JP2015520128A - 長時間作用性オキシントモジュリン変異体とその作製方法 - Google Patents

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Abstract

本発明は、絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）修飾ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニスト、ならびにその作製方法および使用方法に関する。１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストと前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを提供する。【選択図】図５Ａ

Description

本発明は、絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）修飾ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニスト、ならびにその作製方法および使用方法を対象とする。
オキシントモジュリン（ＯＸＭ）は、食物摂取により腸Ｌ細胞が血流に分泌する３７アミノ酸ペプチドであり、脳において満腹感を誘導する。ＯＸＭはＧＰＬ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストでもあり、食物摂取の調節に関与している。ＯＸＭはげっ歯類とヒトの両方で食物摂取を抑制し、体重を減少させることが示された。しかしながら、ＯＸＭは比較的に非常に短い半減期を有し、ヒトにおいて薬理作用を達成するために超生理的用量の反復連日投与が必要である。したがって、後者のことを動物対象およびヒト対象における予防目的および治療目的に合うようにするためにＯＸＭの血清半減期を延長させる必要性がある。
本発明は、ペプチドベースの技術を利用して、タンパク質およびペプチド、とりわけＯＸＭの血清半減期を延長させる。この技術は、天然ペプチドであるｈＣＧのβ鎖のＣ末端ペプチド（ＣＴＰ）に基づく。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストと前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを提供する。
別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストと前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを作製する方法であって、前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを結合するステップを含む方法を提供する。
１つの実施形態では、本発明は、少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合するステップを含み、それにより前記アゴニストの生物学的半減期を改善する、ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストの生物学的半減期を延長する方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを前記アゴニストのカルボキシ末端に結合するステップを含み、それにより前記アゴニストの曲線下面積（ＡＵＣ）を改善する、ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストの曲線下面積（ＡＵＣ）を改善する方法を提供する。
１つの実施形態では、本発明は、少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合するステップを含み、それにより前記アゴニストの投与頻度を低下させる、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与頻度を低下させる方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、対象において耐糖性を誘導するための、ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストと前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用を提供する。
１つの実施形態では、本発明は、対象による望まない体重増を防ぐための、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用を提供する。別の実施形態では、体重増を得るリスクは対象の生理状態、または体重を増やす遺伝的素因に起因する。別の実施形態では、その生理状態は、うつ病、不安症または心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）である。
別の実施形態では、本発明は、対象において食物摂取を防止、減少、または抑制するための、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の使用を提供する。
１つの実施形態では、本発明は、対象において肥満を治療するための、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用を提供する。
別の実施形態では、本発明は、対象におけるＩＩ型糖尿病の治療のための、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用を提供する。
１つの実施形態では、本発明は、対象における代謝性障害を治療するための、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用を提供する。
本発明の他の特徴および利点は、次の実施例と図面の詳細な説明により明らかになる。しかしながら、本発明の精神と範囲の中での様々な変更と修飾がこの詳細な説明から当業者に明らかになることから、その詳細な説明とそれらの特定の実施例は本発明の好ましい実施形態を示すが、例示のみを目的として示されていることが理解されるべきである。
次の図面は本明細書の部分をなし、本開示のある特定の態様をさらに示すために含まれる。本開示の発明は、本明細書において提示される特定の実施形態の詳細な説明と組み合わせてこれらの図面のうちの１つ以上を参照することにより、より良く理解され得る。
精製したＯＸＭ−ＣＴＰ変異体、すなわち、ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰ４Ｘ、ＯＸＭ−ＣＴＰ５ＸのＰＡＧＥおよびウエスタンブロット（ＷＢ）分析を示す図である。ＯＸＭ試料とＯＸＭ−ＣＴＰ変異体（レーン当たり１０および２μｇのタンパク質）のクマシー染色。 精製したＯＸＭ−ＣＴＰ変異体、すなわち、ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰ４Ｘ、ＯＸＭ−ＣＴＰ５ＸのＰＡＧＥおよびウエスタンブロット（ＷＢ）分析を示す図である。抗ＯＸＭ抗体を使用するＯＸＭ−ＣＴＰ変異体のＷＢ分析。 ＯＸＭ−ＣＴＰ変異体、すなわち、ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ、ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰおよびＣＴＰ−ＣＴＰ−ＯＸＭの精製過程からの試料のＰＡＧＥ分析を示す図である。 ＯＸＭ−ＣＴＰ変異体、すなわち、ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ、ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰおよびＣＴＰ−ＣＴＰ−ＯＸＭの精製過程からの試料のＰＡＧＥ分析を示す図である（図２Ａの続き）。 ＳＤ−１ラットにおけるＯＸＭペプチドとＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の３つの一連の実験のうち、実験１のＰＫプロファイルを示す図である。 ＳＤ−１ラットにおけるＯＸＭペプチドとＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の３つの一連の実験のうち、実験２のＰＫプロファイルを示す図である。 ＳＤ−１ラットにおけるＯＸＭペプチドとＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の３つの一連の実験のうち、実験３のＰＫプロファイルを示す図である。 Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて測定されるＯＸＭペプチドとＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の耐糖性検査の結果を示す図である。 Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて測定されるＯＸＭペプチドとＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の耐糖性検査の結果を示す図である。 Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて測定されるＯＸＭペプチドとＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の耐糖性検査の結果を示す図である。 Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて測定されるＯＸＭペプチドとＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の耐糖性検査の結果を示す図である。 Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて測定されるＯＸＭペプチドとＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の急速食物摂取の結果を示す図である。ベヒクルと比べた、処置を受けているマウスにおける蓄積食物摂取のパーセンテージ。 Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて測定されるＯＸＭペプチドとＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の急速食物摂取の結果を示す図である。試験期間中の様々な時間間隔での食物摂取のパーセンテージ。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストと、該アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを提供する。
別の実施形態では、前記アゴニストは、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドである。別の実施形態では、前記ペプチドは、オキシントモジュリンである。
別の実施形態では、前記ＣＴＰ修飾ポリペプチドは、５０アミノ酸よりも少ないアミノ酸を含むペプチドと、該ペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含む。別の実施形態では、前記ペプチドはオキシントモジュリン（ＯＸＭ）である。
オキシントモジュリンペプチドは、糖尿病および肥満などの代謝性障害の治療に有用である。しかしながら、オキシントモジュリンペプチドは、半減期が短く、インビボ安定性が低いため、ヒトにおいて薬理作用を達成するためには超生理的用量を毎日繰り返し投与することが必要とされる。本明細書中以下に示されるように（実施例を参照のこと）、本発明の全てのＯＸＭ−ＣＴＰ変異体は、天然型ＯＸＭと比べて優れた、実質的な曝露の増加と半減期の延長を有する薬物動態プロファイルをラットにおいて示した。驚くことに、ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ変異体は、ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ変異体（３コピーのＣＴＰのうち、１つがＮ末端に、２つが一列になってＣ末端に、それぞれ融合したもの）と比べて優れたＰＫパラメータを示した。
ＯＸＭのＣ末端への２つのＣＴＰと３つのＣＴＰの融合により、天然型ペプチドの半減期と比べた類似の倍率増加（それぞれ２１．６と２１）がＳＣ投与後に生じた（本明細書中の実施例３を参照のこと）。それ故、ＯＸＭのＣ末端への４つのＣＴＰと５つのＣＴＰの融合により半減期が２０倍を超えて著しく延長することはないであろうと予期された。しかしながら、ＯＸＭ−４ＣＴＰ変異体とＯＸＭ−５ＣＴＰ変異体について、曲線下面積（ＡＵＣ）パラメータにより反映されるように曝露の３０倍の増加と共に驚くほど顕著なＯＸＭ半減期の増加（すなわち、５０倍）が実証された（本明細書中の実施例３を参照のこと）。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、オキシントモジュリン（ＯＸＭ）ペプチドと、該オキシントモジュリンペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＯＸＭは、全長型ＯＸＭまたはその活性断片のアミノ末端またはカルボキシ末端のペプチド結合を介して少なくとも１つのＣＴＰ単位に結合したものを含み、そのアミノ末端に他のＣＴＰを含まない。別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＯＸＭは全長型ＯＸＭまたはその活性断片のカルボキシ末端のペプチド結合を介して少なくとも１つのＣＴＰ単位に結合したものを含み、そのアミノ末端に他のＣＴＰを含まない。別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＯＸＭは全長型ＯＸＭまたはその活性断片のアミノ末端のペプチド結合を介して少なくとも１つのＣＴＰ単位に結合したものを含み、そのカルボキシ末端に他のＣＴＰを含まない。別の実施形態では、本発明は、本明細書中の上記の改変型ＯＸＭであって、１つの実施形態では、そのカルボキシ末端またはそのアミノ末端に結合した少なくとも１つのＣＴＰを含むものをコードする核酸分子を提供する。
別の実施形態では、ＣＴＰ配列は、ＤＰＲＦＱＤＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬ（配列番号１）を含む。別の実施形態では、ＣＴＰ配列は、ＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱ（配列番号２）を含む。別の実施形態では、ＣＴＰ配列は、配列番号１および配列番号２に示されている配列から選択されるアミノ酸配列を含む。
１つの実施形態では、本発明のカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）ペプチドはヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸位置１１２番から１４５番までのアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は、配列番号２に示されるような、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸位置１１８番から１４５番までのアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＴＰ配列はヒト絨毛性ゴナドトロピンの位置１１２番〜１１８番の間のいずれかの位置から始まり、位置１４５番で終わることもある。いくつかの実施形態では、ＣＴＰ配列ペプチドは２８アミノ酸長、２９アミノ酸長、３０アミノ酸長、３１アミノ酸長、３２アミノ酸長、３３アミノ酸長または３４アミノ酸長であり、ＣＴＰアミノ酸配列の位置１１２番、１１３番、１１４番、１１５番、１１６番、１１７番または１１８番から始まる。
したがって、１つの実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は、配列番号２に示されるような、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸位置１１２番から１４５番までのアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は、配列番号２に示されるような、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸位置１１３番から１４５番までのアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は、配列番号２に示されるような、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸位置１１４番から１４５番までのアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は、配列番号２に示されるような、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸位置１１５番から１４５番までのアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は、配列番号２に示されるような、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸位置１１６番から１４５番までのアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は、配列番号２に示されるような、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸位置１１７番から１４５番までのアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は、配列番号１に示されるような、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸位置１１２番から１４５番までのアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は、配列番号１に示されるような、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸位置１１３番から１４５番までのアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は、配列番号１に示されるような、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸位置１１４番から１４５番までのアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は、配列番号１に示されるような、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸位置１１５番から１４５番までのアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は、配列番号１に示されるような、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸位置１１６番から１４５番までのアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は、配列番号１に示されるような、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸位置１１７番から１４５番までのアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は、配列番号１に示されるような、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのアミノ酸位置１１８番から１４５番までのアミノ酸配列を含む。
１つの実施形態では、短縮化されたＣＴＰはＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰ（配列番号３）を含む。別の実施形態では、短縮化されたＣＴＰは配列番号３の最初の１０アミノ酸を含む。別の実施形態では、短縮化されたＣＴＰは配列番号３の最初の１１アミノ酸を含む。
１つの実施形態では、短縮化されたＣＴＰは配列番号２の最初の１４アミノ酸を含む。１つの実施形態では、短縮化されたＣＴＰは配列番号２の最初の１３アミノ酸を含む。１つの実施形態では、短縮化されたＣＴＰは配列番号２の最初の１２アミノ酸を含む。１つの実施形態では、短縮化されたＣＴＰは配列番号２の最初の１１アミノ酸を含む。１つの実施形態では、短縮化されたＣＴＰは配列番号２の最初の１０アミノ酸を含む。１つの実施形態では、短縮化されたＣＴＰは配列番号２の最初の９アミノ酸を含む。１つの実施形態では、短縮化されたＣＴＰは配列番号２または配列番号３の最初の８アミノ酸を含む。１つの実施形態では、短縮化されたＣＴＰは配列番号２または配列番号３の最初の７アミノ酸を含む。１つの実施形態では、短縮化されたＣＴＰは配列番号２または配列番号３の最初の６アミノ酸を含む。１つの実施形態では、短縮化されたＣＴＰは配列番号２または配列番号３の最初の５アミノ酸を含む。
別の実施形態では、ＣＴＰペプチドは、参照により全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第５，７１２，１２２号明細書に記載されるような１〜５か所の保存的アミノ酸置換により天然型ＣＴＰと異なる絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰの変異体である。別の実施形態では、ＣＴＰペプチドは、１か所の保存的アミノ酸置換により天然型ＣＴＰと異なる絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰの変異体である。別の実施形態では、ＣＴＰペプチドは、２か所の保存的アミノ酸置換により天然型ＣＴＰと異なる絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰの変異体である。別の実施形態では、ＣＴＰペプチドは、３か所の保存的アミノ酸置換により天然型ＣＴＰと異なる絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰの変異体である。別の実施形態では、ＣＴＰペプチドは、４か所の保存的アミノ酸置換により天然型ＣＴＰと異なる絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰの変異体である。別の実施形態では、ＣＴＰペプチドは、５か所の保存的アミノ酸置換により天然型ＣＴＰと異なる絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰの変異体である。
別の実施形態では、本発明のＣＴＰペプチドアミノ酸配列は、天然型ＣＴＰアミノ酸配列またはそのペプチドに対して少なくとも７０％相同である。別の実施形態では、本発明のＣＴＰペプチドアミノ酸配列は、天然型ＣＴＰアミノ酸配列またはそのペプチドに対して少なくとも８０％相同である。別の実施形態では、本発明のＣＴＰペプチドアミノ酸配列は、天然型ＣＴＰアミノ酸配列またはそのペプチドに対して少なくとも８５％相同である。別の実施形態では、本発明のＣＴＰペプチドアミノ酸配列は、天然型ＣＴＰアミノ酸配列またはそのペプチドに対して少なくとも９０％相同である。別の実施形態では、本発明のＣＴＰペプチドアミノ酸配列は、天然型ＣＴＰアミノ酸配列またはそのペプチドに対して少なくとも９５％相同である。別の実施形態では、本発明のＣＴＰペプチドアミノ酸配列は、天然型ＣＴＰアミノ酸配列またはそのペプチドに対して少なくとも９８％相同である。
別の実施形態では、本発明のＣＴＰペプチドをコードするポリヌクレオチドは、天然型ヒトＣＴＰのＤＮＡ配列またはそのペプチドに対して少なくとも７０％相同である。別の実施形態では、本発明のＣＴＰペプチドをコードするポリヌクレオチドは、天然型ヒトＣＴＰのＤＮＡ配列またはそのペプチドに対して少なくとも８０％相同である。別の実施形態では、本発明のＣＴＰペプチドをコードするポリヌクレオチドは、天然型ヒトＣＴＰのＤＮＡ配列またはそのペプチドに対して少なくとも８５％相同である。別の実施形態では、本発明のＣＴＰペプチドをコードするポリヌクレオチドは、天然型ＣＴＰのＤＮＡ配列またはそのペプチドに対して少なくとも９０％相同である。別の実施形態では、本発明のＣＴＰペプチドをコードするポリヌクレオチドは、天然型ＣＴＰのＤＮＡ配列またはそのペプチドに対して少なくとも９５％相同である。別の実施形態では、本発明のＣＴＰペプチドをコードするポリヌクレオチドは、天然型ＣＴＰのＤＮＡ配列またはそのペプチドに対して少なくとも９８％相同である。
１つの実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが短縮化されている。別の実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの両方が短縮化されている。別の実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの２つが短縮化されている。別の実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの３つが短縮化されている。別の実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの４つが短縮化されている。別の実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの５つが短縮化されている。別の実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの２つ以上が短縮化されている。別の実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列の全てが短縮化されている。
１つの実施形態では、少なくとも１つのＣＴＰがリンカーを介してアゴニストポリペプチドに結合している。別の実施形態では、少なくとも１つのＣＴＰがリンカーを介してアゴニストポリペプチドに結合している。別の実施形態では、前記リンカーはペプチド結合である。
１つの実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの少なくとも１つがグリコシル化されている。別の実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの両方がグリコシル化されている。別の実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの２つがグリコシル化されている。別の実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの３つがグリコシル化されている。別の実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの４つがグリコシル化されている。別の実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの５つがグリコシル化されている。別の実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの２つ以上がグリコシル化されている。別の実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列の全てがグリコシル化されている。
１つの実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は少なくとも１か所のグリコシル化部位を含む。１つの実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は２か所のグリコシル化部位を含む。１つの実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は３か所のグリコシル化部位を含む。１つの実施形態では、本発明のＣＴＰ配列は４か所のグリコシル化部位を含む。１つの実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの１つ以上が完全にグリコシル化されている。別の実施形態では、絨毛性ゴナドトロピンＣＴＰアミノ酸配列のうちの１つ以上が部分的にグリコシル化されている。１つの実施形態では、部分的にグリコシル化されているとは、ＣＴＰグリコシル化部位のうちの１か所がグリコシル化されていることを示す。別の実施形態では、ＣＴＰグリコシル化部位のうちの２か所がグリコシル化されている。別の実施形態では、ＣＴＰグリコシル化部位のうちの３か所がグリコシル化されている。
いくつかの実施形態では、ＣＴＰ配列修飾はより低い投与量の使用を可能にする利点がある。いくつかの実施形態では、ＣＴＰ配列修飾はより少ない投与量の使用を可能にする利点がある。いくつかの実施形態では、ＣＴＰ配列修飾は安全長時間作用性効果を可能にする利点がある。
いくつかの実施形態では、「ポリペプチド」、「改変型オキシントモジュリン」、または「タンパク質」は、本明細書において使用される場合、天然型ポリペプチド（分解産物、合成的に作製されたポリペプチドまたは組換えポリペプチドのいずれか）およびペプチド模倣物（通常は合成的に作製されたポリペプチド）、ならびにポリペプチド類似体であるペプトイドおよびセミペプトイドを包含し、それらは、いくつかの実施形態では、オキシントモジュリンを含むポリペプチドをヒト対象または動物対象内にある間により安定にし、または細胞に透過する可能性を高める修飾を有する。
いくつかの実施形態では、修飾にはＣ末端修飾、ＣＨ２−ＮＨ、ＣＨ２−Ｓ、ＣＨ２−Ｓ＝Ｏ、Ｏ＝Ｃ−ＮＨ、ＣＨ２−Ｏ、ＣＨ２−ＣＨ２、Ｓ＝Ｃ−ＮＨ、ＣＨ＝ＣＨまたはＣＦ＝ＣＨを含むが、これらに限定されないポリペプチド結合修飾、骨格修飾、および残基修飾が含まれるが、これらに限定されない。ペプチド模倣物化合物を調製するための方法は当技術分野においてよく知られており、例えば、Quantitative Drug Design, C.A. Ramsden Gd., 17.2章, F. Choplin Pergamon Press (1992)において明示されている。該文献は、参照により本明細書中において完全に示されたかのように組み込まれる。この点のさらなる詳細が本明細書中下記に示される。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド内のポリペプチド結合（−ＣＯ−ＮＨ−）が置換される。いくつかの実施形態では、ポリペプチド結合がＮ−メチル化結合（−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＯ−）により置換される。いくつかの実施形態では、ポリペプチド結合がエステル結合（−Ｃ（Ｒ）Ｈ−Ｃ−Ｏ−Ｏ−Ｃ（Ｒ）−Ｎ−）により置換される。いくつかの実施形態では、ポリペプチド結合がケトメチレン結合（−ＣＯ−ＣＨ２−）により置換される。いくつかの実施形態では、ポリペプチド結合が、Ｒがあらゆるアルキルであるα‐アザ結合（−ＮＨ−Ｎ（Ｒ）−ＣＯ−）、例えばカルバ結合（−ＣＨ２−ＮＨ−）により置換される。いくつかの実施形態では、ポリペプチド結合がヒドロキシエチレン結合（−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−）により置換される。いくつかの実施形態では、ポリペプチド結合がチオアミド結合（−ＣＳ−ＮＨ−）により置換される。いくつかの実施形態では、ポリペプチド結合がオレフィン二重結合（−ＣＨ＝ＣＨ−）により置換される。いくつかの実施形態では、ポリペプチド結合がレトロアミド結合（−ＮＨ−ＣＯ−）により置換される。いくつかの実施形態では、ポリペプチド結合が、Ｒが自然界であれば炭素原子上に存在する「通常の」側鎖であるポリペプチド誘導体（−Ｎ（Ｒ）−ＣＨ２−ＣＯ−）により置換される。いくつかの実施形態では、これらの修飾はポリペプチド鎖に沿って上記結合のうちのいずれかで生じ、１つの実施形態では、同時に幾つか（２〜３個の結合）で生じる。
１つの実施形態では、ポリペプチド中のトリプトファン、チロシンおよびフェニルアラニンなどの天然芳香族アミノ酸がフェニルグリシン、ＴＩＣ、ナフチルアラニン（ｎａｐｈｔｈｙｌｅｌａｎｉｎｅ）（Ｎｏｌ）、フェニルアラニンの環メチル化誘導体、フェニルアラニンのハロゲン化誘導体またはｏ−メチル−チロシンなどの合成非天然酸の代わりに置換される。いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドは１つ以上の修飾アミノ酸または１つ以上の非アミノ酸単量体（例えば脂肪酸、複合体炭水化物など）を含む。
１つの実施形態では、「アミノ酸」または「アミノ酸配列」は、２０種類の天然アミノ酸；例えば、ヒドロキシプロリン、ホスホセリンおよびホスホトレオニンなどの翻訳後にインビボでしばしば修飾された天然アミノ酸；ならびに２−アミノアジピン酸、ヒドロキシリシン、イソデスモシン、ノルバリン、ノルロイシンおよびオルニチンを含むが、これらに限定されない異常アミノ酸を含むと理解される。１つの実施形態では、「アミノ酸」はＤ−アミノ酸とＬ−アミノ酸の両方を含む。
１つの実施形態では、本発明のポリペプチドは、オキシントモジュリンを含むポリペプチドが可溶性であることを要求する治療において活用される。いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドは、ヒドロキシル基含有側鎖のためポリペプチド溶解性を上昇させることができるセリンとトレオニンを含むが、これらに限定されない１つ以上の非天然型または天然型の極性アミノ酸を含む。
別の実施形態では、本発明の改変型オキシントモジュリンペプチドは例えば標準的固相技法を用いて生化学的に合成される。いくつかの実施形態では、これらの生化学的方法には独占的固相合成、部分的固相合成、断片濃縮、または古典的溶液合成が含まれる。
１つの実施形態では、組換えタンパク質技術を用いて本発明の改変型オキシントモジュリンペプチドを作製する。いくつかの実施形態では、組換えタンパク質技術を比較的に長い（例えば、１８〜２５アミノ酸よりも長い）ポリペプチドの作製のために用いる。いくつかの実施形態では、組換えタンパク質技術を大量の本発明の改変型オキシントモジュリンペプチドの作製のために用いる。いくつかの実施形態では、組換え技術はBitter et al., (1987) Methods in Enzymol. 153:516-544、 Studier et al. (1990) Methods in Enzymol. 185:60-89、 Brisson et al. (1984) Nature 310:511-514、 Takamatsu et al. (1987) EMBO J. 6:307-311、 Coruzzi et al. (1984) EMBO J. 3:1671-1680 および Brogli et al., (1984) Science 224:838-843、 Gurley et al. (1986) Mol. Cell. Biol. 6:559-565 および Weissbach & Weissbach, 1988, Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, ニューヨーク, VIII節, 421〜463頁により記載されている。それらの文献の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ポリペプチドは、５０アミノ酸よりも少ないアミノ酸を含むペプチドと、該ペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含む。１つの実施形態では、本明細書において提供されるＣＴＰ修飾ポリペプチドは、４０アミノ酸よりも少ないアミノ酸を含むペプチドと、該ペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含む。別の実施形態では、本明細書において提供されるＣＴＰ修飾ポリペプチドは、３０アミノ酸、２０アミノ酸、または１０アミノ酸よりも少ないアミノ酸を含むペプチドを含む。１つの実施形態では、５０アミノ酸よりも少ないアミノ酸を含むペプチドは、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストである。別の実施形態では、５０アミノ酸よりも少ないアミノ酸を含むペプチドは、ＯＸＭである。
別の実施形態では、ＯＸＭは、次のアミノ酸（ＡＡ）配列：ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＫＲＮＲＮＮＩＡ（配列番号３０）を含む。別の実施形態では、ＯＸＭは、配列番号３０のアミノ酸配列から成る。別の実施形態では、ＯＸＭは、ＣＡＳ番号６２３４０−２９−８で示されるアミノ酸配列を含むか、またはそのアミノ酸配列から成る。
