BR112020006822B1 - Método para fazer uma composição de extrato de erva mate - Google Patents
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Abstract
Métodos são descritos aqui para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos.
Description
[0001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório U.S. 62/569.279, depositado em 6 de outubro de 2017, e intitulado “Steviol Glycoside Solubility Enhancers,” e Pedido Provisório U.S. 62/676.722, depositado em 25 de maio de 2018, e intitulado “Methods for Making Yerba Mate Extract Composition,” ambos os pedidos são aqui incorporados por referência, como se estivessem totalmente descritos aqui na íntegra.
[0002] Erva-mate é uma espécie do gênero holly (Ilex), com o nome botânico Ilex paraguariensis. A erva-mate às vezes é utilizada para fazer a bebida conhecida como “mate”, tradicionalmente consumida nas regiões central e sul da América do Sul, principalmente no Paraguai, bem como na Argentina, Uruguai, sul e centro-oeste do Brasil, região do Chaco na Bolívia e sul do Chile. A erva-mate também pode ser encontrada em várias bebidas energéticas no mercado hoje.
[0003] A erva-mate tem sido reivindicada para ter vários efeitos na saúde humana e estes efeitos foram atribuídos à alta quantidade de polifenóis encontrados no chá mate. Por exemplo, a erva-mate pode melhorar sintomas alérgicos; reduzir o risco de diabetes mellitus; e pode reduzir o açúcar no sangue elevado, pelo menos em camundongos. Além disso, o mate também contém compostos que podem atuar como inibidor de apetite; agir para aumentar a energia mental e o foco; pode melhorar o humor; e pode promover um sono mais profundo. Finalmente, o consumo de erva-mate tem sido associado a benefícios, incluindo a redução de células de gordura, inflamação, colesterol, lipídeos.
[0004] Devido aos vários efeitos salutares da erva-mate, há interesse em métodos para extrair vários compostos que se acredita serem responsáveis por esses efeitos, a partir da biomassa da erva-mate. Estes compostos incluem, mas não estão limitados a, ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos (por exemplo, ácido clorogênico, ácido neoclorogênico e ácido cripto-clorogênico) e ácidos dicafeoilquínicos (por exemplo, ácido 1,3-dicafeoilquínico, ácido 1,4-dicafeoilquínico, ácido 1,5-dicafeoilquínico, ácido 3,4-dicafeoilquínico, ácido 3,5-dicafeoilquínico e ácido 4,5-dicafeoilquínico), e sais dos mesmos:
[005] Os compostos podem, cada um ser isolado em alta pureza (por exemplo, maior que 50%, maior que 60%, maior que 70%, maior que 80%, maior que 90% e maior que 99%; ou uma pureza de cerca de 50% a cerca de 99%; cerca de 60% a cerca de 90%; cerca de 80% a cerca de 95% ou cerca de 70% a cerca de 99% ou superior). Além disso, os métodos descritos neste documento fornecem a capacidade de isolar os compostos de interesse, de modo que as composições compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos, e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, obtidos pelos métodos aqui descritos, podem compreender substancialmente as mesmas quantidades em peso e/ou substancialmente as mesmas razões em peso de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais relativos à biomassa de erva-mate da qual são isolados.
[006] Os desenhos ilustram geralmente, a título de exemplo, mas não a título limitativo, várias modalidades discutidas neste documento.
[007] A FIG. 1 é um diagrama de fluxo de um exemplo de um método para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos.
[008] A FIG. 2 é um diagrama de fluxo de outro exemplo de um método para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos.
[009] A FIG. 3 é um diagrama de fluxo de um exemplo de um método para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos.
[0010] A FIG. 4 é um diagrama de fluxo de outro exemplo de um método para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos.
[0011] As FIGS. 5-7 são cromatogramas UHPLC-UV de um extrato inicial de erva-mate, um concentrado obtido após a cromatografia do segundo extrato inicial ajustado em uma fase estacionária de cromatografia de troca iônica; e após a secagem, seguindo o processo descrito nas etapas (a) - (h), descritas aqui, em que "DCQA" refere-se a "ácido dicafeoilquínico".
[0012] As FIGS. 8-10 são tabelas que mostram, em forma de tabela, o nome do pico, o tempo de retenção e os dados percentuais da área relativa para os cromatografias UHPLC-UV mostradas nas FIGS. 5-7, respectivamente. A FIG. 8 é uma tabela dos dados para um extrato inicial de erva-mate. A soma dos compostos alvo é 49,7% de pureza por absorbância de UV a 210 nm. A FIG. 9 é uma tabela dos dados para um concentrado obtido após a cromatografia do segundo extrato inicial ajustado em uma fase estacionária de cromatografia de troca iônica. A soma dos compostos alvo é 87,1% de pureza por absorbância de UV a 210 nm. A FIG. 10 são os dados após a secagem, seguindo o processo descrito nas etapas (a) - (h), descritas aqui, em que "DCQA" refere-se a "ácido dicafeoilquínico". A soma dos compostos alvo é 93,2% de pureza por absorbância de UV a 210 nm.
[0013] O uso repetido de caracteres de referência no relatório descritivo e desenhos pretende representar os mesmos recursos ou elementos análogos da divulgação, mesmo quando os números aumentam em 100 de figura a figura (por exemplo, a operação de secagem 120 na FIG. 1 é análoga ou igual às operações de secagem 220, 320 e 420 nas FIGS. 2-4, respectivamente). Deve ser entendido que várias outras modificações e exemplos podem ser planejados por aqueles versados na técnica, que se enquadram no escopo e no espírito dos princípios da divulgação.
[0014] Agora será feita referência detalhada a certas modalidades do objeto divulgado, exemplos dos quais são ilustrados em parte nos desenhos anexos. Embora a matéria divulgada seja descrita em conjunto com as reivindicações enumeradas, será entendido que a matéria exemplificada não se destina a limitar as reivindicações à matéria divulgada.
[0015] A divulgação refere-se geralmente a métodos de fabricação de composições que compreendem pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos (por exemplo, ácido clorogênico, ácido neoclorogênico e ácido criptoclorogênico) e ácidos dicafeoilquínicos (por exemplo, ácido 1,3- dicafeoilquínico, ácido 1,4-dicafeoilquínico, ácido 1,5-dicafeoilquínico, ácido 3,4-dicafeoilquínico, ácido 3,5-dicafeoilquínico e ácido 4,5-dicafeoilquínico) e sais dos mesmos da biomassa da erva-mate. Como o ácido cafeico, os ácidos monocafeoilquínicos e os ácidos dicafeoilquínicos podem ser considerados ácidos fracos, cada um deles pode existir em pelo menos uma de suas formas de ácido conjugado, forma de base conjugada (por exemplo, na forma de sal) e forma mista de base conjugada-ácido conjugado, em que uma fração (por exemplo, fração molar) dos compostos existe na forma de ácido conjugado e outra fração existe na forma de base conjugada. A fração da forma de ácido conjugado para a forma de base conjugada do ácido cafeico, dos ácidos monocafeoilquínicos e dos ácidos dicafeoilquínicos dependerá de vários fatores, incluindo o pKa de cada composto e o pH da composição.
[0016] Exemplos de sais de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos incluem, mas não estão limitados a, sais de amônio quaternário, sódio, potássio, lítio, magnésio e cálcio de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e semelhantes.
[0017] Um exemplo de um método para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, o método compreendendo (a) contatar a biomassa de erva-mate com uma composição aquosa para se obter um extrato inicial; (b) remover sólidos a partir do extrato inicial para se obter um segundo extrato inicial; (c) ajustar o volume do segundo extrato inicial com uma composição aquosa para se obter um segundo extrato inicial ajustado; (d) cromatografar o segundo extrato inicial ajustado em uma fase estacionária de cromatografia de troca iônica; (e) eluir a fase estacionária de cromatografia de troca iônica para obter um primeiro eluente compreendendo um solvente; (f) remover o solvente para formar um concentrado; e (g) pelo menos um de descolorir e dessalgar o concentrado de pelo menos um de um filtrado e um retentato.
[0018] Um exemplo de um método para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, o método compreendendo (a) contatar a biomassa de erva-mate com uma composição aquosa para se obter um extrato inicial; (b) remover sólidos a partir do extrato inicial para se obter um segundo extrato inicial; (c) ajustar o volume do segundo extrato inicial com uma composição aquosa para se obter um segundo extrato inicial ajustado; (d) cromatografar o extrato inicial ajustado em uma fase estacionária de cromatografia de troca iônica; (e) eluir a fase estacionária de troca iônica para obter um primeiro eluente compreendendo um solvente; (f) remover o solvente para formar um concentrado; (g) pelo menos um de descolorir e dessalgar o concentrado para obter pelo menos um de um filtrado e um retentato; e (h) secar pelo menos um de um filtrado e um retentato para obter a composição que compreende pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos, e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos.
[0019] A etapa (a) dos métodos aqui descritos envolve o contatar a biomassa de erva-mate com uma composição aquosa para obter um extrato inicial que compreende pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos (por exemplo, sais de amônio quaternário, sódio, potássio, lítio, magnésio e cálcio).
[0020] A composição aquosa pode compreender água e não contêm cossolventes, como solventes orgânicos. Mas, a composição aquosa pode compreender cossolventes, além de água. Cossolventes adequados incluem solventes orgânicos, tais como, (C1-C4)alcanois e misturas dos mesmos (C1- C4)alcanois. Por “(C1-C4)alcanol”significa um álcool da fórmula (C1- C4)alquil-OH, em que “alquil” refere-se a grupos alquil de cadeia linear e ramificada com 1 a 4 átomos de carbono, como metil, etil, n-propil, n-butil, isopropil, iso-butil, sec-butil e t-butil, de modo que o (C1-C4)alcanol resultanteé metanol, etanol, n-propanol, n-butanol, isopropanol, iso-butanol, sec-butanol e t-butanol. A proporção de solvente orgânico, como (C1- C4)alcanol ou misturas de (C1-C4)alcanois, pode ser qualquer proporção adequada, de modo que a composição aquosa possa compreender até cerca de 30%, até cerca de 40%, até cerca de 50% ou até 60%, até cerca de 70%, até cerca de 80%, até cerca de 90% ou até 100% em volume de solvente orgânico, sendo o restante água, exceto quando a composição aquosa compreender 100% por volume de solvente orgânico; ou de cerca de 30% a cerca de 100%, cerca de 50% a cerca de 100%, cerca de 60% a cerca de 90%, cerca de 30% a cerca de 60%, cerca de 40% a cerca de 60%, cerca de 30% a cerca de 50%, cerca de 40% a cerca de 50%, ou cerca de 50% em volume de solvente orgânico, sendo o restante água.
[0021] Em alguns casos, a composição aquosa pode ser tamponada com qualquer sistema tampão adequado, incluindo, mas não limitado a, fosfato, citrato, ascorbato, lactato, acetato e semelhantes. Os tampões podem estar na faixa de 1-1000 mM do ânion. Alternativamente, a água acidificada a pH 5-6 com ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico ou semelhante pode ser útil na composição aquosa, com ou sem um cossolvente. Em alternativa, a água pura tornada básica a pH 7-11 com hidróxido, tal como com hidróxido de sódio ou potássio, pode ser útil na composição aquosa, com ou sem um cossolvente. Ainda em outros casos, pode ser adequado adicionar um soluto não iônico adequado que possa ajudar a equilibrar o potencial osmótico da composição aquosa.
[0022] Como utilizado neste documento, o termo "biomassa de erva- mate" geralmente se refere a toda e qualquer parte da planta de erva-mate, como Ilex paraguariensis, incluindo folhas, caules, hastes, topos, raízes e semelhantes da planta de erva-mate. A biomassa de erva-mate pode estar em qualquer forma adequada, incluindo na forma triturada resultante de, por exemplo, cortar a biomassa de erva-mate antes e/ou durante o contato com a composição aquosa. Por exemplo, a biomassa de erva-mate pode ser triturada em um recipiente adequado e a composição aquosa pode ser adicionada à biomassa de erva-mate triturada, "contatando" assim a biomassa de erva-mate. A biomassa de erva-mate triturada pode então ser opcionalmente triturada adicionalmente dentro do recipiente adequado. Ou a biomassa de erva-mate pode ser colocada em um recipiente adequado, ao qual a composição aquosa é adicionada, "contatando" assim a biomassa de erva-mate e a composição resultante pode ser triturada.
