KR101074839B1

KR101074839B1 - 금은화 추출물을 포함하는 역류성 식도염 치료 또는 예방용 약학조성물

Info

Publication number: KR101074839B1
Application number: KR1020100117984A
Authority: KR
Inventors: 유영효; 김점용; 김선옥; 김주영; 박선규; 장민정
Original assignee: 주식회사 녹십자; 주식회사 지씨에이치앤피
Priority date: 2010-11-25
Filing date: 2010-11-25
Publication date: 2011-10-19
Anticipated expiration: 2030-11-25
Also published as: JP5793739B2; EP2643007B1; CN103327993A; WO2012070890A2; EP2643007A2; US20130310454A1; WO2012070890A3; JP2014507374A; EP2643007A4

Abstract

본 발명은 금은화(Lonicera japonica Thunberg) 유기용매 추출물을 함유하는 역류성 식도염의 치료 또는 예방용 추출물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 금은화 분획물은 부작용 없이 역류성 식도염의 치료, 예방 또는 개선에 매우 효과적으로 사용될 수 있다.

Description

금은화 추출물을 포함하는 역류성 식도염 치료 또는 예방용 약학조성물{Pharmaceutical composition comprising extract of Lonicera japonica for prevention and treatment of gastroesophageal reflux disease}

본 발명은 역류성 식도염 손상에 대한 치료효과를 가진 금은화 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 역류성 식도염 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 역류성 식도염에 우수한 치료효과를 가지면서 세포독성을 나타내지 않는 금은화 분획물 또는 3,5-디-O-카페오일퀸산(3,5-di-O-caffeoylquinic acid), 4,5-디-O-카페오일퀸산(4,5-di-O-caffeoylquinic acid)로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 역류성 식도염 치료 또는 예방 효과를 갖는 약학적 조성물, 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.

역류성 식도염은 위 내용물(주로 산과 펩신)이 식도로 역류하여 속쓰림과 상복부 통증 등 다양한 임상 증상과 점막의 변화를 가져오는 질환으로, 산에 노출되는 시간이 길수록 심한병변을 보이며 만성적인 경과를 밟는다. 전형적인 역류성 식도염에서는 식도의 과다한 산과 펩신의 노출이 주된 원인인 반면에 비미란성 역류 질환의 경우에는 산과 펩신에 대한 노출 정도는 정상범위이나 식도의 감각이 산과 펩신에 비정상적으로 과민해져 발생하는 것으로 알려져 있다.

역류성 식도염의 초기 치료제로서 과거에 산 분비 억제제인 히스타민 수용체 길항제 (H₂RA)가 사용되었으나, 심한 식도염 경우에는 치료 효과가 만족스럽지 못하고 재발의 빈도가 높아 강한 산 분비 억제 작용을 갖는 프로톤펌프 억제제(proton pump inhibitor: PPI)가 비용-효과면에서 우수성이 입증되어 널리 사용되고 있다.

그러나, 프로톤펌프 억제제를 사용하는 경우에도 재발률이 높으며, 장기 복용해야 하는 문제점이 있다. 실제로 8주 정도 복용하면 역류성 식도염은 치료되나, 약물 복용 중단 후 50~80% 환자가 1년 이내 재발한다고 보고되어 있다. 역류성 식도염 치료를 위해 프로톤펌프 억제제를 장기 복용할 경우에는 신경내분비 세포종양(neuroendocrine cell tumor)을 유발한다는 보고가 계속되고 있고, 2010년 미국 FDA에서는 PPI계 약물을 1년 이상 장기간 복용하거나 고용량으로 복용할 경우 골절 위험이 증가할 수 있다고 보고하였다. 따라서 역류성 식도염의 치료효과가 우수하고 장기 복용 시에도 인체에 안전한 역류성 식도염 치료제의 개발이 절실히 요구되고 있는 실정이다.

금은화(Lonicerae Flos)는 인동과(Caprifoliaceae)에 속하는 인동 덩굴(Lonicera japonica Thunb.)의 꽃으로, 한방이나 민간에서는 이뇨, 건위, 관절염, 화농성 피부염, 기관지염에 사용되고 있다. 금은화의 성분으로는 탄닌(tannin), 이노시톨(inositol), 스테롤(sterol), 클로젠산(chlorogenic acid), 이소클로젠산(isochlogenic acid) 등이 보고되어 있으며, 플라보노이드(flavonoid) 성분으로서는 루테올린(luteolin), 아피게닌(apigenin), 루테올린-7-O-람노글루코사이드(luteolin-7-O-rhamnoglucoside), 퀘세틴(quercetin) 등이 알려져 있다. 이러한 금은화의 플라보노이드(flavonoid) 성분은 항염증작용(Lee, S. J.; Arch. Pharm. Res. 16, 25, 1993) 및 항돌연변이 작용 등이 보고되었다.

금은화에 대한 연구로, 강옥희(금은화의 약리작용에 관한 연구)는 금은화의 메탄올 추출액이 수종의 그람 양성 및 그람 음성균에 항균작용이 있음을 보고하였고, Lee 등은 금은화의 부탄올 분획이 마우스 귀 부종 및 카라기닌(carrageenin) 유발 발바닥 부종실험에서 프레드니솔론(prednisolone)보다는 약하지만, 용량 의존적으로 발바닥 부종을 개선시킴을 보고하였다.(S. J. Lee,; Phytotherapy research. 12, 445-447, 1998) 또한, Tae 등은 Lonicera japonica flower의 물 추출물이 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide, LPS)로 유도된 랫트 간 패혈증(rat liver sepsis)에서 NFκB p65의 활성 억제와 IκBα의 분해(degradation)억제를 통하여 항염증효과를 나타냄을 보고하였다.(Tae, J, Han,; Clin Chim Acta. 330(1-2), 165-171, 2003)

최근 Ku 등은 금은화 물 추출물이 랫트의 역류성 식도염 모델에서 식도점막의 손상을 보호하는 효과를 확인하였고(Ku, S. K.; World J Gastroenterol. 15(38): 4799-4805, 2009), 본 발명자들은 대한민국 특허등록 제10-0878436호에서 "금은화 추출물을 포함하는 소화성 궤양 치료 또는 예방용 약학 조성물" 이라는 내용으로 금은화 추출물이 위염·위궤양에 치료효과가 있음을 확인하였다.

