BRPI9711437B1 - derivados de glp-1 - Google Patents

Abstract

derivados de glp-1 e seus análogos tendo um substituinte lipofílico possuem propriedades farmacólogicas interessants, em particular têm um perfil de ação mais protracted do que glp-1 (7-37).

Description

DERIVADOS DE GLP-1 Campo da Invenção A presente invenção refere-se a derivados novos de peptídeo-1 semelhante a glucagon humano (GLP-1) e seus fragmentos e análogos de tais fragmentos que têm um perfil de ação mais prolongada e a métodos para fabricação e utilizado dos mesmos.

Fundamentos da invenção Os peptídeos são amplamente utilizados na pratica médica, e uma vez que podem ser produzidos por tecnologia de DNA recombinante, pode-se esperar que sua importância também aumentarão nos próximos anos. Quando peptídeos nativos ou seus análogos são utilizados em terapia, verifica-se geralmente que os mesmos têm elevada depuração. Uma elevada depuração de um agente terapêutico é inconveniente em casos onde se deseja manter um elevado nível sangüíneo de mesmo durante um período de tempo prolongado uma vez que administrações repetidas serão então necessárias. Os exemplos de peptídeos que têm elevada depuração são: ACTH, fator de liberação de corticotropina, angiotensina, calcitonína, insulina, glucagon, peptídeo-1 semelhante a glucagon, peptídeo-2 semelhante a glucagon, fator-1 de crescimento semelhante a insulina, fator-2 de crescimento semelhante a insulina, peptídeo inibidor gástrico, fator de liberação de hormônio de crescimento, peptídeo de ativação de adenilato ciclase de pituitária, secretina, enterogastrina somatostatina, somatotropina, somatomedma, hormônio de paratiróide, trombopoietina, eritropoietina, fatores de liberação hipotalâmica, prolactina, hormônios estimuladores de tiróide, endorfmas, encef almas, vasopressma, oxitocina, opiõides e seus análogos, superóxido dismutase, interferon, asparagmase, arginase, argmina. desaminase, _ adenosma desaminase e ribonuclease. Em alguns casos, é possível influenciar o perfil de liberação de peptídeos aplicando composições farmacêuticas adequadas, porém esta abordagem tem vários empecilhos e não é aplicada, em geral.

Os hormônios regulando secreção de insulina pertencem ao denominado eixo enteromsular, designando um grupo de hormônios, liberado da mucosa gastrointestinal em resposta à presença e absorção de nutrientes no intestino, que promovem uma liberação inicial e potenciada de insulina. O efeito aumentado em secreção de insulina, o denominado efeito incretina, ê provavelmente essencial para uma tolerância normal de glicose. Muitos dos hormônios gastrointestinais, incluindo gastrina e secretma (colecistocinina não é insulinotrõpico no homem) , são insulmotrópicos, porém os únicos fisiologicamente importantes, aqueles que são responsáveis pelo efeito incretina.,.. s_ão_o polipeptídeo insulinotrõpico dependente de glicose, GIP, e peptídeo-1 semelhante a glucagon (GLP-1). Devido ao seu efeito insulinotrõpico, GIP, isolado em 1973 (1) atraiu imediatamente interesse considerável entre diabetologistas. Contudo, inúmeras pesquisas realizadas durante os anos seguintes__indicaram, claramente, que uma secreção defeituosa de GIP não estava envolvida na patogênese de diabetes mellitus dependente de insulina (IDDM) ou diabetes mellitus não dependente de insulina (NIDDM) (2) . Além disso, como um hormônio insulmotrópico, verificou-se que GIP era quase ineficaz em NIDDM (2) . 0 outro hormônio de incretina, GLP-1 é a substância insulinotrópica mais potente, conhecida (3). Ao contrário de GIP, é surpreendentemente eficaz para estimular secreção de insulina em pacientes com NIDDM. Além disso, e em contraste com os outros hormônios insulinotrópicos {talvez com a exceção de secretina) também inibe de forma potente secreção de glucagon. Devido a estas ações tem efeitos acentuados de redução de glicose no sangue particularmente em pacientes com NIDDM. GLP-1, um produto do proglucagon (4), é um dos membros mais jovens da família de peptídeos secretina-VIP, mas já é estabelecido como um importante hormônio intestino com função reguladora em metabolismo de glicose e_secreção gastrointestinal e metabolismo (5). 0 gene glucagon é processado de forma diferente no pâncreas e no intestino. No pâncreas (9) , o processamento conduz â formação e secreção paralela do 1) próprio glucagon, ocupando as posições 33-61 de proglucagon (PG); 2) um peptídeo N-terminal de 30 ammoãcidos (PG {1-3 0)) frequentemente denominado peptídeo pancreãtico relacionado a glicentina, GRPP (10, 11); 3) um hexapeptídeo correspondendo a PG {6469) ; 4) e finalmente, o denominado fragmento de proglucagon principal (PG (72-158) , no qual as duas seqúências semelhantes a glucagon são enterradas (9) . Glucagon parece ser o único produto biologicamente ativo. Em contraste, na mucosa intestinal, é glucagon que é enterrado em uma molécula maior, enquanto os dois peptideos semelhantes a glucagon são formados separadamente (8). Os seguintes produtos são formados e secretados em paralelo: 1) glicentina, correspondendo a PG (1-69), com a seqüência de glucagon ocupando resíduos nos. 33-61 (12); 2) GLP-1 (7-36) amida (PG (78-107) amida (13), como se acreditava originalmente PG (72-107) amida ou 108, que é inativa) . Pequenas quantidades de GLP-1(7-37), (PG (78-108)) de glicina terminalmente-C estendida porém igual bioativa também são formadas (14) ; 3) peptídeo-2 intermediário (PG (111-122) amida) (15); e 4) GLP-2 (PG (126-158)) (15, 16). Uma fração de glicentina é clivada adicionalmente em GRPP (PG (1-30))) e oxintomodulina (PG (33-69)) (17, 18). Destes peptideos, GLP-1, tem as atividades biológicas mais conspícuas.

Sendo secretados em paralelo com glicentma/enteroglucagon, conclui-se que os muitos estudos de secreção de enteroglucagon (6,7) até um certo ponto se aplicam à secreção GLP-1, porém GLP-1 é metabolizado mais rapidamente com uma meia-vida de plasma em seres humanos de 2 min. (19) . Refeições ricas em gordura ou carboidrato estimulam 'a secreção (20) , presumivelmente como resultado de interação direta de nutrientes ainda não absorvidos com as microvilosidades das cêlulas-L do tipo aberto da raucosa intestino. Podem existir mecanismos neurais ou endõcrmos promovendo a secreção GLP-1 porém não foram demonstrados ainda em seres humanos. A função de mcretina de GLP-1 (29-31) foi claramente ilustrado em experimentos com o antagonista receptor de GLP-1, exendina 9-39, que reduz de forma acentuada o efeito de incretina causado por glicose oral em ratos (21, 22) . 0 hormônio interage diretamente com as células-β através do receptor GLP-1 (23) que pertence à família de glucagon/VlP/calcitonina de receptores estendendo sobre a transmembrana-7 acoplados â proteína-G. A importância do receptor GLP-1 para regular secreção de insulina foi ilustrada em experimentos recentes nos quais uma ruptura alvo do gene receptor GLP-1 foi realizada em camundongos. Animais homozigotos para ruptura tiveram tolerância a glicose bem deteriorada e hiperglicemia por jejum, e mesmo animais heterozigotos erarn intolerantes a glicose (24) . O mecanismo de transdução de sinal (25) envolve principalmente a ativação de adenilato ciclase, porém as elevações de Ca24, intracelular também são essenciais (25, 26) . A ação do hormônio ê melhor descrita como potenciação de liberação de insulina estimulada por glicose (25), porém não é conhecido o mecanismo que acopla estimulação de GLP-1 e glicose. Pode envolver uma liberação de cálcio induzida por cálcio (26,27). Como já mencionado, a ação insulinotrópica de GLP-1 é preservada em células-β diabéticas. Também não é conhecida a relação da última com sua capacidade de transferir "competência de glicose" para células de secreção de insulina, isoladas (26, 28), que respondem de forma insuficiente a glicose ou GLP-1 individualmente, porém totalmente a uma combinação dos dois. De forma igualmente importante, -contudo, o hormônio também inibe, de forma potente, secreção de glucagon (2 9) . 0 mecanismo não é conhecido, porém parece ser parácrino, através de células vizinhas de insulina ou somatostatina (25). Além disso a ação glucagonostãtica é dependente de glicose, de modo que o efeito inibidor diminui à medida que diminui a glicose no sangue. Devido a este efeito duplo, se as concentrações de GLP-1 no plasma aumentam por secreção aumentada ou por infusão exógenas a razão molar de insulina para glucagon no sangue que atinge o fígado através da circulação portal é aumentada em muito, pelo que a produção de glicose hepática diminui (30). Como resultado as concentrações de glicose no sangue diminuem. Devido à dependência de glicose das ações insulinotrópica e glucagonostãtica, o efeito para redução de glicose ê auto-limitador, e o hormônio, portanto, não causa hipoglicemia independente de dose (31) . Os efeitos são preservados em pacientes com diabetes mellitus (32), nos quais infusões de doses levemente suprafísiológicas de GLP-1 podem normalizar completamente os valores de glicose no sangue apesar do controle metabólico insuficiente e falha secundária a sulfoniluréia (33). A importância dos efeitos glucagonostáticos é ilustrado pela descoberta de que GLP-1 também reduz glicose no sangue em pacientes diabéticos do tipo 1 sem capacidade secretora de células-β residuais (34).

Além dos seus efeitos sobre ilhotas pancreãticas, GLP-1 tem ações potentes sobre o trato gastrointestinal. Infundido em quantidades fisiológicas, o GLP-1 inibe, de forma potente, secreção de ácido gástrico induzido por pentagastrma bem como induzido por refeição (35, 3 6) . Inibe, também, a taxa de esvaziamento gástrico e secreção de enzima pancreática (36). Efeitos inibidores similares sobre secreção gástrica e pancreática e motilidade podem ser ocasionados em seres humanos mediante perfusão do íleo com soluções contendo carboidrato ou lipídeo (3 7, 3 8) . Concomitantemente, a secreção de GLP-1 é muito estimulada, e foi especulado que GLP-1 pode pelo menos parcialmente ser responsável por efeito denominado "ileal-brake" (38) . Na realidade, estudos recentes sugerem que, fisiologicamente, os efeitos de ileal-brake de GLP-1 podem ser mais importantes do que seus efeitos sobre ilhotas pancreáticas. Desse modo, em estudos de resposta de dose o GLP-1 influencia a taxa de esvaziamento gástrico em taxas de infusão pelo menos tão baixas quanto aquelas necessárias para influenciar secreção de ilhota (39). GLP-1 parece ter efeito sobre a ingestão de alimentos. A administração intraventricular de GLP-1 inibe profundamente a ingestão de alimentos em ratos (40, 42). Este efeito parece ser altamente específico. Desse modo, GLP-1 estendido N-terminalmente (PG-27-107)amida é inativo e doses apropriadas do antagonista de GLP-1, exendma 9-39, abolem os efeitos de GLP-1 (41). A administração periférica, aguda de GLP-1 não inibe de forma aguda, a ingestão de alimentos em ratos (41, 42) . Contudo, continua possível que GLP-1 secretado das células-L intestinais também pode agir como um sinal de saciedade. Não apenas os efeitos insulinotrópicos como também os efeitos de GLP-1 sobre o trato gastrointestinal são preservados em pacientes diabéticos (43), e podem ajudar a diminuir excursões de glicose induzidas por refeição, porém, mais importante, também podem influenciar a ingestão de alimento. Administrado mtravenosamente, continuamente por uma semana, GLP-1 a 4 ng/kg/mm foi demonstrado melhorar acentuadamente o controle glicêmico em pacientes com NIDDM sem efeitos colaterais significativos (44) . O peptídeo é totalmente ativo após administração subcutânea (45), porém é rapidamente degradado principalmente devido à degradação por enzimas semelhantes a dipeptidila peptidila IV (46, 47) . A seqüência de aminoácido de GLP-1 é fornecida 5 i.a. por 5 Schmidt e outros (Diabetologia 28 704-707 (1985) . Embora as propriedades farmacológicas interessantes de GLP-1 (7-37) e seus análogos tenham atraído muita atenção nos últimos anos conhece-se pouco sobre a estrutura destas moléculas. A estrutura secundária de GLP-1 em micelas foi descrita por ío Thorton e outros (Biochemistry 33 3532-3539 (1994) ), porém em solução normal, GLP-1 é considerada uma molécula muito flexível. De forma surpreendentemente, verificamos que a derivação desta molécula relativamente pequena e muito flexível resultou em compostos cujo perfil de plasma era 15 altamente prolongado e ainda tinha retido atividade. GLP-1 e análogos de GLP-1 e seus fragmentos são potencialmente úteis i.a. no tratamento de diabetes tipo 1 e tipo 2. Contudo, a elevada depuração limita a utilidade destes compostos, e desse modo ainda há necessidade de 20 aperfeiçoamentos nestes campos. Por conseguinte, é um objetivo da presente invenção fornecer derivados de GLP-1 e seus análogos que tenham um perfil de ação prolongada em relação a GLP-1 (7-37) . É um objetivo adicional da invenção fornecer derivados de GLP-1 e seus análogos que 25 tenham depuração mais baixa do que GLP-1 (7-37). É um objetivo adicional da invenção fornecer uma composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com a invenção e usar um composto da invenção para fornecer tal composição. Além disso, é um objetivo da presente invenção fornecer um método de__ tratar diabetes mellitus dependente de insulina e não dependente de insulina.

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SUMÁRIO DA INVENÇÃO GLP-1 humano é um peptideo de resíduo de 37 aminoãcidos originando de preproglucagon que é sintetizado i.a nas células-L no íleo distante, no pâncreas e no cérebro. O processamento de preproglucagon para fornecer GLP-1(7-36)amida, GLP-1(7-37) e GLP-2 ocorre principalmente nas células-L. Um sistema simples é utilizado para descrever fragmentos e análogos deste peptideo. Desse modo, por exemplo, GLy8-GLP-l(7-37) designa um fragmento de GLP-1 formalmente derivado de GLP-1 pela deleção dos resíduos de aminoãcido nos. 1 a 6 e substituindo o resíduo de aminoãcido de ocorrência natural na posição 8 (Ala) por Gly. Similarmente, Lys34 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-37) designa GLP-1(7-37) em que o grupo ε-amino do resíduo Lys na posição 34 foi tetradecanoilado. Onde se faz referêncra neste texto a análogos de GLP-1 estendidos C-terminalmente, o resíduo de aminoácido na posição 38 é Arg a menos que de outro modo indicado, o resíduo de aminoácido opcional na posição 39 também é Arg a menos que de outro modo indicado e o resíduo de aminoácido opcional na posição 40 é Asp a menos que de outro modo indicado. Além disso, se um análogo estendido C- terminalmente 5 estender até a posição 41, 42, 43, 44 ou 45, a seqüência de aminoácido desta extensão é como na seqüência correspondente em preproglucagon humano a menos que de outro modo indicado.

Em seu aspecto mais amplo, a presente invenção se ío re fere a derivados de GLP-1 e seus análogos. Os derivados de acordo com a invenção têm propriedades farmacológicas interessantes, em particular têm um perfil de ação mais prolongado do que os peptídeos de origem.

No presente texto, a designação "um análogo" é 15 utilizado para designar um peptídeo em que um ou mais resíduos de aminoácido do peptídeo de origem foram substituídos por outro resíduo de aminoácido e/ou em que um ou mais resíduos de aminoácido do peptídeo de origem foram deletados e/ou em que um ou mais resíduos de aminoácido 20 foram adicionados ao peptídeo de origem. Tal adição pode ocorrer na extremidade N-terminal ou na extremidade C-terminal do peptídeo de origem ou em ambos. 0 termo "derivado" é utilizado no presente texto para designar um peptídeo no qual um ou mais dos 25 resíduos de aminoácido do peptídeo de origem foram quimicamente modificados, por exemplo por alquilação, acilação, formação de éster ou formação de amida. 0 termo "derivado GLP-1" é utilizado no presente texto para designar um derivado de GLP-1 ou um seu análogo. No presente texto, o peptídeo de origem do qual tal derivado é formalmente derivado é em alguns lugares mencionado como a "fração de GLP-1" do derivado.

Em uma modalidade preferida, como descrito na reivindicação 1, a presente invenção se refere a um derivado GLP-1 no qual pelo menos um residuo de aminoácido do peptídeo de origem tem um substituínte lipofílico ligado com a condição de que se apenas um substituínte lipofílico estiver presente e este substituínte for ligado ao resíduo de aminoácido de terminal-C ou ao de terminal-N do peptídeo de origem então esta substituição ê um grupo de alquila ou um grupo que tem um grupo de ácido carboxílico-ω.

Em outra modalidade preferida, como descrito na reivindicação 2, apresente invenção se refere a um derivado de GLP-1 tendo apenas um substituínte lipofílico.