別の実施形態では、ＯＸＭは、ヒトＯＸＭまたはあらゆる哺乳類のＯＸＭである。別の実施形態では、ＯＸＭは、グルカゴン−３７または生理活性エンテログルカゴンとも呼ばれる。別の実施形態では、ＯＸＭはＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストである。別の実施形態では、ＯＸＭという用語はＯＸＭの生物学的活性断片を含む。別の実施形態では、生物学的活性ＯＸＭは配列番号３０のアミノ酸３０番からアミノ酸３７番までにわたる。別の実施形態では、生物学的活性ＯＸＭは配列番号３０のアミノ酸１９番からアミノ酸３７番までにわたる。別の実施形態では、本発明のＯＸＭは２個のＣ末端アミノ酸が欠失されるオクタペプチドに対応する。別の実施形態では、本発明のＯＸＭは本明細書に記載されるＯＸＭ活性を保持する配列番号３０のあらゆる断片に対応する。
１つの実施形態では、２つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドがオキシントモジュリンに結合しており、そのうちの１つのＣＴＰがオキシントモジュリンペプチドのカルボキシ末端に、１つのＣＴＰがアミノ末端に結合している。別の実施形態では、２つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドがオキシントモジュリンペプチドのカルボキシ末端でオキシントモジュリンに結合している。別の実施形態では、２つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドがオキシントモジュリンに結合しており、そのうちの両方がオキシントモジュリンペプチドのアミノ末端で結合している。別の実施形態では、３つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドがオキシントモジュリンに結合しており、そのうちの１つのＣＴＰがオキシントモジュリンペプチドのアミノ末端に、２つのＣＴＰがカルボキシ末端に結合している。別の実施形態では、３つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドがオキシントモジュリンペプチドのカルボキシ末端に結合している。別の実施形態では、４つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドがオキシントモジュリンペプチドのカルボキシ末端に結合している。別の実施形態では、５つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドがオキシントモジュリンペプチドのカルボキシ末端に結合している。別の実施形態では、１〜１０個のＣＴＰがオキシントモジュリンのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合している。別の実施形態では、１〜１０個のＣＴＰがオキシントモジュリンのアミノ末端に結合している。別の実施形態では、１〜１０個のＣＴＰがオキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合している。
別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリン（ＯＸＭ）ペプチドと、該オキシントモジュリンペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを作製する方法であって、少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを、オキシントモジュリンペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合させるステップを含む方法を提供する。
１つの実施形態では、本発明は、５０アミノ酸よりも少ないアミノ酸を含むペプチドの生物学的半減期を延長させるための方法であって、少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合させるステップを含み、それにより前記アゴニストの生物学的半減期を改善する方法を提供する。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストの生物学的半減期を延長させるための方法であって、少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合させるステップを含み、それにより前記アゴニストの生物学的半減期を改善する方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンの生物学的半減期を延長させるための方法であって、少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを、オキシントモジュリンのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合させるステップを含み、それによりオキシントモジュリンの生物学的半減期を改善する方法を提供する。
１つの実施形態では、本発明は、５０アミノ酸よりも少ないアミノ酸を含むペプチドの曲線下面積（ＡＵＣ）を改善する方法であって、少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを前記アゴニストのカルボキシ末端に結合させるステップを含み、それにより前記アゴニストの曲線下面積（ＡＵＣ）を改善する方法を提供する。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストの曲線下面積（ＡＵＣ）を改善する方法であって、少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを前記アゴニストのカルボキシ末端に結合させるステップを含み、それにより前記アゴニストの曲線下面積（ＡＵＣ）を改善する方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンの曲線下面積（ＡＵＣ）を改善する方法であって、少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを、オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合させるステップを含み、それによりオキシントモジュリンの曲線下面積（ＡＵＣ）を改善する方法を提供する。
１つの実施形態では、オキシントモジュリンという用語は、公知のオキシントモジュリンの相同体をさらに含む。１つの実施形態では、その相同体は機能的相同体である。別の実施形態では、「機能的」という用語は、本明細書において提供される相同体、ペプチドまたはタンパク質が有する食欲を抑制する能力を指す。その用語は、本明細書において提供される相同体、ペプチドまたはタンパク質が有する別のタンパク質またはペプチドの生物学的半減期を延長させる能力も指す。別の実施形態では、本明細書において提供されるタンパク質、ペプチドまたは相同体の生物学的半減期（Ｔ１／２）は、そのタンパク質、ペプチドまたは相同体の量の半分が対象中の生物学的媒体の中で分解される、または存在しなくなるのにかかる時間を指す。別の実施形態では、その生物学的媒体は血清、脳脊髄液、組織、粘膜、などである。
１つの実施形態では、本発明に係る相同性は、それの欠失変異体、挿入変異体、またはアミノ酸置換を含む置換変異体、およびそれの生物学的活性ポリペプチド断片も包含する。１つの実施形態では、本明細書において提供される変異体は保存的置換、または欠失、挿入、またはオキシントモジュリンの三次元構造を著しく変えることが無い置換を含む。別の実施形態では、欠失、挿入、または置換はオキシントモジュリンの目的の機能を変えることがなく、１つの実施形態ではその目的の機能とは特定の結合相手への結合である。
１つの実施形態では、オキシントモジュリン（ｏｘｙｎｔｏｄｕｌｉｎ）は受容体に結合し、食欲の抑制を仲介する。別の実施形態では、その受容体はＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体である。別の実施形態では、その受容体はＧＬＰ−１受容体である。別の実施形態では、その受容体はグルカゴン受容体である。さらに別の実施形態では、その受容体はオキシントモジュリンに結合する当技術分野において公知のあらゆる受容体である。
別の実施形態では、本発明はオキシントモジュリンの相同体を含む。１つの実施形態では、本発明は、ＯＸＭ相同体であって、１つの実施形態では配列番号３０のペプチドのペプチド相同体を指すＯＸＭ相同体を提供する。
別の実施形態では、本発明は食欲抑制活性を有するオキシントモジュリンの相同体を含む。別の実施形態では、本発明は機能的結合を有するオキシントモジュリンの相同体を含む。別の実施形態では、本発明は食欲抑制および活性を有する本明細書に記載されるオキシントモジュリンの相同体を含む。別の実施形態では、本発明は機能的結合を有する本明細書に記載されるオキシントモジュリンの相同体を含む。別の実施形態では、本発明は相同体、例えば、米国国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）のＢｌａｓｔＰソフトウェアを初期設定パラメータと共に用いて決定される、オキシントモジュリンに対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも８９％、少なくとも９１％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％相同であるポリペプチドも包含する。
１つの実施形態では、本発明は、本明細書において提供されるＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む医薬組成物を提供する。
本明細書に記載される要素またはステップを含む本発明の組成物および方法は、別の実施形態ではそれらの要素またはステップから成り得、または別の実施形態ではそれらの要素またはステップから基本的に成り得ることが理解されるものとする。いくつかの実施形態では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語は、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストなどの指示された活性薬剤の包含、ならびに製薬業において公知であるような他の活性薬剤、および薬学的または生理学的に許容可能な担体、賦形剤、軟化剤、安定化剤などの包含を指す。いくつかの実施形態では、「基本的に成る」という用語は、指示された有効成分が唯一の有効成分であるが、しかしながら、その製剤の安定化、保存などのために含まれ得るが、指示された有効成分の治療効果には直接的に関与しない他の化合物を有する組成物を指す。いくつかの実施形態では、「基本的に成る」という用語はその有効成分の放出を促進する構成要素を指す場合があり得る。いくつかの実施形態では、「成る」という用語は、その有効成分および薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む組成物を指す。
本明細書に記載される要素またはステップを含む本発明の組成物および方法は、別の実施形態ではそれらの要素またはステップから成り得、または別の実施形態ではそれらの要素またはステップから基本的に成り得ることが理解されるものとする。いくつかの実施形態では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語は、ＣＴＰ修飾オキシントモジュリンなどの指示された活性薬剤の包含、ならびに製薬業において公知であるような他の活性薬剤、および薬学的または生理学的に許容可能な担体、賦形剤、軟化剤、安定化剤などの包含を指す。いくつかの実施形態では、「基本的に成る」という用語は、指示された有効成分が唯一の有効成分であるが、しかしながら、その製剤の安定化、保存などのために含まれ得るが、指示された有効成分の治療効果には直接的に関与しない他の化合物を有する組成物を指す。いくつかの実施形態では、「基本的に成る」という用語はその有効成分の放出を促進する構成要素を指す場合があり得る。いくつかの実施形態では、「成る」という用語は、その有効成分および薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む組成物を指す。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜３個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜４個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜５個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜６個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜７個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜８個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜９個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜１０個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜３個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜４個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜５個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜６個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜７個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜８個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜９個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜１０個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜４個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜５個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜６個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜７個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜８個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜９個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜１０個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜４個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜５個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜６個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜７個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜８個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜９個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜１０個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜５個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜６個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜７個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜８個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜９個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜１０個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜５個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜６個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜７個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜８個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜９個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜１０個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５〜６個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５〜７個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５〜８個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５〜９個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５〜１０個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５〜６個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５〜７個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５〜８個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５〜９個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５〜１０個のＣＴＰとを含むポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜３個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜４個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜５個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜６個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜７個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜８個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜９個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜１０個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜３個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜４個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜５個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜６個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜７個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜８個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜９個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜１０個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜４個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜５個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜６個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜７個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜８個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜９個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜１０個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜４個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜５個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜６個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜７個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜８個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜９個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜１０個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜５個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜６個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜７個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜８個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜９個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜１０個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜５個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜６個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜７個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜８個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜９個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜１０個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５〜６個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５〜７個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５〜８個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５〜９個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５〜１０個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５〜６個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５〜７個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５〜８個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５〜９個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５〜１０個のＣＴＰとから成るポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜３個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜４個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜５個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜６個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜７個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜８個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜９個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した２〜１０個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜３個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜４個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜５個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜６個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜７個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜８個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜９個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した２〜１０個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜４個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜５個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜６個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜７個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜８個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜９個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した３〜１０個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜４個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜５個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜６個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜７個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜８個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜９個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３〜１０個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜５個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜６個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜７個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜８個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜９個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した４〜１０個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜５個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜６個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜７個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜８個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜９個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した４〜１０個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５〜６個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５〜７個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５〜８個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５〜９個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した５〜１０個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５〜６個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５〜７個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５〜８個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５〜９個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した５〜１０個のＣＴＰとから基本的に成るポリペプチドを提供する。
別の実施形態では、本発明は、そのアミノ末端にＣＴＰを有しないＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含むか、該アゴニストから基本的に成るか、または該アゴニストから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、そのアミノ末端にＣＴＰを欠くＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含むか、該アゴニストから基本的に成るか、または該アゴニストから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、そのカルボキシ末端に少なくとも１つのＣＴＰを有しかつそのアミノ末端にＣＴＰを有しないＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含むか、該アゴニストから基本的に成るか、または該アゴニストから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、そのカルボキシ末端に本明細書に記載される数のＣＴＰを有しかつそのアミノ末端にＣＴＰを有しないＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含むか、該アゴニストから基本的に成るか、または該アゴニストから成るポリペプチドを提供する。
別の実施形態では、本発明は、そのアミノ末端にＣＴＰを有しないオキシントモジュリンを含むか、該オキシントモジュリンから基本的に成るか、または該オキシントモジュリンから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、そのアミノ末端にＣＴＰを欠くオキシントモジュリンを含む、そのようなオキシントモジュリンから基本的に成る、またはそのようなオキシントモジュリンから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、そのカルボキシ末端に少なくとも１つのＣＴＰを有しかつそのアミノ末端にＣＴＰを有しないオキシントモジュリンを含むか、該オキシントモジュリンから基本的に成るか、または該オキシントモジュリンから成るポリペプチドを提供する。別の実施形態では、本発明は、そのカルボキシ末端に本明細書に記載される数のＣＴＰを有しかつそのアミノ末端にＣＴＰを有しないオキシントモジュリンを含むか、該オキシントモジュリンから基本的に成るか、または該オキシントモジュリンから成るポリペプチドを提供する。
１つの実施形態では、ＣＴＰ修飾ポリペプチドのアミノ酸配列は、本明細書においてさらに提供される配列番号９、１５、２１、２３、２５、２７、または２９を含む。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ポリペプチドのアミノ酸配列は、本明細書においてさらに提供される配列番号９、１５、２１、２３、２５、２７、または２９からなる群より選択される。
別の実施形態では、本発明は、本明細書中の上記のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。別の実施形態では、前記ポリヌクレオチドは、本明細書においてさらに提供される配列番号８、１４、２０、２２、２４、２６または２８を含む。別の実施形態では、前記ポリヌクレオチドは、本明細書においてさらに提供される配列番号９８、１４、２０、２２、２４、２６または２８からなる群より選択される。
１つの実施形態では、本発明は、本明細書において提供されるポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。別の実施形態では、本発明は、前記発現ベクターを含む細胞を提供する。別の実施形態では、本発明は、前記発現ベクターを含む組成物を提供する。
別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載される発現ベクターを含む細胞を提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む細胞、または前記アゴニストと前記ＣＴＰとから成るＣＴＰ修飾ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む細胞を提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから成るＣＴＰ修飾ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む細胞を提供する。
