ES2620111T3

ES2620111T3 - Análogos de glucagón

Info

Publication number: ES2620111T3
Application number: ES13756832.5T
Authority: ES
Inventors: Ditte Riber; Lise GIEHM
Original assignee: Zealand Pharma AS
Current assignee: Zealand Pharma AS
Priority date: 2012-07-23
Filing date: 2013-07-23
Publication date: 2017-06-27
Anticipated expiration: 2033-07-23
Also published as: MY170671A; IL236554B; JP2015524419A; JP2019187419A; FR24C1043I2; AU2013295035B2; PH12015500115B1; US20150210744A1; EA201590058A1; MX356957B; US20200207825A1; KR102129235B1; US11795204B2; CA2878991A1; WO2014016300A1; CN104662038B; CN104662038A; EA033399B1; US10442847B2; FR24C1043I1

Abstract

Un compuesto que tiene la formula I: R1-Z-R2 (I) o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptables del mismo; en el que R1 es hidrogeno, alquilo C1-4, acetilo, formilo, benzoilo o trifluoroacetilo; R2 es OH o NH2; y Z es una secuencia de aminoacidos que procede de la secuencia de formula Ia:**Fórmula** y que comprende ademas al menos cuatro sustituciones o deleciones de aminoacidos que estan solamente en posiciones de la secuencia seleccionadas entre 2, 3, 4, 9, 10, 15, 16, 17, 20, 21, 24, 28 y 29, como sigue: X2 se selecciona entre Aib y Ala; X3 se selecciona entre His, Pro, Dab(Ac), Dap(Ac) y Gln(Me); X4 es DAla; X9 es Glu; X10 se selecciona entre Val, Leu, N-Me-Tyr y N-Me-DTyr; X15 es Glu; X16 se selecciona entre Aib, Lys, Glu, Leu, Val, DVal, Phe, His, Arg, Pro, DPro, N-Me-Ser y N-Me-DSer; X17 se selecciona entre Ala y Ser; X20 se selecciona entre Glu y Lys; X21 se selecciona entre Glu, Lys y Ser; X24 se selecciona entre Lys, Ser, Glu y Ala; X28 se selecciona entre Ser y Lys, y Glu, o esta ausente; X29 se selecciona entre Ser y Ala, o esta ausente; con la condicion de que Z no se seleccione entre: HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLEST; y HSQGTFTSDYSKYLESRRAKEFVEWLEST; en donde el compuesto tiene actividad agonista de glucagon y solubilidad y/o estabilidad mejoradas en comparacion con el glucagon humano nativo.

Description

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DESCRIPCION

Analogos de glucagon Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a analogos de glucagon y su uso medico, por ejemplo, en el tratamiento de hipoglucemia. En particular, la presente invencion se refiere a analogos estables de glucagon adecuados para su uso en una formulacion liquida.

Antecedentes de la invencion

El preproglucagon humano es un polipeptido precursor de 158 aminoacidos que se procesa de manera diferente en los tejidos para formar un numero de peptidos derivados de proglucagon estructuralmente relacionados, incluyendo glucagon (Glu o GCG), peptido 1 similar a glucagon (GLP-1), peptido 2 similar a glucagon (GLP-2), y oxintomodulina (OXM). Estas moleculas estan implicadas en una amplia variedad de funciones fisiologicas, incluyendo homeostasis de glucosa, secrecion de insulina, vaciado gastrico y crecimiento intestinal, asi como la regulacion de la ingesta de alimentos.

El glucagon nativo es un peptido de 29 aminoacidos que corresponde a los aminoacidos 53 a 81 del preproglucagon. El glucagon ayuda a mantener el nivel de glucosa en sangre mediante la union a receptores de glucagon sobre hepatocitos, provocando que el higado libere glucosa - almacenada en forma de glucogeno - a traves de glucogenolisis. Cuando estas reservas llegan a agotarse, el glucagon tambien estimula al higado a que sintetice glucosa adicional mediante gluconeogenesis. Esta glucosa se libera dentro de la corriente sanguinea, previniendo el desarrollo de hipoglucemia.

Debido a la estabilidad fisica y quimica relativamente baja de glucagon nativo por si mismo, los productos de glucagon que actualmente estan comercialmente disponibles, y que se destinan principalmente para su uso en situaciones de “rescate” para aliviar la hipoglucemia aguda en un sujeto diabetico que ha recibido una dosis excesivamente alta de insulina, se proporcionan en forma de preparaciones solidas secadas por congelacion destinadas a reconstitucion en un medio liquido apropiado inmediatamente antes de usarse. Los sujetos hipoglucemicos pueden, entre otros, presentar mareos y/o confusion, y en algunos casos pueden llegar a estar inconscientes o semiconscientes, volviendolos incapaces de llevar a cabo o completar la reconstitucion de liquido inicial requerida y posteriormente la inyeccion de la formulacion de glucagon en cuestion. Como resultado, esta reconstitucion e inyeccion puede tener que ser realizada por otra persona que no tiene experiencia en el procesamiento del producto en el tiempo limitado disponible antes de que ocurra la excesiva agregacion de glucagon.

Aunque son deseables los analogos estabilizados de glucagon nativo en solucion liquida, no hay comercialmente disponible formulacion liquida estable de algo asi como el analogo de glucagon.

Sobre esta base, esta claro que hay una fuerte necesidad de analogos de glucagon que, ademas de tener satisfactoriamente alta actividad en el receptor de glucagon, sean suficientemente solubles (especialmente a pH fisiologico, donde el glucagon nativo no esta) y estables (tanto fisicamente como quimicamente) en medio liquido acuoso. Estos analogos (i) se pueden proporcionar ventajosamente en forma de una formulacion farmaceutica liquida lista para usarse adaptada para inyeccion inmediata, y (ii) pueden ser capaces de ser almacenados (incluyendo ser portados por el sujeto o paciente en cuestion bajo condiciones ambientales) durante un periodo de tiempo satisfactoriamente largo antes de usarse.

Compendio de la invencion

En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona un compuesto que tiene la formula I:

R1-Z-R2 (I)

o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo; en el que

R1 es hidrogeno, alquilo C1-4, acetilo, formilo, benzoilo o trifluoroacetilo;

R2 es OH o NH2; y

Z es una secuencia de aminoacidos que procede de la secuencia de formula la:

llis-Ser-Gln-GLy-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-

Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-GEn-Asp-Phe-Val-GLn-Trp-Leu-Glu-Asn-Thr (ta)

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y que comprende ademas al menos cuatro sustituciones o deleciones de aminoacidos que estan solamente en posiciones de la secuencia de aminoacidos (designadas por una X) seleccionadas entre 2, 3, 4, 9, 10, 15, 16, 17, 20, 21, 24, 28 y 29, como sigue:

X2 se selecciona entre Aib y Ala;

X3 se selecciona entre His, Pro, Dab(Ac), Dap(Ac) y Gln(Me);

X4 es DAla;

X9 es Glu;

X10 se selecciona entre Val, Leu, N-Me-Tyr y N-Me-DTyr;

X15 es Glu;

X16 se selecciona entre Aib, Lys, Glu, Leu, Val, DVal, Phe, His, Arg, Pro, DPro, N-Me-Ser y N-Me-DSer;

X17 se selecciona entre Ala y Ser;

X20 se selecciona entre Glu y Lys;

X21 se selecciona entre Glu, Lys y Ser;

X24 se selecciona entre Lys, Ser, Glu y Ala;

X28 se selecciona entre Ser, Glu, y Lys, o esta ausente;

X29 se selecciona entre Ser y Ala, o esta ausente; con la condicion de que Z no se seleccione entre:

HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLEST; y

HSQGTFTSDYSKYLESRRAKEFVEWLEST; en donde el compuesto tiene actividad agonista de glucagon y solubilidad y/o estabilidad mejorada en comparacion con el glucagon humano nativo.

R1-Z-R2 (I)

o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo; en el que

R1 es hidrogeno, alquilo C1-4, acetilo, formilo, benzoilo o trifluoroacetilo;

R2 es OH o NH2; y

Z es una secuencia de aminoacidos que procede de la secuencia de formula la:

Ilis-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-

Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Glu-Asn-Thr (la)

y que comprende ademas al menos cuatro sustituciones o deleciones de aminoacidos que estan solamente en posiciones de la secuencia de aminoacidos seleccionadas entre 2, 3, 9, 10, 15, 16, 17, 20, 21, 24, 28 y 29, como sigue:

X2 se selecciona entre Aib y Ala;

X3 se selecciona entre His y Pro;

X9 es Glu;

X10 se selecciona entre N-Me-Tyr y N-Me-DTyr;

X15 es Glu;

X17 se selecciona entre Ala y Ser;

X20 se selecciona entre Glu y Lys;

X21 se selecciona entre Glu, Lys y Ser;

X24 se selecciona entre Lys, Ser, Glu y Ala;

X28 se selecciona entre Ser y Lys, o esta ausente;

HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLEST; y

En algunas realizaciones, las al menos cuatro sustituciones y/o deleciones de aminoacidos en posiciones de la secuencia de aminoacidos (designadas por una X) seleccionadas entre 2, 3, 4, 9, 10, 15, 16, 17, 20, 21,24, 28 y 29 del compuesto de formula I son las siguientes:

X2 se selecciona entre Aib y Ala;

X3 se selecciona entre His y Pro, Dab(Ac), Dap(Ac) y Gln(Me);

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X4 es DAla;

X9 es Glu;

X10 se selecciona entre Val, Leu, N-Me-Tyr y N-Me-DTyr;

X15 es Glu;

X16 se selecciona entre Aib, Lys, Glu, Leu, Val, Phe, His y Arg;

X17 se selecciona entre Ala y Ser;

X20 se selecciona entre Glu y Lys;

X21 se selecciona entre Glu, Lys y Ser;

X24 se selecciona entre Lys, Ser, Glu y Ala;

X28 se selecciona entre Ser, Glu, y Lys, o esta ausente;

X29 se selecciona entre Ser y Ala, o esta ausente

En algunas realizaciones, las al menos cuatro sustituciones o deleciones de aminoacidos estan en posiciones de la secuencia de aminoacidos (designadas por una X) seleccionadas entre 2, 3, 4, 10, 15, 16, 17, 20, 21,24, 28 y 29 del compuesto de formula I, y son las siguientes:

X2 es Ala;

X3 es Dab(Ac), Dap(Ac) y Gln(Me);

X4 es DAla;

X10 se selecciona entre Leu y Val;

X15 es Glu;

X16 se selecciona entre Aib, Lys, Glu, Leu, y Val;

X17 es Ala;

X20 se selecciona entre Glu y Lys;

X21 se selecciona entre Glu y Ser;

X24 se selecciona entre Lys, Ser y Glu;

X28 se selecciona entre Ser, Glu y Lys;

X29 es Ala, o esta ausente.

En algunas realizaciones, las al menos cuatro sustituciones o deleciones de aminoacidos estan en posiciones de la secuencia de aminoacidos (designadas por una X) seleccionadas entre 2, 3, 4, 16, 17, 20, 21, 24, 28 y 29 del compuesto de formula I, y son las siguientes:

X2 es Ala;

X3 es Dab(Ac), Dap(Ac), Gln(Me) o His;

X4 es DAla;

X16 se selecciona entre Aib, Lys, Glu;

X17 es Ala;

X20 se selecciona entre Glu y Lys;

X21 se selecciona entre Glu y Ser;

X24 se selecciona entre Lys, Ser y Glu;

X28 se selecciona entre Ser, Glu y Lys;

X29 es Ala, o esta ausente.

Se entendera que cualquier molecula individual comprende al menos 4 diferencias de la secuencia de formula la, que pueden ser cualquier combination de al menos 4 sustituciones y deleciones permitidas dentro de las definiciones proporcionadas.

La secuencia peptidica Z puede tener un maximo de 4 sustituciones y deleciones (tomadas en combinacion), un maximo de 5 sustituciones y deleciones, un maximo de 6 sustituciones y deleciones, un maximo de 7 sustituciones y deleciones, un maximo de 8 sustituciones y deleciones, un maximo de 9 sustituciones y deleciones, un maximo de 10 sustituciones y deleciones, un maximo de 11 sustituciones y deleciones, un maximo de 12 sustituciones y deleciones, o un maximo de 13 sustituciones y deleciones en comparacion con la secuencia de aminoacidos de Formula la.

Por ejemplo, los compuestos pueden tener entre 4 y 11 sustituciones y deleciones, entre 6 y 11 sustituciones y deleciones, entre 4 y 9 sustituciones y deleciones, o entre 6 y 9 sustituciones y deleciones.

Los compuestos de la invention tienen actividad agonista de glucagon.

Los compuestos de la invencion han mejorado la solubilidad y/o estabilidad en comparacion con el glucagon humano nativo.

La solubilidad mejorada puede comprender o constituir solubilidad mejorada en comparacion con el glucagon nativo a pH 4 (por ejemplo, en tampon acetato 100 mM a pH 4), pH 5 (por ejemplo, en tampon acetato 100 mM a pH 5), pH 6 (por ejemplo, en tampon fosfato 100 mM a pH 6), pH 7 (por ejemplo, en tampon fosfato 100 mM a pH 7), y/o pH

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7.5 (por ejemplo, en tampon fosfato 100 mM a pH 7,5). La determination se puede realizar bajo las condiciones expuestas en el Ejemplo 4. Puede ser deseable una solubilidad de > 1 mg/ml.

La estabilidad mejorada puede comprender o constituir estabilidad fisica mejorada y/o estabilidad qmmica mejorada en comparacion con el glucagon humano nativo.