Em outra modalidade preferida, como descrito na reivindicação 3, a presente invenção se refere a um derivado de GLP-1 tendo apenas um substituínte lipofílico cujo substituínte é um grupo de alquila ou um grupo que tenha um grupo de ácido carboxílico-ω e é ligado ao resíduo de aminoácido de terminal-N do peptídeo de origem.

Em outra modalidade preferida, como descrito na reivindicação 4, a presente invenção se refere a um derivado GLP-1 tendo apenas um substitumte lipofílico cujo substitumte é um grupo de alquila ou um grupo que tenha um grupo de ácido carboxílico-ω e é ligado ao resíduo de aminoãcido de terminal-C do peptídeo de origem.

Em outra modalidade preferida, como descrito na reivindicação 5, a presente invenção se refere a um derivado de GLP-1 tendo apenas um substituinte lipofílico cujo substitumte pode ser ligado a qualquer resíduo de aminoãcido que não seja o resíduo de aminoãcido N-terminal ou C-terminal do peptídeo de origem.

Em outra modalidade preferida, como descrito na reivindicação 6, a presente invenção se refere a um derivado de GLP-1 no qual dois substituintes lipofílicos estão presentes.

Em outra modalidade preferida, como descrito na reivindicação 7, a presente invenção se refere a um derivado de GLP-1 no qual dois substituintes lipofílicos estão presentes, um sendo ligado ao resíduo de aminoãcido N-terminal enquanto o outro é ligado ao resíduo de aminoãcido C-terminal.

Em outra modalidade preferida, como descrito na reivindicação 8, a presente invenção se refere a um derivado _de GLP-1 no qual dois substituintes lipofílicos estão presentes, um sendo ligado ao resíduo de aminoácido N-terminal enquanto o outro é ligado a um resíduo de aminoácido que não é resíduo de aminoácido N-terminal nem C-terminal.

Em outra modalidade preferida*, como descrito na reivindicação 9, a presente invenção se refere a um derivado GLP-1 no qual dois substitumtes lipofílicos estão presentes, um sendo ligado ao resíduo de aminoácido C-terminal enquanto o outro é ligado a um resíduo de aminoácido que não é o resíduo de aminoácido N-terminal nem o C-terminal.

Numa modalidade preferida adicional, como descrito na reivindicação 10, a presente invenção se refere a um derivado de GLP-1(7-C), em que C é selecionado do grupo que compreende 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 e 45 cujo derivado tem apenas um substituinte lipofílico que é ligado ao resíduo de aminoácido C-termmal do peptídeo de origem.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção se refere a um derivado de GLP-1 em que o substituinte lipofílico compreende 4 a 40 átomos de carbono, mais preferivelmente de 8 a 25 átomos de carbono.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que um substituinte lipofílico é ligado a um resíduo de aminoácido de tal modo que um grupo de carboxila do substituinte lipofílico forma uma ligação de amida com um grupo amino do resíduo de aminoácido.

Em uma modalidade preferida adicional a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 no qual um substituinte lipofílico é ligado a um resíduo de aminoãcido de tal modo que um grupo amino do substitumte lipofilico forma uma ligação de amida com um grupo de carboxila do resíduo de aminoãcido.

Em uma modalidade preferida, adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que um substituinte lipofílico é ligado ao peptídeo de origem por meio de um espaçador.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que um substituinte lipofílico - opcionalmente através de um espaçador -e ligado ao grupo amino-ε de um resíduo Lys contido no peptídeo de origem.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que um substituinte lipofílico é ligado ao peptídeo de origem por meio de um espaçador que é um grupo de ácido dicarboxílico-α,ω de alcano não ramificado tendo de 1 a 7 grupos de metileno, preferivelmente dois grupos de metileno cujo espaçador forma uma ligação entre um grupo de amino do peptídeo de origem e um grupo de amino do substituinte lipofílico.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que um substituinte lipofílico é ligado ao peptídeo de origem por intermédio de um espaçador que é um resíduo de aminoãcido exceto Cys, ou um dipeptídeo como Gly-Lys. No presente texto, a expressão "um dipeptídeo como Glys-Lys" é utilizado para designar um dipeptídeo onde o resíduo de aminoãcido C-terminal é Lys, His ou Trp, preferivelmente Lys, e onde o resíduo de ammo [acido N-terminal é selecionado do grupo que compreende Ala, Arg, Asp, Asn, Gly, Glu, Gin, Ile, Leu, Vai, Phe e Pro.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que um substituinte lipofílico é ligatk^ ao peptídeo de origem por meio de um espaçador que é um resíduo de aminoãcido exceto Cys, ou ê um dipeptídeo como Gly-Lys e em que um grupo de carboxila do peptídeo de origem forma uma ligação de amida com um grupo de ammo de um resíduo Lys ou um dipeptídeo contendo um resíduo Lys, e o outro grupo de amino do resíduo Lys ou um dipeptídeo contendo um resíduo Lys forma uma ligação de amida com um grupo <ie carboxila do substituinte lipofílico.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 no qual um substituinte lipofílico é ligado ao peptídeo de origem por meio de um espaçador que é um resíduo de aminoãcido exceto Cys, ou é um dipeptídeo como Gly-Lys e onde um grupo de ammo do peptídeo de origem forma uma ligação de amida com um grupo carboxílico do espaçador de dipeptídeo ou resíduo de aminoãcido, e um grupo de amino do espaçador de dipeptídeo ou resíduo de aminoácido forma uma ligação de amida com um grupo de carboxila do substituinte lipofílico.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 onde um substituinte lipofílico é ligado ao peptídeo de origem por meio de um espaçador que é um resíduo de aminoácido exceto Cys, ou é um dipeptídeo como Gly-Lys e onde um grupo de carboxila do peptídeo de origem forma uma ligação de amida com um grupo de amino do espaçador de resíduo de aminoácido ou espaçador de dipeptídeo, e o grupo de carboxila do espaçador de resíduo de aminoácido ou espaçador de dipeptídeo forma uma ligação de amida com um grupo de amino do substituinte lipofílico.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 onde um substituinte lipofílico é ligado ao peptídeo de origem por intermédio de um espaçador que é um resíduo de aminoácido exceto Cys, ou é um dipeptídeo como Gly-Lys, e onde um grupo de carboxila do peptídeo de origem forma uma ligação de amida com um grupo de amino de um espaçador que é Asp ou Glu, ou um espaçador de dipeptídeo contendo um resíduo Asp ou Glu, e um grupo de carboxila do espaçador forma uma ligação de amida com um grupo de amino do substituinte lipofílico.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 tendo um substituinte lipofílico que compreende um esqueleto de ciclopentanofenatreno parcial ou totalmente hidrogenado.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 tendo um substituinte lipofílico que é um grupo de alquila de cadeia reta ou ramificado.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 tendo um substituinte lipofílico que é o grupo de acila de um ácido graxo de cadeia reta ou ramificado.

Em uma modalidade preferida, adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 tendo um substituinte lipofílico que é um grupo de acila selecionado do grupo que compreende CH3 (CH2) nC0-, em que n ê um número inteiro de 4 a 38, preferivelmente um número inteiro de 4 a 24, mais preferivelmente selecionado do grupo que compreende CH3 (CH2) ÊC0-, CH3 (CH2) aC0-, CH3 (0¾) l0CO-, CH3 (CH2) 12C0-, CH3 (CH3)14CO-, CH3 (CH2) 16C0-, CH3 (CHj)iaC0-, CH3{CH2)29CO- e CH3 (CH2) 22CO-.

Em uma modalidade preferida, adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 tendo um substituinte lipofílico que é um grupo de acila de um ácido dicarboxílico a, to de alcano de cadeia reta ou ramificada.

Em uma modalidade prefejrida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 tendo um substituinte lipofílico que é um grupo de acila selecionado do grupo que compreende HOOC(CH2) mC0- , em que m é um número inteiro de 4 a 38, preferivelmente um número inteiro de 4 a 24, mais preferivelmente selecionado do grupo que compreende HOOC (CH2) 14C0-, HOOC {CH2) ieC0- , HOOC (CH2) 1BC0- , HOOC (CH2) 20CO- e HOOC (CH2) 22CO-.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 que tem um substituinte lipofílico o qual é um grupo da fórmula CH3 (CH2) p ( (CH2) gCOOH) CHNH-CO (CH2) 2C0-, em que p e q são números inteiros e p+q ê um número inteiro de 8 a 33, preferivelmente de 12 a 28.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 tendo um substituinte lipofílico que é um grupo da fórmula CH3 (CH2) rCO-NHCH (COOH) (CH2) 2C0-, em que r é um número inteiro de 10 a 24.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 tendo um substituinte lipofílico que é um grupo da fórmula CH3 (CH2) sCO-NHCH ( (CH2) 2COOH) CO-, em que s é um número inteiro de 8 a 24.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 tendo um substituinte lipofílico que é um grupo da fórmula COOH (CH2) cC0-, em que t é um número inteiro de 8 a 24.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 tendo um substituinte lipofílico que é um grupo da fórmula -NHCH(COOH) (CH2) 4NH-CO (CHa) UCH3, em que u é um número inteiro de 8 a 18.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 tendo um substituinte lipofílico que é um grupo da fórmula “ -NHCH (COOH) (CH2) 4NH-COCH ( (CH2) 2COOH) ΝΉ- CO(CH2)wCH3, em que w é um número inteiro de 10 a 16.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 tendo um substituinte lipofílico que é um grupo da fórmula -NHCH (COOH) (CH2) 4NH-C0 ( (CH2) 2 CH(C00H)NH- C0(CH2)xCH3, em que x é um número inteiro de 10 a 16.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 tendo um substituinte lipofílico que é um grupo da fórmula -NHCH (COOH) (CH2) 4NH-C0 (CH2) 2 CH (COOH)NHCO (CH2) yCH3, em que y é um número inteiro de 10 a 16.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 tendo um substitumte lipofílico que pode ser negativamente carregado Tal substitumte lipofílico pode, por exemplo, ser um substituinte que tem um grupo de carboxila.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 cujo peptídeo de origem é selecionado do grupo que compreende GLP-1(1-45) ou um seu análogo.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 derivado de um fragmento de GLP-1 selecionado do grupo que compreende GLP-1(7-35), GLP-1(7-36), GLP-1(7- 36)arnida, GLP-1(7-37), GLP-1(7-38), GLP-1(7-39), GLP-1(7-40) e GLP-1(7-41) ou um seu análogo.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um análogo de GLP-1 derivado de um análogo de GLP-1 selecionado do grupo que compreende GLP-1(1-35), GLP-1(1-36), GLP-1(1- 36)amida, GLP-1(1-37), GLP-1(1-38), GLP-1(1-39), GLP-1(1-40) e GLP-1(1-41) ou um seu análogo.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que o análogo de designação compreende derivados em que um total de até quinze, preferivelmente até dez resíduos de aminoãcido foram permutados com qualquer resíduo de aminoãcido-a.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que o análogo de designação compreende derivados onde um total de até quinze, preferivelmente até dez resíduos de aminoãcido foram permutados com qualquer resíduo de aminoácido-α que pode ser codificado pelo código genético.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que o análogo de designação compreende derivados onde um total de até seis resíduos de aminoácido foram permutados por outro resíduo de aminoácido-α que pode ser codificado pelo código genético.

Em uma modalidade preferida, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-l(A-B) em que A é um número inteiro de 1 a 7 e B é um número inteiro de 38 a 45 ou um seu análogo compreendendo um substituinte lipofílico ligado ao resíduo de aminoácido C-terminal e, opcionalmente, um segundo substituinte lipofílico ligado a um dos outros resíduos de aminoácido.

Em uma modalidade preferida adicional, um peptídeo de origem para um derivado de acordo com a invenção é selecionado do grupo que compreende Arg34-GLP-1 (7-37) ; Arg34-GLP-1 (7-37) ; Lys36-GLP-1 (7-37) ; Arg26,34Lys36-GLP-1 (7-37) ; Arg2S'34Lys38-GLP-l (7-38) ;

Arg26,34Lys39-GLP-1 (7-39) ; Arg2S'34Lys40-GLP-l (7-40) ;

ArgzeLys3S-GLP-l (7-3 7) ; Arg34Lys36-GLP-l (7-37) ; Arg26Lys39-GLP-1 (7-39) ; Arg34Lys40-GLP-l (7-40) ; Arg2S'34Lys36'39-GLP- 1 (7-39) ; Arg2S,34Lys3S'40-GLP-l (7-40) ; GlysArg2 6-GLP-l (737); GlyaArg34-GLP-l (7-3 7) ; Gly8Lys36-GLP-l (7-37) ;

GlyaArg26'34Lys37-GLP-1&7-37) ; Gly8Arg26'34Lys39-GLP-1 (7-39) ; Gly8Arg2S'34Lys40-GLP--l (7-40) ; Gly8Arg26Lys36'GLP-l (7-37) ; GlyBArg34Lys36-GLP-1 (7-37) ; Gly8ArgzeLys39‘GLP-1 (7-39) ;

Gly8Arg34Lys40"GLP-l (7-4 0) ; Gly8Arg26'34Lys3e'39GLP-1 (7-39) ; e Gly8Arg26'34Lys36'40'GLP-l (7-40) .

Em uma modalidade preferida, adicional, um peptídeo de origem para um derivado de acordo com a invenção é selecionado do grupo que compreende Arg26’ 34Lys3eGLP-1 (7-38) ; Arg26'34Lys39GLP-1 (7-39) ;

Arg26'34Lys40GLP-l (7-40) ; Arg26'34Lys41GLP-1 (7-41) ;

Arg26'34Lys42GLP-l {7-42} ; Arg26'34Lys43GLP-1 (7-43) ;

Arg26'34Lys44GLP-l (7-44) ; Arg2e'34Lys4SGLP-l (7-45) ;

Arg26,34Lys3SGLP-l (1-38) ; Arg26'34Lys39GLP-l (1-39) ;

Arg2e,34Lys40GLP-1 (1-40) ; Arg2S'34Lys41GLP-l (1-41) ;

Arg26'34Lys42GLP-l (1-42) ; Arg26'34Lys43GLP-l (1-43 ) ;

Arg26'34Lys44GLP-l (1-44) ; Arg26'34Lys4SGLP-1 (1-45) ;

Arg2S'34Lys3aGLP-l (2-38) ; Arg26'34Lys39GLP-l (2-3 9) ;

Arg26'34Lys40GLP-1 (2-40) ; Arg26'34Lys41GLP-l (2-41) ;

Arg26’34Lys42GLP-1 (2-42) ; Arg2S'34Lys43GLP-1 (2-43) ;

Arg26'34Lys44GLP-1 (2-44) ; Arg2S'34Lys45GLP-1 (2-45) ;

Arg26'34Lys38GLP-l (3-3 8) ; Arg2S'34Lys39GLP-1 (3-39) , Arg26'34Lys40GLP-1 (3-40) ; Arg2e'34Lys41GLP-1 (3-41) ;

Arg26'34Lys42GLP-l (3-42) ; Arg26'34Lys43GLP-l (3-43) ;

Arg26'34Lys44GLP-l (3-44) ; Arg26'34Lys4SGLP-^l (3-45) ;

Arg26'34Lys38GLP-l (4-38) ; Arg26'34Lys39GLP-l (4-3 9);

Arg26'34Lys40GLP-l (4-40) ; Arg26'34Lys41GLP-1 (4-41) ;

Arg2S'34Lys42GLP-l (4-42) , Arg26,34Lys43GLP-l (4-43) ;

Arg2S'34Lys44GLP-l (4-44) ; Arg26'34Lys45GLP-l (4-45) ;

Arg26'34Lys38GLP-1 (5-38) ; Arg26'34Lys39GLP-l (5-39) ;

Arg26’34Lys40GLP-1 (5-40) ; Arg26'34Lys41GLP-l (5-41) ;

Arg26'34Lys42GLP-1 (5-42) ; Arg26'34Lys43GLP-l (5-43) ;

Arg26'34Lys44GLP-1 (5-44) ; Arg26'34Lys45GLP-l (5-45) ;

Arg26,34Lys3_EGLP-1 (6-38) ; Arg26'34Lys39GLP-l (6-39) ;

Arg26,34Lys40GLP-1 (6-40) ; Arg26'34Lys41GLP-l (6-41) ;

Arg26'34Lys42GLP-1 (6-42) ; Arg26'34Lys43GLP-l (6-43) ;

Arg26,34Lys44GLP-l (6-44) ; Arg26'34Lys45GLP-l (6-45) ;

Arg26Lys3SGLP-1 (1-38) ; Arg34Lys3eGLP-l (1-38) ; Arg2<5'34Lys36'38 GLP-1 (1-38) ; Arg2SLys38GLP-1 (7-38) ; Arg34Lys38GLP-1 (7-38) ; Arg2S'34Lys36'38GLP-l (7-3 8) ; Arg26'34Lys33GLP-l (7-3 8);

Arg26Lys39GLP-l (1-39) ; Arg34Lys39GLP-1 (1-39) ; Ãrg26'34Lys36'39 GLP-1 (1-39) ; Arg26Lys39GLP-1 (7-39) ; Arg34Lys39GLP-1 (7-39) ; Arg26'34Lys36'39 GLP-1 (7-39) .