別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載される発現ベクターを含む組成物を提供する。別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む組成物、または前記アゴニストと前記ＣＴＰとから成るＣＴＰ修飾ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む組成物を提供する。別の実施形態では、本発明は、前記アゴニストと、該アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから成るＣＴＰ修飾ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む細胞を提供する。別の実施形態では、前記アゴニストは、ポリペプチド、またはペプチドである。別の実施形態では、前記ペプチドは、オキシントモジュリンである。
別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載される細胞を含む組成物を提供する。別の実施形態では、前記細胞は真核細胞である。別の実施形態では、前記細胞は原核細胞である。
１つの実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを提供する。別の実施形態では、本発明は、本明細書中の上記の組換えオキシントモジュリンを提供する。１つの実施形態では、本発明は、本明細書中の上記の改変型オキシントモジュリンを提供する。１つの実施形態では、本明細書中の上記の改変型オキシントモジュリンは、ＣＴＰ修飾オキシントモジュリンと呼ばれる。
１つの実施形態では、オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合しているＣＴＰは、一列になってそのカルボキシ末端に結合している。１つの実施形態では、オキシントモジュリンのアミノ末端に結合しているＣＴＰは、一列になってそのアミノ末端に結合している。
１つの実施形態では、本明細書に記載される改変型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは、非ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと比べて同等または改善された生物活性を有する。別の実施形態では、本明細書において提供される改変型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは、非ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと比べて同等または改善された薬理的測定値を有する。別の実施形態では、本明細書において提供される改変型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは、非ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと比べて同等または改善された薬物動態を有する。別の実施形態では、本明細書において提供される改変型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは、非ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと比べて同等または改善された薬力学を有する。
別の実施形態では、「ＣＴＰペプチド」、「カルボキシ末端ペプチド」および「ＣＴＰ配列」という用語は、本明細書において互換的に使用される。別の実施形態では、カルボキシ末端ペプチドは全長型ＣＴＰである。それぞれの可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
別の実施形態では、参照により全体が本明細書に組み込まれる米国特許第７，５５３，９４０号明細書に記載されるように、シグナルペプチドがＣＴＰのアミノ末端に結合している。
他の実施形態では、改変型オキシントモジュリンという用語は成熟型オキシントモジュリンのアミノ酸配列を指す。他の実施形態では、改変型オキシントモジュリンという用語はそのシグナル配列またはシグナルペプチドを含むオキシントモジュリンのアミノ酸配列を指す。
別の実施形態では、「シグナル配列」と「シグナルペプチド」は、本明細書において互換的に使用される。別の実施形態では、ポリヌクレオチド分子に対して言及されるとき、「配列」はコード部分を指す場合があり得る。それぞれの可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
別の実施形態では、本明細書に記載される少なくとも１つのＣＴＰを含む改変型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは、少なくとも１つのＣＴＰを有しない同じＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと比べて強化されたインビボ生物活性を有する。１つの実施形態では、前記強化された生物活性は、少なくとも幾らかの生物活性を維持しつつ、長くなったその改変型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの半減期に由来する。別の実施形態では、前記強化された生物活性は、ＣＴＰ修飾により生じる強化された生物活性に由来する。別の実施形態では、前記強化された生物活性は、長くなった半減期とＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの強化された機能性の両方に由来する。
１つの実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端にある少なくとも１つのＣＴＰ配列は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの分解に対する強化された防御を提供する。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端にある少なくとも１つのＣＴＰ配列は、クリアランスに対する強化された防御を提供する。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端にある少なくとも１つのＣＴＰ配列は、延長したクリアランス時間を提供する。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端にある少なくとも１つのＣＴＰ配列は、そのＣｍａｘを高める。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端にある少なくとも１つのＣＴＰ配列は、そのＴｍａｘを高める。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端にある少なくとも１つのＣＴＰ配列は、Ｔ１／２を延長させる。
別の実施形態では、本発明の複合体型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは、非修飾複合体型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと同様に使用される。別の実施形態では、本発明の複合体型オキシントモジュリンは非修飾複合体型オキシントモジュリンと同様に使用される。別の実施形態では、本発明の複合体型オキシントモジュリンは増加した循環半減期と血漿中残留時間、低下したクリアランス、および上昇した臨床活性をインビボで有する。別の実施形態では、本明細書に記載される複合体型オキシントモジュリンの改善された特性のため、この複合体型は同じオキシントモジュリンの非修飾型よりも低い頻度で投与される。
別の実施形態では、投与頻度の低下は治療戦略の改善になり、１つの実施形態では、その改善された治療戦略により患者コンプライアンスが改善されることになり、治療成果の改善ならびに患者のクオリティ・オブ・ライフの改善につながる。別の実施形態では、オキシントモジュリンの従来の複合体と比べて、本明細書に記載される複合体の分子量とリンカー構造を有する複合体は改善された力価、改善された安定性、上昇したＡＵＣレベル、および向上した循環半減期を有することが分かった。
別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、前記オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とから成るＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む医薬組成物をさらに提供する。
別の実施形態では、本発明は、オキシントモジュリンと、該オキシントモジュリンのカルボキシ末端に結合した３つのゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）から成るＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む医薬組成物をさらに提供する。
別の実施形態では、本発明は、本明細書において提供される複合体型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む組成物を提供する。別の実施形態では、本発明は、本明細書において提供されるその複合体型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態では、本発明は、本明細書において提供されるその複合体型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの治療的有効量を含む医薬組成物を提供する。１つの実施形態では、複合体型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの治療的有効量は、治療されている特定の病状、治療されている患者の状態、ならびにその組成物中の他の成分などの因子に応じて決定される。
別の実施形態では、本発明は、本明細書において提供される複合体型オキシントモジュリンを含む組成物を提供する。別の実施形態では、本発明は、本明細書において提供される複合体型オキシントモジュリンを含む医薬組成物を提供する。別の実施形態では、本発明は、本明細書において提供される複合体型オキシントモジュリンの治療的有効量を含む医薬組成物を提供する。１つの実施形態では、複合体型オキシントモジュリンの治療的有効量は、治療されている特定の病状、治療されている患者の状態、ならびにその組成物中の他の成分などの因子に応じて決定される。
１つの実施形態では、本発明のＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは治療適用途を有する。別の実施形態では、本発明のＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは予防的用途を有する。
別の実施形態では、本発明のＣＴＰ修飾オキシントモジュリンは治療適用途を有する。別の実施形態では、本発明のＣＴＰ修飾オキシントモジュリンは予防的用途を有する。
１つの実施形態では、本発明は、対象においてＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与頻度を低下させる方法であって、少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドをＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合させるステップを含み、それによりＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与頻度を低下させる方法を提供する。別の実施形態では、ＣＴＰ配列修飾は、より低い投与量の使用を可能にする利点がある。いくつかの実施形態では、ＣＴＰ配列修飾は、より少ない投与量を可能にする利点がある。いくつかの実施形態では、ＣＴＰ配列修飾は、安全で長時間作用する効果を可能にする利点がある。
別の実施形態では、本発明は、対象においてオキシントモジュリンの投与頻度を低下させる方法であって、少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドをオキシントモジュリンのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合するステップを含み、それによりオキシントモジュリンの投与頻度を低下させる方法を提供する。別の実施形態では、ＣＴＰ配列修飾はより低い投与量の使用を可能にする利点がある。いくつかの実施形態では、ＣＴＰ配列修飾はより少ない投与量を可能にする利点がある。いくつかの実施形態では、ＣＴＰ配列修飾は安全で長時間作用する効果を可能にする利点がある。
１つの実施形態では、本発明は、対象においてコレステロールを減少させる方法であって、少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドをオキシントモジュリンのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合させるステップを含み、それにより対象においてコレステロールを減少させる方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、対象においてグリセロールを減少させる方法であって、少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドをオキシントモジュリンのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合させるステップを含み、それにより対象においてグリセロールを減少させる方法を提供する。
１つの実施形態では、本発明は、長時間作用性ＯＸＭを提供する。１つの実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭは、非修飾型ＯＸＭの生物活性を維持する。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭは、ＯＸＭ生物活性を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は、消化分泌液の減少を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は、胃内容物排出の低下および遅延化を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は、小腸の摂食後運動パターンの抑制を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は、ペンタガストリンにより刺激された酸分泌の抑制を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は、胃ソマトスタチン放出の増加を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性はペプチドＹＹの効果の増強を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は、グレリン放出の抑制を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性はアミノピリン蓄積とｃＡＭＰ産生の刺激を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は、ＧＬＰ−１受容体の結合を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は、アデニル酸シクラーゼの活性化によるＨ＋生産の刺激を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は、ヒスタミン刺激性胃酸分泌の抑制を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は、食物摂取の抑制を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は、インスリン放出の刺激を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は、外分泌性膵臓分泌の抑制を含む。
別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は迷走神経間接的機序を介した膵臓分泌の抑制を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は小腸を介した水電解質輸送の減少を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性はグルコース取り込みの刺激を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性はソマトスタチン分泌の制御／刺激を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は食物摂取と体重増加の両方の減少を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は体脂肪蓄積の減少を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は食欲の抑制を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は食欲不振の誘導を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は、体重超過で肥満の対象における体重の減少を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は、脂肪ホルモンであるレプチンとアディポネクチンのレベル変化の誘導を含む。別の実施形態では、本発明の長時間作用性ＯＸＭの生物活性は、体重超過で肥満の対象におけるエネルギー摂取の減少に加えたエネルギー消費の増加を含む。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、本発明のＣＴＰ修飾ＯＸＭを投与することにより、上述したＯＸＭの生物学的活性のうちのいずれかを達成する方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、ＣＴＰ修飾オキシントモジュリンペプチドを対象に投与するステップを含む、その対象における食物摂取の減少、体重の減少、または両方のための方法をさらに提供する。別の実施形態では、対象は糖尿病を有する。別の実施形態では、対象は体重超過である。別の実施形態では、対象は肥満である。
１つの実施形態では、「減少させる、減少、低下など」の用語は、本明細書において提供される方法に関して使用されるとき、以前に測定または決定したレベルからの、または正常レベルからの１００％の低下を指す。別の実施形態では、その低下は以前に決定したレベルからの８９〜９９％の低下である。別の実施形態では、その低下は以前に決定したレベルからの７９〜８８％の低下である。別の実施形態では、その低下は以前に決定したレベルからの６９〜７８％の低下である。別の実施形態では、その低下は以前に決定したレベルからの５９〜６８％の低下である。別の実施形態では、その低下は以前に決定したレベルからの４９〜５８％の低下である。別の実施形態では、その低下は以前に決定したレベルからの３９〜４８％の低下である。別の実施形態では、その低下は以前に決定したレベルからの２９〜３８％の低下である。別の実施形態では、その低下は以前に決定したレベルからの１９〜２８％の低下である。別の実施形態では、その低下は以前に決定したレベルからの９〜１８％の低下である。別の実施形態では、その低下は以前に決定したレベルからの５〜８％の低下である。別の実施形態では、その低下は以前に決定したレベルからの１〜４％の低下である。
ＯＸＭ−ＣＴＰ変異体のインビボ生物活性は２種類の動物モデル、すなわち、マウスにおけるＩＰＧＴＴと痩身ラットにおける食物摂取阻害において評価された。マウスにおけるＩＰＧＴＴは、グルコース投与後に耐糖性を誘導するＯＸＭの能力を評価し、痩身ラットにおける食物摂取阻害は、動物の食物消費を抑制するＯＸＭの能力を評価する。ＯＸＭ−ＣＴＰ変異体、すなわち、ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＣＴＰおよびＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＣＴＰにより、ベヒクル群と比べた血中グルコースＡＵＣの２０〜３０％の減少によって反映される耐糖性が誘導されることが示された（本明細書中の実施例４を参照のこと）。これらの結果は、ＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の生物活性がＯＸＭのその受容体への結合に対するＣＴＰ融合の潜在的な立体障害に起因してインビボで阻害されることがなかったことを示している。これらの変異体により誘導されるグルコースの顕著な減少はそれらの変異体の改善されたＰＫプロファイルと相関した。それ故、１つの実施形態では、本発明は、対象において耐糖性を誘導する方法であって、オキシントモジュリン（ＯＸＭ）ペプチドと、該オキシントモジュリンペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それにより対象において耐糖性を誘導する方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、対象において耐糖性を誘導する方法であって、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それにより対象において耐糖性を誘導する方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、対象において耐糖性を誘導するための、ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストと、前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用を提供する。１つの実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストは、オキシントモジュリンである。
別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストと前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの、対象において耐糖性を誘導するための医薬の調製における使用を提供する。１つの実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストは、オキシントモジュリンである。
１つの実施形態では、本発明は、対象においてインスリン感受性を上昇させる方法であって、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それにより対象においてインスリン感受性を上昇させる方法を提供する。
１つの実施形態では、本発明は、対象においてインスリン耐性を低下させる方法であって、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それにより対象においてインスリン耐性を低下させる方法を提供する。
１つの実施形態では、本発明は、対象においてインスリン感受性を上昇させ且つインスリン耐性を低下させる方法であって、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それにより対象においてインスリン感受性を上昇させ且つインスリン耐性を低下させる方法を提供する。
ＯＸＭ−ＣＴＰ変異体であるＯＸＭ−３ＣＴＰ、ＯＸＭ−４ＣＴＰおよびＯＸＭ−５ＣＴＰの食物摂取を抑制する能力が評価された。天然ＯＸＭは投与後の最初の１時間にのみ食物摂取を抑制した。しかしながら、全ての変異体はＯＸＭと比べて実質的に延長し、改善された食物摂取の抑制を示した。驚くべきことに、ＯＸＭ−５ＣＴＰの累積的食物阻害は少なくとも１４１時間持続し、この変異体の半減期の延長を強調した（本明細書中の実施例５を参照のこと）。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、対象において食物摂取阻害を誘導する方法であって、オキシントモジュリン（ＯＸＭ）ペプチドと、該オキシントモジュリンペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それにより対象において食物摂取阻害を誘導する方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、対象において食物摂取阻害を誘導する方法であって、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それにより対象において食物摂取阻害を誘導する方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、対象において食物摂取を阻害、減少または抑制する方法であって、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それにより対象による食物摂取を阻害、減少または抑制する方法を提供する。別の実施形態では、対象による食物摂取を阻害、減少または抑制することにより、対象に望ましくない体重増加が発生する可能性を減少させる。別の実施形態では、対象による食物摂取を阻害、減少または抑制することにより、対象に肥満が発生する可能性を減少させる。
別の実施形態では、本発明は、対象による望まない体重増加を防ぐための、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用を提供する。１つの実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは、オキシントモジュリンである。
別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの、対象による望まない体重増加を防止するための医薬の調製における使用を提供する。１つの実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは、オキシントモジュリンである。
別の実施形態では、本発明は、対象において食物摂取を阻害、減少または抑制する方法であって、オキシントモジュリン（ＯＸＭ）ペプチドと、該オキシントモジュリンペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それにより対象による食物摂取を阻害、減少または抑制する方法を提供する。別の実施形態では、対象による食物摂取を阻害、減少または抑制することにより、対象に望ましくない体重増加が発生する可能性を減少させる。別の実施形態では、対象による食物摂取を阻害、減少または抑制することにより、対象に肥満が発生する可能性を減少させる。
別の実施形態では、本発明は、対象による望まない体重増加を防止する方法であって、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それにより対象において体重増加を防止する方法を提供する。別の実施形態では、その体重増加が、対象の肥満につながったり、結果的に対象に肥満を発生させたりする。別の実施形態では、体重増加のリスクは、対象の心理状態、または肥満になりやすい遺伝的素因に起因する。別の実施形態では、その心理状態は、うつ病、不安症または心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）である。
別の実施形態では、本発明は、対象による望まない体重増加を防ぐための、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用を提供する。１つの実施形態では、前記ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストはオキシントモジュリンである。
別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの、対象による望まない体重増加を防止するための医薬の調製における使用を提供する。１つの実施形態では、前記ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストはオキシントモジュリンである。
別の実施形態では、本発明は、対象による望まない体重増加を防止する方法であって、オキシントモジュリン（ＯＸＭ）ペプチドと、該オキシントモジュリンペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それにより対象において体重増加を防止する方法を提供する。別の実施形態では、その体重増加が、対象の肥満につながったり、結果的に対象に肥満を発生させたりする。別の実施形態では、体重増加のリスクは、対象の心理状態、または肥満になりやすい遺伝的素因に起因する。別の実施形態では、その心理状態は、うつ病、不安症または心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）である。
別の実施形態では、本発明は、対象において肥満を治療する方法であって、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それにより対象において肥満を治療する方法を提供する。別の実施形態では、対象は、肥満になりやすい遺伝的素因を有する。別の実施形態では、肥満を治療することにより、対象の体重の減少が生じる。別の実施形態では、体重の減少は体脂肪の減少に起因する。
別の実施形態では、本発明は、対象において肥満を治療するための、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用を提供する。１つの実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは、オキシントモジュリンである。
別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの、対象における肥満の治療のための医薬の調製における使用を提供する。１つの実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは、オキシントモジュリンである。
別の実施形態では、本発明は、対象において肥満を治療する方法であって、オキシントモジュリンペプチドと、該オキシントモジュリンペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それにより対象において肥満を治療する方法を提供する。別の実施形態では、対象は、肥満になりやすい遺伝的素因を有する。
１つの実施形態では、本発明は、対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それによりその対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、対象におけるＩＩ型糖尿病の治療のための、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用を提供する。１つの実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは、オキシントモジュリンである。
別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの、対象におけるＩＩ型糖尿病の治療のための医薬の調製における使用を提供する。１つの実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは、オキシントモジュリンである。
１つの実施形態では、本発明は、対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、オキシントモジュリンペプチドと、該オキシントモジュリンペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それによりその対象においてＩＩ型糖尿病を治療する方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、対象において代謝性障害を治療する方法であって、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それによりその対象において代謝性障害を治療する方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、対象における代謝性障害を治療するための、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用を提供する。１つの実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは、オキシントモジュリンである。
別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの、対象における代謝性障害の治療のための医薬の調製における使用を提供する。１つの実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは、オキシントモジュリンである。
別の実施形態では、本発明は、対象において代謝性障害を治療する方法であって、オキシントモジュリンペプチドと、該オキシントモジュリンペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の有効用量をその対象に投与するステップを含み、それによりその対象において代謝性障害を治療する方法を提供する。
別の実施形態では、代謝性障害は、糖尿病性ケトアシドーシス、または真性糖尿病、または当技術分野において公知のあらゆるグルコース関連代謝性障害である。別の実施形態では、代謝性障害は、対象におけるインスリンの欠乏とグルコースの過剰により生じる。
別の実施形態では、本発明の改変型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニスト変異体は本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド分子を使用して合成される。別の実施形態では、本発明の改変型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストをコードするポリヌクレオチド分子は、ｃｉｓ調節性配列（例えば、プロモーター配列）からなる転写制御手段を含む発現ベクターにライゲーションされる。別の実施形態では、そのｃｉｓ調節性配列は本発明の改変型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの構成的発現の制御に適切である。別の実施形態では、そのｃｉｓ調節性配列は本発明の改変型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドの組織特異的発現の制御に適切である。別の実施形態では、そのｃｉｓ調節性配列は本発明の改変型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニスト変異体の誘導性発現の制御に適切である。
１つの実施形態では、本発明での使用に適切な組織特異的プロモーターには１つ以上の特定の細胞集団において機能的である配列が含まれる。例として、肝臓特異的であるアルブミンなどのプロモーター[Pinkert et al., (1987) Genes Dev. 1:268-277]、リンパ系特異的プロモーター[Calame et al., (1988) Adv. Immunol. 43:235-275]、とりわけＴ細胞受容体のプロモーター[Winoto et al., (1989) EMBO J. 8:729-733] 、および免疫グロブリンのプロモーター[Banerji et al. (1983) Cell 33729-740]、神経フィラメントプロモーターなどの神経細胞特異的プロモーター[Byrne et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:5473-5477]、膵臓特異的プロモーター[Edlunch et al. (1985) Science 230:912-916]またはミルク・ホエー・プロモーターなどの乳腺特異的プロモーター（米国特許第４，８７３，３１６号明細書および欧州特許出願公開第２６４，１６６号明細書）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明での使用に適切な誘導性プロモーターには、例えば、テトラサイクリン誘導性プロモーター(Srour, M.A., et al., 2003. Thromb. Haemost. 90: 398-405)が含まれる。
１つの実施形態では、「ポリヌクレオチド分子」という語句は、単離され、且つ、ＲＮＡ配列、相補性ポリヌクレオチド配列（ｃＤＮＡ）、ゲノム性ポリヌクレオチド配列および／または混成ポリヌクレオチド配列（例えば、上記のものの組合せ）の形態で提供される一本鎖または二本鎖核酸配列を指す。
１つの実施形態では、「相補性ポリヌクレオチド配列」は、逆転写酵素または他のあらゆるＲＮＡ依存的ＤＮＡポリメラーゼを使用するメッセンジャーＲＮＡの逆転写により生じる配列を指す。１つの実施形態では、その配列は後にＤＮＡポリメラーゼを使用してインビボまたはインビトロで増幅され得る。
