MX2014012625A

MX2014012625A - Variantes de oxintomodulina de accion prolongada y metodos para su produccion.

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Publication number: MX2014012625A
Application number: MX2014012625A
Authority: MX
Inventors: Udi Eyal Fima; Oren Hershkovitz
Original assignee: Opko Biolog Ltd
Priority date: 2012-04-19
Filing date: 2013-04-17
Publication date: 2015-05-15
Also published as: SG11201406671RA; HK1207564A1; US9522945B2; CA2870650A1; KR20150008137A; US20150072924A1; CN104487082A; EP2838552A4; US20170088598A1; PE20142405A1; WO2013157002A1; CO7200249A2; EP2838552A1; JP2015520128A; CL2014002791A1; AU2013250711A1; EA201491898A1; IL235184A0; BR112014025951A2; MY167814A

Abstract

Esta invención está dirigida a un agonista de receptor de GLP1/Glucagón dual modificado por un péptido carboxi terminal (CTP) de gonadotrofina coriónica (CTP) de gonadotrifina corionica y métodos de producción y uso del mismo. En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido modificado por CTP que comprende un agonista de receptor de GLP-1/glucagón dual y por lo menos un péptido carboxi terminal (CTP) de gonadotrofina coriónica unido al término amino o término carboxi de dicho agonista.

Description

VARIANTES DE OXINTOMODULINA DE ACCIÓN PROLONGADA Y MÉTODOS PARA SU PRODUCCIÓN Campo de la invención Esta invención se refiere a un agonista del receptor de GLP-1/glucagón dual modificado con péptido carboxi terminal (CTP) de gonadotrofina coriónica y los métodos de producción y uso del mismo.

Antecedentes de la invención Oxintomodulina (OXM) es un péptido de 37aa secretado por las células intestinales L en el torrente sanguíneo tras la ingesta de alimentos e induce la saciedad en el cerebro. OXM es también un agonista del receptor de GLP-1/glucagón dual. Participa en la regulación de la ingesta de alimentos y demostró que inhibe la ingesta de alimentos y reduce el peso corporal en los seres humanos y roedores. Sin embargo, OXM tiene una vida media relativamente muy corta y repetidas administraciones diarias de dosis suprafisiológicas son necesarias para lograr el efecto farmacológico en los seres humanos. Por lo tanto, hay una necesidad para extender la vida media sérica de OXM para hacerla más susceptible al último para fines profilácticos y terapéuticos en sujetos humanos y animales.

La presente invención hace uso de la teenología basada en péptidos para extender la vida media de suero de proteínas y péptidos, en particular, OXM. Esta tecnología se basa en un péptido natural, el péptido C terminal (CTP) de la cadena beta de la hCG.

Breve descripción de la invención En una modalidad, la presente invención proporciona un polipeptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón dual y por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónico (CTP) unido al extremo amino o carboxi terminal de dicho agonista.

En otra modalidad, la presente invención proporciona un método de producir un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón dual y por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónico (CTP) unido al extremo amino o carboxi de dicho agonista, el método que comprende el paso de unir al menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónico unido al extremo amino o carboxi de dicho agonista.

En una modalidad, la presente invención proporciona un método para extender la vida media biológica de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón dual, que comprende el paso de unir al menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónico a un extremo amino o carboxi de dicho agonista, mejorando así la vida media biológica de dicho agonista.

En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para mejorar el área bajo la curva (AUC) de un agonista de receptor de GLP-1/glucagón dual, que comprende el paso por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica a un extremo carboxi de dicho agonista, mejorando así el área bajo la curva (AUC) de dicho agonista.

En una modalidad, la presente invención proporciona un metodo para reducir la frecuencia de dosificación de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón, que comprende el paso de unir por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica a un aminoácido o un extremo amino o carboxi de dicho agonista, reduciendo así la frecuencia de dosificación de dicho agonista.

En otra modalidad, la presente invención proporciona un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón dual y por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o carboxi de dicho agonista para la inducción de tolerancia a la glucosa en un sujeto.

En una modalidad, la presente invención proporciona un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o carboxi de dicho agonista para prevenir la ganancia de peso indeseada por un sujeto. En otra modalidad, el riesgo de ganar peso es debido a una condición psicológica, o debido a un predisposposición genética para que el sujeto suba de peso. En otra modalidad, la condición psicológica es depresión, ansiedad o trastorno de estrés postraumático (PTSD).

En otra modalidad, la presente invención proporciona un uso de una composición que comprende polipéptido modificado con CTP compuesto por un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica (CTP) unida ai extremo amino o carboxi de dicho agonista para prevenir, reducir o suprimir el consumo de alimentos en un sujeto.

En una modalidad, la presente invención proporciona un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o carboxi de dicho agonista para el tratamiento de la obesidad en un sujeto.

En otra modalidad, la presente invención proporciona un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica unida al extremo amino o carboxi de dicho agonista para tratar la diabetes tipo II en un sujeto.

En una modalidad, la presente invención proporciona un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o carboxi de dicho agonista para el tratamiento de un trastorno metabólico en un sujeto.

Otras características y ventajas de la presente invención serán aparentes de los siguientes ejemplos de la descripción detallada y figuras. Debe ser entendido, sin embargo, que la descripción detallada y los ejemplos específicos mientras que indican modalidades preferidas de la invención se dan a modo de ejemplo solamente, puesto que varios cambios y modificaciones en el espíritu y el alcance de la invención serán aparentes para aquellos especializados en la téenica de esta descripción detallada.

Breve descripción de los dibujos Los dibujos siguientes forman parte de la presente especificación y se incluyen además para demostrar ciertos aspectos de la presente descripción, las invenciones de los cuales se pueden entender mejor por referencia a uno o más de estos dibujos en combinación con la descripción detallada de modalidades específicas presentadas en este documento.

Las figuras 1A-B muestran el análisis PAGE y el análisis Western Blot (WB) de variantes de OXM-CTP purificadas: OXM-CTP-CTP-CTP, OXM-CTP 4X, OXM-CTP 5X. Figura 1A. Tinción Coomassie de las muestras OXM y variantes de OXM-CTP (10 y 2 mg proteína/carril). Figura 1 B. Análisis de WB de variantes OXM-CTP usando anti OXM.

La figura 2 muestra el análisis PAGE de muestras del proceso de purificación de las variantes de OXM-CTP: CTP-OXM-CTP, CTP-OXM-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP y CTP-CTP-OXM.

Las figuras 3A-C muestran los perfiles PK de tres experimentos secuenciales de péptido OXM y variantes de OXM-CTP en ratas SD-1.

Las figuras 4A-D muestran los resultados de la prueba de tolerancia a la glucosa de péptido de OXM y variantes de OXM-CTP co o se mide en ratones C57BL/6.

Las figuras 5A-B muestran los resultados de la ingesta alimentaria aguda de péptido OXM y variantes de OXM-CTP como se mide en ratones C57BL/6. Figura 5A. El porcentaje de ingesta de alimentos acumulada en ratones que recibieron tratamiento en comparación con el vehículo. Figura 5B. Porcentaje de ingesta de alimentos para diversos intervalos de tiempo sobre el estudio.

Descripción detallada de la invención En una modalidad, en el presente documento se proporciona un polipeptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón dual y por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o carboxi de dicho agonista.

En otra modalidad, el agonista es una proteína, un polipéptido, o un péptido. En otra modalidad, el péptido es una oxintomodulina.

En otra modalidad, el polipéptido modificado con CTP consta de un péptido que consta de menos de 50 aminoácidos y por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica, unido a un extremo amino o carboxi del péptido. En otra modalidad, el péptido es oxintomodulina (OXM).

El péptido de oxintomodulina es útil para el tratamiento de enfermedades metabólicas como la diabetes y la obesidad. Sin embargo, debido a la corta vida media de los péptidos y su baja estabilidad in vivo, repetidas administraciones diarias de dosis suprafisiológicas se requieren para lograr efectos farmacológicos en los seres humanos. Como se demuestra abajo (véase ejemplos), todas las variantes de OXM-CTP de la invención demostraron un perfil farmacocinético superior en ratas en comparación con OXM nativo, con un incremento sustancial en la exposición y vida media alargada. Sorprendentemente, la variante de OXM-CTP-CTP demostró parámetros de PK superiores en comparación con la variante de la CTP-OXM-CTP-CTP que se fusiona a 3 copias de CTP, una en el extremo N y dos en tándem en el extremo C.

La fusión de 2 y 3 CTP para el extremo C de OXM resultó en aumento múltiplo similar en comparación con la vida media del péptido nativo (21.6 y 21 respectivamente), después de la administración SC (ver ejemplo 3 aquí). Por lo tanto, se esperaba que la fusión de cuatro y cinco CTP para el extremo C de OXM, no alargara significativamente la vida media anterior 20 veces. Sin embargo, se demostró un aumento asombrosamente marcado en la vida media de OXM (es decir, 50 veces) para las variantes de OXM-4CTP y la variante de OXM-5CTP con un aumento de 30 veces en la exposición según lo reflejado por el área bajo el parámetro de la curva (AUC) (ver ejemplo 3 aquí).

Por lo tanto, en una modalidad, en el presente documento se proporciona un polipéptido modificado con CTP que comprende un péptido de oxintomodulina (OXM) y al menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o carboxi del péptido oxintomodulina.

En una modalidad, una OXM modificada con CTP como se describe en este documento comprende una OXM de longitud total o un fragmento activo de la misma unida a través de un enlace peptídico en su extremo amino o carboxi a por lo menos una unidad de CTP sin CTP en su extremo amino. En otra modalidad, una OXM modificada con CTP como se describe en este documento comprende una OXM de longitud total o un fragmento activo de la misma unida a través de un enlace peptídico en su extremo carboxi a por lo menos una unidad de CTP sin CTP en su extremo amino. En otra modalidad, una OXM modificada con CTP como se describe en este documento comprende una OXM de longitud total o un fragmento activo de la misma unida a través de un enlace peptídico en su extremo amino a por lo menos una unidad de CTP sin CTP en su extremo carboxi. En otra modalidad, la presente invención proporciona una molécula de ácido nucleico de codificación una OXM diseñada descrita en este documento, que en una modalidad, comprende al menos una CTP unida a su extremo carboxi o su extremo amino.

En otra modalidad, la secuencia de CTP comprende: DPRFQDSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPIL (SEQ ID NO: 1 ). En otra modalidad, la secuencia de CTP comprende: SSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (SEQ ID NO: 2). En otra modalidad, la secuencia de CTP comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de las secuencias establecidas en SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

En una modalidad, el péptido de carboxi terminal (CTP) de la presente invención comprende la secuencia de aminoácidos del aminoácido 112 a la posición 145 de gonadotrofina coriónica humana. En otra modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende la secuencia de aminoácidos del aminoácido 118 a la posición 145 de gonadotrofina coriónica humana, como se expone en SEQ ID NO: 2. En otra modalidad, la secuencia de CTP también comienza desde cualquier posición entre 112-1 18 y termina en la posición 145 de gonadotrofina coriónica humana. En algunas modalidades, el péptido de la secuencia de CTP es 28, 29, 30, 31 , 32, 33 ó 34 aminoácidos de longitud y comienza en la posición 1 12, 113, 114, 1 15, 116, 117 o 118 de la secuencia de aminoácidos de CTP.

Así, en una modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende la secuencia de aminoácidos del aminoácido 112 a la posición 145 de gonadotrofina coriónica humana, como se establece en SEQ ID NO: 2. En otra modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende la secuencia del aminoácido de aminoácidos del aminoácido 1 13 a la posición 145 de gonadotrofina coriónica humana, como se establece en SEQ ID NO: 2. En otra modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende la secuencia de aminoácidos del aminoácido 114 a la posición 145 de gonadotrofina coriónica humana, como se establece en SEQ ID NO: 2. En otra modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende la secuencia de aminoácidos del aminoácido 115 a la posición 145 de gonadotrofina coriónica humana, como se establece en SEQ ID NO: 2. En otra modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende la secuencia de aminoácidos del aminoácido 116 a la posición 145 de gonadotrofina coriónica humana, como se establece en SEQ ID NO: 2. En otra modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende la secuencia de aminoácidos del aminoácido 1 17 a la posición 145 de gonadotrofina coriónica humana, como se establece en SEQ ID NO: 2.

En otra modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende la secuencia de aminoácidos del aminoácido 112 en la posición 145 de gonadotrofina coriónica humana, como se establece en SEQ ID NO: 1. En otra modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende la secuencia de aminoácidos del aminoácido 113 en la posición 145 de gonadotrofina coriónica humana, como se establece en SEQ ID NO: 1. En otra modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende la secuencia de aminoácidos del aminoácido 1 14 en la posición 145 de gonadotrofina coriónica humana, como se establece en SEQ ID NO: 1. En otra modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende la secuencia de aminoácidos del aminoácido 115 en la posición 145 de gonadotrofina coriónica humana, como se establece en SEQ ID NO: 1. En otra modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende la secuencia de aminoácidos del aminoácido 1 16 en la posición 145 de gonadotrofina coriónica humana, como se establece en SEQ ID NO: 1. En otra modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende la secuencia de aminoácidos del aminoácido 117 en la posición 145 de gonadotrofina coriónica humana, como se establece en SEQ ID NO: 1. En otra modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende la secuencia de aminoácidos del aminoácido 1 18 en la posición 145 de gonadotrofina coriónica humana, como se establece en SEQ ID NO: 1.

En una modalidad, el CTP truncado se compone de SSSSKAPPPSLP (SEQ ID NO: 3). En otra modalidad, el CTP truncado comprende los primeros 10 aminoácidos de SEQ ID NO: 3. En otra modalidad, el CTP truncado comprende los primeros 1 1 aminoácidos de SEQ ID NO: 3.

En una modalidad, el CTP truncado comprende los 14 primeros aminoácidos de SEQ ID NO: 2. En una modalidad, el CTP truncado comprende los primeros 13 aminoácidos de SEQ ID NO: 2. En una modalidad, el CTP truncado comprende los 12 primeros aminoácidos de SEQ ID NO: 2. En una modalidad, el CTP truncado comprende los primeros 1 1 aminoácidos de SEQ ID NO: 2. En una modalidad, el CTP truncado comprende los primeros 10 aminoácidos de SEQ ID NO: 2. En una modalidad, el CTP truncado comprende los primeros 9 aminoácidos de SEQ ID NO: 2. En una modalidad, el CTP truncado comprende los primeros 8 aminoácidos de SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3. En una modalidad, el CTP truncado comprende los 7 primeros aminoácidos de SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3. En una modalidad, el CTP truncado comprende los 6 primeros aminoácidos de SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3. En una modalidad, el CTP truncado comprende los 5 primeros aminoácidos de SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3.

En otra modalidad, el péptido CTP es una variante de CTP de gonadotrofina coriónica que difiere del CTP nativo por 1 -5 sustituciones de aminoácido conservador como se describe en Patente estadounidense No. 5,712, 122, que se incorporan aquí por referencia en su totalidad. En otra modalidad, el péptido de CTP es una variante de CTP de gonadotrofina coriónica que difiere del CTP nativo por 1 substitución del aminoácido conservador. En otra modalidad, el péptido CTP es una variante de CTP de gonadotrofina coriónica que difiere del CTP nativo por 2 sustituciones de aminoácidos conservador. En otra modalidad, el peptido CTP es una variante de CTP de gonadotrofina coriónica que difiere del CTP nativo por 3 sustituciones de aminoácido conservador. En otra modalidad, el péptido CTP es una variante de CTP de gonadotrofina coriónica que difiere del CTP nativo por 4 sustituciones de aminoácido conservador. En otra modalidad, el péptido CTP es una variante de CTP de gonadotrofina coriónica que difiere del CTP nativo por 5 sustituciones de aminoácido conservador.

En otra modalidad, la secuencia de aminoácido del péptido CTP de la presente invención es al menos 70% homologa a la secuencia de aminoácidos CTP nativo o un péptido del mismo. En otra modalidad, la secuencia de aminoácidos del péptido CTP de la presente invención es por lo menos 80% homologa a la secuencia de aminoácidos CTP nativo o un péptido del mismo. En otra modalidad, la secuencia de aminoácidos del péptido CTP de la presente invención es por lo menos el 85% homologa a la secuencia de aminoácidos CTP nativo o un péptido del mismo. En otra modalidad, la secuencia de aminoácidos del péptido CTP de la presente invención es por lo menos el 90% homologa a la secuencia de aminoácidos CTP nativo o un péptido del mismo. En otra modalidad, la secuencia de aminoácidos del péptido CTP de la presente invención es por lo menos 95% homologa a la secuencia de aminoácidos CTP nativo o un péptido del mismo. En otra modalidad, la secuencia de aminoácidos del péptido CTP de la presente invención es por lo menos 98% homologa a la secuencia de aminoácidos CTP nativo o un péptido del mismo.

En otra modalidad, el polinucleótido que codifica el péptido CTP de la presente invención es por lo menos 70% homólogo a la secuencia del DNA de CTP humano nativo o un péptido del mismo. En otra modalidad, el polinucleótido que codifica el péptido CTP de la presente invención es por lo menos 80% homólogo a la secuencia del DNA de CTP humano nativo o un péptido del mismo. En otra modalidad, el polinucleótido que codifica el péptido CTP de la presente invención es por lo menos 85% homólogo a la secuencia del DNA de CTP humano nativo o un péptido del mismo. En otra modalidad, el polinucleótido que codifica el péptido CTP de la presente invención es por lo menos 90% homólogo a la secuencia del DNA de CTP nativo o un péptido del mismo. En otra modalidad, el polinucleótido que codifica el péptido CTP de la presente invención es por lo menos 95% homólogo a la secuencia del DNA de CTP nativo o un péptido del mismo. En otra modalidad, el polinucleótido que codifica el péptido CTP de la presente invención es por lo menos 98% homólogo a la secuencia del DNA de CTP nativo o un péptido del mismo.

En una modalidad, al menos una de las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica se trunca. En otra modalidad, ambas de las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica se truncan. En otra modalidad, dos de las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica se truncan. En otra modalidad, tres de las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica se truncan. En otra modalidad, cuatro de las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica se truncan. En otra modalidad, cinco de las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica se truncan. En otra modalidad, dos o más de las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica se truncan. En otra modalidad, todas las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica se truncan.

En una modalidad, por lo menos un CTP se une al polipéptido agonista vía un enlazador. En otra modalidad, por lo menos un CTP se une al polipéptido agonista vía un enlazador. En otra modalidad, el enlazador es un enlace peptídico.

En una modalidad, al menos una de las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica es glicosilada. En otra modalidad, ambas secuencias de aminoácidos de CTP de gonadrotopina coriónica están glicosiladas. En otra modalidad, dos de las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica están glicosiladas. En otra modalidad, tres de las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica están glicosiladas. En otra modalidad, cuatro de las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica están glicosiladas. En otra modalidad, cinco de las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica son glicosiladas. En otra modalidad, dos o más de las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica son glicosiladas. En otra modalidad, todas las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica están glicosiladas.

En una modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende por lo menos un sitio de glicosilación. En una modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende dos sitios de glicosilación. En una modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende tres sitios de glicosilación. En una modalidad, la secuencia de CTP de la presente invención comprende cuatro sitios de glicosilación. En una modalidad, una o más de las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica es completamente glicosilada. En otra modalidad, una o más de las secuencias de aminoácidos de CTP de gonadotrofina coriónica es parcialmente glicosilada. En una modalidad, parcialmente glicosilada indica que uno de los sitios de glicosilación de CTP es glicosilado. En otra modalidad, dos de los sitios de glicosilación de CTP son glicosilados. En otra modalidad, tres de los sitios de glicosilación de CTP son glicosilados.

En algunas modalidades, la modificación de la secuencia de CTP es ventajosa en permitir el uso de dosificaciones más bajas. En algunas modalidades, la modificación de las secuencias de CTP es ventajosa en permitir menos dosificaciones. En algunas modalidades, la modificación de las secuencias de CTP es ventajosa en permitir un efecto seguro y de acción prolongada.

En algunas modalidades, "polipeptido", "oxintomodulina diseñada" o "proteína" como se usa aquí abarca polipéptidos nativos (ya sea productos de degradación, polipéptidos sintéticamente sintetizados o polipéptidos recombinantes) y peptidomiméticos (típicamente, polipéptidos sintetizados sintéticamente), así como peptoides y semipeptoides que son análogos del polipéptido, que tienen, en algunas modalidades, modificaciones que representan los polipéptidos que comprenden una oxintomodulina incluso más estable mientras que en un sujeto humano o animal o más capaz de penetrar en las células.

