RS62633B1 - Analozi hepcidina i njihove primene - Google Patents

Description

Opis

IZJAVA U VEZI SA LISTOM SEKVENCI

[0001] Lista sekvenci povezana sa ovom patentnom prijavom, obezbeđena je u tekstualnom formatu umesto kopije na papiru i na taj način je u vidu reference uključen u specifikaciju. Ime tekstualne datoteke koja sadrži Listu sekvenci je PRTH_001_01WO_ST25.txt. Tekstualna datoteka je veličine 126 KB, kreirana je 17. marta 2014. godine i podneta je elektronski, putem EFS-Web platforme.

OBLAST PRONALASKA

[0002] Predmetni pronalazak se odnosi, između ostalog, na neke peptidne analoge hepcidina, uključujući peptide i njihove dimere, kao i na kompozicije koje sadrže peptide i peptidne dimere, i na upotrebu peptida i peptidnih dimera u lečenju i/ili prevenciji niza različitih bolesti, stanja ili poremećaja, uključujući lečenje i/ili prevenciju bolesti u kojima dolazi do nagomilavanja gvožđa, uključujući naslednu hemohromatozu, anemije sa nagomilavanjem gvožđa, i druga, ovde opisana stanja i poremećaje.

OSNOV PRONALASKA

[0003] Hepcidin (koji se označava i kao LEAP-1), peptidni hormon koji se proizvodi u jetri, regulator je homeostaze gvožđa kod ljudi i drugih životinja. Hepcidin deluje tako što se vezuje za svoj receptor, kanal za izbacivanje gvožđa, feroportin, čime dovodi do njegove internalizacije i degradacije. Ljudski hepcidin je peptid od 25 amino kiselina (Hep25). Videti Krause et al. (2000) FEBS Lett 480:147-150, i Park et al. (2001) J Biol Chem 276:7806-7810. Struktura biološki aktivnog oblika hepcidina od 25 amino kiselina je jednostavna ukosnica sa 8 cisteina koji obrazuju 4 disulfidne veze, kao što su opisali autori Jordan et al. J Biol Chem 284:24155-67. N-terminalni region je neophodan za funkciju regulacije gvožđa, a delecija 5 N-terminalnih amino kiselinskih ostataka dovodi do gubitka funkcije regulacije gvožđa. Videti Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33.

[0004] Poremećena aktivnost hepcidina je povezana sa bolestima nagomilavanja gvožđa, uključujući naslednu hemohromatozu (HH) i anemiju sa nagomilavanjem gvožđa. Nasledna hemohromatoza je genetska bolest nagomilavanja gvožđa do koje uglavnom dovodi nedostatak hepcidina, ili u nekim slučajevima, rezistencija na hepcidin. Ovo omogućava prekomernu apsorpciju gvožđa iz hrane i razvoj nagomilavanja gvožđa. Kliničke manifestacije HH mogu da uključuju bolest jetre (npr. ciroza jetre i hepatocelularni karcinom), dijabetes i srčanu insuficijenciju. Trenutno, jedini tretman za HH je redovna flebotomija, koja je veoma opterećujuća za pacijente. Anemije sa nagomilavanjem gvožđa su nasledne anemije sa neefikasnom eritropoezom kao što je β-talasemija, koje su praćene teškim nagomilavanjem gvožđa. Komplikacije usled nagomilavanja gvožđa su glavni uzrok morbiditeta i mortaliteta kod ovih pacijenata. Nedostatak hepcidina je glavni uzrok nagomilavanja gvožđa kod pacijenata koji ne primaju transfuziju i doprinosi nagomilavanju gvožđa kod pacijenata koji primaju transfuziju. Aktuelni način lečenja nagomilavanja gvožđa kod ovih pacijenata je helacija gvožđa koja je veoma teška, ponekad neefikasna i praćena čestim neželjenim efektima.

[0005] Hepcidin ima niz ograničenja koja limitiraju njegovu upotrebu kao leka, uključujući težak proces sinteze delimično zbog agregacije i precipitacije proteina tokom savijanja, što, sa svoje strane, dovodi do visoke cene proizvoda. Ono što je potrebno u tehnici su jedinjenja koja imaju hepcidinsku aktivnost i koja takođe poseduju druga korisna fizička svojstva kao što su poboljšana rastvorljivost, stabilnost i/ili potentnost, tako da se omogući proizvodnja bioloških lekova sličnih hepcidinu po pristupačnoj ceni, i njihova upotreba za lečenje bolesti i poremećaja povezanih sa hepcidinom kao što su, na primer, bolesti i poremećaji koji su ovde opisani.

[0006] Predmetni pronalazak se bavi ovim potrebama, obezbeđujući nove peptidne analoge i njihove dimere koji imaju hepcidinsku aktivnost, a takođe imaju i druga korisna svojstva koja od peptida prema predmetnom pronalasku čine pogodne alternative hepcidinu.

KRATAK OPIS PRONALASKA

[0007] Predmetni pronalazak se uopšteno odnosi na peptide koji prikazuju hepcidinsku aktivnost, i na postupke njihove primene.

[0008] Pronalazak obezbeđuje peptide koji mogu da se izoluju i/ili prečiste, koji sadrže, u osnovi se sastoje od, ili se sastoje od, strukturne formule I koja sledi:

R<1>-X-Y-R<2>(I) (SEQ ID NO:12)

ili njene farmaceutski prihvatljive soli ili solvata, pri čemu

R<1>je vodonik, C1-C6 alkil, C6-C12 aril, C6-C12 aril C1-C6 alkil, C1-C20 alkanoil (npr. metil, acetil, formil, benzoil ili trifluoroacetil, izovalerijanska kiselina, izobuterna kiselina, oktanska kiselina, laurinska kiselina i heksadekanska kiselina, γ-Glu-heksadekanska kiselina) ili pGlu,

R<2>je -NH2ili -OH;

X je peptidna sekvenca koja ima formulu (Ic)

X1-Thr-His-X4-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10 (Ic) (SEQ ID NO:3)

pri čemu

X1 je Asp, Ida, ili je odsutno;

X4 je Phe, Dpa;

X5 je Pro;

X8 je Ile, Lys, Arg Phe, Glu, ili Gln, ili Dapa;

X10 je odsutno;

i

Y je odsutno ili, Y je peptid koji ima formulu (IIa)

Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11-Y12-Y13-Y14-Y15 (IIa) (SEQ ID NO:5) pri čemu

Y1 je Gly, Glu, Lys, Ser ili je odsutno;

Y2 je Pro, Ala, Cys, Gly ili je odsutno;

Y3 je Arg, Lys, Pro, Gly, His, Ala, Trp ili je odsutno;

Y4 je Ser, Ala, ili je odsutno;

Y5 je Lys, Arg, ili je odsutno;

Y6 je Gly, Ser, Lys, Ile, Arg, Ala, Pro, Val ili je odsutno;

Y7 je Trp, Val ili je odsutno;

Y8 je Val, Thr, Tyr, Ala, Glu, Lys, Asp, ili je odsutno;

Y9 je Cys, Tyr ili je odsutno;

Y10 je Met, Lys, Arg, Tyr ili je odsutno;

Y11 je Arg, Met, Cys, Lys ili je odsutno;

Y12 je Arg, Lys, Ala ili je odsutno;

Y13 je Arg, Cys, Lys, Val ili je odsutno;

Y14 je Arg, Lys, Pro, Cys, Thr ili je odsutno; i

Y15 je Thr, Arg ili je odsutno;

pri čemu, peptid formule (I) sadrži dva ili više cisteinskih ostataka; izborno

pri čemu, peptid je konjugovan sa jednom ili više dodatnih hemijskih komponenti; i pri čemu, peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat ima hepcidinsku aktivnost.

[0009] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje formule (I) sadrži dva ili više cisteinskih ostataka, pri čemu su najmanje dva od navedenih cisteinskih ostataka povezana disulfidnom vezom.

Y4 je Ser, Arg, Gly, Trp, Ala, His, Tyr ili je odsutno;

Y5 je Lys, Met, Arg, Ala ili je odsutno;

Y6 je Gly, Ser, Lys, Ile, Ala, Pro, Val ili je odsutno;

Y7 je Trp, Lys, Gly, Ala, Ile, Val ili je odsutno;

Y8 je Val, Thr, Gly, Cys, Met, Tyr, Ala, Glu, Lys, Asp, Arg ili je odsutno;

Y9 je Cys, Tyr ili je odsutno;

Y10 je Met, Lys, Arg, Tyr ili je odsutno;

Y11 je Arg, Met, Cys, Lys ili je odsutno;

Y12 je Arg, Lys, Ala ili je odsutno;

Y13 je Arg, Cys, Lys, Val ili je odsutno;

Y14 je Arg, Lys, Pro, Cys, Thr ili je odsutno; i

Y15 je Thr, Arg ili je odsutno;

pri čemu navedeno jedinjenje formule I’ je izborno pegilovano na R<1’>, X’, ili Y’; i pri čemu kada navedeno jedinjenje formule I’ sadrži dva ili više cisteinskih ostataka, najmanje dva od navedenih cisteinskih ostataka su povezana disulfidnom vezom.

[0013] Jedinjenje formule I’ može da sadrži R<1’>komponentu koja je vodonik, izovalerijanska kiselina, izobuterna kiselina, ili acetil.

[0014] Jedinjenje formule I’ može da sadrži X’ peptid formule Ia’, kao što je ovde opisano, pri čemu

X1 je Asp, Ala, Ida, pGlu, bhAsp, Leu, D-Asp ili je odsutno;

X2 je Thr, Ala, ili D-Thr;

X3 je His, Lys, D-His ili Lys;

X4 je Phe, Ala, Dpa ili D-Phe;

X5 je Pro, Gly, Arg, Lys, Ala, D-Pro ili bhPro;

X6 je Ile, Cys, Arg, Lys, D-Ile ili D-Cys;

X7 je Cys, Ile, Leu, Val, Phe, D-Ile ili D-Cys;

X8 je Ile, Arg, Phe, Gln, Lys, Glu, Val, Leu ili D-Ile;

X9 je Phe ili bhPhe; i

X10 je Lys, Phe ili je odsutno.

[0015] Jedinjenje formule I’ može da sadrži X’ peptid formule Ib’:

X1-Thr-His-X4-X5-X6-X7-X8-Phe-X10 (Ib’)

pri čemu

X1 je Asp, Ida, pGlu, bhAsp ili je odsutno;

X4 je Phe ili Dpa;

X5 je Pro ili bhPro;

X6 je Ile, Cys ili Arg;

X7 je Cys, Ile, Leu ili Val;

X8 je Ile Lys, Glu, Phe, Gln ili Arg; i

X10 je Lys ili je odsutno.

[0016] Jedinjenje formule I’ može da sadrži X’ peptid formule Ic’: X1-Thr-His-X4-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10 (Ic’)

pri čemu

X1 je Asp, Ida, pGlu, bhAsp ili je odsutno;

X4 je Phe ili Dpa;

X5 je Pro ili bhPro;

X8 je Ile Lys, Glu, Phe, Gln ili Arg; i

X10 je Lys ili je odsutno.

[0017] Jedinjenje formule I’ može da sadrži a Y’ peptid formule IIb’. Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Cys-Y10 (IIb’)

pri čemu

Y1 je Gly, Ala, Lys, Pro ili D-Pro;

Y2 je Pro, Ala ili Gly;

Y3 je Arg, Ala, Lys ili Trp;

Y4 je Ser, Gly ili Ala;

Y5 je Lys, Met, Arg ili Ala;

Y6 je Gly, Arg ili Ala;

Y7 je Trp ili Ala;

Y8 je Val, Thr, Ala ili Glu; i

Y10 je Met, Lys ili je odsutno.

[0018] Jedinjenje formule I’ može da sadrži Y’ peptid formule IIc’. Y1-Y2-Y3-Ser-Lys-Gly-Trp-Y8-Cys-Y10 (IIc’)

pri čemu

Y1 je Gly, Pro ili D-Pro;

Y2 je Pro ili Gly;

Y3 je Arg ili Lys;

Y8 je Val ili Thr; i

Y10 je Met, Lys ili je odsutno.

[0019] Jedinjenje formule I’ može da sadrži Y’ peptid formule IId’:

Cys-Y3-Y4-Arg-Y6-Y7-Y8-Cys-Y10-Y11-Y12-Y13-Y14-Y15 (IId’)

pri čemu

Y1 je Val ili Ala ili je odsutno;

Y3 je Gly, Pro ili je odsutno;

Y4 je His, Trp ili Tyr; Y6 je Ser, Gly ili Pro;

Y7 je Ile, Gly ili Lys;

Y8 je Gly, Met ili je odsutno;

Y10 je Tyr ili Cys;

Y11 je Arg, Lys, Met ili Ala;

Y12 je Arg ili Ala;

Y13 je Cys ili Val ili je odsutno;

Y14 je Cys, Lys, Pro, Arg, Thr ili je odsutno; i

Y15 je Arg, Thr ili je odsutno.

[0020] Jedinjenje formule I’ može da sadrži Y’ peptid formule IIe’:

Val-Cys-Y3-His-Arg-Y6-Y7-Y8-Cys-Tyr-Arg-Y12-Y13-Y14-Y15 (IIe’)

pri čemu

Y3 je Gly ili je odsutno;

Y6 je Ser ili Pro;

Y7 je Ile ili Lys;

Y8 je Gly ili je odsutno;

Y12 je Arg ili Ala;

Y13 je Cys ili Val ili je odsutno;

Y14 je Cys, Arg, Thr ili je odsutno; i

Y15 je Arg ili je odsutno.

[0021] U ovom dokumentu su dalje prikazani peptidi, koji mogu da budu izolovani i/ili prečišćeni, koji sadrže, u osnovi se sastoje od, ili se sastoje od, sledeće strukturne formule I": R<1">-X"-Y"-R<2">(I") (SEQ ID NO:27)

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat, pri čemu

R<1">je vodonik, C1-C6alkil, C6-C12aril, C6-C12aril C1-C6alkil, C1-C20alkanoil (npr. metil, acetil, formil, benzoil ili trifluoroacetil, izovalerijanska kiselina, izobuterna kiselina, oktanska kiselina, laurinska kiselina i heksadekanska kiselina, γ-Glu-heksadekanska kiselina kiselina) ili pGlu, dodati na N-terminus, i uključujući PEGilovane verzije (npr. PEG3 to PEG11),

same, ili kao spejsere u bilo kom od prethodno navedenih slučajeva;

R2" je -NH2ili -OH;

X" je peptidna sekvenca koja ima formulu Ia"

X1-X2-X3 -X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 (Ia") (SEQ ID NO:22) pri čemu

X1 je Asp, Glu, Ala, Gly, Thr, Ida, pGlu, bhAsp, D-Asp, Tyr, Leu ili je odsutno;

X2 je Thr, Ala, Aib, D-Thr, Arg ili je odsutno;

X3 je His, Ala, D-His ili Lys;

X4 je Phe, Ala, Dpa, bhPhe ili D-Phe;

X5 je Pro, Glu, Ser, Gly, Arg, Lys, Val, Ala, D-Pro, bhPro, Sarc, Abu ili je odsutno;

X6 je Ile, Cys, Arg, Leu, Lys, His, Glu, D-Ile, D-Arg, D-Cys, Val, Ser ili Ala;

X7 je Cys, Ile, Ala, Leu, Val, Ser, Phe, Dapa, D-Ile ili D-Cys;

X8 je Ile, Lys, Arg, Ala, Gln, Phe, Glu, Asp, Tyr, Ser, Leu, Val, D-Ile, D-Lys, D-Arg, ili Dapa;

X9 je Phe, Ala, Ile, Tyr, Lys, Arg, bhPhe ili D-Phe; i

X10 je Lys, Phe ili je odsutno;

i, pod uslovom da je Y" odsutno, X7 je Ile.

[0022] Jedinjenje formule I" može da bude PEGilovano na R<1">, X", ili Y".

[0023] Jedinjenje formule I" može da sadrži dva ili više cisteinskih ostataka, pri čemu su najmanje dva od navedenih cisteinskih ostataka povezana disulfidnom vezom.

[0024] Jedinjenje formule I" može da sadrži R<1">koji je vodonik, izovalerijanska kiselina, izobuterna kiselina ili acetil.

[0025] Jedinjenje formule I" može da sadrži X" peptid u skladu sa ovde prikazanom formulom Ia",

pri čemu

X1 je Asp, Ala, Ida, pGlu, bhAsp, Leu, D-Asp ili je odsutno;

X2 je Thr, Ala, ili D-Thr;

X3 je His, Lys, D-His ili Lys;

X4 je Phe, Ala, ili Dpa;

X5 je Pro, Gly, Arg, Lys, Ala, D-Pro ili bhPro;

X6 je Ile, Cys, Arg, Lys, D-Ile ili D-Cys;

X7 je Cys, Ile, Leu, Val, Phe, D-Ile ili D-Cys;

X8 je Ile, Arg, Phe, Gln, Lys, Glu, Val, Leu ili D-Ile;

X9 je Phe ili bhPhe; i

X10 je Lys ili je odsutno.

[0026] Jedinjenje formule I" može da sadrži X" peptid formule Ib": X1-Thr-His-X4-X5-X6-X7-X8-Phe-X10 (Ib")

pri čemu

X1 je Asp, Ida, pGlu, bhAsp ili je odsutno;

X4 je Phe ili Dpa;

X5 je Pro ili bhPro;

X6 je Ile, Cys ili Arg;

X7 je Cys, Ile, Leu ili Val;

X8 je Ile, Lys, Glu, Phe, Gln ili Arg; i

X10 je Lys, Phe ili je odsutno.

[0027] Jedinjenje formule I" može da sadrži X" peptid formule Ic": X1-Thr-His-X4-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10(Ic")

pri čemu

X1 je Asp, Ida, pGlu, bhAsp ili je odsutno;

X4 je Phe ili Dpa;

X5 je Pro ili bhPro;

X8 je Ile, Lys, Glu, Phe, Gln ili Arg; i

XI0 je Lys ili je odsutno.

[0028] Jedinjenje formule I" može da sadrži Y" peptid formule IIa": Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Cys-Y10 (IIa") (SEQ ID NO:25) pri čemu

Y1 je Gly, Ala, Lys, Pro ili D-Pro;

Y2 je Pro, Ala ili Gly;

Y3 je Arg, Ala, Lys ili Trp;

Y4 je Ser, Gly ili Ala;

Y5 je Lys, Met, Arg ili Ala;

1

Y6 je Gly, Arg ili Ala;

Y7 je Trp, Ala ili je odsutno;

Y8 je Val, Thr, Lys, Ala, Glu ili je odsutno; i

Y10 je Met, Lys ili je odsutno.

[0029] Jedinjenje formule I" može da sadrži Y" peptid formule IIb":

Y1-Y2-Y3-Ser-Lys-Gly-Trp-Y8-Cys-Y10 (IIb")

pri čemu

Y1 je Gly, Pro ili D-Pro;

Y2 je Pro, Gly;

Y3 je Arg, Lys;

Y8 je Val ili Thr; i

Y10 je Met, Lys ili je odsutno.

[0030] Ovde su dalje prikazani dimeri, npr. homodimeri, bilo kog od peptida prema predmetnom pronalasku, kao i peptida koji su ovde prikazani..

[0031] U nekim primerima izvođenja, peptidi ili dimeri prema predmetnom pronalasku pokazuju hepcidinsku aktivnost. U nekim primerima izvođenja, peptidi ili dimeri vezuju feroportin, npr., ljudski feroportin.

[0032] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje postupke za vezivanje feroportina ili indukovanja internalizacije i degradacije feroportina koje obuhvataju dovođenje u kontakt feroportina sa najmanje jednim peptidom, dimerom ili kompozicijom kako je ovde prikazano.

[0033] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje kompozicije koje sadrže najmanje jedan peptid ili dimer kao što je ovde prikazan.

[0034] Ovde je dalje prikazan postupak proizvodnje lekova koji sadrže najmanje jedan peptid ili dimer kao što je ovde prikazan za lečenje bolesti metabolizma gvožđa, kao što su bolesti nagomilavanja gvožđa.

[0035] Takođe je obezbeđen peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat za upotrebu u lečenju bolesti metabolizma gvožđa kod subjekta, kao što je subjekt sisar, na primer, čovek, koje obuhvata primenu kod subjekta najmanje jednog peptida, dimera ili kompozicije kao što je ovde prikazano. U nekim primerima izvođenja, peptid ili dimer se primenjuje u terapeutski efikasnoj količini. U nekim primerima izvođenja, bolest metabolizma gvožđa je bolest nagomilavanja gvožđa.

[0036] Ovde je dalje prikazan postupak proizvodnje peptida ili peptidnog dimera prema predmetnom pronalasku putem sinteze. Ovde je dalje prikazan rekombinantni postupak proizvodnje peptida ili peptidnog dimera prema predmetnom pronalasku.

[0037] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži peptidni analog (npr. peptid ili dimer prema predmetnom pronalasku), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat, kako je ovde opisano, u kombinaciji sa jednim ili više analoga peptida (npr. peptid prema predmetnom pronalasku ili dimer kako je ovde prikazan) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli ili solvatom, kao što je ovde opisano, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, ekscipijensom ili vehikulumom.

[0038] Ovde je dalje prikazan postupak za proizvodnju jedinjenja ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde prikazana.

[0039] Ovde je dalje prikazano sredstvo koje sadrži najmanje jedan peptidni analog (npr., peptid ili dimer prema predmetnom pronalasku), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat za isporuku peptidnog analoga subjektu.

[0040] Ovde su dalje prikazani kitovi koji sadrže najmanje jedan peptid, dimer ili kompoziciju kako je ovde prikazano, koji je upakovan zajedno sa reagensom, sredstvom, materijalom sa uputstvima ili njihovom kombinacijom.

[0041] Ovde su dalje prikazani kompleksi koji sadrže najmanje jedan peptid ili dimer, kako je ovde prikazano, vezan za feroportin, na primer, ljudski feroportin, ili antitelo, kao što je antitelo koje specifično vezuje peptid kao što je ovde prikazano, Hep25, ili njihovu kombinaciju .

[0042] I prethodni opšti opis i detaljni opis koji sledi su samo primeri i objašnjenja i imaju za cilj da pruže dalje objašnjenje pronalaska za koji se traži zaštita. Prateći crteži su uključeni kao bi obezbedili dodatno razumevanje pronalaska i uključeni su i čine deo ove specifikacije, ilustruju nekoliko primera izvođenja prema pronalasku i zajedno sa opisom služe da objasne principe pronalaska.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0043]

Slika 1 prikazuje rezultate testa in vitro aktivnosti koji meri indukciju degradacije humanog proteina feroportina. Predstavljene su krive doznog odgovora za Jedinjenje br. 1 u poređenju sa hepcidinom i mini-hepcidinom kao kontrolom.

Slika 2 prikazuje vremenski zavisne promene serumskog gvožđa nakon izlaganja životinje vehikulumu, Jedinjenju br. 2 i referentnom jedinjenju RI mini-hepcidin. Odgovori su normalizovani u odnosu na početne (t=0) nivoe.

Slika 3 prikazuje relativno smanjenje serumskog gvožđa u odnosu na vahikulum kao kontrolu mereno sa Jedinjenjem br. 2 kao i sa referentnim jedinjenjem RI-mini-hepcidin u vremenskim tačkama 0, 30, 60, 120, 240 i 360 minuta. 100% predstavlja izmerenu prosečnu vrednost za nivo serumskog gvožđa kod životinja tretiranih vehikulumom.

Slika 4 prikazuje in vivo sposobnost za redukciju serumskog gvožđa odabranih peptida prema predmetnom pronalasku i hepcidina.

Slika 5 prikazuje dozni odgovor za in vivo sposobnost za redukciju serumskog gvožđa odabranih peptida prema predmetnom pronalasku i hepcidina.

Slika 6 prikazuje PK/PD efekte za in vivo sposobnosti redukcije serumskog gvožđa odabranih peptida prema predmetnom pronalasku i hepcidina. Za hepcidin i tretman od 300 nmol/kg jedinjenjem br. 181, uzeta je samo jedna vremenska tačka na t=120 min. Hepcidinski odgovor nije jasno vidljiv na ovom grafikonu, pošto se preklapao sa grafikonom za Jed. Br.181 pri 1000 nmol/kg na tački t-120 min. Jedna tačka za podatak za jedinjenje br.181 pri 300 nmol/kg nalazi se direktno iznad tačke za hepcidin.

Slika 7 prikazuje odabrane primere linkera koji su korišćeni za dimerizaciju peptida.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0044] Osim ako u ovom dokumentu nije drugačije definisano, naučni i tehnički izrazi koji se koriste u ovoj prijavi imaće značenja koja su uobičajeno razumljiva stručnjacima u ovoj oblasti. Generalno, nomenklatura koja se koristi u vezi sa, i sa tehnikama hemije, molekularne biologije, biologije ćelija i karcinoma, imunologije, mikrobiologije, farmakologije, hemije proteina i nukleinskih kiselina, koje su ovde opisane, predstavljaju onu nomenklaturu i tehnike koje su dobro poznate i koje se obično koriste u tehnici.

[0045] Svaki primer izvođenja prema pronalasku, koji je ovde opisan, može se uzeti samostalno ili u kombinaciji sa jednim ili više drugih primera izvođenja pronalaska.

