JP2023516155A

JP2023516155A - ダブラフェニブ、ｅｒｋ阻害剤及びｒａｆ阻害剤又はｐｄ－１阻害剤を含む三重の医薬品の組合せ

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Publication number: JP2023516155A
Application number: JP2022551299A
Authority: JP
Inventors: コーケ，ヴェッセリナ
Original assignee: ノバルティスアーゲー
Priority date: 2020-02-28
Filing date: 2021-02-26
Publication date: 2023-04-18
Also published as: CN115279374A; TW202146024A; AU2021225491A1; KR20220148846A; WO2021171260A3; EP4110341A2; CA3173356A1; IL295626A; WO2021171260A2

Abstract

本発明は、ダブラフェニブ、Ｅｒｋ阻害剤及びＲＡＦ阻害剤を含む医薬品の組合せ；それを含む医薬組成物；並びにＭＡＰＫ経路阻害が有益である状態の処置又は予防、例えば癌の処置においてこのような組合せ及び組成物を使用する方法に関する。

Description

本発明は、
（ｉ）ダブラフェニブ若しくはその薬学的に許容される塩、Ｅｒｋ阻害剤（ＥＲＫｉ）、例えば４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミド（「化合物（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ）Ａ」若しくは「化合物（ｃｏｍｐｏｕｎｄ）Ａ」）若しくはその薬学的に許容される塩及びＲＡＦ阻害剤、例えばＮ－（３－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）－６－モルホリノピリジン－４－イル）－４－メチルフェニル）－２－（トリフルオロメチル）－イソニコチンアミド（「化合物Ｃ」）若しくはその薬学的に許容される塩；又は
（ｉｉ）ダブラフェニブ若しくはその薬学的に許容される塩、Ｅｒｋ阻害剤（ＥＲＫｉ）、例えば４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミド（「化合物（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ）Ａ」若しくは「化合物（ｃｏｍｐｏｕｎｄ）Ａ」）若しくはその薬学的に許容される塩及びＰＤ－１阻害剤、例えばスパルタリズマブ
を含む医薬品の組合せ；並びにそれを含む医薬組成物；それを含む商業的パッケージ；並びにＭＡＰＫ経路阻害が有益である状態の処置又は予防、例えば癌の処置においてこのような組合せ及び組成物を使用する方法に関する。本発明は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、例えばＢＲＡＦ機能獲得型結腸直腸癌を含むこのような状態又は癌の処置における使用のためのこのような組合せも提供する。

ＭＡＰＫ経路は、細胞増殖、分化及び生存を推進する重要なシグナル伝達カスケードである。この経路の調節不全は、腫瘍化の多くの例の根底にある。ＭＡＰＫ経路の異常なシグナル伝達又は不適当な活性化は、複数の腫瘍タイプにおいて示されており、ＲＡＳ及びＢＲＡＦにおける活性化変異を含めたいくつかの別個の機序を通して起こり得る。ＭＡＰＫ経路は、ヒト癌において多くの場合に変異しており、ＫＲＡＳ及びＢＲＡＦ変異は、最も頻度が高い（概ね３０％）。ＲＡＳ変異、特に機能獲得型変異は、全ての癌の９～３０％において検出されており、ＫＲＡＳ変異は、最も蔓延している（８６％）。

細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）は、細胞及び細胞内小器官への細胞外シグナルの伝達に関与しているシグナル伝達キナーゼの１つのクラスである。ＥＲＫ１及びＥＲＫ２は、広範囲の活性をレギュレートすることに関与しており、ＥＲＫ１／２カスケードの調節不全は、神経変性疾患、発育異常疾患、糖尿病及び癌を含めた種々の病態をもたらすことが公知である。そのシグナル伝達カスケードにおけるＥＲＫ１／２の上流の活性化変異は、全ての癌の半分超について関与していると考えられるため、癌におけるＥＲＫ１／２の役割は、特に重要である。さらに、過剰なＥＲＫ１／２活性は、癌でも見出され、ここで、上流の構成成分は、変異しておらず、これは、ＥＲＫ１／２シグナル伝達が、変異性活性化を伴わない癌においてでさえ発癌において役割を果たしていることを示唆する。ＥＲＫ経路は、腫瘍細胞移動及び浸潤を制御することも示されており、このように転移と関連し得る。

プログラム死１（ＰＤ－１）タンパク質は、Ｔ細胞レギュレーターの拡張されたＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４ファミリーの阻害性メンバーである。ＰＤ－１への結合によってＴ細胞活性化を下方制御することが示されているＰＤ－１についての２つのリガンドである、ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１）及びＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ）が同定されている。ＰＤ－Ｌ１は、種々のヒト癌において豊富である。ＰＤ－１は、ＴＣＲシグナルを負に調節する免疫抑制タンパク質として公知である。ＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１間の相互作用は、免疫チェックポイントとして作用し得、これは、例えば、腫瘍浸潤リンパ球の減少、Ｔ細胞受容体介在性増殖の減少及び／又は癌性細胞による免疫回避をもたらし得る。免疫抑制は、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２とのＰＤ－１の局所相互作用を阻害することによって逆転させることができ；ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ２との相互作用もブロックされるとき、その効果は、相加的である。

免疫応答の調節における免疫チェックポイント経路の重要性を考慮すれば、免疫系を活性化する新規な組合せ療法を開発する必要性が存在する。特定の癌を患っている患者についての予後は、芳しくないままである。処置に対する耐性が頻繁に発生し、全ての患者が利用可能な処置に応答するとは限らない。例えば、ＢＲＡＦ変異を有する進行性結腸直腸癌を患っている患者についての生存中央値は、１２カ月未満である。このように、より良好な臨床成績を達成する、癌を患っている患者のための新規な治療を開発することは、重要である。より良好な耐容性を示し、且つ／又は耐久性のある抗腫瘍応答を実現する処置の選択肢も望まれる。

本発明の三重の組合せ（ｉ）ダブラフェニブ；Ｅｒｋ阻害剤、例えば化合物Ａ及びＲＡＦ阻害剤、例えば化合物Ｃ；又は（ｉｉ）ダブラフェニブ、Ｅｒｋ阻害剤、例えば化合物Ａ及びＰＤ－１阻害剤、例えばスパルタリズマブは、これらに限定されないが、乳癌、胆管癌、唾液腺癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌を含めた、ＭＡＰＫ経路の異常な活性からもたらされる疾患又は障害の処置のための治療として使用することができる。ダブラフェニブ、Ｅｒｋ阻害剤、例えば化合物Ａ及びＲＡＦ阻害剤、例えば化合物Ｃ又はダブラフェニブ、Ｅｒｋ阻害剤、例えば化合物Ａ及びＰＤ－１阻害剤、例えばスパルタリズマブの三重の組合せは、ＢＲＡＦ機能獲得型又はＢＲＡＦＶ６００Ｅ／Ｄ／Ｋ変異体である進行性又は転移性結腸直腸癌を含めた結腸直腸癌（ＣＲＣ）の処置において特に有用である。

本発明は、
（ａ）構造：

を有するＮ－（３－（５－（２－アミノピリミジン－４－イル）－２－（ｔｅｒｔ－ブチル）チアゾール－４－イル）－２－フルオロフェニル）－２，６－ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）又はその薬学的に許容される塩；
（ｂ）構造：

を有する４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミド（化合物Ａ）又はその薬学的に許容される塩；及び
（ｃ）構造：

を有するＮ－（３－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）－６－モルホリノピリジン－４－イル）－４－メチルフェニル）－２－（トリフルオロメチル）－イソニコチンアミド（化合物Ｃ）又はその薬学的に許容される塩
を含む医薬品の組合せを提供する

本発明は、
（ａ）構造：

を有する４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミド（化合物Ａ）又はその薬学的に許容される塩；及び
（ｃ）ＰＤ－１阻害剤
を含む医薬品の組合せを提供する。

本発明のさらなる態様において、ＰＤ－１阻害剤は、ＰＤＲ００１（スパルタリズマブ；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）、ペムブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ）、ピジリズマブ（ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＭＥＤＩ０６８０（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）、ＴＳＲ－０４２（Ｔｅｓａｒｏ）、ＰＦ－０６８０１５９１（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＢＧＢ－Ａ３１７（Ｂｅｉｇｅｎｅ）、ＢＧＢ－１０８（Ｂｅｉｇｅｎｅ）、ＩＮＣＳＨＲ１２１０（Ｉｎｃｙｔｅ）又はＡＭＰ－２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）から選択される。

本発明のさらなる態様において、ＰＤ－１阻害剤は、ＰＤＲ００１（スパルタリズマブ）である。

（ｉ）ダブラフェニブ若しくはその薬学的に許容される塩、化合物Ａ若しくはその薬学的に許容される塩及び化合物Ｃ若しくはその薬学的に許容される塩、又は（ｉｉ）ダブラフェニブ若しくはその薬学的に許容される塩、化合物Ａ若しくはその薬学的に許容される塩及びＰＤ－１阻害剤、例えばスパルタリズマブの医薬品の組合せは、本明細書において「本発明の組合せ」としても言及される。

癌の処置において使用するための、例えば乳癌、胆管癌、唾液腺癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される癌において使用するための本発明の組合せが提供される。

例えば、乳癌、胆管癌、唾液腺癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される癌における使用のための、（ｉ）ダブラフェニブ若しくはその薬学的に許容される塩、化合物Ａ若しくはその薬学的に許容される塩及び化合物Ｃ若しくはその薬学的に許容される塩、又は（ｉｉ）ダブラフェニブ若しくはその薬学的に許容される塩、化合物Ａ若しくはその薬学的に許容される塩及びＰＤ－１阻害剤、例えばスパルタリズマブの医薬品の組合せが提供される。

ＢＲＡＦ機能獲得型又はＢＲＡＦＶ６００Ｅ／Ｄ／Ｋ変異体である結腸直腸癌（進行性又は転移性結腸直腸癌を含む）の処置において使用するための、（ｉ）ダブラフェニブ若しくはその薬学的に許容される塩、化合物Ａ若しくはその薬学的に許容される塩及び化合物Ｃ若しくはその薬学的に許容される塩、又は（ｉｉ）ダブラフェニブ若しくはその薬学的に許容される塩、化合物Ａ若しくはその薬学的に許容される塩及びＰＤ－１阻害剤、例えばスパルタリズマブの組合せも提供される。

本明細書においてまた提供するのは、ＢＲＡＦ機能獲得型又はＢＲＡＦＶ６００Ｅ／Ｄ／Ｋ変異体である、結腸直腸癌（進行性又は転移性結腸直腸癌を含む）の処置において使用するための本発明の組合せである。

本発明の組合せの別の実施形態では、ダブラフェニブ又はその薬学的に許容される塩と、化合物Ａ又はその薬学的に許容される塩と、化合物Ｃ又はその薬学的に許容される塩とは、同じ製剤中に存在する。

本発明の組合せの別の実施形態では、ダブラフェニブ又はその薬学的に許容される塩と、化合物Ａ又はその薬学的に許容される塩と、化合物Ｃ又はその薬学的に許容される塩とは、別々の製剤中に存在する。

別の実施形態では、本発明の組合せは、同時又は（任意の順序の）順次投与のためのものである。

別の実施形態では、本発明は、癌の処置を、それを必要とする対象において行う方法であって、対象に治療的有効量の本発明の組合せを投与することを含む方法を提供する。

方法のさらなる実施形態では、癌は、乳癌、胆管癌、唾液腺癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される。

さらなる実施形態では、本発明は、乳癌、胆管癌、唾液腺癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される癌を処置するための医薬の製造における使用のための本発明の組合せを提供する。

