PL219335B1 - Pochodna insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól, jej zastosowanie oraz zawierająca ją kompozycja farmaceutyczna - Google Patents

Pochodna insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól, jej zastosowanie oraz zawierająca ją kompozycja farmaceutyczna

Info

Publication number
PL219335B1
PL219335B1 PL385586A PL38558608A PL219335B1 PL 219335 B1 PL219335 B1 PL 219335B1 PL 385586 A PL385586 A PL 385586A PL 38558608 A PL38558608 A PL 38558608A PL 219335 B1 PL219335 B1 PL 219335B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
formula
denotes
asn
group
b32arg
Prior art date
Application number
PL385586A
Other languages
English (en)
Other versions
PL385586A1 (pl
Inventor
Piotr Borowicz
Andrzej Płucienniczak
Jerzy Mikołajczyk
Tadeusz Głąbski
Dariusz Kurzynoga
Diana Mikiewicz-Syguła
Anna Wojtowicz-Krawiec
Marcin Zieliński
Małgorzata Kęsik-Brodacka
Violetta Adamczewska-Cecuda
Iwona Sokołowska
Grażyna Płucienniczak
Dorota Stadnik
Jarosław Antosik
Jacek Pstrzoch
Justyna Bernat
Wojciech Sławiński
Tomasz Pawlukowiec
Jacek Stępniewski
Monika Bogiel
Original Assignee
Inst Biotechnologii I Antybiotyków
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Inst Biotechnologii I Antybiotyków filed Critical Inst Biotechnologii I Antybiotyków
Priority to PL385586A priority Critical patent/PL219335B1/pl
Priority to PCT/PL2009/050010 priority patent/WO2010002283A2/en
Priority to EP11003008.7A priority patent/EP2371853B1/en
Priority to CA2729938A priority patent/CA2729938C/en
Priority to EP09773816A priority patent/EP2321344A2/en
Priority to CN2009801261044A priority patent/CN102083855A/zh
Priority to EA201170149A priority patent/EA023559B1/ru
Priority to PL11003008T priority patent/PL2371853T3/pl
Priority to JP2011516197A priority patent/JP2011526886A/ja
Priority to US13/002,520 priority patent/US8618048B2/en
Publication of PL385586A1 publication Critical patent/PL385586A1/pl
Priority to US14/090,496 priority patent/US20140121353A1/en
Publication of PL219335B1 publication Critical patent/PL219335B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/62—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Abstract

Ujawniono nowe biosyntetyczne analogi rekombinowanej insuliny ludzkiej o przedłużonym działaniu terapeutycznym, które mogą znaleźć zastosowanie w profilaktyce i terapii cukrzycy.

