EA034666B1 - Антитело против pd-1 и его применение для лечения рака или вирусной инфекции и фрагмент антитела - Google Patents

Антитело против pd-1 и его применение для лечения рака или вирусной инфекции и фрагмент антитела Download PDF

Info

Publication number
EA034666B1
EA034666B1 EA201690567A EA201690567A EA034666B1 EA 034666 B1 EA034666 B1 EA 034666B1 EA 201690567 A EA201690567 A EA 201690567A EA 201690567 A EA201690567 A EA 201690567A EA 034666 B1 EA034666 B1 EA 034666B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
cells
seq
mab
antibody
amino acid
Prior art date
Application number
EA201690567A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201690567A1 (ru
Inventor
Цзин Сун
Кан Ли
Тун Чжан
Ланьлань Сюй
Ци Лю
Хао Пэн
Original Assignee
Бейджин Свитзерланд Гмбх
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Бейджин Свитзерланд Гмбх filed Critical Бейджин Свитзерланд Гмбх
Publication of EA201690567A1 publication Critical patent/EA201690567A1/ru
Publication of EA034666B1 publication Critical patent/EA034666B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Предложено антитело, которое специфично связывается с PD-1 человека и содержит вариабельную область тяжелой цепи (Vh), содержащую следующие три гипервариабельные области (CDR): CDR-H1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31, CDR-H2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, и CDR-H3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; и вариабельную область легкой цепи (Vk), содержащую следующие три CDR: CDR-L1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, CDR-L2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, и CDR-L3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36. Также предложен фрагмент заявленного антитела, представляющий собой F(ab) или F(ab), и применение заявленного антитела для лечения рака или вирусной инфекции. Антитела согласно изобретению полезны в лечении рака и вирусных заболеваний, при которых ненадлежащая и пагубно влияющая экспрессия человеческого PD-1 является компонентом этиологии или патологии.