[0023] A biomassa de erva-mate pode ser agitada, sonicada ou agitada de outra forma antes e/ou durante o contato para, entre outras coisas, maximizar a extração de pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos.
[0024] O extrato inicial pode ser conduzido para a etapa (c), como são ou sólidos a granel e ou sólidos de plantas presentes, como folhas de plantas de erva-mate fragmentadas, caules, topos, raízes e semelhantes, podem ser removidos na etapa (b) dos métodos aqui descritos. Quando a etapa (b) é realizada, obtém-se um segundo extrato inicial.
[0025] Os sólidos a granel podem ser removidos por qualquer método adequado, incluindo centrifugação, desnatação ou filtração. Por exemplo, o extrato inicial pode ser filtrado usando qualquer método de filtração adequado, incluindo filtração por gravidade ou filtração a vácuo através de qualquer filtro adequado, desde que o filtro não retenha substancialmente o pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, incluindo um filtro de papel (por exemplo, filtro de papel com baixo teor de cinzas, como filtro de papel Whatman 44 ou 54 com baixo teor de cinzas), um filtro de nylon, filtro de polietersulfona, um filtro de fibra de vidro, uma camada de terra de diatomáceas e semelhantes.
[0026] A etapa (c) dos métodos aqui descritos envolve ajustar o volume do extrato inicial ou do segundo extrato inicial com uma primeira composição aquosa ou uma segunda composição aquosa, respectivamente, para obter um extrato inicial ajustado ou o segundo extrato inicial ajustado. A primeira e a segunda composições aquosas podem ser diferentes ou iguais. O extrato inicial ajustado ou o segundo extrato inicial ajustado podem ser filtrados neste ponto ou podem ser levados à etapa (d) como estão. A extração inicial ou a segunda extração inicial podem ser filtradas usando qualquer método de filtração adequado, incluindo filtração por gravidade ou filtração a vácuo através de qualquer filtro adequado, desde que o filtro não retenha substancialmente o pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, incluindo um filtro de papel (por exemplo, filtro de papel com baixo teor de cinzas, como filtro de papel Whatman 44 ou 54 com baixo teor de cinzas), um filtro de nylon, filtro de polietersulfona, um filtro de fibra de vidro, uma camada de terra de diatomáceas e semelhantes.
[0027] O volume do extrato inicial ou do segundo extrato inicial pode ser ajustado com uma quantidade suficiente de uma composição aquosa (por exemplo, água) para obter um extrato inicial ajustado ou o segundo extrato inicial ajustado para, entre outras coisas, aumentar a ligação do pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos, e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, para a coluna de cromatografia de troca iônica usada na etapa (d) dos métodos aqui descritos, em relação a um extrato inicial não ajustado ou um segundo extrato inicial não ajustado.
[0028] O volume do extrato inicial ou do segundo extrato inicial pode ser ajustado para, entre outras coisas, ajustar a quantidade de solvente orgânico, quando presente, no extrato inicial ou no segundo extrato inicial. O volume do extrato inicial ou do segundo extrato inicial pode ser ajustado de modo que o extrato inicial ajustado ou o segundo extrato inicial ajustado compreendam menos que cerca de 60%, menos que cerca de 50%, menos que cerca de 40%, menos que cerca de 30%, menos que cerca de 20%, menos que cerca de 10%, menos que cerca de 5%, menos que cerca de 1% ou mesmo cerca de 0% em volume de solvente orgânico, sendo o restante água; ou de cerca de 0% a cerca de 40%, cerca de 0% a cerca de 30%, cerca de 10% a cerca de 40%, cerca de 10% a cerca de 30%, cerca de 20% a cerca de 40%, cerca de 30% a cerca de 40%, ou cerca de 35% em volume de solvente orgânico, sendo o restante água.
[0029] A etapa (d) dos métodos aqui descritos envolve a cromatografia do extrato inicial ajustado ou do segundo extrato inicial em uma fase estacionária de troca iônica (por exemplo, uma fase estacionária de troca aniônica fraca). A cromatografia pode ser realizada de qualquer modo adequado, incluindo em modo de lote ou utilizando uma coluna. A cromatografia pode ser realizada com uma composição aquosa (por exemplo, uma composição aquosa compreendendo um alcanol (C1-C4)alcanol) como eluente (por exemplo, uma composição aquosa compreendendo de cerca de 0% a cerca de 40%, cerca de 0% a cerca de 30%, cerca de 10% a cerca de 40%, cerca de 10% a cerca de 30%, cerca de 20% a cerca de 40%, cerca de 30% a cerca de 40% ou cerca de 35% em volume (C1-C4)alcanol, sendo o restante água), deixando pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos adsorvidos na coluna de cromatografia de troca iônica fraca, eluindo outros compostos, incluindo cafeína, rutina (também conhecido como rutosídeo, quercetina-3-O- rutinosídeo e soforina) e isômeros dos mesmos. A etapa (d) dos métodos aqui descritos pode diminuir a concentração de pelo menos um dos cafeína, rutina e isômeros de rutina para uma concentração menor que 1%, menor que 0,5%, menor que 0,1%, menor que 0,05%, menor que 0,01% ou menor que 0,001% em massa. A presente divulgação contempla, portanto, extratos de erva-mate compreendendo menos que 0,1% de pelo menos um dos cafeína, rutina e isômeros de rutina em massa. A presente divulgação também contempla extratos de erva-mate compreendendo menos que 0,5% em massa de cada um de cafeína, rutina e isômeros de rutina e menos que cerca de 1% em massa de cafeína, rutina e isômeros de rutina combinados. A presente divulgação também contempla extratos de erva-mate que são efetivamente livres de pelo menos um de cafeína, rutina e isômeros de rutina (por exemplo, sem cafeína, sem rutina, sem isômeros de rutina e/ou sem cafeína, rutina e isômeros de rutina).
[0030] A fase estacionária de troca iônica não é limitativa e pode ser qualquer fase estacionária de cromatografia de troca iônica adequada. Exemplos de fases estacionárias adequadas de cromatografia de troca iônica incluem resina de fluxo rápido ANX-SEPHAROSE®, resina DEAE SEPHAROSE®, resina DEAE SEPHADEX® A25, AMBERLITE® (FPA 53; FPA 55; CG-50 Tipo I; IRC-50; IRC-50S; e IRP-64), DIAION WA10, e DOWEX® CCR-3.
[0031] A fase estacionária de cromatografia de troca iônica pode opcionalmente ser pré-condicionada com uma composição aquosa (por exemplo, uma composição aquosa compreendendo um (C1-C4)alcanol), como uma composição aquosa compreendendo de cerca de 0% a cerca de 40%, cerca de 0% a cerca de 30%, cerca de 10% a cerca de 40%, cerca de 10% a cerca de 30%, cerca de 20% a cerca de 40%, cerca de 30% a cerca de 40%, ou cerca de 35% em volume (C1-C4)alcanol, sendo o restante água, antes da cromatografia do extrato inicial ajustado ou do segundo extrato inicial ajustado. Por exemplo, a coluna de cromatografia de troca iônica fraca pode ser pré-condicionada com cerca de 2 ou mais volumes de leito (BV) a uma taxa de fluxo de cerca de 2 BV/h.
[0032] O pH da coluna de cromatografia de troca iônica fraca pode opcionalmente ser ajustado antes da cromatografia do extrato inicial ajustado ou do segundo extrato inicial ajustado. Por exemplo, o pH da coluna de cromatografia de troca iônica fraca pode ser ajustado antes da cromatografia com qualquer ácido adequado (por exemplo, ácido clorídrico), de modo que o pH da coluna de cromatografia de troca iônica fraca (por exemplo, o pH da resina/fase estacionária) é um pH inferior a cerca de 10, cerca de 9 ou inferior, cerca de 8 ou inferior, cerca de 7 ou inferior, cerca de 6 ou inferior, cerca de 5 ou inferior, cerca de 4 ou inferior, cerca de 3 ou inferior; ou um pH de cerca de 2 a cerca de 10, cerca de 3 a cerca de 8, cerca de 5 a cerca de 9, cerca de 2 a cerca de 6; cerca de 3 a cerca de 4; ou cerca de 3 a cerca de 6. O pH da coluna de cromatografia de troca iônica fraca pode ser ajustado antes ou depois da coluna ser pré-condicionada opcionalmente com a composição aquosa compreendendo um (C1-C4) antes da cromatografia do extrato inicial ajustado ou do segundo extrato inicial ajustado.
[0033] Após pré-condicionamento e/ou ajuste do pH da coluna de cromatografia de troca iônica fraca, o extrato inicial ajustado ou o segundo extrato inicial ajustado podem ser carregados na coluna a qualquer taxa adequada, como a uma taxa acima de 2 BV/h (volumes de leito por hora). Após carregar o extrato inicial ajustado ou o segundo extrato inicial ajustado, a coluna pode ser lavada com qualquer volume adequado de uma composição aquosa compreendendo um (C1-C4)alcanol (por exemplo, pelo menos cerca de 2 BV, pelo menos cerca de 3 BV ou pelo menos cerca de 4 BV de uma composição aquosa compreendendo de cerca de 10% a cerca de 40%, cerca de 10% a cerca de 30%, cerca de 20% a cerca de 40%, cerca de 30% a cerca de 40% ou cerca de 35% em volume (C1-C4)alcanol, sendo o restante água) a uma taxa adequada, tal como a uma taxa de cerca de 2 BV/h. O volume de composição aquosa compreendendo um (C1-C4)alcanol pode ser descartado, pois conterá, entre outras coisas, cafeína, rutina e isômeros de rutina.
[0034] A etapa (e) dos métodos descritos neste documento envolve eluir pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, da coluna de cromatografia de troca iônica fraca para obter um primeiro eluente compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos. A eluição é realizada sob quaisquer condições adequadas para eluir pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos da coluna.
[0035] Um exemplo de condições adequadas para eluir o pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos da coluna incluem eluir a coluna com qualquer volume adequado de uma solução compreendendo um sal (por exemplo, cloreto de sódio, cloreto de potássio, cloreto de amônio, sulfato de sódio, sulfato de potássio, fosfato de sódio, fosfato de potássio e semelhantes). Exemplos de soluções compreendendo um sal incluem soluções compreendendo pelo menos um sal (por exemplo, cerca de 5% em peso a cerca de 25% em peso, cerca de 15% em peso a cerca de 20% em peso ou cerca de 5% em peso a cerca de 10% em peso de um sal) dissolvido em uma composição aquosa compreendendo um (C1-C4)alcanol, por exemplo, pelo menos cerca de 2 BV, pelo menos cerca de 3 BV ou pelo menos cerca de 4 BV de uma composição aquosa compreendendo de cerca de 10% a cerca de 60%, cerca de 20% a cerca de 50%, cerca de 30% a cerca de 55%, cerca de 40% a cerca de 60% ou cerca de 50% em volume (C1-C4)alcanol).
[0036] Outro exemplo de condições adequadas para eluir o pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos da coluna incluem eluir a coluna com qualquer volume adequado de uma solução compreendendo um ácido (por exemplo, ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido acético, ácido fórmico e semelhantes). Exemplos de soluções compreendendo um ácido incluem soluções compreendendo ácido clorídrico e soluções semelhantes e opcionalmente ácidos compreendendo uma composição aquosa compreendendo de cerca de 10% a cerca de 60%, cerca de 20% a cerca de 50%, cerca de 30% a cerca de 55%, cerca de 40% a cerca de 60% ou cerca de 50% em volume (C1-C4)alcanol) .
[0037] O primeiro eluente compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, coletados a partir da etapa de eluição é coletado e pode ser subsequentemente concentrado através da remoção de solvente (por exemplo, para remover água e (C1-C4)alcanol) por qualquer meio adequado para fornecer um concentrado compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos. A remoção do solvente pode ser realizada sob uma atmosfera inerte (por exemplo, sob uma atmosfera de nitrogênio gasoso). Embora não se deseje ficar vinculado a nenhuma teoria específica, acredita-se que a remoção do solvente sob uma atmosfera inerte possa reduzir a formação de substâncias poliméricas altamente coloridas que existem nativamente na biomassa da erva-mate ou se formam em uma ou mais das etapas aqui descritas.