La estabilidad fisica mejorada puede comprender o constituir tendencia reducida a agregarse, por ejemplo, a formar o bien agregados solubles o insolubles, por ejemplo, fibrillas. La agregacion (por ejemplo, la formation de fibrilla) se puede determinar, por ejemplo, a una concentration inicial de 1 mg/ml de peptido disuelto a pH 7,5 y 40 °C. Se puede usar cualquier periodo de tiempo apropiado, por ejemplo 24 horas, 48 horas o 96 horas. La agregacion se puede determinar bajo las condiciones expuestas en el Ejemplo 5, con o sin agitation.

La estabilidad quimica mejorada puede comprender o constituir una tendencia reducida a la escision o degradation del peptido en tampon acuoso, generalmente en ausencia de actividad de proteasa o peptidasa contaminante. La estabilidad se puede determinar, por ejemplo, a una concentracion inicial de 1 mg/ml de peptido disuelto a pH 4,0 o

7.5 y 40 °C. La valoracion puede comprender la determinacion del peptido intacto que queda despues de la incubation durante un periodo de tiempo adecuado. Esto puede implicar la determinacion de la pureza del peptido intacto como se define en el Ejemplo 6. La incubacion se puede realizar durante cualquier periodo de tiempo adecuado, por ejemplo, 1 dia, 7 dias o 14 dias. La estabilidad se puede determinar bajo las condiciones expuestas en el Ejemplo 6.

Realizaciones adicionales de la presente invention incluyen, pero no se limitan a:

un compuesto, o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo, de la invencion para su uso en terapia (por ejemplo, en el tratamiento de hipoglucemia aguda o cronica);

una composition farmaceutica que comprende un compuesto, o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo, de la invencion y un vehiculo farmaceuticamente aceptable;

un metodo de tratamiento de una enfermedad o afeccion en un sujeto en necesidad del mismo, comprendiendo el metodo la administration de una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto, o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo, de la invencion, o una composicion farmaceutica de la invencion al sujeto;

el uso de un compuesto, o una sal o solvato del mismo, de la invencion, o una composicion farmaceutica de la invencion, en la fabrication de un medicamento para su uso en la terapia (por ejemplo, en el tratamiento de hipoglucemia aguda o cronica);

una construction de acido nucleico (por ejemplo, una construction de ADN o ARN) que codifica un compuesto (peptido) o un peptido Z de la invencion;

un vector de expresion que comprende tal construccion de acido nucleico de la invencion; y

una celula hospedadora que comprende tal construccion de acido nucleico o vector de expresion de la invencion.

En algunas realizaciones, una enfermedad o afeccion a tratar con un compuesto o metodo de la invencion se selecciona entre el grupo que consiste en: hipoglucemia, hipoglucemia aguda, hipoglucemia cronica, diabetes tipo 2, tolerancia a la glucosa alterada, diabetes tipo 1, obesidad, enfermedad coronaria, ateroesclerosis, hipertension, dislipidemia, esteatosis hepatica, intoxication por p-bloqueante, insulinoma y enfermedad de Von Gierkes. En realizaciones particulares, la enfermedad o afeccion es hipoglucemia. En ciertas realizaciones, la hipoglucemia se selecciona entre el grupo que consiste en: hipoglucemia diabetica, hipoglucemia inducida por insulina aguda, hipoglucemia no diabetica, hipoglucemia reactiva, hipoglucemia por ayuno, hipoglucemia inducida por farmaco, hipoglucemia inducida por alcohol, hipoglucemia inducida por cirugia de derivation (bypass) gastrica, e hipoglucemia que ocurre durante el embarazo.

En algunas realizaciones, la invencion incluye un compuesto o su sal o solvato farmaceuticamente aceptable para el tratamiento de hipoglucemia.

Breve descripcion de los dibujos

La Figura 1 es una grafica que muestra el efecto de una administracion subcutanea unica de vehiculizante (PBS, pH 7,4), glucagon humano (20 nmol/kg de peso corporal) o Compuesto 14 de la invencion (20 y 60 nmol/kg de peso corporal), respectivamente, sobre los niveles de glucosa en sangre durante 120 minutos en ratas Sprague-Dawley machos euglucemicas ayunadas durante 5 horas y anestesiadas. Los datos son valores medios con SeM (n=6/grupo).

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Descripcion detallada de la invencion

A menos que se defina lo contrario en el presente documento, los terminos cientificos y tecnicos usados en esta solicitud tendran los significados que comunmente entiende los expertos en la tecnica. Generalmente, la nomenclatura usada en relacion, y las tecnicas de qmmica, biolog^a molecular, biologia celular y de cancer, inmunologia, microbiolog^a, farmacolog^a y quimica de protema y de acido nucleico, descritas en el presente documento, son aquellas bien conocidas y comunmente usadas en la tecnica. En caso de conflicto, la presente memoria, que incluye sus definiciones especificas, lo controlara.

Cada realizacion de la invencion descrita en el presente documento puede tomarse sola o en combinacion con una u otras mas realizaciones de la invencion.

Definiciones

A menos que se especifique lo contrario, las siguientes definiciones se proporcionan para los terminos especificos, los cuales se usan en el presente documento.

Por toda esta memoria, la palabra “comprender” o variaciones tales como “comprende” o “que comprende” se entendera que supone la inclusion de un numero entero indicado (o componentes) o grupo de numeros enteros (o componentes), pero no la exclusion de ningun otro numero entero (o componentes) o grupo de numeros enteros (o componentes).

Las formas del singular “un/a” y “el/la” incluyen los plurales a menos que el contexto claramente dicte lo contrario.

El termino “que incluye” se usa para significar “que incluye, pero no se limita a”. “Que incluye” y “que incluye, pero no se limita a” se usan intercambiablemente.

Los terminos “paciente”, “sujeto” e “individuo” se pueden usar intercambiablemente y se refieren a o bien un animal humano o no humano. Estos terminos incluyen mamiferos tales como seres humanos, primates, animales de ganado (por ejemplo, bovinos, porcinos), animales de compania (por ejemplo, caninos, felinos) y roedores (por ejemplo, ratones y ratas).

Ademas de las explicaciones de los significados de ciertos terminos o expresiones empleados en la presente memoria que se proporcionan en lo anterior, tambien se aplican las siguientes definiciones/explicaciones:

El termino “vehiculo farmaceuticamente aceptable” incluye cualquiera de los vehiculos o diluyentes farmaceuticos estandar, tal como los usados en las composiciones o formulaciones adecuadas para la administracion oral, pulmonar, rectal, nasal, topica, subcutanea, intramuscular, intravenosa, intraperitoneal, intradermica, transdermica o vaginal. Los vehicuios farmaceuticamente aceptables para el uso terapeutico son bien conocidos en la tecnica farmaceutica, y estan descritos, por ejemplo, en “Remington's Pharmaceutical Sciences”, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985). Las composiciones liquidas con frecuencia emplean soluciones acuosas no tamponadas o tamponadas como vehiculos. Por ejemplo, se puede usar solucion salina esteril o solucion salina tamponada con fosfato (PBS) a pH ligeramente acido, ligeramente alcalino o fisiologico. Los agentes de tamponamiento de pH relevantes (algunos de los cuales ya se han mencionado anteriormente en relacion con las composiciones farmaceuticas) incluyen fosfatos, citrato, acetato, tris(hidroximetil)aminometano (TRIS), acido N-tris(hidroximetil)metil-3-aminopropano-sulfonico (TAPS), bicarbonato de amonio, dietanolamina, histidina (que con frecuencia es un tampon preferido), arginina y lisina, asi como mezclas de los mismos. El termino ademas abarca algunos agentes enumerados en la Farmacopea americana para su uso en animales o seres humanos.

El termino “sal farmaceuticamente aceptable” en el contexto de la invencion se refiere a una sal que no es perjudicial al paciente o sujeto a ser tratado con la misma. Tales sales son en general sales de adicion acida o sales basicas. Sales de adicion acida incluyen sales de acidos inorganicos y sales de acidos organicos. Ejemplos no limitantes de sales de adicion acida adecuadas incluyen sales de clorhidrato, sales de fosfato, sales de formato, sales de acetato, sales de trifluoroacetato y sales de citrato. Ejemplos de sales basicas incluyen sales donde el cation se selecciona entre iones de metal alcalino, tales como sodio y potasio, iones de metal alcalinoterreo, tales como calcio, asi como iones de amonio sustituidos, por ejemplo, del tipo NR(R')3+, en el que R y R' designan independientemente alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquenilo C2-6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido. Otros ejemplos de sales farmaceuticamente aceptables estan descritos en “Remington's Pharmaceutical Sciences”, 17a edicion. Ed. Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mack Publishing Company, Easton, PA, EEUU., 1985 y ediciones mas recientes, y en la “Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology”.

El termino “solvato” en el contexto de la presente invencion se refiere a un complejo de estequiometria definida formada por un soluto (en este caso un compuesto, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, de la presente invencion) y un disolvente. Disolventes relevantes (particularmente en el caso de solvatos farmaceuticamente aceptables) incluyen, pero no se limitan a, agua, etanol y acido acetico. Solvatos en los que la

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molecula de disolvente en cuestion es agua generalmente se refieren como “hidratos”.

Los terminos “cantidad terapeuticamente eficaz” y “dosis terapeuticamente eficaz” como se emplean en el contexto de la presente invencion (notablemente en el contexto de un compuesto de la invencion) se refieren a una cantidad o una dosis suficiente para curar, aliviar, detener parcialmente o, de otra manera, promover la cura o curacion de una afeccion dada (trastorno, enfermedad) o lesion y, preferiblemente, complicaciones que surgen de la misma. Una cantidad o dosis eficaz para un fin particular dependera de la gravedad de la afeccion o lesion, asi como del peso corporal y estado general del sujeto o paciente a tratar. La determinacion de una cantidad o dosis que es apropiada esta dentro de las habilidades de un medico (o veterinario) cualificado en la tecnica.

El termino “tratamiento” (asi como “tratar" y otras variaciones del mismo) como se emplea en el contexto de la invencion se refiere a un planteamiento para obtener resultados clinicos beneficiosos o deseados. Con el fin de la presente invencion, resultados clinicos beneficiosos o deseados incluyen, pero no se limitan a, alivio de sintomas, disminucion del grado de la enfermedad, estabilizacion del (es decir, no empeoramiento del) estado de la enfermedad, retraso o frenado de la evolucion de la enfermedad, mejora o paliacion del estado de la enfermedad, y remision (sea parcial o total), sea detectable o no detectable. “Tratamiento” tambien se puede referir a prolongacion de la supervivencia en comparacion con la supervivencia esperada en ausencia de tratamiento. “Tratamiento” es una intervencion realizada con la intencion de prevenir el desarrollo de, o alterar la patologia de, un trastorno. Por consiguiente, “tratamiento” se refiere tanto al tratamiento terapeutico como a las medidas profilacticas o preventivas. Tal como se usa en el contexto de las medidas profilacticas o preventivas, el compuesto no necesita prevenir completamente el desarrollo de la enfermedad o trastorno. Aquellos en necesidad de tratamiento incluyen aquellos que ya padecen el trastorno, asi como aquellos en los que hay que prevenir el desarrollo del trastorno. “Tratamiento” tambien significa inhibicion o reduccion de un incremento en patologia o sintomas (por ejemplo, ganancia de peso o hipoglucemia) en comparacion con la ausencia de tratamiento, y no necesariamente significa suponer completo cese de la afeccion relevante.

El termino “agonista” como se emplea en el contexto de la invencion se refiere a una sustancia (ligando) que activa el tipo de receptor en cuestion.

Por toda la presente memoria, se usan los codigos de una letra y tres letras convencionales para los aminoacidos que se dan de manera natural. A menos que se indique lo contrario, la referencia se hace a las formas L-isomericas de los aminoacidos referidos en el presente documento.

Dab(Ac): acido 4-N-Acetil-2,4-diaminobutmco, acido (2S)-4-(acetilamino)-2-aminobutanoico o acido 4- (acetilamino)-2-aminobutanoico (forma L).

Dap(Ac): acido 3-N-Acetil-2,3-diaminopropionico o acido 3-(acetilamino)-2-aminopropanoico (forma L)

Gln(Me): N-5-metil-L-glutamina N-Me-Tyr: Tirosina que esta metilada en el a-nitrogeno N-Me-DTyr: D-Tirosina que esta metilada en el a-nitrogeno N-Me-Ser: Serina que esta metilada en el a-nitrogeno N-Me-DSer: D-Serina que esta metilada en el a-nitrogeno Aib: acido a-aminoisobutirico

El termino “glucagon nativo” se refiere a glucagon humano nativo que tiene la secuencia Hy-His-Ser-Gln-Gly-Thr- Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-OH (sEq ID NO: 1).

Entre las secuencias descritas en el presente documento estan secuencias que incorporan un resto “Hy-” en el terminal amino (terminal N) de la secuencia, y o bien un resto “-OH” o un resto “-NH2” en el terminal carboxi (terminal C) de la secuencia. En tales casos, y a menos que se indique lo contrario, un resto “Hy-“ en el terminal N de la secuencia en cuestion indica un atomo de hidrogeno [es decir, R1 = hidrogeno = Hy- en las formulas I y la; correspondiendo a la presencia de un grupo amino primario o secundario libre en el terminal N], mientras que un “OH” o un resto “-NH2” en el terminal C de la secuencia indica un grupo hidroxi [por ejemplo, R2 = OH en las formulas I y la; correspondiendo a la presencia de un grupo carboxi (COOH) en el terminal C] o un grupo amino [por ejemplo, R2 = NH2 en las formulas I y la; correspondiendo a la presencia de un grupo amido (CONH2) en el terminal C], respectivamente. En cada secuencia de la invencion, un resto “-OH” C-terminal puede estar sustituido por un resto “- NH2” C-terminal, y viceversa.