Description

Введение
Белок программируемой смерти-1 (PD-1, также называемый CD279) представляет собой 55 кДа рецепторный белок, связанный с семейством костимулирующих/ингибирующих рецепторов CD28/CTLA4 (Blank et al., 2005 Cancer Immunol Immunother 54:307-314). Гены и кДНК, кодирующие PD-1, были клонированы и охарактеризованы у мыши и человека (Ishida et al., 1992 EMBO J. 11:3887-3395; Shinohara et al., 1994 Genomics 23:704-706). Полноразмерный PD-1 содержит 288 аминокислотных остатков (учетный номер NCBI: NP_005009). Его внеклеточный домен состоит из аминокислотных остатков 1-167, и цитоплазматический С-концевой хвост содержит остатки 191-288, который имеет два гипотетических иммунорегуляторных мотива, иммунорецепторный тирозиновый ингибирующий мотив (ITIM; Vivier et al., 1997 Immunol Today 18:286-291) и иммунорецепторный тирозиновый мотив переключения (ITSM; Chemnitz et al., 2004 J. Immunol. 173:945-954).
К настоящему времени идентифицированы два родственных по последовательности лиганда, PD-L1 (В7-Н1) и PD-L2 (B7-DC), которые специфично взаимодействуют с PD-1, индуцируя внутриклеточную сигнальную трансдукцию, которая ингибирует CD3- и CD28-опосредованную активацию Т-клеток (Riley, 2009 Immunol. Rev. 229:114-125), что, в свою очередь, ослабляет активности Т-клеток, например снижение пролиферации клеток, выделение IL-2 (Интерлейкин-2) и IFN-γ (интерферон-гамма), а также выделение других факторов роста и цитокинов.
Экспрессию PD-1 часто обнаруживали в таких клетках иммунной системы, как Т-клетки, В-клетки, моноциты и NK-клетки (натуральные киллеры). Он редко экспрессировался в других тканях человека, таких как мышечные, эпителиальные, нервные ткани и т.д. Кроме того, высокий уровень экспрессии PD1 часто ассоциирован с активацией клеток иммунной системы. Например, когда линию Т-клеток человека, Jurkat, активировали фитогемагглютинином (ФГА) или сложным форболовым эфиром (12-Отетрадеканоилфорбол-13-ацетат или ТФА), экспрессия PD-1 заметно повышалась в Вестерн-блоттинге (Vibharka et al., 1997 Exp. Cell. Res. 232:25-28). Такое же явление наблюдали в стимулированных мышиных Т- и В-лимфоцитах и первичных Т-клетках CD4+ человека при стимуляции антителом против CD3 (Agata et al., 1996 Int. Immunol. 8:765-772; Bennett et al., 2003 J. Immunol. 170:711-118). Повышение экспрессии PD-1 с последующей стимуляцией эффекторных Т-клеток способствует истощению активированных эффекторных Т-клеток и снижению иммунной активности. Таким образом, PD-1опосредованный ингибиторный сигнал играет важную роль в иммунологической толерантности (BourJordan et al., 2011 Immunol. Rev. 241:180-205).
О повышении уровня экспрессии PD-1 в лимфоцитах, инфильтрирующих опухоль (TIL), и экспрессии лиганда PD-1 в опухолевых клетках сообщалось при множестве раковых заболеваний, встречающихся в разных типах тканей и органов, таких как легкое (Konishi et al., 2004 Clin. Cancer. Res. 10:5094-5100), печень (Shi et al., 2008 Int. J. Cancer. 128:887-896; Gao et al., 2009 Clin. Cancer. Res. 15:971-979), желудок (Wu et al., 2006 Acta Histochem 108:19-24), почка (Thompson et al., 2004 Proc. Natl. Acad. Sci. 101:1717417179; Thompson et al., 2007 Clin. Cancer. Res. 13:1757-1761), молочная железа (Ghebeh et al., 2006 Neoplasia 8:190-198), яичник (Hamanishi et al. 2007 Proc. Natl. Acad. Sci. 104:3360-3365), поджелудочная железа (Nomi et al., 2007 Clin. Cancer. Res. 13:2151-2157), меланоциты (Hino et al., 2010 Cancer. 116:17571766) и пищевод (Ohigashi et al., 2005 Clin. Cancer. Res. 11:2947-2953). Чаще повышенная эксперссия PD1 и PD-L1 при этих раковых заболеваниях ассоциирована с неблагоприятным прогнозом в отношении выживаемости пациента. Исследования трансгенных мышей с нокаутом гена PD-1, ингибирующим рост ксенотрансплантатных опухолевых клеток, дополнительно пролили свет на значимость PD-1 сигнализации в модуляции иммунной системы для уничтожения раковых клеток или толерантности к ним (Zhang et al., 2009 Blood 114:1545-1552).
Позитивная регуляция PD-1 сигнализации приводит к иммунологической толерантности не только в отношении роста раковой опухоли, но также в отношении инфицирования и распространения вируса у человека. Преобладающие вирусные инфекции печени, HBV (вирус гепатита В) и HCV (вирус гепатита С), вызывают сверхэкспрессию лигандов PD-1 в гепатоцитах и активируют PD-1 сигнализацию в эффекторных Т-клетках, приводя к Т-клеточному истощению и толерантности к вирусной инфекции (Boni et al., 2007 J. Virol. 81:4215-4225; Golden-Mason et al., 2008 J. Immunol. 180:3637-3641). Так, инфекция HIV (вирус иммунодефицита человека) часто уклоняется от воздействия иммунной системы человека посредством похожих механизмов. Терапевтическая модуляция PD-1 сигнализации посредством молекул антагонистов может нивелировать иммунологическую толерантность и стимулировать клетки иммунной системы для борьбы с раком и хронической вирусной инфекцией (Blank et al., 2005 Cancer Immunol Immunother 54:307-314; Okazaki et al., 2007 Int. Immunol. 19:813-824).
Краткое описание изобретения
Согласно изобретению предложено антитело против PD-1, его фрагмент и его применение для лечения рака или вирусной инфекции у пациента. В одном аспекте изобретения предложено антитело, содержащее антигенсвязывающий домен антитела, которое специфично связывается с PD-1 человека и содержит вариабельную область тяжелой цепи (Vh), содержащую следующие три гипервариабельные области (CDR): CDR-H1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31, CDR-H2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, и CDR-H3, имеющую аминокислотную по
- 1 034666 следовательность SEQ ID NO: 33; и вариабельную область легкой цепи (Vk), содержащую следующие три CDR: CDR-L1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, CDR-L2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, и CDR-L3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36.
В конкретных воплощениях антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи (Vh), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24, и/или вариабельную область легкой цепи (Vk), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:26.
В конкретных воплощениях антитело связывается с остатками PD1 K45 и I93, что соответствует K58 и 1106 в SEQ ID NO: 2.
В конкретных воплощениях антитело индуцирует высвобождение IL-2 в клетках HuT78, трансформированных PD-1, совместно культивируемых с клетками HEK293, совместно трансформированными OS8/PD-L1 или OS8/PD-L2, и/или ингибирует выделение IL-2 в клетках HuT78, трансформированных P3Z, совместно культивируемых с клетками HEK293, трансформированными PD-L1 или PD-L2, где OS8 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 89 и представляет собой заякоренное в мембране химерное Ab, конструированное посредством слияния одноцепочечного вариабельного фрагмента (scFv) mAb OKT3 против человеческого CD3 с С-концевым доменом мышиного CD8a; и P3Z содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90 и представляет собой химерный рецептор PD-1, конструированный посредством слияния внеклеточного и трансмембранного доменов человеческого PD1 с цитоплазматическим доменом цепи CD3Z человека.
Согласно изобретению также предложен фрагмент заявленного антитела, представляющий собой F(ab) или F(ab)2.
Согласно изобретению также предложено применение заявленного антитела для лечения рака или вирусной инфекции.
Согласно изобретению также предложено применение заявленного антитела для изготовления лекарственного средства для лечения рака или вирусной инфекции.
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1 - схематичное представление PD-1/Fc (сверху) и PD-1/His (снизу). ECD: внеклеточный домен, L: линкер. Н: His-метка, Fc: y4Fc фрагмент из человеческого IgG4, N: N-конец, С: С-конец;
фиг. 2 - дозозависимые кривые реакции связывания мышиных mAb с человеческим PD-1, полученные анализом ELISA (твердофазный иммуноферментный анализ). Мышиные mAb указаны в верхнем левом углу каждой фигуры. MAb 317 и 517 имеют высокую степень гомологии вариабельной области тяжелых и легких цепей. Сила сигнала связывания показана с помощью прямых считываний OD450 (оптическая плотность). Покрытие антигеном, PD-1/His, осуществляли в возрастающих концентрациях вплоть до 70 нг/лунку в объеме 50 мкл. Способ описан в примере 1;
фиг. 3 - дозозависимая кривая реакции связывания мышиных mAb с человеческим PD-1, экспрессированным в живых клетках, полученная анализом FACS (сортировка клеток с возбуждением флуоресценции). Коды мышиных антител и ЕС50 (полумаксимальная эффективная концентрация) указаны на каждой панели. MFI означает среднюю интенсивность флуоресценции. Клетки HuT78/PD-1 суспендировали в 96-луночном планшете при 5х104 клеток на лунку для FACS. Связывание mAb против PD-1 с поверхностью клетки-мишени и FACS-детектирование осуществляли, как описано в примере 1;
фиг. 4 - схематичное представление систем совместного культивирования клеток, используемых для анализа функциональных активностей mAb против PD-1. Т-клетки (либо CD4+, либо CD8+) представляют HuT78/PD-1 или первичные Т-клетки в МКПК (мононуклеарные клетки периферической крови). TCR: рецептор Т-клетки, N: ядро, С: цитоплазма;
фиг. 5 - дозозависимая кривая реакции выделения IL-2, индуцированного мышиными mAb, в клетках HuT78/PD-1, совместно культивируемых с клетками HEK293/OS8/PD-L1. Нижняя кривая: среднее высвобождение IL-2, индуцируемое mIgG при всех тестируемых концентрациях. Верхняя кривая: самый высокий уровень высвобождения IL-2 на основе вычисления регрессионным анализом посредством программного обеспечения Prizm;
фиг. 6(А) - гистограммы, отражающие выделение IFN-γ, индуцированное mAb против PD-1, в МКПК (донор-19), совместно культивируемых с линией клеток HEK293/OS8/PD-L1; (Б) гистограммы, показывающие выделение IFN-γ, индуцированное mAb против PD-1, в МКПК (донор-20), совместно культивируемых с линией клеток HEK293/OS8/PD-L1;
фиг 7(А) и (Б) - ADCC (антителозависимая клеточная цитотоксичность) активности mAb против PD-1, определенные посредством совместного культивирования эффекторных клеток (NK92MI/PD-1) и клеток-мишеней (HuT78/PD-1). Средние значения рассчитывали по двум экспериментальным точкам репрезентативных экспериментов. mAb добавляли до концентрации 10 мкг/мл. Эксперимент проводили, как описано в примере 9;
фиг. 8 - картирование эпитопов связывания mAb против PD-1 посредством ELISA (верхняя панель) и Вестерн-блоттинга (нижняя панель). Кондиционированные среды, содержащие WT (дикий тип) или Mt PD-1, использовали для оценки активности связывания посредством ELISA и Вестерн-блоттинга. ** по
- 2 034666 казывает АА остатки, mAb активность связывания с которыми снижалась до 25-50% от WT PD-1. *** показывает АА остатки, mAb активность связывания с которыми снижалась до менее чем 25% от WT PD-1;
фиг. 9 - высвобождение IFN-γ, индуцированное гуманизированными mAb против PD-1, в первичных МКПК человека от разных здоровых доноров, которые культивировали совместно с клетками HEK293/OS8/PD-L1;
фиг. 10 - цитотоксичность клеток NK92MI/PD-1, усиленная гуманизированными mAb против PD-1, hu317 (А) и hu326 (Б). Клетки-мишени рака легкого, SK-MES-1/PD-L1, культивировали совместно с эффекторными клетками в соотношении (Т и Е) 1 к 2 и анализировали, как описано в примере 12;
фиг. 11 - индивидуальные кривые роста опухоли в трех экспериментальных группах, носитель (PBS (фосфатно-солевой буферный раствор)), человеческие IgG (huIgG) и mAb против PD-1 (hu3171/IgG4mt2). Каждая кривая представляет путь роста опухоли, причем мыши с опухолью обозначены номерами, указанными с правой стороны каждой панели. Клетки Hep3B/OS8/PD-L1 (из линии клеток гепатоцеллюлярной карциномы Hep3B) засевали в сутки 1, МКПК имплантировали в сутки 15 и три дозы hu317-1/IgG4mt2 инъецировали в сутки 18, 28 и 38 соответственно. Способы описаны в примере 12.
Описание конкретных воплощений изобретения
PD-1 инициирует ингибиторную сигнализацию в клетках иммунной системы при взаимодействии со своими лигандами PD-L1 или PD-L2. В случаях разрастания опухоли и вирусной инфекции активация PD-1 сигнализации стимулирует иммунологическую толерантность, приводя к тому, что раковые заболевания или клетки, инфицированные вирусом, избегают иммунологического надзора, и к раковым метастазам или повышению вирусной нагрузки. Ингибирование PD-1-опосредованной клеточной сигнализации терапевтическими агентами может активировать клетки иммунной системы, включая Т-клетки, Вклетки и NK-клетки, и, вследствие этого, усиливать функции клеток иммунной системы, ингибируя рост раковых клеток или вирусную инфекцию, и восстанавливать иммунологический надзор и функцию иммунологической памяти для лечения таких заболеваний человека.
Согласно изобретению предложены антитела, обладающие антагонистическими функциями в отношении лиганд-индуцированной и PD-1-опосредованной клеточной сигнализации в клетках иммунной системы. Мышиные антитела против PD-1 гуманизировали до высокой степени сходства с человеческими антителами в каркасных областях. Полноразмерные антитела, созданные в формате модифицированного варианта человеческого IgG4, имеют уникальный набор черт с точки зрения эффекторных функций и физико-химических свойств. Описанные антитела против PD-1 подходят для применений в терапевтических целях при лечении рака и вирусных инфекций, которые механистически связаны с обостренной иммунологической толерантностью.
Определения.
Если в контексте не указано иное, термин антитело используется в самом широком смысле и, в частности, охватывает антитела (включая полноразмерные моноклональные антитела) и фрагменты антител, при условии, что они узнают PD-1. Молекула антитела обычно является моноспецифичной, но также может быть описана как идиоспецифичная, гетероспецифичная или полиспецифичная. Молекулы антител связываются посредством особых сайтов связывания с особыми антигенными детерминантами или эпитопами на антигенах. Фрагменты антител содержат часть полноразмерного антитела, обычно его антигенсвязывающую или вариабельную область. Примеры фрагментов антител включают фрагменты Fab, Fab', F(ab').sub.2 и Fv; диатела; линейные антитела; молекулы одноцепочечных антител и мультиспецифичные антитела, образованные из фрагментов антител.
Моноклональные антитела (MAb) могут быть получены способами, известными специалистам в данной области. См., например, Kohler et al. (1975); пат. США № 4376110; Ausubel et al. (1987-1999); Harlow et al. (1988); и Colligan et al. (1993). MAb по изобретению могут принадлежать к любому классу иммуноглобулинов, включая IgG, IgM, IgE, IgA и любому их подклассу. Гибридому, продуцирующую mAb, можно культивировать in vitro или in vivo. Высокие титры mAb можно получать при продукции in vivo, когда клетки из индивидуальных гибридом вводят мышам внутрибрюшинно, например мышам Balb/c, обработанным пристаном, с образованием свободной жидкости брюшной полости, содержащей высокие концентрации желаемых mAb. MAb изотипа IgM или IgG могут быть очищены от таких свободных жидкостей брюшной полости или от супернатантов культуры методами колоночной хроматографии, известными в данной области.
Термин выделенный полинуклеотид относится к полинуклеотидному участку или фрагменту, который был отделен от последовательностей, которые его фланкируют во встречающемся в природе состоянии, например фрагменту ДНК, который удаляли из последовательностей, в природе примыкающих к данному фрагменту, например последовательностей, примыкающих к данному фрагменту в геноме, в котором он встречается в природе. Таким образом, термин включает, например, рекомбинантную ДНК, которая включена в вектор, в автономно реплицирующуюся плазмиду или вирус или в геномную ДНК прокариота или эукариота, или которая существует в виде отдельной молекулы (например, как кДНК или фрагмент геномной или кДНК, полученный посредством ПЦР (полимеразная цепная реакция) или расщеплением рестриктазой), независимой от других последовательностей. Он также включает рекомби
- 3 034666 нантную ДНК, которая является частью гибридного гена, кодирующего дополнительную полипептидную последовательность.
Под конструкцией подразумевается любая рекомбинантная полинуклеотидная молекула, такая как плазмида, космида, вирус, автономно реплицирующаяся полинуклеотидная молекула, фаг или полинуклеотидная молекула линейной или кольцевой одноцепочечной или двухцепочечной ДНК или РНК, образованная из любого источника, способная к интеграции в геном или автономной репликации, включая полинуклеотидную молекулу, где одна или более чем одна полинуклеотидная молекула связана функциональным образом, т.е. функционально связана. Рекомбинантная конструкция будет как правило содержать полинуклеотиды по изобретению, функционально связанные с регуляторными последовательностями инициации транскрипции, которые будут направлять транскрипцию полинуклеотида в намеченной клетке-хозяине. Для направления экспрессии нуклеиновых кислот по изобретению можно использовать как гетерологичные, так и негетерологичные (т.е. эндогенные) промоторы.
Термин вектор относится к любой рекомбинантной полинуклеотидной конструкции, которую можно использовать в целях трансформации, т.е. введения гетерологичной ДНК в клетку-хозяин. Одним типом вектора является плазмида, которая относится к петле кольцевой двухцепочечной ДНК, в которую могут быть лигированы дополнительные участки ДНК. Другим типом вектора является вирусный вектор, где дополнительные участки ДНК могут быть лигированы в вирусный геном. Определенные векторы способны к автономной репликации в клетке-хозяине, в которую их вводят (например, бактериальные векторы, имеющие бактериальную точку начала репликации, и эписомальные векторы млекопитающих). Другие векторы (например, неэписомальные векторы млекопитающих) интегрированы в геном клетки-хозяина при введении в клетку-хозяин, и, таким образом, реплицируются вместе с геномом хозяина. Кроме того, определенные векторы способны к направлению экспрессии генов, с которыми они функционально связаны. Такие векторы в данном документе называют экспрессионными векторами.
Термин экспрессионный вектор, в том виде, в котором он используется в данном документе, относится к молекуле нуклеиновой кислоты, способной к репликации и экспрессии гена интереса при трансформации, трансфекции или преобразовании в клетку-хозяин. Экспрессионные векторы содержат один или более чем один фенотипический селективный маркер и точку начала репликации для обеспечения поддержания вектора и, при необходимости, для обеспечения амплификации в пределах хозяина. Экспрессионный вектор дополнительно содержит промотор для управления экспрессией полипептида в клетках. Подходящие экспрессионные векторы могут представлять собой плазмиды, полученные, например, из pBR322 или разные плазмиды pUC, которые имеются в продаже. Другие экспрессионные векторы могут быть получены из следующих экспрессионных векторов: бактериофаг, фагмида или космида.
Дополнительные воплощения изобретения
В конкретных воплощениях изобретения предложены мышиные моноклональные антитела, идентифицированные в результате скрининга клонов мышиных гибридом, как описано в данном документе.
В других воплощениях согласно изобретению предложены композиции следующих полинуклеотидных последовательностей и последовательностей белков:
а) последовательность кДНК, SEQ ID NO: 3, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи мышиного mAb 317;
б) белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного mAb 317 или mu317_Vh (SEQ ID NO: 4);
в) последовательность кДНК, SEQ ID NO: 5, кодирующая вариабельную область легкой цепи мышиного mAb 317;
г) белковая последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного mAb 317 или mu317_Vk (SEQ ID NO: 6);
д) последовательность кДНК, SEQ ID NO: 7, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи мышиного mAb 326;
е) белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного mAb 326 или mu326_Vh (SEQ ID NO: 8);
ж) последовательность кДНК, SEQ ID NO: 9, кодирующая вариабельную область легкой цепи мышиного mAb 326;
з) белковая последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного mAb 326 или mu326_Vk (SEQ ID NO: 10).
В одном аспекте изобретения предложены композиции, содержащие последовательности гипервариабельной области (CDR), которые содействуют связыванию с антигенами-мишенями, PD-1, включая последовательности CDR mu317 и m326:
а) CDR1 тяжелой цепи mu317 (mu317 H-CDR1) содержит аминокислотную последовательность GFSLTSYGVH (SEQ ID NO 11);
б) H-CDR2 mu317 содержит аминокислотную последовательность VIWAGGSTNYNSALMS (SEQ ID NO 12);
в) H-CDR3 mu317 содержит аминокислотную последовательность ARAYGNYWYIDV (SEQ ID NO 13);
- 4 034666
г) CDR1 легкой цепи mu317 (mu317 L-CDR1) содержит аминокислотную последовательность KASQSVSNDVA (SEQ ID NO 14);
д) L-CDR2 mu317 содержит аминокислотную последовательность YAFHRFT (SEQ ID NO: 15);
е) L-CDR3 mu317 содержит аминокислотную последовательность HQAYSSPYT (SEQ NO: 16);
ж) H-CDR1 mu326 содержит аминокислотную последовательность GYTFTNYGMN (SEQ ID NO: 17);
з) H-CDR2 mu326 содержит аминокислотную последовательность WINNNNGEPTYAEEFKG (SEQ ID NO: 18);
и) H-CDR3 mu326 содержит аминокислотную последовательность ARDVMDY (SEQ ID NO: 19);
к) L-CDR1 mu326 содержит аминокислотную последовательность RASESVDNYGYSFMH (SEQ ID NO: 20);
л) L-CDR2 mu326 содержит аминокислотную последовательность RASNLES (SEQ ID NO: 21);
м) L-CDR3 mu326 содержит аминокислотную последовательность QQSKEYPT (SEQ ID NO: 22).
В другом воплощении изобретения предложены композиции, содержащие последовательности гуманизированных моноклональных антител, выделенных из мышиных mAb mu317 и mu326, включая следующее:
а) гуманизированное mAb hu317-4B6 содержит белковую последовательность вариабельной области тяжелой цепи (Vh) в виде SEQ ID NO: 24, которая кодируется
б) кДНК hu317-4B6_Vh (SEQ ID NO: 23);
в) гуманизированное mAb hu317-4B6 также содержит белковую последовательность вариабельной области легкой цепи (Vk) в виде SEQ ID NO: 26, которая кодируется
г) кДНК hu317-4B6 (SEQ ID NO: 25);
д) гуманизированное mAb hu326-4A3 содержит белковую последовательность Vh в виде SEQ ID NO: 28, которая кодируется
е) кДНК hu326-4A3-Vh (SEQ ID NO: 27);
ж) гуманизированное mAb hu326-4A3 также содержит белковую последовательность Vk в виде SEQ ID NO: 30, которая кодируется
з) кДНК hu326-4A3_Vk (SEQ ID NO: 29);
и) белковые последовательности hu317-4B2_Vh (SEQ ID NO: 43) и hu317-4B2_Vk (SEQ ID NO: 44);
к) белковые последовательности hu317-4B5_Vh (SEQ ID NO: 45) и hu317-4B5_Vk (SEQ ID NO: 46);
л) белковая последовательность hu317-1_Vh (SEQ ID NO: 48) и кДНК, кодирующая hu317-1_Vh (SEQ ID NO: 47);
м) белковая последовательность hu317-1_Vk (SEQ ID NO: 50) и кДНК, кодирующая hu317-1_Vk (SEQ ID NO: 49);
н) белковые последовательности hu326-3B1_Vh (SEQ ID NO: 51) и hu326-3B1_Vk (SEQ ID NO:52);
о) белковые последовательности hu326-3G1_Vh (SEQ ID NO: 53) и hu326-3G1_Vk (SEQ ID NO: 54);
п) белковая последовательность hu326-1_Vh (SEQ ID NO: 56) и кДНК, кодирующая hu326-1_Vh (SEQ ID NO: 55);
р) белковая последовательность hu326-1_Vk (SEQ ID NO: 58) и кДНК, кодирующая hu326-1_Vk (SEQ ID NO: 57);
с) белковые последовательности других гуманизированных mAb, происходящих из mu317 (SEQ ID NO: 63-74);
т) белковые последовательности других гуманизированных mAb, происходящих из mu326 (SEQ ID NO: 75-82).
В одном аспекте изобретения предложены композиции, содержащие последовательности CDR гуманизированных моноклональных антител. CDR могут быть общими в пределах одной и той же серии гуманизированных антител, таких как hu317 или hu326 (см. табл. 15-16). Неизбыточные CDR перечислены ниже:
а) H-CDR1 последовательность GFSLTSYGVH (SEQ ID NO: 31), являющаяся общей для гуманизированных mAb hu317 и mu317 в тяжелых цепях;
б) H-CDR3 последовательность ARAYGNYWYIDV (SEQ ID NO: 33), являющаяся общей для гуманизированных mAb hu317 и mu317 в тяжелых цепях;
в) L-CDR1 последовательность KSSESVSNDVA (SEQ ID NO: 34), являющаяся общей для гуманизированных mAb hu317-4B2, hu317-4B5 и hu317-4В6 в легких цепях;
г) L-CDR2 последовательность YAFHRFT (SEQ ID NO: 35), являющаяся общей для гуманизированных mAb hu317 и mu317 в легких цепях;
д) L-CDR3 последовательность HQAYSSPYT (SEQ ID NO: 36), являющаяся общей для гуманизированных mAb hu317 и mu317 в легких цепях;
е) H-CDR2 последовательность VIYADGSTNYNPSLKS (SEQ ID NO: 32) в hu317-4B6_Vh;
ж) H-CDR2 последовательность VIYAGGSTNYNPSLKS (SEQ ID NO: 60) в hu317-4B2_Vh и hu3174B5_Vh;
з) H-CDR2 последовательность VIWAGGSTNYNPSLKS (SEQ ID NO: 59) в hu317-1_Vh;
- 5 034666
и) L-CDR1 последовательность KASQSVSNDVA (SEQ ID NO: 11) в hu317-1_Vk;
к) H-CDR1 последовательность GYTFTNYGMN (SEQ ID NO: 37), являющаяся общей для гуманизированных mAb hu326 и mu326 в тяжелых цепях;
л) H-CDR3 последовательность ARDVMDY (SEQ ID NO: 39), являющаяся общей для гуманизированных mAb hu326 и mu326 в тяжелых цепях;
м) L-CDR1 последовательность RASESVDNYGYSFMH (SEQ ID NO: 40), являющаяся общей для гуманизированных mAb hu326 и mu326 в легких цепях;
н) L-CDR2 последовательность RASNLES (SEQ ID NO: 41), являющаяся общей для гуманизированных mAb hu326 и mu326 в легких цепях;
о) L-CDR3 последовательность QQSKEYPT (SEQ ID NO: 42), являющаяся общей для гуманизированных mAb hu326 и mu326 в легких цепях;
п) H-CDR2 последовательность WINNNNAEPTYAQDFRG (SEQ ID NO: 38) в hu326_4A3_Vh;
р) H-CDR2 последовательность WINNNNGEPTYAQGFRG (SEQ ID NO: 62) в Vh hu326_1 и других mAb hu317.
В другом аспекте изобретения предложены конкретные эпитопы связывания гуманизированных mAb против PD-1 на антигене и их функциональное применение. Шесть крайне важных аминокислотных остатков (АА) в PD-1, требуемых для связывания лиганда, были по отдельности мутированы, и мутантные белки и белки дикого типа PD-1 использовали для оценки эпитопов связывания. Остаток, чья мутация значительно ухудшала связывание антитела, считается ключевым или значимым эпитопом связывания. Значимые эпитопы связывания mAb hu317-4B5 и hu317-4B6 представляют собой K45 и I93 (нумерация АА на основе 2008 PNAS, 105:10483; что соответствует K58 и I106 в SEQ ID NO 2); и значимые эпитопы связывания mAb hu326-3B1 и hu317-4A3 представляют собой I93, L95 и Р97 (нумерация АА на основе 2008 PNAS, 105:10483; что соответствует I106, L108 и Р110 в SEQ ID NO: 2).
В другом аспекте изобретения предложены композиции, содержащие последовательности константных областей рекомбинантных вариантов IgG4 человека, которые могут быть связаны с вариабельными областями заявленных антител, включая гуманизированные mAb против PD-1, которые демонстрировали предпочтительные эффекторные функции и физико-химические свойства. Последовательности выглядят следующим образом.
Последовательность константной области IgG4mt10 (SEQ ID NO: 88):
а) референсная последовательность IgG4mt1 (SEQ ID NO: 83);
б) референсная последовательность IgG4mt2 (SEQ ID NO: 84);
в) референсная последовательность IgG4mt6 (SEQ ID NO: 85);
г) референсная последовательность IgG4mt8 (SEQ ID NO: 86);
д) референсная последовательность IgG4mt9 (SEQ ID NO: 87).
В другом воплощении изобретения предложены способы анализа функций антитела против PD-1 посредством плазмиды, экспрессирующей рекомбинантный слитый белок, OS8, с созданием стабильных линий клеток, HEK293/OS8/PD-L1 или HEK293/OS8/PD-L2, которая совместно экспрессирует OS8 (молекула, активирующая Т-клетки) и лиганд PD-1. Линии клеток использовали для активации Т-клеток и МКПК посредством совместной культивации для оценки функциональности mAb против PD-1 (см. примеры 3 и 4). В качестве альтернативы другую плазмиду, экспрессирующую рекомбинантный слитый белок, P3Z, использовали для создания стабильной линии клеток, HuT78/P3Z, в которой P3Z функционирует в качестве молекулярного сенсора и медиатора трансдукции сигнала. Когда P3Z активируется лигандом PD-1, он будет передавать внутриклеточный сигнал для активации высвобождения IL-2 в клетках HuT78. Эти системы можно использовать для оценки ингибирующего действия mAb против PD-1 (см. пример 3).
В одном аспекте изобретения предложены композиции, содержащие следующие аминокислотные последовательности рекомбинантных слитых белков:
а) белковая последовательность OS8 (SEQ ID NO: 89);
б) белковая последовательность P3Z (SEQ ID NO: 90).
В другом аспекте изобретения предложены способы создания стабильных линий клеток, которые экспрессируют рекомбинантные слитые белки, описанные здесь, и способы применения системы для количественного анализа функциональных активностей mAb против PD-1.
В другом воплощении изобретения предложены полинуклеотиды, кодирующие заявленные белки. Полинуклеотиды могут быть функционально связаны с гетерологичной, регулирующей транскрипцию последовательностью для экспрессии и могут быть включены в векторы, клетки и т.д.
В другом воплощении изобретения предложены мышиные антитела против PD-1 и гуманизированные антитела против PD-1, включая hu317-4B6, hu317-4B5, hu317-4B2 и т.д., и hu326-4A3, hu326-3B1, hu326-3G1 и т.д., выполняющие функции подавления PD-1 опосредованной трансдукции сигнала и активации клеток иммунной системы, которые запускают каскад иммунных ответов, включая выделение цитокинов и цитотоксичность в отношении клеток-мишеней, таких как раковые клетки, и такое функциональное применение данных антител.
В одном аспекте изобретения предложены гуманизированные антитела против PD-1, которые акти
- 6 034666 вируют несколько типов клеток иммунной системы, которые экспрессируют PD-1, включая Т-клетки, NK-клетки и МКПК, чьи функции заключаются в усилении сигналов иммунного ответа, в мобилизации иммунной системы и в действии в качестве иммунных эффекторных клеток для устранения раковых клеток и вирусных инфекций, и такое функциональное применение данных антител.
В другом аспекте гуманизированные mAb против PD-1 используют в качестве терапевтических агентов для лечения заболеваний человека, которые участвуют в подавлении клеток иммунной системы посредством PD-1-опосредованной внутриклеточной сигнализации, приводя к развитию заболевания, в частности раковых заболеваний и вирусных инфекций.
Антитела по изобретению являются полезными в лечении рака и вирусных заболеваний, при которых ненадлежащая и пагубно влияющая экспрессия человеческого PD-1 является компонентом этиологии или патологии. Следовательно, согласно изобретению предложены способы лечения рака или ингибирования развития опухоли у нуждающегося в этом субъекта заявленным белком против PD-1. Согласно изобретению дополнительно предложено применение заявленных полинуклеотидов для изготовления лекарственного средства для лечения рака или ингибирования развития опухоли у субъекта.
Изобретение включает все комбинации изложенных конкретных воплощений. Другие воплощения и полный объем применимости изобретения станут очевидными из подробного описания, приведенного ниже в данном документе. Однако следует понимать, что подробное описание и конкретные примеры, несмотря на то, что показывают предпочтительные воплощения изобретения, даны исключительно в качестве иллюстрации, так как разные изменения и модификации в пределах сущности и объема изобретения станут очевидными специалистам в данной области из данного подробного описания. Все публикации, патенты и патентные заявки, приведенные в данном документе, включая ссылки в них, во всех отношениях включены в данный документ во всей полноте посредством ссылки.
Примеры
Пример 1. Создание моноклонального антитела против PD-1.
Моноклональные антитела против PD-1 (mAb) создавали на основе традиционной гибридомной технологии слияния (Kohler and Milstein 1976 Eur. J. Immunol. 6:511-519; de St Groth and Sheidegger 1980, J. Immunol. Methods 35:1-21; Mechetner 2007 Methods Mol. Biol. 378:1-13) с незначительными модификациями. MAb с высокой активностью связывания в твердофазном иммуносорбентном анализе (ELISA) и анализе на основе сортировки клеток с возбуждением флуоресценции (FACS) отбирали для дальнейшей характеристики.
Рекомбинантный белок PD-1 для анализов иммунизации и связывания.
Экспрессионную плазмиду, содержащую кДНК полноразмерного PD-1 человека, получали от Origene (кат. № SC117011, учетный № NCBI: NM_005018.1, Пекин, Китай). Внеклеточный домен, состоящий из аминокислоты (АА) 1-168 PD-1 (SEQ NO: 1, SEQ NO: 2), амплифицировали посредством ПЦР и субклонировали в экспрессионный вектор на основе pcDNA3.1 (Invitrogen, Карлсбад, штат Калифорния, США) с С-концом, слитым либо с His6 меткой, либо с yFc доменом тяжелой цепи человеческого IgG4, что приводило к получению двух экспрессионных плазмид с рекомбинантным слитым белком, PD-1EC/His и PD-1-EC/Fc (сокращенно PD-1/His и PD-1/Fc). Схематичное представление белков иммуноген/антиген показано на фиг. 1. Для получения рекомбинантных слитых белков клетки 293-F временно трансфицировали плазмидами PD-1/His и PD-1/Fc в 1-3 л среды (Invitrogen) и культивировали в течение 5-7 суток в CO2-инкубаторе, оснащенном ротационным шейкером. Супернатант, содержащий рекомбинантный белок, собирали и очищали посредством центрифугирования при 15000 g в течение 30 мин. PD1/His очищали методом аффинной хроматографии с использованием иммобилизованных металлов, используя Ni-Sepharose Fast Flow (кат. № 17531801, GE Lifesciences, Шанхай, Китай) с последующей эксклюзионной хроматографией с использованием колонки HiLoad 16/60 Superdex 200 (кат. № 17106901, GE Lifesciences, Шанхай, Китай). PD-1/Fc очищали, используя колонку Protein G Sepharose Fast Flow (кат. № 17061805, GE Lifesciences). Оба белка PD-1/His и PD-1/Fc диализировали против фосфатно-солевого буферного раствора (PBS) и хранили в морозильной камере при -80°C в маленьких аликвотах.
кДНК, кодирующую человеческий PD-L1, химически синтезировали Genescript (Нанкин, Китай) на основе опубликованной последовательности (учетный № NCBI NM_014143). Экспрессионную плазмиду PD-L2 приобретали у Origene (кат. № SC108873, учетный № NCBI NM_025239.2, Пекин, Китай). Обе кДНК клонировали в pcDNA3.1/гигромицин (кат. № V870-20, Invitrogen) и pcDNA3.1/V5-His (кат. № V810-20, Invitrogen) соответственно.
Стабильная линия экспрессирующих клеток.
Стабильные линии клеток, экспрессирующие человеческий PD-1, PD-L1 или PD-L2, закладывали посредством трансфекции HUT78 (АТСС, Manassas, VA, США) и HEK293 (АТСС) плазмидами pcDNA3.1, содержащими PD-1, PD-L1 и PD-L2 соответственно, с последующей селекцией с использованием среды, содержащей 200 мкг гигромицина (кат. № 10687-010, Invitrogen) или 1 мг G418 (Sigma) на 1 мл. Единичные клоны выделяли традиционным способом, либо методом предельных разведений, либо отбором единичных колоний с поверхности культуры лунки. Скрининг всех клонов проводили посредством Вестерн-блоттинга и анализа FACS с использованием антител против PD-1, PD-L1 и PD-L2 (кат. № 12-9969, 17-5983, 12-5888, eBioscience, Сан-Диего, США), соответственно, и клоны с наивысшим уров
- 7 034666 нем экспрессии отбирали для анализа связывания FACS для скрининга моноклональных антител гибридомы или использовали в функциональных анализах.
Иммунизация, гибридомное слияние и клонирование.
Мышей Balb/c возраста восемь-двенадцать недель (от BEIJING HFK BIOCSIENCE CO., LTD, Пекин, Китай) подкожно иммунизировали 100 мкл адъюванта (кат. № KX0210041, KangBiQuan, Пекин, Китай), содержащего 5 мкг PD-1/Fc. Иммунизацию проводили двумя инъекциями приведенного выше иммуногена с интервалом в три недели. Спустя две недели после 2 иммунизации сыворотки мышей оценивали в отношении связывания PD-1 посредством FACS (следующие разделы). Отбирали мышей с высокими титрами антител против PD-1 в сыворотках и внутрибрюшинно проводили повторную иммунизацию 50 мкг PD-1/Fc в отсутствии какого-либо адьюванта. Спустя трое суток после повторной иммунизации, выделяли спленоциты и сливали с линией клеток мышиной миеломы, клетки SP2/0 (АТСС), используя стандартные методики (Gefter, M.L. et al., 1977 Somat Cell Genet, 3:231-236).
