CN109415655A - 可流动的粗制微生物油以及生产方法 - Google Patents

Abstract

本文提供一种用于获得可流动的原油的方法，所述方法在不存在降低油粘度的添加剂的情况下进行，包括以下步骤：提供产油微生物群；从所述微生物中回收油，其中所述油处于第一温度；在第一时间段内将所述第一温度降低至第二温度；以及在所述第一时间段期间向所述油施加机械能，从而产生所述可流动的原油。

Description

可流动的粗制微生物油以及生产方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年7月20日提交的美国临时申请No.62/364,455的优先权，所述申请以引用的方式整体并入本文。

技术背景

微生物油作为营养油即ω-3脂肪酸的可持续来源，已经引起越来越多的关注。人们越来越意识到这些营养油的健康益处，这使得对膳食补充剂、营养食品和食物中的油的需求量很大。已在专业炼油厂中开发和确立了精炼工艺，以满足市场需求和要求。然而，粗制微生物油在冷却至环境条件时固化，这使得它们难以处理。通常，添加添加剂或执行额外的工艺步骤来从油中去除组分以便改善油的流动性。

发明内容

本文提供一种用于获得可流动的油的方法，所述方法包括以下步骤：提供产油微生物群；从微生物中回收油，其中油处于第一温度；在第一时间段内将油的第一温度降低至第二温度以及在第一时间段期间向油施加机械能，从而产生可流动的油。

附图说明

图1A和图1B是显微镜下的油晶体图像(400倍放大)。(图1A)可流动的油，(图1B)在20℃下冷却的固体油。

具体实施方式

在生产和提取油之后，冷却条件使得油立即过饱和并且油的成核速率高，导致高粘度并最终导致油固化。即使油慢慢冷却，也会形成极厚的糊状物。这主要归因于在冷却过程中形成的均匀分布的晶体以及它们所形成的坚固网络。在本方法之前，通过添加剂或额外的工艺步骤避免了这种粘度和固化。但并不总是希望通过添加添加剂来改变油的流动性，添加剂可能影响食物安全并且需要后续去除，并且额外的工艺步骤可能导致显著的油损失。本文提供一种改变在室温下趋于固化的油的流动性而不从油中去除任何组分或向其中添加任何成分的方法。例如，可去除的组分包括较长链饱和脂肪酸，这些较长链饱和脂肪酸在室温下是固体并且可以通过分馏去除。可添加到油中以增加油的流动性的示例性成分包括但不限于油稀化剂、有机溶剂和轻质油(例如高油酸，C18:1)。本文提供的方法改变了油的流动性，同时保持了其组分。

不受理论限制，所述方法是冷却处理，同时输入选择性机械能以实现快速油晶体生长和微观结构形式修改。机械能促使晶体转变为更稳定的晶体形式，从而降低油粘度。此外，机械能以一种方式牵引固体并从晶体网络中释放液体油，这允许液体油馏分移动。一旦固相和液相建立，温和混合允许两相以可流动的形式共存。换句话说，所提供的流动性方法通过施加选择性机械能来改变油微观结构，所述选择性机械能促进稳定晶体形式的形成和晶体网络的弱化。可流动的油中的晶体比天然冷却的油中形成的晶体大得多(图1)。较大但较少量的晶体会削弱颗粒相互作用，从而使液体油移动。固体获得支撑并在液体油滴内漂浮。通过所公开的方法获得的可流动的油在室温下以及在4℃下储存后保持液态。所提供的可流动的油更易于使用，因为它可以倾倒或泵送，因此能更容易地将油转移到炼油厂。通过使用本文所述的油流动性操纵方法，在油组成方面未发生变化，并且任选地，未添加可能难以随后去除的添加剂。

本文提供一种用于获得可流动的油的方法，所述方法包括以下步骤：提供产油微生物群；从微生物中回收油，其中油处于第一温度；在第一时间段内将油的第一温度降低至第二温度；以及在第一时间段期间向油施加机械能，从而产生可流动的油，其中所述方法在没有进一步纯化步骤以及不存在降低油粘度的剂的情况下进行。任选地，在降低油的第一温度之前，油的组成保持不变。任选地，所述方法还包括将油在第三温度下储存第三时间段。任选地，第三温度为室温(即，约18℃至23℃，例如约20℃)。任选地，第三温度为约4℃。任选地，油包含一种或多种多不饱和脂肪酸。任选地，多不饱和脂肪酸是二十二碳六烯酸(DHA)。