본 발명자들은 금은화 추출물에 대한 위염, 위궤양 치료제를 개발 하던 중 금은화의 특정 분획물이 역류성 식도염 질환에 효과가 우수함을 확인하였으며, Ku에 의해 선행 연구된 금은화 물 추출물보다 본 발명자들이 발명한 금은화 특정 분획물이 역류성 식도염의 치료 효과가 더 우수함을 확인하게 되었다. 이에 본 발명자들은 금은화 분획물 또는 이로부터 분리된 화합물이 역류성 식도염 치료에 아주 효과가 뛰어날 뿐만 아니라, 식도 점막의 염증 억제효과 및 항산화 효과를 통해 식도 점막세포의 보호 및 재생 작용을 발휘함을 알 수 있었다. 이러한 작용은 기존 치료제(프로톤펌트 억제제 및 히스타민 수용체 길항제)의 문제점인 재발률을 낮추고, 나아가 역류성 식도염에 대한 예방 효과를 나타내어, 이를 유효성분으로 함유하는 조성물을 역류성 식도염 치료 또는 예방을 위한 의약품 및 건강기능식품으로 사용될 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 금은화 추출물, 분획물 또는 하기 화학식 1 내지 2의 화합물을 유효성분으로 함유하는 역류성 식도염 치료 및 예방용 약학적 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 금은화 추출물, 분획물 또는 상기 화학식 1 내지 2의 화합물을 유효성분으로 함유하는 역류성 식도염 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 항산화 활성이 우수하고 급만성으로 유발된 역류성 식도염을 치료하는 금은화 분획물 또는 상기 화학식 1의 3,5-디-O-카페오일퀸산(이하, '3,5-di-CQA'라 칭함), 상기 화학식 2의 4,5-디-O-카페오일퀸산(이하, '4,5-di-CQA'라 칭함)로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 역류성 식도염 치료 및 예방용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 항산화 활성이 우수하고 급만성으로 유발된 역류성 식도염을 치료하는 금은화 분획물 또는 상기 화학식 1의 3,5-디-O-카페오일퀸산, 상기 화학식 2의 4,5-디-O-카페오일퀸산으로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 역류성 식도염 개선 및 예방용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

또한 본 발명에 따른 금은화 추출물, 분획물 또는 화학식 1 내지 2의 화합물을 단독으로 사용되거나, 현재 임상에서 역류성 식도염 치료제로 사용되고 있는 H2 수용체 길항제(H2RA, H2 receptor antagonist) 약물인 시메티딘, 라니티딘, 니자티딘, 파모티딘이나 프로톤펌프 억제제(PPI, proton-pump inhibitor) 약물인 오메프라졸, 판토프라졸, 란소프라졸, 레바프라잔 등과 병용 또는 적당한 조합으로 사용하여 보다 우수한 역류성 식도염 치료효과를 갖는 치료 및 예방용 약학적 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 자세히 설명한다.

본 발명에 따른 금은화 추출물은 금은화 또는 이의 건조물로부터 추출하여 얻을 수 있으며, 상기 금은화는 야생 및 사람이 재배한 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 본 발명에 따른 금은화 추출물은 초임계추출, 상온추출, 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법 등의 추출장치를 이용한 방법 또는 XAD 및 HP-20을 포함한 흡착수지를 이용하는 방법 등 당업계의 통상적인 추출방법을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 가용하며 환류 추출 또는 상온에서 추출하여 제조할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 추출 회수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 3회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매를 이용하여 추출될 수 있다. 상기 유기용매는 C1 내지 C4의 알코올, 에틸아세테이트, 염화메틸렌 및 클로로포름으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 또는 이들의 혼합 용매인 것이 바람직하고, C1 내지 C4의 알코올인 것이 더욱 바람직하고, 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 이들의 50~100% 알코올 수용액으로 추출하는 것이 가장 바람직하다.

일례로, 본 발명에 따른 금은화 추출물은 금은화 건조물을 적당한 크기로 분쇄하여 추출 용기에 넣고 추출 용매를 넣어 용매를 끓이며 환류 추출한 후, 일정시간 방치한 후 여과지 등으로 여과하여 알코올 추출물을 얻을 수 있다. 추출 시간은 2 내지 12시간인 것이 바람직하며, 3 내지 6시간인 것이 더욱 바람직하다. 이후에 농축 또는 동결건조 등의 방법을 추가할 수 있다.

본 발명에 따른 금은화 추출물 또는 분획물은 상기 금은화 추출물을 헥산, 에틸아세테이트 및 부탄올을 사용하여 독립적으로 또는 순차적으로 계통 분획을 수행하여 얻을 수 있다. 나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 3,5-디-O-카페오일퀸산, 화학식 2로 표시되는 4,5-디-O-카페오일퀸산으로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 역류성 식도염 치료 또는 예방용 약학적 조성물을 제공한다.

상기 화학식 1 내지 2의 화합물은 금은화에 물 또는 유기용매 또는 이들의 혼합물을 가하여 금은화 추출물을 수득하는 단계(단계 1):

상기 단계 1에서 수득한 금은화 추출물을 물에 현탁시킨 다음 에틸아세테이트 또는 부탄올로 분획하여 분획물을 얻는 단계(단계 2):

상기 단계 2에서 수득한 분획물에 대해 실리카겔 크로마토그래피를 수행하여 화학식 1 내지 2의 화합물을 분리하고 정제하는 단계(단계 3);

를 포함하여 이루어지는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

이하 본 발명에 따른 상기 제조방법을 단계별로 더욱 구체적으로 설명한다. 먼저, 본 발명에 따른 상기 단계 1은 추출용매로 금은화 추출물을 수득하는 단계이다. 건조된 금은화를 적당한 크기로 분쇄하여 추출용기에 넣는다. 추출용매는 C1 내지 C4의 알코올, 50~100% C1 내지 C4의 알코올 수용액, 에틸아세테이트, 염화메틸렌, 클로로포름 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있고, 이들 중에서 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 이들의 50~100% 알코올 수용액을 사용하는 것이 바람직하다. 이를 60℃에서 초음파로 6시간동안 추출한 후 여과지 등으로 여과하여 본 발명에 따른 금은화 추출물을 수득할 수 있다.