Algunas realizaciones de la presente invencion se refieren a compuestos que tienen la formula I:

R1-Z-R2 (I)

o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable de los mismos; en los que

R1 es hidrogeno-, alquilo C1-4, acetilo, formilo, benzoilo o trifluoroacetilo;

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R2 es -OH o -NH2; y

Z es una secuencia de aminoacidos que procede de la secuencia de formula la: liis-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-

Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gin-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-I.eu-GIu-Asn-Thr ([a)

y que comprende ademas al menos cuatro sustituciones o deleciones de aminoacidos que estan solamente en posiciones de la secuencia (designadas por una X) seleccionadas entre 2, 3, 4, 9, 10, 15, 16, 17, 20, 21,24, 28 y 29, como sigue:

X2 se selecciona entre Aib y Ala;

X3 se selecciona entre His, Pro, Dab(Ac), Dap(Ac) y Gln(Me);

X4 es DAla;

X9 es Glu;

X10 se selecciona entre Val, Leu N-Me-Tyr y N-Me-DTyr;

X15 es Glu;

X17 se selecciona entre Ala y Ser;

X20 se selecciona entre Glu y Lys;

X21 se selecciona entre Glu, Lys y Ser;

X24 se selecciona entre Lys, Ser, Glu y Ala;

X25 se selecciona entre Arg, Lys, His, Ile, Leu, Ala, Met, Cys, Asn, Val, Ser, Glu, Asp, Gln, Thr y (p)Tyr;

X28 se selecciona entre Ser, Lys, y Glu, o esta ausente;

X29 se selecciona entre Ser y Ala, o esta ausente; con la condicion de que Z no se seleccione entre: HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLEST; y

HSQGTFTSDYSKYLESRRAKEFVEWLEST; en donde el compuesto tiene actividad agonista de glucagon y solubilidad y/o estabilidad mejorada en comparacion con glucagon humano nativo.

Algunas realizaciones de la presente invencion se refieren a compuestos que tiene la formula I:

R1-Z-R2 (I)

o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable de los mismos; en los que

R1 es hidrogeno-, alquilo C1-4, acetilo, formilo, benzoilo o trifluoroacetilo;

R2 es -OH o -NH2; y

Z es una secuencia de aminoacidos que procede de la secuencia de formula la:

IlLS-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-

Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Glu-Asn-Thr (la)

y que comprende ademas al menos cuatro sustituciones o deleciones de aminoacidos que estan solamente en posiciones de la secuencia (designadas por una X) seleccionadas entre 2, 3, 9, 10, 15, 16, 17, 20, 21, 24, 28 y 29, como sigue:

X2 se selecciona entre Aib y Ala;

X3 se selecciona entre His y Pro;

X9 es Glu;

X10 se selecciona entre N-Me-Tyr y N-Me-DTyr;

X15 es Glu;

X17 se selecciona entre Ala y Ser;

X20 se selecciona entre Glu y Lys;

X21 se selecciona entre Glu, Lys y Ser;

X24 se selecciona entre Lys, Ser, Glu y Ala;

X28 se selecciona entre Ser y Lys, o esta ausente;

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HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLEST; y

En algunas realizaciones, las al menos cuatro sustituciones o deleciones de aminoacidos en posiciones de la secuencia de aminoacidos (designadas por una X) seleccionadas entre 2, 3, 4, 9, 10, 15, 16, 17, 20, 21,24, 28 y 29 del compuesto de formula I son las siguientes:

X2 se selecciona entre Aib y Ala;

X3 se selecciona entre His y Pro, Dab(Ac), Dap(Ac) y Gln(Me);

X4 es DAla;

X9 es Glu;

X10 se selecciona entre Val, Leu, N-Me-Tyr y N-Me-DTyr;

X15 es Glu;

X16 se selecciona entre Aib, Lys, Glu, Leu, Val, Phe, His y Arg;

X17 se selecciona entre Ala y Ser;

X20 se selecciona entre Glu y Lys;

X21 se selecciona entre Glu, Lys y Ser;

X24 se selecciona entre Lys, Ser, Glu y Ala;

X28 se selecciona entre Ser, Glu y Lys, o esta ausente;

X29 se selecciona entre Ser y Ala, o esta ausente.

X2 es Ala;

X3 es Dab(Ac) y Gln(Me);

X4 es DAla;

X10 se selecciona entre Leu y Val;

X15 es Glu;

X16 se selecciona entre Aib, Lys, Glu, Leu, y Val;

X17 es Ala;

X20 se selecciona entre Glu y Lys;

X21 se selecciona entre Glu y Ser;

X24 se selecciona entre Lys, Ser y Glu;

X28 se selecciona entre Ser, Glu y Lys;

X29 es Ala, o esta ausente. En algunas realizaciones, X3 se selecciona entre Dab(Ac) y Gln(Me).

X2 es Ala;

X3 es Dab(Ac), Dap(Ac), Gln(Me) o His;

X4 es DAla;

X16 se selecciona entre Aib, Lys, Glu;

X17 es Ala;

X20 se selecciona entre Glu y Lys;

X21 se selecciona entre Glu y Ser;

X24 se selecciona entre Lys, Ser y Glu;

X28 se selecciona entre Ser, Glu y Lys;

X29 es Ala, o esta ausente.

En algunas realizaciones, X17 es Ala.

En algunas realizaciones, X25 se selecciona entre Arg, His o Lys. En algunas realizaciones, los compuestos de la invention pueden comprender sustituciones en la position 25, tal como los referidos en el documento WO2011/117417. Sin embargo, tales sustituciones en la posicion 25 no son necesarias en la presente invencion para obtener estabilidad fisica aumentada de los analogos de glucagon.

En algunas realizaciones, X27 se selecciona entre Ser, Lys, Glu y Asp. En algunas realizaciones, X27 se selecciona entre: Glu y Asp. En algunas realizaciones, X27 es Glu.

En algunas realizaciones, X28 y/o X29 pueden ser residuos de aminoacidos aparte de los anteriormente descritos. En algunas realizaciones, la sustitucion puede ser una sustitucion hidrofila (por ejemplo, Arg, Lys, Asn, His, Gln, Asp,

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Ser, o Glu). En algunas realizaciones, X28 y/o X29 se pueden seleccionar entre: Glu, Asp, Lys, Arg, Ser, Leu, Ala y Gly. En algunas realizaciones, X28 es Glu o Asp. En algunas realizaciones, X29 es Glu o Asp. En algunas realizaciones, X28 es Glu y X29 es Glu.

En algunas realizaciones, X17 es Ala y X27 es Glu. En algunas realizaciones, X20 es Glu y X27 es Glu. En algunas realizaciones, X17 es Ala, X20 es Glu, y X27 es Glu. En algunas realizaciones, X16 es Aib y X27 es Glu. En algunas realizaciones, X16 es Aib, X21 es Ser, y X27 es Glu. En algunas realizaciones, X16 es Aib, X21 es Ser, X27 es Glu y X28 es Ser.

Ademas de la posibilidad de sustitucion del residuo de aminoacido en la posicion 3 (X3) en la formula la con un residuo de aminoacido seleccionado entre His, Pro, Dab(Ac) y Gln(Me), la posicion 3 tambien puede estar sustituida con un analogo de glutamina, el cual generalmente sera un aminoacido no natural (es decir, uno que no se da de manera natural en proteinas de mamifero) tal como Dap(Ac) [es decir, X3 = Dap(Ac)]. No obstante, en todas las definiciones proporcionadas en el presente documento, la invencion ademas abarca los compuestos definidos por las mismas formulas genericas pero en la que Dap(Ac) no esta permitido en X3.

En algunas realizaciones de los compuestos de la invencion, Z se selecciona entre el grupo que consiste en:

HSQGTFTSDYSKYLDSARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 2)

HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLEET (SEQ ID NO: 3)

HSQGTFTSDYSKYLDKARAEDFVKWLEST (SEQ ID NO: 4)

HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVAWLEST (SEQ ID NO: 5)

HSQGTFTSDYSKYLDEARAKDFVEWLEKT (SEQ ID NO: 6)

HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVEWLEST (SEQ ID NO: 7)

HSQGTFTSDYSKYLESARAEDFVKWLEST (SEQ ID NO: 9)

HSQGTFTSDYSKYLDSARAEEFVKWLEST (SEQ ID NO: 10) HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVSWLEST (SEQ ID NO: 11) HSQGTFTSDLSKYLDSARAEDFVKWLEST (SEQ ID NO: 12) HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEDFVKWLEST (SEQ ID NO: 13) HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLES (SEQ ID NO: 14)

HSQGTFTSDYSKYLDEARAEDFVKWLEST (SEQ ID NO: 15) HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 16) HSQGTFTSDYSKYLESARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 17) HSQGTFTSDYSKYLDLARAEDFVKWLEST (SEQ ID NO: 18) HSQGTFTSDYSKYLDKRRAEDFVSWLEST (SEQ ID NO: 19) HSQGTFTSDYSKYLDVARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 20)

HAQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 21) HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST (SEQ ID NO: 22)

HSQ-DAla-TFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 23) HSQGTFTSDVSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 24) HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 25) HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-RRAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 26) HS-[Gln(Me)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 27) HSQGTFTSDYSKYLDEARAKSFVEWLEKT (SEQ ID NO: 28) HSQGTFTSDYSKYLDEARAKSFVEWLEST (SEQ ID NO: 29) HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAKSFVEWLEKT (SEQ ID NO: 30) HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLESA (SEQ ID NO: 31) HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 32) HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 33) HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVSWLEKT (SEQ ID NO: 34) HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEKFVEWLEST (SEQ ID NO: 35) HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVAWLEST (SEQ ID NO: 36) HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEET (SEQ ID NO: 37) HSQGTFTSDYSKYLE-Aib-ARAEEFVKWLEST (SEQ ID NO: 38) HSHGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST (SEQ ID NO: 39) HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST (SEQ ID NO: 40) y HS-[Dap(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST (SEQ ID NO: 41).

Compuestos especificos de la invencion incluyen:

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAESFVKWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLEET-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDKARAEDFVKWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVAWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDEARAKDFVEWLEKT-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVEWLEST-OH

Compuesto 1 Compuesto 2 Compuesto 3 Compuesto 4 Compuesto 5 Compuesto 6

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Hy-HSQGTFTSDYSKYLESARAEDFVKWLEST-OH Compuesto 8; Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEEFVKWLEST-OH Compuesto 9; Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVSWLEST-OH Compuesto 10; Hy-HSQGTFTSDLSKYLDSARAEDFVKWLEST-OH Compuesto 11; Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEDFVKWLEST-OH Compuesto 12; Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLES-OH Compuesto 13; Hy-HSQGTFTSDYSKYLDEARAEDFVKWLEST-OH Compuesto 14; Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH Compuesto 15; Hy-HSQGTFTSDYSKYLESARAESFVKWLEST-OH Compuesto 16; Hy-HSQGTFTSDYSKYLDLARAEDFVKWLEST-OH Compuesto 17; Hy-HSQGTFTSDYSKYLDKRRAEDFVSWLEST-OH Compuesto 18; Hy-HSQGTFTSDYSKYLDVARAESFVKWLEST-OH Compuesto 19; Hy-HAQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH Compuesto 20; Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH Compuesto 21; Hy-HSQ-DAla-TFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH Compuesto 22; Hy-HSQGTFTSDVSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH Compuesto 23; Hy-HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-NH2 Compuesto 24; Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-RRAESFVKWLEST-OH Compuesto 25; Hy-HS-[Gln(Me)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH Compuesto 26; Hy-HSQGTFTSDYSKYLDEARAKSFVEWLEKT-OH Compuesto 27; Hy-HSQGTFTSDYSKYLDEARAKSFVEWLEST-OH Compuesto 28; Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAKSFVEWLEKT-OH Compuesto 29; Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLESA-OH Compuesto 30; Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-NH2 Compuesto 31; Hy-HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH Compuesto 32; Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVSWLEKT-OH Compuesto 33; Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEKFVEWLEST-OH Compuesto 34; Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVAWLEST-OH Compuesto 35; Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEET-OH Compuesto 36; Hy-HSQGTFTSDYSKYLE-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH Compuesto 37; Hy-HSHGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-NH2 Compuesto 38; Hy-HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH Compuesto 39; Hy-HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-NH2 Compuesto 40; Hy-HS-[Dap(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-NH2 Compuesto 41;

y sus sales y solvatos farmaceuticamente aceptables.

