restos independientemente seleccionados de
X^{12};
R^{1} es -C(O)R^{5} o
-B(OR)_{2}, en el que R^{5} es H, -OH, -OR^{8},
-NR^{9}R^{10}, -CF_{3}, -C_{2}F_{5}, -C_{3}F_{7},
-CF_{2}R^{6}, -R^{6} o -C(O)R^{7} en el que
R^{7} es H, -OH, -OR^{8}, -CHR^{9}R^{10} o
-NR^{9}R^{10}, en los que R^{6}, R^{8}, R^{9} y R^{10}
se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H,
alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo,
cicloalquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo,
-[CH(R^{1'})]_{p}C(O)OR^{11}, -
[CH(R^{1'})]_{p}C(O)NR^{12}R^{13},
-[CH(R^{1'})]_{p}S(O_{2})R^{11},
-[CH(R^{1'})]_{p}C(O)R^{11},
-[CH(R^{1'})]_{p}CH(OH)R^{11}, -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})C(O)OR^{11}, -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})C(O)NR^{12}R^{13}, -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})R', -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})C(O)N(H)CH(R^{3'})C(O)OR^{11}, -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})C(O)N(H)
CH(R^{3'})C(O)NR^{12}R^{13}, -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})C(O)N(H)CH(R^{3'})C(O)N(H)CH(R^{4'})C(O)OR^{11}, -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})C(O)N(H)CH(R^{3'})C(O)N(H)CH(R^{4'})C(O)NR^{12}R^{13}, -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})C(O)N(H)CH(R^{3'})C(O)N(H)CH(R^{4'})C(O)N(H)CH(R^{5'})C(O)OR^{11} y -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})C(O)N(H)CH(R^{3'})C(O)N(H)CH(R^{4'})C(O)
N(H)CH(R^{5'})C(O)NR^{12}R^{13},
-[CH(R^{1'})]_{p}CH(OH)R^{11}, -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})C(O)OR^{11}, -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})C(O)NR^{12}R^{13}, -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})R', -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})C(O)N(H)CH(R^{3'})C(O)OR^{11}, -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})C(O)N(H)
CH(R^{3'})C(O)NR^{12}R^{13}, -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})C(O)N(H)CH(R^{3'})C(O)N(H)CH(R^{4'})C(O)OR^{11}, -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})C(O)N(H)CH(R^{3'})C(O)N(H)CH(R^{4'})C(O)NR^{12}R^{13}, -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})C(O)N(H)CH(R^{3'})C(O)N(H)CH(R^{4'})C(O)N(H)CH(R^{5'})C(O)OR^{11} y -CH(R^{1'})C(O)N(H)CH(R^{2'})C(O)N(H)CH(R^{3'})C(O)N(H)CH(R^{4'})C(O)
N(H)CH(R^{5'})C(O)NR^{12}R^{13},
en los que R^{1'}, R^{2'}, R^{3'},
R^{4'}, R^{5'}, R^{11}, R^{12}, R^{13}, y R' se
seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo,
arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, alquilarilo,
alquilheteroarilo, arilalquilo y heteroaralquilo;
Z se selecciona de O, N, C(H) o
C(R);
W puede estar presente o ausente, y si W está
presente, W se selecciona de C(=O), C(=S), C(=N-CN)
o S(O_{2});
Q puede estar presente o ausente, y cuando Q
está presente, Q es C(H), N, P, (CH_{2})_{p},
(CHR)_{p}, (CRR')_{p}, O, NR, S o SO_{2}; y cuando Q
está ausente, M puede estar presente o ausente; cuando Q y M están
ausentes, A está directamente unido a L;
A es O, CH_{2}, (CHR)_{p},
(CHR-CHR')_{p}, (CRR')_{p}, N(R), S,
S(O_{2}) o un enlace;
E es CH, N, CR, o un doble enlace hacia A, L o
G;
G puede estar presente o ausente, y cuando G
está presente, G es (CH_{2})_{p}, (CHR)_{p} o
(CRR')_{p}; y cuando G está ausente, J está presente y E está
directamente conectado al átomo de carbono en la fórmula I como
está G unido al mismo;
\newpage
J puede estar presente o ausente, y cuando J
está presente, J es (CH_{2})_{p}, (CHR)_{p}, o
(CRR')_{p}, S(O_{2}), N(H), N(R) o O; y
cuando J está ausente, G está presente y E está directamente unido
al N mostrado en la fórmula I como está J unido;
L puede estar presente o ausente, y cuando L
está presente, L es C(H), C(R), O, S o N(R); y
cuando L está ausente, entonces M puede estar presente o ausente; y
si M está presente estando L ausente, entonces M está directa e
independientemente unido a E, y J está directa e independientemente
unido a E;
M puede estar presente o ausente, y cuando M
está presente, M es O, NR, S, S(O_{2}),
(CH_{2})_{p}, (CHR)_{p}
(CHR-CHR')p, o (CRR')_{p};
p es un número de 0 a 6; y
R, R', R^{2}, R^{3} y R^{4} pueden ser
iguales o diferentes y son independientemente del grupo que consiste
en H; alquilo C_{1}-C_{10}; alquenilo
C_{2}-C_{10}; cicloalquilo
C_{3}-C_{8}; heterocicloalquilo
C_{3}-C_{8}, alcoxi, ariloxi, alquiltio,
ariltio, amino, amido, éster, ácido carboxílico, carbamato, urea,
cetona, aldehído, ciano, nitro, halógeno;
(cicloalquil)alquilo y (heterocicloaquil)alquilo, en
el que dicho cicloalquilo está compuesto de 3 a 8 átomos de carbono
y de 0 a 6 átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre o fósforo, y dicho
alquilo es de 1 a 6 átomos de carbono; arilo; heteroarilo;
alquilarilo; y alquilheteroarilo;
en el que dichos restos alquilo, heteroalquilo,
alquenilo, heteroalquenilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo y
heterocicloalquilo pueden estar opcional y químicamente sustituidos
de forma adecuada, refiriéndose dicho término "sustituido" a la
sustitución opcional y químicamente adecuada con uno o más restos
seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alquenilo,
alquinilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, heterocíclico, halógeno,
hidroxi, tio, alcoxi, ariloxi, alquiltio, ariltio, amino, amido,
éster, ácido carboxílico, carbamato, urea, cetona, aldehído, ciano,
nitro, sulfonamido, sulfóxido, sulfona, sulfonilurea, hidrazida e
hidroxamato;
además, cuando dicha unidad
N-C-G-E-L-J-N
en la fórmula I representa una estructura de anillo cíclico de 5
miembros o una estructura de anillo cíclico de 6 miembros con la
condición de que dicha unidad
N-C-G-E-L-J-N
represente una estructura de anillo cíclico de 5 miembros, o cuando
la estructura de anillo bicíclico en la fórmula I que comprende N,
C, G, E, L, J, N, A, Q y M representa una estructura de anillo
cíclica de 5 miembros, entonces dicha estructura de anillo cíclico
de 5 miembros carece de un grupo carbonilo como parte del anillo
cíclico.
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Los compuestos de fórmula I, incluyendo los
compuestos de la invención, se pueden preparar por varias técnicas
conocidas en la materia. A continuación se describen procedimientos
ilustrativos en los siguientes esquemas de reacción. Debe
entenderse que aunque los siguientes esquemas ilustrativos describen
la preparación de algunos compuestos representativos, la
sustitución adecuada de cualquiera o de ambos aminoácidos naturales
y no naturales dará como resultado la formación de los compuestos
deseados basados en dicha sustitución. En los siguientes ejemplos,
los ejemplos XXXX y XXXXII describen la preparación de compuestos de
la invención. Los demás ejemplos se proporcionan por referencia.
Las abreviaturas que se usan en las
descripciones de los esquemas, preparaciones y los ejemplos
siguientes, son:
THF: Tetrahidrofurano
DMF: N,N-Dimetilformamida
EtOAc: Acetato de etilo
AcOH: Ácido acético
HOOBt:
3-Hidroxi-1,2,3-benzotriazin-4(3H)-ona
EDCl: Hidrocloruro de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
NMM: N-Metilmorfolina
ADDP:
1,1'-(Azodicarboxil)dipiperidina
DEAD: Azodicarboxilato de dietilo
MeOH: Metanol
EtOH: Etanol
Et_{2}O: Éter dietílico
DMSO: Dimetilsulfóxido
HOBt: N-Hidroxibenzotriazol
PyBrOP: Hexafluorofosfato de
bromo-tris-pirrolidinofosfonio
DCM: Diclorometano
DCC:
1,3-Diciclohexilcarbodiimida
TEMPO:
2,2,6,6-Tetrametil-1-piperidiniloxi
Phg: Fenilglicina
Chg: Ciclohexilglicina
Bn: Bencilo
Bzl: Bencilo
Et: Etilo
Ph: Fenilo
iBoc: Isobutoxicarbonilo
iPr: Isopropilo
^{t}Bu o Bu^{t}: terc-Butilo
Boc: terc-Butiloxicarbonilo
Cbz: Benciloxicarbonilo
Cp: Cilcopentildienilo
Ts: p-toluenosulfonilo
Me: Metilo
HATU: Hexafluorofosfato de
O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio
DMAP:
4-N,N-Dimetilaminopiridina
Bop: Hexafluorofosfato de
benzotriazol-1-il-oxi-tris(dimetilamino)
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(Esquema pasa a página
siguiente)
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Los siguientes esquemas describen los métodos de
síntesis de unidades estructurales intermedias:
Esquema
1
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Esquema
2
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Esquema
3
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Esquema
4
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Esquema
5
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Esquema
6
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Esquema
7
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Esquema
8
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Esquema
9
Esquema
10
Esquema
11
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Esquema
12
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Esquema
13
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Esquema
14
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Esquema
15
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Esquema
16
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Esquema
17
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Esquema
18
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Esquema
19
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Esquema
20
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Ejemplo preparativo
1
Etapa A: Compuesto
(1.1)
A una disolución agitada del compuesto (1.08)
(3,00 g, 12,0 mmol (S.L. Harbeson et al. J. Med. Chem. 37
No.18 (1994) 2918-2929) en DMF (15 ml) y
CH_{2}Cl_{2} (15 ml) a -20ºC se añadió HOOBt (1,97 g, 12,0
mmol), N-metilmorfolina (4,0 ml, 36,0 mmol) y EDCl (2,79 g,
14,5 mmol) y se agitó durante 10 minutos, seguido de la adición de
HCl\cdotH_{2}N-Gly-OBn (2,56 g,
13,0 mmol). La disolución resultante se agitó a -20ºC durante 2 h,
se mantuvo refrigerada durante una noche y después se concentró
hasta sequedad, seguido de la dilución con EtOAc (150 ml). Después,
la disolución de EtOAc se lavó dos veces con disolución saturada de
NaHCO_{3}, H_{2}O, H_{3}PO_{4} al 5%, salmuera, se secó
sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró hasta sequedad para
dar al compuesto (1.09) (4,5 g, 94%). LRMS m/z MH^{+}=
395,1.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa B: Compuesto
(1.1)
Una disolución del compuesto (1.09) (7,00 g,
17,8 mmol) en etanol absoluto (300 ml) se agitó a temperatura
ambiente en una atmósfera de hidrógeno en presencia de
Pd-C (300 mg, 10%). El avance de la reacción se
siguió por tlc. Después de 2 h, la mezcla se filtró a través de una
almohadilla de celita y la disolución resultante se concentró a
vacío para dar el compuesto (1.1) (5,40 g, cuantitativo). LRMS
m/z MH^{+}= 305,1.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo preparativo
2
Etapa A: Compuesto
(1.3)
Una mezcla del compuesto (1.1) del ejemplo
preparativo 1, etapa B anterior (1 eq.), el compuesto (1.2) (de
Novabiochem, nº de catálogo
04-12-5147) (1,03 eq.), HOOBt (1,03
eq.), N-metilmorfolina (2,2 eq.) y dimetilformamida
(70 mUg) se agitó a -20ºC. Se añadió EDCl (1,04 eq.) y la reacción
se agitó durante 48 h. La mezcla de reacción se vertió en
KH_{2}PO_{4} acuoso al 5% y se extrajo con acetato de etilo (2
x). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con
K_{2}CO_{3} acuoso frío al 5%, después KH_{2}PO_{4} acuoso
al 5%, después salmuera, y la capa orgánica se secó sobre MgSO_{4}
anhidro. La mezcla se filtró, después se evaporó y el filtrado se
secó a vacío, el residuo se trituró con
Et_{2}O-hexano y se filtró para dar el compuesto
del título (1.3) (86% de rendimiento),
C_{25}H_{39}N_{3}O_{7} (493,60), espectro de masas (FAB) M+1
= 494,3.
\newpage
Etapa B: Compuesto
(1.4)
El compuesto (1.3) del ejemplo preparativo 2,
etapa A (3,0 g), se trató con HCl/dioxano 4 N (36 ml) y se agitó a
temperatura ambiente durante 7 min. La mezcla se vertió en 1,5
litros de hexano frío (5ºC) y se agitó, después se dejó reposar en
frío durante 0,5 h. La mezcla se filtró con succión en una atmósfera
seca y el sólido recogido se secó más para dar el compuesto del
título (1.4) (2,3 g, 88% de rendimiento), C_{20}H_{31}
N_{3}O_{5}\cdotHCl, RMN H^{1}
(DMSO-d_{6}/NaOD) \delta 7,38 (m, 5H), 5,25 (m,
1H), 4,3-4,1 (m, 1H), 3,8 (m, 2H),
3,4-3,3 (m, obscured by D_{2}O),
1,7-1,1 (m, 4H), 1,35 (s, 9H), 0,83 (m, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo preparativo
3
Compuesto
(1.5)
El compuesto (1.3) del ejemplo preparativo 2,
etapa A, se trató esencialmente de la misma forma que en el ejemplo
preparativo 7, etapa A anterior, para dar el compuesto (1.5).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo preparativo
4
Compuesto
(1.6)
El compuesto (1.5) del ejemplo preparativo 3, se
trató esencialmente de la misma forma que en el ejemplo preparativo
2, etapa B, para dar el compuesto (1.6).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo preparativo
5
Etapa A: Compuesto
(2.09)
A una disolución del hidrocloruro de
dimetilamina (1,61 g, 19,7 mmol),
N-Boc-fenilglicina, compuesto (2.08) (4,50 g,
17,9 mmol, Bachem Co. nº A-2225), HOOBt (3,07 g,
18,8 mmol) y EDCl (4,12 g, 21,5 mmol) en DMF anhidra (200 ml) y
CH_{2}Cl_{2} (150 ml) a -20ºC se añadió NMM (5,90 ml, 53,7
mmol). Después de agitar a esta temperatura durante 30 min, la
mezcla de reacción se mantuvo en un refrigerador durante una noche
(18 h). Después, se dejó calentar a t.a., y se añadieron EtOAc (450
ml), salmuera (100 ml) y H_{3}PO_{4} al 5% (100 ml). Después de
separar las capas, la capa orgánica se lavó con H_{3}PO_{4} al
5% (100 ml), disolución acuosa saturada de bicarbonato sódico (2 X
150 ml), agua (150 ml) y salmuera (150 ml), se secó (MgSO_{4}), se
filtró y se concentró a vacío para proporcionar el compuesto (2.09)
(4,86 g) en forma de un sólido blanco, que se usó sin más
purificación.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa B: Compuesto
(2.1)
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto (2.09) del ejemplo preparativo 5,
etapa A (4,70 g, bruto) se disolvió en HCl 4 N (60 ml, 240 mmol) y
la disolución resultante se agitó a temperatura ambiente. El avance
de la reacción se siguió por TLC. Después de 4 h, la disolución se
concentró a vacío para dar el compuesto (2.1) en forma de un sólido
blanco que se usó en la siguiente reacción sin más purificación.
LRMS m/z MH^{+}= 179,0.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo preparativo
6
Etapa A: Compuesto
(2.2)
\vskip1.000000\baselineskip
Esencialmente de la misma forma que el ejemplo
preparativo 2, etapa A, sustituyendo el hidrocloruro del éster de
t-butilo de fenilglicina por la
N,N-dimetilamida de fenilglicina, se preparó el
compuesto (2.2), espec. de masas (FAB) M+1 = 465,3.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa B: Compuesto
(2.3)
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto (2.2) de la etapa A (1,85 g) se
hizo reaccionar con HCl/dioxano 4 N (50 ml) a temperatura ambiente
durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío en un baño de agua a 20ºC,
se trituró en éter isopropílico, se filtró y se secó para
proporcionar el compuesto (2.3) (1,57 g, 98% de rendimiento),
C_{18}H_{28}N_{4}O_{4}\cdotHCl, espectro de masas
(FAB)
M+1 = 365,3.
M+1 = 365,3.
\newpage
Ejemplo preparativo
7
Etapa A: Compuesto
(2.4)
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución del compuesto (2.2) del ejemplo
preparativo 5, etapa A (2,0 g) en diclorometano (60 ml) se trató
con dimetilsulfóxido (3,0 ml) y ácido
2,2-dicloroacético (0,70 ml). La mezcla agitada se
enfrió a 5ºC y después se añadió disolución de
diciclohexilcarbodiimida/diclorometano 1 M (8,5 ml). El baño frió se
retiró y la mezcla se agitó durante 22 h. Después se añadió
2-propanol (0,5 ml) y se agitó durante 1 h
adicional. La mezcla se filtró, después se lavó con NaOH 0,1 N (50
ml) enfriado con hielo, después HCl 0,1 N (50 ml) enfriado con
hielo, después KH_{2}PO_{4} acuoso al 5%, y después salmuera
saturada. La disolución orgánica se secó sobre sulfato magnésico
anhidro y después se filtró. El filtrado se evaporó y se
cromatografió en gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo para
proporcionar el compuesto (2.3) (1,87 g, 94% de rendimiento),
C_{23}H_{34}N_{4}O_{6}, espectro de masas (FAB) M+1 =
463,3.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa B: Compuesto
(2.5)
\vskip1.000000\baselineskip
Esencialmente de la misma forma que el ejemplo
preparativo 2, etapa B, se preparó el compuesto (2.5).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo preparativo
8
Etapa A: Compuesto
(3.1)
\vskip1.000000\baselineskip
En un matraz se combinaron el éster de metilo de
la N-Cbz-hidroxiprolina (disponible
en Bachem Biosciences, Incorporated, King of Prussia,
Pennsylvania), el compuesto (3.01) (3,0 g), tolueno (30 ml) y
acetato de etilo (30 ml). La mezcla se agitó enérgicamente, y
después se añadió una disolución de NaBr/agua (1,28 g/5 ml). A esta
se le añadió el radical libre
2,2,6,6-tetrametil-1-piperidiniloxi
(TEMPO, 17 mg, de Aldrich Chemicals, Milwaukee, Wisconsin). La
mezcla agitada se enfrió a 5ºC y después se añadió gota a gota una
disolución preparada de oxidante [blanqueador disponible en el
comercio, Clorox® (18 ml), NaHCO_{3} (2,75 g) y agua hasta
completar 40 ml] a lo largo de 0,5 h. A esta se añadió
2-propanol (0,2 ml). La capa orgánica se separó, y
la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo. Los extractos
orgánicos se combinaron, se lavaron con tiosulfato sódico al 2% y
después salmuera saturada. La disolución orgánica se secó sobre
MgSO_{4} anhidro, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío para
dar una goma amarillo pálido adecuada para reacciones posteriores
(2,9 g, 97% de rendimiento), C_{14}H_{15}NO_{5} (277,28),
espectro de masas (FAB) M+1 = 278,1.
\newpage
Etapa B: Compuesto
(3.2)
El compuesto (3.1) de la etapa A anterior (7,8
g) se disolvió en diclorometano (100 ml) y enfrió a 15ºC. A esta
mezcla se añadió primero 1,3-propanoditiol (3,1 ml),
seguido de eterato de trifluoruro de boro recién destilado (3,7
ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 h.
Mientras se agitaba enérgicamente, se añadió con cuidado una
disolución de K_{2}CO_{3}/agua (2 g/30 ml), seguido de
disolución saturada de NaHCO_{3} (10 ml). La capa orgánica se
separó de la capa acuosa (pH - 7,4), se lavó con agua (10 ml) y
después salmuera. La disolución orgánica se secó sobre MgSO_{4}
anhidro, se filtró y se evaporó a vacío. El residuo se
cromatografió en gel de sílice, eluyendo con tolueno y después con
un gradiente de hexano-Et_{2}O (2:3 a 0:1) para
proporcionar un aceite marrón (7,0 g, 68% de rendimiento),
C_{17}H_{21} NO_{4}S_{2} (367,48), espectro de masas (FAB)
M+1 =368,1.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa C: Compuesto
(3.3)
Una disolución del compuesto (3.2) de la etapa B
anterior (45 g) en acetonitrilo (800 ml) a 20ºC, se trató con
yodotrimetilsilano recién destilado (53 ml) en una vez. La reacción
se agitó durante 30 min, después se vertió en una disolución recién
preparada de dicarbonato de
di-t-butilo (107 g), éter dietílico
(150 ml) y diisopropiletilamina (66,5 ml). La mezcla se agitó
durante 30 min más y después se lavó con hexano (2 x 500 ml). Se
añadió acetato de etilo (1000 ml) a la capa inferior de acetonitrilo
y después la capa se lavó con KH_{2}PO_{4} acuoso al 10% (2 x
700 ml) y salmuera. El filtrado se evaporó a vacío en un baño de
agua a 25ºC, se recogió en acetato de etilo reciente (1000 ml), y
se lavó sucesivamente con HCl 0,1 N, NaOH 0,1 N, KH_{2}PO_{4}
acuoso al 10% y salmuera. La disolución orgánica se secó sobre
MgSO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó a vacío. El residuo (66
g) se cromatografió en gel de sílice (2 kg), eluyendo con hexano (2
litros), después Et_{2}O/hexano (55:45, 2 litros) y después
Et_{2}O (2 litros) para proporcionar una goma naranja que
cristalizó lentamente al reposar (28 g, 69% de rendimiento),
C_{14}H_{23}NO_{4}S_{2} (333,46), espectro de masas (FAB)
M+1 = 334,1-.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa D: Compuesto
(3.4)
Una disolución del compuesto (3.3) de la etapa C
anterior (11 g) en dioxano (150 ml) a 20ºC se trató con LiOH acuoso
1 N (47 ml) y se agitó durante 30 h. La mezcla se concentró a vacío
en un baño a 30ºC hasta la mitad de volumen. El resto se diluyó con
agua (300 ml), se extrajo con Et_{2}O (2 x 200 ml). La capa acuosa
se acidificó a pH \sim4 con HCl 12 N (3-4 ml), se
extrajo con acetato de etilo, y se lavó con salmuera. La disolución
orgánica se secó sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó a
vacío para dar el compuesto (3.4) (8,1 g, 78%),
C_{13}H_{21}NO_{4}S_{2} (319,44), espectro de masas (FAB)
M+1 = 320,1.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa E: Compuesto
(3.5).
A una disolución del compuesto (3.3) de la etapa
C anterior (1 g) en dioxano (5 ml), se añadió disolución de
HCl-dioxano 4 N (50 ml). La mezcla se agitó
enérgicamente durante 1 h. La mezcla se evaporó a vacío en un baño a
25ºC. El residuo se trituró con Et_{2}O y se filtró para dar el
compuesto del título (0,76 g, 93% de rendimiento),
C_{9}H_{15}NO_{2}S_{2}\cdotHCl (269,81), espectro de masas
(FAB) M+1 = 234,0.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo preparativo
9
Etapa A: Compuesto
(3.6)
Siguiendo esencialmente el mismo procedimiento
del ejemplo preparativo 8, etapa B, sustituyendo el propanoditiol
por etanoditiol, se obtuvo el compuesto (3.6).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa B: Compuesto
(3.7)
Siguiendo esencialmente el mismo procedimiento
del ejemplo preparativo 8, etapa C, sustituyendo el compuesto (3.2)
por el compuesto (3.6), se obtuvo el compuesto (3.7).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa C: Compuesto
(3.8)
Siguiendo esencialmente el mismo procedimiento
del ejemplo preparativo 8, etapa C, sustituyendo el compuesto (3.3)
por el compuesto (3.7), se obtuvo el compuesto (3.8).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa D: Compuesto
(3.9)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Siguiendo esencialmente el mismo procedimiento
del ejemplo preparativo 8, etapa E, sustituyendo el compuesto (3.3)
por el compuesto (3.7), se obtuvo el compuesto (3.9).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo preparativo
10
Etapa A: Compuesto
(4.1)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esencialmente de la misma forma que en el
ejemplo preparativo 2, etapa A, se preparó el compuesto (4.1),
C_{33}H_{48}N_{4}O_{9}S_{2} (708,89).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa B: Compuesto
(4.2)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esencialmente de la misma forma que en el
ejemplo preparativo 2, etapa B, se preparó el compuesto (4.2),
espectro de masas (FAB) M+1 = 609,3.
\newpage
Etapa C: Compuesto
(4.3)
\vskip1.000000\baselineskip
Esencialmente de la misma forma que en el
ejemplo preparativo 2, etapa A, se preparó el compuesto (4.3),
C_{41}H_{61}N_{5}O_{10}S_{2} (708.89), espectro de masas
(FAB) M+1 = 709,3.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa D: Compuesto
(4.4)
\vskip1.000000\baselineskip
Esencialmente de la misma forma que el ejemplo
preparativo 7, etapa B, se preparó el compuesto (4.4).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo preparativo
11
Etapa A: Compuesto
(4.5)
\vskip1.000000\baselineskip
Esencialmente de la misma forma que el ejemplo
preparativo 2, etapa A, se preparó el compuesto (4.5).
\newpage
Etapa B: Compuesto
(4.6)
Esencialmente de la misma forma que el ejemplo
preparativo 2, etapa B, se preparó el compuesto (4.6).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa C: Compuesto
(4.7)
El compuesto (4.9) del ejemplo preparativo 12,
se hizo reaccionar con el compuesto (4.6) de la etapa B anterior,
esencialmente de la misma forma que en el ejemplo preparativo 2,
etapa A, para proporcionar el compuesto (4.7).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa D: Compuesto
(4.8)
Esencialmente de la misma forma que el ejemplo
preparativo 7, etapa A, se preparó el compuesto (4.8).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo preparativo
12
Compuesto
(4.9)
Una disolución de
L-ciclohexilglicina (4.02) (1,0 eq.),
dimetilformamida (20 ml/g) y diisopropiletilamina (1,1 eq.) a 5ºC
se trata con cloroformiato de isobutilo (4.01) (1,1 eq.). El baño
frío se retira y se agita durante 6 h. La mezcla de reacción se
vierte en KH_{2}PO_{4} acuoso al 5% y se extrae con acetato de
etilo (2 x). Los extractos orgánicos combinados se lavan con
K_{2}CO_{3} acuoso frío al 5%, después KH_{2}PO_{4} acuoso
al 5%, después salmuera, y los extractos orgánicos se secan sobre
MgSO_{4} anhidro. La mezcla e filtra, el filtrado se evapora a
vacío, el residuo se cromatografía si es necesario, o el residuo se
tritura con Et_{2}O-hexano, y se filtra para dar
el compuesto del título (4.9), C_{13}H_{23}NO_{4}
(257,33).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo preparativo
13
Compuesto
(13.1)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esencialmente de la misma forma que el ejemplo
preparativo 12, sustituyendo la L-ciclohexilglicina
(4.02) por la L-O-benciltreonina
(13.02) (Wang et al., J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, (1997)
No. 5, 621-624.), se prepara el compuesto (13.1)
C_{16}H_{23}NO_{5} (309,36), espectro de masas (FAB) M+1 =
310,2.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo preparativo
14
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto (4.8) del ejemplo preparativo 11,
etapa D (1,0 g) se hizo reaccionar con una disolución de ácido
trifluoroacético anhidro-diclorometano (1:1, 50 ml)
durante 2 h. La disolución se diluyó con xileno (100 ml) y se
evaporó a vacío. El residuo se trituró con Et_{2}O y se filtró
para dar el compuesto del título (5.1) (0,9 g),
C_{37}H_{53}N_{5}O_{9}S_{2} (775,98), espectro de masas
(FAB) M+1 =776,5.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa B: Compuesto
(5.2)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esencialmente de la misma forma que el ejemplo
preparativo 2, etapa A, se hizo reaccionar el compuesto (5.1) con
amoniaco (disolución 0,5 M en 1,4-dioxano), para
obtener el compuesto del título (5.2)
C_{37}H_{54}N_{6}O_{8}S_{2} (774,99), espectro de masas
(FAB) M+1 = 775,4.
\newpage
Ejemplo preparativo
15
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla del compuesto (5.1) del ejemplo
preparativo 14, etapa A (0,15 g), N,N-dimetilamina
(0,12 ml de disolución 2 M en THF), dimetilformamida (10 ml) y el
reactivo de acoplamiento PyBrOP (0,11 g) se enfrió a 5ºC, y después
se añadió diisopropiletilamina (DIEA o DIPEA, 0,12 ml). La mezcla se
agitó en frío durante 1 min y después se agitó a temperatura
ambiente durante 6 h. La mezcla de reacción se vertió en
H_{3}PO_{4} acuoso frío al 5% (50 ml) y se extrajo con acetato
de etilo (2 x). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con
K_{2}CO_{3} acuoso frío al 5%, después KH_{2}PO_{4} acuoso
al 5% y después salmuera. La disolución orgánica se secó sobre
MgSO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó a vacío. El residuo se
cromatografió en gel de sílice, eluyendo con
MeOH-CH_{2}Cl_{2} para dar el compuesto del
título (5.3), C_{39}H_{58}N_{6}O_{8}S_{2} (803,05), espec.
de masas (FAB) M+1 =803,5.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo preparativo
16
Etapa A: Compuesto
(6.2)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esencialmente de la misma forma que en el
ejemplo preparativo 2, etapa A, se hizo reaccionar el compuesto
(6.1) hidrocloruro del éster de bencilo de la hidroxiprolina con el
compuesto (4.9) del ejemplo preparativo 12, para obtener el
compuesto del título (6.2), C_{25}H_{36}N_{2}O_{6} (460,56),
espec. de masas (FAB) M+1 = 461,2.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa B: Compuesto
(6.3)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esencialmente de la misma forma que en el
ejemplo preparativo 8, se preparó el compuesto (6.3),
C_{25}H_{34}N_{2}O_{6} (458,55), espec. de masas (FAB) M+1 =
459,2.
\newpage
Etapa C: Compuesto
(6.4)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla del compuesto (6.3) de la etapa B (1
g), Pd/C al 10% (0,05 g) y EtOH (100 ml) se agitó con 1 atm de
H_{2} durante 6 h. La mezcla se filtró y se evaporó hasta sequedad
a vacío para dar el compuesto del título (6.4) (0,77 g),
C_{18}H_{28}N_{2}O_{6} (368,42) espec. de masas (FAB) M+1 =
369,2.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo preparativo
17
Etapa A: Compuesto
(7.1)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto (6.4) del ejemplo preparativo 16,
etapa C, se hizo reaccionar con el compuesto (2.3) del ejemplo
preparativo 6, etapa B, esencialmente de la misma forma que en el
ejemplo preparativo 2, etapa A, para proporcionar el compuesto
(7.1), C_{36}H_{54}N_{6}O_{9} (714,85), espec. de masas
(FAB) M+1 = 715,9.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa B: Compuesto
(7.2)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto (7.1) se hizo reaccionar
esencialmente de la misma forma que en el ejemplo preparativo 7,
etapa A, para proporcionar el compuesto (7.2),
C_{36}H_{52}N_{6}O_{9} (712,83), espec. de masas (FAB) M+1 =
713,5.
\newpage
Etapa C: Compuesto
(7.3)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto (7.2) de la etapa B anterior, se
hizo reaccionar esencialmente de la misma forma que en el ejemplo
preparativo 8, etapa B, con 1,4-butanoditiol, para
obtener el compuesto del título (7.3),
C_{40}H_{60}N_{6}O_{8}S_{2} (817,07), espec. de masas
(FAB) M+1 = 817,5.
