CZ2002936A3 - Pyrazolopyrimidiny jako terapeutické prostředky - Google Patents

Pyrazolopyrimidiny jako terapeutické prostředky Download PDF

Info

Publication number
CZ2002936A3
CZ2002936A3 CZ2002936A CZ2002936A CZ2002936A3 CZ 2002936 A3 CZ2002936 A3 CZ 2002936A3 CZ 2002936 A CZ2002936 A CZ 2002936A CZ 2002936 A CZ2002936 A CZ 2002936A CZ 2002936 A3 CZ2002936 A3 CZ 2002936A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
substituted
unsubstituted
group
alkyl
hydrogen
Prior art date
Application number
CZ2002936A
Other languages
English (en)
Inventor
Gavin C. Hirst
David Calderwood
Neil Wishart
Paul Rafferty
Kurt Ritter
Lee D. Arnold
Michael M. Friedman
Original Assignee
Abbott Gmbh & Co. Kg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Abbott Gmbh & Co. Kg filed Critical Abbott Gmbh & Co. Kg
Publication of CZ2002936A3 publication Critical patent/CZ2002936A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/16—Masculine contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings

Description

Existuje alespoň 400 enzymů identifikovaných jako proteinkinázy. Tyto enzymy katalyzují fosforylaci cílových proteinových substrátů. Fosforylace je obvykle reakce přenosu fosfátové skupiny z ATP na proteinový substrát. Specifická struktura v cílovém substrátu, na kterou se fosfát přenáší, je tyrosinový, serinový nebo threoninový zbytek. Protože jsou tyto aminokyselinové zbytky cílovými strukturami pro přenos fosforylu, označují se tyto proteinkinázy obvykle jako tyrosinkinázy nebo serin/threoninkinázy.
Fosforylační reakce a proti nim působící fosfatázové reakce na tyrosinových, serinových a threoninových zbytcích se účastní nesčetných buněčných procesů, které jsou základem odpovědí na různé mezibuněčné signály (typicky zprostředkovávané buněčnými receptory), regulace buněčných funkcí a aktivace nebo desaktivace buněčných procesů. Kaskáda proteinkináz se obvykle účastní přenosu mezibuněčného signálu a je nezbytná pro realizaci těchto buněčných procesů. Vzhledem k jejich četnosti výskytu v těchto procesech mohou být proteinkinázy nacházeny jako integrální součást plasmatické membrány nebo jako cytoplasmatické enzymy nebo lokalizované v jádře, často jako složky enzymových komplexů. V mnoha případech jsou tyto proteinkinázy nezbytným prvkem enzymu a strukturálních proteinových komplexů, které určují, kde a kdy v buňce probíhá určitý buněčný proces.
Proteinové tyrosinkinázy. Proteinové tyrosinkinázy (PTK) jsou enzymy, které katalyzují fosforylaci specifických tyrosinových zbytků v buněčných proteinech. Tato post-translační modifikace těchto substrátových proteinů, které jsou často samy enzymy, působí jako proliferace, aktivace nebo diferenciace buněk, regulující molekulární přesmyk (přehled viz Schlessinger a Ulrich, 1992, Neuron 9: 383-391). Aberantní nebo nadbytečná aktivita PTK byla pozorována u mnoha chorobných stavů zahrnujících benigní a maligní proliferativní poruchy, jakož i onemocnění, která jsou důsledkem nevhodné aktivace imunitního systému (například autoimunitních poruch), odmítání transplantátu a onemocnění hostitele versus štěp. PTK, specifické pro endotelové buňky, jako je KDR a Tie-2, navíc zprostředkovávají angiogenní proces, a tudíž se účastní podpory progrese nádorů a dalších onemocnění o © € e β o e ne <? c ( <· o « O ř> < © 0 O c C © © © f; o C C © n o c f - © o c n c © n r.
t - < c c p © © r co r c o c c c c zahrnujících nevhodnou vaskularizaci (například diabetické retinopatie, choroidální neovaskularizace v důsledku makulámí degenerace související s věkem, psoriasy, arthritidy, retinopatie předčasných, infantilních hemangiomů).
Tyrosinkinázy mohou být receptorového typu (s extracelulámí, transmembránovou a intracelulární doménou) nebo non-receptorového typu (jsou plně intracelulární).
Receptářové tyrosinkinázy (RTK). RTK zahrnují velkou skupinu transmembránových receptorů s různými biologickými aktivitami. Dosud bylo identifikováno alespoň 19 různých podskupin RTK. Skupina receptorových tyrosinkináz (RTK) zahrnuje receptory, které jsou rozhodující pro růst a diferenciaci různých buněčných typů (Yarden a Ullrich, Ann. Rev. Biochem. 57: 433-478,1988; Ullrich a Schlessinger, Cell 61: 243-254,1990). Vlastní funkce RTK je aktivována po navázání ligandu, což vede k fosforylaci receptoru a několika buněčných substrátů a následně k různým buněčným odpovědím (Ullrich & Schlessinger, 1990, Cell 61: 203-212). Přenos signálu zprostředkovaný receptorovou tyrosinkinázou je přitom zahájen extracelulární interakcí se specifickým růstovým faktorem (ligandem), po níž typicky následuje dimerizace receptoru, stimulace vlastní aktivity proteinové tyrosinové kinázy a transfosforylace receptoru. Vytvoří se tak vazebná místa pro přenosové molekuly intracelulárního signálu a vedou k vytvoření komplexů se spektrem cytoplasmatických signálních molekul, které usnadňují adekvátní buněčnou odpověď (například buněčné dělení, diferenciaci, metabolické efekty, změny extracelulárního mikroprostředí), viz Schlessinger a Ullrich, 1992, Neuron 9: 1-20.
Proteiny s SH2 (src homologie-2) nebo fosfotyrosinovými vazebnými (PTB) doménami vážou aktivované receptory tyrosinkináz a jejich substráty s vysokou afinitou k propagaci signálů do buňky. Obě domény rozpoznávají fosfotyrosin. (Fantl et al., 1992, Cell 69: 413-423; Songyang et al., 1994, Mol.Cell. Biol. 14: 2777-2785; Songyang et al., 1993, Cell 72: 767-778; a Koch et al., 1991, Science 252: 668-678; Shoelson, Curr. Opin. Chem. Biol. (1997), 1 (2), 227234; Cowburn, Curr. Opin. Struct. Biol. (1997), 7 (6), 835838). Bylo identifikováno několik intraceluiárních substrátových proteinů, které asociují s receptorovými tyrosinkinázami (RTK). Mohou být rozděleny do dvou hlavních skupin: (1) substráty, které mají katalytickou doménu, a (2) substráty, které takovou doménu nemají, ale slouží jako adaptéry a asociují s katalyticky aktivními molekulami (Songyang et al., 1993, Cell 72: 767-778). Specifická interakcí mezi receptory a proteiny a doménami SH2 nebo PTB jejich substrátů je určována aminokyselinovými zbytky, bezprostředně ® © ©
© «
ee e © c <1 o (? & « · ·
C í 0 C & <6 6 » © r r cg co© © * e o o o © © © e r se fý e e β c»·« obklopujícími fosforylovaný tyrosinový zbytek. Například rozdíly ve vazebné afinitě mezi SH2 doménami a aminokyselinovými sekvencemi obklopujícími fosfotyrosinové zbytky na konkrétních receptorech korelují s pozorovanými rozdíly ve fosfory lačním profilu jejich substrátů (Songyang et al., 1993, Cell 72: 767-778). Zpozorování vyplývá, že funkce každé receptorové tyrosinkinázy je určována nejen profilem její exprese a dostupností ligandů, ale i souborem transdukčních drah signálu po směru exprese, které jsou aktivovány konkrétním receptorem, jakož i načasováním a trváním těchto stimulů. Fosforylace tedy poskytuje významný regulační stupeň, který určuje selektivitu signálních drah, vyvolávaných konkrétními receptory růstového faktoru, jakož i receptory diferenciačního faktoru.
Uvádí se, že několik receptorových tyrosinkináz, jako je FGFR-1, PDGFR, TIE-2 a c-Met, a růstové faktory, které se na ně váží, hrají roli v angiogenesi, i když některé z nich mohou podporovat angiogenesi nepřímo (Mustonen a Alitalo, J. Cell Biol. 129: 895898,1995). Jedna taková receptorová tyrosinkináza, známá jako fetální jatemí kináza 1 (FLK-1), je členem podskupiny RTK typu III. Alternativní označení pro lidskou FLK-1 je receptor obsahující doménu kinázového insertu (KDR) (Terman et al., Oncogene 6: 1677-83,1991). Další alternativní označení pro FLK-l/KDR je receptor 2 růstového faktoru vaskulárních endotelových buněk (VEGFR-2), protože s vysokou afinitou váže VEGF. Myší verze FLK1/VEGFR-2 se označuje také NYK (Oelrichs et al., Oncogene 8 (1): 11-15,1993). Byly izolovány DNA kódující myší, krysí a lidskou FLK-1 a byly popsány nukleotidové a kódované aminokyselinové sekvence (Matthews et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 88: 9026-30,1991; Terman et al., 1991, viz výše; Terman et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 187:1579-86,1992; Sarzani et al., viz výše; a Millauer et al., Cell ΊΤ. 835-846,1993). Četné studie, například uvedené v Millauer et al., viz výše, naznačují, že VEGF a FLK-1/KDRNEGFR-2 tvoří dvojici ligand-receptor, která hraje významnou úlohu při proliferaci vaskulárních endotelových buněk, resp. při tvorbě a rašení cév, což se označuje jako vaskulogenese, resp. angiogenese.
Jiná RTK podskupiny typu III, označovaná tyrosin kináza-1 typu fms (Fit- 1) je příbuzná FLK-l/KDR (DeVries et al. Science 255; 989-991,1992; Shibuya et al., Oncogene 5: 519-524,1990). Alternativní označení pro Flt-1 je receptor 1 růstového faktoru vaskulárních endotelových buněk (VEGFR-1). Dosud byla exprese členů podskupin FLK-1/KDR/VEGFR-2 a Flt-l/VEGFR-1 zjišťována primárně na endotelových buňkách. Členové těchto podskupin jsou specificky stimulováni členy skupiny ligandů o r e- e ee c ©
«.* c » © o e * c
C> O ('> c ( © O ťJ ce c e ©
© o © e o p © oce© c c p růstového faktoru vaskulámích endotelových buněk (VEGF) (Klagsbum a D'Amore, Cytokine & Growth Factor Reviews Ί: 259270,1996). Růstový faktor vaskulámích endotelových buněk (VEGF) se váže na Flt-1 s vyšší afinitou než na FLK-l/KDR a je mitogenní vůči vaskulámím endotelovým buňkám (Terman et al., 1992, viz výše; Mustonen et al. viz výše; DeVries et al., viz výše). Má se za to, že Flt-1 je nezbytný pro organizaci endotelu během vaskulámího vývoje. Exprese Flt-1 je spojena s časným vaskulámím vývojem u myších embryí a s neovaskuiarizaci v průběhu hojení ran (Mustonen a Alitalo, viz výše). Exprese Flt-1 v monocytech, osteoklastech a osteoblastech, stejně jako v dospělých tkáních, jako jsou glomeruly v ledvinách, naznačuje pro tento receptor další funkci, která nesouvisí s růstem buněk (Mustonen a Alitalo, viz výše).
Jak je uvedeno výše, nedávné důkazy naznačují, že VEGF hraje úlohu jak při normální, tak při patologické angiogenesi (Jakeman et al., Endocrinology 133: 848859,1993; Kolch et al., Breast Cancer Research and Treatment 36: 139-155,1995; Ferrara et al., Endocrine Reviews 18 (1); 4-25,1997; Ferrara et al., Regulation of Angiogenesis (ed. L. D. Goldberg a E. M. Rosen), 209-232,1997). Navíc se uvádí, že VEGF se účastní regulace a zvyšování vaskulární permeability (Connolly, et al., J. Biol. Chem. 264 200172001720024,1989; Brown et al., Regulation of Angiogenesis (ed. L. D. Goldberg a E. M. Rosen), 233-269,1997). Byly popsány různé formy VEGF, vznikající alternativním sestřihem mRNA, včetně čtyř forem, popsaných v Ferrara et al. (J. Cell. Biochem. 47: 211218,1991). Obě vylučované a převážně s buňkou související formy VEGF identifikoval Ferrara et al. viz výše, a u proteinu se ukázalo, že existuje ve formě disulfidicky spojených dimerů.
V poslední době bylo identifikováno několik příbuzných homologů VEGF. Nebyla však ještě osvětlena jejich role v normálních a chorobných fyziologických procesech. Členové rodiny VEGF jsou navíc často exprimováni v četných tkáních spolu s VEGF a jsou obecně schopni tvořit s VEGF heterodimery. Tato schopnost pravděpodobně mění receptorovou specifitu a biologické účinky heterodimerů a dále komplikuje osvětlení jejich specifických funkcí, jak je ilustrováno dále (Korpelainen a Alitalo, Curr. Opin. Cell Biol., 159164,1998 a tam citované odkazy).
Růstový faktor placenty (P1GF) má aminokyselinovou sekvenci, která vykazuje významnou homologii se sekvencí VEGF (Park et al., J. Biol. Chem. 269: 2564654,1994; Maglione et al. Oncogene 8: 925-31,1993). Jako u VEGF vznikají z alternativního sestřihu mRNA různé typy P1GF a protein existuje v dimemí formě (Park et al., viz výše). PIGF-1 e c- <> ©o c © © r © © © ©
G © © «5 <> © O <' O f> Γ t:· C t>
oce o © P e© c c e c a P1GF-2 se vážou s vysokou afinitou na Flt-1 a P1GF-2 se rovněž ochotně váže na neuropilin-1 (Migdal et al., J. Biol. Chem. 273 (35): 22272-22278), ale žádný z nich se neváže na FLK-l/KDR (Park et al., viz výše). Uvádí se, že P1GF potencuje jak vaskulární permeabilitu, tak mitogenní účinek VEGF na endotelové buňky, je-li VEGF přítomen v nízkých koncentracích (pravděpodobně v důsledku tvorby heterodimerů) (Park et al., viz výše).
VEGF-B je produkován ve dvou isoformách (167 a 185 zbytků), které také zjevně vážou Flt-1/VEGFR-1. Může hrát roli při regulaci degradace extracelulární matrice, buněčné adhesi a migraci prostřednictvím modulace exprese a aktivity plasminového aktivátoru urokinázového typu a inhibitoru 1 plasminového aktivátoru (Pepper et al., Proč. Nati. Acad. Scž. U. S. A. (1998), 95 (20): 11709-11714).
VEGF-C byl původně klonován jako ligand pro VEGFR-3/Flt-4, který je primárně exprimován lymfatickými endotelovými buňkami. Ve své plně zralé formě může VEGF-C také vázat KDR/VEGFR-2 a stimulovat proliferaci a migraci endotelových buněk in vitro a angiogenesi v in vivo modelech (Lymboussaki et al., Am. J. Pathol. (1998), 153 (2): 395403; Witzenbichler et al., Am. J. Pathol. (1998), 153 (2), 381-394). Transgenní hyperexprese VEGF-C vyvolává proliferaci a zvětšení pouze u lymfatických cév, zatímco krevní cévy ovlivněny nejsou. Na rozdíl od VEGF není exprese VEGF-C vyvolávána hypoxií (Ristimaki etal., J. Biol. Chem. (1998), 273 (14), 8413-8418).
Nejnověji objevený VEGF-D je strukturně velmi podobný VEGF-C. Uvádí se, že VEGF-D váže a aktivuje alespoň dva VEGFR, VEGFR-3/Flt-4 a KDR/VEGFR-2. Původně byl klonován jako c-fos indukovatelný mitogen pro fibroblasty a přednostně je exprimován v mesenchymálních buňkách plic a kůže (Achen et al., Proč. Nati. Acad. Sci. U. S. A. (1998), 95 (2), 548-553 a tam uvedené odkazy).
Co se týče VEGF, pro VEGF-C a VEGF-D bylo nárokováno, že v Milesově testu indukují vzrůst vaskulární permeability in vivo, jestliže se vstříknou do kutánní tkáně (PCT/US97/14696; W098/07832, Witzenbichler et al., viz výše). Fyziologická role a význam těchto ligandů při modulaci vaskulární hyperpermeability a endotelových odpovědí ve tkáních, ve kterých nejsou exprimovány, zůstává nejistá.
Nedávno byl popsán virově kódovaný nový typ růstového faktoru vaskulárních endotelových buněk, VEGF-E (NZ-7 VEGF), který přednostně využívá receptor KDR/Flk1 receptor a má silnou mitotickou aktivitu bez vazebné oblasti heparinu (Meyer et al.,
EMBO J. (1999), 18 (2), 363-374; Ogawae/a/., J. Biol. Chem. (1998), 273 (47), 31273»: a «« β $ © β c « r. e © © * © • © © e © o- © o © © © © e e e <» © © © © « © cepe ec o© r c © « e © ©
<· © ©
e e tř e
31282.). Sekvence VEGF-E mají 25% homologii se savčím VEGF a jsou kódovány virem Orf parapoxviru (OV). Tento parapoxvirus napadá ovce a kozy a příležitostně člověka a vytváří léze s angiogenesí. VEGF-E je dimer o velikosti asi 20 kDa bez bázické domény nebo afinity k heparinu, ale má charakteristickou cysteinovou uzlovou jednotku, přítomnou ve všech savčích VEGF, a bylo překvapivě zjištěno, že má účinnost a bioaktivitu podobnou jako heparin vázající isoforma VEGF 165 od VEGF-A, tj. oba faktory stimulují uvolňování tkáňového faktoru (TF), proliferaci, chemotaxi a rašení kultivovaných vaskulárních endotelových buněk in vitro a angiogenesi in vivo. Podobně jako u VEGF165, bylo u VEGF-E zjištěno, že se váže s vysokou afinitou na receptor-2 VEGF (KDR), což vede k autofosforylaci receptoru a dvoufázovému vzrůstu koncentrací volného nitrobuněčného Ca2+, zatímco se VEFG-E, na rozdíl od VEGF 165, nevázal na receptor-1 VEGF (Flt-1).
Na základě objevujících se nálezů dalších homologů VEGF a VEGFR a precedentů heterodimerizace ligandu a receptoru může působení takových homologů VEGF zahrnovat vznik heterodimerů ligandu VEGF a/nebo heterodimerizaci receptorů, nebo vazbu na ještě neobjevený VEGFR (Witzenbichler et al., viz výše). Nedávné zprávy také naznačují, že indukce vaskulámí permeability se může účastnit neuropilin-1 (Migdal et al., viz výše) nebo VEGFR-3/Flt-4 (Witzenbichler et al., viz výše), nebo receptory jiné než KDR/VEGFR-2 (Stacker, S. A., Vítali, A., Domagala, T., Nice, E., a Wilks, A. F., konference Angiogenesis and Cancer, Amer. Assoc. Cancer Res., leden 1998, Orlando, FL; Williams, Diabetelogia 40: S 118-120 (1997)).
Tie-2 (TEK) je člen nedávno objevené rodiny specifických receptorových tyrosinkináz endotelových buněk, který se účastní angiogenních procesů, jako je větvení, rašení, remodelování, maturace a stabilita cév. Tie-2 je první savčí receptorová tyrosinkináza, u níž byl identifikován jak agonistní ligand(y) (například Angiopoietinl (Angl·'), který stimuluje autofosforylaci receptoru a transdukci signálu), tak antagonistní ligand(y) (například Angiopoietin2 (Ang2)). Knock-out a transgenní manipulace exprese Tie-2 a jeho ligandů ukazuje, že přísná prostorová a časová kontrola signalizace Tie-2 je nezbytná pro správný vývoj nové vaskulatury. Současný model naznačuje, že stimulace Tie-2 kinázy ligandem Angl je přímo účastna větvení, rašení a vyrůstání nových cév, a získávání a interakce periendotelových podpůrných buněk je významná při zachovávání integrity cév a zavádění klidu. Absence Angl stimulace Tie-2 nebo inhibice autofosforylace Tie-2 pomocí Ang2, který vzniká ve vysokých hladinách v místech c- e o < cc c c ee
C‘ c c c c o e 0 e t- r- <·· c c g o e c o v e- c (- co· e o t? c c v. e e r c c c· i r e e> ee ® e vaskulární regrese, může vyvolat ztrátu vaskulární struktury a matricových kontaktů vedoucí k odumření endotelových buněk, zejména při absenci stimulů pro růst nebo přežití. Situace je však složitější, protože byly nedávno objeveny alespoň dva další ligandy Tie-2 (Ang3 a Ang4), a byla prokázána schopnost heterooligomerizace různých agonistních a antagonistních angiopoetinů, modifikující jejich aktivitu. Zaměření angiogenního terapeutického přístupu na interakce Tie-2 ligand-receptor má tedy menší přednost a preferuje se kinázová inhibiční strategie.
Rozpustná extracelulámí doména Tie-2 (ExTek) může působit ve prospěch narušování ustavování nádorové vaskulatury v modelech xenotransplantátu nádoru prsu a plicní metastasy a při oční neovaskularizací zprostředkované nádorovými buňkami. Infekcí adenoviru je možno dosáhnout mg/ml hladin produkce ExTek in vivo u hlodavců za 7 až 10 dní bez vedlejších účinků. Tyto výsledky naznačují, že narušování signálních drah Tie-2 může být u normálních zdravých zvířat dobře tolerováno. Tyto inhibiční odpovědi Tie-2 na ExTek mohou být důsledkem sekvestrace ligand(ů) a/nebo tvorby neproduktivního heterodimeru s plnou délkou Tie-2.
V nedávné době bylo zjištěno významné posílení exprese Tie-2 ve vaskulárním synoviálním panu lidských artritických kloubů, což je konzistentní s rolí při nežádoucí neovaskularizací. Tento objev naznačuje, že Tie-2 má určitou roli při progresi revmatoidní artritidy. Ve spojení s poruchami lidské venózní malformace byly objeveny bodové mutace produkující konstitutivně aktivované formy Tie-2. Inhibitory Tie-2 se proto používají při léčbě těchto poruch a v dalších situacích nežádoucí neovaskularizace.
Nereceptorové tyrosinkinázy. Nereceptorové tyrosinkinázy představují soubor buněčných enzymů, jimž chybějí extracelulámí a transmembránové sekvence. Do současnosti byly identifikovány dvacet čtyři jednotlivé nereceptorové tyrosinkinázy, zahrnující jedenáct (11) podrodin (Src, Frk, Btk, Csk, Abl, Zap70, Fes/Fps, Fak, Jak, Ack a LIMK). Podrodina Src nereceptorových tyrosinkináz je v současnosti tvořena největším počtem PTK a zahrnuje Src, Yes, Fyn, Lyn, Lek, Blk, Hek, Fgr a Yrk. Podrodina Src enzymů se spojuje s onkogenesí a imunitní odpovědí. Podrobnější diskusi nereceptorových tyrosinkináz poskytuje Bohlen, 1993, Oncogene 8: 2025-2031, na kteroužto práci se zde odkazuje.
Bylo zjištěno, že mnohé tyrosinkinázy, ať RTK nebo nereceptorové tyrosinkinázy, se účastní buněčných signálních drah podílejících se na četných patogenních stavech <!: ffti · β γ· ¢-) e ·· p e ·/ e>
c c <> e β í>
f o o © © e o o (· o c & o €·« « o e e- e e fy © « e 0 o <> <? · © e e včetně rakoviny, psoriasy a dalších hyperproliferativních poruch nebo hyperimunitních odpovědí.
Vývoj sloučenin pro modulaci PTK. Vzhledem k tušenému významu PTK pro kontrolu, regulaci a modulaci buněčné proliferace, onemocnění a poruchy spojené s abnormální buněčnou proliferací byly činěny četné snahy identifikovat receptorové a nereceptorové tyrosinkinázové inhibitory pomocí různých přístupů, včetně použití mutantních ligandů (US patent č. 4 966 849), rozpustných receptorů a protilátek (patentová přihláška č. WO 94/10202; Kendall & Thomas, 1994, Proč. Nati. Acad. Sci 90: 10705-09; Kim et al., 1993, Nátuře 362: 841-844), RNA ligandů (Jellinek, et al., Biochemistry 33: 1045056; Takano, etal., 1993, Mol. Bio. Cell 4: 358A; Kinsella, etal. 1992, Exp. Cell Res. 199: 56-62; Wright, et al., 1992, J. Cellular Phys. 152: 448-57) a tyrosinkinázových inhibitorů (WO 94/03427; WO 92/21660; WO 91/15495; WO 94/14808; US patent č. 5 330 992; Mariani, etal., 1994, Proč. Am. Assoc. Cancer Res. 35: 2268).
V poslední době byly činěny pokusy identifikovat malé molekuly, které působí jako tyrosinkinázové inhibitory. Například bismonocyklické, bicyklické nebo heterocyklické arylové sloučeniny (PCT WO 92/20642) a vinylen-azaindolové deriváty (PCT WO 94/14808) se obecně popisují jako tyrosinkinázové inhibitory. Styrylové sloučeniny (US patent č. 5 217 999), styryl-substituované pyridylové sloučeniny (US patent č. 5 302 606), některé chinazolinové deriváty (EP č. 0 566 266 Al; Expert Opin. Ther. Pat. (1998), 8 (4): 475-478), selenoindoly a selenidy (PCT WO 94/03427), tricyklické polyhydroxylické sloučeniny (PCT WO 92/21660) a sloučeniny benzylfosfonové kyseliny (PCT WO 91/15495) se popisují jako sloučeniny pro použití jako tyrosinkinázové inhibitory pro použití při léčbě rakoviny. Anilinocinnoliny (PCT WO 97/34876) a sloučeniny chinazolinových derivátů (PCT WO 97/22596; PCT WO 97/42187) byly popsány jako inhibitory angiogenese a vaskulární permeability.
Dále byly činěny pokusy identifikovat malé molekuly, které působí jako inhibitory serin/threoninkináz. Například bylo uvedeno, že bis(indolylmaleinimidové) sloučeniny inhibují konkrétní isoformy PKC serin/threoninkináz, jejichž funkce při transdukci signálu souvisí se změněnou vaskulární permeabilitou při onemocněních souvisejících s VEGF (PCT WO 97/40830; PCT WO 97/40831).
Inhibitory Plk-1 kinázy
SS β
O <3 preo © (·. c, c>
O b c © c » © c o β o c © O ť.· í!
e © í· e © s
β © ®
Plk-1 je serin/threoninkináza, která je významným regulátorem průběhu buněčného cyklu. Má kritickou roli při výstavbě a dynamické funkci aparátu mitotického vřeténka. Ukázalo se rovněž, že Plk-1 a příbuzné kinázy jsou úzce zapojeny do aktivace a inaktivace jiných regulátorů buněčného cyklu, jako jsou cyklin-dependentní kinázy. Vysoká úroveň exprese Plk-1 je spojena s proliferačními aktivitami buněk. Často se nachází v maligních nádorech různého původu. Předpokládá se, že inhibitory Plk-1 blokují proliferaci rakovinných buněk narušením procesů zahrnujících mitotická vřeténka a nesprávně aktivované cyklin-dependentní kinázy.
Inhibitory Cdc2/Cyklin B kinázy (Cdc2 je známa rovněž jako cdkl)
Cdc2/cyklin B je další serin/threoninkináza, která náleží ke skupině cyklindependentních kináz (cdk). Tyto enzymy se účastní kritického přechodu mezi různými fázemi průběhu buněčného cyklu. Má se za to, že nekontrolovaná proliferace buněk, která je známkou rakoviny, je závislá na zvýšené aktivitě cdk v těchto buňkách. Inhibice zvýšené aktivity cdk v rakovinných buňkách prostřednictvím inhibitorů cdc2/cyklin B kinázy by mohla proliferaci potlačit a nastolit normální kontrolu průběhu buněčného cyklu. Regulace aktivace CDK je složitá, ale vyžaduje asociaci CDK se členem cyklinové skupiny regulačních podjednotek (Draetta, Trends in Cell Biology, 3: 287-289 (1993)); Murray a Kirschner, Nátuře, 339: 275-280 (1989); Solomon et al., Molecular Biology of the Cell, 3: 13-27 (1992)). Další úroveň regulace nastává jak aktivací, tak inaktivací fosforylace CDK podjednotky (Draetta, Trends in Cell Biology, 3: 287-289 (1993)); Murray a Kirschner, Nátuře, 339: 275-280 (1989); Solomon et al., Molecular Biology of the Cell, 3: 13-27 (1992); Ducommun et al., EMBO Journal, 10: 3311-3319 (1991); Gautier et al., Nátuře 339: 626-629 (1989); Gould a Nurse, Nátuře, 342: 39-45 (1989); Krek aNigg, EMBO Journal, 10: 3331-3341 (1991); Solomon et al, Cell, 63: 1013-1024 (1990)). Koordinovaná aktivace a inaktivace různých komplexů cyklin/CDK je nezbytná pro normální průběh buněčným cyklem (Pines, Trends in Biochemical Sciences, 18: 195197 (1993); Sherr, Cell, 73: 10591065 (1993)). Oba kritické přechody Gl-S a G 2-M jsou kontrolovány různými aktivitami cyklin/CDK. U G1 se má za to, že nástup S-fáze zprostředkuje jak cyklin D/CDK4, tak cyklin E/CDK2 (Matsushima et al., Molecular & Cellular Biology, 14: 2066-2076 (1994); Ohtsubo a Roberts, Science, 259: 19081912 (1993); Quelle et al., Genes & Development, T. 1559-1571 (1993); Resnitzky et al., Molecular & Cellular Biology, 14: 1669-1679 (1994)). Průchod S-fází vyžaduje aktivitu cyklinu A/CDK2 (Girard et al., Cell, 67: 1169-1179 (1991); Pagano et al., EMBO Journal, © ¢.e ti re <* #- « * & e e e e c- β e c e © ft c o e 9 e e e © c t» e r © © « o mm «· f ť © c c β r · β o o e
11: 961-971 (1992); Rosenblatt et al., Proceedings of the National Academy of Science USA, 89: 2824-2828 (1992); Walker a Maller, Nátuře, 354: 314-317 (1991); Zindy et al., Biochemical & Biophysical Research Communications, 182: 1144-1154 (1992)), zatímco aktivace cyklinu A/cdc2 (CDK1) a cyklin B/cdc2 je nutná pro nástup metafáze (Draetta, Trends in Cell Biology, 3: 287-289 (1993)); Murray a Kirschner, Nátuře, 339: 275-280 (1989); Solomon et al., Molecular Biology of the Cell, 3: 13-27 (1992); Girard et al., Cell, 6Ί-. 1169-1179 (1991); Pagano et al., EMBO Journal, 11: 961-971 (1992); Rosenblatt et al., Proceedings of the National Academy of Science USA, 89: 2824-2828 (1992); Walker a Maller, Nátuře, 354: 314-317 (1991); Zindy et al., Biochemical & Biophysical Research Communications, 182: 1144-1154 (1992)). Nem tedy překvapující, že ztráta kontroly regulace CDK je častým případem u hyperproliferativních onemocnění a rakoviny. (Pines, Current Opinion in Cell Biology, 4: 144-148 (1992); Lees, Current Opinion in Cell Biology, 7: 773-780 (1995); Hunter a Pines, Cell, 79: 573-582 (1994)).
Inhibitory kináz účastnící se zprostředkování nebo udržování chorobných stavů reprezentují nové terapie pro tyto poruchy. Příklady takových kináz zahrnují, ale nejsou na ně omezeny: (1) inhibici c-Src (Brickell, Critical Reviews in Oncogenesis, 3: 401-406 (1992); Courtneidge, Seminars in Cancer Biology, 5: 236-246 (1994), raf (Powis, Pharmacology & Therapeutics, 62: 57-95 (1994)) a cyklin-dependentních kináz (CDK) 1, 2 a 4 u rakoviny (Pines, Current Opinion in Cell Biology, 4: 144148 (1992); Lees, Current Opinion in Cell Biology, 7: 773-780 (1995); Hunter a Pines, Cell, 79: 573-582 (1994)), (2) inhibici CDK2 nebo PDGF-R kinázy při restenóze (Buchdunger et al., Proceedings of the National Academy of Science USA, 92: 2258-2262 (1995)), (3) inhibici CDK5 a GSK3 kináz u Alzheimera (Hosoi et al., Journal of Biochemistry (Tokyo), 117: 741-749 (1995); Aplin et al., Journal of Neurochemistry, 67: 699-707 (1996), (4) inhibici c-Src kinázy při osteoporóze (Tanaka et al., Nátuře, 383: 528-531 (1996), (5) inhibici GSK-3 kinázy při diabetů 2. typu (Borthwick et al., Biochemical & Biophysical Research Communications, 210: 738-745 (1995), (6) inhibici p38 kinázy při zánětech (Badger et al., The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 279: 1453-1461 (1996)), (7) inhibici VEGF-R 1-3 a TIE-1 a 2 kináz při onemocněních zahrnujících angiogenesi (Shawver et al., Drug Discovery Today, 2: 50-63 (1997)), (8) inhibici UL97 kinázy při virových infekcích (He et al., Journal of Virology, 71: 405-411 (1997)), (9) inhibici CSF-1R kinázy při kostních a hematopoetických onemocněních (Myers et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 7: 421-424 (1997) a (10) inhibici Lek kinázy při autoimunitních e ©
Γ • Θ € ť?
@98 f t> R ©
Cť>
β C
Γ t f ·© © O O v
O C f {'· C G t?
c © © t <1 o © c O O < © <? €> C cr. i v ť © e 0 © e onemocněních a odhojování transplantátů (Myers et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, T. 417420 (1997)).
Navíc je možné, že inhibitory určitých kináz mohou být použitelné při léčbě onemocnění, kde kináza není špatně regulována, ale nicméně je nezbytná pro udržování chorobného stavu. V tomto případě by inhibice kinázové aktivity působila buď jako léčba nebo paliativum pro tato onemocnění. Například četné viry, jako je lidský papilomavirus, narušují buněčný cyklus a ženou buňky do S-fáze buněčného cyklu (Vousden, FASEB Journal, 7: 8720879 (1993)). To, že se buňkám po virové infekci zabrání vstoupit do syntézy DNA inhibici aktivit iniciujících S-fázi, jako je CDK2, může přerušit životní cyklus viru zamezením virové replikace. Tentýž princip může být použit k ochraně normálních buněk těla před toxicitou cyklově specifických chemoterapeutik (Stone et al., Cancer Research, 56: 3199-3202 (1996); Kohn et al., Journal of Cellular Biochemistry, 54: 44-452 (1994)). Inhibice CDK 2 nebo 4 zabrání u normálních buněk přechodu do cyklu a omezí toxicitu cytotoxik, která působí v S-fázi, G2 nebo mitose. Dále se ukázalo, že také aktivita CDK2/cyklin E reguluje NF-kB. Inhibice aktivity CDK2 stimuluje NF-kBdependentní genovou expresi, jev zprostředkovaný interakcemi s p300 koaktivátorem (Perkins et al., Science, 275: 523-527 (1997)), NF-kB reguluje geny účastnící se zánětlivých odpovědí (jako hematopoetické růstové faktory, chemokiny a leukocytové adhesní molekuly) (Baeuerle a Henkel, Annual Review of Immunology, 12: 141-179 (1994)) a může se účastnit suprese apoptotických signálů v buňce (Beg a Baltimore, Science, 274: 782-784 (1996); Wang et al., Science, 274: 784-787 (1996); Van Antwerp et al., Science, 274: 787-789 (1996)). Inhibice CDK2 tedy může potlačovat apoptózu indukovanou cytotoxickými léčivy mechanismem, který zahrnuje NF-kB. Z toho tedy vyplývá, že inhibice aktivity CDK2 může být použitelná v případech, kde má NF-kB určitou roli v etiologii onemocnění. Další příklad může být vzat zfungálních infekcí: Aspergillóza je běžné onemocnění imunokompromitovaných pacientů (Armstrong, Clinical Infectious Diseases, 16: 1-7 (1993)). Inhibice kináz Aspergillus Cdc2/CDC28 nebo Nim A (Osmani et al., EMBO Journal, 10: 2669-2679 (1991); Osmani et al., Cell, 67: 283-291 (1991)) může způsobit inaktivaci nebo smrt hub, a tak zlepšit terapeutický výsledek u pacientů s těmito infekcemi.
Identifikace efektivních malých sloučenin, které specificky inhibují přenos signálu a buněčnou proliferaci modulací aktivity receptorových a nereceptorových tyrosin a serin/threoninkináz, a tak regulují a modulují abnormální nebo nesprávnou buněčnou
6> O proliferaci, diferenciaci nebo metabolismus, je tedy žádoucí. Zvláště by byla přínosnou identifikace metod a sloučenin, které specificky inhibují funkci tyrosinkinázy, která je nezbytná pro antigenní procesy nebo vznik vaskulární hyperpermeability vedoucí k edemům, ascitům, efuzím, exudátům a makromolekulám! extravasaci a matricové depozici, jakož i k souvisejícím poruchám.
Podstata vynálezu
Vynález poskytuje sloučeniny obecného vzorce (I)
Gje (I) jejich racemické-diastereomemí směsi, optické isomery, farmaceuticky přijatelné soli, prekursory nebo biologicky aktivní metabolity, kde:
ý—m, z-A-z-z,()0
R„ d24g /JA m2—l2 kde Z100 je z z nebo skupina popřípadě substituovaná substituentem Rj vybraná ze skupiny, kterou tvoří cykloalkyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzothienyl, furanyl, thienyl, benzoxazolyl, benzothiazolyl, , N s thiazolyl, benzofuranyl,
2,3-dihydrobenzofuranyl, indolyl, isoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrrolyl, oxazolyl, isothiazolyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, indolinyl, { ©
β »
ϋί!« ί é Φ © « *> e « f
© © © ο β- e ρ β « e e β indazolyl, benzoisothiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyrido-thiazolyl, pyrimido-oxazolyl, pyrimido-thiazolyl a benzimidazolyl;
je kovalentni vazba nebo popřípadě substituovaný (Ci-Có), který je popřípadě substituován jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO2, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;
Z111 je kovalentni vazba, popřípadě substituovaný (Ci-Có) nebo popřípadě substituovaný (CH2)n-cykloalkyl-(CH2)n-, kde popřípadě substituované skupiny jsou popřípadě substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO2, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;
každý ze substituentů Ra a Ri představuje jeden nebo více substituentů, při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny, kterou tvoří vodík, halogen, -CN, -NO2, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluormethylkarbonylaminoskupina, trifluormethylsulfonamidoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkynyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované nebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylthioskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylthioskupina, -Z105-C(O)N(R)2, -Z105-N(R)-C(O)-Z200, -Z105-N(R)-S(O)2-Z200, -Z105N(R)-C(O)-N(R)-Z200, Rc a CH2ORc;
kde substituent Rc při každém výskytu je nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH2-NRdRe, -W-(CH2)tNRdRc, -W-(CH2)t-Oalkyl, -W-(CH2)t-S-alkyl nebo -W-(CH2)t-OH;
Z105 při každém výskytu je nezávisle kovalentni vazba nebo (Ci-Ce);
c r- c r » <?' «·ί «1 « f- (T «V P P p p r r ·.- λ-
η ř « c- fc e· «· « © & r- e ft r- · o « r β * *7 C I’ C i· f! f e P
Z200 při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Cj-Có), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-fenyl;
Rd a Re při každém výskytu je nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO2-alkyl; nebo Ra, Re a dusíkový atom, k němuž jsou vázány, společně tvoří pěti- nebo šestičlenný heterocyklus;
t při každém výskytu je nezávisle celé číslo 2 až 6;
W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)2, nebo NRf, kde substituent Rf při každém vyskytuje nezávisle H nebo alkyl; nebo
Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2;
R3 je vodík, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;
A je -0-, -S-, -S(0)p-, -N(R)-, -N(C(0)0R)-, -N(C(0)R)-, -N(SO2R)-;
-CH20-, -CH2S-, -CH2N(R)-, -CH(NR)-, -CH2N(C(0)R))-;
-CH2N(C(0)0R)-, -CH2N(SO2R)-, -CH(NHR)-, -CH(NHC(O)R)-, -CH(NHS02R)-, -CH(NHC(0)0R)-;
-CH(OC(O)R)-, -CH(0C(0)NHR)-, -CH=CH-, -C(=N0R)-, -C(0)-, -CH(OR)-,
-C(0)N(R)-, -N(R)C(0)-, -N(R)S(O)P-, -OC(O)N(R)-, -N(R)-C(0)-(CH2)„-N(R)-,
-N(R)C(O)O-, -N(R)-(CH2)n+i-C(O)-, -S(O)PN(R)-;
-O-(CR2)n+1-C(O)-, -O-(CR2)„+1-O-, -N(C(O)R)S(O)p-, -N(R)S(0)pN(R)-, -N(R)-C(0)(CH2)n-O-, -C(0)N(R)C(0)-;
-S(O)PN(R)C(O)-, -OS(O)PN(R)-, -N(R)S(O)PO-, -N(R)S(O)PC(O)-; -SOPN(C(O)R)-; -N(R)SOPN(R)-;
-C(0)0-; -N(R)P(ORb)O-; -N(R)P(ORb)-; -N(R)P(O)(ORb)O-; -N(R)P(0)(0Rb)-;
-N(C(O)R)P(ORb)O-; -N(C(O)R)P(ORb)-; -N(C(O)R)P(O)(ORb)O- nebo -N(C(O)R)P(ORb)-; kde ť « C. ( o p o €> © O C
O C & c <· © ti substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;
substituent Rb při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;
pje 1 nebo 2;
nebo ve skupině obsahující fosfor tvoří dusíkový tom, atom fosforu, substituenty R a Rb společně pěti- nebo šestičlenný heterocyklus; nebo
A je NRSO2 a substituenty R, Ra a dusíkový atom společně tvoří substituovaný nebo nesubstituovaný pěti- nebo šestičlenný heterocyklus kondenzovaný s kruhem 1;
R2 je Z101-Z102;
Z101 je kovalentní vazba, -(CpCs)-, -(Ci-C6)-O-, -(Ci-C6)-C(O)-, -(Ci-C6)-C(O)O-, -(CiC6)-C(0)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((Ci-C6))- nebo substituovaná nebo nesubstituováná fenylová skupina;
1Π9
Z je vodík, substituovaná nebo nesubstituováná alkylová skupina, substituovaná nebo nesubstituováná cykloalkylová skupina, substituovaná nebo nesubstituováná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina nebo substituovaná nebo nesubstituováná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina;
přičemž uvedená substituovaná heterocyklická nebo substituovaná heterobicyklická skupina má jeden nebo více substituentů, z nichž každý je nezávisle zvolen ze skupiny, kterou tvoří hydroxyl, kyanoskupina, substituovaná nebo nesubstituováná alkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituováná sulfonamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituováná ureidoskupina, substituovaná nebo nesubstituováná karboxamidoskupina; substituovaná nebo nesubstituováná aminoskupina, oxoskupina, nasycená, nenasycená <· ¢, (, c c e e
nebo aromatická, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická skupina zahrnující jeden nebo více dusíkových atomů, jeden nebo více kyslíkových atomů nebo jejich kombinaci;
kde uvedené dusíkové atomy jsou popřípadě substituovány substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem nebo substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou; nebo substituent R2 je skupina vzorce B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupinaalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylen, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylamino, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;
a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou každý nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CRa a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou CRa; nebo a je 0 a jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je NRa, jeden ze symbolů Dj, Gi, Li a Mi je CRa a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CRa a N, kde substituent Ra má výše uvedený význam;
b je 1 a symboly D2, G2, J2, L2 a M2 jsou každý nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CRa a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D2, G2, J2, L2 a M2 jsou CRa; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D2, G2, L2 a M2 je NRa, jeden ze symbolů D2, G2, L2 a M2 je CRa a
I <' zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CRa a N, kde substituent Ra má výše uvedený význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6.
Výhodná je sloučenina obecného vzorce (I), kde substituent R3 je H, substituent Ri při každém výskytu je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří F, Cl, Br, I, CH3, NO2, OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF3, -CFLNRdRe, Z-butyl, pyridyl, substituovaný nebo nesubstituovaný oxazolyl, substituovaný nebo nesubstituovaný benzyl, substituovaný nebo nesubstituovaný benzensulfonyl, substituovaná nebo nesubstituovaná fenoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, karboxyl, substituovaný nebo nesubstituovaný tetrazolyl a substituovaný nebo nesubstituovaný styryl.
Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H, substituent Ra při každém výskytu je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří F, Cl, Br, I, CH3, NO2, OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF3, Z-butyl, pyridyl, substituovaný nebo nesubstituovaný oxazolyl, substituovaný nebo nesubstituovaný benzyl, substituovaný nebo nesubstituovaný benzensulfonyl, substituovaná nebo nesubstituovaná fenoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, karboxyl, substituovaný nebo nesubstituovaný tetrazolyl a substituovaný nebo nesubstituovaný styryl.
Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H, substituent R2 je skupina vzorce kde n je 1, 2 nebo 3.
Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H, substituent R2 je skupina vzorce m
« · · 4 • A «> Λ • · e »· f • * • β 4 · ο ft β *
¢. 4 e « t- * * e· ·18 kde mje O, 1, 2 nebo 3 a substituent Rg je H nebo ~(CH2)pN(R4)Rs, kde p je celé číslo od 2 do 6 a substituenty R4 a Rs jsou každý nezávisle H, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH2)q, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-(CH2)qNH- a ~(CH2)qS(O)r“, kde q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, nebo 2; a Z je substituovaná nebo nesubstituovaná skupina, vybraná ze skupiny, kterou tvoří alkyl, alkoxyskupina, aminoskupina, aryl, heteroaryl a heterocykloalkylová skupina, nebo R4, R5 a dusíkový atom, ke kterému jsou vázány, tvoří společně 3-, 4-, 5-, 6- nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo heterobicyklickou skupinu.
Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H, substituent R2 je skupina vzorce
(CH2)„ kde mje 0, 1, 2 nebo 3, každý ze substituentů a a b znamená nezávisle celé číslo od 0 do 6, Q je -ORó nebo -NR4R5; každý ze substituentů R4 a Rs znamená nezávisle H, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH2)q, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, aminoskupina, aryl, heteroaryl nebo heterocykloalkylová skupina nebo substituenty R4, Rs a dusíkový atom, na který jsou vázány, tvoří společně 3, 4, 5, 6 nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo heterobicyklickou skupinu; a substituent R^ je vodík nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina.
Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H, substituent R2 je skupina vzorce
kde n je 1,2 nebo 3; a substituent R4 je H, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituováná aminoskupina, aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.
Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H, substituent R2 je skupina vzorce
kde m je 0, 1,2 nebo 3;
substituent R5 je H, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří kovalentní vazba, -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH-, -(CH2)qC(O)-, -C(O)(CH2)q- a -(CH2)qS(O)r-, kde alkylová část skupiny -(CH2)q-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH-, -(CH2)qC(O)-, -C(O)(CH2)q- a -(CH2)qS(O)r je popřípadě substituována halogenem, hydroxy nebo alkylskupinou, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2, a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituováná aminoskupina, substituovaná nebo nesubstituováná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkylová skupina, nebo Y a Z jsou společně přirozená nebo nepřirozená aminokyselina, která může být na aminovém dusíku mono- nebo di-alkylována, a substituent Rg představuje jeden nebo více substituentů, z nichž každý je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří vodík, hydroxyskupina, oxoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nésubstituovaný aryl, substituovaný nebo nésubstituovaný heterocyklyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupinakarbonyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupinaalkyl, substituovaný nebo nésubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nésubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nésubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nésubstituovaný heterocyklylkarbonyl, substituovaný nebo nésubstituovaný aminoalkyl a substituovaný nebo nésubstituovaný arylalkyl; s podmínkou, že uhlíkové atomy sousedící s dusíkovým atomem nejsou substituovány hydroxyskupinou.
Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H, substituent R2 je skupina vzorce
N kde substituent R4 je H, substituovaný nebo nésubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nésubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou
-(CH2)qS(O)r-, kde q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a Z je vodík, substituovaný nebo nésubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nésubstituovaný aryl, substituovaný nebo nésubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nésubstituovaný heterocykloalkyl.
Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H, substituent R2 je skupina vzorce
ve kterém mje celé číslo od 1 do 6; a substituenty R4 a R5 jsou každý nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo substituenty R4, R5 a atom dusíku mobou také společně tvořit 3, 4, 5-ti, 6-ti nebo 7 člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo substituovanou nebo nesubstituovanou heterobicyklickou skupinu.
Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H,
ve kterém n je celé číslo od 0 do 4;
r je 0 a m je celé číslo od 1 do 6; nebo r je 1 a m je celé číslo od 0 do 6;
Q je -NR4R5 nebo -01%:
každý ze substituentů R4 a R5 je nezávisle vodík, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina;
c·. · ft r e>
© Iři ť ti:
e © © r e c c ctf «! β «
oe e* & fc e
« ©
tr e nebo substituenty R4, R5 a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu; a substituent Ró je vodík nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina.
Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H, substituent R2 je skupina vzorce
ve kterém n je celé číslo od 0 do 4;
m je celé číslo od 0 do 6;
substituent R4 je H, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH2)q, -S(O)2-,
-C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; a substituent Ró je vodík nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina.
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin vytvářejí společně substituenty R4, R5 a atom dusíku heterocyklickou skupinu obecného vzorce
X
R7
-Re
-R9
R10 i ( f
et;
fi (·>
c <' r c < <· c r < c t r c f f «- c <· f> r ve kterém substituenty R7, Rg, R9, R10, R11, R12, R13 a R14 jsou každý nezávisle nižší alkyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R7 a Rg; R9 a Ri0; Ru a R(2; nebo R13 a R14 jsou dohromady atom kyslíku; nebo alespoň jeden ze substituentů R7 a R9 je kyanoskupina, CONHR]5, COOR15, CH2OR15 nebo CLLNRisÍRió), kde substituenty R15 a Ri6 jsou každý nezávisle vodík, azabicykloalkyl nebo V-L, kde význam V je vybrán ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty Rjs, Rió a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti, 6-ti nebo 7 člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo substituovanou nebo nesubstituovanou heterobicyklickou skupinu;
X je O, S, SO, SO2, CH2, CHORpnebo NRp, kde substituent R17 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)Ri7 nebo -C(O)ORi8, kde substituent Ri8 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a t je 0 nebo 1.
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin vytvářejí společně substituenty R4, R5 a atom dusíku heterocykl obecného vzorce
ve kterém substituenty R]9 a R2o jsou každý nezávisle vodík nebo nižší alkyl; nebo substituenty R|9 a R20 jsou dohromady atom kyslíku.
substituenty R21 a R22 jsou každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl V-L, kde význam V je vybrán ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CLhjp-, í·: o· C (!
& (i e- (':
ň ( íi !’ íi e·· e ť-j f to C ř( r. e <?
<· «·- o f «. c to « to í'> c íí c
©
C C €
-S(0)2-, -C(0)0-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a rje 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo substituenty R2i, R22 a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu; m je celé číslo od 1 do 6; a n je celé číslo od 0 do 6.
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin vytvářejí společně substituenty R4, R5 a atom dusíku heterocykl obecného vzorce
ve kterém m je celé číslo od 1 do 6;
substituent R23 je CH2OH, NRR1, C(O)NRR' nebo COOR, kde substituenty R a R' jsou každý nezávisle vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl.
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin vytvářejí společně substituenty R4, R5 a atom dusíku heterocykl obecného vzorce
ve kterém substituent R24 je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, karboxyl, kyanoskupina, C(O)OR25, CH2OR25, CH2NR2óR27 nebo C(O)NHR26, kde substituent R25 je <·® « ť ο < , © © V <· © ύ © υ © ί © « © <· ι ( (
I <· c ί fi γ· ( < ϊ •η © € © © © ί: Rρ e substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloaryl; a substituenty R2e a R27 jsou každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde význam V je vybrán ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; substituenty R26, R27 a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má alespoň jeden ze substituentů R4 a R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec
Γ\
ve kterém
T je C(O), S, SO, SO2, CHOŘ nebo NR, kde substituent R je vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a n je 0, 1 nebo 2.
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má alespoň jeden ze substituentů R4 a R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec -N(R28)R29 a substituenty R2g a R29 jsou každý nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný kyanoalkyl; substituenty R2g a R2g společně s atomem dusíku mohou také tvořit 5-ti nebo 6-ti Člennou heterocyklickou skupinu.
I - e ti p & &
e ©i fe © e
¢. «'· c o © e o « 9' »« 4? 9 «
* © f’ c r c- ♦ » «· e
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin vytvářejí společně substituenty R4, R5 a atom dusíku heterocyklickou skupinu obecného vzorce
ve kterém substituenty R7, Rg, R9, R10, R11, R12, R13 a Rm jsou každý nezávisle nižší alkyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R7 a Rg; R? a R10; Rn a R12; nebo R13 a R14 jsou dohromady atom kyslíku; nebo alespoň jeden ze substituentů R7 a R9 je kyanoskupina, CONHR15, COOR15, CH2OR15 nebo CH2NRi5(Ri6), kde substituenty R15 a Ri6 jsou každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde význam V je vybrán ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty R15, Rie a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti, 6-ti nebo 7 člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo heterobicyklickou skupinu;
X je O, S, SO, SO2, CH2, CHOR17 nebo NR17, kde substituent R17 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)Rig nebo -C(O)ORig, kde substituent Rig je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a t je 0 nebo 1.
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin vytvářejí společně substituenty R4, R5 a atom dusíku heterocykl obecného vzorce
Γ ί- <' ί
Γ r
Ο <>
u r e e c ¢) o <>
o t, t>
{- f o c c « re f- e e e
ve kterém substituenty R19 a R20 jsou každý nezávisle vodík nebo nižší alkyl; nebo substituenty R19 a R20 jsou dohromady atom kyslíku;
substituenty R21 a R22 jsou každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde význam V je vybrán ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)p-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty R2i, R22 a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu; mje celé číslo od 1 do 6; a n je celé číslo od 0 do 6.
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin vytvářejí společně substituenty R4, R5 a atom dusíku heterocykl obecného vzorce — —fCH2 ) \ / m
R23 ve kterém mje celé číslo od 1 do 6; a substituent R23 je CH20H, NRR', C(O)NRR' nebo COOR, kde substituent R je atom vodíku nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
ř- ©j fe· «* fe ♦' ®
¢. ň © ft c « *·' *>
í fc ?- f> o 4 fc P ř' ©· © · &
f ¢- © fc e e· » © © «·>
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin vytvářejí společně substituenty Rt, R5 a atom dusíku heterocykl obecného vzorce
R24 ve kterém substituent R24 je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, karboxyl, kyanoskupina, C(O)OR25, CH2OR25, CH2NR26R27 nebo C(O)NHR26, kde substituent R2s je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloarylová skupina; a substituenty R26 a R27 jsou každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)„O-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo substituenty R26, R27 a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má alespoň jeden ze substituentů R4 a Rs obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec
A R32 ve kterém g je 0 nebo 1;
f c
•e o € f:
T je C(O), O, S, SO, SO2, CH2, CHOR47 nebo NR17, kde substituent R17 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)Rig nebo -C(O)ORig, kde substituent Rig je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl.
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má alespoň jeden ze substituentů R4 a Rs obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec -N(R2g)R29 a substituenty R2g a R29 jsou každý nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný karboxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný kyanoalkyl; nebo substituenty R28 a R29 společně s atomem dusíku tvoří 5-ti nebo 6-ti člennou substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec N(R3o)R3i, kde substituenty R3o a R3i jsou každý nezávisle vodík, alkyl, alkoxykarbonyl, alkoxyalkyl, hydroxyalkyl a aminokarbonyl, kyanoskupina, alkylkarbonyl nebo arylalkyl.
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec
X--M ve kterém &
€; €>
každé X je nezávisle CH nebo N; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec
R32 ve kterém gje 0 nebo 1;
T je O, S, SO, SO2, CH2, CHOR17 nebo NR17, kde substituent R17 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, C(O)NH2, - C(NH)NH2, - C(O)Rn nebo -C(O)ORig, kde substituent Ris je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R22 je vodík, kyanoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec
R32 c-/>
b «> v e ve kterém gje 0,1 nebo 2;
substituent R32 je vodík, kyanoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec
ve kterém
T je C(O), O, S, SO, SO2, CH2, CHOR17 nebo NR17, kde substituent R,7 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, aryl, arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)Rig nebo C(O)ORi8, kde substituent R,s je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl;
gje 0 nebo 1; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec
R32 R33 f;,0 Hř ©«i <7 p, g, p p « ® í> r: P * <s « ©, c i e#· to (- Ě· e
ρ. (v <-.©© © © c e e o e (-. r c e c < · &
r <; c- e í- e- e ® * * < ' e * * e e ve kterém substituent R32 je vodík, kyanoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, alkylkarbonyl, substituovaná nebo nesubstituováná thioalkoxyskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R33 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, perhalogenalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl.
Výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je ta, ve které substituent R3 je atom vodíku; substituent R2 má obecný vzorec
ve kterém m je celé číslo od 0 do 1;
substituenty R34, R35, R36, R37, R38, R39, R40 a R41 jsou každý nezávisle methyl nebo atom vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R34 a R35; R36 a R37; R38 a R39; nebo R40 a R41 společně jsou atom kyslíku;
substituent R42 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r; kde pje celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituováná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituováná heterocykloalkylová skupina; nebo substituent R42 má obecný vzorec *♦ «· «&
ve kterém uje O nebo 1;
substituenty R43, R44, R45, R46, R47, R48, R49 a R50 jsou každý nezávisle methyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R43 a R44; R45 a R46; R47 a R48 ; nebo R49 a R50 společně jsou atom kyslíku; a substituent R51 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.
Výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je ta, ve které substituent R3 je vodík; substituent R2 má obecný vzorec \ \) ^57/i
Ra
Rh
R52 '|< N
R58
R59
R60 ve kterém h, i, j, k a 1 jsou nezávisle 0 nebo 1;
substituenty Rs2, R53, R54, R55, R5g, R57, Rss, R59, Rg a Rh jsou každý nezávisle methyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R52 a R53; R54 a R55 ; R56 a R57; nebo R58 a R59 společně jsou atom kyslíku; a substituent Rgo je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, C c>
f♦ í c ¢34
SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a Z substituovaný nebo nésubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nésubstituovaný aryl, substituovaný nebo nésubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nésubstituovaný heterocykloalkyl; nebo
ve kterém v je 0 nebo 1;
substituenty Rói, R02, Ró3, Ró4, Rós, Róó, Ró7 a Re» jsou každý nezávisle nižší alkyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů Rói a Ró2; Ró3 a Ró4; Rós a Róó; a Ró7 a R&8 společně jsou atom kyslíku;
substituent R09 je vodík, substituovaný nebo nésubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH-, -(CH2)P-, -S(O)2- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nésubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nésubstituovaný aryl, substituovaný nebo nésubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nésubstituovaný heterocykloalkyl.
Další výhodnou sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které je substituent R3 vodík; substituent R2 -Z101-Z102, kde Z101 je kovalentní vazba, -(Ci-C6)-, -(Ci-Có)-O-, -(CiC6)-C(O)-, -(C,-C6)-C(O)O-, -(Ci-C6-C(O)-NH-, -(C,-C6-C(O)-N((Ci-C6))- nebo substituovaný fenyl; a
Z je vodík, substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je Z101 vybráno ze skupiny sestávající
C «* υ fs © « a « o © « © «f o e e t» c r t © * 6 . e φ
C «. <5 φ * © ® » O O « &
© « ♦» © t e »6 m * λ «φ ©
© ©
β ¢- B se z -CH2-C(O)O-, -CH2-C(O)-, -CH2-C(O)-NH-, -CH2-C(O)-N(Me), -CH(Me)-C(O)O-, -(CH2)3-C(O)O-, -CH(Me)-C(O)-NH- a -(CH2)3-C(O)-NH-; a
Z je vybráno ze skupiny sestávající se z vodíku, methylu, ethylu, N, //-dimethy laminoethylu, Λζ/V-diethylaminoethylu, 2-fenyl-2-hydroxyethylu, morfolinoskupiny, piperazinylu, W-methylpiperazinylu a 2-hydroxymethylpyrrolidinylu.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec
benzoxazolyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný benzothiazolyl.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec
ve kterém se vyskytuje pouze jeden substituent Ra a je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku nebo F.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je Z101 kovalentni vazba; a Z102 je případně substituovaný pyridyl.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které je substituent R3 vodík; substituent R2 je cyklopentyl; a G má obecný vzorec ,-« Ofl ť® fí « » ?' f* a o r- í’ i- © r> o r t: e c ( C t- « . *
A r ofí. CP ť f e«» &
© ť
tt f· ©
πο^_ζ1Ιΐ21θο
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je Z110 vodík;
A je O; a Z100 je případně substituovaný fenyl, furanyl nebo thienyl, přičemž Z100 je případně substituované jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z F, COOH, NO2, OMe, -COOMe, OCF3 a CF3.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je Z110 vodík;
A je -0-, -0-(CR2)n-C(0)- nebo -O-(CR2)n-O-; n v každém případě je O až 3;
Z100 je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z cyklohexylu, fenylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, izoxazolylu a piperidinylu; přičemž Z100 je případně substituovaná jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající se z alkylu, alkoxyskupiny, halogenu, hydroxyskupiny a alkoxykarbonylu.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R2 případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z cyklobutylu a cyklohexylu.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R2 případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, alkylu, hydroxyalkylu, karboxyalkylu a fenylalkoxyalkylu.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je G 4-fenoxyfenyl.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je m 2; a je 0; substituent Ré je H; b je 1 nebo 2; a substituenty R4 a R5 jsou každý H.
• ♦ η β
fe
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je m 0, 1 nebo 2; substitutent Ró je vodík; substituent R5 je vodík nebo Y-Z;
kde význam Y je vybrán ze skupiny sestávající se z kovalentní vazby, -C(O)-,
-(CH2)qO-, -(CH2)q, -(CH2)qC(0)- nebo -C(O)(CH2)q-, kde alkylová část skupin
-(CH2)qO-, -(CH2)P-, -(CH2)qC(O)- a -C(O)(CH2)q- je případně substituovaná halogenem, hydroxyskupinou nebo alkylovou skupinou; a
Z je vodík, alkyl, případně substituovaný alkyl, alkoxyalkyl, případně substituovaný heterocykloalkyl, případně substituovaný heteroaryl nebo případně substituovaná aminoskupina.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je Z vybráno ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, methylu, ethylu, hydroxymethylu, methoxyethylu, Y-methyl-piperidinylu, (Z-butoxykarbonyl)(hydroxy)piperidinylu, hydroxypiperidinylu, (hydroxymethyl)piperidinylu, (hydroxy)(methyl)piperidinylu, morfolinoskupiny, (methoxyethyl)piperizinylu, methylpiperizinylu, 4-piperidinylpiperidinylu, imidazolylu, methylimidazolylu, TV-methylaminoskupiny, N, TV-dimethylaminoskupiny, Y-izopropyl-aminoskupiny, ///V-diethy lamino skupiny, 2,3-dihydroxypropylaminoskupiny,
-hy droxyethylaminoskupiny, 3 -hy droxypropylaminoskupiny, methoxyethylaminoskupiny, ethoxykarbonylmethylaminoskupiny, fenylmethylaminoskupiny, Y-methylO.
jV-methoxyaminoskupiny,
HN furanylmethylaminoskupiny, piperidinylethylaminoskupiny, Y-(2-XY-dimethylaminoethyl)-JV-methyl-aminoskupiny, 2N, A-dimethy 1-aminoethy laminoskupiny,
Y-methyl-/V-(//-methyl-piperidin-4yl)aminoskupiny, 2-morfolino-ethylaminoskupiny, 3-morfolino-propylaminoskupiny, 3imidazolyl-propylaminoskupiny nebo 3 -(2-oxopyrro-lidinyl)propylaminoskupiny.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je m rovno 2; substituent R5 je Y-Z; Y
N· je -C(O)-; a Z má obecný vzorec R , ve kterém n je 0, 1,2 nebo 3.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R4 vodík nebo methyl;
•R,
G má obecný vzorec \-' '-' ;
A je vybráno ze skupiny sestávající se z O, -N(R)- a -N(R)C(O)-; Z111 je -(CH2)ncykloalkyl-(CH2)n-;
substituent Rje vodík nebo alkyl;
nje0až5;
substituent Ra je jeden nebo více substituentů, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z H, OH, F, Cl, methylu a methoxy skupiny; substituent Rb je jeden nebo více substituentů, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z H, CN, F, CF3, OCF3, methylu, methoxyskupiny a případně substituované aminoskupiny; a kde uvedená aminoskupina je případně substituovaná jednou nebo více skupinami, přičemž každá je nezávisle vybrána ze skupiny sestávající se z alkylu, alkoxyalkylu, fenylu, substituovaného fenylu a případně substituovaného heteroarylu.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent Rb 4-methylfenylthioskupina nebo 2-pyridinylthioskupina.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má ,100
G obecný vzorec V—J kde Z100 je vybráno ze skupiny sestávající se z benzo[ůjthiofenu, íuranylu a thiofenu.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent Ra alkoxyskupina;
A je NH-C(O)-; a mezi A a Z100 je kovalentní vazba.
«<? r
Vf.“ tu.· í? f c €> ť: € © « f. v fl © & e č1- f. <,
ť)<s Φφ
Φ « <
£ ΦΦΦ
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má /ýž~A—(Co-C6>—z100
G obecný vzorec
A je vybráno ze skupiny sestávající se z -N(R)-C(O)-N(R)-, -(CH2)nN(R)C(O)N(R)-, -N(R)- a -N(R)-SO2-; substituent R je vodík nebo alkyl;
zR,
Z100 je > pyridinyl, thiazolyl, furanyl, benzofuranyl nebo oxazolyl;
X je S, O nebo NR1, kde substituent R1 v každém případě je nezávisle vodík nebo Me;
substituent Ra je jeden nebo více substituentů, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z H a F; a substituent Ri je jeden nebo více substituentů, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se zH, F, Cl, Br, NO2, CF3, alkylu, alkoxyskupiny a alkoxykarbonylu.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl; m je 1, 2 nebo 3;
substituent R5 je Y-Z, kde Y je -C(O)O-, -C(O)- nebo -C(O)-(CH2)P-; a Z je aminoalkyl, A-alkylaminoskupina, Λζ A-dialkylaminoskupina nebo hydroxyalkylaminoalkyl.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl; G má obecný „100
, kde njeOaž3;Zlooje případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z indolylu, indenylu, methylindenylu, methylindolylu, dimethylaminofenylu, fenylu, cyklohexylu a benzofuranylu.
< I' C ( í' Γ ( cn OV r, n f o η Γ> C O ,-’· p e / ) ( C ( C f f: 7 C υ ι» <?
f a c o <; C e e r c
Z. c. ť'· Γ t> Λ Ϊ-.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec
T)
V_XZU-“A_ZU2Z™
Z100 je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z fenylu, imidazolylu, indolylu, furanylu, benzofuranylu a 2,3-dihydrobenzoťuranylu;
Z100 je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z F, Cl, CN, případně substituovaného alkylu, -O- (případně substituovaného alkylu), -COOH, -Z105-C(O)N(R)2, -Z105-N(R)-C(O)-Z200, Zi05-N(R)-S(O)2-Z200 a -Z105-N(R)-C(O)-N(R)-Z200;
Z105 je kovalentní vazba nebo (Cj-Có);
Z200 je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se ze skupiny (Ci-Ce), fenylu a -(Ci-C6)-fenylu;
Z110 a Z111 jsou každý nezávisle kovalentní vazba nebo skupina (C1-C3) případně substituovaná alkylem, hydroxyskupinou, COOH, CN nebo fenylem; a A je O, -N(R)-C(O)-N(R)-, -N(R)-C(O)-O-, -N(R)- nebo -N(R)-C(O)-, kde substituent Rje H nebo alkyl.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec RyÁ-Z‘“ / , kde Z100 je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z benzoxazolylu, benzothiazolylu a benzimidazolylu.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl; A je -NH- ; v tomto případě je zde pouze jeden substituent Ra vybraný z H nebo F; a Z100 je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z alkylu, halogenu, CF3 a alkoxyskupiny.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec @ c v e e e <
® c (- C
O e©@ čeře· ©& co ee ©«>
© e c o e © e © c ď ť? # β © o o & © © © 4 C <5 €5 © « & c p c e © g & ©
Z-A-Z-Z100
Z100 je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z fenylu, pyrrolylu, pyridylu, benzimidazolylu, naftylu a t
s kde Z100 je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z F, Cl, Br, NO2, aminoskupiny, Nalkylaminoskupiny, Λζ/V-dialky lamino skup iny, CN, případně substituovaného alkylu, -O- (případně substituovaného alkylu) a fenylu;
Z110 a Z111 v každém případě je nezávisle (C0-C3) případně substituovaná případně substituovaným fenylem; a
A je -N(R)-C(O)-N(R)-, -N(R)-S(O)2-, -N(R)-C(O)-, -N(R)- nebo -N(R)-C(O)-O-.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl a v tomto případě je zde pouze jeden substituent Ra vybraný z atomu floru.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec
Z100 je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z fenylu, izoxazolylu, tetrahydronafihylu, furanylu, benzofuranylu, pyridylu a indolylu; kde Z100 je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybraný ze skupiny sestávající se z F, CN, NO2, C(O)H, -CONH2, -NHSO2CF3, případně substituovaného alkylu, případně substituovaného heteroarylu a -O- (případně substituované alkylové skupiny);
Z110 a Z111 jsou každý nezávisle případně substituovaná skupina (C0-C3); a
A je O, -N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-, -C(O)-N(R)-, -N(R)-C(O)-O-, -N(R)-C(O) nebo
-N(R), o© ee co eo $ c o o e <; c c ó o o c o c e o o r © o e o c « o e r- c o c r eoeo Cf> co Co
WC €‘ ©se e r· © €’ <t V e oee- et-c
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl; substituent Ra je H nebo methoxyskupina; a Z110 a Z111 jsou každý nesubstituovaný.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec
kde substituent R je H nebo nižší alkyl a n v každém případě je nezávisle 1 až 6. Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je Z100 substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl.
• · to · · · • · * to to • · · · · to • toto·· «•«to ·· «· to · * • toto ·· ··« to
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec
W / , kde Z100 je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z benzoxazolylu, benzothiazolylu a benzimidazolylu.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je n 2; substituent R© je H; m je 1; r je 1; a substituenty R4 a R5 jsou každý vodík.
Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je G 4-fenoxyfenyl.
V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob inhibice aktivity jedné nebo více proteinkináz u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky aktivní soli, prekursoru léčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi. Výhodný způsob je takový, ve kterém je proteinkináza vybrána ze skupiny sestávající se z KDR, FGFR-1, PDGFRp, PDGFRa, IGF-1R, c-Met, Flt-1, Flt-4, TIE-2, TIE-1, Lek, Src, fyn, Lyn, Blk, hek, fgr a yes. Další výhodný způsob je takový, ve kterém je proteinkináza proteinová serin/threoninkináza nebo proteinová tyrosinkináza. Výhodnější způsob je takový, ve kterém je proteinkináza TIE-2, a další výhodnější způsob je takový, ve kterém aktivita proteinkinázy zahrnuje aktivaci T-buněk, B-buněk, degranulaci žírných buněk, aktivaci monocytů, potenciaci zánětlivé odpovědi nebo jejich kombinaci.
V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob ovlivnění hyperproliferacních poruch u pacienta, který zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelné soli, prekursoru léčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob ovlivnění angiogeneze u pacienta, který zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelné soli, prekursoru léčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi. Výhodný způsob je takový, ve kterém sloučenina nebo její fyziologicky přijatelná sůl, prekursor léčiva nebo biologicky aktivní metabolit je podán v množství, které je schopné podporovat angiogenezi nebo vaskulogenezi.
>' Γ c © © c i; γ e 9 © « f t' · CCC© e ¢1 © © » f © r. c í- c e c © © e e © o r © o © ©
C C c C: C O (' & CΓ C <! o (' © (: (' c O © c © e c c ©
Výhodnější způsob je takový, ve kterém pacient trpí anémií, ischémií, infarktem, rejekci transplantátu, zraněním, gangrénou nebo nekrózou.
V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob ošetření jednoho nebo více vředů u pacienta, který zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo nebo její fyziologicky přijatelné soli, prekursoru léčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi. Výhodný způsob je takový, ve kterém jsou vřed nebo vředy způsobeny bakteriální nebo fungální infekcí; nebo se jedná o Moorenovy vředy nebo o symptomy ulcerativní kolitidy.
V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob ošetření onemocnění pacienta, který zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelné soli, prekursoru léčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovim, kde dané onemocnění je oční onemocnění, kardiovaskulární onemocnění, rakovina, syndrom Crow-Fukase (POEMS), diabetické onemocnění, srpkovitá anémie, chronický zánět, systémový lupus, glomerulonefritida, synovitida, zánětlivé střevní onemocnění, Crohnova nemoc, glomerulonefritida, revmatoidní artritida, osteoartritida, roztroušená skleróza, rejekce štěpu, Lymeská nemoc, sepse, von Hippelův-Lindauův syndrom, pemfigoid, psoriáza, Pagetova nemoc, polycystické onemocnění ledvin, fibróza, sarkoidóza, cirhóza, tyreoiditida, hyperviskózní syndrom, Oslerova-Renduova-Weberova nemoc, chronické okluzivní onemocnění plic, astma nebo edém po popáleninách, traumatu, ozáření, mrtvice, hypoxie nebo ischémie, ovariální hyperstimulační syndrom, preeklampsie, menometroragie, endometrióza nebo infekce viry Herpes simplex a Herpes zoster, virusem lidské imunodeficience, Parapoxvirusem, prvoky nebo toxoplazmózou.
Výhodný způsob je takový, ve kterém onemconěním je oční onemocnění:
okulární nebo makulámí edém, okulární neovaskulární onemocnění, skleritida, radiální keratotomie, uveitida, vitritida, myopie, fyziologická exkavace papily, chronické odchlípení sítnice, komplikace po ošetření laserem, konjunktivitida, Stargardtova nemoc a Ealesova nemoc, retinopatie nebo makulámí degenerace; kardiovaskulární onemocnění:
ateroskleróza, restenóza, ichémie/reperfuzní poškození, vaskulární okluze nebo karotické obstruktivní onemocnění;
© © • · * fc • © • e © ©
• · · 9 · e e © · « «
O « · · e © * c © · © © · © © © · © · nádorové onemocnění:
pevný nádor, sarkom, fibrosarkom, osteom, melanom, retinoblastom, rabdomyosarkom, glioblastom, neuroblastom, teratokarcinom, hematopoézní zhoubné bujení, Kaposiho sarkom, Hodgkinova nemoc, lymfom, myelom, leukémie nebo maligní ascites; a diabetické onemocnění:
inzulin-dependentní diebetes mellitus se zeleným zákalem očí, diabetická retinopatie nebo mikroangiopatie.
V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob snížení fertility u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivního metabolitu pacientovi.
V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob, při němž sloučenina obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelná sůl, prekursor léčiva nebo biologicky aktivní metabolit je podáván v kombinaci s proangiogenním růstovým faktorem. Výhodný způsob je takový, ve kterém proangiogenní růstový faktor je vybrán ze skupiny sestávající z VEGF, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, HGF, FGF-1, FGF-2, jejich derivátů a antiidiotypických protilátek.
Detailní popis vynálezu
V rámci jednoho provedení poskytuje předložený vynález sloučeniny obecného vzorce (I) uvedené výše. Specifikace substituentů ve výhodných skupinách sloučenin obecného vzorce (I) jsou uvedeny níže.
Výhodně je substituent Ri vybrán ze skupiny sestávající se z F, Cl, Br, I, CH3, NO2, OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF3, z /-butylu, pyridylu, substituovaného nebo nesubstituovaného oxazolylu, substituovaného nebo nesubstituovaného benzylu, substituovaného nebo nesubstituovaného benzensulfonylu, substituované nebo nesubstituované fenoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, karboxylu, substituovaného a nesubstituovaného tetrazolylu, substituovaného a usubstituovaného styrylu, substituované a nesubstituované arylthio skupiny, substituované nebo nesubstituované thioalkoxyskupiny, substituované a nesubstituované heteroarylthioskupiny; CH2ORc, kde substituent Rc je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku nebo substituovaný nebo nesubstituovaný o f c o
O f‘ alkyl nebo aryl; a -W-(CH2)t-NRdRe, kde t je celé číslo od 1 do 6; W je přímá vazba, O, S, S(O), S(O)2 nebo NRf, kde substituent Rf je vodík nebo alkyl a substituenty Ra a Re jsou nezávisle vodík, alkyl, alkanoyl nebo SO2-alkyl; nebo substituenty Ra, Re a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, vytvářejí 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh.
Výhodně je substituent Ra vybrán ze skupiny sestávající se z F, Cl, Br, I, CH3, NO2, OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF3, Z-butylu, pyridylu, substituovaného nebo nesubstituovaného oxazolylu, substituovaného nebo nesubstituovaného benzylu, substituovaného nebo nesubstituovaného benzensulfonylu, substituované nebo nesubstituované fenoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituované nebo nesubstituované thioalkoxyskupiny, karboxylu, substituovaného a nesubstituovaného tetrazolylu, substituovaného a usubstituovaného styrylu, substituované a nesubstituované arylthioskupiny, substituované a nesubstituované heteroarylthioskupiny; CH2ORC, kde substituent Rc je vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl nebo aryl; a -W(CFDt-NRdRe, kde t je celé číslo od 1 do 6; W je přímá vazba, O, S, S(O), S(O>2 nebo NRf, kde substituent Rf je vodík nebo alkyl a substituenty Rd a Re jsou nezávisle vodík, alkyl, alkanoyl nebo SC^-alkyl; nebo substituenty Ra, Re a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, vytvářejí 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh.
Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat jako soli s farmaceuticky přijatelnými kyselinami. Předložený vynález zahrnuje také tyto soli. Příklady těchto solí zahrnují hydrochloridy, hydrobromidy, sulfáty, methansulfonáty, nitráty, maleáty, acetáty, citráty, fumaráty, tartráty [např. (+)-tartráty, (-)-tartráty nebo jejich směsi, včetně racemických směsí], sukcináty, benzoáty a soli s aminoskupinykyselinami, např. glutamová kyselina. Tyto soli mohou být připraveny standardními způsoby.
Určité sloučeniny obecného vzorce (I), které mají kyselé substituenty, mohou existovat jako soli s farmaceuticky přijatelnými bázemi. Předložený vynález zahrnuje tyto soli. Příklady takových solí zahrnují sodné, draselné, lysinové a argininové soli. Tyto soli mohou být připraveny standardními způsoby.
Určité sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich soli mohou existovat ve více než jedné krystalické formě a předložený vynález zahrnuje každou tuto krystalickou formu a jejich směsi.
Určité sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich soli mohou také existovat ve formě solvátů, např. hydrátů, a předložený vynález zahrnuje každý tento solvát a jejich směsi.
• ·
Určité sloučeniny obecného vzorce (I) mohou obsahovat jedno nebo více chirální ch center, a tudíž existují v různých opticky aktivních formách. Pokud sloučeniny obecného vzorce (I) obsahují jedno chirální centrum, pak sloučeniny existují ve dvou enantiomemích formách a předložený vynález zahrnuje oba enantiomery a směsi enantiomerů, např. racemické směsi. Enantiomery mohou být rozděleny standardními způsoby, např. tvorbou diastereoizomemích solí, které mohou být separovány, např. krystalizací; tvorbou diastereoizomemích derivátů nebo komplexů, které mohou být separovány, např. krystalizací, GLC nebo LC; selektivní reakcí jednoho enantiomerů senantiomemě selektivním činidlem, např. enzymatická esterifikace; nebo GLC nebo LC v chirální prostředí, např. na chirálním pomocném médiu, např. silikagel s vázaným chirálním ligandem nebo za přítomnosti chirálního rozpouštědla. Tam, kde požadovaný enantiomer je konvertován na jinou chemickou entitu jedním z výše uvedených způsobů, je potřeba další krok k uvolnění požadované enantiomemí formy.
Nebo specifické enantiomery mohou být syntetizovány asymetrickou syntézou pomocí opticky aktivních činidel, substrátů, katalyzátorů nebo rozpouštědel nebo konvertováním jednoho enantiomerů na druhý asymetrickou transformací.
Pokud sloučenina obecného vzorce (I) obsahuje více než jedno chirální centrum, může existovat v diastereoizomemích formách. Diastereoizomemí páry mohou být separovány standardními způsoby, např. chromatografií nebo krystalizací a jednotlivé enantiomery v každém páru mohou být separovány výše uvedenými způsoby. Předložený vynález zahrnuje každý diastereoizomer sloučenin obecného vzorce (I) a jejich směsi.
Určité sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat v různých tautomemích formách nebo jako různé geometrické izomery a předložený vynález zahrnuje každý tento tautomer a/nebo geometrický izomer sloučenin obecného vzorce (I) a jejich směsi.
Určité sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat v různých stabilních konformačních formách, které mohou být separovatelné. Torzní asymetrie díky omezené rotaci okolo asymetrické jednoduché vazby, např. díky stérickému bránění nebo napětí kruhu, mohou usnadnit separaci různých konformerů. Předložený vynález zahrnuje každý tento konformační izomer sloučenin obecného vzorce (I) a jejich směsí.
Určité sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat ve formě zwitterionu a předložený vynález zahrnuje kařdou formu zwitterionu sloučenin obecného vzorce (I) a jejich směsí.
• · • · « » • * · ····· ® • ········· « • · · ···· « e ···· · · · · *· ·····«»
Heteroaromatické skupiny používané v předloženém vynálezu zahrnují heteroarylové kruhové systémy (např. pro názornost, nikoliv však limitující: thienyl, pyridyl, pyrazol, izoxazolyl, thiadiazolyl, oxadiazolyl, indazolyl, furany, pyrroly, imidazoly, pyrazoly, triazoly, pyrimidiny, pyraziny, thiazoly, izothiazoly, oxazolyl nebo tetrazoly) a heteroarylové kruhové systémy, ve kterých karbocyklický aromatický kruh, karbocyklický nearomatický kruh nebo heteroarylový kruh je kondenzován na jeden nebo více dalších heteroarylových kruhů (např. pro názornost, nikoliv však limitující: benzo [ůjthienyl, benzimidazolyl, benzoxazolyl, benzothiazolyl, benzothiadiazolyl, benzoxadiazolyl, indol, tetrahydroindol, azaindol, indazol, chinolin, imidazopyridin, chinazolin, purin, pyrrolo[2,3-7]pyrimidin, pyrazolo[3,4-7]pyrimidin) a jejich V-oxidy. Substituované heteroarylové skupiny jsou výhodně substituovány jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z halogenu, hydroxyskupiny, alkylové skupiny, alkoxyskupiny, alkyl-O-C(O)-, alkoxyalkylové skupiny, heterocykloalkylové skupiny, případně substituovaného fenylu, nitroskupiny, aminoskupiny, monosubstituované amino skupiny nebo disubstituované aminoskupiny.
Termín heterocyklická (heterocyklyl)skupina, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na heteroarylovou i heterocykloalkylovou skupinu.
Termín heterobicyklická skupina, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na bicyklickou skupinu mající jeden nebo více heteroatomů, které jsou nasyceny, částečně nasyceny nebo nenasyceny.
Termín arylalkylová skupina, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na aromatický substituent, který je připojen ke sloučenině alifatickou skupinou mající jeden až asi šest atomů uhlíku. Výhodná arylalkylová skupina je benzylová skupina.
Termín heteroaralkylová skupina, jak je používán v předloženém vynálezu, je heteroaromatický substituent, který je připojen na sloučeninu alifatickou skupinou mající jeden až šest atomů uhlíku.
Termín heterocykloalkylová skupina, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na nearomatický kruhový systém, jenž má 3 až 8 atomů a zahrnuje alespoň jeden heteroatom, např. atom dusíku, kyslíku nebo síry.
Alifatické skupiny nebo označení, např. „Co-Cg“, zahrnují lineární, rozvětvené nebo cyklické uhlovodíky, které je zcela nasyceny nebo obsahují jeden nebo více jednotek nenasycenosti. Pokud je skupinou Co, znamená to, že zde není žádná část nebo jinými slovy znamená vazbu.
e β e o © © • o e © e © « · · © e © © rt © e © ©
e © e © e © e θ e © to ee · » e e « » ©to · to © « β© ee··
Termín aromatické skupiny (nebo arylové skupiny) zahrnuje aromatické karbocyklické kruhové systémy (např. fenyl) a kondenzované polycyklické aromatické kruhy (např. naftyl a 1,2,3,4-tetrahydronaftyl).
Termín „přirozená aminokyselina“ se vztahuje na 23 známých přirozených aminokyselin, které jsou (označeny svými zkratkami): Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Cys-Cys, Glu, Gin, Gly, His, Hyl, Hyp, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val. Termín nepřirozené aminokyseliny se vztahuje na sloučeniny obecného vzorce NH2(C(X)2)n-COOH, které jsou ct-(pokud n je 1) nebo 0-(pokud n je 2) aminokyseliny, přičemž X v každém případě je nezávisle jakákoliv část postranního řetězce; příklady nepřirozených aminokyselin zahrnují, aniž by se však na ně omezovaly, hydroxyprolin, homoprolin, 4-amino-fenylalanin, P-(2-naftyl)alanin, norleucin, cyklohexylalanin, β-(3pyridinyl)alanin, P-(4-pyridinyl)alanin, α-aminoisomáselnou kyselinu, urokanovou kyselinu, Α,Α-tetramethylamidino-histidin, W-methylalanin, A-methyl-glycin, V-methylglutamovou kyselinu, ferc-butylglycin, oc-aminomáselnou kyselinu, /erobutylalanin, ornithin, α-aminoisomáselnou kyselinu, β-alanin, γ-aminomáselnou kyselinu, 5-amino valero vou kyselinu, 12-aminododekanovou kyselinu, 2-aminoindan-2karboxylovou kyselinu, atd. a jejich deriváty, zejména ty, ve kterých je dusík aminové skupiny mono- nebo di-alkylovaný.
Bylo uvedeno, že mnoho částí nebo substituentů je buď „substituovaných nebo nesubstituovaných“ nebo „případně substituovaných“. Pokud je část modifikována jedním z těchto termínů, znamená to, že jakákoliv část mající schopnost být substituována může být substituována, což zahrnuje jeden nebo více substituentů, přičemž pokud je substituována více než jedním substituentem, je tento substituent nezávisle vybrán. Způsoby substutituce jsou známy a/nebo mohou být využity podle předloženého popisu. Pro názornost, nikoliv však limitující, zahrnují příklady skupin, které jsou substituenty, následující: alkylové skupiny (které mohou být samy substituovány, např. CF3), alkoxyskupinu (které mohou být samy substituovány, např. OCF3), halogen nebo halogenové skupiny (F, Cl, Br, I), hydroxyskupinu, nitroskupinu, oxoskupinu, CN, COOH, COH, aminoskupinu, TV-alkylaminoskupinu nebo Λζ/V-dialkylaminoskupinu (ve které mohou být alkylové skupiny substituovány), estery (-C(O)-OR, kde substituent R jsou např. skupiny vybrané z alkylové skupiny, arylové skupiny, atd., které mohou být substituovány), arylovou skupinu (nejvýhodněji fenyl, který může být substituován) a arylalkylovou skupinu (která může být substituována).
f· tf (' < ť o e e e © « © s e *> ř © « r« © © © 9 rs e © e © © © c β s- © e © e * r- © « cr e e © ©
Vhodné způsoby syntézy sloučenin obecného vzorce (I) jsou uvedeny ve schématech I-XII. Ve schématu I je uvedena konverze 3-halogen-4chlorpyrazolopyrimidinu na NI -substituovaný 3-aryl-4-aminopyrazolopyrimidin. Ve schématu II je uvedena substituce v poloze N-l 3-halogenu-4-aminopyrazolopyrimidinu a nahrazení halogenu arylovou skupinou. Ve schématu III je uvedena substituce na V-l 3aryl-4-aminopyrazolopyrimidinu. Ve schématu IV je uvedena konverze 4-hydroxypyrazolopyrimidinu na 1-substituovaný 3-brom-4-chlorpyrazolopyrimidin. Ve schématu V je uvedena tvorba pyrazolopyrimidinového jádra. Ve schématu VI je uvedena tvorba 3-aryl-4-aminopyrazolopyrimidinu. Ve schématu VII je uvedeno další zpracování V-l substituentu. P znamená vhodnou amino chránící skupinu. Ve schématu VIII je uvedena příprava arylboronátů používaných podle schématu I. Ve schématech IX a X je uvedena modifikace V-l substituentu. Ve schématu XI je uvedena funkcionalizace 3-arylové skupiny. Ve schématech I-XI může být při provádění reakcí třeba vhodného chránění nebo odstranění chránících skupin z neparticipujících funkčních skupin podle standardních postupů.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mají antiangiogenní vlastnosti. Tyto antiangiogenní vlastnosti jsou způsobeny alespoň částečně inhibici proteinových tyrosinkináz nepostradatelných pro angiogenní proces. Z tohoto důvodu mohou být tyto sloučeniny používány jako aktivní agens proti onemocněním, např. artritidě, ateroskléroze, restenóze, psoriáze, hemangiomům, angiogenezí myokardu, koronárním a cerebrálním koraterálům, ischémické limbické angiogenezí, ischémii/reperfuznímu poškození, hojení ran, peptickému vředu souvisejícím s Helicobacter, virově indukovaným angiogenním poruchám, fraktuře, syndromu Crow-Fukase (POEMS), preeklampsii, menometroragii, horečce kočičího škrábání, rubeóze, neovaskulárnímu glaukomu a retinopatiím, např. těm, které souvisejí s diabetickou retinopatii, retinopatii nedonošených nebo makulární degeneraci související s věkem. Dále mohou být některé z těchto sloučenin používány jako aktiviní agens proti pevným nádorům, maligním ascitům, von Hippel-Lindauově nemoci, hematopoetickým rakovinám a hypeproliferačním poruchám, např. tyreotropní hyperplazii (zejména Gravesova nemoc) a cystám (např. hypervaskularita ovariální trámčiny příznačná pro polycystický ovariální syndrom (Steinův-Leventhalův syndrom) a polycystické chorobě ledvin.
© ® © © e © © © © © © e « e e e • C • a • β
9 9 9 9 9 9
Dále mohou být některé z těchto sloučenin používány jako aktivní agens proti popáleninám, chronickému plicnímu onemocnění, mrtvici, polypům, anafylaxi, chronickému a alergickému zánětu, zpožděnému typu hypersenzitivity, ovariálnímu hyperstimulačnímu syndromu, cerebrálmmu edému souvisejícímu s mozkovým nádorem, výškové nemoci, traumatu nebo cerebrálmmu nebo pulmonámímu edému vyvolaného hypoxií nebo traumatem, očnímu nebo makulámímu edému, ascites, glomerulonefritidě a dalším onemocněním, ve kterých je projevem onemocnění vaskulámí hyperpermeabilita, efúze, exsudáty, proteinový extravazát nebo edém. Sloučeniny budou také účinné při ošetření poruch, ve kterých proteinová extravazace povede k ukládání fibrinu a extracelulární matrix, podpoře stromální proliferace (např. keloid, fibróza, cirhóza a syndrom karpálního tunelu). Zvýšená tvorba VEGF potenciuje zánětlivé procesy, např. recruitment a aktivaci monocytu. Sloučeniny tohoto vynálezu budou také účinné při ošetření zánětlivých poruch, např. zánětlivého střevního onemocnění (IBD) a Crohnovy nemoci.
« fe'
NHjQH, Dioxanr
120°C
Ph3P,DEADr ROH, THF e e e>
«
Schéma Π
Ph3P, OEAD
ROH, THF
Schéma m pd°, ArB(OH)2< nebo ArB(OR}2 --!—>.
DME, H2O, reflux
R (Br.ll
Pd°, AfB(OH)2 neboArB(OR)2 N DME, H2O, reflux
NaH. DMA
2) RBr nebo ROTs <· c f, € C ‘ > e r * § © f.· o f
C Γ í j e c e a c < c
Schéma V
CN
Jh,
Schéma VI
CN TMSCHNp, THF ArJkÍ
Af/nu -P-* 1 CN Reflux
I CN MeOH, PfoNEt OMe O * ' IJSOC^reflu^ *COOH 2) CH2(CN)2. ’Ργ2ΝΕΙ J Toluene
CN Ar
N-V hconh2
180°C €© © © e f· íí f, e c o c <·c· c o
Schéma VH
Schéma vnr
Ar-Br
1) n-BuLi, THF
2) B(OfPr)3,
3) HCI
Ar-B(OH)2
Ar-Br (dppf)PdCl2
QMF, KOAc, 80°C
€ 4 ť> € C?
c o fc [ í <·· e f> e e e> <
Schéma DC
^Ns.
R R
Na(OAc)3BH, HOAc cich2ch2ci
R'*% < Na(OAc)3BH, HOAc N ' cich2ch2ci
N l
\ pd° AiB(OH)2 nebo ArB(OR)2N('Z%<4.N N' · · DME. H2O, reflux
R
,N-R ,n~R
Schéma XI
R(CO, SO2)CI
Pyridin , 40°C
Ar-NK(SO2, CO)R
VEGF jsou unikátní v tom, že jsou jedinými angiogenními růstovými faktory, o kterých je známo, že přispívají k vaskulární hyperpermeabilitě a tvorbě edému. Zdá se, že vaskulární hyperpermeabilita a edém, který souvisí s expresí nebo aplikací mnoha dalších růstových faktorů, mohou být zprostředkovány tvorbou VEGF. Zánětlivé cytokiny stimulují tvorbu VEGF. Hypoxie vede ke značné nadregulaci v mnoha tkáních, a tudíž stavy zahrnující infarkt, okluzi, ischémii, anémii nebo poruchu krevního oběhu typicky vyvolávají odpovědi zprostředkované VEGF/VPF. Vaskulární hyperpermeabilita, související edém, zhoršená transendotheliální výměna a makromolekulámí extravazace, která je často doprovázena diapedézou, může mít za výsledek nadbytečné ukládání • · Φ «ι • · φ • φφφ • « · φ « · «φφφ φφφ matrice, aberantní stromální proliferaci, fibrózu atd. A tudíž hyperpermeabilita zprostředkovaná VEGF může výrazně přispívat k poruchám s těmito etiologickými rysy.
Protože implantace blastocytů, vývoj placenty a embryogeneze jsou závislé na angiogenezi, jsou určité sloučeniny podle předloženého vynálezu účinné jako kontraceptiva a prostředky proti plodnosti.
Předpokládá se, že výše uvedené poruchy jsou zprostředkovány výrazným nadbytkem aktivity proteinové tyrosinkinázy zahrnující KDR/VEGFR-2 a/nebo Fltl/VEGFR-l a/nebo TIE-2 tyrosinkinázy. Inhibici aktivity těchto tyrosinkináz je inhibována progrese uvedených poruch, protože angiogenní nebo vaskulární složka hyperpermeability onemocnění je kriticky snížena. Účinek určitých sloučenin podle předloženého vynálezu daný jejich selektivitou pro specifické tyrosinkinázy vede k minimalizaci vedlejších účinků, které by se vyskytovaly, pokud by byly používány inhibitory tyrosinkináz s menší selektivitou. Určité sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou také účinnými inhibitory FGFR, PDGFR, c-Met a IGF-l-R. Tyto receptorové kinázy mohou přímo nebo nepřímo potencovat angiogenní a hyperproliferační odpovědi při různých poruchách, a tudíž jejich inhibice může bránit progresi onemocnění.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mají inhibiční aktivitu proti proteinkinázam, což znamená, že tyto sloučeniny modulují signální transdukci proteinkináz. Sloučeniny podle předloženého vynálezu inhibují proteinkinázy z rodiny serin/threoninkináz a tyrosinkináz. Zejména tyto sloučeniny selektivně inhibují aktivitu KDR/FLK-l/VEGFR-2 tyrosinkináz. Určité sloučeniny podle předloženého vynálezu také inhibují aktivitu dalších tyrosinkináz, např. Flt-l/VEGFR-1, Flt-4, Tie-1, Tie-2, FGFR, PDGFR, IGF-IR, c-Met, Src-podrodinu kináz, např. Lek, hek, fgr, Src, fyn, yes, etc. Dále některé sloučeniny podle předloženého vynálezu signifikantně inhibují serin/threoninkinázy, např. PKC, MAP kinázy, erk, CDKs, Plk-1 nebo Raf-1, které hrají významnou roli při buněčné proliferaci a progresi buněčného cyklu. Účinnost a specifita generických sloučenin tohoto vynálezu zejména vůči proteinkinázam může být často změněna a optimalizována obměnami v charakteru, počtu a uspořádání substituentů (tzn. Ri, R2, R3, A a kruh 1) a konformačními restrikcemi. Navíc metabolity určitých sloučenin mohou mít také signifikantní inhibiční aktivitu proti proteinkinázam.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu, pokud jsou podávány recipientům při potřebě takové sloučeniny, inhibují vaskulární hyperpermeabilitu a tvorbu edému u těchto recipientů. Předpokládá se, že tyto sloučeniny působí přes inhibici aktivity KDR « * tyrosinkinázy, která se zúčastňuje procesu vaskulámí hyperpermeability a tvorby edému. KDR tyrosinkináza může být také označována jako FLK-1 tyrosinkináza, NYK tyrosinkináza nebo VEGFR-2 tyrosinkináza. KDR tyrosinkináza je aktivována navázáním růstového faktoru vaskulámích endotheliálních buněk (VEGFR)nebo další aktivační ligand (např. VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E nebo HIV Tat protein) váže na KDR receptorovou tyrosinkinázu, která se nachází na povrchu vaskulámích endotheliálních buněk. Po aktivaci KDR tyrosinkinázy nastane hyperpermeabilita krevních cév a tekutina putuje z krevního řečiště přes stěny krevních cév do intersticiálních prostorů, a tím vytváří oblast edému. Tuto formu odpovědi také často doprovází diapedéze. Podobně, nadbytek vaskulámí hyperpermeability může narušit normální molekulární výměnu přes endothel v kritických tkáních a orgánech (např. plíce a ledviny), čímž způsobuje makromolekulám! extravazát a depozici. Po této akutní odpovědi na KDR stimulaci, o které se předpokládá, že podporuje následující angiogenní proces, prolongovaná stimulace KDR tyrosinkinázy vede k proliferací a chemotaxi vaskulámích endotheliálních buněk a tvorbě nových cév. Inhibici aktivity KDR tyrosinkinázy provedenou buď blokováním produkce aktivovaného ligandu, blokováním vazby aktivovaného ligandu na receptor KDR tyrosinkinázy, zabráněním dimerizace a transfosforylace receptoru, inhibici enzymové aktivity KDR tyrosinkinázy (inhibici fosfory lační funkce enzymu) anebo některým jiným mechanismem, který přeruší danou downstreamovou signální dráhu (D. Mukhopedhyay et al., Cancer Res. 55:12781284 (1998) a související odkazy), může být inhibována a minimalizována hyperpermeabilita, jakož i s tím související extravazace, následná tvorba edému a depozice matrix a angiogenní odpovědi.
Jedna skupina výhodných sloučenin podle předloženého vynálezu má schopnost inhibovat aktivitu KDR tyrosinkinázy bez signifikantní inhibice aktivity Flt-1 tyrosinkinázy (Flt-1 tyrosinkináza je také označována jako VEGFR-1 tyrosinkináza). Jak KDR tyrosinkináza, tak i Flt-1 tyrosinkináza jsou aktivovány vazbou VEGF na receptory KDR tyrosinkinázy, respektive na receptory Flt-1 tyrosinkinázy. Určité výhodné sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou jedinečné vtom smyslu, že inhibují aktivitu jedné VEGF-receptorové tyrosinkinázy (KDR), která je aktivována aktivovanými ligandy, ale neinhibují další receptorové tyrosinkinázy, např. Flt-1, které jsou také aktivovány určitými aktivovanými ligandy. Proto jsou výhodné sloučeniny podle předloženého vynálezu selektivními inhibitory aktivity tyrosinkinázy.
• ·' • · φφφφ
V rámci jednoho provedení poskytuje předložený vynález způsob ošetření stavů u pacienta, které jsou zprostředkovány proteinkinázou, který zahrnuje podání terapeuticky nebo profylakticky účinného množství jedné nebo více sloučenin obecného vzorce (I) pacientovi.
Termín „stav zprostředkovaný proteinkinázou“ nebo „stav zprostředkovaný aktivitou proteinkinázy“ zahrnuje nemoc, např. onemocnění nebo další nežádoucí fyzické stavy, ve kterých geneze nebo progrese závisí alespoň částečně na aktivitě alespoň jedné proteinkinázy. Proteinkináza může být např. proteinová tyrosinkináza nebo proteinová serin/threoninkináza.
Pacient, který má být ošetřován, může být jakýkoliv zvířecí subjekt, výhodně savec, např. zdomácnělá či hospodářská zvířata. Výhodně je pacientem lidský subjekt.
Termín „terapeuticky účinné množství“ je množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo kombinace dvou nebo více takových sloučenin, které inhibuje zcela nebo částečně progresi stavu nebo zlepšuje alespoň částečně jeden nebo více symptomů stavu. Terapeuticky účinné množství může být také množství, které je profylakticky účinné. Množství, které je terapeuticky aktivní bude záviset na pacientově váze, pohlaví, nemoci, která má být ošetřována, závažnosti stavu a požadovaném výsledku. Pro jednotlivé pacienty bude terapeuticky účinné množství stanoveno standardním způsobem.
Způsob podle předloženého vynálezu je účinný při ošetření stavů zprostředkovaných proteinkinázou, např. jakéhokoliv výše uvedeného stavu. V rámci jednoho provedení je stav zprostředkovaný proteinkinázou charakterizován nežádoucí angiogenezi, edémem nebo stromální depozicí. Například se může jednat o jeden nebo více vředů, např. vředy způsobené bakteriálními nebo plísňovými infekcemi, Moorenovy vředy a ulcerativní kolitidu. Onemocnění mohou být také způsobena mikrobiální infekcí, např. Lymskou nemocí, sepsí, septickým šokem nebo infekcí Herpes simplex, Herpes Zoster, virem způsobujícím syndrom získaného selhání imunity, prvokem, toxoplazmózou nebo Parapoxvirem; angiogenními poruchami, např. Hippel-Lindauovou nemocí, polycystickou nemocí ledvin, pemfigoidem, Pagetovou nemocí a psoriázou; reprodukčním onemocněním, jako je endometrióza, syndrom ovariální hyperstimulace, preeklampsie nebo menometroragie; fíbrotickým a edémickým stavem, např. sarkoidóza, fibróza, cirhóza, tyreoiditida, systémový hyperviskózní syndrom, Oslerova-Renduova-Weberova nemoc, chronická okluzní onemocnění plic, astma a edém po traumatu, popáleniny, ozáření, mrtvice, hypoxií nebo ischémií; nebo zánětlivým/imunologickým stavem, např. systémový r f o e ft © ťí e' f! { e t> a r- c a-.
c ě c o <’ í' c Γ ft ® © © <' f ť' © © fc t- (' v ft c t. ft f ft o V © ft ft lupus, chronický zánět, glomerulonefritida, synovitida, zánětlivé onemocnění střev, Crohnova nemoc, revmatoidní artritida, osteoartritida, roztroušená skleróza a rejekce štěpu. Příslušné stavy zprostředkované proteinkinázou také zahrnují srpkovitou anémii, osteoporózu, osteopetrózu, hyperkalcemii indukovanou nádorem a kostní metastází. Další stavy zprostředkované proteinkinázou, které mohou být ošetřeny způsobem podle předloženého vynálezu, zahrnují onemocnění očí, např. okulámí nebo makulámí edém, okulární neovaskulární onemocnění, skleritida, radiální keratotomie, uveitida, vitritida, myopie, fyziologická exkavace papily, chronické odchlípení sítnice, komplikace po ošetření laserem, konjunktivitida, Stargardtova nemoc a Ealesova nemoc, kromě retinopatie a makulámí degenerace.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou také účinné při ošetření kardiovaskulárních stavů, např. aterosklerózy, restenózy, vaskulární okluze a karotického obstruktivního onemocnění.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou také účinné při ošetření indikací souvisejících s rakovinou, např. pevné nádory, sarkom (zejména Ewingův sarkom a osteosarkom), retinoblastom, rabdomyosarkom, neuroblastom, hematopoézní zhoubná bujení, včetně leukémie a lymfomu, pleurální nebo perikardiální efuze indukované nádorem a maligní ascites.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou také účinné při ošetření syndromu Crow-Fukase (POEMS) a diabetických stavů, např. glaukomu, diabetické retinopatie a mikroangiopatie.
Rodiny Src, Tec, Jak, Map, Csk, NFkB i Syk kináz hrají stěžejní role při regulaci imunitních funkcí. Rodina Src běžně zahrnuje Fyn, Lek, Fgr, Fes, Lyn, Src, Yrk, Fyk, Yes, Hek a Blk. Rodina Syk obecně zahrnuje pouze Zap a Syk. Rodina Tec zahrnuje Tec, Btk, Rlk a Itk. Rodina Janus kináz se účastní transdukce růstového faktoru a prozánětlivých signálů cytokinů za účasti mnoha receptorů. Ačkoliv role BTK a ITK, členů rodiny Tec kináz, jsou z hlediska imunobiologie menší, jejich modulace inhibitorem může mít terapeutický benefit. Rodina Csk v současné době zahrnuje Csk a Chk. Kinázy RIP, IRAK-1, IRAK-2, NIK, p38 MAP, Jnk, IKK-1 a IKK-2 se podílejí na drahách signální transdukce klíčových prozánětlivých cytokinů TNF a IL-1. Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou, díky schopnosti účinně inhibovat jednu nebo více z těchto kináz, působit jako imunomodulační agens, které jsou účinné ke stabilizaci aloštěpu a ošetření autoimunních chorob. Díky své schopnosti regulovat migraci nebo aktivaci T-buněk, B-buněk, žírných * β»
« «: ts: fí & ρ.
t- © e ť r c· e e f buněk, monocytů a neutrofilů, by mohly být tyto sloučeniny používány k ošetření těchto autoimunních chorob a sepse. Prevence rejekce transplantátu, ať už reakce hostitele proti štěpu u pevných orgánů nebo reakce štěpu proti hostiteli u kostní dřeně, jsou limitovány toxicitou běžně dostupných imunosupresiv, a tudíž účinné léčivo se zlepšeným terapeutickým em by bylo velmi prospěšné. Experimenty zaměřené na geny ukázaly na významnou roli Src v biologii osteoklastů, což jsou buňky odpovědné za resorpci kosti. Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou být díky schopnosti regulace Src také účinné při ošetření osteoporózy, osteopetrózy, Pagetova onemocnění, hyperkalcemie indukované nádorem a při ošetření kostních metastáz
Ukázalo se, že mnoho proteinkináz funguje jako protoonkogeny. Přerušení chromozómu (v bodě přerušení ltk kinázy na chromozómu 5), translokace jako v případě Abl genu s BCR (Philadelphia chromosome), vypuštění v případech jako třeba c-Kit nebo EGFR, nebo mutace (např. Met) má za následek vytvoření dysregulačních proteinů, které zapříčiňují přeměnu protoonkogenních produktů na onkogenní produkty. V případě dalších nádorů je onkogeneze řízena autokrinními nebo parakrinními interakcemi mezi ligandem a receptorem růstového faktoru. Členové rodiny src kináz se typicky účastní downstreamové signální transdukce, čímž potenciují onkogenezí a samotné se mohou stát onkogenními díky nadměrné expresi nebo mutaci. Inhibici aktivity proteinkináz těchto proteinů mohou být ošetřeny příslušné nemoci. Vaskulární restenóza může zahrnovat proces FGF a/nebo proliferaci hladkého svalstva propagovanou PDGF a proliferaci endotheliálních buněk. Ligandová stimulace in vivo FGFR, PDGFR, IGF1-R a c-Met je proangiogenní a potenciuje poruchy závislé na angiogenezi. Inhibice aktivity buď jednotlivých kináz FGFr, PDGFr, c-Met nebo IGF1-R nebo v kombinaci může být účinnou strategií inhibice tohoto fenoménu. Tudíž sloučeniny obecného vzorce (I), které inhibují aktivitu kinázy normálních nebo aberantních c-kit, c-met, c-fms, členů rodiny src, EGFr, erbB2, erbB4, BCR-Abl, PDGFr, FGFr, IGF1-R a dalších receptorových nebo cytosolových tyrosinkináz, mohou hrát důležitou roli při ošetření benigních a neoplastických proliferačních onemocnění.
V mnoha patologických stavech (např. pevné primární nádory a metastáze, Kaposiho sarkom, revmatická artritida, slepota způsobená nepřiměřenou oční neovaskularizací, psoriáza a ateroskleróza) je progrese onemocnění po perzistentní angiogenezi kontingentní. Polypeptidové růstové faktory často produkované nemocnou tkání nebo doprovodnými zánětlivými buňkami a jejich odpovídající specifické receptorové tyrosinkinázy endoteliálních buněk (např. KDR/VEGFR-2, Fit-1/VEGFR-1, e β e
ť> o β e o s> * » » β e * se θ
«·
Φ ©o * € * *
Β β * β ® β e » β « · *
Flt-4, Tie-2/Tek a Tie) jsou důležité pro stimulaci endoteliálního buněčného růstu, migrace, uspořádání, diferenciace a sestavení nových funkčních vaskulátorů. Předpokládá se, že v důsledku aktivity „faktoru vaskulární permeability“ VEGF při zprostředkování vaskulární hyperpermeability má VEGF-stimulace VEGFR kinázy důležitou roli při tvorbě nádorových ascites, cerebrálního a pulmonámího edému, pleurální a perikardiální efuze, hypersensitivmch reakcí opožděného typu, tkáňového edému a orgánové dysfunkce po traumatu, popáleninách, ischémii, diabetických komplikací, endometrióze, syndromu respirační tísně dospělých (ARDS), hypotenzi a hyperpermeability související spost kardiopulmonámím bypassem a očním edémem majícím za následek glaukom nebo oslepnutí v důsledku nepřiměřené neovaskularizace. Kromě VEGF, také v poslední době identifikované VEGF-C a VEGF-D a virově kódované VEGF-E nebo HIV-Tat protein mohou způsobovat vaskulární hyperpermeabilní odpověď zprostředkovanou stimulací VEGFR kinázy. KDR/VEGFR-2 a/nebo Tie-2 je exprimován také v selektivní populaci buněk hematopoietického kmenu. Některé z členů této populace jsou v přírodě multifunkční a mohou být stimulovány růstovými faktory k rozlišení endotheliálních buněk a participaci při vaskulogenetických angiogenních procesech. Z tohoto důvodu byly nazvány endotheliální progenitomí buňky (EPC)(7 Clin. Investig. 103: 1231-1236 (1999)). V některých progenitorech může Tie-2 být důležitý při jejich recruitmentu, adhezi, regulaci a diferenciaci (Blood, 4317-4326 (1997)). Určité sloučeniny reprezentované obecným vzorcem (I) schopné blokovat kinázovou aktivitu specifických kináz endotheliálních buněk by proto mohly inhibovat progresi onemocnění zahrnující tyto stavy.
Má se za to, že vaskulární destabilizace antagonistického ligandu Tie-2 (Ang2) indukuje nestabilní „plastický“ stav v endotheliu. Za vysokých hladin VEGF může vést k silným angiogenním odpovědím, nicméně za absence VEGF nebo stimulu souvisejícího s VEGF může docházet k zřetelné regresi cév a endotheliální apoptóze (Genes and Devel. 13: 1055-1066 (1999)). Analogicky inhibitory Tie-2 kinázy mohou být proangiogenní nebo antiangiogenní v přítomnosti, respektive v absenci stimulu souvisejícího sVEGF. Tudíž inhibitory Tie-2 mohou být používány s příslušným proangiogenním stimulem, např. VEGF, k podpoře terapeutické angiogeneze při takových stavech jako např. léčba zranění, infarkt nebo ischémie.
Proto mohou být používány při ošetření stavů zprostředkovaných proteinkinázou, např. při výše uvedených benigních a neoplastických proliferačních onemocněních a poruch imunitního systému, sloučeniny obecného vzorce (I) nebo jejich soli nebo ' ’ f <·- f ft.
ř © ·7· ť· t {) p · β f. ťi *' © * ť C- ř t- €;
r ; <: ft * e © f f. t {-· p e e e62 farmaceutické přípravky obsahující jejich terapeuticky účinné množství. Tato onemocnění zahrnují autoimunní choroby, např. revmatickou artritidu, tyreoiditidu, diabetes l.typu, roztroušenou sklerózu, sarkoidózu, zánětlivé střevní onemocnění, Crohnovu chorobu, myastenii gravis a systémový lupus erythematosus; psoriázu, rejekci transplantovaného orgánu (např. rejekci ledvin, štěp proti hostiteli), benigní a neoplastická proliferační onemocnění, lidské rakoviny, např. rakoviny plic, prsu, žaludku, měchýře, tlustého střeva, pankreatu, vaječníků, prostaty a konečníku a hematopoietická zhoubná bujení (leukémie a lymfom) a onemocnění zahrnující nepřiměřenou vaskularizaci, např. diabetickou retinopatii, retinopatii nedonošených, choroidální neovaskularizaci v důsledku degeneraci makuly související s věkem a infantilní hemangiomy u lidských subjektů. Navíc tyto inhibitory mohou být účinné při ošetření poruch zahrnujících edém zprostředkovaný VEGF, ascites, efúze a exsudáty, včetně např. makulámího edému, cerebrálního edému, akutního plicního poranění a syndromu respirační tísně dospělých (ARDS).
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být také účinné při profylaxi výše uvedených onemocnění.
Předpokládá se, že výše uvedené poruchy jsou významně zprostředkovány aktivitou proteinových tyrosinkináz zahrnujících VEGF receptory (např. KDR, Flt-1 a/nebo Tie-2). Inhibici aktivity těchto receptorových tyrosinkináz je inhibována progrese uvedených poruch, protože angiogenní komponenta onemocnění je silně snížena. Účinek sloučenin podle předloženého vynálezu díky jejich selektivitě vůči specifickým tyrosinkinázám vede k minimalizaci vedlejších účinků, které by se mohly vyskytovat, pokud by byly používány méně selektivní inhibitory tyrosinkináz.
V dalším aspektu poskytuje předložený vynález sloučeniny obecného vzorce (I), které jsou definovány výše, pro použití jako léčivých přípravků, zejména jako inhibitorů aktivity proteinkináz, např. aktivity proteinkinázy, serinkinázy a threoninkinázy. V ještě dalším aspektu poskytuje předložený vynález použití výše definovaných sloučenin obecného vzorce (I) při výrobě léčivého přípravku určeného k inhibici aktivity proteinkinázy.
V předloženém vynálezu jsou používány následující termíny:
Termín „fyziologicky přijatelné soli“ se vztahuje na ty soli, které si ponechávají biologickou účinnost a vlastnosti volných bází, a které jsou připraveny reakcí anorganických kyselin, např. kyseliny chlorovodíkové, bromovodíkové, sirové, dusičné, nebo organických kyselin, např. sulfonové, karboxylové nebo fosforečné, e · re ••.•«On « « 0 «’-· ~ methansulfonové, ethansulfonové, p-toluensulfonové, salicylové, mléčné, vinné kyseliny, atd.
Farmaceutické formulace
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být podávány lidským nebo zvířecím subjektům jako takové nebo ve farmaceutických přípravcích, ve kterých jsou smíchány s vhodnými nosiči nebo excipienty (tem) v dávkách, které jsou dostačující k ošetření nebo zlepšení vaskulární hyperpermeability, edému a souvisejících poruch. Směsi těchto sloučenin mohou být také podávány pacientům jako jednoduchá směs nebo ve vhodných připravených farmaceutických přípravcích. Terapeuticky účinná dávka dále označuje množství sloučeniny nebo sloučenin, které je dostačující k prevenci nebo atenuaci nepřiměřené neovaskularizace, progrese hyperproliferativních poruch, edému, hyperpermeability související s VEGF a/nebo hypotenze spojené sVEGF. Techniky přípravy a podání sloučenin mohou být nalezeny v „Remingtonů Pharmaceutical Sciences“, Mack Publishing Co., Easton, PA, poslední vydání.
Způsoby podání
Vhodné způsoby podání mohou být například perorální, ve formě očních kapek, rektální, transmukózní, místní nebo intestinální; parenterální dodání zahrnující intramuskulámí a subkutánní podání, intramedulární injekce, jakož i intratekální, přímé intraventrikulární, intravenózní, intraperitoneální, intranazální nebo intraokulární injekce.
Nebo lze podávat sloučeninu spíše místním než systémovým způsobem, např. injekcí sloučeniny přímo do místa edému, často v depotní nebo trvale uvolňující se formulaci.
Dále lze léčivo podávat jako cílově specifické podání, např. v lipozómu potaženém endotheliální, buněčně-specifickou protilátkou.
Přípravky/F ormulace
Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu mohou být vyráběny standardním způsobem, např. standardními mícháním, rozpuštěním, granulací, přípravou dražé, rozmělňováním, emulgací, enkapsulací, uzavřením nebo lyofilizací.
f f
4.
*
Farmaceutické přípravky pro použití podle předloženého vynálezu tak mohou být připraveny standardním způsobem za použití jednoho nebo více fyziologicky přijatelných nosičů obsahujících excipienty a pomocné látky, které usnadňují zpracování aktivních sloučenin do preparátů používaných farmaceutickým způsobem. Vlastní příprava je závislá na vybraném způsobu podání.
Pro injekce mohou být agens podle předloženého vynálezu připraveny ve vodných roztocích, výhodně ve fyziologicky kompatibilních pufřech, např. Hanksův roztok, Ringerův roztok nebo pufru na bázi fyziologického roztoku. Pro transmukózní podání jsou ve formulaci používány takové penetrátory, které jsou vhodné pro překonání dané bariéry. Tyto penetrátory jsou obecně známy.
Pro perorální podání mohou být sloučeniny snadno připraveny spojením aktivních sloučenin se standardními farmaceuticky přijatelnými nosiči. Tyto nosiče umožňují připravit sloučeniny podle předloženého vynálezu ve formě tablet, pilulí, dražé, kapslí, roztoků, gelů, sirupů, injekčních směsí, suspenzí, atd., pro perorální požití léku pacientem, který má být ošetřován. Farmaceutické preparáty pro perorální použití mohou být připraveny spojením aktivní sloučeniny s pevným excipientem, případně rozemletím výsledné směsi, a po přidám vhodných pomocných látek, pokud je třeba, zpracováním směsi granulí, čímž lze získat tablety nebo dražé. Vhodné excipienty jsou zejména fillery, např. cukry, včetně laktosy, sacharosy, mannitolu nebo sorbitolu; celulosové přípravky, např. kukuřičný škrob, pšeničný škrob, rýžový škrob, bramborový škrob, želatina, tragant, methyl-celulosa, hydroxypropylmethyl-celulosa, sodná sůl karboxymethylcelulosy a/nebo polyvinylpyrrolidon (PVP). Pokud je třeba, mohou být přidány agens zajišťující rozpad tablety po požití, např. zesítěný polyvinylpyrrolidon, agar nebo kyselina alginová nebo jejich soli, např. alginát sodný.
Jádra dražé jsou opatřeny vhodnými povrchovými vrstvami. Pro tento účel mohou být používány koncentrované roztoky cukrů, které mohou případně obsahovat arabskou gumu, talek, polyvinylpyrrolidon, karbopolový gel, polyethylenglykol a/nebo oxid titaničitý, roztoky šelaku a vhodná organická rozpouštědla nebo směsi rozpouštědel. Organická barviva nebo pigmenty mohou být přidány do tablet nebo potahových vrstev dražé k identifikaci nebo charakterizaci rozdílných kombinací dávek aktivní sloučeniny.
Farmaceutické preparáty, které mohou být používány perorálně zahrnují kapsle vyrobené ze želatiny, jakož i měkké, uzavřené kapsle vyrobené ze želatiny a změkčovadla, např. glycerol nebo sorbitol. Kapsle mohou obsahovat aktivní složky v příměsi s fillery, « «, ® e ί·, ' © c r> ( e- « * e v $ < t € c c « ® * e e c e e © © © ® * * f p ©«{·£· ©»e « e e e e e ♦ e » <’ * · · * * * · např. laktosou, pojivý, např. škroby, a/nebo lubrikanty, např. talek nebo stearát hořečnatý, a případně stabilizátory. V měkkých kapslích mohou být aktivní sloučeniny rozpuštěny nebo suspendovány ve vhodných roztocích, např. mastných olejích, minerálním oleji nebo tekutých polyethylenglykolech. Navíc mohou být přidávány stabilizátory. Veškeré formulace pro perorální podání by měly být v dávkách vhodných prot takový způsob podání.
Pro bukkální podání mohou být přípravky ve formě tablet nebo pastilek připravených standardním způsobem.
Pro podání inhalací jsou sloučeniny podle předloženého vynálezu standardně dodávány ve formě aerosolového spreje v rozprašovači nebo v balení se stlačeným obsahem s vhodným propelantem, např. dichlordifluormethanem, trichlorfluormethanem, dichlortetrafluorethanem, oxidem uhličitým nebo jinými vhodnými plyny. V případě stlačeného aerosolu může být pro dávkování využit „ventil“, který umožní uvolnění přesného množství látky. Kapsle a catridge, např. želatina, pro použití vinhalačním přístroji nebo insuflatoru mohou být připraveny způsobem, při kterém nabývá hodnot spojena prášková směs sloučeniny a vhodné práškové báze, např. laktosy nebo škrobu.
Sloučeniny mohou být připraveny pro parenterální podání injekcí, např. injekcí bolusu nebo kontinuální infuzí. Formulace pro injekce mohou být v jednotkových dávkovačích formách, např. v ampulích nebo v obalech pro více dávek, s přidanou konzervační látkou. Přípravky mohou být také ve formách suspenze, roztoků nebo emulzí v olejových nebo vodných nosičích a mohou obsahovat pomocné agens, např. suspendační, stabilizační a/nebo dispergační prostředky.
Farmaceutické formulace pro parenterální podání zahrnují vodné roztoky aktivních sloučenin ve formě, která je rozpustná ve vodě. Dále mohou být suspenze aktivních sloučenin připraveny jako příslušné olejovité injekční supenze. Vhodná lipofilní rozpouštědla nebo přenašeče zahrnují mastné oleje, např. sezamový olej, nebo estery syntetických mastných kyselin, např. ethyl-oleát nebo triglyceridy, nebo lipozómy.
Vodné injekční suspenze mohou obsahovat látky, které zvyšují viskozitu suspenze, např. sodná sůl karboxymethyl-celulosy, sorbitol nebo dextran. Případně suspenze mohou také obsahovat vhodné stabilizátory nebo agens, které zvyšují rozpustnost sloučenin, čímž umožňují připravit vysoce koncentrované roztoky.
Nebo může být aktivní složka ve formě prášku určeného ke spojení s vhodným nosičem, např. sterilní voda bez pyrogenu.
¢.-66
Sloučeniny mohou být také připraveny jako rektální přípravky, např. čípky nebo retenční klyzma, obsahující standardní čípkové báze, např. kakaové máslo nebo jiné glyceridy.
Kromě výše uvedených formulací, mohou být také připraveny sloučeniny jako depotní preparát. Tyto formulace s dlouhou dobou účinku mohou být podávány implantací (např. subkutánní nebo intramuskulární podání nebo intramuskulární injekcí). Tímto způsobem mohou být připraveny sloučeniny s vhodnými polymemími nebo hydrofóbními materiály (např. jako emulze v přijatelném oleji)nebo ionexy nebo jako těžko rozpustné deriváty, např. těžko rozpustné soli.
Příklad farmaceutického nosiče pro hydrofobní sloučeniny podle předloženého vynálezu je systém spolurozpouštědel obsahující benzylalkohol, nepolární surfaktant neboganický polymer mísitelný s vodou a vodná fáze. Systém spolurozpouštědel může být systém spolurozpouštědel VPD. VPD je roztok 3 obj.% benzylalkoholu, 8 obj.% nepolárního surfaktantového polysorbátu 80 a 65 obj.% polyethylenglykolu 300 doplněný na konečný objem absolutním ethanolem. Systém spolurozpouštědel VPD (VPD:5W) se sestává z VPD zředěného 1:1 5% dextrosou ve vodném roztoku. Tento systém spolurozpouštědel dobře rozpouští hydrofobní sloučeniny a sám má po systémovém podání nízkou toxicitu. Přirozeně mohou být podíly systému spolurozpouštědel značně měněny, nicméně tak, aby se zachovaly charakteristické rysy jeho rozpustnosti a toxicity. Jednotlivé složky systému spolurozpouštědel mohou být měněny: např. místo polysorbátu 80 mohou být používány další nepolární surfaktanty o nízké toxicitě; velikost částic polyethylenglykolu může být různá; polyethylenglykol mohou nahradit další biokompatibilní polymery, např. polyvinylpyrrolidon; a další cukry nebo polysacharidy mohou nahradit dextrosu.
Nebo může být použit jiný systém dodání pro hydrofobní farmaceutické sloučeniny. Pro hydrofobní léčiva jsou standardními příklady přenašečů a nosičů využívaných při tomto způsobu lipozómy a emulze. Mohou být používána určitá organická rozpouštědla, např. dimethylsulfoxid, nicméně obvykle na úkor větší toxicity. Navíc sloučeniny mohou být dodávány systémem postupného uvolňování, např. semipermeabilními matricemi pevných hydrofóbních polymerů obsahujících terapeutické agens. V této technice jsou zavedeny různé látky s postupným uvolňováním. Kapsle s postupným uvolňováním mohou v závislosti na svém chemickém charakteru uvolňovat sloučeniny po dobu několika týdnů až 100 dnů. V závislosti na chemickém charakteru a e
e ee fc © fl t ©
f.fl l:C «» fy <. 0 © * » © © c o es e- © © r e> e « fc fe v r p fc « <? e < ©· ®f> biologické stabilitě terapeutického reagens mohou být používány další strategie stabilizace proteinu.
Farmaceutické přípravky také mohou obsahovat vhodnou pevnou látku nebo nosiče nebo excipienty gelové fáze. Příklady takových nosičů nebo excipientů zahrnují, ale není to nikterak limitováno, uhličitan vápenatý, fosforečnan vápenatý, různé cukry, škroby, deriváty celulosy, želatina a polymery, např. polyethylenglykoly.
Velký počet sloučenin podle předloženého vynálezu může být ve formě soli s farmaceuticky kompatibilními protiiony. Farmaceuticky kompatibilní soli mohou být připraveny s mnoha kyselinami včetně, ale není až nikterak limitováno, kyseliny chlorovodíkové, sírové, octové, mléčné, tartarové, jablečné, sukcinové, atd. Soli mají tendenci být mnohem rozpustnější ve vodných nebo jiných protonizováných rozpouštědlech než jejich odpovídající volné báze.
Účinná dávka
Farmaceutické přípravky vhodné pro použití v předloženém vynálezu zahrnují přípravky, ve kterých jsou aktivní složky k dosažení požadovného účinku obsaženy v účinném množství. Zejména terapeuticky účinné množství znamená množství, které je dostatečné k zabránění nebo ke zlepšení stávajících symptomů u subjektu, který je ošetřován. Stanovení účinných množství se provádí standardním způsobem.