Cada uno de los ultimos compuestos espedficos (peptidos), y sus sales y solvatos farmaceuticamente aceptables, de la invencion constituyen ademas una realization individual de la invention. Por tanto, en una realization el compuesto de la invencion es

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAESFVKWLEST-OH

o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLEET-OH

o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDYSKYLDKARAEDFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVAWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo. En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDYSKYLDEARAKDFVEWLEKT-OH

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o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo. En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVEWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo. En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDYSKYLESARAEDFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo. En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEEFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo. En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVSWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo. En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDLSKYLDSARAEDFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo. En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEDFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo. En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLES-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo. En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDYSKYLDEARAEDFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo. En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo. En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDYSKYLESARAESFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo. En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDYSKYLDLARAEDFVKWLEST-OH

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En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDYSKYLDKRRAEDFVSWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDYSKYLDVARAESFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HAQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HSQ-DAIa-TFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HSQGTFTSDVSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-NH2 o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-RRAESFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HS-[Gln(Me)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDYSKYLDEARAKSFVEWLEKT-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSQGTFTSDYSKYLDEARAKSFVEWLEST-OH

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En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAKSFVEWLEKT-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLESA-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-NH2 o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVSWLEKT-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEKFVEWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVAWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEET-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HSQGTFTSDYSKYLE-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En aun otra realizacion el compuesto de la invencion es Hy-HSHGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-NH2 o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH

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En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-NH2 o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion el compuesto de la invencion es

Hy-HS-[Dap(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-NH2 o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

Los compuestos de la invencion pueden tener uno o mas puentes intramoleculares dentro de la secuencia peptidica. Cada puente esta formado entre las cadenas laterales de dos residuos de aminoacidos en la secuencia que estan generalmente separados por otros tres residuos de aminoacidos (es decir, entre una cadena lateral de aminoacidos A y una cadena lateral de aminoacidos A+4).

Por ejemplo, dicho puente puede estar formado entre las cadenas laterales de los pares de residuo de aminoacidos 12 y 16, 16 y 20, 20 y 24, o 24 y 28. Las dos cadenas laterales en cuestion se pueden unir a otra a traves de interacciones ionicas, o por enlaces covalentes. Por tanto, tales pares de residuos de aminoacidos pueden contener, por ejemplo, cadenas laterales opuestamente cargadas capaces de formar un puente de sal o que dan como resultado una interaccion ionica. En tales casos, uno de los residuos de aminoacidos en cuestion pueden, por ejemplo, ser Glu o Asp, mientras que el otro puede, por ejemplo, ser Lys o Arg. El emparejamiento de Lys y Glu o Lys y Asp tambien puede conducir a la formacion de un anillo de lactama.

Composiciones farmaceuticas

En algunas realizaciones, la presente invencion se refiere a las composiciones farmaceuticas que comprenden un compuesto (o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo) de la invencion y un vehiculo farmaceuticamente aceptable. Tales composiciones farmaceuticas se pueden preparar mediante tecnicas convencionales, por ejemplo, como se describe en “Remington: The Science and Practice of Pharmacy", 19a edicion, 1995.

Ciertas realizaciones de composiciones farmaceuticas liquidas de la invencion pueden comprender un compuesto de la invencion presente en una concentracion desde aproximadamente 0,01 mg/ml a aproximadamente 25 mg/ml, tal como desde aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml, por ejemplo, desde aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 5 mg/ml. En algunas realizaciones, la composition tiene un pH desde 2,0 a 10,0. Una composicion farmaceutica de la invencion puede comprender ademas un sistema tampon, conservante(s), agente(s) de isotonicidad, establizador(es) quelantes y/o tensioactivo(s). Realizaciones particularmente utiles de las composiciones farmaceuticas liquidas de la invencion son composiciones acuosas, es decir, composiciones que comprenden agua. Tales composiciones pueden estar en forma de una solution acuosa o una suspension acuosa. Realizaciones preferidas de las composiciones farmaceuticas acuosas de la invencion son las soluciones acuosas. En el contexto de la invencion el termino “composicion acuosa" se referira normalmente a una composicion que comprende al menos 50 % en peso (50 % p/p) de agua. Igualmente, el termino “solucion acuosa" se referira normalmente a una solucion que comprende al menos 50 % p/p de agua, y el termino “suspension acuosa" a una suspension que comprende al menos 50 % p/p de agua.

En algunas realizaciones, una composicion farmaceutica de la invencion comprende una solucion acuosa de un compuesto (o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo) de la presente invencion a una concentracion de desde aproximadamente 0,1 mg/ml o por encima, junto con un tampon, teniendo la composicion un pH desde aproximadamente 2,0 a aproximadamente 10,0, tal como un pH desde aproximadamente 6,0 a aproximadamente 8,5, por ejemplo, desde aproximadamente 6,5 a aproximadamente 8,5, tal como desde aproximadamente 7,0 a aproximadamente 8,5, o desde aproximadamente 6,5 a aproximadamente 8,0.

En otras realizaciones de una composicion farmaceutica de la invencion, el pH de la composicion es un pH seleccionado entre la lista que consiste en 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1,3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6,

3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2,

6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9, 8,0, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6, 8,7, 8,8,

8,9, 9,0, 9,1, 9,2, 9,3, 9,4, 9,5, 9,6, 9,8, 9,9, y 10,0. El pH de la composicion puede ser al menos 1 unidad de pH

desde (es decir, mayor o menor que) el punto isoelectrico del compuesto constituyente de la invencion, tal como al menos 2 unidades de pH desde (es decir, mayor o menor que) el punto isoelectrico del compuesto analogo de glucagon de la invencion.

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En realizaciones adicionales de las composiciones farmaceuticas que contienen tampon de la invention, el tampon o sustancia tampon se selecciona entre el grupo que consiste en: tampones acetato (por ejemplo, acetato de sodio), carbonato de sodio, citratos (por ejemplo, citrato de sodio), glicilglicina, histidina, glicina, lisina, arginina, fosfatos (por ejemplo, elegidos entre dihidrogenofosfato de sodio, hidrogenofosfato de disodio y fosfato de trisodio), TRIS (es decir, tris(hidroximetil)aminometano), HEPES (es decir, acido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazina-etanosulfonico), BICINE (es decir, N,N-bis(2-hidroxietil)glicina), y TRIClNE (es decir, N-[tris(hidroximetil)metil]glicina), asi como tampones de succinato, malato, maleato, fumarato, tartrato y aspartato, y mezclas de los mismos.

En realizaciones adicionales de las composiciones farmaceuticas de la invencion, la composition comprende un conservante farmaceuticamente aceptable. Los conservantes relevantes incluyen conservantes seleccionados entre el grupo que consiste en: fenol, o-cresol, m-cresol, p-cresol, p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de etilo, p-hidroxibenzoato de propilo, p-hidroxibenzoato de butilo, 2-fenoxietanol, 2-feniletanol, alcohol bencilico, etanol, clorobutanol, tiomerosal, bronopol, acido benzoico, imidurea, clorhexidina, dehidroacetato de sodio, clorocresol, cloruro de bencetonio, clorfenesina [es decir, 3-(p-clorofenoxi)propano-1,2-diol] y mezclas de los mismos. El conservante puede estar presente en una concentration de desde 0,1 mg/ml a 30 mg/ml, tal como desde 0,1 mg/ml a 20 mg/ml (por ejemplo, desde 0,1 mg/ml a 5 mg/ml, o desde 5 mg/ml a 10 mg/ml, o desde 10 mg/ml a 20 mg/ml) en la composicion liquida final. El uso de un conservante en composiciones farmaceuticas es bien conocido por los expertos en la tecnica. A este respecto, la referencia se puede hacer a “Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edition, 1995.

En realizaciones adicionales, una composicion farmaceutica de la invencion comprende un agente de isotonicidad (es decir, un agente farmaceuticamente aceptable que esta incluido en la composicion con el fin de volver la composicion isotonica). En algunas realizaciones, la composicion se administra a un sujeto por inyeccion. Agentes de isotonicidad relevantes incluyen agentes seleccionados entre el grupo que consiste en: sales (por ejemplo, cloruro de sodio), azucares y alcoholes de azucar, aminoacidos (incluyendo glicina, arginina, lisina, isoleucina, acido aspartico, triptofano y treonina), alditoles (incluyendo glicerol, propilenglicol (es decir, 1,2-propanodiol), 1,3- propanodiol y 1,3-butanodiol), polietilenglicoles (incluyendo PEG400) y mezclas de los mismos. Azucares adecuados incluyen mono-, di- y polisacaridos, y glucanos solubles en agua, tales como fructosa, glucosa, manosa, sorbosa, xilosa, maltosa, lactosa, sacarosa, trehalosa, dextrano, pululano, dextrina, ciclodextrina, almidon soluble, hidroxietil almidon y carboximetilcelulosa sal sodica. En algunas realizaciones se puede emplear la sacarosa. Alcoholes de azucar adecuados incluyen hidrocarburos C4-C8 hidroxilados, incluyendo manitol, sorbitol, inositol, galactitol, dulcitol, xilitol y arabitol. En algunas realizaciones se puede emplear manitol. Los azucares o alcoholes de azucar anteriormente mencionados se pueden usar individualmente o en combination. No hay limite fijado para la cantidad de agente de isotonicidad usado, siempre que sea soluble en la formulation liquida, establezca isotonicidad y no afecte adversamente a la estabilidad de la composicion. La concentracion del agente de isotonicidad (por ejemplo, azucar o alcohol de azucar) en la composicion liquida final puede ser, por ejemplo, desde aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 150 mg/ml, tal como desde 1 mg/ml a 50 mg/ml. En realizaciones particulares, la concentracion puede ser desde 1 mg/ml a 7 mg/ml, o desde 8 mg/ml a 24 mg/ml, o desde 25 mg/ml a 50 mg/ml. El uso de un agente de isotonicidad en composiciones farmaceuticas es bien conocido por los expertos en la tecnica. A este respecto, la referencia se puede hacer a “Remington: The Science and Practice of Pharmacy", 19a edicion, 1995.

En realizaciones adicionales de las composiciones farmaceuticas de la invencion, la composicion comprende un agente quelante. Agentes quelantes relevantes incluyen sales de acido etilendiaminotetraacetico (EDTa), acido citrico o acido aspartico, y mezclas de los mismos. El agente quelante puede estar adecuadamente presente en la composicion liquida final en una concentracion de desde 0,1 mg/ml a 5 mg/ml, tal como desde 0,1 mg/ml a 2 mg/ml, o desde 2 mg/ml a 5 mg/ml. El uso de un agente quelante en composiciones farmaceuticas es bien conocido por los expertos en la tecnica. A este respecto, la referencia se puede hacer a “Remington: The Science and Practice of Pharmacy", 19a edicion, 1995.

En realizaciones adicionales de las composiciones farmaceuticas de la invencion, la composicion comprende un estabilizador. El uso de un estabilizador en composicion farmaceuticas es bien conocido por los expertos en la tecnica, y a este respecto la referencia se puede hacer a “Remington: The Science and Practice of Pharmacy", 19a edicion, 1995. Las composiciones farmaceuticas particularmente utiles de la invencion son composiciones liquidas estabilizadas con componentes terapeuticamente activos que incluyen un compuesto de la invencion (por ejemplo, un peptido de la invencion) que puede de otra manera presentar formation de agregado durante el almacenamiento en un medio liquido. En este contexto, “formacion de agregado" se refiere a interacciones fisicas entre las moleculas peptidicas que dan como resultado la formacion de ensamblajes mas grandes que se someten a algun grado de precipitation visible a partir de la solution. Tal como se usa en el presente documento, “durante el almacenamiento en un medio liquido" se refiere al almacenamiento de una composicion liquida que, una vez preparada, no necesariamente se administra inmediatamente a un sujeto. En su lugar, despues de la preparation, se puede empaquetar para almacenamiento, o bien en una forma liquida, en un estado congelado, o en una forma seca para la posterior reconstitution en una forma liquida u otra forma adecuada para la administration a un sujeto. Tal como se usa en el presente documento, “forma seca" se refiere a una composicion o formulacion farmaceutica inicialmente liquida que se ha secado por secado por congelation (es decir, liofilizacion), por secado por pulverization o por secado al aire. La formacion de agregado mediante un peptido durante el almacenamiento de una composicion farmaceutica liquida del mismo puede afectar adversamente a la actividad biologica del peptido en cuestion, dando

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como resultado una perdida de la eficacia terapeutica de la composicion farmaceutica. Ademas, la formacion de agregado puede causar otros problemas, tales como bloqueo de conductos, membranas o bombas si tal composicion farmaceutica que contiene el peptido se administra usando un sistema de infusion. Por tanto, los peptidos de la invention pueden ser beneficiosos en la superacion de estos problemas.

Ejemplos de estabilizadores apropiados para la incorporation en las composiciones farmaceuticas de la invencion incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: aminoacidos en su forma de base libre o forma de sal, por ejemplo, aminoacidos que portan una cadena lateral cargada, tal como arginina, lisina, acido aspartico o acido glutamico, o aminoacidos tales como glicina o metionina (asi la incorporacion de metionina puede inhibir adicionalmente la oxidation de residuos de metionina en peptidos que comprenden al menos un residuo de metionina susceptible a tal oxidation); ciertos polimeros (por ejemplo, polietilenglicoles (tales como PEG 3350), alcohol polivimlico (PVA), polivinilpirrolidona (PVP), y carboxi-/hidroxicelulosa y sus derivados); ciclodextrinas; sustancias que contienen azufre (tales como monotioglicerol, acido tioglicolico y 2-metiltioetanol); y tensioactivos (tales como tensioactivos no ionicos, incluyendo tensioactivos no ionicos de los tipos de Poloxamero o Polisorbato (Tween). El uso de un tensioactivo en composiciones farmaceuticas es bien conocido por los expertos en la tecnica. A este respecto, la referencia se puede hacer a “Remington: The Science and Practice of Pharmacy", 19a edition, 1995.

Tipos adicionales de constituyentes tambien pueden estar presentes en las composiciones farmaceuticas de la presente invencion. Ejemplos no limitantes de clases de tales constituyentes incluyen agentes humectantes, emulsionantes, antioxidantes, agentes espesantes, vehiculizantes oleaginosos y proteinas (por ejemplo, albumina de suero humano o gelatina).