１つの実施形態では、「ゲノム性ポリヌクレオチド配列」は染色体に由来する（染色体から単離された）配列を指し、したがって、染色体の連続部分を表す。
１つの実施形態では、「混成ポリヌクレオチド配列」は、少なくとも部分的に相補性であり、少なくとも部分的にゲノム性である配列を指す。１つの実施形態では、混成配列は本発明のポリペプチドをコードするのに必要な幾つかのエクソン配列、ならびにそれらの間に挿入されている幾つかのイントロン配列を含み得る。１つの実施形態では、そのイントロン配列は、他の遺伝子を含む、あらゆる起源のものであることができ、通常は保存的スプライシングシグナル配列を含む。１つの実施形態では、イントロン配列はｃｉｓ作用性発現調節配列を含む。
１つの実施形態では、発現と分泌の後にシグナルペプチドが改変型オキシントモジュリンペプチド前駆体から切断されて成熟型改変型オキシントモジュリンペプチドが生じる。
１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＰＣＲ技術、または当業者に知られている他のあらゆる方法または技法をもちいて調整される。いくつかの実施形態では、その技法は２つの異なるＤＮＡ配列のライゲーションを伴う（例えば、「Current Protocols in Molecular Biology」、Ausubelら編, John Wiley & Sons, 1992年を参照のこと）。
１つの実施形態では、本明細書において提供される改変型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストをコードする本発明のポリヌクレオチドは、組換えポリペプチドの発現を可能にするために発現ベクター（すなわち、核酸構築物）に挿入される。１つの実施形態では、本発明の発現ベクターは、このベクターを原核生物での複製と組込みに適切なものにするその他の配列を含む。１つの実施形態では、本発明の発現ベクターは、このベクターを真核生物での複製と組込みに適切なものにするその他の配列を含む。別の実施形態では、本発明の発現ベクターは、このベクターを原核生物と真核生物の両方での複製と組込みに適切なものにするシャトルベクターを含む。いくつかの実施形態では、クローニングベクターは転写開始配列および翻訳開始配列（例えば、プロモーター、エンハンサー（ｅｎｈａｎｃｅｓ））および転写終止配列および翻訳終止配列（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含む。
１つの実施形態では、本明細書において提供されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを発現する宿主発現系として種々の原核細胞または真核細胞を使用することができる。別の実施形態では、これらには、ポリペプチドコード配列を含有する組換えバクテリオファージＤＮＡ発現ベクター、プラスミドＤＮＡ発現ベクターまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌などの微生物；ポリペプチドコード配列を含有する組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母；ポリペプチドコード配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）で感染された、またはポリペプチドコード配列を含有する組換えプラスミド発現ベクター、例えばＴｉプラスミドで形質転換された植物細胞系が含まれるが、これらに限定されない。
１つの実施形態では、本明細書において提供されるＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを発現するために非細菌発現系（例えばＣＨＯ細胞などの哺乳類発現系）が使用される。別の実施形態では、そのＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストはオキシントモジュリンである。別の実施形態では、そのオキシントモジュリンは、本明細書においてさらに提供されるように、少なくとも１つのＣＴＰの付加により修飾される。別の実施形態では、哺乳類細胞において本発明のポリヌクレオチドを発現させるために使用される発現ベクターはｐＣＩ−ｄｈｆｒｒベクターである。ｐＣＩ−ｄｈｆｒｒベクターの構築は、１つの実施形態によれば、下記の実施例の材料と方法に記載されている。
１つの実施形態では、本発明の細菌系では、ポリペプチドの発現目的に応じて複数の発現ベクターを有利に選択することができる。１つの実施形態では、大量のポリペプチドが望ましい。１つの実施形態では、タンパク質産物の高レベルの発現を制御するベクターであって、おそらくは疎水性シグナル配列との融合体として、そのタンパク質産物が容易に精製される細菌の周辺質または培地へその発現した産物を向けるベクターが望ましい。１つの実施形態では、ある特定の融合タンパク質は、そのポリペプチドの回収を支援するための特定の切断部位で改変される。１つの実施形態では、そのような操作に適応できるベクターには大腸菌発現ベクターのｐＥＴシリーズ[Studier et al., Methods in Enzymol. 185:60-89 (1990)]が含まれるが、これらに限定されない。
１つの実施形態では、酵母発現系が使用される。１つの実施形態では、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターを含有する多数のベクターを、全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願番号第５，９３２，４４７号明細書に記載されるように酵母において使用することができる。その文献の全体が参照により本明細書に組み込まれる。別の実施形態では、外来性ＤＮＡ配列の酵母染色体への組込みを促進するベクターが使用される。
１つの実施形態では、本発明の発現ベクターは、例えば、単一のｍＲＮＡから幾つかのタンパク質の翻訳を可能にする配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）などの追加的なポリヌクレオチド配列およびプロモーターキメラポリペプチドのゲノム組込みのための配列をさらに含み得る。
１つの実施形態では、哺乳類発現ベクターには、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社より入手可能であるｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／−）、ｐＧＬ３、ｐＺｅｏＳＶ２（＋／−）、ｐＳｅｃＴａｇ２、ｐＤｉｓｐｌａｙ、ｐＥＦ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＭＶ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＲ３．１、ｐＳｉｎＲｅｐ５、ＤＨ２６Ｓ、ＤＨＢＢ、ｐＮＭＴ１、ｐＮＭＴ４１、ｐＮＭＴ８１、Ｐｒｏｍｅｇａ社より入手可能であるｐＣＩ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ社より入手可能であるｐＭｂａｃ、ｐＰｂａｃ、ｐＢＫ−ＲＳＶおよびｐＢＫ−ＣＭＶ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社より入手可能であるｐＴＲＥＳ、およびそれらの派生物が含まれるが、これらに限定されない。
１つの実施形態では、レトロウイルスなどの真核生物ウイルスに由来する調節配列を含有する発現ベクターが本発明において使用される。ＳＶ４０ベクターにはｐＳＶＴ７およびｐＭＴ２が含まれる。いくつかの実施形態では、ウシパピローマウイルスに由来するベクターにはｐＢＶ−１ＭＴＨＡが含まれ、およびエプスタイン・バーウイルスに由来するベクターにはｐＨＥＢＯおよびｐ２Ｏ５が含まれる。他の例となるベクターにはｐＭＳＧ、ｐＡＶ００９／Ａ＋、ｐＭＴＯ１０／Ａ＋、ｐＭＡＭｎｅｏ−５、バキュロウイルスｐＤＳＶＥ、およびＳＶ−４０早期プロモーター、ＳＶ−４０後期プロモーター、メタロチオネインプロモーター、マウス乳癌ウイルスプロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ポリヘドリンプロモーター、または真核細胞での発現に有効であることが示されている他のプロモーターの制御下でタンパク質を発現させる他のあらゆるベクターが含まれる。
１つの実施形態では、組換えウイルスベクターは水平感染と標的特異性などの利点を提供するので、本発明のオキシントモジュリンペプチドのインビボ発現に有用である。１つの実施形態では、水平感染は、例えば、レトロウイルスの生活環に内在しており、それは、単一の感染細胞が、出芽して隣接する細胞に感染する多数の子孫ビリオンを生産する過程である。１つの実施形態では、結果として、大半が元々のウイルス粒子によって感染されていなかった広い面積で急速に感染が生じる。１つの実施形態では、水平的に伝播することができないウイルスベクターが作製される。１つの実施形態では、所望の目的が限定的な数の標的細胞に特定の遺伝子を導入することである場合にこの特徴は有用であり得る。
１つの実施形態では、様々な方法を使用して本発明の発現ベクターを細胞に導入することができる。そのような方法はSambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory, ニューヨーク (1989年, 1992年)、Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, ボルチモア、メリーランド州 (1989年)、Chang et al., Somatic Gene Therapy, CRC Press, アナーバー、ミシガン州(1995年)、 Vega et al., Gene Targeting, CRC Press, アナーバー、ミシガン州(1995年)、 Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, Butterworths, ボストン、マサチューセッツ州(1988年) および Gilboa et at. [Biotechniques 4 (6): 504-512, 1986]に全般的に記載されており、例えば、組換えウイルスベクターによる安定的または一過性形質移入、リポフェクション、電気穿孔法、および感染を含む。加えて、ポジティブ‐ネガティブ選択方法について、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，４６４，７６４号明細書および第５，４８７，９９２号明細書を参照のこと。
１つの実施形態では、ウイルス感染による核酸の導入は、ウイルスの感染性のためにより高い形質移入効率を得ることができるため、リポフェクションおよび電気穿孔法などの他の方法よりも優れた幾つかの利点を提供する。
本発明の改変型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストペプチドまたはオキシントモジュリンペプチドを、あらゆる適切な投与様式（例えば、皮下投与、経口投与、鼻内投与、静脈内（ｉｎｔｒａ−ｖｅｎａｌ）投与、またはインビボ遺伝子治療）を用いて個体に投与された核酸構築物から発現することもできることが理解される。１つの実施形態では、その核酸構築物は適切な遺伝子送達ベヒクル／方法（形質移入、形質導入、相同組換えなど）および必要に応じて発現系を介して適切な細胞に導入され、その後、それらの改変された細胞が培養されて増殖し、個体に戻される（すなわち、エクスビボ遺伝子治療）。
１つの実施形態では、植物発現ベクターが使用される。１つの実施形態では、ポリペプチドコード配列の発現は多数のプロモーターにより駆動される。いくつかの実施形態では、ＣａＭＶの３５Ｓ ＲＮＡプロモーターおよび１９Ｓ ＲＮＡプロモーター[Brisson et al., Nature 310:511-514 (1984)]、またはＴＭＶのコートタンパク質プロモーター[Takamatsu et al., EMBO J. 6:307-311 (1987)]などのウイルスプロモーターが使用される。別の実施形態では、例えば、ＲＵＢＩＳＣＯの小サブユニット[Coruzzi et al., EMBO J. 3:1671-1680 (1984);および Brogli et al., Science 224:838-843 (1984)]またはヒートショックプロモーター、例えば、大豆ｈｓｐ１７．５−Ｅまたはｈｓｐ１７．３−Ｂ[Gurley et al., Mol. Cell. Biol. 6:559-565 (1986)]などの植物プロモーターが使用される。１つの実施形態では、構築物は、Ｔｉプラスミド、Ｒｉプラスミド、植物ウイルスベクター、直接ＤＮＡ形質転換、マイクロインジェクション、電気穿孔法および当業者によく知られている他の技術を用いて植物細胞に導入される。例えば、Weissbach & Weissbach [Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, ニューヨーク、VIII節, 421〜463頁(1988)]を参照のこと。当技術分野において周知である昆虫宿主細胞系および哺乳類宿主細胞系などの他の発現系も本発明により使用され得る。
挿入された（本ポリペプチドをコードする）コード配列の転写と翻訳に必要な配列を含有する他に、本発明の発現コンストラクトは発現されるポリペプチドの安定性、生産、精製、収量または活性を最適化するために改変された配列を含むこともできることが理解される。
１つの実施形態では、形質転換細胞は、大量の組換え改変型オキシントモジュリンペプチドの発現を可能にする効果的な条件下で培養される。別の実施形態では、効果的な培養条件にはタンパク質産生を可能にする効果的な培地条件、バイオリアクター条件、温度条件、ｐＨ条件および酸素条件が含まれるが、これらに限定されない。１つの実施形態では、効果的な培地は、細胞が本発明の組換えポリペプチドを産生するために中で培養されるあらゆる培地を指す。いくつかの実施形態では、培地は通常は、同化吸収可能な炭素源、窒素源およびリン源、および適切な塩、ミネラル、金属、およびビタミンなどの他の栄養素を有する水性溶液を含む。本発明の細胞は従来の発酵バイオリアクター、振盪フラスコ、試験管、マイクロタイターディッシュおよびペトリプレート内で培養され得る。別の実施形態では、組換え細胞に適切な温度、ｐＨおよび酸素含量で培養が実施される。別の実施形態では、培養条件の決定は当業者の専門知識の範囲内にある。
１つの実施形態では結果として生じる改変ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは、または別の実施形態では結果として生じる本発明のＣＴＰ修飾オキシントモジュリンペプチドは、生産に使用されるベクターおよび宿主系に応じて、ＣＴＰのグリコシル化を起こすのに適した組換え細胞内で発現され、発酵培地に分泌され、または哺乳類細胞の外表面に保持される。
１つの実施形態では、所定の培養時間の後に組換え改変ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストまたはオキシントモジュリンの回収が行われる。
１つの実施形態では、「組換え改変型オキシントモジュリンの回収」という語句はそのポリペプチドを含有する全発酵培地を回収することを指し、分離または精製というその他のステップを必ずしも意味しない。
１つの実施形態では、本明細書において提供される改変型オキシントモジュリンまたはその変異体は、限定されないが、親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、濾過、電気泳動、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、コンカナバリンＡクロマトグラフィー、クロマトフォーカシングおよび示差的可溶化（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）などの種々の標準的タンパク質精製技術を用いて精製される。
回収を容易にするために、発現されるコード配列は本発明の改変型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストまたはオキシントモジュリンおよび融合された切断可能部分をコードするように改変され得る。さらに、融合タンパク質は、そのポリペプチドが親和性クロマトグラフィーにより、例えば、切断可能部分に特異的なカラムへの固定化により容易に単離され得るように設計され得る。切断部位は改変型オキシントモジュリンと切断可能部分の間に設計され、その融合タンパク質をこの部位で特異的に切断する適切な酵素または薬剤を用いる処理によりクロマトグラフィーカラムからそのポリペプチドを放出することができる［例えば、Booth et al., Immunol. Lett. 19:65-70 (1988)、および Gardella et al., J. Biol. Chem. 265:15854-15859 (1990) を参照のこと］。
１つの実施形態では、本明細書において提供される改変型オキシントモジュリンは「実質的に純粋な」形状で回収される。
１つの実施形態では、「実質的に純粋な」という語句は、本明細書に記載される用途におけるそのタンパク質の効果的な使用を可能にする純度を指す。
本明細書において提供される改変ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストまたはオキシントモジュリンはインビトロ発現系を用いて合成されることもあり得る。別の実施形態では、インビトロ合成方法は当技術分野においてよく知られており、その系の構成要素は市販されている。
１つの実施形態では、組換え改変型オキシントモジュリンペプチドが合成および精製され、それらの治療効力がインビボまたはインビトロで測定され得る。本発明の組換え改変型オキシントモジュリンペプチドの結合活性は、当業者に知られている様々な測定法を用いて確認され得る。
別の実施形態では、本発明のＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストまたは改変型オキシントモジュリンはそれ自体で個体に投与され得る。１つの実施形態では、本発明の改変型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストまたはオキシントモジュリンは薬学的に許容可能な担体と共に混合されている医薬組成物の一部として個体に投与され得る。
別の実施形態では、「医薬組成物」は、本明細書に記載される有効成分のうちの１つ以上と生理学的に適切な担体および賦形剤などの他の化学成分からなる製剤を指す。医薬組成物の目的は化合物の生物への投与を容易にすることである。
別の実施形態では、「有効成分」は、生物学的効果について原因となり得る目的のポリペプチド配列を指す。
別の実施形態では、互換的に使用される「生理学的に許容可能な担体」および「薬学的に許容可能な担体」という語句は、生物に対して著しい刺激を引き起こすことがなく、且つ、投与された化合物の生物活性および特性を無効にしない担体または希釈剤を指す。アジュバントがこれらの語句の下に含まれる。１つの実施形態では、薬学的に許容可能な担体に含まれる成分のうちの１つは、例えば、有機媒体と水性媒体の両方に広範囲の溶解性を有する生体適合性重合体であるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であり得る（Mutter et al. (1979)）。
別の実施形態では、「賦形剤」は有効成分の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性物質を指す。１つの実施形態では、賦形剤には炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖および種々のデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油およびポリエチレングリコールが含まれる。
薬品の製剤と投与についての技術は、参照により本明細書に組み込まれる、「Remington's Pharmaceutical Sciences」、Mack Publishing Co.、イーストン、ペンシルバニア州、最新版に見出される。
投与量範囲の様々な実施形態が本発明によって熟慮される。１つの実施形態では、本発明のＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与量は０．００５〜１００ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は０．００５〜５ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は０．０１〜５０ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は０．１〜２０ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は０．１〜１０ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は０．０１〜５ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は０．００１〜０．０１ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は０．００１〜０．１ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は０．１〜５ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は０．５〜５０ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は０．２〜１５ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は０．８〜６５ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は１〜５０ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は５〜１０ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は８〜１５ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は１０〜２０ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は２０〜４０ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は６０〜１２０ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は１２〜４０ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は４０〜６０ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は５０〜１００ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は１〜６０ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は１５〜２５ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は５〜１０ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は５５〜６５ｍｇ／日の範囲である。
別の実施形態では、その投与量は５０〜５００ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は５０〜１５０ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は１００〜２００ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は１５０〜２５０ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は２００〜３００ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は２５０〜４００ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は３００〜５００ｍｇ／日の範囲である。別の実施形態では、その投与量は３５０〜５００ｍｇ／日の範囲である。
１つの実施形態では、その投与量は２０ｍｇ／日である。１つの実施形態では、その投与量は３０ｍｇ／日である。１つの実施形態では、その投与量は４０ｍｇ／日である。１つの実施形態では、その投与量は５０ｍｇ／日である。１つの実施形態では、その投与量は０．０１ｍｇ／日である。別の実施形態では、その投与量は０．１ｍｇ／日である。別の実施形態では、その投与量は１ｍｇ／日である。別の実施形態では、その投与量は０．５３０ｍｇ／日である。別の実施形態では、その投与量は０．０５ｍｇ／日である。別の実施形態では、その投与量は５０ｍｇ／日である。別の実施形態では、その投与量は１０ｍｇ／日である。別の実施形態では、その投与量は２０〜７０ｍｇ／日である。別の実施形態では、その投与量は５ｍｇ／日である。
１つの実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与量は１〜５ｍｇ／日である。１つの実施形態では、ＣＴＰ修飾オキシントモジュリンの投与量は１〜３ｍｇ／日である。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾オキシントモジュリンの投与量は２ｍｇ／日である。
別の実施形態では、その投与量は１〜９０ｍｇ／日である。別の実施形態では、その投与量は１〜９０ｍｇ／２日である。別の実施形態では、その投与量は１〜９０ｍｇ／３日である。別の実施形態では、その投与量は１〜９０ｍｇ／４日である。別の実施形態では、その投与量は１〜９０ｍｇ／５日である。別の実施形態では、その投与量は１〜９０ｍｇ／６日である。別の実施形態では、その投与量は１〜９０ｍｇ／週である。別の実施形態では、その投与量は１〜９０ｍｇ／９日である。別の実施形態では、その投与量は１〜９０ｍｇ／１１日である。別の実施形態では、その投与量は１〜９０ｍｇ／１４日である。
別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与量は１０〜５０ｍｇ／日である。別の実施形態では、その投与量は１０〜５０ｍｇ／２日である。別の実施形態では、その投与量は１０〜５０ｍｇ／３日である。別の実施形態では、その投与量は１０〜５０ｍｇ／４日である。別の実施形態では、その投与量は１０〜５０マイクログラムｍｇ／５日である。別の実施形態では、その投与量は１０〜５０ｍｇ／６日である。別の実施形態では、その投与量は１０〜５０ｍｇ／週である。別の実施形態では、その投与量は１０〜５０ｍｇ／９日である。別の実施形態では、その投与量は１０〜５０ｍｇ／１１日である。別の実施形態では、その投与量は１０〜５０ｍｇ／１４日である。
別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは鼻腔内剤形に製剤される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは注射可能剤形に製剤される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは０．０００１ｍｇから０．６ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは０．００１ｍｇから０．００５ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは０．００５ｍｇから０．０１ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは０．０１ｍｇから０．３ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは０．２ｍｇから０．６ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストはそのアミノ末端にＣＴＰを有しない。
別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは鼻腔内剤形に製剤される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは注射可能剤形に製剤される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは０．０００１ｍｇから０．６ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは０．００１ｍｇから０．００５ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは０．００５ｍｇから０．０１ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは０．０１ｍｇから０．３ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは０．２ｍｇから０．６ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストはそのアミノ末端にＣＴＰを有しない。
別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは１から１００マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは１０から８０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは２０から６０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは１０から５０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは４０から８０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは１０から３０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは３０から６０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。
別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは１から１００マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは１０から８０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは２０から６０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは１０から５０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは４０から８０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは１０から３０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは３０から６０マイクログラムの範囲の用量で対象に投与される。
別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは０．２ｍｇから２ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは２ｍｇから６ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは４ｍｇから１０ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは５ｍｇから１５ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。
別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは０．２ｍｇから２ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは２ｍｇから６ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは４ｍｇから１０ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは５ｍｇから１５ｍｇまでの範囲の用量で対象に投与される。
別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与量は、非ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを用いて投与された投与量と比べてそのアゴニストの量の６５％を含有するような量である。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与量は、非ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを用いて投与された投与量と比べてそのアゴニストの量の５５％を含有するような量である。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与量は、非ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを用いて投与された投与量と比べてそのアゴニストの量の４５％を含有するような量である。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与量は、非ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを用いて投与された投与量と比べてそのアゴニストの量の１０％を含有するような量である。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与量は、非ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを用いて投与された投与量と比べてそのアゴニストの量の２５％を含有するような量である。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与量は、非ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを用いて投与された投与量と比べてそのアゴニストの量の３５％を含有するような量である。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与量は、非ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを用いて投与された投与量と比べてそのアゴニストの量の７５％を含有するような量である。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与量は、非ＣＴＰ修飾アゴニストを用いて投与された投与量と比べてそのアゴニストの量の１００％を含有するような量である。しかしながら、投与量が非ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと同量のアゴニストを含有しているとしても、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは通常のアゴニストと比べて増加した半減期のためにより低い頻度で投与されるという利点が対象にまだある。
別の実施形態では、複合体型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの治療的有効量はｋｇ体重当たり５０〜５００ＩＵの間であり、１日１回投与される。別の実施形態では、複合体型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの治療的有効量はｋｇ体重当たり１５０〜２５０ＩＵであり、１日１回投与される。別の実施形態では、複合体型ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物は様々な手段によるヒト患者への投与に効果的な強度で製剤される。