Pro jakoukoliv sloučeninu používanou ve způsobu podle předloženého vynálezu může být terapeuticky účinná dávka nejprve stanovena podle testů na buněčných kulturách. Například dávka může být testována na buněčných a zvířecích modelech k získání oběhové koncentrace, která zahrnuje IC50 stanovenou podle testů na buněčných kulturách (tzn. koncentrace testované sloučeniny, která je potřebná k dosažení 50% inhibice aktivity dané proteinkinázy). V některých přípradech je vhodné stanovit hodnotu IC50 v přítomnosti 3 až 5% sérumalbuminu, poněvadž toto stanovení aproximuje vazebné efekty plazmových proteinů na sloučeninu. Tyto informace mohou být používány u lidských subjektů k přesnějšímu stanovení účinných dávek. Nejvýhodnější sloučeniny pro systémové podání účinně inhibují signalizaci proteinkináz v intaktní ch buňkách v hladinách, které jsou bezpečně dosažitelné v plazmě.
Terapeuticky účinná dávka znamená takové množství sloučeniny, které má za následek zlepšení symptomů u pacienta. Toxicita a terapeutická účinnost takových sloučenin může být stanovena standardními farmaceutickými způsoby na buněčných «e ©
« Φ © * ř· ¢) « ©>
•'i reo * «.
© ©· c »· e © e· o &
c- & © < ' «· © © © © t:
»· * & ¢e p.
©> ®l ,
C «<
f c f © · · fc kulturách nebo experimentálních zvířatech, např. stanovení maximální tolerované dávky (MTD) a ED50 (koncentrace látky, která vyvolá 50% maximálního účinku dávky). Dávkový poměr mezi toxickými a terapeutickými účinky je určen terapeutickým indexem a může být vyjádřen jako poměr mezi MTD a ED50. Sloučeniny, které mají vysoké terapeutické indexy, jsou výhodné. Data získaná z testů na buněčných kulturách a studie na zvířatech mohou být používány ke stanovení rozpětí dávky určené pro lidské subjekty. Dávka takové sloučeniny leží výhodně v rozmezí koncentrací v systémové cirkulaci, která zahrnují ED50 s malou nebo žádnou toxicitou. Množství dávky může být v tomto rozmezí různé v závislosti na používané dávkové formě a způsobu podání. Přesná formulace, způsob podání a dávka mohou být vybrány příslušným doktorem v závislosti na stavu pacienta (viz Fingl et al., 1975, v „Pharmacological Basis of Therapeutics“, Ch. 1 pl). V krizi může být k dosažení rychlé odpovědi použito podání akutního bolusu nebo infúze k dosažení MTD.
K dosažení plazmové hladiny aktivního podílu, které je dostatečné k udržení účinků modulujících kinázu nebo minimální účinné koncentrace (MEC) může být množství dávky a interval individuálně upraven. Hodnota MEC bude pro každou sloučeninu jiná, nicméně může být stanovena podle in vitro údajů; např. koncentrace potřebná k dosažení 50-90% inhibice proteinkinázy pomocí testů popsaných v předloženém vynálezu. Dávka potřebná k dosažení MEC bude záviset na jednotlivých charakteristickách a způsobu podání. Nicméně ke stanovení plazmových koncentrací může být používána HPLC nebo biotesty.
Intervaly mezi dávkami mohou být také stanoveny pomocí hodnoty MEC. Sloučeniny by měly být podávány podle režimu, kterým se udržují plazmové hladiny nad hodnotou MEC v průběhu 10-90% doby, výhodně mezi 30-90% a nejvýhodněji 50-90%, dokud není dosaženo požadovaného zlepšení daných symptomů. V případech místního podání nebo selektivního vychytávání, nemusí účinné místní koncentrace léčiva odpovídat plazmové koncentraci.
Množství podávaného přípravku bude záviset na ošetřovaném subjektu, jeho váze, závažnosti bolesti, způsobu podání a posouzení stanoveného lékaře.
Technika balení
Přípravky, pokud je třeba, mohou být ve formě balení nebo zásobníku, který může obsahovat jednu nebo více jednotkových dávkovačích forem obsahujících aktivní složku.
e e e « €· O to to £ i-· « « <·. e e c r e » e «eoeer© ©* © * «« ***·
Balení může např. obsahovat kovovou nebo plastickou fólii, např. měkké průhledné balení. Balení nebo zásobník může být distribuován společně s návodem k podání. Také mohou být připraveny přípravky obsahující sloučeninu podle předloženého vynálezu připravené v kompatibilním farmaceutickém nosiči, které jsou vloženy do příslušného obalu a označeny pro ošetření příslušného onemocnění.
V některých formulacích může být výhodné používat sloučeniny podle předloženého vynálezu ve formě velmi malých částic získaných např. mletím využívajícím energii tekutiny (fluid energy milling).
Použití sloučenin podle předloženého vynálezu při výrobě farmaceutických přípravků je uvedeno v následujícím popisu. V této popisné části znamená termín „aktivní sloučenina“ jakoukoliv sloučeninu podle předloženého vynálezu, ale zejména jakoukoliv sloučeninu, jenž je finálním produktem jednoho z výše uvedených příkladů.
a) Kapsle
Při přípravě kapslí může být 10 hmotnostních podílů aktivní sloučeniny a 240 hmotnostních podílu laktosy deagregováno a smícháno. Směs může být plněna do tuhých želatinových kapslí, přičemž každá kapsle obsahuje jednotkovou dávku nebo podíl jednotkové dávky aktivní sloučeniny.
b) Tablety
Tablety mohou být připraveny z následujících složek.
Hmotnostní podíly
Aktivní sloučenina 10
Laktosa 190
Kukuřičný škrob 22
Polyvinylpyrrolidon 10
Stearát hořečnatý 3
Aktivní sloučenina, laktosa a část škrobu mohou být deagregovány, smíchány a výsledná směs může být granulována s roztokem polyvinylpyrrolidonu v ethanolu. Suchý granulát může být smíchán se stearátem hořečnatým a zbytkem škrobu. Směs pak může být lisována v tabletovacím stroji, přičemž každá tableta obsahuje jednotkovou dávku nebo část jednotkové dávky aktivní sloučeniny.
Λ ©'· f :e i: f~<? t ti c-1 t t. e < r
c) Tablety s enterosolventním potahy
Tablety mohou být připraveny způsobem popsavým výše v bodě (b). Tablety pak mohou být enterosolventně potaženy standardním způsobem roztokem 20% acetát-ftalátu celulosy a 3% diethylftalátu ve směsi ethanolu a vody (1:1).
d) Čípky
Pří přípravě čípků může být 100 hmotnostních dílů aktivní sloučeniny vloženo do 1300 hmotnostními dílů čípkové matrice na bázi triglyceridů a vzniklá směs se může dávkovat do čípků, přičemž každý obsahuje terapeuticky účinné množství aktivní složky.
V přípravcích podle předloženého vynálezu může být, pokud je třeba, aktivní sloučenina smíchána s dalšími kompatibilními, farmakologicky aktivními složkami. Například sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být podávány v kombinaci s jedním nebo více dalšími farmaceutickými agens, které inhibují nebo zabraňují produkci VEGF nebo angiopoietinů, zmímňují intracelulární odpovědi na VEGF nebo angiopoietiny, blokují intracelulární signální transdukci, inhibují vaskulámí hyperpermeabilitu, zmírňují zánět nebo inhibují nebo zabraňují tvorbě edému nebo neovaskularizace. Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být podávány před, po nebo současně s dalším farmaceutickým agens, kterýmkoliv vhodným způsobem podání. Další farmaceutické agens zahrnují, ale není až nikterak limitováno, antiedemické steroidy, NSAIDS, inhibitory ras, anti-TNF agens, anti-IL-1 agens, antihistaminika, PAFantagonisty, inhibitory COX-1, inhibitory COX-2, inhibitory NO synthasy, inhibitory Akt/PTB, inhibitory IGF-IR, inhibitory PKC a inhibitory PI3 kinázy. Sloučeniny podle předloženého vynálezu a další účinkují buď aditivně nebo synergisticky. Tudíž další takové kombinace látek, která inhibuje angiogenezi, vaskulámí hyperpermeabilitu a/nebo inhibuje tvorbu edému, může poskytovat větší zmírnění škodlivých účinků hyperproliferačních onemocnění, angiogeneze, vaskulámí hyperpermeability nebo edému než podání kterékoliv samotné látky. Při ošetření maligních poruch jsou předpokládány kombinaci s antiproliferačními nebo cytotoxickými chemoterapiemi nebo ozařováním.
Předložený vynález také zahrnuje použití sloučenin obecného vzorce (I) jako léčivého prostředku.
V dalším aspektu předloženého vynálezu je poskytnuta sloučenina obecného vzorce (I) nebo její sůl při výrobě léčivého přípravku pro ošetření vaskulámí hyperpermeability, • 0 • 9 9 » * • ♦ · • ♦ · · 9 9 9 9 angiogeneze-dependentních poruch, proliferačních onemocnění a/nebo poruch imunitního systému u savců, zejména lidí.
Předložený vynález také poskytuje způsob ošetření vaskulární hyperpermeability, nepřiměřené neovaskularizace, proliferačních onemocnění a/nebo poruch imunitního systému, který zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) savci, zejména lidem, při potřebě takového ošetření.
In vitro účinnost sloučenin při inhibici těchto proteinkináz může být stanovena níže uvedenými způsoby.
Účinnost sloučenin může být stanovena množstvím inhibice fosforylace exogenního substrátu (např. syntetický peptid (Z. Songyang et al., Nátuře, 373:536-539) srovnáním testované sloučeniny s kontrolou.
Produkce KDR tyrosinkinázy pomocí Baculovirového systému:
Kódující sekvence pro lidskou KDR intracelulární doménu (aa789-1354)byla generována pomocí PCR a cDNA kusů izolovaných z buněk HUVEC. Sekvence poly-Hisó byla zavedena na TV-konec tohoto proteinu. Tento fragment byl klonován do transfekčního vektoru pVL1393 v místě Xbal a Not 1. Rekombinantní baculovirus (BV) byl generován kotransfekcí pomocí reagens BaculoGold Transfection reagent (PharMingen). Rekombinantní BV byl plak purifíkovaný a verifikovaný Westernovou analýzou. Za účelem produkce proteinu byly buňky SF-9 pěstovány v médiu SF-900-II při 2 x 106/ml a infikovány v množství tvořícím 0,5 plaku na buňku (MOI). Buňky byly sbírány po 48 hodinách od infekce.
Purifikace KDR
Buňky SF-9 exprimující (His)eKDR(aa789-1354) byly lyžovány přidáním 50 ml lyzovacího pufru Triton X-100 (20 mM Tris, pH 8.0, 137 mM NaCl, 10% glycerol, 1% Triton X-100, lmM PMSF, 10 μg/ml aprotininu, 1 ug/ml leupeptinu)do buněčných pelet z 1 1 buněčné kultury. Lyzát byl centriíugován při 19,000 ot. za min. na přístroji Sorval SS34 rotor po dobu 30 minut při teplotě 4°C. Buněčný lyzát byl aplikován do 5 ml NiCE chelatujícího sepharosového sloupce, ekvilibrovaného 50 mM HEPES, pH 7.5, 0.3 M NaCl. KDR byla eluována stejným pufrem obsahujícím 0,25 M imidazol. Jednotlivé frakce c' *· & e o «i 0 «·· <, “ r' * * ¢- & * * 9. t fe* *’ č.- <-· c 6 e> p ρ, ·- c c « c R C. f O J-. e, r' r c o e t- < r- ¢, 1 r r * <' f· « c <ř c c c- e tee byly analyzovány metodami SDS-PAGE a ELISA (viz níže), pomocí nichž se dala změřit aktivita kinázy. Purifikována KDR byla nalita do 25mM HEPES, pH 7.5, 25mM NaCl, 5 mM pufru DTT a skladována při teplotě -80°C.
Tvorba a purifikace lidské Tie-2 kinázy
Kódující sekvence pro lidskou intracelulární doménu Tie-2 (aa775-1124) byla generována pomocí PCR a cDNA kusů izolovaných z lidské placenty jako templátů. Sekvence poly-Hisó byla zavedena do V-konce a tento konstrukt byl klonován do transfekčního vektoru pVL 1939 v místě Xba 1 a Not 1. Rekombinantní BV byl generován kotransfekcí pomocí reagens BaculoGold Transfection reagent (PharMingen). Rekombinantní BV byl plak purifikovaný a verifikovaný Westernovou analýzou. Za účelem produkce proteinu byly buňky SF-9 pěstovány v médiu SF-900-II při 2 x 106/ml a infikovány vMOI 0,5. Purifikace používané His-značené kinázy při screeningu byla obdobná jako u KDR.
Tvorba a purifikace lidské Flt-1 tyrosinkinázy
Byl používán baculovirový expresívní vektor pVL1393 (Phar Mingen, Los Angeles, CA). Nukleotidová sekvence kódující poly-Hisó byla umístněna do nukleotidové oblasti 5' kódující celou intracelulární doménu kinázy lidské Flt-1 (aminoskupinykyseliny 786-1338). Nukleotidová sekvence kódující oblast kinázy byla generována pomocí PCR a cDNA knihoven izolovaných z buněk HUVEC. Histidinové zbytky umožnily afinitní purifikaci proteinu obdobným způsobem jako u KDR a ZAP70. Insektované buňky SF-9 byly infikovány s 0,5 multiplicitou a sbírány po 48 hodinách od infekce.
Původ EGFR tyrosinkinázy
EGFR byla zakoupena od firmy Sigma (Cat # E-3641; 500 jednotek/50 μΐ) a ligand EGF byl získán u firmy Oncogen Research Products/Calbiochem (Cat # PF011-100).
f! O
Exprese ZAP70
Byl používán baculovirový expresívní vektor pVL1393 (Phar Mingen, Los Angeles, CA). Nukleotidová sekvence kódující aminoskupinykyseliny M(H)6 LVPR9S byla umístněna do nukleotidové oblasti 5' kódující celou ZAP70 (aminoskupinykyseliny Ιό 19). Nukleotidová sekvence kódující oblast ZAP70 byla generována pomocí PCR a cDNA knihoven izolovaných z T-buněk imortalizováných Jurkatem. Histidinové zbytky umožnily afinitní purifikaci proteinu (vide infra). LVPR9S můstek tvořený rozpoznávací sekvencí pro proteolytické štěpení thrombinem umožňující odstranění afinitního tágu z enzymu. Insektované buňky SF-9 byly infikovány s 0,5 multiplicitou a sbírány po 48 hodinách od infekce.
Extrakce a purifikace ZAP70
Buňky SF-9 byly lyžovány v pufru sestávajícího se z 20 mM Tris, pH 8.0, 137 mM NaCI, 10% glycerol, 1% Triton X-100, lmM PMSF, 10 pg/ml aprotininu, 1 ug/ml leupeptinu a 1 mM orthovanadátu sodného). Rozpustný lyzát byl aplikován na chelatující sloupec sepharosy HiTrap (Pharmacia)ekvilibrovaném v 50 mM HEPES, pH 7.5, 0.3 M NaCI. Fúzní protein byl eluován s 250 mM imidazolu. Enzym byl skladován v pufru obsahujícím 25mM HEPES, pH 7.5, 25mM NaCI, 5 mM pufru DTT.
Původ proteinkinázy
Lek, Fyn, Src, Blk, Csk a Lyn a jejich zkrácené formy mohou být získány z komerčních zdrojů (např. od Upstate Biotechnology lne. (Saranac Lake, N.Y.) a Santa Cruz Biotechnology lne. (Santa Cruz, Ca.))nebo purifikovány standardními způsoby ze známých přírodních nebo rekombinantních zdrojů.
Enzymová imunoanalýza na pevné fázi (ELISA) provedená s PTK
K detekci a měření přítomnosti aktivity tyrosinkinázy byla používána enzymová imunoanalýza na pevné fázi (ELISA). ELISA byla prováděna standardním způsobem, který je popsán např. Voliér, et al., 1980, „Enzyme-linked Immunosorbent Assay,“ In:
C:
£ ¢, (>
* Jp «I
Manual of Clinical Immunology, 2d ed., edited by Rose and Friedman, 359-371 Am.Soc. of Microbiology, Washington, D.C.
Uvedený způsob byl upraven pro stanovení aktivity s ohledem na specifickou PTK. Například výhodné způsoby provedení ELISA experimentů jsou uvedeny níže. Úprava těchto protokolů pro stanovém aktivit sloučenin u ostatních členů rodiny receptorové PTK, jakož i nereceptorových tyrosinkináz, patří mezí standardní rutinu. Pro účely stanovení selektivity inhibitoru byl používán univerzální substrát PTK (např. nepravidelný kopolymer na bázi poly(Glu4 Tyr) s molekulovou hmotností 20000-50000)společeně s ATP (typicky 5 μΜ) v přibližně dvojnásobných koncentracích oproti Km z testů.
Ke stanovení inhibičního účinku sloučenin podle předloženého vynálezu na aktivitu KDR, Flt-1, Flt-4/VEGFR-3, Tie-1, Tie-2, EGFR, FGFR, PDGFR, IGF-l-R, c-Met, Lek, Blk, Csk, Src, Lyn, Fyn a ZAP70 tyrosinkináz byl používán následující postup:
Pufry a roztoky:
PGTPoly (Glu, Tyr) 4:1
Skladování prášku při teplotě -20°C. Rozpuštění prášku ve fyziologickém roztoku tlumeném fosfátem (PBS)na objem 50 mg/ml. Uchování 1 ml alikvótního podílu při teplotě -20°C. Pokud se připravují pláty, zředění na 250 pg/ml v Gibco PBS.
Reakční pufr: 100 mM Hepes, 20mM MgCl2, 4 mM MnCl2, 5mM DTT, 0,02% BSA, 200 μΜ NaVO4, pH 7,10.
ATP: Uchování alikvótních podílů 100 mM při teplotě -20°C. Zředění na objem 20 μΜ ve vodě.
Promývací pufr: PBS s 0,1% Tween 20
Protilátkový ředící pufr: 0,1% bovinní sérumalbumin (BSA)v PBS
Substrát TMB: smíchání substrátu TMB a Peroxidového roztoku 9:1 těsně před použitím nebo použití substrátu K-Blue od Neogen Blokovací roztok: 1M fosforečná kyselina
Postup
1. Příprava destiček
Zředění zásobního roztoku PGT (50 mg/ml, zmrazeného)v PBS na 250 pg/ml. Přidání (125 μΙ/jamka) do ELISA destiček s plochým dnem, majících vysokou afinitu a modifikované změní (Corning # 25805-96). Přidání 125 μΐ PBS do slepých jamek. Potažení těsnicí ree eeť© (:l' v v»-— páskou a inkubace přes noc při teplotě 37°C. lx promytí 250 μΐ promývacího pufru a sušení po dobu 2 hodin při teplotě 37°C v suchém inkubátoru.
Skladování potažených destiček v uzavřené nádobě při teplotě 4°C
2. Reakce s tyrosinkinázou:
-příprava inhibičních roztoků ve čtyřnásobné koncentraci ve 20% DMSO ve vodě.
-příprava reakčního pufru
-příprava enzymového roztoku tak, aby požadované jednotky byly v 50 μΐ, např. pro KDR 1 ng/μΐ z celkových 50 ng/jamka při reakcích. Skladování v ledu.
-příprava 4xATP roztoku s koncentrací 20 μΜ ze 100 mM zásobního roztoku ve vodě. Skladování v ledu.
-přidání 50 μΐ enzymového roztoku na jamku (typicky 5-50 ng enzymu na jamku v závislosti na specifické aktivitě kinázy)
-přidám 25 μΐ 4 x inhibitoru -přidání 25 μΐ 4 x ATP při stanovení inhibice -inkubace při pokojové teplotě po dobu 10 minut -zastavení reakce přidáním 50 μΐ 0,05N HCl/jamka -promytí destiček **Finální koncentrace při reakci: 5 μΜ ATP, 5% DMSO
3. Navázání protilátek
-zředění 1 mg/ml alikvótního podílu PY20-HRP (Pierce) protilátky (fosfotyrosinová protilátka) na 50 ng/ml v 0,1 % BSA v PBS 2 krokovým zředěním (100 x, pak 200x) -přidání 100 μΐ Ab/jamka. Inkubace při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny. Inkubace při teplotě 4°C po dobu 1 hodiny.
-4x promytí destiček
4. Barevné reakce
-příprava substrátu TMB a přidání 100 μΐ/jamka
-monitoring OD při 650 nm, dokud se nedosáhne hodnoty 0,6
-zastavení reakce pomocí 1M fosforečné kyseliny. Třepání na detektoru destiček.
-okamžité měření OD při 450 nm
Optimální inkubační časy a podmínky enzymové reakce se mohou nepatrně lišit a jsou empiricky stanoveny pro každou šarži.
»); *· fϋ>
C O f,
c! r>
iň « e
c n o o r« c
r.- ř
Pro Lek byl za obdobných podmínek používán reakční pufr o složení 100 mM MOPSO, pH 6.5,4 mM MnCl2,20 mM MgCl2, 5 mM DTT, 0,2% BSA, 200 mM NaVO4.
Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou být terapeuticky účinné při ošetření onemocnění zahrnujících jak identifikované, včetně těch, které zde nejsou uvedeny, tak i dosud neidentifikované proteinové tyrosinkinázy, které jsou inhibovány sloučeninami obecného vzorce (I). Všechny zde uvedené sloučeniny vykazovaly výraznou inhibici buď FGFR, PDGFR, KDR, Tie-2, Lek, Fyn, Blk, Lyn nebo Src při koncentracích 50 mikromol nebo nižších. Některé sloučeniny podle předloženého vynálezu také výrazně inhibovaly další tyrosin nebo serin/threoninkinázy, např. cdc2 (cdk 1) při koncentracích 50 mikromol nebo nižších.
Původ Cdc2
Lidský rekombinantní enzym a testovací pufr mohou být získány z komerčních zdrojů (New England Biolabs, Beverly, MA. USA)nebo standardními způsoby purifikovány ze známých přírodních nebo rekombinantních zdrojů.
Testy s Cdc2
V postupu byla používána mírně modifikovaná činidla získaná z komerčních zdrojů. Reakce byla prováděna v pufru o složení 50mM Tris pH 7.5, lOOmM NaCl, 1 mM EGTA, 2 mM DTT, 0,01% Brij, 5% DMSO a 10 mM MgCl2 (komerční pufr) suplementovaný čerstvým 300 μΜ ATP (31 pCi/ml) a 30 pg/ml IIIss typu histon jako finálními koncentracemi. Reakční objem činil 80 μΐ s obsaženými jednotkami enzymu. Reakce probíhala 20 minut při teplotě 25°C za přítomnosti nebo absence inhibitoru a byla ukončena přidáním 120 μΐ 10% octové kyseliny. Substrát byl separován od neinkorporované značky nanesením směsi na fosfocelulosový papír a 5 minutovým promytím (3 x 75 mM fosforečné kyseliny). Impulsy byly měřeny za přítomnosti kapalného scintilátoru na přístroji měřícím beta-záření. Měření bylo provedeno v přítomnosti tekutého scintilátoru na přístroji deteku záření β. Některé sloučeniny podle předloženého vynálezu výrazně inhibovaly cdc2 při koncentracích 50 μΜ nebo nižších.
& < ξ' t- * r e 9 &
* C € c <? « r v © (
<5 β fi fi e fi fi <' © fi r ť<
© tv b fi C· fi o *3 £ t tC fi fi fif! O fi fit fi <; t c e
Původ PKC kinázy
Katalytická podjednotka PKC může být získána z komerčních zdrojů (Calbiochem).
Testy s PKC kinázou
Použitý postup radiochemického stanovení kináz byl na bázi publikovaného způsobu viz Yasuda, I., Kirshimoto, A., Tanaka, S., Tominaga, M., Sakurai, A., Nishizuka, Y. Bichemical and Biophysical Research Communication 3:166, 1220-1227 (1990). Veškeré reakce byly prováděny v kinázovém pufru sestávajícím se z 50 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM MgCl2, 2 mM DTT, 1 mM EGTA, 100 μΜ ATP, 8 μΜ peptidů, 5% DMSO and P ATP (8 Ci/mM). Sloučenina a enzym byly smíchány v reakční baňce a reakce byla iniciována přidání ATP a substrátové směsi. Po terminaci reakce přidáním 10 μΐ pufru zastavujícího reakci (5 mM ATP v 75 mM fosforečné kyseliny), byl určitý podíl směsi nanesen na fosfocelulosový pufr. Nanesené vzorky byly promývány (3x) v 75 mM fosforečné kyseliny při pokojové teplotě po dobu 5 až 15 minut. Inkorporace radioaktivní značky byla stanovena měřením kapalné scintilace.
Původ enzymu Erk2
Rekombinantní myšší enzym a testovací pufr mohou být zakoupeny z komerčních zdrojů (New England Biolabs, Beverly MA. USA) nebo standardními způsoby purifikovány z přírodních nebo rekombinantní ch zdrojů.
Testy s enzymem Erk2
Reakce byla prováděna v pufru sestávajícím se z 50 mM Tris pH 7.5, 1 mM EGTA, 2 mM DTT, 0,01% Brij, 5% DMSO a 10 mM MgCb (komerční pufr)suplementovaném čerstvým 100 μΜ ATP (31 pCi/ml) a 30 μΜ myelinového bazálního za podmínek, které jsou doporučovány dodavatelem. Reakční objemy a způsob testování inkorporované radioaktivní značky jsou popsány u testů s PKC (vide supra).
¢ί,*·» β « c o c r « e f! e o « c á. f, e ř. f **** ·λ i «. < <> «©«··**<*
In vitro modely aktivace T-buněk
Po aktivaci mitogenu nebo antigenu jsou T-buňky indukovány k sekreci IL-2, což je růstový faktor, který podporuje jejich následnou proliferační fázi. Proto lze měřit buď produkci IL-2 nebo buněčnou proliferaci primárních T-buněk nebo příslušných linií T-buněk jako náhrad za aktivaci T-buněk. Oba tyto testy a jednotlivé parametry jsou dobře popsány v literatuře (v Current Protocols in Immunology, Vol 2, 7.10.1-7,11.2).
T-buňky mohou být aktivovány kokultivací s allogenním stimulátorem buněk, procesem, který je označován jako jednocestná směsná lymfocytová reakce. Respondér a stimulátor periferních krevních monocytů je purifikován Ficoll-Hypaque gradientem (Pharmacia) podle návodu dodavatele. Stimulátorové buňky jsou mitoticky inaktivovány reakcí smitomycinem C (Sigma) nebo zářením gama. Respondérové a stimulátorové buňky jsou kokultivovány v poměru 2:1 za přítomnosti nebo absence testované sloučeniny. Typicky 105 respondérů je smícháno s 5 χ 104 stimulátory a naneseno (v objemu 200 pl)do mikrotitrační destičky se dnem do U (Costar Scientific). Buňky jsou kultivovány v RPMI 1640 suplementovaném buď fetálním bovinním sérem (Hyclone Laboratories) inaktivovaným záhřevem nebo poolovým lidským AB sérem od mužských dárců, 5 χ 105 M 2merkaptoethanol a 0,5% DMSO. Jeden den před odběrem (typicky tři dny) bylo do kultur zabudováno 0,5 gCi 3H thymidinu (Amersham). Kultury byly odebírány (Betapíate harvester, Wallac) a uptake izotopu byl vyhodnocen pomocí kapalné scintilace (Betapíate, Wallac).
Stejný kultivační systém byl používán pro stanovení aktivace T-buněk měřením produkce IL-2. Osmnáct až dvacetčtyři hodin po iniciaci kultivace byl odstraněn supernatant a koncentrace IL-2 byla měřena metodou ELISA (R a D systémy) podle návodu dodavatele.
In vivo modely aktivace T-buněk
In vivo účinnost sloučenin může být testována na zvířecích modelech přímým měřením aktivace T-buněk nebo T-buněk, u kterých byly prokázány efektory. T-buňky mohou být aktivovány in vivo ligaci konstantní části receptoru T-buněk s monoklonální protilátkou anti-CD3 (ab). V tomto modelu bylo myším BALB/c 2 hodiny před vykrvácením intraperitoneálně podáno 10 pg anti-CD3 Ab. Zvířata, která měla obdržet •4 4« « « <p * * » * · • 4 • · 4 »«♦·
4» • »9 9 β 4 4 4
4 4 4 • 4 « 4 « ·
4« »4 • 4 4 · • 4 4 »4·
4 4 »4 4444 testované léčivo, byla předem ošetřena jednorázovou dávkou sloučeniny jednu hodinu před podáním anti-CD3 Ab. Sérové hladiny protizánětlivých cytokinů interferon-γ (IFN-γ) a faktoru-α (TNF-a)nádorové nekrózy, indikátorů aktivace T-buněk, byly měřeny metodou ELISA. Podobný model využívá in vivo aktivaci T-buněk se specifickým antigenem, např. hemocyanin kuželnatky (KLH), a následnou sekundární in vitro expozici drénovaných buněk mízní uzliny stejnému antigenů. Jak je uvedeno výše, ke stanovení stavu aktivace kultivovaných buněk bylo používáno měření produkce cytokinů. V nultý den byly myši C57BL/6 subkutánně imunizovány 100 pg KLH emulzifikovaného v kompletním Freundově adjuvans (CFA). Zvířata byla jeden den před imunizací a následně první, druhý a třetí den po imunizaci předem ošetřena sloučeninou. Drénované mízní uzliny byly čtvrtý den odebírány a jejich buňky kultivovány v množství 6 χ 106 na ml v médiu ke kultivaci tkáně (RPMI 1640 suplementované fetálním bovinním sérem inaktivovaným záhřevem (Hyclone Laboratories 5 χ 10'5 M 2-merkaptoethanolu a 0,5% DMSO)po dobu 24 i 48 hodin. V kultivačních supematantech pak byl stanoven růstový faktor Interleukin-2 (IL-2) autokrinních T-buněk a/nebo hladiny IFN-γ metodou ELISA.
Sloučeniny mohou být také testovány na zvířecích modelech simulujících lidské onemocnění, např. experimentální autoimunitní encefalomyelitida (EAE) a kolagenem indukovaná artritida (CIA). EAE modely, které mimikují aspekty lidské roztroušené sklerózy byly popsány u myší i potkanů (recenzováno FASEB J. 5:2560-2566, 1991 myšší model: Lab. Invest. 4(3):278, 1981; model na bázi hlodavce: J. Immunol. 146(4):1163-8, 1991). Myši a potkani byly imunizovány emulzí myelinového bazického proteinu (MBP)nebo jeho neurogenními peptidovými deriváty a CFA. Akutní onemocnění mohou být indukovány přidáním bakteriálních toxinů, např. bordetella pertussis. Relapsující/ustupující onemocnění je indukováno adoptivním přenosem T-buněk ze zvířat imunizovaných MBP/peptidem.
CIA může být indukována u myší DBA/1 imunizací kolagenem typu II (J. Immunol: 142(7):2237-2243). U myší až vyvolá známky artritidy již deset dnů po expozici antigenů, které mohou být evidentní i devadesát dnů po imunizaci. U EAE i CIA modelů může být sloučenina podávána buď profylakticky nebo v době propuknutí onemocnění. Účinná léčiva by měla redukovat sílu a/nebo rozsah onemocnění.
Určité sloučeniny podle předloženého vynálezu, které inhibují jednu nebo více angiogenních receptorových PTK a/nebo proteinkinázy, např. lek účastnící se {>©.
zprostředkování zánětlivých odpovědí, mohou u těchto modelů redukovat sílu nebo rozsah artritidy.
Sloučeniny mohou být také testovány na myšších modelech aloimplantátu kůže (recenzováno vAnn. Rev. Immunol., 10:333-58, 1992; Transplantation: 57(12):170117D6, 1994) nebo srdce (Am. J. Anat.: 113:273,1963). Kompletní epidermální štěpy byly transplantovány z myší C57BL/6 myším BALB/c. Štěpy mohou být počínaje šestým dnem kvůli rejekci denně sledovány. U myššího modelu neonatálního transplantátu srdce, jsou neonatální srdce ektopicky transplantovány z myší C57BL/6 do ušních boltců dospělých myší CBA/J. Srdce začíná pracovat čtyři až sedm dní po transplantaci a rejekce může být zkoumána vizuálně disekujícím mikroskopem kvůli sledování přerušení Činnosti srdce.
Testy s buněčnými receptorovými PTK
Ke stanovení hladiny aktivity a účinku různých sloučenin podle předloženého vynálezu na KDR/VEGFR2 byl používán následující buněčný test. Podobné testy receptorových PTK využívající stimulaci specifického ligandu mohou být za použití standardních technik navrženy podle stejných linií u dalších tyrosinkináz.
VEGF-indukovaná fosforylace KDR u lidských endotheliálních buněk pupečníkové žíly (HUVEC) může být měřena Western blottingem:
1. Buňky HUVEC (od poolových donorů) byly zakoupeny u Clonetics (San Diego, CA) a kultivovány podle návodu dodavatele. Pro tyto testy byly používány pouze časné pasáže (3-8). Buňky byly kultivovány ve 100 mm nádobách (Falcon for tissue culture; Becton Dickinson; Plymouth, England) kompletním EBM médiem (Cjonetics).
2. Pro testy inhiční aktivity sloučenin byly buňky trypsinovány a naočkovány v množství 0,5-1,0 χ 105 buněk/jamka do každé jamky klastrovaných destiček (6 jamek každá)(Costar; Cambridge, MA).
3. 3-4 dny po naočkování bylo u 90-100% destiček pozorován souvislý nárůst. Médium bylo ze všech jamek odstraněno, buňky byly promývány 5-10 ml PBS a inkubovány 18-24 hodiny s 5 ml EBM bazálního média bez žádných přidaných suplementů (tzn. nedostatek séra).
4. K buňkám bylo přidáno sériové ředění inhibitorů v 1 ml média EBM (25 μΜ, 5 μΜ nebo 1 μΜ konečné koncentrace) a buňky byly inkubovány po dobu 1 hodiny při teplotě 37°C. Poté byla přidána do všech jamek lidská rekombinantní VEGFi65 (R & D
O «1 f.. t ® « C C ť V < ř; t-5 ť- Γ C O e e c P f' ’-' V ť o °
Systems) ve 2 ml média EBM v konečné koncentraci 50 ng/ml a v inkubaci se při teplotě 37°C pokračovalo po dobu 10 minut. Ke stanovení pozadí fosforylace a fosforylační indukce VEGF byly používány kontrolní buňky ošetřené nebo neošetřené VEGF. Všechny jamky pak byly promývány 5-10 ml studeného PBS obsahujícícho lm M orthovanadátu sodného (Sigma). Buňky byly lyžovány a setřeny ve 200 μΐ pufru RIPA (50mM Tris-HCl) pH 7, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0,25% deoxycholátu sodného, 1 mM EDTA) obsahující inhibitory proteasy (PMSF 1 mM, aprotinin 1 pg/ml, pepstatin 1 pg/ml, leupeptin 1 pg/ml, Na vanadate 1 mM, Na fluorid lmM) a 1 pg/ml Dnase (veškeré chemikálie byla od Sigma Chemical Company, St Louis, MO). Lyzát byl kvůli eliminaci jader centrifugován při 14000 ot./min. po dobu 30 minut.
Stejná množství proteinů pak byla precipitována přidáním studeného (-20 °C) ethanolu (2 objemy) po dobu minimálně 1 hodiny nebo maximálně přes noc. Pelety byly rekonstituovány ve vzorkovém pufru Laemli obsahujícím 5% merkaptoethanol (BioRad Hercules, CA) a zahřívány po dobu 5 minut. Proteiny byly znovu chromatografovány gelovou elektroforézou na polyakrylamidoskupinyvém gelu (6%, l,5mm Novex, San Deigo, CA) a přeneseny do nitrocelulosové membrány pomocí systém Novex. Po blokaci bovinní sérumalbuminem (3%) byly proteiny při teplotě 4 °C značeny polyklonální protilátkou anti-KDR (C20, Santa Cruz Biotechnology; Santa Cruz, CA) nebo monoklonální protilátkou antifosfotyrosin (4G10, Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY). Po promytí a inkubaci s HRP-konjugovaným F(ab)2 kozí protikráličím byly jednotlivé pásy vizualizovány emisní chemiluminiscencí (ECL)(Amersham Life Sciences, Arlington Height, IL). Určité sloučeniny podle předloženého vynálezu výrazně inhibovaly fosforylaci buněčné KDR tyrosinkinázy indukovanou VEGF při koncentracích nižších než 50 μΜ.
In vivo model uterinního edému
Při tomto testu byla měřena kapacita sloučenin inhibovat akutní přírůstek uterinní váhy u myší, který se objevil v prvních několika hodinách po stimulaci estrogenem. Je známo, že tento rychlý přírůstek uterinní váhy je způsobem edémem v důsledku zvýšené permeability uterinní vaskularity. Cullinan-Bove a Koss (Endocrinology (1993), 133: 829837) ukázaly blízký dočasný vztah mezi uterinním edémem stimulovaným estrogenem a zvýšenou expresí VEGF mRNA v děloze. Tyto výsledky bylo potvrzeny použitím i'.· O t1 «» <->
C fc L Γ· C (F, c c( :· r $ & C C neutralizačních monoklonálních protilátek vůči VEGF, které výrazně redukují akutní přírůstek uterinní váhy po stimulaci estrogenem (WO 97/42187). Proto může tento systém sloužit jako model pro in vivo inhibici VEGF signalizační a asociované hyperpermeability a edému.
Látky: Všechny hormony byly zakoupeny u firmy Sigma (St. Louis, MO) nebo Cal Biochem (La Jolla, CA) jako lyofilizované prášky a připravené podle návodu dodavatele. Nosičové komponenty (DMSO, Cremaphor EL) byly zakoupeny u firmy Sigma (St. Louis, MO).
Myši (Balb/c, 8-12 týdnů staré) byly zakoupeny u firmy Taconic (Germantown, NY) a přechovávány s vyloučením pathogenů v zařízení k tomu určnému a podle „institutional Animal Care and Use Committee Guidelines“
Způsob:
l.den: myším Balb/c byla intraperitoneálně (i.p.) podána injekce 12,5 jednotek gonadotropinu ze séra březích klisen (PMSG).
3. den: myším bylo podáno 15 jednotek lidského chorogonadotropinu (hCG) i.p.
4. den: myši byly náhodně rozděleny do skupin o 5-10 kusech. Testovaná sloučeniny byla podáván i.p., i.v. nebo p.o. způsobem, který závisel na rozpustnosti nosiče v dávkách v rozmezí 1-100 mg/kg. Kontrolní skupina obdržela pouze nosič a dvě skupiny nebyly ošetřovány.
Po 30 minutách experimentu byla kontrolní skupině a jedné z neošetřovaných skupin podána i.p. injekce 17-estradiolu (500 pg/kg). Po 2-3 hodinách byla zvířata usmrcena inhalací CO2. Po incizi vedené ve střední čáře byla izolována každá děloha a odstraněna řezem vedeným pod krčkem (cervix) a v místě spojení dělohy a vejcovodů. Tlustá a pojivová tkáň byla opatrně odstraněna tak, aby se neporušila před vážením (vlhká váha)neporušila intergrita dělohy. Z děloh byla tlakem mezi dvěma filtračními papíry s jednolitrovou skleněnou láhví naplněnou vodou odstraněna tekutina. Dělohy byly po odstranění tekutiny zváženy (váhy po odstranění tekutiny). Rozdíl ve váze před a po odstranění tekutiny byl stanoven jako množství tekutiny v děloze. Střední obsah vody ošetřovaných skupin byl porovnáván s neošetřovanými nebo kontrolními skupinami. Statistické parametry byly stanoveny Studentským testem. Ke sledování odpovědi na estradiol byla používána nestimulovaná kontrolní skupina.
Výsledky demonstrují, že určité sloučeniny podle předloženého vynálezu inhibují tvorbu edému, pokud jsou systematicky podávány různými způsoby.
Určité sloučeniny podle předloženého vynálezu, které jsou inhibitory angiogenních receptorových tyrosinkináz mohou také vykazovat aktivitu na modelu neovaskularizace Matrigelového implantátu. Model neovaskularizace Matrigelu zahrnuje tvorbu nových krevních cév bez „mramorové“ extracelulámí matrix subkutánně implantované, která je indukována přítomností proangiogenního faktoru produkovaného nádorovými buňkami (viz: Passaniti, A., et al., Lab. Investig. (1992), 67 (4), 519528; Anat. Rec. (1997), 249 (1), 63-73; Int. J. Cancer (1995), 63 (5), 694-701; Vasc. Biol. (1995), 15 (11), 1857-6). Model je výhodně použitelný v průběhu 3-4 dnů a výstupy zahrnují makroskopické optické/obrazové vyhodnocení neovaskularizace, mikroskopické stanovení hustoty mikrocév a stanovení množství hemoglobinu (Drabkinova metoda) a následně odstranění implantátu proti kontrolám u zvířat neošetřovaných inhibitory. V daném modelu lze alternativně používat bFGF nebo HGF jako stimulans.
Určité sloučeniny podle předloženého vynálezu, které inhibují jednu nebo více onkogenních, protoonkogenních nebo na proliferaci dependentních proteinkináz nebo angiogenního PTK receptoru také inhibují růst primárních myších, potkaních nebo lidských xenoimplantátových nádorů u myší nebo inhibují metastázy u myšších modelů.
Γί ť? · f- c f i- ts. ’ r p fř-' r·© t i. e O
Určité sloučeniny podle předloženého vynálezu, které jsou inhibitory angiogenních receptorových tyrosinkináz mohou také vykazovat aktivitu na modelu neovaskularizace Matrigelového implantátu. Model neovaskularizace Matrigelu zahrnuje tvorbu nových krevních cév bez „mramorové“ extracelulární matrix subkutánně implantované, která je indukována přítomností proangiogenního faktoru produkovaného nádorovými buňkami (viz: Passaniti, A., etal., Lab. Investig. (1992), 67 (4), 519528; Anat. Rec. (1997), 249 (1), 63-73; Int. J. Cancer (1995), 63 (5), 694-701; Vasc. Biol. (1995), 15 (11), 1857-6). Model je výhodně použitelný v průběhu 3-4 dnů a výstupy zahrnují makroskopické optické/obrazové vyhodnocení neovaskularizace, mikroskopické stanovení hustoty mikrocév a stanovení množství hemoglobinu (Drabkinova metoda) a následně odstranění implantátu proti kontrolám u zvířat neošetřovaných inhibitory. V daném modelu lze alternativně používat bFGF nebo HGF jako stimulans.
Určité sloučeniny podle předloženého vynálezu, které inhibují jednu nebo více onkogenních, protoonkogenních nebo na proliferaci dependentních proteinkináz nebo angiogenního PTK receptorů také inhibují růst primárních myších, potkaních nebo lidských xenoimplantátových nádorů u myší nebo inhibují metastázy u myších modelů.
o o
O ec & fe » e © « «
V* f w ©to * ř fe f © <5 C *· ř Cí’^4 ©4 e 4 © 4 e * ©
$á
ÍM) í> C €> · <, f f e © 4 o © e -a e © a t ©
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
-(1 -benzyl-4-piperidinyl)-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 77-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-amin (sloučenina 1)
3-brom-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-ol (meziprodukt A) l/í-pyrazolo[3,4-cf)pyrimidin-4-ol (10 g, 73,5 mmol) se suspenduje v 700 ml vody.
Přidá se brom (10 ml, 194 mmol) a výsledná reakční směs se zahřívá při teplotě 91°C přes noc. Po ochlazení ledovou vodou se pevná látka spojí filtrací, čímž se získá 1,508 g 3brom-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-olu ve formě světle žluté pevné látky. ’H NMR (DMSO) 8,06 (s 1H), 12,25 (bs, 1H), 14,06 (bs, 1H).
3-brom-4-chlor-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin (meziprodukt B)
3-Brom-l//-pyrazolo[3,4-7]pyrimidin-4-ol (meziprodukt A) (15,08 g, 70,5 mmol) se suspenduje v 189 ml oxychloridu fosforečném. Přidá se diethylanilin (19 ml, 119,4 mmol) a výsledná reakční směs se zahřívá při teplotě 106°C po dobu 2 hodin. Po ochlazení na pokojovou teplotu se rozpouštědlo odstraní a výsledný žlutý sirup se nalije do 300 ml ledové vody, po 20 minutách se vodná vrstva extrahuje diethyletherem (500 ml x 4). Spojená organická vrstva se promyje, suší a odpařuje, čímž se získá 6,87 g 3-brom-4-chlorl//-pyrazolo[3,4-íf|pyrimidinu ve formě světle žluté pevné látky.
!H NMR (DMSO) 8,857 (s 1H), 14,84 (bs, 1H);
LC/MS (MH+= 233).
-(1 -benzyl-4-piperidinyl)-3 -brom-4-chlor-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin (meziprodukt C) 3-Brom-4-chlor-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin (meziprodukt B) (5,0 g, 21,42 mmol), l-benzyl-4-piperidinol (8,2 g, 42,83 mmol) a trifenylfosfin (11,23 g, 42,83 mmol) se suspendují v 250 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se ochladí v ledové lázni a po kapkách se přidá diethylazodikarboxylát (6,8 ml, 42,83 mmol). Po 10 minutách se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 2 hodinách míchání se rozpouštědlo odstraní a zbytek se nalije do ethylacetátuu, organická vrstva se promyje, suší a odpařuje, surový produkt se nechá procházet přes sloupec Biotage („Biotage flash column“) ve směsi dichlormethanu a ethylacetátu (90:10) jako mobilní fázi, čímž se získá 10,56 g 1-(1benzyl-4-piperidinyl)~3-brom-4-chlor-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidinu. Produkt s retenčním časem 12,46 min. vykazoval při HPLC 61% čistotu (podmínky HPLC: 5 až 95% CH3CN v O,1N vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut, parametry sloupce - 3,9 x 150 mm, 300 A).
-(1 -benzy 1-4-piperidiny l)-3 -brom-1 H-pyrazolo [3,4-d] pyrimidin-4-amin (meziprodukt D)
-(1 -Benzyl-4-piperidinyl)-3-brom-4-chlor-1 H-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin (meziprodukt C) (9 g, 61% čistota) se smíchá s dioxanem (100 ml) a hydroxidem amonným (100 ml) v autoklávu. Směs se zahřívá při teplotě 120°C přes noc. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií („flasch column chromatography“) v ethylacetátu jako mobilní fázi, čímž se získá l-(l-benzyl-4piperidinyl)-3 -brom-1 H-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin.
*H NMR (CDCb) 1,94 (d, J=11,23 Hz, 2H), 2,21 (m, 2H), 2,35 (m, 2H), 3,04 (d, J=11,48 Hz), 3,57 (s, 2H), 4,71 (m, IH), 5,98 (s, 2H), 7,34 (m, 5H), 8,33 (s, IH);
LC/MS (MH+= 389).
l-(l-benzyl-4-piperidinyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin
-(1 -Benzyl-4-piperidinyl)-3 -brom-1 H-pyrazolo( 1 -benzyl-4-piperidinyl)-3 -bromlH-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidin-4-amin (meziprodukt D) (4,3 g, 11,10 mmol), 4-fenoxyfenylboritá kyselina (meziprodukt V) (2,61 g, 12,21 mmol), tetrakistrifenyfosfmpalladium (0,77 g, 0,67 mmol) a uhličitan sodný (2,82 g, 26,65 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (100 ml) a vodou (50 ml). Reakční směs se zahřívá pod refluxem přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojená organická vrstva se promyje, suší a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi ethylacetátu a methanolu (98/2) jako mobilní fázi, čímž se získá 2,65 g 1-(1 -benzyi-4-piperidinyl)-3-(4-fenoxyfenyl)- 1Hpyrazolo[3,4-JJpyrimidin-4-aminu.
*H NMR (CDCb) 1,99 (d, >11,02 Hz, 2H), 2,25 (m, 2H), 2,47 (m, 2H), 3,07 (d, >11,12 Hz), 3,59 (s, 2H), 4,80 (m, IH), 5,52 (s, 2H), 7,07 (d, J=0,67, IH), 7,15 (m, 3H), 7,37 (m, 6 H), 7,66 (d, >8,51, 2H), 8,37 (s, IH);
LC/MS (MH+-477).
f-- C C c c c c c e ř> c e> c (:
r e <· c f.· ( (' r « (- p c e
Příklad 2
-(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidinyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin l-(l-Benzyl-4-piperidinyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-4-amin (sloučenina 1) (1,224 g, 2,57 mmol), 10% palladium na aktivním uhlí (1,22 g) a mravenčan amonný (0,81 g, 12,84 mmol) se smíchají s 21 ml methanolu. Po 6 hodinovém míchání při pokojové teplotě se reakční směs filtruje a promyje horkým methanolem. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se nalije do dichlormethanu a organická vrstva se promyje, suší a odpařuje, čímž se získá 0,77 g 3-(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidinyl)-1 //-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-4-aminu.
’H NMR (CDC13) 2,05 (d, >12,17 Hz, 2H), 2,26 (m, 2H), 2,87 (m, 2H), 3,29 (d, >12,76 Hz), 4,89 (m, IH), 5,54 (s, 2H), 7,09 (m, 2H), 7,15 (m, 3H), 7,39 (m, 2 H), 7,67 (d, >9,39 Hz, 2H), 8,37 (s, IH);
LC/MS (MH+= 387).
Příklad 3
Trimaleátová sůl 1 -[1 -(1 -methyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (sloučenina 3)
- [ 1 -(1 -methyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-amin (meziprodukt E)
-(4-F enoxy feny 1)-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-4-amin (sloučenina 2) (199 mg, 0,515 mmol), l-methyl-4-piperidon (70 μΐ, 0,566 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (163 mg, 0,772 mmol) a ledová kyselina octová (34 mg, 0,566 mmol) se smíchají s 3 ml 1,2-dichlorethanu. Po míchání při pokojové teplotě přes noc se přidají 2 ml vody a poté se přidává pevný hydrogenuhličitan sodný, dokud není pH = 8. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje, suší a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií, čímž se získá 92 mg l-[l-(l-methyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl](4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-4-aminu.
'H NMR (DMSO) 1,47 (m, 2H), 1,72 (d, >11,75 Hz, 2H), 1,88 (m, 4H), 2,14 (s, 3H), 2,35 (m, 5H), 2,81 (d, >11,32 Hz, 2H), 3,01 (d, >11,26 Hz, 2H), 4,62 (m, IH), 7,16 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (d, >8,69 Hz, 2H), 8,23 (s, IH);
LC/MS (MH+=484).
oo rt. c c t> r
C C- <:
t> c ť> e c r c e<co o c <? o o c c r
O f? Cí c
C> F t t, c c c co «<>
O Í f (4.6 (./:,·.
trimaleátová sůl 1-[1 -(1 -methyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-lHpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu
1-(1-(1 -Methy l-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-amin (92 mg, 0,190 mmol) se rozpustí v 25 ml horkého ethylacetátu a přidá se kyselina maleinová (66 mg, 0,571 mmol) v 5 ml horkého ethylacetátu. Po 2 hodinách při pokojové teplotě se pevná látka filtruje, suší, čímž se získá 135 mg trimaleátové soli 1-[1 (1 -methy l-4-piperidinyl)-4-piperidinyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-4aminu.
lH NMR (DMSO) 1,87 (m, 2H), 2,22 (m, 4), 2,45 (m, 2H), 2,77 (s, 3H), 2,18 (bm, 9H), 5,06 (m.lH), 6,11 (s, 6H), 7,15 (m, 5H), 7,45 (m, 2H), 7,67 (d, J=8,51 Hz, 2H), 8,27 (s, 1H);
LC/MS (MH+= 484).
Příklad 4 trimaleátová sůl l-[l-(l-izopropyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo[3,4-ď)pyrimidin-4-aminu (sloučenina 4)
1-(1-(1 -izopropyl-4-piperidyl)-4-piperidyl]-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 /(-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-amin (meziprodukt F)
3-(4-Fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidinyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (sloučenina 2) (221 mg, 0,572 mmol), l-izopropyl-4-piperidon (89 mg, 0,63 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (182 mg, 0,86 mmol) a ledová kyselina octová (40 μΐ, 0,63 mmol) se smíchají s 3 ml 1,2-dichlorethanu. Po míchám při pokojové teplotě přes noc se přidají 2 ml vody, poté se přidává pevný hydrogenuhličitan sodný, dokud není pH = 8. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje, suší a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií, čímž se získá 132 mg l-[l-(l-izopropyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin.
JH NMR (DMSO) 0,99 (d, J=6,54 Hz, 6H), 1,42 (m, 2H), 1,72 (d, J=11,41 Hz, 2H), 1,88 (d, J=9,61 Hz, 2H), 2,14 (s, 3H), 2,16 (m, 6H), 2,66 (m, 2H), 2,83 (d, J=10,98 Hz, 2H),
2,98 (d, J=8,25 Hz, 2H), 4,62 (m, ÍH), 7,16 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (d, J=8,69 Hz,
2H), 8,23 (s, ÍH);
» «
LC/MS (MH+= 512) trimaleátová sůl 1 - [ 1 -(1 -izopropyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-1Hpyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu
- [ 1 -(1 -Izopropy l-4-piperidinyl)-4-piperidiny l]-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4d]pyrimidin-4-amin (meziprodukt F) (132 mg, 0,258 mmol) se rozpustí v 30 ml horkého ethylacetátu a přidá se maleinová kyselina (90 mg, 0,774 mmol) v 5 ml horkého ethylacetátu. Po 2 hodinách při pokojové teplotě se pevná látka filtruje a suší, čímž se získá 205 mg trimaleátové soli 1-(1-(1-izopropyl-4-piperidiny l)-4-piperidiny l]-3-(4fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-4-aminu.
*H NMR (DMSO) 1,26 (d, >6,34 Hz, 6H), 1,90 (m, 2H), 2,23 (m, 4H), 2,50 (m, 2H), 3,53 (bm, 9H), 5,08 (m, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (d, >8,30 Hz, 2H), 8,28 (s, 1H); LC/MS (MH+= 512).
Příklad 5 trimaleátová sůl 1 -[ 1 -(1 -/erc-butoxykarbonyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu (sloučenina 5)
1-(1-(1 -terc-butoxykarbonyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin-4-amin (meziprodukt G)
-(4-F enoxy feny 1)-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</jpyrimidin-4-amin (sloučenina 2) (350 mg, 0,906 mmol), l-/erc‘-butoxykarbonyl-4-piperidon (198 mg, 0,996 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (288 mg, 1,358 mmol) a ledová kyselina octová (60 ul, 0,996 mmol) se smíchají s 5 ml 1,2-dichlorethanu. Po míchání při pokojové teplotě přes noc se přidají 2 ml vody a dále se přidává pevný hydrogenuhličitan sodný, dokud není pH = 8. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje, suší a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií, čímž se získá 254 mg 1-(1-(1-/erc-butoxykarbonyl-4-piperidyl)-4-piperidyl]-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin-4-amin.
’H NMR (DMSO) 1,39 (m, 13H), 1,75 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 2,17 (m, 2H), 2,35 (m, 2H), 2,72 (m, 2H), 3,0 (m, 2H), 3,63 (m, 1H), 3,98 (m, 2H), 4,63 (m, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (d, >8,60 Hz, 2H), 8,23 (s, 1H);
LC/MS (MH+= 484).
trimaleátová sůl 1-(1-(1 -terc-butoxykarbonyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu
-[ 1 -(1 -7erc-butoxykarbonyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin (254 mg, 0,446 mmol) se míchá v 25 ml 10% roztoku trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu přes noc. Rozpouštědlo se odpařuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. Přidá se nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného a výsledná směs se míchá po dobu 30 minut. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje, suší a odpařuje, čímž se získá 108 mg l-[l-(4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-4aminu (meziprodukt GG), který se používá bez dalšího čištění.
l-[l-(4-pipendyl)-4-piperidyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidÍn-4amin (108 mg, 0,230 mmol) se rozpustí v 25 ml ethanolu a přidá se kyselina maleinová (80 mg, 0,690 mmol) v 5 ml horkého ethanolu. Po 2 hodinách při pokojové teplotě se pevná látka filtruje a suší, čímž se získá 155 mg trimaleátové soli l-[l-(4piperidyl)-4-piperidylj3 -(4-fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-aminu.
’H NMR (DMSO) 1,80 (m, 2H), 2,42 (m, 4), 2,51 (m, 2H), 2,95 (m, 3H), 3,44 (bm, 7H), 5,06 (m, ÍH), 6,10 (s, 6H), 7,15 (m, 5H), 7,45 (m, 2H), 7,67 (d, J=8,51 Hz, 2H), 8,27 (s, ÍH);
LC/MS (MHM84).
Příklad 6 dimaleátová sůl 1 -(trara-4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-3 -(4-fenoxy fenyl)-1J7pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-4-aminu (sloučenina 6)
-(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (sloučenina 9) (meziprodukt I)
3-(4-Fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-(7]pyrimidin-4-amin (sloučenina 15) (3,36 g, 11,1 mmol, l,4-dioxaspiro[4.5]dekan-8-ol (meziprodukt M) (5,26 g, 33,3 mmol), trifenylfosfin (5,81 g, 22,2 mmol) se suspendují v 130 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se ochladí v ledové lázni a po kapkách se přidává diethylazodikarboxylát (3,9 ml, 22,2 mmol). Po 10 minutách se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 2 hodinovém míchání se rozpouštědlo odstraní a zbytek se nalije do ethylacetátu, organická vrstva se promyje, suší a odpařuje, surový produkt se čistí přes zrychlenou chromatografií na sloupci Biotage ve směsi dichlormethanu a ethylacetátu (50:50 až 10:90) jako mobilní fázi, čímž se získá 3,829 g l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-177pyrazolo [3,4-úQpy rimidin-4-aminu.
*H NMR (CDCb) b83 (m, 2H), 1,945 (m, 2H), 2,05 (m, 2H), 2,45 (m, 2H), 3,99 (s, 4H), 4,86 (m, 1H), 5,74 (bs, 2H), 7,09 (m, 2H), 7,15 (m, 3H), 7,39 (m, 2H), 7,66 (d, J=8,70 Hz, 2H), 8,37 (s, 1H);
LC/MS (MH+= 444).
4-(4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 77-pyrazolo [3,4-c7]pyrimidin-1 -yl)-1 -cyklohexanon (sloučenina 10) (meziprodukt J)
-(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4amin (sloučenina 9) (3,80 g, 8,57 mmol) se suspenduje v 190 ml acetonu a ochladí na teplotu 0°C. Přes přídavnou nálevku se pomalu přidá 48 ml 5,ON kyseliny chlorovodíkové. Ledová lázeň se odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Aceton se odstraní a vodná vrstva se neutralizuje l,0N hydroxidem sodným, dokud není pH = 10. Pevná látka se filtruje a suší, čímž se získá 2,926 g 4-(4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-cyklohexanonu.
*H NMR (CDCb) 2,39 (m, 2H), 2,62 (m, 6H), 5,30 (m, 1H), 6,08 (bs, 2H), 7,09 (m, 2H), 7,15 (m, 3H), 7,42 (m, 2H), 7,64 (d, >8,70 Hz, 2H), 8,39 (s, 1H);
LC/MS (MH+= 400).
-(/rař25-4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-amin (meziprodukt K) a l-(cA-4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1)-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidm-4-amin (meziprodukt L)
4-(4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yl)-1 -cyklohexanon (sloučenina 10) (2,916 g, 7,30 mmol), 4-methylpiperazin (2,4 ml, 21,90 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (2,01 mg, 9,49 mmol) a ledová kyselina octová (1,31 g, 21,90 mmol) se smíchají s 147 ml 1,2-dichlorethanu. Po 6 hodinách míchání při pokojové teplotě se přidá 57 ml vody, poté 3,8 g pevného hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje, suší a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu, methanolu a vodného amoniaku (90/10/0,2 až 80/20/0,5) jako mobilní fázi, čímž se získá e e
Γ f6 e©oce e- o (A), 0,47 g Znms-l-(4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-3 -(4-fenoxy fenyl)- 1Hpyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-aminu.
Ή NMR (DMSO) 1,49 (m, 2H), 2,00 (m, 6H), 2,23 (s, 3H), 2,59 (m, 9H), 4,66 (m, 1H), 7,17 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,64 (d, J=8,69 Hz, 2H), 8,23 (s, 1H);
LC/MS (MH+-484).
(B), 2,582 g l-(cA-4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4ř/Jpyrimidin-4-aminu.
‘H NMR (DMSO) 1,58 (m, 2H), 1,68 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 2,28 (m, 11H), 4,79 (m, 1H), 7,17 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,64 (d, J=8,69 Hz, 2H), 8,23 (s, 1H);
LC/MS (MH+= 484).
dimaleátová sůl 1 -(/rans-4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu.
rran5-l-(4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-aminu (0,47 g, 0,972 mmol) se rozpustí v 140 ml horkého ethanolu a přidá se maleinová kyselina (0,40 g, 2,47 mmol) v 10 ml horkého ethanolu.
Po 2 hodinách při pokojové teplotě se pevná látka filtruje a suší, čímž se získá 0,62 g dimaleátové soli 1 -(řran5-4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1Hpyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-4-aminu.
’H NMR (DMSO) 1,58 (m, 2H), 2,04 (m, 6), 2,67 (m, 3H), 2,79 (vbm, 9H), 4,70 (m, 1H), 7,41 (s, 4H), 7,17 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,66 (d, J=8,63 Hz, 2H), 8,24 (s, 1H);
LC/MS (MH+= 484).
Příklad 7 trimaleát 1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(4-fenoxyfenyl)- l//-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-4-ylaminu (sloučenina 7)
4- [4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 /7-pyrazolo [3,4-ďJpyrimidin-1 -y 1] -1 -cyklohexanon (sloučenina 10) (meziprodukt J) (4,45 g) v 300 ml dichlormethanu se míchá pod atmosférou dusíku, zatímco se přidává 3,72 ml A-methylpiperazinu a 1,92 ml kyseliny octové. Po 30 minutách se přidá triacetoxyborohydrid sodný (3,40 g) a směs míchá přes noc. Druhý den se přidá 2 ml A-methylpiperazinu, 1,2 ml kyseliny octové a 1,85 g <·., r o © r o « o 6 o ©
O <s triacetoxyborohydridu sodného a směs se míchá přes noc. Přidají se další 2 ml yV-methylpiperazinu, 1,2 ml kyseliny octové a 1,85 g triacetoxyborohydridu sodného a směs se míchá přes noc a odpařuje za vakua. Zbytek se míchá s 250 ml vody a 100 ml 6M chlorovodíkové kyseliny a nechá stát přes noc. Směs se promyje ethylacetátem (2x). Vodná vrstva se alkalizuje (přebytek vodného amoniaku), extrahuje do ethylacetátu a tento extrakt se suší a odpařuje, čímž se získá 3,5 g světle hnědé gumy, která se čistí zrychlenou chromatografií ve směsi ethylacetátu, ethanolu a triethylaminu (8:1:1) jako mobilní fázi, čímž se získá 1,2 g čistého produktu ve formě bezbarvé gumy.
Reakcí ethylacetátového roztoku gumy s 0,9 g kyseliny maleinové v ethylacetátu se získá maleátová sůl ve formě amorfní pevné látky, která se spojí a promyje ethylacetátem. Sušením na vzduchu, pak při 80°C/20mbar se získá 1,9 g trimaleátu l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-tíQpyrimidin-4-y laminu ve formě 0,8 ethylacetátového solvátu s teplotou tání 169-170°C. Vypočteno pro C43,2H5i,4N7Oi4,6 C 57,5 H 5,7 N 10,9; Zjištěno C 57,7 H 5,7 N 10,9.
Příklad 8 dimaleátová sůl jVl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í(]pyrimidin-3-yl} -2-fluorfenyl)-4-fluor-1 -benzensulfonamidu (sloučenina 8) //-pyrazolo [3,4-</Jpyrimidin-4-ylaminu (meziprodukt KA)
Suspenze 3-amino-4-pyrazolkarbonitrilu (26,85 g, 0,248 mol) ve formamidu (140 ml) se zahřívá při teplotě 180°C pod atmosférou dusíku po dobu 4 hodin. Po ochlazení vznikne precipitát, který se spojí filtrací a promyje vodou. Pevná látka se suší v lyofilizátoru, čímž se získá 1 //-pyrazolo [3,4-e/]pyrimidin-4-ylamin ve formě hnědého prášku (87%, 29,25 g, 0,217 mol).
‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 13,34 (br s, 1H), 8,13 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,56 (br s, 2H); TLC (dichlormethan/methanol = 9:1) Rt 0,16.
3-jod-l//-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidin-4-ylamin (meziprodukt LA)
Směs 4-aminopyrazolo[3,4-Jjpyrimidinu (meziprodukt KA) (11,75 g, 0,087 mol) a V-jodsukcinimidu (25,45 g, 0,113 mol) v dimethylformamidu (300 ml) se zahřívá při teplotě 50°C po dobu 24 hodin. Přidá se další podíl V-jodsukcinimidu (3,92 g, 0,017 mol) a v zahřívání při teplotě 50°C se pokračuje dalších 24 hodin. Směs se nechá vychladnout na
f’ c ¢: C ( e *'»' f e ci pokojovou teplotu a objem se sníží na 1/3 za sníženého tlaku. Do výsledné kašovité směsi se přidá voda (500 ml), čímž se získá tmavě hnědý precipitát, který se spojí filtrací, promyje vodou a ethanolem a suší za vakua, čímž se získá 3-jod-l//-pyrazolo[3,4íZ]pyrimidin-4-ylamin ve formě světle žlutého prášku (97%, 22 g, 0,084 mol). lH NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 13,81 (s, ÍH), 8,17 (s, ÍH), 2,73 (s, ÍH), 2,57 (s, ÍH); TLC (dichlormethan/methanol = 9:1) Rt0,4.
l,4-dioxaspiro[4.5]dekan-8-ol (meziprodukt M)
Roztok 1,4-cyklohexandion-monoethylenketalu (125 g, 0,8 mol) v methanolu (2 1) se ochladí na teplotu 0°C, pak se po kapkách v průběhu 30 min přidává borohydrid sodný (30,3 g, 0,8 mol). Reakční směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 3 hodin a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Žlutý sirup se znovu rozpustí ve směsi dichlormethanu a izopropanolu (3:1, 1,5 1) a promyje 2N hydroxidem sodným (1 1). Vodná vrstva se dále extrahuje ve směsi dichlormethanu a izopropanolu (3:1) a spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší síranem sodným a koncentrují za sníženého tlaku. Spojený l,4-dioxaspiro[4.5]dekan-8-ol se získá ve formě bezbarvého oleje (65%, 82,4 g, 0,65 mol). *H NMR (CDC13 400 MHz) 3,95 (m, 4H), 3,79 (m, ÍH), 1,84 (m, 4H), 1,60 (m, 4H), TLC (ethylacetát/heptan = 1: 1) Rt 0,16.
-(1,4-dioxaspiro [4.5]dec-8-yl)-3 -j od-177-pyrazolo[3,4-íZ]pyrimidin-4-ylamin (meziprodukt N)
3-Jod-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-ylamin (meziprodukt LA) (11 g, 0,042 mol) se suspenduje v tetrahydrofuranu (500 ml) při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Roztok l,4-dioxaspiro[4.5]dekan-8-olu (meziprodukt M) (19,98 g, 0,126 mol) v tetrahydrofuranu (50 ml) a následně trifenylfosfin (22,1 g, 0,084 mol) se přidávají do suspenze, která se ochladí na teplotu 0°C a pomalu se přidá diethylazodikarboxylát (14,67 g, 0,084 mol). Po 15 minutovém míchání při teplotě 0°C se reakční směs nechát ohřát v průběhu 1 hodiny na pokojovou teplotu. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu (300-400 ml) a nechá stát přes noc. Vzniklý precipitát spojený filtrací se promyje ethylacetátem a suší v lyofilizátoru, čímž se získá 1-(1,4dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-ylaminu ve formě světle žluté pevné látky (54%, 9,12 g, 0,023 mol).
e o
o e *» «· fl £
PC β © e θ e ©
f.o o < © e
C’ «3 ’ e r o *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,19 (s, 1H), 4,70 (m, 1H), 3,90 (m, 4H), 2,13 (m, 2H), 1,74 (m, 6H). TLC (dichlormethan/methanol = 9:1) Rt 0,61.
fórc-butyl-7V-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (meziprodukt P)
Roztok bis(trimethylsilyl)amidu sodného (l,0M roztok v tetrahydrofuranu, 270 ml, 0,27 mol) se po kapkách v průběhu 15 minut přidává do roztoku 4-brom-2-fluoranilinu (24,78 g, 0,130 mol) v tetrahydrofuranu (250 ml) pod atmosférou dusíku. Po dalších 15 minutách se po kapkách přidává di-terc-butyldikarbonát (34,12 g, 0,156 mol) (pozn.: bylo pozorován mírně exotermní průběh) a v míchání se pokračuje po dobu 4 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (300 ml) a nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (150 ml). Vodná vrstva se dále extrahuje ethylacetátem (2 x 200 ml) a spojené organické vrstvy se suší síranem sodným a koncentrují za sníženého tlaku. Čištěním chromatografií na sloupci silikagelu v gradientu 10% až 15% ethylacetátu vheptanech se získá světle žlutá, voskovitá, pevná látka (meziprodukt O) (79%, 30,0 g).
Ή NMR (CDC13,400 MHz) δ 1,51 (9H, s), 7,22 (1H, m) a 7,24 (2H, m).
Roztok chráněného bromanilinu (meziprodukt O) (54,0 g, 0,186 mol), bis-pinakolatodiboranu (56,8 g, 0,223 mol), octanu draselného (54,7 g, 0,558 mol) a [l,T-bis(difenylfosfíno)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu (4,65 g, 5,58 mmol) v dimethylformamidu (1 1) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Dimethylformamid se odstraní za sníženého tlaku a výsledná tmavý pevný zbytek se rozpustí v dichlormethanu (500 ml). Anorganické zbytky se odstraní filtrací přes vrstvu silikagelu a filtrát se čistí chromatografií na sloupci silikagelu gradientem 10% až 15% ethylacetátu v heptanech, čímž se získá produkt ve formě žlutého viskózního oleje, který stáním krystalizuje (92%, 56,5 g).
*H NMR (CDCb,400 MHz) δ 1,33 (12 H, s), 1,53 (9 H, s), 6,82 (1H, br s), 7,46 (1H, c), 7,55(1 H, brd) a 8,12(1 H,brt).
terc-butyl-W- {4-[4-amino-l -(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl-1 /7-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-3yl]-2-fluorfenyl}karbamát (meziprodukt Q)
Suspenze l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4ylaminu (meziprodukt N) (6,5 g, 0,016 mol), řerc-butyl-V-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl95 l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (meziprodukt P) (24,3 g, 0,024 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (749 mg, 0,648 mmol) a uhličitanu sodného (4,29 g, 0,04 mol) v odplyněné vodě (50 ml) a dimethoxyethanu (300 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 18 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, pak zředí ethylacetátem (500 ml) a solankou (500 ml). Vzniklá pevná látka spojená filtrací se promyje ethylacetátem a suší za vakua, čímž se získá /erc-butyl-V-{4-[4-amino-l-(l,4dioxaspiro[4.5]dec-8-yl-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2-fluorfenyl}karbamát ve formě hnědé pevné látky (81%, 6,38 g, 0,013 mol).
lH NMR (DMSO-de, 400 MHz) 9,19 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,83 (t, 1H), 7,43 (m, 2H), 4,78 (m, 1H), 3,91 (m, 4H), 2,24 (m, 2H), 1,79 (m, 6H), 1,49 (s, 9H), TLC (dichlormethan/methanol =95:5) Rt0,42.
4-[4-amino-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidin-l-yl]-l-cyklohexanon (meziprodukt R) fórc-Butyl-V- {4-[4-amino-1 -(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl-1 //-pyrazolo[3,4</|pyrimidin-3-yl]-2-fluorfenyl}karbaniát (meziprodukt Q) (6,38 g, 0,013 mol) se suspenduje v acetonu (400 ml) a ochladí na pokojovou teplotu. Do této suspenze se pomalu přidá 5M kyselina chlorovodíková (96 ml). Reakční směs se pak zahřívá při teplotě 60°C po dobu 3 hodin a koncentruje za sníženého tlaku.
Zbývající kyselá vrstva se upraví na pH = 8 vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Vzniklý precipitát spojený filtrací se promyje vodou a suší v lyofilizátoru, čímž se získá 4- [4-amino-3 -(4-amino-3 -fluorfenyl)-1 Tf-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -y 1 ]-1cyklohexanon ve formě hnědé pevné látky (91%, 4,1 g, 0,012 mol).
'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 8,24 (s, 1H), 7,20 (m, 2H), 6,89 (m, 1H), 5,48 (s, 1H), 5,21 (m, 1H), 2,69 (m, 2H), 2,37 (m, 4H), 2,20 (m, 2H); TLC (ethylacetát/heptan) =4:1; MH+341.
cis- a trans-3 -(4-amino-3 -fluorfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (meziprodukty S a T) jV-methylpiperazin (3,6 g, 0,036 mol) a kyselina octová (2,17 g, 0,036 mol) se přidají do suspenze 4-[4-amino-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-lyl]-l-cyklohexanonu (meziprodukt R) (4,1 g, 0,012 mol) v dichlorethanu (200 ml). Do suspenze reakční směsi se pak po kapkách přidá triacetoxyborohydrid sodný (3,32 g, 0,016
ť.- P <: ( mol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. V průběhu 5 dnů se ve dvou dávkách přidává další triacetoxyborohydrid sodný (1,79 g, 0,084 mol a 1,28 g, 0,06 mol). Reakční směs se filtruje, promyje dichlorethanem (100 ml) a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá 3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin ve formě žluté pevné látky (14,5 g, 0,034 mol), která se čistí a cis/trans izomery se separují zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu, methanolu a hydroxidu amonného (93:5:2) jako mobilní fázi, čímž se získá Zrazw-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-amin (pomalejší složka) ve formě bílé pevné látky (115 mg, 0,27 mmol).
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,19 (s, 1H), 7,18 (m, 2H), 6,88 (m, 1H), 5,46 (s, 2H), 4,60 (m, 1H), 2,35 (br m, 4H), 2,14 (s, 3H), 1,95 (br m, 6H), 1,44 (m, 2H), 1,26 (m, 4H), 0,86 (m, 2H), TLC (dichlormethan/methanol/hydroxid amonný=95:5) R{0,31.
Takto spoj ený cis-3 -(4-amino-3 -fluorfenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]lH-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (1,1 g, 2,59 mmol). lH NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,19 (s, 1H), 7,20 (m, 2H), 6,90 (m, 1H), 5,47 (s, 2H), 4,75 (m, 1H), 3,40 (m, 4H), 2,23 (m, 6H), 2,17 (m, 2H), 1,98 (s, 3H), 1,61 (m, 4H); TLC (dichlormethan/methanol/hydroxid amonný -95:5) Rt0,37.
dimaleátová sůl ΛΤ -(4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 77-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} -2-fluorfenyl)-4-fluor-1 -benzensulfonamidu
Směs 3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (meziprodukt T) (107 mg, 0,252 mmol) a 4-fluorbenzensulfonylchloridu (49 mg, 0,252 mmol) v pyridinu (2,5 ml) se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 20 hodin. V průběhu 24 hodin se přidá další 4-fluorbenzensulfonylchlorid (15 mg, 0,063 mmol a 10 mg, 0,051 mmol). Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá oranžový olej (220 mg, 0,378 mmol). Surový olej se čistí preparativní RP-HPLC (Gilson Cl8) pomocí gradientu octanu amonného a acetonitrilu, čímž se získá Nl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-ltfpyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3 -y 1} -2-fluorfenyl)-4-fluor-1 -benzensulfonamid (meziprodukt U) ve formě bílé pevné látky (220 mg). Maleinová kyselina (55 mg, 0,474 mmol) a volná báze AT-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</lpyrimidin3-yl}-2-fluorfenyl)-4-fluor-l-benzensulfonamidu (92 mg, 0,158 mmol) se rozpustí v
-β © horkém ethanolu (3 ml). Precipitát vzniklý po ochlazení a spojený filtrací se suší v lyofilizátoru, čímž se získá dimaleátová sůl Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-íZ]pyrímidin-3-y I} -2-fluorfenyl)-4-fluor-1 benzensulfonamidu ve formě bílé pevné látky (100 mg, 0,172 mmol).
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 10,42 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,86 (m, 2H), 7,41 (m, 5H), 6,16 (s, 4H), 4,67 (br m, 1H), 2,62 (br m, 6H), 2,01 (br m, 6H), 1,56 (brm, 2H); MH+ 583,6.
Příklad 9 (meziprodukt I) 1 -(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-ylamin (sloučenina 9, meziprodukt I)
4-fenoxyfenylboritá kyselina (meziprodukt V)
Do roztoku 4-fenoxybrombenzenu (98,2 g, 0,39 mol) v suchém THF (800 ml) pod atmosférou dusíku při teplotě -78°C se přidá po kapkách n-BuLi (2,5M roztok v hexanech) (172 ml, 0,43 mol). Bylo pozorováno, že teplota stoupla na -65°C. Po přidání se směs míchá při teplotě -78°C po dobu 15 minut. V průběhu 30 minut se přidá po kapkách triizopropylborát (109,2 ml, 0,473 mol). Po přidání se vytvoří suspenze a směs se nechát ohřát na teplotu 0°C v průběhu 1 hodiny a míchá při teplotě 0°C po dobu 4 hodin. Reakce se zháší přidáním vody po kapkách (300 ml) takovým způsobem, aby vnitřní teplota nepřesáhla 20°C (je třeba chlazení ledem). Směs se nechát přes noc ohřát na pokojovou teplotu, pak se odpařuje do sucha. Zbytek se suspenduje ve vodě (600 ml) a okyselí opatrným přidáním konc. HCl. Výsledný precipitát se spojí filtrací a suší za vakua při teplotě 45°C, pevná látka se rozetře na jemný prášek a trituruje petroletherem (40-60°C). Světle pevná látka se filtruje a suší, čímž se získá 4-fenoxyfenylboritá kyselina (68,8 g, 83%).
Ή NMR (250 MHz, d6-DMSO): 7,99 (1H, m), 7,91 (1H, t), 7,83 (1H, d), 7,4 (2H, m), 7,14 (1H, m), 6,92-7,07 (5H, m). Mikroanalýza: Vypočteno: C (71,4%), H (5,45%); Zjištěno: C (70,25%), H (4,7%).
l,4-dioxaspiro[4.5]dekan-8-ol (meziprodukt M) l,4-Dioxaspiro[4.5]dekan-8-on (150 g, 0,96mol) se míchá s MeOH (1200 ml) pod atmosférou dusíku, dokud se nerozpustí. Směs se ochladí na teplotu -5°C v lázni “j ·* F &
T: C t <5 {' P r υ <
r. £: c c t> o r © c e c o c ze suchého ledu/acetonu a nechá po kapkách reagovat s NaBFU (72,6 g, 1,82 mol) v průběhu 2 hodin. (T < 10°C). Po přidání se směs ochladí na teplotu -10°C a pak nechá ohřát na pokojovou teplotu. Míchá přes noc při pokojové teplotě. Výsledná směs se odpařuje a nechá reagovat s ledovým 5N NaOH (400 ml) a extrahuje CH2CI2 (2 x 500 ml), poté extrahuje ve směsi dichlormethanu a izopropanolu (4:1) (2 x 250 ml), spojené extrakty se promyjí solankou (2 x 200 ml), suší (Na2SO4) a odpařují, čímž se získá bezbarvý olej. Tento olej se dále suší za vakua, čímž se získá l,4-dioxaspiro[4.5]dekan-8ol (141,8 g, 93% výtěžek).
*H NMR: CDCb (250 MHz) 3,91 (4H, m), 3,81 (1H, m), 1,21-1,88 (8H, m, alifatické H).
3-brom-4-chlor-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin (meziprodukt W)
Do roztoku 3-brom-4-chlorpyrazolo[3,4-ď]pyrimidinu (meziprodukt B) (7,5 g, 32 mmol), l,4-dioxaspiro[4.5]dekan-8-olu (meziprodukt M) (15,17 g, 96 mmol), trifenylfosfinu (16,86 g, 64 mmol) v THF (275 ml) se přidá diethylazodikarboxylát (11,14 g, 64 mmol) v THF (50 ml) při teplotě 0°C pod atmosférou dusíku.
Reakční směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 1 hodiny, ohřívá na pokojovou teplotu a pak míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Reakční směs se koncentruje za vakua a rozpustí v horké směsi heptanu, EtOAc a DCM (5:1:5). Zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi heptanu, heptanu a EtOAc (5/1), pak heptanu a EtOAc (4/1) se získá pevná látka, která se trituruje heptanem a pevné látky se odstraní filtrací, čímž se získá 8,2 g 3-brom-4-chlor-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidinu ve formě bílé pevné látky (69%)[Rt v 1:1 heptan: EtOAc = 0,5].
’H NMR (400 MHz, d6-DMSO): 8,89 (1H, s), 4,92 (1H, m), 3,90 (4H, m), 2,16 (2H, m), 1,96 (2H, m), 1,81 (6H, m) HPLC: Tr= 17,11 minut, 96,6%.
-brom-1 -(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-1 JY-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-ylamin (meziprodukt X)
3-Brom-4-chlor-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin (meziprodukt W) (8,2 g, 21 mmol), konc. amoniak (100 ml) a dioxan (100 ml) se zahřívají v Parrově autoklávu při teplotě 120°C po dobu 20 hodin. Rozpouštědla se odpařují a zbytek se rozdělí mezi EtOAc a vodu. EtOAc vrstva se suší Na2SO4, filtruje a odpařuje, © 4 «ίρ η (s <'· Γ ϋ!
* t ί<’ Ο
Ε' «ί (' κ· c
C * Τ <
Γ'
C <ί čímž se získá 3-brom-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-l/7-pyrazoIo[3,4-d]pyrimidin-4ylamin ve formě pevné látky (4,7 g, 61%), která se používá bez dalšího čištění.
*H NMR (400 MHz, dó-DMSO): 8,21 (IH, s), 4,71 (IH, m), 3,90 (4H, m), 2,11 (2H, m), 1,72-1,88 (6H,m)
HPLC: TR = 11,84 minut, 92,1 %.
l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-ylamin
3- Brom-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-ylamin (meziprodukt X) (4,0 g, 11,3 mmol), 4-fenoxyfenylboritá kyselina (meziprodukt V) (2,66 g, 12 mmol), uhličitan sodný (2,87 g, 27 mmol), tetrakis(trifenyfosfin)palladium (0,78 g, 0,6 mmol) ve směsi dimethoxyethanu (120 ml) a vody (60 ml) se zahřívají při teplotě 85°C pod atmosférou dusíku po dobu 4 hodin. Ochladí na pokojovou teplotu a nechají stát po dobu 72 hodin, pevná látka, která precipituje, se filtruje a promyje vodou a diethyletherem (100 ml pokaždé). Sušením za vakua po dobu 3 hodin se získá 4,2 g 1-(1,4dioxaspiro[4.5]dec-8-yí)-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-ylaminu ve formě béžové pevné látky (87%).
’H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8,24 (IH, s), 7,67 (2H, m), 7,45 (2H, m), 7,19 (5H, m), 4,78 (IH, m), 3,90 (4H, m), 2,25 (2H, m), 1,71-1,84 (6H, m).
MS: MH+ = 444,2.
-(1,4-dioxaspiro [4.5] dec-8-yl)-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4 -<7]pyrimidin-4-y lamin. Druhý způsob
4- amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidm (sloučenina 15) (4,9 g) v 200 ml suchého dimethylacetamidu se nechá reagovat pod atmosférou dusíku s 60% hydridem sodným (2,0 g) a míchá 30 minut. Pak se přidá l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl-4methyl-l-benzensulfonát (meziprodukt Y) (15 g) a směs zahřívá při teplotě 105°C po dobu 42 hodin. Odpařováním za vakua a reakcí s vodou se získá pevná látka, která se spojí a dobře promyje vodou, suší na vzduchu. Pevná látka se zahřívá s diethyletherem (6 x 120 ml) a filtrovaný roztok se odpařuje. Promytím acetonem se získá 1-(1,4dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-ylamin ve formě bělavé pevné látky, která se spojí a promyje acetonem, pak suší na vzduchu. Teplota tání = 200-202,5°C. Vypočteno pro C25H25N5O3 C 67,7 H 5,6 N 15, 8. Zjištěno C 67,6 H 5,8 N 15,4.
© e θ e β c © ¢- β e e © e e © re t- e s 9 e e © © e e © © © o © o c o © © ©
100 f- ε β © e c © © 6 α © «- © r c c e ε e e
ί) £>
Příklad 10
4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-čZjpyrimidin-1 -yl] -1 -cyklohexanon (sloučenina 10, meziprodukt J)
Do l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4ylaminu (sloučenina 9) (4,2 g, 95 mmol) v acetonu (200 ml) se po kapkách přidá HCl (5N, 50 ml) a míchá se při pokojové teplotě po dobu 24 hodin. Aceton se odpaří a směs se alkalizuje NaOH (5N, 60ml), extrahuje EtOAc (3 x 200 ml), suší, filtruje a odpařuje, čímž se získá pevná látka, která se trituruje ve směsi EtOAc a Et2O (1:20) a filtruje, čímž se získá 4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-1 -yl] -1 -cyklohexanonu ve formě krémové pevné látky (3,4 g, 90%). Teplota tání = 203 - 205°C.
*H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8,28 (1H, s), 7,66 (2H, m), 7,44 (2H, m), 7,08-7,20 (5H, m), 6,1-7,3 (2H, bs), 5,26 (1H, m), 2,71 (2H, m), 2,41 (4H, m), 2,24 (2H, m) HPLC: TR 15,43 minut, 95%.
Příklad 11 fórc-butyl-4-4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-1 -yl]cyklohexyl1-piperazinkarboxylát (sloučeniny 11 a 12)
Do roztoku 4- [4-amino- 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-t/]py rimidin-1 -y 1 ]-1cyklohexanonu (sloučenina 10) (2,0 g, 5 mmol) a /erc-butoxykarbonylpiperazinu (2,8 g, 15 mmol) v dichlorethanu (200 ml) se přidá ledová kyselina octová (0,9 g, 15 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (1,59 g, 7,5 mmol). Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 20 hodin, zháší roztokem NaOH (2,5N, 200 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 100 ml), spojené organické vrstvy se promývají vodou, suší (Na2SO4) a filtrují, roztok se odpařuje za vzniku červeného oleje, který se podrobí zrychlené chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu až 10% MeOH v ethylacetátu s 2,5% přírůstkem MeOH jako mobilní fází. Frakce odpovídající rychlejší látce (Rtv 9:1 EtOAc: MeOH = 0,27) se spojí a odpařují, čímž se získá /crc-butyl-4-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimÍdin-lyl]cyklohexyl-l-piperazinkarboxylát ve formě bílé pevné látky (1,48 g, 53%). Teplota tání = 170-172°C, identifikovaný jako formě cz.s-diastereoizomer (sloučenina 11).
Ο © (S Ρ ň G r t e r ř e o r e · ť? ( t 0 r e c c fj c ř r <
c «·.· C r c c r r c c Γí c> <:. c c <*· r < v e r c · c c υ c c o r r c r c t· <
101 ‘H NMR (400 MHz, d6-DMS0) 8,23 (1H, s), 7,65 (2H, d, J= 8,8 Hz), 7,43 (2H, m), 7,127,20 (5H, m), 4,82 (1H, m), 3,34 (4H, m), 2,40 (4H, m), 2,30 (3H, m), 2,04 (2H, m), 1,601,72 (4H, m), 1,39 (9H, s), HPLC: TR = 15,74 minut, 98,16%.
MS: MH+= 570,1.
Frakce odpovídající pomalejší látce (Rtv 9:1 EtOAc: MeOH = 0,18) se spojí a odpařují, čímž se získá řerc-butyl-4-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4ííjpyrimidin-l-yl]cyklohexyl-1-piperazinkarboxylát ve formě krémové pevné látky (0,5 g, 18%). Teplota tání = 178-179°C, identifikovaný jako trans diastereoizomer, (sloučenina 12).
*H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8,23 (1H, s), 7,65 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,42 (2H, m), 7,11 7,20 (5H, m), 4,63 (1H, m), 3,34 (4H, m), 2,47 (5H, m), 1,89-2,06 (6H, m), 1,34-1,55 (11 H, m) HPLC: Tr = 15,29 minut, 98,15%.
MS: MH+ = 570,1.
Příklad 12 cw-3-(4-fenoxy fenyl)-1 -(4-piperazinocyklohexyl)-1 JT-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-ylamin trimaleát (sloučenina 13)
Do cA-ZÉ’rc-butyl-4-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidÍn-lyl]cyklohexyl-l-piperazinkarboxylátu (sloučenina 11) (1,4 g, 2,46 mmol) v dichlormethanu (35 ml) se po kapkách při teplotě 0°C pod atmosférou dusíku přidá TFA (6 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 48 hodin, zháší NaOH (5N vodným roztokem, 50 ml) a extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml), promývá vodou, suší (Na2SO4), filtruje a odpařuje za vzniku bezbarvého oleje (1,23 g), který se rozpustí v EtOAc (40 ml). Do tohoto roztoku se přidá roztok maleinové kyseliny (913 mg) v EtOAc (10 ml). Výsledná pevná látka se filtruje pod proudem dusíku a suší za vakua další 2 hodiny, čímž se získá 1,8 g (90%) trimaleátu cz.s-3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4piperazinocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-ylaminu ve formě bílé pevné látky. Teplota tání = 173-175°C.
’H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8,26 (1H, s), 7,67 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,42 (2H, m), 7,127,21 (5H, m), 6,19 (6H,s), 4,86 (1H, m), 3,18 (4H, m), 2,89 (4H, m), 2,67 (1H, m), 2,28 (2H, m), 2,05 (2H, m), 1,74-1,80 (4H, m), HPLC: TR = 12,52 minut, 100%.
©e & e © β e « « o· e t>
fí c © e © ř e β · e β © e © © β &
β β β ο cen ε ee e o e o o c co
O <5 © o
102
MS: MH+ = 470,3. Mikroanalýza: Vypočtena pro C39H43N7O13 C: 57,3% H: 5,3% N: 12,0%. Zjištěno C: 57,0% H: 5,3% Ν: 11,97%.
Příklad 13 trimaleát tra/?ó-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 -(4-piperazinocyklohexyl)-1 Z/-pyrazolo[3,4íTJpyrimidin-4-ylaminu (sloučenina 14)
Do trans-terc-hvíy 1-4-4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-č7]pyrimidinl-yl]cyklohexyl-l-piperazinkarboxylátu (sloučenina 12) (0,5 g, 0,88 mmol) v dichlormethanu (15 ml) se po kapkách při teplotě 0°C pod atmosférou dusíku přidá TFA (4 ml). Směs se míchá se při pokojové teplotě po dobu 48 hodin, zháší roztokem NaOH (5N, 25 ml) a extrahuje dichlormethanem (3 x 25 ml), promývá vodou, suší (Na2SO4), filtruje a odpařuje za vzniku béžové pevné látky (0,39 g), která se rozpustí v EtOAc (20 ml). Do tohoto roztoku se přidá roztok maleinové kyseliny (290 mg) v EtOAc (5 ml). Výsledná pevná látka se pod proudem dusíku filtruje a za vakua suší další 2 hodiny, čímž se získá 0,6 g (83%) trimaleátu trans-3-(4-fenoxy fenyl)-1 -(4-piperazinocyklohexyl)-\Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-ylaminu ve formě bílé pevné látky. Teplota tání = 153-155°C. 'H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8,25 (1H, s), 7,65 (2H, m), 7,43 (2H, m), 7,11-7,21 (5H, m), 6,17 (6H, s), 4,69 (1H, m), 3,20 (4H, m), 2,97 (4H, m), 2,84 (1H, m), 2,04-2,09 (6H, m), 1,59 (2H, m), HPLC: TR = 12,65 minut, 100%.
MS: MH+ = 470,1 . Mikroanalýza: Vypočteno pro C39H43N7O13 C: 57,3% H: 5,3% N: 12,0% Zjištěno C: 57,1% H: 5,4% N: 12,10%.
Příklad 14
4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin (sloučenina 15) l,4-dioxaspiro[4.5]dekan-8-ol (meziprodukt M) l,4-Dioxaspiro[4.5]dekan-8-on (150 g, 0,96 mol) se míchá s MeOH ( 1200 ml) pod atmosférou dusíku, dokud se nerozpustí. Reakční směs se ochladí na teplotu -5°C v lázni ze suchého ledu a acetonu a nechá po kapkách v průběhu 2 hodin reagovat s NaBH4 (72,6 g, 1,82 mol), (T < 10°C). Po přidání se směs ochladí na teplotu -10°C a nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá přes noc při pokojové teplotě. Výsledná směs se odpařuje a t fí f P ( © & c c t> λ fí o e> c <- <: fí: fí Γ ř' f.
r ť; e· e ca c < r ť © fí ť c c o r < © β· é © O β ft
103 nechá reagovat s ledovým roztokem 5N NaOH (400 ml) a extrahuje CH2CI2 (2 x 500 ml), poté extrahuje ve směsi dichlormethanu a izopropanolu (4:1) (2 x 250 ml), spojené extrakty se promyjí solankou (2 x 200 ml), suší přes noc (Na2SO4) a odpařují, čímž se získá bezbarvý olej, který se dále suší za vakua (k odstranění zbylého izopropanolu), čímž se získá l,4-dioxaspiro[4.5]dekan-8-ol 141,8 g, 93% výtěžek.
!HNMR: CDCI3 (250 MHz): 3,91 (4H, m), 3,81 (1H, m), 1,21-1,88 (8H, m, alifatické H).
1,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl-4-methyl-1 -benzensulfonát (meziprodukt Y)
Do míchaného roztoku l,4-dioxaspiro[4.5]dekan-8-olu (meziprodukt M) (99,8 g,
0,63 mol) v pyridinu (450 ml) při teplotě 0°C pod atmosférou dusíku se po kapkách přidává tosylchlorid (132,4 g, 0,69 mol) takovým způsobem, aby teplota nepřesáhla 2°C. Po přidání se směs nechát pomalu ohřát na pokojovou teplotu a míchá při pokojové teplotě přes noc. Nechá reagovat s vodou (750 ml) a extrahuje EtOAc (500 ml pak 2 x 250 ml). Spojené extrakty se promyjí 3N HCl (3 x 300 ml), solankou (300 ml) a suší nad Na2SO4, filtrují a odpařují, čímž se získá světle žlutý olej (200 g surový). Tento olej se nechá reagovat s petroletherem (40-60°C) (200 ml) a krystalizuje. l,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl-4methyl-1-benzensulfonát se filtruje, promyje petroletherem (40-60°C) (200 ml) a suší za vakua. Výtěžek = 181,0 g, 92%.
l,l-Dikyano-2-hydroxy-2-(4-fenoxyfenyl)ethen (meziprodukt Z)
4-Fenoxybenzoová kyselina (48 g) se přidá do lOOml thionylchloridu a zahřívá pod mírným refluxem po dobu 1 hodiny. Thionyichlorid se odstraní destilací, zbylý olej se rozpustí v toluenu a těkavá látka se odstraní při teplotě 80°C/20mbar. Výsledný chlorid kyseliny se rozpustí v 200ml toluenu a 35 ml tetrahydrofuranu, přidá se 14,8 g malononitrilu a roztok se míchá při teplotě -10°C, zatímco se přidává 57,9 g diizopropylethylethylaminu v 150 ml toluenu za teploty 0°C. Po 1 hodině při teplotě 0°C se směs míchá při teplotě 20°C přes noc. Hydrochlorid aminu se odstraní filtrací a filtrát se odpařuje za vakua. Zbytek se vytřepává v ethylacetátu a promyje 1,25 M kyselinou sírovou, pak solankou a suší síranem sodným. Odpařením se získá polopevný zbytek, který se nechá reagovat s malým množstvím ethylacetátu, čímž se získá 4,1 g čistého produktu ve formě bílé pevné látky s teplotou tání 160-162°C. Z filtrátu se po odpaření získá 56,5 g (96%) l,l-dikyano-2-hydroxy-2-(4-fenoxyfenyl)ethenu ve formě šedo-hnědé pevné látky dostatečně čisté pro další použití.
104 « · φ φ • φ β • φ β · β φ Φ « · e e e e © © e © ®« « «> © 9 © © © e e ί ® φ <5 © φ φ * φφφ φφφ
Φ φ φφφφ !Η NMR (DMSO-de 400 MHz) 8,18 (široké s, ΙΗ), 7,62 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,19 (m, ÍH), 7,07 (d, 2H), 6,94 (d, 2H).
1,1 -dikyano-2-methoxy-2-(4-fenoxy feny l)ethen (meziprodukt AA) l,l-Dikyano-2-hydroxy-2-(4-fenoxyfenyl)ethen (meziprodukt Z) (56,5 g) v 780 ml acetonitrilu a 85 ml methanolu se míchá pod atmosférou dusíku při teplotě 0°C, zatímco se přidává 52,5 ml diizopropylethylamin, pak 150 ml 2M trimethylsilyldiazomethanu v THF. Po 2 denním míchání při teplotě 20°C se kvůli chromatografii přidá 2 g oxidu křemičitého, přičemž nebylo pozorováno další uvolňování dusíku. Hnědočervený roztok se odpařuje za vakua. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu a dobře promyje vodou, pak solankou, suší a odpařuje. Zbytek se extrahuje diethyletherem (3 x 250 ml), dekantuje od nerozpustného oleje. Odpařením etherových extraktů se získá 22,5 g l,l-dikyano-2-methoxy-2-(4fenoxyfenyl)ethenu ve formě světle oranžové pevné látky téměř čisté podle TLC (3:2 ethylacetát:cyklohexan). Nerozpustný olej se čistí zrychlenou chromatografii, čímž se získá 15,0 g červeno-oranžového oleje.
Spojený výtěžek (63%) ‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 7,71 (d, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,29 (m, ÍH), 7,16 (m, 4H), 3,93 (s, 3H).
3- amino-4-kyano-5-(4-fenoxyfenyl)pyrazol (meziprodukt AB) l,l-Dikyano-2-methoxy-2-(4-fenoxyfenyl)ethen (meziprodukt AA) (22,5 g) a l,l-dikyano-2-methoxy-2-(4-fenoxyfenyl)ethenový olej (15 g) se nechá reagovat s roztokem 18 ml hydrátu hydrazinu v 25 ml ethanolu a zahřívá na parní lázni po dobu 1 hodiny, poté se přidá 15 ml ethanolu a 10 ml vody. Precipitovaná pevná látka se spojí a promyje ve směsi ethanolu a vody (4:1), suší na vzduchu, čímž se získá 3-amino-4-kyano5-(4-fenoxyfenyl)pyrazol ve formě světle oranžové pevné látky 30,0 g (80%) s teplotou tání 187-188,5°C.
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 12,11 (široké s, ÍH), 7,80 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, ÍH), 7,09 (m, 4H), 6,47 (široké s, 2H). Vypočteno pro C16H12N4O C 69,6 H 4,3 N 20,3; Zjištěno C 69,5 H 4,4 N 20,2.
4- amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-e/]pyrimidin
3-amino-4-kyano-5-(4-fenoxyfenyl)pyrazol (meziprodukt AB) (29,5 g) se suspenduje v 300 ml formamidu a zahřívá pod atmosférou dusíku při teplotě 180°C po dobu 4 hodin, ochladí na teplotu 30°C, přidá se 300 ml vody a pevná látka se spojí, dobře ίί fc c e fc fc (i e » e- e fc e e o fc e fc C
O fc ( «· fc fc fc: l O fc β
fc ř e
105 promyje vodou, pak methanolem a suší na vzduchu, čímž se získá 24,6 g čistého produktu (80%) 4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/|pyrimidinu s teplotou tání 267269°C ve formě světle hnědošedé pevné látky. Vypočteno pro C17H13N5O C 67,3 H 4,3 N 23,1. Zjištěno C 67,0 H 4,4 N 23,1.
Příklad 15
4-amino-1 -cyklopentyl-3 -(4-fenoxyfenyl)- l//-pyrazolo[3,4-ř/]pyrimidin (sloučenina 16)
4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin (sloučenina 15) (0,91 g) v 50 ml suchého dimethylacetamidu se míchá pod atmosférou dusíku při teplotě 25°C, zatímco se přidává 60% hydrid sodný (0,20 g). Po 30 minutovém míchání se přidá bromcyklopentan (0,8 ml) a směs se míchá přes noc. Po odpařením za vakua se zbytek nechá reagovat s vodou a extrahuje do ethylacetátu. Zrychlenou chromatografií ve směsi cyklohexanu a ethylacetátu (3:2) jako mobilní fází se získá 0,36 g l-cyklopentyl-4(cyklopentylamino)-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-d\ pyrimidinu ve formě bezbarvého oleje.
Ή NMR (DMSO) 8,319 (s, IH), 7,65-7,69 (m, 2H), 7,40-7,48 (m, 2H), 7,09-7,23 (m, 5H), 5,926/5,955 (d, IH), 5,17-5,29 (chin, IH), 4,44-4,52 (m, IH), 1,86-2,12 (m, 8H), 1,39-1,72 (m, 8H).
Další elucí ethylacetátem se získá 4-amino-l-cyklopentyl-3 -(4-fenoxyfenyl-\Hpyrazolo[3,4-c/|pyrimidin. Rekrystalizací z methyl-Zerc-butyletheru se získají bezbarvé jehličky s teplotou tání 134,7-135,6°C (0,2 g, 18%).
Vypočteno pro C22H2iN5O C 71,2 H 5,7 N 18,9; Zjištěno C 71,05 H 5,7 N 18,8.
Ή NMR (DMSO) 8,237 (s, IH), 7,64-7,68 (m, 2H), 7,40-7,47 (m, 2H), 7,10-7,22 (m, 5H), 6,85 (velmi široké s, 2H), 5,17-5,30 (chin, IH), 1,67-2,09 (m, 8H).
Příklad 16
3-(4-fenoxyfenyl)-l-(tetrahydropyran-4-yl)-lZ/-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-4-ylamin (sloučenina 17)
3-(4-Fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/Ipyrimidin-4-ylamin (sloučenina 15) (0,97 g) v 33 ml suchého dimethylacetamidu se míchá pod atmosférou dusíku, zatímco se přidává 60% hydrid sodný (0,22 g). Po 30 minutách se přidá tetrahydropyran-4-yl-tosyIát (1,0 g) a • f © · e · é « · · © e © « e e « fc 6 ne © « * · <5 C • C
O f?
e r • e e ti c r e o
106 β c e » e · » e © fe €
81» ·»·· směs zahřívá při teplotě 105°C po dobu 4 hodin, pak při 135°C po dobu 3,5 hodiny. Odpařením za vakua a promytím vodou se získá světle hnědá pevná látka, která se spojí a dobře promyje vodou a suší na vzduchu. Zrychlenou chromatografií ve směsi ethylacetátu a triethylaminu (19:1) se získá 0,22 g (18%) 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(tetrahydropyran-4-yl)1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-ylaminu s teplotou tání 187-187,5°C. Vypočteno pro C22H2iN5O2 C 68,2 H 5,4 N 18,1. Zjištěno C 68,1 H 5,5 N 18,0.
Příklad 17 dimaletát cis-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4d]pyrimidin-3-yl}fenyl)(fenyl)methanonu (sloučenina 18) a dimaletát trans-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4ť/]pyrimidin-3-yl}fenyl)(fenyl)methanonu (sloučenina 19) fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methanon (meziprodukt AL) Směs 4-brombenzofenonu (2,97 g, 0,011 mol), diboronpinakolester (3,47 g, 0,014 mol), [l,r-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatý komplex s díchlormethanem (1:1) (0,28 g, 0,00034 mol) a octanu draselného (3,34 g, 0,034 mol) v N,//-dimethylformamidu (65 mi) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (50 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (5:95) jako mobilní fázi, čímž se získá fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methanon (2,01 g, 0,0065 mol).
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 7,85 (d, 2H), 7,71 (m, 5H), 7,56 (d, 2H), 1,32 (s, 12H); TLC (ethylacetát/heptan 1:9) Rt0,36
4-(4-amino-3 -jod-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl)-1 -cyklohexanon (meziprodukt AK) l-(l,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-ylamin (meziprodukt N) (13,12 g, 32,7 mmol) se suspenduje v acetonu (240 ml) a směs se ochladí na teplotu 0°C. Po kapkách se přidá vodný roztok 5N HCI (200 ml), přičemž během přidávání se teplota udržuje pod 4°C. Po přidání se směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 18 hodin, zbývající pevná látka se odstraní filtrací a filtrát se neutralizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, precipitát se spojí filtrací a promyje vodou a suší za vakua, čímž se získá 4-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4z/]pyrimidin-l-yl)-l-cyklohexanon (8,20 g, 32,8 mmol).
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 8,23 (s, ΪΗ), 5,18 (m, 1H), 2,64-2,73 (m, 2H), 2,26-2,37 (m, 4H), 2,17-2,30 (m, 2H).
e«.
e- €.
» «? c c <· $ * c- & er c z o t> t?.
t e » t. f> · «· ©pec- o e e> ( tt e o o © e r © e 0 © < e- © & « e e © e « ©
107 cis- a /ram-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- l//-pyrazolo[3,4-<s']pyrimidin-4amin (meziprodukty AC a AD)
Směs 4-(4-amino-3~jod-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl)-l-cyklohexanonu (meziprodukt AK) (1,32 g, 0,0037 mol), A-methylpiperazinu (1,11 g.0,011 mol) a kyseliny octové (0,66 g, 0,011 mol) v 1,2-dichlorethanu (50 ml) se míchá po dobu 10 minut při teplotě 40°C a při této teplotě se najednou přidá triacetoxyborohydrid sodný (1,09 g, 0,0052 mol). Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 24 hodin a přidá se triacetoxyborohydrid sodný (0,25 g, 0,0012 mol). Směs se míchá dalších 48 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený roztok vodného hydrogenuhličitanu sodného (80 ml) a chloroform (50 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje chloroformem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá žlutý olej. Sloučenina se dále čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, triethylamínu a methanoiu (88:11:1) jako mobilní fázi, čímž se získá cN-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,93 g, 0,0021 mol). 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,18 (s, 1H), 4,71 (m, 1H), 2,38-1,9 (m, 13H), 2,17 (s, 3 H), 1,631,5 (m, 4H); TLC (dichlormethan/triethylamin = 9:1) Rf 0,24 a Zrany-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-íf|pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,38 g, 0,00086 mol). !H NMR (DMSO-d6,400 MHz) 8,18 (s, 1H), 4,55 (m, 1H), 2,38-1,9 (m, 15H), 2,15 (s, 3H), 1,42 (m, 2H); TLC (dichlormethan/triethylamin = 9.T) Rf0,ll.
dimaletát cz'v-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4ďjpyrimidin-3 -yl} fenyl)(fenyl)methanonu
Směs fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methanonu (meziprodukt AL) (0,241 g, 0,00078 mol), m-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]© ©
C ee ,· < : c «' ®© o β o e c r· < r, n e e c c t o β © © O f c o © © e t> © © <·' r ( i o e © <;
© ř e i· c e e < r < c, ® ε e e e e
108
177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (meziprodukt AC) (0,30 g, 0,00068 mol), tetrakis(trifenyl-fosfin)palladia (0,047 g, 0,000041 mol) a uhličitanu sodného (0,18 g, 0,0017 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (10 ml) a vody (5 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi roztok nasyceného vodného hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a ethylacetát. Organická vrstva se separuje a vodná vrstva se dále extrahuje ethylacetátem (2x). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku, čímž se získá hnědá pevná látka, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, triethylaminu a methanolu (95:4:1) jako mobilní fázi, čímž se získá cz'5-{4-[4-amino-l-(4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl-]-fenyl}(fenyl)methanon ve formě bílé pevné látky (0,195 g, 0,0004 mol), která se rozpustí v refluxujícím ethanolu (17 ml) a přidá se předem zahřátý roztok maleinové kyseliny (0,137 g, 0,0018 mol). Směs se refluxuje po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá dimaletát cz5,-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl}fenyl)(fenyl)methanonu ve formě bílé pevné látky (0,221 g, 0,0003 mol).
'H NMR (DMSO-d6,400 MHz) 8,28 (s, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,83 (m, 4H), 7,73 (t, 1H), 7,61 (m, 2H), 6,15 (s, 4H), 4,88 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,71 (s, 3H), 2,28 (m, 2H), 2,07 (m, 2H), 1,74 (m,4H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,63 min.
MS: MH+ 496.
dimaleát trans-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3-yl}fenyl)(fenyl)methanonu
Podobným způsobem pro trans-izomer se získá dimaleát trans-(4-{4-amino-1-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3 yl}fenyl)(fenyl)methanonu ve formě bílé pevné látky (0,155 g, 0,0002 mol).
’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) 8,27 (s, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,83 (m, 4H), 7,73 (t, 1H), 7,61 (m, 2H), 6,17 (s, 4H), 4,77 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,68 (s, 3H), 2,05 (br, 6H), 1,61 (br, 2H) RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5m, 100A, 25 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,59 min.
ei e 5» <£ · » t« « e β & e β fe © f - c e * ··
4- 9 9 9 a a e fe fe © β e » β e e » » Si 6 <· * © β e Φ β fe « fe e e « ♦ · a e
109
MS: MH+ 496.
Příklad 18 trimaleát cis-3 -(4-anilinofenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 7/-pyrazolo[3,47]pyrimidin-4-aminu (sloučenina 20)
A-fenyl-/V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (meziprodukt AE) Směs /VjV-(4-bromfenyl)-fenylaminu (0,60 g, 0,0024 mol), diboronpinakolester (0,74 g, 0,0029 mol), [l,r-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,059 g, 0,000073 mol) a octanu draselného (0,71 g, 0,0073 mol) v Α,Α-dimethylformamidu (25 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (50 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a nheptanu 2:98) jako mobilní fázi, čímž se získá A-fenyl-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,33 g, 0,0011 mol).
'H NMR (DMSO-dg 400 MHz) 8,42 (s, 1H), 7,51 (d, 2H), 7,27 (m, 2H), 7,12 (d, 2H), 7,01 (d, 2H), 6,83 (t, 1H), 1,27 (s, 12H);
TLC (ethylacetát/heptan 1:9) Rt0,54 trimaleát cz5-3-(4-anilinofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í(|pyrimidin-4-amin
Směs jV-fenyl-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (meziprodukt AE) (0,33 g, 0,0011 mol), m-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-7]pyrimidin-4-aminu (meziprodukt AC) (0,43 g, 0,00097 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,0067 g, 0,000058 mol) a uhličitanu sodného (0,26 g, 0,0024 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (16 mí) a vody (8 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi roztok nasyceného vodného hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a ethylacetátu (50 mi). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje ethylacetátem (2x). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a odpařují za sníženého tlaku, čímž se získá
O f:
f c í' f r.
> >' r c < i iV 1/ < Γ ( v
Í r f c Γ < í ( c c (
c. i ·· c, c f , c C
110 hnědá pevná látka, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, triethylaminu a methanolu (92:7:1) jako mobilní fázi, čímž se získá 3-(4anilinofenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl] -1 H-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,400 g, 0,00074 mol), který se rozpustí pod refluxem v ethanolu (17 ml) a přidá se předem zahřátý roztok maleinové kyseliny (0,342 g, 0,003 mol) v ethanolu (8 ml).
Směs se refluxuje po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá trimaleát cw-3-(4-anilinofenyl)l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu (0,44 g, 0,00053 mol).
*H NMR (DMSO-d6 400 MHz) 8,45 (s, IH), 8,23 (s, IH) 7,52 (d, 2H), 7,28 (m, 2H), 7,20 (m, 4H), 6,89 (t, IH), 6,19 (s, 6H), 4,83 (m, IH), 3,1 (br, 9H), 2,72 (s, 3H), 2,28 (m, 2H), 2,07 (m, 2H), 1,74 (m, 4H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,12 minut.
MS: MH+ 483.
Příklad 19 dimaleát cis-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexy 1] -3 -(6-fenoxy-3 -pyridyl)-1Hpyrazolo[3,4-</|pyrimidin-4-amin (sloučenina 21) a maleát trans-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 -(6-fenoxy-3 -pyridyl)- 1Hpyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-amin (sloučenina 22)
5-brom-2-fenoxypyridin (meziprodukt AF)
Roztok fenolu (1,99 g, 0,021 mol) v Η,Η-dimethylformamidu (60 ml) se ochladí na teplotu 0°C a najednou se přidá 60% suspenze hydridu sodného v parafinu (0,89 g, 0,022 mol). Směs se míchá při této teplotě po dobu 10 minut a přidá se najednou 2,4-dibrompyridin. Směs nechá ohřát na pokojovou teplotu, zatímco se míchá pod atmosférou dusíku po dobu 72 hodin a zahřívá při teplotě 70°C po dobu 24 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu (150 ml) a promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml), solankou (80 ml), suší síranem hořečnatým a odpařuje. Zbytek se čistí preparativní RP-LC/MS (Gilson-Micromass Cl8, 5m, 130A, 21 cm, 0%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v t’ O <> f' ci Ě *; « » 8 ·. <s t> ť &e ί» f ť © · * e t « o r «< o © c ft g c b *?
t t> p © 6 e e & e <: t. f- c t, t ft · e e r < r <j © e e
111 průběhu 9 minut, 25 ml/min), čímž se získá 2-brom-5-fenoxypyridin ve formě žlutého oleje (1,40 g, 0,0056 mol).
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 8,28 (s, 1H), 8,07 (d, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,25 (t, 1H), 7,16 (d, 2H), 7,04 (d, 1H).
MS: MH+ 250.
2-fenoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin (meziprodukt AG)
Směs 5-brom-2-fenoxypyridinu (1,40 g, 0,0056 mol), diboronpinakolesteru (meziprodukt AF) (1,71 g, 0,0067 mol), [l,l'-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,137 g, 0,00017 mol) a octanu draselného (1,65 g, 0,0168 mol) v A/ŤV-dimethylformamidu (50 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (40 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu. Filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a n-heptanu (1:9) jako mobilní fázi, čímž se získá 2-fenoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)-pyridin ve formě bílé pevné látky (čistota 93% (HPLC), 1,20 g, 0,004 mol).
’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) 8,36 (s, 1H), 8,03 (d, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,25 (t, 1H), 7,16 (d, 2H), 7,01 (d, 1H), 1,30 (s, 12H).
MS: MH+ 298.
l-(l,4~dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4amin (meziprodukt AH)
Směs 2-fenoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridinu (meziprodukt AG) (1,1 g, 0,0037mol), l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jod-l//pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (meziprodukt N) (1,29 g, 0,0032 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,22 g, 0,00019 mol) a uhličitanu sodného (0,85 g, 0,008 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (40 ml) a vody (20 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a ethylenglykoldimethylether se odstraní za sníženého tlaku, precipitát se spojí filtrací, promyje vodou (lx), acetonitrilem (2x) a diethyletherem (2x), čímž se získá • 4 « β « «· ·* · · • · · 4 9 «4 · · 9 9 ι • 4 · · 4 · ·« » • 4»····«·· » *4 «444··· ······· « · «« 4 · 4444
112
-(1,4-dioxaspiro [4.5 ] dec-8-y 1)-3 -(6-fenoxy-3-pyridyl)-1 /Z-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4amin ve formě bělavé pevné látky (1,03 g, 0,0023 mol).
’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) 8,36 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,03 (d, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,22 (m, 3H), 7,16 (d, 1H), 4,81 (m, 1H), 3,93 (s, 4H), 2,24 (m, 2H), 1,88 (m, 6H). MS:MH+445.
4-[4-amino-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 -cyklohexanon (meziprodukt AI)
1-(1,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-177-pyrazolo [3,4d]pyrimidin-4-amin (meziprodukt AH) (1,00 g, 0,0022 mol) se trituruje v acetonu (20 ml) a po kapkách se přidá roztok 5N kyseliny chlorovodíkové. Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin a neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, precipitát se spojí filtrací, promyje vodou (2x) a suší, čímž se získá 4-[4-amino-3-(6fenoxy-3 -pyridyl)-1 H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1 -yl]-1 -cyklo-hexanon ve formě bělavé pevné látky (čistota 94% (HPLC), 0,90 g, 0,0022 mol)):
*H NMR (DMSO-d6,400 MHz) 8,36 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,07 (d, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,22 (m, 3H), 7,16 (d, 1H), 5,27 (m, 1H), 2,74 (m, 2H), 2,35 (m, 6H);
RP-HPLC (08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,29 minut.
dimaleát c/5'-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu (sloučenina 21) a maleát řra«.s,-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-17/pyrazolo[3,4-tíQpyrimidin-4-aminu (sloučenina 22)
Směs 4-[4-amino-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l/í-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl]-lcyklo-hexanonu (meziprodukt AI) (0,90 g, 0,0022 mol), TV-methylpiperazinu (0,676 g, 0,0067 mol) a octové kyseliny (0,405 g, 0,0067 mol) v 1,2-dichlorethanu (40 ml) se míchá po dobu 10 minut a najednou se přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,62 g, 0,0029 mol). Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 24 hodin a přidá se triacetoxyborohydrid sodný (0,30 g, 0,0014 mol). Směs se míchá po dalších 48 hodin. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (80 ml) a dichlormethan (50 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se r- η υ « « 0 * * «> t e-.ee e> e> {.< ©o- e © (·. n e © cen r- & « e f- n ř o <: c c e C π © t < > Ϊ e c- e· » © e c I· «? e e β ©
113 suší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá žlutý olej. Sloučenina se dále čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, triethylaminu a methanolu (89:10:1) jako mobilní fázi, čímž se získá cisl-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4č/Jpyrimidin-4-amin (meziprodukt AJ): TLC (dichlormethan/triethylamin = 9:1) Rf 0,29 a /rara-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-amin: TLC (dichlormethan/triethylamin = 9:1) Rf0,14.
Roztok czs-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-lHpyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (meziprodukt AJ) (0,53 g, 0,0011 mol) ve směsi ethylacetátu (25 ml) a ethanolu (4 ml) se zahřívá pod refluxem a přidá se předem zahřátý roztok maleinové kyseliny (0,51 g, 0,0044 mol) v ethylacetátu (15 ml). Směs se refluxuje dalších 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá dimaleát czs,-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,61 g, 0,00084 mol).
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,38 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,46 (t, 2H), 7,22 (m, 4H), 6,15 (s, 4H), 4,85 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,70 (s, 3H), 2,25 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,74 (m,4H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 μιη, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,93 minut.
MS: MH+ 485.
Podobným způsobem pro trans-izomer se získá maleát trans-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4aminu ve formě bílé pevné látky (0,049 g, 0,00008 mol). ]H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,35 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,46 (t, 2H), 7,22 (m, 4H), 6,21 (s, 4H), 4,70 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,69 (s, 3H), 2,05 (br, 6H), 1,61 (br, 2H): RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100A, 25 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,40 minut.
MS: MH+ 485.
· © <·. ' c c <· o V , n c r ( ( a t r.
© 0 < C f f. r r? n c <· c < i t· <? i f
CPPC ( i ·. r. < ΐ. t- ¢-.,-- a r
114
Příklad 20 dimaleát trans-benzyl-N- {4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1/7pyrazolo[3,4-<71pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl}karbamátu (sloučenina 23) benzyl-V-(4-brom-2-methoxyfenyl)karbamát (meziprodukt AM)
Roztok hydrogenuhličitanu sodného (3,12 g, 0,0371 mol) ve vodě (35 ml) se přidá do roztoku 4-brom-2-methoxyanilinu (3,00 g, 0,0148 mol) v dioxanu (50 ml). Výsledná směs se míchá po dobu 5 minut a po kapkách se v průběhu 3 minut přidá benzylchloroformiát (3,8 g, 0,022 mol). Reakční směs se míchá po dobu dvou hodin, pak se odstraní dioxan za sníženého tlaku a vodná fáze se extrahuje (2x) ethylacetátem (100 ml každý). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a po filtraci koncentrují za sníženého tlaku. Výsledný zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (5:95) jako mobilní fázi, čímž se získá benzyl-V-(4brom-2-methoxyfenyl)karbamát (3,75 g, 0,011 mol) ve formě bílé pevné látky.
!H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,72 (s, ÍH), 7,61 (d, ÍH), 7,38 (m, 5H), 7,20 (s, ÍH), 7,10 (d, ÍH), 5,14 (s, 2H), 3,81 (s, 3H)
TLC (ethylacetát/heptan 1:9) Rf0,21.
benzyl-V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (meziprodukt AN)
Směs benzyl-V-(4-brom-2-methoxyfenyl)karbamátu (meziprodukt AM) (3,0 g, 0,0089 mol), diboronpinakolesteru (2,72 g, 0,0107 mol), [l,l'-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,219 g, 0,00027 mol) a octanu draselného (2,65 g, 0,027 mol) v W-dimethylformamidu (70 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (70 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (1:9) jako mobilní fázi, čímž se získá benzyl-V-[2methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (1,6 g, 0,0042 mol) ve formě bílé pevné látky.
‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 8,66 (s, ÍH), 7,80 (d, ÍH), 7,38 (m, 5H), 7,25 (d, ÍH), 7,17 (s, ÍH), 5,15 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 1,29 (s, 12H);
β © * ♦ » * « β © β« · · β « · β 0β fe * « © e e © e.
© « £ ·
115
TLC (ethylacetát/heptan 1:9) RfO,13.
dimaleát /ratts-benzyl-V- {4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- 1/í-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl}karbamátu
Směs benzyl-/V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljkarbamátu (meziprodukt AD) (1,26 g, 0,0033 mol), cA-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (1,21 g, 0,0027 mol), tetrakis-(trifenylfosfin)palladia (0,19 g, 0,00016 mol) a uhličitanu sodného (0,726 g, 0,00685 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (40 ml) a vody (20 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi roztok nasyceného vodného hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a ethylacetát (100 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje ethylačetátem (2 x 600 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku, čímž se získá hnědá pevná látka, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, triethylaminu a methanolu (94:5:1) jako mobilní fázi, čímž se získá Zrans-benzyl-JV-({4-{4-amino-1-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl} karbamát (meziprodukt AO) ve formě bílé pevné látky (1,29 g, 0,0023 mol). Tra«5-benzyl-/V-({4-{4-amino-l-[4(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl}karbamát (meziprodukt AO) (0,222 g, 0,00039 mol) se rozpustí v refluxujícím ethanolu (17 ml) a přidá se předem zahřátý roztok maleinové kyseliny (0,135 g, 0,00117 mol) v ethanolu (8 ml). Směs se refluxuje po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací, promyje ethylačetátem a suší, čímž se získá dimaleát /ra/w-benzyl-TV- {4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl}-karbamátu ve formě bílé pevné látky (0,250 g, 0,00031 mol).
’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,76 (s, ÍH), 8,23 (s, ÍH), 7,89 (d, ÍH), 7,40 (m, 5H), 7,20 (m, 2H), 6,15 (s, 4H), 5,18 (s, 2H), 4,69 (m, ÍH), 3,87 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,86 minut.
MS: MH+ 570.
<c e
O ť Ο t ( <! V (- Γ C o f· { r « e r (' c t <> o ť
{i ©
116
Příklad 21 dimaleát trans-N- {4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4<7Jpyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl}benzamidu (sloučenina 24) 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4í7]pyrimidin-4-amin (meziprodukt AP)
Do míchaného roztoku Zra«5,-benzyl-/V-(4-4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl-2-methoxyfenyl)-karbamátu (meziprodukt AO) (0,95 g, 0,00167 mol) v ethanolu (35 ml) se přidá 10% palladium na aktivním uhlí (0,33 g) a výsledná směs se hydrogenuje pod atmosférickým tlakem vodíku po dobu 18 hodin, katalyzátor se odstraní filtrací přes vrstvu celitu a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]177-pyrazolo[3,4-ť7]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,71 g, 0,00164 mol) RPHPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut 1 ml/min), Rt 8,81 minut.
MS: MH+ 437.
dimaleát /r<7m-A-(4-4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl-2-methoxyfenyl)benzamÍdu
Do míchaného roztoku 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (meziprodukt AP) (0,31 g, 0,00071 mol) a benzoylchloridu (0,105 g, 0,00075 mol) v bezvodém dichlormethanu (10 ml) se po kapkách v průběhu 5 minut přidá V-ethyl-A/A-diizopropylamin (0,11 g, 0,00085 mol). Směs se míchá pod atmosférou dusíku další 4 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (30 ml) a vodu (25 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, triethylaminu a methanolu (94:5:1) jako mobilní fázi, čímž se získá /ra«Á-yV-{4-{4-amino1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl}benzamid ve formě bílé pevné látky (0,250 g, 0,00045 mol), který se rozpustí v refluxujícím ethanolu (17 ml) a přidá se předem zahřátý roztok maleinové kyseliny (0,155 g, 0,00133 mol) v ethanolu (8 ml). Směs se reťluxuje po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž e β φ »· · » β ·' tt e « to to c « to C ·; ©· *to tor e β to to e £ to to ο β o © ® «fit· to * β© © to to & © * n e «- e » © · · to * © rte e c *
117 se získá dimaleát /ra«s-N-{4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl}benzamidu ve formě bílé pevné látky (0,196 g, 0,000254 mol).
’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 9,49 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,08 (d, 1H), 7,98 (d, 2H), 7,62 (m, 3H), 7,29 (m, 2H), 6,16 (s, 4H), 4,71 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,20 minut.
MS:MH+571.
Příklad 22 dimaleát N-{4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl}-A,-fenylsulfamidu (sloučenina 25)
3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-í/jpyrimidin-4-amin (meziprodukt AP) (0,37 g, 0,00085 mol) a triethylamin (0,086 g, 0,00085 mol) se suspenduje v bezvodém acetonitrilu (15 ml) při teplotě 0°C a po kapkách se v průběhu 5 minut přidá roztok A-fenylsulfamoylchloridu (0,88 g, 0,0046 mol) v bezvodém acetonitrilu (15 ml). Směs nechá ohřát na pokojovou teplotu pod atmosférou dusíku a míchá po dobu 2,5 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek čistí preparativní RP-HPLC (Rainin, Hypersil Cl 8, 8 m, 100A, 25 cm; 5%-85% acetonitril0,1 % octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), čímž se získá JV-{4-{4-amino-l-[4(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl} A’-fenylsulfamid (0,1 g, 0,00017 mol), který se rozpustí v refluxujícím ethylacetátu (17 ml) a přidá se předem zahřátý roztok maleinové kyseliny (0,039 g, 0,00034 mol) v ethylacetátu (8 ml). Směs se refluxuje po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá dimaleát A-{4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3 -yl} -2 methoxyfenyl}-N’-fenylsulfamidu ve formě bílé pevné látky (0,089 g, 0,00011 mol). 'HNMR (DMSO-dó, 400 MHz) 10,12 (s, 1H), 9,31 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,50 (d, 1H), 7,19 (m, 6H), 6,99 (m, 1H), 6,15 (s, 4H), 4,67 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,1 ( br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);
ť' Γ'
C o < ί ·. < ,- ί ί
Γ < Γ < ί: ( ΐ- , C S- C·
118
RP-HPLC (Delta Pak C 18,5 μηι, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,83 minut.
MS: MH+ 592.