Las composiciones farmaceuticas de la invencion se pueden administrar a un paciente en necesidad de tal tratamiento en diversos sitios, por ejemplo, administration en sitios que evita la absorcion, tal como en una arteria o vena o en el corazon, y en sitios que implican la absorcion, tal como en la piel, bajo la piel, en un musculo o en el abdomen. Mas generalmente, la administracion de las composiciones farmaceuticas segun la invencion puede ser diversas vias de administracion, tales como, o por ejemplo, vias parenterales, epidermicas, dermicas o transdermicas. En algunas realizaciones, pueden ser utiles otras vias tales como lingual, sublingual, bucal, oral, vaginal o rectal.

Las composiciones de la invencion se pueden administrar en diversas formas de dosificacion, por ejemplo, soluciones, suspensiones o emulsiones, y son utiles en la formacion de sistemas de reparto de farmaco de liberation controlada, sostenida, prolongada, retardada o lenta. Mas especificamente, pero no exclusivamente, las composiciones farmaceuticas de la invencion son utiles en relation con los sistemas de liberacion controlada y liberacion sostenida parenteral, bien conocidos por los expertos en la tecnica. La referencia general se puede hacer a este respecto a “Handbook of Pharmaceutical Controlled Release" (Wise, D.L., ed., Marcel Dekker, Nueva York, 2000) y Drugs and the Pharmaceutical Sciences vol. 99: “Protein Formulation and Delivery" (MacNally, E.J., ed., Marcel Dekker, Nueva York, 2000).

La administracion parenteral (de una composicion farmaceutica liquida de la invencion) se puede realizar, por ejemplo, por inyeccion subcutanea, intramuscular, intraperitoneal o intravenosa por medio de una jeringa, adecuadamente una jeringa tipo lapicero. Alternativamente, la administracion parenteral puede tener lugar por medio de una bomba de infusion, por ejemplo, en forma de un dispositivo o sistema cargado por un sujeto o paciente y que comprende un deposito que contiene una composicion liquida de la invencion y una bomba de infusion para el reparto/administracion de la composicion al sujeto o paciente, o en la forma de un dispositivo miniaturizado correspondiente adecuado para la implantation dentro del cuerpo del sujeto o paciente.

El termino “composicion estabilizada" como se emplea en el presente documento se refiere a una composicion que tiene estabilidad fisica incrementada, estabilidad quimica incrementada o estabilidad fisica y quimica incrementada. El termino “estabilidad fisica" como se usa en el presente documento se refiere a una medida de la tendencia de un peptido (por ejemplo, un compuesto de la invencion) para formar agregados solubles o insolubles del peptido, por ejemplo, como resultado de la exposition del peptido a tensiones y/o interaction con interfaces y superficies que se estan desestabilizando, tales como superficies e interfaces hidrofobas. La estabilidad fisica de composiciones pepfidicas acuosas se puede evaluar por medio de inspection visual y/o medidas de turbidez despues de exponer la composicion, rellenada en recipientes adecuados (por ejemplo, cartuchos o viales), a tension mecanica/fisica (por ejemplo, agitation) a diferentes temperaturas durante diversos periodos de tiempo. Una composicion se puede clasificar como fisicamente inestable con respecto a la agregacion pepfidica cuando presenta turbidez visual. Alternativamente, la turbidez de una composicion se puede evaluar por mediciones de turbidez simples bien conocidas por los expertos en la tecnica. La estabilidad fisica de una composicion pepfidica acuosa tambien se puede evaluar usando un agente que funciona como una sonda espectroscopica del estado conformacional del peptido. La sonda preferiblemente es una molecula pequena que preferiblemente se une a un conformador no nativo del peptido. Un ejemplo de tal sonda espectroscopica molecular pequena es Tioflavina T, que es un colorante fluorescente que se ha usado ampliamente para la detection de fibrillas amiloides. En presencia de fibrillas, y quizas tambien otras configuraciones de peptido, Tioflavina T da lugar a un nuevo maximo de excitation a aproximadamente 450 nm y emision aumentada a aproximadamente 482 nm cuando se une a una forma de fibrilla de un peptido. La tioflavina T no unida es basicamente no fluorescente a las longitudes de onda en cuestion.

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El termino “estabilidad quimica” como se usa en el presente documento se refiere a la estabilidad de un peptido con respecto a cambios quimicos covalentes en la estructura del peptido que conduce a la formacion de productos de degradation qmmica con potencia biologica potencialmente menor y/o inmunogenicidad potencialmente incrementada en comparacion con la estructura del peptido nativo. Se pueden formar diversos productos de degradacion quimica, dependiendo del tipo y naturaleza detallada del peptido nativo y el ambiente al que el peptido se expone. En la practica, en general no se puede evitar completamente la elimination de la degradacion quimica en composiciones peptidicas, y la formacion de cantidades incrementadas de productos de degradacion quimica con frecuencia se ve durante el almacenamiento y uso de tales composiciones, como es bien conocido por los expertos en la tecnica. Muchos peptidos son susceptibles de un proceso de degradacion en el que el grupo amida de la cadena lateral en residuos de glutaminilo o asparaginilo se hidroliza para formar un acido carboxilico libre. Otras rutas de degradacion implican la formacion de productos de transformation de alto peso molecular en las que dos o mas moleculas peptidicas llegan a estar covalentemente unidas unas a otras a traves de transamination y/o interacciones de disulfuro, conduciendo a la formacion de oligomero covalentemente unido y productos de degradacion de polimero (vease, por ejemplo, “Stability of Protein Pharmaceuticals”, Ahern. T.J. y Manning M.C., Plenum Press, Nueva York 1992). La oxidation (por ejemplo, de residuos de metionina) es otra forma de degradacion quimica de peptidos. La estabilidad quimica de una composition peptidica se puede evaluar midiendo las cantidades de productos de degradacion quimica en diversos momentos despues de la exposition a diferentes condiciones ambientales (por ejemplo, con frecuencia se puede acelerar la formacion de productos de degradacion incrementando la temperatura). La cantidad de cada producto de degradacion individual se puede determinar mediante la separation de los productos de degradacion basandose en el peso molecular y/o carga usando diversas tecnicas cromatograficas (por ejemplo, SEC-HPLC y/o RP-HPLC).

La inestabilidad quimica del glucagon por si mismo a pH bajo es debida a isomerization y escision de residuos de acido aspartico, desamidacion de residuos de glutamina y oxidacion de metionina. Generalmente hablando, la desaminacion de Asn y Gln se da a pH alto, con indices significativos a pH fisiologico alrededor de pH 7,4 por un intermediario de anillo de imida ciclica que puede abrirse para crear L-Asp y L-isoAsp o L-Glu y L-isoGlu, respectivamente. El intermediario de anillo de imida ciclica tambien puede conducir a la formacion de pequenas cantidades de los D-isomeros correspondientes, indicando una racemizacion lenta de la imida ciclica.

A valores de pH por debajo del pH fisiologico, se reduce el indice de desamidacion de Asn y Gln, pero el indice de formacion de una imida ciclica de Asp y Glu, y por lo tanto la isomerizacion, se incrementa con pH decreciente. La formacion de imida ciclica es la mayor entre pH 4 y pH 6. La formacion del intermediario de imida ciclica tambien puede dar como resultado escision de la secuencia peptidica.

Tal como se resumio anteriormente, una “composicion estabilizadora” puede referirse asi a una composicion con estabilidad fisica incrementada, o estabilidad quimica incrementada, o estabilidad fisica y quimica incrementada. En general, una composicion deberia ser estable durante el uso y el almacenamiento (conforme a las condiciones de uso y almacenamiento recomendadas) al menos hasta que se alcance la fecha de caducidad especificada.

En ciertas realizaciones de las composiciones farmaceuticas de la invention (por ejemplo, composiciones liquidas) la composicion es estable durante al menos 2 semanas de uso y durante al menos 6 meses de almacenamiento. En realizaciones adicionales, la composicion es estable durante al menos 2 semanas de uso y durante al menos un ano de almacenamiento, En aun realizaciones adicionales, la composicion es estable durante al menos 2 semanas de uso y durante al menos dos anos de almacenamiento. En otras realizaciones, la composicion es estable durante al menos 4 semanas de uso y durante al menos dos anos de almacenamiento, o incluso durante al menos 4 semanas de uso y durante mas de 3 anos de almacenamiento. Realizaciones particularmente utiles de tales composiciones farmaceuticas de la invencion son estables durante al menos 6 semanas de uso y durante al menos 3 anos de almacenamiento. En este aspecto, el termino “uso” con el fin de este parrafo se refiere a sacar la composicion farmaceutica del almacenamiento con el fin de emplear la composicion con fines terapeuticos, y de ese modo sometiendola a condiciones ambientales variadas (condiciones de luz, oscuridad, temperatura, agitation, etc.), mientras que el termino “almacenamiento” con el fin de este parrafo se refiere al almacenamiento bajo condiciones no agitadas en una nevera o congelador a una temperatura que no excede aproximadamente 5 °C. El experto en la tecnica entendera el intervalo normal de las condiciones de uso y almacenamiento al que estas composiciones farmaceuticas se pueden someter.

Acidos nucleicos, vectores de expresion y celulas hospedadoras

La invencion proporciona una molecula de acido nucleico (por ejemplo, una molecula de acido nucleico aislado) que codifica un compuesto de la invencion, o la secuencia peptidica Z de un compuesto de la invencion.

Se entendera que un compuesto de la invencion, o secuencia peptidica Z, generalmente se puede codificar solamente por una secuencia de acido nucleico cuando la secuencia peptidica Z comprende solamente aminoacidos que se dan de manera natural, es decir, los veinte aminoacidos que se dan de manera natural en proteinas de mamiferos.

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Tal como se discutio anteriormente, la invencion se refiere, entre otros, a un vector de expresion que comprende una secuencia construccion de acido nucleicos de la invencion, opcionalmente en combinacion con una o mas secuencias para dirigir su expresion, y a una celula hospedadora que contiene un vector de expresion de la invencion. Preferiblemente la celula hospedadora es capaz de expresar y secretar un compuesto de la invencion o un compuesto que tiene la secuencia peptidica Z de un compuesto de la invencion. En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona un metodo de producir un compuesto de la invencion, en el que el metodo comprende cultivar celulas hospedadoras de la invencion bajo condiciones adecuadas para expresar el compuesto y purificar el compuesto asi producido. Alternativamente, el metodo puede comprender la expresion de un compuesto que tiene la secuencia peptidica Z de un compuesto de la invencion, y posteriormente la modificacion del terminal N y/o C para obtener un compuesto de la invencion. La invencion ademas proporciona (i) un acido nucleico de la invencion, (ii) un vector de expresion de la invencion, y (iii) una celula hospedadora capaz de expresar y opcionalmente secretar un compuesto de la invencion, para su uso en un metodo de tratamiento medico. El acido nucleico, el vector de expresion y las celulas hospedadoras se pueden usar para el tratamiento de cualquiera de los trastornos descritos en el presente documento que se pueden tratar con un compuesto de la propia invencion. Las referencias a una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de la invencion, la administracion de un compuesto de la invencion, o cualquiera de su uso terapeutico, por lo tanto, se deberian construir para abarcar el uso equivalente de un acido nucleico, vector de expresion o celula hospedadora de la invencion, excepto donde el contexto demanda lo contrario.

Sintesis de peptido

Los peptidos de la presente invencion se pueden fabricar mediante metodos sinteticos quimicos estandar, o usando sistemas de expresion recombinante, o mediante cualquier otro metodo adecuado de vanguardia. Por tanto, los analogos de glucagon se pueden sintetizar en un numero de modos, incluyendo, entre otros, metodos que comprenden:

(a) sintetizar el peptido por medio de metodologia en fase solida o fase liquida, o bien gradual o mediante

ensamblaje de fragmento, y aislar y purificar el producto peptidico final; o

(b) expresar una construccion de acido nucleico que codifica el peptido en una celula hospedadora, y recuperar

el producto de expresion del cultivo de celula hospedadora; o

(c) efectuar la expresion in vitro acelular de una construccion de acido nucleico que codifica el peptido, y

recuperar el producto de expresion;

o que emplean cualquier combinacion de metodos como en (a), (b) y (c) para obtener fragmentos del peptido, reuniendo posteriormente (por ejemplo, ligando) los fragmentos para obtener el peptido completo, y recuperar el peptido.

Puede ser preferible sintetizar compuestos de la invencion por medio de sintesis de peptido en fase solida o fase liquida, la metodologia de lo cual es bien conocida por los expertos en la tecnica de sintesis de peptido. La referencia tambien se puede hacer a este respecto a, por ejemplo, el documento WO 98/11125 y Fields, G.B. y col., 2002, "Principles and practice of solid-phase peptide synthesis". En: “Synthetic Peptides" (2a Edicion), y ejemplos proporcionados en los mismos.

Para la expresion recombinante, las construcciones de acido nucleico de la invencion se pueden insertar en vectores adecuados para formar vectores de clonacion o expresion que llevan a cabo las construcciones de acido nucleico de la invencion (constituyendo tales vectores tambien aspectos de la presente invencion). Los vectores pueden, dependiendo del fin y tipo de aplicacion, estar en forma de plasmidos, fagos, cosmidos, minicromosomas, o viral, pero el ADN desnudo que solamente se expresa transitoriamente en ciertas celulas puede ser tambien un vector importante. Los vectores de clonacion y expresion preferidos (vectores plasmidos) de la invencion son capaces de replicacion, posibilitando de ese modo alto numeros de copias con el fin de expresion de alto nivel o replicacion de alto nivel para la posterior clonacion.