Usando los procedimientos indicados antes y
descritos en esta memoria, se prepararon los compuestos de la
invención de la tabla 1 adjunta. Como nota general para la tabla 1
así como para los ejemplos y esquemas en esta memoria descriptiva,
cualquier átomo de nitrógeno en un extremo abierto con la valencia
no completada en las estructuras químicas en los ejemplos y la
tabla, se refiere a NH, o en el caso de un nitrógeno terminal a
-NH_{2}. Igualmente, cualquier átomo de nitrógeno en un extremo
abierto con la valencia no completada en las estructuras químicas y
en los ejemplos y la tabla, se refiere a -OH y cualquier átomo de
carbono en extremo abierto con la valencia no completada se completa
de forma adecuada con -H.
\vskip1.000000\baselineskip
La síntesis se hizo en un recipiente de reacción
que se construyó a partir de un cartucho de jeringuilla de
polipropileno equipado con una frita de polipropileno en la parte
inferior. Los aminoácidos protegidos con Fmoc se acoplaron mediante
técnicas en fase sólida habituales. Cada recipiente de reacción se
cargó con 100 mg de la resina de partida
Fmoc-Sieber (aproximadamente 0,03 mmol). La resina
se lavó con porciones de 2 ml de DMF (2 veces). El grupo protector
Fmoc se eliminó por tratamiento con 2 ml de una disolución de
piperidina en DMF al 20% v/v durante 20 min. La resina se lavó con
porciones de 2 ml de DMF (4 veces). El acoplamiento se hizo en DMF
(2 ml), usando 0,1 mmol de Fmoc-aminoácido, 0,1 mmol
de HATU [hexafluorofosfato de
O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio]
y 0,2 mmol de DIPEA (N,N-diisopropiletilamina).
Después de agitar durante 2 h, el recipiente de reacción se drenó y
la resina se lavó con porciones de 2 ml de DMF (4 veces). El ciclo
de acoplamiento se repitió con el siguiente
Fmoc-aminoácido o grupo terminal.
\vskip1.000000\baselineskip
La síntesis se llevó a cabo en un recipiente de
reacción que se construyó a partir de un cartucho de jeringuilla de
polipropileno equipado con una frita de polipropileno en la parte
inferior. El compuesto hidroxi unido a la resina (aproximadamente
0,03 mmol) se trató con una disolución de 0,12 mmol de peryodinano
de Dess-Martin y 0,12 mmol de t-BuOH
en 2 ml de DCM durante 4 h. La resina se lavó con porciones de 2 ml
de una disolución de iPrOH en DCM al 20% v/v, THF, una disolución de
THF en agua al 50% v/v (4 veces), THF (4 veces) y DCM (4 veces).
\newpage
Ejemplo preparativo
18
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de cianuro potásico (1,465 g,
22,5 mmol) y carbonato amónico (5,045 g, 52,5 mmol) en agua (15 ml)
se añadió una disolución de 2,3-dimetoxibenzaldehído
901A (2,5 g, 15 mmol) en etanol (15 ml). La mezcla de reacción se
calentó a 40ºC durante 24 h. El volumen de la disolución se redujo a
10 ml por evaporación a presión reducida. Se añadió ácido
clorhídrico concentrado (15 ml) y se obtuvo el compuesto 901B en
forma de un precipitado blanco. El compuesto 901B se aisló por
filtración (2,2 g, 9,3 mmol). El compuesto 901B se disolvió en
hidróxido sódico acuoso al 10% p/p (15 ml) y la disolución
resultante se calentó a reflujo durante 24 h. Se añadió ácido
clorhídrico concentrado y el pH se ajustó a neutro (pH 7). La
disolución resultante que contenía el compuesto 901C se evaporó a
presión reducida. El residuo se disolvió en disolución acuosa de
bicarbonato sódico al 5% p/p (150 ml). La disolución se enfrió a 0ºC
en un baño de hielo y se añadió 1,4-dioxano (30 ml)
y una disolución de 9-carbonato de fluorenilmetilo y
succinimidilo (2,7 g, 8 mmol) en 1,4-dioxano (30
ml) a 0ºC. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura
ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 24 h. El
1,4-dioxano se evaporó a presión reducida. La
disolución acuosa se lavó con éter dietílico. Se añadió ácido
clorhídrico concentrado y el pH se ajustó a ácido (pH 1). Se añadió
acetato de etilo, la capa orgánica se lavó con agua y salmuera. La
capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente
se evaporó a presión reducida para proporcionar el compuesto 901
deseado en forma de un sólido espumoso blanco (3,44 g, 7,9 mmol). EM
(LCMS-Electropulverización) 434,1 MH^{+}.
\newpage
Ejemplo preparativo
19
Compuesto
(801)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
N-Fmoc-fenilalanina 801A (5 g, 12,9
mmol) en DCM anhidro (22 ml) enfriada a -30ºC en un baño de hielo
seco-acetona, se añadió
N-metilpirrolidina (1,96 ml, 16,1 mmol) y
cloroformiato de metilo (1,2 ml, 15,5 mmol) secuencialmente. La
mezcla de reacción se agitó a -30ºC durante 1 h y se añadió una
disolución de hidrocloruro de
N,O-dimetilhidroxilamina (1,51 g, 15,5 mol) y
N-metilpirrolidina (1,96 ml, 16,1 mmol) en DCM
anhidro (8 ml). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura
ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Se
añadió tolueno y la capa orgánica se lavó con ácido clorhídrico
diluido, disolución acuosa de bicarbonato sódico y salmuera. La
capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente
se evaporó a presión reducida para proporcionar el compuesto 801B (4
g, 9,29 mmol).
A una disolución de Red-Al (6,28
ml, 21,4 mmol) en tolueno anhidro (8 ml) enfriada a -20ºC en un baño
de hielo seco-acetona se añadió una disolución del
compuesto 801B (4 g, 9,29 mmol) en tolueno anhidro (12 ml). La
mezcla de reacción se agitó a -20ºC durante 1,5 h. La capa orgánica
se lavó con ácido clorhídrico diluido, disolución acuosa de
bicarbonato sódico y salmuera. La capa orgánica se secó sobre
sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión
reducida y el producto bruto 801C se usó en la siguiente reacción
sin más purificación.
A una disolución del compuesto 801C (aprox. 9,29
mmol) en hexano (15 ml) se añadió una disolución de cianuro
potásico (24 mg, 0,37 mmol) y yoduro de tetrabutilamonio (34 mg,
0,092 mmol) en agua (4 ml) y cianhidrina de la acetona (1,27 ml,
13,9 mmol) de forma secuencial. La mezcla de reacción se agitó a
temperatura ambiente durante 24 h. Se añadió acetato de etilo y la
capa orgánica se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se secó
sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión
reducida para proporcionar el compuesto 801D (2,4 g, 6,03 mmol).
A una disolución del compuesto 801D (2,4 g, 6,03
mmol) en 1,4-dioxano (11 ml) se añadió ácido
clorhídrico concentrado (11 ml). La mezcla de reacción se calentó a
80ºC durante 3 h. Se añadió acetato de etilo (25 ml) y agua (25
ml). La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato
de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida para
proporcionar el compuesto 801 deseado en forma de un sólido espumoso
blanco (2 g, 4,8 mmol). EM
(LCMS-Electropulverización) 418,1 MH^{+}.
Los compuestos de la invención que se prepararon
y sus intervalos de actividad (Ki*) se dan en la Tabla 1 adjunta. El
procedimiento usado para preparar los compuestos en la Tabla 1 se
resumen a continuación.
Etapa
1
A una disolución de
N-terc-butoxicarbonil-piroglutamato
de terc-butilo (11,5 g, 40 mmol) en THF (200 ml)
agitando a -78ºC, se añadió gota a gota una disolución de
hexametildisilazida de litio 1 M en THF (42 ml, 42 mmol) a lo largo
de 5 minutos. Después de 30 minutos, se añadió yoduro de metilo
(3,11 ml, 50 mmol). Después de 2 horas adicionales a -78ºC, se
quitó el baño de enfriamiento y se añadió disolución acuosa saturada
de cloruro amónico al 50% (200 ml). La disolución se agitó durante
20 minutos y después se extrajo con éter dietílico (3 x 200 ml).
Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (200 ml), se
secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron. El
residuo se cromatografió con acetato de etilo/hexano 1:1 para dar
Boc-PyroGlu(4-metil)-OtBu
(10,6 g, 35,4 mmol, 88%) en forma de una mezcla de isómeros (cis a
trans 2:1).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
A una disolución de
N-terc-butoxicarbonil-4-metil-L-piroglutamato
de terc-butilo (1,2 g, 4,0 mmol) en tetrahidrofurano
(20 ml) agitando a -78ºC, se añadió gota a gota una disolución de
hexametildisilazida de litio 1 M en tetrahidrofurano (4,4 ml, 4,4
mmol) a lo largo de 5 minutos. Después de 30 minutos, se añadió
yoduro de metilo (0,33 ml, 5,2 mmol). Después de 3 horas
adicionales a -78ºC, se quitó el baño de enfriamiento y se añadió
disolución acuosa saturada de cloruro amónico al 50% (40 ml). La
disolución se agitó durante 20 minutos y después se extrajo con
éter dietílico (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se
lavaron con agua (2 \times 25 ml), disolución saturada de
bicarbonato sódico (2 \times 25 ml), salmuera (50 ml), se secaron
(Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron para dar
Boc-PyroGlu(4,4-dimetil)-OtBu
(0,673 g, 54%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Modificación del procedimiento conocido:
Pedregal, C.; Ezquerra, J.; Escribano, A.; Carreno, M. C.; Garcia
Ruano, J. L. Tetrahedron Letters 1994, 35(13),
2053-2056).
A una disolución de
N-terc-butoxicarbonil-4,4-dimetilpiroglutamato
de terc-butilo (2,0 mmol) en tetrahidrofurano (5
ml) agitando a -78ºC, se añadió gota a gota una disolución de
trietilborohidruro de litio 1 M en tetrahidrofurano (2,4 ml, 2,4
mmol) a lo largo de 5 minutos. Después de 30 minutos, se quitó el
baño de enfriamiento y se añadió disolución acuosa saturada de
bicarbonato sódico (5 ml). La mezcla de reacción se sumergió en un
baño de hielo/agua y se añadió peróxido de hidrógeno acuoso al 30%
(10 gotas). La disolución se agitó durante 20 minutos a 0ºC y
después la mezcla de reacción se concentró a vacío para separar el
tetrahidrofurano. La disolución acuosa se diluyó con agua (10 ml) y
se extrajo con diclorometano (3 x 40 ml). Las capas orgánicas se
secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron. El
residuo se disolvió en diclorometano (20 ml) y trietilsilano (310
\mul, 2,0 mmol), después enfrió a -78ºC y se añadió gota a gota
dietileterato de trifluoruro de boro (270 \mul, 2,13 mmol). La
agitación se continuó durante 30 minutos, momento en el que se
añadieron trietilsilano (310 \mul, 2,0 mmol) y dietileterato de
trifluoruro de boro (270 \mul, 2,13 mmol) adicionales. Después de
agitar a -78ºC durante 2 horas adicionales, se quitó el baño de
enfriamiento y se añadió disolución acuosa saturada de bocarbonato
sódico (4 ml). Después de 5 minutos, la mezcla se extrajo con
diclorometano (3 x 40 ml). Las capas orgánicas se secaron
(Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron para dar
Boc-Pro(4,4-dimetil)-OtBu.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
Una disolución de éster de
terc-butilo de la
N-terc-butoxicarbonil-4,4-dimetilprolina
en diclorometano (5 ml) y ácido trifluoroacético (5 ml) se agitó a
temperatura ambiente durante 5 horas. La disolución se concentró, se
secó con alto vacío y se llevó a la siguiente etapa sin más
purificación.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
A una disolución de la sal del ácido
trifluoroacético de la 4,4-dimetilprolina (1,5 mmol)
en dioxano (7 ml), acetonitrilo (12 ml) y diisopropiletilamina (700
\mul, 4 mmol), se añadió una disolución de dicarbonato de
di-terc-butilo (475 mg, 2,18 mmol)
en acetonitrilo (5 ml). Después de agitar durante 12 h a temperatura
ambiente, la disolución se concentró a vacío, se disolvió en
disolución acuosa saturada de bicarbonato sódico (50 ml) y se lavó
con éter dietílico (3 \times 40 ml). La capa acuosa se acidificó a
pH=3 con ácido cítrico, y después se extrajo con diclorometano (3
\times 40 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre
sulfato sódico, se filtraron y se concentraron.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
6
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
Boc-Pro(4,4-diMe)-OH
(0,5 g, 2,06 mmol) en metanol anhidro (8 ml) se añadió gota a gota
cloruro de tionilo (448 ml, 6,18 mmol) y la reacción se agitó
durante 6 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se
concentró hasta un sólido amorfo (377 mg, 95%).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos en los que R es alilo y bencilo
se sintetizaron siguiendo las siguientes etapas
1-4:
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
N-terc-butoxicarbonil-4-metil-L-piroglutamato
de terc-butilo (10,2 g, mmol) (véase el ejemplo I,
etapa 1) en tetrahidrofurano (170 ml) agitando a -78ºC, se añadió
gota a gota una disolución de hexametildisilazida de litio 1 M en
tetrahidrofurano (37,5 ml, 37,5 mmol) a lo largo de 5 minutos.
Después de 40 minutos, se añadió haluro de alquilo (61,4 mmol).
Después de 3 horas adicionales a -78ºC, se quitó el baño de
enfriamiento y se añadió disolución acuosa saturada de cloruro
amónico al 50% (200 ml). La disolución se agitó durante 20 minutos
y después se extrajo con éter dietílico (2 x 200 ml). Las capas
orgánicas combinadas se diluyeron con hexano (150 ml) y se lavaron
con disolución saturada de bicarbonato sódico (100 ml), agua (2
\times 100 ml) y salmuera (100 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}),
se filtraron y se concentraron. El residuo se cromatografió por
cromatografía ultrarrápida usando acetato de etilo al 20% en hexanos
para dar el
N-terc-butoxicarbonil-4-alquil-4-metil-L-piroglutamato
de terc-butilo.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Modificación del procedimiento conocido:
Pedregal, C.; Ezquerra, J.; Escribano, A.; Carreno, M. C.; Garcia
Ruano, J. L. Tetrahedron Letters (1994) 35(13),
2053-2056).
A una disolución de
N-terc-butoxicarbonil-4-alquil-4-metilpiroglutamato
de terc-butilo (16,6 mmol) en tetrahidrofurano (40
ml) agitando a -78ºC, se añadió gota a gota una disolución de
trietilborohidruro de litio 1 M en tetrahidrofurano (20 ml, 20
mmol) a lo largo de 10 minutos. Después de 120 minutos, el baño de
enfriamiento se dejó calentar a -25ºC, momento en el que se añadió
disolución acuosa saturada de bicarbonato sódico (40 ml). La mezcla
de reacción se sumergió en un baño de hielo/agua y se añadió
peróxido de hidrógeno acuoso al 30% (4 ml). La disolución se agitó
durante 10 minutos a 0ºC y después la mezcla de reacción se
concentró a vacío para separar el tetrahidrofurano. La disolución
acuosa se diluyó con agua (300 ml) y se extrajo con diclorometano (3
x 200 ml). Las capas orgánicas se secaron (sulfato sódico), se
filtraron y se concentraron. El residuo se disolvió en diclorometano
(100 ml) y trietilsilano (2,6 ml, mmol), después se enfrió a -78ºC
y se añadió gota a gota dietileterato de trifluoruro de boro (2,2
ml, mmol). La agitación se continuó durante 1 h, momento en el que
se añadieron trietilsilano (2,6 ml, mmol) y dietileterato de
trifluoruro de boro (2,2 ml, mmol) adicionales. Después de agitar a
-78ºC durante 4 h adicionales, se retiró el baño de enfriamiento, y
se añadieron disolución acuosa saturada (30 ml) y agua (150 ml).
Después de 5 minutos, la mezcla se extrajo con diclorometano (3 x
200 ml). Las capas orgánicas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se
filtraron y se concentraron.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de éster de
terc-butilo de la
N-terc-butoxicarbonil-4-alquil-4-metilprolina
en diclorometano (5 ml) y ácido trifluoroacético (5 ml) se agitó a
temperatura ambiente durante 5 horas. Se añadió tolueno y la
disolución se concentró y después se secó con alto vacío.
\newpage
Etapa
4
A una disolución de la sal del ácido
trifluoroacético de la
4-alquil-4-metilprolina
(1,5 mmol) en dioxano (7 ml), acetonitrilo (12 ml) y
diisopropiletilamina (700 \mul, 4 mmol), se añadió una disolución
de dicarbonato de di-terc-butilo
(475 mg, 2,18 mmol) en acetonitrilo (5 ml). Después de agitar
durante 12 h a temperatura ambiente, la disolución se concentró a
vacío, se disolvió en disolución acuosa saturada de bicarbonato
sódico (50 ml) y se lavó con éter dietílico (3 x 40 ml). La capa
acuosa se acidificó a pH=3 con ácido clorhídrico 1 N y después se
extrajo con diclorometano (3 x 40 ml). Las capas orgánicas
combinadas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se
concentraron. El residuo se purificó por cromatografía instantánea
usando acetato de etilo/hexanos 1:1 con ácido acético al 1%.
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de
N-terc-butoxicarbonil-4-alil-4-metilprolina
(400 mg, 1,48 mmol) (véase el ejemplo II, etapa 4) y Pd sobre carbón
al 10% Pd (400 mg) en metanol (20 ml) se hidrogenó a 3,5 kg/cm^{2}
durante 4 horas. La mezcla se filtró y se concentró.
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de
Boc-4-fenilprolina disponible en el
comercio (750 mg) y Rh sobre carbón al 5% (750 mg) en metanol (15
ml) se hidrogenó a 3,5 kg/cm^{2} durante 24 horas. La mezcla se
filtró y se concentró para dar 730 mg de producto.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución enfriada (-78ºC) del
N'-Boc-piroglutamato de
terc-butilo (10 g, 35,1 mmol) en THF (175 ml) se
añadió hexametildisilazida de litio (36,8 ml, 36,8 mmol) a lo largo
de 5 minutos. Se continuó la agitación durante 30 minutos. Se
añadió gota a gota una disolución de bromuro de alilo (6,1 ml, 70,2
mmol) en THF (39 ml) a la primera disolución. Después de 2 h a
-78ºC, la reacción se inactivó por la adición lenta de disolución
saturada de cloruro amónico (50 ml). Después, la mezcla de reacción
se diluyó con acetato de etilo y se separaron las capas. La capa
orgánica se secó sobre sulfato magnésico y se concentró.
La cromatografía en columna ultrarrápida llevada
a cabo en acetato de etilo:hexano 2:8 proporcionó el producto (6 g,
53%). RMN \delta ppm (CDCl3): 5,7 (m, 1H), 5,1 (dd, 2H), 4,4 (m,
1H), 2,6 (m, 2H), 2,4 (m, 1H), 1,8-2,2 (m, 1H), 1,45
(s, 9H), 1,4 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El éster de terc-butilo del
ácido
N-Boc-(4-alil)-piroglutámico
obtenido en la etapa 1 anterior (2,68 g, 8,24 mmol) se sometió a una
segunda alquilación con bromuro de alilo en condiciones similares.
La cromatografía ultrarrápida en acetato de etilo:hexanos 15:85
proporcionó 2,13 g de producto (71%) en forma de un aceite
transparente.
\newpage
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
Parte a: A una disolución enfriada (-78ºC) de
éster de terc-butilo de
Boc-PyroGlu(4,4-dialilo)
(2,13 g, 5,83 mmol) en tetrahidrofurano (14 ml) se añadió
trietilborohidruro de litio (1 M en tetrahidrofurano, 7,29 ml, 7,29
mmol) a lo largo de 5 minutos. Después de 2 h a -78ºC, la reacción
se calentó hasta 0ºC y se inactivó por la adición lenta de
disolución acuosa saturada de bicarbonato sódico (20 ml) y peróxido
de hidrógeno al 30% (20 gotas). Se continuó la agitación durante 20
minutos. El tetrahidrofurano se separó a presión reducida y el
residuo blanco espeso que quedaba se diluyó con agua (80 ml) y se
extrajo 3 veces con diclorometano. La capa orgánica se secó, se
filtró y se concentró, y se llevó a la siguiente etapa sin más
purificación.
Parte b): Al producto obtenido en la parte (a)
en diclorometano (14 ml) se añadió trietilsilano (931 \mul, 5,83
mmol) seguido de dietileterato de trifluoruro de boro (776 \mul,
6,12 mmol). Después de 30 minutos se añadieron más trietilsilano
(931 \mul, 5,83 mmol) y dietileterato de trifluoruro de boro (776
\mul, 6,12 mmol) y la reacción se agitó a -78ºC durante 3 h,
momento en el que la reacción se inactivó por adición lenta de
disolución saturada de bicarbonato sódico y agua. La mezcla de
reacción se extrajo con diclorometano y la capa orgánica se secó,
se filtró y concentró. La cromatografía en columna ultrarrápida en
acetato de etilo en hexanos al 15% proporcionó 1,07 g de aceite
incoloro (57%). RMN \delta ppm (CDCl3): 5,7-5,8
(m, 2H), 5,1 (m, 4H), 4,1-4,2 (2 dd, 1H rotámeros),
3,5-3,3 (dd, 1H) y 3,2 (dd, 1H) rotámeros,
2,2-2,0 (m, 5H), 1,7(m, 1H), 1,46 (s, 9H),
1,43 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
Al éster de terc-butilo de
Boc-Pro(4,4-dialilo) (1,07 g,
3,31 mmol) en diclorometano (66 ml) se añadió dicloruro de
bis(triciclohexilfosfin)benciliden-rutenio
IV al 5% (catalizador de Grubbs) y la mezcla se calentó a reflujo
durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se concentró y el residuo
restante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida con
acetato de etilo en hexanos al 15%. Se obtuvo un aceite amarillo
(0,57 g, 53%). RMN \delta ppm (CDCl3): 5,56 (s ancho, 2H), 4,2 y
4,1 (t, 1H, rotámeros), 3,2-3,5 (m, 2H),
2,2-2,5 (m, 5H), 1,9 (dd, 1H) 1,47 y 1,46 (2 s, 9H,
rotámeros), 1,45 y 1,44 (2 s, 9H, rotámeros).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de éster de
terc-butilo de
Boc-Pro(4-espirociclopenteno)
(1,12 g) en metanol (18 ml), agua (4 ml) y ácido acético (4 ml) se
puso en un agitador Parr y se hidrogenó durante 3 horas a 0,245
kg/cm^{2} en presencia de paladio sobre carbón al 10% (300 mg). El
catalizador se separó por filtración y el filtrado se concentró
hasta un aceite incoloro (1,26 g). RMN \delta ppm (CDCl3): 4,1 y
4,2 (t, 1H, rotámeros, 3,4 (d, 1H), 3,2 (d, 1H), 2,1 (m, 1H), 1,9
(m, 1H), 1,6-1,7 (m, 10H), 1,5 (3 s, 18H,
rotámeros).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El éster de terc-butilo de
Boc-Pro(4-espirociclopentano)
(1,26, 3,9 mmol) se trató con diclorometano (10 ml) y ácido
trifluoroacético (15 ml) durante 3 h. La mezcla de reacción se
concentró y el aceite amarillo obtenido se disolvió en agua (6 ml).
Se añadió en porciones carbonato de fluorenilmetilo y succinilo
(1,45 g, 4,3 mmol) disuelto en dioxano (6 ml) seguido de la adición
de carbonato potásico (2,16 g, 15,6 mmol). La reacción se agitó
durante 18 horas y se concentró. El residuo que quedaba se diluyó
con la disolución saturada de bicarbonato sódico (10 ml) y se lavó
con éter dietílico (3 \times 10 ml). La capa acuosa después se
acidificó a pH -1 con disolución de bisulfato sódico 1 N y se
extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre sulfato
sódico, se filtró y se concentró hasta una espuma beige (1,3 g,
100%).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de
N^{\Box}-terc-butoxicarbonil-trans-4-hidroxi-prolina
(8,79 g, 38 mmol) disponible en el comercio, carbonato de potasio
(13,0 g, 94 mmol), bromuro de bencilo (4,5 ml, 38 mmol) y
dimetilformamida (150 ml) se agitó durante 18 h. A la adición de
acetato de etilo (100 ml) le siguió la filtración. El filtrado
turbio blanco se aclaró por adición de HCl 1 M (100 ml). Se
separaron las capas y la capa acuosa se extrajo con acetato de
etilo adicional (2 \times 100 ml). Las capas orgánicas combinadas
se lavaron con agua (2 \times 50 ml), se secaron (sulfato
sódico), se filtraron y concentraron. Se añadió tolueno al éster de
bencilo bruto y la disolución se filtró y se volvió a concentrar.
Se añadieron diclorometano (70 ml) y tetracloruro de carbono (70
ml), seguido de trifenilfosfina (21,11 g, 80 mmol). La mezcla de
reacción se agitó durante 10 h, se inactivó con etanol (7 ml) y se
agitó durante 5 h más. La disolución se concentró hasta
aproximadamente 100 ml, después se añadió diclorometano (40 ml),
seguido de la adición de éter dietílico (200 ml) mientras se
agitaba. La disolución se enfrió durante 4 h, se filtró y se
concentró para dar un aceite marrón-amarillo que se
purificó por cromatografía ultrarrápida usando éter
etílico/hexano/diclorometano 2:2:1 para dar el compuesto del título
(9,13 g, 26,9 mmol, 71%) en forma de un sólido blanco.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Una disolución del éster de bencilo de la
N^{\alpha}-terc-butoxicarbonil-cis-4-cloro-L-prolina
(9,0 g, 26,5 mmol) y azida sódica (7,36 g, 113 mmol) en
dimetilformamida (270 ml) se calentó a 75ºC durante 2 días. Se
añadió agua (100 ml) y la mezcla de reacción se extrajo con acetato
de etilo (3 \times 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se
lavaron con agua (3 \times 50 ml), se secaron (sulfato sódico), se
filtraron y concentraron. El aceite se purificó por cromatografía
ultrarrápida usando acetato de etilo/hexanos 1:1 para dar el
compuesto del título (8,59 g, 24,8 mmol, 94%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Una mezcla de éster de bencilo
N-\alpha-t-butoxicarbonil-trans-4-azido-L-prolina
(8,59 g, 24,8 mmol) y paladio sobre carbón al 10% (900 mg) en
etanol (500 ml) se hidrogenó 3,5 kg/cm^{2} durante 14 h usando un
aparato de hidrogenación Parr. La mezcla se filtró, se concentró,
se disolvió en metanol (60 ml), se volvió a filtrar y se concentró
para dar un aceite incoloro. El aceite se disolvió en agua (53 ml)
que contenía carbonato de sodio (5,31 g, 50,1 mmol) y se añadió una
disolución de carbonato de fluorenilmetilo y succinilo (8,37 g,
29,8 mmol) en dioxano (60 ml) a lo largo de 40 min. La mezcla de
reacción se agitó a temperatura ambiente durante 17 h, después se
concentró para separar el dioxano y se diluyó con agua (200 ml). La
disolución se lavó con éter dietílico (3 \times 100 ml). El pH de
la disolución se ajustó a 2 mediante la adición de ácido cítrico
(¡precaución! ¡formación de espuma!) y agua (100 ml). La mezcla se
extrajo con diclorometano (400 ml, 100 ml, 100 ml) y las capas
orgánicas combinadas se secaron (sulfato sódico), se filtraron y se
concentraron para dar el compuesto del título.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
A Una mezcla de
cis-hidroxi-L-prolina
(5 g, 38,1 mmol) en benceno (45 ml) y alcohol bencílico (45 ml) se
añadió ácido p-toluenosulfónico monohidrato (7,6 g,
40,0 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 125ºC durante 20 h
mientras se eliminaba el agua (2 ml) usando una trampa de
Dean-Stark. La disolución se filtró mientras
todavía estaba caliente, y después se añadió éter etílico (150 ml).
La disolución se dejó enfriar durante 3 h a temperatura ambiente,
después 3 h a 4ºC. El sólido resultante se recogió, se lavó con éter
dietílico (100 ml) y se secó a vacío durante 1 h para dar 13,5
gramos de sólido blanco. El sólido se disolvió en dioxano (40 ml) y
diisopropiletilamina (7,6 ml), y después se añadió dicarbonato de
di-terc-butilo (10 g, 45,8 mmol) a
lo largo de 5 min mientras se usaba un baño de hielo para mantener
la temperatura de reacción constante. Después de 10 h a temperatura
ambiente la mezcla de reacción se vertió en agua fría (200 ml) y se
extrajo con acetato de etilo (3 \times 200 ml). Las capas
orgánicas combinadas se lavaron con agua (3 \times 100 ml) y
disolución acuosa saturada de cloruro sódico (50 ml), se secaron
(sulfato sódico), se filtraron y se concentraron. El producto bruto
se purificó por cromatografía ultrarrápida usando acetato de etilo
en hexanos al 40-60% para dar el compuesto del
título (10,04 g, 31,24 mmol, 82%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
A una disolución de
Boc-Pro(4-cis-OH)-OBn
(8,45 g, 26,3 mmol) en piridina (65 ml) a 0ºC, se añadió gota a
gota cloruro de metanosulfonilo (3,4 ml, 44 mmol) a lo largo de 7
min. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente
a lo largo de 2 h y después se agitó durante una noche. Se añadió
una disolución de agua en piridina al 10% (20 ml) a lo largo de 15
min y la mezcla de reacción se concentró. El residuo se disolvió en
agua y se extrajo con acetato de etilo (2 \times 200 ml). Las
capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (2 \times 50 ml),
disolución acuosa saturada de bicarbonato sódico (50 ml) y
disolución acuosa saturada de cloruro sódico (50 ml), se secaron
(sulfato sódico), se filtraron y se concentraron. El residuo
resultante se disolvió en tolueno (100 ml) y se concentró para
eliminar las cantidades en trazas de piridina. El residuo se secó a
vacío durante 30 min para dar el compuesto del título (10,7 g, 102%)
y después se usó en la siguiente etapa sin purificar.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Una disolución de
Boc-Pro(4-cis-OMs)-OBn
(10,7 g, 26,3 mmol) y cianuro de tetrabutilamonio (15,0 g, 56 mmol)
en dimetilformamida (100 ml) se calentó en un baño de aceite a 55ºC
durante 28 h. Después de enfriar, se añadió agua (150 ml) y la
mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 \times 200 ml). Las
capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (3 \times 100 ml)
y disolución acuosa saturada de cloruro sódico (100 ml), se secaron
(sulfato sódico), se filtraron y se concentraron. El residuo
resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida (éter
dietílico/hexanos 1:1) y después se recristalizó en acetato de
etilo/hexanos para proporcionar el compuesto del título (2,40 g,
7,26 mmol, 28%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
Una mezcla del compuesto de la etapa 3 anterior
(2,31 g, 7 mmol), agua (10 ml), metanol (85 ml) y paladio sobre
carbón al 10% (700 mg) se hidrogenó a 3,5 kg/cm^{2} durante 11 h
usando un aparato de hidrogenación Parr. La mezcla se filtró y se
concentró. Se añadió al residuo agua (15 ml) y carbonato de sodio
(1,5 g, 14,2 mmol). Se añadió una disolución de carbonato de
fluorenilmetilo y succinilo (2,36 g, 7,0 mmol) en dioxano (17 ml) a
lo largo de 5 min y la agitación se continuó durante 28 h a
temperatura ambiente. La reacción se concentró a vacío hasta un
volumen de 15 ml y se añadió agua (100 ml). La disolución se lavó
con éter dietílico (3 \times 75 ml). El pH de la disolución se
ajustó a 2 mediante la adición de ácido cítrico (aproximadamente 20
g, ¡precaución! ¡formación de espuma!) y agua (100 ml). La mezcla se
extrajo con diclorometano (4 \times 100 ml), y las capas
orgánicas combinadas se secaron (sulfato sódico), se filtraron y
concentraron. El producto bruto contenía una impureza importante
que necesitó una purificación de 3 etapas. El producto bruto se
disolvió en diclorometano (50 ml) y ácido trifluoroacético (50 ml) y
se agitó durante 5 h antes de concentrar. El residuo se purificó
por HPLC de fase inversa preparativa. Se disolvió la sal de
trifluoroacetato de
4-(N-fluorenilmetiloxicarbonil-aminometil)prolina
(1,887 g, 3,93 mmol) en dioxano (10 ml), acetonitrilo (20 ml) y
diisopropiletilamina (1,4 ml, 8 mmol). A la mezcla de reacción se
añadió una disolución de dicarbonato de
di-terc-butilo (1,1 g, 5 mmol) en
dioxano (5 ml). Después de agitar durante 18 h, el pH de la
disolución se ajustó a 2 mediante la adición de ácido cítrico
(¡precaución! ¡formación de espuma!) y agua (100 ml). La mezcla se
extrajo con acetato de etilo (3 \times 150 ml) y las capas
orgánicas combinadas se lavaron con disolución acuosa saturada de
cloruro sódico (100 ml), se secaron (sulfato sódico), se filtraron y
concentraron. El producto bruto se disolvió en disolución acuosa
saturada de bicarbonato sódico (100 ml) y se lavó con éter
dietílico (3 \times 75 ml). La capa acuosa se ajustó a pH = 3 por
adición de ácido cítrico y después se extrajo con diclorometano (4
\times 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato
sódico), se filtraron y se concentraron hasta el compuesto del
título (1,373 g, 2,94 mmol, 42%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
A una disolución con agitación de yoduro de
isopropiltrifenilfosfonio (4,14 g, 9,58 mmol) en tetrahidrofurano
(60 ml) a 0ºC, se añadió
n-butil-litio (1,6 M en hexanos,
5,64 ml, 9,02 mmol) a lo largo de 5 min. Después de 30 min, se
añadió una disolución de enamida
((5R,7S)-5-fenil-5,6,7,7a-tetrahidro-6-oxapirrolizin-3-ona)
(1,206 g, 6,0 mmol) (véase J. Org. Chem. 1999, 64(2),
547, para la síntesis del material de partida enamida) en
tetrahidrofurano (40 ml) a lo largo de 10 min. Después de 10 min
adicionales, se quitó el baño de enfriamiento y la mezcla de
reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La
reacción se vertió en agua (400 ml) y se extrajo con éter dietílico
(400 ml) y acetato de etilo (2 \times 400 ml). Los extractos
orgánicos combinados se secaron con sulfato sódico, se filtraron y
se concentraron para dar el producto bruto deseado. El residuo se
purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con acetato de
etilo/hexanos/cloruro de metileno 3:5:2 para dar el producto
ciclopropanado puro (750 mg, 3,08 mmol, 51%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Una mezcla del producto obtenido en la etapa 1
anterior (1,23 g, 5,06 mmol) e hidruro de litio y aluminio (1,0 M
en THF, 15 ml, 15 mmol) se calentó a reflujo durante 5 horas.
