JP5685355B2

JP5685355B2 - Ｇｌｐ−１および糖尿病の処置方法

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Inventors: エヴァ・スタイネス
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Description

発明の詳細な説明

発明の分野
本発明は、一般に、哺乳類の糖尿病および関連疾患の処置方法に関する。１つの態様において、方法は、治療上有効量の内因性インシュリンをもたらすために、グルカゴン様ペプチドまたはＧＬＰ−１様効果を有する関連分子を投与することを含む。続いて、哺乳類に投与される薬物の量は、「休薬日（drug holiday）」を生じるために実質的に低減される。本発明の実施により、継続的に薬物曝露されることなく、かつ継続的に治療レベルの薬物が存在することなく、有効な治療が達成される。

背景
グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）は、生理的インクレチンホルモンとされている。報告によると、それは、ブドウ糖または脂質の経口摂取後、インシュリン応答を増大させるために作用する。一般に、ＧＬＰ−１は、グルカゴンの濃度を低下させ、胃を空にするのを遅延させ、（前）インシュリンの生合成を刺激し、インシュリン感受性を増強し、そしてインシュリン非依存性グリコーゲン合成を刺激することが、知られている。Holst, JJ (1999) Curr Med Chem. 6:1005；Nauck, MA, et al. (1997) Exp Clin Endocrinol Diabetes 105:187；およびLopez-Delgado,MI, et al. (1998) Endocrinology 139:2811を参照されたい。

ＧＬＰ−１の分子構造および機能は、広く研究されてきた。ＧＬＰ−１のアミノ酸配列およびタンパク質配列は、ヒトおよび他の哺乳類について報告されている。ヒトＧＬＰ−１は、３７個のアミノ酸残基を有するタンパク質であると考えられている。例えば、Heinrich, G., et al., Endocrinol., 115: 2176 (1984)；およびUttenthal, L. O., et al., J. Clin. Endocrinol. Metabol., 61:472 (1985)を参照されたい。

多数のＧＬＰ−１の分子誘導体が報告されている。例えば、ＧＬＰ−１（７〜３７）が知られている。様々な類似体、例えば、Ｇｌｎ^９−ＧＬＰ−１（７〜３７）、Ｄ−Ｇｌｎ^９−ＧＬＰ−１（７〜３７）、アセチル−Ｌｙｓ^９−ＧＬＰ−１（７〜３７）、Ｔｈｒ^１６−Ｌｙｓ^１８−ＧＬＰ−１（７〜３７）、およびＬｙｓ^１８−ＧＬＰ−１（７〜３７）、Ｇｌｙ^８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｓｅｒ^８−ＧＬＰ−１（７〜３７）も記載されている。他のＧＬＰ−１誘導体（「変異体」と呼ばれることもある）は、酸付加塩、カルボン酸塩、低級アルキルエステル、およびアミドとしても具体的に報告されている。ＷＯ９１／１１４５７およびMojsov, S., Int. J. Peptide Protein Research, 40:333-343 (1992)、およびそこで引用される参考文献を参照されたい。

さらに、アゴニスト活性を有すると報告されている、ＧＬＰ−１誘導体のいくつかが開示されている。例えば、米国特許番号６，３５８，９２４；６，３４４，１８０；６，２８４，７２５；６，２７７，８１９；６，２７１，２４１；６，２６８，３４３；および６，１９１，１０２を参照されたい。

さらに、ＧＬＰ−１関連分子が開示されている。
例えば、エキセンディン４と呼ばれるタンパク質が、アメリカドクトカゲの唾液腺から単離されている。さらなる研究により、そのペプチドがＧＬＰ−１と関連することが示された。該ペプチドは、哺乳類のＧＬＰ−１受容体の有効なアゴニストであると分かっている。最近の研究により、エキセンディン４の投与が、膵内分泌細胞の分化、膵島の増殖、およびエキセンディン４がβ細胞に対するトロピック効果を発揮することを示す、β細胞塊の増大を誘導することが示された。Raufman, JP, et al. J (1992) J Biol Chem 267:21432；Young, AA, et al. (1999) Diabetes 48:1026-1034；Edvell,A, Lindstroum,P (1999) Endocrinology 140:778-783；Xu,G, et al. Diabetes 48:2270；Greig, NH, et al. (1999) Diabetologia 42:45；およびParkes, DG, et al. (2001) Metabolism 50:583を参照されたい。

類似体および誘導体を含む、エキセンディン４およびエキセンディン３と関連する様々な分子が報告されている。例えば、米国特許番号５，４２４，２８６；ＷＯ９８／０５３５１；ＷＯ９８／３０２３１；および公開されたＥＰ出願番号９９６１００４３．４を参照されたい。

例えば、Larsen, B.D等は、ＧＬＰ−１活性のアゴニストである新規ペプチドを開示している。ＰＣＴ／ＤＫ００／００３９３を参照。

ＩＩ型糖尿病は、多くの研究の対象とされてきた。該疾患は、耐糖能異常、高インシュリン血症（hyperinsulaemia）、インシュリン抵抗性、グリコシル化ヘモグロビン（ＨｂＡ_１ｃ）の上昇、β細胞機能不全、そしてそれに続くβ細胞死を特徴としている。総論として、S. N. Davis and D. K. Granner in Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (9^th Ed. Hardman, J.G et al. (eds) (1996)) Chapter 60, pp. 1493-1597を参照されたい。

具体的には、ＧＬＰ−１の注射により、ＨｂＡ_１ｃのレベルが正常値化されると報告された。ＧＬＰ−１はさらに、耐糖能異常の対象において、ブドウ糖に対するβ細胞の感受性および応答性を増強させる能力があることが報告された。Byrne et al., supraを参照。

一般に、ｄｂ／ｄｂマウスがヒトＩＩ型糖尿病の満足のいくモデルであることは、一致する見解である。この糖尿病マウスは、深刻な肥満を生じるレプチン受容体の変異、ＩＩ型糖尿病の早期発症、高インシュリン血症、および顕著な末梢インシュリン抵抗性を特徴とする。最終的に、該動物は、β細胞の消耗および完全なインシュリン依存性を展開する。従って、ｄｂ／ｄｂマウスにおけるＩＩ型糖尿病からＩ型糖尿病への臨床的進行が、ヒトＩＩ型糖尿病との結びつきを担うと信じられている。Coleman, DL (1973) Diabetologia 9:294；およびLeiter, EH, et al. (1983) J.Nutr. 113:184を参照されたい。

糖尿病を理解し、そして立ち向かうための試みに関わらず、該疾患の治療法は依然として存在しない。報告された処置方法は、一般に、インシュリンを単独で、または経口用血糖降下薬を含む、１以上の薬剤と共に投与することを含む。S. N. Davis and D. Granner, supraを参照。
不運なことに、今までの糖尿病の予防方法および処置方法には、問題があった。

例えば、インシュリン治療は、いくつかの拒絶反応、例えば、低血糖、インシュリンアレルギーおよび抵抗性、およびインシュリン関連浮腫につながる。ある医療設定においては、該反応は命にかかわり得る。大抵、通常の抗糖尿病薬についての禁忌および副作用が多数存在する。

さらに、糖尿病の通常の処置方法は、典型的には、インシュリンが皮下に投与される、多用量の処方計画を含む。かかる方法に付随する不便さ、痛み、およびコストは相当なものであり得る。該高侵襲的かつ反復的治療による糖尿病の子供および高齢者の管理は、特に困難となり得る。

一般に、より少量の抗糖尿病製剤の投与を必要とする、糖尿病および関連疾患の予防方法または処置方法を有することが有用であろう。生理的相当量の内因性インシュリンをもたらし、これにより、糖尿病および関連疾患を予防または処置するために抗糖尿病製剤を投与する必要性を遅らせるのを助ける方法を有することが、特に有用であろう。

発明の要約
本発明は、一般に、哺乳類の糖尿病および関連疾患の予防方法または処置方法に関する。１つの態様において、方法は、治療上有効量のグルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−１）、またはＧＬＰ−１様効果を有する関連分子を投与すること、次に、該疾患を予防または処置するために当該量を大抵実質的に低減させることを含む。本発明の好ましい実施により、非常に望ましい「休薬日」が達成され、この期間中、哺乳類は、通常該薬物にさらに曝露されることなく、有用な量の内因性インシュリンを自分自身にもたらす。本発明は、投与されたＧＬＰ−１または関連分子が継続的に存在することなく、糖尿病と関連する症状を予防、処置、その発症を遅延、または低減させることを助けることを含む、様々な使用を有する。本発明は、糖尿病患者の経口糖尿病用化合物に対する応答不全の発症を予防するために用いられてもよい。

ＧＬＰ−１および関連分子（薬物）を新たな方法で投与することにより、糖尿病および関連疾患を予防または処置することが可能であることが、発見された。より具体的には、望ましい治療効果を達成するために、哺乳類を該薬物に継続的に曝露させる必要がないことが見出された。すなわち、該薬物の投与を、本明細書において「休薬日」として言及される期間にわたり、時に実質的に低減させることが可能であることが見出された。休薬日の間、哺乳類は、驚くべきことに、有用な量の内因性インシュリンを自分自身にもたらすことが可能である。内因性インシュリンの量は、一般的には、糖尿病および関連疾患の予防、処置、その発症の遅延、その症状の低減、またはその進行の遅延を助けるのに十分であると考えられている。ＧＬＰ−１または関連分子の投与はこの期間にわたり必要とされないが、該休薬日の後、薬物投与は再開され得る。

本発明の実施により、重要な利点が提供される。
例えば、休薬日は、哺乳類、特にヒト患者に、侵襲的、時に痛みを伴い、そして大抵反復的かつ高価な治療からの強く求められた解放をもたらし得る。潜在的には、大抵かかる治療と関連する重篤な副作用および関連する合併症が、本発明により、低減され、遅延され、またはある場合には除去され得る。具体的には、低血糖、アレルギーおよび抵抗性、および浮腫および関連するインシュリンの副作用を発症するリスクは、本発明に従い、少なくとも１回の休薬日を提供することにより、時に低減または回避され得る。

さらに、抗糖尿病薬（例えば、ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１関連分子、インシュリン）の反復かつ頻繁な投薬に付随するコストは、本明細書に記載の方法により、実質的に低減され得る。

特定の恩恵は、ＩＩ型糖尿病を含む、糖尿病または関連疾患を有するか、または有することが疑われているヒト患者に対して生じる。例えば、ＧＬＰ−１または関連分子は、定期的かつ内因性インシュリンレベルを少なくとも維持、そしてある場合には増加させるのに十分な時間、患者に投与され得る。該実施態様において、ＧＬＰ−１または関連分子のさらなる投与は、休薬日をもたらすために、時に実質的に減少され得る。理論と結びつけられることを望んではいないが、この期間中、患者は、彼自身／彼女自身に、治療上相当な量の内因性インシュリンをもたらすことができると考えられている。すなわち、もたらされた内因性インシュリンの量は、患者が望ましくない血糖変動をよりよく制御するのを助けることができる。従って、ＧＬＰ−１または関連分子への曝露を継続、または増加させる必要は、本発明を用いることにより、休薬日の間回避され得る。

糖尿症（関連疾患を含む）の予防方法または処置方法を提供することは、本発明のさらなる目的であり、ここで、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１様効果を有する関連分子の投与は、休薬日期間中低減される。１つの実施態様において、該薬物の投与は、休薬日期間中、完全に排除される。休薬日期間後、または時に期間中、ＧＬＰ−１または関連分子は、哺乳類に、以前に投与された量と実質的に同じであるか、または異なる量で投与される。該２回目の薬物投与の後、所望なら、また休薬日が続けられ得る。従って、少なくとも１回（すなわち、複数回）の休薬日をもたらすことが、本発明の特徴であり、ここで、それぞれの休薬日の後、好ましくは、ある量の少なくとも１種のＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１関連分子、またはインシュリンおよびその類似体の様な本明細書で開示される抗糖尿病薬と認可されたものの様な別の薬物の投与が続けられる。

従って、１つの実施態様において、本発明を用いて、哺乳類、例えば、ヒト患者に、第１の休薬日がもたらされ、その期間の後、ＧＬＰまたはＧＬＰ−１様効果を有する関連分子が、該患者に好ましくは治療上有効な量で投与される。本方法は、１回、２回、３回、またはそれ以上の回数の休薬日を特徴とする、治療計画をもたらすために、１回、２回、３回、または大抵必要な回数、繰り返され得る。本発明の方法は、必要なら、病状を予防または処置するために、例えば、１日毎、２、３日毎、２、３週間毎、２、３ヶ月毎、最大哺乳類の生涯、繰り返され得る。糖尿病を有すると分かっている、またはその影響を受けやすいと疑われているヒト患者（例えば、耐糖性（ＩＧＴ）を有する者、または有することが疑われている者）は、特に本発明の恩恵を受けると予測される。