別の実施形態では、本発明の組合せを含む医薬組成物又は商業用パッケージ（例えば、パーツのキット）を提供する。

さらなる実施形態では、医薬組成物は、１種又は複数の薬学的に許容される添加剤をさらに含む。

ＨＴ２９腫瘍細胞移植後２６日目にマウスを処置群に無作為化した。処置は、２６日目に開始し、腫瘍細胞移植後３９日目まで続けた。腫瘍寸法及び体重は、無作為化のとき及び研究期間についてその後週２回収集した。無作為化後の日数に対する処置群の最初からの腫瘍体積（Ａ）又は体重変化パーセント（Ｂ）をグラフ化する。群毎にＮ＝９匹のマウスで、３９日目に一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）チューキー多重比較検定を使用して腫瘍体積変化についての有意差を計算した（ｐ＜０．０５、ビヒクル、単剤及び二重の組合せに対するダブラフェニブ＋化合物Ａ＋トラメチニブ処置群について）。ＨＴ２９腫瘍細胞移植後２８日目にマウスを処置群に無作為化した。処置は、２８日目に開始し、腫瘍細胞移植後５２日目まで続けた。腫瘍寸法及び体重は、無作為化のとき及び研究期間についてその後週２回収集した。無作為化後の日数に対する処置群の最初からの腫瘍体積（Ａ）又は体重変化パーセント（Ｂ）をグラフ化する。ｎ＝４である未処置の対照群を除いて群毎にＮ＝７匹のマウスで、５２日目に一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）チューキー多重比較検定を使用して有意差を計算した（ｐ＜０．０００１、未処置の対照に対する両方の組合せ処置群について）。ＨＣＯＸ１３２９腫瘍移植後１２日目にマウスを処置群に無作為化した。処置は、１２日目に開始し、腫瘍移植後３８日目（ビヒクル）、６２日目（ダブラフェニブ＋化合物Ａ＋トラメチニブ）又は６７日目（ダブラフェニブ＋トラメチニブ及びダブラフェニブ＋トラメチニブ＋セツキシマブ）まで続けた。腫瘍寸法及び体重は、無作為化のとき及び研究期間についてその後週２回収集した。無作為化後の日数に対する処置群の最初からの腫瘍体積（Ａ）又は体重変化パーセント（Ｂ）をグラフ化する。ｎ＝４であるダブラフェニブ＋化合物Ａ＋トラメチニブ群を除いて群毎にＮ＝５匹のマウスで、３８日目に一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）チューキー多重比較検定を使用して有意差を計算した（ダブラフェニブ＋トラメチニブに対するダブラフェニブ＋化合物Ａ＋トラメチニブについてｐ＝０．００５及びダブラフェニブ＋トラメチニブ＋セツキシマブに対するダブラフェニブ＋化合物Ａ＋トラメチニブについてｐ＝０．０４）。

本明細書の上記及び下記で使用される一般用語は、好ましくは、本開示に関連して、他に示さない限り、下記の意味を有し、より一般の用語が使用される場合には常に、互いに独立に、より特定の定義によって置き換えられるか又はそのままであり、このように本発明のより詳細な実施形態を定義し得る。

「ダブラフェニブ」は、ＢＲＡＦ（Ｖ６００Ｅ）、ＢＲＡＦ（Ｖ６００Ｋ）及びＢＲＡＦ（Ｖ６００Ｇ）変異を阻害することができるＶ６００における変異ＢＲＡＦの選択的阻害剤である、Ｎ－（３－（５－（２－アミノピリミジン－４－イル）－２－（ｔｅｒｔ－ブチル）チアゾール－４－イル）－２－フルオロフェニル）－２，６－ジフルオロベンゼンスルホンアミドである（Ｎ－｛３－［５－（２－アミノ－４－ピリミジニル）－２－（１，１－ジメチルエチル）－１，３－チアゾール－４－イル］－２－フルオロフェニル｝－２，６－ジフルオロベンゼンスルホンアミド；Ｔａｆｉｎｌａｒ（登録商標）；及びＮ－｛３［５－（２－アミノ－４－ピリミジニル）－２－（１，１－ジメチルエチル）－１，３－チアゾール－４－イル］－２－フルオロフェニル｝－２，６ジフルオロベンゼンスルホンアミド、メタンスルホン酸塩としても公知である）。

「セツキシマブ」は、転移性結腸直腸癌、転移性非小細胞肺癌及び頭頸部癌の処置のために使用される上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤である。セツキシマブは、転移性ＣＲＣの処置においてイリノテカンと組み合わせた使用又は単独療法として承認された、上皮成長因子受容体を標的とするＩｇＧ１モノクローナル抗体である。セツキシマブは、静脈内注入によって与えられるキメラ（マウス／ヒト）モノクローナル抗体である。

「化合物Ａ」は、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）１／２の阻害剤である。「化合物Ａ」は、４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミドである。化合物Ａの特に好ましい塩は、その塩酸塩である。

「化合物Ｃ」、Ｎ－（３－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）－６－モルホリノピリジン－４－イル）－４－メチルフェニル）－２－（トリフルオロメチル）－イソニコチンアミドは、ＢＲＡＦ及びＣＲＡＦタンパク質キナーゼのＡＴＰ競争的阻害剤である。

ＰＤ－１阻害剤という用語は、ＰＤＲ００１を含む。ＰＤＲ００１は、参照によりその全体が組み込まれる「ＡｎｔｉｂｏｄｙＭｏｌｅｃｕｌｅｓｔｏＰＤ－１ａｎｄＵｓｅｓＴｈｅｒｅｏｆ」という名称の２０１５年７月３０日に公開された米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書において記載されている抗ＰＤ－１抗体分子であるスパルタリズマブとして公知である。

さらなる抗ＰＤ－１抗体分子は、下記を含む：
ＭＤＸ－１１０６、ＭＤＸ－１１０６－０４、ＯＮＯ－４５３８、ＢＭＳ－９３６５５８又はＯＰＤＩＶＯ（登録商標）としても公知であるニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）。ニボルマブ（クローン５Ｃ４）及び他の抗ＰＤ－１抗体は、参照によりその全体が組み込まれる米国特許第８，００８，４４９号明細書及び国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレットにおいて開示されている；
ラムブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、ＭＫ０３４７５、ＳＣＨ－９００４７５又はＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）としても公知であるペムブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ）。ペムブロリズマブ及び他の抗ＰＤ－１抗体は、参照によりその全体が組み込まれるＨａｍｉｄ，Ｏ．ｅｔａｌ．（２０１３）ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ３６９（２）：１３４－４４、米国特許第８，３５４，５０９号明細書及び国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットにおいて開示されている；
ＣＴ－０１１としても公知であるピジリズマブ（ＣｕｒｅＴｅｃｈ）。ピジリズマブ及び他の抗ＰＤ－１抗体は、参照によりその全体が組み込まれるＲｏｓｅｎｂｌａｔｔ，Ｊ．ｅｔａｌ．（２０１１）ＪＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ３４（５）：４０９－１８、米国特許第７，６９５，７１５号明細書、米国特許第７，３３２，５８２号明細書及び米国特許第８，６８６，１１９号明細書において開示されている；
ＡＭＰ－５１４としても公知であるＭＥＤＩ０６８０（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）。ＭＥＤＩ０６８０及び他の抗ＰＤ－１抗体は、参照によりその全体が組み込まれる米国特許第９，２０５，１４８号明細書及び国際公開第２０１２／１４５４９３号パンフレットにおいて開示されている；
ＡＭＰ－２２４（Ｂ７－ＤＣＩｇ（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、例えば参照によりその全体が組み込まれる国際公開第２０１０／０２７８２７号パンフレット及び国際公開第２０１１／０６６３４２号パンフレットにおいて開示されている；
ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）；ＰＦ－０６８０１５９１（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＢＧＢ－Ａ３１７又はＢＧＢ－１０８（Ｂｅｉｇｅｎｅ）；ＩＮＣＳＨＲ０１２１０又はＳＨＲ－１２１０としても公知であるＩＮＣＳＨＲ１２１０（Ｉｎｃｙｔｅ）；ＡＮＢ０１１としても公知であるＴＳＲ－０４２（Ｔｅｓａｒｏ）；並びに例えば参照によりその全体が組み込まれる国際公開第２０１５／１１２８００号パンフレット、国際公開第２０１６／０９２４１９号パンフレット、国際公開第２０１５／０８５８４７号パンフレット、国際公開第２０１４／１７９６６４号パンフレット、国際公開第２０１４／１９４３０２号パンフレット、国際公開第２０１４／２０９８０４号パンフレット、国際公開第２０１５／２００１１９号パンフレット、米国特許第８，７３５，５５３号明細書、米国特許第７，４８８，８０２号明細書、米国特許第８，９２７，６９７号明細書、米国特許第８，９９３，７３１号明細書及び米国特許第９，１０２，７２７号明細書において記載されているものを含めたさらなる公知の抗ＰＤ－１抗体。

用語「対象」又は「患者」は、本明細書において使用する場合、癌又は癌と直接的若しくは間接的に関与している任意の障害を患うか又は苦しめられ得る動物を含むことを意図する。対象の例は、哺乳動物、例えばヒト、類人猿、サル、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット及びトランスジェニックなヒトではない動物を含む。一実施形態では、対象は、ヒト、例えば癌を患っているか、癌を患う危険性があるか又は潜在的に癌を患い得るヒトである。

用語「処置する」又は「処置」は、本明細書において使用する場合、対象において少なくとも１つの症状を緩和、低減若しくは軽減するか、又は疾患の進行の遅延をもたらす処置を含む。例えば、処置は、障害の１つ又はいくつかの症状の減少又は障害、例えば癌の完全な根絶であり得る。本開示の意味において、用語「処置する」は、発症を抑止し、遅延させ（すなわち疾患の臨床徴候前の期間）、且つ／又は疾患を発生若しくは悪化させる危険性を低減させることも意味する。

用語「含む」及び「含める」は、他に断らない限り、本明細書において、それらの拡張可能及び非限定的な意味で使用される。

本発明の記載に関連して（特に下記の特許請求の範囲に関連して）、用語「１つの（ａ）」、及び「１つの（ａｎ）」、及び「その」並びに同様の参照対象は、本明細書において他に示さない限り又は文脈によって明らかに矛盾しない限り、単数及び複数の両方を包含すると解釈される。複数形が化合物、塩などについて使用される場合、これは、単一の化合物、塩なども意味すると考えられる。

「組合せ」、又は「と組み合わせた」、又は「との同時の投与」及び同様のものにより、治療又は治療剤が同時に物理的に混合若しくは投与され、且つ／又は一緒の送達のために配合されなければならないことを暗示することを意図されないが、送達のこれらの方法は、本明細書に記載されている範囲内である。これらの組合せにおける治療剤は、１つ又は複数の他のさらなる治療又は治療剤と併行的に、その前又はその後に投与することができる。治療剤又は治療プロトコルは、任意の順序で投与することができる。一般に、各薬剤は、その薬剤のために決定した用量及び／又はタイムスケジュールで投与される。この組合せにおいて利用されるさらなる治療剤は、単一の組成物中で一緒に投与され得るか、又は異なる組成物中で別々に投与され得ることがさらに認識される。一般に、組み合わせて利用されるさらなる治療剤は、それらが個々に利用されるレベルを超えないレベルで利用されることが予想される。一部の実施形態では、組み合わせて利用されるレベルは、単剤治療法として利用されるものより低い。

投与量又は用量を本明細書において「約」で特定の量として記載するとき、実際の投与量又は用量は、記述した量から１０％まで、例えば５％まで変化し得る。「約」のこの使用は、所与の用量又は剤形中の正確な量が、投与された化合物のインビボでの効果に実質的に影響を与えることなく、様々な理由のために意図する量から僅かに異なり得ることを認識する。治療化合物の用量又は投与量が本明細書において引用される場合、その量は、その遊離形態又は非溶媒和形態での治療化合物の量を指すことを当業者は理解する。

語句「治療有効量」は、本明細書において使用する場合、任意の医療処置に適用可能な合理的な利益／リスク比で、動物（ヒトを含めた）における細胞の少なくとも亜集団においていくらかの所望の治療効果を生じさせるために有効な化合物、材料又は本発明の化合物を含む組成物の量を意味する。

語句「薬学的に許容される」は、本明細書において、正しい医学的判断の範囲内において、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー応答又は他の問題若しくは合併症を伴わずに人間及び動物の組織と接触させて使用するのに適し、合理的な利益／リスク比と釣り合うそれらの化合物、材料、組成物及び／又は剤形を指すために用いられる。