En algunas modalidades, las modificaciones incluyen, pero están limitadas a modificación del extremo C, modificación del enlace de polipéptido, incluyendo, sin limitarse a, CH2-NH, CH2-S, CH2-S=0, 0=C-NH, CH2-0, CH2-CH2, S=C-NH, CH=CH o CF=CH, modificaciones de la cadena principal y modificación de residuos. Métodos para la preparación de compuestos peptidomiméticos son bien conocidos en la téenica y se especifican, por ejemplo, en Quantitative Drug Design, C.A. Ramsden Gd., Chapter 17.2, F. Choplin Pergamon Press (1992), que se incorpora por referencia como en su totalidad aquí. Detalles adicionales en este sentido se proporcionan posteriormente aquí.

En algunas modalidades, enlaces de polipéptido (-CO-NH-) dentro del polipéptidos son sustituidos. En algunas modalidades, los enlaces de polipéptido sean sustituidos por enlaces N-metilados (-N(CH3)-CO-). En algunas modalidades, los enlaces de polipéptido son sustituidos por enlaces éster (-C(R)H-C-O-0-C(R)-N-). En algunas modalidades, los enlaces de polipéptido son sustituidos por enlaces cetometileno (-CO-CH2-). En algunas modalidades, los enlaces de polipéptido son sustituidos por enlaces a-aza (-NH-N(R)-CO-), en donde R es cualquier alquilo, por ejemplo, metilo, enlaces carba (-CH2-NH-). En algunas modalidades, los enlaces de polipéptido son sustituidos por enlaces de hidroxietileno (-CH(OH)-CH2-). En algunas modalidades, los enlaces del polipéptido son sustituidos por enlaces tioamida (-CS-NH-).

En algunas modalidades, los enlaces de polipéptido son sustituidos por dobles enlaces olefínicos (-CH=CH-). En algunas modalidades, los enlaces de polipéptido son sustituidos por enlaces amida retro (-NH-CO-). En algunas modalidades, los enlaces de polipéptido son sustituidos por derivados de polipéptido (-N(R)-CH2-CO-), en donde R es la cadena lateral "normal", presentada naturalmente en el átomo de carbono. En algunas modalidades, estas modificaciones se producen en cualquiera de los enlaces a lo largo de la cadena polipeptídica y en una modalidad en varios (2-3 enlaces) al mismo tiempo.

En una modalidad, aminoácidos aromáticos naturales del polipéptido tal como Trp, Tyr y Phe, son sustituidos por ácido sintético no natural tal como fenilglicina, TIC, naftilelanina (Nol), derivados metilados del anillo de Phe, derivados halogenados de Phe u o-metil-Tyr. En algunas modalidades, los polipéptidos de la presente invención incluyen uno o más aminoácidos modificados o uno o más monómeros de no amino ácidos (por ejemplo, ácido graso, carbohidratos complejos etc.).

En una modalidad, "aminoácido" o "secuencia de aminoácidos" se entiende que incluyen los 20 aminoácidos de origen natural; estos aminoácidos frecuentemente modificados post-traduccionalmente en vivo, incluyendo, por ejemplo, hidroxiprolina, fosfoserina y fosfotreonina; y otros aminoácidos inusuales incluyendo, pero sin limitarse a, ácido 2-aminoadípico, hidroxilisina, isodesmosina, no valina, no leucina y ornitina. En una modalidad, "aminoácido" incluye tanto D- como L-aminoácidos.

En una modalidad, los polipéptidos de la presente invención se utilizan en terapéuticos que requieren los polipéptidos que comprenden una oxintomodulina para estar en forma soluble. En algunas modalidades, los polipéptidos de la presente invención incluyen uno o más aminoácidos polares naturales o no naturales, incluyendo pero son limitarse a serina y treonina, que son capaces de aumentar la solubilidad del polipéptido debido a su cadena lateral que contiene hidroxilo.

En otra modalidad, los péptidos de oxintomodulina diseñada de la presente invención se sintetizan bioquímicamente tal como usando téenicas estándar de fase sólida. En algunas modalidades, estos métodos bioquímicos incluyen síntesis en fase sólida exclusiva, síntesis de fase sólida parcial, condensación de fragmento, o síntesis de la solución clásica.

En una modalidad, las técnicas de proteína recombinante se utilizan para generar los péptidos de oxintomodulina diseñada de la presente invención. En algunas modalidades, técnicas de la proteína recombinante se utilizan para la generación de polipéptidos relativamente largos (por ejemplo, más largos que 18-25 aminoácidos). En algunas modalidades, las técnicas de la proteína recombinante se utilizan para la generación de grandes cantidades de péptidos de oxintomodulina diseñada de la presente invención. En algunas modalidades, técnicas recombinantes se describen por Bitter et al., (1987) Methods in Enzymol. 153:516-544, Studier et al. (1990) Methods in Enzymol. 185:60-89, Brisson et al. (1984) Nature 310:511-514, Takamatsu et al. (1987) EMBO J. 6:307-311 , Coruzzi et al. (1984) EMBO J. 3: 1671 -1680 and Brogli et al. , (1984) Science 224:838-843, Gurlcy et al. (1986) Mol. Ce 11. Biol. 6:559-565 y Weissbach & Weissbach, 1988, Methods for Plant Molecular Blology, Academic Press, NY, Section VIII, pp 421 -463, que se incorporan aquí por referencia en su totalidad.

En otra modalidad, el polipéptido modificado con CTP comprende un péptido que consta de menos de 50 aminoácidos y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica, unido a un extremo amino o carboxi del péptido. En una modalidad, el polipéptido modificado con CTP proporcionado aquí comprende un péptido que consta de menos de 40 aminoácidos y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica, unido a un extremo amino o carboxi del péptido. En otra modalidad, el polipéptido modificado con CTP proporcionado aquí comprende un péptido que comprende menos de 30, 20 o 10 aminoácidos. En una modalidad, el péptido que comprende menos de 50 aminoácidos es un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón. En otra modalidad, el péptido que comprende menos de 50 aminoácidos es OXM.

En otra modalidad, OXM comprende la siguiente secuencia de aminoácidos (AA): HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA (SEQ ID NO: 30). En otra modalidad, OXM consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 30. En otra modalidad, OXM comprende o consiste de la secuencia de aminoácidos representada en CAS No. 62340-29-8.

En otra modalidad, OXM es OXM humano o cualquier OXM mamífero. En otra modalidad, OXM se conoce tambien como glucagón-37 o enteroglucagón bioactivo. En otra modalidad, OXM es un agonista dual del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, el término OXM incluye un fragmento de OXM biológicamente activo. En otra modalidad, OXM biológicamente activo se extiende desde el aminoácido 30 al aminoácido 37 de SEQ ID NO: 30. En otra modalidad, OXM biológicamente activo se extiende desde el aminoácido 19 al aminoácido 37 de SEQ ID NO: 30. En otra modalidad, OXM de la invención corresponde a un octapéptido del cual se eliminan los dos aminoácidos del extremo C. En otra modalidad, OXM de la invención corresponde a cualquier fragmento de SEQ ID NO: 30 que conserva la actividad OXM como se describe en este documento.

En una modalidad, dos péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónica se unen a oxintomodulina, un CTP en el extremo carboxi y un CTP en el extremo amino del péptido oxintomodulina. En otra modalidad, dos péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónica se unen a una oxintomodulina en el extremo carboxi del péptido oxintomodulina. En otra modalidad, dos péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónica se unen a oxintomodulina, en el extremo amino del péptido oxintomodulina. En otra modalidad, tres péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónica se unen a oxintomodulina, un CTP en el extremo amino y dos CTPs en el extremo carboxi del péptido oxintomodulina. En otra modalidad, tres péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónica se unen al extremo carboxi del péptido oxintomodulina. En otra modalidad, cuatro péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónica se unen al extremo carboxi del péptido oxintomodulina. En otra modalidad, cinco péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónica se unen al extremo carboxi del péptido oxintomodulina. En otra modalidad, 1 -10 CTP se unen a los extremos amino o carboxi de oxintomodulina. En otra modalidad, 1-10 CTPs se unen al extremo amino de oxintomodulina. En otra modalidad, 1 -10 CTPs se unen al extremo carboxi de oxintomodulina.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un método para producir un polipéptido modificado con CTP que comprende un péptido oxintomodulina (OXM) y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido oxintomodulina, el método que comprende el paso de unir al menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido oxintomodulina.

En una modalidad, proporcionado aquí es un método para extender la vida media biológica de un péptido que comprende menos de 50 aminoácidos, que comprende el paso de unir al menos uno de los péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónical a un extremo amino o carboxi del agonista, mejorando así la vida media biológica del agonista.

En una modalidad, proporcionado aquí es un método para extender la vida media biológica de un agonista dual del receptor de GLP-1/glucagón, que comprende el paso de unir al menos uno de los péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónica a un extremo amino o carboxi del agonista, mejorando así la vida media biológica del agonista.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un método para extender la vida media biológica de oxintomodulina, que comprende el paso de unir al menos uno de los péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónica a un extremo amino o carboxi de la oxintomodulina, mejorando así la vida media biológica de la oxintomodulina.

En una modalidad, proporcionado aquí es un método para mejorar el área bajo la curva (AUC) de un péptido que comprende menos de 50 aminoácidos, que comprende el paso de unir al menos uno de los péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónica a un extremo carboxi del agonista, mejorando así el área bajo la curva (AUC) del agonista.

En una modalidad, proporcionado aquí es un método de mejorar el área bajo la curva (AUC) de un agonista dual del receptor de GLP-1/glucagón, que comprende el paso de unir al menos uno de los péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónica a un extremo carboxi del agonista, mejorando así el área bajo la curva (AUC) del agonista.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un método de mejorar el área bajo la curva (AUC) de oxintomodulina, que comprende el paso de unir al menos uno de los péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónica a un extremo carboxi de la oxintomodulina, mejorando así el área bajo la curva (AUC) de oxintomodulina.

En una modalidad, el termino oxintomodulina además incluye un homólogo de una conocida oxintomodulina. En una modalidad, el homólogo es un homólogo funcional. En otra modalidad, el término "funcional" se refiere a la capacidad de un homólogo, péptido o proteína provista aquí que tiene para suprimir el apetito. El término también se refiere a la capacidad de un homólogo, péptido o proteína provistos aquí que tiene de extender otra vida media biológica de la proteína o péptido. En otra modalidad, la vida media biológica (T½) de una proteína, péptido o homólogo proporcionados aquí se refiere al tiempo que tarda la mitad de la cantidad de proteína, péptido o homólogo a ser degradado o no estar presente en un medio biológico en un sujeto. En otra modalidad, el medio biológico es suero, fluido cerebospinal, tejido, mucosa y lo similar.

En una modalidad, la homología de acuerdo con la presente invención también incluye variantes de eliminación, inserción o sustitución, incluyendo una substitución del aminoácido, los mismos y sus fragmentos de polipéptido biológicamente activo. En una modalidad, la variante provista aquí comprende substituciones conservadoras, o supresiones, inserciones o sustituciones que no alteran significativamente las estructuras tridimensionales de la oxintomodulina. En otra modalidad, la eliminación, inserción o sustitución no altera la función del interés de la oxintomodulina, que en una modalidad, se une a un socio de unión particular.

En una modalidad, la oxintodulina se une a un receptor y modera la supresión de apetito. En otra modalidad, el receptor es un receptor dual de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, el receptor es un receptor de GLP-1. En otra modalidad, el receptor es un receptor de glucagón. En aún otra modalidad, el receptor es cualquier receptor conocido en la téenica de unir a oxintomodulina.

En otra modalidad, la invención incluye un homólogo de una oxintomodulina. En una modalidad, la invención proporciona un homólogo OXM, que en una modalidad, se refiere a un homólogo péptido del péptido de SEQ ID NO: 30.

En otra modalidad, la invención incluye un homólogo de una oxintomodulina que tiene una actividad de supresión de apetito. En otra modalidad, la invención incluye un homólogo de una oxintomodulina que tiene enlace funcional. En otra modalidad, la invención incluye homólogos de una oxintomodulina como se describe aquí teniendo una supresión del apetito y la actividad. En otra modalidad, la invención incluye homólogos de una oxintomodulina como se describe aquí que tienen enlace funcional. En otra modalidad, la invención también abarca homólogos por ejemplo, polipéptidos que son al menos 50%, por lo menos 55%, por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 87%, por lo menos 89%, por lo menos 91 %, por lo menos 93%, por lo menos 95%, por lo menos 96%, por lo menos 97%, por lo menos 98% o por lo menos 99% homólogos a una oxintomodulina como se determina utilizando el software de BlastP del Centro Nacional de información biotecnológica (NCBI) utilizando parámetros estándar.

En una modalidad, provista aquí es una composición farmacéutica que comprende el polipéptido modificado con CTP proporcionado aquí.

Debe ser entendido que las composiciones y métodos de la presente invención, que comprenden los elementos o pasos como se describe en este documento pueden, en otra modalidad, consistir de aquellos elementos o pasos, o en otra modalidad, consistir esencialmente de aquellos elementos o pasos. En algunas modalidades, el término "comprenden" se refiere a la inclusión del agente activo indicado, tal como el agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP, así como la inclusión de otros agentes activos, y portadores fisiológicamente o farmacéuticamente aceptables, excipientes, emolientes, estabilizadores, etc., como son conocidos en la industria farmacéutica. En algunas modalidades, el término "que consiste esencialmente de" se refiere a una composición, cuyo único ingrediente activo es el ingrediente activo indicado, sin embargo, otros compuestos pueden ser incluidos que son para estabilizar, preservar, etc. la formulación, pero no están involucrados directamente en el efecto terapéutico del ingrediente activo indicado. En algunas modalidades, el término "que consiste esencialmente de" puede referirse a los componentes que facilitan la liberación del ingrediente activo. En algunas modalidades, el término "que consiste" se refiere a una composición, que contiene el ingrediente activo y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Debe ser entendido que las composiciones y métodos de la presente invención, que comprenden los elementos o pasos como se describe en este documento pueden, en otra modalidad, consistir de aquellos elementos o pasos, o en otra modalidad, consistir esencialmente de aquellos elementos o pasos. En algunas modalidades, el término "comprende" se refiere a la inclusión del agente activo indicado, tal como la oxintomodulina modificada con CTP, así como la inclusión de otros agentes activos y portadores fisiológicamente o farmacéuticamente aceptables, excipientes, emolientes, estabilizadores, etc., como son conocidos en la industria farmacéutica. En algunas modalidades, el término "que consiste esencialmente de" se refiere a una composición, cuyo único ingrediente activo es el ingrediente activo indicado, sin embargo, otros compuestos pueden ser incluidos que son para estabilizar, preservar, etc. , la formulación, pero no están involucrados directamente en el efecto terapéutico del ingrediente activo indicado. En algunas modalidades, el término "que consiste esencialmente de" puede referirse a los componentes que facilitan la liberación del ingrediente activo. En algunas modalidades, el término "que consiste" se refiere a una composición, que contiene el ingrediente activo y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y dos péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y dos a tres CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y dos a cuatro CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón y dos a cinco CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y dos a seis CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1 /glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y dos a siete CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y dos a ocho CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y dos a vuene CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y dos a diez CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que comprende una oxintomodulina y dos péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y dos a tres CTP unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y dos a cuatro CTP unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y dos a cinco CTP unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y dos a seis CTP unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y dos a siete CTP unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y dos a ocho CTP unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y dos a nueve CTP unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y dos a diez CTP unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y tres péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y tres a cuatro CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipeptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y tres a cinco CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y tres a seis CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y tres a siete CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y tres a ocho CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y tres a nueve CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y tres a diez CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que comprende una oxintomodulina y tres péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y tres a cuatro CTP unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un pol ¡ péptido que comprende una oxintomodulina y tres a cinco CTP unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y tres a seis CTP unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y tres a siete CTP unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y tres a ocho CTP unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y tres a nueve CTP unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y tres a diez CTP unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cuatro péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cuatro a cinco CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cuatro a seis CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cuatro a siete CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cuatro a ocho CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cuatro a nueve CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cuatro a diez CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1 /glucagón.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que comprende una oxintomodulina y cuatro péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y cuatro a cinco CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y cuatro a seis CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y cuatro a siete CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y cuatro a ocho CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y cuatro a nueve CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y cuatro a diez CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cinco péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cinco a seis CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cinco a siete CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cinco a ocho CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cinco a nueve CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cinco a diez CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que comprende una oxintomodulina y cinco péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unido al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y cinco a seis CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y cinco a siete CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y cinco a ocho CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y cinco a nueve CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende una oxintomodulina y cinco a diez CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y dos péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y dos a tres CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido compuesto de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de dos a cuatro CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de dos a cinco CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de dos a seis CTP unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de dos a siete CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de dos a ocho CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de dos a nueve CTP unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de dos a diez CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y dos péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y dos a tres CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y dos a cuatro CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y dos a cinco CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y dos a seis CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y dos a siete CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y dos a ocho CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y dos a nueve CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y dos a diez CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y tres péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y tres a cuatro CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de tres a cinco CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipeptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de tres a seis CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de tres a siete CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de tres a ocho CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de tres a nueve CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de tres a diez CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y tres péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y tres a cuatro CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y tres a cinco CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y de tres a seis CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipeptido que consiste de una oxintomodulina y tres a siete CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y de tres a ocho CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y tres a nueve CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y de tres a diez CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que comprende de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cuatro péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cuatro a cinco CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cuatro a seis CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cuatro a siete CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de cuatro a ocho CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipeptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cuatro a nueve CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de cuatro a diez CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y cuatro péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y cuatro a cinco CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y cuatro a seis CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y cuatro a siete CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y cuatro a ocho CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y cuatro a nueve CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y cuatro a diez CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipeptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cinco péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cinco a seis CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de cinco a siete CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de cinco a ocho CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de cinco a nueve CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de cinco a diez CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y cinco péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y de cinco a seis CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y de cinco a siete CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y de cinco a ocho CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y de cinco a nueve CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste de una oxintomodulina y de cinco a diez CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y dos péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de dos a tres CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de dos a cuatro CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de dos a cinco CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de dos a seis CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de dos a siete CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1 /glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de dos a ocho CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de dos a nueve CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1 /glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón y de dos a diez CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido formado esencialmente por una oxintomodulina y dos péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido formado esencialmente por una oxintomodulina y dos a tres CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido formado esencialmente por una oxintomodulina y dos a cuatro CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipeptido formado esencialmente por una oxintomodulina y dos a cinco CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido formado esencialmente de una oxintomodulina y dos a seis CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido formado esencialmente por una oxintomodulina y dos a siete CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido formado esencialmente por una oxintomodulina y dos a ocho CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido formado esencialmente de una oxintomodulina y dos a nueve CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de una oxintomodulina y dos a diez CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y tres péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de tres a cuatro CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de tres a cinco CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipeptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de tres a seis CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de tres a siete CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de tres a ocho CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de tres a nueve CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de tres a diez CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que consiste esencialmente de una oxintomodulina y tres péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de una oxintomodulina y tres a cuatro CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de una oxintomodulina y tres a cinco CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de una oxintomodulina y de tres a seis CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de una oxintomodulina y de tres a siete CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de una oxintomodulina y de tres a ocho CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de una oxintomodulina y tres a nueve CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de una oxintomodulina y de tres a diez CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cuatro péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cuatro a cinco CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cuatro a seis CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipeptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de cuatro a siete CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de cuatro a ocho CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cuatro a nueve CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de cuatro a diez CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1 /glucagón.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que consiste esencialmente de una oxintomodulina y cuatro péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de una oxintomodulina y cuatro a cinco CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de una oxintomodulina y cuatro a seis CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de una oxintomodulina y cuatro a siete CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipeptido que consiste esencialmente de una oxintomodulina y cuatro a ocho CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de una oxintomodulina y cuatro a nueve CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consiste esencialmente de una oxintomodulina y cuatro a diez CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que consta esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y cinco péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consta esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de cinco a seis CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consta esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de cinco a siete CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consta esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de cinco a ocho CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consta esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de cinco a nueve CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consta esencialmente de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y de cinco a diez CTPs unidos al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1 /glucagón.

En una modalidad, la presente invención proporciona un polipéptido que consta esencialmente de una oxintomodulina y cinco péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consta esencialmente de una oxintomodulina y cinco a seis CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consta esencialmente de una oxintomodulina y cinco a siete CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consta esencialmente de una oxintomodulina y cinco a ocho CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consta esencialmente en una oxintomodulina y cinco a nueve CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que consta esencialmente de una oxintomodulina y cinco a diez CTPs unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende, que consiste esencialmente de, o que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón que no tiene CTPs en su extremo amino. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende, que consiste esencialmente de, o que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón que carece de un CTP en su extremo amino. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipeptido que comprende, que consiste esencialmente de, o que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón que tiene al menos un CTP en su extremo carboxi y no CTPs en su extremo amino. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende, que consiste esencialmente de, o que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón que tiene el número de CTPs en su extremo carboxi descrito en este documento y no CTPs en su extremo amino.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende, que consiste esencialmente de, o que consiste de una oxintomodulina que no tiene CTPs en su extremo amino. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende, que consiste esencialmente de, o que consiste de una oxintomodulina que carece de un CTP en su extremo amino. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende, que consiste esencialmente de, o que consiste de una oxintomodulina que tiene al menos un CTP en su extremo carboxi y no CTPs en su extremo amino. En otra modalidad, proporcionado aquí es un polipéptido que comprende, que consiste esencialmente de, o que consiste de una oxintomodulina que tiene el número de CTPs en su extremo carboxi como se describe aquí y no CTPs en su extremo amino.