DEFINICIJE

[0046] Kroz celu ovu specifikaciju, reč „sadrže“ ili varijacije kao npr. „sadrži“ ili „koji sadrži“ podrazumevaće uključivanje navedenog celog broja (ili komponenti) ili grupe celih brojeva (ili komponenti), ali ne do isključivanja bilo kog drugog celog broja (ili komponenti) ili grupe celih brojeva (ili komponenti).

1

[0047] Gramatički oblici jednine uključuju množinu osim ako kontekst jasno ne nalaže drugačije.

[0048] Izraz "uključujući" se koristi da znači "uključujući, ali ne i ograničeno na’. „Uključujući“ i „ uključujući, ali ne i ograničeno na“ se koriste naizmenično.

[0049] Izrazi "pacijent", "subjekt" i "pojedinac" mogu da se koriste naizmenično i odnose se ili na čoveka ili na životinju koja nije čovek. Ovi izrazi uključuju sisare kao što su ljudi, primati, stočne životinje (npr. goveda, svinje), životinje pratioci čoveka (npr. psi, mačke) i glodari (npr. miševi i pacovi).

[0050] Izraz formula (I) se ovde koristi naizmenično sa izrazom formula I (tj., bez zagrade). Izraz formula (I’) se ovde koristi naizmenično sa izrazom formula I’ (tj., bez zagrade). Izraz formula (I"), ovde se koristi naizmenično sa izrazom formula I" (tj., bez zagrada).

[0051] Navodi „identičnost sekvence“, „procenat identičnosti“, „procenat homologije“ ili, na primer, sadrže „sekvencu 50% identičnu sa“, kako se ovde koristi, odnose se na stepen u kome su sekvence identične na osnovu poređenja nukleotid po nukleotid ili amino kiselina po amino kiselina u okviru određenog prozora poređenja. Prema tome, „procenat identičnosti sekvence“ može da se izračuna upoređivanjem dve optimalno porvnane sekvence u okviru prozora poređenja, tako što se odredi broj pozicija na kojima se identična baza nukleinske kiseline (npr. A, T, C, G, I) ili identični amino kiselinski ostatak (npr. Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys i Met) javlja u obe sekvence, kako bi se dobio broj podudarnih pozicija, broja podudarnih pozicija podeli sa ukupnim brojem pozicija u prozoru za poređenje (tj. veličinom prozora) i rezultata pomnoži sa 100 da bi se dobio procenat identičnosti sekvence.

[0052] Izračunavanje sličnosti sekvenci ili identičnosti sekvenci između sekvenci (izrazi se ovde koriste naizmenično) mogu se izvršiti na sledeći način. Da bi se odredio procenat identičnosti dve amino kiselinske sekvence, ili dve sekvence nukleinske kiseline, sekvence se mogu poravnati radi optimalnog poređenja (npr. praznine mogu da se uvedu u jednu ili obe od prve i druge sekvence amino kiseline ili nukleinske kiseline za optimalno poravnanje i nehomologne sekvence mogu da se zanemare u svrhu poređenja). U nekim primerima izvođenja, dužina referentne sekvence koja je poravnata u svrhu poređenja je najmanje 30%, poželjno najmanje 40%, poželjnije najmanje 50%, 60%, a još poželjnije najmanje 70%, 80%, 90% , 100% dužine referentne sekvence. Zatim se porede amino kiselinski ostaci ili nukleotidi na odgovarajućim pozicijama amino kiselina ili nukleotidnih pozicija. Kada je položaj u prvoj sekvenci zauzet istim amino kiselinskim ostatkom ili nukleotidom kao odgovarajući položaj u drugoj sekvenci, onda su molekuli identični na toj poziciji.

[0053] Procenat identičnosti između dve sekvence je funkcija broja identičnih pozicija koje su iste za te sekvence, uzimajući u obzir broj praznina i dužinu svake praznine, koje je potrebno uvesti za optimalno poravnanje dve sekvence.

[0054] Poređenje sekvenci i određivanje procenta identičnosti za dve sekvence može da se postigne upotrebom matematičkog algoritma. U nekim primerima izvođenja, procenat identičnosti između dve amino kiselinske sekvence se određuje upotrebom algoritma po autorima Needleman i Wunsch (1970, J. Mol. Biol.48: 444-453) koji je ugrađen u GAP program u GCG softverskom paketu, koristeći matricu Blossum 62 ili matricu PAM250, i težinu razmaka od 16, 14, 12, 10, 8, 6 ili 4 i težinu dužine od 1, 2, 3, 4, 5 ili 6. U još jednom poželjnom primeru izvođenja, procenat identičnosti dve nukleotidne sekvence se određuje upotrebom GAP programa u GCG softverskom paketu, koristeći matricu NWSgapdna.CMP, i težinu razmaka od 40, 50, 60, 70 ili 80 i težinu dužine od 1, 2, 3, 4, 5 ili 6. Drugi primer za skup parametara uključuje Blossum 62 matricu bodovanja sa panalima za razmak od 12, panalima za proširenje razmaka od 4 i penalima za razmak usled pomeranja okvira čitanja od 5. Procentualna identičnost između dve amino kiselinske ili nukleotidne sekvence takođe mogu da se odrede upotrebom algoritma po autorima E. Meyers i W. Miller (1989, Cabios, 4: 11-17) koji je ugrađen u program ALIGN (verzija 2.0), koristeći tabelu ostatka težine PAM120, penale za dužinu razmaka od 12 i penale za prazninu od 4.

[0055] Ovde opisane peptidne sekvence mogu da se koriste kao „sekvenca upita“ za vršenje pretrage u javnim bazama podataka da bi se, na primer, identifikovali drugi članovi porodice ili srodne sekvence. Takve pretrage mogu da se vrše upotrebom programa NBLAST i XBLAST (verzija 2.0) Altschul, et al., (1990, J. Mol. Biol, 215: 403-10). BLAST pretrage nukleotida se mogu izvršiti pomoću NBLAST programa, rezultat = 100, dužina reči = 12 da bi se dobile nukleotidne sekvence homologe sa molekulima nukleinske kiseline pronalaska. BLAST pretrage proteina se mogu izvršiti pomoću programa XBLAST, rezultat = 50, dužina reči = 3 da bi se dobile amino kiselinske sekvence homologe sa proteinskim molekulima prema pronalasku. Da bi se dobila poravnani razmaci u svrhu poređenja, može da se koristi Gapped BLAST kao što je opisano u Altschul et al. (Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997). Kada se koriste programi BLAST i Gapped BLAST, mogu da se koriste podrazumevani parametri odgovarajućih programa (npr. XBLAST i NBLAST).

[0056] Kako se ovde koristi, izraz "farmaceutski prihvatljiva so" ima za cilj da ukaže na so koja nije štetna za pacijenta ili subjekt kome se daje so. Može da bude pogodno odabrana so, npr., između kiselih adicionih soli i baznih soli. Primeri kiselinskih adicionih soli uključuju hloridne soli, citratne soli i acetatne soli. Primeri baznih soli uključuju soli gde je katjon izabran od katjona alkalnih metala, kao što su joni natrijuma ili kalijuma, katjoni zemnoalkalnih metala, kao

1

što su joni kalcijuma ili magnezijuma, kao i supstituisani joni amonijuma, kao što su joni tipa N( R1)(R2)(R3)(R4)+, gde će R1, R2, R3 i R4 nezavisno označavati vodonik, opciono supstituisani C1-6-alkil ili opciono supstituisani C2-6-alkenil. Primeri relevantnih C1-6-alkil grupa uključuju metil, etil, 1-propil i 2-propil grupe. Primeri C2-6-alkenil grupa od mogućeg značaja uključuju etenil, 1-propenil i 2-propenil. Drugi primeri farmaceutski prihvatljivih soli opisani su u "Remington’s Pharmaceutical Sciences", 17th edition, Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, SAD, 1985 (i novija izdanja), u "Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology", 3rd edition, James Swarbrick (Ed.), Informa Healthcare USA (Inc.), NY, SAD, 2007, i u J. Pharm. Sci. 66: 2 (1977). Takođe, za pregled odgovarajućih soli, videti Priručnik za farmaceutske soli: svojstva, izbor i upotreba autora Stahl i Wermuth (Wiley-VCH, 2002). Druge pogodne bazne soli se formiraju od baza koje formiraju netoksične soli. Reprezentativni primeri uključuju soli aluminijuma, arginina, benzatina, kalcijuma, holina, dietilamina, diolamina, glicina, lizina, magnezijuma, meglumina, olamina, kalijuma, natrijuma, trometamina i cinka. Takođe se mogu formirati hemisoli kiselina i baza, npr. hemisulfatne i hemikalcijumove soli. Kompozicije koje se koriste u pronalasku pogodne za parenteralnu primenu mogu da sadrže sterilne vodene rastvore i/ili suspenzije farmaceutski aktivnih sastojaka, poželjno napravljene izotonično sa krvlju primaoca, generalno koristeći natrijum hlorid, glicerin, glukozu, manitol, sorbitol i kao. Organske kiseline pogodne za formiranje farmaceutski prihvatljivih kiselinskih adicionih soli uključuju, kao primer i bez ograničenja, sirćetnu kiselinu, trifluorosirćetnu kiselinu, propionsku kiselinu, heksansku kiselinu, ciklopentanpropionsku kiselinu, glikolnu kiselinu, oksalnu kiselinu, pirugrožđanu kiselinu, mlečnu kiselinu, malonsku kiselinu, ćilibarnu kiselinu, jabučnu kiselinu, maleinsku kiselinu, fumarnu kiselinu, vinsku kiselinu, limunsku kiselinu, palmitinsku kiselinu, benzoevu kiselinu, 3-(4-hidroksibenzoil) benzoevu kiselinu, cimetnu kiselinu, bademovu kiselinu, alkilsulfonske kiseline (npr. metansulfonska kiselina, etansulfonska kiselina , 1,2-etan-disulfonska kiselina, 2-hidroksietansulfonska kiselina, itd.), arilsulfonske kiseline (npr. benzensulfonska kiselina, 4-hlorobenzensulfonska kiselina, 2-naftalensulfonska kiselina, 4-toluensulfonska kiselina, kamforsulfonska kiselina, itd.), 4-metilbiciklo(2.2.2)-okt-2-en-1-karboksilnu kiselinu, glukoheptonsku kiselinu, 3-fenilpropionsku kiselinu, trimetilsirćetnu kiselinu, tercijarnu butilosirćetnu kiselinu, lauril sumpornu kiselinu, glukonsku kiselinu, glutaminsku kiselinu, hidroksinaftulnu kiselinu, salicilnu kiselinu, stearinsku kiselinu, mukonsku kiselinu i slično.

[0057] Izraz "solvat" u kontekstu prema predmetnom pronalasku odnosi se na kompleks definisane stehiometrije formiran između rastvorene supstance (u ovom slučaju, analoga peptida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli prema pronalasku) i rastvarača. Rastvarač u ovoj vezi može, na primer, da bude voda, etanol ili druga farmaceutski prihvatljiva, organska vrsta, tipično

1

malog molekula, kao što je, ali bez ograničenja, sirćetna kiselina ili mlečna kiselina. Kada je rastvarač u pitanju voda, takav solvat se obično naziva hidratom.

[0058] Izraz "agonist", kako se koristi u kontekstu prema pronalasku, odnosi se na supstancu (ligand) koja dovodi do internalizacije proteina feroprotina.

[0059] Kako se ovde koristi, "bolest metabolizma gvožđa" uključuje bolesti kod kojih aberantni metabolizam gvožđa direktno uzrokuje bolest, ili gde su nivoi gvožđa u krvi neregulisani izazivajući bolest, ili gde je disregulacija gvožđa posledica druge bolesti, ili gde se bolesti mogu lečiti moduliranjem nivoa gvožđa i slično. Tačnije, bolest metabolizma gvožđa prema ovom prikazu uključuje bolesti nagomilavanja gvožđa, poremećaje nedostatka gvožđa, poremećaje biološke distribucije gvožđa, druge poremećaje metabolizma gvožđa i druge poremećaje potencijalno povezane sa metabolizmom gvožđa, itd. Bolesti metabolizma gvožđa uključuju hemohromatozu, hemohromatozu usled HFE mutacije, hemohromatozu usled mutacije feroportina, hemohromatozu usled mutacije transferinskog receptora 2, hemohromatozu usled mutacije hemojuvelina, hemohromatozu usled mutacije hepcidina, juvenilnu hemohromatozu, neonatalnu hemohromatozu, deficijenciju hepcidina, nagomilavanje gvožđa usled transfuzije, talasemiju, prelaznu talasemiju, alfa talasemiju, sideroblastnu anemiju, porfiriju, kasnu kožnu porfiriju, afričko nagomilavanje gvožđa, hiperferitinemiju, deficijenciju ceruloplazmina, atransferinemiju, kongenitalnu diseritropoetsku anemiju, anemiju usled hronične bolesti, anemiju usled zapaljenja, anemiju usled infekcije, hipohromnu mikrocitnu anemiju, anemiju usled deficijencije gvožđa i anemiju usled deficijencije gvožđa reflektornu na gvožđe, anemiju usled hronične bolesti bubrega, rezistenciju na eritropoetin, deficijenciju gvožđa kod gojaznosti, druge anemije, benigne ili maligne tumore koji prekomerno proizvode hepcidin ili izazivaju njegovu prekomernu proizvodnju, stanja sa viškom hepcidina, Fridrajhovu ataksiju, gracilni sindrom, Halervorden-Špacovu bolest, Vilsonovu bolest, plućnu hemosiderozu, hepatocelularni karcinom, kancer, hepatitis, cirozu jetre, piku, hroničnu bubrežnu insuficijenciju, insulinsku rezistenciju, dijabetes, aterosklerozu, neurodegenerativne poremećaje, multiplu sklerozu, Parkinsonovu bolest, Hantingtonovu bolest i Alchajmerovu bolest.

[0060] U nekim primerima izvođenja, bolest i poremećaji su povezani sa bolestima nagomilavanja gvožđa, kao što su hemohromatoza gvožđa, hemohromatozu usled HFE mutacije, hemohromatozu usled mutacije feroportina, hemohromatozu usled mutacije transferinskog receptora 2, hemohromatozu usled mutacije hemojuvelina, hemohromatozu usled mutacije hepcidina, juvenilnu hemohromatozu, neonatalnu hemohromatozu, deficijenciju hepcidina, nagomilavanje gvožđa usled transfuzije, talasemiju, prelaznu talasemiju, alfa talasemiju.

[0061] U nekim primerima izvođenja, peptidi prema pronalasku se koriste za lečenje bolesti i poremećaja koji se tipično ne identifikuju kao povezani sa gvožđem. Na primer, hepcidin je

1

visoko eksprimiran u mišjem pankreasu što sugeriše da dijabetes (tip I ili tip II), insulinska rezistencija, netolerancija na glukozu i drugi poremećaji mogu biti poboljšani lečenjem osnovnih poremećaja metabolizma gvožđa. Videti Ilyin, G. et al. (2003) FEBS Lett. 542 22-26, koji je ovde uključen kao referenca. Kao takvi, peptidi prema pronalasku mogu da se koriste za lečenje ovih bolesti i stanja. Stručnjaci su u stanju da lako odrede da li data bolest može da se leči peptidom prema predmetnom pronalasku upotrebom metoda poznatih u tehnici, uključujući testove iz WO 2004092405, koji je ovde uključen kao referenca, i testove koji prate nivoi i ekspresija hepcidina, hemojuvelina ili gvožđa, koji su poznati u tehnici, kao što su testovi opisani u SAD patentu br.7,534,764, koji je ovde uključen kao referenca.

[0062] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom pronalasku, bolesti metabolizma gvožđa su bolesti nagomilavanja gvožđa, koje uključuju naslednu hemohromatozu, anemije sa nagomilavanjem gvožđa, oboljenja jetre u vezi sa alkoholom i hronični hepatitis C.

[0063] Kako se ovde koristi, izrazi "protein", "polipeptid" i "peptid" se koriste naizmenično tako da se odnose na dve ili više amino kiselina povezanih zajedno. Osim tamo gde je drugačije naznačeno, npr., za skraćenice za neobične ili ne-prirodne amino kiseline koje su ovde izložene, skraćenice od tri slova ili jednog slova, kako se koriste u tehnici, se ovde koriste tako da predstavljaju amino kiselinske ostatke. Osim kada joj prethodi "D-", amino kiselina je L-amino kiselina. Grupe ili nizovi skraćenica amino kiselina se koriste za predstavljanje peptida. Osim kada je izričito naznačeno, peptidi su označeni sa N-terminusom na levoj strani, a sekvenca je napisana od N-terminusa do C-terminusa.

[0064] Izraz "peptidni analog" u kontekstu prema predmetnom pronalasku odnosi se na molekul za koji je prvi peptidni deo vezan (tj. kuplovan ili povezan), bilo direktno ili preko povezivanja (tj. premošćavanja ili razmaka) hemijskog dela, za drugi peptidni deo, pomoću kovalentne hemijske veze. U nekim primerima izvođenja, peptidni analog je peptid opisan ovde koji sadrži X peptidnu sekvencu i Y peptidnu sekvencu. U nekim primerima izvođenja, peptidni analog je peptid opisan ovde koji sadrži X’ peptidnu sekvencu i Y’ peptidnu sekvencu. U nekim primerima izvođenja, peptidni analog je peptid opisan ovde koji sadrži X’’ peptidnu sekvencu i Y’’ peptidnu sekvencu. U nekim primerima izvođenja, peptidni analog je peptid opisan ovde koji sadrži X peptidnu sekvencu i/ili Y peptidnu sekvencu konjugovanu sa dodatnim hemijskim delom. U nekim primerima izvođenja, peptidni analog je peptid opisan ovde koji sadrži X’ peptidnu sekvencu i/ili Y’ peptidnu sekvencu konjugovanu sa dodatnim hemijskim delom. U nekim primerima izvođenja, peptidni analog je peptid opisan ovde koji sadrži X’’ peptidnu sekvencu i/ili Y’’ peptidnu sekvencu konjugovanu sa dodatnim hemijskim delom. Peptidi prema predmetnom pronalasku koji su ovde opisani su analozi peptida. Analozi peptida takođe uključuju bilo koji od peptidnih dimera opisanih ovde.

1

[0065] U ovom dokumentu, peptidi i peptidni dimeri prema predmetnom pronalasku mogu da se označavaju i kao jedinjenja ili peptidni analozi.

[0066] Izraz "konzervativna supstitucija" kako se ovde koristi označava da je jedna ili više amino kiselina zamenjeno drugim, biološki sličnim ostatkom. Primeri uključuju supstituciju amino kiselinskih ostataka sa sličnim karakteristikama, na primer, male amino kiseline, kisele amino kiseline, polarne amino kiseline, bazne amino kiseline, hidrofobne amino kiseline i aromatične amino kiseline. Pogledati, na primer, tabelu ispod. U nekim primerima izvođenja pronalaska, jedan ili više Met ostataka su supstituisani sa norleucinom (Nle) koji je bioizostereomer za Met, ali koji se, za razliku od Met, ne oksiduje lako. Drugi primer konzervativne supstitucije sa ostatkom koji se inače ne nalazi u endogenim peptidima i proteinima sisara je konzervativna supstitucija Arg ili Lys sa, na primer, ornitinom, kanavaninom, aminoetilcisteinom ili drugom baznom amino kiselinom. U nekim primerima izvođenja, jedan ili više cisteina peptidnog analoga prema pronalasku mogu da budu supstituisani drugim ostatkom, kao što je serin. Za dalje informacije o fenotipski tihim supstitucijama u peptidima i proteinima, videti, na primer, Bowie et.al. Science 247, 1306-1310, 1990. U donjoj šemi, konzervativne supstitucije amino kiselina su grupisane prema fizičko-hemijskim osobinama. I: neutralna, hidrofilna, II: kiseline i amidi, III: bazna, IV: hidrofobna, V: aromatične, velike amino kiseline.

U donjoj šemi, konzervativne supstitucije amino kiselina su grupisane prema fizičko-hemijskim osobinama. VI: neutralna ili hidrofobna, VII: kisela, VIII: bazna, IX: polarna, X: aromatična.

[0068] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje peptide koji su korisni u proučavanju i lečenju bolesti metabolizma gvožđa.

[0069] U ovoj specifikaciji, osim ako se prirodne amino kiseline ne pominju punim imenom (npr. alanin, arginin, itd.), označene su svojim uobičajenim skraćenicama od tri slova ili jednog slova (npr. Ala ili A za alanin, Arg ili R za arginin, itd.). U slučaju manje uobičajenih amino

1

kiselina ili amino kiselina koje se ne pojavljuju u prirodi, osim ako su navedene punim imenom (npr. sarkozin, ornitin, itd.), često korišćeni kodovi od tri ili četiri karaktera se koriste za njihove ostatke, uključujući, Sar ili Sarc (sarkozin, tj. N-metilglicin), Aib (a-aminoizobuterna kiselina), Dab (2,4-diaminobutanska kiselina), Dapa (2,3-diaminopropionska kiselina), γ-Glu (γglutaminska kiselina), Gaba (γ-aminobutanska kiselina), β-Pro (pirolidin-3-karboksilna kiselina) i 8Ado (8-amino-3,6-dioksaoktanska kiselina), Abu (4-amino buternaa kiselina), bhPro (βhomoprolin) , bhPhe (β-homofenilalanin) i Dpa (β,β difenilalanin) i Ida (iminodiasirćetna kiselina).

[0070] Kao što je stručnjaku jasno, peptidne sekvence koje su ovde prikazane predstavljene su s leva na desno, pri čemu je levi kraj sekvence N-terminus peptida, a desni kraj sekvence C-terminus peptida. Među sekvencama koje su ovde prikazane su sekvence koje sadrže „Hy-“ komponentu na amino terminusu (N-terminusu) sekvence, i, ili „-OH“ deo ili „-NH2“ deo na karboksi terminusu (C-terminus) sekvence. U takvim slučajevima, i ako nije drugačije naznačeno, „Hy-“ komponenta na N-terminusu date sekvence označava atom vodonika [npr. R<1>, R<1'>ili R<1''>= vodonik (Hy-) u formuli I , I', ili I'', redom, što odgovara prisustvu slobodne primarne ili sekundarne amino grupe na N-terminusu], dok "-OH" ili "-NH2" komponenta na C-terminusu sekvence označava hidroksi grupu [npr. R<2>, R<2'>ili R<2''>= OH u formuli I, I' ili I'', redom, što odgovara prisustvu karboksi (COOH) grupe na C-terminusu] ili amino grupa [npr. R<2>, R<2'>ili R<2''>= NH2u formuli I, I' ili I'', redom, što odgovara prisustvu amido (CONH2) grupe na C-terminusu], redom. U svakoj sekvenci prema pronalasku, C-terminalna "-OH" komponenta može da bude supstituisana C-terminalnom "-NH2" komponentom, i obrnuto. Štaviše, R<1>, R<1’>, ili R<1’’>mogu u svim sekvencama da budu supstituisani izovaleričnim kiselinama ili njenim ekvivalentom. U nekim primerima izvođenja, gde je peptid iz prema predmetnom pronalasku konjugovan sa kiselim jedinjenjem kao što je, na primer, izovalerijanska kiselina, izobuterna kiselina, valerijanska kiselina i slično, prisustvo takve konjugacije se navodi u obliku kiseline. Tako, na primer, ali bez ograničenja ni na koji način, umesto navođenja konjugacije izovalerijanske kiseline sa peptidom DTHFPCIKFCK (SEQ ID NO: 215) govori se o izovaleroil (npr. izovaleroil-DTHFPCIKFCK [SEQ ID NO: 215]), u nekim primerima izvođenja, ova patentna prijava upućuje na konjugaciju kao što je izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFCK (SEQ ID NO: 215). Osim ako nije drugačije naznačeno, govori se o L-izomernim oblicima datih amino kiselina. Tamo gde je prikladno, D-izomerni oblik amino kiseline je označen na konvencionalni način prefiksom „D“ ispred konvencionalnog koda od tri slova (npr. DAsp ili D-Asp; DPhe ili D-Phe).

