KR20150008137A

KR20150008137A - 지속성 옥신토모둘린 변이체 및 이의 생산 방법

Info

Publication number: KR20150008137A
Application number: KR1020147032422A
Authority: KR
Inventors: 우디 이얄 피마; 오렌 헤르쉬코비츠
Original assignee: 옵코 바이오로직스 리미티드
Priority date: 2012-04-19
Filing date: 2013-04-17
Publication date: 2015-01-21
Also published as: SG11201406671RA; WO2013157002A1; CL2014002791A1; US20170088598A1; CN104487082A; JP2015520128A; IL235184A0; PE20142405A1; US9522945B2; HK1207564A1; AU2013250711A1; BR112014025951A2; CO7200249A2; EA201491898A1; EP2838552A4; MY167814A; EP2838552A1; US20150072924A1; MX2014012625A; CA2870650A1

Abstract

본 발명은 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)-변형된 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제, 및 그것의 생산 방법 및 사용 방법에 관한 것이다. 일 구현예에서, 본 발명은 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 제공한다.

Description

지속성 옥신토모둘린 변이체 및 이의 생산 방법 {LONG-ACTING OXYNTOMODULIN VARIANTS AND METHODS OF PRODUCING SAME}

본 발명은 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)-변형된 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제, 및 그것의 생산 방법 및 사용 방법에 관한 것이다.

옥신토모둘린(OXM)은 음식 소화시 장내 L 세포에 의해 혈류 내로 분비되어 뇌에서 포만감을 유발하는 37개 아미노산 펩타이드이다. OXM은 또한 이중 GPL-1/글루카곤 수용체 작용제이다. 그것은 음식 섭취 조절과 연관되며 설치류 및 인간에서 음식 섭취를 억제하여 체중을 감소시키는 것으로 나타났다. 그러나, OXM은 상대적으로 반감기가 매우 짧아 인간에서 약리적 효과를 달성하기 위해서는 과생리적 용량(supraphysiological dose)의 매일 반복된 투여가 필요하다. 그러므로, 동물 및 인간 대상에서 예방 및 치료 목적을 위해 더 잘 받아들여지도록 OXM의 혈청 반감기를 연장할 필요가 있다.

본 발명은 단백질 및 펩타이드, 특히, OXM의 혈청 반감기를 연장하기 위해 펩타이드-기반 기술을 이용한다. 이 기술은 천연 펩타이드인 hCG의 베타 사슬의 C-말단 펩타이드(CTP)에 기초한다.

일 구현예에서, 본 발명은 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 제공한다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 생산하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 부착시키는 단계를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 생물학적 반감기를 연장하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 상기 작용제의 아미노 또는 카복시 말단에 부착시키고, 그렇게 함으로써 상기 작용제의 생물학적 반감기를 개선하는 단계를 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 곡선하 면적 (AUC)를 개선하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 상기 작용제의 카복시 말단에 부착시키고, 그렇게 함으로써 상기 작용제의 곡선하 면적 (AUC)를 개선하는 단계를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 복용 빈도를 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 상기 작용제의 아미노 또는 카복시 말단에 부착시키고, 그렇게 함으로써 상기 작용제의 복용 빈도를 감소시키는 단계를 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 글루코오스 내성을 유도하기 위한, 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의 용도를 제공한다.

일 구현예에서, 본 발명은 대상체에 의한 원하지 않는 체중 증가를 예방하기 위한,GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의 용도를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 체중 증가의 위험은 심리적 상태에 기인하거나, 대상체의 의한 체중 증가에 대한 유전적 소인에 기인한다. 또 하나의 구현예에서, 심리적 상태는 우울증, 불안 또는 외상후 스트레스 장애 (PTSD)이다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 음식 섭취를 예방, 감소 또는 억제하기 위한, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물의 용도를 제공한다.

일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 비만을 치료하기 위한, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의 용도를 제공한다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 제 II형 당뇨병을 치료하기 위한, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의 용도를 제공한다.

일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 대사성 장애를 치료하기 위한, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의 용도를 제공한다.

본 발명의 다른 특징 및 이점은 하기의 상세한 설명예 및 도면으로부터 명확해질 것이다. 그러나, 이 상세한 설명으로부터 본 발명의 사상 및 범위 내에서의 다양한 변화 및 변형이 당해분야의 숙련가에게 명확해질 것이기 때문에, 상기 상세한 설명 및 본 발명의 바람직한 구현예를 나타내는 특정 예들은 단지 예시로써 제시되는 것으로 이해되어야 한다.

하기 도면은 본 명세서의 일부를 형성하고 본 개시내용의 소정의 측면을 더입증하기 위해 포함되며, 본 발명은 본원에 제시된 특정 구현예의 상세한 설명과 함께 이들 도면 중 하나 이상을 참조하여 더 잘 이해될 수 있다.
도 1a 및 1b는 정제된 OXM-CTP 변이체: OXM-CTP-CTP-CTP, OXM-CTP 4X, OXM-CTP 5X의 PAGE 및 웨스턴 블롯(WB) 분석을 보여준다. a. OXM 샘플 및 OXM-CTP 변이체(레인당 10 및 2 μg 단백질)의 쿠마시 염색. b. 항 OXM을 이용한 OXM-CTP 변이체의 WB 분석.
도 2a 및 2b는 OXM-CTP 변이체: CTP-OXM-CTP, CTP-OXM-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP 및 CTP-CTP-OXM의 정제 공정으로부터 얻은 샘플의 PAGE 분석을 보여준다.
도 3a 내지 3c는 SD-1 랫트에서 OXM 펩타이드 및 OXM-CTP 변이체의 세 가지 순차적인 실험의 PK 프로파일을 보여준다.
도 4a 내지 4d는 C57BL/6 마우스에서 측정된 OXM 펩타이드 및 OXM-CTP 변이체의 당부하 검사의 결과를 보여준다.
도 5a 및 5b는 C57BL/6 마우스에서 측정된 OXM 펩타이드 및 OXM-CTP 변이체의 급성 음식 섭취의 결과를 보여준다. a. 비히클과 비교하여 치료를 받는 마우스에서 축적된 음식 섭취의 백분율. b. 연구 동안 다양한 시간 간격에 대한 음식 섭취의 백분율.

일 구현예에서, 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드(CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드가 본원에 제공된다.

또 하나의 구현예에서, 상기 작용제는 단백질, 폴리펩타이드, 또는 펩타이드이다. 또 하나의 구현예에서, 상기 펩타이드는 옥신토모둘린이다.

또 하나의 구현예에서, 상기 CTP-변형된 폴리펩타이드는 50개의 미만의 아미노산 및 상기 펩타이드의 아미노 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 펩타이드를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 상기 펩타이드는 옥신토모둘린(OXM)이다.

옥신토모둘린 펩타이드는 당뇨병 및 비만과 같은 대사성 장애의 치료에 유용하다. 그러나, 상기 펩타이드의 짧은 반감기 및 그의 낮은 생체내 안정성으로 인해, 인간에서 약리적 효과를 달성하기 위해서는 과생리적 용량의 매일 반복된 투여가 필요하다. 하기에 입증된 바와 같이(실시예 참고), 본 발명의 모든 OXM-CTP 변이체들은 상당한 노출의 증가 및 반감기 신장과 함께, 원상태 OXM과 비교하여 랫트에서 우수한 약력학적 프로파일을 입증하였다. 놀랍게도, OXM-CTP-CTP 변이체는 3카피의 CTP(N-말단에 1개 및 C-말단에 나란히 2개)에 융합된 CTP-OXM-CTP-CTP 변이체와 비교하여 우수한 PK 파라미터를 입증하였다.

SC 투여 후, OXM의 C-말단에의 2개 및 3개의 CTP의 융합은 원상태 펩타이드 반감기와 비교하여 유사한 배수 증가(각각 21.6 및 21)를 야기하였다(본원 실시예 3 참고). 따라서, OXM의 C-말단에의 4개 및 5개의 CTP의 융합은 반감기를 20배 넘게 유의미하게 증가시키지 않을 것으로 예상되었다. 그러나, 곡선하 면적(AUC) 파라미터에 의해 반영된 바와 같이 노출에서의 30배 증가와 함께 OXM-4CTP 변이체 및 OXM-5CTP 변이체에 대해 OXM 반감기의 놀랍게 두드러진 증가(즉 50-배)가 입증되었다(본원 실시예 3 참고).

그러므로, 일 구현예에서, 옥신토모둘린(OXM) 펩타이드 및 옥신토모둘린의 아미노 말단 또는 카복시 말단 펩타이드에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드(CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드가 본원에 제공된다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 OXM은, 그것의 아미노 또는 카복시 말단에서의 펩타이드 결합을 통해 그 아미노 말단에 CTP가 없는 적어도 하나의 CTP 단위에 연결된, 전장 OXM 또는 그의 활성 단편을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 OXM은, 그것의 카복시 말단에서의 펩타이드 결합을 통해 그 아미노 말단에 CTP가 없는 적어도 하나의 CTP 단위에 연결된, 전장 OXM 또는 그의 활성 단편을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 OXM은, 그것의 아미노 말단에의 펩타이드 결합을 통해 그 카복시 말단에 CTP가 없는 적어도 하나의 CTP 단위에 연결된, 전장 OXM 또는 그의 활성 단편을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명은 상기 본원에 기재된 바와 같이 조작된 OXM을 인코딩하는 핵산 분자를 제공하며, 이는 일 구현예에서, 그것의 카복시 말단 또는 그것의 아미노 말단에 부착된 적어도 하나의 CTP를 포함한다.

또 하나의 구현예에서, CTP 서열은 DPRFQDSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPIL(서열번호: 1)을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, CTP 서열은 SSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ(서열번호: 2)를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, CTP 서열은 서열번호: 1 및 서열번호: 2에 제시된 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명의 카복시 말단 펩타이드(CTP) 펩타이드는 인간 융모막 성선자극호르몬의 아미노산 112부터 위치 145까지의 아미노산 서열을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 서열번호: 2에 제시된 바와 같이, 인간 융모성 성선자극호르몬의 아미노산 118부터 위치 145까지의 아미노산 서열을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, CTP 서열은 또한 위치 112-118 사이의 임의의 위치로부터 개시되며 인간 융모막 성선자극호르몬의 위치 145에서 종결된다. 일부 구현예에서, CTP 서열 펩타이드는 28, 29, 30, 31, 32, 33 또는 34개의 아미노산 길이이고, CTP 아미노산 서열의 위치 112, 113, 114, 115, 116, 117 또는 118에서 개시된다.

따라서, 일 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 서열번호: 2에서 제시된 바와 같은 인간 융모성 성선자극호르몬의 아미노산 112부터 145 위치까지의 아미노산 서열을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 서열번호: 2에서 제시된 바와 같은 인간 융모성 성선자극호르몬의 아미노산 113부터 145 위치까지의 아미노산 서열을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 서열번호: 2에서 제시된 바와 같은 인간 융모성 성선자극호르몬의 아미노산 114부터 145 위치까지의 아미노산 서열을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 서열번호: 2에서 제시된 바와 같은 인간 융모성 성선자극호르몬의 아미노산 115부터 145 위치까지의 아미노산 서열을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 서열번호: 2에서 제시된 바와 같은 인간 융모성 성선자극호르몬의 아미노산 116부터 145 위치까지의 아미노산 서열을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 서열번호: 2에서 제시된 바와 같은 인간 융모성 성선자극호르몬의 아미노산 117부터 145 위치까지의 아미노산 서열을 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 서열번호: 1에서 제시된 바와 같은 인간 융모성 성선자극호르몬의 아미노산 112부터 145 위치까지의 아미노산 서열을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 서열번호: 1에서 제시된 바와 같은 인간 융모성 성선자극호르몬의 아미노산 113부터 145 위치까지의 아미노산 서열을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 서열번호: 1에서 제시된 바와 같은 인간 융모성 성선자극호르몬의 아미노산 114부터 145 위치까지의 아미노산 서열을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 서열번호: 1에서 제시된 바와 같은 인간 융모성 성선자극호르몬의 아미노산 115부터 145 위치까지의 아미노산 서열을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 서열번호: 1에서 제시된 바와 같은 인간 융모성 성선자극호르몬의 아미노산 116부터 145 위치까지의 아미노산 서열을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 서열번호: 1에서 제시된 바와 같은 인간 융모성 성선자극호르몬의 아미노산 117부터 145 위치까지의 아미노산 서열을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 서열번호: 1에서 제시된 바와 같은 인간 융모성 성선자극호르몬의 아미노산 118부터 145 위치까지의 아미노산 서열을 포함한다.

일 구현예에서, 끝이 잘린 CTP는 SSSSKAPPPSLP (서열번호: 3)을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 끝이 잘린 CTP는 서열번호: 3의 제 1 10개의 아미노산을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 끝이 잘린 CTP는 서열번호: 3의 제 1 11 개의 아미노산을 포함한다.

일 구현예에서, 끝이 잘린 CTP는 서열번호: 2의 제 1 14 개의 아미노산을 포함한다. 일 구현예에서, 끝이 잘린 CTP는 서열번호: 2의 제 1 13 개의 아미노산을 포함한다. 일 구현예에서, 끝이 잘린 CTP는 서열번호: 2의 제 1 12 개의 아미노산을 포함한다. 일 구현예에서, 끝이 잘린 CTP는 서열번호: 2의 제 1 11 개의 아미노산을 포함한다. 일 구현예에서, 끝이 잘린 CTP는 서열번호: 2의 제 1 10 개의 아미노산을 포함한다. 일 구현예에서, 끝이 잘린 CTP는 서열번호: 2의 제 1 9 개의 아미노산을 포함한다. 일 구현예에서, 끝이 잘린 CTP는 서열번호: 2 또는 서열번호: 3의 제 1 8 개의 아미노산을 포함한다. 일 구현예에서, 끝이 잘린 CTP는 서열번호: 2 또는 서열번호: 3의 제 1 7 개의 아미노산을 포함한다. 일 구현예에서, 끝이 잘린 CTP는 서열번호: 2 또는 서열번호: 3의 제 1 6 개의 아미노산을 포함한다. 일 구현예에서, 끝이 잘린 CTP는 서열번호: 2 또는 서열번호: 3의 제 1 5 개의 아미노산을 포함한다.

또 하나의 구현예에서, CTP 펩타이드는 본원에 참조로 그 전체가 편입되어 있는 미국 특허 번호 5,712,122에서 기재된 바와 같이 1-5 개의 보존적 아미노산 치환에 의해 원상태 CTP와 상이한 융모막 성선자극호르몬 CTP의 변이체이다. 또 하나의 구현예에서, CTP 펩타이드는 1 개의 보존적 아미노산 치환 원상태 CTP와 상이한 융모막 성선자극호르몬 CTP의 변이체이다. 또 하나의 구현예에서, CTP 펩타이드는 2 개의 보존적 아미노산 치환에 의해 원상태 CTP와 상이한 융모막 성선자극호르몬 CTP의 변이체이다. 또 하나의 구현예에서, CTP 펩타이드는 3 개의 보존적 아미노산 치환에 의해 원상태 CTP와 상이한 융모막 성선자극호르몬 CTP의 변이체이다. 또 하나의 구현예에서, CTP 펩타이드는 4 개의 보존적 아미노산 치환에 의해 원상태 CTP와 상이한 융모막 성선자극호르몬 CTP의 변이체이다. 또 하나의 구현예에서, CTP 펩타이드는 5 개의 보존적 아미노산 치환에 의해 원상태 CTP와 상이한 융모막 성선자극호르몬 CTP의 변이체이다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드 아미노산 서열은 원상태 CTP 아미노산 서열 또는 그의 펩타이드에 대해 적어도 70% 상동이다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드 아미노산 서열은 원상태 CTP 아미노산 서열 또는 그의 펩타이드에 대해 적어도 80% 상동이다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드 아미노산 서열은 원상태 CTP 아미노산 서열 또는 그의 펩타이드에 대해 적어도 85% 상동이다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드 아미노산 서열은 원상태 CTP 아미노산 서열 또는 그의 펩타이드에 대해 적어도 90% 상동이다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드 아미노산 서열은 원상태 CTP 아미노산 서열 또는 그의 펩타이드에 대해 적어도 95% 상동이다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드 아미노산 서열은 원상태 CTP 아미노산 서열 또는 그의 펩타이드에 대해 적어도 98% 상동이다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 원상태 인간 CTP DNA 서열 또는 그의 펩타이드에 대해 적어도 70% 상동이다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 원상태 인간 CTP DNA 서열 또는 그의 펩타이드에 대해 적어도 80% 상동이다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 원상태 인간 CTP DNA 서열 또는 그의 펩타이드에 대해 적어도 85% 상동이다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 원상태 CTP DNA 서열 또는 그의 펩타이드에 대해 적어도 90% 상동이다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 원상태 CTP DNA 서열 또는 그의 펩타이드에 대해 적어도 95% 상동이다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 원상태 CTP DNA 서열 또는 그의 펩타이드에 대해 적어도 98% 상동이다.

일 구현예에서, 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열의 적어도 하나는 끝이 잘려져 있다. 또 하나의 구현예에서, 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열의 둘 모두는 끝이 잘려져 있다. 또 하나의 구현예에서, 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열의 2 개는 끝이 잘려져 있다. 또 하나의 구현예에서, 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열의 3 개는 끝이 잘려져 있다. 또 하나의 구현예에서, 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열의 4 개는 끝이 잘려져 있다. 또 하나의 구현예에서, 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열의 5 개는 끝이 잘려져 있다. 또 하나의 구현예에서, 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열의 2 개 이상은 끝이 잘려져 있다. 또 하나의 구현예에서, 모든 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열은 끝이 잘려져 있다.

일 구현예에서, 적어도 하나의 CTP는 링커를 통해 작용제 폴리펩타이드에 부착된다. 또 하나의 구현예에서, 적어도 하나의 CTP는 링커를 통해 작용제 폴리펩타이드에 부착된다. 또 하나의 구현예에서, 링커는 펩타이드 결합이다.

일 구현예에서, 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열의 적어도 하나는 당화된다. 또 하나의 구현예에서, 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열의 둘 모두는 당화된다. 또 하나의 구현예에서, 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열의 2 개는 당화된다. 또 하나의 구현예에서, 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열의 3 개는 당화된다. 또 하나의 구현예에서, 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열의 4 개는 당화된다. 또 하나의 구현예에서, 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열의 5 개는 당화된다. 또 하나의 구현예에서, 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열의 2 개 이상는 당화된다. 또 하나의 구현예에서, 모든 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열은 당화된다.

일 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 적어도 하나의 당화 부위를 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 2 개의 당화 부위를 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 3 개의 당화 부위를 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 4 개의 당화 부위를 포함한다. 일 구현예에서, 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열의 하나 이상은 완전히 당화된다. 또 하나의 구현예에서, 융모막 성선자극호르몬 CTP 아미노산 서열의 하나 이상은 부분적으로 당화된다. 일 구현예에서, 부분적으로 당화된다는 것은, CTP 당화 부위의 하나가 당화된다는 것을 나타낸다. 또 하나의 구현예에서, CTP 당화 부위의 2개는 당화된다. 또 하나의 구현예에서, CTP 당화 부위의 3 개는 당화된다.

일부 구현예에서, CTP 서열 변형은 더 낮은 복용량의 사용을 허용하는데 유리하다. 일부 구현예에서, CTP 서열 변형은 더 적은 복용량을 허용하는데 유리하다. 일부 구현예에서, CTP 서열 변형은 안전하고 지속적인 효과를 허용하는데 유리하다.

일부 구현예에서, 본원에서 사용된 바와 같이 "폴리펩타이드", "조작된 옥신토모둘린", 또는 "단백질"은 원상태 폴리펩타이드(분해 생성물, 합성적으로 합성된 폴리펩타이드 또는 재조합 폴리펩타이드) 및 펩타이도모사체(전형적으로, 합성적으로 합성된 폴리펩타이드), 뿐만 아니라 폴리펩타이드 유사체인 펩토이드 및 세미펩토이드를 포함하며, 이는 일부 구현예에서, 옥신토모둘린을 포함하는 폴리펩타이드가 인간 또는 동물 대상에서 훨씬 더 안정적이거나 세포 내로 더 잘 침입할 수 있도록 하는 변형을 갖는다.

일부 구현예에서, 변형은 C 말단 변형, 비제한적으로, CH2-NH, CH2-S, CH2-S=O, O=C-NH, CH2-O, CH2-CH2, S=C-NH, CH=CH 또는 CF=CH를 포함하는 폴리펩타이드 결합 변형, 골격 변형, 및 잔기 변형을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 펩타이도모사체 화합물을 제조하는 방법은 당해기술에서 잘 알려져 있으며 예를 들면 본원에 완전히 제시된 것과 같이 참조로 편입된 문헌[Quantitative Drug Design, C.A. Ramsden Gd., Chapter 17.2, F. Choplin Pergamon Press (1992)]에 명시되어 있다. 이와 관련된 추가 세부사항이 하기에 제공되어 있다.

일부 구현예에서, 폴리펩타이드 내의 폴리펩타이드 결합(-CO-NH-)은 치환된다. 일부 구현예에서, 폴리펩타이드 결합은 N-메틸화된 결합(-N(CH3)-CO-)에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, 폴리펩타이드 결합은 에스테르 결합(-C(R)H-C-O-O-C(R)-N-)에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, 폴리펩타이드 결합은 케토메틸렌 결합(-CO-CH2-)에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, 폴리펩타이드 결합은 α-아자 결합(-NH-N(R)-CO-)에 의해 치환되고, 여기서 R은 임의의 알킬, 예를 들면, 메틸, 카르바 결합(-CH2-NH-)이다. 일부 구현예에서, 폴리펩타이드 결합은 하이드록시에틸렌 결합(-CH(OH)-CH2-)이다. 일부 구현예에서, 폴리펩타이드 결합은 티오아미드 결합(-CS-NH-)에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, 폴리펩타이드 결합은 올레핀성 이중 결합(-CH=CH-)에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, 폴리펩타이드 결합은 레트로 아마이드 결합(-NH-CO-)에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, 상기 폴리펩타이드 결합은 폴리펩타이드 유도체(-N(R)-CH2-CO-)에 의해 치환되며, 여기서 R은 탄소 원자 상에 자연적으로 존재하는 "정상" 측쇄이다. 일부 구현예에서, 이들 변형은 폴리펩타이드 사슬을 따라 임의의 결합에서 일어나고, 일 구현예에서 동시에 몇 개(2-3 결합)에서 일어난다.

