CZ301130B6 - Zvýšená produkce lipidu obsahujících polyenové mastné kyseliny ve fermentorech kulturami mikrobu s vysokou hustotou ve fermentorech - Google Patents

Zvýšená produkce lipidu obsahujících polyenové mastné kyseliny ve fermentorech kulturami mikrobu s vysokou hustotou ve fermentorech Download PDF

Info

Publication number
CZ301130B6
CZ301130B6 CZ20022508A CZ20022508A CZ301130B6 CZ 301130 B6 CZ301130 B6 CZ 301130B6 CZ 20022508 A CZ20022508 A CZ 20022508A CZ 20022508 A CZ20022508 A CZ 20022508A CZ 301130 B6 CZ301130 B6 CZ 301130B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
microorganisms
lipids
fermentation
dissolved oxygen
amount
Prior art date
Application number
CZ20022508A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ20022508A3 (cs
Inventor
M. Reucker@Craig
Dimasi@Don
M. Hansen@Jon
J. Mirrasoul@Peter
B. Bailey@Richard
T. Weeder@George
Kaneko@Tatsuo
R. Barclay@William
Original Assignee
Martek Biosciences Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22653135&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ301130(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Martek Biosciences Corporation filed Critical Martek Biosciences Corporation
Publication of CZ20022508A3 publication Critical patent/CZ20022508A3/cs
Publication of CZ301130B6 publication Critical patent/CZ301130B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/80—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for aquatic animals, e.g. fish, crustaceans or molluscs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23D—EDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS, COOKING OILS
    • A23D9/00—Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/158—Fatty acids; Fats; Products containing oils or fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/065—Microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B1/00—Production of fats or fatty oils from raw materials
    • C11B1/10—Production of fats or fatty oils from raw materials by extracting
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/12—Unicellular algae; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6434—Docosahexenoic acids [DHA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/911—Microorganisms using fungi

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Zpusob pestování mikroorganismu, které jsou schopny produkovat lipidy, zvlášte lipidy obsahující polyenové mastné kyseliny, a zpusob výroby mikrobiálních lipidu, spocívají v tom, že se k fermentacnímu médiu, obsahujícímu mikroorganismy pridává nealkoholový zdroj uhlíku a omezený zdroj živin rychlostí postacující ke zvýšení hustoty biomasy fermentacního média na alespon 100 g/l, a množství rozpušteného kyslíku je udržováno na úrovni alespon 4 %.