Después de enfriar a 0ºC, el hidruro de aluminio que quedaba se
inactivó con cuidado por la adición gota a gota de disolución acuosa
saturada de sulfato sódico (1,5 ml) a lo largo de 15 min. La mezcla
se diluyó con acetato de etilo (40 ml) y después se filtró a través
de celita. El filtrado se secó con sulfato sódico, se filtró y se
concentró para dar el
N-bencil-aminoalcohol (1,25 g), que
se llevó a la siguiente etapa sin más purificación. Una disolución
del N-bencil-aminoalcohol bruto
(1,25 g, 5,06 mmol) en ácido acético/acetato de etilo 1:1 (30 ml)
con Pd/C al 10% (1 g) se hidrogenó a 3,5 kg/cm^{2} durante 16
horas usando un aparato de hidrogenación Parr. La mezcla de reacción
se filtró para separar el catalizador basado en carbón y el
filtrado se concentró. El residuo se disolvió en agua (30 ml) y el
pH se ajustó a 13 con NaOH al 50%. La mezcla se extrajo con éter
dietílico (3 \times 60 ml). Los extractos combinados se secaron
con sulfato sódico, se filtraron y se concentraron para dar el
aminoalcohol bruto (485 mg, 3,43 mmol). Este material se llevó a la
siguiente etapa sin más purificación.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
A una disolución de hidrocloruro de
ciclohexilglicina disponible en el comercio (15 g, 77,4 mmol) en
acetonitrilo (320 ml) y agua (320 ml) se añadió carbonato de
potasio. Se añadió cloroformiato de isobutilo (11,1 ml, 85,1 mmol)
a la disolución transparente a lo largo de 15 minutos y la reacción
se agitó durante 17 horas. El acetonitrilo se separó a presión
reducida y la capa acuosa que quedaba se extrajo dos veces con éter
dietílico (100 ml). La capa acuosa después se acidificó a pH 1 con
ácido clorhídrico 6 N y después se extrajo con diclorometano (3 x
300 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y
se concentró para dar 18,64 g (94%) de producto en forma de un
sólido blanco.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
A una disolución de
iBoc-G(Chx)-OH (890 mg, 3,45
mmol) en acetonitrilo (20 ml) se añadió HATU (1,33 g, 3,5 mmol),
HOAt (476 mg, 3,5 g) y después diisopropiletilamina (2,5 ml, 14
mmol). Después de 2 minutos, se añadió
3,4-isopropilidenprolinol (485 mg, 3,43 mmol) y la
mezcla de reacción se agitó durante una noche. A la adición de
disolución acuosa saturada de bicarbonato sódico le siguió la
extracción con éter dietílico y acetato de etilo. Las capas
orgánicas combinadas se secaron, se filtraron y se concentraron. El
residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con
acetato de etilo/hexanos 1:1 para dar el alcohol dipeptídico puro
iBoc-G(Chx)-3,4-isopropilidenprolinol
(870 mg, 2,3 mmol, 67%).
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución del alcohol dipeptídico
iBoc-G(Chx)-3,4-isopropilidenprolinol
(100 mg, 0,26 mmol) en acetona (2 ml) con agitación a 0ºC, se
añadió gota a gota reactivo de Jones (300 \mul) a lo largo de 5
min. [Reactivo de Jones: Preparado a partir de trióxido de cromo
(13,4, g) y ácido sulfúrico concentrado (11,5 ml) diluido con agua
hasta un volumen total de 50 ml.] Después de agitar a 0ºC durante 3
horas, se añadió isopropanol (500 \mul) y se continuó la
agitación durante 10 minutos adicionales. La mezcla de reacción se
diluyó con agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 70
ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron, se filtraron y se
concentraron para dar el dipéptido
iBoc-G(Chx)-3,4-isopropilidenprolina
(100 mg, 0,25 mmol, 96%).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de material de partida de bencilideno
(J. Org. Chem. 1999, 64(2), 547) (4,6 g, 21,4 mmol) e
hidruro de litio y aluminio (1,0 M en THF, 64 ml, 64 mmol) se
calentó a reflujo durante 5 horas. Después de enfriar a 0ºC, el
hidruro de aluminio que quedaba se inactivó con cuidado por la
adición gota a gota de disolución acuosa saturada de sulfato sódico
(5 ml) a lo largo de 15 min. La mezcla se diluyó con acetato de
etilo (200 ml) y después se filtró a través de celita. El filtrado
se secó con sulfato sódico, se filtró y se concentró para dar el
N-bencil-aminoalcohol (3,45 g), que
se llevó a la siguiente etapa sin más purificación.
\newpage
Etapa
2
Una disolución del
N-bencil-aminoalcohol bruto (3 g,
14,76 mmol) en metanol (120 ml) y HCl concentrado (1,5 ml) con Pd/C
al 10% (300 mg) se hidrogenó a 3,5 kg/cm^{2} durante 16 h. La
mezcla de reacción se filtró para separar el catalizador basado en
carbón y el filtrado se concentró. El residuo se disolvió en
agua/dioxano (100 ml) y se añadió diisopropiletilamina (3,2 ml). Se
añadió cloroformiato de bencilo (2,76 ml, 16,2 mmol) y la reacción
se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se concentró, se
disolvió en HCl 1 M (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3
\times 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron con
sulfato magnésico, se filtraron y se concentraron. El residuo se
purificó por cromatografía ultrarrápida usando acetato de
etilo/hexanos 1:3 para dar el
N-Cbz-3,4-metanoprolinol
(2,4 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
A una disolución de
N-Cbz-3,4-metanoprolinol
(2,2 g, 8,90 mmol) en acetona (68 ml) con agitación a 0ºC, se
añadió gota a gota reactivo de Jones (6,6 ml) a lo largo de 5 min.
[Reactivo de Jones: preparado a partir de trióxido de cromo (13,4,
g) y ácido sulfúrico concentrado (11,5 ml) diluido con agua hasta un
volumen total de 50 ml]. Después de agitar a 0ºC durante 3 horas,
se añadió isopropanol (11 ml) y se continuó la agitación durante 10
minutos adicionales. La mezcla de reacción se diluyó con agua (400
ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 500 ml). Las capas
orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato magnésico, se
filtraron y se concentraron para dar la
N-Cbz-3,4-metanoprolina
(2,25 g, 96%).
\vskip1.000000\baselineskip
La síntesis del compuesto del título se llevó a
cabo de acuerdo con el procedimiento publicado: Marinozzi, M.;
Nataini, B.; Ni, M.H.; Costantino, G.; Pellicciari R. IL
Farmaco (1995) 50 (5), 327-331.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La síntesis del compuesto del título se llevó a
cabo de acuerdo con el procedimiento publicado: Kogami Y., Okawa, K.
Bull. Chem. Soc. Jpn. (1987) 60,
2963-2965.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de
2-aza-2-(1-feniletil)-3S-metoxicarbonil-[2,2,2]-biciclooct-5-eno
bruto (10 mmol) (Tetrahedron (1992) 48(44)
9707-9718) y Pd sobre carbón al 10% (1 g) en metanol
(30 ml) se acidificó con HCl 12 N y después se hidrogenó a 3,5
kg/cm^{2} durante 16 horas usando un aparato de hidrogenación
Parr. La mezcla de reacción se filtró para separar el catalizador
basado en carbón y el filtrado se concentró. El residuo se disolvió
en HCl concentrado y se agitó durante una noche. La disolución se
concentró y se volvió a disolver en acetonitrilo (50 ml). Se
añadieron diisopropiletilamina (3,5 ml) y dicarbonato de
di-terc-butilo (1 g). La mezcla de
reacción se agitó durante 24 horas y después se concentró. El
residuo se disolvió en CH_{2}Cl_{2} y ácido sulfúrico acuoso al
5%. La mezcla de reacción se extrajo con CH_{2}Cl_{2} y las
capas orgánicas combinadas se concentraron. El residuo se disolvió
en disolución saturada de bicarbonato sódico al 10%, se lavó con
éter dietílico (2x) y se acidificó con ácido sulfúrico acuoso al
5%. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2x). Las capas
de acetato de etilo combinadas se filtraron y se concentraron para
dar el
N-terc-butoxicarbonil-2-aza-3S-hidroxicarbonil-[2.2.2]-biciclooctano
(650 mg).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
iBoc-G(Chx)-OH (ejemplo IX,
etapa 1) (377 mg, 1,95 mmol) en acetonitrilo (7 ml) se añadieron
sucesivamente
HCl\cdotHN-Pro(4,4-dimetil)-OMe
(ejemplo I, etapa 6) (377 mg, 1,95 mmol),
N-hidroxibenzotriazol (239 mg, 1,75 mmol), TBTU (845
mg, 2,63 mmol) y diisopropiletilamina (1,35 ml, 7,8 mmol). La mezcla
de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La
mezcla de reacción se concentró y el residuo que quedaba se disolvió
en acetato de etilo. La capa orgánica se lavó dos veces con
porciones de 10 ml de disolución acuosa saturada de bicarbonato
sódico, disolución hidroclórica 1 N y salmuera. La capa orgánica se
secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró hasta un sólido
blanco (612 g, 79%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
El éster de metilo obtenido en la etapa 1
anterior (612 mg, 1,54 mmol) en metanol (6 ml) se saponificó en
presencia de hidróxido de litio 2 M (1,16 ml) durante 3 horas. El
metanol se separó a presión reducida y el residuo que quedaba se
diluyó con acetato de etilo y se acidificó a pH=2 con ácido
clorhídrico 1 N. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó
con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se
concentró.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvió la
N-benciloxicarbonil-L-fenilglicina
(25 g, 88 mmol) en THF (800 ml) y se enfrió a -10ºC. Se añadieron
N-metilmorfolina (9,7 ml, 88 mmol) y cloroformiato
de isobutilo (11,4 ml, 88,0 mmol) y la mezcla se dejó agitar durante
1 minuto. Se añadió dimetilamina (100 ml, 2 M en THF) y la reacción
se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y el
filtrado se concentró a vacío para proporcionar la dimetilamida de
la
N-benciloxicarbonil-L-fenilglicina
(32,5 g) en forma de un aceite amarillo.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
La dimetilamida de la
N-benciloxicarbonil-L-fenilglicina
(32,5 g) obtenida antes se disolvió en metanol (750 ml) y se añadió
paladio sobre carbón activado al 10% (3,3 g). La mezcla se hidrogenó
en un aparato Parr a 2,45 kg/cm^{2} durante 2 horas. La mezcla de
reacción se filtró y el disolvente se separó a vacío y el residuo se
recristalizó en metanol-hexanos para proporcionar la
dimetilamida de la fenilglicina (26 g) en forma de un sólido
blanquecino. Se determinó que el ee de este material era >99% por
análisis por HPLC, del derivado de tioisocianato de
2,3,4,6-tetra-O-acetilglucopiranosilo.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
1-metil-1-hidroxicarbonilciclohexano
(10 g, 70 mmol) en tetrahidrofurano (300 ml) a 0ºC se añadió
diborano 1 M en tetrahidrofurano (200 ml, 200 mmol) a lo largo de 90
minutos. Se quitó el baño de enfriamiento y la mezcla de reacción
se agitó a temperatura ambiente durante 2 días. El borano restante
se inactivó por adición lenta de disolución saturada de bisulfato
sódico (10 ml) a lo largo de 90 min con enfriamiento. Se añadió
disolución saturada de bisulfato sódico adicional (200 ml) y después
de 20 min de agitación se separó la capa acuosa. La capa orgánica
se lavó con agua y disolución saturada de cloruro sódico, se secó,
se filtró y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía
ultrarrápida usando éter dietílico en hexanos al 20% para dar el
1-metil-1-hidroximetilciclohexano
(6,17 g, 48 mmol, 69%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
1-metil-1-hidroximetilciclohexano
(6,17 g, 48 mmol) y trietilamina (20,1 ml, 144 mmol) en
diclorometano (150 ml) a 0ºC, se añadió una disolución de complejo
de trióxido de azufre y piridina (22,9 g, 144 mmol) en
dimetilsulfóxido (150 ml) a lo largo de 15 min. El baño de
enfriamiento se dejó calentar a temperatura ambiente a lo largo de
2 h, momento en el que la mezcla de reacción se vertió en salmuera
con hielo (400 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se
extrajo con diclorometano (200 ml). Las capas orgánicas combinadas
se diluyeron con hexanos (600 ml) y se lavaron con HCl 1 M (2 x 150
ml), disolución saturada de cloruro sódico (2 x 100 ml), se
secaron, se filtraron y concentraron. El residuo se purificó por
cromatografía ultrarrápida para dar el
1-metilciclohexilcarboxaldehído (1,77 g, 13,8 mmol,
29%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La síntesis de la
2,3,4-tri-O-pivaloil-\Box-D-arabinosilamina
se llevó a cabo de acuerdo con el procedimiento publicado (Kunz. H.;
Pfrengle, W.; Ruck, K.; Wilfried, S. Synthesis (1991)
1039-1042).
A una disolución de
1-metilciclohexilcarboxaldehído (1,17 g, 8,34 mmol),
2,3,4-tri-O-pivaloil-\Box-D-arabinosilamina
(8,3 g, 20,7 mmol), ácido fórmico (850 \mul, 22,2 mmol) e
isocianuro de terc-butilo (2,4 ml, 21,2 mmol) en
tetrahidrofurano (170 ml) a -30ºC, se añadió cloruro de cinc 0,5 M
en tetrahidrofurano (41 ml, 20,57 mmol). La disolución se agitó a
-20ºC durante 3 días y después se concentró. El residuo se diluyó
con CH_{2}Cl_{2} (500 ml), se lavó con disolución saturada de
bicarbonato sódico (2 x 500 ml), y agua (500 ml). La capa orgánica
se secó, se filtró y concentró para dar un aceite transparente. La
cromatografía ultrarrápida (acetato de etilo en hexanos al 20%)
proporcionó el producto puro (4,3 g, 6,6 mmol, 33%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
Una disolución del producto obtenido en la etapa
3 anterior (4,3 g, 6,6 mmol), en diclorometano (30 ml) y HCl en
metanol anhidro saturado (30 ml), se agitó durante una noche. La
disolución se concentró y el residuo se disolvió en agua (100 ml) y
se lavó con pentano (2 x 100 ml). La capa acuosa se concentró y el
residuo se disolvió en HCl 6 N (50 ml) y se calentó a reflujo
durante 30 h. La disolución se concentró para dar el hidrocloruro de
(1-metilciclohexil)glicina bruto (790 mg,
3,82 mmol, 58%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
Una mezcla de
4,4-dimetilciclohex-2-en-1-ona
(12 ml, 91,2 mmol) y Pd sobre carbón al 10% de tipo Degussa (2 g)
se hidrogenó a 2,8 kg/cm^{2} durante 18 horas. La mezcla se filtró
y se concentró (la RMN ^{1}H mostró una mezcla de cetona y
alcohol en una relación 5:3). La mezcla se disolvió en acetona (400
ml) y enfrió a 0ºC. Se añadió reactivo de Jones (40 ml) a lo largo
de 30 min y se quitó el baño de enfriamiento. Después de 2 días, se
evaporó el exceso de acetona y el residuo resultante se disolvió en
agua y éter dietílico. La capa de éter se lavó con agua hasta ser
incolora, se secó, se filtró y se concentró para dar la
4,4-dimetilciclohexanona (7,4 g, 58,6 mmol,
64%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
A una disolución de cloruro de
metoximetil-trifenilfosfonio (8,6 g) en
tetrahidrofurano (125 ml) a 0ºC se añadió
n-butil-litio (1,6 M en hexanos,
14,3 ml) a lo largo de 10 min. Después de 30 min, la mezcla de
reacción se enfrió a -78ºC y se añadió una disolución de
4,4-dimetilciclohexanona (2,45 g, 19,1 mmol) en
tetrahidrofurano (50 ml) a lo largo de 20 min. Después de 1 h, se
quitó el baño de enfriamiento y la reacción se calentó lentamente a
0ºC. La reacción se diluyó con disolución saturada de cloruro
amónico (50 ml), acetato de etilo (100 ml) y hexanos (100 ml). La
capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó, se filtró y se
concentró. El residuo se agitó con hexanos (70 ml) durante 10 min y
se filtró. El filtrado se concentró y se cromatografió usando
acetato de etilo en hexanos al 25% para dar el compuesto del título
(1,925 g, 12,5 mmol, 65%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Una disolución éter metílico del enol del
4,4-dimetilciclohexilcarboxaldehído (1,925 g, 12,5
mmol) (etapa II anterior), tetrahidrofurano (100 ml) y HCl 6 M (20
ml) se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla de
reacción se diluyó con hexanos, éter dietílico, salmuera y agua. La
capa orgánica se secó, se filtró y concentró para dar el
4,4-dimetilciclohexilcarboxaldehído (1,0 g, 7,1
mmol, 57%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
A una disolución de
4,4-dimetilciclohexilcarboxaldehído (1,17 g, 8,34
mmol),
2,3,4-tri-O-pivaloil-\alpha-D-arabinosilamina
(3,43 g, 8,55 mmol), ácido fórmico (350 \mul, 9,17 mmol) e
isocianuro de terc-butilo (990 \mul, 8,76 mmol)
en THF (70 ml) a -30ºC se añadió cloruro de cinc 0,5 M en
tetrahidrofurano (17 ml, 8,5 mmol). La disolución se agitó a -20ºC
durante 2 días, y después se concentró. El residuo se diluyó con
diclorometano (200 ml), se lavó con disolución saturada de
bicarbonato sódico (2 x 200 ml), y agua (200 ml). La capa orgánica
se secó, se filtró y concentró para dar un aceite transparente La
cromatografía ultrarrápida (acetato de etilo en hexanos al 20%)
proporcionó el producto puro (2,1 g, 3,3 mmol, 39%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución del producto Ugi obtenido en la
etapa 4 anterior (2,1 g, 3,3 mmol) en diclorometano (20 ml) y HCl en
metanol anhidro saturado (20 ml) se agitó durante una noche. La
disolución se concentró y el residuo se disolvió en agua (100 ml) y
se lavó con pentano (2 x 100 ml). La capa acuosa se concentró y el
residuo se disolvió en HCl 6 N (40 ml) y se calentó a reflujo
durante 30 h. La disolución se concentró para dar el hidrocloruro de
(1-metilciclohexil)glicina bruto (300 mg,
1,36 mmol, 41%).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
Boc-norvalina (25,0 g, 0,115 mol) en
tetrahidrofurano (461 ml), enfriada a 0ºC, se añadió gota a gota
complejo de borano/tetrahidrofurano (461 ml de una disolución 1,0 M
en tetrahidrofurano). Después de 1 h a 0ºC, la disolución se
calentó a temperatura ambiente a lo largo de un periodo de 1,5 h. La
TLC indicaba que la reacción se había completado. Se añadió metanol
para inactivar la reacción. La disolución se concentró para dar el
compuesto del título (22,56 g, 96%) en forma de un jarabe espumoso.
La TLC de los productos indicaba una pureza satisfactoria. R_{f} =
0,34 (acetato de etilo/hexanos al 40%).
\newpage
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
Al Boc-norvalinol (7,77 g, 38
mmol), en dimetilsulfóxido anhidro (153 ml) y tolueno (153 ml) se
añadió EDC (73,32 g, 382 mmol). Después de enfriar la disolución a
0ºC, se añadió gota a gota ácido dicloroacético (15,8 ml, 191
mmol). Después de completar la adición, la reacción se agitó durante
15 min. La disolución se dejó calentar a temperatura ambiente a lo
largo de un periodo de 2 h. La mezcla de reacción se concentró para
separar el tolueno y después se disolvió en acetato de etilo. La
disolución se lavó sucesivamente con bisulfato sódico 1 N,
disolución saturada de bicarbonato sódico y salmuera, se secó sobre
sulfato sódico, se filtró y se concentró para proporcionar el
Boc-norvalinal bruto que se usó directamente en la
siguiente etapa. TLC R_{f} = 0,84 (acetato de etilo/hexanos al
40%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución del
Boc-norvalinal bruto (4,18 g, 20,77 mmol) en
diclorometano (83 ml) se añadió isocianoacetato de etilo (2,72 ml,
24,93 mmol) y piridina (6,72 ml, 83,09 mmol). Después de enfriar la
disolución a 0ºC, se añadió gota a gota ácido trifluoroacético
(4,15 ml, 41,54 mmol). Después de agitar durante 1 h, la disolución
se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas mientras que se
dejaba evaporar el disolvente de la mezcla de reacción en un
recipiente sin cubrir, en condiciones ambientales. La mezcla de
reacción se concentró y después se disolvió en acetato de etilo. La
disolución se lavó sucesivamente con bisulfato sódico 1 N,
disolución saturada de bicarbonato sódico y salmuera, se secó sobre
sulfato sódico, se filtró y después se concentró. El residuo se
purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con acetato de
etilo/hexanos de 20% a 40% para proporcionar 2,8 g del compuesto
del título en forma de un jarabe amarillo. La espectroscopía de
masas de baja resolución confirmó la presencia del producto deseado
(MH^{+} 333).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
El producto obtenido
(Boc-nVal-(CHOH)-Gly-OEt)
(1,52 g, 4,70 mmol) se disolvió en etanol (23 ml), se saponificó
con hidróxido de litio 1 N (18,81 ml) durante 2 h a temperatura
ambiente. La mezcla de reacción se acidificó a pH \cong 2 con
resina de intercambio iónico Dowex® 50 WX8, se agitó durante 20
minutos y después se filtró. La resina se lavó bien con etanol y
agua y los filtrados combinados se concentraron hasta una espuma
blanca (0,48 g, 33%).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de dietilfosfonoacetato de
terc-butilo (4,7 ml, 20 mmol) disuelto en THF (50
ml) a -78ºC se añadió n-butil-litio
1,6 M en hexanos (12,4 ml). Después de 30 minutos, se añadió (1S,
2S)-2-metilciclopropilcarboxaldehído
(1 g, 12 mmol) (Barrett, A. G. M.; Doubleday, W. W.; Kasdorf, K.;
Tustin, G. J., J. Org. Chem. (1996) 61, 3280) en éter
dietílico (100 ml) a lo largo de 10 min. La reacción se calentó a
0ºC durante 2 h y a 6ºC durante 12 h. La reacción se inactivó con
disolución saturada de cloruro amónico (20 ml) y se separó la capa
orgánica, se lavó con 50 ml de salmuera y se secó sobre sulfato
sódico, se filtró y concentró para proporcionar 3,5 g de un aceite
transparente. La cromatografía ultrarrápida (acetato de etilo en
hexanos al 20%) proporcionó el éster de terc-butilo
insaturado puro
(1,4 g).
(1,4 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de carbamato de bencilo (3,55
g, 23,5 mmol) en n-propanol (24 ml) se añadió una
disolución de hidróxido sódico (900 mg, 22,7 mmol) en agua (48 ml),
seguido de hipoclorito de terc-butilo (2,57 ml, 22,7
mmol). Después de 15 minutos, la reacción se enfrió a 0ºC y se
añadió (DHQ)_{2}PHAL (350 mg, 0,45 mmol) en
n-propanol (24 ml), seguido del éster de
terc-butilo insaturado (1,4 g) anterior en
n-propanol (48 ml). Finalmente, se añadió osmiato
potásico (110 mg, 0,30 mmol) en agua (2 ml) y la disolución
desarrolló muy rápidamente un color verde oscuro que persistió
durante 4 horas. Después de 6 h, se añadió disolución saturada de
sulfato sódico (50 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo
(2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera
(30 ml), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y
concentraron. La cromatografía ultrarrápida con acetato de etilo en
hexanos al 20% proporcionó el éster de ter-butilo
del amino protegido con CBz en forma de un sólido blanco (316
mg).
\newpage
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de éster de t-butilo
del amino protegido con CBz (316 mg, 0,9 mmol) y 32 mg de paladio
sobre carbón al 10% en 9 ml de metanol se hidrogenó durante 8 horas.
La mezcla se filtró y se concentró para proporcionar la amina libre
en forma de un aceite transparente (195 mg).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Al
2R-hidroxi-3-metilbutano
disponible en el comercio (410 mg, 4,65 mmol) se añadió una
disolución de fosgeno al 20% en tolueno (1 ml, 2 mmol). La
disolución se agitó durante 6 horas para generar el cloroformiato (2
mmol) que se hizo reaccionar directa e inmediatamente con la amina
deseada. El isómero S se sintetizó por el mismo procedimiento.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
Boc-L-leucinol (0,78 g, 3,6 mmol)
disponible en el comercio (Advanced Chem Tech) en diclorometano
anhidro (17,5 ml) se añadió trietilamina (2 ml, 14,36 mmol) y la
mezcla se enfrió a 0ºC. Se añadió dimetilsulfóxido (17,5 ml) seguido
de complejo de trióxido de azufre y piridina (2,3 g, 14,36 mmol) y
la reacción se agitó durante 2 h. La TLC en acetato de etilo:hexanos
1:1 confirmó que la reacción se había completado. La mezcla de
reacción se concentró y el residuo que quedaba se diluyó con acetato
de etilo. La capa de acetato de etilo se lavó con ácido clorhídrico
1 M (2 \times 75 ml) seguido de disolución saturada de bicarbonato
sódico (2 \times 75 ml) y salmuera (75 ml). La capa orgánica se
secó (sulfato sódico), se filtró y se concentró para dar 775 mg de
producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución del aldehído de
Boc-Leucina (0,77 g, 3,59 mmol) en diclorometano
anhidro (24 ml) se añadió piridina anhidra (1,16 ml, 14,36 mmol) e
isocianoacetato de etilo (0,4 ml, 4,66 mmol). La mezcla de reacción
se enfrió a 0ºC y se añadió ácido trifluoroacético (0,55 ml, 7,18
mmol) a lo largo de 2 min. La mezcla de reacción se tapó y se agitó
a 4ºC durante 4 días, y a temperatura ambiente durante 1 día. La
mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (350 ml) y se lavó 2
veces, cada una con una porción de 75 ml de ácido clorhídrico,
disolución saturada de bicarbonato sódico y salmuera. La capa
orgánica se secó, se filtró y concentró. El residuo obtenido se
sometió a cromatografía ultrarrápida en una columna de gel de sílice
de 5 \times 15,2 cm usando acetato de etilo en hexanos al 10%
(800 ml) seguido de acetato de etilo en hexanos 1:1 (800 ml). Las
fracciones correspondientes al producto se juntaron y se
concentraron para dar 980 mg (79%) de producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
A una disolución de
Boc-Leu-(CHOH)-Gly-Oet
(0,98 g, 2,83 mmol) en etanol (11,3 ml) se añadió hidróxido de
litio 2 M (4,25 ml) y la reacción se agitó durante 5 h a temperatura
ambiente. El etanol se separó a presión reducida y la capa acuosa
se diluyó con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con ácido
clorhídrico 1 M seguido de salmuera, se secó, se filtró y se
concentró para dar 775 mg (86%) de producto en forma de un sólido
blanco.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
A una disolución de
Boc-Leu-(CHOH)-Gly-OH
(0,37 g, 1,18 mmol) en acetonitrilo (23 ml) se añadieron
sucesivamente ladimetilamida de la fenilglicina (obtenida en el
ejemplo XV, etapa 2), EDC (0,34 g, 1,76 mmol),
N-hidroxibenzotriazol (HOBt) (0,18 g, 1,18 mmol) y
diisopropiletilamina (DIEA) (0,82 ml, 4,7 mmol) y la reacción se
agitó durante 18 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se
concentró y el resto que quedaba se diluyó con acetato de etilo y
se lavó sucesivamente con 2 porciones de 75 ml de ácido clorhídrico
1 M, disolución saturada de bicarbonato sódico y salmuera. La capa
orgánica después se secó, se filtró y concentró. El producto bruto
se sometió a cromatografía ultrarrápida en una columna de gel de
sílice de 5 \times 15,2 cm usando acetato de etilo:hexanos 4:1
(700 ml) seguido de acetato de etilo (1000 ml) y metanol en
diclorometano al 10% (600 ml). Las fracciones correspondientes al
producto se juntaron y se concentraron para dar 445 mg (80%) de
sólido blanco.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
Boc-Leu-(CHOH)-Gly-Phg-dimetilamida
(70 mg, 0,146 mmol) en diclorometano (1 ml) se añadió ácido
trifluoroacético (1 ml) y la reacción se agitó a temperatura
ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se concentró y se llevó
a la siguiente etapa sin más purificación.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
iBoc-G(Chx)-P(4,4-diMe)-OH
(ejemplo XIV, etapa 2) (53 mg, 0,148 mmol) en acetonitrilo (3 ml)
se añadieron sucesivamente
TFA-2HN-Leu(CHOH)-Gly-Phg-NMe2
(61 mg, 0,148 mmol), N-hidroxibenzotriazol (HOBt)
(23 mg, 0,148 mmol), TBTU (71,5 mg, 0,222 mmol y
diisopropiletilamina (103 ml, 0,593 mmol). La reacción se agitó a
temperatura ambiente durante 18 horas y se concentró. El residuo que
quedaba se disolvió en acetato de etilo y se lavó con ácido
clorhídrico 1 M (2 \times 5 ml), disolución saturada de
bicarbonato sódico (2 \times 5 ml) y salmuera (2 \times 5 ml).