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que o peptídeo de origem é selecionado do grupo que compreende Arg2S-GLP-l (7-37) , Arg34-GLP-1 (7-37) , Lys3S-GLP-1 (7-37) , Arg26'34Lys3S-GLP-l (7-37) , Arg26Lys36-GLP-1 (7- 37) , Arg34Lys36-GLP-1 (7-37) , GlysArg26-GLP-l (7-37) , GlyeArg34-GLP-1 (7-37) , Gly8Lys3S-GLP-1 (7-37) , Gly8Arg26,34Lys36-GLP-1 (7-37) , Gly8Arg25Lys36-GLP-1 (7-37) e Gly8Arg34Lys3S-GLP-1 (7-37) .

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que o peptídeo de origem é selecionado do grupo que compreende Arg26Lys38-GLP-1 (7-38) , Arg2S'34Lys38'GLP-1 (738} , Arg2S'34Lys3S,38-GLP-1 (7-38) , Gly8Arg26Lys3S-GLP-1 (7-38) e Gly8Arg2e'34Lys36'38-GLP-1 (7-38) .

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que o peptídeo de origem é selecionado do grupo que compreende Arg26Lys39'GLP-l (7-39) , Arg26'34Lys36’39 ‘GLP-1 (7- 39), GlyeArg26Lys39-GLP-1 (7-3 9) e Gly8Arg2S'34Lys3Ê'39-GLP-1 (7-39) .

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 em que o peptídeo de origem é selecionado do grupo que compreende Arg34Lys40-GLP-l (7-40) , Arg2e'34Lys36'40GLP-l (740), Gly8Arg34Lys40-GLP-l (7-40) e Gly8Arg26'34Lys3Ê'40-GLP-1(7-40) .

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se a um derivado de GLP-1 que é selecionado do grupo que compreende: Lys26 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-37) ;

Lys34 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-37) ;

Lys26'34-bis (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-37) ;

GlyBLys26 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-37) ;

Gly8Lys34 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-37) ;

Gly8Lys2S'34-bis (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-37) ;

Arg26Lys34 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-37) ;

Lys26 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-38) ;

Lys34 (Isf-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-38) ;

Lys26,34-bis (N*-tetradecanoí 1 a) -GLP-1 (7-38) ;

Gly8Lys2S (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-38) ;

Gly8Lys34 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-38) ;

Gly8Lys26,34-bis (NE-tetradecanoí la) -GLP-1 (7-38) ;

Arg2SLys34 (NE-tetradecanoí la) -GLP-1 (7-38) ;

Lys26 (N5-tetradecanoí la) -GLP-1 (7-39) ;

Lys34 (K^-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-39) ;

Lys=6,34_biS (Νε- tetradecanoí la) -GLP-1 (7-39) ;

GlyeLys26 (N8-tetradecanoí la) -GLP-1 (7-3 9) ;

GlyaLys34 (IS^-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-39) ;

Gly8Lys26,34-bis (NE-tetradecanolla) -GLP-1 (7-39) ; Arg26Lys34 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-39) ; Lys26(NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-40) ;

Lys34 (Kf-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-40) Lys2á'34-bis ílf-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-40) ; GlyBLys26 (N®-tetradecanoxla) -GLP-1 (7-40) ; GlyaLys34 (Νε-tetradecanoxla) -GLP-1 (7-40) ; GlyeLysZ6'34-bis (NE-tetradecanolla) -GLP-1 (7-40) ; Arg26Lys34 (N®-tetradecanolla) -GLP-1 (7-40) ;

Lys26 (NE-tetradecanolla) -GLP-1 (7-3 6) ;

Lys34 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-36) ;

LysZ6,34-bis (N®-tetradecanolla) -GLP-1 (7-36) GlysLys26 (NE-tetradecanolla) -GLP-1 (7-36) ; GlyaLys34 (N®-tetradecanoí la) -GLP-1 (7-3 6) ; Gly3Lys2Ê,34-bis (N®-tetradecanolla) -GLP-1 (7-36) ; Arg23Lys34 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-36) ;

Lys26 (N®-tetradecanolla) -GLP-1 (7-35) ;

Lys34 (N6-tetradecanolla) -GLP-1 (7-35) ;

LysZ6'34-bis (NE-tetradecanolla) -GLP-1 (7-35) ; GlyaLys2S(N6-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-35) ; Gly8Lys34 (NE-tetradecanoí la) -GLP-1 (7-35) ; Gly3Lys26'34-bis (NE-tetradecanolla) -GLP-1 (7-35) ; ArgzeLys34 (NE-tetradecanolla) -GLP-1 (7-35) ;

Lys23 (NE-tetradecanolla) -GLP-1 (7-3 6) amida;

Lys34 (N®-tetradecanolla) -GLP-1 (7-3 6) amida;

Lys23'34-bis (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-36) amida; Gly8Lys2S (N®-tetradecanolla) -GLP-1 (7-36) amida; GlyeLys34 (NE-tetradecanolla) -GLP-1 (7-36) amida;

GlyeLys2á'34-bis (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7- 36)amida;

Arg26Lys34 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-36) amida; GlyeArg26Lys34 (NE-tetradecano£la) -GLP-1 (7-37) ; Lys26 (^-tetradecanoíla) Arg34-GLP-1 (7-37) ;

Gly8 Lys26 (NE-tetradecano£la) Arg34-GLP-1 (7-37) ; Arg26'34 Lys36 (Mf-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-37) ; GlysArg2S'34 Lys36 (N®-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-37) ; Gly8Arg26Lys34 (N®-tetradecano£la) -GLP-1 (7-38) ; Lys26 (Νε-tetradecanoíla) Arg34-GLP-1 (7-38) ;

Gly8 Lys26 (N®-tetradecanoíla) Arg34-GLP-1 (7-38) ; Arg26'34 Lys36 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-3 8) ; Arg28,34 Lys38 (N®-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-38) ; GlysArg26,34 Lys36 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-38) ; Gly8Arg2SLys34 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-3 9) ; Lys26 (N^-tetradecanoíla) Arg34-GLP-1 (7-39) ;

Gly3 Lys26 (Νε-tetradecanoíla) Arg34-GLP-1 (7-39) ; Arg26,34 Lys36 (ISf-tetradecanoí la) -GLP-1 (7-39) ; GlysArg26'34 Lys36 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-39) ; Gly8Arg2eLys34 (NE-tetradecanoila) -GLP-1 (7-40) ; Lys28 (ISf-tetradecanoíla) Arg34-GLP-1 (7-40) ;

Gly8 Lysze (NE-tetradecanoíla)Arg34-GLP-l (7-4 0) Arg26'34 Lys36 (NE-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-40) ; Gly8Arg2S'34 Lys38 (ISf-tetradecanoíla)-GLP-1 (7-40) ; Lys2e(NE- (ω-carboxmonadecanoíla) -GLP-1 (7-3 7) ; Lys34 (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7-37) ; Lys26,34-bis (Ne- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 37) ;

GlyBLys26 (N®- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 37) ;

GlysLys34 (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 37) ;

GlysLys26,34-bis (NE- {ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1(7-37);

Lys26 (N®- (ω-carboxinonadecanoíla)-GLP-1 (7-38) ; Lys34 (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7-38) ; Lys26'34-bis (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 38) ;

GlyaLys26 (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 38) ;

GlyeLys34 (Νε- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (73 8) ;

GlyBLys2G, 34-bis (N®- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1(7-38);

Lys26 (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7-39) ; Lys34 (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLE-1 (7-3 9) ; Lys26,34-bis (N®- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 39) ;

Gly8Lys2S (N®- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 39) ;

GlyeLys34 (N®- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (739) ;

Gly8Lys26'34-bis (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP- 1(7-39) ;

Lys26 (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7-40) ; Lys34 (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7-40) ;

Lys2S,34-bis (NE- (ω-carboxmonadecanoí 1 a) -GLP-1 (7- 40) ;

Gly8Lys26 {N®- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 40) ;

GlyaLys34 (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (740) ;

Gly8Lys2S,34-bis (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP- 1(7-40) ;

Lys26 (Νε- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7-36) ; Lys34 (N®- (ω-carboxmonadecanoíla) -GLP-1 (7-36) ; Lys2S,34-bis (Νε- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (736;

GlyaLys26 (NE- (ω-carboxmonadecanoíla) -GLP-1 (7- 36) ;

GlyeLys34 (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (73 6) ;

GlyBLys26,34-bis (Νε- (ω - carboxmonade canoí la) -GLP- 1 (7-36) ;

Lys26 (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 36)amida;

Lys34 (N5- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 36)amida;

Lys26,34-bis (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (73 6)ami da;

Gly8Lys2S (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 36)amida;

GlyBLys34 (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7-36)amida;

GlyeLys26'34-bis (N®- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7-3 6) amida ;

Lys2S (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7-35) ; Lys34 (Ne- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7-35) ; Lys2S,34-bis (Νε- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 35) ;

Gly3Lys2S (Νε- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 35) ;

GlyaLys34 (Νε- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (73 5) ;

GlyeLys26'34-bis (Νε- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP- 1 (7-35) ;

Arg2SLys34 (Νε- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 37) ;

GlysArg26Lys34 (Νε- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP- 1(7-37) ;

Lys26 (N®- (ω-carboxinonadecanoíla)Arg34 -GLP-1 (7- 37) ;

Arg2S,34Lys36 (Ne- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 37) ;

Gly8Arg2S,34Lys36 (Ne- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP- 1(7-37);

Arg2SLys34 (N8- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 38) ;

GlyeArg26Lys34 (Νε- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP- 1 (7-38) ;

Lys26 (Ns- (ω-carboxinonadecanoíla) Arg34 -GLP-1 (7- 38) ;

Gly3Lys26 (Νε-(ω-carboxinonadecanoíla) Arg34 -GLP- 1{7-38) ;

Arg26,34Lys36 (Ne- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 38) ;

Arg26,34Lys3S (Νε- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 38) ;

GlyBArg26'34Lys3S (Νε- {ω-carboxinonadecanoíla) -GLP- 1(7-38);

Arg26Lys34 (Νε- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 39) ;

GlyeArg2eLys34 (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP- 1 (7-39) ;

Lys2S (Νε- (ω-carboxinonadecanoíla)Arg34 -GLP-1(7- 39) ;

Gly8Lys2S (IST- (co-carboxrnonadecanoíla) Arg34 -GLP- 1(7-39) ;

Arg26,34Lys3G (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 39) ;

Gly3Arg2S,34Lys3S (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP- 1(7-39) ;

ArgZ6Lys34 (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 40) ;

Gly8Arg26Lys34 (NE- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP- 1(7-40) ;

Lys26 (Νε- (ω-carboxinonadecanoíla) Arg34 -GLP-1 (7- 40) ;

Gly8Lys26 (N5-(ω-carboxinonadecanoíla) Arg34 -GLP- 1(7-40) ;

Arg26,34Lys3S (N®- (ω-carboxinonadecanoíla) -GLP-1 (7- 40) ;

Gly8Arg2S,34Lys3S (N3- (ω-carboxínonadecanoíla) -GLP- 1(7-40) ;

Lys2S (N*- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys34 (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ; Lysz6'34-bis (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ; GlyaLys2S (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ; GlyaLys34 (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ; GlyBLys26'34-bis (Ne- (7-desoxícoloíla) ) -GLP-1 (7- 37) ;

Arg26Lys34 (NE- (7-desoxicoloíla)) -GLP-1 (7-37) ; Lys26 (N3- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-38) ;

Lys34 (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-38) ; Lys2e,34-bis (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-38) ; GlyaLys26 (N3- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-38) ; GlysLys34 (NE- (7-desoxícoloíla) ) -GLP-1 (7-38) ; GlyeLys2e,34-bis (N3- (7-desoxicoloíla)) -GLP-1 (7- 38) ;

Arg2SLys34 (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-38) ; Lys26 (N3- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-3 9) ;

Lys34 (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-39) ; Lys26,34-bis (NE- (7-desoxícoloíla) ) -GLP-1 (7-39) ; GlyaLys2fi (WE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-3 9) ; GlyeLys34 (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-39) ; GlyaLys26,34-bís (Νε- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7- 39) ;

Arg26Lys34 (N3- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-39) ;

Lys26 (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-40) ;

Lys34 (N8- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-40) ; Lys26,34-bis CNE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-40) ; GlyaLys26 (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-40) ; GlyaLys34 (N®- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-40) ; Gly8Lys26'34-bis (Νε- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7- 40) ;

Arg26Lys34 (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-40) ; Lys26 (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-36) Lys34 (N8- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-36) ;

Lys26,34- bis (Ne- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-36) ; GlyaLys26 (UE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-36) ; GlyeLys34 (N8- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-36) ; Gly8Lys2S'34-bis (Νε- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7- 36) ;

Arg26Lys34 (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-36) ; Lys26 (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-35) ;

Lys34 (N8- (7-desoxicoloíla) } -GLP-1 (7-35) ; Lys26,34-bis (Νε- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-35) ; GlysLys26 (Νε- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-35) ; GlyaLys34 (N8- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-117-35) ; GlyeLys26'34-bis (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (735) ;

Arg26Lys34 (N8- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-35) ; Lys26 (N8- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-36) arruda; Lys34 (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-36) araida; Lys2S,34-bis (NE- (7-desoxicoloíla)) -GLP-1 (7- 36)amida;

GlyaLys26 (Νε- (7-desoxicoloíla) } -GLP-1 (7- 36)amida;

GlyeLys34 (Kl*- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7- 3 6) amida;

Gly8Lys26,34-bis (Νε- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-36)amida;

Arg2SLys34 (N®- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7- 36) amida;

Gly8Arg26Lys34 (Νε- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ; Lys2Ê(NE- (7-desoxicoloíla) ) -Arg34-GLP-1 (7-37) ; GlysLys2S (ΝΕ- (7-desoxicoloíla) ) -Arg34-GLP-1 (7- 37) ;

Arg26‘34Lys3ê (WE- (7-desoxicoloíla)) -GLP-.1 (7-37) ; Gly8Arg2S'34Lys36 (Νε- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7- 37) ;

Lys26 (NE- (coloíla) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys34 (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys26,34-bis (N®- (coloíla) ) -GLP-1 (7-37) ;

Gly8Lys2S (3ST*- (coloíla) ) -GLP-1 (7-37) ;

GlyeLys34 (ΝΓ- (coloíla) ) -GLP-1 (7-37) ; GlyeLys26'34-bis (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-37) ; Arg26Lys34 (NE- (coloíla) ) -GLP-1 (7-37) ;

GlysArgzsLys34 (Νε- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-38) ; Lys26 (Νε- (7-desoxicoloíla)) -Arg34-GLP-1 (7-38) ; Gly8Lys2S (N*- (7-desoxicoloíla) ) -Arg34-GLP-1 (7- 38) ;

Arg2E'34Lys36 (Νε- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-38) ; Arg26'34Lys38 (N®- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-38) ;

GlyaArg2S,34Lys3s (Νε- (7-desoxicoloíla)) -GLP-1 (7- 38) ;

Lys26 (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-38) ;

Lys34 (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-38) ;

Lys26'34 -bi s (N£- (coloíla) ) -GLP-1 (7-38) ;

Gly8Lys2S (Ne-(coloíla) )-GLP-K7-38) ;

GlyeLys34 (NE- (coloíla) ) -GLP-1 (7-3 8) ; GlyaLys26,34-bis (Ns- (coloíla) ) -GLP-1 (7-38) ; Arg2SLys34 (NE- (coloíla) ) -GLP-1 (7-38) ;

Gl y8Arg2SLy s34 (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-3 9) ; Lys26 (N*5- (7-desoxicoloíla) ) -Arg34-GLP-1 (7-39) / GlyaLys26 (N£- (7-desoxicoloíla) ) -Arg34-GLP-1 (7 - 39) ;

Arg26,34Lys36 (íf- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-39) ; Gly8Arg26'34Lys36 (Νε- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7- 39) ;

Lys2δ (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-39) ;

Lys34 (N6- (coloíla) ) -GLP-1 (7-39) ;

Lys2S,34-bis (lf- (coloíla)) -GLP-1 (7-39) ;

GlysLys26 (NE- (coloíla) ) -GLP-1 (7-39) ;

GlyeLys34 (W8- (coloíla) ) -GLP-1 (7-39) ;

GlyaLys26 ’34-bis (HE- (coloíla) ) -GLP-1 (7-39) ; Arg26Lys34 (Ns- (coloíla) ) -GLP-1 (7-39) ; GlyeArg2SLys34 (Ne- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-40) ; Lys26 (N®- (7-desoxicoloíla) ) -Arg34-GLP-1 (7-40) ; GlyaLys26 (Ne- (7-desoxicoloíla) ) -Arg34-GLP-1 (7- 40) ;

Arg26'34Lys3S (NE- (7-desoxicoloíla) ) -GLP-1 (7-40) ;