従って、１つの態様において、本発明は、哺乳類、好ましくは、ヒト患者の糖尿病および／または関連疾患の予防方法または処置方法を特徴とする。１つの実施態様において、本発明は、哺乳類に、治療上有効量の少なくとも１種のＧＬＰ−１およびＧＬＰ−１様効果を有する関連分子を投与することを含み、ここで、例えば、投与量およびタイミングは、典型的には、該哺乳類に該分子が継続的に存在することなく、例えば、糖尿病または関連疾患を予防または処置するためのものである。さらに、本発明の方法は、ＧＬＰ−１または関連分子の投与を、ほぼ治療上有効な量より下に休薬期間中低減させることを含む。休薬日のさらなる特徴は以下に記載される。

休薬日の導入に先立ち、哺乳類に投与されるＧＬＰ−１または関連分子の量は、好ましくは、しかしもっぱら、治療上有効なものである。１つの実施態様において、理論と結びつけられることを望にではいないが、当該量は、哺乳類が内因性インシュリンレベルを維持するか、場合によっては、増大させる（休薬日前または期間中）のを助けるのに十分である。休薬日を開始するために、投与される薬物の量は、低減されるか、または完全に排除される。休薬日期間は、該休薬期間中、哺乳類が自分自身にある量の、好ましくは、治療上相当かつ有効な量の有用なインシュリンをもたらすことが可能な限り、任意の特定の内因性インシュリンレベル、またはインビボで該インシュリンをもたらすか、または産生する方法につながることはない。休薬日期間中のかかる内因性インシュリンの存在は、哺乳類の糖尿病および関連疾患を処置または予防するのに非常に有用であることが見出された。休薬日期間に続き、哺乳類は、少なくとも１種のＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１様効果を有する関連分子、および本明細書で言及されるものの様な認可された抗糖尿病薬のさらなる投与を含む、さらなる治療の対象とされ得る。
本発明の他の特徴は、以下に記載される。

図面の簡単な説明
図１は、ビークル（対照）および化合物１１００ｎｍｏｌ／ｋｇを投与した後の血漿インシュリンレベルを示すグラフである。

図２は、一晩（１７時間）絶食した後の血糖レベル（ｎＭ）を示すグラフである。

図３は、経口ブドウ糖負荷試験（ＯＴＴ）の結果を示すグラフである。結果は、１日当たりのＡＵＣ_{０〜２４０分}（ｍＭ×分）として表される。

図４は、ビークルまたは変動させた濃度の化合物１に曝露された群における、グリコシル化ヘモグロビン（ＨｂＡ_１ｃ）の量を示す。

図５は、ビークルまたは様々な投与ストラテジーの化合物１で処置した後の空腹時血糖を示すグラフである。

図６は、ビークルまたは様々な投与ストラテジーの化合物１で処置した後の経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）の結果を説明するグラフである。結果は、ｄＡＵＣ_{０〜２４０分}（ｍＭ×分）として表される。

図７は、ビークルまたは様々な投与ストラテジーの化合物１で処置した後の膵臓のインシュリンｍＲＮＡレベル（ｐｇ／μｇ全ＲＮＡ）を示すグラフである。

図８は、ビークルまたは様々な投与経路の化合物１に曝露された群のＨｂＡ_１ｃ（全ヘモグロビンに対する％）の量を示すグラフである。

好ましい実施態様の詳細な説明
記載の様に、本発明は、哺乳類の糖尿病の予防方法または処置方法を特徴とする。本発明の実施の恩恵を受けると予想される具体的な哺乳類は、糖尿病または関連する病状を有する、有していた、有することが疑われている、または一般にまたはその反対に発症しやすいものを含む。具体的な対象哺乳類は、チンパンジーの様な霊長類；マウスおよびラットの様なげっ歯類；飼いならされた動物、例えば、ウサギ、イヌ、ブタ、ネコ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウシ等を含む。より具体的な対象哺乳類は、以下に記載されるマウスモデルの様な糖尿病および関連疾患の容認された動物モデルを含む。本発明の使用に特に好ましい哺乳類は、糖尿病または耐糖能異常（ＩＧＴ）の様な関連疾患と診断されたヒト患者である。

また記載されるように、哺乳類の関連疾患を含む、糖尿病の処置方法または予防方法を提供することが、本発明の目的であり、ここで、方法は、該哺乳類に治療上有効量の少なくとも１種のＧＬＰ−１およびＧＬＰ−１効果を有する関連分子を投与することを含む。典型的には、投与量およびタイミングは、例えば、該分子を継続的に存在させることなく、哺乳類の糖尿病を予防または処置するためのものである。好ましくは、かかる方法は、ＧＬＰ−１または関連分子の投与を、持続的に休薬日を生じる時間、およそ治療上有効な量より下に低減させることをさらに含む。好ましい方法は、一般に、哺乳類の糖尿病または関連疾患を予防または処置するのに十分である。

用語「治療上相当量の内因性インシュリン」により、哺乳類の糖尿病または関連疾患の進行を少なくとも約１０％、好ましくは、少なくとも２５％、または少なくとも約５０％、少なくとも遅延させるのに少なくとも十分である、哺乳類によりもたらされるインシュリン量を意味する。かかる疾患の進行は、血流中のブドウ糖またはグリコシル化ヘモグロビン利用能の様な認可された臨床検査の１つまたは組合せにより、決定され得る。好ましい検査は、以下でより詳細に記載される。治療上相当であると当該技術分野で知られている内因性インシュリンの例示的な量が、以下に提供される。しかしながら、本発明は、任意の特定レベル、量、または産生量の内因性インシュリンとつながらないことは強調される。対象哺乳類が少なくともある量の内因性インシュリンを自分自身にもたらす能力は、例えば、本明細書に記載される検査により決定されるように、ブドウ糖利用能の改善で明らかにされ得る。

上記の方法の１つの実施態様において、典型的には休薬日の開始に先立ち、少なくとも１種のＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１様効果を有する関連分子の投与が、休薬日の間、治療上の量より少なくとも約５０％、好ましくは、治療上の量より少なくとも約９０％低減され、そしてより好ましくは、かかる投与は、休薬日の間止められる。

用語「ＧＬＰ−１関連分子」により、ＧＬＰ−１の誘導体、相同体、変異体、または類似体を意味し、これは、その医薬的に許容される塩および遊離酸を含む。好ましくは、ＧＬＰ−１関連分子は、ＧＬＰアゴニストである。より具体的なＧＬＰ−１およびＧＬＰ−１関連分子は、以下に提供される。内因性インシュリン産生に影響を与える活性フラグメントが含まれる限り、ＧＬＰ−１類似体、誘導体、変異体、前駆体、および相同体は全て、本発明の実施に適している。「ＧＬＰ−１」により、ＧＬＰ−１（７〜３７）を意味する。慣習により、ＧＬＰ−１（７〜３７）のアミノ末端は数字７を、そしてカルボキシ末端は、数字３７を割り当てられている。

ＧＬＰ−１（７〜３７）のアミノ酸配列はよく知られており、そして次の配列：ＮＨ_２−Ｈｉｓ^７−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ^１０−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ^１５−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ^２０−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ^２５−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ^３０−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ^３７−ＣＯＯＨ（配列番号：）を有する。

「ＧＬＰ−１類似体」は、ＧＬＰ−１と比較した場合、１個以上のアミノ酸置換、欠損、挿入、または付加を含む修飾を有する分子として定義されている。ＧＬＰ−１類似体は、例えば、ＧＬＰ−１（７〜３４）およびＧＬＰ−１（７〜３５）、ＧＬＰ−１（７〜３６）、Ｖａｌ^８−ＧＬＰ−１（７〜３７）、Ｇｌｎ^９−ＧＬＰ−１（７〜３７）、Ｄ−Ｇｌｎ^９−ＧＬＰ−１（７〜３７）、Ｔｈｒ^１６−Ｌｙｓ^１８−ＧＬＰ−１（７〜３７）、およびＬｙｓ^１８−ＧＬＰ−１（７〜３７）を含む。好ましいＧＬＰ−１類似体は、米国特許番号５，１１８，６６６に記載されている、ＧＬＰ−１（７〜３４）およびＧＬＰ−１（７〜３５）、およびＧＬＰ−１（７〜３６）である。該化合物は、インシュリン分泌特性を有するＧＬＰ−１の生物学的に処理された形である。他のＧＬＰ−１類似体は、米国特許出願番号５，５４５，６１８に開示されている。

用語「ＧＬＰ−１誘導体」により、ＧＬＰ−１またはＧＬｐ−１類似体のアミノ酸配列を有し、かつ１またはそれ以上のそのアミノ酸側鎖基、α炭素原子、末端アミノ基、または末端カルボン酸基の少なくとも１個の化学修飾をさらに有する分子を意味する。化学修飾は、化学的部分の付加、新規結合の形成、および化学的部分の除去を含む。アミノ酸側鎖基での修飾は、リジンε−アミノ基のアシル化、アルギニン、ヒスチジン、またはリジンのＮ−アルキル化、グルタミン酸、アスパラギン酸、またはカルボン酸基のアルキル化、およびグルタミンまたはアスパラギンの脱アミドを含む。末端アミノの修飾は、デスアミノ、Ｎ−低級アルキル、Ｎ−ジ−低級アルキル、およびＮ−アシル修飾を含む。末端カルボキシ基の修飾は、アミド、低級アルキルアミド、ジアルキルアミド、および低級アルキルエステル修飾を含む。低級アルキルは、Ｃ_１−Ｃ_４アルキルである。さらに、１以上の側鎖基または末端基は、通常の技術者であるタンパク質についての科学者に既知の保護基により保護されていてもよい。アミノ酸のα炭素は、モノ−メチル化またはジ−メチル化されていてもよい。

記載のように、本発明は、広範囲のＧＬＰ−１類似体および誘導体の使用に適合する。さらに、例としては、活性ＧＬＰ−１ペプチドを含み、７〜３４、７〜３５、７〜３６、および７〜３７は、位置７〜１０のアミノ酸置換を有し、および／またはＣ末端で切断され、および／または塩基性ペプチドにおいて様々な他のアミノ酸置換を含有する。位置７および８でのＤ−アミノ酸置換、および／または位置７でのＮ−アルキル化またはＮ−アシル化アミノ酸を有する類似体は、特に、インビボでの分解に抵抗性である。

米国特許番号６，３５８，９２４；６，３４４，１８０；６，２８４；７２５；６，２７７，８１９；６，２７１，２４１；６，２６８，３４３；６，１９１，１０２；６，０５１，６８９；６，００６，７５３；５，８４６，９３７；５，６７０，３６０；５，６１４，４９２；５，８４６，９３７；５，５４５，６１８；６，４１０，５０８；６，３８８，０５３；６，３８４，０１６；６，３２９，３３６；６，１１０，７０３；５，８４６，７４７；５，６７０，３６０；および５，６３１，２２４（さらなるＧＬＰ−１および関連分子を開示している）も参照されたい。この記載は、引用により取り込まれる。

言及されるように、対象哺乳類に、少なくとも１回の休薬日、例えば、１回、２回、３回、またはそれ以上のかかる休薬日をもたらすことは、本発明の目的である。任意の特定の休薬日と関連する時間の長さは、対象の健康状態、性別、処置されるべき疾患、体重等の様な認定パラメーターに依存して変動することが、考慮されるだろう。

好ましい休薬日は、第１のエンドポイント（開始）と第２のエンドポイント（終了）間の時間間隔として定義される。典型的には、第１のエンドポイントには、ＧＬＰ−１または関連分子の投与の低減が続く。第２のエンドポイントは、標準的方法の１つまたは組合せにより、容易に同定され得る。例えば、かかるエンドポイントは、例えば、第２のエンドポイント前の時間と比較した場合の少なくとも約５％または１０％のＦＢＧの増加により示されるように、対象が絶食時血糖（ＦＢＧ）を制御できないことを特徴とし得る。第２のエンドポイントは、第２のエンドポイント前の間隔と比較した場合も、少なくとも約５％または１０％のグリコシル化ヘモグロビンの望ましくない増加により、さらに同定され得る。ＦＢＧおよびグリコシル化ヘモグロビンの測定方法は知られており、それぞれ標準的ＦＢＧ検査または標準的グリコシル化ヘモグロビン検査として本明細書で言及されるものを含む。好ましい休薬日期間中、ＦＢＧおよびグリコシル化ヘモグロビンは、有意に増加しない。