La capa orgánica se secó, se filtró y se concentró. El producto (100
mg) se llevó la siguiente etapa sin más purificación.
\newpage
Etapa
7
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
iBoc-G(Chx)-Pro(4,4-dimetil)-Leu-(CHOH)-Gly-Phg-dimetilamida
(30 mg, 0,04 mmol) en diclorometano (1 ml) se añadió el reactivo de
Dess-Martin disponible en el comercio (Omega
Chemical Company Inc.) (67,8 mg, 0,16 mmol) y la reacción se agitó
a temperatura ambiente durante 90 minutos. La mezcla de reacción se
concentró y el residuo que quedaba se agitó en tiosulfato sódico al
5%. Después se diluyó con diclorometano y se separaron las capas.
La capa orgánica se lavó con tiosulfato sódico (4 \times 3 ml),
seguido de agua y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato
sódico, se filtró y se concentró. El producto bruto se disolvió en
hexanos y alcohol isopropílico y se sometió a purificación por HPLC
usando una columna de sílice de fase normal Kromasil 5 (Phenomenex,
250 \times 21,20 mm, tamaño de poros 100 angstroms, partículas de
gel de 5 \mum) eluyendo con un gradiente de 30 minutos que
consistía en alcohol isopropílico en hexanos de 0 a 25% (25
ml/minutos). Las fracciones correspondientes al producto se juntaron
y se concentraron. La liofilización del agua dio 6,7 mg de polvo
blanco. El espectro de masas de baja resolución confirmó la masa
deseada (MH^{+} = 741,4).
\vskip1.000000\baselineskip
La síntesis en fase sólida es útil para la
producción de pequeñas cantidades de algunos compuestos de la
presente invención. Como en la síntesis en fase sólida de péptidos
convencional, los reactores para la síntesis en fase sólida de
peptidil-cetoamidas comprenden un recipiente del
reactor con al menos una superficie permeable al disolvente y los
reactivos disueltos, pero no permeable a la resina del tamaño de
malla seleccionado. Dichos reactores incluyen recipientes de
reacción en fase sólida de vidrio con una frita de vidrio
sinterizado, tubos de polipropileno o columnas con fritas o el
reactor Kans^{TM} fabricado por Irori Inc., San Diego CA. El tipo
de reactor elegido depende del volumen de la resina en fase sólida
necesaria, y se pueden usar diferentes tipos de reactores en
diferentes etapas de una síntesis. En los ejemplos posteriores se
hará referencia a los siguientes procedimientos:
Procedimiento A: Reacción de
acoplamiento: A la resina suspendida en
N-metilpirrolidina (NMP) (10-15 ml/g
de resina) se añadió Fmoc-aminoácido (2 eq), HOAt
(2 eq), HATU (2 eq) y diisopropiletilamina (4 eq). La mezcla se
dejó reaccionar durante 4-48 horas. Los
reaccionantes se drenaron y la resina se lavó sucesivamente con
dimetilformamida, diclorometano, metanol, diclorometano y éter
dietílico (se usan 10-15 ml de disolvente/g de
resina). Después, la resina se secó a vacío.
Procedimiento B: Desprotección de Fmoc:
La resina protegida con Fmoc se trató con piperidina en
dimetilformamida al 20% (10 ml de reactivo/g de resina) durante 30
minutos. Los reactivos se drenaron y la resina se lavó sucesivamente
con dimetilformamida, diclorometano, metanol, diclorometano y éter
dietílico (se usan 10 ml de disolvente/g de resina).
Procedimiento C: Desprotección de Boc: La
resina protegida con Boc se trató con una mezcla de diclorometano y
ácido trifluoroacético 1:1 durante 20-60 min (10 ml
de disolvente/g de resina). Los reactivos se drenaron y la resina
se lavó sucesivamente con diclorometano, dimetilformamida,
diisopropiletilamina en dimetilformamida al 5%, dimetilformamida,
diclorometano y dimetilformamida (10 ml de disolvente/g de
resina).
Procedimiento D: Hidrólisis de la
semicarbazona: La resina se suspendió en el cóctel de escisión
(10 ml/g de resina) que constaba de ácido trifluoroacético: ácido
pirúvico: diclorometano: agua 9:2:2:1 durante 2 h. Los
reaccionantes se drenaron y el procedimiento se repitió 3 veces más.
La resina se lavó sucesivamente con diclorometano, agua y
diclorometano y se secó a vacío. Procedimiento E: Escisión con
HF: El
péptido-nVal(CO)-G-O-resina
PAM seca (50 mg) se puso en un recipiente para HF que contenía una
barra agitadora pequeña. Se añadió anisol (10% del volumen total)
como un depurador. En presencia de los aminoácidos ácido glutámico y
cisteína, también se añadieron tioanisol (10%) y
1,2-etanoditiol (0,2%). El recipiente para HF se
conectó al aparato de HF (Immuno Dynamics) y el sistema se lavó por
barrido con nitrógeno durante 5 min. Después se enfrió a -70ºC con
un baño de hielo seco/isopropanol. Después de 20 min, se destiló el
HF hasta el volumen deseado (10 ml de HF/g de resina). La reacción
se dejó que avanzara durante 1,5 horas a 0ºC. El tratamiento
consistía en la separación de todo el HF usando nitrógeno. Después
se añadió diclorometano a la resina y la mezcla se agitó durante 5
minutos. A esto le siguió la adición de ácido acético en agua al 20%
(4 ml). Después de agitar durante 20 minutos, la resina se filtró
usando un embudo sinterizado y el diclorometano se separó a presión
reducida. El residuo que quedaba y la mezcla se lavaron con hexanos
(2x) para separar los depuradores. Mientras, la resina se sumergió
en 1 ml de metanol. La capa acuosa (HOAc al 20%) se volvió a añadir
a la resina y la mezcla se agitó durante 5 minutos y después se
filtró. El metanol se separó a presión reducida y la capa acuosa se
liofilizó. Después, el péptido se disolvió en metanol al
10-25% (que contenía ácido trifluoroacético al 0,1%)
y se purificó por HPLC de fase inversa.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
Se añadió gota a gota isocianoacetato de etilo
(96,6 ml, 0,88 mol) a una disolución enfriada de etanol (1,5 l) e
hidróxido potásico (59,52 g, 1,0 mol). La reacción se calentó
lentamente a temperatura ambiente. Después de 2 h, el producto
precipitado se filtró en un embudo de vidrio y se lavó con varias
porciones de etanol enfriado. La sal de potasio del ácido
isocianoacético así obtenida se secó a vacío hasta un sólido
marrón-dorado (99,92 g, 91,8%).
\vskip1.000000\baselineskip
Al producto de la parte a (99,92 g, 0,81 mol)
disuelto en acetonitrilo (810 ml) se añadió bromuro de alilo (92
ml, 1,05 mol). Después de calentar a reflujo durante 4 h, se obtuvo
una disolución marrón oscura. La mezcla de reacción se concentró y
el residuo que quedaba se disolvió en éter dietílico (1,5 l) y se
lavó 3 veces con agua (500 ml). La capa orgánica se secó, se filtró
y se concentró hasta un jarabe marrón oscuro. El producto bruto se
purificó por destilación a vacío a 7 mm Hg (98ºC) hasta un aceite
transparente (78,92 g, 78%). RMN \delta ppm (CDCl_{3}): 5,9 (m,
1 H), 5,3 (m, 2H), 4,7 (d, 2H), 4,25 (s, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución enfriada de la
Fmoc-norvalina disponible en el comercio (25 g,
73,75 mmol) en metanol anhidro (469 ml) se añadió cloruro de
tionilo (53,76 ml, 737,5 mmol) a lo largo de 1 h. La TLC en acetato
de etilo hecha 1 h más tarde, confirmó que la reacción se había
completado (R_{f} = 0,85). La mezcla de reacción se concentró y
el residuo que quedaba se disolvió en acetato de etilo. La capa
orgánica se lavó con varias porciones de 200 ml de disolución
saturada de bicarbonato sódico seguido de salmuera. La capa orgánica
se secó, se filtró y concentró para proporcionar
Fmoc-norVal-OMe en forma de un
sólido blanco (26,03 g) con rendimiento cuantitativo. RMN \delta
ppm (CD_{3}OD): 7,7 (m, 2H), 7,6 (m, 2H), 7,4 (m, 2H), 7,3 (m,
2H), 4,3 (m, 2H), 4,1 (m, 2H), 3,7 (s, 3H), 1,7 (m, 1H), 1,6 (m,
1H), 1,4 (m, 2H), 0,95 (t, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Al Fmoc-nVal-OMe
(26,03 g, 73,75 mmol) en tetrahidrofurano (123 ml) y metanol (246
ml) se añadió cloruro de calcio (16,37 g, 147,49 mmol). La mezcla
de reacción se enfrió a 0ºC y se añadió borohidruro sódico (11,16
g, 294,98 mmol) en varios lotes. A la pasta espesa obtenida, se
añadió metanol (500 ml) y la reacción se dejó agitar a temperatura
ambiente durante 90 minutos. La TLC en acetato de etilo: hexanos 2:3
confirmó que la reacción se había completado (R_{f} = 0,25). La
reacción se inactivó por adición lenta de agua (100 ml) a 0ºC. Se
separó el metanol a presión reducida y la fase acuosa que quedaba se
diluyó con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua (3
\times 500 ml), disolución saturada de bicarbonato sódico (3
\times 500 ml) y salmuera (500 ml). La capa orgánica se secó
sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró hasta un sólido
blanco (21,70 g, 90,5%). RMN \delta ppm (CD_{3}OD): 7,8 (m, 2H),
7,7 (m, 2H), 7,4 (m, 2H), 7,3 (m, 2H), 4,3-4,5 (m,
2H), 4,2 (m, 1H), 3,6 (s, 1H), 3,5 (s, 2H), 1,5 (m, 1H),
1,3-1,4 (m, 3H), 0,99 (m, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
Fmoc-norValinol (21,70 g, 66,77 mmol) en
diclorometano (668 ml) se añadió trietilamina (37,23 ml, 267 mmol)
y la disolución se enfrió a 0ºC. Se añadió una suspensión de
complejo de piridina y trióxido de azufre (42,51 g, 267 mmol) en
dimetilsulfóxido (96 ml) a la disolución enfriada. Después de 1
hora, la TLC en acetato de etilo:hexanos 2:3 confirmó que la
reacción se había completado. El diclorometano se separó a presión
reducida y el residuo que quedaba se disolvió en acetato de etilo y
se lavó con agua (2 \times 50 ml), disolución saturada de
bisulfato sódico 1 N (2 \times 50 ml), disolución saturada de
bicarbonato sódico (2 \times 50 ml) y salmuera (50 ml). La capa
orgánica se concentró para dar un sólido blanco. Se supuso el
rendimiento teórico (21,57 g) y la reacción se llevó a la siguiente
etapa sin más purificación.
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de carbonildiimidazol (16,2 g,
0,10 mole) en dimetilformamida (225 ml) se añadió gota a gota una
disolución de carbazato de t-butilo (13,2 g, 0,100
mol) en dimetilformamida (225 ml) a lo largo de 30 minutos. Después
se añadió difenilmetilamina (18,3 g, 0,10 mol) a lo largo de 30
minutos. La reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante
1 hora. Se añadió agua (10 ml) y la mezcla se concentró a
aproximadamente 150 ml a presión reducida. Esta disolución se
vertió en agua (500 ml) y se extrajo con acetato de etilo (400 ml).
La fase de acetato de etilo se lavó 2 veces con 75 ml cada vez de
HCl 1 N, agua, disolución saturada de bicarbonato sódico y cloruro
sódico, y se secó con sulfato magnésico. La mezcla se filtró y la
disolución se concentró para dar 29,5 g (85% de rendimiento) de una
espuma blanca. Este material se podía purificar por
recristalización en acetato de etilo/hexano, pero estaba
suficientemente puro para usarlo directamente en la siguiente
etapa: p.f. 142-143ºC. RMN ^{1}H (CDCl_{3}) d
1,45 (s, 9H), 6,10 (dd, 2H), 6,42 (s, 1H), 6,67 (s ancho, 1H),
7,21-7,31 (m, 10H). Anal. calculado para
C_{19}H_{23}N_{3}O_{3}: C, 66,84; H, 6,79; N, 12,31.
Encontrado: C, 66,46; H, 6,75; N; 12,90.
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de
Boc-semicarbazid-4-il-difenilmetano
(3,43 g, 10 mmol) en diclorometano (12,5 ml) se trató con 12,5 ml
de ácido trifluoroacético a temperatura ambiente y se agitó durante
30 min. La disolución se añadió gota a gota a 75 ml de éter
dietílico y el sólido resultante (2,7 g, 80%) se recogió por
filtración, p.f. 182-184ºC. RMN ^{1}H
(CD_{3}OD) d 6,05 (s, 1H), 7,21-7,35 (m, 10H). RMN
^{13}C (CD_{3}OD) d 57,6, 118,3 (q, CF_{3}), 126,7, 127,9,
141,6, 156,9, 160,9 (q, CF_{3}CO_{2}H).
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
Fmoc-nVal-CHO (etapa IB) (5,47 g,
16,90 mmol) en diclorometano (170 ml) se añadió isocianoacetato de
alilo (etapa IA) (2,46 ml, 20,28 mmol) y piridina (5,47 ml, 67,61
mmol). La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC y se añadió gota a
gota ácido trifluoroacético (3,38 ml, 33,80 mmol). La reacción se
agitó a 0ºC durante 1 h y después a temperatura ambiente durante 48
h. La TLC hecha en acetato de etilo confirmó que la reacción se
había completado. La mezcla de reacción se concentró y se sometió a
cromatografía ultrarrápida usando acetato de etilo en hexanos de
20% a 70%. Las fracciones que contenían el producto deseado se
mezclaron y se concentraron hasta una espuma blanca (6,88 g,
87,3%). La TLC en acetato de etilo 50:50 muestra una sola mancha
(R_{f} = 0,37). RMN \delta ppm (CD_{3}OD): 7,8 (m, 2H), 7,65
(m, 2H), 7,4 (m, 2H), 7,3 (m, 2H), 5,9 (m, 1H),
5,1-5,4 (m, 2H), 4,55-4,65 (m, 2H),
4,3-4,4 (m, 2H), 4,15-4,25 (m, 1H),
4,01 (s, 1H), 3,9-4,0 (m, 3H),
1,5-1,6 (m, 2H), 1,35-1,45 (m, 3H),
0,9 (m, 3H).
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A una disolución de
Fmoc-nVal-(CHOH)-Gly-Oalilo
(etapa D) (5,01 g, 10,77 mmol) en dimetilsulfóxido (100 ml) y
tolueno (100 ml) se añadió EDC (20,6 g, 107,7 mmol). La mezcla de
reacción se enfrió a 0ºC y se añadió gota a gota ácido
dicloroacético (4,44 ml, 53,83 mmol). La reacción se agitó durante
15 minutos a 0ºC y 1 h a temperatura ambiente. Después de volver a
enfriar a 0ºC, se añadió agua (70 ml) y el tolueno se separó a
presión reducida. El residuo que quedaba se diluyó con acetato de
etilo y se lavó varias veces con una disolución saturada de
bicarbonato sódico seguido de bisulfato sódico 1 N y salmuera. La
capa orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se
concentró. Se supuso el rendimiento teórico de 4,99 g y la reacción
se llevó a la siguiente etapa sin más purificación. La TLC en
acetato de etilo 50:50 muestra una mancha (R_{f} = 0,73).
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A una disolución de
Fmoc-nVal-(CO)-Gly-Oalilo
(etapa E) (4,99 g, 10,75 mmol) en etanol (130 ml) y agua (42 ml) se
añadió la sal de trifluoroacetato de
difenilmetil-semicarbazida (dpsc) (etapa IC) (7,6 g,
21,5 mmol) y acetato sódico\cdot3H_{2}O (1,76 g, 12,9 mmol),
sucesivamente. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante
90 minutos. Se confirmó que la reacción se había completado por TLC
hecha en acetato de etilo:hexano 1:1. El etanol se separó a presión
reducida y el residuo que quedaba se disolvió en acetato de etilo y
se lavó con bisulfato sódico 1 N (2 \times 10 ml), disolución
saturada de bicarbonato sódico (2 \times 10 ml), seguido de
salmuera (10 ml). La capa orgánica se secó, se filtró y concentró.
El residuo resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida en
acetato de etilo en hexanos de 20% a 50% para dar un sólido blanco
(5,76 g, 78%). La TLC en acetato de etilo:hexanos 50:50 presentaba 2
manchas (isómeros cis y trans) con R_{f} = 0,42 y 0,5.
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A una disolución de
Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-Oalilo
(etapa IG) (4,53 g, 6,59 mmol) en tetrahidrofurano (300 ml) se
añadió dimedona (4,62 g, 32,97 mmol) seguido del catalizador
tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (0,76 g,
0,66 mmol). Se confirmó que la reacción se había completado por TLC
después de 90 minutos usando diclorometano:metanol 9:1. La mezcla
de reacción se concentró y el residuo que quedaba se disolvió en
acetato de etilo y se lavó 3 veces con porciones de 50 ml de
bifosfato de potasio 0,1 M. Después, la capa orgánica se trató con
50 ml de bisulfito sódico y el sistema de 2 fases se agitó durante
15 minutos. Las fases se separaron y el procedimiento se repitió
dos veces más. La capa orgánica se secó y se concentró y se sometió
a cromatografía ultrarrápida con acetato de etilo en hexanos de 20%
a 100%. A esto le siguió disolución de diclorometano:metanol 9:1.
Las fracciones correspondientes al producto puro se juntaron y se
concentraron para obtener un sólido blanco (3,99 g, 94%). La TLC en
diclorometano:metanol 9:1 presentaba 2 manchas (isómeros cis y
trans). RMN \delta ppm (CD_{3}OD): 7,75 (m, 2H), 7,6 (m, 3H),
7,2-7,4 (m, 14H), 6,1-6,2 (m, 1H),
4,25-4,4 (m, 2H), 4,1=4,2 (m, 2H), 3,85 (s, 2H),
1,6-1,8 (m, 2H), 1,3-1,5 (m, 2H),
0,95 (t, 3H).
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Etapa
2
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\vskip1.000000\baselineskip
La resina MBHA disponible en el comercio (2,6 g,
1,12 mmol/g, 2,91 mmol) se transfirió a un recipiente de reacción
en fase sólida sinterizado de 250 ml, equipado con una entrada de
nitrógeno. Después se lavó bien con porciones de 30 ml de
diclorometano, metanol, dimetilformamida y diclorometano y se acopló
durante 18 h al Fmoc-Phg-OH
disponible en el comercio (2,17 g, 5,82 mmol) de acuerdo con el
procedimiento A con una eficacia de 99,82%. Después, la resina se
sometió a la desprotección de Fmoc de acuerdo con el procedimiento
B. Una prueba cualitativa de ninhidrina en una pequeña parte
alícuota dio una resina azul oscuro y disolución, indicando una
reacción satisfactoria.
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Etapa
3
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La resina obtenida en la etapa II (2,6 g, 0,8
mmol/g, 2,91 mmol) se hizo reaccionar con
Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-Oalilo
(etapa IG) (5,82 mmol, 3,77 g) de acuerdo con el procedimiento A.
Después de 18 h, el análisis cuantitativo de ninhidrina indicaba una
eficacia del acoplamiento de 99,91%. La resina se sometió a la
desprotección de Fmoc de acuerdo con el procedimiento B. Una prueba
cualitativa de ninhidrina en una pequeña parte alícuota dio una
resina azul oscuro y disolución, indicando una reacción
satisfactoria.
\newpage
Etapa
4
El compuesto
H-nVal(dpsc)-Gly-Phg-resina
MBHA (etapa 3 anterior) (600 mg, 0,8 mmol/g, 0,67 mmol) se
transfirió a un tubo de polipropileno sinterizado y se acopló a
Boc-Pro(4t-NHFmoc)-OH
(ejemplo VI, etapa 3) (610 mg, 1,34 mmol) de acuerdo con el
procedimiento A. Después de 18 horas, el análisis cuantitativo de
ninhidrina indicaba una eficacia del acoplamiento de 99,96%.
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Etapa
5
La resina de la etapa previa
(Boc-Pro(4t-NHFmoc)-nVal(dpsc)Gly-Phg-resina
MBHA) se sometió a la desprotección de Fmoc de acuerdo con el
procedimiento B. Una prueba cualitativa de ninhidrina en una pequeña
parte alícuota dio una resina azul oscuro y disolución, indicando
una reacción satisfactoria.
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Etapa
6
A la resina obtenida en la etapa previa
(Boc-Pro(4t-NH_{2})-nVal(dpsc)-Gly-Phg-resina
MBHA) (0,2 g, 0,22 mmol) suspendida en NMP (2 ml) se añadió
2,4,6-colidina (0,24 ml, 1,79 mmol) y cloruro de
bencenosulfonilo y la reacción se agitó durante 18 h. El disolvente
se drenó y la resina se lavó bien con porciones de 2 ml de
diclorometano, metanol, dimetilformamida y diclorometano. El
análisis cualitativo de ninhidrina mostró perlas incoloras y la
disolución indicaba una reacción satisfactoria.
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Etapa
7
\vskip1.000000\baselineskip
La resina obtenida en la etapa previa
(Boc-Pro(4t-NHSO_{2}Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-resina
MBHA) se sometió a la desprotección de Boc de acuerdo con el
procedimiento C. Después se acopló
Fmoc-G(Chx) (0,17 g, 0,45 mmol) de acuerdo
con el procedimiento A. Después de 18 h, el análisis cualitativo de
ninhidrina mostró perlas incoloras y el análisis cuantitativo de
ninhidrina indicaba una eficacia del acoplamiento de 99,79%.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
8
\vskip1.000000\baselineskip
La resina de la etapa previa
(Fmoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO2Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-resina
MBHA) se sometió a la desprotección de Fmoc de acuerdo con el
procedimiento B. Una prueba cualitativa de ninhidrina en una pequeña
parte alícuota dio una resina azul oscuro y disolución, indicando
una reacción satisfactoria. A la resina (0,2 g, 0,22 mmol)
suspendida en 2 ml de NMP se añadió cloroformiato de isobutilo (0,12
ml, 0,90 mmol) seguido de diisopropiletilamina (0,31 ml, 1,79
mmol), y la mezcla de reacción se agitó durante 18 h a temperatura
ambiente. El análisis cualitativo de ninhidrina mostró perlas
incoloras y la disolución indicaba una reacción satisfactoria.
\newpage
Etapa
9
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto de la etapa previa
(iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO2Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-resina
MBHA) (200 mg) se sometió a la hidrólisis de semicarbazona del
procedimiento D.
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Etapa
10
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La resina de la etapa previa
(iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO_{2}Bn)-nVal(CO)
Gly-Phg-resina MBHA) (100 mg) se
cometió a condiciones de escisión con HF (procedimiento E) para dar
el producto bruto deseado. El material se purificó por HPLC usando
una columna de fase inversa de 2,2 \times 25, que contenía una
resina C-18 compuesta de partículas de gel de
sílice de 10 micrómetros con un tamaño de poros de 300 angstrom,
eluyendo con un gradiente usando acetonitrilo en agua al
20-50%. La HPLC analítica usando una columna de fase
inversa de 4,6 \times 250, que contenía una resina
C-18 compuesta de partículas de gel de sílice de 5
micrómetros con un tamaño de poros de 300, eluyendo con
acetonitrilo(que contenía ácido trifluoroacético al 0,1%) al
25-75% mostró un pico a 13,5 minutos. El espectro de
masas de baja resolución confirmó la masa deseada (MH^{+}
826,4).
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Etapa
1
Una solución agitada de la cetimima XXIIIa (50
g, 187,1 mmol) en atmósfera de N_{2} en THF seco (400 ml) se
enfrió a -78ºC y se trató con disolución de
K-^{t}BuO 1 M (220 ml, 1,15 equiv.) en THF. La
mezcla de reacción se calentó a 0ºC y se agitó durante 1 h y se
trató con bromometil-ciclobutano (28 ml, 249 mmol).
La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 h y
se concentró a vacío. El residuo se disolvió en Et_{2}O (300 ml)
y se trató con HCl ac. (2 M, 300 ml). La disolución resultante se
agitó a temperatura ambiente durante 5 h y se extrajo con Et_{2}O
(1 litro). La capa acuosa se hizo básica a pH
-12-14 con NaOH (acuoso al 50%) y se extrajo con
CH_{2}Cl_{2} (3x300 ml). Las capas orgánicas combinadas se
secaron (MgSO_{4}), se filtraron, y se concentraron para dar la
amina pura (XXIIIb, 18 g) en forma de un aceite incoloro.
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Etapa
2
Una disolución de la amina XXIIIb (18 g, 105,2
mmol) a 0ºC en CH_{2}Cl_{2} (350 ml) se trató con dicarbonato
de di-terc-butilo (23 g, 105,4 mmol) y se agitó a t.a.
durante 12 h. Después de completarse la reacción (TLC), la mezcla
de reacción se concentró a vacío y el residuo se disolvió en
THF/H_{2}O (200 ml, 1:1) y se trató con LiOH\cdotH_{2}O (6,5
g, 158,5 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La
mezcla de reacción se concentró y la capa acuosa básica se extrajo
con Et_{2}O. La capa acuosa se acidificó con HCl conc. hasta
pH\sim1-2 y se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Las
capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y
se concentraron a vacío para dar el compuesto XXIIIc en forma de un
aceite viscoso incoloro que se usó para la siguiente etapa sin más
purificación.
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Etapa
3
Una disolución del ácido XXIIIc (15,0 g, 62
mmol) en CH_{2}Cl_{2} (250 ml) se trató con el reactivo BOP
(41,1 g, 93 mmol), N-metil-morfolina
(27 ml), hidrocloruro de
N,O-dimetil-hidroxilamina (9,07 g,
93 mmol) y se agitó durante una noche a t.a. La mezcla de reacción
se diluyó con HCl ac. 1 N (250 ml) y se separaron las capas, y la
capa acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3x300 ml). Las capas
orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y
concentraron a vacío y se purificaron por cromatografía (SiO_{2},
EtOAc/Hex 2:3) para dar la amida XXIIId (15,0 g) en forma de un
sólido incoloro.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
Una disolución de la amida XXIIId (15 g, 52,1
mmol) en THF seco (200 ml) se trató gota a gota con una disolución
de LiAlH_{4} (1 M, 93 ml, 93 mmol) a 0ºC. La mezcla de reacción se
agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se inactivó con cuidado
a 0ºC con una disolución de KHSO_{4} (al 10% ac.) y se agitó
durante 0,5 h. La mezcla de reacción se diluyó con HCl ac. (1 M,
150 ml) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3x200 ml). Las capas
orgánicas combinadas se lavaron con HCl ac. (1 M), disolución
saturada de NaHCO_{3}, salmuera, y se secaron (MgSO_{4}). La
mezcla se filtró y se concentró a vacío para dar el compuesto XXIIIe
en forma de un aceite viscoso incoloro (14 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
Una disolución del aldehído XXIIIe (14 g, 61,6
mmol) en CH_{2}Cl_{2} (50 ml), se trató con Et_{3}N (10,73
ml, 74,4 mmol) y cianhidrina de la acetona (10,86 g, 127,57 mmol) y
se agitó a temperatura ambiente durante 24 h. La mezcla de reacción
se concentró a vacío y se diluyó con HCl ac. (1 M, 200 ml) y se
extrajo en CH_{2}Cl_{2} (3x200 ml). Las capas orgánicas
combinadas se lavaron con H_{2}O, salmuera, se secaron
(MgSO_{4}), se filtraron, se concentraron a vacío y se
purificaron por cromatografía (SiO_{2}, EtOAc/Hex 1:4) para dar el
compuesto XXIIIf (10,3 g) en forma de un líquido incoloro.
\newpage
Etapa
6
Se trató metanol saturado con HCl*, preparado
burbujeando HCl gaseoso en CH_{3}OH (700 ml) a 0ºC, con la
cianhidrina XXIIIf y se calentó a reflujo durante 24 h. La reacción
se concentró a vacío para dar el compuesto XXIIIg, que se usó en la
siguiente etapa sin purificación.
* Alternativamente, también se puede usar HCl 6
M preparado por adición de AcCl en metanol seco.
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Etapa
7
Una disolución del hidrocloruro de la amina
XXIIIg en CH_{2}Cl_{2} (200 ml) se trató con Et_{3}N (45,0
ml, 315 mmol) y Boc_{2}O (45,7 g, 209 mmol) a -78ºC. Después, la
mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una
noche y se diluyó con HCl (2 M, 200 ml) y se extrajo en
CH_{2}Cl_{2}. Las capas orgánicas combinadas se secaron
(MgSO_{4}), se filtraron, se concentraron a vacío y se purificaron
por cromatografía (EtOAc/Hex 1:4) para dar el hidroxi-éster
XXIIIh.
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Etapa
8
Una disolución del éster de metilo XXIIIh (3 g,
10,5 mmol) en THF/H_{2}O (1:1) se trató con LiOH\cdotH_{2}O
(645 mg, 15,75 mmol) y se agitó a t.a. durante 2 h. La mezcla de
reacción se acidificó con HCl ac. (1 M, 15 ml) y se concentró a
vacío. El residuo se secó a vacío.
Una disolución del ácido en CH_{2}Cl_{2} (50
ml) y DMF (25 ml) se trató con NH_{4}Cl (2,94 g, 55,5 mmol), EDCl
(3,15 g, 16,5 mmol), HOOBt (2,69 g, 16,5 mmol) y NMM (4,4 g, 44
mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente
durante 3 días. Los disolventes se separaron a vacío y el residuo se
diluyó con HCl ac. (250 ml) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Las
capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución acuosa
saturada de NaHCO_{3}, se secaron (MgSO_{4}), se filtraron, se
concentraron a vacío para obtener el compuesto XXIIIi, que se usó
como estaba en las siguientes etapas.
(Alternativamente el compuesto XXIIIi también se
podía obtener directamente por reacción del compuesto XXIIIf (4,5 g,
17,7 mmol) con H_{2}O_{2} ac. (10 ml), LiOH\cdotH_{2}O (820
mg, 20,8 mmol) a 0ºC en 50 ml de CH_{3}OH durante 0,5 h.)
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Etapa
9
Una disolución del compuesto XXIIIi obtenido en
la etapa previa se disolvió en HCl 4 N en dioxano y se agitó a t.a.
durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró a vacío para dar el
compuesto XXIIIj en forma de un sólido, que se usó sin más
purificación.
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Etapa
10
El aminoéster XXIIII se preparó siguiendo el
método de R. Zhang y J. S. Madalengoitia (J. Org. Chem. 1999,
64, 330), con la excepción de que el grupo Boc se escindió por
reacción del aminoácido protegido con Boc con HCl en metanol.
Una disolución del aminoácido comercial
Boc-Chg-OH, XXIIIk (Senn chemicals,
6,64 g, 24,1 mmol) y el hidrocloruro de la amina XXIIII (4,5 g, 22
mmol)) en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) a 0ºC se trató con el reactivo
BOP y se agitó a t.a. durante 15 h. La mezcla de reacción se
concentró a vacío, después se diluyó con HCl ac. 1 M y se extrajo
en EtOAc (3x200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con
disolución saturada de NaHCO_{3} (200 ml), se secaron
(MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío, y se
cromatografiaron (SiO_{2}, EtOAc/Hex 3:7) para obtener el
compuesto XXIIIm (6,0 g) en forma de un sólido incoloro.