Оценка активности PD-1-связывания антител посредством ELISA и FACS.
Сначала проводили скрининг супернатантов гибридомных клонов посредством твердофазного иммуносорбентного анализа (ELISA), как описано в Flanagan, M.L. et al. 2007 Methods in Molecular Biology 378:33-52 с некоторыми модификациями. Кратко, осуществляли покрытие 50-200 нг белка PD-1/His или PD-1/Fc в 50 мкл фосфатно-солевого буферного раствора (PBS) в 96-луночном планшете (Shenzhen JinCanHua Industry Co., Ltd, Shenzhen, Китай) в расчете на лунку. Антитело против мышиного IgG, связанное с HRP (кат. № 7076S, Cell Signaling Technology, США и Шанхай, Китай), и хемилюминесцентный реагент (кат. № РА107-01, TIANGEN, Китай) использовали для поиска и обнаружения сигнала ELISA, который считывали посредством планшет-ридера (PHREAstar FS, BMG LABTECH, Германия) при длине волны 450 нм. ELISA-позитивные клоны-продуценты антител далее проверяли посредством сортировки клеток с возбуждением флуоресценции (FACS), используя традиционный способ. Стабильные клеточные линии с экспрессией PD-1, HuT78/PD-1 (105 клеток/лунка), описанные выше, окрашивали супернатантами гибридом, продуцирующих антитела против PD-1, в 96-луночных планшетах с V-образным дном (кат. № 3897, Corning, США и Шанхай, Китай). Для блокирования человеческих Fc рецепторов клетки предварительно инкубировали с человеческим IgG (20 мкг/мл) (кат. № Н11296, LifeHolder, США и Шанхай, Китай). Антитела против PD-1 обнаруживали посредством Dylight™ 649-меченного козьего антитела против мышиного IgG (кат. № 405312, Biolegend, Сан-Диего, США), и клеточную флуоресценцию отслеживали, используя проточный цитометр (Guava easyCyte 8HT, Merck-Millipore, США и Шанхай, Китай).
Кондиционированные среды гибридомных клеток, которые демонстрировали позитивный сигнал как в анализе ELISA, так и анализе FACS, подвергали функциональным анализам для идентификации антител с хорошей функциональной активностью в анализах, проводимых на клетках иммунной системы человека (в данном документе). Далее антитела с положительной функциональной активностью субклонировали и характеризовали.
Субклонирование и адаптация к среде без сыворотки или с низким ее содержанием.
Положительные гибридомные клоны от первичного скрининга посредством ELISA, FACS и функциональных анализов субклонировали традиционным методом предельных разведений. Каждый из положительных клонов осаждали в 96-луночном планшете, культивировали в среде RPMI1640 (кат. № SH30809.01B, Hyclone, Шанхай, Китай) с 10% фетальной телячьей сывороткой (FBS, кат. № SH30084.03, Hyclone, Пекин, Китай) в CO2-инкубаторе. Три субклона из каждого планшета с предельным разведением отбирали и описывали посредством FACS и функциональных анализов. Субклоны, отобранные посредством функциональных анализов, определяли как моноклональное антитело. Лучшие субклоны адаптировали для роста в среде CDM4MAb (кат. № SH30801.02, Hyclone) с 1-3% FBS.
Экспрессия и очистка моноклинальных антител.
Либо клетки гибридомы, продуцирующие мышиные моноклональные антитела, либо 293-F клетки, трансфицированные плазмидами с рекомбинантными антителами (кат. № R79007, Invitrogen), культивировали в среде CDM4MAb (кат. № SH30801.02, Hyclone) или экспрессионной среде Freestyle293 (кат. № 12338018, Invitrogen), соответственно, в СО2-инкубаторе при 37°C в течение 5-7 суток. Кондиционированную среду собирали посредством центрифугирования при 10000 g в течение 30 мин с удалением всех клеток и остатков разрушенных клеток и фильтровали через 0,22 мкм мембрану перед очисткой. Мышиные или рекомбинантные антитела наносили и связывали с колонкой белка А (кат. № 17127901, GE Life Sciences), следуя руководству от производителя, промывали PBS, элюировали в буфере, содержащем 20 мМ цитрат, 150 мМ NaCl, pH 3,5. Элюированные вещества нейтрализовали 1М Tris (трис(гидроксиметил)аминометан) рН 8,0, обычно они содержали антитела с уровнем чистоты выше 90%. Антитела, аффинно очищенные с помощью белка А, либо диализировали против PBS, либо дополнительно очищали, используя колонку HiLoad 16/60 Superdex200 (кат. № 17531801, GE Life Sciences) для удаления агрегатов. Концентрации белка определяли путем измерения поглощения при 280 нм или методом Брэдфорда (кат. № 1856210, Thermo Scientific, Rockford, IL, США), используя бычий IgG определенной концентрации (кат. № 23212, Thermo Scientific) в качестве стандартов. Очищенные антитела хранили в аликвотах в морозильной камере при -80°C.
- 8 034666
Пример 2. Сравнение активностей связывания у антител против PD-1.
Посредством скрининга тысяч гибридомных клонов авторы изобретения идентифицировали некоторое количество самых лучших моноклональных антител (mAb), которые связываются с человеческим PD-1 с высокой специфичностью и силой. Как показано в анализе ELISA (фиг. 2), у трех самых лучших антител добивались такой силы и специфичности связывания. Результаты FACS анализа демонстрировали, что отобранные моноклональные антитела связываются с нативными белками PD-1, экспрессирующимися на поверхности клетки. Мышиные mAb317 (mu317), mu326 и mu150 демонстрировали зависимую от концентрации активность связывания, и их ЕС50 связывания (эффективная концентрация при 50% активности) была значительно ниже, чем EC50 контрольного mu55 (фиг. 3).
Оценка аффинности связывания mAb с помощью поверхностного плазмонного резонанса (SPR).
MAb с высокими активностями связывания в ELISA и FACS, а также с сильными функциональными активностями в анализах на клетках (в данном документе), исследовали в отношении их кинетических констант связывания в реакциях связывания в реальном времени. Мышиные mAb против PD-1 очищали от супернатантов гибридомы, используя колонку Protein A Flow (кат. № 17531801, GE Life Sciences) с последующей эксклюзионной хроматографией, используя колонку HiLoad 16/60 Superdex200 (кат. № 17106901, GE Life Sciences). Очищенные антитела против PD-1 концентрировали до 0,5-1 мг/мл в PBS и хранили в аликвотах в морозильной камере при -80°C.
Для определения аффинностей связывания mAb против PD-1 измерения SPR проводили в буфере HBS-N (10 мМ HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазин этансульфоновая кислота) рН 7,4, 0,15М NaCl, 3 мМ EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота), 0,005 об./об.% поверхностно-активное вещество Р20, GE Healthcare), используя прибор BIAcore™ T-200 (GE Life Sciences). Биосенсорный чип СМ5 против мышиного Fc (GE Healthcare) создавали, используя стандартный протокол связывания первичного амина. MAb против PD-1 при 0,3 мкг/мл захватывали на поверхности против мышиного Fc в течение 1 мин при 10 мкл/мин. PD-1/Fc в серийных разведениях от 3,3 до 120 нМ инъецировали по связанной с антителом поверхности в течение 3 мин при 30 мкл/мин с последующей 10 мин фазой диссоциации. Константы скорости ассоциации (Ka или kon) и константы скорости диссоциации (Kd или koff) рассчитывали, используя однозначную модель связывания Ленгмюра (BIA Evaluation Software, GE Life Sciences). Равновесную константу диссоциации (KD) рассчитывали в виде отношения koff/kon.
Как показано в табл. 1, как mu326, так и mu517, близкий член семейства последовательностей, связанный с mu317, имеют субнаномолярную KD, составляющую 0,324 нМ и 0,289 нМ соответственно, которая значительно лучше, чем KD mu134. Константа скорости Kon была схожей у трех mAb, перечисленных в табл. 1, при этом константа скорости Koff значительно различалась, причем у mu134 наблюдали гораздо более высокую скорость диссоциации.
Таблица 1
Константа связывания определенных лучших антител
mAb Kon (Μ’1, c1) Koff (c) Kd(M)
mu326 2,4 x 10b 7,79 x 10’b 3,24 x 10’w
mu517 1,96 x10b 5,66 x 10’b 2,89 x 10’w
mu134 1,1 x 105 3,69 x 10’4 3,35 x 10’9
Определение аффинности Fab (антигенсвязывающий фрагмент) против PD-1 посредством SPR.
MAb против PD-1 превращали в Fab версию посредством ПЦР со слиянием вариабельных областей тяжелых и легких цепей с N-концом человеческого IgG2-CH1 и константной областью κ-цепи соответственно, и субклонировали в вектор pcDNA3.1 (Invitrogen). Оба экспрессионных вектора совместно экспрессировали в клетках 293-F, используя протокол временной трансфекции, подобно временной экспрессии полноразмерных антител. Кратко, κ-цепь Fab амплифицировали с помощью ПЦР и субклонировали в экспрессионный вектор на основе pcDNA3.1 (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США). В отдельной плазмиде вариабельную область тяжелой цепи (VH) вместе с СН1 кодирующей последовательностью из человеческого IgG2 сливали с С-концом c-Myc-His8 метки посредством ПЦР с перекрывающимися праймерами и затем субклонировали в экспрессионный вектор. В тяжелую цепь IgG2 вводили мутации C232S и C233S (нумерация остатков по Kabat, Kabat et al. Sequence of proteins of immunologic interest, 5th ed. Bethesda, MD, NIH 1991) для предотвращения замены дисульфидной связи и стабилизации человеческого IgG2 в конформации IgG2-A (Lightle et al. 2010 Protein Sci 19(4): 753-762). Обе конструкции содержали сигнальный пептид, расположенный выше зрелых последовательностей Fab. Секретируемой экспрессии Fab достигали посредством совместной трансфекции 293-F клеток описанными выше 2 плазмидами и супернатанты клеточных культур собирали через 6-7 суток после трансфекции. His8-меченные Fab очищали от супернатантов клеточной культуры, используя колонку Ni-sepharose Fast Flow (кат. № 17531801, GE Life Sciences) с последующей эксклюзионной хроматографией с использованием колонки HiLoad 16/60 Superdex200 (кат. № 17106901, GE Life Sciences). Очищенные Fab концентрировали до 0,5-5 мг/мл в PBS и хранили в аликвотах в морозильной камере при -80°C.
Для определений аффинности Fab против PD-1 использовали анализы SPR с прибором BIAcore™ T
- 9 034666
200 (GE Life Sciences). Кратко, PD-1/His человека или PD-1/His яванского макака соединяли с активированными биосенсорными чипами СМ5 (кат. № BR100530, GE Life Sciences) с достижением приблизительно 100-200 единиц ответа (RU) с последующим блокированием непрореагировавших групп 1М этаноламином. Образцы Fab возрастающей концентрации от 0,12 до 90 нМ инъецировали в SPR подвижном буфере (10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 0,05% Tween 20, рН 7,4) при 30 мкл/мин и ответы на PD-1/His человека или PD-1/His обезьяны в виде связывания рассчитывали путем вычитания RU из холостой проточной ячейки. Константы скорости ассоциации (kon) и константы скорости диссоциации (koff) рассчитывали, используя однозначную модель связывания Ленгмюра (BIA Evaluation Software, GE Life Sciences). Равновесную константу диссоциации (Kd) рассчитывали в виде отношения koff/kon.
SPR-определенные аффинности связывания Fab против PD-1 перечислены в табл. 18. Каждый Fab против PD-1 связывался с PD-1 человека с высокой аффинностью (Kd = 0,15-1 нМ). Все Fab, за исключением 326-3G1, связывались с немного более низкой, но сопоставимой (в 5-кратных пределах в отношении Kd) аффинностью с PD-1 яванского макака.
Пример 3. Функциональная активность антител против PD-1 в человеческих Т-клетках.
Создание стабильных линий клеток.
Пакующую ретровирусную линию клеток РТ67, линии человеческих Т-клеток HuT78 и HEK293 получали из American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD). Сублинию HuT78/PD-1 HuT78, которая экспрессирует PD-1, создавали посредством ретровирусной трансдукции с использованием вектора pFB-neo (Strategene/Agilent Tech, Santa Clara, CA), содержащего ген PD-1, согласно протоколу, описанному ранее (Zhang et al. 2005 Blood 106: 1544-1551). Активатор Т-клеток, заякоренное в мембране химерное Ab (OS8), конструировали посредством слияния одноцепочечного вариабельного фрагмента (scFv) mAb OKT3 против человеческого CD3 (Kipriyanov et al. 1997, PEDS 10:445-453) с С-концевым доменом (113-220) мышиного CD8a (учетный № NCBI: NP_001074579.1), который включает шарнирный, трансмембранный и цитоплазматический домены. Тем самым, scFv против CD3 заякоривается на поверхности клетки как активатор Т-клеток. Человеческий PD-L1, PD-L2 и кДНК OS8 субклонировали в вектор pcDNA3.1. Стабильные линии клеток линии HEK293/OS8/PD-L1, Hep3B/OS8/PD-L1 и HEK293/OS8/PDL2, которые совместно экспрессируют как кДНК OS8, так и PD-L1 или PD-L2, создавали посредством совместной трансфекции клеток HEK293 и Hep3B (АТСС) парными плазмидами с последующей селекцией с гигромицином или G418 в течение 10-14 суток. Линии клеток затем клонировали методом предельных разведении, как описано ранее (Fuller SA, et al. Curr Protoc Mol Biol. Chapter 11 :Unit11.8., 2001). Химерный рецептор PD-1, называемый P3Z, конструировали посредством слияния внеклеточного и трансмембранного доменов человеческого PD-1 с цитоплазматическим доменом цепи CD3Z человека (учетный № NCBI NP_932170.1). PSZ-кодирующую последовательность кДНК клонировали в pFB-neo и доставляли в клетки HuT78 посредством ретровирусной трансдукции с получением клеток HuT78/P3Z.
Определение функций антитела против PD-1 по высвобождению IL-2 в клетках HuT78/PD-1.
Для определения того, могут ли антитела против PD-1 блокировать взаимодействие PD-L1индуцированной PD-1 сигнализации, клетки HuT78/PD-1 (1,5х104 клеток на лунку в 96-луночном планшете) предварительно инкубировали с супернатантами гибридомы или антителами против PD-1 в течение 15 мин перед совместной культивацией с клетками HEK293/OS8/PD-L1 или HEK293/OS8/PD-L2 (4х 104 на лунку) в плоскодонном планшете с добавлением 200 мкл питательной среды RPMI1640 на лунку при 37°С. Спустя 16-18 ч собирали супернатанты совместной культуры. IL-2 анализировали посредством ELISA, используя человеческие IL-2 наборы для ELISA Ready-Set-Go! (кат. № 88-7025, eBiosciences, San Diego, CA). В данном анализе блокада PD-1 сигнализации антителами против PD-1 приводила к усиленной TCR сигнализации и продукции IL-2 (фиг. 4).
Как показано на фиг. 5 и в табл. 2, мышиное mAb против PD-1, mu317 и mu326, вызывало значительно более высокую функциональную активность, чем mu30, ингибируя PD-L1-индуцированную PD-1 сигнализацию, что приводит к повышенному уровню выделения IL-2. Оба имели более высокий уровень выделения IL-2 (верхняя кривая, табл. 2), 675 и 634 пг/мл соответственно, и оба имели более низкую EC50 (эффективная концентрация mAb при уровне 50% индукции выделения IL-2), чем антитело mu30.
- 10 034666
Таблица 2
Высвобождение IL-2, индуцированное mAb против PD-1 в клетках HuT78/PD-1, совместно культивируемых с клетками HEK293/OS8/PD-L1
Антитело Нижняя кривая (пг/мл) Верхняя кривая (пг/мл) ЕС50 (мкг/мл)
тиЗО 95 527 0,229
ти317 95 675 0,083
ти326 95 634 0,053
mlgG 95 Н.Д. (нет данных) н.д.
Нижняя кривая: среднее высвобождение IL-2, индуцированное mIgG при всех тестируемых концентрациях, см. фиг. 5.
Верхняя кривая: самый высокий уровень высвобождения IL-2 на основе вычисления регрессионным анализом посредством программного обеспечения Prizm, фиг. 5. Н.Д.: нет данных.
Взаимодействие клеток HuT78/PD-1 с mAb против PD-1 не только блокировало PD-L1индуцированную активацию Т-клеток, но также блокировало PD-L2-индуцированное высвобождение IL2. В табл. 3 представлены данные, показывающие, что mu317 и mu326 проявляли гораздо более высокую эффективность в активировании Т-клеток, как показано с помощью параметров (ЕС50) выделения IL-2, чем эффективность в активировании Т-клеток mu476.
Таблица 3 Высвобождение IL-2, индуцированное mAb против PD-1 в клетках HuT78/PD-1, совместно культивируемых с клетками HEK293/OS8/PD-L2
Антитело Нижняя кривая (пг/мл) Верхняя кривая (пг/мл) ЕС50 (мкг/мл)
476 180 599 0,183
317 192 563 0,032
326 218 635 0,038
Нижняя кривая: среднее высвобождение IL-2, индуцированное в более низкой хвостовой части сигмоидной кривой реакции.
Верхняя кривая: среднее высвобождение IL-2, индуцированное на пологом участке сигмоидной кривой реакции.
Определение функций антител против PD-1 по обратной сигнализации высвобождения IL-2 в клетках HuT78/P3Z.
В химерном рецепторе P3Z домен PD-1 сигнализации заменяли цитоплазматическим доменом CD3Z. Таком образом, P3Z содействует активации при взаимодействии с PD-L1, а не ингибированию, как в случае исходного рецептора PD-1. В данном анализе клетки HuT78/P3Z (3х104/лунка) предварительно инкубировали с супернатантами гибридомы или антителами против PD-1 в течение 15 мин перед совместным культивированием с клетками HEK293/PD-L1 или HEK293/PD-L2 (5х104/лунка) в 96-луночных плоскодонных планшетах (общий объем 200 мкл/лунка) при 37°С. Спустя 16-18 ч супернатанты собирали и выработку IL-2 анализировали ELISA, как описано выше.
Функциональную активность мышиных mAb против PD-1 дополнительно подтверждали посредством прямого считывания активации Т-клеток в анализе обратной сигнализации, описанном выше. Согласно результату, описанному выше, mu317 и mu326 обладали наилучшей функциональной активностью среди mAb, скрининг которых проводили авторы изобретения. Как показано в табл. 4 и 5, mu317 и mu326 были гораздо более эффективны, чем одно из mAb с низкой активностью, mu37, как с точки зрения IC50, так и максимального ингибирования.
Таблица 4
Ингибирование выделения IL-2 mAb против PD-1 в клетках HuT78/P3Z, совместно культивируемых с клетками HEK293/PD-L1
Антитело IC50 (мкг/мл) Макс, ингибирование, %
37 0,287 86,9
317 0,083 99,3
326 0,039 97,6
- 11 034666
Максимальное ингибирование рассчитывали в виде процента (%) ингибирования mAb против PD-1, которые добавляли в культуру до самого высокого уровня 10 мкг/мл.
Таблица 5 Ингибирование выделения IL-2 mAb против PD-1 в клетках HuT78/P3Z, совместно культивируемых с клетками HEK293/PD-L2
Антитело IC50 (мкг/мл) Макс, ингибирование, %
37 0,127 43,3
317 0,020 94,3
326 0,018 93,4
Максимальное ингибирование рассчитывали в виде процента (%) ингибирования mAb против PD-1, который добавляли в культуру до самого высокого уровня 10 мкг/мл.
Пример 4. Активация выделения IFN-γ mAb против PD-1 в первичных человеческих МКПК, совместно культивируемых с клетками HEK293/OS8/PD-L1.
Для проверки того, оказывают ли отобранные лучшие mAb против PD-1 действие также на первичные клетки иммунной системы человека, авторы изобретения анализировали функцию антител посредством использования свежевыделенных мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК), которые главным образом состояли из Т-клеток (50-70%), В-клеток и NK-клеток (15-30%) и моноцитов (210%). МКПК человека выделяли из здоровых доноров посредством центрифугирования в градиенте плотности, используя фиколл-среду для фракционирования лимфоцитов (Histopaque-1077; Sigma-Aldrich, МО) согласно инструкциям производителя. При всем сборе крови человека придерживались внутренней процедуры Beigene. Затем МКПК стимулировали mAb OKT3 против CD3 (40 нг/мл) (кат. № 16-0037, eBioscience, CA) в течение 3 суток перед анализом. Анализ FACS (пример 1) показал, что уровень экспрессии PD-1 на активированных МКПК (главным образом Т-клетки) повышался до изменяющейся, в зависимости от отдельно взятых доноров, степени. (табл. 6). Для определения ответа предварительно активированных Т-клеток на PD-1-лиганд-положительные опухолевые клетки при участии комплекса TCR/CD3, МКПК (1 х 104) совместно культивировали либо с клетками HEK293/OS8/PD-L1, либо с клетками HEK293/OS8/PD-L2 (3х104) в 96-луночных плоскодонных планшетах в течение 15-18 ч. Супернатанты, не содержащие клеток, анализировали в отношении уровня IFN-γ посредством ELISA, используя наборы для ELISA Ready-Set-Go (кат. № 88-7316, eBiosciences), который является наиболее значимым показателем активации Т-клеток, а также активации других клеток иммунной системы (Thakur A. et al. 2012 Vaccine, 30:4907-4920).
Таблица 6
МКПК и обработка Процентное соотношение PD-1 положительно окрашенных клеток в сравнении с общим показателем исследованных МКПК
Донор-3 Донор-4
МКПК, не стимулированные / окрашенные АЬ против PD-1 12,0% 3,2%
МКПК, стимулированные / окрашенные АЬ против PD-1 40,0% 38,1%
МКПК, не стимулированные / окрашенные контрольным АЬ < 0,5% < 0,5%
МКПК, стимулированные / окрашенные контрольным АЬ < 0,5% < 0,5%
Стимуляция: свежевыделенные МКПК культивировали в течение 3 суток в присутствии антитела против CD3, OKT3, и IL-2.
Без стимуляции: свежие МКПК, подверженные окрашиванию антителами и анализу FACS.
На фиг. 6 показано, что присутствие mAb mu317 и mu326 в совместной культуре предварительно активированных МКПК и клеток HEK293/OS8/PD-L1 приводило к повышению аккумуляции IFN-γ дозозависимым образом. Несмотря на то, что исходный уровень IFN-γ с контрольной обработкой мышиным IgG различный у разных доноров, увеличение выделения IFN-γ в МКПК, обработанных mu317 или mu326, является статистически значимым в интервале от 0,1 до 10 мкг/мл обработки антителами. По сравнению с соответствующим уровнем mIgG-обработанных МКПК выделение IFN-γ, индуцированное
- 12 034666 mu317 и mu326 в интервале уровней концентраций от 0,1 до 10 мкг/мл, увеличивалось в 2,5-3,2 раза в
МКПК от донора-19 и увеличивалось в 1,4-2,3 раза в МКПК донора-20 соответственно.
Пример 5. Активация NK-клеток человека mAb против PD1.
Стабильные линии клеток для функционального анализа в NK-клетках.
Первичные NK-клетки человека, как сообщалось ранее, экспрессировали белок PD-1 в ответ на обработку IL-2, и ингибирование PD-1-опосредованной сигнализации усиливало цитотоксичность NKклеток (2010 Blood, 116: 2286). Для количественного анализа функционального действия, оказываемого mAb против PD-1 в NK-клетках, линию NK-клеток человека NK92MI (АТСС) и линию раковых клеток легкого SK-Mes-1 (АТСС) создавали для стабильной экспрессии человеческих PD-1 и PD-L1, соответственно, посредством ретровирусной трансдукции в соответствии с протоколами, описанными ранее (Zhang et al. 2005, Blood 106: 1544-1551, Zhang et al. 2006, Cancer Res, 66: 5927). Две данные стабильные линии клеток были названы NK92MI/PD-1 и SK-Mes-1/PD-L1.
Ab против PD-1 стимулируют образование и выделение IFN-γ в клетках NK92MI/PD-1.
Функциональную активность mAb против PD-1 на NK-клетках анализировали посредством количественного измерения образования и выделения IFN-γ в клетках NK92MI/PD-1, которые совместно культивировали с линией раковых клеток легкого SK-MES-1/PD-L1 в соотношении 1 к 2 в 96-луночном плоскодонном планшете с общим количеством 6х104 клеток на лунку. mAb против PD-1 добавляли к клеткам NK92MI/PD-1 за 15 мин до начала совместной культивации, затем клетки совместно культивировали всю ночь в CO2-инкубаторе. Супернатанты, не содержащие клеток, анализировали в отношении уровня IFN-γ посредством ELISA, как описано в примере 4.
Все mAb против PD-1 вызывали значительное увеличение образования IFN-γ от исходного уровня с низкой концентрацией обработки антителами до самого высокого уровня с высокой концентрацией обработки антителами. Два лучших антитела, mu317 и mu326, имели более низкую ЕС50, чем антитело сравнения 5С, указывая на то, что они оказывают более сильное активирующее действие на NK-клетки (табл. 7).
Таблица 7
IFN-γ, выделяемый в среду (пг/мл) клетками NK92MI/PD-1 в присутствии mAb против PD-1 и клеток SK-MES-1/PD-L1
Антитело Исходный уровень (пг/мл) Самый высокий уровень (пг/мл) ЕС5о (мкг/мл)
317 28 532 0,40
326 15 509 0,20
5С 20 535 1,17
Исходный уровень: среднее высвобождение IFN-γ, индуцированное в нижней хвостовой части сигмоидной кривой реакции.
Самый высокий уровень: среднее высвобождение IFN-γ, индуцированное на пологом участке сигмоидной кривой реакции.
Антитело против PD-1 усиливает уничтожение раковых клеток, опосредованное клетками NK92MI/PD-1.
Цитотоксичность клеток NK92MI/PD-1 в отношении клеток SK-MES-1/PD-L1 определяли с помощью анализа высвобождения лактатдегидрогеназы (LDH) с использованием набора CytoTox 96 NonRadioactive Cytotoxicity Assay (Promega, Madison, WI). Кратко, клетки NK92MI/PD-1 (105) предварительно инкубировали с mAb против PD-1 при конечных концентрациях в пределах интервала 0,004-10 мкг/мл в течение 15 мин и клетки SK-MES-1/PD-L1 (2х104) добавляли в культуру клеток иммунной системы в 96-луночном планшете с V-образным дном при отношении эффектора к опухолевой клетке (Е:Т) 5:1, затем совместно культивировали в течение 5 ч. Полный лизис опухолевых клеток определяли как максимальное уничтожение клеток, показание для каждого образца в анализе высвобождения LDH рассчитывали в виде процента от максимального уничтожения клеток. Уничтожение клеток (%) всех образцов нормировали по планшетам, используя 10% исходного уровня в качестве общего стандарта.
В анализе специфичной цитотоксичности, как установлено выше, отобранные mAbt против PD-1 приводили к чистому уничтожению опухолевых клеток (= самый высокий уровень - исходный уровень), находящемуся в интервале 19-20,2% при высокой концентрации вводимых mAb. Mu317 и mu326 имели более низкую ЕС50, чем mu336, указывая на более высокую эффективность запуска уничтожения опухолевых клеток, опосредованного клетками NK92MI/PD-1 (табл. 8).
- 13 034666
Таблица 8
Цитотоксичность клеток NK92MI/PD-1 в отношении опухолевых клеток, индуцированная mAb против PD-1
Антитело Исходный уровень (%) Самый высокий уровень(%) ЕС50 (мкг/мл)
317 10 29,06 0,50
326 10 30,19 0,37
336 10 29,72 1,52
Исходный уровень: процент опухолевых клеток, уничтоженных не вследствие воздействия mAb против PD-1, приведенный к 10% по планшетам.
Самый высокий уровень: средний процент опухоли, уничтоженной в присутствии самых высоких концентраций mAb, т.е. 3 и 10 мкг/мл.
Пример 6. Клонирование и анализы последовательностей mAb против PD-1.
Клоны мышиной гибридомы, выделяющие специфичное mAb, культивировали до получения плотности 3-10х106 клеток в 100 мм чашке для культуры ткани и клетки собирали посредством центрифугирования при 1500 об/мин на качающемся бакет-роторе. Тотальную клеточную РНК выделяли, используя набор Ultrapure RNA (кат. № CW0581, CWBIOTECH, Пекин, Китай), следуя протоколу производителя. РНК ресуспендпровали в дважды деионизированной воде, концентрацию измеряли с помощью NanoDrop (ThermoFisher, Шанхай, Китай).
ПЦР-праймеры, используемые для клонирования кДНК mAb, синтезировали в Invitrogen (Пекин, Китай) на основе последовательностей, приведенных ранее (Brocks et al. 2001 Mol. Med. 7:461-469). Первую нить кДНК синтезировали, используя обратную транскриптазу (кат. № АН301-02, Transgen Biotech, Пекин, Китай). ПЦР-амплификацию кДНК специфичных mAb проводили, используя набор реагентов для ПЦР (кат. № Ар221-12, TransGen Biotech, Пекин, Китай) и следуя протоколу производителя. ПЦРпродукт или непосредственно секвенировали с помощью сервисной службы (GeneWiz, Пекин, Китай), или субклонировали в вектор pCR (Invitrogen) с последующим секвенированием (GeneWiz).
Белковые последовательности мышиных mAb анализировали посредством выравнивания гомологии последовательностей. MAb группировали на основе гомологии последовательностей и результатов картирования эпитопов (пример 13). Гипервариабельные области (CDR) идентифицировали по Kabat (Wu, T.T. and Kabat, E.A., 1970 J. Exp. Med. 132: 211-250) и системе IMGT (ImMunoGeneTics) (Lefranc M.P. et al., 1999 Nucleic Acids Research, 27, 209-212) посредством аннотации последовательностей и посредством анализа последовательностей на основе интернет-данных (http://www.imgt.org/IMGT_vquest/share/textes/index.html и http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/). Как показано в табл. 9, CDR mu317 и mu326 очень отличаются по длине и идентичности последовательностей.
Таблица 9
CDR mu317 и mu326
МАЬ CDR1 SEQ ID NO CDR2 SEQ ID NO CDR3 SEQ ID NO
mu317, НС GFSLTSYGVH 11 VIWAGGSTNYNSALMS 12 ARAYGNYWYIDV 13
mu317, LC KASQSVSNDVA 14 YAFHRFT 15 HQAYSSPYT 16
mu326, НС GYTFTNYGMN 17 WINNNNGEPTYAEEFKG 18 ARDVMDY 19
mu326, LC RASESVDNYGYSFMH 20 RASNLES 21 QQSKEYPT 22
Примечание: CDR, выделенные жирным шрифтом, соответствуют системе Kabat; подчеркнутые CDR соответствуют системе IMGT.
Пример 7. Гуманизация мышиных mAb.
Моделирование 3D структуры антител.
Трехмерные структуры моделировали для вариабельных доменов mu317 и mu326 для идентификации каркасных остатков, которые могли бы быть важными для поддержания петлевых структур CDR. Потенциально важные каркасные остатки оставляли в виде исходных мышиных остатков в первом цикле гуманизации антител. Ранее разработанный способ структурного моделирования для антител (Morea et al. Methods 2000 20:267-279) переняли для моделирования 3D структуры mAb против PD-1 на основе известных канонических структур антител (Al-Lazikani et al. 1997 Journal of Molecular Biology 273:927-948). Кратко, последовательности каждого вариабельного домена (Vk и Vh) мышиного антитела исследовали в BLAST (базовый инструментарий поиска локальных белков) в базе данных PDB (Protein Data Bank, http://
- 14 034666 blast.ncbi.nlm.nih.gov/) для идентификации наиболее гомологичной последовательности антитела с известной структурой в высоком разрешении (разрешение меньше чем 2,5 А). Отобранные структурные матрицы для моделирования mu317 и mu326 (перечислены в табл. 10) имели одни и те же классы канонических петлевых структур в L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1 и H-CDR2 с целевыми антителами, предназначенными для моделирования. Если матрицы для Vk и Vh происходили от разных иммуноглобулинов, их упаковывали посредством подбора методом наименьших квадратов атомов основной цепи с образованием гибридной структуры остатков области взаимодействия Vk-Vh, которую использовали в качестве матриц для моделирования структурной гомологии с помощью швейцарской модельной программы (Kiefer et al. 2009 Nucleic Acids Research 37, D387-D392). Подбирали определенную конформацию боковых цепей, в то время как конформации основной цепи сохраняли. В сайтах, где исходная структура и смоделированная структура имели один и тот же остаток, конформацию боковых цепей сохраняли. В сайтах, где остатки различались, конформации боковых цепей моделировали на основе матричной структуры, библиотек ротамеров и особенностей упаковки. После гомологичного моделирования использовали программу PLOP (Jacobson et al. 2002 Journal of Physical Chemistry 106:11673-11680) для уточнения гомологичных моделей для минимизации энергии всех атомов и оптимизации области взаимодействия Vk и Vh. Данную стадию осуществляли для улучшения стереохимии, особенно в тех областях, где участки структур, происходящие от разных антител, соединялись вместе.
Таблица 10 Структурные матрицы, используемые в моделировании структур антител
Цепь антитела PDB код матричной структуры (PDB матрица для Н- CDR3) Идентичность последовательностей Сходство последовательностей
mu317Vk 3MXV 87% 92%
mu317Vh 3VFG 83% 91%
mu326 Vk 1EJ0 92% 94%
mu326 Vh 1NCA 88% 90%
317-1 Vk 4HJJ 90% 95%
317-1 Vh 3VFG (1AY1) 75% 87%
326-1 Vk 1EJ0 87% 92%
326-1 Vh 3T2N (3CXD) 84% 86%
Структуры также моделировали для CDR-привитых 317-1 и 326-1 для проведения дальнейших циклов конструирования антител с увеличением степеней гуманизации и/или усилением стабильностей антител. Отобранные матрицы структур также перечислены в табл. 10. Модели структур создавали похожим на приведенный выше способ образом, за исключением того, что возможные конформации H-CDR3 брали из матриц PDB 1AY1 для 317-1 и 3CXD для 326-1, соответственно, которые содержали H-CDR3 похожего размера и корпусной области. Минимизацию энергии для привитых H-CDR3 остатков осуществляли, используя PLOP.
Гуманизация.
Для гуманизации mAb против PD-1 авторы изобретения осуществляли поиск человеческих генов IgG зародышевой линии, гомологичных последовательностям кДНК вариабельных областей mu317 и mu326 посредством проведения исследования в BLAST базы данных генов иммуноглобулина человека на веб-сайтах IMGT (http://www.imgt.org/IMGT_vquest/share/textes/index.html) и NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/). В качестве матрицы для гуманизации отбирали человеческие IGVH и IGVk с высоким уровнем гомологии с mAb против PD-1.
Гуманизацию по существу проводили посредством CDR-прививания. В первом цикле гуманизации мутации мышиных до человеческих аминокислотных остатков в каркасных последовательностях вариабельных областей направляли посредством смоделированных 3D структур, и только мышиные аминокислотные остатки, при замене которых сохраняется общая структура антител и структура CDR петель, подвергали мутации до человеческой последовательности, как описано выше. Исходные версии гуманизированных mAb представляли собой hu317-1 (SEQ NO: 47-50) и hu326-1 (SEQ NO: 55-58), которые содержат тяжелую цепь с гуманизированной вариабельной областью тяжелой цепи (Vh), слитой с константной областью человеческого IgG2 (учетный № NCBI P01859), и легкую цепь с гуманизированной вариабельной областью легкой κ-цепи (Vk), слитой с С-областью каппа человеческого Ig (учетный № NCBI P01834). Подобным образом, авторы изобретения создавали химерные антитела из mu317 и mu326, которые состоят из мышиной VH, слитой с константной областью человеческого IgG2, и мышиной Vk, слитой с С-областью каппа человеческого Ig. Полноразмерные химерные антитела были названы ch317 и ch326 соответственно. Все рекомбинантные mAb экспрессировали и очищали, как описано в примере 1.
- 15 034666
FACS и функциональные анализы показали, что mAb hu317-1 почти что сохраняло такую же активность связывания и функциональную активность, как mu317 и ch317. Различие в EC50 в анализе FACS между mu317 и ch317 и hu317-1 можно объяснить тем фактом, что в FACS использовали два разных детекторных антитела, козье против мышиного IgG и козье против человеческого IgG. В двух данных функциональных анализах все три версии 317 подвергали более равной обработке, и результаты также похожи между собой (табл. 11).
В результате первоначального цикла гуманизации mu326 mAb hu326-1 сохраняло функциональный признак, схожий с исходными ch326 и mu326, хотя функциональная активность в FACS анализе связывания и в анализе высвобождения IL-2 с участием клеток HuT78/PD-1 возможно немного слабее, чем в случае ch326 (табл. 12).
Таблица 11 Сравнение mu317, ch317 и hu317-1 посредством FACS анализа и функциональных анализов
Анализ/Параметр mu317 ch317 hu317-1
FACS ЕС50 (мкг/мл) 0,11 0,36 0,46
Наивысшая MFI* 205 217 203
Анализ-1 ЕС5о (мкг/мл) 0,11 0,08 0,09
Самый высокий уровень (пг/мл) 346 294 386
Исходный уровень (пг/мл) 98 82 91
Анализ-2 1С50 (мкг/мл) 0,11 0,10 0,11
Макс. ингибирование 99,5% 99,0% 99,8%
*MFI: средняя интенсивность флуоресценции из FACS анализа.
Анализ-1: высвобождение IL-2, индуцированное mAb в клетках HuT78/PD-1, совместно культивируемых с клетками HEK293/OS8/PD-L1.
Анализ -2: высвобождение IL-2, индуцированное mAb в клетках HuT78/P3Z, совместно культивируемых с клетками HEK293/PD-L1.
Таблица 12
Сравнение mu326, ch326 и hu326-1 посредством FACS анализа и функциональных анализов
Анализ/ Параметр mu326 ch326 hu326-1
FACS ЕС50 (мкг/мл) 0,126 0,072 0,117
Наивысшая MFI 195 163 129
Анализ-1 ЕС50 (мкг/мл) 0,038 0,074 0,112
Самое высокий уровень (пг/мл) 1149 1057 1143
Исходный уровень (пг/мл) 242 250 283
Анализ-2 IC50 (мкг/мл) 0,14 0,12 0,10
Макс. ингибирование 96,9% 81,0% 84,4%
Анализ-1: высвобождение IL-2, индуцированное mAb в клетках HuT78/PD-1, совместно культивируемых с клетками HEK293/OS8/PD-L1.
Анализ-2: высвобождение IL-2, индуцированное mAb в клетках HuT78/P3Z совместно культивируемых с клетками HEK293/PD-L1.
На основе первого цикла гуманизации авторы изобретения дополнительно подвергали мутации другие мышиные аминокислотные остатки (АА) в каркасной области (FR) hu317-1_Vh и _Vk по отдельности для оценки влияния на функцию антител. Как показано в табл. 13, все семь отдельных мутаций в Vh и одна мутация в Vk hu317-1 обладают похожими функциональными активностями. Наблюдали лишь незначительные изменения при некоторых мутациях Vh, например hu317-2_K71V, со слегка более сла- 16 034666 бой ингибирующей функцией среди мутаций. Однако когда все мышиные аминокислотные остатки совместно подвергали мутации до человеческих (hu317-3A), функция становилась явно слабее, чем в случае остальных мутаций в FACS анализе и анализе высвобождения IL-2.