일 구현예에서, 폴리펩타이드의 천연 방향족 아미노산, 예컨대 Trp, Tyr 및 Phe는 페닐글리신, TIC, 나프틸알라닌(Nol), Phe의 고리-메틸화된 유도체, Phe의 할로겐화된 유도체 또는 o-메틸-Tyr과 같은 합성 비-천연산으로 치환된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드는 하나 이상의 변형된 아미노산 또는 하나 이상의 비-아미노산 단량체(예를 들면 지방산, 복합 탄수화물 등)를 포함한다.

일 구현예에서, "아미노산" 또는 "아미노산 서열"은 20개의 자연 발생 아미노산; 예를 들면, 하이드록시프롤린, 포스포세린 및 포스포트레오닌을 포함하는, 생체내에서 번역후 종종 변형되는 아미노산; 및 비제한적으로, 2-아미노아디프산, 하이드록실리신, 이소데스모신, 노르-발린, 노르-류신 및 오르니틴을 포함하는 다른 드문 아미노산을 포함하는 것으로 이해된다. 일 구현예에서, "아미노산"은 D- 및 L-아미노산 모두를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드는 옥신토모둘린을 포함하는 폴리펩타이드가 가용성 형태일 것을 요구하는 치료제에서 이용된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드는 그의 하이드록실-함유 측쇄로 인해 폴리펩타이드 용해도를 증가시킬 수 있는, 비제한적으로 세린 및 트레오닌을 포함하는, 하나 이상의 비-천연 또는 천연 극성 아미노산을 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명의 조작된 옥신토모둘린 펩타이드는, 예컨대 표준 고체상 기술을 이용하여 생화학적으로 합성된다. 일부 구현예에서, 이들 생화학적 방법은 배타적인 고체상 합성, 부분 고체상 합성, 단편 축합, 또는 고전적 용액 합성을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명의 조작된 옥신토모둘린 펩타이드를 생성하기 위해 재조합 단백질 기술이 사용된다. 일부 구현예에서, 상대적으로 긴 폴리펩타이드(예를 들면, 18-25개보다 더 긴 아미노산)의 생성을 위해 재조합 단백질 기술이 사용된다. 일부 구현예에서, 많은 양의 본 발명의 조작된 옥신토모둘린 펩타이드의 생성을 위해 재조합 단백질 기술이 사용된다. 일부 구현예에서, 재조합 기술은 그 전체가 참조로 본원에 통합되어 있는 문헌[Bitter et al., (1987) Methods in Enzymol. 153:516-544, Studier et al. (1990) Methods in Enzymol. 185:60-89, Brisson et al. (1984) Nature 310:511-514, Takamatsu et al. (1987) EMBO J. 6:307-311, Coruzzi et al. (1984) EMBO J. 3:1671-1680 and Brogli et al., (1984) Science 224:838-843, Gurley et al. (1986) Mol. Cell. Biol. 6:559-565 and Weissbach & Weissbach, 1988, Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, NY, Section VIII, pp 421-463]에 기재되어 있다.

또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 폴리펩타이드는 50개 미만의 아미노산 및 상기 펩타이드의 아미노 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 펩타이드를 포함한다. 일 구현예에서, 본원에 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드는 40개 미만의 아미노산 및 상기 펩타이드의 아미노 또는 카복시 말단에 부착된 4적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 펩타이드를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드는 30, 20, 또는 10개 미만의 아미노산을 포함하는 펩타이드를 포함한다. 일 구현예에서, 50개 미만의 아미노산을 포함하는 펩타이드는 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제이다. 또 하나의 구현예에서, 50개 미만의 아미노산을 포함하는 펩타이드는 OXM이다.

또 하나의 구현예에서, OXM은 하기의 아미노산(AA) 서열을 포함한다: HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA(서열번호: 30). 또 하나의 구현예에서, OXM은 서열번호: 30의 아미노산 서열로 구성된다. 또 하나의 구현예에서, OXM은 CAS 번호 62340-29-8에 묘사된 아미노산 서열을 포함하거나 구성된다.

또 하나의 구현예에서, OXM은 인간 OXM 또는 임의의 포유동물 OXM이다. 또 하나의 구현예에서, OXM은 글루카곤-37 또는 생물활성 엔테로글루카곤으로도 지칭된다. 또 하나의 구현예에서, OXM은 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제이다. 또 하나의 구현예에서, 용어 OXM은 OXM의 생물학적 활성 단편을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 생물학적 활성인 OXM은 서열번호: 30의 아미노산 30부터 아미노산 37까지이다. 또 하나의 구현예에서, 생물학적 활성 OXM은 서열번호: 30의 아미노산 19부터 아미노산 37까지이다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 OXM은 2개의 C-말단 아미노산이 결실된 옥타펩타이드에 해당한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 OXM은 본원에 기재된 바와 같이 OXM 활성을 보유하는 서열번호: 30의 임의의 단편에 해당한다.

일 구현예에서, 2개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드들은 옥신토모둘린에 부착되는데, 하나의 CTP는 카복시 말단에 그리고 하나의 CTP는 아미노 말단에 부착된다. 또 하나의 구현예에서, 2개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드들은 옥신토모둘린의 카복시 말단 펩타이드에서 옥신토모둘린에 부착된다. 또 하나의 구현예에서, 2개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드는 둘다 옥신토모둘린 펩타이드의 아미노 말단에서 옥신토모둘린에 부착된다. 또 하나의 구현예에서, 3개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드는 옥시토모둘린에 부착되는데, 하나의 CTP는 아미노 말단에, 그리고 2개의 CTP는 옥신토모둘린의 카복시 말단 펩타이드에 부착된다. 또 하나의 구현예에서, 3개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드는 옥신토모둘린의 카복시 말단 펩타이드에 부착된다. 또 하나의 구현예에서, 4개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드는 옥신토모둘린의 카복시 말단 펩타이드에 부착된다. 또 하나의 구현예에서, 5개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드는 옥신토모둘린의 카복시 말단 펩타이드에 부착된다. 또 하나의 구현예에서, 1-10개의 CTP가 옥신토모둘린의 아미노 또는 카복시 말단에 부착된다. 또 하나의 구현예에서, 1-10개의 CTP가 옥신토모둘린의 아미노 말단에 부착된다. 또 하나의 구현예에서, 1-10개의 CTP가 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된다.

또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린(OXM) 펩타이드 및 옥신토모둘린의 아미노 말단 또는 카복시 말단 펩타이드에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드(CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 생산하는 방법이 본원에 제공되며, 상기 방법은 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 옥신토모둘린 펩타이드의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착시키는 단계를 포함한다.

일 구현예에서, 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 상기 작용제의 아미노 또는 카복시 말단에 부착시킴으로써, 작용제의 생물학적 반감기를 개선하는 단계를 포함하는, 50개 미만의 아미노산을 포함하는 펩타이드의 생물학적 반감기를 연장시키는 방법이 본원에 제공된다.

일 구현예에서, 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 상기 작용제의 아미노 또는 카복시 말단에 부착시킴으로써 작용제의 생물학적 반감기를 개선하는 단계를 포함하는, 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 생물학적 반감기를 연장하는 방법이 본원에 제공된다.

또 하나의 구현예에서, 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 옥신토모둘린의 아미노 또는 카복시 말단에 부착시킴으로써, 옥신토모둘린의 생물학적 반감기를 개선하는 단계를 포함하는, 옥신토모둘린의 생물학적 반감기를 연장하는 방법이 본원에 제공된다.

일 구현예에서, 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 상기 작용제의 카복시 말단에 부착시킴으로써 작용제의 곡선하 면적(AUC)을 개선하는 단계를 포함하는, 50개 미만의 아미노산을 포함하는 펩타이드의 곡선하 면적(AUC)을 개선하는 방법이 제공된다.

일 구현예에서, 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 상기 작용제의 카복시 말단에 부착시킴으로써, 작용제의 곡선하 면적(AUC)을 개선하는 단계를 포함하는, 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 곡선하 면적(AUC)을 개선하는 방법이 본원에 제공된다.

또 하나의 구현예에서, 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착시킴으로써, 옥신토모둘린의 곡선하 면적(AUC)을 개선하는 단계를 포함하는, 옥신토모둘린의 곡선하 면적(AUC)을 개선하는 방법이 본원에 제공된다.

일 구현예에서, 용어 옥신토모둘린은 공지된 옥신토모둘린의 동족체를 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 상기 동족체는 기능성 동족체이다. 또 하나의 구현예에서, 용어 "기능성"은 본원에 제공된 동족체, 펩타이드 또는 단백질이 식욕을 억제하기 위해 갖는 능력을 지칭한다. 상기 용어는 또한 본원에 제공된 동족체, 펩타이드 또는 단백질이 또 다른 단백질 또는 펩타이드의 생물학적 반감기를 연장하기 위해 갖는 능력을 지칭한다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 제공된 단백질, 펩타이드 또는 동족체의 생물학적 반감기(T₁ _/2)는 상기 단백질, 펩타이드 또는 동족체의 양의 절반이 대상에서의 생물학적 매질 내에서 분해되거나 존재하지 않게 되는데 걸리는 시간을 지칭한다. 또 하나의 구현예에서, 상기 생물학적 매질은 혈청, 뇌척수액, 조직, 점막 등이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 상동성은 또한 이의 결실, 삽입, 또는 아미노산 치환을 포함하는 치환 변이체 및 이의 생물학적 활성 폴리펩타이드 단편을 포함한다. 일 구현예에서, 본원에 제공된 변이체는 옥신토모둘린의 3차원 구조를 유의미하게 변경하지 않는 보존적 치환, 또는 결실, 삽입, 또는 치환을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 결실, 삽입, 또는 치환은 일 구현예에서 특정한 결합 파트너에 결합하고 있는 옥신토모둘린의 관심있는 기능을 변경하지 않는다.

일 구현예에서, 옥시토모둘린은 수용체에 결합하여 식욕 억제를 매개한다. 또 하나의 구현예에서, 상기 수용체는 이중 GLP-1/글루카곤 수용체이다. 또 하나의 구현예에서, 상기 수용체는 GLP-1 수용체이다. 또 하나의 구현예에서, 상기 수용체는 글루카곤 수용체이다. 또 하나의 구현예에서, 상기 수용체는 옥신토모둘린에 결합하는 본 기술분야에 공지된 임의의 수용체이다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 옥신토모둘린의 동족체를 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명은 OXM 동족체를 제공하며, 이는 일 구현예에서, 서열번호: 30의 펩타이드의 펩타이드 동족체를 지칭한다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 식욕 억제 활성을 갖는 옥신토모둘린의 동족체를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명은 기능성 결합을 갖는 옥신토모둘린의 동족체를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명은 식욕 억제 및 활성을 갖는 본원에 기재된 바와 같은 옥신토모둘린의 동족체를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명은 기능성 결합을 갖는 본원에 기재된 바와 같은 옥신토모둘린의 동족체를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명은 또한 동족체, 예를 들면, 디폴트 파라미터를 이용하여 국립생물공학정보센터(NCBI)의 BlastP 소프트웨어를 이용하여 결정된 바와 같이 옥신토모둘린에 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 87%, 적어도 89%, 적어도 91%, 적어도 93%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동인 폴리펩타이드를 포함한다.

일 구현예에서, 본원에 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에 제공된다.

본원에 기재된 바와 같은 요소 또는 단계를 포함하는 본 발명의 조성물 및 방법은, 또 하나의 구현예에서, 상기 요소 또는 단계로 구성될 수 있거나, 또는 또 하나의 구현예에서, 상기 요소 또는 단계로 본질적으로 구성될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 일부 구현예에서, 용어 "포함하다"는 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제와 같은 명시된 활성제를 포함하는 것 뿐만 아니라 약제학적 산업에서 공지된 바와 같은 다른 활성제, 및 약제학적으로 또는 생리적으로 허용가능한 담체, 부형제, 완화제, 안정제 등을 포함하는 것을 지칭한다. 일부 구현예에서, 용어 "본질적으로 구성되는"은 조성물의 유일한 활성 성분이 상기 명시된 활성 성분인 조성물을 지칭하지만, 제형을 안정화하고, 보존하는 것 등을 위한 것이나 명시된 활성 성분의 치료 효과에 직접 관여하지 않는 다른 화합물이 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 용어 "본질적으로 구성되는"은 활성 성분의 방출을 용이하게 하는 성분을 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 용어 "구성되는"은 활성 성분 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 함유하는 조성물을 지칭한다.

본원에 기재된 바와 같은 요소 또는 단계를 포함하는 본 발명의 조성물 및 방법은, 또 하나의 구현예에서, 상기 요소 또는 단계로 구성될 수 있거나, 또는 또 하나의 구현예에서, 상기 또는 단계로 본질적으로 구성될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 일부 구현예에서, 용어 "포함하다"는 CTP-변형된 옥신토모둘린과 같은 명시된 활성제를 포함하는 것 뿐만 아니라 약제학적 산업에서 공지된 바와 같은 다른 활성제, 및 약제학적으로 또는 생리적으로 허용가능한 담체, 부형제, 완화제, 안정제 등을 포함하는 것을 지칭한다. 일부 구현예에서, 용어"본질적으로 구성되는"은 조성물의 유일한 활성 성분이 상기 명시된 활성 성분인 조성물을 지칭하지만, 제형을 안정화시키고, 보존하는 것 등을 위한 것이나 명시된 활성 성분의 치료 효과에 직접 관여하지 않는 다른 화합물이 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 용어 "본질적으로 구성되는"은 활성 성분의 방출을 용이하게 하는 성분을 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 용어 "구성되는"은 활성 성분 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 함유하는 조성물을 지칭한다.

일 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 3 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 4 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 5 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 6 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 7 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 8 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 9 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 10 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 3 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 4 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 5 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 6 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 7 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 8 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 9 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 10 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 4 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 5 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 6 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 7 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 8 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 9 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 10 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 4 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 5 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 6 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 7 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 8 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 9 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 10 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 5 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 6 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 7 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 8 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 9 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 10 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 5 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 6 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 7 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 8 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 9 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 10 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 내지 6 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 내지 7 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 내지 8 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 내지 9 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 내지 10 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 내지 6 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 내지 7 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 내지 8 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 내지 9 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 내지 10 개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 이루어진 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 3 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 4 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 5 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 6 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 7 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 8 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 9 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 10 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 이루어진 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 3 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 4 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 5 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 6 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 7 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 8 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 9 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 10 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 이루어진 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 4 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 5 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 6 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 7 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 8 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 9 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 10 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 이루어진 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 4 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 5 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 6 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 7 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 8 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 9 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 10 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 이루어진 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 5 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 6 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 7 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 8 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 9 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 10 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 이루어진 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 5 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 6 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 7 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 8 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 9 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 10 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 이루어진 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 내지 6 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 내지 7 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 내지 8 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 내지 9 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 내지 10 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 이루어진 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 내지 6 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 내지 7 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 내지 8 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 내지 9 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 내지 10 개의 CTP로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 3 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 4 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 5 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 6 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 7 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 8 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 9 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 2 내지 10 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 3 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 4 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 5 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 6 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 7 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 8 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 9 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 2 내지 10 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 4 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 5 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 6 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 7 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 8 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 9 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 3 내지 10 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 4 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 5 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 6 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 7 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 8 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 9 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 내지 10 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 5 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 6 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 7 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 8 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 9 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 4 내지 10 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 5 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 6 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 7 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 8 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 9 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 4 내지 10 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 내지 6 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 내지 7 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 내지 8 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 내지 9 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 5 내지 10 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명은 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 내지 6 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 내지 7 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 내지 8 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 내지 9 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 5 내지 10 개의 CTP로 본질적으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

또 하나의 구현예에서, 그것의 아미노 말단 상에 CTP를 갖지 않는 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하고, 그것으로 본질적으로 이루어지거나, 그것으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 그것의 아미노 말단 상에 CTP가 없는 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하고, 그것으로 본질적으로 이루어지거나, 그것으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 그것의 카복시 말단 상에 적어도 하나의 CTP를 가지며 그것의 아미노 말단 상에 CTP를 갖지 않는 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하고, 그것으로 본질적으로 이루어지거나, 그것으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 그것의 카복시 말단 상에 CTP의 수를 가지며 그것의 아미노 말단 상에 CTP를 갖지 않는 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하고, 그것으로 본질적으로 이루어지거나, 그것으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

또 하나의 구현예에서, 그것의 아미노 말단 상에 CTP를 갖는 옥신토모둘린을 포함하고, 그것으로 본질적으로 이루어지거나, 그것으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 그것의 아미노 말단 상에 CTP가 없는 옥신토모둘린을 포함하고, 그것으로 본질적으로 이루어지거나, 그것으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서공된다 그것의 카복시 말단 상에 적어도 하나의 CTP를 갖는 그것의 아미노 말단 상에 CTP를 갖지 않는 옥신토모둘린을 포함하고, 그것으로 본질적으로 이루어지거나, 그것으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서공된다 본원에 기재된 바와 같은 그것의 카복시 말단 상에 CTP의 수를 갖는 그것의 아미노 말단 상에 CTP를 갖지 않는 옥신토모둘린을 포함하고, 그것으로 본질적으로 이루어지거나, 그것으로 이루어진 폴리펩타이드가 본원에서 제공된다.

일 구현예에서, CTP-변형된 폴리펩타이드의 아미노산 서열은 본원에서 추가로 제공된 서열번호: 9, 15, 21, 23, 25, 27, 또는 29를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 폴리펩타이드의 아미노산 서열은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다: 본원에서 추가로 제공된 서열번호: 9, 15, 21, 23, 25, 27, 또는 29.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 상기에서 기재된 바와 같은 폴리펩타이드 를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 본원에서 추가로 제공된 서열번호: 8, 14, 20, 22, 24, 26 또는 28을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 본원에서 추가로 제공된 서열번호: 98, 14, 20, 22, 24, 26 또는 28로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

일 구현예에서, 본원에서 제공된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 발현 벡터를 포함하는 세포가 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 발현 벡터를 포함하는 조성물이 본원에서 제공된다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 발현 벡터를 포함하는 세포를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 작용제의 아미노 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하거나 그것으로 이루어진 CTP-변형된 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터를 포함하는 세포를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 작용제의 아미노 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 이루어진 CTP-변형된 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터를 포함하는 세포를 제공한다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 발현 벡터를 포함하는 조성물을 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 작용제의 아미노 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하거나 그것으로 이루어진 CTP-변형된 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터를 포함하는 조성물을 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명은 작용제 및 작용제의 아미노 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 이루어진 CTP-변형된 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터를 포함하는 세포를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 작용제는 폴리펩타이드, 또는 펩타이드이다. 또 하나의 구현예에서, 펩타이드는 옥신토모둘린이다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 본원에서 기재된 바와 같은 세포를 포함하는 조성물을 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 세포는 진핵 세포이다. 또 하나의 구현예에서, 세포는 원핵세포이다.

일 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명은 상기에서 기재된 재조합 옥신토모둘린을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 조작된 본원에 기재된 바와 같은 조작된 옥신토모둘린을 제공한다. 일 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 조작된 옥신토모둘린은 CTP-변형된 옥신토모둘린이라고로 한다.

일 구현예에서, 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 CTP는 카복시 말단에 일렬로 부착된다. 일 구현예에서, 옥신토모둘린의 아미노 말단에 부착된 CTP는 아미노 말단에 일렬로 부착된다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 비-CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제와 비교하여 동등한 또는 개선된 생물학적 활성을 갖는다. 또 하나의 구현예에서, 본원에서 제공된 바와 같은 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 비-CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제와 비교하여 동등한 또는 개선된 약리적 측정을 갖는다. 또 하나의 구현예에서, 본원에서 제공된 바와 같은 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 비-CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제와 비교하여 동등한 또는 개선된 약동학을 갖는다. 또 하나의 구현예에서, 본원에서 제공된 바와 같은 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 비-CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제와 비교하여 동등한 또는 개선된 약력학을 갖는다.

또 하나의 구현예에서, 용어들 "CTP 펩타이드," "카복시 말단 펩타이드" 및 "CTP 서열"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 또 하나의 구현예에서, 카복시 말단 펩타이드는 전장 CTP이다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 구현예를 대표한다.

또 하나의 구현예에서, 그 전체가 참조로 본원에 통합되어 있는 US 제7,553,940호에 기재된 바와 같이, 신호 펩타이드가 상기 CTP의 아미노 말단에 부착된다.

다른 구현예에서, 용어 조작된 옥신토모둘린은 성숙한 옥신토모둘린의 아미노산 서열을 지칭한다. 다른 구현예에서, 용어 조작된 옥신토모둘린은 그것의 신호 서열 또는 신호 펩타이드를 포함하는 옥신토모둘린의 아미노산 서열을 지칭한다.

또 하나의 구현예에서, "신호 서열" 및 "신호 펩타이드"는 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 또 하나의 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 분자에 대해 참조할 때 "서열"은 코딩부를 지칭할 수 있다. 각각의 가능성은 본 발명의 별개의 구현예를 대표한다.

또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 적어도 하나의 CTP를 포함하는 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 적어도 하나의 CTP가 없는 동일한 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제와 비교하여 증대된 생체내 생물학적 활성을 갖는다. 일 구현예에서, 상기 증대된 생물학적 활성은 적어도 일부 생물학적 활성을 유지하면서, 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 더 긴 반감기로부터 기인한다. 또 하나의 구현예에서, 상기 증대된 생물학적 활성은 CTP 변형으로부터 비롯된 증대된 생물학적 활성으로부터 기인한다. 또 하나의 구현예에서, 상기 증대된 생물학적 활성은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 더 긴 반감기 및 증대된 기능성 모두로부터 기인한다.