En una modalidad, la secuencia de aminoácidos del polipéptido modificado con CTP comprende SEQ ID NO: 9, 15, 21 , 23, 25, 27 o 29, proporcionado además aquí. En otra modalidad, la secuencia de aminoácidos del poli pé ptido modificado con CTP es seleccionada del grupo que consiste de: SEQ ID NO: 9, 15, 21 , 23, 25, 27 o 29, además proporcionado aquí.

En otra modalidad, la presente invención proporciona un polinucleótido que codifica un polipéptido como descrito anteriormente. En otra modalidad, el polinucleótido comprende SEQ ID NO: 8, 14, 20, 22, 24, 26 o 28, además proporcionado aquí. En otra modalidad, el polinucleótido es seleccionado del grupo que consiste de SEQ ID NO: 98, 14, 20, 22, 24, 26 o 28, además proporcionado aquí.

En una modalidad, proporcionado aquí es un vector de expresión que comprende el polinucleótido provisto aquí. En otra modalidad, proporcionada aquí es una célula que comprende el vector de expresión. En otra modalidad, proporcionada aquí es una composición que comprende el vector de expresión.

En otra modalidad, la invención proporciona una célula que comprende el vector de expresión tal como se describe en este documento. En otra modalidad, la presente invención proporciona una célula que comprende un vector de expresión que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido modificado con CTP que comprende o que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos uno de los péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unido al extremo amino o carboxi del agonista. En otra modalidad, la presente invención proporciona una célula que comprende un vector de expresión que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido modificado con CTP que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos uno de los peptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unido al extremo amino o carboxi del agonista.

En otra modalidad, la invención proporciona una composición que comprende el vector de expresión tal como se describe en este documento. En otra modalidad, la presente invención proporciona una composición que comprende un vector de expresión que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido modificado con CTP que comprende o que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos uno de los péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unido al extremo amino o carboxi del agonista. En otra modalidad, la presente invención proporciona una célula que comprende un vector de expresión que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido modificado con CTP que consiste del agonista y por lo menos uno de los péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unido al extremo amino o carboxi del agonista. En otra modalidad, el agonista es un polipéptido, o un péptido. En otra modalidad, el péptido es oxintomodulina.

En otra modalidad, la invención proporciona una composición que comprende la célula como se describe en este documento. En otra modalidad, la célula es una célula eucariota. En otra modalidad, la célula es una célula procariota.

En una modalidad, la presente invención proporciona a un agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, la presente invención proporciona una oxintomodulina recombinante como se describe anteriormente. En una modalidad, la presente invención proporciona una oxintomodulina diseñada como se describe arriba. En una modalidad, la oxintomodulina diseñada como se describe anteriormente se conoce como una oxintomodulina modificada con CTP.

En una modalidad, los CTPs que se unen al extremo carboxi de la oxintomodulina se unen en tándem al extremo carboxi. En una modalidad, los CTP que se unen al extremo amino de la oxintomodulina se unen en tándem al extremo amino.

En una modalidad, un agonista del receptor de GLP-1/glucagón diseñado como se describe en el presente documento tiene actividad biológica equivalente o mejorada en comparación con el agonista del receptor de GLP-1/glucagón no modificado con CTP. En otra modalidad, un agonista del receptor de GLP-1/glucagón diseñado como se proporciona aquí tiene medidas farmacológicas equivalentes o mejoradas en comparación con el agonista del receptor de GLP-1/glucagón no modificado con CTP. En otra modalidad, un agonista del receptor de GLP-1/glucagón diseñado como se proporciona aquí tiene farmacocineticos equivalentes o mejorado en comparación con el agonista del receptor de GLP-1/glucagón no modificado con CTP. En otra modalidad, un agonista del receptor de GLP-1/glucagón diseñado como se proporciona aquí tiene farmacodinámicos equivalentes o mejorados en comparación con el agonista del receptor de GLP-1/glucagón no modificado con CTP.

En otra modalidad, los términos "péptido CTP," "péptido de extremo carboxi" y "secuencia de CTP" se utilizan indistintamente en el presente. En otra modalidad, el peptido de extremo carboxi es un CTP de longitud completa. Cada posibilidad representa una modalidad separada de la invención.

En otra modalidad, un péptido de señal está unido al extremo amino de CTP, tal como se describe en US 7,553,940, que es incorporada por referencia en este documento en su totalidad.

En otras modalidades, el término oxintomodulina diseñada se refiere a la secuencia de aminoácidos de una oxintomodulina madurada. En otras modalidades, el término oxintomodulina diseñada se refiere a la secuencia de aminoácidos de la oxintomodulina que incluye su secuencia de señal o péptido de señal.

En otra modalidad, "secuencia de señal" y "péptido señal" se usan indistintamente en este documento. En otra modalidad, "secuencia" cuando en referencia a una molécula de polinucleótido puede referirse a una porción de codificación. Cada posibilidad representa una modalidad separada de la presente invención.

En otra modalidad, un agonista del receptor de GLP-1/glucagón diseñado que comprende al menos un CTP como se describe en este documento ha incrementado en la actividad biológica in vivo en comparación con el mismo agonista del receptor de GLP-1/glucagón sin al menos un CTP. En una modalidad, la actividad biológica incrementada proviene de la vida media más larga del agonista del receptor de GLP-1/glucagón diseñado mientras mantiene ai menos alguna actividad biológica. En otra modalidad, la actividad biológica incrementada proviene de la actividad biológica incrementada resultante de la modificación de CTP. En otra modalidad, la actividad biológica incrementada proviene de una vida media más larga y de funcionalidad mejorada del agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP.

En una modalidad, al menos una secuencia de CTP en el extremo terminal carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón proporciona una protección incrementada contra la degradación de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, por lo menos una secuencia de CTP en el extremo terminal carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón proporciona una protección contra la separación incrementada. En otra modalidad, por lo menos una secuencia de CTP en el extremo terminal carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón proporciona tiempo de separación prolongado. En otra modalidad, por lo menos una secuencia de CTP en el extremo terminal carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón aumenta su Cmax. En otra modalidad, por lo menos una secuencia de CTP en el extremo terminal carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón aumenta su Tmax. En otra modalidad, por lo menos una secuencia de CTP en el extremo terminal carboxi del agonista del receptor de GLP-1 /glucagón prolonga su T½.

En otra modalidad, un agonista del receptor de GLP-1/glucagón conjugado de esta invención se utiliza de la misma manera como un agonista del receptor de GLP-1/glucagón conjugado no modificado. En otra modalidad, una oxintomodulina conjugada de esta invención se utiliza de la misma manera que una oxintomodulina conjugada no modificada. En otra modalidad, una oxintomodulina conjugada de esta invención tiene una vida media de circulación incrementada y tiempo de residencia de plasma, separación disminuida y actividad clínica incrementada en vivo. En otra modalidad, debido a las propiedades mejoradas de la oxintomodulina conjugada como se describe en este documento, este conjugado es administrado con menos frecuencia que la forma no modificada de la misma oxintomodulina.

En otra modalidad, la frecuencia disminuida de los resultados de la administración en la estrategia del tratamiento mejorada, que en una modalidad, conduce al mejor cumplimiento del paciente hacia los resultados del tratamiento mejorados, así como calidad de vida mejorada del paciente. En otra modalidad, en comparación con los conjugados convencionales de la oxintomodulinas, se ha encontrado que conjugados con el peso molecular y la estructura de enlazador de conjugados como se describe en este documento tienen una mayor potencia, estabilidad mejorada, niveles de AUC elevados, y vida media de circulación mejorada.

En otra modalidad, la presente invención además proporciona una composición farmacéutica que comprende un polipéptido modificado con CTP que consiste de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y tres péptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina.

En otra modalidad, la presente invención además proporciona una composición farmacéutica que comprende un polipéptido modificado con CTP que consiste de una oxintomodulina y tres peptidos terminales carboxi de gonadotrofina (CTPs) unidos al extremo carboxi de la oxintomodulina.

En otra modalidad, proporcionada aquí es una composición que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón conjugado como se proporciona aquí. En otra modalidad, proporcionada aquí es una composición farmacéutica que comprende el agonista del receptor de GLP-1/glucagón conjugado como se provee aquí. En otra modalidad, proporcionada aquí es una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del agonista del receptor de GLP-1/glucagón conjugado como se proporciona aquí. En una modalidad, una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón conjugado se determina según factores tales como la condición específica a ser tratada, la condición del paciente que es tratado, así como los otros ingredientes en la composición.

En otra modalidad, proporcionada aquí es una composición que comprende una oxintomodulina conjugada como se proporciona aquí. En otra modalidad, proporcionada aquí es una composición farmacéutica que comprende la oxintomodulina conjugada como se proporciona aquí. En otra modalidad, proporcionada aquí es una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de la oxintomodulina conjugada como se proporciona aquí. En una modalidad, una cantidad terapéuticamente efectiva de una oxintomodulina conjugada se determina según factores tales como la condición específica a ser tratada, la condición del paciente que es tratado, así como los otros ingredientes en la composición.

En una modalidad, un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP de la presente invención tiene usos terapeuticos. En otra modalidad, un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP de la presente invención tiene usos profilácticos.

En otra modalidad, una oxintomodulina modificada con CTP de la presente invención tiene usos terapéuticos. En otra modalidad, una oxintomodulina modificada con CTP de la presente invención tiene usos profilácticos.

En una modalidad, proporcionado aquí es un método para reducir la frecuencia de dosificación de agonista del receptor de GLP-1/glucagón en un sujeto, que comprende el paso de unir al menos uno de los péptidos terminales de carboxi de gonadotrofina coriónica a un extremo amino o carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón, reduciendo así la frecuencia de dosificación de agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, la modificación de la secuencia de CTP es ventajosa en permitir el uso de dosificaciones más bajas. En algunas modalidades, la modificación de las secuencias de CTP es ventajosa en permitir menos dosificaciones. En algunas modalidades, la modificación de las secuencias de CTP es ventajosa en permitir un efecto de acción prolongada, seguro.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un método para reducir la frecuencia de dosificación de oxintomodulina en un sujeto, que comprende el paso de unir al menos uno de los péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónica a un extremo amino o carboxi de la oxintomodulina, reduciendo así la frecuencia de dosificación de oxintomodulina. En otra modalidad, la modificación de la secuencia de CTP es ventajosa en permitir el uso de dosificaciones más bajas. En algunas modalidades, la modificación de las secuencias de CTP es ventajosa en permitir menos dosificaciones. En algunas modalidades, la modificación de las secuencias de CTP es ventajosa en permitir un efecto de acción prolongada, seguro.

En una modalidad, proporcionado aquí es un método de reducir el colesterol en un sujeto, que comprende el paso de unir al menos uno de los péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónica a un extremo amino o carboxi de la oxintomodulina, reduciendo así el colesterol en un sujeto.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un método de reducción de glicerol en un sujeto, que comprende el paso de unir al menos uno de los péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónica a un extremo amino o carboxi de la oxintomodulina, reduciendo así glicerol en un sujeto.

En una modalidad, la presente invención proporciona un OMX de acción prolongada. En una modalidad, un OXM de acción prolongada de la invención mantiene la actividad biológica de OXM no modificado. En otra modalidad, el OXM de acción prolongada de la invención comprende actividad biológica de OXM. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende la reducción de secreciones digestivas. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención implica reducir y retrasar el vaciamiento gástrico. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención implica la inhibición del patrón de motilidad de alimentación en el intestino delgado. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende la inhibición de la secreción acida estimulada por pentagastrina. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende un aumento de la liberación de somatostatina gástrica. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende potenciar los efectos del peptido YY. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención implica la inhibición de la liberación de grelina. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende la estimulación de la acumulación de aminopirina y la producción de cAMP. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende unir el receptor de GLP-1. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende la estimulando de la producción de H+ mediante la activación de adenilato cielasa. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende la inhibición de la secreción de ácido gástrico estimulado con histamina. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende inhibir la ingesta de alimentos. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende estimular la liberación de insulina. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende la inhibición de la secreción pancreática de exocrina.

En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende la inhibición de la secreción pancreática mediante un mecanismo indirecto neural vagal. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende reducir el transporte hidromineral a través del intestino delgado. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende estimular la captación de glucosa. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende controlar/estimular la secreción de somatostatina. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende la reducción en la ingesta de alimentos y la ganancia del peso corporal. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende la reducción de adiposidad. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende supresión de apetito. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende la inducción de anorexia. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende reducción de peso corporal en sujetos con sobrepeso y obesidad. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende inducir cambios en los niveles de leptina de hormonas adiposas y adiponectina. En otra modalidad, la actividad biológica de un OXM de acción prolongada de la invención comprende incrementar más gasto de energía además de disminuir la ingesta de energía en sujetos con sobrepeso y obesidad.

Por lo tanto, en una modalidad, la presente invención proporciona un metodo para efectuar cualquiera de las actividades biológicas mencionadas anteriormente de OXM al administrar un OXM modificado con CTP de la presente invención. En otra modalidad, la presente invención además proporciona un método para reducir la ingesta de alimentos, reducir el peso corporal, o ambos en un sujeto, que comprende el paso de la administración al sujeto de un péptido de oxintomodulina modificado con CTP. En otra modalidad, el sujeto tiene diabetes. En otra modalidad, el sujeto tiene sobrepeso. En otra modalidad, el sujeto es obeso.

En una modalidad, los términos "que reduce, reducción, disminución, etc.," cuando se utiliza en relación con los métodos proporcionados en este documento se refieren al 100% de reducción desde una medida previamente o nivel determinado o desde un nivel normal. En otra modalidad, la reducción es por 89-99% de un nivel previamente determinado. En otra modalidad, la reducción es de 79-88% desde un nivel previamente determinado. En otra modalidad, la reducción es de 69-78% desde un nivel previamente determinado. En otra modalidad, la reducción es de 59-68% desde un nivel previamente determinado. En otra modalidad, la reducción es por 49-58% desde un nivel previamente determinado. En otra modalidad, la reducción es de 39-48% desde un nivel previamente determinado. En otra modalidad, la reducción es de 29-38% desde un nivel previamente determinado. En otra modalidad, la reducción es de 19-28% de un nivel previamente determinado. En otra modalidad, la reducción es de 9-18% de un nivel previamente determinado. En otra modalidad, la reducción es de 5-8% desde un nivel previamente determinado. En otra modalidad, la reducción es de 1 -4% de un nivel previamente determinado.

La actividad biológica in vivo de las variantes de OXM-CTP se evaluó en dos modelos animales, IPGTT en ratones, que evalúan la capacidad de OXM de inducir tolerancia a la glucosa tras la administración de glucosa, e inhibición de ingesta de comida en ratas magras, que evalúan la capacidad de OXM para inhibir el consumo de alimentos de los animales. Se demostró que las variantes de OXM-CTP: CTP-OXM-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP-CTP-CTP y OXM-CTP-CTP-CTP-CTP-CTP inducen la tolerancia a la glucosa como se refleja por la reducción del 20-30% de AUC de glucosa en la sangre en comparación con el grupo vehículo (véase el ejemplo 4, adjunto). Estos resultados indican que la actividad biológica de las variantes de OXM-CTP no fue inhibida in vivo debido a la interferencia esférica potencial de fusión de CTP para la unión de OXM a su receptor. La reducción marcada en la glucosa inducida por estas variantes correlacionada con sus mejores perfiles de PK. Por lo tanto, en una modalidad, proporcionado aquí es un método de inducción de tolerancia a la glucosa en un sujeto, el método que comprende el paso de la administración a un sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende un polipéptido modificado con CTP que comprende un péptido de oxintomodulina (OXM) y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido oxintomodulina, induciendo así la tolerancia a la glucosa en un sujeto.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un método para inducir tolerancia a la glucosa en un sujeto, el método que comprende el paso de la administración a un sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido agonista del receptor de GLP-1/glucagón, induciendo así la tolerancia a la glucosa en un sujeto.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista dual del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista para la inducción de tolerancia a la glucosa en un sujeto. En una modalidad, dicho agonista dual del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista dual del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista en la preparación de un medicamento para la inducción de tolerancia a la glucosa en un sujeto. En una modalidad, dicho agonista dual del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

En una modalidad, proporcionado aquí es un metodo para aumentar la sensibilidad a la insulina en un sujeto, el método que comprende el paso de la administración al sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido del agonista del receptor de GLP-1/glucagón, aumentando así la sensibilidad a la insulina en un sujeto.

En una modalidad, proporcionado aquí es un método de reducción de la resistencia a la insulina en un sujeto, el método que comprende el paso de la administración al sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido del agonista del receptor de GLP-1/glucagón, reduciendo así la resistencia a la insulina en un sujeto.

En una modalidad, proporcionado aquí es un método para aumentar la sensibilidad a la insulina y reducir la resistencia a la insulina en un sujeto, el método que comprende el paso de la administración a un sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido del agonista del receptor de GLP-1/glucagón, aumentando así la sensibilidad a la insulina y reduciendo la resistencia a la insulina en un sujeto.

Se evaluó la capacidad de las variantes de OXM-CTP OXM-3CTP, OXM-4CTP y OXM-5CTP para inhibir la ingesta de alimentos. La ingesta de alimento inhibida por OXM nativo solamente en la primera hora después de la administración, sin embargo, todas las variantes manifiestan inhibición mejorada prolongada substancial en la ingesta de alimentos en comparación con OXM. La inhibición de alimento acumulada de OXM-5CTP sorprendentemente fue sostenida por al menos 141 horas destacando la vida media alargada de esta variante (véase ejemplo 5, adjunto).

Por lo tanto, en una modalidad, proporcionado aquí es un método de inducir la inhibición de la ingesta de alimentos en un sujeto, el método que comprende el paso de la administración a un sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende un polipéptido modificado con CTP que comprende un péptido oxintomodulina (OXM) y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido oxintomodulina, induciendo así la inhibición de la ingesta de alimentos en el sujeto.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un método de inducir la inhibición de ingesta de alimentos en un sujeto, el método que comprende el paso de la administración a un sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido agonista del receptor de GLP-1/glucagón, induciendo así la inhibición de la ingesta de alimentos en el sujeto.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un método para prevenir, reducir o suprimir la ingesta de alimentos en un sujeto, el método que comprende el paso de la administración a un sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido del agonista del receptor de GLP-1/glucagón, evitando así la reducción o supresión de la ingesta de alimentos por un sujeto. En otra modalidad, prevención, reducción o supresión de ingesta de alimentos por un sujeto reduce las posibilidades del sujeto de desarrollar aumento de peso no deseado. En otra modalidad, prevenir la reducción o supresión de la ingesta de alimentos en un sujeto reduce las posibilidades del sujeto de desarrollar obesidad.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un peptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi del dicho agonista para prevenir el aumento de peso no deseado por un sujeto. En una modalidad, dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista en la preparación de un medicamento para prevenir el aumento de peso no deseado por un sujeto. En una modalidad, dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un método para prevenir, reducir o suprimir la ingesta de alimentos en un sujeto, el método que comprende el paso de la administración a un sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende polipéptido modificado con CTP que comprende un péptido oxintomodulina (OXM) y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido oxintomodulina, evitando así la reducción o supresión de la ingesta de alimentos por un sujeto. En otra modalidad, prevención, reducción o supresión de ingesta de alimentos por un sujeto reduce las posibilidades de que el sujeto desarrolle aumento de peso no deseado. En otra modalidad, prevenir la reducción o supresión de la ingesta de alimentos en un sujeto reduce las posibilidades de que el sujeto desarrolle obesidad.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un metodo de prevenir el aumento de peso no deseado por un sujeto, el método que comprende el paso de la administración al sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido del agonista del receptor de GLP-1/glucagón, impidiendo así el aumento de peso en un sujeto. En otra modalidad, la ganancia de peso conduce a o resulta en obesidad del sujeto. En otra modalidad, el riesgo de ganar peso es debido a una condición psicológica, o a una predisposición genético para aumentar el peso por el sujeto. En otra modalidad, la condición psicológica es depresión, ansiedad o trastorno de estrés postraumático (PTSD).