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Etapa
11
Una disolución del éster de metilo XXIIIm (4,0
g, 9,79 mmol) en THF/H_{2}O (1:1) se trató con LiOH\cdotH_{2}O
(401 mg, 9,79 mmol) y se agitó a t.a durante 3 h. La mezcla de
reacción se acidificó con HCl ac. y se concentró a vacío para
obtener el ácido libre.
Una disolución del ácido (1,5 g, 3,74 mmol) en
DMF/CH_{2}Cl_{2} (1:1 50 ml) se trató con la amina XXIIIj (772
mg, 3,74 mmol), EDCl (1,07 g, 5,61 mmol), HOOBt (959 mg, 5,61 mmol)
y NMM (2,15 ml, 14,96 mmol) a -10ºC. La mezcla de reacción se agitó
a 0ºC durante 48 h y se concentró a vacío. El residuo se diluyó con
HCl ac. 1 M y se extrajo con CH_{2}Cl_{2.} Las capas orgánicas
combinadas se extrajeron con NaHCO_{3} ac., HCl ac., salmuera, se
secaron (MgSO_{4}), se filtraron y concentraron a vacío para
obtener el compuesto XXIIIn, (2,08 g) en forma de un sólido
coloreado pardo.
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Etapa
12
Una disolución de la amida XXIIIn (2,08 g, 3,79
mmol) en tolueno y DMSO (1:1 20 ml) a 0ºC se trató con EDCl (7,24 g,
37,9 mmol) y ácido dicloroacético (2,42 g, 19,9 mmol) y se agitó a
t.a durante 4 h. La mezcla de reacción se diluyó con
CH_{2}Cl_{2}, se lavó con disolución saturada de NaHCO_{3}, y
salmuera. La capa orgánica se secó (MgSO_{4}) se filtró, se
concentró a vacío y se purificó por cromatografía (SiO_{2},
acetona/hexanos 3:7) para dar el compuesto XXIII en forma de un
sólido incoloro.
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Etapa
1
Una disolución de
Boc-terc-Lue XXIVa (Fluka, 5,0 g
21,6 mmol) en CH_{2}Cl_{2}/DMF secos (50 ml, 1:1) se enfrió a
0ºC y se trató con la amina XXIIII (5,3 g, 25,7 mmol), NMM (6,5 g,
64,8 mmol) y el reactivo BOP (11,6 g, 25,7 mmol). La reacción se
agitó a t.a. durante 24 h, se diluyó con HCl ac. (1 M) y se extrajo
con CH_{2}Cl_{2}. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con
HCl (ac., 1 M), disolución saturada de NaHCO_{3}, salmuera, se
secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío y se
purificaron por cromatografía (SiO2, acetona/hexano 1:5) para dar el
compuesto XXIVb en forma de un sólido incoloro.
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Etapa
2
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Una disolución del éster de metilo XXIVb (4,0 g,
10,46 mmol) se disolvió en HCl (disolución 4 M en dioxano) y se
agitó a t.a. durante 3 h. La mezcla de reacción se concentró a vacío
para obtener la sal de hidrocloruro de la amina usada en la
siguiente etapa.
Una disolución de la sal de hidrocloruro de la
amina (397 mg, 1,24 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 ml) se enfrió a
-78ºC y se trató con isocianato de terc-butilo (250 mg, 2,5
mmol) y se agitó a t.a. durante una noche. La mezcla de reacción se
concentró a vacío y el residuo se diluyó con HCl ac. (1 M) y se
extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Las capas orgánicas combinadas se
lavaron con HCl (ac., 1 M), disolución saturada de NaHCO_{3} y
salmuera. Las capas orgánicas se secaron, se filtraron y se
concentraron a vacío y el residuo se purificó por cromatografía
(SiO_{2}, acetona/Hex 1:4) para dar el compuesto XXIVc en forma de
un sólido incoloro.
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Etapa
3
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\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución del éster de metilo XXIVc (381 g,
1,0 mmol) en THF/H_{2}O (1:1, 5 ml) se trató con
LiOH\cdotH_{2}O (62 mg, 1,5 mmol) y se agitó a t.a durante 3 h.
La mezcla de reacción se acidificó con HCl ac. y se concentró a
vacío para obtener el ácido libre.
Una disolución del ácido (254,9 g, 0,69 mmol) en
DMF/CH_{2}Cl_{2} (1:1, 5,0 ml) se trató con la amina XXIIIj (159
mg, 0,763 mmol), EDCl (199 g, 1,04 mmol), HOOBt (169,5 mg , 1,04
mmol) y NMM (280 ml, 2,77 mmol) a -20ºC. La mezcla de reacción se
agitó a -20ºC durante 48 h y se concentró a vacío. El residuo se
diluyó con HCl ac. 1 M y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas
combinadas se extrajeron con NaHCO_{3} ac., HCl ac., salmuera, se
secaron (MgSO_{4}), se filtraron y concentraron a vacío para
obtener el compuesto XXIVd, (470 mg) en forma de un sólido coloreado
pardo.
\newpage
Etapa
4
Una disolución de la amida XXIVd (470 mg, 0,9
mmol) en tolueno y DMSO (1:1 20 ml) a 0ºC se trató con EDCl (1,72 g,
9,0 mmol) y ácido dicloroacético (0,37 ml, 4,5 mmol) y se agitó a
0ºC durante 4 h. La mezcla de reacción se diluyó con
CH_{2}Cl_{2}, y se lavó con disolución saturada de NaHCO_{3} y
salmuera. La capa orgánica se secó (MgSO_{4}) se filtró, se
concentró a vacío y se purificó por cromatografía (SiO_{2},
acetona/hexanos 3:7) para dar el compuesto XXIV en forma de un
sólido incoloro.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
Una disolución de Fmoc-glicina
(Bachem, 2,0 g, 6,87 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) se trató con
2-fenil-2-propanol
(Aldrich, 3,36 g, 24,7 mmol), DCC (disolución 1 M en
CH_{2}Cl_{2}, 8,24 ml), DMAP (167 mg, 1,37 mmol) y se agitó a
t.a. durante 24 h. La mezcla de reacción se concentró a vacío y se
diluyó con Et_{2}O (100 ml). El sólido que se separó, se filtró y
el filtrado se lavó con disolución saturada de NaHCO_{3}. La capa
orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró, se concentró a vacío, y se
purificó por cromatografía (SiO_{2}, EtOAc/Hex 1:5) para dar el
éster XXVc (1,1 g) en forma de un líquido viscoso incoloro.
\newpage
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de XXVc en CH_{2}Cl_{2} (16,0
ml) se trató con piperidina (4,0 ml) y se agitó a t.a. durante 0,5
h. La mezcla de reacción se concentró a vacío y se purificó por
cromatografía (SiO_{2}, acetona/hexanos de 1:10 a 1:1) para dar la
amina XXVd (420 mg) en forma de un líquido incoloro.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución del éster de metilo XXIVc (381 g,
1,0 mmol) en THF/H_{2}O (1:1, 5 ml) se trató con
LiOH\cdotH_{2}O (62 mg, 1,5 mmol) y se agitó a t.a durante 3 h.
La mezcla de reacción se acidificó con HCl ac. y se concentró a
vacío para obtener el ácido libre.
Una disolución del ácido (2,0 g, 5,5 mmol) en
DMF/CH_{2}Cl_{2} (11:1, 40,0 ml) a -10ºC se trató con la amina
XXIIIg (1,51 g, 6,8 mmol), EDCl (1,57 g, 8,25 mmol), HOOBt (1,41 g,
8,25 mmol) y NMM (2,5 g, 24,7 mmol). La mezcla de reacción se agitó
a 0ºC durante 48 h y se concentró a vacío. El residuo se diluyó con
HCl ac. 1 M (100 ml) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3x100 ml).
Las capas orgánicas combinadas se extrajeron con NaHCO_{3} ac.,
HCl ac., salmuera, se secaron (MgSO_{4}), se filtraron, se
concentraron a vacío para obtener el compuesto XXVe (3,17 g) en
forma de un sólido coloreado pardo, usado después sin
purificación.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución del éster de metilo XXIVc (2,5 g,
4,66 mmol) en THF/H_{2}O/ CH_{3}OH (1:1:1, 60 ml) se trató con
LiOH\cdotH_{2}O (200 mg, 4,87 mmol) y se agitó a t.a durante 4
h. La mezcla de reacción se acidificó con HCl ac. y se concentró a
vacío para obtener el ácido libre.
Una disolución del ácido (200,0 g, 0,38 mmol) en
DMF/CH_{2}Cl_{2} (1:1, 6,0 ml) a -10ºC se trató con la amina
XXVd (78 mg, 0,4 mmol), EDCl (105 g, 0,55 mmol), HOOBt (95 mg, 0,55
mmol) y NMM (150 ml, 1,48 mmol). La mezcla de reacción se agitó a
0ºC durante 48 h y se concentró a vacío. El residuo se diluyó con
HCl ac. 1 M (30 ml) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3x30 ml). Las
capas orgánicas combinadas se extrajeron con NaHCO_{3} ac. (2x30
ml), HCl ac., salmuera (30 ml), se secaron (MgSO_{4}) se
filtraron, se concentraron a vacío para obtener el compuesto XXVf
(240 mg) en forma de un sólido coloreado.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución del compuesto XXVf (240 mg, 0,28
mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 ml) se trató con reactivo de
Dess-Martin (Omega, 242 mg, 0,56 mmol) y se agitó a
t.a. durante 2 h. Después de completarse la oxidación (TLC,
acetona/Hex 1:4) la mezcla de reacción se diluyó con disolución
saturada de NaHCO_{3} (20 ml) y Na_{2}S_{2}O_{3} (disolución
acuosa al 10%, 20 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 30 min
y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3x30 ml). Las capas orgánicas
combinadas se extrajeron con disolución saturada de NaHCO_{3},
salmuera, se secaron (MgSO_{4}), se filtraron, se concentraron a
vacío y se purificaron por cromatografía (SiO_{2}, acetona/hexanos
1:5) para dar el compuesto XXV (122 mg) en forma de un sólido
incoloro.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución agitada de
N-Boc-3,4-deshidroprolina
XXVIa (5,0 g, 23,5 mmol), dicarbonato de di-terc-butilo (7,5
g, 34,4 mmol) y 4-N,N dimetilaminopiridina (0,40 g, 3,33
mmol) en acetonitrilo (100 ml) a temperatura ambiente se añadió
trietilamina (5,0 ml, 35,6 mmol). La disolución resultante se agitó
a esta temperatura durante 18 h antes de concentrarla a vacío. El
residuo marrón oscuro se purificó por cromatografía en columna
ultrarrápida eluyendo con EtOAc/hexano al 10-25%
para dar el producto XXVIb en forma de un aceite amarillo pálido
(5,29 g, 84%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución agitada de deshidroprolina XXVIb
(10,1 g, 37,4 mmol), cloruro benciltrietilamonio (1,60 g, 7,02 mmol)
en cloroformo (120 ml) a temperatura ambiente, se añadió hidróxido
sódico acuoso al 50% (120 g). Después de agitar enérgicamente a esta
temperatura durante 24 h, la mezcla negra se diluyó con
CH_{2}Cl_{2} (200 ml) y éter dietílico (600 ml). Después de
separar las capas, la disolución acuosa se extrajo con
CH_{2}Cl_{2}/Et_{2}O (1:2, 3x600 ml). La disolución orgánica
se secó (MgSO_{4}) y se concentró. El residuo se purificó por
cromatografía en columna ultrarrápida usando EtOAc/hexano al
5-20% para proporcionar 9,34 g (71%) del compuesto
XXVIc en forma de un sólido blanquecino.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La disolución del compuesto XXVIc (9,34 g, 26,5
mmol) en CH_{2}Cl_{2} (25 ml) y CF_{3}CO_{2}H (50 ml) se
agitó a temperatura ambiente durante 4,5 h antes de concentrarla a
vacío para dar un residuo marrón que se usó en la etapa 4 sin más
purificación.
\newpage
Etapa
4
Se añadió ácido clorhídrico concentrado
comercial (4,5 ml) a una disolución del residuo de la etapa 3 en
metanol (70 ml) y la mezcla resultante se calentó a 65ºC en un baño
de aceite. Después de 18 h, la mezcla se concentró a vacío
para dar un aceite marrón XXVIe, que se usó en la etapa 5 sin más
purificación.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
A una disolución agitada del éster de metilo de
la prolina XXVIe de la etapa 4,
N-Boc-ciclohexilglicina XXVIf
comercial (10,2 g, 40,0 mmol) y [hexafluorofosfato de
O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio]
(HATU) (16,0 g, 42,1 mmol) en DMF (200 ml) a 0ºC se añadió
diisopropiletilamina (18,0 ml, 104 mmol). Después de dejar calentar
a temperatura ambiente con el baño de hielo durante una noche (18
h), la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (600 ml),
H_{3}PO_{4} al 5% (150 ml) y salmuera (150 ml). La disolución
orgánica se lavó con H_{3}PO_{4} al 5% (150 ml) y disolución
saturada de NaHCO_{3} (2x200 ml) antes de secarla (MgSO_{4}),
filtrarla y concentrarla a vacío. El residuo se purificó por
cromatografía en columna ultrarrápida usando EtOAc/hexano al
5-20% para proporcionar 3,84 g (32%, 3 etapas) del
compuesto XXVIg en forma de un sólido blanquecino.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
6
La disolución del éster de metilo XXVIg (5,87 g,
13,1 mmol) y LiOH (1,65 g, 39,3 mmol) en THF/MeOH/H_{2}O (1:1:1,
90 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Se separaron el
metanol y THF a presión reducida. La disolución acuosa se acidificó
a pH\sim2 usando disolución acuosa de HCl 1 N (50 ml) y se saturó
con cloruro sódico sólido antes de extraerla con EtOAc (3\times150
ml). Las disoluciones orgánicas se combinaron, se secaron
(MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar un
sólido blanco XXVlh (5,8 g, cuantitativo).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
7
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto XXIIIi deseado se preparó de acuerdo
con el procedimiento del ejemplo XXIII, etapa 11.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
8
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto XXIV deseado se preparó de acuerdo
con el procedimiento del ejemplo XXIII, etapa 12.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
El producto XXVIIa deseado se preparó de acuerdo
con el procedimiento del ejemplo XXIII, etapa 9.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
El producto XXVIIb deseado se preparó de acuerdo
con el procedimiento del ejemplo XXIV, etapa 2.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
El producto XXVII deseado se preparó de acuerdo
con el procedimiento del ejemplo XXIII, etapa 12.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto intermedio XXVIIIb se preparó de
acuerdo con el procedimiento del ejemplo XXIII, etapas
3-6.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El ácido del ejemplo XXIV, etapa 2 (XXVIIIc)
(0,7 g) se hizo reaccionar con el producto de la etapa 1 anterior
(0,436 g), HATU (0,934 g) y DIPEA (1,64 ml) de la forma descrita
previamente en el ejemplo IX, etapa 2a para proporcionar 0,66 g del
producto deseado XXVIIId.
\newpage
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa 2 (0,5 g) se hizo
reaccionar con el reactivo de Dess-Martin (1 g) de
la forma descrita previamente en el ejemplo XX, etapa 7. La
purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (EtOAc,
hexano, al 40%, sílice) proporcionó 0,35 g de producto XXVIIIe.
Espectro de masas (LCMS) 522 (M+H^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
Al producto de la etapa 4 (0,3 g) se añadió una
disolución de H_{2}O/MeOH 1/1 (20 ml) y NaHCO_{3} sólido (242
mg, 5 equiv.). Después de agitar durante 18 h a temperatura
ambiente, la reacción se diluyó con EtOAc y se separaron las capas.
La capa acuosa se acidificó a pH 2 con HCl 1,0 N y se extrajo con
EtOAc. La capa de EtOAc se lavó con salmuera, después se secó sobre
MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para proporcionar el
producto XXVIIIf en forma de un polvo blanco (0,26 g). Espectro de
masas (LCMS) 508 (M+H^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa 5 (0,15 g) se disolvió
en CH_{2}Cl_{2} y se hizo reaccionar con HATU (0,137 g),
NH_{4}Cl (0,08 g, 5 equiv.) y DIPEA (0,53 ml). Después de 2 horas
a temperatura ambiente, la reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con
una disolución de ácido cítrico al 10%, después una disolución
saturada de NaHCO_{3}. La capa de EtOAc se lavó con salmuera,
después se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío
para proporcionar una mezcla bruta. La purificación por
cromatografía en columna ultrarrápida (acetona, hexano, al 30%,
sílice) proporcionó el producto deseado XXVIII (0,096 g). Espectro
de masas (LCMS) 507 (M+H^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
A una disolución a 0ºC del aldehído de partida
(4,0 g) en CH_{2}Cl_{2} (75 ml) se añadió ácido acético (2,0
equiv., 2,15 ml) seguido de isociantoacetato de metilo (1,1 equiv.,
1,9 ml). Después la reacción se calentó gradualmente a temperatura
ambiente Después de 18 horas (durante una noche), la reacción se
diluyó con EtOAc y se lavó con una disolución saturada de
NaHCO_{3}. La capa de EtOAc se lavó con salmuera, después se secó
sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para proporcionar
una mezcla bruta. La purificación por cromatografía en columna
ultrarrápida (EtOAc, hexano, de 30% a 40%, sílice) proporcionó el
producto XXIXa (4,5 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
A una disolución a 0ºC del compuesto XXIXa (4,4
g) en THF (100 ml) se añadieron 26 ml (2,2 equiv.) de una disolución
de LiOH 1,0 N. La reacción se agitó a esta temperatura durante 2
horas y después se calentó a temperatura ambiente. Después de 2
horas, la mezcla de reacción se acidificó a pH 2 con una disolución
de HCl 1,0 N. Se añadió EtOAc y se separaron las capas. La capa de
EtOAc se lavó con salmuera, después se secó sobre MgSO_{4}, se
filtró y se concentró a vacío para proporcionar el producto XXIXb
(3,7 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
El ácido XXIXb se hizo reaccionar con la amina
del ejemplo XV de la misma forma descrita previamente en el ejemplo
XXI, etapa 4. El producto intermedio resultante después se trató con
HCl de la misma forma descrita previamente en el ejemplo XXIII,
etapa 9, para proporcionar el producto XXIXc.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
El ácido XXVIIIc (2,43 g) se disolvió en
CH_{2}Cl_{2} y se hizo reaccionar con la amina XXIXc (2,47 g),
HATU (2,5 g) y DIPEA (5,8 ml) de la forma descrita previamente en el
ejemplo IX, etapa 2a para proporcionar, después de purificación por
cromatografía en columna ultrarrápida (MeOH, CH_{2}Cl_{2}, al
4%, sílice), el producto deseado XXIXd (4,35 g). Espectro de masas
(LCMS) 727 (M+H^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
El producto de la etapa 4 (4,2 g) se hizo
reaccionar con el reactivo de Dess-Martin (6,4 g) de
la forma descrita previamente en el ejemplo preparativo XX, etapa 7.
La purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (EtOAc al
100%, sílice) proporcionó 3 g del producto final XXIX. Espectro de
masas (LCMS) 725 (M+H^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
El alcohol
2-(trifluorometil)propan-2-ol
(1,28 g) se hizo reaccionar con carbonato de
N,N-disucciminidilo (3,84 g) y Et_{3}N (4,2 ml)
en CH_{3}CN seco (50 ml) durante 18 horas. La mezcla se diluyó con
EtOAc (200 ml) y se filtró. El filtrado se lavó con NaHCO_{3},
salmuera, después se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se
concentró a vacío para proporcionar una mezcla bruta. La
purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (acetona,
hexano, al 50%, sílice) proporcionó el producto deseado XXXa (0,3
g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
El producto del ejemplo XXIX (0,3 g) se trató
con 100 ml de HCl 4,0 N en dioxano. Después de 1 h, se añadieron 200
ml de Et_{2}O y el precipitado resultante se separó por filtración
y se secó a vacío para proporcionar el producto XXXb (0,27 g) en
forma de un polvo blanco. Espectro de masas (LCMS) 625 (M - HCl
+H^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
A una disolución a temperatura ambiente del
compuesto XXXb (0,05 g) en CH_{2}Cl_{2} (5 ml) se añadió DIPEA
(0,040 ml), compuesto XXXa (1,5 equiv., 0,030 g), seguido de 1
cristal de DMAP. Después de 30 minutos, la reacción se diluyó con
EtOAc (20 ml) y se lavó con HCl 1,5 N, después NaHCO_{3} y después
salmuera. La capa de EtOAc se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se
concentró a vacío para proporcionar una mezcla bruto. La
purificación por cromatografía preparativa (acetona, hexano, al 40%,
sílice) proporcionó el producto deseado XXX (0,044 g). Espectro de
masas (LCMS) 779 (M+H^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución del compuesto XXXb (0,05 g) en
CH_{2}Cl_{2} (5 ml) a temperatura ambiente se añadió DIPEA
(0,040 ml) e isocianato de terc-butilo (1,2 equiv.,
0,01 ml). Después de 18 h, la reacción se diluyó con EtOAc (20 ml) y
se lavó con HCl 1,5 N, NaHCO_{3} y salmuera. La capa de EtOAc se
secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para
proporcionar una mezcla bruto. La purificación por cromatografía
preparativa (EtOAc al 100%, sílice) proporcionó el producto final
XXXI (0,021 g). Espectro de masas (LCMS) 724 (M+H^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
El producto del ejemplo XXVIII se trató de la
forma descrita previamente en el ejemplo preparativo XXX, etapa 2
para proporcionar el producto XXXIIa. Espectro de masas (LCMS) 407
(M - HCl +H^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
La amina XXXIIa se hizo reaccionar con el
compuesto XXXa de la forma descrita previamente en el ejemplo
preparativo XXX, etapa 3, para proporcionar el producto XXXII
deseado. Espectro de masas (LCMS) 508 (M+H^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
La amina XXXIIa se hizo reaccionar con
isocianato de terc-butilo de la forma descrita
previamente en el ejemplo XXXI, etapa 1, para proporcionar el
producto XXXIII. Espectro de masas (LCMS) 561 (M+H^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
A la mezcla del éster (6,0 g) y tamices
moleculares (5,2 g) en cloruro de metileno anhidro (35 ml) se añadió
pirrolidina (5,7 ml, 66,36 mmol). La suspensión marrón resultante se
agitó a temperatura ambiente en atmósfera de N_{2} durante 24 h,
se filtró y se lavó con CH_{3}CN anhidro. Los filtrados combinados
se concentraron para dar el producto deseado.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución del producto de la etapa
precedente en CH_{3}CN (35 ml) se añadió K_{2}CO_{3} anhidro,
cloruro de metalilo (2,77 g, 30,5 mmol), Nal (1,07 g, 6,7 mmol). La
suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente en atmósfera
de N_{2} durante 24 h. Se añadieron 50 ml de agua enfriada con
hielo seguido de disolución de KHSO_{4} 2 N hasta que el pH era 1.
Se añadió EtOAc (100 ml) y la mezcla se agitó durante 0,75 h. Se
recogieron las capas orgánicas combinadas y se lavaron con salmuera,
se secaron sobre MgSO_{4}, y se evaporaron para dar el producto
deseado.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa precedente (2,7 g, 8,16
mmol) se disolvió en dioxano (20 ml) y se trató con LiOH 1 N recién
preparado (9 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura
ambiente en atmósfera de N_{2} durante 20 h. La mezcla de reacción
se recogió en EtOAc y se lavó con H_{2}O. Las fases acuosas
combinadas se enfriaron a 0ºC y se acidificaron a pH 1,65 usando HCl
1 N. La mezcla turbia se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). Las capas
orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre
MgSO_{4}, se concentraron para dar el ácido deseado (3,40 g).
\newpage
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
A una suspensión de
NaBH(OAc)_{3} (3,93 g, 18,5 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (55 ml) se añadió una disolución del producto de la
etapa precedente en CH_{2}Cl_{2} anhidro (20 ml) y ácido acético
(2 ml). La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 20 h.
Se añadió agua enfriada con hielo (100 ml) a la suspensión y se
agitó durante 1/2 h. Se separó la capa orgánica, se filtró, se secó
y se evaporó para dar el producto deseado.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución del producto de la etapa
precedente (1,9 g) en MeOH (40 ml) se trató con exceso de disolución
de CH_{2}N_{2}/Et_{2}O y se agitó durante una noche. La mezcla
de reacción se concentró hasta sequedad para dar un residuo bruto.
El residuo se cromatografió en gel de sílice, eluyendo con un
gradiente de EtOAc/hexano para proporcionar 1,07 g del producto puro
deseado.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
6
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución del producto de la etapa
precedente (1,36 g) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (40 ml) se trató con
BF_{3}.Me_{2}O (0,7 ml). La mezcla de reacción se agitó a
temperatura ambiente durante 20 h y se inactivó con disolución
saturada de NaHCO_{3} (30 ml) y se agitó durante 1/2 h. La capa
orgánica se separó y las capas orgánicas combinadas se lavaron con
salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, y se concentraron para dar el
residuo bruto. El residuo se cromatografió en gel de sílice,
eluyendo con un gradiente de EtOAc/hexano para proporcionar 0,88 g
del compuesto deseado.
\newpage
Etapa
7
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución del producto (0,92 g) de la
etapa precedente en MeOH (30 ml) se añadió Pd/C al 10% (0,16 g) a
temperatura ambiente y se hidrogenó a temperatura ambiente a 1 atm
de presión. La mezcla de reacción se agitó durante 4 h y se
concentró hasta sequedad para dar el compuesto deseado.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
8
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto deseado se preparó de acuerdo con el
procedimiento del ejemplo XXIII, etapa 10.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
9
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto ácido deseado se preparó de acuerdo
con el procedimiento del ejemplo XXIV, etapa 3.
\newpage
Etapa
10
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto deseado XXXIV se preparó de acuerdo
con el procedimiento del ejemplo XXIX, etapas
4-5.
\vskip1.000000\baselineskip
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Etapa
1
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Una disolución de fosfonato de trietilo (44,8 g)
en THF (30 ml) a 0ºC se trató con una disolución 1 M (200 ml) de
bis(trimetilsililamida) sódica en THF. La mezcla resultante
se agitó a t.a. durante 0,5 h, y después se enfrió a 0ºC. Se añadió
gota a gota una disolución de etilenacetal de la
1,4-ciclohexanodiona (15,6 g) en THF (50 ml), y la
disolución se agitó a t.a. durante 18 h. Después, la mezcla de
reacción enfrió a 0ºC, se trató con ácido cítrico acuoso frío, y la
mezcla se extrajo con EtOAc. El extracto se lavó con disolución
acuosa saturada de NaHCO_{3}, y después salmuera; y después se
secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y el filtrado se
evaporó. El residuo se cromatografió en gel de sílice, eluyendo con
un gradiente de CH_{2}Cl_{2}/EtOAc para proporcionar el
compuesto del título (21 g), 92% de rendimiento. Espectro de masas
(FAB) 227,3 (M+H^{+}).
\newpage
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa precedente (20 g) se
disolvió en EtOH (150 ml) y se trató con Pd/C al 10% a 1 atm de
hidrógeno durante 3 días. La mezcla se filtró y el filtrado se
evaporó para proporcionar el compuesto del título (20,3 g), 100% de
rendimiento. Espectro de masas (FAB) 229,2 (M+H^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa precedente (20 g) se
disolvió en MeOH (150 ml) y se trató con una disolución de LiOH (3,6
g) en agua (50 ml). La mezcla se agitó durante 18 horas y se
concentró a vacío. El residuo se disolvió en agua fría (100 ml), la
disolución se acidificó a pH 2-3 con HCl 5 N, y la
mezcla resultante se extrajo con EtOAc. El extracto se secó sobre
Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y el filtrado se evaporó para
proporcionar el compuesto del título (17,1 g), 97% de rendimiento.
Espectro de masas (FAB) 201,2 (M+H^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
1. El producto de la etapa precedente (3,0 g) se
disolvió en Et_{2}O (150 ml), se trató con Et_{3}N (2,1 ml), y
la disolución enfrió a -78ºC. Se añadió gota a gota cloruro de
pivaloilo (1,85 ml) y después de 0,25 h adicionales agitando, la
disolución se calentó a 0ºC a lo largo de 0,75 h y después se enfrió
otra vez a -78ºC para proporcionar una disolución del anhídrido
mixto para la reacción de la parte 2.
2. Una disolución de
(S)-4-bencil-2-oxazolidinona
(2,66 g) en THF (22 ml) se enfrió a -78ºC, y se añadió gota a gota
una disolución 1,6 M (9,38 ml) de
n-butil-litio en hexano. Después de
0,33 h adicionales de agitación a esta temperatura, la disolución se
transfirió mediante una cánula a la disolución fría de la parte 1.
La mezcla se agitó a -78ºC, después se calentó a 0ºC y se agitó a
esta temperatura durante 0,5 h. La capa orgánica se separó, la capa
acuosa se extrajo con Et_{2}O, los extractos orgánicos se lavaron
con salmuera, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se
filtraron y el filtrado se evaporó. El residuo se cromatografió en
gel de sílice, eluyendo con un gradiente de hexano/EtOAc (9:1) para
proporcionar el compuesto del título (5,0 g), 93% de rendimiento.
Espectro de masas (FAB) 360,4 (M+H^{+}).
\newpage
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa precedente (2,7 g) se
disolvió en THF (25 ml), se enfrió a -78ºC, se transfirió mediante
una cánula a una disolución de
bis(trimetilsilil)amiduro de potasio/tolueno 0,5 M
(16,5 ml) en THF (25 ml) a -78ºC, y la disolución resultante se
agitó a -78ºC durante 0,75 h. A esta disolución se añadió mediante
una cánula una disolución de trisilil-azida (3,01 g)
en THF (25 ml) previamente enfriada a -78ºC. Después de 1,5 minutos,
la reacción se inactivó con ácido acético (1,99 ml), la reacción se
calentó a t.a., y después se agitó durante 16 horas. La reacción se
diluyó con EtOAc (300 ml), y se lavó con NaCl acuoso al 5%. La fase
acuosa se extrajo con EtOAc, las fases orgánicas combinadas se
lavaron con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} y después
salmuera; y después se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se
filtró y el filtrado se evaporó. El residuo se cromatografió en gel
de sílice, eluyendo con EtOAc/hexano (1:3) para proporcionar el
compuesto del título (2,65 g), 88% de rendimiento.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
6
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa precedente (11,4 g) se
disolvió en ácido fórmico al 95% (70 ml) y se calentó a 70ºC durante
0,5 h mientras se agitaba. La disolución se evaporó a vacío y el
residuo se recogió en EtOAc. La disolución se lavó con disolución
acuosa saturada de NaHCO_{3}, y después salmuera; después se secó
sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y el filtrado se evaporó.
El residuo se cromatografió en gel de sílice para proporcionar el
compuesto del título (8,2 g).
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Etapa
7
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa precedente (8,2 g) se
disolvió en CH_{2}Cl_{2} (16 ml) y se trató con trifluoruro de
dietilaminoazufre (DAST, 7,00 ml) a t.a. durante 3 h. La reacción se
vertió sobre hielo/agua (200 cc) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2}.
El extracto se lavó con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3}, y
después salmuera; y después se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro,
se filtró y el filtrado se evaporó. El residuo se cromatografió en
gel de sílice, eluyendo con EtOAc/hexano (15:85) para proporcionar
el compuesto del título (4,5 g), 52% de rendimiento.
\newpage
Etapa
8
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa precedente (3,7 g) se
disolvió en una mezcla de THF (150 ml) y agua (48 ml), se enfrió a
0ºC, se trató con H_{2}O_{2} al 30% (3,95 ml) y después con
LiOH\cdotH_{2}O (0,86 g). La mezcla se agitó durante 1 h a 0ºC,
después se inactivó con una disolución de Na_{2}SO_{3} (5,6 g)
en agua (30 ml), seguido de una disolución de NaHCO_{3} 0,5 N (100
ml). La mezcla se concentró a vacío hasta 1/2 volumen, se diluyó con
agua (hasta 500 ml), y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (4 x 200 ml).