Gly8Arg26,34Lys36 (Νε- (7-desoxicoloíla)) -GLP-1 (74 0) ;

Lys26 (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-40) ;

Lys34 (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-40) ;

Lys26‘34-bis (N®- (coloíla) ) -GLP-1 (7-40) ; GlyeLys2S (N8- (coloíla) ) -GLP-1 (7-40) ;

Gly8Lys34 (Ne- (coloíla) ) -GLP-1 (7-40) ; Gly8Lys26'34-bis (N®- (coloíla) ) -GLP-1 (7-40) ; Arg25Lys34 (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-40) ;

Lys26 (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-36) ;

Lys34 (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-36) ;

Lys2Ê,34-bis (N®- (coloíla) ) -GLP-1 (7-36) ; GlyeLys26 (N®- (coloíla) ) -GLP-1 (7-36) ;

GlyeLys34 (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-36) ; Gly3Lys26'34-bis(N®- (coloíla) ) -GLP-1 (7-36) ; Arg2eLys34 (N®- (coloíla) ) -GLP-1 (7-36) ;

Lys26 (N®-(coloíla) )-GLP-1 (7-3 5) ;

Lys34 (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-35) ;

Lys26'34-bis (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-35) ; GlyaLys26 (N®- (coloíla) ) -GLP-1 (7-35) ;

GlyÊLys34 (N®- (coloíla) ) -GLP-1 (7-35) ; Gly6LyS26'34-bis (Ne- (coloíla) ) -GLP-1 (7-35) ; Arg26Lys34 (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-35) ;

Lys26 (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-36) ;

Lys34 (N®- (coloíla) ) -GLP-1 (7-3 6) ;

Lys26'34-bis (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-36) ; Gly8Lys28 (N®- (coloíla) ) -GLP-1 (7-36) ;

GlyeLys34 (NE- (coloíla) ) -GLP-1 (7-3 6) ;

Gly8Lys2Ê,34-bis (tf- (coloíla) ) -GLP-1 (7-36) ; Arg26Lys34 (tf- (coloíla) ) -GLP-1 (7-35) ;

Lys26 (tf- (coloíla) ) -GLP-1 (7-36) amida;

Lys34 (tf- (coloíla) ) -GLP-1 (7-3 6) arruda; Lys26'34-bis (tf- (coloíla) ) -GLP-1 (7-36) amida; Gly8Lys2S (tf- (coloíla) ) -GLP-1 (7-36) amida; GlysLys34 (tf- (coloíla) ) -GLP-1 (7-36) amida; Gly8Lys2S,34-bis (tf- (coloíla)) -GLP-1 (7-36) amida; Arg26Lys34 (tf- (coloíla) ) -GLP-1 (7-36) amida; Gly8Arg2£Lys34 (tf- (coloíla) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys25 (tf- (coloíla) ) Arg34-GLP-1 (7-37) ;

GlysLys26 (tf- (coloíla) ) Arg34-GLP-1 (7-3 7) ; Arg26,34Lys3S (tf- (coloíla) ) -GLP-1 (7-37) ; Gly8Arg2S,34Lys36 (NE- (coloíla) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys26 (tf- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys34 (tf- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys26'34-bis (tf- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ; GlyBLys2S (tf- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ; GlyeLys34 (tf- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ; GlyeLys26,34-bis (tf- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ; Arg2eLys34 (tf- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ; Gly8Arg26Lys34 (tf- (coloíla) ) -GLP-1 (7-38) ;

Lys23 (tf- (coloíla) ) Arg34-GLP-1 (7-38) ;

GlyeLys25 (tf- (coloíla) )Arg34-GLP-l (7-38) ; Arg26,34Lys36 (tf- (coloíla) ) -GLP-1 (7-38) ; Arg2S,34Lys38 (tf- (coloíla) ) -GLP-1 (7-38) ; GlyeArg2e,34Lys36 (tf - (coloíla) ) -GLP-1 (7-38) ;

Lys28 (tf- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-38) ;

Lys34 (N6- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-38) ; Lys26,34-bis (JSI®- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-38) ; GlyeLys26 (NE- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-38) ; GlyBLys34 (NE- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-38) ; GlyBLys26,34-bis (NE- (litocoloíla)) -GLP-l"{7-38) ; Arg26Lys34 (NE- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-38) ; GlyeArg26Lys34 (NE- (coloíla) ) -GLP-1 (7-39) ;

Lys25 (Ne- (coloíla) ) Arg34-GLP-1 (7-39) ;

GlyeLys26 (Νε- (coloíla) ) Arg34-GLP-1 (7-3 9) ; Arg26,34Lys36 (Κε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-39) ; GlyeArg2S'34Lys36 (N8- (coloíla) ) -GLP-1 (7-39) ; Lys26 (Νε- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-39) ;

Lys34 (Ne- (litocoloíla) } -GLP-1 (7-39) ; Lys2S,34-bis (Νε- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-39) ; GlyeLys26 (Νε- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-39) ; GlyeLys34 (Ne- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-39) ; Gly8Lys26'34-bis (N®- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-39) ; Arg26Lys34 (NE- (litocoloíla) } -GLP-1 (7-39) ; Gly8Arg26Lys34 (Νε- (coloíla) ) -GLP-1 (7-40) ; Lys2S(NE- (coloíla) )Arg34-GLP-l (7-40) ;

Gly8Lys2S (íf- (coloíla) )Arg34-GLP-l (7-40) ; Arg26'34Lys3S (NE- (coloíla) ) -GLP-1 (7-40) ; Gly8Arg26,34Lys36 (Νε- (coloíla) )-GLP-1 (7-40) ; Lys26 (N®- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-40) ;

Lys34 (N8- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-40) ; Lys26,34-bis (N5- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-40) ; Gly8Lys2S (NE- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-40) ; Gly8Lys34 (NE- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-40) ;

GlyaLys26,34-bis (N8- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-40) ; Arg26Lys34 (N®- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ;

Lys2S (N*- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-36) ;

Lys34 (NE- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-36) ;

Lys26,34-bis (NE- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-36) ; GlyaLys2e (Νε- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-36) ; GlysLys34 (N®- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-36) ; GlyBLys26/34-bis (NE- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-36) ; Arg25Lys34 (NE- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-36) ;

Lys26 (Με- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-35) ;

Lys34 (Νε- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-35) ;

Lys26'34-bis (Νε- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-35) ; GlyeLys26 (Ns- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-35) ; Gly6Lys34 (NE- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-35) ; Gly8Lys26'34-bis (N®- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-35) ; Arg2SLys34 (N*- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-35) ;

Lys26 (N*- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-36) amida; Lys34(NE- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-36) amida; Lys2e'34-bis (NE- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-36) amida; GlyaLys26 (NE- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-36) amida; Gly3Lys34 (NE- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-36) amida; GlyaLys26,34-bis (N5- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-36)amida;

Arg26Lys34 (NE- (litocoloíla)) -GLP-1 (7-3 6) amida; GlyeArg2SLys34 (Ne- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ; Lys26 (NE- (litocoloíla) ) -Arg34-GLP-1 (7-37) ; GlyaLys26 (NE- (litocoloíla) ) -Arg34-GLP-1 (7-37) , Arg26,34Lys3e (íf- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ;

Arg26,34Lys38 (Νε- (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ;

Gly8 Arg26,34Lys36 (Νε - (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-37) ;

Gly8 Arg26Lys34 (Νε - (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-38) ;

Lys26 (Νε - (litocoloíla)) -Arg34-GLP-1 (7-38);

GlY8Lys26 (Νε - (litocoloíla) ) -Arg34-GLP-1 (7-38) ;

Arg26,34Lys35 (Νε - (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-38);

Arg26,34Lys38 (Νε - (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-38);

Gly8Arg26,34Lys36 (Νε - (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-38); Gly8Arg26Lys34 (Νε - (lirocoloíla) ) -GLP-1 (7-39) ;

Lys26 (Νε - (litocoloíla) ) -Arg34-GLP-1 (7-39);

Gly8Lys25 (tf - (litocoloíla) ) -Arg34-GLP-1 (7-39);

Arg26,34Lys36 (Ne - (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-39) ;

Gly8Arg2s,34Lys36 (Νε - (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-39); Gly8Arg26Lys3S (Νε - (litocoloíla) ) -GLP-1 (7-39);

Lys26 (Νε - (lícocoloíla) ) -Arg34-GLP-1 (7-40);

Gly8Lys26 (Νε - (litocoloíla) ) -Arg34-GLP-1 (7-40) ;

Arg26,34Lys36 (Νε - (litocoloíla) ) GLP-1 (7-40);

Gly8Arg28Lys34 (Νε - (lítccoloíla) ; -GLP-1 (7-40) Em uma modalidade preferida adicional, apresente invenção se refere a composição farmacêutica compreendendo um derivado de GLP-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se ao uso de um derivado de GLP-1 de acordo com a invenção para a preparação de um medicamento que tem um perfil de ação prolongado em relação a GLP-1 (7-37) .

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se ao uso de um derivado de GLP-1 de acordo com a invenção para a preparação de um medicamento com efeito prolongado para o tratamento de diabetes mellitus não dependente de insulina.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se ao uso de um derivado de GLP-1 de acordo com a invenção para a preparação de um medicamento com efeito prolongado para o tratamento de diabetes mellitus dependente de insulina.

Em uma modalidade preferida adicional, a presente invenção refere-se ao uso de um derivado de GLP-1 de acordo com a invenção para a preparação de um medicam.enzo com efeito prolongado para o tratamento de obesidade.

Em una modalidade preferida adicional, a presente invenção se refere a um método de tratar diabetes mellitus dependente de insulina ou não dependente de insulina em um paciente necessitando de tal tratamento, compreendendo administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um derivado de GLP-1 de acordo com a reivindicação 1, juntamente com um veículo farmaceuticamente aceitável.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Para obter um perfil de ação prolongado, satisfatório, do derivado de GLP-1, o substituinte lipofílico ligado à fração de GLP-1 compreende preferivelmente 4-40 átomos de carbono, em particular 8-25 átomos de carbono. 0 substituinte lipofílico pode ser ligado a um grupo ammo da fração GLP-1 por meio de um grupo de carboxila do substituinte lipofíiico que forma uma ligação amida com um grupo de amino do resíduo de aminoácido ao qual é ligado.

Alternativamente, o substituinte lipofíiico pode ser ligado ao referido resíduo de aminoácido de tal modo de que um grupo amino do substituinte lipofíiico forma uma ligação de amida com um grupo de carboxila do resíduo de aminoácido. Como opção adicional, o substituinte lipofíiico pode ser ligado ã fração GLP-1 através de uma ligação de éster. Formalmente, o ést.er pode ser formado por reação entre um grupo de carboxila da fração GLP-1 e um grupo de hidroxila do substituinte futuro ou por reação entre um grupo de hidroxila da fração GLP-1 e um grupo de carboxila do substituinte futuro. Como alternativa adicional, o substituinte lipofíiico pode ser um grupo de alquila que é introduzido em um grupo de amino primário da fração GLP-1.

Em uma modalidade preferida da invenção, o substituinte lipofíiico é ligado à fração GLP-1 por meio de um espaçador de tal modo que um grupo de carboxila do espaçador forma uma ligação de amida com um grupo de amino da fração GLP-1. Qs exemplos de espaçadores adequados são ácido succínico, Lys, Glu ou Asp, ou um dipeptídeo como Gly-Lys. Quando o espaçador é ácido succínico, um seu grupo de carboxila pode formar uma ligação de amida com um grupo _d_e amino do resíduo de aminoãcido, e o seu outro grupo de carboxila pode formar uma ligação de amida com um grupo de ammo do substituinte lipofílico. Quando o espaçador é Lys, Glu ou Asp, o seu grupo de carboxila pode formar uma ligação de amida com um grupo de amino do resíduo de aminoácido, e o seu grupo de amino pode formar uma ligação de amida com um grupo de carboxila do substituinte lipofílico. Quando Lys é utilizado como o espaçador, um espaçador adicional pode em alguns casos, ser inserido entre o grupo de amino-ε de Lys e o substituinte lipofílico. Em uma modalidade preferida, tal espaçador adicional é ácido succínico que forma uma ligação de amida com o grupo de amino-ε de Lys e com um grupo de amino presente no substituinte lipofílico. Em outra modalidade preferida, tal espaçador .adicional é Glu ou Asp que forma uma ligação de amida com o grupo de amino-ε de Lys e outra ligação de amida com um grupo de carboxila presente no substituinte lipofílico, isto é, o substituinte lipofílico é um resíduo de lisma acilado-Ns.

Em outra modalidade preferida da presente invenção, o substituinte lipofílico tem um grupo que pode ser negativamente carregado. Um grupo preferido que pode ser negat ivamente carregado e um grupo de ácido carboxílico. O peptídeo de origem pode ser produzido por um método que compreende cultivar uma célula hospedeira contendo uma sequência de DNA codificando o polipeptídeo e capaz de expressar o polipeptídeo em um meio nutriente adequado sob condições que permitam a expressão do peptídeo, após o que o peptídeo resultante é recuperado da cultura. 0 meio utilizado para cultivar as células pode ser qualquer meio convencional adequado para desenvolver as células hospedeiras, como meios mínimos ou complexos contendo suplementos apropriados. Meios adequados são disponíveis de fornecedores comerciais ou podem ser preparados de acordo com receitas publicadas (por exemplo nos catálogos do American Type Culture Collection). O peptídeo produzido pelas células pode ser então recuperado do meio de cultura por procedimentos convencionais incluindo separar as células hospedeiras do meio por centrifugação ou filtração, precipitar os componentes proteinãceos do sobrenadante ou filtrado por meio de um sal, por exemplo sulfato de amônio, purificação^ por uma variedade de procedimentos cromatogrãficos, por exemplo, cromatografia de permuta de íon, cromatografia de filtração de gel, cromatografia de afinidade, ou similar, dependendo do tipo de peptídeo em questão. A sequência de DNA codificando o peptídeo de origem pode ser adequadamente de origem genômico ou cDNA, por exemplo obtida por preparação de uma biblioteca genômica ou cDNA e seleção para seqüências de DNA codificando para todo ou parte do peptídeo por hibridização utilizando sondas de oligonucleotídeo sintético de acordo com técnicas padrão (vide, por exemplo, Sambrook, J, Fritsch, EF e Maniatis, T, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Nova York, 1989). A seqüência de DNA codificando o peptídeo também pode ser preparada sinteticamente por métodos padrão estabelecidos, por exemplo o método de fosfoamidite descrito por Beaucage e Caruthers, Tetrahedron Letters 22 91981), 1859 -1869, ou o método descrito por Matthes e outros, EMBO Journal 3 (1984), 801 - 805. A seqüência de DNA também pode ser preparada por reação de cadeia de polimerase utilizando bases específicas, por exemplo como descrito em US 4.683.202 ou Saiki e outros, Science 239 (1988), 487-491. A seqüência de DNA pode ser inserida em qualquer vetor que pode ser convenientemente submetida a procedimentos de DNA recombmantes, e a escolha do vetor dependerá, freqüentemente, da célula hospedeira na qual o mesmo deve ser introduzido. Desse modo, o vetor pode ser um vetor de replicação autônoma, isto é um vetor que existe como uma entidade extracromossômica, cuja replicação é independente de replicação cromossômica, por exemplo um plasmídeo. Alternativamente, o vetor pode ser um que, quando introduzido em uma célula hospedeira, é integrado no genoma de célula hospedeira e replicado juntamente com o{s) cromossomo(s) no(s) qual(is) foi integrado. O vetor é preferivelmente um vetor de expressão no qual a sequência de DNA codificando o peptídeo é operavelmente ligado a segmentos adicionais necessários para transcrição do DNA, como um promotor. 0 promotor pode ser qualquer sequência de DNA que mostre atividade de transcrição na célula hospedeira escolhida e pode ser derivado de genes codificando proteínas quer homólogas ou heterólogas â célula hospedeira. Os exemplos de promotores adequados para orientar a transcrição do DNA codificando o peptídeo da invenção em uma variedade de células hospedeiras são bem conhecidos no estado da técnica, cf. por exemplo Sambrook e outros, supra. A^ seqüência de DNA codificando o _peptídeo também pode, se necessário, ser operavelmente conectado a um termmador adequado, sinais de poliadenilação, seqüências reforçadoras de transcrição, e sequências reforçadoras de translação. O vetor recombmante da invenção pode compreender ainda uma seqüência de DNA permitindo que o vetor replique na célula hospedeira em questão. 0 vetor também pode compreender um marcador selecionãvel, por exemplo um gene cujo produto complementa um defeito na célula hospedeira ou um que confere resistência â uma droga, por exemplo ampicilma, canamicma, tetraciclina, cloranf enicol, neomicina, higromicina ou metotrexato.