Příklad 23 dimaleát cis- {4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 H-pyrazolo [3,4íOpyrimidin-3 -yl} -fenyl} (fenyl)methanon-O-methyloximu (sloučenina 27) dimaleát trans- {4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-3-yl} -fenyl} (fenyl)methanon-(9-methyloximu (sloučenina 26) (4-Bromfenyl)(fenyl)methanon-<9-methyloxim (meziprodukt AQ)
Směs 4-brombenzofenonu (3,02 g, 0,0116 mol) a hydrochloridu methoxylaminu (4,83 g, 0,0578 mol) se zahřívá ve směsi ethanolu (90 ml) a pyridinu (18 ml) pod refluxem po dobu 2 hodin pod atmosférou dusíku. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi vodu (150 ml) a dichlormethan (100 ml). Vodná fáze se dále extrahuje dichlormethanem (2 x 80 ml každý) a spojené organické extrakty se suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (2:98) jako mobilní fázi, čímž se získá (4-bromfenyl)(fenyl)methanon-<9-methyloxim ve formě bezbarvého oleje (3,13 g, 0,0108 mol).
!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 7,67 (d, 1H), 7,59 (d, 1H), 7,48 (m, 4H), 7,32 (m, 1H), 7,26 (m, 2H), 3,93 (s, 3H)
TLC (ethylacetát/heptan 1:9) Rt 0,44.
fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methanon-<9-methyloxim (meziprodukt AR)
Směs (4-bromfenyl)(fenyl)methanon-<9-methyloximu (meziprodukt AQ) (2,41 g, 0,0083 mol), diboronpinakolesteru (2,53 g, 0,010 mol), [l,T-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,203 g, 0,00025 mol) a octanu draselného (2,44 g, 0,025 mol) v W-dimethylformamidu (65 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (50 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje it 4 t · » · ··' ff· *· · * a «, r · · * * < · © * ·' es r> e · · β ř © « «* c- e> 9 » * «' « ť © * * c © · · © c « « »* r · © * * * * ««*»«··
119 za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (2:98) jako mobilní fázi, čímž se získá fenyl-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methanon-<9-methyloxim (1,9 g, 0,0056 mol).
!H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 7,76 (d, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,41 (m, 5H), 7,26 (d, 2H), 3,88 (s, 3H) 1,30 (s, 12H);
TLC (ethylacetát/heptan 1:9) Rf0,27.
dimaleát cis- {4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //~pyrazolo[3,4J]pyrimidin-3-yl} -fenyl} (fenyl)methanon-O-methyloximu
Směs fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-methanon-6>methyloximu (meziprodukt AQ) (0,701 g, 0,0021 mol), czÁ-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (meziprodukt AC) (0,80 g, 0,0018 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,125 g, 0,00011 mol) a uhličitanu sodného (0,48 g, 0,0045 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (40 ml) a vody (20 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi roztok nasyceného vodného hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a ethylacetát (100 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje ethylacetátem (2 x 70 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku, čímž se získá hnědá pevná látka, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, triethylaminu a methanolu (96:3:1) jako mobilní fázi, čímž se získá cw-{4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yl} -fenyl} (fenyl)methanonO-methyloxim ve formě bílé pevné látky (0,700 g, 0,00133 mol).
Cz5’-{4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3-yl}-fenyl}(fenyl)methanon-č?-methyloxim (0,201 g, 0,00039 mol) se rozpustí v refluxujícím ethanolu (17 ml) a přidá se předem zahřátý roztok maleinové kyseliny (0,178 g, 0,0015 mol) v ethanolu (8 ml). Směs se refluxuje po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá dimaleát cz.s'-{4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}-fenyl }(fenyl)methanon-<9-methyloximu ve formě bílé pevné látky (0,212 g, 0,00028 mol).
120 ’Η NMR (DMSO-d6,400 MHz) 8,26 (s, 1H), 7,74 (d, 1H), 7,66 (d, 1H), 7,51 (m, 6H), 7,33 (d, 1H), 6,14 (s, 4H), 4,85 (m, 1H), 3,91 (s, 3H) 3,1 (br, 9H), 2,71 (s, 3H), 2,33 (m, 2H),
2,07 (m, 2H), 1,74 (m, 4H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 μπι, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,25 minut.
MS: MH+ 525.
Dimaleát trans- {4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3 -y 1} -fenyl} (fenyl)methanon-D-methyloximu
Podobným způsobem (c) pro /rans-izomer s /ra«.v-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidin-4-aminem jako výchozí látkou (meziprodukt AD) (0,317 g, 0,00072 mol) se získá dimaleát trans-{4-{4-amino-1[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y 1} fenyl}(fenyl)methanon-O-methyloxim ve formě bílé pevné látky (0,255 g, 0,000337 mol). *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,25 (s, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,66 (d, 1H), 7,51 (m, 6H), 7,33 (d, 1H), 6,17 (s, 4H), 4,71 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (br, 6H), 1,59 (br, 2H) RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100A, 25 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,10 minut.
MS: MH+ 525.
Příklad 24
Dimaleát trans- {4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3-yl}-fenyl}(fenyl)methanon-oximu (sloučenina 28) (4-bromfenyl)(fenyl)methanon-oxim (meziprodukt AS)
Směs 4-brombenzofenonu (10,0 g, 0,0383 mol) a hydrochloridu hydroxylaminu (13,3 g, 0,192 mol) se zahřívá ve směsi ethanolu (250 ml) a pyridinu (50 ml) pod refluxem po dobu 2 hodin pod atmosférou dusíku. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi vodu (300 ml) a dichlormethan (300 ml). Vodná fáze se dále extrahuje dichlormethanem (2 x 180 ml) a spojené organické extrakty se suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (1:9) jako mobilní r ββ. © c © r, «· ® e. fc » β « ft «> « · β β β
121 fázi, čímž se získá (4-bromfenyl)(fenyl)methanon-oxim ve formě bílé pevné látky (9,93 g, 0,036 mol).
’HNMR (DMSO-d6,400 MHz) 7,66 (d, IH), 7,57 (d, IH), 7,33 (m, 7H)
TLC (ethylacetát/heptan 1:5) RfO,38.
fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methanon-oxim (meziprodukt AT)
Směs (4-bromfenyl)(fenyl)methanon-oximu (1,02 g, 0,0037 mol), diboronpinakolesteru (1,13 g, 0,0044 mol), [l,l’-bis(difenylfosfmo)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,09 g, 0,00011 mol) a octanu draselného (1,09 g, 0,011 mol) v A,A-dimethylformamidu (30 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (50 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (1:7) jako mobilní fázi, čímž se získá fenyl-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methanon-oxim (0,82 g, 0,00254 mol).
*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 11,40 (s, IH), 7,76 (d, IH), 7,66 (d, IH), 7,41 (m, 5H), 7,26 (d, 2H), 1,32 (s, 12H);
TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf0,22 dimaleát trans- {4- {4-amino-l- [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} -fenyl} (fenyl)methanon-oximu
Směs fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methanon-oximu (0,357 g, 0,0011 mol), /ra«s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-l/7pyrazolo[3,4-d]pyrimídin-4-aminu (meziprodukt AD) (0,80 g, 0,00096 mol), tetrakis(trifenylfosfm)palladia (0,067 g, 0,00006 mol) a uhličitanu sodného (0,26 g, 0,0024 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (22 ml) a vody (11 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi roztok nasyceného vodného hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje ethylacetátem (2 x 40 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku, < t>
® β · ™ 4 (l· * · o f9 * • < « o © o « i- · ♦ ••©«©•«•β * *4 ©ÉCB «<3# * « e »3 e t> » c & «.# M e s f « »
122 čímž se získá hnědá pevná látka, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, triethylaminu a methanolu (93:6:1) jako mobilní fázi, čímž se získá Zrfln5,-{4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-fenyl}(fenyl)methanon-oxim ve formě bílé pevné látky (0,211 g, 0,00041 mol), který se suspenduje v refluxujícím chloroformu (17 ml) a přidá se methanolu (4 ml), čímž dojde k vyčeření reakční směsi. Přidá se předem zahřátý roztok maleinové kyseliny (0,096 g, 0,00082 mol) v methanolu (8 ml) a směs se refluxuje po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se suspenduje v ethylacetátu a precipitát se spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá dimaleát řra«s-{4-{4-amino-l-[4-(4-methyl-piperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl}-fenyl}(fenyl)methanon-oximu ve formě bílé pevné látky (0,295 g, 0,0004 mol).
‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,26 (S, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,51 (m, 6H), 7,33 (d, 1H), 6,14 (s, 4H), 4,72 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,68 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,60 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,82 minut.
MS:MH+511.
Příklad 25 tri[(Z)-3-karboxy-2-propenoát] trans-1 -{4-[4-amino-3-(4-(l-fenylamonio)fenyl)-\Hpyrazolo[3,4-d]py rimidin-1 -y l]-cyklohexyl} -4-methylhexahy.dropyrazindia (sloučenina 29)
Podobným způsobem jako u sloučeniny 20 a s /ra«5-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidin-4-aminem jako výchozí látkou (meziprodukt AD) (0,33 g, 0,00075 mol) se získá tri[(Z)-3-karboxy-2-propenoát] trans-1 - {4- [4-amino-3 -(4-(1 -fenylamonio)fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4 -í/]pyrimidin-1 -yl] cyklohexyl}-4-methylhexahydropyrazindia (0,245 g, 0,00034 mol).
’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,43 (s, 1H), 8,22 (s, 1H) 7,51 (d, 2H), 7,28 (m, 2H), 7,20 (m, 4H), 6,89 (t, 1H), 6,17 (s, 6H), 4,67 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,73 (s, 3H), 2,08 (m, 6H), 1,56 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,63 minut.
<: *<
« V ι*4' φ ·» <· r & & β-, <- fe· t <* β· & i e »· « e. c p· i* β ( Ο c fe r <s <> ® fe fe· c c e č v e* « < ρ <í e· « >' fe- *· « f « *a « e r e *
123
MS: MH+ 483.
Příklad 26 c/5_l.[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidmyl)-l//-pyrazolo[3,4ď|pyrimidin-4-amin (sloučenina 30)
5-Brom-2-fenox]pyrimidin (meziprodukt AU)
Směs 5-brom-2-chlorpyrimidinu (5,00 g, 0,0259 mol), fenolu (3,l 6 g, 0,0336 mol), dibenzo-18-crown-6 (0,47 g, 0,0013mol) a práškový hydroxid draselný (3,51 g, 0,0626 mol) v toluenu (75 ml) se zahřívá pod refluxem po dobu 5 hodin za azeotropického odstraňování vody. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi vodu a chloroform. Vrstvy se separují a vodná fáze se extrahuje chloroformem (3x). Spojené organické vrstvy se suší síranem sodným, filtrují a odpařují. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi n-heptanu a ethylacetátu (98:2) jako mobilní fázi, čímž se získá 5-brom-2-fenoxypyrimidin ve formě bílé pevné látky (3,55 g, 0,0141 mol).
’H NMR (DMSO-Dé, 400 MHz, 8,80 (s, 2H), 7,45 (t, 2H), 7,27 (t, lH), 7,22 (d, 2H); TLC («-heptan/ethylacetát = 95:5) Rf 0,20.)
2-fenoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyl-Í ,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyrimidín (meziprodukt AV)
Směs 5-brom-2-fenoxy-pyrimidinu (meziprodukt AU) (3,00 g, 0,0119 mol), diboronpinakolester (3,64 g, 0,0143 mol), [1,1'bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,29 g, 0,00036 mol) a octanu draselného (3,52 g, 0,0358 mol) v N,V-dimethylformamidu (70 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku přes noc. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a téměř veškeré rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (70 ml) a výsledné pevné látky se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá tmavý olej. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (5 ml) a přidá do heptanu (75 ml). Směs se filtruje a precipitát se zahušťuje na suspenzi v heptanu (75 ml) po dobu 17 hodin. Po filtraci, normálním sušení a sušení za vakua se získá 2-fenoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)-pyrimidin ve formě šedé pevné látky (2,95 g, 0,00989 mol).
i- © t 1 i C t r #i ( r ( f c f f e < c
124 *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 8,75 (s, 2H), 7,45 (t, 2H), 7,27 (t, 1H), 7,20 (d, 2H), 1,31 (s, 12H) cis-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 -(2-fenoxy-5 -pyrimidinyl)-177-pyrazolo [3,4J]pyrimidin-4-amin (meziprodukt AW)
Směs cA-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (meziprodukt AC) (0,297 g, 0,000674 mol), 2-fenoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyrimidinu (meziprodukt AV) (0,221 g, 0,000741 mol), uhličitanu sodného (0,179 g, 0,001684 mol) v 1,2-dimethoxyethanu (10 ml) a vodě (20 ml) se intenzivně míchá a přidá se tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,047 g, 0,000040 mol). Reakční směs se míchá po dobu 18 hodin při teplotě 80°C. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (50 ml) a nasycený vodný hydrogenuhiičitan sodný (50 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (3 x 25 ml). Spojené organické fáze se suší síranem sodným a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, methanolu a hydroxidu amonného (95:5:0,5). Rozpouštědla se odstraní za vakua, čímž se získá cz5-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-177pyrazolo[3,4-<7|pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,185 g, 0,000381 mol).
!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,79 (s, 2H), 8,24 (s, 1H), 7,48 (t, 2H), 7,28 (t, 1H), 7,27 (d, 2H), 4,81 (m, 1H), 1,55-2,56 (m, 20H); TLC (dichlormethan/methanol /hydroxid amonný = 90:10:0,5) Rf 0,23 bismaleát czs-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l/7pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu
Roztok cz5-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l/7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (meziprodukt AW) (0,193 g, 0,00040 mol) v absolutním ethanolu (15 ml) se zahřívá pod refluxem. Přidá se roztok maleinové kyseliny (0,184 g, 0,00159 mol) v absolutním ethanolu (10 ml) zahřívaný při teplotě 78°C a směs se zahřívá pod refluxem po dobu 10 minut. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu, vzniklý bílý precipitát se spojí filtrací a promyje absolutním ethanolem (2x10 ml), zbylé rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá bismaleát l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-3 -(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-177-pyrazolo[3,4-<7}pyrimidin4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,254 g, 0,00035 mol).
·<'
A* s- fi i. · ®· « * «.-·· e «·· A «\ re ® t? «ί r. ® 6?
β ft ( * 0 tt f·' 6 © e φ « « » e r » *ť- * « e » · « *
125 ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,81 (s, 2H), 8,26 (s, 1H), 7,49 (t, 2H), 7,28 (t, 1H), 7,26 (d, 2H), 6,14 (s, 4H), 4,87 (m, 1H), 1,60-2,85 (m, 20H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,12 minut.
MS: MH+ 486.
Příklad 27 bismaleát /ram'-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l.ř/pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (sloučenina 31) trans-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-1 /7-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-4-amin (meziprodukt AX)
Směs bwM-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/í-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-4-aminu (meziprodukt AD) (0,300 g, 0,00068 mol), 2-fenoxy-5-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyrimidinu (meziprodukt AV) (0,304 g, 0,00102 mol), uhličitanu sodného (0,180 g, 0,00170 mol) v 1,2-dimethoxyethanu (10 ml) a vodě (20 ml) se intenzivně míchá a přidá se tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,047 g, 0,000040 mol). Reakční směs se míchá po dobu 18 hodin při teplotě 80°C. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (50 ml) a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (3 x 25 ml). Spojené organické fáze se suší síranem sodným a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, methanolu a hydroxidu amonného (95:5:0,5). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá /razí5-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy5-pyrimidinyl)-l//-pyrazolo[3,4-t7]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,155 g, 0,00032 mol).
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,78 (s, 2H), 8,25 (s, 1H), 7,48 (t, 2H), 7,28 (t, 1H), 7,27 (d, 2H), 4,65 (m, 1H), 1,44-2,36 (m, 20H); TLC (dichlormethan/methanol /hydroxid amonný = 90:10:0,5) Rf 0,33.
bismaleát /rans-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l/7pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (sloučenina 31) © «<a r c f- r- « © e· rva © c č «.> © « v © <.
© · r e c c e e -fc © « e f ti < c c » £ o © « c- t-· t <5 Φ <1 r f> β o <s ť! » β (, c r· f. « f. ¢. c e »
126
Roztok /razw-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (meziprodukt AX) (0,155 g, 0,00032 mol) v absolutním ethanolu (15 ml) se zahřívá pod refluxem. Přidá se roztok maleinové kyseliny (0,148 g, 0,000128 mol) v absolutním ethanolu (10 ml) zahřátý na teplotu 78°C a směs se dálezahřívá pod refluxem po dobu 10 minut. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu, vzniklý bílý precipitát se spojí filtrací a promyje absolutním ethanolem (2x10 ml), zbylé rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá bismaleát trans-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-3 -(2 -fenoxy-5 -pyrimidinyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,082g, 0,00011 mol).
*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,78 (s, 2H), 8,26 (s, IH), 7,48 (t, 2H), 7,28 (t, IH), 7,26 (d, 2H), 4,70 (m, IH), 1,50-3,00 (m, 20H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 10,83 minut.
MS: MH+ 486.
Příklad 28 czs,-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4í/|pyrimidin-4-amin (sloučenina 32)
2-Fenox]pyrimidin, (meziprodukt AY)
Směs 5-chlorpyrimidinu (5,00 g, 0,0437 mol), fenolu (5,38 g, 57,2 mmol), dibenzo18-crown-6 (0,84 g, 0,0023 mol) a práškového hydroxidu draselného (5,92 g, 0,1055 mol) v toluenu (75 ml) se zahřívá pod refluxem po dobu 3 hodin za azeotropického odstraňování vody. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi vodu a chloroform. Vrstvy se separují a vodná fáze se extrahuje chloroformem (3x). Spojené organické vrstvy se suší síranem sodným, filtrují a odpařují, čímž se získá 2-fenox]pyrimidin ve formě bílého prášku (95% čisté, 4,56 g, 0,0265 mol).
*H NMR (CDC13 400 MHz) 8,57 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,26 (t, IH), 7,20 (d 2H); TLC («heptan/ethylacetát =1:1) Rt0,42.
2-(4-Jodfenoxy)pyrimidin (meziprodukt AZ) (i ·· ¢- ¢.
♦ ft »«fc f e «> + * e·
G <!·«·«- * t>
t? & c p ft * e ®· r e:· v.- s « *· ·.· * ft « e
127
Směs 2-fenox]pyrimidinu (meziprodukt AY) (4,03 g, 0,0234 mol) a vV-jodsukcinimidu (10,52 g, 0,0468 mol) v trifluoroctové kyselině (40 ml) a anhydridu trifluoroctové kyseliny (8 ml) se zahřívá pod reťluxem po dobu 4 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a přidá se voda (75 ml). Směs se extrahuje (3 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 50 ml), 10% vodným roztokem thiosulfátu sodného (2 x 50 ml) a solankou (50 ml). Organická vrstva se suší síranem sodným, filtruje a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Surová pevná látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi «-heptanu a ethylacetátu (3:1) jako mobilní fázi, čímž se získá 2-(4jodfenoxy)pyrimidin ve formě světle žluté pevné látky (3,49 g, 0,0117 mol).
!H NMR (CDC13, 400 MHz) 8,57 (d, 2H), 7,73 (d, 2H), 7,07 (t, 1H), 6,98 (d 2H); TLC («heptan/ethylacetát =1:1) Rf0,45.
2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]pyrimidin (meziprodukt BA)
Směs 2-(4-jodfenoxy)pyrimidinu (meziprodukt AZ) (3,50 g, 0,0118 mol), diboronpinakolesteru (3,58 g, 0,0141 mol), [1,1’bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s díchlormethanem (1:1) (0,29 g, 0,00035 mol) a octanu draselného (3,46 g, 0,00346 mol) v Λζ/V-dimethylformamidu (70 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku přes noc. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu, pak se téměř veškeré rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (70 ml) a výsledné pevné látky se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá tmavý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi «-heptanu a ethylacetátu (2:1) jako mobilní fázi, čímž se získá 2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenoxy]pyrimidin ve formě bílé pevné látky (2,95 g, 0,00989 mol).
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 8,65 (d, 2H), 7,74 (d, 2H), 7,29 (t, 1H), 7,20 (d, 2H), 1,31 (s, 12H).
-(1,4-dioxaspiro [4.5 ] dec- 8 -y l)-3 - [4-(2-pyrimidinyloxy)feny 1] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-amin (meziprodukt BB)
Směs l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrÍmidin-4-aminu (meziprodukt N) (1,50 g, 0,00374 mol), 2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenoxy]-pyrimidinu (meziprodukt BA) (1,23 g, 0,00412 mol),
C ft o
C -r- ft ¢-e e © e í- r ft e ©·. i
V <: ίο < C f © P « rsf
128 tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,26 g, 0,00022 mol) a uhličitanu sodného (0,993 g, 0,00937 mol) v 40 ml 1,2-dimethoxyethanu a 20 ml vody se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 18 hodin, po kterých se přidá další l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jod-lHpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,15 g, 0,00037 mol). Směs se míchá další hodinu a pak se nechá vychladnout na pokojovou teplotu, precipitát se filtruje a promyje 1,2-dimethoxyethanem a suší za vakua, čímž se získá l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-[4(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l H-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (1,26 g, 0,00283 mol).
*H NMR (DMSO-d6 400 MHz) 8,68 (d, 2H), 8,254 (s, IH), 7,73 (d, 2H), 7,37 (d, 2H), 7,31 (t, IH), 6,30-7,20 (bs, 2H), 4,78-4,84 (m, IH), 3,91 (s, 4H), 2,22-2,30 (m, 2H), 1,73-1,92 (m, 6H).
4- { 4-amino-3 - [4-(2-pyrimidiny loxy)fenyl] -1 H-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 yl}cyklohexanon (meziprodukt BC)
Kašovitá směs 1 -(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-y 1)-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (meziprodukt BB) (1,22 g, 0,00274 mol) v acetonu se ochladí na teplotu 0°C a po kapkách se přidává 5N vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (15 ml), přičemž teplota se udržuje pod 5°C. Po přidání se směs míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin, roztok se filtruje přes vrstvu celitu a neutralizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vzniklý precipitát se filtruje, promyje vodou a suší za vakua přes noc, čímž se získá 4-{-4-amino-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-lHpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl}-cyklohexanon ve formě bílé pevné látky (0,937 g, 0,00243 mol).
*H NMR (DMSO-dé 400 MHz) 8,68 (d, 2H), 8,29 (s, IH), 7,56 (d, 2H), 7,37 (d, 2H), 7,31 (t, IH), 6,30-7,20 (bs, 2H), 5,25-5,30 (m, IH), 2,67-2,75 (m, 2H), 2,24-2,43 (m, 6H) czs-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-lH-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin (meziprodukt BD)
Směs 4-4-amino-3 - [4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-1 H-pyrazolo [3,4-ďj-pyrimidin-1 yl-l-cyklohexanonu (meziprodukt BC) (0,925 g, 0,0024 mol), H-methylpiperazinu (0,721 g, 0,0072 mol) a kyseliny octové (0,432 g, 0,0072 mol) v dichlormethanu (40 ml) se intenzivně míchá a ve 2 podílech se v 30 minutových intervalech přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,661 g, 0,00312 mol). Reakční směs se míchá po dobu 18
129 hodin při pokojové teplotě. Přidá se další triacetoxyborohydrid sodný (0,300 g, 0,00142 mol) a směs se míchá další 4 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se rozdělí mezi dichlormethan (25 ml) a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje dichlormethanem (3 x 25 ml). Spojené organické fáze se suší síranem sodným a rozpouštědlo se odstraní za vakua, cis- a trans-izomery se separují zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, triethylaminu a methanolu (87:10:3). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá frakce trans-l-[4(4-methy lpiperazino)cyklohexyl]-3 - [4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl] -1 //-pyrazolo [3,4ďJpyrimidin-4-aminu (TLC (dichlormethan/triethylamin/methanol) = 90:8:2) Rf 0,45) a zbytek se rozpustí v dichlormethanu a extrahuje (2x) 1,0 M vodným roztokem uhličitanu sodného. Organická fáze se suší síranem sodným, filtruje a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá tra«5-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2pyrimidinyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,272 g, 0,00056 mol).
*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 8,68 (d, 2H), 8,25 (s, ÍH), 7,73 (d, 2H), 7,39 (d, 2H), 7,31 (t, ÍH), 6,30-6,20 (bs, 2H), 4,79-4,84 (m, 1H), 2,06-2,75 (m, 12H), 2,24-2,43 (m, 4H);
trismaleát cw-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l//pyrazolo[3,4-ri]pyrimidm-4-aminu
Roztok cis-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)-fenyljl//-pyrazolo[3,4-<7jpyrimidin-4-aminu (meziprodukt BD) (0,193 g, 0,0004 mol) v absolutním ethanolu (15 ml) se zahřívá pod refluxem. Přidá se roztok maleinové kyseliny (0,184 g, 0,00159 mol) v absolutním ethanolu (10 ml) zahřívaný při teplotě 78°C a směs se zahřívá pod refluxem po dobu 10 minut. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu, vzniklý bílý precipitát se spojí filtrací a promyje absolutním ethanolem (2x10 ml), zbylé rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá trismaleát cz'ó'-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-3 - [4-(2-pyrimidiny loxy )fenyl] -1 //-pyrazolo [3,4ri]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,222 g, 0,00027 mol).
*H NMR (DMSO-de, 400 MHz), 8,68 (d, 2H), 8,26 (s, ÍH), 7,72 (d, 2H), 7,39 (d, 2H), 7,32 (t, ÍH), 6,17 (s, 6H), 4,85-4,87 (m, 1H), 3,85-2,85 (br, 9H), 2,71 (s, 3H), 2,23-2,43 (bs, 2H), 2,03-2,18 (bs, 2H), 1,71-2,89 (bs, 4H) RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 9,56
130 i* e { * i, r f C f? t. r ίο c t·. t f·. ,· t r c r f < r «· e
o e
minut,
MS:MH+486.
trans-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 - [4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl] -1 27pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (meziprodukt BE)
Podobným způsobem se použije /ra«5-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin jako výchozí látka (0,06 g, 0,000124 mol) a získá se dimaleát Zra/7X-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2pyrimidinyloxy)-fenyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (sloučenina 33) ve formě bílé pevné látky (0,06 g, 0,000084 mol).
*H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) 8,68 (d, 2H), 8,25 (s, 1H), 7,71 (d, 2H), 7,37 (d, 2H), 7,31 (t, 1H), 6,18 (s, 4 H), 4,71 (m, 1H), 3,1 (br, 9 H), 2,67 (s, 3 H) 2,06 (m, 6 H) 1,58 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 9,45 minut.
MS: MH+ 486.
Příklad 29
Série 5 ml baněk se opatří šeptem a naplní 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4piperidylmethyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-ylaminem (300 mg, 0,776 mmol), triecetoxyborohydridem sodným (247 mg, 1,16 mmol) a příslušným aldehydem nebo ketonem (0,85 mmol). Postupně se přidá dichlorethan (5 ml) a ledová kyselina octová (50 μΐ, 0,87 mmol), baňky se utěsní šeptem a nechají protřepávat přes noc na kruhové třepačce. Pokud HPLC analýza reakční směsi ukazuje u některých reakcí nezreagovaný výchozí amin, přidá se do těchto reakcí více aldehydů nebo ketonů (0,85 mmol), triacetoxyborohydridu sodného (247 mg, 1,16 mmol) a ledové kyseliny octové (50 μΐ) a výsledná směs se znovu nechá protřepávat přes noc. Přidá se voda (2 ml) a přebytek pevného hydrogenuhličitanu sodného, dokud se nepřestane uvolňovat plyn. Vodná vrstva se odstraní pasírováním směsi přes extrakční diskový cartridge 3M Empore (Oktadecyl Cl8 SD). Surové produkty se čistí pomocí catridge Supelco supelclean silica (10 g) ve směsi dichlormethanemu a methanolu (95:5) jako eluentů, čímž se získají příslušné produkty.
Analytické podmínky LC/MS:
¢.
t
É®«Ρ e * © .* e c » e p e.
β a e
f «
<· © fc © <
131
Sloupec: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluent: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut.
Data z LC/MS jsou uvedena níže:
Příklad 30
67Á-3-{4-[amino(fenyl)methyl]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-l/7pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-4-amin
a) (4-bromfenyl)(fenyl)methanamin
Formiát amonný (20,1 g, 0,318 mol) se umístní do do baňky s 3 hrdly vybavené teplotním regulátorem, mechanickým míchadlem a chladičem a zahřívá se při teplotě 150°C, poté se najednou přidá 4-brombenzofenon (7,2 g, 0,0276 mol). Teplota se zvýší na 165°C a směs se míchá pod refluxem po dobu 24 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, trituruje v ethylacetátu (350 ml), nechá reagovat karborafinem a filtruje přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje, suspenduje v koncentrované kyselině chlorovodíkové (120 ml) a zahřívá pod refluxem po dobu 8 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se spojený filtrací se trituruje ve vodě (120 ml), alkalizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a extrahuje ethylacetátem (2x 250 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku, čímž se získá (4-bromfenyl)(fenyl)methanamin (5,25 g, 0,02 mol) ve formě bílé pevné látky.
2H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 7,46 (d, 2H), 7,36 (m, 4H), 7,27 (t, 2H), 7,18 (t, 1H), 5,07 (s, 1H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 15,54 minut
b) terc-butyl-ŤV- [(4-bromfeny l)(fenyl)methyl]karbamát
Di-/erc-butyl-dikarbonát (5,63 g, 0,0258 mol) se rozpustí v bezvodém dichlormethanu (150 ml), ochladí na teplotu 0°C a po kapkách se přidá roztok (4bromfenyl)(fenyl)methanaminu (5,2 g, 0,0198 mol) v bezvodém dichlormethanu (30 ml). Směs se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (120 ml), suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá žlutý olej, ť » ·-<*, , ·,· c e. r c < ‘íS ť’ 9 r c ť? o © a í- íť> « í Z- f> « ( ¢.
* ť © < c- <· c f, t f. c ý o < f- í c ® < (
132 který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (7:93) jako mobilní fázi, čímž se získá terc-butyl-V-[(4bromfenyl)(fenyl)methyl]karbamát (5,9 g, 0,0163 mol) ve formě bezbarvého oleje.
*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,01 (d, 1 H), 7,51 (d, 2H), 7,36 (m, 7H), 5,81 (d, 1H),
1,39 (s, 9H), TLC (ethylacetát/heptan 1:9) Rf 0,24
c) ZLcrc-butyl-jV-{fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]methyl} karbamát
Směs /erc-butyl-;V-[(4-bromfenyl)(fenyl)methyl]karbamátu (4,5 g, 0,0123 mol), diboronpinakolesteru (3,79 g, 0,0149 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,305 g, 0,000373 mol) a octanu draselného (3,66 g, 0,0373 mol) v Λζ/V-dimethylformamidu (80 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (80 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (1:9) jako mobilní fázi. Výsledné frakce se koncentrují. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá řerc-butyl-zV-{fenyl[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methyl}karbamát (3,0 g, 0,00733 mol) ve formě bílé pevné látky.
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,01 (d, 1H), 7,61 (d, 2H), 7,33 (d, 2H), 7,28 (m, 5H), 5,81 (d, 1H), 1,39 (s, 9H), 1,27 (s, 12H), TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf0,34
d) CM-/erc-butyl-V-[(4-{4-amino-l -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-3-yl}fenyl)(fenyl)methyl]karbamát
Směs /erc-butyl-V-{fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]methyl}karbamátu (3,0 g, 0,00733 mol), czs-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (2,4 g, 0,0054 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,381 g, 0,00033 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (1,69 g, 0,0136 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (80 ml) a vodě (40 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi roztok nasyceného vodného hydrogenuhličitanu sodného (200 ml) a ethylacetát (200 ml).
·«’ 4» 44 t* « * · * © *· a 9 a r · »·
0 / «· « ·, £ * • · < ť.· c ·· e * o r- * » · < « ·- « · e t «?»«· ♦»- «4 · 4 β- β e 4 β * *
133
Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje ethylacetátem (2 x 100 ml každý). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku, čímž se získá hnědá pevná látka, která se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, triethylaminu a methanolu (96:3:1) jako mobilní fázi, čímž se získá c7Ů-/erc-butyl-V-[(4-{4-amino-1-[4-(4methylpÍperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-3-yl}fenyl)(fenyl)methyljkarbamát (2,24 g, 0,00375 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 8,01 (d, 1H), 7,60 (d, 2H), 7,49 (d, 2H),
7,35 (m, 4H), 7,23 (t, 1H), 5,91 (d, 4H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,42 (m, 4H), 1,40 (s, 9H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 μιη, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,45 minut
e) cw-3-{4-[amino(fenyl)methyl]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin
Czs-fórc-butyl-/V-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-3-yl}fenyl)(fenyl)methyl]karbamát (2,05 g, 0,00344 mol) se trituruje v bezvodém dichlormethanu (50 ml) a reakční směs se ochladí na teplotu 0°C. Po kapkách se přidá trifluoroctová kyselina (10 ml) a výsledný roztok se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek suspenduje ve vodě (50 ml) a alkalizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, který se extrahuje dichlormethanem (3x 150 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá ds-3-{4-[amino(fenyl)methyl]fenyl}-l-[4-{4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (1,60 g, 0,00322 mol) ve formě bělavé pevné látky.
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,57 (m, 4H), 7,45 (d, 2H), 7,31 (dd, 2H), 7,20 (t, 1H), 5,17 (s, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 9,36 minut.
t> v © · * « e 4 β e e c © © « © β
Οι- 4« 9 9 c v 4·- e « t © « <' í ť· 4 4 « «
1' ® < « ® · * e * t· ts ě · e &
134
f) diacetát cis-NI - [(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 77-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)(fenyl)methyl]acetamidu
Cz5-3-{4-[amino(fenyl)methyl]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin (0,05 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se anhydrid octové kyseliny (0,010 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát cis7Vl-[(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 77-pyrazolo [3,4- JjpyrimÍdin-3 yl}fenyl)(fenyl)methyl]acetamidu (0,015 g, 0,000021 mol) ve formě bílé pevné látky. lH NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,84 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,62 (d, 2H), 7,46 (d, 2H),
7,35 (m, 4H), 7,28 (m, 1H), 6,21 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,5-21 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,95 (s, 3H), 1,90 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,15 minut.
MS: MH+ 539.
Příklad 31 diacetát cz'5-ŽVl-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-3-yl}fenyl)(fenyl)methyl]benzamidu
Cis-3 - {4- [amino (feny l)methyl] fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-amin (0,05 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se benzoylchlorid (0,014 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát cisM-[(4-{4-ammo-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3yl}fenyl)(fenyl)methyl]benzamidu (0,017 g, 0,000024 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,32 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,96 (d, 2H), 7,62 (d, 2H),
7,58-7,29 (b, 10H), 6,51 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s,
6H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);
t » J r «v e 8 © *
C ♦ fe · *
P © » e « t r- * © <- r ♦ e- ».
P- <> « • r » s-V • l'~ » • e © *.
• o 8
Γ C C » Φ * β
135
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 μιη, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,53 minut.
MSíMH* 601.
Příklad 32 cis-N- [(4- {4-amino-1 - [4 -(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4-d\ pyrimidin-3 yl} fenyl)(feny l)methyl]methansulfonamid
CA-3-{4-[amino(fenyl)methyl]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lApyrazolo[3,4-fiQpyrimidin-4-amin (0,05 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se methansulfonylchlorid (0,011 g, 0,000lmol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitrilΟ,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát cA-A-[(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 yl}fenyl)(fenyl)methyl]methansulfonamidu (0,021 g, 0,00003 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,39 (d, IH), 8,23 (s, IH), 7,65 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,47 (d, 2H), 7,37 (t, 2H), 7,27 (t, IH), 5,72 (d, IH), 4,78 (m, IH), 2,70 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), R 11,81 minut.
MS: MH+ 575.
Příklad 33 acetát cA-Al-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -y 1} fenyl)(feny l)methyl] -1 -benzensulfonamidu
CA-3-{4-[amino(fenyl)methyl]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amin (0,05 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se benzensulfonylchlorid (0,018g, 0,0001mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60%
c <·- <· e c c <·- o
C <· e «' C:
<' t ť €, e ι.
136 acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát cisM-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3yl}fenyl)(fenyl)methyl]-l-benzensulfonamidu (0,045 g, 0,000065 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,89 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,57-7,27 (br, 12H), 5,66 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,70 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,78 minut.
MS: MH+ 637.
Příklad 34 acetát cis-Nl - [(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)(feny l)methyl] -3 -hydroxybutanamidu
Cis-3 - {4- [amino(feny l)methyl]fenyl} -1- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,05 g, 0,0001 mol) a β-butyrolakton (0,009g, 0,0001 mol) se zahřívají v dioxanu pod refluxem po dobu 3 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát cis-Nl - [(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)(fenyl)methyl]-3-hydroxybutanamidu (0,027g, 0,000042 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,78 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,62 (d, 2H), 7,45 (d, 2H),
7,35 (m, 4H), 7,27 (t, 1H), 6,21 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,67 (d, 1H), 4,02 (m, 1H), 2,52,1 (br, 15H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H), 1,07 (d, 3H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 10,97 a 11,13 minut.
MS: MH+ 583.
e * 4* · 9 © *· * <·.
» * <
» · ,
O » · ♦ » Í:
«» * * & 9 9 · í * * ΐ & a · © t 9 9 # » « · |λ< » © * 9« ( f e· *
O 9
Κι © e « 9 9 9
137
Příklad 35
CN-4-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4-ďJpyrimidin-3 y 1} fenoxy)benzamid
a) 4-(4-bromfenoxy)benzonitril
Směs 4-bromfenolu (4,56 g, 0,0264 mol), 4-fluorbenzonitrilu ( 0,0264 mol), 18-crown-6 (0,7 g, 0,00264 mol) a 40% fluorid draselný na hliníku (10,8 g) v bezvodém acetonitrilu (100 ml) se zahřívá pod refluxem pod atmosférou dusíku po dobu 12 hodin, ochladí na pokojovou teplotu, filtruje přes vrstvu celitu a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi diethylether (120 ml) a vodu (100 ml). Organická fáze se dále promyje nasyceným roztokem chloridu draselného ve vodě, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (3:97) jako mobilní fázi, čímž se získá 4-(4bromfenoxy)benzonitril (3,7 g, 0,0135 mol) ve formě bílé pevné látky.
‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 7,85 (d, 2H), 7,64 (d, 2H), 7,13 (dd, 4H).TLC (ethylacetát/heptan 3:97) Rf0,21
b) 4- [4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitril
Směs 4-(4-bromfenoxy)benzonitrilu (4,55 g, 0,0166 mol), diboronpinakolesteru (5,06 g, 0,020 mol), [l,l'-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,407 g, 0,000498 mol) a octanu draselného (4,88 g, 0,0498 mol) v A/V-dimethylformamidu (90 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (120 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (5:95) jako mobilní fázi. Spojené frakce se koncentrují za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá 4-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitril (2,75 g, 0,0086 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 7,85 (d, 2H), 7,64 (d, 2H), 7,13 (dd, 4H), 1,28 (s, 12H) TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf 0,63.
f í c e » <*'<·.· e © ť ů * ♦ 4’ * C {:
< ««» c í- e « ί « e © © λ e e í. «« e tt o «í: < ec r c e κ ( $ <· e t e c e c i> a t'
O f- V> p138
c) c/x-4-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-č/Jpyrimidin3 -yl} fenoxy)benzonitril
Směs 4-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitrilu (2,63 g, 0,00819 mol), ¢/5-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4</Jpyrimidin-4-aminu (3,01 g, 0,00683 mol), tetrakis-(trifenylfosfm)palladia (0,473 g, 0,00041 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (2,12 g, 0,0171 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (80 ml) a vody (40 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi roztok nasyceného vodného hydrogenuhličitanu sodného (200 ml) a ethylacetát (200 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje ethylačetátem (2 x 100 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku, čímž se získá hnědá pevná látka, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, triethylaminu a methanolu (96:3:1) jako mobilní fázi, čímž se získá cis-4(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3yl}fenoxy)benzonitril (2,45 g, 0,00483 mol) ve formě bílé pevné látky.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,87 (d, 2H), 7,71 (d, 2H), 7,30 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 4,78 (m, ÍH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,04 minut.
d) cA-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3 -y 1} fenoxy)benzamid
Cz'x-4-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4z/Jpyrimidin-3-yl}fenoxy)benzonitril (0,200 g, 0,000394 mol) se rozpustí v dioxanu (3 ml), přidá se roztok hydroxidu sodného (0,15 g, 0,00197 mol) ve vodě ( 2 ml), poté se přidá 30% roztok hydrogenperoxidu ve vodě (5 kapek). Reakční směs se zahřívá pod refluxem pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny, ochladí na pokojovou teplotu a neutralizuje 5% roztokem kyseliny citrónové ve vodě. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá cz.v-4-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 Z/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)benzamid (0,120 g, 0,000223 mol) ve formě bělavé pevné látky.
ί·· 0 ·♦·» ©
c · «1 «
a
139 ‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,93 (m, 3H), 7,68 (d, 2H), 7,30 (s, ÍH), 7,24 (d, 2H), 7,15 (d, 2H), 4,78 (m, ÍH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (DeltaPak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 10,87 minut.
MS: MH+ 527.
Příklad 36 ¢/5-4-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-3yl}fenoxy)benzoová kyselina
Czó'-4-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4ť7]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzonitril (0,200 g, 0,000394 mol) se rozpustí ve směsi kyseliny octové (15 ml) a 6N roztoku kyseliny chlorovodíkové ve vodě (15 ml) a roztok se zahřívá pod refluxem po dobu 12 hodin, ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se rekrystalizuje z λζ/V-dimethylformamidu, čímž se získá m-4-(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 yl}fenoxy)benzoová kyselina (0,100 g, 0,00019 mol) ve formě bělavé pevné látky.
Ή NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,97 (d, 2H), 7,70 (d, 2H), 7,24 (d, 2H), 7,15 (d, 2H), 4,78 (m, ÍH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 10,95 minut.
MS: MH+ 528.
Příklad 37 acetát cis-Ní -[4-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4<7)pyrimidÍn-3 -yl} fenoxy)benzyl]acetamidu
a) cis-3- {4-[4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin
Cw-4-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4(7]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzonitril (0,600 g, 0,00118 mol) se rozpustí ve směsi methanolu (50 ml) a koncentrovaného roztoku hydroxidu amonného ve vodě (3 ml). Přidá
Ο < ( <·<- c · C a v £ £ ( ft ¢, © © < <. c e o oř r c t; e ré c © c. © ©
© to ©
140 se 50% kašovitá směs Raneyova niklu ve vodě (2 ml) a výsledná směs se hydrogenuje při atmosférickém tlaku po dobu 18 hodin. Reakční směs se filtruje přes vrstvu celitu, koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se vyluhuje (za tepla) díchlormethanem (50 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým, koncentruje za sníženého tlaku a zbytek suspenduje v diethyletheru (25 ml), precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá cw-3-{4[4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl} -l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 7/-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-amin (0,45 g, 0,0088 mol).
*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,39 (d, 2H), 7,12 (d, 2H), 7,08 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 3,73 (s, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 9,72 minut.
b) acetát cis-NÍ -[4-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1/7-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3 -yl} fenoxy )benzyl]acetamidu
CA-3-{4-[4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,051 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se anhydrid kyseliny octové (0,010 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát cis-NÍ -[4-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzyl]acetamidu (0,046 g, 0,0000749 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,38 (t, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,31 (d, 2H), 7,12 (d, 2H), 7,08 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,25 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,33 minut.
MS:MH+555.
í?o >Ύ: ·>» c· β r < <·’ ?> t { * . A'©· ft · © · í e { » © * f < (. t *
1' f- 9 9 í ft C o # Λ ť f.· « «? * ♦
C t ř r f r, fí « 9 n c
141
Příklad 38 acetát cis-N- [4-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4í/Jpyrimidin-3 -yl} fenoxy )benzyl]methansulfonamidu
Cz'ó'-3-{4-[4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,051 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (lml), přidá se methansulfonylchlorid (0,011 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát cis-N[4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3yl}fenoxy)benzyl]methansulfonamidu (0,011 g, 0,000017 mol) ve formě bílé pevné látky. Ή NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,57 (t, 1H), 7,40 (d, 2H), 7,13 (m, 4H), 4,78 (m, 1H), 4,17 (d, 2H), 2,89 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,97 minut.
MS: MH+ 591.
Způsoby přípravy cA-3-{4-[3-(aminomethyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-4-aminu a jeho derivátů jsou stejné jako způsoby přípravy cz'x-3-{4-[4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu a jeho derivátů s využitím vhodných výchozích látek.
Příklad 39 diacetát cis-3 -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 Z/-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)benzamidu a) 3-(4-bromfenoxy)benzonitril ‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 7,59 (m, 5H), 7,38 (m, 1H), 7,06 (d, 2H).TLC (ethylacetát/heptan 3:97) Rt 0,19.
*· ί ř &t- fr <»> < « v e f ! © * * í ( 0« 9 < $ © ·♦<'.© ť © « » <t> »>
& © r. © © t « e v & ©»te ( c ??e «se- eť-í’,e
142
b) 3 - [4-(4,4,5,5 -tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-y l)fenoxy]benzonitril *H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) 8 7,65 (m, 5H), 7,41 (m, 1H), 7,06 (d, 2H), 1,27 (s, 12H) TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf 0,56.
c) cis-3 -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3 -yl} fenoxy)benzonitril *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,61 (m, 3H), 7,47 (m, 1H), 7,25 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H). RP-HPLC (Delta Pak C 18, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,96 minut.
d) diacetát cis-3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4í/Jpyrimidin-3 -yl} fenoxy)benzamidu ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,68 (m, 3H), 7,60 (s, 1H), 7,50 (t, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,27 (m, 1H), 7,15 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 10,99 minut.
MS: MH+ 527.
Příklad 40 c/5'-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ť/|pyrimidin-3yl}fenoxy)benzoová kyselina *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,68 (d, 2H), 7, 56 (m, 2H), 7,39 (m, 1H), 7,20 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,01 minut.
MS: MH+ 528.
4* ©· Φ Φ <? i· * ( & 9 r e · í:
<- £ « · « fe € to
C ís δ? »í · ¢, e 0 ♦ o t>
ε <* t Φ β £ <? f., p * Γ· ť- <t ©<·«·« e· <
o e © · »> ’9«; # © * «
143
Příklad 41 acetát cz5-M-[3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4<7]pyrimÍdin-3 -yl} fenoxy )benzyl]acetamid
a) cis-3 - {4- [3 -(aminomethyl)fenoxy ]fenyl} -1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexy 1]-177pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-amin !H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,38 (m, 1H), 7,15 (m, 4H), 6,96 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 3,73 (s, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 9,32 minut.
b) acetát cis-Al - [3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)benzyl]acetamidu ‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,38 (t, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,36 (t, 1H), 7,15 (d, 2H), 7,07 (d, 1H), 7,00 (m, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,25 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,44 minut.
MS: MH+ 555.
Příklad 42 ó7.y-Al-[3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3 -yl} fenoxy )benzyl]benzamid lH NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,07 (t, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,86 (d, 2H), 7,63 (d, 2H), 7,48 (m, 4H), 7,10 (m, 5H), 4,78 (m, 1H), 4,49 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,58 minut.
MS:MH+617.
O fv ! '·’ © ť> © * fc c tt © fc (.·' fc 9 © c e « c <
fcfc o ae <?© /'.ο í’C PC» fcfc fc ©fcfc© < · t‘ < © fc fc fc fe Λ fc fc fe e r fcfc. efc vfcC©
144
Příklad 43 acetát cis-N- [3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzyl]methansulfonamidu ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, IH), 7,64 (d, 2H), 7,58 (t, IH), 7,42 (t, IH), 7,16 (m, 3H), 7,12 (s, IH), 7,03 (d, IH), 4,78 (m, IH), 4,17 (d, 2H), 2,89 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,12 minut.
MS:MH+591.
Příklad 44 dimaleát cA-benzy 1-/V- {4- {4-amino-1 -[4-(4-methy lpiperazino)cyklohexy 1] -1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl} karbamátu
Směs benzyl-jV-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljkarbamátu (2,00 g, 0,0052 mol), cw-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (1,92 g, 0,0044 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,300 g, 0,00026 mol) a uhličitanu sodného (1,35 g, 0,0109 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (70 ml) a vody (35 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi roztok nasyceného vodného hydrogenuhličitanu sodného (150 ml) a ethylacetát (180 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje ethylacetátem (2 x 250 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku, čímž se získá hnědá pevná látka, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, triethylaminu a methanolu (96:3:1) jako mobilní fázi, čímž se získá cisbenzy 1-/V- {4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4c/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyljkarbamát ve formě bílé pevné látky (1,88 g, 0,0023 mol). Obenzyl-yV-{4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexylj-1 //-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl {karbamát (0,206 g, 0,00036 mol) se rozpustí v refluxujícím ethanolu (17 ml) a přidá se předem zahřátý roztok kyseliny maleinové (0,126 g, 0,00108 mol) v ethanolu (8 ml). Směs se refluxuje po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá c Λ íf * £· ruč (·· b e
C O v e < o e e p { ř o e nr Pt f &
e <: &
r e f‘ id <& <’ c
145 dimaleát m-benzyl-7V- {4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl}-karbamátu ve formě bílé pevné látky (0,224 g, 0,00028 mol).
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 5 8,76 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,40 (m, 5H), 7,20 (m, 2H), 6,15 (s, 4H), 5,18 (s, 2H), 4,85 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,1 (br, 11H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 2H), 1,57 (m, 4H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,83 minut.
MS:MH+571.
Příklad 45 cis-N-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-3 yl} -2-methoxy fenyl)-/V ’-benzylmočo vina
Acetát cis-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1Hpyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-4-aminu (0,082 g, 0,000188 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se benzylizokyanát (0,025g, 0,000188mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek čistí preparativní HPLC (Hypersií Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát cis-N(4- {4-amino-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3-y 1} -2methoxyfenyl)-jV'-benzylmočoviny (0,009 g, 0,0000142 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,29 (d, 1H), 8,18 (m, 2H), 7,33 (m, 5H), 7,26 (t, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,13 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,33 (d, 2H), 3,91 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,35 minut.
MS: MH+ 570.
Obecný způsob reduktivní alkylace cis- nebo /ra«.s'-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-1[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu.
Postup A:
U0 * υο *>0 » ♦ <? © 0 · 0 © ® · ® j- é ® © « e 0
0 0© 00 «00 0 0
0« 0 © 0 0 00® ® ř« «ř # e r o η « «.
146
Směs cis- nebo /ra«s-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<f|pyrimidin-4-aminu (nebo jenom cis nebo trans) (1 ekviv.), aldehydu (1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, zháší nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty.
Postup B:
Po syntéze a čištění (postup A) se zbytek vyluhuje (za tepla) dichlormethanem (1 ml), nanese na sloupec Trikonex (7 cm) a eluuje dichlormethanem (5 ml). Látka s požadovaným pásem (UV-detekce) se oddělí a sloučenina se extrahuje směsí dichlormethanu, methanolu a triethylaminu = 90:5:5 (10 ml), filtruje a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se suspenduje v diethyletheru (4 ml) a precipitát se spojí filtrací a suší.
Příklad 46 acetát cis-3 - [4-(benzylamino)-3 -methoxyfenyl] -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrÍmidin-4-aminu
Postup A ’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,34 (m, 4H), 7,22 (t, 1H), 7,06 (s, 1H),
6,99 (d, 1H), 6,55 (d, 1H), 5,90 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,40 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,81 minut.
MS: MH+ 527.
Příklad 47 diacetát czs-3-(3-methoxy-4-[4-(trifluormethyl)benzyl]aminofenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexylj-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-4-aminu
Postup A
44 (9 4 9 4
Ě 9» « · C 4
Φ 1 9 #444 igfe víí « r 9 9 1 © e © · © © 4 Φ 4 C 4 e e ft 4
4 4 © * *4 ♦
147 ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, ÍH), 7,69 (d, 2H), 7,59 (d, 2H), 7,06 (s, ÍH),
6,99 (d, ÍH), 6,49 (d, ÍH), 6,14 (t, ÍH), 4,78 (m, ÍH), 4,50 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 15,50 minut.
MS: MH+ 595.
Příklad 48 acetát czs-3-{4-[(l/7-4-imidazolylmethyl)amino]-3-methoxyfenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu
Postup A ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,85 (br, ÍH), 8,19 (s, ÍH), 7,59 (s, ÍH), 7,06 (br, 3H), 6,77 (d, ÍH), 5,30 (br, ÍH), 4,78 (m, ÍH), 4,24 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 8,70 minut.
MS:MH+517.
Příklad 49 dimaleát trans-3 - [4-(benzylamino)-3 -methoxy fenyl] -1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimÍdin-4-ammu
7ra«5'-3-[4-(benzylamino)-3-methoxyfenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-4-amin se připraví podle postupu A. Trans-3-\4(benzylamino)-3-methoxyfenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin (0,190 g, 0,00036 mol) se rozpustí v ethanolu (20 ml) a roztok se zahřívá pod refluxem, najednou přidá se roztok maleinové kyseliny (0,126 g, 0,00108 mol) a v refluxu se pokračuje dalších 10 minut. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, precipitát se spojí filtrací a suší.
‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, ÍH), 7,34 (m, 4H), 7,22 (t, ÍH), 7,06 (s, ÍH),
6,99 (d, ÍH), 6,55 (d, ÍH), 6,16 (d, 4H), 4,68 (m, ÍH), 4,40 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);
e év cr ©& @e eei ♦ r c © © ® e e o © e o í tw © e &
© & $ t- f,· e © © © t> » © e> © o r © © © © c e e © © © © c n ,s © © © φ © © ©
148
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5um, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,89 minut.
MS: MH+ 527.
Příklad 50 diacetát írans-3-{4-[(2,6-dimethoxybenzyl)amino]-3-methoxyfenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu
Postup A ’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,25 (t, 1H), 7,09 (d, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,92 (d, 1H), 6,69 (d, 2H), 4,68 (m, 1H), 4,60 (t, 1H), 4,31 (d, 2H), 3,83 (m, 9H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,87 minut.
MS: MH+ 587.
Příklad 51 diacetát trans-3 - {4- [(2-chlor-6-fluorbenzyl)amino] -3 -methoxy feny 1 } -1 - [4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu
Postup A *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,39 (m, 2H), 7,26 (t, 1H), 7,10 (d, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,86 (d, 1H), 5,21 (t, 1H), 4,68 (m, 1H), 4,31 (d, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 15,23 minut.
MS: MH+ 579.
Meziprodukt při reduktivní alkylaci:
cis- a Zra«.s’-3-(4-amino fenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- 177-pyrazolo[3,4t/]pyrimidin-4-amin
a) terc-butyl-A-(4-bromfenyl)karbamát (' ť «’ (
C < ( (- I C C I <· (' r
Cf
P t'· o <»
C O fí
CC fí O c c· e f; O fy
n. rc t? c o
C o ( o c c
C C f c
Cfí f (4 0
149
Di-fórc-butyl-dikarbonát (16,5 g, 0,0756 mol) se rozpustí v bezvodém dichlormethanu (150 ml), ochladí na teplotu 0°C a po kapkách se přidá roztok 4bromanilinu (9,75 g, 0,0567 mol) v bezvodém dichlormethanu (50 ml). Směs se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (120 ml), suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (3:97) jako mobilní fázi, čímž se získá /erc-butyl-V-[(4-bromfenyl)karbamát (7,1 g, 0,0257 mol) ve formě bezbarvého oleje.
!H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,49 (s, 1H), 7,42 (s, 4H) 1,47 (s, 9H).
TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf 0,74.
b) terc-butyl-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát
Směs ferc-butyl-V-[(4-bromfenyl)karbamátu (5,95 g, 0,0219 mol), diboronpinakolesteru (6,67 g, 0,0263 mol), [1,Tbis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,536 g, 0,00066 mol) a octanu draselného (6,47 g, 0,066 mol) v Λζ/V-dimethylformamidu (120 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (100 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (7:93) jako mobilní fázi. Výsledné frakce se koncentrují. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá férc-butyl-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamát (6,0 g, 0,0188 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,50 (s, 1H), 7,55 (d, 2H), 7,46 (d, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,27 (s, 12H).
TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rt 0,56.
c) m-fórc-butyl-yV-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</|pyrimidin-3 -yl} fenyl)karbamát
Směs terc-butyl-/V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (3,71 g, 0,0116 mol), cri-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazmo)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4$ fe © © ® e ® o ® ® © a c ® © e e ♦ · © • · # • * ee o e
150 ó/]pyrimidin-4-arninu (4,46 g, 0,0101 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,700 g, 0,00061 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (3,13 g, 0,0253 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (140 ml) a vody (70 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi roztok nasyceného vodného hydrogenuhličitanu sodného (300 ml) a ethylacetát (300 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje ethylacetátem (2 x 150 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku, čímž se získá hnědá pevná látka, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, triethylaminu a methanolu (95:4:1) jako mobilní fázi, čímž se získá cisterc-butyl-ŤV-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- 177-pyrazolo[3,47]pyrimidin-3-yl}fenyl)karbamát (4,1 g, 0,0081 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8 9,57 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,52 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,50 (s, 9H), 1,42 (m,4H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,41 minut.
cis-3 -(4-aminofenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-TJpyrimidin4-amin
Cw-/erc-butyl-TV-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)karbamát (4,0 g, 0,0079 mol) se trituruje v bezvodém dichlormethanu (75 ml) a reakční směs se ochladí na teplotu 0°C.
Po kapkách se přidá trifluoroctová kyselina (10 ml) a výsledný roztok se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek suspenduje ve vodě (70 ml) a alkalizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, který se extrahuje dichlormethanem (3 x 150 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá cis-3-(4-aminofenyl)-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrÍmidin-4-amin (3,0 g, 0,00739 mol) ve formě bělavé pevné látky.
‘H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) 8,18 (s, 1H), 7,30 (d, 2H), 6,71 (d, 2H), 5,41 (s, 2H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
β © β © ® · β ϊ) β · · ο β © « © © « © · · ο © · β ο © · · «ο © * Ο Ο «·····»
151
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 8,64 minut.
tra«5-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-4-amin se připraví podobným způsobem jako cA-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 7/-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amin trans-3 -(4-aminofenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-17/-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin ’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,30 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,40 (s, 2H), 4,60 (m, 1H), 4,40 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,50 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 8,32 minut.
Obecný způsob reduktivní alkylace cis- nebo /ra«s-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 í/-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-aminu Postup C:
Směs cis- nebo íra«5,-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/řpyrazolo[3,4-ě/]pyrimidin-4-aminu (buď meziprodukt...anebo...) (1 ekviv.), aldehydu (1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a kyseliny octové (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichíorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, zháší nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a koncentruje znovu. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 1060% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty.
Postup D:
Po syntéze a čištění (postup C) se zbytek vyluhuje (za tepla) dichlormethanem (1 ml), nanese na sloupec Trikonex (7 cm) a eluuje dichlormethanem (5 ml). Sloučenina s požadovaným pásem (UV-detekce) se oddělí a extrahuje směsí dichlormethanu, methanolu a triethylaminu = 90:5:5 (10 ml), filtruje a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se suspenduje v diethyletheru (4 ml) a precipitát se spojí filtrací a suší.
e • «
© f!
© e
β e e © · » © e o « · · ·
9 8 e © «« « «
152
Příklad 52 diacetát cis-3 - [4-(benzylamino)fenyl] -1- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1] -1Hpyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-amin Postup C ‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,34 (m, 6H), 7,26 (t, IH), 6,74 (d, IH), 6,62 (t, IH), 4,78 (m, IH), 4,35 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,10 minut.
MS:MH+497.
Příklad 53 diacetát cis-3 - {4- [(2-methylbenzyl)amino]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklo-hexyl]177-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-4-aminu Postup C *H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,37 (m, 3H), 7,18 (m, 3H), 6,75 (d, 2H), 6,43 (t, IH), 4,76 (m, IH), 4,28 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,35 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,25 minut.
MS:MH+511.
Příklad 54 diacetát cz'5,-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(4-[2(trifluormethyl)benzyl]aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu
Postup C *H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,76 (d, IH), 7,64 (d, 2H), 7,48 (t, IH), 7,36 (d, 2H), 6,75 (t, IH), 6,69 (d, 2H), 4,76 (m, IH), 4,52 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,95 minut.
e rΓ β 9 ft C 6
(. gi β f: C ft © ο o β e c fc o o © t e e í· fc © ® $ © ( c· © e c · « © o
153
MS: MH+ 565.
Příklad 55 czs-3-{4-[(2-chlorbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin Postup D *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,38 (m, 6H), 6,74 (d, 2H), 6,55 (t, 1H),
4,76 (m, 1H), 4,39 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,43 minut.
MS: MH+531.
Příklad 56 cis-3 - {4-[(2-brombenzyl)amino]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-4-amin
Postup D *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,38 (m, 4H), 7,20 (t, 1H), 6,70 (m, 3H), 4,76 (m, 1H), 4,39 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,76 minut.
MS: MH+ 576.
Příklad 57 cis-3- {4- [(2-ethoxybenzy l)amino]fenyl} -1- [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo [3,4-í/Jpy rimidin-4-amin Postup D ’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,34 (d, 2H), 7,29 (s, 1H), 7,20 (t, 1H), 6,99 (d, 1H), 6,88 (t, 1H), 6,72 (d, 2H), 6,42 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,30 (d, 2H), 4,12 (q, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,38 (t, 3H);
e β f’ e t c * e f> O Ě & ( i'· » © f· e © f r c
154
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,71 minut.
MS:MH+541.
Příklad 58 cA-3-(4-[2-(difluormethoxy)benzyl]aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 //-pyrazolo [3,4-ř/]pyrimidin-4-amin Postup D *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,33 (m, 7H), 6,83 (d, 2H), 6,62 (t, 1H)
4,76 (m, 1H), 4,38 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,25 minut.
MS: MH+ 563.
Příklad 59 diacetát cz.s-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(4-[2(trifluormethoxy)benzy ljaminofeny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-aminu
Postup C *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,38 (m, 4H), 6,73 (d, 2H), 6,64 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,40 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 15,33 minut.
MS:MH+581.
Příklad 60 diacetát m-2-[2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</jpyrimidin-3 -yl} anilino)methyl]fenoxy-1 -ethanolu Postup C
í. f' ,- (. β · c <' Γ η , r ο β Ο C <: fc »> ® ' β β η >· * <* ( β Α ι : ,- e c ο 6 e υ <'
155 *Η NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1Η), 7,32 (m, 3H), 7,21 (t, 1H), 7,00 (d, 1H), 6,90 (t, 1H), 6,74 (d, 2H), 6,42 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,33 (d, 2H), 4,07 (t, 2H), 3,78 (t, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,08 minut.
MS: MH+ 557.
Příklad 61 diacetát cis-2-[(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- lH-pyrazolo [3,4d]pyrimidin-3 -yl} anilino)methyl]benzonitrilu Postup C ’HNMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,86 (d, 1H), 7,69 (t, 1H), 7,59 (d.lH), 7,47 (t, 1H), 7,37 (d, 2H), 6,73 (m, 3H), 4,76 (m, 1H), 4,53 (d, 2H), 2,5-2,1 (br.l3H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,72 minut.
MS: MH+ 522.
Příklad 62 cz'.s'-3-{4-[(2,6-difluorbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin
Postup C *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,40 (m, 3H), 7,17 (dd, 2H), 6,82 (d, 2H), 6,38 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,33 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,59 minut.
MS:MH+533.
© ©to p * © © to © toto to β e <e e © c e «' <' c
156
Příklad 63 acetát czs-3-4-[(2-chlor-6-fluorbenzyl)amino]fenyl-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu
Postup C ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,41 (m, 4H), 7,30 (t, IH), 6,84 (d, 2H), 6,29 (t, IH), 4,76 (m, IH), 4,38 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 μιη, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,36 minut.
MS: MH+ 549.
Příklad 64 cA-3-(4-[2-fluor-6-(trifluormethyl)benzyl]aminofenyl)-1 - [4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin
Postup D *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,67 (m, 3H), 7,39 (m, 2H), 6,84 (d, 2H), 6,18 (t, IH), 4,76 (m, IH), 4,38 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 15,02 minut.
MS: MH+ 583.
Příklad 65 diacetát cis-3-{4-[(2 -fluor-6-methoxybenzy 1)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu a) 2-fluor-6-methoxybenzaldehyd
Roztok 3-fluoranizolu (3,36 g, 0,0266 mol) v bezvodém tetrahydrofuranu se ochladí na teplotu -78°C a přidá se po kapkách 1,4M roztok zz-butyllithia v hexanech (19 ml, 0,0266 mol), přičemž teplota reakční směsi se udržuje pod -75°C. Dále se po kapkách přidá /V,yV,yV',/V',/V-pentamethyldiethylentriamin a pokračuje se v míchání při teplotě 78°C pod atmosférou dusíku další 2 hodiny. Po kapkách se přidá AA-dimethylformamid ( Ο * e « <> « e « e e r <' <' * e e {. ř t o i <· f t r. © © r ' '·· Λ e t t, f c < e ΐ: ' f e » < < <· <· « * * c ’·
157 (3,89 g, 0,0532 mol) a reakční směs se pomalu zahřívá, zatímco se míchá po dobu 30 minut, zháší po kapkách přidáním IN kyseliny chlorovodíkové a vrstvy se separují, vodná fáze se dále extrahuje ethylacetátem (2 x 150 ml) a spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým. Organická fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se trituruje v «-heptanu. Precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá 2-fluor-6-methoxybenzaldehyd (2,95 g, 0,0191 mol) ve formě bělavé pevné látky.
‘H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 10,31 (s, 1H), 7,66 (dd, 1H), 7,06 (d, 1H), 6,89 (dd,
1H), 3,92 (s, 3H).
TLC (ethylacetát/heptan 5:95) Rt 0,24.
b) diacetát cA-3-{4-[(2-fluor-6-methoxybenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu
Postup C ‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,35 (m, 3H), 6,90 (m, 4H), 6,08 (t.lH),
4,76 (m, 1H), 4,25 (d, 2H), 3,87 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,84 minut.
MS: MH+ 550.
Příklad 66 cA-3-4-[(2,6-dichlorbenzyl)amino]fenyl-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-amin Postup D 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,54 (d, 2H), 7,39 (m, 3H), 6,84 (d, 2H), 6,18 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,44 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 15,20 minut.
MS: MH+ 566.
© e
158
Příklad 67 diacetát cis-3 - {4- [(2,6-dimethoxybenzyl)amino]fenyl} -1 - [4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu
Postup C *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, ÍH), 7,34 (d, 2H), 7,26 (t, ÍH), 6,82 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,75 (t, ÍH), 4,78 (m, ÍH), 4,22 (d, 2H), 3,82 (s, 6H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,01 minut.
MS: MH+ 557.
Příklad 68 diacetát czs-3-{4-[(2-fluor-4-methylbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-íZr|pyrimidin-4-aminu
a) 2-fluor-4-methylbenzaldehyd
Roztok 3-fluortoluenu (2,91 g, 0,0266 mol) v bezvodém tetrahydrofuranu se ochladí na teplotu -78°C a po kapkách se přidá 1,4M roztok «-butyllithia v hexanech (19 ml, 0,0266 mol), přičemž se teplota reakční směsi udržuje pod 75°C. Po přidání se dále po kapkách přidává Ν,Ν,Ν',Ν', A-pentamethyldiethylentriamin a pokračuje se v míchání při teplotě -78°C pod atmosférou dusíku další 2 hodiny. Po kapkách se přidá ΛζΑ-dimethylformamid (3,89 g, 0,0532 mol) a reakční směs se pomalu ohřívá, zatímco se míchá po dobu 0,5 hodiny, pak se zháší přidáním (po kapkách) IN kyseliny chlorovodíkové a vrstvy se separují, vodná fáze se dále extrahuje ethylacetátem (2 x 150 ml) a spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým. Organická fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (5:95) jako mobilní fázi, čímž se získá 2-fluor4-methylbenzaldehyd (0,83 g, 0,006 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,17 (s, ÍH), 7,74 (d, ÍH), 7,23 (m, 2H), 2,41 (s, 3H). TLC (ethylacetát/heptan 5:95) Rf 0,18.
e f -- e (·. c f * • &
• ·β o β t>
«> β c« esΦ* β · • · • · • * • · · · · «* ©
159
b) díacetát cA-3-{4-[(2-fluor-4-methylbenzyl)amino]fenyl}-l -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-117-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu
Postup C *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,33 (m, 3H), 7,00 (m, 2H), 6,74 (d, 2H), 6,52 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,32 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,34 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (xn, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,58 minut.
MS: MH+ 529.
Příklad 69 díacetát cis-3 - {4- [(1 //-2-indolylmethyl)amino]fenyl} -1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu
Postup C *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,04 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,44 (d, 1H), 7,35 (m, 3H), 7,01 (t, 1H), 6,95 (t, 1H), 6,83 (d, 2H), 6,48 (t, 1H), 6,36 (s, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,46 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut 1 ml/min), Rt 13,75 minut.
MS: MH+ 536.
Příklad 70 díacetát cA-3-(4-[(l-methyl-l//-2-indolyl)methyl]arninofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu
Postup C 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,49 (d, 1H), 7,41 (d, 1H), 7,33 (d, 2H), 7,11 (t, 1H), 7,00 (t, 1H), 6,87 (d, 2H), 6,50 (t, 1H), 6,43 (s, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,56 (d, 2H), 3,77 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H).1,58 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut 1 ml/min), Rt 14,84 minut.
MS: MH+ 550.
« v « v O • © ( r e o © c© c ♦ f f C í
Vtf e © e e *· © e © © * ·: o β e © β <5 ° 6 e c » * e © · © ť <í φ t
160
Příklad 71 tris-maleát /ra«s-3-[4-(benzylamino)fenyl]-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo [3,4-<7jpyrimidin-4-aminu
Trans-3 - [4-(benzylamino)-3 -methoxyfeny 1]-1- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-amin se připraví podle postupu C. 7ra/75-3-[4(benzylamino)-3-methoxyfenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-4-amin (0,215 g, 0,00043 mol) se rozpustí v ethanolu (20 ml) a roztok se zahřívá pod refluxem, najednou se přidá roztok maleinové kyseliny (0,151 g, 0,00129 mol) a v refluxu se pokračuje dalších 10 minut. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací a suší.
JH NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,34 (m, 7H), 6,74 (d, 2H), 6,16 (s, 6H), 4,65 (m, 1H), 4,33 (s, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,09 minut.
MS: MH+ 497.
Příklad 72 diacetát trans-3 - {4- [(2-methylbenzyl)amino] fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cykiohexy 1] 177-pyrazolo [3,4 -í/]pyrimidin-4-aminu Postup C *HNMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 7,30 (t, 1H), 7,17 (m, 3H), 6,74 (d, 2H), 6,42 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,28 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,44 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,24 minut.
MS:MH+511.
Příklad 73 diacetát /ra/w-3-{4-[(2,6-dimethoxybenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4-<T]pyrim idi n-4-aminu
Postup C « » • · · · · · · ·· ·· ·· ···· ···
161 !H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, ÍH), 7,35 (d, 2H), 7,24 (t, ÍH), 6,81 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,75 (t, ÍH), 4,60 (m, ÍH), 4,20 (d, 2H), 3,82 (s, 6H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,15 minut.
MS: MH+ 557.
Příklad 74 diacetát /ra/M-3-{4-[(2-chlorbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-aminu Postup C *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, ÍH), 7,40 (m, 6H), 6,65 (m, 3H), 4,60 (m.lH), 4,40 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,53 minut.
MS:MH+531.
Příklad 75 acetát /ra«5-3-{4-[(2-brombenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-ri]pyrimidin-4-aminu
Postup D ’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,18 (s, ÍH), 7,64 (d, ÍH), 7,39 (m, 4H), 7,22 (t, ÍH), 6,65 (m, 3H), 4,60 (m, ÍH), 4,36 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C 18, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,79 minut.
MS: MH+ 576.
Obecný způsob reduktivní alkylace 3-(4-amino-fenyl)-l-[l-(l-methylpiperid-4-yl)piperid4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu:
Postup E:
162
Směs 3 -(4-amino-feny 1)-1 - [ 1 -(1 -methylpiperid-4-yl)piperid-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-aminu (1 ekviv.), aldehydu (1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a kyseliny octové (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, zháší nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty.
Postup F:
Po syntéze a čištění (postup E) se zbytek vyluhuje (za tepla) dichlormethanem (1 ml), nanese na sloupec Trikonex (7 cm) a eluuje dichlormethanem (5 ml). Látka s požadovaným pásem (UV-detekce) se oddělí a extrahuje směsí dichlormethanu, methanolu a triethylaminu = 90:5:5 (10 ml), filtruje a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se suspenduje v diethyletheru (4 ml) a precipitát se spojí filtrací a suší.
Příklad 76 acetát 3- [4-(benzylamino)fenyl] -1 - [ 1 -(1 -methylpiperid-4-y l)piperid-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-aminu
Postup E ‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,22 (t, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,98 (d, 1H), 6,54 (d, 1H), 5,89 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,39 (d, 2H), 3,89 (s, 3H), 2,98 (d, 2H), 2,79 (d, 2H), 2,25 (br, 5H), 2,15 (s, 3H), 1,91 (m, 7H), 1,69 (d, 2H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,88 minut.
MS: MH+ 527.
Příklad 77 acetát 3- {4-[(2,6-dimethoxybenzyl)amino]fenyl} -1 - [1 -(1 -methy lpiperid-4-yl)piperid-4yl] -1 //-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidin-4-aminu Postup E ©
»1 (3 c
O «8 ©· <e ( β * ©
β r, e e « fi e
< «163 *H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,24 (t, IH), 7,12 (d, IH), 7,04 (s, IH), 6,93 (d, IH), 6,68 (d, 2H), 4,81 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,31 (d, 2H), 3,82 (s, 9H), 2,98 (d, 2H), 2,79 (d, 2H), 2,25 (br, 5H), 2,15 (s, 3H), 1,91 (m, 7H), 1,69 (d, 2H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,71 minut.
MS: MH+ 587.
Příklad 78
3. {4-[(2-chlor-6-ťluorbenzyl)amino]fenyl} -1 -[ 1 -(1 -methylpiperid-4-yl)piperid-4-yl]-1Hpyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin Postup F ‘H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,37 (m, 2H), 7,25 (t, IH), 7,11 (d, IH), 7,07 (s, IH), 6,86 (d, IH), 5,21 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,49 (d, 2H), 3,83 (s, 3H), 2,98 (d, 2H), 2,79 (d, 2H), 2,25 (br, 5H), 2,15 (s, 3H), 1,89 (m, 4H), 1,69 (d, 2H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,94 minut.
MS: MH+ 579.
Příklad 79 diacetát cA-3-4-[benzyl(methyl)amino]fenyl-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7pyrazolo[3,4-</Jpyrimidin-4-aminu
a) A-benzyl-A-methyl-A-fenylamin
60% Disperze hydridu sodného v minerálním oleji (2,37 g, 0,0592 mol) se přidá do roztoku A-fenyl-A-benzylaminu (10,33 g, 0,0564 mol) v bezvodém AA-dimethylformamidu (200 ml) při teplotě 0°C. Reakční směs se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá po dobu 45 minut. Po kapkách se přidá jodmethan (7,99 g, 0,0564 mol) a vmíchání se při pokojové teplotě pokračuje pod atmosférou dusíku po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek rozdělí mezi ethylacetát (250 ml) a vodu (200 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu c < r »e r ' r c f c C ' C
V tl (: (·.
a r e, ,· e r , v o < i€· í O »S F f í c C ť <’ ( i o C <· <C r, i;· <,
F í ( f c c f {· ( p <164 a «-heptanu (2:98) jako mobilní fázi, čímž se získá V-benzyl-V-methyl-;V-fenylamin (4,4 g, 0,0223 mol) ve formě žlutého oleje.
Ή NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 7,30 (m, 2H), 7,20 (m, 5H), 6,70 (d, 2H), 6,60 (t, ÍH), 4,55 (s, 2H), 2,99 (s, 3H);
TLC (ethylacetát/heptan 5:95) Rf 0,53.
b) /V-benzyl-/V-(4-bromfenyl)-ŤV-methylamin
V-benzyl-V-fenyl-V-methylamin (4,41 g, 0,0224 mol) se rozpustí v bezvodém dichlormethanu (150 ml) a v 10 ekviv. podílech se v průběhu 30 minut přidá 2,4,4,6tetrabromcyklohexadien-l-on (9,16 g, 0,0224 mol). V míchání se pokračuje při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Organická fáze se postupně promyje 0,5N roztokem hydroxidu sodného ve vodě (100 ml), IN roztoku hydroxidu sodného ve vodě (100 ml), vodou (120 ml) a solankou (120 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (1:99) jako mobilní fázi, čímž se získá V-benzyl-V-(4bromfenyl)-/V-methylamin (3,52 g, 0,0127 mol) ve formě bezbarvého oleje.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,27 (m, 7H), 6,65 (d, 2H), 4,55 (s, 2H), 2,99 (s, 3H); TLC (ethylacetát/heptan 5:95) Rf 0,67.
c) V-benzyl-V-methyl-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin
Směs V-benzyl-V-(4-bromfenyl)-/V-methylamínu (3,52 g, 0,0128 mol), diboronpinakolesteru (3,89 g, 0,0153 mol), [l,l'-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,312 g, 0,00038 mol) a octanu draselného (3,72 g, 0,038 mol) v Λζ/V-dimethylformamidu (75 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (120 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (2:98) jako mobilní fázi. Výsledné frakce se koncentrují. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá V-benzyl-V-methylV-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,75 g, 0,00232 mol) ve formě bílé pevné látky.
£ *
165 ’Η NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 7,45 (d, 2H), 7,30 (m, 5H), 6,68 (d, 2H), 4,62 (s, 2H), 3,03 (s, 3H), 1,27 (s, 12H);
TLC (ethylacetát/heptan 5,95) Rf 0,62
d) diacetát cw-3-{4-[benzyl(methyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu
Směs A-benzyl-/V-methyl-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]aminu (0,076 g, 0,000235 mol), czs-3-jod-l-[4-(4-inethylpiperazino)-cyklohexyl]l/7-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-aminu (0,080 g, 0,000181 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,012 g, 0,000011 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,056 g, 0,00045 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát cA-3-{4[benzyl(methyl)amino]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 L7-pyrazolo[3,4e/]pyrimidin-4-aminu (0,069 g, 0,00011 mol) ve formě bílé pevné látky.
‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), (d, 2H), 7,34 (m, 2H), 7,26 (m, 3H), 6,89 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,66 (s, 2H), 3,09 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,60 minut.
MS:MH+511.
Příklad 80 diacetát cis-3 - {4-[benzyl(ethyl)amino]fenyl} -l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu
a) jV-benzyl-Ar-(4-bromfenyl)-/V-ethylamin
A-benzyl-A-feny 1-A-ethylamin (2,25 g, 0,0107 mol) se rozpustí v bezvodém dichlormethanu (80 ml) a 2,4,4,6-tetrabromcyklohexadien-l-on (4,36 g, 0,0107 mol) se přidá v 6 ekviv. podílech v průběhu 20 minut. V míchání se pokračuje při pokojové teplotě po dobu 20 hodin, organická fáze se postupně promyje 0,5N roztokem hydroxidu sodného
O r ř!fe © e c g
e ©
V© vf’ «? Í> c cC
C » ř· C * © c c !’· fe r. <
166 ve vodě (50 ml), 1/V roztokem hydroxidu sodného ve vodě (50 ml), vodou (70 ml) a solankou (75 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (1:99) jako mobilní fázi, čímž se získá V-benzyl-V-(4-bromfenyl)-ŽV-ethy lamin (2,38 g, 0,0082 mol) ve formě bezbarvého oleje.
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,27 (m, 7H), 6,59 (d, 2H), 4,51 (s, 2H), 3,46 (q, 2H), 1, 11 (t, 3H);
TLC (ethylacetát/heptan 1:99) Rf 0,23.
b) V-benzyl-zV-ethyl-ŽV-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin
Směs V-benzyl-/V-(4-bromfenyl)-/V-ethylaminu (2,22 g, 0,00765 mol), diboronpinakolesteru (2,33 g, 0,00919 mol), [l,l'-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,188 g, 0,00023 mol) a octanu draselného (2,25 g, 0,023 mol) v VV-dimethylformamidu (50 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (100 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (3:97) jako mobilní fázi. Výsledné frakce se koncentrují. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá ŤV-benzyl-JV-ethylV-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,24 g, 0,000712 mol).
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,42 (d, 2H), 7,30 (m, 2H), 7,20 (m, 3H), 6,63 (d, 2H), 4,57 (s, 2H), 3,48 (q, 2H), 1,27 (s, 12H), 1,09 (t, 3H);
TLC (ethylacetát/heptan 1:99) Rf 0,14.
c) diacetát czs-3-{4-[benzyl(ethyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metbylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu
Směs yV-benzyl-V-ethyl-V-[4-(4,4,5,5 -tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]aminu (0,065 g, 0,000193 mol), cw-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]lH-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,071 g, 0,000161 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,011 g, 0,00001 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,056 g, 0,00045 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (5 ml) a vody (3 ml) při ff C C
167 teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát czs-3-{4-[benzyl(ethyl)amino]fenyl}l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,049 g, 0,000076 mol) ve formě bílé pevné látky.
Ή NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,42 (d, 2H), 7,34 (m, 2H), 7,26 (m, 3H), 6,83 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,61 (s, 2H), 3,55 (q, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,19 (t, 3H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 15,47 minut.
MS; MH+ 525.
Příklad 81 diacetát cis-N-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1/7-pyrazolo[3,4ďjpyrimidin-3 -yl} fenyl)-2-feny lacetamidu
Cis-3 -(4-aminofenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cykIohexyl]-1 /7-pyrazolo [3,4ť/Jpyrimidin-4-amin (0,255 g, 0,00063 mol) a fenylacetylchlorid (0,102 g, 0,00066 mol) se rozpustí v bezvodém dichlormethanu (20 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 5 minut. Po kapkách se přidá ΛζΑ-diizopropylethylamin (0,097 g, 0,00076 mol) a v míchání se pokračuje po dobu 16 hodin. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (25 ml), koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil C 18, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát cis-N-(4-{4-amino-1-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyΟΙ /7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-2-fenylacetamidu (0,250 g, 0,000388 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,37 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,77 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,33 (m, 4H), 7,23 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 3,68 (s, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,86 minut.
z t, c
et
168
Ό 4 (i n * © e c.
© 9 ís »
P © 4 p 4?
9 f> e > (<$ ** ct.
© C ř?
o © e *>
€’ © f * © e«_, (
MS: MH+ 525.
Příklad 82 diacetát cis-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 - [4-(fenethy lamino)fenyl] -1Hpyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-4-aminu
Diacetát cis-N\ -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo[3,4-č/|pyrimidin-3-yl}fenyl)-2-fenylacetamidu (0,200 g, 0,00031 mol) se suspenduje v bezvodém tetrahydrofuranu (15 ml), suspenze se ochladí na teplotu 0°C a najednou se přidá hydridohlinitan lithný (0,177 g, 0,00416 mol). Výsledná směs se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin a poté zháší přidáním ( po kapkách) vody. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek čistí preparativní HPLC (Hypersií Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát cz's,-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4(fenethylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu (0,039 g, 0,0000619 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,37 (d, 2H), 7,31 (m, 4H), 7,22 (m, 1H), 6,75 (d, 2H), 6,07 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 3,32 (m, 2H), 2,86 (t, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,03 minut.
MS:MH+511.
Příklad 83 diacetát cz's-V-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} feny l)-3 -fenylpropanamidu
Cis-3 -(4-aminofenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-amin (0,250 g, 0,000616 mol) a 3-fenylpropanoylchlorid (0,109 g, 0,000646 mol) se rozpustí v bezvodém dichlormethanu (20 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 5 minut. Po kapkách se přidá V, V-diizopropylethy lamin (0,095 g, 0,00074 mol) a v míchání se pokračuje po dobu 16 hodin. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve ςκ» r «.·.·» z -.· a ρ c e «ν ί» ι ’ ί> « r c c c· t - í f € ctt» * ť,· » © e.
ň « e <>
c e- e « *> * <169 vodě (25 ml), koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 m, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát cis-N-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yífenyl)-3-fenyl}propanamidu (0,225 g, 0,00034 mol) ve formě bílé pevné látky.
‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,12 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,77 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,29 (m, 4H), 7,19 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,94 (m, 2H), 2,67 (m 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,57 minut.
MS: MH+ 539.
Příklad 84 diacetát cis-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 - {4- [(3 -fenylpropyl)amino]feny 1} -1Hpyrazolo[3,4-í/|pyrimidin-4-aminu
Diacetát cis-Ni -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 í/-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl}fenyl)-3-fenylpropanamidu (0,090 g, 0,000167 mol) se suspenduje v bezvodém tetrahydrofuranu (5 ml), suspenze se ochladí na teplotu 0°C a najednou se přidá hydridohlinitan lithný (0,01 g, 0,00025 mol). Výsledná směs se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin a zháší (po kapkách) přidáním vody. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát cN-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-{4[(3-fenylpropyl)amino]fenyl}-l/7-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (0,037 g, 0,000057 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,29 (m, 7H), 6,70 (d, 2H), 6,02 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 3,08 (m, 2H), 2,71 (m, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (m, 8H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,84 minut.
MS: MH+ 525.
© C
9«
170 «5 «
C © ©
Meziprodukt Α: 3-(Benzyloxy)fenylboritá kyselina
Do směsi 3-benzyloxobrombenzenu (0,590 g, 2,24 mmol, 1 ekviv.) v THF (10 ml) o teplotě -78°C se přidá n-butyllithium (1,6 M v hexanech, 2,9 ml, 4,7 mmol, 2,1 ekviv.). Reakční směs se míchá po dobu 45 minut, pak se přidá triizopropylborát (0,77 ml, 3,4 mmol, 1,5 ekviv.). Reakční směs se míchá při teplotě -78°C po dobu 30 minut a nechát se ohřát na pokojovou teplotu v průběhu 2 hodin. Přidá se kyselina chlorovodíková (2,5M, 10 ml) a směs se intenzivně míchá po dobu 16 hodin. Organický podíl se separuje a vodná vrstva se extrahuje 2 podíly EtjO (50 ml každý). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným, filtrují a koncentrují, čímž se získá hnědý olej. Zbytek se trituruje z heptanu (100 ml) a precipitát se spojí filtrací, čímž se získá 3-(benzyloxy)fenylboritá kyselina ve formě a levandulové pevné látky (0,111 g, 0,486 mmol). 'H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δ 8,00 (2H, bs), 7,02-7,46 (9H, m) a 5,09 (2H, s).
Meziprodukt B: 4-(4-amino-l-cyklopentyl-1 Zř-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl)fenol
Směs 3 - [4-(benzyloxy)fenyl] -1 -cyklopentyl-177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (2,47 g, 6,41 mmol, 1 ekviv.), černého palladia (0,341 g, 3,20 mmol, 0,5 ekviv.) a mravenčanu amonného (2,02 g, 32 mmol, 5 ekviv.) v ethanolu (50 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 4 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a výsledné pevné látky se odstraní filtrací přes vrstvu celitu s EtOH (300 ml), filtrát se koncentruje za vzniku světle žluté pevné látky, která se promývá CH2CI2 (200 ml), čímž se získá 4-(4-amino-l-cyklopentyl-l.ř/-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-3-yl)fenol ve formě bílé pevné látky (1,89 g, 6,4 mmol).
*H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (1H, s), 7,45 (2H, d, J= 8,5 Hz), 6,92 (2H, d, > 8, 2,01-2,10 (4H, m), 1,87-1,90 (2H, m), 1,67-1,70 (2H, m).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,13 minut.
MS: MH+ 296.
Meziprodukt C: Zerc-butyl-/V-(3-bromfenyl)karbamát
Do směsi di-t-butyldikarbonátu (9 ml, 39 mmol, 1,3 ekviv.) v CH2CI2 (75 ml) o teplotě 0°C se přidá roztok 3-bromanilinu (3,3 ml, 30 mmol, 1 ekviv.) v CH2CI2 (75 ml). Reakční směs se nechát pomalu ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 16 hodin. Surová reakční směs se rozdělí mezi nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (50 ml) a c c c e
C C « &
ί.·· » e < <> © <! (! 9 ( o í? o e e e e e © • β O fi O c c r c c c c
171
EtOAc (50 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva se extrahuje EtOAc (100 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným, filtrují a koncentrují, čímž se získá červený olej. Čištěním chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 1 13% EtOAc/heptan a 1 1 5% EtOAc/heptan) se získá /erc-butyl-zV-(3-bromfenyl)karbamát ve formě mazlavé žluté pevné látky (9,0 g, 33 mmol).
!H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,54 (1H, s), 7,75 (1H, s), 7,37-7,39 (1H, m), 7,127,22 (2H, m) a 1,47 (9H, s).
Meziprodukt D: férc-butyl-A-[3-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamát
Směs /erc-butyl-A-(3-bromfenyl)karbamátu (8,19 g, 30,1 mmol, 1 ekviv.), PdCl2(dppf)2 (0,675 g, 0,90 mmol, 0,03 ekviv.), diboronpinakolester (9,17 g, 36,1 mmol,
1,2 ekviv.) a octanu draselného (8,86 g, 90,3 mmol, 3,0 ekviv.) v DMF (150 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 12 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v CH2C12 (100 ml) a výsledné pevné látky se odstraní filtrací přes vrstvu celitu CH2C12 (100 ml) a Et2O (100 ml). Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí na sloupci silikagelu (elucí 1 1 5% EtOAc/heptan), čímž se získá Zerc-butyl-yV-[3-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát ve formě bílé pevné látky (6,77 g, 21,2 mmol).
*H NMR (dg-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,30 (1H, s), 7,85 (1H, s), 7,45-7,50 (1H, m), 7,257,30 (2H, m), 1,47 (9H, s) a 1,29 (12H, s).
Meziprodukt E: cz.s'-fórc-butyl-yV-(3-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo [3,4-</Jpyrimidin-3 -yl} fenyl)karbamát
Směs cis-3 -j od-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (1,89 g, 4,28 mmol, 1 ekviv.), /erc-butyl-A-[3-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,64 g, 5,14 mmol, 1,2 ekviv.), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,271 g, 0,257 mmol, 0,06 ekviv.) a monohydrátu uhličitanu sodného (1,28 g, 10,3 mmol, 2,4 ekviv.) ve vodě (13 ml) a DME (18 ml) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 14 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu. Přidá se roztok nasyceného vodného hydrogenuhličitanu sodného (15 ml) a vodný podíl se extrahuje EtOAc (30 ml). Organický extrakt se suší síranem sodným, filtruje a koncentruje, čímž se získá světle žluté pevné látky. Čištěním chromatografií na sloupci • · C * · · β · * • · e β · · · · · · · • · e · · · »·· ······· «· ·· · · ····
172 silikagelu (elucí 2 1 95:4:1 CH2Cl2:Et3N:MeOH) se získá cís'-terc-butyl-(3-{4-ammo-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl }fenyl)karbamát ve formě bílé pevné látky (1,76 g, 3,47 mmol).
‘H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,55 (IH, s), 8,23 (IH, s), 7,81 (IH, s), 7,40-7,52 (2H, m), 7,24 (IH, d, J= 7,5 Hz), 4,79-4,81 (IH, m), 2,05-2,44 (11H, m), 2,14 (3H, s), 1,54-1,70 (6H, m), 1,49 (9H, s).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,61 minut.
Meziprodukt F: cw-3-(3-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin
Směs cis-terc-bviiyi-N-(3 - {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)karbamátu (1,7 g, 3,3 mmol, 1 ekviv.) a dichlormethanu (40 ml) se zchladí na teplotu 0°C, pak se přidá trifluoroctová kyselina (10,5 ml, 137 mmol, 41 ekviv.). Reakční směs se nechát ohřát na pokojovou teplotu v průběhu 3 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi CH2C12 (50 ml) a vodu (50 ml). Organická vrstva se separuje a nechá reagovat s nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml). Organický extrakt se suší síranem sodným, filtruje a koncentruje, čímž se získá cz'5-3-(3-aminofenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/lpyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (1,34 g, 3,30 mmol).
’H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,21 (IH, s), 7,17-7,21 (IH, m), 6,85 (IH, s), 6,726,74 (IH, m), 6,65-6,68 (IH, m), 5,36 (2H, bs), 4,75-4,80 (IH, m), 2,22-2,51 (11H, m), 2,20 (3H, s), 2,06-2,08 (2H, m), 1,58-1,68 (4H, m).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 9,06 minut.
MS: MH+ 407.
Meziprodukt G: 2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitril
Směs [2-(4-bromfenoxy)fenyl](methylidyn)amonia (4,00 g, 14,6 mmol, 1 ekviv.), PdCl2(dppf)2 (0,320 g, 0,44 mmol, 0,03 ekviv.), diboronpinakolesteru (4,45 g, 17,5 mmol,
1,2 ekviv.) a octanu draselného (4,30 g, 43,8 mmol, 3,0 ekviv.) v DMF (70 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a β
o r>
PC 9 © e r c e e o e © c c © t ('. p c e o e c ©
r e O C
173 rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá černá kašovitá směs. Výsledné pevné látky se odstraní filtrací přes vrstvu celitu směsí CH2CI2 (200 ml) a EtOAc (200 ml), filtrát se koncentruje, čímž se získá tmavě hnědý olej, který se čistí chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 500 ml 5% MeOH/CEbCfe), čímž se získá 2-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitril ve formě světle žlutého oleje (2,04 g, 6,35 mmol).
*H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): H 7,92-7,94 (1H, m), 7,69-7,92 (3H, m), 7,33-7,37 (1H, m), 7,08-7,12 (3H, m) a 1,30 (12H, s).
Příklad 85
-cyklopenty 1-3 - [4-(3 -methoxy fenoxy)fenyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin
Směs 4-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)fenolu (0,195 g,
0,660 mmol, 1 ekviv.), 3-methoxyborité kyseliny (0,240 g, 1,58 mmol, 2,4 ekviv.), octanu měďnatého (0,180 g, 0,990 mmol, 1,5 ekviv.) a 4Á molekulárních sít v pyridinu (0,27 ml) se zahřívá pod refluxem po dobu 5 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu směsí CH2C12 (20 ml) a MeOH (20 ml), filtrát se koncentruje, čímž se získá olej ovitá zelená pevná látka, která se čistí chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 1 1 CH2Cl2,600 ml 20% MeOH/CH2Cl2 a 600 ml 40 % MeOH/CH2Cl2), čímž se získá 1 -cyklopentyl-3-[4-(3-methoxyfenoxy)fenyl]l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu ve formě žluto-hnědé pevné látky (0,072 g, 0,179 mmol).
*H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,23 (1H, s), 7,67 (2H, d, J= 8, 6 Hz), 7,34 (1H, t, J= 8, 2 Hz), 7,16 (2H, d, J = 8,6 Hz), 6,78 (1H, d, J= 8,3 Hz), 6,65-6,70 (2H, m), 5,21-5,25 (1H, m), 3,76 (3H, s), 2,02-2,11 (4H, m), 1,87-1,91 (2H, m), 1,67-1,71 (2H, m).
RP-HPLC (Hypercil Cl8, 5 pm, 100A, 15 cm; 5%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut 1 ml/min). Rt 13,35 minut.
MS: MH+ 402.
Příklad 86
3-[4-(benzyloxy)fenyl]-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin
Ct i· i- «· f © r· eo
G ft ' G ft í < ft 0 G
O í c/ C V <· ft C ft e c í '· r e ¢-. ť i o ci c c c c ft ft. r C p
C fj O V ft < ft ft ft < i· r !' CCG C
174
Do směsi l-cyklopentyl-3-jod-lH-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-aminu (5,41 g, 17,1 mmol, 1 ekviv.) a 4-(benzyloxy)fenylborité kyseliny (4,87 g, 21,4 mmol, 1,2 ekviv.) v DME (100 ml) se přidá tetrakis(trifenylfosfm)palladium (1,19 g, 1,03 mmol, 0,06 ekviv.) a roztok monohydrátu uhličitanu sodného (5,09 g, 41 mmol, 2,4 ekviv.) ve vodě (54 ml). Směs se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 2 hodin. Přidá se další tetrakis(trifenylfosfin)palladium (1,19 g, 1,03 mmol, 0,06 ekviv.) a reakční směs se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 3 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a bílá krystalická pevná látka (3,868 g) se spojí filtrací takovým způsobem, aby se získalo více produktu, filtrát se koncentruje za vakua a zbytek se rozdělí mezi vodu (50 ml) a EtOAc (50 ml). Vodná vrstva se extrahuje 3 podíly EtOAc (150 ml každý) a spojené organické extrakty se promyjí 3 podíly vody (100 ml každý) a solankou (100 ml), suší síranem sodným, filtrují a koncentrují, čímž se získá žlutá pevná látka (0,916 g). Oba podíly pevné látky se spojí a rekrystalizují z horkého EtOAc, čímž se získá 3-[4-(benzyloxy)fenyl]-lcyklopentyl-1 H-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (3,41 g, 8,8 mmol).
*H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (IH, s), 7,19-7,62 (7H, m), 7,18 (2H, d, J= 6,9 Hz), 5,18-5,23 (IH, m), 5,22 (2H, s), 2,00-2,10 (4H, m), 1,87-1,89 (2H, m), 1,66-1,70 (2H, m).
RP-HPLC (Hypercil Cl8, 5 pm, 100 A, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), Rt 13,05 minut.
Příklad 87
-cyklopenty 1-3 - [4-(4-fluorfenoxy)fenyl] -1 H-pyrazolo [3,4-H|pyrimidin-4-amin
Směs 4-(4-amino-l-cyklopentyl-lH-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-3-yl)fenolu (0,151 g, 0,511 mmol, 1 ekviv.), 4-(fluorfenyl)borité kyseliny (0,357 g, 2,55 mmol, 5,0 ekviv.), octanu měďnatého (0,139 g, 0,766 mmol, 1,5 ekviv.) a 4Á molekulárních sít v pyridinu (0,21 ml) a dichlorethanu (5 ml) se zahřívá pod refluxem po dobu 48 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a výsledné pevné látky se odstraní filtrací přes vrstvu celitu s MeOH (20 ml), filtrát se koncentrujeza vzniku hnědého oleje, který se čistí chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 300 ml CH2CI2, 400 ml 10% MeOH/CH2Cl2 a 400 ml 20 % MeOH/CH2Cl2), čímž se získá červený olej, který se dále čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 50%-l00% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v o <··· e· 0 c * ·.
& e o e © c e © f: t C · β
O
C <5 í>
t? η β
« e>
« O » « o o © o c <- e <' © c r c r< c « e
175 průběhu 20 minut, 21 ml/min). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá l-cyklopentyl-3-[4-(4-fluorfenoxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,010 g, 0,025 mmol).
‘H NMR (d6-CDCl3, 400 MHz): δΗ 8,37 (1H, s), 7,65 (2H, d, J= 8,6 Hz), 7,03-7,26 (6H, m), 5,59 (2H, bs), 5,27-5,35 (1H, m), 2,09-2,21 (4H, m), 1,95-2,02 (2H, m), 1,68-1,79 (2H, m).
RP-HPLC (Hypercil Cl8, 5 pm, 100, 15 cm; 5%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), Rt 14,63 minut.
MS: MH+ 390.
Příklad 88 l-cyklopentyl-3-4-[3-(trifluormethyl)fenoxy]fenyl-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-amin
Směs 4-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl)fenolu (0,170 g,
0,576 mmol, 1 ekviv.), 3-(trifluormethylfenyl)borité kyseliny (0,328 g, 1,73 mmol, 3,0 ekviv.), octanu měďnatého (0,108 g, 0,594 mmol, 1,0 ekviv.) a 4Á molekulárních sít v pyridinu (0,23 ml) a dichlorethanu (5,8 ml) se zahřívá pod refluxem po dobu 6 hodin. Přidá se octan měďnatý (0,050 g, 0,5 ekviv.) a reakční směs se zahřívá pod refluxem po dobu 16 hodin. Přidají se další molekulární síta a 3-(trifluormethylfenyl)boritá kyselina (0,250 g,
2,3 ekviv.) a reakční směs se zahřívá pod refluxem po dobu 54 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu s MeOH (20 ml), filtrát se koncentruje za vzniku hnědé pevné látky, která se čistí chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 400 ml heptanu, 400 ml 10% EtOAc/heptan, 400 ml 20% EtOAc/heptan a 400 ml 50% EtOAc/heptan), čímž se získá žlutá pevná látka. Dalším čištěním preparativní RP-LC/MS (Gilson-Micromass Cl8, 5 pm, 130A, 21 cm, 0%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 9 minut, 25 ml/min), odstraněním acetonitrilu za vakua a lyofilizací vodné směsi se získá l-cyklopentyl-3-4-[3(trifluormethyl)fenoxy]fenyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin ve formě světle hnědé pevné látky (0,017 g, 0,039 mmol).
*H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,29 (1H, s), 7,68-7,74 (3H, m), 7,65 (1H, d, J= 8,1 Hz), 7,52-7,54 (2H, m), 7,24 (2H, d, J= 8,7 Hz), 7,7 (2H, bs), 5,20-5,28 (1H, m), 2,03-2,11 (4H, m), 1,90-1,91 (2H, m), 1,68-1,70 (2H, m);
o e c c e
E ©
o e © © c f! β C
O o o e e o o o o © O
C o © © í r> © © c c © <· <? β ( c c
c. r- c e © e
176
RP-HPLC (Hypercil 08, 5 pm, 100, 15 cm; 5%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), Rt 15,72 minut.
MS: MH+ 440.
Příklad 89
-cyklopentyl-3 - [4-(3 -nitrofenoxy)fenyl]-177-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-4-amin
Směs 4-(4-amino-l -cyklopentyl-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl)fenolu (0,202 g,
0,684 mmol, 1 ekviv.), 3-nitrofenylborité kyseliny (0,571 g, 3,42 mmol, 5,0 ekviv.), octanu měďnatého (0,186 g, 1,02 mmol, 1,5 ekviv.) a 4Á molekulárních sít v pyridinu (0,28 ml) a dichlorethanu (6,8 ml) se zahřívá pod refluxem po dobu 24 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu. Do zbytku se přidá dichlormethan (25 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu s MeOH (20 ml), filtrát se koncentruje za vzniku hnědé tekutiny, která se čistí chromatografii na sloupci silikagelu (elucí 400 ml heptanu, 400 ml 10% EtOAc/heptan, 400 ml 20% EtOAc/heptan a 800 ml MeOH), čímž se získá červený olej, který se dále čistí preparativní RP-LC/MS (Gilson-Micromass Cl8, 5 pm, 130 A, 21 cm, 0%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 9 minut, 25 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá 1 -cyklopentyl-3 - [4-(3 -nitrofenoxy)fenyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-amin ve formě světle žluté pevné látky (0,034 g, 0,081 mmol).
*H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (ÍH, s), 7,28-7,74 (6H, m), 7,18 (2H, d, J= 8,6 Hz), 7,7 (2H, bs), 5,13-5,26 (ÍH, m), 2,02-2,10 (4H, m), 1,89-1,91 (2H, m), 1,68-1,70 (2H, m);
RP-HPLC (Hypercil Cl8, 5 pm, 100, 15 cm; 5%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), Rt 19,98 minut.
MS:MH+417.
Příklad 90 l-cyklopentyl-3-4-[4-(trifluormethoxy)fenoxy]fenyl-17/-pyrazolo[3,4-ť7]pyrimidin-4-amin Směs 4-(4-amino-l-cyklopentyl-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl)fenolu (0,100 g,
0,339 mmol, 1 ekviv.), 4-trifluormethoxyfenylborité kyseliny (0,349 g, 1,69 mmol, 5,0 ekviv.), octanu měďnatého (0,092 g, 0,51 mmol, 1,5 ekviv.) a 4Á molekulárních sít v © «>
<: R © © o e e f e r o t- c a © » r e o © co e ».· o © £,
C. C
177 pyridinu (0,12 ml) a dichlorethanu (3,4 ml) se zahřívá pod refluxem po dobu 72 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu. Přidá se dichlormethan (25 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá hnědý olej, který se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 A, 25 cm; 10%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá l-cyklopentyl-3-4-[4-(trifluormethoxy)fenoxy]fenyl-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrirnidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,020 g, 0,044 mmol).
’H NMR (d6-CDCl3, 400 MHz): 5H 8,53 (ÍH, s), 7,69 (2H, d, J= 8,6 Hz), 7,07-7,26 (6H, m), 5,55 (2H, bs), 5,28-5,36 (ÍH, m), 2,16-2,21 (4H, m), 1,94-2,04 (2H, m), 1,72-1,79 (2H, m);
RP-HPLC (Hypercil 08, 5 pm, 100, 15 cm; 5%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), Rt 16,33 minut.
MS:MH+456.
Příklad 91
-cyklopentyl-3 -4- [4-(trifluormethyl)fenoxy]fenyl -1 //-pyrazolo[3,4- JJpyrimidin-4-amin Použitím způsobu popsaného pro syntézu l-cyklopentyl-3-4-[4(trifluo rmethoxy)fenoxy] feny 1-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu se připraví
-cyklopentyl-3 -4- [4-(trifluormethyl)fenoxy]fenyl-1 //-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,008 g, 0,018 mmol).
'H NMR (dg-CDCb, 400 MHz): δΗ 8,34 (ÍH, s), 7,60-7,73 (4H, m), 7,05-7,32 (4H, m), 5,89 (2H, bs), 5,27-5,34 (ÍH, m), 2,17-2,21 (4H, m), 2,00-2,03 (2H, m), 1,72-1,79 (2H, m); RP-HPLC (Hypercil Cl8, 5 pm, 100, 15 cm; 5%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), Rt 15,77 minut.
MS: MH+ 440.
Příklad 92
3-[3-(benzyloxy)fenyl]-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidm-4-amin
Do směsi l-cyklopentyl-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,200 g,
0,631 mmol, 1 ekviv.) a 3-(benzyloxy)fenylborité kyseliny (0,110 g, 0,487 mmol, 1,0 © f.
( o í c
f. t> ť> f: v (' «' © / ©O <
© c ‘ í- < - i r- © © e o ( c © v. ( . < © e c ť- i- (' f c c c c o i- o © o t·· f f c o ě i. <' € e. o e
178 ekviv.) v DME (6 ml) se přidá tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,044 g, 0,038 mmol, 0,07 ekviv.) a roztok monohydrátu uhličitanu sodného (0,187 g, 1,51 mmol, 2,4 ekviv.) ve vodě (2 ml). Směs se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 16 hodin, pak se nechá vychladnout na pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi EtOAc (50 ml) a vodu (50 ml). Organická vrstva se suší síranem sodným, filtruje a koncentruje, čímž se získá olejovitá červeno-oranžová pevná látka. Rekrystalizací z horkého EtOAc se získá červeno-oranžová pevná látka, která se čistí preparativní RPHPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 10%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá 3-[3-(benzyloxy)fenyl]-l-cyklopentyl-lí/-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,023 g, 0,060 mmol).
*H NMR (dg-CDCb, 400 MHz): δΗ 8,34 (1H, s), 7,27-7,46 (8H, m), 7,077,10 (1H, m), 5,63 (2H, bs), 5,31 (1H, chint, J= 7,6 Hz), 5,16 (2H, s), 2,15-2,20 (4H, m), 1,96-2,01 (2H, m), 1,72-1,75 (2H, m);
RP-HPLC (Hypercil 08, 5 pm, 100A, 15 cm; 5%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), Rt 14,00 minut.
MS:MH+386.
Příklady 93-99
Obecný způsob syntézy [substituovaných (methylamino)] feny lpyrazolopyrimidinů je následující:
Do 0,10 M roztoku cw-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu v dichlorethanu se přidá 1,5 ekviv. substituovaného benzaldehydu, 3,8 ekviv. ledové kyseliny octové a 3,5 ekviv. triacetoxyborohydridu sodného. Tato směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidají se další 3,3 ekviv. triacetoxyborohydridu sodného (pokud je třeba). Reakční směs se míchá po dobu 1,5 hodiny a pak zředí dichlorethanem (5 ml) a nasyceným vodným roztokem NaHCCb (5 ml). Organický podíl se separuje a vodný podíl se extrahuje s CH2CI2 (10 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným, filtrují a koncentrují. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 10%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá požadovaný produkt.
e e * * β ♦ · * * * e © © ř © © • r e © · * «5 ©
♦ o c r e t e>
c e e<
t>
e f- ί>
© © c c>
a e e ř<c c r r
179
Sloučeniny syntetizované výše uvedeným způsobem zahrnují:
Název HPLC rt M+ (min)
Příklad 93 triacetát cis-3 - {4- [(3 -fluorbenzyl)amino]fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazinojcyklohexyl]-l.ř/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu 13,25 515,3
Příklad 94 triacetát czs-3-{4-[(2-fluorbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methyl 13,24 515,3
-piperazino)cyklohexyl] -1 H-pyrazolo [3,4-íZ]pyrimidin-4-aminu
Příklad 95 diacetát cz\s'-3-{4-[(4-methoxybenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4- 13,08 527,3 methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-íZ]pyrimidin-4-aminu
Příklad 96 triacetát cis-3 - {4- [(3 -methoxybenzyl)amino] fenyl }-l- 13,12 527,3 [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-Jjpyrimidin-4-aminu
Příklad 97 triacetát czs-3-{4-[(4-fluorbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methyl- 13,35 515,3 piperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu
Příklad 98 cis-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-4-[(3 -pyridylmethyl) 10,19 498,5
a · · « · * · •· «· ·· ···· β ·
180 amino] fenyl-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin
Příklad 99 cw-3-{4-[(2-methoxybenzyl)amino]fenyl}-l -[4-(4-methyl 13,57 527,4 piperazino)cyklohexyl] -1//-pyrazolo [3,4-<2]pyrimidin-4-amin
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5mm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min)
Příklad 100 triacetát cis-3 - [3 -(benzylamino)feny 1] -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1] -1Hpyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu
Do roztoku czs-3-(3-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-l/7pyrazolo[3,4-g/]pyrimidin-4-aminu (0,104 g, 0,256 mmol, 1 ekviv.) v dichlorethanu (2 ml) se přidá benzaldehyd (0,03 ml, 0,282 mmol, 1,1 ekviv.), ledová kyselina octová (0,06 ml, 1,0 mmol, 3,9 ekviv.) a triacetoxyborohydrid sodný (0,212 g, 1,0 mmol, 3,9 ekviv.). Tato směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidá se nasycený vodný roztok NaHCCb (5 ml). Organický podíl se separuje a vodný podíl se extrahuje 2 podíly CH2CI2 (15 ml každý). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným, filtrují a koncentrují, čímž se získá žlutý olej, který se čistí (2x) preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 10%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá triacetát cis-3-[3 (benzylamino)fenyl] -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,023 g, 0,046 mmol).
’H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,21 (1H, s), 7,40 (4H, m), 7,20-7,25 (2H, m), 6,88 (1H, s), 6,78 (1H, d, J= 7,7 Hz), 6,67-6,69 (1H, m), 6,56-6,58 (1H, m), 4,75-4,79 (1H, m), 4,32 (2H, d, J= 5,8 Hz), 2,21-2,49 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,05-2,14 (2H, m), 1,89 (9H, s), 1,54-1,68 (4H, m);
RP-HPLC (Hypercil Cl8, 5 pm, 100 A, 15 cm; 5% 100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), Rt 13,04 minut.
MS: MH+ 497.
181
Příklad 101 cw-2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidin-3 yl} fenoxy)benzonitril
Směs cis-3 -jod- l-[4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl]-l //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (2,29 g, 5,19 mmol, 1 ekviv.), 2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitrilu (2,0 g, 6,2 mmol, 1,2 ekviv.), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,329 g, 0,311 mmol, 0,06 ekviv.), DME (21 ml) a monohydrátu uhličitanu sodného (1,54 g, 12,5 mmol, 2,4 ekviv.) ve vodě (16 ml) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 60 hodin. Přidá se další tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,100 g, 0,02 ekviv.) a reakční směs se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 6,5 hodiny. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozdělí mezi roztok nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (25 ml) a EtOAc (25 ml). Organický extrakt se suší síranem sodným, filtruje a koncentruje. Zbytek se trituruje zEt2O a čistí chromatografii na sloupci silikagelu (eluce 1 1 5% MeOH/CíUCh, 1 1 10% MeOH/CH2Cl2, 1 1 20% MeOH/CH2Cl2 a 1 1 25% MeOH/CH2Cl2), čímž se získá czs-2-(4{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-3yl}fenoxy)benzonitril ve formě světle žluté pevné látky (1,79 g, 3,52 mmol).
‘H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,24 (1H, s), 7,94 (1H, d, J = 7,7 Hz), 7,68-7,73 (3H, m), 7,31-7,34 (3H, m), 7,18 (1H, d, J - 8,5 Hz), 4,78-4,83 (1H, m), 2,21-2,51 (11H, m), 2,19 (3H, s), 2,05-2,08 (2H, m), 1,56-1,71 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,16 minut.
MS: MH+ 509.
Příklad 102 triacetát cis-2-(3 - {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo[3,4</|pyrimidin-3 -yl} fenoxy )benzamidu
Směs cis-2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4ó/]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzonitrilu (0,111 g, 0,218 mmol, 1 ekviv.), 25% vodného roztoku hydroxidu sodného (1 ml) a 30% H2O2 (1 ml) v dioxanu (1 ml) se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 16 hodin. Přidá se další podíl 30% H2O2 (1 ml) a reakční směs se ©o ee c © © © v © ίο © © e e © ne e© © © c© e e o ©o © o © ts e c r e © © o e & ® © e ct
182 zahřívá při teplotě 100°C po dobu 2 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a zředí CH2CI2 (15 ml). Organický podíl se separuje a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá světle žlutá pevná látka, která se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 10%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá triacetát cis-2-(3- {4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzamidu ve formě bělavé pevné látky (0,020 g, 0,038 mmol). *H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,23 (1H, s), 7,75 (1H, d, J= 7,7 Hz), 7,64 (3H, d, J= 6, 7 Hz), 7,56 (1H, s), 7,48 (1H, t, J=7, 5Hz), 7,27 (1H, t, >7, 4Hz), 7,19 (2H, d, J= 8,6 Hz), 7,06 (1H, d, J= 7,7 Hz), 4,76-4,82 (1H, m), 2,20-2,50 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,04-2,08 (2H, m), 1,89 (9H, s), 1,58-1,70 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 10,79 minut.
MS: MH+ 527.
Příklad 103 cz5,-3-4-[2-(aminomethyl)fenoxy]fenyl-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo [3,4-í7Jpyrimidin-4-amin
Směs cis-2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl} fenoxy)benzonitrilu (0,097 g, 0,19 mmol, 1 ekviv.) a hydridohlinitanu lithného (0,036 g, 0,95 mmol, 5 ekviv.) v THF (2 ml) se zahřívá při teplotě 66°C po dobu 2 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozdělí mezi ledovou vodu (30 ml) a CH2CI2 (50 ml). Organický extrakt se suší síranem sodným, filtruje a koncentruje, čímž se získá žlutá pevná látka, která se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 A, 25 cm; 10%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá cis-3 -4-[2 -(aminomethyl)fenoxyj fenyl-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,078 g, 0,152 mmol). !H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (1H, s), 7,57-7,64 (3H, m), 7,21-7,29 (2H, m), 7,04 (2H, d, J= 8,7 Hz), 7,01 (1H, d, J= 7,9 Hz), 4,76-4,81 (1H, m), 3,74 (2H, s), 2,20-2,51 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,05-2,08 (2H, m), 1,57-1,70 (4H, m);
• ©
183
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 9,85 minut.
MS:MH+513.
Příklad 104 diacetát cis-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3 -4-[2-(2H-1,2,3,4-tetraazol-5yl)fenoxy]fenyl-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu
Směs 675-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4</|pyrimidin-3-yl} fenoxy jbenzonitrilu (0,070 g, 0,14 mmol, 1 ekviv.) a azidotributylcínu (0,8 ml, 2,4 mmol, 17 ekviv.) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 80 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a zředí EtOAc (15 ml). Výsledný precipitát se spojí filtrací, čímž se získá béžová pevná látka, která se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 10%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodný podíl se nechá reagovat s nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) kvůli odstranění zbylé kyseliny octové. Vodná směs se extrahuje CH2CI2 (25 ml) a organický extrakt se suší síranem sodným, filtruje a koncentruje, čímž se získá diacetát cA-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-3 -4-[2-(2//-1,2,3,4-tetraazol-5-yl)fenoxy]fenyl-1 //pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,009 g, 0,016 mmol).
Ή NMR (dó-DMSO, 400 MHz); δΗ 8,20 (1H, s), 7,94 (1H, d, J= 7,7 Hz), 7,54 (2H, d, J= 8,7 Hz), 7,32-7,37 (1H, m), 7,24-7,28 (1H, m), 7,11 (1H, d, J= 9,1 Hz), 6,99 (2H, d, J= 8,7 Hz), 4,73-4,80 (1H, m), 2,23-2,34 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,05-2,07 (2H, m), 1,68 (6H, s), 1,56-1,65 (4H,m);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 10,86 minut.
MS: MH+ 552.
Příklad 105 diacetát cis-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 -[4-(2-nitrofenoxy)fenyl] -1Hpyrazolo[3,4-ídpyrimidin-4-aminu c «·· (i &
© © ( © e © c © e e ©e <l © ♦ » o © © a © β o © © c »· 9 · · · ϋ · t> © β Ο e c « e i ® e © e © © t· © η o
184
Směs 4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 77-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenolu (0,200 g, 0,491 mmol, 1 ekviv.) a 60% hydridu sodného (0,020 g, 0,49 mmol, 1 ekviv.) v dioxanu (4,9 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 minut. Přidá se 2-fluomitrobenzen (0,06 ml, 0,6 mmol, 1,1 ekviv.) a reakční směs se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 3 hodin. Přidá se další hydrid sodný (0,010 g, 0,24 mmol, 0,5 ekviv.) a 2-fluomitrobenzen (0,02 ml, 0,2 mmol, 0,4 ekviv.) a reakční směs se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 3 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a výsledná pevná látka se odstraní filtrací se směsí CH2CI2 (10 ml) a EtOAc (10 ml). Filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutá polopevná látka, která se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 10%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá diacetát czs-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-nitrofenoxy)fenyl]-l/7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,023 g, 0,043 mmol).
*H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,23 (1H, s), 8,10 (1H, d, J= 8,2 Hz), 7,68-7,73 (3H, m), (1H, m), 7,31 (1H, d, J= 7,3 Hz), 7,24 (2H, d, J= 8,7 Hz), 4,764,82 (1H, m), 2,26-2,51 (11H, m), 2,24 (3H, s), 2,17-2,21 (2H, m), 2,05 (6H, s), 1,56-1,71 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,09 minut.
Příklad 106 cw-3-[4-(2-aminofenoxy)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4t/Jpyrimidin-4-amin
Směs cis-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1] -3 - [4-(2-nitrofenoxy)fenyl] -1Hpyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (0,059 g, 0,091 mmol, 1 ekviv.), ledové kyseliny octové (0,03 ml, 0,5 mmol, 5 ekviv.) a 10% Pd-C (0,024 g, 0,4 hm./hm. ekviv.) v ethanolu (1 ml) se míchá při pokojové teplotě pod pozitivním tlakem vodíku po dobu 16 hodin. Pevné látky se odstraní filtrací s CH2CI2 (10 ml) a filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 10%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá c«-3-[4-(2-aminofenoxy)fenyl]-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l 77-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin ve formě bělavé pevné látky (0,018 g, 0,036 mmol).
É1 &
(’ e © * t <->' e>. © o © · β r «·. ·- © c r e e © « * f © ·:
fe » © B © β· © © e «
185 ’H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (ÍH, s), 7,59 (2H, d, J= 8,6 Hz), 7,05 (2H, d, J= 8,7 Hz), 6,85-6,98 (3H, m), 6,58-6,61 (ÍH, m), 4,93 (2H, bs), 4,78-4,80 (ÍH, m), 2,202,50 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,05-2,09 (2H, m), 1,55-1,70 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,00 minut.
MS: MH+ 499.
Příklad 107 [2-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl)-5-fenoxyfenyl]methanol
a) (2-brom-5-fenoxyfenyl)methanol
Do roztoku 3-fenoxyfenylmethanolu (4,0 g, 0,020 mol) v bezvodém acetonitrilu se přidá 1-brom-2,5-pyrrolidindion (3,73 g, 0,021 mol) při pokojové teplotě. Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1,5 hodiny pod atmosférou dusíku. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá tetrachlormethan (100 ml) a směs se filtruje, filtrát se koncentruje a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (1:5) jako mobilní fázi, čímž se získá (2-brom-5fenoxyfenyl)methanol (4,7 g, 0,017 mol).
RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25%-100% v průběhu 10 minut s 0,lM octanem amonným, 1 ml/min), Rt 11,7 minut TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf0,18.
b) 5-fenoxy-1,3-dihydro-2,1 -benzoxaborol-1 -ol
Do roztoku (2-brom-5-fenoxyfenyl)methanolu (2,21 g, 0,0079 mol) v bezvodém tetrahydrofuranu (50 ml) při teplotě -78°C pod atmosférou dusíku se pomalu přidává roztok «-butyllithia v «-hexanech (2,24 M, 8,6 ml, 0,019 mol). Reakce se míchá po dobu 30 minut při teplotě -78°C, pak míchá po dobu 20 minut při teplotě -25°C. Reakce se ochladí na teplotu -50°C a se pomalu přidává triizopropylborát (4,075 g, 0,0216 mol). Reakce se ohřívá na pokojovou teplotu a míchá po dobu jedné hodiny. Přidá se IN vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (20 ml) k dosažení pH = 5, pak se reakce míchá při pokojové teplotě po dobu jedné hodiny. Reakční směs se extrahuje ethyletherem (3 x 40 ml). Spojené organické extrakty se promyj i vodou (60 ml) a solankou (60 ml) a suší síranem sodným. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku, čímž se získá zbytek, který
Ci « β
β · > ί €· 0 C e
«00 · 88 C © e ft © 0· e « ® c ©0 «
0 0 © · · ¢0 © ft e · · © © ® c ® 0 ©« »···
186 se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (1:5), poté ethylacetátu a «-heptanu (1:4) jako mobilní fázi, čímž se získá 5-fenoxy-l,3dihydro-2,l-benzoxaborol-l-ol (1,3 g, 0,0058 mol).
RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25%-100% v průběhu 10 minut s 0,lM octanem amonným, 1 ml/min), Rt 10,8 minut TLC (ethylacetát/heptan 1:2) Rf0,24.
c) [2-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-5-fenoxyfenyl]methanol Směs l-cyklopentyl-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (0,36 g, 0,0011 mol), 5-fenoxy-l,3-dihydro-2,l-benzoxaborol-l-olu (0,30 g, 0,0013 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,077 g, 0,000067 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,34 g, 0,0028 mol) v ethylenglykoldimethyletheru (7 ml) a vody (5 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 17 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (20 ml) a nasycený vodný roztok uhličitanu sodného (20 ml). Vodná vrstva se dále extrahuje ethylacetátem (3 x 20 ml). Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá ethylacetát (15 ml), čímž vznikne bílý precipitát, který se filtruje a promyje acetonem (2 x 15 ml) a dichlormethanem (1 x 15 ml), čímž se získá [2-(4amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-5-fenoxyfenyl]methanol (0,267 g, 0,00067 mol).
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,46 (m, 2H), 7,38 (m, 1H), 7,28 (m, 1H), 7,13 (m, 3H), 7,00 (m, 1H); 5,28 (m, 1H), 5,17 (m, 1H), 4,48 (d, 2H), 2,08 (br, 2H), 1,98 (br, 2H), 1,86 (br, 2H), 1,68 (br, 2H).
RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25%-100% v průběhu 10 minut s 0,lM octanem amonným, 1 ml/min), Rt 10,5 minut.
MS: MH+ 402.
Příklad 108 maleát cis-1 -(aminomethyl)-4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin1 -yl] -1 -cyklohexanolu
a) czó'-l-(l-oxaspiro[2,5]okt-6-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-é/]pyrimidin-4-amin a © «· 8 «
© · e *
© • e © ř ©
e· ©
187
Směs trimethy lsulfoxonium-jodidu (0,33 g, 0,0015 mol) a hydridu sodného (60 % disperze v oleji, 0,055 g, 0,00138 mol) v methylsulfoxidu (4 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 30 minut. Reakční směs se ochladí na teplotu 10°C a přidá se 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-lcyklohexanon (0,5 g, 0,00125 mol) v methylsulfoxidu (2 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2 hodin. Směs se rozdělí mezi nasycený vodný roztok chloridu amonného (20 ml) a dichlormethan a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 20 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou a solankou a suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá cz's-l-(loxaspiro[2,5]okt-6-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,527 g, 0,00125 mmol).
*H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 8,25 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 4,90 (br, 1H), 2,70 (s, 2H), 2,17 (br, 4H), 1,97 (br, 2H), 1,32 (br, 2H).
RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25%-100% v průběhu 23 minut s 0,lM octanem amonným, 1 ml/min), Rt 11,7 minut.
MS:MH+413.
b) maleát cis-\-(aminomethyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4~ í/]pyrimidin-1 -yl] -1 -cyklohexanolu
Cis-1 -(1 -oxaspiro [2,5 ] okt-6-yl)-3 -(4-fenoxy fenyl)-177-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-4amin (0,62 g, 0,0015 mol) v amoniaku (2 M v methanolu, 15 ml) a roztok 20 % Λζ/V-dimethylformamidu v izopropanolu (15 ml) se zahřívá při teplotě 65°C v autoklávu po dobu 18 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi hydroxidu amonného, methanolu a dichlormethanu (2:5:93), poté hydroxidu amonného, methanolu a dichlormethanu (2:8:90) jako mobilní fázi, čímž se získá cis-1 -(aminomethyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo[3,4-í(|pyrimidin-1 -yl]-1 cyklohexanol (0,11 g, 0,00026 mol). Sloučenina se rozpustí v ethylacetátu (10 ml) při teplotě 40°C a přidá se předem zahřátý roztok maleinové kyseliny (0,060 g, 0,000512 mol) v ethylacetátu (2 ml). Směs se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá maleát c/,y-l-(aminomethyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin1 -yl]-l -cyklohexanolu (0,140 g, 0,00026 mol).
© © g ť? « p r © o (, © fi
C © β ©· <· © © © ©
C (·.
« o ú r < C 0 e ť- f c c © e ©
C C P ©
188 *H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,73 (br, 3H), 7,64 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,13 (m, 5H), 6,01 (s, 2H), 4,94 (s, 1H), 4,70 (br, 1H), 2,79 (s, 2H), 2,36 (br, 2H), 1,76 (br, 4H), 1,58 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,9 minut.
MS: MH+ 431.
Příklad 109 maleát cis-1 -(2-aminoethyl)-4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin1 -yl] -1 -cyklohexanol
a) cis-14-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-Jjpyrimidin-1 -yl]-1 hydroxycyklohexyl} methylkyanid
Do směsi cis-1 -(1 -oxaspiro [2,5]okt-6-yl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-4-aminu (4,4 g, 0,011 mol) a chloristanu lithného (l,7g, 0,016 mol) se přidá kyanid draselný (1,04 g, 0,016 mol) v acetonitrilu (600 ml). Reakční směs se refluxuje po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Směs se zředí vodou (200 ml) a extrahuje diethyletherem (2 x 300 ml). Spojené organické fáze se promyjí vodou a solankou a suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá czs-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l -hydroxycyklohexy 1}methylkyanid (4,30 g, 0,0098 mol).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 10,4 minut.