Description

Zvýšená produkce lipidů obsahujících polyenové mastné kyseliny ve fermentorech kulturami mikrobů s vysokou hustotou ve fermentorech
Oblast techniky
Předložený vynález se týká nového způsobu pěstování mikroorganismů a izolování mikrobiálních lipidů. Zvláště se předložený vynález týká výroby mikrobiálních polynenasycených lipidů.
io
Dosavadní stav techniky
O produkci polyenových mastných kyselin (mastných kyselin obsahujících dvě nebo více nenasycených vazeb mezi atomy uhlíku) v eukaryotických mikroorganismech se předpokládalo, že vyžaduje přítomnost molekulárního kyslíku (tj. aerobní podmínky). Je tomu tak proto, že se předpokládá, že cis dvojná vazba vytvořená v mastných kyselinách všech neparazitických eukaryotických mikroorganismů zahrnuje přímou desaturační reakci závislou na kyslíku (oxidační mikrobiální desaturační systémy). Mezi další eukaryotické mikrobiální lipidy, o kterých je známo, že vyžadují molekulární kyslík, patří houbové a rostlinné steroly, oxykarotenoidy (tj.
xanthofyly), ubichinony a sloučeniny vyrobené z jakýchkoliv těchto lipidů (tj. sekundární metabolity).
Některé eukaryotické mikroby (jako jsou řasy, houby, včetně kvasinek, a protisti) demonstrovaly, že jsou dobrými producenty polyenových mastných kyselin ve fermentorech. Velmi vysoká hus25 tota kultivace (větší než asi 100 g/1 mikrobiální biomasy, zvláště v komerčním měřítku) může vést ke sníženým obsahům polyenových mastných kyselin a tudíž ke snížené produktivitě polyenových mastných kyselin. Tomu může být zčásti kvůli některým faktorům, mezi které patří obtížnost udržování vysokých hladin rozpuštěného kyslíku díky vysokému požadavku na kyslík vzhledem k vysoké koncentraci mikrobů ve fermentační živné půdě. Mezi způsoby pro udržování vyšších hladin rozpuštěného kyslíku patří zvýšení rychlosti provzdušňování a/nebo používání čistého kyslíku místo vzduchu pro provzdušňování a/nebo zvýšení rychlosti míchání ve fermentoru. Tato řešení obvykle zvyšují cenu výroby lipidů a základní cenu fermentačního zařízení a mohou způsobit další problémy. Například zvýšené provzdušňování může snadno vést k intenzívním pěnícím problémům ve fermentoru při vysoké hustotě buněk a zvýšené míchání může vést k rozbití mikrobiálních buněk díky zvýšeným střihovým silám ve fermentačním živném prostředí (toto způsobí, že lipidy se uvolňují do fermentační živné půdy, kde se mohou být oxidovány a/nebo degradovány enzymy). Mikrobiální rozbíjení buněk je zvýšeným problémem u buněk, které podléhají dusíkovému omezení nebo vymizení, aby se indukovala tvorba lipidů, což vede ke slabším buněčným stěnám.
Výsledkem je to, že jestliže eukaryotické mikroby produkující lipidy rostou ve velmi vysokých koncentracích buněk, jejich lipidy obvykle obsahují pouze velmi malá množství polyenových mastných kyselin. Například kvasinky Lipomyces starkeyi byly nechány růst na hustotu 153 g/1 s výslednou koncentrací lipidů 83 g/1 po 140 hodinách s použitím alkoholu jako zdroje uhlíku.
Přesto obsah polyenových mastných kyselin u kvasinek při koncentraci větší než 100 g/1 byl průměrně pouze 4,2 % z celkového množství mastných kyselin (při čemž spadl z vysoké hodnoty 11,5 % z celkového množství mastných kyselin při buněčné hustotě 20 až 30 g/1), Yamauchi a spol: J. Ferment. Technoí 1983, 61,275 až 280. To vede ke koncentraci polyenové mastné kyseliny pouze asi 3,5 g/1 a průměrné produktivitě polyenových mastných kyselin pouze asi
0,025 g/l/h. Dále pak - jedinou polyenovou mastnou kyselinou popsanou v kvasinkových lipidech byla Cl8:2.
U jiné kvasinky, Rhodotorula glutinus, bylo ukázáno, že má průměrnou produktivitu lipidů asi 0,49 g/l/h, ale také nízký celkový obsah polyenových kyselin ve svých lipidech (15,8% z celkového množství mastných kyselin, 14,7 % C18:2 a 1,2 % C18:3), což znamená produktivitu
-1CZ 301130 B6 polyenových mastných kyselin v kultuře s dávkovým napájením pouze asi 0,047 a 0,077 g/l/h u kontinuální kultury.
Jeden z autorů předloženého vynálezu již dříve ukázal, že jisté mořské mikrořasy řádu
Thraustochytriales mohou být vynikajícími producenty polyenových mastných kyselin ve fermentorech, zvláště tehdy, jestliže rostou v přítomnosti nízkého množství soli a zvláště při velmi nízkých hladinách chloridů. Jiní autoři popsali Thraustochytridy, které vykazují průměrnou produktivitu polyenových mastných kyselin (DHA, C22:6n=3, a DPA, C22:5n=6) asi 0,158 g/l/h, jestliže vyrostou na buněčnou hustotu 59 g/1 během 120 hodin. Tato produktivita však byla dosaio žena pouze při slanosti asi 50 % hodnoty slanosti mořské vody, koncentrace, která by způsobila vážnou korozi v konvenčních fermentorech z nerezavějící oceli.
Ceny produkovaných mikrobiálních lipidů obsahujících polyenové mastné kyseliny, a zvláště vysoce nenasycené mastné kyseliny, jako je Cl 8:4n-3, C20:4n-6, C20:5n-3, C22:5n-3, C22:5n15 6 a C22:6n-3, zůstávaly vysoké zčásti díky omezeným hustotám, při nichž eukaryotické mikroby obsahující vysoké polyenové mastné kyseliny rostly za omezené dostupnosti kyslíku jak při těchto vysokých buněčných koncentracích tak vyšších teplotách potřebných pro dosazení vysoké produktivity.
Existuje tedy potřeba způsobu pěstování mikroorganismů při vysoké koncentraci, která ještě usnadňuje zvýšenou produkci lipidů obsahujících polyenové mastné kyseliny.
Podstata vynálezu
Předložený vynález poskytuje způsob růstu mikroorganismů, které jsou schopny produkovat alespoň asi 20 % jejich biomasy jako lipidy, a způsoby výroby těchto lipidů. S výhodou tyto lipidy obsahují jednu nebo více polyenových mastných kyselin. Podle tohoto způsobu se k fermentačnímu médiu obsahujícímu eukaryotické mikroorganismy přidává zdroj uhlíku, s výhodou nealko30 holový zdroj uhlíku, a omezený zdroj živin, S výhodou se zdroj uhlíku a omezený zdroj živin přidává takovou rychlostí, která je postačující pro zvýšení hustoty biomasy fermentačního média na alespoň asi 100 g/1.
Podle jednoho aspektu předloženého vynálezu podmínky fermentace zahrnují stupeň zvýšení hustoty biomasy a stupeň produkce lipidů, přičemž uvedený stupeň zvyšování hustoty biomasy zahrnuje přidání zdroje uhlíku a omezeného zdroje živin, a stupeň produkce lipidů zahrnuje přidání zdroje uhlíku bez přidání omezeného zdroje dusíkatých živin pro to, aby se vytvořily podmínky, které indukují produkci lipidů.
Podle jiného aspektu předloženého vynálezu je množství rozpuštěného kyslíku přítomného ve fermentačním médiu během stupně produkce lipidů nižší než množství rozpuštěného kyslíku přítomného ve fermentačním mediu během stupně zvyšování hustoty biomasy.
Podle ještě jiného aspektu předloženého vynálezu jsou uvedené mikroorganismy vybrány ze sku45 piny sestávající z řas, hub (včetně kvasinek), protist, bakterií a jejich směsí, přičemž uvedené mikroorganismy jsou schopny produkovat polyenové mastné kyseliny nebo jiné lipidy, o kterých se obecně předpokládá, že pro svoji syntézu vyžadují molekulární kyslík. Zvláště užitečné mikroorganismy podle předloženého vynálezu jsou mikroorganismy, které jsou schopny produkovat lipidy ve fermentačním médiu s množstvím kyslíku asi méně než 3 % z nasycenosti.
Podle ještě jiného aspektu podle předloženého vynálezu se mikroorganismy pěstují dávkovým způsobem.
Podle ještě jiného aspektu podle předloženého vynálezu se udržuje množství kyslíku ve fermentaěním médiu během druhém poloviny fermentaěního procesu na méně než asi 3 % z hodnoty nasycenosti.
Jiné provedení podle předloženého vynálezu poskytuje způsob výroby mikrobiálních lipidů, který se vyznačuje tím, že zahrnuje následující stupně:
a) ve fermentaČním médiu se nechají růst mikroorganismy tak, aby se zvýšila hustota biomasy uvedeného fermentaěního média na alespoň asi 100 g/1,
b) zajistí se takové fermentační podmínky, které jsou postačující pro to, aby umožnily uvedeio ným mikroorganismům produkovat uvedené lipidy, a
c) izolují se uvedené lipidy, přičemž více než asi 15 % z uvedeného množství lipidů znamená polynenasycené lipidy.
Jiný aspekt podle předloženého vynálezu poskytuje způsob izolace lipidů, který zahrnuje:
d) odstranění vody z fermentaěního média, takže se získají suché mikroorganismy, a e) izolování uvedených lipidů z uvedených suchých mikroorganismů.
S výhodou stupeň odstraňování vody zahrnuje uvedení fermentaěního média do kontaktu přímo s bubnovou sušárnou bez předchozího odstřeďování.
Jiný aspekt podle předloženého vynálezu poskytuje způsob izolace lipidů, který zahrnuje:
d) zpracování fermentační živné půdy tak, aby došlo k permeabilizaci, lyžování nebo prasknutí mikrobiálních buněk, a
e) izolování lipidů z fermentační živné půdy gravitačním dělením, s výhodou odstřeďováním, bez pomoci nebo s pomocí rozpouštědla rozpustného ve vodě, které napomáhá rozbití emulze lipidu ve vodě.
S výhodou se mikrobiální buňky zpracovávají ve stupni ad c) ve fermentorů nebo v podobné nádobě.
Podle dalšího aspektu podle předloženého vynálezu se získává způsob obohacení obsahu polyenové mastné kyseliny v mikroorganismu. Tento způsob zahrnuje fermentaci mikroorganismů v růstovém médiu, které obsahuje rozpuštěný kyslík v množstvím menším než je 10 %.
Dalším aspektem tohoto vynálezu je heterotrofhí způsob výroby produktů a mikroorganismů. Tento způsob zahrnuje kultivování mikroorganismů obsahujících polyketidové syntázové geny v růstovém médiu a udržování hladiny rozpuštěného kyslíku v kultuře na méně než asi 10 procentech.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1 je tabulka a vynesení různých parametrů produkce lipidů mikroorganismy proti množství kyslíku rozpuštěného ve fermentaČním médiu.
Podrobný popis vynálezu
Předložený vynález poskytuje způsob růstu mikroorganismů, jako jsou například řasy, houby so (včetně kvasinek), protisti a bakterie. Mikroorganismy jsou s výhodou vybrány ze skupiny sestávající zřas, protist ajejich směsí. Výhodněji mikroorganismy znamenají řasy. Navíc, způsob podle předloženého vynálezu se může používat pro výrobu rozmanitých lipidových sloučenin, zvláště nenasycených lipidů, s výhodou polynenasycených lipidů (tj. lipidů obsahujících alespoň dvě nenasycené vazby atom uhlíku-atom uhlíku, např. dvojné vazby) a výhodněji vysoce nenasycené lipidy (tj. lipidy obsahující 4 nebo více nenasycených vazeb atom uhlíku - atom uhlíku), jako jsou omega-3 a/nebo omega-6 polynenasycené mastné kyseliny, mezi které patří dokosahexenová kyselina (tj. DHE), a další přirozeně se vyskytující nenasycené, polynenasycené a vysoce nenasycené sloučeniny. Mezi pojem „lipid“, jak je zde používán, patří fosfolipidy, volné mastné kyseliny, estery mastných kyselin, triacylglyceroly, steroly a estery sterolů, karotenoidy, xanthofylly (např. oxykarotenoidy), uhlovodíky, sloučeniny odvozené od isoprenoidů a další lipidy známé odborníkovi z oblasti techniky.
io Podrobněji - způsoby podle předloženého vynálezu jsou užitečné při výrobě mikrobiálních polyenových mastných kyselin, karotenoidů, houbových sterolů, fytosterolů, xanthofylů, ubichinonů a dalších sloučenin odvozených od isoprenoidů, o kterých se obecně předpokládá, že vyžadují kyslík pro produkci nenasycených vazeb atom uhlíku - atom uhlíku (tj. aerobní podmínky) a jejich sekundárních metabolitů. Konkrétně - způsoby podle předloženého vynálezu jsou zvláště užitečné při pěstování mikroorganismů, které produkují polyenovou mastnou kyselinu (polyenové mastné kyseliny) a pro výrobu mikrobiální polyenové mastné kyseliny (mikrobiálních polyenových mastných kyselin).
I když se způsoby podle předloženého vynálezu mohou používat pro růst rozmanitých mikro20 organismů a pro získání sloučenin obsahujících polynenasycené lipidy produkované těmito mikroorganismy, z důvodů stručnosti, konvence a ilustrace, bude tento detailní popis diskutovat způsob pěstování mikroorganismů, které jsou schopny produkovat lipidy obsahující omega-3 a/nebo omega-6 polynenasycené mastné kyseliny, zvláště mikroorganismů, které jsou schopny produkovat DHA (nebo úzce související sloučeniny, jako je DPA, EPA nebo ARA). Mezi výhodné mikroorganismy patří mikrořasy, houby (včetně kvasinek), protisti a bakterie. Jednu skupinu výhodných mikroorganismů tvoří členové mikrobiální skupiny zvané Stramenopily, mezi které patří mikrořasy a mikroorganismy podobající se řasám. Mezi Stramenopily patří následující skupiny mikroorganismů: Hamatory, Proteromonady, Opaliny, Developayella, Diplophrys, Labrinthulidy, Thraustochytridy, Biosecidy, Oomycety, Hypochytridiomycety, Commation,
Reticulosphaera, Pelagomony, Pelagococcus, Ollicola, Aureococcus, Parmaley, Diatomy, Xanthofyty, Phaeofyty (hnědé rasy), Eustigmatofyty, Raphidofyty, Synuridy, Axodiny (včetně Rhizochromulinaales, Perdinellales, Dictyochaley), Chrysomeridaley, Sarcinochrysidaley, Hydruraly, Hubberdialy a Chromulinaley. Mezi další výhodné skupiny mikrořas patří členové zelených řas a dinoflagelát, mezi které patří členové rodu Crypthecodium, Podrobněji - výhodná provedení podle předloženého vynálezu budou diskutována s ohledem na způsob růstu mořských mikroorganismů, zvláště řas, jako jsou Thraustochytridy řády Thraustochytriales, podrobněji Thraustochytriales rodu Thraustocyhtrales a Schizochytrium, včetně Thraustocyhtriales, které jsou obecně popsány v patentech US 5 340 594 a US 5 340 742, oba Barclayho, které jsou zde zahrnuty celé jako odkazy. Je třeba poznamenat, že mnoho odborníků souhlasí s tím, že Ulkenia není jiný rod, ale že ve skutečnosti je částí rodu Schyzochytrium. Pojem rod Schyzochytrium, jak se zde používá, bude zahrnovat Ulkenia.
Výhodné mikroorganismy jsou ty, které produkují sloučeniny, o které se jedná, systémy polyketidové syntázy. Mezi takové mikroorganismy patří mikroorganismy, které mají endogenní polyketidový syntázový systém, a mikroorganismy, do nichž byl polyketidový syntázový systém geneticky vložen. Polyketidy jsou strukturně různé přírodní produkty, které mají rozmanité biologické aktivity, mezi které patří antibiotické a farmakologické vlastnosti. Biosyntéza základního uhlíkového skeletu polyketidů je katalyzována polyketidovou syntézou. Podobně jako strukturně a mechanisticky příbuzné syntázy mastných kyselin, polyketidové syntázy katalyzují opakované dekarboxylaění kondenzace mezi acylthioestery, čímž po každé prodlouží uhlíkový řetězec o dva atomy uhlíku. Na rozdíl od syntáz mastných kyselin, polyketidové syntázy mohou generovat velkou strukturní variabilitu konečného produktu. Jednotlivé polyketidové syntázové systémy to mohou dělat použitím jiných výchozích jednotek než je acetát, použitím methyl- nebo ethyl-malonátu jako prodlužující jednotky a měněním redukčního cyklu ketoredukce, dehydratace a enoylové redukce na betaketoskupině vytvořené po každé kondenzaci. Zvláště zajímavé je zde to, že dvojné vazby mezi atomy uhlíku, které jsou zavedeny dehydratačním stupněm, mohou být v konečném produktu zachovány. Dále pak, i když tyto dvojné vazby jsou původně v trans konfiguraci, mohou se převrátit na cis konfiguraci nacházející se vDHA (a dalších polyenových mastných kyselinách, o které se jedná) enzymatickou izomerizací. Jak k reakcím s dehydrázou tak k izomerizačním reakcím může docházet v nepřítomnosti molekulárního kyslíku.
S výhodou se podle předloženého vynálezu získává heterotrofní způsob výroby produktů a mikrorganismů. Tento způsob s výhodou zahrnuje kultivování mikroorganismů v růstovém médiu, ío přičemž tyto mikroorganismy obsahují polyketidový syntázový systém. S výhodou se množství rozpuštěného kyslíku udržuje na méně než asi 8 procentech, s výhodou na méně než asi 4 procentech, výhodněji na méně než asi 3 procentech a výhodněji na méně než asi 1 procentu.
Tomu je však třeba rozumět tak, že to je myšleno tak, že vynález jako celek by tím měl být ome15 zen a že zručný odborník z oblasti techniky si uvědomí že koncept předloženého vynálezu bude aplikovatelný na jiné mikroorganismy produkující rozmanité jiné sloučeniny, včetně dalších lipidových prostředků, v souladu se způsoby zde diskutovanými.
Za předpokladu relativně konstantní rychlosti produkce lipidů řasami se zdá být zřejmé, že vyšší hustota biomasy povede k vyššímu celkovému množství lipidů, které jsou produkovány daným objemem. Běžný konvenční fermentační způsob pro růst řas poskytuje hustotu biomasy od asi 50 do asi 80 nebo méně g/1. Autoři předloženého vynálezu zjistili, že použitím způsob podle předloženého vynálezu lze dosáhnout významně vyšší hustoty biomasy než je běžně známá hustota biomasy. S výhodou způsoby podle předloženého vynálezu produkují hustotu biomasy alespoň asi 100 g/1, výhodněji alespoň asi 130 g/1, ještě výhodněji alespoň asi 150 g/1, ještě výhodněji alespoň asi 170 g/1 a nej výhodněji větší než 200 g/1. Při tak vysoké hustotě biomasy, i když pomalu klesá rychlost produkce lipidů řasami, je celková rychlost produkce lipidů na objem významně vyšší než u běžně známých způsobů.
Mezi způsoby pěstování mikroorganismů řádu Thraustochytriales podle předloženého vynálezu patří přidávání zdroje uhlíku a zdroje omezených živin k fermentačnímu prostředí, které obsahuje mikroorganismy, takovou rychlostí, kteráje postačující pro zvýšení hustoty biomasy fermentačního média na shora popsanou hustotu. Pojem „omezený zdroj živin“, jak se zde tento pojem používá, označuje zdroj živin (zahrnující živinu samotnou) podstatných pro růst mikroorganismu v tom, že jestliže se omezená živina vyčerpá z růstového média, její nepřítomnost podstatně limituje růst nebo replikaci mikroorganismu. Avšak vzhledem k tomu, že stále ještě existuje hojnost dalších živin, organismus může pokračovat při výrobě hromadění intracelulámích a/nebo extracelulámích produktů. Výběrem specifických omezujících živin lze kontrolovat typy produktů, které jsou akumulovány. Poskytnutí omezeného zdroje živin vjistém množství tedy umožňuje regulovat jak rychlost růstu mikroorganismů tak produkci nebo akumulaci žádaných produktů (např. lipidů). Tento způsob fermentace, při kterém se jeden nebo více substrátů (např. zdroj uhlíku a omezený zdroj dusíkových živin) přidává (přidávají) postupně po Částech, se obvykle označuje jako způsob fermentace s dávkovým napájením. Bylo zjištěno, že jestliže se substrát přidává do dávkového fermentačního způsobu, velká množství přítomného zdroje uhlíku (např. asi 200 g/1 nebo větší hustota biomasy než 60 g/I) mají škodlivý účinek na mikroorganismy. Bez ohledu na teorii se předpokládá, že takové vysoké množství zdroje uhlíku způsobuje škodlivé účinky, mezi které patří osmotický stres, pro mikroorganismy, a inhibuje počáteční produktivitu mikroorganismů. Způsoby podle předloženého vynálezu se těmto nežádoucím škodlivým účinkům vyhýbají, přičemž poskytují dostatečné množství substrátu, aby se dosáhla vysoká shora popsaná hustota biomasy mikroorganismů.
Způsoby podle předloženého vynálezu pěstování mikroorganismů mohou zahrnovat stupeň zvyšování hustoty biomasy. Ve stupni zvyšování hustoty biomasy je primárním předmětem fermentačního procesu zvýšit hustotu biomasy ve fermentačním médiu tak, aby se získala shora popsaná hustota biomasy. Rychlost přidávání zdroje uhlíku se typicky udržuje na příslušné úrovni nebo v příslušném rozmezí, které nezpůsobuje významný škodlivý účinek na produktivitu mikroorganismů nebo na životaschopnost mikroorganismů pocházející z nedostatečných schopností fermentačního zařízení odstraňovat teplo z kapalného živného média a přenášet plyny do a z kapalného živného média. Odborníkovi z oblasti techniky je dobře známo příslušné rozmezí množství zdroje uhlíku potřebné pro příslušný mikroorganismus během fermentačního procesu. Zdrojem uhlíku podle předloženého vynálezu je s výhodou nealkoholový zdroj uhlíku, tj. zdroj uhlíku, který neobsahuje alkohol. Pojem „alkohol“, jak je zde používán, znamená sloučeninu se 4 nebo méně atomy uhlíku a s jednou hydroxylovou skupinou, např. methanol, ethanol a isopropanol, ale pro účely tohoto vynálezu nezahrnuje organické hydroxykyseliny, jako je kyselina mléčná, a ío podobné sloučeniny. Zdrojem uhlíku podle předloženého vynálezu je s výhodněji cukr, mezi který patří, ale bez omezení na ně, fruktóza, glukóza, sacharóza, melasa a škrob. Další vhodné jednoduché a složité zdroje uhlíku a zdroje dusíku jsou popsány ve shora uvedených citovaných patentech. Typicky se však jako primární zdroj uhlíku používá cukr, s výhodou kukuřičný sirup. Jako zdroj uhlíku mohou sloužit také mastné kyseliny, ve formě mastných hydroxykyselin, tri15 glyceridy a di- a mono-glyceridy.
Zvláště výhodnými zdroji dusíku jsou močovina, dusičnan, dusitan, sojový protein, aminokyseliny, protein, kukuřičný extrakt zvaný com-steep, kvasinkový extrakt, živočišné vedlejší produkty, anorganické amonné soli, výhodněji amonné soli síranu a hydroxidu a nej výhodněji hydroxid amonný. Mezi další zdroje omezených živin patří zdroje uhlíku (jak shora uvedeno), fosforečnanové zdroje, vitaminové zdroje (jako jsou zdroje vitaminu Bt2, zdroje pantothenátu a zdroje thiaminu), zdroje stopových prvků (jako jsou zdroje zinku, mědi, kobaltu, niklu, železa, manganu a molybdenu) a zdroje hlavních kovů (jako jsou zdroje manganu, vápníku, sodíku a draslíku, zdroje oxidů křemičitého atd.). Mezi zdroje stopových prvků a zdroje hlavních kovů mohou být zahr25 nuty síranové a chloridové soli těchto kovů (například, ale bez omezení na ně, MgSO4.7H2O, MnCh.4 H2O, ZnSO4.7 H2O, CoC126 H2O, Na2MoO4.2 H2O, CuSO4.5 H2O, NiSO4.6 H2O, FeSO4.7 H2O, CaCl2, K2SO4, KCl aNa2SO4).
Jestliže se jako zdroj dusíku používá amoniak, fermentační médium se stává kyselým, jestliže se so prostředí nereguluje přidáváním báze nebo pufrů. Jestliže se používá hydroxid amonný jako primární zdroj dusíku, může sloužit také pro zajištění regulace pH. Mikroorganismy řádu
Thraustochytriales, zvláště Thraustochytriales rodu Thraustochytrium a Schizochytrium, budou růst v širokém rozmezí pH, např. od asi pH 5 do asi pH 11, Příslušné rozmezí pH pro fermentaci příslušného mikroorganismu je ve znalostech zručného odborníka z oblasti techniky.
Mezi způsoby pěstování mikroorganismů podle předloženého vynálezu patří produkční stadium. V tomto stadiu primárním použitím substrátu mikroorganismy není zvýšení hustoty biomasy, ale spíše použití substrátu pro produkci lipidů. Je třeba si uvědomit, že lipidy jsou produkovány mikroorganismy během také stadia zvyšování hustoty biomasy; jak však bylo shora uvedeno, pri40 mámím cílem ve stupni zvyšování hustoty biomasy je zvýšit hustotu biomasy. Typicky se během produkčního stadia přidávání substrátu omezených živin snižuje nebo se s výhodou zastaví.
Dříve bylo obecně předpokládáno, že přítomnost rozpuštěného kyslíku ve fermentačním médiu je rozhodující pro produkci polynenasycených sloučenin, mezi které patří omega-3 a/nebo omega45 6 polynenasycené mastné kyseliny, eukaryotickými mikroorganismy. Předpokládá se tedy, že relativně velké množství rozpuštěného kyslíku ve fermentačním médiu je výhodné. Překvapivě a neočekávaně však autoři předloženého vynálezu zjistili, že rychlost produkce lipidů se dramaticky zvýší, jestliže je sníženo množství rozpuštěného kyslíku během produkčního stupně. I když tedy množství rozpuštěného kyslíku ve fermentačním médiu během stupně zvyšujícího hustotu biomasu je s výhodou alespoň asi 8 % z hodnoty nasycenosti, a s výhodou alespoň asi 4 % z hodnoty nasycenosti, během produkčního stupně se rozpuštěný kyslík (DO) ve fermentačním médiu sníží na asi 3 % nasycenosti nebo na nižší hodnotu, s výhodou na asi 1 nebo méně % z nasycenosti, a výhodněji asi na 0 % nasycenosti. Na počátku fermentace může být DO na hodnotě nasycenosti nebo blízko nasycenosti a jak mikroby rostou, je možné se přesunout na tyto nízké hodnoty DO. V jednom příslušném provedení podle předloženého vynálezu se množství kyslíku rozpuštěného ve fermentačním mediu mění během procesu fermentace. Například u fermentačního procesu s celkovou dobou fermentace od asi 90 do asi 100 hodin se množství kyslíku rozpuštěného ve fermentačním mediu udržuje na asi 8 % během prvních 24 hodin, asi 4 % od asi
24. hodiny do asi 40. hodiny, a asi 0,5 nebo méně % od asi 40. hodiny do konce fermentačního procesu.
Množství rozpuštěného kyslíku přítomného ve fermentačním médiu může být regulováno regulováním množství kyslíku v homí části (hlavě) fermentor nebo s výhodou regulováním rychlosti, kterou se fermentační médium třepe (nebo míchá). Například vysoká rychlost třepání (nebo to míchání) vede k relativně vyššímu množství kyslíku rozpuštěného ve fermentačním médiu než nízká rychlost třepání. Například u fermentoru s objemem asi 63 000 litrů se rychlost třepání nastaví na od asi 50 otáček za minutu do asi 70 otáček za minutu během prvních dvanácti hodin, od asi 55 otáček za minutu do asi 80 otáček za minutu během asi 12. hodiny až asi 18. hodiny a od asi 70 otáček za minutu do asi 90 otáček za minutu od asi 18, hodiny do konce doby fermen15 tačního procesu, čímž se dosáhne shora diskutované množství rozpuštěného kyslíku pro celkovou dobu fermentačního procesu od asi 90 od asi 100 hodin. Příslušné rozmezí rychlostí třepání potřebných pro dosažení příslušného množství kyslíku rozpuštěného ve fermentačním médiu může být snadno stanoveno zručným odborníkem z oblasti techniky.
Výhodnou teplotou pro způsoby podle předloženého vynálezu je alespoň asi 20 °C, výhodněji alespoň asi 25 °C a nej výhodněji alespoň asi 30 °C. Je třeba si uvědomit, že chladná voda může zadržovat vyšší množství rozpuštěného kyslíku než teplá voda, Vyšší teplota fermentačního média má tedy další příznivý účinek na snížení množství rozpuštěného kyslíku, což je zvláště žádoucí, jak shora popsáno.
Některé mikroorganismy mohou vyžadovat jistá množství solných minerálů ve fermentačním médiu. Tyto solné minerály, zvláště chloridové ionty, mohou způsobovat korozi fermentoru nebo jiného dalšího zařízení pro zpracování. Pro předcházení nebo snížení těchto nežádoucích účinků díky relativně velkému množství chloridových iontů přítomných ve fermentačním médiu, způso30 by podle předloženého vynálezu mohou zahrnovat také použití sodných solí neobsahujících chlorid, s výhodou síranu sodného, ve fermentačním prostředí jako zdroj sodíku. Podrobněji - významná část sodíkových požadavků fermentace je dodávána jako sodné soli neobsahující chlorid. Například méně než asi 75 % sodíku ve fermentačním médiu je dodáváno jako chlorid sodný, výhodněji méně než asi 50 % a výhodněji méně než asi 25 %. Mikroorganismy podle předlože35 ného vynálezu mohou růst při koncentracích chloridů menších než asi 3 g/1, výhodněji menších než asi 500 mg/1, výhodněji menších než asi 250 mg/1 a výhodněji mezi asi 60 a asi 120 mg/1.
Mezi sodné soli neobsahující chlorid může patřit bezvodá soda (směs uhličitanu sodného a oxidu sodného), uhličitan sodný, hydrogenuhličitan sodný, síran sodný a jejich směsi, a s výhodou mezi ně patří síran sodný. Bezvodá soda, uhličitan sodný a hydrogenuhličitan sodný mají tendenci zvyšovat pH fermentačního média, takže vyžadují kontrolní stupně, aby se udržovalo příslušné pH média. Koncentrace síranu sodného je účinná pro to, aby vyhovovala požadavkům mikroorganismů na slanost, s výhodou je koncentrace sodíku (vyjádřenojako g/1 sodíku) alespoň asi 1 g/1, výhodněji v rozmezí od asi 1 do asi 50 g/1, a výhodněji v rozmezí od asi 2 do asi 25 g/1.