油流动性或冷流油特性可以通过三个不同的点或温度来表征：熔点、浊点和倾点。如本文所用，术语熔点是指油变得澄清时的温度。如本文所用，术语浊点是指油开始结晶时油的温度。如本文所用，倾点是在规定的试验条件下观察到试样(例如油)移动时的最低温度的指数。这些温度可通过已知方法确定，这些方法包括由美国石油化学学会(AOCS)和美国材料与试验协会(ASTM)建立的方法，这些方法建立了确定诸如脂质和油等流体的熔点、浊点和倾点的规范。例如，可使用AOCS官方方法Cc1-25测定熔点，可使用AOCS官方方法Cc6-25测定浊点，并且可使用ASTM官方方法D97测定倾点。通常，油的倾点高于室温。所提供的方法产生可在等于或低于约室温下流动的油。任选地，油可在约4℃下流动。

在所提供的方法中，第一温度通常高于油的熔点。任选地，第一温度为30℃至60℃。因此，第一温度可以是30℃与60℃之间的任何度数并且包括30℃和60℃。因此，第一温度可以为30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60℃，或其任何分数值例如49.1、49.2、49.3、49.4、49.5、49.6、49.7、49.8、49.9或50.0。

可以将油在第一温度下保持一段时间。任选地，将油在第一温度下保持1至60分钟或更长时间。因此，可以将油在第一温度下保持1与60分钟之间的任何时间或超过60分钟的任何时间。任选地，将油在第一温度下保持5与60分钟之间的任何时间。

在所提供的方法中，在第一时间段内将油从第一温度降低至第二温度。任选地，第一时间段为1至30分钟。第一时间段可以为1与30分钟之间的任何值。任选地，第一时间段为5至30分钟。因此，第一时间段可以为1、5、10、15、20、25或30分钟或其中的任何分数值。任选地，在第一时间段内将第一温度以每分钟0.5至5度降低至第二温度。

任选地，油的第二温度为-10℃至30℃，包括端值。任选地，油的第二温度为0至9℃或0至9℃之间的任何温度。任选地，油的第二温度为5℃。

可以将油在第二温度下保持1至30分钟。任选地，将油在第二温度下保持5至30分钟。因此，可以将油在第二温度下保持1、5、10、15、20、25或30分钟或其中的任何分数值。

任选地，将油在第三温度下储存第三时间段。任选地，第三温度约为室温。任选地，第三温度为0至5℃，例如约4℃。

可以通过任何合适的方式施加机械能以达到期望的结果。任选地，通过离心、搅拌、混合、共混、摇荡、振动或它们的任何组合来施加机械能。任选地，机械能包括以50至200rpm的速度混合。任选地，机械能包括离心。

相比不存在机械能时产生的晶体，机械能产生的晶体群的平均粒径更大。任选地，可流动的油的晶体群的直径为15-60μm。

任选地，所提供的方法包括在高于油的熔点的温度下提供油并在一段时间内降低油的温度，同时向油施加机械能使油的温度低于油的熔点并将油储存在第三温度下。任选地，机械能是离心。任选地，第三温度约为室温。任选地，第三温度为0至5℃，例如约4℃。

使用所提供的方法加工的油可以获自多种来源，包括例如微生物。任选地，油是植物种子油。可用于生产在所提供的方法中加工的油的合适微生物包括但不限于产油藻类(例如微藻)、真菌(包括酵母)、细菌或原生生物。任选地，微生物群选自长形壶菌属(Oblongichytrium)、海洋壶菌属(Aurantiochytrium)、破囊壶菌属(Thraustochytrium)和裂殖壶菌属(Schizochytrium)或它们的任何组合。任选地，微生物包括破囊壶菌目(Thraustochytriales)的破囊壶菌(Thraustochytrid)，并且更具体来说，是破囊壶菌目的破囊壶菌属。任选地，微生物群包括如美国专利No.5,340,594和5,340,742中所述的破囊壶菌目，所述美国专利以引用的方式整体并入本文。微生物可为破囊壶菌属种，诸如如美国专利No.8,163,515中所述的以ATCC登录号PTA-6245保藏的破囊壶菌属种(即ONC-T18)，所述美国专利以引用的方式整体并入本文。

微藻在领域内被公认为代表不同的生物群。出于本文件的目的，术语微藻用于描述源于水生和/或陆地环境的单细胞微生物(一些蓝细菌栖息在陆地/土壤)。水生环境从海洋环境延伸至淡水湖泊和河流，并且还包括咸水环境，诸如河口和江口。微藻可以是光合作用的；任选地，微藻是异养的。微藻可具有真核性质或原核性质。微藻可以是非运动性的或运动性的。