[0071] Pronalazak obezbeđuje peptide koji mogu da budu izolovani i/ili prečišćeni, koji sadrže, sastoje se u osnovi od, ili se sastoje od, sledeće strukturne formule:

2

R<1>-X-Y-R<2>(I) (SEQ ID NO:12)

ili njene farmaceutski prihvatljive soli ili solvata, pri čemu

R<1>je vodonik, C1-C6 alkil, C6-C12 aril, C6-C12 aril C1-C6 alkil, C1-C20 alkanoil (npr., metil, acetil, formil, benzoil ili trifluoroacetil, izovalerijanska kiselina, izobuterna kiselina, oktanska kiselina, laurinska kiselina i heksadekanska kiselina, γ-Glu-heksadekanska kiselina) ili pGlu, dodati na N-terminus, i uključuju PEGilovane verzije (npr., PEG3 to PEG11), same, ili kao spejsere u bilo kom od prethodno navedenih slučajeva;

R<2>je -NH2ili -OH;

U ovom dokumentu je prikazano da X može da bude peptidna sekvenca koja ima formulu (Ia) X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 (Ia) (SEQ ID NO:1)

pri čemu

X1 je Asp, Glu, Ala, Gly, Thr, Ida, pGlu, bhAsp, D-Asp, Tyr, Leu ili je odsutno;

X2 je Thr, Ala, Aib, D-Thr, Arg ili je odsutno;

X3 je His, Lys, Ala, ili D-His;

X4 je Phe, Ala, Dpa, bhPhe, ili D-Phe;

X5 je Pro, Glu, Ser, Gly, Arg, Lys, Val, Ala, D-Pro, bhPro, Sarc, Abu ili je odsutno;

X6 je Ile, Cys, Arg, Leu, Lys, His, Glu, D-Ile, D-Arg, D-Cys, Val, Ser ili Ala;

X7 je Cys, Ile, Ala, Leu, Val, Ser, Phe, Dapa, D-Ile ili D-Cys;

X8 je Ile, Lys, Arg, Ala, Gln, Phe, Glu, Asp, Tyr, Ser, Leu, Val, D-Ile, D-Lys, D-Arg, ili Dapa;

X9 je Phe, Ala, Ile, Tyr, Lys, Arg, bhPhe ili D-Phe; i

X10 je Lys, Phe ili je odsutno;

Y je odsutno ili, Y je peptid koji ima formulu (IIa)

Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11-Y12-Y13-Y14-Y15 (IIa) (SEQ ID NO:5) pri čemu

Y1 je Gly, Glu, Lys, Ser ili je odsutno;

Y2 je Pro, Ala, Cys, Gly ili je odsutno;

Y3 je Arg, Lys, Ala, ili je odsutno;

Y4 je Ser, Ala, ili je odsutno;

Y5 je Lys, Arg, ili je odsutno;

Y6 je Gly, Ser, Lys, Ile, Arg, Ala, Pro, Val ili je odsutno;

Y7 je Trp, Val ili je odsutno;

Y8 je Val, Thr, Tyr, Ala, Glu, Lys, Asp, ili je odsutno;

Y9 je Cys, Tyr ili je odsutno;

Y10 je Met, Lys, Arg, Tyr ili je odsutno;

Y11 je Arg, Met, Cys, Lys ili je odsutno;

Y12 je Arg, Lys, Ala ili je odsutno;

Y13 je Arg, Cys, Lys, Val ili je odsutno;

Y14 je Arg, Lys, Pro, Cys, Thr ili je odsutno; i

Y15 je Thr, Arg ili je odsutno;

U ovom dokumentu je prikazano da, ako Y je odsutno iz peptida formule (I), X7 je Ile; i pri čemu navedeno jedinjenje formule (I) je izborno pegilovano na R<1>, X, ili Y.

[0072] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje ili peptid formule (I) sadrži dva ili više cisteinskih ostataka, pri čemu su najmanje dva od navedenih cisteinskih ostataka povezana disulfidnom vezom.

[0073] U ovom dokumentu je dalje prikazano da X može da bude peptidna sekvenca u skladu sa ovde opisanom formulom (Ia),

pri čemu

X1 je Asp, Glu, Ala, Gly, Thr, Ida, pGlu, bhAsp, D-Asp, Tyr, Leu ili je odsutno;

X2 je Thr, Ala, Aib, D-Thr, Arg ili je odsutno;

X3 je His, Lys, Ala, ili D-His;

X4 je Phe, Ala, Dpa, ili bhPhe;

X5 je Pro, Glu, Ser, Gly, Arg, Lys, Val, Ala, D-Pro, bhPro, Sarc, Abu ili je odsutno;

X6 je Ile, Cys, Arg, Leu, Lys, His, Glu, D-Ile, D-Arg, D-Cys, Val, Ser ili Ala;

X7 je Cys, Ile, Ala, Leu, Val, Ser, Phe, Dapa, D-Ile ili D-Cys;

X8 je Ile, Lys, Arg, Ala, Gln, Phe, Glu, Asp, Tyr, Ser, Leu, Val, D-Ile, D-Lys, D-Arg, ili Dapa;

X9 je Phe, Ala, Ile, Tyr, Lys, Arg, bhPhe ili D-Phe; i

X10 je Lys, Phe ili je odsutno.

[0074] U ovom dokumentu je dalje prikazano da X može da bude peptidna sekvenca u skladu sa ovde opisanom formulom (Ia),

pri čemu

X1 je Asp, Ala, Ida, pGlu, bhAsp, Leu, D-Asp ili je odsutno;

X2 je Thr, Ala, ili D-Thr;

X3 je His, Lys, ili D-His;

X4 je Phe, Ala, ili Dpa;

X5 je Pro, Gly, Arg, Lys, Ala, D-Pro ili bhPro;

X6 je Ile, Cys, Arg, Lys, D-Ile ili D-Cys;

X7 je Cys, Ile, Leu, Val, Phe, D-Ile ili D-Cys;

X8 je Ile, Arg, Phe, Gln, Lys, Glu, Val, Leu ili D-Ile;

X9 je Phe ili bhPhe; i

X10 je Lys, Phe ili je odsutno.

[0075] U ovom dokumentu je dalje prikazano da, X može da bude peptidna sekvenca koja ima formulu (Ib)

X1-Thr-His-X4-X5-X6-X7-X8-Phe-X10 (Ib) (SEQ ID NO:2)

pri čemu

X1 je Asp, Ida, pGlu, bhAsp ili je odsutno;

X4 je Phe ili Dpa;

X5 je Pro ili bhPro;

X6 je Ile, Cys ili Arg;

X7 je Cys, Ile, Leu ili Val;

X8 je Ile, Lys, Glu, Phe, Gln ili Arg; i

X10 je Lys, Phe ili je odsutno;

[0076] U ovom dokumentu je dalje prikazano da X može da bude peptidna sekvenca u skladu sa formulom (Ib), kao što je ovde opisano,

pri čemu

X1 je Asp, Glu, Ida, pGlu, bhAsp ili je odsutno;

X4 je Phe ili Dpa;

X5 je Pro ili bhPro;

X6 je Ile, Cys ili Arg;

X7 je Cys, Ile, Leu ili Val;

X8 je Ile, Lys, Glu, Phe, Gln ili Arg; i

X10 je Lys ili je odsutno.

[0077] X je peptidna sekvenca koja ima formulu (Ic)

X1-Thr-His-X4-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10 (Ic) (SEQ ID NO:3)

pri čemu

X1 je Asp, Ida, ili je odsutno;

X4 je: Phe ili Dpa;

2

X5 je Pro;

X8 je Ile Lys, Glu, Phe, Gln ili Arg; i

X10 je Lys ili je odsutno.

[0078] U nekim primerima izvođenja, X je peptidna sekvenca koja ima formulu (Id)

X1-Thr-His-Phe-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10 (Id) (SEQ ID NO:4)

pri čemu

X1 je Asp, ili Ida;

X5 je Pro;

X8 je Ile, Lys ili Phe; i

X10 je odsutno.

[0079] U ovom dokumentu je dalje prikazano da Y može da bude peptidna sekvenca koja ima formulu IIb

Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Cys-Y10 (IIb) (SEQ ID NO:6)

pri čemu

Y1 je Gly, Ala, Lys, Pro ili D-Pro;

Y2 je Pro, Ala ili Gly;

Y3 je Arg, Ala, Lys ili Trp;

Y4 je Ser, Gly ili Ala;

Y5 je Lys, Met, Arg ili Ala;

Y6 je Gly, Arg ili Ala;

Y7 je Trp, Ala ili je odsutno;

Y8 je Val, Thr, Lys, Ala, Glu ili je odsutno; i

Y10 je Met, Lys ili je odsutno.

[0080] U ovom dokumentu je dalje prikazano da Y može da bude peptidna sekvenca u skladu sa formulom (IIb), kao što je ovde opisano,

pri čemu

Y1 je Gly, Ala, Lys, Pro ili D-Pro;

Y2 je Pro, Ala ili Gly;

Y3 je Arg, Ala, Lys ili Trp;

Y4 je Ser, Gly ili Ala;

Y5 je Lys, Met, Arg ili Ala;

Y6 je Gly, Arg ili Ala;

Y7 je Trp ili Ala;

Y8 je Val, Thr, Ala, ili Glu; i

Y10 je Met, Lys, ili je odsutno.

[0081] U ovom dokumentu je dalje prikazano da Y može da bude peptidna sekvenca koja ima formulu (IIc)

Y1-Y2-Y3-Ser-Lys-Gly-Trp-Y8-Cys-Y10 (IIc) (SEQ ID NO:7)

pri čemu

Y1 je Gly, Pro ili D-Pro;

Y2 je Pro ili Gly;

Y3 je Arg ili Lys;

Y8 je Val ili Thr; i

Y10 je Met, Lys ili je odsutno.

[0082] U ovom dokumentu je dalje prikazano da Y može da bude peptidna sekvenca koja ima formulu (IId)

Y1-Cys-Y3-Y4-Arg-Y6-Y7-Y8-Cys-Y10-Y11-Y12-Y13-Y14-Y15 (IId) (SEQ ID NO:8)

pri čemu

Y1 je Val, Ala ili je odsutno;

Y3 je Gly, Pro ili je odsutno;

Y4 je His, Trp ili Tyr;

Y6 je Ser, Gly ili Pro;

Y7 je Ile, Gly ili Lys;

Y8 je Gly, Met ili je odsutno;

Y10 je Tyr ili Cys;

Y11 je Arg, Lys, Met ili Ala;

Y12 je Arg ili Ala;

Y13 je Cys ili Val ili je odsutno;

Y14 je Cys, Lys, Pro, Arg, Thr ili je odsutno; i

Y15 je Arg, Thr ili je odsutno.

[0083] U ovom dokumentu je dalje prikazano da Y može da bude peptidna sekvenca koja ima formulu (IIe)

Val-Cys-Y3-His-Arg-Y6-Y7-Y8-Cys-Tyr-Arg-Y12-Y13-Y14-Y15 (IIe) (SEQ ID NO:9)

pri čemu

2

Y3 je Gly ili je odsutno;

Y6 je Ser ili Pro;

Y7 je Ile ili Lys;

Y8 je Gly ili je odsutno;

Y12 je Arg ili Ala;

Y13 je Cys, Val ili je odsutno;

Y14 je Cys, Arg, Thr ili je odsutno; i

Y15 je Arg ili je odsutno.

[0084] U ovom dokumentu je dalje prikazano da Y može da bude peptidna sekvenca koja ima formulu (IIf)

Y1-Pro-Y3-Ser-Y5-Y6-Y7-Y8-Cys-Y10 (IIf) (SEQ ID NO:10)

pri čemu

Y1 je Gly, Glu, Val, ili Lys;

Y3 je Arg ili Lys;

Y5 je Arg ili Lys;

Y6 je Gly, Ser, Lys, Ile ili Arg;

Y7 je Trp ili je odsutno;

Y8 je Val, Thr, Asp, Glu ili je odsutno; i

Y10 je Lys ili je odsutno.

[0085] U ovom dokumentu je dalje prikazano da Y može da bude peptidna sekvenca koja ima formulu (IIg)

Y1-Pro-Y3-Ser-Y5-Y6-Y7-Y8-Cys-Y10 (IIg) (SEQ ID NO:11)

pri čemu

Y1 je Glu ili Lys;

Y3 je Arg ili Lys;

Y5 je Arg ili Lys;

Y6 je Gly, Ser, Lys, Ile ili Arg;

Y7 je Trp ili je odsutno;

Y8 je Val ili je odsutno; i

Y10 je Lys ili je odsutno.

2

[0086] Neki peptidi formule (I) sadrže najmanje tri, najmanje četiri, najmanje pet, najmanje šest, najmanje sedam, najmanje osam, najmanje devet, ili najmanje deset, najmanje jedanaest, najmanje dvanaest, najmanje trinaest, najmanje četrnaest ili najmanje petnaest Y ostataka u Y.

[0087] U nekim peptidima, Y1 to Y3 su prisutni i Y4 to Y15 su odsutni.

[0088] U nekim peptidima, Y1 to Y11 su prisutni i Y12 to Y15 su odsutni.

[0089] U nekim peptidima, Y1 to Y10 su prisutni i Y11 to Y15 su odsutni.

[0090] U nekim peptidima, Y8 i Y15 su odsutni.

[0091] U nekim peptidima, Y3 i Y15 su odsutni

[0092] U nekim peptidima, Y3, Y14 i Y15 su odsutni.

[0093] U nekim peptidimaY5, je odsutno.

[0094] U nekim peptidima Y1, Y5, Y7, Y12, Y13, Y14 i Y15 su odsutni.

[0095] U nekim peptidima Y1, Y5, i Y7 su odsutni. U nekim primerima izvođenja, Y8 je odsutno. U nekim peptidima, Y3 je odsutno. U nekim peptidima,Y1, Y5, Y7, i Y11-Y15 su odsutni. U nekim peptidima, Y8 i Y11-Y15 su odsutni. U nekim peptidima, Y3 i Y11-Y15 su odsutni.

[0096] U nekim peptidima, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), pri čemu jedinjenje sadrži bilo koju od kombinacija formule peptidne sekvence X / Y prikazanih u Tabeli 1 koja sledi.

Tabela 1: Ilustrativne kombinacije peptida X i Y jedinjenja Formula (I)

2

[0097] U ovom dokumentu su dalje prikazani peptidi, koji mogu da budu izolovani i/ili prečišćeni, koji sadrže, u osnovi se sastoje od, ili se sastoje od, sledeće strukturne formule:

R<1’>-X’-Y’-R<2’>(I’) (SEQ ID NO:21)

ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili solvati, pri čemu

R<1’>je vodonik, C1-C6alkil, C6-C12aril, C6-C12aril C1-C6alkil, C1-C20alkanoil (npr., metil, acetil, formil, benzoil ili trifluoroacetil, izovalerijanska kiselina, izobuterna kiselina, oktanska kiselina, laurinska kiselina i heksadekanska kiselina, γ-Glu-heksadekanska kiselina) ili pGlu, dodati na N-terminus, i uključujući PEGilovane verzije (npr., PEG3 to PEG11), same, ili kao spejsere u bilo kom od prethodno navedenih slučajeva;

R<2’>je -NH2ili -OH;

X’ je peptidna sekvenca koja ima formulu (Ia’)

X1-X2-X3 -X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 (Ia’) (SEQ ID NO:13)

pri čemu

X1 je Asp, Glu, Ala, Gly, Thr, Ida, pGlu, bhAsp, D-Asp, Tyr, Leu ili je odsutno;

X2 je Thr, Ala, Aib, D-Thr, Arg ili je odsutno;

X3 je His, Lys, Ala, ili D-His;

X4 je Phe, Ala, Dpa, bhPhe ili D-Phe;

X5 je Pro, Glu, Ser, Gly, Arg, Lys, Val, Ala, D-Pro, bhPro, Sarc, Abu ili je odsutno;

X6 je Ile, Cys, Arg, Leu, Lys, His, Glu, D-Ile, D-Arg , D-Cys, Val, Ser ili Ala;

X7 je Cys, Ile, Ala, Leu, Val, Ser, Phe, Dapa, D-Ile ili D-Cys;

X8 je Ile, Lys, Arg, Ala, Gln, Phe, Glu, Asp, Tyr, Ser, Leu, Val, D-Ile, D-Lys, D-Arg ili Dapa; X9 je Phe, Ala, Ile, Tyr, Lys, Arg, bhPhe ili D-Phe; i

2

X10 je Lys, Phe ili je odsutno;

i, pod uslovom da ako je Y’ odsutno, X7 je Ile; i

Y’ je a peptid koji ima formulu (IIa’)

Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11-Y12-Y13-Y14-Y15 (IIa’) (SEQ ID NO:16)

pri čemu

Y1 je Gly, Cys, Ala, Phe, Pro, Glu, Lys, D-Pro, Val, Ser ili je odsutno;

Y2 je Pro, Ala, Cys, Gly ili je odsutno;

Y3 je Arg, Lys, Pro, Gly, His, Ala, Trp ili je odsutno;

Y4 je Ser, Arg, Gly, Trp, Ala, His, Tyr ili je odsutno;

Y5 je Lys, Met, Arg, Ala ili je odsutno;

Y6 je Gly, Ser, Lys, Ile, Arg, Ala, Pro, Val ili je odsutno;

Y7 je Trp, Lys, Gly, Ala Ile, Val ili je odsutno;

Y8 je Val, Thr, Gly, Cys, Met, Tyr, Ala, Glu, Lys, Asp, Arg ili je odsutno;

Y9 je Cys, Tyr ili je odsutno;

Y10 je Met, Lys, Arg, Tyr ili je odsutno;

Y11 je Arg, Met, Cys, Lys ili je odsutno;

Y12 je Arg, Lys, Ala ili je odsutno;

Y13 je Arg, Cys, Lys, Val ili je odsutno;

Y14 je Arg, Lys, Pro, Cys, Thr ili je odsutno; i

Y15 je Thr, Arg ili je odsutno;

pri čemu navedeno jedinjenje formule (I’) je izborno PEGilovano na R<1’>, X’, ili Y’; i pri čemu, kada navedeno jedinjenje formule sadrži dva ili više cisteinskih ostataka, najmanje dva od navedenih cisteinskih ostataka su povezana disulfidnom vezom.

[0098] R<1’>može da bude vodonik, izovalerijanska kiselina, izobuterna kiselina ili acetil.

[0099] U nekim peptidnim jedinjenjima formule X’ je peptidna sekvenca u skladu sa formulom (Ia’), pri čemu

X1 je Asp, Ala, Ida, pGlu, bhAsp, Leu, D-Asp ili je odsutno;

X2 je Thr, Ala, ili D-Thr;

X3 je His, Lys, D-His ili Lys;

X4 je Phe, Ala, Dpa ili D-Phe;

X5 je Pro, Gly, Arg, Lys, Ala, D-Pro ili bhPro;

X6 je Ile, Cys, Arg, Lys, D-Ile ili D-Cys;

X7 je Cys, Ile, Leu, Val, Phe, D-Ile ili D-Cys;

2

X8 je Ile, Arg, Phe, Gln, Lys, Glu, Val, Leu ili D-Ile;

X9 je Phe ili bhPhe; i

X10 je Lys, Phe ili je odsutno.

[0100] U nekim peptidnim jedinjenjima formule I’, X’ je peptidna sekvenca koja ima formulu (Ib’)

X1-Thr-His-X4-X5-X6-X7-X8-Phe-X10 (Ib’) (SEQ ID NO:14)

pri čemu

X1 je Asp, Ida, pGlu, bhAsp ili je odsutno;

X4 je Phe ili Dpa;

X5 je Pro ili bhPro;

X6 je Ile, Cys ili Arg;

X7 je Cys, Ile, Leu ili Val;

X8 je Ile Lys, Glu, Phe, Gln ili Arg; i

X10 je Lys ili je odsutno.

[0101] U nekim peptidnim jedinjenjima formule I’, X’ je peptidna sekvenca koja ima formulu (Ic’)

X1-Thr-His-X4-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10 (Ic’) (SEQ ID NO:15)

pri čemu

X1 je Asp, Ida, pGlu, bhAsp ili je odsutno;

X4 je: Phe ili Dpa;

X5 je Pro ili bhPro;

X8 je Ile Lys, Glu, Phe, Gln ili Arg; i

X10 je Lys ili je odsutno.

[0102] U nekim peptidnim jedinjenjima formule I’, X’ je peptidna sekvenca koja ima formulu (Id’)

X1-Thr-His-Phe-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10 (Id’) (SEQ ID NO:4)

pri čemu

X1 je Asp, Glu, ili Ida;

X4 je: Phe;

X5 je Pro ili bhPro;

X8 je Ile, Lys, ili Phe; i

X10 je odsutno.

[0103] U nekim peptidnim jedinjenjima formule I’, Y’ je peptidna sekvenca koja ima formulu (IIb’)

Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Cys-Y10 (IIb’) (SEQ ID NO:17)

pri čemu

Y1 je Gly, Ala, Lys, Pro ili D-Pro;

Y2 je Pro, Ala ili Gly;

Y3 je Arg, Ala, Lys ili Trp;

Y4 je Ser, Gly ili Ala;

Y5 je Lys, Met, Arg ili Ala;

Y6 je Gly, Arg ili Ala;

Y7 je Trp ili Ala;

Y8 je Val, Thr, Ala ili Glu; i

Y10 je Met, Lys ili je odsutno.

[0104] U nekim peptidnim jedinjenjima formule I’, Y’ je peptidna sekvenca koja ima formulu (IIc’)

Y1-Y2-Y3-Ser-Lys-Gly-Trp-Y8-Cys-Y10 (IIc’) (SEQ ID NO:18)

pri čemu

Y1 je Gly, Pro ili D-Pro;

Y2 je Pro ili Gly;

Y3 je Arg ili Lys;

Y8 je Val ili Thr; i

Y10 je Met, Lys ili je odsutno.

[0105] U nekim peptidnim jedinjenjima formule I’, Y’ je peptidna sekvenca koja ima formulu (IId’)

Y1-Cys-Y3-Y4-Arg-Y6-Y7-Y8-Cys-Y10-Y11-Y12-Y13-Y14-Y15 (IId’) (SEQ ID NO:19)

pri čemu

Y1 je Val ili Ala ili je odsutno;

Y3 je Gly, Pro ili je odsutno;

Y4 je His, Trp ili Tyr;

Y6 je Ser, Gly ili Pro;

Y7 je Ile, Gly ili Lys;

Y8 je Gly, Met ili je odsutno;

1

Y10 je Tyr ili Cys;

Y11 je Arg, Lys, Met ili Ala;

Y12 je Arg ili Ala;

Y13 je Cys ili Val ili je odsutno;

Y14 je Cys, Lys, Pro, Arg, Thr ili je odsutno; i

Y15 je Arg, Thr ili je odsutno.

[0106] U nekim peptidnim jedinjenjima formule I’, Y’ je peptidna sekvenca koja ima formulu (IIe’)

Val-Cys-Y3-His-Arg-Y6-Y7-Y8-Cys-Tyr-Arg-Y12-Y13-Y14-Y15 (IIe’) (SEQ ID NO:20)

pri čemu

Y3 je Gly ili je odsutno;

Y6 je Ser ili Pro;

Y7 je Ile ili Lys;

Y8 je Gly ili je odsutno;

Y12 je Arg ili Ala;

Y13 je Cys, Val ili je odsutno;

Y14 je Cys, Arg, Thr ili je odsutno; i

Y15 je Arg ili je odsutno.

[0107] U nekim peptidnim jedinjenjima formule I’, Y’ je peptidna sekvenca koja ima formulu (IIf’)

Y1-Pro-Y3-Ser-Y5-Y6-Y7-Y8-Cys-Y10 (IIf’) (SEQ ID NO:10)

pri čemu

Y1 je Gly, Glu, Val, ili Lys;

Y3 je Arg ili Lys;

Y5 je Arg ili Lys;

Y6 je Gly, Ser, Lys, Ile ili Arg;

Y7 je Trp ili je odsutno;

Y8 je Val, Thr, Asp, Glu ili je odsutno; i

Y10 je Lys ili je odsutno.

[0108] U nekim peptidnim jedinjenjima formule I’, Y’ je peptidna sekvenca koja ima formulu (IIg’)

Y1-Pro-Y3-Ser-Y5-Y6-Y7-Y8-Cys-Y10 (IIg’) (SEQ ID NO: 11)

2

pri čemu

Y1 je Glu ili Lys;

Y3 je Arg ili Lys;

Y5 je Arg ili Lys;

Y6 je Gly, Ser, Lys, Ile ili Arg;

Y7 je Trp ili je odsutno;

Y8 je Val ili je odsutno; i

Y10 je Lys ili je odsutno.

[0109] Neki peptidi formule I’ sadrže najmanje tri, najmanje četiri, najmanje pet, najmanje šest, najmanje sedam, najmanje osam, najmanje devet, najmanje deset, najmanje jedanaest, najmanje dvanaest, najmanje trinaest, najmanje četrnaest ili najmanje petnaest Y ostataka u Y’.

[0110] U nekim peptidima, Y1 do Y3 su prisutni i Y4 do Y15 su odsutni.

[0111] U nekim peptidima, Y1 do Y11 su prisutni i Y12 do Y15 su odsutni.

[0112] U nekim peptidima, Y1 do Y10 su prisutni i Y11 do Y15 su odsutni.

[0113] U nekim peptidima, Y8 i Y15 su odsutni.

[0114] U nekim peptidima, Y3 i Y15 su odsutni

[0115] U nekim peptidima, Y3, Y14 i Y15 su odsutni.

[0116] U nekim peptidima, Y5 je odsutno.

[0117] U nekim peptidima, Y1, Y5, Y7, Y12, Y13, Y14 i Y15 su odsutni.

[0118] U ovom dokumentu je dalje prikazano jedinjenje formule pri čemu jedinjenje sadrži bilo koju od kombinacija formula peptidne sekvence X’ / Y’ prikazanih u Tabeli 2 koja sledi.

