TW202317185A - 抗ＴＧＦ－β抗體配製品及其用途 - Google Patents

Abstract

本公開文本提供了包含抗TGF-β抗體的醫藥組合物及其使用方法。

Description

抗TGF-β抗體配製品及其用途

本公開文本提供了包含抗TGF-β抗體的醫藥組合物及其使用方法。

轉化生長因數β（TGF-β）是控制包括增殖、分化、存活、遷移和上皮間充質轉換在內的許多關鍵細胞功能的細胞因數。它調節不同的生物過程，如細胞外基質形成、創傷癒合、胚胎發育、骨骼發育、造血作用、免疫和炎性反應以及惡性轉化。TGF-β的失調導致病理性病症，例如出生缺陷、癌症、慢性炎症以及自身免疫和纖維化疾病。

TGF-β具有三個已知的同種型：TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3。所有三個同種型最初都被翻譯為前肽。在切割之後，成熟的C末端保持與N末端締合（被稱為潛在型締合肽或LAP），從而形成小潛在複合物（SLC），這種小潛在複合物是從細胞分泌而來。SLC無法與TGF-β受體II（TGFβRII）結合阻止了受體接合。由N末端和C末端的解離而活化通過包括蛋白水解切割、酸性pH或整合蛋白結構改變在內的若干種機制之一發生（Connolly等人, Int J Biol Sci.(2012) 8(7):964-78）。

TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3在其功能上是多效性的，並且跨細胞和組織類型以不同的模式表現。它們具有相似的體外活性，但特定細胞類型中的單獨敲除表明在體內的作用並不相同，儘管它們都能與同一受體結合（Akhurst等人, Nat Rev Drug Discov. (2012) 11(10):790-811）。在TGF-β與TGFβRII結合時，所述受體的組成型激酶活性磷酸化並活化TGF-β受體I（TGFβRI），後者磷酸化SMAD2/3，從而允許與SMAD4締合、定位到細胞核並且轉錄TGF-β反應基因。同上。除了這種經典的信號傳導級聯之外，非經典的途徑通過包括p38 MAPK、PI3K、AKT、JUN、JNK和NF-κB在內的其他因數傳輸信號。TGF-β信號傳導也受到包括WNT、Hedgehog、Notch、INF、TNF和RAS在內的其他途徑的調控。因此，TGF-β信號傳導的最終結果是所有這些信號傳導途徑的串擾，這種串擾整合了細胞的狀態和環境。同上。

鑒於TGF-β的不同功能，需要有效的泛TGF-β特異性抗體療法。

相關申請的交叉引用

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本公開文本提供了包含抗TGF-β抗體的醫藥組合物。在一方面，本公開文本提供了一種醫藥組合物，其中所述組合物是水性液體溶液，所述水性液體溶液包含：20-200 mg/ml抗TGFβ抗體，其中所述抗體包含對應於SEQ ID NO: 1的殘基1-120的重鏈可變結構域（V _H）胺基酸序列和對應於SEQ ID NO: 2的殘基1-108的輕鏈可變結構域（V _L）胺基酸序列；10-50 mM乙酸鹽，任選地25 mM乙酸鹽；以及5%-15% w/v蔗糖，任選地8% w/v蔗糖；其中所述溶液的pH為5.0 ± 0.2或5.0 ± 0.3。在一些具體實施例中，所述組合物是pH為4.7-5.3的水性液體溶液。

在一些具體實施例中，所述抗體包含SEQ ID NO: 1中所示的重鏈胺基酸序列（有或沒有C末端賴胺酸）和SEQ ID NO: 2中所示的輕鏈胺基酸序列。

在一些具體實施例中，所述抗TGFβ抗體的濃度為40-180 mg/ml，任選地50 mg/ml或150 mg/ml。

在一些具體實施例中，所述組合物包含表面活性劑，如聚山梨醇酯（例如，聚山梨醇酯80（PS80））。在特定具體實施例中，所述組合物包含濃度為0.01%-0.10% w/v、任選地0.06% w/v的PS80。

在一些具體實施例中，所述組合物包含螯合劑，所述螯合劑任選地選自EDTA和DPTA。在某些具體實施例中，所述螯合劑的濃度為0至20 μM，任選地10 μM。

在特定具體實施例中，所述組合物包含50 mg/ml、75 mg/ml或150 mg/ml抗TGFβ抗體、25 mM乙酸鹽、10 µM EDTA、0.06% PS80和8% w/v蔗糖，所述組合物的pH為5.0 ± 0.3。在某些具體實施例中，所述抗體包含SEQ ID NO: 1中所示的重鏈胺基酸序列（有或沒有C末端賴胺酸）和SEQ ID NO: 2中所示的輕鏈胺基酸序列。

本公開文本還提供了一種製品，所述製品包含小瓶和使用說明書，其中所述小瓶含有約16 ml的本發明組合物。

本文還提供了一種治療有需要的患者的癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用治療有效量的本發明組合物。在一些具體實施例中，所述方法進一步包括施用另外的抗癌治療劑。在特定具體實施例中，所述組合物是以5 mg/kg或15 mg/kg的劑量靜脈內施用，任選地每兩週一次。本公開文本還提供了在這些方法中用於治療有需要的患者的本發明組合物、以及本發明組合物用於製造在本公開本文的治療方法中治療有需要的患者的藥物的用途。

本發明的其他特徵、目的和優勢在以下的具體實施方式中是清楚的。然而，應當理解，儘管指示了本發明的具體實施例和方面，但具體實施方式是通過僅說明而非限制的方式給出的。從具體實施方式中，本領域技術人員將清楚在本發明範圍內的各種變化和修改。

本公開文本提供了呈水性液體溶液的包含泛TGFβ特異性單株抗體的穩定醫藥組合物。一種這樣的抗體是Ab1。Ab1是靶向人TGF-β的所有三個同種型（TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3）的IgG ₄單株抗體，並且具有SEQ ID NO: 1的重鏈胺基酸序列和SEQ ID NO: 2的輕鏈胺基酸序列。

單株抗體的治療成功部分地取決於候選抗體藥物的可製造性、穩定性和遞送屬性。較差的溶液行為（例如，高溶液粘度或乳光）會極大地影響抗體藥物的可開發性。對Ab1的配製品研究已經顯示，這種抗體具有表面活性，並且在溶液攪拌時或其他介面應力條件下具有形成顯微鏡下可見微粒和可見微粒的高傾向性。諸位發明人已經發現，基於酸性pH為5.0左右的乙酸鹽緩衝液的本發明配製品顯著地提高了配製品在儲存和運輸期間的穩定性，包括減少微粒形成。諸位發明人已經發現，Ab1在較高pH（例如，pH 6.0）下顯示出不期望的溶液行為，如乳光和較差的膠體穩定性。諸位發明人還已經發現，通過添加表面活性劑，溶液中的顆粒形成可以進一步得到緩解，並且螯合劑的包含也會幫助改進配製品。 I. 泛特異性抗 TGFβ 單株抗體

本文所配製的單株抗體包含Ab1中的互補決定區（CDR）。此類抗體在本文中被統稱為“Ab1相關抗體”，其包括Ab1本身。在一些具體實施例中，所述抗體是包含人IgG ₄恒定區和人κ輕鏈恒定區的全人抗體。在另外的具體實施例（例如，Ab1）中，所述人IgG ₄恒定區具有在位置228處的突變（Eu編號）。在一些具體實施例（例如，Ab1）中，所述突變是絲胺酸到脯胺酸的突變（S228P）。

Ab1的重鏈和輕鏈胺基酸序列分別以如下SEQ ID NO: 1和2所示。在SEQ ID NO: 1的序列中，S228P位點為方框加黑體。可變結構域是斜體的。CDR以方框示出。重鏈的恒定結構域中的糖基化位點為黑體（N297）。

在一些具體實施例中，本文中的抗體具有含有上文所示的CDR的抗體（例如，人抗體）。也就是說，所述抗體具有以下重鏈和輕鏈CDR胺基酸序列： HCDR1  SNVIS (SEQ ID NO:3) HCDR2  GVIPIVDIANYAQRFKG (SEQ ID NO:4) HCDR3  TLGLVLDAMDY (SEQ ID NO:5) LCDR1   RASQSLG SSYLA (SEQ ID NO:6) LCDR2   GASSRAP (SEQ ID NO:7) LCDR3   QQYADSPIT (SEQ ID NO:8) 因此，所述抗體可以包含SEQ ID NO: 3、4、5、6、7和8。

在另外的具體實施例中，所述抗體具有上文所示的重鏈可變結構域（SEQ ID NO: 1的胺基酸1-120）和輕鏈可變結構域（SEQ ID NO: 2的胺基酸1-108）。在某些具體實施例中，本文所配製的抗體在重鏈中沒有C末端賴胺酸。

在特定具體實施例中，本文所配製的抗體是Ab1。Ab1在未糖基化時的估計分子量為144 kDa。Ab1的如通過質譜法確定的分子量為147.011 kDa，理論實驗等電點（pI）為6.78，並且實驗pI為約5.9-7.1。 II. 製備抗體的方法

可以通過本領域中已建立的方法來製備Ab1相關抗體。可以將編碼所述抗體的重鏈和輕鏈的DNA序列插入表現載體中，使得基因與必要的表現控制序列（如轉錄和翻譯控制序列）可操作性連接。表現載體包括質粒、逆轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒（AAV）、植物病毒（如花椰菜花葉病毒、煙草花葉病毒）、粘粒、YAC、EBV來源的附加體等。可以將抗體輕鏈編碼序列和抗體重鏈編碼序列插入單獨的載體中，並且可以使所述抗體輕鏈編碼序列和所述抗體重鏈編碼序列與同一或不同表現控制序列（例如，啟動子）可操作地連接。在一個具體實施例中，將兩個編碼序列插入同一表現載體中，並且可以使所述兩個編碼序列與同一表現控制序列（例如，共同啟動子）、單獨的相同的表現控制序列（例如，啟動子）或不同的表現控制序列（例如，啟動子）可操作地連接。可以通過標準方法將抗體編碼序列插入表現載體中（例如，連接抗體基因片段和載體上的互補限制性位點，或者如果不存在限制性位點，則進行平端連接）。

