KR100878436B1 - 금은화 추출물을 포함하는 소화성 궤양 치료 또는 예방용 약학조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 금은화(Lonicera japonica Thunberg) 추출물을 함유하는 위염 및 위궤양의 치료 또는 예방용 추출물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 금은화 추출물은 부작용 없이 위염 및 위궤양의 치료, 예방 또는 개선에 매우 효과적으로 사용될 수 있다.

Description

금은화 추출물을 포함하는 소화성 궤양 치료 또는 예방용 약학조성물{Pharmaceutical composition comprising extract of Lonicera japonica for prevention and treatment of digestive ulcer}

본 발명은 급만성 위염 및 위 손상에 대한 치료효과와 과다한 위산을 제거하는 효과를 가진 금은화 추출물을 활성성분으로 함유하는 약학 조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다.

위염과 위궤양은 소화기 질환 중에서 가장 빈도수 높은 질병으로서, 위장관 점막이 위산에 의해 소화되어 궤양을 형성하는 상태를 말하며, 인구의 약 10% 가량이 일생 중 한번은 위염이나 위궤양을 경험한다는 보고가 있다. 위벽은 점막층, 점막하층, 근육층, 장막으로 구성되어 있는데, 위염은 점막이 손상된 상태이고, 위궤양은 점막하층 또는 근육층까지 손상된 경우를 말한다. 위염 및 위궤양은 발생빈도가 높은 것에 비해 발생원인은 정확히 밝혀져 있지 않으며, 공격인자와 방어인자의 불균형, 즉, 공격인자의 증가나 방어인자의 약화에 의해 발생하는 것으로 알려져 있다. 공격인자의 증가 요인으로는 산, 펩신분비의 증가 등을 들 수가 있고 방어인자의 약화 요인으로는 위점막의 구조나 형태의 결손, 점액분비의 감소, 중탄산 이온 분비의 감소, 프로스타글란딘 생산의 저하 등을 들 수 있으며, 최근 헬리코박터 피롤리(Helicobacter pylori)의 감염에 의해서도 위궤양이 발생된다는 보고가 있다.

위염 및 위궤양의 치료 방법은 과다한 위분비액을 중화시키는 제산제(antacid), 산분비를 감소시키는 콜린 억제제, 위산의 방출을 억제하는 히스타민 길항제(histamine antagonist), 소화액에 대한 위내막의 내성을 증가시키고 회복을 돕는 위점막보호제 등이 주류를 이루고 있으며, 최근 헬리코박터 피롤리를 제거하고자 위의 약물과 항생제를 복합하여 처방하는 약물 치료법 등이 있다.

그러나, 이들 약제를 사용하는 경우 재발률이 높으며, 장기 복용해야 하는 문제점이 있다. 실제로 6주 정도 복용하면 궤양은 치료되나 이들 환자의 대부분이 1년 정도 지나면 재발한다고 보고되어 있다. 또한, 라니티딘, 시메티딘, 파모티딘을 위궤양 치료를 위해 장기 복용할 경우에는 위종양을 유발하고, 오메프라졸을 장기 복용할 경우에는 신경내분비 세포종양(neuroendocrine cell tumor)을 유발한다는 보고가 계속되고 있어서, 인체에 안전한 위염 및 위궤양 치료제의 개발이 절실히 요구되고 있는 실정이다.

금은화(Lonicerae Flos)는 인동과(Caprifoliaceae)에 속하는 인동 덩굴(Lonicera japonica Thunb.)의 꽃으로, 한방이나 민간에서는 이뇨, 건위, 관절염, 화농성 피부염, 기관지염에 사용되고 있다. 금은화의 성분으로는 tannin, inositol, sterol, chlorogenic acid, isochlogenic acid등이 보고되어 있으며 flavonoid 성분으로서는 luteolin, apigenin, luteolin-7-O-rhamnoglucoside, quercetin 등이 알려져 있다. 금은화의 flavonoid 성분은 항염증작용[Lee, S.J., Son, K.H., Chang, H. W., Do, J.D., Jung, K.Y., Kang, S. S. and Kim, H.P.: Anti-inflammatory activity of naturally occurring flavones and flavonol glycosides. Arch. Pharm. Res. 16, 25(1993)] 및 항돌연변이 작용 등이 보고되었으나 아직 그 작용기전에 관한 연구는 미진한 상태에 있다.