本発明の組合せであるダブラフェニブ、化合物Ａ及び化合物Ｃ又はスパルタリズマブは、化合物の標識されていない形態及び同位体的に標識された形態を表すことも意図する。同位体標識化合物は、選択された原子質量又は質量数を有する原子によって置き換えられた１個又は複数の原子を有する。ダブラフェニブ、化合物Ａ及び化合物Ｃ又はスパルタリズマブ中に組み込むことができる同位体の例は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素及び塩素の同位体、例えばそれぞれ^２Ｈ、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１８Ｆ、^３１Ｐ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉを含む。本発明は、例えば、その中に放射性同位体、例えば^３Ｈ及び^１４Ｃ又は非放射性同位体、例えば^２Ｈ及び^１３Ｃが存在する、同位体的に標識されたダブラフェニブ、化合物Ａ及び化合物Ｃ又はスパルタリズマブを含む。同位体的に標識されたダブラフェニブ、化合物Ａ及び化合物Ｃ又はスパルタリズマブは、代謝研究（^１４Ｃによる）、反応速度論研究（例えば、^２Ｈ若しくは^３Ｈによる）、検出若しくはイメージング技術、例えば薬物若しくは基質組織分布アッセイを含むポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）若しくは単光子放射型コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）において又は患者の放射性処置において有用である。特に、^１８Ｆで標識されたダブラフェニブ、化合物Ａ又は化合物Ｃ又はスパルタリズマブは、ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴ研究のために特に望ましいことがあり得る。本発明の同位体標識された化合物は、一般に、当業者に公知の従来の技術により、又は適当な同位体標識された試薬を使用して添付の実施例において記載されているものと類似のプロセスにより調製することができる。

さらに、より重い同位体、特に重水素（すなわち^２Ｈ又はＤ）による置換は、より大きい代謝安定性、例えばインビボでの半減期の増加、又は投与必要量の低減、又は治療指数における改善に起因する特定の治療上の利益をもたらし得る。重水素は、これに関連して、ダブラフェニブ、化合物Ａ又は化合物Ｃ又はスパルタリズマブの置換基と見なされることが理解される。このようなより重い同位体、特に重水素の濃度は、同位体濃縮因子によって定義することができる。本明細書で使用される場合、用語「同位体濃縮因子」とは、同位体存在度と、指定同位体の天然存在度との間の比を意味する。ダブラフェニブ、化合物Ａ又は化合物Ｃ又はスパルタリズマブの置換基が重水素と示される場合、こうした化合物は、少なくとも３５００（それぞれ指定された重水素原子における５２．５％重水素の取り込み）、少なくとも４０００（６０％重水素の取り込み）、少なくとも４５００（６７．５％重水素の取り込み）、少なくとも５０００（７５％重水素の取り込み）、少なくとも５５００（８２．５％重水素の取り込み）、少なくとも６０００（９０％重水素の取り込み）、少なくとも６３３３．３（９５％重水素の取り込み）、少なくとも６４６６．７（９７％重水素の取り込み）、少なくとも６６００（９９％重水素の取り込み）又は少なくとも６６３３．３（９９．５％重水素の取り込み）のそれぞれ指定された重水素原子についての同位体濃縮因子を有する。

ダブラフェニブは、ＲＡＦ阻害活性を有する経口的に生物が利用可能な小分子である。化合物Ａは、ＥＲＫ阻害活性を有する経口的に生物が利用可能な小分子である。これは、細胞外シグナル調節キナーゼ１及び２（ＥＲＫ１／２）の阻害剤である。化合物Ｃは、Ｂ／Ｃ－ＲＡＦ阻害活性を有する経口的に生物が利用可能な小分子である。スパルタリズマブは、ＰＤ－１へのプログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）及びプログラム死－リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）の結合をブロックする高親和性リガンド遮断ヒト化抗プログラム死－１（ＰＤ－１）ＩｇＧ４抗体である。

一実施形態では、本発明の医薬品の組合せに関して、Ｎ－（３－（５－（２－アミノピリミジン－４－イル）－２－（ｔｅｒｔ－ブチル）チアゾール－４－イル）－２－フルオロフェニル）－２，６－ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）又はその薬学的に許容される塩；４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミド（化合物Ａ）又はその薬学的に許容される塩；及びＮ－（３－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）－６－モルホリノピリジン－４－イル）－４－メチルフェニル）－２－（トリフルオロメチル）－イソニコチンアミド（化合物Ｃ）又はその薬学的に許容される塩を含む医薬品の組合せである。

さらなる実施形態では、Ｎ－（３－（５－（２－アミノピリミジン－４－イル）－２－（ｔｅｒｔ－ブチル）チアゾール－４－イル）－２－フルオロフェニル）－２，６－ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）又はその薬学的に許容される塩、４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミド（化合物Ａ）又はその薬学的に許容される塩及びＮ－（３－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）－６－モルホリノピリジン－４－イル）－４－メチルフェニル）－２－（トリフルオロメチル）－イソニコチンアミド（化合物Ｃ）又はその薬学的に許容される塩は、別々に、同時に又は逐次的に任意の順序で投与される。

さらなる実施形態では、医薬品の組合せは、経口投与のためのものである。

医薬品の組合せのさらなる実施形態では、Ｎ－（３－（５－（２－アミノピリミジン－４－イル）－２－（ｔｅｒｔ－ブチル）チアゾール－４－イル）－２－フルオロフェニル）－２，６－ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）は、経口剤形におけるものである。

医薬品の組合せのさらなる実施形態では、４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミド（化合物Ａ）は、経口剤形におけるものである。

医薬品の組合せのさらなる実施形態では、Ｎ－（３－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）－６－モルホリノピリジン－４－イル）－４－メチルフェニル）－２－（トリフルオロメチル）－イソニコチンアミド（化合物Ｃ）は、経口剤形におけるものである。

別の実施形態では、（上記の実施形態のいずれかにおいて記載するような）医薬品の組合せ及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物又は商業的パッケージである。

別の実施形態では、癌の処置における使用のための、（上記の実施形態のいずれかにおいて記載するような）医薬品の組合せ又は（上記の実施形態において記載するような）医薬組成物若しくは商業的パッケージである。

さらなる実施形態では、癌は、乳癌、胆管癌、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される。

さらなる実施形態では、癌は、進行性又は転移性結腸直腸癌である。

さらなる実施形態では、癌は、ＢＲＡＦ機能獲得型ＣＲＣ又はＢＲＡＦＶ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ若しくはＶ６００ＫＣＲＣである。

別の実施形態では、癌の処置のための医薬の製造のための、上記の実施形態のいずれかによる医薬品の組合せ又は上記の実施形態による医薬組成物若しくは商業的パッケージの使用である。

さらなる実施形態では、癌は、乳癌、胆管癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択され、任意選択で、癌は、進行性又は転移性結腸直腸癌であり、任意選択で、癌は、ＢＲＡＦ機能獲得型ＣＲＣ又はＢＲＡＦＶ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ若しくはＶ６００ＫＣＲＣである。

別の実施形態では、乳癌、胆管癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される癌を処置する方法であって、それを必要とする患者に、上記の実施形態のいずれかの１つによる医薬品の組合せ若しくは商業的パッケージ又は上記の実施形態による医薬組成物を投与することを含む方法である。

さらなる実施形態では、結腸直腸癌は、進行性又は転移性結腸直腸癌である。

さらなる実施形態では、結腸直腸癌は、ＢＲＡＦ機能獲得型ＣＲＣ又はＢＲＡＦＶ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ若しくはＶ６００ＫＣＲＣである。

さらなる実施形態では、Ｎ－（３－（５－（２－アミノピリミジン－４－イル）－２－（ｔｅｒｔ－ブチル）チアゾール－４－イル）－２－フルオロフェニル）－２，６－ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）は、１日当たり約１～約１５０ｍｇ（例えば、１日当たり１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ又は１５０ｍｇ）の用量で経口的に投与される。

さらなる実施形態では、Ｎ－（３－（５－（２－アミノピリミジン－４－イル）－２－（ｔｅｒｔ－ブチル）チアゾール－４－イル）－２－フルオロフェニル）－２，６－ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）は、７５ｍｇ、ＢＩＤの用量で経口的に投与される。

さらなる実施形態では、４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミド（化合物Ａ）は、１日当たり約５０～約２００ｍｇの用量（例えば、１日当たり約５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ又は２００ｍｇの用量）で経口的に投与される。

さらなる実施形態では、４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミド（化合物Ａ）は、１００ｍｇ、ＱＤの用量で経口的に投与される。

さらなる実施形態では、４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミド（化合物Ａ）は、２００ｍｇ、ＱＤの用量で経口的に投与される。

さらなる実施形態では、Ｎ－（３－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）－６－モルホリノピリジン－４－イル）－４－メチルフェニル）－２－（トリフルオロメチル）－イソニコチンアミド（化合物Ｃ）は、１日当たり約１００ｍｇ、又は１日当たり約２００ｍｇ、又は１日当たり約３００ｍｇ～１日当たり約４００ｍｇの用量で経口的に投与される。

さらなる実施形態では、Ｎ－（３－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）－６－モルホリノピリジン－４－イル）－４－メチルフェニル）－２－（トリフルオロメチル）－イソニコチンアミド（化合物Ｃ）は、２００ｍｇ、ＢＩＤの用量で経口的に投与される。

一実施形態では、本発明の医薬品の組合せに関して、Ｎ－（３－（５－（２－アミノピリミジン－４－イル）－２－（ｔｅｒｔ－ブチル）チアゾール－４－イル）－２－フルオロフェニル）－２，６－ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）又はその薬学的に許容される塩；４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミド（化合物Ａ）又はその薬学的に許容される塩；及びＰＤ－１阻害剤又はその薬学的に許容される塩を含む医薬品の組合せである。

さらなる実施形態では、Ｎ－（３－（５－（２－アミノピリミジン－４－イル）－２－（ｔｅｒｔ－ブチル）チアゾール－４－イル）－２－フルオロフェニル）－２，６－ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）又はその薬学的に許容される塩、４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミド（化合物Ａ）又はその薬学的に許容される塩及びＰＤ－１阻害剤又はその薬学的に許容される塩は、別々に、同時に又は逐次的に任意の順序で投与される。

別の実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体分子である。

さらなる実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、参照によりその全体が組み込まれる「ＡｎｔｉｂｏｄｙＭｏｌｅｃｕｌｅｓｔｏＰＤ－１ａｎｄＵｓｅｓＴｈｅｒｅｏｆ」という名称の２０１５年７月３０日に公開された米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書において記載されているような抗ＰＤ－１抗体分子である。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＢＡＰ０４９－クローンＥ又はＢＡＰ０４９－クローンＢである。

さらなる実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、スパルタリズマブ（ＰＤＲ００１）である。

一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、表１において示すか、又は表１において示すヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域（例えば、表１において開示されているＢＡＰ０４９－クローン－Ｅ又はＢＡＰ０４９－クローン－Ｂの重鎖及び軽鎖可変領域配列）からの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（又は集合的にＣＤＲの全て）を含む。一部の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔの定義に従う（例えば、表１において示すような）。一部の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａの定義に従う（例えば、表１において示すような）。一部の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ両方の合わせたＣＤＲの定義に従う（例えば、表１において示すような）。一実施形態では、ＶＨＣＤＲ１のＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａＣＤＲの組合せは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨ（配列番号５４１）を含む。一実施形態では、ＣＤＲの１つ又は複数（又は集合的にＣＤＲの全て）は、表１において示すか、又は表１において示すヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対して１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ又はそれを超える変化、例えばアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）又は欠失を有する。

一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５０１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５０２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号５０３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号５１０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５１１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号５１２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）（それぞれ表１において開示されている）を含む。

一実施形態では、抗体分子は、配列番号５２４のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ１、配列番号５２５のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ２及び配列番号５２６のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに配列番号５２９のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ１、配列番号５３０のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ２及び配列番号５３１のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ３（それぞれ表１において開示されている）を含むＶＬを含む。

一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５０６のアミノ酸配列又は配列番号５０６と少なくとも８５％、９０％、９５％若しくは９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５２０のアミノ酸配列又は配列番号５２０と少なくとも８５％、９０％、９５％若しくは９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５１６のアミノ酸配列又は配列番号５１６と少なくとも８５％、９０％、９５％若しくは９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５０６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５２０のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５０６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。