MS:MH+441.
b) maleát cis-1 -(2-aminoethyl)-4- [4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-1 -yl] -1 -cyklohexanolu
Do cis- {4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 /7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -y 1]-1hydroxycyklohexyljmethylkyanidu (3,4 g, 0,0077 mol) v methanolu (100 ml) a hydroxidu amonného (5 ml) se přidá Raneyův nikl (50 % kašovitá směs ve vodě, 3 ml). Směs se míchá 18 hodin pod atmosférou vodíku (1 atm). Reakční směs se filtruje přes vrstvu celitu a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá surový m-l-(2-aminoethyl)-4-[4amino-3 -(4-fenoxy feny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-ť/]pyrimidin-l-yl] -1 -cyklohexanol (1,82 g, c «·
Ir «?
< i··· «.· c r re· © e c- © r r < e- c e <-· *>
v r- < c < c r r r © c c > e e c e
189
0,0041 mol). 0,8 g Surového cz's-l-(2-aminoethyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-l-yl]-l-cyklohexanolu se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi hydroxidu amonného, methanolu a dichlormethanu (2:3:95), poté hydroxidu amonného, methanolu a dichlormethanu (2:12:86) jako mobilní fázi, čímž se získá czs-l-(2-aminoethyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidinl-yl]-l-cyklohexanol (0,423 g, 0,00095 mol). Tato sloučenina se rozpustí v ethylacetátu (40 ml) při teplotě 40°C a přidá se předem zahřátý roztok maleinové kyseliny (0,13 g, 0,0014 mol) v ethylacetátu (5 ml). Směs se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá maleát cz'5-l-(2-aminoethyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4</|pyrimidin-l-yl]-l-cyklohexanolu (0,186 g, 0,00033 mol).
*H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,67 (m, 2H), 7,60 (br, 3H), 7,42 (m, 2H), 7,16 (m, 5H), 6,01 (s, 2H), 4,73 (br, lH), 4,53 (s, 1H), 2,92 (br, 2H), 2,38 (br, 2H), 1,72 (br, 6H), 1,54 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,1 minut.
MS:MH+455.
c) cis-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)- l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-1 -yl]-1 hydroxy cyklohexyl} acetamid
Do směsi cis-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfeny 1)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-1 hydroxycyklohexyl jmethylkyanidu (0,972 g, 0,0022 mol) a uhličitanu draselného (1,28 g, 0,00093) v methylsulfoxidu (20 ml) se pomalu přidává 30 % roztok peroxidu vodíku ve vodě (3 ml) při teplotě 20°C. Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Reakční baňka se umístní do ledové lázně a do reakční směsi se pomalu přidá ledová voda (20 ml). Směs se extrahuje ethylacetátem (2 x 30 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, solankou a suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se trituruje dichlormethanem (8 ml) a pevná látka se filtruje, čímž se získá cis-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] -1 hydroxycyklohexyl {acetamid (0,542 g, 0,0012 mol).
‘H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,67 (m, 2H), 7,42 (m, 3H), 7,16 (m, 5H), 7,06 (s, 1H), 4,95 (br, 1H), 4,65 (m, 1H), 2,39 (m, 2H), 2,24 (s, 2H), 1,70 (br, 6H).
e · • · ·
• 9 9 9
9 9 ♦ * e ♦ » · • 9 9»
9 «
9 9
9 9999
190
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5nom, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,6 minut.
MS: MH+ 459.
Příklad 110
-(3 -azetanyl)-3 -(4-fenoxy feny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-í/jpyrimidin-4-amin
a) terc-buty 1-3 -hydroxy-l-azetankarboxylát
Do směsi l-benzhydryl-3-azetanolu (7,5 g, 0,031 mol) a di-terc-butyl-dikarbonátu (10,3 g, 0,047 mol) se přidá 20 % hydroxid palladnatý na aktivním uhlí (1,0 g) v ethylacetátu (200 ml). Směs se nechá protřepávat pod atmosférou vodíku při pokojové teplotě po dobu 20 hodin v Parrově hydrogenačním přístroji. Směs se filtruje přes vrstvu celitu a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, poté methanolu a dichlormethanu (5:95) jako mobilní fázi, čímž se získá terc-butyl-3-hydroxy-l-azetankarboxylát (5,015 g, 0,029 mol).
lH NMR (chloroform-^, 400 MHz) δ 4,59 (m, 1H), 4,14 (m, 2H), 3,80 (m, 2H), 2,55 (br, 1H), 1,50 (s, 9H)
TLC (methanol/dichlormethan = 2:98) Rf0,13.
b) terc-butyl-3 - [(methylsulfonyl)oxy]-1 -azetankarboxylát
Do roztoku terc-butyl-3-hydroxy-l-azetankarboxylátu (4,0 g, 0,023 mol) v bezvodém pyridinu (50 ml) se přidá methansulfonylchlorid (5,3 g, 0,046 mol) při teplotě -20°C pod atmosférou dusíku. Žlutá heterogenní směs se míchá při teplotě v rozmezí -20°C až -30°C po dobu jedné hodiny, pak v rozmezí 0°C až -5°C po dobu 2 hodin. Směs se nalije do ledové vody (50 ml). Vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 50 ml), 5 % vodným roztokem kyseliny citrónové (4 x 50 ml), vodou (1 x 50 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (1 x 50 ml) a solankou (1 x 50 ml) a suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá terc-butyl-3-[(methylsulfonyl)oxy]-lazetankarboxylát ve formě nahnědlého oleje (4,85 g, 0,019 mol).
’H NMR (chloroform-í/, 400 MHz) δ 5,19 (m, 1H), 4,25 (m, 2H), 4,07 (m, 2H), 3,04 (s, 3H), 1,42 (s, 9H) rfc · * r. « * · « β # c & & o © Φ Φ r © β © f‘< © · (- e e· e c © fc β © © o ©·<% © · © © r- fc e π · fc r c· « c r c © · © c © e © r ΐ- re e © e
191
TLC (methanol/dichlormethan = 2:98) Rf 0,28.
c) tórc-butyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-1 -yl]-1 azetankarboxylát
Do směsi 3-(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (1,0 g, 0,0033 mol) a uhličitanu česného (2,14 g, 0,0066 mol) v bezvodém V/V-dimethylformamidu (30 ml) se při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku přidá /erc-butyl-3[(methylsulfonyl)oxy]-l-azetankarboxylát (1,66 g, 0,0066 mol) v bezvodém N, V-dimethylformamidu (20 ml). Směs se míchá při teplotě 75°C po dobu 22 hodin a směs nalije do ledové vody (50 ml). Vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 70 ml) a solankou (1 x 70 ml) a suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, poté methanolu a dichlormethanu (5:95) jako mobilní fázi, čímž se získá /erc-butyl-3-[4-amino-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-azetankarboxylát (0,81 g, 0,0018 mol). *H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,25 (s, IH), 7,69 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 5,70 (br, IH), 4,35 (br, 4H), 1,39 (s, 9H)
RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25%-100% v průběhu 10 minut s 0,lM octanem amonným, 1 ml/min), Rt 12 minut.
MS: MH+ 459.
l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin
Do roztoku /erc-butyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/Jpyrimidinl-yl]-l-azetankarboxylátu (0,81 g, 0,0018 mol) v dichlormethanu (5 ml) se pomalu přidává 20% roztok kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu (10 ml) při teplotě 0°C pod atmosférou dusíku. Směs se ohřívá na pokojovou teplotu a míchá po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá 5N vodný roztok hydroxidu sodného při teplotě 0°C, aby se pH zvýšilo na 11. Vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (2 x 30 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 60 ml) a solankou (1 x 60 ml) a suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-amin (0,44 g, 0,0012 mol).
>4 • · · » » · » « * ♦ · · • β « » «· · · · • · ©β ······ · • · e · ♦ · « · · ··· ···· ·· »· ·· ····
192 *Η NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 8,28 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,18 (m, 5H), 5,70 (m, 1H), 4,20 (m, 2H), 4,05 (m, 2H)
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,8 minut.
MS: MH+ 359.
Obecný způsob:
Alkylace l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu
Do směsi 1 -(3 -azetanyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00014 mol, 1 ekviv.) a uhličitanu draselného (0,058 g, 0,00042 mol, 3 ekviv.) v bezvodém acetonitrilu se při pokojové teplotě přidá odpovídající alkylbromid (0,00014 mol, 1 ekviv.). Směs se míchá po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí by RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získají odpovídající alkylazetidiny.
Příklad 111
a) alkylbromid: 2-brom-1 -ethanol
2- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-djpyrimidin-1 -y 1]-1 -azetany 1} 1-ethanol *H NMR (DMSO-d, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,14 (m, 5H), 5,41 (m, 1H), 4,69 (br, 1H), 3,83 (m, 2H), 3,63 (m, 2H), 3,42 (m, 2H), 2,62 (m, 2H). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,0 minut.
MS:MH+403.
Příklad 112
b) alkylbromid: 2-bromethylmethylether acetát 1 - [ 1 -(2-methoxyethyl)-3 -azetanyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin4-aminu e c © to t o to * ft- €’ to e- i'.· t r o to ,-- c c c <? «
I '- C; to C ¢- to to r c e ( e t?
C <· < to«·. o to β
193 ’H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 9,09 (br, IH), 8,27 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 5,69 (m, IH), 4,13 (m, 2H), 3,94 (m, 2H), 3,51 (m, 2H), 3,36 (s, 3H), 2,95 (m, 2H), 2,08 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,6 minut.
MS:MH+417.
Příklad 113
c) alkylbromid: l-brom-2-(2-methoxyethoxy)ethan l-{l-[2-(2-methoxyethoxy)ethyl]-3-azetanyl}-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4ď|pyrimidin-4-amin *H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 8,24 (s, IH), 7,69 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,14 (m, 5H), 5,41 (m, IH), 3,79 (m, 2H), 3,62 (m, 2H), 3,44 (br, 6H), 3,23 (s, 3H), 2,69 (br, 2H). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,6 minut.
MS:MH+461.
Příklad 114
-[ 1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-3 -azetanyl]-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-ďjpyrimidin4-amin
Směs 1 -(3 -azetanyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (0,06 g, 0,00017 mol), l-methyl-4-piperidinonu (0,057 g, 0,0005 mol) a kyseliny octové (0,03 g, 0,0005 mol) v dichlorethanu (2,5 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny. Do směsi se přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,072 g, 0,00034 mol) a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi hydroxidu amonného, methanolu a dichlormethanu (2:15:83) jako mobilní fázi, čímž se získá l-[l-(l-methyl-4-piperidyl)-3-azetanyl]-3-(4fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-amin (0,029 g, 0,000064 mol).
β r /.
© ® í? © « c
43
C <?
e e e e ř £ e ( í>6 e © e © o e © © e o e c β
Ci β o©
V: © « <5 o © ts fs © « f; © © «; (: © © © «
194 ’H NMR (chloroform-J, 400 MHz) δ 8,38 (s, ÍH), 7,68 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,08 (d, 2H), 5,64 (m, ÍH), 5,57 (br, 2H), 3,93 (m, 2H), 3,73 (m, 2H), 2,83 (br, 2H), 2,40 (br, 3H), 2,00 (br, ÍH), 1,78 (br, 4H), 1,46 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,9 minut.
MS: MH+ 456.
Příklad 115
- {1 -[(1 -methyl-177-2-imidazolyl)methyl]-3-azetanyl} -3-(4-fenoxyfenyl)-177pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin
Směs l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,06 g, 0,00017 mol), 1-methyl-177-2-imidazolkarboxy lové kyseliny (0,056g, 0,0005 mol) a kyseliny octové (0,03 g, 0,0005 mol) v dichlorethanu (2,5 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny. Do směsi se přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,072 g, 0,00034 mol) a míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 25 minut s 0,lM octanem amonným, 2 1 ml/min), čímž se získá l-{l-[(l-methyl-177-2-imidazolyl)methyl]3-azetanyl}-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ť7Jpyrimidin-4-amin (0,020 g, 0,000044 mol).
!H NMR (chloroform-íZ, 400 MHz) δ 8,35 (s, ÍH), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,20 (d, 3H), 7,18 (d, 2H), 6,93 (s, ÍH), 6,85 (s, ÍH), 5,59 (m, 3H), 3,93 (m, 6H), 3,85 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,5 minut.
MS: MH+ 453.
Příklad 116
-3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-úQpyrimidin-1 -yl] -1 -azetanyl} -1 -ethanon Do směsi 1 -(3-azetanyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,020 g, 0,000056 mol) a uhličitanu draselného (0,016 g, 0,00012 mol) v bezvodém A, A,-dimethylformamidu (1 ml) se přidá anhydrid kyseliny octové (0,009 g, 0,000084 mol) <7 β * ♦ r
195 při pokojové teplotě. Reakční směs se míchá po dobu 1 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 5 pm, 100 x 20 mm; 20%-85% v průběhu 7,5 minut s 0,05 M octanem amonným, 251 ml/min), čímž se získá 1{3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-1 -yl] -1 -azetany} -1 -ethanonu (0,014 g, 0,000035 mol).
*H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,71 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,17 (m.5H), 5,72 (m, 1H), 4,66 (m, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 1,84 (s.3H). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,9 minut.
MS:MH+401.
Příklad 117 cis 3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 -cyklobutanol
a) 3 -propylidencyklobutyl-methansulfonát
Roztok 3-propyliden-l-cyklobutanolu (0,344 g, 0,00307 mol) v pyridinu (5 ml) se ochladí na teplotu 0°C. Po kapkách se přidá methansulfonylchlorid (0,422 g, 0,00369 mol) a teplota se udržuje pod 2°C. Směs se míchá po dobu 2 hodin a pak nalije do ledové vody (15 ml) a extrahuje ethyletherem (2x10 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (3x10 ml). Organická vrstva se suší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá 3-propylidencyklobutyl-methansulfonát (0,492 g, 0,00221 mol) ve formě žlutého oleje.
!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 5,25-5,29 (m, 1H), 4,98-5,04 (m, 1H), 3,17 (s, 3H), 2,98-3,16 (m, 2H), 2,78-2,96 (m, 2H), 1,86-1,91 (m, 2H), 0,91 (t, 3H).
b) 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -(3 -propylidencyklobutyl)-1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amin
Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,743 g, 0,00245 mol) v A,//-dimethylformamidu (20 ml) se nechá reagovat s 3-propylidencyklobutylmethansulfonátem (0,699 g, 0,00367 mol) a uhličitanem česným (0,866 g, 0,00367 mol) při teplotě 70°C po dobu 3 dnů. Reakční směs se nalije do vody (30 ml) a extrahuje ethylacetátem (3 x 15 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (2 x 20 ml) a solankou (20 ml). Organická vrstva se suší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi β* • Φ 9 » · * . * * · · · • .£*··· » · · · · · ·<··»«*« · · · · <Ě »
e ¢- 9 »« ve « • ♦ « · • » « * . ·
196 dichlormethanu a methanoiu (98:2). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá 3-(4fenoxyfenyl)-1 -(3 -propylidencyklobutyl)-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,655 g, 0,00165 mol) ve formě hnědé pevné látky.
‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,25 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,10- 7,19 (m, 5H), 5,35-5,40 (m, 1H), 5,38-5,33 (m, 1H), 3,09-3,38 (m, 4 H) 1,90-1,97 (m, 2H), 0,96 (t, 3H);
MS: MH+398;
TLC (dichlormethan/methanol 95:5) Rf0,52.
c) 3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl] -1 -cyklobutanon
Roztok 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -(3 -propylidencyklobutyl)-1 //-pyrazolo-[3,4-d\ pyrimidin-4-aminu (0,156 g, 0,00039 mol) v dichlormethanu (25 ml) se ochladí na teplotu 78°C a dokud roztok nezmodrá nechá se jím probublávat ozon. Reakční směs se míchá 5 minut a dokud modrá barva nezmizí nechá se jím probublávat dusík. Přidá se dimethylsulfid (0,12 ml, 0,097 g, 0,00157 mol) a směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá 3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-cyklobutanon (0,144 g, 0,00038 mol) ve formě hnědé pevné látky.
‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,29 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11-7,22 (m, 5H), 5,61-5,66 (m, 1H), 3,65-3,74 (m, 4H).
MS: MH+372;
TLC (dichlormethan/methanol = 90: 10) Rf0,62.
CN-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin-l-yl]-l-cyklobutanol
Roztok 3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl] -1-cyklobutanonu (0,208 g, 0,00056 mol) v tetrahydrofuranu (10 ml) a absolutním ethanolu (5 ml) se nechá reagovat s borohydridem sodným (0,021 g, 0,00056 mol) při pokojové teplotě po dobu 4 hodin. Přidá se voda (5 ml) a směs se extrahuje ethylacetátem (3x15 ml). Spojené organické podíly se suší síranem sodným a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu a methanoiu (98:2). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá cz'5-3-[4-amino-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-cyklobutanol (0,090 g, 0,00024 mol) ve formě bílé pevné látky.
et c β o c c β!
rf «
Γ1 Φ e e « c « * ♦ <β<
t,·© ©· » Ρ t «< í. f! «- C © s< e t- c e « © c « ©
Φ f C>
• e ť £ © c- ©· © < c e o r ©
197 *H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,68 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11-7,22 (m, 5H), 5,31 (d, ÍH), 4,82-4,89 (m, ÍH), 4,04-4,10 (m, ÍH), 2,70-2,73 (m, 2H), 2,50-2,60 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,50 minut;
MS: MH+ 374.
Příklad 118 trans-3 - [4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4 -í/Jpyrimidin-1 -yl]-1 -cyklobutanol a) trans-3 - [4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4 -d]pyrimidin-1 -yl]cyklobutyl-4nitrobenzoát
Roztok cis-3 - [4-amino-3 -(4-fenoxy feny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-ď|py rimidin-1 -y 1]-1 cyklobutanolu (0,113 g, 0,000302 mol), 4-nitrobenzoové kyseliny (0,101 g, 0,000605 mol) a trifenylfosfínu (0,159 g, 0,000605 mol) v tetrahydrofuranu (5 ml) se ochladí na teplotu 0°C. Po kapkách se přidá diethylazodikarboxylát (0,096 ml, 0,159 g, 0,000605 mol) a teplota se udržuje pod 10°C. Směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu v průběhu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi heptanu a ethylacetátu (3:1). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá /ra«,s-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-lyl]cyklobutyl-4-nitrobenzoát (0,081 g, 0,000164 mmol) ve formě hnědé pevné látky.
‘H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,39 (d, 2H), 8,29 (d, 2H), 8,26 (s, ÍH), 7,72 (d, 2H), 7,44 (t, 2H) 7,12-7,22 (m, 5H), 5,60-5,69 (m, ÍH), 3,03-3,12 (m, 2H), 2,85-2,94 (m, 2H).
trans-3 - [4-amino-3 -(4-fenoxy feny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-íflpyrimidin-1 -y 1]-1 -cyklobutanol
Roztok trans-3 - [4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]py rimidin-1 yl]cyklobutyl-4-nitrobenzoátu (0,081 g, 0,000164 mol) v methanolu (5 ml) se nechá reagovat s hydroxidem draselným (0,091 g, 0,00164 mol) pod refluxem po dobu jedné hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se rozdělí mezi vodu (10 ml) a ethylacetát (5 ml). Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2x5 ml). Spojené organické podíly se promyjí s IN vodným roztokem hydroxidu sodného (5 ml) a solankou (5 ml). Organická vrstva se suší síranem sodným a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se suspenduje ve vodě a lyofilizuje, čímž se získá /ra«.s'-3-[4-amino-3-(4fe» e e · fe © e <
«' f, e e « © fe 0 fe fe t, fe fee fe ♦ « e fe e « e e © © « * e « e e e fe ř>* e ® fe « © f fet r fe β · ©
C 4 fe fe fe fe « « ©
198 fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl]-l-cyklobutanol (0,055 g, 0,000147 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,23 (s, IH), 7,68 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11-7,22 (m, 5H), 5,43-5,52 (m, IH), 4,53-4,65 (m, IH), 2,75-2,80 (m, 2H), 2,39-2,44 (m, 2H). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,77 minut.
MS:MH+374.
Příklad 119 dimaleát l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]cyklobutyl}4-methylhexahydropyrazindia
Směs 3 - [4-amino-3 -(4-fenoxy feny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-g/jpyrimidin-1 -yl] -1 -cyklobutanon (0,300 g, 0,00081 mol), A-methylpiperazinu 0,243 g, 0,00242 mol) a kyseliny octové (0,146 g, 0,00242 mol) v 1,2-dichlorethanu (20 ml) se míchá po dobu 20 minut při teplotě 40°C a ve 3 podílech se v průběhu jedné hodiny přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,223 g, 0,00105 mol). Směs se míchá po dobu 18 hodin při teplotě 40°C. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi vodný nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (30 ml) a chloroform (15 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva se dále extrahuje chloroformem (3x) (15 ml každý). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu a methanolu (97:3) jako mobilní fázi. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek (0,120 g, 0,000263 mol) se rozpustí v absolutním ethanolu (10 ml). Přidá se roztok maleinové kyseliny (0,122 g, 0,001053 mol) v absolutním ethanolu (5 ml) a směs se míchá pod refluxem po dobu 15 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se filtruje, promyje absolutním ethanolem (3x5 ml). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá dimaleát l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-lyl]cyklobutyl}-4-methylhexahydropyrazindia (0,181 g, 0,000397 mmol) ve formě bílé pevné látky.
!H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,25 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,10-7,20 (m, 5H), 6,14 (s, 4H), 5,05-5,16 (m, IH), 2,77 (s, IH), 2,48-3,00 (m, 5H).
ce «ο V' Ο R Γ» f V ΓΓ.· <> tt <- C 0 f < : ( ; fc € fc « © ¢- e © fc « t 9 {'· fc 0 *>1> r;
e c t fí fc fc
O fc e
c fc c fc fc t- e
199
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,35 minut.
MS:MH+456.
Příklad 120 trans 1 - { 3 - [(benzy loxy)methy l]cyklobutyl} -3 -(4-fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4d]pyrimidin-4-amin
a) czs-3-[(benzyloxy)methyl]cyklobutylmethansulfonát.
Roztok ezó'-3-((benzyloxy)methyl)-l-cyklobutanolu (2,50 g, 0,0130 mol) v pyridinu (50 ml) se ochladí na teplotu 0°C. Po kapkách se přidá methansulfonylchlorid (1,21 ml, 1,79 g, 0,0126 mol) a teplota se udržuje pod 2°C. Směs se míchá po dobu 4 hodin a pak nalije do ledové vody (100 ml) a extrahuje ethyletherem (2 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (3 x 50 ml) a solankou (50 ml). Organická vrstva se suší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá cz's-3[(benzyloxy)methyl]cyklobutyl-methansulfonát (2,73 g, 0,0101 mol) ve formě žlutého oleje. *H NMR (CDC13 400 MHz) δ 7,29-7,38 (m, 5H), 4,88-4,94 (m, 1H), 4,52 (s, 2H), 3,45 (d, 2H), 2,99 (s, 3H), 2,50-2,56 (m, 2H), 2,12-2,19 (m, 3H).
b) trans 1 - {3 - [(benzy loxy)methyl] cyklobutyl} -3 -(4-fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4í/Jpyrimidin-4-amin
Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,452 g, 0,00149 mol) v ΛζΑ-dimethylformamidu (10 ml) se nechá reagovat s cis-3- [(benzyloxy )methyl]cyklobutyl-methansulfonátem (0,483 g, 0,00179 mol) a uhličitanem česným (0,582 g, 0,00179 mol) při teplotě 70°C po dobu 2 dnů. Reakční směs se nalije do vody (30 ml) a extrahuje ethylacetátem (3x15 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (2 x 20 ml) a solankou (20 ml). Organická vrstva se suší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu a methanolu (98:2). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá Zrazz5-l-{3-[(benzyloxy)methyl]cyklobutyl]-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,325 g, 0,000681 mol) ve formě hnědé pevné látky.
β ee * * « © « © ♦ <8 O « fi • « « 4*4©
4© * * « ♦ » * a ««« · * 9 e » · *
9 * *
Í9 © a« » « > 9 t 9
9 9 « a « * «> e ar feí
200 ‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,69 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,37- 7, 39 (m, 4H), 7,29-7,31 (m, ÍH), 7,11-7,21 (m, 5H), 5,42-5,47 (m, ÍH), 4,57 (s, ÍH), 3,63 (d, 2H), 2,76-2,81 (m, 2H), 2,60-2,70 (m, ÍH), 2,28-2,34 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 21,92 minut.
MS:MH+478.
trans-3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 yl]cyklobutylmethanol
Roztok trans-1 - {3 - [(benzyloxy)methyl]cyklobuty 1} -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (0,244 g, 0,00051 mol) v dichlormethanu (10 ml) se ochladí na teplotu -78°C a po kapkách se přidá 1,0 M roztok chloridu boritého v dichlormethanu (1,53 ml, 0,00153 mol), přičemž teplota se udržuje pod -70°C. Reakční směs se míchá 7 hodin při teplotě -78°C, poté se přidá 8 M roztok amoniaku v methanolu (1,5 ml). Rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu a methanolu (93: 7). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá /ra«5'-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidinl-yl]cyklobutylmethanol (0,192 g, 0,00049 mol) ve formě bílé pevné látky.
‘H NMR (DMSO-d6 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,69 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11-7,22 -206 (m, 5H), 5,36-5,46 (m, ÍH), 4,70-4,80 (br, 1 H), 3,58 (d, 2H) 2,70-2,75 (m, 2H), 2,432,50 (m, ÍH), 2,26-2,32 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 15,31 minut.
MS:MH+388.
Příklady 121-137
Obecný způsob syntézy arylalkylových analog cz\-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu.
Cis-3 -(4-amino-3 -fluorfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin (50 mg, 0,118 mmol) se suspenduje v 1,2-dichlorethanu (4 ml). Do této suspenze se přidá příslušný aldehyd (0,177 mmol), kyselina octová (35 mg, 0,59 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (50 mg, 0,236 mmol). Reakční směs se pak
Γ.’ C Γ «
© ίο C «, G
9* » © « e » * f# ι ϊ
9 & 9 9 ♦ « • Ρ ♦ « · •ί <· β ©* « * 9 © *
I» © e «ί e ο © e β
201 zahřívá při teplotě 100°C po dobu 1,5 hodiny. Pokud všechny reakce podle TLC a/nebo HPLC neproběhnou dokonce, přidá se do každé reakce (na dvakrát) v průběhu 3-5 dnů další triacetoxyborohydrid sodný (100 mg, 0,472 mmol) a v třepání se pokračuje při pokojové teplotě. Každá reakce se zředí dichlormethanem (4 ml) a zháší nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (4 ml). Pokud se vytvoří emulze, přidá se solanka (1 ml). Organická vrstva se separuje, pak koncentruje za sníženého tlaku. Surové vzorky se čistí na RP-HPLC buď MS aktivací (Micromass/Gilson, Hypersil BDS Cl8, 5 pm, 100 x 21,2 mm sloupec; 0-100% acetonitril a 0,05M pufr octanu amonného na pH 4,5 v průběhu 12,5 minut při 25 ml/min) nebo UV aktivací (Waters PrepLC 4000, rychlost průtoku: 10 ml/minut B= 254 nm, gradient: 10% až 30% gradient acetonitril/O, 1M vodného roztoku octanu amonného v průběhu 40 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec). Požadované finální sloučeniny se získají v 80%-100% čistotě analytickou RPHPLC (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/O, 1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec).
Obecný způsob přípravy maleátových solí
Příklad 137 maleátová sůl trismaleátové soli cA-3-{4-[(4-brombenzyl)amino]-3-fluorfenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexylj-1 //-pyrazolo [3,4-</Jpyrimidin-4-aminu
Volná báze cA-3-{4-[(4-brombenzyl)amino]-3-fluorfenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (36 mg, 0,061 mmol) se rozpustí v ethanolu (2 ml), pak se přidá kyselina maleinová (14 mg, 0,121 mmol). Směs se zahřívá za vznikutéměř čirého roztoku. Vzniklý precipitát se ochladí a pevná látka se spojí filtrací, promyje minimálním množstvím ethanolu, pak suší za sníženého tlaku, čímž se získá 16 mg trismaleátové soli cA-3-{4-[(4-brombenzyl)amino]3-fluorfenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4aminu.
© to * © <1 fe' «to
O © e ® © f; £> e * {’ ¥ »> fe (' ©S © © r © e <5 © © © © © c r 9 * · © & Ct?
e e © r
6· Í-.
© © e r.
C V e ťeCc <? I» ©fc
202
Př. Struktura m/z (MH+) HPLC Řt (min)
121 ''S^o3x 515,2 13,74
122 < 529,3 14,04
123 Φ 9 516,3 10,82
124 9 543,3 14,91
125 $ 557,4 15,53
126 í 545,3 13,27
127 ť 591,4 15,89
ec r e O r f. Vft o e ς ro O e <· e o ti o i>
fí Π í i < e- ( l <' <·
203
Př. Struktura m/z(MH+) HPLC Rt (min)
128 X 9 561,0 11,58
129 í 569,3 11,27
130 T 583,3 14,83
131 595,4 15,48
132 «χ 9 0 1 545,3 12,91
& ου ο» e ( © < » c © o řee eccc c < · e řc (' o o <: o o t < o o c <-·© ec c
o O « v ě
d ©
Γ c- © c
204
133 516,3 10,10
134 516,2 10,41
135 583,3 14,78
136 573,3 13,10
137 594,8 14,61
Příklady 138-153
Obecný způsob syntézy sulfonamidových variant cis- a /ra«5-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 H-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-amini
Cis-3 -(4-amino-3-fluorfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin (100 mg, 0,236 mmol) se rozpustí v pyridinu (3 ml), pak se přidá příslušný sulfonylchlorid (0,472 mmol) buď jako roztok v pyridinu (0,25 ml) nebo jako pevná látka. Reakční směs se zahřívá při teplotě 40°C pod atmosférou dusíku po dobu přibližně 1-7 dnů. Pokud je třeba, přidá se další sulfonylchlorid (0,5 ekviv.). Každá reakce se zakoncentruje na poloviční objem, zředí V V-dimethylformamidem (1,5 ml). Vzorky se čistí na RP-HPLC s aktivací buď MS (Micromass/Gilson, Hypersil BDS C 18,5 pm, 100 x 21,2 mm sloupec; 0-100% acetonitril a 0,05M pufru octanu amonnéhona pH = 4,5 v průběhu 12,5 minut při 25 ml/min) nebo UV (Waters PrepLC 4000, rychlost průtoku: 10 ml/minut, λ = 254 nm, gradient: 10% až 30% acetonitril/0,1M vodný roztok octanu <5(5 ItC (?e f o © e «soče « r, ee re e r t r r e c e e o c r r e a o c e o e r e e e r e
205 amonného v průběhu 40 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec). Požadované finální sloučeniny se získají v 90%-100% čistotě analytickou RP-HPLC: (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec). V jednotlivých případech se připraví příslušné maleátové soli.
Př. Struktura m/z (MH+) HPLC Řt Rt (min)
140 f 645,1 12,22
141 < 623,3 11,30
142 f 610,2 11,85
143 633,2 12,50
144 •f 624,3 11,86
145 583,3 11,29
<S Γ c ( © a r o c- fc e e, co ccc © e c o c n ( C C:
206
147 623,2 11,14
148 9 633,2 12,38
149 6 9 643,2 12,04
150 ní·1· 624,3 11,67
151 9 619,2 12,22
152 9 9 633,2 13,09
153 {£ 9 649,3 12,81
Příklad 154 cis-N- (4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-z/]pyrimidin-3 yl}-2-fluorfenyl)-jV’-(2,4-difluorfenyl)močovina
Czs-3-(4-am.ino-3-fluorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-4-amin (100 mg, 0,236 mmol) se rozpustí v kyselině octové (6 ml), pak se pomalu při pokojové teplotě přidává 2,4-difluorfenylizokyanát (44 mg, 0,283 mmol). Po 2 dnech se reakční směs koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá surový • · ff e
207 produkt ve formě světle žlutého oleje (185 mg). Surová látka se čistí na RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, rychlost průtoku: 10 ml/minut, λ = 254 nm, gradient: 10% až 30% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 40 minut; DeltaPak 08, 300A, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec). Požadovaný produkt se spojí ve formě bílé pevné látky (52 mg, 0,090 mmol). HPLC-RT: 13,19 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak 08, 300A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) = 580,3.
Příklad 155 monoacetát trans-N-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 77-pyrazolo [3,4J]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-A-(3-methoxyfenyl)močoviny
7ra«5-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/pyrazolo[3,4-(7]pyrimidin-4-amin (77 mg, 0,182 mmol) se suspenduje v pyridinu (1 ml). Roztok 3-methoxyfenylizokyanátu (30 mg, 0,200 mmol) v pyridinu (1 ml) se přidá do reakční směsi a v míchání se pokračuje po dobu 19 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt ve formě světle žlutého oleje (149 mg). Surová látka se čistí na RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, rychlost průtoku: 10 ml/minut λ=254 nm, gradient: 10% až 30% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 40 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 15 xlOO mm sloupec), čímž se získá /ra«5-A-(4{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl}-2fluorfenyl)-jV-(3-methoxyfenyl)močovina ve formě bílé pevné látky (76 mg, 0,133 mmol). HPLC-RT: 12,33 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) = 574,2.
Příklad 156 monoacetát trans-N-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4t/]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-A'-(3-methylfenyl)niočoviny se připraví stejným způsobem, který je uveden výše.
e β e © © © « c © © ® « v © í> © e> c v β « c e e e o c © © © ® c ť * * p *· °
208
HPLC-RT: 13,02 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ - 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) = 558,3.
Příklad 157 cis-N-(4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3yl}-2-fluorfenyl)-A'-(3-methylfenyl)močovina se připraví stejným způsobem, který je uveden výše pro bwM-izomer.
HPLC-RT: 13,03 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) = 558,5.
Příklad 158 cis-N- /4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1] -177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-3 y 1} -2-fluorfenyl)-A-ethy 1-A ’-(3 -methylfenyl)močovina
a) cis-3 - [4-(ethylamino)-3 -fluorfenyl] -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177pyrazolo [3,4-í7|pyrimidin-4-amm
Cis-3 -(4-amino-3 -fluorfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-amin (75 mg, 0,177 mmol) se suspenduje v
1,2-dichlorethanu (6 ml). Přidá se roztok acetaldehydu (12 mg, 0,266 mmol) v 1,2-dichlorethanu (0,300 ml) a kyseliny octové (42 mg, 0,708 mmol) a směs se míchá po dobu 1 hodiny. Přidá se triacetoxyborohydrid sodný (75 mg, 0,354 mmol). Po 16 hodinách se přidá triacetoxyborohydrid sodný (37 mg, 0,175 mmol) a v reakci se pokračuje další 3 hodiny. Reakční směs se pak koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (75 ml), promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a solankou (100 ml). Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku. Surový produkt (80 mg) se spojí ve formě bezbarvého oleje, m/z (MH+) = 453,3.
b) cis-N-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin3-yl}-2-fluorfenyl)-A-ethyl-A'-(3-methylfenyl)močovina
C κ>
Γ « • ε f · • t· <· * <- <· ©
Ρ © © ♦ © © © e
Κ » β · 4 α ο · ® e © « «?· © © e © <?
β · c e • © « © » e e e © e © © e β i; ce « © © ©
209
Czs-3-[4-(ethylamino)-3-fluorfenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazoIo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin (80 mg, 0,177 mmol) se rozpustí v pyridinu (3 ml), ochladí na teplotu 0°C, do reakce se přidá zw-tolylizokyanát (26 mg, 0,194 mmol) a v míchání se pokračuje při teplotě 0°C po dobu 2,5 hodiny. Reakční směs se ohřívá na pokojovou teplotu a míchá přes noc. Do reakční směsi se přidá další zw-tolylizokyanát (13 mg, 0,101 mmol) a v míchání se pokračuje po dobu 1 týdne. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt ve formě světle žlutého oleje (110 mg). Čištění se provede RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, rychlost průtoku: 10 ml/minut λ = 254 nm, gradient: 10% až 30% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 40 minut; DeltaPak 08, 300A, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec). Cis-N-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-čdpyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-/V-ethylA'-(3-methylfenyl)(3-methylfenyl)močovina se spojí ve formě bílé pevné látky (10 mg), HPLC-RT: 13,18 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min), λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak 08, 300A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) = 586,5.
Příklad 159
Cz5-A-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 yl} -2-fluorfenyl)-/V-benzyl-V '-(2,4-difluorfenyl)močovina.
Cis-3 - [4-(Benzy lamino)-3 -fluorfenyl] -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1] -1Hpyrazolo[3,4~č/|pyrimidin-4-amin (28 mg, 0,054 mmol) se rozpustí v kyselině octové (3 ml), pak se v průběhu 4 dnů přidá 2,4-difluorfenylizokyanát (28 mg, 0,183 mmol). Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá světle žlutý olej (65 mg). Čištění se provede RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, rychlost průtoku: 10 ml/minut, λ = 254 nm, gradient: 10% až 30% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 40 minut; DeltaPak 08, 300A, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec), čímž se získá cis-N-(4-{4amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2fluorfenyl)-/V-benzyl-Ar-(2,4-difluorfenyl)močovina ve formě bílé pevné látky (13 mg, 0,019 mmol), HPLC-RT: 14,66 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak 08, 300A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) = 670,1.
® © c e ft <:
« © © e © o © e c e ¢210 «e e « • * « © e e ··» © © e© ς · β « © β · e « e * • &
• ©
Příklad 160 cis-N-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 H-pyrazolo [3,4-ď]pyrímidin-3 yl} fenyl)-vV-(3-methylfenyl)močovina
Cis-3 -(4-aminofenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 H-pyrazolo [3,4ď]pyrimidin-4-amin (50 mg, 0,123 mmol) se rozpustí v pyridinu (3,5 ml), pak ochladí na teplotu 0°C. Přidá se m-tolylizokyanát (18 mg, 0,135 mmol) a reakce se v průběhu 16 hodin nechát ohřát na pokojovou teplotu. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá světle žlutý olej (200 mg). Čištění se provede RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, rychlost průtoku: 10 ml/minut, λ = 254 nm, gradient: 10% až 30% acetonitril/0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 40 minut; DeltaPak Cl 8, 300A, 15 m, 40 x 100 mm sloupec). Požadovaný produkt se spojí ve formě bílé pevné látky (52 mg), HPLC-RT: 12,58 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) = 540,1.
Příklady 161-164 amidová analoga N- {4- [4-amino-1 -(4-piperidy 1)-1 H-pyrazolo [3,4-úQpyrimidin-3 -yl] -2fluorfenyl} -N '-(3 -methylfenyl)močoviny
a) Zerc-buty 1-4- [4-amino-3 -(4-amino-3 -fluorfeny 1)-1 H-pyrazolo [3,4-H|pyrimidin-1 -yl] -1 piperidinkarboxylát.
-(4-amino-3-fluorfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 H-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (2,12 g, 6,48 mmol) se rozpustí ve směs dioxanu a vody (1:1) (20 ml). Do reakční směsi se přidá uhličitan sodný (1,03 g, 9,72 mmol) a di-terc-butyldikarbonát (1,55 g, 7,12 mmol). Po 3 hodinách se reakce koncentruje za sníženého tlaku, zbytek se rozdělí mezi dichlormethan (100 ml) a vodu (100 ml), pak extrahuje dichlormethanem (200 ml). Organická vrstvy se spojí a promyjí solankou (100 ml). Organické vrstva se pak suší síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá nažloutlá až hnědá pěna (2,85 g, 6,67 mmol), HPLC-RT: 14,41 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec); m/z (MH+) = 428,1.
• ·
211
a) terc-buty l-4-(4-amino-3 - {3 -fluor-4- [(3 -toluidinokarbonyl)amino]feny 1 }-lHpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylát /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-lyl]-l-piperidinkarboxylát (600 mg, 1,41 mmol) se rozpustí v pyridinu (25 ml) a ochladí na teplotu 0°C. Přidá se m-tolylizokyanát (206 mg, 1,54 mmol) a reakce se míchá při teplotě 0°C po dobu 2,5 hodiny. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt ve formě nahnědlé až žluté pěny (841 mg). Čištěním chromatografii na sloupci silikagelu gradientem 25% až 50% ethylacetátu v heptanu, poté 5% methanolu v dichlormethanu jako mobilní fázi se získá ferc-butyl-4-(4-amino-3-{3-fluor-4-[(3toluidinokarbonyl)amino]fenyl} -1 //-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylát ve formě světle žluté pevné látky (243 mg, 0,434 mmol), HPLC-RT: 17,82 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/O, 1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec); m/z (MH+) = 561,4.
a) dihydrochlorid N- {4- [4-amino-1 -(4-piperidy 1)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y 1] 2-fluorfenyl}-yV'-(3-methylfenyl)močoviny.
7erc-butyl-4-(4-amino-3 - {3 -fluor-4- [(3 -toluidinokarbonyl)amino] fenyl} -1Hpyrazolo[3,4-</|pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylát (117 mg, 0,209 mmol) se suspenduje v acetonu (7 ml) a ochladí na teplotu 0°C. Do reakční směsi se pomalu přidá kyselina chlorovodíková (6N, 1,6 ml). Reakční směs se ohřívá na pokojovou teplotu, pak zahřívá při teplotě 50°C po dobu 4 hodin. Koncentrací reakční směsi za sníženého tlaku, poté triturací dichlormethanem (25 ml) se získá dihydrochlorid tV-{4-[4-amino-1-(4-piperidy 1)1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-y 1]-2-fluorfenyl} -N'-(3 -methylfenyl)močoviny ve formě bělavé pevné látky (111 mg, 0,241 mmol), HPLC-RT: 11,98 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/O, 1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec); m/z (MH+) = 461,3.
a) Obecný způsob syntézy amidových analog /V-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-ťluorfenyl} -N '-(3 -methylfenyl)močoviny.
i) Obecný způsob (A): pro nechráněné aminokyseliny.
t> c· © <
Ο <'
Γ 0 Τ.·
C (' ί C © Ο © Ο Ο © η r © C e ( c ο
212
Příklad 161
TV- [4-(4-amino-1 - {1 - [2-(dimethylamino)acetyl]-4-piperidy 1} -1 /7-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3 -yl)-2-fluorfenyl] -N-(3 -methy lfenyl)močovina
Dihydrochlorid N- {4- [4-amino-l-(4-piperidyl)-1 /7-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y 1] 2-fluorfenyl}-/V'-(3-methylfenyl)močoviny (50 mg, 0,109 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (6 ml) a TV-ethyl-TV-izopropy laminu (0,095 ml), ΛζΆ-dimethylglycin (14 mg, 0,136 mmol), l-hydroxy-7-azabenzotriazol (15 mg, 0,109 mmol) a hydrochlorid l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (26 mg, 0,136 mmol) se přidají do reakční směsi. Po 16 hodinách se reakční směs zředí díchlormethanem (100 ml), promyje vodou (50 ml) a solankou (50 ml). Organická vrstva se suší síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku, zbytek se trituruje diethyletherem (25 ml), čímž se získá světle žlutá pevná látka (52 mg, 0,097 mmol). Čištěním RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, rychlost průtoku: 10 ml/minut, λ = 254 nm, gradient: 10% až 30% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 40 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 15 um, 40 x 100 mm sloupec) se získá K-[4-(4-amino-l-{l-[2-(dimethylamino)acetyl]-4-piperidyl}-l//-pyrazo lo[3,4t7]pyrimidin3-yl)-2-fluorfenyl]-A'-(3-methylfenyl)močovina ve formě bílé pevné látky (27 mg, 0,050 mmol), HPLC-RT: 12,48 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ - 254 nm, gradient; 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak 08, 300A, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec); m/z (MH+) = 546,0.
Příklad 162 monoacetát N- [4-(4-amino-1 - {1 -[3 -(diethylamino)propanoyl] -4-piperidyl} -1 /7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-fluorfenyl]-TV-(3-methylfenyl)močoviny se připraví podle obecného způsobu A.
HPLC-RT: 13,16 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak 08, 300A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) = 588,2.
d. ii) Obecný způsob (B); pro aminokyseliny chráněné Zerc-butoxykarbonylem.
» • · © β »· © © e ©'· © · · β e β © · © tí e p © e e e «
213
Příklad 163
A-[4-(4-amino-1 - {1 -[2-(methylamino)acetyl]-4-piperidyl} - l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidm3 -yl)-2-fluorfenyl] -N '-(3 -methylfenyl)močovina.
Dihydrochlorid V-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]2-fluorfenyl}-A= -(3-methylfenyl)močoviny (63 mg, 0,118 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (7 ml) a /V-ethyl-zV-izopropylaminu (0,113 ml), 2-[(tercbutoxykarbonyl)(methyl)amino]octová kyselina (28 mg, 0,147 mmol), l-hydroxy-7azabenzotriazol (16 mg, 0,118 mmol) a hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyl)-3ethylkarbodiimidu (28 mg, 0,147 mmol) se přidají do reakční směsi. Po 16 hodinách se reakční směs zředí dichlormethanem (75 ml), pak promyje vodou (75 ml). Organická vrstva se suší síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku, surový produkt se izoluje ve formě světle žluté pevné látky (75 mg, 0,119 mmol). Surový /m--butyl-ŤV-{2-[4-(4amino-3 - {3 -fluor-4- [(3 -toluidinokarbonyl)amino]feny 1} -1 //-pyrazolo [3,4-í/|pyrimidin-1 yl)piperidinoj-2oxoethyl}-V-methylkarbamát (75 mg, 0,119 mmol) se rozpustí v acetonu (5 ml), pak se pomalu přidává vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (6N, 1 ml). Reakční směs se zahřívá při teplotě 45°C po dobu 2,5 hodiny, pak koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje dichlormethanem (25 ml), čímž se získá světle žlutá pevná látka. Čištěním RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, rychlost průtoku: 10 ml/minut, λ - 254 nm, gradient: 10% až 30% acetonitril/0,IM vodný roztok octanu amonného v průběhu 40 minut; DeltaPak 08, 300A, 15m, 40 x 100 mm sloupec) se získá /V-[4-(4-amino-l-{l-[2(methylamino)acetyl]-4-piperidyl}-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-fluorfenyl]-Ar'-(3methylfenyl)močovina ve formě bílé pevné látky (40 mg, 0,075 mmol).
HPLC-RT: 12,22 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/0,IM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak 08, 300A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) = 532,1.
Příklad 164 monoacetát N- {4- [4-amino-1 -(1 - {3 -[(2-hydroxyethyl)amino]propanoyl} -4-piperidyl)-1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-fluorfenyl}-/V'-(3-methylfenyl)močoviny a) 3-[(/erc-butoxykarbonyl)(2-hydroxyethyl)amino]propanová kyselina.
<· e e ( c <
c o e o r c © <
f. € C <' e i·· c ( c- e
214
Komerčně dostupná 3-[(2-hydroxyethyl)amino]propanová kyselina (76 mg, 0,571 mmol) se rozpustí ve směsi dioxanu a vody (1,5 ml/1,5 ml), pak se přidá uhličitan sodný (91 mg, 0,886 mmol) a di-řerc-butyldikarbonát (137 mg, 0,628 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 dnů, filtruje a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá 3-[(/erc-butoxykarbonyl)(2-hydroxyethyl)amino]propanová kyselina ve formě bezbarvého oleje (135 mg, 0,579 mmol).
’H NMR (d6-DMSO): δ 1,40 (s, 9H); 2,36 (br s, 2H); 3,27 (br s, 3H); 3,46 (br s, 2H); 3,64 (brs, 2H); 5,71 (brs, ÍH).
b) monoacetát N- {4- [4-amino-1 -(1 - {3 - [(2-hydroxyethyl)amino]propanoyl} -4piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl]-2-fluorfenyl }-N'-(3 -methy lfenyl)močo viny se připraví způsobem uvedeným v bodu v d. ii) obecný způsob B.
HPLC-RT: 12,19 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) - 576,3.
Příklad 165 cis-3 - {4- [(1 -methyl-1 //-benzo [d\ imidazol-2-yl)amino]feny 1} -1 - [4-(4 methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidin-4-amin
a) A2-(4-bromfenyl)-1 -methyl-1 //-benzo[</]imidazol-2-amin
Směs 2-chlor-l-methyl-benzimidazolu (0,639 g, 3,84 mmol) a 4-bromanilinu (0,710 g, 4,12 mmol) se zahřívá při teplotě 170°C po dobu 21 hodin. Výsledná hnědá pevná látka se ochladí na pokojovou teplotu, promyje 3 podíly (5 ml) heptanu a trituruje toluenem, čímž se získá V2-(4-bromfenyl)-l -methyl- l//-benzo[J]imidazol-2-amin (1,120 g, 90%) ve formě hnědého prášku, RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) tr= 10,85 minut 96%; m/z 302 (MH+).
b) V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-1 -methyl- 1Hbenzo[d]Ímidazol-2-amin
Do roztoku A2-(4-bromfenyl)-l -methyl-1//-benzo[</]imidazol-2-aminu (1,12 g, 3,71 mmol) v dimethylformamidu (15 ml) pod atmosférou dusíku se přidá • · • ·
215 bis(pinakolato)diboron (1,129 g, 4,448 mmol), octan draselný (1,204 g, 12,27 mmol) a [l,r-bis(difenylfosfmo)ferrocen]dichlorpalladnatý komplex s dichlormethanem (1:1) (0,334 g, 0,409 mmol). Fialový roztok se míchá při teplotě 80°C po dobu 18 hodin, pak se ochladí na pokojovou teplotu. Výsledná tmavě hnědá směs se koncentruje za vakua, čímž se získá tmavě hnědá pevná látka. Tato látka se trituruje dichlormethanem, filtruje a filtrát se koncentruje, čímž se získá tmavě hnědý olej. Čištěním chromatografií na sloupci silikagelu (mobilní fází 30% ethylacetátu v heptanech) se získá A2-[4-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-methyl-l//-benzo[</]imidazol-2-amin (0,515 g, 40%) ve formě bílého prášku.
’H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 9,10 (s, 1 H), 7,88 (d, 2 H), 7,63 (d, 2 H), 7,40 (m, 1 H), 7,30 (m, 1 H), 7,08 (m, 2 H), 3,72 (s, 3 H), 1,29 (s, 12 H);
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) tR =11, 70 minut, 90%; zw/z 350 (MH+).
c) czs-3-{4-[(l-methyl-l//-benzo[č/|imidazol-2-yl)amino]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidin-4-amin
Do roztoku cz's-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,227 mmol) v ethylenglykoldimethyletheru (3 ml) a vodě (1,5 ml) pod atmosférou dusíku se přidá A2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-l -methyl-1//-benzo [z/]imidazol-2-amin (0,099 g, 0,28 mmol), tetrakis(trifenylfosfm)palladium (0,013 mg, 0,011 mmol) a uhličitan sodný (0,060 mg, 0,568 mmol). Roztok se míchá při teplotě 83°C po dobu 15 hodin. Výsledná žlutá směs se koncentruje za vakua, čímž se získá žlutý olej. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min na 8μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm sloupec, tr=7,3-l 1,2 minut) se získá cz'5-3-{4-[(l-methyll//-benzo[z/|irnidazoI-2-yI)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cykIohexyl]-l/7pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin ve formě bělavé pevné látky (0,061 g, 50 %).
*H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 9,17 (s, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 8,08 (d, 2 H), 7,62 (d, 2 H), 7,42 (m, 1 H), 7,33 (m, 1 H), 7,08 (m, 1 H), 4,80 (m, 1 H), 3,76 (s, 3 H), 2,50-2,07 (m, 12 H), 1,80-1,60 (m, 8H);
<1 e
216
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v O,1N vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) tr=5,92 minut, 99%; míz 537 (MH+).
Příklady 166-170
Amidy odvozené od cA-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-7//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu
Reprezentativní způsob přípravy:
Do vhodné karboxylové kyseliny (0,46 mmol) v dichlormethanu (1,5 ml) se přidá oxalylchlorid (400 ml,0,2 mmol) a DMF (1 kapka). Baňky se uzavřou šeptem a do každé baňky se k odstranění tlaku vsune jehla. Pak se baňky nechají třepat na J-Kem třepačce. Oddělí se 50% roztok a přebytek oxalylchloridu a dichlormethanu se odstraní na Supelco manifold s 12 porty za vakua a s dusíkem. Surový chlorid kyseliny (0,23 mmol) se přidá do cw-3-(4-amino-3 -methoxy fenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- l//-pyra-zolo[3,4d]pyrimidin-4-aminu (40 mg, 0,09 mmol) v suchém pyridinu (800 pl) a směs se míchá při pokojové teplotě. Výsledné roztoky se přímo čistí preparativní HPLC (Hypersil BSD Cl8, 5 pm, 100x21 mm, 0%-100% acetonitril/0,05M octan amonný v průběhu 10 minut 25,0 ml/min). Výsledné produkty se dále čistí rozdělením mezi dichlormethan (4 ml) a l,0N hydroxid sodný (2 ml) a pasírováním přes vysoce výkonný extrakční diskový cartridge Empore™ (C18-SD oktadecyl), čímž se získají odpovídající produkty. Sloučeniny jsou uvedeny na druhé další straně s odpovídajícími hodnotami LC-MS (Micromass-Column: Pecosphere, 08, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut).
9
217
Sloučenina R Př. Qty. (mg) MH+ R,(min)
ZV2-(4-{4-amino-1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1Hpyrazolo(3,4-d]pyrimidin-3-y}-2methoxy fenyl)-1//-2indolkarboxamid KC H 166 34 580,5 1,98
AQ-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1//pyrazolo[3,4-fi0pyrimidin-3-y}l-2methoxyfenyl)-3-methyl-1//-2indenkarboxamid Ao 167 14 593,3 3,2
NI -(4- {4-amino-1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl} -2methoxyf enyl)-(£)-3-phenyI-2propenamid A 0 168 17 567,3 2,85
N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1//pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl}2methoxyfenyl) -1 -methyl-1//-2indolkarboxamid λγΟ 169 20 594,3 3,18
N3-(4- {4-amino-l -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1//pyrazolo[3,4-rf]pyrimidin-3-yl} -2methoxyfenyl)-1//-3indolkarboxamid +9 170 6 580,4 2,74
Příklad 171 cis-NI -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3-yl} -2-methoxyfenyl-3 -fenylpropanamid
Do roztoku cz5,-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (75 mg, 0,17 mmol) a triethylaminu (34 mg, 0,34 mmol) v dichlormethanu (2,5 ml) se po kapkách přidá hydrocinnamoylchlorid (34 mg, 0,20 mmol) v dichlormethanu (0,5 ml). Roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 48 hodin a pak se přidá další ekvivalent hydrocinnamoylchloridu. Reakční směs se míchá dalších 24 hodin. Výsledná směs se rozdělí mezi dichlormethan (4 ml) a 2N NaOH (1,5 ml) a nechá procházet přes extrakční kazetu Empore. Odpařením rozpouštědla se získá olejovitá pevná látka, která se čistí chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 10-20%
C « 't> e c c © í < t
c. c . ' t
218 c?
€ c
ř- e « c- o ©
© © P e « ©
P P { © © ί e t? t e o r P <’ < ·> <! C
MeOH v dichlormethanu jako mobilní fázi, čímž se získá cw-M-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lJ7-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3fenylpropanamid (12 mg, 13%).
'H NMR (CDCb): δΗ 8,55 (1H, d), 8,36 (1H, s), 7,75 (1H, s), 7,25 (7H, m), 5,51 (2H, bs), 4,91 (1H, m), 3,92 (3H, s), 3,09 (2H, m), 2,76 (2H, m), 2,34-2,59 (9H, m), 2,29 (3H, s), 2,16 (2H, m), 1,85 (4H, m), 1,66 (2H, m).
LCMS (Micromass-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut) Rt = 1,92 minut, MH+ = 569,6.
Příklad 172 trimaleátová sůl trans-N\ -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1Hpyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -y 1} -2-methoxyfeny l)-4-(dimethylamino)benzamidu
Do roztoku tra«5-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (500 mg, 1,15 mmol) v pyridinu (5 ml) se po kapkách přidá 4-(dimethylamino)benzoylchlorid (420 mg, 2,28 mol) a roztok se míchá přes noc. Rozpouštědlo se odpařuje a zbytek rozdělí mezi dichlormethan a 2N roztok NaOH. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (x 3), organické části se suší, filtrují a odpařují za vzniku pevné látky, která se trituruje ve směsi EtOAc a Et2O (1:4) za vzniku pevné látky, která se rozpustí v EtOAc a nechá reagovat s maleínovou kyselinou (3 ekviv.), čímž se získá trans-N\ -(4- {4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 /7-pyrazolo [3,4-ú]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny l)-4(dimethylamino)benzamid (320 mg, 30%).
*H NMR (d6-DMSO)): δΗ 9,05 (1H, s), 8,25 (1H, s), 8,18 (1H, d, J - 8 Hz), 7,84 (2H, d, J = 9, 2 Hz), 7,29 (1H, s), 7,25 (1H, d, J = 8 Hz), 6,78 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,17 (6H, s), 4,71 (1H, m), 3,95 (3H, s), 3,01 (6H, s), 2,83-3,18 (9H, m), 2,68 (3H, s), 2,08 (6H, m), 1,56 (2H, m), HPLC (5,23 minut, 100%).
Příklad 173
V-4-[4-amino-l-(3-kyano-2-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/)pyrimidin-3-yl]-2-fluorfenyl~jV’(3 -methylfenyl)močovina • ·· β ««· * · • « · « © · β © • » · « · » tt β © © « e s « β e « β β o
219
a) 2-(4-amino-3 -j od-1 //-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-1 -y 1)-3 -pyridy lkyanid
Hydrid sodný (60% disperze v minerálním oleji, 3,825 mmol, 153 mg) se přidá do suspenze 4-amino-3-jod-1//-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidinu (l,0g, 3,825 mmol) v DMF (5 ml). Po 10 minutách se přidá 2-chlor-3-kyanopyridin (531 mg) a reakce se zahřívá při teplotě 60°C po dobu 16 hodin. Výsledná tmavá směs se nalije do ledové vody (50 ml) a pevná látka spojí filtrací, čímž se získá 2-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimÍdin-l-yl)-3pyridylkyanid ve formě hnědé pevné látky (1,1 g, 79%);’H NMR (DMSO-dó,400 MHz) δ 7,82 (1 H, m), 8,29 (1 H, s), 8,64 (1 H, m) a 8,93 (1 H, m);
RP-HPLC (Pecosphere, Cl8, 3m, 33 x 4,6 mm sloupec, 0% až 100% acetonitril v 50mM octanu amonného, pufrovaný na pH = 4,5, při teplotě 3,5 ml/min), Rt 2,16 minut.
b) 2- [4-amino-3 -(4-amino-3 -fluorfeny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] -3 -pyridy 1kyanid
2-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-3-pyridylkyanid (1,35 g), íerc-butylV-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (1,5 g), tetrakistrifenylfosfinpalladium (253 mg) a uhličitan sodný (1,153 g) se suspenduje v odplyněné vodě (10 ml) a DME (20 ml) a zahřívá při teplotě 85°C po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (200 ml) a vodu (200 ml). Výsledný precipitát se odstraní a organická vrstva se separuje, suší síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se krystalizuje z minimálního množství ethylacetátu, čímž se získá /erc-butyl-V-4-[4-amino-l-(3-kyano-2-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/|pyrimidin-3-yl]-2fluorfenylkarbamát ve formě bělavé pevné látky (400 mg). TFA (4 ml) se pomalu přidá do suspenze fórc-butyl-Ar-4-[4-amino-l-(3-kyano-2-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3ylj-2-fluorfenylkarbamátu (400 mg) v dichlormethanu (4 ml). Po 1 hodině se výsledný červený roztok koncentruje za sníženého tlaku a olej ovitý zbytek se neutralizuje nasyceným vodným roztokem uhličitanu sodného, čímž se získá 2-[4-amino-3-(4-amino-3fluorfenyl)-1//-pyrazolo [3,4-t/|pyrimidin-l-ylj-3-pyridylkyanid ve formě žlutého precipitátu (300 mg).
*H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 5,61 (2 H, br s), 6,92 (1 H, t), 7,36 (2 H, m), 7,76 (1 H, m), 8,32 (1 H, s), 8,62 (1 H, m) a 8,93 (1 H, m);
RP-HPLC (Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm sloupec, 0% až 100% acetonitril v 50 mM octanu amonného, pufrovaný na pH = 4,5, při 3,5 ml/min), Rt 2,25 minut.
¢- © ť ,·. e v < © e * O ř,Ce ncr© oe co «®«e
220
c) A-4-[4-amino-l-(3-kyano-2-pyridyl)-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2fluorfenyl-A ’-(3 -methylfenyl)močovina m-Tolylizokyanát (0,1 mmol) se přidá do roztoku (2-[4-amino-3-(4-amino-3fluorfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-g/]pyrimidin-l-yl]-3-pyridylkyanidu (35 mg, 0,1 mmol) v pyridinu a reakce se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 dnů. Reakce se koncentruje za vakua. Čištění se provádí hmotnostní aktivovanou preparativní RP-HPLC (Micromass/Gilson, Hypersil BDS Cl8, 5 pm, 100 x 21,2 mm sloupec; 0-100% acetonitril a 0,05M octan amonný pufrovaný na pH = 4,5 v průběhu 12,5 minut při 25 ml/min), čímž se získá A-4-[4-amino-l-(3-kyano-2-pyridyl)-lA-pyrazolo[3,4-í(Ipyrimidin-3-yl]-2fluorfenyl-A’-(3 -methy lfenyl)močo vina (4 mg);
!H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 2,30 (3H, s), 6,84 (IH, d), 7,19 (IH, t), 7,25 (IH, m), 7, 33 (IH, br s), 7,58 (2H, m), 7, 80 (IH, m), 8, 35 (IH, s), 8,43 (IH, t), 8,65 (1 H, m), 8,80 (IH, brs), 8,95 (1 H, m) a 9,10 (1 H, br s);
RP-HPLC (Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm sloupec; 0% až 100% acetonitril v 50mM octanu amonného, pufrovaný na pH = 4,5, při teplotě 3,5 ml/min), Rt 3,09 minut.
Příklad 174-185
Obecný způsob přípravy Al-4-(4-amino-l-{4-[l-(l-methylpiperid-4-yl)piperidyl]}-lApyrazolo[3,4-íf}pyrimidin-3-yl)-2 fluorfenyl-1 -arylsulfonamidů
a) fórc-butyl-4-(4-amino-3-4-[(/erc-butoxykarbonyl)amino]-3-fluorfenyl-1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylát
Směs ferc-butyl-4-(4-amino-3 -j od-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -y 1)-1 -piperidinkarboxylátu (8,756 g, 20,26 mmol), ferc-butyl-A-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (10,25 g, 30,38 mmol), tetrakis-trifenylfosfínpalladia (940 mg, 0,81 mmol) a uhličitanu sodného (4,20 g, 50,64 mmol) se suspenduje v odplyněné vodě (57 ml) a DME (323 ml) a zahřívá při teplotě 80°C po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (200 ml) a 10 % vodný roztok uhličitanu sodného (200 ml). Organická vrstva se dále promyje 10 % vodným roztokem uhličitanu sodného (2 x 200 ml), suší bezvodým síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku. Čištěním chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a heptanu (1:1), poté čistým ethylacetátem jako mobilní fází se získá nečistá frakce. Tato frakce se dále čistí krystalizací z ethylacetátu, čímž se získá /crc-butyl-4-(4f- Ρ ; · * * · · · « · « «© «-· 4 ©·· » * © » R· e « e « © « © « © © © e- e ♦ · © © © •♦ · · r, e · «.
221 amino-3 -4-[(terc-butoxykarbony l)amino] -3 -fluorfenyl-1 //-pyrazolo [3,4 -ůQpyrimidin-1 -y 1)1-piperidinkarboxylát (7,256 g, 68%);
*H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 1,43 (9H, s), 1,49 (9H, s), 1,93 (2H, m), 2,01 (2H, m), 3,00 (2H, br m), 4,04 (2H, br d), 4,90 (ÍH, m), 7,42 (2H, m), 7,83 (ÍH, t), 8,24 (1 H, s) a 9,17(1 H,brs).
b) 3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-amin
Směs férc-butyl-4-(4-amino-3-{4-[(férc-butoxykarbony ljamino]-3-fluorfenyl}-1 //pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylátu (6,26 g, 11,9 mmol), 5M HCI (95 ml) a acetonu (390 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Reakce se alkalizuje uhličitanem sodným a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytky se rozdělí mezi CH2C12 (200 ml) a vodu (200 ml) a vodná fáze se extrahuje dalším CH2C12 (2 x 200 ml). Spojené organické vrstvy se suší síranem sodným a odpařují do sucha, čímž se získá 3-(4amino-3-fluorfenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/|pyrimidin-4-amin (3,427 g, 88%); ‘H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 1,85 (2H, br t), 2,06 (2H, m), 2,65 (2H, m), 3,10 (2H, m), 4,72 (ÍH, m), 5,45 (2H, br s), 6,89 (ÍH, m), 7,22 (2H, m) a 8,19 (1 H, s).
c) NI -4-(4-amino-1 - {4-[ 1 -(1 -methylpiperid-4-yl)piperidyl]} -1 //-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-3-yl)-2-fluorfenylanilin
Do roztoku 3-(4-amino-3 -fluorfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin4-aminu (2,0 g, 6,11 mmol), V-methylpiperid-4-onu (0,69 g, 6,11 mmol, 0,8 ml) a ledové kyseliny octové (1,25 ml) v V-methylpyrrolidinonu (100 ml) pod atmosférou dusíku se přidá triacetoxyborohydrid sodný (1,5 ekviv., 1,94 g, 9,16 mmol), roztok se míchá po dobu 18 hodin, pak se přidá další triacetoxyborohydrid sodný (0,6 ekviv., 0,78 g) a V-methylpiperid-4-on (0,4 ekviv., 0,32 ml) a v reakci se pokračuje po dalších 18 hodin. Reakce se koncentruje za vakua, rozdělí mezi dichlormethan (100 ml) a nasycený vodný NaHCCb (100 ml). Vodná vrstva se dále extrahuje dichlormethanem (4 x 100 ml) a spojené organické vrstvy se suší nad bezvodým síranem hořečnatým a odpařují do sucha, čímž se získá žlutá pěna (0,95 g). Čištěním chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu a methanolu (4:1) jako mobilní fázi se získá Vl-4-(4-amino-l-{4-[l-(lmethylpiperid-4-yl)piperidyl]} -1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2-fluorfenylanilin (1,67 g, 72%).
• » « · « ·* 4 * • · • * • · · · 4 · · • · C «·
4©· *
222
Ή NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 1,44 (2H, m), 1,69 (3H, m), 1,83 (4H, m), 2,13 (3H, s), 2,28 (4H, m), 2,78 (2H, br d), 2,98 (2H, br d), 4,58 (1H, m), 5,25 (2H, brs), 6,89 (1H, t), 7,18 (1H, d), 7,24 (1H, d) a 8,19 (1 H, s).
d) Obecný způsob sulfonylace M-4-(4-amino-l-{4-[l-(l-methylpiperid-4yl)piperidyl]}-lH-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2-fluorfenylanilinu
Směs jVI -4-(4-amino-1 - {4- [ 1 -(1 -methylpiperid-4-yl)piperidyl]} -1 H-pyrazolo [3,4ď]pyrimidin-3-yl)-2-fluorfenylanilinu (100 mg, 0,236 mmol) a arylsulfonylchloridu (2 ekviv. 0,471 mmol) v pyridinu (2 ml) se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 3 dnů. Rozpouštědlo se odstraní za vakua. Čištění se provede pomocí hmotnostní aktivované preparativní RP-HPLC (Micromass/Gilson, Hypersil BDS Cl8, 5 pm, 100 x 21,2 mm sloupec; 0-100% acetonitril v 0,05M octanu amonného pufrovaném na pH = 4,5 v průběhu 12,5 minut při 25 ml/min), čímž se získají následující sloučeniny:
*
175 © » » v «<· r- » a ® « · <
223
HPLC
174
176
177
Struktura
Z m/z (ΜΗ»)
11,045 98,6 619,2
11,982 91,6 633,1
10,099 77,9 601,2
11,059 93,9 617,2
10,332 92,5 583,5
178
224
Η' «' C *
Ο Ο Γ f> C C V ti <> e t> fc f. C C c. t' , CO tc f- ( ' ( t f· € C i: , c c e i o c ť Γ e e c c < t c c- v , (S © t ť t c
HPLC Čistota
Struktura_RfcťXmin) %
Ap 10,929 84,3 f / z 643,2
Ap 10,074 87,1 583,2
f 11,256 90,5 633,1
Ap <y^ 11,807 75,7 649,2
10,617 100 610,2
Ap. 11,895 88,4 633,2
(MH*)
U-/b )
Analytické podmínky RP-HPLC: 10 až 90% CH3CN νΟ,ΙΝ vodném roztoku octanu amonného, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 12 minut při 2 ml/minutu za použití sloupce Waters Symmetry Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm.
» fe «
e>
* ©
«? «· e er 0 fe e o a fen fe# • fe « · · ·- # 9 · « C t fe «· • * fe fe C · *♦·<«© · fe * fe e 9 » • * «· β *·«···«
225
Příklad 186-189 cis-3-{4-[-amino(fenyl)methyl]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminová analoga
a) Obecný způsob syntézy sulfonamidových a karboxamidových derivátů
Směs cis-3-{4-[amino(fenyl)methyl]fenyl}-1 -[4-(4-methylpiperazino)cykIohexy 1]l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (50 mg, 0,10 mmol), odpovídající elektrofíl (sulfonylchlorid nebo chlorid kyseliny) (1 ekviv.) a pyridin (1 ml) se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 24-72 hodin. (V některých případech je potřeba pro proběhnutí reakce další podíl elektrofílu (typicky 1 ekviv.). Rozpouštědlo se odstraní za vakua. Čištění se provádí pomocí hmotnostní aktivované preparativní RP-HPLC (Micromass/Gilson, Hypersil BDS 08, 5 pm, 100 x 21,2 mm sloupec; 0-100% acetonitril a 0,05M octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 12,5 minut při teplotě 25 ml/min) se získají následující sloučeniny.
Struktura HPLC Rt (min) Čistota (%) m/z (MH+)
r 15,76 94,9 721,6
.ér 9 13,21 94,9 697,3
187 < Γ(· CU e . - (' » f © c e c
U c c r fC C © ť c e C <: e © <;· »' «> e (-
4 (' e e e • « r· e ( &
226
Struktura HPLC Rt (min) Čistota (%) m/z (MH+)
V ©e|«o rfA 14,20 91,3 697,4
<x OS&BO 15,30 96,8 705,3
/ ς o— 14,00 100 675,4
% 12,00 99 602.4
9- Z Γ 12,08 100 602,3
e e r e * C (' t!.
© ť <i © e to © · ř e c to c * o ©
227
Struktura HPLC Rt (min) Čistota (%) m/z (MH+)
0*UM 13,68 100 695
Γ r
12,08 100 100
Analytické podmínky RP-HPLC: 10 až 90 % CH3CN v O,1N vodném roztoku octanu amonného, pufrovaný na pH = 4,5, v průběhu 12 minut při 2 ml/min, za použití sloupce Waters Symmetry 08, 5 pm, 250 x 4,6 mm.
Příklad 195
-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3- {4-[(fenethylamino)(fenyl)methyl]fenyl} -1Hpyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-4-amin
Do roztoku cw-3-{4-[amino(fenyl)methyl]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (50 mg, 0,10 mmol), fenylacetaldehydu (13 mg) a ledové kyseliny octové (0,013 ml) v 1,2-dichlorethanu (1 ml) pod atmosférou dusíku se přidá triacetoxyborohydrid sodný (2 ekviv. 43 mg), roztok se míchá po dobu 18 hodin, pak se koncentruje za vakua, rozdělí mezi dichlormethan (10 ml) a nasycený vodný NaHCCL (10 ml) a organická vrstva se separuje. Vodná vrstva se dále extrahuje dichlormethanem (4 x 10 ml) a spojené organické vrstvy se suší bezvodým síranem hořečnatým a odpařují do sucha. Čištění se provede pomocí hmotnostní aktivované preparativní RP-HPLC (Micromass/Gilson, Hypersil BDS Cl8, 5 pm, 100 x 21,2 mm sloupec; 0-100% acetonitril a 0,05M octan amonný, pufrovaný na pH = 4,5, v © o c e c ® « t> © • e e © • © © • · <· * • · © «
0 • · * β e e * «0 0 0 • 0 0 »
0 * ··· ® * e • · © $ 0 ·
228 průběhu 12,5 minut při 25 ml/min), čímž se získá l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3{4-[(fenethylamino)(fenyl)methyl]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin(28 mg);
RP-HPLC (10 až 90 % CH3CN v O,1N vodný roztok octanu amonného, pufrovaném na pH = 4,5, v průběhu 12 minut při 2 ml/min za použití Waters Symmetry 08,250 x 4,6 mm sloupec) Rt = 12,269 minut 95,2%; m/z (MH) 601,3.
Příklad 196
N- {4-[4-amino-1 -(4-oxocyklohexyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-fluorfenyl} -N (3 -methy lfenyl)močo vina
Do roztoku 4- [4-amino-3 -(4-amino-3 -fluorfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-1 yl]-l-cyklohexanonu (80,3 mg, 0,236 mmol) v pyridinu se přidá w-tolylizokyanát (1,2 ekviv., 37,7 mg, 0,283 mmol). Po 16 hodinách při teplotě 40°C se reakce zháší vodou (2 ml) a odpařuje do sucha. Čištěním preparativní RP-HPLC (10% až 40% CH3CN v O,1N vodný roztok octanu amonného, pufrovaném na pH = 4,5, v průběhu 60 minut při 10 ml/min za použití Waters DeltaPak Cl8, 15 pm, 100 x 40 mm sloupec, λ = 254 nm) se získá N- {4- [4-amino-1 -(4-oxocyklohexyl)-1 //-pyrazolo [3,4 -e/]pyrimidin-3 -y 1] -2 fluorfenyl}-N’-(3-methylfenyl)močovina (91 mg, 84 %).
’H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 2,26 (2H, br t), 2,30 (3H, s), 2,43 (4H, m), 2,69 (2H, m),
5.26 (1H, m), 6,82 (1H, d), 7,18 (1H, t), 7,25 (1H, br d), 7,32 (1 H, br s), 7,45 (2 H, m),
8.26 (1H, s), 8,36 (1H, t), 8,72 (1H, d) a 9,05 (1 H, s) a RP-HPLC (10 až 90 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného, pufrovaného na pH = 4,5, v průběhu 12 minut při 2 ml/min za použití Waters Symmetry Cl 8, 5 pm, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt = 15,433 minut 97,9%.
Příklad 197 ethyl-2-[4-amino-3-(4-[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino-3-fluorfenyl)-l-pyrazolo[3,4</|pyrimidin-1 -y 1] -acetát
a) ethyl-2-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-acetát
Hydrid sodný (60%, 0,138 g, 3,45 mmol) se přidá do suspenze 3-jod-l//pyrazolo[3,4-é/]pyrimidin-4-aminu (0,750 g, 2,87 mmol) v N,//-dimethylformamidu (9 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny do té doby, dokud není roztok
A f!' c e <- ©
229 homogenní. Přidá se ethyl-bromacetát (0,447 ml, 4,03 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 14 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledná pevná látka se trituruje postupně vodou (25 ml), pak směsí etheru a petroletheru (4:1, 50 ml), čímž se získá ethyl-2-(4-amino-3-jod-lH-pyrazolo[3,4<7Jpyrimidin-l-yl)-acetát (0,791 g, 2,28 mmol) ve formě hnědé pevné látky.
’H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 8,21 (s, 1H), 5,17 (s, 2H), 4,15 (qt, 2H), 1,20 (t, 3H); RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt = 6,87 minut.
b) ethyl-2-(4-amino-3-4-[(fórc-butoxykarbonyl)amino]-3-fluorfenyl-17/-pyrazolo[3,4djpyrimidin-1 -yl)-acetát
Suspenze ethyl-2-(4-amino-3-jod-lH-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)-acetátu (0,790 g, 2,28 mmol), fórc-butyl-V-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamátu (1,08 g, 3,19 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,105 g, 0,091 mmol) a hydrogenuhličitanu sodného (0,478 g, 5,69 mmol) v W-dimethylformamidu (12 ml) a vodě (2 ml) se zahřívá při teplotě 90°C po dobu 14 hodin pod atmosférou dusíku. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený vodný roztok chloridu sodného (50 ml) a ethylacetát (30 ml). Vodná vrstva se separuje a extrahuje dále ethylacetátem (3 x 30 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným, filtrují a koncentrují za sníženého tlaku. Čištěním zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a heptanu (9:1) jako mobilní fázi se získá ethyl-2(4-amino-3-4-[(terc-butoxykarbonyl)amino]-3-fluorfenyl-lH-pyrazolo[3,4-d]pyrirnidin-lyl)-acetát (0,193 g, 0,449 mmol) ve formě žlutého oleje.
’H NMR (CDCb, 400 MHz) δ 8,41 (s, 1H), 8,30 (m, 1H), 7,47 (m, 2H), 6,81 (s, 1H), 5,47 (br, 2H), 5,20 (s, 2H), 4,25 (qt, 2H), 1,55 (s, 9H), 1,27 (t, 3H);
RP-HP (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl 8, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt 9,47 minut.
c) ethyl-2-[4-amino-3-(4-[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino-3-fluorfenyl)-lH-pyrazolo[3,4d) pyrimidin-l-yl]-acetát
Do 50 ml baňky obsahující roztok chlorovodíku v dioxanu (4M, 6 ml) a ethanolu (6 ml) se přidá ethyl-2-(4-amino-3-4-[(ferc-butoxykarbonyl)amino]-3-fluorfenyl-lHpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl)-acetát (0,452 g, 1,05 mmol). Vzdušný chladič se připevní
CCC
230 k baňce a směs se míchá při teplotě 50°C pod atmosférou dusíku. Po 16 hodinách se reakční směs ochladí na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0,5 M, 30 ml) a etheru (20 ml). Organická vrstva se separuje a odstraní. Vodná vrstva se alkalizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (30 ml) a výsledná směs se extrahuje ethylacetátem (3 x 30 ml). Spojené ethylacetátové extrakty se suší síranem sodným, filtrují a koncentrují, čímž se získá žlutá pevná látka (0,295 g).
Tato žlutá pevná látka se přidá do roztoku 2,3-dichlorbenzensulfonylchloridu (0,263 g, 1,07 mmol) a 4-dimethylaminopyridinu (0,005 g, 0,041 mmol) v pyridinu (5 ml) a výsledný roztok se míchá pod atmosférou dusíku po dobu 3 dnů, pak se přidá směs methanolu a dichlormethanu (1:19, 100 ml) a výsledná směs se extrahuje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3 x 10 ml). Organická vrstva se suší síranem sodným, filtruje a koncentruje a určitý podíl látky se čistí preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, Rt 12,4-13,9 min), čímž se získá ethyl-2-[4-amino-3 -(4-[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino-3 -fluorfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4d]pyrimidin-l-yl]acetát ve formě bílé pevné látky (0,011 g, 0,020 mmol). RP-HP (25 až 100 % CH3CN v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS 08, 250 x 4, 6 mm sloupec) Rt 9,78 minut.
*H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 10,84 (s, IH), 8,25 (s, IH), 7,97 (s, IH), 7,95 (s, IH),
7,54 (t, IH), 7,43 (m, 3H), 5,21 (s, 2H), 4,15 (qt, 2H), 1,20 (t, 3H).
MS: MH+ 539.
Příklad 198
NI -4-[4-amino-1 -(2-hydroxyethyl)-1 H-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-fluorfenyl-2,3dichlor-1 -benzensulfonamid
Ethyl-2- [4-amino-3 -(4-[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl]amino-3 -fluorfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]acetát (0,120 g, 0,222 mmol) se suspenduje v ethylenglykoldimethyletheru (2 ml) a suspenze se ochladí na teplotu 0°C. Přidá se hydridohlinitan lithný (0,025 g, 0,660 mmol) a reakční směs se ohřívá na pokojovou teplotu. Po 24 hodinách se přebytek hydridu zháší přidáním vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové (0,5 M, 10 ml). Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2x7 ml) a «·©
231 organické extrakty se oddělí. Vodná vrstva se alkalizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml), nasyceným chloridem sodným a extrahuje směsí methanolu a dichlormethanu (1:9, 4 x 20 ml). Organické vrstvy se spojí, suší síranem sodným, filtrují a koncentrují za sníženého tlaku. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS C 18,250 x 21 mm sloupec, Rt 8,93-9,90 min) se získá Al-4-[4amino-l-(2-hydroxyethyl)-l/7-pyrazolo[3,4-J]pyrimÍdin-3-yl]-2-fluorfenyl-2,3-dichlor-1benzensulfonamid ve formě bělavé pevné látky (0,004 g, 0,008 mmol).
’H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 10,82 (s, ÍH), 8,23 (s, ÍH), 7,97 (s, ÍH), 7,95 (s, ÍH),
7,54 (t, ÍH), 7,39 (m, 3H), 6,90 (br, 2H), 4,86 (t, ÍH), 4,35 (t, 2H), 4,04 (t, 2H).
MS: (M-H)'495.
Příklad 199
NI -(4- {4-amino-1 - [2-ky ano-4-(4-methylpiperazino)fenyl] -1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3 yl} -2-fluorfenyl)-2, 3-dichlor-1 -benzensulfonamid
Suspenze 3-jod-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (0,172 g, 0,66 mmol), hydridu sodného (60%, 0,030 g, 0,75 mmol), 2,5-difluorbenzonitrilu (0,105 g, 0,75 mmol) a N, V-dimethylformamidu (2,5 ml) se zahřívá po dobu 24 hodin při teplotě 100°C. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi dichlormethan (50 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva se separuje, suší síranem sodným, filtruje a koncentruje za sníženého tlaku.
Tato látka (0,045 g) a uhličitan česný (0,115 g, 0,353 mmol) se suspendují v 1-methylpiperazinu (1 ml) a směs se zahřívá při teplotě 110°C v uzavřené nádobě po dobu 20 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se okyselí vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (1 M, 10 ml) a vodná fáze se extrahuje etherem (10 ml). Organická fáze se oddělí a vodná fáze se alkalizuje vodným roztokem uhličitanu sodného (3 M, 10 ml), extrahuje dichlormethanem (3 x 15 ml) a spojené organické frakce se suší síranem sodným, filtrují a koncentrují za sníženého tlaku. Tato látka se zpracovává podle způsobu uvedeného v bodu (b), pak odstraní chránící skupiny a sulfonylace se provede podle způsobu uvedeného v bodě (c). Čištěním produktu preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS C 18, 250 x 21 mm sloupec, » »
232
Rt 8,4-9,4 min) se získá Vl-(4-{4-amino-1-[2-kyano-4-(4-methylpiperazino)fenyl]-1/7pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-2,3-dichlor-l -benzensulfonamid ve formě žluté pevné látky (0,007 g, 0,011 mmol).
*H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,98 (d, 1H), 7,86 (d, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,53 (m, 6H), 3,30 (m, 4H), 2,70 (m, 4H), 2,40 (s, 3H).
MS (M-H)' 650.
Příklad 200 cz5-Nl-fenyl-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy benzamid
a) 4-brom-2-methoxybenzonitril
Do roztoku 4-brom-2-fluorbenzonitrilu (8,0 g, 40,0 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml) při teplotě -50°C se po částech přidá suspenze methoxidu draselného (4,24 g, 60,0 mmol) v tetrahydrofuranu (40 ml). Po jedné hodině se ledová lázeň odstraní a reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá při pokojové teplotě po dobu 6 hodin. Reakční směs se nalije do vody (250 ml) a pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá 4-brom-2methoxybenzonitril (7,85 g, 92%).
*H NMR (DMSO-dg) δ 3,94 (s, 3H), 7,32 (d, J=8,23 Hz, 1H), 7,15 (s, 1H), 7,69 (d, J=8,23 Hz, 1H).
b) 4-brom-2-methoxybenzoová kyselina
4-Brom-2-methoxybenzonitril (7,35 g, 35 mmol) se rozpustí v dioxanu (400 ml), přidá se hydroxid sodný (2,0 N, 200 ml) a suspenze se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 16 hodin. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná směs se filtruje a promyje vodou, filtrát se neutralizuje kyselinou chlorovodíkovou (5,ON) na pH = 1. Pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá 4-brom-2-methoxybenzoová kyselina (3 g, 37%).
2H NMR (DMSO-dg) δ 3,84 (s, 3H), 7,21 (d, J=8,25 Hz, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,58 (d, >8,23 Hz, 1H).
c) 4-brom-2-methoxy-1 -benzenkarbonylchlorid
4-Brom-2-methoxybenzoová kyselina (2,934 g, 12,70 mmol) se smíchá s uhličitanem sodným (2,2 g, 26,51 mmol). Přidá se thionylchlorid (20 ml) a reakční směs se i· ¢.
233 zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin. Po oddestilování přebytku thionylchloridu, se přidá heptan a pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá 4-brom-2-methoxy-lbenzenkarbonylchlorid (3,16g, 100%).
’H NMR (CDC13) δ 3,94 (s, 3H), 7,16 (s, 1H), 7,20 (d, J=8,51 Hz, 1H), 7,95 (d, J=8,51 Hz, 1H).
d) VI -fenyl-4-brom-2-methoxybenzamid
Do směsi 4-brom-2-methoxy-I-benzenkarbonylchloridu (3,24 g, 12,98 mmol) a triethylaminu (2,7 ml, 19,48 mmol) v dichlormethanu (130 ml) se pomalu přidá anilin (1,24 ml, 13,62 mmol). Po 3 hodinách se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku, přidá se ethylacetát a směs se filtruje, filtrát se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se rekrystalizuje ze směsi ethylacetátu a heptanu, čímž se získá Vl-fenyl-4-brom-2methoxybenzamid (2,92 g, 74%).
*H NMR (DMSO-de) δ 3,92 (s, 3H), 7,09 (s, 1H), 7,27 (m, 1H), 7,33 (m, 2H), 7,39 (s, 1H),
7,55 (d, J=8,15 Hz, 1H), 7,71 (m, 2H), 10,10 (s, 1H).
e) 4-(anilinokarbonyl)-3-methoxy fenylboritá kyselina
Do roztoku Vl-fenyl-4-brom-2-methoxybenzamidu (1,0 g, 3,26 mmol) v tetrahydrofuranu (25 ml) při teplotě -78°C se pomalu přidá n-butyllithium (1,6 M roztok v hexanech, 5,1 ml, 8,16 mmol). Po 30 minutách se najednou přidá triizopropylborát (1,13 ml, 4,90 mmol). Po 15 minutách se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidá se kyselina chlorovodíková (2,5N, 18 ml) a směs se míchá po dobu 5 hodin. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a koncentruje. Zbytek se rekrystalizuje ze směsi ethylacetátu a heptanu, čímž se získá 4-(anilinokarbonyl)-3-methoxyfenylboritá kyselina (0,549 g, 62%).
’H NMR (DMSO-dg) δ 3,91 (s, 3H), 7,08 (m, 1H), 7,33 (m, 2H), 7,47 (d, >7,57 Hz, 1H), 7,59 (m, 2H), 7,73 (d, >7,36 Hz, 2H), 8,24 (s, 2H), 10,10 (s, 1H).
f) cis-Nl -fenyl-4- {4-amino- l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,·4í/jpyrimidin-3 -y 1} -2-methoxy benzamid
Cis-3 -j od-1 - [4-( 4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</jpyrimidin-4ylamin (148 mg, 0,335 mmol), 4-(anilinokarbonyl)-3-methoxyfenylboritá kyselina (100
ICC lift v
234 mg, 0,369 mmol), tetrakistrifenyfosfinpalladium (23 mg, 0,020 mmol) a uhličitan sodný (85 mg, 0,845 mmol) se smíchají s ethylenglykoldimethyletherem (4 ml) a vodou (2 ml). Reakční směs se zahřívá pod refluxem přes noc, organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu a methanolu (95:5) jako mobilní fázi, čímž se získá cis-Nl -fenyl-4- {4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl} -2-methoxybenzamid (125 mg, 69%).
'H NMR (CDC13) δ 1,69 (m, 2H), 1,86 (m, 2H), 2,17 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,44 (m, 11H), 4,15 (s, 3H), 4,96 (m, 1H), 5,69 (bs, 2H), 7,14 (m, 1H), 7,37 (m, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,68 (m, 2H), 8,41 (m, 2H), 9,77 (s, 1H).
LC/MS (Micromass-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut): MH+^ 541,2, Rt = 2,58 minut.
Příklad 201
Zra«s-Al-fenyl-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4ě/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxybenzamid
Trans-3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4amin (266 mg, 0,604 mmol), 4-(anilinokarbonyl)-3-methoxyfenylboritá kyselina (180 mg, 0,664 mmol), tetrakistrifenyfosfinpalladium (42 mg, 0,036 mmol) a uhličitan sodný (154 mg, 1,449 mmol) se smíchají s ethylenglykoldimethyletherem (8 ml) a vodou (4 ml). Reakční směs se zahřívá pod refluxem přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu a methanolu (95:5) jako mobilní fázi, čímž se získá íra«s-/Vl-fenyl-4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</Jpyrimidin-3-yl} -2-methoxybenzamid (226 mg, 69%).
* β Φ «' <
• e
© » · e * ft ft< β · ♦ © ·· « « ® · · ft * * « © *· «<
β ♦ ft « 4 · • ft ft * ft ft * · « e ·
235 *H NMR (CDCb) δ 1,58 (m, 4H), 2,17 (m, 7H), 2,32 (s, 3H), 2,52 (m, 2H), 2,69 (2,69,3H), 4,16 (s, 3H), 4,78 (m, 1H), 5,49 (bs, 2H), 7,14 (m, 1H), 7,43 (m, 4H), 7,69 (m, 2H), 8,44 (m, 2H), 9,77 (s, 1H).
LC/MS (Micromass-Column: Pecosphere, 08, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut): MH+ 541,2, Rt = 2,61 minut.
Příklad 202 czs-N 1 -benzy 1-4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4</|pyrimidin-3-yl} -2-methoxybenzamid
a) Ni -benzyl-4-brom-2-methoxybenzamid
Do směsi 4-brom-2-methoxy-l-benzenkarbonylchloridu (1,5 g, 6,01 mmol) a triethylaminu (1,3 ml, 9,02 mmol) v dichlormethanu (60 ml) se pomalu přidá benzylamin (0,69 ml, 6,31 mmol). Po 3 hodinách se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku, přidá se ethylacetát a směs se filtruje, filtrát se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se rekrystalizuje ze směsi ethylacetátu a heptanu, čímž se získá Al -benzyl-4-brom-2methoxybenzamid (1,654 g, 86%).
’H NMR (DMSO-de) δ 3,92 (s, 3H), 4,67 (d, J=5,67 Hz, 32H), 7,31 (m, 7H), 8,03 (bs, 1H), 8,13 (d, J=8,41,1H).
b) 4-[(benzylamino)karbonyl]-3-methoxyfenylboritá kyselina zz-Butyllithium (1,6 M roztok v hexanech, 8,0 ml, 12,88 mmol) se přidá pomalu do roztoku Al-benzyl-4-brom-2-methoxybenzamidu (1,65 g, 5,15 mmol) v tetrahydrofuranu (40 ml) při teplotě -78°C. Po 30 minutách se najednou přidá triizopropylborát (1,8 ml, 7,73 mmol). Po 13 minutách se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 16 hodin. Přidá se kyselina chlorovodíková (2,5N, 36 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a koncentruje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu a methanoiu (95:5) jako mobilní fázi, čímž se získá 4-[(benzylamino)karbonyl]-3-methoxyfenylboritá kyselina (0,675 g, 46%).
e& < s© í’ c <’ e o -.· <--e fr o fr e c c e <? O > < · r- c o ©· ť< <i; v ť e e υ <; r e c? c « ťfrč t c e { · ο ϊ· t Φ <' v «. ť o 6 í> ’’·
C (i V C <' ť>
236 ‘H NMR (DMSO-d6) δ 3,90 (s, 3H), 4,51 (d, >6,18 Hz, 2H), 7,24 (m, ÍH), 7,34 (m, 4H), 7,43 (d, >7,55 Hz, ÍH), 7,59 (s, ÍH), 7,69 (d, >7,55 Hz, ÍH), 8,23 (s, 2H), 8,69 (m, ÍH).
c) cis-Νϊ -benzyl-4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4djpyrimidin-3 -yl} -2-methoxybenzamid
Cis-3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4amin (141 mg, 0,319 mmol), 4-[(benzylamino)karbonyl]-3-methoxyfenylboritá kyselina (100 mg, 0,351 mmol), tetrakistrifenyfosfínpalladium (22 mg, 0,019 mmol) a uhličitan sodný (81 mg, 0,765 mmol) se smíchaj9 s ethylenglykoldimethyletherem (4 ml) a vodou (2 ml). Reakční směs se zahřívá pod refluxem přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografii ve směsi dichlormethanu a methanolu (95:5) jako mobilní fázi, čímž se získá cis-Ní -benzyl-4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxybenzamid (126 mg, 71%).
’H NMR (CDC13) δ 1,83 (m, 6H), 2,34 (s, 3H), 2,45 (m, 1 ÍH), 4,02 (s, 3H), 4,43 (d, >5,66 Hz, 2H), 4,95 (m, ÍH), 5,52 (bs, 2H), 7,37 (m, 7H), 8,18 (m, ÍH), 8,41 (m, ÍH);
LC/MS (Micromass-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut): MH+ 555,5, Rt =2,65 minut
Příklad 203 cz's-Nl-fenethyl-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4ť/Jpyrimidin-3 -y 1} -2-methoxybenzamid
a) Ní -fenethyl-4-brom-2-methoxybenzamid
Do směsi 4-brom-2-methoxy-l-benzenkarbonylchloridu (1,5 g, 6,01 mmol) a triethylaminu (1,3 ml, 9,02 mmol) v dichlormethanu (60 ml) se pomalu přidá fenethylamin (0,79 ml, 6,31 mmol). Po 2 hodinách se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku, přidá se ethylacetát a směs se filtruje, filtrát se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografii ve směsi dichlormethanu a ethylacetátu (97:3) jako mobilní fázi, čímž se získá Al-fenethyl-4-brom-2-methoxybenzamid (1,81 g, 90%).
oe fe, π o c « r to ,· o ři © o i c
237 'Η NMR (DMSO-dó) δ 2,83 (m, 2H), 3,50 (m, 2H), 3,84 (s, 3H), 7,31 (m, 7H), 7,65 (d, J=8,28 Hz, 1H), 8,15 (m, 1H).
b) 4-[(fenethylamino)karbonyl]-3-methoxy fenylboritá kyselina «-Butyllithium (1,6 M roztok v hexanech, 8,5 ml, 13,54 mmol) se přidá pomalu do roztoku Vl-fenethyl-4-brom-2-methoxybenzamidu (1,81 g, 5,41 mmol) v tetrahydrofuranu (40 ml) při teplotě -78°C. Po 30 minutách se najednou přidá triizopropylborát (1,87 ml, 8,12 mmol). Po 13 minutách se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 3 hodin. Přidá se kyselina chlorovodíková (2,5N, 40 ml) a směs se míchá přes noc. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší MgSCL, filtruje a koncentruje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu a methanolu (95:5) jako mobilní fázi, čímž se získá 4-[(benzylamino)karbonyl]-3-methoxyfenylboritá kyselina (0,916 g, 56%). ’H NMR (DMSO-dó) δ 2,85 (m, 2H), 3,53 (m, 2H) 3,88 (s, 3H), 7,31 (m, 7H), 7,70 (d, J=7,61 Hz, 1H), 8,19 (m, 2H), 9,10 (m, 1H).
c) cis-NÍ -fenethyl-4- {4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1 /7-pyrazolo [3,4c7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxybenzamid
Cis-3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 /7-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4amin (154 mg, 0,349 mmol), 4-[(fenethylamino)karbonyl]-3-methoxy fenylboritá kyselina (115 mg, 0,384 mmol), tetrakistrifenyfosfinpalladium (24 mg, 0,021 mmol) a uhličitan sodný (89 mg, 0,839 mmol) se smíchají s ethylenglykoldimethyletherem (4 ml) a vodou (2 ml). Reakční směs se zahřívá pod refluxem přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje díchlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu a methanolu (95:5) jako mobilní fázi, čímž se získá cis-ΝΪ -fenethyl-4 {4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxybenzamid (64 mg, 32%).
‘H NMR (CDCl3-dó) δ 1,62 (m, 4H), 2,16 (m, 16H), 2,87 (m, 2H), 3,57 (m, 2H), 3,90 (s,
3H), 4,83 (m, 1H), 7,31 (m, 7H), 7,95 (m, 1H), 8,22 (m, 2H);
•3 5V ' l' © © <> £ * * © ť e <' « 0 β r <
(;- O Φ £ « e ť-· e r < <? £ 1 f> »© v© ,:. e t © © « » /G V ♦ « <?
c · * v β © íi ř-> ť «
238
LC/MS (Micromass-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut): MH+ = 569,3, Rt =2,50 minut.
Příklad 204 cis-Nl -fenyl-4- { 4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 L/-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3 -yl} benzamid
a) Vl-fenyl-4-brombenzamid
Do směsi 4-brom-l-benzenkarbonylchloridu (2,0g, 9,11 mmol) a triethylaminu (1,9 ml, 13,67 mmol) v dichlormethanu (95 ml) se pomalu přidá anilin (0,87 ml, 9,57 mmol). Po 3 hodinách se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku. Přidá se ethylacetát a směs se filtruje, filtrát koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se rekrystalizuje ze směsi ethylacetátu a heptanu, čímž se získá Al-fenyl-4-brombenzamid (1,00 g, 40%).
JH NMR (DMSO-dé) δ 7,11 (m, 1H), 7,38 (m, 2H), 7,76 (m, 4H), 7,92 (m, 2H), 10,30 (s, 1H).
b) 4-(anilinokarbonyl)fenylboritá kyselina
Do roztoku Al-fenyl-4-brom-2-methoxybenzamidu (1,0 g, 3,62 mmol) v tetrahydrofuranu (27 ml) při teplotě -78°C se pomalu přidá n-butyllithium (1,6 M roztok v hexanech, 5,7 ml, 9,05 mmol). Po 30 minutách se najednou přidá triizopropylborát (1,25 ml, 5,43 mmol). Po 13 minutách se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 6 hodin.Přidá se kyselina chlorovodíková (2,5N, 27 ml) a směs se míchá přes noc. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a koncentruje. Zbytek se rekrystalizuje ze směsi ethylacetátu a heptanu, čímž se získá 4-(anilinokarbonyl)fenylboritá kyselina (0,354 g, 40%).
’H NMR (DMSO-d6) δ 7,10 (m, 1H), 7,35 (m, 2H), 7,80 (m, 4H), 7,92 (m, 2H), 8,23 (s, 2H), 10,23 (s, 1H).
c) c«-Vl-fenyl-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4cQpyrimidin-3 -y 1} benzamid fcC ve © < <; < a r f * : c
P I- ,· <·· fc fc fc · m (5 e c b o e>
€ e e <?
ř.r r,· .8« e
e
O fc ř?
»» © e © «
et fy
239
Cis-3 -j od-1 -[4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4amin (100 mg, 0,226 mmol), 4-(anilinokarbonyl)fenylboritá kyselina (60 mg, 0,249 mmol), tetrakistrifenyfosfinpalladium (16 mg, 0,014 mmol) a uhličitan sodný (58 mg, 0,544 mmol) se smíchají s ethylenglykoldimethyletherem (3ml) a vodou (1,5 ml). Reakční směs se zahřívá pod refluxem přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, methanolu a hydroxidu amonného (95:5:05) jako mobilní fázi, čímž se získá czs-yVl-fenyl-4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-3-yl}benzamid (32 mg, 27%). ’H NMR (DMSO-d6) δ 1,60 (m, 4H), 1,73 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 2,19 (s, 3H), 2,28 (m, 11H), 4,84 (m, IH), 7,12 (m, IH), 7,38 (m, 2H), 7,81 (m, 4H), 8,16 (d, J=8,30 Hz, 2H), 8,27 (s, IH), 10,34 (s, IH).
LC/MS (Micromass-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0%
B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut): MH+= 511,2, Rt = 2,41 minut
Příklad 205 cw-N 1 -fenethyl-4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo[3,4ď|pyrimidin-3 -yl} benzamid
a) Vl-fenethyl-4-brombenzamid
Do směsi 4-brom-l-benzenkarbonylchloridu (2,0 g, 9,11 mmol) a triethylaminu (1,9 ml, 13,67 mmol) v dichlormethanu (95 ml) se pomalu přidá fenethylamin (1,2 ml, 9,57 mmol). Po 3 hodinách se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku. Přidá se ethylacetát a směs se filtruje, filtrát se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se rekrystalizuje ze směsi ethylacetátu a heptanu, čímž se získá ΛΠ-fenyl-4-brombenzamid (1,925 g, 69%).
'H NMR (DMSO-dó) δ 2,84 (m, 2H), 3,47 (m, 2H), 7,28 (m, 5H), 7,67 (d, >8,59 Hz, 2H), 7,76 (d, >8,59 Hz, 4H), 8,64 (m, IH).
b) 4-[(fenethylamino)karbonyl]fenylboritá kyselina
Do roztoku yVl-fenyl-4-brom-2-rrtethoxybenzamidu (1,92 g, 6,31 mmol) v tetrahydrofuranu (47 ml) při teplotě -78°C se pomalu přidá n-butyllithium (1,6 M roztok v t
€ fe fe *
© tře· v fe v.' fi • « c e @ β ο β • re 4 « fe r; fe $ e c (’· • fe> ** β · « e ♦ &
9 9 • · » ¢6 © e fe e
240 hexanech, 10 ml, 15,78 mmol). Po 30 minutách se najednou přidá triizopropylborát (2,2 ml, 9,47 mmol). Po 13 minutách se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 16 hodin. Přidá se kyselina chlorovodíková (2,5N, 47 ml) a směs se míchá po dobu 5 hodin. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a koncentruje. Zbytek se rekrystalizuje ze směsi ethylacetátu a heptanu, čímž se získá 4-[(fenethylamino)karbonyl]fenylboritá kyselina (0,486 g, 28%).
lH NMR (DMSO-dé) δ 2,85 (m, 2H), 3,49 (m, 2H), 7,22 (m, 5H), 7,73 (m, 4H), 8,17 (s, 2H), 8,54 (m, 1H).
c) cis-Nl -fenethyl-4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} benzamid
Cw-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4amin (100 mg, 0,226 mmol), 4-[(fenethylamino)karbonyl]fenylboritá kyselina (60 mg, 0,249 mmol), tetrakistrifenyfosfinpalladium (16 mg, 0,014 mmol) a uhličitan sodný 58 mg, 0,544 mmol) se smíchají s ethylenglykoldimethyletherem (3 ml) a vodou (1,5 ml). Reakční směs se zahřívá pod refluxem přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fázi, čímž se získá cis-Nl-fenethyl-4- {4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrímidin-3-yl}benzamid (28 mg, 23%). *H NMR (DMSO-d6) δ 1,62 (m, 4H), 2,24 (m, 16H), 2,88 (m, 2H), 3,54 (m, 2H), 4,82 (m, 1H), 7,29 (m, 7H), 8,73 (d, J=8,10 Hz, 2H), 7,99 (d, 8,17 Hz, 1H), 8,67 (m, 1H).
LC/MS (Micromass-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/Α v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut): MH+= 539,3, Rt = 2,50 minut.
Příklad 206 trimaleátová sůl trans-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l//-2-indolkarboxamidu *0 β e r φ f * Ρ « fi·
J? 9 «► β
1} «Θ ¢0 β ί- c • » c • « r • · 6 fi • t ί>Ρ tí® g>
* * e> o c § « « f o e c e €« e « «
241
a) trans-terc-buty\-N-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4</Ipyrimidin-3-yl} -2-methoxy fenyl)karbamát rra«5-3-jod-l -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //--pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4amin (4,0 g, 9,06 mmol), Zerc-butyl<V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (3,48 g, 9,97 mmol), tetrakistrifenyfosfinpalladium (0,63 g, 0,64 mmol) a uhličitan sodný (2,30 g, 21,75 mmol) se smíchají s ethylenglykoldimethyletherem (100 ml) a vodou (50 ml). Reakční směs se zahřívá pod refluxem přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografii ve směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fázi, čímž se získá trans-terc-buty\-N-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)karbamát (4,75 g, 98%).
‘H NMR (DMSO-dó) δ 1,48 (m, 11H), 2,02 (m, 6H), 2,15 (s, 3H), 2,35 (m, 5H), 2,53 (m, 4H), 3,87 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,20 (m, 2H), 7,90 (d, J=8,15,1H), 8,03 (s, 1H), 8,22 (s, 1H).
b) trans-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-cř]pyrimidin-4-amin
Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 150 ml) se přidá do roztoku N-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidin-3 -yl} 2-methoxyfenyl)karbamátu (4,75 g, 8,85 mmol) v dichlormethanu (100 ml) při teplotě 0°C. Po 2 hodinách se ledová lázeň odstraní a rozpouštědla se odpařují a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. K upravení pH na 10 se přidá hydroxid sodný (l,0N). Pevná látka vzniklá po odstranění organického rozpouštědla se spojí filtrací, čímž se získá PwM-3-(4-amino-3methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4amin (3,85 g, 100%).
’H NMR (DMSO-dg) δ 1,44 (m, 2H), 1,96 (m, 6H), 2,21 (s, 3H), 2,33 (m, 5H), 2,53 (m, 4H), 3,83 (s, 3H), 4,60 (m, IH), 5,03 (bs, 2H), 6,76 (d, >7,91 Hz, 1H), 6,98 (d, 3=7,89 Hz, 1H), 7,03 (m, 2H), 8,19 (s, IH).
c) /ra«,s--;V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4J]pyrimÍdin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 //-2-indolkarboxamid
0» · · ®
242
Do l//-2-indolkarboxylové kyseliny (0,738 g, 4,58 mmol) v dichlormethanu (14 ml) se přidá oxalylchlorid (4 ml, 45,8 mmol) a DMF (1 kapka). Reakční směs se míchá přes noc. Rozpouštědlo se odpařuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu (5 ml). Poloviční podíl dichlormethanového roztoku (2,5 ml) se přidá do roztoku trcms-3-(4amino-3 -methoxy fenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-aminu (0,50 g, 1,145 mmol) v pyridinu (6 ml) při teplotě 0°C. Po 30 minutách se pevná látka spojí filtrací, poté se přidá voda a pH roztoku se upraví na 10 hydroxidem sodným (l,0N). Vodná fáze se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fázi, čímž se získá Zrans-N2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-č/|pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-1H-2indolkarboxamid (0,312 g, 47%).
*H NMR (DMSO-d6) δ 1,49 (m, 2H), 2,05 (m, 6H), 2,15 (s, 3H), 2,32 (m, 5H), 2,51 (m, 4H), 3,97 (s, 3H), 4,66 (m, 1H), 7,10 (m, 1H), 7,22 (m, 1H), 7,30 (d, J=7,98 Hz, 1H), 8,11 (d, J=8,14 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H).
d) trimaleátová sůl /ru«ó-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 //-2-indolkarboxamidu,
Trans-N2-(4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiper azino)cyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yi}-2-methoxyfenyl)-l//-2-indolkarboxamid (312 mg, 0,539 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (35 ml) a přidá se maleinová kyselina (187 mg, 1,614 mmol) v horkém ethylacetátu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin, pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá dimaleátová sůl /ra«.s-A2-(4-{4-aminol-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-l//-2-indolkarboxamidu, (473 mg, 95%).
*H NMR (DMSO-d6) δ 1,60 (m, 2H), 2,09 (m, 6H), 2,68 (s, 3H), 2,84 3,19 (bm, 9H), 3,97 (s, 3H), 4,73 (m, 1H), 6,17 (s, 6H), 7,11 (m, 1H), 7,25 (m, 1H), 7,30 (m, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,49 (d, >8,21,1H), 7,68 (d, >8,02 Hz, 1H), 8,13 (d, >8,15 Hz, 1H), 8,26 (s, 1H), 9,44 (s,lH), 11,38 (s, 1H).
LCMS (Finigan-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A ve 4 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,0 ml/minut): MH+=580,4, Rt =2,01 minut.
243
Příklad 207 trimaleátová sůl /rara-V2-(4-{ 4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyI)-l-methyl-lH-2-indolkarboxamidu.
a) trans-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-1 -methyl-1 H-2-indolkarboxamid
Do 1-methyl-ΙΗ-2-indolkarboxy love kyseliny (0,802g, 4,58 mmol) v dichlormethanu (14 ml) se přidá oxalylchlorid (4 ml, 45,8 mmol) a DMF (1 kapka). Reakční směs se míchá přes noc. Rozpouštědlo se odpařuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu (5 ml). Do roztoku /razw-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,50 g, 1,145 mmol) v pyridinu (6 ml) při teplotě 0°C se přidá poloviční podíl roztoku dichlormethanu (2,5 ml). Po 30 minutách se pevná látka se spojí filtrací. Pak se do pevného podílu přidá voda a pH roztok se upraví na 10 hydroxidem sodným (l,0N). Vodný podíl se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fázi, čímž se získá trans-N2-(4{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//~pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2methoxy feny 1)-1 -methyl- ΙΗ-2-indolkarboxamid (0,545 g, 80%).
’H NMR (DMSO-dé) δ 1,49 (m, 2H), 2,02 (m, 6H), 2,17 (s, 3H), 2,36 (m, 5H), 2,55 (m, 4H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,66 (m, IH), 7,15 (m, IH), 7,28-7,35 (m, 4H), 7,58 (d, J=8,42 Hz, IH), 7,70 (d, J=7,96 Hz, IH), 8,11 (d, J=8,14,1 H), 8,24 (s, IH), 9,43 (s, IH).
b) trimaleátová sůl trans-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l-methyl-lH-2-indolkarboxamidu.
Trans-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l-methyl-lH-2-indolkarboxamidu (545 mg, 0,917 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (60 ml) a přidá se maleinová kyselina (320 mg, 2,75 mmol) v horkém ethylacetát (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin, pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá dimaleátová sůl /ra«.s’-V2-(4-{4amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-íZ]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-!-methyl-ΙΗ-2-indolkarboxamidu (473 mg).
244 lH NMR (DMSO-d6) δ 1,60 (m, 2H), 2,06 (m, 6H), 2,68 (s, 3H), 2,83-3,57 (bm, 9H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,72 (m, 1H), 6,18 (s, 6H), 7,16 (m, 1H), 7,28-7,36 (m, 4H), 7,59 (d, J=8,44 Hz, 1H), 7,72 (d, J=7,94 Hz, 1H), 8,13 (d, J=8,15,1H), 8,28 (s.lH), 9,44 (s, 1H). LC/MS (Finigan-Column: Pecosphere, 08, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,0 ml/minut): MH+=594,4, Rt =2,24.
Příklad 208 trimaleátová sůl trans-ΝΪ -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethyl)benzamidu
a) /rans-Arl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</}pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethyl)benzamidu
4-(Trifluormethyl)-l-benzenkarbonylchlorid (262 mg, 1,256 mmol) v dichlormethanu (1 ml) se přidá do roztoku /rara-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (500 mg, 1,145 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě 0°C. Po 30 minutách se ledová lázeň se odstraní. Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1,5 hodiny. Rozpouštědlo se odpařuje a zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fázi, čímž se získá trans-N\-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4(trifluormethyl)benzamid (516 mg, 74%).
‘H NMR (CDCl3-d) δ 1,55 (m, 2H), 1,74 (m, 2H), 2,10-2,27 (m, 6H), 2,30 (s, 3H), 2,51 (m, 4H), 2,66 (m, 3H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,78 (m, 1H), 5,57 (bs, 2H), 7,30 (m, 2H), 7,79 (d, J=8,25 Hz, 2H), 8,04 (d, J=8,05 Hz, 2H), 8,38 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,68 (d, J=8,20 Hz, 1H).
b) trimaleátová sůl řrans-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/pyrazolo[3,4-e/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethyl)benzamidu
Trans-N\ -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4í/|pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethyl)benzamid (510 mg, 0,838 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (55 ml) a přidá se maleinová kyselina (292mg, 2,513 mmol) v horkém ethylacetátu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu
(. c co
í. (·: f β »· O C
C f' © (I
C O O
'.· f CO ( c ť e c- c <> fí fi, o o c c c í> c e (' r c r o e © e © ti o o o o c o © © 0 © o o o t f r
245 hodin, pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá dimaleátová sůl Zra«s-Al-(4-{4-aminol-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-4-(trifluormethyl)benzamidu, (802 mg, 100%).
*H NMR (DMSO-dg) δ 1,60 (m, 2H), 2,06 (m, 6H), 2,68 (s, 3H), 2,83-3,17 (bm, 9H), 3,93 (s, 3H), 4,72 (m, IH), 6,17 (s, 6H), 7,29 (d, J=8,12 Hz.lH), 7,33 (s, IH), 7,92 (d, J=8,34 Hz, 2H), 8,02 (d, J=8,12 Hz, IH), 8,17 (d, J=8,12 Hz, 2H), 8,26 (s, IH), 9,83 (s, IH). LCMS (Finigan-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,0 ml/minut): MH+=609,4, Rt =2,16 minut.
Příklad 209 trimaleáto vá sůl trans-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamidu.
a) trans-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamidu
4-(Trifluormethoxy)-l-benzenkarbonylchlorid (283 mg, 1,256 mmol) v dichlormethanu (1 ml) se přidá do roztoku Zra«í-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-g/]pyrimidin-4-aminu (500 mg, 1,145 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě 0°C. Po 30 minutách se ledová lázeň odstraní, reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1,5 hodiny. Rozpouštědlo se odpařuje a zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fázi, čímž se získá /raw-Al-(4-{4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yI}-2-methoxyfenyl)-4(trifluormethoxy)benzamid (526 mg, 74%).
’H NMR (CDCb) δ 1,57 (m, 2H), 1,74 (m, 2H), 2,10-2,27 (m, 6H), 2,30 (s, 3H), 2,51 (m, 4H), 2,66 (m, 3H), 4,03 (s, 3H), 4,77 (m, 3H), 5,56 (bs, 2H), 7,26-7,37 (m, 4H), 7,99 (m, 2H), 8,38 (s, IH), 8,59 (s, IH), 8,67 (d, J=8,21 Hz, IH).
b) trimaleátová sůl íra«s-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamidu.
Trans-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethoxyjbenzamid (520 mg, 0,832 mmol) ® · «t · · * · • · « β · · · φ e · · · • e e * ® e © · « • · e « © « « © © « · • · © © © © · · · • · · · · · β t« ee «» ····
246 se rozpustí v horkém ethylacetátu (55 ml) a přidá se maleinová kyselina (290 mg, 2,497 mmol) v horkém ethylacetátu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin, pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá dimaleátová sůl /ra«x-/Vl-(4-{4-aminol-[4-(4-methylpiperazino)cykIohexyl]-177-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl} -2methoxyfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamidu (780 mg, 96%).
‘H NMR (DMSO-dó) δ 1,60 (m, 2H), 2,06 (m, 6H), 2,68 (s, 3H), 2,83-3,17 (bm, 9H), 3,93 (s, 3H), 4,72 (m, ÍH), 6,18 (s, 6H), 7,28 (d, >8,14 Hz, ÍH), 7,33 (s, ÍH), 7,54 (d, >8,47 Hz, 2H), 8,01 (d, >8,12 Hz, ÍH), 8,10 (d, >8,69 Hz, 2H), 8,26 (s, ÍH), 9,69 (s, ÍH).
LCMS (Finigan-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,0 ml/minut): MH+=625,4, Rt=2,21 minut.
Příklad 210 /VI-{4- [4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 H-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -3 -feny lpropanamid
a) fórc-butyl-4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylát
Do roztoku tórc-butyl-4-oxo-l-piperidinkarboxylátu (20 g, 100,4 mmol) v methanolu (600 ml) při teplotě 0°C se po částech přidá borohydrid sodný (3,8 g, 100,4 mmol). Po 15 minutách se odstraní ledová lázeň a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Přidá se hydroxid sodný (1,0 N, 100 ml) a organické rozpouštědlo se odpařuje, vodný podíl se extrahuje etherem (4x). Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje, čímž se získá Zerc-butyl-4hydroxy-1-piperidinkarboxylát (20,48 g, 100%).
’H NMR (CDCl3-d) δ 1,48 (s, 9H), 1,63 (m, 2H), 1,87 (m, 2H), 3,03 (m, 2H), 3,83 (m, 3H).
b) íerc-butyl-4-(4-amino-3-jod-lH-pyrazolo[3,4-Jjpyrimidin-l-yl)-lpiperidinkarboxylát
3-Jod-lZ/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (10 g, 38,3 mmol), /erc-butyl-4hydroxy-1-piperidinkarboxylát (16,96 g, 84,2 mmol) a trifenylfosfin (20,09 g, 76,0 mmol) se suspenduje v tetrahydrofuranu (425 ml). Reakční směs se ochladí v ledové lázni a se po kapkách přidá diethylazodikarboxylát (12,09 ml, 76,0 mmol). Po 10 minutách se reakční e ft o ft r p O P * p r- t> c· ft p c e o
r. < ·' o © c- r o < ; e <? c o c ft B c ft· ( p rc t'.- é c e ρ f . <· ( o c e ť! c t f.· <s
247 směs nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 5 hodinách se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku a při zahřívání se přidá dichlormethan (65 ml), pevná látka se filtruje a promyje dichlormethanem (20 ml). Pevná látka se dále promyje ethylacetátem (5x20 ml), čímž se získá směs diethyl-l,2-hydrazindikarboxylát a /erc-butyl-4-(4-amino-3-jod-l//pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylát (1:1, 14,98 g, 63%), které se používají bez dalšího čištění.
‘H NMR (CDCb) δ 1,48 (s, 9H), 1,95 (m, 2H), 2,20 (m, 2H), 2,92 (m, 2H), 4,23 (m, 2H), 4,84 (m, 1H), 8,31 (s, 1H).
c) 3-jod-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin
Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80,250 ml) se přidá do roztoku te rc-butyl-4-(4-amino-3-jod-1 //-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylátu (10,72 g, 24,1 mmol) v dichlormethanu (100 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Rozpouštědla se odpařují a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. Přidá se kyselina chlorovodíková (5,ON) a vodná vrstva se promyje dichlormethanem (3x). K upravení pH na asi 10 se přidá hydroxid sodný (50%) 10, suspenze se lyofilizuje , čímž dojde ke snížení objemu na jednu třetinu, pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá 3-jod-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-amin (8,109 g, 97%).
’H NMR (CDCb) δ 1,81 (m, 2H), 1,99 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 3,07 (m, 2H), 4,68 (m, 1H), 8,19 (s, 1H).
d) 3 -jod-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)]-piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin4-amin
3-Jod-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (2,00 g, 5,81 mmol), 1methyl-4-piperidon (2,14 ml, 17,42 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (2,45 g, 11,62 mmol) a ledová kyselina octová (1,05 g, 17,42 mmol) se smíchají s 1,2-dichlorethanem (75 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 6 hodin a k upravení pH na asi 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného, pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá 3 -j od-1 -[l-( 1 -methylpiperidin-4-yl)]-piperidin-4-yl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4amin (2,39 g, 93%). ’H NMR (DMSO-dó) δ 1,52 (m, 2H), 1,75 (m, 2H), 1,87 (m, 2H), 2,05 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,28 (m, 3H), 2,91 (m, 2H), 3,00 (m, 2H), 4,55 (m, 1H), 8,18 (s, 1H).
•« · · ·· ·· · · • ···· ·· · • β · ♦ · · · · · · • · · · · · · · • * · *· ·· ·· ····
248
e) /erc-buty 1-jV- {4- [4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-y l)-piperidin-4-y 1]-1Hpyrazolo[3.4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}karbamát
3-Jod-l -[1 -(1 -methy lpiperidin-4-yl)]-piperidin-4-yl]-17/-pyrazolo[3,4-7|pyrimidin4-amin (2,39 g, 5,41 mmol), fórc-butyl-jV-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (2,08 g, 5,96 mmol), tetrakistrifenyfosfinpalladium (0,375 g, 0,32 mmol) a uhličitan sodný (1,38 g, 13,00 mmol) se smíchají s ethylenglykoldimethyletherem (80 ml) a vodou (40 ml). Reakční směs se zahřívá pod refluxem přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu, methanolu a hydroxidu amonného (95:5:0,5) jako mobilní fázi, čímž se získá /erc-butyl-A-{4-[4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}karbamát (1,67 g, 57%).
’H NMR (DMSO-dé) δ 1,48 (m, 11H), 1,71 (m, 2H) 1,86 (m, 4H), 2,14 (s, 3H), 2,18 (m, 3H), 2,32 (m, 2H), 2,80 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,22 (m, 2H), 7,91 (d, J=8,12,1H), 8,03 (s, 1H), 8,21 (s, 1H).
í) ÍV1 - {4-[4-amino-l-[l-( 1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1//-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-3-fenylpropanamid
3-Fenylpropanoylchlorid (77 mg, 0,458 mmol) se přidá do roztoku 3-(4-amino-3methoxy feny 1)-1-[ 1-(1-methylpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl] -1//-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-aminu (100 mg, 0,229 mmol) v pyridinu (1,2 ml). Po 5 hodinách se rozpouštědlo odpařuje a zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií, čímž se získá NI - {4- [4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-3-fenylpropanamid (24 mg, 18%).
*H NMR (CDCl3-d) δ 1,70 (m, 2H), 1,85 (m, 2H), 2,04 (m, 4H), 2,30 (s, 3H), 2,41 (m, 5H), 2,75 (m, 2H), 2,97 (m, 2H), 3,08 (m, 4H), 3,90 (s, 3H), 4,75 (m, 1H), 5,71 (bs, 2H), 7,24 (m, 8H), 7,76 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,52 (d, J=8,12,1H).
LCMS (Finigan-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,0 ml/minut): MH+=569,5, Rt= 1,65 minut.
t f e c z © r, f?
c α β r ft n c ft ft ft ft ft o <' c ft c r c c © ft ft C (i ft ft ft;
r f c >·» ft r < ft ft β e o e e e © a o o © í> c ft ft «» ft fí c c
249
Příklad 211
NÍ - {4-[4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-yl)piperidin-4-yl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin3 -yl]-2-methoxy feny 1} -4-(trifluormethoxy)benzamid
4-(Trifluormethoxy)-l-benzenkarbonylchlorid (103 mg, 0,458 mmol) se přidá do roztoku 3 -(4-amino-3 -methoxy fenyl)-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl] -1Hpyrazolo[3,4-tí(]pyrimidin-4-aminu (100 mg, 0,229 mmol) v pyridinu (1,0 ml). Po 5 hodinách se rozpouštědlo odpařuje a zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií, čímž se získá Vl-{4-[4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-yl)piperidin-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4J]pyrimidm-3-yl]-2-methoxyfenyl}-4-(triíluormethoxy)benzamid (40 mg, 28%).
*H NMR (CDCfi-d) δ 1,67 (m, 2H), 1,84 (m, 2H), 1,97 (m, 2H), 2,06 (m, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,45 (m, 5H), 2,94 (m, 2H), 3,10 (m, 2H), 4,03 (s, 3H), 4,77 (m, 1H), 5,53 (bs, 2H), 7,34 (m, 4H), 7,98 (d, >8,73 Hz, 2H), 8,38 (s, 1H), 8, 59 (s, 1H), 8,66 (d, >8,73 Hz, 1H). LCMS (Finigan-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,0 ml/minut): MH+=625,5, Rt =2,00 minut.
Příklad 212 trimaleátová sůl Ni - {4-[4-amino-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3 yl] -2-methoxy fenyl} -4-(trifluormethyl)benzamidu
a) Al -14-[4-amino-l-( 1 -methyl-4-piperidyl)- l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxy feny 1} -4-(trifluormethyl)benzamid
4-(Trifluormethyl)-l-benzenkarbonylchlorid (48 mg, 0,231 mmol) se přidá do roztoku 3 -(4-amino-3 -methoxy fenyl)-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl] -1Hpyrazolo[3,4-t/]pyrimidm-4-ammu (101 mg, 0,231 mmol) v pyridinu (1,0 ml). Po 5 hodinách se rozpouštědlo odpařuje a zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií, čímž se získá Al-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidm-3yl]-2-methoxyfenyl}-4-(trifluormethyl)benzamid (83mg, 59%).
'H NMR (CDCb-d) δ 1,68 (m, 2H), 1,82 (m, 4H), 2,01 (m, 4H), 2,29 (s, 3H), 2,44 (m, 3H), 2,93 (m, 2H), 3,30 (m, 2H), 4,03 (s, 3H), 4,77 (m, 1H), 5,60 s, 2H), 7,33 (m, 2H), 1,79 d, >8,19 Hz, 2H), 8,04 (d, >8,04 Hz, 2H), 8,37 (s, 1H), 8,66 (m, 2H).
β · © © · » « · >
β· e © · e © * © υ © * © 6 o © e o © © ® © © © © *;
e © · © ί φ β © » β e e » € © e e © β © ©
250
LCMS (Micromass-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut): MH+=609,4, Rt= 2,50 minut.
b) trimaleátová sůl Al-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-4-(trifluormethyl)benzamidu
Al - (4-[4-amino-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)- 1 A-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidm-3-yl]-2methoxyfenyl}-4-(trifluormethyl)benzamid (78 mg, 0,128 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (10 ml) a přidá se kyselina maleinová (45 mg, 0,387 mmol) v horkém ethylacetátu (1 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin, rozpouštědlo se odstraní, přidá se ethylacetát a pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá trimaleátová sůl Al - {4-[4-amino-l-( 1 -methyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ďJpyrimidin-3 yl]-2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethyl)benzamidu (115 mg, 94%).
Ή NMR (DMSO-de) δ 1,87 (m, 2H), 2,24 (m, 4H), 2,79 (s, 3H), 3,01-3,57 (bm, 11H), 3,93 (s, 3H), 5,09 (m, 1H), 6,12 (s, 6H), 7,32 (m, 2H), 7,93 (d, J=8,37 Hz, 2H), 8,04 (d, J=8,l 1 Hz, 1H), 8,16 (d, J=8,18 Hz, 2H), 8,29 (s, 1H), 9,84 (s, 1H).
LCMS (Micromass sloupec: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut): MH+=609,4, Rt =2,50 minut.
Příklad 213
-[ 1 -(1 A-2-imidazolylmethyl)tetrahydro-1H-3 -pyrrolyl]-3 -(4-fenoxyfenyl)-1Hpyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-4-amin.
a) /erc-butyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-lpyrrolidinkarboxylát
3-(4-Fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-amin (0,5 g, 1,648 mmol), ferc-butyl-3-{[(4-methylfenyl)sulfonyl]oxy}-l-pyrrolidinkarboxylát (1,12 g, 3,30 mmol) a uhličitan česný (1,07 g, 3,30 mmol) v Α,Α-dimethylformamidu (12 ml) se zahřívají při teplotě 75°C přes noc. Reakční směs se nalije do ledové vody (100 ml). Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií <·. r r e n fc c e » e f ( c <' í.· C fi fi c ť t c ( υ r.· c r c ť r e < i- <·.· r c .· c r. e t- r r , o <· c. c <- c r ι i f < < < (. i- r 4' f t fi r n r o
251 ve směsi ethylacetátu jako mobilní fázi, čímž se získá terc-butyl-3-[4-amino-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-pyrrolidinkarboxylát (0,20 g, 28%).