La fase acuosa se acidificó a pH 1-2 con HCl 5 N y
se extrajo con EtOAc (4 x 200 ml). El extracto se lavó con salmuera;
después se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y el
filtrado se evaporó para proporcionar el compuesto del título (1,95
g), 91% de rendimiento, que se usó directamente en la siguiente
etapa.
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Etapa
9
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto del ejemplo precedente (2,6 g) se
disolvió en Et_{2}O (50 ml) y se trató gota a gota con una
disolución de CH_{2}N_{2} en Et_{2}O hasta que la disolución
permaneció amarilla. La disolución se agitó durante 18 h, después se
evaporó a vacío para proporcionar el compuesto del título (2,8), que
se usó directamente en la siguiente etapa.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
10
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa precedente (1,95 g) se
disolvió en MeOH (150 ml), se trató con ácido fórmico (1,7 ml),
después se trató con Pd/C al 10% (3,3 g, Degussa tipo E101) a 1 atm
de hidrógeno durante 1,5 h. La mezcla se filtró y el filtrado se
evaporó para proporcionar el compuesto del título (2,1 g) en forma
de la sal de ácido fórmico, que se usó directamente en la siguiente
etapa.
\newpage
Etapa
11
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa precedente (2,1 g) se
disolvió en 1,4-dioxano (100 ml) y se añadió
dicarbonato de di-terc-butilo (1,9
g) seguido de diisopropiletilamina (2,9 ml). La disolución se agitó
durante 18 horas y se concentró a vacío. El residuo se trató con
KH_{2}PO_{4} acuoso al 5% y la mezcla se extrajo con EtOAc. El
extracto se lavó con salmuera; después se secó sobre MgSO_{4}
anhidro, se filtró y el filtrado se evaporó. El residuo se
cromatografió en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de
CH_{2}Cl_{2}/Et_{2}O para proporcionar el compuesto del título
(2,5 g), 99% de rendimiento. Espectro de masas (FAB) 307,9
(M+H^{+}).
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Etapa
12
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa precedente (2,5 g) se
disolvió en 1,4-dioxano (35 ml), se trató con LiOH
acuoso 1 M (17 ml), y se agitó durante 2 h. La mezcla se inactivó
con hielo/agua (125 cc), la mezcla se acidificó a pH
3-4 con HCl 3 N, y se extrajo con EtOAc. El extracto
se secó sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró y el filtrado se evaporó
para proporcionar el compuesto del título (2,3 g), 96% de
rendimiento. Espectro de masas (FAB) 294,0 (M+H^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
13
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto deseado se preparó de acuerdo con el
procedimiento del ejemplo XXIII, etapa 10.
\newpage
Etapa
14
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El producto ácido deseado se preparó de acuerdo
con el procedimiento del ejemplo XXIV, etapa 3.
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Etapa
15
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto ácido deseado se preparó de acuerdo
con el procedimiento del ejemplo XXIX, etapa 4.
\newpage
Los compuestos de fórmulas XXXVI y XXXVIII se
prepararon de acuerdo con el siguiente esquema y usando los ejemplos
preparativos 11 a 15 discutidos antes.
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El compuesto de fórmula XXXVIb se preparó a
partir de un compuesto de fórmula XXXVIa como sigue, mediante
procedimientos conocidos:
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A una disolución del compuesto XXXVIa (6,58 g,
22 mmol) en 100 ml de MeOH se añadió Pd/C al 10% (0,8 g) y ácido
p-toluenosulfónico (4,2 g). La mezcla de reacción se
sometió a hidrogenación a temperatura ambiente durante una noche. La
mezcla de reacción se filtró a través de celita y se lavó con MeOH
en exceso. Los filtrados combinados se concentraron a vacío para
proporcionar el compuesto del título XXXVIb en forma de una goma. La
conversión de XXXVIb en XXXVI y XXXVII seguía la ruta mostrada en el
esquema anterior y de acuerdo con los ejemplos preparativos
11-15.
\newpage
Se preparó un compuesto de fórmula XXXVIII
usando el siguiente esquema y siguiendo los ejemplos preparativos 11
a 15 discutidos antes.
Se preparó un compuesto de fórmula XXXVIII
usando el siguiente esquema y siguiendo los ejemplos preparativos 11
a 15 discutidos antes.
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\vskip1.000000\baselineskip
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\newpage
Etapa
1
Una disolución del cloruro de sulfonilo de
XXXIXa preparado por el procedimiento de H. MckIwain (J. Chem.
Soc. 1941, 75) se añadió gota a gota a una mezcla de 1,1. equiv
de t-butilmetilamina y trietilamina a -78ºC y se
agitó a t.a. durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró a vacío
y se purificó por cromatografía (SiO_{2}, Hex/acetona 4:1) para
dar la sulfonamida XXXIXb en forma de un aceite incoloro.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Una disolución de la amina protegida con Cbz
XXXIXb se disolvió en metanol y se trató con Pd/C al 5% en moles (5%
p/p) y se hidrogenó a 4,2 kg/cm^{2}. La mezcla de reacción se
filtró a través de un tapón de celita y se concentró a vacío para
obtener la amina libre XXXIXc que solidificó al reposar.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
La hidroxisulfonamida XXXIXd se sintetizó de
forma similar al procedimiento para la síntesis del compuesto XXVf
excepto sustituyendo la amina XXVd por el compuesto XXXIXc. La
mezcla de reacción bruta se usó directamente para la siguiente
reacción.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
La hidroxiamida XXXIXd se oxidó al compuesto
XXXIX usando el reactivo de Dess-Martin siguiendo el
procedimiento para la síntesis de XXV (etapa 5). La mezcla bruta se
purificó por cromatografía (SiO_{2}, acetona/hexano 3:7) para
obtener el compuesto XXXIX en forma de un sólido incoloro.
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Etapa
1
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\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto XXXXa se hizo reaccionar de la
forma descrita previamente en XXXII, etapa 1, para proporcionar el
producto XXXXb de la etapa 1. Espectro de masas (LCMS) 421 (M - HCl
+H^{+}).
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Etapa
2
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\vskip1.000000\baselineskip
Se añadieron Et_{3}N (1,4 ml) y
difenilfosforilazida (2,2 ml) a una disolución del ácido carboxílico
XXXXc en tolueno (13 ml). La reacción se agitó a t.a. durante 30 min
y después se mantuvo a reflujo durante una noche. Después de 18 h,
la reacción enfrió a t.a. y el producto XXXXd de la etapa 2, se usó
directamente en forma de una disolución 0,7 M en tolueno.
\newpage
Etapa
3
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\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto XXXXb, producto de la etapa 1 del
ejemplo preparativo XXXX se hizo reaccionar con el producto XXXXd de
la etapa 2 del ejemplo preparativo XXXX de la forma descrita
previamente en el ejemplo XXXIII para proporcionar el compuesto
XXXX. Espectro de masas (LCMS) 560 (M+H^{+}).
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto XXXXb, producto de la etapa 1 del
ejemplo preparativo XXXX se hizo reaccionar con el cloroformiato
XXXXIa preparado según J. Org. Chem., 1977, 42, 143, de la
forma descrita previamente en el ejemplo 12 compuesto 4.1 para
proporcionar el compuesto XXXXI. Espectro de masas (LCMS) 561
(M+H^{+}).
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución agitada y enfriada (baño de
acetona/hielo seco) de la imina XXXXIIa de partida (3,679 g) en éter
dietílico (50 ml) se añadió metil-litio 1,6 M en
éter dietílico (12,6 ml). La mezcla de reacción se dejó calentar
hasta temperatura ambiente a lo largo de 2 h. Se añadió disolución
saturada de NaHCO_{3} y después de agitar durante -30 min se
separó la fase orgánica. Después se lavó con salmuera, se secó sobre
Na_{2}SO_{4} anhidro y se concentró hasta sequedad a vacío. El
producto bruto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice
(acetato de etilo en n-hexano al 2%) para
proporcionar el producto XXXXIIb deseado (0,3 g).
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Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución agitada y enfriada (baño de
hielo) del compuesto XXXXIIb, el producto de la etapa 1 (0,3 g), se
añadió NaOH 1,0 N (1,38 ml) seguido de (Boc)_{2}O. La
mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante -20 h,
después de lo cual se distribuyó entre acetato de etilo (50 ml) y
agua (10 ml). La fase de acetato de etilo se separó, se lavó con
salmuera y se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La evaporación a
vacío hasta sequedad proporcionó el derivado NBoc XXXXIIc (0,660 g),
que se usó sin más purificación en la siguiente etapa.
\newpage
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución del producto XXXXIIc de la etapa
2 en metanol (10 ml) se hidrogenó en presencia de
Pd(OH)_{2} hasta que la cromatografía en capa fina
mostró la ausencia de material de partida. Se separó el
Pd(OH)_{2} por filtración y se lavó con metanol. Los
filtrados y lavados combinados se concentraron hasta sequedad a
vacío para proporcionar un sólido que se disolvió en metanol y se
trató con HCl 1,0 N en éter dietílico. Después de -2 h la mezcla de
reacción se evaporó a sequedad a vacío para proporcionar el
hidrocloruro de la amina deseada XXXXIId en forma de un sólido
blanco (0,2 g).
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Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución agitada y enfriada (baño de
hielo) del compuesto XXXXIId, el producto de la etapa C (0,1 g) en
CH_{2}Cl_{2} (6 ml) se añadió disolución saturada de NaHCO_{3}
(4 ml) seguido de fosgeno (0,64 ml). La mezcla de reacción se agitó
a 0ºC durante 30 h, y después a temperatura ambiente durante 1 h. Se
separó la fase orgánica, se secó sobre MgSO_{4} anhidro y se
concentró hasta sequedad a vacío para proporcionar el isocianato
XXXXIIe deseado (0,0611 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto XXXXIIe, producto de la etapa 5, se
hizo reaccionar con el compuesto XXXXb del ejemplo preparativo XXXX
de la forma descrita previamente en el ejemplo XXXIII para
proporcionar el compuesto XXXXII. Espectro de masas (LCMS) 574
(M+H^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
A una disolución enfriada (baño de hielo) de
4-hidroxi-2-butanona
(8,81 g) XXXXIIIa en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) se añadió con
agitación, cloruro de benzoilo (14,76 g) seguido de piridina (16,15
ml) y DMAP (0,01 g). La mezcla de reacción se agitó a temperatura
ambiente durante una noche y después se diluyó con acetato de etilo
(-200 ml). La disolución se lavó con CuSO_{4} acuoso, NH_{4}Cl
acuoso y salmuera. Después la fase orgánica se secó sobre MgSO_{4}
anhidro y se evaporó hasta sequedad. El producto se purificó por
cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo en
n-hexano al 5%-15%) para proporcionar el compuesto
XXXXIIIb (16,3 g; 84,9%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución del compuesto XXXXIIIb, el
producto de la etapa 1 (16,3 g) en CH_{2}Cl_{2} (150 ml), se
añadió DAST (26,1 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura
ambiente durante -72 h. Después, la mezcla se añadió gota a gota a
una disolución saturada fría de Na_{2}CO_{3} (150 ml). La mezcla
se diluyó con acetato de etilo (-200 ml) y después de agitar durante
-30 min se separó la fase orgánica; se lavó con salmuera y se secó
sobre MgSO_{4} anhidro. La concentración a vacío y purificación
por cromatografía sobre gel de sílice (acetato de etilo en
n-hexano al 4%) proporcionó el compuesto XXXXIIIc
(14,6 g; 80,4%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución del compuesto XXXXIIIc, el
producto de la etapa 2 (4 g), en éter dietílico seco (150 ml) se
añadió con enfriamiento (baño de hielo) EtMgCl (28 ml). La mezcla de
reacción se agitó en el baño de enfriamiento durante -6 h, después
de lo cual se vertió en disolución acuosa saturada de NH_{4}Cl
enfriando con hielo. La capa orgánica se separó, se lavó con
salmuera, se secó sobre MgSO_{4} anhidro y se concentró hasta
sequedad a vacío. El residuo se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (100
ml) y se trató con reactivo de Dess-Martin (15,8
g). Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 h, se añadió
Ph_{3}P=CHCOO^{t}Bu (10,54 g). La agitación se continuó durante
-20 h, se añadió acetato de etilo (-200 ml) seguido de una mezcla de
disolución saturada de Na_{2}S_{2}O_{3} y disolución saturada
de NaHCO_{3} (200 ml; 1/1) y se agitó durante - 10 min. La capa
orgánica se separó y se lavó sucesivamente con disolución saturada
de NaHCO_{3} y salmuera. La fase orgánica lavada se secó sobre
MgSO_{4} anhidro y se evaporó hasta sequedad a vacío para
proporcionar el producto bruto deseado.
La reacción anterior se repitió usando el
producto de la etapa 2 (10,6 g). Los productos brutos finales de las
dos reacciones se combinaron y se sometieron a purificación por
cromatografía en gel de sílice (CH_{2}Cl_{2} en
n-hexano al 10%) para proporcionar el producto
XXXXIIId (7,93 g; 57%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvió carbamato de bencilo (8,92 g) en
alcohol n-propílico (79 ml). A la disolución
resultante se añadió, con agitación, una disolución recién preparada
da NaOH (2,33 g) en agua (145 ml), seguido de hipoclorito de
terc-butilo (6,57 ml). A la mezcla resultante se
añadió (DHQ)_{2}PHAL (0,742 g) disuelto en alcohol
n-propílico (66 ml) seguido del compuesto XXXXIIId
(19,05 mmol). Después se añadió el catalizador de osmio,
K_{2}OsO_{2}(OH)_{2} y la mezcla de reacción se
agitó a temperatura ambiente durante 1 h.
La reacción anterior se repitió usando el
compuesto XXXXIIId (19,36 mmol). Se combinaron las dos reacciones
seguido de dilución con acetato de etilo (500 ml). La mezcla se
agitó con agua (100 ml), la fase orgánica se separó y se lavó con
agua, salmuera y finalmente se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La
evaporación a vacío proporcionó el producto bruto que se
cromatografió sobre gel de sílice (acetato de etilo en
n-hexano al 10%-20%) para proporcionar el producto
puro deseado (3 g) en forma de una mezcla de los compuestos
XXXXIIIe y XXXXIIIf.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una solución agitada de los compuestos XXXXIIIf
y XXXXIIIe, el producto de la etapa 4, en CH_{2}Cl_{2} (50 ml)
se trató con ácido trifluoroacético (50 ml). Después de 4 h, la
mezcla de reacción se concentró hasta sequedad a vacío. El residuo
se disolvió en disolución acuosa de Na_{2}CO_{3} al 10%, la
disolución se lavó con éter dietílico y la fase acuosa se acidificó
con H_{2}SO_{4} 2 M a pH -1,5. La extracción de la disolución
ácida con acetato de etilo seguido de secado sobre MgSO_{4}
anhidro y evaporación a vacío proporcionó el producto deseado en
forma de una mezcla de compuestos XXXXIIIg y XXXXIIIh (2,6 g).
\newpage
Etapa
6
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución del producto de la etapa 5 (1
g) en CH_{2}Cl_{2} (50 ml) se añadió HATU (1,43 g), NH_{4}Cl
(0,842 g) y DMSO (5,59 ml). La mezcla de reacción se agitó a
temperatura ambiente durante -20 h, se diluyó con acetato de etilo y
se lavó con disolución saturada de NaHCO_{3} y salmuera. La fase
orgánica después se secó sobre MgSO_{4} anhidro y se concentró
hasta sequedad a vacío para proporcionar el producto bruto. La
cromatografía en gel de sílice (n-hexano en acetato
de etilo al 10%) proporcionó en una de las fracciones el producto
XXXXIIIi puro deseado (0,205 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
7
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución del compuesto XXXXIIIi, el
producto de la etapa 6, (0,205 g) en etanol (15 ml) se añadió el
catalizador Pd/C al 10%. La suspensión resultante se hidrogenó hasta
que la cromatografía en capa fina indicó el consumo completo del
material de partida (-3 h). El catalizador se separó por filtración
y se lavó con etanol. El filtrado y los lavados combinados se
evaporaron a vacío hasta sequedad para proporcionar el producto
deseado XXXXIIIj (0,164 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
8
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto XXXXIIIj se convirtió en el
compuesto XXXIII siguiendo el procedimiento similar a los ejemplos
XXVIII y XXXIII.
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\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
Se añadió malonato de etilo XXXXIVa (5,4 ml; 36
mmol) a una suspensión de NaH (1,44 g de una dispersión al 60% en
aceite mineral; 0,9 eq.) en tetrahidrofurano anhidro (THF; 60 ml) a
0ºC, en una atmósfera de nitrógeno y la mezcla se agitó a
temperatura ambiente durante 30 min. Se añadió éter de bencilo y
2-bromoetilo (8,5 ml; 40 mmol) antes de calentar a
reflujo la reacción durante un periodo de 24 h. Después de enfriar,
la reacción se repartió entre EtOAc y HCl diluido (aprox. 1 M). Se
separó la capa orgánica, se secó (MgSO_{4}) y se concentró para
dar un residuo.
El residuo antes mencionado se disolvió en THF
anhidro (100 ml) y se añadió una disolución de hidruro de litio y
aluminio (LAH; 66 ml de una disolución 1,0 M) en una atmósfera de
nitrógeno y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente
durante un periodo de 4 h y se añadió EtOAc seguido de HCl diluido.
Se separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó
(MgSO_{4}) y se concentró. El producto de reacción bruto se
purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando
EtOAc:hexano (70:30) como eluyente para proporcionar el diol XXXXIVb
(3,59 g) deseado, en forma de un aceite incoloro.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Se añadió cloruro de
p-toluenosulfonilo (1,12 g; 5,9 mmol) al diol
XXXXIVb (1,00 g; 4,9 mmol) en una mezcla de diclorometano (15 ml) y
piridina (1,18 ml; 14,6 mmol) y la mezcla resultante se agitó a
temperatura ambiente durante una noche (aproximadamente 16 h). La
mezcla de reacción se repartió entre EtOAc y disolución acuosa
diluida de HCl. La fase orgánica se separó, se lavó con disolución
acuosa saturada de bicarbonato de sodio, se secó (MgSO_{4}) y se
concentró a presión reducida. El residuo se purificó por
cromatografía en columna de gel de sílice usando EtOAc:hexano
(30:70) como eluyente para proporcionar i) el ditosilato (0,291 g),
seguido de ii) el monotosilato XXXXIVc deseado (1,02 g) y iii) diol
recuperado (0,27 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
El monotosilato XXXXIVc (1,0 g; 2,8 mmol) en
dimetilformamida anhidra (DMF; 3 ml) se añadió a una suspensión de
NaH (0,333 g de una dispersión al 60% en aceite mineral; 8,3 mmol)
en DMF (13 ml) y la mezcla resultante se agitó a temperatura
ambiente durante un periodo de 3 h. La mezcla de reacción se
repartió entre EtOAc y agua. La fase orgánica se separó, se lavó con
salmuera, se secó (MgSO_{4}) y se concentró para proporcionar un
residuo que se purificó por cromatografía en columna de gel de
sílice usando EtOAc:hexano (1:5) como eluyente para proporcionar el
oxetano XXXXIVd deseado (0,37 g) en forma de un aceite incoloro.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
Una suspensión de Pd-C al 10%
(0,10 g) y el éter de bencilo XXXXIVd (0,33 g) en metanol (10 ml) se
puso en una atmósfera de hidrógeno (balón) durante un periodo de 1
h. La mezcla de reacción se filtró por una almohadilla de celita y
el sólido se lavó bien con metanol. Los filtrados combinados se
concentraron a presión reducida para proporcionar el alcohol XXXXIVe
(0,17 g) en forma de un aceite incoloro usado en posteriores
procedimientos sin purificación.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió peryodinano de
Dess-Martin (0,658 g; 0,16 mmol) a una disolución
del alcohol XXXXIVe (0,144 g; 1,4 mmol) en diclorometano (5 ml) y se
agitó a temperatura ambiente durante un periodo de 1 h, antes de
añadir el fosforano (0,637 g; 0,16 mmol). La mezcla de reacción
resultante se agitó durante un periodo de aproximadamente 16 h,
después se repartió entre EtOAc y agua. La fase orgánica se separó,
se secó (MgSO_{4}) y se concentró a presión reducida. El residuo
se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando
EtOAc:hexano 1:5 para proporcionar el éster XXXXIVf (0,131 g) en
forma de un aceite incoloro.
\newpage
Etapa
6
Se disolvió carbamato de bencilo (0,657 g; 4,3
mmol) en n-propanol (6 ml). Se añadió hidróxido
sódico acuoso (0,171 g; 4,3 mmol, en 11 ml de agua) seguido de
hipoclorito de terc-butilo (0,49 ml; aproximadamente
4,3 mmol) y una disolución de (DHQ)_{2}PHAL (0,056 g) en
n-propanol (5 ml). La mezcla resultante se puso en
un baño de agua y se agitó durante 5 min, antes de añadir la olefina
XXXXIVf (0,326 g; 1,4 mmol) seguido de osmiato de potasio dihidrato
(0,021 g). La mezcla de reacción resultante se agitó durante 3 h y
se añadió a EtOAc. La capa acuosa se separó y se lavó con EtOAc. Las
fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron
(MgSO_{4}) y se concentraron a presión reducida. El residuo se
purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando
EtOAc:hexano (7:3) como elu-
yente para dar el alfa-hidroxiéster XXXXIVg (0,367 g), que contenía aprox. 20% del beta-hidroxiéster no deseado.
yente para dar el alfa-hidroxiéster XXXXIVg (0,367 g), que contenía aprox. 20% del beta-hidroxiéster no deseado.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
7
Se añadió carbonato de potasio (0,100 g) a una
disolución en metanol (30 ml) de aprox. 2 g del éster de bencilo
XXXXIVg (contaminado con una pequeña cantidad del carbamato de
bencilo). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente
durante 2 h, y después se repartió entre EtOAc y agua. La fase
orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó y se concentró a
presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en
columna de gel de sílice usando EtOAc:hexanos (7:3) para
proporcionar el éster XXXXIVh (1,02 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
8
Una suspensión de Pd-C al 10%
(0,030 g) y el carbamato de bencilo XXXXIVh (0,090 g) en metanol (5
ml) se puso en una atmósfera de hidrógeno (balón) durante un periodo
de 1 h. La reacción se filtró por una almohadilla de celita y el
sólido se lavó bien con metanol. Los filtrados combinados se
filtraron a presión reducida para dar la amina intermedia (0,050 g)
que se usó inmediatamente.
Se añadieron el reactivo BOP (0,131 g; 0,31
mmol) seguido de trietilamina (0,130 ml; 0,93 mmol) a una mezcla de
la amina (0,050 g; 0,28 mmol) y el ácido carboxílico XXXXIVi (0,121
g; 0,31 mmol) en diclorometano (3 ml) y la mezcla resultante se
agitó durante un periodo de 4 h y se repartió entre HCl ac. dil.
(aprox. 1 M) y EtOAc. La fase orgánica se separó, se lavó con
disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, se secó
(MgSO_{4}) y se concentró a presión reducida. El residuo se
purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando EtOAc
como eluyente para proporcionar el éster de metilo XXXXIVj (0,107 g)
en forma de un sólido blanco.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
9
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió carbonato de potasio (0,054 g; 0,39
mmol) al éster XXXXIVj (0,107 g; 0,19 mmol) en una mezcla de metanol
(3 ml) y agua (1 ml) y la reacción resultante se agitó durante un
periodo de 16 h y se repartió entre EtOAc y agua. La fase orgánica
se separó, se lavó con salmuera, se secó y se concentró para dar el
ácido XXXXIVK (0,099 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
10
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió trietilamina (0,035 ml; 0,25 mmol) a
una mezcla del ácido carboxílico XXXXIVk (0,041 g; 0,08 mmol), la
sal de hidrocloruro (0,023 g; 0,08 mmol) y el reactivo BOP (0,037 g;
0,08 mmol) en diclorometano (3 ml) y la mezcla resultante se agitó a
temperatura ambiente durante un periodo de 4 h. La reacción se
repartió entre EtOAc y HCl ac. diluido (1 M). La fase orgánica se
separó, se lavó con disolución acuosa saturada de bicarbonato de
sodio, agua, se secó y se concentró a presión reducida.
Se añadieron el residuo del procedimiento
anterior en diclorometano (3 ml) y reactivo peryodinano de
Dess-Martin (0,065 g; 0,15 mmol) y la mezcla se
agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La reacción se repartió
entre sulfito sódico acuoso al 5%, disolución ac. sat. de
bicarbonato de sodio, agua, se secó y se concentró a presión
reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel
de sílice usando CH_{2}Cl_{2};MeOH; 20:1 como eluyente para
proporcionar la alfa-cetoamida XXXXIV (0,021 g).
FABMS: MH^{+}, 767,4.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
Una disolución del aldehído XXIIIe (0,626 g,
2,75 mmol), TOSMIC (1,63 g, 8,27 mmol) y CH_{3}COOH (0,48 ml,
8,27 mmol) en CH_{2}Cl_{2} seco (15 ml) se agitó a t.a.
durante 36 h. La mezcla de reacción se concentró a vacío y se
purificó por cromatografía (SiO_{2}, EtOAc/Hex 2:3) para dar 0,90
g (68%) del compuesto XXXXVIa en forma de un sólido incoloro.
MS (ES) m/z, intensidad relativa 965
[(2M+1)^{+}, 30], 483 [(M+1)^{+}, 53], 427 (60),
383 (100), 365 (71), 272 (64).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Una disolución del compuesto XXXXVIa (0,9 g,
1,86 mmol) en HCl (30 ml, 6 M en CH_{3}OH, preparado por adición
de cloruro de acetilo a CH_{3}OH a 0ºC) se agitó a t.a. durante
una noche. La mezcla de reacción se concentró a vacío y se usó como
estaba en la siguiente etapa de reacción.
MS (ES) m/z, intensidad relativa 681
[(2M+1)^{+}, 26], 341 [(M+1)^{+}, 100], 180
(40).
\newpage
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La síntesis del compuesto XXXVIc se llevó a cabo
usando el compuesto XXIVc (134 mg, 0,36 mmol), y la amina XXXVIb
(120 mg, 0,32 mmol) siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo XXIV a partir de la Etapa 3 para dar el producto XXXXVIc que
se usó para la posterior oxidación sin purificar.
MS (ES) m/z, intensidad relativa 690
[(M+1)^{+}, 100], 591 (27), 537 (18), 513 (27), 478 (63),
438 (18), 414 (60), 268 (27).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La síntesis del compuesto XXXXVI se llevó a cabo
por oxidación usando el alcohol XXXXVIc (219 mg, 0,32 mmol), EDCl
(609 mg, 3,2 mmol) y Cl_{2}CHCOOH (131 ml, 1,59 mmol) siguiendo
el procedimiento descrito en el ejemplo XXIV, etapa 4, y se purificó
por cromatografía (SiO_{2}, acetona/hexanos 3:7) para dar el
producto XXXXVI (117 mg, 53% a lo largo de las 2 etapas) en forma de
un sólido incoloro.
MS (ES) m/z, intensidad relativa 688
[(M+1)^{+}, 32], 589 (81), 476 (100).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
A la disolución de la cetona XXXXVIIa (4,93 g,
12,8 mmol) en THF anhidro (100 ml) a -78ºC se añadió una
disolución de hexametildisililazida de litio (LiHMDS) (17,0 ml, 17,0
mmol). La disolución resultante se agitó a esta temperatura durante
1 h antes de añadir una disolución de acetona (1,51 ml, 20,5 mmol)
y BF_{3}Et_{2}O (2,60 ml, 20,5 mmol) en THF (15 ml). Después
de agitar durante otras 4 h, se añadió H_{3}PO_{4} al 5% (20
ml) seguido de disolución saturada de cloruro amónico (200 ml) y
éter dietílico (200 ml). Se separaron las capas y la capa acuosa se
extrajo con éter dietílico (2 X 200 ml). Las disoluciones orgánicas
combinadas se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron a
vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida
con EtOAc/hexano al 20-50% para dar 1,84 g del
compuesto XXXXVIIb (33%) y 3,26 g del material de partida
XXXXVIIa.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
A la disolución de la cetona XXXXVIIb (0,94 g,
2,13 mmol) en THF anhidro (20 ml) a -78ºC se añadió una disolución
de LiAlH_{4} en THF (2,6 ml, 2,6 mmol) y la mezcla de reacción se
agitó durante 40 min antes de añadir una disolución de KHSO_{4}
(1,0 M, 16 ml). La mezcla se dejó calentar a t.a. y se le añadió
EtOAc (100 ml) y agua (50 ml). Después, se separaron las capas y la
capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 X 50 ml). Las disoluciones
orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se
concentraron a vacío. El producto bruto se purificó por
cromatografía ultrarrápida con EtOAc/hexano al
30-100% para dar 0,49 g del compuesto XXXXVIIc (52%)
y 0,18 g (19%) del compuesto XXXXVIId.
\newpage
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La disolución del compuesto XXXXVIIc (103 mg,
0,232 mmol), trifenilfosfina (120 mg, 0,456 mmol) y
azodicarboxilato de dietilo (0,055 ml, 0,349 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} anhidro (5 ml) se agitó a t.a. durante 18 h.
Después de concentrar a vacío, la mezcla se purificó por
cromatografía en columna ultrarrápida usando EtOAc/hexano al
10-30% para dar 24 mg (24%) del compuesto
XXXXVIIe.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La disolución del compuesto XXXXVIIe en EtOH se
hidrogenó a t.a. en el catalizador de Pd-C al 10% al
compuesto XXXXVII.
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
los productos intermedios XXXXVII siguiendo los procedimientos
señalados para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y
XXXX.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Etapa
1
A 5 g (22 mmol) del éster de metilo de la
N-Boc-deshidroprolina XXXXVIIIa se
añadieron 25 mg de NaF y 2 g de tolueno. A 110ºC, se añadieron
mediante jeringuilla 1,6 equiv (35 mmol, 8,75 g) de
fluorosulfonildifluoroacetato de TMS (TFDA) en 1 h. Después de 2 h,
la reacción enfrió a t.a. A la mezcla se añadió NMO (6,8 g, 50
mmol), acetona (50 ml), H_{2}O (25 ml) y OsO_{4} (0,015 M en
H_{2}O, 1% en moles, 0,44 mmol, 28 ml). La reacción se agitó
durante una noche a t.a., después se diluyó con EtOAc y se lavó con
H_{2}O y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4}, se
filtró y se concentró hasta sequedad. La purificación por
cromatografía en columna (10 EtOAc, hexano, sílice) proporcionó el
producto XXXXVIII (0,76 g).
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
el producto intermedio XXXXVIII siguiendo los procedimientos
señalados para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y
XXXX.