Description

Przedmiotem wynalazku są nowe biosyntetyczne analogi rekombinowanej insuliny ludzkiej o przedłużonym działaniu terapeutycznym lub ich farmaceutycznie dopuszczalne sole, które mogą znaleźć zastosowanie w profilaktyce i terapii cukrzycy, zawierająca je kompozycja farmaceutyczna oraz ich zastosowanie do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania cukrzycy.
Insulina i jej rozmaite pochodne są stosowane w dużych ilościach w leczeniu cukrzycy i często wytwarzane w dużej skali przemysłowej. Chociaż znanych jest wiele różnych modyfikowanych pochodnych insuliny i preparatów farmaceutycznych o różnych profilach działania, to stale poszukiwany jest lek, dzięki któremu możliwe byłoby utrzymywanie stałego poziomu glukozy w organizmie ludzkim w ciągu długiego okresu czasu.
Dla osiągnięcia efektu opóźnionego i/lub przedłużonego działania niektóre preparaty zwykłej insuliny ludzkiej zawierają specyficzne dodatki, np. różne ilości protaminy, białka tworzącego z insuliną nierozpuszczalny kompleks osadzający się w tkance podskórnej, z którego stopniowo uwalnia się insulina.
W terapii cukrzycy znane są różne pochodne insuliny ludzkiej zawierające dodatkowe aminokwasy lub zmienioną sekwencję niektórych aminokwasów. Zmiany pierwszorzędowej struktury insuliny wpływają na jej strukturę drugo- i trzeciorzędową, które wywołują zmiany właściwości chemicznych i biologicznych, a te z kolei wywołują efekty farmakokinetyczne i farmakodynamiczne. Zmiany te mają różny charakter, prowadzą do przyspieszania lub opóźniania i przedłużania działania podawanej zmodyfikowanej insuliny. Aktywną formą insuliny jest postać monomeryczna, która łatwo przenika do krwi po iniekcji podskórnej. Jak wiadomo egzogenna insulina ludzka ma w roztworze postać heksameryczną, która po podaniu dysocjuje na dimery i następnie monomery przed przeniknięciem do krwioobiegu. Do pochodnych insuliny o przyśpieszonym działaniu należą lispro-insulina (Humalog®), w której sekwencja prolina(28)-lizyna(29) w łańcuchu B została odwrócona. Ze względów sterycznych utrudnia to tworzenie dimerów insuliny w roztworze. Drugą taką pochodną insuliny jest insulina, w której prolina w pozycji 28 w łańcuchu B została zastąpiona kwasem asparaginowym. Wprowadzony w ten sposób ładunek ujemny zmniejsza możliwość samoasocjacji monomerów insuliny. Obie te pochodne insuliny są dzięki swojej strukturze szybciej wchłaniane.
Analogi rekombinowanej insuliny ludzkiej o przedłużonym działaniu konstruuje się przedłużając łańcuch B zasadowymi aminokwasami lub acylując grupę ε-aminową w lizynie w łańcuchu B kwasem alifatycznym o kilkunastu atomach węgla. Wprowadzenie dodatkowych zasadowych aminokwasów zmienia niektóre właściwości chemiczne lub fizyczne insuliny. Najważniejszą zmianą jest przesunięcie punktu izoelektrycznego w stosunku do niemodyfikowanej naturalnej insuliny z 5,4 do zakresu od około 5,5 do około 8,5, co jest wynikiem wprowadzenia dodatkowych dodatnich ładunków do cząsteczki. Konsekwencją tego jest zmniejszenie rozpuszczalności analogów w obojętnym środowisku wodnym i wynikająca z tego konieczność stosowania środowiska słabo kwaśnego do wytwarzania preparatów farmaceutycznych zawierających tak zmodyfikowaną insulinę.
Obok oczywistych korzyści wynikających z wprowadzenia dodatkowych zasadowych aminokwasów obserwuje się jednak niekorzystne zmniejszenie stabilności nowych analogów, wynikające przede wszystkim z zachodzącej w środowisku kwaśnym dezamidacji asparaginy w pozycji A21.
Problem ten rozwiązywany jest drogą wymiany A21Asn na inny aminokwas, taki m.in. jak kwas asparaginowy, glicyna, alanina, treonina i inne. Jednym z takich analogów jest pochodna rekombinowanej insuliny ludzkiej, w której w łańcuchu A asparagina(21) została zastąpiona glicyną(21) oraz do C-końca łańcucha B zostały przyłączone dwie reszty argininy. Jest to tak zwana pochodna glarginowa insuliny, wytwarzana pod nazwą Lantus® (opis patentowy St. Zjedn. Am. nr 5.656.722).
W naszych badaniach stwierdziliśmy, że podobne do obecnej już na rynku pochodnej glarginowej działanie biologiczne wykazuje pochodna insuliny ludzkiej, w której do C-końca w łańcuchu B zostały przyłączone reszta lizyny (B31 Lys) i argininy (B32Arg). Wstępne badania na zwierzętach wykazały, że preparat ten nazwany lizarginsuliną charakteryzował się przedłużonym działaniem i płaskim profilem uwalniania naśladującym wydzielanie naturalnej insuliny, a z klinicznego punktu widzenia redukcją hipoglikemii nocnych. Ze względu na wybitne podobieństwo do insuliny ludzkiej a także do proinsuliny można się było spodziewać dobrych wyników badań, umożliwiających etap po etapie rozwój kandydata na lek i jego ostateczną komercjalizację. Istotne jest, ze sekwencja LizArg w C-końcu łańcucha B insuliny ludzkiej występuje w proinsulinie ludzkiej, oraz że należy się spodziewać przekształcenia lizarg-insuliny w insulinę ludzką pod wpływem obecnej karboksypeptydazy C. Oznacza to,
PL 219 335 B1 że pierwszym metabolitem lizarg-insuliny w organizmie ludzkim może być insulina ludzka o dobrze poznanych i akceptowanych właściwościach, nawet w przypadku egzogennego hormonu. Przeprowadzone zostały rozszerzone badania przedkliniczne na szczurach, które potwierdziły długotrwałe działanie nowego analogu insuliny.
Okazało się jednak, że pochodna ta obok korzystnego działania biologicznego charakteryzuje się jednak niewystarczającą stabilnością w kwaśnych roztworach iniekcyjnych. Podstawową przyczyną niedostatecznej stabilności przejawiającej się przede wszystkim dezamidacją jest obecność w C-końcu łańcucha A reszty asparaginy, gdzie w kwaśnym środowisku wodnym może zachodzić autokatalizowana protonem grupy karboksylowej dezamidacja.
Stąd też celem niniejszego wynalazku jest dostarczenie nowych analogów insuliny, które charakteryzowałyby się odpowiednią stabilnością w kwaśnych roztworach (pH 3,5 - 5) iniekcyjnych, wykazując jednocześnie pożądaną aktywność biologiczną. Pożądane jest zwłaszcza, żeby wykazywały one cechy działania biologicznego naturalnej insuliny. Szczególnie istotne jest również, aby początek działania nowych pochodnych był praktycznie natychmiastowy tuż po podaniu pacjentowi, przy jednoczesnym umożliwieniu przedłużonego uwalniania części podanej dawki. Dzięki temu możliwe byłoby zapewnienie zarówno przyspieszonego jak i przedłużonego w czasie działania preparatu farmaceutycznego zawierającego takie analogi insuliny.
Określony powyżej cel został nieoczekiwanie osiągnięty w niniejszym wynalazku.
Przedmiotem wynalazku jest pochodna insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól charakteryzująca się tym, że jest analogiem rekombinowanej insuliny ludzkiej o punkcie izoelektrycznym 5 - 8,5 posiadającym odpowiednią stabilnością w kwaśnych (pH 3,5 - 5) roztworach iniekcyjnych i wzorze 1:
Gly-Ile-Val-Glu-Gln-Cys-Cys-Thr-Ser-Ile-Cys-Ser-Leii-Tyr-Gln-Leu' 12 3 4 5 6 7\\ 8 9 w 11 12 13 14 15 16
Glu-Asn-Tyr-Cys-R I
18 19 20 S
Phe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys-Gly-Ser-His-Leu-Val-Glu-Ala-Leu-Tyr1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Leu-Val-Cys-Gly-Glu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Lys-Thr-R1 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
gdzie R oznacza grupę o wzorze Asn-R2, w którym R2 oznacza obojętny L-aminokwas wybrany z grupy obejmującej Gly, Ala, Ser, Thr lub grupę NH2;
a R1 oznacza B31Lys-B32Arg lub B31Arg-B32Arg lub B31Arg, przy czym B3Asn może być ewentualnie zastąpiony innym aminokwasem, korzystnie Glu.
Korzystnie pochodna insuliny lub jej fizjologicznie dopuszczalna sól według wynalazku charakteryzuje się tym, że:
2 1
R we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R2, w którym R2 oznacza Gly a R1 oznacza B31
Lys-B32Arg, albo
2 1
R we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R2, w którym R2 oznacza Ala a R1 oznacza B31
Lys-B32Arg, albo
2 1
R we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R2, w którym R2 oznacza Ser a R1 oznacza B31
Lys-B32Arg, albo
2 1
R we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R2, w którym R2 oznacza Thr a R1 oznacza B31
Lys-B32Arg, albo
PL 219 335 B1
2 1
R we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R , w którym R oznacza grupę NH2 a R oznacza
B31Lys-B32Arg, albo
R we wzorze 1 oznacza grupę o 2 wzorze Asn-R2, w 2 którym R2 oznacza Gly a R1 oznacza
B31Arg-B32Arg, albo R we wzorze 1 oznacza grupę o 2 wzorze Asn-R2, w 2 którym R2 oznacza Ala a R1 oznacza
B31Arg-B32Arg, albo R we wzorze 1 oznacza grupę o 2 wzorze Asn-R2, w 2 którym R2 oznacza Thr a R1 oznacza
B31Arg-B32Arg, albo R we wzorze 1 oznacza grupę o 2 wzorze Asn-R2, w 2 którym R2 oznacza Ser a R1 oznacza
B31Arg-B32Arg, albo 2 2 1 R we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R , w którym R oznacza grupę NH2 a R oznacza
B31Arg-B32Arg, albo R we wzorze 1 oznacza grupę o 2 wzorze Asn-R2, w 2 którym R2 oznacza Gly a R1 oznacza
B31Arg, albo R we wzorze 1 oznacza grupę o 2 wzorze Asn-R2, w 2 którym R2 oznacza Ala a R1 oznacza
B31Arg, albo R we wzorze 1 oznacza grupę o 2 wzorze Asn-R2, w 2 którym R2 oznacza Thr a R1 oznacza
B31Arg, albo R we wzorze 1 oznacza grupę o 2 wzorze Asn-R2, w 2 którym R2 oznacza Ser a R1 oznacza
B31Arg, albo
2 1
R we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R , w którym R oznacza grupę NH2 a R oznacza
B31Arg, albo
2 1