１つの実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドは、対象において循環ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニスト活性を２０〜３０ＩＵ／ｄＬにするのに効果的な量で投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドは、対象において循環ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニスト活性を２５〜５０ＩＵ／ｄＬにするのに効果的な量で投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドは、対象において循環ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニスト活性を５０〜１００ＩＵ／ｄＬにするのに効果的な量で投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドは、対象において循環ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニスト活性を１００〜２００ＩＵ／ｄＬにするのに効果的な量で投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドは、対象において循環ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニスト活性を１０〜５０ＩＵ／ｄＬにするのに効果的な量で投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドは、対象において循環ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニスト活性を２０〜１００ＩＵ／ｄＬにするのに効果的な量で投与される。
１つの実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは毎週の頻度で対象に投与される。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは週２回の頻度で対象に投与される。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは隔週（２週間に１回）の頻度で対象に投与される。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは月に２回の頻度で対象に投与される。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは月に１回の頻度で対象に投与される。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは毎日の頻度で対象に投与される。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは２日毎の頻度で対象に投与される。
別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは３日に１回の頻度で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは４日に１回の頻度で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは５日に１回の頻度で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは６日に１回の頻度で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは７〜１４日に１回の頻度で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは１０〜２０日に１回の頻度で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは５〜１５日に１回の頻度で対象に投与される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは１５〜３０日に１回の頻度で対象に投与される。
別の実施形態では、本発明の方法はＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニスト治療の使用におけるコンプライアンスの向上を含み、それを必要とする対象にＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、該ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）を含むポリペプチドを提供し、それによりＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニスト治療の使用におけるコンプライアンスを向上させることを含む。
別の実施形態では、本発明の方法は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニスト治療を必要とする慢性疾患に苦しめられている患者のコンプライアンスの向上を含む。別の実施形態では、本発明の方法は、本明細書中の上記のようにＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストをＣＴＰで修飾することによりＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与頻度の低下を可能にする。
別の実施形態では、コンプライアンスという用語はアドヒアランスを含む。別の実施形態では、本発明の方法は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与頻度の低下によるＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニスト治療を必要とする患者のコンプライアンスの向上を含む。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与頻度の低下は、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストをより安定なものにするＣＴＰ修飾に起因して達成される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与頻度の低下は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのＴ１／２の増加の結果として達成される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与頻度の低下は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのクリアランス時間の増加または排除速度の低下の結果として達成される。
別の実施形態では、本発明は、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの排除速度を低下させる方法であって、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端への少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）のステップを含み、それによりＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの排除速度を低下させる方法を提供する。
別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与頻度の低下はＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストのＡＵＣの程度を増大させた結果として達成される。
経口投与は、１つの実施形態では、錠剤、カプセル剤、ロゼンジ剤、チュアブル錠剤、懸濁剤、乳剤などを含む単位剤形を含む。そのような単位剤形は本発明の所望のＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの安全有効量を含み、それらのそれぞれは１つの実施形態では７０ｋｇ当たり約０．７または３．５ｍｇから約２８０ｍｇまで、または別の実施形態では７０ｋｇ当たり約０．５または１０ｍｇから約２１０ｍｇまでである。経口投与用の単位剤形の調製に適切な薬学的に許容可能な担体は当技術分野において周知である。別の実施形態では、錠剤は通常は炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、マンニトール、ラクトースおよびセルロースなどの従来の薬学的に適合するアジュバントを不活性希釈剤として含み、デンプン、ゼラチンおよびショ糖などの結合剤を含み、デンプン、アルギン酸およびクロスカルメロース（ｃｒｏｓｃａｒｍｅｌｏｓｅ）などの崩壊剤を含み、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸およびタルクなどの滑沢剤を含む。１つの実施形態では、二酸化ケイ素などの滑剤を使用して粉末混合物の流動性を改善することができる。１つの実施形態では、ＦＤ＆Ｃ染料などの着色剤を外観のために添加することができる。アスパルテーム、サッカリン、メントール、ペパーミント、および果実フレーバーなどの甘味料および着香剤はチュアブル錠剤にとって有用なアジュバントである。カプセル剤は通常は上で開示された１つ以上の固形希釈剤を含む。別の実施形態では、担体成分の選択は味、費用、および貯蔵性のような副次的考慮事項に左右され、それらは本発明の目的にとっては重要ではなく、当業者によって容易に選択され得る。
１つの実施形態では、経口剤形は所定の放出プロファイルを備える。１つの実施形態では、本発明の経口剤形は徐放性錠剤、カプセル剤、ロゼンジ剤またはチュアブル錠剤を含む。１つの実施形態では、本発明の経口剤形は遅放性錠剤、カプセル剤、ロゼンジ剤またはチュアブル錠剤を含む。１つの実施形態では、本発明の経口剤形は即放性錠剤、カプセル剤、ロゼンジ剤またはチュアブル錠剤を含む。１つの実施形態では、経口剤形は、当業者に知られているように薬学的有効成分の所望の放出プロファイルに応じて製剤される。
経口組成物は、いくつかの実施形態では、液体水剤、乳剤、懸濁剤などを含む。いくつかの実施形態では、そのような組成物の調製に適切な薬学的に許容可能な担体は当技術分野において周知である。液体経口組成物は、いくつかの実施形態では所望の（単数の）化合物または（複数の）化合物を約０．００１％から約０．９３３％まで含み、または別の実施形態では約０．０１％から約１０％まで含む。
１つの実施形態では、本発明の方法において使用される組成物は水剤または乳剤を含み、それらは、いくつかの実施形態では、局所的鼻腔内投与を対象とした、本発明の化合物の安全有効量および任意により他の化合物を含む水性溶液または乳液である。別の実施形態では、それらの組成物は対象化合物を約０．００１％から約１０．０％（重量／体積）まで、より好ましくは約００．１％から約２．０まで含み、それらの化合物の鼻腔内経路による全身送達のために使用される。
別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは筋肉に注射される（筋肉内注射）。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは皮膚の下に注射される（皮下注射）。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは筋肉に注射される。別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと少なくとも１つのＣＴＰ単位を含むポリペプチドは皮膚に注射される。別の実施形態では、本明細書に記載されるＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは全身的投与により投与される。別の実施形態では、本明細書に記載されるＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは静脈内注射により投与される。別の実施形態では、投与は非経口送達、肺性送達、経口送達、局所送達、皮内送達、筋肉内送達、腹腔内送達、静脈内送達、皮下送達、鼻腔内送達、経鼻送達、眼内送達、点眼送達、硬膜外送達、頬側送達、直腸送達、経粘膜送達、腸管内送達、または非経口の送達であり得、髄内注射ならびに髄腔内投与または直接脳室内投与を含む。
別の実施形態では、製剤は全身的よりもむしろ局所的に、例えば、患者の身体の特定の領域へ直接的に製剤を注射することにより投与される。
１つの実施形態では、投与経路は腸内経路であり得る。別の実施形態では、経路は結膜経路、経皮経路、皮内経路、動脈内経路、経膣経路、直腸経路、腫瘍内経路、傍癌（ｐａｒｃａｎｃｅｒａｌ）経路、経粘膜経路、筋肉内経路、血管内経路、脳室内経路、頭蓋内経路、鼻内経路、舌下経路、またはそれらの組合せであり得る。
別の実施形態では、医薬組成物は液体製剤の静脈内注射、動脈内注射、または筋肉内注射により投与される。いくつかの実施形態では、液体製剤には水剤、懸濁剤、分散剤、乳剤、油剤などが含まれる。１つの実施形態では、医薬組成物は静脈内投与され、したがって、静脈内投与に適切な形態に製剤される。別の実施形態では、医薬組成物は動脈内投与され、したがって、動脈内投与に適切な形態に製剤される。別の実施形態では、医薬組成物は筋肉内投与され、したがって、筋肉内投与に適切な形態に製剤される。
さらに、および別の実施形態では、医薬組成物は体表に局所投与され、したがって、局所投与に適切な形態に製剤される。適切な局所製剤にはゲル剤、軟膏、クリーム剤、外用水薬、滴剤などが含まれる。局所投与のために本発明の化合物は追加の適切な治療用の（単数の）薬剤または（複数の）薬剤と混合され、生理学的に許容可能な希釈剤中に医薬担体を含む、または含まない水剤、懸濁剤、または乳剤として調製および適用される。
１つの実施形態では、本発明の医薬組成物は当技術分野において周知の処理法により、例えば、従来の混合処理法、溶解処理法、造粒処理法、糖衣掛け処理法、ゲル化処理法、乳化処理法、カプセル化処理法、封入処理または凍結乾燥処理法を用いて製造される。
１つの実施形態では、本発明に従って使用される医薬組成物は、有効成分の製剤への加工を容易にする薬学的に使用され得る賦形剤と補助剤を含む１つ以上の生理学的に許容可能な担体を用いて従来法により製剤される。１つの実施形態では、製剤は選択された投与経路に左右される。
１つの実施形態では、本発明の注射剤は水溶液中に製剤される。１つの実施形態では、本発明の注射剤はハンクス溶液、リンゲル溶液、または生理的塩緩衝液などの生理学的に適切な緩衝液中に製剤される。いくつかの実施形態では、経粘膜投与のために、透過される隔壁に対して適切な浸透剤が製剤に使用される。そのような浸透剤は当技術分野において一般的に知られている。
１つの実施形態では、本明細書に記載される製剤は、例えば、ボーラス注射または連続点滴による非経口投与用に製剤される。いくつかの実施形態では、注射用の製剤は単位剤形、例えば、アンプルまたは添加保存剤を任意により含む複数回投与用容器で提供される。いくつかの実施形態では、組成物は油性ベヒクルまたは水性ベヒクル中の懸濁液、溶液、または乳液であり、懸濁化剤、安定化剤および／または分散化剤などの製剤用薬剤を含有する。
それらの組成物は、いくつかの実施形態では、塩化ベンザルコニウムおよびチメロサールなどのような保存剤；エデト酸ナトリウムとその他などのキレート剤；リン酸塩、クエン酸塩および酢酸塩などの緩衝剤；塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトールおよびその他などの等張化剤；アスコルビン酸、アセチルシスチン、ピロ亜硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｍｅｔａｂｉｓｕｌｆｏｔｅ）およびその他などの抗酸化剤；芳香剤；セルロースおよびその誘導体を含む重合体などの粘度調整剤；およびポリビニルアルコールおよび必要に応じてこれらの水性組成物のｐＨを調節するための酸および塩基も含む。それらの組成物は、いくつかの実施形態では、局所的麻酔剤または他の有効成分も含む。それらの組成物はスプレー剤、噴霧剤、滴剤などとして使用され得る。
１つの実施形態では、非経口投与用の医薬組成物には水溶性形態の活性製剤の水溶液が含まれる。さらに、有効成分の懸濁液は適切なオイルベースまたは水ベースの注射用懸濁液として調製され得る。適切な親油性溶媒またはベヒクルには、いくつかの実施形態では、ゴマ油のような脂肪油、またはオレイン酸エチル、トリグリセリドまたはリポソームなどの合成脂肪酸エステルが含まれる。水性注射様懸濁液は、いくつかの実施形態では、その懸濁液の粘度を上昇させる、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランなどの物質を含有する。別の実施形態では、その懸濁液は適切な安定化剤または高濃度溶液の調製を可能にするための有効成分の溶解性を上昇させる薬剤も含有する。
別の実施形態では、活性化合物は小胞状、特にリポソーム状で送達され得る（Langer, Science 249:1527-1533 (1990)、Treat et al., Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer内, Lopez- Berestein and Fidler (編), Liss, ニューヨーク, 353〜365頁 (1989年)、 Lopez-Berestein, 同書, 317〜327頁、 J. E. Diederichs ら, Pharm./nd. 56 (1994) 267- 275を参照のこと）。
別の実施形態では、制御放出システムで送達される医薬組成物は静脈内点滴用、移植可能浸透圧ポンプ用、経皮パッチ用、リポソーム用、または他の投与様式用に製剤される。１つの実施形態では、ポンプを使用する（Langer, 上掲、 Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987)、 Buchwald et al., Surgery 88:507 (1980)、 Saudek et al., N. Engl. J. Med. 321:574 (1989) を参照のこと）。別の実施形態では、高分子材料を使用することができる。さらに別の実施形態では、制御放出システムを治療標的、すなわち、脳の近くに設置することができ、したがって、全身用用量のほんの一部分が必要とされる（例えば、Goodson, Medical Applications of Controlled Release内, 上掲, 第2巻, 115〜138頁 (1984年)を参照のこと）。他の制御放出システムはLanger (Science 249:1527-1533 (1990)による総説において考察されている。
別の実施形態では、有効成分は、使用前に適切なベヒクル、例えば、無菌無発熱性物質水ベースの溶液と構成するために粉末形態である。組成物は、いくつかの実施形態では、噴霧および吸入投与用に製剤される。別の実施形態では、組成物は噴霧化装置取り付けられた容器の中に含有される。
１つの実施形態では、本発明の製剤は、例えば、カカオバターまたは他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を使用して、坐剤または停留性直腸投与剤などの直腸組成物状に製剤される。
１つの実施形態では、本発明との関係での使用に適切な医薬組成物には、使用目的の達成に有効な量で有効成分が含まれる組成物が含まれる。別の実施形態では、治療的有効量は、病気の症状を予防、軽減または改善するのに、または治療を受けている対象の生存期間を長くするのに効果的な有効成分の量を意味する。
１つの実施形態では、治療的有効量の決定は十分に当業者の能力の範囲内である。
薬学的に許容可能な担体またはそれらの成分として働き得る物質の幾つかの例は、ラクトース、グルコースおよびショ糖などの糖；コーンスターチおよびジャガイモデンプンなどのデンプン；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、およびメチルセルロースなどのセルロースおよびその誘導体；粉末化トラガカント；モルト；ゼラチン；タルク；ステアリン酸およびステアリン酸マグネシウムなどの固形滑沢剤；硫酸カルシウム；ピーナッツ油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油およびカカオ属の油などの植物油；プロピレングリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなどのポリオール；アルギン酸；ツイーン（商標）ブランドの乳化剤などの乳化剤；ラウリル硫酸ナトリウムなどの湿潤剤；着色剤；着香剤；錠剤化剤、安定化剤；抗酸化剤；保存剤；無発熱性物質水；等張性生理食塩水；およびリン酸緩衝溶液である。化合物と併せて使用される薬学的に許容可能な担体の選択は基本的にその化合物が投与される予定の方法によって決定される。対象化合物が注射される予定である場合、１つの実施形態では、薬学的に許容可能な担体は、ｐＨが約７．４に調節された血液適合懸濁化剤を含む無菌生理的食塩水である。
加えて、それらの組成物は結合剤（例えばアカシア、コーンデンプン、ゼラチン、カルボマー、エチルセルロース、グアーガム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドン）、崩壊剤（例えば、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸、二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、グアーガム、デンプングリコール酸ナトリウム）、様々なｐＨおよびイオン強度の緩衝液（例えば、トリス塩酸、アセテート、ホスフェート）、表面への吸収を防止するためのアルブミンまたはゼラチンなどの添加物、界面活性剤（例えば、ツイーン２０、ツイーン８０、プルロニックＦ６８、胆汁酸塩）、プロテアーゼ阻害剤、界面活性剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）、透過増強剤、可溶化剤（例えば、グリセロール、ポリエチレングリセロール）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、ピロ亜硫酸ナトリウム、ブチルヒドロキシアニソール）、安定化剤（例えばヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル（ｈｙｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ）メチルセルロース）、増粘剤（例えばカルボマー、コロイド状二酸化ケイ素、エチルセルロース、グアーガム）、甘味料（例えばアスパルテーム、クエン酸）、保存剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン）、滑沢剤（例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、流動補助剤（例えばコロイド状二酸化ケイ素）、可塑剤（例えばフタル酸ジエチル、クエン酸トリエチル）、乳化剤（例えばカルボマー、ヒドロキシプロピルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム）、高分子被覆材（例えば、ポロキサマーまたはポロキサミン）、被覆および被膜形成剤（例えばエチルセルロース、アクリレート、ポリメタクリレート）および／またはアジュバントをさらに含む。
シロップ剤、エリキシル剤、乳剤および懸濁剤のための担体の典型的な構成成分にはエタノール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、液体ショ糖、ソルビトールおよび水が含まれる。懸濁剤について、典型的な懸濁化剤にはメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、セルロース（例えばアビセル（商標）、ＲＣ−５９１）、トラガカントおよびアルギン酸ナトリウムが含まれ、典型的な湿潤剤にはレシチンおよびソルビタンポリエチレンオキシド（例えばポリソルベート８０）が含まれる。典型的な保存剤にはメチルパラベンおよび安息香酸ナトリウムが含まれる。別の実施形態では、経口液体組成物は上で開示された甘味料、着香剤および着色料のような１つ以上の構成成分も含有する。
それらの組成物は、ポリ乳酸、ポリグリコール酸（ｐｏｌｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、ヒドロゲルなどのような重合性化合物の粒子状製剤中または粒子状製剤上への、またはリポソーム、マイクロエマルジョン、ミセル、単層状または多層状小胞、赤血球ゴースト、またはスフェロプラスト上への活性物質の組込みも含む。）そのような組成物は物理状態、溶解性、安定性、インビボ放出速度、およびインビボクリアランス速度に影響を与える。
本発明は、重合体（例えばポロキサマーまたはポロキサミン）および組織特異的受容体、リガンドまたは抗原に対する抗体に結合した、または組織特異的受容体のリガンドに結合した化合物で被覆された粒子状組成物も含む。
１つの実施形態では、化合物はポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンまたはポリプロリンなどの水溶性重合体の共有結合により修飾される。別の実施形態では、それらの修飾化合物は静脈内注射後に対応する非修飾型化合物よりも実質的に長い血中半減期を示す。１つの実施形態では、修飾はまた水溶液中での化合物の溶解性を高め、凝集を除き、化合物の物理的および化学的安定性を高め、化合物の免疫原性および反応性を大いに低下させる。別の実施形態では、所望のインビボ生物活性はそのような高分子化合物付加物（ａｂｄｕｃｔｓ）の投与により非修飾型化合物を用いるよりも低い頻度で、または少ない用量で達成される。
有効量または有効用量の調剤は最初にインビトロアッセイから推定され得る。１つの実施形態では、動物モデルにおいて用量を策定することができ、ヒトにおける有用な用量のより正確な決定のためにそのような情報を用いることができる。
１つの実施形態では、本明細書に記載される有効成分の毒性および治療効力はインビトロでの標準的薬学的手順により、細胞培養物において、または実験動物において決定され得る。１つの実施形態では、これらのインビトロアッセイおよび細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータはヒトで使用するための範囲の投与量の策定に使用され得る。１つの実施形態では、それらの投与量は使用される剤形および利用される投与経路に応じて変化する。１つの実施形態では、正確な製剤、投与経路および投与量は個々の医師により、患者の状態を考慮して選択され得る［例えば、Fingl, et al., (1975) 「The Pharmacological Basis of Therapeutics」、第１章、１頁を参照のこと］。
１つの実施形態では、数日から数週間まで続く治療過程で、または治癒が達成されるまでの過程で、また疾患状態の縮小が達成されるまでの過程で投与は単回投与または複数回投与であり得、それは治療される状態の重症度および応答性による。
１つの実施形態では、投与される組成物の量は治療を受けている対象、苦痛の重症度、投与方式、医師の判定などに左右される。
１つの実施形態では、適合性医薬担体中に製剤された本発明の製剤を含む組成物はまた、調製され、適切な容器に配置され、適応症状の治療のためにラベル付けされる。
別の実施形態では、ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストまたはその変異体（ＣＴＰ修飾）型は、本明細書に記載されるように、非イオン性表面活性剤（すなわち、界面活性剤）、様々な糖、有機ポリオールおよび／またはヒト血清アルブミンなどの複合性有機賦形剤と安定化剤と組み合わせた凍結乾燥（すなわち、冷凍乾燥）調製物（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）である。別の実施形態では、医薬組成物は注射用の滅菌水中に記載される凍結乾燥ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む。別の実施形態では、医薬組成物は注射用の滅菌ＰＢＳ中に記載される凍結乾燥ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む。別の実施形態では、医薬組成物は注射用の滅菌０．９％ＮａＣｌ中に記載される凍結乾燥ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む。
別の実施形態では、その医薬組成物は本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストとヒト血清アルブミン、ポリオール、糖、および陰イオン性表面活性安定化剤などの複合性担体を含む。別の実施形態では、その医薬組成物は本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストとラクトビオン酸および酢酸／グリシン緩衝液を含む。別の実施形態では、その医薬組成物は本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと水におけるインターフェロン組成物の溶解性を高めるアルギニンまたはグルタミン酸などのアミノ酸を含む。別の実施形態では、その医薬組成物は本明細書に記載される凍結乾燥ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストとグリシンまたはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、緩衝液（例えば酢酸緩衝液）および等張化剤（例えばＮａＣｌ）を含む。別の実施形態では、その医薬組成物は本明細書に記載される凍結乾燥ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストとリン酸緩衝液、グリシンおよびＨＳＡを含む。
別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物は、約４と７．２の間のｐＨを有する緩衝溶液中にあるときに安定化される。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物は約４と８．５の間のｐＨを有する緩衝溶液中に存在する。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物は約６と７の間のｐＨを有する緩衝溶液中に存在する。別の実施形態では、ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物は約６．５のｐＨを有する緩衝溶液中に存在する。別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物は安定化剤としてのアミノ酸と幾つかの事例では塩（そのアミノ酸が荷電側鎖を含有しない場合）により安定化される。
別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物は約０．３重量％と５重量％の間でアミノ酸である安定化剤を含む液体組成物である。
別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物は投薬精度と製品安全性を備える。別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物は注射用途において使用するための生物学的活性安定液体製剤を提供する。別の実施形態では、その医薬組成物は本明細書に記載される非凍結乾燥ＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む。
別の実施形態では、本明細書において提供されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物は、投与前の貯蔵および輸送を容易にする液体状態で長期間の貯蔵を可能にする液体製剤を提供する。
別の実施形態では、本明細書において提供されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物は基質物質として固形脂質を含む。別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む注射可能医薬組成物は基質物質として固形脂質を含む。別の実施形態では、噴霧凝固による脂質微粒子の作製はＳｐｅｉｓｅｒによって記載されており (Speiser and al., Pharm. Res. 8 (1991) 47-54)、経口投与用の脂質ナノペレットはそれに従っている（Ｓｐｅｉｓｅｒの欧州特許第０１６７８２５号明細書（１９９０年））。別の実施形態では、使用される脂質は身体によって十分に忍容される（例えば、非経口栄養補給用乳剤中に存在する脂肪酸から構成されるグリセリド）。
別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物は高分子マイクロパーティクルを含む。別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物はナノパーティクルを含む。別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物はリポソームを含む。別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物は脂肪乳剤を含む。別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物はミクロスフィアを含む。別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物は脂質ナノパーティクルを含む。別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物は両親媒性脂質を含む脂質ナノパーティクルを含む。別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストを含む医薬組成物は薬品、脂質基材、および界面活性剤を含む脂質ナノパーティクルを含む。別の実施形態では、その脂質基材は少なくとも５０％（重量／重量）であるモノグリセリド含量を有する。
１つの実施形態では、本発明の組成物は、有効成分を含有する１単位以上の単位剤形を含む、ＦＤＡ認証キットなどのパックまたは分配装置中に提供される。１つの実施形態では、そのパックは、例えば、ブリスター包装など、金属箔またはプラスチック箔を含む。１つの実施形態では、そのパックまたは分配装置には投与についての指示書が添付されている。１つの実施形態では、そのパックまたは分配装置には、医薬品の製造、使用、または販売を規制する政府機関により定められた形態で容器に付けられた注意書きが用意されており、その注意書きはそれらの組成物またはヒトへの投与または獣医の投与の形態についてのその機関による認可を反映している。そのような注意書は、１つの実施形態では、処方薬について米国食品医薬品局により認可された表示、または認可された製品折り込物の表示である。
１つの実施形態では、本発明のＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストは、各薬剤をそれぞれ用いる治療と比べて改善された治療効果を達成するために、追加の活性薬剤と共に個体に投与され得ることが理解される。別の実施形態では、併用治療に関係する悪性副作用を避けるための手段（例えば、相補的薬剤の投与および選択）が採られる。
「約」という用語は数量的に、１つの実施形態では±５％、または別の実施形態では±１０％、または別の実施形態では±１５％、または別の実施形態では±２０％を意味する。
「対象」という用語は、１つの実施形態では、病気またはその余病の治療を必要とする、または病気もしくはその余病になりやすいヒトを含む哺乳類動物を指す。対象にはイヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ラット、およびマウスおよびヒトが含まれ得る。「対象」という用語はあらゆる点で正常な個体を除外しない。
１つの実施形態では、本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ポリペプチドの治療および予防の方法が、本明細書に記載される治療および予防の方法を達成するための本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用法および／または本明細書に記載される治療および予防の方法を達成するための医薬品の調製における本明細書に記載されるＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用法によって置き換えられ得ることが理解されるものとする。
本発明のその他の目的、利点、および新規の特徴は、限定目的ではない次の実施例の検討により当業者に明らかになる。さらに、本明細書において上述され、下の特許請求の範囲で請求される本発明の様々な実施形態および態様の各々についての実験的証拠が次の実施例の中に見出される。
実施例
材料と方法
プラスミドの構築
ＯＸＭアミノ酸配列（受託番号ＮＰ＿００２０４５）とＣＴＰアミノ酸配列（受託番号ＮＰ＿１４９０３２）に基づいて７種類のＯＸＭプラスミドを真核生物発現ベクター（ｐＣＩ−ｄｈｆｒｒ）に構築した。