’H NMR (DMSO-dg) δ 1,38 (m, 9H), 2,37 (m 2H), 3,32 (s, 3H), 3,44 (m, 1H), 3,59 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 5,44 (m, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,43 (m, 2H), 7,65 (m, 2H), 8,26 (s, 1H).
b) 3 -(4-fenoxy fenyl)-1 -tetrahydro-1H-3 -pyrrolyl-1 //-pyrazolo [3,4-</jpyrimidm-4-amin Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 8 ml) se přidá do roztoku terc-butyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-l-yl]-lpyrrolidinkarboxylátu (240 mg, 0,508 mmol) v dichlormethanu (1 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minut se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Rozpouštědla se pak odpařují a zbytek se rozpustí v ethylacetátu. Přidá se nasycený hydrogenuhličitan sodný k upravení pH na asi 8. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje, čímž se získá 3-(4-fenoxyfenyl)-1 -tetrahydro-1 H-3-pyrrolyll//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,157 mg, 91%).
’H NMR (DMSO-d6) δ 1,99-2,21 (m, 2H), 2,94 (m, 1H), 3,04-3,23 (m, 3H), 5,31 (m, 1H), 7,14 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (m, 2H), 8,24 (s, 1H).
c) 1 -[1 -(1//-2-imidazolylmethyl)tetrahydro-l//-3-pyrrolyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo [3,4-í/|pyrimidin-4-amin
-(4-Fenoxy feny 1)-1 -tetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl-1 //-pyrazolo [3,4-e/]pyrimidin-4amin (100 mg, 5,81 mmol), l//-2-imidazolkarbaldehyd (77 mg, 0,806 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (113 mg, 0,537 mmol) a ledová kyselina octová (48 mg, 0,806 mmol) se smíchají s 1,2-dichlorethanem (4 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 6 hodin a přidá se nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného k upravení pH na asi 9. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší MgSC>4, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu a methanolu (90:10) jako mobilní fázi, čímž se získá l-[l-(l//-2-imidazolylmethyl)tetrahydro-l//-3-pyrrolyl]-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-4-amin (100 mg, 83%).
'H NMR (DMSO-de) δ 2,33 (m, 2H), 2,81 (m, 4H), 3,15 (m, 1H), 3,69 (s, 2H), 5,38 (m, 1H), 6,90 (s, 2H), 7,15 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,66 (m, 2H), 8,24 (s, 1H).
»♦ ·· ·· · · • · ·« · · * 9 · · · ··· · · « · · · » · * «· ·· «· ····
252
LCMS (Micromass-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut): MH+ 453,4, Rt =2, 17 minut.
Příklad 214 trimaleátová sůl 1 -[1 -(1 -methyl-4-piperidyl)tetrahydro- l//-3-pyrrolyl]-3-(4-fenoxyfenyl)1 //-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidin-4-aminu
a) 1 -[!-(1 -methyl-4-piperidyl)tetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu
-(4-F enoxy feny 1)-1 -tetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl-1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4amin (150 mg, 0,403 mmol), 1-methy 1-4-piperidon (0,099 ml, 0,806 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (113 mg, 0,537 mmol) a ledová kyselina octová (48 mg, 0,806 mmol) se smíchá s 1,2-dichlorethanem (4 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 6 hodin a k upravení pH na asi 9 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu a methanolu (85:15) jako mobilní fázi, čímž se získá l-[l-(l-methyl-4-piperidyl)tetrahydro-l//-3-pyrrolyl]-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (148 mg, 78%).
’H NMR (DMSO-d6) δ 1,42 (m, 2H), 1,81 (m, 2H), 1,92 (m, 2H), 2,15 (m, ÍH), 2,26 (m, 2,3H), 2,28 (m, 2H), 2,75 (m, 4H), 2,86 (m, ÍH), 3,22 (m, ÍH), 5,36 (m, ÍH), 7,16 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (m, 2H), 8,24 (s, ÍH).
LCMS (Micromass-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut): MH+= 470,4, Rt =2,01.
b) trimaleátová sůl l-[l-(l-methyl-4-piperidyl)tetrahydro-l//-3-pyrrolyl]-3-(4fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu
1-(1-(1 -Methyl-4-piperidyl)tetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-g/]pyrimidin-4-amin (148 mg, 0,315 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (20 ml) a přidá se maleinová kyselina (110 mg, 0,946 mmol) v horkém ethylacetátu (1 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Pevná látka se spojí filtrací,
c. r « * «· i· c «· e « β © p. e e ··- e c t. o ti o e i t·· r r ( f r t· β © ti r r c f o o o © e < C ί'· I «·' «· < ( C C fi e C ft {'<;<?
253 čímž se získá trimaleátová sůl l-[l-(l-methyl-4-piperidyl)tetrahydro-l//-3-pyrrolyl]-3-(4fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-úQpyrimidin-4-aminu (230 mg, 90%).
lH NMR (DMSO-de) δ 1,81 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,78 (s, 3H), 2,97-3,84 (bm, 11H), 5,63 (m, 1H), 6,12 (s, 6H), 7,17 (m, 5H), 7,45 (m, 2H), 7,68 (m, 2H), 8,29 (s, 1H).
LCMS (Micromass-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut): MH+= 470,4, Rt=2,01.
Příklad 215
VI -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 //-2-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]- l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-3-fenylpropanamid
a) 1 -[ 1 -(1 //-2-imidazolylmethyl)-4-piperidyl] -3 -j od-1 //-pyrazolo [3,4-</Jpyrimidin-4amin
3-Jod-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,5 g, 1,45 mmol), l//-2-imidazolkarbaldehyd (0,42 g, 4,34 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (0,61 g, 2,90 mmol) a ledová kyselina octová (0,26 g, 4,36 mmol) se smíchají s 1,2-dichlorethanem (20 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 6 hodin a přidá se nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného k upravení pH na asi 9. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje, čímž se získá l-[l-(l//-2-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-3-jod-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,57 g, 92%).
’H NMR (DMSO-dé) δ 1,85 (m, 2H), 2,17 (m, 4H), 2,92 (m, 2H), 3,55 (s, 2H), 4,57 (m, 1H), 6,92 (s, 2H), 8,14 (s, 1H).
b) tcrc-butyl-V-(4- {4-amino-1 -[1 -(1 //-2-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)karbamát
-[1 -(1 //-2-Imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-3-jod-1 /7-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin-4amin (127 mg, 0,299 mmol), férc-butyl-V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (115 mg, 0,329 mmol), tetrakistrifenyfosfínpalladium (21 mg, 0,018 mmol) a uhličitan sodný (76 mg, 0,718 mmol) se smíchají s ethylenglykoldimethyletherem (3 ml) a vodou (1,5 ml). Reakční směs se zahřívá pod « β f.
C {1 € 0 Γ; Γ» C β » · c 6 e o o r> » » « © n e ® v o r e © β © <.· o e e e e c e * © c o e e r o © © e © e © e © e> « o e e c © e β e β
254 refluxem přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje díchlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu a methanolu (95:5) jako mobilní fázi, čímž se získá terc-butyl-TV-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 77-2-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-1Hpyrazolo[3,4-í/jpyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)karbamát (64 mg, 41%).
’H NMR (DMSO-d6) δ 1,48 (m, 9H), 1,87 (m, 2H), 2,23 (m, 4H), 2,94 (m, 2H), 3,56 (s, 2H), 3,88 (s, 3H), 4,66 (m, 1H), 6,92 (s, 2H), 7,21 (m, 2H), 7,90 (d, J=8,14,1H), 8,04 (s, 1H), 8,22 (s, 1H).
c) 3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1-(1-(1 77-2-imidazoly lmethyl)-4-piperidyl] -177pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-amin
Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 2 ml) se přidá do roztoku Zerc-buty 1-tV-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(177-2-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-177-pyrazolo[3,4d) pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)karbamátu (55 mg, 0,106 mmol) v dichlormethanu (0,5 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Rozpouštědla se pak odpařují a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. K upravení pH na asi 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje díchlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje, čímž se získá 3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 -[1 -(177-2-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-177pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (30 mg, 68%).
‘H NMR (CDCl3-d) δ 2,20 (m, 2H), 2,44 (m, 2H), 3,04 (m, 2H), 3,75 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 4,01 (s, 2H), 4,80 (m, 1H), 5,58 (bs, 2H), 6,82 (m, 1H), 7,01 (m, 4H), 8,34 (s, 1H).
e) ZVI -(4- {4-amino-1 -[1 -(177-2-imidazolylmethyl)-4-piperidylj-177-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3 -y 1} -2 -methoxy fenyl)-3 -fenylpropanamid
3-Fenylpropanoylchlorid (0,01 1 ml, 0,0715 mmol) se přidá do roztoku 3-(4-amino3 -methoxyfenyl)-1-(1-(177-2-imidazoly lmethy l)-4-piperidy 1]-177-pyrazolo [3,4ď]pyrimidin-4-aminu (30 mg, 0,0715 mmol) v pyridinu (1,2 ml) při teplotě 0°C. Po 2 hodinách se rozpouštědlo odpařuje a zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií, čímž se získá Vl-(4-{4-amino-l-[l-(177-2-imidazolylmethyl)-4-píperidyl]-177pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3-fenylpropanamid (20 mg, 51%).
C·.· e !·: o e ή ( l, r e
255
Ή NMR (CDC13) δ 2,27 (m, 2H), 2,61 (m, 2H), 2,76 (m, 4H), 3,09 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 4,07 (s, 2H), 4,96 (m, 1H), 5,61 (bs, 2H), 7,06-7,33 (m, 10 H), 7,78 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,55 (d, J=8,15Hz, 1H).
LCMS (Finigan-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,0 ml/minut): MH+=552,5, Rt = 1,83 minut.
Příklady 216-221
Amidy odvozené od czs-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-7H-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-4-aminu
Reprezentativní způsoby přípravy:
Do vhodné karboxylové kyseliny (0,46 mmol) v dichlormethanu (1,4 ml) se přidá oxalylchiorid (0,4 ml, 4,6 mmol) a DMF (1 kapka). Baňky se uzavřou šeptem a do každé baňky se vsune jehla k odstranění tlaku. Pak se baňky nechají třepat na J-Kem třepačce. Oddělí se 50% roztok a přebytek oxalylchloridu a dichlormethanu se odstraní na Supelco manifold s 12 porty za vakua a spromýváním dusíkem. Surový chlorid kyseliny (0,23 mmol) se přidá do czs,-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]17/-pyra-zolo[3,4-z/]pyrimidin-4-aminu (50 mg, 0,11 mmol) v suchém pyridinu (0,6 ml) a směs míchá při pokojové teplotě. Výsledné roztoky se přímo čistí preparativní HPLC (Hypersil BSD Cl8, 5 pm, 100 x 21mm, 0%-100% acetonitril/0,05M octan amonný v průběhu 10 minut, 25,0 ml/min). Výsledné produkty se dále čistí rozdělením mezi dichlormethan (4 ml) a l,0N hydroxid sodný (2 ml) a pasírováním přes vysoce výkonný extrakční diskový cartridge Empore™ (C18-SD oktadecyl), čímž se získají odpovídající produkty. Sloučeniny jsou uvedeny na druhé další straně s odpovídajícími hodnotami LCMS (Micromass-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut).
o « * e n fe « « c · » o e « c e e
Γ C © f e e c c « trn ť c t·. e
C <;
¢1 r-
Sloučenina R Př. Qty. (mg) MH+ R, (min)
N1 -(4- {4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3y 1} -2-methoxyfenyl)-3-(2methoxy fenyl)propanamid Uo 216 29 599,4 2,72
NI -(4- {4-amino-1 -(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin3-yl} -2-methoxyfenyl)-3-(4methoxyfenyl)propanamid / ° yy o \ 217 31 599,4 2,58
NI -(4- {4-amino-1 -(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin3-y 1} -2-methoxyfenyl)-3-(3methoxyfenyl)propanamid 218 30 599,4 2,61
N1 -(4- {4-amino-1 -(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin3 -y 1} -2-methoxyf enyl)-3-(4methylfenyQpropanamid 219 33 583,4 2,70
NI -(4- {4-amino-l -(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin3 -y 1} -2-methoxyfenyl)-3-(4fluorofenyQpropanamid 220 27 587,3 2,72
N1 -(4- {4-amino-1 -(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin3 -yl} -2-methoxyf enyl)-3(3,4- difluorof enyl)propanamid 'Sx 221 34 605,3 2,80
β· e «<
< f! e- f r- «* o <í o t· r r o r c. c- fc & n β í? ( ο i. i c <· e © r c e * t < < i· c « p v e n e r
257
Příklad 221 cz,s’-3-[4-(benzyloxy)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/Jpyrimidin-4-amin
Směs cis-3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-z/] pyr i midin-4-aminu (3,41 g, 7,74 mmol) v ethylenglykoldimethyletheru (50 ml) se nechá reagovat s 4-(benzyloxy)fenylboritou kyselinou (1,94 g, 8,51 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,537 g, 0,464 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (1,97 g, 18,58 mmol) ve vodě (25 ml). Reakční směs se míchá přes noc při teplotě 85°C pod atmosférou dusíku. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do vodné vrstvy se přidá ethylacetát (300 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (200 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou (1 1 každý), suší síranem sodným, filtrují a odpařují za sníženého tlaku. Do pevného podílu se přidá ethylacetát. Je možné, že výraznamné množství pevné látky není v ethylacetátu rozpustné. Směs se dále filtruje, čímž se získá 2,95 g (77%) cw-3-[4-(benzyloxy)fenyl]-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu.
Ή NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,217 (s, IH), 7,592-7,570 (m, 2H), 7,504-7,483 (m, 2H), 7,440-7,369 (m, 3H), 7,206-7,184 (m, 2H), 5,186 (s, 2H), 4,802-4,755 (m, IH), 2,497-2,354 (m, 7H), 2,256-2,228 (m, 4H), 2,151 (s, 3H), 2,076-1,989 (m, 2H), 1,6941,673 (m, 2H), 1,607-1,545 (m, 2H);
HPLC Waters 2690 Albánce HPLC (Symmetry Shield RPjg, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 5,128 min (100%).
Příklad 222 cŤ$,-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidin-3yl}fenoxy)-6-[(3-methoxypropyl)amino]benzonitril cis-4- {4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl} fenol
Roztok cz.y-3-[4-(benzyloxy)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimÍdin-4-aminu (0,500 g, 1,005 mmol) v absolutním ethanolu (25 ml) se nechá reagovat s 10% palladiem na aktivním uhlí (0,100 g, 0,201 mmol) a mravenčanem amonným (0,317 g, 5,03 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 2 hodin o ?· e·
Λ fe · · © « ©
258 (při TLC není pozorována výchozí látka). Reakční směs se filtruje přes vrstvu celitu, který se promyje ethanolem (500 ml). Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku. Výsledná pevná látka se suší přes noc za vysokého vakua, čímž se získá 0,406 g (99%) cz's-4-{4amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</|pyrimidin-3 -yl} fenolu.
*H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,204-8,194 (m, 2H), 7,472-7,437 (m, 2H), 6,947-6,912 (m, 2H), 4,791-4,744 (m, 1H), 2,418 (m, 9H), 2,249-2,243 (m, 2H), 2,193 (s, 3H), 2,0772,050 (m, 2H), 1,688-1,666 (m, 2H), 1,656-1,578 (m, 2H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPig, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 3,47 min (99%).
2-fluor-6-[(2-methoxyethyl)amino]benzonitril
Roztok 2,6-difluorbenzonitrilu (3,5 g, 25,16 mmol) v dimethylformamidu (50 ml) se nechá reagovat s 3-methoxypropylaminem (2,24 g, 25,16 mmol) a uhličitanem draselným (6,94 g, 50,32 mmol). Reakční směs se míchá přes noc pod atmosférou dusíku. Do reakčního roztoku se přidá voda (100 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (1,2 1). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (1,5 1), suší síranem sodným, filtrují a odpařují za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi heptanu a ethylacetátu (7:1) jako mobilní fázi, čímž se získá 3,5 g (68%) 2-fluor-6-[(2-methoxyethyl)amino]benzonitrilu.
‘H NMR (DMSO-d6,400 MHz) 6 7,48-7, 39 (m, 1H), 6,64-6,48 (m, 2H), 3,45-3,31 (m, 2H), 3,30-3,20 (m, 5H), 1,85-1,75 (m, 2H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP18, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 6,57 min (97%).
cis-2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 yl}fenoxy)-6-[(3-methoxypropyl)amino]benzonitril
Roztok cis-4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}fenolu (0,200 g, 0,491 mmol) v dimethylformamidu (25 ml) se nechá reagovat s 2-fluor-6-[(2-methoxyethyl)amino]benzonitrilem (0,124 g, 0,589 mmol) a uhličitanem draselným (0,136, 0,982 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 120°C přes noc pod atmosférou dusíku. Pokud reakce po 18 hodinách nedoběhne dokonce, přidá se do reakční směsi další podíl 2-fluor-6-[(2-methoxyethyl)amino]benzonitrilu (0,12 g, 0,574 mmol) a v míchání se pokračuje přes noc. Do reakční směsi se přidá ethylacetát a směs se f·· (ί ο e β fr r? r· fr e r- o © <- c c < o e C· v·. (· c f f C ť fr 9 fr fi fr· f·' C fr c
C íi
r. ttO r. c fí <: c f;
259 promyje IN roztokem hydroxidu sodného (300 ml). Organická vrstva se promyje vodou a solankou (300 ml každý), suší síranem sodným, filtruje a odpařuje za sníženého tlaku. Produkt se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci Supelco ve směsi 20% methanolu v dichlormethanu jako mobilní fázi. Ze sloupce se získá 0,050 g produktu, který je kontaminovaný výchozí látkou. Surový produkt se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 100 x 21 mm sloupec, 5 pm, 15-100% gradient acetonitrilu v průběhu 8 minut, celkový čas10 minut, pufr - 50 mM octanu amonného, 25 ml/min). Produkt po HPLC se kvůli odstranění zbylého octanu amonného rozpustí v dichlormethanu a promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se rozdělí na extrakčním diskovém cartridge Empore, čímž se získá 0,010 g (3%) cis-2-(4- {4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4 -<7]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)-6- [(3 methoxypropyl)amino]benzonitrilu.
’H NMR (CDCb,400 MHz) δ 8,328 (s, ÍH), 7,706-7,678 (m, 2H), 7,305-7,211 (m, 4H), 6,433-6,411 (d, ÍH, J= 8,8 Hz), 4,925-4,904 (m, ÍH), 3,574-3,547 (m, 2H), 3,400 (s, 3H), 3,389-3,343 (m, 2H), 2,441-2,418 (m, 3H), 2,382 (s, 3H), 2,25-2,10 (m, 2H), 2,031 (s, 3H), 1,973-1,944 (m, 2H), 1,851-1,829 (m, 2H), 1,700-1,679 (m, 3H), 1,355-1,200 (m, 5H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis, 3,5 pm, 2,1 x 50mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 5,185 min (100%).
Příklad 223 tris-maleát cis-2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4J|pyrimidin-3-yl}fenoxy)-6-[(4-methylfenyl)sulfanyl]benzonitrilu
2-fluor-6-[(4-methylfenyl)sulfanyl]benzonitril
Roztok 2,6-difluorbenzonitrilu (5,18 g, 37,26 mmol) v dimethylformamidu (100 ml) se nechá reagovat s p-thiokresolem (4,628 g, 37,26 mmol) a uhličitanem draselným (10,28 g, 74,52 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 24 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá voda (150 ml) a ethylacetát (250 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (500 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (1 1), suší síranem sodným, filtrují a odpařují za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi heptanu a ethylacetátu (7:1). Ze sloupce se získá 3,341 g (37%) 2-fluor-6-[(4-methylfenyl)sulfanyl]benzonitrilu.
β «
260 ‘Η NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 7,66-7,61 (m, 1H), 7,47-7,45 (m, 2H), 7,36-7,32 (m, 3H), 6,83-6,79 (m, 1H), 2,36 (s, 3H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 8,04 min (93%).
tris-maleát cis-2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4ď]pyrimidin-3-yl}fenoxy)-6-[(4-methylfenyl)sulfanyl]benzonitrilu
Roztok cA-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}fenol (0,300 g, 0,736 mmol) v dimethylformamidu (20 ml) se nechá reagovat s 2-fluor-6-[(4-methylfenyl)sulfanyl]benzonitrilem (0,447g, 1,84 mmol) a uhličitanem draselným (0,203,1,47 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 120°C přes noc pod atmosférou dusíku. Do tohoto reakčního roztoku se přidá ethylacetát (150 ml) a IN roztok hydroxidu sodného. Vrstvy se rozdělí a organická vrstva se promyje IN roztokem hydroxidu sodného (300 ml). Organická vrstva se promyje vodou a solankou (400 ml pokaždé), suší síranem sodným, filtruje a odpařuje za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 10 % methanolu v dichlormethanu jako mobilní fázi. Světle hnědá pevná látka se trituruje ethylacetátem a filtruje, čímž se získá 0,050 g (11%) cis-2-(4- {4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl{ fenoxy)-6-[(4methylfenyl)sulfanyl]benzonitrilu. Horký roztok cis-2-(4- {4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidm-3-yl} fenoxy)-6- [(4methylfenyl)sulfanyl]benzonitrilu (0,050 g, 0,079 mmol) ve směsi ethylacetátu a methanolu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,028 g, 0,240 mmol) v ethylacetátu. Takto vzniklý precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku, čímž se získá 0,028 g tris-maleátu cA-2-(4-{4-amino-1-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1//pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}fenoxy)-6-[(4-methylfenyl)sulfanyl]benzonitrilu.
’H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 8,251 (s, 1H), 7,72-7,70 (d, 2H, J= 8 Hz), 7,55-7,48 (m, 3H), 7,37-7, 33 (m, 4H), 6,96-6,93 (d, 1H, J= 12 Hz), 6,74-6,72 (d, 1 H, J= 8 Hz), 6,18 (s, 6H), 4,85 (m, 1H), 3,15-2,90 (m, 4H), 2,85-2,75 (m, 3H), 2,38 (s, 3H), 2,051,99 (m, 2H), 1,90-1,60 (m, 5H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 6,359 min (100%).
261
Příklad 224 bis-maleát cis-2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/Jpyrimidin-3-yl}fenoxy)-6-(2-pyridylsulfanyI)benzonitrilu bis-maleát cw-2-(4- {4-amino- l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l 7/-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} fenoxy )-6-(2-pyridylsulfanyl)benzonitrilu
Roztok cz'á’-4-14-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenolu (0,300 g, 0,736 mmol) v dimethylformamidu (20 ml) se nechá reagovat s 2-fluor-6-(2-pyridylsulfanyl)benzonitrilem (0,424 g, 1,84 mmol) a uhličitanem draselným (0,203, 1,47 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 120°C po dobu 2 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá ethylacetát (125 ml) a IN roztok hydroxidu sodného (50 ml). Vrstvy se rozdělí a organická vrstva se promyje IN roztokem hydroxidu sodného (300 ml). Organická vrstva se promyje vodou a solankou (250 ml pokaždé), suší síranem sodným, filtruje a odpařuje za sníženého tlaku. Pevná látka se trituruje ethylacetátem, čímž se získá 0,310 g (68%) czT-2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}fenoxy)-6-(2pyridylsulfanyl)benzonitril. Horký roztok cw-2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenoxy)-6-(2pyridylsulfanyl)benzonitrilu (0,310 g, 0,502 mmol) v ethanolu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,175 g, 1,503 mmol) v ethanolu. Vzniklý precipitát po ochlazení se filtruje pod atmosférou dusíku, čímž se získá 0,356 g bis-maleátu cw-2-(4-{4amino-1 [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)6-(2-pyridylsulfanyl)benzonitrilu.
’H NMR (DMSO-db, 400 MHz) δ 8,47-8,46 (d, 1H, J= 4 Hz), 8,26 (s, 1H), 7,79-7,72 (m, 4H), 7,53-7,51 (d, 1H, J= 8 Hz), 7,38-7,34 (m, 3H), 7,28-7,24 (m, 2H), 6,14 (s, 4H), 4,85 (m, 1H), 3,60-3,10 (m, 7H), 3,1-2,85 (m, 2H), 2,71-2,67 (m, 2H), 2,32-2,27 (m, 3H), 2,051,99 (m, 2H), 1,78-1,71 (m, 4H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP18, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitrilO,lM octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 5,196 min (98%).
Příklad 225 /ra«s-3-[4-(benzyloxy)fenyl]-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin
e e
262 <- «5 © Cβ fc ® ί ff
O © β ©
P · © n e « © β e c © · « e ·
Směs /rattó'-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (1,50 g, 3,4 mmol) v ethylenglykoldimethyletheru (100 ml) se nechá reagovat s 4-(benzyloxy)fenylboritou kyselinou (0,853 g, 3,74 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,236 g, 0,204 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,864 g, 8,16 mmol) ve vodě (35 ml). Reakční směs se míchá přes noc při teplotě 85°C pod atmosférou dusíku. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do vodné vrstvy se přidá ethylacetát (100 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (300 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou (500 ml každý), suší síranem sodným, filtrují a odpařují za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 5% methanolem v dichlormethanu, 10% methanolem v dichlormethanu, 20% methanolem v dichlormethanu, pak 30% methanolem v dichlormethanu jako mobilní fází. Ze sloupce se získá 0,817 g (49%) trans-3-[4(benzyloxy)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4aminu.
*H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,22 (s, ÍH), 7,59-7,57 (m, 2H), 7,53-7,50 (m, 2H), 7,487,21 (m, 3H), 7,19-7,17 (d, 2H, J= 8 Hz), 5,18 (s, 2H), 4,65-4,60 (m, ÍH), 2,5 (s, 3H), 2,45-2,25 (m, 5H), 2,15 (s, 3H), 2,04-1,92 (m, 7H), 1,50-1,44 (m, 2H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP, g 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 5,021 min (95%).
Příklad 226 tris-maleát tra«5-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4g/]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)-6- [(3 -methoxypropyl)amino]benzonitrilu íra«v-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3yl} fenol
Roztok trans-3 - [4-(benzy loxy)fenyl] -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1] -1Hpyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-4-aminu (0,806 g, 1,62 mmol) v absolutním ethanolu (40 ml) se nechá reagovat s 10%(hmotn.) palladiem na aktivním uhlí (0,161 g, 0,324 mmol) a mravenčanem amonným (0,511 g, 8,1 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 3 hodin, a pokud je podle TLC jen malý podíl produktu, přidá se další podíl 10% palladia na aktivním uhlí (0,161 g, 0,324 mmol) a vmíchání se pokračuje další hodinu. Pokud je stále malý podíl produktu, přidá se další mravenčan amonný (0,204 g, 3,24 & e·
e. <> (:> f <-·: r. o ť a ( t'. «3 P <- O fi f n ft c r- Í, ι·> c c p C. 4 < <. < . Γ: © * <' < · < ·' r Ρ « Λ C C
263 mmol) a míchá se přes noc. Reakční směs se filtruje přes vrstvu celitu, která se promyje ethanolem (500 ml). Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku. Výsledná pevná látka se trituruje ethylačetátem a suší přes noc za vysokého vakua, čímž se získá 0,491 g (75%) trans-4- {4-amino-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl} fenolu. *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,74 (s, ÍH), 8,2 (s, ÍH), 7,46-7,44 (d, 2H, >8 Hz). 6,92-6,90 (d, 2H, >8 Hz), 4,64-4,58 (m, ÍH), 2,67-2,50 (m, 5H), 2,39-2,34 (m, 4H), 2,17 (s, 3H), 2,06-1,92 (m, 6H), 1,50-1,42 (m, 2H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 3,337 min (96%).
tris-maleát trans-2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//pyrazo!o[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenoxy)-6-[(3-methoxypropyl)amino]benzonitrilu
Roztok trans-4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}fenolu (0,100 g, 0,245 mmol) v dimethylformamidu (25 ml) se nechá reagovat s 2-fluor-6-[(2-methoxyethyl)amino]benzonitrilem (0,128 g, 0,613 mmol) a uhličitanem draselným (0,068, 0,49 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 120°C přes noc pod atmosférou dusíku. Ethylacetát a IN roztok hydroxidu sodného se přidají do reakční směsi. Organická vrstva se promyje IN roztokem hydroxidu sodného (1 1). Vrstvy se rozdělí a organická vrstva se promyje vodou a solankou (500 ml každý), suší síranem sodným, filtruje a odpařuje za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 10% methanolu v dichlormethanu jako mobilní fázi, čímž se získá 71 mg (48%) trans-2-(4- {4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklobexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)-6- [(3 methoxypropyl)amino]benzonitrilu. Horký roztok trans-2-(4- {4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lZ/-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin-3-yl}fenoxy)-6-[(3methoxypropyl)amino]benzonitrilu (0,071 g, 0,119 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,042 g, 0,358 mmol) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší za vysokého vakua, čímž se získá tris-maleát trans-2(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 Z/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3 yl}fenoxy)-6-[(3-methoxypropyl)amino]benzonitrilu.
’H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,69-7,67 (d, 2H, J= 8 Hz), 7,377,33 (m, ÍH), 7,25-7,23 (d, 2H, J= 8 Hz), 6,53-6,51 (d, ÍH, J= 8 Hz), 6,30-6,29 (m, ÍH), 6,19-6,17 (d, ÍH, J= 8 Hz), 6,17 (s, 6H), 4,65-4,64 (m, ÍH), 3,45-3,42 (m, 2H), 3,27 (s, 3H), 2,55© o • » • · · e • e • « • · «4 ·«
4 · · * ♦ · © « · e« » · · » ·· 4 · 9 · · β · · 0 « 4 « • ♦ « · · · ····
264
2,50 (m, 4H), 2,50-2,30 (m, 5H), 2,33 (br, s, 3 H), 2,01-1,96 (m, 8 Hz), 1,84-1,80 (m, 2H), 1,49-1,46 (m,2H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis, 3,5 am, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 5,181 min (95%).
Příklad 227 tris-maleát /ra«.s-Ařl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3-fenylpropanamid
4-brom-2-methoxyanilin
Roztok o-anisidinu (5,46 g, 44,3 mmol) v dichlormethanu (100 ml) se nechá po částech v průběhu 1 hodiny při teplotě -5°C reagovat s 2,4,4,6-tetrabrom-2,5cyklohexadien-l-onem (18,16 g, 44,3 mmol). Po přidání bromačního činidla se odstraní lázeň ze suchého ledu a acetonu a reakční směs míchá přes noc při pokojové teplotě. Do reakční směsi se přidá roztok hydroxidu sodného (IN) a vrstvy se rozdělí. Organická vrstva se promyje IN roztokem hydroxidu sodného (1 1), promyje vodou (750 ml), suší síranem sodným, filtruje a odpařuje za sníženého tlaku, čímž se získá 8,096 g (89%) 4brom-2-methoxyanilinu.
*H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 6,90 (s, 1H), 6,83-6,76 (m, 1H), 6,57-6,55 (m, 1H), 4,86 (s, 2H), 3,76 (s, 3H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield Ris, 3,5 m, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 5,635 min (89%).
jVl-(4-brom-2-methoxyfenyl)-3-fenylpropanamid
Roztok 4-brom-2-methoxyanilinu (8,096 g, 40,04 mmol) v dichlormethanu (100 ml) se nechá reagovat s triethylaminem (6,06 g, 60,06 mmol), pak hydrocinnamoylchloridem (7,08 g, 42,04 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 48 hodin pod atmosférou dusíku. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se ethylacetát, precipitát se filtruje a filtrát se odpařuje na pevnou látku za sníženého tlaku, pevná látka se rozpustí v ethylacetátu a promyje 5N roztokem kyseliny chlorovodíkové, 5N roztokem hydroxidu sodného, vodou a solankou. Surová látka (2 tečky podle TLC) se trituruje methanolem a nerozpuštěná pevná látka se filtruje, čímž se získá 6 g (50%) /VI-(4-brom-2methoxyfenyl)-3-fenylpropanamidu.
© ο © ©>- p r (> ee> «' «- c <·. e © © e c c
¢. P· ·?; f- to' ť
f. t:· to to. e toto toto· toto
265 *H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 9,17 (s, 1H), 7,92-7,90 (m, 1H), 7,30-7,24 (m, 4H), 7,207,18 (m, 2H), 7,09-7,07 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 2,90-2,86 (m, 2H), 2,72-2,69 (m, 2H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 7,491 min (97%).
3-methoxy-4-[(3-fenylpropanoyl)amino]fenylboritá kyselina
Roztok ?/l-(4-brom-2-methoxyfenyl)-3-fenylpropanamidu (1,004 g, 3 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (30 ml) při teplotě -78°C se nechá reagovat s roztokem 1,6 M «-butyllithia v hexanech (4,7 ml, 7,5 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě -78°C po dobu 40 minut, pak se do této reakční směsi přidá tri-izopropylborát (1,05 ml, 4,5 mmol) a směs se míchá při teplotě -78°C po dobu 20 minut. Lázeň ze suchého ledu a acetonu se odstraní a reakční směs se míchá po dobu 4 hodin při pokojové teplotě. Reakční směs se zháší 2,5N roztokem kyseliny chlorovodíkové (30 ml). Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku. Do kyselé vodné vrstvy se přidá ethylacetát. Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (250 ml). Spojená organická vrstva se promyje vodou a solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu a ethylacetátu (1:1) jako mobilní fázi, gradient se mění na 15% methanol v dichlormethanu kvůli odstranění bazického produktu, čímž se získá 0,209 g (23%) 3-methoxy-4-[(3fenylpropanoyl)amino]fenyíborité kyseliny.
*H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 9,08 (s, 1H), 7,89-7,95 (m, 3H), 7,45-7,42 (s, 1H), 7,357,16 (m, 5H), 3,82 (s, 3H), 2,91-2,81 (m, 2H), 2,74-2,70 (s, 2H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPig, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 5,389 min (95%).
tris-maleát /ram-yVl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3-fenylpropanamidu
Roztok /razz5’-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-4-aminu (0,268 g, 0,607 mmol) v ethylenglykoldimethyletheru (20 ml) se nechá reagovat s 3-methoxy-4-[(3-fenylpropanoyl)amino]fenylboritou kyselinou (0,200 g, 0,669 mmol), tetrakis(trifenylfosfm)palladiem (0,042 g, 0,036 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,154, 1,46 mmol) ve vodě (10 ml). Reakční směs se míchá po dobu 9 hodin při teplotě 85°C pod atmosférou dusíku. Přidá se tetrakis(trifenylfosfin)palladium η © « · ·· · · ♦ · · β · · « · • 8 8*88 8 8 « * 8 *8 88 888 8 β • · 88·· ··« β······ β» Λ · » » « « 8 8
266 (0,035 g, 0,03 mmol) a směs se míchá přes noc (15 h). Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku a přidá se ethylacetát. Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (300 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou, suší síranem sodným, filtrují a odpařují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 10% methanolu v dichlormethanu (6 1) jako mobilní fázi. Dále je třeba druhé čištění zrychlenou chromatografií na sloupci Supelco ve směsi 20% methanolu v dichlormethanu jako mobilní fázi, čímž se získá 0,132 g (38%) trans-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3-fenylpropanamidu. Produkt se podrobí čištění na preparativní HPLC (Hypersií 08, 100 x 21mm sloupec, 5 pm, 15-100% gradient acetonitrilu v průběhu 8 minut, celkový čas - 10 minut, puft - 50mM octan amonný, 25 ml/min). Takto se získá 0,026 g trans-Nl.-(4- {4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny l)-3 fenylpropanamidu. Horký roztok trans-Nl -(4- {4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny l)-3fenylpropanamidu (0,026 g, 0,046 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,016 g, 0,137 mmol) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší za vysokého vakua, čímž se získá trismaleát trans-Nl-(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</jpyrimidin-3 -y 1} -2methoxyfenyl)-3 -fenylpropanamidu.
‘H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 9,25 (s, 1H), 8,23-8,19 (m, 2H), 7,337,27 (m, 5H), 7,237,18 (m, 2H), 6,17 (s, 6H), 4,72-4,69 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 2,942,90 (m, 4H), 2,79-2,75 (m, 5H), 2,67 (s, 4H), 2,10-1,99 (m, 8H), 1,59-1,56 (m, 3H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPig, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 4,844 min (90%).
Příklad 228 cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</|pyrimidin3 -yl} -2-methoxyfenyl)-Vl -methyl-3 -fenylpropanamid
VI -(4-brom-2-methoxyfenyl)-Vl -methyl-3 -fenylpropanamid « *
β * β * * 0 ♦ ·
Ů « 4 » ♦* ** ·· ····»*
267
Roztok Vl-(4-brom-2-methoxyfenyl)-3-fenylpropanamidu (1,0 g, 3 mmol) v dimethylformamidu (20 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s předem promytým (3 x heptanem) hydridem sodným (0,158 g, 6,6 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 1 hodiny při teplotě 0°C. Po kapkách se přidá methyljodid (0,511 g, 3,6 mmol) a roztok míchá po dobu 15 minut při 0°C. Ledová lázeň se odstraní a reakční směs se míchá přes noc při pokojové teplotě. Pokud reakce přes noc proběhne, přidá se další podíl methyljodidu (0,511 g, 3,6 mmol) a reakční směs míchá přes noc. Reakční směs se zháší vodou (30 ml). Přidá se ethylacetát a vrstvy se rozdělí. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou, suší síranem sodným, filtrují a odpařují za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi heptanu a ethylacetátu (3:1), čímž se získá 0,729 g (70%) Vl-(4-brom-2-methoxyfenyl)-Vl-methyl-3-fenylpropanamidu.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,330-7,326 (s, IH), 7,235-7,178 (m, 2H), 7,161-7,116 (m, 3H), 7,0587,040 (m, 2H), 3,811 (s, 3H), 3,002 (s, 3H), 2,753-2,708 (m, 2H), 2,2822,204 (m, IH), 2,138-2,061 (m, IH);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 7,366 min (96%).
Vl-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-Vl-methyl-3fenylpropanamid
Roztok VI -(4-brom-2-methoxyfenyl)-Vl -methyl-3-fenylpropanamidu (0,729 g, 2,09 mmol) v dimethylformamidu (10 ml) se nechá reagovat s diboronpinakolesterem (0,637 g, 2,51 mmol), octanem draselným (0,615 g, 6,27 mmol) a pak [Ι,Γ-bis (difenylfosfinoferrocenjdichlorpalladnatým komplexem s dichlormethanem (1:1) (0,052 g, 0,063 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 26 hodin, pak se přidá další podíl diboronpinakolesteru (0,318 g, 1,254 mmol), octanu draselného (0,312 g, 3,135 mmol) a [l,r-bis(difenylfosfinoferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,025 g, 0,031 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 48 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a směs se suší za vysokého vakua. Do černé pevné látky se přidá dichlormethan. Směs se pak filtruje přes vrstvu celitu a silikagelu. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a heptanu (1:1) jako mobilní fázi. Ze sloupce se získá 0,290 g (35%) Vl-[2methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-Vl -methyl-3c ft ft Γ £ ft ft ft <ft ft v ft ft ft r <·.' f « r r <! & ft:
C’ c c ft ί ίο ft <
ť «·
268 fenylpropanamidu a 0,148 g (18%) homokopulovaného vedlejšího produktu. Al-[2methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-Al -methyl-3fenylpropanamid:
*H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 7,33 (s, 1H), 7,29-7,27 (m, 2H), 7,22-7,13 (m, 5H), 7,06-7,03 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,03-3,00 (m, 3H), 2,75-2,71 (m, 4H), 2,30-2,15 (m, 2H), 2,15-2,05 (m, 2H), 1,30 (s, 12 H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 5,296 min (100%). Homokopulovaný vedlejší produkt:
*H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 7,374 (s, 2H), 7,293-7,276 (m, 4H), 7,258-7,188 (m, 4H), 7,142-7,107 (m, 2H), 7,067-7,049 (m, 4H), 3,921 (s, 6H), 2,992 (s, 6H), 2,756-2,741 (m, 4H), 2,3392,263 (m, 2H), 2,196-2,070 (m, 2H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 7,910 min (100%).
cN-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidm3-yl} -2-methoxyfenyl)-Al -methyl-3 -fenylpropanamid
Roztok cN-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,293 g, 0,664 mmol) v ethylenglykoldimethyletheru (10 ml) se nechá reagovat s 3-methoxy-4-[methyl(3-fenylpropanoyl)amino]fenylboritou kyselinou (0,290 g, 0,730 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,046 g, 0,040 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,169 g, 1,59 mmol) ve vodě (5 ml). Reakční směs se míchá přes noc při teplotě 85°C pod atmosférou dusíku. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a ethylacetát se přidá do vodné vrstvy. Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (150 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou, suší síranem sodným, filtrují a odpařují za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 4% methanoiu v dichlormethanu, 8% methanoiu v dichlormethanu a pak 12% methanoiu v dichlormethanu jako mobilní fázi. Po druhém čištění zrychlenou chromatografií na sloupci Supelco ve směsi 30% methanoiu v dichlormethanu se získá 0,037 g (10%) cis-Nl-(4- {4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny 1) - Al methyl-3-fenylpropanamidu.
í>*s
e e* es e> ¢, « C' r c fe © <· {:' (' © « e &
© <5 o ©
C © e © e © ©re & β·
269
Ή NMR (CDCl3,400 MHz) δ 8,374 (s, 1H), 7,315-7,312 (m, 1H), 7,285-7,213 (m, 3H), 7,174-7,087 (m, 4H), 5,795 (br, s, 2H), 4,965-4,922 (m, 1H), 3,892 (s, 3H), 3,213 (s, 3H), 2,948-2,918 (m, 2H), 2,667 (m, 6H), 2,455-2,349 (m, 10H), 2,25-2,15 (m, 2H), 1,8671,845 (m, 2H), 1,718-1,710 (m, 2H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPjg, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 4,947 min (98%).
Příklad 229 tris-maleát VI -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-y 1]-1 //-pyrazolo [3,4J]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamidu fórc-buty 1-V- [l-( 1 -methy lpiperidin-4-y l)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl2-methoxyfenyl)karbamát
Roztok 3 -jod-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4č/]pyrimidin-4-aminu (2,667 g, 6,04 mmol) v ethylenglykoldimethyletheru (95 ml) se nechá reagovat s terc-butyl-V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyí]karbamátem (2,32 g, 6,64 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,419 g, 0,362 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (1,54 g, 14,5 mmol) ve vodě (40 ml). Reakční směs se míchá po dobu 18 hodin při teplotě 85°C pod atmosférou dusíku. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku. Přidá se ethylacetát (100 ml) a vrstvy se separují. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (1 1). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (1 1) a solankou (500 ml), suší síranem sodným, filtrují a odpařují za sníženého tlaku, čímž se získá 3,71 g surové látky. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 20% methanolu v dichlormethanu (4 1), 30% methanolu v dichlormethanu (1 1) a methanolu v dichlormethanu (1:1) (1 1) jako mobilní fázi, čímž se získá 2,305 g (71%) fórc-butyl-V-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl-2-methoxyfenyl)karbamátu.
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,221 (s, 1H), 8,030 (s, 1H), 7,921-7,901 (m, 1H), 7,239-7,195 (m, 2H), 4,652-4,594 (m, 1H), 3,890 (s, 3H), 2,988-2,804 (m, 2H), 2,7762,507 (m, 2H), 2,40-2,21 (m, 5H), 2,190 (s, 3H), 1,898-1,815 (m, 4H), 1,716-1,686 (m, 2H), 1,482-1,446 (m, 11H);
·« • · · * * © 9 *
270 » e© ♦ » ® 6 • fr • ©
Φ Φ •»φ ίe«e « e fr © « a ® ♦ * o fr < » e e β fr β c · « »
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPig 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 4,541 min (98%); TLC (20 % methanolu v dichlormethan), Rt = 0,4.
-(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -177pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin
Roztok ferc-butyl-A-[l -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-177-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl-2-methoxyfenyl)karbamát (2,298 g, 4,28 mmol) v dichlormethanu (26 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s roztokem trifluoroctové kyseliny (9,2 ml) v dichlormethanu (20 ml). Reakční roztok se míchá po dobu 20 minut při teplotě 0°C. Poté se odstraní ledová lázeň a reakce se míchá po další 2 hodiny při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek suší za vysokého vakua. Do tohoto oleje se přidá ethylacetát (150 ml) a 5N roztok kyseliny chlorovodíkové (100 ml). Vrstvy se separují a organická vrstva se extrahuje 5N roztokem kyseliny chlorovodíkové (400 ml). Spojené vodné vrstvy se ochladí na teplotu 0°C v ledové lázni a neutralizují 50% roztokem hydroxidu sodného na pH = 10. Neutralizovaná vrstva se extrahuje dichlormethanem (700 ml). Organická vrstva se suší síranem sodným, filtruje a odpařuje za sníženého tlaku, čímž se získá 1,769 g (95%) 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[l-(l-methylpiperidin-4yl)piperidin-4-yl] -177-pyrazolo [3,4-</|pyrimidin-4-aminu.
*H NMR (DMSO-de,400 MHz) 6 8,189 (s, ÍH), 7,048-7,043 (s, ÍH), 7,004-6,980 (d, d, ÍH, J= 1 Hz, J= 4 Hz), 6,775-6,755 (m, ÍH), 5,039 (s, 2H), 4,605-4,565 (m, ÍH), 3,831 (s, 3H), 2,992-2,882 (m, 2H), 2,882-2,794 (m, 2H), 2,40-2,15 (m, 5H), 2,149 (s, 3H), 1,8761,849 (m, 4H), 1,727-1,698 (m, 2H), 1,4861,448 (m, 2H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPjg 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 2,83 min (99%).
tris-maleát Al -(4- {4-amino-l- [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-177-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamidu
Roztok 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin4-yl]177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-aminu (0,450 g, 1,03 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá po kapkách reagovat s roztokem 4-(trifluormethoxy)-lbenzenkarbonylchloridu (0,231 g, 1,03 mmol) v dichlormethanu (2,5 ml). Reakční směs se r < - Ο
C I f ¢,: <- fi r <· f. «.> © r & ©·& e> · «
C O· fr {·- fi- t> «· 4 c c o ( © e fi f. (*' v o o © e ( c- <, © e fi t- ť> fí. ©♦«©»»©
271 míchá při teplotě -5°C po dobu 30 minut. Ledová lázeň se odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Přidá se IN roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá po dobu 1 hodiny. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Přidá se dichlormethan (10 ml) a vrstvy se separují a použije extrakční cartridge Empore. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a surová sloučenina se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 10% methanolu v dichlormethanu jako mobilní fázi, čímž se získá 0,430 g (67%) Al-(4-{4-amino-l-[l-(lmethylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 //-pyrazolo [3,4-</jpyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)4-(trifluormethoxy)(trifluormethoxy)benzamidu. Horký roztok Al-(4-{4-amino-1-[1-(1methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)4-(trifhiormethoxy)benzamidu (0,430 g, 0,688 mmol) v ethylacetátu (15 ml) se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,240 g, 2,07 mmol) v ethylacetátu. Vzniklý precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší za vysokého vakua, čímž se získá tris-maleátová sůl Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin4-yl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamidu.
*H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 9,70 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,11-8,08 (m, 2H), 8,05-8,03 (m, 1H), 7,56-7,54 (m, 2H), 7,34 (m, 1H), 7,31-7,29 (m, 1H), 6,11 (s, 6H), 5,10-5,00 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,54 (m, 4H), 2,99 (m, 2H), 2,79 (s, 3H), 2,22-2,19 (m, 4H), 1,84 (m, 2H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPig, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 4,999 min (100%).
Příklad 230 bis-maleát 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ř/]pyrimidm-l-yl]piperidino(4methylpiperazino)methanonu
Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,300 g, 0,780 mmol) v pyridinu (5 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s hydrochloridem 4-methyl-l-piperazinkarbonylchloridu (0,127 g, 0,780 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 5 minut při 0°C, poté se ledová lázeň odstraní a reakce se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidají se další ekvivalenty hydrochloridu 4-methyl-lpiperazinkarbonylchloridu (0,127 g, 0,780 mmol) a směs míchá po dobu 2 hodin.
©•e ·· • · « e * · · e « 0 « © • e · · <© * · · • · e · ··©··· · • · · · · e ··« ······· ·· ·· ·« ·»··
272
Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do pevné látky se přidá dichlormethan (10 ml) a hydrogenuhličitan sodný (5 ml). Vrstvy se separují a použije se extrakční cartridge Empore. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá 0,417 g surové látky. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 8% methanolu v dichlormethanu, 15% methanolu v dichlormethanu a pak 20% methanolu v dichlormethanu jako mobilní fázi, čímž se získá 0,178 g (45%) 4-[4-amino-3-(4fenoxyfenyl)-1 7/-pyrazolo[3,4-7]pyrimidin-1 -yl]piperidino(4methylpiperazino)methanonu. Horký roztok 4-[4-amino-3-(4-fenoxy fenyl)-1/7pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl]piperidino(4-methylpiperazino)methanonu (0,178 g, 0,347 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,08 lg, 0,693 mmol) v ethylacetátu. Po ochlazení rozpouštědla se vytvořený precipitát filtruje pod atmosférou dusíku a suší za vysokého vakua, čímž se získá 0,124 g bis-maleátu 4-[4amino-3-(4-fenoxy feny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-1 -yl]piperidino(4methylpiperazino)methanonu.
’H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 8,257 (s, 1H), 7,661-7,639 (d, 2H, J= 8,8 Hz), 7,441-7,42 (m, 2H), 7,210-7,112 (m, 5H), 6,142 (s, 4H), 4,963-4,908 (m, 1H), 3,784-3,754 (d, 2H, J= 12 Hz), 3,7-3,2 (br, s, 11H), 3,15-3,05 (m, 2H), 2,922 (s, 3H), 2,161-2,138 (m, 2H), 1,9891,93 (m, 2H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 5,159 min (97%).
Příklad 231 tris-maleát VI-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 //-pyrazolo[3,4ť/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4-(dimethylamino)benzamidu
Suspenze 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4yl]-1//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,398 g, 0,912 mmol) v pyridinu (7 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem 4-(dimethylamino)-l-benzenkarbonylchloridu (0,167 g, 0,912 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs se míchá při teplotě -5°C po dobu 2,5 hodiny a ledová lázeň se odstraní. Do reakční směsi se přidá IN roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá po dobu 1 hodiny. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (15 ml). Vrstvy se separují a použije se extrakční cartridge Empore. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku. Surová pevná látka se e e # · » © »· * · «& © r s » 9 > © * · ♦ β & σ <- ·· ♦«· · · • ř ©·»··* ·· 9 » © « · © fe © t c»e© · · ·· ·© ··©··♦·
273 čistí (2x) zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 12% (methanolu s 5% hydroxidem amonným) v dichlormethanu jako mobilní fázi, čímž se získá 0,284 g (53%) NI -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 //-pyrazolo [3,4fi0pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4-(dimethylamino)benzamidu. Horký roztok Vl-(4{4-amino-1 -[1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3yl}-2-methoxyfenyl)-4-(dimethylamino)benzamidu (0,284 g, 0,487 mmol) v ethylacetátu a pár kapek ethanolu se nechají reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,169 g, 1,46 mmol) v ethylacetátu. Vzniklý precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší za vysokého vakua, čímž se získá 0,409 g tris-maleát VI-(4-{4-amino-1-[1-(1methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-ylj-1 Z/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)4-(dimethylamino)benzamidu.
JH NMR (DMSO-de, 400 MHz,) δ 9,054 (s, IH), ,8,278 (s, IH), 8,215-8,194 (m, IH), 7,851-7,828 (m, 2H), 7,312-7,308 (m, IH), 7,288-7,263 (m, IH), 6,794-6,772 (m, 2H), 6,096 (s, 6H), 5,10-5,00 (m, IH), 3,951 (s, 3H), 3,538 (s, 4H), 3,061 (s, 8H), 2,215-2,183 (m, 4H), 1,90-1,81 (m, 2H);
HPLC Waters 2690 Albánce HPLC (Symmetry Shield RPig 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 4,496 minut (98%).
Příklady 232-237 cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin3 -yl} -2-methoxy fenyl)-2-(trifhiormethoxy)benzamid cis-NI -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin3 -y 1} -2-methoxy fenyl)-3 -(trifluormethoxy)benzamid cis-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid cis-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-</jpyrimidin3 -yl} -2-methoxy feny 1)-3 -(trifluormethyl)benzamid
Amidy odvozené od c«-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-7//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu
5· €· e » r co c © t c c £· e e c c © «·· O ÍÍC í!
r ί ί· re© e t f t· <
» r (i e c r o r c f i e € (>
C f · o ¢- o c © © f.
O
274
Komerčně dostupné chloridy kyselin (0,23 mmol) v dichlormethanu (100 μΐ) se přidají do cis-3-(4-amino-3 -methoxy fenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-7/7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,050 g, 0,115 mmol) v pyridinu (800 μΐ). Reakční směs se míchá přes noc. Reakční směs se zháší IN roztokem hydroxidu sodného. Rozpouštědlo se odstraní na Supelco manifold za vakua a s promýváním dusíkem. Zbývající pevné látky se podrobí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 100 x 21 mm sloupec, 5 pm, 15-100% gradient acetonitrilu v průběhu 8 minut, celkový čas - 10 minut, pufr 50mM octanu amonného, 25 ml/min) a přidá se do nich dichlormethan a IN roztok hydroxidu sodného. Vrstvy se rozdělí na extrakčním cartridge Empore, čímž se získají odpovídající produkty, HPLC Perkin Elmer, Pecosphere Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, 3,5 ml/min 100 - 100% 50 mM octanu amonného ve vodě v průběhu 4,5 minut, C36H44N6O3 (581,2), 95%.
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 column, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min).
ee (.9- » to· ·© «i o e. © e> β- e ť to «' * t o a fi e « © 9 0 c */· c to e e e c· e « t ca ě- e ee· ·> a- e e « <· « c-> &
a -to r to· cre® e « ®
275
Sloučenina R Př. Qty. (mg) MH+ R. (min)
c/s-7Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl] -l/ř-pyrazolo[3,4- </Jpyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-2- (trifluormethyl)benzamid 232 44 (63%) 609,1 2,957
«í-M-(4-{4-amino-l - [4-(4- methylpiperazíno)cyklohexyl} -l/7~pyrazolo[3,4- í/]pyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-2- (trifluormethoxy)benzamid F^F 233 10 (14%) 625,5 3,464
cis-7Vl-(4-{4-amino-l~[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl] -l/ř-pyrazolo{3,4- d]pyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-3- (trifluormethoxy)benzamid Y F_0 RF F 234 40 (56%) 625,1 3,405
cis-Ni -(4- {4-amino-1 - [4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl] -l/ř-pyrazolo[3,4- rfJpyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-2-fluoro-4- (trifluormethyl)benzamid F 235 47 (65%) 627,5 3,405
c/íwVl-(4-{4-amino-l-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl] -l/f-pyrazolo[3,4- rflpyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-3- (írifluormethyl)benzamid 236 41 (59%) 609,3 3,223
c/s-TVl-(4-{4-amino-l-[4-(4- methylpiperazino)cykloliexy]] -l//-pyrazolo[3,4- </]pyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-3-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid Y F F 237 48 (67%) 627,4 3,613
» < O β* <5 Γ fe fe «· © ' « © ο s> © e c c e
C<;
©r rc cfe
C fe «.- (.' © fe fe fe fe r σ í? fe fe <' fe © f c s © e fe fe c r fe fe fe fe «? C fe C r, fe # © fe
276
Příklad 238 cA-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3yl} -2-methoxyanilino)-2-fenyl-1 -ethanol
Cis-3-(4-amino-3 -methoxy feny 1)-1-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,075 g, 0,000172 mol) a styrenoxid (0,029 g, 0,000172 mol) se rozpustí v izopropanolu (3 ml) a výsledná směs se zahřívá pod refluxem po dobu hodin. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá cis-2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-dJpyrimidin-3-yl}-2-methoxyanilino)-2-fenyl-l-ethanol (0,005 g, 0,0000089 mol) ve formě bělavé pevné látky.
’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,36 (m, 5H), 7,06 (s, IH), 6,91 (d, IH), 6,36 (d, IH), 5,55 (d, IH), 5,20 (s, IH) 4,78 (m, IH), 4,43 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,74 (m, IH), 3,58 (m, IH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,97 minut.
MS: MH+ 557.
Meziprodukty:
cis-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [4-(4-methy lpiperazinojcyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4g/]pyrimidin-4-amin trans-3 -(4-amino-3-methoxyfenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-</Jpyrimidin-4-amin
Obecný způsob reduktivní alky láce cis- nebo /ra«5-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-g/]pyrimidin-4-aminu:
Postup A:
Směs cis- nebo Zra«.v-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-4-aminu (nebo samotné cis nebo trans) (1 ekviv.), aldehydu (1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a kyseliny octové (3,4 ekviv.) se míchají v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, zháší nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8
Α« ί» ,? ♦ β β .?· 4 · * a t 9 α * ♦ · β · »4 β « C.
• 4 e · · r · β · ·
9 9 9 · 4 • 9 9 9 9 9 9
277 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty.
Postup B:
Po syntéze a čištění (postup A) se zbytek vyluhuje (za tepla) dichlormethanem (1 ml), nanese na sloupec Trikonex (7 cm) a eluuje dichlormethanem (5 ml). Látka s požadovaným pásem (UV-detekce) se oddělí a sloučenina se extrahuje směsí dichlormethanu, methanolu a triethylaminu (90:5:5) (10 ml), filtruje a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se suspenduje v diethyletheru (4 ml) a precipitát se spojí filtrací a suší.
Příklad 239 acetát cA-3-{4-[(2-íuryImethyl)amino]-3-methoxyfenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-4-aminu
Postup A ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,06 (br, 2H), 6,77 (d, 1H), 6,38 (d, 1H), 6,32 (d, 1H), 5,65 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,38 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5m, 300A, 15 pm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,65 minut.
MS:MH+517.
Příklad 240 acetát cis-5 - [(4- {4-amino-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -1 H-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyanilino)methyl]-2-furylmethanolu
Postup A ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,06 (br, 2H), 6,77 (d, 1H), 6,23 (d, 1H), 6,19 (d, 1H), 5,63 (t, 1H), 5,18 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,35 (d, 4H), 3,88 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
β < c e * c c «· c «· c £ ře © e o v i: <
t ¢. <0
P ♦ © t i « {-- ·?
<· e © © o © c íc «· t e
-£ © e « £ c <· e t: n r· c e e ?, ti t (I v e e « © ©
278
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 μπι, 300A, 15 μιη; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 10,91 minut.
MS: MH+ 547.
Příklad 241 dimaleát trans-3 - {4- [(2-furylmethyl)amino] -3 -methoxy fenyl-1- [4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu
Trans-3 - {4- [(2-furylmethyl)amino] -3 -methoxyfenyl-1 - [4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin se připraví podle postupu A. Trans-3-{4-[(2-furylmethyl)amino]-3-methoxyfenyl-1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin (1 ekviv.) se rozpustí v ethanolu (20 ml) a roztok se zahřívá pod refluxem. Najednou se přidá roztok maleinové kyseliny (3 ekviv.) a pod refluxem se pokračuje dalších 10 minut. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu, precipitát se spojí filtrací a suší.
dimaleát /ra«s-3-{4-[(2-furylmethyl)amino]-3-methoxyfenyl-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-4-aminu *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,06 (br, 2H), 6,77 (d, 1H), 6,38 (d, 1H), 6,32 (d, 1H), 6,16 (s, 4H), 5,65 (t, 1H), 4,67 (m, 1H), 4,38 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,62 minut.
MS:MH+517.
Příklad 242 dimaleát traw-3-(3-methoxy-4-[(5-methyl-2-furyl)methyl]aminofenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu
Připraví se stejný způsobem jako dimaleát tra/?5'-3-{4-[(2-furylmethyl)amino]-3methoxy fenyl-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidÍn-4aminu uvedený výše.
Cr I.
i <· C «- 1' (> v flO
C- ň £ f' O <··« ( (. ec r c o e o ( t c r c { © e. ft
B fC c e «5 * c
279
H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,08 (d, 2H), 6,77 (d, IH), 6,16 (m, 5H),
5,95 (d, IH), 5,65 (t, IH), 4,67 (m, IH), 4,32 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5μ m, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,73 minut.
MS:MH+531.
Obecný způsob reduktivní alkylace cis- nebo /ra«ó-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidin-4-aminu:
Postup C:
Směs cis- nebo /razw-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-tíQpyrimidin-4-aminu (buď meziprodukt...nebo...) (1 ekviv.), aldehydu (1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a kyseliny octové (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, zháší nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty.
Příklad 243 diacetát cis-2-[2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 Z/-pyrazolo[3,4ó/]pyrimidin-3 -yl} anilino)methyl]fenoxykyseliny octové
Postup C ’Η NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,33 (m, 3H), 7,17 (t, IH), 6,83 (m, 4H), 4,76 (m, IH), 4,46 (s, 2H), 4,29 (s, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 10,78 minut.
MS: MH+ 571.
to 6 C tto ti *j to to β to η © to © C < < <
c t·. r ( R & C r «· c c
f. c c ·« e c to to o to o « ® ¢- ©
280
Příklad 244 diacetát cis-3-{4-[(2-furylmethyl)amino]fenyl}-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu
Postup C *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,81 (d, 2H), 6,46 (t, 1H), 6,41 (d, 1H), 6,34 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,31 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,29 minut.
MS:MH+487.
Příklad 245 diacetát cz'5-3-(4-[(5-methyl-2-furyl)methyl]aminofenyl)-l-[4-(4methylpÍperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu
Postup C ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,79 (d, 2H), 6,43 (t, 1H), 6,21 (d, 1H), 5,98 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,24 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,86 minut.
MS:MH+501.
Příklad 246 diacetát cis-3 - {4-[(3 -íurylmethyl)amino]fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu
Postup C
--- r- c ¢¢. p í~
P f’ © n C <« ti ťífc
281 *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,37 (d, 2H), 6,79 (d, 2H), 6,52 (s, 1H), 6,29 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,18 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s.3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,17 minut.
MS: MH+ 488.
Příklad 247 diacetát cis-3 - {4- [(benzo [6] furan-2-ylmethyl)amino]fenyl} -1 - [4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidin-4-aminu
Postup C *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8, 18 (s, 1H), 7,58 (d, 1H), 7,53 (d, 1H), 7,38 (d, 2H), 7,23 (m, 2H), 6,86 (d, 2H), 6,80 (s, 1H), 6,66 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,52 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Α, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,00 minut.
MS: MH+ 537.
Příklad 248 diacetát/raws-3-{4-[(2-íurylmethyI)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyI]17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu
Postup C *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,79 (d, 2H), 6,45 (t, 1H), 6,39 (d, 1H), 6,33 (d, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,30 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,96 minut.
MS: MH+ 487.
«· * e co «C t:
« ť € Γ fi fi o e © e e fi c «?
e e & &
« e c- fi e v <5 e
t.
©
CP?
fi ε;
fi tí e o e c fi fi· «? *
282
Obecný způsob reduktivní alkylace 3-(4-amino-fenyl)-l-[l-(l-methylpiperid-4-yl)piperid4-y 1 ] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu:
Postup D:
Směs 3-(4-amino-feny 1)-1 -[ 1 -(1 -methylpiperid-4-yl)piperid-4-yl]-1 //-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-aminu (1 ekviv.), aldehydu (1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a kyseliny octové (3,4 ekviv.) se míchá v bežvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, zháší nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty.
Příklad 249 acetát 3-(4-[(5-methyl-2-furyl)methyl]aminofenyl)-l-[l-(l-methylpiperid-4-yl)piperid-4yl] -1 //-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-4-aminu Postup D 'HNMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,07 (br, 2H), 6,76 (d, 1H), 6,17 (d, 1H), 5,97 (d, 1H), 5,57 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,30 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,98 (d, 2H), 2,79 (d, 2H), 2,27 (s, 3H), 2,25 (br, 5H), 2,15 (s, 3H), 1,91 (m, 7H), 1,69 (d, 2H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 8,97 minut.
MS:MH+531.
Příklad 250 díacetát cis-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1] -3 - {4- [(1 -fenylethy l)amino] fenyl} -1Hpyrazolo [3,4-</jpy rimidin-4-aminu
a) A-(4-bromfenyl)-yV-( 1 -fenylethyl)
Do roztoku A-(4-bromfenyl)-A-(l-fenylmethyliden)aminu (1,0 g, 0,00385 mol) v toluenu (30 ml) schlazeném na teplotu -78°C a po kapkách se přidá 1,4M roztok methyllithia v diethyletheru (5,5 ml), přičemž teplota se udržuje pod teplotou -75°C. Roztok se ohřeje na teplotu -40°C a míchá při této teplotě pod atmosférou dusíku po dobu < <·· r·. o eo «v o co c c f i s:· c
4? C-- v C ť
Λ re f © «: (- < , c r ( . o <:·
f. » <- < c C> <· to ť( (· o
283 hodin. Reakční směs se zháší a po kapkách přidáním vody a vrstvy se separují. Organická fáze se promyje solankou (50 ml), suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá V-(4-bromfenyl)-H-(l-fenylethyl)amin (1,03 g, 0,00373 mol) ve formě bělavé pevné látky.
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δί 7 30 (m, 4H), 7,18 (t, IH), 7,09 (d, 2H), 6,43 (d, 2H), 6,38 (d, IH), 4,43 (m, IH), 1,40 (d, 3H);
TLC (ethylacetát/heptan 5,95) Rt0,27.
b) H-(l-fenylethyl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin
Směs V-(4-bromfenyl)-V-(l-fenylethyl)aminu (0,87 g, 0,00315 mol), diboronpinakolesteru (0,96 g, 0,00378 mol), [l,r-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,077 g, 0,0000945 mol) a octanu draselného (0,93 g, 0,00945 mol) v A/V-dimethylformamidu (20 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (60 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu. Filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (7:93) jako mobilní fázi. Výsledné frakce se koncentrují. Zbytek se trituruje v «-heptanech a precipitát spojí filtrací, čímž se získá H-(l-fenylethyl);V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,3 g, 0,00093 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,30 (m, 6H), 7,18 (t, IH), 6,58 (d, IH), 6,46 (d, 2H), 4,51 (m, IH), 1,40 (d, 3H), 1,27 (s, 12H);
TLC (ethylacetát/heptan 5,95) Rt 0,17.
c) diacetát cis-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3- {4-[( 1 -fenylethyl)amino]fenyl} 1 H-pyrazolo [3,4-d]pyr imidin-4-aminu
Směs V-(l -fenylethyl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]aminu (0,070 g, 0,000235 mol), c/s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyljlH-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (0,080 g, 0,000181 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,012 g, 0,000011 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,056 g, 0,00045 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na e« «’· e f * 9 & e « e e « » £ € β
Γ (<· «ΐ tr. ?· » ο ť v f: f· r- i C fi O f ©fi Ofi V 6· fc fi é c © v e · β t.
o * ® © c e © e284 pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát czs-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-3 - {4- [(1 -fenylethyl)amino]fenyl} -1 //-pyrazolo [3,4t/]pyrimidin-4-aminu (0,062g, 0,0000984 mol) ve formě bílé pevné látky.
!H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,42 (d, 2H), 7,30 (m, 4H), 7,19 (t, 1H),
6,68 (d, 2H), 6,52 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,53 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,44 (d, 3H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,96 minut.
MS:MH+511.
Příklad 251 a 252 cíy-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[Z>]furan-3-ylamino)fenyl]-1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin diacetát trans-3 - [4-(2,3 -dihydrobenzo [ó]furan-3 -ylamino)feny 1] -1- [4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu
a) V-(4-bromfenyl)-V-(2,3-dihydrobenzo[Z>]furan-3-yl)amin
Do roztoku trimethylsulfoxonium-jodidu (0,8 g, 0,00362 mol) v bezvodém dimethylsulfoxidu (10 ml) se přidá 60% disperze hydridu sodného v minerálním oleji (0,145 g, 0,00362 mol) a výsledná směs se míchá pod atmosférou dusíku po dobu 10 minut. Po kapkách se přidá roztok 2-{[(4-bromfenyl)imino]methyl} fenolu (0,4 g, 0,00145 mol) v bezvodém dimethylsulfoxidu (5 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2,5 hodiny, pak se nalije do ledové vody (100 ml) a extrahuje diethyletherem (2x50 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku, čímž se získá V-(4-bromfenyl)-/V-(2,3-dihydrobenzo[/>]furan-3-yl)amin (0,321 g, 0,0011 mol) ve formě bělavé pevné látky.
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,34 (d, 1H), 7,23 (m, 3H), 6,90 (m, 2H), 6,67 (d, 2H), 6,34 (d, 1H), 5,23 (m, 1H), 4,72 (dd, 1H), 4,19 (dd, 1H).
TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf0,52.
ť v-'· t; r < ··· v < ; o c ť- ( v
Ϊ 1' C
CC* S?e
C C’ <· r
Γ- Λ C ť f
C. (. fi i •CC’ <><’ oo o e P < .· o o tr- w f f c
C:· e e c r c o
285
b) A-(2,3-dihydrobenzo[Z?]furan-3-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amin
Směs A-(4-bromfenyl)-yV-(2,3-dihydrobenzo[Z?]furan-3-yl)aminu (1,65 g, 0,00569 mol), diboronpinakolesteru (1,73 g, 0,00683 mol), [l,r-bis(difenylfosfmo)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,139 g, 0,000171 mol) a octanu draselného (0,81 g, 0,0171 mol) v A,A-dimethylformamidu (35 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (100 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (5:95) jako mobilní fázi. Výsledné frakce se koncentrují. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá A-(2,3-dihydrobenzo[h]furan-3-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amin (0,59 g, 0,00176 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 7,42 (d, 2H), 7,34 (d, ÍH), 7,23 (t, ÍH), 6,89 (m, 2H),
6,68 (d, 2H), 6,52 (d, ÍH), 5,23 (m, ÍH), 4,74 (dd, 1H), 4,20 (dd, ÍH).
TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf0,37.
c) cw-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ň]furan-3-ylamino)fenyl]-l -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidin-4-amin
Směs jV-(2,3-dihydrobenzo[ó]furan-3-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,080 g, 0,000237 mol), cw-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,087 g, 0,000198 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,014 g, 0,000012 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,061 g, 0,000495 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min). Dále se surový produkt rozpustí v dichlormethanu, nanese na sloupec Trikonex (7 cm) a eluuje dichlormethanem (5 ml). Látka s požadovaným pásem se oddělí. Produkt se extrahuje směsí dichlormethanemu, methanolu a triethylaminu (90:5:5) (10 ml) a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje v diethyletheru a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá cz'.s'-3-[4-(2,3e co © © o c © c & c ¢5 C 90 0 /:< < C c c e r c· o c v· c r c c c c c· cr (· c o c <:
oe ee o e e- e p e c c e e fí e e
Cf! Cfftf286 dihydrobenzo[6]furan-3-ylamino)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo [3,4-</|pyrimidin-4-amin (0,02 lg, 0,00004 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,40 (m, 3H), 7,25 (t, 1H), 6,90 (m, 4H), 6,50 (d, 1H), 5,35 (m, 1H), 4,80 (m, 2H), 4,28 (dd, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H),
1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,39 minut.
MS: MH+ 525.
diacetát frara-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ů]íuran-3-ylamino)fenyl]-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-4-aminu
Směs A-(2,3-dihydrobenzo[6]furan-3-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,089 g, 0,000265 mol), /ram'-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-«/]pyrimidin-4-aminu (0,090 g, 0,000204 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,014 g, 0,000012 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,063 g, 0,00051 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát fra«.v-3-[4-(2,3dihydrobenzo[Z>]furan-3 -ylamino)fenyl]-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,078 g, 0,000121 mol) ve formě bílé pevné látky.
‘H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,40 (m, 3H), 7,25 (t, 1H), 6,90 (m, 4H), 6,50 (d, 1H), 5,33 (m, 1H), 4,79 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,28 (dd, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,49 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,05 minut.
MS: MH+ 525.
Příklad 253 diacetát cw-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl} anilino)-1 -fenyl-1 -ethanonu
1)0 Cř' c g r c «.» r f o c o o o t
i.·! Γ f; c e r l!|l (C <·· e ( cr c υ c ύ r c <
<· e f <
Uf <(·
DO c e o c o e c
D t) <?
C C €i;Cf ftf
287
Cis-3 -(4-aminofenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4ď]pyrimidin-4-amin (0,6 g, 0,00148 mol) a bromacetofenon (0,295 g, 0,00148 mol) se rozpustí v bezvodém ΛζΑ-dimethylformamidu (30 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 5 minut. Po kapkách se přidá Λζ-V-diizopropylethylamin (0,095 g, 0,00074 mol) a míchá pod atmosférou dusíku se pokračuje po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát czs-2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} anilino)-1 -fenyl-1 ethanonu (0,410 g, 0,00064 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,99 (d, 2H), 7,75 (t, 1H), 7,61 (t, 2H), 7,29 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,41 (br, 3H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,16 minut.
MS: MH+ 525.
Příklad 254 diacetát cis-2-(4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3 -yl} anilino)-1 -fenyl-1 -ethanolu
Roztok diacetátu cA-2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}anilino)-l-fenyl-l-ethanonu (0,050 g, 0,000077 mol) v bezvodém methanolu (5 ml) se ochladí na teplotu 0°C a najednou se přidá borohydrid sodný (0,018 g, 0,0000477 mol). Směs nechá ohřát na pokojovou teplotu, zatímco se míchá pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakce se zháší po kapkách přidáním kyseliny octové. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát cis-2-(4- {4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-<7Jpyrimidin-3-yl} anilino)-1 -fenyl-1 ethanolu (0,035 g, 0,000054 mol) ve formě bílé pevné látky.
fr β • e c ® ® € e • 0 • © © e e e e s> e f f o e o c c o e © e c e · fr · © ® · · · e © ε · * o e e e · c e ® « e e ® · · · · ·
288 *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,20 (s, ÍH), 7,31 (m, 7H), 6,69 (d, 2H), 5,41 (br, 2H), 5,31 (d, ÍH), 4,78 (m, ÍH), 2,5-2,1 (br, 14H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m,2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,34 minut. MS: MH+ 527.
Příklad 255 acetát cw-A-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-3-yl}fenyl)(fenyl)methyl]-A-benzyímočoviny
Cis-3-{4-[amino(fenyl)methyl]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin (0,05 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (lml), se přidá benzylizokyanát (0,013 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitrilΟ,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát cw-A-[(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]py rimidin-3 yl}fenyl)(fenyl)methyl]-A’-benzylmočoviny (0,015 g, 0,000022 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,62 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,57-7,27 (br, 10H), 7,04 (d, ÍH), 6,41 (t, ÍH), 6,03 (d, ÍH), 4,78 (m, ÍH), 4,25 (d, 2H), 2,70 (s, 3H), 2,52,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,39 minut.
MS: MH+ 630.
Příklad 256 acetát cis-Nl - [4-(4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo[3,4í7]pyrimidin-3 -yl} fenoxy )benzy ljbenzamidu
CM-3-{4-[4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-amin (0,051 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém ř » « β e e fe c c· « é e © ť;
© e © o c <? ( e c < e e ©
r. « ť c <' © c © fi
289 pyridinu (1 ml), přidá se benzoylchlorid (0,014 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitrilΟ,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát cis-Nl -[4-(4-(4amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-č/|pyrimidin-3yl}fenoxy)benzyl]benzamidu (0,042 g, 0,000062 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-dň, 400 MHz) δ 9,07 (t, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,91 (d, 2H), 7,63 (d, 2H), 7,49 (m, 3H), 7,38 (t, 2H), 7,12 (d, 2H), 7,08 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,49 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,62 minut
MS:MH+617.
Příklad 257 acetát cA-Vl-[4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin~3 -yl} fenoxy)benzyl] -1 -benzensulfonamidu
C/5'-3-{4-[4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,051 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se benzensulfonyIchlorid (0,018 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát cis-Nl -[4-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzyl]-l-benzensulfonamidu (0,042 g, 0,000048 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,79 (d, 2H), 7,63 (m, 3H), 7,58 (t, 2H), 7,26 (d, 2H), 7,09 (d, 2H), 7,01 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,01 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,31 minut.
MS: MH+ 653.
• · © « ·
O © · « β © © ti e © · · ♦ • © © • · e c • ® • © • © © © β © e c <3 © © © « e e © © e e © © *'· e © © e © © © © © e
290
Příklad 258 acetát cis-N- [4-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4č/Jpyrimidin-3 -yl} fenoxy)benzyl] -N ’-benzylmočo viny
Cis-3 - {4- [4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl} -1- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1//-pyrazolo [3,4-čfipyrimidin-4-amin (0,051 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se benzylizokyanát (0,013 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát cis-N[4-(4- { 4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 yl}fenoxy)benzyl]-/V’-benzylmočoviny (0,019 g, 0,000027 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,63 (d, 2H), 7,27 (m, 7H), 7,13 (d, 2H), 7,09 (d, 2H), 6,46 (m, 2H), 4,78 (m, ÍH), 4,24 (d, 4H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,49 minut.
MS: MH+ 646.
Způsoby přípravy cis-3 - {4- [3 -(aminomethyl)fenoxy] fenyl} -1- [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</)pyrimidin-4-aminu a jeho derivátů jsou stejné jako způsoby uvedené pro c/s-3-{4-[4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-amin a j eho deriváty.
Příklad 259 diacetát cis-Nl - [3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4c/]pyrimidin-3-yl} fenoxy)benzyl]benzamidu
a) czs-3-{4-[3-(aminomethyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-J]pyrimÍdin-4-amin *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,63 (d, 2H), 7,38 (m, ÍH), 7,15 (m, 4H), 6,96 (d, ÍH), 4,78 (m, ÍH), 3,73 (s, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
β 0
291
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 9,32 minut
b) diacetát cw-N 1 - [3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1] -177-pyrazolo[3,4-JJpyrimidin-3-yl}fenoxy)benzyl]benzamidu
Ή NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 9,07 (t, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,86 (d, 2H), 7,63 (d, 2H), 7,48 (m, 4H), 7,10 (m, 5H), 4,78 (m, 1H), 4,49 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,58 minut.
MS:MH+617.
Příklad 260 acetát cz'ó’-Vl-[3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} fenoxy )benzyl] -1 -benzensulfonamidu *H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,23 (m, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,62 (m, 5H), 7,31 (m, 1H), 7,04 (m, 5H), 4,78 (m, 1H), 4,03 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,36 minut.
MS: MH+ 653.
Příklad 261 acetát cw-V-[3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-3 -yl} fenoxy )benzyl] -N ’-benzylmočoviny *H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,35 (t, 1H), 7,27-7,04 (m, 10H), 6,46 (m, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,25 (d, 2H), 4,22 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,44 minut.
MS: MH+ 646.
©· C; * C « fJ e c>
© ® © e e e o e c <> © © ΰ e«
O v © t. c p. fíi « o 6> © © < ! e «
(.< © © o c r· e e e e> © c o r> © c o © © to a c «e
292
Příklad 262 a 263 acetát cis-3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-fenyl-l,3-oxazolan-2-onu trans-3-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin3-yl}fenyl)-5-fenyl-1,3-oxazolan-2-on
a) 2-(4-bromanilino)-1 -fenyl-1 -ethanon
Do roztoku obsahujícího 4-bromanilin (7,42 g, 0,0431 mol) a 2-bromacetofenon (8,58 g, 0,0431 mol) v VTV-dimethylformamidu (200 ml) se po kapkách přidá N, V-diizopropylethylamin a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi dichlormethan (150 ml) a vodu (100 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se suspenduje v diethyletheru a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá 2-(4-bromanilino)-l-fenyl-1-ethanon (10,03 g, 0,0346 mol) ve formě bělavé pevné látky.
*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,06 (d, 2H), 7,69 (t, IH), 7,58 (m, 2H), 7,20 (d, 2H), 6,66 (d, 2H), 6,11 (t, IH), 4,68 (d, 2H).
TLC (ethylacetát/heptan 1:2) Rf0,39.
b) 2-(4-bromanilino)-1 -fenyl-1 -ethanol
Roztok 2-(4-bromanilino)-l-fenyl-1-ethanonu (3,50 g, 0,0121 mol) v bezvodém methanolu (200 ml) se ochladí na teplotu 0°C a najednou se přidá borohydrid sodný (2,28 g, 0,0603 mol). Směs nechá ohřát na pokojovou teplotu, zatímco se míchá pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakce se zháší po kapkách přidáním kyseliny octové. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi dichlormethan (120 ml) a vodu (85 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá 2-(4-bromanilino)-l-fenyl-1-ethanol (3,49 g, 0,0117 mol) ve formě žlutého oleje.
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,39 (d, 2H), 7,33 (m, 2H), 7,24 (t, IH), 7,17 (d, 2H),
5,81 (t, IH), 5,47 (d, IH), 4,71 (m, IH), 3,18 (m, IH), 3,07 (m, IH).
TLC (ethylacetát/heptan 1:2) Rf0,22.
c) 3-(4-bromfenyl)-5-fenyl-l ,3-oxazolan-2-on í? fe © fe « fe » · fe fe
<« <> fe e e « « o <1 fe e e e e © o co e c ř tt €
& fe © fe 9 fe ®
C CCC ( o ©
293
Roztok obsahující 2-(4-bromanilino)-l-fenyl-1-ethanol (0,74 g, 0,00253 mol), V,V-diizopropylethylamin (1,01 g, 0,00786 mol) a VA-dimethylaminopyridin (0,092 g, 0,00076 mol) v bezvodém dichlormethanu (32 ml) se ochladí na teplotu 0°C a po kapkách se přidá roztok trifosgenu (0,38 g, 0,00127 mol) v bezvodém dichlormethanu (8 ml). Reakční směs se pomalu ohřeje na pokojovou teplotu, zatímco se míchá pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (40 ml), solankou (30 ml) a suší síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a w-heptanu (1:5) jako mobilní fázi, čímž se získá 3-(4-bromfenyl)-5-fenyl-l,3-oxazolan-2-on (0,62 g, 0,00192 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 7,58 (s, 4H), 7,47 (m, 5H), 5,77 (m, 1H), 4,46 (t, 1H), 4,01 (t, 1H).
TLC (ethylacetát/heptan 1:2) Rf0,28.
d) 5-fenyl-3-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-oxazolan-2-on Směs 3-(4-bromfenyl)-5-fenyl-l,3-oxazolan-2-onu (0,6 g, 0,00189 mol), diboronpinakolesteru (0,58 g, 0,00226 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,046 g, 0,000057 mol) a octanu draselného (0,56 g, 0,0057 mol) v W-dimethylformamidu (20 ml) se zahřívá při teplotě
80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (100 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (1:5) jako mobilní fázi. Výsledné frakce se koncentrují. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát se spojí filtrací, čímž se získá 5-fenyl-3-[4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-oxazolan-2-on (0,19 g, 0,00052 mol) ve formě bílé pevné látky.
]H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,69 (d, 2H), 7,62 (d, 2H), 7,47 (m, 5H), 5,77 (m, 1H),
4,46 (t, 1H), 4,01 (t, 1H), 1,27 (s, 12H).
TLC (ethylacetát/heptan 1:2) Rf0,19.
0*00
0 · 0 « · · · » • · · © 0 00 »00 0 0
0 0 0 0 0 0
0» 0· 0000
294
e) acetát cis-3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4d]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5-fenyl-1,3-oxazolan-2-onu
Směs 5-fenyl-3-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3oxazolan-2-onu (0,085 g, 0,000233 mol), czs-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu (0,086 g, 0,000194 mol), tetrakis(trifenylfosfm)palladia (0,013 g, 0,000012 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,060 g, 0,000485 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát czs-3-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-3 -yl} feny l)-5-fenyl-1,3oxazolan-2-onu (0,074 g, 0,000121 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,79 (d, 2H), 7,68 (d, 2H), 7,47 (m, 5H),
5,82 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,57 (t, 1H), 4,09 (t, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C 18, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,84 minut.
MS: MH+ 553.
f) /ra«s-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5 -feny 1-1,3 -oxazolan-2-on
Sloučenina se připraví syntetickým způsobem podobným tomu, který je uveden pro přípravu acetátu cis-3 -(4- {4-amino-1 ~[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-fenyl-l ,3-oxazolan-2-onu.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,79 (d, 2H), 7,68 (d, 2H), 7,47 (m, 5H),
5,82 (t, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,57 (t, 1H), 4,09 (t, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,49 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,72 minut.
MS: MH+ 553.
295
Příklad 264 diacetát trans-3-(4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-benzyl-l,3-oxazolan-2-onu
a) 1 -(4-bromanilino)-3 -feny 1-2-propanol
Směs 4-bromanilinu (1,75 g, 0,0102 mol) a 2,3-epoxypropylbenzenu (1,77 g, 0,0132 mol) v methanolu (40 ml) se zahřívá pod refluxem po dobu 16 hodin. Směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (1:5) jako mobilní fázi, čímž se získá l-(4-bromanilino)-3-fenyl-2-propanol (2,2 g, 0,00719 mol) ve formě bezbarvého oleje.
‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 7,33 (m, 7H), 6,50 (d, 2H), 5,76 (t, 1H), 4,83 (d, 1H),
3,82 (m, 1H), 2,98 (m, 1H), 2,90 (m, 1H), 2,78 (dd, 1H), 2,67 (dd, 1H).
TLC (ethylacetát/heptan 1: 3) Rf 0,29.
b) 5-benzyl-3-(4-bromfenyl)-1,3-oxazolan-2-on
Roztok obsahující l-(4-bromanilino)-3-fenyl-2-propanol (1,90 g, 0,00621 mol), ΛζΑ-diizopropylethylamin (2,48 g, 0,0193 mol) a TVjV-dimethylaminopyridin (0,152 g, 0,00124 mol) v bezvodém dichlormethanu (64 ml) se ochladí na teplotu 0°C a po kapkách se přidá roztok trifosgenu (0,92 g, 0,0031 mol) v bezvodém dichlormethanu (16 ml). Reakční směs se pomalu ohřeje na pokojovou teplotu, zatímco se míchá pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (70 ml), solankou (60 ml) a suší síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (1:5) jako mobilní fázi, čímž se získá 5-benzyl-3-(4-bromfenyl)-l,3-oxazolan-2-on (1,25 g, 0,00377 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,54 (d, 2H), 7,47 (d, 2H), 7,27 (m, 5H), 4,95 (m, 1H), 4,12 (t, 1H), 3,78 (t, 1H), 3,07 (d, 2H).
TLC (ethylacetát/heptan 1:3) Rf 0,37.
c) 5-benzyl-3-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l ,3-oxazolan-2on « β • · »e · · · · β β e · · · · © © ο e 9 » <e © oce · β * 9 O fy # fy fy 9 t fy © β © 9 e © « fy e « « « « ·
296
Směs 5-benzyl-3-(4-bromfenyl)-l,3-oxazolan-2-onu (1,25 g, 0,00377 mol), diboronpinakolesteru (1,15 g, 0,00452 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,092 g, 0,000114 mol) a octanu draselného (1,12 g, 0,0113 mol) v W-dimethylformamidu (30 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku Do zbytku se přidá dichlormethan (100 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (1:5) jako mobilní fázi. Výsledné frakce se koncentrují. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá 5-benzyl-3-[4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-oxazolan-2-on (1,03 g, 0,0027 mol) ve formě bílé pevné látky.
Ή NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,65 (d, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,27 (m, 5H), 4,95 (m, IH), 4,12 (t, IH), 3,78 (t, IH), 3,07 (d, 2H), 1,28 (s, 12H).
TLC (ethylacetát/heptan 1:3) Rf0,25.
d) diacetát /ra«s-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l Vpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-benzyl-l,3-oxazolan-2-onu
Směs 5 -benzyl-3 - [4-(4,4,5,5 -tetramethyl-1,3,2 -dioxaborolan-2-y l)fenyl] -1,3oxazolan-2-onu (0,110 g, 0,00029 mol), /ra«,s-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,080 g, 0,000181 mol), tetrakis-(trifenylfosfin)palladia (0,012 g, 0,000011 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,056 g, 0,00045 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát Zra«ó-3-(4-{4-amino-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-benzyl-l,3oxazolan-2-onu (0,049 g, 0,000072 mol) ve formě bílé pevné látky.
'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, IH), 7,65 (m, 4H), 7,32 (m, 5H), 5,02 (m, IH),
4,64 (m, IH), 4,19 (t, IH), 3,85 (t, IH), 3,11 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,17 (s, 6H), 2,05 (m,
6H), 1,91 (s,6H), 1,49 (m,2H);
297
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,13 minut.
MS: MH+ 567.
Příklad 265 diacetát c/s-N 1 -(4-{4-amino-1 - [4-(4-methy lpi perazino)cyklohexy 1] -177-pyrazolo [3,4č/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-2-methyl-2-fenylpropanamidu
Roztok obsahuj ící cis-3 -(4-aminofenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (0,1 g, 0,000246 mol), α,α-dimethylfenyloctové kyseliny (0,045 g, 0,000271 mol), hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3ethylkarbodiimidu (0,071 g, 0,000369 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,0037 g, 0,00271 mol) v bezvodém AA-dimethylformamidu (5 ml) se míchá po dobu 5 minut. Pak se po kapkách přidá W-diizopropy lethy lamin (0,098 g, 0,00076 mol) a v míchání pod atmosférou dusíku se pokračuje po dobu 16 hodin. Poté se reakční směs koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitrilΟ,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát ců-Nl-(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -y 1} fenyl)-2methyl-2-fenylpropanamidu ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,29 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,82 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,38 (m, 4H), 7,27 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,59 (s, 6H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,59 minut.
MS: MH+ 553.
Příklady 266 a 267 acetát cw-4-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4í/jpyrimidin-3 -yl} anilino)-4-oxo-2-fenylbutanové kyseliny acetát cw-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4ř/Jpyrimidin-3-yl} anilino)-4-oxo-3-fenylbutanové kyseliny * fi « v r >' fi p ©« o C ť; fi C fi e β «? e· e> e o « t>
© t c c fi fi c fi o ® fi fi et t: o © c β fe e oeeefioc e e «ε e * e e o e
298
a) l-(4-bromfenyl)-3-fenyl-2, 5-pyrrolidindionu
Roztok 4-bromanilinu (5,48 g, 0,0318 mol) a anhydrid fenylsukcinové kyseliny (5,89 g, 0,0334 mol) v bežvodém benzenu (80 ml) se zahřívá pod refluxem po dobu 1,5 hodiny. Směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá acetylchlorid (60 ml) a roztok se zahřívá pod refluxem po dobu 1,5 hodiny. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a precipitát spojí filtrací, promyje diethyletherem a suší, čímž se získá l-(4-bromfenyl)-3-fenyl-2,5-pyrrolidindion (8,7 g, 0,0264 mol) ve formě bělavé pevné látky.
*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 7,72 (d, 2H), 7,40 (m, 7H), 4,33 (dd, 1H), 3,33 (dd, 1H), 2,94 (dd, 1H);
TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf0,34.
b) 3-fenyl-l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2,5-pyrrolidindion
Směs l-(4-bromfenyl)-3-fenyl-2,5-pyrrolidindionu (2,00 g, 0,00602 mol), diboronpinakolesteru (1,85 g, 0,00727 mol), [l,l'-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,148 g, 0,000182 mol) a octanu draselného (1,784 g, 0,0182 mol) v A,A-dimethylformamidu (40 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (100 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (1:4) jako mobilní fázi. Výsledné frakce se koncentrují. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá 3-fenyl-l-[4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2,5-pyrrolidindion (0,78 g, 0,00207 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 7,79 (d, 2H), 7,40 (m, 7H), 4,33 (dd, 1H), 3,33 (dd, 1H), 2,97 (dd, 1H), 1,31 (s, 12H);
TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf0,21
c) acetát cz.s-4-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 /7-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-3-yl}anilino)-4-oxo-2-fenylbutanové kyseliny a acetát cz\-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-3-yl} anilino)-4-oxo-3-fenylbutanové kyseliny (i e β β' o ί e ©β- * * ® » β ¢- ® e e fe $«· « » * e » β e tt <> ® © r © e e t ® per c ce>D fe b c ti p fe « t r, t· « e © « ti c g t e
299
Směs 3-fenyl-l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaboroIan-2-yl)fenyl]-2,5-pyrroIidindionu (0,35 g, 0,00093 mol), c«-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-ri]pyrimidin-4-aminu (0,34 g, 0,000773 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)palladia (0,053 g, 0,000046 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,24 g, 0,00193 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (14 ml) a vody (7 ml) pří teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát c/s-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl}anilino)-4-oxo-2-fenylbutanové kyseliny (0,150 g, 0,000233 mol) a acetát cA-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}anilino)-4-oxo-3-fenylbutanové kyseliny (0,11 g, 0,000171 mol) obě ve formě bílé pevné látky.
acetát cw-4-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} anilino)-4-oxo-2-fenylbutanové kyseliny lH NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 10,37 (s, IH), 8,21 (s, IH), 7,73 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,25 (m, 5H), 4,76 (m, IH), 4,00 (m, IH), 3,12 (dd, IH), 2,71 (dd, IH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5p m, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 10,54 minut.
MS: MH+ 583.
acetát c z.s-4 - (4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4J]pyrimidin-3-yl}anilino)-4-oxo-3-fenylbutanové kyseliny ‘H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 10,46 (s, IH), 8,21 (s, IH), 7,78 (d, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,41 (d, 5H), 7,31 (t, 2H), 7,24-(t, IH), 4,76 (m, IH), 4,16 (m, IH), 3,08 (dd, IH), 2,51 (dd, IH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,11 minut.
MS: MH+ 583.
-β β © β β © ο « G © β β 6 9 9 0 ¢(1 Ο © ©Ο © « * · · η <? ο » « * ο © <? e e « · c © « «· * » n c r> © · 4 · · ©
300
Příklad 268 cis-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 y 1} fenyl)(feny l)methy lkyanid
a) 2-fenyI-2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yí)fenyl]acetonitril
Směs (4-bromfenyl)(fenyl)methylkyanidu (0,604 g, 0,00222 mol), diboronpinakolesteru (0,677 g, 0,00266 mol), [Ι,Γbis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,054 g, 0,000067 mol) a octanu draselného (0,52 g, 0,00666 mol) v W-dimethylformamidu (30 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (80 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (1:9) jako mobilní fázi. Výsledné frakce se koncentrují. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát se spojí filtrací, čímž se získá 2-fenyl-2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]acetonitril (0,110 g, 0,000345 mol) ve formě bílé pevné látky.
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,67 (d, 2H), 7,40 (m, 7H), 5,87 (s, 1H), 1,31 (s, 12H); TLC (ethylacetát/heptan 1:9) Rf 0,18.
b) cis-(4~ {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)(fenyl)methylkyanid
Směs 2-fenyl-2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]acetonitrilu (0,120 g, 0,000376 mol), cz's-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (0,083 g, 0,000188 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,013 g, 0,000011 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,058 g, 0,00047 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá cL-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3 yl}fenyl)(fenyl)methylkyanid (0,025 g, 0,0000494 mol) ve formě bělavé pevné látky.
© tj
301 *H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,58 (d, 2H), 7,47 (tn, 4H), 7,38 (t, 1H), 5,93 (s, 1H), 4,76 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 μτη, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,95 minut.
MS: MH+ 507.
Příklad 269 diacetát cV-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,47]pyrimidin-3-yl)fenyl)-1,3-benzoxazol-2-aminu
a) V-(l ,3-benzoxazol-2-yl)-V-(4-bromfenyl)amin
4-Bromanilin (3,9 g, 0,0227 mol) se přidá do roztoku 2-chlorbenzoxazolu (1,16 g, 0,00755 mol) v xylenech a reakční směs se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 2 hodin, která se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (50 ml) a vodu (50 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá V-( 1,3-benzoxazol-2-yl)-V-(4-bromfenyl)amin (1,48 g, 0,00512 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 10,78 (s, 1H), 7,74 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,50 (m, 2H), 7,23 (t, 1H), 7,16 (t, 1H).
TLC (ethylacetát/heptan 1:3) Rf0,34.
b) V-(l,3-benzoxazol-2-yl)-/V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amin
Směs V-(l,3-benzoxazol-2-yl)-V-(4-bromfenyl)aminu (0,800 g, 0,00277 mol), diboronpinakolesteru (0,84 g, 0,00332 mol), [l,r-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,068 g, 0,000083 mol) a octanu draselného (0,81 g, 0,0083 mol) v Λ/V-dimethylformamidu (20 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (100 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve • <' C C -i· C f.' C c «» fi *’ t f> fi v <- t oce® o c c <· f o o e * * £ <: c c· c t? ( o c « «> t C <. < C O ft o pec c r c r »; <· fi <\ c n e e ® ©
302 směsi ethylacetátu a «-heptanu (1:5) jako mobilní fázi. Výsledné frakce se koncentrují. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá (V-(l,3-benzóxazol2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,59 g, 0,00176 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,80 (s, 1H), 7,78 (d, 2H), 7,68 (d, 2H), 7,50 (d, 2H), 7,23 (t, 1H), 7,16 (t, 1H), 1,26 (s, 12H)
TLC (ethylacetát/heptan 1:3) Rf0,29.
c) diacetát cis-N2~(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyr azolo [3,4-t/]py r imidin-3 -y 1} fenyl)-1,3 -benzoxazol -2-aminu
Směs V-(l ,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]aminu (0,073 g, 0,000217 mol), cz'ó-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]l/f-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-4-aminu (0,080 g, 0,000181 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,012 g, 0,000011 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,056 g, 0,000453 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát cA-/V2-(4-4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-ylfenyl)-l,3-benzoxazol-2aminu (0,082 g, 0,000128 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,66 (d, 2H), 7,51 (m, 2H), 7,25 (t, 1H), 7,15 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,80 minut.
MS: MH+ 524.
Meziprodukt A: 2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenoxy]benzaldehyd
Směs 2-(4-jodfenoxy)benzaldehydu (1,31 g, 4,03 mmol, 1 ekviv.), PdCl2(dppf)2 (0,092 g, 0,13 mmol, 0,03 ekviv.), diboronpinakolesteru (1,23 g, 4,84 mmol, 1,2 ekviv.) a octanu draselného (1,19 g, 12,1 mmol, 3,0 ekviv.) v DMF (15 ml) se zahřívá při teplotě < r <- ť < * ft c í r.
t. <! o: <: t. c »· <· f. r, « c; <·? r c> 0- c t- fe c <; c e, <. o r c r o «> r? r · c β ť fe ° <· (- < {, c. f <f fe r: r fe < o fe fe fe
303
80°C po dobu 5,5 hodiny. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v CH2CI2 (50 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu CH2CI2 (100 ml) a Et2O (100 ml), filtrát se koncentruje, čímž se získá hnědý olej, který se čistí chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 500 ml 5% MeOH/CH2Cl2), čímž se získá 2-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzaldehyd ve formě červeno-hnědého oleje (0,875 g, 2,70 mmol).
‘H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 10,30 (1H, s), 7,87-7,89 (1H, m), 7,69-7,75 (3H, m), 7,36-7,38 (1H, m), 7,05-7,22 (3H, m) a 1,29 (12H, s).
Příklad 270
2- [4-(4-amino-1 -cyklopentyl-17/-pyrazolo[3,4-</}pyrimidin-3-yl)fenoxy]acetamid
Směs 4-(4-amino-l-cyklopentyl-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)fenolu (0,050 g, 0,17 mmol, 1,0 ekviv.), dioxanu (1,7 ml) a hydridu sodného (60%, 0,010 g, 0,17 mmol, 1,0 ekviv.) se míchá při pokojové teplotě po dobu 10 minut. Přidá se jodacetamin (0,031 g, 0,17 mmol, 1,0 ekviv.). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 30 minut a pak zahřívá při teplotě 110°C po dobu 3,5 hodiny. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a výsledná pevná látka se odstraní filtrací s CH2C12 (5 ml) a EtOAc (5 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá žlutá pevná látka, která se trituruje z EtOAc, čímž se získá 2-[(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3- yl)oxy]acetamid ve formě béžové pevné látky (0,045 g, 0,13 mmol).
’H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δ 8,22 (1H, s), 7,60 (2H, d), 7,12 (2H, d), 5,20-5,25 (1H, m), 4,50 (2H, s), 2,02-2,10 (4H, m), 1,87-1,90 (2H, m), 1,68-1,71 (2H, m);
RP-HPLC (Delta Pak C 18,5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,38 minut.
MS: MH+ 353.
Příklad 271 methyl-5-[4-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-3-yl)fenoxy]-2-furoát
Směs 4-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidin-3-yl)fenolu (0,107 g,
0,362 mmol, 1,0 ekviv.), DMSO (0,5 ml), hydridu sodného (60%, 0,030 g, 0,72 mmol, 2,0 <<ř o
«?
í- < c c C (·. c >.· < o o σ
304 ekviv.) a methyl-5-nitro-2-furoátu (0,062 g, 0,36 mmol, 1,0 ekviv.) se zahřívá při teplotě 90°C po dobu 3 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu, nalije do ledové vody (10 ml) a extrahuje 3 podíly CH2C12 (50 ml každý). Spojené organické extrakty se promyjí 5% vodným roztokem KOH (50 ml) a organická vrstva se suší síranem sodným, filtruje a koncentruje, čímž se získá červený olej, který se čistí chromatografii na sloupci silikagelu (elucí 300 ml 5% MeOH/CH2Cl2), čímž se získá methyl-5-[4-(4-aminol-cyklopentyl-lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl)fenoxy]-2-furoát ve formě červené pevné látky (0,070 g, 0,17 mmol).
’H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δ 8,24 (1H, s), 7,707,74 (2H, m), 7,35-7,39 (3H, m), 6,9 (2H, bs), 6,02 (1H, s), 5,22-5,26 (1H, m), 3,79 (3H, s), 2,01-2,11 (4H, m), 1,88-1,91 (2H, m), 1,67-1,71 (2H, m).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 18,17 minut.
MS: MH+ 420.
Příklad 272
- [4-(4-amino-l-cyklopentyl-1 H-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl)fenoxy]-2-furoová kyselina
Směs methyl-5-[4-(4-amino-l-cyklopentyl-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl)fenoxy]-2-furoátu (0,030 g, 0,072 mmol, 1 ekviv.) a hydroxidu sodného (0,020 g, 0,50 mmol, 7 ekviv.) v 50% směsi EtOH ve vodě (1 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 6 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a zředí vodou (10 ml). Směs se neutralizuje by přidáním 1M HCI a extrahuje 2 podíly CH2C12 (20 ml každý) a 2 podíly EtOAc (20 ml každý). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným, filtrují a koncentrují, čímž se získá žlutý olej, který se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl 8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 50%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá světle hnědé pevná látka (0,009 g, 0,022 mmol).
*H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δ 13,0 (1H, bs), 8,23 (1H, s), 7,74 (2H, d), 7,35 (2H, d),
7,29 (1H, s), 6,03 (1H, s), 5,21-5, 28 (1H, m), 2,01-2,11 (4H, m), 1,89-1,90 (2H, m), 1,681,71 (2H, m).
• tt t> e (I « &
tt fl β & β ft C·
305
RP-HPLC (Hypercil Cl8, 5 pm, 100, 15 cm; 5%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), Rt 6,45 minut.
MS: MH+ 406.
Příklad 273 l-cyklopentyl-3-[4-(3-thienyloxy)fenyl]-lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amin
Směs 4-(4-amino-l-cyklopentyl-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl)fenolu (0,212 g,
0,718 mmol, 1 ekviv.), uhličitanu draselného (0,060 g, 0,43 mmol, 0,6 ekviv.), práškové mědi (0,015 g, 0,24 mmol, 0,33 ekviv.) a 3-bromthiofenu (0,09 ml, 0,9 mmol, 1,3 ekviv.) v DMF (7,2 ml) se zahřívá při teplotě 153°C po dobu 24 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu, koncentruje a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 10%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá 1 -cyklopentyi-3-[4-(3-thienyloxy)fenyl]- lH-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-amin ve formě světle hnědé pevné látky (0,060 g, 0,16 mmol).
’H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δ 9,77 (IH, s), 8,46 (IH, s), 8,41 (IH, s), 7,73-7,74 (IH, m), 7,57 (2H, d, J= 4,5 Hz), 7,467,48 (IH, m), 7,15 (IH, d, J= 5,2 Hz), 6,96 (2H, d, J= 8,6 Hz), 5,24-5, 30 (IH, m), 2,03-2,05 (4H, m), 1,89-1,93 (2H, m), 1,70-1,72 (2H, m). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 18,76 minut.
MS: MH+ 378.
Příklad 274 monoacetát cis-3 - {3 - [(benzo [ů] furan-2-y lmethyl)amino]feny 1} -1 - [4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-4-aminu
Směs cw-3-(3-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4íř]pyrimidin-4-aminu (0,107 g, 0,263 mmol, 1 ekviv.), ledové kyseliny octové (0,06 ml, 1,0 mmol, 3,8 ekviv.), benzo[/>]furan-2-karboxaldehydu (0,1 g, 0,3 mmol, 1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (0,212 g, 1,0 mmol, 3,8 ekviv.) a dichlorethanu (2 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 4,5 hodiny. Přidá se vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva se separuje a vodná vrstva se extrahuje 2 podíly CH2CI2 (10 ml t· η v ' cc t < r
V Λ C V <· c < ( i c e c f r C ''' * V í: f' C *
306 každý). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným, filtrují a koncentrují, čímž se získá žlutý olej, který se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 10%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá monoacetát cis-3-{3[(benzo[Z>]furan-2-ylmethyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,017 g, 0,031 mmol).
’H NMR δΗ 8,22 (ÍH, s), 7,51-7,58 (2H, m), 7,22-7,28 (3H, m), 6,98 (ÍH, s), 6,79-6,84 (2H, m), 6,59-6,62 (ÍH, m), 4,76-4,81 (ÍH, m), 4,50 (2H, d, J= 5,6 Hz), 2,19-2,24 (14H, m), 2,05-2,07 (2H, m), 1,91 (3H, s), 1,60-1,75 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8,5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,99 minut.
MS: MH+ 537.
Příklad 275 cis-3 - { 3 -[di-(2-fury lmethyl)amino]fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin
Směs cis-3 -(3 -aminofenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4č/jpyrhmdin-4-aminu (0,120 g, 0,296 mmol, 1 ekviv.), íurfuralu (0,03 ml, 0,3 mmol, 1,1 ekviv.), ledové kyseliny octové (0,07 ml, 1,1 mmol, 3,8 ekviv.) a triacetoxyborohydridu sodného (0,314 g, 1,48 mmol, 5,0 ekviv.) v dichlorethanu (2 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 60 hodin. Přidá se roztok nasyceného vodného hydrogenuhličitanu sodného (5 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva se extrahuje 2 podíly CH2CI2 (10 ml každý). Organické extrakty se suší síranem sodným, filtrují a koncentrují, čímž se získá žlutý olej. Čištěním chromatografii na sloupci silikagelu (elucí 200 ml 5% MeOH/CH2Cl2,100 ml 10% MeOH/CH2Cl2 a 300 ml 10:20: 70% MeOH/Et3N/CH2Cl2) se získá cis-3-{3-[di-(2-furylmethyl)amino]fenyl}-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,051 g, 0,10 mmol).
‘H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (ÍH, s), 7,60 (2H, s), 7,31-7,35 (ÍH, m), 7,19 (ÍH, s), 7,00 (ÍH, d, >8, 4Hz), 6,93 (ÍH, d, J= 7,6 Hz), 6,39 (2H, s), 6,32 (2H, s), 4,774,80 (ÍH, m), 4,60 (4H, s), 2,23-2,39 (11H, m), 2,16 (3H, s), 2,05-2,07 (2H, m), 1,59-1,71 (4H,m);
r © © »
f. Ě fi· t£ e; e ¢: fi fi f- fi c c r fi r- fi fi fi·
*. <- <v o t· fi « « » e>
• t* <>
e β ¢--» «
©
307
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,52 minut.
MS: MH+ 567.
Příklad 276 diacetát cz.v-A-[2-(3-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)benzyl]trifluormethansulfonamidu
Do směsi cz5-3-4-[2-(aminomethyl)fenoxy]fenyl-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,018 g, 0,035 mmol, 1 ekviv.) a pyridinu (0,4 ml) pri teplotě 0°C se po kapkách v průběhu 20 sekund přidá CF3SO2CI (0,05 ml, 0,04 mmol, 1,2 ekviv.). Reakční směs se nechá pomalu ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 3 hodin. Rozpouštědlo se odpařuje za sníženého tlaku a olejovitý žlutý zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 10%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá diacetát cA-A-[2-(3-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3yl}fenoxy)benzyl]trifluormethansulfonamidu (0,004 g, 0,006 mmol).
‘H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (1H, s), 7,61-7,67 (3H, m), 7,257,30 (2H, m), 7,19-7,23 (2H, m), 6,96-6,98 (1H, m), 4,77-4,81 (1H, m), 4,25 (2H, s), 2,09-2,54 (14H, m), 2,05-2,08 (2H, m), 1,91 (6H, s), 1,57-1,74 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 15,15 minut.
MS: MH+ 645.
Příklad 277 cw-2-(3-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-3yl} fenoxy) benzaldehyd
Směs cis-3 -jod-1 -[4-(4-methy lpiperazino)cyklohexy 1]-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,970 g, 2,20 mmol, 1 ekviv.), 2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzaldehydu (0,842 g, 2,60 mmol, 1,2 ekviv.), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,186 g, 0,180 mmol, 0,08 ekviv.), DME (9 ml) a <'c r-o ΐ· t; fí f>
k (.· e
C t C « c <·. ( f <· <; a c b
308 monohydrátu uhličitanu sodného (0,655 g, 5,30 mmol, 2,4 ekviv.) ve vodě (7 ml) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 7 hodin, pak se nechá vychladnout na pokojovou teplotu. Přidá se roztok nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a roztok se extrahuje EtOAc (25 ml). Organický extrakt se suší síranem sodným, filtruje a koncentruje, čímž se získá světle hnědá pevná látka. Triturací z Et2O (35 ml) se získá cis2-(3 - {4-amino-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo[3,4-</jpyrimidin-3 yl}fenoxy)benzaldehyd ve formě bělavé pevné látka (0,830 g, 1,62 mmol).
'H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δΗ 10,42 (1H, s), 8,24 (1H, s), 7,89 (1H, d, J=7,7Hz), 7,69-7,71 (3H, m), 7,30-7,36 (1H, m), 7,29 (2H, d, J=6,3 Hz), 7,16 (1H, d, >8,2 Hz), 4,794,81 (1H, m), 2,18-2,55 (11H, m), 2,17 (3H, s), 2,05-2,09 (2H, m), 1,56-1,71 (4H, m); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,56 minut.
MS:MH+512.
Příklad 278 cis-3-{3-[2-( 1 //-2-imidazolyl)fenoxy]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-</|pyrimidin-4-amin
Směs cz',y-2-(3 - {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4</)pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzaldehydu (0,102 g, 0,199 mmol, 1 ekviv.) glyoxalu (0,12 ml, 0,99 mmol, 5 ekviv.) a uhličitanu amonného (0,078 g, 0,99 mmol, 5 ekviv.) v methanolu (1 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidá se další glyoxal (0,20 ml, 1,6 mmol, 8,3 ekviv.) a uhličitan amonný (0,130 g, 1,66 mmol, 8,4 ekviv.) a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin. Surová reakční směs se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 A, 25 cm; 10%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá ďz'5,-3-{3-[2-(l//-2-imidazolyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimÍdin-4-atttin ve formě hnědé pevné látky (0,010 g, 0,018 mmol).
’H NMR (dg-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,23 (1 H, s), 8,11-8,13 (1H, dd, J= 7,7,1,9 Hz), 7,95 (1H, s), 7,66 (2H, d, J= 8,5 Hz), 7,34-7,39 (1H, m), 7,23-7,27 (3H, m), 7,077,19 (3H, m),
4,77-4,82 (1H, m), 2,16-2,56 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,05-2,11 (2H, m), 1,55-1,71 (4H, m);
• ♦.
*.*.**. fc fc fc * ·,· o ei, tí c · C fc ft fi ci o e & c.. · « λ «· ·
t.> c. ř> c o * (v f* * r , ť- P, «·. i·. t . ». · e t-. e> λ ří #? » »
309
RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 10,43 minut.
MS: MH+ 550.
Příklad 279 cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3 -yl} -2-methoxyfenyl)-2 -anilinoacetamíd
Směs 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,151 g, 0,356 mmol, 1 ekviv.), uhličitanu draselného (0,098 g, 0,711 mmol, 2 ekviv.) a chloracetylchloridu (0,04 ml, 0,5 mmol, 1,5 ekviv.) v DMF (1,5 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 minut, pak se přidá anilin (0,32 ml, 3,5 mmol, 10 ekviv.). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 72 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 10%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml), pak extrahuje CH2CI2 (25 ml). Organický extrakt se suší síranem sodným, filtruje a koncentruje, čímž se získá c/v-//l-(4{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cykIohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-</jpyrimidin-3-yl} -2methoxyfenyl)-2-anilinoacetamid ve formě žluté pevné látky (0,010 g, 0,017 mmol).
'H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,30 (1H, s), 8,35-8,38 (1H, m), 8,21 (1H, s), 7,217,23 (2H, m), 7,12-7,16 (2H, m), 6,64-6,66 (3H, m), 6,31-6,34 (1H, m), 4,77 4,81 (1H, m), 3,90 (2H, d, J= 6,0 Hz), 3,82 (3H, s), 2,21-2,51 (11H, m), 2,16 (3H, s), 2,06-2,08 (2H, m), 1,55-1,70 (4H,m);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,37 minut.
MS: MH+ 570.
Příklad 280 (25)-3-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-lazetanyl} propan-1,2-diol
Γ <·· © €
V Γ P <· i f- r © v © f r c, ( ' t © <? e ť' C c ti ©
310
Do roztoku 1 -(3 -azetanyl)-3-(4-fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidm-4aminu (0,05 g, 0,00014 mol) se přidá (R)-(+)-glycidol (0,05 M v izopropanolu, 2,8 ml, 0,00014 mol) při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 3 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi hydroxidu amonného, methanolu a dichlormethanu (2:7:91), poté hydroxidu amonného, methanolu a dichlormethanu (2:10:88) jako mobilní fázi, čímž se získá (2S)-3-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-azetanyl (propan-1,2-diol (0,023 g, 0,000053 mol).
*H NMR (chloro form-ď, 400 MHz) δ 8,31 (s, ÍH), 7,64 (d, 2H), 7,38 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 5,90 (br, 2H), 5,60 (m, ÍH), 3,97 (m, 3H), 3,88 (m, ÍH), 3,75 (m, 2H), 3,61 (m, ÍH), 2,80 (m, 2H).
RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25%-100% v průběhu 10 minut s 0,lM octanem amonným, 1 ml/min), Rt 8,6 minut.
MS: MH+ 433.
Příklad 281 (2/?)-3 - {3 -[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-1 azetanyl}propan-1,2-diol
Způsob přípravy je podobný jako syntéza (2S)-3-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-azetanylpropan-l,2-diolu za použití (S)-(-)-glycidolu.
’H NMR (chloroform-ď, 400 MHz) δ 8,36 (s, ÍH), 7,67 (d, 2H), 7,39 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 5,65 (br, 3H), 4,00 (m, 3H), 3,90 (m, ÍH), 3,75 (m, 2H), 3,62 (m, ÍH), 2,85 (m, 2H). RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25%-100% v průběhu 10 minut s 0,lM octanem amonným, 1 ml/min), Rt 8,76 minut.
MS: MH+ 433.
Příklad 282 /m-butyl-4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-1 -yl]-1 azetany lmethyl)-4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylát
a) terc-butyl-1 -oxa-6-azaspiro[2,5]oktan-6-karboxylát « toí i:· to
311
Směs trimethylsulfoxonium-j odidu (2,62 g, 0,012 mol) a hydridu sodného (0,44 g, 0,011 mol) v bezvodém dimethylsulfoxidu (30 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 30 minut. Reakční směs se ochladí na teplotu 10°C a přidá se terc-butyl-4-oxo-l-piperidinkarboxylát (2,0 g, 0,010 mol) v bezvodém dimethylsulfoxidu (10 ml). Reakční směs se ohřívá na pokojovou teplotu a míchá po dobu 1,5 hodiny. Směs se nalije do nasyceného vodného roztoku chloridu amonného (60 ml). Vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (2 x 100 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 60 ml) a solankou (1 x 50 ml) a suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá řerc-butyl-l-oxa-6-azaspiro[2,5]oktan-6-karboxylát (2,12 g, 0,0099 mol).
’H NMR (chloroform-íZ, 400 MHz) δ 3,74 (br, 2H), 3,44 (m, 2H), 2,69 (s, 2H), 1,80 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,46 (m, 2H)
TLC (ethylacetát/dichlormethan = 20:80) Rf 0,57.
fórobuty 1-4-(3-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-č/Jpyrimidin-1 -yl] -1 azetanylmethyl)-4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylát
Do směsi 1 -(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)- 177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,4 g, 0,0011 mol) v izopropanolu (40 ml) se přidá férc-butyl-l-oxa-6-azaspiro[2,5]oktan6-karboxylát (0,27 g, 0,0013 mol) při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 3,5 hodiny. Přidá se další /erobutyl-l-oxa-6azaspiro[2,5]oktan-6-karboxylát (0,13 g, 0,00061 mol) a směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 7 hodin. Přidá se další Zerc-butyl-l-oxa-6-azaspiro[2,5]oktan-6-karboxylát (0,13 g, 0,00061 mol) a směs se míchá při teplotě 60°C po dobu 18 hodin, pak při teplotě 80°C po dobu 8 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se suspenduje ve vodě (50 ml) a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 50 ml) a solankou (1 x 50 ml) a suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi methanolu a dichlormethanu (5:95), poté methanolu a dichlormethanu (10:90) jako mobilní fázi, čímž se získá Zerc-buty 1-4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfeny 1)-177pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-l-azetanylmethyl)-4-hydroxy-l-piperidinkarboxylát (0,243 g, 0,000425 mol).
ftr
O ft ť>
ft r č e r v
V fft ft ft ft ft r: o e e
312 *H NMR (chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,17 (m, 3H), 7,10 (d, 2H), 5,78 (m, 1H), 5,48 (br, 2H), 4,34 (br, 2H), 4,20 (br, 2H), 3,89 (br, 2H), 3,18 (br, 2H), 2,91 (br, 2H), 1,60 (br, 2H), (s, 9H).
RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25%-100% v průběhu 10 minut s 0,lM octanem amonným, 1 ml/min), Rt 10,7 minut.
MS:MH+572.
Příklad 283
4-(3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 yl] -1 -azetanylmethyl)-4-piperidinol
Do roztoku férc-butyl-4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-l-yl]-l-azetanylmethyl)-4-hydroxy-lpiperidinkarboxylátu (0,090 g, 0,00016 mol) v dichlormethanu (2 ml) se pomalu přidává 20 % roztok kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu (10 ml) při teplotě 0°C pod atmosférou dusíku. Směs se ohřívá na pokojovou teplotu a míchá po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Přidá se vodný roztok 5N hydroxidu sodného při teplotě 0°C, aby pH bylo 11. Vodná fáze se extrahuje dichlormethanem (2 x 30 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 60 ml) a solankou (1 x 60 ml) a suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá 4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-l-yl]-l-azetanylmethyl)-4-piperidinol (0,045 g, 0,000096 mol).
*H NMR (chloroform-ď, 400 MHz) δ 8,37 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,42 (t, 2H), 7,11 (m, 3H), 7,00 (d, 2H), 5,64 (m, 1H), 5,43 (br, 2H), 4,02 (m, 4H), 3,28 (br, 1H), 3,10 (m, 4H), 2,67 (s, 2H), 1,67 (m, 4H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,5 minut.
MS: MH+ 472.
Příklad 284
4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-c/jpyrimidin-1 -yl]-1 -azetanylmethyl)-1 methyl-4-piperidinol /·, f ; f ·, P> e; (.· ív <5 © « ti 4 í·;. ťj f.·! f f i «· (? Λι 0 fi Ci t? C, e. e © © «· © í-· r. fí ·.- ι λ r; r «
313
Směs 4-(3 -[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ďjpyrimidin-1 -yl]-1 -azetanylmethyl)-4-piperidinolu (0,035 g, 0,000074 mol) a formaldehydu (0,006 ml, 37 % ve vodě, 0,000082 mol) v dichlorethanu (4 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu jedné hodiny. Do směsi se přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,022 g, 0,000104 mol) a míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Přidají se molekulová síta (0,05 g, 3A, 4-8 mesh) a další formaldehyd (0,006 ml, 37 % ve vodě, 0,000082 mol) a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 25 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), Čímž se získá 4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-lyl]-l-azetanylmethyl)-l-methyl-4-piperidinol (0,020 g, 0,000041 mol).
'H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 8,63 (s, IH), 7,69 (d, 2H), 7,42 (t, 2H), 7,17 (m, 5H), 5,42 (m, IH), 3,88 (m, 2H), 3,67 (m, 2H), 2,37 (m, 2H), 2,25 (m, 2H), 2,14 (s, 3H), 1,90 (s, 2H), 1,50 (m, 4H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,5 minut.
MS: MH+ 486.
Obecný způsob:
Směs 1 -(3 -azetanyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidin-4-aminu (0,06 g, 0,00017 mol, 1 ekviv.), odpovídajícího chloracetamidu (0,0005 mol, 3 ekviv.) a VV-diizopropylethylaminu (0,033 g, 0,00026 mol, 1,5 ekviv.) v acetonitrilu (2,5 ml) se míchá při teplotě 75°C pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Směs se nalije do vody (10 ml) a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (2 x 10 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 10 ml) a solankou (1 x 10 ml) a suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5% -100% v průběhu 25 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získají odpovídající amid.
Příklad 285
V-methyl-2- {3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-1 -yl]-1 azetanyl] acetamid
314
a) chloracetamid: V-methyl-2-chloracetamid
Ή NMR (chloro form-ri, 400 MHz) δ 8,35 (s, ÍH), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,08 (d, 2H), 5,80 (br, 2H), 5,60 (m, ÍH), 4,00 (m, 4H), 3,37 (s, 2H), 2,85 (s, 3H). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5μ m, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,2 minut.
MS: MH+ 430.
Příklad 286
Λζ jV-dimethy 1-2- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidin-1 -yl] -1 azetanyl} acetamid
b) chloracetamid: Wdimethyl-2-chloracetamid ’H NMR (chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,33 (s, ÍH), 7,65 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,16 (m, 3H), 7,08 (d, 2H), 5,86 (br, 2H), 5,67 (m, ÍH), 4,15 (m, 2H), 3,90 (m, 2H), 3,57 (s, 2H), 3,00 (s, 3H), 2,90 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,3 minut.
MS: MH+ 444.
Příklad 287 /V-Ízopropyl-2- { 3 -[4-amino-3-(4-fenoxyfeny 1)-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-1 -yl]-1 azetanyl} acetamid
c) chloracetamid: /V-izopropyl-2-chloracetamid ’H NMR (chloroform-č/, 400 MHz) δ 8,36 (s, ÍH), 7,67 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,09 (d, 2H), 6,90 (br, ÍH), 5,66 (m, 3H), 4,11 (m, ÍH), 3,99 (m, 4H), 3,39 (s, 2H), 1,19 (d, 6H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,8 minut.
MS: MH+ 458.
* ♦ e, íí e* < .· c * » c * fc*»
i.· fc cí r < « r * » t\ β» ť* e <· .r « n r o- &
f. fc fc r- c * fi. e ♦· i ·.- i c- * * t i · · r v r β β> i·. *> ·
315
Příklad 288
A-(3-hydroxypropyl)-2-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-lyl]-l -azetanyl}acetamid
d) chloracetamid: A-(3-hydroxypropyl)-2-chloracetamid ‘H NMR (chloroform-/, 400 MHz) δ 8,31 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (d, 2H), 5,99 (br, 2H), 5,62 (m, 1H), 3,95 (m, 4H), 3,78 (m, 2H), 3,63 (m, 2H), 3,40 (s, 2H), 1,71 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 μιη, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,9 minut.
MS: MH+ 474.
Příklad 289 ethyl-2-[(2-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-l-yl]-lazetanyl}acetyl)amino] acetát (4037150)
e) chloracetamid: ethyl 2-[(2-chloracetyl)amino]acetát *H NMR (chloroform-/, 400 MHz) δ 8,37 (s, 1H), 7,66 (d, 2H), 7,65 (br, 1H), 7,40 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,09 (d, 2H), 5,67 (m, 1H), 5,56 (br, 2H), 4,23 (m, 2H), 4,10 (m, 4H), 4,00 (m, 2H), 3,47 (s, 2H), 1,29 (t, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 μπι, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,9 minut.
MS: MH+ 502.
Příklad 290
A-benzy 1-2- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-1 -yl] -1 azetany 1} acetamid
f) chloracetamid: A-benzyl-2-chloracetamid ’H NMR (chloroform-/, 400 MHz) δ 8,25 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,33 (m,
5H), 7,16 (m, 5H), 5,72 (m, 1H), 4,49 (d, 2H), 3,97 (m, 4H), 3,44 (s, 2H).
PC- (-fy fy fy fy fy fy 6 C <·· e ň fy © « © * © © © β <<
fy 1 (
Γ- < · + r e· c· c e o ř fy fy
316
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 10,7 minut,
MS: MH+ 506.
Příklad 291
V,V-methoxymethyl-2-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-l-yl]1 -azetanyl {acetamid
g) chloracetamid: W-methoxymethyl-2-chloracetamid ’H NMR (chloroform-J, 400 MHz) δ 8,37 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,08 (d, 2H), 5,71 (m, IH), 5,48 (br, 2H), 4,16 (m, 2H), 3,92 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,69 (s, 2H),3,18(s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,5 minut.
MS: MH+ 460.
Příklad 292
2- {3-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 7/-pyrazolo[3,4-ť/Jpyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -1 morfolino-1 -ethanon
h) chloracetamid: 2-chlor-1 -morfolino-1 -ethanon ‘H NMR (chloroform-ri, 400 MHz) δ 8,36 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,08 (d, 2H), 5,71 (m, 3H), 4,13 (m, 2H), 3,93 (m, 2H), 3,69 (br, 4H), 3,60 (br, 4H), 3,51 (s, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,3 minut.
MS:MH+486.
Příklad 293
V-(3-methyl-5-izoxazolyl)-2-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4í/Jpyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl {acetamid
i) chloracetamid: V-(3-methyl-5-izoxazolyl)-2-chloracetamid
Jř tt
P«>
ε © ε *s e= e>
*. r>
ft e »> © to f c · to. *>
rs r · © t>· to* to f
to
317 ’H NMR (chloroform-í/, 400 MHz) δ 10,10 (br, IH), 8,37 (s, IH), 7,66 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,19 (m, 3H), 7,09 (d, 2H), 6,26 (s, IH), 5,65 (m, IH), 4,07 (m, 4H), 3,54 (s, 2H), 2,28 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 10,3 minut.
MS:MH+497.