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\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
Una mezcla de 0,55 litros de
terc-butanol, 1,1 litros de agua, 100 ml de
3-careno ILa (Aldrich Chemical Co.) y 490 g de
NalO_{4}, se trató con 2,2 g de cloruro de rutenio hidrato. La
mezcla agitada enérgicamente se calentó y enfrió alternativamente
durante 2 h para mantener una temperatura de
35-40ºC. La mezcla agitada enérgicamente se calentó
y enfrió alternativamente durante 1 h para mantener una temperatura
de 40-50ºC. La mezcla agitada enérgicamente después
se calentó durante otra 1/2 h para mantener una temperatura de
50-55ºC. Después la mezcla se enfrió a 30ºC, se
filtró en un embudo Buchner, y los precipitados se lavaron con 700
ml de éter iso-propílico. La parte acuosa del
filtrado se extrajo con 900 ml de EtOAc-hexano (2:1)
y el extracto se combinó con la parte de éter del filtrado. Los
extractos orgánicos combinados se lavaron con 300 ml de NaCl acuoso
al 20%, después se extrajeron con una disolución de 36 g de NaOH en
2,2 litros de agua. El extracto acuoso enfriado se acidificó con
100 ml de HCl 12 N y se extrajo con Et_{2}O (3 x 800 ml). El
extracto se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4} anhidro y
se evaporó a vacío para dar el compuesto del título ILb 98 g (88%)
en forma de una goma. RMN H^{1} (CDCl_{3}) \delta 2,39 (m, 2),
2,28 (m, 2), 2,19 (s, 3), 1,1,12 (s, 3), 0,90 (m, 2), 0,63 (s,
3).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de 98 g del compuesto ILb, el
producto de la etapa precedente y 0,55 litros de DMF se trató con
98 g de Cs_{2}CO_{3}. La mezcla se agitó durante 10 minutos, se
añadieron 41,5 ml de Mel y la mezcla se agitó a 40ºC durante 1 h.
La mezcla se enfrió y se filtró en un embudo Buchner. El filtrado se
inactivó con 2,5 litros de NaCl acuoso al 18%, se separó la capa
orgánica y la disolución acuosa se extrajo con
Et_{2}O-hexano (1:1; 2 x 1 litro). La capa
orgánica y los extractos combinados se lavaron con agua, se secaron
sobre MgSO_{4} anhidro, se filtraron y evaporaron a vacío para
dar el compuesto del título ILc como 91 g (86%) de aceite espeso.
RMN H^{1} (CDCl_{3}) \delta 3,67 (s, 3), 2,3 (m, 4), 2,17 (s,
3), 1,12 (s, 3), 0,97 (m, 2), 0,91 (s, 3).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución del compuesto ILc, 91 g del
producto de la etapa precedente, y 0,7 litros de
1,1,2-tricloroetano se trató con 165 g de ácido
m-cloroperbenzoico al 70%. La mezcla se agitó a
temperatura ambiente durante 1 h, después se calentó con un baño de
aceite para mantener una temperatura de reacción de
65-70ºC durante 1 h, y después se calentó a 75ºC
durante 1 h más. La mezcla se enfrió, se filtró en un embudo Buchner
y la torta de filtración se lavó con tricloroetano reciente. El
filtrado y los lavados combinados se concentraron a vacío hasta 0,5
litros, y el residuo se diluyó con 2,5 litros de
hexano-Et_{2}O (3:1). La disolución orgánica se
lavó repetidamente con una disolución de K_{2}CO_{3} acuoso al
3,5%-salmuera (3:1; 8 x 0,9 litros), después con salmuera, después
se secó sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó a vacío
para dar el compuesto del título ILd como 98 g (100%) de aceite
espeso. RMN H^{1} (CDCl_{3}) \delta 4,1-3,9
(m, 2), 3,68 (s, 3), 2,34 (d, 2), 2,04 (s, 3), 1,12 (s, 3), 1,04 (m,
2), 1,00 (s, 3).
\newpage
Etapa
4
Una disolución de 98 g del compuesto ILd, del
producto de la etapa precedente, y 1 litro de metanol se trató con
19 g de K_{2}CO_{3}, y la mezcla se agitó a 30ºC durante 1 h. La
mezcla se concentró a vacío para separar 0,6 litros de metanol, el
residuo se inactivó con KH_{2}PO_{4} acuoso al 10% frío, y la
mezcla se extrajo con EtOAc. El extracto se lavó con salmuera, se
secó sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó a vacío para
dar 70 g (89%) del compuesto del título ILe en forma de una goma.
RMN H^{1} (CDCl_{3}) \delta 3,80 (q, 1), 3,73 (s, 3), 3,52 (m,
1), 2,68 (d de d, 1), 2,23 (d de d, 1), 1,09 (s, 3),
1,1-0,9 (m, 2), 0,98 (s, 3).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
Una disolución de 70 g del compuesto ILe, el
producto de la etapa precedente y 1,1 litros de xilenos se trató con
30,8 g de DBU. La disolución se calentó a un reflujo suave durante
18 h, mientras se separaba el metanol del destilado. La disolución
se enfrió, se lavó con HCl 1 N frío y después con salmuera; se secó
sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó a vacío. El residuo
se cromatografió en 600 g de gel de sílice usando un gradiente de
CH_{2}Cl_{2} a EtOAc-CH_{2}Cl_{2} 1:10 para
obtener el compuesto del título ILf como 54 g (94%) de aceite. RMN
H^{1} (CDCl_{3}) \delta 4,71 (d de d, 1), 4,04 (d de d, 1),
2,75 (d de d, 1), 2,16 (d de d, 1), 1,16 (s, 3), 1,25 (m, 1), 1,12
(s, 3).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
6
Una disolución de 42 g del producto de la etapa
precedente ILf y 300 ml de tolueno anhidro se trató con 102 ml de
nitrito de terc-butilo al 90%. La mezcla agitada se calentó y
enfrió alternativamente según fuera necesario, mientras se añadían
45 g de terc-butóxido de potasio en 6 porciones a lo largo de
20 minutos a 30-35ºC. Después se añadieron 180 ml
de metanol anhidro, la temperatura se elevó a 40ºC y se continuó
agitando a 40ºC durante 2,5 h. La mezcla se enfrió, se inactivó con
una disolución fría de 1,1 litros de HCl acuoso al 10% y 20 ml 12
N, después se extrajo con EtOAc-tolueno (3:1). Los
extractos se lavaron con NaHCO_{3} acuoso al 5% y después
salmuera; se secaron sobre MgSO_{4} anhidro, se filtraron y
evaporaron a vacío. El residuo (25 g) se cromatografió en 150 g de
gel de sílice usando un gradiente de CH_{2}Cl_{2} a
EtOAc-CH_{2}Cl_{2} 35:65 para obtener 15 g
(29%) el compuesto del título ILg en forma de un aceite. RMN H^{1}
(CDCl_{3}) \delta 4,82 (d de d, 1), 4,55 (d de d, 1), 2,40 (d,
1), 1,49 (m, 1), 1,27 (s, 3), 1,18 (s, 3).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
7
Una disolución de 18 g del producto de la etapa
precedente ILg y 400 ml de EtOAc se trató con 32 g de dicarbonato de
di-terc-butilo (Boc_{2}O) y 2,0 g de Pd sobre carbón al
10%. La mezcla se hidrogenó a 2,5 atm durante 18 h, se filtró y el
filtrado se evaporó para dar 36 g del compuesto del título mezclado
con Boc_{2}O, que se llevó directamente a la siguiente etapa. Se
cromatografió una porción para obtener el compuesto ILh como el
compuesto del título puro: RMN H^{1}
(DMSO-d_{6}) \delta 7,28 (d, NH),
4,76-4,64 (m, 2), 4,44 (d, 1), 1,40 (s, 9), 1,24 (m,
1), 1,11 (m, 2), 1,07 (s, 3),
0,99 (s, 3).
0,99 (s, 3).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
8
Una disolución de 35 g del compuesto ILh, la
mezcla de productos de la etapa precedente, y 350 ml de metanol
anhidro se trató con 12 g de K_{2}CO_{3} anhidro finamente
triturado. La mezcla se agitó enérgicamente durante 2 h, se
concentró a vacío con un baño a 25ºC y después se inactivó con 0,6
litros de KH_{2}PO_{4} acuoso al 10%. La disolución se extrajo
con EtOAc-hexano (95:5; 2 x 200 ml), los extractos
se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} anhidro, se
filtraron y el filtrado se evaporó a vacío para dar 22 g
(70%) de el compuesto del título ILi, en forma de una mezcla gomosa
de los dos epímeros en una relación
\alpha-S/\alpha-R de 8:2, que no había que separar
para el propósito presente. Se cromatografió una porción con
Et_{2}O-hexano (60:40) para obtener el epímero
\alpha-S del compuesto del título puro: RMN H^{1}
(CDCl_{3}) \delta 5,2 (s ancho, 1), 4,05 (s ancho, 1), 3,81 (m,
1), 3,76 (s, 3), 3,65 (m, 1), 1,43 (s, 9), 1,14 (s, 3), 1,06 (s,
3), 1,05 (m, 1), 0,86 (m, 1). Rotación óptica:
[\alpha]_{D}^{25} - 62,9º (c=1, MeOH). Análisis
elemental: teórico C 58,52, H 8,77, N 4,87; encontrado C 58,48, H
8,75, N 5,10.
La elución posterior proporcionó el epímero
\alpha-R del compuesto del título: RMN H^{1} (CDCl_{3})
\delta 4,95 (d ancho, 1), 4,03 (m, 1), 3,82 (m, 1), 3,78 (s, 3),
3,71 (m, 1), 1,44 (s, 9), 1,13 (m, 1), 1,10 (s, 3), 1,08 (s, 3),
0,86 (m, 1). Rotación óptica: [\alpha]_{D}^{25} - 32,8º
(c=1, MeOH). Análisis elemental: teórico C 58,52, H 8,77, N 4,87;
encontrado C 58,46, H 8,69, N 4,74.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
9
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de 21,6 g trifenilfosfina y 250
ml de THF anhidro se enfrió a -10ºC y se trató gota a gota con 16,2
g de azodicarboxilato de diisopropilo mientras la temperatura de la
reacción subía hasta +5ºC. Después de 5 minutos de agitación
adicional, la mezcla se trató con una disolución de 19,7 g de la
mezcla de producto ILi de la etapa precedente en 35 ml de THF.
Después de 10 minutos de agitación adicional, la mezcla se calentó
a reflujo durante 3 h, se enfrió y se evaporó a vacío. El residuo se
transfirió a un embudo de separación con un total de 450 ml de
metanol-agua (1:1), y la mezcla de 2 fases se
extrajo con hexano (7 x 225 ml). Los extractos combinados se
lavaron con 20 ml de metanol-agua (1:1) y después
salmuera; se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtraron y
el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se recogió en 400 ml de
hexano, se filtró con succión a través de una almohadilla de 30 g
de gel de sílice, y la almohadilla de sílice se eluyó con 210 ml
adicionales de EtOAc-hexano (1:9). Los filtrados
combinados se evaporaron a vacío para dar 12,8 g (69%) del
compuesto del título ILj en forma de una mezcla gomosa de 2
epímeros, contaminada con una pequeña cantidad de
hidrazinadicarboxilato de diisopropilo, pero adecuado para las
reacciones posteriores.
El epímero S puro de la etapa precedente se
trató de la misma forma para proporcionar el epímero S puro del
compuesto del título. RMN H^{1} (CDCl_{3}) \delta 4,21 y 4,09
(s+s, 1), 3,75 (s, 3), 3,65 (m, 1), 3,41 (m, 1), 1,44 y 1,39 (s+s,
9), 1,38 (m, 2), 1,03 (s, 3), 0,98 y 0,97 (s+s, 3). Análisis
elemental: teórico C 62,43, H 8,61, N 5,20; encontrado C 61,82, H
8,67, N 5,15.
El epímero R de la etapa precedente se trató de
la misma forma para proporcionar el epímero R del compuesto del
título: RMN H^{1} (CDCl_{3}) \delta 4,49 y 4,30 (d+d, 1), 3,62
(s, 3), 3,59 (m, 1), 3,42 (m, 1), 1,65 (m, 1), 1,45 y 1,39 (s+s, 9),
1,36 (m, 1), 1,10 (s, 3), 0,99 (s, 3).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
10
Una disolución de 14,5 g de la mezcla de
productos ILj de la etapa precedente y 270 ml de
1,4-dioxano se trató con 135 ml de LiOH acuoso 1 M
y la mezcla se calentó a 80ºC durante 4 h. La mezcla se enfrió, se
concentró a vacío hasta la mitad de volumen, se diluyó con 200 ml
de agua, y se extrajo con hexano. La capa acuosa se enfrió y se
trató con una disolución de 9 ml de HCl 12 N en 50 ml de
KH_{2}PO_{4} acuoso al 10%, y después se extrajo con EtOAc. El
extracto se lavó con salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4}
anhidro, se filtró y el filtrado se evaporó a vacío para dar el
compuesto del título IL como 10,8 g (78%) de goma, >90% química
y diastereoisómericamente puro por PMR, y adecuado para la síntesis
posterior: RMN H^{1} (CDCl_{3}) \delta 4,20 y 4,11 (s+s, 1),
3,62 (m, 1), 3,44 (m, 1), 1,68 y 1,45 (d+desconocido, 1), 1,46 y
1,40 (s+s, 9), 1,45 (m oculto en 1,46, 1), 1,07 (s+s, \Box\Box=
2 Hz, 3), 0,99 y 0,95 (s+s, 3).
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
los productos intermedios IL siguiendo los procedimientos señalados
para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y XXXX.
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Etapa
1
A una mezcla del compuesto La (10,0 g, 50,0
mmol), acetato de
2-[(trimetilsilil)metil]-2-propanen-1-ilo
(22,0 g, 118 mmol) y triisopropilfosfito (18,6 g, 89,2 mmol) en
tolueno (50 ml) se añadió acetato de paladio(II) (2,5 g, 11
mmol) con agitación a temperatura ambiente en atmósfera de Ar. Se
calentó a 120ºC (baño de aceite) durante 13 h. El enfriamiento a
temperatura ambiente seguido de cromatografía ultrarrápida
(CH_{2}Cl_{2}: hexano = 4:1) proporcionó 9,55 g de compuesto Lb
(75%). [\alpha]^{25} = +132º (CHCl_{3}). HRMS (FAB)
Calculado para C_{16}H_{18}NO_{2} (MH+): 256,1338; Encontrado:
256,1340.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
A una disolución del compuesto Lb (2 g, 7,8
mmol) en THF anhidro (50 ml) se añadió LAH (1,13 g, 28,9 mmol) en
pequeñas porciones a 0ºC. La mezcla después se mantuvo a reflujo
durante 6 h antes de enfriar a 0ºC. Se añadieron a la reacción con
cuidado 2 ml de H_{2}O, 2 ml de NaOH al 15% y 6 ml de H_{2}O. El
sólido se separó por filtración y el filtrado concentrado se
cromatografió (MeOH en CH_{2}Cl_{2} al 2%) para dar 1,33 g del
compuesto Lc (70%). HRMS (FAB) Calculado para C_{16}H_{22}NO
(MH+): 244,1701; Encontrado: 244,1697.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Una mezcla del compuesto Lc (1,33 g, 5,46 mmol)
y Pd sobre carbón al 10% (1,3 g) en ácido acético (20 ml) se
hidrogenó a 4,3 kg/cm^{2} durante 3 días. El catalizador se separó
por filtración y el filtrado se concentró a vacío. El residuo se
disolvió en 20 ml de HCl 4 N en dioxano y la disolución se evaporó
hasta sequedad. Se obtuvieron 1,04 g (100%) del compuesto L como una
mezcla 1:1 de los dos epímeros HRMS (FAB) Calculado para
C_{16}H_{22}NO (MH+): 156,1388; Encontrado: 156,1390.
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
los productos intermedios L siguiendo los procedimientos señalados
para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y XXXX.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
El compuesto Lb (2,6 g, 10,2 mmol) en una
mezcla de CH_{2}Cl_{2} (30 ml) y ^{i}PrOH (10 ml) se ozonizó
a -78ºC hasta que persistió un color azulado (aproximadamente 40
minutos). Se añadió sulfuro de dimetilo (10 ml) y la disolución se
agitó a temperatura ambiente a lo largo de una noche. El disolvente
se separó a vacío y el residuo se repartió entre agua y EtOAc. La
fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4} y
se concentró. La cromatografía ultrarrápida (MeOH en
CH_{2}Cl_{2} al 2%) proporcionó 2,32 g del compuesto Lla (77%).
MS (MH+, FAB) = 257.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
A una disolución del compuesto Lla (0,86 g, 3,35
mmol) en CH_{2}Cl_{2} seco (30 ml) se añadió trifluoruro de
dimetilaminoazufre (metil-DAST, 2,23 g, 16,8 mmol)
a temperatura ambiente. La disolución se agitó a temperatura
ambiente durante 2 días. Se añadió con cuidado a una mezcla de hielo
y disolución saturada de NaHCO_{3} y se extrajo con EtOAc. La
disolución de EtOAc se lavó con salmuera, se secó sobre
Na_{2}SO_{4} y se concentró. El residuo se cromatografió (MeOH
en CH_{2}Cl_{2} al 0,8%) para dar el compuesto Llb (0,82 g,
88%). HRMS (FAB) Calculado para C_{15}H_{18}NO_{2}F_{2}
(MH+): 280,1149; Encontrado: 280,1152.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Siguiendo los mismos procedimientos descritos
para la preparación del compuesto L, desde Lb a L, 0,44 g de LIb
proporcionaron 0,31 g de Ll (92% en 2 etapas). HRMS (FAB) Calculado
para C_{8}H_{14}NOF_{2} (MH+): 178,1043; Encontrado:
178,1042.
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
los productos intermedios LI siguiendo los procedimientos señalados
para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y XXXX.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
El compuesto Lb (3,74 g, 14,7 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (30 ml) se ozonizó a -78ºC hasta que persistió un
color azulado (aproximadamente 60 minutos). Se purgó con N_{2}
durante 5 min, y se añadió a una disolución fría de NaBH_{4} (4,44
g, 117 mmol) en 50 ml de EtOH/H_{2}O (1:1). Se agitó durante 12 h
a t.a. y después se extrajo 2 veces con EtOAc. Las capas orgánicas
combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre
Na_{2}SO_{4} y se concentraron. El residuo se cromatografió
(MeOH en CH_{2}Cl_{2} al 2%) para dar el compuesto LIIa (2,19 g,
58%). HRMS (FAB) Calculado para C_{15}H_{18}NO_{3} (MH+):
260,1287; Encontrado: 260,1283.
\newpage
Etapa
2
A una disolución del compuesto LIIa (2,18 g,
8,40 mmol) en piridina seca (50 ml) se añadieron cloruro de
toluenosulfonilo (3,2 g, 16,8 mmol) y
N,N-dimetilaminopiridina (1,03 g, 8,40 mmol). Se
agitó a t.a. durante 3 días y se concentró a vacío. El residuo se
repartió entre ácido cítrico al 3% y EtOAc. La capa orgánica se lavó
con ácido cítrico al 3% otra vez, seguido de salmuera. Después de
separar el disolvente, el residuo se cromatografió para proporcionar
el compuesto LIIb (2,54 g, 73%). HRMS (FAB) Calculado para
C_{22}H_{24}SNO_{5} (MH+): 414,1375; Encontrado: 414,1378.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Siguiendo los mismos procedimientos descritos
para la preparación del compuesto L, desde Lb a L, 2,53 g de LIIb
proporcionaron 1,03 g de LII (95% en 2 etapas). HRMS (FAB) Calculado
para C_{8}H_{16}NO (MH+): 142,1232; Encontrado: 142,1233.
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
los productos intermedios LII siguiendo los procedimientos señalados
para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y XXXX.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
A 7,84 mmol de dietil-cinc (1 N
en hexano) en CH_{2}Cl_{2} seco (30 ml) se añadió gota a gota
ácido trifluoroacético (0,893 g, 7,84 mmol) a 0ºC. Tras agitar
durante 20 min adicionales, se añadió diyodometano (2,10 g, 7,84
mmol) seguido del compuesto Lb (1 g, 3,92 mmol) en 5 ml de
CH_{2}Cl_{2} en 20 min. Se quitó el baño de hielo y la mezcla se
agitó a t.a. durante 14 h. La reacción se inactivó con disolución
saturada de NH_{4}Cl y se extrajo con EtOAc. La disolución de
EtOAc se lavó con disolución saturada de Na_{2}SO_{4}, seguido
de salmuera y se concentró a vacío. El residuo se cromatografió para
proporcionar el compuesto LIIIa (4,61 g, 73%). HRMS (FAB) Calculado
para C_{17}H_{20}NO_{2} (MH+): 270,1494; Encontrado:
270,1497.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Se añadió ácido trifluoroacético (TFA, 10 ml) a
una disolución del compuesto LIIIa (4,6 g, 17,1 mmol) en THF (20
ml) y H_{2}O (20 ml) a t.a. Después de agitar durante una noche,
se separaron los disolventes a vacío. El residuo se repartió entre
disolución saturada de NaHCO_{3} y EtOAc. La fase acuosa se volvió
a extraer con EtOAc 5 veces. Las fases orgánicas combinadas se
secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron. El residuo se
cromatografió para proporcionar el compuesto LIIIb (3,1 g, 100%).
HRMS (FAB) Calculado para C_{10}H_{16}NO_{2} (MH+): 182,1181;
Encontrado: 180,1182.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
Se añadió LAH (1,76 g, 46,3 mmol) al compuesto
LIIIb en THF seco (50 ml) en porciones pequeñas a 0ºC. La mezcla
después se mantuvo a reflujo durante 6 h antes de enfriar a 0ºC. Se
añadieron a la reacción con cuidado 2 ml de H_{2}O, 2 ml de NaOH
al 15% y 6 ml de H_{2}O. El sólido se separó por filtración y el
filtrado concentrado se cromatografió (MeOH en CH_{2}Cl_{2} al
30% con NH_{4}OH al 1%) para dar 0,39 g del compuesto LIIIc (71%).
HRMS (FAB) Calculado para C_{10}H_{18}NO (MH+): 168,1388;
Encontrado: 168,1389.
\newpage
Etapa
4
A una mezcla del compuesto LIIIc (0,5 g, 2,99
mmol), LIIId (0,69 g, 2,99 mmol) y HATU (1,14 g, 3 mmol) en DMF
seca (20 ml) se añadió N, N-diisopropiletilamina (1
ml, 5,89 mmol) a 0ºC. Se agitó a t.a. durante 3 h. La mezcla de
reacción se repartió entre H_{2}O y EtOAc. La capa orgánica se
lavó sucesivamente con ácido cítrico al 3%, disolución saturada de
NaHSO_{4} y salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se
concentró. El producto LIIIe (0,978 g, 86%) así obtenido era
suficientemente puro para la siguiente etapa. HRMS (FAB) Calculado
para C_{21}H_{37}N_{2}O_{4} (MH+): 381,2910; Encontrado:
381,2749.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
A una disolución del compuesto LIIIe (0,49 g,
1,29 mmol) en acetona (20 ml) se añadió reactivo de Jones (2 ml de
disolución 2,5 M, 5 mmol) a 0ºC. Se agitó a 0ºC durante 20 min,
después a t.a. durante 30 h. A esta mezcla se añadieron
sucesivamente EtOAc (50 ml), Na_{2}SO_{4} anhidro (3 g),
celita (2 g) e ^{i}PrOH (1 ml). Se agitó enérgicamente durante 20
min. El sólido se separó por filtración. El filtrado se lavó con
ácido cítrico al 3%, se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró a
vacío. El residuo se cromatografió (MeOH en CH_{2}Cl_{2} al 3%,
ácido acético al 0,5%) para proporcionar LIII (0,48 g, 94%). HRMS
(FAB) Calculado para C_{21}H_{35}N_{2}O_{5} (MH+): 395,2546;
Encontrado: 395,2543.
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
los productos intermedios LIII siguiendo los procedimientos
señalados para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y
XXXX.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
El compuesto LIIIe (0,41 g, 1,08 mmol) en una
mezcla de disolventes de AcOH (10 ml) y EtOAc (20 ml) que contenía
PtO_{2} (1 g) se hidrogenó a 1 atm de H_{2} durante 3 h. El
catalizador se separó por filtración y el filtrado se concentró a
vacío para proporcionar el compuesto LIV (0,41 g, 100%). HRMS (FAB)
Calculado para C_{21}H_{39}N_{2}O_{5} (MH+): 383,2910;
Encontrado: 383,2906.
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
los productos intermedios LIV siguiendo los procedimientos señalados
para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y XXXX.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
Se añadió
bis(trimetilsilil)amiduro potásico (158 ml de un
disolución 0,5 M en tolueno; 79 mmol) a una suspensión agitada de
bromuro de ciclopropiltrifenilfosfonio (33,12 g; 86,4 mmol) en
tetrahidrofurano anhidro (130 ml) y la mezcla naranja resultante se
agitó en atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante un
periodo de 1 h, antes de añadir el aldehído LVa (9,68 g; 42,2 mmol)
en THF (8 ml). La reacción después se mantuvo a reflujo en atmósfera
de nitrógeno durante un periodo de 2 h. Después de enfriar, se
añadieron metanol, éter dietílico y sal de Rochelle. La fase
orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó y se concentró a
presión reducida. El producto de reacción bruto se purificó por
cromatografía en columna de gel de sílice usando
EtOAc-hexano (1:99) a EtOAc-hexano
(5:95) para proporcionar el alqueno LVb (8,47 g) en forma de un
aceite amarillo.
\newpage
Etapa
2
Una disolución de HCl 1 M en MeOH/MeOAc se
preparó añadiendo gota a gota 14,2 ml de cloruro de acetilo en
metanol frío y diluyendo la disolución resultante hasta 200 ml a
temperatura ambiente.
El carbamato LVb (9,49 g; 37,5 mmol) se disolvió
en metanol (12 ml) y se añadió a HCl 1 M en MeOH/MeOAc (150 ml)
mientras se enfriaba en un baño de hielo. La mezcla resultante se
mantuvo a esta temperatura durante 1 h, después se quitó el baño de
hielo y se continuó agitando durante una noche a temperatura
ambiente. Los productos volátiles se separaron a presión reducida
para dar un aceite amarillo que se usó en la siguiente etapa sin
purificación.
El aceite amarillo se disolvió en una mezcla de
THF (30 ml) y MeOH (20 ml) y se trató con trietilamina (15 ml; 108
mmol) hasta que la disolución tenía un pH=9-10.
Después de ponerla en un baño de hielo, la mezcla se trató con
N-Boc-Gly-OSu (11,22
g; 41 mmol). Se quitó el baño de hielo y la reacción se agitó a
temperatura ambiente durante 1 h. Los productos volátiles se
separaron a presión reducida y el residuo se purificó por
cromatografía en columna de gel de sílice usando metanol
(1-3%) en diclorometano proporcionando la amida
deseada LVc (9,09 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
El alcohol LVc (9,09 g; 33,6 mmol) se disolvió
en acetona (118,5 ml) y se trató con
2,2-dimetoxipropano (37,4 ml; 304 mmol) y
BF_{3}:Et_{2}O (0,32 ml; 2,6 mmol) y la mezcla resultante se
agitó a temperatura ambiente durante un periodo de 5,5 h. La
disolución de la reacción se trató con unas gotas de trietilamina y
los productos volátiles se separaron a presión reducida. El residuo
se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando
EtOAc en hexanos al 5-25% para proporcionar el
N,O-acetal LVd (8,85 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
El carbamato LVd (8,81 g; 28,4 mmol) se disolvió
en acetonitrilo (45 ml) y la disolución se enfrió a -40ºC en
atmósfera de nitrógeno. Se añadieron piridina (6,9 ml; 85,3 mmol)
seguido de tetrafluoroborato de nitrosio (6,63 g; 56,8 mmol) y la
mezcla de reacción resultante se mantuvo por debajo de 0ºC hasta que
la TLC que no quedaba material de partida (aprox. 2,25 h). Se añadió
pirrolidina (20 ml; 240 mmol), se quitó el baño de enfriamiento y la
agitación se continuó a temperatura ambiente durante 1 h y después
se separaron los productos volátiles a presión reducida. El residuo
se pasó rápidamente por una almohadilla de gel de sílice para
proporcionar un aceite amarillo.
El aceite amarillo se disolvió en benceno
anhidro (220 ml) y se añadió acetato de paladio (0,317 g; 1,41
mmol) antes de calentar la mezcla resultante a reflujo, en atmósfera
de nitrógeno durante un periodo de 1,5 h. Después de enfriar, los
productos volátiles se separaron a presión reducida y el residuo
oscuro se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice
usando EtOAc-hexano (1:4) para proporcionar i) la
trans-pirrolidinona LVe (1,94 g) seguido de ii) la
cis-pirolidinona LVf (1,97 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
Se añadió HCl 1 M en MeOAc/MeOH (10 ml) recién
preparado (como se ha descrito antes) al N,O-acetal
LVe y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El disolvente se
separó a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía
en columna de gel de sílice usando MeOH en diclorometano al
0-4% como eluyente para proporcionar el alcohol LVg
deseado (1,42 g), un aceite amarillo.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
6
A una disolución de la lactama LVg (1,29 g; 8,44
mmol) en tetrahidrofurano anhidro (55 ml) se añadió hidruro de litio
y aluminio (2,40 g; 63,2 mmol) y la mezcla resultante se mantuvo a
reflujo durante 8 h. Después de enfriar, se añadieron agua, seguido
de NaOH ac. al 15% y la mezcla resultante se filtró a través de
celita, y el sólido se lavó bien con THF y MeOH. El disolvente se
separó a presión reducida y el residuo se volvió a disolver en
diclorometano, se secó y se concentró a presión reducida para
proporcionar la pirrolidina, usada sin purificación.
Se añadió base de Hunigs (4,5 ml; 25,8 mmol) a
una mezcla de
N-Boc-L-terc-Leu-OH
(1,76 g; 7,6 mmol), la pirrolidina bruta y HATU (2,89 g; 7,6 mmol)
en diclorometano anhidro (50 ml) a -60ºC, en atmósfera de nitrógeno.
La reacción resultante se dejó llegar a temperatura ambiente
lentamente, durante una noche. Se añadió EtOAc y la disolución
amarilla se lavó con disolución acuosa diluida de HCl, disolución
acuosa saturada de bicarbonato sódico, agua y salmuera. La capa
orgánica se secó y se concentró a presión reducida. El residuo se
purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando
EtOAc:hexanos (1:3) para dar la amina LVh deseada (2,00 g).
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Etapa
7
\vskip1.000000\baselineskip
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El alcohol LVh (2,00 g; 5,67 mmol) se disolvió
en acetona (116 ml) y se enfrió en un baño de hielo durante 10 min.
Esta disolución después se añadió al reactivo de Jones enfriado
(14,2 ml; aprox. 2 mmol/ ml) y la mezcla resultante se agitó a 5ºC
durante 0,5 h y se quitó el baño de enfriamiento. La reacción se
agitó durante 2 h adicionales a temperatura ambiente, antes de
añadir sulfato sódico (28,54 g), celita (15 g) en EtOAc (100 ml). Se
añadió isopropanol (15 ml) después de 1 min y después se agitó
durante 10 min adicionales y se filtró. El filtrado se concentró a
presión reducida, proporcionando un aceite marrón que se disolvió en
EtOAc. Esta disolución se lavó con agua, ácido cítrico ac. al 3%,
salmuera, se secó y se concentró para proporcionar el ácido
carboxílico LV deseado (1,64 g) en forma de un sólido blanco.
NOTA: Alternativamente, el ácido XXIVc, el ácido
XXVIg y el compuesto XXVIIc, se podían sintetizar siguiendo el
procedimiento mencionado antes con buenos rendimientos. Se
sintetizaron una serie de inhibidores usando los productos
intermedios LV siguiendo los procedimientos señalados para los
ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y XXXX.
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La síntesis del compuesto LVIa se llevó a cabo
siguiendo el procedimiento descrito por Bailey, J, H.; Cherry, D.T.;
Crapnell, K.M.; Moloney, M.G.; Shim, S.B.; Bamford, M.J.; Lamont,
R.B., Tetrahedron (1997), 53, 11731. Este se convirtió en LVI
de forma similar al procedimiento para LIII (de la etapa 2 a la
etapa 5).
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
los productos intermedios LVI siguiendo los procedimientos señalados
para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y XXXX.
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Etapa
1
A la disolución agitada de TFA (22,6 ml, 305
mmol), agua (120 ml) y
[bis(trifluoroacetoxi)yodo]benceno (131 g, 305
mmol) en acetonitrilo (600 ml) se añadió la ciclobutilmetilcetona
LVIIa (15,0 g, 153 mmol). La disolución resultante se calentó a
reflujo y se agitó durante 4 h. El acetonitrilo se separó a vacío.