記載のように、特定の休薬日と関連する時間の長さは、対象の健康状態、性別、処置されるべき疾患、体重、既往歴等を含む、認定因子に依存して変動するであろう。しかしながら、本発明の１つの実施態様において、休薬日は、約１日から最大約２５週間、例えば、約３から４週間にわたる。しかしながら、上記のように、休薬日期間の終わりまたは終わり近くで、標準的ＦＢＧアッセイは、少なくとも約５％または１０％のＦＢＧの増加を示すであろう。

本発明に従い投与されるＧＬＰ−１または関連分子は、米国特許番号６，３５８，９２４；６，３４４，１８０；６，２８４，７２５；６，２７７，８１９；６，２７１，２４１；６，２６８，３４３；６，１９１，１０２；６，０５１，６８９；６，００６，７５３；５，８４６，９３７；５，６７０，３６０；５，６１４，４９２；５，８４６，９３７；５，５４５，６１８；６，４１０，５０８；６，３８８，０５３；６，３８４，０１６；６，３２９，３３６；６，１１０，７０３；５，８４６，７４７；５，６７０，３６０；および５，６３１，２２４に記載されるものの様な持続性製剤を含む、ほぼ任意の許容される手段で与えられ得る。または、あるいはさらに、かかる薬物は、哺乳類に、少なくともほぼ１日１回、少なくとも１週間に１回、ボーラス投与され得る。他の投与手段はまた、約１から約２０週間の間、およそ１日２回（静脈注射または皮下注射）を含むことが想定されている。

記載のように、糖尿病または関連疾患を予防または処置するために、少なくとも１回の休薬日、例えば、１回、２回、または３回のそれを提供することは、本発明の目的である。本方法を実施するために必要とされる休薬日の正確な回数は、対象の健康状態、性別、処置されるべき疾患等の様な認定パラメーターに依存するであろう。１つの実施態様において、本発明は、哺乳類に、（第１の）休薬日に続き第２の治療上有効量のＧＬＰ−１または関連分子を投与することをさらに含む。所望なら、方法はまた、第２の治療上有効量のＧＬＰ−１または関連分子の投与を、第２の休薬日を持続的に生じる時間、低減させることを含み得る。かかる投与、そして低減段階は、少なくとも１回、例えば、少なくとも約２回から約２５回、あるいは糖尿病または関連疾患を予防または処置するのに必要とされるだけ、繰り返される。例えば、本発明は、哺乳類の生涯、実施され得る。

また記載のように、本発明はまた、哺乳類において治療上有効量の内因性インシュリンをもたらすために、哺乳類に治療上有効量の少なくとも１種のグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）またはＧＬＰ−１関連分子を投与することを含む、方法を特徴とする。哺乳類の内因性インシュリン産生を少なくとも維持し、そして好ましくは増加させるのを助けることにより、通常の抗糖尿病治療の休止期間（休薬日）を提供することは本発明の目的である。本発明のゴールは、かかる治療の再開を休薬期間中遅延させることである。

ヒトの糖尿病の一般的な特徴決定方法、診断方法、および処置方法は、S. N. Davis and D. Granner, supra；ならびにそこで引用された参考文献により、開示されている。

本発明の方法の１つの実施態様において、内因性インシュリン産生は、哺乳類において、約１日から約２５週間、少なくともほぼ維持される。別の実施態様において、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１関連分子の投与は、哺乳類のインシュリン産生を対照と比較して少なくとも約１０％増加させるのに十分である。好ましくは、内因性インシュリン産生の増加は、対照と比較して、少なくとも約２０％、より好ましくは、少なくとも約５０％の増加である。好ましい対照は、糖尿病の無処置哺乳類である。

本明細書における対照哺乳類への言及は、典型的には、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１関連分子で処置されていないことを意味する。適当な対照は、具体的な本発明の使用に適していることが必要とされる、糖尿病または非糖尿病の哺乳類である。本発明のある適用について、例えば、内因性インシュリン産生レベルが既に知られている場合、対照の使用は必要とされない。

インシュリンレベルおよびインシュリンｍＲＮＡ（タンパク質および核酸レベル）の検出方法および測定方法は、日常的なものである。総論として、S. N. Davis and D. Granner, supra；ならびにそこで引用される参考文献を参照されたい。従って、本発明の１つの例において、方法は、内因性インシュリン産生および血糖レベルのうち少なくとも１つをモニタリングすることをさらに含む。かかるモニタリングは、例えば、哺乳類においてインシュリンｍＲＮＡを検出することを含み得る。この実施態様において、哺乳類は、インシュリン産生組織、通常、膵臓の生検検体の採取および分析を可能とする非ヒト哺乳類であるだろう。ヒト患者において、確立されたプロトコールに従い、血中インシュリン産生のより低い侵襲的モニタリングは、本発明のある適用の助けとなるだろう。生物学的試料由来のインシュリンｍＲＮＡを少なくとも検出する方法は知られており、そしてこれは、核酸ハイブリダイゼーション、ＰＣＲ、および関連する増幅技術を含む。従って、本発明の１つの例において、方法は、インシュリンｍＲＮＡを定量すること、そして哺乳類により産生された量を対照と比較することをさらに含む。許容される血漿インシュリン検査は、以下に記載される。

インシュリンの治療上相当なレベルは、広範な様々な哺乳類について知られている。ヒトの患者について、内因性インシュリンは、血中をモノマーとして約２から約４ｎｇ／ｍｌの間の濃度で、門脈および末梢循環中を約０．５ｎｇ／ｍｌまたは約０．１ｎＭで循環することが報告されている。食事の摂取後、門脈中の内因性インシュリンの濃度が上昇し、次に、末梢血中で若干上昇すると考えられている。S. N. Davis and D. Granner, supraを参照。

記載のように、本発明は、治療上重要であると報告された、インシュリンの上記レベルを達成することとつながらない。むしろ一般的には、当該技術分野において、内因性にもたらされた任意の量のインシュリンは、最も医療的な設定において相当するものであることは理解されている。すなわち、一般的には、対象の哺乳類は、正常レベルまたは正常に近いレベルを達成するか否かにかかわらず、ある量の内因性インシュリンをもたらす能力を有することが、好ましい。本発明によりもたらされる、ある内因性インシュリンの存在でさえ、疾患の進行を少なくとも遅延させ、そしてある場合にはそれをより臨床的に管理し易いようにするのを助けるだろう。

本発明に従い投与される「治療上有効」量のＧＬＰ−１または関連分子は、門脈および末梢血循環中のインシュリン（例えば、ヒトインシュリン）の正常モノマー濃度の少なくとも約０．０１％、好ましくは、少なくともその約０．５％、より好ましくは、少なくとも約５％、そしてなおより好ましくは、そのレベルの少なくとも約１０％回復することを意味する。さらに、ＧＬＰ−１または関連分子の好ましい投薬量は、対象哺乳類におけるインシュリン産生の内因性レベルに、例えば、少なくともその約５０％から最大１００％または２００％、さらに近づくだろう。かかる量のより具体的な例は、１以上の次の特許：６，３５８，９２４；６，３４４，１８０；６，２８４，７２５；６，２７７，８１９；６，２７１，２４１；６，２６８，３４３；６，１９１，１０２；６，０５１，６８９；６，００６，７５３；５，８４６，９３７；５，６７０，３６０；５，６１４，４９２；５，８４６，９３７；５，５４５，６１８；６，４１０，５０８；６，３８８，０５３；６，３８４，０１６；６，３２９，３３６；６，１１０，７０３；５，８４６，７４７；５，６７０，３６０；および５，６３１，２２４で見出され得る。

多くの実施態様において、ＧＬＰ−１または関連分子は、哺乳類に、少なくとも約０．０１ｎｍｏｌ／ｋｇ（体重）の用量で投与され得る。

従って、休薬日の例は、本発明の１つの実施態様において、正常（非糖尿病）対象の門脈および末梢血循環中のインシュリンレベルの少なくとも約５０％、好ましくは、少なくとも約８０％、より好ましくは、その約１００％を達成する。

多くの対象哺乳類のインシュリン産生のベースラインレベルは、当該技術分野の技術者により、確定され得ることは理解されるだろう。典型的には、大抵の健常ヒト対象の正常インシュリンレベルが知られており、特定の個人の年齢、性別、食事、および健康状態により変動すると理解されている。糖尿病を有するか、または有すると疑われている対象についての該ベースラインは変化し得るが、標準的方法を用いて確かめられ得る。

方法の１つの実施態様において、哺乳類により産生されたインシュリンの量は、標準的血漿インシュリン検査により測定されるように、対照より少なくとも約１０％高く、好ましくは、少なくとも約２０％高く、なおより好ましくは、少なくとも約５０％高い。好ましい対照は、無処置の糖尿病の哺乳類である。血漿インシュリンの通常の検出方法は、以下に開示される。S. N. Davis and D. Granner, supraも参照されたい。

別の実施態様において、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１関連分子の投与は、少なくとも約２４時間、少なくともおよそ１日１回である。好ましくは、投与は、約１から２０週間、およそ１日２回である。哺乳類に投与されるＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１関連ペプチドの具体的な量は、意図される使用と共に変動し、一般的には、少なくとも約０．０１ｎｍｏｌ／ｋｇ（体重）、好ましくは、少なくとも約０．１ｎｍｏｌ／ｋｇ（体重）、より好ましくは、１、２、５、または１０ｎｍｏｌ／ｋｇ（体重）である。使用するためのＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１関連分子のより具体的な量は、対象の一般的な健康状態、糖尿病の種類、性別、既往歴等を含む、認定パラメーターにより導かれるだろう。

本発明の使用はまた、エキセンディン４、エキセンディン３、ならびにその分子の医薬的に許容される塩を含む、その類似体および誘導体の使用に完全に適合する。かかる分子のより具体的な例は、米国特許番号５，４２４，２８６；ＷＯ９８／０５３５１；ＷＯ９８／３０２３１；ＷＯ９９／０７４０４；ＷＯ９９／２５７２７；ＷＯ９９／２５７２８；ＷＯ９９／４６２８３；ＰＣＴ／ＤＫ００／００３９３；および公開されたＥＰ特許出願番号９９６１００４３．４（これらの記載は引用により取り込まれる）において報告されている。

ＰＣＴ／ＤＫ００／００３９３において開示されるように、例えば、具体的なＧＬＰ−１類似体は、
（ａ）エキセンディン４と少なくとも９０％の相同性を有するエキセンディン；
（ｂ）位置３４〜３９の１から５個の欠損からなる群から選択される修飾を含み、かつ親油性置換基を有する位置４０のＬｙｓを含有する、該エキセンディンの変異体；または
（ｃ）（ｉ）位置８のアラニンについてのＤ−アラニン、グリシン、またはα−アミノイソ酪酸の置換からなる群から選択される少なくとも１個の修飾、かつ
（ｉｉ）親油性置換基
を有するＧＬＰ−１（７〜３６）またはＧＬＰ−１（７〜３７）；
からなる群から選択されるペプチドＸ、
および該変異体と共有結合している４〜２０個のアミノ酸単位のペプチド配列であるＺ、ここで、該ペプチド配列のそれぞれのアミノ酸単位であるＺは、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｏｒｎ、および一般式Ｉ

（式中、Ｒ^１およびＲ^２は、水素、Ｃ_１−６−アルキル、フェニル、およびフェニル−メチルであり、ここで、Ｃ_１−６−アルキルは、必要に応じて、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、スルホノ、およびカルボキシから選択される１から３個の置換基により置換されており、そしてフェニルおよびフェニル−メチルは、必要に応じて、Ｃ_１−６−アルキル、Ｃ_２−６−アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、スルホノ、およびカルボキシから選択される１から３個の置換基により置換されているか、あるいは、Ｒ^１およびＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一体となって、シクロペンチル、シクロヘキシル、またはシクロヘプチル環、例えば、２，４−ジアミノブタン酸および２，３−ジアミノプロパン酸を形成している）のアミノ酸単位からなる群から選択される；
および医薬的に許容される塩、または該ペプチドのＣ末端アミド結合体を含む。