В первоначальном испытании, описанном выше, hu326-1 достигало значительного уровня гуманизации в FR, за исключением нескольких оставшихся мышиных АА остатков. Кроме того, оно имеет более слабую функцию, чем mu326. Вследствие этого, авторы изобретения создали больше отдельных мутаций, либо обратно в мышиные остатки, либо далее в человеческие остатки, для исследования вклада каждого отдельного АА остатка в функцию mAb326. В табл. 14 представлены все единичные мутации АА, сделанные на основе матрицы hu326-1_Vh (SEQ NO 56, SEQ ID NO: 57), и полученные по ним результаты функционального анализа. Большинство мутаций показало более высокую функциональную активность, чем в случае hu326-1, что соответствует исходному mAb mu326. Пара мутаций (Е46Х и F95Y) демонстрировали немного меньшую эффективность по EC50 или IC50, указывая на роль тех остатков в структуре и функции антитела.
Таблица 13 Сравнение функциональной активности Fab с мутациями гуманизации в каркасной области hu317-1
Fab и состав FACS, EC5q Высвобождение IL-2 в HuT78/P3Z
Vh Vk Макс, ингибирование, % ec50
hu317-1_Vh hu317-1_VK 0,19 98,78 0,30
hu317-2_L48l hu317-1_VK 0,14 98,51 0,37
hu317-2_L67V hu317-1_VK 0,15 98,57 0,30
hu317-2_K71V hu317-1_VK 0,18 96,55 0,48
hu317-2_N73T hu317-1_VK 0,15 98,29 0,31
hu317-2_S76N hu317-1_VK 0,13 98,56 0,28
hu317-2_V78F hu317-1_VK 0,18 98,03 0,38
hu317-2_M82L hu317-1_VK 0,13 98,47 0,27
hu317-1_Vh HU317- 2 G100Q 0,21 98,86 0,27
hu317-3A hu317-1_VK 0,32 79,66 0,35
Примечание: единицей для выражения EC50 является мкг/мл;
нумерация мутированных аминокислотных остатков является такой же, как в перечисленных последовательностях для hu317-1;
hu317-3A имеет всю последовательность каркасной области, подвергнутую мутации до человеческой.
- 17 034666
Таблица 14
Сравнение функциональной активности mAb с мутациями в каркасной области hu326-1
Антитело FACS, ec50 мкг/мл Высвобождение IL-2 в HuT78/P3Z Высвобождение IL-2 в HuT78/PD-1
Макс. ингибирование, % ICso, мкг/мл Самый высокий уровень, пг/мл ес50, мкг/мл
ch326 0,118 93,05 0,074 993 0,135
hu326-1 0,317 92,38 0,087 987 0,213
hu326-2 S9PB 0,145 96,04 0,075 1022 0,136
hu326-2 A16EB 0,155 96,33 0,078 1048 0,126
hu326-2 E46KB 0,132 95,25 0,079 1244 0,259
hu326-2 G63DB 0,139 96,44 0,064 1069 0,120
hu326-2 A76Vf 0,102 96,65 0,071 1002 0,112
hu326-2 S84NB 0,131 96,52 0,060 1015 0,126
hu326-2 S85NB 0,110 95,62 0,093 932 0,104
hu326-2 T88NB 0,098 95,85 0,102
hu326-2 F95Yf 0,097 95,62 0,166 1028 0,135
B обратная мутация до мышиной аминокислоты;
F прямая мутация до человеческой аминокислоты.
Все мутации получали в hu326-1_Vh (SEQ ID NO: 56), которые составляли пару hu326-1_Vk (SEQNO58).
Для исследования наилучшего возможного состава последовательностей Vh и Vk для mAb 317 и 326, который можно было бы использовать в качестве терапевтических средств у человека, авторы изобретения создали множество комбинаций мутаций (включая некоторые мутации в CDR последовательностях), принимая во внимание характеристики антител, такие как уровень гуманизации в FR, функциональные активности, физико-химические свойства, антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность (ADCC) и комплемент-зависимая цитотоксичность (CDC). Большинство мутаций считались неудовлетворяющими квалификационным требованиям. С помощью процесса конструирования были отобраны шесть гуманизированных, рекомбинантных mAb по причине их потенциальной терапевтической ценности: hu317-4B2 (SEQ ID NO: 43-44), hu317-4B5 (SEQ ID NO: 45-46), hu317-4B6 (SEQ ID NO: 23-26), hu326-3B1 (SEQ ID NO: 51-52), hu326-3G1 (SEQ ID NO: 53-54) и hu326-4A3 (SEQ ID NO: 27-30). CDR mAb сравнивали с CDR исходных мышиных антител, показанными в табл. 15 и 16.
Среди шести mAb, hu317-4B2, hu317-4B5 и hu317-4B6 тесно связаны друг с другом по последовательностям и очень похожи по своим функциональным активностям и силе. С другой стороны, hu3263B1, hu326-3G1 и hu326-4A3 довольно близки друг к другу по последовательностям и функциональным характеристикам (табл. 17-18). В пределах каждой из данных двух групп mAb они также обладали многими другими общими признаками помимо последовательностей и функции, такими как физикохимические свойства и эпитопы связывания (описанные в примере 10 и 11), хотя некоторые незначительные различия действительно существуют.
- 18 034666
Таблица 15
Сравнение CDR у разных версий mAb 317
mAb CDR1 SEQ ID NO CDR2 SEQ ID NO CDR3 SEQ ID NO
mu317, НС GFSLTSYGVH 11 VIWAGGSTNYNSALMS 12 ARAYGNYWYIDV 13
hu317-1, НС GFSLTSYGVH 11 VIWAGGSTNYNPSLKS 59 ARAYGNYWYIDV 13
hu317-4B2, НС GFSLTSYGVH 11 VIYAGGSTNYNPSLKS 60 ARAYGNYWYIDV 13
hu317-4B5, НС GFSLTSYGVH 11 VIYAGGSTNYNPSLKS 60 ARAYGNYWYIDV 13
hu317-4B6, НС GFSLTSYGVH 11 VIYADGSTNYNPSLKS 32 ARAYGNYWYIDV 13
mu317, LC KASQSVSNDVA 14 YAFHRFT 15 HQAYSSPYT 16
hu317-1, LC KASQSVSNDVA 14 YAFHRFT 15 HQAYSSPYT 16
hu317-4B2, LC KSSESVSNDVA 61 YAFHRFT 15 HQAYSSPYT 16
hu317-4B5, LC KSSESVSNDVA 61 YAFHRFT 15 HQAYSSPYT 16
hu317-4B6, LC KSSESVSNDVA 61 YAFHRFT 15 HQAYSSPYT 16
Примечание: подчеркнутые АА остатки, по сравнению с мышиной последовательностью, заменены на последовательности человеческих антител или для улучшения физикохимических свойств.
Таблица 16
Сравнение CDR у разных версий mAb 326
mAb CDR1 SEQ ID NO CDR2 SEQ ID NO CDR3 SEQ ID NO
mu326, HC GYTFTNYGM N 17 WINNNNGEPTYA EEFKG 18 ARDVM DY 19
hu326-1, HC GYTFTNYGM N 17 WINNNNGEPTYA QGFRG 62 ARDVM DY 19
hu326-3B1, HC GYTFTNYGM N 17 WINNNNGEPTYA QDFRG 62 ARDVM DY 19
hu326-3G1, HC GYTFTNYGM N 17 WINNNNGEPTYA QDFRG 62 ARDVM DY 19
hu326-4A3, HC GYTFTNYGM N 17 WINNNNAEPTYA QDFRG 38 ARDVM DY 19
mu326, LC RASESVDNY GYSFMH 20 RASNLES 21 QQSKE YPT 22
hu326-1, LC RASESVDNY GYSFMH 20 RASNLES 21 QQSKE YPT 22
hu326-3B1, LC RASESVDNY GYSFMH 20 RASNLES 21 QQSKE YPT 22
hu326-3G1, LC RASESVDNY GYSFMH 20 RASNLES 21 QQSKE YPT 22
hu326-4A3, LC RASESVDNY GYSFMH 20 RASNLES 21 QQSKE YPT 22
Примечание: подчеркнутые АА остатки, по сравнению с мышиной последовательностью, заменены на последовательности человеческих антител, или для улучшения физико-химических свойств.
- 19 034666
Таблица 17 Активности связывания гуманизированных mAb, анализируемые ELISA и FACS
mAb ELISA, EC5o мкг/мл FACS, EC50 мкг/мл
hu317-4B2 0,066 0,129*
hu317-4B5 0,057 0,115*
hu317-4B6 0,061 0,092*
hu326-3B1 0,092 0,165
hu326-3G1 0,088 0,190
hu326-4A3 0,091* 0,142*
* данные FACS, полученные посредством использования Fab версии антител без нормирования.
** данные исследования связывания и нормированные.
Таблица 18
Аффинность связывания Fab, анализируемая посредством SPR
Fab Kon (Μ’1, c1) Koff(c) Kd (M)
hu317-4B5 3,89 x 105 9,07 x 10’5 2,33 x 10’10
hu317-4B6 5,71 x 105 8,37 x 10'5 1,47x1 O'10
hu326-3B1 2,18x 105 1,90 x 10'4 8,70x1 O'10
hu326-3G1 2,00 x 105 2,01 x W4 1,00 x 10’9
Определение аффинности гуманизированных Fab против PD-1 посредством SPR.
MAb против PD-1 превращали в Fab версию посредством ПЦР со слиянием вариабельных областей тяжелых и легких цепей с N-концом человеческого IgG2-CH1 и константной областью κ-цепи, соответственно, и субклонировали в вектор pcDNA3.1 (Invitrogen). Оба экспрессионных вектора совместно экспрессировали в клетках 293-F, используя протокол временной трансфекции, подобно временной экспрессии полноразмерных антител. Кратко, κ-цепь Fab амплифицировали посредством ПЦР и субклонировали в экспрессионный вектор на основе pcDNA3.1 (Invitrogen, Carlsbad, CA, США). В отдельной плазмиде вариабельную область тяжелой цепи (VH) вместе с СН1 кодирующей последовательностью от человеческого IgG2 сливали с С-концевой c-Myc-His8 меткой посредством ПЦР с перекрывающимися праймерами и затем субклонировали в экспрессионный вектор. Мутации C232S и C233S (нумерация остатков по Kabat, Kabat et al. Sequence of proteins of immunologic interest, 5th ed Bethesda, MD, NIH 1991) вводили в тяжелую цепь IgG2 для предотвращения замены дисульфидной связи и стабилизации человеческого IgG2 в конформации IgG2-A (Lightle et al. 2010 Protein Sci 19(4): 753-762). Обе конструкции содержали сигнальный пептид, расположенный выше зрелых последовательностей Fab. Секретируемой экспрессии Fab достигали посредством совместной трансфекции клеток 293-F более чем 2 плазмидами, и супернатанты клеточной культуры собирали через 6-7 суток после трансфекции. His8-меченные Fab очищали от супернатантов клеточной культуры, используя колонку Ni-sepharose Fast Flow (кат. № 17531801, GE Life Sciences) с последующей эксклюзионной хроматографией, используя колонку HiLoad 16/60 Superdex200 (кат. № 17106901, GE Life Sciences). Очищенные Fab концентрировали до 0,5-5 мг/мл в PBS и хранили в аликвотах в морозильной камере при -80°С.
Для определения аффинности Fab против PD-1 использовали анализы SPR с прибором BIAcore™ T200 (GE Life Sciences). Кратко, PD-1/His человека или PD-1/His яванского макака соединяли с активированными биосенсорными чипами СМ5 (кат. № BR100530, GE Life Sciences) с достижением приблизительно 100-200 единиц ответа (RU) с последующим блокированием непрореагировавших групп 1М этаноламином. Образцы Fab с возрастающей концентрацией от 0,12 до 90 нМ инъецировали в подвижном буфере SPR (10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 0,05% Tween 20, pH 7,4) при 30 мкл/мин, и ответы на PD-1/His человека или PD-1/His обезьяны в виде связывания рассчитывали посредством вычитания RU из холостой проточной ячейки. Константы скорости ассоциации (kon) и константы скорости диссоциации (koff) рассчитывали, используя однозначную модель связывания Ленгмюра (BIA Evaluation Software, GE Life Sciences). Равновесную константу диссоциации (Kd) рассчитывали в виде отношения koff/kon.
Аффинности связывания Fab против PD-1, определенные SPR, перечислены в табл. 18. Каждый Fab против PD-1 связывался с PD-1 человека с высокой аффинностью (Kd = 0,15-1 нМ). Все Fab, за исключением 326-3G1, связывались с PD-1 яванского макака с немного более низкими, но сопоставимыми (в 5кратных пределах в отношении Kd) аффинностями.
Пример 8. Создание и экспрессия рекомбинантных mAb против PD-1 с модифицированной константной областью человеческого IgG4.
Так как PD-1 в основном экспрессируется в активированных Т-клетках, считается, что PD-1блокирующие антитела, связанные с встречающимся в природе типом группировок IgG-yFc, индуцируют
- 20 034666 yFc-опосредованные эффекторные функции, такие как ADCC и CDC, в разной степени, в зависимости от подклассов IgG, что приводит к элиминации активированных Т-клеток (Natsume A., et al., 2009 Drug Des Devel Ther. 3: 7-16). Во многих предыдущих исследованиях было показано, что подкласс антител человека IgG4 имеет умеренную ADCC и почти не обладает эффекторной функцией CDC (Moore G.L., et al. 2010 MAbs, 2:181-189). С другой стороны, было обнаружено, что встречающийся в природе IgG4 менее стабилен в стрессовых условиях, например в кислотном буфере, или в условиях возрастающей температуры (Angal, S. 1993 Mol. Immunol., 30:105-108; Dall'Acqua, W. et al., 1998 Biochemistry, 37:9266-9273; Aalberse et al. 2002 Immunol., 105:9-19). Для того чтобы уберечь PD-1+ Т-клетки от уничтожения и для улучшения физико-химических свойств антител против PD-1, гуманизированные mAb связывали с IgG4, сконструированным посредством комбинаций мутаций для получения пониженных или нулевых активностей связывания с FcyR или C1q, таким образом, ослабляя или устраняя эффекторные функции ADCC и CDC. Рассматривая физико-химические свойства антитела в качестве биологического лекарственного средства, одним из менее желательных, присущих IgG4 свойств является динамическое разделение его двух тяжелых цепей в растворе с образованием половины антитела, что приводит к биспецифичным антителам, созданным in vivo с помощью способа, называемого замена Fab-фрагмента (Van der Neut Kolfschoten M., et al. 2007 Science, 317:1554-157). Мутация серина до пролина в положении 228 (система нумерации EU) оказалась ингибирующей в отношении разделения тяжелых цепей IgG4 (Angal, S. 1993 Mol. Immunol., 30:105-108; Aalberse et al. 2002 Immunol., 105:9-19). Сообщалось, что некоторые из аминокислотных остатков в шарнире и yFc области оказывают влияние на взаимодействие антител с Fcy рецепторами (Chappel S.M., et al. 1991 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:9036-9040; Mukherjee, J. et al., 1995 FASEB J., 9:115-119; Armour, K.L. et al., 1999 Eur. J. Immunol., 29:2613-2624; Clynes, R.A. et al., 2000 Nature Medicine, 6:443-446; Arnold J.N., 2007 Annu Rev Immunol, 25:21-50). Кроме того, с некоторыми редко встречающимися изоформами IgG4 в человеческой популяции можно также добиться разных физикохимических свойств (Brusco, A. et al. 1998 Eur. J. Immunogenet, 25:349-55; Aalberse et al. 2002 Immunol., 105:9-19). Однако объединение всех мутаций и изоформ, ранее открытых в специфичном антителе, не гарантирует идеальную молекулу антитела, которая имеет все признаки терапевтического средства, такие как описано выше, что может быть результатом эффекта противоречия комбинированных мутаций и влияния вариабельной области на эффекторную функцию и физико-химические свойства антитела (Igawa Т. et al., 2010 Prot. Eng. Design. Select, 23:385-392; Perchiacca J.M. and Tessier P.M., 2012 Ann Rev Biomol Eng. 3:263-286).
Для создания mAb против PD-1 с самой низкой ADCC, CDC и нестабильностью авторы изобретения модифицировали шарнирную и yFc область человеческого IgG4 посредством введения ряда комбинаций мутаций, что привело к созданию IgG4mt1-IgG4mt12. Некоторые из модифицированных вариантов IgG4 были явно менее желательными, что отражают результаты анализа, проведенного авторами изобретения, несколько значимых вариантов IgG4 и модифицированных последовательностей перечислены в табл. 19. Оценка данных антител описана в данном документе.
Таблица 19
Модификации последовательностей вариантов IgG4
lgG4 и варианты Аминокислотные последовательности*
228 229 230 231 232 233 234 235 236 265 309 409
lgG4 S C P A P E F L G D L R
lgG4mt1 P C P A P E F L G D L R
lgG4mt2 P C P A P P V A G D L R
lgG4mt6 P C P A P P V A G A L R
lgG4mt8 P C P A P P V A G T L R
lgG4mt9 P C P A P P V A G A L К
lgG4mt10 P C P A P P V A G A V К
Нумерация аминокислот основана на системе EU. Замены выделены посредством подчеркивания
Пример 9. IgG4mt10 характеризуется отсутствием связывания с FcyR, имеет самую слабую ADCC и CDC эффекторную функцию.
Инициирование ADCC происходит, когда антитело связывается с целевым белком поверхности клетки с последующим лигированием с рецепторами Fcy (FcyR), экспрессируемыми на эффекторных клетках. Документально доказано, что человеческий IgG1 обладает значительно более высокой, чем IgG2 и IgG4, аффинностью связывания с FcyR, особенно с FcyR-I и FcyR-IIIA, что соотносилось с силой активирования IgG1 ADCC. Напоминая ADCC, CDC активируется, когда антитело поперечно связывается с мишенью поверхности клетки и белком C1q с последующей каскадной реакцией образования комплекса комплемента и лизисом клетки-мишени. По аналогии с ADCC и CDC, анализы связывания антитела с FcyR и C1q могут служить фундаментальным показателем ADCC и CDC. Вследствие этого авторы изобретения систематически оценивали связывание mAb со всеми основными FcyR.
- 21 034666
Связывание с FcyR.
Связывание различных мутантов IgG4 с FcyR определяли посредством проточной цитометрии. Кратко, создавали серию трансфектантов HEK293, экспрессирующих FcyR человека. Данные трансфектанты экспрессировали FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB или FcyRIIIA. Мульти-субъединичные FcyR (т.е. FcyRI и FcyRIIIA) совместно экспрессировались с FcRy. Полиморфные варианты (т.е. FcyRIIA H131 и R131, FcyRIIIA F158 и V158) были также включены. Вторичное антитело (антитело козы против F(ab)'2 человеческого IgG, конъюгированное с Alexa Fluor 488, Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA, США) использовали для выявления связывания mAb против PD-1 с модифицированными вариантами IgG4 (табл. 19) с клетками FcyR+ HEK293. Как ожидалось, mAb против PD-1 в формате IgG1 (hu317-1/IgG1 и hu3174B6/IgG1) хорошо связываются со всеми FcyR, включая FcyRI, FcyRIIA (H131 и R131 аллели), FcyRIIB и FcyRIIIA (V158 и F158 аллели) (табл. 20). Интересно, что, когда две разные версии гуманизированных mAb, hu317-1 и hu317-4B6 (с различиями как в Vh, так и Vk) создавали в одном и том же формате варианта IgG4, например либо в формате IgG4mt1, либо в формате IgG4mt6, их сила связывания (MFI) варьируется в интервале от двукратной до близко к 100-кратной (например, 455,2/115,7 = 3,9 раза; 13,6/1,0 = 13,6 раза; 434,6/4,9 = 88,7 раза и т.д., см. табл. 20). Это согласуется с результатами, полученными ранее, согласно которым вариабельные области антител действительно оказывают значительное влияние на связывание с FcR, вследствие этого, оказывая воздействие на эффекторную функцию, такую как ADCC (Igawa T. et al., 2010 Prot. Eng. Design Select, 23:385-392; Perchiacca J.M. and Tessier P.M., 2012 Ann Rev Biomol. Eng. 3:263-286).
Как показано в табл. 20, когда hu317-4B6 и hu326-4A3 были созданы в формате IgG4mt10, они обладали самой низкой активностью связывания с FcyR среди mAb против PD-1 и форматов вариантов IgG, перечисленных в таблице, а также многих других гуманизированных mAb и форматов IgG, протестированных в данном исследовании. Уникальность hu317-4B6 и hu326-4A3 формата IgG4mt10 в этом отношении не может быть распространена на такое же семейство гуманизированных mAb с в некоторой степени отдаленной гомологией последовательностей, например, hu317-1, как описано выше.
Таблица 20 Сила связывания (MFI*) mAb против PD-1 с FcyR, определенная с помощью FACS
mAb FcyRI FcyRIIA (H131) FcyRIIA (R131) FcyRIIB FcyRIIIA (F158) FcyRIIIA (V158)
hu317-1 /igGl 2152,9 168,7 139,6 442,4 99,7 277,2
hu317-4B6 /IgGl 2771,7 1,7 0,6 1,9 28,0 293,7
hu317-l /gG4mt1 455,2 21,3 21,9 434,6 0,6 20,7
hu317-4B6 /lgG4mt1 115,7 0,2 0,0 4,9 0 6,1
hu317-1 /lgG4mt6 13,6 1,0 0,8 1,8 0,9 1,1
hu317-4B6 /lgG4mt6 1,0 0 0 0 0 0
hu317-4B6 /lgG4mt10 0,4 0 0 0 0 0
hu326-4A3 /lgG4mt10 0,5 0 0 0 0 0
* MFI: средняя интенсивность флуоресценции из анализа FACS.
ADCC.
Классическая ADCC подразумевает активацию NK-клеток посредством антител, связывающихся с FcyRIIIA или CD16. Для подтверждения того, индуцируют ли гуманизированные mAb против PD-1 ADCC, клетки NK92MI/CD16V, которые были созданы из клеток NK92MI (АТСС) посредством совместной трансдукции экспрессионных плазмид, содержащих гены CD16 (V158 аллель) и FcRy, использовали в качестве эффекторных клеток, и PD-1-экспрессирующую линию Т-клеток, HuT78/PD-1, использовали в качестве клеток-мишеней. Клетки NK92MI/CD16V (4х104) совместно культивировали с равным количеством клеток HuT78/PD-1 в 96-луночных планшетах с V-образным дном в течение 5 ч. Цитотоксичность определяли посредством анализа высвобождения LDH, описанного в предыдущем разделе. Результаты подтвердили, что все hu317-4B2/IgG4mt6, hu317-4B6/IgG4mt6, hu317-4B6/IgG4mt10 и hu3264A3/IgG4mt10 имеют базовый уровень ADCC по сравнению с положительными контролями (фиг. 7).
- 22 034666
Незначительное различие в ADCC между теми 4 mAb можно объяснить экспериментальной ошибкой (см. планки погрешностей на фиг. 7).
CDC.
Человеческие антитела IgG4, в общем, не индуцируют какую-либо CDC по классическому пути. Будут ли mAb против PD-1 в формате IgG4mt10 запускать CDC оценивали, используя PD-1экспрессирующую линию Т-клеток, Hut78/PD-1, и свежую сыворотку человека от здоровых доноров. Лизис клеток в результате CDC определяли с помощью наборов для анализа Celltiter glo (Promega, Пекин, Китай). Кратко, клетки HuT78/PD-1 (2х104) инкубировали в RPMI1640, не содержащей сыворотку (Invitrogen), с Ab против PD-1 (10 мкг/мл) при 37°C в течение 15 мин перед добавлением сыворотки здорового человека (NHS) до конечной концентрации 15 или 50% в 96-луночных плоскодонных планшетах в общем объеме 120 мкл. После инкубации в течение ночи при 37°C клетки подвергали лизису и анализировали в отношении концентрации АТФ. Для тестирования того, могут ли гуманизированные mAb против PD-1 в IgG4mt10 уничтожать PD-1+ первичные Т-клетки в результате CDC, МКПК, выделенные из здоровых доноров, предварительно культивировали с Ab OKT3 против CD3 (40 нг/мл) в течение 3 суток перед совместным культивированием с Ab против PD-1 и NHS. Количество АТФ прямо пропорционально числу клеток, находящихся в культуре. Флуоресценцию считывали, используя 96-луночный флуориметр (PHERA Star FS, BMG LABTECH). Результаты выражены в относительных единицах флуоресценции (RFU), что пропорционально числу жизнеспособных клеток. CDC активность, выраженную в процентах, рассчитывали следующим образом: % CDC активность = [(RFU тест - RFU фон)/(RFU при полном лизисе клеток - RFU фон)] х 100. В общем, авторы изобретения не смогли выявить какую-либо ADCC, опосредованную mAb против PD-1 в формате IgG4mt10, которые связываются с активированными МКПК. В гиперчувствительных экспериментальных условиях, например, при использовании линии клеток с высоким уровнем экспрессии PD-1, высокой концентрации сыворотки и антител, авторы изобретения выявляли очень низкий уровень CDC в некоторых случаях, и не существует больших различий между разными версиями и mAb против PD-1, что указывает на то, что mAb против PD-1 в форматах вариантов IgG4 сохраняли низкий уровень CDC активности или ее отсутствие, как и обычная форма IgG4.
Пример 10. Гуманизированные mAb против PD-1 в формате IgG4mt10 обладают повышенной стабильностью в стрессовых условиях.
Стабильность антител против PD-1 в условиях высокой температуры и кислотных условиях.
Все антитела против PD-1, используемые для исследований стабильности, очищали на колонке с белком А с последующей эксклюзионной хроматографией (SEC), как описано в предыдущих разделах. После очистки содержания агрегатов очищенных образцов антител отслеживали с помощью аналитической эксклюзионной хроматографии-высокоэффективной жидкостной хроматографии (SEC-HPLC), которые попадали в интервал 0-0,5%.
Во время анализа SEC-HPLC образцы антител анализировали с использованием колонки TSKgel G3000 SWXL (7,8x300 мм, кат. № 08541, Tosoh Bioscience, Шанхай, Китай) в условиях изократического элюирования (элюирующий буфер 0,2М фосфат натрия, рН 7,2) и с последующим детектированием при УФ (ультрафиолетовое излучение) 215 нм. В каждом запуске 10 мкл образца антител загружали на колонку и элюировали при скорости потока 1 мл/мин. Димерные формы или большие по размеру формы агрегатов антитела отделяли от мономерных форм и процентное содержание димеров и агрегатов определяли на основе интегральных площадей пиков под УФ-кривыми.
Для исследования стабильности в условиях ускоренного старения антитела против PD-1 (10-40 мг/мл в PBS) держали в инкубаторах при 40-50°C в течение 4-7 суток для тестирования стабильности антител в условиях высокой температуры. Затем образцы антител анализировали в отношении индуцированного теплом образования димеров и агрегатов в SEC-HPLC. Для каждого анализируемого антитела против PD-1 менее 2% становилось формами с более высокой молекулярной массой (димерами и агрегатами), указывая на то, что антитела против PD-1 обладали высокой стабильностью в условиях высоких температур.
Стабильность антитела в кислотных условиях была ключевой проблемой в последующем технологическом процессе (Liu et al. 2010 mAbs 2:480-499). Элюирование антител с белка А и инактивация вируса обычно требуют инкубации антитела в условиях низкого рН (2,5-4). Однако такие кислотные условия могли потенциально вызывать денатурацию и агрегирование антител. Известно, что человеческий IgG4 является менее стабильным, чем IgG1 и IgG2 (2002 Immunology 105:9). Вследствие этого, авторы изобретения анализировали гуманизированные mAb, полученные с разными мутантными формами IgG4. Кратко, стабильности антител в условиях низкого рН исследовали, используя объем каждого образца антитела (10 мг/мл в PBS), смешанный в соотношении 1:1 с буферами с низким рН, содержащими 50 мМ цитрат натрия, 100 мМ NaCl при рН 3,6, 3,3, 3,0 или 2,7 соответственно. Спустя 1 ч инкубации при комнатной температуре, образцы антител в условиях низкого рН нейтрализовали посредством разведения 1:5 в элюирующем буфере SEC-HPLC, содержащем 0,2М фосфат натрия, рН 7,2. Анализы SEC-HPLC проводили, как описано выше, и количественно определяли процентные содержания димеров и агрегатов, обу- 23 034666 словленных низким уровнем рН. MAb против PD-1 317-4B6 в формате IgG1 оказалось наиболее стабильным в биотехнологически релевантных кислотных условиях, даже когда значение рН становилось всего лишь 2,7. Среди mAb против PD-1, полученных в нескольких вариантах IgG4, hu317-4B6/IgG4mt10 и hu326-4A3/IgG4mt10, являлись наиболее стабильными в условиях кислотного буфера (табл. 21), так как уровень агрегатов, образование которых было вызвано кислотными условиями, был значительно снижен до уровня, который сопоставим с уровнем агрегатов формата IgG1 mAb против PD-1, 317-4B6 и 326-4A3, т.е. уровень растворимых агрегатов составляет меньше чем 2% (табл. 21).
Таблица 21 Димеры и растворимые агрегаты, образованные в кислотных буферах и анализируемые посредством SEC-HPLC
mAb против PD-1 % димеров и агрегатов
pH 7,2 pH 3,6 pH 3,3 pH 3,0 pH 2,7
317-4B6/lgG1 0,0% 0,0% 0,2% 0,1% 0,2%
317-4B6/lgG4mt1 0,0% 1,0% 11,0% 49,0% 48,0%
317-4B6/lgG4mt3 0,0% 13,0% 31,0% больше 50% больше 50%
317-4B6/lgG4mt6 0,0% 4,0% 41,0% больше 50% больше 50%
317-4B6/lgG4mt9 0,0% 0,5% 2,1% 3,3% 2,0%
317-4B6/lgG4mt10 0,0% 0,2% 0,6% 0,6% 1,4%
326-4A3/lgG4mt10 0,0% 0,0% 0,4% 0,5% 1,2%
Пример 11. Картирование эпитопов связывания mAb против PD-1.
Предыдущие исследования кристаллических структур комплексов PD-1/PD-L1 и PD-1/PD-L2 пролили свет на понимание важнейших аминокислотных (АА) остатков на PD-1, которые требуются для связывания лиганда (Zhang et al. 2004 Immunity, 20:337-347; Lin D.Y. et al. 2008 PNAS 105:3011-3016; Lazar-Molnar E. et al. 2008 PNAS, 105:10483-10488). Фактически, шесть из таких АА остатков, которые необходимы для PD-L1-связывания, были идентифицированы на рецепторе в результате анализа точечных мутаций. Пять из данных шести АА остатков также требовались для PD-L2-связывания (Lin D.Y. et al. 2008 PNAS 105:3011-3016). На основе информации анализа структурно-направленных мутаций авторы изобретения предположили, что наиболее эффективным путем для блокирования функциональными mAb PD-1-опосредованной сигнализации является конкуренция с лигандами PD-1 посредством связывания с шестью важнейшими АА остатками, вследствие чего, эпитопы связывания, требуемые для связывания лигандов, оказываются занятыми. Для исследования данной гипотезы и для понимания механизма действия функциональных антител против PD-1 авторы изобретения создали шесть мутантов PD-1 посредством замещения каждой из шести важнейших АА на Ala, по отдельности, т.е. K45A, №А, L95A, Р97А, П01А и Е103А (нумерация АА остатков на основе Lin D.Y. et al. 2008 PNAS 105:3011-3016). Мутантные PD-1/Fc и PD-1/His (фиг. 1) использовали в качестве матриц для ПЦР-направленного мутагенеза или мутагенеза по типу катящегося кольца с использованием Fast Mutagenesis System (кат. № FM111, Transgen Biotech, Пекин, Китай). Все мутанты субклонировали в экспрессионные векторы по изобретению на основе pcDNA и проверяли посредством секвенирования. Мутантные PD-1 белки и PD-1 белки дикого типа экспрессировали посредством временной трансфекции (описанной в примере 1) и получали спустя 4-6 суток культивирования. Кондиционированные среды (СМ) анализировали посредством Вестерн-блоттинга для подтверждения экспрессии PD-1-белка с точки зрения качества и количества. Супернатанты (СМ) после очистки от продуктов разрушения клеток непосредственно использовали в анализе ELISA или Вестерн-блоттинге для картирования эпитопов.
Для исследования эпитопов связывания гуманизированных mAb против PD-1 анализы ELISA с использованием PD-1 дикого типа (WT) и мутантного PD-1 (Mt) проводили для оценки активностей связывания hu317-4B5, hu317-4B6, hu326-3B1 и hu326-4A3. Для сравнения, для того чтобы проверить уникальность сигнатурной связывающей последовательности антител, в исследование включали два эталонных антитела (эталонное Ab-1 и эталонное Ab-2 из US 8008449 B2 и US 8168757 B2 соответственно). Осуществляли покрытие равным объемом СМ, содержащей WT или Mt PD-1, в 96-луночном планшете для всех mAb в том же анализе ELISA. Все результаты ELISA нормировали, используя средние результаты ELISA считывания сигналов связывания с WT PD-1 в качестве стандарта. Сигналы связывания ELISA с конкретным Mt PD-1 дополнительно нормировали по самому высокому показанию считывания сигнала связывания антитела (задано как 100%) с конкретным Mt PD-1. Для удобства анализа данных, когда сигнал связывания ELISA mAb в отношении конкретного мутанта падал ниже 50% относительно PD-1 WT, это свидетельствовало о том, что аминокислотный остаток представляет собой значимый эпитоп связывания, мутация которого значительно подавляет связывание антител. Подобным образом, если сигнал
- 24 034666 связывания ELISA mAb в отношении конкретного мутанта падал ниже 25%, аминокислотный остаток определяли, как очень значимый. Как показано на фиг. 8, два важнейших АА остатка в PD-1, K45 и I93, представляют собой значимый или очень значимый эпитопы для связывания mAb hu317-4B5 и hu3174B6, и три АА остатка, I93, L95 и Р97, представляют собой либо значимые, либо очень значимые эпитопы для hu326-3B1 и hu326-4A3. С другой стороны, два данных эталонных антитела имеют характерные эпитопы связывания, Р97 является значимым для эталонного Ab-1, в то время как L95 и Р97 являются значимыми для эталонного Ab-2.
Интересно, что когда белок PD-1 денатурировал в Вестерн-блоттинге, mAb hu317-4B5 и -4В6 все еще были способны связываться с WT PD-1, хотя важнейшие эпитопы связывания (K45 и I93) не находятся близко друг к другу (нелинейные). Это указывало на то, что белок PD-1 становился до некоторой степени ренатурированным после денатурации в SDS-PAGE (полиакриламидный гель в присутствии додецилсульфата натрия) метода Вестерн-блоттинга, что позволяет mAb против PD-1 узнавать его и связываться с ним. Пользуясь данным наблюдением, авторы изобретения проводили анализ Вестерн-блоттинга для всех шести антител, используемых в описанном выше исследовании ELISA. Суммарные результаты Вестерн-блоттинга прекрасно соответствовали результатам ELISA, т.е. значимые или очень значимые эпитопы, мутации которых приводили к слабым сигналам связывания в ELISA, также давали самую слабую полосу Вестерн-блоттинга, по сравнению со связыванием с другим мутантным PD-1 (фиг. 8). Также наблюдали некоторые незначительные различия между ELISA и Вестерн-блоттингом, например, сигналы связывания в ELISA на I93A и Е103А эталонным Ab-2 были относительно сильнее, чем сигналы связывания в Вестерн-блоттинге. Это может быть показателем того, что те АА остатки, мутации которых влияли на связывание, могут также способствовать связыванию, однако только в стрессовых условиях (т.е. денатурация или потеря нативной конформации).
Как представлено в табл. 22, mAb против PD-1 в данном изобретении имеют опознаваемые эпитопы связывания, отличающиеся от другого антитела против PD-1.
Таблица 22
Краткое изложение ключевых эпитопов связывания mAb против . PD-1
K45A I93A L95A P97A I101A E103A
hu317-4B5 *** **
hu317-4B6 *** **
hu326-3B1 ** ** **
hu326-4A3 *** ** **
Эталон. Ab-1 **
Эталон. Ab-2 ** **
* на основе Фиг. 8
Пример 12. mAb против PD-1 активируют первичные МКПК человека и ингибируют рост опухоли в моделях ксенотрансплантата у мышей.
Гуманизированные mAb против PD-1 активируют МКПК человека.
В процессе гуманизации гуманизированные mAb против PD-1 на разных стадиях сохраняли похожие функциональные активности, как показали результаты анализов ELISA, FACS и анализов высвобождения цитокинов на основе клеток иммунной системы. Для подтверждения функции конечных версий гуманизированных mAb авторы изобретения анализировали активирующие функции hu317-4B5, hu3174B6, hu326-3B1 и hu326-4A3, используя первичные МКПК человека. Результаты показали, что эти mAb на протяжении гуманизации поддерживали функции исходных мышиных mAb с активацией первичных МКПК, хотя степень активации различается у четырех доноров вследствие расхождения генетического фона индивидуума (фиг. 9).
Гуманизированные mAb против PD-1 усиливают цитотоксичность, опосредованную NK-клетками, в отношении раковых клеток.
Напоминая исходные мышиные mAb, гуманизированные mAb против PD-1, hu317-4B5, hu317-4B6, hu326-3B1 и hu326-3G1, усиливают цитотоксичность, опосредованную клетками NK92MI/PD-1, в отношении клеток-мишеней рака легкого, SK-MES-1/PD-L1, дозозависимым образом (фиг. 10, табл. 23). Казалось очевидным, что в принципе гуманизированные mAb против PD-1 могут функционировать, нарушая иммунологическую толерантность, опосредованную PD-1 сигнализацией, усиливая активность уничтожения раковых клеток клетками иммунной системы, например NK-клетками и цитотоксичными Тлимфоцитами.
Гуманизированное mAb против PD-1 активирует МКПК человека и ингибирует рост опухоли в модели ксенотрансплантата опухоли у мышей in vivo.
Все приведенные выше экспериментальные данные показали, что mAb против PD-1 могли бы работать в мышиных раковых моделях, используя мышей с ослабленным иммунитетом с ксенотрансплантацией раковых клеток человека с последующей имплантацией МКПК человека и применением обработки
- 25 034666 mAb для ингибирования роста раковых клеток in vivo. Эксперимент планировали следующим образом. Самцам мышей с SCID (тяжелым комбинированным иммунодефицитом) возрастом семь-восемь недель (Vital River Laboratories, Китай) в правый бок посредством прививки подкожно вводили 3х106 клеток Hep3B/OS8-PD-L1 в 50% Matrigel (BD Biosciences, New Jesey, США). Спустя 15 суток после инокуляции опухолевых клеток мышей, несущих опухоль размером 100-250 мм3, рандомизировали и разделяли на три экспериментальные группы. Сто микролитров объединенных МКПК (5х 105) от 2 здоровых доноров инъецировали внутрь опухоли. Спустя трое суток после МКПК-имплантации п.к. (подкожно) вводили антитела против PD-1 (Hu317-IgG4mt2) и человеческий IgG при дозе 10 мг/кг соответственно. Обработку антителами повторяли один раз каждые 10 суток, всего 3 раза. PBS инъецировали в параллельной группе в качестве отрицательного контроля. Опухоли измеряли дважды в неделю, используя калипер, начиная с 7 суток. Объемы опухолей рассчитывали, используя следующую формулу: [Dx(d2)]/2, в которой D представляет собой большой диаметр опухоли и d представляет собой малый диаметр. Все исследования животных проводили, следуя регламенту по уходу за животными и их использованию Beigene.
В исследовании in vivo, несмотря на то, что 60% опухолей в контрольных группах саморегрессировали, остальная часть эксперимента in vivo все еще являлась довольно информативной, что представлено на фиг. 11. В каждой из контрольных групп, либо в группе, обработанной носителем, либо в группе, обработанной человеческим IgG (huIgG), имеется 40% опухолей (2 из 5 мышей), перерастающих объем исходного уровня в начальной точке. Две опухоли в группе, обработанной PBS, росли до гораздо большего объема (больше 2000 мм3, причем исследование на мыши, несущей одну опухоль, завершали досрочно вследствие выхода за пределы размера опухоли по протоколу). Данные две опухоли в группе, обработанной huIgG, вырастали до размера 800 и 1370 мм3, значительно превышающего средний исходный уровень 164 мм3, хотя и меньшего, чем в случае опухолей, обработанных PBS. С другой стороны, в группе, обработанной mAb против PD-1 (hu317-1/IgG4mt2), опухоли либо полностью регрессировали, либо по размеру были близки к исходному уровню (одна опухоль = 200 мм3, которая медленно вырастала обратно после регрессии до 50% от исходного уровня, спустя две недели с момента МКПК имплантации). Результаты показали, что mAb против PD-1, описанное выше, может активировать клетки иммунной системы человека, ингибируя рост опухолевых клеток в мышиной модели опухоли in vivo, что согласуется с экспериментальными результатами in vitro, описанными выше.