금은화에 대한 연구로, 강옥희(금은화의 약리작용에 관한 연구)는 금은화의 메탄올 추출액이 수종의 그람 양성 및 그람 음성균에 항균작용이 있음을 보고하였고 황윤정(주엽나무잎 및 금은화의 페놀성 성분)은 금은화의 페놀성 성분을 단리하여 5종의 인체암 세포에 적용하여 쿼세틴(quercetin)에서 항암활성이 있는 것으로 보고하였으며, Lee 등은 금은화의 부탄올 분획이 마우스 귀(mouse ear) 부종 및 CGN-paw 부종실험에서 프레드니솔론(prednisolone)보다는 약하지만 용량의존적으로 부종을 개선시킴을 보고하였다(S.J. Lee, K.H. Son, H.W. Chang, S.S. Kang and H.P. Kim. Antiinflammatory activity of Lonicera japonica, Phytotherapy research. 12, 445-447, 1998.) 또한, Chang 등은 금은화의 탄닌성분이 human immunodeficiency virus-1 reverse transcriptase activity(HIV-1 RT)를 저해한다고 보고하였으며(Chang, C.W., Lin, M.T., Lee, S.S., Liu, K.C., Hsu, F.L., Lin, J.Y. Differential inhibition of reverse transcriptase and cellular DNA polymerase-alpha activities by lignans isolated from Chinese herbs, Phyllanthus myrtifolius Moon, and tannins from Lonicera japonica Thunb. and Castanopsis hystrix. Antiviral Res. 27(4): 367~374, 1995.), Tae 등은 Lonicera japonica flower의 물추출물이 LPS(Lipopolysaccharide)로 유도된 랫트 간 패혈증(rat liver sepsis)에서 NFκB p65의 활성 억제와 IκBa의 분해(degradation)억제를 통하여 항염증효과를 나타냄을 밝혔을 뿐이다.[Tae, J, Han, S.W., Yoo, J.Y., Kim, J.A., Kang, O.H., Baek, O.S., Lim, J.P., Kim, D.K., Kim, Y.H., Bae, K.H., Lee, Y.M., Anti-inflammatory effect of Lonicera japonica in proteinase-activated receptpr 2-mediated paw edema. Clin. Chim. Acta. 330(1-2): 165~171, 2003]

상기와 같이, 금은화 추출물을 함유하는 위염 및 위궤양 치료용 조성물에 대해서는 어떠한 연구문헌이나 기타 자료가 없을 뿐만 아니라 연구 자체도 이루어지지 않은 실정이다.

이에 본 발명자들은 천연물 유래의 위염 및 위궤양 질환 연구를 주력한 결과, 금은화 추출물을 필수 유효성분으로 함유한 조성물이 급만성 위염 및 위궤양에 우수한 효과가 있음을 확인하였다.

이에 본 발명자들은 위염 및 위궤양 치료제를 연구하던 중 금은화 추출물이 위염 및 위궤양에 우수한 효과를 나타내며 안전성이 입증된 전통생약이므로 부작용이 없어 위염 및 위궤양을 치료하는데 효과적임을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명자들은 금은화 추출물이 급만성 위염 및 위손상으로부터 위점막을 보호하고 과다 분비된 위산으로부터 위의 손상을 방어해주며 손상된 위장점막의 세포막의 복원에 도움을 준다는 사실을 발견하였다.

따라서, 본 발명은 위염 및 위궤양 질환의 치료에 효과적인 금은화 추출물을 제공하는데 그 목적이 있다.

본 발명은 급만성 위염 및 위 손상에 대한 치료효과와 과다한 위산을 제거하는 효과를 가진 금은화 추출물에 관한 것이다.

상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 극성용매, 또는 에틸아세테이트 등 유기용매에 가용한 추출물을 포함한다.

이하 본 발명을 더욱 상세히 설명한다. 본 발명에 따른 추출물은 통상의 물, 알코올, 유기용매 등을 용매로 한 용매 추출법 등을 적용하여 제조한 조추출물일 수 있으며, 또한 칼럼 크로마토그래피를 이용하여 정제한 분획추출물일 수 있다. 본 발명에 따른 추출물의 제조방법은 본 기술분야에 속하는 통상의 지식을 가진 자에게 알려진 추출방법을 모두 적용할 수 있으며, 예컨대 물, 알코올 또는 혼합용매, 유기용매에 의한 추출, 중탕이나 상온에 의한 추출법 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는, 건조 상태의 생약들을 재료의 표면에 존재하는 이물질 등을 제거하기 위하여 세척한 다음 건조기에서 말린 후, 적절한 배합비로 혼합하고 이를 분쇄하여 생약 분쇄물을 얻을 수 있다. 또한, 상기 분말화된 복합 생약들의 2 내지 20배, 바람직하게는 3~10배 부피/중량의 증류수, 탄소수 1~4의 알콜 또는 이들의 혼합용매, 에틸아세테이트 단독 또는 이들의 혼합용매를 가하여 0℃ 내지 상온, 바람직하게는 4~6℃의 온도에서, 12~48시간, 바람직하게는 20~24시간 동안 냉침을 하거나, 60~110℃, 바람직하게는 90℃ 이상의 추출온도에서 1~24시간, 바람직하게는 2~6시간 동안 무압력으로 열수추출법으로 추출 총량의 10~50배의 물로 2~5회 추출하여 극성 용매에 가용한 복합생약 추출물의 추출물을 얻을 수 있다.