ＧＬＰ−１およびその類似体を含む、ＧＬＰ−１関連分子のより具体的な例は、例えば、ＰＣＴ／ＤＫ００／００３９３出願に開示されている。かかる分子は、次の具体的な化合物：
デスＳｅｒ^３９−エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２（配列番号：＿＿）、
デスＰｒｏ^３６−エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２（配列番号：＿＿）、
デスＡｌａ^３５−エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２（配列番号：＿＿）、
デスＧｌｙ^３４−エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２（配列番号：＿＿）、
デスＳｅｒ^３９−（Ｌｙｓ^４０（パルミトイル））エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_７−ＮＨ_２（配列番号：＿＿）、
デスＧｌｙ^３４−（Ｌｙｓ^４０（パルミトイル））エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_７−ＮＨ_２（配列番号：＿＿）、
デスＡｌａ^３５−（Ｌｙｓ^４０（パルミトイル））エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_７−ＮＨ_２（配列番号：＿＿）、
デスＰｒｏ^３６−（Ｌｙｓ^４０（パルミトイル））エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_７−ＮＨ_２（配列番号：＿＿）、
Ｌｙｓ^４０（パルミトイル）エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_７−ＮＨ_２（配列番号：＿＿）、
デスＰｒｏ^３６，Ｐｒｏ^３７−エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２、
Ｌｙｓ_６−デスＰｒｏ^３６，Ｐｒｏ^３７，Ｐｒｏ^３８−エキセンディン４（１〜３９）−ＮＨ_２、
Ａｓｎ（Ｇｌｕ）_５−デスＰｒｏ^３６，Ｐｒｏ^３７，Ｐｒｏ^３８−エキセンディン４（１〜３９）−ＮＨ_２、
Ｌｙｓ_６−デスＰｒｏ^３６，Ｐｒｏ^３７，Ｐｒｏ^３８−エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２、
Ａｓｎ（Ｇｌｕ）_５−デスＰｒｏ³⁶，Ｐｒｏ^３７，Ｐｒｏ^３８−エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２、
デスＰｒｏ^３６，Ｐｒｏ^３７，Ｐｒｏ^３８−エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２、
Ｇｌｙ^８−ＧＬＰ−１（７〜３６）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２（配列番号：＿＿）、
Ｌｙｓ_６−Ｇｌｙ^８−ＧＬＰ−１（７〜３６）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２、
Ｌｙｓ_６−Ｇｌｙ^８−ＧＬＰ−１（７〜３６）−ＮＨ_２、
（Ｇｌｙ^８，Ｌｙｓ^３７（パルミトイル）−ＧＬＰ−１（７〜３６）（ヒト）−Ｌｙｓ_７−ＮＨ_２（配列番号：＿＿）、
（Ｇｌｙ^８，Ｌｙｓ^２６（パルミトイル）−ＧＬＰ−１（７〜３６）（ヒト）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２、
Ｇｌｙ^８，Ｌｙｓ^３４（パルミトイル）−ＧＬＰ−１（７〜３６）（ヒト）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２、
Ｇｌｙ^８−ＧＬＰ−１（７〜３６）−Ｌｙｓ_８−ＮＨ_２、
Ｇｌｙ^８−ＧＬＰ−１（７〜３６）−Ｌｙｓ_１０−ＮＨ_２、
Ｇｌｙ^８−ＧＬＰ−１（７〜３７）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２；およびその遊離酸または医薬的に許容される塩を含む。

本発明において使用するための活性化合物の別の好ましい群は、ＷＯ９１／１１４５７で開示されており、ＧＬＰ−１（７〜３４）、ＧＬＰ−１（７〜３５）、ＧＬＰ−１（７〜３６）、またはＧＬＰ−１（７〜３７）、またはそのアミド形、および以下で示されるもの：
（ａ）位置２６および／または位置３４のリジンについてのグリシン、セリン、システイン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、アルギニン、またはＤ−リジンの置換；または位置３６のアルギニンについてのグリシン、セリン、システイン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、リジン、またはＤ−アルギニンの置換；
（ｂ）位置３１のトリプトファンについての酸化抵抗性アミノ酸の置換；
（ｃ）位置１６のバリンについてのチロシン；位置１８のセリンについてのリジン；位置２１のグルタミン酸についてのアスパラギン酸；位置２２のグリシンについてのセリン；位置２３のグルタミンについてのアルギン；位置２４のアラニンについてのアルギニン；および位置２６のリジンについてのグルタミンのうち少なくとも１つの置換；および
（ｄ）位置８のアラニンについてのグリシン、セリン、またはシステイン；位置９のグルタミン酸についてのアスパラギン酸、グリシン、セリン、システイン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、またはフェニルアラニン；位置１０のグリシンについてのセリン、システイン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、またはフェニルアラニン；および位置１５のアスパラギン酸のグルタミン酸のうち少なくとも１つの置換；および
（ｅ）位置７のヒスチジンについてのグリシン、セリン、システイン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、またはフェニルアラニンの置換、またはヒスチジンのＤ−またはＮ−アシル化またはアルキル化；
（ここで、置換は、（ａ）、（ｂ）、（ｄ）および（ｅ）であり、置換されたアミノ酸は、必要に応じて、Ｄ形であり得、かつ位置７の置換されたアミノ酸は、必要に応じて、Ｎ−アシル化またはＮ−アルキル化形であり得る）を含む少なくとも１つの修飾を有する、その医薬的に許容される塩を含む。

関連する開示については、米国特許番号５，５１２，５４９；５，１２０，７１２；５，１１８，６６６；５，１２０，７１２および５，５２３，５４９も参照されたい。

記載のように、本発明は、糖尿病の重要な予防方法または処置方法を提供する。好ましい実施は、休薬日をサポートするのに十分な哺乳類における内因性インシュリン産生を少なくとも維持するか、または休薬日をサポートするのに十分なグリコシル化ヘモグロビンのレベルを維持することを含む。この期間中、抗糖尿病製剤の投与は、有意に低減され、そして時に完全に回避され得る。本発明の１つの実施態様において、方法は、少なくとも１種の抗糖尿病薬を哺乳類に投与することをさらに含む。好ましくは、該投与は、およそ、哺乳類において少なくとも１種の薬物について認定された治療上有効な量より少ないだろう。すなわち、哺乳類に与えられる抗糖尿病薬の少なくとも１種、そして好ましくは、全ての量が、およそ有用な用量と認められているものより少ないだあろう。しかしながら、他の実施態様において、例えば、糖尿病を管理することが難しいかまたは困難であるとされた場合、哺乳類における少なくとも１種の薬物の少なくともおよそ治療上有効量で投与することを助けるだろう。抗糖尿病薬の投与は、この期間前、中、または後であり得、内因性インシュリンレベルは、哺乳類において少なくとも維持される。

別の実施態様において、方法は、少なくとも１種の抗糖尿病薬の哺乳類への投与を中止する（完全または一時的のいずれか）ことをさらに含む。投与の中止は、およそこの期間の前、中、または後であり得、内因性インシュリン産生は、哺乳類において少なくとも維持される。好ましくは、方法は、哺乳類の糖尿病と関連する症状の予防、処置、その発症の遅延、または少なくとも緩和に十分であり、ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１関連分子、または抗糖尿病薬の投与の後、ある時間中止される。

言及されるように、本発明の実施により、対象哺乳類の糖尿病の症状を適当に予防、処置、遅延、その発症を遅延、または少なくとも緩和し得る。１つの実施態様において、かかる恩恵は、哺乳類において、約１日から約２５週間達成され得る。もちろん、休薬期間の長さは、対象哺乳類、投与されるＧＬＰ−１および／またはＧＬＰ−１関連分子の量、および所望なら、処置されるべき糖尿病の型を含む、認定パラメーターに依存するだろう。例として、ＧＬＰ−１または関連分子の投与は、通常、休薬日期間後（しかし、時に期間前または期間中）例えば、１またはそれ以上の回数、必要に応じて繰り返され得る。従って、具体的な例において、ＧＬＰ−１または関連分子の投与は、該期間後に１回またはそれ以上繰り返され、内因性インシュリン産生が、哺乳類において少なくとも維持される。

本明細書において記載される本発明の方法の実施は、認可された抗糖尿病薬の１種または組合せ（しばしば、「カクテル」方法として言及されるものを含む）の使用に完全に適合する。かかる薬物の投与は、休薬日の前、期間中、または後であり得るが、大抵の実施態様において、該薬物は特定の休薬日の前または後に与えられる。抗糖尿病薬の使用は、本発明を実施するのに必要とされないが、特定の対象の疾患を管理するために、かかる処置をＧＬＰ−１および／またはＧＬＰ−１様効果を有する関連分子の使用と組み合わせて含むことを時に助けるだろう。

例えば、方法の１つの実施態様において、少なくとも１種の抗糖尿病薬は、インシュリン、インシュリン類似体；またはその医薬的に許容される混合物である。好ましいヒトインシュリンは、例えば、ＨＵＭＵＬＩＮ［商標］およびＮＯＶＵＬＩＮ［商標］として市販されている。さらに、インシュリンは、ウシインシュリン、ブタインシュリン、またはインシュリン混合物を含む。時に、インシュリン類似体の使用が示されるであろう。かかる実施態様において、選択するインシュリン類似体は、Ｌｙｓ（Ｂ２８）、Ｐｒｏ（Ｂ２９）ヒトインシュリンである。

本発明は、S. N. Davis and D. Granner, supraにより開示されるものの様な広範囲の抗糖尿病薬の使用にさらに適合する。

１つの実施態様において、抗糖尿病薬は、スルホニル尿素、ビグアニド、チアゾリジンジオ、ジアゾキシド、ソマトスタチン、またはアカルボースの様なα−グルコシダーゼ阻害剤である。本発明による好ましいスルホニル尿素は、トルブタミド、クロルプロパミド、トラザミド、アセトヘキサミド、グリブリド、グリピジド、およびグリクラジドからなる群から選択され得る。具体的な対象のビグアニドは、メトホルミンおよびフェンホルミンである。適当なチアゾリジンジオは、シグリタゾンおよびピオグリダゾンである。

本発明を用いて、広範囲の対象哺乳類の糖尿病が予防または処置され得る。糖尿病を有する、有していた、有することが疑われているか、またはかかっていると事前に診断されたヒト患者での使用が、しばしば好ましいであろう。典型的な糖尿病は、真性糖尿病または関連疾患である。好ましい種類の真性糖尿病は、インシュリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭまたはI型糖尿病）およびインシュリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭまたはＩＩ型糖尿病）からなる群から選択される。真性糖尿病と関連する疾患の例は、S. N. Davis and D. Granner, supraに記載されており、耐糖能異常（ＩＧＴ）；若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）；妖精症（インシュリン受容体変異）、熱帯性糖尿病、膵疾患または手術の二次性糖尿病；遺伝的症候群と関連する糖尿病（例えば、プラダーウィリ症候群）；膵炎；および内分泌疾患の二次性糖尿病；肥満症；および代謝症候群（Ｘ症候群）を含むが、これらに制限されない。

本発明は、以下および実施例において考察される特定の知見と関連する。より具体的には、ｄｂ／ｄｂマウスに、特定のＧＬＰ−１アゴニストである化合物１を毎日投与する、２つの長期間の研究を行った。第１の研究を、１日２回、２４日間、腹腔内投与した後の化合物１の用量依存性抗糖尿病効果を検討するために始めた。第２の研究は、通常の１用量の交差研究であり、ここで、動物を化合物１またはビークルを投与する２つの群に分けた。５０日後、ビークルで処置した動物の半数を、化合物１での処置に切り換え、そして化合物１で処置した動物の半数を、ビークルでの処置に切り換えた。両研究において、ＩＩ型糖尿病の進行は、飲料水および食物の消費、体重、空腹時血糖、および耐糖能を測定することで評価した。血糖レベルの長期間の制御に対する化合物１での処置の効果をモニターするために、ＨｂＡ_１Ｃの量を研究の終わりに測定した。さらに、化合物１が、β細胞機能に対する直接的保護効果を仲介するか否かを解決するために、インシュリンｍＲＮＡの発現を、β細胞機能のマーカーとしてＲＴ−ＰＣＲにより測定した。

以下に示すように、新規ＧＬＰ−１アゴニストでの動物の処置は、対照（積極的処置なし）と比較して、インシュリンｍＲＮＡを改善する。該改善は、化合物の持続期間である、長期間見られる。アゴニストでの処置を中止すると、比較的高いインシュリンｍＲＮＡレベルは、長期間高いままである。本発明によりもたらされるインシュリンメッセージのこの継続的後押しが、休薬日をもたらす。