これらのプラスミドの模式的表示が表１に示されている。プラスミド構築の詳細な説明が続く。
Figure 2015520128
ＤＧ４４発現系用のコドン使用頻度の最適化の後にＯＸＭ変異体ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ（０．５Ｃ ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ、ＧｅｎＡｒｔ、ＧＡ番号０８０４３７７）の核酸配列を合成した。０．５Ｃ ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ配列を含有するＸｂａＩ−ＮｏｔＩ断片を単離した。その断片を真核生物発現ベクターｐＣＩ−ｄｈｆｒに挿入して６０１−０−ｐ１４２−１クローンを得た。
ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰの構築
６０１−６−ｐ１４９−１（ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ）を合成するために次のプライマーを使用した。
プライマー２５ ５'ＣＴＣＴＡＧＡＧＧＡＣＡＴＧＧＣＣＡＣ３'（配列番号４）。
プライマー８５Ｒ ５'ＣＴＧＧＣＴＧＴＧＣＴＧＧＧＧＣＡＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴ３'（配列番号５）。
プライマー８６ ５'ＣＣＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＡＧＧＧ３'（配列番号６）。
プライマー７４Ｒ ５'ＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＣＣＡＧＡＣＣＴ３'（配列番号７）。
３回のＰＣＲ反応を実施した。第１の反応を、プライマー２５およびプライマー８５Ｒおよび鋳型として４０２−３−ｐ８１−４（ＣＴＰ−ｈＧＨ−ＣＴＰ−ＣＴＰ）のプラスミドＤＮＡを用いて実施した。ＰＣＲ増幅の結果として、約１８１ｂｐ産物が形成された。第２の反応を、プライマー８６およびプライマー７４Ｒおよび鋳型として６０１−０−ｐ１４２−１（０．５Ｃ ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ）のプラスミドＤＮＡを用いて実施した。ＰＣＲ増幅の結果として、約２２４ｂｐ産物が形成された。最後の反応を、プライマー２５および７４Ｒおよび鋳型としてそれまでの２回の反応の産物の混合物を用いて実施した。ＰＣＲ増幅の結果として、約３９１ｂｐ産物が形成され、ＴＡクローニングベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログＫ２０００−０１）にライゲーションされた。ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ配列を含有するＸｂａＩ−ＮｏｔＩ断片を単離した。その断片を真核生物発現ベクターｐＣＩ−ｄｈｆｒに挿入して６０１−６−ｐ１４９−１クローンを得た。
ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰをコードする核酸配列は次の通りである：
ｔｃｔａｇａｇｇａｃａｔｇｇｃｃａｃｃｇｇｃａｇｃａｇｇａｃｃａｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｇｃｃｔｔｃｇｇｃｃｔｇｃｔｇｔｇｃｃｔｇｃｃａｔｇｇｃｔｇｃａｇｇａｇｇｇｃａｇｃｇｃｃａｇｃｔｃｔｔｃｔｔｃｔａａｇｇｃｔｃｃａｃｃｃｃｃａｔｃｔｃｔｇｃｃｃａｇｃｃｃｃａｇｃａｇａｃｔｇｃｃｇｇｇｃｃｃｃａｇｃｇａｃａｃａｃｃｃａｔｔｃｔｇｃｃｃｃａｇｃａｃａｇｃｃａｇｇｇｃａｃｃｔｔｃａｃｃａｇｃｇａｃｔａｃａｇｃａａｇｔａｃｃｔｇｇａｃａｇｃａｇａａｇｇｇｃｃｃａｇｇａｃｔｔｃｇｔｃｃａｇｔｇｇｃｔｇａｔｇａａｃａｃｃａａｇａｇｇａａｃａｇｇａａｃａａｃａｔｃｇｃｔｔｃｃｔｃｔａｇｃｔｃｃａａｇｇｃｃｃｃｔｃｃａｃｃｃｔｃｔｃｔｇｃｃｔａｇｃｃｃｃｔｃｔｃｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｃｃｃａｔｃｃｇａｃａｃａｃｃａａｔｃｃｔｇｃｃａｃａｇｔｇａｔｇａａｇｇｔｃｔｇｇａｔｇｃｇｇｃｃｇｃ（配列番号８）。
ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰをコードするアミノ酸配列は次の通りである：
ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＫＲＮＲＮＮＩＡＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱ（配列番号９）。
ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰの構築
６０１−３−ｐ１５８−２（ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ）を合成するために次のプライマーを使用した：
プライマー２５ ５'ＣＴＣＴＡＧＡＧＧＡＣＡＴＧＧＣＣＡＣ３'（ＸｂａＩの制限部位を含む）（配列番号１０）。
プライマー８７Ｒ ５'ＧＣＴＧＧＡＧＣＴＡＧＣＧＡＴＧＴＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣ３'（ＯＸＭの３'末端とＣＴＰの５'末端を含む）（配列番号１１）。
プライマー８８ ５'ＡＣＡＴＣＧＣＴＡＧＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣ３'（ＯＸＭの３'末端とＣＴＰの５'末端を含む）（配列番号１２）。
プライマー７４Ｒ ５'ＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＣＣＡＧＡＣＣＴ３'（ＮｏｔＩの制限部位を含む）（配列番号１３）。
３回のＰＣＲ反応を実施した。第１の反応を、プライマー２５およびプライマー８７Ｒおよび鋳型として６０１−６−ｐ１４９−１（ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ）のプラスミドＤＮＡを用いて実施した。ＰＣＲ増幅の結果として、約２９０ｂｐ産物が形成された。第２の反応を、プライマー８８およびプライマー７４Ｒおよび鋳型として４０２−３−ｐ８１−４（ＣＴＰ−ｈＧＨ−ＣＴＰ−ＣＴＰ）のプラスミドＤＮＡを用いて実施した。ＰＣＲ増幅の結果として、約２００ｂｐ産物が形成された。最後の反応を、プライマー２５および７４Ｒおよび鋳型としてそれまでの２回の反応の産物の混合物を用いて実施した。ＰＣＲ増幅の結果として、約４５０ｂｐ産物が形成され、ＴＡクローニングベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログＫ２０００−０１）にライゲーションされた。ＸｂａＩ−ＮｏｔＩ断片を含有するＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ配列を単離した。その断片を我々の真核生物発現ベクターｐＣＩ−ｄｈｆｒに挿入して６０１−３−ｐ１５８−２クローンを得た。
ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰをコードする核酸配列は次の通りである：
ｔｃｔａｇａｇｇａｃａｔｇｇｃｃａｃｃｇｇｃａｇｃａｇｇａｃｃａｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｇｃｃｔｔｃｇｇｃｃｔｇｃｔｇｔｇｃｃｔｇｃｃａｔｇｇｃｔｇｃａｇｇａｇｇｇｃａｇｃｇｃｃａｇｃｔｃｔｔｃｔｔｃｔａａｇｇｃｔｃｃａｃｃｃｃｃａｔｃｔｃｔｇｃｃｃａｇｃｃｃｃａｇｃａｇａｃｔｇｃｃｇｇｇｃｃｃｃａｇｃｇａｃａｃａｃｃｃａｔｔｃｔｇｃｃｃｃａｇｃａｃａｇｃｃａｇｇｇｃａｃｃｔｔｃａｃｃａｇｃｇａｃｔａｃａｇｃａａｇｔａｃｃｔｇｇａｃａｇｃａｇａａｇｇｇｃｃｃａｇｇａｃｔｔｃｇｔｃｃａｇｔｇｇｃｔｇａｔｇａａｃａｃｃａａｇａｇｇａａｃａｇｇａａｃａａｃａｔｃｇｃｔａｇｃｔｃｃａｇｃａｇｃａａｇｇｃｃｃｃｔｃｃｃｃｃｇａｇｃｃｔｇｃｃｃｔｃｃｃｃａａｇｃａｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｇｃｃｃｔｃｃｇａｃａｃａｃｃａａｔｃｃｔｇｃｃａｃａｇａｇｃａｇｃｔｃｃｔｃｔａａｇｇｃｃｃｃｔｃｃｔｃｃａｔｃｃｃｔｇｃｃａｔｃｃｃｃｃｔｃｃｃｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｃｃｃｃｔｃｔｇａｃａｃｃｃｃｔａｔｃｃｔｇｃｃｔｃａｇｔｇａｔｇａａｇｇｔｃｔｇｇａｔｇｃｇｇｃｃｇｃ（配列番号１４）。
ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰをコードするアミノ酸配列は次の通りである：
ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＫＲＮＲＮＮＩＡＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱ（配列番号１５）。
ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰの構築
６０１−２−ｐ１６０−２（ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ）を合成するために次のプライマーを使用した：
プライマー７５ ５'ＣＴＣＣＣＡＧＴＴＣＡＡＴＴＡＣＡＧＣＴ３'（ＸｂａＩ制限部位の前にｐＣＩ−ｄｈｆｒの配列を含む）（配列番号１６）。
プライマー８９Ｒ ５'ＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＣＣＴＣＣＴＧＣＡＧ３'（ＯＸＭの５'末端を含む）（配列番号１７）。
プライマー９０ ５'ＧＣＧＣＴＣＡＣＡＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＴＴＣ３'（ＯＸＭの５'末端を含む）（配列番号１８）。
プライマー７４Ｒ ５'ＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＣＣＡＧＡＣＣＴ３'（ＮｏｔＩの制限部位を含む）（配列番号１９）。
３回のＰＣＲ反応を実施した。第１の反応を、プライマー７５およびプライマー８９Ｒおよび鋳型として６０１−０−ｐ１４２−１（０．５Ｃ ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ）のプラスミドＤＮＡを用いて実施した。ＰＣＲ増幅の結果として、約１７５ｂｐ産物が形成された。第２の反応を、プライマー９０およびプライマー７４Ｒおよび鋳型として６０１−３−ｐ１５８−２（ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ）のプラスミドＤＮＡを用いて実施した。ＰＣＲ増幅の結果として、約２００ｂｐ産物が形成された。最後の反応を、プライマー２５および７４Ｒおよび鋳型としてそれまでの２回の反応の産物の混合物を用いて実施した。ＰＣＲ増幅の結果として、約３９１ｂｐ産物が形成され、ＴＡクローニングベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログＫ２０００−０１）にライゲーションされた。ＸｂａＩ−ＮｏｔＩ断片を含有するＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ配列を単離した。その断片を真核生物発現ベクターｐＣＩ−ｄｈｆｒに挿入して６０１−２−ｐ１６０−２クローンを得た。
ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰをコードする核酸配列は次の通りである：
ｔｃｔａｇａｇｇａｃａｔｇｇｃｃａｃａｇｇｇａｇｃａｇｇａｃｃａｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｇｃｔｔｔｃｇｇｃｃｔｇｃｔｇｔｇｔｃｔｇｃｃａｔｇｇｃｔｇｃａｇｇａｇｇｇｃａｇｃｇｃｔｃａｃａｇｃｃａｇｇｇｃａｃｃｔｔｃａｃｃａｇｃｇａｃｔａｃａｇｃａａｇｔａｃｃｔｇｇａｃａｇｃａｇａａｇｇｇｃｃｃａｇｇａｃｔｔｃｇｔｃｃａｇｔｇｇｃｔｇａｔｇａａｃａｃｃａａｇａｇｇａａｃａｇｇａａｃａａｃａｔｃｇｃｔａｇｃｔｃｃａｇｃａｇｃａａｇｇｃｃｃｃｔｃｃｃｃｃｇａｇｃｃｔｇｃｃｃｔｃｃｃｃａａｇｃａｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｇｃｃｃｔｃｃｇａｃａｃａｃｃａａｔｃｃｔｇｃｃａｃａｇａｇｃａｇｃｔｃｃｔｃｔａａｇｇｃｃｃｃｔｃｃｔｃｃａｔｃｃｃｔｇｃｃａｔｃｃｃｃｃｔｃｃｃｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｃｃｃｃｔｃｔｇａｃａｃｃｃｃｔａｔｃｃｔｇｃｃｔｃａｇｔｇａｔｇａａｇｇｔｃｔｇｇａｔｇｃｇｇｃｃｇｃ（配列番号２０）
ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰをコードするアミノ酸配列は次の通りである：
ＬＥＤＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＫＲＮＲＮＮＩＡＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱ（配列番号２１）
ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＯＸＭの構築
ＤＧ４４発現系用のコドン使用頻度の最適化の後にＯＸＭ変異体（ＣＴＰｘ２−ＯＸＭ、ＧｅｎＡｒｔ、ＧＡ番号１０６７１０１）の核酸配列を合成した。その断片をＥｘｃｅｌｌｇｅｎｅ真核生物発現ベクターに挿入してｐ１６２クローンを得た。
ＣＴＰｘ２−ＯＸＭをコードする核酸配列は次の通りである：
ｃｔａｔａｇｇｇｃｇａａｔｔｇａａｇｇａａｇｇｃｃｇｔｃａａｇｇｃｃｇｃａｔｇａｇｃｔｃｔｃｔａｇａｇｇａｃａｔｇｇｃｃａｃｃｇｇｃａｇｃａｇｇａｃｃａｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｇｃｃｔｔｃｇｇｃｃｔｇｃｔｇｔｇｃｃｔｇｃｃａｔｇｇｃｔｇｃａｇｇａｇｇｇｃａｇｃｇｃｃａｇｃｔｃｃａｇｃａｇｃａａｇｇｃｃｃｃｔｃｃｃｃｃｇａｇｃｃｔｇｃｃｃｔｃｃｃｃａａｇｃａｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｇｃｃｃｔｃｃｇａｃａｃａｃｃａａｔｃｃｔｇｃｃａｃａｇａｇｃａｇｃｔｃｃｔｃｔａａｇｇｃｃｃｃｔｃｃｔｃｃａｔｃｃｃｔｇｃｃａｔｃｃｃｃｃｔｃｃｃｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｃｃｃｃｔｃｔｇａｃａｃｃｃｃｔａｔｃｃｔｇｃｃｔｃａｇｃａｃａｇｃｃａｇｇｇｃａｃｃｔｔｃａｃｃａｇｃｇａｃｔａｃａｇｃａａｇｔａｃｃｔｇｇａｃａｇｃａｇａａｇｇｇｃｃｃａｇｇａｃｔｔｃｇｔｃｃａｇｔｇｇｃｔｇａｔｇａａｃａｃｃａａｇａｇｇａａｃａｇｇａａｃａａｃａｔｃｇｃｔｔｇａｔｇａａｇｇｔｃｔｇｇａｔｇｃｇｇｃｃｇｃｇｇｔａｃｃｃｔｇｇｇｃｃｔｃａｔｇｇｇｃｃｔｔｃｃｔｔｔｃａｃｔｇｃｃｃｇｃｔｔｔｃｃａｇ（配列番号２２）。
ＣＴＰｘ２−ＯＸＭをコードするアミノ酸配列は次の通りである：
ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＫＲＮＲＮＮＩＡ＊＊ＲＳＧＣＧＲＧＴＬＧＬＭＧＬＰＦＴＡＲＦＰ（配列番号２３）。
ＯＸＭ−ＣＴＰｘ３の構築：
ＤＧ４４発現系用のコドン使用頻度の最適化の後にＯＸＭ変異体（ＯＸＭ−ＣＴＰｘ３、ＧｅｎＡｒｔ、ＧＡ番号１０１７８６４）の核酸配列を合成した。ＯＸＭ−ＣＴＰｘ３配列を含有するＸｂａＩ−ＮｏｔＩ断片を単離した。その断片を我々の真核生物発現ベクターｐＣＩ−ｄｈｆｒに挿入してｐＣＩ−ｄｈｆｒ−ＯＸＭ−ｃｔｐｘ３−ｐ２１６−４クローンを得た。
ＯＸＭ−ＣＴＰｘ３をコードする核酸配列は次の通りである：
ｔｃｔａｇａｃｔｃｇａｇｃｇａｔｃｇｃｃａｔｇｇｃｃａｃｃｇｇｃｔｃｔａｇｇａｃｃｔｃｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｇｃｃｔｔｃｇｇｃｃｔｇｃｔｇｔｇｃｃｔｇｃｃｃｔｇｇｃｔｇｃａｇｇａａｇｇｃａｇｃｇｃｔｃａｃｔｃｃｃａｇｇｇｃａｃｃｔｔｃａｃｃｔｃｃｇａｃｔａｃｔｃｃａａｇｔａｃｃｔｇｇａｃｔｃｔｃｇｇａｇａｇｃｃｃａｇｇａｃｔｔｃｇｔｇｃａｇｔｇｇｃｔｇａｔｇａａｃａｃｃａａｇｃｇｇａａｃｃｇｇａａｃａａｔａｔｃｇｃｃｔｃｃｔｃａａｇｃｔｃｃａａｇｇｃａｃｃｔｃｃａｃｃｔｔｃｃｃｔｇｃｃｔａｇｃｃｃｔｔｃｃａｇａｃｔｃｃｃｔｇｇｇｃｃｃａｇｔｇａｃａｃｃｃｃｔａｔｃｃｔｇｃｃｔｃａｇｔｃｃａｇｃｔｃｃａｇｃａａｇｇｃｃｃｃａｃｃｃｃｃｔａｇｃｃｔｇｃｃｔｔｃｔｃｃｔｔｃｔｃｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｃｃｃｃａｇｃｇａｔａｃｔｃｃａａｔｔｃｔｇｃｃｃｃａｇｔｃｃｔｃｃａｇｃａｇｔａａｇｇｃｔｃｃｃｃｃｔｃｃａｔｃｔｃｔｇｃｃａｔｃｃｃｃｃａｇｃａｇａｃｔｇｃｃａｇｇｃｃｃｔｔｃｔｇａｔａｃａｃｃｃａｔｃｃｔｃｃｃａｃａｇｔｇａｔｇａｇｇａｔｃｃｇｃｇｇｃｃｇｃ（配列番号２４）。
ＯＸＭ−ＣＴＰｘ３をコードするアミノ酸配列は次の通りである：
ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＫＲＮＲＮＮＩＡＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱ＊＊（配列番号２５）。
ＯＸＭ−ＣＴＰｘ４の構築：
ＤＧ４４発現系用のコドン使用頻度の最適化の後にＯＸＭ変異体（ＯＸＭ−ＣＴＰｘ４、ＧｅｎＡｒｔ、ＧＡ番号１１１５７６９）の核酸配列を合成した。ＯＸＭ−ＣＴＰｘ４配列を含有するＸｂａＩ−ＮｏｔＩ断片を単離した。その断片を真核生物発現ベクターｐＣＩ−ｄｈｆｒに挿入してｐＣＩ−ｄｈｆｒ−ＯＸＭ−ｃｔｐｘ４−ｐ２５４−３クローンを得た。
ＯＸＭ−ＣＴＰｘ４をコードする核酸配列は次の通りである：
ｔｃｔａｇａｃｔｃｇａｇｃｇａｔｃｇｃｃａｔｇｇｃｔａｃｃｇｇｃｔｃｃａｇａａｃｃｔｃｔｃｔｇｃｔｇｃｔｇｇｃｃｔｔｃｇｇｃｃｔｇｃｔｇｔｇｔｃｔｇｃｃｔｔｇｇｃｔｇｃａａｇａｇｇｇｃａｇｃｇｃｔｃａｔｔｃｃｃａｇｇｇｃａｃｃｔｔｃａｃｃｔｃｃｇａｃｔａｃｔｃｃａａｇｔａｃｃｔｇｇａｃｔｃｔｃｇｃａｇａｇｃｃｃａｇｇａｃｔｔｃｇｔｇｃａｇｔｇｇｃｔｇａｔｇａａｃａｃｃａａｇｃｇｇａａｃｃｇｇａａｃａａｔａｔｃｇｃｃｔｃｃｔｃｃａｇｃｔｃｃａａｇｇｃｃｃｃｔｃｃｔｃｃａｔｃｔｃｔｇｃｃａｔｃｃｃｃｃａｇｔａｇａｃｔｇｃｃｔｇｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃａｃｃｃｃｔａｔｃｃｔｇｃｃｔｃａｇｔｃｃａｇｃｔｃｃｔｃｔａａｇｇｃｃｃｃａｃｃａｃｃｔｔｃｃｃｔｇｃｃｔａｇｃｃｃｔｔｃａａｇａｃｔｇｃｃａｇｇｃｃｃｔａｇｃｇａｔａｃａｃｃａａｔｔｃｔｇｃｃｃｃａｇｔｃｃｔｃｃａｇｃａｇｃａａｇｇｃｔｃｃｃｃｃａｃｃｔａｇｃｃｔｇｃｃｔｔｃｔｃｃａｔｃａａｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｃｃｃａｔｃｃｇａｔａｃｃｃｃａａｔｔｔｔｇｃｃｔｃａｇａｇｃａｇｃｔｃｔａｇｃａａｇｇｃａｃｃｔｃｃｃｃｃｃａｇｔｃｔｇｃｃｃｔｃｔｃｃａａｇｃａｇａｃｔｃｃｃｔｇｇｃｃｃｔｔｃａｇａｃａｃｔｃｃｃａｔｔｃｔｇｃｃａｃａｇｔｇａｔｇａｇｇａｔｃｃｇｃｇｇｃｃｇｃ（配列番号２６）
ＯＸＭ−ＣＴＰｘ４をコードするアミノ酸配列は次の通りである：
ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＫＲＮＲＮＮＩＡＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱ＊＊（配列番号２７）。
ＯＸＭ−ＣＴＰｘ５の構築：
ＤＧ４４発現系用のコドン使用頻度の最適化の後にＯＸＭ変異体（ＯＸＭ−ＣＴＰｘ５、ＧｅｎＡｒｔ、ＧＡ番号１１１５７７０）の核酸配列を合成した。ＯＸＭ−ＣＴＰｘ５配列を含有するＸｂａＩ−ＮｏｔＩ断片を単離した。その断片を真核生物発現ベクターｐＣＩ−ｄｈｆｒに挿入してｐＣＩ−ｄｈｆｒ−ＯＸＭ−ｃｔｐｘ５−ｐ２５５−１クローンを得た。
ＯＸＭ−ＣＴＰｘ５をコードする核酸配列は次の通りである：
ｃｔｃｔａｇａｃｔｃｇａｇｃｇａｔｃｇｃｃａｔｇｇｃｔａｃｃｇｇｃｔｃｃａｇａａｃｃｔｃｔｃｔｇｃｔｇｃｔｇｇｃｃｔｔｃｇｇｃｃｔｇｃｔｇｔｇｔｃｔｇｃｃｔｔｇｇｃｔｇｃａａｇａｇｇｇｃａｇｃｇｃｔｃａｔｔｃｃｃａｇｇｇｃａｃｃｔｔｃａｃｃｔｃｃｇａｃｔａｃｔｃｃａａｇｔａｃｃｔｇｇａｃｔｃｔｃｇｃａｇａｇｃａｃａｇｇａｃｔｔｃｇｔｇｃａｇｔｇｇｃｔｇａｔｇａａｃａｃｃａａｇｃｇｇａａｃｃｇｇａａｃａａｔａｔｃｇｃｃｔｃｃｔｃｃａｇｃｔｃｃａａｇｇｃｃｃｃｔｃｃｔｃｃａｔｃｔｃｔｇｃｃａｔｃｃｃｃｃａｇｔａｇａｃｔｇｃｃｔｇｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃａｃｃｃｃｔａｔｃｃｔｇｃｃｔｃａｇｔｃｃａｇｃｔｃｃｔｃｔａａｇｇｃｔｃｃａｃｃａｃｃｔｔｃｃｃｔｇｃｃｔａｇｃｃｃｔｔｃａａｇａｃｔｇｃｃａｇｇｃｃｃｔａｇｃｇａｔａｃａｃｃａａｔｔｃｔｇｃｃｃｃａｇｔｃｃｔｃｃａｇｃａｇｃａａｇｇｃｔｃｃｃｃｃａｃｃｔａｇｃｃｔｇｃｃｔｔｃｔｃｃａｔｃａａｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｃｃｃａｔｃｃｇａｔａｃｃｃｃａａｔｔｔｔｇｃｃｔｃａｇａｇｃａｇｃｔｃｔａｇｃａａｇｇｃａｃｃｔｃｃｃｃｃｃａｇｔｃｔｇｃｃｃｔｃｔｃｃａａｇｃａｇａｃｔｃｃｃｔｇｇｃｃｃｔｔｃａｇａｃａｃｔｃｃａａｔｃｃｔｃｃｃａｃａｇｔｃｃｔｃｔａｇｃｔｃｔａａａｇｃｔｃｃａｃｃｔｃｃｃａｇｃｃｔｇｃｃｃａｇｃｃｃｔａｇｔａｇａｃｔｃｃｃｃｇｇａｃｃｔｔｃｔｇａｔａｃｃｃｃｃａｔｃｔｔｇｃｃｃｃａｇｔｇａｔｇａｇｇａｔｃｃｇｃｇｇｃｃｇｃ（配列番号２８）。
ＯＸＭ−ＣＴＰｘ５をコードするアミノ酸配列は次の通りである：
ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＫＲＮＲＮＮＩＡＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱ＊＊（配列番号２９）。
ＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の発現、精製および特徴解析
ＯＸＭ−ＣＴＰの７種類全ての変異体をＸＬＧのＣＨＯエクスプレス細胞株（Ｅｘｃｅｌｌｇｅｎｅ社、スイス）において一時的に発現および産生した。ＯＸＭ−ＣＴＰ回収物の濃縮レベルはＯＸＭ ＥＬＩＳＡキット（Ｂａｃｈｅｍ社、カタログ番号Ｓ−１３９３．０００１）を用いて決定された。その回収物をＤＥＡＥカラムに続いて第２の精製ステップとしてジャカリンカラムを使用して精製した。最終画分を１０ｍＭクエン酸緩衝液、１４７ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６に対して透析した。精製された変異体の濃度は、１．９＝１ｍｇ／ｍｌの吸光係数を用いて２８０ｎｍの吸光度により決定された。１．９はＯＸＭペプチドについて理論的に計算された吸光係数である。ＣＴＰペプチドは２８０ｎｍで吸光しないので、同じ吸光係数をＯＸＭ−ＣＴＰ変異体に適用した。ＯＸＭ天然型ペプチドを化学的に合成し（Ａｌｍａｃ社、アイルランド）、そのペプチド含量をアミノ酸分析により決定した。
ＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の薬物動態（ＰＫ）プロファイル
ＯＸＭペプチドとＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の薬物動態プロファイルを次の用に評価した。オスのスプレーグ・ダウリー（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）（ＳＤ）−１ラットに単回用量の天然型ＯＸＭ（ｎ＝６、２３０μｇ／ｋｇ）、変異体ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ、ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰおよびＣＴＰ−ＣＴＰ−ＯＸＭ（ｎ＝６、２３０μｇ／ｋｇ）または変異体番号ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＣＴＰ（ｎ＝６、１５３μｇ／ｋｇ）を皮下投与（ＳＣ）または静脈内投与（ＩＶ）した。群当たり３匹動物からなるコホートから異なる時点で採血した。ＯＸＭ血清濃度は、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｂａｃｈｅｍ社、カタログ番号Ｓ−１３９３．０００１）を用いて分析された。その試験計画が表２に要約されている。その試験を３つの一連の実験である実験番号１（第１〜４群）、実験番号２（第５〜９群）および実験番号３（第１０〜１３群）に分けた。
Figure 2015520128
一晩絶食させたマウスをグルコースについて測定した（投与前グルコース）。直後に試験物品のうちの１つをそれらのマウスにＩＰ注射した。注射から１５分後または１２０分後にグルコースレベルを測定し（グルコースについて０時間）、ＩＰ注射によるグルコース投与（１．５ｇ／ｋｇ）がそれに続いた。追加のグルコース測定を１０分、２０分、３０分、６０分、９０分、１２０分および１８０分に実施した。血中グルコースレベルは携帯式血糖計を使用して尾静脈採血により測定された。
Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける食物摂取試験
注射の少なくとも１週間前にマウスの体重を量り、順化のための小さいケージに移した（ケージ当たり１匹のマウス）。順化期間の間にそれらのマウスは毎日世話され、試験期間中のストレスを最小限にするために２回のベヒクルの注射を受けた。実験の前日にそれらのマウスは絶食処理された。絶食から１７時間後に早期明期（９００〜１０００時間）の時間でそれらのマウスの体重を再び量り（ＩＰ注射の前）、１７００ｎｍｏｌ／ｋｇ（１０μｌ／１ｇマウス体重）のＯＸＭペプチドまたはＯＸＭ−ＣＴＰ変異体ＯＸＭ−ＣＴＰＸ３、ＯＸＭ−ＣＴＰＸ４およびＯＸＭ−ＣＴＰＸ５の単回ＩＰ注射がそれに続いた。注射後にそれらのマウスをそれらのホームケージに戻し（ケージ当たり１匹のマウス）、体重測定前の量の飼料を与えた。飼料の重量を量ることにより注射から０時間後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、８時間後、２１時間後、３２時間後および４４時間後、５５時間後、６８時間後、８０時間後、９３時間後および１４１時間後に食物摂取量を測定した。実験の最後にラットの体重を再び量った。
結果
実施例１：ＣＴＰ修飾ＯＸＭの構築
遺伝子操作によりＣＴＰペプチドｃＤＮＡをヒトＯＸＭのｃＤＮＡに融合し、表１に詳述される７種類の異なるＯＸＭ−ＣＴＰ変異体を作成した。それらのプラスミドのヌクレオチド配列を確認し、それらのプラスミドをＸＬＧのＣＨＯエクスプレス細胞株（Ｅｘｃｅｌｌｇｅｎｅ社、スイス）に一時的に形質移入した。ＯＸＭ−ＣＴＰ変異体は培養培地に分泌され、回収物を収集し、ＯＸＭ−ＣＴＰレベルを決定した。
実施例２：ＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の発現、精製および特徴解析
産生培地（回収物）をＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の分泌レベルについて測定した。分泌レベルが表３に要約されている。得られた分泌レベルは組換えペプチドの標準的一時的形質移入発現レベルを考えると高かった。
Figure 2015520128
材料と方法に記載されている方法に従って回収物を精製した。変異体ＯＸＭ−ＣＴＰＸ３、ＯＸＭ−ＣＴＰＸ４およびＯＸＭ−ＣＴＰＸ５の最終試料をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析した（クマシー染色（図１Ａ）と抗ＯＸＭウエスタンブロット分析（図１Ｂ））。変異体ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ、ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰおよびＣＴＰ−ＣＴＰ−ＯＸＭについて、精製過程に由来する試料をクマシー染色とウエスタンブロット分析の両方により分析した（図２Ａ、図２Ｂ）。予期されたように、ＯＸＭ−ＣＴＰ変異体はそのペプチドに融合されたＣＴＰカセットの数に相関するサイズの差異を示した。比較的に大きい分子量は、Ｏ‐グリカン鎖が高い占有率でＣＴＰペプチド上の潜在的なセリン部位上に存在し得ることを表す。ＯＸＭペプチドは、おそらくは小さいサイズのペプチドを転写することの技術的な難しさのために、抗ＯＸＭ抗体と反応しなかった。クマシー染色により、ＯＸＭ−ＣＴＰ変異体は高度に精製され、主に高形状を含有したことが示されている。
実施例３：ＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の薬物動態（ＰＫ）プロファイル
ＯＸＭ−ＣＴＰ変異体と比べた、ＯＸＭペプチドの薬物動態プロファイルをオスＳＤ−１ラットにおいて分析した。天然型ＯＸＭまたはＯＸＭ−ＣＴＰ変異体ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ、ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＯＸＭ（２３０μｇ／ｋｇペプチド）または変異体ＯＸＭ−ＣＴＰＸ３、ＯＸＭ−ＣＴＰＸ４およびＯＸＭ−ＣＴＰＸ５（１５３μｇ／ｋｇペプチド）を動物に単回ＩＶ注射（実験１、図３Ａ）または単回ＳＣ注射（実験２および３、図３Ｂ〜図３Ｃ）で投与した。表示されている時点でのＯＸＭまたはＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の血清中濃度を、市販のＥＬＩＳＡを用いて分析した。ＰＫプロファイルが図３Ａ〜図３Ｃに示されており、従来のノンコンパートメント解析によるＰＫパラメータが表４に要約されている。ＯＸＭへのＣＴＰペプチドの付加により、半減期が天然型ＯＸＭの０．２２時間から様々なＯＸＭ−ＣＴＰ変異体（表４、ＳＣ投与；実験２および３）の２．７〜１０時間まで延長した。
変異体ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰおよびＣＴＰ−ＣＴＰ−ＯＸＭを作成するために、２コピーのＣＴＰを３つの異なる方法でＯＸＭペプチドに付加した。ＣＴＰが一列になってＯＸＭのＣ末端に付加されたときに最も著しい血清半減期の延長を受け、変異体ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰのＴ１／２は４．７６時間であった。ＯＸＭのＣ末端への３つのＣＴＰの融合は、２コピーのＣＴＰの融合と比べると半減期の延長を生じなかった。驚くべきことに、４コピーおよび５コピーのＣＴＰのＯＸＭのＣ末端への付加は、Ｔ１／２を最大で１０時間まで延長させた（表４）。
曝露はＡＵＣパラメータによって反映され、変異体ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ（実験２）では約１７倍ならびに変異体ＯＸＭ−ＣＴＰＸ４およびＯＸＭ−ＣＴＰＸ５（実験３）では約３０倍まで大いに増加した。これらの結果は、４コピーまたは５コピーのＣＴＰのＯＸＭペプチドへの付加の後に優れた延長効果が存在することを示す。
実験１および２から計算される生物学的利用率はＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰについては増加したが、ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰおよびＣＴＰ−ＣＴＰ−ＯＸＭについては顕著な改善が見られなかった（表４）。
Figure 2015520128
Ｔ１／２とＡＵＣ∞の倍率増加を示す様々な群の間での比較により、ＯＸＭ−ＣＴＰｘ４とＯＸ−ＣＴＰｘ５では他の変異体と比べてこれらのパラメータが優れていることが示された（表５）。
Figure 2015520128
実施例４：ＣＴＰ修飾ＯＸＭは耐糖性を誘導する
Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいてＩＰＧＴＴ検査が実施され、ＯＸＭがインスリン分泌の刺激を介してグルコースクリアランスを向上させることを示した。ＩＰ耐糖性検査（ＩＰＧＴＴ）はＯＸＭのグルコースの低下作用を評価する。ＯＸＭまたはＯＸＭ−ＣＴＰ変異体のインビボ活性を評価するためにＩＰＧＴＴモデルを適用した。一晩絶食させたＣ５７ＢＬ／６マウスにＯＸＭペプチドまたはＯＸＭ−ＣＴＰ変異体をＩＰ注射した後にグルコース（１．５ｇ／ｋｇ）をＩＰ注射し、血糖計により尾静脈に由来する血中グルコースレベルを測定した（図４Ａ〜図４Ｄ）。２つの一連の実験においてＯＸＭ−ＣＴＰ変異体を評価し、実験１では変異体ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ、ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＯＸＭ（図４Ａおよび図４Ｃ）について、および実験２では変異体ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰＸ４およびＯＸＭ−ＣＴＰＸ５（図４Ｂおよび図４Ｄ）について評価した。ＯＸＭ（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）またはＯＸＭ−ＣＴＰ変異体（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）をグルコースのＩＰ注射の１５分前または２時間前（ＯＸＭペプチドと変異体ＯＸＭ−ＣＴＰＸ４）にＩＰ投与し、耐糖性の誘導をベヒクル（緩衝液）群と比べた。ベヒクル群と比較した血中グルコースＡＵＣの２０〜３０％の減少によって反映される、ＡＵＣ計算値に対して少ない影響を有する１００ｎｍｏｌ／ｋｇのＯＸＭペプチド（図４Ａ〜図４Ｄ、実験１では１％の減少、および実験２では６．７％の減少）と比べて顕著な効果がＯＸＭ−ＣＴＰ変異体ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰ−ＣＴＰ、ＯＸＭ−ＣＴＰＸ３、ＯＸＭ−ＣＴＰＸ４およびＯＸＭ−ＣＴＰＸ５について測定された。驚くことに、ＣＴＰ−ＯＸＭ−ＣＴＰはグルコースレベルの上昇を引き起こしたが、ＣＴＰ−ＣＴＰ−ＯＸＭは耐糖性に対してわずかな影響しか有しなかった。ＯＸＭ−ＣＴＰＸ４はグルコースの１２０分前に投与されたときでも耐糖性活性を誘導したが、ＯＸＭペプチドの活性はもはや明らかではなかった。この結果はこの変異体の改善された薬物動態学プロファイルと一致する。
実施例５：ＣＴＰ修飾ＯＸＭは食物摂取量を減少させる
ＯＸＭおよびＯＸＭ−ＣＴＰ変異体の薬理学的活性をＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて単回ＳＣ薬品投与後にさらに評価した。本試験では、食物摂取に対する急性効果を測定した。オスＣ５７ＢＬ／６マウス（群当たりｎ＝４）に単回ＳＣ投与によりＯＸＭペプチド（２０００ｎｍｏｌ／ｋｇ）またはＯＸＭ−ＣＴＰ（１７００ｎｍｏｌ／ｋｇ）変異体：ＯＸＭ−ＣＴＰＸ３、ＯＸＭ−ＣＴＰＸ４またはＯＸＭ−ＣＴＰＸ５を投与した。食物摂取量を６日間にわたって毎日測定した。注射から１時間および２時間の後に測定されると、図６において示されるように、ＯＸＭおよびＯＸＭ−ＣＴＰ変異体で処置されたマウスについて（ベヒクルと比べて）３４〜５１％の食物摂取という、食物摂取量の著しい減少がＯＸＭと測定された全てのＯＸＭ−ＣＴＰ変異体により引き起こされた。ＯＸＭペプチドの効果は注射から４時間後に消失したが、他の全てのＯＸＭ−ＣＴＰ変異体は少なくとも２４時間は効果的であった。変異体ＯＸＭ−ＣＴＰＸ５で最も顕著な効果が見られ、それはベヒクルと比べて食物摂取量を５日間減少させた。実験期間の様々な時間間隔についてのベヒクルと比べた食物摂取のパーセンテージが図６Ｂに提示されている。天然型ＯＸＭの効果は１時間後に消失したが、ＯＸＭ−４／５ＣＴＰは抑制を２時間維持し、ＯＸＭ−５ＣＴＰは約８０時間（３日間）維持した。注目すべきことに、急速食物摂取試験における変異体ＯＸＭ−ＣＴＰｘ５の優位性はその改善されたＰＫプロファイルと相関関係にある。驚くことに、変異体ＯＸＭ−ＣＴＰｘ４は約１０時間というＴ１／２を有する改善されたＰＫプロファイルを示したにもかかわらず、その効果はＯＸＭ−ＣＴＰｘ５またはＯＸＭ−ＣＴＰｘ３程長く続かなかった。
添付図面を参照して本発明の好ましい実施形態を説明してきたが、本発明はまさにこれらの実施形態に限定されることはなく、当業者は、添付されている特許請求の範囲において定義される本発明の範囲と精神から逸脱することなく、様々な変更と改変を行うことができることが理解されるべきである。