R we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R2, w którym R2 oznacza Gly, R1 oznacza B31 Lys-B32Arg, a B3Asn został zastąpiony B3Glu.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna charakteryzująca się tym, że zawiera efektywnie działającą ilość pochodnej insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalnej soli według wynalazku, jak zdefiniowano powyżej. Korzystnie, kompozycja farmaceutyczna według wynalazku charakteryzuje się tym, że zawiera od 10 do 50 μg/ml cynku.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie pochodnej insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalnej soli według wynalazku, zdefiniowanych powyżej, do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania cukrzycy.
Jak opisano wcześniej, w przypadku glarginy problem niskiej stabilności rozwiązano poprzez wymianę asparaginy na glicynę. Badania mające na celu otrzymanie analogu insuliny wykazującego przedłużone działanie i stabilność w kwaśnych roztworach iniekcyjnych według wynalazku poszły w innym kierunku. W celu zablokowania odpowiedzialnej za niską stabilność grupy karboksylowej otrzymane zostały nowe pochodne lizarginy z przekształconą w różny sposób grupą karboksylową w reszcie asparaginowej z wykorzystaniem metod inżynierii genetycznej i transformacji enzymatycznej. W wyniku przeprowadzonych badań, nieoczekiwanie ustalono, że podobne do pochodnej glarginowej i lizarginowej właściwości chemiczne i biologiczne wykazują pochodne insuliny ludzkiej o wzorze 1, w której łańcuch A w C-końcu został przedłużony o resztę obojętnego aminokwasu (A22) lub grupa karboksylowa asparaginy została przekształcona w grupę karboksyamidową a do C-końca w łańcuchu B zostały przyłączone reszty lizyny i argininy (B31Liz-B32Arg), lub dwie reszty argininy (B31Arg-B32Arg) albo jedna reszta argininy (B31Arg). Otrzymane w ten sposób nowe analogi charakteryzują się odpowiednią stabilnością w kwaśnych roztworach (pH 3,5 - 5) iniekcyjnych, wykazując jednocześnie pożądaną aktywność biologiczną.
Wprowadzone modyfikacje spowodowały nieoczekiwanie przesunięcie punktu izoelektrycznego do pH od 5 do 8 i tym samym zmniejszenie rozpuszczalności nowej pochodnej insuliny w fizjologicznym pH miejsca iniekcji. Powoduje to wytrącenie mikrodepozytu pochodnej insuliny w tkance podskórnej i następnie jej stopniowe, powolne wydzielanie do krwi, przez co utrzymywanie poziomu terapeutycznego trwa przez dłuższy czas. Istotne jest również, że początek działania nowych pochodnych według niniejszego wynalazku, jest praktycznie natychmiastowy, co oznacza, że związki te nieoczekiwanie wykazują cechy działania biologicznego znanych analogów insuliny zarówno o przyspieszonym jak i przedłużonym czasie działania. Przykładami pochodnych insuliny o wzorze 1 są takie jak, ale nie wyłącznie, przedstawione poniżej.
PL 219 335 B1
A22Gly - insulina ludzka - B31Lys,B32Arg
A22Ala B31Lys,B32Arg
A22Thr B31Lys,B32Arg
A22Ser B31Lys,B32Arg
A21Asn-NH2 B31Lys,B32Arg
A22Gly B31Arg,B32Arg
A22Ala B31Arg,B32Arg
A22Thr B31Arg,B32Arg
A22Ser B31Arg,B32Arg
A21Asn-NH2 B31Arg,B32Arg
A22Gly B31Arg
A22Ala B31Arg
A22Thr B31Arg
A22Ser B31Arg
A21Asn-NH2 B31Arg
A22Gly B3Glu,B31Lys,B32Arg
Analogi insuliny o wzorze 1 wytwarzano drogą manipulacji genetycznych wykorzystując standardowe metody inżynierii genetycznej.
Dla tego celu skonstruowane zostały warianty genu insuliny ludzkiej przy wykorzystaniu technik genetycznych takich jak np. reakcja miejscowo-specyficznej mutagenezy. Reakcję mutagenezy punktowej przeprowadzono przy użyciu zestawu firmy Stratagene (nr kat. 200518-5), jako matrycę wykorzystano DNA plazmidowe pIGALZUINS - P5/ZUINS.
Mieszaniną reakcyjną transformowano komórki kompetentne Escherichia coli DH5a. Plazmid zawierający określony wariant genu insuliny ludzkiej izolowano i sekwencjonowano, w celu sprawdzenia poprawności sekwencji nukleotydowej. Plazmid ze zmodyfikowanym genem proinsuliny ludzkiej używano do transformacji komórek kompetentnych E. coli DH5a i przeprowadzano hodowlę bakteryjną na podłożu LB z dodatkiem ampicyliny (0,01 mg/ml) w objętości 500 ml, temp. 37°C, 200 obr/min w czasie 18 h. Przygotowano materiał bakteryjny do banku szczepów, próby w stosunku 1:1 hodowli bakteryjnej i 40% glicerolu zdeponowano w temp. -70 °C.
Wytwarzane na drodze ekspresji w powyższych szczepach E.coli warianty preproinsuliny izolowano po rozbiciu komórek w postaci ciałek inkluzyjnych, które następnie poddawano standardowym procesom eliminacji białek fuzyjnych. Uzyskany po renaturacji roztwór białka hybrydowego z analogiem insuliny poddawano kontrolowanemu działaniu trypsyny, analogicznie jak w przypadku szeregu metod znanych uprzednio i opisanych np. przez Kemmlera i wsp. w J. Biol. Chem., Vol. 246, str. 67866791 (1971) lub w patentach US 6686177 lub US 6100376. Otrzymane analogi insuliny poddawano procesowi oczyszczania przy zastosowaniu znanych metod, przede wszystkim chromatografii niskociśnieniowej, ultrafiltracji i/lub HPLC. Z oczyszczonego w dostatecznym stopniu roztworu analogu insuliny wytrącano produkt.
Dla otrzymywania pochodnych A21Asn-NH2 oraz A20Cys-NH2 stosowano enzymy α-amidujące (α-AE, ang. α-amidating enzyme) katalizujące przemianę naturalnie występujących w organizmach żywych prohormonów, które są substratami reakcji przekształconymi w aktywne formy α-amidowe.
Enzym PAM ang. „peptidylglicine α-amidating monooxygenase” jest proteazą o podwójnej aktywności oznaczonej jako aktywność PHM (α-wodoro-monoutleniacz) oraz PAL (aktywność peptydoaminoglikolowa) (schemat nr 1), która pozwala na otrzymanie C-końcowego amidu. Zbadano, iż połowa hormonów peptydowych takich jak oksytocyna czy wazopresyna wymagają do osiągnięcia swojej optymalnej aktywności C-końcowej grupy amidowej. W reakcji tej grupa amidowa pochodzi z C-końcowej reszty glicyny, która jest tu bezpośrednim prekursorem reakcji (Satani i in., 2003; Miller i in., 1992).
Η H U
Prekursor z Gly
Pochodna hydroksylowa glioksylan
PL 219 335 B1
Schemat 1. Schemat reakcji α-amidacji peptydu przez aktywną proteazę PAM (wg. Sataniego i in., 2003).
Proteaza PAM - jest to białko występujące m. in. w organizmach eukariotycznych o różnej długości łańcucha aminokwasowego. W niniejszym projekcie zastosowano proteazę pochodzącą z organizmu ludzkiego Homo sapiens, w którym występuje 6 genów kodujących białka o aktywności proteazy α-amidującej.
1
Podstawową właściwością fizykochemiczną pochodnych A20R-B30R1, biosyntetycznego analogu insuliny, która odróżnia je od insuliny ludzkiej, jest wartość jej punktu izoeloektrycznego, wynosząca od około 5 do około 8. Oznacza to dobrą rozpuszczalność związku w roztworach o pH kwaśnym do słabo kwaśnego. Właściwość ta pozwoliła na przygotowanie kompozycji - roztworów nowych pochodnych insuliny w pH kwaśnym.
Solą analogu insuliny ludzkiej według wynalazku może być na przykład sól metalu alkalicznego lub sól amoniowa.
Przeznaczona do podawania kompozycja według wynalazku jest przygotowywana w postaci roztworu i zawiera; efektywnie działającą ilość biosyntetycznego analogu insuliny ludzkiej o wzorze 1, lub jego farmakologicznie dopuszczalnej soli oraz substancje pomocnicze, takie jak; czynniki izotonizujące, czynniki konserwujące, czynniki stabilizujące, ewentualnie czynnik buforujący.
Ilość zastosowanej w kompozycji według wynalazku substancji aktywnej wynosi około 1 -1600, korzystnie 10-1200, szczególnie korzystnie 10-500 lU/ml.
Dla kompozycji farmaceutycznej według wynalazku wartość pH roztworu wynosi od około 3,5 do około 5, korzystnie 4,5.
Generalnie, środkami pomocniczymi w kompozycjach według wynalazku są takie same substancje, jakie stosuje się w preparatach zawierających znaną rekombinowaną insulinę ludzką.
Substancją izotonizującą według wynalazku może być każda substancja, która pozwala na otrzymywanie roztworu izoosmotycznego w stosunku do osocza krwi ludzkiej. Do typowych środków izotonizujących stosowanych w farmacji należą takie jak chlorek sodowy, mannitol, glicyna i gliceryna. Korzystne jest stosowanie gliceryny.
Użytecznymi czynnikami konserwującymi do stosowania w kompozycji według wynalazku są związki wybrane z grupy, do której należą takie jak m-krezol, fenol, lub ich mieszaniny.
Nowe pochodne, podobnie jak rekombinowana normalna insulina ludzka, są stabilizowane dodatkiem jonów cynku, wprowadzanych do roztworu w postaci między innymi chlorku lub tlenku cynku. Zawartość cynku może wynosić od około 5 μg/ml, do około 150 μg/ml.
Opracowano przykładowy następujący skład kompozycji zawierających pochodne rekombinowanej insuliny ludzkiej według wynalazku; 10-500 lU/ml biosyntetycznego analogu insuliny ludzkiej o wzorze 1 lub jego farmakologicznie dopuszczalna sól, 16 mg/ml gliceryny, 3 mg/ml m-krezolu, 10-50 μg/ml cynku oraz woda do iniekcji do 1 ml.
Dla lepszego wyjaśnienia istoty wynalazku niniejszy opis został uzupełniony o szczegółowe omówienie jego przykładowych realizacji obejmujące również załączony wykaz sekwencji oraz figury, z których:
Figura 1 przestawia strukturę plazmidu p5/ZUINSGIy kodującego białko rekombinowanej insuliny ludzkiej INSGIy(22A);
Figura 2 przedstawia sekwencję nukleotydową i aminokwasową plazmidu p5/ZUINSGIy(22A);
Figura 3 przedstawia wyniki obrazujące reakcję szczurów normoglikemicznych na podanie badanych preparatów insuliny (grupy badane n=10).
P r z y k ł a d 1.
Konstrukcja plazmidu p5/ZUINSGIy(22A).