다음으로, 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 얻은 금은화 추출물을 극성을 달리하는 용매로 분획하여 분획물을 얻는 단계이다. 상기 용매로는 에틸아세테이트 또는 부탄올을 사용할 수 있다.

다음으로, 상기 단계 3은 상기 단계 2에서 얻은 분획물에 대해 실리카겔 크로마토그래피를 수행하여 화학식 1 내지 화학식 2의 화합물을 분리하고 정제하는 단계이다. 상기 실리카겔 크로마토그래피는 크기배제 크로마토그래피용 컬럼을 사용하여 수행할 수 있으며, 바람직하게는 HP-20을 충진한 컬럼을 사용할 수 있다. 상기 단계 2에서 수득한 분획물에 대하여 에탄올을 이동상으로 하여 HP-20 컬럼을 이용한 실리카겔 크로마토그래피를 수행한다. 이때 수득한 분획물에 대하여 고속액체크로마토그래피를 수행하여 화학식 1 내지 화학식 2의 화합물을 분리할 수 있다. 상기 고속액체크로마토그래피는 0 내지 5부피%, 5 내지 10부피% 아세토니트릴로 농도 구배된 물과 아세토니트릴의 혼합용매를 전개용매로 사용하여 수행할 수 있다. 이때, 상기 이동상의 유속은 2-15 mL/분이다.

본 발명에 따른 상기 금은화 분획물 또는 상기 화학식 1 내지 2의 화합물은 역류성 식도염의 치료 또는 예방용으로 사용될 수 있다. 이들의 역류성 식도염 치료 또는 예방 효과는 구체적인 실험결과들을 근거로 설명한다.

본 발명에 따른 금은화 분획물 또는 화학식 1 내지 2의 화합물에 대하여 급·만성 역류성 식도염의 치료효과를 확인하기 위해 문헌(Nakamura K et al; Jpn. J. Pharmacol., 32(3), 445-456, 1982 : Okabe S, et al; Jpn. J. Pharmacol., 69(4), 317-323, 1995)에 기재된 역류성 식도염에 대한 치료효과 측정방법을 응용하여 본 실험에 사용하였다.

본 발명에 따른 금은화 분획물 또는 화학식 1 내지 2의 화합물을 유효성분으로 함유하는 역류성 식도염 치료 또는 예방용 약학적 조성물은 하기의 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.

경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캡슐제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제 등이 있는데, 이들 제형은 상기 유효성분 이외에 통상적으로 사용되는 충진제, 증량제, 습윤제, 붕해제, 활택제, 결합제, 계면 활성제 등의 희석제 또는 부형제를 1종 이상 사용할 수 있다. 붕해제로는 한천, 전분, 알긴산 또는 이의 나트륨염, 무수인산일수소 칼슘염 등이 사용될 수 있고, 활택제로는 실리카, 탈크, 스테아르산 또는 이의 마그네슘염 또는 칼슘염, 폴리에틸렌 글리콜 등이 사용될 수 있으며, 결합제로는 마그네슘, 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로오스, 나트륨카복시메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리딘, 저치환도 하이드록시프로필셀룰로오스, 글리신 등을 희석제로 사용할 수 있으며, 경우에 따라서는 일반적으로 알려진 비등 혼합물, 흡수제, 착색제, 향미제, 감미제 등을 함께 사용할 수 있다.

또한 금은화 추출물, 분획물 또는 화학식 1 내지 2의 화합물을 유효성분으로 함유하는 역류성 식도염 치료 또는 예방용 약학적 조성물은 비경구 투여 할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사제, 정맥주사제, 근육 내 주사제 또는 흉부 내 주사제를 주입하는 방법에 의한다. 이때 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 금은화 추출물, 분획물 또는 화학식 1 내지 2의 화합물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여형으로 제조할 수 있다.

상기 조성물은 멸균되거나 또는 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염, 완충제 등의 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화 할 수 있다.

본 발명의 금은화 분획물 또는 화학식 1 내지 2의 화합물을 유효성분으로 함유하는 역류성 식도염 치료 또는 예방용 약학적 조성물을 단위 용량 형태로 제형화하는 경우, 유효성분으로서 이들 금은화 분획물 또는 화학식 1 내지 2의 화합물을 약 0.1~1500 ㎎의 단위용량으로 함유되는 것이 바람직하다. 투여량은 환자의 체중, 나이 및 질병의 특수한 성질과 심각성과 같은 요인에 따라 의사의 처방에 따른다. 그러나, 성인 치료에 필요한 경구 또는 비경구 투여량은 투여의 빈도와 강도에 따라 하루에 약 0.1~1000 ㎎ 범위가 보통이다. 성인에게 근육 내 또는 정맥 내 투여 시 일회 투여량으로 분리하여 하루에 보통 0.1~300 ㎎의 전체 투여량이면 충분할 것이나, 일부 환자의 경우 더 높은 일일 투여량이 바람직할 수 있다.