Různé fermentační parametry pro očkování, růst a izolaci mikroorganismů jsou diskutovány podrobně v patentu US 5 130 242, který je zde celý zahrnut jako odkaz. Pro izolaci mikroorganismů z fermentačního média se mohou používat jakékoliv běžně známé izolační způsoby, mezi které patří odstřeďování, filtrace, ultrafiltrace, dekantace a odpaření rozpouštědla. Autory předlo50 ženého vynálezu bylo zjištěno, že kvůli takové vysoké hustotě biomasy pocházející ze způsobu podle předloženého vynálezu, jestliže se pro izolaci mikroorganismů použije odstřeďování, je výhodné zředit fermentační médium přidání vody, která snižuje hustotu biomasy, čímž umožní účinnější oddělení mikroorganismů z fermentačního média.
Velice vysoké hustoty biomasy dosažené v předloženém vynálezu také usnadňují způsoby izolace mikrobiálních lipidů „bez rozpouštědla“. Výhodné způsoby lyžování buněk ve fermentoru jsou popsány v US patentové přihlášce 60/177 125, nazvané „Solventless Extraction Process“, podané
19. ledna 2000, v US patentové přihlášce US 2001/0766 500, nazvané „Solventless Extraction
Process“, podané 19. ledna 2001, a v PCT patentové přihlášce WO 01/53512, nazvané „Solventless Extraction Process“, podané 19. ledna 2001, které jsou zde celé zahrnuty jako odkazy. Mezi výhodné způsoby izolace lipidů, jakmile jsou buňky ve fermentoru permeabilizovány, rozbity nebo lyžovány (což umožňuje, že lipidová emulze je rozbita a frakce bohatá na lipidy se izoluje) patří způsob odstraňování oleje uvedený ve spisu WO 96/05278, který je zde celý zahrío nut jako odkaz. Podle tohoto způsobu se sloučenina rozpustná ve vodě, např. alkohol nebo aceton, přidá k emulzi oleje ve vodě, aby se tato emulze rozbila. Výsledná směs se rozdělí gravitačním dělením, např. odstřeďováním. Tento způsob lze také modifikovat pro použití jiných činidel (voda a/nebo rozpustný olej) pro rozbití emulze.
Alternativně se mikroorganismy z fermentačního média izolují v suché formě odpařením vody z fermentačního média, například uvedením fermentačního média do kontaktu přímo (tj. bez předběžného zahuštění, například odstřeďováním) se sušičkou, jako je například bubnové sušicí zařízení, tj. přímým způsobem izolace v bubnové sušičce. Jestliže se pro izolování mikroorganismů používá přímý proces izolace v bubnové sušičce, typicky se používá bubnová sušička vyhřívaná parou. Navíc, jestliže se používá přímý způsob izolace v bubnové sušičce, hustota biomasy fermentačního média je s výhodou alespoň asi 130, výhodněji alespoň asi 150, a nejvýhodněji alespoň asi 180 g/l. Tato vysoká hustota biomasy je obecně vyžadována pro přímý způsob izolace v bubnové sušičce, protože při vysoké hustotě biomasy fermentační medium obsahuje dostatečné množství vody pro významné ochlazení bubnu, což vede k neúplnému vysušení mik25 roorganismů. Další způsoby sušení buněk, včetně sušení rozprašováním, jsou dobře známy zručným odborníkům z oblasti techniky.
Způsoby podle předloženého vynálezu poskytují průměrnou rychlost produkce lipidů alespoň asi 0,5, s výhodou alespoň při 0,7, výhodněji alespoň asi 0,9, a nejvýhodněji alespoň asi 1,0 g/l/h.
Navíc - lipidy produkované způsoby podle předloženého vynálezu obsahují polynenasycené lipidy v množství větším než asi 15, s výhodou větším než asi 20, výhodněji větším než asi 25, ještě výhodněji větším než asi 30, a nejvýhodněji větším než asi 35 %. Lipidy lze izolovat buď z vysušených mikroorganismů, nebo z mikroorganismů ve fermentačním médiu. Obvykle alespoň asi 20 % lipidů produkovaných mikroorganismy podle způsobů podle předloženého vynálezu jsou omega-3 a/nebo omega-ó polynenasycené mastné kyseliny, s výhodou alespoň asi 30 % lipidů jsou omega-3 a/nebo omega-6 polynenasycené mastné kyseliny, výhodněji alespoň asi 40 % lipidů jsou omega-3 a/nebo omega-6 polynenasycené mastné kyseliny, a nejvýhodněji alespoň asi 50 % lipidů jsou omega-3 a/nebo omega-6 polynenasycené mastné kyseliny. Způsoby podle předloženého vynálezu poskytují také průměrnou rychlost produkce omega—3 mastné kyseliny (např. DHA) alespoň asi 0,2 g omega-3 mastné kyseliny (např. DHA)/l/h, s výhodou alespoň asi 0,3 g omega-3 mastné kyseliny (např. DHA)/l/h, výhodněji alespoň asi 0,4 g omega-3 mastné kyseliny (např. DHA)/l/h, a nejvýhodněji alespoň asi 0,5 g omega-3 mastné kyseliny (např. DHA)/l/h, Způsoby podle předloženého vynálezu poskytují také průměrnou rychlost produkce omega-6 mastné kyseliny (např. DPAn-6) alespoň asi 0,07 g omega-6 mastné kyseliny (např.
DPAn-6)/l/h, s výhodou alespoň asi 0,1 g omega-6 mastné kyseliny (např. DPAn-6)/I/h, výhodněji alespoň asi 0,13 g omega-6 mastné kyseliny (např. DPAn-6)/l/h, a nejvýhodněji alespoň asi 0,17 g omega-6 mastné kyseliny (např. DPAn-6)/l/h. Nebo ještě jinak - alespoň asi 25 % lipidu znamená DHA (vztaženo na celkový obsah methylesteru mastné kyseliny), s výhodou alespoň asi 30, výhodněji alespoň asi 35 a nejvýhodněji alespoň asi 40 %.
Mikroorganismy, lipidy z nich extrahované, biomasa zbývající po extrakci lipidů nebo jejich kombinace lze používat přímo jako potravinové přísady, jako je například přísada v nápojích, omáčkách, denních základních potravinách (jako je mléko, jogurt, sýr a zmrzlina) a v pečeném zboží, jako výživový doplněk (ve formě tobolek nebo tablet), v potravinách nebo jako potravino55 vý doplněk pro jakéhokoliv živočicha, jehož maso nebo produkty jsou konzumovány lidmi, jako potravinový doplněk, včetně jídla pro děti a kojence, a jako farmaceutické přípravky (při přímé nebo doplňkové terapeutické aplikaci). Pojem „zvíře“ znamená jakýkoliv organismus patřící do oblasti zvířat (Animalia) a patří sem, bez omezení, jakékoliv zvíře, od něhož je odvozeno drůbeží maso, mořská potrava, hovězí, vepřové nebo jehněčí. Mořská potrava je odvozena od, bez ome5 zení, ryb, krabů a měkkýšů. Mezi pojem „produkty“ patří jakýkoliv produkt, jiný než maso, odvozený od takových zvířat, mezi které patří, bez omezení, vejce, mléko nebo další produkty. Jestliže se takoví živočichové krmí, polynenasycené lipidy mohou být zahrnuty do masa, mléka, vajec nebo jiných produktů takových živočichů, aby se v nich zvýšil obsah těchto lipidů.
io Další předměty, výhody a nové znaky tohoto vynálezu budou zřejmé odborníkům z oblasti techniky pro prozkoumání následujících příkladů, které nejsou zamýšleny jako omezené.
Příklady provedení vynálezu
Kmen Schizochytrium používaný v těchto příkladech produkuje dvě primární polyenové kyseliny, DHAn-3 a DPAn-6 v poměru obvykle asi 3:1, a malá množství dalších polyenových kyselin, jako je EPA a C20:3, za rozmanitých fermentačních podmínek. Zatímco následující příklady uvádějí pouze seznam množství DHA, lze tedy snadno vypočítat množství produkované DPA(N20 6) použitím shora popsaného poměru.
Příklad 1
Tento příklad ilustruje vliv obsahu kyslíku ve fermentačním médiu na produktivitu lipidů.
Byly měřeny fermentační výsledky Schizochytrium ATCC 20888 při různých množstvích rozpuštěného kyslíku. Výsledky jsou uvedeny na obrázku 1, kde RCS je zbytková koncentrace cukru a DCW je hmotnost suchých buněk,
Příklad 2
Tento příklad také ilustruje vliv nízkého množství kyslíku na obsah DHA (% suché hmotnosti) v konečném produktu biomasy fermentaěního média.
„Zmenšený“ typ pokusu byl prováděn ve 250ml Erlenmeyerových baňkách, aby byl napodoben účinek nízkého množství kyslíku na obsah DHA v buňkách Schizochytrium sp. ve fermentorech ve velkém měřítku. Schizochytrium sp. (ATCC 20 888) byl kultivován v médiu 04-4. Toto kulti40 vaění medium sestávalo z následujících složek (najeden litr) rozpuštěných v destilované vodě: 12,61 g Na2SO4, 1,2 g MgSO4.7 H2O, 0,25 g KC1, 0,05 g CaCl2, 7,0 g hydrogenglutamátu sodného, 10 g glukózy, 0,5 g KH2PO4, 0,1 g NaHCO3, 0,1 g kvasinkového extraktu, 1,0 ml vitaminové směsi, 1,00 ml PII kovů. Směs PII kovů obsahuje (v jednom litru): 6,0 g Na2EDTA, 0,29 g FeCl3.6 H2O, 6,84 g H3BO3, 0,86 g MnCl2.4 H2O, 0,06 g ZnCl2, 0,026 g CoCI2.6 H2O, 0,052 g
NiSO4.H2O, 0,002g CuSO4.H2O a 0,005 g Na2MoO4.2 H2O. Vitaminová směs obsahuje (v jednom litru): 100 mg thiaminu, 0,5 mg biotinu a 0,5 mg kyankobalaminu. Hodnota pH kultivačního média byla upravena na 7,0 a médium bylo pak sterilováno zfiltrováním.
Myšlenka, která vede k tomuto zmenšenému pokusu, byla kultivovat buňky v kultivačních baň50 kách s různými objemy kultivačního média v baňkách - téměř plná baňka (např. 200 ml ve 250ml kultivační baňce) by se dobře nepromíchala na trepací desce a proto by, jak buňky rostou, bylo dosaženo podmínek s malým množstvím rozpuštěného kyslíku. V každém pokusu byla proto provedena 4 různá uspořádání, přičemž každé žních bylo provedeno dvakrát: 1) 250ml baňka byla naplněna 50 ml kultivačního média, 2) 250ml baňka byla naplněna 100 ml kultivační55 ho média, 3) 250ml baňka byla naplněna 150 ml kultivačního média a 4) 250ml baňka byla naplCZ 301130 B6 něna 200 ml kultivačního média. Každá z těchto osmi baněk byla naočkována buňkami ze hodin staré kultury Schizochytriům kultivované v médiu 04-4 za podmínek uvedených v provedení ad 1), při 28 °C a při 220 otáčkách za minutu na třepací desce. Všech osm baněk pro pokus bylo umístěno na třepací desce (220 otáček za minutu) v inkubátoru (28 °C) a kultivováno
48 hodin ve tmě. Na konci pokusu byla změřena množství rozpuštěného kyslíku v každé baňce měřicím zařízením YSI pro měření rozpuštěného kyslíku, bylo také stanovena pH kultivačního média, suchá hmotnost buněk a rovněž byl změřen obsah jejich mastných kyselin. Výsledky tohoto pokusu jsou uvedeny v tabulce 1.
Tabulka 1
Výsledky zmenšeného pokusu zkoumajícího vliv nízkých koncentrací rozpuštěného kyslíku na obsah vysoce nenasycených mastných kyselin s dlouhým řetězcem (% suché hmotnosti DHA)
Schizochytrium sp.).
ml media FAME (%TFA) DHA (% suché hmotn.) biomasa ΟΛ) konečné PH DO (% nas.)
50 16.5 7,4 4,2 7.4 31
100 17,0 6,5 3.9 7,2 29
150 22,4 9,2 2,7 7,0 11
200 35,9 14,5 1,8 6,9 3
Výsledky ukazují, že obsah lipidů (jako % FAME) a obsah DHA (% suché hmotnosti) byly vyšší u buněk kultivovaných s nízkými množstvími rozpuštěného kyslíku - čím nižší bylo množství rozpuštěného kyslíku, tím vyšší byl obsah lipidů. To je neočekávané, protože o kyslíku se obecně předpokládalo, zeje nutný pro vytvoření nenasycených (dvojných) vazeb. Je překvapující, že tak mnoho DNA bylo vytvořeno při nízkém množství rozpuštěného kyslíku, protože DHA je jednou z nejvíce nenasycených mastných kyselin. I když produkce biomasy se snižuje s tím, jak se sni25 žuje množství rozpuštěného kyslíku, obsah DHA se zvyšuje. Je tedy výhodné mít růstovou fázi s vyššími množstvími rozpuštěného kyslíku, aby se maximalizovala tvorba biomasy a potom nižší množství rozpuštěného kyslíku, aby se maximalizovala produkce mastných kyselin s dlouhým řetězcem.
Příklad 3
Tento příklad ilustruje reprodukovatelnost způsobů podle předloženého vynálezu.
Mikroorganismy byly produkovány použitím fermentorů s nominálním pracovním objemem 6300 1. Výsledné fermentační živné médium bylo zahuštěno a mikroorganismy byly vysušeny v bubnové sušárně. Lipidy z podílů získaných mikroorganismů byly extrahovány a vyčištěny. Byl tak vyroben přečištěný, vyráběný olej zbavený pachu. Před analýzou bylo přidáno přibližně 3000.104 % d-l-a-tokoferyl-acetátu pro výživové doplňkové účely.
Bylo provedeno devět fermentaci Schizochytrium ATCC č. 20 888. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 2. Množství rozpuštěného kyslíku bylo asi 8 % během prvních 24 hodin a asi 4 % potom.
Tabulka 2
Výsledky fermentace produkce DHA z Schizochytrium sp. při dávkovém napájení
vstup stáří výtěžek1 DHA2 FAME3 produktivita4
(h) (9Λ) (%) (%)
1 100,3 160,7 17,8 49,5 0,285
2 99,8 172,4 19,4 51,3 0,335
3 84,7 148,7 14,4 41,4 0,253
4 90,2 169,5 19,7 53,9 0,370
5 99,0 164,1 12,5 38,9 0,207
6 113,0 187,1 19,7 47,2 0,326
7 97,0 153,5 13,7 41,0 0,217
8 92,8 174,8 16,4 48,6 0,309
průměr5 97,1 166,4 16,7 46,5 0,288
S.D8 8,4 12,3 2,9 5,4 0,058
C.V7(%) 8,7 7,4 17,3 117 20,2
skutečný výtěžek hustoty biomasy obsah DHA jako % suché hmotnosti buněk celkový obsah mastných kyselin jako % suché hmotnosti buněk (měřeno jako methylestery) (gramy DHA)/l/h
5 průměr standardní odchylka koeficient variability; hodnoty koeficientů variability pod 5 % znamenají způsob, který má vynikající reprodukovatelnost, hodnoty mezi 5 a 10 % znamenají způsob, který má dobrou reprodukovatelnost a hodnoty mezi 10 a 20 % znamenají způsob, který má rozumnou repro20 dukovatelnost
Kukuřičný sirup byl přiváděn tak dlouho, dokud objem ve fermentoru nedosáhl 6300 1, v této době byl přívod sirupu zastaven. Fermentaění proces byl zastaven, jakmile se koncentrace zbylého sirupu snížila pod 5 g/L Typické stáří, od naočkování do konce, bylo asi 100 hodin.
Fermentaění živná půda, tj. fermentační médium, byla zředěna vodou použitím poměru přibližně 2:1 aby se snížil obsah popela konečného produktu a aby se zlepšila fáze dělení během stupně odstřeďování. Koncentrovaná buněčná pasta byla zahřáta na asi 71 °C a vysušena v sušárně Blaw
Knox s dvojím bubnem (106 krát 91 cm). S výhodou byly však mikroorganismy sušeny přímo v bubnové sušárně bez předchozího odstřeďování.
Výsledky analýz lipidů extrahovaných z podílů jednotlivých vstupů v tabulce 2 jsou souhrnně 5 uvedeny v tabulce 3.
Tabulka 3 i o Analýza mikrobiální biomasy produkované ve fermentacích s dávkovým napájením uvedených v tabulce 2 vstup % DHA vzhledem k FAME1 celkové % hmotn. lipidů
1 36,0 72,3
2 37,8 70,3
3 34,8 61,5
4 36,5 74,8
5 32,1 52,8
6 41,7 67,7
7 33,4 49,9
8 33,7 61,4
průměr 35,8 63,8
stand. odchylka1 * 3 4 3,0 9,1
koef. var* (%) 8,5 14,2
viz tabulka 2
2 viz diskuze shora standardní odchylka koeficient variability; hodnoty koeficientů variability pod 5 % znamenají způsob, který má vynikající reprodukovatelnost, hodnoty mezi 5 a 10 % znamenají způsob, který má dobrou reprodukovatelnost a hodnoty mezi 10 a 20 % znamenají způsob, který má rozumnou repro20 dukovatelnost
Pokud není jinak uvedeno, fermentační médium použité v oddělení příkladů zahrnuje následující složky, kde první číslo znamená nominální cílovou koncentraci a číslo v závorkách znamená přijatelné rozmezí: 12 g/1 (11 až 13) síranu sodného, 0,5 g/1 KCI (0,45 až 0,55), 2 g/1
MgSO4.7 H2O (1,8 až 2,2), 0,35 g/1 protipěnícího činidla Hodag K-60 (0,3 až 0,4), 0,65 g/1
K2SO4 (0,60 až 0,70), 1 g/1 KH2PO4 (0,9 až 1,1), 1 g/1 síranu amonného (0,95 az 1,1), 0,17 g/1 CaCI2.2 H2O (0,15 až 0,19), 4,5 g/1 kukuřičného sirupu 95 DE (vztaženo na pevnou hmotu) (2 až 10), 3 mg/1 MnCl2.4 H2O (2,7 až 3,3), 3 mg/1 ZnSO4.7 H2O (2,7 až 3,3), 0,04 mg/1 CoCl2.6 H2O (0,035 až 0,045), 0,04 mg/1 Na2Mo04.2 H2O (0 až 0,045), 2 mg/1 CuSO4.5 H2O (1,8 až 2,2),
2 mg/1 NiSO4.6 H2O, 10 mg/1 FeSO4.7 H2O (9 až 11), 9,5 mg/1 thiaminu (4 až 15), 0,15 mg/1 vitaminu B)2 (0,05 až 0,25) a 3,2 mg/1 pantothenát vápenatý (1,3 až 5,1). Navíc se jako zdroj dusíku používá 28% roztok hydroxidu amonného.
Obsah popela ve vysušených mikroorganismech je asi 6 % hmotnostních.
Příklad 4
Tento příklad ilustruje účinek snížené hladiny rozpuštěného kyslíku ve fermentačním médiu na ío produktivitu mikroorganismů v pracovním měřítku 63 000 litru.
Použitím postupu popsaného v příkladu 3 se provede fermentace o nominálním objemu 63 000 litrů použitím přírodního kmene Schizochytrium, který byl získán způsobem izolace, který je popsán ve shora uvedených patentech US 5 340 594 a US 5 340 742. Množství rozpuštěného kyslíku ve fermentačním médiu bylo asi 8 % během prvních 24 hodin, asi 4 % od 24, hodiny do 40. hodiny a asi 0,5 % od 40. hodiny do konce fermentaěního procesu. Výsledky této nízké hladiny rozpuštěného kyslíku v procesech s fermentačním médiem jsou uvedeny v tabulce 4.
Tabulka 4
Výsledky fermentaci Schizochytrium s dávkovým napájením o velikosti 63 000 litrů pří snížených koncentracích rozpuštěného kyslíku
vstup stáří výtěžek (g/i) DHA (%) FAME (%) %DHA vzhledem kFAME produktivita DHA (g DHA/l/h)
(h)
1 82,0 179,3 21,7 52,4 41,4 0,474
2 99,0 183,1 22,3 55,0 40,5 0,412
3 72,0 159,3 - - 40,9 -
4 77,0 161,3 - - 43,2 -
5 100,0 173,0 23,9 53,3 44,9 0,413
6 102,0 183,3 21,6 50,8 42,6 0,388
7 104,0 185,1 23,7 55,0 43,1 0,422
8 88,0 179,3 22,3 52,6 42,4 0,454
9 100,0 166,4 22,5 53,5 42,1 0,374
10 97,0 182,6 22,8 51,6 44,1 0,429
11 87,5 176,5 19,8 45,6 43,5 0,399
12 67,0 170,8 18,8 48,1 39,1 0,479
13 97,0 184,9 23,2 52,7 44,0 0,442
14 102,0 181,9 23,6 52,9 44,6 0,421
15 102,0 186,9 19,9 47,8 41,8 0,365
16 97,0 184,4 19,6 45,5 43,0 0,373
17 98,0 174,7 19,7 45,1 43,7 0,351
18 103,5 178,8 18,3 44,5 41,2 0,316
19 102,0 173,7 15,8 43,1 36,7 0,269
20 94,0 190,4 19,3 46,9 41,1 0,391
21 72,0 172,5 22,8 52,8 43,2 0,546
22 75,0 173,1 21,0 51,7 40,8 0,485
23 75,0 152,7 20,3 50,3 40,4 0,413
24 75,5 172,5 21,9 51,7 42,3 0,500
25 61,0 156,4 17,3 45,7 37,8 0,444
26 74,5 150,6 20,2 50,1 40,2 0,408
27 70,5 134,3 14,8 40,6 36,6 0,282
28 75,5 146,1 21,3 49,7 42,8 0,412
29 82,0 174,3 21,4 50,4 42,5 0,455
30 105,0 182,3 21,7 50,7 42,8 0,377
31 66,0 146,2 16,4 44,6 36,7 0,363
pr. 87,2 171,5 20,6 49,5 41,6 0,409
S.D. 13,9 14,1 2,4 3,8 2,3 0,061
C.V/ 16,0 8,2 11,6 7,7 5,5 15,0
’ C.V. uveden v %
Příklad 5
Tento příklad ilustruje vliv snížené hladiny rozpuštěného kyslíku ve fermentaČním médiu na pro duktivitu mikroorganismů při velikosti fermentace 185 000 1.
io Byly použity stejné postupy jako v příkladu 4 až na to, že fermentace byla prováděna ve fermen toru o velikosti 185 000 litrů. Objemy kultivačního média byly zvýšeny, aby se udržely koncent race cílové sloučeniny v tomto měřítku. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 5.
CZ 301130 Bó
Tabulka 5
Fermentace Schizochytrium o objemu 195 000 litrů
vstup Stáři výtěžek <gfl) DHA (%) FAME (%) %DHA vzhledem kFAME produktivita DHA (g DHA/l/h)
(h)
1 75,0 116,1 17,3 46,1 37,4 0,268
2 99,0 159,3 17,4 47,0 37,1 0,280
3 103,0 152,6 16,0 47,2 33,8 0,237
4 68,0 136,8 17,9 45,9 39,1 0,360
5 84,0 142,0 17,5 47,0 37,2 0,296
ΡΓ 85,8 141,4 17,2 46,6 36,9 0,288
S.D. 15,1 16,6 0,7 0,6 1,9 0,046
C.V.* 17,5 11,8 4,2 1,3 5,2 15,8
* C.V. uveden v %
Příklad 6
Tento příklad ilustruje vliv dalšího dusíku na fermentační způsob podle předloženého vynálezu.
Podobným způsobem jako v příkladu 4 byly provedeny čtyři řady pokusů o objemu 250 litrů io s dávkovým napájením. Byly provedeny dva kontrolní pokusy a dva pokusy obsahující další množství dusíku (l,15násobné a l,25násobné množství než je normální množství). Výsledky jsou uvedeny v tabulce 6.
Tabulka 6
Účinky dalšího dusíku na fermentací Schizochytrium
stáří výtěžek produkti- účinnost obsah obsah produkti-
(h) (g/0 vita konverze DHA FAME vita DHA
biomasy (0/I) (%) (%) (%) (g/l/h)
cílový cukr 7 g/l, základní nastavení pH: 5,5; nastavení kyselého pH: 7,3,* 1 .Onásobek amoniaku
48 178 3,71 51,5 10,7 37,8 0,40
60 185 3,08 46,9 16,3 47,2 0,50
72 205 2,85 45,2 17,4 47,4 0,50
84 219 2,61 43,8 17,1 45,5 0,45
90 221 2,46 44,1 18,4 48,9 0,45
cílový cukr 7 g/1, základní nastavení pH: 5,5; nastavení kyselého pH: 7,3; 1,1 Snásobek amoniaku
48 171 3,56 55,6 12,0 36,3 0,43
60 197 3,28 54,6 9,4 38,4 0,31
72 191 2,65 52,8 9,4 40,0 0,25
84 190 2,26 52,5 10,0 42,5 0,23
90 189 2,10 52,2 9,2 43,3 0,19
cílový cukr 7 g/l, základní nastavení pH: 5,5, nastavení kyselého pH: 7,3, 1,25násobek amoniaku
48 178 3,71 56,4 11,5 33,7 0,43
60 179 2,98 48,6 10,3 36,0 0,31
72 180 2,50 48,8 12,0 37,6 0,30
84 181 2,15 46,1 13,6 40,1 0,29
90 185 2,06 45,7 12,6 40,7 0,26
cílový cukr 7 g/l, základní nastavení pH: 5,5; nastavení kyselého pH: 7,3; 1 .Onásobek amoniaku
48 158 3,29 55,7 13,1 36,5 0,43
60 174 2,90 48,9 17,9 39,2 0,52
72 189 2,63 45,7 21,0 39,4 0,55
84 196 2,33 44,1 22,4 40,1 0,52
90 206 2,29 44,8 22,1 40,3 0,51
Obecně platí, že další množství dusíku má negativní vliv na provedení fermentace, jelikož bylo 5 pozorováno významné snížení produktivity DHA u dvou dávek, kde bylo přidáno další množství amoniaku. Jak je uvedeno v tabulce 6, kontrolní dávky vedly ke konečným hladinám DHA 18,4 a
22,1 % z celkové buněčné suché hmotnosti proti 9,2 % (u l,15násobku amoniaku) a 12,6 % (u l,25násobku amoniaku) u dávek s dalším dodaným amoniakem.
Příklad 7
Tento příklad ukazuje kinetický profil fermentačního procesu podle předloženého vynálezu.
Pokus s dávkovým napájením o objemu 4500 litrů byl proveden podobným způsobem jako v příkladu 4. Kinetický profil fermentačního procesuje uveden v tabulce 7.
Tabulka 7
Kinetický profil fermentace Schizochytrium s dávkovým napájením o objemu 4500 litrů
stáři výtěžek (h) (0Λ) produkti- vita biomasy (βΛΛι) účinnost konverze (%) obsah DHA (%) obsah FAME (%) produktivita DHA (g/l/h)
24 118 4,92 78,2 Λ4 18,8 0,36
30 138 4,60 60,3 10,6 30,9 0,49
36 138 3,83 46,6 11,6 36,5 0,44
42 175 4,17 49,8 13,4 41,7 0,56
48 178 3,71 45,1 16,7 52,8 0,69
48* 164 3,42 41,5 15,3 33,1 0,52
54 196 3,63 45,7 16,6 51,2 0,60
60 190 3,17 41,7 16,9 33,9 0,54
72 189 2,62 39,1 15,6 31,8 0,41
84 195 2,32 38,5 16,4 32,7 0,38
90 200 2,22 39,0 18,8 33,3 0,42
90 171 1,90 33,3 22,2 61,6 0,42
Dva oddělené vzorky byly analyzovány po 48 hodinách.
’* Tento pokus je pro vzorek s hmotností promytých suchých buněk (DCW). Další popsané hodnoty jsou pro nepromyté vzorky.
Příklad 8
Tento příklad ilustruje vliv množství zdroje uhlíku na produktivitu.
Byly provedeny tři různé fermentační procesy použitím způsobu z příkladu 4 s různými množstvími zdroje uhlíku. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 8.
T
Tabulka 8
Výsledky fermentace s různými množstvími zdroje uhlíku u fermentace Schizochytrium
stáří (h) výtěžek (g/i) náplň uhlíku (%) účinnost konverze (%) obsah DHA (%) obsah FAME (%) produkti- vita (g/l/h)
90 171 51,3 33,3 22,2 61,6 0,42
94 122 40,5 30,1 19,1 57,3 0,25
59 73 20,0 36,5 11,9 40,8 0,15
Příklad 9 io Tento příklad ilustruje vliv omezení živin na účinnost konverze uhlíku na biomasu, lipid a nejkonkrétněji na DHA.
Kontinuální kultivační pokus pro studium účinku omezených živin byl proveden kultivováním Schizochytrium ATCC 20 888 ve dvoulitrovém fermentoru Appl ikon v základním růstovém médiu (ICM-2) sestávajícím z následujících sloučenin (nominální koncentrace): složky skupiny I: 18,54 g/1 síranu sodného, 2,0 g/1 MgSO4.7 H2O a 0,572 g/1 KC1, složky skupiny II (každá připravena odděleně): 43,81g/l glukózy, 1,28 g/1 KH2PO4, 0,025 g/1 CaCl2.2 H2O a 6,538 g/1 síranu amonného, složky skupiny III: 6,0 mg/1 Na2EDTA, 0,29 mg/1 FeC^.ó H2O, 6,84 mg/1 H3BO3, 0,86 mg/1 MnCI2.4 H2O, 0,237 mg/1 ZnSO4.7 H2O, 0,026 mg/1 CoCl2.2 H2O, 0,005 mg/I
Na2MoO4.2 H2O, 0,002 mg/1 CuSO4.5 H2O a 0,052 mg/1 N1SO4.6 H2O, a složky skupiny IV: 0,2 mg/1 hydrochloridu thiaminu, 0,005 mg/1 vitaminu Bi2 a 0,2 mg/1 pantothenátu vápenatého. Skupiny I a II byly sterilovány v autoklávu, zatímco skupiny III a IV byly sterilovány zfiltrováním před tím, než byly přidány do fermentoru. Růstové médium pak bylo naočkováno Schizocyhtrium a necháno růst za regulovaných podmínek při 30 °C, pH 5,5 a rozpuštěným kys25 líkem v množství 20 % z nasycenosti, a to až do dosažení maximální hustoty buněk.
Potom byl prováděn kontinuální způsob zpracování simultánním čerpáním sterilního ICM-2 napájecího média do fermentoru a odstraňováním živného média obsahujícího buňky Schizochytrium takovým průtokem, aby se udržovalo ředění 0,06h_1, dokud nebyl dosažen stabil30 ní stav. Pro zkoumání účinku omezení živin byla sloučenina obsahující specifickou požadovanou živinu snižována v napájecím médiu ICM-2 tak, až tato živina vymizela při vývodu ze živného média obsahujícího buňky, takže růst buněk je omezen nepřítomností příslušné potřebné živiny. Jakmile byl pro každý stav dosažen stabilní pracovní systém, byla měřena konečná suchá biomasa v živné médiu, zbývající glukóza, koncentrace omezujících živin, obsah lipidu v buňkách a obsah DHA v buňkách. Účinnost konverze glukózy na biomasu byla vypočtena podělením celkové spotřebované glukózy celkovým množstvím vytvořené vysušené biomasy a vyjádřena jako procenta.
Účinky omezeného růstu každé jednotlivé živiny byly studovány opakováním tohoto pokusu pro každou jednotlivou živinu uvedenou v následující tabulce. Konečné výsledky jsou souhrnně uvedeny v následující tabulce.
Tabulka 9
Vliv omezení živin na výtěžek biomasy, účinnost konverze (glukózy na biomasu), obsah lipidů a obsah DHA ve Schizochytrium sp.
omezená živina biomasa1 (g/i) Υλ2 RCS3 (0Λ) obsah4 tuku(%) obsah5 DHA(%)
glukosa 18,7 46,8 0,0 19,8 7,3
dusík 14,5 36,3 0,6 47,5 10,3
fosforečnan 17,8 44,5 0,8 37,0 8,2
thiamin 7,5 18,8 7,7 11,1 4,0
zinek 16,0 40,0 1,3 27,8 7,2
méď 14,0 35,0 10,4 13,8 5,3
kobalt 14,5 36,3 0,0 22,2 6,9
nikl 17,8 44,5 0,0 21,9 8,0
železo 15,9 39,8 3,5 18,5 7,2
mangan 12,5 31,3 3,4 26,1 8,0
hořčík 13,9 34,8 5,3 18,7 6,4
vápník 16,7 41,8 4,3 18,7 6,4
vitamin B12 19,6 49,0 0.0 17,5 6,3
molybden 18,9 47,3 0,0 19,3 7,0
pantothenát 19,2 48,0 0,0 20,4 6,7
sodík 17,9 44,8 1,8 21,8 8,2
draslík 13,0 32,5 8,8 14,1 5,3
koncentrace suché biomasy (gram/litr) koeficient výtěžku (% produkované biomasy/spotřebovaná glukóza) koncentrace zbytkové glukózy v živném prostředí (gram/litr)
4 obsah lipidů ze suché biomasy (g lipidu (jako FAME)/g suché biomasy) obsah DHA v suché biomase (g DHA/g suché biomasy)
Z tabulky je zřejmém, že omezení dusíku vede k nejvyšší akumulací DHA v buňkách, následuje omezení fosforečnanem, sodíkem, niklem, manganem, glukózou (uhlíkem), zinkem a železem.
Tato informace může být použita komerčně napájením jedné nebo více těchto živin do dávkové fermentace takovou rychlostí, která je dostatečná pro to, aby se omezil růst buněk. V nej výhodnějším případě se dusík napájí omezeným způsobem do dávkové fermentace, aby se maximalizoval obsah DHA v buňkách. Další živiny (nebo jejich směsi) mohou být přiváděny takovým omezujícím způsobem, aby se maximalizovala produkce biomasy nebo jiných cenných
CZ 301130 Bó produktů. Další biologicky potřebné prvky nebo živiny, které nejsou vyhodnoceny, jako je síran by se také mohly používat jako omezující živiny v této strategii regulace fermentace.
Předložený vynález, v různých provedeních, zahrnuje složky, způsoby, postupy, systémy a/nebo zařízení v podstatě tak, jak jsou zde navrženy a popsány, včetně různých provedení, subkombinací ajejich podřad. Zruční odborníci z oblasti techniky pochopí jak provádět a používat předložený vynález po pochopení předloženého popisu. Předložený vynález, v různých provedeních, zahrnuje získání zařízení a způsobů, v nepřítomnosti položek zde neuvedených a/nebo nepopsaných nebo v jejich různých provedeních, včetně nepřítomností takových položek, které mohou být používány v předešlých zařízeních nebo způsobech, např. pro zlepšení provedení, dosažení snadnosti a/nebo snížení ceny provedení.
Předcházející diskuze tohoto vynálezu zde byla presentována pro účely ilustrace a popisu. Předcházející popis není zamýšlen jako omezení vynálezu na formu nebo na formy, které jsou zde popsány. I když popis tohoto vynálezu zahrnuje popis jednoho nebo více provedení a jistých obměn a modifikací, v rozsahu tohoto vynálezu jsou další změny a modifikace, např. takové, které mohou být ve zručnosti a znalosti odborníků z oblasti techniky pro porozumění předloženého popisu. Úmyslem je získat práva, která zahrnují alternativní provedení v povoleném rozsahu, včetně alternativních, vzájemně zaměnitelných a/nebo ekvivalentních struktur, funkcí, rozsahů nebo stupňů k těm, které jsou zde nárokovány, ať již jsou zde takové alternativní, vzájemně zaměnitelné a/nebo ekvivalentní struktury, funkce, rozsahy nebo stupně popsány nebo nikoliv, a bez zamýšlení veřejně věnovat jakýkoliv patentovatelný předmět.