Do konstrukcji rekombinowanego genu insuliny INSGIy(22A) użyto plazmidu p5/ZUINS, w którym fragment DNA kodujący prekursor insuliny jest dołączony do zmodyfikowanego genu syntetycznej ubikwityny. W genie ubikwityny kodony dla argininy zostały zamienione na kodony dla alaniny oraz do C-końca genu ubikwityny dołączony został dodatkowy kodon dla argininy. Peptyd stanowiący część ubikwityny jest nośnikiem dla prekursora insuliny, warunkującym dużą wydajność syntezy białka fuzyjnego w E. coli. Region kodujący modyfikowane białko fuzyjne ubikwityna-insulina ludzka umieszczony jest pod kontrolą promotora pms (WO05066344 A2). Plazmid posiada gen oporności na ampicylinę. Do konstrukcji wektora p5/ZUINS wykorzystano plazmid pIGAL1, którego sekwencja znajduje się w Banku Genów pod numerem AY424310.
PL 219 335 B1
Gen insuliny INSGly(22A) różni się od wzorcowego genu insuliny ludzkiej tym, że ma dołączony dodatkowy kodon GGT do C-końca łańcucha A. W rezultacie sekwencja aminokwasowa łańcucha A zostaje wydłużona w pozycji 22 o resztę aminokwasową Gly - glicynę.
W celu zmodyfikowania genu kodującego sekwencję insuliny ludzkiej poprzez dołączenie kodonu GGT (Gly) na jego C-końcu, zaplanowano następujące primery do reakcji mutagenezy punktowej:
GLYG
5' AACTACTGCAATGGTTAAGTCGACTCTAGC 3’
Gly STOP
GLYD
5’ GTAGCTAGAGTCGACTTAACCATTGCAG 3’
Gly
Przy użyciu zestawu firmy Stratagene (nr kat. 200518-5) przeprowadzono reakcję mutagenezy punktowej, jako matrycę zastosowano DNA plazmidowe p5/ZUINS. Mieszaniną reakcyjną transformowano komórki kompetentne Escherichia coli DH5α. Plazmid p5/ZUINSGIy(22A) izolowano i sekwencjonowano, w celu sprawdzenia obecności nukleotydów GGT kodujących glicynę oraz poprawności sekwencji plazmidu. Plazmid ze zmodyfikowanym genem proinsuliny ludzkiej p5/ZUINSGIy(22A) użyto do transformacji komórek kompetentnych E. coli DH5α i przeprowadzono hodowlę bakteryjną w podłożu LB z dodatkiem ampicyliny (0,01 mg/ml) w objętości 500 ml, temp. 37°C, 200 obr/min w czasie 18 h. Przygotowano materiał bakteryjny do banku szczepów, próby w stosunku 1:1 hodowli bakteryjnej i 40% glicerolu zdeponowano w temp. -70°C.
Konstrukcja genetyczna plazmidu p5/ZUINSGIy(22A).
Plazmid p5/ZUINSGIy(22A) ma wielkość 4775 par zasad i jest zbudowany z następujących sekwencji regulatorowych oraz genów:
- od 374 pz do 1234 pz zlokalizowany jest gen oporności na ampicylinę AMP R,
- od 4158 pz do 4323 pz znajduje się region kodujący promotor pms,
- od 4327 pz do 4554 pz zawarta jest sekwencja kodująca modyfikowany gen ubikwityny syntetycznej ZUBl,
- od 4558 pz do 4722 pz znajduje się sekwencja kodująca gen insuliny INSGIy(22A),
- od 4729 pz do 4775 pz zlokalizowany jest region kodujący terminator transkrypcji Ter.
Strukturę plazmidu p5/ZUINSGIy(22A) kodującego białko rekombinowanej insuliny ludzkiej lNSGly(22A) przedstawiono schematycznie na Fig.1.
P r z y k ł a d 2.
Konstrukcja plazmidu p5/ZUINSGIy(22A)Arg(31B).
Do konstrukcji rekombinowanego genu INSGIy(22A)Arg(31B) wykorzystano plazmid p5/ZUINSGIy(22A). Gen insuliny INSGIy(22A)Arg(31B) charakteryzuje się tym, że ma zamieniony kodon AAG (Lys) na kodon CGT (Arg) w pozycji 31 łańcucha B.
W celu zmodyfikowania genu kodującego sekwencję insuliny ludzkiej INSGIy(22A) zaplanowano następujące primery do reakcji mutagenezy punktowej:
ARGG
5’ CTAAAACACGTCGCGGCATCGTTGAACAG 3 Arg
ARGD
5’ CGATGCCGCGACGTGTTTTAGGAGTGTAG 3'
Arg
Reakcję mutagenezy punktowej przeprowadzono przy użyciu zestawu firmy Stratagene (nr kat. 200518-5). Izolację i sprawdzenie poprawności sekwencji nukleotydowej plazmidu oraz otrzymanie bakterii E. coli DH5α z plazmidem p5/ZUINSGIy(22A)Arg(31 B) wykonano tak jak w przykładzie 1.
P r z y k ł a d 3.
Konstrukcja plazmidu p5/ZUINSSer(22A)Arg(31B).
Do konstrukcji rekombinowanego genu INSSer(22A)Arg(31B) wykorzystano plazmid p5/ZUINSGIy(22A)Arg(31B). Gen insuliny INSSer(22A)Arg(31B) różni się od genu insuliny INSGIy(22A)Arg(31B) zamianą kodonu GGT (Gly) na kodon TCT (Ser) w pozycji 22 łańcucha A.
W celu zmodyfikowania genu kodującego sekwencję insuliny ludzkiej INSGIy(22A)Arg(31B) poprzez zamianę kodonu GGT (Gly) na kodon TCT (Ser) w pozycji 22 łańcucha A, zaplanowano następujące primery do reakcji mutagenezy punktowej;
PL 219 335 B1
SERG
5’ CAATTCTTAAGGATCCTCTAG 3’
Ser STOP
SERD
5’ CTTAAGAATTGCAGTAGTTCTCCAG 3’
Ser
Reakcję mutagenezy punktowej przeprowadzono przy użyciu zestawu firmy Stratagene (nr kat. 200518-5). Izolację i sprawdzenie poprawności sekwencji nukleotydowej plazmidu oraz otrzymanie bakterii E. coli DH5α z plazmidem p5/ZUINSSer(22A)Arg(31 B) wykonano tak jak w przykładzie 1.
P r z y k ł a d 4.
Konstrukcja plazmidu p5/ZUINSAIa(22A).
Do konstrukcji rekombinowanego genu INSAIa(22A) wykorzystano plazmid p5/ZUINS. Gen insuliny INSAIa(22A) różni się od wzorcowego genu insuliny ludzkiej dołączeniem kodonu GGT do C-końca łańcucha A. W rezultacie sekwencja aminokwasowa łańcucha A zostaje wydłużona w pozycji 22 o resztę aminokwasową Ala - alaninę.
W celu zmodyfikowania genu kodującego sekwencję insuliny ludzkiej poprzez dołączenie kodonu GGT (Ala) na jego C-końcu, zaplanowano następujące primery do reakcji mutagenezy punktowej;
ALAG
5’ CAATGCTTĄĄGGATCCTCTAG 3'
Ala STOP
ALAD
5’ CTTAAGCATTGCAGTAGTTCTCCAG 3’
Ala
Reakcję mutagenezy punktowej przeprowadzono przy użyciu zestawu firmy Stratagene (nr kat. 200518-5). Izolację i sprawdzenie poprawności sekwencji nukleotydowej plazmidu oraz otrzymanie bakterii E. coli DH5α z plazmidem p5/ZUINSAIa(22A) wykonano tak jak w przykładzie 1.
P r z y k ł a d 5.
Konstrukcja plazmidu p5/ZUINSGIy(22A)Glu(3B).
Do konstrukcji rekombinowanego genu INSGIy(22A)Glu(3B) wykorzystano plazmid p5/ZUINSGIy(22A). Gen insuliny INSGIy(22A)Glu(3B) różni się od genu insuliny INSGIy(22A) zamianą kodonu AAC (Asn) na kodon GAA (Glu) w pozycji 3 łańcucha B.
W celu zmodyfikowania genu kodującego sekwencję insuliny ludzkiej INSGIy(22A) poprzez zamianę kodonu AAC (Asn) na kodon GAA (Glu) w pozycji 3 łańcucha B, zaplanowano następujące primery do reakcji mutagenezy punktowej:
GLUG
5’ GTCGAACAGCACCTGTGTGGTTC 3’
Glu
GLUD
5’ GCTGTTCGACAAAACGAGGACCTGC 3’
Glu
Reakcję mutagenezy punktowej przeprowadzono przy użyciu zestawu firmy Stratagene (nr kat. 200518-5). Izolację i sprawdzenie poprawności sekwencji nukleotydowej plazmidu oraz otrzymanie bakterii E. coli DH5α z plazmidem p5/ZUINSGIy(22A)Glu(31 B) wykonano tak jak w przykładzie 1.
P r z y k ł a d 6.
Badania aktywności na modelu zwierzęcym
Analog A22Gly-B31Lys,32Arg rekombinowanej insuliny ludzkiej (Insulina GKR) podobnie jak Gensulin N wykazuje przedłużony okres działania przy czym hipoglikemia u szczurów normoglikemicznych ma podobny przebieg. Istotne różnice w działaniu hipoglikemicznym obu preparatów występują po 0.5 i 1 godzinie od chwili podania (tab. 1, ryc. 1). W tym czasie obserwuje się szybki i głęboki spadek stężenia glukozy po insulinie GKR. Szczyt działania GKR oraz GENSULINY N występuje w 2 godzinie.
Badania wstępne potwierdziły, że insulina GKR jest czynnym preparatem o przedłużonym okresie działania hipoglikemicznego, działanie to występuje po krótkim okresie utajenia. Obniżenie poziomu glukozy po podaniu insuliny GKR obserwowano do 12 godzin, natomiast poziomy glukozy po 24 godzinach mieściły się w granicach wyjściowych. Wyniki reakcji szczurów normoglikemicznych na podanie badanych preparatów insuliny (uwzględniając wartości średnie) przedstawiono w tabeli 1 i na fig. 3.
PL 219 335 B1
Tabela 1 Reakcja szczurów normoglikemicznych na podanie badanych preparatów insuliny (grupy badane n=10)
PL 219 335 B1
Wykaz sekwencji <110> Instytut Biotechnologii i Antybiotyków <120> Nowe analogi insuliny o przedłużonym działaniu <130> 571/RW ’ ' ’ <160> 18 <170> Patentln version 3.3 <210> 1 <211> 22 <212> PRT <213> artificial <220>
<223> mutant łańcucha A insuliny <400> 1 ’
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu 15 10 15
Glu Asn Tyr Cys Asn Gly 20 ' <210> 2 <211> 22 <212> PRT <213> artificial <220>
<223> mutant łańcucha A insuliny <400> 2
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu 15 10 15
Glu Asn Tyr Cys Asn Ala 20 <210> 3 <211> 22 <212> PRT <213> artificial <220>
<223> mutant łańcucha A insuliny <400> 3
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile 10 Cys Ser Leu Tyr Gin Leu 15
1 5
Glu Asn Tyr Cys Asn Ser
20
<210> 4
<211> 21
<212> PRT
<213> <220> artificial
<223> mutant Łańcucha A insuliny
<220> <221> MISC FEATURE
<222> (21)..(21)
<223> Xaa = amid Asn
<400> 4
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu
1 5 10 15
Glu Asn Tyr Cys Xaa 20
PL 219 335 B1 <210> 5 <211> 20 <212> PRT <213> artificial <220>
<223> mutant łańcucha A insuliny <220>
<221> misc_feature <222> [20)..(20) <223> Xaa = amid Lys <400> 5
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu 15 10 15
Glu Asn Tyr Xaa 20 <21Q> 6 <211> 31 <212> PRT <213> artificial <220>
<223> mutant łańcucha B insuliny <400> 6
Phe Val Asn Gin His Leu Cys Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu
1 5 10 15
Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr Lys Arg
25 30 <210> 7 <211> 31 <212> PRT <213> artificial <220>
<223> mutant łańcucha B insuliny <400> 7
Phe 1 Val Asn Gin His 5 Leu Cys Ser His Leu 10 Val Glu Ala Leu Tyr Leu 15
Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr Arg Arg
25 30 <210> 8 <211> 31 <212> PRT <213> artificial <220>
<223> mutant łańcucha B insuliny <400> 8
Phe Val Gly Gin His Leu Cys Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu 15 10 15
Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr Lys Arg 20 25 30 <210> 9 <211> 35 <212> DNA
PL 219 335 B1
PL 219 335 B1
PL 219 335 B1