除了抗體鏈基因之外，重組表現載體可以攜帶調節序列，所述調節序列控制宿主細胞中抗體鏈基因的表現。用於哺乳動物宿主細胞表現的調節序列的例子包括引導哺乳動物細胞中的高水準的蛋白質表現的病毒元件，如源自逆轉錄病毒LTR的啟動子和/或增強子、源自巨細胞病毒（CMV）的啟動子和/或增強子（如CMV啟動子/增強子）、源自猿猴病毒40（SV40）的啟動子和/或增強子（如SV40啟動子/增強子）、源自腺病毒的啟動子和/或增強子（例如，腺病毒主要晚期啟動子（AdMLP））、多瘤和強哺乳動物啟動子（如天然免疫球蛋白和肌動蛋白啟動子）。

除了抗體鏈基因和調節序列之外，本發明的重組表現載體還可以攜帶另外的序列（如調節宿主細胞中載體的複製的序列（例如，複製起點））和可選擇標記基因。例如，可選擇標記基因賦予已將載體引入其中的宿主細胞對藥物（如G418、潮黴素或甲氨蝶呤）的抗性。可選擇標記基因可以包括二氫葉酸還原酶（DHFR）基因（在用甲氨蝶呤選擇/擴增的情況下用於dhfr-宿主細胞）、neo基因（用於G418選擇）和穀氨醯胺合成酶基因。

將編碼本公開文本的抗體的表現載體引入宿主細胞以進行表現。將宿主細胞在適於表現抗體的條件下培養，然後採集和分離所述抗體。宿主細胞包括哺乳動物、植物、細菌或酵母宿主細胞。作為用於表現的宿主的可獲得的哺乳動物細胞系是本領域熟知的，並且包括可從美國典型培養物保藏中心（ATCC）獲得的許多永生化細胞系。這些細胞系尤其包括中國倉鼠卵巢（CHO）細胞、NS0細胞、SP2細胞、HEK-293T細胞、293 Freestyle細胞（Invitrogen）、NIH-3T3細胞、HeLa細胞、小倉鼠腎（BHK）細胞、非洲綠猴腎細胞（COS）、人肝細胞癌細胞（例如，Hep G2）、A549細胞和許多其他細胞系。細胞系可以基於其表現水準來選擇。可以使用的其他細胞系是昆蟲細胞系，如Sf9或Sf21細胞。

此外，抗體的表現可以使用多種已知技術來增強。例如，谷氨醯胺合成酶基因表現系統（GS系統）是用於增強在某些條件下的表現的常用方法。

用於宿主細胞的組織培養基可以包含或不含動物來源的組分（ADC），如牛血清白蛋白。在一些具體實施例中，對於人身安全而言，無ADC培養基是優選的。組織培養可以使用分批補料方法、連續灌注方法或適合於宿主細胞和期望產率的任何其他方法進行。 III. 抗體配製品

本發明配製品賦予Ab1相關抗TGF-β抗體（包括Ab1）優異的穩定性。“穩定的”或“穩定性”是指組合物中的抗體的活性在儲存期間和/或當經受物理或化學應力時保持其物理穩定性、化學穩定性和/或生物活性的能力。穩定性可以在選定的溫度的背景下，例如在冷凍條件下（例如，-70ºC至-30ºC）、在冷藏條件下（例如，2ºC-8ºC）或在室溫下（例如，23ºC-25ºC），持續選定的時間段，例如16周、24周、36周、四個月、六個月、一年、兩年、三年或更長時間。蛋白質的穩定性可以在這樣的測定中測量，所述測定在較短的時間內進行，但是所述測定的結果指示臨床環境中的穩定性。此類測定包括冷凍/解凍迴圈測定，其中使蛋白質組合物經受一個或多個冷凍-解凍迴圈；或攪拌測定，其中使蛋白質組合物在預定的時間段內經受機械攪拌處理。可以通過這樣的方式確定蛋白質穩定性：將蛋白質組合物在指定的儲存溫度（如2ºC-8ºC）下儲存選定的時間段，並且分析其結構和功能屬性，如二聚化或聚集程度（例如，如通過尺寸排阻HPLC或蛋白質凝膠測量的）、蛋白質降解（例如，如通過尺寸排阻HPLC或蛋白質凝膠測量的）、組合物的顏色變化、液體組合物的透明度、酶活性、聚糖含量和組成、受體結合親和力、甲硫胺酸殘留氧化和組合物的生物活性。還參見以下實施例以更詳細地說明用於檢查抗體配製品的穩定性的方法。

如果在給定時間下的化學穩定性是使得抗體被認為維持如下文所定義的其生物活性，則本文所述的抗體在醫藥組合物中“保持其化學穩定性”。為了評估化學穩定性，可以檢測和定量抗體的化學改變形式。化學改變可以涉及尺寸修飾並且可以使用本領域已知的方法（如尺寸排阻色譜法、毛細管等電聚焦（cIEF）、液相色譜法/質譜法（LCMS）、SDS-PAGE和/或基質輔助鐳射解吸電離/飛行時間質譜法（MALDI/TOF MS））來評估。其他類型的化學改變包括電荷改變，所述電荷改變例如可以由於脫醯胺化或氧化而發生，並且可以通過離子交換色譜法、質譜法或尺寸排阻色譜法來評估。在一些具體實施例中，在包括本文所述的抗體的組合物的加速儲存期間發生的一種類型的化學改變涉及抗體的氧化。在一些具體實施例中，在加速儲存時，在金屬加標的樣品中，SEQ ID NO: 1的殘基M252和M428被氧化。

本公開文本的組合物含有一種或多種藥學上可接受的賦形劑。術語“賦形劑”或“載體”在本文中用來描述除本發明的一種或多種化合物之外的任何成分。“賦形劑”可以是用作藥物的一種或多種活性成分的稀釋劑、媒介物、載體、防腐劑、粘合劑或穩定劑的惰性物質。例如，所述組合物可以含有緩衝劑、等滲劑和/或穩定劑（如抗氧化劑）。在一些情況下，一種試劑可以用於不止一個的這些目的。在一些具體實施例中，本發明的組合物含有本文所述的抗TGF-β抗體、緩衝劑（如乙酸鹽）、穩定劑（如蔗糖）和表面活性劑（如聚山梨醇酯80（PS80））。本文所述的抗TGF-β抗體由於組合物中特定組分的組合而具有提高的穩定性。本發明的組合物可以是水性液體溶液或凍幹製劑。在優選具體實施例中，本發明的組合物是水性液體溶液。

在一些具體實施例中，所述組合物包含穩定劑，如L-甲硫胺酸。在特定具體實施例中，所述組合物是包含5-20 mM（例如，10 mM）L-甲硫胺酸的水性液體組合物。

在一些具體實施例中，所述組合物包含填充劑，如甘露糖醇。在特定具體實施例中，所述組合物是包含1%-10%（例如，3.5%）甘露糖醇（w/v）的水性液體組合物。

在一些具體實施例中，所述水性液體組合物包含緩衝液，如L-組胺酸。在一些具體實施例中，所述水性液體組合物包含5-20 mM（例如，10 mM）L-組胺酸。在一些具體實施例中，所述水性液體組合物包含在特定具體實施例中，所述水性液體組合物包含10 mM L-組胺酸。

在一些具體實施例中，所述緩衝液的pH範圍為從4.0至6.0。在一些具體實施例中，所述緩衝液的pH為6.0。在優選具體實施例中，所述緩衝液的pH為5.0 ± 0.3。在一些具體實施例中，用氫氧化鈉調節所述緩衝液的pH。

在一些具體實施例中，所述組合物是包含40-180 mg/ml（例如，50-150 mg/ml）Ab1相關抗體、10-50 mM（例如，10-30 mM）乙酸鹽和1%-10%（例如，6%-8%）w/v蔗糖的水性液體組合物。在一些其他具體實施例中，所述組合物是包含15-40 mg/mL抗TGF-β單株抗體、5-20 mM（例如，10 mM）L-組胺酸、1%-10%（例如，6-8%）蔗糖、1%-10%（例如，3.5%）甘露糖醇和5-20 mM（10 mM）L-甲硫胺酸（所有均為w/v濃度）的水性液體組合物。所述水性液體組合物的pH可以是4.0-6.0（例如，4.7-5.5）。

在一些具體實施例中，所述水性液體組合物包含0.01%-0.07% w/v的一種或多種表面活性劑。示例性的表面活性劑包括非離子型去污劑，如聚山梨醇酯（例如，聚山梨醇酯20和80）和泊洛沙姆（例如，泊洛沙姆188）。在一些具體實施例中，所述水性液體組合物包含0.01%-0.07%聚山梨醇酯80（例如，大於0.025%或0.05%-0.06% PS80）。在一些情況下，一種或多種表面活性劑的存在可以説明降低液體組合物中的濁度/乳光。

在一些具體實施例中，所述水性液體組合物包含0至50 µM（例如，10 µM）的一種或多種螯合劑，如EDTA或DPTA。

在優選具體實施例中，所述組合物是包含50或150 mg/ml抗TGF-β單株抗體、25 mM乙酸鹽、10 µM EDTA或DPTA、0.06% PS80和8% w/v蔗糖的水性液體組合物。在特定具體實施例中，所述水性液體組合物的pH為5 ± 0.3。在特定具體實施例中，所述組合物是包含25 mg/mL抗TGF-β單株抗體、10 mM L-組胺酸、2%（w/v）蔗糖、3.5%（w/v）甘露糖醇、10 mM L-甲硫胺酸、0.01%（w/v）聚山梨醇酯80的水性液體組合物，且所述水性液體組合物的pH為6.0。在特定具體實施例中，所述組合物是包含25 mg/mL抗TGF-β單株抗體、1.18 mg/mL L-組胺酸單鹽酸鹽、0.68 mg/mL L-組胺酸、1.5 mg/mL L-甲硫胺酸、0.1 mg/mL聚山梨醇酯80、20 mg/mL蔗糖和35.3 mg/mL甘露糖醇的水性液體組合物，其pH為6.0。