ＧＬＰ−１でのＩＩ型糖尿病の特定の処置は、インシュリンｍＲＮＡを改善するであろう。該改善は、いくつかの利点を有し、長時間、すなわち、何日間、何週間、またはある設定では何ヶ月も続くだろう。このことは、ヒト対象が、投与間隔を化合物の半減期を超えて増大させることを可能とするだろう。血漿半減期と比較して、投与間隔の持続時間を、例えば、ＧＬＰ−１アゴニストの投与を中止する前、および後の標準的ブドウ糖摂取後の血漿インシュリンおよび血漿ブドウ糖応答性を測定することで、評価し得る。所望なら、グリコシル化ヘモグロビンもモニターし得る。

ＧＬＰ−１およびその誘導体およびアゴニストを含む、ＧＬＰ−１関連分子は、かかる処置の必要な哺乳類に、１またはそれ以上の許容される手段で投与され得る。

例えば、ＩＩ型糖尿病患者において、化合物１は、皮下に投与され得る。認可された持続性製剤、または単一投与について許容される水溶性製剤の使用を含む、広範囲の製剤のストラテジーが許容される。

具体的なＧＬＰ−１または関連分子の使用をより理解するために、ヒト患者の様な対象哺乳類が、４つの群に分けられ得る。研究設計は、好ましくは、約８ヶ月間継続する二重盲検比較試験である。３つの群は、１ヶ月、３ヶ月、または６ヶ月間投与され、その後投与が中止される。４番目の群は、検査されるべき分子の代わりにプラセボにより処置される。空腹時血糖、制御された経口ブドウ糖摂取後の血糖応答は、ＧＬＰ−１または関連分子の投与の中止後、数日および数週間、全群で平行して追跡される。所望なら、グリコシル化ヘモグロビンが同様に追跡され得る。パラメーターは、分子の投与が中止される前日に測定された同一パラメーター、他の積極的処置群のパラメーター、およびプラセボ処置群で得られたパラメーターと比較され得る。化合物１の様な好ましい化合物は、空腹時血糖および経口摂取後の血糖応答に対して、血中由来の化合物が無くなった後少なくとも数日間、好ましくは、数週間作用する。

検査されるべき分子の血漿レベルは、ＲＩＡ、ウエスタンブロッティングおよび／またはＥＬＩＳＡの様な通常の免疫学的方法を用いて測定され得る。
血糖およびＨｂＡ_１ｃは、標準的生物学的分析方法により、測定され得る。

典型的には、本発明をふまえた好ましい投与ストラテジーは、ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−１アゴニストの様な関連分子（例えば、化合物１）が、投与される製剤の種類の様な認定されたパラメーターに依存して、１０回全て、またはいっそう長い生物学的半減期で１回だけ投与されるものである。

ＩＩ型糖尿病および関連疾患の進行は、適当な方法の１つ、または組合せによりモニターされ得る。

例えば、ＩＩ型の患者は、少なくとも１種のＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストの様な関連分子、具体的には化合物１で処置される。かかる処置は、典型的には、個人に合わせられた最大限耐容可能な用量の化合物を単独で、または少なくとも１種の認可された抗糖尿病製剤と組み合わせて含む。かかる製剤の例は、本明細書において開示され、そしてグリタゾン、メトホルミン、グルコファージの様な経口用抗糖尿病薬を含む。典型的には、化合物検査の代わりにプラセボで処置された処置対応患者群と比較することが有用である。

糖尿病を検出し、評価する診断検査は知られている。かかる検査は、典型的には、振動感受性による末梢神経障害の評価、検眼鏡検査により評価された網膜症、例えば、ＥＣＧにより評価された心筋虚血、タンパク量および糸球体濾過量の測定値より評価された腎不全を含み、これは、少なくとも２、３日間、好ましくは、２、３週間から１から３年またはそれ以上の観察期間、追跡され得る。対象化合物（例えば、化合物１）が、無処置患者と比較して二次性糖尿病合併症の発症の有意な遅延を示すと、研究は中止される。

ほぼ任意の適当な統計学的分析が用いられ得る。例えば、かかる分析は、様々な症状の進行が存在しないことを分析する（「生存分析」）ことにより、成され得る。適当には、少なくとも１つの末梢神経障害、網膜症、心筋虚血、タンパク質の腎損失、および腎不全の進行は、少なくとも１種のＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストの様なＧＬＰ−１関連分子（例えば、化合物１）を投与された患者において、有意に遅延される。より具体的には、化合物１単独、またはＧＬＰ−１または既に記載の関連分子と組合せた処置は、ＩＩ型糖尿病の合併症が進行する時間を有意に低減するであろう。

従って、本発明は、患者に血糖制御治療をもたらす非常に有用な方法を提供する。１つの実施態様において、方法は、次の段階；（ａ）処置の必要な患者に、少なくとも１用量の少なくとも１種のＧＬＰ−１アゴニストを、治療上相当な血漿濃度の内因性に生じたインシュリンをもたらすのに十分な量で投与すること、（ｂ）ＧＬＰ−１アゴニストの投与を、一時的に１日から約２５週間、低減するかまたは排除すること、そして（ｃ）必要に応じて、段階（ａ）および（ｂ）を患者にインシュリンをもたらす（休薬日）ために、十分に繰り返すこと、の少なくとも１つ、そして好ましくは、全てを含む。かかる方法は、所望なら、本明細書に記載のほぼ任意の標準的抗糖尿病ストラテジーと組み合わされ得る。

以下の実施例は、化合物１を用いた際の結果に焦点を置く。該化合物は、インシュリン放出を増加し、そして耐糖能を改善する、新規の合理的に設計したペプチドＧＬＰ−１受容体アゴニストであると考えられている。化合物１を、次のＩＩ型糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスでの２つの独立した長期研究で特徴決定した。研究Ｉ：用量反応性研究化合物１を、１日２回、６週間、用量０、１、１０、または１００ｎｍｏｌ／ｋｇで投与した（ｎ＝１０／群）。研究ＩＩ：β細胞保護に対する化合物１の効果４群の動物（ｎ＝１５／群）を、交差設計（５０＋４０日；群：Ｖ＋Ｖ、Ｖ＋化合物１、化合物１＋Ｖ、化合物１＋化合物１）のビークル（Ｖ）または化合物１（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ；腹腔内；１日１回）で処置した。

これらの研究の結果を以下で考察する。簡単に言うと、化合物１は、空腹時血糖（ＦＢＧ）を効果的に減少させる。経口ブドウ糖負荷後の血糖は、対照と比較して化合物１で処置した動物で有意に低下した。グリコシル化ヘモグロビン（ＨｂＡ_１ｃ）は、用量に依存して低下した（８．４±０．３８％から６．２±０．２７％）。Ｖ＋Ｖ群において、ＦＢＧ、経口ブドウ糖負荷後の血糖、およびＨｂＡ_１ｃレベルは、化合物１で処置したマウス全てより有意に高かった。興味深いことに、該効果は、化合物１で処置したｄｂ／ｄｂマウスでの研究を通じて、研究の最初の５０日間のみ持続した。ＺＰ１０での初期治療の有益な効果は、対照動物と比較して膵臓のインシュリンｍＲＮＡ発現の増加と関連した。

他に特定されない限り、次の略語：ＤＭＳＯジメチルスルホキシド；ＦＢＧ空腹時血糖；ＨｂＡ_１Ｃグリコシル化ヘモグロビン；およびＯＧＴＴ経口ブドウ糖負荷試験を用いた。

実施例１：ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−１受容体結合化合物１
受容体結合の研究これは、MDS Panlabs, Panlabs Taiwan Ltd.で行った。簡単に言うと、ヒト組換えＧＬＰ−１受容体を有するＣＨＯ−Ｋ１細胞を回収した。膜分画を精製し、結合アッセイに用いた。化合物１およびＧＬＰ−１を、０．４％ＤＭＳＯに可溶化した。膜を、３０種類（3 decades）の濃度に及ぶ、異なる濃度の試験化合物と共に、２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、５ｍＭＭｇＣｌ_２、２０ｍＭＮａＣｌ、１ｍＭロイペプチン、１ｍＭＰＭＳＦおよび２％ＢＳＡ中、０．０３ｎＭ ^１２５Ｉ−ＧＬＰ−１（７〜３６）アミドの存在下で３７℃で９０分間インキュベートした。放射能をγカウンターで測定し、ＩＣ_５０値を、特異的結合（１００ｎＭＧＬＰ−１（７〜３６）アミドの存在下での全結合−非特異的結合）を５０％減少させる濃度として決定した。

ヒトＧＬＰ−１受容体との結合
ＣＨＯ−Ｋ１細胞で発現するヒトＧＬＰ−１受容体との結合の最大値の半分を阻害する濃度は、化合物１およびＧＬＰ−１（７〜３６）アミドについて、それぞれ１．４±０．２４ｎＭ、５．５±１．３ｎＭであった。従って、化合物１は、ＧＬＰ−１（７〜３６）アミドより、およそ４倍アゴニストとして強力であった。

血漿インシュリンレベルに対する効果化合物１（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ、腹腔内）で事前に処置した動物において、経口ブドウ糖負荷により、ビークルで処置した動物で観察した応答より約２倍血漿インシュリンレベルを増加した（Ｐ＝０．００２）（図１）。

図１を以下でより詳細に説明する。それは、ｄｂ／ｄｂマウスにおけるインシュリン放出に対する化合物１の効果を示す。一晩絶食した動物に、経口ブドウ糖を１ｇ／ｋｇで負荷し、そして１５分後に、ビークル（ｎ＝２０）または化合物１１００ｎｍｏｌ／ｋｇ（ｎ＝１９）を投与した。３０分後に動物を採血し、血漿インシュリン濃度を測定した（^＊＊：Ｐ＝０．００２対対照動物）。

実施例２−耐糖能に対する化合物１の効果
用いた動物は、１１〜１５週齢のｄｂ／ｄｂマウス（Ｍ＆Ｂ, Denmark）であった。化合物１を用量：０．０１、０．１、１、１０、および１００ｎｍｏｌ／ｋｇで腹腔内投与し（ｎ＝４〜７／群）、そして１５分後に、動物を経口ブドウ糖負荷（１ｇ／ｋｇ）の対象とした。研究に先立ち、２４０分間にわたり観察した血糖濃度曲線下面積（ＡＵＣ_{０〜２４０}；単位：ｍＭ×分）を用いて、類似の耐糖能を示す５つの群に動物を分けた。用量反応相関に基づき、ＥＤ_５０用量を評価した。

実施例３：化合物１の４２日にわたる投与の効果
この研究に含まれた動物は、研究の開始時に６から１０週齢であった。初回投与の４日前に、動物を体重測定し、一晩（１７時間）絶食させた。次に、絶食させた動物を、経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）の対象とした。２４０分間にわたり観察した血糖濃度曲線下面積（ＡＵＣ_{０〜２４０}；単位：ｍＭ×分）を用いて、類似の耐糖能を示す４つの群に動物を分けた。動物に、１日２回、腹腔内用量の化合物１を、それぞれ午前８時、午後４時に４２日間投与した。用量は、０（ビークル）、１、１０、または１００ｎｍｏｌ／ｋｇであった。注射用量は、全群で５ｍｌ／ｋｇであった。

４２日間の研究で記録したパラメーター４２日間の投与期間中、体重、食物および飲料水の消費を毎日記録した。動物の一晩の空腹時血糖レベルを、−３、１、１４、４１、および４３日目に測定し、ＯＧＴＴを処置期間の−３、１、１４、および４１日目に行った。４３日目に動物を屠殺し、ＨｂＡ_１ｃを測定するために血液試料を採取した。

経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）４２日間の研究において化合物１での長期間の処置の効果を調べるため、ＯＧＴＴを、投与期間の−３、１、１４、および４１日目の午前の投与と組み合わせて行った。９０日間の研究においては、ＯＧＴＴを、０、５０、６７、７８、および９０日目の午前中に行った。ＯＧＴＴを行う前に、動物を一晩（１７時間）の絶食の対象とした。血液試料を尾の端から採取し、血糖を測定した。全ての血糖濃度（ｎＭ）を、製造元のマニュアルに従い、少量の血液を用いた固定化グルコースオキシダーゼ法（＜５μｌ；Elite Autoanalyser, Bayer, Denmark）により分析した。Elite Autoanalyserの測定範囲外のブドウ糖濃度を含有する血液試料を、Nova Medical Medi-Lab A/S；Denmarkの酵素／光学的方法により測定した。４２日間の研究において、初回血液試料（空腹時血糖レベル）の採取直後に１日用量を動物に投与し、そして１５分後（ｔ＝０）に、リン酸緩衝液（ｐＨ＝７．４０）に溶解した経口用量のブドウ糖（１ｇ／ｋｇ）（Sigma, St. Louis, MO, U.S.A.）を投与した。９０日間の研究において、初回血液試料の採取直後に、経口ブドウ糖を負荷した。両研究において、ＢＧレベルをｔ＝３０分、ｔ＝６０分、ｔ＝１２０分、およびｔ＝２４０分に測定した。２４０分間にわたり得た曲線下面積（ＡＵＣ_{０〜２４０}；単位：ｍＭ×分）を、処置効果の評価に含めた。