본 발명은 상기한 제법으로 얻어진 금은화 추출물을 포함하고 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 위염 또는 위궤양 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다. 본 발명의 위염 또는 위궤양 질환 예방 및 치료용 금은화 추출물은 이에 한정하는 것은 아니다. 상기 금은화 추출물은 금성독성 실험결과 독성 및 부작용 등의 문제가 없다. 또한, 상기와 같은 방법으로 얻어진 금은화 추출물 조성물의 위염과 위궤양 동물모델에서 위장질환에 미치는 효과를 살펴본 결과, 기존제품인 스틸렌(동아제약, Stillen)과 동등 이상의 위장질환 치료효과를 나타내는 치료효과를 확인하였다.

본 발명 추출물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물인 항궤양제(예로서, 시메티딘, 라니티딘, 니자티딘, 파모티딘, 오메프라졸, 판토프라졸, 탄산칼슘, 중탄산나트륨, 삼규산마그네슘 또는 마갈드레이트) 및/또는 점막 보호제(예로서, 콜로이드성 비스무스 서브시트레이트, 비스무스 알루미네이트, 비스무스 서브카보네이트, 비스무스 시트레이트, 비스무스 갈레이트, 비스무스 나이트레이트, 비스무스 타르트레이트 또는 이들의 혼합물)와 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 추출물을 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다.

비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 1~5000 ㎎/kg으로, 바람직하게는 10~2000 ㎎/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명의 추출물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 추출물은 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.

또한, 본 발명은 상기 금은화 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 위장질환 개선을 위한 건강 기능 식품을 제공한다. 본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다. 상세하게는, 본 발명은 금은화 추출물을 유효성분으로 함유하는 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 위장질환 예방 및 치료용 건강 기능 식품을 제공한다. 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 금은화 추출물은 위염, 위궤양 또는 염증성 장 질환에 대하여 기존의 스틸렌과 동등 이상의 효과를 나타내며, 장기복용에 따른 부작용의 발생 가능성이 차단된 안전한 약제이다. 본 발명의 금은화 추출물은 위궤양 병변 억제효과와 함께 세포보호 작용을 나타내어 위염, 위궤양 염증성 장질환에 대한 우수한 치료 효과를 나타낸다.

<실험예 1: 랫트의 HCl-EtOH 유발 위염 모델에서의 효과>

랫트를 24시간 절식시킨 다음 Mizui 등(Jap. J. Pharmacol. 33: 939~945, 1983)의 방법에 준하여 실시예 1의 5개 금은화 추출물을 각각 경구 투여하고 30분 후에 HCl-EtOH(60% 에탄올에 150mM HCl 함유) 1㎖를 경구투여하였다. 절식, 절수하에 1시간 방치한 후 에테르로 치사시켜 위를 적출하고, 유문 및 분문부를 결찰하여 위 내에 1% 포르말린 용액 13㎖을 넣었다. 포르말린 용액에 10분간 담그어 고정시키고, 고정 후 대만부를 따라 절개하여 펼친 후에 실체현미경 (×10)으로 위병변의 면적(㎟)을 측정하고 하기의 수학식을 이용하여 위병변 치료율을 계산하였다.

대조군의 위병변면적(㎟) - 약물투여군의 위병변면적(㎟) 치료율(%) = -------------------------------------------------------- X 100 대조군의 위병변면적(㎟)

5개의 금은화 추출물 분획 투여 1시간 후, 60% EtOH(150mM HCl)로 위염을 유발시킨 흰쥐의 위점막 손상을 관찰한 결과는 다음과 같다(표1). 5개의 금은화 추출물 분획은 1, 5, 25, 50, 100㎎/㎏ 용량으로 실험을 진행하였다. 표1에서 알 수 있는 바와 같이 5개의 분획 중 금은화 에틸아세테이트 분획은 모든 투여 용량에서 90%이상 위병변을 억제하였다. 따라서 본 연구에서는 금은화 에틸아세테이트 분획을 선정하였다. 금은화 에틸아세테이트 분획은 동일용량에서 스틸렌(비교군)을 경구투여 한 것 보다 더욱더 우수한 효과를 확인하였다.