En otra modalidad, proporcionado aquí es un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista para prevenir el aumento de peso no deseado por un sujeto. En una modalidad, dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista en la preparación de un medicamento para prevenir el aumento de peso no deseada por un sujeto. En una modalidad, dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un metodo de prevenir el aumento de peso no deseado por un sujeto, el método que comprende el paso de la administración a un sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende polipéptido modificado con CTP que comprende un péptido oxintomodulina (OXM) y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido oxintomodulina, impidiendo así el aumento de peso en un sujeto. En otra modalidad, la ganancia de peso conduce a o resulta en obesidad del sujeto. En otra modalidad, el riesgo de ganar peso es debido a una condición psicológica, o debido a una predisposición genética para aumentar de peso por el sujeto. En otra modalidad, la condición psicológica es depresión, ansiedad o trastorno de estrés postraumático (PTSD).

En otra modalidad, proporcionado aquí es un método de tratar la obesidad en un sujeto, el método que comprende la administración a un sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende un polipéptido modificado con CTP que comprende un péptido del agonista del receptor GLP-1/Glucagon y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido de agonista del receptor de GLP-1/glucagón, tratando así la obesidad en el sujeto. En otra modalidad, el sujeto está predispuesto genéticamente a ser obeso. En otra modalidad, el método para tratar la obesidad resulta en una reducción del peso corporal en un sujeto. En otra modalidad, la reducción en el peso corporal es debido a la reducción de grasa corporal.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista para el tratamiento de la obesidad en un sujeto. En una modalidad, dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la obesidad en un sujeto. En una modalidad, dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un método para tratar la obesidad en un sujeto, el método que comprende la administración a un sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende un polipéptido modificado con CTP que comprende un péptido oxintomodulina y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido oxintomodulina, tratando así la obesidad en el sujeto. En otra modalidad, el sujeto está predispuesto genéticamente a ser obeso.

En una modalidad, proporcionado aquí es un metodo de tratamiento de la diabetes tipo II en un sujeto, el método que comprende la administración a un sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende un polipéptido modificado con CTP que comprende un péptido del agonista del receptor GLP-1/Glucagon y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido del agonista del receptor de GLP-1/glucagón, tratando así diabetes tipo II en el sujeto.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista para tratar la diabetes tipo II en un sujeto. En una modalidad, dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista en la preparación de un medicamento para tratar la diabetes tipo II en un sujeto. En una modalidad, dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

En una modalidad, proporcionado aquí es un método de tratamiento de la diabetes tipo II en un sujeto, el método que comprende la administración de una dosis efectiva a un sujeto de una composición que comprende un polipéptido modificado con CTP que comprende un péptido oxintomodulina y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido oxintomodulina, tratando así la diabetes tipo II en el sujeto.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un método para tratar un trastorno metabólico en un sujeto, el método que comprende la administración al sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido del agonista del receptor de GLP-1/glucagón, tratando así un trastorno metabólico en el sujeto.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista para el tratamiento de un trastorno metabólico en un sujeto. En una modalidad, dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno metabólico en un sujeto. En una modalidad, dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

En otra modalidad, proporcionado aquí es un metodo para tratar un trastorno metabólico en un sujeto, el método que comprende la administración a un sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende un polipéptido modificado con CTP que comprende un péptido oxintomodulina y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o extremo carboxi del péptido oxintomodulina, tratando así un trastorno metabólico en el sujeto.

En otra modalidad, el trastorno metabólico es cetoacidosis diabética, o diabetes mellitus o cualquier trastorno metabólico relacionado con glucosa, conocido en la téenica. En otra modalidad, el trastorno metabólico resulta de la falta de insulina y una sobreabundancia de la glucosa en un sujeto.

En otra modalidad, las variantes del agonista del receptor de GLP-1/Glucagon de la presente invención se sintetizan mediante una molécula de polinucleótido que codifica un polipéptido de la presente invención. En otra modalidad, la molécula de polinucleótido que codifica al agonista del receptor de GLP-1/glucagón diseñado de la presente invención está ligada a un vector de expresión, que comprende un control transcripcional de una secuencia cis-reguladora (por ejemplo, secuencia del promotor). En otra modalidad, la secuencia cis-reguladora es adecuada para dirigir la expresión constitutiva de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón diseñado de la presente invención. En otra modalidad, la secuencia cis-reguladora es adecuada para dirigir la expresión específica de tejido de los péptidos del agonista del receptor de GLP-1 /glucagón diseñados de la presente invención. En otra modalidad, la secuencia cis-reguladora es adecuada para dirigir la expresión inducible de las variantes del agonista del receptor de GLP-1/glucagón diseñado de la presente invención.

En una modalidad, promotores específicos de tejido adecuados para su uso con la presente invención incluyen secuencias que son funcionales en una o más poblaciones de células específicas. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, los promotores como albúmina que es específica de hígado [Pinkert et al. , (1987) Genes dev 1 :268-277], promotores específicos de linfoides [Caíame et al. , (1988) Adv. Immunol. 43:235-275]; en particulares promotores de receptores de célula T [Winoto et al., (1989) EMBO J. 8:729-733] e inmunoglobulinas; [Banerji et al (1983) Cell 33729-740], promotores específicos de neurona tal como neurofilamento [Byrne et al (1989) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 86:5473-5477], promotores específicos de páncreas [Edlunch et al (1985) Science 230:912-916] o promotores específicos de glándula mamaria tal como el promotor de suero de leche (US Pat. No. 4,873,316 y la publicación de la solicitud Europea No. 264, 166). Los promotores inducibles adecuados para utilizarse con la presente invención inducibles por ejemplo, promotores inducible por tetracielina (Srour, M.A., et al. , 2003. Thromb. Haemost. 90: 398-405).

En una modalidad, la frase "una molécula de polinucleótido" se refiere a una secuencia de ácido nucleico de cadena doble sencilla que es aislada y proporcionada en forma de una secuencia de RNA, una secuencia de polinucleótido complementario (cDNA), una secuencia de polinucleótido genómico y / secuencias de polinucleótido compuesto (por ejemplo, una combinación de los anteriores).

En una modalidad, una "secuencia de polinucleótido complementaria" se refiere a una secuencia, que resulta de la transcripción reversa del RNA mensajero usando una transcriptasa inversa o cualquier otra polimerasa de DNA dependiente de RNA. En una modalidad, la secuencia puede ser amplificada posteriormente in vivo o in vitro usando una polimerasa de DNA.

En una modalidad, una "secuencia de polinucleótido genómica" se refiere a una secuencia derivada (aislada) de un cromosoma y por lo tanto representa una porción contigua de un cromosoma.

En una modalidad, una "secuencia de polinucleótido compuesto" se refiere a una secuencia, que es al menos parcialmente complementaria y por lo menos parcialmente genómica. En una modalidad, una secuencia compuesta puede incluir algunas secuencias exonales requeridas para codificar el polipeptido de la presente invención, así como algunas secuencias intrónicas interpuestas entre estas. En una modalidad, las secuencias intrónicas pueden ser de cualquier fuente, incluyendo de otros genes y típicamente incluyen secuencias de señal dividida conservada. En una modalidad, secuencias intrónicas incluyen elementos reguladores de expresión de cis-actuación.

En una modalidad, después de la expresión y secreción, los péptidos de señal están divididos de los péptidos de oxintomodulina diseñados precursores resultantes en los péptidos de oxintomodulina diseñados maduros.

En unas modalidades, los polinucleótidos de la presente invención se preparan mediante téenicas de PCR, o cualquier otro método o procedimiento conocido por un experto en la técnica. En algunas modalidades, el procedimiento consiste en la ligadura de dos diferentes secuencias de DNA (véase, por ejemplo, “Current Protocols in Molecular Biology”, eds. Ausubel et al., John Wilcy & Sons, 1992).

En una modalidad, los polinucleótidos de la presente invención que codifican el agonista del receptor de GLP-1/glucagón diseñado proporcionado aquí se insertan en vectores de la expresión (es decir, un constructo de ácido nucleico) para permitir la expresión del polipéptido recombinante. En una modalidad, el vector de expresión de la presente invención incluye secuencias adicionales que hacen de este vector adecuado para replicación e integración en procariotas. En una modalidad, el vector de expresión de la presente invención incluye secuencias adicionales que hacen de este vector adecuado para replicación e integración en eucariotas. En otra modalidad, el vector de expresión de la presente invención incluye un vector lanzadera que representa este vector adecuado para replicación e integración en procariotas y eucariotas. En algunas modalidades, vectores de clonación comprenden las secuencias de inicio de transcripción y traducción (por ejemplo, promotores, intensificadores) y terminadores de transcripción y traducción (por ejemplo, señales de poliadenilación).

En una modalidad, una variedad de celulas procariotas o eucariotas puede utilizarse como sistemas de expresión hospedera para expresar al agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP proporcionado aquí. En otra modalidad, éstos incluyen, pero no se limitan a, microorganismos como bacterias transformadas con un DNA de bacteriófago recombinante, DNA de plásmido o vector de expresión de DNA cósmido que contiene la secuencia de codificación de polipéptido; levadura transformada con vectores de expresión de levadura recombinante que contiene la secuencia de codificación de polipéptido; sistemas de la célula vegetal infectada con vectores de expresión de virus recombinante (por ejemplo, virus del mosaico del coliflor, CaMV; virus del mosaico del tabaco, TMV) o transformados con vectores de la expresión del plásmido recombinante, tal como el plásmido Ti, que contiene la secuencia de codificación del polipéptido.

En una modalidad, los sistemas de expresión no bacteriana se utilizan (por ejemplo, sistemas de expresión de mamíferos tales como células CHO) para expresar al agonista del receptor de GLP-1/glucagón proporcionado aquí. En otra modalidad, el agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina. En otra modalidad, la oxintomodulina es modificada por la adición de por lo menos un CTP, como se dispone en el presente. En otra modalidad, el vector de expresión utilizado para expresar polinucleótidos de la presente invención en células de mamífero es vector de pCI-dhfrr. La construcción del vector pCI-dhfrr se describe, de acuerdo con una modalidad, en materiales y métodos, de ejemplo abajo.

En una modalidad, en sistemas bacterianos de la presente invención, un número de vectores de la expresión puede ser ventajosamente seleccionado dependiendo del uso para el polipéptido expresado. En una modalidad, se desean grandes cantidades del polipéptido. En una modalidad, vectores que dirigen la expresión de niveles elevados del producto de proteína, posiblemente como una fusión con una secuencia de señal hidrofóbica, que dirige el producto expresado en el periplasma de las bacterias o el medio de cultivo donde fácilmente se purifica el producto de proteína se desean. En una modalidad, ciertas proteínas de fusión están diseñadas con un sitio específico de división para ayudar en la recuperación del polipéptido. En una modalidad, vectores adaptable a tal manipulación incluyen, pero no se limitan a, la serie de pET de vectores de la expresión de E. coli [Studier et al. , Methods in Enzymol. 185:60-89 (1990)].

En una modalidad, los sistemas de expresión de la levadura se utilizan. En una modalidad, puede utilizarse un número de vectores que contienen promotores inducibles o constitutivos en la levadura como se describe en Solicitud de Patente estadounidense No. 5,932,447, que es incorporada por referencia en este documento en su totalidad. En otra modalidad, se utilizan los vectores que promueven la integración de secuencias de DNA extranjeras en el cromosoma de la levadura.

En una modalidad, el vector de expresión de la presente invención además puede incluir secuencias de polinucleótido adicionales que permiten, por ejemplo, la traducción de varias proteínas de un mRNA solo tal como un sitio de entrada interna del ribosoma (IRES) y secuencias para integración genómica del polipeptido quimérico del promotor.

En una modalidad, los vectores de expresión de mamíferos incluyen, pero no están limitados a, pcDNA3, pcDNA3.1 (+/-), pGL3, pZeoSV2(+/-), pSecTag2, pDisplay, pEF/myc/cyto, pCMV/myc/cyto, pCR3.1 , pSinRep5, DH26S, DHBB, pNMT1 , pNMT41 , pNMT81 , que están disponibles desde Invitrogen, pCI disponible en Promega, pMbac, pPbac, pBK-RSV y pBK-CMV que están disponibles desde Strategene, pTRES que está disponible en Clontech y sus derivados.

En una modalidad, los vectores de expresión que contienen elementos reguladores de virus de eucariotas tales como los retrovirus son utilizados en la presente invención. Vectores SV40 incluyen pSVT7 y pMT2. En algunas modalidades, los vectores derivados de virus del papiloma bovino incluyen VGP-1 MTHA y vectores derivados de virus Epstein Bar incluyen pHEBO y p205. Otros vectores ejemplares incluyen pMSG, pAV009/A+, pMTO10/A+, pMAMneo-5, pDSVE de baculovirus y cualquier otro vector que permite la expresión de proteínas bajo la dirección del promotor temprano SV-40, el promotor tardío SV-40, promotor de metalotioneína, promotor del virus de tumor mamario murino, promotor de virus sarcoma de Rous, promotor de polihedrina, u otros promotores se muestran efectivos para su expresión en las células eucariotas.

En una modalidad, los vectores virales recombinantes son útiles para la expresión in vivo de los péptidos oxintomodulina de la presente invención puesto que ofrecen ventajas tal como la infección lateral y especificidad dirigida. En una modalidad, infección lateral es inherente en el ciclo de vida de, por ejemplo, un retrovirus y es el proceso mediante el cual una célula infectada única produce muchos viriones de progenie que surgen e infectan células vecinas. En una modalidad, el resultado es que rápidamente se infecta un área grande, la mayoría de la que inicialmente no fue infectada por las partículas virales originales. En una modalidad, se producen vectores virales que son incapaces de difundir lateralmente. En una modalidad, esta característica puede ser útil si el objetivo deseado consiste en introducir un gene determinado en solamente un número localizado de células especificas.

En una modalidad, pueden utilizarse diversos métodos para introducir el vector de expresión de la presente invención en las células. Tales métodos se describen generalmente en Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Coid Springs Harbor Laboratory, New York (1989, 1992), en Ausubel et al. , Current Protocols in Molecular Biology, John Wilcy and Sons, Baltimore, Md. (1989), Chang et al., Somatic Gene Therapy, CRC Press, Ann Arbor, Mich. (1995), Vega et al., Gene Targeting, CRC Press, Ann Arbor Mich. (1995), Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, Butterworths, Boston Mass. (1988) and Gilboa et at. [Biotechniques 4 (6): 504-512, 1986] e incluyen, por ejemplo, transfección estable o transitoria, lipofección, electroporación e infección con vectores virales recombinantes. Además, véase Patente estadounidense No. 5,464,764 y 5,487,992, incorporado aquí para referencia, para los métodos de selección positiva-negativa.

En una modalidad, introducción de ácidos nucleicos por infección viral ofrece varias ventajas sobre otros metodos tales como lipofección y electroporación, puesto que puede obtenerse una mayor eficiencia de transfección debido a la naturaleza contagiosa de los virus.

Será apreciado que el agonista del receptor GLP-1/Glucagón diseñado u péptidos oxintomodulina de la presente invención también pueden expresarse de un constructo de ácido nucleico administrado al individuo empleando cualquier modo adecuado de administración (por ejemplo, la administración subcutánea, la administración oral, la administración intranasal, administración intravenal o terapia génica in vivo). En una modalidad, el constructo de ácido nucleico se introduce en un célula adecuada mediante un vehículo/método de suministro de gene apropiado (transfección, transducción, recombinación homologa, etc.) y un sistema de expresión según sea necesario y luego las células modificadas son ampliadas en cultivo y regresan al individuo (es decir, terapia génica ex vivo).

En una modalidad, los vectores de expresión de la planta se utilizan. En una modalidad, la expresión de una secuencia de codificación del polipéptido es impulsa por un número de promotores. En algunas modalidades, promotores virales tal como promotores 35S RNA y 19S RNA del CaMV [Brisson et al., Nature 310:51 1 -514 (1984)], o el promotor de la proteína de capa TMV [Takamatsu et al. , EMBO J. 6:307-311 (1987)] se utilizan. En otra modalidad, los promotores de la planta se utilizan como, por ejemplo, la subunidad pequeña de RUBISCO [Coruzzi et al., EMBO J. 3:1671 -1680 (1984); y Brogli et al., Science 224:838-843 (1984)] o promotores de choque termico, por ejemplo, soya hsp17.5-E o hsp17.3-B [Gurlcy et al., Mol. Cell. Biol 6:559-565 (1986)]. En una modalidad, los constructos se introducen en las células vegetales mediante plásmido Ti, plásmido Ri, vectores virales vegetales, transformación DNA dirigido, micromyección, electroporación y otras téenicas bien conocidas por los artesanos en la técnica. Véase, por ejemplo, Weissbach & Weissbach [Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, NY, Section VIII, pp 421-463 (1988)]. Otros sistemas de expresión tales como insectos y sistemas de la célula hospedera del mamífero, que son bien conocidos en la técnica, también pueden ser utilizados por la presente invención.

Será apreciado que aparte contiene los elementos necesarios para la transcripción y traducción de la secuencia de codificación insertada (codificación del polipéptido), el constructo de expresión de la presente invención también puede incluir secuencias diseñadas para optimizar la estabilidad, producción, purificación, producción o actividad del polipéptido expresado.

En una modalidad, las células transformadas se cultivan bajo condiciones efectivas, que permiten la expresión de altas cantidades de péptidos de oxintomodulina diseñados recombinantes. En otra modalidad, las condiciones de cultivo efectivas incluyen, pero no se limitan a, los medios efectivos, biorreactor, temperatura, pH y condiciones de oxígeno que permiten la producción de proteínas. En una modalidad, el medio efectivo se refiere a cualquier medio en el cual una célula se cultiva para producir el polipéptido recombinante de la presente invención. En algunas modalidades, un medio típicamente incluye una solución acuosa que tiene carbono asimilable, nitrógeno y fuentes de fosfato y sales apropiadas, minerales, metales y otros nutrientes, tales como vitaminas. Las células de la presente invención pueden ser cultivadas en biorreactores para fermentación convencionales, matraces de agitación, tubos de ensayo, platos de microtitulación y placas de petri. En otra modalidad, el cultivo se realiza a una temperatura, pH y oxígeno contenido apropiado para una celda recombinante. En otra modalidad, la determinación de las condiciones de cultivo está dentro de la experiencia de uno de habilidad ordinaria en la téenica.

En una modalidad, dependiendo del vector y sistema hospedero utilizado para la producción, el agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP diseñado o, en otra modalidad, los péptidos de oxintomodulina de modificado con CTP resultantes de la presente invención se expresan dentro de una célula recombinante para la glicosilación de CTP para tomar lugar, se secretan al medio de fermentación o son retenidos en la superficie exterior de una célula de mamífero.

En una modalidad, después de un tiempo predeterminado en el cultivo, la recuperación del agonista del receptor de GLP-1/glucagón diseñado recombinante u oxintomodulina se efectuará.

En una modalidad, la frase "recuperación de la oxintomodulina diseñada recombinante" se refiere a la colección del medio de fermentación que contiene el polipéptido y no necesita implicar los pasos adicionales de separación o purificación.

En una modalidad, la oxintomodulina diseñada o variantes de la misma proporcionadas en este documento son purificadas usando una variedad de téenicas de purificación de proteínas estándar, tales como, pero no limitado a, cromatografía de afinidad, cromatografía de intercambio iónico, filtración, electroforesis, cromatografía de interacción hidrófoba, cromatografía de filtración de gel, cromatografía de fase reversa, cromatografía concanavalina A, cromatoenfoque y solubilización diferencial.

Para facilitar la recuperación, la secuencia de codificación expresada puede ser diseñada para codificar el agonista del receptor de GLP-1/glucagón diseñado u oxintomodulina de la presente invención y radical divisible fusionable. Además, una proteína de fusión puede ser diseñada para que el polipéptido pueda aislarse fácilmente mediante cromatografía de afinidad; por ejemplo, por inmovilización en una columna específica para el radical divisible. Un sitio de escisión se diseña entre la oxintomodulina diseñada y el radical divisible y el polipéptido puede ser liberado de la columna cromatográfica por tratamiento con una enzima apropiada o agente que divide específicamente la proteína de fusión en este sitio [por ejemplo, véase Booth et al., Immunol. Lett. 19:65-70 (1988); y Gardella et al., J. Biol Chema. 265: 15854-15859 (1990)].

En una modalidad, la oxintomodulina diseñada provista aquí se recupera en forma "pura sustancialmente".

En una modalidad, la frase "sustancialmente pura" se refiere a una pureza que permite el uso efectivo de la proteína en las aplicaciones descritas aquí.

El agonista del receptor de GLP-1/glucagón diseñado u oxintomodulina provista aquí puede tambien ser sintetizado usando sistemas de expresión in vitro. En otra modalidad, métodos de síntesis in vitro son bien conocidos en la téenica y los componentes del sistema están comercialmente disponibles.

En una modalidad, los péptidos de oxintomodulina diseñados recombinantes se sintetizan y se purifican; su eficacia terapéutica puede ensayarse in vivo o in vitro. Las actividades de unión de los péptidos de oxintomodulina diseñados recombinantes de la presente invención pueden determinarse utilizando varios ensayos como conoce por una persona con experiencia en la técnica.