経口ブドウ糖負荷試験における化合物１の用量反応効果急激な化合物１の腹腔内投与後の用量反応相関は、ＥＤ_５０値０．０２１ｎｍｏｌ／ｋｇを示した。

４２日間の研究における化合物１の用量反応効果動物の体重は、実験中に２１．５％から２６．５％増加した（表２）。化合物１処置群とビークル処置群との間に体重の統計上有意な差はない。しかしながら、若干体重増加の傾向を、ビークルで処置した動物と比較して化合物１１００ｎｍｏｌ／ｋｇを投与した動物で検出できた。記録した飲料水の消費は、ビークルで処置した動物の飲料水の大量摂取を示し、これは、動物が糖尿病誘発性煩渇多飲を患っていることを示す。さらに、１日の飲料水摂取は、化合物１で処置したマウスにおいて、有意かつ用量依存性に低減された（表２；ｐ＜０．００１対ビークル）。

表２．研究期間の終了時での体重の変化および飲料水の消費

^＊：Ｐ＜０．０５対ビークル

^＊：Ｐ＜０．０５対ビークル

４２日間の研究において、空腹時血糖を、層別日、そして研究期間中の１、１４、４１、および４３日目に測定した（図２）。層別日、１日目、および１４日目において、群間の差を検出できなかった。しかしながら、４１日目および４３日目において、空腹時血糖レベルは、用量にかかわらず化合物１を投与した動物において有意に低下し、これは、化合物１が顕著な抗糖尿病効果を誘発したことを示唆している。両研究での化合物１の抗高血糖効果をさらに分析するために、動物をＯＧＴＴの対象とした（図３）。層別日において、全群は類似の耐糖能を示した。興味深いことに、既に化合物１の第１の投与を受けた後、耐糖能は、ビークルで処置した動物と比較してＺＰ１０で処置した動物で改善された。ビークルで処置した動物において、耐糖能は徐々に低下し、研究の終了時に、この群は、研究開始時のこの動物の応答性と比較し、ブドウ糖負荷に対して応答する能力の７倍の減少を示した。対照的に、化合物１で処置した動物は、ビークルで処置した動物と比較してブドウ糖に対する応答の明確な改善を示した。事実、層別日のＯＧＴＴに対する応答性と比較して、耐糖能の有意な変化を研究の終了時に検出しなかった（図３）。

図２を以下でより詳細に説明する。それは、層別日（−３日）、そして化合物１での処置の１、１４、４１および４３日目に関する空腹時血糖（平均±ＳＥＭ）を示す。^＊：ｐ＜０．０５対同日のビークルで処置したマウスの絶食時ＢＧ濃度。

図３を以下でより詳細に考察する。図は、処置前（−３日）、そして化合物１での長期処置の１、１４、および４１日目の経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）を示す（平均±ＳＥＭ）。^＊：ｐ＜０．０５対群の−３日目のＡＵＣ_{０〜２４０分}。§：ｐ＜０．０５対全３つのＺＰ１０処置群のＡＵＣ_{０−２４０分}。

長期間の血糖制御の指標であるＨｂＡ_１ｃを、研究の終了時に測定した（図４）。ＨｂＡ_１ｃのレベルを、全ヘモグロビン濃度に対する割合として表す。このデータは、化合物１での長期間の処置が、用量に依存し、ＨｂＡ_１ｃの濃度を有意に減少させることを明確に示した。図４は、全Ｈｇｂ（ヘモグロビン）に対する割合として表されたＨｂＡ_１ｃを示す（４２日間の研究）。データは、平均±ＳＥＭである。^＊：ｐ＜０．０１対ビークル。

実施例３：９０日にわたる化合物１投与の効果
初回投与の３日前に、動物を体重測定し、一晩の絶食の対象とした。絶食させた動物をＯＧＴＴの対象とした（以下を参照）。２４０分間にわたり得た血糖濃度曲線下面積（ＡＵＣ_{０〜２４０}；単位：ｍＭ×分）を用いて、類似の耐糖能を示す２群に動物を分けた。動物に、１日１回、腹腔内用量の化合物１１００ｎｍｏｌ／ｋｇ、またはビークルを５０日間与えた。投与は、食物摂取が最大の期間、すなわち夜の間に薬理学的効果を証明するため、午後３時から４時の間で行った。投与５０日目、再びＯＧＴＴを行い、これに基づきビークル処置群および化合物１処置群を、類似の耐糖能を示す４つの群に再び分けた。群１は、最初にビークルを投与され、続けて、ビークル投与された。群２は、最初にビークル投与され、化合物１での処置（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ、腹腔内）にスイッチされた。群３は、最初に化合物１を投与され、ビークル処置に変更された。そして群４は、最初に化合物１を投与され、化合物１処置（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ、腹腔内）が続けられた。処置計画を表１で概説する。この投与計画を４０日間続けた。

表１：９０日間の研究における処置群

^＊動物１匹が７１日目に死亡

９０日間の研究で記録したパラメーター９０日の投与期間中、体重および飲料水の消費を毎日記録した。動物の空腹時血糖レベルを、４４、５８、６５、７２、８６、および９１日目に測定し、そしてＯＧＴＴを、処置期間の０、５０、６７、７８、および９０日目に行った。９１日目において、動物を屠殺し、グリコシル化ヘモグロビンを測定するために血液試料を採取し、インシュリンｍＲＮＡを測定するために膵臓を取り出した。

９０日間の交差研究における化合物１の効果４２日間の研究の結果は、化合物１が、ｄｂ／ｄｂマウスでのＩＩ型糖尿病の進行を遅延させることを強く示した。しかしながら、化合物１が、β細胞の機能を保護し、これにより、このマウスのＩ型糖尿病の発症を予防するか否かがはっきりしていない。それ故、５０日＋４０日の研究期間の９０日間の交差研究を行った。動物を最初に２つの群に分けた（一方は、１日１回、ビークルを投与、そして他方は、化合物１００ｎｍｏｌ／ｋｇを腹腔内投与）。５０日後、両群を再び４つの群に分けた。群１にビークル投与を続け、最初ビークル投与を受けていた群２をＺＰ１０での処置に変え、最初化合物１の投与を受けていた群３をビークルでの処置に変え、そして最後の群４にビークル投与を続けた。動物の体重を研究中モニターした。興味深いことに、５０日間、最初の２つの群間での有意な差は検出しなかった（データは示していない）。しかしながら、９０日後、群３と群４の体重は、群１および群２より有意に高くなった（表２）。このことは、最初に化合物１で処置したマウスの一般的状態が、ビークル処置群より良いことを示す。飲料水の消費も、研究を通じて測定し、４２日間の研究においてと同様に飲料水の消費はビークル処置群で最も高かった。興味深いことに、４０日後に化合物１での治療を中止しても、最初の５０日間化合物１で処置した群は、化合物１で処置されていない動物より飲料水の消費は依然として少なかった。

空腹時血糖も研究中測定した（図５）。最初の期間である０〜５０日において、空腹時血糖レベルは、化合物１で処置した動物よりビークルで処置した動物で有意に高かった。第２の処置期間中、群１は、依然として高い空腹時血糖を示した。対照的に、群２、３、および４は全て、９０日間の研究期間を通じて、空腹時血糖レベルは有意に低下した。群２は、中間レベルの空腹時血糖を示したが、依然として群１より有意に低かった。この結果は、この動物が、４０日間の化合物１の中止後、血糖レベルを制御する能力を依然として有していることを示す。群４は、高血糖のサインを全く示さなかった。

図５を以下でより詳細に説明する。それは、８時間の絶食後の空腹時血糖（ＦＧ）を示す。０〜５０日間、ＦＧはビークルと比較して、化合物１で処置した動物で有意に低下した。さらに、第２の処置期間中（５１〜９０日）、ＦＧはずっと、ビークルで処置したマウスで他の３群と比較して有意に高かった。しかしながら、化合物１からビークルへ変えられたマウスはずっと、化合物１で処置したマウスより有意に高いＦＧレベルを有していた。

経口ブドウ糖負荷試験を研究中５回測定した（図６）。最初の５０日の後、ビークルで処置した群は、グルコースに対する応答性の低下を示したが、化合物１で処置した群のグルコース応答性は、開始レベルから逸脱しなかった。事実、耐糖能は、終わりの４０日間、群２、３、および４で類似した。動物が化合物１の処置を受けている第３群において、耐糖能は、研究の後の期間中有意に低下し、そして研究の終了時に、群２および４の耐糖能と差は無かった。

図６を以下でより詳細に説明する。それは、０、５０、６７、７８、および９０日目に行われた経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）を示す。ビークルで処置したｄｂ／ｄｂマウスは、研究中耐糖能の低下を徐々に示した。６７〜９０日の耐糖能は、１〜５０日（群２）、５１〜９０日（群３）、または全研究期間を通じて（群４）化合物１で処置した動物の３つの群で類似した。

化合物１での処置終了後の糖尿病状態に対する長期効果（群３）は、β細胞機能の改善に影響し得る。β細胞機能を調べるために、我々は、研究終了時のインシュリンｍＲＮＡの発現を測定した（図７）。群４は、群１と比較してインシュリンｍＲＮＡの発現が増加した。興味深いことに、インシュリンｍＲＮＡの発現は、群３と群４で類似し、これは、化合物１での初期の治療が、膵臓のインシュリンｍＲＮＡ産生の低下を予防することを示している。群１〜４のそれぞれの処置に続く、インシュリンｍＲＮＡ発現の時間依存性変化を評価するために、膵臓のインシュリンｍＲＮＡを、若年無処置動物群（６〜１０週齢；図７の群０）においても測定した。結果は、若年動物と、５０日または９０日間（群３および群４）化合物１で処置した動物との間の有意な差を示さなかった。

図７を以下でより詳細に説明する。それは、それぞれの処置後の膵臓のインシュリンｍＲＮＡのレベルを示す。ずっと化合物１で処置したマウス（群４）は、ビークルで処置したマウス（群１）と比較して、９０日間の投与後、インシュリンｍＲＮＡの発現が増加した。興味深いことに、インシュリンｍＲＮＡの発現は、最初の５０日間のみ化合物１で処置したマウスと９０日間処置したマウスで類似したが、一方、化合物１での処置が、５０日まで始められなかったマウスは、ビークルで処置したマウスで見出される発現と類似するインシュリン発現を示した。インシュリンｍＲＮＡのレベルは、若年無処置マウス（群０）、および研究の最初の部分で化合物１の処置を受けた２つの群（群３および群４）で類似した。

最後に、ＨｂＡ_１ｃレベルを、研究の終了時に測定した（図８）。化合物１の処置を受けた３つの群は、ビークル処置をずっと受けた動物より、ＨｂＡ_１ｃのレベルが低下したが、この差は、統計上有意なものには至らなかった。

図８を以下でより詳細に説明する。それは、終了日に測定したＨｂＡ_１ｃレベル（全ヘモグロビン濃度に対する％）を示す。一方向的差異分析は、全体的な群の間の有意な差を示さなかった（ｐ＝０．２２）。しかしながら、この後の比較についてのフィッシャーのＬＳＤ検定は、ＨｂＡ_１ｃが、ビークルで処置したマウス（群１：７．９９±０．５１％）と比較して、化合物１で処置したマウス（群４：６．６５±０．２２％）で有意に低下することを示した。