Claims (119)

  1. ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストと、
    前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  2. 前記ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストがオキシントモジュリンであることを特徴とする請求項１に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  3. 前記少なくとも１つのＣＴＰのアミノ酸配列が、配列番号１および配列番号２からなる群より選択されることを特徴とする請求項１または２に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  4. 前記少なくとも１つのＣＴＰがグリコシル化されていることを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  5. 前記少なくとも１つのＣＴＰが短縮化されていることを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  6. 前記少なくとも１つのＣＴＰが、リンカーを介して前記アゴニストに結合していることを特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  7. 前記リンカーがペプチド結合であることを特徴とする請求項６に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  8. ５個の絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドが、前記アゴニストの前記カルボキシ末端に結合していることを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  9. ４個の絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドが、前記アゴニストの前記カルボキシ末端に結合していることを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  10. ３個の絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）が前記アゴニストに結合しており、そのうちの１個のＣＴＰが前記アゴニストの前記アミノ末端に結合し、２個のＣＴＰが前記アゴニストの前記カルボキシ末端に結合していることを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  11. ３個の絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドが、前記アゴニストの前記カルボキシ末端に結合していることを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  12. ２個の絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）が前記アゴニストに結合しており、そのうちの１個のＣＴＰが前記アゴニストの前記カルボキシ末端に結合し、１個のＣＴＰが前記アゴニストの前記アミノ末端に結合していることを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  13. ２個の絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドが、前記アゴニストの前記カルボキシ末端に結合していることを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  14. ２個の絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドが、前記アゴニストの前記アミノ末端に結合していることを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  15. 前記ＣＴＰ修飾ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号９、１５、２１、２３、２５、２７、または２９を含むことを特徴とする請求項１〜１４のいずれか一項に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  16. 請求項１〜１５のいずれか一項に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む医薬組成物。
  17. 請求項１〜１５のいずれか一項に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
  18. 前記ポリヌクレオチドの配列が、配列番号８、１４、２０、２２、２４、２６または２８を含むことを特徴とする請求項１７に記載のポリヌクレオチド。
  19. 請求項１７〜１８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
  20. 請求項１９に記載の発現ベクターを含む細胞。
  21. 請求項１９に記載の発現ベクターを含む組成物。
  22. ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストと、前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを作製する方法であって、
    前記少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを、前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合させるステップを含むことを特徴とする方法。
  23. 前記ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストがオキシントモジュリンであることを特徴とする請求項２２に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  24. ５個の絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドが、前記アゴニストの前記カルボキシ末端に結合していることを特徴とする請求項２２〜２３のいずれか一項に記載の方法。
  25. ４個の絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドが、前記アゴニストの前記カルボキシ末端に結合していることを特徴とする請求項２２〜２３のいずれか一項に記載の方法。
  26. ３個の絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）が、前記アゴニストに結合しており、そのうちの１個のＣＴＰが前記アゴニストの前記アミノ末端に結合し、２個のＣＴＰが前記アゴニストの前記カルボキシ末端に結合していることを特徴とする請求項２２〜２３のいずれか一項に記載の方法。
  27. ３個の絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドが、前記アゴニストのカルボキシ末端に結合していることを特徴とする請求項２２〜２３のいずれか一項に記載の方法。
  28. ２個の絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドが前記アゴニストに結合しており、そのうちの１個のＣＴＰが前記アゴニストの前記カルボキシ末端に結合し、１個のＣＴＰが前記アゴニストの前記アミノ末端に結合していることを特徴とする請求項２２〜２３のいずれか一項に記載の方法。
  29. ２個の絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドが、前記アゴニストの前記カルボキシ末端に結合していることを特徴とする請求項２２〜２３のいずれか一項に記載の方法。
  30. ２個の絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドが、前記アゴニストの前記アミノ末端に結合していることを特徴とする請求項２２〜２３のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記ＣＴＰ修飾ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号９、１５、２１、２３、２５、２７、または２９を含むことを特徴とする請求項２２〜３０のいずれか一項に記載の方法。
  32. 前記少なくとも１つのＣＴＰのアミノ酸配列が、配列番号１および配列番号２からなる群より選択されることを特徴とする請求項２２〜３１のいずれか一項に記載の方法。
  33. 前記少なくとも１つのＣＴＰがグリコシル化されていることを特徴とする請求項２２〜３２のいずれか一項に記載の方法。
  34. 前記少なくとも１つのＣＴＰが短縮化されていることを特徴とする請求項２２〜３３のいずれか一項に記載の方法。
  35. 前記少なくとも１つのＣＴＰが、リンカーを介して前記アゴニストに結合していることを特徴とする請求項２２〜３４のいずれか一項に記載の方法。
  36. 前記リンカーがペプチド結合であることを特徴とする請求項３５に記載の方法。
  37. ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストの生物学的半減期を延長させるための方法であって、
    前記少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを、前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合させるステップを含み、
    それにより、前記アゴニストの生物学的半減期を改善するようにしたことを特徴とする方法。
  38. 前記ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストがオキシントモジュリンであることを特徴とする請求項３７に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  39. 前記少なくとも１つのＣＴＰのアミノ酸配列が、配列番号１および配列番号２からなる群より選択されることを特徴とする請求項３７〜３８のいずれか一項に記載の方法。
  40. 前記少なくとも１つのＣＴＰがグリコシル化されていることを特徴とする請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の方法。
  41. 前記少なくとも１つのＣＴＰが短縮化されていることを特徴とする請求項３７〜４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. 前記少なくとも１つのＣＴＰが、リンカーを介して前記アゴニストに結合していることを特徴とする請求項３７〜４１のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記リンカーがペプチド結合であることを特徴とする請求項４２に記載の方法。
  44. 前記ＣＴＰ修飾ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号９、１５、２１、２３、２５、２７、または２９を含むことを特徴とする請求項３７〜４３のいずれか一項に記載の方法。
  45. ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストの曲線下面積（ＡＵＣ）を改善するための方法であって、
    前記少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを、前記アゴニストのカルボキシ末端に結合させるステップを含み、
    それにより、前記アゴニストの曲線下面積（ＡＵＣ）を改善するようにしたことを特徴とする方法。
  46. 前記ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストが、オキシントモジュリンであることを特徴とする請求項４５に記載のＣＴＰ修飾ポリペプチド。
  47. 前記少なくとも１つのＣＴＰのアミノ酸配列が、配列番号１および配列番号２からなる群より選択されることを特徴とする請求項４５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
  48. 前記少なくとも１つのＣＴＰがグリコシル化されていることを特徴とする請求項４５〜４７のいずれか一項に記載の方法。
  49. 前記少なくとも１つのＣＴＰが短縮化されていることを特徴とする請求項４５〜４８のいずれか一項に記載の方法。
  50. 前記少なくとも１つのＣＴＰが、リンカーを介して前記アゴニストに結合していることを特徴とする請求項４５〜４９のいずれか一項に記載の方法。
  51. 前記リンカーがペプチド結合であることを特徴とする請求項５０に記載の方法。
  52. 前記ＣＴＰ修飾ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号９、１５、２１、２３、２５、２７、または２９を含むことを特徴とする請求項４５〜５１のいずれか一項に記載の方法。
  53. ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストの投与頻度を低下させるための方法であって、
    前記少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドを、前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合させるステップを含み、
    それにより、前記アゴニストの投与頻度を低下させるようにしたことを特徴とする方法。
  54. 前記ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストがオキシントモジュリンであることを特徴とする請求項５３に記載の方法。
  55. 前記少なくとも１つのＣＴＰのアミノ酸配列が、配列番号１および配列番号２からなる群より選択されることを特徴とする請求項５３〜５４のいずれか一項に記載の方法。
  56. 前記少なくとも１つのＣＴＰがグリコシル化されていることを特徴とする請求項５３〜５５のいずれか一項に記載の方法。
  57. 前記少なくとも１つのＣＴＰが短縮化されていることを特徴とする請求項５３〜５６のいずれか一項に記載の方法。
  58. 前記少なくとも１つのＣＴＰが、リンカーを介して前記ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストに結合していることを特徴とする請求項５３〜５７のいずれか一項に記載の方法。
  59. 前記リンカーがペプチド結合であることを特徴とする請求項５８に記載の方法。
  60. 前記ＣＴＰ修飾ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号９、１５、２１、２３、２５、２７、または２９を含むことを特徴とする請求項５３〜５９のいずれか一項に記載の方法。
  61. 対象における耐糖性を誘導するための、
    ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアル受容体アゴニストと、
    前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用。
  62. 前記ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストがオキシントモジュリンであることを特徴とする請求項６１に記載の使用。
  63. 前記少なくとも１つのＣＴＰのアミノ酸配列が、配列番号１および配列番号２からなる群より選択されることを特徴とする請求項６１〜６２のいずれか一項に記載の使用。
  64. 前記少なくとも１つのＣＴＰがグリコシル化されていることを特徴とする請求項６１〜６３のいずれか一項に記載の使用。
  65. 前記少なくとも１つのＣＴＰが短縮化されていることを特徴とする請求項６１〜６４のいずれか一項に記載の使用。
  66. 前記少なくとも１つのＣＴＰが、リンカーを介して前記アゴニストポリペプチドに結合していることを特徴とする請求項６１〜６５のいずれか一項に記載の使用。
  67. 前記リンカーがペプチド結合であることを特徴とする請求項６６に記載の使用。
  68. 前記ＣＴＰ修飾ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号９、１５、２１、２３、２５、２７、または２９を含むことを特徴とする請求項６１〜６７のいずれか一項に記載の使用。
  69. 対象における望ましくない体重増加を防ぐための、
    ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用。
  70. 前記ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストがオキシントモジュリンであることを特徴とする請求項６９に記載の使用。
  71. 前記少なくとも１つのＣＴＰのアミノ酸配列が、配列番号１および配列番号２からなる群より選択されることを特徴とする請求項６９〜７０のいずれか一項に記載の使用。
  72. 前記少なくとも１つのＣＴＰがグリコシル化されていることを特徴とする請求項６９〜７１のいずれか一項に記載の使用。
  73. 前記少なくとも１つのＣＴＰが短縮化されていることを特徴とする請求項６９〜７２のいずれか一項に記載の使用。
  74. 前記少なくとも１つのＣＴＰが、リンカーを介して前記アゴニストに結合していることを特徴とする請求項６９〜７３のいずれか一項に記載の使用。
  75. 前記リンカーがペプチド結合であることを特徴とする請求項７４に記載の使用。
  76. 前記ＣＴＰ修飾ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号９、１５、２１、２３、２５、２７、または２９を含むことを特徴とする請求項６９〜７５のいずれか一項に記載の使用。
  77. 前記体重増加が、前記対象に肥満を発生させることを特徴とする請求項６９〜７６のいずれか一項に記載の使用。
  78. 前記体重増加が、前記対象の心理状態、または肥満になりやすい遺伝的素因に起因することを特徴とする請求項６９〜７７のいずれか一項に記載の使用。
  79. 前記心理状態が、うつ病、不安症、または心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）であることを特徴とする請求項７８に記載の使用。
  80. 対象において食物摂取を阻害、減少、または抑制するための、
    ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチド（ＣＴＰ）とを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドを含む組成物の使用。
  81. 前記ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストがオキシントモジュリンであることを特徴とする請求項８０に記載の使用。
  82. 前記少なくとも１つのＣＴＰのアミノ酸配列が、配列番号１および配列番号２からなる群より選択されることを特徴とする請求項８０〜８１のいずれか一項に記載の使用。
  83. 前記少なくとも１つのＣＴＰがグリコシル化されていることを特徴とする請求項８０〜８２のいずれか一項に記載の使用。
  84. 前記少なくとも１つのＣＴＰが短縮化されていることを特徴とする請求項８０〜８３のいずれか一項に記載の使用。
  85. 前記少なくとも１つのＣＴＰが、リンカーを介して前記アゴニストに結合していることを特徴とする請求項８０〜８４のいずれか一項に記載の使用。
  86. 前記リンカーがペプチド結合であることを特徴とする請求項８５に記載の使用。
  87. 前記ＣＴＰ修飾ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号９、１５、２１、２３、２５、２７、または２９を含むことを特徴とする請求項８０〜８６のいずれか一項に記載の使用。
  88. 前記対象による食物摂取を阻害、減少または抑制することにより、前記対象に望ましくない体重増加が発生する可能性を減少させるようにしたことを請求項８０〜８７のいずれか一項に記載の使用。
  89. 前記対象による食物摂取を阻害、減少または抑制することにより、前記対象に肥満が発生する可能性を減少させるようにしたことを特徴とする請求項８０〜８７のいずれか一項に記載の使用。
  90. 対象における肥満を治療するための、
    ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用。
  91. 前記ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストがオキシントモジュリンであることを特徴とする請求項９０に記載の使用。
  92. 前記少なくとも１つのＣＴＰのアミノ酸配列が、配列番号１および配列番号２からなる群より選択されることを特徴とする請求項９０〜９１のいずれか一項に記載の使用。
  93. 前記少なくとも１つのＣＴＰがグリコシル化されていることを特徴とする請求項９０〜９２のいずれか一項に記載の使用。
  94. 前記少なくとも１つのＣＴＰが短縮化されていることを特徴とする請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の使用。
  95. 前記少なくとも１つのＣＴＰが、リンカーを介して前記アゴニストに結合していることを特徴とする請求項９０〜９４のいずれか一項に記載の使用。
  96. 前記リンカーがペプチド結合であることを特徴とする請求項９５に記載の使用。
  97. 前記ＣＴＰ修飾ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号９、１５、２１、２３、２５、２７、または２９を含むことを特徴とする請求項９０〜９６のいずれか一項に記載の使用。
  98. 前記対象が、肥満になりやすい遺伝的素因を有していることを特徴とする請求項９０〜９７のいずれか一項に記載の使用。
  99. 肥満を治療することにより、前記対象の体重が減少するようにしたことを特徴とする請求項９０〜９８のいずれか一項に記載の使用。
  100. 肥満を治療することにより、前記対象の体脂肪が減少するようにしたことを特徴とする請求項９０〜９９のいずれか一項に記載の使用。
  101. 対象におけるＩＩ型糖尿病を治療するための、
    ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用。
  102. 前記ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストがオキシントモジュリンであることを特徴とする請求項１０１に記載の使用。
  103. 前記少なくとも１つのＣＴＰのアミノ酸配列が、配列番号１および配列番号２からなる群より選択されることを特徴とする請求項１０１〜１０２のいずれか一項に記載の使用。
  104. 前記少なくとも１つのＣＴＰがグリコシル化されていることを特徴とする請求項１０１〜１０３のいずれか一項に記載の使用。
  105. 前記少なくとも１つのＣＴＰが短縮化されていることを特徴とする請求項１０１〜１０４のいずれか一項に記載の使用。
  106. 前記少なくとも１つのＣＴＰが、リンカーを介して前記アゴニストに結合していることを特徴とする請求項１０１〜１０５のいずれか一項に記載の使用。
  107. 前記リンカーがペプチド結合であることを特徴とする請求項１０６に記載の使用。
  108. 前記ＣＴＰ修飾ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号９、１５、２１、２３、２５、２７、または２９を含むことを特徴とする請求項１０１〜１０７のいずれか一項に記載の使用。
  109. 前記対象が、肥満になりやすい遺伝的素因を有していることを特徴とする請求項１０１〜１０８のいずれか一項に記載の使用。
  110. 対象における代謝性障害を治療するための、
    ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストと、前記アゴニストのアミノ末端またはカルボキシ末端に結合した少なくとも１つの絨毛性ゴナドトロピンカルボキシ末端ペプチドとを含むＣＴＰ修飾ポリペプチドの使用。
  111. 前記ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニストがオキシントモジュリンであることを特徴とする請求項１１０に記載の使用。
  112. 前記少なくとも１つのＣＴＰのアミノ酸配列が、配列番号１および配列番号２からなる群より選択されることを特徴とする請求項１１０〜１１１のいずれか一項に記載の使用。
  113. 前記少なくとも１つのＣＴＰがグリコシル化されていることを特徴とする請求項１１０〜１１２のいずれか一項に記載の使用。
  114. 前記少なくとも１つのＣＴＰが短縮化されていることを特徴とする請求項１１０〜１１３のいずれか一項に記載の使用。
  115. 前記少なくとも１つのＣＴＰが、リンカーを介して前記アゴニストに結合していることを特徴とする請求項１１０〜１１４のいずれか一項に記載の使用。
  116. 前記リンカーがペプチド結合であることを特徴とする請求項１１５に記載の使用。
  117. 前記ＣＴＰ修飾ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号９、１５、２１、２３、２５、２７、または２９を含むことを特徴とする請求項１１０〜１１６のいずれか一項に記載の使用。
  118. 前記代謝性障害が、糖尿病性ケトアシドーシス、真性糖尿病、またはそれらの組合せであることを特徴とする請求項１１０〜１１７のいずれか一項に記載の使用。
  119. 前記代謝性障害が、前記対象におけるインスリンの欠乏とグルコースの過剰により生じることを特徴とする請求項１１０〜１１８のいずれか一項に記載の使用。
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PCT/IL2013/050332 WO2013157002A1 (en) 2012-04-19 2013-04-17 Long-acting oxyntomodulin variants and methods of producing same

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2015520128A true JP2015520128A (ja) 2015-07-16
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Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2015506351A Pending JP2015520128A (ja) 2012-04-19 2013-04-17 長時間作用性オキシントモジュリン変異体とその作製方法

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Country Link
US (2) US9522945B2 (ja)
EP (1) EP2838552A4 (ja)
JP (1) JP2015520128A (ja)
KR (1) KR20150008137A (ja)
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CA (1) CA2870650A1 (ja)
CL (1) CL2014002791A1 (ja)
CO (1) CO7200249A2 (ja)
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HK (1) HK1207564A1 (ja)
IL (1) IL235184A0 (ja)
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MY (1) MY167814A (ja)
PE (1) PE20142405A1 (ja)
SG (1) SG11201406671RA (ja)
WO (1) WO2013157002A1 (ja)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150038413A1 (en) 2006-02-03 2015-02-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US10221228B2 (en) 2006-02-03 2019-03-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8946155B2 (en) 2006-02-03 2015-02-03 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US9249407B2 (en) 2006-02-03 2016-02-02 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8048849B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Modigene, Inc. Long-acting polypeptides and methods of producing same
US10351615B2 (en) 2006-02-03 2019-07-16 Opko Biologics Ltd. Methods of treatment with long-acting growth hormone
US9458444B2 (en) 2006-02-03 2016-10-04 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US20140113860A1 (en) 2006-02-03 2014-04-24 Prolor Biotech Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US9663778B2 (en) 2009-07-09 2017-05-30 OPKO Biologies Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US10166295B2 (en) 2011-06-02 2019-01-01 Opko Biologics Ltd. Pegylated OXM variants
CA2838503C (en) 2011-06-10 2020-02-18 Hanmi Science Co., Ltd. Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
PH12018501119A1 (en) 2011-06-17 2019-02-04 Hanmi Science Co Ltd A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
SG11201406671RA (en) 2012-04-19 2014-11-27 Opko Biolog Ltd Long-acting oxyntomodulin variants and methods of producing same
AU2013273135B2 (en) 2012-06-04 2017-12-07 Opko Biologics Ltd. Pegylated OXM variants
KR101968344B1 (ko) 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
EA031852B1 (ru) 2012-11-06 2019-03-29 Ханми Фарм. Ко., Лтд. Жидкая композиция белкового конъюгата, содержащего оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина
KR101993393B1 (ko) 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
MY172997A (en) * 2012-11-20 2019-12-18 Opko Biologics Ltd Method of increasing the hydrodynamic volume of polypeptides by attaching to gonadotrophin carboxy terminal peptides
US20150158926A1 (en) 2013-10-21 2015-06-11 Opko Biologics, Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
WO2016061149A1 (en) * 2014-10-14 2016-04-21 Medgenics Medical Israel Ltd. Genetically-modified micro-organ secreting a therapeutic peptide and methods of use thereof
EP4212546A1 (en) 2014-12-10 2023-07-19 OPKO Biologics Ltd. Methods of producing long acting ctp-modified polypeptides
KR102418477B1 (ko) 2014-12-30 2022-07-08 한미약품 주식회사 글루카곤 유도체
IL301728A (en) 2015-06-19 2023-05-01 Opko Biologics Ltd Long-term coagulation factors and methods for their preparation
AR105284A1 (es) * 2015-07-10 2017-09-20 Sanofi Sa Derivados de exendina-4 como agonistas peptídicos duales específicos de los receptores de glp-1 / glucagón
BR112019000610A2 (pt) 2016-07-11 2019-07-02 Opko Biologics Ltd fator vii de coagulação de longa ação e métodos de produção do mesmo
CN108299553B (zh) * 2017-01-13 2021-07-16 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 胃泌酸调节素修饰物
HRP20240371T1 (hr) * 2017-08-16 2024-06-07 Dong-A St Co., Ltd Peptidni analog aciliranog oksintomodulina
CN110831941A (zh) * 2018-06-11 2020-02-21 细胞内治疗公司 取代的杂环稠合的γ-咔啉类化合物合成
US20200262887A1 (en) 2018-11-30 2020-08-20 Opko Ireland Global Holdings, Ltd. Oxyntomodulin peptide analog formulations

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH07502166A (ja) * 1991-10-04 1995-03-09 ワシントン・ユニバーシティ 複数のｃｔｐ付加を有するホルモンアナログ
JP2009525052A (ja) * 2006-02-03 2009-07-09 モディジーン・インコーポレイテッド 長期間作用型ポリペプチド並びにその製造方法及び投与方法。
WO2011004361A2 (en) * 2009-07-09 2011-01-13 Prolor Biotech Inc. Long-acting coagulation factors and methods of producing same

Family Cites Families (126)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154600B (nl) 1971-02-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen.