	濃度(mg/mL)
Ab1	25.0
L-組胺酸單鹽酸鹽	1.18
L-組胺酸	0.68
L-甲硫胺酸	1.50
聚山梨醇酯80	0.10
蔗糖	20.0
甘露糖醇	35.3
注射用水	適量

所述水性液體組合物可以通過這樣的方式製備：將通過重組技術產生並且隨後從宿主細胞純化的Ab1與本文所述的賦形劑在水中混合，並且將所得的混合物調節至期望pH。例如，可以將抗TGF-β單株抗體和期望的賦形劑添加至或經緩衝液交換至期望pH的乙酸鹽緩衝液中。

在一些具體實施例中，所述水性液體組合物可以通過重構本發明的凍幹組合物來製備。可以用藥學上可接受的液體（如無菌水、鹽水（例如，0.9%氯化鈉）或乙酸鹽緩衝鹽水）來完成重構。 IV. 製品

本發明的組合物可以在製品（例如，試劑盒）中提供，所述製品包含使用說明書和任選地用於治療障礙的其他治療劑。所述製品中的活性藥物成分（API）（例如，Ab1）可以以按照本文所述的給藥方案容易施用的量提供。

例如，所述製品可以包含在16 mL的水性液體溶液中含有800 mg Ab1的小瓶，所述水性液體溶液包含25 mM乙酸鹽、8%蔗糖、10 µM EDTA或DTPA、0.06% PS80，其pH為5.0 ± 0.3。在一些具體實施例中，所述小瓶含有800 mg的Ab1、15 mg的乙酸鹽、800 mg的蔗糖和6 mg的PS80。在一些具體實施例中，所述小瓶含有800 mg的Ab1、24 mg的乙酸鹽、1280 mg的蔗糖和9.6 mg的PS80。在特定具體實施例中，所述小瓶是含有標準封閉物的經預處理的玻璃小瓶。例如，所述小瓶可以是帶有West 20 mm塞子作為封閉物的ISO 20R類型1管狀玻璃小瓶。

本發明組合物可以在-3ºC至5ºC下儲存兩年或更多年。 V.   Ab1 和相關抗體的用途

TGF-β受體在免疫細胞上廣泛表現，從而導致TGF-β在先天免疫系統和適應性免疫系統兩者中的廣泛作用。TGF-β已經與許多患病病症有關聯，例如出生缺陷、癌症、慢性炎症、自身免疫和纖維化疾病。可以使用治療量的Ab1或相關抗體來治療這些病症。“治療有效”量是指Ab1、相關抗體或本文所提及的另一種治療劑的如下量，其緩解所治療的病症的一種或多種症狀。這種量可以基於正在治療的病症或患者而變化，並且可以由醫療保健專業人員使用既定的原則來確定。

本文所述的醫藥組合物的適當的劑量水準可以基於多種因素確定，包括患者的年齡、體重、疾病狀況、總體健康狀況和病史；以及藥物施用的途徑和頻率；藥物中Ab1活性成分的藥效學和藥代動力學；和患者可能同時服用的任何其他藥物。在一些具體實施例中，所述Ab1或相關抗體可以以40、20或15 mg/kg或更少（如14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1 mg/kg）施用。在一些具體實施例中，所述Ab1可以以5 mg/kg和15 mg/kg施用。給藥頻率可以為例如每天、每兩天、每三天、每四天或每五天、每週、每兩周或每三周、每月或每兩月。在一些具體實施例中，給藥頻率可以是每兩周。如臨床醫生確定是適當的，連續劑量之間的間隔可以是兩周或短於或長於兩周。

所述抗體可以靜脈內施用（例如，經0.5-8小時的靜脈輸注）、皮下施用、局部施用或適合於病症和藥物配製品的任何其他施用途徑施用。

Ab1和相關抗體源自人源抗體基因，因此在人體中具有低免疫原性；然而，當用Ab1或相關抗體治療患者時，可以監測患者的不良事件。

在一些具體實施例中，本發明的抗體的功效可以由在患者體內（例如，在患者體內的受累組織（如腫瘤組織）中）出現以下中的一個或多個來指示：(1) TGF-β水準或活性降低；(2) MIP2和/或KC/GRO水準提高；(3) CD8+ T細胞（如INF-γ-陽性CD8+ T細胞）對腫瘤組織的活化和浸潤；以及 (4) 自然殺傷（NK）細胞的聚集增加。

所述患者可以是成人（例如，18歲或以上的患者，包括65歲或以上的老年患者）。所述患者可以是兒科患者（小於18歲的患者，例如新生兒至6歲、6至12歲或12至18歲的患者）。

在某些具體實施例中，每兩周以5 mg/kg或15 mg/kg向患者靜脈內施用含有50 mg/ml Ab1並且含有25 mM乙酸鹽、8%蔗糖、10 µM EDTA或DPTA和0.06% PS80的藥物Ab1組合物（pH 5.0 ± 0.3）（例如，在10 mL小瓶中提供），直到已經實現期望的治療終點的這一時間為止。對於IV施用，可以將Ab1組合物稀釋於鹽水或IV葡萄糖液（通常在水中含有5%葡萄糖）中。可以使用例如PO或PVC IV袋。在一些具體實施例中，在使用之前將Ab1配製品在PVC袋中稀釋於鹽水中。在一些具體實施例中，在使用之前將Ab1配製品在PVC袋中稀釋於IV葡萄糖液中。在一些具體實施例中，在使用之前將Ab1配製品在PO袋中稀釋於鹽水中。在一些具體實施例中，在使用之前將Ab1配製品在PO袋中稀釋於IV葡萄糖液中。 A. 非腫瘤學患病病症

可以通過Ab1和相關抗體治療的病症可以包括但不限於骨缺損（例如，成骨不全症）、血管球性腎炎、神經或皮膚瘢痕、肺或肺部纖維化（例如，特發性肺部纖維化）、輻射誘導的纖維化、肝纖維化、骨髓纖維化、硬皮病、免疫介導疾病（包括類風濕性關節炎、多發性硬化症、全身性紅斑狼瘡、修格倫氏症（Sjogren's syndrome）、Berger病和移植排斥）和杜普伊特倫攣縮（Dupuytren’s contracture）。

它們還可以可用於治療、預防腎功能不全和降低發生腎功能不全的風險，所述腎功能不全包括但不限於局灶性節段性腎小球硬化（FSGS）、糖尿病（I型和II型）腎病、放射性腎病、梗阻性腎病、彌漫性全身性硬化症、遺傳性腎臟疾病（例如，多囊性腎病、髓質海綿腎、馬蹄腎）、血管球性腎炎、腎硬化、腎鈣質沉著症、全身性或腎小球性高血壓、小管間質性腎病、腎小管酸中毒、腎結核和腎梗塞。特別地，它們在與腎素-血管緊張素-醛固酮系統的拮抗劑組合時是有用的，所述拮抗劑包括但不限於：腎素抑制劑、血管緊張素轉化酶（ACE）抑制劑、Ang II受體拮抗劑（也被稱為“Ang II受體阻斷劑”）和醛固酮拮抗劑。參見例如WO 2004/098637，將其公開內容通過引用以其整體併入本文。

Ab1和相關抗體可用於治療與ECM的沉積相關的疾病和病症，如全身性硬化症、術後粘連、瘢痕疙瘩和增生性瘢痕、增殖性玻璃體視網膜病變、青光眼引流手術、角膜損傷、白內障、佩羅尼氏病（Peyronie’s disease）、成人呼吸窘迫綜合征、肝硬化、心肌梗塞後瘢痕、血管成形術後再狹窄、蛛網膜下腔出血後瘢痕、椎板切除術後纖維化、肌腱修復和其他修復後纖維化、膽汁性肝硬變（包括硬化性膽管炎）、心包炎、胸膜炎、氣管造口術、穿透CNS損傷、嗜酸性肌痛症候群、血管再狹窄、靜脈阻塞性疾病、胰腺炎和幹癬性關節病變。

Ab1和相關抗體進一步可用於其中促進上皮再形成是有益的病症。此類病症包括但不限於皮膚的疾病（如靜脈潰瘍、缺血性潰瘍（壓瘡）、糖尿病性潰瘍、移植部位、移植接受部分、擦傷和燒傷）、支氣管上皮的疾病（如哮喘、ARDS）、腸上皮的疾病（如與細胞毒性治療相關的粘膜炎、食管潰瘍（逆流病）、胃食道逆流病、胃潰瘍、小腸和大腸病變（炎性腸病））。

Ab1和相關抗體的仍另外的用途是在如下病症中，在所述病症中內皮細胞增殖是期望的，例如穩定動脈粥樣硬化斑塊、促進血管吻合的治癒；或在如下病症中，在所述病症中抑制平滑肌細胞增殖是期望的（如在動脈疾病、再狹窄和哮喘中）。

Ab1和相關抗體還可用於增強對巨噬細胞介導的感染（如由利什曼蟲屬（Leishmania spp.）、克氏錐蟲（Trypanosorna cruzi）、結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis）和麻風分枝桿菌（Mycobacterium leprae）以及原生動物剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）、真菌莢膜組織胞漿菌（Histoplasma capsulatum）、白色念珠菌（Candida albicans）、平滑念珠菌（Candida parapsilosis）和新型隱球菌（Cryptococcus neoformans）引起的感染）的免疫反應。它們還可用於降低例如由腫瘤、AIDS或肉芽腫性疾病引起的免疫抑制。