Para orientar um peptídeo de origem da presente invenção ria via secretora das células hospedeiras, uma sequência de sinal secretor (também conhecida como uma seqüência líder, seqüência prepro ou sequência pre) pode ser fornecido no vetor recombinante. A seqüência de sinal secretor e unida à seqüência de DNA codificando o peptídeo no quadro de leitura correto. Seqüências de sinal secretor são comumente posicionadas 5' em relação à seqüência de DNA codificando o peptídeo. A seqüência de sinal secretor pode ser aquela normalmente associada ao peptídeo ou pode ser de um gene codificando outra proteína secretada.

Os procedimentos utilizados para ligar as seqüências de DNA codificando para o presente peptídeo, o promotor e opcionalmente o terminador e/ou a seqüência de sinal secretor, respectivamente e para inserir os mesmos em vetores adequados contendo as informações necessárias para replicação, são bem conhecidos das pessoas versadas no estado da técnica (cf, por exemplo, Sambrook e outros, supra). A célula hospedeira na qual a seqüência de DNA ou o vetor recombinante é introduzido pode ser qualquer célula que é capaz de produzir o presente peptídeo e inclui bactérias, levedura, fungos e células eucarióticas mais elevadas. Os exemplos de células hospedeiras adequadas bem conhecidos e utilizados no estado da técnica são, sem limitação, E. coli, Saccharomyces cerevisiae, ou linhagens de célula CHO ou BHK de mamíferos.

Os exemplos de compostos que podem ser úteis como frações GLP-1 de acordo com a presente invenção são descritos no Pedido de Patente. Internacional no. WO 87/06941 (The General Hospital Corporation) que se refere a um fragmento de peptídeo o qual compreende GLP-l(7-37) e seus derivados funcionais e a seu uso como um agente msulinotrópico.

Análogos de GLP-1 adicionais são descritos no Pedido de Patente Internacional no. 90/11296 (The General Hospital Corporation) que se refere a fragmentos de peptídeo os quais compreendem GLP-1(7-36) e seus derivados funcionais e têm uma atividade insulinotrópica que excede a atividade msulinotrópica de GLP-1 (1-36) ou GLP-1 (1-37) e a se_u uso como agentes insulmotrópicos. O pedido de patente internacional no. 91/11457 (Buckley e outros) revela análogos dos peptídeos de GLP-1 ativos 7-34, 7-35, 7-36 e 7-37 que também podem ser úteis como frações de GLP-1 de acordo com a presente invenção.

Composições Farmacêuticas Composições farmacêuticas contendo um derivado de GLP-1 de acordo com a presente invenção podem ser administrados parenteralmente a pacientes necessitando de tal tratamento. A administração parenteral pode ser realizada por injeção subcutânea, intramuscular ou intravenosa por meio de uma seringa, opcionalmente uma seringa semelhante a caneta Alternativamente, a administração parenteral pode ser realizada por meio de uma bomba de infusão. Uma opção adicional é uma composição que pode ser um pó ou um líquido para a administração do derivado de GLP-1 na forma de uma pulverização nasal ou pulmonar. Como opção adicional, os derivados de GLP-1 da invenção também podem ser administrados transdermicamente, por exemplo de uma placa, opcionalmente uma placa íontoforética, ou por meio de transmucosa, por exemplo bucal.

As composições farmacêuticas contendo um derivado de GLP-1 da presente invenção podem ser preparadas por técnicas convencionais, por exemplo como descrito em Remington's Pharmaceutiçal Sciences, 1985 ou em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edição, 1995.

Desse modo, as composições injetáveis do derivado de GLP-1 da invenção podem ser preparadas utilizando as técnicas convencionais da indústria farmacêutica que envolve dissolver e misturar os ingredientes, conforme apropriado, para fornecer o produto final desejado.

De acordo com um procedimento, o derivado de GLP-1 é dissolvido em uma quantidade de água que é de um certo ponto menor do que o volume final da composição a ser preparada. Um agente isotômco, um conservante e um tampão são adicionados conforme necessário, e o valor de pH da solução é ajustado - se necessário - utilizando um ácido, por exemplo ácido clorídrico, ou uma base, por exemplo hidróxido de sódio aguoso conforme necessário. Finalmente, o volume da solução é ajustado com água para fornecer a concentração desejada dos ingredientes.

Os exemplos de agentes isotônicos são cloreto de sódio, manitol e glicerol.

Os exemplos de conservantes são fenol, m-cresol, metil p-hidroxibenzoato e álcool benzílico.

Os exemplos de tampões adequados são acetato de sódio e fosfato de sódio Além dos componentes acima mencionados, soluções contendo um derivado de GLP-1 de acordo com a presente invenção também podem conter um agente tensoativo para melhorar a solubilidade e/ou a estabilidade do derivado de GLP-1.

Uma composição para administração nasal de certos peptídeos pode, por exemplo, ser preparada como descrito na patente européia no. 272097 (para Novo Nordisk A/S) ou em WO 93/18785.

De acordo com uma modalidade preferida da presente invenção, o derivado de GLP-1 é fornecido na forma de uma composição adequada para administração por injeção. Tal composição pode ser uma solução injetável pronta para uso ou pode ser uma quantidade de uma composição sólida, por exemplo, um produto liofilizado, que tem de ser dissolvido em um solvente antes que possa ser injetado. A solução injetável contém preferivelmente não menos do que aproximadamente 2 mg/ml, preferivelmente não menos do que aproximadamente 5 mg/ml, mais preferivelmente não menos do que aproximadamente 10 mg/ml' do derivado de GLP-1 e, preferivelmente, não mais do que aproximadamente 100 mg/ml do derivado de GLP-l. 5 Os derivados de GLP-1 da presente invenção podem ser utilizados no tratamento de varias doenças. 0 derivado de GLP-1 específico a ser utilizado e o nível de dose ideal para qualquer paciente dependerá da doença a ser tratada e de uma variedade de fatores incluindo a eficácia ío do derivado de peptídeo específico empregado, idade, peso corpóreo, atividade física, e dieta do paciente, de uma possível combinação com outras drogas, e da gravidade do caso. Recomenda-se que a dosagem do derivado de GLP-1 da presente invenção seja determinada para cada paciente 15 individual por aqueles versados no estado da técnica.

Em particular, é considerado que o derivado de GLP-1 será útil para a preparação de um medicamento com um perfil de ação pró t ratado para o tratamento de diabetes mellitus não dependente de insulina e/ou para o tratamento 20 de obesidade. A presente invenção é adicionalmente ilustrada pelos seguintes exemplos que, contudo, não devem ser considerados como limitando o âmbito de proteção. As características reveladas na descrição acima e nos exemplos 25 a seguir podem, tanto separadamente corno em qualquer combinação das mesmas, ser importantes para a realização da invenção em suas diversas formas.

EXEMPLOS

Os seguintes acrônimos para produtos químicos comercializados, são utilizados: DMF; Ν,Κ-dimetilformamida NMP: N-metil-2-pirrolidona EDPA: N-et íl-N, N-dusopropi lamina EGTA: etileno glicol-bis(p-aminoetil éter)-Ν,Ν,Ν',N'-ácido tetraacêtico GTP : guanosina 5 '-tnf osf ato TFA: ácido tnfluoroacético THF: tetrahidrofurano Myr-ONSu: ácido tetradecanóico 2,5-dioxopir- rolidina-l-il éster Pal-ONSu: ácido hexadecanóico 2,5-dioxopirro- lidina-1- éster Ste-ONSu ácido octadecanóico 2,5-dioxopirro-lidina-l-il éster HOOC-(CH2) 6-COONSu: ω-ácido carboxiheptanóico 2.5- dioxopirrolidina-l-il éster HOOC- (CH2) 10-COONSu: a>-ácido_ carboxiundecanóico 2.5- dioxopirrolidina-l-il éster HOOC- (CH2) 12-C00NSu: ω-ácido carboxitridecanóico 2.5- dioxopirrolidína-l-il éster HOOC- (CH2) 14-C00NSu: ω-ãcido carboxipentadeca- nóico 2,5-dioxopirrolidina-l-il éster HOOC-(CH2) lS-COONSu: ω-ãcido carboxiheptadeca-nóico 2,5-dioxopirrolidina-l-il éster HOOC-(CH2) ieCOONSu : co-ácido carboxinonadeca-nóico 2,5-dioxopirrolidma-l-il êster Abreviaturas: PDMS: Espectrometria de massa por dessorção de plasma MALDI-MS: Espectrometna de Massa por Ionização/Dessorção a laser auxiliada por matriz HPLC: Cromatografia de líquido de alto desempenho amu: unidades de massa atômica Analítico Espectrometria de massa por dessorção de plasma Preparação de amostra: A amostra é dissolvida em 0,1% TFA/EtOH (1:1) a uma concentração de 1 ug/ul. A solução de amostra (ΒΙΟ ul) é colocada em um alvo de nitrocelulo_se (Bio-ion AB, Uppsala, Suécia) e deixada adsorver na superfície alvo por 2 minutos. O alvo é subsequentemente enxaguado com 2x25 ul de TFA a 0,1% e seco por rotação. Finalmente, o alvo de nitrocelulose é colocado em um carrossel alvo e introduzido no espectrômetro de massa.

Análise MS: A análise PDMS foi realizada utilizando um instrumento de tempo de vôo Bio-ion 20 (Bio-ion Nordic AB, Uppsala, Suécia). Uma voltagem de aceleração de 15 kv foi aplicada e íons moleculares formados por bombardeio da superfície de nitrocelulose cora 252-Cf fragmentos de fissão foram acelerados em direção a um detector de parada. O espectro de tempo de vôo resultante foi calibrado em um verdadeiro espectro de massa utilizando os íons H+ e N0+ a m/-z 1 e 30, respectivamente. Os espectros de massa foram geralmente acumulados por l,0xl0s eventos de fissão correspondendo a 15-20 minutos. Massas atribuídas, resultantes correspondem, todasa massas moleculares com média isotópica. A precisão de atribuição de massa é geralmente melhor do que 0,1%.

MALDI-MS A analise MALDI-TOF MS foi realizada utilizando instrumento Voyager RP (PerSeptive Biosystems Inc., Frammgham, MA) equipado com extração retardada e operado em modo linear. Alfa-ciano-4-hidróxi-ácido cinâmico foi utilizado como matriz, e as atribuições de massa se basearam em calibragem externa.

Exemplo 1 Síntese de Lys2S (Ne -tetradecanoíla)-GLP-1 (7-37) O composto título foi sinterizado de GLP-1(7-37). Uma mistura de GLP-l(7-37) (25 mg, 7,45 um), EDPA (26,7 mg, 208 um), NMP (520 ul) e água (260 ul) foi suavemente agitado por 5 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de Myr-ONSu (2,5 mg, 7,67 um) em NMP (62,5 ul) , a mistura de reação foi. suavemente agitada por 5 min. em “temperatura ambiente e a seguir deixada em repouso por 20 min. Uma quantidade adicional de My-ONSu (2,5 mg, 7,67 um) em NMP (62,5 ul) foi adicionada e a mistura resultante suavemente agitada por 5 min. Após um tempo total de reação de 4 0 mm. a reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (12,5 mg, 166 umol) em etanol aquoso a 50% (12,5 ml) . 0 composto título foi isolado da mistura de reação por HPLC utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de TFA/acetonitrila padrão, rendimento: 1,3 mg (correspondendo a 4,9% do rendimento teórico). A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos._ 0 produto isolado foi analisado por PDMS e verificou-se que o valor para o íon molecular protonado era 3567,9+3. 0 peso molecular resultante é desse modo 3566,9±3 amu (valor teórico: 3565,9 amu). A posição de acilação (Lys26) foi verificada por divagem enzimãtica do composto título com protease Staphylococcus aureus V8 e subsequente determinação de massa dos fragmentos de peptídeo por PDMS.

Além do composto título dois outros derivados GLP-1 foram isolados da mistura de reação utilizando a mesma coluna cromatogrãfica e um gradiente mais raso (35-38% de acetonitrila em 60 minutos), vide Exemplos 2 e 3 .

Exemplo 2 Síntese de Lys34 (W^-tetradecanoíla) -GLP-1 (7-37) 0 composto título foi isolado põr HPLC da mistura de reação descrita no Exemplo 1. A análise de PDMS forneceu um íon molecular protonado a m/z 3567,7+3. Verificou-se desse modo que o peso molecular ê 3566,7±3 amu (valor teórico: 3565,9 amu). O local de acilação foi determinado com base no padrão de fragmentação.

Exemplo 3 Síntese de Lys2e,34-bis (NE-tetradecanoíla)-GLP- 1 (7-37) O composto título foi isolado por HPLC da mistura de reação descrita no Exemplo 1. A análise PDMS forneceu um íon molecular protonado a m/z 3778,4±3. Verificou-se desse modo que o peso molecular ê 3777,4+3 amu (valor teórico. 3776,1 amu}.

Exemplo 4 Síntese de Lyszs (NE-tetradecanoíla) Arg34-GLP-1 (737) O composto título foi sintetizado de Arg34-GLP-1(7-37). Uma mistura de Arg34-GLP-1 (7-3 7) (5 mg, 1,47 um), EDPA (5,3 mg, 41,1 um), NMP (105 ul) e água (50 ul) foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de Myr-ONSu (0,71 mg, 2,2 um) em NMP (17,8 ul), a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente e a seguir deixada em repouso por 20 min. Após um tempo total de reação de 30 min. a reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicma 925 mg, 33,3 um) em etanol aquoso a 50% (2,5 ml). A mistura de reação foi purificada por HPLC como descrito no exemplo 1. A análise de PDMS forneceu um íon molecular protonado em m/z 3594,9±3. Verificou-se desse modo que o peso molecular é 3593,9±3 amu (valor teórico: 3593,9 amu).

Exemplo 5 Síntese de Gly8Arg2S,34Lys3S (N*-tetradecanoíla) -GLP-1(7-37) 0 composto título foi sintetizado de Gly8Arg26,34Lys36-GLP-l (7-37) que foi adquirido de QCB. Uma mistura de GlyeArg26,34Lys36-GLP-l (7-37) (1,3 mg, 0,39 um), EDPA (1,3 mg, 10 um), NMP (125 ul) e água (30 ul) foi suavemente agitado por 5 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de Myr-ONSu (0,14 mg, 0,44 um) em UMP (3,6 ml), a mistura de reação foi suavemente agitada por 15 min. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicma (0,lmg, 1,33 um) em etanol aquoso a 50% (10 ul). A mistura de reação foi purificada por HPLC, e o composto título (60 ug, 4%) foi isolado.

Exemplo 6 Síntese de Arg26,34Lys3S (If-tetradecanoíla) -GLP-1(7-37)-OH

Uma mistura de Arg26,34Lys36-GLP-l (7-37)-OH (5,0 mg, 1,477 umol) , EDPA (5,4 mg, 41,78 umol) , NMP (105 ul) e água 950 ul) foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, À mistura resultante foi adicionada uma solução de Myr-ONSu (0/721 mg, 2,215 umol) em NMP (18 ul). A mistura de ração foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 45 min. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição cie uma solução de glicina (2,5 mg, 33,3 umol) em etanol aquoso a 50% {250 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) em um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida' a 65DC e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. 0 composto título (1,49 mg, 28%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular _protonado era 3595++ 3. O peso molecular resultante é desse modo 3594 ± 3 amu (valor teórico 3594 amu).

Exemplo 7 Síntese de Lys2S,34bis (NE- (co- car boxmonadecanoíla) ) -GLP-1 (7-37) -OH

Uma mistura de GLP-1 (7-37)-OH (70 mg, 20,85 umol), EDPA (75,71 mg, 585,8 umol), NMP (1,47 ml) e água (700 ul) foi suavemente agitada por 10 mm. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(CH2) 18-COONSu (27,44 mg, 62,42 umol) em NMP (686 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 mm. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 5 0 min. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (34,43 mg, 458,7 umol) em etanol aquoso a 50% (3,44 ml). A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila foi 0-100% em 60 minutos. 0 composto título (8,6 mg, 10%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 4006 ± 3. O peso molecular resultante é des_se modo 4 005 ± 3 amu (valor teórico 4005 amu).

Exemplo 8 Síntese de Arg2S'34Lys36 (Νε- (ω- carboxmonadecanoíla) ) -GLP-1 (7-36) -OH

Uma mistura de Arg2S'34Lys36-GLP-1 (7-36) -OH (5,06 mg, 1,52 umol), EDPA (5,5 mg, 42,58 umol), NMP (106 ul) e água (10 0 ul) foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de H00C-(CH2) ia-COONSu (1,33 mg, 3,04 umol) em NMP (33,2 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 2,5 h em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (2,50 mg, 33,34 umol) em etanol aquoso a 50% (250 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 3Q0SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetomtrila era 0-100% em 60 minutos. 0 composto título (0,46 mg, 8%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3562 ± 3. O peso molecular resultante é desse modo 3651 ± 3 amu (valor teórico 3641 amu).