En otra modalidad, el agonista del receptor de GLP- 1/glucagón u oxintomodulina diseñada de la presente invención puede proporcionar al individuo propiamente. En una modalidad, el agonista del receptor de GLP-1/glucagón u oxintomodulina de la presente invención puede proporcionar al individuo como parte de una composición farmacéutica donde se mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable.

En otra modalidad, una "composición farmacéutica" se refiere a una preparación de uno o más de los ingredientes activos descritos aquí con otros componentes químicos tal como portadores fisiológicamente adecuados y excipientes. El propósito de una composición farmaceutica es facilitar la administración de un compuesto a un organismo.

En otra modalidad, "ingrediente activo" se refiere a la secuencia del polipéptído de interés, que es responsable por el efecto biológico.

En otra modalidad, las frases "portador fisiológicamente aceptable" y "portador farmacéuticamente aceptable" que se utilizan indistintamente se refieren a un portador o un diluyente que no causa irritación significativa a un organismo y no derogar la actividad biológica y las propiedades del compuesto administrado. Un adyuvante está incluido en estas frases. En una modalidad, uno de los ingredientes incluidos en el portador farmacéuticamente aceptable puede ser por ejemplo polietilenglicol (PEG), un polímero biocompatible con una amplia gama de solubilidad en medios orgánicos y acuosos (Mutter et al. (1979)).

En otra modalidad, "excipiente" se refiere a una sustancia inerte añadida a una composición farmacéutica para facilitar aún más la administración de un ingrediente activo. En una modalidad, los excipientes incluyen el carbonato de calcio, fosfato de calcio, varios azúcares y tipos de almidón, derivados de celulosa, gelatina, aceites vegetales y polietilenglicoles.

Téenicas para la formulación y administración de fármacos se encuentran en "Remington’s Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, PA, última edición, que se incorporan aquí por referencia.

Varias modalidades de intervalos de dosificación por esta invención. La dosificación del agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP de la presente invención, en una modalidad, está en el intervalo de 0.005-100 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 0.005-5 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 0.01 -50 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 0.1 -20 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 0.1 -10 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es en el intervalo de 0.01 -5 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 0.001 -0.01 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 0.001 -0.1 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 0.1-5 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 0.5-50 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 0.2-15 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 0.8-65 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 1 -50 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 5 a 10 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 8-15 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 10-20mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 20-40 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en un intervalo de 60-120 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 12-40 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 40-60 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en un intervalo de 50-1 OOmg/día. En otra modalidad, la dosificación está en un intervalo de 1 -60 mg/día.

En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 15-25 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 5-10 mg/día. En otra modalidad, la dosificación está en el intervalo de 55-65 mg/día.

En otra modalidad, la dosificación es en un intervalo de 50-500 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es en un intervalo de 50-150 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es en un intervalo de 100-200 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es en un intervalo de 150-250 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es en un intervalo de 200-300 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es en un intervalo de 250-400 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es en un intervalo de 300-500 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es en un intervalo de 350-500 mg/día.

En una modalidad, la dosificación es de 20 mg/día. En una modalidad, la dosificación es de 30 mg/día. En una modalidad, la dosificación es de 40 mg/día. En una modalidad, la dosificación es de 50 mg/día. En una modalidad, la dosificación es de 0.01 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es de 0.1 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es de 1 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es 0.530 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es de 0.05 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es de 50 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es de 10 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es de 20-70 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es 5 mg/día.

En una modalidad, la dosificación del agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP es 1 -5 mg/día. En una modalidad, la dosificación de la oxintomodulina modificada con CTP es 1-3 mg/día. En otra modalidad, la dosificación de la oxintomodulina modificada con CTP es 2 mg/día.

En otra modalidad, la dosificación es de 1 -90 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es de 1 -90 mg/2 días. En otra modalidad, la dosificación es de 1 -90 mg/3 días. En otra modalidad, la dosificación es de 1 -90 mg/4 días. En otra modalidad, la dosificación es de 1 -90 mg/5 días. En otra modalidad, la dosificación es de 1 -90 mg/6 días. En otra modalidad, la dosificación es de 1 -90 mg/semana. En otra modalidad, la dosificación es de 1 -90 mg/9 días. En otra modalidad, la dosificación es de 1 -90 mg/1 1 días. En otra modalidad, la dosificación es de 1 -90 mg/14 días.

En otra modalidad, el agonista del receptor GLP-1/Glucagón la dosificación es de 10-50 mg/día. En otra modalidad, la dosificación es de 10-50 mg/2 días. En otra modalidad, la dosificación es de 10-50 mg/3 días. En otra modalidad, la dosificación es de 10-50 mg/4 días. En otra modalidad, la dosificación es de 10-50 microgramos mg/5 días. En otra modalidad, la dosificación es de 10-50 mg/6 días. En otra modalidad, la dosificación es de 10-50 mg/semana. En otra modalidad, la dosificación es de 10-50 mg/9 días. En otra modalidad, la dosificación es de 10-50 mg/1 1 días. En otra modalidad, la dosificación es de 10-50 mg/14 días.

En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP está formulado en una forma de dosificación intranasal. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP está formulado en una forma de dosificación inyectable. En otra modalidad, un polipéptido compuesto por un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 0.0001 mg a 0.6 mg. En otra modalidad, un polipéptido compuesto por un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 0.001 mg a 0.005 mg. En otra modalidad, un polipéptido compuesto por un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrada a un sujeto en una dosis que varía de 0.005 mg a 0.01 mg. En otra modalidad, un polipéptido compuesto por un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 0.01 mg a 0.3 mg. En otra modalidad, un polipéptido compuesto por un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 0.2 mg a 0.6 mg. En otra modalidad, el agonista del receptor de GLP-1/glucagón está libre de CTP en su término amino.

En otra modalidad, un polipéptido compuesto por un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP está formulado en una forma de dosificación intranasal. En otra modalidad, un polipéptido compuesto por un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP está formulado en una forma de dosificación inyectable. En otra modalidad, un polipéptido compuesto por un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrada a un sujeto en una dosis oscilan entre 0.0001 mg a 0.6 mg. En otra modalidad, un polipéptido compuesto por un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrada a un sujeto en una dosis que varía de 0.001 mg a 0.005 mg. En otra modalidad, un polipéptido compuesto por un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrada a un sujeto en una dosis que varía de 0.005 mg a 0.01 mg. En otra modalidad, un polipéptido compuesto por un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón y al menos una unidad de CTP es administrada a un sujeto en una dosis que varía de 0.01 mg a 0.3 mg. En otra modalidad, un polipéptido compuesto por un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón y al menos una unidad de CTP es administrada a un sujeto en una dosis en dosis que van desde 0.2 mg a 0.6 mg. En otra modalidad, el agonista del receptor de GLP-1/glucagón está libre de CTP en su término amino.

En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP se administra a un sujeto en una dosis que varía de 1-100 microgramos. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 10-80 microgramos. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 20-60 microgramos. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 10 y 50 microgramos. En otra modalidad, un polipeptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 40-80 microgramos. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía desde 10-30 microgramos. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 30-60 microgramos.

En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP se administra a un sujeto en una dosis que varía de 1 -100 microgramos. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 10-80 microgramos. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 20-60 microgramos. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 10-50 microgramos. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 40-80 microgramos. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 10-30 microgramos. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 30-60 microgramos.

En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP se administra a un sujeto en una dosis que varía de 0.2 mg a 2 mg. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 2 mg a 6 mg. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 4 mg a 10 mg. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 5 mg y 15 mg.

En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP se administra a un sujeto en una dosis que varía de 0.2 mg a 2 mg. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 2 mg a 6 mg. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 4 mg a 10 mg. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto en una dosis que varía de 5 mg y 15 mg.

En otra modalidad, la dosificación del agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP es tal que contiene 65% de la cantidad de los agonistas que administra mediante el agonista del receptor de GLP-1/glucagón no modificado con CTP. En otra modalidad, la dosificación del agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP es tal que contiene 55% de la cantidad del agonista que administra mediante el agonista del receptor de GLP-1/glucagón no modificado con CTP. En otra modalidad, la dosificación del agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP es tal que contiene 45% de la cantidad del agonista que administra mediante el agonista del receptor de GLP-1/glucagón no modificado con CTP. En otra modalidad, la dosificación del agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP es tal que contiene 10% de la cantidad del agonista que administra mediante el agonista del receptor de GLP-1/glucagón no modificado con CTP. En otra modalidad, la dosificación del agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP es tal que contiene 25% de la cantidad del agonista que administra mediante el agonista del receptor de GLP-1/glucagón no modificado con CTP. En otra modalidad, la dosificación del agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP es tal que contiene 35% de la cantidad del agonista que administra mediante el agonista del receptor de GLP-1/glucagón no modificado con CTP. En otra modalidad, la dosificación del agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP es tal que contiene 75% de la cantidad del agonista que administra mediante el agonista del receptor de GLP-1/glucagón no modificado con CTP. En otra modalidad, la dosificación del agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP es tal que contiene 100% de la cantidad del agonista que administra mediante el agonista no modificado con CTP. Sin embargo, aunque la dosificación contiene la misma cantidad de agonista como agonista del receptor de GLP-1/glucagón no modificado con CTP, es todavía ventajoso para los sujetos en que se administrarán con menos frecuencia debido a su vida media incrementada en comparación con el agonista normal.

En otra modalidad, una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón conjugado es entre 50-500 Ul por kg de peso corporal administrada una vez al día. En otra modalidad, una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón conjugado es 150-250 IU por kg de peso corporal, administrado una vez al día. En otra modalidad, una composición farmacéutica que comprende a un agonista del receptor de GLP-1/glucagón conjugado está formulada en una fuerza efectiva para la administración por diversos medios a un paciente humano.

En una modalidad, el polipéptido modificado con CTP que comprende agonista del receptor de GLP-1/glucagón es administrado en una cantidad efectiva para circular la actividad del agonista del receptor GLP-1/glucagón a 20-30 lU/dL en un sujeto. En otra modalidad, el polipeptido modificado con CTP que comprende agonista del receptor de GLP-1/glucagón es administrado en una cantidad efectiva para circular actividad del agonista del receptor GLP-1/glucagón a 25-50 lU/dL en un sujeto. En otra modalidad, el polipéptido modificado con CTP que comprende el agonista del receptor de GLP-1/glucagón es administrado en una cantidad efectiva para circular actividad del agonista del receptor GLP-1/glucagón a 50-100 lU/dL en un sujeto. En otra modalidad, el polipéptido modificado con CTP que comprende el agonista del receptor de GLP-1/glucagón es administrado en una cantidad efectiva para circular actividad del agonista del receptor GLP-1/glucagón a 100-200 lU/dL en un sujeto. En otra modalidad, el polipéptido modificado con CTP que comprende el agonista del receptor de GLP-1/glucagón es administrado en una cantidad efectiva para circular actividad del agonista del receptor GLP-1/glucagón a 10-50 lU/dL en un sujeto. En otra modalidad, el polipéptido modificado con CTP que comprende el agonista del receptor de GLP-1/glucagón es administrado en una cantidad efectiva para circular actividad del agonista del receptor GLP-1/glucagón de 20-100 lU/dL en un sujeto.

En una modalidad, el agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP es administrado a un sujeto sobre una base semanal. En otra modalidad, el agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP es administrado a un sujeto dos veces por semana. En otra modalidad, el agonista del receptor de GLP- 1/glucagón modificado con CTP es administrado a un sujeto en forma qumcenal (una vez cada dos semanas). En otra modalidad, el agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP es administrado a un sujeto dos veces al mes. En otra modalidad, el agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP es administrado a un sujeto una vez al mes. En otra modalidad, el agonista del receptor de GLP- 1/glucagón modificado con CTP es administrado a un sujeto sobre una base diaria. En otra modalidad, el agonista del receptor de GLP- 1/glucagón modificado con CTP es administrado a un sujeto cada dos días.

En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto una vez cada tres días. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP- 1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto una vez cada cuatro días. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto una vez cada cinco días. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto una vez cada seis días. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto una vez cada 7-14 días. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto una vez cada 10-20 días. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto una vez cada 5-15 días. En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP es administrado a un sujeto una vez cada 15-30 días.

En otra modalidad, los métodos de la invención incluyen aumentar el cumplimiento en el uso de la terapia del agonista del receptor de GLP-1/glucagón, que comprende proporcionar a un sujeto en necesidad del mismo, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón y por lo menos un péptido terminal carboxi de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón, aumentando así la situación de cumplimiento en el uso de la terapia del agonista del receptor de GLP-1/glucagón.

En otra modalidad, los métodos de la invención incluyen aumentar el cumplimiento de los pacientes afligidos con enfermedades crónicas que necesitan una terapia del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, los métodos de la invención permiten la reducción en la frecuencia de dosificación de un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificando el agonista del receptor de GLP-1/glucagón con CTP como descrito arriba.

En otra modalidad, el término cumplimiento comprende la adhesión. En otra modalidad, los métodos de la invención incluyen aumentar el cumplimiento de los pacientes que necesitan una terapia del agonista del receptor de GLP-1/glucagón reduciendo la frecuencia de administración del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, reducción en la frecuencia de administración del agonista del receptor de GLP-1/glucagón se logra debido a las modificaciones de CTP que rinden al agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP más estable. En otra modalidad, reducción en la frecuencia de administración del agonista del receptor de GLP-1/glucagón se obtiene como resultado del aumento T½ del agonista del receptor de GLP-1/glucagón. En otra modalidad, reducción en la frecuencia de administración del agonista del receptor de GLP-1/glucagón se obtiene como resultado de aumentar el tiempo de liquidación o reducción de la tasa de aclaramiento de la agonista del receptor de GLP-1/glucagón.

En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para reducir la tasa de aclaramiento de agonista del receptor de GLP-1/glucagón, que comprende el paso de al menos uno de los péptidos terminales carboxi de gonadotrofina coriónica (CTPs) al extremo amino o carboxi de agonista del receptor de GLP-1/glucagón, reduciendo la tasa de aclaramiento de agonista del receptor de GLP-1/glucagón.

En otra modalidad, reducción en la frecuencia de administración del agonista del receptor de GLP-1/glucagón se obtiene como resultado del aumento en la medida de AUC del agonista del receptor de GLP-1/glucagón.

La administración oral, en una modalidad, comprende una forma de dosificación unitaria que comprende tabletas, cápsulas, pastillas, tabletas masticables, suspensiones, emulsiones y similares. Tales formas de dosificación unidades comprenden una cantidad segura y eficaz de la deseada agonista del receptor de GLP-1/glucagón de la invención, cada una de los cuales en una modalidad de aproximadamente 0.7 o 3.5 mg a aproximadamente 280 mg/70 kg, o en otra modalidad, aproximadamente 0.5 o 10 mg a aproximadamente 210 mg/70 kg. Los portadores farmacéuticamente aceptables adecuados para la preparación de formas de dosificación de la unidad de administración peroral son bien conocidos en la téenica. En otras modalidades, las tabletas normalmente comprenden adyuvantes farmacéuticamente tal como adyuvantes como diluyentes inertes, tales como el carbonato de calcio, carbonato de sodio, manitol, lactosa y celulosa; aglutinantes tales como almidón, gelatina y sacarosa; disgregantes tales como almidón, ácido algínico y croscarmelosa; lubricantes tales como estearato de magnesio, ácido esteárico y talco. En una modalidad, deslizantes tal como el dióxido de silicio puede utilizarse para mejorar las características del flujo de la mezcla del polvo. En una modalidad, agentes colorantes, tales como tintas FD&C, puede agregarse para el aspecto. Los agentes edulcorantes y aromatizantes, tal como aspartame, sacarina, mentol, menta y sabores de la fruta, son adyuvantes útiles para tabletas masticables. Las cápsulas normalmente comprenden uno o más diluyentes sólidos descritos por encima. En otra modalidad, la selección de los componentes del portador depende de consideraciones secundarias como sabor, costos y auto-estabilidad, que no son críticos para los propósitos de esta invención, y puede hacerse fácilmente por una persona experta en la téenica.

En una modalidad, la forma de dosificación oral se compone de perfil de liberación predefinido. En una modalidad, la forma de dosificación oral de la presente invención comprende tabletas de liberación prolongada, cápsulas, pastillas o tabletas masticables. En una modalidad, la forma de dosificación oral de la presente invención comprende tabletas de lenta liberación, cápsulas, pastillas o tabletas masticables. En una modalidad, la forma de dosificación oral de la presente invención comprende unas tabletas de liberación inmediata, cápsulas, pastillas o tabletas masticables. En una modalidad, la forma de dosificación oral está formulada según el perfil de liberación deseada del ingrediente farmacéutico activo como es conocido para una persona con experiencia en la técnica.

Las composiciones perorales, en algunas modalidades, constituyen soluciones líquidas, emulsiones, suspensiones y similares. En algunas modalidades, los portadores farmacéuticamente aceptables adecuados para la preparación de dichas composiciones son bien conocidos en la técnica. En algunas modalidades, composiciones orales líquidas comprenden desde alrededor de 0.001 % a aproximadamente 0.933% del compuesto deseado o compuestos, o en otra modalidad, de aproximadamente 0.01 % a aproximadamente 10%.

En una modalidad, composiciones para su uso en los métodos de esta invención comprenden soluciones o emulsiones, que en algunas modalidades son soluciones acuosas o emulsiones que comprenden una cantidad segura y efectiva de los compuestos de la presente invención y, opcionalmente, otros compuestos, destinados a la administración tópica intranasal. En otra modalidad, las composiciones comprenden de aproximadamente 0.001 % a aproximadamente 10.0% p/v de un compuesto objeto, más preferiblemente de aproximadamente 00.1 % a aproximadamente 2.0, que se utilizan para el suministro sistémico de los compuestos por vía intranasal.

En otra modalidad, un polipéptido que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP se inyecta en el músculo (inyección intramuscular). En otra modalidad, un polipéptido compuesto por un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP se inyecta debajo de la piel (inyección subcutánea). En otra modalidad, un polipéptido compuesto por un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón y al menos una unidad de CTP se inyecta en el músculo. En otra modalidad, un polipéptido compuesto por un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y al menos una unidad de CTP se inyecta en la piel. En otra modalidad, un agonista del receptor de GLP-1/glucagón como se describe en este documento es administrado por la administración sistémica. En otra modalidad, un agonista del receptor de GLP-1/glucagón como se describe en este documento se administra por inyección intravenosa. En otra modalidad, la administración puede ser parenteral, pulmonar, oral, tópica, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, intranasal, transnasal, intraocular, oftálmica, epidural, bucal, rectal, transmucosal, de suministro intestinal o parenteral, incluyendo inyecciones ¡ntramedularmente así como intratecal o la administración intraventricular directa.

En otra modalidad, la preparación es administrada de forma local en lugar de sistemica, por ejemplo, mediante la inyección de la preparación directamente en una región específica del cuerpo del paciente.

En una modalidad, la vía de administración puede ser enteral. En otra modalidad, la ruta puede ser conjuntival, transdérmica, intradérmica, intraarterial, vaginal, rectal, intratumoral, parcanceral, transmucosal, intramuscular, intravascular, intraventricular, intracraneal, intranasal, sublingual o una combinación de las mismas.

En otra modalidad, las composiciones farmacéuticas son administradas por inyección intravenosa, intraarterial o intramuscular de una preparación líquida. En algunas modalidades, las formulaciones líquidas incluyen soluciones, suspensiones, dispersiones, emulsiones, aceites y similares. En una modalidad, las composiciones farmacéuticas son administradas por vía intravenosa y así se formulan en un formato adecuado para la administración intravenosa. En otra modalidad, las composiciones farmacéuticas son administradas intra arterial y así se formulan en un formato adecuado para la administración intraarterial. En otra modalidad, las composiciones farmacéuticas son administradas por vía intramuscular y por lo tanto se formulan en un formato adecuado para la administración intramuscular.

Además y en otra modalidad, las composiciones farmacéuticas son administradas por vía tópica para las superficies del cuerpo, y así se formulan en un forma adecuada para la administración tópica. Formulaciones tópicas adecuadas incluyen geles, ungüentos, cremas, lociones, gotas y similares. Para la administración tópica, los compuestos de la presente invención se combinan con un agente o agentes terapeuticos apropiados adicionales, preparados y aplicados como soluciones, suspensiones o emulsiones en un diluyente fisiológicamente aceptable con o sin un portador farmacéutico.

En una modalidad, las composiciones farmacéuticas de la presente invención son fabricadas por procesos conocidos en la téenica, por ejemplo, por medio de mezclado convencional, disolución, granulación, fabricación de gragea, pulverización, emulsificación, encapsulación, atrapamiento o procesos de liofilización.