Tabela 2: Ilustrativne kombinacije peptida X’ i Y’ jedinjenja Formule

[0119] U ovom dokumentu su dalje prikazani peptidi, koji mogu da budu izolovani i/ili prečišćeni, koji sadrže, sastoje se u osnovi od, ili se sastoje od, sledeće strukturne formule:

R<1">-X"-Y"-R<2">(I") (SEQ ID NO:27)

ili njene farmaceutski prihvatljive soli ili solvata, pri čemu

R<1">je vodonik, C1-C6alkil, C6-C12aril, C6-C12aril C1-C6alkil, C1-C20alkanoil (npr., metil, acetil, formil, benzoil ili trifluoroacetil, izovalerijanska kiselina, izobuterna kiselina, oktanska kiselina, laurinska kiselina i heksadekanska kiselina, γ-Glu-heksadekanska kiselina) ili pGlu, dodati na N-terminus, i uključuju PEGilovane verzije (npr., PEG3 do PEG11), same, ili kao spejsere u bilo kom od prethodno navedenih slučajeva;

R<2">je -NH2ili -OH;

X" je peptidna sekvenca koja ima formulu (Ia")

X1-X2-X3 -X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 (Ia") (SEQ ID NO:22)

pri čemu

X1 je Asp, Glu, Ala, Gly, Thr, Ida, pGlu, bhAsp, D-Asp, Tyr, Leu ili je odsutno;

X2 je Thr, Ala, Aib, D-Thr, Arg ili je odsutno;

X3 je His, Lys, Ala, D-His ili Lys;

X4 je Phe, Ala, Dpa, bhPhe ili D-Phe;

4

X5 je Pro, Glu, Ser, Gly, Arg, Lys, Val, Ala, D-Pro, bhPro, Sarc, Abu ili je odsutno;

X6 je Ile, Cys, Arg, Leu, Lys, His, Glu, D-Ile, D-Arg, D-Cys, Val, Ser ili Ala;

X7 je Cys, Ile, Ala, Leu, Val, Ser, Phe, Dapa, D-Ile ili D-Cys;

X8 je Ile, Lys, Arg, Ala, Gln, Phe, Glu, Asp, Tyr, Ser, Leu, Val, D-Ile, D-Lys, D-Arg, ili Dapa;

X9 je Phe, Ala, Ile, Tyr, Lys, Arg, bhPhe ili D-Phe; i

X10 je Lys, Phe ili je odsutno;

i pod uslovom da, ako je Y" odsutno, X7 je Ile;

pri čemu, navedeno jedinjenje formule I" je izborno pegilovano R1", X", ili Y"; i pri čemu, kada navedeno jedinjenje formule I" sadrži dva ili više cisteinskih ostataka, najmanje dva od navedenih cisteinskih ostataka su povezana disulfidnom vezom.

[0120] Y" može da bude odsutno.

[0121] R<1">može da bude vodonik, izovalerijanska kiselina, izobuterna kiselina ili acetil.

[0122] U nekim jedinjenjima formule (I"), X" je peptidna sekvenca u skladu sa formulom (Ia"), pri čemu

X1 je Asp, Ala, Ida, pGlu, bhAsp, Leu, D-Asp ili je odsutno;

X2 je Thr, Ala, ili D-Thr;

X3 je His, Lys, ili D-His;

X4 je Phe, Ala, ili Dpa;

X5 je Pro, Gly, Arg, Lys, Ala, D-Pro ili bhPro;

X6 je Ile, Cys, Arg, Lys, D-Ile ili D-Cys;

X7 je Cys, Ile, Leu, Val, Phe, D-Ile ili D-Cys;

X8 je Ile, Arg, Phe, Gln, Lys, Glu, Val, Leu ili D-Ile;

X9 je Phe ili bhPhe; i

X10 je Lys ili je odsutno.

[0123] (Ib") U nekim jedinjenjima formule (I"), X" je peptidna sekvenca koja ima formulu X1-Thr-His-X4-X5-X6-X7-X8-Phe-X10 (Ib") (SEQ ID NO:23)

pri čemu

X1 je Asp, Ida, pGlu, bhAsp ili je odsutno;

X4 je Phe ili Dpa;

X5 je Pro ili bhPro;

X6 je Ile, Cys ili Arg;

X7 je Cys, Ile, Leu ili Val;

X8 je Ile, Lys, Glu, Phe, Gln ili Arg; i

X10 je Lys, Phe ili je odsutno.

[0124] U nekim jedinjenjima formule (I"), X" je peptidna sekvenca koja ima formulu (Ic") X1-Thr-His-X4-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10 (Ic") (SEQ ID NO:24)

pri čemu

X1 je Asp, Ida, pGlu, bhAsp ili je odsutno;

X4 je Phe ili Dpa;

X5 je Pro ili bhPro;

X8 je Ile, Lys, Glu, Phe, Gln ili Arg; i

X10 je Lys ili je odsutno.

[0125] U nekim jedinjenjima formule (I"), X" je peptidna sekvenca koja ima formulu (Id") X1-Thr-His-Phe-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10 (Id") (SEQ ID NO:4)

pri čemu

X1 je Asp, Glu ili Ida;

X4 je Phe;

X5 je Pro ili bhPro;

X8 je Ile, Lys, ili Phe; i

X10 je odsutno.

[0126] U nekim jedinjenjima formule (I"), Y" je a peptid koji ima formulu (IIa")

Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Cys-Y10 (IIa") (SEQ ID NO:25)

pri čemu

Y1 je Gly, Ala, Lys, Pro ili D-Pro;

Y2 je Pro, Ala ili Gly;

Y3 je Arg, Ala, Lys ili Trp;

Y4 je Ser, Gly ili Ala;

Y5 je Lys, Met, Arg ili Ala;

Y6 je Gly, Arg ili Ala;

Y7 je Trp Ala ili je odsutno;

Y8 je Val, Thr, Lys, Ala, Glu ili je odsutno; i

Y10 je Met, Lys ili je odsutno.

[0127] U nekim jedinjenjima formule (I"), Y" je peptidna sekvenca u skladu sa formulom (IIa") (SEQ ID NO:25)

pri čemu

Y1 je Gly, Glu, Val, ili Lys

Y2 je Pro;

Y3 je Arg ili Lys;

Y4 je Ser;

Y5 je Arg ili Lys;

Y6 je Gly, Ser, Lys, Ile ili Arg;

Y7 je Trp ili je odsutno;

Y8 je Val, Thr, Asp, Glu ili je odsutno;

Y10 je Lys ili je odsutno.

[0128] U nekim jedinjenjima formule (I"), Y" je peptidna sekvenca u skladu sa formulom (IIa") (SEQ ID NO:25)

pri čemu

Y1 je Glu ili Lys;

Y2 je Pro;

Y3 je Arg ili Lys;

Y4 je Ser;

Y5 je Arg ili Lys;

Y6 je Gly, Ser, Lys, Ile ili Arg;

Y7 je Trp ili je odsutno;

Y8 je Val ili je odsutno;

Y10 je Lys ili je odsutno.

[0129] U nekim jedinjenjima formule (I"), Y" je peptidna sekvenca u skladu sa formulom (IIa") (SEQ ID NO:25)

pri čemu

Y1 je Gly, Pro ili D-Pro;

Y2 je Pro ili Gly;

Y3 je Arg ili Lys;

Y4 je Ser;

Y5 je Lys;

Y6 je Gly;

Y7 je Trp;

Y8 je Val ili Thr; i

Y10 je Met, Lys ili je odsutno.

[0130] (IIb") U nekim jedinjenjima formule (I"), Y" je peptidna sekvenca koja ima formulu Y1-Y2-Y3-Ser-Lys-Gly-Trp-Y8-Cys-Y10 (IIb") (SEQ ID NO:26)

pri čemu

Y1 je Gly, Pro ili D-Pro;

Y2 je Pro ili Gly;

Y3 je Arg ili Lys;

Y8 je Val ili Thr; i

Y10 je Met, Lys ili je odsutno.

[0131] U ovom dokumentu je dodatno prikazano jedinjenje formule (I"), pri čemu jedinjenje sadrži bilo koju od kombinacija formula peptidne sekvence X" / Y" koje su prikazane u Tabeli 3 koja sledi.

Tabela 3: Ilustrativne kombinacije peptida X" i Y" jedinjenja Formule (I")

[0132] Peptid formule (I") može da sadrži najmanje tri, najmanje četiri, najmanje pet, najmanje šest, najmanje sedam, najmanje osam, najmanje devet, ili najmanje deset Y ostataka u Y". U nekim peptidima, Y1 do Y3 su prisutni, a Y4 do Y10 su odsutni. U nekim peptidima, Y5 je odsutno. U nekim peptidima, Y1, Y5, i Y7 su odsutni. U nekim peptidima, Y8 je odsutno. U nekim peptidima, Y3 je odsutno.

[0133] U ovom dokumentu je dodatno prikazano jedinjenje formule (I), , ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X7 je Leu. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. Dodatno je ovde opisano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0134] U ovom dokumentu je dodatno prikazano jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, koje sadrži peptidnu sekvencu X u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X7 je Val. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. Dodatno je ovde prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0135] U ovom dokumentu je dodatno prikazano jedinjenje formule (I), , ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X6 je Cys. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0136] U ovom dokumentu je dodatno prikazano jedinjenje formule (I), , ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X7 je Cys. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0137] U ovom dokumentu je dodatno prikazano jedinjenje formule (I), , ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X6 je Ile. Dodatno je ovde prikazano da formula (I) sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0138] U ovom dokumentu je dodatno prikazano jedinjenje formule (I), , ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X7 je Ile. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a)Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. Dodatno je ovde prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0139] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, koje sadrži peptidnu sekvencu X, u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X8 je Ile. U ovom dokumentu su dodatno prikazana jedinjenja formula ili (I"), kao što je ovde opisano od kojih svako redom sadrži peptid X’ ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X8 je Ile. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula

može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0140] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, koje sadrži peptidnu sekvencu X’ u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X8 je Lys. U ovom dokumentu su dodatno prikazana jedinjenja formule ili (I"), kao što je ovde opisano od kojih svako redom sadrži X’ ili X" peptide, u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X8 je Lys. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0141] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, koje sadrži peptidnu sekvencu X u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X6 je Cys i X7 je Ile. U ovom dokumentu su dodatno prikazana jedinjenja formule ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži X’ ili X" peptide, u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X6 je Cys i X7 je Ile. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ic ili Id i, izborno, (b) IIa ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0142] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano koje sadrži X peptidnu sekvencu, u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X6 je Cys i X8 je Ile. U ovom dokumentu su dalje opisana jedinjenja formule ili (I"),

4

kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži X’ ili X" peptid, u skladu sa predmetnim pronalaskom, pri čemu, X6 je Cys i X8 je Ile. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a), Ic ili Id i, izborno, (b) IIa , ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da u formuli (I’) može da se sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. Dalje je ovde opisano da, formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0143] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, od kojih svako, redom, sadrži X, peptidnu sekvencu u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X6 je Cys, X7 je Ile, i X8 je Ile. U ovom dokumentu su dodatno prikazana jedinjenja formule ili (I"). kao što je ovde opisano, od kojih svako, redom, sadrži X’ ili X" peptid, u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X6 je Cys, X7 je Ile, i X8 je Ile.

[0144] U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a), Ic ili Id i, izborno, (b) IIa ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0145] U ovom dokumentu su dalje prikazana jedinjenja formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako, redom, sadrži X, X’, ili X" peptidnu sekvencau u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X6 je Ile i X7 je Cys. U ovom dokumentu je dalje opisano da formula (I) sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0146] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X7 je Cys i X8 je Ile. Dalje je u ovom dokumentu prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I’) sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0147] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X6 je Ile, X7 je Cys, i X8 je Ile. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0148] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X6 je Cys i X8 je Lys. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0149] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X6 je Cys, X7 je Ile, i X8 je Lys. U ovom dokumentu su dodatno prikazana jedinjenja formule ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptid X’ ili X" u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X6 je Cys, X7 je Ile i X8 je Lys. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0150] U ovom dokumentu je dodatno prikazano jedinjenje formule (I), , ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X6 je Cys, i X7 je Leu. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0151] U ovom dokumentu je dodatno prikazano jedinjenje formule (I), , ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X6 je Cys, i X7 je Val. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0152] U ovom dokumentu je dodatno prikazano jedinjenje formule (I), , ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X7 je Ile i X8 je Lys. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0153] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X7 je Leu i X8 je Lys. Ovde je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0154] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X7 je Val i X8 je Lys. Dalje je prikazano da formula (I) sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0155] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X6 je Cys, X7 je Leu i X8 je Lys. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

4

[0156] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X6 je Cys, X7 je Val, i X8 je Lys. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0157] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X6 je Cys, i X7 je Ile, Leu, ili Val. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0158] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X6 je Cys, X7 je Ile, Leu, ili Val, i X8 je Lys. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0159] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X" u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu XI je Asp ili IDA, X6 je Cys, X7 je Ile, Leu, ili Val, i X8 je Lys. Dalje je ovde prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’ , IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. Dalje je ovde prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0160] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu XI je Asp ili IDA, X6 je Cys, X7 je Ile, Leu, ili Val, i X8 je Lys. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula

može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. Dalje je ovde prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0161] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X2 je Thr, X6 je Cys, X7 je Ile, Leu, ili Val, i X8 je Lys. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. Dalje je ovde prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0162] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X3 je His, X6 je Cys, X7 je Ile, Leu, ili Val, i X8 je Lys. Dalje je ovde prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I") sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0163] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X4 je Phe, X6 je Cys, X7 je Ile, Leu, ili Val, i X8 je Lys. Dalje je ovde prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0164] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, Leu, ili Val, i X8 je Lys. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde

4

opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0165] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X6 je Cys, X7 je Ile, Leu, ili Val, X8 je Lys, i X9 je Phe. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0166] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, koje sadrži peptidnu sekvencu X, u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X2 je Thr, X6 je Cys, X7 je Ile i X8 je Lys. Dalje su ovde prikazana jedinjenja formule ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptid X’ ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X2 je Thr, X6 je Cys, X7 je Ile i X8 je Lys. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a), Ic ili Id i, izborno, (b) IIa ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0167] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, koje sadrži peptidnu sekvencu X, u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X3 je His, X6 je Cys, X7 je Ile, i X8 je Lys. Dalje su ovde prikazana jedinjenja formule ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptid X’ ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X3 je His, X6 je Cys, X7 je Ile i X8 je Lys. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ic ili Id i, izborno, (b) II, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0168] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, koje sadrži peptidnu sekvencu X, u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu. X4 je Phe, X6 je Cys, X7 Ile, i X8 je Lys. U ovom dokumentu su dodatno prikazana jedinjenja formule ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptid X’ ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X4 je Phe, X6 je Cys, X7 je Ile i X8 je Lys. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ic ili Id i, izborno, (b) IIa ili IIg, kao što je ovde opisano. Ovde je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i,

4

izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0169] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X5 je Pro, X6 je Cys, X7 Ile, i X8 je Lys. U ovom dokumentu su dodatno prikazana jedinjenja formule ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptid X’ ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X4 je Phe, X6 je Cys, X7 je Ile, i X8 je Lys. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa ili IIg, kao što je ovde opisano. Dalje je ovde prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0170] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, koje sadrži peptidnu sekvencu X, u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X6 je Cys, X7 je Ile, X8 je Lys, i X9 je Phe. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ic ili Id i, izborno, (b) IIa ili IIg, kao što je ovde opisano. Dalje je ovde prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0171] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, koje svako redom sadrži peptidnu sekvencu X u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, X8 je Lys, i X9 je Phe. U ovom dokumentu su dodatno prikazana jedinjenja formule ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptid X’ ili X" u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, X8 je Lys, i X9 je Phe. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ic ili Id i, izborno, (b) IIa ili IIg, kao što je ovde opisano. Ovde je dodatno prikazano, formula

sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic",ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0172] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, koje svako redom sadrži peptidnu sekvencu X u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X4 je Phe, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, X8 je Lys, i X9 je Phe. U ovom dokumentu su dodatno prikazana jedinjenja formule ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptid X’ ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X4 je Phe, X5

4

je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, X8 je Lys, i X9 je Phe. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) sadrži (a) Ic ili Id i, izborno, (b) IIa ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’ ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’ ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0173] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, koje sadrži peptidnu sekvencu X u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X3 je His, X4 je Phe, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, X8 je Lys, i X9 je Phe. U ovom dokumentu su dodatno prikazana jedinjenja formule ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži X’ ili X" peptide, u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X3 je His, X4 je Phe, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, X8 je Lys, i X9 je Phe. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a), Ic ili Id i, izborno, (b) IIa ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’ ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0174] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, koje sadrži peptidnu sekvencu X, u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X2 je Thr, X3 je His, X4 je Phe, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, X8 je Lys, i X9 je Phe. U ovom dokumentu su dodatno prikazana jedinjenja formule ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži X’ ili X" peptide, u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X2 je Thr, X3 je His, X4 je Phe, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, X8 je Lys, i X9 je Phe. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ic ili Id i, izborno, (b) IIa ili IIg, kao što je ovde opisano. Dalje je ovde prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. Dalje je ovde prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0175] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, od kojih svako sadrži peptidnu sekvencu X, u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X1 je Asp ili IDA, X2 je Thr, X3 je His, X4 je Phe, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, X8 je Lys, i X9 je Phe. u ovom dokumentu su dodatno prikazana jedinjenja formule ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptid X’ ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu XI je Asp, X2 je Thr, X3 je His, X4 je Phe, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, X8 je Lys, i X9 je Phe. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ic ili Id i, izborno, (b) IIa, ili IIg, kao što je ovde opisano. Dalje je ovde prikazano da formula

4

može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0176] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X1 je Asp ili IDA, X2 je Thr, X3 je His, X4 je Phe, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, Leu, ili Val, X8 je Lys, i X9 je Phe. Dalje je ovde prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. Dalje je ovde prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0177] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, koje sadrži peptidnu sekvencu X, u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X1 je Asp, X2 je Thr, X3 je His, X4 je Phe, X5 je Pro X6 je Cys, X7 je Ile, X8 je Lys, i X9 je Phe. U ovom dokumentu su dodatno prikazana jedinjenja formule ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptid X’ ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X1 je Asp, X2 je Thr, X3 je His, X4 je Phe, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, X8 je Lys, i X9 je Phe. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ic ili Id i, izborno, (b) IIa ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0178] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, koje sadrži peptidnu sekvencu X, u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X1 je IDA, X2 je Thr, X3 je His, X4 je Phe, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, X8 je Lys, i X9 je Phe. U ovom dokumentu su dodatno prikazana jedinjenja formule ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptid X’ ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X1 je IDA, X2 je Thr, X3 je His, X4 je Phe, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, X8 je Lys, i X9 je Phe. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a) Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0179] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, pri čemu jedinjenje sadrži R<1>koje je izovalerijanska kiselina.

4

[0180] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X1 je Asp ili IDA, X2 je Thr, X3 je His, X4 je Phe, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, Leu, ili Val, X8 je Lys, i X9 je Phe; pri čemu navedeni peptid dalje sadrži R<1>koji je izovalerijanska kiselina. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIe’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. Dalje je ovde prikazano da (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0181] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X1 je Asp, X2 je Thr, X3 je His, X4 je Phe, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, Leu, ili Val, i X8 je Lys; pri čemu navedeni peptid dalje sadrži R<1>koji je izovalerijanska kiselina. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0182] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu X1 je Asp, X2 je Thr, X3 je His, X4 je Phe, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, Leu, ili Val, X8 je Lys, i X9 je Phe; pri čemu navedeni peptid dalje sadrži R grupu koja je izovalerijanska kiselina. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. Dalje je ovde prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0183] Ovde je dalje prikazano jedinjenje formule (I), (I’), ili (I"), kao što je ovde opisano, od kojih svako redom sadrži peptidnu sekvencu X, X’, ili X", u skladu sa predmetnim prikazom, pri čemu, X1 je Asp, X2 je Thr, X3 je His, X4 je Phe, X5 je Pro, X6 je Cys, X7 je Ile, X8 je Lys, i X9 je Phe; pri čemu navedeni peptid dalje sadrži R grupu koja je izovalerijanska kiselina. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I) može da sadrži (a) Ia, Ib, Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf, ili IIg, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da, formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0184] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), kao što je ovde opisano, pri čemu jedinjenje sadrži peptidnu sekvencu koja je 85% ili više (npr., 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ili 99.5%) homologa sa amino kiselinskom sekvencom izloženom u bilo kojoj od Tabela 5-15. U konkretnim primerima izvođenja, formula (I) sadrži (a), Ic, ili Id i, izborno, (b) IIa, ili IIg, kao što je ovde opisano. Dalje je ovde prikazano da formula (I’) može da sadrži (a) Ia’, Ib’, Ic’, ili Id’ i, izborno, (b) IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’, ili IIg’, kao što je ovde opisano. U ovom dokumentu je dalje prikazano da formula (I") može da sadrži (i) Ia", Ib", Ic", ili Id" i, izborno, (ii) IIa" ili IIb’, kao što je ovde opisano.

[0185] U nekim primerima izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku sadrži bilo koje od jedinjenja prikazanih u bilo kojoj od Tebela 5-15.

[0186] U nekim primerima izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku sadrži bilo koju od amino kiselinskih sekvenci obezbeđenih kao sekvence sa brojevima SEQ ID NO: 1-334 i 338-375, ili kao što su prikazane u bilo kojoj od Tabela 5-15.

[0187] U nekim primerima izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku sadrži amino kiselinsku sekvencu izloženu u bilo kojoj od Tabela 5-15.

[0188] U nekim primerima izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku ima strukturu prikazanu u bilo kojoj od Tabela 5-15, npr., u Tabelama 7 ili 12-15. U jednom konkretnom primeru izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku sadrži amino kiselinsku sekvencu izloženu u bilo kojoj od Tabela 5-15, npr., u Tabelama 7 ili 12-15. U nekim primerima izvođenja, peptid prema predmetnom pronalasku sadrži amino kiselinsku sekvencu koja ima najmanje oko 85% identičnosti ili najmanje oko 90%, 95%, 97%, 98%, 99% identičnosti sa bilo kojom amino kiselinskom sekvencom izloženom u bilo kojoj od Tabela 5-15, npr., u Tabelama 7 ili 12-15, ili bilo kojom od sekvenci pod brojevima SEQ ID NO: 1-334 i 338-375. U jednom konkretnom primeru izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku sadrži amino kiselinsku sekvencu koja ima najmanje oko 85% identičnosti ili najmanje oko 90%, 95%, 97%, 98%, 99% identičnosti sa amino kiselinskom sekvencom izloženom u Tabeli 7 ili u bilo kojoj od Tabela 5-15.

[0189] Podrazumeva se da u kontekstu pronalaska, peptid ili peptidni dimer koji sadrži peptidnu sekvencu prikazanu u jednoj od pratećih tabela ili na listi sekvenci, može da ima određene manje izmene u jednom ili više amino kiselinskih ostataka peptidne sekvence, u poređenju sa nativnom amino kiselinom, a da se ipak smatra da sadrži peptidnu sekvencu prikazanu u tabelama ili listi sekvenci. Na primer, jedan ili više bočnih lanaca jednog ili više amino kiselinskih ostataka

1

prisutnih u peptidu ili peptidnom dimeru mogu da budu malo izmenjeni usled vezivanja linkera ili dimerizacije preko cisteinskih ostataka, ili N-terminalna ili C-terminalna amino kiselina može da bude amidovana.

[0190] U nekim primerima izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku prikazuje hepcidinsku aktivnost. U nekim primerima izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku prikazuje najmanje oko 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, više od 99%, više od 100%, više od 110%, više od 120%, više od 150%, više od 200% više od 500%, ili više od 1000% aktivnosti referentnog hepcidina, (npr., bilo koje od hepcidinskih referentnih jedinjenja koja su obezbeđena u Tabeli 4). U nekim primerima izvođenja, aktivnost je in vitro ili in vivo aktivnost kao što je ovde opisano.

[0191] U nekim primerima izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku prikazuje najmanje oko 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, ili više od 99% in vitro aktivnosti koja indukuje degradaciju ljudskog feroportin proteina, od vrednosti koju idukuje hepcidinska referenca, (npr., bilo koje od hepcidinskih referentnih jedinjenja koja su obezbeđena u Tabeli 4), pri čemu se aktivnost meri u skladu sa ovde opisanim postupcima (npr., u skladu sa Primerom 2).

[0192] U nekim primerima izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku prikazuje najmanje oko 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, ili više od 99% in vivo aktivnosti koja indukuje redukciju slobodnog gvožđa u plazmi kod pojedinca, nego što to čini hepcidinska referenca, (npr., bilo koje od hepcidinskih referentnih jedinjenja koja su obezbeđena u Tabeli 4), pri čemu se aktivnost meri u skladu sa ovde opisanim postupcima (npr., u skladu sa Primerom 8).

[0193] U nekim primerima izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku prikazuje povećanu hepcidinsku aktivnost u poređenju sa hepcidinskim referentnim peptidom, (npr., bilo koje od hepcidinskih referentnih jedinjenja koja su obezbeđena u Tabeli 4). U nekim primerima izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku prikazuje aktivnost koja je 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, ili 200 puta veća ili najmanje oko 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% , 700%, ili 1000% veća od hepcidinske reference, (npr., bilo koje od hepcidinskih referentnih jedinjenja koja su obezbeđena u Tabeli 4). U nekim primerima izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku prikazuje najmanje oko 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, ili više od 99% aktivnosti koju ispoljava hepcidinsko referentno jedinjenje. U nekim primerima izvođenja, aktivnost je in vitro ili in vivo aktivnost, npr., ovde opisana in vivo ili in vitro aktivnost. U nekim primerima izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom

2

pronalasku prikazuje 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, ili 200 puta veću ili najmanje oko 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500%, 700%, ili 1000% veću aktivnost od hepcidinske reference, (npr., bilo koje od hepcidinskih referentnih jedinjenja koja su obezbeđena u Tabeli 4), pri čemu je aktivnost in vitro aktivnost kojom se indukuje degradacija feroportina, npr., kada se meri u skladu sa Primerom 2; ili pri čemu je aktivnost in vivo aktivnost kojom se redukuje slobodno gvožđe u plazmi, npr., kada se meri u skladu sa Primerom 8.