[0038] O primeiro eluente compreendendo o pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos compreende um solvente. O solvente pode ser removido na etapa (f) até a secura ou pode ser removido até um ponto em que um volume de uma composição aquosa compreendendo um (C1-C4)alcanol permaneça como solvente (por exemplo, cerca de 50%, cerca de 40%, cerca de 30% cerca de 20%, cerca de 10% ou cerca de 5% de um volume total original do eluente) para formar um concentrado, embora a razão de componentes que compõem a composição aquosa compreendendo um (C1-C4)alcanol possa ou não ser diferente da razão de componentes que compuseram a composição aquosa compreendendo um (C1-C4)alcanol que foi usado para eluir o adsorvido pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos. Alternativamente, o solvente no eluente compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, pode ser removido até um ponto em que um volume de uma composição aquosa compreendendo um (C1-C4)alcanol permaneça, em que a composição aquosa compreendendo um (C1-C4)alcanol compreende menos que cerca de 10%, menos que cerca de 5%, menos que cerca de 2% ou menos que cerca de 1% em volume (C1- C4)alcanol.
[0039] Condições adequadas para remover o solvente do eluente compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, para formar um concentrado compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos incluem soprar um gás inerte (por exemplo, gás nitrogênio) sobre a superfície do eluente. O eluente pode ser aquecido ao mesmo tempo que funde o nitrogênio gasoso ou pode estar à temperatura ambiente (por exemplo, 25°C). Outras condições para a remoção do solvente no eluente incluem aplicar um vácuo para o recipiente contendo o eluente. O vácuo pode ser aplicado com o eluente à temperatura ambiente ou enquanto se aquece o recipiente. No entanto, outras condições para a remoção de solvente no eluente incluem passar o eluente através de um evaporador de filme limpo, ou um evaporador de filme fino agitado.
[0040] O pH do concentrado pode ser ajustado neste momento para se obter um concentrado ajustado ao pH, embora o ajuste do pH neste momento seja opcional. Por exemplo, o pH do concentrado pode ser ajustado para um pH em que pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos estejam protegidos da degradação. pHs adequados incluem valores de pH de menos que cerca de 6, menos que cerca de 5, menos que cerca de 4, a menos que cerca de 3 ou menos que cerca de 2; tal como um pH de cerca de 2 a cerca de 6, cerca de 2 a cerca de 5, cerca de 2 a cerca de 4, cerca de 3 a cerca de 5 ou um pH de cerca de 3,5. O pH do concentrado pode ser ajustado utilizando qualquer ácido ou base adequado. Quando se utiliza um ácido, o ácido pode ser o ácido clorídrico e outros semelhantes.
[0041] O concentrado ou o concentrado ajustado ao pH pode ser tomado como está nos métodos aqui descritos ou na etapa de remoção (f) ou podem ser filtrados. O concentrado ou o concentrado ajustado ao pH pode ser filtrado usando qualquer filtro adequado (por exemplo, filtro de papel com baixo teor de cinzas, como filtro de papel Whatman 44 ou 54 com baixo teor de cinzas), um filtro de nylon, um filtro de polietersulfona, um filtro de fibra de vidro, uma almofada de terra de diatomáceas e semelhantes. Em alguns casos, o concentrado ajustado ao pH pode ser filtrado através de uma membrana polimérica, como um filtro de polietersulfona (PES) com, por exemplo, tamanho de poro de 0,2 μm ou uma membrana plissada (membrana plana, filtração a vácuo) ou uma membrana PES plissada, dependendo do volume do concentrado ou do concentrado ajustado ao pH.
[0042] O concentrado compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos, seja ajustado ao pH, filtrado ou ambos de ajustado ao pH e filtrado, pode ser levado diretamente para a etapa de secagem (h) ou pode ser enviado para dessalinização/descoloração na etapa (g) (em qualquer ordem, incluindo dessalinização, seguida de descoloração; descoloração seguida de dessalinização; descoloração, mas não dessalinização; ou dessalinização, mas não descoloração) de um concentrado que pode ser altamente colorido. A dessalinização/descoloração pode ser realizada sob uma atmosfera inerte (por exemplo, sob uma atmosfera de gás nitrogênio). Embora não deseje ficar vinculado a nenhuma teoria específica, acredita-se que a execução de uma ou mais etapas sob uma atmosfera inerte possa reduzir a formação de substâncias poliméricas altamente coloridas que existem nativamente na biomassa de erva-mate ou se formam em uma ou mais das etapas aqui descritas.
[0043] O concentrado, seja ajustado ao pH, filtrado ou ambos de ajustado ao pH e filtrado, pode ser descolorido por qualquer meio adequado, incluindo ultrafiltração (por exemplo, filtração através de uma membrana de corte de peso molecular, cromatografia de exclusão de tamanho ou permeação de gel). Obtém-se um filtrado por descoloração. A ultrafiltração realiza, entre outras coisas, a descoloração de um concentrado que pode ser altamente colorido. Embora não deseje estar vinculado a nenhuma teoria específica, acredita-se que a ultrafiltração remova substâncias poliméricas altamente coloridas que existem nativamente na biomassa de erva-mate ou se formem em uma ou mais das etapas descritas aqui.
[0044] O filtrado da descoloração pode ser levado para a etapa de secagem (h) ou pode ser dessalinizado na etapa (g). Alternativamente, o concentrado, ajustado ao pH, filtrado ou ambos de ajustado ao pH e filtrado, pode ser dessalinizado sem primeiro descolorir. Independentemente disso, a dessalinização pode ser realizada usando uma membrana de nanofiltração e uma resina hidrofóbica. Os versados na técnica reconhecerão que quando alguém usa uma membrana de nanofiltração e uma resina hidrofóbica, descarta o permeado e mantém o retentato. Em um exemplo, a dessalinização pode ser realizada usando uma resina hidrofóbica (por exemplo, uma matriz polivinilbenzeno/etilvinilbenzeno porosa, como SEPABEADS™ SP70), onde seria carregado um concentrado ajustado ao pH (por exemplo, um concentrado acidificado, com um pH inferior a cerca de 2) compreendendo menos que cerca de 20% em volume de alcanol (C1-C4)alcanol. A resina é então lavada com álcool diluído (por exemplo, menos que cerca de 10% em volume (C1-C4), sendo o restante água com um pH menor que cerca de 2) e depois eluída com uma composição aquosa compreendendo cerca de 70% por volume (C1-C4) alcanol em água para obter um segundo eluente dessalinizado compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos.
[0045] Se a dessalinização precede a descoloração na etapa (g), o solvente no permeado da etapa de dessalinização pode ser removido até um ponto em que um volume de uma composição aquosa compreendendo um (C1-C4)alcanol permaneça como solvente (por exemplo, cerca de 50%, cerca de 40%, cerca de 30%, cerca de 20%, cerca de 10% ou cerca de 5% de um volume total original do eluente) para formar um primeiro concentrado dessalinizado. Alternativamente, o solvente no permeado da dessalinização pode ser removido, para dar um segundo concentrado dessalinizado, até um ponto em que permanece um volume de uma composição aquosa compreendendo um (C1-C4)alcanol em que a composição aquosa compreendendo um (C1-C4)alcanol compreende menos que cerca de 10%, menos que cerca de 5%, menos que cerca de 2% ou menos que cerca de 1% em volume de (C1-C4)alcanol. O primeiro concentrado dessalinizado também pode ter os atributos do segundo concentrado dessalinizado, de modo que o primeiro concentrado dessalinizado também tenha menos que cerca de 10%, menos que cerca de 5%, menos que cerca de 2% ou menos que cerca de 1% em volume (C1-C4)alcanol.
[0046] Condições adequadas para remover o solvente do permeado compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, para formar um primeiro/segundo concentrado dessalinizado compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos incluem soprar um gás inerte (por exemplo, gás nitrogênio) sobre a superfície do eluente. O permeado pode ser aquecido ao mesmo tempo que funde o nitrogênio gasoso ou pode estar à temperatura ambiente (por exemplo, 25°C). Outras condições para a remoção do solvente no eluente incluem aplicar um vácuo para o recipiente contendo o permeado. O vácuo pode ser aplicado com o permeado à temperatura ambiente ou enquanto se aquece o recipiente. No entanto, outras condições para a remoção de solvente no permeado incluem passar o permeado através de um evaporador de filme limpo, ou um evaporador de filme fino agitado.
[0047] Em outro exemplo, o concentrado compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos pode ser filtrado através de filtro de papel para obter um primeiro filtrado, o primeiro filtrado é ultrafiltrado para obter um segundo filtrado e o segundo filtrado é nanofiltrado usando uma membrana de nanofiltração para obter um primeiro retentato ou o segundo filtrado é eluído através de uma resina hidrofóbica para obter um segundo eluente dessalinizado. Em outro exemplo, o concentrado compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos pode ser filtrado através de filtro de papel para obter um primeiro filtrado, o primeiro filtrado é nanofiltrado usando uma membrana de nanofiltração para obter um terceiro retentato ou o primeiro filtrado é eluído através de uma resina hidrofóbica para obter um segundo eluente dessalinizado, e o terceiro retentato ou o segundo eluente dessalinizado é ultrafiltrado para obter um terceiro filtrado.
[0048] Como mencionado neste documento, o eluente compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos , pode ser concentrado até a secura ou pode ser concentrado até um ponto em que um volume de uma composição aquosa compreendendo (C1-C4)alcanol permaneça. Se o eluente for concentrado até a secura, o material seco pode ser reconstituído usando, por exemplo, uma composição aquosa compreendendo um (C1-C4)alcanol. O material reconstituído pode então ser filtrado como descrito aqui, entre outras coisas, pelo menos um de dessalinização e descoloração.
[0049] Os métodos aqui descritos podem incluir a etapa (h) que envolve secar o primeiro retentato, o segundo eluente dessalinizado ou terceiro filtrado para obter a composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos, e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos. O primeiro retentato, o segundo eluente dessalinizado ou o terceiro filtrado podem ser secos de qualquer maneira adequada, incluindo por liofilização ou secagem por pulverização.
[0050] A FIG. 1 é um diagrama de fluxo de um método 100 para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos. Na operação 102, a biomassa de erva-mate é contatada com uma composição aquosa contendo 50% de etanol/água em um recipiente adequado (por exemplo, um frasco de vidro) por 1 h (300 g de biomassa de erva-mate em 1,5 L de solvente) para se obter um extrato inicial. Na operação 104, o extrato inicial é filtrado usando, por exemplo, um funil de cerâmica Büchner com filtro de papel Whatman 54 com baixo teor de cinzas em frasco de vidro de braço lateral de 4 L. Na operação 106, o volume do extrato inicial filtrado é ajustado com uma composição aquosa, neste caso água, para obter um extrato inicial filtrado ajustado contendo uma proporção mais baixa de etanol, neste caso 35% em volume de etanol. Na operação 108, o extracto inicial filtrado ajustado pode ser refiltrado usando, por exemplo, um funil de cerâmica Büchner com filtro de papel Whatman 44 com baixo teor de cinzas em frasco de vidro de braço lateral de 4 L. Na operação 110, o extrato inicial filtrado ajustado é cromatografado em uma fase estacionária de cromatografia de troca iônica. Por exemplo, a resina AMBERLITE® FPA 53 é embalada em coluna de vidro. A resina é pré-condicionada com 35% de etanol (2 BV a 2 BV/h). O extrato inicial filtrado ajustado é carregado (2 BV/h) na resina, descartando o permeado de carga. A resina é lavada com etanol a 35% (4 BV a 2 BV/h) descartando o permeado de lavagem. O pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos são eluídos com 50% de etanol/água, 10% de cloreto de sódio FCC (4 BV, 0,5 BV/h) e o permeado é mantido. A coluna/resina pode opcionalmente ser regenerada com água (4 BV, 2 BV/h). Na operação 112, o eluente/permeado é concentrado para formar um concentrado. Nesse caso, o gás nitrogênio foi soprado por cima do eluente/permeado por 2 dias, até que o volume seja aproximadamente um terço do volume inicial de eluente/permeado e/ou etanol seja menor que 1% no eluente/permeado , obtendo assim um concentrado. Na operação 114, o concentrado é acidificado a um pH de aproximadamente 3,5 e depois filtrado através de um filtro de papel Whatman 44 em um funil de Büchner, seguido por um filtro de 0,2 μm de poliéter sulfona (PES). Na operação 116, o concentrado filtrado é descolorido usando uma membrana de corte de peso molecular (MWCO; por exemplo, uma membrana MWCO que remove materiais com um peso molecular superior a 10 kDA, como um TURBOCLEAN® NP010 de 3 kDa) para, entre outras coisas , descolorir o concentrado filtrado e obter um permeado. Na operação 118, o permeado é filtrado através de uma membrana de nanofiltração (por exemplo, membrana TRISEP® XN45) e o retentato é subsequentemente seco na operação 120 para obter a composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos.