実施例４：ｄｂ／ｄｂマウスでのインシュリン放出に対する化合物１の効果
高血糖での生理的インシュリン放出に対する化合物１の効果を調べるために、インシュリンのレベルを経口ブドウ糖負荷（１ｇ／ｋｇ）後に決定した。３９匹の一晩絶食したマウスを実験に導入し、１週間後、上記のＯＧＴＴ後に２群に分けた。動物に経口ブドウ糖を負荷し、そして１５分後、それぞれのマウスに、ビークルまたは化合物１１００ｎｍｏｌ／ｋｇを腹腔内投与した。ブドウ糖投与の３５分後、二酸化炭素麻酔下での左心室穿刺法により、動物の血を抜いた。血液を、あらかじめヘパリン（５０００ＩＵ／ｍｌ）を通した針を備え付けたシリンジを用いて収集した。血液試料を、０．５ＭＥＤＴＡ５μｌおよびTrasylol［商標］（アプロチニン、２０×１０^−６ＩＵ／ｍｌ）を含有する、事前に氷冷した試験管に直ぐに移し、３０００ｒｐｍ、２〜４℃で１０分間遠心した。血漿を回収中冷却し続け、ドライアイス上で凍結させ、後のホルモン分析のために−８０℃で保存した。全血糖濃度（ｍＭ）を上記のように分析した。インシュリンの血漿濃度を、Peninsula Laboratories Europe, LTD (ELIS7537)の酵素免疫アッセイを用いて、血漿１０μｌ試料で測定した。

他に示されていない限り、次の材料および方法を、上記の実施例において必要に応じて用いた。

動物導入時の体重３７．３±１．１ｇのオスのｄｂ／ｄｂマウスであるC57BLKS/J-Leprdb/Leprdb（M&B, Ll. Skensved, Denmark）を用いた。マウスを、制御された条件（２０℃、湿度５５〜８５％）の下、午前６時に点灯する１２：１２時間の明／暗サイクルに従い、収容した（３匹のマウス／１ケージ）。動物に、標準的Altromin番号１３２４飼料（Chr. Petersen, Ringsted, Denmark）を適宜与え、国内品質の水道水に自由にアクセス可能とした。導入の時点で、全マウスを一晩（１７時間）絶食させ、血糖（ＢＧ）レベルを１０ｎｍｏｌ／ｌより下とした。研究に含んだ動物で、標準的経口ブドウ糖負荷の対象とする際に、３３ｍＭより高い血糖レベルを示すものはいなかった（以下を参照）。

飲料水の消費投与のモニタリングにおいて、動物を体重測定し、そして群毎の飲料水の消費を、水のビンを計量し、そして消費された水の量を計算することにより、重量測定法で測定した。

マウスの膵臓由来の全ＲＮＡの単離凍結膵腺を計量し、すり鉢で液体窒素下で細かくした。全ＲＮＡの抽出を、キットの製造元（Qiagen Rneasy kit, VWR International）により記載のように行った。

ファーストストランドの合成０．５〜１．０μｇの全ＲＮＡをファーストストランドの合成に用いた。簡単に言うと、ＲＮＡを７０℃で１０分間インキュベートし、そして氷上にクエンチした。ＲＮＡを４２℃まで平衡化し、最終容量２０μｌで１０ｍＭｄＮＴＰ、Superscript II（Life Technologies）１μｌと混合し、そしてさらなる時間４２℃でインキュベートした。反応を、９４℃、５分間のインキュベーションにより終結させた。

定量的ＰＣＲのインシュリンスタンダードファーストストランドの合成物１μｌを、次のインシュリンプライマー：５’−ＡＡＣＣＣＡＣＣＣＡＧＧＣＴＴＴＴＧＴＣＡ；５’−ＣＴＴＣＣＴＣＣＣＡＣＧＴＣＣＡＧＴＴＧＴＴＣ−３でのＰＣＲに用いた。単位複製配列をＰＣＲ４−ＴＯＰＯベクター（invitrogen）に挿入し、大腸菌に形質転換した。プラスミドを精製し、それぞれ２μｇをＳｐｅＩまたはＮｏｔＩのいずれかで直鎖化した。直鎖化したプラスミドを、Ｔ７またはＴ３ＲＮＡポリメラーゼを用いて、インビトロで転写した。インビトロでの転写後、鋳型をＤＮＡｓｅ処理により除去した。続いて、混合物をフェノール／クロロホルムで抽出し、沈殿させた。沈殿後、ＲＮＡを１ｍｇ／ｍｌで水に溶解した。

定量的ＰＣＲスタンダードおよび試料１μｇを、上記のように、ファーストストランド合成の対象とした。インシュリンｍＲＮＡのスタンダードの連続希釈液を、試料と共に、次のプローブ（マウスインシュリンTaqmanプローブ、１１０〜１３８）:５’−ＦＡＭ−ＡＧＧＣＴＣＴＣＴＡＣＣＴＧＧＴＧＴＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＴ−Ｔａｍｒａ−３’および上記のプライマーを用いる定量的ＰＣＲの対象とした。全ＰＣＲ反応をデュプリケートで行った。Ｃ_ｔ（閾値サイクル）を測定し、インシュリンｍＲＮＡの開始濃度を、標準曲線に従い計算した。

薬物：化合物１（Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ_２、Batch:ZP15.65-3A）を、Merifield技術を用いて、Zealand Pharma A/Sで生成した。

統計：一方向の分類データを、事後比較分析のための一方向的差異分析およびフィッシャーのＬＳＤ検定を用いて、分析した。二方向の分類データを、２方向的差異分析を用いて分析した。無対のデータを、無対データについてのスチューデントｔ検定を用いて分析した。

次の実施例は、化合物１が、強力な抗糖尿病効果を有する非常に有効なＧＬＰ−１アゴニストであることを示す。それは、ＧＬＰ−１自体より４倍高い親和性でヒトＧＬＰ−１受容体と結合し、経口ブドウ糖負荷に応答して、インシュリンの分泌を増強し、そして糖尿病のｄｂ／ｄｂマウスの耐糖能を、低いｎｍｏｌ／ｋｇ範囲の用量で正常値化する。さらに、長期にわたる処置後、化合物１は、インシュリンｍＲＮＡレベルを増加し、そしてＨｂＡ_１ｃレベルを正常値化する。実施例は、長期にわたる化合物１での処置が、ｄｂ／ｄｂマウスのＩＩ型糖尿病の進行を低減することを示す。

この実施例において、３つの用量全ての化合物１が、耐糖能、空腹時血糖、およびＨｂＡ_１Ｃの類似の改善を生じ、このことは、化合物１が、用量１〜１００ｎｍｏｌ／ｋｇでの長期間の腹腔内投与中、最大の抗糖尿病性応答を生じることを示唆している。耐糖能の改善は、化合物１で処置したマウスにおける１日の飲料水の摂取の増加と密接に関連する。さらに、１日の飲料水の摂取は、ビークルで処置したマウス、および化合物１１ｎｍｏｌ／ｋｇのみで処置した動物におけるものより、１００ｎｍｏｌ／ｋｇを投与した動物で有意に低かった。この結果は、口渇および煩渇多飲が、糖尿病の対象の血糖レベルと密接に関連するという臨床的知見と一致する。

ビークルで処置した動物は、化合物１で処置した群で見られる明確な用量依存性の増加と対照的に高レベルのＨｂＡ_１ｃを示した。理論と結びつけられることを望んではいないが、この実施例のデータは、ケトアシドーシスおよびｄｂ／ｄｂマウスの早期死亡と関連する重症の糖尿病の発症を延期し得る、膵臓に対する保護的効果を発揮する（直接的または間接的）化合物１と一致する。

この疑問に実施例で取りかかった。具体的には、動物が化合物１からビークルの処置に変えられる、交差研究を設計した。２４日間の研究において、１００ｎｍｏｌ／ｋｇが最も有効な用量であると見出された。従って、１００ｎｍｏｌ／ｋｇを、交差研究での１日１回の注射として用いた。この研究の主要な知見は、化合物１での３ヶ月間の処置が、ｄｂ／ｄｂマウスの糖尿病の進行性の発症を予防したことである。化合物１での９０日の処置は、ビークルで処置した対照マウスと比較して、耐糖能を増大し、空腹時血糖を減少し、ＨｂＡ_１Ｃを減少し、飲料水の摂取を減少し、そして膵臓のβ細胞のインシュリンｍＲＮＡの発現を増大した。

理論と結びつけられることを望んではいないが、膵臓のインシュリンｍＲＮＡの発現の増加は、化合物１で処置したｄｂ／ｄｂマウスの耐糖能の改善が、経口ブドウ糖負荷に応答して、インシュリン放出する能力の改善と結びつくと示唆された。この知見は、上記の実施例、特に、血漿インシュリンレベルが、無処置の対照動物においてより化合物１で処置したマウスにおいて、経口ブドウ糖負荷に応答して２倍も増加するという発見により、支持されている。

興味深いことに、研究期間の最初の５０日間、化合物１で処置したマウスにおいて、化合物１での処置は、ビークルで処置した動物と比較して、耐糖能の持続的改善を生じ、空腹時血糖を減少し、飲料水の摂取を低減し、そしてインシュリンｍＲＮＡの発現を上昇した。この結果は、化合物１の１日１回の腹腔内投与が、ｄｂ／ｄｂマウスの糖尿病の進行を予防することを示す。理論と結びつけられることを望んではいないが、ブドウ糖代謝および膵臓のインシュリンｍＲＮＡの発現に対する持続的効果は、糖尿病のｄｂ／ｄｂマウスのβ細胞の機能を保護する化合物１と一致する。ビークル（プラセボ）にシフトした群のインシュリンｍＲＮＡに対する化合物１の持続的効果は、β細胞の控えめな機序および／または前駆細胞からのβ細胞の新生を示す。若年動物、および５０日または９０日間（群３および群４）化合物１で処置した動物のインシュリンｍＲＮＡレベル有意な差はなく、このことは、処置がβ細胞を保護し、そしてＩＩ型糖尿病の進行を有意に遅延さえることを示す。第１の処置期間中ビークルで、そして５１日以降化合物１で処置したマウスにおいて、耐糖能、空腹時血糖、および飲料水の摂取は、化合物１での治療中改善した。化合物１での治療の後期開始は、処置を研究の途中で開始するため、膵臓のβ細胞のインシュリンｍＲＮＡレベルの発現を有意に改善しない。

実施例はまた、化合物１の保護的作用が、治療を、糖尿病発症中の初期に開始した場合、最も有効であることを示す。化合物１での治療を、後期無処置の糖尿病の動物で開始すると、化合物１は、インシュリンｍＲＮＡの発現の変化の非存在下で耐糖能を改善した。ビークルで処置したマウスの検出可能なインシュリンｍＲＮＡの存在は、重症な病気の動物でさえインシュリンを産生可能であることを示唆する。

実施例は、化合物１が、ｄｂ／ｄｂマウスの糖尿病の進行を予防する有効な抗糖尿病化合物であることをさらに示す。理論と結びつけられることを望んではいないが、化合物１での処置の中止後の糖代謝および膵臓のインシュリン発現に対する持続性効果は、化合物１が糖尿病のｄｂ／ｄｂマウスのβ細胞機能を保護することを示す。

化合物１が、ｄｂ／ｄｂマウスの糖尿病の進行を予防する、有効な抗糖尿病化合物であることを見出した。化合物１での処置の中止後のブドウ糖代謝および膵臓のインシュリンｍＲＮＡ発現に対する持続性効果は、化合物１が糖尿病のｄｂ／ｄｂマウスβ細胞の機能を保護することを示す。

実施例は、以下のようにさらに要約され得る。
化合物１は、新規かつ合理的に設計されたＧＬＰ−１アゴニストである。化合物１は、インシュリン放出を増加し、かつ耐糖能を改善する、ＧＬＰ−１受容体対する高親和性ペプチドである。化合物１の薬理学的効果を、それぞれ６週間および１２週間継続する、ＩＩ型糖尿病のｄｂ／ｄｂマウスでの２つの独立的長期研究で特徴決定した。６週間の研究において、化合物１を、毎日２回、６週間、用量０、１、１０、または１００ｍｏｌ／ｋｇで投与した（ｎ＝１０／群）。この研究は、化合物１が、空腹時血糖（ＦＢＧ）を、対照動物での１３．７±１．３ｍＭから化合物１で処置した群での８．６±１．４ｍＭまで有意に減少させることを示した。一方、耐糖能は、６週間の研究中、化合物１で処置した動物全てに対して無変化のままであったが、経口ブドウ糖負荷後の曲線下面積は、研究の終了時に、ビークルで処置した（プラセボ）マウスにおいて５〜６倍増加した。６週間後、グリコシル化ヘモグロビン（ＨｂＡ_１Ｃ）は、対照動物での８．４±０．３８％から化合物１１００ｎｍｏｌ／ｋｇで処置したマウスでの６．２１±０．２７％まで、用量に依存して増加した。化合物１（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ、腹腔内投与：１日１回）の長期間の効果が、β細胞の保護機序により仲介されるかを評価するために、４つの群の動物（ｎ＝１５／群）を、ビークル（Ｖ）または交差設計（５０＋４０日；群：Ｖ＋Ｖ、Ｖ＋化合物１、化合物１＋Ｖ、化合物１＋化合物１）において化合物１で処置した。Ｖ＋Ｖ群において、ＦＢＧ、経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）中の血糖、およびＨｂＡ_１ｃレベルは、ずっと化合物１で処置したマウスにおけるものより、有意に高かった。興味深いことに、研究の最初の５０日間のみ処置したｄｂ／ｄｂマウスにおいて、ＦＢＧ、ＯＧＴＴ応答性、およびＨｂＡ_１Ｃは、９０日後に、Ｖ＋Ｖにおけるものより依然として低かった。ＺＰ１０での初期治療の有益な効果は、無処置の糖尿病マウスと比較して、膵臓のインシュリンｍＲＮＡ発現の増加と関連した（Ｖ＋Ｖ：１０．４±２．２、Ｖ＋化合物１：１２．７±２．４；化合物１＋Ｖ：２０．９±４．１；化合物１＋化合物１：２１．８±２．７ｐｇ／ｍｇ（全ＲＮＡ））。この研究は、化合物１が、ｄｂ／ｄｂマウスの糖尿病の進行を予防する、有効な抗糖尿病化合物であることを示した。任意の理論と結びつられることを望んではいないが、化合物１での処置の中止後、ブドウ糖代謝および膵臓のインシュリン発現に対する持続性効果は、化合物１が糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおいてβ細胞機能を保護することを示すと考えられる。