[0194] U nekim primerima izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku vezuje feroportin, npr., ljudski feroportin. U nekim primerima izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku prikazuje najmanje oko 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, ili više od 99% od sposobnosti za vezivanje feroportina koju ispoljava referentni hepcidin (npr., bilo koje od hepcidinskih referentnih jedinjenja koja su obezbeđena u Tabeli 4). U nekim primerima izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku ima nižu IC50(tj., veći afinitet vezivanja) vezivanja za feroportin, (npr., ljudski feroportin) u poređenju sa referentnim hepcidinom, (npr., bilo koje od hepcidinskih referentnih jedinjenja koja su obezbeđena u Tabeli 4). U nekim primerima izvođenja, peptid prema predmetnom pronalasku ima IC50određenu u testu kompetitivnog vezivanja feroportina, koja je najmanje oko 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500%, 700%, ili 1000% niža nego kod referentnog hepcidina, (npr., bilo koje od hepcidinskih referentnih jedinjenja koja su obezbeđena u Tabeli 4).

[0195] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, kao što je ovde opisano, pri čemu peptid ispoljava povećanu stabilnost (npr. koja se meri kao polu-život, stopa degradacije proteina) u poređenju sa referentnim hepcidinom, (npr., bilo koje od hepcidinskih referentnih jedinjenja koja su obezbeđena u Tabeli 4). U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje dimer ovakvog jedinjenja, i, u nekim primerima izvođenja, dimer je homodimer. U nekim primerima izvođenja, stabilnost peptida ili peptidnog dimera prema predmetnom pronalasku je povećana najmanje oko 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, ili 200 puta više ili najmanje oko 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, ili 500% više u odnosu na referentni hepcidin, (npr., bilo koje od hepcidinskih referentnih jedinjenja koja su obezbeđena u Tabeli 4). U nekim primerima izvođenja, stabilnost je stabilnost koja je opisana u ovom dokumentu. U nekim primerima izvođenja, stabilnost je stabilnost u plazmi, npr., kao što je izborno izmerena u skladu sa postupkom opisanim u Primeru 7.

[0196] U konkretnim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, kao što je ovde opisano, pri čemu peptid ispoljava duži polu-život od referentnog hepcidina, (npr., bilo koje od hepcidinskih referentnih jedinjenja koja su obezbeđena u Tabeli 4). U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje dimer ovakvog jedinjenja, i u nekim primerima izvođenja, dimer je homodimer. U konkretnim primerima izvođenja, peptid ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku ima polu-život, pod datim setom uslova (npr., temperatura, pH) od najmanje oko 5 minuta, najmanje oko 10 minuta, najmanje oko 20 minuta, najmanje oko 30 minuta, najmanje oko 45 minuta, najmanje oko 1 sata, najmanje oko 2 sata, najmanje oko 3 sata, najmanje oko 4 sata, najmanje oko 5 sati, najmanje oko 6 sati, najmanje oko 12 sati, najmanje oko 18 sati, najmanje oko 1 dana, najmanje oko 2 dana, najmanje oko 4 dana, najmanje oko 7 dana, najmanje oko 10 dana, najmanje oko dve nedelje, najmanje oko tri nedelje, najmanje oko 1 meseca, najmanje oko 2 meseca, najmanje oko 3 meseca, ili više, ili bilo koji polu-život ili opseg između tih vrednosti, oko 5 minuta, oko 10 minuta, oko 20 minuta, oko 30 minuta, oko 45 minuta, oko 1 sata, oko 2 sata, oko 3 sata, oko 4 sata, oko 5 sati, oko 6 sati, oko 12 sati, oko 18 sati, oko 1 dan, oko 2 dana, oko 4 dana, oko 7 dana, oko 10 dana, oko dve nedelje, oko tri nedelje, oko 1 meseca, oko 2 meseca, oko 3 meseca, ili more, ili bilo koji poluživot ili opseg između tih vrednosti. U nekim primerima izvođenja, polu-život peptida ili peptidnog dimera prema predmetnom pronalasku je produžen usled njegove konjugacije sa jednim ili više lipofilnih supstituenata, npr., bilo kojim od ovde prikazanih lipofilnih supstituenata. U nekim primerima izvođenja, polu-život peptida ili peptidnog dimera prema predmetnom pronalasku je produžen usled njegove konjugacije sa jednom ili više polimernih komponenti, npr., bilo kojom od ovde prikazanih polimernih komponenti. U nekim primerima izvođenja, temperatura je oko 25 °C, oko 4 °C, ili oko 37 °C, i pH je fiziološki pH ili pH od oko 7.4.

[0197] U nekim primerima izvođenja, polu-život se meri in vitro upotrebom bilo kog pogodnog postupka poznatog u stanju tehnike, npr., u nekim primerima izvođenja, stabilnost peptida ili peptidnog dimera prema predmetnom pronalasku određena je tako što su peptid ili peptidni dimer inkubirani sa ljudskim serumom (Sigma) prethodno zagrejanim na 37 ° C. Uzorci su uzimani u različitim vremenskim tačkama, tipično najviše do 24 sata, i stabilnost uzorka je analizirana tako što su peptid ili peptidni dimer razdvojeni od serumskih proteina u kojima je zatim analizirano prisustvo peptida ili peptidnog dimera od interesa pomoću LC-MS.

[0198] U nekim primerima izvođenja, stabilnost peptida je merena in vitro upotrebom bilo kog pogodnog postupka poznatog u stanju tehnike, npr., u nekim primerima izvođenja, stabilnost peptida ili peptidnog dimera je određena in vivo tako što su peptid ili peptidni dimer primenjeni kod subjekta kao što je čovek ili bilo koji sisar (npr., miš), a uzorci su zatim uzimani od subjekta izvlačenjem krvi u različitim vremenskim tačkama, tipično najviše do 24 sata. Uzorci su zatim analizirani kao što je opisano prethodno u tekstu u vezi sa in vitro postupkom za merenje polu-

4

života. U nekim primerima izvođenja, in vivo stabilnost peptida ili peptidnog dimera prema predmetnom pronalasku je određena postupkom prikazanim u Primeru 7.

[0199] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, kao što je ovde opisano, ili njegov dimer, pri čemu peptid ili dimer ispoljava poboljšane karakteristike rastvorljivosti ili agregacije u poređenju sa hepcidinskom referencom, (npr., bilo koje od hepcidinskih referentnih jedinjenja koja su obezbeđena u Tabeli 4). Rastvorljivost može da se određuje bilo kojim pogodnim postupkom koji je poznat u stanju tehnike. U nekim primerima izvođenja, pogodni postupci za određivanje rastvorljivosti, koji su poznati u stanju tehnike uključuju inkubaciju peptida u različitim puferima (acetatni pH4.0, acetatni pH5.0, fosf./citratni pH5.0, fosf. citratni pH6.0, fosf. pH 6.0, fosf. pH 7.0, fosf. pH7.5, jak PBS pH 7.5, Tris pH7.5, Tris pH 8.0, glicin pH 9.0, voda, sirćetna kiselina (pH 5.0 i drugi poznati u stanju tehnike) i testiranje agregacije i rastvorljivosti pomoću standardnih tehnika. One uključuju, ali nisu ograničene na, vidljivu precipitaciju, dinamičko rasipanje svetla, cirkularni dihroizam i fluorescentne boje za merenje površinske hidrofobnosti i detekciju agregacije ili fibrilacije, na primer. U nekim primerima izvođenja, poboljšana rastvorljivost znači da je peptid rastvorljiviji u datoj tečnosti od hepcidinske reference (npr., bilo koje od hepcidinskih referentnih jedinjenja koja su obezbeđena u Tabeli 4).

[0200] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, kao što je ovde opisano, ili njegov dimer, pri čemu peptid ili dimer pokazuje manju degradaciju (tj. veću stabilnost u odnosu na degradaciju), npr. više od ili oko 10% manje, više od ili oko 20% manje, više od ili oko 30% manje, više od ili oko 40% manje, ili više od ili oko 50% manje od referentnog hepcidina (npr. bilo koje od referentnih jedinjenja hepcidina datih u tabeli 4) . U nekim primerima izvođenja, stabilnost u odnosu na degradaciju se određuje bilo kojim pogodnim metodom poznatim u tehnici. U nekim primerima izvođenja, pogodne metode poznate u tehnici za određivanje stabilnosti u odnosu na degradaciju uključuju metod opisan u Hawe et al J Pharm Sci, VOL. 101, NO. 3, 2012, str. 895-913, uključeno ovde u celini. Takve metode se u nekim primerima izvođenja koriste za odabir potentnih sekvenci sa produženim rokom trajanja.

[0201] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje kompozicije i lekove koji sadrže najmanje jedan peptid, kao što je ovde prikazan. Predmetni pronalazak obezbeđuje najmanje jedan peptid kao što je ovde prikazan, za upotrebu u lečenju bolesti metabolizma gvožđa, kao što su bolesti nagomilavanja gvožđa. U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje najmanje jedan peptid kako je ovde otkriven za upotrebu u lečenju dijabetesa (Tip I ili Tip II), ili insulinske rezistencije. Takođe je obezbeđen najmanje jedan peptid ili kompozicija za upotrebu u lečenju bolesti metabolizma gvožđa kod subjekta, kao što je sisar, a poželjno i čovek, koji obuhvata primenu najmanje jednog peptida ili kompozicije, kako je ovde prikazano, kod subjekta. U nekim primerima izvođenja, peptid ili kompozicija se primenjuje u terapeutski efikasnoj količini. Takođe je obezbeđena najmanje jedan peptid ili kompozicija za upotrebu u lečenju dijabetesa (Tip I ili Tip II), ili insulinske rezistencije, kod subjekta, kao što je sisar, a poželjno i čovek, koji obuhvata primenu najmanje jednog peptida ili kompozicije, kako je ovde prikazano, kod subjekta. U nekim primerima izvođenja, peptid ili kompozicija se primenjuje u terapeutski efikasnoj količini.

[0202] U nekim primerima izvođenja, peptid prema predmetnom pronalasku je proizveden sintezom. U drugim primerima izvođenja, peptid prema predmetnom pronalasku je proizveden rekombinantno.

[0203] Ovde je dalje prikazan postupak za proizvodnju jedinjenja, peptida, peptidnog analoga, peptidnog dimera ili farmaceutske kompozicije kako je ovde prikazana.

[0204] Ovde je dalje prikazano sredstvo koje sadrži najmanje jedan peptid, peptidni analog ili peptidni dimer prema predmetnom pronalasku, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat za isporuku peptidnog analoga ili peptidnog dimera subjektu.

[0205] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje postupke vezivanja feroportina ili izazivanje internalizacije i degradacije feroportina koje obuhvataju dovođenje u kontakt feroportina sa najmanje jednim peptidom, ili kompozicijom kako je ovde prikazano.

[0206] Dalje su ovde prikazani kitovi koji sadrže najmanje jedan peptid, peptidni analog, peptidni dimer ili kompoziciju kako je ovde prikazano, upakovane zajedno sa reagensom, sredstvom, materijalom sa uputstvima ili njihovom kombinacijom.

[0207] Ovde su dalje prikazani kompleksi koji sadrže najmanje jedan peptid ili peptidni dimer kako je ovde prikazano vezan za feroportin, poželjno ljudski feroportin, ili antitelo, kao što je antitelo koje specifično vezuje peptid ili peptidni dimer kao što je ovde prikazano, Hep25, ili njihovu kombinaciju.

[0208] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje ima merenje (npr. EC50) manje od 500 nM u okviru testa Fpn internalizacije. Kao što će stručnjak u oblasti shvatiti, funkcija peptida zavisi od tercijarne strukture peptida i izložene površine vezivanja. Tada je moguće napraviti manje promene sekvence koje ne utiču na savijanje ili nisu na površini vezivanja i održavaju funkciju. U drugim primerima izvođenja, jedinjenje prema pronalasku je peptid ili peptidno mimetsko jedinjenje, ili njegov dimer koji ima 85% ili više (npr. 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96 %, 97%, 98%, 99% ili 99,5%) identičnost ili homologija sa sekvencom amino kiselina bilo kog jedinjenja formule I, koje pokazuje aktivnost, ili smanjuje simptom bolesti ili indikacije za koje je hepcidin uključen.

[0209] U nekim primerima izvođenja, peptid, analog peptida ili njegov dimer prema pronalasku može da sadrži funkcionalne fragmente ili njihove varijante koje imaju najviše 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ili 1 supstituciju amino kiselina u poređenju sa jednom ili više specifičnih sekvenci navedenih u nastavku.

[0210] Pored postupaka koji su ovde prikazani u Primeru 1, peptidi i peptidni dimeri prema predmetnom pronalasku mogu se proizvesti korišćenjem metoda poznatih u tehnici uključujući hemijsku sintezu, biosintezu ili in vitro sintezu korišćenjem metoda rekombinantne DNK i sinteze u čvrstoj fazi. Videti npr. Kelly & Winkler (1990) Genetic Engineering Principles and Methods, vol. 12, J. K. Setlow ed., Plenum Press, NY, pp.1-19; Merrifield (1964) J Amer Chem Soc 85:2149; Houghten (1985) PNAS USA 82:5131-5135; i Stewart & Young (1984) Solid Phase Peptide Synthesis, 2ed. Pierce, Rockford, IL, koji su ovde uključeni kao referenca. Peptidi prema predmetnom pronalasku mogu da se prečiste korišćenjem tehnika prečišćavanja proteina poznatih u tehnici, kao što su reverzno-fazna tečna hromatografija visokih performansi (HPLC), hromatografija sa izmenom jona ili imunoafinitetna hromatografija, filtracija ili isključivanje po veličini, ili elektroforeza. Videti Olsnes, S. and A. Pihl (1973) Biochem. 12(16):3121-3126; i Scopes (1982) Protein Purification, Springer-Verlag, NY, koji su ovde uključeni kao referenca. Alternativno, peptidi prema predmetnom pronalasku mogu biti napravljeni rekombinantnim DNK tehnikama poznatim u tehnici. Prema tome, ovde se razmatraju polinukleotidi koji kodiraju polipeptide prema predmetnom pronalasku. U poželjnim primerima izvođenja, polinukleotidi su izolovani. Kako se ovde koristi, "izolovani polinukleotidi" se odnose na polinukleotide koji se nalaze u okruženju različitom od onog u kome se polinukleotid prirodno javlja.

[0211] U nekim primerima izvođenja, peptidi prema predmetnom pronalasku vezuju feroportin, poželjno ljudski feroportin. Poželjni peptidi prema predmetnom pronalasku specifično vezuju ljudski feroportin. Kako se ovde koristi, "specifično se vezuje" odnosi se na preferencijalnu interakciju agensa specifičnog vezivanja sa datim ligandom u odnosu na druge agense u uzorku. Na primer, sredstvo za specifično vezivanje koje specifično vezuje dati ligand, vezuje dati ligand, pod pogodnim uslovima, u količini ili stepenu koji je vidljiv u odnosu na bilo koju nespecifičnu interakciju sa drugim komponentama u uzorku. Pogodni uslovi su oni koji dozvoljavaju interakciju između datog specifičnog vezujućeg agensa i datog liganda. Ovi uslovi uključuju pH, temperaturu, koncentraciju, rastvarač, vreme inkubacije i slično, i mogu se razlikovati među datim specifičnim vezivnim agensom i parovima liganda, ali ih stručnjaci iz ove oblasti mogu lako odrediti.

[0212] Peptidi prema predmetnom pronalasku koji imitiraju hepcidinska aktivnost jedinjenja Hep25, koje predstavlja biološki aktivan oblik od 25 amino kiselina kod ljudi, ovde se označavaju kao "mini-hepcidini". Kako se ovde koristi, u nekim primerima izvođenja, jedinjenje koja ima "hepcidinsku aktivnost" znači da jedinjenje ima sposobnost da snizi koncentracije gvožđa u plazmi kod subjekata (npr. miševa ili ljudi), kada se primeni kod tih subjekata (npr.

injecira parenteralno ili primeni oralno), na dozno-zavisan i vremenski-zavisan način. Videti npr. kako je to prikazano u publikaciji Rivera et al. (2005), Blood 106:2196-9. U nekim primerima izvođenja, peptidi prema predmetnom pronalasku snižavaju koncentraciju gvožđa u plazmi subjekta najmanje oko 1.2, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili 10 puta, ili najmanje oko 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, ili oko 99%.

[0213] U nekim primerima izvođenja, peptidi prema predmetnom pronalasku imaju in vitro aktivnost koja se ispituje sposobnošću da izazovu internalizaciju i degradaciju feroportina u ćelijskoj liniji koja eksprimira feroportin, kao što je navedeno u Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33. In vitro aktivnost se može meriti gubitkom fluorescencije u zavisnosti od doze ćelija koje su konstruisane da prikazuju feroportin fuzionisan sa zelenim fluorescentnim proteinom, kao u Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33. Alikvoti ćelija su inkubirani tokom 24 sata sa postepeno promenjenim koncentracijama referentnog preparata Hep25 ili mini-hepcidina. Kao što je ovde predviđeno, vrednosti EC50 su date kao koncentracija datog jedinjenja (npr. peptida) koja izaziva 50% maksimalnog gubitka fluorescencije generisanog referentnim preparatom Hep25. EC50 Hep25 pepracija u ovom testu se kreće od 5 do 15 nM, a poželjni mini-hepcidini imaju vrednosti EC50 u in vitro testovima aktivnosti od oko 1,000 nM ili manje. U nekim primerima izvođenja, peptid prema predmetnom pronalasku ima EC50 u in vitro testu aktivnosti (npr., kao što je opisano u Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33 ili Primer 2 ovde) manji od bilo kojeg od 0.01, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200 ili 500 nM. U nekim primerima izvođenja, peptidni analog ili bioterapeutska kompozicija ima EC50vrednost od oko 1nM ili manje.

[0214] Za izračunavanje aktivnosti hepcidina i in vitro aktivnosti peptida prema predmetnom pronalasku mogu da se koriste i drugi postupci poznati u tehnici. Na primer, in vitro aktivnost jedinjenja može da se meri njihovom sposobnošću da internalizuju ćelijski feroportin, što se određuje imunohistohemijom ili protočnom citometrijom, uz upotrebu antitela koja prepoznaju ekstracelularne epitope feroportina. Alternativno, in vitro aktivnost jedinjenja može da se meri njihovom sposobnošću da, zavisno od doze, inhibiraju efluks gvožđa iz ćelija koje eksprimiraju feroportin, a u kojima je prethodno došlo do nagomilavanja radioizotopa ili stabilnih izotopa gvožđa, kao što je dato u publikaciji Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33.

Konjugacija

[0215] Stručnjaku u oblasti će biti dobro poznate pogodne tehnike za pripremu jedinjenja, koje se koriste u kontekstu pronalaska. Za primere pogodnih hemijskih postupaka, videti, npr., WO98/08871, WO00/55184, WO00/55119, Madsen et al (J. Med. Chem. 2007, 50, 6126-32), i Knudsen et al.2000 (J. Med Chem.43, 1664-1669).

[0216] Bočni lanci jednog ili više amino kiselinskih ostataka (npr. Lys ostataka) u jedinjenju prema pronalasku mogu da budu dodatno konjugovani (tj. kovalentno vezani) sa lipofilnim supstituentom. Lipofilni supstituent može da bude kovalentno vezan sa atomom u bočnom lancu amino kiseline, ili alternativno može da bude konjugovan sa bočnim lancem amino kiseline preko jednog ili više spejsera. Data(e) amino kiselina(e) može da bude deo peptidne komponente X, ili deo peptidne komponente Y.

[0217] Bez želje da budemo vezani nekom posebnom teorijom, veruje se da se lipofilni supstituent vezuje za albumin u krvotoku, štiteći na taj način analog peptida prema pronalasku od enzimske degradacije, i na taj način produžavajući njegov poluživot. Spejser, kada je prisutan, može da obezbedi razmak između peptidnog analoga i lipofilnog supstituenta.

[0218] U nekim primerima izvođenja, lipofilni supstituent može da sadrži ugljovodonični lanac koji ima od 4 do 30 C atoma, na primer najmanje 8 ili 12 C atoma, a poželjno 24 C atoma ili manje, ili 20 C atoma ili manje. Lanac ugljovodonika može da bude linearan ili razgranat i može da bude zasićen ili nezasićen. U nekim primerima izvođenja, ugljovodonični lanac je supstituisan sa ostatkom koji čini deo vezivanja za bočni lanac amino kiseline ili spejser, na primer acil grupu, sulfonil grupu, N atom, O atom ili S atom. U nekim primerima izvođenja, ugljovodonični lanac je supstituisan sa acil grupom, i shodno tome ugljovodonični lanac može da sačinjava deo alkanoil grupe, na primer palmitoil, kaproil, lauroil, miristoil ili stearoil.

[0219] Lipofilni supstituent može da bude konjugovan sa bilo kojim bočnim lancem amino kiseline u jedinjenju prema pronalasku. U određenom izvođenju, bočni lanac amino kiseline uključuje karboksi, hidroksil, tiol, amid ili aminsku grupu za formiranje estra, sulfonil estra, tioestra, amida ili sulfonamida sa razmakom ili lipofilnim supstituentom. Na primer, lipofilni supstituent može da bude konjugovan sa Asn, Asp, Glu, Gln, His, Lys, Arg, Ser, Thr, Tyr, Trp, Cys ili Dbu, Dpr ili Orn. U nekim primerima izvođenja, lipofilni supstituent je konjugovan sa Lys. Amino kiselina prikazana kao Lys u bilo kojoj od ovde datih formula može da bude zamenjena sa, npr., Dbu, Dpr ili Orn gde je dodat lipofilni supstituent.

[0220] U daljim primerima izvođenja prema predmetnom pronalasku, alternativno ili dodatno, bočni lanci jednog ili više amino kiselinskih ostataka u jedinjenju prema pronalasku mogu da budu konjugovani sa polimernom komponentom, na primer, da bi se povećala rastvorljivost i/ili polu-život in vivo (npr. u plazmi) i/ili bioraspoloživost. Poznato je da takve modifikacije smanjuju klirens (npr. bubrežni klirens) terapeutskih proteina i peptida.

[0221] Kako se ovde koristi, "Polietilen glikol" ili "PEG" je polietarsko jedinjenje opšte formule H-(O-CH2-CH2)n-OH. PEG su takođe poznati kao polietilen oksidi (PEO oksidi) ili polioksietileni (POE etileni), u zavisnosti od njihove molekulske težine. PEO, PEE ili POG, kako se ovde koriste, odnosi se na oligomer ili polimer etilen oksida. Ova tri imena su hemijski sinonimna, ali PEG se obično odnosi na oligomere i polimere sa molekulskom masom ispod 20,000 g/mol, PEO na polimere sa molekulskom masom iznad 20,000 g/mol, a POE na polimer bilo koje molekulske mase. PEG i PEO su tečnosti ili čvrste materije niske tačke topljenja, u zavisnosti od njihove molekulske težine. U ovom prikazu, 3 imena se koriste bez razlike. PEG se pripremaju polimerizacijom etilen oksida i komercijalno su dostupni u širokom opsegu molekulskih težina od 300 g/mol do 10,000,000 g/mol. Dok PEG i PEO sa različitim molekularnim težinama nalaze upotrebu u različitim primenama i imaju različita fizička svojstva (npr. viskoznost) zbog efekata dužine lanca, njihova hemijska svojstva su skoro identična. Polimerni deo je poželjno rastvorljiv u vodi (amfifilan ili hidrofilan), netoksičan i farmaceutski inertan. Pogodni polimerni delovi uključuju polietilen glikole (PEG), homo- ili ko-polimere PEG, monometil-supstituisani polimer PEG (mPEG) ili polioksietilen glicerol (POG). Videti, na primer, Int. J. Hematology 68:1 (1998); Bioconjugate Chem. 6:150 (1995); i Crit. Rev. Therap. Drug Carrier Sys. 9:249 (1992). Takođe su obuhvaćeni peptidi koji su pripremljeni u svrhu produženja polu-života, na primer, mono-aktivirani, alkoksi-terminirani polialkilen oksidi (POA) kao što su mono-metoksi-terminirani polietilen glikoli (mPEG); bis aktivirani polietilen oksidi (glikoli) ili drugi PEG derivati su takođe razmatrani. Pogodni polimeri koji značajno variraju po težini u rasponu od oko 70 do oko 40,000 ili od oko 200 do oko 40,000, obično se biraju za svrhe prema predmetnom pronalasku. Molekularne težine od 200 do 2000 su poželjne, a od 200 do 500 su posebno poželjne. Dostupni su i različiti oblici PEG molekula, u zavisnosti od inicijatora koji se koristi za proces polimerizacije – najčešći inicijator je monofunkcionalni metil etar PEG, ili metoksipoli(etilen glikol), skraćeno mPEG.

[0222] Kako se ovde koristi, PEG molekuli manje molekulske težine su takođe dostupni kao čisti oligomeri, koji se nazivaju monodisperzni, uniformni ili diskretni. Oni se koriste u nekim primerima izvođenja prema predmetnom pronalasku.