Claims (5)

1. Pochodna insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól, znamienna tym, że jest analogiem rekombinowanej insuliny ludzkiej o punkcie izoelektrycznym 5 - 8,5 charakteryzującym się odpowiednią stabilnością w kwaśnych (pH 3,5 - 5) roztworach iniekcyjnych i wzorze 1:
s-s
I I
Gly-lle-Val-Glu-Gln-Cys-Cys-Thr-Ser-lle-Cys-Ser-Leu-Tyr-Gln-Leu~
12 3 4 5 6 7\^ S 9 w 11 12 13 u 15 16 s I S
Glu-Asn-Tyr-Cys-R I
17 18 19 20 S
Phe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys-Gly-Ser-His-Leu-Val-Glu-Ala-Leii-Tyr1 2 3 4 5 6 7 8 g 10 11 12 13 14 15 16
Leu-Val-Cys-Gly-Glu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Lys-Thr- R1
17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 wzór 1 gdzie R oznacza grupę o wzorze Asn-RA, w którym R2 oznacza obojętny L- aminokwas wybrany z grupy obejmującej Gly, Ala, Ser, Thr lub grupę NH2; a RA oznacza B31 Lys-B32Arg lub B31ArgB32Arg lub B31Arg, przy czym B3Asn może być ewentualnie zastąpiony innym aminokwasem, korzystnie Glu.
2. Pochodna insuliny lub jej fizjologicznie dopuszczalna sól według zastrz. 1, znamienna tym, że:
2 2 1
R we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R2, w którym R2 oznacza Gly a R1 oznacza B31 Lys-B32Arg, albo
2 2 1
R we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R2, w którym R2 oznacza Ala a R1 oznacza B31 Lys-B32Arg, albo
2 2 1
R we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R2, w którym R2 oznacza Ser a R1 oznacza B31 Lys-B32Arg, albo
2 2 1
R we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R2, w którym R2 oznacza Thr a R1 oznacza B31 Lys-B32Arg, albo
2 2 1
R we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R , w którym R oznacza grupę NH2 a R oznacza
2 2 1
B31Lys-B32Arg, alboR we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R2, w którym R2 oznacza Gly a R1 oznacza B31Arg-B32Arg, albo R we wzorze 1 oznacza grupę o 2 wzorze Asn-R2, w 2 którym R2 oznacza Ala a R1 oznacza B31Arg-B32Arg, albo R we wzorze 1 oznacza grupę o 2 wzorze Asn-R2, w 2 którym R2 oznacza Thr a R1 oznacza B31Arg-B32Arg, albo R we wzorze 1 oznacza grupę o 2 wzorze Asn-R2, w 2 którym R2 oznacza Ser a R1 oznacza B31Arg-B32Arg, albo 22 R we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R2, w którym R2 oznacza grupę NH 2 a R1 oznacza B31Arg-B32Arg, albo R we wzorze 1 oznacza grupę o 2 wzorze Asn-R2, w 2 którym R2 oznacza Gly a R1 oznacza B31Arg, albo R we wzorze 1 oznacza grupę o 2 wzorze Asn-R2, w 2 którym R2 oznacza Ala a R1 oznacza B31Arg, albo R we wzorze 1 oznacza grupę o 2 wzorze Asn-R2, w 2 którym R2 oznacza Thr a R1 oznacza B31Arg, albo R we wzorze 1 oznacza grupę o 2 wzorze Asn-R2, w 2 którym R2 oznacza Ser a R1 oznacza B31Arg, albo 22 R we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R2, w którym R2 oznacza grupę NH 2 a R1 oznacza
B31Arg, albo
PL 219 335 B1
2 2 1
R we wzorze 1 oznacza grupę o wzorze Asn-R2, w którym R2 oznacza Gly, R1 oznacza B31
Lys-B32Arg, a B3Asn został zastąpiony B3Glu.
3. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera efektywnie działającą ilość pochodnej insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalnej soli według zastrz. 1 albo 2.
4. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 3, znamienna tym, że zawiera 10 do 50 μg/ml cynku.
5. Zastosowanie pochodnej insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalnej soli według zastrz. 1 albo 2 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania cukrzycy.
PL385586A 2008-07-04 2008-07-04 Pochodna insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól, jej zastosowanie oraz zawierająca ją kompozycja farmaceutyczna PL219335B1 (pl)