一実施形態では、抗体分子は、配列番号５０７のヌクレオチド配列又は配列番号５０７と少なくとも８５％、９０％、９５％若しくは９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号５２１若しくは５１７のヌクレオチド配列又は配列番号５２１若しくは５１７と少なくとも８５％、９０％、９５％若しくは９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号５０７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨ及び配列番号５２１又は５１７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。

一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５０８のアミノ酸配列又は配列番号５０８と少なくとも８５％、９０％、９５％若しくは９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５２２のアミノ酸配列又は配列番号５２２と少なくとも８５％、９０％、９５％若しくは９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５１８のアミノ酸配列又は配列番号５１８と少なくとも８５％、９０％、９５％若しくは９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５０８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号５２２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５０８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号５１８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

一実施形態では、抗体分子は、配列番号５０９のヌクレオチド配列又は配列番号５０９と少なくとも８５％、９０％、９５％若しくは９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号５２３若しくは５１９のヌクレオチド配列又は配列番号５２３若しくは５１９と少なくとも８５％、９０％、９５％若しくは９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号５０９のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖及び配列番号５２３又は５１９のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。

本明細書に記載されている抗体分子は、参照によりその全体が組み込まれる米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書に記載されているベクター、宿主細胞及び方法によって作製することができる。

さらなる実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、約３００～４００ｍｇの用量で投与される。

さらなる実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、３週間に１回又は４週間に１回投与される。

別の実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、約３００ｍｇの用量で３週間に１回投与される。

別の実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、約４００ｍｇの用量で４週間に１回投与される。

薬理学及び有用性
ＲＡＳ／ＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ又はマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）経路は、例えば、成長因子受容体チロシンキナーゼからの上流の細胞シグナルを統合し、細胞増殖、分化及び生存の調整をする重要なシグナル伝達カスケードである。ＭＡＰＫシグナル伝達経路は、最も一般に遺伝子のＲＡＳファミリーのメンバーの変異を介してヒト癌において頻繁に調節不全となる。これらの変異は、ＧＴＰ結合状態を促進し、ＲＡＳ活性をもたらし、これは、ＲＡＦ、ＭＥＫ及びＥＲＫタンパク質の活性化を引き起こす。ＲＡＳ変異は、結腸直腸、肺及び膵臓癌を含めた複数の癌タイプにおいて見出される。

ＲＡＦ（急速進行性線維肉腫）は、レトロウイルス癌遺伝子として発見されたセリン－トレオニンタンパク質キナーゼである。タンパク質のＲＡＦファミリー（ＡＲＡＦ、ＢＲＡＦ、ＣＲＡＦ）は、活性化されたＲＡＳのすぐ下流でシグナルを送る。活性化されたＧＴＰ結合ＲＡＳは、サイトゾルの不活性なＲＡＦ単量体を形質膜にリクルートし、ここで、ＲＡＦは、ＧＴＰ－ＲＡＳに結合し、それによりＲＡＦのホモ二量体化及びヘテロ二量体化を促進する。ＲＡＦの二量体化は、立体配座変化を促進し、これは、触媒的に活性化されたＲＡＦをもたらす。活性化されたＲＡＦ二量体は、ＭＥＫ１／２（マイトジェン活性化タンパク質キナーゼとしても公知である）タンパク質をリン酸化及び活性化し、これにより、それに続いて細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ１／２）をリン酸化及び活性化する。ＥＲＫは、複数の転写因子を含めた種々の基質をリン酸化し、それにより増殖、代謝、移動及び生存を含むいくつかの重要な細胞活動を調節する。そのシグナル伝達カスケードにおけるＥＲＫ１／２の上流の活性化変異は、全ての癌の半分超について関与していると考えられるため、癌におけるＥＲＫ１／２の役割は、特に重要である。

ＭＡＰＫ経路におけるいずれかのステップにおける活性化の調節不全は、腫瘍化をもたらす。活性化ＢＲＡＦ変異は、癌の概ね７％において見出すことができ、Ｖ６００Ｅは、ＢＲＡＦにおける観察された変異の９０％超の割合を占める。Ｖ６００Ｅ変異は、ＢＲＡＦの活性部位を曝露させるグルタミン酸置換にバリンをコードし、ＲＡＳと無関係である単量体又は二量体としてその恒常的な活性化を可能とした。活性ＲＡＦの阻害剤、例えばベムラフェニブ、ダブラフェニブ及びエンコラフェニブは、５０～７０％の全応答率（ＯＲＲ）を伴って、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ転移性黒色腫において劇的な活性を示した。Ｖ６００Ｅ黒色腫におけるこれらの阻害剤の成功は、癌細胞における発癌性を駆動するものであるＲＡＦの変異体単量体形態に結合し、阻害する能力に由来する。しかし、野生型ＢＲＡＦを発現している癌細胞において又はＶ６００Ｅ駆動癌を有する患者の正常細胞において、阻害剤、例えばベムラフェニブは、ＲＡＦシグナル伝達を逆説的に活性化する。単量体ＲＡＦ阻害剤の存在下でのＭＡＰＫ経路シグナル伝達の複雑さは、そのＢＲＡＦＶ６００Ｅ依存性黒色腫細胞が死滅する一方、野生型ＢＲＡＦを含有する正常な表皮細胞が過剰増殖する患者において強調される。野生型細胞におけるＲＡＦのこの逆説的な活性化は、ＲＡＦ二量体の１つのプロトマーへの阻害剤の結合によって誘発される。これは、第２のプロトマーへの阻害剤結合を防止する立体配座変化をもたらし、二量体の第２のＲＡＦプロトマーのトランス活性化が結果として起こる。ＲＡＦ及びＭＥＫを標的とした組合せ療法によるＭＡＰＫ経路の逐次ノードにおける阻害は、正常細胞におけるＲＡＦ二量体シグナル伝達を弱め、それにより転移性ＢＲＡＦＶ６００黒色腫における安全性及び臨床活性を改善させる。

ＢＲＡＦＶ６００Ｅ結腸直腸癌（ＣＲＣ）における単剤ＲＡＦ阻害剤又は組合せＲＡＦ／ＭＥＫ阻害は、最小の活性を示し；臨床上の利点は、黒色腫において見られる活性と比較して限定される。ＲＡＦ阻害剤及びＭＥＫ阻害剤に対する固有耐性及び獲得耐性がＭＡＰＫ経路の複数のレベルにおいて発生する。ＢＲＡＦ阻害を回避するシグナル伝達フィードバック及び代替経路の複雑さは、ＣＲＣにおいて活性化されたＢＲＡＦを標的とする課題の中心となる。生理学的条件下において、変異体ＢＲＡＦを介した活性化ＭＡＰＫシグナル伝達は、活性化ＲＡＳを介して生じたシグナルに対するＥＲＫ依存性の負のフィードバックをもたらす。薬物、例えばベムラフェニブ又はダブラフェニブは、ＭＥＫを介したＥＲＫへのＢＲＡＦＶ６００Ｅシグナル伝達を効果的に阻害するため、ＲＡＦ阻害に対する固有耐性が顕在化するが、しかし、これにより、ＥＲＫ依存性の負のフィードバックをＲＡＳシグナル伝達中に放出する。したがって、上流シグナルは、ＲＡＳを活性化させることができ、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ並びに野生型ホモ二量体及びヘテロ二量体の誘導をもたらす。薬剤、例えばダブラフェニブ及びベムラフェニブは、ＢＲＡＦ依存性ＣＲＣ細胞においてＶ６００Ｅ活性化単量体を阻害するため、ＲＡＳ刺激ＲＡＦ二量体シグナル伝達は、妨害されず、それによりＢＲＡＦＶ６００Ｅ黒色腫において見られるものより大きい程度までのＥＲＫ再活性化がもたらされ、このようにしてＣＲＣにおける治療の有効性が限定される。

ＢＲＡＦＶ６００ＥＣＲＣにおけるＢＲＡＦ及びＭＥＫ阻害の圧力下において、獲得耐性が急速に発生する。例えば、ＭＡＰＫ阻害後に疾患の進行を経験している８人の患者からの９つの腫瘍試料の分析において、ＭＡＰＫ再活性化をもたらす遺伝子変化が明らかにされた。これらには、ＫＲＡＳ若しくはＮＲＡＳにおける活性化変異、野生型（ＷＴ）ＮＲＡＳ若しくはＫＲＡＳ若しくは変異体ＢＲＡＦＶ６００Ｅの増幅及びＢＲＡＦＶ６００Ｅにおける遺伝子内欠失が含まれた。ＭＡＰＫ阻害剤の存在にも関わらず、ＥＲＫシグナル伝達の再活性化をもたらす獲得された遺伝子変化も報告されている。獲得耐性も腫瘍微小環境における相補的シグナル伝達によって生じ得る。

ＢＲＡＦ変異体ＣＲＣへの従前の治療的なアプローチは、化学療法及び／又は標的療法に焦点を合わせてきたが、免疫療法が果たす役割も存在する。腫瘍化中、癌細胞は、免疫チェックポイント経路を利用して、適応免疫系による検出を回避する。プログラム細胞死タンパク質－１（ＰＤ－１）のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）阻害剤及びプログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）免疫学的チェックポイントは、様々な固形腫瘍を有する患者において有意な抗腫瘍活性を示している。ＰＤ－１は、特に重要な免疫学的標的であり、阻害剤、例えばペムブロリズマブ及びニボルマブは、黒色腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）及び他の固形腫瘍において単剤活性を示す。

しかし、ＣＲＣは、一般に、マイクロサテライト不安定性を有する腫瘍を例外として、ＰＤ－１遮断に対して非応答性である。しかし、免疫応答を調節する小分子阻害剤の使用についての理論的根拠が存在する。癌細胞においてＭＡＰＫ経路に対する遺伝的依存性を阻害する同じ治療は、免疫細胞においてシグナル伝達カスケードを阻害する。例えば、ＭＡＰＫ経路阻害剤、例えばＢＲＡＦ及びＭＥＫ阻害剤は、腫瘍における腫瘍浸潤リンパ球を増加させることにより、リンパ球ホーミング及び機能を改善させ得ることを前臨床研究が示した。

したがって、ＲＡＦ及びＭＥＫ阻害剤は、腫瘍に対する免疫応答を調節し得、このような薬剤とチェックポイント遮断との組合せは、「免疫コールド」腫瘍、例えばＣＲＣのＰＤ－１阻害に対する感受性を増加し得る。さらに、ＢＲＡＦ変異体ＣＲＣの概ね２０％は、遺伝子マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ：マイクロサテライト不安定性－高）によって特性決定される。ＭＳＩ－ＨＣＲＣにおいて、ＢＲＡＦ遺伝的状態に関わりなく、単剤抗ＰＤ－１治療は、３０～５０％の応答率と関連付けられている。さらに、腫瘍免疫細胞における標的とするＭＡＰＫ阻害は、マイクロサテライト安定性及びミスマッチ修復機構欠損ＣＲＣにおける抗ＰＤ－１抗体の作用機序を補完し、それにより抗癌免疫調節を強力に増加し得る。

肺癌は、世界中の男性及び女性に影響を与える一般のタイプの癌である。ＮＳＣＬＣは、最も一般のタイプ（概ね８５％）の肺癌であり、これらの患者の概ね７０％は、診断を行った時点で進行性疾患（ステージＩＩＩＢ又はステージＩＶ）を提示している。ＮＳＣＬＣ腫瘍の約３０％は、活性化ＫＲＡＳ変異を含有し、これらの変異は、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）への耐性と関連している。活性化ＫＲＡＳ変異は、黒色腫、膵臓癌及び卵巣癌でも頻繁に見出される。ＢＲＡＦ変異は、ＮＳＣＬＣの３％までにおいて観察されており、またＥＧＦＲ変異陽性ＮＳＣＬＣにおいて耐性機序として説明されている。

ＣＲＣは、一般の疾患であり、２０１８年において、８００，０００件超の死亡に加えて、世界中で１８０万超の新規症例があると推定される（ＷｏｒｌｄＨｅａｌｔｈＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，Ｇｌｏｂｏｃａｎ２０１８）。ＭＡＰＫ経路の成分をコードする遺伝子における変異は、一般的であり、ＲＡＳ変異は、ＣＲＣの概ね５０％において起こる。ＢＲＡＦＶ６００Ｅをコードする遺伝子における活性化変異は、ＣＲＣ患者の概ね１０～１５％において存在し、変異ＢＲＡＦは、予後不良をもたらす。Ｖ６００Ｅ変異は、ＢＲＡＦ変異体ＣＲＣの概ね９０％において起こるが、他のもの、例えばＶ６００Ｄ又はＶ６００Ｋ変異も見出される。