Claims (10)

1. Антитело, которое специфично связывается с PD-1 человека и содержит вариабельную область тяжелой цепи (Vh), содержащую следующие три гипервариабельные области (CDR): CDR-H1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31, CDR-H2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, CDR-H3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; и вариабельную область легкой цепи (Vk), содержащую следующие три CDR: CDR-L1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, CDR-L2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, и CDR-L3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36.
2. Антитело по п.1, содержащее вариабельную область тяжелой цепи (Vh), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.
3. Антитело по п.1 или 2, содержащее вариабельную область легкой цепи (Vk), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.
4. Антитело по п.1, содержащее вариабельную область тяжелой цепи (Vh) и вариабельную область легкой цепи (Vk), содержащие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 24 и SEQ ID NO: 26 соответственно.
5. Антитело по любому из пп.1-4, которое связывается с остатками PD-1 K45 и I93, что соответствует K58 и I106 SEQ ID NO: 2.
6. Антитело по любому из пп.1-5, содержащее константный домен IgG4, содержащий любую из SEQ ID NO: 83-88.
7. Антитело по п.6, содержащее константный домен IgG4, содержащий SEQ ID NO: 87 или 88.
8. Фрагмент антитела по любому из пп.1-7, представляющий собой F(ab) или F(ab)2.
9. Применение антитела по любому из пп.1-7 для лечения рака или вирусной инфекции.
10. Применение антитела по любому из пп.1-7 для изготовления лекарственного средства для лечения рака или вирусной инфекции.
EA201690567A 2013-09-13 2013-09-13 Антитело против pd-1 и его применение для лечения рака или вирусной инфекции и фрагмент антитела EA034666B1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/CN2013/083467 WO2015035606A1 (en) 2013-09-13 2013-09-13 Anti-pd1 antibodies and their use as therapeutics and diagnostics

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201690567A1 EA201690567A1 (ru) 2016-08-31
EA034666B1 true EA034666B1 (ru) 2020-03-04