Priority Applications (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL385586A PL219335B1 (pl) 2008-07-04 2008-07-04 Pochodna insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól, jej zastosowanie oraz zawierająca ją kompozycja farmaceutyczna
CN2009801261044A CN102083855A (zh) 2008-07-04 2009-07-04 活性延长的新胰岛素类似物
EP11003008.7A EP2371853B1 (en) 2008-07-04 2009-07-04 Insulin derivatives or its pharmaceutically acceptable salt, pharmaceutical composition, use of insulin derivative or its pharmaceutically acceptable salt and method of treatment
CA2729938A CA2729938C (en) 2008-07-04 2009-07-04 New insulin analogues of prolonged activity
EP09773816A EP2321344A2 (en) 2008-07-04 2009-07-04 New insulin analogues of prolonged activity
PCT/PL2009/050010 WO2010002283A2 (en) 2008-07-04 2009-07-04 New insulin analogues of prolonged activity
EA201170149A EA023559B1 (ru) 2008-07-04 2009-07-04 Аналоги инсулина человека с пролонгированной терапевтической активностью, стабильные в кислой среде
PL11003008T PL2371853T3 (pl) 2008-07-04 2009-07-04 Pochodna insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól, kompozycja farmaceutyczna, zastosowanie pochodnej insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalnej soli oraz sposób leczenia
JP2011516197A JP2011526886A (ja) 2008-07-04 2009-07-04 持効型活性を有する新規インスリン類似体
US13/002,520 US8618048B2 (en) 2008-07-04 2009-07-04 Insulin analogues of prolonged activity
US14/090,496 US20140121353A1 (en) 2008-07-04 2013-11-26 Insulin analogues of prolonged activity