ＢＲＡＦ変異体ＣＲＣについての有効な処置の選択肢は、限定されている。単剤ＢＲＡＦ阻害剤が転移性状況において概ね７０％の応答率を生じさせた黒色腫と異なり、ベムラフェニブによる転移性ＢＲＡＦ変異体ＣＲＣの単剤阻害は、概ね５％のＯＲＲと関連した。ＭＡＰＫ経路を標的とする薬剤との組合せ療法は、ＢＲＡＦ阻害の有効性を改良したが、成績は、依然として芳しくない。ＭＥＫ阻害剤であるトラメチニブと合わせたダブラフェニブは、１２％のＯＲＲ及び３．５カ月の無進行生存期間（ＰＦＳ）と関連した。

ＣＲＣにおいて、成長因子によって媒介される受容体チロシンキナーゼ活性化を介したＲＡＳの刺激は発癌性環境を支援する。ＥＧＦＲの阻害剤は、ＢＲＡＦ阻害の有効性を適度に改良し；ＥＧＦＲ阻害剤と合わせたＢＲＡＦ阻害剤は、４～２２％のＯＲＲ及びＰＦＳ３．２～４．２カ月と関連した。ダブラフェニブ＋トラメチニブ＋パニツムマブで処置された患者は、２１％のＯＲＲ及び４．２カ月のＰＦＳを経験した。第ＩＩＩ相ＢＥＡＣＯＮ治験において、患者を第２選択の処置又は第３選択を超える処置における３つのアームの１つに無作為化した：イリノテカン／セツキシマブ又はＦＯＬＦＩＲＩ／セツキシマブ（対照）に対するエンコラフェニブ／ビニメチニブ／セツキシマブ、エンコラフェニブ／セツキシマブ。三つ組治療を受けた患者は、２６％のＯＲＲ、４．３カ月のＰＦＳ及び９カ月の全生存期間（ＯＳ）を達成した。エンコラフェニブ＋セツキシマブは、２０％のＯＲＲ及び４．２カ月のＰＦＳ及び８．４カ月のＯＳと関連した。両方のレジメンは、２％のＯＲＲ、１．５カ月のＰＦＳ及び５．４カ月のＯＳと関連するイリノテカン又はＦＯＬＦＩＲＩ／セツキシマブを超える統計的に有意な改善を達成した。ＲＡＦ、ＭＥＫ及びＥＧＦＲシグナル伝達の合わせた阻害によって示される改善された成績は、ＭＡＰＫ経路内の複数のノードの阻害がＢＲＡＦＶ６００ＥＣＲＣの処置のために必要とされるという概念を支持する。

ダブラフェニブ（Ｔａｆｉｎｌａｒ（登録商標））は、ＲＡＦキナーゼの経口的に生物が利用可能な強力で選択的な阻害剤であり、その作用機序は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）結合の競争的阻害と一致する。ＢＲＡＦキナーゼのいくつかの変異形態を阻害するダブラフェニブの能力は濃度依存性であり、それぞれＢＲＡＦＶ６００Ｅ、ＢＲＡＦＶ６００Ｋ及びＢＲＡＦＶ６００Ｄ酵素について０．６５ｎＭ、０．５ｎＭ及び１．８４ｎＭのインビトロでのＩＣ５０値を伴う。野生型ＢＲＡＦ及びＣＲＡＦキナーゼの阻害は、それぞれ３．２ｎＭ及び５．０ｎＭのＩＣ５０値を伴って、より高い濃度を必要とする。他のキナーゼ、例えばＳＩＫ１、ＮＥＫ１１及びＬＩＭＫ１は、より高い濃度でも阻害し得る。ダブラフェニブは、様々なＢＲＡＦＶ６００変異陽性腫瘍の細胞成長をインビトロ及びｉｎインビボで阻害する。

ダブラフェニブは、ＢＲＡＦＶ６００変異を有する成人患者における切除不能又は転移性黒色腫のための単剤経口処置として２０１３年においてＦＤＡによって最初に承認されたが、同じ適応症について様々な他の国において承認されている。トラメチニブと組み合わせたダブラフェニブは、下記の適応症についても複数の国で承認されている（承認された適応症は、国により異なる）：ＢＲＡＦＶ６００変異を有する切除不能又は転移性黒色腫を有する患者の処置；完全な切除に続くＢＲＡＦＶ６００変異を有するステージＩＩＩ黒色腫を有する患者のアジュバント処置；ＢＲＡＦＶ６００変異を有する進行性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する患者の処置；及びＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する局所進行性又は転移性の未分化甲状腺癌（ＡＴＣ）を有する患者の処置。

ダブラフェニブの推奨用量は、１５０ｍｇ、ＢＩＤである（全部で３００ｍｇの１日用量に対応する）。

化合物Ａは、ＲＡＦ及びＭＥＫ阻害剤又は他の標的治療剤との組合せを可能とする物理的化学的特性を示す、強力な選択的及び経口的に生物が利用可能なＡＴＰ競合的ＥＲＫ１／２キナーゼ阻害剤である。化合物Ａは、ｐＥＲＫシグナル伝達を効果的に阻害し、複数のＭＡＰＫ活性化癌細胞及び異種移植片モデルにおいて腫瘍成長阻害を示した。重要なことに、化合物Ａは、遺伝子操作された細胞系モデルにおいて示すように、ＲＡＳ変異、ＢＲＡＦスプライス変異体及びＭＥＫ１／２変異を含めたＢＲＡＦ及びＭＥＫ阻害剤に対する耐性の複数の公知の機序を標的とする広範な有効性を示した。化合物Ａを４５ｍｇ～４５０ｍｇ、ＱＤで患者に投薬した。

ＢＲＡＦＶ６００ＥＣＲＣにおける臨床研究は、単独での又はＭＥＫ±ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせたＢＲＡＦ阻害剤の活性が不十分なＭＡＰＫ経路抑制によって限定され、且つ患者において耐性の機序が最初の臨床上の利点のある状況においてでさえ急速に生じることを示した。患者の腫瘍においてＭＡＰＫ経路再活性化をもたらす獲得耐性機序は、ＲＡＳ、ＢＲＡＦ又はＭＥＫにおいて遺伝子変化が活性化されることが主に関与する。これは、ＭＡＰＫシグナル伝達に対するＢＲＡＦＶ６００ＥＣＲＣの依存に脚光を当て、且つシグナル伝達経路の最も下流のポイントであるＥＲＫの阻害が上流ノードにおいて起こる耐性を回避し得ることを示唆する。

ＢＲＡＦＶ６００Ｅ細胞系中に工学処理によって導入したＲＡＳ、ＲＡＦ又はＭＥＫ耐性変異の前臨床モデルは、この概念を支持した。親ＢＲＡＦＶ６００Ｅ細胞系は、ＢＲＡＦ、ＭＥＫ、ＥＧＦＲ及び／又はＥＲＫ阻害剤の組合せに対して感受性であった一方、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＭＥＫ１又はＭＥＫ２耐性変異の導入は、ＥＲＫ阻害剤を含有するものを除いて、全ての阻害剤の組合せに対する遺伝子操作されたＢＲＡＦＶ６００Ｅ細胞の感受性の減少をもたらした。さらに、マウス異種移植片における以前から存在する低頻度プールされた耐性クローンの増殖は、ＢＲＡＦ及びＭＥＫ阻害剤と比較して、ＢＲＡＦ及びＥＲＫ阻害剤を含有する薬物の組合せによる処置によってより効果的に抑制された。

ダブラフェニブ＋化合物Ａの組合せをＢＲＡＦ変異体ヒト細胞系異種移植片ＨＴ２９においてインビボで試験した。ダブラフェニブ＋化合物Ａで処置したマウスは、臨床的に関連性のある用量でのダブラフェニブ＋トラメチニブと比較して同様の抗腫瘍応答を達成した（それぞれ２８％Ｔ／Ｃに対して３６％Ｔ／Ｃ）。単剤処置は、進行性疾患をもたらし、ここで、化合物Ａは、５４％Ｔ／Ｃを達成し、ダブラフェニブは、５９％Ｔ／Ｃを達成し、トラメチニブは、４８％Ｔ／Ｃを達成した。全てのレジメンは、有意な体重減少がないことによって判断するように耐容性を示した。これらのデータは、ダブラフェニブ＋化合物Ａの組合せが、ＢＲＡＦ変異体結腸直腸癌を有する患者においてダブラフェニブ＋トラメチニブに対するものと同様の抗腫瘍活性を達成し得、診療所におけるその使用についての理論的根拠を提供することを示唆する。

ＢＲＡＦ、ＭＥＫ及びＥＧＦＲシグナル伝達の合わせた阻害によって示される改善された成績は、ＭＡＰＫ経路内の複数のノードの阻害がＢＲＡＦＶ６００ＣＲＣの処置のために必要とされるという概念を支持する。

それにも関わらず、治療に対する固有耐性及び獲得耐性は、依然として重要な課題であり、臨床成績は、依然として芳しくない。ＭＡＰＫシグナル伝達のより強固な抑制を実現し、且つＭＡＰＫ経路内及びＭＡＰＫ経路を超える両方の耐性の機序の複雑さに取り組む組合せ療法が果たす役割が存在する。ＢＲＡＦ変異体ＣＲＣを特性決定するシグナル伝達の適応型の複雑さを考慮すれば、ＲＡＦ及びＥＲＫを超えたタンパク質の阻害が必要とされる。一例として、２１８のＢＲＡＦ－Ｖ６００Ｅ変異ＣＲＣ腫瘍の１つの研究は、高いＫＲＡＳ／ｍＴＯＲ／ＡＫＴ／４ＥＢＰ１／ＥＭＴ活性化によって特性決定される腫瘍の別個のサブセットを同定する一方、細胞周期調節不全は他のサブセットを特性決定した。

標的療法の組合せ、例えばＢＥＡＣＯＮ治験（Ｋｏｐｅｔｚら、２０１９年）において研究されたものによって示される進歩にも関わらず、癌細胞においてＢＲＡＦＶ６００発癌性駆動を遮断する能力は、１．）無駄に阻害された二量体を介してシグナルを送るＲＡＦキナーゼの適応能力によってＢＲＡＦ活性を完全に抑制することができないこと、及び２．）ＭＡＰＫ経路内の適応機序によってだけではなく、並列シグナル伝達経路を介して刺激される進行中のＥＲＫ活性化によって限定される。ダブラフェニブ、ベムラフェニブ及びエンコラフェニブは、単量体Ｖ６００Ｅが発癌性を駆動するものであるＢＲＡＦ変異体癌細胞において、ＢＲＡＦ活性を効果的に抑制する。しかし、これらの薬物はまた、いくつかの機序を介してＥＲＫの逆説的な活性化をもたらし得る。

ＢＲＡＦ及びＭＥＫの合わせた阻害は、経路抑制を改良するが、しかし、ＥＲＫシグナル伝達の持続性は、この治療的なアプローチの限界の根底にある。ＭＡＰＫ経路の究極的なシグナルであるＥＲＫの遮断は、適応性上流シグナルを回避し、改善された有効性及び獲得耐性からの回復力を提供し得る。