Příklad 294
- {3 -[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -2-( 1H-4imidazolyl)-1 -ethanon
Směs l~(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu(0,05 g, 0,00014 mol), 2-(lH-4-imidazolyl)-acetátu sodného (0,0026 g, 0,000175 mol), hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (0,0034 g, 0,000175 mol), A/A-diizopropylethylaminu (0,033 g, 0,00026 mol) a 1-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodém ΛζΑ-dimethylformamidu (6 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá l-{3-[4-amino-3(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -y 1]-1 -azetanyl} -2-( 1 H-4-imidazoly 1)-1 ethanon (0,018 g, 0,00004 mol).
’H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 11,90 (br, IH), 8,27 (s, IH), 7,71 (d, 2H), 7,53 (s, IH), 7,42 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 6,92 (br, IH), 5,73 (m, IH), 4,74 (m, IH), 4,61 (m, IH), 4,42 (m, 2H), 3,42 (s, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,0 minut.
MS: MH+ 467.
Příklad 295 l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl}-3-(1//-4imidazolyl)-1 -propanon «v e o <- <·. © © ť> C <· ο β c to S © c to toto
318
Směs 1 -(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (0,10 g, 0,00028 mol), 3-(177-4-imidazolyl) propanové kyseliny (0,050 g, 0,00035 mol), hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (0,0068 g, 0,00035 mol), AA-diizopropy lethy laminu (0,068 g, 0,00053 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,038 g, 0,00028 mol) v bezvodém ΛζΑ-dimethylformamidu (13 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (5 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá l-{3-[4-amino-3(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-1 -yl]-l-azetanyl} -3 -(177-4-imidazoly 1)-1propanon (0,040 g, 0,00008 mol).
’H NMR (chloroform-J, 400 MHz) δ 8,96 (s, 1H), 7,77 (br, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,17 (m, 3H), 7,08 (m, 2H), 6,90 (br, 1H), 5,78 (m, 1H), 5,56 (br, 2H), 4,76 (m, 1H), 4,57 (m, 3H), 2,98 (m, 2H), 2,55 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,0 minut.
MS:MH+481.
Obecný způsob
Do směsi 1 -(3 -azetanyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00014 mol, 1 ekviv.) a uhličitanu draselného (0,039 g, 0,00028 mol, 2 ekviv.) v bezvodém ΛζΑ-dimethylformamidu se přidá chloracetylchlorid (0,031 g, 0,00028 mol, 2 ekviv.) při pokojové teplotě. Směs se před přidáním aminu (0,0014 mol, 10 ekviv.) míchá po dobu 10 minut. Směs se v závislosti na aminu míchá při pokojové teplotě od 1,5 hodiny až 2 dnů. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje s vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získají odpovídající acetamidy.
319
Příklad 296 l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-7]pyrimidin-l-yl]-l-azetanyl}-2-[(2hydroxyethy l)amino] -1 -ethanon
a) amin: 2-amino-1-ethanol !H NMR (chloroform-/, 400 MHz) δ 8,37 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,15 (m, 3H), 7,08 (m, 2H), 5,83 (m, 1H), 5,57 (br, 2H), 4,82 (m, 1H), 4,65 (m, 3H), 3,71 (m, 2H), 3,45 (tn, 2H), 2,92 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,7 minut.
MS: MH+ 460.
Příklad 297 l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ífJpyrimidin-l-yl]-l-azetanyl}-2-[(2methoxy ethyl)amino]-1 -ethanon
b) amin: 2-methoxy-1 -ethanamin ]H NMR (chloroform-/, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (m, 2H), 5,83 (m, 1H), 5,54 (br, 2H), 4,81 (m, 1H), 4,64 (m, 2H), 4,56 (m, 1H),
3,55 (t, 2H), 3,41 (s, 2H), 3,37 (s, 3H), 2,88 (t, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,0 minut.
MS:MH+474.
Příklad 298 l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4~/Jpyrimidin-l-yl]-l-azetanyl}-2-[(3hydroxypropyl)amino]-1 -ethanon
c) amin: 3-amino-1-propanol ‘H NMR (chloroform-/, 400 MHz) δ 8,37 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (m, 2H), 5,86 (m, 1H), 5,54 (br, 2H), 4,81 (m, 1H), 4,64 (m, 3H), 3,87 (m, 2H), 3,48 (m, 2H), 3,01 (m, 2H), 1,83 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,7 minut.
«» «*
320 <- e © c © r í· c e «4 β » β · * · * β · 9 9 9 9 *· 4 » ♦ • · ·
MS:MH+474
Příklad 299
- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-1 -y 1]-1 -azetanyl} -2- [(2,3 dihydroxypropyl)amino]-1 -ethanon
d) amin: 3-amino-l,2-propandiol lH NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,72 (d, 2H), 7,46 (in, 2H), 7,16 (m, 5H), 5,73 (m, 1H), 4,67 (m, 1H), 4,59 (m, 2H), 4,37 (m, 2H), 3,53 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 3,22 (m, 2H), 2,59 (m, 1H), 2,45 (m, 1H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,6 minut.
MS: MH+ 490.
Příklad 300
- {3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl}-2[(tetrahydro-2-furanylmethyl)amino]-1 -ethanon
e) amin: tetrahydro-2-furanylmethanamin *H NMR (chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (m, 2H), 5,81 (m, 1H), 5,54 (br, 2H), 4,80 (m, 1H), 4,64 (m, 2H), 4,57 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,87 (m, 1H), 3,76 (m, 1H), 3,42 (m, 2H), 2,83 (m, 1H), 2,74 (m, 1H), 2,00 (m, 1H), 1,89 (m, 2H), 1,57 (m, 1H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,3 minut.
MS: MH+ 500.
Příklad 301
f) amin: 2-piperidino-l-ethanamin
- {3- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-í/jpyrÍmidin-1 -y 1]-1 -azetanyl} -2- [(2piperidinoethyl)amino]-1 -ethanon γ * c- C f' C #· * ΐ··
Ρ f‘ ft t C, e C « tu e β
e.
c, 9 e f r t ř řř a
321 ‘H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 8,27 (s, ÍH), 7,70 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 5H), 5,73 (m, ÍH), 4,60 (m, 2H), 4,36 (m, 2H), 3,24 (d, 2H), 2,60 (m, 2H), 2,36 (m, 6H), 1,49 (m, 4H), 1,36 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5μ m, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,4 minut.
MS: MH+ 527.
Příklad 302
g) amin: V,N,N-trimethyl-l,2-ethandiamin
- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -y 1]-1 -azetanyl} -2- [[2(dimethylamino)ethyl](methyl)amino]-1 -ethanon *H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 8,27 (s, ÍH), 7,70 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,17 (m, 5H), 5,75 (m, ÍH), 4,70 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 3,22 (d, 2H), 2,75 (br, 2H), 2,61 (m, 2H), 2,47 (s, 6H), 2,29 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,4 minut.
MS:MH+501.
Příklad 303
h) amin: N, TV-dimethyl-1,2-ethandiamin acetát l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-azetanyl}-2{[2-(dimethylamino)ethyl]amino} -1 -ethanonu *H NMR (chloroform-d, 400 MHz) δ 8,33 (s, ÍH), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, 3H), 7,11 (m, 2H), 5,81 (br, 3H), 4,81 (m, ÍH), 4,59 (m, 3H), 3,38 (s, 2H), 2,89 (t, 2H),
2,68 (t, 2H), 2,43 (s, 6H), 2,05 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,0 minut.
MS: MH+ 487.
c
322
£.·<!
© ř e © fe « fe í <· fe fe t· fe <>feV 45 V>
ť {>Cfe fe c fe fe c ffe cti fe t fe *3 fe < íi » (} <: ft fe fe «·’ fe ť -fe ©
Příklad 304
i) amin: A-methyl-W(l-methyl-4-piperidyl)amin
- {3-[4-amino-3-(4-fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -2[methyl( 1 -methy l-4-piperidyl)amino] -1 -ethanonu *H NMR (chloroform-d, 400 MHz) δ 8,36 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (m, 2H), 5,76 (m, 1H), 5,58 (br, 2H), 4,87 (m, 1H), 4,79 (m, 1H), 4,62 (m, 1H),
4,55 (m, 1H), 3,27 (m, 2H), 2,97 (br, 2H), 2,51 (br, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,04 (br, 2H), 1,79 (br, 2H), 1,65 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,1 minut.
MS: MH+ 527.
Příklad 305
j) amin: 2-morfolino-1 -ethanamin
- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfeny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-</Jpyrimidin-1 -y 1]-1 -azetanyl} -2- [(2morfolinoethyl)amino]-1 -ethanon ’H NMR (chloroform-ri, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,19 (m, 3H), 7,09 (m, 2H), 5,86 (m, 1H), 5,50 (br, 2H), 4,82 (m, 1H), 4,67 (m, 3H), 3,77 (m, 4H), 3,50 (s, 2H), 2,92 (t, 2H), 2,66 (t, 2H), 2,57 (br, 4H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,1 minut.
MS: MH+ 529.
Příklad 306
k) amin: 3-morfolino-l-propanamin
- {3 -[4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 Z/-pyrazolo[3,4-úQpyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -2-[(3morfolinopropyl)amino]-1 -ethanon ’H NMR (chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m,
3H), 7,10 (m, 2H), 5,85 (m, 1H), 5,54 (br, 2H), 4,81 (m, 1H), 4,64 (m, 3H), 3,74 (m, 4H),
3,40 (s, 2H), 2,83 (br, 2H), 2,52 (br, 6H), 1,80 (br, 2H).
c
V ¢,, o,
Φ Γ 0 ř' ty C
Ě> c ti es
323
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,9 minut.
MS: MH+543.
Příklad 307
l) amin: 3-(177-1 -imidazolyl)-1 -propanamin
- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -2 - {[3 (177-1 -imidazolyl) propyl]amino} -1 -ethanon 'H NMR (chloroform-//, 400 MHz) δ 8, 37 (s, ÍH), 7,65 (d, 2H), 7,40 (m, 3H), 7,15 (m, 3H), 7,08 (m, 3H), 6,93 (s, ÍH), 5,82 (m, ÍH), 5,62 (br, 2H), 4,75 (m, ÍH), 4,62 (m, 3H), 4,07 (t, 2H), 3,27 (s, 2H), 2,58 (t, 2H), 1,97 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,7 minut.
MS: MH+ 524.
Příklad 308
m) amin: l-(3-aminopropyl)-2-pyrrolidinon
- {3-[(2- {3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -2oxoethyl)amino]propyl} -2 -pyrrolidinon *H NMR (chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,38 (s, ÍH), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (m, 2H), 5,82 (m, ÍH), 5,54 (br, 2H), 4,81 (m, ÍH), 4,64 (m, 3H), 3,42 (m, 6H), 2,79 (t, 2H), 2,42 (t, 2H), 2,07 (m, 2H), 1,86 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,0 minut.
MS: MH+ 541.
Příklad 309
n) amin: 4-piperidinol
- {3 -[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrÍmidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -2-(4hydroxypiperidino)-1 -ethanon r r e ©» < © fí fí β
* e c· fífí e-^ ©e fe r- © · e t>
fí fí ® « * © < - fe · » © é- ť 8 » C •fe fe © © í f,‘ « €
324 ‘H NMR (chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,38 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,09 (m, 2H), 5,77 (m, 1H), 5,57 (br, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,63 (m, 1H),
4,56 (m, 1H), 3,73 (br, 1H), 3,18 (s, 2H), 2,91 (br, 2H), 2,38 (br, 2H), 1,95 (br, 2H), 1,62 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,9 minut.
MS: MH+ 500.
Příklad 310
o) amin: 4-piperidylmethanol
- {3-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 /7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -2 - [4 (hydroxymethyl)piperidino]-l-ethanon ‘H NMR (chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,36 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (m, 2H), 5,78 (m, 1H), 5,64 (br, 2H), 4,89 (m, 1H), 4,81 (m, 1H), 4,62 (m, 1H), 4,55 (m, 1H), 3,49 (m, 2H), 3,13 (s, 2H), 2,97 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 1,74 (m, 2H), 1,49 (br, 1H), 1,30 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,0 minut.
MS:MH+514.
Příklad 311
p) amin: 1-(2-methoxyethyl)piperazin
- {3 -[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/|pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -2- [4-(2methoxyethyl)piperidino]-1 -ethanon ’H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,26 (s, 1H), 7,71 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 5H),
5,69 (m, 1H), 4,73 (m, 2H), 4,38 (m, 2H), 3,39 (t, 2H), 3,30 (s, 2H), 3,21 (s, 3H), 3,05 (m, 2H), 2,43 (br, 8H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), R, 9,0 minut, MS :543.
*<
β *·
325
Příklad 312
q) amin: morfolin l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidin-l-yI]-lazetanyl]-2-morfolino-1-ethanon *H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 8,26 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 5H),
5,70 (m, 1H), 4,73 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 3,57 (m, 4H), 3,08 (m, 2H), 2,44 (m, 4H). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,6 minut.
MS:MH+486.
Příklad 313
r) amin: 1-methy lpiperazin
- {3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetany 1} -2-(4methylpiperazino)-1 -ethanon ’H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 8,26 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,16 (m, 5H),
5,70 (m, 1H), 4,70 (m, 2H), 4,35 (m, 2H), 3,29 (s, 2H), 3,06 (m, 2H), 2,45 (br, 6H), 2,16 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,0 minut.
MS: MH+ 499.
Příklad 314
s) Amin: 4-piperidinopiperidin l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidin-l-yl]-l-azetanyl}-2~[4(piperid-1 -y l)piperidino] -1 -ethanon 'H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 8,26 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,18 (m, 5H),
5,70 (m, 1H), 4,73 (m, 2H), 4,40 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 2,88 (m, 4H), 2,38 (br, 4H), 2,13 (m, 1H), 2,00 (m, 2H), 1,61 (br, 2H), 1,43 (br, 6H), 1,34 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,2 minut.
MS: MH+ 567.
c /· c r e <·
É ť C £·<· e« + c c V;
e f t? t? t c |s t í f f.‘ r c c o
326
Příklad 315
t) Amin: 1//-imidazo 1
-{3 - [4-amino-3 -(4-fenoxy feny 1)-1 /7-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl}-2-( 1 Η-1 imidazolyl)-1 -ethanon ‘H NMR (chloro form-<7, 400 MHz) δ 8,31 (s, 1H), 7,87 (br, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 4H), 7,10 (m, 3H), 5,90 (br, 2H), 5,80 (m, 1H), 4,82 (m, 1H), 4,72 (m, 3H), 4,59 (m, 1H), 4,47 (m, 1H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,2 minut.
MS: MH+ 467.
Příklad 316 acetát 1 - {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 /7-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -2(methylamino)-1 -ethanonu
Směs l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazoio[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00014 mol), 2-[(fórc-butoxykarbonyl)(methyl)amino]octové kyseliny (0,0033 g, 0,000175 mol), hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (0,0034 g, 0,000175 mol), A/V-diizopropylethy laminu (0,033 g, 0,00026 mol) a l-hydroxy-7azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodém Λ/N-dimethy lformamidu (6 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x
21,1 mm; 5% -100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá férc-butyl-A-(2- {3 -[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 /7-pyrazolo [3,4-</)pyrimidin-1 -y 1 ]1-azetanyl }-2-oxoethyl)-N-methylkarbamát. Pevná látka se rozpustí v dichlormethanu (2 ml) a do reakční směsi se při teplotě 0°C pomalu přidá 25 % roztok kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu (4 ml). Reakční směs se míchá po dobu 5 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a při teplotě 0°C se přidá 5N vodný roztok hydroxidu sodného, aby pH bylo 11. Vodná fáze se extrahuje díchlormethanem (2 x 30 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 60 ml) a solankou (1 x 60 ml) a suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá acetát l-{3, ti C e »». G « © <? * 9 « < t f. f í· < <> ( 9 {- í (-. © t> C 9 Ó β ft ř /'. < t: *: ( ♦ e « ♦
·.( <·« e-t '.t <· tor© *♦·
327 [4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -2(dimethylamino)-l -ethanonu (0,022 g, 0,00004 mol).
Ή NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 5,75 (m, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 3,18 (s, 2H), 2,25 (s, 3H), 1,90 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,9 minut.
MS: MH+ 430.
Příklad 317 acetát l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-l-yl]-l-azetanyl}-2(dimethylamino)-1 -ethanonu
Směs 1 -(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00014 mol), 2-(dimethylamino)octové kyseliny (0,0018 g, 0,000175 mol), hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (0,0034 g, 0,000175 mol), VV-diizopropylethylaminu (0,033 g, 0,00026 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 moi) v bezvodém ΛζΑ-dimethylformamidu (6 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá acetát l-{3-[4amino-3 -(4-fenoxyfeny 1)-1 V-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-1 -yl] -1 -azetanyl} -2(dimethy lamino)-1 -ethanonu (0,022 g, 0,00004 mol).
'H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 5,69 (m, 1H), 4,70 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 2,97 (m, 2H), 2,20 (s, 6H), 1,89 (s, 3H). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,6 minut.
MS:MH+444.
©fi ©
©e o
β « © c ©<f t>
<? ©· ťi-o © * © c- © o e < c o v
328
Příklad 318
- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxy feny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -3 (diethylamiňo)-1 -propanon
Směs l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00014 mol), hydrochloridu 3-(diethylamino)propionové kyseliny (0,0032 g, 0,000175 mol), hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (0,0034 g, 0,000175 mol), 7V,/V-diizopropylethylaminu (0,068 g, 0,00053 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodém N, //-dimethylformamidu (6 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá l-{3[4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-1 -yl] -1 -azetanyl} -3 (diethylamiňo)-1-propanon (0,025 g, 0,00005 mol).
’H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 8,26 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,14 (m, 5H),
5,70 (m, 1H), 4,67 (m, 2H), 4,37 (m, 2H), 2,66 (m, 2H), 2,45 (m, 4H), 2,21 (m, 2H), 0,95 (m, 6H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,3 minut.
MS: MH+ 486.
Příklad 319 acetát 1 - {4- [4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -y l]piperidino } -2(methylamino)-1 -ethanonu
Směs 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidyl)- l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,054 g, 0,00014 mol), 2-[(fórc-butoxykarbonyl)(methyl)amino]octové kyseliny (0,0033 g, 0,000175 mol), hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (0,0034 g, 0,000175 mol), N,V-diizopropylethylaminu (0,033 g, 0,00026 mol) a l-hydroxy-7azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodém MA-dimethylformamidu (6 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se
c. r. <. ř·, <· « f, < · 4 f » f ,· ci> ť f. t fv . , o o i. e ·.- '·'> f
r. - í o i . 0 ( > r © t l t i <· V Ϊ!Ο *?·«' <'«>€'·* <-0*
329 odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x
21,1 mm; 5% -100% v průběhu 35 minut s O,1M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá terc-butyl-V-(4-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lZ/-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-lyljpiperidino }-2-oxoethyl)-V-methylkarbamát. Pevná látka se rozpustí v dichlormethanu (2 ml) a při teplotě 0°C do reakční směsi se pomalu přidá 25 % trifluoroctová kyselina v dichlormethanu (4 ml). Reakční směs se míchá po dobu 5 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se při teplotě 0°C přidá 5N vodný roztok hydroxidu sodného, aby pH bylo 11. Vodná fáze se extrahuje dichlormethanem (2 x 30 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 60 ml) a solankou (1 x 60 ml) a suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá acetát 1 - {4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l -yljpiperidino} -2(methylamino)-1-ethanonu (0,010 g, 0,00002 mol).
‘H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,25 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,13 (m, 5H), 4,94 (br, IH), 4,53 (br, IH), 3,99 (br, IH), 3,36 (m, 2H), 3,21 (br, IH), 2,85 (br IH), 2,26 (s, 3H), 2,10 (br, IH), 1,96 (br, 3H), 1,85 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,1 minut.
MS: MH+ 458.
Příklad 320 l-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-l-yl]piperidino}-2(dimethylamino)-1 -ethanon
Směs 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidy 1)-1 H-pyrazolo [3,4-ďJpy rimidin-4-aminu (0,054 g, 0,00014 mol), 2-(dimethylamino)octové kyseliny (0,0018 g, 0,000175 mol), hydrochloridu 1-(3-dimethy laminopropyl)-3-ethyIkarbodiimidu (0,0034 g, 0,000175 mol), W-diizopropylethylamin (0,033 g, 0,00026 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodém W-dimethylformamidu (6 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá l-4-[4-amino-3* * · C * « ® ft « ♦ © * * 4 6 « « « <·»3 © « <?
C ftft € » β € < « e &&
»♦ eft ♦ ft « e * 4 ft « ft ft • ♦ e β ft · ft « ·
330 (4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-l-yl]piperidino}-2-(diniethylamino)-lethanon(dimethylamino)-l-ethanon (0,031 g, 0,00007 mol).
]H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,25 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 4,97 (br, 1H), 4,50 (br, 1H), 4,22 (br, 1H), 3,25 (br, 1H), 3,12 (m, 2H), 2,83 (br, 1H), 2,21 (s, 6H), 2,16 (br, 1H), 1,90 (br, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,3 minut.
MS: MH+ 472.
Příklad 321 acetát 1 - {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]piperidino} -3 (diethylamino)-1 -propanonu
Směs 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 Z/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,054 g, 0,00014 mol), hydrochloridu 3-(diethylamino)propionové kyseliny (0,0032 g, 0,000175 mol), hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (0,0034 g, 0,000175 mol), W-'diizopropylethylaminu (0,068 g, 0,00053 mol) a l-hydroxy-7azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) V bezvodém A,A-dimethylformamidu (6 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x
21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá acetát 1 - {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-e/]pyrimidin-1 -yljpiperidino}-3-(diethylamino)-lpropanonu (0,038 g, 0,00006 mol).
*H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 8,25 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 4,97 (br, 1H), 4,52 (br, 1H), 4,03 (br, 1H), 3,27 (br, 1H), 2,80 (br, 1H), 2,66 (m, 2H), 2,49 (m, 8H), 2,11 (br, 1H), 1,95 (br, 3H), 1,87 (s, 3H), 0,93 (m, 6H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5p m, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,7 minut.
MS: MH+514.
Obecný způsob t* ( «ř<
ΐ €
t- e »'j ř>.
e ® < c t- v v r· t e «- z
-331
Do směsi 3-(4-fenoxyfenyl)-l -(4-piperidyl)-l A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00013 mol, 1 ekviv.) a uhličitanu draselného (0,036 g, 0,00026 mol, 2 ekviv.) v bezvodém AA-dimethylformamidu (3 ml) se při pokojové teplotě přidá chloracetylchlorid (0,028 g, 0,00026 mol, 2 ekviv.). Směs se míchá před přidáním aminu po dobu 10 minut (0,0013 mol, 10 ekviv.). Směs se míchá při pokojové teplotě 3 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získají odpovídající acetamidy.
Příklad 322
a) amin: morfolin acetát 1 - {4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l -yl]piperidino} -2morfolino-1 -ethanonu ’H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 8,24 (s, IH), 7,65 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,16 (m, 5H), 4,99 (m, IH), 4,47 (br, IH), 4,19 (br, IH), 3,58 (m, 4H), 3,25 (m, 2H), 3,11 (m, IH), 2,83 (br, IH), 2,43 (m, 4H), 2,25 (br, IH), 1,99 (br, 3H), 1,89 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,7 minut.
MS: MH+514.
Příklad 323
b) amin: 1-methy lpiperazin acetát 1 - {4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</)pyrimidin-1 -yljpiperidino} -2(4-methylpiperazino)-l -ethanonu ’H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 8,24 (s, IH), 7,65 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,16 (m, 5H), 4,99 (m, IH), 4,47 (br, IH), 4,19 (br, IH), 3,29 (m, 2H), 3,22 (m, 2H), 3,05 (m, IH), 2,80 (br, IH), 2,33 (br, 6H), 2,22 (br, IH), 2,13 (s, 3H), 1,94 (br, 3H), 1,89 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,3 minut.
MS: MH+ 527.
o c e <©© <, <> · β · & ‘,’ Ř * '0 9 « fc « c fy í- j e «t? fr$> ·· f< č c e # < ® <? π o · » e «' c e e » é o t <. 4 · « t c fc €> « »«? e
332
Příklady 324 a 325 cis- a trans-2-{ 4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-1 hydroxycyklohexyl {octová kyselina
a) cis- a /rnns-íerc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyraz.olo[3,4-</]pyrimidin1 -yl] -1 -hydroxycyklohexyl} acetát
Suspenze kyseliny se promyje zinkovým prachem (0,350 g, 0,00535 mol) a chloridem měďným (0,053 g, 0,000535 mol) v bezvodém tetrahydrofuranu (10 ml) se zahřívá pod refluxem po dobu 30 minut. Zahřívám se přeruší a ihned se přidá další podíl (1 ml) roztoku íerc-butyl-2-bromacetátu (0,261 g, 0,00134 mol) v tetrahydrofuranu (10 ml). Směs se míchá 5 minut, pak se po kapkách přidá zbylý podíl směsi, směs se zahřívá pod refluxem po dobu 30 minut, ochladí na pokojovou teplotu a v průběhu 5 minut se po kapkách přidá roztok 4-(4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-lcyklohexanonu (0,200 g, 0,00053 mol) v bezvodém tetrahydrofuranu (5 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě 4 hodin, nezreagovaný zinek se odstraní filtrací, promyje etherem (3x5 ml), filtrát se promyje vodou (3x5 ml) a solankou (10 ml). Organická vrstva se suší síranem sodným a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Poměr cis a trans izomerů v surové látce činí (1:1). Izomery se separují zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu a methanolu (98:2). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá méně polární /ra/K-ferc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo[3,4-J|pyrimidin-l-yl]-l-hydroxycyklohexyl}acetát ve formě bílé pevné látky (0,092 g, 0,00018 mol) a polárnější czs-/erc-butyl-2-{4-[4-ammo-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-hydroxycyklohexyl{acetát ve formě bílé pevné látky (0,049 g, 0,000096 mol).
czÁ-fórc-butyl-2-{4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1 -yl]-1 hydroxycyklohexyl} acetát !H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) eS 8,23 (s, IH), 7,66 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,11-7,20 (m, 5H), 4,70-4,84 (m, IH), 2,36 (s, 2H), 1,89-2,12 (m, 4H), 1,51-1,67 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,37-1,42 (m, 4H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5μ m, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 19,31 minut;
MS: MH+516.
ί c, £ c . fi f Λ c r <· 8 <-· e
C t í. fi f? C « !, I· e f r © fi.e <f>€O »<fi
333 trans-terc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-1 -yl]-1 hydroxy cyklohexyl} acetát *H NMR (DMSO-de 400 MHz) F 8,23 (s, 1H), 7,66 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,11-7,20 (m, 5H), 4,45-4,61 (m, 1H), 2,36 (s, 2H), 1,78-1,85 (m, 2H), 1,64-1,71 (m, 2H), 1,4 (s, 9H), 1,36-1,45 (m, 4H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5μ m, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut I ml/min), Rt 19,64 minut;
MS: MH+516.
czÁ-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-l-yl]-lhydroxycyklohexyl} octová kyselina
CA-/erc-butyl-2-(4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-1 yl]-l-hydroxycyklohexyl}acetát (0,092 g, 0,000178 mol) se nechá reagovat s roztokem 20% trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu (10 ml) při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 45 minut. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se rozpustí v ethylacetátu (25 ml) a promyje vodou (3 x 10 ml), roztok se suší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se suspenduje ve vodě (25 ml) a lyofilizuje, čímž se získá czs-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-l-yl]-lhydroxycyklohexyl} octové kyseliny ve formě bílého prášku (0,078 g, 0,000170 mol).
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,32 (s, 1H), 7,66 (d, 2H), 7,44-(t, 2H), 7,11-7,22 (m, 5H), 4,62-4,67 (m, 1H), 2,39 (s, 2H), 2,27-2,43 (m, 2H), 1,55-1,90 (m, 6H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 μζη, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,65 minut.
MS: MH+460.
/ra«.s-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-l-yl]-lhydroxycyklohexyl} octovákyselina
7razw-férc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-lyl]-l-hydroxycyklohexyl}acetát (0,049 g, 0,000096 mol) se nechá reagovat s roztokem 20% trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu (10 ml) při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 45 minut. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se rozpustí v ethylacetátu (25 ml) a promyje vodou (3x10 ml). Roztok se suší síranem hořečnatým a «4 *4 t»
9 ·
9 · 9 • » 9 9 « 9 «
f. 9 • e • 9 » «9« e · • β 4 *
*999
334 rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se suspenduje ve vodě (25 ml) a lyofilizuje, čímž se získá trans 2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-l-yl]-lhydroxycyklohexyl}octová kyselina ve formě bílého prášku (0,038 g, 0,000083 mol).
’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,36 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,44-(t, 2H), 7,11-7,22 (m, 5H), 4,72-4,79 (m, 1H), 1,99 (s, 2H), 1,91-2,09 (m, 6H), 1,61-1,65 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,46 minut.
MS: MH+460.
Příklad 326 trn«5-l-{3-[(benzyloxy){3-[(benzyloxy)methyl]cyklobutyl}-3-(4-fenoxyfenyl)-lApyrazolo [3,4-djpyrÍmidin-4-amin ’H NMR (DMSO-De, 400 MHz) δ 8,23 (s ,1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,37-7,39 (m, 4H), 7,29-7,31 (m, 1H), 7,11-7,21 (m, 5H), 5,42-5,47 (m, 1H), 4,57 (s, 1H), 3,63 (d, 2H), 2,76-2,81 (m, 2H), 2,60-2,70 (m, 1H), 2,28-2,34 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 21,92 minut.
MS:MH+478.
Příklad 327 [3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-JJpyrimidin-1 -yl]-1 (hydroxymethyl)cyklobutyl]methanol
a) diethyl-3 - [(methylsulfonyl)oxy]-1,1 -cyklobutandikarboxy lát
Roztok diethyl-3-hydroxy-1,1-cyklobutandikarboxylátu (0,268 g, 0,00116 mol) v pyridinu (7 ml) se ochladí na teplotu 0°C. Po kapkách se přidá methansulfonylchlorid (0,11 ml, 0,160 g, 0,00140 mol), přičemž teplota se udržuje pod 2°C. Směs se míchá po dobu 4 hodin, pak se nalije do ledové vody (20 ml) a extrahuje ethyletherem (2x10 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (3 x 10 ml) a solankou (10 ml). Organická vrstva se suší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá diethyl-3-[(methylsulfonyl)oxy]-l,l-cyklobutandikarboxylát (0,302 g, 0,00102 mol) ve formě žlutého oleje.
'.· fr- CC (“ c / O ( C‘ t: ( v *.-ť ó ( «-<-· c r ( © , ,· {· c c ·- f ·? <-* <> T c <· r. c i (' r r f·=-«. i r ' *'<> ι. i' t c «e«
335 *H NMR (CDC13 400 MHz) (m, 1 H), 4,23 (q, 4H), 3,01 (s, 3H), 2,98-3,03 (m, 2H), 2,812,86 (m, 2H), 1,27 (t, 6H).
b) diethyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-1 -yl]-l, 1 cyklobutandikarboxylát
Roztok 3-(4-fenoxy feny l)-lH-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-4-aminu (0,129 g, 0,00042 mmol) v VV-dimethylformamidu (5 ml) se nechá reagovat s diethyl-3[(methylsulfonyl)oxy]-l,l-cyklobutandikarboxylátem (0,150 g, 0,00051 mmol) a uhličitanem česným (0,166 g, 0,00051 mmol) při teplotě 70°C po dobu 5 dnů. Reakční směs se nalije do vody (20 ml) a extrahuje ethylacetátem (3x10 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (2x10 ml) a solankou (10 ml). Organická vrstva se suší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu a methanolu (98:2). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá diethyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxy-fenyl)-lH-pyrazolo[3,4/]pyrimidin-l-yl]-1,1-cyklobutandikarboxylát (0,060 g, 0,00012 mol) ve formě hnědé pevné látky.
!H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,44-(t, 2H), 7,12-7,21 (m, 5H), 5,38-5,42 (m, 1H), 4,16-4,28 (m, 4H), 3,14-3,17 (m, 2H), 2,96-3,00 (m, 2H), 1,171,28 (m, 6H).
c) [3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-l-yl]-l(hydroxymethyl)cyklobutyl]methanol
Do roztoku diethyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-lyl]-l,l-cyklobutandikarboxylátu (0,045 g, 0,000089 mol) v tetrahydrofuranu (10 ml) se přidá hydridohlinitan lithný (0,010 g, 0,000270 mol). Reakční směs se míchá 6 hodin při pokojové teplotě, poté se přidá voda (1,0 ml). Směs se filtruje přes vrstvu Celitu® 521. Rozpouštědlo se odstraní z filtrátu za vakua. Zbytek se rozdělí mezi vodu (15 ml) a ethylacetát (15 ml). Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (3 x 10 ml). Spojené organické vrstvy se suší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl 8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 40% izokraticky po dobu 5 minut, pak 40%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 30 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje na [3-[4-amino-3-(4oo ec c e o c re o ό £ O
C Q O c O C t <·>
o o o c c e ( o
r. o v, c © ťi'( UCC eo «o o o o o © <. </(;
© r c c » o e r· c r r. c
336 fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-(7]pyrimidin-l-yl]-l-(hydroxymethyl)cyklobutyl]methanol ve formě bílé pevné látky (0,007 g, 0,000017 mol).
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,22 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,44-(t, 2H), 7,11-7,20 (m, 5H), 5,28-5,34 (m, 1H), 4,76 (t, 1 H), 4,58 (t, 1H), 3,55 (d, 2H) 3,47 (d, 2H), 2,46-2,55 (m, 2H), 2,24-2,31 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,81 minut.
MS:MH+418.
Příklady 328-334
Obecný způsob syntézy arylalkylových analog cA-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu.
Tyto sloučeniny se připraví podle způsobu, který je uvedený výše pro syntézu arylalkylových analog czs-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 H-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-4-aminu <;/’ CG ( ! Ci o c c o c ( ; 0 C r i- . <? e
337
329 505,3 12,05
330 538,4 9,27
331 ÓA $ 453,2 11,16
332 < 519,1 12,95
333 f 535,3 10,57
334 555,3 14,08
Příklad 335 maleát sůl A2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-5-chlor-2-thiofensulfonamidu.
Tato sloučenina se syntetizuje jako maleátová sůl podle způsobu uvedeného pro cis- a /ra«v-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-4-amin e© ©e © e © © e e © e e· © e β e ee ee© © © oc ee o© oe c e e c © © © © $ e © © © © © © o v © © © o © c e> © eoc ceoo o« e©
338
HPLC-RT: 12,39 minut (rychlost průtoku: 1 ml/minut λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak 08, 300A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH*) = 606,1.
Příklad 336
-(4- {4-amino-3-[4-( 1,3-benzoxazol-2-ylamino)-3 -fluorfenyl]-1 77-pyrazolo[3,4ó/Jpyrimidin-1 -yl} piperidino)-2-(dimethylamino)-1 -ethanon
a) férc-butyl-4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylát
7erc-butyl-4-oxo-l-piperidinkarboxylát (20 g, 100,4 mmol) se rozpustí v methanolu (250 ml), pak ochladí na teplotu 0°C a v průběhu 10 minut se přidá borohydrid sodný (3,8 g, 100,4 mmol). Reakční směs se ohřeje z teploty 0°C na pokojovou teplotu. Po 4 hodinách se reakce koncentruje za sníženého tlaku a zbývající sirup se rozpustí ve směsi dichlormethanu a izopropanolu (3:1) (400 ml). Organická vrstva se promyje IN vodným roztokem hydroxidu sodného (200 ml). Vodná vrstva se pak extrahuje směsí dichlormethanu a izopropanolu (3:1) (3 x 150 ml). Organická vrstva se promyje solankou (400 ml), pak suší síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá tórcbutyl-4-hydroxy-l-piperidinkarboxylát ve formě světle žlutého sirupu (20 g, 100,4 mmol). ’H NMR (de-DMSO): δ 1,21-1,28 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,65-1,69 (m, 2H), 2,942,96 (m, 2H), 3,59-3,68 (m, 3H), 4,68 (d, ÍH).
b) fórc-buty l-4-(4-amino-3-j od-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-1 -yl)-1 piperidinkarboxylát.
3-Jod-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin (17,3 g, 66,33 mmol) se suspenduje v tetrahydrofuranu (800 ml) a přidá se roztok férc-butyl-4-hydroxy-l-piperidinkarboxylátu (20 g, 99,5 mmol) v tetrahydrofuranu (300 ml) a trifenylfosfin (34,8 g, 132,66 mmol). Reakční směs se ochladí na teplotu 0°C a po kapkách se přidá diethylazodikarboxylát (23,1 g, 132,66 mmol). Po 2 hodinách při pokojové teplotě se reakce koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá surový fórc-butyl-4-(4-amino-3-jod-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-lyl)-l-piperidinkarboxylát ve formě oranžového oleje (69,44 g), HPLC-RT: 14,29 minut, 19%, (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak Cl8, 300 A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec).
Γ: r < C( <· Í' <' «ί ί-, / c γ c r <’ c < ο ®
Ο <. ί· C ί ο ι C! e . .·> r>í'· ‘ f: c ( c o oce twtt
339
c) dihydrochlorid 3 -j od-1 -(4-piperidy 1)-1 //-pyrazolo [3,4-</]py rimidin-4-aminu
Surový terc-butyl-4-(4-amino-3-jod-1 Z/-pyrazolo[3,4-č/jpyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylát (69,4 g, 156,30 mmol) se rozpustí v acetonu (900 ml) a pomalu po kapkách se přidává 6N vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (300 ml). Reakce se pak zahřívá při teplotě 45°C, čímž se získá precipitát. Po 1,5 hodině se precipitát spojí vakuovou filtrací, promyje minimálním množství acetonu a suší v lyofilizátoru, čímž se získá dihydrochlorid 3-jod-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu ve formě žluté pevné látky (16,61 g, 39,8 mmol).
HPLC-RT: 6,16 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) = 345,0.
d) 1 -[4-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-l -yl)piperidino]-2(dimethylamino)-1 -ethanon.
Dihydrochlorid 3 -j od-1 -(4-piperidy 1)-1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-aminu (3 g, 7,19 mmol) se suspenduje v dichlormethanu (350 ml), pak se přidává v průběhu 4 dnů Λ/JV-dimethylglycin (1,02 g, 9,88 mmol), l-hydroxy-7-azabenzotriazol (1,08 g, 7,91 mmol), hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyi)-3-ethylkarbodiimidu (1,89 g, 9,89 mmol) a /V-ethyl-jV-izopropylamin (5,06 g, 39,2 mmol). Reakce se zředí dichlormethanem (300 ml), pak promyje vodou (150 ml) a solankou (150 ml). Organická vrstva se suší síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá l-[4-(4-amino-3-jod-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)piperidino]-2-(dimethylamino)-l-ethanon ve formě hnědé pevné látky (2,74 g, 6,39 mmol).
HPLC-RT: 7,40 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak Cl8, 300 A, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec); m/z (MH+) = 430,3.
e) l-(4-{4-amino-3-[4-(l,3~benzoxazol-2-ylamino)-3-fluorfenyl]-l//-pyrazolo[3,4í/Jpyrimidin-1 -yl} piperidino)-2-(dimethylamino)-1 -ethanon.
-[4-(4-amino-3 -j od-1 //-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-1 -y l)piperidino]-2(dimethylamino)-l-ethanon (100 mg, 0,233 mmol) se rozpustí v ř< c fe fe fe ( fe- o © c fe © e e ® < o c e e < fe c © φ β fe' fe o o e © fc fe c (· © © t fe fe e © e e « c
340 ethylenglykoldimethyletheru (10 ml) a vodě (1,5 ml) apřidá se 7V-(l,3-benzoxazol-2-yl)-/V[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (103 mg, 0,291 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (13 mg, 0,051 mmol) a uhličitan sodný (62 mg, 0,583 mmol) a reakce se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 24 hodin. Reakce se koncentruje za sníženého tlaku, zbytek se rozdělí mezi dichlormethan (100 ml) a minimální množství vody. Organická vrstva se koncentruje za sníženého tlaku a trituruje diethyletherem (25 ml), čímž se získá žluto-hnědá pevná látka (172 mg). Čištěním RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, rychlost průtoku: 10 ml/minut, λ= 254 nm, gradient: 15% až 35% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 40 minut; DeltaPak Cl8, 300 A, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec) se získá l-(4-{4-amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2-ylamino)-3-fluorfenyl]1 H-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-l -yl}piperidino)-2-(dimethylamino)-1 -ethanon ve formě bělavé pevné látky (64 mg, 0,121 mmol). HPLC-RT: 7,27 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 95% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; Waters Symmetry Shield 08, 3,5 pm, 50 x 2,1 mm sloupec); m/z (MH+) = 530,2.
Příklad 337 l-(4-{4-amino-3-[4-(l,3-benzothiazol-2-ylamino)-3-fluorfenyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-l -yl}piperidino)-2-(dimethylamino)-1 -ethanon
HPLC-RT: 10,09 minut (rychlost průtoku: 1 ml/min, λ= 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut; DeltaPak 08, 300 A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) = 546,2.
Příklady 338-364
a) Reprezentativní způsob alkylace:
Hydrid sodný (60%, 0,138 g, 3,45 mmol) se přidá do suspenze 3-jod- 1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,750 g, 2,87 mmol) v DMF (9 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny, dokud není roztok homogenní. Přidá se alkylbromid (4,03 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 14 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledná pevná látka se trituruje c
( (> C
341 postupně vodou (25 ml), pak směsí etheru a petroletheru (4:1,50 ml), čímž se získá produkt.
b) Reprezentativní způsob Suzukiho kopulace:
Suspenze aryljodidu (2,28 mmol), terc-butyl-W-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,08 g, 3,19 mmol), tetrakis(trifenylfosfm)palladia (0,105 g, 0,091 mmol), hydrogenuhličitanu sodného (0,478 g, 5,69 mmol) v yV,jV-dimethylformamidu (12 ml) a vodě (2 ml) se zahřívá při teplotě 90°C po dobu 14 hodin pod atmosférou dusíku. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený vodný roztok chloridu sodného (50 ml) a ethylacetát (30 ml). Vodná vrstva se separuje a extrahuje dále ethylacetátem (3 x 30 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným, filtrují a koncentrují za sníženého tlaku. Čištěním zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a heptanu (9:1) jako mobilní fázi se získá chráněný anilin jako produkt.
c) Reprezentativní způsob odstranění chránících skupin:
Do 50 ml baňky obsahující roztok chlorovodíku v dioxanu (4 M, 6 ml) a ethanolu (6 ml) se přidá chráněný anilin (1,05 mmol). K baňce se připevní vzduchový chladič a směs se míchá při teplotě 50°C pod atmosférou dusíku. Po 16 hodinách se reakční směs ochladí na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0,5 M, 30 ml) a etheru (20 ml). Organická vrstva se separuje a oddělí. Vodná vrstva se alkalizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (30 ml) a výsledná směs se extrahuje ethylacetátem (3 x 30 ml). Spojené ethylacetátové extrakty se suší síranem sodným, filtrují a koncentrují, čímž se získá anilinový produkt.
d) Reprezentativní způsob sulfonylace:
Do roztoku 2,3-dichlorbenzensulfonylchloridu (0,263 g, 1,07 mmol) a 4-dimethylaminopyridinu (0,005 g, 0,041 mmol) v pyridinu (5 ml) se přidá anilin (1,0 mmol) a výsledný roztok se míchá pod atmosférou dusíku po dobu 3 dnů. Přidá se směs methanolu a dichlormethanu (1:19, 100 ml) a výsledná směs se extrahuje polovinou nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (3x10 ml). Organická vrstva se suší síranem sodným, filtruje a koncentruje, čímž se získá sulfonamidový produkt.
O fe ° «' O o (C ' © 6 c fe fe © o o o c e © f- fe © c o c o © o fe c c c c f ’. © (. c e f. f. p c e c 0
342
e) Reprezentativní způsob transesterifikace:
Ethylester (2,76 mmol) se přidá do roztoku triethylaminu (3,8 ml, 28 mmol) a methanolu (30 ml). Zpětný chladič se připevní k reakční baňce a reakční směs se zahřívá při teplotě 75°C pod atmosférou dusíku. Po 24 hodinách se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá methylesterový produkt.
f) Alternativní způsob transesterifikace:
Roztok ethylesteru (0,279 mmol) a methoxidu sodného (0,015 g, 0,279 mmol) v methanolu (2 ml) se zahřívá v uzavřené baňce při teplotě 75°C po dobu 2 hodin. Reakce se ochladí na pokojovou teplotu. Přidá se směs methanolu a dichlormethanu (1: 19, 100 ml) a výsledná směs se extrahuje polovinou nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (3x10 ml). Organická vrstva se suší síranem sodným, filtruje a koncentruje, čímž se získá methylesterový produkt.
g) Reprezentativní způsob tvorby amidu:
V opětovně utěsnitelné Schlenkově baňce se suspenduje ester (0,056 mmol) v aminovém rozpouštědle (1 ml). Baňka se uzavře teflonovou vydutým závěrem a zahřívá při teplotě 80°C po dobu 2 dnů. Reakce se ochladí na pokojovou teplotu, čímž se získá amidový produkt.
h) Reprezentativní způsob tvorby primárního amidu:
Utěsnitelná Schlenkova baňka se naplní methylesterem (0,086 mmol). Přidá se roztok methanolu nasycený amoniakem (1 ml) a Schlenkova baňka se uzavře a zahřívá při teplotě 90°C po dobu 24 hodin. Reakce se ochladí na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá primární amidový produkt.
i) Reprezentativní způsob tvorby močoviny:
Anilin (0,152 mmol) se rozpustí v pyridinu (1 ml) a roztok se ochladí na teplotu
-20°C, přidá se roztok m-tolylizokyanátu (0,143 mmol) a roztok se nechát přirozeně ohřát na pokojovou teplotu. Po 6 hodinách se produkt koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá močovinový produkt.
e <s r ft * f> r e ® β c- C C 9 <!» (' 0 n ft /> © O f' O ©
(. (· f· Λ O C »
C Γ íJ ft c ft- ft* e> & O O
343
Příklad 338 ethyl-2 - [4-amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfeny l)sulfonyl]amino} -3 -fluorfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-1 -yl]acetát
Postupně se provádějí reprezentativní způsoby alkylace (za použití ethylbromacetátu jako alkylbromidu), Suzukiho kopulace, odstranění chránících skupin a sulfonylace. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v O,1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 12,4-13,9 min) se získá ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3 -fluorfeny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-</Jpyrimidin-1 -yl] acetát ve formě bílé pevné látky (0,011 g, 0,020 mmol). RP-HP (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8,250 x 4,6 mm sloupec) Rt 9,78 minut.
Ή NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 10,84 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,54-(t, 1H), 7,43 (m, 3H), 5,21 (s, 2H), 4,15 (qt, 2H), 1,20 (t, 3H).
MS: MH+ 539.
Příklad 339
VI - {4-[4-amino-1 -(2-morfolino-2-oxoethyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2fluorfenyl} -2,3 -di chlor-1 -benzensulfonamid
Ethyl-2- [4-amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3 -fluorfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-(/]pyrimidin-l-yl]acetát se nechá reagovat s morfolinem za použití reprezentativních způsobů tvorby amidu. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 9,3-9,8 min) se získá tV1-{4-[4amino-1 -(2-morfolino-2-oxoethy 1)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y 1]-2 -fluorfenyl} -2,3 dichlor-1-benzensulfonamid ve formě bílé pevné látky (0,005 g, 0,009 mmol). RP-HP (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS C 18,250 x 4,6 mm sloupec) Rt 8,22 minut.
'H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 10,82 (s, 1H), 8,21 (s.lH), 7,96 (d, 1H), 7,94 (m, 1H),
7,53 (t, 1H), 7,39 (m, 3H), 6,97 (br, 2H), 5,32 (s, 2H), 3,5 (m, 8H).
MS:MH+580.
«« »» * · · © * · © β ® © € to e e © to e « « o « « e «·- © e ť?
β e © g e « « * r € e • e c © ® o c « β © e? o © © to © <· ©
344
Příklad 340
VI -(4- {4-amino-1 -[2-(4-methylpiperazino)-2-oxoethyl]- lH-pyrazolo[3,4-í(|pyrimidin-3yl}-2-fluorfenyl)-2,3-dichlor-l-benzensulfonamid
Ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-lHpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-l-yl]acetát se nechá reagovat s 1-methylpiperazinem podle reprezentativního způsobu tvorby amidu. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, Rt 6,4-7,0 min) se získá tV1-(4-{4amino-l-[2-(4-methylpiperazino)-2-oxoethyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2fluorfenyl)-2,3-dichlor-l -benzensulfonamid ve formě bílé pevné látky (0,005 g, 0,009 mmol). RP-HP (25 až 100 % acetonitril v O,1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8,250 x 4,6 mm sloupec) Rt 6,83 minut.
!H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,96 (d, IH), 7,88 (d, IH), 7,50 (t, IH), 7,36 (m, 3H), 5,31 (s, 2H), 3,45 (m, 4H), 2,50 (m, 4H), 2,30 (s, 3H).
MS: MH+ 593.
Příklad 341
2V1 - [(1 R,2S)-2-hydroxy-l-methyl-2-fenylethyl]-Hl -methyl-2-[4-amino-3-(4- {[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl] amino} -3 -fluorfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-1 -yljacetamid
Roztok (+)-pseudoefedrinu (0,037 g, 0,224 mmol) v ethylenglykoldimethyletheru (0,75 ml) se nechá reagovat s roztokem «-butyllithia (2,5 M v hexanech, 0,060 ml, 0,150 mmol). Po 20 minutách se tento roztok převede přes kanylu do roztoku ethyl-2-[4-amino3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3-fluorfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-1 yljacetátu (0,040 g, 0,074 mmol) v H,H-dimethylformamidu (0,75 ml). Výsledný roztok se míchá při teplotě 50°C po dobu 15 hodin, pak se ochladí na pokojovou teplotu a rozdělí mezi směs methanolu a dichlormethanu (1:9,50 ml) a vody (15 ml). Organická vrstva se separuje, suší síranem sodným, filtruje a koncentruje za sníženého tlaku. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl 8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 11,88-12,65 min) se získá Hl-[(l/?,25)-2-hydroxy-l-methyl-2-fenylethyl]-/Vl-methyl-2-[4r ρ {· c: r β c· © e *· r ( ·· r c © * r r c c- c
¢. r <- i? o © (' <’ o V2 C f- C f> 9 O ť C e ,, f ¢. ( O fí r e c ,· r ( e r t: P C C < ' f « c f c
345 amino-3-(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3 -fluorfenyl)-1A-pyrazolo[3,4rijpyrimidin-l-yljacetamid ve formě bělavé pevné látky (0,010 g, 0,015 mmol).
RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8,250 x 4,6 mm sloupec) Rt 9,63 min;
MS: (MH+) 658.
Příklad 342
Al -[(1S, 25)-2 -hydroxy-1 -methyl-2-fenylethyl]-Al -methyl-2-[4-amino-3-(4- {[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-l-yl]acetamid
Podle způsobu, který je podobný výše uvedenému, se smíchá hydrochlorid (+)-efedrinu (0,061 g, 0,302 mmol) s ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3-fluorfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-1 -yljacetátem (0,054 g, 0,10 mmol). Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 11,4-11,9 min) se získá Al-[(IS,2S)-2-hydroxy-l-methy 1-2fenylethyl]-Al-methyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]acetamid ve formě bělavé pevné látky (0,010 g, 0,015 mmol).
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8,250 x 4,6 mm sloupec) Rt 9,36 min;
MS: (M-H)' 656.
Příklad 343
Al -[4-(4-amino-l-{2-[(2S)-2-(hydroxymethyl)tetrahydro-1 Η-1 -pyrrolyl]-2-oxoethyl}-1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2-fluorfenyl]-2,3-dichlor-l-benzensulfonamid
Podle způsobu, který je podobný výše uvedenému, se smíchají, (/?)pyrrolidinmethanol (0,038 ml, 0,385 mmol) s ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfbnyl]amino}-3-fluorfenyÍ)-lA-pyrazolo[3,4-<7)pyrimidin-l-yl]acetátem (0,060 g, 0,111 mmol). Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v O,1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 8,45-9,90 min) se získá Al-[4-(4-amino-l-{2-[(2S)-2f. l· ft ft ft e © ©
346 ο © c c c o p C
C n c r ft r ft c c ft 0 (-· ft ft
O ft
C ft ft ft (hydroxymethyl)tetrahydro-lA-l-pyrrolyl]-2-oxoethyl}-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl)-2-fluorfenyl]-2,3-dichlor-l-benzensulfonamid ve formě bělavé pevné látky (0,024 g, 0,040 mmol).
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS 08,250 x 4,6 mm sloupec) Rt 8,05 min; MS: (M-H)592.
Příklad 344
Al -[4-(4-amino-1 -{2-[(2/?)-2-(hydroxymethyl)tetrahydro-1 A-1 -pyrrolyl]-2-oxoethyl}-iHpyrazolo[3,4-ď]pyriinidin-3-yl)-2-fluorfenyl]-2,3-dichlor-l-benzensulfonamid
Podle způsobu, který je podobný výše uvedenému, se smíchá, (S)pyrrolidinmethanol (0,038 ml, 0,385 mmol) s ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3 - fluorfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yljacetátem (0,060 g, 0,111 mmol). Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, Rt 8,15-9,70 min), se získá Al-[4-(4-amino-l-{2-[(2/?)-2(hydroxymethyl)tetrahydro-1 Η-1 -pyrrolyl] -2-oxoethyl} -1 A-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-3 yl)-2-fluorfenyl}-2,3-dichlor-l-benzensulfonamid ve formě bělavé pevné látky (0,022 g, 0,037 mmol).
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt 7,98 min;
MS: (M-H)’ 592.
Příklad 345 methyl-2-[4-amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3-fluorfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]acetát
Za použití reprezentativního způsobu transesterifíkace se ethyl-2-[4-amino-3-(4{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino) -3-fluorfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]acetát (1,49 g, 2,76 mmol) konvertuje na odpovídající methylester. Určitý podíl surové látky se čistí preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v O,1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, Rt ť> © t* e » c e r β 1' c
© Γ r «► • β © ft ft 0 n ft ft ft ft
347
11,0-12,3 minut), čímž se získá methyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidin-l -yljacetát ve formě bílé pevné látky (0,016 g, 0,030 mmol).
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v O,1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl 8,250 x 4,6 mm sloupec) Rt 9,22 minut.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,84 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,96 (m, 2H), 7,60 (m, 1H), 7,56 (m, 3H), 5,23 (s, 2H), 3,68 (s, 3H).
MS: MH+ 525.
Příklad 346
2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-l-yl]octová kyselina
V utěsnitelné Schlenkově baňce se rozpustí methyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-<y|pyrimidin-l-yljacetát ve směsi methanolu a vody (1:1, 1 ml). Baňka se uzavře teflonovým vydutým závěrem a zahřívá při teplotě 90°C. Po 2 dnech se reakce ochladí na pokojovou teplotu. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 6,3-6,7 min) se získá 2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]octová kyselina ve formě bílé pevné látky (0,006 g, 0,030 mmol).
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8,250 x 4,6 mm sloupec) Rt 6,42 minut.
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,13 (s, 1H), 7,97 (d, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,36 (t, 1H), 7,19 (m, 3H), 7,15 (d, 1H), 4,59 (s, 2H).
MS: (M-H)' 509.
Příklad 347
NI-[2-(dimethylamino)ethyl]-2-[4-amino-3-(4-{ [(2,3-dichlorfenyl)sulfonyljamino} -3fluorfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-djpyrimidin-1 -y ljacetamid © O C ¢, © e © ri> e r.
< c t>
€ © <S « i' r o c r c
© © <: O o e c €> < C<'·· O © ť? c o fi c
348
Při reakci methyl-2-[4-amino-3-(4- {[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyljamino}-3fluorfenyl)-l A-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-l-yl]acetátu (0,035 g, 0,067 mmol) s N,Ndimethylethylendiaminem (1 ml) se použije reprezentativní způsob tvorby amidu. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 6,85-7,45 min) se získá Al-[2-(dimethylamino)ethylj-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3-fluorfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-t/jpyrimidin-1 -yljacetamid ve formě bělavé pevné látky (0,008 g, 0,014 mmol).
!H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 10,20 (br, IH), 8,22 (m, 2H), 7,96 (d, IH), 7,80 (d, IH), 7,45 (t, IH), 7,31 (m, 3H), 6,90 (br, 2H), 4,96 (s, 2H), 3,40 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 2,07 (s, 6H).
MS: (M-H)' 579.
Příklad 348
Al -[2-(diethylamino)ethyl]-2-[4-amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3fluorfenyl)-1 A-pyrazolo[3 ,4-í/j pyrimidin-1 -yljacetamid
Při reakci methyl-2-[4-amino-3-(4- {[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl jamino} -3fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yljacetátu (0,035 g, 0,067 mmol) s AA-diethylethylendiaminem (1 ml) se použije reprezentativní způsob tvorby amidu. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 7,12-7,98 min) se získá Al-[2-(diethylamino)ethyl]-2-[4-amino-3-(4{[(2,3 -dichlorfeny l)sulfonyl jamino} -3 -fluorfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/jpyrimidin-1 yljacetamid ve formě bělavé pevné látky (0,017 g, 0,028 mmol).
’H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 8,22 (s, IH), 8,12 (br, IH), 7,96 (d, IH), 7,78 (d, IH), 7,44-(t, IH), 7,31 (m, 3H); 6,95 (br, 2H), 4,96 (s, 2H), 3,35 (m, 2H), 2,82 (m, 2H), 2,50 (m, 4H), 1,05 (t, 6H).
MS: (M-H)' 607.
© c ΐ- *'
Příklad 349
C <!·
349
2-(dimethylamino)ethy l-2-[4-amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3 fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yt]acetát
Při reakci methyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-l-yl]acetátu (0,035 g, 0,067 mmol) s VV-dimethylethanolamínem (1 ml) se použije reprezentativní způsob tvorby amidu. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 7,50-8,07 min) se získá 2-(dimethylamino)ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3 -fluorfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-t/Jpyrimidin-1 -yljacetátu ve formě bělavé pevné látky (0,008 g, 0,014 mmol).
fH NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,96 (d, 1H), 7,83 (d, 1H), 7,48 (t, 1H), 7,32 (m, 3H), 5,23 (s, 2H), 4,29 (t, 2H), 2,86 (m, 2H), 2,39 (s, 6H).
MS: (M-H) 580.
Příklad 350
Vl-[3-(dimethylamino)propyl]-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3fluorfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]acetamid
Při reakci methyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3fluorfenyl)l//-pyrazolo[3,4-£/Jpyrimidin-l-yl]acetátu (0,025 g, 0,048 mmol) s 3-(dimethylamino)propylaminem (1 ml) se použije reprezentativní způsob tvorby amidu. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 6,7-7,3 min) se získá Vl-[3-(dimethylamino)propyl]-2-[4-amino-3-(4{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3-fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1 yljacetamid ve formě bělavé prášku (0,015 g, 0,025 mmol).
*H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,20 (m, 1H), 7,96 (m, 1H), 7,76 (m, 1H), 7,43 (t, 1H), 7,30 (m, 2H), 4,93 (s, 2H), 3,12 (m, 2H), 2,82 (m, 2H), 2,50 (s, 6H), 1,73 (m, 2H).
MS (M-H)' 593.
co ©c to- © O í? t e tt e o <' p ft « C ť>
v © f c c « e
350
Příklad 351
2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4djpyrimidin-1 -yljacetamid
Reprezentativní způsob tvorby primárního amidu se použije ke konvertování methyl-2-[4-amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3-fluorfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-l-yl]acetátu (0,045 g, 0,086 mmol) na odpovídající primární amid. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl 8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 6,9-8,5 min) se získá 2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3 -fluorfeny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-c/Jpyrimidin-1 -yljacetamid ve formě bělavé prášku (0,015 g, 0,029 mmol).
‘H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 9,83 (br, 2H), 8,84 (br, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,50 (m, 2H), 7,36 (m, 1H); 3,87 (s, 2H).
MS (M-H) 508.
Příklad 352 ethyl-2-(4-amino-3- {3-fluor-4-[(3 -toluidinokarbonyl)amino]fenyl} -1 //-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-1 -yl)-acetát
Postupně se provádějí reprezentativní způsoby alkylace (za použití ethylbromacetátu jako alkylbromidu), Suzukiho kopulace, odstranění chránících skupin a tvorba močoviny. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, Rt 12,1-13,5 min) se získá ethyl-2-(4-amino-3-{3-fluor-4-[(3toluidinokarbonyl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-acetát ve formě žlutého prášku (0,015 g, 0,032 mmol).
!H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 9,07 (br, 1H), 8,73 (br, 1H), 8,38 (t, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,48 (m, 2H), 7,32 (s, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,19 (t, 1H), 6,82 (d, 1H), 5,23 (s, 2H), 4,17 (qt, 2H), 2,30 (s, 3H), 1,21 (t, 3H).
MS: (M-H)' 462.
» R t c C <'· * L <' * <· r- c f fi C C fi <' <· *
r. r r. r o e f c 0 r ,·; ,· , r ( ť- fi f- Γ c <' « * β O O
351
Příklad 353 jV-{4-[4-amino-l-(2-morfolino-2-oxoethyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin-3-yl]-2fluorfenyl)-A-(3-methylfenyl)močovina
Ethyl-2-(4-amino-3 - {3 -fluor-4-[(3 -toluidinokarbonyl)amino]fenyl} -1Hpyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-l-yl)-acetát (0,025 g, 0,054 mmol) se konvertuje na odpovídající methylester za použití reprezentativního způsobu transesterifikace. Tento produkt se rozpustí v morfolinu (1 ml) a roztok se zahřívá při teplotě 50°C v uzavřené baňce po dobu 2 dnů. Reakce se ochladí na pokojovou teplotu, koncentruje a čistí preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 9,3-10,2 min), čímž se získá A-{4-[4-amino-l-(2-morfolino-2-oxoethyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2fluorfenyl}-A”-(3-methylfenyl)močovina ve formě žluté pevné látky (0,009 g, 0,018 mmol). ‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,07 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,37 (t, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,45 (m, 2H), 7,33 (t, 1H), 7,27 (m, 1H), 7,19 (t, 1H), 6,83 (d, 1H), 5,34 (s, 2H), 3,5 (m, 8H), 2,30 (s.3H).
MS (M-H)' 503.
Příklad 354
A-(4- {4-amino-1 -[2-(4-methylpiperazino)-2-oxoethyl] -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl} -2-fluorfenyl)-A' '-(3-methylfenyl)močovina
Použije se způsob podobný výše uvedenému, ale použije se 1-methylpiperazin (1 ml) místo morfolinu jako rozpouštědla, poté se provede čištění preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8,250 x 21 mm sloupec, Rt 7,1-7,8 min), čímž se získá A-(4-{4-amino-l-[2-(4-methylpiperazino)-2-oxoethylJ-lApyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-N-(3-methylfenyl)močovina ve formě bělavé pevné látky (0,008 g, 0,015 mmol).
lH NMR (DMSO-dó,400 MHz) δ 9,07 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,37 (t, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,45 (m, 2H), 7,32 (s, 1H), 7,25 (m, 1H), 7,19 (t, 1H), 6,90 (br, 2H), 6,83 (d, 1H), 5,33 (s, 2H), 3,39 (m, 4H), 2,40 (m, 4H), 2,30 s, 3H).
MS (M-H)’516.
ΦΦ Φ®
Φ Φ Φ « « Φ ©
ΦΦΦ
Φ Φ « •· ΦΦΦΦ ©
© Φ
Ο Φ © © β © © Ο © β Φ
Φ © £ © • © © φ φ
Φ Φ i) Φ © © ( β
352
Příklad 355 ethyl-2- [4-amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfony ljamino} -3 -fluorfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-l -yljpropanoát
Postupně se provádějí reprezentativní způsoby alkylace (za použití ethyl-2brompropionátu jako alkylbromidu), Suzukiho kopulace, odstranění chráničích skupin a sulfonylace. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v O,1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 10,1-11,0 min) se získá ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4rí/]pyrimidin-l-yl]propanoát (0,016 g, 0,029 mmol) ve formě šedé pevné látky.
‘H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 10,84 (br, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,54-(t, 1H); 7,41 (m, 3H), 7,0 (br, 1H), 5,61 (qt, 1H), 4,10 (qt, 2H), 1,73 (d, 3H), 1,11 (t, 3H).
MS (M-H)' 551.
Příklad 356 methyl-2-[4-amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3-fluorfenyl)-1 //pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yljpropanoát (4032811)
Ke konvertování ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3fluorfenyl)-l //-pyrazolo [3,4-</jpyrimidin-l-yl]propanoátu (0,400 g, 0,723 mmol) na odpovídající methylester se použije reprezentativní způsob transesterifikace. Čištěním podílů látky na preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 12,4-12,9 min) se získá methyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyljamino}-3-fluorfenyl)-l//-pyrazoIo[3,4-</Jpyrimidin-l-yl]propanoát (0,008 g, 0,015 mmol) ve formě šedé pevné látky.
*H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 10,84 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,95 (s, 1H),
7,54-(t, 1H), 7,40 (m, 3H), 4,10 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 1,73 (d, 3H).
MS (MH+) 539.
t- (· t
C f I ( c ( o < <
(.: e· t: o » e ©. Φ c í 0 4 O i «4 <
í <1 (’ f ft 4 C
O c 4 f & n c *·
353
Příklad 357
2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-lH-pyrazolo[3,4(TJpyrimidin-1 -yljpropanamid
Reprezentativní způsob tvorby primárního amidu se použije ke konvertování methyl-2-[4-amino-3-(4~{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-lHpyrazoIo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]propanoátu (0,040 g, 0,074 mmol) na odpovídající primární amid. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 8,1-9,6 min) se získá 2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-l-yl]propanamid (0,015 g, 0,029 mmol) ve formě bílého prášku.
lH NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 10,82 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,56 (t, 1H), 7,42 (m, 3H), 7,31 (br, 1H), 7,21 (br, 1H), 5,34 (qt, 1H), 1,71 (d, 3H).
MS (MH)+ 524.
Příklad 358 ethyl-2-(4-amino-3 - {3 -fluor-4-[(3 -toluidinokarbonyl)amino]fenyl} -1 H-pyrazolo [3,4í/Jpyrimidin-1 -yl)propanoát
Postupně se provádějí reprezentativní způsoby alkylace (za použití ethyl-2brompropionátu jako alkylbromidu), Suzukiho kopulace, odstranění chránících skupin a tvorba močoviny. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8 μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 13,3-14,3 min) se získá ethyl-2-(4-amino-3-{3-fluor-4-[(3toluidinokarbonyl)amino]fenyl} -1 H-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yl)propanoát ve formě bílé pevné látky (0,022 g, 0,046 mmol).
*H NMR (DMSO-dé,400 MHz) 5 9,06 (s, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,37 (t, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,46 (m, 2H), 7,32 (s, 1H), 7,25 (m, 1H), 7,19 (t, 1H), 6,83 (d, 1H), 5,63 (qt, 1H), 4,12 (qt, 2H), 2,30 (s, 3H), 1,76 (d, 3H), 1,15 (t, 3H).
MS (M-H)' 476.
ο t ř· c o r ί<.( r> , c c © ¢. ; e to e ( <’ (' ( c
C O c c (-'{· <? r *1 © o e e n c c f
354
Příklad 359
2-(4-amino-3-{3-fluor-4-[(3-toluidinokarbonyl)amino]fenyl}-177-pyrazolo[3,4ď|pyrimidin-1 -yl)propanamid
Postupně se provádějí reprezentativní způsoby alkylace (za použití ethyl-2brompropionátu jako alkylbromidu), Suzukiho kopulace, odstranění chránících skupin, alternativní způsob transesterifikace a reprezentativní způsoby tvorby primárního amidu a tvorba močoviny. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v O,1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, Rt 9,1-10,1 minut) se získá 2-(4-amino-3-{3-fluor-4-[(3toluidinokarbonyl)amino]fenyl} -177-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl)propanamid ve formě šedé pevné látky (0,010 g, 0,022 mmol).
*H NMR (DMSO-dó,400 MHz) δ 9,08 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,37 (t, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,46 (m, 2H), 7,33 (m, 2H), 7,24 (m, 2H), 7,12 (d, 1H), 6,97 (br, 2H), 6,82 (d, 1H), 5,35 (qt, 1H), 2,30 (s, 3H), 1,75 (d, 3H).
MS (MH)+ 449.
Příklad 360 ethyl-4- [4-amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfeny l)sulfonyl]amino} -3 -fluorfenyl)-177-pyrazolo [3,4<7|pyrimidin-1 -yljbutanoát
Postupně se provádějí reprezentativní způsoby alkylace (za použití ethyl-4brombutyrát jako alkylbromidu), Suzukiho kopulace, odstranění chránících skupin a sulfonylace. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 12,8-13,8 min) se získá ethyl-4-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-l-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]butanoát (0,010 g, 0,018 mmol) ve formě bělavé pevné látky.
*H NMR (DMSO-dó,400 MHz) δ 10,83 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,95 (s, 1H),
7,54-(t, 1H), 7,40 (m, 3H), 6,95 (m, 2H), 4,35 (t, 2H), 3,97 (qt, 2H), 2,30 (t, 2H), 2,08 (m,
2H), l,12-(t, 3H).
MS (M-H)' 565.
Příklad 361 t?
β,
355 methyl-4-[4-amino-3-(4- {[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3-fluorfenyl)-177-pyrazolo pyrazolo[3,4-í(]pyrimidin-l-yl]butanoát
Postupně se provádějí reprezentativní způsoby alkylace (za použití ethyl-4brombutyrátu jako alkylbromidu), Suzukiho kopulace, odstranění chránících skupin, alternativní způsob transesterifíkace a reprezentativní způsob sulfonylace. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v O,1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8,250 x 21 mm sloupec, Rt 11,7-12,2 min) se získá methyl-4-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3fluorfenyl)-l 77-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-l-yl]butanoát ve formě žluté pevné látky (0,015 g, 0,027 mmol).
*H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 10,84 (br, ÍH), 8,23 (s, ÍH), 7,95 (m, 2H), 7,52 (m, ÍH), 7,40 (m, 3H), 4,35 (t, 2H), 3,52 (s, 3H), 2,32-(t, 2H), 2,09 (m, 2H).
MS (MH)+ 553.
Příklad 362
4-[4-amino-3-(4- {[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3-fluorfenyl)-177-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-1 -y ljbutanamid
Reprezentativní způsob tvorby primárního amidu se použije ke konvertování methyl-4-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-177pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-l -yl]butanoátu (0,026 g, 0,047 mmol) na odpovídající primární amid. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 8,0-9,0 min) se získá 4-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfeny l)sulfony 1] amino} -3 -fluorfenyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yl]butanamid ve formě bílé pevné látky (0,007 g, 0,013 mmol).
*H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 10,82 (s, ÍH), 8,24 (s, ÍH), 7,97 (s, ÍH), 7,95 (s, ÍH),
7,54-(t, ÍH), 7,45 (m, 3H), 7,24 (br, ÍH), 6,93 (br, 2H), 6,73 (br, ÍH), 4,31 (t, 2H), 2,05 (m,
4H).
MS (M-H)’ 536.
1' © © c © í v- © Γ *· é. f.
r e e © c f e c o t · © c <; c o © Γί ( i
CC , C G rf- (· 0 C υ o «: c <f C fí fí
CGC I i. fí.r n fí
356
Příklad 363 ethyl-4-(4-amino-3 - {3 -fluor-4- [(3 -toluidinokarbonyl)amino] fenyl} -1 //-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-1 -yl)butanoát (4032812)
Postupně se provádějí reprezentativní způsoby alkylace (za použití ethyl-4brombutyrátu jako alkylbromidu), Suzukiho kopulace, odstranění chránících skupin a tvorba močoviny. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v O,1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, Rt 12,6-13,6 min) se získá ethyl-4-(4-amino-3-{3-fluor-4-[(3toluidínokarbonyl)amino]fenyl} -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl)butanoát ve formě bělavé prášku (0,015 g, 0,030 mmol).
’H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 9,06 (s, IH), 8,72 (s, IH), 8,36 (t, IH), 8,24 (s, IH), 7,47 (m, 2H), 7,32 (s, IH), 7,22 (m, IH), 7,19 (t, IH), 6,82 (d, IH), 4,37 (t, 3H), 3,99 (qt, 3H), 2,34-(t, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,11 (m, 2H), 1,13 (t, 3H);
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS 08,250 x 4,6 mm sloupec) Rt 10,00 minut.
Příklad 364
4-(4-amino-3 - {3 -fluor-4- [(3 -toluidinokarbonyl)amino] fenyl} -1 //-pyrazolo [3,4í/Jpyrimidin-1 -yl)butanamidu
Postupně se provádějí reprezentativní způsoby alkylace (za použití ethyl-4brombutyrát jako alkylbromidu), Suzukiho kopulace, odstranění chránících skupin, alternativní způsob transesterifikace a reprezentativní způsoby tvorby primárního amidu a tvorba močoviny. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 8,4-9,1 min) se získá 4-(4-amino-3-{3-fluor-4-[(3toluidinokarbonyl)amino]fenyl} -1 Z/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)butanamid ve formě bílé pevné látky (0,010 g, 0,022 mmol).
'H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 9,08 (s, IH), 8,73 (s, IH), 8,38 (t, IH), 8,25 (s.lH), 7,47 (m, 2H), 7,32 (s, IH), 7,25 (m, 2H), 7,19 (m, IH), 6,83 (d, IH), 6,75 (s.lH), 4,34-(t, 2H),
2,30 (s, 3H), 2,05 (m, 4H).
MS (MH)+ 463.
f <:fc <* {> ( < fi »> β c < Λ o «· c t · < · o e ó <-· o e «· fi ( < © «> <5 « * r fi ( fi ( C ‘' C fi © < © <' & *' <s O
357
Příklad 365
2- {4-amino-3 -[4-( 1,3-benzoxazol-2-ylamino)fenyl]-1 //-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-1 -yl} -5(4-methylpiperazino)benzonitril
Suspenze 3-jod-l//-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (0,172 g, 0,66 mmol), hydridu sodného (60%, 0,030 g, 0,75 mmol), 2,5-difluorbenzonitrilu (0,105 g, 0,75 mmol) a A, A-dimethylformamidu (2,5 ml) se zahřívá po dobu 24 hodin při teplotě 100°C. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi dichlormethan (50 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva se separuje, suší síranem sodným, filtruje a koncentruje za sníženého tlaku. Určitý podíl látky (0,045 g, 0,118 mmol) a uhličitanu česného (0,115 g, 0,353 mmol) se suspenduje v 1-methylpiperazinu (1 ml) a směs se zahřívá při teplotě 110°C v uzavřené baňce po dobu 20 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se okyselí vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (1 M, 10 ml) a vodná fáze se extrahuje etherem (10 ml). Organická fáze se oddělí a vodná fáze se alkalizuje vodným roztokem uhličitanu sodného (3 M, 10 ml), extrahuje dichlormethanem (3 x 15 ml) a spojené organické frakce se suší síranem sodným, filtrují a koncentrují za sníženého tlaku. Tato látka se podrobí Suzukiho kopulaci podle reprezentativního způsobu, ale A-(l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin se použije místo terc-butyl-A-[2-fluor-4(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karba-mátu. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 7,0-8,6 min) se získá 2-{4-amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2-ylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-/}pyrimidin-lyl}-5-(4-methylpiperazino)benzonitril ve formě šedé pevné látky (0,009 g, 0,017 mmol).
‘H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 10,93 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,98 (d, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,73 (d, 1H), 7,52 (m, 3H), 7,44 (m, 1H), 7,26 (t, 1H), 7,17 (t, 1H), 3,24 (m, 4H), 2,45 (m, 4H), 2,28 (s, 3H).
MS (MH)+ 543.
Příklad 366 ethyl-2-{4-amino-3-[4-(l,3-benzothiazol-2-ylamino)-3-fluorfenyl]-l//-pyrazoIo[3,4/| pyrimidin-1 -yl} propanoát
358 < © e <: c o o ' v e ' c fe- © © f i C ® fi f!
o © © © c c © c e e © fe o © © f © © © © e © © © < © © © © <.· t, © o e « << ©
Postupně se provádí reprezentativní způsob alkylace (za použití ethyl-2brompropionátu jako alkylbromidu) a reprezentativní způsob Suzukiho kopulace vyjma toho, že se použije V-(l,3-benzothiazol-2-yl)-V-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin místo fórc-butyl-/V-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu). Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v O,1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 14,4-14,9 min) se získá ethyl-2-{4-amino-3[4-( 1,3 -benzothiazol-2-ylamino)-3 -fluorfenyl] -1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-1 yljpropanoát ve formě bělavé pevné látky (0,022 g, 0,046 mmol).
‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,52 (s, 1H), 8,82-(t, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,85 (d, 1H), 7,66 (d, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,36 (t, 1H), 7,22-(t, 1H), 5,65 (qt, 1H), 4,14 (qt, 2H), 1,77 (d, 3H), l,14-(t, 3H).
MS (MH)+ 478.
Příklad 367 cis-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin3-yl} -2-fluorfenyl)-1,3-benzoxazol-2-amin V2-(4-brom-2-fluorfenyl)-1,3-benzoxazol-2-amin
Do roztoku 4-brom-2-fluoranilinu (1,00 g, 5,26 mmol) v toluenu (25 ml) se přidá 2-chlorbenzoxazol (0,66 ml, 5,79 mmol). Růžový roztok se zahřívá pod refluxem po dobu 30 min, pak při teplotě 100°C po dobu 17 hodin. Výsledná bílá suspenze/růžový roztok se ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se filtruje, filtrační koláč se promyje 2 ml (5x) podíly heptanu, čímž se získá V2-(4-brom-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amin (1,480 g, 92%) ve formě světle růžového prášku.
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) tR = 12,87 minut, 97%; m/z 307 (MH).
V2-(4-brom-2-fluor fenyl)-1,3-benzothiazol-2-amin
Do roztoku 4-brom-2-fluoranilinu (1,00 g, 5,26 mmol) v toluenu (25 ml) se přidá
2-chlorbenzothiazol (0,75 ml, 5,79 mmol). Růžový roztok se zahřívá při teplotě 110-150°C v opětovně utěsnitelné baňce po dobu 66 hodin, pak ochladí na pokojovou teplotu.
piti· ť’ v * ť: P, «< f: c- o c e » © «©· c<- ft o fo c c © e r o
359
Výsledný hnědý roztok se koncentruje, čímž se získá růžová pevná látka, která se trituruje heptanem, čímž se získá V2-(4-brom-2-fluorfenyl)-l,3-benzothiazol-2-amin (1,699 g, 99%) ve formě růžového prášku.
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v O,1N vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) tR = 13,82 minut, 95%; m/z 325 (MH+).
V2-(4-bromfeny 1)-1,3 -benzothiazol-2-amin
V2-(4-bromfenyl)-l,3-benzothiazol-2-amin se připraví y 4-bromanilinu (1,00 g,
5,81 mmol) způsobem, který je podobný použitému pro V2-(4-brom-2-fluorfenyl)-l,3benzoxazol-2-amin. Sloučenina se p5iprav9 jako světle růžový prášek (0,867 g, 49%). RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) tR - 13,32 minut, 100%; m/z 307 (MH+).
V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3.2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l ,3-benzoxazol-2-amin Do roztoku V2-(4-brom-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-aminu (1,480 g, 4,819 mmol) v dimethylformamidu (15 ml) pod atmosférou dusíku se přidá bis(pinakolato)diboron (1,468 g, 5,781 mmol), octan draselný (1,419 g, 14,45 mmol) a [1,1 '-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatý komplex s dichlormethanem (1:1) (0,119 g, 0,146 mmol). Fialový roztok se míchá při teplotě 80°C po dobu 18 hodin, pak se ochladí na pokojovou teplotu. Výsledná tmavě hnědá směs se koncentruje za vakua, čímž se získá tmavě hnědá pevná látka. Tato látka se trituruje dichlormethanem, filtruje a filtrát se koncentruje, čímž se získá tmavě hnědý olej. Čištěním chromatografií na sloupci silikagelu 30% ethylačetátem v heptanech jako mobilní fází se získá 2,28 g žluté pevné látky. Tato látka se trituruje heptanem a pevná látka se spojí, čímž se získá V2-[2-fluor-4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amin (0,961 g, 56%) ve formě bílého prášku.
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) tR = 13,80 minut 88%; m/z 355 (MH+).
V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzothiazol-2-amin e <? -e © e «*· r «,
V © <;
e © e e © © & o r e © ©
Č 1' ('· ©f i cr ( o © o ©· © © o e c- o c o © <? e p p © r < «oce
P ť. <· < * i, f r. <. ©
360
V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-1,3benzothiazol-2-amin se připraví z V2-(4-brom-2-fluorfenyl)-l,3-benzothiazol-2-aminu (1,699 g, 5,258 mmol) způsobem, který je podobný použitému pro V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě bělavého prášku (0,825 g, 42%).
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v O,1N vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) tR = 14,48 minut 90%; m/z 371 (MH+).
V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzothiazol-2-amin
7V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzothiazol-2-amin se připraví z V2-(4-bromfenyl)-l,3-benzothiazol-2-aminu (0,909 g, 2,98 mmol) způsobem, který je podobný použitému pro V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě bělavého prášku (0,321 g, 31%).
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) tR =13,82 minut, 92%; m/z 351 (MH+).
Příklad 367 cis-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin3 -yl} -2-fluorfenyl)-1,3 -benzoxazol-2-amin
Do roztoku cis-3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4e/]pyrimidin-4-aminu (0,150 g, 0,340 mmol) v ethylenglykoldimethyletheru (3 ml) a vodě (1,5 ml) pod atmosférou dusíku se přidá V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amin (0,151 g, 0,425 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)palladium (0,020 mg, 0,017 mmol) a monohydrát uhličitanu sodného (0,105 mg, 0,850 mmol). Roztok se míchá při teplotě 83°C po dobu 19 hodin. Výsledná žlutá směs se koncentruje za vakua, čímž se získá žlutý olej. Čištěním preparativní RPHPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, tR = 5,7-8,1 minut) se získá cw~V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyí]-l//-pyrazolo[3,4< c. ít r fc ©fc e
C s fc í fc *! c> * *” * * Í V c r f Γ «’ fc fc fc 9 , < ,·, r. <, r- r ,» « r r ( C- fc / - fc < fc fc r fy fc ©fcfc
361 í/}pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amin ve formě bělavé pevné látky (0,046 g, 25 %).
*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,65 (s, 1 H), 8,49 (m, 1 H), 8,25 (s, 1 H), 7,53 (d, 2 H), 7,48 (d, 2 H), 7,26 (t, 1 H), 7,20 (t, 1 H), 4,80 (m, 1 H), 3,51-2,50 (m, 11 H), 2,33-2,32 (m, 4 H), 2,09-2,06 (m, 2 H), 1,80-1,40 (m, 3 H);
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v O,1N vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 6,95 minut, 99%; m/z 542 (MH+).
Příklad 368 fcZ5-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-(7]pyrimidin3 -yl} -2 -fluorfenyl)-1,3 -benzothiazol-2-amin
Cis-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3-benzothiazol-2-amin se připraví zc/s-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,227 mmol) a V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl)-1,3benzothiazol-2-aminu (0,105 g, 0,283 mmol) způsobem, který je podobný použitému pro cis-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4-JJpyrimidin3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě bělavého prášku (0,051 g, 41%).
‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,51 (s, 1 H), 8,80 (m, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,85 (d, 1 H), 7,65 (d, 1 H).7,51 (m, 2 H), 7,36 (t, 1 H), 7,20 (t, 1 H), 4,82 (m, 1 H), 3,51-2,25 (m, 14 H), 2,152,10 (m, 2 H), 1,80-1,50 (m, 4 H);
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 7,63 minut, 100%; m/z 558 (MH+).
Příklad 369 cw-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c(|pyrimidin3 -yl} fenyl)-1,3 -benzothiazol-2-amin t> e *e ©e » e © e © c
9 0 © 4 ©
4« 9 0 g> © ο © e © fe © e o <s p e < c © © e* v ť· e © c e (i e f ο κ fi í c (· * t r ť>
362
Cis-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 77-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3-yl}fenyl)-l,3-benzothiazol-2-amin se připraví z cw-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,227 mmol) a N2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzothiazol-2aminu (0,100 g, 0,283 mmol) způsobem, který je podobný použitému pro cis-N2~(4-{4amino-1 - [4 -(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě bělavého prášku (0,035 g, 28%).
’H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 10,71 (s, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 7,98 (d, 2 H), 7,84 (d, 1 H), 7,65 (d, 3 H), 7,35 (t, 1H), 7,19 (t, 1 H), 4,80 (m, 1 H), 3,50 (m, 1 H), (m, 15 H), 1,71-1,57 (m, 4H);
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 7,47 minut, 100%; m/z 540 (MH+).
Příklad 370 trans-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4í/jpyrimidin-3 -yl} fenyl)-1,3 -benzoxazol-2-amin
Trans-N2 -(4-14-amino-l- [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3-yl}fenyl)-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z /ra/w-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,036 g, 0,082 mmol) a N2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2aminu (0,034 g, 0,10 mmol) způsobem, který je podobný použitému pro cis-N2-(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě bělavého prášku (0,021 g, 50%).
'H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 10,86 (s, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 7,93 (d, 2 H), 7,66 (d, 2 H), 7,51 (t, 1 H), 7,25 (t, 1 H), 7,16 (t, 1 H), 4,65 (m, 1 H), 3,51 (m, 1 H), 2,67-1,91 (m, 17 H), 1,49-1,46 (m, 2 H);
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 7,17 minut, 100%;
m/z 524 (MH+).
co v ,·· g c- 9 o e « to e o .· f - r c © 1' ' · e ,, f <- f>. o r> t- c o o ® < < < ε e /. e> © , , . , . f. ( f. f: ft f. ft C · 0« β
363
Příklad 371 trans-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 H-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amin
7r«m,-H2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z /ra«5-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l H-pyrazolo [3,4-í/jpyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,227 mmol) a H2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l ,3benzoxazol-2-aminu (0,151 g, 0,425 mmol) způsobem, který je podobný použitému pro óH-izomer. Sloučenina se připraví ve formě bílého prášku (0,053 g, 43%).
*H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 10,63 (s, 1 H), 8,45 (m, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,55-7,48 (m, 4 H), 7,25 (t, 1 H), 7,17 (t, 1 H), 4,65 (m, 1 H), 3,36 (m, 1 H), 3,31-1,93 (m, 16 H), 1,461,23 (m, 3 H);
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) tR = 6,73 minut, 99%; m/z 542 (MH+)·
Příklad 372 trans-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 H-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl} -2-fluorfenyl)-1,3 -benzothiazol-2-amin
71ra«ó'-H2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4z/]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3-benzothiazol-2-amin se připraví z /ra«ó-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,227 mmol) a H2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l, 3benzothiazol-2-aminu (0,105 g, 0,283 mmol) způsobem, který je podobný použitému pro m-izomer. Sloučenina se připraví ve formě bílého prášku (0,052 g, 41%).
‘H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 10,51 (s, 1 H), 8,79 (m, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,85 (d, 1 H), 7,66 (d, 1 H), 7,51 (m, 2 H), 7,36 (t, 1 H), 7,20 (t, 1 H), 4,66 (m, 1 H), 3,69 (m, 1 H), 2,891,94 (m, 17 H), 1,50-1,47 (m, 2 H);
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) tR = 6,30 minutách se
99%; m/z 558 (MH+).
et? o o
C to ť c· «* to c ř? e c to β c f r C { f (<
© φ
<c ť? Γ ι r t i · v f t- (· c • f < c « o V í’ e c (- © c c f. <364
Příklad 373 cis-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo[3,4-</jpyrimidin3 -yl} fenyl)-4-methyl-1,3 -benzoxazol-2-amin l,l'-Thiokarbonyldi-2-(l//)-pyridon (0,086 g, 0,369 mmol) se přidá do roztoku d5-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</)pyrimidin4-aminu (0,150 g, 0,369 mmol) v pyridinu (7 ml) při teplotě 0°C a směs se míchá po dobu 1 hodiny při teplotě 0°C. Výsledný oranžový roztok se rozdělí mezi dichlormethan (10 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva se separuje a promyje 0,5N HCl (10 ml), suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje. Do suspenze výsledné oranžové pevné látky a toluen (10 ml) se přidá 2-amino-w-kresol (0,045 g, 0,369 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 1 hodiny. Přidá se 1,3-dicyklohexylkarbodiimid (0,114 g, 0,554 mmol) a reakční směs se zahřívá při teplotě 80°C dalších 18 hodin. Výsledný oranžovo-hnědý roztok se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje, čímž se získá světle hnědá sklovitá pevná látka. Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, ír = 8,1-10,3 minut) se získá cis-N2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 /7-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl} feny l)-4-methyl-1,3benzoxazol-2-amin ve formě bělavé pevné látky (0,024 g, 12 %).
*H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 10,81 (s, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,96 (d, 2 H), 7,66 (d, 2 H), 7,33 (d, 1 H), 7,06 (m, 2 H), 4,80 (m, 1 H), 3,391 (m, 1 H), 2,67-2,10 (m, 18 H), 1,71-1,60 (m, 4 H);
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm sloupec) tR = 7,57 minut, 99%; m/z 538 (MH+).
Příklad 374 cis-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin3 -yl} fenyl)-5-chlor-1,3 -benzoxazol-2-amin
C/5-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-chlor-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z cw-3-(4-aminofenyl)l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,246 mmol) a 2-amino-4-chlorfenolu (0,035 g, 0,246 mmol) způsobem, který je podobný
365 použitému pro cis-N2-(4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4-methyl-l ,3-benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě světle žluté pevné látky (0,020 g, 15%).
*H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 11,03 (s, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,92 (d, 2 H), 7,67 (d, 2 H), 7,56 (m, 2 H), 7,20 (m, 1 H), 7,16 (t, 1 H), 4,81 (m, 1 H), 3,41-1,60 (m, 20 H);
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v O,1N vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) tR = 7,83 minut, 99%; m/z 558 (MH+).
Příklad 375 czs-Ar2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin3 -yl} fenyl)-5-methyl-1,3 -benzoxazol-2-amin
Cis-N2-(4- (4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-methyl-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví zcw-3-(4aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,057 g, 0,140 mmol) a 2-amino-p-kresolu (0,017 g, 0,140 mmol) způsobem, který je podobný použitému pro ďA-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4-methyl-l ,3-benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě bělavé pevné látky (0,010 g.13%).
*H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 10,81 (s, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 7,93 (d, 2 H), 7,66 (d, 2 H), 7,38 (d, 1 H), 7,30 (s, 1 H), 6,96 (d, 1 H), 4,80 (m, 1 H), 2,60-2,07 (m.12 H), 2,39 (s, 3 H), 2,15 (s, 3 H), 1,71-1,59 (m, 5 H);
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 7,48 minut, 90%; m/z 538 (MH+).
Příklad 376 cis-N2-(4- [4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin
Cis-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 Z/-pyrazolo[3,4ó/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z cz.v-3-(4e * © c-V fc R 9 β © e
e c e e © c © *?e »♦’ » © e ť fc fc c fc v * O fc fc í « fc c © e * e>
0 0 fc e t 6 e ♦ ♦ © < 0 fc β β β € fc fc
366 aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,246 mmol) a 6-amino-2,4-xylenolu (0,034 g, 0,246 mmol) způsobem, který je podobný použitému pro cis-N2-(4-{ 4-amino-1- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- 1Hpyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-4-methyl-1,3 -benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě bělavé pevné látky (0,031 g, 23%).
'H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 10,85 (s, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 7,93 (d, 2 H), 7,65 (d, 2 H), 7,11 (s, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 4,80 (m, 1 H), 2,60-2,17 (m, 12 H), 2,41 (s, 3 H), 2,37 (s, 3 H), 2,22 (s, 3 H), (m, 5 H);
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 8,00 minut, 93%; m/z 552 (MH+).
Příklad 377
7V2-[4-(4-amino-1 - {4-[l -(1 -methylpiperid-4-yl)piperidyl]} - lH-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin3-yl)-2-fluorfenyl]-5-chlor-2-thiofensulfonamid
Tato slučenina se připraví z Al-4-(4-amino-l-{4-[l-(l-methylpiperid-4yl)piperidyl]}-lH-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl)-2-fluorfenylanilinu (100 mg, 0,236 mmol) za použití způsobu popsaného výše, čímž se získá 7V2-[4-(4-amino-l-(4-(1-(1methylpiperid-4-yl)piperidyl]}-lH-pyrazolo[3,4-/Jpyrimidin-3-yl)-2-fluorfenyl]-5-chlor-2thiofensulfonamid (51 mg);
podmínky RP-HPLC: 10 až 90 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného, pufrovaný na pH = 4,5, v průběhu 20 minut při 2 ml/min za použití Waters Symmetry Cl 8, 300 A, 5 pm, 250 x 4,6 mm sloupec, Rt 11,219 minut, 98,5 % a m/z (MH+) 605,2.
Příklady 378-383
Obecný způsob syntézy močo vínových a sulfonamidových analog cis-3-{4[amino(fenyl)methyl] fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4/Jpyrimidin-4-aminu
Tato analoga se připraví z cw-3-(4-[amino(fenyl)methyl]fenyl}-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (50 mg, 0,10 mmol) za použití způsobu popsaného výše, čímž se získají následující příklady:
Př.
0 fc β c 6 * e f © « c c e * fc (> e fc fc
Cti fe fc f« · o fc »· o · o fc © « f © β fc fc β fc
367
HPLC Rt Čistota +
Struktura (min) (%) m/z (MH )
OA 13,815 100 616,3
ku. ý 13,122 100 659,5
A r 11,64 100 568,3
λλ dA 14,99 97,8 685,5
í 14,43 100 676,6
QauaTO 13,68 100 695
378
379
380
381
382
383
Analytické podmínky RP-HPLC: 10 až 90 % CH3CN v O,1N vodný roztok octanu amonného, pufrovaný na pH = 4,5, v průběhu 20 minut při 2 ml/min za použití Waters
Symmetry Cl8, 5 pm, 300 A, 250 x 4,6 mm sloupec.
ílti fe * e < í fe í;
* fe
C m o c cfe fe e r v>
fe í fe <;
fe t v o e fe V Cc t V t f> ti ft ¢. ft e « i
fe β « ti «
368
Příklad 384 trans-N-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Z/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin3-yl}-benzyl)-A-(3-methylfenyl)
Směs obsahuj ící trans-3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-aminu (850 mg, 1,93 mmol), fórc-butyl-7V-[4-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzyl]karbamát (1,25 ekviv. 812 mg, 2,41 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (135 mg) a uhličitanu sodného (2,5 ekviv. 511 mg, 4,83 mmol) v odplyněné vodě (10 ml) a DME (30 ml) se zahřívá a míchá při teplotě 85°C po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá hnědá pěna, která se čistí chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 10% methanolu a 1% hydroxidu amonného v dichlormethanu jako mobilní fázi. Tram-fórc-butyl-JV-(4-{ 4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 7/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3 -yl} benzy l)karbamát se připraví ve formě bělavé pěny (800 mg, 80%).
Roztok terc-butyl-/V-(4~{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-fércbutyl-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}benzyl)karbamátu (800 mg) v TFA (4 ml) a dichlormethanu (4 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a olejovitý zbytek se alkalizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodná vrstva se promyje dichlormethanem (3 x 20 ml). Vodná vrstva se koncentruje a přidá se DMF (20 ml). Soli se odstraní filtrací a DMF se odstraní za vakua. Zbytek se čistí chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 10% methanolu v dichlormethanu jako mobilní fázi, čímž se získá 3-[4-(aminomethyl)fenyl]-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-4-amin ve formě žluté pevné látky (70 mg, 11 %). Do roztoku 3-[4-(aminomethyl)fenyl]-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]- lH-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (35 mg, 0,083 mmol) v pyridinu (0,5 ml) se přidá zw-tolylizokyanát (1,1 ekviv. 13,7 mg, 0,1 mmol), pak se míchá po dobu 2 dnů. Reakční směs se čistí za použití hmotnostní aktivované preparativní RP-HPLC (Micromass/Gilson, Hypersil BDS C 18, 5 pm, 100 x 21,2 mm sloupec; 0100% acetonitril a 0,05M octan amonný, pufrovaný na pH = 4,5, v průběhu 12,5 minut při 25 ml/min), čímž se získá trans-N-(4- {4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidin-3 -yl} benzy 1)-V '-(3methylfenyl)močovina (17 mg, 37 %).
ι-i c r f· <5 ’.5 C <.» ©
Γ, f r C- O I- <? f* ť- f>
C C © 0 © C i : ©
O t. f C < € č C O C < i i i· ft e c c cc i fi rc cct. <> o c
369 !H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 1,46 (2H, m), 2,05 (4H, m), 2,18 (2H, m), 2,25 (3H, s), 2,33 (4H, m), 2,45-2,53 (8H, m), 4,38 (2H, br d), 4,65 (IH, m), 6,52-(lH, t), 6,66 (1 H, d), 7,10 (1 H, t), 7,19 (1 H, br d), 7,26 (1 H, br s), 7,46 (2 H, d), 7,63 (2H, d), 8,23 (IH, s) a 8,51 (IH, s) a m/z (MH+) 554,2.
Příklad 385 trans-N-(4-{04-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} benzyl)-A '-(3 -methoxyfenyl)močovina
K připravení trans-N-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1Hpyrazolo[3,4-t(]pyrimidin-3-yl}benzyl)-A’-(3-methoxyfenyl)močoviny (17 mg, 36 %) se použije stejným způsob a stejné měřítko jako v příkladu 240.
*H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 1,46 (2H, m), 2,05 (4H, m), 2,18 (2H, m), 2,35 (4H, m), 2,45-2,53 (8H, m), 3,70 (3H, s), 4,38 (2H, br d), 4,65 (IH, m), 6,49 (IH, m), 6,67 (IH, m), 6,90 (IH, br c, 7,12-(1H, t), 7,17 (IH, m), 7,46 (2 H, d), 7,63 (2H, d), 8,23 (IH, s) a 8,62(1H, s) zm/z (MH+) 570,2.
Příklad 386 cis-N\ -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-</|pyrimidin3 -yl} -2-methoxyfenyl)-2,2-dimethyl-3-fenylpropanamid
2,2-dimethyl-3-fenylpropannitril
Roztok A-izopropylcyklohexylaminu (2,8 g, 19,72 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (25 ml) při teplotě -78°C se po kapkách v průběhu 15 minut nechá reagovat s 1,6 M «-butyllithiem v hexanech (12,23 ml, 19,72 mmol). Reakční roztok se míchá po dobu 10 minut při teplotě -78°C. Barva roztoku se změní ze žluté na bezbarvou. Izobutyronitril (1,36 g, 19,72 mmol) se přidá do reakčního roztoku a reakční směs se míchá po dalších 10 minut při teplotě -78°C. Tento roztok se pomocí injekční stříkačky převede do roztoku benzylchloridu (2,62 g, 20,71 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu při teplotě -78°C pod atmosférou dusíku. Načervenalý až hnědý reakční roztok se míchá po dobu 1 hodiny při teplotě -78°C. Pak se odstraní lázeň ze suchého ledu a acetonu a roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Reakční roztok se zháší nasyceným vodným roztokem chloridu amonného (10 ml). Ke zhášení reakce se přidá ethylacetát (25 o
co
370 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (150 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou, suší síranem sodným, filtrují a odpařují za sníženého tlaku, ěímž se získá 3,18 g surové látky. Surová látka se rozdělí mezi 2N roztok kyseliny chlorovodíkové a ethylacetát. Organická vrstva se promyje vodou a solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje, ěímž se získá 2,18 g (69%) 2,2-dimethyl-3fenylpropannitrilu.
'H NMR (DMSO-dó,400 MHz) δ 7,369-7,333 (m, 2H), 7,3097,270 (m, 3H), 2,832 (s, 2H), 1,294 (s, 6H).
Tato sloučenina se použije v následujícím kroku bez další analýzy.
2.2- dimethyl-3-fenylpropanová kyselina
Roztok 2,2-dimethyl-3-fenylpropannitrilu (1,0 g, 6,28 mmol) v ethylenglykolu (5 ml) se nechá reagovat s pevným hydroxidem draselným (1,06 g, 18,84 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 48 hodin při teplotě 196°C pod atmosférou dusíku. Ethylenglykol se odstraní za vakuové destilace. Do hnědého zbytku se přidá IN roztok hydroxidu sodného (25 ml) a ethylacetát (15 ml). Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (375 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou, suší síranem sodným, filtrují a odpařují za sníženého tlaku, čímž se získá 0,856 g (76%)
2.2- dimethyl-3-fenylpropanové kyseliny.
Ή NMR (DMSO-dó,400 MHz) δ 12,20 (s, 1H), 7,28-7,24 (m, 2H), 7,22-7,20 (m, 1H), 7,15-7,13 (m, 2H), 2,78 (s, 2H), 1,07 (s, 6H).
Tato sloučenina se použije v následujícím kroku bez další analýzy.
2.2- dimethyl-3-fenylpropanoylchlorid
Roztok 2,2-dimethyl-3-fenylpropanové kyseliny (0,856 g, 4,8 mmol) v chloroformu (6 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s oxalylchloridem (3,05 g, 24 mmol) a 1 kapkou dimethylformamidu. Reakční roztok se míchá po dobu 1 hodiny při teplotě 0°C. Ledová lázeň se odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství
2.2- dimethyl-3-fenylpropanoylchloridu.
Olej se použije přímo v další reakcí.
r-.n rc π. c«* ee ' , ( C f ř- C ť i> CC c C c i r < v © c o <- fI , i- r c ( c © ,'«·(·. či- Γ· O r. cr.r (·.
<
v © c e
371 rz5-jVl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin~3 -yl} -2 -methoxy fenyl)-2,2-dimethy 1-3 -fenylpropanamid
Roztok rw-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,23 mmol) v pyridinu (2,5 ml) se nechá reagovat s 2,2-dimethyl-3-fenylpropanoylchloridem (0,120 g, 0,61 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 2 hodin při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Přidá se nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a reakční směs se míchá po dobu 20 minut. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují za použití extrakční cartridge Empore. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Surová sloučenina se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi 10% methanolu v dichlormethanu jako mobilní fázi, čímž se získá 0,085 g (62%) cřs’-Vl-(4{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-2,2dimethyl-3 -fenylpropanamidu.
’H NMR (CDCl3,400 MHz) δ 8,595-8,574 (m, IH), 8,372 (s, IH), 7,985 (s, IH), 7,2927,158 (m, 7H), 4,923 (m, IH), 3,891 (s, 3H), 3,050-3,013 (m, IH), 2,965 (s, 2H), 2,65-2,55 (m, 5H), 2,440-2,346 (m, 4H), 2,244-2,166 (m, 4H), 1,854-1,823 (m, 3H), 1,688 (m, 3H), 1,334 (s, 6H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPi8, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 5,517 min (100%).
Příklad 387 tris-maleát trans-Nl-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-2,2-dimethyl-3-fenylpropanamidu
Roztok /ra«s-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (0,250 g, 0,573 mmol) v pyridinu (3 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s 2,2-dimethyl-3-fenylpropanoylchloridem (0,304 g, 1,55 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 10 minut při 0°C. Ledová lázeň se odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do této pevné látky se přidá suchý dichlormethan (15 ml) a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (5 ml). Vrstvy se separují za použití se extrakční cartridge
C <· í v vg f <? ee c r f> o (. e o ( ( <, · o c e e r c c ( ccc c o c (: c o < o c ř f c c e c ccc ť,
372
Empore. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Surová pevná látka se čistí zrychlenou chromatografii ve směsi 10% methanolu v dichlormethanu, pak 15% (methanolu s 5% hydroxidem amonným) v dichlormethanu jako mobilní fázi. Surová pevná látka z předchozího čištění se rekrystalizuje za použití ethylacetátu a heptanu, precipitát se filtruje, čímž se získá 0,201 g (59%) trans-Ni-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny 1)-2,2dimethyl-3-fenylpropanamidu. Horký roztok trans-N\ -(4- {4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-2,2dimethyl-3-fenylpropanamidu (0,201, 0,337 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,117 g, 1,011 mmol) v ethylacetátu, precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší za vysokého vakua, čímž se získá 0,265 g tri-maleátu trans-N\ -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-2,2-dimethyl-3-fenylpropanamidu.
*H NMR (DMSOd6,400 MHz) δ 8,46 (s, 1H), 8,241 (s, 1H), 8,107-8,086 (d, 1H, J= 8,4 Hz), 7,2487,183 (m, 7H), 6,170 (s, 6H), 4,697 (m, 1H), 3,883 (s, 3H), 2,931 (s, 3H), 2,92,75 (br, s, 4H), 2,671 (s, 3H), 2,104-1,990 (m, 7H), 1,588-1,5632 (m, 2H), 1,226 (s, 7H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 5,413 min (95%).
Příklad 388 tris-maleát trans-N\-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4íf]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-( 1 S,2S)-2-feny lcyklopropan-1 -karboxamidu
Roztok trans-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]lH-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (0,162 g, 0,371 mmol) v pyridinu (2 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s /ra«ó-2-fenyl-l-cyklopropylkarbonylchloridem (0,134 g, 0,742 mmol) pod atmosférou dusíku. Reakční směs se míchá po dobu 20 minut při 0°C. Ledová lázeň se odstraní a reakční směs míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Přidá se další trans-2-fenyl-1 -cyklopropylkarbonylchlorid (0,034 g, 0,186 mmol) a reakční směs míchá po dobu 1 hodiny. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (15 mi). Vrstvy se separují za použití extrakční cartridge Empore. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ( ('
I I·· R . ( ( O Í' í;
c <' ť; f; ( i r O <: c c < f o c « i- f· r (.
c <· o < e o i r < c c i- c c c c c
373 za použití 15% methanolu v dichlormethanu pak 20% methanolu v dichlormethanu jako mobilní fázi. Ze sloupce se získá 0,150 g (70%) trans-Al-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)(lS,2S)-2-fenylcyklopropan-l-karboxamidu. Horký roztok írans-Al-(4-f4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)(LS',25)-2-fenylcyklopropan-l-karboxamidu (0,147, 0,253 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,088 g, 0,759 mmol) v ethylacetátu, vytvořený precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší za vysokého vakua, čímž se získá 0,204 g tris-maleát Zrans-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin~3~yl} -2-methoxyfenyl)-( 1 S',25)-2-fenylcyklopropan-1 karboxamidu.
JH NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 9,64 (s, ÍH), 8,23-8,21 (m, 2H), 7,33-7,29 (m, 2H), 7,247,17 (m, 4H), 6,16 (s, 6H), 4,69-4,66 (m, ÍH), 3,90 (s, 3H), 2,90-2,60 (m, 7H), 2,37-2,35 (m, 2H), 2,10-1,99 (m, 8H), 1,70-1,50 (m, 3H), 1,32 (m, ÍH);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPjg. 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 5,346 min (97%).
Příklady 389 c/s-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-£Z]pyrimidin-3yl} -2-methoxyfenyl)benzo[7]thiofen-2-karboxamid
Příklad 390 cis-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin3 -yl} -2-methoxy fenyl)-2-thiofenkarboxamid
Příklad 391 czs-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazoIo[3,4-</]pyrimidin3 -yl} -2-methoxyfenyl)-2-furamid
Amidy odvozené od rá-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-7//-pyrazolo[3,4-íZlpyrimidin-4-aminu. Komerčně dostupné chloridy kyselin (0,23 mmol) v dichlormethanu (100 μΐ) se přidají do m-3-(4-amino-3ο ο e e < ne e © e e oce e c o e c© eeee
374 methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-7A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4aminu (0,050 g, 0,115 mmol) v pyridinu (800 μΐ). Reakční směs se míchá přes noc, zháší IN roztokem hydroxidu sodného. Rozpouštědlo se odstraní na Supelco manifold za vakua a s promýváním dusíkem. Zbývající pevné látky se podrobí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 100 x 21 mm sloupec, 5 pm, gradient: 15-100% acetonitrilu v průběhu 8 minut, celkový čas - lOminut, pufr 50mM octan amonný, 25 ml/min) do pevné látky se přidá dichlormethan a IN roztok hydroxidu sodného. Vrstvy se rozdělí za použití extrakční cartridge Empore, čímž se získají odpovídající produkty, HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 μΜ, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný až acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581,2), 95%.
LCMS (Perkin Elmer.Pecosphere 08 column, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min).
Cr &
© ft t e o ti O
C C © © ft t O 0 c ft f ( ti C ft e © e· c © © © ft e e o o © © ft fí C ft & ft c ft C ft c
375
Sloučenina R Qty. (mg) MET Rt (min)
ris-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino) cy klohexylj-lApyrazolo[3,4-íf|pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)benzo[á]thiophen -2-karboxamid Př. 389 OH° 45 (66%) 596.8 3.464
m-zV2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino) cyklohexylj-l//pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-2- thiof enkarboxamid Př. 390 c/ 47 (75%) 547.1 2.746
cis-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4metbylpiperazino)cy klohexyl]-l/7~ pyrazolo[3,4-djpyrimidin-3-yl}-2methoxyf enyl)-2-fu ramid Př. 391 36 (59%) 531.3 2.626
Příklad 392 tris-maleát /ram-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3-methyl-3-fenylbutanamidu 3 -methyl-3 -fenylbutanoy lchlorid
Roztok 3-methyl-3-fenylbutyrové kyseliny (0,508 g, 2,85 mmol) v dichlormethanu (10 ml) při teplotě -78°C se nechá reagovat s oxalylchloridem (3,62, 28,5 mmol) a 1 kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se míchá při teplotě-78°C po dobu 10 minut a odstraní se lázeň z acetonu a suchého ledu a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua. Produkt se použije přímo do další reakce bez analýzy.
tris-maleát trans-Nl -(4- {4-amino-1 ~[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -y 1} -2-methoxy feny l)-3 -methyl-3 -fenylbutanamídu
Roztok /ra«x-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]7A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,458 mmol) v pyridinu (4 ml) při teplotě
-5°C se nechá po kapkách reagovat s roztokem 3-methyl-3-fenylbutanoylchloridu (0,101 g, © -e ( o o © v c c
C O Λ (: C O
O <> f f C C
C ť> c c
V ΓΟΟ C c C:
o co <’ O C C C
O O PO o c o o o ť o f ť·
376
0,514 mmol) v dichlormethanu (1 ml). Reakční směs se míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C, pak se odstraní lázeň z acetonu a suchého ledu a reakční směs míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin. Přidá se IN roztok hydroxidu sodného (5 ml) a směs míchá přes noc. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Surová pevná látka se suší za vysokého vakua. Přidá se dichlormethan (10 ml) a IN roztok hydroxidu sodného (10 ml). Vrstvy se separují a použije se extrakční cartridge Empore. Organické rozpouštědlo se odstraní zavedením a probubláváním dusíku, čímž se získá 0,240 g (88%) trans-Nl-(4-{4amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yl} -2methoxy feny l)-3 -methy 1-3 -fenylbutanamid.
Horký roztok trans-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexy 1]-1Apyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -y 1} -2-methoxyfenyl)-3 -methyl-3 -fenylbutanamidu (0,240 g, 0,402 mmol) v ethylacetátu a pár kapek ethanolu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,140 g, 1,206 mmol) v ethylacetátu. Vzniklý precipitá se filtruje pod atmosférou dusíku a suší na lyofilizátoru, čímž se získá 0,323 g tris-maleátu trans-N\ -(4{4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)-3-methyl-3-fenylbutanamidu.
‘H NMR (DMSO-dó,400 MHz) δ 8,807 (s, 1H), 8,226 (s, 1H), 8,109- 8,088 (d, 1H, J= 8,4 Hz), 7,489-7,470 (d, 2H, J= 7,6 Hz), 7,345-7,306 (m, 2H), 7,213-7,134 (m, 3H), 6,151 (s, 5H), 4,680 (m, 1H), 3,836 (s, 3H), 3,3 (br, s, 7H), 2,655 (s, 3H), 2,541 (s, 4H), 2,085-1,989 (m, 6H), 1,574-1,551 (m, 2H), 1,431 (s, 6H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPjg 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt 5,407 min (99%).
Příklady 393-397
Amidy odvozené od cA-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-7A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu
Reprezentativní způsoby:
Do vhodné karboxylové kyseliny (0,46 mmol) v dichlormethanu (1,4 ml) se přidá oxaiylchlorid (0,4 ml, 4,6 mmol) a DMF (1 kapka). Baňky se uzavřou závěrem a k vyrovnání tlaku se do závěru každé baňky přidá malá jehla. Baňky se třepají přes noc na třepačce J-Kem. 50% Roztok se separuje a přebytek oxalylchloridu a dichlormethanu se pak se odstraní na spojce Supelco s 12 porty za vacuum a s dusíkem. Surový chlorid • fc e β e fc £·
¢) e ϊί β e
» 9 e · e e β β © © t e « e fc r r c
377 kyseliny (0,23 mmol) se přidá do ds-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (50 mg, 0,11 mmol) v suchém pyridin (0,6 ml) a míchá při pokojové teplotě přes noc. Výsledné roztoky se podrobí přímo čištění na preparativní HPLC (Hypersil BSD 08, 5 um, 100x21mm, 0%100% acetonitril/O,05M octan amonný v průběhu 10 minut 25,0 ml/min). Výsledné produkty se dále čistí rozdělením mezi dichlormethan (4 ml) a 1,0 N hydroxid sodný (2 ml) a pasírováním na vysoce účinném extrakčním diskovém catridge Empore (C18-SD oktadecyl), čímž se získají odpovídající produkty. Sloučeniny s odpovídajícími hodnotami LCMS jsou uvedeny níže (Micromass-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut) data.
© © © « · · © » · © · © » © β • · « · © • · e • · © © • · e • · · · · · « « © © e © © © © & © © © e © © e
378
Sloučenina R Qty. (mg) MH+ Rt (min)
N1 -(4- {4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo(3,4-d]pyrimidín-3-yl} -2methoxy fenyl)-3-fenylbutanamid Př. 393 25 583,4 2,76
N1 -(4- {4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-2-methyl-3fenylpropanamid Př. 394 Vq 20 583,4 2,76
N2-(4- {4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl} -2methoxyfenyl)-l,2,3,4-tetrahydro2-naftalen karboxamid Př. 395 >0 30 595,4 2,97
Nl-(4- (4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl} -2methoxyfenyl)-(3R)-3fenylbutanamid Př. 396 14 583,4 2,85
NI -(4- {4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl} -2methoxyfenyl)-(3S)-3ťenylbutanamid Př. 397 ΛΑθ .13 583,4 2,78
Příklad 398 c/.y-A4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</jpyrimidin3 -y 1} -2-methoxy fenyl)-3,5 -dimethy 1-4-izoxazolkarboxamid
a) </s-terc-butyl-A-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)karbamát
Cis-3 -j od-1 - [4-(4-methy lpiperazíno)cyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4-</Jpyrimidin-4amin (10 g, 22,66 mmol), terc-butyl-A-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (9,49 g, 27,17 mmol), tetrakistrifenyfosfinpalladium (1,57 g, 1,36 mmol) a uhličitan sodný (5,76 g, 54,38 mmol) se smíchají s ethylenglykoldimethyletherem (180ml) a vodou (90 ml). Reakční směs se zahřívá pod τ e O β e« e e e t *· # r- o «· r, © fí e re. c-. c·.
fí © e e © e c, o <’ fí © r e f r
f. < i f * e r * < <>
©· fí e o e e « c e c i: fí e o « <5
379 refluxem přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší MgSO4, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fázi, čímž se získá č7Á-/erc-butyl-V-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4í/|pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)karbamát (10,859 g, 89%).
‘H NMR (DMSO-dó) δ 1,49 (s, 9H), 1,58 (m, 2H), 1,71 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,45 (m, 4H), 2,38 (m, 4H), 2,45 (m, 3H), 3,87 (s, 3H), 4,80 (m, 1H), 7,22 (m, 2H), 7,91 (d, >8,14,1H), 8,04 (s, 1H), 8,22 (s, 1H).
b) cis-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin
Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 200 ml) se přidá do roztoku 7V-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidin-3-yl}2-methoxyfenyl)karbamátu (10,85 g, 20,24 mmol) v dichlormethanu (100 ml) při teplotě 0°C. Po 2 hodinách se ledová lázeň odstraní a rozpouštědla se odpařují a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. K upravení pH na asi 10 se přidá hydroxid sodný (l,0N). Pevná látka vzniklá po odstranění organického rozpouštědla se spojí filtrací, čímž se získá cis-3-(4amino-3 -methoxyfenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4£/]pyrimidin-4-amÍn (8,84g, 100%).
lH NMR (CDC13) δ 1,65 (m, 2H), 1,83 (m, 2H), 2,18 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,35-2,60 (m, 11H), 3,90 (s, 3H), 4,00 (bs, 2H), 4,89 (m, 1H), 5,61 (bs, 2H), 6,83 (d, >7,78 Hz, 1H), 7,12 (m, 2H), 8,35 (s, 1H).
c) cis-N4-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4z/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3,5-dimethyl-4-izoxazolkarboxamid
3,5-Dimethyl-4-izoxazolkarbonylchlorid (22 mg, 0,137 mmol) se přidá do roztoku czs-3-(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4z/Jpyrimidin-4-aminu (30 mg, 0,067 mmol) v pyridinu (0,5 ml). Po 5 hodinách se rozpouštědlo odpařuje a zbytek se rekrystalizuje z DMSO, čímž se získá cis-N4-(4-{4amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)-3,5-dimethyl-4-izoxazolkarboxamid (33 mg, 87%).
© © ©PC β η ο β © © © θ ti ο e « © e e © ο © © ρ ο © © η
Ρ © © Ρ © © ο β ο © ο ©
380 ’Η NMR (DMSO-d6) δ 1,91 (m, 2Η), 2,24 (m, 2Η), 2,36 (m, 2Η), 2,41 (s, 3H), 2,63 (s, 3H), 2,77 (m, 3H), 3,17 (s, 3H), 3,37 (bm, 8H), 3,95 (s, 3H), 4,95 (m, ÍH), 7,37 (m, 2H), 8,17 (d, J=8,17,1H), 8,30 (s, ÍH), 9,26 (s, ÍH).
LC/MS (Micromass-Column: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut), MH+= 560,2, Rt = 2,44 minut.
Příklad 399 cis-N3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin3 -yl} -2-methoxyfenyl)-5 -meťhyl-3 -izoxazolkarboxamid
5-Methyl-3-izoxazolkarbonylchlorid (20 mg, 0,137 mmol) se přidá do roztoku cis3 -(4-amino-3 -methoxy fenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4tíQpyrimidin-4-aminu (30 mg, 0,067 mmol) v pyridinu (0,5 ml). Po 5 hodinách se rozpouštědlo odpařuje a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil BSD 08, 5 pm, 100 x 21mm, 0%-100% acetonitril/0,05M octan amonný v průběhu 10 minut 25,0 ml/min). Výsledné produkty se dále čistí rozdělením mezi dichlormethan (4 ml) a l,0N hydroxid sodný (2 ml) a pasírováním přes vysoce účinný extrakční diskový cartridge Empore (08SD oktadecyl), čímž se získá cA-A3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-5-methyl-3-izoxazolkarboxamid (14 mg, 38%).
‘H NMR (DMSO-dg) δ 1,81 (m, 2H), 2,14 (m, 2H), 2,35 (m, 2H), 2,53 (s, 3H), 2,76 (m, 3H), 3,37 (bm, 8H), 3,99 (s, 3H), 4,93 (m, ÍH), 6,74 (s, ÍH), 7,36 (m, 2H), 8,26 (m, ÍH), 9,48 (s, ÍH);
LCMS (Finigan-Column: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,0 ml/minut): MH+=546,4, Rt =1,82 minut.
Příklad 400 dimaleátová sůl cis-Nl -[(2J?)-2-fenylpropyl]-4- {4-amino-1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl}-2-methoxybenzamidu t:
o e>
«·* te &
λ t< r· · e e © <5· e· r tt c. © r- λ n a β c o e r n r: v, e o o t>
< ' t - c· f c r o o o r c r C * e c r. ř; t> n r r· p~: r f
381
Cis-NÍ -[(2J?)-2-fenylpropyl]-4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxybenzamid (100 mg, 0,172 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (12 ml) a přidá se kyselina maleinová (60 mg, 0,515 mmol) v horkém ethylacetátu (3 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá dimaleátová sůl cw-Vl-[(2J?)-2-fenylpropyl]-4{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 Z/-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}-2methoxybenzamidu (117 mg, 87%).
*H NMR (DMSO-d6) δ 1,25 (d, J=6,96,3H), 1,73 (m, 42H), 2,09 (m, 2H), 2,26 (m, 2H), 2,71 (s, 3H), 2,74 (m, 2H), 2,85-3,70 (bm, 7H), 3,89 (s, 3H), 4,85 (m, ÍH), 6,14 (s, 4H), 7,20 (m, 3H), 7,31 (d, J=4,33,4H), 8,12 (d, J=8,17 Hz, ÍH), 8,24 (s, ÍH), 9,20 (s, ÍH). LC/MS (Finigan column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,0 ml/minut): MH+= 583,4, Rt =2,14 minut.
Příklad 401 trimaleátová sůl trans-/V2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)benzo[/]furan-2 -karboxamidů
a) tra«.y-A/2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)benzo[ů]furan-2-karboxamid
Do benzo[ů]furan-2-karboxylové kyseliny (0,743 g, 4,58 mmol) v dichlormethanu (14 ml) se přidá oxalylchlorid (4 ml, 45,8 mmol) a DMF (1 kapka). Reakční směs se míchá přes noc. Rozpouštědlo se odpařuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu (5 ml). Polovina dichlormethanového roztoku (2,5 ml) se přidá do roztoku /raw-3-(4-amino-3methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-4aminu (0,50 g, 1,145 mmol) v pyridinu (6 ml) při teplotě 0°C. Po 30 minutách se pevná látka spojí filtrací. Pak se do pevné látky přidá voda a pH roztoku se upraví na 10 hydroxidem sodným (l,0N). Vodná fáze se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fázi, čímž se získá trans-N2-(4- {4-amino-1-(4-(4methylpiperazinojcyklohexyl]-1 Z/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl} -2methoxyfenyl)benzo[/]furan-2-karboxamid (0,497 g, 75%).
C ηi'! f>
© e β fc © c 1 η e β fc r. © © * υ c © c © c p ť • o o r e <· « e> e fc β fc © o e « · cep e e í e © 0 ť co e fc fc » cep©
382 ‘H NMR (DMSO-d6) δ 1,49 (m, 2H), 2,01 (m, 6H), 2,15 (s, 3H), 2,40 (m, 3H), 2,51 (m, 4H), 4,00 (s, 3H), 4,66 (m, 1H), 7,31 (m, 1H), 7,39 (m, 2H), 7,54 (m, 1H), 7,81 (m, 3H),
8.24 (m, 1H), 9,50 (s, 1H).
b) trimaleátová sůl /ramA2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)benzo[ó]íuran-2-karboxamidu
Trans-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- 17f-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)benzo[Z>]furan-2-karboxamid (497 mg, 0,855 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (56 ml) a přidá se maleinová kyselina (298 mg, 2,566 mmol) v horkém ethylacetátu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá trimaleátová sůl teans-V2-(4-{4-aminol-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl} -2methoxyfenyl)benzo[/]furan-2-karboxamidu (117 mg, 92%).
’H NMR (DMSO-d6) δ 1,60 (m, 2H), 2,09 (m, 6H), 2,68 (s, 3H), 2,82-3,17 (bm, 9H), 4,00 (s, 3H), 4,69 (m, 1H), 6,16 (s, 6H), 7,30-7,42 (m, 3H), 7,54 (m, 1H), 7,76-7,85 (m, 3H),
8.25 (m, 2H), 9,51 (s, 1H);
LCMS (Finigan-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,0 ml/minut): MH+=581,4, Rt =2, 12 minut.
Příklad 402 trimaleátová sůl trans-N\ -[(27?)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxybenzamidu a) trans-Νϊ -[(27?)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 //-pyrazolo [3,4 -c/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxybenzamid
Do (3/?)-3-fenylbutanové kyseliny (376 mg, 2,29 mmol) v dichlormethanu (7 ml) se přidá oxalylchlorid (2 ml, 22,9 mmol) a DMF (1 kapka). Reakční směs se míchá přes noc. Rozpouštědlo se odpařuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml). Dichlormethanový roztok se přidá do roztoku /ra«5-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (448 mg, 1,026 mmol) v pyridinu (6 ml) při teplotě 0°C. Po 2 hodinách se reakční směs nalije do ethylacetátu (60 ml) a pevná látka se spojí filtrací. Pak se přidá do pevné látky voda a pH (- fy « rť fy- O c <; © ©
C fy fs C
C C C fy fy H- fy fy <> o
O <3 fy fy e < e ·· f c 0 O
383 roztoku se upraví na 10 hydroxidem sodným (l,0N). Vodná fáze se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, solankou, suší síranem hořečnatým, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fázi, čímž se získá /ra«5-Vl-[(2/?)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-l//pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxybenzamid (383 mg, 64%).
‘H NMR (CDCb) δ 1,40 (d, >6,96, 3H), 1,57 (m, 2H), 2,08-2,21 (m, 6H), 2,30 (s, 3H), 2,50 (m, 5H), 2,63-2,74 (m, 6H), 3,40 (m, IH), 3,88 (s, 3H), 4,74 (m, IH), 5,69 (bs, 2H), 7,16-7,34 (m, 7H), 7,66 (s, IH), 8,34 (s, IH), 8,49 (d, >8,21, IH).
b) trimaleátová sůl /ra«s-Vl-[(2/?)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexylj-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxybenzamidu rra«s-Vl-[(2R)-2-fenylpropylj-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cykiohexyljl//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl}-2-methoxybenzamid (383 mg, 0,657 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (42 ml) a přidá se maleinová kyselina (229 mg, 1,971 mmol) v horkém ethylacetátu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá řra«x-Vl-[(27?)-2-fenylpropyl]-4-{4amino-1- [4-(4-methy lpiperazino)eyklohexyl j -1 //-pyrazolo[3,4-zQpy rimidin-3 -yl} -2methoxybenzamid (571 mg, 93%).
'H NMR (DMSO-dó) δ 1,25 (d, >6,95, 3H), 1,57 (m, 2H), 2,03 (m, 6H), 2,60-3,40 (bm, 18H), 3,89 (s, 3H), 4,67 (m, IH), 6,16 (s, 6H), 7,20 (m, 3H), 7,31 (d, >4,37 Hz, 4H), 8,14 (d, >8,22 Hz, IH), 8,23 (s, IH), 9,18 (s, IH).
LCMS (Micromass-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut): MH+=583,2, Rt = 2,89 minut.
Příklad 403 fórz-butyl-V- {4- [4-amino-1-(1-(1 -methylpiperidin-4-y l)-piperidin-4-y 1)-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -y 1 j-2-methoxyfenyl} karbamát
a) Zerc-butyl-4-hydroxy-l -piperidinkarboxylát
Borohydrid sodný (3,8 g, 100,4 mmol) se přidá po částech do roztoku fórc-butyl-4oxo-l-piperidinkarboxylátu (20 g, 100,4 mmol) v methanolu (600 ml) při teplotě 0°C. Po » · • ·· · « β· e· • · ♦ · · e · · · « · · · ♦ · » · · • ········· * • · ···· e · β ······· «* β» 9« ····
384 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Přidá se hydroxid sodný (1,0 N, 100 ml) a organické rozpouštědlo se odpařuje. Vodná fáze se extrahuje etherem (4x). Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje, čímž se získá ferc-butyl-4-hydroxy-lpiperidinkarboxylát (20,48 g, 100%).