Claims (20)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    30 1. Způsob výroby mikrobiálních lipidů, vyznačující se tím, že
    a) se fermentuje médium, které obsahuje mikroorganismy, zdroj uhlíku a limitující zdroj živin, a zajišťují se podmínky dostačující pro to, aby se množství rozpuštěného kyslíku udržovalo na hladině alespoň asi 4 % nasycení v uvedeném fermentaČním médiu pro zvýšení hustoty biomasy;
    b) pak se zajišťují podmínky dostačující pro to, aby se množství rozpuštěného kyslíku udržo35 válo na hladině asi 1 % nasycení nebo méně v uvedeném fermentaČním médiu a podmínky dostačující pro to, aby bylo uvedeným mikroorganismům umožněno produkovat uvedené lipidy, a
    c) získají se uvedené mikrobiální lipidy, přičemž alespoň asi 15 % uvedených mikrobiálních lipidů jsou polynenasycené lipidy, a přičemž 40 se během fermentace dosáhne hustota biomasy alespoň asi 100 g/1.
  2. 2. Způsob obohacení obsahu polyenových mastných kyselin mikroorganismu, vyznačující se t í m , že uvedený mikroorganismus fermentuje v růstovém médiu, které má množství rozpuštěného kyslíku méně než 1 % z nasycenosti.
  3. 3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedené fermentační médium nebo růstové médiu je při teplotě alespoň asi 20 °C.
  4. 4. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedený způsob produ50 kuje lipidy průměrnou rychlostí alespoň asi 0,5 g/l/h.
  5. 5. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedený způsob produkuje lipidy průměrnou rychlostí alespoň asi 0,5 g/l/h a přičemž alespoň asi 15% uvedených lipidů jsou polynenasycené lipidy.
  6. 6. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedený způsob produkuje lipidy při průměrné rychlosti alespoň asi 0,5 g/l/h a přičemž celkové množství omega-3 a omega-6 mastných kyselin je alespoň asi 20 % z uvedených lipidů.
  7. 7. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedený způsob produkuje lipidy průměrnou rychlostí alespoň asi 0,5 g/l/h a přičemž alespoň asi 25 % z uvedených lipidů znamená dokosahexenovou kyselinu.
    io
  8. 8. Způsob podle nároku 1 nebo 2, v y z n a č u j í c í se t í m, že uvedené mikroorganismy jsou vybrány ze skupiny sestávající z řas, hub (včetně kvasinek), protist, bakterií a jejich směsí, přičemž uvedené mikroorganismy jsou schopny produkovat polyenové mastné kyseliny.
  9. 9. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedené mikroorganismy 15 jsou vybrány ze skupiny sestávající z řas, hub (včetně kvasinek), protist, bakterií a jejich směsí, přičemž uvedené mikroorganismy jsou schopny produkovat polyenové mastné kyseliny a přičemž uvedené mikroorganismy rostou fed-batch způsobem.
  10. 10. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se znamenají mikrorasy a mikroorganismy podobné řasám.
  11. 11. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se znamenají Stramenopiles.
  12. 12. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se jsou z řádu Thraustochytriales.
    tím, že uvedené mikroorganismy t í m, že uvedené mikroorganismy tím, že uvedené mikroorganismy
  13. 13. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedené mikroorganismy jsou vybrány ze skupiny složené z Thraustochytrium, Schizochytrium a jejich směsí.
  14. 14, Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že zdrojem uhlíku je nealkoholový zdroj uhlíku.
  15. 15 syntázy se přirozeně vyskytují v uvedených mikroorganismech.
    23. Způsob podle nároku 21, vyznačující se tím, že uvedené geny polyketidové syntázy se do uvedených mikroorganismů vnášejí geneticky.
    15. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedeným způsobem se 35 produkuje v průměru alespoň asi 0,2 g/l/h dokosahexenové kyseliny.
  16. 16. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený stupeň získání lipidů zahrnuje:
    d) odstranění vody z uvedeného fermentačního média, aby se získaly suché mikroorganismy, a 40 e) izolování uvedených lipidů z uvedených suchých mikroorganismů.
  17. 17. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený stupeň získání lipidů zahrnuje:
    d) odpaření vody z uvedeného fermentačního média bez předchozího odstřeďování, aby se
    45 získaly suché mikroorganismy, a
    e) izolování uvedených lipidů z uvedených suchých mikroorganismů.
  18. 18. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený stupeň získání lipidů zahrnuje:
    50 d) zpracování fermentační živné půdy tak, aby došlo k permeabilizaci, lyžování nebo prasknutí mikrobiálních buněk, a
    e) získání lipidů z fermentaění živné půdy gravitačním dělením bez pomoci nebo s pomocí činidla, které napomáhá rozbití emulze lipidu s vodou.
  19. 19. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že během počáteční fáze růstu je množství rozpuštěného kyslíku větší než asi 10 % nasycení a během následující produkční fáze je množství rozpuštěného kyslíku menší než 1 % nasycení.
    20. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že uvedený mikroorganismu obsahuje geny polyketidové syntázy.
    21. Heterotrofní způsob výroby produktů a mikroorganismů, vyznačující se tím, že ío se uvedené mikroorganismy kultivují v růstovém médiu, které má množství rozpuštěného kyslíku menší než asi 1 % nasycení, přičemž uvedené mikroorganismy obsahují geny polyketidové syntázy.
    22. Způsob podle nároku 21, vyznačující se tím, že uvedené geny polyketidové
  20. 20 24. Způsob podle nároku 21, vyznačující se tím, že během počáteční fáze růstu je množství rozpuštěného kyslíku větší než asi 10 % nasycení a během následující produkční fáze je množství rozpuštěného kyslíku menší než asi 1 %.
CZ20022508A 2000-01-28 2001-01-26 Zvýšená produkce lipidu obsahujících polyenové mastné kyseliny ve fermentorech kulturami mikrobu s vysokou hustotou ve fermentorech CZ301130B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US17858800P 2000-01-28 2000-01-28