En una modalidad, composiciones farmacéuticas para uso de acuerdo con la presente invención están formuladas de manera convencional utilizando uno o más portadores fisiológicamente aceptables que comprenden excipientes y auxiliares, que facilitan la transformación de los ingredientes activos en preparaciones que, se puede utilizar farmacéuticamente. En una modalidad, formulación es dependiente sobre la vía de administración elegida.

En una modalidad, inyectables de la invención se formulan en soluciones acuosas. En una modalidad, inyectables de la invención se formulan en amortiguadores fisiológicamente compatibles como tal como solución de Hank, solución de Ringer o amortiguador de sal fisiológica. En algunas modalidades, para la administración transmucosal, penetrantes apropiados a la barrera a ser penetrada se utilizan en la formulación. Dichos penetrantes generalmente son conocidos en la téenica.

En una modalidad, las preparaciones descritas aquí son formuladas para la administración parenteral, por ejemplo, por inyección del bolo o infusión continua. En algunas modalidades, las formulaciones para la inyección se presentan en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampollas o en envases multidosis con opcionalmente, un conservador añadido. En algunas modalidades, composiciones son suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos y contienen agentes de formulación como agentes de suspensión, estabilización y/o agentes dispersantes.

Las composiciones también comprenden, en algunas modalidades, conservadores, como el cloruro de benzalconio y timerosal y similares; agentes quelantes como edetato sódico y otros; amortiguadores como fosfato, citrato y acetato; agentes de tonicidad tales como cloruro de sodio, cloruro de potasio, glicerina, manitol y otros; antioxidantes como ácido ascórbico, acetilcistina, metabisulfato de sodio y otros; agentes aromáticos; ajustadores de viscosidad, tales como polímeros, incluyendo celulosa y derivados de la misma y alcohol polivinílico y ácidos y bases para ajustar el pH de estas composiciones acuosas según sea necesario. Las composiciones también comprenden, en algunas modalidades, anestésicos locales u otros ingredientes activos. Las composiciones pueden utilizarse como aerosoles, nieblas, gotas y similares.

En una modalidad, las composiciones farmacéuticas para la administración parenteral incluyen soluciones acuosas de la preparación activa en forma soluble en agua. Además, las suspensiones de los ingredientes activos pueden prepararse como aceite apropiado o suspensiones de inyección basadas en agua. Vehículos o solventes lipofílicos convenientes incluyen, en algunas modalidades, aceites grasos como el aceite de ajonjolí o ésteres de ácidos grasos sintéticos tales como oleato de etilo, triglicéridos o liposomas. Suspensiones acuosas inyectables contienen, en algunas modalidades, sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión, como la carboximetilcelulosa de sodio, sorbitol o dextrano. En otra modalidad, la suspensión también contiene estabilizantes adecuados o agentes que aumentan la solubilidad de los ingredientes activos para permitir la preparación de soluciones altamente concentradas.

En otra modalidad, el compuesto activo se puede entregar en una vesícula, en particular un liposoma (véase Langer, Science 249: 1527-1533 (1990); Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cáncer, López- Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353-365 (1989); Lopez-Berestein, ibid. , pp. 317-327; J. E. Diederichs and al. , Pharm./nd. 56 (1994) 267- 275).

En otra modalidad, la composición farmacéutica entregada en un sistema de liberación controlada está formulada para infusión intravenosa, bomba osmótica implantable, parche transdérmico, liposomas u otros modos de administración. En una modalidad, se utiliza una bomba (véase Langer, supra; Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987); Buchwald et al. , Surgery 88:507 (1980); Saudek et al., N. Engl. J. Med. 321 :574 (1989). En otra modalidad, pueden utilizarse los materiales polimericos. En otra modalidad, puede colocarse un sistema de liberación controlada en proximidad al objetivo terapéutico, es decir, el cerebro, por lo que requiere sólo una fracción de la dosis sistémica (véase, por ejemplo, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984). Otros sistemas de liberación controlada se discuten en la revisión por Langer (Science 249: 1527-1533 (1990).

En otra modalidad, el ingrediente activo está en forma de polvo para la constitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, solución estéril a base de agua libre de pirógenos, antes de su uso. Las composiciones se formulan, en algunas modalidades, para la administración por atomización e inhalación. En otra modalidad, las composiciones están contenidas en un recipiente con medio atomizante adherido.

En una modalidad, la preparación de la presente invención está formulada en composiciones rectales como supositorios o enemas de retención, usando, por ejemplo, bases de supositorio convencionales como la manteca de cacao u otros glicéridos.

En una modalidad, las composiciones farmacéuticas adecuadas para su uso en contexto de la presente invención incluyen composiciones en donde los ingredientes activos están contenidos en una cantidad efectiva para lograr el propósito previsto. En otra modalidad, una cantidad terapéuticamente efectiva significa una cantidad de ingredientes activos eficaces para evitar, aliviar o mejorar los síntomas de la enfermedad o prolongar la supervivencia del sujeto siendo tratado.

En una modalidad, la determinación de una cantidad terapeuticamente efectiva está dentro de la capacidad de los expertos en la téenica.

Algunos ejemplos de sustancias que pueden servir como portadores farmacéuticamente aceptables o sus componentes son azúcares, como la lactosa, glucosa y sacarosa; almidones, tales como almidón de maíz y almidón de papa; celulosa y sus derivados, como la carboximetil celulosa sódica, etil celulosa y metil celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; lubricantes sólidos, tales como el ácido esteárico y estearato de magnesio; sulfato de calcio; aceites vegetales, como el aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de ajonjolí, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de teobroma; polioles como el glicol de propileno, glicerina, sorbitol, manitol y glicol de polietileno; ácido algínico; emulsificantes, tales como los emulsores marca Tween™; agentes humectantes, tal como lauril sulfato de sodio; agentes colorantes; aromatizantes; agentes para tabletas, estabilizadores; antioxidantes; conservadores; agua libre de pirógenos; solución salina isotónica; y las soluciones amortiguadoras de fosfato. La elección de un portador farmacéuticamente aceptable para ser utilizado en conjunción con el compuesto está determinada básicamente por el compuesto que debe ser administrado. Si el compuesto en cuestión se debe inyectar, en una modalidad, el portador farmacéuticamente aceptable es solución salina estéril, fisiológica, con un agente de suspensión compatible con sangre, el pH de los cuales ha sido ajustado a alrededor de 7.4.

Además, las composiciones además comprenden aglutinantes (por ejemplo acacia, almidón de maíz, gelatina, carbómero, etilcelulosa, goma guar, hidroxipropil celulosa, hidroxipropil metil celulosa, povidona), agentes de desintegración (almidón de maíz, almidón de papa, ácido algínico, dióxido de silicio, croscarmelosa de sodio, crospovidona, goma guar, glicolato sódico de almidón), amortiguadores (por ejemplo, Tris-HCI, acetato, fosfato) de diferentes pH y fuerza iónica, aditivos como albúmina o gelatina para prevenir la absorción de las superficies, detergentes (por ejemplo, Tween 20, Tween 80, Pluronic F68, las sales de ácido biliar), inhibidores de la proteasa, tensioactivos (por ejemplo lauril sulfato de sodio), potenciadores de impregnación, agentes de solubilización (por ejemplo, glicerol, glicerol de polietileno), antioxidantes (por ejemplo, ácido ascórbico, metabisulfito de sodio, hidroxianisol butilado), estabilizadores (por ejemplo, hidroxipropil celulosa, hidroxipropilmetil celulosa), agentes de aumento de la viscosidad (por ejemplo carbómero, dióxido de silicio coloidal, etil celulosa, goma guar), edulcorantes (por ejemplo, aspartamo, ácido cítrico), conservadores (por ejemplo, timerosal, alcohol bencílico, parabenos), lubricantes (por ejemplo, ácido esteárico, estearato de magnesio, polietilenglicol, lauril sulfato de sodio), auxiliares del flujo (por ejemplo, dióxido de silicio coloidal), plastificantes (por ejemplo, dietil ftalato, trietil citrato), emulsificantes (por ejemplo, carbómero, hidroxipropil celulosa, lauril sulfato de sodio), revestimientos poliméricos (por ejemplo, poloxámeros o poloxaminas), agentes formadores de revestimiento y película (por ejemplo, etil celulosa, acrilatos, polimetacrilatos) y/o adyuvantes.

Componentes típicos de los portadores de jarabes, elixires, emulsiones y suspensiones incluyen etanol, glicerol, glicol de propileno, polietilenglicol, sacarosa líquida, sorbitol y agua. Para una suspensión, agentes de suspensión típicos incluyen metil celulosa, carboximetilcelulosa sódica, celulosa (por ejemplo Avicel™, RC-591), tragacanto y alginato de sodio; agentes humectantes típicos incluyen lecitina y polietileno óxido de sorbitán (por ejemplo, polisorbato 80). Conservadores típicos incluyen metilparabeno y benzoato de sodio. En otra modalidad, composiciones líquidas perorales también contienen uno o más componentes como los edulcorantes, aromatizantes y colorantes descritos antes.

Las composiciones también incluyen la incorporación del material activo en o en preparaciones de partículas de compuestos poliméricos como el ácido poliláctico, ácido poliglicólico, hidrogeles etc. o en liposomas, microemulsiones, micelas, vesículas unilaminares o multilaminares, eritrocito fantasmas o esferoplastos.) Tales composiciones influirán en el estado físico, solubilidad, estabilidad, tasa de liberación in vivo y tasa de aclarado in vivo.

También comprendidas por la invención son las composiciones en partículas recubiertas con polímeros (por ejemplo poloxámeros o poloxaminas) y el compuesto acoplado a los anticuerpos dirigidos contra los receptores específicos de tejido, ligandos o antígenos o acoplados a ligandos de receptores específicos de tejido.

En una modalidad, los compuestos modificados por la unión covalente de polímeros solubles en agua tales como polietilenglicol, copolímeros de polietilenglicol y polipropilenglicol, carboximetilcelulosa, dextrano, alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona o poliprolina. En otra modalidad, los compuestos modificados exhiben una vida media substancialmente más larga en sangre despues de la inyección intravenosa que los correspondientes compuestos sin modificar. En una modalidad, las modificaciones también aumentan la solubilidad del compuesto en solución acuosa, eliminan la agregación, mejoran la estabilidad física y química del compuesto y reducen considerablemente la inmunogenicidad y reactividad del compuesto. En otra modalidad, la actividad biológica in vivo deseada es alcanzada por la administración de tales secuestradores de polímero-compuesto con menos frecuencia o en dosis más bajas que con los compuestos no modificados.

La preparación de la cantidad efectiva o dosis puede ser estimada inicialmente de ensayos in vitro. En una modalidad, una dosis puede ser formulada en modelos animales y dicha información puede utilizarse para determinar con mayor precisión las dosis útiles en los seres humanos.

En una modalidad, la toxicidad y eficacia terapéutica de los principios activos descritos aquí pueden determinarse por procedimientos farmacéuticos estándar in vitro en cultivos celulares o en animales de experimentación. En una modalidad, los datos obtenidos en estos ensayos de cultivo in vitro y de células y los estudios en animales pueden utilizarse en la formulación de un rango de dosis para uso en humanos. En una modalidad, las dosis varían dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. En una modalidad, la formulación exacta, vía de administración y dosificación puede ser elegida por el médico individual teniendo en cuenta la condición del paciente. [Véase por ejemplo, Fingí, et al., (1975) "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Ch. 1 p.1.

En una modalidad, dependiendo de la severidad y la respuesta de la afección a tratar, la dosificación puede ser de una sola o una pluralidad de administraciones, con el curso del tratamiento que dura desde varios días a varias semanas o hasta que la curación sea efectuada o disminución del estado de la enfermedad se logre.

En una modalidad, la cantidad de una composición a ser administrada será dependiente del sujeto a ser tratado, la severidad de la enfermedad, la forma de administración, el juicio del médico tratante, etc.

En una modalidad, las composiciones, incluyendo la preparación de la presente invención formulada en un portador farmacéutico compatible son también preparadas, colocadas en un recipiente adecuado y etiquetadas para el tratamiento de una condición indicada.

En otra modalidad, un agonista del receptor de GLP-1/glucagón o una forma variante (modificado con CTP) del mismo, tal como se describe en este documento, es preparación liofilizada (es decir, secada por congelamiento) en combinación con excipientes orgánicos complejos y estabilizadores como agentes de superficie activa no iónicos (es decir, surfactantes), diversos azúcares, polioles orgánicos y/o albúmina serica humana. En otra modalidad, una composición farmacéutica comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón liofilizado como se describe en agua estéril para inyección. En otra modalidad, una composición farmacéutica comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón liofilizado como se describe en PBS estéril para inyección. En otra modalidad, una composición farmacéutica comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón liofilizado como se describe en 0.9% NaCI estéril para la inyección.

En otra modalidad, la composición farmacéutica comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP como se describe aquí y portadores complejos como la albúmina sérica humana, polioles, azúcares y agentes estabilizantes de superficie activa aniónicos. En otra modalidad, la composición farmacéutica comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP como se describe en este documento y ácido lactobiónico y un amortiguador de acetato/glicina. En otra modalidad, la composición farmacéutica comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP como se describe en este documento y aminoácidos como la arginina o glutamato que aumentan la solubilidad de las composiciones de interferón en el agua. En otra modalidad, la composición farmacéutica comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón liofilizado modificado con CTP como se describe en este documento y glicina o albúmina sérica humana (HSA), un amortiguador (por ejemplo, acetato) y un agente isotónico (por ejemplo, NaCI). En otra modalidad, la composición farmaceutica comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón liofilizado modificado con CTP como se describe en este documento y amortiguador de fosfato, glicina y HSA.

En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP como se describe en este documento se estabiliza cuando se coloca en soluciones amortiguadas con un pH entre cerca de 4 y 7.2. En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP está en una solución amortiguada con un pH entre cerca de 4 y 8.5. En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende a un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP está en una solución amortiguada con un pH entre cerca de 6 y 7. En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP está en una solución amortiguada con un pH de aproximadamente 6.5. En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende un agonista del receptor de GLP- 1/glucagón modificado con CTP como se describe en este documento se estabiliza con un aminoácido como un agente estabilizador y en algunos casos una sal (si el aminoácido no contiene una cadena lateral cargada).

En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP como se describe en este documento es una composición líquida que comprende un agente estabilizador entre cerca de 0.3% y 5% en peso, que es un aminoácido.

En otra modalidad, la composición farmaceutica que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP como se describe en este documento proporciona una dosificación precisa y seguridad del producto. En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP como se describe en este documento proporciona una formulación líquida biológicamente activa y estable para su uso en aplicaciones inyectables. En otra modalidad, la composición farmacéutica comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP no liofilizado como se describe en este documento.

En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP proporcionado aquí ofrece una formulación líquida permitiendo almacenaje durante un largo periodo de tiempo en un estado líquido facilitando el almacenaje y envío antes de la administración.

En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP proporcionado aquí comprende los lípidos sólidos como material de la matriz. En otra modalidad, la composición farmacéutica inyectable que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP como se describe en este documento comprende lípidos sólidos como material de la matriz. En otra modalidad, la producción de micropartículas de lípidos por congelación con aerosol fue descrita por Speiser (Speiser and al., Pharm. Res. 8 (1991 ) 47-54) seguido de nano-pellas de lípidos para la administración peroral (Speiser EP 0167825 (1990)). En otra modalidad, los lípidos, que se utilizan, son bien tolerados por el organismo (por ejemplo, glicéridos compuestos de ácidos grasos que están presentes en las emulsiones para nutrición parenteral).

En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP como se describe en este documento comprende micropartículas poliméricas. En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP como se describe en este documento comprende las nanopartículas. En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP como se describe en este documento comprende liposomas. En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP como se describe en este documento comprende emulsión de lípidos. En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón modificado con CTP como se describe en este documento comprende microesferas. En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende un agonista del receptor de GLP- 1/glucagón modificado con CTP como se describe en este documento comprende nanopartículas de lípidos. En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende un agonista del receptor de GLP- 1/glucagón modificado con CTP como se describe en este documento consta de nanopartículas de lípidos que comprenden lípidos anfifílicos. En otra modalidad, la composición farmacéutica que comprende un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón modificado con CTP como se describe en este documento comprende nanopartículas de lípidos que comprenden un fármaco, una matriz de lípidos y un agente tensioactivo. En otra modalidad, la matriz de lípidos tiene un contenido de monoglicéridos que es al menos el 50% p/p.

En una modalidad, las composiciones de la presente invención se presentan en un paquete o dispositivo dispensador, como por ejemplo un kit aprobado por la FDA, que contienen una o más formas de dosificación unitaria que contiene el ingrediente activo. En una modalidad, el paquete, por ejemplo, comprenden una hoja de metal o de plástico, tales como un blíster. En una modalidad, el dispositivo de paquete o dispensador es acompañado de las instrucciones para la administración. En una modalidad, el paquete o el dispensador se acomoda en un aviso asociado con el contenedor en un formulario prescrito por una agencia gubernamental que regula la fabricación, uso o venta de productos farmacéuticos, cuyo aviso es un reflejo de la aprobación por la agencia de la forma de las composiciones o administración humana o veterinaria. Tal aviso, en una modalidad, es etiquetado aprobado por la U S. Food y Drug Administration para la prescripción de fármacos o de una etiqueta de producto aprobado.

En una modalidad, se apreciará que el agonista del receptor de GLP-1/glucagón de la presente invención puede proporcionar al individuo con agentes activos adicionales para lograr un efecto terapeutico mejorado en comparación con el tratamiento con cada agente por sí mismo. En otra modalidad, (por ejemplo, dosificación y selección del agente complementario) se toman medidas para evitar efectos secundarios adversos que se asocian con las terapias de combinación.

En una modalidad, el término "cerca de/aproximadamente", significa en términos cuantitativos más o menos 5%, o en otra modalidad más o menos 10%, o en otra modalidad más o menos el 15% o en otra modalidad más o menos el 20%.

El término "sujeto" se refiere en una modalidad a un mamífero como a un ser humano que necesita de terapia, o susceptible a una condición o sus secuelas. El sujeto puede incluir perros, gatos, cerdos, vacas, ovejas, cabras, caballos, ratas y ratones y seres humanos. El término "sujeto" no excluye a un individuo que es normal en todos los aspectos.

Es de entenderse que en una modalidad, métodos de tratamiento y prevención del polipéptido modificado con CTP como se describe en este documento pueden ser sustituidos por usos del polipéptido modificado con CTP como se describe en este documento para lograr los métodos para la prevención y el tratamiento como se describe en este documento y/o usos del polipéptido modificado con CTP como se describe en la preparación de un medicamento para el cumplimiento de los métodos para la prevención y el tratamiento como se describe en este documento.

Objetos adicionales, ventajas y características novedosas de la presente invención serán aparentes para uno normalmente entendido en la materia en el examen de los siguientes ejemplos, que no están destinados a ser limitantes. Además, cada uno de los varios aspectos de la presente invención como se delinea antes en la presente y como se reclama en la sección de reivindicaciones posterior encuentra soporte experimental en los siguientes ejemplos.

Ejemplos Materiales y métodos: Construcción de plásmidos Siete plásmidos de OXM fueron construidos en el vector de expresión eucariótica (pCI-dhfrr) basado en la secuencia de aminoácidos OXM (# de acceso NP_002045) y la secuencia de aminoácidos de CTP (# de acceso NP_149032).

Una presentación esquemática de estos plásmidos se muestra en la tabla 1. A continuación una descripción detallada de la construcción de los plásmidos.

Tabla 1 Descripción esquemática de plásmidos Una secuencia de ácido nucleico de la variante OXM CTP-OXM-CTP (0.5C CTP-OXM-CTP, GenArt, GA # 0804377) fue sintetizada después de una optimización del uso de codón para el sistema de expresión DG44. Un fragmento de Xbal-Notl que contenga 0.5C secuencia CTP-OXM-CTP fue aislado. El fragmento fue insertado en el vector de expresión eucariótica pCI-dhfr para dar el clon 601 -0-p142-1.

Construcción de CTP-OXM-CTP Se utilizaron los siguientes iniciadores para sintetizar 601-6-p 149- 1 (CTP-OXM-CTP).

Iniciador 255’ CTCTAGAGGACATGGCCAC 3' (SEQ ID NO: 4).

Iniciador 85R 5' CTGGCTGTGCTGGGGCAGAATGGGTGT 3’ (SEQ ID NO: 5).

Iniciador 86 5' CCCCAGCACAGCCAGGG 3’ (SEQ ID NO: 6).

Iniciador 74R 5' GCGGCCGCATCCAGACCT 3' (SEQ ID NO: 7).