일 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 있는 상기 적어도 하나의 CTP 서열은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 분해에 대해 증대된 보호를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에서의 적어도 하나의 CTP 서열은 소거에 대해 증대된 보호를 제공한다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 있는 상기 적어도 하나의 CTP 서열은 연장된 소거 시간을 제공한다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 있는 상기 적어도 하나의 CTP 서열은 그것의 Cmax를 향상시킨다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 있는 상기 적어도 하나의 CTP 서열은 그것의 Tmax를 향상시킨다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 있는 상기 적어도 하나의 CTP 서열은 그것의 T₁ _/2을 연장한다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명의 접합된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 변형되지 않은 접합된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제와 동일한 방식으로 사용된다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 접합된 옥신토모둘린은 변형되지 않은 접합된 옥신토모둘린과 동일한 방식으로 사용된다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 접합된 옥신토모둘린은 증가된 순환 반감기 및 혈장 체류 시간, 감소된 소거능, 및 생체내에서 증가된 임상적 활성을 갖는다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 접합된 옥신토모둘린의 개선된 특성으로 인해, 이 접합체는 동일한 옥신토모둘린의 변형되지 않은 형태보다 덜 빈번하게 투여된다.

또 하나의 구현예에서, 감소된 투여 빈도는 개선된 치료 전략을 야기하며, 이것은 일 구현예에서 개선된 치료 결과 뿐만 아니라 개선된 환자 삶의 질을 야기하는 개선된 환자 수용상태를 야기한다. 또 하나의 구현예에서, 종래의 옥신토모둘린의 접합체와 비교하여, 본원에 기재된 바와 같은 접합체의 분자량 및 링커 구조를 갖는 접합체는 개선된 효능, 개선된 안정성, 상승된 AUC 수준, 및 증대된 순환 반감기를 갖는 것으로 확인되어 왔다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 추가로, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 이루어진 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 추가로, 옥신토모둘린 및 옥신토모둘린의 카복시 말단에 부착된 3 개의 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)로 이루어진 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

또 하나의 구현예에서, 본원에서 제공된 바와 같은 접합된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 조성물이 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 본원에서 제공된 바와 같은 접합된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 치료적으로 효과적인 양의, 본원에서 제공된 바와 같은 접합된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에서 제공된다. 일 구현예에서, 접합된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 치료적으로 효과적인 양은 인자 예컨대 치료될 특이적 병태, 치료될 환자의 상태, 뿐만 아니라 조성물 중 다른 성분에 따라 결정된다.

또 하나의 구현예에서, 본원에서 제공된 바와 같은 접합된 옥신토모둘린을 포함하는 조성물이 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 본원에서 제공된 바와 같은 접합된 옥신토모둘린을 포함하는 약제학적 조성물이 본원에서 제공된다. 또 하나의 구현예에서, 치료적으로 효과적인 양의, 본원에서 제공된 바와 같은 접합된 옥신토모둘린을 포함하는 약제학적 조성물이 본원에서 제공된다. 일 구현예에서, 치료적으로 효과적인 양의, 접합된 옥신토모둘린은 인자 예컨대 치료될 특이적 병태, 치료될 환자의 상태, 뿐만 아니라 조성물 중 다른 성분에 따라 결정된다.

일 구현예에서, 본 발명의 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 치료 용도를 갖는다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 예방 용도를 갖는다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP-변형된 옥신토모둘린은 치료 용도를 갖는다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 CTP-변형된 옥신토모둘린은 예방 용도를 갖는다.

일 구현예에서, 대상체에서 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 복용 빈도를 감소시키는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 아미노 또는 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착시키고, 그렇게 함으로써 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 복용 빈도를 감소시키는 단계를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, CTP 서열 변형은 더 낮은 복용량의 용법을 허용하는데 유리하다. 일부 구현예에서, CTP 서열 변형은 더 적은 복용량을 허용하는데 유리하다. 일부 구현예에서, CTP 서열 변형은 안전한, 지속성 효과를 허용하는데 유리하다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 옥신토모둘린의 복용 빈도를 감소시키는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 옥신토모둘린의 아미노 또는 카복시 말단에 부착시키고, 그렇게 함으로써 옥신토모둘린의 복용 빈도를 감소시키는 단계를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, CTP 서열 변형은 더 낮은 복용량의 용법을 허용하는데 유리하다. 일부 구현예에서, CTP 서열 변형은 더 적은 복용량을 허용하는데 유리하다. 일부 구현예에서, CTP 서열 변형은 안전한, 지속성 효과를 허용하는데 유리하다.

일 구현예에서, 대상체에서 콜레스테롤을 감소시키는 방법이 제공되고, 상기 방법은 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 옥신토모둘린의 아미노 또는 카복시 말단에 부착시키고, 그렇게 함으로써 대상체에서 콜레스테롤을 감소시키는 단계를 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 글리세롤을 감소시키는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 옥신토모둘린의 아미노 또는 카복시 말단에 부착시키고, 그렇게 함으로써 대상체에서 글리세롤을 감소시키는 단계를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 지속성 OXM을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM은 비변형된 OXM의 생물학적 활성을 유지한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM은 OXM 생물학적 활성을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 소화액 분비를 감소시키는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 위 배출을 감소 및 지연시키는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 작은 창자에서 섭취음식 운동 패턴의 억제를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 펜타가스트린에 의해 자극된 산 분비의 억제를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 위 소마토스타틴 방출의 증가를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 펩타이드 YY의 효과를 강력하게 하는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 그렐린 방출의 억제를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 아미노피린 축적 및 cAMP 생산의 자극을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 GLP-1 수용체를 결합하는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 아데닐레이트 사이클라제를 활성화하여 H+ 생산을 자극하는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 히스타민-자극된 위산 분비를 억제하는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 음식 섭취를 억제하는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 인슐린 방출을 자극하는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 외분비 췌장 분비를 억제하는 것을 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 미주신경 간접적인 기전을 통해 췌장 분비를 억제하는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 작은 창자를 통한 하이드로미네랄 수송을 감소시키는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 글루코오스 흡수를 자극하는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 소마토스타틴 분비를 조절/자극하는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 음식 섭취 및 체중 증가 둘 모두의 감소를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 비만의 감소를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 식욕 억제를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 식욕부진의 유도를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 과체중 및 비만인 대상체의 체중의 감소를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 지방질 호르몬 렙틴 및 아디포넥틴의 수준의 변화를 유도하는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 지속성 OXM의 생물학적 활성은 과체중 및 비만인 대상체의 에너지 섭취를 증가시키는 것 외에 에너지 소모를 증가시키는 것을 포함한다.

따라서, 일 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 CTP-변형된 OXM을 투여하여 OXM의 상기-언급된 생물학적 활성의 어떤 것에 영향을 주는 방법을 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명은 추가로, 대상체에서 음식 섭취를 감소시키고, 체중을 감소시키나 둘 모두를 달성하는 방법을 제공하고, 상기 방버븐 상기 대상체에게 CTP-변형된 옥신토모둘린 펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 대상체는 당뇨병을 가지고 있다. 또 하나의 구현예에서, 대상체는 과체중이다. 또 하나의 구현예에서, 대상체는 비만이다.

일 구현예에서, 용어들 "감소시키는, 감소, 저하시키는, 등등"이 본원에서 제공된 방법과 관련하여 사용될 때, 이전에 측정된 또는 결정된 수준으로부터 또는 정상 수준으로부터 100% 감소를 의미한다. 또 하나의 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 89-99%까지이다. 또 하나의 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 79-88%까지이다. 또 하나의 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 69-78%까지이다. 또 하나의 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 59-68%까지이다. 또 하나의 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 49-58%까지이다. 또 하나의 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 39-48%까지이다. 또 하나의 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 29-38%까지이다. 또 하나의 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 19-28%까지이다. 또 하나의 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 9-18%까지이다. 또 하나의 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 5-8%까지이다. 또 하나의 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 1-4%까지이다.

OXM-CTP 변이체의 생체내 생물학적 활성은 2 개의 동물 모형에서 평가되되었고, 마우스에서 IPGTT는 빈약한 랫트에서 글루코오스 투여, 및 음식 섭취 억제 다음에 글루코오스 내성을 유도하기 위해 OXM의 능력을 평가하고, 동물의 음식 소비를 억제하기 위해 OXM의 능력을 평가한다. OXM-CTP 변이체: CTP-OXM-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP-CTP-CTP 및 OXM-CTP-CTP-CTP-CTP-CTP가, 비히클 그룹과 비교된 혈당 AUC의 20-30%의 감소까지 반영된 바와 같이 글루코오스 내성을 유도했다는 것이 실증되었다 (참고 실시예 4, 본원). 이들 결과는, OXM-CTP 변이체의 생물학적 활성은 OXM의 그것의 수용체에의 결합에 대한 CTP 융합의 잠재적인 입체 간섭으로 인해 생체내에서 억제되지 않았다는 것을 나타낸다. 글루코오스의 현저한 감소는 그의 개선된 PK 프로파일과 상관된 이들 변이체에 의해 유도된다. 따라서, 일 구현예에서, 대상체에서 글루코오스 내성을 유도하는 방법이 본원에서 제공된다, 상기 방법은 상기 대상체에게 효과적인 용량의, 옥신토모둘린 (OXM) 펩타이드 및 옥신토모둘린의 아미노 말단 또는 카복시 말단 펩타이드에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에서 글루코오스 내성을 유도하는 단계를 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 글루코오스 내성을 유도하는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 상기 대상체에게 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단 펩타이드에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 효과적인 용량으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에서 글루코오스 내성을 유도하는 단계를 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 글루코오스 내성을 유도하기 위한, 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의 용도가 본원에서 제공된다. 일 구현예에서, 상기 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린이다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 글루코오스 내성을 유도하기 위한 약제의 제조에서의, 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의 용도가 본원에서 제공된다. 일 구현예에서, 상기 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린이다.

일 구현예에서, 대상체에서 인슐린 민감도를 유도하는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 상기 대상체에게 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단 펩타이드에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 효과적인 용량으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에서 인슐린 민감도를 증가시키는 단계를 포함한다.

일 구현예에서, 대상체에서 인슐린 저항성을 감소시키는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 상기 대상체에게 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단 펩타이드에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 효과적인 용량으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에서 인슐린 저항성을 감소시키는 단계를 포함한다.

일 구현예에서, 대상체에서 인슐린 민감도를 증가시키고 인슐린 저항성을 감소시키는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 상기 대상체에게 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단 펩타이드에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 효과적인 용량으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에서 인슐린 민감도를 증가시키고 인슐린 저항성을 감소시키는 단계를 포함한다.

음식 섭취를 억제하기 위한 OXM-CTP 변이체 OXM-3CTP, OXM-4CTP 및 OXM-5CTP의 능력이 평가되었다. 원상태 OXM는 투여 1 시간에 음식 섭취만을 억제했고, 그러나, 모든 변이체는 OXM와 비교하여 음식 섭취의 실질적인 장기적인 개선된 억제를 명시했다. OXM-5CTP의 누적 음식 억제는 놀랍게도 적어도 141 시간 동안 지속되었고, 이것은 변이체의 신장된 반감기를 강조하는 것이다 (참고 실시예 5, 본원).

그러므로, 일 구현예에서, 대상체에서 음식 섭취 억제를 유도하는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 상기 대상체에게 옥신토모둘린 (OXM) 펩타이드 및 옥신토모둘린의 아미노 말단 또는 카복시 말단 펩타이드에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 효과적인 용량으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에서 음식 섭취 억제를 유도하는 단계를 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 음식 섭취 억제를 유도하는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 상기 대상체에게 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단 펩타이드에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 효과적인 용량으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에서 음식 섭취 억제를 유도하는 단계를 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 음식 섭취를 예방, 감소 또는 억제하는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 상기 대상체에게 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단 펩타이드에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 효과적인 용량으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에 의해 음식 섭취를 예방, 감소 또는 억제하는 단계를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 대상체에 의한 음식 섭취의 예방, 감소 또는 억제는 원하지 않는 체중 증가를 발달시키는 대상체이 기회를 감소시킨다. 또 하나의 구현예에서, 대상체에서 음식 섭취의 예방, 감소 또는 억제는 비만을 발달시키는 대상체의 기회를 감소시킨다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에 의한 원하지 않는 체중 증가를 예방하기 위한, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의 용도가 본원에서 제공된다. 일 구현예에서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린이다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에 의한 원하지 않는 체중 증가를 예방하기 위한 약제의 제조에서의, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의 용도가 본원에서 제공된다. 일 구현예에서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린이다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 음식 섭취를 예방, 감소 또는 억제하는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 상기 대상체에게 옥신토모둘린 (OXM) 펩타이드 및 옥신토모둘린의 아미노 말단 또는 카복시 말단 펩타이드에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 효과적인 용량으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에 의해 음식 섭취를 예방, 감소 또는 억제하는 단계를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 대상체에 의한 음식 섭취의 예방, 감소 또는 원하지 않는 체중 증가를 발달시키는 대상체의 기회를 감소시킨다. 또 하나의 구현예에서, 대상체에서 음식 섭취의 예방, 감소 또는 억제는 비만을 발달시키는 대상체의 기회를 감소시킨다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에 의해 원하지 않는 체중 증가를 예방하는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 상기 대상체에게 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단 펩타이드에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 효과적인 용량으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에서 체중 증가를 예방하는 단계를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 체중 증가는 대상체의 비만으로 이어지거나 그것을 야기한다. 또 하나의 구현예에서, 체중 증가의 위험은 심리적 상태에 기인하거나, 대상체의 의한 체중 증가에 대한 유전적 소인에 기인한다. 또 하나의 구현예에서, 심리적 상태는 우울증, 불안 또는 외상후 스트레스 장애 (PTSD)이다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에 의해 원하지 않는 체중 증가를 예방하는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 상기 대상체에게 옥신토모둘린 (OXM) 펩타이드 및 옥신토모둘린의 아미노 말단 또는 카복시 말단 펩타이드에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 효과적인 용량으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에서 체중 증가를 예방하는 단계를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 체중 증가는 대상체의 비만으로 이어지거나 그것을 야기한다. 또 하나의 구현예에서, 체중 증가의 위험은 심리적 상태에 기인하거나, 대상체의 의한 체중 증가에 대한 유전적 소인에 기인한다. 또 하나의 구현예에서, 심리적 상태는 우울증, 불안 또는 외상후 스트레스 장애 (PTSD)이다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 비만을 치료하는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 펩타이드 및 아미노 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 또는 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 효과적인 용량으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에서 비만을 치료하는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 대상체는 비만인 것에 대해 유전적으로 취약하다. 또 하나의 구현예에서, 비만 치료의 방법은 대상체에서 체중의 감소를 야기한다. 또 하나의 구현예에서, 체중 감소는 체지방 감소에 기인한다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 비만을 치료하기 위한, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의 용도가 본원에서 제공된다. 일 구현예에서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린이다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 비만을 치료하기 위한 약제의 제조에서의, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의 용도가 본원에서 제공된다. 일 구현예에서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린이다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 비만을 치료하는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 상기 대상체에게 옥신토모둘린 펩타이드 및 아미노 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 또는 옥신토모둘린의 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 효과적인 용량으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에서 비만을 치료하는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 대상체는 비만인 것에 대해 유전적으로 취약하다.

일 구현예에서, 대상체에서 제 II형 당뇨병을 치료하는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 펩타이드 및 아미노 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 또는 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 효과적인 용량으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에서 제 II형 당뇨병을 치료하는 것을 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 제 II형 당뇨병을 치료하기 위한, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의 용도가 본원에서 제공된다. 일 구현예에서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린이다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 제 II형 당뇨병을 치료하기 위한 약제의 제조에서의, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의 용도가 본원에서 제공된다. 일 구현예에서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린이다.

일 구현예에서, 대상체에서 제 II형 당뇨병을 치료하는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 상기 대상체에게 옥신토모둘린 펩타이드 및 아미노 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 또는 옥신토모둘린의 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 효과적인 용량으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에서 제 II형 당뇨병을 치료하는 것을 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 대사성 장애를 치료하는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 상기 대상체에게 o GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 아미노 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 또는 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 효과적인 용량으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에서 대사성 장애를 치료하는 것을 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 대사성 장애를 치료하기 위한, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의 용도가 본원에서 제공된다 대상체에서. 일 구현예에서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린이다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 대사성 장애를 치료하기 위한 약제의 제조에서의, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의 용도가 본원에서 제공된다. 일 구현예에서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린이다.

또 하나의 구현예에서, 대상체에서 대사성 장애를 치료하는 방법이 본원에서 제공되고, 상기 방법은 상기 대상체에게 옥신토모둘린 펩타이드 및 아미노 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 또는 옥신토모둘린의 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 효과적인 용량으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대상체에서 대사성 장애를 치료하는 것을 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 대사성 장애는 당뇨병 케톤산증, 또는 진성 당뇨병 또는 당해기술에서 공지된 임의의 글루코오스-관련된 대사성 장애이다. 또 하나의 구현예에서, 대사성 장애는 대상체의 인슐린의 부족 및 글루코오스의 과잉에서 기인한다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명의 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 변이체는 본 발명의 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 분자를 사용하여 합성된다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 분자는 시스-조절 서열 (예를 들면, 프로모터 서열)의 전사 대조군을 포함하는 발현 벡터에 결찰된다. 또 하나의 구현예에서, 시스-조절 서열은 본 발명의 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 항시적 발현을 겨냥하는데 적당하다. 또 하나의 구현예에서, 시스-조절 서열은 본 발명의 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 펩타이드의 조직-특이적 발현을 겨냥하는데 적당하다. 또 하나의 구현예에서, 시스-조절 서열은 본 발명의 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 변이체의 유도성 발현을 겨냥하는데 적당하다.

일 구현예에서, 본 발명과 함께 사용하기에 적합한 조직-특이적 프로모터는 하나 이상의 특정 세포 집단에서 기능성인 서열들을 포함한다. 예들은, 비제한적으로, 간-특이적인 알부민[Pinkert et al., (1987) Genes Dev. 1:268-277], 림프-특이적 프로모터[Calame et al., (1988) Adv. Immunol. 43:235-275]와 같은 프로모터; 특히 T-세포 수용체[Winoto et al., (1989) EMBO J. 8:729-733] 및 면역글로불린의 프로모터[Banerji et al. (1983) Cell 33729-740]; 신경필라멘트 프로모터[Byrne et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:5473-5477]와 같은 뉴런-특이적 프로모터, 췌장-특이적 프로모터[Edlunch et al. (1985) Science 230:912-916] 또는 우유 유장 프로모터와 같은 유선-특이적 프로모터(미국 특허 제4,873,316호 및 유럽 출원 공보 제264,166호)를 포함한다. 본 발명과 함께 사용하기에 적합한 유도성 프로모터는, 예를 들면, 테트라사이클린-유도성 프로모터(Srour, M.A., et al., 2003. Thromb. Haemost. 90: 398-405)를 포함한다.

일 구현예에서, 어구 "폴리뉴클레오타이드 분자"는 RNA 서열, 상보적 폴리뉴클레오타이드 서열(cDNA), 게놈 폴리뉴클레오타이드 서열 및/또는 복합 폴리뉴클레오타이드 서열(예를 들면, 상기의 조합)의 형태로 분리되고 제공되는 단일 또는 이중가닥 핵산 서열을 지칭한다.

일 구현예에서, "상보적 폴리뉴클레오타이드 서열"은 역전사효소 또는 임의의 다른 RNA-의존적 DNA 폴리머라제를 이용하여 메신저 RNA의 역전사로부터 비롯된 서열을 지칭한다. 일 구현예에서, 상기 서열은 이후 DNA 폴리머라제를 이용하여 생체내 또는 시험관내에서 증폭될 수 있다.

일 구현예에서, "게놈 폴리뉴클레오타이드 서열"은 염색체로부터 유래된(분리된) 서열을 지칭하며, 따라서 그것은 염색체의 인접한 일부를 대표한다.

일 구현예에서, "복합 폴리뉴클레오타이드 서열"은 적어도 부분적으로 상보적이고 적어도 부분적으로 게놈인 서열을 지칭한다. 일 구현예에서, 복합 서열은 본 발명의 폴리펩타이드를 인코딩하는데 필요한 일부 엑손 서열 뿐만 아니라 이들 사이에 삽입되는 일부 인트론 서열을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 상기 인트론 서열은 다른 유전자를 포함하는 임의의 공급원일 수 있으며, 전형적으로 보존된 스플라이싱 신호 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 인트론 서열은 시스-작용 발현 조절 인자를 포함한다.

일 구현예에서, 발현 및 분비 후, 신호 펩타이드는 전구체 조작된 옥신토모둘린 펩타이드로부터 절단되어 성숙한 조작된 옥신토모둘린 펩타이드를 야기한다.

일 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 PCR 기술, 또는 당해분야의 숙련가에게 공지된 임의의 다른 방법 또는 절차를 이용하여 제조된다. 일부 구현예에서, 상기 절차는 2개의 상이한 DNA 서열들의 라이게이션을 포함한다(예를 들면, "Current Protocols in Molecular Biology", eds. Ausubel et al., John Wiley & Sons, 1992 참고).

일 구현예에서, 본원에 제공된 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 인코딩하는 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 재조합 폴리펩타이드의 발현을 가능하게 하는 발현 벡터(즉, 핵산 구조체) 내로 삽입된다. 일 구현예에서, 본 발명의 발현 벡터는 이 벡터를 원핵생물에서의 복제 및 통합에 적합하게 만드는 부가적인 서열들을 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명의 발현 벡터는 이 벡터를 진핵생물에서의 복제 및 통합에 적합하게 만드는 부가적인 서열들을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 발현 벡터는 이 벡터를 원핵생물 및 진핵생물 모두에서 복제 및 통합에 적합하게 만드는 셔틀 벡터를 포함한다. 일부 구현예에서, 클로닝 벡터는 전사 및 번역 개시 서열(예를 들면, 프로모터, 인핸서) 및 전사 및 번역 종결자(예를 들면, 폴리아데닐화 신호)를 포함한다.