표1. 랫트의 HCl-EtOH 유발 위염 모델에서의 금은화 추출물과 스틸렌의 효과
용량(㎎/㎏)	억제율 (%)
	열수층	에탄올	메탄올	부탄올	에틸아세테이트	스틸렌(비교군)
대조군	-	-	-	-	-	-
1	50.7	84.4	63.7	59.1	95.6	53.8
5	60.5	82.3	64.4	75.6	91.2	60.3
25	67.9	78.4	97.9	89.5	95.1	68.5
50	79.3	62.6	74.9	90.3	95.9	72.4
100	72.1	78.6	81.5	90.5	98.6	85.3

<실험예 2: 랫트의 수침·구속 스트레스 위궤양모델에서의 항궤양 효과>

Takagi 등(Jap . J. Pharmacol . 18: 9~18, 1968)의 방법에 의해 랫트를 24시간 절식시킨 후에 실시예 1의 5개 금은화 추출물을 각각 경구 투여하고 30분 후에 스트레스 케이지(stress cage)에 넣어 검상돌기가 물에 잠기도록 물속에 넣고 수온을 21±1℃로 유지하면서 8시간 동안 방치하였다. 이후 에테르 마취하에서 동물을 치사시킨 다음 위를 적출하여 1% 포르말린 13㎖을 위내에 주입하고 1% 포르말린 용액에 넣어 1시간 동안 고정하였다. 고정이 끝난 위를 대만부를 따라 절개하여 펼친 후에 실체현미경 (×10)으로 위병변의 면적(㎟)을 측정하고 실험예 1과 동일한 방법으로 위병변 억제율을 계산하였다.

실험예 1에서 선정된 금은화 에틸아세테이트 추출물의 수침·구속 스트레스 위궤양모델에서의 효과는 표2에 나타내었다. 금은화 투여군은 모든 용량에서 대조군에 대해 유의성 있는 항궤양 효과가 나타났다. 특히 금은화 에틸아세테이트 추출물 5㎎/㎏ 용량이상에서는 약 70%이상 항궤양 효과를 확인할 수 있었다. 이는 스틸렌을 경구투여 한 것보다 효과가 더욱 우수함을 알 수 있었다.

표2. 랫트의 수침·구속 스트레스 위궤양모델에서의 금은화 에틸아세테이트 추출물과 스틸렌의 효과
용량 (㎎/㎏)	금은화 에틸아세테이트 추출물		스틸렌 (비교군)
	궤양면적(㎟)	치료율(%)	궤양면적(㎟)	치료율(%)
대조군	31.4	-	31.4	-
1	13.2	57.9	28.1	10.5
5	8.4	73.2	24.5	21.9
25	4.8	84.7	20.1	35.9
50	6.0	80.8	14.3	54.4
100	6.5	79.2	7.1	77.3

<실험예 3: 랫트의 인도메타신 위궤양 모델에서의 효과>

Urushidani 등(Jap . J. Pharmacol . 27:316~~319, 1977)의 방법에 의해 랫트를 24시간 절식시킨 후에 실시예 1의 5개 금은화 추출물을 각각 경구 투여하고 1시간 후에 인도메타신(indomethacin) 40㎎/㎏을 경구투여 하였다. 6시간 후에 동물을 에테르로 마취하여 치사시킨 후 위를 적출하여 1% 포르말린 13㎖을 위 내로 주입하고 1% 포르말린 용액에 넣어 1시간 동안 고정하였다. 고정이 끝난 위의 대만부를 따라 절개하여 펼친 후에 실체현미경 (×10)으로 위병변의 면적(㎟)을 측정하고 실험예 1과 동일한 방법으로 위병변 억제율을 계산하였다. 인도메타신은 0.5% CMC액에 현탁하였다.

금은화 에틸아세테이트 추출물의 인도메타신 위궤양 모델에서의 효과는 표3에 나타내었다. 금은화 투여군은 모든 용량에서 대조군에 대해 유의성 있는 항궤양 효과가 나타났다. 특히 금은화 에틸아세테이트 추출물 5㎎/㎏ 용량이상에서는 약 80%이상 항궤양효과를 확인할 수 있었다. 이는 스틸렌을 경구투여 한 것보다 효과가 더욱 우수함을 알 수 있었다.