Ab1和相關抗體還可用於預防和/或治療眼科病症，如青光眼和小梁切除術後瘢痕。 B. 腫瘤學患病病症

TGF-β調節若干種生物過程，包括細胞增殖、上皮間充質轉換（EMT）、基質重塑、血管生成和免疫功能。這些過程中的每種過程都促成腫瘤進展。TGF-β在癌症患者中跨適應證的廣泛有害作用也通過其在腫瘤微環境內的升高以及全身性升高而表明。參見例如Kadam等人, Mo Biomark Diagn. (2013) 4(3):1-8。研究已經顯示，在惡性狀態下，TGF-β可以誘導EMT，並且所得的間充質表型使得細胞遷移和侵襲增加。

包含Ab1和相關抗體的組合物可用於治療過度增殖性疾病，如癌症，包括但不限於皮膚癌（例如，黑色素瘤（包括不可切除或轉移性黑色素瘤）、皮膚鱗狀細胞癌和角化棘皮瘤）、肺癌（例如，非小細胞肺癌）、食管癌、胃癌、結直腸癌、胰腺癌、肝癌（例如，肝細胞癌）、原發性腹膜癌、膀胱癌、腎癌（renal cancer）或腎癌（kidney cancer）（例如，腎細胞癌）、尿路上皮癌、乳腺癌、卵巢癌、輸卵管癌、宮頸癌、子宮癌、前列腺癌、睾丸癌、頭頸癌（例如，頭頸部鱗狀細胞癌）、腦癌、膠質母細胞瘤、神經膠質瘤、間皮瘤、白血病和淋巴瘤。

在一些具體實施例中，包含Ab1和相關抗體的組合物可用於治療基於抗PD-1、抗PD-L1或抗PD-L2治療劑的先前療法已經失敗或預期失敗的患者（即作為或預期作為對抗PD-1、抗PD-L1或抗PD-L2療法的無反應者的患者）的癌症，。在一些具體實施例中，Ab1和相關抗體可用於治療在先前的抗PD-1、抗PD-L1或抗PD-L2療法後已復發的患者的癌症。如本文所用，術語“預期”意指醫學領域技術人員可以在沒有施用療法的情況下基於他/她的醫學常識和患者的特定病症預見患者是否是反應者或無反應者以及療法是否將會失敗或將不會有效。

在一些具體實施例中，所述癌症是實體瘤的間充質亞型，包括但不限於間充質結直腸癌、間充質卵巢癌、間充質肺癌、間充質頭癌和間充質頸癌。上皮間充質轉換（EMT）通過下調上皮細胞基因和增強間充質基因表現而促進細胞遷移和侵襲特性。EMT是腫瘤進展和侵襲的標誌。多達四分之一的結直腸癌和卵巢癌是間充質的。因此，通過抑制TGF-β和其對EMT的誘導，Ab1或相關抗體可以用於治療間充質實體瘤。實體瘤的間充質亞型可以通過多個遺傳標記物和病理學測試來鑒定。標記物包括ACTA2、VIM、MGP、ZEB2和ZWINT，這些標記物可以通過qRT-PCR或免疫組織化學來檢測。此類標記物可以用於選擇患者進行本發明的抗TGFβ單一療法或組合療法。

在一些具體實施例中，Ab1和相關抗體可用於治療患有晚期實體瘤的患者。

包括Ab1和相關抗體的組合物還可以用於治療造血功能障礙或惡性腫瘤（如多發性骨髓瘤、骨髓增生異常症候群（MDS）、霍奇金淋巴瘤（Hodgkin lymphoma）、非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma）和白血病）以及各種肉瘤（如卡波濟氏肉瘤（Kaposi’s Sarcoma））。

包括Ab1和相關抗體的組合物還可以可用於抑制環孢黴素介導的惡性腫瘤或癌症進展（例如，轉移）。

當然，應當瞭解，在癌症療法的上下文中，“治療”包括使得癌症生長減緩、癌症進展或復發延遲、癌症轉移減少以及癌症部分緩解以便延長患者的預計壽命的任何醫學干預。 C. 腫瘤學中的組合療法

已經觀察到，癌症中細胞毒性T細胞浸潤的水準與有利臨床結局相關（Fridman等人, Nat Rev Cancer(2012) 12(4):298–306；和Galon等人, Immunity(2013) 39(1):11–26）。另外，輔助細胞毒性T細胞（CD4+ TH1）的T輔助細胞以及它們所產生的細胞因數（例如，IFN- γ）通常也與陽性患者結局相關。相比之下，已經顯示，Treg細胞的存在與較差患者預後相關（Fridman, 同上）。

TGF-β抑制抗腫瘤免疫反應的幾乎所有方面。細胞因數促進iTreg分化並且減少細胞毒性（CD8+）細胞增殖和浸潤。通過Ab1或相關抗體抑制TGFβ將減輕如上所述的免疫抑制腫瘤微環境，以為癌症患者帶來陽性結局。

此外，諸位發明人已經發現，通過減輕免疫抑制腫瘤微環境，Ab1和相關抗體可以允許檢查點調節劑（如抗PD-1抗體）更好地誘導免疫反應。因此，更多的患者可以受益於如抗PD-1、抗PD-L1或抗PD-L2治療等免疫療法。

在有或沒有靶向免疫檢查點分子的治療劑的情況下，Ab1和相關抗體也可以與其他癌症療法（如化學療法（例如，基於鉑或紫杉烷的療法））、放射療法和靶向癌症抗原或致癌驅動因數的療法配合使用。

可以通過涉及Ab1或相關抗體和如抗PD-1抗體等免疫檢查點抑制劑的組合治療的癌症包括上述小節中所列出的癌症。

在一些具體實施例中，所述癌症對於先前的抗PD-1、抗PD-L1或抗PD-L2療法來說是難治性的，如晚期或轉移黑色素瘤、非小細胞肺癌、腎細胞癌、頭頸部鱗狀細胞癌和霍奇金淋巴瘤。難治性患者是在開始治療的12周內疾病進展得到確認（例如，在放射學上）、但沒有任何證據表明有反應的患者。

在一些具體實施例中，Ab1或相關抗體可以與如抗PD-1療法等另一種癌症療法配合使用以治療間充質癌症，如結直腸癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、膀胱癌、頭頸部鱗狀細胞癌、腎細胞癌、肝細胞癌和皮膚鱗狀細胞癌。還參見以上討論。

抗PD-1抗體的例子是納武單抗、派姆單抗、匹地利珠單抗、MEDI0608（曾用名AMP-514；參見例如，WO 2012/145493和美國專利9,205,148）、PDR001（參見例如，WO 2015/112900）、PF-06801591（參見例如，WO 2016/092419）和BGB-A317（參見例如，WO 2015/035606）。在一些具體實施例中，所述抗PD-1抗體是在WO 2015/112800中披露的那些（如在所述PCT公開的表1中被稱為H1M7789N、H1M7799N、H1M7800N、H2M7780N、H2M7788N、H2M7790N、H2M7791N、H2M7794N、H2M7795N、H2M7796N、H2M7798N、H4H9019P、H4xH9034P2、H4xH9035P2、H4xH9037P2、H4xH9045P2、H4xH9048P2、H4H9057P2、H4H9068P2、H4xH9119P2、H4xH9120P2、H4xH9128P2、H4xH9135P2、H4xH9145P2、H4xH8992P、H4xH8999P和H4xH9008P的那些，和在所述PCT公開的表3中被稱為H4H7798N、H4H7795N2、H4H9008P和H4H9048P2的那些）。將WO 2015/112800的公開內容通過引用以其整體併入本文。

例如，WO 2015/112800中披露的抗體和相關抗體（包括具有在所述PCT公開中披露的CDR、VH和VL序列或重鏈和輕鏈序列的抗體和抗原結合片段）以及結合至與所述PCT公開中披露的抗體相同的PD-1表位的抗體和抗原結合片段可以與本公開文本的Ab1或相關抗體聯合使用以治療癌症。在相關具體實施例中，有用的抗PD-1抗體可以包含分別以如下SEQ ID NO: 9和10所示的重鏈和輕鏈胺基酸序列；在SEQ ID NO: 9和10中的VH和VL序列（以斜體示出）或在SEQ ID NO: 9和10中的一個或多個（例如，全部六個）CDR（以方框示出）。

在其他相關具體實施例中，有用的抗PD-1抗體可以包含分別以如下SEQ ID NO: 11和12所示的重鏈和輕鏈胺基酸序列；在SEQ ID NO: 11和12中的VH和VL序列（以斜體示出）或在SEQ ID NO: 11和12中的一個或多個（例如，全部六個）CDR（以方框示出）。在相關具體實施例中，有用的抗PD-1抗體可以包含分別以如下SEQ ID NO: 11和12所示的重鏈和輕鏈胺基酸序列；在SEQ ID NO: 11和12中的VH和VL序列（以斜體示出）或在SEQ ID NO: 9和10中的一個或多個（例如，全部六個）CDR（以方框示出）。

在一些具體實施例中，本公開文本的抗體（如抗PD-1抗體）在重鏈中沒有C末端賴胺酸。C末端賴胺酸可以在製造期間或通過重組技術移除（即，重鏈的編碼序列不包含C末端賴胺酸的密碼子）。因此，在本發明中還設想了包含沒有C末端賴胺酸的SEQ ID NO: 3的重鏈胺基酸序列的抗體。 D. 治療功效的生物標記物

Ab1和相關抗體的功效可以通過生物標記物或靶標佔有率來確定。例如，在腫瘤組織中，靶標佔有率可以通過使用Meso Scale Discovery（MSD）測定評估活檢中的活性TGFβ的水準來測定。在血液中，靶標接合可以通過評估減少的迴圈TGFβ對外周血單個核細胞（如淋巴細胞（T細胞、B細胞、NK細胞））和單核細胞的作用來測定。例如，迴圈CD8+ T細胞的增殖增加可以在流式細胞術中使用CD45 ⁺RO ⁺CCR7 ⁺CD28 ⁺Ki67 ⁺作為標記物進行評估。迴圈NK細胞的活化可以在流式細胞術中使用CD3-CD56高/暗CD16 ⁺或CD137 ⁺作為標記物進行評估。另外，Ki-67、PD-1和ICOS可以用作與T細胞活化相關的PD標記物。