ＢＲＡＦ選択的阻害剤は、恒常的に活性化された単量体ＢＲＡＦＶ６００に対して有効であるが、しかし、ＲＡＦ阻害剤に対する固有耐性及び獲得耐性は、ＭＡＰＫ経路の複数のレベルにおいて発生する。定常状態条件下において、ＢＲＡＦＶ６００Ｅを介した活性化されたＭＡＰＫシグナル伝達は、活性化されたＲＡＳを介して生じたシグナルに対するＥＲＫ依存性の負のフィードバックをもたらす。薬物、例えばダブラフェニブは、ＭＥＫを介したＥＲＫへの単量体ＢＲＡＦＶ６００Ｅシグナル伝達を効果的に阻害するため、ＢＲＡＦＶ６００ＣＲＣにおいて、ＲＡＦ阻害に対する固有耐性が顕在化するが、しかし、これは、ＥＲＫ依存性の負のフィードバックをＲＡＳシグナル伝達に放出する。したがって、例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を介した上流シグナルは、ＲＡＳを活性化することができる。これは、ＭＥＫにシグナルを送るＷＴ及びＢＲＡＦ－Ｖ６００Ｅ、ＣＲＡＦ及びＢＲＡＦ－Ｖ６００Ｅ並びにＡＲＡＦ及びＢＲＡＦ－Ｖ６００Ｅのホモ二量体及びヘテロ二量体を含めたＢＲＡＦＶ６００Ｅ並びに野生型ホモ二量体及びヘテロ二量体の誘導をもたらす。さらに、阻害剤は、１つのみのＲＡＦパートナーに結合する一方、他の非結合の二量体パートナーは、下流シグナル伝達を刺激することにおいて触媒活性であるように、ＲＡＦ阻害剤、例えばダブラフェニブは、ＲＡＦファミリーメンバーのホモ及びヘテロ二量体化をアロステリックに促進する。

したがって、薬剤、例えばダブラフェニブは、ＢＲＡＦ依存性ＣＲＣ細胞におけるＶ６００Ｅ単量体を標的とし、ＲＡＳ刺激二量体シグナル伝達は、妨害されないままである。これは、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ黒色腫において見られるものより大きい程度までＥＲＫ再活性化をもたらし、このようにしてＣＲＣにおける治療の有効性が限定される。さらに、ＣＲＡＦは、ＢＲＡＦ阻害剤処置に続いて逆説的な活性化を媒介することにおいて重要な役割を果たす。このように、ＣＲＡＦ及びＢＲＡＦの活性を強力に阻害するＲＡＦ阻害剤、例えば化合物Ｃは、ＢＲＡＦ変異体腫瘍及びＲＡＳ駆動適応性ＭＡＰＫ活性化を遮断することにおいて有効であり得る。治療への耐性におけるＣＲＡＦの役割は、三重の組合せにおいてＢＲＡＦ及びＣＲＡＦの両方を阻害する薬剤を含むことについての理論的根拠の根底にある。

ダブラフェニブ＋化合物Ａ＋化合物Ｃの三重の組合せは、ＢＲＡＦＶ６００駆動癌細胞における固有耐性及び獲得耐性の機序を固有に標的とする潜在力を利用することにより、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ／Ｋ／Ｄ結腸直腸癌におけるＭＡＰＫ経路を阻害することができる。

単剤チェックポイント遮断は、マイクロサテライト安定性ＣＲＣの処置において有効ではないが、抗ＰＤ－１抗体によるＭＳＩ－ＨＣＲＣの処置は、３１～５０％の応答率と関連付けられている。ＢＲＡＦＶ６００ＥＣＲＣの概ね２１％は、ＭＳＩ－Ｈ状態を示し得るが、マイクロサテライト不安定性は、この疾患におけるＭＡＰＫ－標的療法に対する応答性を調節するように思われない。したがって、ＭＳＩ－ＨＢＲＡＦＶ６００ＥＣＲＣを有する対象は、ＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ標的療法又はチェックポイント遮断に応答し得る。ＭＳＩ－ＨＢＲＡＦ変異体ＣＲＣにおける発癌性ＢＲＡＦ及び免疫療法応答性の同時に起こる特色に取り組むことにより、ＭＡＰＫ経路阻害とチェックポイント遮断との組合せは、いずれかのカテゴリーの治療単独で達成される成績を改良する潜在力を有する。

さらに、標的小分子阻害剤は、免疫微小環境を調節し得る。例えば、前臨床研究は、ＭＡＰＫ経路阻害剤が、腫瘍における腫瘍浸潤リンパ球を増加させ、上方制御された免疫抑制性サイトカインを減少させ、且つ癌の免疫寛容に一般に対抗することにより、リンパ球ホーミング及び機能を改善させ得ることを示した。さらに、ＢＲＡＦ－ＭＡＰＫシグナル伝達経路は、ヒト黒色腫細胞における癌免疫回避に不可欠である。したがって、ＲＡＦ及びＭＥＫ阻害剤は、腫瘍に対する免疫応答を調節することができ、このような薬剤とチェックポイント遮断との組合せは、「免疫コールド」腫瘍、例えばマイクロサテライト安定性ＣＲＣの、ＰＤ－１阻害に対する感受性をさらに増加させることができる。

ダブラフェニブ＋化合物Ａ＋スパルタリズマブの三重の組合せは、ＢＲＡＦＶ６００駆動癌細胞における固有耐性及び獲得耐性の機序を固有に標的とする潜在力を利用することにより、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ／Ｋ／Ｄ結腸直腸癌におけるＭＡＰＫ経路を阻害することができる。

医薬組成物
別の態様において、本発明は、１種又は複数の薬学的に許容される担体（添加物）及び／又は賦形剤と一緒に製剤化される、治療有効量のダブラフェニブ、化合物Ａ及び化合物Ｃを含む薬学的に許容される組成物を提供する。以下に詳細に記載するように、本発明の医薬組成物は、経口投与のために適応させたもの、例えば水薬（水溶液又は非水溶液又は懸濁液）、錠剤、例えば口腔内頬側、舌下及び全身的吸収を標的としたもの、ボーラス、散剤、顆粒剤、舌への適用のためのペースト剤を含めて、固体又は液体形態で投与のために特に製剤化され得る。

語句「薬学的に許容される担体」は、本明細書において使用する場合、薬学的に許容される材料、組成物又はビヒクル、例えば液体若しくは固体充填剤、賦形剤、添加剤、製造助剤（例えば、滑沢剤、タルクマグネシウム、カルシウム若しくはステアリン酸亜鉛若しくはステアリン酸）又は１つの器官若しくは体の部分から別の器官若しくは体の部分に対象化合物を運搬若しくは輸送することに関与する溶媒封入材料を意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合性であり、患者にとって傷害性でないという意味で「許容され」なくてはならない。薬学的に許容される担体としての役割を果たすことができる材料のいくつかの例は、（１）糖、例えばラクトース、グルコース及びスクロース；（２）デンプン、例えばトウモロコシデンプン及びバレイショデンプン；（３）セルロース及びその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロース；（４）トラガカント粉末；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）添加剤、例えばカカオバター及び坐剤ワックス；（９）油、例えばピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油及びダイズ油；（１０）グリコール、例えばプロピレングリコール；（１１）ポリオール、例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコール；（１２）エステル、例えばオレイン酸エチル及びラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質を含まない水；（１７）等張食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝液；（２１）ポリエステル、ポリカーボネート及び／又はポリ酸無水物；並びに（２２）医薬製剤において用いられる他の無毒性の適合性物質を含む。

上記で示したように、本化合物の特定の実施形態は、塩基性官能基、例えばアミノ又はアルキルアミノを含有し得、したがって薬学的に許容される酸と共に薬学的に許容される塩を形成することができる。用語「薬学的に許容される塩」は、この点において、本発明の化合物の相対的に無毒性の無機及び有機の酸付加塩を指す。これらの塩は、投与ビヒクル若しくは剤形製造プロセスにおいてインサイチューで、又はその遊離塩基の形態の本発明の精製された化合物と適切な有機酸若しくは無機酸とを別々に反応させ、それに続く精製中にこのように形成された塩を単離することによって調製することができる。代表的な塩は、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナプシル酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩及びラウリルスルホン酸塩などを含む。

対象化合物の薬学的に許容される塩は、例えば、無毒性の有機酸又は無機酸からの、化合物の通常の無毒性塩又は第四級アンモニウム塩を含む。例えば、こうした通常の無毒性塩は、無機酸、例えばヒドロクロリド、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などに由来するもの；及び有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２－アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸などから調製した塩を含む。

他の場合、本発明の化合物は、１個又は複数の酸性官能基を含有し得、したがって薬学的に許容される塩基と共に薬学的に許容される塩を形成することができる。用語「薬学的に許容される塩」は、これらの場合、本発明の化合物の相対的に無毒性の無機及び有機の塩基付加塩を指す。これらの塩は、同様に、投与ビヒクル若しくは剤形製造プロセスにおいてインサイチューで、又はその遊離酸の形態の精製された化合物と、適切な塩基、例えば薬学的に許容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩若しくは炭酸水素塩、アンモニア又は薬学的に許容される有機第一級、第二級若しくは第三級アミンとを別々に反応させることによって調製することができる。代表的なアルカリ又はアルカリ土類塩は、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びアルミニウム塩などを含む。塩基付加塩の形成のために有用な代表的な有機アミンは、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどを含む。

ダブラフェニブの特に好ましい塩は、そのメシル酸塩である。化合物Ａの特に好ましい溶媒和物は、その塩酸塩である。化合物Ｃの特に好ましい形態は、遊離塩基結晶形態である。

また、湿潤剤、乳化剤及び潤滑剤、例えばラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウム並びに着色剤、剥離剤、コーティング剤、甘味料、香味及び芳香剤、防腐剤及び抗酸化剤が組成物に存在し得る。

薬学的に許容される抗酸化剤の例として、（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化剤；（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α－トコフェノールなどの油溶性抗酸化剤；並びに（３）クエン酸、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート剤が挙げられる。

本発明の製剤は、経口、鼻内、局所（口腔及び舌下を含む）、直腸、膣及び／又は非経口投与に好適なものが挙げられる。製剤は、好都合には、単位剤形で存在し得、調剤の分野でよく知られる任意の方法により調製することができる。担体材料と組み合わせて単一の剤形を生成することができる活性成分の量は、処置を受ける宿主、投与の特定のモードによって変化する。担体材料と組み合わせて単一の剤形を生成することができる活性成分の量は、一般に、治療効果を生じさせる化合物のその量である。一般に、１００パーセントのうち、この量は、活性成分の約０．１パーセント～約９９パーセント、好ましくは約５パーセント～約７０パーセント、最も好ましくは約１０パーセント～約３０パーセントの範囲である。

特定の実施形態では、本発明の製剤は、シクロデキストリン、セルロース、リポソーム、ミセル形成剤、例えば胆汁酸及びポリマー担体、例えばポリエステル及びポリ酸無水物からなる群から選択される添加剤；並びに本発明の化合物を含む。特定の実施形態では、上記の製剤は、本発明の化合物を経口的に生物が利用可能なものとする。

これらの製剤又は組成物を調製する方法は、本発明の化合物を担体、任意選択で１種又は複数の副成分と結合させるステップを含む。一般に、製剤は、本発明の化合物を液体担体若しくは微粉化した固体担体と、又はその両方と均質且つ密接に結合させ、その後、必要に応じて生成物を成形する。

経口投与に好適な本発明の製剤は、カプセル、カシェ、丸薬、錠剤、ロゼンジ（着香ベース、例えば、通常、スクロース及びアカシアガム若しくはトラガカントを用いて）、粉末、顆粒の形態、又は水性若しくは非水性液体中の溶液、懸濁液若しくは固体分散体として、又は水中油形若しくは油中水形エマルジョンとして、又はエリキシル若しくはシロップとして、又は香錠（ゼラチン及びグリセリン若しくはスクロース及びアカシアガムなどの不活性基材を用いて）及び／又はマウスウォッシュなどとして存在し得、これらは、それぞれ活性成分として所定量の本発明の化合物を含有する。本発明の化合物は、ボーラス、舐剤又はペーストとしても投与され得る。

経口投与のための本発明の固体剤形（カプセル剤、錠剤、丸剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤、トローチ剤など）において、活性成分を１種又は複数の薬学的に許容される担体、例えばクエン酸ナトリウム若しくは第二リン酸カルシウム並びに／又は下記のいずれかと混合する：（１）充填剤又は増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール及び／又はケイ酸；（２）結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース及び／又はアカシア；（３）保湿剤、例えばグリセロール；（４）崩壊剤、例えば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカデンプン、アルギン酸、特定のシリケート及び炭酸ナトリウム；（５）溶解遅延剤、例えばパラフィン；（６）吸収促進剤、例えば第四級アンモニウム化合物及び界面活性剤、例えばポロキサマー及びラウリル硫酸ナトリウム；（７）湿潤剤、例えばセチルアルコール、モノステアリン酸グリセロール及び非イオン性界面活性剤；（８）吸収剤、例えばカオリン及びベントナイトクレイ；（９）滑沢剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸及びこれらの混合物；（１０）着色剤；並びに（１１）制御放出剤、例えばクロスポビドン又はエチルセルロース。カプセル、錠剤及び丸薬の場合、医薬組成物は、緩衝剤も含み得る。類似のタイプの固体組成物は、ラクトース又は乳糖、さらに高分子量ポリエチレングリコールなどといった賦形剤を用い、軟質及び硬質シェルゼラチンカプセルにおける充填剤としても使用され得る。