일 구현예에서, 다양한 원핵 또는 진핵 세포가 본원에서 제공된 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 발현하는 숙주-발현 시스템으로서 사용될 수 있다. 또 하나의 구현예에서, 이들은, 비제한적으로, 폴리펩타이드 코딩 서열을 함유하는 재조합 박테리오파아지 DNA, 플라스미드 DNA 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 박테리아; 폴리펩타이드 코딩 서열을 함유하는 재조합 효모 발현 벡터로 형질전환된 효모; 재조합 바이러스 발현 벡터(예를 들면, 꽃양배추 모자이크 바이러스, CaMV; 담배 모자이크 바이러스, TMV)로 감염되거나 폴리펩타이드 코딩 서열을 함유하는 Ti 플라스미드와 같은 재조합 플라스미드 발현 벡터로 형질전환된 식물 세포 시스템을 포함한다.

일 구현예에서, 본원에 제공된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 발현하기 위해 비-박테리아 발현 시스템이 사용된다(예를 들면 CHO 세포와 같은 포유동물 발현 시스템). 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린이다. 또 하나의 구현예에서, 옥신토모둘린은 본원에 추가로 제공된 바와 같이, 적어도 하나의 CTP의 부가에 의해 변형된다. 또 하나의 구현예에서, 포유동물 세포에서 본 발명의 폴리뉴클레오타이드를 발현하는데 사용된 발현 벡터는 pCI-dhfrr 벡터이다. pCI-dhfrr 벡터의 제조는 하기 실시예의 물질 및 방법에서 일 구현예에 따라 기재되어 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 박테리아 시스템에서, 폴리펩타이드를 발현하기 위해 의도된 용도에 따라 수많은 발현 벡터가 유익하게 선택될 수 있다. 일 구현예에서, 많은 양의 폴리펩타이드가 요구된다. 일 구현예에서, 발현된 생성물을 박테리아의 세포질 내로 또는 단백질 생성물이 쉽게 정제되는 배양 배지 내로 유도하는, 아마도 소수성 신호 서열과 융합으로서, 높은 수준의 단백질 생성물의 발현을 유도하는 벡터가 바람직하다. 일 구현예에서, 어떤 융합 단백질은 폴리펩타이드의 회수를 돕기 위한 특이적 절단 부위를 이용하여 조작된다. 일 구현예에서, 그러한 조작에 적응할 수 있는 벡터는, 비제한적으로, 대장균 발현 벡터의 pET 시리즈를 포함한다[Studier et al., Methods in Enzymol. 185:60-89 (1990)].

일 구현예에서, 효모 발현 시스템이 사용된다. 일 구현예에서, 항시적 또는 유도성 프로모터를 함유하는 수많은 벡터가 그 전체가 본원에 참조로 통합된 미국 특허 출원 제5,932,447호에 개시된 바와 같이 효모에서 사용될 수 있다. 또 하나의 구현예에서, 효모 염색체 내로 외래 DNA 서열의 통합을 촉진하는 벡터가 사용된다.

일 구현예에서, 본 발명의 발현 벡터는 내부 리보솜 유입 부위(IRES) 및 프로모터-키메라 폴리펩타이드의 게놈 통합을 위한 서열과 같은 단일 mRNA로부터 몇 가지 단백질의 번역을 가능하게 하는 부가적인 폴리뉴클레오타이드 서열을 추가로 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 포유동물 발현 벡터는, 비제한적으로, 인비트로젠으로부터 이용가능한 pcDNA3, pcDNA3.1(+/-), pGL3, pZeoSV2(+/-), pSecTag2, pDisplay, pEF/myc/cyto, pCMV/myc/cyto, pCR3.1, pSinRep5, DH26S, DHBB, pNMT1, pNMT41, pNMT81, 프로메가로부터 이용가능한 PCI, 스트라테젠으로부터 이용가능한 pMbac, pPbac, pBK-RSV 및 pBK-CMV, 클론테크로부터 이용가능한 pTRES, 및 그의 유도체를 포함한다.

일 구현예에서, 레트로바이러스와 같은 진핵 바이러스 유래의 조절 인자를 함유하는 발현 벡터가 본 발명에 사용된다. SV40 벡터는 pSVT7 및 pMT2를 포함한다. 일부 구현예에서, 소 유두종 바이러스로부터 유래된 벡터는 pBV-1MTHA를 포함하고, 엡슈타인 Bar 바이러스로부터 유래된 벡터는 pHEBO, 및 p2O5를 포함한다. 다른 예시적인 벡터는 pMSG, pAV009/A+, pMTO10/A+, pMAM네오-5, 배큘로바이러스 pDSVE, 및 SV-40 초기 프로모터, SV-40 후발 프로모터, 메탈로티오네인 프로모터, 쥣과 유선 종양 바이러스 프로모터, 루(Rous) 육종 바이러스 프로모터, 폴리헤드린 프로모터, 또는 진핵 세포에서의 발현에 효과적인 것으로 나타난 다른 프로모터의 지시 하에 단백질의 발현을 가능하게 하는 임의의 다른 벡터를 포함한다.

일 구현예에서, 재조합 바이러스 벡터는 측면 감염 및 표적화 특이성과 같은 이점을 제공하기 때문에 본 발명의 옥신토모둘린 펩타이드의 생체내 발현에 유용하다. 일 구현예에서, 측면 감염은, 예를 들면, 레트로바이러스의 생활 주기에 고유하며, 하나의 감염된 세포가 많은 자손 비리온을 생산하는 공정으로서, 상기 비리온은 갈라져 나와 이웃 세포를 감염시킨다. 일 구현예에서, 상기 결과는 대부분이 최초 바이러스 입자에 의해 초기에 감염되지 않았던 커다란 영역이 빠르게 감염되는 것이다. 일 구현예에서, 측면으로 확산될 수 없는 바이러스 벡터가 생산된다. 일 구현예에서, 이 특징은 만약 원하는 목적이 단지 국재화된 수의 표적화된 세포 내로 명시된 유전자를 도입하는 것이면 유용할 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 발현 벡터를 세포 내로 도입하기 위해 다양한 방법이 사용될 수 있다. 그와 같은 방법은 일반적으로 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory, New York (1989, 1992), in Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Md. (1989), Chang et al., Somatic Gene Therapy, CRC Press, Ann Arbor, Mich. (1995), Vega et al., Gene Targeting, CRC Press, Ann Arbor Mich. (1995), Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, Butterworths, Boston Mass. (1988) and Gilboa et at. [Biotechniques 4 (6): 504-512, 1986]]에 기재되어 있고, 예를 들면, 안정적인 또는 일시적인 형질감염, 리포펙션, 전기천공 및 재조합 바이러스 벡터를 이용한 감염을 포함한다. 또한, 양성-음성 선택 방법에 대해, 본원에 참조로 통합된 미국 특허 제5,464,764호 및 제5,487,992호를 참조한다 .

일 구현예에서, 바이러스 감염에 의한 핵산의 도입은, 바이러스의 감염 특성으로 인해 더 높은 형질감염 효율이 얻어질 수 있으므로, 리포펙션 및 전기천공과 같은 다른 방법에 비해 몇 가지 이점을 제공한다.

본 발명의 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 또는 옥신토모둘린 펩타이드는 임의의 적당한 투여 방식(예를 들면, 피하 투여, 경구 투여, 비강내 투여, 정맥내 투여, 또는 생체내 유전자 요법)을 이용하여 개인에게 투여된 핵산 구조체로부터 발현될 수 있는 것으로 인식될 것이다. 일 구현예에서, 상기 핵산 구조체는 적절한 유전자 전달 비히클/방법(형질감염, 형질도입, 상동 재조합 등) 및 필요에 따라 발현 시스템을 통해 적합한 세포 내로 도입되고, 그 후 상기 변형된 세포는 배양에서 확장되고 개인에게 되돌아간다(즉, 생체외 유전자 요법).

일 구현예에서, 식물 발현 벡터가 사용된다. 일 구현예에서, 폴리펩타이드 코딩 서열의 발현은 수많은 프로모터에 의해 유도된다. 일부 구현예에서, CaMV의 35S RNA 및 19S RNA 프로모터[Brisson et al., Nature 310:511-514 (1984)], 또는 TMV에 대한 코트 단백질 프로모터[Takamatsu et al., EMBO J. 6:307-311 (1987)]와 같은 바이러스 프로모터가 사용된다. 또 하나의 구현예에서, 예를 들면, RUBISCO의 작은 서브유닛[Coruzzi et al., EMBO J. 3:1671-1680 (1984); 및 Brogli et al., Science 224:838-843 (1984)] 또는 열충격 프로모터, 예를 들면, 대두 hsp17.5-E 또는 hsp17.3-B[Gurley et al., Mol. Cell. Biol. 6:559-565 (1986)]와 같은 식물 프로모터가 사용된다. 일 구현예에서, 구조체들은 Ti 플라스미드, Ri 플라스미드, 식물 바이러스 벡터, 직접적인 DNA 형질전환, 미세주입, 전기천공 및 숙련가에게 잘 알려진 다른 기술을 이용하여 식물 세포 내로 도입된다. 예를 들면, Weissbach & Weissbach[Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, NY, Section VIII, pp 421-463 (1988)]을 참조한다. 곤충 및 포유동물 숙주세포 시스템과 같은 당해기술에서 잘 알려진 다른 발현 시스템이 또한 본 발명에 의해 사용될 수 있다.

삽입된 코딩 서열(폴리펩타이드를 인코딩함)의 전사 및 번역을 위한 필요한 요소 외에도, 본 발명의 발현 구조체는 또한 발현된 폴리펩타이드의 안정성, 생산, 정제, 수율 또는 활성을 최적화하기 위해 조작된 서열을 포함할 수 있는 것으로 인식될 것이다.

일 구현예에서, 형질전환된 세포는 다량의 재조합 조작된 옥신토모둘린 펩타이드의 발현을 가능하게 하는, 효과적인 조건 하에서 배양된다. 또 하나의 구현예에서, 효과적인 배양 조건은, 비제한적으로, 단백질 생산을 허용하는 효과적인 배지, 생물반응기, 온도, pH 및 산소 조건을 포함한다. 일 구현예에서, 효과적인 배지는 재조합 본 발명의 폴리펩타이드를 생산하기 위해 세포가 배양되는 임의의 배지를 지칭한다. 일부 구현예에서, 배지는 전형적으로 동화할 수 있는 탄소, 질소 및 포스페이트 공급원, 및 적절한 염, 미네랄, 금속 및 다른 영양소, 예컨대 비타민을 갖는 수용액을 포함한다. 본 발명의 세포는 종래의 발효 생물반응기, 진탕 플라스크, 시험관, 미세적정 디쉬 및 페트리 플레이트에서 배양될 수 있다. 또 하나의 구현예에서, 배양은 재조합 세포에 적절한 온도, pH 및 산소 함량에서 수행된다. 또 하나의 구현예에서, 배양 조건의 결정은 당해분야의 숙련가의 전문 지식 내에 속한다.

일 구현예에서, 생산을 위해 사용된 벡터 및 숙주 시스템에 따라, 수득된 조작된 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 또는, 또 하나의 구현예에서, 수득된 본 발명의 CTP-변형된 옥신토모둘린 펩타이드는 CTP의 당화가 일어나는 재조합 세포 내에서 발현되거나, 발효 배지 내로 분비되거나, 또는 포유동물 세포의 외부 표면 상에서 유지된다.

일 구현예에서, 예정된 배양 시간 후, 재조합 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 또는 옥신토모둘린이 회수된다.

일 구현예에서, 어구 "재조합 조작된 옥신토모둘린을 회수하는 것"은 폴리펩타이드를 함유하는 전체의 발효 배지를 수집하는 것을 지칭하고 분리 또는 정제의 추가의 단계를 암시할 필요는 없다.

일 구현예에서, 본원에 제공된 조작된 옥신토모둘린 또는 이의 변이체는 다양한 표준 단백질 정제 기술, 예컨대, 비제한적으로, 친화성 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 여과, 전기영동, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피, 콘카나발린 A 크로마토그래피, 크로마토포커싱 및 차별적인 가용화를 이용하여 정제된다

회수를 용이하게 하기 위하여, 상기 발현된 코딩 서열은 본 발명의 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 또는 옥신토모둘린 및 융합된 절단가능 모이어티를 인코딩하도록 조작될 수 있다. 또한, 융합 단백질은 상기 폴리펩타이드가 친화성 크로마토그래피; 예를 들면, 절단가능한 모이어티에 특이적인 칼럼 상에서의 고정화에 의해 쉽게 단리될 수 있도록 설계될 수 있다. 절단 부위는 조작된 옥신토모둘린과 상기 절단가능한 모이어티 사이에서 조작되며 상기 폴리펩타이드는 적절한 효소 또는 이 부위에서 융합 단백질을 특이적으로 절단하는 제제로 처리함으로써 크로마토그래피 칼럼으로부터 방출될 수 있다[예를 들면, Booth et al., Immunol. Lett. 19:65-70 (1988); 및 Gardella et al., J. Biol. Chem. 265:15854-15859 (1990)를 참조한다].

일 구현예에서, 본원에 제공된 조작된 옥신토모둘린은 "실질적으로 순수한" 형태로 회수된다.

일 구현예에서, 어구 "실질적으로 순순한"은 본원에서 기재된 출원에서 단백질의 효과적인 사용을 허용하는 순도를 지칭한다.

본원에 제공된 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 또는 옥신토모둘린은 또한 시험관내 발현 시스템을 이용하여 합성될 수 있다. 또 하나의 구현예에서, 시험관내 합성 방법은 당해기술분야에 널리 알려져 있으며, 상기 시스템의 성분은 상업적으로 이용가능하다.

일 구현예에서, 상기 재조합 조작된 옥신토모둘린 펩타이드는 합성되고 정제되며; 그의 치료 효능은 생체내 또는 시험관내에서 분석될 수 있다. 본 발명의 재조합 조작된 옥신토모둘린 펩타이드의 결합 활성은 당해분야의 숙련가에게 공지된 다양한 분석을 이용하여 확인될 수 있다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명의 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 또는 조작된 옥신토모둘린은 그 자체로 개인에게 제공될 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명의 조작된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 또는 옥신토모둘린은 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합된 약제학적 조성물의 일부로서 개인에게 제공될 수 있다.

또 하나의 구현예에서, "약제학적 조성물"은 생리적으로 적당한 담체 및 부형제와 같은 다른 화학적 성분들을 갖는 본원에 기재된 하나 이상의 활성 성분의 조제물을 지칭한다. 약제학적 조성물의 목적은 유기체에 대한 화합물의 투여를 용이하게 하는 것이다.

또 하나의 구현예에서, "활성 성분"은 생물학적 효과에 대해 책임을 지는, 관심있는 폴리펩타이드 서열을 지칭한다.

또 하나의 구현예에서, 상호교환적으로 사용되는 어구 "생리적으로 허용가능한 담체" 및 "약제학적으로 허용가능한 담체"는 유기체에게 유의한 자극을 야기하지 않으며 투여된 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 폐지하지 않는 담체 또는 희석제를 지칭한다. 보조제가 이들 어구에 포함된다. 일 구현예에서, 약제학적으로 허용가능한 담체 내에 포함되는 성분들 중 하나는, 예를 들면 유기 및 수성 배지 모두에서 광범위한 용해도를 갖는 생체적합성 폴리머인 폴리에틸렌 글리콜(PEG)일 수 있다(Mutter et al. (1979)).

또 하나의 구현예에서, "부형제"는 활성 성분의 투여를 더 용이하게 하기 위해 약제학적 조성에 첨가되는 불활성 물질을 지칭한다. 일 구현예에서, 부형제는 칼슘 카보네이트, 칼슘 포스페이트, 전분의 다양한 당류 및 유형, 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 식물성 오일 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.

약물의 제형화 및 투여를 위한 기술들은 본원에 참조로 통합되어 있는 문헌["Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, PA, latest edition]에서 확인될 수 있다.

복용량 범위의 다양한 구현예는 본 발명에 의해 고려된다. 본 발명의 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 복용량은, 일 구현예에서, 0.005-100 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 0.005-5 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 0.01-50 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 0.1-20 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 0.1-10 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 0.01-5 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 0.001-0.01 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 0.001-0.1 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 0.1-5 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 0.5-50 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 0.2-15mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 0.8-65 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 1-50 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 5-10 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 8-15 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 10-20mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 20-40 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 60-120 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 12-40 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 40-60 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 50-100mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 1-60 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 15-25 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 5-10 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 55-65 mg/1일의 범위이다.

또 하나의 구현예에서, 복용량은 50-500 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 50-150 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 100-200 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 150-250 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 200-300 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 250-400 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 300-500 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 350-500 mg/1일의 범위이다.

일 구현예에서, 복용량은 20 mg/1일의 범위이다. 일 구현예에서, 복용량은 30 mg/1일의 범위이다. 일 구현예에서, 복용량은 40 mg/1일의 범위이다. 일 구현예에서, 복용량은 50 mg/1일의 범위이다. 일 구현예에서, 복용량은 0.01 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 0.1 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 1 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 0.530 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 0.05 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 50 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 10 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 20-70 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 5 mg/1일의 범위이다.

일 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 복용량은 1-5 mg/1일의 범위이다. 일 구현예에서, CTP-변형된 옥신토모둘린의 복용량은 1-3 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 옥신토모둘린의 복용량은 2 mg/1일의 범위이다.

또 하나의 구현예에서, 복용량은 1-90 mg/1일의 범위이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 1-90 mg/2 일이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 1-90 mg/3 일이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 1-90 mg/4 일이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 1-90 mg/5 일이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 1-90 mg/6 일이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 1-90 mg/주이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 1-90 mg/9 일이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 1-90 mg/11 일이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 1-90 mg/14 일이다.

또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 복용량은 10-50 mg/1일이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 10-50 mg/2 일이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 10-50 mg/3 일이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 10-50 mg/4 일이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 10-50 마이크로그램 mg/5 일이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 10-50 mg/6 일이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 10-50 mg/주이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 10-50 mg/9 일이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 10-50 mg/11 일이다. 또 하나의 구현예에서, 복용량은 10-50 mg/14 일이다.

또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 비강내 복용 형태로 제형된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 주사가능 복용 형태로 제형된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 0.0001 mg 내지 0.6 mg 범위의 용량으로 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 0.001 mg 내지 0.005 mg 범위의 용량으로 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 0.005 mg 내지 0.01 mg 범위의 용량으로 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 0.01 mg 내지 0.3 mg 범위의 용량으로 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 0.2 mg 내지 0.6 mg 범위의 용량으로 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 그것의 아미노 말단 상에 CTP가 없다.

또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 1-100 마이크로그램 범위의 용량으로 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 10-80 마이크로그램 범위의 용량으로 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 20-60 마이크로그램 범위의 용량으로 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 10-50 마이크로그램 범위의 용량으로 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 40-80 마이크로그램 범위의 용량으로 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 10-30 마이크로그램 범위의 용량으로 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 30-60 마이크로그램 범위의 용량으로 대상체에게 투여된다.

또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 0.2 mg 내지 2 mg 범위의 용량으로 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 2 mg 내지 6 mg 범위의 용량으로 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 4 mg 내지 10 mg 범위의 용량으로 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 5 mg 및 15 mg 범위의 용량으로 대상체에게 투여된다.

또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 복용량은 비-CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 사용하여 투여된 것보다 작용제의 양의 65%를 함유하는 양이다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 복용량은 비-CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 사용하여 투여된 것보다 작용제의 양의 55%를 함유하는 양이다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 복용량은 비-CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 사용하여 투여된 것보다 작용제의 양의 45%를 함유하는 양이다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 복용량은 비-CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 사용하여 투여된 것보다 작용제의 양의 10%를 함유하는 양이다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 복용량은 비-CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 사용하여 투여된 것보다 작용제의 양의 25%를 함유하는 양이다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 복용량은 비-CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 사용하여 투여된 것보다 작용제의 양의 35%를 함유하는 양이다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 복용량은 비-CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 사용하여 투여된 것보다 작용제의 양의 75%를 함유하는 양이다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 복용량은 비-CTP-변형된 작용제를 사용하여 투여된 것보다 작용제의 양의 100%를 함유하는 양이다. 그러나, 복용량이 비-CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제와 동일한 양의 작용제를 함유할지라도, 정상 작용제와 비교된 그것의 증가된 반감기 때문에 덜 빈번하게 더 투여될 것이라는 점에서 대상체에게 여전히 유리하다.

또 하나의 구현예에서, 접합된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 치료적으로 효과적인 양은 50-500 IU / kg 체중이고 1일 1회 투여된다. 또 하나의 구현예에서, 접합된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 치료적으로 효과적인 양은 150-250 IU / kg 체중이고, 1일 1회 투여된다. 또 하나의 구현예에서, 접합된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 다양한 수단에 의해 인간 환자에의 투여에 효과적인 강도로 제형된다.

일 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드는 대상체에서 순환 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 활성이 20-30 IU/dL가 되도록 하는 효과적인 양으로 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드는 대상체에서 순환 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 활성이 25-50 IU/dL가 되도록 하는 효과적인 양으로 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드는 대상체에서 순환 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 활성이 50-100 IU/dL가 되도록 하는 효과적인 양으로 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드는 대상체에서 순환 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 활성이 100-200 IU/dL가 되도록 하는 효과적인 양으로 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드는 대상체에서 순환 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 활성이 10-50 IU/dL가 되도록 하는 효과적인 양으로 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드는 대상체에서 순환 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 활성이 20-100 IU/dL가 되도록 하는 효과적인 양으로 투여된다.

일 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 대상체에게 일주일 단위로 투여된다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 대상체에게 매주 2회 투여된다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 격주로 (매 2 주 1회) 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 대상체에게 매월 2회 투여된다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 대상체에게 1월 1회 투여된다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 대상체에게 1일 기준으로 투여된다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 대상체에게 매 2 일 투여된다.