在通過Ab1或相關抗體治療後的免疫調節可以通過使用例如NeoGenomics平臺通過多重免疫組織化學（IHC）測定評估浸潤免疫細胞和免疫標記物的變化來測定。具體地，NeoGenomic的MultiOmyx TIL Panel對一組免疫標記物進行染色，從而允許定量確定各種免疫細胞的密度和定位。免疫標記物可以指示：iTreg的分化；CD8 ⁺T細胞的浸潤和增殖；和由CD8 ⁺T細胞產生IFN γ。已經顯示，Ab1抑制CD4 ⁺T細胞分化為iTreg（參見例如，美國專利公開號US2018/0244763中的實施例3）並且增加CD8 ⁺T細胞增殖和其IFN γ產生（如混合淋巴細胞反應測定中顯示的；數據未示出）。因此，通過Ab1或相關抗體治療的功效可以通過以下來指示：iTreg的抑制、誘導CD8 ⁺T細胞增殖和向腫瘤或其他患病組織浸潤、IFN γ產生增加和/或CD8 ⁺T細胞與Treg細胞的比率增加。通過Ab1或相關抗體治療後的免疫調節也可以在外周血中通過對CD8 ⁺T細胞、Treg細胞、NK細胞和其他免疫細胞進行基於甲基化PCR的定量免疫細胞計數來測定。治療功效可以臨床表現為疾病進展（如腫瘤進展）的延遲或逆轉。

除非本文另外定義，否則結合本公開文本所用的科學和技術術語應當具有本領域普通技術人員通常理解的含義。下文描述了示例性方法和材料，但在本公開文本的實踐或測試中也可以使用與本文所述的那些方法和材料類似或等效的方法和材料。在矛盾的情況下，應以包括定義在內的本說明書為准。通常，本文描述的與神經病學、醫學、藥物和藥物化學的技術以及細胞生物學結合使用的命名法是本領域熟知且常用的那些。酶促反應和純化技術是根據製造商的說明書來進行的，如本領域通常所實現的或如本文所述的。進一步地，除非上下文另有要求，否則單數術語應當包括複數，並且複數術語應當包括單數。在整個本說明書和具體實施例中，詞語“具有”（have）和“包括”（comprise）或變體如“具有”（has）、“具有”（having）、“包括”（comprises）或“包括”（comprising）將被理解為暗示包括所述整數或整數組，但是不排除任何其他整數或整數組。將本文提及的所有出版物和其他參考文獻均通過引用以其整體併入。儘管本文引用了許多檔，但此引用並不意味著承認這些檔中的任一個構成本領域公知常識的一部分。如本文所用，如應用於一個或多個目的值的術語“大約”或“約”是指與所述的參考值類似的值。在某些具體實施例中，除非另有說明或另外從上下文顯而易見，所述術語是指落入所陳述的參考值的任一方向（大於或小於）的10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少內的值的範圍。

為了可以更好地理解本發明，列出了以下實施例。這些實施例僅用於說明目的，並且不被解釋為以任何方式限制本發明的範圍。 實施例

以下實施例描述了評估Ab1的各種配製品以便獲得具有最佳生物活性和長期穩定性的配置品的研究。評估了在冷藏儲存條件、加速儲存條件和應力儲存條件期間緩衝液身份和pH對Ab1液體配製品的物理和化學穩定性的影響。選擇了添加和不添加氯化鈉的乙酸鹽緩衝液體系和組胺酸緩衝液體系用於此研究。

評估了在各種儲存溫度、冷凍-解凍迴圈和攪拌誘導應力下穩定Ab1液體配製品所需的聚山梨醇酯80（PS80）的最佳濃度。

還評估了在室溫下在靜脈內（IV）輸注袋中稀釋和培育多達48小時之後Ab1藥物產品（DP）的物理穩定性。將DP稀釋至0.5 mg/ml和1.0 mg/ml。在以下袋組合中評估兩種濃度：含鹽水的聚氯乙烯（PVC）袋、含鹽水的聚烯烴（PO）袋、含葡萄糖的PVC袋和含葡萄糖的PO袋。還檢查了液體DP中的最佳PS80濃度在稀釋後保護Ab1的能力。

進一步檢查了過渡金屬對蛋白質的化學和物理穩定性的影響。過渡金屬有時會在製造期間滲入藥物物質（DS）中。評估了EDTA和DTPA在一組最壞情況的實驗期間螯合和保護蛋白質的能力。

為了確保所提出的目標配製品基質足以穩定高濃度DS和較低濃度DP溶液，我們評估了在冷凍-解凍迴圈期間和在冷凍和液體儲存條件下以及跨所有賦形劑（包括API）的濃度範圍的溶液穩定性。

實驗所用的材料和方法如下。 藥物物質

使用超濾/滲濾方法（UFDF）製備了高濃度Ab1藥物物質（DS）。DS濃度通常製備為高達180 mg/ml。使用來自UFDF模擬器的結果對可能會在UF處理步驟期間由於Donnan效應而積聚或耗盡的緩衝鹽進行濃度校正。在將配製品藥物產品（DP）樣品配製成目標蛋白質和賦形劑濃度後，在無菌填充前用0.22 µm篩檢程式在層流下對配製品進行純化。 可見顆粒的檢視 在目視檢查單元下分析可見顆粒。在檢視之前用拭鏡紙清潔DP小瓶以去除外表面上的灰塵和指紋。 pH

使用Thermo-Scientific ^TMpH探針測量計測量緩衝液和所配製的mAb溶液的pH。當重複測量之間的差在0.1 pH單位之內時，結果被認為是可比較的。 滲透度 (Osmolarity)

使用冰點降低滲壓計（Advanced Instruments，OsmoPRO）對20 µL樣品（n = 2或3）進行滲透度測量。在樣品分析之前和之後運行滲透度標準以確保測量準確性。 總蛋白質濃度

通過使用來自C technologies的SoloVPE系統的可變路徑長度技術測量280 nm處的紫外線（UV）吸光度來確定總蛋白質濃度。對20 µL的樣品（n = 2或3）進行測量。還通過在來自Unchained Labs的Big Lunatic系統的微流體晶片上測量280 nm處的UV吸光度來確定總蛋白質濃度。對2至5 µL的樣品一式兩份地進行測量。 針對構象穩定性和熱穩定性的 DSC

在Malvern Microcal熱量計上以0.5ºC/min的加熱速率從15ºC升溫至105ºC來進行差示掃描量熱法（DSC）。在1 mg/ml蛋白質濃度下測量蛋白質溶液。使用OriginPro軟體進行分析和熱去折疊溫度（T _m）確定。 溶液濁度和光學密度

通過在來自Molecular Devices的SpectraMax® i3微板閱讀器上測量從340至360 nm的光學密度（OD）來定量樣品濁度。對於每個樣品，將200 µL裝載到UV-Vis透明96孔板上。OD被確定為340 nm、345 nm、350 nm、355 nm和360 nm處的吸光度值的平均值。 高分子量種類的尺寸排阻 HPLC

通過尺寸排阻色譜法（SEC）對蛋白質聚集體（高分子量種類或HMWS）進行分析。將樣品在配備有TSK-GEL® G3000SWXL（Tosoh Bioscience，日本東京）分析柱和匹配保護柱的1260系列HPLC（Agilent，加利福尼亞州聖克拉拉）上運行。所使用的流動相是40 mM磷酸鹽和150 mM氯化鈉（pH 7.2），且流速為0.5 mL/min，持續30分鐘。每個樣品進行三次進樣。通過280 nm處的UV吸光度進行檢測，並對色譜峰進行積分，以確定每個經洗脫種類的相對百分比。 顯微鏡下可見顆粒的微血流成像（ MFI ）

使用Protein Simple MFI™型號DPA-4200分析顯微鏡下可見顆粒。用經0.22 µm過濾和脫氣的MilliQ®水大量沖洗系統，然後測量2、10和25 µm標準品。使用1 mL方法以0.17 mL/min的流速運行樣品（n = 1或2）。當樣品流經流動池時，光源照亮樣品，並且相機在樣品經過流動池時迅速捕捉圖像。由MFI™軟體鑒定顆粒，然後計算出每個單獨顆粒的尺寸、透明度和形態。 顯微鏡下可見顆粒的高準確度液體顆粒計數器

還在Hach®高準確度（HIAC）液體顆粒計數器型號9703+上通過光遮蔽測量顯微鏡下可見顆粒。用經0.22 µm過濾和脫氣的MilliQ®水沖洗系統，直到顆粒計數低於20個顆粒/mL為止。測量2 µm、10 µm和25 µm標準品以確保準確的顆粒計數，然後進行大量洗滌以去除任何背景。使用1 mL方案（進樣五次，每次0.2 mL），對樣品進行測量。忽略第一次樣品測量結果，並求取之後的四個樣品測量結果的平均值。 電荷變體的毛細管等電聚焦

使用來自ProteinSimple的iCE3儀器，通過280 nm處的UV吸收經由毛細管等電聚焦（cIEF）測量蛋白質電荷異質性。將樣品（1 mL）和標準溶液在水中稀釋至2.5 mg/ml。在分析之前，使用板上混合將樣品和主混合物混合。樣品的等電聚焦包括在1500 V下為時1分鐘的預聚焦、然後在3000 V下聚焦超過10分鐘。檢測涵蓋5次曝光，並且每個配製品的樣品裝載持續55秒。當差等於或小於10%時，結果被認為是可比較的。 通過 LC-MS 進行 PTM 定量

將蛋白質樣品稀釋至2 mg/ml，渦旋，並將40 µg的蛋白質用於自動化消化。消化緩衝液是25 mM Tris（pH 8.5）。對於每個樣品，將15 µL的消化物（含有約5 µg的蛋白質）進樣到C18柱上以進行LC-MS分析。在Q Exactive ^TM上使用DDA top 8 LC-MS/MS方法分析樣品。