본 발명에 따른 금은화 추출물, 분획물 또는 화학식 1 내지 2의 화합물을 역류성 식도염 치료 또는 예방용 목적으로 식품, 음료 등의 건강보조 또는 건강기능성 식품에 첨가할 수 있다. 이 경우, 금은화 분획물 또는 화학식 1 내지 2의 화합물을 식품 첨가물로 사용 시에 원료에 대하여 0.01~30중량%, 바람직하게는 0.1~10중량%의 양으로 첨가할 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에 상기 양은 상기 범위 이하 일 수 있으며, 안정성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용 될 수 있다. 상기 분획물 또는 화학식 1 내지 2의 화합물을 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한이 없다. 상기 분획물 또는 화학식 1 내지 2의 화합물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초컬릿, 캔디류, 스넥류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함하는 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 혼합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 식품 보존 첨가제는 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스, 수크로오스 등과 같은 디사카리이드 및 덱스트린, 시클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 솔비톨, 에르트리톨 등의 당알코올이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명에 따른 조성물 100중량부당 일반적으로 약 0.01~0.04중량부, 바람직하게는 0.02~0.03중량부이다.

상기 외에 본 발명에 따른 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 중점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있으며, 첨가제의 비율은 크게 중요하지 않지만 본 발명에 따른 조성물 100중량부당 0.01~0.1중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명에 따른 금은화 분획물 또는 상기 화학식 1의 3,5-디-O-카페오일퀸산, 상기 화학식 2의 4,5-디-O-카페오일퀸산으로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 역류성 식도염 질환에 대하여 기존의 치료제보다 부작용 없이 동등 이상의 효과를 나타내며, 식도 점막의 염증 억제효과와 함께 식도점막세포 보호 작용을 나타내어 식도염의 재발률을 낮춰 역류성 식도염 질환에 대한 우수한 치료 효과를 나타낸다.

본 발명에 따른 추출물 또는 화학식 1 내지 2의 화합물은 역류성 식도염 치료 및 예방에 유용하게 사용될 수 있다.

또한 본 발명에 따른 금은화 추출물 또는 화학식 1 내지 2의 화합물을 단독으로 사용되거나, 현재 임상에서 역류성 식도염 치료제로 사용되고 있는 H2 수용체 길항제(H2RA, H2 receptor antagonist) 약물인 시메티딘, 라니티딘, 니자티딘, 파모티딘이나 프로톤펌프 억제제(PPI, proton-pump inhibitor) 약물인 오메프라졸, 판토프라졸, 란소프라졸, 레바프라잔 등과 병용 또는 적당한 조합으로 사용하여 보다 우수한 역류성 식도염 치료효과를 갖는다.

<실험예 1: 금은화 추출물의 역류성 식도염에 대한 약효 시험>

본 발명에 따른 금은화 추출물, 분획물 또는 화학식 1 내지 2 화합물에 대한 랫트의 역류성 식도염 질환모델에서의 치료효과에 관한 방법으로는 7주령 스프라그 도울리(Spraugue-Dawley: SD)계 수컷 흰쥐를 24시간 동안 절식시키고, 물은 충분한 양을 공급하였다. 체중을 측정한 다음 대조약물인 오메프라졸(Sigma-Aldrich)과 시험약물인 금은화 추출물과 분획물은 0.5% CMC(carboxymethyl celluse) 용액에 현탁하여 역류를 유도하기 1시간 전에 경구 투여하였다. 역류를 유도하기 위해 복부를 개복하여 위와 십이지장의 경계가 되는 유문부를 결찰하고 식도와 위의 경계를 이루는 위-식도 괄약근에 세로로 1 ㎝의 상처를 주어 괄약근의 이완이 비정상적으로 일어나게 하여 위산을 역류시키게 하였다. 또한 전위(forestomach)와 선위(glandular portion)사이인 이행부위(transition zone)를 실로 결찰한 후 복부를 면사로 봉합하였다. 수술 종료 후 6시간 후에 흡입 마취하여 식도를 적출하여 식도병변의 크기와 식도염의 정도를 관찰하였다. 표 1은 대조군 대비 본 발명 시험물질 투여군의 식도병변 억제율(%)을 표시하였으며, 도 1은 식도 점막에서의 본 발명 시험물질의 효과를 나타낸 사진이다.

표 1에서 알 수 있는 바와 같이 5개의 분획 중 금은화 에틸아세테이트 분획물은 대조군에 비해 85% 식도 손상을 억제하였으며, 3,5-디-O-카페오일퀸산 또는 4,5-디-O-카페오일퀸산과 유사한 억제효과를 발휘하였다. 이러한 효과는 선행문헌의 금은화 물 추출물을 경구투여 한 것 보다 현저하게 우수한 효과임을 확인할 수 있었고, 양성대조군인 오메프라졸과 동등 우위의 우수한 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

구 분	투여용량 (㎎/㎏)	대조군 대비 식도병변 억제율 (%)
대조군	-	-
비교예 1 (물 추출물)	50 ㎎/㎏	30
실시예 1 (70% 에탄올 추출물)	50 ㎎/㎏	70
실시예 2 (에탄올 추출물)	50 ㎎/㎏	70
실시예 3 (메탄올 추출물)	50 ㎎/㎏	68
실시예 4 (에틸아세테이트 분획물)	50 ㎎/㎏	85
실시예 5 (부탄올 분획물)	50 ㎎/㎏	75
3,5-di-CQA	10 ㎎/㎏	90
4,5-di-CQA	10 ㎎/㎏	81
오메프라졸	10 ㎎/㎏	83