NL154598B (nl) 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
NL154599B (nl) 1970-12-28 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen, alsmede testverpakking.
US3901654A (en) 1971-06-21 1975-08-26 Biological Developments Receptor assays of biologically active compounds employing biologically specific receptors
US3853987A (en) 1971-09-01 1974-12-10 W Dreyer Immunological reagent and radioimmuno assay
US3867517A (en) 1971-12-21 1975-02-18 Abbott Lab Direct radioimmunoassay for antigens and their antibodies
NL171930C (nl) 1972-05-11 1983-06-01 Akzo Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van haptenen, alsmede testverpakkingen.
US3850578A (en) 1973-03-12 1974-11-26 H Mcconnell Process for assaying for biologically active molecules
US3935074A (en) 1973-12-17 1976-01-27 Syva Company Antibody steric hindrance immunoassay with two antibodies
US3996345A (en) 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4034074A (en) 1974-09-19 1977-07-05 The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University Universal reagent 2-site immunoradiometric assay using labelled anti (IgG)
US3984533A (en) 1975-11-13 1976-10-05 General Electric Company Electrophoretic method of detecting antigen-antibody reaction
US4098876A (en) 1976-10-26 1978-07-04 Corning Glass Works Reverse sandwich immunoassay
US4879219A (en) 1980-09-19 1989-11-07 General Hospital Corporation Immunoassay utilizing monoclonal high affinity IgM antibodies
JPS5781447A (en) 1980-11-11 1982-05-21 Toyo Jozo Co Ltd Human chorionic gonadotropic hormone c-terminal fragment
US4853332A (en) 1982-10-19 1989-08-01 Cetus Corporation Structural genes, plasmids and transformed cells for producing cysteine depleted muteins of biologically active proteins
US5011771A (en) 1984-04-12 1991-04-30 The General Hospital Corporation Multiepitopic immunometric assay
DE3421468A1 (de) 1984-06-08 1985-12-19 Dr. Rentschler Arzneimittel Gmbh & Co, 7958 Laupheim Lipidnanopellets als traegersystem fuer arzneimittel zur peroralen anwendung
US4666828A (en) 1984-08-15 1987-05-19 The General Hospital Corporation Test for Huntington's disease
US4911691A (en) 1984-09-21 1990-03-27 Menlo Care, Inc. Assembly for adminstering IV solution
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4801531A (en) 1985-04-17 1989-01-31 Biotechnology Research Partners, Ltd. Apo AI/CIII genomic polymorphisms predictive of atherosclerosis
EP0264166B1 (en) 1986-04-09 1996-08-21 Genzyme Corporation Transgenic animals secreting desired proteins into milk
US5118666A (en) 1986-05-05 1992-06-02 The General Hospital Corporation Insulinotropic hormone
US4873316A (en) 1987-06-23 1989-10-10 Biogen, Inc. Isolation of exogenous recombinant proteins from the milk of transgenic mammals
ATE110571T1 (de) 1988-05-06 1994-09-15 Toray Industries Stabile interferon-beta-zusammensetzung.
US5272057A (en) 1988-10-14 1993-12-21 Georgetown University Method of detecting a predisposition to cancer by the use of restriction fragment length polymorphism of the gene for human poly (ADP-ribose) polymerase
US5338835A (en) 1989-02-21 1994-08-16 Washington University CTP-extended form of FSH
US5792460A (en) 1989-02-21 1998-08-11 Washington University Modified glycoprotein hormones having a CTP at the amino terminus
EP0461200B1 (en) 1989-02-21 1997-01-22 Washington University Modified forms of reproductive hormones
US5705478A (en) 1989-02-21 1998-01-06 Washington University Covalently linked β subunits of the glycoprotein hormones as antagonists
US5464764A (en) 1989-08-22 1995-11-07 University Of Utah Research Foundation Positive-negative selection methods and vectors
US5192659A (en) 1989-08-25 1993-03-09 Genetype Ag Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes
US7217689B1 (en) 1989-10-13 2007-05-15 Amgen Inc. Glycosylation analogs of erythropoietin
US5126324A (en) 1990-06-07 1992-06-30 Genentech, Inc. Method of enhancing growth in patients using combination therapy
US6028177A (en) 1991-10-04 2000-02-22 Washington University Methods of detecting single-chain forms of the glycoprotein hormone quartet
US5281521A (en) 1992-07-20 1994-01-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Modified avidin-biotin technique
ES2141229T3 (es) 1993-04-20 2000-03-16 Univ Washington Productos farmaceuticos de proteinas y peptidos modificados.
US5605976A (en) 1995-05-15 1997-02-25 Enzon, Inc. Method of preparing polyalkylene oxide carboxylic acids
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US6737515B2 (en) 1993-11-19 2004-05-18 Washington University Follicle stimulating hormone-glycosylation analogs
US6238890B1 (en) 1994-02-18 2001-05-29 Washington University Single chain forms of the glycoprotein hormone quartet
US5935924A (en) 1994-04-15 1999-08-10 Genentech, Inc. Treatment of congestive heart failure
US5541110A (en) 1994-05-17 1996-07-30 Bristol-Myers Squibb Cloning and expression of a gene encoding bryodin 1 from Bryonia dioica
MX9601320A (es) 1994-08-12 1997-05-31 Univ Washington Formas de cadena unica de cuarteto de hormona de glicoproteina.
US6083725A (en) 1996-09-13 2000-07-04 Transkaryotic Therapies, Inc. Tranfected human cells expressing human α-galactosidase A protein
US20050032211A1 (en) 1996-09-26 2005-02-10 Metabogal Ltd. Cell/tissue culturing device, system and method
IL122732A0 (en) 1997-01-15 1998-08-16 Akzo Nobel Nv Liquid gonadotropin-containing formulation its preparation and a device containing same
US6310183B1 (en) 1997-09-10 2001-10-30 Novo Nordisk A/S Coagulation factor VIIa composition
US6103501A (en) 1997-11-17 2000-08-15 Washington University Single chain glycoprotein hormones comprising two β and one α subunits and recombinant production thereof
PL200586B1 (pl) 1998-10-16 2009-01-30 Biogen Idec Inc Polipeptydy zawierające mutanty interferonu-beta-1a, kodujące je cząsteczki kwasów nukleinowych, komórki gospodarza transformowane tymi cząsteczkami, sposób wytwarzania polipeptydów, zawierające je kompozycje farmaceutyczne i zastosowania polipeptydów
US6514729B1 (en) 1999-05-12 2003-02-04 Xencor, Inc. Recombinant interferon-beta muteins
PE20010288A1 (es) 1999-07-02 2001-03-07 Hoffmann La Roche Derivados de eritropoyetina
WO2001056579A1 (en) 2000-02-04 2001-08-09 Esperion Therapeutics Inc. Methods for treating alzheimer's disease
US20020127652A1 (en) 2000-02-11 2002-09-12 Schambye Hans Thalsgard Follicle stimulating hormones
US7094566B2 (en) 2000-03-16 2006-08-22 Amgen Inc., IL-17 receptor like molecules and uses thereof
US20030036181A1 (en) 2000-06-30 2003-02-20 Okkels Jens Sigurd Peptide extended glycosylated polypeptides
US7118737B2 (en) 2000-09-08 2006-10-10 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Polymer-modified synthetic proteins
EP2316490A3 (en) 2000-10-31 2012-02-01 PR Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for enhanced delivery of bioactive molecules
EP2343317A1 (en) 2000-11-10 2011-07-13 F. Hoffmann-La Roche Ltd. Apolipoprotein analogues
AU2002224124A1 (en) 2000-12-01 2002-06-11 Takeda Chemical Industries Ltd. Method for producing preparation containing bioactive substance
IL155812A0 (en) 2000-12-07 2003-12-23 Lilly Co Eli Glp-1 fusion proteins
KR101229995B1 (ko) 2000-12-11 2013-02-06 씨제이 주식회사 생체내 에리스로포이에틴 활성이 증진된 융합단백질
WO2002048194A1 (en) 2000-12-11 2002-06-20 Cheil Jedang Corporation Fusion protein having the enhanced in vivo activity of erythropoietin
EP1356809A4 (en) 2000-12-28 2008-05-14 Takeda Pharmaceutical SUSTAINED RELEASE PREPARATIONS
US6987172B2 (en) 2001-03-05 2006-01-17 Washington University In St. Louis Multifunctional single chain glycoprotein hormones comprising three or more β subunits
US6887462B2 (en) 2001-04-09 2005-05-03 Chiron Corporation HSA-free formulations of interferon-beta
JP2004529147A (ja) 2001-04-25 2004-09-24 アセヴェド，ハーナン，エフ． ｈＣＧ処方
US6824769B2 (en) 2001-08-28 2004-11-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Optimal compositions and methods thereof for treating HCV infections
GB0121709D0 (en) 2001-09-07 2001-10-31 Imp College Innovations Ltd Food inhibition agent
US7795210B2 (en) 2001-10-10 2010-09-14 Novo Nordisk A/S Protein remodeling methods and proteins/peptides produced by the methods
AU2002335585B2 (en) 2001-10-29 2007-08-16 Crucell Holland B.V. Methods and means for producing proteins with predetermined post-translational modifications
KR100467751B1 (ko) 2001-12-03 2005-01-24 씨제이 주식회사 생체내 에리스로포이에틴 활성이 증진된 융합단백질
EP1463751B1 (en) 2001-12-21 2013-05-22 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
US7173113B2 (en) 2002-01-31 2007-02-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Long-acting hormone and growth factor compositions and uses thereof
US7081446B2 (en) 2002-01-31 2006-07-25 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Long-acting follicle stimulating hormone analogues and uses thereof
GB0206048D0 (en) 2002-03-14 2002-04-24 Croda Int Plc Use
CA2485365A1 (en) 2002-05-13 2003-11-20 Modigenetech Ltd. Ctp-extended erythropoietin
US20070298041A1 (en) 2002-06-28 2007-12-27 Tomlinson Ian M Ligands That Enhance Endogenous Compounds
RS20050035A (en) 2002-07-17 2007-06-04 Biogen Idec Ma Inc., Therapies for renal failure using interferon-betha
US7459435B2 (en) 2002-08-29 2008-12-02 Hoffmann-La Roche Inc. Treatment of disturbances of iron distribution
US8129330B2 (en) 2002-09-30 2012-03-06 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof
US7459436B2 (en) 2002-11-22 2008-12-02 Hoffmann-La Roche Inc. Treatment of disturbances of iron distribution
EP1595549A4 (en) 2003-02-19 2010-09-22 Takeda Pharmaceutical DISPERSING AGENT FOR SUSTAINED RELEASE PREPARATIONS
DK1620118T3 (da) * 2003-04-08 2014-09-29 Yeda Res & Dev Reversible pegylerede lægemidler
EP2338333B1 (en) 2003-04-09 2017-09-06 ratiopharm GmbH Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods
WO2005035761A1 (en) * 2003-10-16 2005-04-21 Compugen Ltd. Splice variants of preproglucagon, glucagon-like peptide-1 and oxyntomodulin
WO2005047319A2 (en) 2003-11-12 2005-05-26 The University Of Georgia Research Foundation, Inc. Dna sequence and expressed recombinant glycoproteins related to feline thyrotropin
ES2460671T3 (es) 2003-12-19 2014-05-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Uso de eritropoyetina en el tratamiento de alteraciones de la distribución del hierro en enfermedades intestinales inflamatorias crónicas
DE602005024955D1 (de) 2004-03-19 2011-01-05 Baxter Healthcare Sa Faktor ixa zur behandlung von blutungsstörungen
RU2396347C2 (ru) 2004-08-17 2010-08-10 Ксл Бехринг Гмбх Модифицированные витамин к-зависимые полипептиды
AU2005289638A1 (en) 2004-09-27 2006-04-06 Cornell Research Foundation, Inc. Recombinant bifunctional protein of human lutropin receptor and human chorionic gonadotropin b-subunit and uses thereof
CN101724071A (zh) 2004-10-08 2010-06-09 杜门蒂斯有限公司 抗肿瘤坏死因子受体1的单域抗体及其使用方法
GB0521621D0 (en) 2005-10-24 2005-11-30 Domantis Ltd Tumor necrosis factor receptor 1 antagonists for treating respiratory diseases
EP1728798A1 (en) 2005-06-01 2006-12-06 ZLB Behring GmbH Coagulation factor X polypeptides with modified activation properties
WO2006134340A2 (en) 2005-06-13 2006-12-21 Imperial Innovations Limited Oxyntomodulin analogues and their effects on feeding behaviour
WO2007047834A2 (en) 2005-10-18 2007-04-26 Biocon Limited Oral peptide conjugates for metabolic diseases
US8048849B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Modigene, Inc. Long-acting polypeptides and methods of producing same
US10351615B2 (en) 2006-02-03 2019-07-16 Opko Biologics Ltd. Methods of treatment with long-acting growth hormone
US8450269B2 (en) 2006-02-03 2013-05-28 Prolor Biotech Ltd. Long-acting growth hormone and methods of producing same
US20150038413A1 (en) 2006-02-03 2015-02-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US9458444B2 (en) 2006-02-03 2016-10-04 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8946155B2 (en) 2006-02-03 2015-02-03 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8304386B2 (en) 2006-02-03 2012-11-06 Prolor Biotech, Inc. Long-acting growth hormone and methods of producing same
US20140113860A1 (en) 2006-02-03 2014-04-24 Prolor Biotech Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8048848B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Prolor Biotech Ltd. Long-acting interferons and derivatives thereof and methods thereof
US8759292B2 (en) 2006-02-03 2014-06-24 Prolor Biotech, Llc Long-acting coagulation factors and methods of producing same
CA2638800A1 (en) 2006-02-22 2007-09-07 Merck & Co., Inc. Oxyntomodulin derivatives
TW200806317A (en) 2006-03-20 2008-02-01 Wyeth Corp Methods for reducing protein aggregation
AT505262A1 (de) 2007-06-12 2008-12-15 Apeiron Biolog Forschungs Und Rekombinantes ace2 polypeptid
EP2225372A2 (en) 2007-12-05 2010-09-08 Novozymes A/S Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same
CN102112157B (zh) 2008-08-06 2013-05-29 诺沃-诺迪斯克保健股份有限公司 具有延长的体内效能的缀合蛋白
WO2010033207A1 (en) 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of therapeutic peptides
CN102413990A (zh) 2009-02-27 2012-04-11 钴领无限公司 模块化自动工具配送机
US8828953B2 (en) 2009-04-20 2014-09-09 NaZura BioHealth, Inc. Chemosensory receptor ligand-based therapies
DE102009031992A1 (de) 2009-07-06 2011-01-13 Paul Hartmann Ag Vorrichtung zur Unterdrucktherapie von Wunden
US9663778B2 (en) 2009-07-09 2017-05-30 OPKO Biologies Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
JO2976B1 (en) 2009-12-22 2016-03-15 ايلي ليلي اند كومباني Axentomodulin polypeptide
AR079344A1 (es) * 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad
KR101382593B1 (ko) 2010-07-21 2014-04-10 한미사이언스 주식회사 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물
BR112013030933A2 (pt) 2011-06-02 2018-04-24 Prolor Biotech Inc agonistas do receptor de glp-1/glucágon de ação prolongada
SG11201406671RA (en) 2012-04-19 2014-11-27 Opko Biolog Ltd Long-acting oxyntomodulin variants and methods of producing same
AU2013273135B2 (en) 2012-06-04 2017-12-07 Opko Biologics Ltd. Pegylated OXM variants
MY172997A (en) 2012-11-20 2019-12-18 Opko Biologics Ltd Method of increasing the hydrodynamic volume of polypeptides by attaching to gonadotrophin carboxy terminal peptides
US20150158926A1 (en) 2013-10-21 2015-06-11 Opko Biologics, Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH07502166A (ja) * 1991-10-04 1995-03-09 ワシントン・ユニバーシティ 複数のｃｔｐ付加を有するホルモンアナログ
JP2009525052A (ja) * 2006-02-03 2009-07-09 モディジーン・インコーポレイテッド 長期間作用型ポリペプチド並びにその製造方法及び投与方法。
WO2011004361A2 (en) * 2009-07-09 2011-01-13 Prolor Biotech Inc. Long-acting coagulation factors and methods of producing same

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PROLOR BIOTECH, INC., CORPORATE PRESENTATION [ONLINE], JPN6017010306, 1 June 2011 (2011-06-01), pages 1 - 35, ISSN: 0003523990 *
PROLOR BIOTECH, INC., PROLOR BIOTECH ANNOUNCES POSITIVE RESULTS OF ITS OBESITY/DIABETES DRUG CANDIDATE IN PRECLINICAL WEIG, JPN6017010305, 17 April 2012 (2012-04-17), ISSN: 0003523989 *

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