[0051] A FIG. 2 é um diagrama de fluxo de um método 200 para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos. Na operação 202, a biomassa de erva-mate é contatada com uma composição aquosa contendo 50% de etanol/água em um recipiente adequado (por exemplo, um frasco de vidro) por 1 h (300 g de biomassa de erva-mate em 1,5 L de solvente) para se obter um extrato inicial. Na operação 204, o extrato inicial é filtrado usando, por exemplo, um funil de cerâmica Büchner com filtro de papel Whatman 54 com baixo teor de cinzas em frasco de vidro de braço lateral de 4 L. Na operação 206, o volume do extrato inicial filtrado é ajustado com uma composição aquosa, neste caso água, para obter um extrato inicial filtrado ajustado contendo uma proporção mais baixa de etanol, neste caso 35% em volume de etanol. Na operação 208, o extracto inicial filtrado ajustado pode ser refiltrado usando, por exemplo, um funil de cerâmica Büchner com filtro de papel Whatman 44 com baixo teor de cinzas em frasco de vidro de braço lateral de 4 L. Na operação 210, o extrato inicial filtrado ajustado é cromatografado em uma fase estacionária de cromatografia de troca iônica. Por exemplo, a resina AMBERLITE® FPA 53 é embalada em coluna de vidro. A resina é pré-condicionada com 35% de etanol (2 BV a 2 BV/h). O extrato inicial filtrado ajustado é carregado (2 BV/h) na resina, descartando o permeado de carga. A resina é lavada com etanol a 35% (4 BV a 2 BV/h) descartando o permeado de lavagem. O pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos são eluídos com 50% de etanol/água, 10% de cloreto de sódio FCC (4 BV, 0,5 BV/h) e o permeado é mantido. A coluna/resina pode opcionalmente ser regenerada com água (4 BV, 2 BV/h). Na operação 212, o eluente/permeado é concentrado para formar um concentrado, onde o volume é aproximadamente um terço do volume inicial de eluente/permeado e/ou etanol é inferior a 1% no eluente/permeado, obtendo assim um concentrado. Na operação 214, o concentrado é acidificado a um pH de aproximadamente 1 e depois filtrado através de um filtro de papel Whatman 44 em um funil de Büchner, seguido por um filtro de 0,2 μm de poliéter sulfona (PES). Na operação 218, o concentrado é dessalinizado usando uma resina hidrofóbica (por exemplo, uma matriz polivinilbenzeno/etilvinilbenzeno poroso, como SEPABEADS™ SP70) e o solvente no retentado é removido na operação 217. Na operação 216, o concentrado dessalinizado é descolorado usando uma membrana de corte de peso molecular (MWCO; por exemplo, uma membrana MWCO que remove materiais com um peso molecular superior a 10 kDA, como um TURBOCLEAN® NP010 de 3 kDa) para, entre outras coisas, descolorir o concentrado filtrado e obter um permeado. subsequentemente seco na operação 220 para obter a composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos.
[0052] Um outro exemplo de um método para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, o método compreendendo (v) contatar a biomassa de erva-mate com uma composição aquosa para se obter um extrato inicial; (vi) remover sólidos a partir do extrato inicial para se obter um segundo extrato inicial; (vii) contatar o segundo extracto inicial com acetato de etil acidificado para obter um extracto ácido de acetato de etil; (viii) neutralizar o extrato ácido de acetato de etil para obter acetato de etil neutralizado e um extrato aquoso; (ix) descolorir o extrato aquoso para obter um extrato aquoso descolorido; e (x) ) secar o extrato aquoso descolorido para obter a composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos.
[0053] As etapas (i), (ii) e (vi) são executadas conforme descrito aqui para as etapas (a), (b) e (h). A etapa (v) é análoga à etapa de filtração (g), exceto que a etapa (v) envolve apenas processos de descoloração, como ultrafiltração, que inclui a filtração através de uma membrana de corte de peso molecular, cromatografia de exclusão de tamanho e permeação de gel, conforme discutido aqui. Por conseguinte, a divulgação em relação às etapas (a), (b), (g) e (h) se aplica às etapas (i), (ii), (v) e (vi).
[0054] A etapa (i) dos métodos aqui descritos envolve contatar a biomassa de erva-mate com uma composição aquosa para obter um extrato inicial compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos.
[0055] A composição aquosa pode compreender água e não contêm cossolventes, como solventes orgânicos. Mas, a composição aquosa pode compreender cossolventes, além de água. Cossolventes adequados incluem solventes orgânicos, tais como, (C1-C4)alcanois e misturas dos mesmos (C1- C4)alcanois. A proporção de solvente orgânico, como (C1-C4)alcanol ou misturas de (C1-C4)alcanois, pode ser qualquer proporção adequada, de modo que a composição aquosa possa compreender até cerca de 30%, até cerca de 40%, até cerca de 50% ou até 60% em volume de solvente orgânico, sendo o restante água; ou de cerca de 30% a cerca de 60%, cerca de 40% a cerca de 60%, cerca de 30% a cerca de 50%, cerca de 40% a cerca de 50% ou cerca de 50% em volume de solvente orgânico, sendo o restante água.
[0056] Em alguns casos, a composição aquosa pode ser tamponada com qualquer sistema tampão adequado, incluindo, mas não limitado a, fosfato, citrato, ascorbato, lactato, acetato e semelhantes. Os tampões podem estar na faixa de 1-1000 mM do ânion. Alternativamente, a água acidificada a pH 5-6 com ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico ou semelhante pode ser útil na composição aquosa, com ou sem um cossolvente. Em alternativa, a água pura tornada básica a pH 7-11 com hidróxido, tal como hidróxido de sódio ou potássio, pode ser útil na composição aquosa, com ou sem um cossolvente. Ainda em outros casos, pode ser adequado adicionar um soluto não iônico adequado que possa ajudar a equilibrar o potencial osmótico da composição aquosa.
[0057] A biomassa de erva-mate pode ser agitada, sonicada ou agitada de outra forma antes e/ou durante o contato da etapa (i) para, entre outras coisas, maximizar a extração de pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos.
[0058] O extrato inicial pode ser conduzido para a etapa (iii), como são ou sólidos a granel e ou sólidos de plantas presentes, como folhas de plantas de erva-mate fragmentadas, caules, topos, raízes e semelhantes, podem ser removidos na etapa (ii) dos métodos aqui descritos. Quando a etapa (ii) é realizada, obtém-se um segundo extrato inicial.
[0059] Os sólidos a granel podem ser removidos por qualquer método adequado, incluindo centrifugação, desnatação ou filtração. Por exemplo, o extrato inicial pode ser filtrado usando qualquer método de filtração adequado, incluindo filtração por gravidade ou filtração a vácuo através de qualquer filtro adequado, desde que o filtro não retenha substancialmente o pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, incluindo um filtro de papel (por exemplo, filtro de papel com baixo teor de cinzas, como filtro de papel Whatman 44 ou 54 com baixo teor de cinzas), um filtro de nylon, filtro de polietersulfona, um filtro de fibra de vidro, uma camada de terra de diatomáceas e semelhantes.
[0060] Antes de executar a etapa (iii), pode-se opcionalmente ajustar o pH do extrato inicial ou do segundo extrato inicial com um ácido adequado (por exemplo, ácido clorídrico e semelhantes) ou base adequada (por exemplo, hidróxido de sódio) a um pH entre cerca de 4 e cerca de 7. O extrato inicial ajustado ao pH ou o segundo extrato inicial é então extraído com acetato de etil que não foi pré-acidificado como aqui descrito. Embora não deseje ficar vinculado a nenhuma teoria específica, acredita-se que quando o pH do extrato inicial ou do segundo extrato inicial for ajustado entre cerca de 4 e 7, é possível extrair certas impurezas no acetato de etil, mantendo os compostos de interesse (por exemplo, ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos) na camada aquosa.
[0061] A etapa (iii) dos métodos aqui descritos envolve contatar o primeiro ou o segundo extrato inicial com acetato de etil acidificado para obter um extrato ácido de acetato de etil. O acetato de etil acidificado pode ser preparado de qualquer maneira adequada, incluindo a adição de qualquer ácido adequado, incluindo ácido clorídrico, ácido sulfúrico e ácido acético glacial (por exemplo, 0,01-1% vol/vol). O extrato acídico de acetato de etil é lavado com água (por exemplo, três vezes, com 1:1 vol/vol de água). Sob essas condições, o pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos estarão substancialmente em sua forma de ácido conjugado e residirão substancialmente na camada acídica de acetato de etil que se forma quando o extrato ácido de acetato de etil é lavado com água. As camadas de água são descartadas e o extrato ácido de acetato de etil é levado à etapa (iv).
[0062] A etapa (iii) dos métodos aqui descritos pode ser realizada de outras maneiras adequadas, incluindo o uso de acetato de etil que não foi pré- acidificado conforme descrito aqui (por exemplo, pré-lavagem com ácido acético glacial), mas ajustando o pH do extrato inicial ou do segundo extrato inicial com um ácido adequado. (por exemplo, ácido clorídrico e semelhantes), e depois extraindo o extrato inicial ou o segundo extrato inicial ajustado ao pH com acetato de etil que não foi pré-acidificado. Independentemente do ácido usado para ajustar o pH do extrato inicial ou do segundo extrato inicial, o pH do extrato inicial ou do segundo extrato inicial é ajustado para cerca de 4 ou menos, 3 ou menos, cerca de 2 ou menos ou cerca de 1 ou menos. As camadas de água são descartadas e o extrato ácido de acetato de etil que resulta é levado à etapa (iv).
[0063] A etapa (iv) dos métodos aqui descritos envolve neutralizar o extrato acídico de acetato de etil para obter acetato de etil neutralizado e um extrato aquoso. Isso é realizado de qualquer maneira adequada, incluindo a lavagem do extrato acídico de acetato de etil com água (por exemplo, três vezes, com 1:1 vol/vol de água) compreendendo uma base adequada, como hidróxido de sódio, hidróxido de potássio e semelhantes, e combinações dos mesmos. Sob essas condições, o pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos estarão substancialmente em sua forma de base conjugada e residirão substancialmente na camada de água que se forma quando o extrato ácido de acetato de etil é lavado com água compreendendo uma base adequada.
[0064] Numa alternativa, a etapa opcional para etapa (iv), etapa (iv-a), o extrato acídico de acetato de etil que resulta da etapa (iii) pode ser opcionalmente removido, até mesmo removido até a secura. Qualquer sólido que permanece pode ser reconstituído com água com pH neutro (por exemplo, água desionizada) e o pH da água pode então ser ajustado para cerca de 3 a cerca de 7; ou o sólido que resta pode ser reconstituído com água com um pH de cerca de 3 a cerca de 7.
[0065] O extrato aquoso compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos, independentemente de serem provenientes da etapa (iv) ou da etapa (iv-a), pode então ser submetido à etapa (v) para realizar, entre outras coisas, descoloração do extrato aquoso, que pode ser altamente colorido. A descoloração pode ser realizada por qualquer meio adequado, incluindo ultrafiltração (por exemplo, filtração através de uma membrana de corte de peso molecular, cromatografia de exclusão de tamanho ou permeação de gel). Obtém-se um filtrado por descoloração. A ultrafiltração realiza, entre outras coisas, a descoloração de um concentrado que pode ser altamente colorido. Embora não deseje estar vinculado a nenhuma teoria específica, acredita-se que a ultrafiltração remova substâncias poliméricas altamente coloridas que existem nativamente na biomassa de erva-mate ou se formem em uma ou mais das etapas descritas aqui.