<실험예 2: 랫트의 역류성 식도염 모델 내 식도조직에서의 과산화지질 측정>

본 발명에 따른 금은화 추출물, 분획물 또는 이로부터 분리된 3,5-디-O-카페오일퀸산 및 4,5-디-O-카페오일퀸산 화합물에 대한 지질과산화 억제정도를 알아보고자 하였다. 실험예 1에서 적출한 식도 점막을 취한 후 트리스-염산 버퍼용액(pH 7.0) 1 ㎖에 넣고 초음파 분쇄한다. 600×ｇ, 4 ℃에서 5분간 원심분리한 후 상등액 0.3 ㎖에 삼염화아세트산(trichloroacetic acid, 8%) 0.9 ㎖를 가한다. 그리고 나서 10,000×ｇ, 4 ℃에서 5분간 원심분리한 후 상등액 1 ㎖에 티오바비트린산(TBA 1%) 0.25 ㎖를 가한 후, n-부탄올 2 ㎖을 가하고 3,000×ｇ, 4 ℃에서 5분간 원심분리한 후 부탄올 분액층 1 ㎖를 가지고 532 ㎚에서 흡광도를 측정한다. 표준물질은 말론알데히드 비스-디메틸 아세탈을 사용한다. 결과는 n㏖/㎎ protein으로 표시하였고 단백질 정량 분석은 브래드포드법으로 하였다. 실험결과, 도 2는 랫트의 역류성 식도염 모델에서 식도조직의 지질과산화 정도를 말론디알데히드 값으로 나타낸 것으로서, 페놀성 성분을 함유한 금은화 추출물 중 실시예 4의 에틸아세테이트 분획물을 처리한 그룹에서의 과산화지질 억제율은 46.2%로 효과가 우수하였고, 3,5-디-O-카페오일퀸산과 4,5-디-O-카페오일퀸산의 과산화지질 억제율은 각각 49.1%, 50.2%로 나타났으며, 오메프라졸(omeprazole)을 처리한 그룹에서는 53.9%의 과산화지질 억제율을 나타내었다.

<실험예 3 : 식도 조직 내에서의 종양궤사인자-알파(TNF-alpha) 수준 분석을 통한 항염증 효과>

랫트의 역류성 식도염 질환모델에서 치료 효과를 확인한 금은화 추출물, 분획물 또는 이로부터 분리된 3,5-디-O-카페오일퀸산 및 4,5-디-O-카페오일퀸산 화합물에 대해 식도조직 내에서의 항염증 효과를 측정하기 위하여 염증성 질환의 메커니즘상 중요한 역할을 하는 종양궤사인자-알파(TNF-α)의 수준을 랫트 식도 조직 내에서 측정하였다(Nippon Rinsho, 68(5), 819-822, 2010). 이를 측정하기 위한 키크는 이바이오사이언스(eBioscience)사의 랫트 종양궤사인자-알파 ELISA 키트(Cat No:88-7340)를 사용하였다. <실험예 1>에서 얻은 모든 시험군의 식도 조직을 각각 10배수의 분쇄 완충액(homogenizing buffer, pH 7.4 : 1.15% KCl, 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA)를 넣어 준 후 분쇄기(homogenizer)로 파쇄시켰다. 그 다음 3,000 rpm 이상에서 10분간 원심 분리하여 균질화 조직액(상층액)을 분리한 후 초저온 냉동고(deep freezer)에 보관하면서 실험에 사용하였다. 모든 항원항체 반응이 끝난 후 ELISA 리더(ELISA reader, BIORAD)기로 450 ㎚에서 흡광도를 측정하였으며, 흡광도의 표준곡선을 이용하여 식도 조직에서의 종양궤사인자-알파(TNF-α) 양을 표시하였다. 시험물질의 염증 억제율 (%)은 아래와 같이 산출하였으며,

랫트의 역류성 식도염 유발 모델에서 금은화 추출물의 항염증 효과는 표 2에 나타내었다.

구 분	용량 (㎎/㎏)	TNF-alpha (pg/㎎ Tissue weight)	염증 억제율 (%)
정상군	-	120.3	-
대조군	-	325.2	-
비교예 1 (물 추출물)	50	270.3	26.8
실시예 1 (70% 에탄올 추출물)	50	220.3	51.2
실시예 4 (에틸아세테이트 분획물)	50	132.5	94.0
실시예 5 (부탄올 분획물)	50	178.3	71.7
3,5-di-CQA	10	145.3	87.8
4,5-di-CQA	10	150.1	85.5
omeprazole	10	160.2	80.5

표 2에 나타낸 바와 같이, 대조군 대비 금은화 추출물을 처리한 모든 그룹에서 종양궤사인자-알파(TNF-alpha) 수준이 감소되었다. 그중 에틸아세테이트 분획물(실시예 4)의 염증억제율이 94.0%로 가장 높은 항염증 효과를 나타내었으며, 이는 오메프라졸(omeprazole) 단독 처리군 (80.5%)에 비해 우수하였다. 3,5-디-O-카페오일퀸산 및 4,5-디-O-카페오일퀸산의 염증 억제율은 각각 87.8%, 85.5%로 우수하게 나타났다.

<실험예 4: 금은화 분획물의 식도 점막 보호 효과>

랫트의 역류성 식도염 질환모델에서 치료 효과를 확인한 금은화 추출물, 분획물 또는 이로부터 분리된 3,5-디-O-카페오일퀸산 및 4,5-디-O-카페오일퀸산 화합물에 대해 식도조직에서의 식도점막 구성성분인 헥소사민(hexosamine)량과 시알산(sialic acid)량을 측정하였다.

1. 식도조직에서 헥소사민(hexosamine)량의 측정

<실험예 1>에서 얻은 모든 시험군의 식도 조직을 에탄올에 담근 다음 아세톤에 2일, 에테르에 1일간 방치하여 탈지하고 건조하였다. 이 표본의 무게를 단 후 4N HCl 용액 5 ㎖를 가하여 100 ℃에서 9시간 동안 가열하여 가수분해 시킨 후 상온에서 냉각 후 여과하였다. 여액 0.5 ㎖에 4N NaOH 용액 0.5 ㎖를 가하여 중화시키고, 아세틸아세톤(acetylacetone) 용액 1 ㎖을 가하여 진탕한 후 100 ℃에서 20 분간 가열하고 냉각한 후 이소아밀알코올(isoamylalcohol) 5 ㎖ 가하여 2분간 진탕한 다음 3,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액 2 ㎖를 취하였다. 발색용액 0.5 ㎖를 가하여 15분간 방치한 다음 530 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 글루코사민(glucosamine)을 사용하여 작성한 검량선으로부터 헥소사민(hexosamine)의 함량을 환산하였다.