En general, un vector de expresion puede comprender las siguientes caracteristicas en la direccion 5'^3' y unido de manera operable: un promotor para conducir la expresion del fragmento de acido nucleico de la invencion, opcionalmente una secuencia de acido nucleico que codifica un peptido lider que posibilita la secrecion (a la fase extracelular o, donde sea aplicable, en el periplasma), el fragmento de acido nucleico que codifica el peptido de la invencion, y opcionalmente una secuencia de acido nucleico que codifica un terminador. El vector de expresion tambien puede comprender caracteristicas adicionales tales como marcadores seleccionables y origenes de replicacion. Cuando se opera con vectores de expresion en cepas productoras o lineas celulares, se puede preferir que el vector sea capaz de integrarse dentro del genoma de la celula hospedadora. El experto en la tecnica estara familiarizado con los vectores adecuados, y sera capaz de disenar uno segun los requerimientos especificos en cuestion.

Los vectores de la invencion se pueden usar para transformar las celulas hospedadoras para producir compuestos de la invencion. Tales celulas transformadoras, que tambien constituyen las realizaciones de la invencion, pueden ser celulas o lineas celulares cultivadas usadas para la propagacion de los fragmentos de acido nucleico de la

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invention, o se pueden usar para la production recombinante de los peptidos de la invention.

En algunas realizaciones, las celulas transformadas de la invencion son microorganismos tales como bacterias (por ejemplo, especies de Escherichia (por ejemplo, E. coli), Bacillus (por ejemplo, B. subtilis), Salmonella o Mycobacterium (preferiblemente no patogenos, por ejemplo, M. bovis BCG)), levaduras (por ejemplo, Saccharomyces cerevisiae o Pichia pastoris), o protozoos. Alternativamente, las celulas transformadas pueden proceder de un organismo multicelular, por ejemplo, las celulas pueden ser celulas fungicas, celulas de insecto, celulas de alga, celulas vegetales o celulas animales tales como celulas de mamifero. Con el fin de donation y/o expresion optimizada, la celula transformada puede ser capaz de replicar la construction de acido nucleico de la invencion. Las celulas que expresan las construcciones de acido nucleico son realizaciones utiles de la invencion, y se pueden usar para la preparation a pequena escala o a gran escala de peptidos de la invencion.

Cuando se produce un peptido de la invencion por medio de celulas transformadas, sera conveniente, aunque no esencial, que el producto de expresion se secrete dentro del medio de cultivo.

Eficacia

Los compuestos de la invencion tienen actividad agonista de glucagon.

La union de los compuestos relevantes a receptores de glucagon (Glu o GCG) se puede usar como una indication de la actividad agonista. En realizaciones alternativas, tambien se puede usar un ensayo biologico que mide la senalizacion intracelular causada por la union del compuesto al receptor. Por ejemplo, la activation del receptor de glucagon por un agonista del receptor de glucagon estimulara la formation de AMP dclico celular (cAMP). Por tanto, la produccion de cAMP en celulas adecuadas que expresan el receptor se puede usar para hacer un seguimiento de la actividad del receptor.

El experto en la tecnica sera consciente de los formatos de ensayo adecuados, y mas adelante se proporcionan ejemplos. A modo de ejemplo, el ensayo puede emplear el receptor de glucagon humano (GCG-R) que tiene numero de acceso primario GI:4503947 (NP_000l51.1) o que tiene numero de acceso primario P47871. El experto en la tecnica entendera a este respecto que cuando se refiere a secuencias de proteinas precursoras, los ensayos pueden hacer uso de la proteina madura que carece de la secuencia senal. Las celulas adecuadas generalmente son celulas de mamifero, por ejemplo, celulas de roedores o primates, por ejemplo, celulas de rata, raton o hamster o celulas humanas tales como celulas HEK293. Pueden expresar su receptor de glucagon endogeno o pueden haber sido modificadas por ingenieria para expresar el receptor de glucagon (por ejemplo, teniendo la secuencia humana anteriormente referida). El ensayo se puede realizar usando los materiales y bajo las condiciones expuestas en el Ejemplo 3.

Los valores de EC50 se pueden usar como una medida numerica de la potencia agonista en un receptor dado, siendo el valor de EC50 una medida de la concentration de un compuesto requerida para alcanzar la mitad de esa actividad maxima del compuesto hacia el receptor en cuestion en un ensayo particular.

Usos terapeuticos

Los compuestos (y sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables) de la invencion, asi como composiciones farmaceuticas de la invencion, pueden ser utiles en el tratamiento o prevention de diversas afecciones o trastornos. Opcionalmente, los compuestos (y sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables) se pueden usar en combination con una o mas sustancias terapeuticamente activas adicionales. Por tanto, los usos terapeuticos relevantes incluyen: tratamiento o prevencion de hipoglucemia (tanto aguda como cronica), diabetes tipo 2 (incluyendo la evolution de la enfermedad en diabetes tipo 2), tolerancia a la glucosa alterada, diabetes tipo 1, obesidad (incluyendo las enfermedades o problemas relacionados con el sobrepeso u obesidad), enfermedad coronaria, ateroesclerosis, hipertension, dislipidemia, esteatosis hepatica, intoxication por p-bloqueante, insulinoma y enfermedad de Von Gierkes; prevencion de que un sujeto llegue a ser obeso; reduction de peso corporal; disminucion de la ingesta de comida; incremento del gasto energetico; retraso en la evolucion desde tolerancia a la glucosa alterada (IGT) a diabetes tipo 2; retraso de la evolucion desde diabetes tipo 2 a diabetes que requiere insulina; regulation del apetito o induction de la saciedad (incluyendo tratamiento de la bulimia y tratamiento de trastorno por atracon); y prevencion de la recuperation de peso despues de perdida de peso con exito. Como principio general, los compuestos (y sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables) de la invencion, asi como las composiciones farmaceuticas de la invencion, se pueden usar para controlar los niveles de glucosa en sangre.

Entre las formas de hipoglucemia capaces de tratamiento o prevencion de acuerdo con la invencion estan hipoglucemia diabetica (incluyendo la hipoglucemia inducida por insulina aguda), hipoglucemia no diabetica, hipoglucemia reactiva, hipoglucemia por ayuno, hipoglucemia inducida por farmaco, hipoglucemia inducida por alcohol, hipoglucemia inducida por cirugia de derivation gastrica e hipoglucemia que ocurre durante el embarazo.

Aplicaciones adicionales de los compuestos (y sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables) de la invencion, y composiciones farmaceuticas de la invencion, incluyen los usos como relajante de musculo liso (agente

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espasmolitico) con respecto a los procedimientos de toma de imagen (por ejemplo, toma de imagen por rayos X, tomografia por ordenador (CT) o resonancia magnetica (MR)), tal como la toma de imagen de la region abdominal.

Terapia de combinacion

Tal como ya se indico anteriormente, el tratamiento con un compuesto (o su sal o solvato farmaceuticamente aceptable) segun la presente invencion puede tener lugar en combinacion con una u otras mas sustancias o agentes farmaceuticamente activos, por ejemplo, seleccionados entre agentes antidiabeticos, agentes antiobesidad, agentes reguladores del apetito, agentes antihipertensores, agentes para el tratamiento y/o prevencion de las complicaciones resultantes de o asociadas a la diabetes, y agentes para el tratamiento y/o prevencion de complicaciones y trastornos resultantes de o asociados a obesidad. En el presente contexto, la expresion “agente antidiabetico” incluye compuestos para el tratamiento y/o profilaxis de la resistencia a insulina y enfermedades en las que la resistencia a insulina es el mecanismo patofisiologico.

Ejemplos de tales sustancias farmacologicamente activas son insulina y analogos de insulina, agonistas de GLP-1, sulfonilureas (por ejemplo, tolbutamida, glibenclamida, glipizida y gliclazida), biguanidas (por ejemplo, metformina), meglitinidas, inhibidores de glucosidasa (por ejemplo, acarbosa), antagonistas de glucagon, inhibidores de dipeptidil peptidasa IV (DPP-IV), inhibidores de enzimas hepaticas implicadas en la estimulacion de la gluconeogenesis y/o glucogenolisis, moduladores de la absorcion de glucosa, tiazolidinodionas tales como troglitazona y ciglitazona, compuestos modificadores del metabolismo de lipido tal como agentes antihiperlipidemicos (por ejemplo, inhibidores de HMG CoA (estatinas)), compuestos que reducen la ingesta de alimentos, agonistas de rXr y agentes que actuan sobre el canal de potasio ATP-dependiente de las celulas p, por ejemplo, glibenclamida, glipizida, glicazida y repaglinida; colestiramina, colestipol, clofibrato, gemfibrozil, lovastatina, pravastatina, simvastatina, probucol, dextrotiroxina, neteglinida, repaglinida; p-bloqueantes, tales como alprenolol, atenolol, timolol, pindolol, propranolol y metoprolol, ACE (enzima de conversion de angiotensina) inhibidores tales como benazepril, captopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, alatriopril, quinapril y ramipril, bloqueantes del canal de calcio, tal como nifedipina, felodipina, nicardipina, isradipina, nimodipina, diltiazem y verapamil, y a-bloqueantes, tales como doxazosin, urapidil, prazosin y terazosin; agonistas de CART (transcrito regulado por cocaina y anfetamina); antagonista de NPY (neuropeptido Y), agonistas de MC4 (melanocortina 4), antagonistas de orexina, agonistas de TNF (factor de necrosis tumoral), agonistas de CRF (factor de liberacion de corticotropina), antagonistas de CRF BP (proteina de union a factor de liberacion de corticotropina), agonistas de urocortina, agonistas p3, agonistas de MSH (hormona estimuladora de melanocito), antagonistas de MCH (hormona de concentration de melanocito), agonistas de CCK (colecistoquinina), inhibidores de la reabsorcion de serotonina, inhibidores de la reabsorcion de serotonina y noradrenalina, serotonina y compuestos noradrenergicos mezclados, agonistas de 5HT (serotonina), agonistas de bombesina, antagonistas de galanina, hormona de crecimiento, compuestos de liberacion de la hormona de crecimiento, agonistas de TRH (hormona de liberacion de tirotropina), moduladores de UCP2 o 3 (proteina de desacoplamiento 2 o 3), agonistas de leptina, agonistas de DA (por ejemplo, bromocriptina, doprexina), inhibidores de lipasa/amilasa, moduladores de RXR (receptor X retinoide), agonistas de TR p y antagonistas de histamina H3.

Cualquier combinacion adecuada de un compuesto o compuestos segun la invencion con uno o mas de los compuestos anteriormente mencionados, y opcionalmente una o mas sustancias farmacologicamente activas adicionales, estan dentro del alcance de la presente invencion.

METODOS EXPERIMENTALES

Las abreviaturas empleadas en lo siguiente son las siguientes:

COMU: hexafluorofosfato de 1-[(1-(ciano-2-etoxi-2-oxoetilidenoaminooxi)-dimetilamino-

morfolinometileno)]metanaminio DCM: diclorometano

DMF: N,N-dimetilformamida

DIPEA: diisopropiletilamina

EtOH: etanol

Et2O: dietil eter

HATU: N-[(dimetilamino)-1H-1,2,3-triazol[4,5-b]piridina-1-ilmetileno]-N-metilmetanaminio hexafluorofosfato N-

oxido

HPLC: cromatografia liquida de alta resolution

IBMX: 3-isobutil-1-metilxantina

MeCN: acetonitrilo

MS: espectroscopia de masas

PBS solution salina tamponada con fosfato

RP: fase inversa

TFA: acido trifluoroacetico

TIS: triisopropilsilano

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Procedimiento de la sintesis general para analogos de glucagon

La sintesis de peptido en fase solida (SPPS) se realizo en un sintetizador asistido por microondas usando estrategia Fmoc estandar en DMF sobre una resina de poliestireno (TentaGel S Ram o Tentagel S PHB-Thr(tBu)). Se uso HATU o COMU como reactivo de acoplamiento junto con DIPEA como base. Se uso Piperidina (20 % en DMF) para la desproteccion. Se usaron, cuando era aplicable, pseudoprolinas: Fmoc-Phe-Thr(V Me, Me pro)-OH, Fmoc-Asp- Ser(V, Me, Me pro)-OH y Fmoc-Glu-Ser(V, Me, Me pro)-OH (compradas de NovaBiochem). El glucagon humano se sintetizo igualmente y se purifico usando la metodologia de sintesis y los procedimientos de purificacion como se describen en el presente documento.

Escision:

El peptido en bruto se escindio de la resina mediante el tratamiento con TFA/TIS/agua al 95/2,5/2,5 % (v/v) a temperatura ambiente durante 2 h. La mayoria de TFA se separo a presion reducida, y el peptido en bruto se precipito y se lavo con dietil eter y se dejo secar a temperatura ambiente.

Purificacion de peptido

Los peptidos en bruto se purificaron mediante RP HPLC estandar con un gradiente de tampon A (TFA acuoso al 0,1 %) y tampon B (solucion acuosa que contenia TFA al 0,1 % y MeCN al 90 %). Las fracciones se analizaron mediante HPLC analitica y MS, y las fracciones relevantes se agruparon y se liofilizaron.

Los peptidos se purificaron mas mediante RP HPLC preparativa usando un gradiente de tampon A' (acido formico acuoso al 0,1 %) y tampon B' (solucion acuosa que contenia acido formico al 0,1 % y MeCN al 90 %). Se anadio TFA a las fracciones recogidas antes de la liofilizacion. El producto final se caracterizo mediante HPLC analitica y MS.

Metodo de HPLC analftica

Los peptidos se analizaron mediante un metodo de HPLC analitica usando un gradiente de tampon A' (vease anteriormente) y tampon B' (vease anteriormente).

