JPS6087798A

JPS6087798A - 藻類によるエイコサペンタエン酸の生産方法

Info

Publication number: JPS6087798A
Application number: JP58196068A
Authority: JP
Inventors: Hiroaki Iwamoto; 浩明岩本; Tsutomu Yuhara; 湯原　力
Original assignee: Meiji Milk Products Co Ltd
Current assignee: Meiji Dairies Corp
Priority date: 1983-10-21
Filing date: 1983-10-21
Publication date: 1985-05-17
Also published as: JPH0438397B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は単細胞藻類を用いたエイコサペンタエン酸（以
後ＥＰＡという）の新規な生産方法に関する。

さらに詳しくは本発明はＥＰＡを多量に含有する脂肪を
産生ずる単細胞藻類を光合成条件下、無機液体培地で培
養し、培養の途中より窒素欠乏状態となし、ＥＰＡ含有
脂肪を藻体内に多針に蓄積させるＥＰＡの生産方法に関
する。

一般に、ＥＰＡは血栓形成抑制作用があり１才た、コレ
ステロール含量を低下させる作用も有することはよく知
られている。

近年になって、この血栓形成抑制作用とコレステロール
低下作用を有するＥＰＡが健康食品および医薬品の素材
として注目されるようになって来た。

ＥＰＡはイワシ、サバなどの魚油に１０％程度、また、
ある種の大型海藻の脂肪に２０％程度含まれていること
が知られているが、食品、医薬品の素材として使うには
市販の魚油より得るのが一般的である。しかしながら、
魚油中のＥＰＡの含量は低く、精製、濃縮などの操作を
経なければ食品への使用可能濃度（２０〜３０％）に達
しないこと、また不完全な精製、濃縮では魚臭が残るな
どの欠点を有している。

本発明者らは、魚油以外の給源からＥＰＡをめるべく鋭
意研究した結果、単細胞藻類にＥＰＡを多量に含有する
脂肪を生産する株が存在することを知ったのである。ま
た、更に研究の結果、このＥＰＡ多量含有脂肪生産株は
藻類培養途中で窒素欠乏状態にすることによってＥＰＡ
多量含有脂肪を多量蓄積できることも分ったのである。

本発明は、これら知見から完成されたもので、エイコサ
ペンタエン酸を多量に含有する脂肪を産生ずる単細胞藻
類を培養することを特徴とするエイコサはンクエン酸の
生産方法である。そして、エイコサはンクエン酸を多量
に含有する脂肪を産生ずる単細胞藻類を光照射と炭酸ガ
ス通気下、無機液体培地で培養し、培養の途中より窒素
欠乏状態となし、エイコサＲンクエン酸高含有脂肪を藻
体内に多量に蓄積させることを特徴とするエイコサはン
クエン酸の生産方法である。

本発明に使用する藻類の株としては、光合成条件下で培
養し、細胞内にある脂肪中に３０％程度はＥＰＡを含有
し、かつ、そのＥＰＡ含有脂肪を多量細胞内に蓄積する
ものが選択される。この基準にもとすいて、湖沼、河川
、水田などの水と各種の土壌から分離した藻株と保存株
を探索した結果、モノダス属に属する単細胞藻類中に上
記条件を満足しうる藻株が存在することが確認される。

本発明で使用される寄託藻株の具体例としてモノダス・
サブテラネウス（Ｍｏｎｏｄｕｓ　５ｕｈｔｅｒｒａｎ
ｅｕｓ）ＡＴＣＣ３０５９３、モノダス・サブテラネウ
スＣＴＣ０８４８／Ｉ　（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ　ｔｙｐ
ｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔ−ｊｏｎ　）など
があげられる。

本発明において、ＢＰＡ高含有脂肪の蓄積は次の操作に
よって達成される。すなわち、硝酸ナトリウム、りん酸
−カリウム、硫酸マグネシウム。

塩化カルシウム、くえん酸鉄、硼素、マンガン。

モリブデン、コバルト、銅、即鉛を含む無機液体培地に
藻株を接種し、２０〜！１０℃、奸才しくは２５℃で、
４〜１０キロルツクス、好ましくは６〜７キロルツクス
の光照射下、炭酸ガス５％を含む空気を通気しつつ細胞
数が培地１１当り４．５〜５、ＯＸ　１０”になる才で
培養する。この場合、培養容器は扁平形が好昧しく、光
源は白色光、才たは墨色光の蛍光灯、白熱灯、太陽のい
ずれでもよい。培養日数は６〜１０日間程度である。