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ20022508A3 CZ20022508A3 (cs) 2003-02-12
CZ301130B6 true CZ301130B6 (cs) 2009-11-11

Family

ID=22653135

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20022508A CZ301130B6 (cs) 2000-01-28 2001-01-26 Zvýšená produkce lipidu obsahujících polyenové mastné kyseliny ve fermentorech kulturami mikrobu s vysokou hustotou ve fermentorech

Country Status (27)

Country Link
US (18) US6607900B2 (cs)
EP (7) EP2338974B1 (cs)
JP (9) JP2004501603A (cs)
KR (6) KR100925290B1 (cs)
CN (8) CN101519679B (cs)
AT (1) ATE374531T1 (cs)
AU (4) AU785124B2 (cs)
BR (1) BRPI0107832B1 (cs)
CA (3) CA2760879C (cs)
CY (1) CY1107114T1 (cs)
CZ (1) CZ301130B6 (cs)
DE (2) DE01903376T1 (cs)
DK (1) DK1251744T4 (cs)
ES (4) ES2208141T5 (cs)
HK (1) HK1050611A1 (cs)
HU (1) HUP0301794A3 (cs)
IL (3) IL150770A0 (cs)
MX (2) MXPA02007321A (cs)
NO (1) NO20023588L (cs)
NZ (1) NZ520420A (cs)
PL (1) PL362620A1 (cs)
PT (1) PT1251744E (cs)
RU (1) RU2326171C2 (cs)
TR (1) TR200302163T3 (cs)
TW (3) TWI310788B (cs)
WO (1) WO2001054510A1 (cs)
ZA (1) ZA200205957B (cs)