2. 식도조직에서 시알산(sialic acid)량의 측정

<실험예 1>에서 얻은 모든 시험군의 식도 조직을 에탄올에 담근 다음 아세톤에 2일, 에테르에 1일간 방치하여 탈지하고 건조하였다. 이 표본의 무게를 단 후 0.1N H₂SO₄ 용액 5 ㎖를 가하여 80 ℃에서 1시간 동안 가열하여 가수분해 시킨 후 상온에서 냉각한 후 여과하였다. 여액 0.2 ㎖에 0.2M 과아이오딘산염(periodate) 용액 0.1 ㎖를 가하여 혼화하고 상온에서 20분간 방치한 후 10% 아비산염(arsenite) 용액 1 ㎖를 가하여 황갈색이 소실될 때까지 혼화한 후 0.6% TBA 용액 3 ㎖를 가하여 혼화한 후 뚜껑을 막고 100 ℃에서 15분간 가열하고 냉각한 후 5분간 냉탕에서 방치한 다음 3,000 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상등액을 취하여 549 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. N-아세틸뉴라민산((N-acetylneuraminic acid)을 사용하여 작성한 검량선으로부터 시알산(sialic acid)의 함량을 환산하였다.

본 시험의 결과는 표 3과 같다. 역류성 식도염 유발군은 정상군에 비해 헥소사민(hexosamine) 함량 및 시알산(sialic acid) 함량이 감소하였으며, 금은화 추출물, 분획물, 3,5-di-CQA 및 4,5-di-CQA의 투여시에는 대조군에 비해 헥소사민(hexosamine) 함량 및 시알산(sialic acid) 함량은 유의성 있는 증가를 보였다. 이러한 결과는 역류성 식도염에 의해 감소된 식도점막의 구성성분이 금은화 추출물, 분획물, 3,5-di-CQA 및 4,5-di-CQA에 의해 치유과정을 거치면서 식도조직이 정상화됨을 의미한다. 역류성 식도염을 일으킨 랫트에서 헥소사민(hexosamine)량이 감소되었고, 역류성 식도염의 치유와 점막내 헥소사민(hexosamine)과의 상관관계를 고려하였을 때 식도조직에서 헥소사민(hexosamine) 함량의 변화가 역류성 식도염의 정도와 비례하였다. 본 결과는 금은화 추출물 또는 분획물이 임상적으로 손상된 식도점막을 신속하게 정상화 시키고 위산에 대해 방어할 수 있는 조건으로 식도조직을 만들어 줌으로서 역류성 식도염의 재발률을 낮출 수 있음을 의미한다.

그룹	투여용량 (㎎/㎏)	단위: ㎍/100㎎ dry tissue
그룹	투여용량 (㎎/㎏)	Sialic acid	Hexosamine
정상군	-	125.2	1101.3
대조군	-	95.2	925.3
비교예 1 (물 추출물)	50	123.3	1130.5
실시예 1 (70% 에탄올 추출물)	50	138.0	1220.5
실시예 4 (에틸아세테이트 분획물)	50	163.3	1512.5
실시예 5 (부탄올 분획물)	50	147.8	1278.3
3,5-di-CQA	10	155.3	1445.2
4,5-di-CQA	10	148.1	1380.2
omeprazole	10	132.2	1176.3

< 실험예 5: 금은화 분획물의 HPLC 분석>

본 발명의 금은화 추출물, 그의 분획물 또는 화학식 1 내지 2 화합물의 HPLC 분석조건은 아래 표 4와 같다.

Instrument	Shiseido Nonospace SI-2
Column	Capcell Pak C18 UG80 4.6×150㎜ (5μm)
UV wavelength	254㎚
Flow rate	1.00 mL/mim
Injection volume	5μL
Temperature	40℃
Mobile phase	A) 5% Acetonitrile B) 80% Acetonitrile
Gradient program	Min	A (%)	B (%)
	0	100	0
	10	95	5
	20	80	20
	25	75	25
	35	50	50
	40	100	0
	50	100	0

본 발명의 금은화 추출물과 이의 분획물에 대한 3,5-디-O-카페오일퀸산 및 4,5-디-O-카페오일퀸산 함량은 아래 표 5와 같다.

분 류	3,5-di-CQA 함량(중량%)	4,5-di-CQA 함량(중량%)
비교예 1 (물 추출물)	0.8	0.08
실시예 1 (70% 에탄올 추출물)	2.1	1.0
실시예 2 (에탄올 추출물)	2.4	1.1
실시예 3 (메탄올 추출물)	2.2	1.2
실시예 4 (에틸아세테이트 분획물)	13.0	2.5
실시예 5 (부탄올 분획물)	6.7	1.1

본 발명의 금은화 추출물 및 이의 분획물에 대한 HPLC 분석결과, 70% 에탄올 추출물, 에탄올 추출물, 메탄올 추출물, 부탄올 분획물 및 에틸아세테이트 분획물은 3,5-디-O-카페오일퀸산을 2중량% 이상 함유하고 있었으며, 4,5-디-O-카페오일퀸산을 1중량% 이상 함유하고 있었다. 역류성 식도염을 유발한 랫트에서 이들 금은화 분획물은 대조군에 비해 식도병변이 60% 이상 억제율을 나타내었다. 화합물 1 또는 2와 동등한 식도염 억제 효과를 보인 에틸아세테이트 분획물은 3,5-디-O-카페오일퀸산을 10중량% 이상, 4,5-디-O-카페오일퀸산을 2중량% 이상 함유하고 있으며, 화학식 1 또는 2를 분리 정제하는 것보다 에틸아세테이트 분획물이 역류성 식도염을 치료하는데 비용이나 효과면에서 더 우수함을 알 수 있다.