Exemplo 9 Síntese de Arg2S'34Lys38 (Ν'- (co- carboxmonadecanoíla)) -GLP-1 (7-38) -OH

Uma mistura de Arg2e'MLys3a-GLP-1 (7-38) -OH (5,556 mg, 1,57 umol) , EDPA (5,68 mg, 43,96 utnol) , NMP (116,6 ul) e água (50 ul) foi suavemente agitada por 10 min. em temperatura ambiente. Ã mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(CH2) ie-C00NSu (l,38mg, 3,14 umol) em NMP (34,5 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 2,5 h em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (2,5 mg, 33,3 umol) em etanol aquoso a 50% (250 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65 °C e o gradiente de acetomtrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (0,7 mg, 12%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3866 ± 3. 0 peso molecular resultante é desse modo 3865 ± 3 amu ( valor teórico 3865 amu).

Exemplo 10 Síntese de Arg34Lys2S (NE- (co- carboxmonadecanoíla) ) -GLP-1 (7-37) -OH

Uma mistura de Arg34-GLP-1 (7-3 7) -OH (5,04 mg, 1,489 umol), EDPA (5,39 mg, 41,70 umol), NMP {105 ul) e água (5 0 ul) foi suavemente agitada por 10 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução H00C-(CH2) ie-COONSu (1,31 mg, 2,97 umol) em NMP (32,8 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 3 0 min. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (2,46 mg, 32,75 umol) em etanol aquoso a 50% (246 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e uma sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (1,2 mg, 22%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3709 ± 3. O peso molecular resultante é desse modo 3708 ± 3 amu {valor teórico 3708 amu).

Exemplo 11 Síntese de Arg34Lys27 {tf - (ω- carboxiheptadecanoíla))-GLP-1(7-37)-OH

Uma mistura de Arg34-GLP-1 (7-37)-OH (5,8 mg, 1,714 umol), EDPA (6,20 mg, 47,99 umol), NMP 121,8 ul) e água (58 ul) foi suavemente agitada por 10 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de H00C-(CH2) ie-COONSu (2,11 mg, 5,142 umol) em NMP (52,8 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 2 h em temperatura ambiente. A reação foi resfriada brusqamente pela adição de uma solução de glicina (2,83 mg, 37,70 umol) em etanol aquoso a 50% (283 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 3002B-CN) e um sistema de acetomtrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65 °C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. 0 composto título (0,81 mg, 13%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3681 ± 3._ 0 peso molecular resultante é desse modo 3 680 ± 3 amu (valor teórico 3680 amu).

Exemplo 12 Síntese de Arg2Ss34Lys36 (!f- (ω- carboxiheptadecanoíla))-GLP-1(7-37)-OH

Uma mistura de Arg2e'34Lys36-GLP-l (7-37) -OH (3,51 mg, 1,036 umol) , EDPA (3,75 mg, 29,03 umol), nmp (73,8 ul) e água (35 ul) foi suavemente agitada por 10 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução H00C- (CH2) 16-COONSu (1,27 mg, 3,10 umol) em NMP (31,8 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 2 h e 10 min. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de„ uma solução de glicma (1,71 mg, 22,79 umol) em etanol aquoso a 50% (171 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatograf ia de coluna utilizando, uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (0,8 mg, 21%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3682 ± 3. O peso molecular resultante é desse modo 3 681 ± 3 amu (valor teórico 3681 amu).

Exemplo 13 Síntese de Arg26'34Lys38 (N®- (ω- carboxiheptadecanoíla))-GLP-1(7-38)-OH

Uma mistura de Arg26'34Lys38-GLP-1 (7-38) -OH (5,168 mg, 1,459 umol), EDPA (5,28 mg, 40,85 umol), NMP (108,6 ul) e âgua 951,8 ul) foi suavemente agitada por 10 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC- (CH2) ls-COONSu (1,80 mg, 4,37 umol) em NMP (45 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 10 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 2 h e 15 mm. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (2,41 mg, 32,09 umol) em etanol aquoso a 50% (241 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65 °C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (0,8 mg, 14%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3838 ± 3. O peso molecular resultante é desse modo 3 83 7 ± 3 amu (valor teórico 3837 amu).

Exemplo 14 S.íntese de Arg2S,34Lys36 (Νε- (ω- carboxiheptadecanoíla))-GLP-1(7-36)-OH

Uma mistura de Arg26'34Lys3S-GLP-1 (7-36) -OH (24,44 mg, 7,34 umol), EDPA (26,56 mg, 205,52 umol), NMP (513 ul) e água (244,4 ul) foi suavemente agitada por 5 mm. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(CH2) 16-COONSu (9,06 mg, 22,02 umol) em NMP (1,21 ml), a mistura de_reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 3 0 min. em temperatura ambierrte. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina {12,12 mg, 161,48 umol) em etanol aquoso a 50% (1,21 ml). A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65 °C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto titulo (7,5 mg, 28%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3625 ± 3. O peso molecular resultante é desse modo 3 624 ± 3 amu (valor teórico 3624 amu).

Exemplo 15 Síntese de Arg2s'34Lys36 (NE- (o- carboxiundecanoíla))-GLP-1(7-37)-OH

Uma mistura de Arg26'34Lys3e-GLP-1 (7-37) -OH (4,2 mg, 1,24 umol), EDPA (4,49 mg, 34,72 umol), NMP (88,2 ul) e água (42 ul) foi suavemente agitada por 10 mm. em temperatura ambiente. Â mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(CH2) 10-COONSu (1,21 mg, 3,72 umol) em NMP (30,25 ul), a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 mm. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 50 min. em temperatura ambiente. A “reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (2,04 mg, 27,28 umol) em etanol aquoso a 50% (2 04 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (0,8 mg, 18%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3598 ± 3. O peso molecular resultante é desse modo 3 597 ± 3 amu (valor teórico 3597 amu).

Exemplo 16 Síntese de Arg26'34 Lys38 (Νε- (ω- carboxiundecanoíla))-GLP-1(7-38)-OH

Uma mistura de Arg26'34Lys38-GLP-l (7-38)-OH (5,168 mg, 1,46 umol) , EDPA (5,28 mg, 40,88 umol) , NMP (108,6 ul) e água (51,7 ul) foi suavemente agitada por 10 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(CH2) 10-COONSu (1,43 mg, 4,38 umol) em NMP (35,8 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 5 0 min. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicma (2,41 mg, 32,12 umol) em etanol aquoso a 50% (241 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sdstema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (0,85 mg, 16%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3753 ± 3. O peso molecular resultante é desse modo 3752 ± 3 amu (valor teórico 3752 amu).

Exemplo 17 Síntese de Lysz6'34bis (Νε- (ω- carboxiundecanoíla))-GLP-1(7-37)-OH

Uma mistura de GLP-1(7-37)-OH (10,0 mg, 2,98 umol) , EDPA (10,8 mg, 83,43 umol) , NMP (210 ul) e água (10 0 ul) foi suavemente agitada por 10 mm em temperatura ambiente. Â mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC- (CH2) 10-COONSu (2,92 mg, 8,94 umol) em NMP (73 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 50 min. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicma (4,92 mg, 65,56 umol) em etanol aquoso a 50% (492 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de açetonitrila era 0-10.0% em 60 minutos. O composto título (1,0 mg, 9%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3781 ±3. O peso molecular resultante é desse modo 3780 ± 3 amu (valor teórico 378 0 atnu) . - Exemplo 18 Síntese de Arg2S'34Lys36 (Ν'- (ω- carboxiundecanoíla) ) -GLP-1 (7-36) -OH

Uma mistura de Arg2S,34Lys3S-GLP-1 (7-36) -OH (15,04 mg, 4,52 umol) , EDPA (16,35 mg, 126,56 umol) , NMP (315,8 ul) e água (150,4 ul) foi suavemente agitada por 10 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução HOOC-(CH2) 10-COONSu (4,44 mg, 13,56 umol) em KIMP (111 ul) , a mistura de- reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 40 min. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicma (7,5 mg, 99,44 umol) em etanol aquosa a 50% (750 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 30QSB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. 0 composto título (3,45 mg, 22%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3540 ± 3. 0 peso molecular resultante é desse modo 3539 ± 3 amu (valor teórico 3539 amu).

Exemplo 19 Síntese de Arg34Lys26 (Νε- (co- carboxiundecanoíla))-GLP-1(7-37)-OH

Uma mistura de Arg34-GLP-(1-7-37)-OH (5,87 mg, 1,73 umol) , EDPA (6,27 mg,48,57 umol) , NMP 123,2 ul) e âgua (58,7 ul) foi suavemente agitada por 10 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC- (CHa) 10-COONSu (1,70 mg, 5,20 umol) em NMP (42,5 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 40 min. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (2,86 mg, 286 umol) em etanol aquoso a 50% (286 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65"C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (1,27 mg, 20%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3597 ±3. 0 peso molecular resultante é desse modo 3596 3 amu (valor teórico 3596 amu).

Exemplo 20 Síntese de Arg34Lys2fi (Ne- (co-carboxiheptanoíla) ) -GLP-l(7-37)-OH

Uma mistura de Arg34-GLP-1 (7-37)-OH (4,472 mg, 1,32 umol), EDPA (4,78 mg, 36,96 umol), NMP (94 ul) e água (44,8 ul) foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução HOOC-(CH2) s_COONSu (1,07 mg, 3,96 umol) em NMP (26,8 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 mm. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 1 h e 50 min. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (2,18 mg, 29,04 umol) em etanol aquoso a 50% (218 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. 0 composto título (0,5 mg, 11%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3540 ± 3. 0 peso molecular resultante é desse modo 353 9 ± 3 amu (valor teórico 3539 amu).

Exemplo 21 Síntese de Arg26'34Lys88 (Ns- (ω- carboxiheptanoíla))-GLP-1(7-38)-OH

Uma mistura de Arg2S,34Lys38-GLP-1 (7-38) -OH (5,168 mg, 1,459 umol), EDPA (5,28 mg, 40,85 umol), NMP (108,6 ul) e água (51,6 ul) foi suavemente agitada por 10 mm. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de H00C- (CH2) 6-COONSu (1,18 mg, 4,37 umol) em NMP (29,5 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 1 h e 50 mm. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (2,40 mg, 32,0_9 _ umol) em etanol aquoso a 50% (240ul). A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-NC) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. 0 composto título (0,5 mg, 9%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3697 ± 3. 0 peso molecular resultante é desse modo 3 695 ± 3 amu (valor teórico 3695 amu).

Exemplo 22 Síntese de Arg26'34Lys3S (Νε- (ω- carboxiheptanoíla))-GLP-1(7-37)-OH

Uma mistura de Arg2e'34Lys3S-GLP-l (7-37) -OH (5,00 mg, 1,47 umol), EDPA (5,32 mg, 41,16 umol), NMP (105 ul) e água (50 ul) foi suavemente agitada por 5 mm. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC- (CH2) 6_C00NSu (1,19 mg, 4,41 umol) em NMP (29,8 ul), a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 2 h em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (2,42 mg, 32,34 umol) em etanol aquoso a 50% (242 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 3OOSB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65 °C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (0,78 mg, 15%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3 542 ±3, O peso molecular resultante é desse modo 3541 ± 3 amu {valor teórico 3541 amu).

Exemplo 23 Síntese de Arg26j34Lys36 (Ν'- (ω- carboxiheptanoíla))-GLP-1(7-36)-OH

Uma mistura de Arg2S'34Lys3S-GLP-1 (7-36) -OH (5,00 mg, 1,50 umol) , EDPA (5,44 mg, 42,08 umol) , NMP (210 ul) e agua (50 ul) foi suavemente agitada por 5 mm. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(CH2) e-COONSu (1,22 mg, 4,5 umol) em NMP (30,5 ul) , a mistura de~ reação foi suavemente agitada por 5 mm. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 2 h em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (2,47 mg, 33,0 umol) em etanol aquoso a 50% (247 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. 0 composto título (0,71 mg, 14%) foi isolado, e “o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3484 ±3. O peso molecular resultante é desse modo 34 83 ± 3 amu (valor teórico 3483 amu).

Exemplo 24 Síntese de Arg26'34bis (N5- (ω-carboxiheptanoíla) ) -GLP-1(7-37)-OH

Uma mistura de GLP-1(7-37)-OH (10 mg, 2,5 umol), EDPA (10,8 mg, 83,56 umol), NMP (210 ul) e água (100 ul) foi suavemente agitada por 10 min. em temperatura ambiente. A mistura resultante foi adicionada uma solução de H00C-(CH2) s-C00NSu (2,42 mg, 8,92 umol) em NMP (60,5 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 2 h e 35 min. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (4,92 mg, 65,54 umol) em etanol aquoso a 50% (492 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. 0 composto título (2,16 mg, 24%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3669 ± 3. O peso molecular resultante é desse modo 3668 ± 3 amu (valor teórico 3668 amu).

Exemplo 25 Síntese de Arg34Lys2Ê (Νε- (ω- carboxipentadecanoíla))-GLP-1(7-37)-OH

Uma mistura de Arg34-GLP-1 (7-37) -OH (4,472 mg, 1,321 umol) , EDPA (4,78 mg, 3 6,99 umol), NMP (93,9 ul) e água (44,7 ul) foi suavemente agitada por 10 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(CH2) 14-COONSu (1,519 mg, 3,963 umol) em NMP (38 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 1 h em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicma (2,18 mg, 29,06 umol) em etanol aguoso a 50% (218 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA“padrão. A coluna foi aquecida a 65 °C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (0,58 mg, 12%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3 654 ±3. O peso molecular resultante ê desse modo 3653 ± 3 amu (valor teórico 3653 amu).

Exemplo 26 Síntese de Arg2S'34Lys3e (N®- (ω- carboxiheptanoíla))-GLP-1(7-36)-OH

Uma mistura de Arg26'34Lys36-GLP-l (7-3 6)-OH (5,00 mg, 1,50 umol) , EDPA (5,44 mg, 42,08 umol) , NMP (210 ul) e água (50 ul) foi suavemente agitada por 5 mm. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de H00C-(CH2) 14 -COONSu (1,72 mg, 4,5 umol) em NMP (43 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 mm. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 1 h em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicma (2,48 mg, 33 umol) em etanol aquoso a 50% (248 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65 °C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. 0 composto título (0,58 mg, 11%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3596 ± 3. O peso molecular resultante ê desse modo 3595 ± 3 amu (valor teórico 3595 amu).

Exemplo 27 Síntese de ácido litocólico 2,5-dioxo-pirrolidina-l-il éster À uma mistura de ácido litocólico (5,44 g, 14,34 mmol), N-hidroxisuccinimida (1,78 g, 15,0 mmol), THF anidro (120 ml) e acetonitrila anidra (30 ml), mantida a 10°C, foi adicionada uma solução de N,N'- diciclohexilcarbodiimida (3,44 g, 16,67 mmol) em THF anidro. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 16 h, filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em diclorometano (450 ml), lavado com uma solução aquosa de Na2C03 a 10% (2x150 ml) e água (2x150 ml), e seca (MgS04) , filtrado e o filtrado concentrado a vácuo para fornecer um resíduo cristalino. 0 resíduo foi recnstalizado de uma mistura de diclorometano (30 ml) e n-heptano (30 ml para fornecer o composto título (3,46 g, 51%) como um sólido cristalino.

Exemplo 28 Síntese de Arg34Lys26 (ISf- (ω-litocolila) ) -GLP-1 (7- 37)-OH

Uma mistura de Arg34-GLP-1 (7-37)-OH (4,472 mg, 1,32 umol) , EDPA (4,78 mg, 36,96 umol) , NMP (94 ul) e água (44,8 ul) foi suavemente agitada por 10 mm. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de ácido litocólico 2,5-díoxo-pirrolidina-l-il éster (1,87 mg, 3,96 umol) em NMP (46,8 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 1 h em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (2,18 mg, 29,04 umol) em etanol aquoso a 50% (218 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65 °C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (1,25 mg, 25%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3744 ±3. 0 peso molecular resultante ê desse modo 3 743 ± 3 amu (valor teórico 3743 amu).

Exemplo 29 Síntese de N“-tetradecanoíla-Glu(ONSu)-0Bufc. A uma suspensão de H-Glu (OH-OB^ (2,5 g, 12,3 mmol) , DMF (283 ml) e EDPA (1,58 g, 12,3 mmol) foi adicionada gota a gota uma solução de Myr-ONSu (4,0 g, 12,3 mmol) em DMF (59 ml). A mistura de reaçã_o foi agitada por 16 h em temperatura ambiente e a seguir concentrada a vácuo a um volume total de 20 ml. O resíduo foi dividido entre ácido cítrico aquoso a 5% (250 ml) e acetato de etila (150 ml) , e as fases foram separadas. A fase orgânica foi concentrada a vácuo e o resíduo dissolvido em DMF (4 0 ml) . A solução resultante foi adicionada gota a gota a uma solução aquosa a 10% de ácido cítrico (300 ml) mantida a 0°C. O composto precipitado foi coletado e lavado com água gelada e seco em um forno de secagem a vácuo. 0 composto seco foi dissolvido em DMF (23 ml) e HONSu (1,5 g, 13 mmol) foi adicionado. À mistura resultante foi adicionada uma solução de N,N'- diciclohexilcarbodiimida (2,44 g, 11,9 mmol) em diclorome.tano (47 ml). A mistura de reação-foi agitada por 16 h em temperatura ambiente, e o composto precipitado foi filtrado. 0 precipitado foi recristalizado de n-heptano/2-propanol para fornecer o composto título (3^,03 g, 50%).