Families Citing this family (181)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5340742A (en) 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Process for growing thraustochytrium and schizochytrium using non-chloride salts to produce a microfloral biomass having omega-3-highly unsaturated fatty acids
US6451567B1 (en) * 1988-09-07 2002-09-17 Omegatech, Inc. Fermentation process for producing long chain omega-3 fatty acids with euryhaline microorganisms
US20060094089A1 (en) * 1988-09-07 2006-05-04 Martek Biosciences Corporation Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
EP0823475B1 (en) 1995-04-17 2009-06-17 National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Novel microorganisms capable of producing highly unsaturated fatty acids and process for producing highly unsaturated fatty acids by using the microorganisms
US20080175953A1 (en) * 1995-06-07 2008-07-24 Martek Biosciences Corporation Process for the Heterotrophic Production of Microbial Products with High Concentrations of Omega-3 Highly Unsaturated Fatty Acids
WO2010045368A2 (en) 2008-10-14 2010-04-22 Solazyme, Inc. Food compositions of microalgal biomass
NZ520420A (en) * 2000-01-28 2005-03-24 Martek Biosciences Corp Enhanced production of lipids containing polyenoic fatty acids by high density cultures of eukaryotic microbes in fermentors
ATE505724T1 (de) * 2001-09-14 2011-04-15 Arkray Inc Verfahren, gerät und vorrichtung zur konzentrationsmessung
US7560123B2 (en) 2004-08-12 2009-07-14 Everett Laboratories, Inc. Compositions and methods for nutrition supplementation
ES2774656T3 (es) * 2002-05-03 2020-07-22 Dsm Ip Assets Bv Métodos para producir lípidos de alta calidad mediante liberación enzimática desde biomasa
US8617617B2 (en) * 2002-12-10 2013-12-31 Everett Laboratories, Inc. Methods and kits for co-administration of nutritional supplements
US6814983B2 (en) * 2002-12-10 2004-11-09 Everett Laboratories, Inc. Compositions and methods for nutrition supplementation
US20050019880A1 (en) * 2003-03-31 2005-01-27 Council Of Scientific And Industrial Research Method of enhancing levels of polyunsaturated fatty acids in thraustochytrid protists
US20060263403A1 (en) * 2003-04-24 2006-11-23 Essam Enan Compositions and methods for controlling insects involving the tyramine receptor
US7622269B2 (en) * 2004-03-19 2009-11-24 Tyratech, Inc. Methods of screening tyramine- and octopamine-expressing cells for compounds and compositions having potential insect control activity
EP1624881A4 (en) 2003-04-24 2010-01-06 Tyratech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR REGULATION OF INSECTS
AU2003902794A0 (en) * 2003-06-03 2003-06-19 Agresearch Limited Improvements in grass endophytes
US7267976B2 (en) 2003-07-02 2007-09-11 E.I. Du Pont De Nemours And Company Acyltransferases for alteration of polyunsaturated fatty acids and oil content in oleaginous yeasts
RU2346033C2 (ru) * 2003-09-01 2009-02-10 Новозимс А/С Способ непрерывного культивирования водорослей
MX271416B (es) 2003-10-02 2009-10-30 Martek Biosciences Corp Produccion de altos niveles de dha en microalgas usando cantidades modificadas de cloruro y de potasio.
JP4916886B2 (ja) * 2003-11-12 2012-04-18 イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー 油性植物および酵母中の多価不飽和脂肪酸レベルを変更するのに適したδ１５デサチュラーゼ
KR101167331B1 (ko) * 2003-12-30 2012-07-19 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 탈기 방법
US8101587B2 (en) 2004-08-12 2012-01-24 Everett Laboratories, Inc. Kits for nutrition supplementation
US8241868B2 (en) 2005-02-08 2012-08-14 Nippon Suisan Kaisha, Ltd. Production of polyunsaturated fatty acids using cell treatment method
JP4849806B2 (ja) * 2005-02-08 2012-01-11 日本水産株式会社 新規な菌体処理方法を用いた高度不飽和脂肪酸の製造方法
ES2451667T3 (es) 2005-06-07 2014-03-28 Ocean Nutrition Canada Limited Microorganismos eucariotas para producir lípidos y antioxidantes
EA200800225A1 (ru) 2005-07-01 2008-06-30 Мартек Байосайенсиз Корпорейшн Содержащий полиненасыщенные жирные кислоты маслопродукт и его применения и получение
US8177262B2 (en) * 2005-07-28 2012-05-15 Hydril Company Lp Mid-seal for expandable connections
DE602006015701D1 (de) * 2005-12-29 2010-09-02 Abl Biotechnologies Ltd Neuer schizochytrium-limacinum-stamm, der sich für die produktion von lipiden und extrazellulären polysacchariden eignet, sowie verfahren hierfür
EP2043620B1 (en) 2006-06-27 2017-05-03 Tyratech, Inc. Compositions for use in treating a parasitic infections in a mammalian subject
CN101489377A (zh) * 2006-07-17 2009-07-22 蒂拉德克公司 防治昆虫的组合物和方法
EP2082053B1 (en) * 2006-08-01 2016-04-13 DSM Nutritional Products AG Process for producing microbial oil comprising polyunsaturated fatty acids
US9637714B2 (en) * 2006-12-28 2017-05-02 Colorado State University Research Foundation Diffuse light extended surface area water-supported photobioreactor
AU2008205516A1 (en) * 2007-01-16 2008-07-24 Tyratech, Inc. Pest control compositions and methods
JP2010530741A (ja) * 2007-06-14 2010-09-16 ミトロプーロス，ニコラオス バイオ燃料用の藻育成
WO2008155410A1 (en) * 2007-06-21 2008-12-24 Novozymes A/S Production of lipids containing poly-unsaturated fatty acids
EP2173699A4 (en) * 2007-06-29 2014-04-16 Dsm Ip Assets Bv PRODUCTION AND PURIFICATION OF POLYUNSATURATED FATTY ACID ESTERS
GB0713121D0 (en) * 2007-07-06 2007-08-15 Univ Keele Refrigerated gas equilibration device
ES2665879T3 (es) * 2007-09-12 2018-04-30 Dsm Ip Assets B.V. Método para producir aceite biológico usando un fermentador no estéril
ITMI20072343A1 (it) 2007-12-14 2009-06-15 Eni Spa Processo per la produzione di biomassa algale ad alto contenuto lipidico
US7989195B2 (en) * 2008-02-20 2011-08-02 Washington State University Research Foundation Heterotrophic algal high cell density production method and system
ES2326022B1 (es) 2008-03-25 2010-06-07 Neuron Biopharma, S.A. Procedimiento mejorado para la produccion de biodiesel.
WO2009126843A2 (en) * 2008-04-09 2009-10-15 Solazyme, Inc. Direct chemical modification of microbial biomass and microbial oils
JP5171422B2 (ja) * 2008-06-19 2013-03-27 ルネサスエレクトロニクス株式会社 感光性組成物、これを用いたパターン形成方法、半導体素子の製造方法
US20100050502A1 (en) * 2008-08-21 2010-03-04 LiveFuels, Inc. Systems and methods for hydrothermal conversion of algae into biofuel
US20100236137A1 (en) * 2008-09-23 2010-09-23 LiveFuels, Inc. Systems and methods for producing eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid from algae
US20100077654A1 (en) * 2008-09-23 2010-04-01 LiveFuels, Inc. Systems and methods for producing biofuels from algae
US20100081835A1 (en) * 2008-09-23 2010-04-01 LiveFuels, Inc. Systems and methods for producing biofuels from algae
US8809037B2 (en) 2008-10-24 2014-08-19 Bioprocessh20 Llc Systems, apparatuses and methods for treating wastewater
US20110239318A1 (en) * 2008-11-18 2011-09-29 LiveFuels, Inc. Methods for producing fish with high lipid content
WO2010080377A1 (en) * 2008-12-19 2010-07-15 Alpha-J Research Limited Partnership Optimization of algal product production through uncoupling cell proliferation and algal product production
EP2401386A4 (en) 2009-02-25 2013-03-13 Vb Medicare Pvt Ltd IMPROVED METHODS FOR THE FERMENTATIVE MANUFACTURE OF DOCOSAHEXAENIC ACID
US8207363B2 (en) * 2009-03-19 2012-06-26 Martek Biosciences Corporation Thraustochytrids, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof
KR101899933B1 (ko) 2009-04-14 2018-09-19 테라비아 홀딩스 인코포레이티드 신규의 미세 조류 식품 조성물
WO2010121094A1 (en) 2009-04-17 2010-10-21 Livefuels. Inc. Systems and methods for culturing algae with bivalves
EP2427420A1 (en) 2009-05-04 2012-03-14 Primafuel, Inc. Improved recovery of desired co-products from fermentation stillage streams
CN101899481A (zh) * 2009-05-25 2010-12-01 华盛顿州立大学 异养海藻高密度生产的方法和系统
CN102656261B (zh) 2009-09-18 2015-07-01 菲科尔生物技术国际公司 利用控制的光照的微藻发酵
MY160121A (en) 2010-01-19 2017-02-28 Dsm Ip Assets Bv Eicosapentaenoic acid-producing microorganisms, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof
CN102971430A (zh) 2010-03-11 2013-03-13 Bp生物燃料英国有限公司 与在压缩式发动机中的应用相关的方法、生物油、生物燃料、装置和生物体
MX2012010490A (es) 2010-03-12 2012-12-17 Solix Biosystems Inc Sistemas y metodos para colocar fotobioreactores flotantes flexibles.
KR101147450B1 (ko) 2010-05-04 2012-05-21 한국생명공학연구원 신규 유지성 미세조류 ｋｒｓ１０１ 균주 및 이를 이용한 바이오오일의 제조방법
CN103025862B (zh) * 2010-05-04 2015-02-11 韩国生命工学研究院 新型破囊壶菌类微藻及用其生产生物油的方法
ES2758782T3 (es) 2010-06-01 2020-05-06 Dsm Ip Assets Bv Extracción de lípido de células y productos del mismo
US9023625B2 (en) 2010-06-14 2015-05-05 Io-Mega Holding Corporation Methods for production of algae derived oils
US10479969B2 (en) 2010-10-11 2019-11-19 Phycoil Biotechnology International. Inc. Utilization of wastewater for microalgal cultivation
CN102485898A (zh) * 2010-12-02 2012-06-06 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 微生物发酵生产脂质的方法
WO2012109375A2 (en) * 2011-02-08 2012-08-16 Phycal Inc. Methods for improved mixed trophic algal culture
WO2012120375A1 (en) 2011-03-07 2012-09-13 Ocean Nutrition Canada Limited Engineering thraustochytrid microorganisms
US9487716B2 (en) 2011-05-06 2016-11-08 LiveFuels, Inc. Sourcing phosphorus and other nutrients from the ocean via ocean thermal energy conversion systems
KR101895651B1 (ko) 2011-06-23 2018-09-05 알에이치오 리뉴어블스, 인크. 방향족 분자를 위한 재조합 생산 시스템
US8183227B1 (en) 2011-07-07 2012-05-22 Chemo S. A. France Compositions, kits and methods for nutrition supplementation
BR112013033977B1 (pt) * 2011-07-13 2020-11-10 Alltech, Inc processo de preparação de uma biomassa de alga
EP2734197A4 (en) 2011-07-21 2014-12-17 Dsm Ip Assets Bv FATTY ACID COMPOSITIONS
AU2012285803B2 (en) 2011-07-21 2016-08-25 Dsm Ip Assets B.V. Eicosapentaenoic acid-producing microorganisms, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof
WO2013032333A1 (en) * 2011-09-01 2013-03-07 Algae Biotech S.L. Oral dosage units containing astaxanthin, phospholipids and omega-3 fatty acids
US8168611B1 (en) 2011-09-29 2012-05-01 Chemo S.A. France Compositions, kits and methods for nutrition supplementation
MX2014011979A (es) 2012-04-09 2015-01-16 Bp Biofuels Uk Ltd Microorganismos bajos en polisacaridos para la produccion de biocombustibles y otros materiales renovables.
US10100338B2 (en) * 2012-05-22 2018-10-16 Ineos Bio S.A. Method of operation of a syngas fermentation process
RU2539766C2 (ru) * 2012-08-03 2015-01-27 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) ШТАММ Arthrospira platensis (Nordst.) Geitl. rsemsu T/05-117 - ПРОДУЦЕНТ ЛИПИДОСОДЕРЖАЩЕЙ БИОМАССЫ
CN102864111B (zh) * 2012-10-10 2013-07-17 江南大学 一株产二十二碳六烯酸的裂殖壶菌菌株
NZ707192A (en) 2012-10-17 2019-02-22 Solazyme Roquette Nutritionals Llc Microalgal flour granules and process for preparation thereof
EP2724625A1 (en) 2012-10-26 2014-04-30 Roquette Freres Microalgal flour granules and process for preparation thereof
US9394505B2 (en) 2012-12-04 2016-07-19 Flint Hills Resources, Lp Recovery of co-products from fermentation stillage streams
EP2947141B1 (en) * 2013-01-18 2019-11-06 Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. Microorganisms producing docosahexaenoic acid and utilization thereof
EP2762008A1 (de) 2013-02-05 2014-08-06 Evonik Industries AG Verbesserung der Bioverfügbarkeit von Wertstoffen aus Mikroorganismen durch Verwendung eines Rotor-Stator Systems für den Zellaufschluss
DE102013201978A1 (de) 2013-02-07 2014-08-07 Evonik Industries Ag Verbesserte Bioverfügbarkeit von Wertstoffen aus Mikroorganismen
WO2014122092A1 (de) 2013-02-05 2014-08-14 Evonik Industries Ag Verbesserung der bioverfügbarkeit von wertstoffen aus mikroorganismen
EP2762009A1 (de) 2013-02-05 2014-08-06 Evonik Industries AG Verbesserung der Bioverfügbarkeit von Wertstoffen aus Mikroorganismen
EP2968568A2 (en) * 2013-03-11 2016-01-20 Life Science Nutrition AS Natural lipids containing non-oxidizable fatty acids
US9873880B2 (en) 2013-03-13 2018-01-23 Dsm Nutritional Products Ag Engineering microorganisms
EP2777400A1 (en) 2013-03-15 2014-09-17 Roquette Freres Microalgal flour granules and process for preparation thereof
US20160046900A1 (en) 2013-03-29 2016-02-18 Roquette Freres Microalgal biomass protein enrichment method
EP2826384A1 (de) 2013-07-16 2015-01-21 Evonik Industries AG Verfahren zur Trocknung von Biomasse
FR3008581B1 (fr) 2013-07-19 2016-11-04 Roquette Freres Farine de microalgues riches en lipides et procede de preparation
WO2015055965A1 (fr) 2013-10-18 2015-04-23 Roquette Freres Procede de texturation d'une biomasse de microalgues
AU2014349880A1 (en) 2013-11-12 2015-08-13 Roshan Viswanath MAKAM A process of production and extra-cellular secretion of lipids
KR101541521B1 (ko) 2013-11-28 2015-08-03 롯데케미칼 주식회사 미세조류를 이용한 도코사헥사엔산 생산방법
JP2016537986A (ja) 2013-11-29 2016-12-08 ロケット フレールＲｏｑｕｅｔｔｅ Ｆｒｅｒｅｓ 微細藻類バイオマスのカロテノイドおよびタンパク質を富化するためのプロセス
ES2718089T3 (es) 2013-11-29 2019-06-27 Corbion Biotech Inc Gránulos de harina de biomasa de microalgas ricas en proteínas y procedimiento de preparación de los mismos
FR3015516B1 (fr) * 2013-12-19 2016-01-22 Roquette Freres Procede d'enrichissement en dha de la biomasse de microalgues du genre thraustochytrium
ES2796079T3 (es) 2013-12-20 2020-11-25 Dsm Ip Assets Bv Procesos para obtener aceite microbiano de células microbianas
KR102552228B1 (ko) 2013-12-20 2023-07-05 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 미생물 세포로부터의 미생물 오일의 수득 방법
TWI646188B (zh) 2013-12-20 2019-01-01 荷蘭商Ｄｓｍ智慧財產有限公司 用於從微生物細胞獲得微生物油之方法（四）
BR112016014208B1 (pt) 2013-12-20 2022-09-20 Dsm Nutricional Products Ag Método de extração de lipídeos a partir de uma população de micro-organismos
NZ721413A (en) 2013-12-20 2022-05-27 Dsm Ip Assets Bv Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
CN115141859A (zh) 2013-12-20 2022-10-04 玛拉可再生能源公司 从微生物中回收油的方法
MX371484B (es) 2014-01-20 2020-01-30 Corbion Biotech Inc Metodo para el enriquecimiento con proteinas de biomasa de microalgas.
BR112016019894B1 (pt) * 2014-02-28 2021-10-05 Delft Advanced Biofuels B.V. Processo para a recuperação de lipídios ou hidrocarbonetos
KR102236782B1 (ko) 2014-05-22 2021-04-05 마라 리뉴어블즈 코퍼레이션 미생물에서 오일 생산 방법
WO2015191449A2 (en) 2014-06-08 2015-12-17 Solazyme, Inc. Personal care products containing microalgae or extracts thereof
EP4361281A2 (en) * 2014-07-03 2024-05-01 The Fynder Group, Inc. Acidophilic fusarium oxysporum strains, methods of their production and methods of their use
WO2016050552A1 (de) 2014-10-02 2016-04-07 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur herstellung einer pufas enthaltenden biomasse mit hoher zellstabilität
CN106793798A (zh) 2014-10-02 2017-05-31 赢创德固赛有限公司 具有高抗磨损性和高水稳定性的含pufa的饲料
EP3200606B1 (de) * 2014-10-02 2021-03-31 Evonik Operations GmbH Verfahren zur herstellung eines pufas enthaltenden futtermittels durch extrusion einer pufas enthaltenden biomasse des typs labyrinthulomycetes
EP3200604B1 (de) 2014-10-02 2021-11-03 Evonik Operations GmbH Verfahren zur herstellung eines futtermittels
ES2856838T3 (es) 2014-10-16 2021-09-28 Mara Renewables Corp Métodos de cultivo semicontinuo
CN106604998B (zh) 2014-10-16 2021-03-30 玛拉可再生能源公司 重复补料分批培养方法
US10570427B2 (en) * 2014-10-31 2020-02-25 Lanzatech New Zealand Limited Fermentation process for the production of lipids
JP6711278B2 (ja) * 2014-11-28 2020-06-17 味の素株式会社 イソプレノイド化合物の製造方法
FR3030191B1 (fr) 2014-12-18 2018-03-23 Corbion Biotech, Inc. Composition pour produit frit allege en matiere grasse et procede de fabrication
EP3098318A1 (en) 2015-01-24 2016-11-30 Indian Oil Corporation Limited Thraustochytrid based process for treating waste effluents
FR3031984B1 (fr) * 2015-01-27 2019-05-24 Roquette Freres Procede d'enrichissement de la biomasse de microalgues du genre traustochytrium en dha et en acides amines arg et glu
CN107667164A (zh) 2015-03-24 2018-02-06 泰拉瑞亚控股公司 微藻组合物及其用途
AR104042A1 (es) 2015-03-26 2017-06-21 Mara Renewables Corp Producción de alta densidad de biomasa y aceite utilizando glicerol en bruto
WO2017009790A1 (en) 2015-07-13 2017-01-19 MARA Renewables Corporation Enhancing microalgal metabolism of xylose
CN104974944B (zh) * 2015-07-15 2018-05-25 南京工业大学 一种产dha的裂殖壶菌基因工程菌及其构建方法和应用
ITUB20152958A1 (it) 2015-08-06 2017-02-06 Eni Spa Metodo per concentrare una sospensione cellulare comprendente una biomassa mucillaginosa di lieviti oleaginosi.
CN105018539B (zh) * 2015-08-24 2019-02-12 青岛旭能生物工程有限责任公司 一种培养裂殖壶菌高产dha的方法
CN105002227B (zh) * 2015-08-24 2018-09-07 青岛旭能生物工程有限责任公司 一种通过流加策略提高摇瓶发酵裂殖壶菌生产二十二碳六烯酸的方法
CN105420122A (zh) * 2015-12-23 2016-03-23 通威股份有限公司 可高密度培养的裂殖壶菌及其生产富含dha的油脂的方法
WO2017131188A1 (ja) * 2016-01-28 2017-08-03 日本水産株式会社 高度不飽和脂肪酸を含む油脂の製造方法
ES2877474T3 (es) 2016-03-01 2021-11-16 The Fynder Group Inc Biomateriales fúngicos filamentosos, métodos de su producción y métodos de su uso
US10851395B2 (en) 2016-06-10 2020-12-01 MARA Renewables Corporation Method of making lipids with improved cold flow properties
AU2017297752B2 (en) 2016-07-13 2021-09-23 Dsm Ip Assets B.V. Method for isolating lipids from lipid-containing cells
BR112019000435A2 (pt) 2016-07-13 2019-04-30 Evonik Degussa Gmbh método para separar lipídios de uma biomassa contendo lipídios lisados
WO2018011286A1 (en) 2016-07-13 2018-01-18 Evonik Degussa Gmbh Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
CN109415655A (zh) 2016-07-20 2019-03-01 玛拉可再生能源公司 可流动的粗制微生物油以及生产方法
EP3487969B1 (en) 2016-07-20 2024-04-17 Mara Renewables Corporation A two-step fractionation method for winterizing oil.
CN106359930A (zh) * 2016-08-29 2017-02-01 界首市任寨乡天佑家庭农场 一种用于生产epa、dpa含量高的功能性牛肉饲料
WO2018122057A1 (en) 2016-12-27 2018-07-05 Evonik Degussa Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
CA3048289C (en) 2016-12-27 2023-09-26 Evonik Degussa Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
CN106636235B (zh) * 2016-12-30 2020-08-04 内蒙古金达威药业有限公司 一种利用微生物发酵生产dha的方法
TWI661780B (zh) * 2017-02-10 2019-06-11 台原藥股份有限公司 含不飽和脂肪酸的素食組合物
BR112020000421A2 (pt) 2017-07-12 2020-09-01 Bunge Global Innovation Llc processo de extração de óleo a partir de biomassa de algas
WO2019034354A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Evonik Degussa Gmbh ENHANCED PRODUCTION OF LIPIDS BY LIMITING AT LEAST TWO SOURCES OF NUTRIENT LIMITING
EP3668989A1 (en) 2017-08-17 2020-06-24 Evonik Operations GmbH Enhanced production of lipids by limitation of at least two limiting nutrient sources
CA3073710C (en) 2017-08-30 2023-05-23 Sustainable Bioproducts, Inc. Edible composition with filamentous fungi
EP3470502A1 (en) 2017-10-13 2019-04-17 Evonik Degussa GmbH Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
WO2019048327A1 (en) 2017-09-05 2019-03-14 Evonik Degussa Gmbh METHOD FOR SEPARATING LIPIDS IN A BIOMASS CONTAINING LYDE LIPIDS
WO2019121752A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Evonik Degussa Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
EP3527664A1 (en) 2018-02-15 2019-08-21 Evonik Degussa GmbH Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
WO2019122030A1 (en) 2017-12-22 2019-06-27 Dsm Ip Assets B.V. Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
WO2019185910A2 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Novel use of substituted 2h-chromens and their derivatives
WO2019185941A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Novel use of substituted chroman-6-ols with extended lipophilic side chains
US20230165276A1 (en) 2018-03-29 2023-06-01 Dsm Ip Assets B.V. Novel use of substituted 2h-chromens and their derivatives
WO2019185940A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Use of twin-chromanols as antioxidants
WO2019185888A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Novel use of tocopherols
WO2019185889A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Novel use of carnosic acid
WO2019185939A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Use of twin-chromanols as antioxidants in oil
PE20210446A1 (es) 2018-03-29 2021-03-08 Dsm Ip Assets Bv Nuevo uso de croman-6-oles sustituidos
WO2019185891A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Novel use of substituted chroman-6-ols
EP3774758A2 (en) 2018-03-29 2021-02-17 DSM IP Assets B.V. Novel use of substituted chroman-6-ols with extended lipophilic side chains
WO2019185942A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Use of tocotrienols as antioxidants
EP3774757A1 (en) 2018-03-29 2021-02-17 DSM IP Assets B.V. Chroman-6-ols with an extended lipophilic side chain in position 2, their manufacture and use
US11976253B2 (en) 2018-05-15 2024-05-07 Evonik Operations Gmbh Method of isolating lipids from a lysed lipids containing biomass by emulsion inversion
WO2019219443A1 (en) 2018-05-15 2019-11-21 Evonik Operations Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass with aid of hydrophobic silica
CN109022284B (zh) * 2018-09-03 2021-05-21 杭州园泰生物科技有限公司 提高球等鞭金藻生物量以及dha产量的方法
FR3085825B1 (fr) 2018-09-14 2021-07-16 Fermentalg Huile de microorganismes riche en acide docosahexaenoique
FR3085962B1 (fr) 2018-09-14 2021-06-18 Fermentalg Procede d'extracton d'une huile riche en pufa
CN112955564A (zh) * 2018-11-09 2021-06-11 赢创运营有限公司 用于生产可被容易破碎并具有增加的多不饱和脂肪酸含量的生物质的方法
CN112969796A (zh) * 2018-11-09 2021-06-15 赢创运营有限公司 用于生产具有增加的多不饱和脂肪酸含量的生物质的方法
KR102286636B1 (ko) * 2019-01-31 2021-08-05 한국생명공학연구원 로리오라이드 생산성이 높은 신규 미세조류
CN114126412A (zh) 2019-02-27 2022-03-01 芬德集团公司 包含丝状真菌颗粒的食物材料组合物和膜生物反应器设计
KR20220024666A (ko) 2019-06-18 2022-03-03 더 파인더 그룹, 인크. 진균 직물 재료 및 가죽 유사체
EP3933016A1 (en) 2020-06-30 2022-01-05 Evonik Operations GmbH Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
WO2022228687A1 (en) 2021-04-29 2022-11-03 S2B Gmbh & Co. Kg Biotechnological production of terpenes
TWI766669B (zh) * 2021-04-29 2022-06-01 大自然環保科技有限公司 有機液體生物醱酵槽裝置
EP4180513A1 (en) 2021-11-15 2023-05-17 Indian Oil Corporation Limited An improved process for production of enriched algal biomass
EP4198136A3 (en) 2021-12-16 2023-08-30 Indian Oil Corporation Limited Methods and formulations for enhancing high value lipids
WO2023144707A1 (en) 2022-01-25 2023-08-03 Dsm Ip Assets B.V. Media refinement and nutrient feeding approaches to increase polyunsaturated fatty acid production