’H NMR (CDCb) δ 1,48 (s, 9H), 1,63 (m, 2H), 1,87 (m, 2H), 3,03 (m, 2H), 3,83 (m, 3H).
b) Zerc-butyl-4-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin-l-yl)-lpiperidinkarboxylát
3-Jod-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (10 g, 38,3 mmol), řerc-butyl-4hydroxy-l-piperidinkarboxylát (16,96 g, 84,2 mmol) a trifenylfosfin (20,09 g, 76,0 mmol) se suspenduje v tetrahydrofuranu (425 ml). Reakční směs se ochladí v ledové lázni a po kapkách se přidá diethylazodikarboxylát (12,09 ml, 76,0 mmol). Po 10 minutách se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 5 hodinách se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku a při zahřívání přidá se dichlormethan (65 ml). Pevná látka se filtruje a promyje dichlormethanem (20 ml). Pevná látka se dále promyje ethylacetátem (5 x 20 ml), čímž se získá směs diethyl-1,2-hydrazindikarboxylátu a tórc-butyl-4-(4-amino-3-jod-l//pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylátu (1:1, 14,98 g, 63%), která se používá bez dalšího čištění.
’H NMR (CDCb) δ 1,48 (s, 9H), 1,95 (m, 2H), 2,20 (m, 2H), 2,92 (m, 2H), 4,23 (m, 2H), 4,84 (m, 1H), 8,31 (s, 1H).
c) 3-jod-l-(4-piperidyl)- l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin
Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 250 ml) se přidá do roztoku řerc-buty l-4-(4-amino-3 -jod-1 //-pyrazolo [3,4-í/jpyrimidin-1 -y 1)-1 -piperidinkarboxy látu (10,72 g, 24,1 mmol) v dichlormethanu (100 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Rozpouštědla se odpařují a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. Přidá se kyselina chlorovodíková (5,ON) a vodná vrstva se promyje dichlormethanem (3x). K upravení pH na asi 10 se přidá hydroxid sodný (50%). Suspenze se lyofilizuje kvůli snížení objemu na jednu třetinu. Pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá 3-jod-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4í/|pyrimidin-4-amin (8,109 g, 97%). ‘H NMR (CDC13) δ 1,81 (m, 2H), 1,99 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 3,07 (m, 2H), 4,68 (m.lH), 8,19 (s, 1H).
r β ř. 9 c c r tt <'· »- © « · c- c e c λ c r © « ' ♦ · tt 9>
CG © <í » e fe e · e © e
385
d) 3 -jod-1 -[1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)]-piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin4-amin
- Jod-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimÍdin-4amin (2,00 g, 5,81 mmol), 1-methy 1-4-piperidon (2,14 ml, 17,42 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (2,45 g, 11,62 mmol) a ledová kyselina octová (1,05 g, 17,42 mmol) se smíchají s 1,2-dichlorethanem (75 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 6 hodin a k upravení pH na asi 9 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá 3-jod-l-[l-(lmethylpiperidin-4-yl)]-piperidin-4-yl]-l A-pyrazolo [3,4-g/]pyrimidin-4-amin (2,39 g, 93%). ’H NMR (DMSO-dg) δ 1,52 (m, 2H), 1,75 (m, 2H), 1,87 (m.2H), 2,05 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,28 (m, 3H), 2,91 (m, 2H), 3,00 (m, 2H), 4,55 (m.lH), 8,18 (s, IH).
e) férc-butyl-A- {4-[4-amino-1 -[l-( 1 -methy lpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl]-1Apyrazolo[3,4-ďjpyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}karbamát
- Jod-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)] -piperidin-4-yl] -1 A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin4-amin (2,39 g, 5,41 mmol), fórc-butyl-A-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (2,08 g, 5,96 mmol), tetrakistrifenyfosfinpalladium (0,375 g, 0,32 mmol) a uhličitan sodný (1,38 g, 13,00 mmol) se smíchají s ethylenglykoldimethyletherem (80 ml) a vodou (40 ml). Reakční směs se zahřívá pod refluxem přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu, methanolu a hydroxidu amonného (95:5:0,5) jako mobilní fázi, čímž se získá Zerc-butyl-A-{4-[4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-ylj-1 A-pyrazolo[3,4-ť/jpyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}karbamát (1,67 g, 57%).
Ή NMR (DMSO-dg) 8 1,48 (m, 11H), 1,71 (m, 2H) 1,86 (m, 4H), 2,14 (s, 3H), 2,18 (m, 3H), 2,32 (m, 2H), 2,80 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 4,64 (m, IH), 7,22 (m, 2H), 7,91 (d, J=8,12,1H), 8,03 (s, IH), 8,21 (s, IH).
φ© »· © fi fi fi e e · e fi · e fi « * · · · · · * «5 fi « • © • © © · • a • · · · · · ·
PC © · © fi · € © e © © · e ® « © © e » ·
386
Příklad 404
- {4-[(2-furylmethyl)amino]-3 -methoxyfenyl} -1- [l-( 1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4y 1] -1 //-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-4-amin
a) 3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [ 1 -(1 -methy lpiperidin-4-y l)-piperidin-4-yl] -1Hpyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin
Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 28 ml) se přidá do roztoku ferc-buty 1-tV- {4-[4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-y l)-piperidin-4-ylj-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl }karbamátu (0,914 g, 1,70 mmol) v dichlormethanu (5 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Rozpouštědla se pak odpařují a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. K upravení pH na asi 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje, čímž se získá 3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-y l)-piperidin-4-yl] -1Hpyrazolo[3,4-</Jpyrimidin-4-amin (0,726 g, 97%).
'H NMR (CDC13) δ 1,67 (m, 2H) 1,83 (m, 4H), 2,00 (m, 2H), 2,27 (s, 3H), 2,39 (m, 5H), 2,91 (m, 2H), 3,08 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,99 (m, 2h), 4,73 (m, 1H), 5,56 (bs, 2H), 6,82 (d, J=7,87,1H), 7,08 (d, J=7,84,1H), 7,13 (s, 1H), 8,34 (s, 1H).
b) 3 - {4-[(2-furylmethyl)amino] -3 -methoxyfenyl} -1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4yl)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin
-(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [ 1 -(1 -methy lpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl] -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (100 mg, 0,229 mmol), 2-furaldehyd (0,027 ml, 0,321 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (193 mg, 0,916 mmol) a ledová kyselina octová (55 mg, 0,916 mmol) se smíchají s 1,2-dichlorethanem (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. K upravení pH na asi 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu, methanolu a hydroxidu amonného (95:5:0,2) jako mobilní fázi, čímž se získá 3- {4-[(2-furylmethyl)amino]-3-methoxyfenyl} -1 -[ 1 -(1 -methyípiperidin-4yl)piperidin-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (57 mg, 48%).
« fc « t «' © C fc e fc <· «· r » <* c r c c ft (' «· c e c ( r © ft c e · e © e e fc ft β' o ft β © c € ft
C { ft fc
C ft· c387 ’H NMR (DMSO-dó) δ 1,45 (m, 2H), 1,71 (m, 2H), 1,87 (m, 4H), 2,14 (s, 3H), 2,28 (m, 5H), 2,80 (m, 2H), 3,01 (m, 2H), 3,86 (s, 1H), 4,37 (d, J=3,13,1H), 6,76 (d, J=8,62,1H), 7,07 (m, 2H), 7,57 (s, 1H), 8,19 (s, 1H).
LCMS (Finigan-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,0 ml/minut): MH+ 517,3, Rt =2,28 minut.
Příklad 405 dimaleátová sůl VI - {4- [4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-y l]-2-methoxyfenyl} -/r««.s-2-fenylcyklopropan-1 karboxamidu
a) VI - {4-[4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 V-pyrazolo[3,4í/Jpyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -/ra«5-2-fenylcyklopropan-1 -karboxamid rra/ts-2-fenyl-l-cyklopropankarbonyl chlorid (42 mg, 0,231 mmol) se přidá do roztoku 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl]-lVpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (100 mg, 0,229 mmol) v pyridinu (1,0 ml). Po 5 hodinách se rozpouštědlo odpařuje a zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií, čímž se získá Vl-{4-[4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-lVpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-/ra«s-2-fenylcyklopropan-l-karboxamid (80 mg, 60%).
’H NMR (CDC13) δ 1,42 (m, 1H), 1,77 (rn, 2H), 1,85 (m, 2H), 2,06 (m, 3H), 2,36-2,45 (m, 8H), 2,62 (m, 1H), 3,00 (m, 2H), 3,10 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,75 (m, 1H), 5,54-(bs, 2H), 7,14-7,33 (m, 7H), 8,10 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 8,54 (d, J=8,5O,1H).
LCMS (Finigan-Column: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,0 ml/minut): MH+=581,4, Rt=l,77 minut.
b) dimaleátová sůl Vl-{4-[4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-lVpyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-/ra«.s'-2-fenylcyklopropan-lkarboxamidu
VI -{4-[4-amino-1 -[1 -(1 -methy lpiperidin-4-y l)piperidin-4-yl]-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -y 1 ] -2 -methoxy fenyl} -/ram-2-feny lcyklopropan-1 -karboxamid (75 mg,
0,129 mmol) se rozpustí v ethanolu (2 ml) a přidá se maleinová kyselina (45 mg, 0,387 mmol) v ethanolu (1 ml). Reakční směs se míchá pri pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Rozpouštědlo se odstraní a přidá se ethylacetát a pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá dimaleátová sůl Al - {4-[4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-írans-2-fenylcyklopropan-lkarboxamidů (75 mg).
!H NMR (DMSO-dó) δ 1,17 (m, 1H), 1,32 (m, 2H), 1,48 (m, 2H), 1,48, (m, 2H), 2,19 (m, 4H), 2,37 (Μ, 1H), 2,46 (m, 1H), 2,59 (m, 1H), 2,78 (s, 3H), 2,98-3,52-(bm, 9H), 3,90 (s, 3H), 5,02 (m, 1H), 6,08 (s, 4H), 7,17-7,33 (m, 7H), 8,25 (m, 2H), 9,65 (s, 1H).
LCMS (Finigan-Column: Pecosphere, 08, 3 pm, 33x4,6 mm. eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,0 ml/minut): MH+ = 581,4, Rt =1,77 minut.
Příklady 406 a 407
Amidy odvozené od czY3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-7A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu
Reprezentativní způsob:
Do vhodné karboxylové kyseliny (0,46 mmol) v dichlormethanu (1,5 ml) se přidá oxaiylchlorid (400 pl, 0,2 mmol) a DMF (1 kapka). Baňky se uzavřou šeptem a do každé baňky se vsune jehla k odstranění tlaku. Pak se baňky nechají třepat na třepačce J-Kem. Oddělí se 50% roztok a přebytek oxalylchloridu a dichlormethanu se odstraní na spojce Supelco s 12 porty za vakua a s dusíkem. Surový chlorid kyseliny (0,23 mmol) se přidá do cz5,-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyra-zolo[3,4ď]pyrimidin-4-aminu (40 mg, 0, 09 mmol) v suchém pyridinu (800 plk) a směs se míchá při pokojové teplotě. Výsledné roztoky se přímo čistí preparativní HPLC (Hypersil BSD Cl 8, 5 um, 100 x 21 mm, 0%-100% acetonitril/0,05M octan amonný v průběhu 10 minut 25,0 ml/min). Výsledné produkty se dále čistí rozdělením mezi dichlormethan (4 ml) a l,0N hydroxid sodný (2 ml) a pasírováním přes vysoce výkonný extrakční diskový cartridge Empore™ (C18-SD oktadecyl), čímž se získají odpovídající produkty. Sloučeniny jsou uvedeny na další straně s odpovídajícími hodnotami LCMS (MicromassColumn: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 3,5 ml/minut).
t? G e e » G>
12« c<, ι>· p, g © e. ív e> © <$ f © (· <-· c, & e. © o f>
© r· e © r o <> é © o c.
é< C fi O ft f; c β c;
i r f r e ti e- t> o c O P C C r fi c
389
Sloučenina R Qty. (mg) mít Rt (min)
NI -(4- {4-amino-1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]- IHpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-y} -2methoxyfenyl)-3- cyklohexylpropanamid Př. 406 0 11 575,3 3,3
7V2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} 2methoxyfenyl)-1 -methyl-1H-2indolkarboxamid Př.407 KO 20 581,3 2,98
Příklad 408 dihydrochlorid N2-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl]fenyl} 5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-aminu
390
ΝΗ,
BoCjO (tójCOj dioxan/HjO
2HCI
a) terc-butyl-4-(4-amino-3-j od-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yl)-1 piperidinkarboxylát
Di-terc-butyl-dikarbonát (0,287 g, 1,32 mmol) se přidá do směsi dihydrochloridu 3jod-l-(4-piperidyl)-l A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,50 g, 1,20 mmol) a uhličitanu sodného (0,445 g, 4,20 mmol) v dioxanu (10 ml) a vody (10 ml) a reakce se míchá po dobu 18 hodin. Přidá se dichlormethan (100 ml) a organická vrstva se promyje vodou (30 ml) a solankou (30 ml), suší (Na2SO4) a koncentruje za vakua, čímž se získá řerc-butyl-4-(4amino-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylát ve formě světle žluté pevné látky (0,524 g, 98 %);
RP-HPLC 12,227 minut, 100% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného, pufrovaný na pH = 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min ; λ = 254 nm; DeltaPak Cl8, 300 A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) = 445,1.
b) terc-butyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lApyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylát
Arc-butyl-4-(4-amino-3-jod-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)-1 piperidinkarboxylát (524 mg, 1,18 mmol) se rozpustí v ethylenglykoldimethyletheru (50 ml) a vody (10 ml). Přidá se A-(l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (537 mg, 1,47 mmol), tetrakistrifenylfosfínpalladium (68 mg, 0,059 mmol) a uhličitan sodný (313 mg, 2,95 mmol) a reakce se zahřívá při teplotě «ί <5
391
80°C po dobu 19 hodin. Přidá se další boronát (188 mg, 0,515 mmol) a tetrakistrifenylfosfinpalladium (27 mg, 0,024 mmol) a reakce se zahřívá při teplotě 80°C po dobu dalších 23 hodin. Reakce se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi dichlormethan (100 ml) a vodu (100 ml). Organická vrstva se suší (Na2SO4), pak koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá oranžový olej (1,4 g). Čištěním chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a heptanu (gradient 2:1 až 9:1), poté gradient 2% až 5 % methanolu v dichlormethanu se získá terc-butyl-4-(4-amino-3-{4[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-lpiperidinkarboxylát ve formě hnědé pevné látky (577 mg, 85%);
RP-HPLC 17,090 minut 98% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného, pufrovaný na pH = 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; DeltaPak Cl8, 300 A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) = 555,2.
c) dihydrochlorid A2-{4-[4-amino-l -(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yljfenyl} -5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol -2-aminu
7erc-butyl-4-(4-amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-y l)amino]fenyl} -1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylát (142 mg, 0,256 mmol) se rozpustí v acetonu (7 ml) a 6N vodném roztoku kyseliny chlorovodíkové (1,4 ml). Reakce se pak zahřívá při teplotě 45°C, čímž se získá precipitát. Po 2,5 hodinách se precipitát spojí vakuovou filtrací, promyje minimálním množstvím acetonu a suší v lyofilizátoru na dihydrochlorid A2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]fenyl}5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu ve formě oranžové pevné látky (130 mg, 96%); RP-HPLC 10,436 minut 96% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného, pufrovaný na pH = 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; DeltaPak Cl8, 300 A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) = 455,3.
Příklady 409-416
Obecný způsob syntézy piperidinových amidových analog ;V2-{4-[4-amino-l-(4piperidyl)-1 H-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-3-y Ijfenyl} -5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin
392
DIPEA (5.0 ekviv.) CHjCIj
Aminokyselina(1.25ekviv.) EDC (1.25ekviv.)
HOAt
_Y). n = 1nebo2 rn-r'
Každá 20 ml scintilační baňka se naplnila dihydrochloridem N2-{4-[4-amino-l-(4piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]fenyl}-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (45 mg, 0,085 mmol), N-nechráněnou nebo N-chráněnou aminokyselinou (1,25 ekviv.), l-hydroxy-7-azabenzotriazolem (12 mg, 0,085 mmol), hydrochloridem l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (20 mg, 1,06 mmol), JV-ethyl-ΛζΝdiizopropylaminem (74 μΐ, 0,425 mmol) a díchlormethanem (5 ml). Reakce se nechala oscilovat při pokojové teplotě po dobu 2,5 dnů. Do reakcí, které nedoběhnou do konce, se přidá další N-ethyl-NN-diizopropylamin (15 μΐ, 0,085 mmol) a hydrochlorid l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (8 mg, 0,0425 mmol). Dále je do reakcí s malou rozpustností složek přidán DMF (1 ml). Reakční směsi se koncentrují za vakua, rozpustí v dichlormethanu (2 ml), promyjí solankou (2 ml) a vrstvy se separují pasírováním přes cartridge Empore (6 ml). Organická vrstva se koncentruje za sníženého tlaku. Produkty, které mají nižší než 80% čistotu, byly čištěny RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, rychlost průtoku; 10 ml/minut, λ = 254 nm, gradient: 15% až 35% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 40 minut; DeltaPak Cl8, 300 A, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec).
N-fórc-butoxykarbonylová skupina chránící produkty (0,11 mmol) se odstraní reakcí v 6N HCI (0,7 ml) a acetonu (3,5 ml) při teplotě 45°C po dobu 4,5 hodiny. Aceton se odstraní za sníženého tlaku a produkty se čistí RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, rychlost průtoku: 10 ml/minut, λ = 254 nm, gradient: 15% až 35% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 40 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec).
;V-(9-fluorenylmethoxykarbonylová) skupina chránící produkty (0,126 mmol) se odstraní reakcí s piperidinem (0,4 ml) v DMF (1,6 ml) při pokojové teplotě po dobu 3,5 hodiny. Produkty se pak čistí RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, rychlost průtoku: 10 c c· • e- «, $ ft η · c ·ft c« r ft c # • e> e « o ft e> © « a © r © β c *
A ft ft ft ft ť· ft ft ft ft O
393 ml/minut A= 254 nm, gradient: 15% až 35% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného v průběhu 40 minut; DeltaPak Cl8, 300A, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec). Produkty se analyzují RP-HPLC (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného, pufrovaný na pH = 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; DeltaPak Cl8, 300, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec) a hmotnostní spektrometrií. Tyto produkty jsou uvedeny níže:
Př Struktura Výchozí aminokyselina m/z(MH+) HPLCRt (min) Čistota
409 w 0 - Na Λ Φ 582,2 11,394 96%
410 o .°Y° Na 1 0 596,3 11,104 91%
411 ó 0 Ah X 540,2 9,287 93%
412 1 (X/OH čr 566,2 11,160 100%
c © e e fr C· © te
© <<Ρ β e ř o t O © © o © «* © « e f © e © co e> © r © © © o © o © o © © © e © < e «· o <» e
394
Př Struktura Výchozí aminokyselina m/z(MH+) HPLCRt (min) Čistota
413 r&f Y ď HO^O r^NFmoc 566,2 11,139 100%
414 N Y^OH /NFmoc 554,3 11.035 93%
415 r&t n yJ w* Λ <r HO^O ^^NBoc 552,2 11,051 100%
416 nÓ W Q ď HOyO t^NBoc 551,9 11,027 100%
Příklad 417 ezs-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidin-3yl} fenyl -2,3 -dichlor-1 -benzensulfonát
Roztok obsahující cis-4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1Hpyrazolo[3,4-ť/Jpyrimidin-3-yl}fenol (100 mg, 0,245 mmol), 2,3-dichlorc &
e «&
©e σ pí- ® c © e © <-· © ť- e.
* c e 6«. i © © © g r ty r fí fí < e e e © e < r- <· * C e> ( ti·, fí η fí ( c fí o β e> e· e f ť.-. © © e e
395 benzensulfonylchlorid (180 mg, 0,735 mmol) a triethylamin (0,34 ml, 2,45 mmol) v dichlormethanu (8 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 17 hodin. Přidá se další dichlormethan (20 ml) a reakce se promyje solankou (10 ml), nasyceným vodným roztokem NaHCCb (10 ml), suší (Na2SC>4) a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá 6“z.s,-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-3yl}fenyl-2,3-dichlor-l-benzensulfonát ve formě bílé pevné látky (135 mg, 90%);
RP-HPLC 11,787 minut 97 % čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného, pufrovaný na pH = 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; DeltaPak 08, 300 A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) = 616,2.
Příklad 418 jV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl} benzyl)-5-methyl-1,3 -thiazol-2-amin (a) cis-4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 H-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} benzaldehyd
Směs cis-3 -j od-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-4-ylaminu (5,0 g, 11,33 mmol), 4-formylfenylborité kyseliny (2,55 g, 16,98 mmol), tetrakistrifenylfosfínpalladia (0,47 g, 0,4 mmol) a uhličitanu sodného (3,002 g, 28,32 mmol) v ethylenglykoldimethyletheru (170 ml) a vodě (30 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 18 hodin. Přidá se další boronát (1,567 ekviv.) a katalyzátor (0,0135 ekviv.) a v reakci se pokračuje dalších 40 hodin. Reakce se ochladí na pokojovou teplotu a směs se koncentruje za vakua. Zbytky se rozdělí mezi ethylacetát (300 ml) a vodu (200 ml).
* * 4 * 4 ©4 4 4 «© β• · C © 4 4 © fc • ··©©©··©· © • · ©€>©« etc··· ··♦· O 44 44 4444
396
Výsledný precipitát se spojí filtrací a suší na lyofilizátoru, čímž se získá cz'5-4-{4-amino-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl j -1 H-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3 -y 1} benzaldehyd ve formě světle hnědé pevné látky (2,1 g, 43 %);
RP-HPLC 7,003 minut 98 % čistota (5% až 85% acetonitril/0,1M vodný roztok octanu amonného, pufrovaný na pH = 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; DeltaPak Cl8, 300 A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec).
JH NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 1,60 (2H, br t), 1,72-(2H, m), 2,06 (2H, m), 2,17 (3H, s), 2,27 (3H, m), 2,35-2,50 (6H, m), 3,39 (2H, m), 4,84-(lH, m), 7,88 (2H, d), 8,07 (2H, d), 8,26 (lH,s) a 10,11 (lH,s).
b) ÍV2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl}benzyl)-5-methyl-l,3-thiazol-2-amin
Kašovitá směs obsahující czs-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}benzaldehyd (100 mg, 0,24 mmol) a 2-amino-5methylthiazolu (33 mg, 0,29 mmol) v titanium-izopropoxidu (0,48 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin. Přidá se methanol (2 ml) a poté opatrně borohydrid sodný (13,5 mg, 0,36 mmol). Po 10 minutách přestane pěnění a reakce se zháší vodným roztokem hydroxidu sodného (0,lN, 10 ml). Výsledná směs se nechá stát přes noc, pak se filtruje přes vrstvu celitu za použití dalšího methanolu (přibližně 10 ml), filtrát se odpařuje do sucha, pak se rozpustí v dichlormethanu (50 ml) a promyje solankou (50 ml). Vodná vrstva se extrahuje dále dichlormethanem (3 x 50 ml) a spojené organické vrstvy se suší (MgSO4) a koncentrují za vakua. Čištěním RP-HPLC (Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm sloupec, 0% až 100% acetonitril v 50mM octanu amonného, pufrovaný na pH = 4,5, při teplotě 3,5 ml/min) se získají 2 frakce, první frakce obsahuje (4-{4-amino-7-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-7H-cyklopenta[č/]pyrimidin-5yl}fenyl)methanol (5 mg, 5 %);
RP-HPLC 6,261 minut, 82 % čistota (5% až 85% acetonitril/0,1M vodný roztok octanu amonného, pufrovaný na pH = 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; DeltaPak 08, 300 A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH+) = 422,1.
V druhé frakci se získá ŽV2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}benzyl)-5-methyl-l,3-thiazol-2-amin (4 mg, 3 %);
fc fc c *. fc c < · í r e fO O c © o e n r f C fc. < .< <·; fc fc fc
397
RP-HPLC 8,344 minut 100 % čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného, pufrovaný na pH = 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min ; λ = 254 nm; DeltaPak Cl8,300, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec);
*H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 1,59 (2H, br t), 1,70 (2H, m), 2,07 (2H, m), 2,10-2,50 (9H, m), 2,16 (3H, s), 2,54-(3H, s), 3,29 (2H, m), 4,47 (2H, d), 4,80 (1H, m), 6,66 (1H, s), 7,49 (2H, d), 7,61 (2H, d), 7,88 (1H, m) a 8,23 (1H, s).
Příklad 419
N2-(4-{ 4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 H-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3 yl}benzyl)-4-methyl-1,3-thiazol-2-amin jV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4/]pyrimidin-3-yl}benzyl)-4-methyl-l,3-thiazol-2-amin se připraví za použití stejného způsobu a měřítka, které je uvedeno pro 5-methylová analoga (viz výše) (11 mg, 8%); RP-HPLC 8,177 minut 97 % čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný roztok octanu amonného, pufrovaný na pH - 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; DeltaPak Cl8, 300 A, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec).
’H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 1,57 (2H, br t), 1,67 (2H, m), 2,07 (2H, m), 2,10-2,50 (9H, m), 2,19 (3H, s), 2,54-(3H, s), 3,29 (2H, m), 4,50 (2H, br s), 4, 79 (1H, m), 6,17 (1H, s), 7,50 (2H, d), 7,62-(2H, d), 7,99 (1H, m) a 8,23 (1H, s).
r c> c pc f= <5 © e ρ © fí o t>
• o e ti o © © β t> © © © © © © e © c © e ft © ©. © « © <> © c t>
398 &e © « « &
« © C © © © «60 o c c <> © e
Příklad 420 cis-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin3 -yl} fenyl)-5, 7-dichlor-1,3 -benzoxazol-2-amin
a) 2-amino-6-chlorfenol
Roztok 2-chlor-6-nitrofenolu (1,210 g, 6,972 mmol) v ethanolu (50 ml) se nechá reagovat s železným práškem (1,947 g, 34,86 mmol) a koncentrovanou HCI (3 ml). Žlutá směs se zahřívá pod refluxem po dobu 18 hodin, pak se ochladí na pokojovou teplotu. Reakční směs se filtruje přes vrstvu celitu a filtrát se neutralizuje nasyceným vodným roztokem NaHCO3. Výsledná šedá suspenze se filtruje přes vrstvu celitu a filtrát se extrahuje ethylacetátem (3 x 20 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí solankou, suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrují a koncentrují, čímž se získá černá pevná látka. Triturací heptanem se získá 2-amino-6-chlorfenol (0,577 g, 58 %) ve formě tmavě hnědé pevné látky.
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS 08, 100, 5 pm, 250 x 4,6 mm sloupec) tR = 7,30 minutách,91%; m/z 143 (MH+).
b) cis-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dichlor-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z cis-3-(4aminofenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,245 mmol) a 2-amino-4,6-dichlorfenolu (0,044 g, 0,245 mmol) způsobem, který je podobný způsobu použitému při syntéze cis-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj- 1Apyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4-methyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (F4042235). Sloučenina se připraví ve formě bělavé pevné látky (0,008 g, 6%): RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8, 100, 5 pm, 250 x 4,6 mm sloupec) tR = 8,93 minut, 95%; m/z 594 (MH+).
Příklad 421 cis-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin3 -y 1} fenyl)-7-methyl-1,3 -benzoxazol-2-amin
fi ty ti c í> η o
C. (· o <
C c, r e c c e
399
a) 2-amino-4,6-dichlorfenol
2-Amino-4,6-dichlorfenol se připraví z 2,4-dichlor-6-nitrofenolu (0,625 g, 2,40 mmol) způsobem, který je podobný způsobu použitému pro 2-amino-6-chlorfenol. Sloučenina se připraví ve formě černé pevné látky (0,044g, 10%).
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 100 Á, 5 pm, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 9,033 minut, 74%; m/z 177 (MH+).
b) cis-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-7-methyl-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví zcis-3-(4aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin~4-aminu (0,100 g, 0,245 mmol) a 2-amino-6-methylfenolu (0,030 g, 0,245 mmol) způsobem, který je podobný způsobu použitému pro c«-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4methy lpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-z/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-4-methyl-1,3benzoxazol-2-amin (PH4052419F). Sloučenina se připraví ve formě bělavé pevné látky (0,018 g, 14%):
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl8,100, 5 pm, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 7,37 minut, 85%; m/z 539 (MH+).
Příklad 422 cw-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin3-yl}fenyl)-7-chlor-l,3-benzoxazol-2-amin
a) 2-amino-6-methylfenol
2-Amino-6-methylfenol se připraví z 2-methyl-6-nitrofenolu (0,500 g, 3,26 mmol) způsobem, který je podobný způsobu použitému při syntéze 2-amino-6-chlorfenolu. Sloučenina se připraví ve formě černé pevné látky (0,030 g, 8%).
RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut pri 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8,100 Á, 5 pm, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 5,78 minut, 86%; m/z 123 (MH).
b) cř'5-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4t/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-7-chlor-l,3-benzoxazoI-2-amin se připraví z cis-3-(4-aminofenyl)* φ • β 9 « • 4- 9 • « · * « · * « β· ř&ft ř
400
- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,245 mmol) a 2-amino-6-chlorfenolu (0,053 g, 0,367 mmol) způsobem, který je podobný již použitému při syntéze cw-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-ďJpyrimidin-3-yl}fenyl)-4-methyl-l ,3-benzoxazol-2-aminu (F4052419F). Sloučenina se připraví ve formě bělavé pevné látky (0,018 g, 13%): RP-HPLC (25 až 100 % CH3CN v 0,lN vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min na Hypersilu HS Cl 8,100 Á, 5 pm, 250 x 4,6 mm sloupec) tR = 7,78 minut, 94%; m/z 558 (MH+).
Příklad 423
2-{4-amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2-yIamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/lpyrimidin-l-yl}-3pyridylkyanid
Při přípravě ethyl-2-[4-amino-3-(4- {[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrímidin-l-yl]acetátu se použije Suzukiho způsob kopulace pro N-{\,3-benzoxazol-2-yl)-7V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amin (0,052 g, 0,155 mmol) s 2-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-č/)pyrimidin-lyl)-3-pyridylkyanidem (0,045 g, 0,124 mmol). Čištěním preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8p Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 10,1-11,2 min) se získá 2-{4amino3-[4-(l,3-benzoxazol-2-ylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl}-3pyridylkyanid ve formě žlutého prášku (0,004 g, 0,009 mmol).
RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití a 5 Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt 8,55 min; MS (MH+) 446.
Příklad 424 /Vl-[2-(dimethylamino)ethyl]-2-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2yl)amino]fenyl} -1 //-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidin-1 -y I)propanamid
Ethyl-2-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-l-yl)propanoát (2,03 g, 5,62 mmol), meziprodukt popsaný při přípravě ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyi)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-<i]pyrimidin-l-yl]propanoátu, f «'· re r z? «c e-ί» f« f- <· (' < i- £> f- /- <· f.
t '.· f Cl·· O t. <. V
C C r © © r ·.' Γ -? c© (· < © < < c· c .·· t ť r < f © (' © c r ( c A ( c c
401 se konvertuje na odpovídající methylester (1,90 g, 5,47 mmol) za použití způsobu esterifikace popsané při přípravě methyl-4-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]butanoátu: RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v O,1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS Cl 8, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt 6,88 minut.
Podíl tohoto methylesteru (0,110 g, 0,32 mmol) se pak konvertuje na sekundární amid s //,/V-dimethylethylendiaminem za použití způsobu pro tvorbu amidu použitému k přípravě /Vl-{4-[4-amino-l-(2-morfolino-2-oxoethyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl]-2-fluorfenyl}-2,3-dichlor-l-benzensulfonamidu:
RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS Cl 8,250 x 4,6 mm sloupec) Rt 3,47 minut.
Sekundární amid (0,12 g, 0,30 mmol) se kopuluje s 7V-(5,7-dimethyl-l,3benzoxazol-2-yl)-//-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminem (0,100 g, 0,275 mmol) za použití Suzukiho způsobu kopulace použitého při přípravě ethyl-2-[4amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4ó/]pyrimidin-l-yl]acetátu. Čištěním produktu preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 6,3-8,3 min) se získá //1-(2(dimethylamino)ethyl] -2-(4-amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2yl)amino]fenyl}-lZ/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)propanamid ve formě žlutého prášku (0,0015 g, 0,003 mmol);
RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS C 18, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt 7,60 min; MS (MH+)514.
Příklad 425 >(4-{ 4-amino-l-[2-kyano-4-(4-methylpiperazino)fenyl]-l//-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-3yl} -2-fluorfenyl)-/V '-(3 -methy lfenyl)močo vina
Použije se stejný způsob jako u //1-(4-{4-amino-1-(2-kyano-4-(4methylpíperazino)fenyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/(pyrimidin-3 -yl} -2-fluorfeny 1)-2,3 -dichlor-1 benzensulfonamidu, vyjma toho, že finální krok ve způsobu přípravy močoviny použitý při přípravě ethy l-2-(4-amino-3 - {3 -fluor-4- ((3 -tol uidinokarbony l)amino]feny 1} -1H»» • β > · « · « • · ® 9
9 9 ··fc9 « ** ·· · · * 9 * · • · • ® » « · » · « » «
« · • Φ
ΦΦ <·
402 pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-l-yl)-acetátu způsobí reakci 2-[4-amino-3-(4-amino-3fluorfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-1 -yl]-5-(4-methylpiperazino)benzonitrilu (0,018 g, 0,041 mmol) s w-tolylizokyanátem (0,005 ml, 0,040 mmol). Čištěním produktu preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl 8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 9,3-10,3 min) se získá V-(4-{4-amino-l-[2-kyano-4-(4-methylpiperazino)fenyl]-l//pyrazolo [3,4 -í/Jpyrimidin-3 -y 1} -2-fluorfenyl)-N -(3 -methylfenyl)močovina ve formě žlutého prášku (0,008 g, 0,014 mmol);
RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS C 18, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt 8,03 min; MS (MH+) 577.
Příklad 426 cz's-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3-yl} fenyl)-6-chlor-1,3-benzothiazol-2-amin
Pevný 4-bromanilin (1,00 g, 5,81 mmol) a 2,6-dichlorbenzothiazol (1,18 g, 5,81 mmol) se zahřívá při teplotě 140°C po dobu 3 dnů v baňce vybavené s vzduchovým chladičem (luze se objeví během pár minut, přičemž dochází k tvorbě čiré tekutiny, která během 3 dnů ztuhne). Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu, čímž se získá V-(4-bromfenyl)-V-(6-chlor-1,3-benzothiazol-2-yl)amin (1,97 g, 5,81 mmol). RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5 μ Hypersilu HS C 18, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt 14,65 minut.
Způsob přípravy boronátu:
Surový V-(4-bromfenyl)-V-(6-chlor-l,3-benzothiazol-2-yI)amin (0,178 g, 0,525 mmol), bis(pinakolato)diboron (0,180 g, 0,709 mmol), octan draselný (0,154 g, 1,57 mmol) a [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatý komplex s dichlormethanem (1:1) (0,043 g, 0,053 mmol) v V/V-dimethylformamidu (3 ml) v utěsnitelné Schlenkově baňce se zahřívá při teplotě 90°C po dobu 24 hodin. Směs se ochladí na pokojovou teplotu, filtruje přes vrstvu celitu a surový produkt čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a heptanu (1:3), čímž se získá boronátový meziprodukt NPl*
v. r e c 1' o c r e
c.
f> c e. a r e fi· e v c o e © ( c i:
<. <:· r fi r E fi p t? n © o c- c C c © c, r © c- η i c> <·’ c c
403 (6-chlor-1,3 -benzo thi azol-2-yl)-/V- [4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amin ve formě bílého prášku (0,116 g, 0,30 mmol).
RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5 μ Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt 15,15 minut.
Způsob Suzukiho kopulace: Směs V-(6-chlor-l,3-benzothiazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,116 g, 0,30 mmol), cA-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,106 g, 0,24 mmol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,014 g, 0,012 mmol) v ethylenglykoldimethyletheru (3,0 ml), uhličitanu sodného (0,064 g, 0,60 mmol) a vody (1,5 ml) v uzavřené Schlenkově baňce se zahřívá při teplotě 90°C po dobu 24 hodin. Směs se ochladí, zředí vodou (10 ml) a extrahuje methanolem a dichlormethanem (1:19,3 x 20 ml). Spojená organická frakce se suší (síranem hořečnatým), filtruje, koncentruje a čistí preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 7,8-10,0 min), čímž se získá cisV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3yl}fenyl)-6-chlor-l,3-benzothiazol-2-amin ve formě žlutého prášku (0,036 g, 0,062 mmol); RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5 μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt 8,42 min; MS (MH+) 574.
Příklad 427 czs-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidm3-yl} feny l)-6-methoxy-1,3-benzothiazol-2-amin
Za použití způsobu, který je podobný způsobu použitému při přípravě cis-N2-(4-4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrÍmidin-3 -y lfenyl)-6chlor-l,3-benzothiazol-2-aminu, ale použije se 2-chlor-6-methoxybenzothiazol (0,352 g, 2,05 mmol). Čištěním produktu preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 6,3-8,3 min) se získá cis-N2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy lj-1 //-pyrazolo[3,4-č/|pyrimidin-3-yl} fenyl)-6-methoxy-1,3benzothiazol-2-amin ve formě bílého prášku (0,046 g, 0,080 mmol);
«· c-f) re te ci c t> o co í< c cc «
C 0 υ o c ri c č # <-·· n c o ·: c c* c c < e c ťí c c c «» c c (
V 1' C C f f C C c C C l (. C C C f
404
RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v O,1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5 μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt 7,40 min; MS (MH+) 570.
Příklad 428 cis-N2-(4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidm3 -yl} fenyl)-4-ethy 1-1,3 -thiazol-2-amin
Roztok fluorenylmethyloxykarbonylizothiokyanátu (1,36 g, 4,84 mmol, Keamy, P. C.; Femandz, M.; Flygare, J. A. J. Org. Chem., 1998, 63, 196-200) v dichlormethanu (40 ml) se přidá přes pipetu do roztoku 4-bromanilinu (0,86 g, 5,00 mmol) v dichlormethanu (10 ml), přičemž teplota se udržuje při 0°C a výsledná směs míchá při pokojové teplotě po dobu 14 hodin. Reakce se zředí dichlormethanem (60 ml) a promyje vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (0,5 M, 2 x 10 ml). Organická vrstva se suší (síranem hořečnatým), filtruje a koncentruje, čímž se získá 9A-9-fluorenyl-methyl-A-[(4bromanilino)karbothioyl]karbamát (2,25 g, 4,97 mmol).
RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5 μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt 14,25 minut.
Způsob syntézy thiazolu: 9A-9-fluorenyl-methyl-A-[(4-bromanilino)karbothioyl]karbamát (0,25 g, 0,55 mmol) se rozpustí ve směsi piperidínu a AA-dimethylformamidu (1:6, 3,5 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek rozpustí ve směsi kyseliny octové (1 ml), ethanolu (2 ml) a dioxanu (2 ml). Přidá se l-brom-2-butanon (90%, 0,11 ml, 1,10 mmol) a směs se míchá po dobu 14 hodin při pokojové teplotě. Reakční směs se zředí polovinou nasyceného vodného roztoku uhličitanu sodného (15 ml) a extrahuje methanolem a dichlormethanem (1:19, 3 x 20 ml). Spojené organické vrstvy se suší (síranem hořečnatým), filtrují, koncentrují a čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a heptanu (1:4), čímž se získá bromthiazol-A-(4bromfenyl)-A-(4-ethyl-l,3-thiazol-2-yl)amin (0,15 g, 0,53 mmol).
RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití a 5μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt 13,15 minut.
€ 0
405
Výše uvedený bromthiazolový meziprodukt se konvertuje na boronát podle způsobu popsaného při přípravě zV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]lZ/-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-6-chlor-l,3-benzothiazol-2-aminu, čímž se získá boronátový meziprodukt V-(4-ethyl-l,3-thiazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,158 g, 0,48 mmol).
RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití a 5 Hypersil HS Cl8,250 x 4,6 mm sloupec) Rt 13,60 minut.
Boronátový meziprodukt (0,15 g, 0,45 mmol) se kopuluje s czs-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ů]pyrimidin-4-aminem (0,182 g, 0,41 mmol) za použití Suzukiho způsobu kopulace popsaného při přípravě V2-(4-{4-amino-1[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-6-chlor-1,3benzothiazol-2-aminu. Čištěním produktu preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 7,0-8,0 min) se získá cz's-V2-(4-{4-amino-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3}fenyl)-4-ethyl-l,3thiazol-2-amin ve formě bělavého prášku (0,069 g, 0,133 mmol);
RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5 μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt 7,05 min; MS (MH+)518.
Příklad 429 cis-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-metbylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-</|pyrimidin3 -yl} fenyl)-4, 5 -dimethyl-1,3 -thiazol-2-amin
Použije se způsob syntézy thiazolu popsaný při přípravě cz',s,-zV2-(4-{4-amino-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4-ethyl-l,3thiazol-2-aminu, ale použije se 3-brom-2-butanon (0,183 g, 1,21 mmol) jako alky lační činidlo. Alkylace se provádí při teplotě 40°C po dobu 24 hodin. Čištěním produktu preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 6,7-7,7 min) se získá cz.v-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4,5-dimethyl-l,3-thiazol-2-amin ve formě bělavého prášku (0,069 g, 0,133 mmol);
β β «·· · « ;
* β t ο r r Ο « · « * • e ι β » « « ® „ Λ _ , f, λ λ eo e e e © e e © e © ® c f f r
406
RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v O,1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití a 5μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt 6,83 min; MS (MH+)518.
Příklad 430 cis-N2-(4-{ 4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin3 -yl} fenyl)-4-fenyl-1,3 -thiazol-2-amin
Použije se způsob syntézy thiazolu popsaný při přípravě cis-N2-(4-{4-amino-1 -[4(4-methy lpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-4-ethyl-1,3thiazol-2-aminu, ale 2-bromacetofenon (0,131 g, 0,66 mmol) se použije jako alkylační činidlo. Čištěním produktu preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, Rt 8,7-9,8 min) se získá cz5-W2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} feny l)-4-feny 1-1,3thiazol-2-amin ve formě žlutého prášku (0,036 g, 0,064 mmol);
RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt 8,22 min; MS (MH+) 566.
Příklad 431 cis-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin3 -yl} fenyl)-4-(4-methylfenyl)-1,3-thiazol-2-amin
Použije se způsob syntézy thiazolu popsaný při přípravě c«-V2-(4-{ 4-amino-1-[4(4-methy lpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-4-ethyl -1,3thiazol-2-aminu, ale použije se 2-brom-4'-methylacetofenon (0,118 g, 0,554 mmol) jako alkylační činidlo. Čištěním produktu preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, Rt 9,1-10,7 min) se získá cis-N2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3-yl} fenyl)-4-(4methylfenyl)-l,3-thiazol-2-amin ve formě bělavého prášku (0,022 g, 0,038 mmol);
β e & η
407
RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v O,1M vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS C 18,250 x 4,6 mm sloupec) Rt 8,88 min; MS (MH+) 580.
Příklad 432 cis-N2-(4- { 4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-Z]pyrimidin3 -yl} fenyl)-5 -methy 1-4-fenyl)-1,3 -thiazol-2-amin
Použije se způsob syntézy thiazolu popsaný při přípravě cis-N2-(4-{4-amino-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4-ethyl-l,3thiazol-2-aminu, ale použije se 2-brom-propiofenon (0,081 ml, 0,532 mmol) jako alkylační činidlo a alkylační reakce se provádí při teplotě 50°C po dobu 24 hodin. . Čištěním produktu preparativní HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, Rt 9,1-10,7 min) se získá cis-N2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3 -yl} feny l)-5 -methyl-4fenyl)-l,3-thiazol-2-amin ve formě bělavého prášku (0,015 g, 0,026 mmol);
RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,lM vodný roztok octanu amonného v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití a 5μ Hypersilu HS C 18, 250 x 4,6 mm sloupec) Rt 8,67 min; MS (MH+) 580.
Příklad 433 trimaleát NI -(4-{4-amino-1 -[1 -(1 -methylpiperidin)-4-yl]piperidin-4-yl]-1//-pyrazolo[3,4/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxy fenyl)-(37?)-3-feny lbutanamidu (3K)-3 -fenylbutanoylchlorid
Roztok (3/?)-3-fenylbutarové kyseliny (0,755 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se nechá třepat po dobu 15 hodin při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Reakční směs se nechá protřepávat po dobu 15 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství (37?)-3-fenylbutanoylchloridu. Olej se přímo použije v následující reakci.
® ©
β © · · © o © © © © ©
408 tri-maleát NI -(4-{4-amino-l-[l-(l -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-lN-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(37?)-3-fenylbutanamidu
Roztok 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-1-(1-(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin4-yl]177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem (3R)-3-fenylbutanoylchloridu (0,420 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C, pak se lázeň z acetonu a suchého ledu odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá (3R)-3-fenylbutanoylchlorid (0,210 g, 1,15 mmol) a směs se míchá po dobu 2 hodin. Přidá se hydroxid sodný (IN) (10 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (20 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje díchlormethanem (125 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší síranem sodným, filtrují a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. NI-(4-{4-amino-1-(1-(1-methylpiperidin-4yl)piperidin-4-yl]-17/-pyrazolo[3,4-íZ]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(37?)-3fenylbutanamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 15% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (10 min), 20% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (15 min), 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (7 min), čímž se získá 0,378 g (57%) čistého Nl-(4-{4amino-1 - [l-( 1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-ylj-1 7/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)-(3/?)-3-fenylbutanamidu. Horký roztok NI-(4-{4-amino 1-(1-(1methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)(3Á)-3-fenylbutanamidu (0,378 g, 0,649 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,226 g, 1,95 mmol) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší v lyofilizátoru, čímž se získá tri-maleát NI-(4-{4-amino-1-(1-( 1methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l/7-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)(3 R)-3-fenylbutanamidu.
’H NMR (DMSO-dó,400 MHz) δ 9,200 (s, 1H), 8,263 (s, 1HO, 8,1747-8,1543 (d, 1H, J = 8,16 Hz), 7,312-7,282 (m, 4H), 7,235-7,232 (s, 1H), 7,211-7,168 (m, 2H), 6,114 (s, 6H), 5,061 (m, 1H), 3,890 (s, 3H), 3,301 (m, 4H), 2,997 (m, 2H), 2,783-2,741 (m, 6H), 2,541 (m, 8 H), 2,261-2,185 (m, 4H), 1,879 (m, 2H);
HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 μΜ, 33 x 4,6,3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný až acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581,2), 95%.
o © e e e © e © « a c ti © © fc
P C: © β <·;
« fc ř f, o (i e c fj e « c
409
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 column, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min), Rt 2,64 min (100%).
Příklad 434 tri-maleát VI -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 H-pyrazolo [3,4/jpyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-benzo[ó]furan-2-karboxamid benzo [Z>] furan-2-karbonylchlorid
Suspenze 2-benzofurankarboxylové kyseliny (0,746 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se nechá protřepávat po dobu 15 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství benzo[6]furan-2-karbonylchloridu. Olej se přímo použije v následující reakci.
tri-maleát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-lH-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-benzo[6]furan-2-karboxamidu
Roztok 3 -(4-amino-3 -methoxy feny 1)-1 - [l-( 1 -methy lpiperidin-4-y l)piperidin4-yl] lH-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem benzo[ó]furan-2-karbonylchloridem (0,415 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 min při teplotě -5°C, pak se lázeň z acetonu a suchého ledu odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá benzo [6]furan-2-karbonylchlorid (0,207 g, 1,15 mmol) a směs se míchá po dobu 2 hodin. Přidá se hydroxid sodný (IN) (10 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (20 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (125 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší síranem sodným, filtrují a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. VI-(4-{4-amino-1-[1-(1-me thylpiperidin-4yl)piperidin-4-yl]-l H-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl}-2-meťhoxyfenyl))-benzo[Z?]furan-2karboxamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 15% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (10 min), 20% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (15 min), 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (7 min), čímž se získá 0,143 g (21 %) čistého Vl-(4-{4c < ·· o © c (7 © © © fi e c © © e o e c e f; co© c e e © c <
C C t(' C fi f: (- C c e o © © © ©
O © C © © r- fi <; © © © © © c C C fi © ©
410 amino-1 - [ 1 -(1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-y 1]-1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl))-benzo[ů]furan-2-karboxamidu. Horký roztok Vl-(4-{4-amino-1-[1-(1methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl))-benzo[ů]furan-2-karboxamidu (0,143 g, 0,246 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,086 g, 0,739) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší v lyofilizátoru, čímž se získá tri-maleát Vl -(4- { 4-amino-1 - [ 1 -(1 -methy lpiperidin-4-yl)piperídin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4djpyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-benzo[Z>]furan-2 -karboxamidu.
’H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 9,518 (s, 1H), 8,282 (s, 1H), 8,2652-8,2447 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 7,849-7,814 (m, 2H), 7,7813-7,7603 (d, 1H, J= 8,4 Hz), 7,562-7,523 (m, 1H), 7,418-7,369 (m, 2H), 7,338-7,313 (m, 1H), 6,088 (s, 5H), 5,10-5,00 (m, 1H), 4,003 (s, 3H), 3,529 (m, 4H), 3,314 (m, 2H), 2,971 (m, 2H), 2,778 (s, 3H), 2,497 (m, 3H), 2,209 (m, 4H), 1,909 (m, 2H);
HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 μΜ, 33 x 4,6,3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný až acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581,2), 95%.
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 column, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min), R, 2,73 min (100%).
Příklad 435 tri-maleát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(3>S)-3-fenylbutanamid (35)-3-fenylbutanoylchlorid
Roztok S-3-fenylbutyrové kyseliny (0,755 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se nechá protřepávat po dobu 15 hodin při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Reakční směs se nechá protřepávat po dobu 15 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství (3S)-3-fenylbutanoylchloridu. Olej se přímo použije v následující reakci.
G «'· ft ť <· © ě V
C (Í
Γ; fi c(i i- r· c . r < c < o p (,
411 tri-maleát NI -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 H-pyrazolo [3,4J]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(35)-3-fenylbutanamidu
Roztok 3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1-(1-(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] 1 H-pyrazolo[3,4-<3']pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem (35)-3-fenylbutanoylchloridu (0,420 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C, pak se lázeň z acetonu a suchého ledu odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá (35)-3-fenylbutanoylchlorid (0,210 g, 1,15 mmol) a směs se míchá po dobu 2 hodin. Přidá se roztok hydroxidu sodného (1 N) (10 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (20 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (125 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší síranem sodným, filtrují a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. VI-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4yl)piperidin-4-yl] -1 H-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -y 1} -2-methoxy feny 1)-(3 5)-3 fenylbutanamid-(35)-3-fenylbutanamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 15% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (10 min), 20% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (15 min), 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (7 min), čímž se získá 0,455 g (68%) čisté VI -(4- {4-amino-1-(1-(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1Hpyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfeny 1)-(35)-3 -fenylbutanamid. Horký roztok VI -(4- {4-amino-1-(1-(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 H-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(35)-3-fenylbutanamidu (0,455 g, 0,782 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,272 g, 2,35) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší v lyofilizátoru, čímž se získá tri-maleát VI -(4- {4-amino-l -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]- 1Hpyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny 1)-(35)-3 -fenylbutanamid-(35)-3 fenylbutanamidu.
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9, 199 (s, IH), 8,261 (s, IH), 8,1733-8,1528 (d, IH, J = 8,2 Hz), 7,312-7,282 (m, 4H), 7,236-7,232 (m, IH), 7,211-7,168 (m, 2H), 6,094 (s, 6H), 5,046 (m, IH), 3,890 (s, 3H), 3,534 (m, 4H), 2,994 (m, 2H), 2,784-2,740 (m, 6H), 2,5062,470 (m, 8H), 2,442-2,200 (m, 4H), 1,855 (m, 2H);
HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 μΜ, 33 x 4,6,3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný až acetonitril v 4,5 minutách, CseH^NeOs (581,2), 95%.
• · ««*· · · · ······« ·· ·· ·· ····
412
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 column, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min), Rt 2,64 min (100%).
Příklad 436 /erobuty l-zV-(4- {4-amino-1 - [4-nitrofenyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y 1} -2methoxyfenyl)karbamát
4-amino-1 - [4-nitrofenyl] -3 -j od-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin
Suspenze 3-jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (2,00 g, 7,66 mmol) v dimethylformamidu (40 ml) se nechá reagovat s uhličitanem česným (3,74 g, 11,49 mmol) ap-fluomitrobenzenem (1,08 g, 7,66 mmol). Reakční směs míchá při teplotě 80°C po dobu 5 hodin pod atmosférou dusíku. Reakční směs se přidá do ledu. Precipitát se filtruje a promyje vodou. Produkt, 4-amino-l-[4-nitrofenyl]-3-jod-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin, se suší v lyofilizátoru přes noc, čímž se získá 2,55 g látky (87%).
’H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,4952-8,4720 (m, 2H), 8,4142-8,3654 (m, 3H);
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 column, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) tR - 3,73 min (100%) M+ 380,6.
terc-buty 1-7/-(4-{4-amino-1 -[4-nitrofenyl]- l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)karbamát
Suspenze 4-amino-l-[4-nitrofenyl]-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidinu (0,500 g, 1,31 mmol) v dimethylformamidu (8 ml) se nechá reagovat s /erc-butyl-7/-[2-methoxy-4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátem (0,915 g, 2,62 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,091 g, 0,06 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,333 g, 3,14 mmol) ve vodě (4 ml). Reakční směs míchá při teplotě 85°C po dobu 26 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá voda. Precipitát se filtruje a promyje vodou. Pevná látka se trituruje diethyletherem, čímž se získá 0,431 g, (63%) tercbutyl-zV-(4- {4-amino-1 - [4-nitrofenyl]-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)karbamát.
e- e c « e- r » » i 9 t i,. i * © « « ♦ e 6 » * *» fr © e c e r? · fr © e β « c, &
« ; r o e β c c« f ¢. 0
413 ’H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 8,6862-8,6634 (d, 2H, J= 9,12 Hz), 8,48978,4423 (m, 3H), 8,1117 (s, ÍH), 8,0074-7,9872 (d, ÍH, J= 8,08 Hz), 7,3743-7,3293 (m, 2H), 3,9189 (s, 3H), 1,4959 (s, 9H);
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 column, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) tR = 4,38 minut, M+ 478,1.
Příklad 437
4-amino-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [4-nitrofenyl] -1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin
Suspenze terc-butyl-A-(4- {4-amino-1 - [4-nitrofenyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)karbamátu (0,386 g, 0,808 mmol) v dichlormethanu (8 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s trifluoroctovou kyselinou (1,6 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě 0°C, pak se ledová lázeň odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Reakční směs se míchá po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do olejového zbytku se přidá dichlormethan (15 ml) a IN roztok hydroxidu sodného. Vytvořený precipitát se filtruje a suší přes noc v lyofilizátoru, čímž se získá 0,286 g (94%) 4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-nitrofenyl]-l//pyrazolo[3,4-<7]pyrimidinu, *H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 8,7826-8,759 (m, 2H), 8,48928,4296 (m, 3H), 7,18617,1338 (m, 2H), 6,8320-6,8121 (d, ÍH, J= 7,96 Hz), 5,2225 (s, 2H), 3,8672 (s, 3H);
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 column, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) tR = 3,48 min M+ 377,6.
Příklad 438 di-maleát Al -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 Z/-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-l-methyl-1 //-2-indolkarboxamidu
-methyl-1 //-2-indolkarbonylchlorid
Suspenze l-methylindol-2-karboxylové kyseliny (0,805 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou β ?>
414 kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se nechá protřepávat po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství 1 -methyl-lV-2-indolkarbonylchloridu. Olej se přímo použije v následující reakci.
di-maleát NI-(4-{4-amino-1 -[1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 V-pyrazolo[3,4tíQpyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu
Roztok 3 -(4-amino-3 -methoxy feny 1)-1 - [ 1 -(1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin4-y 1]l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem 1-methyl-l//-2-indolkarbonylchloridu ( 0,445 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C, pak se lázeň z acetonu a suchého ledu odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá 1-methyl-lV-2-indolkarbonylchlorid (0,221 g, 1,15 mmol) a směs se míchá po dobu 2 hodin. Přidá se roztok hydroxidu sodného (IN) (10 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (20 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (125 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší síranem sodným, filtrují a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vl-(4-{4-amino-l-[l-(lmethylpiperidin-4-y l)piperidin-4-y 1] -1 V-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl } -2methoxyfeny 1))-1 -methyl- lV-2-indolkarboxamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 15% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (10 min), 20% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (15 min), 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (7 min), čímž se získá 0,463 g (68%) čistého Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-3-yl}-2-rnethoxyfenyl))-l-rnethyl-l//-2-indolkarboxamidu. Horký roztok VI -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-y 1} -2-methoxyfenyl))-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu (0,463 g, 0,781 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,272 g, 2,34 mmol) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší v lyofilizátoru, čímž se získá di-maleát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4y 1 )piperidin-4-y 1 ] -1 V-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-1 -methyl-1H-2indolkarboxamidu.
» β €· « β » ♦ ί β » β
4> β c c e ρ ίο
415 *Η NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 9,4495 (s, ΙΗ), 8,2848 (s, IH), 8,1505-8,1301 (d, IH, J= 8,16 Hz), 7,7232-7,7034 (d, IH, J = 7, 92 Hz), 7,6054-7,5844 (d, IH, J= 8,4 Hz), 7,35837,3012 (m, 4H), 7,1778-7,1406 (m, IH), 6,0804 (s, 4H), 5,10-5,00 (m, IH), 4,0403 (s, 3H), 3,9614 (s, 3H), 3,5336 (m, 4H), 3,1879 (m, 2H), 2,9937 (m, 2H), 2,7836 (s, 3H), 2,4979 (m, 3H), 2,2157 (m, 4H), 1,8513 (m, 2H);
HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 μΜ, 33 x 4,6,3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný až acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581-2), 95%.
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 column, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) Rt 2,76 min (100%).
Příklad 439 di-maleát NI-(4-{4-amino-l-[1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-lA-pyrazolo[3,4g/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl))-1 A-2-indolkarboxamidu 1 A-2-indolkarbonylchlorid
Suspenze indol-2-karboxylové kyseliny (0,742 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se nechá protřepávat po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantiíativní množství 1 A-2-indolkarbonylchloridu. Olej se použije přímo v následující reakci.
di-maleát NI -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl))-1 A-2-indolkarboxamidu
Roztok 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-1 -[1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]1 A-pyrazolo [3,4-g/]pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem ΙΑ-2-indolkarbonylchloridu (0,413 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (1 ml). Reakční směs se míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C. Lázeň z acetonu a suchého ledu se odstraní a reakční směs míchá po dobu 18 hodin pod atmosférou dusíku. Přidá se ΙΑ-2-indolkarbonylchlorid (0,207 g, 1,15 mmol) a směs se míchá další 2 hodiny. Přidá se IN roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá po dobu 30 minut. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (25 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojené organické vrstvy • « ««
416 se promyjí vodou a solankou, suší síranem sodným, filtrují a koncentrují za sníženého tlaku, čímž se získá surový VI-(4-{4-amino-1-[1-(1-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]lH-pyrazolo[3,4-íZ]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl))-lH-2-indolkarboxamid. Vl-(4-{4amino-1 - [1 -(1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]- lH-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl} -2methoxyfenyl))-lH-2-indolkarboxamid se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi 15 % (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu, čímž se získá opět surový produkt. Proto se provede další čištění na druhém sloupci v gradientu 10% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) až 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným), čímž se získá 0,139 g (21%) čistého VI-(4-{4-amino-1-[1-(1-methy lpiperidin4-yl)piperidin-4-yl]-1 H-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl))-1H-2indolkarboxamidu. VI -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -IVpyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl))-lV-2-indolkarboxamid (0,139 g, 0,24 mmol) v horkém ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,083 g, 0,719 mmol) v ethylacetátu. Vytvořený precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku, čímž se získá 0,166 g di-maleát VI-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4y l)piperidin-4-y 1] -1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl))-1H-2indolkarboxamidu.
*H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 11,83 (s, 1H), 9,442 (s, 1H), 8,283 (s, 1H), 8,154-8,134 (d, 1H, J= 8,12 Hz), 7,694-7,674 (d, 1H, J - 8,04 Hz), 7,498-7,477 (d, 1H, J = 8,20 Hz), 7,407-7,402 (m, 1H), 7,352-7,325 (m, 2H), 7,267-7,229 (m, 1H), 7,112-7,074 (m, 1H), 6,078 (s, 4H), 5,10-5,00 (m, 1H), 3,974 (s, 3H), 3,525 (m, 4H), 3,178 (m, 2H), 2,975 (m, 2H), 2,771 (s, 3H), 2,457 (s, 3H), 2,208 (m, 4H), 1,909 (m, 2H);
HPLC Pěrkin Elmer Pecosphere Cl8, 3 μΜ, 33 x 4,6,3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný až acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581,2), 95%.
LCMS (Pěrkin Elmer, Pecosphere Cl8 column, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min), Rt 2,67 min (100%).
Příklad 440
-fenyl-1 -trityl-1 V-pyrazolo [3,4-<7|py rimidin-4-amin
-j od-1 -trityl-1 V-pyrazolo [3,4-tf|pyrimidin-4-amin
417
Suspenze 3-jod-lA-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidm-4-aminu (3,0 g, 11,5 mmol) v dimethylformamidu (50 ml) se nechá reagovat s uhličitanem česným (5,62 g, 17,25 mmol) a trifenylmethylchloridem (3,85 g, 13,8 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 70°C po dobu 22,5 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá uhličitan česný (3,75 g, 11,5 mmol) a trifenyímethylchlorid (3,2 g, 11,5 mmol) a směs se míchá po dobu 6,5 hodiny. Reakční směs se přidá do ledové vody. Precipitát se filtruje a promyje vodou. Produkt, 3-jod-ltrityl-l A-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidÍn-4-amin, se suší přes noc v lyofilizátoru. Výsledná pevná látka se trituruje ethylacetátem, čímž se získá 3,05 g (53%) 3 -j od 1 -trity 1-1 A-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-4-aminu.
*H NMR (DMSO-db, 400 MHz) δ 7,3190-7,1106 (m, 16H); TLC (TLC destičky typu Baker Pre-coated Hard Layer Silica Gel, Si250F254, 30% ethylacetát v heptanu) Rf= 0,33.
-fenyl-1 -trityl-1 A-pyrazolo [3,4-<7|pyrimidin-4-amin
Roztok 3-jod-l-trityl-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (1,0 g, 1,99 mmol) v dimethylformamidu (20 ml) se nechá reagovat s fenylboritou kyselinou (0,485 g, 3,8 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,138 g, 0,119 mmol) a roztokem, uhličitanu sodného (0,506 g, 4,78 mmol) ve vodě (10 ml). Reakční směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 18,5 hodin pod atmosférou dusíku, reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a přidá se voda (15 ml). Precipitát se filtruje a promyje vodou. Surová pevná látka se trituruje diethyletherem (30 ml). Výsledná pevná látka se suší přes noc v lyofilizátoru, čímž se získá 0,407 g (45%) 3-feny 1-1-trity 1-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-4-aminu.
‘H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 7,9416 (s, ÍH), 7,6190-7,6011 (m, 2H), 7,5369-7,4493 (m, 3H), 7,3995-7,2248 (m, 15H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt =11,813 min (97%).
Příklad 441
NÍ-{ 4-[4-amino-1 -(4-oxocyklohexyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxy fenyl} -(3/?)-3 -fenylbutanamid (3/?)-3-Fenylbutanoylchlorid (2,22 g, 12,18 mmol) v dichlormethanu (10 ml) se přidá do roztoku 4-[4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l A-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidin-l9 « © « <s e · * w © β © c « © o e β « · e e e » c e · · ♦ «·· *»ee ®e ©<? ·· ····
418 yl]-l-cyklohexanonu (2,86 g, 8,12 mmol) v pyridinu (50 ml) při teplotě -10°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Roztok hydroxidu sodného (1,0 N, 15 ml) a organické rozpouštědlo se odpaří. Vodný zbytek se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem hořečnatým, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu a methanolu (95:5) jako mobilní fázi, čímž se získá VI - { 4- [4-amino-1 -(4-oxocyklohexyl)-1 //-pyrazolo [3,4 -í/Jpyrimidin-3 -yl] -2methoxyfenyl}-(3/?)-3-fenylbutanamid(3,ll g, 77%).
*H NMR (CDCb) δ 1,40 (d, J=6,97 Hz, 3H), 2,04 (m, IH), 2,59-2,78 (m, 9H), 3,40 (m, IH), 3,98 (s, 3H), 5,28 (m, IH), 5,70 (bs, 2H), 7,15-7,35 (m, 7H), 7,66 (s, IH), 8,38 (s, IH), 8,51 (d, >8,18, IH).
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; eluenty: 5%B/A až 95% B/A v 9,0 minutách (B: acetonitril, A: 100 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 0,5 ml/min): Rt = 6,273 minut.
Příklad 442 {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-1 -yl] fenyl} methanol
a) 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-1 -yljbenzaldehyd 3-(4-Fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (2,0 g, 6,59 mmol) se smíchá s 4-fluorbenzaldehydem (1,06 ml, 9,89 mmol), uhličitanem česným (4,30 g, 13,19 mmol) v DMF (6 ml). Reakční směs se zahřívá při teplotě 86°C přes noc. Po ochlazení na pokojovou teplotu se reakční směs nalije do ledové vody. Pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]benzaldehyd (2,46 g, 92%).
'H NMR (CDCb) δ 7,19 (m, 5H), 7,46 (m, 2H), 7,78 (d, J=8,64 Hz, 2H), 8,10 (d, >8,70 Hz, 2H), 8,44 (s, IH), 8,59 (d, >8,70 Hz, 2H), 10,03 (s, IH).
b) {4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)- l//-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-1 -yljfenyljmethanol Borohydrid sodný (19 mg, 0,491 mmol) se přidá do roztoku 4-[4-amino-3-(4fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yljbenzaldehydu (100 mg, 0,245 mmol) v methanolu (2 ml). Po 16 hodinách se přidá THF (1 ml) a další podíl borohydridu sodného (19 mg, 0,491 mmol). Po 5 hodinách se rozpouštědlo odstraní a přidá se voda. Vodná « o a«:
419 vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi ethylacetátu a dichlormethanu (80:20 až 100:0) jako mobilní fázi, čímž se získá {4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-1 -yl]fenyl} methanol (36 mg, 36 %).
Ή NMR (DMSO-dg) δ 4,56 (s, 2H), 5,27 (bs, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,47 (m, 4H), 7,76 (d, >8,64 Hz, 2H), 8,18 (d, >8,52,2H), 8,37 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Column: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 0,8 ml/minut): MH+=410,l.Rt=2,43 minut.
Příklad 443
- {4- [(4-methy lpiperazino)methyl]fenyl} -3 -(4-fenoxy fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ďjpy rimidin4-amin
Triacetoxyborohydrid sodný (67 mg, 0,319 mmol) se přidá do směsi 4-[4-amino-3(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-l-yl]benzaldehydu (100 mg, 0,245 mmol), 4-methylpiperazinu (37 mg, 0,369 mmol), ledové kyseliny octové (35 mg, 0,589 mmol) v dichlorethanu (4 ml). Po míchání při pokojové teplotě přes noc se přidá další podíl triacetoxyborohydridu sodného (67 mg, 0,319 mmol) a reakční směs se míchá přes noc. Přidá se voda (2 ml) a hydrogenuhličitan sodný (250 mg). Po intenzivním míchání po dobu 1 hodiny se vrstvy separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem hořečnatým, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlromethanu a methanoiu (97:3 až 80:20) jako mobilní fázi, čímž se získá l-{4-[(4-methylpiperazino)methyl]fenyl}-3-(4fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (25 mg, 21%).
'H NMR (DMSO-dg) δ 2,30 (s, 3H), 2,48 (bm, 8H), 3,56 (s, 3H), 5,75 (bs, 2H), 7,11 (d, >8,50,2H), 7,18 (m, 3H), 7,40 (m, 2H), 7,48 (d, >8,50 Hz, 2H), 7,29 (d, >8,63 Hz, 2H), 8,12 (d, >8,50 Hz, 2H), 8,47 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Column: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 0,8 ml/minut): MH+=492,2, Rt =2,97 minut.
<· o «»
Γ e {’ © c o c c β e fi ti ř c e e c c e e r t
V C c
ť Γ; c <? c ř< O
420
Příklad 444 fórc-butyl-A-(4- {4-amino-l -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1 A-pyrazolo[3,4Jjpyrimidin-3-yl}-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát
a) 1 -brom-2-fluor-5 -methoxy-4-nitrobenzen
Terc-butoxid draselný (1,0 N v THF, 38 ml, 38 mmol) se přidá do methanolu (1,54 ml, 38,0 mmol) v THF (30 ml) při teplotě 0°C. Po 30 minutách se kalný roztok se převede pomocí kanyly do roztoku l-brom-2,5-difluor-4-notrobenzenu (9,04 g, 38,0 mmol) v THF (27 ml) při teplotě -78°C. Po 30 minutách se chladící lázeň odstraní a reakční směs nechá ohřát na teplotu 0°C. Přidá se voda (250 ml) a po 10 minutách se organické rozpouštědlo odstraní. Pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá l-brom-2-fluor-5-methoxy-4nitrobenzen (9,28 g, 98%).
*H NMR (CDC13) δ 3,97 (s, 3H), 7,30 (d, J=5,48 Hz, 2H), 7,71 (d, J=7,58 Hz, 2H).
b) 4-brom-5-fluor-2-methoxy anilin
Hydrogensulfit sodný (14,7 g, 84,4 mmol) se přidá do roztoku l-brom-2-fluor-5methoxy-4-nitrobenzenu (9,28 g, 37,12 mmol) v ethanolu (180 ml) a vody (130 ml) při teplotě 80°C (ve 3 podílech). Po 5 hodinách se organické rozpouštědlo odstraní a pevná látka ve vodné vrstvě se spojí filtrací. Pevná látka se dále promyje směsí heptanu a ethylacetátu (3:2, 400 ml), filtrát se odpařuje, čímž se získá 4-brom-5-fluor-2methoxyanilin (3,29 g, 40%).
’H NMR (DMSO-dó) δ 3,75 (s, 3H), 5,22 (s, 2H), 6,56 (d, J=10,68 Hz, 2H), 6,94 (d, J=6,57 Hz, 2H).
c) /erc-butyl-A-(4-brom-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát
Di-Zerc-butyl-dikarbonát (3,42 g, 15,70 mmol) se smíchá s 4-brom-5-fluor-2methoxyanilinem (3,29 g, 14,95 mmol) v THF (30 ml). Reakční směs se zahřívá při teplotě 65°C po dobu 3 dnů, přičemž di-Zerobutyl-dikarbonát (3,42 g, 15,70 mmol) se přidává každý den. Po odstranění rozpouštědla se zbytek čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi heptanu a ethylacetátu (95:5 až 85:15) jako mobilní fázi, čímž se získá směs požadovaného produktu /erc-butyl-A-(4-brom-5-fluor-2methoxyfenyl)karbamátu a di-Zerc-butyl-dikarbonátu (10,4 g). Přidá se roztok hydroxidu sodného (50% roztok, 2,0 ml) do směsi v methanolu (30ml) při teplotě 0°C a reakční směs « « * ř sec C. r © « e «· * f t « e © © <, © e « ε Í ϊ «... e t: © e β β © e »
421 se míchá při pokojové teplotě přes noc. Po odstranění rozpouštědla se přidá voda a vodná vrstva se extrahuje heptanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje, čímž se získá řerc-butyl-A-(4-brom-5-fluor-2methoxyfenyl)karbamát (4,24 g, 89%).
‘H NMR (CDC13) δ 1,52 (s, 9H), 3,85 (s, 3H), 6,93 (d, >6,10 Hz, 1H), 7,06 (s, 1H), 8,01 (d, >10,4 Hz, 1H).
d) zerc-butyl-A-[5-fluor-2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamát
7erc-butyl-A-(4-brom-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát (4,24 g, 13,26 mmol), diboronpinakolester (4,04 g, 15,91 mmol), octan draselný (3,90 g, 39,78 mmol) a [Ι,Γbis(difenylfosfino)-ferrocen)dichlorpalladnatý komplex s dichlormethanem (0,32 g, 0,40 mmol) v DMF (75 ml) se zahřívá při teplotě 85°C přes noc. Přidá se diboronpinakolester (2,02 g, 7,96 mmol) a [l,l’-bis(difenylfosfino)-ferrocen)dichlorpalladnatý komplex s dichlormethanem (0,32 g, 0,40 mmol) a v zahřívání se pokračuje dalších 5 hodin. Po odstranění rozpouštědla se černý zbytek rozpustí v dichlormethanu a filtruje přes vrstvu celitu. Surová směs se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi heptanu a ethylacetátu (95:5 až 85:15) jako mobilní fázi, čímž se získá směs Zerc-butyl-A-[5-fluor-2methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu a diboronpinakolesteru (poměr 1:1, 4,23 g), který se použije v následující reakci bez dalšího čištění.
e) trans-terc-butyl-N-(4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyI] -1Hpyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl}-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát
Trcms-3-} od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 77-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4amin (0,60 g, 1,36 mmol), férc-butyl-A-[5-fluor-2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (1,0 g, 2,72 mmol), tetrakistrifenyfosfinpalladium (0,094 g, 0,082 mmol) a uhličitan sodný (0,35 g, 3,27 mmol) se smíchají s ethylenglykoldimethyletherem (14 ml) a vodou (7 ml). Reakční směs se zahřívá pod refluxem přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu a methanolu (95:5 až 70:30) jako mobilní fázi, • φ « ·
422 čímž se získá /ra«s-fórc-butyl-A-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát (0,264 g, 35%).
’H NMR (DMSO-d6) δ 1,49 (s, 9H), 1,97 (m, 6H), 2,16 (s, 3H), 2,33 (m, 5H), 2,53 (m, 4H), 3,84 (s, 3H), 4,64 (m, ÍH), 7,60 (d, J=6,78 Hz, ÍH), 7,83 (d, J=11,96 Hz, ÍH), 8,20 (s, ÍH), 8,24 (s, ÍH).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Column: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 0,8 ml/minut): MH+=555,3, Rt = 2,00 minut.
Příklad 445 /ram-3-(4-amino-2-fluor-5-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amin
Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80,7 ml) se přidá do roztoku trans-terc-huXy\-N-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamátu (250 mg, 0,451 mmol) v dichlormethanu (4,0 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se pak odpařuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. K upravení pH na 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje, čímž se získá tra«y-3-(4-amino-2-fluor-5-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpi-perazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (179 mg, 87%).
’H NMR (CDC13) δ 1,56 (m, 2H), 2,15 (m.7H), 2,31 (s, 3H), 2,51 (m, 4H), 2,67 (m, 4H), 3,88 (s, 3H), 4,16 (bs, 2H), 4,74-(m.lH), 5,64-(bs, 2H), 6,56 (d, J=10,84 Hz, ÍH), 6,88 (d, J=6,55 Hz, ÍH), 8,33 (s, ÍH).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Column: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril.A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 0,8 ml/minut): MH+=455,2, Rt = 0,63 minut.
f ( * < o . n c <
ř' fe'· fe ·- r <: © C c £fe <' f>- f G r fí ti e ' 1 1 *' η Γ Γ e ·' i C fí C fí f. c fí
423
Příklad 446 trans-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} -5 -fluor-2-methoxyfenyl)-/rara-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid
7rara-2-fenyl-l-cyklopropankarbonylchlorid (32 mg, 0,176 mmol) v dichlormethanu (0,3 ml) se přidá do roztoku tra«s-3-(4-amino-2-fluor-5-methoxyfenyl)-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu (80 mg, 0,176 mmol) v pyridinu (1,5 ml) při teplotě 0°C. Po 5 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Přidá se další podíl ň-anx-2-fenyl-lcyklopropankarbonylchloridu (32 mg, 0,176 mmol) a tím reakce doběhne do konce. Rozpouštědlo se odpařuje a zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií, čímž se získá trans-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-l//-pyrazolo[3,4JJpyrimidin-3 -yl} -5 -fluor-2-methoxyfeny l)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid (93 mg, 88%).
’H NMR (DMSO-dé) δ 1,35 (m, 1H), 1,50 (m, 3H), 1,98 (m, 6H), 2,19 (s, 3H), 2,37-2,68 (m, 11H), 3,87 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,09 (m, 1H), 7,21 (m, 3H), 7,31 (m, 2H), 8,21 (m, 2H), 9,82 (m, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Column: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 0,8 ml/minut): MH+=599,3, Rt = 1,97 minut.
Příklad 447
7erc-butyl-V-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl} karbamát
a) 3 -j od-l-( 1 -methyl-4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin
3-Jod-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1//-pyrazolo(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-amin (0,5 g, 1,45 mmol), formaldehyd (30% ve vodě, 0,16 ml, 1,60 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,43 g, 2,03 mmol) se smíchají v dichlorethanu (5 ml). Po 4 hodinách se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného, poté hydroxid sodný (l,0N) ke změně pH na 10. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje, čímž se získá 3-jod-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,275 g, 53%).
to O
C c r to toto 1' O to {' < i to to i toe c © © c © i'· a « r o ví < í- c c- © «· f: c. to C f- f, © to - to «' f; *’ « « *
424 ’H NMR (DMSO-dé) δ 1,85 (m, 2H), 2,09 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,88 (m, 2H), 4,75 (m, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,32 (s, 1H).
b) terc-butyl-A-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ř/]pyrimidin-3y 1] -2 -methoxy fenyl} karbamát
3-Jod-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</jpyrimidin-4-amin (270 mg, 0,754 mmol), terc-butyl-7V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamát (290 mg, 0,829 mmol), tetrakistrifenyfosfmpalladium (52 mg, 0,045 mmol) a uhličitan sodný (192 mg, 1,81 mmol) se smíchají s ethylenglykoldimethyletherem (8 ml) a vodou (4 ml). Reakční směs se zahřívá pod refluxem přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu a methanolu (90:10 až 70:30) jako mobilní fázi, čímž se získá ferc-butyl-A-{4-[4-amino-1(l-methyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-fiQpyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}karbamát (250 mg, 73%).
*H NMR (DMSO-dé) 8 1,48 (s, 9H), 1,88 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 2,24 (m, 5H), 2,92 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,21 (m, 2H), 7,91 (d, J=8,16 Hz, 1H), 8,04 (s, 1H), 8,23 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Column: Genesis, Cl8, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 0,8 ml/minut): MH+ = 454,2, Rt = 1,67 minut.
Příklad 448 tri-maleát (37?)-3 -feny lbutanoylchloridu Al -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methy lpiperidin-4yl)piperidin-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(37ř)-3fenylbutanamidu
Roztok R-3-fenylbutyrové kyseliny (0,755 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se nechá protřepávat po dobu 15 hodin při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Reakční směs se nechá protřepávat po dobu 15 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá
¢. e
425 kvantitativní množství (3/?)-3-fenylbutanoylchloridu. Olej se přímo použije v následující reakci.
tri-maleát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-lH-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(3Á)-3-fenylbutanamidu
Roztok 3 -(4-amino-3-methoxyfenyl)-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-y l)piperidin4-y 1] lH-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem (37?)-3-fenylbutanoylchloridu (0,420 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C, pak se lázeň z acetonu a suchého ledu odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá (37?)-3-fenylbutanoylchlorid (0,210 g, 1,15 mmol) a směs se míchá po dobu 2 hodin. Přidá se IN roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (20 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (125 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší síranem sodným, filtrují a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4y l)piperidin-4-y 1] -1 H-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl} -2-methoxy fenyl)-(3 7?)-3fenylbutanamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 15% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (10 min), 20% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (15 min), 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (7 min), čímž se získá 0,378 g (57%) čistého Vl-(4-{4amino-1 -[l-( 1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 H-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)-(37?)-3-fenylbutanamidu. Horký roztok Vl-(4-{4-amino-l-[l-(lmethylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)(3Á)-3-fenylbutanamidu (0,378 g, 0,649 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,226 g, 1,95 mmol) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší v lyofilizátoru, čímž se získá tri-maleát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(lmethylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 H-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)(37?)-3-fenylbutanamidu.
'H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 9,200 (s, IH), 8,263 (s, 1H0, 8,1747-8,1543 (d, IH, J = 8,16 Hz), 7,312-7,282 (m, 4H), 7,235-7,232 (s, IH), 7,211-7,168 (m, 2H), 6,114 (s, 6H), 5,061 (m, IH), 3,890 (s, 3H), 3,301 (m, 4H), 2,997 (m, 2H), 2,783-2,741 (m, 6H), 2,541 (m, 8 H), 2,261-2,185 (m, 4H), 1,879 (m, 2H);
HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 μΜ, 33 x 4,6,3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný až acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581,2), 95%.
LCMS (Perkin Elmer.Pecosphere 08 column, 3um velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min), Rt
2,64 min (100%).
r c ;· (i (' c
426
Příklad 449 tri-maleát NI -(4- {4-amino-1-(1-(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 V-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-benzo[ů]furan-2-karboxamidu benzo [/>] furan-2-karbonylchlorid
Suspenze 2-benzofurankarboxylové kyseliny (0,746 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se nechá protřepávat po dobu 15 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství benzo[ů]furan-2-karbonylchloridu. Olej se přímo použije v následující reakci.
tri-maleát Vl -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 H-pyrazolo[3,4í/]pyrÍmidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-benzo[ó]furan-2-karboxamidu
Roztok 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem benzo[ů]furan-2-karbonylchloridů (0,415 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 min při teplotě -5°C, pak se lázeň z acetonu a suchého ledu odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá benzo[ů]furan-2-karbonylchlorid (0,207 g, 1,15 mmol) a směs se míchá po dobu 2 hodin. Přidá se IN roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (20 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (125 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší síranem sodným, filtrují a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vl-(4-{4-amino-1-(1-(1methy lpiperidin-4-y 1 )piperidin-4-y 1] -1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl))-benzo[Z>]furan-2-karboxamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 15% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (10 Γ· ('(· 9 9 f C· $0 ¢1” e> Φ **' V' fc i? <·= ( ©' «*©<-- e, ť; {'' < < R 0 ť< fc. fc= fc. f.
Γ f · , · ( C fc. fc, fc fc < < f- ’’ t‘ » * C O fc C f fc f- O fc
427 min), 20% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (15 min), 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (7 min), čímž se získá 0,143 g (21 %) čistého N1 -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-y l)piperidin-4-y 1] -1Hpyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfeny l))-benzo[h]furan-2-karboxamidu. Horký roztok VI -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 H-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl))-benzo[ó]furan-2-karboxamidu (0,143 g, 0,246 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,086 g, 0,739) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší v lyofilizátoru, čímž se získá tri-maleát VI -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1Hpyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-benzo[ó]furan-2-karboxamidu. lH NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 9,518 (s, 1H), 8,282 (s, 1H), 8,2652-8,2447 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 7,849-7,814 (m, 2H), 7,7813-7,7603 (d, 1H, J= 8,4 Hz), 7,562-7,523 (m, 1H), 7,418-7,369 (m, 2H), 7,338-7,313 (m, 1H), 6,088 (s, 5H), 5,10-5,00 (m, 1H), 4,003 (s, 3H), 3,529 (m, 4H), 3,314 (m, 2H), 2,971 (m, 2H), 2,778 (s, 3H), 2,497 (m, 3H), 2,209 (m, 4H), 1,909 (m, 2H);
HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 μΜ, 33 x 4,6,3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný až acetonitril v 4,5 minutách, C30H44N6O3 (581,2), 95%.
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 column, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min), Rt 2,73 min (100%).
Příklad 450 tri-maleát VI -(4-{4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-y 1]-1 V-pyrazolo[3,4/]pyrimidin-3 -yl} -2 -methoxy feny 1)-(35)-3 -fenylbutanamidu (35)-3 -fenylbutanoylchlorid
Roztok S-3-fenylbutyrové kyseliny (0,755 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se nechá protřepávat po dobu 15 hodin při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Reakční směs se nechá protřepávat po dobu 15 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství (35)-3-fenylbutanoylchloridu. Olej se přímo použije v následující reakci.
<·<· rc· c «·. f ‘ ( f ( < ·. , < < c r c r c <· c < f <’ i .· . (' t < i c <
428 tri-maleát TVÍ-(4-{4-amino-1-(1-( l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l 77-pyrazolo [3,4</Jpyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(35)-3-fenylbutanamidu
Roztok 3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1-(1-(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin4-y 1] 177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem (35)-3-fenylbutanoylchloridu (0,420 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C, pak se lázeň z acetonu a suchého ledu odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá (35)-3-fenylbutanoylchlorid (0,210 g, 1,15 mmol) a směs se míchá po dobu 2 hodin. Přidá se IN roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (20 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (125 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší síranem sodným, filtrují a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. TVl-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4yl)piperidin-4-yl]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl} -2-methoxy feny 1)-(35)-3fenylbutanamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 15% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (10 min), 20% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (15 min), 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (7 min), čímž se získá 0,455 g (68%) čistého Nl-(4-{4amino-1-(1-(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -177-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3 -yl} -2methoxy feny 1)-(35)-3-fenylbutanamidu. Horký roztok TVÍ-(4-{ 4-amino-l-(1-(1methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l/7-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)(35)-3-fenylbutanamid (0,455 g, 0,782 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,272 g, 2,35) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší v lyofilizátoru, čímž se získá tri-maleát M-(4-{4-amino-l-[l-(lmethylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)(35)-3-fenylbutanamidu.
*H NMR (DMSO-dó,400 MHz) δ 9,199 (s, 1H), 8,261 (s, 1H), 8,1733-8,1528 (d, 1Η, J = 8,2 Hz), 7,312-7,282 (m, 4H), 7,236-7,232 (m, 1H), 7,211-7,168 (m, 2H), 6,094 (s, 6H), 5,046 (m, 1H), 3,890 (s, 3H), 3,534 (m, 4H), 2,994 (m, 2H), 2,784-2,740 (m, 6H), 2,5062,470 (m, 8H), 2,442-2,200 (m, 4H), 1,855 (m, 2H);
HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 μΜ, 33 x 4,6,3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný až acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581,2), 95%.
i- o ťí e♦ c· c í?
« o í ÍS:
429
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 column, 3 pm velikost Částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min), Rt2,64 min (100%).
Příklad 451 /erc-butyl-jV-(4- {4-amino-1 -[4-nitrofenyl]-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)karbamát
4-amino-1 -[4-nitrofenyl]-3-jod-1 Z/-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin
Suspenze 3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-4-aminu (2,00 g, 7,66 mmol) v dimethylformamidu (40 ml) se nechá reagovat s uhličitanem česným (3,74 g, 11,49 mmol) ap-fluomitrobenzenem (1,08 g, 7,66 mmol). Reakční směs míchá při teplotě 80°C po dobu 5 hodin pod atmosférou dusíku. Reakční směs se přidá do ledu. Precipitát se filtruje a promyje vodou. Produkt, 4-amino-l-[4-nitrofenyl]-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin, se suší v lyofilizátoru přes noc, čímž se získá 2,55 g (87%). *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,4952-8,4720 (m, 2H), 8,4142-8,3654 (m, 3H);
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere C18 column, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) tR = 3,73 min (100%) M+ 380,6.
íerc-buty 1-N-(4- {4-amino-1 - [4-nitrofenyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</jpyrimidin-3 -y 1} -2methoxyfenyl)karbamát
Suspenze 4-amino-l-[4-nitrofenyl]-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidinu (0,500 g, 1,31 mmol) v dimethylformamidu (8 ml) se nechá reagovat s Zerc-butyl-/V-[2-methoxy-4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátem (0,915 g, 2,62 mmol), tetrakis(trifenyífosfin)palladiem (0,091 g, 0,06 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,333 g, 3,14 mmol) ve vodě (4 ml). Reakční směs se míchá při teplotě 85°C po dobu 26 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá voda. Precipitát se filtruje a promyje vodou. Pevná látka se trituruje diethyletherem, čímž se získá 0,431 g (63%) tercbuty 1-//-(4- {4-amino-l - [4-nitrofenyl] -1 //-pyrazolo [3,4-ri]py rimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)karbamát.
( ( f ( i s. cc c f c * [· «> Γη <? e r c c i
i. C C <·
430 JH NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,6862-8,6634 (d, 2H, J= 9,12 Hz), 8,48978,4423 (m, 3H), 8,1117 (s, IH), 8,0074-7,9872 (d, IH, J= 8,08 Hz), 7,3743-7,3293 (m, 2H), 3,9189 (s, 3H), 1,4959 (s, 9H);
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 column, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) ír = 4,38 minut, M+ 478,1.
Příklad 452
4-amino-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 -[4-nitrofenyl] - i A-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin
Suspenze fórc-butyl-vV-(4- { 4-amino-1 - [4-nitrofenyl] -1 A-pyrazolo [3,4-úQpyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)karbamátu (0,386 g, 0,808 mmol) v dichlormethanu (8 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s trifluoroctovou kyselinou (1,6 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě 0°C, pak se ledová lázeň odstraní a míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Reakční směs se míchá po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Kolej ovitému zbytku se přidá dichlormethan (15 ml) a IN roztok hydroxidu sodného, vytvořený precipitát se filtruje a suší přes noc v lyofilizátoru, čímž se získá 0,286 g (94%) 4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-nitrofenyl]-1Apyrazolo[3,4-</|pyrimidinu.
*H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 8,7826-8,759 (m, 2H), 8,4892-8,4296 (m, 3H), 7,18617,1338 (m, 2H), 6,8320-6,8121 (d, IH, J= 7,96 Hz), 5,2225 (s, 2H), 3,8672 (s, 3H);
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl 8 column, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) tR = 3,48 min M+377,6.
Příklad 453 di-maleát Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-lA-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamidu 1 -methyl-1 A-2-indolkarbonylchlorid
Suspenze l-methylindol-2-karboxylové kyseliny (0,805 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se nechá protřepávat po dobu 18 hodin.
ft * • · » * · · · · · * ft · ·· · · · * ft ft·· ·« · · • · · · · · · ···· ·· ·» · · ·
431
Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství 1-methyl-l//-2-indolkarbonylchloridu. Olej se přímo použije v následující reakci.
di-maleát JV1 - (4 - { 4-amino-1 - [ 1 -(1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4J]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl))-1 -methyl-1//-2-indolkarboxamidu
Roztok 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin4-yl]l//-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem 1 -methyl- l//-2-indolkarbonylchloridu ( 0,445 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C, pak se lázeň z acetonu a suchého ledu odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá 1-methyl-l//-2-indolkarbonylchlorid (0,221 g, 1,15 mmol) a směs se míchá po dobu 2 hodin. Přidá se IN roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (20 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (125 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší síranem sodným, filtrují a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vl-(4-{4-amino-l-[l-(lmethylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 - y 1} -2 methoxyfeny 1))-1 -methyl- l//-2-indolkarboxamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 15% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (10 min), 20% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (15 min), 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (7 min), čímž se získá 0,463 g (68%) čistého Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu. Horký roztok Al -(4- {4-amino-1-(1-(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-y 1] -1 //pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu (0,463 g, 0,781 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,272, 2,34 mmol) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší v lyofilizátoru, čímž se získá di-maleát VI-(4-{4-amino-1-(1-(1-methy lpiperidin-4yl)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl} -2 -methoxy feny 1))-1 -methyl-1 H-2 indolkarboxamidu.
’H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 9,4495 (s, 1H), 8,2848 (s, 1H), 8,1505-8,1301 (d, 1H, J= 8,16 Hz), 7,7232-7,7034 (d, 1H, J= 7,92 Hz), 7,6054-7,5844 (d, 1H, J= 8,4 Hz), 7,3583e fi « β * ·* « β» $ · » · « « • 8 · tt 8 8 9 fi® tt ♦ * « • fi t-· 8 ♦ 8 8 ® · ♦ se · © β ® · · tt · tt fi « « fi β * β · tt » · ·
9 9998
432
7,3012 (m, 4H), 7,1778-7,1406 (m, 1H), 6,0804 (s, 4H), 5,10-5,00 (m, 1H), 4,0403 (s, 3H), 3,9614 (s, 3H), 3,5336 (m, 4H), 3,1879 (m, 2H), 2,9937 (m, 2H), 2,7836 (s, 3H), 2,4979 (m, 3H), 2,2157 (m, 4H), 1,8513 (m, 2H);
HPLC Perkin Elmer Pecosphere Cl8, 3 μΜ, 33 x 4,6,3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný až acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581,2), 95%.
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 column, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min), Rt 2,76 min (100%).
Příklad 454 di-maleát NI -(4- { 4-amino-1 - [ 1 -(1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4í/Jpyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl))-1 //-2-indolkarboxamidu 1 //-2-indolkarbonylchlorid
Suspenze indol-2-karboxylové kyseliny (0,742 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se nechá protřepávat po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství l//-2-indolkarbonylchloridu. Olej se přímo použije v následující reakci.
di-maleát VI -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo[3,4c/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-1 //-2-indolkarboxamidu
Roztok 3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin4-yl]l//-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem l//-2-indolkarbonylchloridem (0,413 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (1 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C. Lázeň z acetonu a suchého ledu se odstraní a reakční směs se míchá po dobu 18 hodin pod atmosférou dusíku. Přidá se 1//-2-indolkarbonylchlorid (0,207 g, 1,15 mmol) a směs se míchá další 2 hodiny. Přidá se 1 N roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá po dobu 30 minut. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (25 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou, suší síranem sodným, filtrují a koncentrují za sníženého tlaku, čímž se získá surový VI -(4-{4-amino-1-[1-(11 ť e ©· r <-< <.· t- © «. f i < c ,· c e
433 methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl}-2methoxy fenyl))-1 A-2-indolkarboxamid. Al -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4yl)piperidin-4-yl] -1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl))-1H-2indolkarboxamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 15 % (methanoiu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu, čímž se získá pouze surový produkt. Novou chromatografií v gradientu 10% (methanoiu s 2% hydroxidem amonným) až 50% (methanoiu s 2% hydroxidem amonným) se získá 0,139 g (21%) čistého Al-(4-{4amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-y 1] -1 A-pyrazolo [3,4-ď]py rimidin-3 -yl} -2methoxy feny 1))-1 A-2-indolkarboxamidu. Al -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4y l)piperidin-4-y I] -1 A-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-1A-2indolkarboxamid (0,139 g, 0,24 mmol) v horkém ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem maleinové kyseliny (0,083 g, 0,719 mmol) v ethylacetátu. Vytvořený precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku, čímž se získá 0,166 g di-maleátu Al-(4-{4-amino-1-[1(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-ylj-1 A-pyrazolo[3,4-ífipyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl))-1 A-2-indolkarboxamidu.
*H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 11,83 (s, 1H), 9,442 (s, 1H), 8,283 (s, 1H), 8,154-8,134 (d, 1H, J= 8,12 Hz), 7,694-7,674 (d, 1H, J = 8,04 Hz), 7,498-7,477 (d, 1H, J = 8,20 Hz), 7,407-7,402 (m, 1H), 7,352-7,325 (m, 2H), 7,267-7,229 (m, 1H), 7,112-7,074 (m, 1H), 6,078 (s, 4H), 5,10-5,00 (m, 1H), 3,974 (s, 3H), 3,525 (m, 4H), 3,178 (m, 2H), 2,975 (m, 2H), 2,771 (s, 3H), 2,457 (s, 3H), 2,208 (m, 4H), 1,909 (m, 2H);
HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 μΜ, 33 x 4,6,3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný až acetonitril v 4,5 minutách, CsgHzuNgCfi (581,2), 95%.
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 column, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min), Rt 2,67 min (100%).
Příklad 455
-fenyl-1 -trityl-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin
3-jod-1 -trityl-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin
Suspenze 3-jod-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (3,0 g, 11,5 mmol) v dimethylformamidu (50 ml) se nechá reagovat s uhličitanem česným (5,62 g, 17,25 mmol) a trifenylmethylchloridem (3,85 g, 13,8 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 70°C po « « • 0 0 » i ί > 9 tiš · *
V 4 « « » 0 e « » r · » « «0 40 » a « ♦ 4 a ♦ β o e· • <» · a · «· *
434 dobu 22,5 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá uhličitan česný (3,75 g, 11,5 mmol) a trifenylmethylchlorid (3,2 g, 11,5 mmol) a směs se míchá po dobu 6,5 hodiny. Reakční směs se přidá do ledové vody. Precipitát se filtruje a promyje vodou. Produkt, 3-jod-l-trityl-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-amin, se suší přes noc v lyofilizátoru. Výsledná pevná látka se trituruje ethylacetátem, čímž se získá 3,05 g (53%) 3 -j od-1 -trityl-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu.
’H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 7,3190-7,1106 (m, 16H); TLC (TLC destičky Baker Precoated Hard Layer Silikaca, Si250F254, 30% ethylacetát v heptan) Rf = 0, 33.
-fenyl-1 -trityl-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin
Roztok 3 -j od-1 -trityl-1 //-pyrazolo [3,4-</jpyrimidin-4-aminu (1,0 g, 1,99 mmol) v dimethylformamidu (20 ml) se nechá reagovat s fenylboritou kyselinou (0,485 g, 3,8 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,138 g, 0,119 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,506 g, 4,78 mmol) ve vodě (10 ml). Reakční směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 18,5 hodiny pod atmosférou dusíku. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a přidá se voda (15 ml). Precipitát se filtruje a promyje vodou. Surová pevná látka se trituruje diethyletherem (30 ml). Výsledná pevná látka se suší přes noc v lyofilizátoru, čímž se získá 0,407 g (45%) 3-fenyl-l-trityl-l//-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidin-4-amin.
’H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 7,9416 (s, IH), 7,6190-7,6011 (m, 2H), 7,5369-7,4493 (m, 3H), 7,3995-7,2248 (m, 15H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 m, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min), Rt =11,813 min (97%).
Příklad 456
VI - {4- [4-amino-1 -(4-oxocyklohexy 1)-1 //-pyrazolo [3,4-</|pyrimidin-3 -y 1] -2methoxyfenyl}-(37?)-3-fenylbutanamid (3Á)-3-Fenylbutanoylchlorid (2,22 g, 12,18 mmol) v dichlormethanu (10 ml) se přidá do roztoku 4-[4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-lyl]-l-cyklohexanonu (2,86 g, 8,12 mmol) v pyridinu (50 ml) při teplotě -10°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se IN roztok hydroxidu sodného, 15 ml) a organické rozpouštědlo se odpařuje. Vodný zbytek se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje β e <ř · β * v? 3 A « t, * « · ♦·»«» a * ♦ · * · · « «· ® * · t · g- « t' * c * ·· * · s> * «
435 solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlromethanu a methanolu (95:5) jako mobilní fázi, čímž se získá NI - {4-[4-amino-1 -(4-oxocyklohexyl)-1 //-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-3-ylj-2methoxyfenyl}-(3/ř)-3-fenylbutanamid (3,11 g, 77%).
JH NMR (CDC13) δ 1,40 (d, >6,97 Hz, 3H), 2,04 (m, 1 H), 2,59-2,78 (m, 9H), 3,40 (m, IH), 3,98 (s, 3H), 5,28 (m, IH), 5,70 (bs, 2H), 7,15-7,35 (m, 7H), 7,66 (s, IH), 8,38 (s, IH), 8,51 (d, J=8,18,1H).
HPLC (Waters Alliance-Column: Waters SymmetryShield, RPjg, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm, eluenty: 5% B/A až 95% B/A v 9,0 minul (B: acetonitril, A: 100 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 0,5 ml/minut): Rt= 6,273 minut.
Příklad 457 { 4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-1 -yljfenyljmethanol 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]benzaldehyd
3-(4-Fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin (2,0 g, 6,59 mmol) se smíchá s 4-fluorbenzaldehydem (1,06 ml, 9,89 mmol), uhličitanem česným (4,30 g, 13,19 mmol) v DMF (6 ml). Reakční směs se zahřívá při teplotě 86°C přes noc. Po ochlazení na pokojovou teplotu se reakční směs nalije do ledové vody. Pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yljbenzaldehyd (2,46 g, 92%).
’H NMR (CDCb) δ 7,19 (m, 5H), 7,46 (m, 2H), 7,78 (d, >8,64 Hz, 2H), 8,10 (d, >8,70 Hz, 2H), 8,44 (s, IH), 8,59 (d, >8,70 Hz, 2H), 10,03 (s, IH).
b) {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-1 -y 1 ] fenyl} methanol
Borohydrid sodný (19 mg, 0,491 mmol) se přidá do roztoku 4-[4-amino-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]benzaldehydu (100 mg, 0,245 mmol) v methanolu (2 ml). Po 16 hodinách se přidá THF (1 ml) a další podíl borohydridu sodného (19 mg, 0,491 mmol). Po 5 hodinách se rozpouštědlo odstraní a přidá se voda. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi ethylacetátu a dichlormethanu (80:20 až 100:0) jako mobilní fázi, Čímž se získá
«.· i? ο η © ft < * ř F « © r < <’ e e ť· o © c * β < r e © © < t o e t· e « © < · e ti c< c t.· c o c '- €
436 {4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-l-yl]fenyl}methanol (36 mg, 36 %).
’H NMR (DMSO-dó) δ 4,56 (s, 2H), 5,27 (bs, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,47 (m, 4H), 7,76 (d, J=8,64 Hz, 2H), 8,18 (d, J=8,52,2H), 8,37 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Column: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 0,8 ml/minut): MH+=410,l, Rt=2,43 minut.
Příklad 458 -(4- [(4-methylpiperazino)methyl] fenyl} -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin4-amin
Triacetoxyborohydrid sodný (67 mg, 0,319 mmol) se přidá do směsi 4-[4-amino-3(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo [3,4-d]pyrimídin-l-yl]benzaldehydu (100 mg, 0,245 mmol), 4-methylpiperazinu (37 mg, 0,369 mmol), ledové kyseliny octové (35 mg, 0,589 mmol) v dichlorethanu (4 ml). Po míchání při pokojové teplotě přes noc se přidá další podíl triacetoxyborohydridu sodného (67 mg, 0,319 mmol) a reakční směs se míchá přes noc. Přidá se voda (2 ml) a poté hydrogenuhličitan sodný (250 mg). Po intenzivním míchání po dobu 1 hodiny se vrstvy separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlromethanu a methanolu (97:3 až 80:20) jako mobilní fázi, čímž se získá l-{4-[(4-methylpiperazino)methyl]fenyl}-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (25 mg, 21%).
!H NMR (DMSO-d6) δ 2,30 (s, 3H), 2,48 (bm, 8H), 3,56 (s, 3H), 5,75 (bs, 2H), 7,11 (d, J=8,50,2H), 7,18 (m, 3H), 7,40 (m, 2H), 7,48 (d, J=8,50 Hz, 2H), 7,29 (d, J=8,63 Hz, 2H), 8,12 (d, J=8,50 Hz, 2H), 8,47 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Column: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 0,8 ml/minut):
MH+=492,2, Rt = 2,97 minut.
Λ * 4 • · · • ♦ · • ♦ » ♦ ·« β ♦ 4 » > · « · ♦ · · ♦ ► · « β ► · » »
437
Příklad 459 řerc-butyl-A-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazoIo[3,4</]pyrimidin-3-yl} -5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát
c) 1 -brom-2-fluor-5-methoxy-4-nitrobenzen
K methanolu (1,54 ml, 38,0 mmol) v THF (30 ml) při teplotě 0°C se přidá tercbutoxid draselný (l,0N v THF, 38 ml, 38 mmol). Po 30 minutách se kalný roztok převede pomocí kanyly do roztoku l-brom-2,5-difluor-4-notrobenzenu (9,04 g, 38,0 mmol) v THF (27 ml) při teplotě -78°C. Po 30 minutách se chladící lázeň odstraní a reakční směs se nechá ohřát na teplotu 0°C. Přidá se voda (250 ml) a po 10 minutách se odstraní organické rozpouštědlo. Pevná látka se spojí filtrací, čímž se získá l-brom-2-fluor-5-methoxy-4nitrobenzen (9,28 g, 98%).
!H NMR (CDCb) δ 3,97 (s, 3H), 7,30 (d, J=5,48 Hz, 2H), 7,71 (d, >7,58 Hz, 2H).
d) 4-brom-5-fluor-2-methoxyanilin
K roztoku l-brom-2-fluor-5-methoxy-4-nitrobenzenu (9,28 g, 37,12 mmol) v ethanolu (180 ml) a vodě (130 ml) při teplotě 80°C (ve 3 dílech) se přidá hydrosulfit sodný (14,7 g, 84,4 mmol). Po 5 hodinách se organické rozpouštědlo odstraní a pevná látka ve vodné vrstvě se spojí filtrací. Pevná látka se dále promyje směsí heptanu a ethylacetátu (3:2, 400 ml), filtrát se odpařuje, čímž se získá 4-brom-5-fluor-2-methoxyanilin (3,29 g, 40%).
*H NMR (DMSO-dg) δ 3,75 (s, 3H), 5,22 (s, 2H), 6,56 (d, >10,68 Hz, 2H), 6,94 (d, >6,57 Hz, 2H).
c) fórc-butyl-A-(4-brom-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát
Di-terc-butyl-dikarbonát (3,42 g, 15,70 mmol) se smíchá s 4-brom-5-fluor-2methoxyanilinem (3,29 g, 14,95 mmol) v THF (30 ml). Reakční směs se zahřívá při teplotě 65°C po dobu 3 dnů, přičemž každý den se přidává di-tere-butyl-dikarbonát (3,42 g, 15,70 mmol). Po odstranění rozpouštědla se zbytek čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi heptanu a ethylacetátu (95:5 až 85:15) jako mobilní fázi, čímž se získá směs požadovaného produktu, férc-butyl-A-(4-brom-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát a &\-tercbutyl-dikarbonát (10,4 g). Do směsi v methanolu (30ml) při teplotě 0°C se přidá roztok hydroxidu sodného (50% roztok, 2,0 ml) a reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes i' f
438 noc. Po odstranění rozpouštědla se přidá voda a vodná vrstva se extrahuje heptanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje, čímž se získá Zerc-butyl-A-(4-brom-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát (4,24 g, 89%).
’H NMR (CDC13) δ 1,52 (s, 9H), 3,85 (s, 3H), 6,93 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,06 (s, 1H), 8,01 (d, J=10,4Hz, 1H).
d) terc-butyl-A-[5-fluor-2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamát
7erc-butyl-A-(4-brom-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát (4,24 g, 13,26 mmol), diboronpinakolester (4,04 g, 15,91 mmol), octan draselný (3,90 g, 39,78 mmol) a [Ι,Γbis(difenylfosfino)-ferrocen)dichlorpalladnatý komplex s dichlormethanem (0,32 g, 0,40 mmol) v DMF (75 ml) se zahřívá při teplotě 85°C přes noc. Přidá se diboronpinakolester (2,02 g, 7,96 mmol) a [l,l’-bis(difenylfosfino)-ferrocen)dichlorpalladnatý komplex s dichlormethanem (0,32 g, 0,40 mmol) a v zahřívání se pokračuje dalších 5 hodin. Po odstranění rozpouštědla se černý zbytek rozpustí v dichlormethanu a filtruje přes vrstvu celitu. Surová směs se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi heptanu a ethylacetátu (95:5 až 85:15) jako mobilní fázi, čímž se získá směs Zerc-butyl-yV-[5-fluor-2methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu a diboronpinakolesteru (poměr 1:1,4,23 g), která se použije v dalším kroku bez čištění.
e) trans-terc-huiy 1-A-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-í(]pyrimidin-3-yl}-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát
7’ra«5’-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4amin (0,60 g, 1,36 mmol), ferc-butyl-A-[5-fluor-2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (1,0 g, 2,72 mmol), tetrakistrifenyfosfinpalladium (0,094 g, 0,082 mmol) a uhličitan sodný (0,35 g, 3,27 mmol) se smíchají s ethylenglykoldimethyletherem (14 ml) a vodou (7 ml). Reakční směs se zahřívá pod refluxem přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu a methanolu (95:5 až 70:30) jako mobilní fázi, čímž se získá Zra«sAerc-butyl-A-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l Apyrazolo[3,4-íí|pyrimidin-3-yl}-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát (0,264 g, 35%).
® A
439 ’Η NMR (DMSO-dé) δ 1,49 (s, 9H), 1,97 (m, 6H), 2,16 (s, 3H), 2,33 (m, 5H), 2,53 (m, 4H), 3,84 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,60 (d, J-6,78 Hz, 1H), 7,83 (d, J=11,96 Hz, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,24 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Column: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 0,8 ml/minut): MH+=555,3, Rt = 2,00 minut.
Příklad 460 trans-3 -(4-amino-2-fluor-5-methoxy fenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-177pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-amin
Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80,7 ml) se přidá do roztoku trans-terc-bxáy\-N-(fi- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-3-yl}-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamátu (250 mg, 0,451 mmol) v dichlormethanu (4,0 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin a rozpouštědlo se pak odpařuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. K upravení pH na 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje, čímž se získá řrans,-3-(4-amino-2-fluor-5-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-amin (179 mg, 87%).
*H NMR (CDCb) δ 1,56 (m, 2H), 2,15 (m, 7H), 2,31 (s, 3H), 2,51 (m, 4H), 2,67 (m, 4H), 3,88 (s, 3H), 4,16 (bs, 2H), 4,74 (m, 1H), 5,64-(bs, 2H), 6,56 (d, J= 10,84 Hz, 1H), 6,88 (d, J=6,55 Hz, 1H), 8,33 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Column: Genesis.C18, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril.A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 0,8 ml/minut): MH+=455,2, Rt = 0,63 minut.
Příklad 461 trans- VI -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -17/-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-5-fluor-2-methoxyfenyl)-/ra«5'-2-fenyl-l-cykíopropankarboxaniid fj <; f C f. (- fi ,- λ , r t < c © <, ,·. ,· i · c r C c
440
7razw-2-fenyl-l-cyklopropankarbonylchlorid (32 mg, 0,176 mmol) v dichlormethanu (0,3 ml) se přidá do roztoku trans-3 -(4-amino-2-fluor-5 -methoxyfenyl)l-[4-(4-methylpiperazion)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (80 mg, 0,176 mmol) v pyridinu (1,5 ml) při teplotě 0°C. Po 5 minutách se ledová lázeň odstraní a reačkní směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Kvůli proběhnutí reakce se přidá další /ra«s-2-fenyl-l-cyklopropankarbonylchlorid (32 mg, 0,176 mmol). Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií, čímž se získá trans-N\ -(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3 -yl} -5-fluor-2methoxyfenyl)-tra«s-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid (93 mg, 88%). ’H NMR (DMS-dé) δ 1,35 (m, 1H), 1,50 (m, 3H), 1,98 (m, 6H), 2,19 (s, 3H), 2,37-2,68 (m, 11H), 3,87 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,09 (m, 1H), 7,21 (m, 3H), 7,31 (m, 2H), 8,21 (m, 2H), 9,82 (m, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Column: Genesis.C18, 3 pm, 33x4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril.A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 0,8 ml/minut): MH+=599,3, Rt = 1,97 minut.
Příklad 462 fórobuty 1-A- {4- [4-amino-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3 -yl] -2methoxy fenyl} karbamát
b) 3-j od-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-/|pyrimidin-4-amin
3-Jod-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,5 g, 1,45 mmol), formaldehyd (30% ve vodě, 0,16 ml, 1,60 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,43 g, 2,03 mmol) se smíchají v dichlorethanu (5 ml). K upravení pH na 10 se po 4 hodinách přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného, poté hydroxid sodný (l,0N). Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje, čímž se získá 3-jod-1-(1-methy 1-4-piperidy 1)-1//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,275 g, 53%).
'H NMR (DMSO-dó) δ 1,85 (m, 2H), 2,09 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,88 (m, 2H), 4,75 (m, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,32 (s, 1H).
b) /erc-buty 1-V-4-[4-amino-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-3y 1 ] -2 -methoxy feny 1} karbamát • .< r' fi fi e fi í·- o fi <· <ř ť fi Γ ť> © fi fi C i 6 <·, (. f- £ fi ' <’· < fi .a fi o t> ( ť (, {. $ e
441
3-Jod-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (270 mg, 0,754 mmol), terc-butyl-;V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamát (290 mg, 0,829 mmol), tetrakistrifenyfosfmpalladium (52 mg, 0,045 mmol) a uhličitan sodný (192 mg, 1,81 mmol) se smíchají s ethylenglykoldimethyletherem (8 ml) a vodou (4 ml). Reakční směs se zahřívá pod refluxem přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší síranem sodným, filtruje a odpařuje. Zbytek se čistí zrychlenou sloupcovou chromatografií ve směsi dichlormethanu a methanolu (90:10 až 70:30) jako mobilní fázi, čímž se získá terc-butyl-/V-{4-[4-amino-l-(lmethyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}karbamát (250 mg, 73%).
lH NMR(DMSO-d6) δ l,48(s, 9H), 1,88 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 2,24 (m, 5H), 2,92 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,21 (m, 2H), 7,91 (d, J=8,16 Hz, 1H), 8,04 (s, 1H), 8,23 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Column: Genesis, C 18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM octan amonný jako pufr, pH 4,5), 0,8 ml/minut): MH+=454,2, Rt - 1,67 minut.
Příklad 463 diacetát trans-2 - {4-[(2-chlorbenzyl)amino] -3 -methoxyfenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)~ cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu Způsob A (Obecný způsob reduktivní alkylace /ra«x-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-f/]pyrimidin-4-aminu) ’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,46 (d, 1H), 7,30 (m, 3H), 7,08 (s, 1H), 7,01 (d, 1H), 6,42 (d, 1H), 5,96 (t, 1H), 4,59 (m, 1H), 4,45 (d, 2H), 3,90 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut lml/min), Rt 15,22 minut.
MS:MH+561.
t? co i? © 9 C? ® i: (' t?
¢3 <5 £' £ ť O % »©««·· ε o o t © <£ f c p& ® @ <© < * * ť &
©Ě-. *><?
ti e © « «3 C ® <3 O · & & © ř·:© eeci
442
Příklad 464 diacetát trans-3-{3-methoxy-4-[( 1,3 -thiazol-2-ylmethyl)amino]fenyl} -1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu Způsob A ‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, ÍH), 7,76 (d, ÍH), 7,59 (d, ÍH), 7,08 (s, ÍH), 7,02 (d, ÍH), 6,59 (d, ÍH), 6,27 (t, ÍH), 4,68 (d, 2H), 4,61 (m, ÍH), 3,89 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,09 minut.
MS: MH+ 534.
Příklad 465 diacetát /ra«y-3-(3-methoxy-4-[(3-methyl-17/-4-pyrazolyl)methyl]aminofenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t7Jpyrimidin-4-aminu
Způsob A !H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, ÍH), 7,47 (s, ÍH), 7,06 (m, 3H), 6,74 (d, ÍH), 5,08 (t, ÍH), 4,61 (m, ÍH), 4,13 (d, 2H), 3,84 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,25 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 10,65 minut.
MS: MH+ 531.
Příklad 466 acetát trans-3-{3-methoxy-4-[(2-thienylmethyl)amino]fenyl}-1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu
Způsob A ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, ÍH), 7,36 (d, ÍH), 7,01 (m, 4H), 6,71 (d, ÍH), 5,87 (t, ÍH), 4,61 (m, 3H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,61 minut.
ί ί < ι <·· · -· ο r (. (·· , ί . , Γ C .. . 1 f <’ < ř
443
MS: ΜΗ+ 533.
Příklad 467 acetát trans-3 -(3 -methoxy-4-[(5 -methyl-2-thienyl)methyl]aminofenyl)-1 - [4-(4methy lpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidm-4-aminu Způsob A *H NMR (DMSO-ds, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,04 (m, 2H), 6,84 (d, 1H), 6,70 (d, 1H), 6,62 (d, 1H), 5,77 (t, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,47 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,37 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,66 minut.
MS: MH+ 547.
Příklad 468 acetát tra«5-3-(4-[(5-chlor-2-thienyl)methyl]amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</Jpyrimidin-4-aminu
Způsob A *H NMR (DMSO-ds, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,04 (m, 2H), 6,95 (s, 1H), 6,69 (d, 1H), 5,99 (t, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,50 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 15,04 minut.
MS: MH+ 567.
Příklad 469 diacetát /ra«.v-3-(3-methoxy-4-[(2-methyl-l,3-thiazol-4-yl)methyl]aminofenyl)-l-[4-(4methyIpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</Jpyrimidin-4-aminu
a) 2-methyl-1,3-thiazol-4-karbaldehyd
Do roztoku 4-chlormethyl-2-methyl-1,3-thiazolu (1,91 g, 0,0129 mol) v toluenu (50 ml) se přidá V-methylmorpolin-V-oxid (4,55 g, 0,0389 mol) a reakční směs se zahřívá při í> «
444 teplotě 90°C po dobu 4 hodin. Přidá se A-methylmorpolin-A-oxid (1,60 g, 0,0137 mol) a v zahřívání se pokračuje další 1,5 hodiny. Směs se ochladí na pokojovou teplotu, promyje vodou (3x50 ml) a koncentruje, čímž se získá 2-methyl-l,3-thiazol-4-karbaldehyd (1,40 g, 0,011 mol) ve formě hnědé tekutiny.
NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 9,87 (s, IH), 8,57 (s, IH), 2,72 (s, 3H).
TLC (ethylacetát/heptan 1:3) Rf0,26.
b) diacetát /ra«s-3-(3-methoxy-4-[(2-methyl-l,3-thiazol-4-yl)methyl]aminofenyl)-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1] -1 A-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidin-4-aminu Způsob A *H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,21 (s, IH), 7,06 (m, 2H), 6,66 (d, IH), 5,70 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,41 (d, 2H), 3,87 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,71 minut.
MS: MH+ 548.
Příklad 470 diacetát trans-3-(4-[(l A-7-indolylmethyl)amino]fenyl}-1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 A-pyrazolo [3,4-g/]pyrimidin-4-aminu
Způsob C (Obecný způsob reduktivní alkylace Zra«5-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-tíQpyrimidin-4-aminu) ’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 11,14 (s, IH), 8,18 (s, IH), 7,44 (d, IH), 7,37 (m, 3H), 7,12 (d, IH), 6,97 (t, IH), 6,77 (d, 2H), 6,55 (t, IH), 6,46 (m, IH), 4,60 (m, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,68 minut.
MS: MH+ 536.
t f)
445
Příklad 471 diacetát/ra«5-3-{4-[(2-chlor-6-fluorbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4methy lpiperazino)cyklohexylj-1 //-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-4-aminu
Způsob C *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,41 (m, 4H), 7,29 (t, 1H), 6,83 (d, 2H), 6,26 (t, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,37 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,46 minut.
MS: MH+ 549.
Příklad 472 diacetát /ra«5-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(4-[(5-methyl-l//-4pyrazolyl)methyl]aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu
Způsob C *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,76 (d, 2H).6,07 (t, 1H), 4,59 (m, 1H), 4,06 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,21 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 10,15 minut.
MS:MH+501.
Příklad 473 diacetát /ra«5-3-{4-[(2-aminobenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 //-pyrazoio[3,4-</]pyrimidin-4-atninu
a) /erc-butyl-A-[2-(hydroxymethyl)fenyl]karbamát
Do roztoku di-/erc-butyl-dikarbonátu (23,04 g, 0,106 mol) v bezvodém dichlormethanu (150 ml) při teplotě 0°C se přidá roztok 2-aminobenzylalkoholu (10,0 g, 0,0812 mol) a výsledná směs se míchá pod atmosférou dusíku při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (2x250 ml), suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku.
446
Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (1:5) jako mobilní fázi, čímž se získá fórc-butyl-V-[2(hydroxymethyl)fenyl]karbamát (17,2 g, 0,077 mol) ve formě bezbarvého oleje.
‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,52 (s, ÍH), 7,57 (d, ÍH), 7,30 (d, ÍH), 7,22 (t, ÍH), 7,04 (t, ÍH), 5,42-(t, ÍH), 4,51 (d, 2H), 1,46 (s, 9H).
TLC (ethylacetát/heptan 1:3) Rf 0,28.
b) terc-butyl-W-(2-formylfenyl)karbamát
20% Disperze pyridinium-chlorochromátu v bazické alumině (50 g) se přidá do roztoku férc-butyl-/V-[2-(hydroxymethyl)fenyl]karbamátu (11,0 g, 0,0493 mol) v bezvodém chloroformu a výsledná suspenze se míchá pod atmosférou dusíku při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny. Přidá se dalších 16 g 20% disperze pyridinium-chlorochromátu v bazické alumině a v míchání se pokračuje po dobu 45 minut. V tomto bodě se přidá dalších 15 g 20% disperze pyridinium-chlorochromátu v bazické alumině a v míchání se pokračuje po dobu 25 minut. Výsledná suspenze se filtruje přes vrstvu silikagelu, filtrát se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (2:98) jako mobilní fázi, čímž se získá tercbutyl-V-(2-formylfenyl)karbamát (8,67 g, 0,0392 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,31 (s, ÍH), 9,95 (s, ÍH), 8,18 (d, ÍH), 7,87 (d, ÍH), 7,67 (t, ÍH), 7,24-(t, ÍH), 1,49 (s, 9H).
TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf0,56.
c) acetát řra«e-terc-butyl-V-2-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}anilino)methyl]fenylkarbamátu
Způsob C *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,69 (s, ÍH), 8,18 (s, ÍH), 7,33 (m, 4H), 7,18 (t, ÍH), 7,12-(t, ÍH), 6,68 (d, 2H), 6,51 (t, ÍH), 4,58 (m, ÍH), 4,30 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,47 (s, 9H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,73 minut.
d) diacetát tr««.s-3-{4-[(2-arninobenzyl)arnino]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu
447
Acetát /ríz«5-fórc-butyl-[(4-4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cykIohexyl]-lpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-ylanilino)methyl]fenylkarbamátu (0,080 g, 0,000118 mol) se rozpustí v dichlormethanu (4 ml) při teplotě 0°C a po kapkách se přidá trifluoroctová kyselina (1 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny, koncentruje za sníženého tlaku a zbytek čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát Zra«5-3-{4-[(2-aminobenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/ř-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,067 g, 0,000106 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,35 (d, 2H), 7,09 (d, IH), 6,95 (t, IH),
6,73 (d, 2H), 6,66 (d, IH), 6,53 (d, IH), 6,36 (t, IH), 4,97 (br, IH), 4,58 (m, IH), 4,13 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 11,87 minut.
MS:MH+512.
Příklad 474 diacetát Zra«5-Vl-2-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cykIohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}anilino)methyl]fenylacetamidu
Do roztoku diacetátu /ra«s-3-{4-[(2-aminobenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyI]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,050 g, 0,000079 mol) v dichlormethanu (3 ml) při teplotě 0°C se postupně přidá N, V-diizopropylethylamin (0,041 g, 0,000316 mol) a anhydrid kyseliny octové (0,011 g, 0,000103 mol) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát Zra«5'-Vl-2-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}anilíno)methyl]fenylacetamidu (0,010 g, 0,0000148 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,48 (s, IH), 8,18 (s, IH), 7,35 (m, 4H), 7,20 (m, IH), 7,13 (m, IH), 6,66 (d, 2H), 6,53 (t, IH), 4,58 (m, IH), 4,29 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
448
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 μιη, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 10,67 minut.
MS: MH+ 554.
Příklad 475 acetát trans-3 - [3 -chlor-4-(2,3 -dihydrobenzo [ů]furan-3 -ylamino)fenyl] -1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu
a) /erc-butyl-V-(4-brom-2-chlorfenyl)karbamát
Roztok 4-brom-2-chloranilinu (5,00 g, 0,0242 mol) v tetrahydrofuranu (50 ml) se nechá reagovat s 1,OM roztokem bis(trimethylsilyl)amidu sodného v tetrahydrofuranu (53,2 ml, 0,0532 mol). Směs se míchá 15 minut při pokojové teplotě, přidá se di-tercbutyl-dikarbonát (6,34 g, 0,0290 mol) a roztok se míchá po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a surová látka se ěistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi heptanu a ethylacetátu (4:1). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá tercbutyl-V-(4-brom-2-chlorfenyl)karbamát ve formě bílé pevné látky (4,214 g, 0,0137 mol).
‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,75 (s, IH), 7,71 (d, IH), 7,54 (d, IH), 7,50 (dd, 5H),
1.46 (s, 9H); TLC (heptan/ethylacetát 4:1) Rf0,54.
b) fórc-butyl-V-[2-chlor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamát
Směs /erc-butyl-V-(4-brom-2-chlorfenyl)karbamátu (2,10 g, 0,00685 mol), diboronpinakolesteru (2,09 g, 0,00822 mol), [l,r-bis(difenylfosfino)ferrocenjdichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,17 g, 0,00021 mol) a octanu draselného (2,02 g, 0,02055 mol) v N,JV-dimethylformamidu (50 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje heptanem (70 ml) a výsledné pevné látky se odstraní filtrací přes vrstvu celitu. Heptan se odstraní za vakua, čímž se získá íerc-butyl-V-[2-chlor4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát ve formě šedé pevné látky (1,93 g, 0,00546 mol).
*H NMR (DMSO-dé 400 MHz) δ 8,65 (s, IH), 7,74 (d, IH), 7,61 (d, IH), 7,56 (dd, IH),
1.47 (s, 9H), 1,29 (s, 12H).
449
c) trans-terc-butyl-N-(4~{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo [3,4-/]py rimidin-3 -y 1} -2-chlorfenyl)karbamát
Směs rrans-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (2,20 g, 0,00498 mol), Zerc-butyl-;V-[2-chlor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,93 g, 0,00548 mol), uhličitanu sodného (1,32 g, 0,01245 mol) v 1,2-dimethoxyethanu (50 ml) a vodě (100 ml) se intenzivně míchá a přidá se tetrakis(trifenylfosfín)paHadium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakční směs se míchá po dobu 6 hodin při teplotě 80°C, po kterých se přidá další tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,345 g, 0,00030 mol) se přidá. Reakční směs se míchá dalších 16 hodin při teplotě 80°C. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (100 ml) a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (200 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (3 x 75 ml). Spojené organické fáze se suší síranem sodným a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu, methanolu a hydroxidu amonného (90:10:0,5). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá Zra«ó-fórc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)karbamát ve formě bílé pevné látky (1,993 g, 0,00368 mol).
*H NMR (DMSO-d6 400 MHz) δ 8,76 (s, 2H), 8,23 (s, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,57 (dd, 1H), 4,58-4,71 (m, 1H), 2,15 (2,3H), 1,89-2,61 (m, 15H), 1,49 (s, 9H), 1,40-1,48 (tn, 2H);
TLC (dichlormethan/methanol = 90:10) Rf 0,13.