如本文所用，术语破囊壶菌是指破囊壶菌目的任何成员，破囊壶菌目包括破囊壶菌科。描述为破囊壶菌的菌株包括以下生物：目：破囊壶菌目；科：破囊壶菌科；属：破囊壶菌属(种：arudimentale、金黄色破囊壶菌(aureum)、benthicola、球破囊壶菌(globosum)、金尼破囊壶菌(kinnei)、动孢破囊壶菌(motivum)、多增殖性破囊壶菌(multirudimentale)、厚皮破囊壶菌(pachydermum)、层出破囊壶菌(proliferum)、粉红破囊壶菌(roseum)、纹带破囊壶菌(striatum))；吾肯氏壶菌属(Ulkenia)(种：变形吾肯氏壶菌(amoeboidea)、克格伦吾肯氏壶菌(kerguelensis)、小吾肯氏壶菌(minuta)、深海吾肯氏壶菌(profunda)、福射吾肯氏壶菌(radiata)、sailens、沙氏吾肯氏壶菌(sarkariana)、schizochytrops、威瑟氏吾肯氏壶菌(visurgensis)、约肯氏吾肯氏壶菌(yorkensis))；裂殖壶菌属(种：聚生裂殖壶菌(aggregatum)、limnaceum、红树林裂殖壶菌(mangrovei)、微小裂殖壶菌(minutum)、八孢裂殖壶菌(octosporuni))；日本壶菌属(Japonochytrium)(种：marinum)；Aplanochytrium属(种：haliotidis、克格伦吾肯氏壶菌、深海吾肯氏壶菌、)；阿尔托尼氏壶菌属(Althornia)(种：crouchii)；或埃氏壶菌属(Elina)(种：marisalba、sinorifica)。吾肯氏壶菌属中描述的物种将被认为是破囊壶菌属的成员。被描述为属于破囊壶菌属的菌株可以与裂殖壶菌属共享共同的性状，也可以描述为属于裂殖壶菌属。例如，在一些分类学分类中，ONC-T18可被视为属于破囊壶菌属，而在其他分类中其可被描述为属于裂殖壶菌属，因为它包含指示这两个属的性状。

所提供的方法包括根据本领域已知的方法培养微生物并从中获得油的额外步骤，或可以与这些额外步骤结合使用。例如，破囊壶菌，例如破囊壶菌属种可以根据美国专利公布2009/0117194或2012/0244584中描述的方法培养，所述美国专利公布中关于本文使用的方法的每个步骤或组合物通过引用整体并入本文。然后可以根据本文所述的方法进一步处理从微生物获得的油。任选地，油包含甘油三酯。任选地，油包含α亚麻酸、花生四烯酸、二十二碳六烯酸、二十二碳五烯酸、二十碳五烯酸、γ-亚麻酸、亚油酸、亚麻酸或它们的组合。

使微生物在生长培养基(也称为培养基)中生长。多种培养基中的任一种都适用于培养本文所述的微生物。任选地，培养基为微生物供给各种营养性组分，包括碳源和氮源。用于破囊壶菌培养的培养基可包括多种碳源中的任一种。碳源的实例包括脂肪酸、脂质、甘油、三甘油、碳水化合物、多元醇、氨基糖和任何种类的生物质或废物物流。脂肪酸包括例如油酸。碳水化合物包括但不限于葡萄糖、纤维素、半纤维素、果糖、右旋糖、木糖、乳果糖、半乳糖、麦芽三糖、麦芽糖、乳糖、糖原、明胶、淀粉(玉米淀粉或小麦淀粉)、乙酸盐、肌肉肌醇(例如源于玉米浆)、半乳糖醛酸(例如源于果胶)、L-海藻糖(例如源于半乳糖)、龙胆二糖、葡糖胺、α-D-葡萄糖-1-磷酸酯(例如源于葡萄糖)、纤维二糖、糊精、α-环糊精(例如源于淀粉)和蔗糖(例如来自糖蜜)。多元醇包括但不限于麦芽糖醇、赤藻糖醇和阿东糖醇(adonitol)。氨基糖包括但不限于N-乙酰基-D-半乳糖胺、N-乙酰基-D-葡糖胺和N-乙酰基-β-D-甘露糖胺。