<실험예 6: 금은화 분획물의 급성경구투여 독성시험>

6주령의 특정병원부재(SPF) SD계 암수 랫트를 사용하여 실시예 1의 금은화 추출물과 실시예 4, 5의 분획물 및 실시예 6에 의해 제조된 3,5-디-O-카페오일퀸산, 4,5-디-O-카페오일퀸산 화합물에 대한 급성독성시험을 실시하였다. 시험군당 암수 각각 5마리씩의 랫트에 대하여 상기 실시예의 시험물질을 1.0 g/㎏ 및 2.0 g/㎏의 투여용량으로 단 회 경구투여 하였다. 시험물질은 0.5% CMC(carboxymethyl celluse) 용액에 현탁하여 투여하였다. 시험물질 투여 시 동물의 폐사여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 7일 후 부검하여 혈액학적 검사와 혈액 생화학적 검사를 실시하였으며, 육안으로 복강 장기와 흉강 장기의 이상여부를 관찰하였다. 그 결과 시험물질을 투여한 모든 동물에서 특이할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학적 검사, 부검소견 등에서도 이상변화는 관찰되지 않았다. 이상의 결과, 본 발명의 금은화 추출물, 분획물 또는 이로부터 분리된 화합물 1 또는 화합물 2는 랫트에서 2.0 g/㎏까지 독성 변화를 나타내지 않는 안전한 물질로 확인되었다.

이로부터, 본 발명의 금은화 추출물, 분획물 또는 화학식 1 내지 2의 화합물은 역류성 식도염 치료에 효과가 뛰어나고 식도 점막에서의 항산화 효과 및 항염증 효과가 우수한 것으로 확인되었다. 또한 식도 점막 재생 및 보호 작용이 뛰어나므로, 역류성 식도염 치료 또는 예방을 위한 의약품 및 건강기능식품에 안전한 물질로 유용하게 이용될 수 있다.

도 1은 랫트의 급성 역류성 식도염 모델에서 대조군, 금은화 물 추출물, 70% 에탄올 추출물, 부탄올 분획물, 에틸아세테이트 분획물을 각각 50 ㎎/㎏ 용량으로 경구투여 하였으며, 3,5-디-O-카페오일퀸산, 4,5-디-O-카페오일퀸산 및 오메프라졸(omeprazole)은 각각 10 ㎎/㎏ 용량으로 경구 투여한 후 랫트의 식도 점막에서의 식도병변을 나타낸 사진이다.
도 2는 랫트의 역류성 식도염 모델에서 대조군, 금은화 물 추출물, 70% 에탄올 추출물(실시예 1), 에틸아세테이트 분획물(실시예 4), 부탄올 분획물(실시예 5), 3,5-디-O-카페오일퀸산, 4,5-디-O-카페오일퀸산 및 오메프라졸(omeprazole)에 대한 식도조직에서의 지질과산화 정도를 말론디알데히드 값으로 나타낸 것이다.

이하, 본 발명을 실시 예를 통하여 상세히 설명한다. 단, 하기의 실시 예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기의 실시 예에 의해 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 금은화 70% 에탄올 수용액 추출물의 제조

본 발명에 사용된 금은화는 꽃이 피전 전 꽃봉오리 건조물로서, 분쇄하여 얻은 분말을 적당한 크기로 세절하여 추출용기에 1 ㎏을 넣고 70% 에탄올 수용액 용매 10 L를 가하여 60 ℃에서 6시간 동안 교반하면서 추출하였고, 여과지로 여과하여 추출물을 얻었다. 추출과정을 3회 반복하였고, 이후 용매를 감압 농축 및 건조하여 300 g의 70% 에탄올 수용액 추출물을 얻었다.

<실시예 2~3> 금은화 알코올 추출물의 제조

상기 실시예 1과 같이 실시하되, 실시예 1의 70% 에탄올 수용액 추출용매 대신에 에탄올 및 메탄올을 각각 사용하여 320 g의 에탄올 추출물과 340 g의 메탄올 추출물을 각각 얻었다.

<실시예 4> 금은화 추출물의 에틸아세테이트 분획물 제조

상기 실시예 1의 70% 에탄올 수용액 추출물에 물 3L를 가하여 현탁시킨 다음 에틸아세테이트 3 L를 가하여 3회 반복 추출한 후 여과지를 사용하여 감압여과 한 후 얻은 에틸아세테이트 추출물의 용매를 제거 한 후 잔사로서 에틸아세테이트 분획물 30 g을 얻었다.

<실시예 5> 금은화 추출물의 부탄올 분획물 제조

상기 실시예 1의 70% 에탄올 수용액 추출물에 물 3 L를 가하여 현탁시킨 다음 부탄올 3 L를 가하여 3회 반복 추출한 후 여과지를 사용하여 감압여과 한 후 얻은 부탄올 추출물의 용매를 제거 한 후 잔사로서 부탄올 분획물 75 g을 얻었다.

<실시예 6> 금은화 분획물로부터 페놀성 화합물의 제조

(실시예 6-1) 3,5-디-O-카페오일퀸산의 제조

상기 실시예 4에서 수득한 에틸아세테이트 분획물에 100% 에탄올을 이동상으로 하여 HP-20 컬럼을 이용한 크로마토그래피를 수행하여 분획물(subfraction) 1 내지 4를 수득하였다. 상기 분획물 중 분획물 3을 에탄올에 녹인 후, 고속액체크로마토그래피를 수행하여 3,5-디-O-카페오일퀸산을 얻었다. 이때 이동상으로 물과 아세토니트릴을 혼합용매를 사용하였고, 50분 동안 0부피%에서 20부피% 아세토니트릴로 순차적으로 극성을 주어 농도구배 하였고, 유속은 10 mL/분, Capcell pak UG120 (6.0×50㎜, 5㎛) 컬럼을 사용하였다.