표3. 랫트의 인도메타신 위궤양 모델에서의 금은화 에틸아세테이트 추출물과 스틸렌의 효과
용량 (㎎/㎏)	금은화 에틸아세테이트 추출물		스틸렌 (비교군)
	궤양면적(㎟)	치료율(%)	궤양면적(㎟)	치료율(%)
대조군	21.5	-	21.5	-
1	6.8	68.3	18.4	14.4
5	4.1	80.9	14.2	33.9
25	2.8	86.9	12.2	43.2
50	3.5	83.7	9.8	54.4
100	3.9	81.8	5.4	74.8

<실험예 4: 랫트의 아스피린-샤이(Aspirin-Shay) 궤양 모델에서의 효과>

Guth 등(Gastroenterology, 76: 88~93, 1979)의 방법과 Okabe 등(Japan J. Pharmacol ., 24: 363~371, 1974)의 방법을 조합하여 랫트를 24시간 절식시킨 후에 실시예 1의 5개 금은화 추출물을 각각 경구 투여하고 1시간 후에 에테르 마취하에 개복하여 위 유문부를 결찰하고 아스피린(150mM HCl-CMC 현탁액) 200㎎/㎏을 십이지장내로 투여하고 7시간 후에 에테르로 치사하였다. 위를 적출하여 1% 포르말린 13㎖를 위내로 주입하고 1% 포르말린 용액에 넣어 1시간 동안 고정하였다. 고정이 끝난 위의 대만부를 따라 절개하여 펼친 후에 실체현미경 (×10)으로 위병변의 면적(㎟)을 측정하고 실험예 1과 동일한 방법으로 위병변 억제율을 계산하였다.

표4. 랫트의 아스피린-샤이(Aspirin-Shay) 궤양 모델에서의 금은화 에틸아세테이트 추출물과 스틸렌의 효과
용량 (㎎/㎏)	금은화 에틸아세테이트 추출물		스틸렌 (비교군)
	궤양면적(㎟)	치료율(%	궤양면적(㎟)	치료율(%)
대조군	18.4	-	18.4	-
1	5.1	72.2	14.8	19.5
5	3.5	80.9	13.5	26.6
25	2.3	87.5	11.2	39.1
50	3.3	82.0	6.8	63.0
100	3.5	80.9	3.8	79.3

금은화 에틸아세테이트 추출물의 아스피린-샤이 궤양모델에서의 효과는 표4에 나타내었다. 금은화 투여군은 모든 용량에서 대조군에 대해 유의성 있는 항궤양 효과가 나타났다. 특히 금은화 에틸아세테이트 추출물 1㎎/㎏ 용량이상에서는 약 70%이상 항궤양효과를 확인할 수 있었다. 이는 스틸렌을 경구투여 한 것보다 효과가 더욱 우수함을 알 수 있었다.

<실험예 5: 초산 유발 아만성 위궤양에서의 효과>

Okabe와 Pfeiffer(Dig . Dis ., 17: 619~628, 1972)의 방법에 의해 랫트를 비절식하에 에테르로 마취하여 개복하고 위를 노출시킨 후에 마이크로리터 주사기(microliter syringe)를 이용하여 30% 초산 30㎕를 선위부 유문쪽의 장막하 조직층 안으로 주입하고 복부를 면사로 봉합하였다. 수술 후 2일째로부터 10일간 1일 1회 실시예 1의 5개 금은화 추출물을 각각 경구 투여하였다. 최종 투여 후 24시간 절식시키고 에테르로 마취하여 치사시킨 후 위를 적출하여 1% 포르말린 13㎖를 위내로 주입하고 1% 포르말린 액에 넣어 1시간 동안 고정하였다. 고정이 끝난 위의 대만부를 따라 절개하여 펼친 후에 실체현미경 (×10)으로 위병변의 면적(㎟)을 측정하고 실험예 1과 동일한 방법으로 위병변 억제율을 계산하였다.

금은화 에틸아세테이트 추출물의 초산 유발 아만성 위궤양모델에서의 효과는 표5에 나타내었다. 금은화 투여군은 모든 용량에서 대조군에 대해 유의성있는 항궤양 효과가 나타났다. 특히 금은화 에틸아세테이트 추출물 5㎎/㎏ 용량이상에서는 약 70%이상 항궤양효과를 확인할 수 있었다. 이는 스틸렌을 경구투여 한 것보다 효과가 더욱 우수함을 알 수 있었다.