[0066] Outro exemplo de modificações no método descrito neste documento compreendendo as etapas (i) - (vi) (incluindo a etapa opcional alternativa (iv-a) inclui um método para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, o método compreendendo contatar a biomassa de erva-mate com uma composição aquosa para se obter um extrato inicial; remover sólidos a partir do extrato inicial para se obter um segundo extrato inicial; ajustar o pH do segundo extrato inicial a um pH de cerca de 4 a cerca de 7 para obter um primeiro segundo extrato inicial ajustado ao pH; contatar o primeiro segundo extrato inicial ajustado ao pH com acetato de etil para obter um primeiro extrato de acetato de etil e um segundo extrato aquoso; ajustar o pH do segundo extrato aquoso a um pH menor que 2 para obter um segundo extrato aquoso ajustado ao pH; contatar o segundo extrato aquoso ajustado ao pH com acetato de etil para obter um segundo extrato de acetato de etil; remover o acetato de etil do segundo extrato de acetato de etil para obter uma composição purificada; reconstituir a composição em bruto com água para obter um terceiro extrato aquoso; e descolorir o terceiro extrato aquoso para obter um extrato aquoso descolorido. A "composição purificada" compreenderá os compostos de interesse (por exemplo, o pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos) e é purificado em relação a pelo menos o extrato inicial e o segundo extrato inicial, em que a "composição purificada" não conterá certas impurezas no extrato inicial e no segundo extrato inicial, mas contém substâncias poliméricas altamente coloridas que existem nativamente na biomassa de erva-mate ou se formam em uma ou mais das etapas descritas aqui e que são removidos na etapa de descoloração.
[0067] Ainda autro exemplo de modificações no método descrito neste documento compreendendo as etapas (i) - (vi) (incluindo a etapa opcional alternativa (iv-a) inclui um método para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, o método compreendendo contatar a biomassa de erva-mate com uma composição aquosa para se obter um extrato inicial; remover sólidos a partir do extrato inicial para se obter um segundo extrato inicial; ajustar o pH do segundo extrato inicial para um pH menor que cerca de 2 para obter um segundo extrato inicial ajustado ao pH; contatar o segundo extrato inicial ajustado ao pH com acetato de etil para obter um terceiro extrato de acetato de etil; neutralizar o terceiro extrato de acetato de etil para obter um primeiro extrato de acetato de etil neutralizado e um terceiro extrato aquoso; e descolorir o terceiro extrato aquoso para obter um extrato aquoso descolorido.
[0068] Os métodos descritos neste documento podem incluir a etapa (vi) que envolve secar o extrato aquoso descolorido para obter a composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos. O primeiro ou o segundo retentatos ou o terceiro filtrado podem ser secos de qualquer maneira adequada, incluindo por liofilização ou secagem por pulverização.
[0069] A FIG. 3 é um diagrama de fluxo de um método 300 para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos. Na operação 302, a biomassa de erva-mate é contatada com uma composição aquosa contendo 50% de etanol/água em um recipiente adequado (por exemplo, um frasco de vidro) por 1 h (300 g de biomassa de erva-mate em 1,5 L de solvente) para se obter um extrato inicial. Na operação 304, o extrato inicial é filtrado usando, por exemplo, um funil de cerâmica Büchner com filtro de papel com baixo teor de cinzas Whatman 54 em um frasco de vidro de braço lateral de 4 L para, entre outras coisas, remover sólidos da biomassa de erva-mate. O filtrado da operação 304 é extraído na operação 306 com extração acidificada de acetato de etila. Após a extração do pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos no acetato de etil acidificado, o acetato de etil acidificado é lavado com água compreendendo uma base adequada, como hidróxido de sódio, hidróxido de potássio e semelhantes, na operação 308 para obter acetato de etil neutralizado e um extrato aquoso. Sob essas condições, o pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos estarão substancialmente em sua forma de base conjugada e residirão substancialmente na camada de água que se forma quando o extrato ácido de acetato de etil é lavado com água compreendendo uma base adequada. Na operação 310 a camada aquosa é filtrada para obter um filtrado. Na operação 316, o filtrado é descolorido usando uma membrana de corte de peso molecular de 3 kDa (TURBOCLEAN® NP010; seis diafiltrações) para, entre outras coisas, descolorir o extrato aquoso, obtendo assim um extrato aquoso descolorido. Na operação 320, o extrato aquoso descolorido é seco para obter a composição de pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos.
[0070] A FIG. 4 é um diagrama de fluxo de um método 400 para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos. Na operação 402, a biomassa de erva-mate é contatada com uma composição aquosa contendo 50% de etanol/água em um recipiente adequado (por exemplo, um frasco de vidro) por 1 h (300 g de biomassa de erva-mate em 1,5 L de solvente) para se obter um extrato inicial. Na operação 404, o extrato inicial é filtrado usando, por exemplo, um funil de cerâmica Büchner com filtro de papel com baixo teor de cinzas Whatman 54 em um frasco de vidro de braço lateral de 4 L para, entre outras coisas, remover sólidos da biomassa de erva-mate. O filtrado da operação 404 é ajustado ao pH de cerca de 4 a cerca de 7 e o filtrado é extraído na operação 408 com acetato de etil, enquanto os compostos de interesse permanecem na camada aquosa. Na operação 406, o pH da camada aquosa é ajustado para menos que 2, e a camada aquosa é extraída com acetato de etil. Após a extração do pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos no acetato de etil, o acetato de etil é removido até a secura na operação 407 para obter um sólido. O sólido é reconstituído com água e o pH da água é ajustado para cerca de 3 a cerca de 7. Sob estas condições, o pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos estarão substancialmente na sua forma de base conjugada e se dissolverá na água. Na operação 410 a camada aquosa é filtrada para obter um filtrado. Na operação 416, o filtrado é descolorido usando uma membrana de corte de peso molecular de 3 kDa (TURBOCLEAN® NP010; seis diafiltrações) para, entre outras coisas, descolorir o extrato aquoso, obtendo assim um extrato aquoso descolorido. Na operação 420, o extrato aquoso descolorido é seco para obter a composição de pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos.
[0071] A composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos preparados de acordo com os métodos aqui descritos pode compreender substancialmente as mesmas quantidades em peso e/ou substancialmente as mesmas razões em peso de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos em relação à biomassa de erva-mate.
[0072] A composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos preparada de acordo com os métodos aqui descritos pode compreender uma razão em massa de ácidos dicafeoilquínicos totais para ácidos monocafeoilquínicos totais de cerca de 1:1 a cerca de 10:1 (por exemplo, de cerca de 3:1 a cerca de 10:1; cerca de 3:2 a cerca de 4:1; ou cerca de 3:1 a cerca de 5:1). A composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos preparados de acordo com os métodos descritos neste documento pode compreender uma razão em massa do total de ácidos dicafeoilquínicos para ácidos monocafeoilquínicos totais de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 0,01:1 (por exemplo, de cerca de 0,5:1 a cerca de 0,1:1).
[0073] A composição compreendendo o pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos preparada de acordo com os métodos descritos neste documento pode compreender uma razão em massa de cada um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos, de cerca de 0,01 (por exemplo, cerca de 0,005 a cerca de 0,05) a cerca de 1 (por exemplo, 0,5 a cerca de 1,5) a cerca de 1 (por exemplo, 0,5 a cerca de 1,5), respectivamente.
[0074] A composição compreendendo o, pelo menos, um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos preparada de acordo com os métodos aqui descritos pode ser incorporada em qualquer composição ingerível, incluindo em bebidas e produtos alimentares.
[0075] Por exemplo, a composição ingerível pode ser uma composição comestível ou composição não comestível. Por "composição comestível" entende-se qualquer composição que pode ser consumida como alimento por humanos ou animais, incluindo sólidos, gel, pasta, o material espumoso, semissólidos, líquidos, ou misturas dos mesmos. Por "composição não comestível", entende-se qualquer composição que se destina a ser consumida ou utilizada por seres humanos ou animais não como alimento, incluindo sólidos, gel, pasta, material espumoso, semissólidos, líquidos ou misturas dos mesmos. A composição não comestível inclui, mas não está limitada a composições médicas, que se refere a uma composição não compatível destinada a ser usada por humanos ou animais para fins terapêuticos. Por "animal", inclui qualquer animal não humano, como, por exemplo, animais de fazenda e animais de estimação.
[0076] A composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos preparada de acordo com os métodos aqui descritos pode ser adicionada a uma composição não comestível ou a um produto não comestível, como suplementos, nutracêuticos, produtos alimentares funcionais (por exemplo, qualquer alimento fresco ou processado que tenha propriedades de promoção da saúde e/ou de prevenção de doenças além da função nutricional básica do fornecimento de nutrientes), farmacêuticos e de venda livre, produtos de higiene bucal, como dentifrícios e enxaguantes bucais, produtos cosméticos, como protetores labiais e outros produtos para cuidados pessoais.
[0077] Em geral, produtos de venda livre (OTC) e produtos de higiene bucal geralmente se referem a produtos para uso doméstico e/ou pessoal que podem ser vendidos sem receita médica e/ou sem visita a um profissional médico. Exemplos de produtos OTC incluem, entre outros, vitaminas e suplementos alimentares; Analgésicos tópicos e/ou anestésicos; Remédios para tosse, resfriados e alergias; Anti-histamínicos e/ou remédios para alergias; e combinações dos mesmos. Vitaminas e suplementos alimentares incluem, entre outros, vitaminas, suplementos alimentares, tônicos/bebidas nutritivas engarrafadas, vitaminas específicas para crianças, suplementos alimentares, quaisquer outros produtos de ou relacionados a ou fornecer nutrição e combinações dos mesmos. Analgésicos e/ou anestésicos tópicos incluem quaisquer cremes/pomadas/géis tópicos usados para aliviar dores e dores superficiais ou profundas, por ex. dor muscular; gel de dentição; adesivos com ingrediente analgésico; e combinações dos mesmos. Remédios para tosse, resfriado e alergia incluem, entre outros, descongestionantes, remédios para tosse, preparações faríngeas, produtos de confeitaria medicamentosos, anti-histamínicos e tosse específica para criança, remédios para resfriado e alergia; e produtos combinados. Os anti-histamínicos e/ou remédios para alergia incluem, entre outros, tratamentos sistêmicos para febre do feno, alergias nasais, picadas de insetos e picadas. Exemplos de produtos de higiene bucal incluem, entre outros, tiras de limpeza bucal, pasta de dentes, escovas de dentes, enxaguantes bucais/enxaguantes dentários, tratamento de dentaduras, purificadores de boca, branqueadores de dentes e fio dental.
[0078] A composição compreendendo o, pelo menos, um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos preparada de acordo com os métodos aqui descritos pode ser adicionada a produtos ou formulações de alimentos ou bebidas. Exemplos de produtos ou formulações de alimentos e bebidas incluem, entre outros, coberturas, recheios ou glacê para produtos comestíveis ou qualquer entidade incluída na categoria sopa, categoria alimentos secos processados, categoria de bebidas, categoria de refeição pronta, categoria de alimentos em conserva ou enlatados, categoria de alimentos processados congelados, categoria de alimentos processados refrigerados, categoria de petiscos, categoria de produtos de panificação, categoria de confeitaria, categoria de laticínios, categoria de sorvete, categoria de substituição de refeições, categoria de massas e macarrão e categoria de molhos, toppings e condimentos, categoria de comida para bebê e/ou categoria produtos para espalhar.
[0079] Em geral, a categoria refere-se a sopa enlatada/em conserva, desidratada, instantânea, refrigerada, UHT e sopa congelada. Para os fins desta definição, sopa (s) significa um alimento preparado a partir de carne, aves, peixes, legumes, grãos, frutas e outros ingredientes, cozido em um líquido que pode incluir pedaços visíveis de alguns ou de todos esses ingredientes. Pode ser clara (como caldo) ou espessa (como ensopado), lisa, como purê ou grossa, pronta para servir, semi-condensada ou condensada e pode ser servida quente ou fria, como primeiro prato ou como prato principal de uma refeição ou como um lanche entre as refeições (servida como uma bebida). A sopa pode ser usada como ingrediente na preparação de outros componentes da refeição e pode variar de caldos (consomé) a molhos (sopas à base de creme ou queijo).
[0080] "Categoria de comida desidratada e culinária" geralmente significa: (i) produtos auxiliares de cozinha, como: pós, grânulos, pastas, produtos líquidos concentrados, incluindo caldos concentrados, caldos e caldos em cubos prensados, comprimidos ou em pó ou granulados, vendidos separadamente como produto acabado ou como ingrediente de um produto, molhos e misturas de receitas (independentemente da tecnologia); (ii) Produtos de soluções para refeições, tais como: sopas desidratadas e liofilizadas, incluindo sopas desidratadas, sopas instantâneas desidratadas, sopas desidratadas prontas para cozinhar, preparações desidratadas ou preparações ambientais de pratos prontos, refeições e pratos de serviço único, incluindo massas, batatas e arroz; e (iii) produtos para enfeitar refeições, como: condimentos, marinadas, molhos para salada, coberturas de saladas, molhos, panificação, misturas para massa, produtos para espalhar não perecíveis, molhos para churrasco, misturas líquidas de receitas, concentrados, molhos ou misturas de molhos, incluindo misturas de receitas para saladas, vendidas como produto acabado ou como ingrediente dentro de um produto, desidratado, líquido ou congelado.