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL385586A PL219335B1 (pl) 2008-07-04 2008-07-04 Pochodna insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól, jej zastosowanie oraz zawierająca ją kompozycja farmaceutyczna

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL385586A1 PL385586A1 (pl) 2010-01-18
PL219335B1 true PL219335B1 (pl) 2015-04-30

Family

ID=41130257

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL385586A PL219335B1 (pl) 2008-07-04 2008-07-04 Pochodna insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól, jej zastosowanie oraz zawierająca ją kompozycja farmaceutyczna
PL11003008T PL2371853T3 (pl) 2008-07-04 2009-07-04 Pochodna insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól, kompozycja farmaceutyczna, zastosowanie pochodnej insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalnej soli oraz sposób leczenia

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL11003008T PL2371853T3 (pl) 2008-07-04 2009-07-04 Pochodna insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól, kompozycja farmaceutyczna, zastosowanie pochodnej insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalnej soli oraz sposób leczenia

Country Status (8)

Country Link
US (2) US8618048B2 (pl)
EP (2) EP2321344A2 (pl)
JP (1) JP2011526886A (pl)
CN (1) CN102083855A (pl)
CA (1) CA2729938C (pl)
EA (1) EA023559B1 (pl)
PL (2) PL219335B1 (pl)
WO (1) WO2010002283A2 (pl)

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10100098B2 (en) 2006-12-13 2018-10-16 Stelis Biopharma Private Limited Insulin production methods and proinsulin constructs
US8685919B2 (en) 2008-12-15 2014-04-01 Zealand Pharma A/S Glucagon analogues
KR20110126591A (ko) 2008-12-15 2011-11-23 질랜드 파마 에이/에스 글루카곤 유사체
MX2011006315A (es) 2008-12-15 2011-09-22 Zealand Pharma As Analogos de glucagon.
DK2370460T3 (da) 2008-12-15 2014-08-04 Zealand Pharma As Glucagon analoger
HUE026255T2 (en) 2009-07-13 2016-06-28 Zealand Pharma As Acylated glucagon analogues
AR081975A1 (es) 2010-06-23 2012-10-31 Zealand Pharma As Analogos de glucagon
CN103068841A (zh) 2010-06-24 2013-04-24 西兰制药公司 胰高血糖素类似物
WO2012098462A1 (en) 2011-01-20 2012-07-26 Zealand Pharma A/S Combination of acylated glucagon analogues with insulin analogues
WO2012115638A1 (en) * 2011-02-23 2012-08-30 Elona Biotechnologies Glargine proinsulin compositions and methods of producing glargine insulin analogs therefrom
TR201815338T4 (tr) 2012-05-03 2018-11-21 Zealand Pharma As Gıp-glp-1 dual agonist bileşikleri ve yöntemler.
PL222975B1 (pl) * 2012-05-23 2016-09-30 Inst Biotechnologii I Antybiotyków Analog insuliny lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól, kompozycja farmaceutyczna o przedłużonym działaniu terapeutycznym oraz zastosowanie analogu insuliny
WO2014015078A1 (en) * 2012-07-17 2014-01-23 Michael Weiss O-linked carbohydrate-modified insulin analogues
US9624287B2 (en) 2012-07-17 2017-04-18 Case Western Reserve University O-linked carbohydrate-modified insulin analogues
ES2620111T3 (es) 2012-07-23 2017-06-27 Zealand Pharma A/S Análogos de glucagón
TWI608013B (zh) 2012-09-17 2017-12-11 西蘭製藥公司 升糖素類似物
WO2014113434A1 (en) * 2013-01-15 2014-07-24 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic agents, compositions, and methods for glycemic control
WO2014122653A1 (en) * 2013-02-07 2014-08-14 Valin Technologies Ltd. Process for preparing insulin
WO2014122651A1 (en) * 2013-02-07 2014-08-14 Valin Technologies Ltd. Process for preparing insulin
CN103981243A (zh) * 2013-02-07 2014-08-13 华凌科技有限公司 胰岛素的制备方法
CN103981242A (zh) * 2013-02-07 2014-08-13 华凌科技有限公司 胰岛素的制备方法
US9988429B2 (en) 2013-10-17 2018-06-05 Zealand Pharma A/S Glucagon analogues
TWI666220B (zh) 2013-10-17 2019-07-21 丹麥商西蘭製藥公司 醯化升糖素類似物
KR102310389B1 (ko) 2013-11-06 2021-10-13 질랜드 파마 에이/에스 Ｇｉｐ-ｇｌｐ-1 이원 효능제 화합물 및 방법
MX369770B (es) 2013-11-06 2019-11-21 Zealand Pharma As Compuestos agonistas triples de glucagón-glp-1-gip.
EP3212218B1 (en) 2014-10-29 2021-06-30 Zealand Pharma A/S Gip agonist compounds and methods
CN107636010B (zh) 2015-04-16 2021-10-01 西兰制药公司 酰化胰高血糖素类似物
PL239062B1 (pl) * 2016-01-22 2021-11-02 Inst Biotechnologii I Antybiotykow Sposób wytwarzania insuliny i jej pochodnych
US11208453B2 (en) * 2016-11-21 2021-12-28 Case Western Reserve University Rapid-acting insulin analogues of enhanced stability
KR20200017078A (ko) * 2018-08-08 2020-02-18 주식회사 대웅제약 지속형 인슐린 아날로그 및 그 복합체
AU2019398579A1 (en) * 2018-12-11 2021-07-29 Sanofi Peptide binder
EP4048686A4 (en) * 2019-10-24 2024-01-03 Univ Utah Res Found NEW MINI INSULIN WITH EXTENDED C-TERMINAL A-CHAIN