[0223] PEG molekuli su takođe dostupni sa različitim geometrijama: Razgranati PEG molekuli imaju tri do deset PEG lanaca koji polaze iz centralne grupe jezgra; zvezdasti PEG imaju 10 do 100 PEG lanaca koji polaze iz centralne grupe jezgra; češljasti PEG molekuli imaju više PEG lanaca koji su normalno kalemljeni na polimernu kičmu. PEG molekuli takođe mogu da budu linearni. Brojevi koji su često uključeni u nazive PEG molekula ukazuju na njihovu prosečnu molekulsku težinu (npr. PEG sa n = 9 bi imao prosečnu molekulsku težinu od približno 400 daltona i bio bi označen kao PEG 400.

[0224] Kako se ovde koristi, "PEGilacija" je aktivnost kovalentnog kuplovanja PEG strukture sa peptidom prema pronalasku, koji se tada naziva "PEGilovani peptid". U nekim primerima izvođenja, X komponenta formule I, Y komponenta formule I, R<1>komponenta formule I, R<2>komponenta formule I, ili bilo koja njihova kombinacija, je PEGilovana. U nekim primerima izvođenja, X’ komponenta formule I’, Y’ komponenta formule I’, R<1’>komponenta formule I’, R<2’>komponenta formule I’, ili bilo koja njihova kombinacija, je PEGilovana. U nekim primerima izvođenja, X'' komponenta formule I'', Y'' komponenta formule I'', R<1''>komponenta formule I'', R<2''>komponenta formule I'', ili bilo koji njihova kombinacija, je PEGilovana. U nekim primerima izvođenja, jedan ili više bočnih lanaca amino kiseline u peptidu formule I, formule I’ ili formule I’’ je PEGilovan. U nekim primerima izvođenja, PEG u PEGilovanom bočnom lancu je PEG sa molekulskom težinom od oko 200 do oko 40,000 Da. U nekim primerima izvođenja, spejser peptida formule I, formule I’ ili formule I’’ je PEGilovan. U nekim primerima izvođenja, PEG u PEGilovanom spejseru je PEG3, PEG4, PEG5, PEG6, PEG7, PEG8, PEG9, PEG10 ili PEG11. U nekim primerima izvođenja, PEG u PEGilovanom spejseru je PEG3 ili PEG8.

[0225] Druge pogodne polimerne komponente uključuju poli-amino kiseline kao što su polilizin, poli-asparaginska kiselina i poliglutaminska kiselina (videti na primer Gombotz, et al. (1995), Bioconjugate Chem., vol.6: 332-351; Hudecz, et al. (1992), Bioconjugate Chem., vol.3, 49-57 i Tsukada, et al. (1984), J. Natl. Cancer Inst., vol. 73, : 721-729. Polimerna komponenta može da ima prav lanac ili da se grana. U nekim primerima izvođenja, ona ima molekulsku težinu od 500-40,000 Da, na primer 500-10,000 Da, 1000-5000 Da, 10,000-20,000 Da, ili 20,000-40,000 Da.

[0226] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje prema pronalasku može da sadrži dva ili više takvih polimernih komponenti, u kom slučaju će ukupna molekulska težina svih takvih komponenti generalno pasti u opsege koji su navedeni prethodno u tekstu.

[0227] U nekim primerima izvođenja, polimerna komponenta može da bude kuplovana (kovalentnom vezom) sa amino, karboksilnom ili tiolnom grupom bočnog lanca amino kiseline. Poželjni primeri su tiol grupa Cys ostataka i epsilon amino grupa Lys ostataka, a karboksilne grupe Asp i Glu ostataka takođe mogu da budu uključene.

[0228] Stručnjak u oblasti će biti dobro upoznat sa odgovarajućim tehnikama koje mogu da se koriste za izvođenje reakcije kuplovanja. Na primer, PEG deo koji nosi metoksi grupu može da se kupluje sa Cys tiol grupom pomoću maleimido veze korišćenjem reagenasa koji su komercijalno dostupni od Nektar Therapeutics AL. Videti takođe WO 2008/101017 i gore citirane reference za detalje o pogodnoj hemiji. PEG funkcionalizovan maleimidima takođe može da bude konjugovan sa sulfhidril grupom bočnog lanca Cys ostatka.

[0229] Kako se ovde koristi, oksidacija disulfidne veze može se desiti u jednom koraku ili je to proces od dva koraka. Kako se ovde koristi, za jedan korak oksidacije, tricil zaštitna grupa se često koristi tokom asembliranja, omogućavajući uklanjanje zaštite tokom odvajanja, nakon čega

1

sledi oksidacija rastvora. Kada je potrebna druga disulfidna veza, postoji mogućnost nativne ili selektivne oksidacije. Za selektivnu oksidaciju koja zahteva ortogonalne zaštitne grupe Acm i Tricil se koriste kao zaštitne grupe za cistein. Odvajanje rezultira uklanjanjem jednog zaštitnog para cisteina što omogućava oksidaciju ovog para. Zatim se izvodi drugi korak oksidativne deprotekcije Acm grupe zaštićene cisteinom. Za nativnu oksidaciju tricil zaštitna grupa se koristi za sve cisteine, omogućavajući prirodno savijanje peptida.

[0230] Stručnjak u oblasti će biti dobro upoznat sa pogodnim tehnikama koje mogu da se koriste za izvođenje koraka oksidacije.

Peptidni Dimeri

[0231] Izraz „dimer“, kao u peptidnom dimeru, odnosi se na jedinjenja u kojima su dva peptidna lanca povezana, ili identična (homo-dimer) ili neidentična (hetero-dimer) preko veznog dela. Cisteinski dimer tako predstavljaju dva peptidna lanca povezana amino kiselinskom cistein disulfidnom vezom.

[0232] Ovde je dalje prikazano da peptidi, kako su ovde prikazani, mogu da budu aktivni u konformaciji dimera ili heterodimera, posebno kada su slobodni cisteinski ostaci prisutni u peptidu. U nekim primerima izvođenja ovo se dešava u vidu sintetisanog dimera, ili naročito kada je monomerni peptid sa slobodnim cisteinom prisutan i u oksidacionim uslovima dimerizuje. U nekim primerima izvođenja, dimer je homodimer. Dimer može da bude heterodimer.

[0233] Ovde je dalje prikazano da peptidni analog kako je ovde prikazan može da bude peptidni dimer koji sadrži peptid pronalaska. Peptidni dimeri mogu sadržati peptid formule I, peptid formule I’ ili peptid formule Peptidni dimeri mogu da sadrže dva peptida formule I, dva peptida formule I’ ili dva peptida formule Peptidni dimeri mogu biti homodimeri. Peptidni dimer može da sadrži peptid formule I, X ima formulu Ia, Ib, Ic ili Id. U varijantama u kojima peptidni dimer sadrži peptid formule I, Y ima formulu IIa, IIb, IIc, IId, IIe, IIf ili IIg. U varijantama u kojima peptidni dimer sadrži peptid formule I’, X’ ima formulu Ia’, Ib’, Ic’ ili Id’. U varijantama u kojima peptidni dimer sadrži peptid formule I’, Y’ ima formulu IIa’, IIb’, IIc’, IId’, IIe’, IIf’ ili IIg’. U varijantama u kojima peptidni dimer sadrži peptid formule I'', X'' ima formulu Ia'', Ib'', Ic'' ili Id''. U varijantama u kojima peptidni dimer sadrži peptid formule I'', Y'' ima formulu IIa'' ili IIb''.

[0234] Dimer može da bude između dve X grupe formule I, dve X' grupe formule I', ili dve X'' grupe formule I'', na primer, dva peptida dimera su povezana preko dve X grupe formule I , dve X' grupe formule I', ili dve X'' grupe formule I''. Dimer može da sadrži dve X grupe formule I, dve X’ grupe formule I’, ili dve X'' grupe formule I''. I Dve X grupe, X’ grupe ili X’’ grupe u

2

dimerima mogu sadržati iste amino kiselinske ostatke. Dve X grupe, X’ grupe ili X’’ grupe u dimerima mogu sadržati različite amino kiselinske ostatke (tj., svaka amino kiselina u svakoj od dve X, X’ ili X’’ grupe je nezavisno odabrana). Dimer može da bude između dve Y grupe formule I, dve Y grupe formule I', ili dve Y'' grupe formule I'', npr. dva peptida dimera su povezana preko dve Y grupe formule I, dve Y' grupe formule I', ili dve Y'' grupe formule I''. Dimer može da sadrži dve Y grupe formule I, dve Y grupe formule I', ili dve Y'' grupe formule I''. Dve Y grupe, Y’ grupe ili Y’’ grupe u dimeru mogu sadržati iste amino kiselinske ostatke. Dve Y grupe, Y’ grupe ili Y’’ grupe u dimeru mogu da sadrže različite amino kiselinske ostatke (tj., svaka amino kiselina u svakoj od Y, Y’ ili Y’’ grupa je nezavisno odabrana). Dimer može da bude između X grupe formule I i Y grupe formule I (npr. dva peptida dimera su povezana preko X grupe formule I i Y grupe formule I), X' grupe formule I' i Y' grupa formule I (npr. dva peptida dimera su povezana preko X' grupe formule I' i Y' grupe formule I'), ili X'' grupe formule I' ' i Y'' grupa formule I'' (npr. dva peptida dimera su povezana preko X'' grupe formule I'' i Y'' grupe formule I'').

[0235] Peptidni dimer, kako je prikazan u ovom dokumentu, može da sadrži peptid koji sadrži: peptidnu sekvencu izloženu u bilo kojoj od Tabela 5-15 ili sekvence SEQ ID NO: 1-334 i 338-375; ili peptidnu sekvencu koja ima najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, ili najmanje 99% identičnosti sa peptidnom sekvencom izloženom u bilo kojoj od Tabela 5-15 ili sekvencama SEQ ID NO: 1-334 i 338-375. Peptidni dimer, kako je prikazan u ovom dokumentu, može da bude homodimer koji sadrži dva peptida, od kojih svaki sadrži: peptidnu sekvencu izloženu u bilo kojoj od Tabela 5-15 ili sekvence SEQ ID NOs: 1-334 i 338-375; ili peptidnu sekvencu koja ima najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, ili najmanje 99% identičnosti sa peptidnom sekvencom izloženom u bilo kojoj od Tabela 5-15 ili sekvencama 5-15 ili SEQ ID NOs: 1-334 i 338-375. Peptidni dimer, kako je prikazan u ovom dokumentu, može da sadrži jedinjenje izloženo u bilo kojoj od Tabela 5-15. Peptidni dimer, kako je prikazan u ovom dokumentu, može da bude homodimer koji sadrži dva peptida, od kojih svaki sadrži jedinjenje izloženo u bilo kojoj od Tabela 5-15.

[0236] Peptidni dimeri mogu da sadrže dva peptida dimerizovana putem disulfidne veze između cisteinskog ostatka prisutnog u jednom od peptida i cisteinskog ostatka prisutnog u drugom peptidu, tj., intermolekularne disulfidne veze između ovoh cisteinskih ostataka.

[0237] Peptidni dimeri mogu da sadrže dva peptida dimerizovana putem kovalentnog vezivanja svakog peptida sa zajedničkom povezujućom komponentom, tj., linkerom. U stanju tehnike je poznat, i komercijalno je dostupan, niz različitih linkera koji su pogodni za dimerizaciju dva peptida, uključujući, npr., dietilen glikol (DIG), iminodisirćetnu kiselinu (IDA), β-Ala-IDA, PEG13 i PEG25. Peptidni dimeri mogu da uključuju bilo koju od povezujućih komponenti prikazanih u nastavku teksta ili da imaju bilo koju od strukutra koje su prikazane u nastavku teksta. Peptidni dimeri mogu da dimerizuju i preko povezujuće komponente i preko disulfidne veze između cisteinskog ostatka u jednom peptidu i cisteinskog ostatka u drugom peptidu dimera.

[0238] Povezujuća komponenta može da sadrži formulu: -NH-R20-NH-, pri čemu, R20je niži (C1-

20) alkil. Povezujuća komponenta može da sadrži formulu: -CO-(CH2)n-(X-(CH2)m)o-X-(CH2)pCO-, pri čemu, n je 1-3, m je 1-3, p je 1-3, o je 0-24, i X je O ili NH. U jednoj varijanti, svako n, m i p je 2, o je 1-25, X je O.

[0239] Linkerska komponenta može da sadrži formulu: -NH-(CH2)α-[O-(CH2)β]γ-Oδ-(CH2)ε-Y-, pri čemu su svako α, β i ε celi brojevi čije su vrednosti nezavisno izabrane od 1 do 6, δ je 0 ili 1, γ je ceo broj izabran od 0 do 10, i y je izabrano od NH ili CO, pod uslovom da je β 2 kada je γ veće od 1.

[0240] Linker može da bude povezan sa N-terminalnom amino kiselinom jednog ili oba peptida u dimeru, linker može da bude povezan sa C-terminalnom amino kiselinom jednog ili oba peptida u dimeru, ili linker može da bude povezan sa unutrašnjom amino kiselinom jednog ili oba peptida u dimeru. Linker može da bude povezan sa ostatkom lizina u svakom od peptida u dimeru. Linker može da ne bude povezan sa N-terminalnom amino kiselinom jednog ili oba peptida u dimeru.

[0241] Jedan, ili oba peptida koji su prisutni u dimeru, mogu da sadrže amino kiselinski ostatak koji je konjugovan (tj., kovalentno vezan) sa lipofilnim supstituentom, uključujući bilo koji od ovde opisanih lipofilnih supstituenata. Jedan ili oba peptida koji su prisutni u dimeru, mogu da sadrže amino kiselinski ostatak koji je konjugovan sa polimernom komponentom, uključujući bilo koju od ovde opisanih polimernih komponenti. Jedan, ili oba peptida koji su prisutni u

4

peptidnim dimerima mogu da budu konjugovani sa kiselim jedinjenjem, npr., izovalerijanskom kiselinom, izobuternom kiselinom, valerijanskom kiselinom, i sličnim jedinjenjima.

[0242] Linkerska komponenta prisutna u dimeru može da bude konjugovana (tj., kovalentno povezana) sa lipofilnim supstituentom, uključujući bilo koji od ovde opisanih lipofilnih supstituenata. Linkerska komponenta prisutna u dimeru može da bude konjugovana sa polimernom komponentom, uključujući bilo koju od ovde opisanih polimernih komponenti. IA linkerska komponenta prisutna u petidnom dimeru može da bude konjugovana sa kiselim jedinjenjem, npr., izovalerijanskom kiselinom, izobuternom kiselinom, valerijanskom kiselinom, i sličnim jedinjenjima.

Farmaceutske kompozicije

[0243] Potrebno je razumeti da uključivanje peptidnog analoga prema pronalasku (tj., jednog ili više peptidnih analoga prema pronalasku) u farmaceutsku kompoziciju, takođe obuhvata uključivanje farmaceutski prihvatljive soli ili solvata peptidnog analoga.

[0244] Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži peptidni analog, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat, u skladu sa pronalaskom. U konkretnim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži peptidni dimer, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat, u skladu sa pronalaskom. U konkretnim primerima izvođenja, farmaceutske kompozicije dodatno sadrže jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, ekscipijenasa ili vehikuluma.

[0245] Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži peptidni analog, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat, za lečenje niza različitih stanja, bolesti ili poremećaja, kao što su prikazani na drugim mestima u ovom dokumentu (videti, npr., terapeutske primene, prethodno u tekstu). U konkretnim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži peptidni dimer, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat, za lečenje niza različitih stanja, bolesti ili poremećaja, kao što su prikazani na drugim mestima u ovom dokumentu (videti, npr., terapeutske primene, prethodno u tekstu).

[0246] Peptidni analozi prema predmetnom pronalasku mogu da budu formulisani kao farmaceutske kompozicije koje su pogodne za primenu sa ili bez skladištenja, i koji tipično sadrže terapeutski efikasnu količinu najmanje jednog peptidnog analoga prema pronalasku, sajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, ekscipijensom ili vehikulumom.

[0247] Izraz "farmaceutski prihvatljiv nosač" uključuje bilo koji od standardnih farmaceutski prihvatljivih nosača. Farmaceutski prihvatljivi nosači za terapeutsku primenu su dobro poznati u oblasti farmacije i opisani su, na primer, u publikaciji "Remington’s Pharmaceutical Sciences", 17th edition, Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, SAD, 1985. Na primer, mogu da se koriste sterilni fiziološki rastvor i fosfatom puferovani fiziološki rastvor na blago kiseloj ili fiziološkoj pH vrednosti. Pogodna sredstva za puferovanje pH mogu, npr., da budu fosfat, citrat, acetat, tris(hidroksimetil)aminometan (TRIS), N-tris(hidroksimetil)metil-3-aminopropansulfonska kiselina (TAPS), amonium bikarbonat, dietanolamin, histidin, arginin, lizin ili acetat (npr. u vidu natrijum acetata), ili njihove smeše. Izraz dodatno obuhvata bilo koje nosačko sredstvo navedeno u SAD Farmakopeji kao sredstvo za upotrebu kod životinja, uključujući ljude.

[0248] Farmaceutska kompozicija prema pronalasku može da bude u jediničnom obliku doziranja. U takvom obliku, kompozicija je podeljena u jedinične doze koje sadrže pogodne količine aktivne komponente ili komponenti. Jedinični oblik doziranja može da bude prisutan kao upakovana preparacija, gde pakovanje sadrži diskretne količine peparacije, na primer, upakovane tablete, kapsule ili praškove u bočicama ili ampulama. Jedinični oblik doziranja može takođe da bude, npr., kapsula, film tableta, tableta, sama po sebi ili ih može biti pogodan broj bilo kog od ovih upakovanih oblika. Jedinični oblik doziranja može takođe da bude obezbeđen u obliku jedne doze za injeciranje, na primer u obliku pen sredstva koje sadrži kompoziciju u tečnoj fazi (tipično vodenoj). Kompozicije mogu da budu formulisane za bilo koju pogodnu rutu i sredstva primene. Farmaceutski prihvatljivi nosači ili razblaživači uključuju one nosače ili razblaživače koji se koriste u formulacijama pogodnim za, npr. oralnu, intravitrealnu, rektalnu, vaginalnu, nazalnu, topikalnu, enteralnu ili parenteralnu (uključujući potkožnu (SC), intramuskularnu (IM), intravensku (IV), intradermalnu i transdermalnu) primenu ili primenu putem inhalacije. Formulacije mogu da budu pogodno prezentovane u vidu jediničnog oblika doziranja i mogu da se pripremaju bilo kojim od postupaka dobro poznatih u tehnici farmaceutskog formulisanja.

[0249] Potkožni ili transdermalni načini primene mogu da budu posebno pogodni za peptidne analoge prema pronalasku.

[0250] Dodatni primeri izvođenja prema pronalasku odnose se na sredstva, oblike doziranja i pakovanja koja se koriste da bi se farmaceutske formulacije prema predmetnom pronalasku isporučivale. Dakle, najmanje jedan ovde opisani peptidni analog ili specifično definisani deo ili varijanta, bilo u stabilnim ili konzerviranim formulacijama, može da se primanjuje kod pacijenta u skladu sa predmetnim pronalaskom, putem niza različitih postupaka isporučivanja, uključujući SC ili IM injekciju; transdermalno, plućno, transmukozalno, putem implanta, osmotske pumpe, patrone, mikro pumpe, ili drugim sredstvima koje stručnjak u oblasti prepoznaje kao dobro poznate u stanju tehnike.

[0251] Još dodatnih primera izvođenja prema pronalasku odnosi se na oralne formulacije i oralnu primenu. Formulacije za oralnu primenu mogu da se oslanjaju na istovremenu primenu adjuvanasa (npr. rezorcinola i/ili nejonskih surfaktanata kao što su polioksi etilen oleil etar i nheksadecilpolietilen etar) da bi se veštački povećala permeabilnost zidova creva, i/ili na istovremenu primenu enzimskih inhibitora (npr. inhibitori tripsina iz pankreasa, diizopropilfluorofosfat (DFF) ili trasilol) u cilju inhibicije enzimske degradacije. Aktivno sastavno jedinjenje doznog oblika čvrstog tipa za oralnu primenu može da se meša sa najmanje jednim aditivom kao što je saharoza, laktoza, celuloza, manitol, trehaloza, rafinoza, maltitol, dekstran, skrob, agar, alginati, hitini, hitozani, pektini, tragakant guma, guma arabika, želatin, kolagen, kazein, albumin, sintetički ili polusintetički polimer, ili glicerid. Ovi oblici doziranja takođe mogu da sadrže druge vrste aditiva, npr. neaktivno sredstvo za razblaživanje, lubrikant kao što je magnezijum stearat, paraben, konzervans kao što je sorbinska kiselina, askorbinska kiselina, alfa-tokoferol, antioksidanse kao što je cistein, sredstva za raspadanje, vezujuća sredstva, sredstva za zgušnjivanje, sredstva za puferisanje, sredstva za podešavanje pH vrednosti, zaslađivače, sredstva za davanje arome ili mirisa.

Doze

[0252] Tipična doza peptidnog analoga, npr. peptida ili dimera prema pronalasku, kako se koristi u kontekstu prema predmetnom pronalasku, može da bude u opsegu od oko 0.0001 do oko 100 mg/kg telesne težine na dan, kao što je od oko 0.0005 do oko 50 mg/kg telesne težine na dan, kao što je od oko 0.001 do oko 10 mg/kg telesne težine na dan, npr. od oko 0.01 do oko 1 mg/kg telesne težine na dan, primenjeno u jednoj ili više doza, kao što je od jedne do tri doze. Kao što je u izvesnoj meri prethodno naznačeno, tačna primenjena doza zavisiće, između ostalog, od: prirode i težine bolesti ili poremećaja koji se leči; pola, starosti, telesne težine i opšteg stanja subjekta koji se leči; mogućih drugih, pratećih, bolesti ili poremećaja koji se leče ili će biti lečeni; kao i drugih faktora koji će biti poznati lekaru sa iskustvom u ovoj oblasti.

[0253] Peptidni analog, npr. peptid prema pronalasku može da se primenjuje kontinuirano (npr. intravenskom primenom ili drugim postupkom kontinuirane primene leka), ili može da se primenjuje kod subjekta u intervalima, tipično u pravilnim vremenskim intervalima, u zavisnosti od željene doze i farmaceutske kompozicije koju odabere stručnjak u oblasti za konkretnog subjekta. Intervali doziranja prilikom redovne primene uključuju, na primer, jednom na dan, dva puta na dan, jednom u dva, tri, četiri, pet ili šest dana, jednom ili dva puta nedeljno, jednom ili dva puta mesečno i slično.

[0254] Ovi redovni režimi primene peptidnog analoga, peptida ili dimera prema pronalasku mogu, u određenim okolnostima kao, na primer, tokom dugotrajne hronične primene, poželjno da se prekinu na određeni vremenski period tako da subjekt koji uzima lek smanji nivo uzimanja ili prestane da uzima lek, što se često naziva uzimanje “odmora od leka”. „Odmori od leka” su korisni za, na primer, održavanje ili vraćanje osetljivosti na lek, posebno tokom dugotrajnog hroničnog lečenja, ili za smanjenje neželjenih nuspojava dugotrajnog hroničnog lečenja subjekta lekom. U koje vreme će se primeniti odmor od leka zavisi od toga u koje vreme se primenjuje redovan režim doziranja i koja je svrha primenjivanja odmora od leka (npr. da li da se povrati osetljivost na lek i/ili da se smanje neželjeni neželjeni efekti kontinuirane, dugotrajne primene). U nekim primerima izvođenja, odmor od leka može da bude smanjenje doze leka (npr. ispod terapeutski efikasne količine tokom određenog vremenskog intervala). U drugim primerima izvođenja, primena leka se zaustavlja tokom određenog vremenskog intervala pre nego što se davanje ponovo započne uz upotrebu istog ili drugačijeg režima doziranja (npr. pri nižoj ili višoj dozi i/ili učestalosti primene). Odmor od leka prema pronalasku se stoga može izabrati iz širokog spektra vremenskih perioda i režima doziranja. Primer odmora od leka je odmora od leka od dva ili više dana, jedne ili više nedelja ili jednog ili više meseci, do oko 24 meseca. Tako, na primer, redovni dnevni režim doziranja peptidom, peptidnim analogom ili dimerom prema pronalasku može, na primer, da se prekine odmorom od leka u trajanju od nedelju dana, ili dve nedelje, ili četiri nedelje, nakon čega se nastavlja prethodni, redovni režim doziranja (npr. dnevni ili nedeljni režim doziranja). Ima se u vidu da niz različitih drugih režima odmora od leka mogu da budu korisni tokom primene peptida, dimera i peptidnih analoga prema pronalasku.

[0255] Prema tome, peptidni analog ili peptid mogu da se isporučuju putem režima primene koji sadrži dve ili više faza primene koje su razdvojene odgovarajućim fazama odmora od leka.

[0256] Tokom svake faze primene, peptidni analog ili peptid se daju subjektu primaocu u terapeutski efikasnoj količini prema unapred određenoj šemi primene. Šema primene može da obuhvata kontinuirano davanje leka subjektu primaocu tokom trajanja faze primene. Alternativno, šema primene može da sadrži primenu većeg broja doza peptidnog analoga kod subjekta primaoca, pri čemu su navedene doze razdvojene intervalima doziranja.