由WLSD58伺服器上的BioPharma Finder™ 3.0處理在Q Exactive ^TM上獲得的LC-MS/MS資料，以用於鑒定和相對定量修飾，所述修飾包括Met/Trp氧化、脫醯胺化、Asp異構化和HC C末端修飾。對於無法生成良好的MS/MS譜以通過BioPharma Finder™進行鑒定的低水準修飾，使用僅MS肽圖譜進行肽分配。然後使用Progenesis處理所有資料，在保留時間比對和峰揀選之後，提供肽豐度。當Progenesis不能正確執行這一任務時，對於一些脫醯胺化和異構化的肽，需要手動調整峰揀選。 效力

當TGF-β與水貂肺細胞一起培育時，它抑制細胞增殖。Ab1是抗TGFβ抗體，其在與TGF-β結合時抑制TGF-β與TGF-β細胞表面受體結合，從而允許細胞增殖。在Ab1效力測定中，將不同水準的Ab1與TGF-β2一起培育，然後添加至水貂肺細胞。

將細胞與Ab1和TGF-β2一起培育三天，然後添加PrestoBlue ^TM試劑。PrestoBlue ^TM含有細胞可滲透的非螢光化合物刃天青，刃天青會被活細胞代謝和還原，從而產生螢光產物試鹵靈。因此，細胞增殖與螢光信號的強度直接相關。在添加PrestoBlue ^TM後五個小時，使用讀板儀測量螢光。生物測定軟體進行Log ₁₀轉化並擬合為四參數模型。在參考和樣品曲線被確定為合適之後，對曲線進行約束，並將測定的最終結果確定為參考的EC ₅₀與測試樣品的EC ₅₀的比率並且以相對效力百分比（RP%）為單位進行報告。 實施例 1 ：緩衝液和 pH 篩選

此實施例描述了其中對各種緩衝液和pH條件進行篩選以鑒定Ab1的合適配製品的實驗。因為液體藥物產品更便於製備以及在臨床環境和家庭環境兩者中施用（與凍幹藥物產物相比），所以對各種液體水性緩衝液進行測試。表1表示此研究中使用的配製品條件和樣品代碼。 表1 緩衝液條件

參考	條件	Ab1（mg/ml）
乙酸鹽_4.7	pH 4.7，20 mM乙酸鹽	80
乙酸鹽_5.0	pH 5.0，20 mM乙酸鹽	80
乙酸鹽_5.3	pH 5.3，20 mM乙酸鹽	80
乙酸鹽_5.5	pH 5.5，20 mM乙酸鹽	80
乙酸鹽-NaCl_5.5	pH 5.5，20 mM乙酸鹽，25 mM NaCl	80
組胺酸-NaCl_5.5	pH 5.5，10 mM組胺酸，25 mM NaCl	80
組胺酸_5.5	pH 5.5，10 mM組胺酸	80
組胺酸_6.0	pH 6.0，10 mM組胺酸	80
組胺酸_6.5	pH 6.5，10 mM組胺酸	80

乳光是有吸引力的蛋白質間相互作用的目視表現。目視觀察到，Ab1配製品展現出顯著的pH依賴性乳光（圖1）。低於pH 5.3時，溶液大部分澄清透明，但在pH ＞ 5.3時，乳光隨pH增加而增加。乙酸鹽配製品的乳光通常低於組胺酸配製品的乳光（圖1）。這些目視外觀圖像表明，使用乙酸鹽作為緩衝種類的最佳配製品pH範圍為4.7-5.0。

在5ºC和25ºC下儲存長達4周後，表1中的溶液顯示出高分子量種類（HMWS）%無顯著變化。然而，在40ºC下儲存4周後，所有配製品的HMWS%增加約0.5%。考慮到應力條件，這種變化不是特別顯著。此外，向配製品添加氯化鈉對蛋白質聚集程度和HMWS%沒有顯著影響。

關於顯微鏡下可見顆粒，HIAC微粒計數顯示出顯微鏡下可見顆粒生長對緩衝液種類的身份和溶液pH敏感（圖2A-圖2C）。與任何其他pH的乙酸鹽配製品和所研究的所有組胺酸配製品相比，緩衝至pH 4.7和5.0的乙酸鹽配製品使得隨時間產生的顆粒數量最小。然而，對於任何條件，溫度對顆粒生長沒有可辨別或明顯的作用。

在40ºC下，對於任何給定pH，在添加或沒有添加氯化鈉的情況下，乙酸鹽配製品和組胺酸配製品的粘度在T ₀時和在4周後是可比較的（圖3）。測得的粘度值均在2-3 cP內，這遠低於在向患者施用DP期間或在製造過程期間可能會面臨挑戰的任何限制。粘度值也沒有顯著變化，這表明所測試的配製品沒有經歷顯著的化學降解。在四周時期內，在三個溫度下儲存之後，任何配製品的pH值也沒有顯著變化（圖4A和圖4B）。這些結果表明，乙酸鹽和組胺酸沒有經歷任何顯著的化學降解並且甚至在40ºC下應力儲存長達4周後也維持它們緩衝的能力。

進行板UV測量，以追蹤可能隨時間出現的濁度和乳光的任何變化（圖5）。採用分光光度法檢測到先前在目視檢查期間在T ₀時觀察到的相同的pH依賴性乳光。測得的OD值隨pH增加而增加，其中組胺酸配製品比乙酸鹽配製品更渾濁。在25ºC和40ºC下儲存4周後，大多數配製品的OD都略微增加。OD隨時間增加是由於顯微鏡下可見顆粒的形成所致。這些結果證實了，4.7-5.0左右的pH產生最少量的顯微鏡下可見顆粒。

將僅緩衝液的滲透度值和緩衝的蛋白質溶液的滲透度值進行比較（表2）。與組胺酸相比，乙酸鹽配製品的滲透度略高。添加蛋白質增加了所有配製品的滲透度。考慮到DP僅在稀釋至IV輸注袋中之後施用，滲透度值全部都是合理的。 表2 僅緩衝液和緩衝的Ab1溶液的滲透度值

樣品	滲透度（mOsmo/kg）
僅緩衝液（一式兩份）	80 mg/ml Ab1
乙酸鹽_4.7	24.5	92
乙酸鹽_5.0	28	40
乙酸鹽_5.5	32	46
乙酸鹽-NaCl_5.5	79.5	101
組胺酸-NaCl_5.5	71.5	74
組胺酸_5.5	13.5	26
組胺酸_6.0	11.5	21
組胺酸_6.5	9	15

如在比較酸性同種型的量和單體百分比時所見，對於乙酸鹽配製品和組胺酸配製品，Ab1的化學穩定性是類似的。在40ºC下4周後，在溶液pH接近6.0和6.5時，組胺酸配製品產生的酸性同種型的相對量略微增加。

所有配製品具有約1.0的相同的相對效力，這表明所有配製品均是可接受的。這些效力結果與先前的聚集和HMWS%結果相符合，因為所有HMWS%值均較低（＜ 2%），因此預期效力不會太大變化。 實施例 2 ：表面活性劑篩選

此實施例描述了評估向Ab1配製品添加表面活性劑聚山梨醇酯80（PS80）的實驗。下表3中示出了這些實驗中所使用的配製品條件和樣品代碼。 表3 具有聚山梨醇酯80的配製品

配製品	PS80來源	參考	PS80	Ab1	緩衝液	pH
1	A	PS80_CSR_0%	0%	150 mg/ml	20 mM乙酸鹽 + 8%蔗糖	5.0
2	PS80_CSR_0.025%	0.025%
3	PS80_CSR_0.05%	0.05%
4	PS80_CSR_0.1%	0.1%
5	B	PS80_ChP_0.05%	0.05%	150 mg/ml	20 mM乙酸鹽 + 8%蔗糖	5.0
6	PS80_ChP_0.1%	0.1%

對於在5ºC或40ºC下儲存一周或劇烈攪拌48小時之後的配製品，評估所述配製品的板濁度和光學密度（OD；在340-360 nm處）值。資料顯示出，對於含有PS80的配製品，在5ºC或40ºC下儲存1周之後或在劇烈攪拌48小時之後，OD值沒有變化。使用兩種不同商業來源的PS80（A和B），在PS80具有0.025%、0.05%和0.1%的不同濃度的情況下，也沒有觀察任何差別。然而，對於沒有添加表面活性劑的配製品，在5ºC儲存和40ºC儲存這兩種情況下，OD值確實隨時間略微減小。對於無表面活性劑配製品，還觀察到濁度略高。這些觀察結果表明，PS80對Ab1蛋白有增溶作用。

在不同的儲存條件和介面應力條件下，通過SEC監測小可溶性聚集體的水準（圖6）。儲存溫度僅具有微不足道的影響，並且在儲存長達2周後才使得聚集增加0.5%；PS80濃度對聚集水準沒有明顯的作用。在-30ºC與室溫之間進行最壞情況的冷凍-解凍迴圈多達10次對蛋白質穩定性也沒有負面影響（圖6，右下圖）。

另一方面，劇烈攪拌或振盪對聚集有很大影響（圖6，左下圖）。沒有添加表面活性劑的配製品在攪拌48小時後產生高達8% HMWS。這些聚集水準對表面活性劑的存在和濃度高度敏感。低至0.025%的PS80濃度足以將聚集水準降低至小於無PS80配製品的聚集水準的2%。增加PS80濃度甚至高達0.05%或0.1%進一步使HMWS%稍微降低。這些資料表明，0.05%可以用作以穩定Ab1配製品為目標的PS80濃度下限。