Ejemplo 1

Sintesis del compuesto 7

(Hy-HSQGTFTSDYSRYLESARAEDFVKWLEST-OH; no reivindicado)

El compuesto 7 (SEQ ID NO: 8) se sintetizo en un Sintetizador de Peptidos CEM Liberty usando resina Tentagel S PHBThr(tBu) (1,13 g, 0,24 mmol/g), COMU como reactivo de acoplamiento, DMF como disolvente, y la quimica de Fmoc como se describio anteriormente. Se usaron en la secuencia las pseudoprolinas Fmoc-Phe-Thr(V Me, Me pro)-OH (en la posicion 6/7) y Fmoc-Glu-Ser(V, Me, Me pro)-OH (en la posicion 15/16).

El peptido se escindio de la resina como se describio anteriormente, y la purificacion se realizo en una columna Gemini-NX (5 cm, C18, 10 micras) con un flujo de 35 ml/min de una mezcla de tampon A (vease anteriormente) y tampon B (vease anteriormente). El producto se eluyo con un gradiente lineal de tampon B al 20 a 50 % durante 47 min, y se analizaron las fracciones relevantes mediante HPLC analitica y MS. Las fracciones agrupadas se liofilizaron y se volvieron a disolver en agua antes de purificacion adicional en una columna Gemini-NX (2,12 x 25 cm, C18 (110A); 10 micras) con un flujo de 10 ml/min de una mezcla de tampon A' (vease anteriormente) y tampon B' (vease anteriormente). El producto se eluyo con un gradiente lineal de tampon B' al 5 a 40 % durante 47 min, y las fracciones relevantes se analizaron mediante HPLC analitica y MS. Se anadio TFA a las fracciones agrupadas y se liofilizaron para dar 112 mg. La pureza era de 99 % determinada mediante HPLC analitica (vease anteriormente), y la masa monoisotopica era de 3409,55 Da determinada por MS (calc. 3409,58 Da).

Ejemplo 2

Generacion de la linea celular que expresa el receptor de glucagon humano

Se clono el ADNc que codifica el receptor de glucagon humano (Glucagon-R) (numero de acceso primario P47871) a partir del clon de ADNc BC104854 (MgC:132514/IMAGE:8143857). Se amplifico el ADN que codifica el Glucagon- R mediante PCR usando cebadores codificadores de los sitios de restriccion terminales para la subclonacion. Los cebadores (primers) del extremo 5' ademas codificaron una secuencia consenso cerca de Kozak para asegurar la traduccion eficaz. La fidelidad del ADN que codifica el Glucagon-R se confirmo mediante secuenciacion de ADN. Los productos de PCR que codifican el Glucagon-R se subclonaron dentro de un vector de expresion de mamifero que contenia un marcador de resistencia a neomicina (G418). El vector de expresion de mamifero que codifica el Glucagon-R se sometio a transfeccion dentro de las celulas HEK293 mediante un metodo de transfeccion de fosfato

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de calcio estandar. 48 h despues de la transfeccion, las celulas se sembraron para clonacion en dilucion limitada y se seleccionaron con 1 mg/ml de G418 en el medio de cultivo. Tres semanas despues se recogieron doce colonias supervivientes de celulas de expresion de Glucagon-R, se propagaron y se ensayaron en el ensayo de eficacia de Glucagon-R descrito mas adelante. Se eligio un clon de expresion de Glucagon-R para el perfilado del compuesto.

Ejemplo 3

Ensayo del receptor de Glucagon

Se sembraron celulas HEK293 que expresan el Glucagon-R humano a 60.000 celulas por pocillo en placas de microtitulacion de 96 pocillos revestidas con poli-L-lisina al 0,01 %, y se cultivaron durante 1 dia en cultivo en 100 |jl de medio de crecimiento. Para los analisis de la induccion de cAMP por el Glucagon-R se uso el kit de ensayo de cAMP AlphaScreen® de Perkin Elmer, segun las instrucciones del fabricante. El dia del analisis, se separo el medio de crecimiento y las celulas se lavaron una vez con 200 ml del tampon de ensayo incluido con IBMX. Las celulas se incubaron en 100 ml de tampon de ensayo/IBMX que contenia concentraciones crecientes de los peptidos de ensayo durante 15 min a 37 °C. A continuacion, se separo el peptido/tampon de ensayo y las celulas se sometieron a lisis mediante la adicion de 80 ml de tampon de lisis por pocillo y la incubacion durante al menos 10 min a temperatura ambiente. A partir de cada pocillo, se transfirieron 10 ml de lisado celular a una OptiPlate de 384 pocillos y se mezclaron con perlas Donadoras y Receptoras y se incubaron durante 1 h a temperatura ambiente. El contenido de cAMP se midio en un lector de placa Envision. EC50 y las eficacias relativas comparadas con el compuesto de referencia (glucagon) se estimaron mediante el calculo del ajuste a la curva asistido por ordenador.

Ejemplo 4

Valoracion de la solubilidad

Se preparo una solucion madre del peptido de ensayo (2 mg/ml; determinado por la medicion de la absorcion de la solucion a 280 nm, y usando el coeficiente de extension teorica basado en el contenido de triptofano y tirosina en el peptido) en agua desmineralizada ajustada a pH 2,5 con HCl, y se disolvieron alicuotas 1:1 en tampon acetato 100 mM (pH 4,0) y tampon fosfato 100 mM (pH 7,5), respectivamente, y se cargaron en una Microplaca UV de 96 pocillos no esteril de base plana estandar. Se midio la absorbancia de las muestras (muestras unicas, n=1) a 280 y 325 nm en un lector de placa basado en absorbancia, el cual se precalento a temperatura ambiente. El criterio de absorbancia de turbidez para una solubilidad de peptido de > 1 mg/ml era una absorbancia a 325 nm de < 0,02 unidades de absorbancia (que es 5 a 6 veces la desviacion estandar de 8 muestras de tampon en una placa).

Numerosos compuestos de la invention presentan una solubilidad de > 1 mg/ml en el intervalo de pH desde 4 a 7,5, mas especificamente a pH 4 y pH 5 (por ejemplo, en tampon acetato), y a pH 6, pH 7 y pH 7,5 (por ejemplo, en tampon fosfato).

Ejemplo 5

Valoracion de la estabilidad fisica

Se detecto agregacion en la forma de la formation de fibrilla usando el colorante especifico amiloide Tioflavina T (ThT), que frecuentemente se emplea para demostrar la presencia de fibrillas en solucion (vease, por ejemplo, Groenning, M., J. Chem. Biol. 3(1) (2010), pp. 1-18; Groenning y col., J. Struct. Biol. 158 (2007) pp. 358-369; y Levine, H., III, Protein Sci. 2 (1993) pp. 404-410). Se disolvieron todos los peptidos de ensayo en agua desmineralizada ajustada a pH 2,5 con HCl, a temperatura ambiente. Se cargo una solucion que contenia 1 mg/ml de peptido, ThT 40 jM y tampon fosfato 50 mM, pH 7,5, en una placa de fluorescencia negra de 96 pocillos (fondo claro) por triplicado. Los datos se recogieron a intervalos fijados de 10 min, cada uno precedido por 300 s de automezclado (agitation), durante un periodo de 96 horas a 40 °C. El experimento entero se repitio, pero sin agitation. La estabilidad fisica, expresada como tiempo de latencia (lag-time) de la formacion de fibrilla (en horas), se definio como la intersection entre dos regresiones lineales que representan la fase estable inicial y la fase de crecimiento.

Ejemplo 6

Valoracion de la estabilidad guimica

Se prepararon soluciones madre de cada peptido de ensayo (1 mg/ml; determinado por la medicion de la absorcion de la solucion a 280 nm, y usando el coeficiente de extension teorico basado en el contenido de triptofano y tirosina en el peptido) en tampon acetato 50 mM (pH 4,0) y en tampon fosfato 50 mM (pH 7,5), respectivamente. Las muestras se colocaron en viales de vidrio y se incubaron a 40 °C. Las muestras se analizaron mediante HPLC de fase inversa sobre una columna C18 con elucion en gradiente usando un sistema eluyente de acetonitrilo/acido trifluoroacetico/agua. El porcentaje del area (area-%) del pico principal despues del tiempo de incubacion T=t (en relation a tiempo T=0) se detecto mediante espectrometria de UV a 220 nm.

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Se determino primero la pureza como sigue:

Pureza (area-%) = (area del pico principal/area total de todos los picos) x 100.

A continuacion, se normalizo la pureza entre tiempos mediante la fijacion de la pureza a tiempo 0 (T=0) a 100 para cada valor de pH para un peptido dado, como sigue:

Area-% normalizada a tiempo t (T=t) = [area-% (T=t)/area-% (T=0)] x 100.

Los resultados de la actividad in vitro (expresados como valores de EC50) y los resultados de la valoracion de la solubilidad se resumen en la Tabla 1 (a continuacion), y los resultados de valoracion de la estabilidad fisica y quimica se resumen en la Tabla 2 (a continuacion). Los valores de pureza normalizados en la Tabla 2 se determinaron despues de 14 dias de incubacion.

Ejemplo 7

Liberacion de glucosa intensa

Se investigo el efecto del Compuesto 14 de la invencion (dosis de 20 y 60 nmol/kg de peso corporal, respectivamente) sobre la liberacion de glucosa intensa en ratas Sprague-Dawley machos euglucemicas (Taconic, Lille Skensved, Dinamarca, 9 a 10 semanas de vida) en comparacion con el del glucagon humano nativo (dosis 20 nmol/kg). Se dejaron las ratas en ayuno durante 5 horas antes de la dosificacion. Los animales (n=6/grupo) se inyectaron una vez subcutaneamente (SC) con vehiculizante (PBS, pH 7,4), compuesto de ensayo o glucagon. Se recogieron muestras de sangre de la vena de la cola antes de la dosificacion (t=0) y cada 15 minutos durante 2 horas a partir de entonces usando tubos capilares de 5 |jl. Los animales se anestesiaron (con una mezcla estandar de hypnorm/dormicum) durante el experimento para asegurar los niveles de glucosa en sangre basales estables. Las concentraciones de glucosa en sangre se determinaron usando un Analizador de Glucosa Biosen (EKF- diagnostic GmbH, Alemania). Los datos se resumen en la Fig. 1.

Ejemplo 8

Farmacocineticas

Se realizo una evaluacion farmacocinetica comparativa de glucagon humano nativo y un compuesto representativo de la presente invencion en ratones, ratas y perros. Los dos compuestos presentaron caracteristicas farmacocineticas similares, por ejemplo, con respecto a la semivida (ti/2) y el volumen de distribucion.

Tabla 1. ^ EC50 y datos de solubilidad

N° Compuesto: SEQ ID N°. GCG-R EC50 in vitro [nM]# Solubilidad pH 7,5

Glucagon: 1 0,013 < 1 mg/m

1: 2 0,064 > 1 mg/m

2: 3 0,18 > 1 mg/m

3: 4 0,030 > 1 mg/m

4: 5 0,34 > 1 mg/m

5: 6 0,17 > 1 mg/m

6: 7 1,0 > 1 mg/m

7: 8 0,93 > 1 mg/m

8: 9 0,38 > 1 mg/m

9: 10 0,030 > 1 mg/m

10: 11 0,32 > 1 mg/m

11: 12 0,11 > 1 mg/m

12: 13 0,030 > 1 mg/m

13: 14 0,070 > 1 mg/m

14: 15 0,15 > 1 mg/m

15: 16 0,030 > 1 mg/m

16: 17 0,39 > 1 mg/m

17: 18 0,029 > 1 mg/m

18: 19 0,026 > 1 mg/m

19: 20 0,054 > 1 mg/m

20: 21 0,24 > 1 mg/m

21: 22 0,0095 > 1 mg/m

22: 23 0,024 > 1 mg/m

23: 24 0,16 > 1 mg/m

24: 25 0,0078 > 1 mg/m

25: 26 0,0066 > 1 mg/ml

26: 27 0,0069 > 1 mg/ml

27: 28 0,063 > 1 mg/ml

28: 29 0,035 > 1 mg/ml

29: 30 0,023 > 1 mg/ml

30: 31 0,016 > 1 mg/ml

31: 32 0,0072 > 1 mg/ml

32: 33 0,0093 > 1 mg/ml

33: 34 0,044 > 1 mg/ml

34: 35 0,028 > 1 mg/ml

35: 36 0,014 > 1 mg/ml

36: 37 0,010 > 1 mg/ml

37: 38 0,094 > 1 mg/ml

38: 39 0,0047 > 1 mg/ml

39: 40 0,0044 > 1 mg/ml

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40: 0,0035 > 1 mg/ml

41
41: 0,0038 > 1 mg/ml

# Todos los valores referidos a dos figuras significativas

Tabla 2. Datos de la estabilidad fisica y quimica para los compuestos de la invencion

N° Compuesto: SEQ ID N° Pureza normalizada Pureza normalizada Estabilidad Estabilidad


: pH 4,0 despues de 14 dias [%] pH 7,5 despues de 14 dias [%] fisica a pH 7,5 [hr:min] (no agitado) fisica a pH 7,5 [hr:min] (agitado)