本明細書に引用される全参考文献の記載は、引用により取り込まれる。次の参考文献は、特に引用により取り込まれる。

１．Holst,JJ (1999) Glucagon-like peptide-1, a gastrointestinal hormone with a pharmaceutical potential. Curr Med Chem. 6:1005-1017
２．Nauck,MA, Holst,JJ, Willms,B, Schmiegel,W (1997) Glucagon-like peptide 1 (GLP-1) as a new therapeutic approach for type 2-diabetes. Exp Clin Endocrinol Diabetes 105:187-195

３．Lopez-Delgado,MI, Morales,M, Villanueva-Penacarrillo,ML, Malaisse,WJ, Valverde,I (1998) Effects of glucagon-like peptide 1 on the kinetics of glycogen synthase a in hepatocytes from normal and diabetic rats. Endocrinology 139:2811-2817
４．Byrne,MM, Gliem,K, Wank,U, Arnold,R, Katschinski,M, Polonsky,KS, Goke,B (1998) Glucagon-like peptide 1 improves the ability of the beta-cell to sense and respond to glucose in subjects with impaired glucose tolerance. Diabetes 47:1259-1265

５．Raufman,JP, Singh,L, Singh,G, Eng,J (1992) Truncated glucagon-like peptide-1 interacts with exendin receptors on dispersed acini from guinea pig pancreas. Identification of a mammalian analogue of the reptilian peptide exendin-4. J Biol Chem 267:21432-7
６．Young,AA, Gedulin,BR, Bhavsar,S, Bodkin,N, Jodka,C, Hansen,B, Denaro,M (1999) Glucose-lowering and insulin-sensitizing actions of exendin-4: studies in obese diabetic (ob/ob, db/db) mice, diabetic fatty Zucker rats, and diabetic rhesus monkeys (Macaca mulatta). Diabetes 48:1026-1034

７．Edvell,A, Lindstroum,P (1999) Initiation of increased pancreatic islet growth in young normoglycemic mice (Umeau +/?). Endocrinology 140:778-783
８．Xu,G, Stoffers,DA, Habener,JF, Bonner-Weir,S (1999) Exendin-4 stimulates both beta-cell replication and neogenesis, resulting in increased beta-cell mass and improved glucose tolerance in diabetic rats. Diabetes 48:2270-2276

９．Greig,NH, Holloway,HW, De Ore,KA, Jani,D, Wang,Y, Garant,MJ, Egan,JM (1999) Once daily injection of exendin-4 to diabetic mice achieves long-term beneficial effects on blood glucose concentrations. Diabetologia 42:45-50
１０．Parkes,DG, Pittner,R, Jodka,C, Smith,P, Young,A (2001) Insulinotropic actions of exendin-4 and glucagon-like peptide -1 in vivo and in vitro. Metabolism 50:583-589

１１．Chen,H, Charlat,O, Tartaglia,LA, Woolf,EA, Wang,X, Ellis,SJ, Lakey,ND, Culpepper,J, Moore,KJ, Breitbart,RE, Duyk,GM, Tepper,RI, Morgenstern,JP (1996) Evidence that the diabetes gene encodes the leptin receptor: identification of a mutation in the leptin receptor gene in db/db mice. Cell 84:491-495
１２．Coleman,DL (1973) Effects of parabiosis of obese with diabetes and normal mice. Diabetologia 9:294-298

１３．Leiter,EH, Coleman,DL, Ingram,DK, Reynolds,MA (1983) Influence of dietary carbohyderate on the induction of diabetes in C57BL/KsJ-db/db diabetes mice. J.Nutr. 113:184-195
１４．Hui,H, Wright,C, Perfetti,R (2001) Glucagon-like peptide 1 induces differentiation of islet duodenal homeobox-1-positive pancreatic ductal cells into insulin-secreting cells. Diabetes 50:785-796

１５．Tourrel,C, Bailbe,D, Meile,MJ, Kergoat,M, Portha,B (2001) Glucagon-like peptide-1 and exendin-4 stimulate beta-cell neogenesis in streptozotocin-treated newborn rats resulting in persistently improved glucose homeostasis at adult age. Diabetes 50:1562-1570
１６．USSN 60/393,917 by E. Steiness entitled "Method For Treating diabetes and Related Disorders" as filed on July 4, 2002.

本発明は、その好ましい実施態様に言及して記載されているが、当該技術分野の技術者が、本記載を考慮して、本発明の精神および範囲に修飾および改善をすることは考慮されている。本明細書に引用される文献全てが、引用により取り込まれる。

図１は、ビークル（対照）および化合物１１００ｎｍｏｌ／ｋｇを投与した後の血漿インシュリンレベルを示すグラフである。図２は、一晩（１７時間）絶食した後の血糖レベル（ｎＭ）を示すグラフである。図３は、経口ブドウ糖負荷試験（ＯＴＴ）の結果を示すグラフである。結果は、１日当たりのＡＵＣ_{０〜２４０分}（ｍＭ×分）として表される。図４は、ビークルまたは変動させた濃度の化合物１に曝露された群における、グリコシル化ヘモグロビン（ＨｂＡ_１ｃ）の量を示す。図５は、ビークルまたは様々な投与ストラテジーの化合物１で処置した後の空腹時血糖を示すグラフである。図６は、ビークルまたは様々な投与ストラテジーの化合物１で処置した後の経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）の結果を説明するグラフである。図７は、ビークルまたは様々な投与ストラテジーの化合物１で処置した後の膵臓のインシュリンｍＲＮＡレベル（ｐｇ／μｇ全ＲＮＡ）を示すグラフである。図８は、ビークルまたは様々な投与経路の化合物１に曝露された群のＨｂＡ_１ｃ（全ヘモグロビンに対する％）の量を示すグラフである。

Claims

哺乳類の糖尿病を予防または処置するための医薬組成物であって、該予防または処置が、哺乳類に治療上有効量のＧＬＰ−１アゴニストを投与するものであり、
該ＧＬＰ−１アゴニストが、
エキセンディン４、
デスＳｅｒ^３９−エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２、
デスＰｒｏ^３６−エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２（配列番号：５）
、
デスＡｌａ^３５−エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２、
デスＧｌｙ^３４−エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２、
デスＳｅｒ^３９−（Ｌｙｓ^４０（パルミトイル））エキセンディン４（１〜３９）−Ｌ
ｙｓ_６−ＮＨ_２、
デスＰｒｏ^３６−（Ｌｙｓ^４０（パルミトイル））エキセンディン４（１〜３９）−Ｌ
ｙｓ_６−ＮＨ_２、
デスＡｌａ^３５−（Ｌｙｓ^４０（パルミトイル））エキセンディン４（１〜３９）−Ｌ
ｙｓ_６−ＮＨ_２、
デスＧｌｙ^３４−（Ｌｙｓ^４０（パルミトイル））エキセンディン４（１〜３９）−Ｌ
ｙｓ_６−ＮＨ_２、
Ｌｙｓ^４０（パルミトイル）エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２、
デスＰｒｏ^３６，Ｐｒｏ^３７−エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２、
Ｌｙｓ_６−デスＰｒｏ^３６，Ｐｒｏ^３７，Ｐｒｏ^３８−エキセンディン４（１〜３９）
−ＮＨ_２、
Ａｓｎ（Ｇｌｕ）_５−デスＰｒｏ^３６，Ｐｒｏ^３７，Ｐｒｏ^３８−エキセンディン４（
１〜３９）−ＮＨ_２、
Ｌｙｓ_６−デスＰｒｏ^３６，Ｐｒｏ^３７，Ｐｒｏ^３８−エキセンディン４（１〜３９）
−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２、
Ａｓｎ（Ｇｌｕ）_５−デスＰｒｏ^３６，Ｐｒｏ^３７，Ｐｒｏ^３８−エキセンディン４（
１〜３９）−Ｌｙｓ_６−ＮＨ_２および
デスＰｒｏ^３６，Ｐｒｏ^３７，Ｐｒｏ^３８−エキセンディン４（１〜３９）−Ｌｙｓ_６
−ＮＨ_２
から選択されるものであって、
該予防または処置が、該ＧＬＰ−１アゴニストの投与を持続的に休薬日を生じる時間、治療上有効量より低減させることを含むものであり、前記休薬日は、該ＧＬＰ−１アゴニストの投与の低減の後の第１のエンドポイントおよび第２のエンドポイントの間の時間間隔として定義されるものであり、該ＧＬＰ−１アゴニストの投与量およびタイミングが、該ＧＬＰ−１アゴニストが継続的に存在することなく哺乳類における糖尿病または関連疾患を予防または処置するためのものであり、休薬日が３から２５週間の間持続するものである、医薬組成物。
該ＧＬＰ−１アゴニストの投与が、休薬日の間中止されるものである、請求項１記載の医薬組成物。
第２のエンドポイントが、標準的ＦＢＧ検査または標準的グリコシル化ヘモグロビン検査により同定されるものである、請求項１または２記載の医薬組成物。
休薬日が３から４週間の間持続するものである、請求項１記載の医薬組成物。
予防または処置が、さらに哺乳類に第２の治療上有効量のＧＬＰ−１アゴニストを休薬日に続き投与するものである、請求項１〜４いずれか１項記載の医薬組成物。
投与段階、そして低減段階が、糖尿病を予防または処置するために必要に応じて繰り返されるものである、請求項１〜５のいずれか１項記載の医薬組成物。
予防または処置が、さらに少なくとも１種の抗糖尿病薬を哺乳類に投与するものである、請求項１〜６のいずれか１項記載の医薬組成物。
抗糖尿病薬が、インシュリン、インシュリン類似体、スルホニル尿素、ビグアニド、チアゾリジンジオ、ジアゾキシド、ソマトスタチン、またはα−グルコシダーゼ阻害剤、または医薬的に許容されるそれらの混合物である、請求項７記載の医薬組成物。
インシュリンが、ヒトインシュリン、ウシインシュリン、ブタインシュリン；またはそれらの混合物であるか、あるいはインシュリン類似体が、Ｌｙｓ（Ｂ２８）、Ｐｒｏ（Ｂ２９）ヒトインシュリンである、請求項８記載の医薬組成物。
スルホニル尿素が、トルブタミド、クロルプロパミド、トラザミド、アセトヘキサミド、グリブリド、グリピジド、またはグリクラジドであるか；ビグアニドが、メトホルミンまたはフェンホルミンであるか；チアゾリジンジオが、シグリタゾンまたはピオグリダゾンであるか；あるいはα−グルコシダーゼ阻害剤がアカルボースである、請求項８記載の医薬組成物。
糖尿病または関連疾患が、インシュリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭまたはＩ型糖尿病）、インシュリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭまたはＩＩ型糖尿病）；糖尿病を発症する遺伝的素因；耐糖能異常（ＩＧＴ）、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）；妖精症（インシュリン受容体変異）、熱帯性糖尿病、膵疾患または手術の二次性糖尿病；プラダーウィリ症候群のような遺伝的症候群と関連する糖尿病；膵炎；内分泌疾患の二次性糖尿病；肥満症；または代謝症候群（Ｘ症候群）である、請求項１〜１０のいずれか１項記載の医薬組成物。