[0081] A categoria Bebida significa bebidas, misturas e concentrados de bebidas, incluindo, entre outras, bebidas gaseificadas e não gaseificadas, bebidas alcoólicas e não alcoólicas, bebidas prontas para beber, formulações de concentrado líquido para a preparação de bebidas como refrigerantes e misturas precursoras de bebidas em pó secas. A categoria Bebida também inclui as bebidas alcoólicas, refrigerantes, bebidas esportivas, bebidas isotônicas, e bebidas quentes. As bebidas alcoólicas incluem, entre outras, cerveja, sidra/perry, FABs, vinho e bebidas espirituosas. Os refrigerantes incluem, mas não estão limitados a gaseificados, tais como colas e gaseificados sem cola; suco de frutas, como sucos, néctares, sucos e bebidas com sabor de frutas; água engarrafada, que inclui água com gás, água de nascente e água de mesa/purificada; bebidas funcionais, que podem ser gaseificadas ou paradas e incluem bebidas esportivas, energéticas ou de elixir; concentrados, como concentrados líquidos e em pó, prontos para beber. As bebidas quentes incluem, entre outras, café, como café fresco (por exemplo, fabricado), café instantâneo, combinado, líquido, pronto para beber, bebidas de café solúveis e secas, misturas e concentrados de bebidas de café (xaropes, puros, formulado ou em pó; o exemplo de uma "forma em pó" é um produto que compreende café, adoçante e branqueador, todos em forma de pó); chá, como chá preto, verde, branco, oolong e aromatizado; e outras bebidas quentes, incluindo pós, grânulos, blocos ou comprimidos à base de sabor, malte ou vegetais, misturados com leite ou água.
[0082] A categoria Salgadinho geralmente se refere a qualquer alimento que possa ser uma refeição informal leve, incluindo, entre outros, lanches doces e temperados e barrinhas. Exemplos de salgadinhos incluem, entre outros, salgadinhos de frutas, salgadinhos/batatas fritas, salgadinhos extrudados, tortilhas/salgadinhos de milho, pipoca, pretzels, nozes e outros salgadinhos doces e temperados. Exemplos de salgadinhos incluem, entre outros, barras de granola/muesli, barras de café da manhã, barras energéticas, barras de frutas e outras barras de lanches.
[0083] A categoria Produtos de Panificação geralmente se refere a qualquer produto comestível cujo processo de preparação envolva exposição ao calor ou luz solar excessiva. Exemplos de produtos de panificação incluem, entre outros, pães, bolos, biscoitos, bolos, cereais, torradeiras, doces, waffles, tortilhas, biscoitos, tortas, bagels, tortas, quiches, bolos, quaisquer alimentos assados e qualquer combinação dos mesmos.
[0084] A categoria Sorvete geralmente se refere a sobremesas congeladas que contêm creme, açúcar e aromas. Exemplos de sorvete incluem, mas não estão limitados a: sorvete de impulso; sorvete para levar para casa; iogurte congelado e sorvete artesanal; soja, aveia, feijão (por exemplo, feijão vermelho e feijão mungo) e sorvetes à base de arroz.
[0085] A categoria de Confeitaria geralmente refere-se a produto comestível que é doce ao paladar. Exemplos de produtos de confeitaria incluem, mas não estão limitados a bombons, gelatinas, doces de chocolate, produtos de confeitaria, gomas, e semelhantes e quaisquer produtos de combinação. A categoria de Substituição de Refeições geralmente se refere a qualquer alimento destinado a substituir as refeições normais, particularmente para pessoas com problemas de saúde ou fitness. Exemplos de substituição de refeição incluem, mas não estão limitados a produtos de emagrecimento e produtos de convalescença.
[0086] A categoria Refeição Pronta geralmente se refere a qualquer alimento que pode ser servido como refeição sem preparação ou processamento extenso. A refeição pronta inclui produtos que tiveram "habilidades" de receita adicionadas a eles pelo fabricante, resultando em um alto grau de prontidão, conclusão e conveniência. Exemplos de refeições prontas incluem, mas não estão limitados a refeições prontas em conserva/enlatadas, congeladas, secas e refrigeradas; misturas para jantares; pizza congelada; pizza refrigerada; e saladas preparadas.
[0087] A categoria Massas e Macarrões inclui todas as massas e/ou macarrão, incluindo, entre outros, massas enlatadas, secas e refrigeradas/frescas; e macarrão simples, instantâneo, refrigerado, congelado e lanche.
[0088] A categoria Alimento em conserva/enlatado inclui, mas não se limita a, carne e produtos à base de carne em conserva/enlatados, peixe/frutos do mar, legumes, tomates, feijões, frutas, refeições prontas, sopas, massas e outros alimentos em conserva/enlatados.
[0089] A categoria Alimentos Processados Congelados inclui, entre outros, carne vermelha processada congelada, aves processadas, peixe/frutos do mar processados, vegetais processados, substitutos da carne, batatas processadas, produtos de panificação, sobremesas, refeições prontas, pizza, sopa, macarrão e outras comidas congeladas.
[0090] A categoria Alimentos processados secos inclui, entre outros, arroz, misturas para sobremesas, refeições prontas secas, sopa desidratada, sopa instantânea, macarrão seco, macarrão simples e macarrão instantâneo.
[0091] A categoria Alimentos processados refrigerados inclui, entre outros, carnes processadas refrigeradas, produtos processados de peixe/frutos do mar, kits de almoço, frutas frescas, refeições prontas, pizza, saladas preparadas, sopa, massas frescas e macarrão.
[0092] A categoria Molhos, Coberturas e Condimentos inclui, mas não se limita a, pastas e purês de tomate, cubos de caldo, ervas e especiarias, glutamato monossódico (MSG), molhos de mesa, molhos à base de soja, molhos para massas, molhos para cozinha/molhos secos/ misturas em pó, ketchup, maionese, mostarda, molhos para salada, vinagretes, molhos, produtos em conserva e outros molhos, coberturas e condimentos.
[0093] A categoria Comida para bebê inclui, mas não se limita à fórmula à base de leite ou soja; e preparados, secos e outros alimentos para bebês.
[0094] A categoria Produtos para espalhar inclui, mas não está limitada a compotas e conservas, mel, pastas de chocolate, pastas de nozes e pastas de fermento.
[0095] A categoria de Produtos Lácteos geralmente se refere a produtos comestíveis produzidos a partir de leite de mamífero. Exemplos de produtos lácteos incluem, mas não estão limitados a produtos de consumo de leite, queijo, iogurte e bebidas lácteas e outros produtos lácteos.
[0096] Exemplos adicionais de composição comestível, em particular produtos alimentares e bebidas ou formulações, são fornecidos como se segue. Exemplos de composições comestíveis incluem uma ou mais confeitarias, confeitaria de chocolate, pastilhas, linhas de contagem, selflines/softlines ensacados, sortimentos em caixas, sortimentos em caixas padrão, miniaturas embrulhadas em torção, chocolate sazonal, chocolate com brinquedos, alfajores, outros produtos de confeitaria de chocolate, hortelã, hortelã padrão, balas de hortelã, doces cozidos, pastilhas, gomas, geleias e pastilhas, toffees, caramelos e torrone, confeitaria medicamentosa, pirulitos, alcaçuz, outros produtos de confeitaria, goma, goma de mascar, goma açucarada, goma sem açúcar, goma funcional, chiclete, pão, pão embalado/industrial, pão não embalado/artesanal, doces, bolos, bolos embalados/industriais, bolos não embalados/artesanais, biscoitos, biscoitos revestidos de chocolate, biscoitos sanduíche, biscoitos recheados, biscoitos salgados e bolachas, substitutos de pão, cereais para café da manhã, cereais rte, cereais para café da manhã em família, flocos, muesli, outros cereais, cereais para café da manhã para crianças, cereais quentes, sorvete, sorvete de impulso, sorvete de leite de porção única, sorvete de água de porção única , sorvete de laticínios com vários pacotes, sorvete de água com vários pacotes, sorvete para levar para casa, sorvete de leite para levar para casa, sobremesas de sorvete, sorvete a granel, sorvete de água para levara para casa, iogurte congelado, sorvete artesanal, laticínios, leite, leite fresco/pasteurizado, leite fresco/pasteurizado com muita gordura, leite fresco/pasteurizado semidesnatado, leite vida longa/uht, leite integral vida longa/uht, leite semi- desnatado vida longa/uht , leite sem gordura vida longa/uht leite, leite de cabra, leite condensado/evaporado, leite condensado/evaporado comum, aromatizado, funcional e outros leites condensados, bebidas com leite com sabor, bebidas com leite apenas com sabor de leite, bebidas com leite com suco de frutas, leite de soja, bebidas ácidas, bebidas lácteas fermentadas, branqueadores de café (por exemplo, cremes lácteos e não lácteos ou branqueadores para bebidas de café), leite em pó, bebidas com leite em pó aromatizadas, creme, queijo, queijo processado, queijo processado para espalhar, queijo processado não espalhado, queijo não processado, queijo não processado para espalhar, queijo duro, queijo duro embalado, queijo duro não embalado, iogurte, iogurte frasco/natural, iogurte com sabor, iogurte frutado, iogurte probiótico, iogurte para beber, iogurte regular, iogurte probiótico, sobremesas resfriadas e não perecíveis, sobremesas à base de laticínios, sobremesas à base de soja, petiscos refrigerados, fromage frais e quark, fromage frais e quark fresco, fromage frais e quark com sabor, fromage frais e quark temperado, doces e salgados temperados, salgadinhos de frutas, salgadinhos/batatas fritas, salgadinhos extrudados, tortilhas/salgadinhos de milho, pipoca, pretzels, nozes, outros salgadinhos doces e salgados, barrinhas, barras de granola, barras de café da manhã; barras energéticas, barras de frutas, outras barrinhas, produtos de substituição de refeições, produtos de emagrecimento, bebidas de convalescença, refeições prontas, refeições prontas enlatadas, refeições prontas congeladas, refeições prontas secas, refeições prontas refrigeradas, misturas para jantares, pizza congelada, pizza refrigerada, sopa, sopa enlatada, sopa desidratada, sopa instantânea, sopa gelada, sopa quente, sopa congelada, massas, massas enlatadas, massas secas, massas refrigeradas/frescas, macarrão, macarrão simples, macarrão instantâneo, macarrão instantâneo para copos/tigela, macarrão instantâneo para bolsa, macarrão refrigerado, macarrão para lanches, comida enlatada, carne enlatada e produtos à base de carne, peixe enlatado/frutos do mar, vegetais enlatados, tomates enlatados, feijão enlatado, frutas enlatadas, refeições prontas enlatadas, sopa enlatada, massas enlatadas, outros alimentos enlatados, alimentos congelados, processados congelados carne vermelha, aves de capoeira processadas congeladas, peixe/frutos do mar congelados processados, vegetais processados congelados, substitutos de carne congelada, batatas congeladas, batatas fritas assadas no forno, outros produtos de batata cozida no forno, batatas congeladas sem forno, produtos de panificação congelados, sobremesas congeladas, refeições prontas congeladas, pizza congelada, sopa congelada, macarrão congelado, outros alimentos congelados, alimentos secos, misturas para sobremesas, refeições prontas secas, sopa desidratada, sopa instantânea , massas secas, macarrão simples, macarrão instantâneo, macarrão instantâneo para copos/tigela, macarrão instantâneo para bolsas, alimentos refrigerados, carnes processadas refrigeradas, peixe/frutos do mar refrigerados, peixe processado refrigerado, peixe revestido refrigerado, peixe defumado refrigerado, kit de almoço refrigerado, refeições prontas refrigeradas, pizza gelada, sopa gelada, massas frescas/refrigeradas, macarrão, óleos e gorduras refrigerados, azeite de oliva, óleo vegetal e de sementes, gorduras para cozinhar, manteiga, margarina, óleos e gorduras para espalhar, óleos e gorduras para espalhar funcionais, molhos, molhos e temperos, pastas e purês de tomate, cubos de caldo de carne, cubos, grânulos de molho, caldos e fondues líquidos, ervas e especiarias, molhos fermentados, molhos à base de soja, molhos para massas, molhos úmidos, molhos secos/misturas em pó, ketchup, maionese, maionese regular, mostarda, molhos para salada, molhos para salada com baixo teor de gordura, vinagretes, molhos, produtos em conserva, outros molhos, molhos e condimentos, comida para bebê, fórmula de leite, fórmula padrão de leite, fórmula de leite de acompanhamento, fórmula de leite para bebês, fórmula de leite hipoalergênico, comida para bebê preparada, comida para bebê seca, outros alimentos para bebê, barrinhas, doces e conservas, mel, barrinhas de chocolate, barrinhas de nozes e barrinhas de fermento. Exemplos de composições comestíveis também incluem produtos de confeitaria, produtos de padaria, gelados, produtos lácteos, snacks doces e salgados, barrinhas, produtos de substituição de refeições, refeições prontas, sopas, massas, macarrão, alimentos enlatados, alimentos congelados, alimentos secos, alimentos refrigerados, óleos e gorduras, alimentos para bebês ou produtos para espalhar, ou uma mistura dos mesmos. Exemplos de composições comestíveis também incluem cereais de café da manhã, bebidas doces ou composições de concentrado sólido ou líquido para a preparação de bebidas. Exemplos de composições comestíveis incluem alimentos com sabor café (por exemplo, sabor café gelado).