任选地，在使生物质和/或目标化合物的产量(例如油或总脂肪酸(TFA)含量)增加的条件下培养本文提供的微生物。例如通常在盐水培养基中培养破囊壶菌。任选地，可在具有约0.5g/L至约50.0g/L的盐浓度的培养基中培养破囊壶菌。任选地，在具有约0.5g/L至约35g/L(例如约18g/L至约35g/L)的盐浓度的培养基中培养破囊壶菌。任选地，可使本文所述的破囊壶菌在低盐条件下生长。举例来说，可在具有约0.5g/L至约20g/L(例如约0.5g/L至约15g/L)的盐浓度的培养基中培养破囊壶菌。培养基任选包括NaCl。任选地，培养基包括天然或人工海盐和/或人工海水。

培养基可包括非含氯钠盐作为钠的来源。适于根据本发明方法使用的非氯钠盐的实例包括但不限于苏打灰(碳酸钠和氧化钠的混合物)、碳酸钠、碳酸氢钠、硫酸钠以及它们的混合物。参见，例如美国专利No.5,340,742和6,607,900，所述美国专利各自的整个内容以引用的方式并入本文。总钠中的很大部分例如可由非氯盐供给以使培养基中总钠的小于约100％、75％、50％或25％由氯化钠供给。

例如用于破囊壶菌培养的培养基可包括多种氮源中的任一种。示例性氮源包括铵溶液(例如，含NH₄的H₂O)、铵或胺盐(例如，(NH₄)₂SO₄、(NH₄)₃PO₄、NH₄NO₃、NH₄OOCH₂CH₃(NH₄Ac))、蛋白胨、胰蛋白胨、酵母提取物、麦芽提取物、鱼粉、谷氨酸钠、大豆提取物、酪蛋白氨基酸和酒糟。合适培养基中的氮源的浓度通常在约1g/L与约25g/L之间的范围内，并且包括约1g/L和约25g/L。

培养基任选地包含磷酸盐，诸如磷酸钾或磷酸钠。培养基中的无机盐和微量营养物可包括硫酸铵、碳酸氢钠、原钒酸钠、铬酸钾、钼酸钠、亚硒酸、硫酸镍、硫酸铜、硫酸锌、氯化钴、氯化铁、氯化锰、氯化钙和EDTA。可包括维生素，诸如盐酸吡哆辛、盐酸硫胺、泛酸钙、对氨基苯甲酸、核黄素、烟酸、生物素、叶酸和维生素B12。

可使用酸或碱，当适当时，和/或使用氮源，将培养基的pH调节至在3.0与10.0之间，并且包括3.0和10.0。任选地，可将培养基灭菌。

通常，用于培养微生物的培养基是液体培养基。然而，用于培养微生物的培养基可为固体培养基。除如本文讨论的碳源和氮源之外，固体培养基可含有一种或多种提供结构支撑和/或使培养基呈固体形式的组分(例如琼脂或琼脂糖)。

任选地，对所得生物质进行巴氏杀菌(pasteurized)以使生物质中存在的不合需要的物质失活。举例来说，可对生物质进行巴氏杀菌以使化合物降解性物质失活。生物质可存在于发酵培养基中或从发酵培养基分离以进行巴氏杀菌步骤。巴氏杀菌步骤可通过将生物质和/或发酵培养基加热至高温来进行。举例来说，可将生物质和/或发酵培养基加热至约50℃至约140℃(例如约55℃至约90℃或约65℃至约80℃)的温度。任选地，可将生物质和/或发酵培养基加热约30分钟至约120分钟(例如约45分钟至约90分钟或约55分钟至约75分钟)。可使用合适加热手段诸如像通过直接蒸汽喷射来进行巴氏杀菌。

任选地，不进行巴氏杀菌步骤。换句话说，本文所公开方法任选缺乏巴氏杀菌步骤。

任选地，可根据多种方法收集生物质，所述方法包括当前为本领域技术人员所知的那些。举例来说，生物质可使用例如离心(例如用固体排出离心机)或过滤(例如交叉流过滤)从发酵培养基收集。任选地，收集步骤包括使用沉淀剂来达成对细胞生物质的加速收集(例如磷酸钠或氯化钙)。