또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 매 3 일 1회 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 매 4 일 1회 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 매 5 일 1회 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 매 6 일 1회 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 매 7-14 일 1회 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 매 10-20 일 1회 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 매 5-15 일 1회 대상체에게 투여된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 매 15-30 일 1회 대상체에게 투여된다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명의 방법은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 요법의 사용에서 수용상태를 증가시키고, 그것을 필요로 하는 대상체에게, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 폴리펩타이드를 제공하고, 그렇게 함으로써 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 요법의 사용에서 수용상태를 증가시키는 것을 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명의 방법은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 요법이 필요한 만성 병으로 괴로운 환자의 수용상태를 증가시키는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 방법은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 상기에서 기재된 바와 같은 CTP로 변형시켜서 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 복용 빈도가 감소되도록 할 수 있다.

또 하나의 구현예에서, 용어 수용상태는 부착을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 방법은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 투여 빈도를 감소시켜서 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 요법이 필요한 환자의 수용상태를 증가시키는 것을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 투여 빈도의 감소는 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 더 안정하게 하는 CTP 변형으로 인해 달성된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 투여 빈도의 감소는 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 T이분의일기호를 증가시키는 결과로서 달성된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 투여 빈도의 감소는 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 청소능 시간을 증가시키거나 청소능 속도를 감소키시는 결과로서 달성된다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 청소능 속도를 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 아미노 또는 카복시 말단에 부착시키고, 그렇게 함으로써 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 청소능 속도를 감소시키는 단계를 포함한다.

또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 투여 빈도의 감소는 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 AUC 측정을 증가시키는 결과로서 달성된다.

경구 투여, 일 구현예에서, 정제, 캡슐, 로젠지, 씹을 수 있는 정제, 서스펜션, 에멀젼 등을 포함하는 단위 복용 형태를 포함한다. 그와 같은 단위 복용 형태는 안전한 및 효과적인 양의, 본 발명의 원하는 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하고, 이들 각각은, 일 구현예에서, 약 0.7 또는 3.5 mg 내지 약 280 mg/70 kg, 또는 또 하나의 구현예에서, 약 0.5 또는 10 mg 내지 약 210 mg/70 kg이다. The 경구 투여를 위해 단위 복용 형태의 제조에 적당한 약제학적으로-허용가능한 담체는 당해기술에 공지되어 있다. 또 하나의 구현예에서, 정제는 전형적으로 하기와 같은 불활성 희석제로서 종래의 약제학적으로-양립가능한 아쥬반트를 포함한다: 칼슘 카보네이트, 나트륨 카보네이트, 만니톨, 락토오스 및 셀룰로오스; 결합제 예컨대 전분, 젤라틴 및 수크로오스; 붕해제 예컨대 전분, 알긴산 및 크로스카르멜로오스; 윤활유 예컨대 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 및 탈크. 일 구현예에서, 활제 예컨대 실리콘 디옥사이드는 분말-혼합물의 유동 특성을 개선하기 위해 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 착색제, 예컨대 FD&C 염료는 외관을 위해 부가될 수 있다. 감미제 및 풍미제, 예컨대 아스파르탐, 사카린, 멘톨, 박하, 및 과일 풍미제는 씹을 수 있는 정제를 위한 유용한 아쥬반트이다. 캡슐은 전형적으로 하기에서 개시된 하나 이상의 고형 희석제를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 담체 성분의 선택은 맛, 비용, 및 저장 안정성과 같은 2차적 고려에 달려 있고, 이것은 본 발명의 목적을 위해 중요하지는 않고, 당업자에 의해 쉽게 만들어 질 수 있다.

일 구현예에서, 경구 복용 형태는 사전규정된 방출 프로파일을 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명의 경구 복용 형태는 서방출 정제, 캡슐, 로젠지 또는 씹을 수 있는 정제를 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명의 경구 복용 형태는 느린 방출 정제, 캡슐, 로젠지 또는 씹을 수 있는 정제를 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명의 경구 복용 형태는 즉시 방출 정제, 캡슐, 로젠지 또는 씹을 수 있는 정제를 포함한다. 일 구현예에서, 경구 복용 형태는 당해분야의 숙련가에게 공지된 약제학적 활성 성분의 원하는 방출 프로파일에 따라 제형된다.

경구 조성물은, 일부 구현예에서, 액체 용액, 에멀젼, 서스펜션, 등을 포함한다. 일부 구현예에서, 그와 같은 조성물에 적당한 약제학적으로-허용가능한 담체는 당해기술에 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 액체 경구 조성물은 약 0.001% 내지 약 0.933%의 원하는 화합물 또는 화합물들, 또는 또 하나의 구현예에서, 약 0.01% 내지 약 10%을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명의 방법에 사용하기 위한 조성물은 용액 또는 에멀젼을 포함하고, 이것은 일부 구현예에서 안전한 및 효과적인 양의, 본 발명의 화합물 및 임의로, 다른 화합물을 포함하는 수용액 또는 에멀젼이고, 이것은 국소 비강내 투여를 위해 의도된다. 또 하나의 구현예에서, 조성물은 약 0.001% 내지 약 10.0% w/v의 대상 화합물, 더 바람직하게는 약 00.1% 내지 약 2.0을 포함하고, 그 조성물은 비강내 경로에 의해 화합물의 전신 전달을 위해 사용된다.

또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 근육 내로 주사된다(근육내 주사). 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 피부 아래로 주사된다(피하 주사). 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 근육 내로 주사된다. 또 하나의 구현예에서, GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 피부 내로 주사된다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 전신 투여를 통해 투여된다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 정맥내 주사에 의해 투여된다. 또 하나의 구현예에서, 투여는 비경구, 폐, 경구, 국소, 진피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비강내, 경비, 안구내, 안과, 경막외, 구강, 직장, 점막통과, 창자 또는 수질내 주사 뿐만 아니라 척추강내 또는 직접적인 뇌실내 투여를 포함하는, 비경구 전달일 수 있다.

또 하나의 구현예에서, 상기 조제물은 전신 방식보다는 국소 방식으로, 예를 들면, 환자의 몸의 특정 영역 내로 직접 조제물의 주사를 통해 투여된다.

일 구현예에서, 투여 경로는 장일 수 있다. 또 하나의 구현예에서, 경로는 결막, 경피, 진피내, 동맥내, 질의, 직장, 종양내, 암옆, 점막통과, 근육내, 혈관내, 뇌실내, 두개내, 비강내, 설하, 또는 이들의 조합일 수 있다.

또 하나의 구현예에서, 약제학적 조성물은 액상 제제의 정맥내, 동맥내, 또는 근육내 주사에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 액체 제형은 용액, 현탁액, 분산액, 유화액, 오일 등을 포함한다. 일 구현예에서, 약제학적 조성물은 정맥내로 투여되며, 따라서 정맥내 투여에 적합한 형태로 제형화된다. 또 하나의 구현예에서, 약제학적 조성물은 동맥내로 투여되고, 따라서 동맥내 투여에 적합한 형태로 제형화된다. 또 하나의 구현예에서, 약제학적 조성물은 근육내로 투여되고, 따라서 근육내 투여에 적합한 형태로 제형화된다.

또한, 그리고 또 하나의 구현예에서, 약제학적 조성물은 체 표면에 국소로 투여되고, 따라서 국소 투여에 적합한 형태로 제형화된다. 적합한 국소 제형은 겔, 연고, 크림, 로션, 액적 등을 포함한다. 국소 투여를 위해, 본 발명의 화합물은 추가의 적절한 치료제 또는 제제들과 조합되고, 제조되며, 약제학적 담체를 갖거나 갖지 않는 생리적으로 허용가능한 희석제 중의 용액, 현탁액, 또는 유화액으로서 도포된다.

일 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 당해기술에서 잘 알려진 공정에 의해, 예를 들면, 종래의 혼합, 용해, 과립화, 당의정-제조, 분말화, 유화, 캡슐화, 엔트랩핑 또는 동결건조 공정에 의해 제조된다.

일 구현예에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물은 활성성분을 약제학적으로 사용될 수 있는 제제로 가공하는 것을 용이하게 하는, 부형제 및 보조물을 포함하는 하나 이상의 생리적으로 허용가능한 담체를 이용하여 종래의 방식으로 제형화된다. 일 구현예에서, 제형은 선택된 투여 경로에 좌우된다.

일 구현예에서, 본 발명의 주사제는 수용액에서 제형화된다. 일 구현예에서, 본 발명의 주사제는 생리적으로 양립가능한 완충제, 예컨대 한스 용액, 링거액, 또는 생리적 염 완충제에서 제형화된다. 일부 구현예에서, 점막통과 투여를 위해, 침투될 장벽에 적합한 침투제가 제형에 사용된다. 그와 같은 침투제는 본 기술분야에 일반적으로 공지되어 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 제제는, 예를 들면, 볼러스 주사 또는 연속적 주입에 의해 비경구 투여를 위해 제형화된다. 일부 구현예에서, 주사용 제형은 임의로 부가된 보존제와 함께 단위 복용 형태, 예를 들면, 앰풀 또는 다회용량 용기 내에 제공된다. 일부 구현예에서, 조성물은 오일성 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액 또는 유화액이며, 현탁화제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제형화제를 함유한다.

상기 조성물은 또한, 일부 구현예에서, 벤즈알코늄 클로라이드 및 티메로산 등과 같은 보존제; 에데테이트 나트륨 등과 같은 킬레이트제; 포스페이트, 시트레이트 및 아세테이트와 같은 완충제; 염화나트륨, 염화칼륨, 글리세린, 만니톨 등과 같은 긴장제; 아스코르브산, 아세틸시스틴, 나트륨 메타바이설파이트 등과 같은 항산화제; 방향족 제제; 셀룰로오스 및 그의 유도체를 포함하는 폴리머와 같은 점도 조정제; 및 필요에 따라 이들 수성 조성물의 pH를 조정하기 위한 폴리비닐 알코올 및 산 및 염기를 포함한다. 상기 조성물은 또한, 일부 구현예에서, 국소 마취제 또는 다른 활성 성분을 포함한다. 상기 조성물은 스프레이, 미스트, 액적 등으로서 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 비경구 투여용 약제학적 조성물은 수용성 형태의 활성 조제물의 수용액을 포함한다. 추가로, 활성 성분의 현탁액은 적절한 오일 또는 물 기반의 주사 현탁액으로서 제조될 수 있다. 적합한 친지질성 용매 또는 비히클은, 일부 구현예에서, 참깨 오일과 같은 지방 오일, 또는 에틸 올레이트, 트리글리세라이드 또는 리포좀과 같은 합성 지방산 에스테르를 포함한다. 수성 주사 현탁액은, 일부 구현예에서, 현탁액의 점도를 증가시키는 물질, 예컨대 나트륨 카복시메틸 셀룰로오스, 소르비톨 또는 덱스트란을 함유한다. 또 하나의 구현예에서, 현탁액은 또한 활성 성분의 용해도를 증가시켜 고농축 용액의 제조를 가능하게 하는 적당한 안정화제 또는 제제들을 함유한다.

또 하나의 구현예에서, 상기 활성 화합물은 소포, 특히 리포좀 내에서 전달될 수 있다(Langer, Science 249:1527-1533 (1990); Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez- Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353-365 (1989); Lopez-Berestein, ibid., pp. 317-327; J. E. Diederichs and al., Pharm./nd. 56 (1994) 267- 275 참고).

또 하나의 구현예에서, 제어 방출 시스템에서 전달되는 약제학적 조성물은 정맥내 주입, 이식가능한 삼투 펌프, 경피 패치, 리포좀, 또는 다른 투여 방식용으로 제형화된다. 일 구현예에서, 펌프가 사용된다(Langer, supra; Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987); Buchwald et al., Surgery 88:507 (1980); Saudek et al., N. Engl. J. Med. 321:574 (1989) 참고). 또 하나의 구현예에서, 폴리머 물질이 사용될 수 있다. 또 하나의 구현예에서, 제어 방출 시스템은 치료 표적, 즉, 뇌의 부근에 위치할 수 있으므로, 따라서 전신 용량의 일부만을 필요로 한다(예를 들면, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984) 참고). 다른 제어 방출 시스템은 Langer(Science 249:1527-1533 (1990)에 의한 검토에서 논의된다.

또 하나의 구현예에서, 활성 성분은 사용 전에 적합한 비히클, 예를 들면, 멸균한 발열성물질이 없는 물 기반의 용액을 이용하여 제조하기 위해 분말 형태이다. 조성물은, 일부 구현예에서, 미립화 및 흡입 투여를 위해 제형화된다. 또 하나의 구현예에서, 조성물은 부착된 미립화 수단을 갖는 용기 내에 함유된다.

일 구현예에서, 본 발명의 조제물은 예를 들면, 코코아 버터 또는 다른 글리세라이드와 같은 종래의 좌약 기제를 이용하여, 좌약 또는 체류 관장제와 같은 직장 조성물로 제형화된다.

일 구현예에서, 본 발명의 문맥에서 사용하기에 적합한 약제학적 조성물은 활성 성분이 의도된 목적을 달성하기 위한 유효량으로 함유된 조성물을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 치료적 유효량은 치료될 대상의 질환의 증상을 예방하거나, 완화하거나 개선하거나, 생존을 연장하는데 효과적인 활성 성분의 양을 의미한다.

일 구현예에서, 치료적 유효량의 결정은 당해분야의 숙련가의 능력 내에 속한다.

약제학적으로-허용가능한 담체 또는 이의 성분으로서 제공될 수 있는 물질의 일부 예는 락토오스, 글루코오스 및 수크로오스와 같은 당류; 옥수수 전분 및 감자 전분과 같은 전분류; 나트륨 카복시메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스, 및 메틸 셀룰로오스와 같은 셀룰로오스 및 그의 유도체; 분말화된 트라가칸쓰; 맥아; 젤라틴; 탈크; 스테아르산 및 마그네슘 스테아레이트와 같은 고체 윤활유; 칼슘 설페이트; 땅콩 오일, 목화씨 오일, 참깨 오일, 올리브 오일, 옥수수 오일 및 테오브로마의 오일과 같은 식물성 오일; 프로필렌 글리콜, 글리세린, 소르비톨, 만니톨, 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 폴리올; 알긴산; Tween™ 브랜드 유화제와 같은 유화제; 나트륨 라우릴 설페이트와 같은 습윤제; 착색제; 풍미제; 정제화제, 안정제; 항산화제; 보존제; 발열성물질이 없는 물; 등장 염수; 및 포스페이트 완충제이다. 화합물과 함께 사용될 약제학적으로 허용가능한 담체의 선택은 기본적으로 화합물이 투여될 방식에 의해 결정된다. 만약 대상 화합물이 주입될 경우, 일 구현예에서, 약제학적으로 허용가능한 담체는, pH가 약 7.4로 조정된, 혈액과 양립가능한 현탁화제를 갖는 멸균한 생리적 염수이다.

또한, 상기 조성물은 결합제(예를 들면 아카시아, 옥수수전분, 젤라틴, 카보머, 에틸 셀룰로오스, 구아르 검, 하이드록시프로필 셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸 셀룰로오스, 포비돈), 붕해제(예를 들면 옥수수 전분, 감자 전분, 알긴산, 실리콘 디옥사이드, 크로스카르멜로오스 나트륨, 크로스포비돈, 구아르 검, 나트륨 전분 글리콜레이트), 다양한 pH 및 이온성 강도의 완충제(예를 들면, 트리스-HCl, 아세테이트, 포스페이트), 표면에 대한 흡수를 방지하는 알부민 또는 젤라틴과 같은 첨가제, 세제(예를 들면, Tween 20, Tween 80, Pluronic F68, 담즙산 염), 프로테아제 억제제, 계면활성제(예를 들면 나트륨 라우릴 설페이트), 투과 증대제, 가용화제(예를 들면, 글리세롤, 폴리에틸렌 글리세롤), 항산화제(예를 들면, 아스코르브산, 나트륨 메타바이설파이트, 부틸화된 하이드록시아니솔), 안정제(예를 들면 하이드록시프로필 셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스), 점도 증가제(예를 들면 카보머, 콜로이드 실리콘 디옥사이드, 에틸 셀룰로오스, 구아검), 감미제(예를 들면 아스파르탐, 시트르산), 보존제(예를 들면, 티메로산, 벤질 알코올, 파라벤), 윤활유(예를 들면 스테아르산, 마그네슘 스테아레이트, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 라우릴 설페이트), 유동 조제(예를 들면 콜로이드 실리콘 디옥사이드), 가소제 (예를 들면 디에틸 프탈레이트, 트리에틸 시트레이트), 유화제(예를 들면 카보머, 하이드록시프로필 셀룰로오스, 나트륨 라우릴 설페이트), 폴리머 코팅(예를 들면, 폴록사머 또는 폴록사민), 코팅 및 막 형성제(예를 들면 에틸 셀룰로오스, 아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트) 및/또는 보조제를 추가로 포함한다.

시럽, 엘릭시르, 유화액 및 현탁액을 위한 담체의 전형적인 성분은 에탄올, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 액체 수크로오스, 소르비톨 및 물을 포함한다. 현탁액의 경우, 전형적인 현탁화제는 메틸 셀룰로오스, 나트륨 카복시메틸 셀룰로오스, 셀룰로오스(예를 들면 Avicel™, RC-591), 트라가칸쓰 및 나트륨 알기네이트를 포함하고; 전형적인 습윤제는 레시틴 및 폴리에틸렌 옥사이드 소르비탄(예를 들면 폴리소르베이트 80)을 포함한다. 전형적인 보존제는 메틸 파라벤 및 나트륨 벤조에이트를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 경구 액체 조성물은 또한 하나 이상의 성분, 예컨대 상기 개시된 감미제, 풍미제 및 착색제를 함유한다.

상기 조성물은 또한 폴리락트산, 폴리글리콜산, 하이드로겔 등과 같은 폴리머 화합물의 미립자 조제물 내로 또는 상으로 활성 물질을 혼입하는 것을 포함하거나, 또는 리포좀, 마이크로유화액, 교질입자, 단일라멜라 또는 다중라멜라 소포, 파열적혈구, 또는 스페로플라스트 상으로 활성 물질을 혼입하는 것을 포함한다. 그러한 조성물은 물리적 상태, 용해도, 안정성, 생체내 방출 속도, 및 생체내 소거 속도에 영향을 미칠 것이다.

또한 폴리머(예를 들면 폴록사머 또는 폴록사민)로 코팅된 미립자 조성물 및 조직-특이적 수용체, 리간드 또는 항원에 대한 항체에 커플링되거나 또는 조직-특이적 수용체의 리간드에 커플링된 화합물이 본 발명에 의해 이해된다.

일 구현예에서, 화합물은 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜의 코폴리머, 카복시메틸 셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐피롤리돈 또는 폴리프롤린와 같은 수용성 폴리머의 공유 결합에 의해 변형된다. 또 하나의 구현예에서, 상기 변형된 화합물은 상응하는 변형되지 않은 화합물보다 정맥내 주사 후 혈액에서 상당히 더 긴 반감기를 나타낸다. 일 구현예에서, 변형은 또한 수용액에서의 화합물의 용해도를 증가시키고, 응집을 없애며, 화합물의 물리적 및 화학적 안정성을 향상시키고, 화합물의 면역원성 및 반응성을 크게 낮춘다. 또 하나의 구현예에서, 원하는 생체내 생물학적 활성은 그와 같은 폴리머-화합물 부가생성물을 비변형된 화합물보다 덜 빈번하게 또는 더 낮은 용량으로 투여함으로써 달성된다.

효과적인 양 또는 용량의 제조는 시험관내 분석으로부터 초기에 추정될 수 있다. 일 구현예에서, 용량은 동물 모델에서 공식화될 수 있고 그러한 정보는 인간에서 유용한 용량을 보다 정확하게 결정하는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 본원에서 기재된 활성 성분의 독성 및 치료 효능은 시험관내에서, 세포 배양 또는 실험 동물에서, 표준 약제학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 일 구현예에서, 이들 시험관내 및 세포 배양 분석 및 동물 연구로부터 얻어진 데이터는 인간에서 사용하기 위한 복용량의 범위를 공식화하는데 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 상기 복용량은 이용된 복용 형태 및 이용된 투여 경로에 따라 달라진다. 일 구현예에서, 정확한 제형, 투여 경로 및 복용량은 환자의 상태를 고려하여 각 의사에 의해 선택될 수 있다. [예를 들면, Fingl, et al., (1975) "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Ch. 1 p.1을 참조한다].

일 구현예에서, 치료될 병태의 중증도 및 반응성에 따라, 복용은 단일 또는 복수의 투여일 수 있으며, 치료 과정은 며칠에서 몇 주까지 지속되거나 치유가 이뤄지거나 질환 상태의 축소가 달성될 때까지 지속된다.

일 구현예에서, 투여될 조성물의 양은 치료될 대상, 고통의 중증도, 투여 방식, 처방의의 판단 등에 좌우될 것이다.

일 구현예에서, 양립가능한 약제학적 담체 내에 제형화된 본 발명의 조제물을 포함하는 조성물은 또한 제조되어, 적절한 용기 내에 놓여지고, 명시된 병태의 치료를 위해 라벨링된다.

또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같이 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 또는 이의 변이체(CTP-변형된) 형태는 비이온성 표면 활성제(즉, 계면활성제), 다양한 당, 유기 폴리올 및/또는 인간 혈청 알부민과 같은 복합 유기 부형제 및 안정제와 조합된 동결건조된 조제물이다. 또 하나의 구현예에서, 약제학적 조성물은 주사용 멸균수 내에 기재된 바와 같은 동결건조된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 약제학적 조성물은 주사용 멸균 PBS 내에 기재된 바와 같은 동결건조된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 약제학적 조성물은 주사용 멸균 0.9% NaCl 내에 기재된 바와 같은 동결건조된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 약제학적 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 복합 담체 예컨대 인간 혈청 알부민, 폴리올, 당, 및 음이온성 표면 활성 안정제를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 약제학적 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 락토바이오산 및 아세테이트/글리신 완충제를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 약제학적 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 아미노산, 예컨대 물에서 인터페론 조성물의 용해도를 증가시키는 아르기닌 또는 글루타메이트를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 약제학적 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 동결건조된 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 글리신 또는 인간 혈청 알부민 (HSA), 완충제 (예를 들면 아세테이트) 및 등장제 (예를 들면 NaCl)를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 약제학적 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 동결건조된 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 포스페이트 완충제, 글리신 및 HSA를 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 pH 약 4 내지 7.2를 갖는 완충된 용액에 놓여질 때 안정하다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 pH 약 4 내지 8.5를 갖는 완충된 용액 내에 있다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 pH 약 6 내지 7을 갖는 완충된 용액 내에 있다. 또 하나의 구현예에서, CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 pH 약 6.5를 갖는 완충된 용액 내에 있다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 안정제로서 및 일부 경우에서 염으로서 아미노산에 의해 안정된다 (아미노산이 전하를 띤 측쇄를 함유하지 않는다면).