Family

ID=50736425

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201690567A EA034666B1 (ru) 2013-09-13 2013-09-13 Антитело против pd-1 и его применение для лечения рака или вирусной инфекции и фрагмент антитела

Country Status (30)

Country Link
US (9) US8735553B1 (ru)
EP (3) EP3702373B9 (ru)
JP (1) JP6623353B2 (ru)
KR (1) KR102100419B1 (ru)
CN (6) CN112552401B (ru)
AU (3) AU2013400609B9 (ru)
BR (1) BR112016005408B1 (ru)
CA (3) CA3080200A1 (ru)
CY (2) CY1125652T1 (ru)
DK (2) DK3702373T3 (ru)
EA (1) EA034666B1 (ru)
ES (2) ES2927567T3 (ru)
FR (1) FR24C1001I1 (ru)
HK (1) HK1217501A1 (ru)
HR (1) HRP20221262T1 (ru)
HU (3) HUE049281T2 (ru)
IL (5) IL312577A (ru)
LT (1) LT3702373T (ru)
MX (1) MX2016003292A (ru)
NL (1) NL301252I2 (ru)
NO (1) NO2023045I1 (ru)
NZ (1) NZ718643A (ru)
PL (2) PL3044234T3 (ru)
PT (2) PT3702373T (ru)
RS (1) RS63571B9 (ru)
SG (1) SG11201601844TA (ru)
SI (1) SI3702373T1 (ru)
TW (1) TWI636995B (ru)
WO (1) WO2015035606A1 (ru)
ZA (1) ZA201601953B (ru)