この１次培養で、ＥＰＡを６０％程度含有する脂肪が藻
細胞内に１０〜２０％産生されるが、この脂肪の含量を
さらに増加させるために次の２次培養に移される。即ち
、１次培養物を無菌的遠心分離により藻体を分別し、こ
れを前記無機液体培地中の硝酸ナトリウムを除いた培地
にて洗浄、洗浄藻体を同培地に再懸濁して遠心分離直前
の細胞数となし、遠心分離前の培養条件にて藻体の窒素
含量が藻体乾物に対して２％程度に減少する才で培養す
る。この培養に要する日数は約１０〜１５日間程度であ
り、この２次培養によって、前記ＥＰＡ會有脂肪が藻細
胞内で含有率３０％以上にも高められることになる。

上述したのは１次培養、２次培養と培養を２段階に分け
て行う方法であるが、特に２段階に培養を分けて行なわ
ずに、藻細胞数が４．５〜５．０×１３１１　／　ｔ、
に達すると硝酸すｌ−ＩＪウムが消費しつくされるよう
に該塩類を減量した上記無機液体培地にて本藻株を連続
培養することによってもＥＰＡ高含有脂肪の蓄積を行な
わせることができる。連続培養の場合の培養日数は前培
養が６〜１０日間、後培養が１０〜１５日間で、計１６
〜２５日間程度の培養となる。

培養藻体は遠心分離して採取し、十分水洗し、乾燥され
る。乾燥は凍結乾燥、風乾等によって行なわれる。

乾燥された藻体は、その１１栄養料として服用に供して
もよく、才た、食品の加工原料として使用され、更には
、抽出原料として使用される。

乾燥藻体は窒素気流下で有機溶媒によって抽出処理され
る。有機溶媒としてはメタノール、エタノール２石油エ
ーテル等があるが、メタノールと石油エーテルの交互抽
出によって良好に抽出される。

抽出物は減圧下に有機溶媒を留去すれば、約６０％のＥ
ＰＡを含有した脂肪が得られる。

得られた脂肪は魚臭などの不快臭はなく、しかも約′５
０％のＢＰＡを含有しているので、濃縮等の操作を要す
ることなく、そのまま健康食品に使用することができる
ものである。

また、乾燥藻体をそのま才服用したり、食品の加工原料
として使用する場合は、細胞自体がＢＰＡを保設し、酸
素に対してかなり安定であるというすぐれた効果を有す
るものである。

次に本発明の実施例を示す。

実施例１硝酸ナトリウム２．１ｆ／Ａ、りん酸−カリウム０．２
ｔ／ｌ、硫酸マグネシウム０．２２／Ｊ、塩化カルシウ
ム０．０９ｒ／ｚ、（えん酸鉄０．　Ｏ０５ｆ／ｊ、硼
素０．２ｍｇ／Ａ、マンガン０．２η／！、モリブデン
０２叩７１．コバルト０．０２■／Ａ、銅０．０２９／
Ａ、亜鉛ｏ、ｏ２１ｒ１ｇ／Ａを含む無機液体培地（ｐ
Ｈ６，ｏ−６，２）　２　Ａを調製し、巾２Ｑｃｍ。

高さ４５ｃｍ、厚さ３ｃｒｎのガラス製扁平フラスコに
入れて１２１℃、１５分の加熱滅菌をした。

この培地にモノダス・サブテラネウスＡＴＣＣ３０５９
３を１、ｌＸ１０”／ｊの割合で接種、フラスコ表面で
６．５キロルツクスを示すように白色蛍光灯光を照射し
、２５℃で炭酸ガス５％を含む空気を毎分２！通気しつ
つ８日間培養して５．２Ｘ１０”／！の細胞数（トーマ
の血球盤で測定）を含むモノダス培養物を得た。