또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 아미노산인 약 0.3% 내지 5중량%에서 안정제를 포함하는 액체 조성물이다.

또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 복용 정확도 및 생성물 안전성을 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 주사가능 적용에서 사용하기 위한 생물학적 활성, 안정한 액체 제형을 제공한다. 또 하나의 구현예에서, 약제학적 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 비-동결건조된 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 본원에서 제공된 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 투여 전에 저장 및 선적을 용이하게 하는 액체 상태에서 장기간이 저장을 허용하는 액체 제형을 제공한다.

또 하나의 구현예에서, 본원에서 제공된 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 고형 지질을 매트릭스 물질로서 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 주사가능 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 고형 지질을 매트릭스 물질로서 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 분무 응고에 의한 지질 마이크로입자의 생산은 Speiser (Speiser 및 al., Pharm. Res. 8 (1991) 47-54) 그 다음 경구 투여를 위한 지질 나노펠렛 (Speiser EP 0167825 (1990))에 의해 기재되었다. 또 하나의 구현예에서, 사용된 지질은 신체에 잘 용인된다 (예를 들면 비경구 영양을 위해 에멀젼에 존재하는 지방산으로 구성된 글리세라이트).

또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 폴리머 마이크로입자를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 나노입자를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 리포좀을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 지질 에멀젼을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 마이크로구형체를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 지질 나노입자를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 양친매성 지질을 포함하는 지질 나노입자를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제를 포함하는 약제학적 조성물은 약물을 포함하는 지질 나노입자, 지질 매트릭스 및 계면활성제를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 지질 매트릭스는 적어도 50% w/w의 함량의 모노글리세라이드를 갖는다.

일 구현예에서, 본 발명의 조성물은 활성 성분을 함유하는 하나 이상의 단위 복용 형태를 함유하는, FDA 승인된 키트와 같은 팩 또는 분배기 디바이스 내에 제공된다. ,일 구현예에서, 상기 팩은, 예를 들면, 금속 또는 플라스틱 포일, 예컨대 블리스터 팩을 포함한다. 일 구현예에서, 상기 팩 또는 분배기 디바이스는 투여를 위한 지침을 동반한다. 일 구현예에서, 상기 팩 또는 분배기는 의약품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 규정된 형태로 용기와 관련된 통지를 수용하며, 이 통지는 조성물의 형태 또는 인간 또는 수의적 투여의 기관에 의한 승인을 반영한다. 그와 같은 통지는, 일 구현예에서, 처방 약물을 위한 또는 승인된 제품내 삽입물의 미국 식품의약품안전청에 의해 승인된 라벨링이다.

일 구현예에서, 본 발명의 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 각 제제 자체를 이용한 치료와 비교하여 개선된 치료 효과를 달성하기 위해 부가적인 활성제와 함께 개인에게 제공될 수 있는 것으로 인식될 것이다. 또 하나의 구현예에서, 병용 요법과 관련된 불리한 부작용을 피하기 위한 수단(예를 들면, 상호보완적인 제제의 복용 및 선택)이 취해진다.

일 구현예에서, 용어 "약"은 정량적 용어로 플러스 또는 마이너스 5%, 또는 또 하나의 구현예에서 플러스 또는 마이너스 10%, 또는 또 하나의 구현예에서 플러스 또는 마이너스 15%, 또는 또 하나의 구현예에서 플러스 또는 마이너스 20%를 의미한다.

용어 "대상"은 일 구현예에서 병태 또는 그것의 후유증을 위한 요법을 필요로 하거나 상기 병태 또는 그것의 후유증에 민감한 인간을 포함하는 포유동물을 지칭한다. 상기 대상은 개, 고양이, 돼지, 소, 양, 염소, 말, 랫트, 및 마우스 및 인간을 포함할 수 있다. 용어 "대상"은 모든 점에 있어서 정상적인 개인을 제외하지 않는다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 폴리펩타이드의 치료 및 예방 방법은 본원에 기재된 바와 같은 치료 및 예방 방법을 달성하기 위해 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 폴리펩타이드를 사용함으로써 대체될 수 있고/거나, 본원에 기재된 바와 같은 치료 및 예방을 위한 방법을 달성하기 위한 약제를 제조하는데 있어서 본원에 기재된 바와 같은 CTP-변형된 폴리펩타이드의 사용에 의해 대체될 수 있는 것으로 이해되어야 한다.

본 발명의 부가적인 목적, 이점, 및 신규 특징들은 하기의 예를 조사시 본 기술분야의 숙련자에게 자명할 것이며, 이는 제한하고자 하는 것이 아니다. 또한, 상기 기술된 바와 같은 그리고 하기 청구항 부분에 청구된 바와 같은 각각의 다양한 구현예 및 측면들은 하기 실시예에서 실험적으로 뒷받침된다.

실시예

물질 및 방법:

플라스미드 구축

OXM 아미노산 서열(승인 # NP_002045) 및 CTP 아미노산 서열(승인 # NP_149032)에 기초하여 진핵 발현 벡터(pCI-dhfrr)에서 7개의 OXM 플라스미드를 구축하였다.

이들 플라스미드의 도식적 제시가 표 1에 나타나 있다. 플라스미드 구축의 상세한 설명은 하기와 같다.

표 1: 플라스미드의 도식적 설명

	플라스미드 변이체 설명	핵산 서열
1	OXM-CTP-CTP	서열번호: 20
2	CTP-OXM-CTP	서열번호: 8
3	CTP-CTP-OXM	서열번호: 22
4	CTP-OXM-CTP-CTP	서열번호: 14
5	OXM-CTP-CTP-CTP	서열번호: 24
6	OXM-CTP-CTP-CTP-CTP	서열번호: 26
7	OXM-CTP-CTP-CTP-CTP-CTP	서열번호: 28

OXM 변이체 CTP-OXM-CTP(0.5C CTP-OXM-CTP, GenArt, GA # 0804377)의 핵산 서열을 DG44 발현 시스템에 대한 코돈 용법 최적화 후 합성하였다. 0.5C CTP-OXM-CTP 서열을 함유하는 XbaI-NotI 단편을 분리하였다. 상기 단편을 진핵 발현 벡터 pCI-dhfr 내로 삽입하여 601-0-p142-1 클론을 생성하였다.

CTP - OXM - CTP 의 구축

601-6-p149-1(CTP-OXM-CTP)를 합성하기 위해 하기의 프라이머를 사용하였다.

프라이머 25 5' CTCTAGAGGACATGGCCAC 3' (서열번호: 4).

프라이머 85R 5' CTGGCTGTGCTGGGGCAGAATGGGTGT 3' (서열번호: 5).

프라이머 86 5' CCCCAGCACAGCCAGGG 3' (서열번호: 6).

프라이머 74R 5' GCGGCCGCATCCAGACCT 3' (서열번호: 7).

3가지 PCR 반응을 수행하였다. 첫 번째 반응은 프라이머 25 및 프라이머 85R 및 주형으로서 402-3-p81-4(CTP-hGH-CTP-CTP)의 플라스미드 DNA를 이용하여 수행하였고, PCR 증폭 결과로서, ~181 bp 생성물이 형성되었다. 두 번째 반응은 프라이머 86 및 프라이머 74R 및 주형으로서 601-0-p142-1(0.5C CTP-OXM-CTP)의 플라스미드 DNA를 이용하여 수행하였고, PCR 증폭의 결과로서, ~224 bp 생성물이 형성되었다. 마지막 반응은 프라이머 25 및 74R 및 주형으로서 이전의 두 가지 반응의 생성물의 혼합물로 수행하였고, PCR 증폭의 결과로서, ~391 bp 생성물이 형성되었고 이를 TA 클로닝 벡터(Invitrogen, catalog K2000-01) 내로 라이게이션하였다. CTP-OXM-CTP 서열을 함유하는 XbaI-NotI 단편을 분리하였다. 상기 단편을 본 발명자들의 진핵 발현 벡터 pCI-dhfr 내로 삽입하여 601-6-p149-1 클론을 생성하였다.

CTP-OXM-CTP를 인코딩하는 핵산 서열은 하기와 같다:

tctagaggacatggccaccggcagcaggaccagcctgctgctggccttcggcctgctgtgcctgccatggctgcaggagggcagcgccagctcttcttctaaggctccacccccatctctgcccagccccagcagactgccgggccccagcgacacacccattctgccccagcacagccagggcaccttcaccagcgactacagcaagtacctggacagcagaagggcccaggacttcgtccagtggctgatgaacaccaagaggaacaggaacaacatcgcttcctctagctccaaggcccctccaccctctctgcctagcccctctcggctgcctggcccatccgacacaccaatcctgccacagtgatgaaggtctggatgcggccgc(서열번호: 8).

CTP-OXM-CTP를 인코딩하는 아미노산 서열은 하기와 같다:

MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSASSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQHSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIASSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ(서열번호: 9).

CTP - OXM - CTP - CTP 의 구축

601-3-p158-2(CTP-OXM-CTP-CTP)를 합성하기 위해 하기의 프라이머를 사용하였다:

프라이머 25 5' CTCTAGAGGACATGGCCAC 3' (XbaI의 제한 부위를 함유함 ) (서열번호: 10).

프라이머 87 ^R 5' GCTGGAGCTAGCGATGTTGTTCCTGTTCC 3' (OXM의 3' 말단 및 CTP의 5' 말단을 함유함) (서열번호: 11).

프라이머 88 5' ACATCGCTAGCTCCAGCAGCAAGGCC 3' (OXM의 3' 말단 및 CTP의 5' 말단을 함유함) (서열번호: 12).

프라이머 74 ^R 5' GCGGCCGCATCCAGACCT 3' (NotI의 제한 부위를 함유함) (서열번호: 13).

3가지 PCR 반응을 수행하였다. 첫 번째 반응은 프라이머 25 및 프라이머 87R 및 주형으로서 601-6-p149-1(CTP-OXM-CTP-CTP)의 플라스미드 DNA로 수행하였고, PCR 증폭 결과로서, ~290 bp 생성물이 형성되었다. 두 번째 반응은 프라이머 88 및 프라이머 74R 및 주형으로서 402-3-p81-4(CTP-hGH-CTP-CTP)의 플라스미드 DNA로 수행하였고, PCR 증폭의 결과로서, ~200 bp 생성물이 형성되었다. 마지막 반응은 프라이머 25 및 74R 및 주형으로서 이전의 두 가지 반응의 생성물의 혼합물로 수행하였고, PCR 증폭의 결과로서, ~450 bp 생성물이 형성되었고 이를 TA 클로닝 벡터(Invitrogen, catalog K2000-01) 내로 라이게이션하였다. CTP-OXM-CTP-CTP 서열을 함유하는 XbaI-NotI 단편을 분리하였다. 상기 단편을 본 발명자들의 진핵 발현 벡터 pCI-dhfr 내로 삽입하여 601-3-p158-2 클론을 생성하였다.

CTP-OXM-CTP-CTP를 인코딩하는 핵산 서열은 하기와 같다:

tctagaggacatggccaccggcagcaggaccagcctgctgctggccttcggcctgctgtgcctgccatggctgcaggagggcagcgccagctcttcttctaaggctccacccccatctctgcccagccccagcagactgccgggccccagcgacacacccattctgccccagcacagccagggcaccttcaccagcgactacagcaagtacctggacagcagaagggcccaggacttcgtccagtggctgatgaacaccaagaggaacaggaacaacatcgctagctccagcagcaaggcccctcccccgagcctgccctccccaagcaggctgcctgggccctccgacacaccaatcctgccacagagcagctcctctaaggcccctcctccatccctgccatccccctcccggctgcctggcccctctgacacccctatcctgcctcagtgatgaaggtctggatgcggccgc(서열번호: 14).

CTP-OXM-CTP-CTP를 인코딩하는 아미노산 서열은 하기와 같다:

MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSASSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQHSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIASSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ(서열번호: 15).

OXM - CTP - CTP 의 구축

601-2-p160-2(OXM-CTP-CTP)를 합성하기 위해 하기의 프라이머를 사용하였다:

프라이머 75 5' CTCCCAGTTCAATTACAGCT 3' (XbaI 제한 부위 앞에 pCI-dhfr 의 서열을 함유함) (서열번호: 16).

프라이머 89 ^R 5' GCTGTGAGCGCTGCCCTCCTGCAG 3' (OXM의5' 말단을 함유함) (서열번호: 17).

프라이머 90 5' GCGCTCACAGCCAGGGCACCTTC 3' (OXM의 5' 말단을 함유함) (서열번호: 18).

프라이머 74 ^R 5' GCGGCCGCATCCAGACCT 3' (NotI의 제한 부위를 함유함) (서열번호: 19).

3가지 PCR 반응을 수행하였다. 첫 번째 반응은 프라이머 75 및 프라이머 89R 및 주형으로서 601-0-p142-1(0.5C CTP-OXM-CTP)의 플라스미드 DNA로 수행하였고, PCR 증폭 결과로서, ~175 bp 생성물이 형성되었다. 두 번째 반응은 프라이머 90 및 프라이머 74R 및 주형으로서 601-3-p158-2(CTP-OXM-CTP-CTP)의 플라스미드 DNA로 수행하였고, PCR 증폭의 결과로서, ~200 bp 생성물이 형성되었다. 마지막 반응은 프라이머 25 및 74R 및 주형으로서 이전의 두 가지 반응의 생성물의 혼합물로 수행하였고, PCR 증폭의 결과로서, ~391 bp 생성물이 형성되었고 이를 TA 클로닝 벡터(Invitrogen, catalog K2000-01) 내로 라이게이션하였다. OXM-CTP-CTP 서열을 함유하는 XbaI-NotI 단편을 분리하였다. 상기 단편을 본 발명자들의 진핵 발현 벡터 pCI-dhfr 내로 삽입하여 601-2-p160-2 클론을 생성하였다.

OXM-CTP-CTP를 인코딩하는 핵산 서열은 하기와 같다:

tctagaggacatggccacagggagcaggaccagcctgctgctggctttcggcctgctgtgtctgccatggctgcaggagggcagcgctcacagccagggcaccttcaccagcgactacagcaagtacctggacagcagaagggcccaggacttcgtccagtggctgatgaacaccaagaggaacaggaacaacatcgctagctccagcagcaaggcccctcccccgagcctgccctccccaagcaggctgcctgggccctccgacacaccaatcctgccacagagcagctcctctaaggcccctcctccatccctgccatccccctcccggctgcctggcccctctgacacccctatcctgcctcagtgatgaaggtctggatgcggccgc(서열번호: 20)

OXM-CTP-CTP를 인코딩하는 아미노산 서열은 하기와 같다:

LEDMATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSAHSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIASSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ(서열번호: 21)

CTP - CTP - OXM 의 구축

DG44 발현 시스템에 대한 코돈 용법 최적화 후 OXM 변이체(CTPx2-OXM, GenArt, GA # 1067101)의 핵산 서열을 합성하였다. 상기 단편을 Excellgene 진핵 발현 벡터 내로 삽입하여 p162 클론을 생성하였다.

CTPx2-OXM을 인코딩하는 핵산 서열은 하기와 같다:

ctatagggcgaattgaaggaaggccgtcaaggccgcatgagctctctagaggacatggccaccggcagcaggaccagcctgctgctggccttcggcctgctgtgcctgccatggctgcaggagggcagcgccagctccagcagcaaggcccctcccccgagcctgccctccccaagcaggctgcctgggccctccgacacaccaatcctgccacagagcagctcctctaaggcccctcctccatccctgccatccccctcccggctgcctggcccctctgacacccctatcctgcctcagcacagccagggcaccttcaccagcgactacagcaagtacctggacagcagaagggcccaggacttcgtccagtggctgatgaacaccaagaggaacaggaacaacatcgcttgatgaaggtctggatgcggccgcggtaccctgggcctcatgggccttcctttcactgcccgctttccag(서열번호: 22).

CTPx2-OXM을 인코딩하는 아미노산 서열은 하기와 같다:

M A T G S R T S L L L A F G L L C L P W L Q E G S A S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q H S Q G T F T S D Y S K Y L D S R R A Q D F V Q W L M N T K R N R N N I A * * R S G C G R G T L G L M G L P F T A R F P(서열번호: 23).

OXM - CTPx3 의 구축:

DG44 발현 시스템에 대한 코돈 용법 최적화 후 OXM 변이체(OXM-CTPx3, GenArt, GA # 1017864)의 핵산 서열을 합성하였다. OXM-CTPx3 서열을 함유하는 XbaI-NotI 단편을 분리하였다. 상기 단편을 본 발명자들의 진핵 발현 벡터 pCI-dhfr 내로 삽입하여 pCI-dhfr-OXM-ctpx3-p216-4 클론을 생성하였다.

OXM - CTPx3 을 인코딩하는 핵산 서열은 하기와 같다:

tctagactcgagcgatcgccatggccaccggctctaggacctccctgctgctggccttcggcctgctgtgcctgccctggctgcaggaaggcagcgctcactcccagggcaccttcacctccgactactccaagtacctggactctcggagagcccaggacttcgtgcagtggctgatgaacaccaagcggaaccggaacaatatcgcctcctcaagctccaaggcacctccaccttccctgcctagcccttccagactccctgggcccagtgacacccctatcctgcctcagtccagctccagcaaggccccaccccctagcctgccttctccttctcggctgcctggccccagcgatactccaattctgccccagtcctccagcagtaaggctccccctccatctctgccatcccccagcagactgccaggcccttctgatacacccatcctcccacagtgatgaggatccgcggccgc(서열번호: 24).

OXM-CTPx3을 인코딩하는 아미노산 서열은 하기와 같다:

M A T G S R T S L L L A F G L L C L P W L Q E G S A H S Q G T F T S D Y S K Y L D S R R A Q D F V Q W L M N T K R N R N N I A S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q * * (서열번호: 25).

OXM - CTPx4 의 구축:

DG44 발현 시스템에 대한 코돈 용법 최적화 후 OXM 변이체(OXM-CTPx4, GenArt, GA # 1115769)의 핵산 서열을 합성하였다. OXM-CTPx4 서열을 함유하는 XbaI-NotI 단편을 분리하였다. 상기 단편을 본 발명자들의 진핵 발현 벡터 pCI-dhfr 내로 삽입하여 pCI-dhfr-OXM-ctpx4-p254-3 클론을 생성하였다.

OXM-CTPx4를 인코딩하는 핵산 서열은 하기와 같다:

tctagactcgagcgatcgccatggctaccggctccagaacctctctgctgctggccttcggcctgctgtgtctgccttggctgcaagagggcagcgctcattcccagggcaccttcacctccgactactccaagtacctggactctcgcagagcccaggacttcgtgcagtggctgatgaacaccaagcggaaccggaacaatatcgcctcctccagctccaaggcccctcctccatctctgccatcccccagtagactgcctgggccctctgacacccctatcctgcctcagtccagctcctctaaggccccaccaccttccctgcctagcccttcaagactgccaggccctagcgatacaccaattctgccccagtcctccagcagcaaggctcccccacctagcctgccttctccatcaaggctgcctggcccatccgataccccaattttgcctcagagcagctctagcaaggcacctccccccagtctgccctctccaagcagactccctggcccttcagacactcccattctgccacagtgatgaggatccgcggccgc(서열번호: 26)

OXM-CTPx4를 인코딩하는 아미노산 서열은 하기와 같다:

M A T G S R T S L L L A F G L L C L P W L Q E G S A H S Q G T F T S D Y S K Y L D S R R A Q D F V Q W L M N T K R N R N N I A S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q * * (서열번호: 27).

OXM - CTPx5 의 구축:

DG44 발현 시스템에 대한 코돈 용법 최적화 후 OXM 변이체(OXM-CTPx5, GenArt, GA # 1115770)의 핵산 서열을 합성하였다. OXM-CTPx5 서열을 함유하는 XbaI-NotI 단편을 분리하였다. 상기 단편을 본 발명자들의 진핵 발현 벡터 pCI-dhfr 내로 삽입하여 pCI-dhfr-OXM-ctpx5 -p255-1 클론을 생성하였다.

OXM-CTPx5를 인코딩하는 핵산 서열은 하기와 같다:

ctctagactcgagcgatcgccatggctaccggctccagaacctctctgctgctggccttcggcctgctgtgtctgccttggctgcaagagggcagcgctcattcccagggcaccttcacctccgactactccaagtacctggactctcgcagagcacaggacttcgtgcagtggctgatgaacaccaagcggaaccggaacaatatcgcctcctccagctccaaggcccctcctccatctctgccatcccccagtagactgcctgggccctctgacacccctatcctgcctcagtccagctcctctaaggctccaccaccttccctgcctagcccttcaagactgccaggccctagcgatacaccaattctgccccagtcctccagcagcaaggctcccccacctagcctgccttctccatcaaggctgcctggcccatccgataccccaattttgcctcagagcagctctagcaaggcacctccccccagtctgccctctccaagcagactccctggcccttcagacactccaatcctcccacagtcctctagctctaaagctccacctcccagcctgcccagccctagtagactccccggaccttctgatacccccatcttgccccagtgatgaggatccgcggccgc(서열번호: 28).

OXM-CTPx5를 인코딩하는 아미노산 서열은 하기와 같다:

M A T G S R T S L L L A F G L L C L P W L Q E G S A H S Q G T F T S D Y S K Y L D S R R A Q D F V Q W L M N T K R N R N N I A S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q * * (서열번호: 29).