[0097] Os valores expressos em um formato de intervalo devem ser interpretados de maneira flexível para incluir não apenas os valores numéricos explicitamente recitados como limites do intervalo, mas também para incluir todos os valores numéricos ou subintervalos individuais abrangidos nesse intervalo, como se cada numérico valor e subintervalo fossem explicitamente recitados. Por exemplo, uma faixa de "cerca de 0,1% a cerca de 5%" ou "cerca de 0,1% a 5%" deve ser interpretada como incluindo não apenas cerca de 0,1% a cerca de 5%, mas também os valores individuais (por exemplo, 1%, 2%, 3% e 4%) e os subintervalos (por exemplo, 0,1% a 0,5%, 1,1% a 2,2%, 3,3% a 4,4%) dentro do intervalo indicado. A afirmação "cerca de X a Y" tem o mesmo significado que "cerca de X a cerca de Y", salvo indicação em contrário. Da mesma forma, a afirmação "cerca de X, Y ou cerca de Z" tem o mesmo significado que "cerca de X, cerca de Y ou cerca de Z", salvo indicação em contrário.
[0098] Neste documento, os termos "um", "uma" ou "a/o" são usados para incluir um ou mais de um, a menos que o contexto claramente indique o contrário. O termo "ou" é usado para se referir a um “ou” não exclusivo, a menos que indicado de outra forma. Além disso, deve ser compreendido que a fraseologia ou terminologia empregadas neste documento, e não definidas de outra forma, têm o propósito único de descrição e não de limitação. Qualquer uso de cabeçalhos de seção tem como objetivo auxiliar a leitura do documento e não deve ser interpretado como limitativo; informações relevantes para um cabeçalho de seção podem ocorrer dentro ou fora dessa seção específica. Além disso, todas as publicações, patentes e documentos de patente referidos neste documento são incorporados por referência neste documento em sua totalidade, como se individualmente incorporados por referência. No caso de usos inconsistentes entre este documento e os documentos incorporados por referência, o uso na referência incorporada deve ser considerado suplementar ao deste documento; para inconsistências irreconciliáveis, o uso neste documento controla.
[0099] Nos métodos descritos neste documento, as etapas podem ser realizadas em qualquer ordem sem partir dos princípios da invenção, exceto quando uma sequência temporal ou operacional for explicitamente enunciada. Além disso, etapas especificadas podem ser efetuadas simultaneamente a menos que a linguagem explícita de reivindicação recite que elas sejam realizadas separadamente. Por exemplo, uma etapa reivindicada de fazer X e uma etapa reivindicada de fazer Y podem ser conduzidas simultaneamente dentro de uma única operação, e o processo resultante vai cair no escopo literal do processo reivindicado.
[00100] O termo “cerca de”, como usado neste documento, pode permitir um grau de variabilidade em um valor ou intervalo, por exemplo, dentro de 10%, 5% ou 1% de um valor declarado ou de um limite estabelecido de um intervalo.
[00101] O termo “substancialmente”, como usado neste documento, refere-se a uma maioria de ou, principalmente, como em pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,9%, 99,99%, ou pelo menos cerca de 99,999% ou mais.
[00102] A presente invenção pode ser mais bem compreendida por referência aos seguintes exemplos, os quais são apresentados a título de ilustração. A presente invenção não é limitada aos exemplos fornecidos aqui.
[00103] Uma biomassa de erva-mate que pode ser usada é um produto disponível comercialmente vendido como ECOTEAS™ Yerba Mate Nonmoked Leaf and Stem Traditional Cut, que é o chá de erva-mate cultivado no estado de Misiones, no nordeste da Argentina. A biomassa é obtida já triturada. Uma porção da biomassa de erva-mate triturada (300 g) foi suspensa em etanol a 50%/água (1,5 L) em frasco de vidro e foi agitada por 1 hora Após agitação, a mistura resultante foi filtrada usando um funil de cerâmica Büchner com filtro de papel Whatman 54 com baixo teor de cinzas em frasco de vidro de braço lateral de 4 L. O material filtrado foi diluído até 35% de etanol, utilizando água. Após a diluição, algum material indesejado precipita, pois não é solúvel a 35% em volume de etanol. O material diluído foi, portanto, filtrado novamente usando um funil de cerâmica Büchner com filtro de papel Whatman 44 com baixo teor de cinzas em frasco de vidro de braço lateral de 4 L.
[00104] A resina AMBERLITE® FPA 53 em uma coluna de vidro foi preparada para cromatografia de troca iônica tratando a resina com ácido clorídrico aquoso para protonar aminas na resina. O cloreto é então lavado até o pH ser superior a 4 com aproximadamente 10 BV de água. A resina é então pré-condicionada com 35% de etanol em água (2 BV a 2 BV/h) antes da carga. O material refiltrado foi carregado na resina. O permeado de carga foi descartado. A resina foi então lavada com 35% de etanol em água (4 BV a 2 BV/h). O permeado foi descartado. A resina foi então eluída com 50% de etanol em água, que compreende 10% de FCC de cloreto de sódio (4 BV, 0,5 BV/h). Esse último permeado foi levado para a próxima etapa, onde o solvente foi removido lentamente soprando gás nitrogênio no topo do permeado por dois dias, até que o volume atingisse aproximadamente 1/3 do volume inicial e/ou a concentração de etanol fosse <1% da solução. A temperatura foi mantida à temperatura ambiente (cerca de 25°C) ou abaixo, uma vez que elevadas temperaturas, com altas temperaturas, alto teor de oxigênio e/ou alta exposição à luz podem degradar os compostos de interesse. Se tal não for tomado cuidado, os compostos irão polimerizar para formar polímeros hidrofóbicos altamente coloridos, alguns dos maiores dos quais são insolúveis em água.
[00105] O material concentrado foi filtrado através de filtro de papel Whatman 44 em um funil Büchner, seguido de filtração através de um filtro de 0,2 μm de polietersulfona. O material filtrado foi descolorido usando uma membrana de corte de peso molecular de 3 kDa TURBOCLEAN® NP010, mantendo o permeado, embora possa ser usada uma membrana GE Osmonic Sepa CF TF (filme fino) UF GK. O material descolorido se degradará/polimerizará com o tempo e poderá se degradar devido a processos de oxidação, e isso reintroduzirá a cor no sistema. Portanto, é aconselhável dessalinizar e secar logo após a descoloração, como em um a dois dias. O material descolorido foi então filtrado através de uma membrana de nanofiltração TRISEP® XN45 para dessalinizar. O material dessalinizado foi liofilizado usando frascos de 600 mL LABCONCO™ FAST-FREEZE™.
[00106] O material liofilizado foi caracterizado usando análise UHPLC-UV usando uma coluna de fase reversa à base de C18. A fase móvel A é constituída por 0,025% de TFA em água e a fase móvel B é acetonitrila. Após uma retenção inicial a 5% de B, os compostos são eluídos a temperatura elevada por um gradiente de 5% de B a 25% de 1,2 a 15 minutos a uma taxa de fluxo de 0,4 mL/min. A coluna é então lavada com 100% de acetonitrila e reequilibrada. O detector de UV é ajustado para gravar dados a 210 e 324 nm.
[00107] As FIGS. 5-7 são cromatogramas UHPLC-UV de um extrato inicial de erva-mate, um concentrado obtido após a cromatografia do segundo extrato inicial ajustado em uma fase estacionária de cromatografia de troca iônica; e após a secagem, seguindo o processo descrito nas etapas (a) - (h), em que "DCQA" refere-se a "ácido dicafeoilquínico". A FIG. 5 mostra que o extrato inicial de erva-mate contém cafeína e rutina, além dos compostos de interesse, incluindo ácido clorogênico, ácido neoclorogênico, ácido criptoclorogênico, ácido cafeico e os vários isômeros dos ácidos dicafeoilquínicos, incluindo 3,4-DCQA e 3,5-DCQA. Tal como aqui descrito, e como mostrado na FIG. 6, a cromatografia remove uma grande quantidade de cafeína e rutina presente no extrato inicial de erva-mate. Os picos em um tempo de retenção de aproximadamente 5,67 minutos, correspondentes à cafeína, e em aproximadamente 9,36 minutos, correspondentes à rutina, presentes na FIG. 5 estão ausentes na FIG. 6. O mesmo vale na FIG. 7. Vale ressaltar que as intensidades relativas dos picos de ácido neoclorogênico, ácido clorogênico, ácido cafeico, ácido criptoclorogênico e os vários isômeros do ácido dicafeoilquínico são mantidos, dando credibilidade ao fato de que as composições obtidas usando os métodos aqui descritos compreendem substancialmente as mesmas quantidades em peso ou substancialmente as mesmas razões em peso de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos em relação à biomassa de erva- mate.
[00108] As FIGS. 8-10 são tabelas que mostram, em forma de tabela, o nome do pico, o tempo de retenção e os dados percentuais da área relativa para os cromatografias UHPLC-UV mostradas nas FIGS. 5-7, respectivamente.
[00109] A presente invenção fornece as seguintes modalidades, cuja numeração não deve ser interpretada como designando níveis de importância: A Modalidade 1 refere-se a um método para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos, o método compreendendo: contatar a biomassa de erva-mate com uma primeira composição aquosa para obter um extrato inicial; ajustar o volume do extrato inicial com uma segunda composição aquosa para obter um extrato inicial ajustado; cromatografar o extrato inicial ajustado em uma fase estacionária de troca iônica; eluir a fase estacionária para obter um primeiro eluente compreendendo um solvente; remover o solvente para formar um concentrado; e pelo menos um de descolorir e dessalinizar o concentrado para pelo menos um de um filtrado e um retentado.
[00110] A Modalidade 2 refere-se ao método da Modalidade 1, compreendendo ainda remover sólidos do extrato inicial para obter um segundo extrato inicial; ajustar o volume do segundo extrato inicial com uma segunda composição aquosa para obter um segundo extrato inicial ajustado; e cromatografar o segundo extrato inicial ajustado em uma fase estacionária de troca iônica.
[00111] A Modalidade 3 refere-se ao método das Modalidades 1-2, compreendendo ainda secar pelo menos um de um filtrado e um retentato para obter a composição que compreende pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos, e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos.
[00112] A Modalidade 4 refere-se ao método das Modalidades 1-3, em que a secagem compreende liofilização ou secagem por pulverização.
[00113] A Modalidade 5 refere-se ao método das Modalidades 1-4, em que a biomassa de erva-mate compreende pelo menos uma de folhas e caules de erva-mate.
[00114] A Modalidade 6 refere-se ao método das Modalidades 1-5, em que a pelo menos uma da biomassa de erva-mate é triturada antes do contato.
[00115] A Modalidade 7 refere-se ao método das Modalidades 1-6, em que o ajuste do volume do extrato inicial ou do segundo extrato inicial com a segunda composição aquosa para obter um extrato inicial ajustado ou o segundo extrato inicial ajustado compreende ajustar o extrato inicial ou o segundo extrato inicial com uma quantidade suficiente da segunda composição aquosa para obter um extrato inicial ajustado ou um segundo extrato inicial ajustado compreendendo de cerca de 30% a cerca de 40% em volume de um solvente orgânico.