以上SEC資料表明，對於此部分中所研究的大多數條件，Ab1沒有高聚集風險。因此，HIAC是追蹤通過SEC過濾出的較大可溶性和不溶性聚集體（這些聚集體的大小可以在顯微鏡下可見顆粒範圍內）所需的關鍵測定。HIAC資料顯示出，在任何給定儲存或介面應力條件下，不含任何PS80的配製品產生顯著更多的顯微鏡下可見顆粒。資料進一步顯示出，PS80對Ab1配製品中的顆粒數量的減少有濃度依賴性作用。低至0.025%的PS80濃度足以開始減少顆粒計數。將PS80濃度增加至0.05%和更高持續地減少顆粒計數。

在T ₀時和在儲存2周後測量配製品的pH值。在任何時間點或溫度下，任何配製品都沒有顯著的pH變化。PS80對配製品pH也沒有濃度特異性影響。PS80的濃度沒有誘導乙酸鹽緩衝液維持150 mg/ml Ab1配製品的pH的能力發生任何變化。

對於此實施例中的所有研究，在任何測試條件下，未顯現出PS80來源對配製品穩定性的影響。 實施例 3 ： IV 袋稀釋研究

此實施例描述了測試Ab1配製品在不同的IV袋中的穩定性的實驗。下表4中示出了這些實驗中所使用的配製品條件。 表4 用於IV袋稀釋研究的配製品和樣品代碼

PO
經稀釋的PS80（%）	PO_葡萄糖	PO_鹽水
0.5 mg/ml Ab1	1.0 mg/ml Ab1	0.5 mg/ml Ab1	1.0 mg/ml Ab1
0.0010%	PO_D_0.5_a	PO_D_1.0_a	PO_S_0.5_a	PO_S_1.0_a
0.0005%	PO_D_0.5_b	PO_D_1.0_b	PO_S_0.5_b	PO_S_1.0_b
0.0003%	PO_D_0.5_c	PO_D_1.0_c	PO_S_0.5_c	PO_S_1.0_c
0.0002%	PO_D_0.5_d	PO_D_1.0_d	PO_S_0.5_d	PO_S_1.0_d
PVC
經稀釋的PS80（%）	PVC_葡萄糖	PVC_鹽水
0.5 mg/ml Ab1	1.0 mg/ml Ab1	0.5 mg/ml Ab1	1.0 mg/ml Ab1
0.0010%	PVC_D_0.5_a	PVC_D_1.0_a	PVC_S_0.5_a	PVC_S_1.0_a
0.0005%	PVC_D_0.5_b	PVC_D_1.0_b	PVC_S_0.5_b	PVC_S_1.0_b
0.0003%	PVC_D_0.5_c	PVC_D_1.0_c	PVC_S_0.5_c	PVC_S_1.0_c
0.0002%	PVC_D_0.5_d	PVC_D_1.0_d	PVC_S_0.5_d	PVC_S_1.0_d

在IV輸注前，將DP稀釋至IV袋中。在DP中沒有足夠濃度的表面活性劑的情況下，蛋白質分子有可能吸附在袋上，這取決於製成IV袋的材料類型。因此，IV袋中的經稀釋的DP的API濃度與旨在給患者施用的劑量相比較低。

我們追蹤了稀釋至用不同濃度的PS80加標和包被的袋中的Ab1的吸附行為和物理穩定性。PS80通過加標稀釋至0.001%、0.0005%、0.0003%和0.0002%的濃度，以便確定起始DP配製品中所需的最佳濃度。上述PS80濃度對應於起始DP中的50-300倍稀釋的PS80濃度。接著，將不含PS80的150 mg/ml DP稀釋至0.5或1.0 mg/ml。評估將配製品稀釋至IV袋材料和稀釋液的以下四種不同組合中的作用：含鹽水的PVC袋、含鹽水的PO袋、含葡萄糖的PVC袋和含葡萄糖的PO袋。

然後將經稀釋配製品培育，並在24和48小時之後進行測量。資料顯示出，對於所研究的任何加標的表面活性劑濃度，含鹽水的PO和PVC袋沒有顯著影響蛋白質吸附（圖7A）。然而，使用葡萄糖作為稀釋劑以依賴於袋材料的方式略微影響吸附。具體地，PVC葡萄糖袋組合隨著PS80濃度降低而引起明顯的蛋白質吸附（圖7A）。結果直接影響將為施用DP提出的建議。

DP稀釋後的顯微鏡下可見（＞ 10 µm）顆粒產生對所使用的稀釋劑類型高度敏感。與基於葡萄糖的溶液相比，基於鹽水的溶液產生較高水準的顆粒（圖7B）。這與配製品中所使用的PS80濃度無關。0.001% PS80的顯微鏡下可見顆粒計數與0.003% PS80的顯微鏡下可見顆粒計數之間沒有顯著差異。IV袋的材料似乎對顆粒化沒有顯著影響，並且顆粒計數是可比較的。

還評估了在葡萄糖和鹽水與PO袋和PVC袋的組合中培育之後經稀釋的DP樣品的聚集。與葡萄糖袋相比，稀釋至鹽水袋中的蛋白質產生略微更多的HMWS%。與PVC袋相比，PO袋還產生更多的聚集體。蛋白質濃度對蛋白質穩定性也有依賴性，其中與1.0 mg/ml稀釋度相比，0.5 mg/ml稀釋度通常具有較高的聚集水準。然而，PS80濃度對蛋白質穩定性沒有顯著影響。 實施例 4 ： DS 和 DP 穩定性

此實施例描述了用於評估藥物物質（DS）和藥物產品（DP）的長期穩定性的研究。表5示出了所測試的配製品，其中蔗糖用作冷凍保護劑，PS80用作表面活性劑，並且DTPA用作螯合劑。 表5 用於長期穩定性測試的配製品

參考號	Ab1（mg/ml）	緩衝液（pH 5.0）	蔗糖%	PS80%	DTPA（μM）
D_1	50	20 mM乙酸鹽	8	0.06	50
D_2	100	20 mM乙酸鹽	8	0.06	50
D_3	135	20 mM乙酸鹽	8	0.06	50
D_4	150	20 mM乙酸鹽	8	0.06	50
D_5	165	20 mM乙酸鹽	8	0.06	50

考慮到含有50 μM DTPA的20 mM乙酸鹽緩衝液的這些資料，確定含有25 mM乙酸鹽（提供相同的pH範圍）和10 μM EDTA的UF/DF純化的Ab1的配製品將顯示出相同的溶液行為。為此，測試了這種初步提出的DS和DP的目標配製品：25 mM乙酸鹽、8%蔗糖、0.06% PS80、10 µM螯合劑（測試的是DTPA，但EDTA是等效的）（pH 5.0）（表5）。在儲存穩定性方面，評估了此配製品基質在跨越DS和DP濃度範圍的濃度下穩定Ab1的能力。在5ºC或25ºC下儲存3個月後，在任何配製品中，HMWS%沒有顯著變化（圖8A）。在40ºC的情況下，有至多約0.5%的增加；然而，在這些類型的加速應力儲存條件下，這種增加被認為是微不足道的，並反映了所提出的配製品基質優化穩定性和保質期的總體能力。

還將Ab1配製品在-80ºC下冷凍，然後在-20ºC下儲存。在這些條件下儲存6個月後，HMWS%沒有顯著變化（圖8B）。還通過SEC追蹤低分子量種類（LMWS）%，並且在任何配製品或儲存條件下沒有觀察到配製品顯著變化。此外，對於10和25 µm顯微鏡下可見顆粒，每個配製品的都在USP ＜787＞規格內。

在任何條件下，Ab1的化學穩定性也沒有巨大變化。總之，所提出的配製品基質具有穩定50 mg/ml的最低電位DP濃度和165 mg/ml的最高電位DS濃度的範圍的能力。 實施例 5 ： 金屬加標研究和螯合劑相容性

在生物製品製造期間，DS和DP中過渡金屬污染的風險很低。如果有污染，過渡金屬可能會導致液體溶液中的化學不穩定和聚集。此實施例描述了評估金屬和螯合劑對Ab1配製品的影響的研究。表6示出了用於測試金屬加標物的配製品： 表6 用於金屬加標研究的配製品

參考號	Ab1（mg/ml）	緩衝液（pH 5.0）	蔗糖%	PS80%	DTPA（μM）	Fe（ppb）	Cu（ppb）
M_1	150	20 mM乙酸鹽	8	0.06	-	-	-
M_2	150	20 mM乙酸鹽	8	0.06	-	-	500
M_3	150	20 mM乙酸鹽	8	0.06	50	-	500
M_4	150	20 mM乙酸鹽	8	0.06	-	500	-
M_5	150	20 mM乙酸鹽	8	0.06	50	500	-

如表中所示，在添加和沒有添加螯合劑DTPA的情況下，將Ab1樣品用鐵和銅加標。在沒有添加螯合劑的情況下，在鐵加標的樣品中有顯著的M252氧化和聚集；銅加標的樣品也顯示出氧化和聚集增加，但程度較小（圖9）。在存在DTPA的情況下，蛋白質降解大大減少。

還測試了另一種螯合劑EDTA。將Ab1配製品的儲存穩定性用10 µM DTPA或10 µM EDTA加標，並進行比較。資料顯示出，這兩種螯合劑對溶液中的蛋白質分子提供了類似的保護水準。這些螯合劑選擇性地緩解金屬誘導的顆粒形成或聚集。 實施例 6 ：配製品穩健性與 API 和賦形劑的濃度範圍

此實施例描述了評估跨抗體以及賦形劑的濃度範圍的Ab1配製品穩定性的研究。下表7中示出了用於研究的配製品。 表7 用於API和賦形劑濃度範圍研究的配製品

pH參考	pH	Ab1（mg/ml）	乙酸鹽（mM）	蔗糖%	PS80%	DTPA（μM）
4.7_F1	4.7	40	16	9.6	0.045	50
4.7_F2	4.7	40	24	6.4	0.075	50
4.7_F3	4.7	40	24	9.6	0.060	40
4.7_F4	4.7	57.5	16	6.4	0.045	40
4.7_F5	4.7	75	16	8.0	0.075	50
4.7_F6	4.7	75	20	9.6	0.075	40
4.7_F7	4.7	75	24	6.4	0.045	45
5.0_F1	5.0	40	16	6.4	0.075	40
5.0_F2	5.0	57.5	20	8.0	0.060	45
5.0_F3	5.0	75	24	9.6	0.045	50
5.3_F1	5.3	40	16	9.6	0.075	45
5.3_F2	5.3	40	20	6.4	0.045	50
5.3_F3	5.3	40	24	8.0	0.045	40
5.3_F4	5.3	57.5	24	9.6	0.075	50
5.3_F5	5.3	75	16	6.4	0.060	50
5.3_F6	5.3	75	16	9.6	0.045	40
5.3_F7	5.3	75	24	6.4	0.075	40