표5. 랫트의 10%-초산 유발 위궤양모델에서의 금은화 에틸아세테이트 추출물과 스틸렌의 효과
용량 (㎎/㎏)	금은화 에틸아세테이트 추출물		스틸렌 (비교군)
	궤양면적(㎟)	치료율(%	궤양면적(㎟)	치료율(%)
대조군	16.8	-	16.8	-
1	6.5	61.3	14.2	15.4
5	5.0	70.2	13.5	19.6
25	3.1	81.5	12.7	24.4
50	4.2	75.0	9.9	41.0
100	4.6	72.6	6.2	63.0

<실험예 6: 기초 위액 분비에 대한 실험>

Shay 등(Gastroenterology , 5: 43~61, 1945)의 방법에 의해 랫트를 24시간 절식시킨 후에 에테르 마취하에 유문부를 결찰하고 실시예 1의 5개 금은화 추출물을 십이지장내로 투여한 후 면사로 봉합하였다. 절수, 절식하에 6시간 동안 방치한 후 에테르로 마취하여 치사시킨 후 위를 적출하였다. 회수된 위액을 3000 rpm에서 15분간 원심분리 한 후 상등액만 취하여 위액량, pH를 측정하고 위액 1㎖를 취하여 0.05N NaOH 로 유리산 및 총산을 pH meter로 적정하였다. 위액 중 총산은 phenol red 지시약으로 하여 황색에서 분홍색이 되는 점을 종말점으로 하여 0.05N NaOH로 적정하였다. 0.05N NaOH 소비량(㎖)에 위액량을 곱하여 총산(mEq/5hr)으로 하였다. 유리산은 methyl orange 지시약으로 하여 주황색에서 황색이 되는 점을 종말점으로 하여 0.05N NaOH로 적정하였다. 0.05N NaOH 소비량(㎖)에 위액량을 곱하여 유리산(mEq/5hr)으로 하였다.

금은화 에틸아세테이트 추출물에 대한 기초산 분비 결과는 다음과 같다(표6). 금은화 에틸아세테이트 추출물 투여군은 대조군과 비교하였을 때 위액량, pH, 총산, 유리산에 영향을 주지 않는 것으로 나타났으며 스틸렌과 비교하여도 금은화 에틸아세테이트 추출물은 기초산 분비에는 영향을 주지 않는 것으로 판단되었다.

표6. 랫트의 기초산 분비 모델에서의 금은화 에틸아세테이트 추출물과 스틸렌의 효과
구분	용량(㎎/㎏)	위액량(㎖)	pH	총산	유리산
대조군	-	5.09±0.32	1.61±0.07	17.61±0.87	10.58±0.45
금은화에틸아세테이트 추출물	40	4.94±0.77	1.61±0.07	19.13±1.23	10.88±1.08
	120	4.23±0.46	1.69±0.07	16.63±1.16	9.88±1.04
	400	4.88±0.46	1.72±0.13	17.56±1.34	11.67±1.25
스틸렌(비교군)	40	4.74±0.25	1.63±0.12	18.21±1.73	10.21±1.25
	120	4.59±0.83	1.58±0.03	16.70±1.26	9.82±1.31
	400	4.91±0.58	1.68±0.11	18.45±1.23	10.58±1.03

<실험예 7: 랫트에 대한 급성경구투여 독성실험>

6주령의 특정병원부재(SPF) SD계 암수 랫트를 사용하여 실시예 1의 5개 금은화 추출물에 대한 급성독성실험을 실시하였다. 실험군의 구성은 군당 암수 각각 5 마리씩의 동물에 대하여 본 발명의 5개의 금은화 추출물을 1g/㎏, 2g/㎏ 및 5g/㎏의 용량군으로 하였으며, 실험물질은 5% HPMC(hydroxypropylmethyl cellulose) 용액에 현탁하여 1회 경구투여 하였다. 시험물질 투여 후 동물의 폐사여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액 생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상여부를 관찰하였다. 그 결과, 시험물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 또한, 본 발명의 추출물을 투여한 실험군과 투여하지 않은 대조군의 현미경적 소견을 비교한 결과, 간장, 비장, 신장, 뇌, 피부, 생식기계, 위장, 대장, 심장, 폐장 등 실질 장기 등에서 본 발명의 추출물이 독성을 나타내지 않는 것으로 확인되었다. 이상의 결과 실험된 본 발명의 추출물은 모두 랫트에서 5g/㎏까지 독성변화를 나타내지 않는 안전한 물질로 판단되었다.