[0257] Šema doziranja može da obuhvata najmanje dve doze po fazi primene, najmanje pet doza po fazi primene, najmanje 10 doza po fazi primene, najmanje 20 doza po fazi primene, najmanje 30 doza po fazi primene, ili više.

[0258] Navedeni intervali doziranja mogu da budu pravilni intervali doziranja, koji mogu da budu kao što je prethodno u tekstu navedeno, uključujući jednom na dan, dva puta na dan, jednom na svaka dva, tri, četiri, pet ili šest dana, jednom ili dva puta nedeljno, jednom ili dva puta mesečno ili pravilni i čak ređi intervali doziranja, u zavisnosti od konkretne formulacije doze, bioraspoloživosti i farmakokinetičkog profila peptidnog analoga, ili peptidnog dimera prema predmetnom pronalasku.

[0259] Faza primene može da traje najmanje dva dana, najmanje nedelju, najmanje 2 nedelje, najmanje 4 nedelje, najmanje mesec, najmanje 2 meseca, najmanje 3 meseca, najmanje 6 meseci, ili više.

[0260] Kada šema primene sadrži veći broj doza, trajanje sledeće faze odmora od leka je duže od intervala doziranja koji se koristi u toj šemi primene. Kada je interval doziranja nepravilan, trajanje faze odmora od leka može da bude duže od srednje vrednosti intervala između doza u toku trajanja faze primene. Alternativno, trajanje odmora od leka može da bude duže od najdužeg intervala između uzastopnih doza tokom faze primene.

[0261] Trajanje faze odmora od leka može da bude najmanje dvostruko duže od relevantnog intervala doziranja (ili njegove srednje vrednosti), najmanje 3 puta, najmanje 4 puta, najmanje 5 puta, najmanje 10 puta ili najmanje 20 puta duže od relevantnog intervala doziranja ili njegove srednje vrednosti.

[0262] U okviru ovih ograničenja, faza odmora od leka može da traje najmanje dva dana, najmanje nedelju, najmanje 2 nedelje, najmanje 4 nedelje, najmanje mesec, najmanje 2 meseca, najmanje 3 meseca, najmanje 6 meseci ili više, u zavisnosti od šeme primene tokom prethodne faze primene.

[0263] Režim primene se sastoji od najmanje 2 faze primene. Faze uzastopne primene su razdvojene odgovarajućim fazama odmora od leka. Prema tome, režim primene može da sadrži najmanje 3, najmanje 4, najmanje 5, najmanje 10, najmanje 15, najmanje 20, najmanje 25, ili najmanje 30 faza primene, ili više, od kojih je svaka odvojena odgovarajućom fazom odmora od leka.

[0264] Uzastopne faze primene mogu da koriste istu šemu primene, iako to ne mora uvek da bude poželjno ili neophodno. Međutim, ako se drugi lekovi ili aktivna sredstva primenjuju u kombinaciji sa peptidnim analogom, peptidom ili peptidnim dimerom prema pronalasku, tada se tipično ista kombinacija lekova ili aktivnih sredstava daje u fazama uzastopne primene. U nekim primerima izvođenja, subjekt primalac je čovek.

Sredstva i kitovi

[0265] U nekim primerima izvođenja, pronalazak se odnosi na sredstvo koje sadrži jedan ili više peptida, peptidnih analoga, peptidnih dimera ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli ili solvata prema pronalasku, za isporuku jedinjenja iz prema predmetnom pronalasku subjektu. Prema tome, jedan ili više peptidnih analoga, peptida, dimera ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli ili solvata mogu da se primenjuju kod pacijenta u skladu sa ovim pronalaskom putem različitih metoda isporuke uključujući intravensku, potkožnu, intramuskularnu ili intraperitonealnu injekciju; oralno davanje, transdermalno, plućnom ili transmukoznom primenom, implantacijom ili osmotskom pumpom, kartridžom ili mikro pumpom, ili na drugi način koji kvalifikovani stručnjak odredi, kao što je dobro poznato u tehnici.

[0266] U ovom dokumentu je dodatno prikazan kit koji sadrži jedan ili više peptidnih analoga ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli ili solvata prema pronalasku. U ovom dokumentu je dalje prikazan kit koji sadrži jedan ili više peptidnih dimera kao što su ovde prikazani, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili solvate, pri čemu kit može da sadrži jednu ili više farmaceutskih kompozicija koje sadrže jedan ili više peptidnih analoga ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli ili solvata. Kit dalje može da sadrži pakovanje ili uputstva za upotrebu. U drugim primerima izvođenja, kit može da sadrži jednu ili više farmaceutskih kompozicija koje sadrže jedan ili više peptidnih dimera kao što su ovde prikazani, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili solvate. Kit dalje može da sadrži pakovanje ili uputstva za upotrebu.

Kombinovana terapija

[0267] Kao što je prethodno u tekstu navedeno, podrazumeva se da se u nastavku poziva na peptidni analog prema pronalasku (npr. jedinjenja navedena u bilo kojoj od Tabela 5-15, na primer jedinjenja 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 73, 74, 75, 76, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 293, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361 ili njihove dimere prikazane u Tabelama 12-15, na primer jedinjenja 311-353 se takođe proširuju na svoju farmaceutski prihvatljivu so ili solvat, kao i na kompoziciju koja sadrži više od jednog različitog peptida, peptidnog analoga ili peptidnog dimera prema pronalasku .

[0268] U nekim primerima izvođenja, peptidni analog ili peptidni dimer prema pronalasku mogu imati izvesnu prednost ako se primenjuju u kombinaciji sa helatorom gvožđa, kao što je Deferoksamin i Deferasiroks (Exjade™)

PRIMERI

[0269] Sledeći primeri pokazuju neke specifične primere izvođenja predmetnog pronalaska. Primeri koji slede su izvedeni upotrebom standardnih tehnika koje su dobro poznate i rutinske za stručnjake iz ove oblasti tehnike, osim gde je drugačije detaljno opisano. Podrazumeva se da su ovi primeri dati samo u ilustrativne svrhe i ne pretenduju da budu u potpunosti konačni u pogledu uslova ili obima pronalaska. Budući da su takvi, ne treba ni na koji način smatrati da ograničavaju obim predmetnog pronalaska.

SKRAĆENICE:

[0270]

DCM: dihlorometan

DMF: N,N-dimetilformamid

NMP N-metilpirolidon

HBTU: O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum heksafluorofosfat HATU: 2-(7-aza-1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronium heksafluorofosfat DCC: Dicikloheksilkarbodiimid

NHS: N-hidorksisukcinimid

DIPEA: diizopropiletilamin

EtOH: etanol

Et2O: dietil etar

Hy: vodonik

TFA: trifluorosirćetna kiselina

TIS: triizopropilsilan

ACN: acetonitril

HPLC: tečna hromatografija visokog učinka

ESI-MS: elektron sprej jonizacija masena spektrometrija

PBS: fosfatom puferovan fiziološki rastvor

Boc: t-butoksikarbonil

Fmoc: Fluorenilmetiloksikarbonil

Acm: acetamidometil

1

IVA: Izovalerijanska kiselina (ili izovaleril)

K(): U peptidnim sekvencama koje su ovde obezbeđene, pri čemu je jedinjenje ili hemijska grupa predstavljena u zagradi odmah iza lizinskog ostatka, potrebno je smatrati da je jedinjenje ili hemijska grupa u zagradi bočni lanac konjugovan sa lizinskim ostatkom. Tako, npr., ali ne i ograničeno na bilo koji način, K(PEG8) označava da je PEG8 komponenta konjugovana sa bočnim lancem ovog lizina. Za nekoliko neograničavajućih primera tako konjugovanih lizina, potrebno je videti, npr., jedinjenja 54 i 90.

Palm: označava konjugaciju palmitinske kiseline (palmitoil).

[0271] Kako se ovde koristi, "C( )" se odnosi na cisteinski ostatak koji je uključen u konkretni disulfidni most. Na primer, u hepcidinu postoje četiri disulfidna mosta: prvi između dva C(1) ostatka; drugi između dva C(2) ostatka; treći između dva C(3) ostatka; i četvrti između dva C(4) ostatka. U skladu sa tim, u nekim primerima izvođenja, sekvenca za hepcidin je napisana na sledeći način:

Hy-DTHFPIC(1)IFC(2)C(3)GC(2)C(4)HRSKC(3)GMC(4)C(1)KT-OH (SEQ ID NO:335); a sekvenca za druge peptide može takođe izborno da bude napisana na isti način.

[0272] Sledeći primeri su dati kako bi ilustrovali neke primere izvođenja prema pronalasku i nisu namenjeni da ograniče obim pronalaska.

PRIMER 1

SINTEZA JEDINJENJA

[0273] Osim ako nije drugačije naznačeno, reagensi i rastvarači koji se nadalje koriste bili su komercijalno dostupni u standardnom stepenu čistoće za laboratorijske reagense ili analitičke reagense i korišćeni su bez daljeg prečišćavanja.

Postupak za sintezu peptida u čvrstoj fazi

[0274] Ilustrativna jedinjenja prema pronalasku (npr. Jedinjenje br. 2) su hemijski sintetisana upotrebom optimizovanih protokola sinteze peptida u čvrstoj fazi 9-fluorenilmetoksi karbonila (Fmoc). Za C-terminalne amide korišćena je rink-amidna smola, iako su vang i tricil smole takođe korišćene za proizvodnju C-terminalnih kiselina. Zaštitne grupe bočnog lanca bile su sledeće: Glu, Thr i Tyr: O-tButil; Trp i Lys: t-Boc (t-butiloksikarbonil); Arg: N-gama-2,2,4,6,7 pentametildihidrobenzofuran-5-sulfonil; His, Gln, Asn, Cys: Tricil. Za selektivno formiranje disulfidnog mosta, Acm (acetamidometil) je takođe korišćen kao Cys zaštitna grupa. Za kuplovanje, četiri do deset puta veća količina rastvora koji sadrži Fmoc amino kiselinu, HBTU i DIPEA (1:1:1.1) u DMF je dodat u nabubrelu smolu [HBTU: O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-

2

tetrametiluronijum heksafluorofosfat; DIPEA: diizopropiletilamin; DMF: dimetilformamid]. HATU (O-(7-azabenzotriazol-l-il)-l,l,3,3,-tetrametiluronijum heksafluorofosfat) je korišćen umesto HBTU kako bi se poboljšala efikasnost kuplovanja u teškim regionima. Uklanjanje Fmoc zaštitne grupe je postignuto tretmanom sa rastvorom DMF, piperidin (2:1).

Postupak za odvajanje peptida sa smole

[0275] Deprotekcija bočnog lanca i odvajanje peptida prema pronalasku (npr. Jedinjenja br.2) je postignuto mešanjem suve smole u rastvoru koji sadrži trifluorosirćetnu kiselinu, vodu, etanditiol i tri izopropilsilan (90:5:2.5:2.5) tokom 2 do 4 sata. Nakon uklanjanja TFA, peptid je precipitiran pomoću ledeno hladnog dietil etra. Rastvor je centrifugiran i etar je dekantovan, nakon čega je usledilo drugo ispiranje dietil etrom. Peptid je rastvoren u acetonitrilu, vodenom rastvoru (1:1) koji sadrži 0.1% TFA (trifluorosirćetne kiseline) i dobijeni rastvor je filtriran. Kvalitet linearnog peptida je procenjen upotrebom masene spektrometrije jonizacijom elektrospreja (ESI-MS).

Postupak za prečišćavanje peptida

[0276] Prečišćavanje peptida prema pronalasku (npr. Jedinjenja br. 2) je postignuto upotrebom reverzno-fazne tečne hromatografije visokog učinka (RP-HPLC). Analiza je izvedena upotrebom C18 kolone (3µm, 50 x 2mm) sa brzinom protoka od 1 mL/min. Prečišćavanje linearnih peptida je postignuto upotrebom preparativne RP-HPLC sa C18 kolonom (5 µm, 250 x 21.2 mm) sa brzinom protoka od 20 mL/min. Razdvajanje je postignuto upotrebom linearnih gradijenta pufera B u A (pufer A: vodeni rastvor 0.05% TFA; pufer B: 0.043% TFA, 90% acetonitril u vodi).

Postupak za oksidaciju peptida

[0277]

Metoda A (Pojedinačna oksidacija disulfida). Oksidacija nezaštićenih peptida prema pronalasku (npr. Jedinjenje br.2) je postignuta dodavanjem joda u kapima u MeOH (1 mg na 1 mL) peptidu u rastvoru (ACN: H2O, 7:3, 0.5% TFA). Posle mešanja tokom 2 minuta, dodavana je askorbinska kiselina u porcijama dok rastvor nije postao bistar i uzorak je odmah nanesen na HPLC u cilju prečišćavanja.

Metoda B (Selektivna oksidacija dva disulfida). Kada je bilo prisutno više od jednog disulfida (npr. Jedinjenje 30), često je vršena selektivna oksidacija. Oksidacija slobodnih cisteina je postignuta rastvorom NH4CO3, na pH 7.6 , pri koncentraciji peptida od l mg/10 mL. Posle mešanja tokom 24 h i pre prečišćavanja, rastvor je zakišeljen do pH 3 sa TFA, a zatim liofiliziran. Dobijeni pojedinačno oksidovani peptidi (sa ACM zaštićenim cisteinima) su zatim oksidovani / selektivno deprotektovani pomoću rastvora joda. Peptid (1 mg na 2 mL) je rastvoren u MeOH/H2O, 80:20 joda rastvorenog u reakcionom rastvaraču i dodat u reakciju (konačna koncentracija: 5 mg/mL) na sobnoj temperaturi. Rastvor je mešan 7 minuta pre nego što je dodata askorbinska kiselina u porcijama dok rastvor nije postao bistar. Rastvor je zatim direktno nanesen na HPLC.

Metoda C (Nativna oksidacija). Kada je bilo prisutno više od jednog disulfida i kada se nisu vršile selektivne oksidacije, izvođena je nativna oksidacija (npr., ovaj metod je korišćen za Jedinjenje 19). Nativna oksidacija je postignuta sa 100 mM rastvora NH4CO3(pH 7.4) u prisustvu oksidovanog i redukovanog glutationa (peptid/GSH/GSSG, molarni odnos 1 : 100: 10) od (peptida: GSSG: GSH, 1 : 10, 100). Posle mešanja tokom 24 h, i pre prečišćavanja putem RP-HPLC, rastvor je zakišeljen do pH 3 sa TFA, a zatim liofiliziran.

Postupak oksidacije cisteina u cilju proizvodnje dimera. Oksidacija nezaštićenih peptida prema pronalasku (npr. Jedinjenje br.1) je postignuta dodavanjem joda u kapima u MeOH (1 mg po 1 mL), peptidu u rastvoru (ACN: H2O, 7:3, 0.5% TFA). Posle mešanja tokom 2 minuta, dodavana je askorbinska kiselina u porcijama dok rastvor nije postao bistar i uzorak je odmah nanesen na HPLC u cilju prečišćavanja.

Prostupak za dimerizaciju. Glioksilna kiselina, IDA ili Fmoc-β-Ala-IDA je prethodno aktiviran u vidu N-hidroksisukcinimid estra tako što je kiselina (1 ekviv.) tretirana sa 2.2 ekv. i N-hidroksisukcinimida (NHS) i dicikloheksil karbodiimida (DCC) u NMP (N-metil pirolidonu) u finalnoj koncentraciji od 0.1 M. Za PEG13 i PEG25 linkere, ovi hemijski entiteti su kupljeni prethodno formirani u vidu aktiviranog sukcinimidnog estra. Aktivirani estar ~ 0.4 ekv. je polako dodavan peptidu u NMP (1 mg/mL) u porcijama. Rastvor je ostavljen da se meša 10 min pre nego što su polako dodata 2-3 dodatna alikvota linkera ~0.05 ekv. Rastvor je ostavljen da se meša dodatna 3 h pre nego što je rastvarač uklonjen pod vakuumom, a ostatak je prečišćen pomoću reverzno-fazne HPLC. izveden je dodatni korak mešanja peptida u 20% piperidina u DMF (2 x 10 min) pre dodatnog prečišćavanja reverznofaznom HPLC.

[0278] Stručnjak u oblasti će razumeti da standardni postupci za sintezu peptida mogu da se koriste za dobijanje jedinjenja prema pronalasku.

PRIMER 2

METODOLOGIJA ISPITIVANJA AKTIVNOSTI

[0279] Dizajnirani peptidi su testirani in vitro na indukciju degradacije ljudskog proteina feroportina.

4

[0280] cDNK koja kodira ljudski feroportin (SLC40A1) je klonirana iz cDNK klona kompanije Origene (NM_014585). DNK koja kodira feroportin je amplifikovana PCR reakcijom upotrebom prajmera koji takođe kodiraju terminalna restrikciona mesta za subkloniranje, ali bez terminacionog kodona. Receptor za feroportin je subkloniran u sisarski ekspresioni GFP vektor koji sadrži marker rezistencije na neomicin (G418) tako da je okvir čitanja feroportina spojen u okvir sa GFP proteinom. Vernost DNK koja kodira protein potvrđena je sekvenciranjem DNK. HEK293 ćelije su korišćene za transfekciju feroportin-GFP receptor ekspresionog plazmida. Ćelije su gajene prema standardnom protokolu u medijumu za rast i transfektovane plazmidima pomoću preparata Lipofectamin (protokol proizvođača, Invitrogen). Ćelije koje stabilno eksprimiraju feroportin-GFP su selektovane pomoću G418 u medijumu za rast (po tome što preživljavaju samo ćelije koje su preuzele i inkorporirale cDNK ekspresioni plazmid) i sortirane nekoliko puta na instrumentu za sortiranje ćelija Cytomation MoFlo™, kako bi bile dobijene GFP-pozitivne ćelije (488 nm/530 nm). Ćelije su razmnožene i zamrznute u alikvotima.

[0281] Da bi se odredila aktivnost jedinjenja pri delovanju na humani feroportin, ćelije su inkubirane u pločama sa 96 bunarčića u standardnom medijumu, bez fenol crvenog. Jedinjenje je dodato do željene finalne koncentracije i inkubirano najmanje 18 sati u inkubatoru. Nakon inkubacije, preostala fluorescencija GFP proteina je određena ili GFP fluorescencijom cele ćelije (Envision čitač ploča, 485 / 535 par filtera), ili pomoću Beckman Coulter Quanta™ protočnog citometra (izraženo kao geometrijska sredina intenziteta fluorescencije na 485nm/525nm). Jedinjenje je dodato do željene finalne koncentracije i inkubirano najmanje 18 sati, ali ne više od 24 sata u inkubatoru.

[0282] Referentna jedinjenja su uključivala nativni hepcidin, mini-hepcidin i R1- mini-hepcidin, koji je analog mini-hepcidina. "RI" u RI-mini-hepcidin se odnosi na Retro inverzno. Retro inverzni peptid je peptid sa obrnutom sekvencom svih D amino kiselina. Jedan primer je kada Hy-Glu-Thr-His-NH2 postaje Hy-DHis-DThr-Dglu-NH2. EC50 vrednost ovih referentnih jedinjenja za degradaciju feroportina je određena prema prethodno opisanom ispitivanju aktivnosti. Ovi peptidi su služili kao kontrolni standardi za mnoge studije u nastavku.

Tabela 4: Referentna jedinjenja

[0283] Da bi se utvrdilo da li dati peptid modifikuje internalizaciju i degradaciju endogenog feroportina, nivoi proteina i ćelijska distribucija feroportina u hepatocitima i makrofagima koji su tretirani peptidom mogu da se testiraju upotrebom Western blotinga, imunohistohemije i feroportinskih antitela koja su poznata u tehnici.

PRIMER 3

SKENIRANJE ZAMENE CISTEINA U MINI-HEPCIDINU

[0284] Prethodne studije pokazuju da je N-terminalni segment Hep25 važan zbog svoje hepcidinske aktivnosti i verovatno formira dodirnu površinu sa feroportinom. Štaviše, smatralo se da je Cys na 7. poziciji kritičan za aktivnost. Disulfidne veze mogu da deluju strukturnim, katalitičkim ili funkcionalnim sredstvima. Pretpostavlja se da se hepcidin vezuje za feroportin preko disulfidne veze usled čega se receptor naknadno internalizuje. Pažljiviji pregled hepcidina otkrio je da su prisutna 4 disulfida i da bi bilo koji od ovih cisteina mogao da bude odgovoran za vezivanje za feroportin. Slobodni tiol feroportina sam po sebi poseduje ekvivalent "funkcionalne, alosterične veze". Da bismo temeljnije razumeli odnos strukturne aktivnosti u odnosu na položaj cisteina unutar hepcidina, izvršili smo skeniranje cisteina do 15. ostatka mini-hepcidinskog peptida i analizirali smo sposobnost peptida da ispolje hepcidinsku aktivnost. Peptidi su sintetisani upotrebom postupaka opisanih u Primeru 1, a njihova potencija u degradaciji feroportina je testirana kao što je opisano u Primeru 2. Rezultati ove studije su prikazani u Tabeli 5, gde je potencija naznačena EC50 vrednostima.

Tabela 5. Skeniranje zamene cisteina u derivatima mini-hepcidina

[0285] Promena položaja cisteina za većinu peptida koji su testirani je ukinula aktivnost; međutim ovi podaci su iznenađujuće pokazali da je Jedinjenje 1 aktivno uprkos tome što ima cistein na 6. poziciji. Slika 1 prikazuje poređenje krive odgovora na dozu za Jedinjenje 1, u poređenju sa hepcidinom, i mini-hepcidinom kao kontrolom. Ovi podaci jasno pokazuju da Jedinjenje 1 ima sličnu in vitro potenciju kao i hepcidin.

PRIMER 4

SKENIRANJE ALA U JEDINJENJU 1 KOJE JE IDENTIFIKOVANO SKENIRANJEM CISTEINA

[0286] Da bi se potvrdili rezultati iz Primera 3, izvršeno je Ala skeniranje Jedinjenja 1. Peptidi su sintetisani kao što je opisano u Primeru 1 i njihova aktivnost je testirana kao što je opisano u Primeru 2. Rezultati ove studije prikazani su u Tabeli 6. Poređenjem ovog rezultata sa poznatim odnosima strukturne aktivnosti za hepcidin i druge analoge mini-hepcidina, povećali smo potenciju. Štaviše, ovi podaci jasno pokazuju važnost nekoliko ostataka za aktivnost. Nasuprot tome, ovi podaci takođe identifikuju izvestan broj ostataka koji mogu da se modifikuju, a da se aktivnost ne ukine.

Tabela 6: Skeniranje alanina u Jedinjenju 1

PRIMER 5

ANALIZA AKTIVNOSTI PEPTIDA IN VITRO

[0287] Delom na osnovu odnosa strukture i aktivnosti (SAR) koji je određen iz rezultata eksperimenata opisanih u Primerima 3 i 4, niz različitih peptida sličnih hepcidinu prema predmetnom pronalasku sintetisan je upotrebom metode opisane u Primeru 1, i in vitro aktivnost je testirana kao što je opisano u Primeru 2. Referentna jedinjenja (prikazana u Tabeli 4) su uključivala nativni hepcidin, mini-hepcidin i RI-mini-hepcidin. EC50 vrednosti za peptide su zbirno prikazane u Tabeli 7.

Tabela 7. In vitro aktivnost peptidnih analoga hepcidina

1

2

4

1

Za neka jedinjenja koja sadrže N-terminalnu PEG11 komponentu (npr. jedinjenja 89, 108 i 109), u cilju sinteze je korišćeno sledeće jedinjenje:

Fmoc-amino PEG propionska kiselina

[0288]

PRIMER 6

SKENIRANJE ALANINA U JEDINJENJU 18

[0289] Da bi se dodatno razumeo odnos strukture i aktivnosti hepcidina, izvršen je skeniranje alanina u Jedinjenja 18, koje je hepcidinski analog prema predmetnom pronalasku koji sadrži cistein na poziciji 7. Peptidi su sintetisani kao što je opisano u Primeru 1 i njihova aktivnost je testirana kao što je opisano u Primeru 2; rezultati su prikazani u Tabeli 8.

Tabela 8. Skeniranje alanina u Jedinjenju 18

2

[0290] Kao što je to bio slučaj sa skeniranjem alanina u Jedinjenju 1 (cistein na poziciji 6), ovo skeniranje je identifikovalo ostatke unutar Jedinjenja 18 (cistein na poziciji 7) koji su važni za aktivnost, kao i nekoliko ostataka koji izgleda da su manje važni za aktivnost, tako da mogu da se modifikuju, a da se ne ukine aktivnost.

PRIMER 7

STABILNOST U PLAZMI

[0291] Eksperimenti stabilnosti u serumu su preduzeti da bi se in vivo rezultati upotpunili i pomogli u dizajnu potentnih, stabilnih agonista feroportina. Da bi se predvidela stabilnost kod ljudi, studije stabilnosti ex vivo su inicijalno sprovedene u ljudskom serumu.

[0292] Ključni peptidi (10 μΜ) su inkubirani sa prethodno zagrejanim ljudskim serumom (Sigma) na 37 stepeni C. Uzorci su uzeti u različitim vremenskim tačkama do 24 sata. Uzorci su odvojeni od serumskih proteina i prisustvo peptida od interesa je analizirano upotrebom LC-MS. Količina intaktnog peptida u svakom uzorku je izračunata upotrebom površine pika analita u odnosu na nultu vremensku tačku. Tabela 9 prikazuje rezultate ove studije.