Families Citing this family (617)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010062960A2 (en) 2008-11-26 2010-06-03 Cedars-Sinai Medical Center METHODS OF DETERMINING RESPONSIVENESS TO ANTI-TNFα THERAPY IN INFLAMMATORY BOWEL DISEASE
CA2858350A1 (en) 2011-01-14 2013-07-19 The Regents Of The University Of California Therapeutic antibodies against ror-1 protein and methods for use of same
EP3812387A1 (en) 2011-07-21 2021-04-28 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Heterocyclic protein kinase inhibitors
CN103703004B (zh) 2011-12-31 2016-06-29 百济神州有限公司 作为parp抑制剂的稠合的四环或五环的二氢二氮杂*并咔唑酮
EP2978440B1 (en) 2013-03-27 2019-10-02 Cedars-Sinai Medical Center Treating fibrosis by inhibiting tl1a and diagnosing fibrosis by detecting il31ra
AU2014256633B2 (en) 2013-04-25 2017-02-02 Beigene Switzerland Gmbh Fused heterocyclic compounds as protein kinase inhibitors
US10316083B2 (en) 2013-07-19 2019-06-11 Cedars-Sinai Medical Center Signature of TL1A (TNFSF15) signaling pathway
AU2014316682B2 (en) 2013-09-06 2018-11-22 Aurigene Discovery Technologies Limited 1,2,4-oxadiazole derivatives as immunomodulators
LT3041468T (lt) 2013-09-06 2018-10-25 Aurigene Discovery Technologies Limited Cikliniai peptidomimetiniai junginiai kaip imunomoduliatoriai
TR201811077T4 (tr) 2013-09-06 2018-08-27 Aurigene Discovery Tech Ltd İmmünomodülatörler olarak 1,3,4-oksadiazol ve 1,3,4-tiyadiyazol türevleri.
CA3080200A1 (en) 2013-09-13 2015-03-19 Beigene Switzerland Gmbh Anti-pd1 antibodies and their use as therapeutics and diagnostics
EP3757130A1 (en) 2013-09-26 2020-12-30 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
US10344090B2 (en) 2013-12-12 2019-07-09 Shanghai Hangrui Pharmaceutical Co., Ltd. PD-1 antibody, antigen-binding fragment thereof, and medical application thereof
EP3083685A2 (en) 2013-12-20 2016-10-26 Intervet International B.V. Canine antibodies with modified ch2-ch3 sequences
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
US9394365B1 (en) 2014-03-12 2016-07-19 Yeda Research And Development Co., Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of alzheimer's disease
US10618963B2 (en) 2014-03-12 2020-04-14 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
US10519237B2 (en) 2014-03-12 2019-12-31 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
CN106687125B (zh) 2014-03-12 2021-12-14 耶达研究与开发有限公司 降低系统性调节性t细胞水平或活性来治疗cns疾病和损伤
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
TWI687438B (zh) 2014-07-03 2020-03-11 英屬開曼群島商百濟神州生物科技有限公司 抗ｐｄ-ｌ１抗體及其作為治療及診斷之用途
SG11201700496WA (en) 2014-07-22 2017-02-27 Cb Therapeutics Inc Anti-pd-1 antibodies
US10435470B2 (en) 2014-08-05 2019-10-08 Cb Therapeutics, Inc. Anti-PD-L1 antibodies
US9982052B2 (en) 2014-08-05 2018-05-29 MabQuest, SA Immunological reagents
PL3177644T3 (pl) 2014-08-05 2021-06-14 MabQuest SA Immunologiczne reagenty wiążące do PD-1
WO2016024228A1 (en) 2014-08-11 2016-02-18 Acerta Pharma B.V. Therapeutic combinations of a btk inhibitor, a pi3k inhibitor, a jak-2 inhibitor, a pd-1 inhibitor and/or a pd-l1 inhibitor
WO2016033555A1 (en) 2014-08-28 2016-03-03 Halozyme, Inc. Combination therapy with a hyaluronan-degrading enzyme and an immune checkpoint inhibitor
TW201617368A (zh) 2014-09-05 2016-05-16 史坦森特瑞斯公司 新穎抗ｍｆｉ２抗體及使用方法
CA2960824A1 (en) 2014-09-13 2016-03-17 Novartis Ag Combination therapies of alk inhibitors
CA2964317C (en) 2014-10-14 2021-10-05 Halozyme, Inc. Compositions of adenosine deaminase-2 (ada2), variants thereof and methods of using same
JP7305300B2 (ja) 2014-11-05 2023-07-10 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 併用免疫療法
US10822414B2 (en) 2014-11-11 2020-11-03 Sutro Biopharma, Inc. Anti-PD-1 antibodies, compositions comprising anti-PD-1 antibodies and methods of using anti-PD-1 antibodies
HUE052526T2 (hu) 2014-11-21 2021-05-28 Bristol Myers Squibb Co Antitestek, amelyek tartalmaznak módosított nehéz konstans régiókat
ES2807182T3 (es) 2014-11-21 2021-02-22 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos frente a CD73 y sus usos
CA2971734A1 (en) * 2014-12-22 2016-06-30 Enumeral Biomedical Holdings, Inc. Anti-pd-1 antibodies
US11639385B2 (en) 2014-12-22 2023-05-02 Pd-1 Acquisition Group, Llc Anti-PD-1 antibodies
WO2016117618A1 (ja) * 2015-01-20 2016-07-28 国立大学法人九州大学 慢性炎症性脱髄性多発神経炎の診断方法、キット及びバイオマーカー
MX2020003735A (es) 2015-03-10 2022-01-14 Aurigene Discovery Tech Ltd Compuestos de 1,2,4-oxadiazol y tiadiazol como inmunomoduladores.
US10336824B2 (en) 2015-03-13 2019-07-02 Cytomx Therapeutics, Inc. Anti-PDL1 antibodies, activatable anti-PDL1 antibodies, and methods of thereof
AU2016236270B2 (en) 2015-03-23 2022-01-27 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Anti-CEACAM6 antibodies and uses thereof
CN106146667B (zh) * 2015-03-27 2020-06-19 四川大学华西医院 一种Exendin-4融合蛋白及其制备方法与用途
US11933786B2 (en) 2015-03-30 2024-03-19 Stcube, Inc. Antibodies specific to glycosylated PD-L1 and methods of use thereof
US10836827B2 (en) 2015-03-30 2020-11-17 Stcube, Inc. Antibodies specific to glycosylated PD-L1 and methods of use thereof
JP6901400B2 (ja) 2015-04-03 2021-07-14 ゾーマ テクノロジー リミテッド ＴＧＦ−β及びＰＤ−１の阻害物質を使用する癌の治療法
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
JP6949718B2 (ja) 2015-04-17 2021-10-13 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 抗ｐｄ−１抗体と他の抗体の組み合わせを含む組成物
KR20170138555A (ko) 2015-04-28 2017-12-15 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-pd-1 항체 및 항-ctla-4 항체를 사용한 pd-l1-음성 흑색종의 치료
US20160362489A1 (en) 2015-04-28 2016-12-15 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of PD-L1-Positive Melanoma Using an Anti-PD-1 Antibody
NZ738068A (en) 2015-05-06 2019-07-26 Snipr Tech Ltd Altering microbial populations & modifying microbiota
WO2016179472A2 (en) * 2015-05-07 2016-11-10 University Of Maryland, Baltimore Modulation of natural killer cell tolerance
IL274151B (en) 2015-05-21 2022-07-01 Harpoon Therapeutics Inc Trispecific binding proteins and methods of use
WO2016191751A1 (en) 2015-05-28 2016-12-01 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of pd-l1 positive lung cancer using an anti-pd-1 antibody
US11078278B2 (en) 2015-05-29 2021-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of renal cell carcinoma
WO2016196237A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Agenus Inc. Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
CN105061597B (zh) * 2015-06-09 2016-04-27 北京东方百泰生物科技有限公司 一种抗pd-1的单克隆抗体及其获得方法
MA42447A (fr) * 2015-07-13 2018-05-23 Cytomx Therapeutics Inc Anticorps anti-pd-1, anticorps anti-pd-1 activables, et leurs procédés d'utilisation
US10544224B2 (en) 2015-07-14 2020-01-28 Bristol-Myers Squibb Company Method of treating cancer using immune checkpoint inhibitor
RU2711380C2 (ru) 2015-07-16 2020-01-16 Байоксэл Терапьютикс, Инк. Новый подход к лечению рака с применением иммуномодуляции
CN108976300B (zh) 2015-07-30 2023-04-14 宏观基因有限公司 Pd-1结合分子和其使用方法
EP3331901A1 (en) 2015-08-07 2018-06-13 Pieris Pharmaceuticals GmbH Novel fusion polypeptide specific for lag-3 and pd-1
WO2017024465A1 (en) 2015-08-10 2017-02-16 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibodies
EP3341375B1 (en) 2015-08-25 2022-04-13 BeiGene, Ltd. Process for preparing parp inhibitor, crystalline forms, and uses thereof
SG10201913276WA (en) * 2015-09-01 2020-02-27 Agenus Inc Anti-pd-1 antibodies and methods of use thereof
MA44909A (fr) 2015-09-15 2018-07-25 Acerta Pharma Bv Association thérapeutique d'un inhibiteur du cd19 et d'un inhibiteur de la btk
US10981991B2 (en) 2015-09-29 2021-04-20 Shanghai Zhangjiang Biotechnology Co., Ltd. PD-1 antibodies and uses thereof
AR106184A1 (es) * 2015-09-29 2017-12-20 Celgene Corp Proteínas de unión a pd-1 y sus métodos de uso
WO2017055484A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for determining the metabolic status of lymphomas
CN116063566A (zh) * 2015-10-01 2023-05-05 热生物制品有限公司 作为异源嵌合蛋白邻接i型和ii型胞外结构域的组合物和方法
US12030942B2 (en) 2015-10-02 2024-07-09 Les Laboratoires Servier Anti-PD-1 antibodies and compositions
CN106632674B (zh) * 2015-10-30 2018-11-16 泽达生物医药有限公司 一种抗pd-1单克隆抗体、其药物组合物及其用途
EP3370733B1 (en) 2015-11-02 2021-07-14 Board of Regents, The University of Texas System Methods of cd40 activation and immune checkpoint blockade
WO2017079112A1 (en) 2015-11-03 2017-05-11 Janssen Biotech, Inc. Antibodies specifically binding pd-1 and their uses
US20190038713A1 (en) 2015-11-07 2019-02-07 Multivir Inc. Compositions comprising tumor suppressor gene therapy and immune checkpoint blockade for the treatment of cancer
CN106699889A (zh) 2015-11-18 2017-05-24 礼进生物医药科技（上海）有限公司 抗pd-1抗体及其治疗用途
TWI795347B (zh) 2015-11-18 2023-03-11 美商必治妥施貴寶公司 使用抗ｐｄ-１抗體與抗ｃｔｌａ-４抗體之組合以治療肺癌
WO2017096026A1 (en) * 2015-12-02 2017-06-08 Stcube, Inc. Antibodies specific to glycosylated pd-1 and methods of use thereof
KR102424513B1 (ko) 2015-12-14 2022-07-25 마크로제닉스, 인크. Pd-1 및 ctla-4과의 면역반응성을 가진 이중특이적 분자, 및 이것의 사용 방법
US10392442B2 (en) 2015-12-17 2019-08-27 Bristol-Myers Squibb Company Use of anti-PD-1 antibody in combination with anti-CD27 antibody in cancer treatment
US11091556B2 (en) 2015-12-18 2021-08-17 Intervet Inc. Caninized human antibodies to human IL-4R alpha
DK3394093T3 (da) 2015-12-23 2022-04-19 Modernatx Inc Fremgangsmåder til anvendelse af ox40-ligand-kodende polynukleotider
EP3400443B1 (en) 2016-01-04 2020-09-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of pd-1 and tim-3 as a measure for cd8+ cells in predicting and treating renal cell carcinoma
WO2017122175A1 (en) 2016-01-13 2017-07-20 Acerta Pharma B.V. Therapeutic combinations of an antifolate and a btk inhibitor
WO2017124050A1 (en) * 2016-01-14 2017-07-20 Bps Bioscience, Inc. Anti-pd-1 antibodies and uses thereof
EP3195878A1 (en) 2016-01-22 2017-07-26 Werner Lubitz Bacterial ghosts for the treatment of cancer
WO2017125815A2 (en) 2016-01-22 2017-07-27 MabQuest SA Immunological reagents
US11214617B2 (en) 2016-01-22 2022-01-04 MabQuest SA Immunological reagents
EA201891724A1 (ru) 2016-02-17 2019-01-31 Новартис Аг Антитела к tgf-бета2
CN118773299A (zh) 2016-03-17 2024-10-15 西达-赛奈医疗中心 通过rnaset2诊断炎性肠病的方法
TW201735949A (zh) 2016-03-24 2017-10-16 千禧製藥公司 治療抗ctla4及抗pd-1組合治療中的胃腸道免疫相關不良事件之方法
JP7069032B2 (ja) 2016-03-24 2022-05-17 ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド がん免疫治療における胃腸の免疫関連有害事象の治療方法
WO2017172518A1 (en) 2016-03-29 2017-10-05 Stcube, Inc. Dual function antibodies specific to glycosylated pd-l1 and methods of use thereof
US12059474B2 (en) 2016-03-29 2024-08-13 Stcube & Co., Inc. Methods for selecting antibodies that specifically bind glycosylated immune checkpoint proteins
CN109195990A (zh) 2016-03-30 2019-01-11 Musc研究发展基金会 通过靶向糖蛋白a重复优势蛋白(garp)治疗和诊断癌症以及单独或联合提供有效免疫疗法的方法
US11209441B2 (en) 2016-04-05 2021-12-28 Bristol-Myers Squibb Company Cytokine profiling analysis
BR112018072286A2 (pt) 2016-04-29 2019-02-12 Yale University medida direcionada de atividade transcricional relacionada a receptores de hormônios
US11352413B2 (en) 2016-05-17 2022-06-07 Albert Einstein College Of Medicine Engineered PD-1 variants
JP2019519516A (ja) 2016-05-18 2019-07-11 モデルナティーエックス， インコーポレイテッド がんの治療のためのｍＲＮＡ併用療法
LT3458083T (lt) 2016-05-18 2023-02-10 Modernatx, Inc. Polinukleotidai, koduojantys interleukiną-12 (il12), ir jų naudojimas
JP7194594B2 (ja) 2016-05-18 2022-12-22 モデルナティエックス インコーポレイテッド 免疫調節ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの組み合わせ及びその使用
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
CN105968200B (zh) 2016-05-20 2019-03-15 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 抗人pd-l1人源化单克隆抗体及其应用
CN106008714B (zh) 2016-05-24 2019-03-15 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 抗人pd-1人源化单克隆抗体及其应用
KR20230091191A (ko) 2016-05-27 2023-06-22 아게누스 인코포레이티드 항-tim-3 항체 및 이의 사용 방법
PT3464368T (pt) 2016-06-02 2023-08-17 Bristol Myers Squibb Co Utilização de um anticorpo anti-pd-1 em combinação com um anticorpo anti-cd30 no tratamento de linfoma
SI3463457T1 (sl) 2016-06-02 2023-09-29 Bristol-Myers Squibb Company Blokada pd-1 z nivolumabom pri refraktornem hodgkinovem limfomu
JP2019517498A (ja) 2016-06-03 2019-06-24 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 再発性小細胞肺癌の処置方法において使用するための抗ｐｄ−１抗体
KR20230118713A (ko) 2016-06-03 2023-08-11 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 종양을 치료하는 방법에 사용하기 위한 항-pd-1 항체
ES2897964T3 (es) 2016-06-03 2022-03-03 Bristol Myers Squibb Co Uso del anticuerpo anti-PD-1 en el tratamiento de pacientes con cáncer colorrectal
GB201609811D0 (en) 2016-06-05 2016-07-20 Snipr Technologies Ltd Methods, cells, systems, arrays, RNA and kits
WO2017214182A1 (en) * 2016-06-07 2017-12-14 The United States Of America. As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Fully human antibody targeting pdi for cancer immunotherapy
CA3029813A1 (en) 2016-06-13 2017-12-21 Torque Therapeutics, Inc. Methods and compositions for promoting immune cell function
AU2017286128B2 (en) * 2016-06-17 2022-02-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compounds, compositions and methods for prevention and/or treatment of cancer
CN109475602B (zh) 2016-06-20 2023-05-16 科马布有限公司 抗pd-l1和il-2细胞因子
US10912287B2 (en) 2016-06-28 2021-02-09 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd Genetically modified mice expressing humanized PD-1
WO2018007885A1 (en) * 2016-07-05 2018-01-11 Beigene, Ltd. COMBINATION OF A PD-l ANTAGONIST AND A RAF INHIBITOR FOR TREATING CANCER
RU2656181C1 (ru) * 2016-07-13 2018-05-31 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Анти-pd-1-антитела, способ их получения и способ применения
US11746152B2 (en) 2016-07-20 2023-09-05 Stcube, Inc. Methods of cancer treatment and therapy using a combination of antibodies that bind glycosylated PD-L1
CA3033827A1 (en) 2016-08-16 2018-02-22 Beigene, Ltd. Crystalline form of (s)-7-(1-acryloylpiperidin-4-yl)-2-(4-phenoxyphenyl )-4,5,6,7-tetra-hydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide,preparation, and uses thereof
TWI739887B (zh) 2016-08-19 2021-09-21 英屬開曼群島商百濟神州有限公司 使用包含btk抑制劑的組合產品治療癌症
CN116478290A (zh) 2016-08-26 2023-07-25 百济神州有限公司 抗tim-3抗体及其用途
CN110121352B (zh) 2016-09-01 2020-12-11 嵌合体生物工程公司 Gold优化的car t-细胞
JP2019535001A (ja) 2016-09-06 2019-12-05 インセルディーエックス・インコーポレーテッド 細胞あたりのｐｄ−ｌ１発現量を検出する方法及びその使用
US11726089B2 (en) 2016-09-06 2023-08-15 Incelldx, Inc. Methods of assaying neoplastic and neoplasia-related cells and uses thereof
ES2952525T3 (es) 2016-09-08 2023-11-02 2Seventy Bio Inc Variantes de endonucleasa homing PD-1, composiciones y métodos de uso
TN2019000081A1 (en) 2016-09-14 2020-07-15 Beijing hanmi pharm co ltd Antibody specifically binding to pd-1 and functional fragment thereof
MX2019002867A (es) 2016-09-19 2019-11-12 Celgene Corp Metodos de tratamiento de trastornos inmunologicos usando proteinas de union a pd-1.
JP2019534859A (ja) 2016-09-19 2019-12-05 セルジーン コーポレイション Ｐｄ−１結合タンパク質を使用して白斑を治療する方法
CN107840887B (zh) * 2016-09-21 2022-03-25 基石药业（苏州）有限公司 一种新的pd-1单克隆抗体
BR112019006041A2 (pt) 2016-09-27 2019-09-03 Univ Texas métodos para aprimorar a terapia de bloqueio do ponto de verificação imunológico por modulação do microbioma
EP3519051B1 (en) * 2016-09-27 2021-09-22 Beigene, Ltd. Treatment of cancers using combination comprising parp inhibitors
MX2019003683A (es) 2016-10-11 2019-08-22 Agenus Inc Anticuerpos anti gen 3 de activación linfocítica (lag 3 ) y métodos para usarlos.
SG11201903283UA (en) 2016-10-12 2019-05-30 Univ Texas Methods and compositions for tusc2 immunotherapy
KR20190082815A (ko) 2016-10-26 2019-07-10 세다르스-신나이 메디칼 센터 중화 항-tl1a 단일 클론 항체
EP3532504A1 (en) 2016-10-28 2019-09-04 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating urothelial carcinoma using an anti-pd-1 antibody
TWI788307B (zh) 2016-10-31 2023-01-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 用於擴增腫瘤浸潤性淋巴細胞之工程化人造抗原呈現細胞
EP3988569A1 (en) 2016-11-02 2022-04-27 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to pd-1 and uses thereof
KR102584340B1 (ko) 2016-11-03 2023-10-10 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 활성화가능한 항-ctla-4 항체 및 그의 용도
EP3538112A4 (en) 2016-11-09 2020-09-02 Musc Foundation for Research Development CD38-NAD + REGULATED METABOLIC AXIS IN ANTITUMOR IMMUNOTHERAPY
EA201991214A1 (ru) * 2016-11-18 2019-10-31 Антитела против pd-1 и их композиции
US11279694B2 (en) 2016-11-18 2022-03-22 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
WO2018098352A2 (en) 2016-11-22 2018-05-31 Jun Oishi Targeting kras induced immune checkpoint expression
EP4289484A3 (en) 2016-12-07 2024-03-06 Agenus Inc. Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
CN118634323A (zh) 2016-12-07 2024-09-13 艾吉纳斯公司 抗体和其使用方法
JP2020510624A (ja) 2016-12-12 2020-04-09 マルチビア インコーポレイテッド がんおよび感染性疾患の治療および予防のための、ウイルス遺伝子治療および免疫チェックポイント阻害剤を含む方法および組成物
CN106519034B (zh) * 2016-12-22 2020-09-18 鲁南制药集团股份有限公司 抗pd-1抗体及其用途
CN113480530A (zh) 2016-12-26 2021-10-08 阿里根公司 芳香烃受体调节剂
US11584733B2 (en) 2017-01-09 2023-02-21 Shuttle Pharmaceuticals, Inc. Selective histone deacetylase inhibitors for the treatment of human disease
ES2914123T3 (es) 2017-01-09 2022-06-07 Shuttle Pharmaceuticals Inc Inhibidores selectivos de la histona desacetilasa para el tratamiento de una enfermedad humana
EP3568412A2 (en) 2017-01-13 2019-11-20 Agenus Inc. T cell receptors that bind to ny-eso-1 and methods of use thereof
WO2018134279A1 (en) 2017-01-18 2018-07-26 Pieris Pharmaceuticals Gmbh Novel fusion polypeptides specific for lag-3 and pd-1
EP3570870A1 (en) 2017-01-20 2019-11-27 Novartis AG Combination therapy for the treatment of cancer
TWI788321B (zh) 2017-01-20 2023-01-01 美商健臻公司 骨靶向抗體
TWI787230B (zh) 2017-01-20 2022-12-21 法商賽諾菲公司 抗ＴＧＦ-β抗體及其用途
EP3571227A1 (en) 2017-01-20 2019-11-27 Sanofi Anti-tgf-beta antibodies and their use
CA3049047A1 (en) 2017-01-20 2018-07-26 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Anti-pd-1 antibodies and uses thereof
CN108341871A (zh) * 2017-01-24 2018-07-31 三生国健药业（上海）股份有限公司 抗pd-1单克隆抗体及其制备方法和应用
EP3573989A4 (en) 2017-01-25 2020-11-18 Beigene, Ltd. CRYSTALLINE FORMS OF (S) -7- (1- (BUT-2-YNOYL) -PIPERIDINE-4-YL) -2- (4-PHENOXYPHENYL) -4,5,6,7-TETRAHYDROPYRAZOLO [1,5-A ] PYRIMIDINE-3-CARBOXAMIDE, MANUFACTURING AND USES THEREOF
KR20190115053A (ko) 2017-02-10 2019-10-10 노파르티스 아게 1-(4-아미노-5-브로모-6-(1h-피라졸-1-일)피리미딘-2-일)-1h-피라졸-4-올 및 암 치료에 있어서의 이의 용도
TWI674261B (zh) 2017-02-17 2019-10-11 美商英能腫瘤免疫股份有限公司 Nlrp3 調節劑
CA3054571A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 Board Of Regents,The University Of Texas System Assay for detection of early stage pancreatic cancer
CA3054133A1 (en) 2017-02-27 2018-03-30 Shattuck Labs, Inc. Methods of making and using extracellular domain-based chimeric proteins
CN115433187B (zh) 2017-02-28 2023-10-27 百济神州(苏州)生物科技有限公司 稠合的四环或五环二氢二氮杂䓬并咔唑酮的盐的结晶形式组合物及其用途
KR102700956B1 (ko) 2017-02-28 2024-09-03 사노피 치료적 rna
US11161905B2 (en) 2017-03-04 2021-11-02 Xiangtan Tenghua Bioscience Recombinant antibodies to programmed death 1 (PD-1) and uses thereof
US20200095323A1 (en) * 2017-03-20 2020-03-26 The General Hospital Corporation MITIGATING Fc-Fc RECEPTOR INTERACTIONS IN CANCER IMMUNOTHERAPY
US20210186982A1 (en) 2017-03-24 2021-06-24 Universite Nice Sophia Antipolis Methods and compositions for treating melanoma
CN107082812B (zh) * 2017-03-29 2018-11-13 上海科医联创生物科技有限公司 一种恢复衰竭性免疫细胞功能的融合蛋白及其应用
CN110494450A (zh) 2017-03-31 2019-11-22 百时美施贵宝公司 治疗肿瘤的方法
EP4116328A1 (en) 2017-04-05 2023-01-11 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd. Combination therapies targeting pd-1, tim-3, and lag-3
TWI788340B (zh) 2017-04-07 2023-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗icos促效劑抗體及其用途
MX2019012223A (es) 2017-04-13 2019-12-09 Agenus Inc Anticuerpos anti-cd137 y metodos de uso de los mismos.
PL3612234T3 (pl) 2017-04-20 2024-09-02 Adc Therapeutics Sa Terapia skojarzona z koniugatem anty-AXL przeciwciało-lek
BR112019021680A2 (pt) 2017-04-20 2020-05-12 Adc Therapeutics Sa Terapia de combinação com conjugado anticorpo-fármaco anti-cd25??
CN106939049B (zh) 2017-04-20 2019-10-01 苏州思坦维生物技术股份有限公司 拮抗抑制人pd-1抗原与其配体结合的单克隆抗体及其制备方法与应用
US11492403B2 (en) 2017-04-20 2022-11-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Anti-phosphotyrosinylated programmed death 1 (PD-1) monoclonal antibodies, methods of making and methods of using thereof
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
US11427636B2 (en) 2017-05-01 2022-08-30 The Children's Medical Center Corporation Methods and compositions relating to anti-PD1 antibody reagents
RS64576B1 (sr) 2017-05-01 2023-10-31 Agenus Inc Anti-tigit antitela i postupci njihove primene
WO2018209298A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 Harpoon Therapeutics, Inc. Mesothelin binding proteins
CA3063723A1 (en) 2017-05-18 2018-11-22 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding tethered interleukin-12 (il12) polypeptides and uses thereof
AR111760A1 (es) 2017-05-19 2019-08-14 Novartis Ag Compuestos y composiciones para el tratamiento de tumores sólidos mediante administración intratumoral
HUE065242T2 (hu) 2017-05-30 2024-05-28 Bristol Myers Squibb Co LAG-3-pozitív tumorok kezelése
AU2018275209A1 (en) 2017-05-30 2019-10-17 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising an anti-LAG-3 antibody or an anti-LAG-3 antibody and an anti-PD-1 or anti-PD-L1 antibody
JP2020522495A (ja) 2017-05-30 2020-07-30 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 抗ｌａｇ−３抗体、ｐｄ−１経路阻害剤および免疫療法剤の組み合わせを含む組成物
JOP20190279A1 (ar) 2017-05-31 2019-11-28 Novartis Ag الصور البلورية من 5-برومو -2، 6-داي (1h-بيرازول -1-يل) بيريميدين -4- أمين وأملاح جديدة
KR102714702B1 (ko) 2017-06-01 2024-10-10 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-pd-1 항체를 사용하여 종양을 치료하는 방법
KR20200021474A (ko) 2017-06-01 2020-02-28 컴퓨젠 엘티디. 삼중 조합 항체 치료제
WO2018222949A1 (en) 2017-06-01 2018-12-06 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable anti-pdl1 antibodies, and methods of use thereof
BR112019026564A2 (pt) 2017-06-14 2020-06-30 Adc Therapeutics Sa regimes de dosagem para a administração de um adc anti-cd19
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
US11312783B2 (en) 2017-06-22 2022-04-26 Novartis Ag Antibody molecules to CD73 and uses thereof
EP3642240A1 (en) 2017-06-22 2020-04-29 Novartis AG Antibody molecules to cd73 and uses thereof
TW201904993A (zh) 2017-06-22 2019-02-01 瑞士商諾華公司 IL-1β 結合抗體之用途
WO2018235056A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag IL-1BETA BINDING ANTIBODIES FOR USE IN THE TREATMENT OF CANCER
EP3645569A4 (en) * 2017-06-26 2021-03-24 BeiGene, Ltd. IMMUNOTHERAPY FOR LIVER CELL CARCINOMA
WO2019006007A1 (en) 2017-06-27 2019-01-03 Novartis Ag POSOLOGICAL REGIMES FOR ANTI-TIM3 ANTIBODIES AND USES THEREOF
EP3421494A1 (en) 2017-06-29 2019-01-02 Sanofi Use of isatuximab in combination with an anti-pd-1 antibody
JP7159282B2 (ja) 2017-07-14 2022-10-24 イネイト・テューマー・イミュニティ・インコーポレイテッド Ｎｌｒｐ３モジュレーター
EP3655023A1 (en) 2017-07-20 2020-05-27 Novartis AG Dosage regimens of anti-lag-3 antibodies and uses thereof
EP3658914A1 (en) 2017-07-28 2020-06-03 Bristol-Myers Squibb Company Predictive peripheral blood biomarker for checkpoint inhibitors
KR102709265B1 (ko) 2017-07-28 2024-09-23 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항암제로서의 시클릭 디뉴클레오티드
US11377449B2 (en) 2017-08-12 2022-07-05 Beigene, Ltd. BTK inhibitors with improved dual selectivity
SG11202001211TA (en) 2017-08-28 2020-03-30 Bristol Myers Squibb Co Tim-3 antagonists for the treatment and diagnosis of cancers
ES2945140T3 (es) 2017-08-31 2023-06-28 Bristol Myers Squibb Co Dinucleótidos cíclicos como agentes anticancerosos
KR102674630B1 (ko) 2017-08-31 2024-06-11 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항암제로서의 시클릭 디뉴클레오티드
JP7316263B2 (ja) 2017-08-31 2023-07-27 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗癌剤としての環状ジヌクレオチド
CA3073055A1 (en) 2017-09-04 2019-03-07 Agenus Inc. T cell receptors that bind to mixed lineage leukemia (mll)-specific phosphopeptides and methods of use thereof
WO2019055579A1 (en) 2017-09-12 2019-03-21 Tolero Pharmaceuticals, Inc. TREATMENT REGIME FOR CANCERS THAT ARE INSENSITIVE TO BCL-2 INHIBITORS USING THE MCL-1 ALVOCIDIB INHIBITOR
WO2019061324A1 (en) 2017-09-29 2019-04-04 Curis Inc. CRYSTALLINE FORMS OF IMMUNOMODULATORS
WO2019074887A1 (en) 2017-10-10 2019-04-18 Bristol-Myers Squibb Company CYCLIC DINUCLEOTIDES AS ANTICANCER AGENTS
EA202090536A1 (ru) 2017-10-11 2020-07-22 Ориджен Дискавери Текнолоджис Лимитед Кристаллические формы 3-замещенного 1,2,4-оксадиазола
KR101982001B1 (ko) * 2017-10-13 2019-05-27 한국과학기술원 동종 또는 이종 거부반응을 이용한 항 pd-1 또는 항 pd-l1 항체 선별 방법
CR20200195A (es) 2017-10-13 2020-08-14 Harpoon Therapeutics Inc Proteínas de unión a antigenos de maduraciòn de celulas b
WO2019072241A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Beijing Biocytogen Co., Ltd NON-HUMAN ANIMAL GENETICALLY MODIFIED WITH PD-1 HUMAN OR CHIMERIC
EP3694884A1 (en) 2017-10-15 2020-08-19 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
WO2019079261A1 (en) 2017-10-16 2019-04-25 Bristol-Myers Squibb Company CYCLIC DINUCLEOTIDES AS ANTICANCER AGENTS
US20210040205A1 (en) 2017-10-25 2021-02-11 Novartis Ag Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
SG11202003625VA (en) 2017-11-03 2020-05-28 Aurigene Discovery Tech Ltd Dual inhibitors of tim-3 and pd-1 pathways
CN111213059B (zh) 2017-11-06 2024-01-09 豪夫迈·罗氏有限公司 用于癌症的诊断和治疗方法
SG11202003626RA (en) 2017-11-06 2020-05-28 Bristol Myers Squibb Co Methods of treating a tumor
WO2019087092A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Aurigene Discovery Technologies Limited Conjoint therapies for immunomodulation
JP7339944B2 (ja) 2017-11-07 2023-09-06 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム がんの処置におけるｃａｒ－ｔ細胞またはｃａｒ－ｎｋ細胞を用いるｌｉｌｒｂ４のターゲティング法
WO2019094265A1 (en) * 2017-11-10 2019-05-16 Armo Biosciences, Inc. Pd1 polypeptide binding molecules
JP7201400B2 (ja) 2017-11-14 2023-01-10 ファイザー・インク Ｅｚｈ２阻害剤組合せ療法
WO2019099838A1 (en) 2017-11-16 2019-05-23 Novartis Ag Combination therapies
CN111587249A (zh) 2017-11-20 2020-08-25 阿里根公司 吲哚化合物及其用途
CN107952069A (zh) * 2017-11-24 2018-04-24 长春百克生物科技股份公司 重组疫苗及其应用
WO2019108795A1 (en) * 2017-11-29 2019-06-06 Beigene Switzerland Gmbh Treatment of indolent or aggressive b-cell lymphomas using a combination comprising btk inhibitors
EP3717907A1 (en) 2017-11-30 2020-10-07 Novartis AG Bcma-targeting chimeric antigen receptor, and uses thereof
US11667713B2 (en) * 2017-12-28 2023-06-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cytotoxicity-inducing therapeutic agent
US20210072244A1 (en) 2018-01-04 2021-03-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating melanoma resistant
TW201930591A (zh) 2018-01-08 2019-08-01 瑞士商諾華公司 用於與嵌合抗原受體療法併用之免疫增強rna
EP3737376B1 (en) 2018-01-09 2024-04-17 Shuttle Pharmaceuticals, Inc. Selective histone deacetylase inhibitors for the treatment of human diseases
CN111699200B (zh) * 2018-01-15 2023-05-26 南京传奇生物科技有限公司 针对pd-1的单域抗体和其变体
EP3740506A1 (en) 2018-01-16 2020-11-25 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating cancer with antibodies against tim3
WO2019144126A1 (en) 2018-01-22 2019-07-25 Pascal Biosciences Inc. Cannabinoids and derivatives for promoting immunogenicity of tumor and infected cells
CN111629731A (zh) 2018-01-22 2020-09-04 百时美施贵宝公司 治疗癌症的组合物和方法
CA3090249A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Novartis Ag Combination therapy using a chimeric antigen receptor
US20200405806A1 (en) 2018-02-08 2020-12-31 Bristol-Myers Squibb Company Combination of a tetanus toxoid, anti-ox40 antibody and/or anti-pd-1 antibody to treat tumors
WO2019157353A1 (en) * 2018-02-09 2019-08-15 Beigene, Ltd. Immunotherapy for urothelial carcinoma
US10519187B2 (en) 2018-02-13 2019-12-31 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
WO2019160956A1 (en) 2018-02-13 2019-08-22 Novartis Ag Chimeric antigen receptor therapy in combination with il-15r and il15
EP3756012A1 (en) 2018-02-21 2020-12-30 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of sk1 as biomarker for predicting response to immunecheckpoint inhibitors
EP3755716A4 (en) 2018-02-23 2021-08-04 Eucure (Beijing) Biopharma Co., Ltd ANTI-PD-1 ANTIBODIES AND THEIR USES
GB201803745D0 (en) 2018-03-08 2018-04-25 Ultrahuman Eight Ltd PD1 binding agents
GB201803746D0 (en) 2018-03-08 2018-04-25 Ultrahuman Eight Ltd PD1 binding agents
KR20200130362A (ko) 2018-03-08 2020-11-18 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항암제로서의 시클릭 디뉴클레오티드
US20210094991A1 (en) 2018-03-19 2021-04-01 Multivir Inc. Methods and compositions comprising tumor suppressor gene therapy and cd122/cd132 agonists for the treatment of cancer
EP3768715A1 (en) 2018-03-23 2021-01-27 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against mica and/or micb and uses thereof
EP4066851A1 (en) 2018-03-25 2022-10-05 SNIPR Biome ApS. Treating & preventing microbial infections
US10760075B2 (en) 2018-04-30 2020-09-01 Snipr Biome Aps Treating and preventing microbial infections
KR20200136417A (ko) 2018-03-27 2020-12-07 보드 오브 리전츠, 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 Her2 엑손 19 돌연변이를 보유하는 암 세포에 대해 항 종양 활성을 갖는 화합물
WO2019191676A1 (en) 2018-03-30 2019-10-03 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
JP2021520201A (ja) 2018-04-04 2021-08-19 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 抗ｃｄ２７抗体およびその使用
US20210147547A1 (en) 2018-04-13 2021-05-20 Novartis Ag Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof
JP7332627B2 (ja) 2018-04-25 2023-08-23 プロメテウス バイオサイエンシーズ，インク． 最適化された抗ｔｌ１ａ抗体
ES2971122T3 (es) 2018-04-25 2024-06-03 Innate Tumor Immunity Inc Moduladores de NLRP3
EP3784688A2 (en) 2018-04-26 2021-03-03 Agenus Inc. Heat shock protein-binding peptide compositions and methods of use thereof
US11957695B2 (en) 2018-04-26 2024-04-16 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions targeting glucocorticoid signaling for modulating immune responses
US20210386829A1 (en) 2018-05-04 2021-12-16 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods for modulating cgrp signaling to regulate innate lymphoid cell inflammatory responses
WO2019217457A1 (en) 2018-05-07 2019-11-14 Genmab A/S Methods of treating cancer with a combination of an anti-pd-1 antibody and an anti-tissue factor antibody-drug conjugate
US11136394B2 (en) 2018-05-17 2021-10-05 Nanjing Leads Biolabs Co., Ltd. Antibody binding PD-1 and use thereof
EP3797123A4 (en) 2018-05-23 2022-03-02 BeiGene, Ltd. ANTI-OX40 ANTIBODIES AND METHODS OF USE
KR20210016562A (ko) 2018-05-23 2021-02-16 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 분자 애쥬번트
UY38247A (es) 2018-05-30 2019-12-31 Novartis Ag Anticuerpos frente a entpd2, terapias de combinación y métodos de uso de los anticuerpos y las terapias de combinación
US20210214459A1 (en) 2018-05-31 2021-07-15 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
WO2019232319A1 (en) 2018-05-31 2019-12-05 Peloton Therapeutics, Inc. Compositions and methods for inhibiting cd73
KR20210016390A (ko) 2018-06-01 2021-02-15 노파르티스 아게 Bcma에 대한 결합 분자 및 이의 용도
CN108752460B (zh) * 2018-06-07 2022-05-10 江苏东抗生物医药科技有限公司 一种高亲和力的pd-1膜外区突变体的融合蛋白及其药物组合物和用途
CN112566643A (zh) 2018-06-12 2021-03-26 加利福尼亚大学董事会 用于治疗癌症的单链双特异性嵌合抗原受体
AU2019288728A1 (en) 2018-06-23 2021-01-14 Genentech, Inc. Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, a platinum agent, and a topoisomerase ii inhibitor
KR20210031680A (ko) 2018-07-10 2021-03-22 노파르티스 아게 3-(5-하이드록시-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 유도체 및 ikaros 패밀리 아연 핑거 2(ikzf2)-의존성 질환의 치료에 있어서의 이의 용도
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
US11448651B2 (en) 2018-07-10 2022-09-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Modifying binding molecules to minimize pre-exisiting interactions
CA3176812A1 (en) 2018-07-11 2020-01-16 Actym Therapeutics, Inc. Engineered immunostimulatory bacterial strains and uses thereof
WO2020014583A1 (en) 2018-07-13 2020-01-16 Bristol-Myers Squibb Company Ox-40 agonist, pd-1 pathway inhibitor and ctla-4 inhibitor combination for use in a mehtod of treating a cancer or a solid tumor
CN112839644A (zh) 2018-07-18 2021-05-25 豪夫迈·罗氏有限公司 用pd-1轴结合拮抗剂、抗代谢物和铂剂治疗肺癌的方法
JP7519985B2 (ja) * 2018-07-19 2024-07-22 タユー ファシャ バイオテック メディカル グループ カンパニー， リミテッド 抗ｐｄ－１抗体、投薬量、およびその使用
WO2020021465A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. Method of treatment of neuroendocrine tumors
WO2020021061A1 (en) 2018-07-26 2020-01-30 Pieris Pharmaceuticals Gmbh Humanized anti-pd-1 antibodies and uses thereof
US20210238287A1 (en) 2018-07-26 2021-08-05 Bristol-Myers Squibb Company LAG-3 Combination Therapy for the Treatment of Cancer
CN113038989A (zh) 2018-08-16 2021-06-25 先天肿瘤免疫公司 咪唑并[4,5-c]喹啉衍生的nlrp3调节剂
KR20210045430A (ko) 2018-08-16 2021-04-26 인네이트 튜머 이뮤니티, 인코포레이티드 이미다조[4,5-c]퀴놀린 유래 NLRP3-조정제
KR20210046022A (ko) 2018-08-16 2021-04-27 인네이트 튜머 이뮤니티, 인코포레이티드 치환된 4-아미노-1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린 화합물 및 그의 개선된 제조 방법
TW202026423A (zh) 2018-08-24 2020-07-16 法商賽諾菲公司 用於實體瘤癌症的治療性ｒｎａ
EP3843849A1 (en) 2018-08-27 2021-07-07 Pieris Pharmaceuticals GmbH Combination therapies comprising cd137/her2 bispecific agents and pd-1 axis inhibitors and uses thereof
US10780121B2 (en) 2018-08-29 2020-09-22 Shattuck Labs, Inc. FLT3L-based chimeric proteins
TW202031273A (zh) 2018-08-31 2020-09-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 抗ｐｄ－１抗體難治療性之非小細胞肺癌（ｎｓｃｌｃ）病患的治療
WO2020044252A1 (en) 2018-08-31 2020-03-05 Novartis Ag Dosage regimes for anti-m-csf antibodies and uses thereof
TW202024023A (zh) 2018-09-03 2020-07-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 治療性化合物及其使用方法
WO2020049534A1 (en) 2018-09-07 2020-03-12 Novartis Ag Sting agonist and combination therapy thereof for the treatment of cancer
AU2019345151A1 (en) 2018-09-19 2021-04-29 Alpine Immune Sciences, Inc. Methods and uses of variant CD80 fusion proteins and related constructs
WO2020061429A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tils from cryopreserved tumor samples
AU2019346466A1 (en) 2018-09-25 2021-05-20 Harpoon Therapeutics, Inc. DLL3 binding proteins and methods of use
EP3864046A1 (en) 2018-10-09 2021-08-18 Bristol-Myers Squibb Company Anti-mertk antibodies for treating cancer
CN112867803A (zh) 2018-10-16 2021-05-28 诺华股份有限公司 单独的或与免疫标志物组合的肿瘤突变负荷作为生物标志物用于预测对靶向疗法的应答
CN109470806A (zh) * 2018-10-19 2019-03-15 张骐 通过二维液相对单抗类产品细胞株进行高通量筛选的方法
MX2021003903A (es) 2018-10-19 2021-06-04 Bristol Myers Squibb Co Terapia combinada para el melanoma.
CN112912403A (zh) 2018-10-23 2021-06-04 百时美施贵宝公司 治疗肿瘤的方法
EP3873532A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Novartis AG Dc-sign antibody drug conjugates
US20220001026A1 (en) 2018-11-08 2022-01-06 Modernatx, Inc. Use of mrna encoding ox40l to treat cancer in human patients
WO2020099230A1 (en) 2018-11-14 2020-05-22 Bayer Aktiengesellschaft Pharmaceutical combination of anti-ceacam6 and either anti-pd-1 or anti-pd-l1 antibodies for the treatment of cancer
CN113316590A (zh) 2018-11-16 2021-08-27 百时美施贵宝公司 抗nkg2a抗体及其用途
EP3880231A1 (en) 2018-11-16 2021-09-22 NeoImmuneTech, Inc. Method of treating a tumor with a combination of il-7 protein and an immune checkpoint inhibitor
JP2022513076A (ja) 2018-11-19 2022-02-07 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム Ｃａｒおよびｔｃｒ形質導入用のモジュール式ポリシストロニックベクター
KR20220089688A (ko) 2018-11-19 2022-06-28 바이오사이토젠 파마슈티컬스 (베이징) 컴퍼니 리미티드 항-pd-1 항체 및 이의 용도
CN109452229B (zh) * 2018-11-19 2021-10-22 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 狗源化pd-1基因改造动物模型的制备方法及应用
TW202038943A (zh) 2018-11-19 2020-11-01 美商雅里俊公司 治療癌症之方法
US20230183379A1 (en) 2018-11-20 2023-06-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Bispecific antibody targeting transferrin receptor 1 and soluble antigen
WO2020104479A1 (en) 2018-11-20 2020-05-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating cancers and resistant cancers with anti transferrin receptor 1 antibodies
AU2019386140A1 (en) 2018-11-28 2021-06-24 Board Of Regents, The University Of Texas System Multiplex genome editing of immune cells to enhance functionality and resistance to suppressive environment
BR112021010248A2 (pt) 2018-11-29 2021-08-17 Board Of Regents, The University Of Texas System métodos para expansão ex vivo de células naturais killer e uso dos mesmos
KR20210099066A (ko) 2018-12-04 2021-08-11 스미토모 다이니폰 파마 온콜로지, 인크. 암의 치료를 위한 작용제로서 사용하기 위한 cdk9 억제제 및 그의 다형체
EP3891508A1 (en) 2018-12-04 2021-10-13 Bristol-Myers Squibb Company Methods of analysis using in-sample calibration curve by multiple isotopologue reaction monitoring
KR102195135B1 (ko) * 2018-12-07 2020-12-24 한국과학기술원 면역조절제의 스크리닝 방법
WO2020115261A1 (en) 2018-12-07 2020-06-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating melanoma
EP3893886A4 (en) * 2018-12-10 2022-09-28 2seventy bio, Inc. PDCD-1 HOMING ENDONUCLEASE VARIANTS
WO2020123453A2 (en) 2018-12-11 2020-06-18 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Alk5 inhibitors
EP3666905A1 (en) 2018-12-11 2020-06-17 Sanofi E. coli positive for pks island as marker of positive response to anti-pd1 therapy in colorectal cancer
WO2020120592A1 (en) 2018-12-12 2020-06-18 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for predicting and treating melanoma
US20220064332A1 (en) 2018-12-19 2022-03-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating cancers by immuno-modulation using antibodies against cathespin-d
CN113271945A (zh) 2018-12-20 2021-08-17 诺华股份有限公司 包含3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物的给药方案和药物组合
JP7450622B2 (ja) 2018-12-21 2024-03-15 ヴァレリオ・セラピューティクス 新規のコンジュゲートされた核酸分子及びその使用
WO2020128613A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1beta binding antibodies
CN113227138A (zh) 2018-12-21 2021-08-06 诺华股份有限公司 IL-1β结合抗体的用途
BR112021012103A2 (pt) 2018-12-21 2021-09-08 Aim Immunotech Inc. Composições e métodos para terapia de câncer
WO2020128636A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1 beta antibodies in the treatment or prevention of myelodysplastic syndrome
WO2020128637A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1 binding antibodies in the treatment of a msi-h cancer
WO2020127885A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Compositions for treating cancers and resistant cancers
US11739156B2 (en) 2019-01-06 2023-08-29 The Broad Institute, Inc. Massachusetts Institute of Technology Methods and compositions for overcoming immunosuppression
CN111423510B (zh) 2019-01-10 2024-02-06 迈威(上海)生物科技股份有限公司 重组抗人pd-1抗体及其应用
TW202043272A (zh) 2019-01-14 2020-12-01 美商建南德克公司 使用pd-1軸結合拮抗劑及rna疫苗治療癌症之方法
EP3911417B1 (en) 2019-01-14 2022-10-26 Innate Tumor Immunity, Inc. Heterocyclic nlrp3 modulators , for use in the treatment of cancer
EP3911642A1 (en) 2019-01-14 2021-11-24 Innate Tumor Immunity, Inc. Nlrp3 modulators
EP3911641A1 (en) 2019-01-14 2021-11-24 Innate Tumor Immunity, Inc. Nlrp3 modulators
ES2981835T3 (es) 2019-01-14 2024-10-10 Innate Tumor Immunity Inc Quinazolinas sustituidas como moduladores de NLRP3, para su uso en el tratamiento del cáncer
KR20210118870A (ko) 2019-01-21 2021-10-01 사노피 진행성 단계의 고형 종양 암에 대한 치료용 rna 및 항-pd1 항체
EP3918332A1 (en) 2019-01-30 2021-12-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for identifying whether a subject suffering from a cancer will achieve a response with an immune-checkpoint inhibitor
WO2020161083A1 (en) 2019-02-04 2020-08-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for modulating blood-brain barrier
US20220160706A1 (en) 2019-02-12 2022-05-26 Novartis Ag Pharmaceutical combination comprising tno155 and a pd-1 inhibitor
MX2021009371A (es) 2019-02-12 2021-09-10 Sumitomo Pharma Oncology Inc Formulaciones que comprenden inhibidores de proteina cinasa heterociclicos.
WO2020165370A1 (en) 2019-02-13 2020-08-20 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for selecting a cancer treatment in a subject suffering from cancer
US20220144798A1 (en) 2019-02-15 2022-05-12 Novartis Ag Substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
EP3924054A1 (en) 2019-02-15 2021-12-22 Novartis AG 3-(1-oxo-5-(piperidin-4-yl)isoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
EP3924521A4 (en) 2019-02-15 2023-03-29 IncellDx, Inc. BLADDER-ASSOCIATED SPECIMEN ASSAY, IDENTIFICATION AND TREATMENT OF BLADDER-ASSOCIATED NEOPLASIA, AND KITS FOR USE THEREOF
WO2020191079A1 (en) 2019-03-18 2020-09-24 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods for modulating metabolic regulators of t cell pathogenicity
CN110297093B (zh) * 2019-03-18 2022-04-22 山西瑞豪生物科技有限公司 一种检测人免疫球蛋白g4的方法和试剂盒
JP2022525149A (ja) 2019-03-20 2022-05-11 スミトモ ダイニッポン ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド ベネトクラクスが失敗した急性骨髄性白血病（ａｍｌ）の処置
CA3133460A1 (en) 2019-03-22 2020-10-01 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Compositions comprising pkm2 modulators and methods of treatment using the same
US20220195046A1 (en) 2019-03-28 2022-06-23 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
US20220041733A1 (en) 2019-03-28 2022-02-10 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
JP2022527345A (ja) 2019-04-03 2022-06-01 オレガ・バイオテック Ｐｄ１阻害剤及びｉｌ－１７ｂ阻害剤に基づく複合療法
AU2020258394A1 (en) 2019-04-15 2021-10-28 Ariagen, Inc. Chiral indole compounds and their use
KR20220002967A (ko) 2019-04-19 2022-01-07 제넨테크, 인크. 항 mertk 항체 및 이의 사용 방법
EP3725370A1 (en) 2019-04-19 2020-10-21 ImmunoBrain Checkpoint, Inc. Modified anti-pd-l1 antibodies and methods and uses for treating a neurodegenerative disease
EP3963109A1 (en) 2019-04-30 2022-03-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating melanoma
CA3138348A1 (en) 2019-05-09 2020-11-12 FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. Methods for the production of hepatocytes
US20230295087A1 (en) 2019-05-13 2023-09-21 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
US12012374B2 (en) 2019-05-13 2024-06-18 Bristol-Myers Squibb Company Agonists of ROR GAMMAt
US11434291B2 (en) 2019-05-14 2022-09-06 Provention Bio, Inc. Methods and compositions for preventing type 1 diabetes
TW202110431A (zh) 2019-05-17 2021-03-16 美商癌症預防製藥股份有限公司 治療家族性腺瘤性瘜肉症之方法
WO2020239558A1 (en) 2019-05-24 2020-12-03 Pfizer Inc. Combination therapies using cdk inhibitors
EP3976831A1 (en) 2019-05-30 2022-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures for suitability to immuno-oncology therapy
EP3976832A1 (en) 2019-05-30 2022-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject suitable for an immuno-oncology (i-o) therapy
CN114174537A (zh) 2019-05-30 2022-03-11 百时美施贵宝公司 细胞定位特征和组合疗法
MX2021014867A (es) 2019-06-03 2022-03-25 Univ Chicago Metodos y composiciones para el tratamiento del cancer con adyuvantes dirigidos al cancer.
BR112021024438A2 (pt) 2019-06-03 2022-02-15 Univ Chicago Métodos e composições para tratar câncer com carreadores de fármaco de ligação de colágeno
US11246906B2 (en) 2019-06-11 2022-02-15 Alkermes Pharma Ireland Limited Compositions and methods for subcutaneous administration of cancer immunotherapy
MA56523A (fr) 2019-06-18 2022-04-27 Janssen Sciences Ireland Unlimited Co Combinaison de vaccins contre le virus de l'hépatite b (vhb) et d'anticorps anti-pd-1 ou anti-pd-l1
JP2022537324A (ja) 2019-06-18 2022-08-25 ヤンセン・サイエンシズ・アイルランド・アンリミテッド・カンパニー Ｂ型肝炎ウイルス（ｈｂｖ）ワクチンおよび抗ｐｄ－１抗体の組合せ
CN117447596A (zh) * 2019-06-30 2024-01-26 福州创方医药科技有限公司 一种靶向pd-1的单克隆抗体及其应用
CN112225809B (zh) * 2019-06-30 2023-09-05 福州创方医药科技有限公司 一种靶向pd-1的单克隆抗体及其应用
JP2022539208A (ja) 2019-07-03 2022-09-07 スミトモ ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド チロシンキナーゼ非受容体１（ｔｎｋ１）阻害剤およびその使用
EP3998081A4 (en) 2019-07-05 2023-07-12 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. TREATMENT OF BLOOD CANCER WITH PD-1/CD3 DUAL SPECIFICITY PROTEIN
US20220306630A1 (en) 2019-08-06 2022-09-29 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
JPWO2021025140A1 (ru) 2019-08-08 2021-02-11
WO2021030627A1 (en) 2019-08-13 2021-02-18 The General Hospital Corporation Methods for predicting outcomes of checkpoint inhibition and treatment thereof
GB201912107D0 (en) 2019-08-22 2019-10-09 Amazentis Sa Combination
KR20220053007A (ko) 2019-08-30 2022-04-28 아게누스 인코포레이티드 항-cd96 항체 및 이의 사용 방법
WO2021047623A1 (en) * 2019-09-11 2021-03-18 Beigene, Ltd. Treatment of cancer using a combination comprising multi-tyrosine kinase inhibitor and immune checkpoint inhibitor
WO2021048292A1 (en) 2019-09-11 2021-03-18 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating melanoma
US12121565B2 (en) 2019-09-13 2024-10-22 Duke University Methods of treatment of specific cancers with NLRP3 inhibitors and anti-PD1/PD-L1 antibodies
CA3150906A1 (en) 2019-09-17 2021-03-25 Renato T. Skerlj Substituted, saturated and unsaturated n-heterocyclic carboxamides and related compounds for their use in the treatment of medical disorders
US20220402901A1 (en) 2019-09-17 2022-12-22 Bial - R&D Investments, S.A. Substituted n-heterocyclic carboxamides as acid ceramidase inhibitors and their use as medicaments
EP4031531A1 (en) 2019-09-17 2022-07-27 Bial-R&D Investments, S.A. Substituted imidazole carboxamides and their use in the treatment of medical disorders
EP4031578A1 (en) 2019-09-18 2022-07-27 Novartis AG Entpd2 antibodies, combination therapies, and methods of using the antibodies and combination therapies
TW202124446A (zh) 2019-09-18 2021-07-01 瑞士商諾華公司 與ｅｎｔｐｄ２抗體之組合療法
MX2022003197A (es) 2019-09-22 2022-04-11 Bristol Myers Squibb Co Perfilado espacial cuantitativo para terapia con antagonistas de la proteina del gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3).
MX2022003487A (es) 2019-09-25 2022-04-25 Bristol Myers Squibb Co Biomarcador compuesto para terapia de cancer.
CN114728046A (zh) 2019-09-25 2022-07-08 思进公司 联合抗cd30 adc、抗pd-1和化疗以治疗血液癌症
WO2021064180A1 (en) 2019-10-03 2021-04-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for modulating macrophages polarization
US11981922B2 (en) 2019-10-03 2024-05-14 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods and compositions for the modulation of cell interactions and signaling in the tumor microenvironment
US11793787B2 (en) 2019-10-07 2023-10-24 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for enhancing anti-tumor immunity by targeting steroidogenesis
CA3157889A1 (en) 2019-10-17 2021-04-22 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods for diagnosing nasal intestinal type adenocarcinomas
BR112022007179A2 (pt) 2019-10-21 2022-08-23 Novartis Ag Inibidores de tim-3 e usos dos mesmos
JP2022553293A (ja) 2019-10-21 2022-12-22 ノバルティス アーゲー ベネトクラックスおよびｔｉｍ－３阻害剤を用いた併用療法
JP7504992B2 (ja) 2019-10-24 2024-06-24 プロメテウス バイオサイエンシーズ，インク． Ｔｎｆ様リガンド１ａ（ｔｌ１ａ）に対するヒト化抗体およびその使用
MX2022005056A (es) 2019-10-29 2022-05-18 Eisai R&D Man Co Ltd Combinacion de un antagonista de pd-1, un inhibidor tirosina cinasa de vegfr/fgfr/ret y un inhibidor de cbp/beta-catenina para el tratamiento del cancer.
US20240122938A1 (en) 2019-10-29 2024-04-18 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating uveal melanoma
WO2021087458A2 (en) 2019-11-02 2021-05-06 Board Of Regents, The University Of Texas System Targeting nonsense-mediated decay to activate p53 pathway for the treatment of cancer
US20220387529A1 (en) 2019-11-04 2022-12-08 Duke University Treatment for primary and metastatic cancer
CN115298549A (zh) 2019-11-05 2022-11-04 百时美施贵宝公司 M蛋白测定及其用途
WO2021092221A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
WO2021092220A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
EP4054723A1 (en) 2019-11-08 2022-09-14 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for melanoma
EP4058435A1 (en) 2019-11-13 2022-09-21 Genentech, Inc. Therapeutic compounds and methods of use
CN112794906B (zh) * 2019-11-13 2022-04-05 合肥瀚科迈博生物技术有限公司 抗4-1bb的单链抗体及其应用
EP4058465A1 (en) 2019-11-14 2022-09-21 Cohbar Inc. Cxcr4 antagonist peptides
AU2020386583A1 (en) * 2019-11-21 2022-06-02 Beigene, Ltd. Methods of cancer treatment using anti-OX40 antibodies in combination with anti-PD1 or anti-PDL1 antibodies
JP2023502264A (ja) 2019-11-22 2023-01-23 スミトモ ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド 固体用量医薬組成物
EP4061809A1 (en) 2019-11-22 2022-09-28 Theravance Biopharma R&D IP, LLC Substituted 1,5-naphthyridines or quinolines as alk5 inhibitors
GB201917254D0 (en) 2019-11-27 2020-01-08 Adc Therapeutics Sa Combination therapy
WO2021113644A1 (en) 2019-12-05 2021-06-10 Multivir Inc. Combinations comprising a cd8+ t cell enhancer, an immune checkpoint inhibitor and radiotherapy for targeted and abscopal effects for the treatment of cancer
BR112022011268A2 (pt) 2019-12-09 2022-09-06 Seagen Inc Terapia de combinação com antagonista de liv1-adc e pd1
CN115243721A (zh) 2019-12-19 2022-10-25 百时美施贵宝公司 Dgk抑制剂和检查点拮抗剂的组合
AU2020408198A1 (en) 2019-12-19 2022-07-14 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and vaccine compositions to treat cancers
IL293834A (en) 2019-12-20 2022-08-01 Novartis Ag A combination of anti-tim-3 antibody mbg453 and anti, nis793 tgf-beta antibody with or without decitabine or anti-pd-1 antibody spratlizumab, for the treatment of myelofibrosis and myelodysplastic syndrome
US20230044381A1 (en) * 2019-12-20 2023-02-09 Guangdong Feipeng Pharmaceutical Co., Ltd Anti-human programmed death-1 monoclonal antibody
CA3161733A1 (en) 2020-01-07 2021-05-15 Everett Stone Improved human methylthioadenosine/adenosine depleting enzyme variants for cancer therapy
JP7573622B2 (ja) 2020-01-10 2024-10-25 イネイト・テューマー・イミュニティ・インコーポレイテッド Ｎｌｒｐ３モジュレーター
EP4090770A1 (en) 2020-01-17 2022-11-23 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating melanoma
BR112022012310A2 (pt) 2020-01-17 2022-09-06 Novartis Ag Combinação compreendendo um inibidor de tim-3 e um agente hipometilante para uso no tratamento de síndrome mielodisplásica ou leucemia mielomonocítica crônica
WO2021152548A1 (en) 2020-01-30 2021-08-05 Benitah Salvador Aznar Combination therapy for treatment of cancer and cancer metastasis
WO2021155149A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 Genentech, Inc. Methods of inducing neoepitope-specific t cells with a pd-1 axis binding antagonist and an rna vaccine
WO2021156360A1 (en) 2020-02-05 2021-08-12 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for discontinuing a treatment with a tyrosine kinase inhibitor (tki)
KR20220139915A (ko) 2020-02-06 2022-10-17 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Il-10 및 그의 용도
CA3168337A1 (en) 2020-02-17 2021-08-26 Marie-Andree Forget Methods for expansion of tumor infiltrating lymphocytes and use thereof
US20230045494A1 (en) 2020-02-28 2023-02-09 Orega Biotech Combination therapies based on ctla4 and il-17b inhibitors
US20230113705A1 (en) 2020-02-28 2023-04-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for diagnosing, prognosing and managing treatment of breast cancer
JP2023516155A (ja) 2020-02-28 2023-04-18 ノバルティス アーゲー ダブラフェニブ、ｅｒｋ阻害剤及びｒａｆ阻害剤又はｐｄ－１阻害剤を含む三重の医薬品の組合せ
IL296103A (en) 2020-03-05 2022-11-01 Neotx Therapeutics Ltd Methods and preparations for treating cancer with immune cells
JP2023516745A (ja) 2020-03-06 2023-04-20 セルジーン・クオンティセル・リサーチ・インコーポレイテッド 小細胞肺癌および／または扁平上皮非小細胞肺癌の処置方法
WO2021176424A1 (en) 2020-03-06 2021-09-10 Ona Therapeutics, S.L. Anti-cd36 antibodies and their use to treat cancer
EP3878446A1 (en) 2020-03-09 2021-09-15 Universite De Geneve Hsd11b1 inhibitors for use in immunotherapy and uses thereof
WO2021194942A1 (en) 2020-03-23 2021-09-30 Bristol-Myers Squibb Company Anti-ccr8 antibodies for treating cancer
CN115916963A (zh) 2020-03-27 2023-04-04 门德斯有限公司 白血病来源的经修饰细胞用于增强过继性细胞治疗的效力的离体用途
JP2023519673A (ja) 2020-03-31 2023-05-12 セラヴァンス バイオファーマ アール＆ディー アイピー， エルエルシー 置換ピリミジンおよび使用方法
WO2021214623A1 (en) 2020-04-21 2021-10-28 Novartis Ag Dosing regimen for treating a disease modulated by csf-1r
JP2023524639A (ja) 2020-04-22 2023-06-13 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 患者特異的免疫療法用細胞の製造調整システム及び調整方法
KR102623161B1 (ko) * 2020-10-08 2024-01-09 고려대학교 산학협력단 Pd-l1 친화도가 증가된 pd-1 변이체
AU2021275239A1 (en) 2020-05-21 2022-12-15 Board Of Regents, The University Of Texas System T cell receptors with VGLL1 specificity and uses thereof
WO2021243207A1 (en) 2020-05-28 2021-12-02 Modernatx, Inc. Use of mrnas encoding ox40l, il-23 and il-36gamma for treating cancer
WO2021247836A1 (en) 2020-06-03 2021-12-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for targeting shp-2 to overcome resistance
US20210387983A1 (en) 2020-06-10 2021-12-16 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Crystalline alk5 inhibitors and uses thereof
WO2021252917A2 (en) 2020-06-11 2021-12-16 Provention Bio, Inc. Methods and compositions for preventing type 1 diabetes
AR122644A1 (es) 2020-06-19 2022-09-28 Onxeo Nuevas moléculas de ácido nucleico conjugado y sus usos
US20230321067A1 (en) 2020-06-23 2023-10-12 Novartis Ag Dosing regimen comprising 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives
CN116209459A (zh) 2020-06-26 2023-06-02 美国安进公司 Il-10突变蛋白及其融合蛋白
WO2022003568A1 (en) 2020-06-30 2022-01-06 Dcprime B.V. Use of leukemia-derived cells in ovarian cancer vaccines
AU2021306613A1 (en) 2020-07-07 2023-02-02 BioNTech SE Therapeutic RNA for HPV-positive cancer
WO2022009157A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 Novartis Ag Lhc165 and spartalizumab combinations for treating solid tumors
US11787775B2 (en) 2020-07-24 2023-10-17 Genentech, Inc. Therapeutic compounds and methods of use
WO2022023379A1 (en) 2020-07-28 2022-02-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for preventing and treating a cancer
US20230271940A1 (en) 2020-08-03 2023-08-31 Novartis Ag Heteroaryl substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
BR112023003427A2 (pt) 2020-08-28 2023-03-21 Bristol Myers Squibb Co Terapia com antagonista de lag-3 para carcinoma hepatocelular
WO2022043557A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
WO2022047412A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and immunotherapy
US20230338587A1 (en) 2020-08-31 2023-10-26 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
JP2023540490A (ja) 2020-09-02 2023-09-25 ファーマブシン インコーポレイテッド がん患者を治療するためのｐｄ－１拮抗薬及びｖｅｇｆｒ－２拮抗薬の併用療法
BR112023005377A2 (pt) 2020-09-24 2023-04-25 Merck Sharp & Dohme Llc Formulações estáveis de anticorpos de receptor de morte programada 1 (pd-1) e variantes de hialuronidase e fragmentos das mesmas e métodos de uso das mesmas
CN112285224A (zh) * 2020-10-02 2021-01-29 朱吉安 一种抗pd-1单克隆抗体药物的质量标准检测方法
WO2022076318A1 (en) 2020-10-05 2022-04-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods for concentrating proteins
WO2022076596A1 (en) 2020-10-06 2022-04-14 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicle-aso constructs targeting stat6
TW202233671A (zh) 2020-10-20 2022-09-01 美商建南德克公司 Ｐｅｇ結合抗ｍｅｒｔｋ抗體及其使用方法
WO2022084531A1 (en) 2020-10-23 2022-04-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating glioma
IL301907A (en) 2020-10-23 2023-06-01 Bristol Myers Squibb Co LAG-3 antagonist therapy for lung cancer
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
CA3196535A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Alfredo C. Castro Combination of an ahr inhibitor with a pdx inhibitor or doxorubicine
EP4240766A2 (en) 2020-11-04 2023-09-13 Genentech, Inc. Subcutaneous dosing of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2022098638A2 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
EP4240493A2 (en) 2020-11-04 2023-09-13 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and anti-cd79b antibody drug conjugates
AU2021373366A1 (en) 2020-11-06 2023-06-01 Novartis Ag Cd19 binding molecules and uses thereof
CA3201499A1 (en) 2020-11-13 2022-05-19 Catamaran Bio, Inc. Genetically modified natural killer cells and methods of use thereof
US20230416830A1 (en) 2020-11-16 2023-12-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for predicting and treating uveal melanoma
US20230416838A1 (en) 2020-11-16 2023-12-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for predicting and treating uveal melanoma
IL302836A (en) 2020-11-17 2023-07-01 Seagen Inc Methods for treating cancer with a combination of tocatinib and an anti-PD-1/anti-PD-L1 antibody
US20220162288A1 (en) 2020-11-25 2022-05-26 Catamaran Bio, Inc. Cellular therapeutics engineered with signal modulators and methods of use thereof
US20220168293A1 (en) 2020-12-02 2022-06-02 Pfizer Inc. Time to resolution of axitinib-related adverse events
WO2022119830A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Genentech, Inc. Methods and compositions for neoadjuvant and adjuvant urothelial carcinoma therapy
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
WO2022120388A2 (en) 2020-12-04 2022-06-09 Tidal Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof
TW202237119A (zh) 2020-12-10 2022-10-01 美商住友製藥腫瘤公司 Ａｌｋ﹘５抑制劑和彼之用途
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
EP4267172A1 (en) 2020-12-28 2023-11-01 Bristol-Myers Squibb Company Subcutaneous administration of pd1/pd-l1 antibodies
EP4267105A1 (en) 2020-12-28 2023-11-01 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
US20240299568A1 (en) 2021-01-19 2024-09-12 William Marsh Rice University Bone-specific delivery of polypeptides
AU2022211682A1 (en) 2021-01-22 2023-08-03 Mendus B.V. Methods of tumor vaccination
JP2024505049A (ja) 2021-01-29 2024-02-02 ノバルティス アーゲー 抗ｃｄ７３及び抗ｅｎｔｐｄ２抗体のための投与方式並びにその使用
JP2024506557A (ja) 2021-01-29 2024-02-14 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 修飾された腫瘍浸潤リンパ球を作製する方法及び養子細胞療法におけるそれらの使用
US20240109899A1 (en) 2021-02-04 2024-04-04 Bristol-Myers Squibb Company Benzofuran compounds as sting agonists
GB202102396D0 (en) 2021-02-19 2021-04-07 Adc Therapeutics Sa Molecular adjuvant
IL305795A (en) * 2021-03-10 2023-11-01 B G Negev Technologies & Applications Ltd At Ben Gurion Univ Reporter cells expressing chimeric proteins for use in determining the presence and or activity of immune barrier molecules
WO2022190058A1 (en) 2021-03-12 2022-09-15 Dcprime B.V. Methods of vaccination and use of cd47 blockade
US20240165094A1 (en) 2021-03-17 2024-05-23 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods and compositions for treating melanoma
US20240310266A1 (en) 2021-03-18 2024-09-19 Novartis Ag Biomarkers for cancer and methods of use thereof
TW202304506A (zh) 2021-03-25 2023-02-01 日商安斯泰來製藥公司 涉及抗claudin 18.2抗體的組合治療以治療癌症
US20240181052A1 (en) 2021-03-29 2024-06-06 Juno Therapeutics, Inc. Methods for dosing and treatment with a combination of a checkpoint inhibitor therapy and a car t cell therapy
JP2024514530A (ja) 2021-04-02 2024-04-02 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 切断型ｃｄｃｐ１に対する抗体およびその使用
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
TW202309022A (zh) 2021-04-13 2023-03-01 美商努法倫特公司 用於治療具egfr突變之癌症之胺基取代雜環
EP4322938A1 (en) 2021-04-14 2024-02-21 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) New method to improve nk cells cytotoxicity
US20240158861A1 (en) 2021-04-23 2024-05-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating cell senescence accumulation related disease
MX2023012408A (es) 2021-04-30 2023-10-31 Hoffmann La Roche Dosis para tratamiento conjunto con anticuerpo biespecifico anti-cd20/anti-cd3 y conjugado anticuerpo farmaco anti-cd79b.
WO2022232503A1 (en) 2021-04-30 2022-11-03 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods and compositions for cancer
AR125874A1 (es) 2021-05-18 2023-08-23 Novartis Ag Terapias de combinación
CA3218786A1 (en) 2021-05-25 2022-12-01 Lifei HOU C-x-c motif chemokine receptor 6 (cxcr6) binding molecules, and methods of using the same
WO2022251359A1 (en) 2021-05-26 2022-12-01 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Bicyclic inhibitors of alk5 and methods of use
EP4346903A1 (en) 2021-06-03 2024-04-10 Synthorx, Inc. Head and neck cancer combination therapy comprising an il-2 conjugate and pembrolizumab
GB202107994D0 (en) 2021-06-04 2021-07-21 Kymab Ltd Treatment of cancer
TW202317185A (zh) 2021-06-18 2023-05-01 美商健臻公司 抗ＴＧＦ－β抗體配製品及其用途
CA3223534A1 (en) 2021-07-02 2023-01-05 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating cancer
JP2024525758A (ja) 2021-07-13 2024-07-12 ビオンテック・ソシエタス・エウロパエア がんのための併用療法におけるｃｄ４０およびｃｄ１３７に対する多重特異性結合剤
JP2024527049A (ja) 2021-07-28 2024-07-19 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんを治療するための方法及び組成物
CA3224180A1 (en) 2021-07-28 2023-02-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating cancer
JP2024529502A (ja) 2021-07-30 2024-08-06 オーエヌエー セラピューティクス エセ．エレ． 抗ｃｄ３６抗体及び癌を治療するためのそれらの使用
CA3228262A1 (en) 2021-08-04 2023-02-09 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Lat activating chimeric antigen receptor t cells and methods of use thereof
WO2023028501A1 (en) 2021-08-23 2023-03-02 Immunitas Therapeutics, Inc. Anti-cd161 antibodies and uses thereof
WO2023031366A1 (en) 2021-09-02 2023-03-09 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Anti-cecam6 antibodies with reduced side-effects
EP4398889A1 (en) 2021-09-10 2024-07-17 Leap Therapeutics, Inc. Combination therapy
WO2023051926A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 BioNTech SE Treatment involving non-immunogenic rna for antigen vaccination and pd-1 axis binding antagonists
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
KR20240116708A (ko) 2021-10-05 2024-07-30 사이토비아 테라퓨틱스, 엘엘씨. 자연 살해 세포 및 이의 사용 방법
TW202327595A (zh) 2021-10-05 2023-07-16 美商輝瑞大藥廠 用於治療癌症之氮雜內醯胺化合物的組合
WO2023057534A1 (en) 2021-10-06 2023-04-13 Genmab A/S Multispecific binding agents against pd-l1 and cd137 in combination
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
WO2023068382A2 (en) 2021-10-20 2023-04-27 Takeda Pharmaceutical Company Limited Compositions targeting bcma and methods of use thereof
WO2023076880A1 (en) 2021-10-25 2023-05-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Foxo1-targeted therapy for the treatment of cancer
KR20240099331A (ko) 2021-10-28 2024-06-28 라이엘 이뮤노파마, 인크. 면역 세포를 배양하기 위한 방법
KR20240099362A (ko) 2021-10-29 2024-06-28 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 혈액암에 대한 lag-3 길항제 요법
WO2023079428A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Pfizer Inc. Combination therapies using tlr7/8 agonist
EP4427044A1 (en) 2021-11-03 2024-09-11 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Methods and compositions for treating triple negative breast cancer (tnbc)
WO2023080900A1 (en) 2021-11-05 2023-05-11 Genentech, Inc. Methods and compositions for classifying and treating kidney cancer
WO2023083439A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 BioNTech SE Tlr7 agonist and combinations for cancer treatment
MX2024005722A (es) 2021-11-12 2024-05-28 Novartis Ag Terapia de combinacion para el tratamiento del cancer de pulmon.
TW202340212A (zh) 2021-11-24 2023-10-16 美商建南德克公司 治療性化合物及其使用方法
EP4436957A1 (en) 2021-11-24 2024-10-02 Genentech, Inc. Therapeutic indazole compounds and methods of use in the treatment of cancer
EP4448761A1 (en) 2021-12-16 2024-10-23 Valerio Therapeutics New conjugated nucleic acid molecules and their uses
EP4452327A1 (en) 2021-12-20 2024-10-30 Synthorx, Inc. Head and neck cancer combination therapy comprising an il-2 conjugate and pembrolizumab
WO2023118165A1 (en) 2021-12-21 2023-06-29 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating melanoma
EP4456907A1 (en) 2021-12-30 2024-11-06 NeoImmuneTech, Inc. Method of treating a tumor with a combination of il-7 protein and vegf antagonist
WO2023133424A2 (en) * 2022-01-05 2023-07-13 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins and anti-pd-1 fusion peptides
MX2024008831A (es) 2022-01-26 2024-07-25 Bristol Myers Squibb Co Terapia combinada para carcinoma hepatocelular.
WO2023147488A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Iovance Biotherapeutics, Inc. Cytokine associated tumor infiltrating lymphocytes compositions and methods
CN118765284A (zh) 2022-02-25 2024-10-11 百时美施贵宝公司 结直肠癌的组合疗法
WO2023168404A1 (en) 2022-03-04 2023-09-07 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
WO2023170606A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Alentis Therapeutics Ag Use of anti-claudin-1 antibodies to increase t cell availability
CN118871451A (zh) 2022-03-18 2024-10-29 百时美施贵宝公司 分离多肽的方法
AU2022450448A1 (en) 2022-04-01 2024-10-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023196987A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
WO2023196988A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Modernatx, Inc. Methods of use of mrnas encoding il-12
US20230326022A1 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Bristol-Myers Squibb Company Machine Learning Identification, Classification, and Quantification of Tertiary Lymphoid Structures
EP4257609A1 (en) 2022-04-08 2023-10-11 iOmx Therapeutics AG Combination therapies based on pd-1 inhibitors and sik3 inhibitors
WO2023198116A1 (en) * 2022-04-14 2023-10-19 Beigene Switzerland Gmbh Stable high concentration arginine formulations containing pd-1 antibody and methods of use thereof
WO2023201369A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Til expansion processes using specific cytokine combinations and/or akti treatment
WO2023211972A1 (en) 2022-04-28 2023-11-02 Medical University Of South Carolina Chimeric antigen receptor modified regulatory t cells for treating cancer
WO2023214325A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine derivatives and uses thereof as tet2 inhibitors
CN114920830B (zh) * 2022-05-07 2023-05-16 北京大学 Vκ4-1-IgLC多肽及其用途
WO2023219613A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023218046A1 (en) 2022-05-12 2023-11-16 Genmab A/S Binding agents capable of binding to cd27 in combination therapy
WO2023230554A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Pfizer Inc. Combination of a braf inhibitor, an egfr inhibitor, and a pd-1 antagonist for the treatment of braf v600e-mutant, msi-h/dmmr colorectal cancer
WO2023235847A1 (en) 2022-06-02 2023-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
US11786531B1 (en) 2022-06-08 2023-10-17 Beigene Switzerland Gmbh Methods of treating B-cell proliferative disorder
TW202423482A (zh) 2022-06-08 2024-06-16 美商泰德治療公司 可電離陽離子脂質和脂質奈米顆粒、及其合成方法和用途
WO2023241659A1 (en) * 2022-06-16 2023-12-21 Beigene, Ltd. Methods of treating lymphoma using anti-tigit antibodies
GB202209518D0 (en) 2022-06-29 2022-08-10 Snipr Biome Aps Treating & preventing E coli infections
WO2024012364A1 (en) * 2022-07-12 2024-01-18 Beigene Switzerland Gmbh Preparation methods for a highly concentrated pd1 antibody solution by ultrafiltration/diafiltration (uf/df)
WO2024015897A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024012584A1 (en) * 2022-07-15 2024-01-18 Beigene Switzerland Gmbh Methods of cancer treatment using anti-tigit antibodies
TW202413433A (zh) 2022-07-19 2024-04-01 美商建南德克公司 用抗ｆｃｒｈ５／抗ｃｄ３雙特異性抗體進行治療之給藥
EP4310197A1 (en) 2022-07-21 2024-01-24 Fundación para la Investigación Biomédica del Hospital Universitario Puerta de Hierro Majadahonda Method for identifying lung cancer patients for a combination treatment of immuno- and chemotherapy
WO2024023740A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Astrazeneca Ab Combinations of recombinant virus expressing interleukin-12 with pd-1/pd-l1 inhibitors
WO2024028794A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Temple Therapeutics BV Methods for treating endometrial and ovarian hyperproliferative disorders
WO2024033400A1 (en) 2022-08-10 2024-02-15 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Sk2 inhibitor for the treatment of pancreatic cancer
WO2024033399A1 (en) 2022-08-10 2024-02-15 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Sigmar1 ligand for the treatment of pancreatic cancer
WO2024041651A1 (en) * 2022-08-25 2024-02-29 Beigene, Ltd. Methods of cancer treatment using anti-pd1 antibodies in combination with anti-tim3 antibodies and anti-lag3 antibodies
WO2024041652A1 (en) * 2022-08-25 2024-02-29 Beigene, Ltd. Methods of cancer treatment
WO2024044675A1 (en) 2022-08-25 2024-02-29 Beigene, Ltd. Methods of cancer treatment using anti-pd1 antibodies in combination with anti-tim3 antibodies
WO2024049949A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
WO2024056716A1 (en) 2022-09-14 2024-03-21 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of dilated cardiomyopathy
WO2024069009A1 (en) 2022-09-30 2024-04-04 Alentis Therapeutics Ag Treatment of drug-resistant hepatocellular carcinoma
WO2024077166A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Genentech, Inc. Methods and compositions for classifying and treating lung cancer
WO2024077095A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Genentech, Inc. Methods and compositions for classifying and treating bladder cancer
WO2024086827A2 (en) 2022-10-20 2024-04-25 Repertoire Immune Medicines, Inc. Cd8 t cell targeted il2
WO2024084034A1 (en) 2022-10-21 2024-04-25 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of osteoarthritis
WO2024091991A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for multiple myeloma
WO2024102722A1 (en) 2022-11-07 2024-05-16 Neoimmunetech, Inc. Methods of treating a tumor with an unmethylated mgmt promoter
WO2024112571A2 (en) 2022-11-21 2024-05-30 Iovance Biotherapeutics, Inc. Two-dimensional processes for the expansion of tumor infiltrating lymphocytes and therapies therefrom
WO2024110905A1 (en) 2022-11-24 2024-05-30 Beigene, Ltd. Anti-cea antibody drug conjugates and methods of use
WO2024116140A1 (en) 2022-12-01 2024-06-06 Medimmune Limited Combination therapy for treatment of cancer comprising anti-pd-l1 and anti-cd73 antibodies
WO2024115725A1 (en) 2022-12-01 2024-06-06 BioNTech SE Multispecific antibody against cd40 and cd137 in combination therapy with anti-pd1 ab and chemotherapy
WO2024124044A1 (en) 2022-12-07 2024-06-13 The Brigham And Women’S Hospital, Inc. Compositions and methods targeting sat1 for enhancing anti¬ tumor immunity during tumor progression
WO2024126457A1 (en) 2022-12-14 2024-06-20 Astellas Pharma Europe Bv Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and immune checkpoint inhibitors
WO2024137589A2 (en) 2022-12-20 2024-06-27 Genentech, Inc. Methods of treating pancreatic cancer with a pd-1 axis binding antagonist and an rna vaccine
WO2024137776A1 (en) 2022-12-21 2024-06-27 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for lung cancer
WO2024148243A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Lassen Therapeutics 1, Inc. Anti-il-18bp antibodies
WO2024148241A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Lassen Therapeutics 1, Inc. Anti-il-18bp antibodies
WO2024150177A1 (en) 2023-01-11 2024-07-18 Advesya Treatment methods for solid tumors
WO2024151885A1 (en) 2023-01-13 2024-07-18 Iovance Biotherapeutics, Inc. Use of til as maintenance therapy for nsclc patients who achieved pr/cr after prior therapy
WO2024153168A2 (en) 2023-01-19 2024-07-25 Beigene, Ltd. Anti-cmet antibodies and methods of use
WO2024160721A1 (en) 2023-01-30 2024-08-08 Kymab Limited Antibodies
WO2024165043A1 (en) * 2023-02-08 2024-08-15 Beigene Switzerland Gmbh Preparation methods for a highly concentrated pd1 antibody solution by applying single-pass tangential flow filtration (sptff)
WO2024175699A1 (en) 2023-02-23 2024-08-29 Imcheck Therapeutics Combination of btn3a activating antibody and immune checkpoint inhibitors
WO2024183635A1 (en) 2023-03-03 2024-09-12 Beigene, Ltd. Muc1 and cd16a antibodies and methods of use
WO2024183637A1 (en) 2023-03-03 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Muc1 antibodies and methods of use
WO2024184811A1 (en) 2023-03-06 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Anti-cd3 multispecific antibodies and methods of use
WO2024184810A1 (en) 2023-03-06 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Anti-cldn6 and anti-cd3 multispecific antibodies and methods of use
WO2024184812A1 (en) 2023-03-06 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Anti-cldn6 antibodies and methods of use
WO2024196952A1 (en) 2023-03-20 2024-09-26 Bristol-Myers Squibb Company Tumor subtype assessment for cancer therapy
WO2024200571A1 (en) 2023-03-28 2024-10-03 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Method for discriminating mono-immunotherapy from combined immunotherapy in cancers
WO2024209072A1 (en) 2023-04-06 2024-10-10 Genmab A/S Multispecific binding agents against pd-l1 and cd137 for treating cancer
WO2024216028A1 (en) 2023-04-12 2024-10-17 Agenus Inc. Methods of treating cancer using an anti-ctla4 antibody and an enpp1 inhibitor