OXM - CTP 변이체의 발현, 정제 및 특성규명

OXM-CTP의 모든 7개의 변이체를 XLG의 CHO-Express 세포주(Excellgene Company, Switzerland)에서 일시적으로 발현시켜 생산하였다. OXM-CTP 수확물의 농도 수준을 OXM ELISA 키트(Bachem Cat# S-1393.0001)를 이용하여 결정하였다. 상기 수확물을 DEAE 칼럼, 그 다음 두 번째 정제 단계로서 Jacalin 칼럼을 이용하여 정제하였다. 최종 분획을 10mM 완충제 시트레이트, 147 mM NaCl, pH 6에 대해 투석하였다. 정제된 변이체의 농도를 1.9=1mg/ml의 소멸 계수를 이용하여 280 nm에서의 흡광도에 의해 결정하였다. 1.9는 OXM 펩타이드에 대해 이론적으로 계산된 소멸 계수이다. CTP 펩타이드는 280 nm에서 흡수하지 않으므로, OXM-CTP 변이체에 대해 동일한 소멸 계수를 적용하였다. OXM 원상태 펩타이드를 화학적으로 합성하고(Almac Company, Ireland), 그의 펩타이드 함량을 아미노산 분석에 의해 결정하였다.

OXM - CTP 변이체의 약력학적 ( PK ) 프로파일

OXM 펩타이드 및 OXM-CTP 변이체의 약력학적 프로파일을 하기와 같이 평가하였다. 수컷 스프래그-다우리(SD)-1 랫트에게 원상태 OXM(n=6, 230μg/kg), 변이체 CTP-OXM-CTP, CTP-OXM-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP 및 CTP-CTP-OXM(n=6, 230μg/kg) 또는 변이체 # OXM-CTP-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP-CTP-CTP-CTP(n=6, 153 μg/kg)를 단회 용량으로 피하로(SC) 또는 정맥내로(IV) 투여하였다. 그룹당 3마리의 동물의 집단을 교차 시점에 채혈하였다. OXM 혈청 농도를 상업적 ELISA 키트(Bachem, Cat# S-1393.0001)를 이용하여 분석하였다. 연구 설계가 표 2에 요약되어 있다. 상기 연구를 3가지 순차적인 실험인 실험 #1(그룹 1-4), 실험 #2(그룹 5-9) 및 실험 #3(그룹 10-13)으로 나누었다.

표 2 : PK 연구 설계의 요약.

C57BL /6 마우스에서의 IPGTT 연구

그룹 #	시험 물품 변이체 #	동물/그룹/시점의 번호	용량 경로	성별	OXM의 투여 수준 (㎍/랫트)	OXM의 투여 수준 (㎍/kg)	시점 (시간 투약후)
1	OXM	6/3	IV	수컷	34	230	0 (전-용량), 5분, 15분, 25분, 35분, 45분, 60분, 75분, 1.5h, 2h
2	CTP-OXM-CTP	6/3	IV	수컷	34	230	0 (전-용량), 10분, 30분, 1h, 2h, 3h, 4h , 6h, 8h , 24h, 36h, 48h
3	CTP-OXM-CTP-CTP	6/3	IV	수컷	34	230	0 (전-용량), 10분, 30분, 1h, 2h, 3h, 4h , 6h, 8h, 24h, 36h, 48h
4	CTP-CTP-OXM	6/3	IV	수컷	34	230	0 (전-용량), 10분, 30분, 1h, 2h, 3h, 4h , 6h, 8h , 24h, 36h, 48h
5	OXM	6/3	SC	수컷	34	230	0 (전-용량), 5분, 15분, 25분, 35분, 45분, 60min 75분, 1.5h, 2h
6	CTP-OXM-CTP	6/3	SC	수컷	34	230	0 (전-용량), 10분, 30분, 1h, 2h,4h , 6h, 8h ,24h, 36h, 2d, 3d
7	CTP-OXM-CTP-CTP	6/3	SC	수컷	34	230	0 (전-용량), 10분, 30분, 1h, 2h,4h , 6h, 8h , 24h, 36h, 2d, 3d
8	CTP-CTP-OXM	6/3	SC	수컷	34	230	0 (전-용량), 10분, 30분, 1h, 2h ,4h , 6h, 8h , 24h, 36h, 2d,3d
9	OXM-CTP-CTP	6/3	SC	수컷	34	230	0 (전-용량), 10분, 30분, 1h, 2h, 4h , 6h, 8h, 24h, 36h, 2d, 3d
10	OXM	6/3	SC	수컷	34	230	0 (전-용량), 5분, 15분, 25분, 35분, 45분, 60min 75분, 1.5h, 2h
11	OXM-CTPX3	6/3	SC	수컷	23	153	0 (전-용량), 10분, 30분, 1h, 2h, 4h , 6h, 8h, 24h, 36h, 2d, 3d, 4d
12	OXM-CTPX4	6/3	SC	수컷	23	153	0 (전-용량), 10분, 30분, 1h, 2h ,4h , 6h, 8h, 24h, 36h, 2d, 3d, 4d
13	OXM-CTPX5	6/3	SC	수컷	23	153	0 (전-용량), 10분, 30분, 1h, 2h, 4h , 6h, 8h, 24h, 36h, 2d, 3d, 4d

밤새-단식한 마우스를 대상으로 글루코오스(투여전 글루코오스)를 측정하였다. 곧바로, 상기 마우스에게 시험 물품 중 하나를 IP 주사하였다. 주사 15분 또는 120분 후, 글루코오스 수준을 측정한 다음(글루코오스의 경우 0시간) IP 주사를 통해 글루코오스를 투여하였다(1.5 g/kg). 10, 20, 30, 60, 90, 120 및 180분에 추가적인 글루코오스 측정을 수행하였다. 소형 혈당측정기를 이용하여 꼬리 정맥 샘플링에 의해 혈당 수준을 측정하였다.

C57BL /6 마우스에서의 음식 섭취 연구

최소 주사 1주일 전에, 마우스의 무게를 재고 순응을 위해 미니 우리로 옮겼다(우리당 마우스 1마리). 연구 기간 동안 스트레스를 최소화하기 위해 순응 기간 동안 마우스를 매일 손으로 만지고 비히클의 2회 주사를 투여하였다. 실험 전날, 마우스를 단식시켰다. 공복 17시간 후, 초기 빛 상(light phase) (900-1000h)에, 마우스의 무게를 다시 잰 다음(IP 주사 이전), 1700 nmol/kg(10 μl/1g 마우스)의 OXM 펩타이드 또는 OXM-CTP 변이체 OXM-CTPX3, OXM-CTPX4 및 OXM-CTPX5를 단일 IP 주사하였다. 주사 후, 마우스를 집우리(우리당 마우스 1마리)로 돌려보내고, 미리 양을 잰 음식물을 제공하였다. 음식물의 무게를 잼으로써 주사 0, 1, 2, 4, 6, 8, 21, 32 및 44, 55, 68, 80, 93 및 141시간 후에 음식 섭취를 측정하였다. 실험 말기에, 랫트의 무게를 다시 재었다.

결과

실시예 1: CTP -변형된 OXM 의 구축

유전공학에 의해, CTP 펩타이드 cDNA를 인간 OXM cDNA에 융합시켜, 표 1에 상세히 설명된 바와 같이 7개의 상이한 OXM-CTP 변이체를 생성하였다. 상기 플라스미드의 뉴클레오타이드 서열을 확인하고, 플라스미드를 XLG의 CHO-Express 세포주(Excellgene Company, Switzerland) 내로 일시적으로 형질감염시켰다. OXM-CTP 변이체를 성장 배지 내로 분비시키고, 수확물을 수집하고, OXM-CTP 수준을 결정하였다.

실시예 2: OXM - CTP 변이체의 발현, 정제 및 특성규명

생산 배지(수확물)에 대해 OXM-CTP 변이체의 분비 수준을 측정하였다. 상기 분비 수준이 표 3에 요약되어 있다. 수득된 분비 수준은 재조합 펩타이드의 표준 일시적 형질감염 발현 수준을 고려할 때 높았다.

표 3: OXM-CTP 분비 수준의 요약.

변이체	CTP-OXM-CTP	CTP-OXM-CTP-CTP	OXM-CTP-CTP	CTP-CTP-OXM	OXM-CTPX4	OXM-CTPX4	OXM-CTPX5
수확 농도 (㎍/ ml )	31.1	15.3	3.3	51.9	13.9	15.3	14.4

수확물을 물질 및 방법에 기재된 방법에 따라 정제하였다. 변이체 OXM-CTPX3, OXM-CTPX4 및 OXM-CTPX5의 최종 샘플을 SDS-PAGE에 의해 분석하였다(쿠마시 염색(도 1a) 및 항-OXM 웨스턴 블롯 분석(도 1b)). 변이체 CTP-OXM-CTP, CTP-OXM-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP 및 CTP-CTP-OXM의 경우, 정제 공정으로부터 얻은 샘플을 쿠마시 염색 및 웨스턴 블롯 분석 모두에 의해 분석하였다(도 2a 및 2b). 예상대로, OXM-CTP 변이체는 펩타이드에 융합된 CTP 카세트의 수와 관련된 크기 차이를 나타내었다. 상대적으로 큰 분자량은, CTP 펩타이드 상의 잠재적 세린 부위에 O-글리칸 사슬이 많이 점유하고 있을 수 있음을 가리킨다. 아마 작은 크기의 펩타이드를 이전하는데 있어서 기술적 어려움으로 인해 OXM 펩타이드는 항-OXM 항체와 반응하지 않았다. 쿠마시 염색은 OXM-CTP 변이체가 고도로 정제되었고 주로 높은 형태를 함유하였다는 것을 보여준다.

실시예 3: OXM - CTP 변이체의 약력학적 ( PK ) 프로파일

OXM-CTP 변이체와 비교된 OXM 펩타이드의 약력학적 프로파일을 수컷 SD-1 랫트에서 분석하였다. 동물에게 원상태 OXM 또는 OXM-CTP 변이체 CTP-OXM-CTP, CTP-OXM-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP, CTP-CTP-OXM(230μg/kg 펩타이드) 또는 변이체 OXM-CTPX3, OXM-CTPX4 및 OXM-CTPX5(153μg/kg 펩타이드)를 단일 IV(실험 1, 도 3a) 또는 단일 SC(실험 2 및 3, 도 3b 및 3c) 주사로 투여하였다. 지정된 시점에서 OXM 또는 OXM-CTP 변이체의 혈청 농도를 상업적 ELISA를 이용하여 분석하였다. PK 프로파일이 도 3a 내지 3c에 나타나 있으며, 종래의 비구획적 PK 파라미터들이 표 4에 요약되어 있다. OXM에의 CTP 펩타이드의 첨가는, 다양한 OXM-CTP 변이체에 대해 0.22시간에서 2.7-10시간으로 원상태 OXM의 반감기를 연장시켰다(표 4, SC 투여; 실험 2 및 3).

3가지 상이한 방식으로 2카피의 CTP를 OXM 펩타이드에 첨가하여 변이체 CTP-OXM-CTP, OXM-CTP-CTP 및 CTP-CTP-OXM을 생산하였다. CTP들이 OXM의 C-말단에 나란히 부가될 때 혈청 반감기가 가장 현저히 연장되었고, 변이체 OXM-CTP-CTP은 4.76시간의 T_1/2을 가지고 있었다. OXM C-말단에의 3개의 CTP의 융합은 2개의 CTP의 융합과 비교하여 반감기 신장을 야기하지 않았다. 놀랍게도, OXM c-말단에의 4 및 5 카피의 CTP의 부가는 T₁ _/2을 10시간까지 신장시켰다(표 4).

AUC 파라미터에 의해 반영된 바와 같은 노출은, 변이체 OXM-CTP-CTP의 경우 ~17배까지(실험 2) 그리고 변이체 OXM-CTPX4 및 OXM-CTPX5의 경우 ~30배까지(실험 3) 최대로 증가하였다. 이들 결과는 OXM 펩타이드에의 4 또는 5 카피의 CTP의 부가 후 우수한 연장 효과가 있음을 보여준다.

실험 1 & 2로부터 계산된 바와 같은 생체이용률은 CTP-OXM-CTP-CTP의 경우 증가하였지만, CTP-OXM-CTP 및 CTP-CTP-OXM의 경우 유의미한 개선이 확인되지 않았다(표 4).

표 4: 3가지 상이한 실험에서 결정된 OXM 펩타이드 및 OXM-CTP 변이체의 종래의 비구획적 PK 파라미터.

		T1 /2	T1 /2β	Cmax	Tmax	AUC (0-t)	AUC ∞	CL	Vd	MRT	*생체이용률*
		hr	hr	ng / ml	hr	ng - hr / ml	ng - hr / ml	ml / hr / kg	ml / kg	hr	%
실험 1 IV .	OXM	0.29	NA	NA	NA	211.7	213.9	993.0	417.0	0.34
	CTP-OXM-CTP	0.25	1.57	NA	NA	592.7	598.0	355.3	806.9	0.81
	CTP-OXM-CTP-CTP	0.28	1.61	NA	NA	968.2	977.4	217.4	506.4	0.80
	CTP-CTP-OXM	0.27	1.20	NA	NA	488.6	490.4	433.3	748.1	0.86
실험 2 SC .	OXM	0.22		118.40	0.08	42.52	42.84	4960.39	1564.40	0.37	20.09
	CTP-OXM-CTP	3.28		31.11	1.00	144.87	170.82	1243.97	5887.75	4.73	24.44
	CTP-OXM-CTP-CTP	4.39		30.18	6.00	313.98	320.86	662.28	4139.25	6.62	32.43
	OXM-CTP-CTP	4.76		50.90	6.00	697.00	702.10	302.70	2078.90	8.20	NA
	CTP-CTP-OXM	2.74		27.77	1.00	114.15	129.85	1636.55	6459.76	4.10	23.36
실험 3 SC .	OXM	0.18		36.4	0.08	13.1	13.3	16999	4375
	OXM-CTPX3	3.78		25.1	2.0	308.9	312	512.8	2797
	OXM-CTPX4	10.15		21.1	2.0	400.4	431.9	355.4	5379.6
	OXM-CTPX5	9.63		21.2	8	431	442	346.2	4812

T₁ _/2의 배수 증가 및 AUC

를 보여주는 다양한 그룹 간의 비교는, OXM-CTPx4 및 OX-CTPx5가 다른 변이체와 비교하여 이들 파라미터에서 우수하였음을 입증하였다(표 5).

표 5: 실험 1-3으로부터 계산된 OXM 펩타이드와 비교하여 OXM-CTP 변이체의 PK 파라미터의 증가 배수.

	변이체	T1/2 샘플/OXM 펩타이드	AUC∞ 샘플/OXM 펩타이드
실험 1 Ⅳ.	CTP-OXM-CTP	NA	2.8
	CTP-OXM-CTP-CTP	NA	5.6
	CTP-CTP-OXM	NA	2.29
실험 2 SC.	CTP-OXM-CTP	14.9	3.98
	CTP-OXM-CTP-CTP	19.9	7.48
	OXM-CTP-CTP	21.6	16.3
	CTP-CTP-OXM	12.4	3.03
실험 3 SC.	OXM-CTP-CTP-CTP	21	23.45
	OXM-CTP-CTP-CTP-CTP	56.4	32.478
	OXM-CTP-CTP-CTP-CTP-CTP	53.5	33.23

실시예 4 : CTP -변형된 OXM 은 글루코오스 내성을 유도한다

C57BL/6 마우스에서 IPGTT 연구를 수행하였고, 이는 OXM이 인슐린 분비의 자극을 통해 글루코오스 소거를 향상시켰다는 것을 입증하였다. IP 당부하 검사(IPGTT)는 OXM의 글루코오스 강하 효과를 평가한다. OXM 또는 OXM-CTP 변이체의 생체내 활성을 평가하기 위해, IPGTT 모델을 적용하였다. 밤새 단식한 C57BL/6 마우스에게 OXM 펩타이드 또는 OXM-CTP 변이체를 IP 주입한 다음 글루코오스를 IP 주사하고(1.5g/kg), 혈당측정기에 의해 꼬리 정맥으로부터 혈당 수준을 측정하였다(도 4a 내지 4d). OXM-CTP 변이체를 2개의 순차적인 실험에서 평가하였는데, 변이체 CTP-OXM-CTP, CTP-OXM-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP, CTP-CTP-OXM의 경우 실험 1(도 4a 및 4c) 및 변이체 OXM-CTP-CTP-CTP, OXM-CTPX4 및 OXM-CTPX5의 경우 실험 2(도 4b 및 4d)에서 평가하였다. OXM(100 nmol/kg), 또는 OXM-CTP 변이체(100 nmol/kg)를 글루코오스 IP 주사 15분 또는 2시간(OXM 펩타이드 및 변이체 OXM-CTPX4) 전에 IP 투여하고, 글루코오스 내성의 유도를 비히클(완충제) 그룹과 비교하였다. 계산된 AUC에 대해 낮은 효과를 가졌던 100nmol/kg의 OXM 펩타이드와 비교된 비히클 그룹과 비교하여 혈당 AUC의 20-30% 감소에 의해 반영된 바와 같이 OXM-CTP 변이체 CTP-OXM-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP, OXM-CTPX3, OXM-CTPX4 및 OXM-CTPX5에 대해 두드러진 효과가 측정되었다(도 4a 내지 d, 1%의 감소, 실험 1 및 6.7%, 실험 2). 놀랍게도, CTP-OXM-CTP는 증가된 글루코오스 수준을 야기한 반면, CTP-CTP-OXM은 글루코오스 내성에 대해 영향이 적었다. OXM-CTPX4는 글루코오스에 앞서 120분에 투여될 때도 글루코오스 내성 활성을 유도한 반면 OXM 펩타이드 활성은 더 이상 분명하지 않았다. 이 결과는 이 변이체의 개선된 약동학 프로파일과 일치한다.

실시예 5: CTP -변형된 OXM 은 음식 섭취를 감소시킨다

OXM 및 OXM-CTP 변이체의 약리적 활성을 단일 SC 약물 투여 후 C57BL/6 마우스에서 추가로 평가하였다. 이 연구에서, 음식 섭취에 대한 급성 효과를 측정하였다. 수컷 C57BL/6 마우스(그룹 당 n=4)에게 OXM 펩타이드(2000nmol/kg) 또는 OXM-CTP(1700nmol/kg) 변이체: OXM-CTPX3, OXM-CTPX4 또는 OXM-CTPX5의 단일 SC 투여를 투여하였다. 음식 섭취를 6일간 매일 측정하였다. OXM 및 모든 측정된 OXM-CTP 변이체는 주사 후 1시간 및 2시간에 측정된 바와 같이, 음식 섭취에서 유의한 감소를 야기하였고, 도 6에 나타난 바와 같이, OXM 및 OXM-CTP 변이체-처리된 마우스의 경우 34-51%(비히클 대비) 음식 섭취의 감소를 야기하였다. OXM 펩타이드 효과는 주사 후 4시간에 폐지된 반면, 모든 다른 OXM-CTP 변이체는 적어도 24시간 동안 효과적이었다. 가장 유의미한 효과는 변이체 OXM-CTPX5에 대해 확인되었고, 이는 비히클과 비교하여 5일간 음식 섭취를 감소시켰다. 실험 동안 다양한 시간 간격에 대한 비히클 대비 음식 섭취의 백분율이 도 6B에 제시되어 있다. 원상태 OXM의 효과는 1시간 후 사라졌고, OXM-4/5 CTP는 2시간 동안 억제를 유지하였고 OXM-5CTP는 약 80 시간(3일) 동안 유지하였다. 흥미롭게도, 급성 음식 섭취 연구에서의 변이체 OXM-CTPx5의 우수성은 그것의 개선된 PK 프로파일과 상관관계가 있다. 놀랍게도, 변이체 OXM-CTPx4는 10시간의 T₁ _/2을 갖는 개선된 PK 프로파일을 입증하였음에도 불구하고, 그것의 효과는 OXM-CTPx5 또는 OXM-CTPx3만큼 길게 지속되지 않았다.

첨부된 도면들을 참조하여 본 발명의 바람직한 구현예를 기재하였음에도 불구하고, 본 발명은 정확한 구현예들에 제한되지 않으며, 첨부된 청구항들에서 정의된 본 발명의 범위 또는 정신으로부터 벗어나지 않으면서 당해분야의 숙련가에 의해 다양한 변화 및 변형이 이뤄질 수 있는 것으로 이해되어야 한다.