錠剤は、任意選択で１種又は複数の補助成分と一緒に圧縮又は成形によって製造することができる。圧縮錠剤は、結合剤（例えば、ゼラチン若しくはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、グリコール酸ナトリウムデンプン若しくは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤又は分散剤を使用して調製することができる。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末状化合物の混合物を好適な機械で成形することによって製造することができる。

本発明の医薬組成物の錠剤及び他の固体剤形、例えば糖衣錠、カプセル、丸薬及び顆粒）は、任意選択で、刻み目を入れられ得、コーティング及び殻（例えば、腸溶性コーティング及び医薬製剤化分野で公知の他のコーティング）を備えて調製され得る。これらは、例えば、所望の放出プロフィールを提供するための様々な割合のヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリクス、リポソーム及び／又はミクロスフェアを用いて、活性成分の徐放又は制御放出を達成するようにも製剤化され得る。これらは、急速放出のために製剤化、例えば凍結乾燥され得る。これらは、例えば、細菌保持フィルタを介した濾過により、又は使用直前に、滅菌水若しくはいくつかの他の滅菌注射用媒体中に溶解させることができる滅菌固体組成物の形態で滅菌剤を含有させることにより、滅菌することができる。これらの組成物は、任意選択で、不透明化剤も含み得、それらは、活性成分のみを又は好ましくは胃腸管の特定の部分において任意選択で遅延するように放出する組成物であり得る。使用することができる埋込用組成物の例は、ポリマー物質及びワックスを含む。活性成分は、必要に応じて、前述した賦形剤の１種又は複数を含むマイクロカプセル化形態でもあり得る。

本発明の化合物の経口投与のための液体剤形としては、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシルが挙げられる。活性成分に加えて、液体剤形は、当技術分野で一般に使用される不活性希釈剤、例えば水又は他の溶媒など、可溶化剤及び乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコールなど、油（特に綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル並びにこれらの混合物を含み得る。

不活性希釈剤の他に、経口用組成物は、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味料、香味料、着色剤、芳香剤及び防腐剤などの補助剤を含み得る。

懸濁液は、活性化合物に加えて、懸濁剤、例えばエトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム（ａｌｕｍｉｎｕｍｍｅｔａｈｙｄｒｏｘｉｄｅ）、ベントナイト、寒天及びトラガカントガム並びにこれらの混合物を含み得る。

本発明の医薬組成物に使用することができる好適な水性及び非水性担体の例として、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）及びそれらの好適な混合物、オリーブ油などの植物油、オレイン酸エチルなどの注射用有機エステルが挙げられる。適正な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用により、分散液の場合には要求される粒度の維持により、さらに界面活性剤の使用によって維持することができる。

これらの組成物は、防腐剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤などの補助剤を含有し得る。対象化合物に対する微生物の作用の予防は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの含有によって確実にすることができる。また、糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含有させることが望ましい場合もある。

本発明の化合物が医薬品としてヒト及び動物に投与されるとき、これらは、それ自体で、又は薬学的に許容される担体と組み合わされた、例えば０．１～９９％（より好ましくは、１０～３０％）の活性成分を含有する医薬組成物として与えることができる。

本発明の化合物及び／又は本発明の医薬組成物は、当業者に周知の通常の方法により、薬学的に許容される剤形に製剤化される。

本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投与レベルは、患者に対して毒性とならずに、特定の患者、組成物及び投与様式について所望の治療応答を達成する上で有効な活性成分の量を達成するために変動し得る。

選択される投与レベルは、様々な要因に応じて変動し得、こうした要因として、使用する本発明の特定の化合物又はそのエステル、塩若しくはアミドの活性、投与経路、投与時間、使用する特定の化合物の排出又は代謝速度、吸収の速度及び程度、治療期間、使用する特定の化合物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物及び／又は材料、治療対象の患者の年齢、性別、体重、病状、健康状態及び過去の病歴並びに医療分野で公知の同様の要因が挙げられる。

当技術分野の通常の技術を有する医師又は獣医は、必要な医薬組成物の有効量を容易に決定し、処方することができる。例えば、医師又は獣医は、要望される治療効果を達成するために必要なレベルより低いレベルにおいて、医薬組成物に使用する本発明の化合物の用量を開始し、要望される効果が達成されるまで投薬量を漸増することができる。

一般に、本発明の組合せの好適な１日用量は、治療効果をもたらすのに有効な最も低い用量である各化合物の量となる。こうした有効量は、一般に、前述した要因に左右される。

別の態様において、本発明は、１種又は複数の薬学的に許容される担体（添加物）及び／又は希釈剤と一緒に製剤化された、治療有効量の上記のような対象化合物の１つ又は複数を含む薬学的に許容される組成物を提供する。

実施例１
ダブラフェニブ、化合物Ａ及び化合物Ｃ
ダブラフェニブは、国際公開第２００９／１３７３９１号パンフレットの実施例５８ａに従って合成される。化合物Ａは、国際公開第２０１５／０６６１８８号パンフレットの実施例１８４に従って合成される。化合物Ｃは、国際公開第２０１４／１５１６１６号パンフレットの実施例１１５６に従って合成される。国際公開第２００９／１３７３９１号パンフレット、国際公開第２０１５／０６６１８８号パンフレット及び国際公開第２０１４／１５１６１６号パンフレットは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されているダブラフェニブ、化合物Ａ及び化合物Ｃの組合せの有用性は、下記の実施例において試験することによって証明することができる。

実施例２
ヌードマウスにおけるヒトＢＲＡＦ変異体ＣＲＣ異種移植片モデルＨＴ２９におけるＭＡＰＫ経路阻害剤の組合せ有効性
ダブラフェニブ（ＤＲＢ４３６）：ＢＲＡＦ（Ｖ６００Ｅ）、ＢＲＡＦ（Ｖ６００Ｋ）及びＢＲＡＦ（Ｖ６００Ｇ）変異を阻害することができるＶ６００における変異ＢＲＡＦの選択的阻害剤。化合物Ａ：選択的ＡＴＰ競合的ＥＲＫ１及びＥＲＫ２キナーゼ阻害剤。化合物Ｃ：ＢＲＡＦ及びＣＲＡＦのＡＴＰ競争的阻害剤。ダブラフェニブをｐＨ８の脱イオン水中のビヒクル：０．５％ＨＰＭＣ＋０．２％Ｔｗｅｅｎ８０中でｐ．ｏ．投薬した。化合物Ａを、酸でｐＨ４．０に調節したｐＨ７．４のリン酸緩衝液中のビヒクル：０．５％ＨＰＣ／０．５％ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ１２７中でｐ．ｏ．投薬した。化合物Ｃ（遊離塩基結晶形態、粉末形態）をＭＥＰＣ４ビヒクル（４５％ＣｒｅｍｏｐｈｏｒＲＨ４０＋２７％ＰＥＧ４００＋１８％ＣａｐｍｕｌＭＣＭＣ８＋１０％エタノール）中でｐ．ｏ．投薬した。

ＨＴ２９ヒト結腸直腸癌（ＣＲＣ）腫瘍細胞系は、ＡＴＣＣから購入し、ＮｏｖａｒｔｉｓＣｅｌｌＬｉｎｅＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ（ＣＬＥ）細胞系収集物に含めた。系は、ＩＭＰＡＣＴ－ＶＩＩＩＰＣＲアッセイパネル（ＲｅｓｅａｒｃｈＡｎｉｍａｌＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＲＡＤＩＬ），ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＭｉｓｓｏｕｒｉ，Ｃｏｌｕｍｂｉａ，ＭＯ）においてマイコプラズマ属の種（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｓｐ．）及びマウスウイルスを非含有であることが示された。５％二酸化炭素を含有する加湿雰囲気下で３７℃において、ＥＭＥＭ（Ｌｏｎｚａ、＃１２－６１１Ｆ）＋１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、＃２６１４０－０７９）（５６℃、３０分間、不活化）中に細胞を維持した。０．２５％トリプシン－ＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ、＃２５２００－０５６）によって８０～９５％コンフルエンスで細胞を収集し、成長培地で中和し、１２００ｒｐｍでの５分間の遠心分離後、それに続いて冷たいＨＢＳＳ（Ｇｉｂｃｏ、＃１４１７５－０９５）での細胞ペレットの再懸濁を行い、次いで等しい容量のＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）マトリックス（Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃３５４２３４）と混合し、１０×１０^６個の細胞／ｍＬの最終濃度を調製した。次いで、２００μｌ（２×１０^６個の細胞）を雌性ヌードマウスの右側腹部の皮下に移植した。腫瘍体積は、カリパスによる測定によって決定し、式（腫瘍体積（ＴＶ）（ｍｍ^３）＝（ｌ×ｗ^２）／２、式中、ｌは、腫瘍の最も長い軸であり、ｗは、ｌに垂直である）を使用して計算した。マウスを腫瘍成長及び体重について週２回モニターした。動物の満足のいく状態並びに毛づくろい及び歩行運動を含めた挙動を週２回モニターした。マウスの身体全体の健康を毎日モニターした。

ＨＣＯＸ１３２９ＣＲＣ患者由来の腫瘍異種移植片（ＰＤＸ）をヌードマウスにおける腫瘍スラリーの連続継代によって増殖させた。手短に言えば、従前の継代からの新鮮な腫瘍の断片を、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳＤｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（ＭＡＣＳ（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ、＃１２０－００５－３３１）を使用してホモジナイズし、組織グラインダー（ＣｈｅｍｇｌａｓｓｌｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ、＃ＣＬＳ－５０２０－０８５）を通過させ、ＰＢＳで希釈した。次いで、１００μｌの腫瘍スラリー中の４×１０^６個の細胞を雌性ヌードマウスの右側腹部の皮下に継代７として移植した。腫瘍体積をカリパスによる測定によって決定し、式（腫瘍体積（ＴＶ）（ｍｍ^３）＝（ｌ×ｗ^２）／２、式中、ｌは、腫瘍の最も長い軸であり、ｗは、ｌと直角である）を使用して計算した。マウスを腫瘍成長及び体重について週２回モニターした。動物の満足のいく状態並びに毛づくろい及び歩行運動を含めた挙動を週２回モニターした。マウスの身体全体の健康を毎日モニターした。

各モデルについての有効性研究デザインを表１、表２及び表３において記載する。試験剤を１０ｍＬ／ｋｇの用量体積投薬したが、これは、体重によって調節した。腫瘍寸法及び体重は、無作為化のとき及び研究期間についてその後週２回収集した。

体重の変化パーセントを（ＢＷ_現在－ＢＷ_最初）／（ＢＷ_最初）×１００％として計算した。データは、処置開始の日からの平均体重変化パーセント±ＳＥＭとして提示する。

腫瘍体積：処置／対照パーセント（Ｔ／Ｃ％）値は、下記の式を使用して計算した：△Ｔ≧０である場合、Ｔ／Ｃ％＝１００×△Ｔ／△Ｃ；△Ｔ＜０である場合、退縮％＝１００×△Ｔ／Ｔ_最初；式中、
Ｔ＝研究の最終日における薬物処置群の平均腫瘍体積；
△Ｔ＝研究の最終日における薬物処置群の平均腫瘍体積－投薬の最初の日における薬物処置群の平均腫瘍体積；
Ｔ_最初＝投薬の最初の日における薬物処置群の平均腫瘍体積；
Ｃ＝研究の最終日における対照群の平均腫瘍体積；及び
△Ｃ＝研究の最終日における対照群の平均腫瘍体積－投薬の最初の日における対照群の平均腫瘍体積。