任选地，用水洗涤生物质。任选地，可使生物质浓缩直至约30％固体。举例来说，可使生物质浓缩至约5％至约20％固体、约7.5％至约15％固体、或约固体至约20％固体、或所叙述范围内的任何百分比。任选地，可使生物质浓缩至约20％固体或更少、约19％固体或更少、约18％固体或更少、约17％固体或更少、约16％固体或更少、约15％固体或更少、约14％固体或更少、约13％固体或更少、约12％固体或更少、约11％固体或更少、约10％固体或更少、约9％固体或更少、约8％固体或更少、约7％固体或更少、约6％固体或更少、约5％固体或更少、约4％固体或更少、约3％固体或更少、约2％固体或更少、或约1％固体或更少。

可使用多种方法中的一种或多种从生物质或微生物获得或提取油或多不饱和脂肪酸，所述方法包括当前为本领域技术人员所知的那些。举例来说，分离油或多不饱和脂肪酸的方法描述于美国专利No.8,163,515中，所述美国专利以引用的方式整体并入本文。另选地，如美国公布No.2015-0176042中所述分离油或多不饱和脂肪酸，所述美国公布以引用的方式整体并入本文。任选地，一种或多种多不饱和脂肪酸是选自由以下组成的组：α亚麻酸、花生四烯酸、二十二碳六烯酸、二十二碳五烯酸、二十碳五烯酸、γ-亚麻酸、亚油酸、亚麻酸以及它们的组合。

根据本文所述的方法产生的包括多不饱和脂肪酸(PUFA)和其他脂质的油可用于利用它们的生物、营养或化学特性的多种应用中的任一种中。任选地，油可用于生产燃料例如生物燃料。任选地，油可用于药物、食物补充剂、动物饲料添加剂、化妆品等中。根据本文所述的方法产生的脂质也可作为中间体用于生产其他化合物。

举例来说，由使用所提供的方法培养的微生物产生的油可包含脂肪酸(例如PUFA)。任选地，脂肪酸是选自由以下组成的组：α亚麻酸、花生四烯酸、二十二碳六烯酸、二十二碳五烯酸、二十碳五烯酸、γ-亚麻酸、亚油酸、亚麻酸以及它们的任何组合。任选地，油包含甘油三酯。任选地，油包含选自由以下组成的组的脂肪酸：棕榈酸(C16:0)、肉豆蔻酸(C14:0)、棕榈油酸(C16:1(n-7))、顺-十八碳烯酸(C18:1(n-7))、二十二碳五烯酸(C22:5(n-6))、二十二碳六烯酸(C22:6(n-3))以及它们的任何组合。

任选地，可将根据本文所述的方法生产的脂质并入最终产品(例如食物或饲料补充剂、婴儿配方食品、药物、燃料等)中。脂质可被并入其中的合适食物或饲料补充剂包括饮料诸如奶、水、运动饮料、能量饮料、茶和果汁；甜食诸如糖果、果冻和饼干；含脂肪食物和饮料诸如乳制品；加工食品诸如软质米饭(或粥)；婴儿配方食品；早餐谷物；等。任选地，可将一种或多种产生脂质并入膳食补充剂诸如像维生素或复合维生素中。任选地，根据本文所述的方法产生的脂质可被包括在膳食补充剂中，并且任选地可直接并入食物或饲料的组分(例如食物补充剂)中。

通过本文所述的方法产生的脂质可被并入其中的食品的实例包括动物饲料(宠物食物诸如猫食物、狗食物；用于观赏鱼、养殖鱼或甲壳动物等的饲料)；用于农场饲养动物(包括家畜和在水产养殖业中饲养的鱼或甲壳动物)的饲料。根据本文所述的方法产生的脂质可被并入其中的食物或饲料物质优选对于作为预定接受者的生物体而言是适口的。这种食物或饲料物质可具有当前关于食物物质已知的任何物理特性(例如固体、液体、软质)。

任选地，可将一种或多种产生化合物(例如PUFA)并入营养或药物产品或化妆品中。这种营养食品或药物的实例包括各种类型的片剂、胶囊、饮剂等。任选地，营养食品或药物适于局部施加(例如，呈洗剂和膏剂)。剂型可包括例如胶囊、油剂、颗粒剂、细粒剂、散剂、片剂、丸剂、糖锭等。

可将根据本文所述的方法产生的油或脂质与多种其他剂中的任一种组合并入如本文所述的产品中。举例来说，可使此类化合物与一种或多种粘合剂或填充剂、螯合剂、色素、盐、表面活性剂、保湿剂、粘度调节剂、增稠剂、润肤剂、芳香剂、防腐剂等或它们的任何组合进行组合。