得られた培養物を滅菌遠心管にとり、５０００ｒｐｍ、
３０分の遠心分離により藻体を分別し、上記培地の硝酸
ナトリウムを除いた培地に１ｇ濁、５０００ｒｐｍ、３
０分の遠心分離により、再び藻体を分別（前記洗浄操作
）、藻体を同培地１．８ｋに再懸濁して５．２　Ｘ　Ｉ
　Ｑｌｌ／ｚの細胞数が得られるようにし、遠心前の培
養条件にて培養、藻体乾物中の総窒素量がミクロケルプ
ール法で２．２％を示す２次培養日数１２日間で培養を
終了した。

この培養物を１０．００Ｏｒ　ｐｍ、　５０分の遠心分
離にかけて藻体を分別し、これを蒸溜水に懸濁、遠心操
作（１０，０００ｒｐｍ、３０分）による洗浄を２回繰
返した後、洗浄藻体を凍結乾燥し、乾燥物４．７ｆを得
た。

得られた乾燥藻体４．７ｆを窒素気流下、メタノールと
石油エーテルの交互抽出によって魚臭のない粗脂肪１．
７２を得た。これは藻体乾物に対して３６．２％の蓄積
量であった。次に、この粗脂肪をメチル化したのちガス
クロマトグラフィーによって脂肪酸組成を解析した結果
、第１表のようにＢＰＡが５０，６％と目標値に達した
脂肪酸組成を得た。これらの値より、ＢＰＡの蓄積量を
めると乾燥藻体中１１．１％とマイワシのそれの約６倍
の値を得た。

第１表実施例２実施例１の培地にモノダス・サブテラネウスＣＴＣ０８
４８／Ｉを１．２　Ｘ　１　（１１１／７接種、同実施
例と同じ条件にて培養し、培養開始後８日月に４．８Ｘ
　１０１１／７の培養物を得た。これを前例と同様な処
理を施してさらに培養、二次培養開始後１３日目に藻体
の窒素含量が２．３％になったことから、藻体を採取、
水洗後凍結乾燥して粗脂肪を抽出、その量と脂肪酸組成
を検討した。

その結果、乾燥藻体４．３ｔより粗脂肪１，４ｆが得ら
れて３２．６％の蓄積量を示し、誉た、脂肪中のＢＰＡ
の含量は５１．２％で、ＥＰＡの蓄積量は１０．２％で
あった。

実施例３藻細胞数が５．０Ｘ１０”／Ｊに達すると硝酸ナトリウ
ムが消費しつくされるように該塩類を０．９２／ｌに減
量した前記無機液体培地２！を調製して滅菌、これにモ
ノダス・サブテラネウスＡＴＣＣ３０５９３を１．４Ｘ
ｉＯ”／７に接種して実施例１と同一培養条件にて培養
、培養開始後１０日目に４．９ｘ１０”／Ａの培養物が
得られた。以後、その４ｓ培養を続行し、培養開始後２
３日目に乾燥藻体の窒素含量が２．３％を示したことか
ら藻体を採取、水洗後凍結乾燥して粗脂肪を抽出、その
量と脂肪酸組成を検討した。

その結果、乾燥藻体４．４２より粗脂肪１．５２が得゛
られて６４．１％の蓄積量を示し１才た、脂肪中のＥＰ
Ａの含量は３０．２％、ＥＰＡの蓄積量は１０．３％で
あった。

代理人　弁理士　戸　１）親　男

Claims

【特許請求の範囲】

（１）エイコサはンクエン酸を多量に含有する脂肪を産
生ずる単細胞藻類を培養することを特徴とするエイコサ
ペンタエン酸の生産方法。
（２）エイコサはンクエン酸を多量に含有する脂肪を産
生する単細胞藻類を光照射と炭酸ガス通気下、無機液体
培地で培養し、培養の途中より窒素欠乏状態となし、エ
イコサはンクエン酸高含有脂肪を藻体内に多量に蓄□積
させることを特徴とするエイコサはンクエン酸の生産方
法。 −（３）エイコサペンタエン酸を多量に含有する脂肪を
産生ずる単細胞藻類がモノダス属に属する藻類である特
許請求の範囲第１項及び第２項記載のエイコサペンタエ
ン酸の生産方法。