全てのデータは、平均±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表した。腫瘍体積及び体重における変化パーセントを統計解析のために使用した。一元配置ＡＮＯＶＡ、それに続いてチューキー多重比較検定を使用して群間比較を行った。全ての統計的評価のために、有意水準をｐ＜０．０５に設定した。

ＭＡＰＫ経路阻害剤の抗腫瘍有効性を、胸腺欠損のヌードマウスにおいてＢＲＡＦ変異体ＨＴ２９ヒトＣＲＣ異種移植片モデルを使用した２つの研究において調査した。第１の研究において（表１）、ビヒクル処置した腫瘍が処置開始の１３日後に容積＞１０００ｍｍ^３を達成するまで、マウスを表１に記載したようなＭＡＰＫ経路阻害剤の単剤又は組合せで処置した。移植の３９日目後（処置開始の１３日後）、Ｔ／Ｃ％又は退縮％を評価することによって抗腫瘍活性を決定した。処置開始の１３日後の抗腫瘍活性、腫瘍体積の平均変化、体重の平均変化及び生存を表３において報告する。処置後の腫瘍体積及び体重変化を図１にプロットする。化合物Ａ、ダブラフェニブ又はトラメチニブによる毎日の単剤処置は、ビヒクル処置群と比較したとき、それぞれ５４％Ｔ／Ｃ、５９％Ｔ／Ｃ又は４８％Ｔ／Ｃを達成した。化合物Ａ＋ダブラフェニブの合わせた抗腫瘍活性（３５％Ｔ／Ｃ）は、トラメチニブ＋ダブラフェニブの組合せによって達成された抗腫瘍活性（２８％Ｔ／Ｃ）と同様であり、両方の組合せの抗腫瘍活性は、ダブラフェニブ処置と比較したときに有意に異なった（ダブラフェニブに対するダブラフェニブ＋トラメチニブについてｐ＝０．００３７；ダブラフェニブに対するダブラフェニブ＋化合物Ａについてｐ＝０．０３）が、トラメチニブ又は化合物Ａ処置と比較したときに有意に異ならなかった。比較すると、化合物Ａ＋ダブラフェニブ＋トラメチニブの三重の組合せは、ビヒクル、全ての単剤及びそれぞれの二重組合せ群と比較したとき、有意な（ｐ＜０．０５）抗腫瘍活性（３％Ｔ／Ｃ）を達成した（表１及び図１）。全ての処置群は、２週間の研究の終わりにおいて最小の体重減少（１０％未満）を伴って良好な耐容性を示し；毒性又は死亡の徴候は、観察されなかった（図１）。

第２の研究において、ダブラフェニブ＋トラメチニブ＋化合物Ａの三重の組合せの活性をダブラフェニブ＋化合物Ａ＋化合物Ｃの三重の組合せと比較した。処置開始の２４日後にビヒクル処置された腫瘍が容積＞１０００ｍｍ^３を達成するまで、マウスを表２において記載する用量及びレジメンで処置した。抗腫瘍活性は、移植の５２日目後（処置開始の２４日後）にＴ／Ｃ％又は退縮％を評価することによって決定した。処置開始の２４日後の抗腫瘍活性、腫瘍体積の平均変化、体重の平均変化及び生存を表４において報告する。

処置後の腫瘍体積及び体重変化を図２にプロットする。化合物Ａ＋トラメチニブ＋ダブラフェニブの合わせた抗腫瘍活性（１４％Ｔ／Ｃ）は、同様であり、化合物Ａ＋化合物Ｃ＋ダブラフェニブによって達成される抗腫瘍活性（５％Ｔ／Ｃ）と比較したときに有意差があるとはいえなかった（ｐ＝０．３８）。両方の組合せの抗腫瘍活性は、未処置の対照群と比較したときに有意に改善した（未処置の対照群に対して両方の群についてｐ＜０．０００１）（表４及び図２）。全ての処置群は、研究の終わりにおいて最小の体重減少（１０％未満）を伴って良好な耐容性を示し；毒性又は死亡の徴候は、観察されなかった（図２）。

次に、ＭＡＰＫ経路阻害剤の抗腫瘍有効性を、胸腺欠損のヌードマウスにおけるＢＲＡＦ変異患者由来のＣＲＣ異種移植片モデルＨＣＯＸ１３２９において調査した。ビヒクル処置した腫瘍が容積＞１０００ｍｍ^３を達成するか、又はＭＡＰＫ経路阻害剤の処置開始の６２～６７日後まで、マウスを表３において記載するようなビヒクル又はＭＡＰＫ経路阻害剤の組合せで処置した。抗腫瘍活性は、移植の３８日目後（処置開始の２６日後）にＴ／Ｃ％又は退縮％を評価することによって決定したが、この時点においてビヒクルで処置したマウスを屠殺し、ＭＡＰＫ経路阻害剤で処置したマウスをさらに２４～２９日処置し、移植の６２日後（ダブラフェニブ＋化合物Ａ＋トラメチニブ）又は６７日後（ダブラフェニブ＋トラメチニブ及びダブラフェニブ＋トラメチニブ＋セツキシマブ）に屠殺した。処置開始の２６日後の抗腫瘍活性、腫瘍体積における平均変化、体重における平均変化及び生存を表４において報告する。２６～５５日の処置後の腫瘍体積及び体重変化を図３にプロットする。ダブラフェニブ＋トラメチニブの合わせた抗腫瘍活性（１７％Ｔ／Ｃ）は、トラメチニブ＋ダブラフェニブ＋セツキシマブによって達成される抗腫瘍活性（１３％Ｔ／Ｃ）と比較したときに同様であり、統計的に有意でなかった（ｐ＝０．６８）。比較すると、化合物Ａ＋ダブラフェニブ＋トラメチニブの三重の組合せは、腫瘍退縮（７０％退縮）を達成したが、これは、ダブラフェニブ＋トラメチニブ（ｐ＝０．００５）又はダブラフェニブ＋トラメチニブ＋セツキシマブの組合せ（ｐ＝０．０４）の両方と比較して有意に異なった（表４及び図３）。全ての処置群は、２週間の研究の終わりに最小の体重減少（１０％未満）を伴って良好な耐容性を示し；毒性又は死亡の徴候は、観察されなかった（図３）。

ＭＡＰＫ経路阻害剤の組合せのインビボでの活性をＢＲＡＦ変異体ＣＲＣ腫瘍異種移植片においてプロファイルした。ヒトＢＲＡＦ変異細胞系由来の異種移植片ＨＴ２９において、ダブラフェニブ＋トラメチニブの合わせた活性は、ダブラフェニブ＋化合物Ａのものと同様であり、それぞれの単剤と比較したときに適度により良好であった。比較すると、ダブラフェニブ＋化合物Ａ＋トラメチニブ又はダブラフェニブ＋化合物Ａ＋化合物Ｃの三重の組合せは、この異種移植片モデルにおいて有意な抗腫瘍活性を達成した。ヒト患者由来のＢＲＡＦ変異体ＣＲＣ異種移植片ＨＣＯＸ１３２９において、ダブラフェニブ＋化合物Ａ＋トラメチニブの組合せは、ダブラフェニブ＋トラメチニブ及びダブラフェニブ＋トラメチニブ＋セツキシマブの組合せより有意に活性でもあった。これらのデータは、集合的に、ダブラフェニブ＋化合物Ａ＋トラメチニブ又はダブラフェニブ＋化合物Ａ＋化合物Ｃの三重の組合せが、ＢＲＡＦ変異体ＣＲＣ患者においてより大きくより耐久性のある応答を達成し得ることを示す。

本明細書に記載されている実施例及び実施形態は、例示のために過ぎず、それに照らした様々な改変形態又は変更形態が当業者に示唆され、本出願の趣旨及び趣旨並びに添付の特許請求の範囲内に含まれることが理解される。

Claims

Ｎ－（３－（５－（２－アミノピリミジン－４－イル）－２－（ｔｅｒｔ－ブチル）チアゾール－４－イル）－２－フルオロフェニル）－２，６－ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）又はその薬学的に許容される塩；４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミド（化合物Ａ）又はその薬学的に許容される塩；及びＮ－（３－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）－６－モルホリノピリジン－４－イル）－４－メチルフェニル）－２－（トリフルオロメチル）－イソニコチンアミド（化合物Ｃ）又はその薬学的に許容される塩を含む医薬品の組合せ。
Ｎ－（３－（５－（２－アミノピリミジン－４－イル）－２－（ｔｅｒｔ－ブチル）チアゾール－４－イル）－２－フルオロフェニル）－２，６－ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）又はその薬学的に許容される塩、４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミド（化合物Ａ）又はその薬学的に許容される塩及びＮ－（３－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）－６－モルホリノピリジン－４－イル）－４－メチルフェニル）－２－（トリフルオロメチル）－イソニコチンアミド（化合物Ｃ）又はその薬学的に許容される塩は、別々に、同時に又は逐次的に任意の順序で投与される、請求項１に記載の組合せ。
経口投与のためのものである、請求項１又は２に記載の医薬品の組合せ。
Ｎ－（３－（５－（２－アミノピリミジン－４－イル）－２－（ｔｅｒｔ－ブチル）チアゾール－４－イル）－２－フルオロフェニル）－２，６－ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）は、経口剤形におけるものである、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬品の組合せ。
４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミド（化合物Ａ）は、経口剤形におけるものである、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬品の組合せ。
Ｎ－（３－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）－６－モルホリノピリジン－４－イル）－４－メチルフェニル）－２－（トリフルオロメチル）－イソニコチンアミド（化合物Ｃ）は、経口剤形におけるものである、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬品の組合せ。
請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬品の組合せ及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物又は商業用パッケージ。
癌の処置において使用するための、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬品の組合せ又は請求項７に記載の医薬組成物若しくは商業用パッケージ。
前記癌は、乳癌、胆管癌、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される、請求項８に記載の使用のための医薬品の組合せ又は医薬組成物若しくは商業用パッケージ。
前記癌は、進行性又は転移性結腸直腸癌である、請求項８に記載の使用のための医薬品の組合せ又は医薬組成物若しくは商業用パッケージ。
前記癌は、ＢＲＡＦ機能獲得型ＣＲＣ又はＢＲＡＦＶ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ若しくはＶ６００ＫＣＲＣである、請求項１０に記載の医薬品の組合せ。
癌の処置のための医薬の製造のための、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬品の組合せ又は請求項７に記載の医薬組成物若しくは商業用パッケージの使用。
前記癌は、乳癌、胆管癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択され、任意選択で、前記癌は、進行性又は転移性結腸直腸癌であり、任意選択で、前記癌は、ＢＲＡＦ機能獲得型ＣＲＣ又はＢＲＡＦＶ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ若しくはＶ６００ＫＣＲＣである、請求項１２に記載の医薬品の組合せ又は医薬組成物の使用。
乳癌、胆管癌、結腸直腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌及び甲状腺癌から選択される癌を処置する方法であって、それを必要とする患者に、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬品の組合せ若しくは商業用パッケージ又は請求項７に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
前記結腸直腸癌は、進行性又は転移性結腸直腸癌である、請求項１４に記載の方法。
前記結腸直腸癌は、ＢＲＡＦ機能獲得型ＣＲＣ又はＢＲＡＦＶ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ若しくはＶ６００ＫＣＲＣである、請求項１５に記載の方法。
Ｎ－（３－（５－（２－アミノピリミジン－４－イル）－２－（ｔｅｒｔ－ブチル）チアゾール－４－イル）－２－フルオロフェニル）－２，６－ジフルオロベンゼンスルホンアミド（ダブラフェニブ）は、１日当たり約１～約１５０ｍｇの用量で経口的に投与される、請求項１４に記載の方法。
４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミド（化合物Ａ）は、１日当たり約５０～約２００ｍｇの用量で経口的に投与される、請求項１４に記載の方法。
Ｎ－（３－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）－６－モルホリノピリジン－４－イル）－４－メチルフェニル）－２－（トリフルオロメチル）－イソニコチンアミド（化合物Ｃ）は、１日当たり約１００ｍｇ、又は１日当たり約２００ｍｇ、又は１日当たり約３００ｍｇ～１日当たり約７０ｍｇの用量で経口的に投与される、請求項１４に記載の方法。