Se realizaron tres reacciones de POR. La iniciadora reacción se llevó a cabo con el iniciador 25 y el iniciador 85R y DNA plasmídico de 402-3-p81 -4 (CTP-hGH-CTP-CTP) como una plantilla; como resultado de la amplificación por PCR, se formó un producto bp ~181. La segunda reacción se llevó a cabo con el iniciador 86 y iniciador 74R y DNA plasmídico de 601-0-p142-1 (0.5C CTP-OXM-CTP) como una plantilla; como resultado de la amplificación por PCR, se formó un producto bp ~224. La última reacción se llevó a cabo con los iniciadores 25 y 74R y una mezcla de los productos de las anteriores dos reacciones como una plantilla; como resultado de la amplificación por PCR, un producto ~391 bp fue formado y ligado a un vector de clonación TA (Invitrogen, Catálogo K2000-01 ). Un fragmento de Xbal-Notl que contiene la secuencia de CTP-OXM-CTP fue aislado. El fragmento fue insertado en nuestro vector de expresión eucariótica pCI-dhfr para dar el clon 601 -6-p149-1.

La secuencia de ácido nucleico de codificación de CTP-OXM-CTP es como sigue: tctagaggacatggccaccggcagcaggaccagcctgctgctggccttcggcctgctgtgcctgcca tggctgcaggagggcagcgccagctcttcttctaaggctccacccccatctctgcccagccccagca gactgccgggccccagcgacacacccattctgccccagcacagccagggcaccttcaccagcgac tacagcaagtacctggacagcagaagggcccaggacttcgtccagtggctgatgaacaccaagag gaacaggaacaacatcgcttcctctagctccaaggcccctccaccctctctgcctagcccctctcggc tgcctggcccatccgacacaccaatcctgccacagtgatgaaggtctggatgcggccgc (SEQ ID NO: 8).

La secuencia de aminoácidos de codificación de CTP-OXM-CTP es como sigue: MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSASSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPI LPQHSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIASSSSKAPPPS LPSPSRLPGPSDTPILPQ (SEQ ID NO: 9).

Construcción de CTP-OXM-CTP-CTP Los siguientes iniciadores se usaron para sintetizar 601-3-p158-2 (CTP-OXM-CTP-CTP): Iniciador 25 5' CTCTAGAGGACATGGCCAC 3' (contiene el sitio de restricción de Xbal ) (SEQ ID NO: 10).

Iniciador 87R 5' GCTGGAGCTAGCGATGTTGTTCCTGTTCC 3' (contiene el extremo 3’ de OXM y el extremo 5’ de CTP) (SEQ ID NO: 11 ).

Iniciador 88 5' ACATCGCTAGCTCCAGCAGCAAGGCC 3' (contiene el extremo 3’ de OXM y el extremo 5’ de CTP) (SEQ ID NO: 12).

Iniciador 74R 5' GCGGCCGCATCCAGACCT 3' (contiene el sitio de restricción de Notl) (SEQ ID NO: 13).

Se realizaron tres reacciones de PCR. La primera reacción se realizó con el iniciador 25 e iniciador 87R y DNA plasmídico de 601-6-p149-1 (CTP-OXM-CTP-CTP) como una plantilla; como resultado de la amplificación por PCR, un producto -290 bp fue formado. La segunda reacción se llevó a cabo con el iniciador 88 y el iniciador 74R y DNA plasmídico de 402-3-p81 -4 (CTP-hGH-CTP-CTP) como una plantilla; como resultado de la amplificación por PCR, se formó un producto -200 bp. La última reacción se llevó a cabo con iniciadores 25 y 74R y una mezcla de los productos de las anteriores dos reacciones como una plantilla; como resultado de la amplificación por PCR, un producto -450 bp fue formado y ligado en el vector de clonación TA (Invitrogen, catálogo K2000-01 ). El fragmento Xbal-Notl que contiene la secuencia de CTP-OXM-CTP-CTP fue aislado. El fragmento fue insertado en nuestro vector de expresión eucariótica pCI-dhfr que da el clon 601-3-p158-2.

La secuencia de ácido nucleico que codifica CTP-OXM-CTP-CTP es como sigue: tctagaggacatggccaccggcagcaggaccagcctgctgctggccttcggcctgctgtgcctgcca tggctgcaggagggcagcgccagctcttcttctaaggctccacccccatctctgcccagccccagca gactgccgggccccagcgacacacccattctgccccagcacagccagggcaccttcaccagcgac tacagcaagtacctggacagcagaagggcccaggacttcgtccagtggctgatgaacaccaagag gaacaggaacaacatcgctagctccagcagcaaggcccctcccccgagcctgccctccccaagca ggctgcctgggccctccgacacaccaatcctgccacagagcagctcctctaaggcccctcctccatc cctgccatccccctcccggctgcctggcccctctgacacccctatcctgcctcagtgatgaaggtctgg atgcggccgc (SEQ ID NO: 14).

La secuencia de aminoácidos que codifica CTP-OXM-CTP- CTP es como sigue: MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSASSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPI LPQHSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIASSSSKAPPPS LPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (SEQ ID NO: 15).

Construcción de OXM-CTP-CTP Los siguientes iniciadores se usaron para sintetizar 601 -2-P160-2 (OXM-CTP-CTP): Iniciador 75 5' CTCCCAGTTCAATTACAGCT 3' (contiene la secuencia de pCI-dhfr antes del sitio de restricción Xbal) (SEQ ID NO: 16).

Iniciador 89R 5' GCTGTGAGCGCTGCCCTCCTGCAG 3' (contiene el extremo 5’ de OXM) (SEQ ID NO: 17).

Iniciador 90 5' GCGCTCACAGCCAGGGCACCTTC 3' (contiene el extremo 5’ de OXM) (SEQ ID NO: 18).

Iniciador 74R 5' GCGGCCGCATCCAGACCT 3' (contiene el sitio de restricción de Notl) (SEQ ID NO: 19).

Se realizaron tres reacciones de PCR. La primera reacción se realizó con el iniciador 75 e iniciador 89R y DNA plasmídico de 601-0-p142-1 (0.5C CTP-OXM-CTP) como una plantilla; como resultado de la amplificación por PCR, un producto ~ 175 bp fue formado. La segunda reacción se llevó a cabo con el iniciador 90 y el iniciador 74R y DNA plasmídico de 601-3-p158-2 (CTP-OXM-CTP-CTP) como una plantilla; como resultado de la amplificación por PCR, se formó un producto ~200 bp. La última reacción se llevó a cabo con iniciadores 25 y 74R y una mezcla de los productos de las anteriores dos reacciones como una plantilla; como resultado de la amplificación por PCR, un producto ~391 bp fue formado y ligado en el vector de clonación TA (Invitrogen, catálogo K2000-01). El fragmento Xbal-Notl que contiene la secuencia de OXM-CTP-CTP fue aislado. El fragmento fue insertado en nuestro vector de expresión eucariótica pCI-dhfr que da el clon 601-2-p160-2.

La secuencia de ácido nucleico que codifica OXM-CTP-CTP es como sigue: tctagaggacatggccacagggagcaggaccagcctgctgctggctttcggcctgctgtgtctgccat ggctgcaggagggcagcgctcacagccagggcaccttcaccagcgactacagcaagtacctggac agcagaagggcccaggacttcgtccagtggctgatgaacaccaagaggaacaggaacaacatcg ctagctccagcagcaaggcccctcccccgagcctgccctccccaagcaggctgcctgggccctccg acacaccaatcctgccacagagcagctcctctaaggcccctcctccatccctgccatccccctcccg gctgcctggcccctctgacacccctatcctgcctcagtgatgaaggtctggatgcggccgc (SEQ ID NO: 20) La secuencia de aminoácidos que codifica OXM-CTP-CTP es como sigue: LEDMATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSAHSQGTFTSDYSKYLDSRRAQD FVQWLMNTKRNRNNIASSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAP PPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (SEQ ID NO: 21 ) Construcción de CTP-CTP-OXM Una secuencia de ácido nucleico de la variante OXM (CTPx2-OXM, GenArt, GA # 1067101 ) fue sintetizada después de una optimización del uso de codón para el sistema de expresión DG44. El fragmento fue insertado en vector de expresión eucariótico Excellgene para dar el clon p162.

La secuencia de ácido nucleico de codificación de CTPx2-OXM es como sigue: ctatagggcgaattgaaggaaggccgtcaaggccgcatgagctctctagaggacatggccaccgg cagcaggaccagcctgctgctggccttcggcctgctgtgcctgccatggctgcaggagggcagcgc cagctccagcagcaaggcccctcccccgagcctgccctccccaagcaggctgcctgggccctccg acacaccaatcctgccacagagcagctcctctaaggcccctcctccatccctgccatccccctcccg gctgcctggcccctctgacacccctatcctgcctcagcacagccagggcaccttcaccagcgactac agcaagtacctggacagcagaagggcccaggacttcgtccagtggctgatgaacaccaagagga acaggaacaacatcgcttgatgaaggtctggatgcggccgcggtaccctgggcctcatgggccttcc tttcactgcccgctttccag (SEQ ID NO: 22).

La secuencia de aminoácido de codificación de CTPx2-OXM es como sigue: M A T G S R T S L L L A F G L L C L P W L Q E G S A S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q H S Q G T F T S D Y S K Y L D S R R A Q D F V Q W L M N T K R N R N N I A * * R S G C G R G T L G L M G L P F T A R F P (SEQ ID NO: 23).

Construcción de OXM-CTPx3: Una secuencia de ácido nucleico de la variante OXM (OXM-CTPx3, GenArt, GA # 1017864) fue sintetizada después de una optimización del uso de codón para el sistema de expresión DG44. El fragmento Xbal-Notl que contiene la secuencia de OXM-CTPx3 fue aislado. El fragmento fue insertado en nuestro vector de expresión eucariótica pCI-dhfr para dar el clon pCI-dhfr-OXM-ctpx3-p216-4.

La secuencia de ácido nucleico de codificación OXM-CTPx3 es como sigue: tctagactcgagcgatcgccatggccaccggctctaggacctccctgctgctggccttcggcctgctgt gcctgccctggctgcaggaaggcagcgctcactcccagggcaccttcacctccgactactccaagta cctggactctcggagagcccaggacttcgtgcagtggctgatgaacaccaagcggaaccggaaca atatcgcctcctcaagctccaaggcacctccaccttccctgcctagcccttccagactccctgggccc agtgacacccctatcctgcctcagtccagctccagcaaggccccaccccctagcctgccttctccttct cggctgcctggccccagcgatactccaattctgccccagtcctccagcagtaaggctccccctccatc tctgccatcccccagcagactgccaggcccttctgatacacccatcctcccacagtgatgaggatccg cggccgc (SEQ ID NO: 24).

La secuencia de aminoácido de codificación OXM-CTPx3 es como sigue: M A T G S R T S L L L A F G L L C L P W L Q E G S A H S Q G T F T S D Y S K Y L D S R R A Q D F V Q W L M N T K R N R N N IA S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P IL P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P IL P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P IL P Q * * (SEQ ID NO:25).

Construcción de OXM-CTPx4 Una secuencia de ácido nucleico de la variante OXM (OXM- CTPx4, GenArt, GA # 1115769) fue sintetizada despues de una optimización del uso de codón para el sistema de expresión DG44. El fragmento Xbal-Notl que contiene la secuencia de OXM-CTPx4 fue aislado. El fragmento fue insertado en el vector de expresión eucariótica pCI-dhfr para dar el clon pCI-dhfr-OXM-ctpx4-p254-3.

La secuencia de ácido nucleico de codificación de OXM-CTPx4 es como sigue: tctagactcgagcgatcgccatggctaccggctccagaacctctctgctgctggccttcggcctgctgt gtctgccttggctgcaagagggcagcgctcattcccagggcaccttcacctccgactactccaagtac ctggactctcgcagagcccaggacttcgtgcagtggctgatgaacaccaagcggaaccggaacaat atcgcctcctccagctccaaggcccctcctccatctctgccatcccccagtagactgcctgggccctct gacacccctatcctgcctcagtccagctcctctaaggccccaccaccttccctgcctagcccttcaag actgccaggccctagcgatacaccaattctgccccagtcctccagcagcaaggctcccccacctag cctgccttctccatcaaggctgcctggcccatccgataccccaattttgcctcagagcagctctagcaa ggcacctccccccagtctgccctctccaagcagactccctggcccttcagacactcccattctgccac agtgatgaggatccgcggccgc (SEQ ID NO: 26) La secuencia de aminoácidos de codificación de OXM-CTPx4 es como sigue: M A T G S R T S L L L A F G L L C L P W L Q E G S A H S Q G T F T S D Y S K Y L D S R R A Q D F V Q W L M N T K R N R N N I A S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P I L P Q * * (SEQ ID NO: 27).

Construcción de OXM-CTPx5 Una secuencia de ácido nucleico de la variante OXM (OXM-CTPx5, GenArt, GA # 1115770) fue sintetizada después de una optimización del uso de codón para el sistema de expresión DG44. El fragmento Xbal-Notl que contiene la secuencia de OXM-CTPx5 fue aislado. El fragmento fue insertado en el vector de expresión eucariótica pCI-dhfr para dar el clon pCI-dhfr-OXM-ctpx5-p255-1.

La secuencia de ácido nucleico de codificación de OXM-CTPx5 es como sigue: ctctagactcgagcgatcgccatggctaccggctccagaacctctctgctgctggccttcggcctgctg tgtctgccttggctgcaagagggcagcgctcattcccagggcaccttcacctccgactactccaagta cctggactctcgcagagcacaggacttcgtgcagtggctgatgaacaccaagcggaaccggaaca atatcgcctcctccagctccaaggcccctcctccatctctgccatcccccagtagactgcctgggccct ctgacacccctatcctgcctcagtccagctcctctaaggctccaccaccttccctgcctagcccttcaa gactgccaggccctagcgatacaccaattctgccccagtcctccagcagcaaggctcccccaccta gcctgccttctccatcaaggctgcctggcccatccgataccccaattttgcctcagagcagctctagca aggcacctccccccagtctgccctctccaagcagactccctggcccttcagacactccaatcctccca cagtcctctagctctaaagctccacctcccagcctgcccagccctagtagactccccggaccttctgat acccccatcttgccccagtgatgaggatccgcggccgc (SEQ ID NO: 28).

La secuencia de aminoácidos de codificación de OXM-CTPx5 es como sigue: M A T G S R T S L L L A F G L L C L P W L Q E G S A H S Q G T F T S D Y S K Y L D S R R A Q D F V Q W L M N T K R N R N N IA S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P IL P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P IL P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P IL P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P IL P Q S S S S K A P P P S L P S P S R L P G P S D T P IL P Q * * (SEQ ID NO: 29).

Expresión, purificación y caracterización de las variantes de OXM-CTP Todas las variantes de siete de OXM-CTPs fueron transitoriamente expresadas y producidas en la línea celular de XLG CHO-Express (Excellgene Company, Suiza). Se determinaron los niveles de concentración de recolecciones de OXM-CTPs usando un kit de OXM ELISA (Bachem Cat # S-1393.0001 ). La recolección se purificó mediante una columna DEAE, seguida de una columna Jacalin como un segundo paso de purificación. Las fracciones finales se dializaron contra citrato amortiguador 10 mM, 147 mM NaCI, pH 6. Se determinó la concentración de variantes purificadas por absorbancia a 280 nm utilizando el coeficiente de extinción de 1.9 = 1 mg/ml. 1.9 es el coeficiente de extinción que teóricamente se calculó para el peptido OXM. Puesto que no absorbe el péptido CTP a 280 nm, el mismo coeficiente de extinción se aplicó para la variante de OXM-CTP. El péptido nativo OXM era químicamente sintetizado (Almac Company, Irlanda), y su contenido de péptidos se determinó mediante análisis del aminoácido.

Perfil farmacocinético (PK) de variantes de OXM-CTP Se evaluaron los perfiles farmacocinéticos del péptido OXM y variantes de OXM-CTP de la siguiente manera. Ratas macho Sprague-Dawlcy (SD)-1 fueron administradas por vía subcutánea (SC) o por vía intravenosa (IV) con una dosis única de OXM nativa (n = 6, 230 mg/kg), de variantes CTP-OXM-CTP, CTP-OXM-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP y CTP-CTP-OXM (n = 6, 230 pg/kg) o variantes # OXM-CTP-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP-CTP-CTP-CTP (n = 6, 153 pg/kg). Cohortes de 3 animales por grupo fueron desangradas en puntos del tiempo alternandos. La concentración del suero OXM se analizó utilizando el kit ELISA comercial (Bachem, Cat # S-1393.0001 ). El diseño del estudio se resume en la tabla 2. El estudio fue dividido en 3 experimentos secuenciales, experimento #1 (grupos 1-4), experimento #2 (grupos 5-9) y experimento #3 (grupos 10-13).

Tabla 2 Resumen del diseño del estudio PK Estudio de IPGTT en ratones C57BL/6 Ratones en ayunas durante la noche se les midió la glucosa (glucosa pre dosis). Inmediatamente después, fueron inyectados IP con uno de los artículos de prueba. Qumce o 120 min después de la inyección, los niveles de glucosa fueron medidos (tiempo cero para la glucosa) seguido por la administración de glucosa vía la inyección IP (1.5 g/kg). Mediciones de glucosa adicionales en 10, 20, 30, 60, 90, 120 y 180 min fueron realizadas. Los niveles de glucosa en sangre fueron medidos en la vena de la cola utilizando un glucómetro portátil de muestreo.

Estudio de ingesta de alimentos en ratones C57BL/6 Al menos una semana antes de la inyección, los ratones se pesaron y fueron trasladados a una mini jaula para aclimatación, (un ratón en cada jaula). Durante el período de aclimatación, se manejaron diariamente y recibieron dos inyecciones de vehículo para minimizar el estrés durante el período de estudio. El día antes del experimento, los ratones se mantuvieron en ayuno. Diecisiete horas después de un ayuno, en la fase temprana de luz (900-1000 h), los ratones se pesaron nuevamente (antes de la inyección IP) seguida de una sola inyección de IP de 1700 nmol/kg (10 ml/1 g ratón) de péptido OXM o variantes de OXM-CTP OXM-CTPX3, OXM-CTPX4 y OXM-CTPX5. Después de la inyección, los ratones fueron regresados a sus jaulas (1 ratón en cada jaula) y recibieron una cantidad previamente pesada de comida. La ingesta de alimentos se midieron 0, 1 , 2, 4, 6, 8, 21 , 32 y 44, 55, 68, 80, 93 y 141 h después de la inyección pesando la comida. Al final del experimento, las ratas se pesaron nuevamente.

Resultados Ejemplo 1 Construcción de OXM modificado con CTP Por ingeniería genética, cDNA de péptido CTP fue fusionado a cDNA OXM humano, generando siete diferentes variantes OXM-CTP como se detalla en la tabla 1. Se verificaron las secuencias nucleotídicas de los plásmidos y los plásmidos fueron transfectados transitoriamente en línea celular de XLG CHO-Express (Excellgene Company, Suiza). Las variantes de OXM-CTP se secretaron en el medio de crecimiento, las recolecciones se recolectaron y se determinaron los niveles de OXM-CTP.

Ejemplo 2 Expresión, purificación y caracterización de las variantes de OXM-CTP Los medios de producción (recolecciones) fueron medidos para el nivel de secreción de variantes de OXM-CTP. Los niveles de secreción se resumen en la tabla 3. Los niveles de secreción obtenidos eran altos teniendo en cuenta los niveles de expresión de transfección transitoria estándar de péptidos recombinantes.

Tabla 3 Resumen de nivel de secreción de OXM-CTP Las recolecciones se purificaron según el método descrito en materiales y métodos. Se analizaron las muestras finales de variantes OXM-CTPX3, OXM-CTPX4 y CTPX5-OXM por SDS-PAGE (tinción Coomassie (Figura 1A) y análisis anti-OXM Western Blot (Figura 1 B)). Para las variantes CTP-OXM-CTP, CTP-OXM-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP y CTP-CTP-OXM, se analizaron muestras del proceso de purificación por tinción de Coomassie y análisis Western Blot (Figura 2). Como era de esperarse, las variantes de OXM-CTP mostraron diferencias en tamaño correlacionando el número de cartuchos CTP fusionados con el péptido. Los pesos moleculares relativamente altos es una indicación que puede haber alta ocupación de las cadenas O-glicano en los sitios potenciales de serina en el péptido CTP. El péptido OXM no reaccionó con el anticuerpo anti-OXM, probablemente debido a la dificultad téenica en la transferencia de un péptido de tamaño pequeño. La tinción de Coomassie demuestra que las variantes de OXM-CTP fueron altamente purificadas y contienen principalmente la forma superior.

Ejemplo 3 Perfil farmacocinético (PK) de variantes de OXM-CTP El perfil farmacocinético del péptido OXM en comparación a las variantes de OXM-CTP se analizó en las ratas macho SD-1. Los animales fueron administrados con una inyección sencilla IV (experimento 1 , figura 3A) o una inyección SC sencilla (experimentos 2 & 3, figuras 3B-3C) de variantes nativas de OXM u OXM-CTP CTP-OXM-CTP, CTP-OXM-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP, CTP-CTP-OXM (péptido 230 pg/kg) o variantes OXM-CTPX3, OXM-CTPX4 y OXM-CTPX5 (péptido 153 mg/kg). La concentración sérica de variantes OXM o OXM-CTP en los puntos de tiempo indicados se analizó mediante ELISA comercial. El perfil de PK se muestra en las figuras 3A-C, y los parámetros convencionales de PK no compartimental se resumen en la tabla 4. La adición de péptidos CTP a OXM dio lugar a prolongar la vida media de OXM nativa, de 0.22 hora a 2.7-10 h para diversas variantes de OXM-CTP (tabla 4, administración SC; Experimentos 2 & 3).