[00116] A Modalidade 8 refere-se ao método da Modalidade 7, em que a segunda composição aquosa é água.
[00117] A Modalidade 9 refere-se ao método das Modalidades 1-8, compreendendo ainda filtrar o extrato inicial ajustado ou o segundo extrato inicial antes da cromatografia.
[00118] A Modalidade 10 refere-se ao método das Modalidades 1-9, em que a eluição compreende eluir com uma solução compreendendo um sal.
[00119] A Modalidade 11 refere-se ao método da Modalidade 10, em que a solução compreendendo um sal compreende pelo menos um sal dissolvido em uma composição aquosa compreendendo um (C1-C4)alcanol.
[00120] A Modalidade 12 refere-se ao método da Modalidade 10, em que a solução salina compreende cloreto de sódio, cloreto de potássio e misturas dos mesmos.
[00121] A Modalidade 13 refere-se ao método das Modalidades 1-12, compreendendo ainda ajustar o pH da fase estacionária de troca iônica fraca antes da cromatografia, de modo que o pH da fase estacionária de troca iônica seja um pH menor que cerca de 10.
[00122] A Modalidade 14 refere-se ao método das Modalidades 1-13, compreendendo ainda pré-condicionar a fase estacionária de troca iônica com uma composição aquosa compreendendo 30% a cerca de 40% em volume de um (C1-C4)alcanol.
[00123] A Modalidade 15 refere-se ao método das Modalidades 1-14, em que o primeiro eluente é concentrado até cerca de 30% de um volume total original do primeiro eluente ou até que uma concentração de (C1-C4)alcanol no eluente seja inferior a cerca de 2% em volume.
[00124] A Modalidade 16 refere-se ao método das Modalidades 1-15, em que a descoloração é realizada antes da dessalinização.
[00125] A Modalidade 17 se refere ao método das Modalidades 1-15, em que a dessalinização é realizada antes da descoloração.
[00126] A Modalidade 18 refere-se ao método das Modalidades 1-17, em que a descoloração compreende ultrafiltração através de uma membrana de corte de peso molecular, cromatografia de exclusão de tamanho ou permeação em gel.
[00127] A Modalidade 19 refere-se ao método das Modalidades 1-18, em que a dessalinização compreende usar membrana de nanofiltração ou uma resina hidrofóbica.
[00128] A Modalidade 20 refere-se ao método das Modalidades 1-19, em que o concentrado é filtrado através de papel de filtro para obter um primeiro filtrado, o primeiro filtrado é ultrafiltrado para obter um segundo filtrado e o segundo filtrado é nanofiltrado usando uma membrana de nanofiltração para obter um primeiro retentato ou o segundo filtrado é eluído através de uma resina hidrofóbica para obter um segundo eluente dessalinizado.
[00129] A Modalidade 21 refere-se ao método das Modalidades 1-20, em que o concentrado é filtrado através de papel de filtro para obter um primeiro filtrado, o primeiro filtrado é nanofiltrado usando uma membrana de nanofiltração para obter um terceiro retentato ou o primeiro filtrado é eluído através de uma resina hidrofóbica para obter um segundo eluente dessalinizado, e o terceiro retentato ou o segundo eluente dessalinizado é ultrafiltrado para obter um terceiro filtrado.
[00130] A Modalidade 22 refere-se ao método das Modalidades 1-21, em que pelo menos um de remoção do solvente; e a descoloração/dessalinização são realizadas sob uma atmosfera inerte.
[00131] A Modalidade 23 refere-se ao método das Modalidades 1-22, em que o (C1-C4)alcanol é etanol.
[00132] A Modalidade 24 refere-se ao método das Modalidades 1-22, em que a composição compreende substancialmente as mesmas quantidades em peso ou substancialmente as mesmas razões em peso de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos em relação à biomassa de erva-mate.
[00133] A Modalidade 25 refere-se ao método das Modalidades 1-24, em que a composição compreende uma razão em massa do total de ácidos dicafeoilquínicos para o total de ácidos monocafeoilquínicos de cerca de 1:1 a cerca de 10:1.
[00134] A Modalidade 26 refere-se ao método das Modalidades 1-25, em que a composição compreende uma razão em massa de cada um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, de cerca de 0,01 a cerca de 1 a cerca de 1.
[00135] A Modalidade 27 refere-se a um método para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, o método compreendendo: contatar a biomassa de erva-mate com uma composição aquosa para obter um extrato inicial; remover sólidos do extrato inicial para obter um segundo extrato inicial; contatar o segundo extrato inicial com acetato de etil acidificado para obter um extrato acídico de acetato de etil; neutralizar o extrato acídico de acetato de etil para obter extrato neutralizado de acetato de etil e um primeiro extrato aquoso; e descolorir o primeiro extrato aquoso para obter um extrato aquoso descolorido.
[00136] A Modalidade 28 refere-se ao método da Modalidade 27, em que compreende ainda secar o extrato aquoso descolorido para obter a composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos, e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos.
[00137] A Modalidade 29 refere-se ao método das Modalidades 27-28, em que a biomassa de erva-mate compreende pelo menos uma de folhas e caules de erva-mate.
[00138] A Modalidade 30 refere-se ao método das Modalidades 27-29, em que a pelo menos uma da biomassa de erva-mate é triturada antes do contato.
[00139] A Modalidade 31 refere-se ao método das Modalidades 27-30, em que a composição compreende substancialmente as mesmas quantidades em peso ou substancialmente as mesmas razões em peso de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos em relação à biomassa de erva-mate.
[00140] A Modalidade 32 refere-se ao método das Modalidades 27-31, em que a composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos compreende uma razão em massa do total de ácidos dicafeoilquínicos para o total de ácidos monocafeoilquínicos de cerca de 1:1 a cerca de 10:1.
[00141] A Modalidade 33 refere-se ao método das Modalidades 27-32, em que a composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos compreende uma razão em massa de cada um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, de cerca de 0,5 a cerca de 1 a cerca de 1.
[00142] A Modalidade 34 refere-se a um método para fabricar uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, o método compreendendo: contatar a biomassa de erva-mate com uma composição aquosa para obter um extrato inicial; remover sólidos do extrato inicial para obter um segundo extrato inicial; ajustar o pH do segundo extrato inicial a um pH de cerca de 4 a cerca de 7 para obter um primeiro segundo extrato inicial ajustado ao pH; contatar o primeiro segundo extrato inicial ajustado ao pH com acetato de etil para obter um primeiro extrato de acetato de etil e um segundo extrato aquoso; ajustar o pH do segundo extrato aquoso a um pH menor que 2 para obter um segundo extrato aquoso ajustado ao pH; contatar o segundo extrato aquoso ajustado ao pH com acetato de etil para obter um segundo extrato de acetato de etil; remover o acetato de etil do segundo extrato de acetato de etil para obter uma composição bruta; reconstituir a composição bruta com água para obter um terceiro extrato aquoso; e descolorir o terceiro extrato aquoso para obter um extrato aquoso descolorido.
[00143] A Modalidade 35 refere-se a um método para fazer uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos, o método compreendendo: contatar a biomassa de erva-mate com uma composição aquosa para obter um extrato inicial; remover sólidos do extrato inicial para obter um segundo extrato inicial; ajustar o pH do segundo extrato inicial para um pH menor que cerca de 2 para obter um segundo extrato inicial ajustado ao pH; contatar o segundo extrato inicial ajustado ao pH com acetato de etil para obter um terceiro extrato de acetato de etil; neutralizar o terceiro extrato de acetato de etil para obter um primeiro extrato de acetato de etil neutralizado e um terceiro extrato aquoso; e descolorir o terceiro extrato aquoso para obter um extrato aquoso descolorido.
[00144] A Modalidade 36 refere-se a uma composição compreendendo pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos e ácidos dicafeoilquínicos, e sais dos mesmos feitos pelo método das Modalidades 135.
[00145] A Modalidade 37 se refere a uma composição ingerível compreendendo a composição da Modalidade 36.
[00146] A Modalidade 38 refere-se à composição ingerível da Modalidade 37, em que a composição ingerível é uma bebida ou um produto alimentar.
Claims (14)
1. MÉTODO PARA FAZER UMA COMPOSIÇÃO DE EXTRATO DE ERVA MATE, caracterizado pelo fato de que compreende: contatar biomassa de erva-mate com uma primeira composição de solvente orgânico aquosa compreendendo de 30% a 60% de (C1-C4)alcanol para se obter um extrato inicial; ajustar o volume do extrato inicial com uma segunda composição aquosa para se obter um extrato inicial ajustado compreendendo menos que 40% de (C1-C4)alcanol; cromatografar o extrato inicial ajustado em uma fase estacionária de troca iônica; eluir a fase estacionária com um terceiro solvente compreendendo de 40% a 60% de (C1-C4)alcanol para se obter um primeiro eluente; remover o terceiro solvente a partir do eluente para formar um concentrado; e pelo menos um de descolorir e dessalinizar o concentrado para formar uma composição de extrato de erva mate compreendendo, pelo menos, um dentre ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos, ácidos dicafeoilquínicos, ou sais dos mesmos, e menos que 1% em peso de cafeína, rutina ou isômeros de rutina.
2. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende ainda remover sólidos do extrato inicial para obter um segundo extrato inicial; ajustar o volume do segundo extrato inicial com a segunda composição aquosa para obter um segundo extrato inicial ajustado compreendendo menos que 40% (C1-C4)alcanol; e cromatografar o segundo extrato inicial ajustado em uma fase estacionária de troca iônica.
3. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que compreende ainda secar a composição de extrato de erva mate que compreende pelo menos um de ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos, e ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos.
4. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o ajuste do volume do extrato inicial com a primeira composição aquosa compreende ajustar o extrato inicial com uma quantidade suficiente da primeira composição aquosa para obter um extrato inicial ajustado compreendendo de cerca de 30% a cerca de 40% em volume de um solvente orgânico, ou em que o ajuste do volume do segundo extrato inicial com a segunda composição aquosa compreende ajustar o segundo extrato inicial com uma quantidade suficiente da segunda composição aquosa para obter um segundo extrato inicial ajustado compreendendo de cerca de 30% a cerca de 40% em volume de um solvente orgânico.
5. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que compreende ainda filtrar o extrato inicial ajustado ou o segundo extrato inicial antes da cromatografia.
6. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a eluição compreende eluição com uma solução compreendendo um sal, como pelo menos um sal dissolvido em uma composição aquosa compreendendo um (C1- C4)alcanol.
7. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende ainda ajustar o pH da fase estacionária de troca iônica fraca antes da cromatografia, de modo que o pH da fase estacionária de troca iônica seja um pH menor que cerca de 10.
8. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende ainda pré- condicionar a fase estacionária de troca iônica com uma composição aquosa compreendendo de 30% a cerca de 40% em volume de um (C1-C4)alcanol.
9. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o concentrado é filtrado através de papel de filtro para obter um primeiro filtrado, o primeiro filtrado é ultrafiltrado para obter um segundo filtrado e o segundo filtrado é nanofiltrado usando uma membrana de nanofiltração para obter um primeiro retentato ou o segundo filtrado é eluído através de uma resina hidrofóbica para obter um segundo eluente dessalinizado.
10. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o concentrado é filtrado através de papel de filtro para obter um primeiro filtrado, o primeiro filtrado é nanofiltrado usando uma membrana de nanofiltração para obter um terceiro retentato ou o primeiro filtrado é eluído através de uma resina hidrofóbica para obter um segundo eluente dessalinizado, e o terceiro retentato ou o segundo eluente dessalinizado é ultrafiltrado para obter um terceiro filtrado.
11. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma dentre a remoção do solvente; e a descoloração/dessalinização é realizada sob uma atmosfera inerte.
12. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a composição compreende uma razão em massa do total de ácidos dicafeoilquínicos para o total de ácidos monocafeoilquínicos de cerca de 1:1 a cerca de 10:1.
13. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a composição compreende uma razão em massa de ácido cafeico e/ou seus sais para ácidos monocafeoilquínicos e/ou sais dos mesmos, de cerca de 0,01 a cerca de 1.
14. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que compreende ainda secar a composição de extrato de erva mate compreendendo pelo menos um dentre ácido cafeico, ácidos monocafeoilquínicos, ou ácidos dicafeoilquínicos e sais dos mesmos.
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