Exemplo 30 Síntese de Glu22'23'30Arg26'34Lys38 (Νε- (y- glutamila (N“-tetradecanoíla) ) -GLP-1 (7-38) -OH

Uma mistura de Glu23'23'30 Arg26'34 Lys38-GLP-1 (7-38)-OH (1,00 mg, 0,272 umol), EDPA (0,98 mg, 7,62 umol) , NMP (70 ul) e agua (70 ul) foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de N“-tetradecanoílaGlu(ONSu)-0Bufc, preparada como descrito no exemplo 29, (0,41 mg, 0,816 umol) em NMP (10,4 ul), a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 mm. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 45 mm. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (0,448 mg, 5,98 umol) em etanol aguoso a 50% (45 ul). Uma solução aquosa a 0,5% de acetato de amônio (0,9 ml) foi adicionada, e a mistura resultante foi imobilizada em um cartucho Varian 500 mg C8 Meag Bond Elut®, o composto imobilizado lavado com acetonitrila aquosa a 5% (10 ml) , e finalmente liberado do cartucho por eluição com TFA (10 ml). 0 eluado foi concentrado a vácuo, e a mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65 °C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. 0 composto titulo (0,35 mg, 32%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 4012 ± 3. O peso molecular resultante é desse modo 4011 ± 3 amu (valor teórico 4011 amu).

Exemplo 31 Síntese de Glu23,26Arg34Lys3a (Ns- (γ-glutamila (N41-tetradecanoila)))-GLP-1(7-38)-OH

Uma mistura de Glu23'26Arg34Lys33GLP-l (7-38)-OH (6,07 mg, 1,727 umol) , EDPA (6,25 mg, 48,36 umol) , NMP (425 ul) e água (425ul) foi suavemente agitada por 5 mm. em temperatura ambiente. Ã mistura resultante foi adicionada uma solução de IST-tetradecanoíla-Glu (ONSu)-OBu6, preparado como descrito no exemplo 29, (2,65 mg, 5,18 umol) em NMP (66,3 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 45 min. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (2,85 mg, 38,0 umol) em etanol aquoso a 50% (285 ul) . Uma solução aquosa a 0,5% de acetato de amônio (5,4 ml) foi adicionada, e a mistura resultante foi imobilizada em um cartucho Varian 500 mg C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado lavado com acetonitrila aquosa a 5% (10 ml), e finalmente liberado do cartucho por eluição cora TFA (10 ml) . 0 eluado foi concentrado a vácuo, e a mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65 °C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% era 60 minutos. 0 composto título (0,78 mg, 12%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3854 ± 3. O peso molecular resultante é desse modo 3 853 ± 3 amu (valor teórico 3853 amu).

Exemplo 32 Síntese de Lys26'34bis (NE-(ω- carboxitrídecanoíla))-GLP-1(7-37)-OH

Uma mistura de GLP-1(7-37)-OH (30 mg, 8,9 umol) , EDPA (32,3 mg, 250 umol) , NMP (2,1 ml) e água (2,1 ml) foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(CHa) 12COONSu (12,7 mg, 35,8 umol) em NMP (318 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 1 h e 40 min. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (3,4 mg, 44,7 umol) em etanol aquoso a 50% (335 ul). A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (10 mg, 29%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3840 + 3. 0 peso molecular resultante é desse modo 383 9 ± 3 amu (valor teórico 3839 amu).

Exemplo 33 Síntese de Lys2S'34bis (N®- (γ-tetradecanoíla) ) ) -GLP-1(7-37)-OH. (NNC 90-1167).

Uma mistura de GLP-1 (7-37)-OH (300 mg, 79,8 umol) , EDPA (288,9mg, 2,24 umol) , NMP (21 ml) e água (21 ml) foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente. Â mistura resultante foi adicionada uma solução de N^tetradecaníla-Glu(ONSu)-OBu6, preparado como descrito no exemplo 29, (163 mg, 319,3 umol) em NMP (64,08 ml), a mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 1 h em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (131,8mg, 1,76 umol) em etanol aquoso a 50% (13,2ml). Uma solução aquosa a 0,5% de acetato de amônio (250 ml) foi adicionada, e a mistura resultante foi dividida em quatro porções iguais. Cada porção foi eluída sobre um cartucho Varin 500 mg C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado lavado com TFA aquoso a 0,1% (3,5 ml), e finalmente liberado do cartucho por eluição com acetonitnla aquosa a 70% (4 ml) . Os eluados combinados foram diluídos com TFA aquoso a 0,1% {3 00 ml) . O composto precipitado foi coletado por centnfugação, lavado com TFA aquoso a 0/1% (50 ml), e finalmente isolado por centnfugação. Ao precipitado foi adicionado TFA {6 0 ml) , e a mistura de reação resultante foi agitada por 1 h e 30 mm. em temperatura ambiente. TFA em excesso foi removido a vácuo, e o resíduo foi derramado em água 950 ml) . O composto precipitado foi purificado por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 3Q0SB-CN) e um sistema de acetonitnla/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila era 0100% em 60 minutos. O composto título {27,3 mg, 8%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 4036 ±3. O peso molecular resultante é desse modo 4035 ± 3 arau (valor teórico 4035 amu).

Exemplo 34 Síntese de Arg^^Lys^N6- (ω- carboxipentadecanoíla))-GLP-1(7-38)-OH

Uma mistura de Arg2S,34Lys3S-GLP-l {7-38) -OH (30 mg, 8,9 umol), EDPA (32,3 mg, 250 umol), NMP (2,1 ul) e água (2,1 ul) foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de HOOC-(CH2) 14C00NSu (13,7 mg, 35,8 umol) em NMP (343 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 1 h em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina {3,4 mg, 44,7 umol) em etanol aquoso a 50% (335 ul). A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zojebax 3 0 0SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 55°C e o gradiente, de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto titulo (4,8 mg, 14%) foi- isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3894 ± 3. 0 peso molecular resultante é desse modo 3 893 ± 3 amu (valor teórico 3893 amu).

Exemplo 35 Síntese de N“'hexadecanoíla-Glu (ONSu)-OB^ A uma suspensão de H-Glu (OH)-OBu11 (4,2 g, 20,6 mmol) , DMF (500 ml) e EDPA (2,65 g, 20,6 mmol) foi adicionada gota a gota uma solução de Pal-ONSu (7,3 g, 2 0,6 mmol) em DMF (100 ml) . A mistura de reação foi agitada por 64 h em temperatura ambiente e a seguir concentrada a vácuo até um volume total de 20 ml. 0 resíduo foi dividido entre ácido cítrico aquoso a 10% (300 ml) e acetato de etila (250 ml) , e as fases foram separadas. A fase orgânica foi concentrada a vácuo e o resíduo dissolvido em DMF (50 ml) . A solução resultante foi adicionada gota a gota a uma solução aquosa a 10% de ácido cítrico (500 ml) mantida a 0°C. 0 composto precipitado foi coletado e lavado com água gelada e seco em um forno de secagem a vácuo. 0 composto seco foi dissolvido em DMF (45 ml) e HONSu (2,15 g, 18,7 mmol) foi adicionado. À mistura resultante foi adicionada uma solução de N,N'-diciclohexilcarbodnmida (3,5 g, 17 rranol) em diclororaetano (67 ml). A mistura de reação foi agitada por 16 h em temperatura ambiente, e o composto precipitado foi - filtrado 0 precipitado foi recristalizado de n-heptano/2-propanol para fornecer o composto título (6,6 g, 72%).

Exemplo 36 Síntese de Lys26'34 "bis (tf-(γ-glutamila (N“-hexadecanoila)))-GLP-1(7-37)-OH

Uma mistura de GLP-1(7-37)-OH (10 mg, 2,9 umol) , EDPA (10,8 mg, 83,4umol), NMP (0,7 ul) e água (0,7 ul) foi suavemente agitada por 5 mm. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de N^hexadecanoíla-Glu-(ONSu)-OBu*1, preparada como descrito no exemplo 33, (163 mg, 319,3 umol) em NMP (4,08 ml), a mistura de reação foi suavemente agitada por 1 h e 20 min. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (4,9 mg, 65,6 umol) em etanol aquoso a 50% (492 ul). Uma solução aquosa a 0,5% de acetato de amônio (9 ml) foi adicionada, e a mistura resultante eluída sobre um cartucho. Varian lg C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado lavado com acetonitrila aquosa a 5% (10 ml), e finalmente liberado do cartucho por eluição com TFA (10 ml) . 0 eluado foi concentrado a vácuo, e o resíduo purificado por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 3QGSB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão A coluna foi aquecida a 65 °C e o gradiente de acetomtrila era 0-100% em 60 minutos. 0 composto título (2,4 mg, 20%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 4092 ± 3. 0 peso molecular resultante é desse modo 4091 ± 3 amu (valor teórico 4091 amu).

Exemplo 37 Síntese de Arg34Lys2S (NE- (γ-glutamila (N“- hexadecanoila)))-GLP-1(7-37)-OH

Uma mistura de Arg34- GLP-1 (7-37)-OH (3,7 mg, 1,1 umol), EDPA (4,0 mg, 30,8umol), acetonitrila (260 ul) e agua (260 ul) foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de N^hexadecanoíla-Glu(ONSu)-OBus, preparada como descrito no exemplo 35, (1,8 mg, 3,3 umol) em acetonitrila (44,2 ml), e a mistura de reação foi suavemente agitada por 1 h e 20 min. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (1,8 mg, 24,2 umol) em etanol aquoso a 50% (181 ul) . Uma solução aquosa a 0,5% de acetato de amônio (12ml) e NMP (300 ul) foram adicionados, e a mistura resultante eluída sobre um cartucho Varian lg C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado lavado com acetonitrila aquosa a 5% (10 ml) , e finalmente liberado do cartucho por eluição com TFA (6 ml) . O eluado foi deixado em repouso por 2 h em temperatura ambiente e a seguir concentrado a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65“C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (0,23 mg, 6%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3752 ± 3. O peso molecular resultante é desse modo 3751 ± 3 amu (valor teórico 3751 amu).

Exemplo 38 Síntese de Arg26'34Lys3a (NE- (y-glutamila (N°-tetradecanoila)))-GLP-1(7-38)-OH

Uma mistura de Arg26,34Lys38- GLP-1 (7-38)-OH (14 mg, 4,0 umol), EDPA (14,3 mg, 110,6 mol), NMP (980 ul) e água (980ul) foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de N“"tetradecanoíla-Glu- (ONSu) -OBu6, preparada como descrito no exemplo 29, (12,lmg, 23,7 umol) em NMP (303 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 2 h em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (6,5 mg, 36,9 umol) em etanol aquoso a 50% (652 ul). Uma solução aquosa a 0,5% de acetato de amônio (50ml) foi adicionada, e a mistura resultante eluída sobre um cartucho Varian Ig C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado lavado com acetonitrila aquosa a 5% (15 ml) , e finalmente liberado do cartucho por eluição com TFA (6 ml) . O eluado foi deixado em repouso por 1 h e 45 min. em temperatura ambiente e a seguir concentrado a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (3,9 mg, 26%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3S81 ± 3. O peso molecular resultante é desse modo 3880 ± 3 amu (valor teórico 3880 amu).

Exemplo 39 Síntese de Arg26'Mys3S (Ne- (o- carboxípentadecanoíla))-GLP-1(7-38)-OH

Uma mistura de Arg2S'34 Lys38-GLP-1 (7-38) -OH (14 mg, 4,0 umol), EDPA (14,3 mg, 111 umol), NMP (980ul) e água (980 ul) foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de H00C- (0¾) 14„C00NSu (4,5 mg, 11,9 umol) em NMP (114 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 1 h e 45 mm. em temperatura ambiente. Uma solução adicional de H00C- (CH2) 14-C00NSU (4,0 mg, 10,4 umol) em NMP (100 ul) foi adicionada, e a mistura resultante foi agitada suavemente por um período adicional de 1 h. e 30 min. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (1,5 mg, 19,8 umol) em etanol aquoso a 50% (148 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetomtrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (3,9 mg, 26%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3809 ± 3. O peso molecular resultante é desse modo 3808 ± 3 amu (valor teórico 3808 amu}.

Exemplo 40 Síntese de Arg2S,34Lys3e (N®-(γ-glutamila (N“-hexadecanoila)))-GLP-1(7-38)-OH

Uma mistura de Arg26'34Lys30- GLP-1 (7-38)-OH (14 mg, 4,0 umol), EDPA (14,3 mg, 110,6 mol), NMP (980 ul) e água (98 0ul) foi suavemente agitada por 5 mm. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de N“'tetradecanoíla-Glu- (ONSu) -0Bufc, preparada como descrito no exemplo 35, (6,4mg, 11,9 umol) em NMP (160 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 1 h e 20 mm em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (6,5 mg, 87 umol) em etanol aquoso a 50% (653 ul). Uma solução aquosa a 0,5% de acetato de amônio (50ml) foi adicionada, e a mistura resultante eluída sobre um cartucho Varian lg C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado lavado com acetonitnla aquosa a 5% {10 ml) , e fmalmente liberado do cartucho por eluição com TPA (6 ml) . 0 eluado foi deixado em repouso por 1 h e 30 min. em temperatura ambiente e a seguir concentrado a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (7,2 mg, 47%) foi isolado, e o produto foi analisado por PDMS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3881 ± 3. 0 peso molecular resultante ê desse modo 3880 ± 3 amu {valor teórico 3880 amu).

Exemplo 41 Síntese de Arg18'23'2S'30'34ys38 (NE-hexadecanoíla) ) -GLP-1(7-38)-OH

Uma mistura de Arg18,23'26'30'34 Lys3E-GLP-l (7-38) -OH {1,0 mg, 0,2 7 umol) , EDPA (0,34 mg, 2,7 umol) , e DMSO (600 ul) foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de Pal-ONSu (0,28 mg, 0,8 umol) em NMP (7 ul) . A mistura de reação foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente, e a seguir deixada em repouso por um período adicional de 6 h em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (1,6 mg, 21,7 umol) em etanol aquoso a 50% (163 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 30QSB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65 °C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. 0 composto titulo (0,17 mg, 16%) foi isolado, e o produto foi analisado por MALDI-MS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3961 ±3. O peso molecular resultante é desse modo 3 96 0 ± 3 amu (valor teórico 3960 amu).

Exemplo 42 Síntese de Arg26'34Lys3a (Νε- (ω- carboxitridecanoíla))-GLP-1(7-38)-OH

Uma mistura de Arg26'34 Lys38-GLP-1 (7-38)-OH (14 mg, 4,0 umol), EDPA (14,3 mg, 111 umol), HMP (980 ul) e água (98 0 ul) foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de H00C-(CH2) 12-COOMSu (4,2 mg, 11,9 umol) em NMP (105 ul) e a mistura de reação foi suavemente agitada por 1 h e 50 mm. em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (6,5 mg, 87 umol) em etanol aquoso a 50% (652 ul) . A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (5,8mg, 39%) foi isolado, e o produto foi analisado por MALDI-MS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3780 ±3. 0 peso molecular resultante é desse modo 3779 ± 3 amu (valor teórico 3781 amu).

Exemplo 43 Síntese de Arg34Lys2e (N6- (γ-glutamila (N“- tetradecanoila))}-GLP-1(7-37)-OH

Uma mistura de Arg34' GLP-1 (7-37)-OH (15 mg, 4,4 umol) , EDPA (16 mg, 124 mol) , NMP (2 ml) e água (4,8ml) foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente. À mistura resultante foi adicionada uma solução de N“'tetradecanoíla-Glu- (ONSu) -0Buc, preparada como descrito no exemplo 29, (12,1 mg, 23,7 umol) em NMP (303 ul) , a mistura de reação foi suavemente agitada por 2 h em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicma (6,5 mg, 86,9 umol) em etanol aquoso a 50% (652 ul). Uma solução aquosa a 0,5% de acetato de amônio (50ml) foi adicionada, e a mistura resultante eluída sobre um cartucho Varian lg C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado lavado com acetonitrila aquosa a 5% (15 ml) , e finalmente liberado do cartucho por eluição com TFA (6 ml) . O eluado foi deixado em repouso por 1 h e 45 min. em temperatura ambiente e a seguir concentrado a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aquecida a 65°C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto titulo (3,9 mg, 26%) foi isolado, e o produto foi analisado por MALDI-MS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3723 ± 3. 0 peso molecular resultante é desse modo 3X22 ± 3 amu (valor teórico 3723 amu).