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992013086A1 (en) * 1991-01-24 1992-08-06 Martek Corporation Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
US5244921A (en) * 1990-03-21 1993-09-14 Martek Corporation Eicosapentaenoic acids and methods for their production

Family Cites Families (138)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2879162A (en) * 1956-10-04 1959-03-24 Du Pont Augmenting poultry feed
US2890989A (en) 1957-07-01 1959-06-16 Ralph F Anderson Method for the production of carotenes
GB857161A (en) 1958-01-07 1960-12-29 Boots Pure Drug Co Ltd Improvements in the propagation of fungi
US3108402A (en) 1961-03-16 1963-10-29 Grain Processing Corp Production of carotenoid pigments
US3444647A (en) 1961-08-08 1969-05-20 Masahito Takahashi Process of cultivating algae
US3142135A (en) 1962-02-13 1964-07-28 Grain Processing Corp Production of carotenoids by the cultivation of algae
US3282794A (en) * 1963-09-19 1966-11-01 Ajinomoto Kk Method of producing citrulline by bacterial fermentation
US3296079A (en) 1963-12-09 1967-01-03 Pfizer & Co C Products sweetened without sugar and characterized by freedom from aftertaste
US3316674A (en) * 1964-09-11 1967-05-02 Yakult Honsha Kk Method of new industrial cultivation of unicellular green algae such as chlorella
GB1143405A (en) 1965-02-25 1969-02-19 Unilever Ltd Processing of foodstuffs and the like
GB1123884A (en) 1966-05-23 1968-08-14 Pfizer & Co C Animal feed compositions
FR1557635A (cs) 1967-04-20 1969-02-21
US3661663A (en) * 1968-08-21 1972-05-09 Owens Corning Fiberglass Corp Method of producing siliceous fiber corrosion inhibiting composites
DE1901980A1 (de) * 1969-01-16 1970-09-03 Wunder Kg Heinrich Sicherheits-Skibindung mit ausschwenkbarem Andrueckbacken
US3761588A (en) * 1969-02-06 1973-09-25 Meiji Seika Kaisha Antibiotics and production thereof
US3617299A (en) 1969-09-15 1971-11-02 Abbott Lab Animal feed premix resistant to static charge and method of making same
US3647482A (en) * 1970-03-04 1972-03-07 Gen Mills Inc Reduction and modification of the unpleasant aftertaste of saccharin
GB1401956A (en) 1971-09-11 1975-08-06 Marmite Ltd Growing of yeast and other microorganisms
US3924017A (en) 1972-07-28 1975-12-02 Gen Foods Corp Sweetness inducer
JPS564233B2 (cs) * 1973-03-30 1981-01-29
US3908026A (en) * 1973-04-19 1975-09-23 Procter & Gamble Culinary composition containing paramethoxycinnamaldehyde as a flavoring agent and sweetener
US3908028A (en) 1973-04-19 1975-09-23 Procter & Gamble Soft drink composition containing paramethoxycinnamaldehyde as a flavoring agent and sweetner
GB1466853A (en) 1973-05-22 1977-03-09 Simon Rosedowns Ltd Extraction
US3879890A (en) * 1974-02-06 1975-04-29 Canadian Patents Dev Algal polysaccharide production
US4162324A (en) 1975-11-21 1979-07-24 Merck & Co., Inc. Antibiotics 890A1 and 890A3
IT1109471B (it) * 1976-08-17 1985-12-16 Deral Sa Procedimento e prodotto per la conservazione e la valorizzazione di vegetali a verde e dei sotto prodotti umidi delle industrie agro alimentari
JPS5944020B2 (ja) 1978-01-27 1984-10-26 協和醗酵工業株式会社 油脂酵母による海産魚類の飼育方法
US4229544A (en) * 1978-08-08 1980-10-21 Payfer Laboratories Inc. Living organism packaging
US4304794A (en) * 1978-12-14 1981-12-08 Chimicasa Gmbh Artificial-sweetener composition and process of preparing and using same
US4232122A (en) 1979-01-17 1980-11-04 Z-L Limited Partnership Antioxidants, antioxidant compositions and methods of preparing and using same
JPS55111794A (en) * 1979-02-19 1980-08-28 Agency Of Ind Science & Technol Production of lipid having high linolic acid content
US4405649A (en) * 1979-05-07 1983-09-20 Marvin Dudley Process for producing premium quality fish meal from whole fish
IL57712A (en) 1979-07-03 1984-02-29 Yissum Res Dev Co Cultivation of halophilic algae of the dunaliella species for the production of fuel-like product
DE3011185A1 (de) * 1980-03-22 1981-10-01 Kali-Chemie Pharma Gmbh, 3000 Hannover Verfahren zur gewinnung von fuer physiologische zwecke direkt verwendbarem rin(paragraph)lecithin
GB2098065A (en) 1981-04-14 1982-11-17 Nippon Suisan Kaisha Ltd Antithrombotic compositions containing docosahexaenoic acid
US4426396A (en) 1981-06-11 1984-01-17 Union Oil Company Of California Preservation of harvested crops and animal feedstuffs
IL63734A (en) 1981-09-04 1985-07-31 Yeda Res & Dev Lipid fraction,its preparation and pharmaceutical compositions containing same
DE3268859D1 (en) 1981-10-07 1986-03-13 Commw Scient Ind Res Org Method for harvesting algae
US4383038A (en) * 1981-12-10 1983-05-10 Ethyl Corporation Process for the preparation of L-proline by cultivating algae
DE3368377D1 (en) * 1982-04-16 1987-01-29 Nestle Sa Lipid composition for oral, enteral or parenteral feeding
JPS58196068A (ja) 1982-05-12 1983-11-15 Nec Corp 電歪効果素子
JPS58213613A (ja) 1982-06-03 1983-12-12 Sumitomo Bakelite Co Ltd 球型活性炭の製造方法
US4670285A (en) * 1982-08-06 1987-06-02 The University Of Toronto Innovations Foundation Infant formula
US4425396A (en) * 1982-09-28 1984-01-10 The B. F. Goodrich Company Insulative panel
US4588600A (en) 1983-04-18 1986-05-13 Scm Corporation Dry premix composition for imparting a fried appearance to baked foods
JPS6087798A (ja) 1983-10-21 1985-05-17 Meiji Milk Prod Co Ltd 藻類によるエイコサペンタエン酸の生産方法
JPS60105471A (ja) 1983-11-14 1985-06-10 Nisshin Flour Milling Co Ltd 健康食品卵の生産方法
JPS60133094A (ja) 1983-12-21 1985-07-16 日清製油株式会社 高純度エイコサペンタエン酸の製造法
EP0155420B1 (en) * 1984-02-09 1988-03-23 The Agency of Industrial Science and Technology A method for the preparation of a fungal body and a lipid rich in gamma-linolenic acid therefrom
JPS61170366A (ja) 1985-01-21 1986-08-01 Nisshin Kararingu Kk 多価不飽和脂肪酸含有魚類を主成分とする食品の製造方法
IL74497A (en) 1985-03-05 1990-02-09 Proterra Ag Pharmaceutical compositions containing phenyl carbamate derivatives and certain phenyl carbamate derivatives
US4634533A (en) 1985-04-26 1987-01-06 Somerville Robert L Method of converting brines to useful products
US4792418A (en) 1985-08-14 1988-12-20 Century Laboratories, Inc. Method of extraction and purification of polyunsaturated fatty acids from natural sources
US4749522A (en) 1985-10-31 1988-06-07 Angio-Medical Corporation Supercritical fluid extraction of animal derived materials
DE3603000A1 (de) 1986-01-31 1987-08-06 Milupa Ag Neue polyensaeure-reiche fettmischung und deren verwendung bei der herstellung von saeuglingsnahrungen
JPS6340711A (ja) 1986-08-06 1988-02-22 Ngk Insulators Ltd β型窒化珪素の製造法
US4758438A (en) * 1986-10-14 1988-07-19 Stroz John J Sweetener composition
US4804555A (en) 1986-10-21 1989-02-14 General Mills, Inc. Physical process for simultaneous deodorization and cholesterol reduction of fats and oils
US4957748A (en) * 1987-03-23 1990-09-18 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Ruminant feed, method of making and method of using
US5064665A (en) 1987-03-23 1991-11-12 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Method of making and using a ruminant feed
US5023091A (en) * 1987-03-23 1991-06-11 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Ruminant feed method of making and method of using
JPS63237745A (ja) 1987-03-27 1988-10-04 Harumi Okuyama α−リノレン酸系脂肪酸の含有率が高められた動物性食品の生産方法
US4764392A (en) * 1987-04-01 1988-08-16 Q.P. Corporation Margarine containing fish oil
US4918104A (en) 1987-06-16 1990-04-17 Weiss Howard S Method and composition for increasing the concentration of omega-3 polyunsaturated fatty acids in poultry and poultry eggs and poultry and eggs resulting therefrom
AU2122688A (en) * 1987-07-20 1989-02-13 Maricultura, Incorporated Microorganism production of omega-3 (n-3) lipids
CA1263270A (en) * 1987-08-19 1989-11-28 Bruce J. Holub Animal feed supplement
US4871551A (en) 1988-02-08 1989-10-03 Microbio Resources, Inc. Pigmentation supplements for animal feed compositions
JP2723243B2 (ja) 1988-02-25 1998-03-09 サントリー株式会社 高度不飽和脂肪酸添加動物飼料
JPH01218573A (ja) 1988-02-25 1989-08-31 Yoshio Tanaka ドナリエラ藻体含有固形状食品の製造法
US4822500A (en) * 1988-02-29 1989-04-18 Texas United Chemical Corporation Saturated brine well treating fluids and additives therefore
US4874629A (en) 1988-05-02 1989-10-17 Chang Stephen S Purification of fish oil
US7033584B2 (en) 1988-09-07 2006-04-25 Omegatech, Inc. Feeding Thraustochytriales to poultry for increasing omega-3 highly unsaturated fatty acids in eggs
US5130242A (en) 1988-09-07 1992-07-14 Phycotech, Inc. Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US5340742A (en) * 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Process for growing thraustochytrium and schizochytrium using non-chloride salts to produce a microfloral biomass having omega-3-highly unsaturated fatty acids
US20060094089A1 (en) 1988-09-07 2006-05-04 Martek Biosciences Corporation Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US6977167B2 (en) 1988-09-07 2005-12-20 Martek Biosciences Corporation Mixtures of omega-3 and omega-6 highly unsaturated fatty acids from euryhaline microorganisms
US5985348A (en) 1995-06-07 1999-11-16 Omegatech, Inc. Milk products having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US5340594A (en) 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Food product having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US6451567B1 (en) 1988-09-07 2002-09-17 Omegatech, Inc. Fermentation process for producing long chain omega-3 fatty acids with euryhaline microorganisms
US5698244A (en) * 1988-09-07 1997-12-16 Omegatech Inc. Method for raising animals having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US5012761A (en) * 1988-11-17 1991-05-07 Oh Suk Y Chicken egg having relatively high percentage of long chain fatty acids and method of reducing heart related disease in humans using such eggs
JP2664452B2 (ja) 1988-12-23 1997-10-15 サントリー株式会社 魚貝類用餌料
DE3920679A1 (de) 1989-06-23 1991-01-10 Milupa Ag Fettmischung zur herstellung von nahrungen, insbesondere saeuglingsnahrungen
US5272085A (en) 1989-10-31 1993-12-21 Queen's University Sodium tolerance genes derived from schizosaccharomyces pombe
US5407957A (en) 1990-02-13 1995-04-18 Martek Corporation Production of docosahexaenoic acid by dinoflagellates
JPH0458847A (ja) 1990-06-23 1992-02-25 Nippon Oil & Fats Co Ltd 抗肥満症油脂および抗肥満症食品
US5297625A (en) 1990-08-24 1994-03-29 Associated Universities, Inc. Biochemically enhanced oil recovery and oil treatment
JP3102645B2 (ja) 1990-10-15 2000-10-23 雪印乳業株式会社 栄養補給用栄養組成物
US5133963A (en) 1990-12-21 1992-07-28 Shuntaro Ise Method of producing commercially useful poultry products with increased concentrations of Omega-3 polyunsaturated fatty acids
EP1832181A3 (en) 1991-01-24 2010-03-31 Martek Biosciences Corporation Microbial oil mixtures and uses thereof
DE4101976C2 (de) 1991-01-24 1995-09-21 Adatomed Pharma Chiron Behandlungssystem für Netzhautentfaltung
US5658767A (en) 1991-01-24 1997-08-19 Martek Corporation Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
JPH0728677B2 (ja) 1991-01-25 1995-04-05 理研ビタミン株式会社 養魚飼料用油脂組成物及びこれを用いた養魚飼料
JPH04271754A (ja) 1991-02-26 1992-09-28 Nippon Nousan Kogyo Kk 家畜、家禽用飼料および畜肉の生産方法
KR940005180B1 (ko) 1991-08-20 1994-06-13 주식회사 우방랜드 n-3 지방산이 축적된 돈육 생산용 사료 조성물
FR2686619B1 (fr) * 1992-01-28 1995-07-13 Commissariat Energie Atomique Procede de production selective de lipides poly-insatures a partir d'une culture de micro-algues du type porphyridium et cuve utilisee dans ce procede.
GB2266652B (en) 1992-05-06 1995-11-22 Woobang Land Company Ltd Feed composition for a broiler
US6410281B1 (en) * 1992-07-10 2002-06-25 Omegatech, Inc. Reducing corrosion in a fermentor by providing sodium with a non-chloride sodium salt
KR940007396A (ko) 1992-09-30 1994-04-27 스마 요시츠기 교차 홈 타입의 등속회전 조인트
JP2558050B2 (ja) 1993-02-18 1996-11-27 イセ食品株式会社 鶏用飼料
JPH078215A (ja) * 1993-04-30 1995-01-13 Kawasaki Steel Corp ドコサヘキサエン酸含有海洋性微細藻類食品素材およびその製造方法
JPH07255387A (ja) 1994-03-24 1995-10-09 Morinaga Milk Ind Co Ltd 食用家禽用飼料及び該飼料を用いる食用家禽の飼養方 法
PL179737B1 (pl) 1994-08-16 2000-10-31 Drfrische Gmbh Sposób uzyskiwania naturalnych, rodzimych substancji organicznych PL PL PL PL
JP2764572B2 (ja) * 1995-04-17 1998-06-11 工業技術院長 ドコサヘキサエン酸生産能を有する新規微生物及びそれを用いたドコサヘキサエン酸の製造方法
EP0823475B1 (en) * 1995-04-17 2009-06-17 National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Novel microorganisms capable of producing highly unsaturated fatty acids and process for producing highly unsaturated fatty acids by using the microorganisms
JPH08322475A (ja) 1995-05-29 1996-12-10 Nisshin Flour Milling Co Ltd 家禽類用飼料
DE69635154T2 (de) 1995-05-30 2006-06-22 Suntory Limited Hühnereier mit einem hohen anteil an mehrfach ungesättigten fettsäuren, verfahren für deren herstellung und die verwendung derselben
US20080175953A1 (en) * 1995-06-07 2008-07-24 Martek Biosciences Corporation Process for the Heterotrophic Production of Microbial Products with High Concentrations of Omega-3 Highly Unsaturated Fatty Acids
JPH0965971A (ja) * 1995-09-04 1997-03-11 Mitsuo Fukushige 加熱調理容器
JPH0965871A (ja) * 1995-09-04 1997-03-11 Kawasaki Steel Corp 海洋性微細藻類の培養方法
JPH0984590A (ja) 1995-09-21 1997-03-31 Itouen:Kk α−リノレン酸の製造法
JPH09110888A (ja) 1995-10-17 1997-04-28 Nippon Oil & Fats Co Ltd リン脂質組成物
US6255505B1 (en) * 1996-03-28 2001-07-03 Gist-Brocades, B.V. Microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
EP0821068A3 (en) * 1996-03-29 1999-06-02 Rohm And Haas Company Novel sphingolipids and a process thereto
BR9710394A (pt) * 1996-07-23 2000-01-11 Nagase Biochemicals Ltda Processo para preparação de ácido docosahexaenóico e ácido docosapentaenóico;processo de preparação a partir de lipidio;microorganismo produtor de lipìdios;alimentos e congenêres abtidos através do processo
FI964692A0 (fi) * 1996-11-25 1996-11-25 Primalco Ltd Foerbaettrad cellulassammansaettning foer bioefterbehandling av textilmaterial som innehaoller cellulosa
WO1998037179A2 (en) * 1997-02-20 1998-08-27 Dsm N.V. Fermentative production of valuable compounds on an industrial scale using chemically defined media
US6566583B1 (en) 1997-06-04 2003-05-20 Daniel Facciotti Schizochytrium PKS genes
US6140486A (en) * 1997-06-04 2000-10-31 Calgene Llc Production of polyunsaturated fatty acids by expression of polyketide-like synthesis genes in plants
HUP0003079A3 (en) * 1997-08-14 2001-02-28 Martek Biosciences Corp Columb A method for increasing incorporation efficiency of omega-3 highly unsaturated fatty acid in poultry meat
DE19749413A1 (de) * 1997-11-07 1999-05-12 Hoechst Ag Neuartige Sophoroselipide, Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung
DE19838011C2 (de) * 1998-08-21 2000-01-13 Christoph Syldatk Verfahren zur biotechnischen Herstellung von Fettsäuremethylestern ("Biodiesel") auf Molkebasis
US7271315B2 (en) 1999-01-14 2007-09-18 Martek Biosciences Corporation PUFA polyketide synthase systems and uses thereof
US7247461B2 (en) 1999-01-14 2007-07-24 Martek Biosciences Corporation Nucleic acid molecule encoding ORFA of a PUFA polyketide synthase system and uses thereof
DE19903095C2 (de) * 1999-01-27 2003-05-22 Nutrinova Gmbh Gewinnung von gamma-Linolensäure aus Protozoen der Gattung Colpidium
DE60034775T3 (de) * 1999-03-04 2016-11-24 Suntory Holdings Ltd. Verwendung von Docosapentsäure enthaltendem Material
NZ520420A (en) * 2000-01-28 2005-03-24 Martek Biosciences Corp Enhanced production of lipids containing polyenoic fatty acids by high density cultures of eukaryotic microbes in fermentors
US6338866B1 (en) 2000-02-15 2002-01-15 Applied Food Biotechnology, Inc. Pet foods using algal or fungal waste containing fatty acids
TWI426126B (zh) 2001-04-16 2014-02-11 Dsm Ip Assets Bv 多不飽和脂肪酸（ｐｕｆａ）聚乙醯合成酶系統及其用途（二）
CA2520396C (en) 2003-03-26 2016-08-09 Martek Biosciences Corporation Pufa polyketide synthase systems and uses thereof
US7208160B2 (en) * 2003-08-26 2007-04-24 Sol Katzen Process of treating sea algae and halophytic plants
DE102004017370A1 (de) 2004-04-08 2005-10-27 Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredients Gmbh PUFA-PKS Gene aus Ulkenia
JP4821409B2 (ja) * 2006-03-31 2011-11-24 アイシン・エィ・ダブリュ株式会社 自動変速機の油圧制御装置
US8585552B2 (en) * 2006-08-01 2013-11-19 GM Global Technology Operations LLC Torque converter clutch lock on method and low slip regulation
US7485073B2 (en) * 2006-08-02 2009-02-03 Horng-Jiun Chang Muscle exerciser
US8846781B2 (en) * 2007-09-25 2014-09-30 Monsanto Technology Llc Use of oils with high concentrations of polyunsaturated fatty acids in plastics and surface coatings
US8940884B2 (en) 2009-03-19 2015-01-27 Dsm Ip Assets B.V. Polyunsaturated fatty acid synthase nucleic acid molecules and polypeptides, compositions, and methods of making and uses thereof
FR3015516B1 (fr) 2013-12-19 2016-01-22 Roquette Freres Procede d'enrichissement en dha de la biomasse de microalgues du genre thraustochytrium