MS:MH+541.
d) P*<w-3-(4-amino-3-chlorfenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-amin
Trans-terc-buty\-N-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)karbamát (1,993 g, 0,00368 mol) se přidá do roztoku 20% trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu. Směs se míchá po dobu 2 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se rozpustí v dichlormethanu (50 ml) a promyje s l,0M vodným roztokem hydroxidu sodného (2 x 25 ml). Organická vrstva se suší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá /ra«s-3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyí]-lH-pyrazolo[3,4djpyrimidin-4-amin (1,564 g, 0,00355 mol) ve formě bílé pevné látky.
e 9 C • « * c ? r e e ř, a íi ©o e < v * * e « g ť e e © e * „ „ - ť. c *·. r- © e e e í © « β o G © ® V <- c n
450 ’Η NMR (DMSO-de 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,45 (d, IH), 7,31 (dd, IH), 6,92 (d, IH), 4,57-4,63 (m, IH), 2,23-2,55 (m, 9H), 2,14 (s, 3H), 1,89-2,08 (m, 6H), 1,38-1,52 (m, 2H); TLC (dichlormethan/methanol = 90:10) Rf 0,08.
MS:MH+441.
e) acetát Zra«5-3-[3-chIor-4-(2,3-dihydrobenzo[ó]furan-3-ylamino)fenyl]-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyriiiiidin-4-aminu
Salicylaldehyd (0,033 g, 0,000274 mol) a /ram-3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,115 g, 0,000261 mol) se smíchají v absolutním ethanolu a míchají při pokojové teplotě po dobu 48 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek suší přes noc, čímž se získá trans-2-[(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1H- pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin3-yl}-2-chlorfenyl)imino]methylfenol, který se používá bez dalšího čištění. Trimethylsulfoxonium-jodid (0,110 g, 0,0005 mol) se rozpustí v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a najednou se přidá 60% disperze hydridu sodného v parafínu (0,02 g, 0005 mol). Po 10 minutách se přidá roztok /ra«s-2-[(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2chlorfenyl)imino]methylfenolu v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2,5 hodin, roztok se nalije do ledové vody (50 ml) a extrahuje dichlormethanem (2x40 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát tra«5-3-[3-chlor-4-(2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3ylamino)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4aminu (0,044g, 0,000071 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,21 (s, IH), 7,55 (s, IH), 7,45 (d, IH), 7,38 (d, IH), 7,25 (t, IH), 7,11 (d, IH), 6,89 (m, 2H), 5,70 (d, IH), 5,54 (m, IH), 4,83 (t, IH), 4,61 (m, IH), 4,41 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,94 minut.
MS: MH+ 559.
<· < · v
451
Příklad 476 diacetát /r«tty-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[Z>]furan-3-ylamino)-3-methoxyfenyl]-1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu
Salicylaldehyd (0,034 g, 0,000282 mol) a /ra«s-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin (0,117 g, 0,000268 mol) se smíchají v absolutním ethanolu a míchají při pokojové teplotě po dobu 48 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek suší přes noc, čímž se získá trans-2-[(4- {4-amino-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin3-yl}-2-methoxy feny l)imino]methylfenol, který se používá bez dalšího čištění. Trimethylsulfoxonium-jodid (0,145 g, 0,00068 mol) se rozpustí v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a najednou se přidá 60% disperze hydridu sodného v parafínu (0,027 g, 00068 mol). Po 10 minutách se přidá roztok trans-2-[(4-(4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny l)iminojmethylfenolu v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2,5 hodiny. Roztok se nalije do ledově studené vody (50 ml) a extrahuje dichlormethanem (2 x 40 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersií Cl8, 8 pm, 25 cm; 10%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát íra«5-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[/>]furan-3ylamino)-3 -methoxyfenyl] -1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-aminu (0,096 g, 0,000142 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,21 (s, 1H), 7,38 (d, 1H), 7,25 (t, 1H), 7,11 (m, 2H), 6,89 (m, 3H), 5,42 (m, 1H), 5,18 (d, 1H), 4,77 (t, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,37 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,16 minut.
MS: MH+ 555.
Příklad 477 diacetát /ra«s-3-[4-(3-methyl-5-fenyl-1 Η-1 -pyrazolyl)fenyl]-1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu • · « ·
452
a) l-(4-bromfenyl)-3-methyl-5-fenyl-4,5-dihydro-lA-pyrazol
Do roztoku 1-benzoylacetonu (3,63 g, 0,0224 mol) a ΛζΑ-diizopropylethylaminu (2,88 g, 0,0224 mol) v bezvodém methanolu (160 ml) se přidá hydrochloridu
4- bromfenylhydrazinu a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledná směs se rozdělí mezi 5% roztok kyseliny citrónové ve vodě (200 ml) a ethylacetát (150 ml). Organická fáze se postupně promyje vodou (2x200 ml) a solankou (150 ml), suší síranem hořečnatým a koncentruje. Výsledný zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (5:95) jako mobilní fázi, čímž se získá l-(4-bromfenyl)-3-methyl5- fenyl-4,5-dihydro-l A-pyrazol (4,05 g, 0,0129 mol) ve formě bělavé pevné látky.
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,58 (d, 2H), 7,36 (m, 3H), 7,21 (d, 2H), 7,17 (d, 2H), 6,46 (s, ÍH), 2,72 (s, 3H).
TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf 0,41.
b) 3-methyl-5-fenyl-l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-4,5dihydro-1 A-pyrazol
Směs l-(4-bromfenyl)-3-methyl-5-fenyl-4,5-dihydro-lA-pyrazolu (2,17 g, 0,00693 mol), diboronpinakolesteru (2,11 g, 0,00832 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,170 g, 0,000207 mol) a octanu draselného (2,03 g, 0,0207 mol) v W-dimethylformamidu (50 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (70 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (7:93) jako mobilní fázi. Výsledné frakce se koncentrují. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát se spojí filtrací, čímž se získá 3-methyl-5-fenyl1-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-4,5-dihydro-l A-pyrazol (1,00 g, 0,00278 mol) ve formě bílé pevné látky.
'H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 7,65 (d, 2H), 7,36 (m, 3H), 7,21 (m, 4H), 6,46 (s, ÍH), 2,79 (s,3H), 1,29 (s, 12H).
TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf 0,27.
• *
453
c) diacetát trans-3 -[4-(3 -methyl-5-fenyl-1 Η-1 -pyrazolyl)fenyl]-1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]~ 1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu
Směs 3-methyl-5-fenyl-l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l, 3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]4,5-dihydro-l//-pyrazolu (0,102 g, 0,000283 mol), trara-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,104 g, 0,000236 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,016 g, 0,000014 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,073 g, 0,00055 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát R««s-3-[4-(3-methyl-5-fenyl-l//-lpyrazolyl)feny 1]-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</|pyrÍmidin-4aminu (0,094g, 0,000141 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,37 (m, 7H), 6,49 (s, 1H), 4,63 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,30 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 14,10 minut.
MS: MH+ 548.
Příklad 478 acetát trans-3-[4-(5-ethoxy-1 Η-1 -pyrazolyl)feny 1]-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 //-pyrazolo [3,4-£/]pyrimidin-4-aminu
a) 1 -(4-bromfenyl)-1H- 5 -pyrazoly lethyletheru
Ethylacetoacetát (3,49 g, 0,02684 mol) a hydrochlorid 4-bromfenylhydrazinu (6,00 g, 0,02684 mol) se refluxuje v kyselině octové (50 ml) po dobu 4 hodin. Precipitát se odstraní filtrací, filtrát koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a n-heptanu (7:93) jako mobilní fázi, čímž se získá l-(4-bromfenyI)-l//-5-pyrazolyIethylether (2,63 g, 0,00936 mol) ve formě bělavé pevné látky.
*H NMR (CDCl3-d6, 400 MHz) δ 7,61 (d, 2H), 7,49 (d, 2H), 7,26 (s, 1H), 5,47 (s, 1H).4,14 (q, 2H), 2,26 (s, 3H), l,44-(t, 3H).
e* © e© ť * β -β 0* • t c o 9 e © · · • « © «· ©« ® # · · · e · β « © * 0 « β « © 0 © ©«« »·«©··· * * *· * · ···0
454
TLC (ethylacetát/heptan 1:9) Rf 0,24
b) 5-ethoxy-3-methyl-l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3-dioxolan-2-yl)fenyl]-17/-pyrazol
Směs l-(4-bromfenyl)-l//-5-pyrazolylethyletheru (2,22 g, 0,00791 mol), diboronpinakolesteru (2,41 g, 0,00949 mol), [l,l'-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,194 g, 0,000237 mol) a octanu draselného (2,32 g.0,0237 mol) v N,N-dimethyIformamidu (60 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá dichlormethan (70 ml) a výsledná pevná látka se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje za vzniku žlutého oleje, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu a «-heptanu (7:93) jako mobilní fázi. Výsledné frakce se koncentrují. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá
5-ethoxy-3-methyl-l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3-dioxolan-2-yl)fenyl]-l//-pyrazol (0,604 g, 0,00184 mol) ve formě bílé pevné látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,72 (s, 4H), 5,72 (s, 1H), 4,18 (q, 2H), 2,16 (s.3H), 1,37 (t, 3H), 1,29 (s, 12H).
TLC (ethylacetát/heptan 1:9) Rf 0,18
c) acetát /ra«s-3-[4-(5-ethoxy-17/-l-pyrazolyl)fenyl]-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</jpyrimidin-4-aminu
Směs 5-ethoxy-3-methyl-l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3-dioxolan-2-yl)fenyl]-lHpyrazolu (0,062 g, 0,00019 mol), Cra«.s--3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-17/pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,070 g, 0,000159 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,011 g, 0,0000095 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,049 g, 0,000398 mol) se zahřívá ve směsi ethylenglykoldimethyletheru (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát Zra«A'-3-[4-(5-ethoxy-lN-l-pyrazolyl)fenylj-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lZ/-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (0,037 g, 0,000064 mol) ve formě bílé pevné látky.
0· <>
« * *
455 *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,85 (d, 2H), 7,71 (d, 2H), 5,75 (s, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,21 (q, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,18 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H), 1,40 (t, 3H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,59 minut.
MS: MH+516.
Příklad 479 diacetát trans-1 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-3 -methy 1-4,5 -dihydro-1 A-pyrazolonu
Roztok acetátu trans-3 - [4-(5 -ethoxy-1 A-1 -pyrazolyl)fenyl] -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-4-ammu (0,100 g, 0,000194 mol) v 30% kyselině bromovodíkové v kyselině octové (2,5 ml) se zahřívá pod refluxem po dobu 1,5 hodiny. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek neutralizuje koncentrovaným roztokem hydroxidu amonného ve vodě. Výsledná suspenze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 5-45% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát trans-1 -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1Apyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -y 1} fenyl)-3 -methyl-4,5 -dihydro-1A-5 -pyrazolonu (0,066 g, 0,00011 mol) ve formě bílé pevné látky.
*H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 8,02 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 4,64 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,53 (s, 2H), 2,21 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5p m, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 9, 34 minut.
MS: MH+ 488.
Příklad 480 acetát 2-(2-amino-1 A-1 -imidazolyl)-1 - {3 -[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4d] pyrimidin-1 -yl] -1 -azetanyl} -1 -ethanonu # ·
456
Do směsi 1 -(3 -azetanyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/)pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00014 mol) a uhličitanu draselného (0,039 g, 0,00028 mol) v bezvodém VV-dimethylformamidu (3 ml) se přidá chloracetylchlorid (0,0031 g, 0,00028 mol) při pokojové teplotě. Před přidáním 2-aminoimidazolsulfátu (0,18 g, 0,0014 mol) a uhličitanu draselného (0,19g, 0,0014 mol) se směs míchá po dobu 10 minut. Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 dnů, pak se zahřívá při teplotě 60°C po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá acetát 2-(2-amino-l//-l-imidazolyl)1 -{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl}-1 ethanonu (0,006 g, 0,00001 mol).
*H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 8, 27 (s, 1H), 7,71 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 6,55 (s, 1H), 6,36 (s, 1H), 5,76 (m, 1H), 5,30 (s, 2H), 4,59 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 1,90 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,1 minut.
MS: MH+ 482.
Příklad 481
- { 3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-1 -y 1]-1 -azetanyl} -3 - [(2hydroxyethy l)amino] -1 -propanon
a) terc-butyl- V-(3 - { 3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] 1 -azetanyl} -3 -oxopropy l)-V-(2-hydroxyethyl)karbamát
Směs 1 -(3 -azetanyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00014 mol), 3-[(terc-butoxykarbonyl)(2-hydroxyethyl)amino]propanové kyseliny (0,038 g, 0,000175 mol), hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (0,034 g, 0,000175 mol), W-diizopropylethylaminu (0,034 g, 0,00026 mol) a 1-hydroxy7-azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodém dichlormethanu (5 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá terc-butyl-V-(3-{3-[4-amino© ©
457
-(4-fenoxy fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-1 -yl] -1 -azetanyl} -3 -oxopropyl)-A-(2hydroxyethyl)karbamát (0,040 g, 0,000070 mol).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 10,3 minut.
MS: MH+ 574.
b) 1 - { 3 - [4-amino-3 - (4-fenoxy fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4 -djpyrimidin-1 -y 1]-1 -azetanyl} 3 - [(2-hydroxyethyl)aminoJ-1 -propanon
Vodný roztok hydrochloridu (2 ml, 6N) se přidá do směsi Zerc-butyl-A-(3-{3-[4amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-l-yl]-l-azetanyl}-3-oxopropyl)-A(2-hydroxyethyl)(2-hydroxyethyl)karbamátu (0,040 g, 0,000070 mol) v acetonu (5 ml). Směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 1,5 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a do zbytku se přidá voda. Směs se lyofilizuje. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lApyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl]-l-azetanyl}-3-[(2-hydroxyethyl)amino]-l-propanon (0,003 g, 0,00001 mol).
*H NMR (DMSO-dg,400 MHz) eS 8,27 (s, IH), 7,69 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 5,70 (m, IH), 4,67 (m, IH), 4,57 (m, IH), 4,40 (m, IH), 4,31 (m, IH), 3,40 (m, 2H), 2,74 (m, 2H), 2,51 (m, 2H), 2,29 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,7 minut.
MS: MH+ 474.
Příklad 482 acetát 2-(2-amino-1 A-1 -imidazolyl)-1 - {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4JJpyrimidin-1 -yljpiperidino} -1 -ethanonu
Do směsi 3-(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00013 mol) a uhličitanu draselného (0,036 g, 0,00026 mol) v bezvodém Α,Α-dimethylformamidu (3 ml) se přidá chloracetylchlorid (0,028 g, 0,00026 mol) při pokojové teplotě. Před přidáním 2-aminoimidazolsulfátu (0,18 g, 0,0014 mol) a uhličitanu draselného (0,19 g, 0,0014 mol) se směs míchá po dobu 10 minut, při pokojové teplotě se r- ο
458 míchá po dobu 18 hodin a pak zahřívá při teplotě 60°C po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s O,1M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá acetát 2-(2-amino-l/f-l-imidazolyl)-l-{4[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]piperidino}-l-ethanonu (0,015 g, 0,00003 mol).
*H NMR (DMSO-ds,400 MHz) δ 8,26 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,17 (m, 5H), 6,52 (s, 1H), 6,38 (s, 1H), 5,49 (br, 2H), 4,99 (m, 1H), 4,76 (m, 2H), 4,59 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 2,80 (m, 1H), 2,20 (m, 1H), 1,99 (m, 3H), 1,90 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,4 minut.
MSiMH+SlO.
Příklad 483
- {4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-1 -y ljpiperidino} -2- [(2 hydroxyethy ljamino]-1 -ethanon
Do směsi 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00013 mol) a uhličitanu draselného (0,036 g, 0,00026 mol) v bezvodém W-dimethylformamidu (3 ml) se přidá chloracetylchlorid (0,028 g, 0,00026 mol) při pokojové teplotě. Před přidáním ethanolaminu (0,078 ml, 0,0013 mol) se směs míchá po dobu 10 minut. Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí by RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá l-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]piperidino}-2-[(2-hydroxyethyl)amino]-l-ethanon (0,022 g, 0,00005 mol).
*H NMR (DMSO-ds,400 MHz) δ 8,26 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,17 (m.5H), 5,03 (br, 1H), 5,00 (br, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,87 (m, 2H), 3,64 (m, 2H), 2,96 (m, 2H), 2,92 (m, 2H), 2,17 (m, 1H), 1,90 (m, 3H).
«-· e í> f<
459
RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,0 minut.
MS:MH+488.
Příklad 484
Syntéza 1- {4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)- l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yl]piperidino} 3-[(2-hydroxyethyl)amino]-1 -propanon
Zerc-buty l-V-(3 - {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 yl]piperidino}-3-oxopropyl)-yV-(2-hydroxyethyl)karbamát
Směs 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidy 1)-1 //-pyrazolo [3,4-cř|pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00013 mol), 3-[(/erc-butoxykarbonyl)(2-hydroxyethyl)amino]propanové kyseliny (0,038 g, 0,000163 mol), hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3ethylkarbodiimidu (0,031 g, 0,000163 mol), N, V-diizopropylethylaminu (0,031 g, 0,00024 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,018 g, 0,00013 mol) v bezvodém dichlormethanu (5 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá tercbutyl-V-(3-{4-[4-ammo-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]piperidino}3-oxopropy l)-/V-(2-hydroxy ethyl )karbamát (0,050 g, 0,000083 mol).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 10,4 minut.
MS: MH+ 602.
b) 1 - {4- [4-amino-3 -(4-fenoxy feny l)-l//-pyrazolo [3,4-</jpyrimidin-1 -y ljpiperidino }-3[(2-hydroxyethyl)amino]-1 -propanon
Vodný roztok hydrochloridu (2 ml, 6N) se přidá do směsi Zerobutyl-V-(3-{4-[4amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]piperidino}-3-oxopropyl)-V(2-hydroxyethyl)karbamátu (0,050 g, 0,000083 mol) v acetonu (5 ml). Směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 1,5 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá voda (10 ml) a směs se lyofilizuje. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 • ♦ ~ « · e · » · · * « • © e c * * e * ® • © «» <?»·«· 9 · • r ® φ · · ♦ · ♦ « α · c 0 e · «· *· ·· ··**
460 ml/min), čímž se získá l-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-lyl]piperidino}-3-[(2-hydroxyethyl)amino]-l-propanon (0,014 g, 0,00003 mol).
'H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,25 (s, ÍH), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 4,98 (m, ÍH), 4,52 (m, 2H), 4,04 (m, ÍH), 3,31 (m, 2H), 2,81 (m, 2H), 2,78 (m, ÍH), 2,74 (m, 2H), 2,58 (m, 2H), 1,99 (m, ÍH), 1,90 (m, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,1 minut.
MS: MH+ 502.
Příklad 485
Syntéza 2- {4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 yljpiperidino} octové kyseliny
a) terc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-lyl]piperidino}acetát
Do směsi 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4 -J]pyrimidin-4-aminu (0,10 g, 0,00026 mol, 1 ekviv.) a uhličitanu draselného (0,072 g, 0,000526 mol, 2 ekviv.) v bezvodém Α,Α-dimethylformamidu (8 ml) se přidá ferc-butyl-2-bromacetát (0,0768 g, 0,00039 mol, 1,5 ekviv.) při pokojové teplotě. Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (5 ml) a promyje vodou (3 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi methanolu a dichlormethanu (5:95) jako mobilní fázi, čímž se získá terc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-l-yl]piperidino}acetát (0,10 g, 0,0002 mol). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 11,8 minut.
MS: MH+ 501.
2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]piperidino}octové kyseliny
Vodný roztok hydrochloridu (2 ml, 6N) se přidá do směsi terc-butyl-2-{4-[4amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-t7]pyrimÍdin-1 -yljpiperidino} acetátu (0,10 g,
0,0002 mol) v acetonu (5 ml). Směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 2 hodin.
€ ©
461
Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá voda (10 ml) a směs se lyofilizuje, čímž se získá 2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lV-pyrazolo[3,4-</]pyrimidinl-yl]piperidino}octová kyselina (0,010 g, 0,0002 mol).
*H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 8,50 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,43 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 5,07 (m, 1H), 4,02 (s, 2H), 3,50 (br, 2H), 3,42 (br, 2H), 2,53 (br, 2H), 2,25 (br, 2H). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,7 minut.
MS:MH+445.
Příklad 486
VI -(1 V-2-imidazoly 1)-2 - { 4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-1 yljpiperidino} acetamid
Směs 2-{4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -y 1 j p iper idino} octové kyseliny (0,06 g, 0,00013 mol), 2-aminoimidazolsulfátu (0,022 g, 0,000163 mol), hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (0,031 g, 0,000163 mol), V,V-diizopropylethylaminu (0,047 g, 0,00036 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,018 g, 0,00013 mol) v bezvodém dichlormethanu (8 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Přidá se další 2-aminoimidazolsulfát (0,022 g, 0,000163 mol), hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (0,031 g, 0,000163 mol), V V-diizopropy lethy laminu (0,047 g, 0,00036 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,018 g, 0,00013 mol) a směs se míchá po dobu 18 hodiny při pokojové teplotě. Směs se zahřívá při teplotě 50°C po dobu 6 hodin, pak míchá při pokojové teplotě po dobu 2 dnů. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl 8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá Vl-(lV-2-imidazolyl)-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lVpyrazolo[3,4-6/]pyrimidin-l-yl]piperidino}acetamid (0,005 g, 0,00001 mol).
‘H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,43 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 6,80 (br, 1H), 6,70 (br, 1H), 4,80 (br, 1H), 3,06 (s, 2H), 3,05 (m, 2H), 2,43 (m, 2H), 2,33 (m, 2H), 1,92 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,2 minut.
MS:MH+510.
462
Příklad 487 maleát Zra«ó-Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxy fenyl} -2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamidu
a) benzyl-4-(4-amino-3-jod-l A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-l -yl)-1 -piperidinkarboxylát
Do směsi dihydrochloridu 3-jod-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4aminu (13,86 g, 0,0333 mol) a hydrogenuhličitanu sodného (8,4 g, 0,0999 mol) ve vodě (140 ml) se přidá benzylchloroformiát (6,48 g, 0,0383 mol) v dioxanu (120 ml) při pokojové teplotě. Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin, žluté pevné látky se filtrují a promyjí ethyletherem, čímž se získá benzy 1-4-(4amino-3-jod-l A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylát (12 g, 0,025 mol). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 10,5 minut.
MS:MH+479.
b) benzyl-4-(4-amino-3-{4-[(/erc-butoxykarbonyl)amino]-3-methoxyfenyl}-lApyrazolo [3,4-d]py rimidin-1 -y 1)-1 -piperidinkarboxylát
Směs benzy l-4-(4-amino-3 -j od-1 A-pyrazolo [3,4-í/jpyrimidin-1 -y 1)-1 -piperidinkarboxylátu (7,0 g, 0,0146 mol), terc-butyl-A-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (6,15 g, 0,0176 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (1,0 g, 0,000876 mol) a uhličitanu sodného (3,9 g, 0,0365 mol) v ethylenglykoldimethyletheru (170 ml) a vodě (70 ml) se zahřívá při teplotě 75°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Po přidání Zerc-butyl-V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (6,15 g, 0,0176 mol, 1,2 ekviv.) a tetrakis(trifenylfosfin)palladia (1,0 g, 0,000876 mol) se směs míchá při teplotě 85°C po dobu dalších 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a ethylenglykoldimethylether se odstraní za sníženého tlaku. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (3 x 150 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší síranem sodným. Rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku za vzniku nahnědlé pevné látky, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 20%-40% ethylacetátu a dichlormethanu, poté 2%-5% methanolu a dichlormethanu jako mobilní fázi, čímž se získá ř’ « ' c e e c- f. e e r e f.
’ ' » * ' · . ‘ ur ‘ e clo
463 benzyl-4-(4-amino-3 - {4- [(/erc-butoxy karbony l)amino] -3 -methoxy fenyl} -1 A-pyrazolo [3,4tíř]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylát (8,0 g, 0,014 mol).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 12,6 minut.
MS: MH+ 574.
c) benzyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</jpyrimídin-1 yl] -1 -piperidinkarboxylát
Do směsi benzyl-4-(4-amíno-3 - {4- [(férc-butoxykarbonyl)amino] -3 -methoxyfeny 1} lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylátu (7,68 g, 0,0134 mol) v dichlormethanu (10 ml) se přidá 25 % roztok kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu při teplotě 0°C. Směs se míchá pod atmosférou dusíku při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se ochladí na teplotu 0°C a alkalizuje vodným 5N roztokem hydroxidu sodného. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 150 ml). Spojená organická vrstva se promyje vodou a solankou a suší síranem sodným. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá benzyl-4-[4-amino-3-(4-amino3-methoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-<7jpyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylát (6,02 g, 0,0127 mol).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 10,3 minut.
MS: MH+ 474.
d) tra«5-benzyl-4- [4-amino-3 -(3 -methoxy-4- {[(2-fenylcyklopropyl)karbonyl]amino} fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-1 -yl]-1 piperidinkarboxylát
Do směsi benzyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (3,0 g, 0,0063 mol) v pyridinu (100 ml) se přidá racemát tra«s,-2-fenyl-cyklopropankarbonylchloridu (1,163 g, 0,007 mol) při teplotě -5°C. Směs se míchá při teplotě -5°C po dobu 10 minut, pak se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá po dobu 1,5 hodiny. Směs se zháší vodným IN roztokem hydroxidu sodného. Organická rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi vodu (200 ml) a ethylacetát (200 ml). Organická vrstva se promyje 5% vodným roztokem kyseliny citrónové (3 x 100 ml), IN vodným roztokem hydrochloridu (3 x 100 ml), vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší síranem « *
V i!
«
C fí β Z<;. « · β * © o $ « (: © * « $ c ř $ © © ©6® »» «· · · « « « ·
464 sodným. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá /ra«s-benzyl-4-[4amino-3-(3 -methoxy-4- {[(2-fenylcyklopropyl)karbonyl]amino} fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-l-yl]-lpiperidinkarboxylát (3,47 g, 0,006 mol).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 11,5 minut.
MS:MH+618.
e) maleát trans-Nl - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxy feny 1} -(1 S,2S)/(1 R,2R)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamidu
Směs /ram-benzyl-4-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(2-fenylcyklopropyl)karbonyl]amino}fenyl)-lA-pyrazolo[3,4-<i]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (3,4 g, 0,0055 mol) a 20 % hydroxidu palladnatého na aktivním uhlí (0,4 g) v ethanolu (150 ml) se míchá pod atmosférou vodíku při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Směs se filtruje a rozpouštědla se odstraní. Do zbytku se přidá 20 % hydroxid palladnatý na aktivním uhlí (0,4 g), kyselina octová (0,25 ml) v ethanolu (60 ml) a ethylacetát (40 ml). Směs se míchá pod atmosférou vodíku při pokojové teplotě dalších 18 hodin. Směs se filtruje a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 25%-50 % methanoiu a dichlormethanu, čímž se získá transNl-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxy fenyl} (15.25) /(lR,2R)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamidu (1,36 g, 0,0028 mol). 7rans-Al-{4[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}(15.25) /(lR,2R)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid (0,05 g, 0,000104 mol) v ethylacetátu (5 ml) se zahřívá při teplotě 40°C. Před přidáním do směsi se maleinová kyselina (0,00133 g, 0,000114 mol) rozpustí v horkém ethylacetátu. Směs se míchá při teplotě 40°C po dobu 10 minut, pak ochladí na pokojovou teplotu, bílé precipitáty se filtrují, čímž se získá maleát trans-Nl - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl]-2methoxy fenyl}-(15,25)/( lR,2R)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamidu (0,0044 g, 0,00001 mol).
‘H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 9,65 (s, 1H), 8,26 (m, 2H), 7,25 (m, 7H), 6,01 (d, 2H), 5,09 (br, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,48 (m, 2H), 3,18 (m, 2H), 2,61 (br, 1H), 2,37 (m, 3H), 2,13 (m, 2H), 1,50 (br, 1H), 1,34 (br, 1H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,0 minut.
φ * « · • · · ο · · t ·'»«-.
•· · ť« « » » e * »··£«»».. , »*»<· ·»· . j, * · · · · >· ·. ··.·.»,
465
MS: MH+ 484.
Příklad 488
Al -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 //-2-imidazolylmethy l)-4-piperidy 1]-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3-yl} -2-methoxyfenyl)-( 15,25)/( 1 R,2R)-2-fenyl-l -cyklopropankarboxamid
Směs Al-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl}-(lS,2S)/(lR,2R)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamidu (0,10 g, 0,00021 mol),
2-imidazolkarboxaldehydu (0,022 g, 0,00023 mol) a kyseliny octové (0,037 g, 0,0006 mol) v dichlorethanu (8 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny. Do směsi se přidá triacetoxyborohydridu sodného (0,133 g, 0,00063 mol) a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Do směsi se přidá další podíl kyseliny octové (0,037 g, 0,0006 mol), 2-imidazolkarboxaldehydu (0,011 g, 0,00012 mol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,133 g, 0,00063 mol) a směs se míchá po dobu 18 hodin. Reakce se zháší vodným 5N roztokem hydroxidu sodného. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi vodu a dichlormethan. Organická vrstva se promyje vodou a solankou. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s O,1M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá Al-(4-{4-amino-1-[ 1-(1//-2imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-1 Z/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)(15,25)/(17?,27?)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid (0,019 g, 0,000034 mol).
'H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 11,8 (br, 1H), 9,63 (s, 1H), 8,22 (m, 2H), 7,25 (m, 7H), 6,99 (br, 1H), 6,83 (br, 1H), 4,68 (br, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,56 (s, 2H), 2,93 (m, 2H), 2,58 (br, 1H), 2,37 (br, 1H), 2,22 (m, 3H), 1,90 (m, 3H), 1,50 (br, 1H), 1,30 (br, 1H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,4 minut.
MS: MH+ 564.
Příklad 489
Al -[4-(4-amino-1 - {1 - [(1 -methyl-1 //-2-imidazolyl)methyl]-4-piperidy 1} -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-( 1 S,2S)/( 1 R,2R)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid to to • c « · e e ··· * © t o « 8 « e · * * ·♦·©««« ·· ·* · · · t · ·
466
Směs Ni - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 H-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -y 1]-2methoxy fenyl}-(IS, 25)/( l/?,2/ř)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamidu (0,10 g, 0,00021 mol), l-methyl-2-Ímidazolkarboxaldehydu (0,025 g, 0,00023 mol) a kyseliny octové (0,037 g, 0,0006 mol) v dichlorethanu (8 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny. Do směsi se přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,133 g, 0,00063 mol) a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Reakce se zháší vodným 5N roztokem hydroxidu sodného. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi vodu a dichlormethan. Organická vrstva se promyje vodou a solankou. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 5 %-50% methanolu v dichlormethanu jako mobilní fázi, čímž se získá VI-[4-(4-amino-l-{ 1-[(1 -methyl-lH-2-imidazolyl)methyl]-4piperidyl} -1 H-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl)-2-methoxy feny 1]-(15,25)/( 17?,2Á)-2fenyl-1 cyklopropankarboxamid (0,070 g, 0,00012 mol).
’H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 9,63 (s, IH), 8,22 (m, 2H), 7,25 (m, 7H), 7,09 (s, IH), 6,75 (s, IH), 4,68 (br, IH), 3,90 (s, 3H), 3,68 (s, 3H), 3,20 (s, 2H), 2,93 (m, 2H), 2,58 (br, IH), 2,35 (br, IH), 2,24 (m, 4H), 1,89 (m, 2H), 1,50 (br, IH), 1,30 (br, IH).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,6 minut.
MS: MH+ 578.
Příklad 490
3-(3 -methoxy-4- {[(5 -methyl-2-furyl)methyl]amino} fenyl)-1 -(4-piperidyl)-1Hpyrazolo [3,4 -Jjpyrimidin-4-amin
a) benzyl-4-[4-amino-3 -(3 -methoxy-4- {[(5 -methyl-2-fury l)methyl] amino} fenyl)-1Hpyrazolo[3,4-r/jpyrimidin-1 -y 1]-1 -piperidinkarboxylát
Směs benzyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3 -methoxy fenyl)-1 H-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (3,0 g, 0,0063 mol), 5-methylfurfuralu (0,77 g, 0,007 mol) a kyseliny octové (1,15 g, 0,019 mol) v dichlorethanu (100 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny. Do směsi se přidá triacetoxyborohydrid sodný (4,1 g, 0,0195 mol) a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Reakce se zháší vodným 5N roztokem hydroxidu sodného. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva ť? ř- fc < · * e> e <3» «-· *' * c 6 · <- e 9> f «
C ©Γ'β © f.
- ' e » < r * » » » , , «· « e ·. « * . a i ' *· · · · <· « »· »»»».».
467 se extrahuje dichlormethanem (3 x 200 ml) a spojená organická vrstva se promyje vodou a solankou a suší síranem sodným. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 2%-5% methanolu v dichlormethanu jako mobilní fázi, čímž se získá benzyl-4-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(5methyl-2-íuryl)methyl]amino} fenyl)- l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1 -y 1] -1 piperidinkarboxylát (2,63 g, 0,0046 mol).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5p m, 300A, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 11,59 minut.
MS: MH+ 568.
b) 3 -(3-methoxy-4- {[(5 -methyl-2-furyl)methyl]amino} fenyl)-1 -(4-piperidyl)-1Hpyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin
Směs benzyl-4-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(5-methyl-2furyl)methy 1] amino} fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -y 1] -1 -piperidinkarboxy látu (0,18 g, 0,000317 mol) a 20% hydroxid palladnatý na aktivním uhlí (0,02 g) v ethylacetátu (10 ml) se míchá pod atmosférou vodíku při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Směs se filtruje a rozpouštědla se odstraní. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu ve směsi 5%-l 0 % methanolu a dichlormethanu (2 % NH4OH), čímž se získá 3(3 -methoxy-4- {[(5-methyl-2-furyl)methyl]amino} fenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 Z/~pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin (0,02 g, 0,000046 mol).
*H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,07 (m, 2H), 6,78 (m, 1H), 6,18 (s, 1H), 5,97 (s, 1H), 5,59 (m, 1H), 4,79 (br, 1H), 4,31 (m, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,16 (m, 2H), 2,74 (m, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,15 (m, 2H), 1,90 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,7 minut.
MS:MH+434.
Příklad 491
3-(3-methoxy-4-{[(5-methyl-2-řuryl)methyl]amino} fenyl)-1 -{1 -[(1 -methyl-1H-2imidazolyl)methyl]-4-piperidyl}-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin
Směs 3 -(3 -methoxy-4- {[(5-methyl-2-furyl)methyl]amino} fenyl)-1 - (4-pi peridy 1 )lH-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,045 g, 0,0001 mol), l-methyl-2β r <?C TV
C « / ' fc « < ’ ? * « c e c f e « r> © fc fc © Q
Φ ,- « « © fc <> fc © «· <; e a © e <* Ci © ť- e C {- fcfc fc fc © &
C © fc © © ť © © fc fc © ©
468 imidazolkarboxaldehydu (0,011 g, 0,00011 mol) a kyseliny octové (0,018 g, 0,0003 mol) v dichlorethanu (4 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny. Do směsi se přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,064 g, 0,0003 mol) a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Reakce se zháší vodným 5N roztokem hydroxidu sodného. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi vodu a dichlormethan. Organická vrstva se promyje vodou a solankou. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá 3-(3-methoxy-4-{[(5-methyl-2furyl)methyl]amino} fenyl)-1 - {1 - [(1 -methyl- l//-2-imidazolyl)methyl]-4-piperidyl} -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,03 g, 0,00006 mol).
'Η NMR (DMSO-dó,400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,16 (s, IH), 7,06 (m, 2H), 6,86 (s, IH), 6,77 (d, IH), 6,18 (s, IH), 5,98 (s, IH), 5,59 (m, IH), 4,67 (br, IH), 4,31 (m, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,66 (s, 2H), 2,96 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,18 (m, 2H), 1,91 (m,2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 9,5 minut.
MS: MH+ 528.
Příklad 492 trans-N\ -(4- {4-amino-l- [(4-hydroxy-4-piperidyl)methylj -1 //-pyrazolo [3,4-z/]pyrimidin-3 yl} -2-methoxyfenyl)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid a) /erc-butyl-4-[(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-l-yl)methyl]-4hydroxy-1 -piperidinkarboxylát
Směs 3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,86 g, 0,0033 mol), /erc-butyll-oxa-6-azaspiro[2,5]oktan-6-karboxylátu (0,7 g, 0,0033 mol) a uhličitanu česného (1,1 g, 0,0033 mol) v bezvodém A/V-dimethylformamidu (30 ml) se míchá při teplotě 60°C po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi vodu a dichlormethan (200 ml). Organická vrstva se promyje vodou a solankou a suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje dichlormethanem a pevná látka se filtruje, čímž se získá íerc-butyl-4-[(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo «β o &
<9 # * * * * * · f· ¢- t t « ’ ~ ' 6 €·. © » e <! f, ,r‘ c t ft © Λ · C· © © (i * © £' {.«-♦© β € fi < · ♦ · · M tx β «β
469 pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-l-yl)methyl]-4-hydroxy-l-piperidinkarboxylát (0,66 g, 0,0014 mol).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,7 minut.
MS: MH+ 475.
b) fórc-buty 1-4-{[4-amino-3 -(4- {[(benzyloxy)karbonyl]amino } -3 -methoxyfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]methyl}-4-hydroxy-l-piperidinkarboxylát
Směs fórc-butyl-4-[(4-amino-3 -j od-1 //-pyrazolo [3,4-</Jpyrimidin-1 -y l)methyl] -4hydroxy-l-piperidinkarboxylátu (0,27 g, 0,00057 mol), benzyl-V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (0,26 g, 0,00068 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,039 g, 0,000034 mol) a uhličitanu sodného (0,15 g, 0,0014 mol) v ethylenglykoldimethyletheru (7 ml) a vodě (3 ml) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a ethylenglykoldimethylether se odstraní za sníženého tlaku. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 100 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou a solankou a suší síranem sodným. Organická vrstva se filtruje přes vrstvu silikagelu (2x) k odstranění katalyzátoru a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RPHPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá terc-butyl-4-{[4-amino-3-(4{[(benzyloxy)karbonyl]amino}-3-methoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-lyl]mehtyl}-4-hydroxy-l-piperidinkarboxylát (0,1 g, 0,00017 mol).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 10,9 minut.
MS: MH+ 604.
c) Zerc-buty 1-4- {[4-amino-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin1 -yljmethyl} -4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylát
Směs fcrobutyl-4- {[4-amino-3-(4- {[(benzyl oxy )karbonyl]amino} -3 -methoxyfenyl)- 1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]methyl}-4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylátu (0,1 g, 0,000017 mol) a palladia na aktivním uhlí (0,01 g) v ethanolu (2,5 ml) a tetrahydrofuranu (2,5 ml) se míchá pod atmosférou vodíku při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Směs se filtruje a přidá se další palladium na aktivním uhlí (0,01 g). Směs se míchá
C £
PS 8 © f » f© r »88 p«e&
470 pod atmosférou vodíku při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Směs se filtruje přes vrstvu celitu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá /erc-butyl-4-{[4-amino3 -(4-amino-3-methoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yljmethyl} -4-hydroxy-1 piperidinkarboxylát (0,08 g, 0,00017 mol).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,8 minut.
MS: MH+ 470.
d) trans terc-butyl-4- {[4-amino-3-(3 -methoxy-4- {[(2-fenylcyklopropyl)karbonyl]amino} fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yljmethyl} -4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylát
Do směsi terc-buty 1-4- {[4-amino-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4d] pyrimidin-l-yl]methyl}-4-hydroxy-l-piperidinkarboxylátu (0,08 g, 0,00017 mol) v pyridinu (4 ml) se přidá tra«s-2-fenyl-cyklopropankarbonylchlorid (0,035 g, 0,00019 mol) při teplotě -5°C. Směs se míchá při teplotě -5°C po dobu 10 minut, pak se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá po dobu 1 hodiny. Směs se zháší vodným IN roztokem hydroxidu sodného a pyridin se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi vodu a dichlormethan (50 ml). Organická vrstva se promyje vodou. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,lM octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá transřerc-buty 1-4- {[4-amino-3 -(3 -methoxy-4- {[(2-fenylcyklopropyl)karbonyl]amino} fenyl)-1 //pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l -yljmethyl}-4-hydroxy-l -piperidinkarboxylát (0,08 g, 0,00013 mol).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 10,7 minut.
MS:MH614.
e) hydrochlorid trans-Ni -(4- {4-amino-1 -[(4-hydroxy-4-piperidyl)methylj-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamidu
Směs trans-terc-huiyi-4- {[4-amino-3-(3-methoxy-4- {[(2-fenylcyklopropyl)karbonyljamino} fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-l -yljmethyl} -4-hydroxy-1 piperidinkarboxylátu (0,08 g, 0,00013 mol) v acetonu (12 ml) a 6N vodném roztoku hydrochloridu (3 ml) se míchá při teplotě 40°C po dobu 2 hodin. Aceton se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se lyofilizuje, čímž se získá hydrochlorid trans-Ni -(4- {4-aminoc o
I; i C l (6 <··: ,· f, (' £.
' i' c * [- * ' '
471
- [(4-hydroxy-4-piperidy l)methy 1] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -y 1} -2-methoxy fenyl)-2fenyl-l-cyklopropankarboxamidu (0,07 g, 0,00012 mol).
*H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 9, 65 (s, 1H), 8,71 (br, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,26 (m, 1H), 7,25 (m, 7H), 4,40 (s, 2H), 3,90 (s, 3H), 3,10 (m, 2H), 2,98 (m, 2H), 2,51 (m, 1H), 2,34 (m, 1H), 1,89 (m, 2H), 1,71 (m, 2H), 1,48 (m, 1H), 1,31 (m, 1H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), Rt 8,7 minut.
MS: MH+ 514.
Příklad 493
Ní -4-[4-amino-1 -(4-oxocyklohexyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimídin-3 -yl] -2-methoxy feny 1(15,25)/( 17?,2/?)-2-feny lcyklopropan-1 -karboxamid
Suspenze 4- [4-amino-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 yl]-l-cyklohexanonu (2,00 g, 0,00568 mol) v pyridinu (20 ml) se ochladí na teplotu -10°C. Po kapkách se přidává racemický roztok řrans-2-benzylcyklopropan-l-karbonylchloridů (1,53 g, 0,00852 mol) v dichlormethanu (5 ml), přičemž teplota se udržuje pod -5°C. Reakční směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu v průběhu 4 hodin. Přidá se vodný roztok hydroxidu sodného (1,0 M.10 ml) a směs se míchá 1 hodinu. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (25 ml) a vodu (50 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (2 x 25 ml). Spojené organické fáze se suší síranem sodným a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá TVl-4-[4-amino-l(4-oxocyklohexyl)-177~pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl]-2~methoxyfenyl-(15,2S)-2fenylcyklopropan-1-karboxamid ve formě bílé pevné látky (1,603 g, 0,00323 mol).
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 7,14-7,35 (m, 7H), 5,24-5,27 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 2,65-2,78 (m, 2H), 2,56-2,63 (m, 1H), 2,34-2,37 (m, 5H), 2,20-2,30 (m, 2H), 1,45-1,53 (m, 1H), 1,28-1,35 (m, 1H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 15,04 minut.
MS:MH+497.
» e v • · β * • 8 *
«' (ϊ· • li < I ·· « 9 4 9 9 <« * « 6 «Φ « · *
472
Příklad 494 acetát cis-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(amoniomethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4t/] pyr imidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl-( 1 S,2S)/( 1 R,2R)-2-fenylcyklopropan-1 -karboxamidu
a) cz5-zVl-4-[4-amino-l-(l-oxaspiro[2,5]okt-6-yl)-l//-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidin-3-yl]2-methoxyfenyl-( 15,25)-2-fenylcyklopropan-1 -karboxamid
Ve vysušené baňce se nechá reagovat trimethylsulfoxonium-jodid (0,425 g, 0,00193 mol) v dimethylsulfoxidu (5 ml) s 60% hydridem sodným (disperze v minerálním oleji, 0,071 g, 0,00193 mol). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 30 minut, pak se ochladí na teplotu 10°C. Přidá se roztok VI -4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexy 1)-1//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl( 1 S,25)/( 1 R,2R)-2-fenylcyklopropan-1 karboxamidu (0,800 g, 0,00161 mol) v dimethylsulfoxidu (5 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 6 hodin. Přidá se voda (5 ml) a směs se extrahuje ethylacetátem (3 x 10 ml). Organická fáze se promyje vodou (5 ml), solankou (5 ml) a suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá cis Vl-4-[4-amino-l-(loxaspiro[2,5]okt-6-yl)-l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl(15,25)/( lR,2R)-2-fenylcyklopropan-l-karboxamid ve formě bílé pevné látky (0,820 g, 0,00160 mol).
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,22 (d, 1H), 7,17-7,31 (m.7H), 4,84-4,90 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 2,70 (s, 2H), 2,56-2,63 (m, 1H), 2,34-2,42(m.lH), 2,12-2,33 (m, 4H), (m, 2H), 1,44-1,52 (m, 1H), 1,27-1,37 (m, 3H).
MS: MH+413.
b) acetát cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(amoniomethyl)-4-hydroxycyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl)-( 15,25)/( 17?,2/?)-2-fenylcyklopropan-1 karboxamidu.
Směs cz'.v-Vl-4-[4-amino-l-(l-oxaspiro[2,5]okt-6-yl]-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin3 -yl]-2-methoxyfenyl-( 15,25)/( 1 Á,2/?)-2-fenylcyklopropan-1 -karboxamidu (0,200 g, 0,000391 mol) v 2-propanolu (5 ml) a hydroxidu amonného (5 ml) se zahřívá při teplotě 65°C v tlakové trubce po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá acetát cA-Vl-(4υ
473 {4-amino-1 -[4-(amoniomethyl)-4-hydroxycyklohexyl]- 1 V-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidin-3 yl}-2-methoxyfenyl)-(lS',2S)/(IR,2Á)-2-fenylcyklopropan-l-karboxamidu ve formě bílé pevné látky (0,112 g, 0,000212 mol).
*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,64 (s, IH), 8,23 (d, IH), 8,22-8,24 (m, IH), 7,177,33 (m, 7H), 4,59-4,80 (m, IH), 3,91 (s, 3H), 2,28-2,65 (m, 4H), 1,88 (s, 3H), 1,681,72 (m, 4H), 1,47-1,51 (m, 3H), 1,30-1,33 (m, IH);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 13,11 minut.
MS:MH+528.
Příklad 495 trans-N 1 -benzyl-2- {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)- IV-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-1 -yl] -1 hydroxycyklohexyl) acetamid
Suspenze /ra«v-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lV-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidin-lyl]-l-hydroxycyklohexyl) octové kyseliny (0,076 g, 0,000165 mol) v dichlormethanu (2 ml) se nechá reagovat s triethylaminem (0,050 g, 0,000496 mol) a chloridem bis(2-oxo-3oxazolidinyl)fo stínové kyseliny (0,063 g, 0,000248 mol). Směs se míchá 2 hodiny při pokojové teplotě, během kterých se rozpustí. Roztok se pak promyje vodou (2x2 ml). Organická vrstva se suší síranem sodným a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Surová látka se rozpustí v dichlormethanu (5 ml) a nechá reagovat s benzylaminem (0,052 g, 0,000489 mol) při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu ve směsi dichlormethanu a methanolu (95:5), poté preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 60% izokraticky po dobu 5 minut, pak 60%-100% acetonitril -0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá trans-Nlbenzyl-2- {4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 V-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidin-1 -yl]-1 hydroxycyklohexyl {acetamid ve formě bílé pevné látky (0,10 g, 0,000018 mol).
‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,53 (t, IH), 8,24 (s, IH), 7,66 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,09-7,34 (m, 10H), 5,24 (s, IH), 4,70-4,79 (m,lH), 4,30 (d, 2H), 2,02-2,18 (m, 2H), 1,91 (s, 2H), 1,86-1,98 (m, 4H), 1,56-1,64 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 16,16 minut.
474
MS: MH+ 549.
Příklad 496
-(aminomethyl)-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)- l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 cyklobutanol
Roztok 3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)- lH-pyrazolo [3,4-</]pyrimtdin-1 -yl]-1 -cyklobutanonu (0,150 g, 0,000404 mol) v dichlormethanu (5 ml) se nechá reagovat s 1,1,1-trimethylsilylkyanidem (0,060 g, 0,000606 mol) a bezvodým jodidem zinečnatým (0,004 g, 0,000012 mol). Směs se míchá 8 hodin pod refluxem. Směs se rozdělí mezi vodu (20 ml) a diethylether (10 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva se extrahuje diethyletherem (10 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí solankou a suší síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a surová látka se rozpustí v bezvodém tetrahydrofuranu (10 ml) a nechá reagovat s hydridohlinitanem lithným (0,031 g, 0,000804 mol) při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Surová látka se čistí preparativní RP-LC/MS (Gilson-Micromass Cl8, 5 pm, 130A, 21 cm, 0%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 9 minut, 25 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá směs izomerů 1 -(aminomethyl)-3-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)- 1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-cyklobutanolu 4:1 ve formě bílé pevné látky (0,024 g, 0,000060 mol).
*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H) minoritní, 8,23 (s, 1H) major, 7,66-7-70 (m, 2H), 7,41-7,46 (m, 2H), (m, 5H), 5,45-5,50 (m, 1H) minoritní, 4,87-4,96 (m, 1H) majoritní,
4,30 (d, 2H), 2,34-2,72 (m, 6H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300A, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min), Rt 12,07 minut (minoritní) a 12,36 minut (majoritní).
MS: MH+403.

Claims (85)

  1. Sloučenina obecného vzorce (I) (I) její racemické-diastercomemí směsi, optické izomery, farmaceuticky přijatelné soli, prekursory nebo biologicky aktivní metabolity, kde:
    A xb
    Gje AY-A-Z^Z'“ dA
    -ty t kde Z100 je nebo skupina popřípadě substituovaná substituentem
    Ri vybraná ze skupiny, kterou tvoří cykloalkyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzothienyl, furanyl, thienyl, benzoxazolyl, benzothiazolyl, thiazolyl, benzofuranyl,
  2. 2,3-dihydrobenzofuranyl, indolyl, izoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrrolyl, oxazolyl, izothiazolyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, benzoizothiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyrido-thiazolyl, pyrimido-oxazolyl, pyrimido-thiazolyl a benzimidazolyl;
    Z110 je kovalentní vazba nebo popřípadě substituovaný (Ci-Cé), který je popřípadě substituován jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří
    4Ί6 alkyl, CN, OH, halogen, NO2, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;
    Z111 je kovalentní vazba, popřípadě substituovaný (Ci-Cg) nebo popřípadě substituovaný -(CH2)n-cykloalkyl-(CH2)n-, kde popřípadě substituované skupiny jsou popřípadě substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO2, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl; každý ze substituentů Ra a Ri představuje jeden nebo více substituentů, při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny, kterou tvoří vodík, halogen, -CN, -NO2, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluormethylkarbonylaminoskupina, trifluormethylsulfonamidoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkynyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované nebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylthioskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylthioskupina, -Z105C(O)N(R)2, -Z105-N(R)-C(O)-Z200, -Z105-N(R)-S(O)2-Z200, -Z105-N(R)-C(O)-N(R)Z200, Rc a CH2ORc;
    kde substituent Rc při každém výskytu je nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH2-NRdRc, -W(CH^t-NRuRe, -W-(CH2),-Oalkyl, -W-(CH2)rS-alkyl nebo -W-(CH2)t-OH;
    Z105 při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-C6);
    Z200 při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Cj-Cg), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-Có)-fenyl;
    .'(· f;c C C O < < ( <·· tí r >
    rt) ť‘O r. í c o c· c r o r , c· e ( < t c t < o .’-C • P v ť' ff f c (.· e o í)
    C í:
    ( : o·. e o (, r
    477
    Rd a Re při každém výskytu je nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO2-alkyl; nebo Rd, Re a dusíkový atom, k němuž jsou vázány, společně tvoří pěti- nebo šestičlenný heterocyklus;
    t při každém výskytu je nezávisle celé číslo 2 až 6;
    W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)2, nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo
    Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2;
    R3 je vodík, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;
    A je -O-; -S-; -S(O)P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO2R)-; -CH2O-; -CH2S-; -CH2N(R)-; -CH(NR)-; -CH2N(C(O)R))-; -CH2N(C(O)OR)-;
    -CH2N(SO2R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO2R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-; -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH2)n+1-C(O)-; -S(O)PN(R)-; -O-(CR2)n+i-C(O)-; -O-(CR2)n+i-O-; -N(C(O)R)S(O)P-; -N(R)S(O)PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH2)»-O-; C(O)N(R)C(O)-; -S(O)pN(R)C(O)-; -OS(O)pN(R)-;
    -N(R)S(O)PO-; -N(R)S(O)PC(O)-; -SOPN(C(O)R)-; -N(R)SOPN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(ORb)O-; -N(R)P(ORb)-; -N(R)P(O)(ORb)O-; -N(R)P(O)(ORb)-;
    -N(C(O)R)P(ORb)O-; -N(C(O)R)P(ORb)-; -N(C(O)R)P(O)(ORb)O- nebo -N(C(O)R)P(ORb)-; kde substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;
    478 substituent Rb při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylaikyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;
    p je 1 nebo 2;
    nebo ve skupině obsahující fosfor tvoří dusíkový tom, atom fosforu, substituenty R a Rb společně pěti- nebo šestičlenný heterocyklus; nebo
    A je NRSO2 a substituenty R, Ra a dusíkový atom společně tvoří substituovaný nebo nesubstituovaný pěti- nebo šestičlenný heterocyklus kondenzovaný s kruhem 1;
    R2je Z101-Z102;
    Z101 je kovalentní vazba, -(CrC6)-, -(Ci-C6)-O-, -(Ci-C6)-C(O)-, -(CrC6)-C(O)O-, -(Ci-C6)-C(O)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((Ci-C6))- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;
    Z102 je vodík, substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina, substituovaná nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina, substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina;
    přičemž uvedená substituovaná heterocyklická nebo substituovaná heterobicyklická skupina má jeden nebo více substituentů, z nichž každý je nezávisle zvolen ze skupiny, kterou tvoří hydroxyl, kyanoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná sulfonamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina; substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, oxoskupina, nasycená, nenasycená nebo aromatická, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická skupina zahrnující jeden nebo více dusíkových atomů, jeden nebo více kyslíkových atomů nebo jejich kombinaci;
    479 kde uvedené dusíkové atomy jsou popřípadě nezávisle substituovány substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem nebo substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou; nebo substituent R2 je skupina vzorce B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylen, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;
    a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou každý nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CRa a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou CRa; nebo a je 0 a jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je NRa, jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je CRa a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CRa a N, kde substituent Ra má výše uvedený význam;
    b je 1 a symboly D2, G2, J2, L2 a M2 jsou každý nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CRa a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D2, G2, J2, L2 a M2 jsou
    CRa; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D2, G2, L2 a M2 je NRa, jeden ze symbolů D2, β ® f c
    480
    G2, L2 a M2 je CRa a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CRa a N, kde substituent Ra má výše uvedený význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6.
    2. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R3 je vodík; substituent Rj je při každém výskytu nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z F, Cl, Br, I, CH3, NO2, OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, -CH2NRdRe, CF3, f-butylu, pyridylu, substituovaného nebo nesubstituovaného oxazolylu, substituovaného nebo nesubstituovaného benzylu, substituovaného nebo nesubstituovaného benzensulfonylu, substituované nebo nesubstituované fenoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, karboxylu, substituovaného a nesubstituovaného tetrazolylu a substituovaného nebo nesubstituovaného styrylu.
  3. 3. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R3 je vodík; substituent Ra je při každém výskytu nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z F, Cl, Br, I, CH3, NO2, OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF3, Z-butylu, pyridylu, substituovaného nebo nesubstituovaného oxazolylu, substituovaného nebo nesubstituovaného benzylu, substituovaného nebo nesubstituovaného benzensulfonylu, substituované nebo nesubstituované fenoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, karboxylu, substituovaného a nesubstituovaného tetrazolylu a substituovaného a nesubstituovaného styrylu.
  4. 4. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R3 je H, substituent R2 je skupina obecného vzorce kde nje 1, 2 nebo 3.
    Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R3 je H, substituent R2 je skupina obecného vzorce • · ® · • ·(· « · © kde mje O, 1, 2 nebo 3 a substituent Rg je H nebo -(CH2)PN(R4)R
  5. 5, kde p je celé číslo od 2 do 6 a substituenty R4 a R5 jsou každý nezávisle H, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH2)q, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-, kde q je celé číslo od 0 do 6 a rje 0, nebo 2; a Z je substituovaná nebo nesubstituovaná skupina, vybraná ze skupiny, kterou tvoří alkyl, alkoxyskupina, aminoskupina, aryl, heteroaryl a heterocykloalkylová skupina, nebo R4, R5 a dusíkový atom, ke kterému jsou vázány, tvoří společně 3-, 4-, 5-, 6- nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo heterobicyklickou skupinu.
  6. 6. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R3 je H, substituent R2 je skupina obecného vzorce
    Q NR4R5 kde mje 0, 1, 2 nebo 3, každý ze substituentů a a b znamená nezávisle celé číslo od 0 do 6, Q je -ORs nebo -NR4R5; každý ze substituentů R4 a R5 znamená nezávisle H, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH2)q, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, aminoskupina, aryl, heteroaryl nebo heterocykloalkylová skupina nebo substituenty R4, R5 a dusíkový atom, na který jsou vázány, tvoří společně 3, 4, 5, 6 nebo 7člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo e e
    482 heterobicyklickou skupinu; a substituent Ró je vodík nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina.
  7. 7. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R3 je H, substituent R2 je skupina obecného vzorce kde nje 1, 2 nebo 3; a substituent R4 je H, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.
  8. 8. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R3 je H, substituent R2 je skupina obecného vzorce
    Rs kde m je 0, 1, 2 nebo 3;
    substituent R5 je H, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří kovalentní vazba, -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH-, -(CH2)qC(O)-, -C(O)(CH2)q- a -(CH2)qS(O)r-, kde alkylová část skupiny -(CH2)q-, - (CH2)qO-, - (CH2)qNH-, - (CH2)qC(O)-, -C(O)(CH2)q- a -(CH2)qS(O)r je popřípadě substituována halogenem, hydroxyskupinou nebo alkylskupinou, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2, a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, e t>
    o i' ° fy · o C ° C ť « * * fc C fy / ť‘ * » β a ť, 0 c -i r e f, * c *' © η β p o c r. c β e ' A <! c c « &
    ° P e ¢- c e fy v
    483 substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina, nebo Y a Z jsou společně přirozená nebo nepřirozená aminokyselina, která může být na aminovém dusíku mono- nebo di-alkylována, a substituent Ró představuje jeden nebo více substituentů, z nichž každý je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří vodík, hydroxyskupina, oxoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocyklyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocyklylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl a substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; s podmínkou, že uhlíkové atomy sousedící s dusíkovým atomem nejsou substituovány hydroxyskupinou.
  9. 9. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R3 je H, substituent R2 je skupina obecného vzorce kde substituent R4 je H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-, kde q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a Z je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.
    484
  10. 10. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R3 je H, substituent R2 je skupina obecného vzorce ve kterém m je celé číslo od 1 do 6; a substituenty R4 a R5 jsou každý nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo substituenty R4, R5 a atom dusíku mohou také společně tvořit 3, 4, 5-ti, 6-ti nebo 7 člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo substituovanou nebo nesubstituovanou heterobicyklickou skupinu.
  11. 11. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R3 je H, substituent R2 je skupina obecného vzorce ve kterém n je celé číslo od 0 do 4; r je 0 a m je celé číslo od 1 do 6; nebo r je 1 a m je celé číslo od 0 do 6;
    485
    Q je -NR4R5 nebo -ORé;
    každý ze substituentů R4 a R5 je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituováná alkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituováná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituováná heterocykloalkylová skupina;
    nebo substituenty R4, R5 a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovánou heterocyklickou skupinu; a substituent Ré je vodík nebo substituovaná nebo nesubstituováná alkylová skupina.
  12. 12. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R3 je H, substituent R2 je skupina obecného vzorce ve kterém n je celé číslo od 0 do 4;
    m je celé číslo od 0 do 6;
    substituent R4 je substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH2)q, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituováná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; a > # β
    486 substituent Rg je vodík nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina.
  13. 13. Sloučenina podle nároku 10, ve které substituenty R4, R5 společně s atomem dusíku vytvářejí heterocyklickou skupinu obecného vzorce ve kterém substituenty R7, Rg, R9, R10, R11, R12, R13 a R14 jsou každý nezávisle nižší alkyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R7 a Rs; R9 a R10; R11 a R12; nebo R13 a R14 dohromady jsou atom kyslíku; nebo alespoň jeden ze substituentů R7 a R9 je kyanoskupina, CONHR15, COOR15, CH2OR15 nebo CH2NRi5(Rié), kde substituenty R15 a Rig jsou každý nezávisle vodík, azabicykloalkyl nebo V-L, kde význam V je vybrán ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)p-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty R15, Rig a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti, 6-ti nebo 7 člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo substituovanou nebo nesubstituovanou heterobicyklickou skupinu;
    X je O, S, SO, SO2, CH2, CHORj7 nebo NRJ7, kde substituent Rj7 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylaikyl, -C(NH)NH2, -C(O)Ri7 nebo -C(O)ORi8, kde substituent Ru je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylaikyl; a t je 0 nebo 1.
  14. 14. Sloučenina podle nároku 10, ve které substituenty R4, R5 společně s atomem dusíku vytvářejí heterocykl obecného vzorce (} ©
    487 m
    ve kterém substituenty R19 a R20 jsou každý nezávisle vodík nebo nižší alkyl; nebo substituenty Rj9 a R20 dohromady jsou atom kyslíku.
    substituenty R21 a R22 jsou každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl V-L, kde význam V je vybrán ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo substituenty R2i, R22 a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu; m je celé číslo od 1 do 6; a nje celé číslo od 0 do 6.
  15. 15. Sloučenina podle nároku 10, ve které substituenty R4, R5 společně s atomem dusíku vytvářejí heterocyklickou skupinu obecného vzorce ve kterém m je celé číslo od 1 do 6;
    substituent R23 je CH20H, NRR', C(O)NRR' nebo COOR, kde substituenty R a R' jsou každý nezávisle vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl.
    9 9 • C
    488
  16. 16. Sloučenina podle nároku 10, ve které substituenty R4, R5 společně s atomem dusíku vytvářejí heterocyklickou skupinu obecného vzorce ve kterém substituent R24 je substituovaný nebo nésubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nésubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nésubstituovaný arylalkyl, karboxyl, kyanoskupina, C(O)OR25, CH2OR25, CH2NR26R27 nebo C(O)NHR2ó, substituent R25 je substituovaný nebo nésubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nésubstituovaný aryl, substituovaný nebo nésubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nésubstituovaný heterocykl nebo substituovaný nebo nésubstituovaný heterocykloaryl; substituenty R2ó a R27 jsou každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nésubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde význam V je vybrán ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nésubstituovaný alkyl, aminoskupina, substituovaný nebo nésubstituovaný aryl, substituovaný nebo nésubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nésubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty R26, R27 a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.
  17. 17. Sloučenina podle nároku 10, ve které má alespoň jeden ze substituentů R4 a R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec ve kterém T je C(O), S, SO, SO2, CHOŘ nebo NR, kde substituent R je vodík nebo substituovaný nebo nésubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nésubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nésubstituovaný arylalkyl; a n je 0, 1 nebo 2.
    Ε Ρ « »
    Β fr fr fr.
    fr
    489
  18. 18. Sloučenina podle nároku 10, ve které má alespoň jeden ze substituentů R4 a R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec -N(R2s)R29 a substituenty R2s a R29 jsou každý nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný karboxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný kyanoalkyl; nebo substituenty R2g a R29 společně s atomem dusíku tvoří 5-ti nebo 6-ti člennou substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.
  19. 19. Sloučenina podle nároku 11, ve které substituenty R4, Rs společně s atomem dusíku vytvářejí heterocykl obecného vzorce ve kterém substituenty R7, Rs, R9, R10, R11, R12, R13 a R14 jsou každý nezávisle nižší alkyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R7 a Rs; R9 a R10; Rn a Ri2; nebo R13 a R14 dohromady jsou atom kyslíku; nebo alespoň jeden ze substituentů R7 a R9 je kyanoskupina, CONHR15, COOR15, CH2ORi5 nebo CH2NRi5(Ri6), kde substituenty R15 a Rif jsou každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde význam V je vybrán ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)P~, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH~, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty R15, Rié a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti, 6-ti nebo 7 člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo heterobicyklickou skupinu;
    β « e
    e β #
    490
    X je O, S, SO, SO2, CH2, CHOR17 nebo NR17, kde substituent R17 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)Rig nebo -C(O)ORi8, kde substituent Rig je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a t je 0 nebo 1.
  20. 20. Sloučenina podle nároku 11, ve které substituenty R4, R5 společně s atomem dusíku vytvářejí heterocykl obecného vzorce ve kterém substituenty R19 a R2o jsou každý nezávisle vodík nebo nižší alkyl; nebo substituenty R19 a R2o dohromady jsou atom kyslíku;
    substituenty R21 a R22 jsou každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde význam V je vybrán ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde pje celé číslo od 0 do 6, qje celé Číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty R2i, R22 a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti Člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu; m je celé číslo od 1 do 6; a n je celé číslo od 0 do 6.
  21. 21. Sloučenina podle nároku 11, ve které substituenty R4, R5 společně s atomem dusíku vytvářejí heterocyklickou skupinu obecného vzorce ve kterém m je celé číslo od 1 do 6; a substituent R23 je CH2OH, NRR', C(O)NRR' nebo COOR, kde substituent R je vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
  22. 22.
    Sloučenina podle nároku 11, ve které substituenty R4, R5 společně s atomem dusíku vytvářejí heterocyklickou skupinu obecného vzorce ve kterém substituent R24 je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, karboxyl, kyanoskupina, C(O)OR25, CH2OR25, CH2NR26R27 nebo C(O)NHR2ó, kde substituent R25 je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloarylová skupina; a substituenty R26 a R27 jsou každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde V je vybráno z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-,
    -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)NH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina;
    r <
    492 nebo substituenty R2ó, R27 a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.
  23. 23. Sloučenina podle nároku 11, ve které má alespoň jeden ze substituentů R4 a R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec λΛ
    -N T
    R32 ve kterém g je 0 nebo 1;
    T je C(O), O, S, SO, SO2, CH2, CHOR17 nebo NRp, kde substituent R17 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)Ris nebo -C(O)ORi8, kde substituent Ru je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R22 je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl.
  24. 24. Sloučenina podle nároku 11, ve které má alespoň jeden ze substituentů R4 a R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec -N(R28)R29 a substituenty R28 a R29 jsou každý nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný karboxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný kyanoalkyl; nebo substituenty R28 a R29 společně s atomem dusíku tvoří 5-ti nebo 6-ti člennou substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.
    * ¢.
    © «
    e » β β· « S to » © · β e β
    493
  25. 25. Sloučenina podle nároku 8, ve které má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec N(R3o)R3i, kde substituenty R30 a R31 jsou každý nezávisle vodík, alkyl, alkoxykarbonyl, alkoxyalkyl, hydroxyalkyl, aminokarbonyl, kyanoskupina, alkylkarbonyl nebo arylalkyl.
  26. 26. Sloučenina podle nároku 8, ve které má substituent Rs obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec
    X—-N
    R32 ve kterém každé X je nezávisle CH nebo N; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
  27. 27. Sloučenina podle nároku 8, ve které má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec
    R32 ve kterém g je 0 nebo 1;
    T je O, S, SO, SO2, CH2, CHOR17 nebo NR17, kde substituent Rn je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, C(O)NH2, -C(NH)NH2, -C(0)Ri7 nebo -C(O)ORis, kde substituent Ris je vodík, substituovaný nebo • 9
    494 nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
  28. 28. Sloučenina podle nároku 8, ve které má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec ve kterém g je 0,1 nebo 2; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
  29. 29. Sloučenina podle nároku 8, ve které má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec ve kterém
    T je C(O), O, S, SO, SO2, CH2, CHORp nebo NRp, kde substituent R|7 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, aryl, arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)R|8 β »
    495 nebo -C(O)ORi8, kde substituent Ris je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl;
    gje 0 nebo 1; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl.
  30. 30. Sloučenina podle nároku 8, ve které má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec ve kterém substituent R32 je vodík, kyanoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, alkylkarbonyl, substituovaná nebo nesubstituovaná thioalkoxyskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R33 je vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, perhalogenalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl.
  31. 31. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R3 je H; substituent R2 má obecný vzorec e> » €· ř PC© e> » * © « e © · «' <J
    496 ©
    s e· ve kterém m je celé číslo od 0 do 1;
    substituenty R34, R35, R36, R37, R38, R39, R40 a R» jsou každý nezávisle methyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R34 a R35; R36 a R37; R3g a R39; nebo
    R40 a R41 společně jsou atom kyslíku; a substituent R42 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r; kde pje celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituováná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituováná heterocykloalkylová skupina; nebo substituent Rt2 má obecný vzorec ve kterém uje 0 nebo 1;
    substituenty R43, R44, R45, R46, R47, R48, R49 a R50 jsou každý nezávisle methyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R43 a R44; R45 a R46; R47 a R}8; nebo R49 a R50 společně jsou atom kyslíku; a substituent R5i je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo
    V-L, kde V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-,
    C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde pje celé f ί· ©
    497 číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a rje 0,1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.
  32. 32. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R3 je H; substituent R2 má obecný vzorec
    -¾)
    R57/ R58 R59
    Reo , ve kterém h, i, j, k a 1 jsou nezávisle 0 nebo 1;
    substituenty R52, R53, R54, R55, R56, R57, R58, R59, Rg a Rh jsou každý nezávisle methyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R52 a R53; R54 a R55; R56 a R57; nebo R5g a Rsg společně jsou atom kyslíku; a substituent Rgo je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde význam Y je vybrán ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a rje 0, 1 nebo 2; a Z substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituent Rgo má obecný vzorec ,^65
    R66
    Rel N
    R69 ve kterém
    498 vje O nebo 1;
    substituenty Rói, Ró2, R03, Rm, R55, Ró6, R57 a Rós jsou každý nezávisle nižší alkyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů Rói a R02; Ró3 a Ró4; Rós a Róó; a R07 a Rós společně jsou atom kyslíku;
    substituent R09 je vodík, substituovaný nebo nésubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)P-, -S(O)2-, (CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nésubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nésubstituovaný aryl, substituovaný nebo nésubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nésubstituovaný heterocykloalkyl.
  33. 33. Způsob inhibice jedné nebo více aktivit proteinkináz u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 nebo její fyziologicky přijatelné soli, prekursoru léčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
  34. 34. Způsob podle nároku 33, vyznačující se tím, že daná proteinkináza je vybrána ze skupiny sestávající se z KDR, FGFR-1, PDGFRP, PDGFRa, IGF-1R, c-Met, Flt-1, Flt-4, TEE-2, TIE-1, Lek, Src, fyn, Lyn, Blk, hek, fgr a yes.
  35. 35. Způsob ovlivňování hyperproliferačních poruch u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 nebo její fyziologicky přijatelné soli, prekursoru léčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
  36. 36. Způsob ovlivňování angiogeneze u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 nebo její fyziologicky přijatelné soli, prekursoru léčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
  37. 37. Způsob podle nároku 33, vyznačující se tím, že proteinkináza je proteinová serin/threoninkináza nebo proteinová tyrosinkináza.
    f C «
    t! »' ř V 4V. fi © * < f, ť Γ 8·· C ť>
    ‘ 9 e p o p.
    f ·'’ t t c- ř ¢.^
    499
  38. 38. Způsob ošetřování jednoho nebo více vředů u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 nebo její fyziologicky přijatelné soli, prekursoru léčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
  39. 39. Způsob podle nároku 38, vyznačující se tím, že vřed nebo vředy jsou způsobeny bakteriální nebo plísňovou infekcí; nebo se jedná o Moorenovy vředy; nebo se jedná o symptomy ulcerativní kolitidy.
  40. 40. Způsob ošetřování onemocnění u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 nebo její fyziologicky přijatelné soli, prekursoru léčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi, přičemž dané onemocnění je onemocnění očí, kardiovaskulární onemocnění, rakovina, syndrom Crow-Fukase (POEMS), diabetické onemocnění, srpkovitá anémie, chronický zánět, systémový lupus, glomerulonefřitida, synovitida, zánětlivé střevní onemocnění, Crohnova nemoc, glomerulonefřitida, revmatoidní artritida, osteoartritida, roztroušená skleróza, rejekce štěpu, Lymská nemoc, sepse, von Hippel-Lindauův syndrom, pemfigoid, psoriáza, Pagetova nemoc, polycystické ledvinové onemocnění, fibróza, sarkoidóza, cirhóza, tyreoiditida, hyperviskózní syndrom, Oslerova-Renduova-Weberova nemoc, chronické okluzní onemocnění plic, astma nebo edém po popáleninách, traumatu, ozáření, mrtvice, hypoxie nebo ischemie, syndrom ovariální hyperstimulace, preeklampsie, menometroragie, endometrióza nebo infekce Herpes simplex, Herpes Zoster, virem způsobujícím syndrom získaného selhání imunity, Parapoxvirem, prvoky nebo toxoplazmóza.
  41. 41. Způsob podle nároku 40, vyznačující se tím, že onemocnění očí je okuiární nebo makulární edém, okuiární neovaskulární onemocnění, skleritida, radiální keratotomie, uveitida, vitritida, myopie, fyziologická exkavace papily, chronické odchlípení sítnice, komplikace po ošetření laserem, konjunktivitida, Stargardtova nemoc, Ealesova nemoc, retinopatie nebo makulární degenerace.
    o fi «ο v r < < ‘ ' 1 < f, * C V
    0 fi ' ( C„ r- ’ i' ' 0 ř
    G fi *' r r f- C f'
    I,A χ
    500
  42. 42. Způsob podle nároku 40, vyznačující se tím, že kardiovaskulární onemocnění je ateroskleróza, restenóza, ischémie/reperfuzní poškození, vaskulární okluze a karotické obstruktivní onemocnění.
  43. 43. Způsob podle nároku 40, vyznačující se tím, že rakovina je pevný nádor, sarkom, fibrosarkom, osteom, melanom, retinoblastom, rabdomyosarkom, glioblastom, neuroblastom, teratokarcinom, hematohematopoetické zhoubné bujení, Kaposiho sarkom, Hodgkinova nemoc, lymfom, myelom, leukémie nebo maligní ascites.
  44. 44. Způsob podle nároku 40, vyznačující se tím, že diabetické onemocnění je inzulindependentní diabetes mellitus s glaukomem, diabetická retinopatie nebo mikroangiopatie.
  45. 45. Způsob snižování fertility u pacienta, vyznačující se tím, že daný způsob zahrnuje krok, ve kterém dochází k podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 nebo její fyziologicky přijatelné soli, prekursoru léčiva nebo biologicky aktivních metabolitů pacientovi.
  46. 46. Způsob podle nároku 36, vyznačující se tím, že sloučenina nebo její fyziologicky přijatelná sůl, prekursor léčiva nebo biologicky aktivní metabolit je podávána v množství, které má na angiogenezi nebo vaskulogenezi podpůrný účinek,
  47. 47. Způsob podle nároku 34, vyznačující se tím, že proteinkináza je Tie-2.
  48. 48. Způsob podle nároku 46, vyznačující se tím, že sloučenina obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelná sůl, prekursor léčiva nebo biologicky aktivní metabolit je podávána v kombinaci s proangiogenním růstovým faktorem.
  49. 49. Způsob podle nároku 48, vyznačující se tím, že proangiogenní růstový faktor je vybrán ze skupiny sestávající se z VEGF, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, HGF, FGF-1, FGF-2, jejich deriváty a antiidiotypické protilátky.
    < ( e- © r e <>
    501
  50. 50. Způsob podle nároku 46, vyznačující se tím, že pacient trpí anémií, ischémií, infarktem, rejekcí transplantátu, zraněním, gangrénou nebo nekrózou.
  51. 51. Způsob podle nároku 33, vyznačující se tím, že aktivita proteinkinázy se podílí na aktivaci T-buněk, aktivaci B-buněk, degranulaci žírných buněk, aktivaci monocytů, potenciaci zánětlivé odpovědi nebo jejich kombinaci.
  52. 52. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R3 je vodík;
    substituent R2 -Z101-Z102, kde Z101 je kovalentní vazba, -(Ci-Cň)-, -(Ci-Cój-O-, -(Ci-C6)-C(O)-, -(Ci-C6)-C(O)O-, -(Ci-C6-C(O)-NH-, -(CrCe-qOj-NtfCrCe))nebo substituovaná fenylová skupina; a
    Z102 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina.
  53. 53. Sloučenina podle nároku 52, ve které Z101 je vybráno ze skupiny sestávající se z
    -CH2-C(O)O-, -CH2-C(O)-, -CH2-C(0)-NH-, -CH2-C(O)-N(Me),
    -CH(Me)-C(O)O-, -(CH2)3-C(O)O-, -CH(Me)-C(O)-NH- a -(CH2)3-C(O)-NH-;
    Z102 je vybráno ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, methylu, ethylu, VV-dimethylaminoethylu, zV,V-diethylaminoethylu, 2-fenyl-2-hydroxyethylu, morfolinoskupiny, piperazinylu, ŤV-methylpiperazinylu a
    2-hy droxymethylpyrrolidinylu.
  54. 54. Sloučenina podle nároku 53, ve které G má obecný vzorec nesubstituovaný benzoxazolyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný benzo thiazolyl.
    e o o
    tt< ve
    502 c <?v f> c ® r e í! ® c «5 © « c * # fí f (: t- <· f- « <' ř? P
    ť) tí <?
    ť o » <
    ® <
    © o r i e £ 9
  55. 55. Sloučenina podle nároku 8, 9, 10 nebo 53, ve které G má obecný vzorec ve kterém se vyskytuje pouze jeden substituent Ra a je vybrán ze skupiny sestávající se z vodíku nebo F.
  56. 56. Sloučenina podle nároku 52, ve které Z101 je kovalentní vazba; a Z102 je případně substituovaný pyridyl.
  57. 57. Sloučenina podle nároku 56, ve které G má obecný vzorec
  58. 58. Sloučenina podle nároku 1, ve které substituent R3 je vodík; substituent R2 je cyklopentyl; a G má obecný vzorec
    Z—A—Z—Z100
  59. 59. Sloučenina podle nároku 58, ve které Z110 je vodík;
    A je O; a Z100 je případně substituovaný fenyl, furanyl nebo thienyl, přičemž Z100 je případně substituované jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z F, COOH, NO2, OMe, -COOMe, OCF3 a CF3.
    503
  60. 60. Sloučenina podle nároku 58, ve které Z110 je vodík;
    A je -0-, -O-(CR2)„-C(O)- nebo -O-(CR2)n-O-;
    n při každém výskytu je O až 3;
    Z100 je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z cyklohexylu, fenylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, izoxazolylu a piperidinylu; přičemž Z100 je případně substituovaná jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající se z alkylu, alkoxyskupiny, halogenu, hydroxy skupiny a alkoxykarbonylu.
  61. 61. Sloučenina podle nároku 58, ve které substituent R2 je případně substituovaný skupinou vybranou ze skupiny sestávající se z cyklobutylu a cyklohexylu.
  62. 62. Sloučenina podle nároku 61, ve které substituent R2 je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, alkylu, hydroxyalkylu, karboxyalkylu a fenylalkoxyalkylu.
  63. 63. Sloučenina podle nároku 62, ve které G je 4-fenoxyfenyl.
  64. 64. Sloučenina podle nároku 6, ve které m je 2; a je 0; substituent Ró je vodík; b je 1 nebo 2; a substituenty Rj a R5 jsou každý vodík.
  65. 65. Sloučenina podle nároku 8, ve které m je 0, 1 nebo 2; substituent Ró je vodík; substituent R5 je vodík nebo Y-Z;
    kde Y je kovalentní vazba, -C(O)-, -(CH2)q0-, -(CH2)q, -(CH2)qC(O)- nebo -C(O)(CH2)q-, kde alkylová část skupin -(CH2)qO-, -(CH2)P-, -(CH2)qC(O)- a -C(O)(CH2)q- je případně substituovaná halogenem, hydroxyskupinou nebo alkylovou skupinou; a
    Z je vodík, alkyl, případně substituovaný alkyl, alkoxyalkyl, případně substituovaný heterocykloalkyl, případně substituovaný heteroaryl nebo případně substituovaná aminoskupina.
  66. 66. Sloučenina podle nároku 65, ve které Z je vybráno ze skupiny sestávající se z vodíku, methylu, ethylu, hydroxymethylu, methoxyethylu, Y-methyl-piperidinylu, ©
    © «!
    r
    U' v.-í' i- t> C' *’ e e < o { t <· C
    f. e « <' c- O < · c »> <>
    c ( t:
    F ť- <· <- «*
    504 (/-butoxykarbonyl)(hydroxy)piperidinylu, hydroxypiperidinylu, (hydroxymethyl)piperdinylu, (hydroxy)(methyl)piperidinylu, morfolinoskupiny, (methoxyethyl)piperizinylu, methylpiperizinylu, 4-piperidinylpiperidinylu, imidazolylu, methylimidazolylu, zV-methylaminoskupiny, ΛζΗ-dimethylaminoskupiny, A-izopropylaminoskupiny, AjV-diethylaminoskupiny, 2,3-dihydroxypropylaminoskupiny, 2-hydroxyethylaminoskupiny, 3-hydroxypropylaminoskupiny, methoxyethylaminoskupiny, ethoxykarbonylmethylaminoskupiny, fenylmethylaminoskupiny, A-methyl-A-methoxyaminoskupiny, furanylmethylaminoskupiny, piperidinylethylaminoskupiny, N-(2-N,Ndimethylaminoethyl)-yV-methylaminoskupiny, 2-A,jV-dimethyl-aminoethylaminoskupiny, N-methyl-H-(N-methyl-piperidin-4-yl)aminoskupiny,
    2-morfolino-ethylaminoskupiny, 3-morfolino-propylaminoskupiny, 3-imidazolylpropylaminoskupiny nebo 3-(2-oxopyrrolidinyl)propylaminoskupiny.
  67. 67. Sloučenina podle nároku 8, ve které index m je 2; substituent R5 je Y-Z; Y je
    -C(O)-; a Z má obecný vzorec R , ve kterém n je 0,1,2 nebo 3.
  68. 68. Sloučenina podle nároku 9, ve které substituent R4 je vodík nebo methyl;
    G má obecný vzorec
    A je vybráno ze skupiny sestávající se z O, -N(R)- a -N(R)C(O)-; Z111 je -(CH2)ncykloalkyl-(CH2)n-;
    substituent R je vodík nebo alkyl;
    nje 0 až 5;
    substituent Ra je jeden nebo více substituentů, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z vodíku, OH, F, Cl, methylu a methoxyskupiny; a el« » · » · β » ·
    505 substituent Ri je jeden nebo více substituentů, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z vodíku, CN, F, CF3, OCF3, methylu, methoxyskupiny a případně substituované aminoskupiny;
    kde uvedená aminoskupina je případně substituovaná jednou nebo více skupinami, přičemž každá je nezávisle vybrána ze skupiny sestávající se z alkylu, alkoxyalkylu, fenylu, substituovaného fenylu a případně substituovaného heteroarylu.
  69. 69.
  70. 70.
  71. 71.
    Sloučenina podle nároku 68, ve které substituent Ri je 4-methylfenylthioskupina nebo 2-pyridinylthioskupina.
    Sloučenina podle nároku 9, ve které má ^6 \-A—(C^-Z100
    G obecný vzorec V—J kde Z100 je vybráno ze skupiny sestávající se z benzo[Z>]thiofenu, furanylu a thiofenu.
    Sloučenina podle nároku 9, ve které je substituent Ra alkoxyskupina; A je -NH-C(O)-; a mezi A a Z100 je kovalentní vazba.
  72. 72.
    Sloučenina podle nároku 1, 8 nebo 9, ve které má
    A je vybráno ze skupiny sestávající se z -N(R)-C(O)-N(R)-, -(CH2)n-N(R)C(O)N(R)-, -N(R)- a -N(R)-SO2-; substituent R je vodík nebo alkyl;
    > pyridinyl, thiazolyl, furanyl, benzofuranyl nebo oxazolyl;
    Γ· , c <'' < l;'cc « ‘9 *' c ν Ρ 9 % .· í t * r e f ’’ A .- <· » *’ f O ( .. Γ ς- ,. Í t <· c c Γ , 5 r <ro<.·
    506
    X je S, O nebo NR1, kde substituent R1 při každém výskytu je nezávisle vodík nebo Me;
    substituent Ra je jeden nebo více substituentů, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z vodíku a F; a substituent Ri je jeden nebo více substituentů, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z vodíku, F, Cl, Br, NO2, CF3, alkylu, alkoxyskupiny a alkoxykarbonylu.
  73. 73. Sloučenina podle nároku 72, ve které substituent R4 je methyl; m je 1, 2 nebo 3; substituent R5 je Y-Z, kde Y je -C(O)O-, -C(O)- nebo -C(O)-(CH2)P-; a Z je aminoalkyl, Y-alkylaminoskupina, T/TV-dialkylaminoskupina nebo hydroxy alkylaminoalkyl.
  74. 74. Sloučenina podle nároku 9, ve které substituent R> je methyl; G má obecný vzorec
    O
    H , kde n je 0 až 3; Z100 je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z indolylu, indenylu, methylindenylu, methylindolylu, dimethylaminofenylu, fenylu, cyklohexylu a benzofuranylu.
  75. 75. Sloučenina podle nároku 9, ve které má G obecný vzorec
    Z100 je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z fenylu, imidazolylu, indolylu, furanylu, benzofuranylu a 2,3-dihydrobenzofuranylu; kde
    Z100 je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z F, Cl, CN, případně substituovaného alkylu, -O- (případně substituovaného alkylu), -COOH, -Z105-C(O)N(R)2, -Z105-N(R)-C(O)-Z200, -Z105-N(R)-S(O)2-Z200 a
    -Zl05-N(R)-C(O)-N(R)-Z200;
    Z105 je kovalentní vazba nebo skupina (Ci-Cň);
    vt ř- Γ» « Γ· c. · , ' l ' é <' ί- α λ ’ 1 9 c f, ; 1 (· < < * f. ř ( « .</ \γ-γ· r :
    1 Λ ι' *' <4 © c? e
    507
    Ζ2θ0 je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se ze skupiny (Ci-Có), fenylu a -(Ci-C6)-fenylu;
    Z110 a Z111 jsou každý nezávisle kovalentní vazba nebo skupina (C1-C3) případně substituovaná alkylem, hydroxyskupinou, COOH, CN nebo fenylem; a A je O, -N(R)-C(O)-N(R)-, -N(R)-C(O)-O-, -N(R)- nebo -N(R)-C(O)-, kde substituent Rje vodík nebo alkyl.
  76. 76. Sloučenina podle nároku 75, ve které substituent R4 je methyl.
  77. 77. Sloučenina podle nároku 8, 9 nebo 10, ve které má G obecný vzorec R„ , kde Z100 je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z benzoxazolylu, benzothiazolylu a benzimidazolylu.
  78. 78. Sloučenina podle nároku 77, ve které substituent R4 je methyl; A je -NH-; v tomto případě je zde pouze jeden substituent Ra vybraný z vodíku nebo F; a Z100 je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z alkylu, halogenu, CF3 a alkoxyskupiny.
    Sloučenina podle nároku 9, ve které má G obecný vzorec R,O
    Vj^z^A-Z^Z1“
    Z100 je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z fenylu, pyrrolylu, pyridylu, benzimidazolylu, naftylu a
    S ?
    kde Z100 je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z F, Cl, Br, ΝΟ2, aminoskupiny, TV-alkylaminoskupiny, N,TV-dialkylaminoskupiny, CN, «ί* « e e e eε>
    ® fc φ
    <· ©
    oc Γ> <) fr» ο f © €· © © &
    e * « ř eft of f. o fr * * φ * © fr e
    β fe e «·
    508 případně substituovaného alkylu, -O- (případně substituovaného alkylu) a fenylu;
    Z110 a Z111 při každém výskytu je nezávisle skupina (C0-C3) případně substituovaná případně substituovaným fenylem; a
    A je -N(R)-C(O)-N(R)-, -N(R)-S(O)2-, -N(R)-C(O)-, -N(R)- nebo -N(R)-C(O)-O-.
  79. 80. Sloučenina podle nároku 79, ve které je substituent R4 methyl a v tomto případě je zde pouze jeden substituent Ra vybraný z atomu floru.
  80. 81. Sloučenina podle nároku 9 nebo 66, ve které má G obecný vzorec R„ 'Z—A—Z—Z100
    Z100 je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z fenylu, izoxazolylu, tetrahydronafthylu, furanylu, benzoíuranylu, pyridylu a indolylu;
    kde Z100 je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybraný ze skupiny sestávající se z F, CN, NO2, -C(O)H, -CONH2, -NHSO2CF3, případně substituovaného alkylu, případně substituovaného heteroarylu a -O- (případně substituovaného alkylu);
    Z110 a Z111 jsou každý nezávisle případně substituovaná skupina (C0-C3); a
    A je O, -N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-, -C(O)-N(R)-, -N(R)-C(O)-O-, -N(R)-C(O) nebo
    -N(R)-.
  81. 82. Sloučenina podle nároku 81, ve které substituent R4 je methyl; substituent Ra je vodík nebo methoxy skupina; a Z110 a Z111 jsou každý nesubstituovaný.
  82. 83. Sloučenina podle nároku 9, ve které má G obecný vzorec
    Cc rř. <’ c « o ~ e c í? e c n ft <· < & c cc.
    >-V fi «* r® «5 *
    f fi.
    <& e fi e
    509 ' kde substituent R je vodík nebo nižší alkyl a n při každém výskytu je nezávisle 1 až
    6.
  83. 84. Sloučenina podle nároku 83, ve které má G obecný vzorec
  84. 85. Sloučenina podle nároku 84, ve které je Z100 substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl.
  85. 86. Sloučenina podle nároku 8, 9 nebo 10, ve které má G obecný vzorec
CZ2002936A 1999-09-17 2000-09-15 Pyrazolopyrimidiny jako terapeutické prostředky CZ2002936A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US15462099P 1999-09-17 1999-09-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ2002936A3 true CZ2002936A3 (cs) 2002-10-16

Family

ID=22552063

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2002936A CZ2002936A3 (cs) 1999-09-17 2000-09-15 Pyrazolopyrimidiny jako terapeutické prostředky

Country Status (27)

Country Link
US (1) US6660744B1 (cs)
EP (1) EP1212327B8 (cs)
JP (1) JP2003509428A (cs)
KR (1) KR20020088406A (cs)
CN (1) CN1390219A (cs)
AR (1) AR031528A1 (cs)
AT (1) ATE247657T1 (cs)
AU (1) AU780052B2 (cs)
BG (1) BG106586A (cs)
BR (1) BR0014073A (cs)
CA (1) CA2385747A1 (cs)
CZ (1) CZ2002936A3 (cs)
DE (1) DE60004685T2 (cs)
DK (1) DK1212327T3 (cs)
ES (1) ES2207552T3 (cs)
HK (1) HK1050355B (cs)
IL (1) IL148718A0 (cs)
MX (1) MXPA02002898A (cs)
NO (1) NO20021328L (cs)
NZ (1) NZ517758A (cs)
PL (1) PL354249A1 (cs)
PT (1) PT1212327E (cs)
SK (1) SK3812002A3 (cs)
TR (1) TR200201505T2 (cs)
TW (1) TWI230709B (cs)
WO (1) WO2001019829A2 (cs)
ZA (1) ZA200202123B (cs)

Families Citing this family (197)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1987000613A1 (en) * 1985-07-19 1987-01-29 Armtech Limited A disc magazine firearm
US7863444B2 (en) * 1997-03-19 2011-01-04 Abbott Laboratories 4-aminopyrrolopyrimidines as kinase inhibitors
US7223724B1 (en) 1999-02-08 2007-05-29 Human Genome Sciences, Inc. Use of vascular endothelial growth factor to treat photoreceptor cells
US6921763B2 (en) * 1999-09-17 2005-07-26 Abbott Laboratories Pyrazolopyrimidines as therapeutic agents
US7273751B2 (en) * 2000-08-04 2007-09-25 Human Genome Science, Inc. Vascular endothelial growth factor-2
MXPA03008560A (es) * 2001-03-22 2004-06-30 Abbot Gmbh & Co Kg Pirazolopirimidinas como agentes terapeuticos.
JP2004536579A (ja) * 2001-04-13 2004-12-09 ヒューマン　ジノーム　サイエンシーズ，　インコーポレイテッド 血管内皮増殖因子２
US20050232921A1 (en) * 2001-04-13 2005-10-20 Rosen Craig A Vascular endothelial growth factor 2
EP1385862A4 (en) * 2001-04-13 2005-03-02 Human Genome Sciences Inc VASCULAR ENDOTHEL GROWTH FACTOR 2
WO2002088095A1 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Glaxo Group Limited Fused pyrimidines as antagonists of the corticotropin releasing factor (crf)
DE60228103D1 (de) * 2001-10-02 2008-09-18 Smithkline Beecham Corp Chemische verbindungen
US20030187026A1 (en) 2001-12-13 2003-10-02 Qun Li Kinase inhibitors
US20030225273A1 (en) * 2002-03-21 2003-12-04 Michaelides Michael R. Thiopyrimidine and isothiazolopyrimidine kinase inhibitors
US20030199525A1 (en) * 2002-03-21 2003-10-23 Hirst Gavin C. Kinase inhibitors
US6695881B2 (en) 2002-04-29 2004-02-24 Alcon, Inc. Accommodative intraocular lens
CN101404986B (zh) * 2002-05-17 2011-09-28 赛奎拉公司 用于诊断和治疗感染性疾病的组合物和制药方法
US7456222B2 (en) * 2002-05-17 2008-11-25 Sequella, Inc. Anti tubercular drug: compositions and methods
US20040033986A1 (en) * 2002-05-17 2004-02-19 Protopopova Marina Nikolaevna Anti tubercular drug: compositions and methods
AU2003254053A1 (en) * 2002-07-23 2004-02-09 Smithkline Beecham Corporation Pyrazolopyrimidines as protein kinase inhibitors
EP1534389A2 (en) * 2002-07-23 2005-06-01 SmithKline Beecham Corporation Pyrazolopyrimidines as kinase inhibitors
WO2004009602A1 (en) * 2002-07-23 2004-01-29 Smithkline Beecham Corporation Pyrazolopyrimidines as kinase inhibitors
CA2494421A1 (en) 2002-08-06 2004-02-12 Astrazeneca Ab Condensed pyridines and pyrimidines with tie2 (tek) activity
GB0226370D0 (en) * 2002-11-12 2002-12-18 Novartis Ag Organic compounds
GB0230089D0 (en) * 2002-12-24 2003-01-29 Astrazeneca Ab Therapeutic agents
SG182004A1 (en) 2003-01-14 2012-07-30 Arena Pharm Inc 1,2,3-trisubstituted aryl and heteroaryl derivatives as modulators of metabolism and the prophylaxis and treatment of disorders related thereto such as diabetes and hyperglycemia
US20050008640A1 (en) * 2003-04-23 2005-01-13 Wendy Waegell Method of treating transplant rejection
US7429596B2 (en) * 2003-06-20 2008-09-30 The Regents Of The University Of California 1H-pyrrolo [2,3-D] pyrimidine derivatives and methods of use thereof
BRPI0412689A (pt) * 2003-07-14 2006-10-03 Arena Pharm Inc derivados de heteroarila e arila fundida como moduladores de metabolismo e a profilaxia e tratamento de distúrbios relacionados a ele
US7884097B2 (en) * 2003-09-05 2011-02-08 Sequella, Inc. Methods and compositions comprising diamines as new anti-tubercular therapeutics
SG148161A1 (en) 2003-11-05 2008-12-31 Palingen Inc Enhanced b cell cytotoxicity of cdim binding antibody
GB0401334D0 (en) * 2004-01-21 2004-02-25 Novartis Ag Organic compounds
JP2007520559A (ja) * 2004-02-03 2007-07-26 アボット・ラボラトリーズ 治療薬としてのアミノベンゾオキサゾール類
WO2005085249A1 (en) * 2004-02-27 2005-09-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Fused derivatives of pyrazole
CA2560269A1 (en) * 2004-03-19 2005-09-29 The Penn State Research Foundation Combinatorial methods and compositions for treatment of melanoma
US20080287405A1 (en) * 2004-05-14 2008-11-20 Thannickal Victor J Compositions and Methods Relating to Protein Kinase Inhibitors
WO2005117932A1 (en) * 2004-06-04 2005-12-15 The Board Of Governors For Higher Education, State Of Rhode Island And Providence Plantations Bisubstrate inhibitors of protein tyrosine kinases as therapeutic agents
EP1768662A2 (en) 2004-06-24 2007-04-04 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Small molecule immunopotentiators and assays for their detection
JP2008519030A (ja) 2004-11-05 2008-06-05 パリンゲン インコーポレーテッド 抗体で誘導される細胞膜損傷
WO2006068760A2 (en) * 2004-11-19 2006-06-29 The Regents Of The University Of California Anti-inflammatory pyrazolopyrimidines
DOP2006000009A (es) * 2005-01-13 2006-08-15 Arena Pharm Inc Procedimiento para preparar eteres de pirazolo [3,4-d] pirimidina
US8143285B2 (en) 2005-09-06 2012-03-27 Shionogi & Co., Ltd. Indolecarboxylic acid derivative having PGD2 receptor antagonistic activity
US20070072933A1 (en) * 2005-09-26 2007-03-29 Peyman Gholam A Delivery of an ocular agent
PL2385053T3 (pl) 2005-11-17 2014-05-30 Osi Pharmaceuticals Llc Związki pośrednie do wytwarzania skondensowanych bicyklicznych inhibitorów mTOR
CN101448506A (zh) * 2005-12-02 2009-06-03 拜尔健康护理有限责任公司 通过抑制有丝分裂酶激酶治疗癌症的吡咯并三嗪衍生物
WO2007064931A2 (en) * 2005-12-02 2007-06-07 Bayer Healthcare Llc Substituted 4-amino-pyrrolotriazine derivatives useful for treating hyper-proliferative disorders and diseases associated with angiogenesis
PE20070855A1 (es) * 2005-12-02 2007-10-14 Bayer Pharmaceuticals Corp Derivados de 4-amino-pirrolotriazina sustituida como inhibidores de quinasas
EP1973917B1 (en) * 2005-12-29 2015-06-10 AbbVie Inc. Protein kinase inhibitors
US7625880B2 (en) 2006-01-13 2009-12-01 Pharmacyclics, Inc. Inhibitors of tyrosine kinases and uses thereof
DK1988777T3 (da) * 2006-02-09 2012-01-16 Athersys Inc Pyrazoler til behandling af fedme og andre cns-lidelser
MX2008011220A (es) * 2006-03-07 2008-09-11 Array Biopharma Inc Compuestos de pirazol heterobiciclicos y metodos de uso.
MX2008012928A (es) * 2006-04-04 2009-03-06 Univ California Antagonistas de pi3-cinasa.
NL2000613C2 (nl) * 2006-05-11 2007-11-20 Pfizer Prod Inc Triazoolpyrazinederivaten.
GB0610242D0 (en) * 2006-05-23 2006-07-05 Novartis Ag Organic compounds
ES2585902T3 (es) 2006-09-22 2016-10-10 Pharmacyclics Llc Inhibidores de tirosina cinasa de Bruton
WO2008121742A2 (en) 2007-03-28 2008-10-09 Pharmacyclics, Inc. Inhibitors of bruton's tyrosine kinase
WO2008054827A2 (en) 2006-11-03 2008-05-08 Pharmacyclics, Inc. Bruton's tyrosine kinase activity probe and method of using
JP2010514692A (ja) 2006-12-20 2010-05-06 バイエル ヘルスケア リミティド ライアビリティ カンパニー 癌の治療に有用なヒドロキシメチルフェニルピラゾリル尿素化合物
JP2010514777A (ja) * 2006-12-26 2010-05-06 ファーマサイクリックス，インク． 併用療法においてヒストンデアセチラーゼ阻害剤を使用し、バイオマーカーをモニタする方法
US20080200458A1 (en) * 2007-01-18 2008-08-21 Joseph Barbosa Methods and compositions for the treatment of body composition disorders
US20080194557A1 (en) * 2007-01-18 2008-08-14 Joseph Barbosa Methods and compositions for the treatment of pain, inflammation and cancer
US20120101113A1 (en) 2007-03-28 2012-04-26 Pharmacyclics, Inc. Inhibitors of bruton's tyrosine kinase
US20100190777A1 (en) 2007-07-17 2010-07-29 Plexxikon Inc. Compounds and methods for kinase modulation, and indications therefor
RU2437883C1 (ru) * 2007-08-17 2011-12-27 Эл Джи Лайф Сайенсиз Лтд. Соединения индола и индазола в качестве ингибитора некроза клетки
GB2467670B (en) 2007-10-04 2012-08-01 Intellikine Inc Chemical entities and therapeutic uses thereof
US8193182B2 (en) 2008-01-04 2012-06-05 Intellikine, Inc. Substituted isoquinolin-1(2H)-ones, and methods of use thereof
CN101965336B (zh) 2008-01-04 2015-06-17 英特利凯恩有限责任公司 某些化学实体、组合物和方法
WO2009111529A2 (en) * 2008-03-04 2009-09-11 Children's Medical Center Corporation Method of treating polycystic kidney disease
WO2009114870A2 (en) 2008-03-14 2009-09-17 Intellikine, Inc. Kinase inhibitors and methods of use
US8993580B2 (en) 2008-03-14 2015-03-31 Intellikine Llc Benzothiazole kinase inhibitors and methods of use
WO2009136965A1 (en) * 2008-05-06 2009-11-12 Sequella, Inc. Compositions and methods comprising capuramycin analogues
US20090301928A1 (en) * 2008-06-05 2009-12-10 United Comb & Novelty Corporation Packaging For Lipped Containers
US20110224223A1 (en) 2008-07-08 2011-09-15 The Regents Of The University Of California, A California Corporation MTOR Modulators and Uses Thereof
CA2730106A1 (en) 2008-07-08 2010-01-14 Intellikine, Inc. Kinase inhibitors and methods of use
US8946239B2 (en) 2008-07-10 2015-02-03 Duquesne University Of The Holy Spirit Substituted pyrrolo, -furano, and cyclopentylpyrimidines having antimitotic and/or antitumor activity and methods of use thereof
CN102159214A (zh) 2008-07-16 2011-08-17 药品循环公司 用于实体肿瘤的治疗的布鲁顿酪氨酸激酶的抑制剂
JP5731978B2 (ja) 2008-09-26 2015-06-10 インテリカイン， エルエルシー 複素環キナーゼ阻害剤
ES2570429T3 (es) 2008-10-16 2016-05-18 Univ California Inhibidores de heteroaril quinasa de anillo condensado
US8476431B2 (en) 2008-11-03 2013-07-02 Itellikine LLC Benzoxazole kinase inhibitors and methods of use
US20100113472A1 (en) * 2008-11-03 2010-05-06 Chemocentryx, Inc. Compounds for the treatment of osteoporosis and cancers
US20120101261A1 (en) * 2009-04-15 2012-04-26 Fondazione Irccs Istituto Nazionale Dei Tumori Use of multi-kinase inhibitors in the treatment of vascular hyperpermeability
CA2760791C (en) 2009-05-07 2017-06-20 Intellikine, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
MX2012002066A (es) 2009-08-17 2012-03-29 Intellikine Inc Compuestos heterociclicos y usos de los mismos.
CA2771895A1 (en) * 2009-08-28 2011-03-03 Array Biopharma Inc. Raf inhibitor compounds and methods of use thereof
US7718662B1 (en) 2009-10-12 2010-05-18 Pharmacyclics, Inc. Pyrazolo-pyrimidine inhibitors of bruton's tyrosine kinase
WO2011047384A2 (en) 2009-10-16 2011-04-21 The Regents Of The University Of California Methods of inhibiting ire1
EP2519517B1 (en) 2009-12-29 2015-03-25 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Type ii raf kinase inhibitors
CN108558740B (zh) 2010-01-27 2021-10-19 艾尼纳制药公司 S1p1受体调节剂及其盐的制备方法
MX2012009208A (es) * 2010-02-08 2012-09-07 Msd Oss Bv Compuestos de 8-metil-1-fenil-imidazol[1, 5-a]pirazina.
ES2593256T3 (es) 2010-05-21 2016-12-07 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Compuestos químicos, composiciones y métodos para las modulaciones de cinasas
JP5892550B2 (ja) 2010-05-24 2016-03-23 トーアエイヨー株式会社 縮合イミダゾール誘導体
MX2020004501A (es) 2010-06-03 2021-11-09 Pharmacyclics Llc El uso de inhibidores de la tirosina quinasa de bruton (btk).
SG188548A1 (en) 2010-09-22 2013-04-30 Arena Pharm Inc Modulators of the gpr119 receptor and the treatment of disorders related thereto
CA2817577A1 (en) 2010-11-10 2012-05-18 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
DK2663309T3 (en) 2011-01-10 2017-06-19 Infinity Pharmaceuticals Inc METHODS FOR PRODUCING ISOQUINOLINONES AND SOLID FORMS OF ISOQUINOLINONES
US8889684B2 (en) * 2011-02-02 2014-11-18 Boehringer Ingelheim International Gmbh Azaindolylphenyl sulfonamides as serine/threonine kinase inhibitors
TWI592411B (zh) 2011-02-23 2017-07-21 英特爾立秦有限責任公司 激酶抑制劑之組合及其用途
EA025496B1 (ru) 2011-05-17 2016-12-30 Принсипиа Биофарма Инк. Ингибиторы тирозинкиназы
WO2012158795A1 (en) 2011-05-17 2012-11-22 Principia Biopharma Inc. Pyrazolopyrimidine derivatives as tyrosine kinase inhibitors
CA2840687C (en) 2011-07-01 2020-04-28 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Discovery of a somatic mutation in myd88 gene in lymphoplasmacytic lymphoma
EA201490265A1 (ru) 2011-07-13 2014-12-30 Фармасайкликс, Инк. Ингибиторы тирозинкиназы брутона
MX2014000648A (es) 2011-07-19 2014-09-25 Infinity Pharmaceuticals Inc Compuestos heterociclicos y sus usos.
AU2012284088B2 (en) 2011-07-19 2015-10-08 Infinity Pharmaceuticals Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
EP2548877A1 (en) * 2011-07-19 2013-01-23 MSD Oss B.V. 4-(5-Membered fused pyridinyl)benzamides as BTK-inhibitors
KR20140075693A (ko) 2011-08-29 2014-06-19 인피니티 파마슈티칼스, 인코포레이티드 헤테로사이클릭 화합물 및 그의 용도
EP2751112B1 (en) * 2011-09-02 2019-10-09 The Regents of The University of California Substituted pyrazolo[3,4-d]pyrimidines and uses thereof
CN103917231B (zh) 2011-09-13 2016-09-28 药品循环有限责任公司 组蛋白脱乙酰酶抑制剂与苯达莫司汀的联合制剂及其用途
EP2822935B1 (en) 2011-11-17 2019-05-15 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of c-jun-n-terminal kinase (jnk)
US8377946B1 (en) 2011-12-30 2013-02-19 Pharmacyclics, Inc. Pyrazolo[3,4-d]pyrimidine and pyrrolo[2,3-d]pyrimidine compounds as kinase inhibitors
TWI606064B (zh) 2012-02-08 2017-11-21 Ｉｇｍ生物科技公司 細胞死亡誘導分子（ｃｄｉｍ）結合蛋白類及彼等之用途
US8940742B2 (en) 2012-04-10 2015-01-27 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
RU2678767C2 (ru) * 2012-05-31 2019-02-01 ГБ005, Инк. Ингибиторы протеинкиназ
CA3218491A1 (en) 2012-06-04 2013-12-12 Pharmacyclics Llc Crystalline forms of a bruton's tyrosine kinase inhibitor
US8828998B2 (en) 2012-06-25 2014-09-09 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Treatment of lupus, fibrotic conditions, and inflammatory myopathies and other disorders using PI3 kinase inhibitors
GB201211309D0 (en) * 2012-06-26 2012-08-08 Fujifilm Mfg Europe Bv Process for preparing membranes
BR112015001690A2 (pt) 2012-07-24 2017-11-07 Pharmacyclics Inc mutações associadas com a resistência a inibidores da tirosina quinase de bruton (btk)
JP6327713B2 (ja) 2012-07-27 2018-05-23 国立研究開発法人理化学研究所 急性骨髄性白血病の治療又は再発抑制剤
PT2892900T (pt) 2012-09-10 2017-11-06 Principia Biopharma Inc Compostos de pirazolopirimidina como inibidores de cinase
CN104995192A (zh) 2012-09-26 2015-10-21 加利福尼亚大学董事会 Ire1的调节
EP2909194A1 (en) 2012-10-18 2015-08-26 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 (cdk7)
WO2014063054A1 (en) 2012-10-19 2014-04-24 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Bone marrow on x chromosome kinase (bmx) inhibitors and uses thereof
USRE48175E1 (en) 2012-10-19 2020-08-25 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Hydrophobically tagged small molecules as inducers of protein degradation
BR112015011171A2 (pt) 2012-11-15 2017-07-11 Pharmacyclics Inc compostos de pirrolopirimidina como inibidores da quinase
AU2013355110B2 (en) 2012-12-07 2017-11-09 VenatoRx Pharmaceuticals, Inc. Beta-lactamase inhibitors
CN105101970B (zh) 2013-01-10 2018-11-20 维纳拓尔斯制药公司 β-内酰胺酶抑制剂
US9593106B2 (en) 2013-02-07 2017-03-14 Heptares Therapeutics Limited Piperidin-1-yl and azepin-1-yl carboxylates as muscarinic M4 receptor agonists
SG10201809696UA (en) * 2013-03-15 2018-11-29 Janssen Pharmaceutica Nv Processes and intermediates for preparing a medicament
US9481667B2 (en) 2013-03-15 2016-11-01 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Salts and solid forms of isoquinolinones and composition comprising and methods of using the same
WO2014153509A1 (en) 2013-03-22 2014-09-25 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Combination of catalytic mtorc 1/2 inhibitors and selective inhibitors of aurora a kinase
US8957080B2 (en) 2013-04-09 2015-02-17 Principia Biopharma Inc. Tyrosine kinase inhibitors
PT2989106T (pt) 2013-04-25 2017-03-15 Beigene Ltd Compostos heterocíclicos fundidos como inibidores da proteína quinase
WO2015017812A1 (en) 2013-08-02 2015-02-05 Pharmacyclics, Inc. Methods for the treatment of solid tumors
WO2015023703A1 (en) 2013-08-12 2015-02-19 Pharmacyclics, Inc. Methods for the treatment of her2 amplified cancer
PL3702373T3 (pl) 2013-09-13 2022-12-05 Beigene Switzerland Gmbh Przeciwciała anty-PD1 i ich zastosowanie jako środki terapeutyczne i diagnostyczne
TN2016000094A1 (en) 2013-09-30 2017-07-05 Pharmacyclics Llc Inhibitors of bruton's tyrosine kinase.
WO2015051241A1 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
NZ718430A (en) 2013-10-04 2021-12-24 Infinity Pharmaceuticals Inc Heterocyclic compounds and uses thereof
WO2015058126A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Syros Pharmaceuticals, Inc. Heteroaromatic compounds useful for the treatment of prolferative diseases
JP6491202B2 (ja) 2013-10-18 2019-03-27 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド サイクリン依存性キナーゼ７（ｃｄｋ７）の多環阻害剤
KR102357526B1 (ko) 2013-10-25 2022-02-04 파마싸이클릭스 엘엘씨 이식편 대 숙주 질환의 치료 및 예방 방법
CA2934989C (en) 2014-02-03 2017-08-08 Cadila Healthcare Limited Novel heterocyclic compounds
EP3623364A1 (en) * 2014-02-13 2020-03-18 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Prodrug compounds and their uses
WO2015127310A1 (en) 2014-02-21 2015-08-27 Principia Biopharma Inc. Salts and solid form of a btk inhibitor
EA201691872A1 (ru) 2014-03-19 2017-04-28 Инфинити Фармасьютикалз, Инк. Гетероциклические соединения для применения в лечении pi3k-гамма-опосредованных расстройств
US9885086B2 (en) 2014-03-20 2018-02-06 Pharmacyclics Llc Phospholipase C gamma 2 and resistance associated mutations
WO2015160975A2 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
US9862688B2 (en) 2014-04-23 2018-01-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Hydrophobically tagged janus kinase inhibitors and uses thereof
US10017477B2 (en) 2014-04-23 2018-07-10 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Janus kinase inhibitors and uses thereof
GB201410430D0 (en) 2014-06-11 2014-07-23 Redx Pharma Ltd Compounds
KR102003754B1 (ko) 2014-07-03 2019-07-25 베이진 엘티디 Pd-l1 항체와 이를 이용한 치료 및 진단
EP3174539A4 (en) 2014-08-01 2017-12-13 Pharmacyclics, LLC Inhibitors of bruton's tyrosine kinase
WO2016022942A1 (en) 2014-08-07 2016-02-11 Pharmacyclics Llc Novel formulations of a bruton's tyrosine kinase inhibitor
US9708348B2 (en) 2014-10-03 2017-07-18 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Trisubstituted bicyclic heterocyclic compounds with kinase activities and uses thereof
ITRM20140620A1 (it) 2014-10-30 2016-04-30 Lead Discovery Siena S R L Compounds and uses thereof
UY36390A (es) * 2014-11-05 2016-06-01 Flexus Biosciences Inc Compuestos moduladores de la enzima indolamina 2,3-dioxigenasa (ido), sus métodos de síntesis y composiciones farmacéuticas que los contienen
EA201790806A1 (ru) 2014-11-05 2017-11-30 Флексус Байосайенсиз, Инк. Иммунорегулирующие средства
CN104478884A (zh) * 2014-12-05 2015-04-01 广东东阳光药业有限公司 一种中间体的制备方法
AU2015364335B2 (en) 2014-12-18 2020-11-26 Principia Biopharma Inc. Treatment of pemphigus
JP6736253B2 (ja) * 2014-12-22 2020-08-05 ザ チャイニーズ ユニバーシティ オブ ホンコン 体細胞から多能性幹細胞を作製するための機械的操作とプログラミンの併用
US10167451B2 (en) 2014-12-22 2019-01-01 The Chinese University Of Hong Kong Combinational use of mechanical manipulation and programin derivatives to increase Oct4, Sox2, or Nanog expression in fibroblasts
US10870651B2 (en) 2014-12-23 2020-12-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 (CDK7)
MX2017008925A (es) 2015-01-06 2017-10-11 Arena Pharm Inc Metodos de condiciones de tratamiento relacionadas con el receptor s1p1.
CN105777755A (zh) * 2015-01-07 2016-07-20 常州百敖威生物科技有限公司 一种伊鲁替尼中间体3-碘-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺的制备方法
AU2016226279B2 (en) 2015-03-03 2021-11-11 Pharmacyclics Llc Pharmaceutical formulations of Bruton's tyrosine kinase inhibtor
JP6861166B2 (ja) 2015-03-27 2021-04-21 ダナ−ファーバー キャンサー インスティテュート， インコーポレイテッド サイクリン依存性キナーゼの阻害剤
US10702527B2 (en) 2015-06-12 2020-07-07 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Combination therapy of transcription inhibitors and kinase inhibitors
KR102603199B1 (ko) 2015-06-22 2023-11-16 아레나 파마슈티칼스, 인크. Ｓ1ｐ1 수용체-관련 장애에서의 사용을 위한 (ｒ)-2-(7-(4-시클로펜틸-3-(트리플루오로메틸)벤질옥시)-1,2,3,4-테트라히드로시클로-펜타[ｂ]인돌-3-일)아세트산 (화합물 1)의 결정성 ｌ-아르기닌 염
TW201718572A (zh) 2015-06-24 2017-06-01 普林斯匹亞生物製藥公司 酪胺酸激酶抑制劑
EP3347018B1 (en) 2015-09-09 2021-09-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinases
CN114230571A (zh) 2015-09-14 2022-03-25 无限药品股份有限公司 异喹啉酮的固体形式、其制备方法、包含其的组合物及其使用方法
AU2016322063A1 (en) 2015-09-16 2018-04-12 Loxo Oncology, Inc. Pyrazolopyrimidine derivatives as BTK inhibitors for the treatment of cancer
SG11201805044WA (en) 2015-12-16 2018-07-30 Loxo Oncology Inc Compounds useful as kinase inhibitors
WO2017161116A1 (en) 2016-03-17 2017-09-21 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Isotopologues of isoquinolinone and quinazolinone compounds and uses thereof as pi3k kinase inhibitors
WO2017214269A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
JP7054681B2 (ja) 2016-06-24 2022-04-14 インフィニティー ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 組合せ療法
KR102391693B1 (ko) 2016-06-29 2022-04-29 프린시피아 바이오파마, 인코퍼레이티드 2-[3-[4-아미노-3-(2-플루오로-4-페녹시-페닐)피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-카르보닐]-4-메틸-4-[4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일]펜트-2-엔니트릴의 변형 방출 제제
WO2018007885A1 (en) 2016-07-05 2018-01-11 Beigene, Ltd. COMBINATION OF A PD-l ANTAGONIST AND A RAF INHIBITOR FOR TREATING CANCER
KR20230162137A (ko) * 2016-08-16 2023-11-28 베이진 스위찰랜드 게엠베하 (s)-7-(1-아크릴로일피페리딘-4-일)-2-(4-페녹시페닐)-4,5,6,7-테트라-하이드로피라졸로 [1,5-a] 피리미딘-3-카르복스아미드의 제조 및 그 용도
TWI739887B (zh) 2016-08-19 2021-09-21 英屬開曼群島商百濟神州有限公司 使用包含btk抑制劑的組合產品治療癌症
EP3573989A4 (en) 2017-01-25 2020-11-18 Beigene, Ltd. CRYSTALLINE FORMS OF (S) -7- (1- (BUT-2-YNOYL) -PIPERIDINE-4-YL) -2- (4-PHENOXYPHENYL) -4,5,6,7-TETRAHYDROPYRAZOLO [1,5-A ] PYRIMIDINE-3-CARBOXAMIDE, MANUFACTURING AND USES THEREOF
WO2018151873A1 (en) 2017-02-16 2018-08-23 Arena Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for treatment of primary biliary cholangitis
CA3066518A1 (en) 2017-06-26 2019-01-03 Beigene, Ltd. Immunotherapy for hepatocellular carcinoma
WO2019034009A1 (en) 2017-08-12 2019-02-21 Beigene, Ltd. BTK INHIBITOR WITH ENHANCED DOUBLE SELECTIVITY
US11786529B2 (en) 2017-11-29 2023-10-17 Beigene Switzerland Gmbh Treatment of indolent or aggressive B-cell lymphomas using a combination comprising BTK inhibitors
CN108299311A (zh) * 2018-02-28 2018-07-20 杭州福斯特药业有限公司 一种5-溴-2-氯-n-环戊基嘧啶-4-胺的制备方法
CN111171035B (zh) * 2018-11-13 2021-03-30 山东大学 4-苯氧基苯基吡唑并嘧啶酰胺衍生物的制备方法和应用
CN111454268B (zh) * 2019-01-18 2023-09-08 明慧医药（上海）有限公司 作为布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂的环状分子
US20220372017A1 (en) * 2019-06-24 2022-11-24 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Hck degraders and uses thereof
CN110511225B (zh) * 2019-08-19 2023-07-18 杭州中美华东制药有限公司 一种伊布替尼中间体的合成方法
WO2021038540A1 (en) 2019-08-31 2021-03-04 Sun Pharma Advanced Research Company Limited Cycloalkylidene carboxylic acids and derivatives as btk inhibitors
US11787796B2 (en) 2019-09-18 2023-10-17 Takeda Pharmaceutical Company Limited Plasma Kallikrein inhibitors and uses thereof
KR20220098732A (ko) * 2019-10-08 2022-07-12 다나-파버 캔서 인스티튜트 인크. 요법, 특히 myd88 돌연변이된 질환에 사용하기 위한 hck 억제제로서의 피라졸로피리미딘 유도체
CN112961158B (zh) * 2020-03-05 2022-07-01 四川大学华西医院 氨基嘧啶并吡唑/吡咯类衍生物及其制备方法和用途
AU2020436612A1 (en) * 2020-03-16 2022-09-01 Flash Therapeutics, Llc Compounds for treating or inhibiting recurrence of acute myeloid leukemia
KR20230121758A (ko) 2020-11-18 2023-08-21 데시페라 파마슈티칼스, 엘엘씨. Gcn2 및 perk 키나제 억제제 및 그의 사용 방법
EP4308229A1 (en) * 2021-03-17 2024-01-24 Takeda Pharmaceutical Company Limited Inhibitors of plasma kallikrein
US11786531B1 (en) 2022-06-08 2023-10-17 Beigene Switzerland Gmbh Methods of treating B-cell proliferative disorder
CN115650986A (zh) * 2022-10-22 2023-01-31 浙江工业大学 肉桂酰氨基吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物及其制备和应用

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4140851A (en) 1977-11-21 1979-02-20 The United States Of America As Represented By The Department Of Health, Education And Welfare Synthesis and antitumor activity of 2,4,5-trisubstituted-pyrrolo2,3-d]-pyrimidine nucleosides
DE2818676A1 (de) 1978-04-27 1979-11-08 Troponwerke Gmbh & Co Kg Substituierte 5,6-dimethylpyrrolo 2,3-d pyrimidine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als arzneimittel
DE3036390A1 (de) 1980-09-26 1982-05-13 Troponwerke GmbH & Co KG, 5000 Köln Neue pyrrolo-pyrimidine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung bei der herstellung von biologischen wirkstoffen
US4892865A (en) 1987-12-01 1990-01-09 The Regents Of The University Of Michigan Pyrrolo[2,3-d]pyrimidine nucleosides as antiviral agents
US4927830A (en) 1988-04-08 1990-05-22 The Regents Of The University Of Michigan Acyclic pyrrolo[2,3-D]pyrimidine analogs as antiviral agents
US4968686A (en) 1988-04-08 1990-11-06 The Regents Of The University Of Michigan Acyclic pyrrolo [2,3-d]pyrimidine analogs as antiviral agents
JP2983254B2 (ja) 1989-06-14 1999-11-29 武田薬品工業株式会社 ピロロ〔２，３―ｄ〕ピリミジン誘導体の製造法およびその中間体
US5721356A (en) 1989-09-15 1998-02-24 Gensia, Inc. Orally active adenosine kinase inhibitors
US5674998A (en) 1989-09-15 1997-10-07 Gensia Inc. C-4' modified adenosine kinase inhibitors
US5726302A (en) 1989-09-15 1998-03-10 Gensia Inc. Water soluble adenosine kinase inhibitors
US4996206A (en) 1989-12-11 1991-02-26 The Trustees Of Princeton University N-(pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-3-ylacyl)-glutamic acid derivatives
KR0162654B1 (ko) 1989-12-11 1998-11-16 알렌 제이. 시니스갤리 N-(피롤로[2,3-d]피리미딘-3-일아크릴)-글루타민산 유도체
US5248775A (en) 1989-12-11 1993-09-28 The Trustees Of Princeton University Pyrrolo(2,3-d)pyrimidines
CA2100863A1 (en) 1991-01-23 1992-07-24 David A. Bullough Adenosine kinase inhibitors
US5254687A (en) 1991-12-04 1993-10-19 The Trustees Of Princeton University Process for the preparation of pyrrolo[2,3-d]pyrimidines
IL108523A0 (en) 1993-02-03 1994-05-30 Gensia Inc Pharmaceutical compositions containing adenosine kinase inhibitors for preventing or treating conditions involving inflammatory responses and pain
WO1996010028A1 (en) 1994-09-29 1996-04-04 Novartis Ag PYRROLO[2,3-d]PYRIMIDINES AND THEIR USE
ES2150113T3 (es) * 1995-04-03 2000-11-16 Novartis Ag Derivados de pirazol y procedimientos para la preparacion de los mismos.
US5593997A (en) * 1995-05-23 1997-01-14 Pfizer Inc. 4-aminopyrazolo(3-,4-D)pyrimidine and 4-aminopyrazolo-(3,4-D)pyridine tyrosine kinase inhibitors
GB9514265D0 (en) 1995-07-13 1995-09-13 Wellcome Found Hetrocyclic compounds
AR004010A1 (es) 1995-10-11 1998-09-30 Glaxo Group Ltd Compuestos heterociclicos
CH690773A5 (de) 1996-02-01 2001-01-15 Novartis Ag Pyrrolo(2,3-d)pyrimide und ihre Verwendung.
AU748884B2 (en) 1997-03-19 2002-06-13 Abbott Gmbh & Co. Kg Pyrrolo(2,3d)pyrimidines and their use as tyrosine kinase inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
AU780052B2 (en) 2005-02-24
JP2003509428A (ja) 2003-03-11
NO20021328L (no) 2002-05-21
NZ517758A (en) 2004-06-25
CA2385747A1 (en) 2001-03-22
PL354249A1 (en) 2003-12-29
TWI230709B (en) 2005-04-11
ATE247657T1 (de) 2003-09-15
PT1212327E (pt) 2004-01-30
EP1212327B1 (en) 2003-08-20
EP1212327A2 (en) 2002-06-12
DE60004685D1 (de) 2003-09-25
HK1050355A1 (en) 2003-06-20
HK1050355B (zh) 2004-10-15
DE60004685T2 (de) 2004-07-29
BG106586A (en) 2003-01-31
WO2001019829A3 (en) 2001-09-27
ZA200202123B (en) 2003-08-27
EP1212327B8 (en) 2004-02-25
BR0014073A (pt) 2002-07-16
TR200201505T2 (tr) 2003-01-21
NO20021328D0 (no) 2002-03-18
SK3812002A3 (en) 2003-09-11
KR20020088406A (ko) 2002-11-27
ES2207552T3 (es) 2004-06-01
US6660744B1 (en) 2003-12-09
WO2001019829A2 (en) 2001-03-22
IL148718A0 (en) 2002-09-12
AR031528A1 (es) 2003-09-24
CN1390219A (zh) 2003-01-08
MXPA02002898A (es) 2003-10-14
AU7495000A (en) 2001-04-17
DK1212327T3 (da) 2003-12-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ2002936A3 (cs) Pyrazolopyrimidiny jako terapeutické prostředky
US6921763B2 (en) Pyrazolopyrimidines as therapeutic agents
US7332497B2 (en) Pyrazolopyrimidines as therapeutic agents
RU2675105C2 (ru) Замещенные аминопиримидиновые соединения и способы их использования
US6713474B2 (en) Pyrrolopyrimidines as therapeutic agents
US20030153568A1 (en) Benzothiazole derivatives
JP2002526500A (ja) プロテインキナーゼ阻害剤としてのピロロピリミジン
WO2001072751A1 (en) Pyrrolopyrimidines as tyrosine kinase inhibitors
ES2583006T3 (es) Compuestos de 3-sustituido-8-sustituido-3H-imidazo[5,1-d][1,2,3,5-tetrazin-4-ona y su uso
ES2547151T3 (es) Derivados de 7-azaindol adecuados para el tratamiento de carcinosis
AU2002316030A1 (en) Pyrazolopyrimidines as therapeutic agents
AU2002258590A1 (en) Pyrazolopyrimidines as Therapeutic Agents