SEQUENCE LISTING <110> Prolor Biotech Inc. Fima, Udi Eyal Hershkovitz, Oren <120> LONG-ACTING OXYNTOMODULIN VARIANTS AND METHODS OF PRODUCING SAME <130> P-75938-PC <150> 61/635,483 <151> 2012-04-19 <160> 30 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Asp Pro Arg Phe Gln Asp Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 15 Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu 20 25 30 <210> 2 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg 1 5 10 15 Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 20 25 <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro 1 5 10 <210> 4 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer 25 <400> 4 ctctagagga catggccac 19 <210> 5 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer 85R <400> 5 ctggctgtgc tggggcagaa tgggtgt 27 <210> 6 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer 86 <400> 6 ccccagcaca gccaggg 17 <210> 7 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer 74R <400> 7 gcggccgcat ccagacct 18 <210> 8 <211> 391 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-OXM-CTP <400> 8 tctagaggac atggccaccg gcagcaggac cagcctgctg ctggccttcg gcctgctgtg 60 cctgccatgg ctgcaggagg gcagcgccag ctcttcttct aaggctccac ccccatctct 120 gcccagcccc agcagactgc cgggccccag cgacacaccc attctgcccc agcacagcca 180 gggcaccttc accagcgact acagcaagta cctggacagc agaagggccc aggacttcgt 240 ccagtggctg atgaacacca agaggaacag gaacaacatc gcttcctcta gctccaaggc 300 ccctccaccc tctctgccta gcccctctcg gctgcctggc ccatccgaca caccaatcct 360 gccacagtga tgaaggtctg gatgcggccg c 391 <210> 9 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-OXM-CTP <400> 9 Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Ser Ser Ser Ser Lys Ala 20 25 30 Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp 35 40 45 Thr Pro Ile Leu Pro Gln His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr 50 55 60 Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu 65 70 75 80 Met Asn Thr Lys Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala Ser Ser Ser Ser Lys 85 90 95 Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser 100 105 110 Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 115 <210> 10 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer 25 <400> 10 ctctagagga catggccac 19 <210> 11 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer 87R <400> 11 gctggagcta gcgatgttgt tcctgttcc 29 <210> 12 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer 88 <400> 12 acatcgctag ctccagcagc aaggcc 26 <210> 13 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer 74R <400> 13 gcggccgcat ccagacct 18 <210> 14 <211> 475 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-OXM-CTP-CTP <400> 14 tctagaggac atggccaccg gcagcaggac cagcctgctg ctggccttcg gcctgctgtg 60 cctgccatgg ctgcaggagg gcagcgccag ctcttcttct aaggctccac ccccatctct 120 gcccagcccc agcagactgc cgggccccag cgacacaccc attctgcccc agcacagcca 180 gggcaccttc accagcgact acagcaagta cctggacagc agaagggccc aggacttcgt 240 ccagtggctg atgaacacca agaggaacag gaacaacatc gctagctcca gcagcaaggc 300 ccctcccccg agcctgccct ccccaagcag gctgcctggg ccctccgaca caccaatcct 360 gccacagagc agctcctcta aggcccctcc tccatccctg ccatccccct cccggctgcc 420 tggcccctct gacaccccta tcctgcctca gtgatgaagg tctggatgcg gccgc 475 <210> 15 <211> 147 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-OXM-CTP-CTP <400> 15 Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Ser Ser Ser Ser Lys Ala 20 25 30 Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp 35 40 45 Thr Pro Ile Leu Pro Gln His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr 50 55 60 Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu 65 70 75 80 Met Asn Thr Lys Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala Ser Ser Ser Ser Lys 85 90 95 Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser 100 105 110 Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro 115 120 125 Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile 130 135 140 Leu Pro Gln 145 <210> 16 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer 75 <400> 16 ctcccagttc aattacagct 20 <210> 17 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer 89R <400> 17 gctgtgagcg ctgccctcct gcag 24 <210> 18 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer 90 <400> 18 gcgctcacag ccagggcacc ttc 23 <210> 19 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer 74R <400> 19 gcggccgcat ccagacct 18 <210> 20 <211> 391 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> OXM-CTP-CTP <400> 20 tctagaggac atggccacag ggagcaggac cagcctgctg ctggctttcg gcctgctgtg 60 tctgccatgg ctgcaggagg gcagcgctca cagccagggc accttcacca gcgactacag 120 caagtacctg gacagcagaa gggcccagga cttcgtccag tggctgatga acaccaagag 180 gaacaggaac aacatcgcta gctccagcag caaggcccct cccccgagcc tgccctcccc 240 aagcaggctg cctgggccct ccgacacacc aatcctgcca cagagcagct cctctaaggc 300 ccctcctcca tccctgccat ccccctcccg gctgcctggc ccctctgaca cccctatcct 360 gcctcagtga tgaaggtctg gatgcggccg c 391 <210> 21 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> OXM-CTP-CTP <400> 21 Leu Glu Asp Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Gly Leu Leu Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala His Ser Gln 20 25 30 Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala 35 40 45 Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn Arg Asn Asn 50 55 60 Ile Ala Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro 65 70 75 80 Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser 85 90 95 Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro 100 105 110 Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 115 120 <210> 22 <211> 481 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTPx2-OXM <400> 22 ctatagggcg aattgaagga aggccgtcaa ggccgcatga gctctctaga ggacatggcc 60 accggcagca ggaccagcct gctgctggcc ttcggcctgc tgtgcctgcc atggctgcag 120 gagggcagcg ccagctccag cagcaaggcc cctcccccga gcctgccctc cccaagcagg 180 ctgcctgggc cctccgacac accaatcctg ccacagagca gctcctctaa ggcccctcct 240 ccatccctgc catccccctc ccggctgcct ggcccctctg acacccctat cctgcctcag 300 cacagccagg gcaccttcac cagcgactac agcaagtacc tggacagcag aagggcccag 360 gacttcgtcc agtggctgat gaacaccaag aggaacagga acaacatcgc ttgatgaagg 420 tctggatgcg gccgcggtac cctgggcctc atgggccttc ctttcactgc ccgctttcca 480 g 481 <210> 23 <211> 140 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTPx2-OXM <400> 23 Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Ser Ser Ser Ser Lys Ala 20 25 30 Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp 35 40 45 Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser 50 55 60 Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu 65 70 75 80 Pro Gln His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu 85 90 95 Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys 100 105 110 Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala Arg Ser Gly Cys Gly Arg Gly Thr Leu 115 120 125 Gly Leu Met Gly Leu Pro Phe Thr Ala Arg Phe Pro 130 135 140 <210> 24 <211> 481 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> OXM-CTPx3 <400> 24 tctagactcg agcgatcgcc atggccaccg gctctaggac ctccctgctg ctggccttcg 60 gcctgctgtg cctgccctgg ctgcaggaag gcagcgctca ctcccagggc accttcacct 120 ccgactactc caagtacctg gactctcgga gagcccagga cttcgtgcag tggctgatga 180 acaccaagcg gaaccggaac aatatcgcct cctcaagctc caaggcacct ccaccttccc 240 tgcctagccc ttccagactc cctgggccca gtgacacccc tatcctgcct cagtccagct 300 ccagcaaggc cccaccccct agcctgcctt ctccttctcg gctgcctggc cccagcgata 360 ctccaattct gccccagtcc tccagcagta aggctccccc tccatctctg ccatccccca 420 gcagactgcc aggcccttct gatacaccca tcctcccaca gtgatgagga tccgcggccg 480 c 481 <210> 25 <211> 147 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> OXM-CTPx3 <400> 25 Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala His Ser Gln Gly Thr Phe 20 25 30 Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp Phe 35 40 45 Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala Ser 50 55 60 Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu 65 70 75 80 Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys 85 90 95 Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser 100 105 110 Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro 115 120 125 Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile 130 135 140 Leu Pro Gln 145 <210> 26 <211> 565 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> OXM-CTPx4 <400> 26 tctagactcg agcgatcgcc atggctaccg gctccagaac ctctctgctg ctggccttcg 60 gcctgctgtg tctgccttgg ctgcaagagg gcagcgctca ttcccagggc accttcacct 120 ccgactactc caagtacctg gactctcgca gagcccagga cttcgtgcag tggctgatga 180 acaccaagcg gaaccggaac aatatcgcct cctccagctc caaggcccct cctccatctc 240 tgccatcccc cagtagactg cctgggccct ctgacacccc tatcctgcct cagtccagct 300 cctctaaggc cccaccacct tccctgccta gcccttcaag actgccaggc cctagcgata 360 caccaattct gccccagtcc tccagcagca aggctccccc acctagcctg ccttctccat 420 caaggctgcc tggcccatcc gataccccaa ttttgcctca gagcagctct agcaaggcac 480 ctccccccag tctgccctct ccaagcagac tccctggccc ttcagacact cccattctgc 540 cacagtgatg aggatccgcg gccgc 565 <210> 27 <211> 175 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> OXM-CTPx4 <400> 27 Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala His Ser Gln Gly Thr Phe 20 25 30 Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp Phe 35 40 45 Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala Ser 50 55 60 Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu 65 70 75 80 Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys 85 90 95 Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser 100 105 110 Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro 115 120 125 Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile 130 135 140 Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser 145 150 155 160 Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 165 170 175 <210> 28 <211> 650 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> OXM-CTPx5 <400> 28 ctctagactc gagcgatcgc catggctacc ggctccagaa cctctctgct gctggccttc 60 ggcctgctgt gtctgccttg gctgcaagag ggcagcgctc attcccaggg caccttcacc 120 tccgactact ccaagtacct ggactctcgc agagcacagg acttcgtgca gtggctgatg 180 aacaccaagc ggaaccggaa caatatcgcc tcctccagct ccaaggcccc tcctccatct 240 ctgccatccc ccagtagact gcctgggccc tctgacaccc ctatcctgcc tcagtccagc 300 tcctctaagg ctccaccacc ttccctgcct agcccttcaa gactgccagg ccctagcgat 360 acaccaattc tgccccagtc ctccagcagc aaggctcccc cacctagcct gccttctcca 420 tcaaggctgc ctggcccatc cgatacccca attttgcctc agagcagctc tagcaaggca 480 cctcccccca gtctgccctc tccaagcaga ctccctggcc cttcagacac tccaatcctc 540 ccacagtcct ctagctctaa agctccacct cccagcctgc ccagccctag tagactcccc 600 ggaccttctg atacccccat cttgccccag tgatgaggat ccgcggccgc 650 <210> 29 <211> 203 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> OXM-CTPx5 <400> 29 Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala His Ser Gln Gly Thr Phe 20 25 30 Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp Phe 35 40 45 Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala Ser 50 55 60 Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu 65 70 75 80 Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys 85 90 95 Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser 100 105 110 Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro 115 120 125 Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile 130 135 140 Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser 145 150 155 160 Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser 165 170 175 Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu 180 185 190 Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 195 200 <210> 30 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35

Claims

이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제1항에 있어서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린인, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP의 아미노산 서열은 서열번호: 1 및 서열번호: 2로 이루어진 군으로부터 선택되는, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 글리코실화된, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제1항 내지 제4항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 끝이 잘려 있는, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 링커를 통해 상기 작용제 폴리펩타이드에 부착된, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제6항에 있어서, 상기 링커는 펩타이드 결합인, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제1항 내지 제7항 중 어느 하나의 항에 있어서, 5 개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드는 상기 작용제의 카복시 말단에 부착되는, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제1항 내지 제7항 중 어느 하나의 항에 있어서, 4 개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드는 상기 작용제의 카복시 말단에 부착되는, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제1항 내지 제7항 중 어느 하나의 항에 있어서, 3 개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드가 상기 작용제에 부착되며, 하나의 CTP는 상기 작용제의 아미노 말단 상에서 및 2개의 CTP는 상기 작용제의 카복시 말단 상에서 상기 작용제에 부착되는, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제1항 내지 제7항 중 어느 하나의 항에 있어서, 3 개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드는 상기 작용제의 카복시 말단에 부착되는, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제1항 내지 제7항 중 어느 하나의 항에 있어서, 2 개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드가 상기 작용제에 부착되며, 하나의 CTP는 상기 작용제의 카복시 말단 상에서 및 하나의 CTP는 상기 작용제의 아미노 말단 상에서 상기 작용제에 부착되는, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제1항 내지 제7항 중 어느 하나의 항에 있어서, 2 개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드는 상기 작용제의 카복시 말단 상에서 상기 작용제에 부착되는, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제1항 내지 제7항 중 어느 하나의 항에 있어서, 2 개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드는 상기 작용제의 아미노 말단 상에서 상기 작용제에 부착되는, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제1항 내지 제14항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 CTP-변형된 폴리펩타이드의 아미노산 서열은 서열번호: 9, 15, 21, 23, 25, 27, 또는 29를 포함하는, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제1항 내지 제15항 중 어느 하나의 항의 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 약제학적 조성물.
제1항 내지 제15항 중 어느 하나의 항의 CTP-변형된 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
제17항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드의 서열은 서열번호: 8, 14, 20, 22, 24, 26 또는 28을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
제17항 또는 제18항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
제19항의 발현 벡터를 포함하는 세포.
제19항의 발현 벡터를 포함하는 조성물.
이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 생산하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착시키는 단계를 포함하는 방법.
제22항에 있어서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린인 방법.
제22항 또는 제23항에 있어서, 5 개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드는 상기 작용제의 카복시 말단에 부착되는 방법.
제22항 또는 제23항에 있어서, 4 개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드는 상기 작용제의 카복시 말단에 부착되는 방법.
제22항 또는 제23항에 있어서, 3 개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드는 상기 작용제에 부착되며, 하나의 CTP는 상기 작용제의 아미노 말단 상에서 및 2개의 CTP는 상기 작용제의 카복시 말단 상에서 상기 작용제에 부착되는 방법.
제22항 또는 제23항에 있어서, 3 개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드는 상기 작용제의 카복시 말단에 부착되는 방법.
제22항 또는 제23항에 있어서, 2 개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드가 상기 작용제에 부착되며, 하나의 CTP는 상기 작용제의 카복시 말단 상에서 및 하나의 CTP는 상기 작용제의 아미노 말단 상에서 상기 작용제에 부착되는 방법.
제22항 또는 제23항에 있어서, 2 개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드는 상기 작용제의 카복시 말단 상에서 상기 작용제에 부착되는 방법.
제22항 또는 제23항에 있어서, 2 개의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드는 상기 작용제의 아미노 말단 상에서 상기 작용제에 부착되는 방법.
제22항 내지 제30항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 CTP-변형된 폴리펩타이드의 아미노산 서열은 서열번호: 9, 15, 21, 23, 25, 27, 또는 29를 포함하는 방법.
제22항 내지 제31항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP의 아미노산 서열은 서열번호: 1 및 서열번호: 2로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제22항 내지 제32항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 글리코실화된 방법.
제22항 내지 제33항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 끝이 잘려 있는 방법.
제22항 내지 제34항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 링커를 통해 상기 작용제에 부착된 방법.
제35항에 있어서, 상기 링커는 펩타이드 결합인 방법.
적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 아미노 또는 카복시 말단에 부착시켜 상기 작용제의 생물학적 반감기를 개선하는 단계를 포함하는, 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 생물학적 반감기를 연장하는 방법.
제37항에 있어서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린인, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제37항 또는 제38항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP의 아미노산 서열은 서열번호: 1 및 서열번호: 2로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제37항 내지 제39항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 글리코실화된 방법.
제37항 내지 제40항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 끝이 잘려 있는 방법.
제37항 내지 제41항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 링커를 통해 상기 작용제에 부착된 방법.
제42항에 있어서, 상기 링커는 펩타이드 결합인 방법.
제37항 내지 제43항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 CTP-변형된 폴리펩타이드의 아미노산 서열은 서열번호: 9, 15, 21, 23, 25, 27, 또는 29를 포함하는 방법.
적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 카복시 말단에 부착시켜 상기 작용제의 곡선 하 면적(AUC)을 개선하는 단계를 포함하는, 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 곡선하 면적(AUC)을 개선하는 방법.
제45항에 있어서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린인, CTP-변형된 폴리펩타이드.
제45항 또는 제46항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP의 아미노산 서열은 서열번호: 1 및 서열번호: 2로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제45항 내지 제47항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 글리코실화된 방법.
제45항 내지 제48항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 끝이 잘려 있는 방법.
제45항 내지 제49항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 링커를 통해 상기 작용제에 부착된 방법.
제50항에 있어서, 상기 링커는 펩타이드 결합인 방법.
제45항 내지 제51항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 CTP-변형된 폴리펩타이드의 아미노산 서열은 서열번호: 9, 15, 21, 23, 25, 27, 또는 29를 포함하는 방법.
적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착시켜 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 복용 빈도를 감소시키는 단계를 포함하는, 이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제의 복용 빈도를 감소시키는 방법.
제53항에 있어서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린인 방법.
제53항 또는 제54항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP의 아미노산 서열은 서열번호: 1 및 서열번호: 2로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제53항 내지 제55항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 글리코실화된 방법.
제53항 내지 제56항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 끝이 잘려 있는 방법.
제53항 내지 제57항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 링커를 통해 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제에 부착된 방법.
제58항에 있어서, 상기 링커는 펩타이드 결합인 방법.
제53항 내지 제59항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 CTP-변형된 폴리펩타이드의 아미노산 서열은 서열번호: 9, 15, 21, 23, 25, 27, 또는 29를 포함하는 방법.
이중 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의, 대상체에서 글루코오스 내성을 유도하기 위한 용도.
제61항에 있어서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린인 용도.
제61항 또는 제62항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP의 아미노산 서열은 서열번호: 1 및 서열번호: 2로 이루어진 군으로부터 선택되는 용도.
제61항 내지 제63항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 글리코실화된 용도.
제61항 내지 제64항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 끝이 잘려 있는 용도.
제61항 내지 제65항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 링커를 통해 상기 작용제 폴리펩타이드에 부착된 용도.
제66항에 있어서, 상기 링커는 펩타이드 결합인 용도.
제61항 내지 제67항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 CTP-변형된 폴리펩타이드의 아미노산 서열은 서열번호: 9, 15, 21, 23, 25, 27, 또는 29를 포함하는 용도.
GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의, 대상체에서 원하지 않는 체중 증가를 예방하기 위한 용도.
제69항에 있어서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린인 용도.
제69항 또는 제70항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP의 아미노산 서열은 서열번호: 1 및 서열번호: 2로 이루어진 군으로부터 선택되는 용도.
제69항 내지 제71항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 글리코실화된 용도.
제69항 내지 제72항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 끝이 잘려 있는 용도.
제69항 내지 제73항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 링커를 통해 상기 작용제에 부착된 용도.
제74항에 있어서, 상기 링커는 펩타이드 결합인 용도.
제69항 내지 제75항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 CTP-변형된 폴리펩타이드의 아미노산 서열은 서열번호: 9, 15, 21, 23, 25, 27, 또는 29를 포함하는 용도.
제69항 내지 제76항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 체중 증가로 대상체가 비만이 되는, 용도.
제69항 내지 제77항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 체중 증가가 심리적 상태에 기인하거나, 상기 대상체에 의한 체중 증가에 대한 유전적 소인에 기인하는 용도.
제78항에 있어서, 상기 심리적 상태는 우울증, 불안 또는 외상후 스트레스 장애 (PTSD)인 용도.
GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물의, 대상체에서 음식 섭취를 예방, 감소 또는 억제하기 위한 용도.
제80항에 있어서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린인 용도.
제80항 또는 제81항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP의 아미노산 서열은 서열번호: 1 및 서열번호: 2로 이루어진 군으로부터 선택되는 용도.
제80항 내지 제82항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 글리코실화된 용도.
제80항 내지 제83항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 끝이 잘려 있는 용도.
제80항 내지 제84항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 링커를 통해 상기 작용제에 부착된 용도.
제85항에 있어서, 상기 링커는 펩타이드 결합인 용도.
제80항 내지 제86항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 CTP-변형된 폴리펩타이드의 아미노산 서열은 서열번호: 9, 15, 21, 23, 25, 27, 또는 29를 포함하는 용도.
제80항 내지 제87항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 대상체에 의한 음식 섭취의 예방, 감소 또는 억제는 원하지 않는 체중 증가를 발달시키는 상기 대상체의 가능성을 감소시키는 용도.
제80항 내지 제87항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 대상체에 의한 음식 섭취의 예방, 감소 또는 억제는 비만을 발달시키는 상기 대상체의 가능성을 감소시키는 용도.
GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의, 대상체에서 비만을 치료하기 위한 용도.
제90항에 있어서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린인 용도.
제90항 또는 제91항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP의 아미노산 서열은 서열번호: 1 및 서열번호: 2로 이루어진 군으로부터 선택되는 용도.
제90항 내지 제92항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 글리코실화된 용도.
제90항 내지 제93항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 끝이 잘려 있는 용도.
제90항 내지 제94항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 링커를 통해 상기 작용제에 부착된 용도.
제95항에 있어서, 상기 링커는 펩타이드 결합인 용도.
제90항 내지 제96항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 CTP-변형된 폴리펩타이드의 아미노산 서열은 서열번호: 9, 15, 21, 23, 25, 27, 또는 29를 포함하는 용도.
제90항 내지 제97항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 대상체는 비만에 유전적으로 취약한 용도.
제90항 내지 제98항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 비만 치료의 방법으로 상기 대상체의 체중이 감소되는 용도.
제90항 내지 제99항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 비만 치료의 방법으로 상기 대상체의 체지방이 감소하게 되는 용도.
GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의, 대상체에서 제II형 당뇨병을 치료하기 위한 용도.
제101항에 있어서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린인 용도.
제101항 또는 제102항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP의 아미노산 서열은 서열번호: 1 및 서열번호: 2로 이루어진 군으로부터 선택되는 용도.
제101항 내지 제103항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 글리코실화된 용도.
제101항 내지 제104항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 끝이 잘려 있는 용도.
제101항 내지 제105항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 링커를 통해 상기 작용제에 부착된 용도.
제106항에 있어서, 상기 링커는 펩타이드 결합인 용도.
제101항 내지 제107항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 CTP-변형된 폴리펩타이드의 아미노산 서열은 서열번호: 9, 15, 21, 23, 25, 27, 또는 29를 포함하는 용도.
제101항 내지 제108항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 대상체는 비만에 유전적으로 취약한 용도.
GLP-1/글루카곤 수용체 작용제 및 상기 작용제의 아미노 말단 또는 카복시 말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 성선자극호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드의, 대상체에서 대사성 장애를 치료하기 위한 용도.
제110항에 있어서, 상기 GLP-1/글루카곤 수용체 작용제는 옥신토모둘린인 용도.
제110항 또는 제111항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP의 아미노산 서열은 서열번호: 1 및 서열번호: 2로 이루어진 군으로부터 선택되는 용도.
제110항 내지 제112항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 글리코실화된 용도.
제110항 내지 제113항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 끝이 잘려 있는 용도.
제110항 내지 제114항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 CTP는 링커를 통해 상기 작용제에 부착된 용도.
제115항에 있어서, 상기 링커는 펩타이드 결합인 용도.
제110항 내지 제116항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 CTP-변형된 폴리펩타이드의 아미노산 서열은 서열번호: 9, 15, 21, 23, 25, 27, 또는 29를 포함하는 용도.
제110항 내지 제117항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 대사성 장애는 당뇨병 케톤산증, 진성 당뇨병, 또는 이들의 조합인 용도.
제110항 내지 제118항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 대사성 장애는 상기 대상체에서 인슐린의 부족 및 글루코오스의 과잉이 원인인 용도.