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5244921A (en) * 1990-03-21 1993-09-14 Martek Corporation Eicosapentaenoic acids and methods for their production
WO1992013086A1 (en) * 1991-01-24 1992-08-06 Martek Corporation Arachidonic acid and methods for the production and use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
US20080032387A1 (en) 2008-02-07
RU2002120481A (ru) 2004-02-20
EP1707055A2 (en) 2006-10-04
JP2016202189A (ja) 2016-12-08
EP2341127B1 (en) 2015-05-27
DE60130737T2 (de) 2008-07-17
IL196776A (en) 2011-09-27
EP2341127A3 (en) 2011-10-05
CN101519680A (zh) 2009-09-02
TWI301509B (en) 2008-10-01
PT1251744E (pt) 2007-11-08
CN105112463A (zh) 2015-12-02
KR100938945B1 (ko) 2010-01-26
US7732170B2 (en) 2010-06-08
WO2001054510A9 (en) 2002-10-17
KR20110139767A (ko) 2011-12-29
EP2960325A1 (en) 2015-12-30
CN101519678A (zh) 2009-09-02
CN101003821A (zh) 2007-07-25
MX345559B (es) 2017-02-03
EP1251744A1 (en) 2002-10-30
US20080032381A1 (en) 2008-02-07
EP1251744B1 (en) 2007-10-03
CN101519679B (zh) 2013-11-13
US20030180898A1 (en) 2003-09-25
KR20070073986A (ko) 2007-07-10
JP2012019802A (ja) 2012-02-02
US20080032364A1 (en) 2008-02-07
US20120178135A1 (en) 2012-07-12
CN105567752A (zh) 2016-05-11
EP1251744A4 (en) 2004-02-25
KR20030013368A (ko) 2003-02-14
JP2004501603A (ja) 2004-01-22
DE01903376T1 (de) 2004-07-08
US6607900B2 (en) 2003-08-19
US20080032361A1 (en) 2008-02-07
PL362620A1 (en) 2004-11-02
AU785124B2 (en) 2006-09-28
US20010046691A1 (en) 2001-11-29
CZ20022508A3 (cs) 2003-02-12
US8216812B2 (en) 2012-07-10
EP2341125A3 (en) 2011-10-05
ES2653545T3 (es) 2018-02-07
NO20023588D0 (no) 2002-07-26
KR101293135B1 (ko) 2013-09-12
EP2341126A2 (en) 2011-07-06
TR200302163T3 (tr) 2004-02-23
CA2760879C (en) 2018-02-27
US8288134B2 (en) 2012-10-16
DK1251744T4 (en) 2015-11-16
JP2014087375A (ja) 2014-05-15
JP2013099366A (ja) 2013-05-23
US8133706B2 (en) 2012-03-13
EP2338974A2 (en) 2011-06-29
CA2760879A1 (en) 2001-08-02
HUP0301794A3 (en) 2011-04-28
ES2208141T3 (es) 2008-04-01
TW200513535A (en) 2005-04-16
US20170049131A1 (en) 2017-02-23
CY1107114T1 (el) 2012-10-24
CN101519680B (zh) 2013-11-13
AU2009213103A1 (en) 2009-10-08
US20080057551A1 (en) 2008-03-06
US20060286649A1 (en) 2006-12-21
US20080032360A1 (en) 2008-02-07
KR20080086938A (ko) 2008-09-26
MXPA02007321A (es) 2003-01-28
CA2786722A1 (en) 2001-08-02
US7579174B2 (en) 2009-08-25
JP6134136B2 (ja) 2017-05-24
JP2013051973A (ja) 2013-03-21
DK1251744T3 (da) 2007-10-29
IL150770A0 (en) 2003-02-12
ATE374531T1 (de) 2007-10-15
ZA200205957B (en) 2003-11-19
CA2396691C (en) 2012-09-18
KR100925290B1 (ko) 2009-11-04
AU3120101A (en) 2001-08-07
US20080032363A1 (en) 2008-02-07
AU2006207882A1 (en) 2006-10-05
KR20090064603A (ko) 2009-06-19
JP2019088319A (ja) 2019-06-13
CN101519678B (zh) 2013-11-13
NZ520420A (en) 2005-03-24
CN101519679A (zh) 2009-09-02
ES2208141T5 (es) 2015-11-26
WO2001054510A1 (en) 2001-08-02
US20150320084A1 (en) 2015-11-12
ES2545492T3 (es) 2015-09-11
AU2009213103B2 (en) 2013-06-06
EP2338974B1 (en) 2017-09-27
US8124385B2 (en) 2012-02-28
US8288133B2 (en) 2012-10-16
EP2341126A3 (en) 2011-10-05
US8124384B2 (en) 2012-02-28
US20080032365A1 (en) 2008-02-07
BRPI0107832B1 (pt) 2015-07-07
HUP0301794A2 (hu) 2003-09-29
RU2326171C2 (ru) 2008-06-10
TWI310788B (en) 2009-06-11
EP1251744B2 (en) 2015-08-26
EP2341127A2 (en) 2011-07-06
US20170049132A1 (en) 2017-02-23
HK1050611A1 (en) 2003-07-04
EP2338974A3 (en) 2011-10-05
CN1416320A (zh) 2003-05-07
US8187846B2 (en) 2012-05-29
CA2396691A1 (en) 2001-08-02
NO20023588L (no) 2002-09-26
KR20100116233A (ko) 2010-10-29
CN100491519C (zh) 2009-05-27
ES2654384T3 (es) 2018-02-13
US20060286648A1 (en) 2006-12-21
DE60130737T3 (de) 2016-01-14
DE60130737T8 (de) 2008-10-30
JP6534156B2 (ja) 2019-06-26
BR0107832A (pt) 2004-04-27
EP2341125A2 (en) 2011-07-06
IL171408A (en) 2009-09-01
ES2208141T1 (es) 2004-06-16
JP2005270115A (ja) 2005-10-06
EP2960325B1 (en) 2017-09-27
US20080032362A1 (en) 2008-02-07
AU2013205894B2 (en) 2016-06-02
TWI354702B (en) 2011-12-21
AU2006207882B2 (en) 2009-06-11
EP1707055A3 (en) 2009-01-14
AU2013205894A1 (en) 2013-06-06
TW200911995A (en) 2009-03-16
DE60130737D1 (de) 2007-11-15
US9848623B2 (en) 2017-12-26
EP2341125B1 (en) 2017-09-27
US20080032366A1 (en) 2008-02-07
JP2010057508A (ja) 2010-03-18
CN101519677A (zh) 2009-09-02
US8206956B2 (en) 2012-06-26
US8187845B2 (en) 2012-05-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ301130B6 (cs) Zvýšená produkce lipidu obsahujících polyenové mastné kyseliny ve fermentorech kulturami mikrobu s vysokou hustotou ve fermentorech

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Effective date: 20210126