1: 2 N/A N/A 05:18 ± 00:23 01:49 ± 00:10

2: 3 83,5 86,2 FND FND

3: 4 85,0 86,5 FND 72:50 ± 06:16

4: 5 80,5 84,6 FND FND

5: 6 91,8 89,6 FND FND

8: 9 No realizado No realizado 85 57:02 ± 0:43

9: 10 No realizado No realizado inicio 53:20 ± 05:46

10: 11 No realizado No realizado FND FND

11: 12 78,6 89,9 FND FND

12: 13 86,8 90,8 FND FND

13: 14 84,6 88,8 FND 80:10 ± 14:54

14: 15 89,5 92,4 FND FND

15: 16 89,1 95,1 FND FND

16: 17 89,1 No realizado 12:57 ± 00:02 No realizado

17: 18 89,9 88,3 62 ± 4 41:33 ± 04:18

18: 19 No realizado No realizado 15:04 ± 00:41 03:48 ± 00:06

19: 20 No realizado No realizado inicio No realizado

20: 21 No realizado No realizado FND FND

21: 22 89,8 93,5 FND FND

22: 23 91,1 95,3 FND FND

23: 24 No realizado No realizado FND FND

24: 25 92,8 94,4 FND FND

25: 26 93,8 89,8 FND FND

26: 27 90 93,9 FND FND

27: 28 No realizado No realizado 46:20 ± 04:43 18:00 ± 04:00

28: 29 No realizado No realizado 08:33 ± 00:05 02:20 ± 00:17

29: 30 91 91,6 FND FND

30: 31 88,6 91,4 FND FND

31: 32 93,1 91,7 FND FND

32: 33 91,2 96,3 FND FND

33: 34 No realizado No realizado No realizado FND

34: 35 No realizado No realizado No realizado FND

35: 36 No realizado No realizado No realizado FND

36: 37 No realizado No realizado No realizado FND

37: 38 No realizado No realizado No realizado FND

38: 39 No realizado No realizado No realizado FND

*FND = formacion de fibrilla no detectada

Claims

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REIVINDICACIONES

1. Un compuesto que tiene la formula I:

R1-Z-R2 (I)

o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptables del mismo; en el que

R1 es hidrogeno, alquilo C1-4, acetilo, formilo, benzoilo o trifluoroacetilo;

R2 es OH o NH2; y

Z es una secuencia de aminoacidos que procede de la secuencia de formula la:

His-Ser-GIn-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Scr-Lys-Tyr-Leu-

Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-GIn-Asp-Phe-Val-GIn-Trp-Leu-Glu-Asn-Thr (la)

y que comprende ademas al menos cuatro sustituciones o deleciones de aminoacidos que estan solamente en posiciones de la secuencia seleccionadas entre 2, 3, 4, 9, 10, 15, 16, 17, 20, 21,24, 28 y 29, como sigue:

X2 se selecciona entre Aib y Ala;

X3 se selecciona entre His, Pro, Dab(Ac), Dap(Ac) y Gln(Me);

X4 es DAla;

X9 es Glu;

X10 se selecciona entre Val, Leu, N-Me-Tyr y N-Me-DTyr;

X15 es Glu;

X16 se selecciona entre Aib, Lys, Glu, Leu, Val, DVal, Phe, His, Arg, Pro, DPro, N-Me-Ser y N-Me-DSer;

X17 se selecciona entre Ala y Ser;

X20 se selecciona entre Glu y Lys;

X21 se selecciona entre Glu, Lys y Ser;

X24 se selecciona entre Lys, Ser, Glu y Ala;

X28 se selecciona entre Ser y Lys, y Glu, o esta ausente;

X29 se selecciona entre Ser y Ala, o esta ausente; con la condicion de que Z no se seleccione entre:

HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLEST; y HSQGTFTSDYSKYLESRRAKEFVEWLEST;

en donde el compuesto tiene actividad agonista de glucagon y solubilidad y/o estabilidad mejoradas en comparacion con el glucagon humano nativo.
2. Un compuesto segun la reivindicacion 1 que tiene la formula I:

R1-Z-R2 (I)

o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptables del mismo; en el que

R1 es hidrogeno, alquilo C1-4, acetilo, formilo, benzoilo o trifluoroacetilo;

R2 es OH o NH2; y

Z es una secuencia de aminoacidos que procede de la secuencia de formula Ia: His-Scr-GIn-Gly-Thr-Phc-Thr-Scr-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Lcu-

Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phc-Val-Gln-Trp-Leu-Glu-Asn-Thr (la)

y que comprende ademas al menos cuatro sustituciones o deleciones de aminoacidos que estan solamente en posiciones de la secuencia (designadas como X) seleccionadas entre 2, 3, 9, 10, 15, 16, 17, 20, 21, 24, 28 y 29, como sigue:

X2 se selecciona entre Aib y Ala;

X3 se selecciona entre His y Pro;

X9 es Glu;

X10 se selecciona entre N-Me-Tyr y N-Me-DTyr;

X15 es Glu;

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X16 se selecciona entre Aib, Lys, Glu, Leu, Val, DVal, Phe, His, Arg, Pro, DPro, N-Me-Ser y N-Me-DSer;

X17 se selecciona entre Ala y Ser;

X20 se selecciona entre Glu y Lys;

X21 se selecciona entre Glu, Lys y Ser;

X24 se selecciona entre Lys, Ser, Glu y Ala;

X28 se selecciona entre Ser y Lys, o esta ausente;

X29 se selecciona entre Ser y Ala, o esta ausente;

con la condicion de que Z no se seleccione entre:

HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLEST; y HSQGTFTSDYSKYLESRRAKEFVEWLEST;

en donde el compuesto tiene actividad agonista de glucagon y solubilidad y/o estabilidad mejoradas en comparacion con el glucagon humano nativo.
3. El compuesto o su sal o su solvato farmaceuticamente aceptables segun la reivindicacion 1, en el que dichas al menos cuatro sustituciones o deleciones de aminoacidos en posiciones de la secuencia de aminoacidos (designadas como X) seleccionadas entre 2, 3, 4, 9, 10, 15, 16, 17, 20, 21, 24, 28 y 29 del compuesto de formula I son las siguientes:

X2 se selecciona entre Aib y Ala;

X3 se selecciona entre His y Pro;

X4 es DAla;

X9 es Glu;

X10 se selecciona entre N-Me-Tyr y N-Me-DTyr;

X15 es Glu;

X16 se selecciona entre Aib, Lys, Glu, Leu, Val, Phe, His y Arg;

X17 se selecciona entre Ala y Ser;

X20 se selecciona entre Glu y Lys;

X21 se selecciona entre Glu, Lys y Ser;

X24 se selecciona entre Lys, Ser, Glu y Ala;

X28 se selecciona entre Ser, Glu y Lys, o esta ausente X29 se selecciona entre Ser y Ala, o esta ausente.
4. El compuesto o su sal o su solvato farmaceuticamente aceptables segun la reivindicacion 1, en el que las al menos cuatro sustituciones o deleciones de aminoacidos estan en posiciones de la secuencia de aminoacidos (designadas por una X) seleccionadas entre 2, 3, 4, 10, 15, 16, 17, 20, 21,24, 28 y 29 del compuesto de formula I, y son las siguientes:

X2 es Ala;

X3 es Dab(Ac), Dap(Ac) y Gln(Me);

X4 es DAla;

X10 se selecciona entre Leu y Val;

X15 es Glu;

X16 se selecciona entre Aib, Lys, Glu, Leu y Val;

X17 es Ala;

X20 se selecciona entre Glu y Lys;

X21 se selecciona entre Glu y Ser;

X24 se selecciona entre Lys, Ser y Glu;

X28 se selecciona entre Ser, Glu y Lys;

X29 es Ala, o esta ausente.
5. El compuesto o su sal o su solvato farmaceuticamente aceptables segun la reivindicacion 1, en el que las al menos cuatro sustituciones o deleciones de aminoacidos estan en posiciones de la secuencia de aminoacidos (designadas por una X) seleccionadas entre 2, 3, 4, 16, 17, 20, 21,24, 28 y 29 del compuesto de formula I, y son las siguientes:

X2 es Ala;

X3 es Dab(Ac), Dap(Ac), Gln(Me) o His;

X4 es DAla;

X16 se selecciona entre Aib, Lys, Glu;

X17 es Ala;

X20 se selecciona entre Glu y Lys;

X21 se selecciona entre Glu y Ser;

X24 se selecciona entre Lys, Ser y Glu;

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

X28 se selecciona entre Ser, Glu y Lys;

X29 es Ala, o esta ausente.
6. El compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que X17 es Ala.
7. El compuesto o su sal o su solvato farmaceuticamente aceptables segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que Z se selecciona entre el grupo que consiste en:

HSQGTFTSDYSKYLDSARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 2)

HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLEET (SEQ ID NO: 3)

HSQGTFTSDYSKYLDKARAEDFVKWLEST (SEQ ID NO: 4)

HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVAWLEST (SEQ ID NO: 5)

HSQGTFTSDYSKYLDEARAKDFVEWLEKT (SEQ ID NO: 6)

HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVEWLEST (SEQ ID NO: 7)

HSQGTFTSDYSKYLESARAEDFVKWLEST (SEQ ID NO: 9)

HSQGTFTSDYSKYLDSARAEEFVKWLEST (SEQ ID NO: 10)

HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVSWLEST (SEQ ID NO: 11)

HSQGTFTSDLSKYLDSARAEDFVKWLEST (SEQ ID NO: 12)

HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEDFVKWLEST (SEQ ID NO: 13)

HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLES (SEQ ID NO: 14)

HSQGTFTSDYSKYLDEARAEDFVKWLEST (SEQ ID NO: 15)

HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 16)

HSQGTFTSDYSKYLESARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 17)

HSQGTFTSDYSKYLDLARAEDFVKWLEST (SEQ ID NO: 18)

HSQGTFTSDYSKYLDKRRAEDFVSWLEST (SEQ ID NO: 19)

HSQGTFTSDYSKYLDVARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 20)

HAQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 21)

HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST (SEQ ID NO: 22)

HSQ-DAla-TFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 23) HSQGTFTSDVSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 24) HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 25) HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-RRAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 26) HS-[Gln(Me)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 27) HSQGTFTSDYSKYLDEARAKSFVEWLEKT (SEQ ID NO: 28)

HSQGTFTSDYSKYLDEARAKSFVEWLEST (SEQ ID NO: 29)

HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAKSFVEWLEKT (SEQ ID NO: 30)

HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLESA (SEQ ID NO: 31)

HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 32) HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST (SEQ ID NO: 33) HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVSWLEKT (SEQ ID NO: 34)

HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEKFVEWLEST (SEQ ID NO: 35)

HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVAWLEST (SEQ ID NO: 36)

HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEET (SEQ ID NO: 37)

HSQGTFTSDYSKYLE-Aib-ARAEEFVKWLEST (SEQ ID NO: 38)

HSHGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST (SEQ ID NO: 39) HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST (SEQ ID NO: 40) y HS-[Dap(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST (SEQ ID NO: 41).
8. El compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, seleccionado entre el grupo que consiste en:

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAESFVKWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLEET-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDKARAEDFVKWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVAWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDEARAKDFVEWLEKT-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVEWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLESARAEDFVKWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEEFVKWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVSWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDLSKYLDSARAEDFVKWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEDFVKWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLES-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDEARAEDFVKWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLESARAESFVKWLEST-OH

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDLARAEDFVKWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDKRRAEDFVSWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDVARAESFVKWLEST-OH

Hy-HAQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH

Hy-HSQ-DAla-TFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDVSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH

Hy-HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-NH2

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-RRAESFVKWLEST-OH

Hy-HS-[Gln(Me)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDEARAKSFVEWLEKT-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLDEARAKSFVEWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAKSFVEWLEKT-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLESA-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-NH2

Hy-HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAESFVKWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVSWLEKT-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEKFVEWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVAWLEST-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEET-OH

Hy-HSQGTFTSDYSKYLE-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH

Hy-HSHGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-NH2

Hy-HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH

Hy-HS-[Dab(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-NH2

Hy-HS-[Dap(Ac)]-GTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-NH2

0 una sal o un solvato farmaceuticamente aceptables del mismo.
9. Una construction de acido nucleico que codifica un peptido Z segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en donde dicho peptido esta compuesto enteramente de aminoacidos que se dan de manera natural.

10 Un vector de expresion que comprende una construccion de acido nucleicos segun la reivindicacion 9.
11. Una celula hospedadora que comprende una construccion de acido nucleicos segun la reivindicacion 9 o un vector de expresion segun la reivindicacion 10.
12. Una composition farmaceutica que comprende un compuesto, o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptables del mismo, segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y un vehiculo farmaceuticamente aceptable.
13. Un compuesto o su sal o su solvato farmaceuticamente aceptables segun una cualquiera de las reivindicaciones

1 a 8 para su uso en un metodo de tratamiento medico.
14. Un compuesto o su sal o su solvato farmaceuticamente aceptables segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para su uso en un metodo de tratamiento de hipoglucemia, hipoglucemia aguda, hipoglucemia cronica, diabetes tipo 2, tolerancia a la glucosa alterada, diabetes tipo 1, obesidad, enfermedad coronaria, ateroesclerosis, hipertension, dislipidemia, esteatosis hepatica, intoxication por p-bloqueante, insulinoma y enfermedad de Von Gierkes.
15. Un compuesto o su sal o su solvato farmaceuticamente aceptables para su uso segun la reivindicacion 14 en donde la hipoglucemia se selecciona entre el grupo que consiste en: hipoglucemia diabetica, hipoglucemia inducida por insulina aguda, hipoglucemia no diabetica, hipoglucemia reactiva, hipoglucemia por ayuno, hipoglucemia inducida por farmaco, hipoglucemia inducida por alcohol, hipoglucemia inducida por cirugia de derivation gastrica e hipoglucemia que ocurre durante el embarazo.