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101899114A (zh) * 2002-12-23 2010-12-01 惠氏公司 抗pd-1抗体及其用途

Family Cites Families (205)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BE792533A (fr) 1971-12-09 1973-06-08 Int Chem & Nuclear Corp Nouvelles pyrazolo (1,5a) pyrimidines et leur procede de preparation
US4376110A (en) 1980-08-04 1983-03-08 Hybritech, Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5859205A (en) * 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US5994514A (en) 1991-08-14 1999-11-30 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants
WO1993022332A2 (en) 1992-04-24 1993-11-11 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
CA2163345A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Susan Adrienne Morgan Antibodies
JPH07291996A (ja) 1994-03-01 1995-11-07 Yuu Honshiyo ヒトにおけるプログラムされた細胞死に関連したポリペプチド、それをコードするｄｎａ、そのｄｎａからなるベクター、そのベクターで形質転換された宿主細胞、そのポリペプチドの抗体、およびそのポリペプチドまたはその抗体を含有する薬学的組成物
JP2778921B2 (ja) 1994-11-18 1998-07-23 三共株式会社 イミダゾピラゾール誘導体
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP1141024B1 (en) 1999-01-15 2018-08-08 Genentech, Inc. POLYPEPTIDE COMPRISING A VARIANT HUMAN IgG1 Fc REGION
US6936704B1 (en) 1999-08-23 2005-08-30 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Nucleic acids encoding costimulatory molecule B7-4
AU7072700A (en) 1999-08-23 2001-03-19 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor
ES2222919T3 (es) 1999-08-27 2005-02-16 Abbott Laboratories Compuestos sulfonilfenilpirazoles utiles como inhibidores de cox-2.
CZ2002936A3 (cs) 1999-09-17 2002-10-16 Abbott Gmbh & Co. Kg Pyrazolopyrimidiny jako terapeutické prostředky
WO2001071005A2 (en) * 2000-03-24 2001-09-27 Micromet Ag Multifunctional polypeptides comprising a binding site to an epitope of the nkg2d receptor complex
IL151348A0 (en) 2000-04-13 2003-04-10 Univ Rockefeller Enhancement of antibody-mediated immune responses
US20020094989A1 (en) 2000-10-11 2002-07-18 Hale Jeffrey J. Pyrrolidine modulators of CCR5 chemokine receptor activity
WO2002039813A1 (fr) 2000-11-15 2002-05-23 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Souris sans pd-1 et utilisation de celle-ci
DE60143544D1 (de) 2000-12-12 2011-01-05 Medimmune Llc Moleküle mit längeren halbwertszeiten, zusammensetzungen und deren verwendung
DK1347971T3 (da) 2000-12-21 2006-05-15 Bristol Myers Squibb Co Thiazolylinhibitorer af tyrosinkinaser fra Tec-familien
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
PT1366067E (pt) 2001-03-07 2012-11-29 Merck Patent Gmbh Tecnologia de expressão para proteínas contendo uma unidade de anticorpo de isotipo híbrido
DE60207390T2 (de) 2001-03-09 2006-07-20 Pfizer Products Inc., Groton Entzündungshemmende benzimidazolverbindungen
AR036993A1 (es) 2001-04-02 2004-10-20 Wyeth Corp Uso de agentes que modulan la interaccion entre pd-1 y sus ligandos en la submodulacion de respuestas inmunologicas
WO2003004497A1 (fr) 2001-07-05 2003-01-16 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited Compose heterocyclique
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US8093357B2 (en) 2002-03-01 2012-01-10 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
FI2206517T3 (fi) 2002-07-03 2023-10-19 Ono Pharmaceutical Co Immuunopotentioivia koostumuksia käsittäen anti-PD-L1 -vasta-aineita
JP4494205B2 (ja) 2002-08-26 2010-06-30 武田薬品工業株式会社 カルシウム受容体調節化合物およびその用途
CN1771231B (zh) 2002-08-26 2011-05-25 武田药品工业株式会社 钙受体调节性化合物及其用途
WO2004042017A2 (en) 2002-10-31 2004-05-21 Genentech, Inc. Methods and compositions for increasing antibody production
US7960512B2 (en) * 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
EP1587540B1 (en) 2003-01-09 2021-09-15 MacroGenics, Inc. IDENTIFICATION AND ENGINEERING OF ANTIBODIES WITH VARIANT Fc REGIONS AND METHODS OF USING SAME
EP1591527B1 (en) 2003-01-23 2015-08-26 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Substance specific to human pd-1
US8084582B2 (en) 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
US20060183746A1 (en) 2003-06-04 2006-08-17 Currie Kevin S Certain imidazo[1,2-a]pyrazin-8-ylamines and method of inhibition of Bruton's tyrosine kinase by such compounds
WO2005014599A1 (en) 2003-06-04 2005-02-17 Cellular Genomics, Inc. Imidazo[1,2-a]pyrazin-8-ylamines and method of inhibition of bruton’s tyrosine kinase by such compounds
WO2005005429A1 (en) 2003-06-30 2005-01-20 Cellular Genomics, Inc. Certain heterocyclic substituted imidazo[1,2-a]pyrazin-8-ylamines and methods of inhibition of bruton’s tyrosine kinase by such compounds
CN1860118A (zh) 2003-07-29 2006-11-08 Irm责任有限公司 作为蛋白激酶抑制剂的化合物和组合物
EP1664116A4 (en) 2003-08-22 2009-06-03 Biogen Idec Inc IMPROVED ANTIBODIES WITH CHANGED EFFECTOR FUNCTION AND MANUFACTURING METHOD THEREFOR
US20060134105A1 (en) * 2004-10-21 2006-06-22 Xencor, Inc. IgG immunoglobulin variants with optimized effector function
US20050288295A1 (en) 2003-11-11 2005-12-29 Currie Kevin S Certain imidazo[1,2-a]pyrazin-8-ylamines, method of making, and method of use thereof
US20050249723A1 (en) 2003-12-22 2005-11-10 Xencor, Inc. Fc polypeptides with novel Fc ligand binding sites
GB0400440D0 (en) 2004-01-09 2004-02-11 Isis Innovation Receptor modulators
ES2387312T3 (es) 2004-09-22 2012-09-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Anticuerpos IgG4 humanos estabilizados
NZ555681A (en) 2004-11-10 2009-08-28 Cgi Pharmaceuticals Inc Imidazo[1, 2-a] pyrazin-8-ylamines useful as modulators of kinase activity
AU2005316540A1 (en) 2004-12-16 2006-06-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrid-2-ones useful as inhibitors of Tec family protein kinases for the treatment of inflammatory, proliferative and immunologically-mediated diseases
TW200639163A (en) 2005-02-04 2006-11-16 Genentech Inc RAF inhibitor compounds and methods
CA2601628C (en) 2005-03-10 2014-05-13 Cgi Pharmaceuticals, Inc. Certain substituted amides, method of making, and method of use thereof
EP2439273B1 (en) 2005-05-09 2019-02-27 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1(PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
LT2397156T (lt) * 2005-06-08 2017-02-27 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Būdai ir kompozicijos, skirti nuolatinių infekcijų ir vėžio gydymui inhibuojant užprogramuotos ląstelės mirties-1 (pd-1) kelią
ES2546333T3 (es) 2005-07-01 2015-09-22 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Anticuerpos monoclonales humanos para ligandos 1 (PD-L1) de muerte programada
US7691885B2 (en) 2005-08-29 2010-04-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyridones useful as inhibitors of kinases
US7786130B2 (en) 2005-08-29 2010-08-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyridones useful as inhibitors of kinases
WO2007026720A1 (ja) 2005-08-31 2007-03-08 Taisho Pharmaceutical Co., Ltd. 縮環ピラゾール誘導体
AU2006285599A1 (en) 2005-09-01 2007-03-08 Astellas Pharma Inc. Pyridazinone derivatives used for the treatment of pain
WO2007067444A1 (en) 2005-12-08 2007-06-14 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic compounds with kinase inhibitory activity
CA2636696A1 (en) 2006-01-13 2007-08-02 Pharmacyclics, Inc. Inhibitors of tyrosine kinases and uses thereof
NZ567888A (en) * 2006-03-23 2010-08-27 Bioarctic Neuroscience Ab Improved protofibril selective antibodies and the use thereof
WO2007136573A2 (en) 2006-05-15 2007-11-29 Merck & Co., Inc. Antidiabetic bicyclic compounds
AU2007254179B2 (en) 2006-05-18 2013-03-21 Pharmacyclics Llc Intracellular kinase inhibitors
JO3235B1 (ar) 2006-05-26 2018-03-08 Astex Therapeutics Ltd مركبات بيررولوبيريميدين و استعمالاتها
CN101104640A (zh) 2006-07-10 2008-01-16 苏州大学 抗人pd-l1单克隆抗体制备及应用
AR063946A1 (es) 2006-09-11 2009-03-04 Cgi Pharmaceuticals Inc Determinadas pirimidinas sustituidas, el uso de las mismas para el tratamiento de enfermedades mediadas por la inhibicion de la actividad de btk y composiciones farmaceuticas que las comprenden.
AR063706A1 (es) 2006-09-11 2009-02-11 Cgi Pharmaceuticals Inc Determinadas amidas sustituidas, el uso de las mismas para el tratamiento de enfermedades mediadas por la inhibicion de la actividad de btk y composiciones farmaceuticas que las comprenden.
PE20081370A1 (es) 2006-09-11 2008-11-28 Cgi Pharmaceuticals Inc Determinadas amidas sustituidas, metodo de elaboracion y metodo de uso de las mismas
US20100160292A1 (en) 2006-09-11 2010-06-24 Cgi Pharmaceuticals, Inc Kinase Inhibitors, and Methods of Using and Identifying Kinase Inhibitors
PL2529621T3 (pl) 2006-09-22 2017-06-30 Pharmacyclics Llc Inhibitory kinazy tyrozynowej brutona
BRPI0717805A2 (pt) 2006-10-06 2013-10-29 Irm Llc Inibidores de proteína quinase e métodos de uso dos mesmos
ES2403546T3 (es) 2006-11-03 2013-05-20 Pharmacyclics, Inc. Sonda de actividad de la tirosina-cinasa de Bruton y procedimiento de utilización
CN101730699A (zh) 2007-03-21 2010-06-09 百时美施贵宝公司 可用于治疗增殖性、变应性、自身免疫性和炎症性疾病的稠合杂环化合物
WO2008144253A1 (en) 2007-05-14 2008-11-27 Irm Llc Protein kinase inhibitors and methods for using thereof
EP2164873B2 (en) * 2007-05-31 2018-09-12 Genmab A/S Stable igg4 antibodies
BRPI0812913B8 (pt) * 2007-06-18 2021-05-25 Merck Sharp & Dohme anticorpos monoclonais ou fragmento de anticorpo para o receptor de morte programada humano pd-1, polinucleotideo, método para produzir os referidos anticorpos ou fragmentos de anticorpos, composição que os compreende e uso dos mesmos
WO2009024531A1 (en) 2007-08-17 2009-02-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for treating and diagnosing hematologic malignancies
CL2008002793A1 (es) 2007-09-20 2009-09-04 Cgi Pharmaceuticals Inc Compuestos derivados de amidas sustituidas, inhibidores de la actividad de btk; composicion farmaceutica que los comprende; utiles en el tratamiento del cancer, trastornos oseos, enfermedades autoinmunes, entre otras
JO3076B1 (ar) * 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
US7982036B2 (en) 2007-10-19 2011-07-19 Avila Therapeutics, Inc. 4,6-disubstitued pyrimidines useful as kinase inhibitors
US7989465B2 (en) 2007-10-19 2011-08-02 Avila Therapeutics, Inc. 4,6-disubstituted pyrimidines useful as kinase inhibitors
SG185330A1 (en) 2007-10-23 2012-11-29 Hoffmann La Roche Novel kinase inhibitors
CN101952283B (zh) 2007-12-14 2013-04-17 霍夫曼-拉罗奇有限公司 咪唑并[1，2-a]吡啶和咪唑并[1，2-b]哒嗪衍生物
CA2710462C (en) 2008-02-05 2015-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Pyridinones and pyridazinones
CA2713981C (en) 2008-02-08 2016-11-01 Medimmune, Llc Anti-ifnar1 antibodies with reduced fc ligand affinity
EP2262837A4 (en) 2008-03-12 2011-04-06 Merck Sharp & Dohme PD-1 BINDING PROTEINS
EP2297105B1 (en) 2008-05-06 2015-09-02 Gilead Connecticut, Inc. Substituted amides, method of making, and use as btk inhibitors
US8338439B2 (en) 2008-06-27 2012-12-25 Celgene Avilomics Research, Inc. 2,4-disubstituted pyrimidines useful as kinase inhibitors
MX2010014029A (es) 2008-06-27 2011-01-21 Avila Therapeutics Inc Compuestos de heteroarilo y usos de los mismos.
EP2300459B1 (en) 2008-07-02 2013-05-29 F. Hoffmann-La Roche AG Novel phenylpyrazinones as kinase inhibitors
JP5318952B2 (ja) 2008-07-15 2013-10-16 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 新規なフェニル−イミダゾピリジン類及びピリダジン類
CN102159214A (zh) 2008-07-16 2011-08-17 药品循环公司 用于实体肿瘤的治疗的布鲁顿酪氨酸激酶的抑制剂
CA2725512C (en) 2008-07-18 2016-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel phenylimidazopyrazines
JP2011529073A (ja) 2008-07-24 2011-12-01 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー キナーゼ調節因子として有用な縮合ヘテロ環化合物
JP2012500855A (ja) 2008-08-25 2012-01-12 アンプリミューン、インコーポレーテッド Ｐｄ−１アンタゴニストおよび感染性疾患を処置するための方法
CN102405284B (zh) 2008-09-05 2016-01-20 新基阿维罗米克斯研究公司 设计不可逆抑制剂的算法
WO2010029435A1 (en) 2008-09-12 2010-03-18 Isis Innovation Limited Pd-1 specific antibodies and uses thereof
JP5794917B2 (ja) 2008-09-12 2015-10-14 アイシス・イノベーション・リミテッドＩｓｉｓ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｌｉｍｉｔｅｄ Ｐｄ−１特異抗体およびその使用
KR102197527B1 (ko) * 2008-09-26 2020-12-31 다나-파버 캔서 인스티튜트 인크. 인간 항-ｐｄ-１, ｐｄ-ｌ１, 및 ｐｄ-ｌ2 항체 및 그의 용도
KR101050829B1 (ko) 2008-10-02 2011-07-20 서울대학교산학협력단 항 ｐｄ-1 항체 또는 항 ｐｄ-ｌ1 항체를 포함하는 항암제
WO2010051549A1 (en) 2008-10-31 2010-05-06 Genentech, Inc. Pyrazolopyrimidine jak inhibitor compounds and methods
US20120028981A1 (en) 2008-11-05 2012-02-02 Principia Biopharma Inc. Kinase Knockdown Via Electrophilically Enhanced Inhibitors
US8598174B2 (en) 2008-11-12 2013-12-03 Genetech, Inc. Pyridazinones, method of making, and method of use thereof
EP2370593B1 (en) * 2008-11-28 2016-03-30 Emory University Methods for determining the efficacy of pd-1 antagonists
US8426428B2 (en) 2008-12-05 2013-04-23 Principia Biopharma, Inc. EGFR kinase knockdown via electrophilically enhanced inhibitors
KR20190069615A (ko) * 2008-12-09 2019-06-19 제넨테크, 인크. 항-ｐｄ-ｌ１ 항체 및 ｔ 세포 기능을 향상시키기 위한 그의 용도
WO2010068788A1 (en) 2008-12-10 2010-06-17 Cgi Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic amides as btk inhibitors
WO2010068810A2 (en) 2008-12-10 2010-06-17 Cgi Pharmaceuticals, Inc. Certain substituted amides, method of making, and method of use thereof
WO2010068806A1 (en) 2008-12-10 2010-06-17 Cgi Pharmaceuticals, Inc. Amide derivatives as btk inhibitors in the treatment of allergic, autoimmune and inflammatory disorders as well as cancer
CN102325753B (zh) 2008-12-19 2014-09-10 百时美施贵宝公司 用作激酶抑制剂的咔唑甲酰胺化合物
US20100197924A1 (en) 2008-12-22 2010-08-05 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Preparation of aminotetralin compounds
EP3828185A3 (en) 2009-01-06 2021-09-01 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Pyrimido-diazepinone kinase scaffold compounds and methods of treating disorders
EP2393835B1 (en) * 2009-02-09 2017-04-05 Université d'Aix-Marseille Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof
US8299077B2 (en) 2009-03-02 2012-10-30 Roche Palo Alto Llc Inhibitors of Bruton's tyrosine kinase
CN102292329B (zh) 2009-04-24 2014-09-03 霍夫曼-拉罗奇有限公司 布鲁顿酪氨酸激酶的抑制剂
US8765754B2 (en) 2009-04-29 2014-07-01 Locus Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolotriazine compounds
ES2444777T3 (es) 2009-06-12 2014-02-26 Bristol-Myers Squibb Company Compuestos de nicotinamida útiles como moduladores de quinasas
AR077468A1 (es) 2009-07-09 2011-08-31 Array Biopharma Inc Compuestos de pirazolo (1,5 -a) pirimidina sustituidos como inhibidores de trk- quinasa
EP2789615B1 (en) 2009-08-11 2017-05-03 Bristol-Myers Squibb Company Azaindazoles as Btk kinase modulators and use thereof
WO2011028952A1 (en) * 2009-09-02 2011-03-10 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
EP3461824B1 (en) 2009-09-04 2021-08-25 Biogen MA Inc. Bruton's tyrosine kinase inhibitors
WO2011029043A1 (en) 2009-09-04 2011-03-10 Biogen Idec Ma Inc. Heteroaryl btk inhibitors
US7718662B1 (en) 2009-10-12 2010-05-18 Pharmacyclics, Inc. Pyrazolo-pyrimidine inhibitors of bruton's tyrosine kinase
WO2011056644A2 (en) * 2009-10-28 2011-05-12 Centocor Ortho Biotech Inc. Anti-glp-1r antibodies and their uses
DK2506871T3 (da) * 2009-11-30 2017-01-02 Janssen Biotech Inc ANTISTOF-Fc-MUTANTER MED ABLATEREDE EFFEKTORFUNKTIONER
US10053513B2 (en) * 2009-11-30 2018-08-21 Janssen Biotech, Inc. Antibody Fc mutants with ablated effector functions
RS61136B1 (sr) * 2010-02-19 2020-12-31 Xencor Inc Novi ctla4-ig imunoadhezini
CA2794745A1 (en) 2010-03-29 2011-10-06 Zymeworks, Inc. Antibodies with enhanced or suppressed effector function
EP2566869B1 (en) 2010-05-07 2016-03-02 Gilead Connecticut, Inc. Pyridone and aza-pyridone compounds and methods of use
HUE030720T2 (en) 2010-05-31 2017-06-28 Ono Pharmaceutical Co Purinone derivative as btk kinase inhibitor
AU2011261185A1 (en) 2010-06-03 2013-01-10 Pharmacyclics, Inc. The use of inhibitors of Bruton's tyrosine kinase (Btk)
US8685969B2 (en) 2010-06-16 2014-04-01 Bristol-Myers Squibb Company Carboline carboxamide compounds useful as kinase inhibitors
RU2598852C2 (ru) 2010-06-23 2016-09-27 Ханми Сайенс Ко., Лтд. Новые конденсированные пиримидиновые производные для ингибирования тирозинкиназной активности
US20120053189A1 (en) 2010-06-28 2012-03-01 Pharmacyclics, Inc. Btk inhibitors for the treatment of immune mediated conditions
US20120100166A1 (en) * 2010-07-15 2012-04-26 Zyngenia, Inc. Ang-2 Binding Complexes and Uses Thereof
MX336875B (es) 2010-08-10 2016-02-04 Celgene Avilomics Res Inc Sal de besilato de un inhibidor de tirosina cinasa de bruton (btk).
AR082590A1 (es) 2010-08-12 2012-12-19 Hoffmann La Roche Inhibidores de la tirosina-quinasa de bruton
KR20180031823A (ko) 2010-09-01 2018-03-28 질레드 코네티컷 인코포레이티드 피리다지논, 그의 제조 방법 및 사용 방법
EP2611790B1 (en) 2010-09-01 2015-11-04 Gilead Connecticut, Inc. Pyridinones/pyrazinones, method of making, and method of use thereof
PT2654790T (pt) * 2010-12-22 2019-05-16 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Anticorpo modificado com semivida melhorada
MY163539A (en) 2011-03-29 2017-09-15 Roche Glycart Ag Antibody fc variants
KR102289394B1 (ko) * 2011-03-31 2021-08-13 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 인간 프로그램화된 사멸 수용체 pd-1에 대한 항체의 안정한 제제 및 관련된 치료
US8703767B2 (en) 2011-04-01 2014-04-22 University Of Utah Research Foundation Substituted N-(3-(pyrimidin-4-yl)phenyl)acrylamide analogs as tyrosine receptor kinase BTK inhibitors
CA2760174A1 (en) 2011-12-01 2013-06-01 Pharmascience Inc. Protein kinase inhibitors and uses thereof
PL2699264T3 (pl) * 2011-04-20 2018-08-31 Medimmune, Llc Przeciwciała i inne cząsteczki wiążące B7-H1 i PD-1
EP2699577A1 (en) 2011-04-20 2014-02-26 Glaxo Group Limited Tetrahydropyrazolo [1,5 -a]pyrimidine as anti -tuberculosis compounds
CA2834077A1 (en) 2011-05-17 2012-11-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Inhibitors of bruton's tyrosine kinase
WO2012158795A1 (en) 2011-05-17 2012-11-22 Principia Biopharma Inc. Pyrazolopyrimidine derivatives as tyrosine kinase inhibitors
JP5974084B2 (ja) 2011-05-17 2016-08-23 プリンシピア バイオファーマ インコーポレイテッド チロシンキナーゼ阻害剤
WO2012158810A1 (en) 2011-05-17 2012-11-22 Principia Biopharma Inc. Tyrosine kinase inhibitors
WO2012168199A1 (en) * 2011-06-06 2012-12-13 Novo Nordisk A/S Therapeutic antibodies
DK2718270T3 (da) 2011-06-10 2022-08-01 Merck Patent Gmbh Sammensætninger og fremgangsmåder til fremstillingen af pyrimidin- og pyridinforbindelser med btk-hæmmende aktivitet
BR112013032899A2 (pt) 2011-06-22 2017-01-24 Inserm Inst Nat De La Santé Et De La Rech Médicale anticorpos anti-axl e utilizações dos mesmos
EP2729466B1 (en) 2011-07-08 2015-08-19 Novartis AG Novel pyrrolo pyrimidine derivatives
WO2013019906A1 (en) * 2011-08-01 2013-02-07 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and mek inhibitors
JP6138813B2 (ja) 2011-11-28 2017-05-31 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングＭｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｉｔ ｂｅｓｃｈｒａｅｎｋｔｅｒ Ｈａｆｔｕｎｇ 抗ｐｄ−ｌ１抗体及びその使用
CN113527469A (zh) 2012-02-09 2021-10-22 中外制药株式会社 抗体的Fc区变异体
JP6391564B2 (ja) 2012-04-30 2018-09-19 メディミューン，エルエルシー 低減されたエフェクター機能及び延長された半減期を有する分子、組成物、並びにそれらの使用
MX368507B (es) * 2012-05-15 2019-10-07 Bristol Myers Squibb Co Uso de un anticuerpo anti-pd-1 en combinación con un anticuerpo anti-ctla-4 en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de cáncer.
WO2013181634A2 (en) 2012-05-31 2013-12-05 Sorrento Therapeutics Inc. Antigen binding proteins that bind pd-l1
KR20150036163A (ko) * 2012-07-03 2015-04-07 얀센 알츠하이머 이뮤노테라피 Ｃ―말단 및 중심 에피토프 ａ―베타 항체
CN114507282A (zh) 2012-10-04 2022-05-17 达纳－法伯癌症研究所公司 人单克隆抗-pd-l1抗体和使用方法
WO2014100490A1 (en) * 2012-12-19 2014-06-26 Adimab, Llc Multivalent antibody analogs, and methods of their preparation and use
AR093984A1 (es) 2012-12-21 2015-07-01 Merck Sharp & Dohme Anticuerpos que se unen a ligando 1 de muerte programada (pd-l1) humano
TWI635098B (zh) 2013-02-01 2018-09-11 再生元醫藥公司 含嵌合恆定區之抗體
EP3351095A1 (en) * 2013-02-20 2018-07-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals with modified immunoglobulin heavy chain sequences
AU2014240101B2 (en) * 2013-03-15 2018-05-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. IL-33 antagonists and uses thereof
AU2014256633B2 (en) 2013-04-25 2017-02-02 Beigene Switzerland Gmbh Fused heterocyclic compounds as protein kinase inhibitors
CN105683217B (zh) * 2013-05-31 2019-12-10 索伦托治疗有限公司 与pd-1结合的抗原结合蛋白
CA3080200A1 (en) 2013-09-13 2015-03-19 Beigene Switzerland Gmbh Anti-pd1 antibodies and their use as therapeutics and diagnostics
WO2015061752A1 (en) 2013-10-25 2015-04-30 Pharmacyclics, Inc. Treatment using bruton's tyrosine kinase inhibitors and immunotherapy
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
TWI687438B (zh) 2014-07-03 2020-03-11 英屬開曼群島商百濟神州生物科技有限公司 抗ｐｄ-ｌ１抗體及其作為治療及診斷之用途
WO2016008411A1 (en) 2014-07-18 2016-01-21 Beigene, Ltd. 5-amino-4-carbamoyl-pyrazole compounds as selective and irreversible t790m over wt-egfr kinase inhibitors and use thereof
WO2016024228A1 (en) 2014-08-11 2016-02-18 Acerta Pharma B.V. Therapeutic combinations of a btk inhibitor, a pi3k inhibitor, a jak-2 inhibitor, a pd-1 inhibitor and/or a pd-l1 inhibitor
CA2958139A1 (en) 2014-08-14 2016-02-18 Assia Chemical Industries Ltd. Solid state forms of ibrutinib
TW201625304A (zh) 2014-10-24 2016-07-16 美國禮來大藥廠 泌尿上皮癌之療法
WO2016087994A1 (en) 2014-12-05 2016-06-09 Acerta Pharma B.V. Btk inhibitors to treat solid tumors through modulation of the tumor microenvironment
PL3233103T3 (pl) 2014-12-18 2021-04-19 Principia Biopharma Inc. Leczenie pęcherzycy
PL3236943T3 (pl) 2014-12-24 2023-05-29 Principia Biopharma Inc. Kompozycje do krętniczo-czczego dostarczania leków
US9139653B1 (en) * 2015-04-30 2015-09-22 Kymab Limited Anti-human OX40L antibodies and methods of treatment
EP4335931A3 (en) 2015-05-29 2024-06-19 F. Hoffmann-La Roche AG Therapeutic and diagnostic methods for cancer
WO2017024465A1 (en) 2015-08-10 2017-02-16 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibodies
US20190022092A1 (en) 2015-09-15 2019-01-24 Acerta Pharma B.V. Therapeutic Combinations of a BTK Inhibitor and a GITR Binding Molecule, a 4-1BB Agonist, or an OX40 Agonist
TW201725044A (zh) 2015-10-01 2017-07-16 基利科學股份有限公司 用於治療癌症之btk抑制劑及查核點抑制劑之組合
WO2018007885A1 (en) 2016-07-05 2018-01-11 Beigene, Ltd. COMBINATION OF A PD-l ANTAGONIST AND A RAF INHIBITOR FOR TREATING CANCER
CA3033827A1 (en) 2016-08-16 2018-02-22 Beigene, Ltd. Crystalline form of (s)-7-(1-acryloylpiperidin-4-yl)-2-(4-phenoxyphenyl )-4,5,6,7-tetra-hydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide,preparation, and uses thereof
TWI739887B (zh) 2016-08-19 2021-09-21 英屬開曼群島商百濟神州有限公司 使用包含btk抑制劑的組合產品治療癌症
CN116478290A (zh) * 2016-08-26 2023-07-25 百济神州有限公司 抗tim-3抗体及其用途
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
EP3519051B1 (en) 2016-09-27 2021-09-22 Beigene, Ltd. Treatment of cancers using combination comprising parp inhibitors
MX2019004327A (es) 2016-10-14 2019-10-14 Xencor Inc Proteinas de fusion heterodimericas biespecificas que contienen proteinas de fusion fc il-15/il-15ra y fragmentos de anticuerpo pd-1.
EP3573989A4 (en) 2017-01-25 2020-11-18 Beigene, Ltd. CRYSTALLINE FORMS OF (S) -7- (1- (BUT-2-YNOYL) -PIPERIDINE-4-YL) -2- (4-PHENOXYPHENYL) -4,5,6,7-TETRAHYDROPYRAZOLO [1,5-A ] PYRIMIDINE-3-CARBOXAMIDE, MANUFACTURING AND USES THEREOF
MX2019012462A (es) 2017-04-20 2020-07-27 Adc Therapeutics Sa Terapia combinada.
EP3645569A4 (en) 2017-06-26 2021-03-24 BeiGene, Ltd. IMMUNOTHERAPY FOR LIVER CELL CARCINOMA
US11377449B2 (en) 2017-08-12 2022-07-05 Beigene, Ltd. BTK inhibitors with improved dual selectivity
WO2019108795A1 (en) 2017-11-29 2019-06-06 Beigene Switzerland Gmbh Treatment of indolent or aggressive b-cell lymphomas using a combination comprising btk inhibitors
WO2019157353A1 (en) 2018-02-09 2019-08-15 Beigene, Ltd. Immunotherapy for urothelial carcinoma
GB201803746D0 (en) 2018-03-08 2018-04-25 Ultrahuman Eight Ltd PD1 binding agents
JP2021517116A (ja) 2018-03-21 2021-07-15 エムイーアイ ファーマ，インク． 併用療法
US20220249491A1 (en) 2019-06-10 2022-08-11 Beigene Switzerland Gmbh Oral solid tablet comprising bruton's tyrosine kinase inhibitor and preparation method therefor
US20220241285A1 (en) 2019-06-10 2022-08-04 Beigene Switzerland Gmbh Oral capsule and preparation method therefor
WO2021047623A1 (en) * 2019-09-11 2021-03-18 Beigene, Ltd. Treatment of cancer using a combination comprising multi-tyrosine kinase inhibitor and immune checkpoint inhibitor

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101899114A (zh) * 2002-12-23 2010-12-01 惠氏公司 抗pd-1抗体及其用途

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BRAHMER, Julie R. et al. "Safety and Activity of Anti-PD-L1 Antibody in Patients with Advanced Cancer". N. Engl. J. Med., Vol. 366, No.26, 28 June 2012 (2012-06-28), see the whole document *

Also Published As

Publication number Publication date
US20180111995A1 (en) 2018-04-26
WO2015035606A1 (en) 2015-03-19
US9834606B2 (en) 2017-12-05
CN112552401B (zh) 2023-08-25
US20230303689A1 (en) 2023-09-28
BR112016005408A2 (pt) 2018-01-16
CY1125652T1 (el) 2024-02-16
AU2013400609B9 (en) 2020-03-05
RS63571B1 (sr) 2022-10-31
CN112552401A (zh) 2021-03-26
IL272867B (en) 2021-07-29
US20200216535A1 (en) 2020-07-09
US10519235B2 (en) 2019-12-31
EP3702373B1 (en) 2022-08-24
HK1217501A1 (zh) 2017-01-13
EP3044234B1 (en) 2020-03-04
US20210230274A1 (en) 2021-07-29
IL244514B (en) 2020-03-31
IL272867A (en) 2020-04-30
IL244514A0 (en) 2016-04-21
EP3044234A4 (en) 2017-08-09
BR112016005408B1 (pt) 2023-03-21
EP3702373B9 (en) 2022-11-23
NL301252I2 (nl) 2024-01-04
US20150079109A1 (en) 2015-03-19
IL296026B1 (en) 2024-06-01
HUE049281T2 (hu) 2020-09-28
CN105531288A (zh) 2016-04-27
US9988450B2 (en) 2018-06-05
SG11201601844TA (en) 2016-04-28
HUE060420T2 (hu) 2023-02-28
CN107090041A (zh) 2017-08-25
IL284258B2 (en) 2023-02-01
AU2013400609A8 (en) 2016-07-21
PT3044234T (pt) 2020-05-27
KR20160044063A (ko) 2016-04-22
FR24C1001I1 (fr) 2024-02-23
US9217034B2 (en) 2015-12-22
AU2013400609A9 (en) 2020-03-05
TW201538525A (zh) 2015-10-16
US8735553B1 (en) 2014-05-27
EP3044234B9 (en) 2020-08-26
EP4130044A1 (en) 2023-02-08
CN112457403A (zh) 2021-03-09
NO2023045I1 (no) 2023-12-07
JP6623353B2 (ja) 2019-12-25
CA2924172A1 (en) 2015-03-19
PL3702373T3 (pl) 2022-12-05
IL296026A (en) 2022-10-01
US11673951B2 (en) 2023-06-13
EP3702373A3 (en) 2020-11-11
EP3702373A2 (en) 2020-09-02
KR102100419B1 (ko) 2020-04-14
CA3078121A1 (en) 2015-03-19
CN108715615A (zh) 2018-10-30
EA201690567A1 (ru) 2016-08-31
JP2016533763A (ja) 2016-11-04
CN107090041B (zh) 2018-11-16
PL3044234T3 (pl) 2020-10-19
AU2013400609B2 (en) 2019-11-14
NZ718643A (en) 2020-02-28
TWI636995B (zh) 2018-10-01
MX2016003292A (es) 2016-06-24
ES2792183T3 (es) 2020-11-10
CN107011441A (zh) 2017-08-04
BR112016005408A8 (pt) 2023-01-10
CA3080200A1 (en) 2015-03-19
PT3702373T (pt) 2022-09-27
CY2023025I1 (el) 2024-02-16
US20220119524A1 (en) 2022-04-21
SI3702373T1 (sl) 2022-11-30
CN108715615B (zh) 2020-11-27
CN107011441B (zh) 2020-12-01
DK3044234T3 (da) 2020-05-18
CN105531288B (zh) 2020-12-11
HRP20221262T1 (hr) 2022-12-09
IL284258A (en) 2021-07-29
AU2022204171A1 (en) 2022-07-07
US11186637B2 (en) 2021-11-30
AU2020201069B2 (en) 2022-03-24
CA2924172C (en) 2020-06-30
IL312577A (en) 2024-07-01
AU2020201069A1 (en) 2020-03-05
RS63571B9 (sr) 2023-02-28
ES2927567T3 (es) 2022-11-08
IL284258B (en) 2022-10-01
EP3044234A1 (en) 2016-07-20
CN112457403B (zh) 2022-11-29
AU2013400609A1 (en) 2016-05-05
ZA201601953B (en) 2017-06-28
IL296026B2 (en) 2024-10-01
US20150315274A1 (en) 2015-11-05
HUS2300041I1 (hu) 2023-12-28
DK3702373T3 (da) 2022-09-12
US20180251551A1 (en) 2018-09-06
LT3702373T (lt) 2022-11-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11186637B2 (en) Anti-PD1 antibodies and their use as therapeutics and diagnostics
JP6800191B2 (ja) 抗ｐｄ−１抗体並びにその治療及び診断のための使用
EA044655B1 (ru) Антитела против pd1 и их применение в качестве терапевтических и диагностических средств
EA047964B1 (ru) Антитела к pd1 и их применение в качестве терапевтических и диагностических средств

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KZ KG TJ TM