<실험예8: 랫트의 시스테아민(Cysteamine) 유발 십이지장 궤양에 대한 효과>

랫트를 24시간 절식시킨 후에 금은화 에틸아세테이트 추출물과 스틸렌을 경구 투여하고 30분 후에 시스테아민을 300mg/kg씩 피하주사하고 18시간 후에 에테르로 마취하여 치사시킨 후 위와 십이지장을 함께 적출한 후 십이지장 점막 병변의 변화를 관찰하고 궤양의 면적을 측정하였다.

표7. 랫트의 시스테아민(cysteamine) 유발 십이지장궤양 모델에서의 금은화 에틸아세테이트 추출물과 스틸렌의 효과
용량 (mg/kg)	금은화 에틸아세테이트 추출물		스틸렌 (비교군)
	궤양면적(㎟)	치료율(%)	궤양면적(㎟)	치료율(%)
대조군	13.5	-	13.5	-
1	2.4	82.2	7.8	42.2
5	1.2	91.1	6.4	52.5
25	0.8	94.0	6.0	55.5
50	1.3	90.3	5.3	60.7
100	2.1	84.4	4.8	64.4

금은화 에틸아세테이트 추출물의 cysteamine 십이지장궤양 모델에서의 효과는 표7에 나타내었다. 금은화 에틸아세테이트 추출물 투여군은 모든 용량에서 대조군에 대해 유의성 있는 효과가 나타났다. 특히 금은화 에틸아세테이트 추출물 5mg/kg 용량이상에서는 약 90%이상 항 십이지장궤양효과를 확인할 수 있었다. 이는 스틸렌을 경구투여 한 것보다 효과가 더욱 우수함을 알 수 있었다.

도 1은 랫트의 HCl-EtOH 위염모델에서 대조군, 스틸렌 5㎎, 금은화 에틸아세테이트 추출물 5㎎ 용량으로 투여한 랫트 위에서의 위궤양 억제효과를 나타낸 사진이다.

<실시예 1> 금은화 추출물의 제조방법

(1-1) 에탄올 추출물

건조상태의 금은화 1㎏에 80% 에탄올 10L 가하여 6시간 동안 활성물질을 추출하고 상층액을 거름종이(Wattman No.2)로 여과한 후 50℃의 강압 농축기로 80% 에탄올 용매를 제거하고 금은화 추출물을 농축하여 에탄올 추출물 100g을 얻었다.

이와 같은 방법을 이용하여 물, 에틸아세테이트, 부탄올 그리고 메탄올로 추출하여 금은화 추출물을 얻었다.

(1-2) 열수 추출물

금은화 1㎏에 10L의 물을 넣고 100℃에서 환류 냉각 하면서 6시간 동안 교반 한 후 여과, 여과액을 농축, 건조하여 분말 300g을 얻었다.

(1-3) 메탄올 추출물

금은화 1㎏에 10L의 80% 메탄올을 넣고 60℃로 가온 하면서 6시간 동안 교반 한 후, 여과, 여과액을 농축, 건조하여 분말 120g을 얻었다.

(1-4) 부탄올 추출물

금은화 1㎏에 10L의 80% 에탄올을 넣고 60℃로 가온 하면서 6시간 동안 교반 한 후, 여과, 여과액을 농축한다. 농축물을 물 1L에 녹인 후 동량의 부탄올(1-부탄올)을 넣은 후 부탄올층을 분리하여 농축, 건조하여 분말 60g을 얻었다.

(1-5) 에틸아세테이트 추출물

금은화 1㎏에 10L의 80% 에탄올을 넣고 60℃로 가온 하면서 6시간 동안 교반 한 후, 여과, 여과액을 농축한다. 농축물을 물 1L에 녹인 후 동량의 에틸아세테이트를 넣은 후 에틸아세테이트 층을 분리하여 농축, 건조하여 분말 20g을 얻었다.

<실시예 2> 실험동물의 사육

시험동물은 샘타코로부터 SD계 랫트를 공급 받아 온도 23±1℃, 상대습도 55 ± 15% 및 300~500 룩스(Lux)의 조도로 12시간 간격으로 명암이 조절되는 동물 사육실에서 일주일이상 순화시킨 후 육안적 증상을 관찰하여 정상적인 동물만을 실험에 사용하였으며, 실험 동물용 고형사료(주식회사 삼양사) 및 물은 자유롭게 섭취시켰으며, 실험 48시간 전에 절식시켜 사용하였다.