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3327709A1 (de) * 1983-07-29 1985-02-07 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Insulin-derivat-kristallsuspensionen, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung
US5434247A (en) * 1986-10-10 1995-07-18 Board Of Regents, The University Of Texas System Peptides for inducing monocyte cytotoxicity in diagnostics
US5135736A (en) * 1988-08-15 1992-08-04 Neorx Corporation Covalently-linked complexes and methods for enhanced cytotoxicity and imaging
DE3837825A1 (de) 1988-11-08 1990-05-10 Hoechst Ag Neue insulinderivate, ihre verwendung und eine sie enthaltende pharmazeutische zubereitung
DE3844211A1 (de) * 1988-12-29 1990-07-05 Hoechst Ag Neue insulinderivate, verfahren zu deren herstellung, ihre verwendung und eine sie enthaltende pharmazeutische zubereitung
EP0547544B1 (de) * 1991-12-18 1997-03-12 Hoechst Aktiengesellschaft Verfahren zur Gewinnung von insulinhaltigen Lösungen
BR9306042A (pt) * 1992-02-28 1997-11-18 Autoimmune Inc Método para tratar uma doença auto-immune em um mamifero e formas de dosagens farmacêuticas oral e inalável
DE4405179A1 (de) * 1994-02-18 1995-08-24 Hoechst Ag Verfahren zur Gewinnung von Insulin mit korrekt verbundenen Cystinbrücken
DE19652713C2 (de) 1996-12-18 2001-11-22 Aventis Pharma Gmbh Verfahren zur Reinigung von Insulin und Insulinderivaten durch Chromatographie an stark saurem Kationenaustauscher
US6403764B1 (en) * 1999-01-06 2002-06-11 Genentech, Inc. Insulin-like growth factor-1 protein variants
DE19825447A1 (de) 1998-06-06 1999-12-09 Hoechst Marion Roussel De Gmbh Neue Insulinanaloga mit erhöhter Zinkbildung
US6777207B2 (en) * 1999-12-29 2004-08-17 Novo Nordisk A/S Method for making insulin precursors and insulin precursor analogues having improved fermentation yield in yeast
TWI345587B (en) 2003-06-17 2011-07-21 Sembiosys Genetics Inc Methods for the production of insulin in plants
PL213561B1 (pl) 2004-01-09 2013-03-29 Inst Biotechnologii I Antybiotykow Sposób otrzymywania plazmidu, plazmid oraz zastosowania
US7893197B2 (en) * 2004-08-25 2011-02-22 Janssen Pharmaceutica N.V. Relaxin-3 chimeric polypeptides and their preparation and use
JP5052345B2 (ja) * 2004-09-02 2012-10-17 コグノッシ， インコーポレイテッド 改善されたアポｅ類似体群およびそれらの使用方法
PL373543A1 (pl) * 2005-03-10 2006-09-18 Instytut Biotechnologii i Antybiotyków Kompozycja farmaceutyczna zawierająca biosyntetyczny analog insuliny ludzkiej, oraz jej zastosowanie w terapii cukrzycy
AU2006259307B2 (en) * 2005-06-17 2012-12-20 Mannkind Corporation Epitope analogues
DE102005051366A1 (de) * 2005-10-25 2007-04-26 Degussa Gmbh Drug Delivery Systeme
JP2009530243A (ja) * 2006-03-13 2009-08-27 ノボ・ノルデイスク・エー／エス アシル化単鎖インスリン
CN101573133B (zh) * 2006-07-31 2014-08-27 诺沃-诺迪斯克有限公司 Peg化延长的胰岛素
WO2008049711A1 (en) * 2006-10-27 2008-05-02 Novo Nordisk A/S Peptide extended insulins

Also Published As

Publication number Publication date
WO2010002283A2 (en) 2010-01-07
EP2371853A3 (en) 2012-10-03
EP2321344A2 (en) 2011-05-18
US20140121353A1 (en) 2014-05-01
US8618048B2 (en) 2013-12-31
PL2371853T3 (pl) 2018-06-29
PL385586A1 (pl) 2010-01-18
CA2729938C (en) 2018-11-06
EP2371853B1 (en) 2017-09-13
CN102083855A (zh) 2011-06-01
WO2010002283A9 (en) 2011-01-20
EA201170149A1 (ru) 2011-06-30
CA2729938A1 (en) 2010-01-07
JP2011526886A (ja) 2011-10-20
US20110136736A1 (en) 2011-06-09
EP2371853A2 (en) 2011-10-05
EA023559B1 (ru) 2016-06-30
WO2010002283A3 (en) 2010-04-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL219335B1 (pl) Pochodna insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól, jej zastosowanie oraz zawierająca ją kompozycja farmaceutyczna
JP5694779B2 (ja) 極度に遅延した時間作用プロファイルを有する新規なインスリン誘導体
US6221633B1 (en) Insulin derivatives having a rapid onset of action
JP5695909B2 (ja) 極度に遅延した時間作用プロファイルを有する新規なインスリン誘導体
US20180371045A1 (en) Novel insulin derivatives
JP2662390B2 (ja) インシユリン類似体
US9260503B2 (en) Multi-substituted insulins
KR20150008137A (ko) 지속성 옥신토모둘린 변이체 및 이의 생산 방법
KR20130115086A (ko) 페길화된 c-펩티드
JP2018508504A (ja) 持続型インスリンまたはインスリンアナログ結合体
KR20070050454A (ko) 섬유아세포 성장 인자 21의 뮤테인
HU229626B1 (en) A variant form of urate oxidase and use thereof
JP2022507627A (ja) ポリ－アラニンｃ－ドメインのサブセグメントを有する単鎖インスリンアナログ
CA2049961A1 (en) Insulin compounds
TW201323439A (zh) 人胰島素類似物及其醯化衍生物
EP2700654A1 (en) Human insulin and analog conjugate thereof
US6686177B1 (en) Insulin analogs with enhanced zinc binding
JP2019535733A (ja) 安定性が増強された速効性インスリン類似体
JP6995284B2 (ja) 新規インスリン類似体およびそれらの使用
WO1992000322A1 (en) Insulin analogues with organ preferential action
WO1992015611A1 (en) Novel insulin derivatives
EP2852400B1 (en) An insulin analogue or its pharmaceutically acceptable salt, pharmaceutical composition with prolonged therapeutic effect, use of the insulin analogue, dosage method and method of treatment of diabetes
AU2011256203A1 (en) PEGylated C-peptide