3,5-디-O-카페오일퀸산 화합물: ¹H-NMR (CD₃OD) δ 2.11-2.34(4H, m, H-2,6), 3.95 (1H, dd, J=3.0, 7.8Hz, H-4), 5.37-5.44 (2H, m, H-3,5), 6.26, 6.36 (1H each, J=15.9Hz, H-8', 8"), 6.77 (2H, d, J=7.8Hz, H-5',5"), 6.96 (2H, dd, J=2.1, 8.1Hz, H-6', 6"), 7.05, 7.06 (1H each, d, J=2.1Hz, H-2', 2"), 7.57, 7.61 (1H each, d, J=15.9Hz, H-7', 7")

¹³C-NMR (125MHz, CD₃OD) δ 36.3 (C-2), 38.2 (C-6), 71.1 (C-4), 72.0 (C-5), 72.9 (C-3), 75.2 (C-1), 115.1, 115. 2 (C2', 2"), 115.3, 115.5 (C-8', 8"), 116.5 (C-5', 5"), 123.0, 123.1 (C-6', 6"), 127.7, 127.8 (C-1', 1"), 146.6 (C-3', 3"), 147.0, 147.2 (C-7', 7"), 149.3, 149.4 (C-4', 4"), 168.5, 168.9 (C-9', 9"), 178.1 (COOH)

(실시예 6-2) 4,5-디-O-카페오일퀸산의 제조

상기 실시예 4에서 수득한 에틸아세테이트 분획물에 100% 에탄올을 이동상으로 하여 HP-20 컬럼을 이용한 크로마토그래피를 수행하여 분획물(subfraction) 1 내지 4를 수득하였다. 상기 분획물 중 분획물 3을 에탄올에 녹인 후, 고속액체크로마토그래피를 수행하여 4,5-디-O-카페오일퀸산을 얻었다. 이때 이동상으로 물과 아세토니트릴을 혼합용매를 사용하였고, 50분 동안 0 부피%에서 20 부피% 아세토니트릴로 순차적으로 극성을 주어 농도구배 하였고, 유속은 10mL/분, Capcell pak UG120 (6.0×150㎜, 5㎛) 컬럼을 사용하였다.

4,5-디-O-카페오일퀸산 화합물: ¹H-NMR (500MHz, CD₃OD) δ 1.98-2.30 (4H, m, H-2, 6), 4.33 (1H, br s, H-3), 5.10 (1H, dd, J=2.6, 9.5Hz, H-4), 5.65 (1H, m, H-5), 6.19, 6.27 (1H each, d, J=15.9Hz, H-8', 8"), 6.72, 6.73 (1H each, d, J=8.1Hz, H-5', 5"), 6.88, 6.90 (1H each, dd, J=1.8, 8.1Hz, H-6', 6"), 6.99, 7.01 (1H each, d, J=1.8Hz, H-2', 2"), 7.50, 7.58 (1H each, d, J=15.9Hz, H-7', 7")

¹³C-NMR (125MHz, CD₃OD) δ 76.1 (C-1), 38.3 (C-2), 69.8 (C-3), 75.8 (C-4), 69.0 (C-5), 39.8 (C-6), 127.3, 127.4 (C-1', 1"), 146.5 (C-3', 3"), 149. 4 (C-4'. 4"), 116.1 (C-5', 5"), 122.9 (C-6', 6"), 147.2, 147.3 (C-7', 7"), 114.4 (C-8', 8"), 168.1, 168.3 (C-9', 9")

<실시예 7> 약학적 제제의 제조

(실시예 7-1) 금은화 에틸아세테이트 분획물의 산제 제조

금은화 에틸아세테이트 분획물 20 ㎎

유당 100 ㎎

탈크 10 ㎎

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

(실시예 7-2) 정제의 제조

금은화 에틸아세테이트 분획물 10 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

(실시예 7-3) 캅셀제의 제조

금은화 에틸아세테이트 분획물 10 ㎎

결정성 셀룰로오스 30 ㎎

락토오스 14.8 ㎎

마그네슘 스테아레이트 0.2 ㎎

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

(실시예 7-4) 주사제의 제조

금은화 에틸아세테이트 분획물 10 ㎎

만니톨 180 ㎎

주사용 멸균 증류수 2974 ㎎

Na₂HPO₄,12H₂O 26 ㎎

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

(실시예 7-5) 액제의 제조예

금은화 에틸아세테이트 분획물 20 ㎎

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음, 상기의 성분을 혼합한 후 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

<실시예 8> 건강기능식품의 제조

(실시예 8-1) 음료의 제조

꿀 522 ㎎

치옥토산아미드 5 ㎎

니코틴아미드 10 ㎎

염산리보플라빈나트륨 3 ㎎

염산피리독신 3 ㎎

이노시톨 30 ㎎

오르트산 50 ㎎

금은화 에틸아세테이트 분획물 100 ㎎

정제수 200 mL

상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 음료를 제조하였다.

(실시예 8-2) 비타민 혼합제

금은화 초산 에틸 분획물 100 ㎎

페놀산 화합물 100 ㎎

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B1 0.13 ㎎

비타민 B2 0.15 ㎎

비타민 B6 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물은 비교적 건강식품에 적합한 성분으로 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하며, 통상의 건강식품 제조 방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

Claims

금은화(Lonicerae Flos)의 C1~C4 알코올 또는 50~100% C1~C4 알코올 수용액 추출물로서, 하기 화학식 1의 3,5-디-O-카페오일퀸산을 2중량% 이상, 및, 하기 화학식 2의 4,5-디-O-카페오일퀸산을 1중량% 이상 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 역류성 식도염 치료 또는 예방용 약학 조성물.
삭제
삭제
제 1 항에 있어서,
상기 약학 조성물은 역류성 식도염 치료제인 시메티딘, 라니티딘, 니자티딘, 파모티딘, 오메프라졸, 판토프라졸, 란소프라졸, 레바프라잔 중에서 선택된 1종 이상 약물을 추가로 함유된 것을 특징으로 하는 역류성 식도염 치료 또는 예방용 약학 조성물.
금은화(Lonicerae Flos)의 C1 내지 C4 알코올 또는 50~100% C1 내지 C4 알코올 수용액 추출물로서, 하기 화학식 1의 3,5-디-O-카페오일퀸산을 2중량% 이상, 및, 하기 화학식 2의 4,5-디-O-카페오일퀸산을 1중량% 이상 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 역류성 식도염 개선 또는 예방용 건강기능식품 조성물.
삭제