Tabela 9. Stabilnost ključnih jedinjenja u ljudskom serumu

PRIMER 8

SMANJENJE SLOBODNOG GVOŽĐA U PLAZMI KOD PACOVA

[0293] Da bi se ispitalo da li je Jedinjenje br.2, koje predstavlja jedinjenje koje imitira hepcidin, bilo efikasno u smanjenju slobodnog Fe<2+>u serumu, Retro inverzni mini hepcidin je korišćen kao referentni peptid. Iako RI mini-Hep ima veoma nisku potenciju in vitro, on je veoma aktivan in vivo kako su objavili autori Presza et al. J Clin Invest.2011.

[0294] Prvog dana, kod životinja je praćen slobodni Fe<2+>u serumu. Da bi se postigao homogeni nivo u serumu, analiziran je Fe<2+>i homogena kohorta od 7 ili 8 životinja je nasumično raspoređena u svaku tretiranu grupu. 2. dana, trenutni eksperiment gde su životinje bile podvrgnute i.p. doziranju ispitivanog jedinjenja i naknadno su uzeti uzorci krvi iz repne vene. Pre doziranja, životinje su stavljene pod lampu za zagrevanje na 3-5 minuta. Uzorci krvi su uzeti iz repne vene od svih životinja, kako bi bili određeni nivoi gvožđa u serumu pre doziranja vehikuluma ili jedinjenja. Životinjama je i.p. dozirano po 1 ml ispitivane supstance u vehikulumu ili samo vehikulum i uzorci krvi od 250 μl uzeti su od svake životinje na t=0, 60, 120, 240, 360 min i 24 sata prilikom ispitivanja referentnog jedinjenja. Studija odgovora na dozu

4

izvedena sa Retro inverznim (RI) mini-hepcidinom (referentno jedinjenje), i studija efikasnosti izvedena sa Jedinjenjem br.2, izvedene su kao dva odvojena eksperimenta.

[0295] Analiza Fe<2+>od dana 0 i 1 izvedena je u kasnijim vremensoj tački, ali ne kasnije od 10 dana. Hemikalije i oprema koji su korišćeni u ovom Primeru, prikazani su u Tabeli 10.

Tabela 10. Hemikalije i oprema koji su korišćeni u ovom Primeru

[0296] Svi peptidi su inicijalno rastvoreni u kiseloj H2O na pH=2.5 i do koncentracije od 3 mg/ml API. Jedinjenja su nakon toga rastvorena ili u Na-acetatnom puferu (50 mM sirćetna kiselina, 125 mM NaCl, pH 5.0) ili jakom PBS, (25 mM natrijum fosfat, 125 mM NaCl, pH 7.4).

[0297] Mužjaci Sprague-Dawley pacova teški 200-250 g su korišćeni u ovoj studiji. Čuvani su u grupama od n=2 u sobi u kojoj su kontrolisani svetlo, temperatura i vlažnost (ciklus od 12 sata svetla: 12 sati tame, svetla su se palila/gasila u 0600/1800 sata; 23 stepena po Celzijusu; relativna vlažnost od 50%). Primenjeni su humani ishodi, u skladu sa OECD "Smernicama za ishode u predlozima za studije na životinjama". Životinje su svakodnevno praćene. U slučaju značajne promene stanja životinje (na osnovu znakova kao što je gubitak težine > 30% (gojazne životinje); nenormalno držanje; grubo krzno; eksudat oko očiju i/ili nosa; lezije na koži; abnormalno disanje; poteškoće sa kretanjem; nenormalan unos hrane ili vode; ili samopovređivanje) ili drugih stanja koja izazivaju značajan bol ili uznemirenost, životinje su odmah eutanazirane.

[0298] Sadržaj gvožđa u plazmi/serumu je meren pomoću kolorimetrijskog testa na instrumentu Cobas c 111 u skladu sa uputstvima proizvođača testa (test: IRON2: ACN 661).

[0299] Podaci dobijeni cobas Iron2 analizom su predstavljeni kao srednje vrednosti /- SEM.

[0300] Kao što je prikazano na Slikama 2 i 3, IP doziranje jedinjenja 2 dovelo je do smanjenja nivoa gvožđa u serumu koje je bilo uporedivo sa smanjenjem uočenim nakon injekcije Retro inverznog mini hepcidina (RI-Mini-hepcidin) kao pozitivne kontrole. Smanjenje koje indukuju i RI-mini-hepcidin i Jedinjenje 2 nije ni u jednom slučaju bilo značajno, verovatno usled velike varijanse merenja unutar grupe.

PRIMER 9

IN VIVO VALIDACIJA ODABRANIH PEPTIDA

[0301] Odabrani peptidi prema predmetnom pronalasku su testirani na aktivnost in vivo, kao što je opisano u Primeru 8, uz sledeće promene. Umesto pacova, testirani su miševi (C57-BL6). Peptidi ili kontrolni vehukulumi su primenji kod miševa (n=8/grupi) gde su jedinjenja prema predmetnom pronalasku dozirana sa 3000 nmol/kg, a hepcidinska kontrola je primenjena potkožnom injekcijom od 1000 nmol/kg. Primarni cilj ovog eksperimenta je bio da se potvrdi, na modelu miša, aktivnost nekoliko peptida za koje se pokazalo da su aktivni kod pacova. Nivoi gvožđa u serumu su procenjeni kao u Primeru 8 dva sata nakon primene peptida ili vehikuluma. Kao što je prikazano na slici 4, pri ovim dozama, primećeno je značajno smanjenje gvožđa u serumu kod životinja tretiranih jedinjenjem u poređenju sa kontrolnim vehikulumom. Štaviše, odgovori na maksimalnu dozu jedinjenja prema pronalasku bili su veoma slični odgovoru na maksimalnu dozu koji je postignut sa hepcidinom.

[0302] Sličan eksperiment je izveden sa nižim dozama kako bi se procenio odgovor na dozu ovih jedinjenja za indukciju smanjenja gvožđa u serumu. Metode su bile kao što je gore opisano u ovom primeru, osim za sledeće parametre: n = 4 miša/grupi, međutim n = 8 za vehikulum, pošto su dve grupe objedinjene. Miševima su davana testirana jedinjenja u dve odvojene doze (300 nmol/kg ili 1000 nmol/kg), putem potkožne injekcije. Nivoi gvožđa u serumu su procenjeni kao u Primeru 8 dva sata nakon injekcije peptida ili vehikuluma. Kao što je prikazano na Slici 5, ovi peptidi su izazvali slične redukcije gvožđa kao i prirodni hepcidin in vivo. Štaviše, bilo je jasno da je nekoliko jedinjenja bilo u stanju da izazove maksimalne efekte pri niskim dozama od čak 300 nmol/kg.

[0303] Drugi peptidi su testirani na sličan način, bilo na pacovima kao što je opisano u Primeru 8, ili na miševima kako je gore opisano u ovom Primeru, a rezultati ovih testova su predstavljeni u Tabeli 11, ovde, u koloni koja ima naslov „in vivo aktivnost". U ovoj tabeli, doziranje je naznačeno u podnaslovima navedenim u prvom redu kolone "in vivo aktivnost"; podaci o aktivnosti in vivo su prijavljeni kao odrednice "da" ili "ne", pri čemu da označava da je primećena in vivo aktivnost smanjenja serumskog gvožđa, dok "ne" označava da takva aktivnost nije primećena. Ruta primene peptida bio je putem potkožne injekcije, osim ako nije drugačije naznačeno da je to bilo putem intraperitonealne injekcije (ovo je u tabeli označeno sa „i.p.“ u zagradama posle odrednice „da“ ili „ne“).

[0304] Peptidi su takođe testirani na druge farmakokinetičke/farmakodinamičke (PK/PD) parametre upotrebom metoda koje su uobičajeno poznate stručnjaku. Rezultati ovih testova su takođe navedeni u Tabeli 11. Ovi parametri su uključivali određivanja stabilnosti (sati stabilnosti u plazmi naznačenog čoveka ili pacova), polu-život kod miševa i in vitro aktivnost (EC50), testirane su kao što je opisano u Primeru 2. Jedan primer takve studije je predstavljen na Slici 6, gde su PK/PD svojstva dva jedinjenja prema predmetnom pronalasku br. 153 i br. 181) upoređena sa hepcidinom da bi se odredili njihovi PK/PD efekti kod C57BL6 miševa. Svako od ovih jedinjenja je izazvalo brzo smanjenje serumskog gvožđa, koje je bilo prolazno u slučaju Jed. br. 181, i održavano u slučaju Jed. br.153.

[0305] Ovi podaci, pored podataka koji su ovde predstavljeni u Tabeli 11, demonstrirali su aktivnost i korisna PK/PD svojstva peptida prema predmetnom pronalasku, od kojih veliki broj pokazuje slične ili poboljšane PK/PD profile u poređenju sa hepcidinom.

Tabela 11: Aktivnosti peptida in vivo

PRIMER 10

IN VITRO AKTIVNOST ODABRANIH PEPTIDNIH DIMERA

[0306] In vitro aktivnost odabranih peptidnih dimera prema predmetnom pronalasku je testirana kao što je opisano u Primeru 2.

[0307] EC50 i % aktivnosti pri 1 µM određeni su za peptidne monomere i peptidne dimere prikazane u Tabeli 12. Ovi peptidni dimeri su dimerizovani preko jedne disulfidne veze između po jednog cisteinskog ostatka prisutnog u svakom peptidnom monomeru. Rezultati ovih eksperimenata su prikazani uTabeli 12.

Tabela 12. In vitro aktivnost peptida dimerizovanih preko jedne disulfidne veze između cisteinskih ostataka

[0308] EC50 vrednosti su takođe određene za peptidne dimere koji imaju sekvence prikazane u Tabeli 10. Aktivnost peptidnih dimera dimerizovanih samo preko disulfidne veze između dva peptidna monomera poređena je sa aktivnošću peptidnih dimera istih monomera koji su dimerizovani i preko disulfidne veze i preko DIG linkerske komponente. Pored toga, ispitivana je aktivnost peptidnih dimera dimerizovanih preko DIG linkerske komponente kuplovane sa N-terminusom monomera, C-terminusom monomera, ili različitim unutrašnjim lizinskim ostacima. Rezultati ovih eksperimenata su obezbeđeni u Tabeli 13.

Tabela 13. Ispitivana pozicija dimera (ispitivan je DIG kao reprezentativni linker)

1

[0309] EC50vrednosti su određene za peptidne dimere koji sadrže različite linkerske komponente i u poređenju sa vezom preko disulfidnog mosta između dva peptidna monomera, uključujući peptidne dimere prikazane u Tabeli 14. Kada konkretna linkerska komponenta nije naznačena, peptidni dimer je dimerizovan preko disulfidnog mosta između cisteinskih ostataka prisutnih u svakom od peptidnih monomera peptidnog dimera. Rezultati ovog eksperimenta su prikazani u Tabeli 14, a različiti tipovi linkera su prikazani šematski na Slici 7.

Tabela 14. Dimerizacija upotrebom različitih linkera na različitim pozicijama

1 1

[0310] EC50vrednosti su određene za peptidne dimere dimerizovane preko glikolnog linkera vezanog sa εNlizinskih ostataka unutar peptidnih lanaca, u poređenju sa peptidnim monomerima. Kako je prikazano u Tabeli 15, peptidni dimeri su imali niže EC50vrednosti od svojih odgovarajućih peptidnih monomera. U ovom slučaju, disulfidna veza postoji unutar molekula svake peptidne (npr., jed. br. 2 i jed. br. 3) komponente pre dimerizacije preko upotrebe DIG putem acilacije εNlizina.

Tabela 15. Dimerizacija preko glikolnog linkera vezanog za εN lizina unutar peptidnog lanca

1 2

1

14

1

1

1

1

1

11

11

11

11

11

11

11

12

12

12

12

12

12

12

1

11

12

1

14

1

1

1

1

1

14

14

14

14

14

14

14

1

11

12

1

14

1

1

1

1

1

1

11

12

1

14

1

1

1

1

1

1

11

12

1

14

1

1

1

1

1

1

11

12

1

14

1

1

1

1

1

1

11

12

1

14

1

1

1

1

1

2

21

22

2

24

2

2

2

2

2

21

21

21

21

21

21

21

22

22

22

22

22

22

22

2

21

22

2

24

2

2

2

2

2

24

Claims (20)

Patentni zahtevi

1. Peptid koji ima sledeću strukurnu formulu I

R<1>-X-Y-R<2>(I) (SEQ ID NO:12)

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat, naznačen time što:

R<1>je vodonik, C1-C6 alkil, C6-C12 aril, C6-C12 aril C1-C6 alkil, C1-C20 alkanoil ili pGlu;

R<2>je -NH2ili -OH;

X je peptidna sekvenca koja ima formulu (Ic)

X1-Thr-His-X4-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10 (Ic) (SEQ ID NO:3)

pri čemu:

X1 je Asp, Ida, ili je odsutno;

X4 je Phe ili Dpa;

X5 je Pro;

X8 je Ile, Lys, Glu, Phe, Gln, ili Arg; i

X10 je Lys ili je odsutno;

i

Y je odsutno ili Y je peptidna sekvenca koja ima formulu (IIa)

Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11-Y12-Y13-Y14-Y15 (IIa) (SEQ ID NO:5) pri čemu

Y1 je Gly, Glu, Lys, Ser, ili je odsutno;

Y2 je Pro, Ala, Cys, Gly, ili je odsutno;

Y3 je Arg, Lys, Ala, ili je odsutno;

Y4 je Ser, Ala, ili je odsutno;

Y5 je Lys, Arg, ili je odsutno;

Y6 je Gly, Ser, Lys, Ile, Arg, Ala, Pro, Val, ili je odsutno;

Y7 je Trp, Val, ili je odsutno;

Y8 je Val, Thr, Tyr, Ala, Glu, Lys, Asp, ili je odsutno;

Y9 je Cys, Tyr, ili je odsutno;

Y10 je Met, Lys, Arg, Tyr, ili je odsutno;

Y11 je Arg, Met, Cys, Lys, ili je odsutno;

Y12 je Arg, Lys, Ala, ili je odsutno;

Y13 je Arg, Cys, Lys, Val, ili je odsutno;

24

Y14 je Arg, Lys, Pro, Cys, Thr, ili je odsutno; i

Y15 je Thr, Arg, ili je odsutno,

- pri čemu peptid formule (I) sadrži dva ili više cisteinskih ostataka; pri čemu je, izborno, peptid konjugovan sa jednom ili više dodatnih hemijskih komponenti; i pri čemu peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat ima hepcidinsku aktivnost.

2. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što peptid sadrži dva cisteinska ostatka povezana putem disulfidne veze.

3. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, naznačen time što je R<1>vodonik, izovalerijanska kiselina, izobuterna kiselina ili acetil.

4. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, naznačen time što je peptid konjugovan sa jednom ili više dodatnih hemijskih komponenti, izborno pri čemu su jedna ili više dodatnih hemijskih komponenti lipofilni supstituenti i/ili polimerne komponente.

5. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, naznačen time što

X je peptidna sekvenca koja ima formulu (Id)

X1-Thr-His-Phe-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10 (Id) (SEQ ID NO:4)

pri čemu

X1 je Asp ili Ida;

X5 je Pro;

X8 je Ile, Lys, ili Phe; i

X10 je odsutno.

6. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, naznačen time što,

Y je peptidna sekvenca koja ima formulu (IIg) Y1-Pro-Y3-Ser-Y5-Y6-Y7-Y8-Cys-Y10 (IIg) (SEQ ID NO:11)

pri čemu:

Y1 je Glu ili Lys;

Y3 je Arg ili Lys;

Y5 je Arg ili Lys;

Y6 je Gly, Ser, Lys, Ile ili Arg;

Y7 je Trp ili je odsutno;

Y8 je Val ili je odsutno; i

Y10 je Lys ili je odsutno.

7. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što:

X1 je Asp ili IDA, X4 je Phe, ili X8 je Lys.

8. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što:

X1 je Asp ili IDA, X4 je Phe, i X8 je Lys.

9. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što peptid sadrži sekvencu izloženu u bilo kojoj od sekvenci pod brojem SEQ ID NO: 204-207, 210-226, 237, 241-255, 261-265, 270-276, 286, 288, 289, 369, 370 ili 372-375.

10. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što peptid sadrži jednu od sledećih sekvenci ili struktura:

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIIFGPRSKGWVCK-NH2(SEQ ID NO:38);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIIFEPRSKGWVCK-NH2(SEQ ID NO: 128) Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIIFGPRSKGWACK-NH2(SEQ ID NO:164);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIIFEPRSKGWVCK-NH2(SEQ ID NO:165);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIIFGPRSKGWVCKK-NH2(SEQ ID NO:168);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCI-K(PEG8)-FGPRSKGWVCK-NH2(SEQ ID NO:172); Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKF-K(PEG8)-PRSKGWVCK-NH2(SEQ ID NO:173); Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIIFGPRSRGWVC-K(PEG8)-NH2(SEQ ID NO:201); Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIIFGPRSRGWVC-K(PEG4)-NH2(SEQ ID NO:202;; Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIIFGPRSRGWVC-K(PEG2)-NH2(SEQ ID NO:203;; Izovalerijanska kiselina-DTHFPCI-K(Palm)-FGPRSKGWVCK-NH2(SEQ ID NO: 183); Izobuterna kiselina-DTHFPCIKFGPRSKGWVCK-NH2(SEQ ID NO: 185);

Cikloheksanska kiselina-DTHFPCIKFGPRSKGWVCK-NH2(SEQ ID NO: 191);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKF-K(Palm)-PRSKGWVCK-NH2(SEQ ID NO:217); Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFGP-K(Palm)-SKGWVCK-NH2(SEQ ID NO:219); Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFGPRS-K(Palm)-GWVCK-NH2(SEQ ID NO:220); Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFGPRSKGWVC-K(Palm)-NH2(SEQ ID NO:221);

24

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCI-K(PEG3-Palm)-FGPRSKGWVCK-NH2(SEQ ID NO:222);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKF-K(PEG3-Palm)-PRSKGWVCK-NH2(SEQ ID NO:223);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFGP-K(PEG3-Palm)-SKGWVCK-NH2(SEQ ID NO:224);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFGPRS-K(PEG3-Palm)-GWVCK-NH2(SEQ ID NO:225);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFGPRSKGWVC-K(PEG3-Palm)-NH2(SEQ ID NO:226);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFGPRSKGWVC-K(PEG8)-NH2(SEQ ID NO:176); Izovalerijanska kiselina-DTHFPCI-K(izoGlu-Palm)-FEPRSKGCK-NH2(SEQ ID NO:241);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKF-K(izoGlu-Palm)-PRSKGCK-NH2(SEQ ID NO:242);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFEP-K(izoGlu-Palm)-SKGCK-NH2(SEQ ID NO:243);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFEPK(izoGlu-Palm)-SKGWECK-NH2(SEQ ID NO:265);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFEPRS-K(izoGlu-Palm)-GCK-NH2(SEQ ID NO:244);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFEPRSK-K(izoGlu-Palm)-CK-NH2(SEQ ID NO:245);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFEPRSKGCK-K(izoGlu-Palm)-NH2(SEQ ID NO:246);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCI-K(Dapa-Palm)-FEPRSKGCK-NH2(SEQ ID NO:248); Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKF-K(Dapa-Palm)-PRSKGCK-NH2(SEQ ID NO:249); Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFEP-K(Dapa-Palm)-SKGCK-NH2(SEQ ID NO:250); Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFEPRS-K(Dapa-Palm)-GCK-NH2(SEQ ID NO:251); Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFEPRSK-K(Dapa-Palm)-CK-NH2(SEQ ID NO:252); Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFEPRSKGC-K(Dapa-Palm)-K-NH2(SEQ ID NO:253);

Izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKFEPRSKGCK-K(Dapa-Palm)-NH2(SEQ ID NO:254);

DTHFPCIIFGPRSKGWVCK;

DTHFPCIIFEPRSKGWVCK;

DTHFPCIIFGPRSKGW ACK;

DTHFPCIIFGPRSKGWVCKK;

DTHFPCIKFGPRSKGWVCK;

DTHFPCIKFGPRSKGWVCK;

DTHFPCIKFKPRSKGWVCK;

DTHFPCIIFGPRSRGWVCK;

DTHFPCIKFGPKSKGWVCK;

DTHFPCIKFEPRSKGCK;

DTHFPCIKFEPKSKGWECK;

DTHFPCIKFEPRSKKCK;

DTHFPCIKFEPRSKGCKK;

DTHFPCIKFKPRSKGCK; ili

DTHFPCIKFEPKSKGCK.

11. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što peptid sadrži sledeću sekvencu:

DTHFPCIKFEPRSKGCK,

DTHFPCIKFKPRSKGCK, ili

DTHFPCIKFGPRSKGWVCK.

12. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što peptid sadrži sledeću strukturu:

izovalerijanska kiselina-DTHFPCI-K(izoGlu-Palm)-FEPRSKGCK-NH2(SEQ ID NO:241) i pri čemu između dva Cys ostatka postoji disulfidna veza.

13. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što peptid sadrži sledeću strukturu:

izovalerijanska kiselina-DTHFPCIKF-K(izoGlu-Palm)-PRSKGCK-NH2(SEQ ID NO:242) i pri čemu između dva Cys ostatka postoji disulfidna veza.

14. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što peptid sadrži sledeću strukturu:

cikloheksanska kiselina-DTHFPCIKFGPRSKGWVCK-NH2(SEQ ID NO: 191) i pri čemu između dva Cys ostatka postoji disulfidna veza.

24

15. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što,

Y1 je Gly, Glu, Ser, ili je odsutno;

Y2 je Pro, Cys, ili je odsutno;

Y3 je Arg, Lys, Ala, ili je odsutno;

Y4 je Ser, Ala, ili je odsutno;

Y5 je Lys, Arg, ili je odsutno;

Y6 je Gly, ili je odsutno;

Y7 je Trp, Val, ili je odsutno;

Y8 je Val, Thr, Ala, Glu, Lys, Asp, ili je odsutno;

Y9 je Cys ili je odsutno;

Y10 je Lys ili je odsutno;

Y11 je odsutno;

Y12 je odsutno;

Y13 je odsutno;

Y14 je odsutno; i

Y15 je odsutno.

16. Farmaceutska kompozicija koja sadrži peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15 i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens.

17. Postupak za vezivanje feroportina ili indukciju internalizacije i degradacije feroportina in vitro, koji sadrži dovođenje u kontakt feroportina sa peptidom ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli ili solvatom prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15 ili kompozicijom prema patentnom zahtevu 16.

18. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15 ili kompozicija prema patentnom zahtevu 16 za upotrebu u lečenju bolesti metabolizma gvožđa, kod subjekta kome je to potrebno, pri čemu je bolest metabolizma gvožđa izborno izabrana od hemohromatoze, nasledne hemohromatoze, hemohromatoze usled HFE mutacije, hemohromatoze usled mutacije feroportina, hemohromatoze usled mutacije transferinskog receptora 2, hemohromatoze usled mutacije hemojuvelina, hemohromatoze usled mutacije hepcidina, juvenilne hemohromatoze, neonatalne hemohromatoze, deficijencije hepcidina, bolesti nagomilavanja gvožđa, nagomilavanja gvožđa usled transfuzije, talasemije, prelazne talasemije, alfa talasemije, β-talasemije, sideroblastne anemije, porfirije, kasne kožne porfirije, afričkog nagomilavanja gvožđa, hiperferitinemije, deficijencije ceruloplazmina, atransferinemije,

24

kongenitalne diseritropoetske anemije, anemije usled hronične bolesti, anemije usled zapaljenja, anemije usled infekcije, hipohromne mikrocitne anemije, anemije usled deficijencije gvožđa i anemije usled deficijencije gvožđa reflektorne na gvožđe, anemije usled hronične bolesti bubrega, rezistencije na eritropoetin, deficijencije gvožđa kod gojaznosti, drugih anemija, benignih ili malignih tumora koji prekomerno proizvode hepcidin ili izazivaju njegovu prekomernu proizvodnju, stanja sa viškom hepcidina, Fridrajhove ataksije, gracilnog sindroma, Halervorden-Špacove bolesti, Vilsonove bolesti, plućne hemosideroze, hepatocelularnog karcinoma, kancera, hepatitisa, ciroze jetre, pike, hronične bubrežne insuficijencije, insulinske rezistencije, dijabetesa, ateroskleroze, neurodegenerativnih poremećaja, multiple skleroze, Parkinsonove bolesti, Hantingtonove bolesti i Alchajmerove bolesti.

19. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat ili kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 18, naznačen time što je je bolest metabolizma gvožđa bolest nagomilavanja gvožđa, izborno izabrana od nasledne hemohromatoze, hemohromatoze gvožđa, hemohromatoze usled HFE mutacije, hemohromatoze usled mutacije feroportina, hemohromatoze usled mutacije transferinskog receptora 2, hemohromatoze usled mutacije hemojuvelina, hemohromatoze usled mutacije hepcidina, juvenilne hemohromatoze, neonatalne hemohromatoze, deficijencije hepcidina, nagomilavanja gvožđa usled transfuzije, talasemije, prelazne talasemije, alfa talasemije i β-talasemije.

20. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat ili kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 19, naznačen time što je bolest metabolizma gvožđa talasemija, izborno alfa talasemija ili β-talasemija.

24