如本文所述的所有范围包括该范围内的每个值或分数值，并且包括范围的端点。

所公开的材料、组合物以及组分可用于所公开的方法和组合物，可与所公开的方法和组合物联合使用，可用来制备所公开的组合物，或者是所公开的方法和组合物的产品。本文公开了这些材料和其他材料，应当理解，如果公开了这些材料的组合、子集、相互作用、群组等，而没有明确地公开对各种个体和集体组合以及这些化合物的排列的具体提及，则每种情况均得到本文的明确涵盖和描述。例如，如果公开并讨论了方法，并且讨论可对多种分子(包括所述方法)进行的多种修改，则除非明确相反地指示，否则明确涵盖所述方法的每一种组合和排列以及可能的修改。同样地，也明确涵盖并公开这些修改的任何子集或组合。这个概念适用于本公开的所有方面，包括但不限于使用所公开的组合物的方法中的步骤。因此，如果存在可执行的多个额外步骤，那么应当理解，这些额外步骤中的每一个均可与所公开方法的任何具体方法步骤或方法步骤的组合一起进行，并且每种这样的组合或组合的子集均得到明确涵盖并应视为得到公开。

本文所引用的出版物以及引用这些出版物所涉及到的材料特此以引用的方式明确地整体并入。

以下实施例意图进一步说明本文所述的方法和组合物的某些方面，并且不意图限制权利要求的范围。

实施例

实施例1.使用离心操纵油的流动性。

以实验室规模进行测试以复制试验工厂生产条件。通过温度控制同时进行离心有意地进行冷却和油晶体聚集。发现在10℃及以上的温度下离心不能使油在第二天的观察中流动。然而，在低至5℃的温度下离心产生可流动的油。进行额外的测试以确认结果的可重复性，也排除其他有争议的条件，例如静止冷却。将获得的可流动的油置于4℃下以挑战其冷流性能并保持流动性。可流动的油中的晶体比天然冷却的油中形成的晶体大得多(图1)。较大但较少量的晶体可能会减弱颗粒相互作用，从而使液体油移动。由此固体获得支撑并在液体油内漂浮。获得的可流动的油在室温下以及在4℃下储存一周后保持液态(即可流动)。

实施例2.通过混合操纵油的流动性。

为了确定其他类型的机械能是否有效，将油加热至50℃并保持10分钟。将油冷却至5℃或15℃并以350rpm或60rpm搅拌20分钟。将油置于室温下，第二天测定流动性。经60rpm和5℃处理的油是可流动的。在5℃下将每分钟转数增加至350，产生半固体油。在15℃下以60或350rpm混合的油是不可流动的。

Claims (22)

1.一种用于获得可流动的油的方法，所述方法包括以下步骤：提供产油微生物群；从所述微生物中回收油，其中所述油处于第一温度；在第一时间段内将所述第一温度降低至第二温度；以及在所述第一时间段期间向所述油施加机械能，从而产生所述可流动的油，其中所述方法在无进一步纯化步骤以及不存在降低油粘度的剂的情况下进行。

2.如权利要求1所述的方法，其中将所述油在所述第一温度下保持5至60分钟。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述第一温度高于所述油的熔点。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述第一温度为30℃至60℃。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述第一时间段为5至30分钟。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述第二温度为-10℃至30℃。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述第二温度为0至9℃。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述第二温度为5℃。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中在所述第一时间段内将所述第一温度以每分钟0.5至5度降低至所述第二温度。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中将所述油在所述第二温度下保持5至30分钟。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中通过混合、摇荡或离心施加所述机械能。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述混合包括50至200rpm的速度。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中相比不存在所述机械能时产生的晶体，所述机械能产生的晶体群的平均粒径更大。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述可流动的油的所述晶体群的直径为15-60μm。

15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述油包含一种或多种多不饱和脂肪酸。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述多不饱和脂肪酸是二十二碳六烯酸(DHA)。

17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述油源于选自由以下组成的组的微生物群：藻类、真菌、细菌和原生生物。

18.如权利要求17所述的方法，其中所述微生物群选自长形壶菌属、海洋壶菌属、破囊壶菌属和裂殖壶菌属或它们的任何组合。

19.如权利要求18所述的方法，其中所述微生物群是以ATCC登录号PTA-6245保藏的破囊壶菌属种。

20.如权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述方法还包括将所述油在第三温度下储存第三时间段。

21.如权利要求20所述的方法，其中所述第三温度为室温。

22.如权利要求20所述的方法，其中所述第三温度为4℃。