通過分析HMWS為二聚體、三聚體和四聚體的亞種來評估聚集。這允許能夠追蹤配製品組分的改變對聚集細節的直接影響。pH 4.7和pH 5.3是最穩定的，並且沒有產生較大量的HMWS；此外，主要的HMW種類是二聚體（圖10）。pH 5.0配製品產生大約多0.6%的總聚集體；二聚體水準與pH 4.7和5.3是可比較的，且0.6%主要表示三聚體種類。儘管如此，總HMWS%水準是可接受的。

相對於時間或儲存溫度，跨不同的配製品，顯微鏡下可見顆粒（10和25 µm）的數量沒有巨大變化（資料未示出）。在攪拌或冷凍-解凍迴圈應力之後，顯微鏡下可見顆粒（10和25 µm）的數量也沒有巨大變化（資料未示出）。

總而言之，相對於組胺酸，乙酸鹽緩衝配製品提供了最佳的物理和化學穩定性。顯微鏡下可見顆粒計數對緩衝液種類的身份和pH高度敏感，其中pH較低（4.7和5.0）的乙酸鹽配製品產生了最低的顆粒計數。濁度和乳光也是pH依賴性的；配製品在較低pH乙酸鹽條件下的乳光要少的多，這表明在較低pH下不太值得考慮蛋白質間相互作用。還顯示出較少乳光的溶液在UFDF操作期間的處理時間較短，這是產生高濃度藥物物質所需的重要製造考慮因素。

需要向最終配製品添加PS80以緩解聚集、尤其是顆粒化風險，其顯示出聚集和顆粒化會通過介面應力（如攪拌或冷凍/解凍迴圈）而加速。PS80在緩解或減少蛋白質吸附至IV輸注元件（例如，IV袋）方面也是有效的。≥ 0.05%的PS80濃度提供了最佳穩定性。

在加速儲存條件下觀察到了金屬加標的樣品中的顯著氧化和中度聚集水準。向配製品添加金屬螯合劑，以提供保護防止可能發生的電位金屬誘導的蛋白質和賦形劑降解。10 µM EDTA和10 µM DTPA提供了可比較的保護水準，並且使得HMWS、氧化和PS80濃度的變化類似。

發現大約相當於80 mg/ml的8%蔗糖是適於保護分別為50 mg/ml和150 mg/ml的DP濃度和DS濃度的比率。

來自這些穩定性研究的結果證實了目標配製品在各種儲存和其他應力條件下穩定冷凍DS以及液體DP的穩健性。 實施例 7 ： Ab1 的替代配製品 [ 用於輸注用溶液的粉末 ] 藥物產品的描述和組成

另外的示例性Ab1配製品是無菌凍幹產品。將藥物產品填充在USP 1型硼矽酸鹽玻璃小瓶中，10.3 mL/小瓶且過量0.3 mL。將小瓶用矽化灰色丁基橡膠塞子塞住，並且用鋁制密封件和翻蓋密封。表9提供了關於Ab1藥物產品的示例性組成的資訊。

對於施用，在22ºC下將每個小瓶用9.7 mL的注射用水重構，以得到在10 mM L-組胺酸、2%（w/v）蔗糖、3.5%（w/v）甘露糖醇、10 mM L-甲硫胺酸、0.01%（w/v）聚山梨醇酯80（pH 6.0）中25 mg/mL的蛋白質濃度（表9）。賦形劑篩選顯示出，在冷凍和解凍期間，2%蔗糖減少了聚集體的形成。填充劑甘露糖醇沒有顯著影響蛋白質穩定性，但是幫助產生雅致的凍幹餅。 表9：Ab1的示例性配製品。

DP：25 mg/mL

10 mM L-組胺酸HCL

2% wt/vol蔗糖

3.5% w/vol甘露糖醇

10 mM L-甲硫胺酸

0.01% PS80

pH 0.6

圖1是示出了80 mg/ml Ab1的乙酸鹽或組胺酸緩衝液配製品在一定範圍的pH下的乳光度的照片。

圖2A至圖2C是示出了在5ºC、25ºC或40ºC下儲存4周期間的乙酸鹽和組胺酸配製品中2 µm（圖2A）、10 µm（圖2B）和25 µm（圖2C）顯微鏡下可見顆粒的演變的橫條圖組圖。

圖3是示出了緊接在製備（T ₀）之後和在40ºC下儲存四周之後乙酸鹽和組胺酸配製品的粘度值（以厘泊（cP）為單位）的橫條圖。

圖4A和圖4B是示出了在40ºC、25ºC或5ºC下儲存4周期間的乙酸鹽和組胺酸配製品的pH的橫條圖組圖。

圖5是示出了在T ₀時和在5ºC、25ºC或40ºC下儲存4周之後乙酸鹽（pH 4.7、5和5.5）和組胺酸（pH 5.5、6和6.5）的光學密度值（340-360 nm）的散點圖。

圖6是示出了在不同的聚山梨醇酯（PS80）濃度下在5ºC下儲存2周期間（左上圖）、在40ºC下儲存2周期間（右上圖）、劇烈攪拌持續48小時（左下圖）和在-30ºC至室溫下冷凍/解凍（FT）迴圈（右下圖）的配製品中的HMWS演變的一組圖。SR_#或Ch_#：#是PS80的濃度%。SR和Ch表示PS80的兩個不同的供應商。

圖7A是示出了在聚烯烴（PO）或聚氯乙烯（PVC）IV袋中稀釋於鹽水或葡萄糖中之後Ab1濃度的一對橫條圖。

圖7B是示出了在PO或PVC IV袋中稀釋於鹽水（S）或葡萄糖（D）中之後在顯微鏡下可見（≥ 10 μm）顆粒的一對橫條圖。T0：時間零點。T24：24小時。T48：48小時。

圖8A和圖8B是示出了在5ºC、25ºC或40ºC下儲存12周期間（圖8A）和在-20ºC下儲存6個月期間（圖8B）的各種濃度的Ab1配製品中的HMWS演變的圖。

圖9是示出了金屬加標的Ab1配製品中的M252氧化（左圖）和HMWS%（右圖）演變的一對圖。

圖10是示出了在40ºC下儲存一個月（左圖）或在25ºC下儲存三個月之後各種配製品中的HMWS和亞種演變的一對橫條圖。

Claims (17)

1. 一種醫藥組合物，其中所述組合物是水性液體溶液，其包含： 20-200 mg/ml抗TGFβ抗體，其中所述抗體包含對應於SEQ ID NO: 1的殘基1-120的重鏈可變結構域（V _H）胺基酸序列和對應於SEQ ID NO: 2的殘基1-108的輕鏈可變結構域（V _L）胺基酸序列； 10-50 mM乙酸鹽，任選地25 mM乙酸鹽；以及 5-15% w/v蔗糖，任選地8% w/v蔗糖； 其中所述溶液的pH為5.0 ± 0.2或5.0 ± 0.3。
2. 根據請求項1所述的組合物，其中所述抗體包含SEQ ID NO: 1中所示的重鏈胺基酸序列（有或沒有C末端賴胺酸）和SEQ ID NO: 2中所示的輕鏈胺基酸序列。
3. 根據請求項1或2所述的組合物，其進一步包含表面活性劑。
4. 根據請求項3所述的組合物，其中所述表面活性劑是聚山梨醇酯，任選地聚山梨醇酯80（PS80）。
5. 根據請求項4所述的組合物，其中PS80的濃度為約0.01%-0.10% w/v，任選地0.06% w/v。
6. 根據前述請求項中任一項所述的組合物，其中所述抗TGFβ抗體的濃度為40-180 mg/ml，任選地50 mg/ml或150 mg/ml。
7. 根據前述請求項中任一項所述的組合物，所述組合物進一步包含螯合劑，所述螯合劑任選地選自EDTA和DPTA。
8. 根據請求項7所述的組合物，其中所述螯合劑的濃度為0至20 μM，任選地10 μM。
9. 根據前述請求項中任一項所述的組合物，其中所述水性液體溶液的pH為4.7-5.3。
10. 根據請求項1所述的組合物，所述組合物包含： 50 mg/ml、75 mg/ml或150 mg/ml抗TGFβ抗體； 25 mM乙酸鹽； 10 µM EDTA； 0.06% PS80；以及 8% w/v蔗糖， 所述組合物的pH為5.0 ± 0.3。
11. 根據請求項10所述的組合物，其中所述抗體包含SEQ ID NO: 1中所示的重鏈胺基酸序列和SEQ ID NO: 2中所示的輕鏈胺基酸序列。
12. 一種製品，其包含小瓶和使用說明書，其中所述小瓶含有約16 ml的根據請求項11所述的組合物。
13. 一種治療有需要的患者的癌症的方法，其包括向所述患者施用治療有效量的根據請求項1-11中任一項所述的組合物。
14. 根據請求項13所述的方法，其中所述方法進一步包括施用另外的抗癌治療劑。
15. 根據請求項13或14所述的方法，其中所述組合物是以5 mg/kg或15 mg/kg的劑量靜脈內施用，任選地每兩週一次。
16. 一種組合物，其用於在根據請求項13-15中任一項所述的方法中治療有需要的患者。
17. 一種根據請求項1-11中任一項所述的組合物用於製造在根據請求項13-15中任一項所述的方法中治療有需要的患者的藥物的用途。

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