Dos copias de CTP se agregaron al péptido OXM en tres maneras diferentes para producir variantes CTP-OXM-CTP, OXM-CTP-CTP y CTP-CTP-OXM. La extensión más importante de la vida media del suero fue recibida cuando se agregaron las CTP en tándem al extremo C de OXM; variante OXM-CTP-CTP con T½ de 4.76 h. La fusión de tres CTP para el extremo C de OXM no resulta en una vida media alargada en comparación con la fusión de dos CTP. Sorprendentemente, la adición de cuatro y cinco copias del CTP a OXM extremo C había alargado el T½ hasta 10 h (tabla 4).

La exposición como se refleja por el parámetro de las AUC, fue aumentada más por ~17 veces para la variante OXM-CTP-CTP (experimento 2) y -30 veces para las variantes de OXM-CTPX4 y OXM-CTPX5 (experimento 3). Estos resultados indican que hay un efecto superior de prolongación despues de la adición de cuatro o cinco ejemplares de CTP para el péptido OXM.

La biodisponibilidad calculada de los experimentos 1 & 2 fue aumentada para CTP-OXM-CTP-CTP, pero ninguna mejora significativa fue encontrada para CTP-OXM-CTP y CTP-CTP-OXM (tabla 4).

Tabla 4 Parámetros de PK no compartimentales convencionales del peptido OXM y variantes de OXM-CTP como se determinó en tres diferentes experimentos w -J Una comparación entre los distintos grupos mostrando el aumento múltiplo de T1/2 y AUC°° demostraron que OXM-CTPx4 y OX-CTPx5 fueron superiores en estos parámetros en comparación con otras variantes (tabla 5).

Tabla 5 Doble de aumento de parámetros PK de variantes OXM-CTP con respecto al peptido OXM calculado de los experimentos 1 -3 Ejemplo 4 OXM modificado con CTP induce tolerancia a la glucosa Un estudio IPGTT fue llevado a cabo en ratones C57BL/6 demostrando que OXM mejora el aclarado de glucosa mediante la estimulación de la secreción de insulina. La prueba de tolerancia a la glucosa IP (IPGTT) evalúa el efecto de disminución de glucosa de OXM. Para evaluar la actividad in vivo de variantes de OXM o OXM-CTP, se aplicó el modelo IPGTT. Los ratones C57BL/6 en ayunas durante la noche se les inyectó IP peptido OXM o variantes de OXM-CTP seguidas por inyección IP de glucosa (1.5 g/kg) y la medición de los niveles de glucosa en sangre de la vena de la cola por medio de un glucómetro (figuras 4A-D). Las variantes de OXM-CTP se evaluaron en dos experimentos secuenciales; Experimento 1 para variantes CTP-OXM-CTP, CTP-OXM-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP, CTP-CTP-OXM (figuras 4A y 4C) y el experimento 2 para las variantes de OXM-CTP-CTP-CTP, OXM-CTPX4 y OXM-CTPX5 (figuras 4B y 4D). OXM (100 nmol/kg), o variantes de OXM-CTP (100 nmol/kg) se administraron IP 15 min o 2 horas (péptido OXM y variante OXM-CTPX4) antes de la inyección de glucosa IP, y la inducción de tolerancia a la glucosa fue comparada con el grupo de vehículos (amortiguador). Se midió un marcado efecto para las variantes de OXM-CTP CTP-OXM-CTP-CTP, OXM-CTP-CTP, OXM-CTPX3, OXM-CTPX4 y OXM-CTPX5 según lo reflejado por la reducción del 20-30% de glucosa en la sangre AUC en comparación con el grupo de vehículo en comparación con 100 nmol/kg del péptido OXM que tuvo poco impacto en la AUC calculada (Figuras 4A-D, reducción del 1 %, experimento 1 y 6.7%, experimento 2). Sorprendentemente, CTP-OXM- CTP dio lugar a los niveles de glucosa mayores mientras que CTP-CTP-OXM tuvo un impacto menor en la tolerancia a la glucosa. OXM-CTPX4 indujo actividad de tolerancia a la glucosa aún cuando se administro 120 min antes de la glucosa mientras que la actividad del péptido OXM ya no era evidente. Este resultado está alineado con el perfil de farmacocinética mejorado de esta variante.

Ejemplo 5 OXM modificado con CTP reduce la ingesta de alimentos La actividad farmacológica de OXM y variantes OXM-CTP además se evaluó en ratones C57BL/6 después de la administración del fármaco SC sola. En este estudio, se midió el efecto agudo sobre la ingesta de alimentos. Ratones C57BL/6 machos (n = 4 por grupo) fueron administrados con una sola administración SC de péptido OXM (2000 nmol/kg) o variantes de OXM-CTP (1700 nmol/kg): OXM-CTPX3, OXM-CTPX4 o OXM-CTPX5. La ingesta de alimentos se midió diariamente durante 6 días. OXM y variantes de OXM-CTP todos medidas resultaron en una reducción significativa en la ingesta de alimentos, según fue medido 1 h y 2h después de la inyección, la ingesta de alimentos 34-51 % (frente al vehículo) para los ratones tratados con la variante OXM y OXM-CTP, como se muestra en la figura 5A. El efecto del péptido OXM se suprimió 4h después de la inyección, mientras que todas las variantes de OXM-CTP fueron eficaces durante al menos 24h. El efecto más importante fue encontrado para la variante OXM-CTPX5, que redujo la ingesta de alimentos durante 5 días en comparación con el vehículo.

El porcentaje de consumo de alimentos en comparación con el vehículo, para diversos intervalos de tiempo sobre el experimento se presenta en la figura 5B. El efecto de OXM nativa desapareció después de una hora, CTP OXM-4/5 mantiene la inhibición durante 2 horas y OXM-5CTP alrededor de 80 horas (3 días). Es de destacar, la superioridad de la variante OXM-CTPx5 en el estudio de ingesta alimentaria aguda en correlación a su perfil mejorado de PK. Sorprendentemente, aunque la variante OXM-CTPx4 demostró un perfil mejorado de PK con T1/2 de aproximadamente 10 horas, su efecto no duró tanto como OXM-CTPx5 o OXM-CTPx3.

Habiendo descrito las modalidades preferidas de la invención en referencia a los dibujos de acompañamiento, debe entenderse que la invención no está limitada a las modalidades precisas, y que varios cambios y modificaciones podrán efectuarse en esta por los entendidos en la materia sin apartarse del alcance o el espíritu de la invención como se define en las reivindicaciones anexadas.

Claims

REIVINDICACIONES

1.- Un poli peptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón dual y por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista.

2.- El polipéptido modificado con CTP de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

3. El polipéptido modificado con CTP de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -2, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de por lo menos un CTP es seleccionada del grupo formado por SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

4.- El polipéptido modificado con CTP de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -3, caracterizado porque por lo menos un CTP es glicosilado.

5.- El polipéptido modificado con CTP de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -4, caracterizado porque por lo menos un CTP se trunca.

6.- El polipéptido modificado con CTP de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -5, caracterizado porque por lo menos un CTP se une a dicho polipéptido agonista vía un enlazador.

7.- El polipéptido modificado con CTP de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque dicho enlazador es un enlace peptídico.

8.- El polipéptido modificado con CTP de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, caracterizado porque cinco péptidos carboxi terminal de gonadotrofina coriónica se unen al extremo carboxi de dicho agonista.

9.- El polipéptido modificado con CTP de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -7, caracterizado porque cuatro péptidos carboxi terminal de gonadotrofina coriónica se unen al extremo carboxi de dicho agonista.

10.- El polipéptido modificado con CTP de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, caracterizado porque se unen tres péptidos carboxi terminal de gonadotrofina coriónica a dicho agonista, un CTP en el extremo amino y dos CTP en el extremo carboxilo de dicho agonista.

1 1.- El polipéptido modificado con CTP de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -7, caracterizado porque tres péptidos carboxi terminal de gonadotrofina coriónica se unen al extremo carboxi de dicho agonista.

12. El polipéptido modificado con CTP de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, caracterizado porque se unen dos péptidos carboxi terminal de gonadotrofina coriónica a dicho agonista, un CTP en el extremo carboxi y un CTP en el extremo amino de dicho agonista.

13.- El polipéptido modificado con CTP de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -7, caracterizado porque se unen dos péptidos amino terminal de gonadotrofina coriónica a dicho agonista en el carboxilo terminal de dicho agonista.

14.- El poli péptido modificado con CTP de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -7, caracterizado porque se unen dos péptidos carboxi terminal de gonadotrofina coriónica a dicho agonista en el extremo amino de dicho agonista.

15.- El polipéptido modificado con CTP de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -14, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de dicho polipéptido modificado con CTP comprende SEQ ID NO: 9, 15, 21 , 23, 25, 27 o 29.

16.- Una composición farmacéutica que comprende el polipéptido modificado con CTP de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -15.

17.- Un polinucleótido de codificación del polipéptido modificado con CTP de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -15.

18.- El polinucleótido de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la secuencia de dicho polinucleótido comprende SEQ ID NO: 8, 14, 20, 22, 24, 26 o 28.

19.- Un vector de expresión que comprende el polinucleótido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 17-18.

20.- Una célula que comprende el vector de expresión de la reivindicación 19.

21.- Una composición que comprende el vector de expresión de la reivindicación 19.

22.- Un método para producir un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón dual y por lo menos un peptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista, el método que comprende el paso de unir al menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista.

23.- El polipéptido modificado con CTP de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

24.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 22-23, caracterizado porque cinco péptidos carboxi terminal de gonadotrofina coriónica se unen a la extremo carboxi de dicho agonista.

25.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 22-23, caracterizado porque cuatro péptidos carboxi terminal de gonadotrofina coriónica se unen al extremo carboxi de dicho agonista.

26.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 22-23, caracterizado porque se unen tres péptidos carboxi terminal de gonadotrofina coriónica a dicho agonista, un CTP en el extremo amino y dos CTP en el extremo carboxi de dicho agonista.

27.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 22-23, caracterizado porque tres péptidos carboxi terminal de gonadotrofina coriónica se unen al extremo carboxi de dicho agonista.

28.- El metodo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 22-23, caracterizado porque se unen dos péptidos carboxi terminal de gonadotrofina coriónica a dicho agonista, un CTP en el extremo carboxilo y un CTP en el extremo amino de dicho agonista.

29.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 22-23, caracterizado porque se unen dos péptidos carboxi terminal de gonadotrofina coriónica a dicho agonista en el extremo carboxi de dicho agonista.

30.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 22-23, caracterizado porque se unen dos péptidos carboxi terminal de gonadotrofina coriónica a dicho agonista del extremo amino de dicho agonista.

31.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 22-30, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de dicho poli péptido modificado con CTP comprende SEQ ID NO: 9, 15, 21 , 23, 25, 27 o 29.

32.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 22-31 , caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de por lo menos un CTP es seleccionada del grupo formado por SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

33.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 22-32, caracterizado porque por lo menos un CTP es glicosilado.

34.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 22-33, caracterizado porque por lo menos un CTP se trunca.

35.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 22-34, caracterizado porque por lo menos un CTP se une a dicho agonista vía un enlazador.

36.- El método de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado porque dicho enlazador es un enlace peptídico.

37.- Un método para extender la vida media biológica de un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón dual, que comprende el paso de unir al menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica a un extremo amino o carboxi de dicho agonista, mejorando así la vida media de dicho agonista biológico.

38.- El polipéptido modificado con CTP de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

39. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 37-38, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de por lo menos un CTP es seleccionada del grupo formado por: SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

40.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 37-39, caracterizado porque por lo menos un CTP es glicosilado.

41.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 37-40, caracterizado porque por lo menos un CTP se trunca.

42.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 37-41 , caracterizado porque por lo menos un CTP se une a dicho agonista vía un enlazador.

43.- El metodo de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque dicho enlazador es un enlace peptídico.

44.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 37-43, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de dicho polipéptido modificado con CTP comprende SEQ ID NO: 9, 15, 21 , 23, 25, 27 o 29.

45.- Un método de mejorar el área bajo la curva (AUC) de un dual agonista del receptor de GLP-1/glucagón dual, que comprende el paso de unir al menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica a un extremo carboxi de dicho agonista, de tal modo mejorando el área bajo la curva (AUC) de dicho agonista.

46.- El polipéptido modificado con CTP de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

47.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45-46, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de por lo menos un CTP es seleccionada del grupo formado por: SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

48.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45-47, caracterizado porque por lo menos un CTP es glicosilado.

49.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45-48, caracterizado porque por lo menos un CTP se trunca.

50.- El metodo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45-49, caracterizado porque por lo menos un CTP se une a dicho agonista vía un enlazador.

51.- El método de conformidad con la reivindicación 50, caracterizado porque dicho enlazador es un enlace peptídico.

52.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45-51 , caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de dicho polipéptido modificado con CTP comprende SEQ ID NO: 9, 15, 21 , 23, 25, 27 o 29.

53.- Un método para reducir la frecuencia de dosificación de un agonista del receptor de GLP-1 /glucagón dual, que comprende el paso de conectar al menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica a un extremo amino o carboxi del agonista del receptor de GLP-1/glucagón, de tal modo reduciendo la frecuencia de dosificación de agonista del receptor de GLP-1 /glucagón.

54.- El método de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

55.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 53-54, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de por lo menos un CTP es seleccionada del grupo formado por SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

56.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 53-55, caracterizado porque por lo menos un CTP es glicosilado.

57.- El metodo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 53-56, caracterizado porque por lo menos un CTP se trunca.

58.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 53-57, caracterizado porque por lo menos un CTP se une al agonista del receptor de GLP-1/glucagón vía un enlazador.

59.- El método de conformidad con la reivindicación 58, caracterizado porque dicho enlazador es un enlace peptídico.

60.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 53-59, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos del polipéptido modificado con CTP dicho comprende SEQ ID NO: 9, 15, 21 , 23, 25, 27 o 29.

61.- Uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón dual y por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica (CTP) unida al extremo amino o caboxi de dicho agonista para la inducción de tolerancia a la glucosa en un sujeto.

62.- El uso de conformidad con la reivindicación 61 , caracterizado porque dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

63.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 61 -62, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de por lo menos un CTP es seleccionada del grupo formado por: SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

64.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 61 -63, caracterizado porque por lo menos un CTP es glicosilado.

65.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 61 -64, caracterizado porque por lo menos un CTP se trunca.

66.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 61 -65, caracterizado porque por lo menos un CTP se une a dicho polipéptido agonista vía un enlazador.

67.- El uso de conformidad con la reivindicación 66, caracterizado porque dicho enlazador es un enlace peptídico.

68.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 61 -67, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de dicho polipéptido modificado con CTP dicho comprende SEQ ID NO: 9, 15, 21 , 23, 25, 27 o 29.

69.- El uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista para prevenir el aumento de peso no deseado por un sujeto.

70.- El uso de conformidad con la reivindicación 69, caracterizado porque dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

71.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 69-70, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de por lo menos un CTP es seleccionada del grupo formado por: SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

72.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 69-71 , caracterizado porque por lo menos un CTP es glicosilado.

73.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 69-72, caracterizado porque por lo menos un CTP se trunca.

74.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 69-73, caracterizado porque por lo menos un CTP se une a dicho agonista vía un enlazador.

75.- El uso de conformidad con la reivindicación 74, caracterizado porque dicho enlazador es un enlace peptídico.

76.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 69-75, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de dicho polipéptido modificado con CTP comprende SEQ ID NO: 9, 15, 21 , 23, 25, 27 o 29.

77.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 69-76, caracterizado porque dicha ganancia de peso resulta en la obesidad en el sujeto.

78.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 69-77, caracterizado porque dicho peso es debido a una condición psicológica, o a una predisposición genética a ganar peso por dicho sujeto.

79.- El uso de conformidad con la reivindicación 78, caracterizado porque dicha condición psicológica es depresión, ansiedad o trastorno de estrés postraumático (PTSD).

80.- El uso de una composición que comprende modificado con CTP polipéptido compuesto por un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica (CTP) unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista para prevenir, reducir o suprimir el consumo de alimentos en un sujeto.

81.- El uso de conformidad con la reivindicación 80, caracterizado porque dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

82.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 80-81 , caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de por lo menos un CTP es seleccionada del grupo formado por: SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

83.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 80-82, caracterizado porque por lo menos un CTP es glicosilado.

84.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 80-83, caracterizado porque por lo menos un CTP se trunca.

85.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 80-84, caracterizado porque por lo menos un CTP se une a dicho agonista vía un enlazador.

86.- El uso de conformidad con la reivindicación 85, caracterizado porque dicho enlazador es un enlace peptídico.

87.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 80-86, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de dicho polipéptido modificado con CTP comprende SEQ ID NO: 9, 15, 21 , 23, 25, 27 o 29.

88.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 80-87, caracterizado porque prevenir, reducir o suprimir la ingesta de alimentos por dicho sujeto reduce las probabilidades de que dicho sujeto desarrolle un aumento de peso indeseado.

89.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 80-87, caracterizado porque prevenir, reducir o suprimir la ingesta de alimentos por dicho sujeto reduce las posibilidades de que el sujeto desarrolle la obesidad.

90.- El uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos una péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista para el tratamiento de la obesidad en un sujeto.

91.- El uso de conformidad con la reivindicación 90, caracterizado porque dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

92.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 90-91 , caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de por lo menos un CTP es seleccionada del grupo formado por: SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

93.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 90-92, caracterizado porque por lo menos un CTP es glicosilado.

94.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 90-93, caracterizado porque por lo menos un CTP se trunca.

95.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 90-94, caracterizado porque por lo menos un CTP se une a dicho agonista vía un enlazador.

96.- El uso de conformidad con la reivindicación 95, caracterizado porque dicho enlazador es un enlace peptídico.

97.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 90-96, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de dicho polipéptido modificado con CTP comprende SEQ ID NO: 9, 15, 21 , 23, 25, 27 o 29.

98 - El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 90-97, caracterizado porque dicho sujeto es genéticamente predispuesto a ser obeso.

99.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 90-98, caracterizado porque dicho método de tratar la obesidad provoca una reducción de peso corporal en dicho sujeto.

100.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 90-99, caracterizado porque dicho método de tratar la obesidad resulta en la reducción de grasas corporales en dicho sujeto.

101.- El uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un peptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista para tratar la diabetes tipo II en un sujeto.

102.- El uso de conformidad con la reivindicación 101 , caracterizado porque dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

103.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 101-102, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de por lo menos un CTP es seleccionado del grupo formado por: SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

104.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 101 -103, caracterizado porque por lo menos un CTP es glicosilado.

105.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 101 -104, caracterizado porque por lo menos un CTP se trunca.

106.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 101 -105, caracterizado porque por lo menos un CTP se une a dicho agonista vía un enlazador.

107.- El uso de conformidad con la reivindicación 106, caracterizado porque dicho enlazador es un enlace peptídico.

108.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 101-107, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de dicho polipéptido modificado con CTP comprende SEQ ID NO: 9, 15, 21 , 23, 25, 27 o 29.

109.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 101-108, caracterizado porque dicho sujeto es geneticamente predispuesto a ser obeso.

1 10.- El uso de un polipéptido modificado con CTP que comprende un agonista del receptor de GLP-1/glucagón y por lo menos un péptido carboxi terminal de gonadotrofina coriónica unido al extremo amino o extremo carboxi de dicho agonista para el tratamiento de un trastorno metabólico en un sujeto.

1 1 1.- El uso de conformidad con la reivindicación 1 10, caracterizado porque dicho agonista del receptor de GLP-1/glucagón es oxintomodulina.

1 12.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 10-1 11 , caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de por lo menos un CTP es seleccionada del grupo formado por: SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

1 13.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 110-112, caracterizado porque por lo menos un CTP es glicosilado.

1 14.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 10-1 13, caracterizado porque por lo menos un CTP se trunca.

1 15.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 110-1 14, caracterizado porque por lo menos un CTP se une a dicho agonista vía un enlazador.

1 16.- El uso de conformidad con la reivindicación 1 15, caracterizado porque dicho enlazador es un enlace peptídico.

117.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 10-1 16, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de dicho polipeptido modificado con CTP comprende SEQ ID NO: 9, 15, 21 , 23, 25, 27 o 29.

118.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 10-117, caracterizado porque dicho trastorno metabólico es la cetoacidosis diabética, diabetes mellitus o una combinación de éstos.

119.- El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 10-1 18, caracterizado porque dicho trastorno metabólico resulta de la falta de insulina y una sobreabundancia de la glucosa en dicho sujeto.