<실시예 3> 시험물질의 조제 및 투여

시험 물질을 각각 체중의 용량으로 (1㎖/100g b.wt.) 경구투여 바늘을 사용하여 경구로 강제 투여하였다. 투여 부피는 투여 당일에 측정된 체중에 따라 산출하였고, 대조군은 5% HPMC saline 용액만 투여하였다(1㎖/100g b.wt.). 양성대조군은 천연물 위염 치료제 스틸렌을 사용하였으며 각각 실험 모델에 적합한 용량으로 5% HPMC saline 용액에 현탁하여 경구로 투여하였다 (1㎖/100g b.wt.).

<실시예4>

(4-1) 금은화 에틸아세티이트 추출물의 산제 제조예

- 실시예 1-5의 추출물 20 ㎎,

- 유당 100 ㎎,

- 탈크 10 ㎎

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

(4-2) 금은화 에틸아세티이트 추출물의 정제 제조예

- 실시예 1-5의 추출물 10 ㎎

- 옥수수전분 100 ㎎

- 유당 100 ㎎

- 스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

(4-3) 금은화 에틸아세티이트 추출물의 캅셀제 제조예

- 실시예 1-5의 추출물 10 ㎎

- 결정성 셀룰로오스 30 ㎎

- 락토오스 14.8 ㎎

- 마그네슘 스테아레이트 0.2 ㎎

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

(4-4) 금은화 에틸아세티이트 추출물의 주사제 제조예

- 실시예 1-5의 추출물 10 ㎎

- 만니톨 180 ㎎

- 주사용 멸균 증류수 2974 ㎎

- Na₂HPO₄,12H₂O 26 ㎎

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

(4-5) 금은화 에틸아세티이트 추출물의 액제 제조예

- 실시예 1-5의 추출물 20 ㎎

- 이성화당 10 g

- 만니톨 5 g

- 정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

(4-6) 금은화 에틸아세티이트 추출물의 건강 식품 제조예

- 실시예 1-5의 추출물 1000 ㎎

- 페룰산 화합물 1000 ㎎

- 비타민 혼합물 적량

- 비타민 A 아세테이트 70 ㎍

- 비타민 E 1.0 ㎎

- 비타민B1 0.13 ㎎

- 비타민 B2 0.15 ㎎

- 비타민 B6 0.5 ㎎

- 비타민 B12 0.2 ㎍

- 비타민 C 10 ㎎

- 비오틴 10 ㎍

- 니코틴산아미드 1.7 ㎎

- 엽산 50 ㎍

- 판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

- 무기질 혼합물 적량

- 황산제1철 1.75 ㎎

- 산화아연 0.82 ㎎

- 탄산마그네슘 25.3 ㎎

- 제1인산칼륨 15 ㎎

- 제2인산칼슘 55 ㎎

- 구연산칼륨 90 ㎎

- 탄산칼슘 100 ㎎

- 염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물은 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

(4-7) 금은화 에틸아세티이트 추출물의 건강 음료 제조예

- 실시예 1-5의 추출물 1000 ㎎

- 구연산 1000 ㎎

- 올리고당 100 g

- 매실농축액 2 g

- 타우린 1 g

- 정제수를 가하여 전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2℃ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims (6)

1. 금은화 추출물을 유효성분으로 포함하고 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 위점막 손상 보호용 또는 위염, 위궤양, 십이지장궤양 치료 또는 예방용 약학 조성물
2. 제 1 항에 있어서,

   상기 금은화 추출물이 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에틸아세테이트 중에서 선택된 용매로 추출한 것을 특징으로 하는 약학 조성물
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

   금은화 추출물은 1㎎ 내지 2,000㎎의 범위 내에서 1일 1~3회 경구 투여되는 것을 특징으로 하는 위점막 손상 보호용 또는 위염, 위궤양, 십이지장궤양 치료 또는 예방용 약학 조성물
4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

   경구용 약제 조성물 정제, 캡슐제 또는 액제 형태인 것을 특징으로 하는 항궤양제 및 점막 보호제를 추가로 함유하는 경구용 약학 조성물
5. 삭제
6. 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에틸아세테이트 중에서 선택된 용매로 추출한 금은화 추출물을 식품에 첨가하여 제조된 위점막 손상 보호용 또는 위염, 위궤양, 십이지장궤양 개선용 기능성 건강식품