Se añadió agua (120 ml) y la mezcla se extrajo con éter dietílico
(2 X 500 ml). Las disoluciones orgánicas combinadas se secaron
(MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. El producto
bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida con
Et_{2}O/hexano al 30% para dar 8,82 g del compuesto LVIIb
(51%).
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Etapa
2
A la disolución del compuesto LVIIb (1,4 g, 12,3
mmol), anhídrido acético (1,3 ml, 13,5 mmol) y trietilamina (3,4 ml,
24,5 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (50 ml) se añadió DMAP (0,67 g, 5,5
mmol). La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante 4 h antes de
añadir H_{3}PO_{4} al 5% (50 ml). Después de separar las capas,
la capa acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 X 50 ml). Las
disoluciones orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}), se
filtraron y se concentraron a vacío hasta 2,0 g de producto LVIIc
bruto.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
La mezcla del compuesto LVIIc (1,9 g, 12,2
mmol) y DAST (trifluoruro de dietilaminoazufre, 3,0 ml, 22,3 mmol)
se calentó a 50ºC y se agitó durante 2 h. Después la mezcla se
vertió lentamente en hielo-agua (50 ml), y se
extrajo con éter dietílico (3 X 50 ml). Las disoluciones orgánicas
combinadas se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron a
vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida
con Et_{2}O/hexano al 10-40% para dar 0,62 g del
compuesto LVIId (29%) y 0,68 g del material de partida LVIIc.
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Etapa
4
La mezcla del compuesto LVIId (3,10 g, 17,4
mmol) e hidróxido de litio (0,84 g, 34,8 mmol) en agua (10 ml) se
agitó enérgicamente a t.a. durante 6 h antes de diluirla con agua
(50 ml) y se extrajo con éter dietílico (3 X 60 ml). Las
disoluciones orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}), se
filtraron y se concentraron con cuidado a vacío para dar el
compuesto LVIIe, 2,68 g de producto bruto.
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Etapa
5
La disolución del compuesto LVIIe y reactivo de
Dess-Martin en CH_{2}Cl_{2} se agitó a t.a.
durante 1 h antes de añadir Ph_{3}P=CHCO_{2}Bn y la agitación se
continuó durante otras 20 h. Se añadió éter dietílico seguido de
disolución saturada de NaS_{2}O_{3} y disolución saturada de
NaHCO_{3}. Después de agitar durante 15 min, se separaron las
capas. La disolución orgánica se lavó con disolución saturada de
NaHCO_{3} y salmuera, se secó (MgSO_{4}), se filtró y se
concentró a vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía
ultrarrápida para dar el producto LVIIf deseado.
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Etapa
6
El compuesto LVIIg se preparó como se ha
descrito antes (etapa 4, ejemplo XXXXIII) con las cantidades
adecuadas de reactivos.
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Etapa
7
La hidrogenación catalítica del compuesto LVIIg
con Pd/C al 10% en MeOH seguido de tratamiento con Boc_{2}O en
NaHCO_{3}/THF/agua proporcionó el compuesto LVIIh.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
8
\vskip1.000000\baselineskip
La conversión del compuesto LVIIh en el
compuesto LVIIi sigue los procedimientos descritos previamente
(etapa 5, ejemplo XXVIII).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
9
\vskip1.000000\baselineskip
La conversión del compuesto LVIII en el
compuesto LVII sigue los procedimientos descritos previamente (etapa
9, ejemplo XXIII).
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
los productos intermedios LVII siguiendo los procedimientos
señalados para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y
XXXX.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
A una disolución del compuesto LVIIIa [para la
preparación del compuesto LVIIIa véase J. Ramnauth y E.
Lee-Ruff, Can. J. Chem., 2001, 79,
114-120] (3 g) en diclorometano (75 ml) se añadió
DAST (trifluoruro de dietilaminoazufre, 9,1 ml) lentamente y la
reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La
mezcla se vertió lentamente en hielo/disolución saturada de
bicarbonato sódico (100/200 ml) con agitación. Se añadieron 200 ml
de diclorometano y la capa orgánica se separó y se lavó con
disolución saturada de bicarbonato sódico fría, salmuera, se secó
(Na_{2}SO_{4}) y se concentró. La purificación en cromatografía
(EtOAc/hexanos 5/95) proporcionó 2,59 g del compuesto LVIIIb.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
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\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto LVIIIb (3,42 g) se disolvió en
THF/MeOH (1/1, 50 ml). A este se añadió una disolución de carbonato
de potasio (1,97 g) en agua (25 ml). La mezcla de reacción se
agitó a temperatura ambiente durante 4 h y después se almacenó en el
refrigerador (-10ºC) durante una noche. La mezcla de reacción se
calentó a temperatura ambiente a lo largo de 3 h, cuando la TLC
indicó el consumo completo del compuesto LVIIIb. Se añadió salmuera
(100 ml) a la mezcla de reacción y se extrajo con éter dietílico (3
100 ml). Las capas de éter se combinaron, se secaron
(Na_{2}SO_{4}) y se concentraron para proporcionar un residuo
(2,77 g) que se procesó sin más purificación.
El residuo así obtenido se disolvió en
CH_{2}Cl_{2}/DMSO (6/1, 140 ml). A esta disolución se añadió
(trifenilfosforaniliden)acetato de bencilo (11,7 g) y después
peryodinano de Dess-Martin (12,09 g, en 3 porciones
iguales) con cuidado. La mezcla de reacción se agitó a temperatura
ambiente durante 4 h y se inactivó con disolución de bicarbonato
sódico fría (200 ml) y se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (100 ml). La
capa de CH_{2}Cl_{2} se separó y se lavó con disolución de
Na_{2}S_{2}O_{3} al 10% (125 ml), disolución de NaHCO_{3}
(125 ml), agua (125 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se
concentró. El residuo se purificó por cromatografía en columna
usando CH_{2}Cl_{2}/hexanos 50/50 para proporcionar el compuesto
requerido,
LVIIIc (2,25 g).
LVIIIc (2,25 g).
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Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto LVIIId se preparó como se ha
descrito antes (etapa 4, ejemplo XXXXIII) con las cantidades de
reactivos adecuadas.
\newpage
Etapa
4
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\vskip1.000000\baselineskip
La hidrogenación catalítica del compuesto LVIIId
con Pd/C al 10% en MeOH seguido de tratamiento con Boc_{2}O en
NaHCO_{3}/THF/agua proporcionó el compuesto LVIIIe.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La conversión del compuesto LVIIIe en el
compuesto LVIIIf sigue los procedimientos descritos previamente
(etapa 5, ejemplo XXVIII).
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Etapa
6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La conversión del compuesto LVIIIF en el
compuesto LVIII sigue los procedimientos descritos previamente
(etapa 9, ejemplo XXIII).
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
los productos intermedios LVIII siguiendo los procedimientos
señalados para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y
XXXX.
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La glicina protegida con N-Boc
LIXa disponible en el comercio se hizo reaccionar con la amina XV
del ejemplo XV de la forma descrita previamente en el ejemplo XXI,
etapa 4. El producto intermedio resultante después se trató con HCl
de la misma forma descrita previamente en el ejemplo XXIII, etapa 9,
para proporcionar el producto LIXb.
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Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El ácido LVIIIe (de antes) se puede hacer
reaccionar con el compuesto LIXb de la forma descrita previamente en
el ejemplo XXI, etapa 4. El producto intermedio resultante después
se puede tratar con HCl de la misma forma descrita previamente en el
ejemplo XXIII, etapa 9, para proporcionar el producto LIX.
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
los productos intermedios LIX siguiendo los procedimientos señalados
para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y XXXX.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
El ácido LVIIIh (de antes) se hizo reaccionar
con el compuesto LIXb de la forma descrita previamente en el ejemplo
XXI, etapa 4. El producto intermedio resultante después se trató con
HCl de la misma forma descrita previamente en el ejemplo XXIII,
etapa 9, para proporcionar el producto LX.
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
los productos intermedios LIX siguiendo los procedimientos señalados
para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y XXXX.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución del nitroacetato de metilo LXIa
(3 g) en benceno (15 ml) se añadió dimetoxipropano (6,2 ml) y
anhídrido acético (4,87 ml). La mezcla se mantuvo a reflujo durante
una noche. La mezcla de reacción se concentró. Se volvió a someter a
las condiciones anteriores. El residuo después de concentrar se
recogió en EtOAc (100 ml) y se lavó con disolución saturada de
bicarbonato sódico fría (3 x 75 ml), salmuera (100 ml), se secó
(Na_{2}SO_{4}) y se concentró.
El residuo de antes se recogió en MeOH (150 ml).
Se añadieron Boc_{2}O (6 g) y Pd/C al 10% (150 mg) y la mezcla se
hidrogenó usando un balón cargado de hidrógeno. Después de 24 horas,
se añadió más Pd/C al 10% y se repitió el procedimiento. Después, la
mezcla de reacción se filtró a través de celita, se concentró y se
purificó por cromatografía en columna usando EtOAc/hexanos de 5/95 a
10/90 para proporcionar 2,2 g del compuesto LXIb.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto LXIb se preparó a partir del
compuesto LXI con rendimiento cuantitativo usando procedimientos
descritos antes para la conversión del compuesto XXVIg en el XXVIh
(véase el ejemplo XXVI).
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
los productos intermedios LVIII siguiendo los procedimientos
señalados para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y
XXXX.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Etapa
1
El butenol LXIIa se hizo reaccionar de la forma
descrita previamente en el ejemplo preparativo XXXXIII, etapa 1,
para proporcionar el producto LXIIb.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
A 5,3 g (30 mmol) del producto LXIIb de la
etapa 1, se añadieron 25 mg de NaF. A 110ºC, se añadieron mediante
jeringuilla-bomba 1,6 equiv (48 mmol, 12 g) de
fluorosulfonildifluoroacetato de TMS (TFDA) en 2 h. Después de 2 h,
la reacción enfrió a t.a. La purificación por cromatografía en
columna ultrarrápida (EtOAc, hexano, al 3%, sílice) proporcionó
LXIIc, el producto de la etapa 2, (4,93 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
El producto de la etapa 2, LXc (1 g), se trató
de la forma descrita previamente en la etapa 3 del ejemplo
preparativo XXXXIII para proporcionar LXIId, el producto de la etapa
3 (0,89 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
El producto de la etapa 3, LXIId (3,2 g), se
trató de la forma descrita previamente en la etapa 4 del ejemplo
preparativo XXXXIII para proporcionar el producto LXIIe (1,4 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa 4, LXIIe (0,54 g), se
trató de la forma descrita previamente en la etapa 5, después la
etapa 6 y finalmente la etapa 7 del ejemplo preparativo XXXXIII,
para proporcionar el producto LXIIf (0,24 g).
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
el producto intermedio LXII siguiendo los procedimientos señalados
para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y XXXX.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de ciclobutanona a -78ºC (15 g,
214 mmol) en THF (100 ml) se añadió gota a gota cloruro de
alilmagnesio (2,0 M en THF, 1,1 equiv, 118 ml). Después de 1 h, la
reacción se paró por adición de hielo HCl 1,0 N (100 ml). La mezcla
se diluyó con acetato de etilo (\sim200 ml) y la fase orgánica se
separó; se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La
concentración a vacío y purificación por cromatografía sobre gel de
sílice (acetato de etilo en n-hexano al 10%)
proporcionó el compuesto LXIIIb (21 g).
\newpage
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
En un disolución del producto de la etapa 1,
LXIIIb (11,2 g), a -78ºC en CH_{2}Cl_{2} (200 ml) se burbujeó
ozono hasta que se observó un color azul persistente (después de 1
h). Se paró el ozono y se hizo un barrido con N_{2} en la mezcla
de reacción durante 10 minutos. Se añadió Me_{2}S (10 equiv., 7,3
ml) y la reacción se calentó gradualmente a temperatura ambiente
durante una noche.
Después de 18 h, se añadió
Ph_{3}P=CHCOO^{t}Bu (40 g). La agitación se continuó durante
-24 h. La evaporación a vacío proporcionó el producto bruto que se
cromatografió sobre gel de sílice (acetato de etilo en
n-hexano al 10%) para proporcionar el producto
LXIIIc como una mezcla de isómeros (6,65 g de isómero trans) y (1,9
g de la olefina cis).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución a 0ºC del producto de la etapa
2, LXIIIc (0,21 g), en CH_{2}Cl_{2} (3 ml) se añadió DAST (1,1
equiv., 0,135 ml). Después de 15 minutos, la reacción se paró por la
adición de una disolución saturada fría de Na_{2}CO_{3} (150
ml). La mezcla se diluyó con acetato de etilo (\sim10 ml) y
después de agitar durante -30 min se separó la fase orgánica; se
lavó con salmuera y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La
concentración a vacío y purificación por cromatografía sobre gel de
sílice (CH_{2}Cl_{2} en n-hexano de 5% a 10%)
proporcionó el compuesto LXIIId (0,1 g; 47%).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa 3, LXIIId (3,5 g) se
trató de la forma descrita previamente en la etapa 4 del ejemplo
preparativo XXXXIII para proporcionar los productos LXIIIe y LXIIIf
como una mezcla (3,25 g).
\newpage
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los productos de la etapa 4 (LXIIIe+LXIIIf) (2,3
g) se trataron de la forma descrita previamente en la etapa 5,
después la etapa 6 y finalmente la etapa 7 del ejemplo preparativo
XXXXIII, para proporcionar el producto LXIII (0,47 g).
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
el producto intermedio LXII siguiendo los procedimientos señalados
para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y XXXX.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto LXIIIc (1,36 g) se trató de la forma
descrita previamente en la etapa 4 del ejemplo preparativo XXXXIII
para proporcionar los productos LXIVa y LXIVb como una mezcla (1,3
g).
\newpage
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
Una solución agitada de los productos de la
etapa 1 (LXIVa+LXIVb) (1,2 g) en CH_{2}Cl_{2} (40 ml) se trató
con ácido trifluoroacético (40 ml). Después de 45 h, la mezcla de
reacción se concentró hasta sequedad a vacío. El residuo se
cromatografió sobre gel de sílice (MeOH en CH_{2}Cl_{2} al 2%)
para proporcionar los productos LXIVc y LXIVd como una mezcla (0,97
g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
A los productos de la etapa 2 (LXIVc+LXIVd) (0,4
g) se añadieron 30 ml de NH_{3} (2,0 M en MeOH). Después de 4 h,
la mezcla de reacción se concentró hasta sequedad a vacío. El
residuo se trató por cromatografía preparativa sobre gel de sílice
(CH_{3}CN al 100%) para proporcionar el producto deseado LXIVe
(0,3 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa 3, LXIVe (0,054 g), se
trató de la forma descrita previamente en la etapa 7 del ejemplo
preparativo XXXXIII para proporcionar el producto LXIV (0,032
g).
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
el producto intermedio LXII siguiendo los procedimientos señalados
para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y XXXX.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución a temperatura ambiente del
paraformaldehído LXVa (12 g, 400 mmol) y
1-bromo-1,1-difluorop-2-eno
LXVb (6,3 g, 40 mmol) en DMF (100 ml) se añadió In(0) (6,5
g, 57 mmol) y Lil (0,4 g, 3 mmol). La suspensión resultante se
agitó a t.a. durante 48 h. Después de 48 h, la reacción se filtró a
través de una almohadilla de celita. El filtrado se diluyó con EtOAc
(250 ml) y se lavó con H_{2}O (3 veces) y después salmuera.
La fase orgánica se separó y finalmente se secó
sobre MgSO_{4} anhidro. La evaporación a vacío proporcionó el
producto LXVc, que se usó como estaba directamente en la siguiente
etapa.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa 1, LXVcv (4 g, 37 mmol)
se hizo reaccionar de la forma descrita previamente en el ejemplo
preparativo XXXXIII etapa 1, para proporcionar después de purificar
por cromatografía sobre gel de sílice (CH_{2}Cl_{2} en
n-hexano de 10% a 50%) el producto LXVd (4,3 g).
\newpage
Etapa
3
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución del producto de la etapa 2,
LXVd (3,8 g) en etanol (30 ml) se añadió el catalizador Pd/C al
10% (0,76 g). La suspensión resultante se hidrogenó hasta que el
análisis por RMN indicó el consumo completo del material de partida
(\sim4 h). El catalizador se separó por filtración a través de una
almohadilla de celita y se lavó con etanol. El filtrado y los
lavados combinados se evaporaron a vacío hasta sequedad para
proporcionar el producto deseado LXVe (3,8 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa 3, LXVe (3,4 g), se
trató de la forma descrita previamente en la etapa 3 del ejemplo
preparativo XXXXIII para proporcionar el producto LXVf (2,5 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
\vskip1.000000\baselineskip
El producto de la etapa 4, LXVf (2 g) se trató
de la forma descrita previamente en la etapa 4 del ejemplo
preparativo XXXXIII para proporcionar después de purificar por
cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc en n-hexano
al 30%) los compuestos LXVg (0,27 g) y LXVh (0,26 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
6
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
El producto de la etapa 5, LXVg (0,17 g), se
trató de la forma descrita previamente en la etapa 5, después la
etapa 6 y finalmente la etapa 7 del ejemplo preparativo XXXXIII,
para proporcionar el producto LXV (0,025 g).
Se sintetizaron una serie de inhibidores usando
el producto intermedio LXV siguiendo los procedimientos señalados
para los ejemplos preparativos XXIII, XXIV, XXVIII, XXIX y XXXX.
Separación de diastereoisómeros: Los
diastereoisómeros procedentes del centro \alpha de la cetoamida se
separaron usando cromatografía (SiO_{2}) o HPLC (columna diol YMC)
con hexano/CH_{2}Cl_{2}/isopropanol/CH_{3}CN = 85/7,5/6,5/1
como disolvente, como conocen los expertos en la materia.
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayo espectrofotométrico: Se llevó a
cabo el ensayo espectrofotométrico para la serina proteasa del VHC
de los compuestos de la invención siguiendo el procedimiento
descrito por R. Zhang et al., Analytical Biochemistry, 270
(1999) 268-275, cuya descripción se incorpora en la
presente memoria por referencia. Este ensayo basado en la
proteólisis de sustratos éster cromógenos es adecuado para el
seguimiento continuo de la actividad de la proteasa NS3 del VHC. Los
sustratos se obtuvieron del lado P de la secuencia de unión de
NS5A-NS5B (Ac-DTEDVVX(Nva),
en la que X = A o P) cuyos grupos carboxilo
C-terminales se esterificaron con 1 de 4 alcoholes
cromóforos diferentes (3- ó 4-nitrofenol,
7-hidroxi-4-metil-cumarina
o 4-fenilazofenol). A continuación se presentan las
síntesis, caracterización y aplicación de estos nuevos sustratos
éster espectrofotométricos al cribado de alta capacidad y evaluación
cinética detallada de los inhibidores de la proteasa NS3 del
VHC.
\vskip1.000000\baselineskip
Materiales y métodos:
Materiales: Los reactivos químicos para
los tampones relacionados con el ensayo se obtuvieron en Sigma
Chemical Company (St. Louis, Missouri). Los reactivos para la
síntesis de péptidos eran de Aldrich Chemicals, Novabiochem (San
Diego, California), Applied Biosystems (Foster City, California) y
Perseptive Biosystems (Framingham, Massachusetts). Los péptidos se
sintetizaron de forma manual o en un sintetizador automático ABI
modelo 431A (de Applied Biosystems). El espectrofotómetro de UV/VIS
modelo LAMBDA 12 era de Perkin Elmer (Norwalk, Connecticut) y las
placas de UV de 96 pocillos se obtuvieron en Corning (Corning, New
York). El bloque de precalentamiento era de USA Scientific (Ocala,
Florida) y el agitador vortical de placa de 96 pocillos era de
(Melrose Park, Illinois). Se obtuvo un lector de placa de
microvaloración Spectramax Plus con monocromador de Molecular
Devices (Sunnyvale, California).
Preparación de la enzima: La proteasa
NS3/NS4A del VHC heterodimérica recombinante (cepa 1a) se preparó
usando los procedimientos descritos previamente (D. L. Sali et
al., Biochemistry, 37 (1998) 3392-3401). Las
concentraciones de proteínas se determinaron por el método del
colorante Biorad usando patrones de proteasa del VHC recombinantes
previamente cuantificados por análisis de aminoácidos. Antes de
iniciar el ensayo, el tampón de almacenamiento de la enzima (fosfato
sódico 50 mM pH 8,0, NaCl 300 mM, glicerol al 10%, maltósido de
laurilo al 0,05% y DTT 10 mM) se intercambió por el tampón de ensayo
(MOPS 25 mM pH 6,5, NaCl 300 mM, glicerol al 10%, maltósido de
laurilo al 0,05%, EDTA 5 \muM y DTT 5 \muM) usando una columna
preempaquetada Bio-Spin P-6
Biorad.
Síntesis y purificación del sustrato: La
síntesis de los sustratos se hizo como describen R. Zhang et
al, (véase antes) y se inició por el anclaje de
Fmoc-Nva-OH a la resina de cloruro
de 2-clorotritilo usando un protocolo estándar (K.
Barlos et al., Int. J. Pept. Protein Res., 37 (1991),
513-520). Posteriormente se ensamblaron los péptidos
usando la química de Fmoc, sea de forma manual o en un sintetizador
de péptidos automático ABI modelo 431. Los fragmentos de péptido
N-acetilados y completamente protegidos se
escindieron de la resina mediante ácido acético al 10% (HOAc) y
trifluoroetanol al 10% (TFE) en diclorometano (DCM) durante 30 min,
o mediante ácido trifluoroacético al 2% (TFA) en DCM durante 10 min.
El filtrado y lavado de DCM combinados se evaporaron
azeotrópicamente (o se extrajeron repetidamente con disolución de
Na_{2}CO_{3}) para separar el ácido usado en la escisión. La
fase de DCM se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se evaporó.
Los sustratos éster se ensamblaron usando
procedimientos estándar de acoplamiento de
ácido-alcohol (K. Holmber et al., Acta Chem.
Scand., B33 (1979) 410-412). Los fragmentos de
péptidos se disolvieron en piridina anhidra (30-60
mg/ml) a la que se añadieron 10 equivalentes molares de cromóforo y
una cantidad catalítica (0,1 eq.) de ácido paratoluenosulfónico
(pTSA). Se añadió diciclohexilcarbodiimida (DCC, 3 eq.) para iniciar
las reacciones de acoplamiento. La formación de producto se siguió
por HPLC y se encontró que se había completado después de
12-72 horas de reacción a temperatura ambiente. El
disolvente piridina se evaporó a vacío y después se separó por
evaporación azeotrópica con tolueno. El éster peptídico se
desprotegió con TFA al 95% en DCM durante 2 horas y se extrajo 3
veces con éter dietílico anhidro para eliminar el exceso de
cromóforo. El sustrato desprotegido se purificó por HPLC de fase
inversa en una columna C3 o C8 con gradiente de acetonitrilo de 30%
a 60% (usando 6 volúmenes de columna). El rendimiento global después
de la purificación por HPLC era aproximadamente
20-30%. La masa molecular se confirmó por
espectroscopía de masas de ionización por electropulverización. Los
sustratos se almacenaron en forma de polvo seco con desecación.
Espectros de los sustratos y productos:
Los espectros de los sustratos y los correspondientes productos
cromóforos se obtuvieron en el tampón de ensayo a pH 6,5. Los
coeficientes de extinción se determinaron a la longitud de onda
óptima fuera del máximo en cubetas de 1 cm (340 nm para
3-Np y HMC, 370 nm para PAP y 400 nm para
4-Np) usando diluciones múltiples. La longitud de
onda óptima fuera del máximo se definió como aquella longitud de
onda que da la diferencia de fracción máxima de la absorbancia entre
sustrato y producto (DO producto - DO sustrato)/DO sustrato).
Ensayo de la proteasa: Los ensayos de la
proteasa del VHC se llevaron a cabo a 30ºC usando una mezcla de
reacción de 200 \mul en una placa de microvaloración de 96
pocillos. Las condiciones del tampón de ensayo (MOPS 25 mM pH 6,5,
NaCl 300 mM, glicerol al 10%, maltósido de laurilo al 0,05%, EDTA 5
\muM y DTT 5 \muM) se optimizaron para el heterodímero NS3/NS4A
(D. L. Sali et al., véase antes)). Típicamente, se pusieron
en los pocillos 150 \mul de mezclas de tampón, sustrato e
inhibidor (concentración final de DMSO \leq4% v/v) y se dejó
preincubar a 30ºC durante aproximadamente 3 minutos. Después se
usaron 50 \mul de proteasa precalentada (12 nM, 30ºC) en tampón de
ensayo, para iniciar la reacción (volumen final 200 \mul). Se
siguió en las placas a lo largo de la duración del ensayo (60
minutos) el cambio de absorbancia a la longitud de onda adecuada
(340 nm para 3-Np y HMC, 370 nm para PAP, y 400 nm
para 4-Np) usando un lector de placa de
microvaloración Spectromax Plus equipado con un monocromador (se
pueden obtener resultados aceptables con lectores de placa que usan
filtros con corte de exclusión). La escisión proteolítica de la
unión éster entre el Nva y el cromóforo se siguió a la longitud de
onda adecuada frente a un blanco no enzimático como control para la
hidrólisis no enzimática. La evaluación de los parámetros cinéticos
del sustrato se llevó a cabo a lo largo de un intervalo de
concentración del sustrato de 30 veces (\sim6-200
\muM). Las velocidades iniciales se determinaron usando regresión
lineal y se obtuvieron constantes cinéticas mediante el ajuste de
los datos a la ecuación de Michaelis-Menten usando
análisis de regresión no lineal (Mac Curve Fit 1,1, K. Raner). El
número de recuperaciones (k_{cat}) se calculó suponiendo
que la enzima era totalmente activa.
Evaluación de los inhibidores e inactivadores:
Las constantes de inhibición (Ki*) para los inhibidores competitivos
Ac-D-(D-Gla)-L-I-(Cha)-C-OH
(27), Ac-DTEDVVA(Nva)-OH y
Ac-DTEDVVP(NVa)-OH se
determinaron experimentalmente a concentraciones fijas de la enzima
y el sustrato, mediante representación de v_{o}/v_{i} frente a
la concentración de inhibidor ([I]_{o}) de acuerdo con la
ecuación de Michaelis-Menten reordenada para las
cinéticas de inhibición competitivas: v_{o}/v_{i} = 1 +
[I]_{o} /(Ki* (1 + [S] _{o} /K_{m})), en la que v_{o}
es la velocidad inicial no inhibida, v_{i} es la velocidad inicial
en presencia de inhibidor a cualquier concentración dada de
inhibidor ([I]_{o}) y [S]_{o} es la concentración
de sustrato usada. Los datos resultantes se ajustaron usando
regresión lineal y se usó la pendiente resultante,
1/(Ki*(1+[S]_{o}/K_{m}), para calcular el valor de
Ki*.
Los valores de Ki* para los diferentes
compuestos de la presente invención, se dan en la tabla 1, en la que
los compuestos se han ordenado en el orden de intervalo de los
valores de Ki*. A partir de estos resultados de ensayo, será
evidente para el experto en la técnica, que los compuestos de la
invención tienen una utilidad excelente como inhibidores de la
serina proteasa NS3.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
- Intervalo de Ki* de ensayo continuo de VHC:
- Categoría A =1-100 nM; Categoría B =101-1.000 nM; Categoría C >1000 nM.
Claims (26)
1. Un compuesto que presenta actividad
inhibidora de la proteasa del VHC, o enantiómeros, estereoisómeros,
rotámeros, tautómeros o racematos de dicho compuesto, o sales o
solvatos de dicho compuesto farmacéuticamente aceptables,
seleccionándose dicho compuesto de las estructuras listadas a
continuación:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
2. Un compuesto de la reivindicación 1, o
enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros o racematos de
dicho compuesto, o sales o solvatos de dicho compuesto
farmacéuticamente aceptables, siendo dicho compuesto el compuesto de
la estructura mostrada continuación:
\vskip1.000000\baselineskip
3. Un compuesto de la reivindicación 2, que
tiene la fórmula mostrada a continuación:
\vskip1.000000\baselineskip
4. Un compuesto de la reivindicación 2, que
tiene la fórmula mostrada a continuación:
\vskip1.000000\baselineskip
5. Una composición farmacéutica que comprende
como un principio activo al menos un compuesto de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4.
6. La composición farmacéutica de la
reivindicación 5, para usar en el tratamiento de trastornos
asociados con el VHC.
7. La composición farmacéutica de la
reivindicación 5, que además comprende un vehículo farmacéuticamente
aceptable.
8. La composición farmacéutica de la
reivindicación 7, que además contiene al menos un agente
antivírico.
9. La composición farmacéutica de la
reivindicación 8, que además también contiene un interferón o
conjugado de PEG-interferón alfa.
10. La composición farmacéutica de la
reivindicación 9, en la que dicho agente antivírico es la ribavirina
y dicho interferón es el interferón \alpha.
\newpage
11. El uso de un compuesto de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4, para fabricar un medicamento para tratar
trastornos asociados con el VHC.
12. El uso de la reivindicación 11, en el que
dicho medicamento es para la administración oral o subcutánea.
13. Un compuesto de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4, para tratar trastornos asociados con el
VHC.
14. Un método de preparación de una composición
farmacéutica para tratar los trastornos asociados con el VHC,
comprendiendo dicho método poner en contacto íntimo al menos un
compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
15. Un método para modular la actividad de la
proteasa del virus de la hepatitis C (VHC), que comprende poner en
contacto la proteasa del VHC con uno o más compuestos de cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho método es distinto de
un método para el tratamiento mediante terapia del cuerpo humano o
animal.
16. El uso de uno o más compuestos de cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 4, para fabricar un medicamento para
tratar, prevenir o mejorar uno o más síntomas de la hepatitis C.
17. El método de la reivindicación 15, en el que
la proteasa del VHC es la proteasa NS3/NS4a.
18. El uso de la reivindicación 16, en el que el
compuesto o los compuestos son inhibidores de la proteasa NS3/NS4a
del VHC.
19. Un compuesto de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4, para tratar, prevenir o mejorar uno o más
síntomas de la hepatitis C.
20. Un método para modular el procesamiento del
polipéptido del virus de la hepatitis C (VHC), que comprende poner
en contacto una composición que contiene el polipéptido del VHC en
condiciones en las que el polipéptido es procesado con uno o más
compuestos de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que
dicho método es distinto de un método para el tratamiento mediante
terapia del cuerpo humano o animal.
21. El uso de un compuesto según cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 4, en la fabricación de una composición
para usar en una terapia de combinación para tratar trastornos
asociados con el virus de la hepatitis C (VHC), comprendiendo dicha
terapia de combinación administrar (i) dicho compuesto y (ii) un
interferón.
22. El uso de la reivindicación 21, en el que
dicho interferón es el interferón alfa o interferón pegilado.
23. El uso de la reivindicación 21 o
reivindicación 22, en el que dicha terapia de combinación comprende
administrar una composición de la reivindicación 5.
24. El uso de la reivindicación 21 o
reivindicación 22, en el que dicha terapia de combinación comprende
administrar un compuesto de la reivindicación 2.
25. El uso de la reivindicación 21 o
reivindicación 22, en el que dicha terapia de combinación comprende
administrar un compuesto de la reivindicación 3 o reivindicación
4.
26. El uso de cualquiera de las reivindicaciones
21 a 25, en el que dicha terapia de combinación comprende la
administración oral o subcutánea.
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Family Applications (1)
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| ES03731956T Expired - Lifetime ES2344890T3 (es) | 2002-01-18 | 2003-01-16 | Nuevos peptidos como inhibidores de la serina proteasa ns3 del virus de la hepatitis c. |
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-
2003
- 2003-01-16 ES ES03731956T patent/ES2344890T3/es not_active Expired - Lifetime
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