Exemplo 44 Síntese de N“-octadecanoíla-Glu (ONSu) -OBu11 A uma suspensão de H-Glu(OH)-OBufc (2,82 g, 13,9 mmol) , DMF (370 ml) e EDPA (1,79 g, 13,9 mmol) foi adicionada gota a gota uma solução de Ste-ONSu (5,3 g, 13.9 mmol) em DMF (60 ml) . Diclorometano (35 ml) foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada por 24 h em temperatura ambiente e a seguir concentrado a vácuo. O resíduo foi dividido entre ácido cítrico aquoso a 10% (330 ml) e acetato de etila (200 ml) , e as fases foram separadas. A fase orgânica foi concentrada a vácuo e o resíduo dissolvido em DMF (60 ml) . A solução resultante foi adicionada gota a gota a utna solução aquosa a 10% de ácido cítrico (400 ml) mantida a 0°C. O composto precipitado foi coletado e lavado com água gelada e seco em um forno de secagem a vácuo. 0 composto seco foi dissolvido em DMF (4 0 ml) e HONSu (1,63 g, 14,2 mmol) foi adicionado. Â mistura resultante foi adicionada uma solução de DCC (2,66 g, 12.9 mmol) em diclorometano (51 ml) . A mistura de reação foi agitada por 64 h em temperatura ambiente, e o composto precipitado foi filtrado. O precipitado foi recristalizado de n-heptano/2-propanol para fornecer o composto título (4,96 g, 68%).

Exemplo 45 Síntese de Arg2S,34Lys3e (Νε- (γ-glutamila (N*-octadecanoíla)))-GLP-1(7-38)-OH

Uma mistura de Arg26,34-GLP-1 (7-38) -OH (28 mg), 7,9 umol), EDPA (28,6 mg, 221,5 umol), NMP (1,96 ml) e água (1,96 ml) foi suavemente agitada por 5 min. em temperatura ambiente. Ά mistura resultante foi adicionada uma solução de N^-octadecanoíla-Glu(ONSu)-OBu11 (17,93 g, 31,6 umol), preparada como descrito no Exemplo 44, em NMP (448 ul), e a mistura de reação foi suavemente agitada por 2 h em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de uma solução de glicina (13,1 mg, 174 umol) em etanol aguoso a 50% (1,3 ml) . Uma solução aguosa a 0,5% de acetato de amônio (12 0 ml) foi adicionada, e a mistura resultante foi dividida em duas porções iguais. Cada porção foi eluida sobre um cartucho Varian 5 g C8 Mega Bond Elut®, o composto imobilizado lavado com acetonitrila aguosa a 5% (25 ml), e finalmente liberado do cartucho por eluição de TFA (25 ml) . Os eluados combinados foram deixados em repouso por 1 h e 25 mm. em temperatura ambiente e a seguir concentrados a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de coluna utilizando uma coluna de cianopropila (Zorbax 300SB-CN) e um sistema de acetonitrila/TFA padrão. A coluna foi aguecida a 65 °C e o gradiente de acetonitrila era 0-100% em 60 minutos. O composto título (3,6 mg, 11%) foi isolado, e o produto foi analisado por MALDI-MS. Verificou-se que o valor m/z para o íon molecular protonado era 3940 ±3. 0 peso molecular resultante é desse modo 3939 ± 3 amu (valor teórico 3937 amu).

DESCOBERTAS BIOLÓGICAS

Protração de derivados de GLP-1 após administração s.c. A protração de diversos derivados de GLP-1 da invenção foi determinada pela monitoração da sua concentração em plasma após administração sc em porcos saudáveis, utilizando o método descrito abaixo. Para comparação seguiu-se também a concentração em plasma de GLP-1(7-37) após administração sc. Os resultados são dados na Tabela 1. A protração de outros derivados de GLP-1 da invenção pode ser determinada do mesmo modo.

Porcos (50% Duroc, 25% Yorkshire, 25% Danish Landrace, aprox. 40 kg) foram deixados sem alimento desde o início do experimento. A cada porco 0,5 nmol de composto teste por kg de peso corpóreo foi administrado em uma solução isotônica de 50 uM (5 mM fosfato, pH 7,4, 0,02% Tween®-20 (Merck), 45 mg/ml manitol (isento de pirogênio, Novo Nordisk). Amostras de sangue foram tiradas de um catéter na_vena jugularis nas horas indicadas na Tabela 1. 5 ml das amostras de sangue foram derramadas em vidros resfriados contendo 175 ul da seguinte solução: 0,18 m EDTA, 1500 KIE/ml aprotimna (Novo Nordisk) e 3% de bacitracina (Sigma) , ρΗ 7,4. Em 30 min., as amostras foram centrifugadas por 10 min. a 5-6000*g. A temperatura foi mantida a 4°C. O sobrenadante foi pipetado em vidros diferentes e mantido a menos 2 0°C até o uso.

As concentrações de plasma dos peptídeos foram determinadas por RIA utilizando um anticorpo monoclonal específico para a região N-terminal de GLP-1(7-37). As reatividades cruzadas eram menos de 1% com GLP-1(1-37) e GLP-1(8-36) amida e < 0,1% com GLP-1(9-37), GLP-1(10-36) amida e GLP-1(11-36)amida. Todo o procedimento foi realizado a 4°C. O ensaio foi realizado como a seguir: 100 ul de plasma foi misturado com 271 ug de etanol a 96%, misturado utilizando um misturador de rotação e centrifugado a 2600*g por 3 0 min. 0 sobrenadante foi decantado em tubos Mimsorp e evaporado totalmente (Savant Speedvac AS290). O resíduo de evaporação foi reconstituído no tampão de ensaio consistindo em 80 mM NaH2P04/Na2HP04, 0,1% HSA (Orpha 20/21, Behnng) , 10 mM EDTA, 0,6 mM tiomersal (Sigma) ,pH 7,5. As amostras foram reconstituídas em volumes adequados para suas concentrações esperadas, e foram deixadas reconstituir por 30 min. À amostra de 300 ul, 100 ul de solução de anticorpo em tampão de diluição contendo 40 mM NaH2P04/Na2HP04, 0,1% de HSA, 0,6 mM tiomersal, pH 7,5, foi adicionada. Uma amostra não específica foi preparada misturando 3 00 ml de tampão com 10 0 ul de tampão de diluição. Padrões individuais foram preparados de estoques secos congelados, dissolvidos em 30 0 ul de tampão de ensaio. Todas as amostras foram pré-incubadas em tubos Minisorp com anticorpo como descrito acima por 72 h. 200 ul de traçador em tampão de diluição contendo 6-7000 CPM foi adicionado, as amostras foram misturadas e incubadas por 48 h. 1,5 ml de uma suspensão de 2 00 ml por litro de plasma bovino estabilizado por heparina e 18 g por litro de carvão ativado (Merck) em 40 mM NaH2P04/Na2HP04, 0,6 mM tiomersal, pH 7,5, foi adicionado a cada tubo. Antes do uso, a suspensão foi misturada e deixada em repouso por 2 h a 4°C. Todas as amostras foram incubadas por 1 h a 4°C e a seguir centrifugadas a 3400*g por 25 min. imediatamente após a centrifugação, o sobrenadante foi decantado e contado em um contador-γ. A concentração nas amostras foi calculada de curvas padrão individuais. As seguintes concentrações de plasma foram encontradas, calculadas como % da concentração máxima para os compostos individuais (n=2): Tabela 1 Composto Horas após administração sc. teste*) 0,75 1 2 4 6 8 10 12 24 GLP-1(7- 100 9 1 37) Exemplo 73 92 100 98 82 24 16 16 16 25 Exemplo 76 71 91 100 84 68 30 9 17 Exemplo 39 71 93 100 91 59 50 17 43 Exemplo 26 38 97 100 71 81 80 45 37 Exemplo 24 47 59 71 100 94 100 94 11 Exemplo 36 54 65 94 80 100 85 93 12 Exemplo 55 53 90 83 88 70 98 100 100 32 Exemplo 18 25 32 47 98 83 97 100 14 Exemplo 15 22 38 59 97 85 100 76 13 Exemplo 60 53 100 66 48 39 25 29 0 38 Exemplo 38 100 70 47 33 33 18 27 0 39 Exemplo 47 19 50 100 51 56 34 14 0 40 Exemplo 19 32 44 84 59 66 83 84 100 34 *) Os compostos de teste são os compostos de título dos exemplos com os números dados.

Como é constatado na Tabela 1, os derivados de GLP-1 da invenção tem um perfil de ação prolongado em relação a GLP-1(7-37) e são muito mais persistentes em plasma do que GLP-l{7-37) . Também ê constatado na Tabela 1, que o tempo no qual a concentração máxima em plasma é obtida, varia em limites amplos, dependendo do derivado de GLP-1 específico selecionado.

Estimulação de formação de cAMP em uma linhagem de célula expressando o receptor de GLP-1 humano clonado Para demonstrar a eficácia dos derivados de GLP-1, sua capacidade em estimular formação de cAMP em uma linhagem de célula expressando o receptor de GLP-1 humano clonado foi testado. Calculou-se ECS0 da curva de resposta de dose.

As células de rim de um hamster filhote (BHK) expressando o receptor GLP-1 pancreãtico humano foram utilizadas (Knudsen e Pndal, 1996, Eur. J. Pharm. 318, 429-435). As membranas de plasma foram preparadas (Adelhorst e outros, 1994, J. Biol. Chem. 269, 6275) por homogeneização em tampão (10 mmol/l Tris-HCl e 30 mmol/I NaCl pH 7,4, contendo, além disso, 1 mmol/I ditiotreitol, 5 mg/l leupeptina (Sigma, St. Louis, MO, USA), 5 mg/l pepstatina (Sigma, St. Louis, MO, EUA), 100 mg/I bacitracina (Sigma, St. Louis, MO, EUA) e 16 mg/I aprotinina (Novo Nordisk A/S, Bagsvaerd, Dinamarca)). O homogeneizado foi centrifugado no topo de uma camada de 41 peso/volume % de sacarose-. A faixa branca entre as duas camadas foi diluída em tampão e centrifugada. As membranas de plasma foram armazenadas a -80°C até serem utilizadas. O ensaio foi realizado em placas de microtítulo de 96 cavidades em um volume total de 140 ul._ O tampão utilizado foi 50 mmol/I Tris-HCl, pH 7,4 com a adição de 1 mmol/EGTA, 1,5 mmol/I MgS04, 1,7 mmol/I ATP, 2 0 mM GTP, 2 mmoL/I 3-isobutil-l-metilxantina, 0,01% Tween-20 e 0,1% de albumma de soro humano (Reinst, Behringwerke AG, Marburg, Alemanha). Os compostos a serem testados para atividade agonista foram dissolvidos e diluídos em tampão, adicionados â preparação de membrana e a mistura foi incubada por 2 h a 37°C. A reação foi parada pela adição de 25 ul de 0,05 mol/I Hcl. As amostras foram diluídas 10 vezes antes da análise em relação à cAMP por um ensaio de proximidade de cintilação (RPA 538, Amersham, UK) . Os resultados a seguir foram encontrados: Composto de ECS0, pM Composto de ECS0, pM teste *) teste *) GLP-1(7-37) 61 Exemplo 31 96 Exemplo 45 120 Exemplo 30 41 Exemplo 43 24 Exemplo 26 8,8 Exemplo 40 55 Exemplo 25 99 Exemplo 39 5,1 Exemplo 19 79 Exemplo 38 54 Exemplo 16 3,5 Exemplo 37 60 *) Os compostos de teste são ~os compostos título dos exemplos com os números dados.

REIVINDICAÇÕES

Claims (28)

1. Derivado de Arg34-GLP-1 (7-37), caracterizado pelo fato de que o derivado tem apenas um substituinte lipofílico selecionado de CH3(CH2)nCO- em que n é de 4 a 38, HOOC(CH2)mC0-, em quem m é de 4 a 38 ou litocoloil, o qual o substituinte lipofílico é ligado ao resíduo de aminoácido que não é o resíduo de aminoácido N-terminal ou C-terminal.

2. Derivado de Arg34-GLP-1 (7-37), caracterizado pelo fato de que o derivado tem apenas dois substituintes lipofílicos independentemente selecionados de CH3(CH2)nCO- em que n é de 4 a 38, HOOC(CH2)raCO- em que m é de 4 a 38 ou litocoloil, um dos substituintes lipofílicos é ligado ao resíduo de aminoácido que não é o resíduo de aminoácido N-terminal ou C-terminal.

3. Derivado, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que um dos substituintes lipofílicos é ligado ao resíduo de aminoácido C-terminal enquanto o outro é ligado ao resíduo de aminoácido que não é o resíduo de aminoácido N-terminal ou C-terminal.

4. Derivado . de Arg34-GLP-1 (7-37) caracterizado pelo fato de que o derivado tem apenas dois substituintes lipofílicos independentemente selecionados de CH3(CH2)nCO- em que n é de 4 a 38, HOOC(CH2)mCO- em que m é de 4 a 38 e litocoloil, que os substituintes lipofílicos são ligados aos resíduos de aminoácido que não são resíduos de aminoácido N-terminal ou C-terminal.

5. Derivado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que o substituinte lipofílico compreende de 8 a 25 átomos de carbono.

6. Derivado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que o substituinte lipofílico é ligado a um resíduo de aminoácido de tal modo que um grupo carboxila do substituinte lipofílico forma uma ligação de amida com um grupo amino do resíduo de aminoácido.

7. Derivado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que o substituinte lipofílico é ligado ao resíduo de aminoácido por meio de um espaçador.

8. Derivado, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o espaçador é um resíduo de aminoácido exceto Cys, ou um dipeptídeo como Gly-Lys.

9. Derivado, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que um grupo carboxila do peptídeo de origem forma uma ligação de amida com um grupo amino de Lys ou um dipeptídeo contendo um resíduo Lys, e o outro grupo amino do espaçador Lys ou um espaçador de dipeptídeo contendo um resíduo Lys forma uma ligação de amida com um grupo carboxila do substituinte lipofílico.

10. Derivado, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que um grupo amino do peptídeo forma uma ligação amida com um grupo carboxílico do resíduo de aminoácido ou espaçador dipeptídeo e um grupo amino do resíduo de aminoácido ou espaçador dipeptídeo forma uma ligação amida com um grupo carboxila do substituinte lipofílico.

11. Derivado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que o grupo acila é selecionado do grupo que compreende CH3(CH2)nCO- em que n é de 4 a 38, preferencialmente CH3(CH2)6CO-, CH3(CH2)3CO-, CH3(CH2)10CO-, CH3(CH2)i2CO-, ch3(ch2)14co-, ch3(ch2)16co-, ch3(ch2)18co-, ch3(ch2)20co- e CH3(CH2)22CO-.

12. Derivado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que o grupo acila é selecionado do grupo que compreende HOOC(CH2) mC0-, em que m é de 4 a 38, preferencialmente de 4 a 24, mais preferivelmente selecionado do grupo compreendendo HOOC(CH2) i4CO-, HOOC(CH2) i6CO-, HOOC(CH2)i8CO-, HOOC(CH2)20CO- e HOOC(CH2)22CO-.

13. Derivado, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser Lys26 (íf-tetradecanoil) Arg34-GLP-1(7-37).

14. Derivado, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de ser Lys2S,34bis (N*-( ω - carboxinonadecanoil))-GLP-1(7-37).

15. Derivado, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser Arg34Lys26 (If- (ω - carboxinonadecanoil)-GLP-1(7-37).

16. Derivado, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser Arg34Lys26 (N6- (ω - carboxiheptadecanoil)-GLP-1(7-37).

17. Derivado, de acordo com a reivindicação ir caracterizado pelo fato de ser Lys26,34bis (Νε- (co -carboxiundecanoil)-GLP-1(7-37).

18. Derivado, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser Arg34Lys26 (N6- (co - carboxiundecanoil)-GLP-1(7-37). ’

19. Derivado, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser Arg34Lys26 (N8- (co - carboxiheptanoil)-GLP-1(7-37).

20. Derivado, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de ser Lys26,34bis (N®-( ω - carboxiheptanoil)-GLP-1(7-37) .

21. Derivado, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser Arg34Lys26 (N6- (co - carboxipentadecanoil)-GLP-1(7-37).

22. Derivado, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser Arg34Lys26 (ff-litocoloil) -GLP-1(7-37) .

23. Derivado, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de ser Lys26,34-bis (N£-(q- carboxitridecanoil))-GLP-1(7-37) .

24. Derivado, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de ser Lys26,34 -bis (Ns-(γ-glutamil (n“ -tetradecanoil)))-GLP-1(7-37).

25. Derivado, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de ser Lys26,34-bis (Ns- (γ-glutamil (N° -hexadecanoil)))-GLP-1(7-37) .

26. Derivado, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser Arg34Lys2S (Νε- (γ-glutamil (n“ -hexadecanoil)))-GLP-1(7-37) .

27. Derivado, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser Arg34Lys25 (Νε- (γ-glutamil (Να -tetradecanoil)))-GLP-1(7-37).

28. Composição farmacêutica para tratar diabetes mellitus não dependente de insulina, diabetes mellitus dependente de insulina ou obesidade, caracterizado pelo fato de que compreende um derivado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, ll, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 ou 27 e um veículo farmaceuticamente aceitável.