RS55229B1 - Heterodimerni vezujući proteini i njihove upotrebe - Google Patents

Heterodimerni vezujući proteini i njihove upotrebe

Info

Publication number
RS55229B1
RS55229B1 RS20160812A RSP20160812A RS55229B1 RS 55229 B1 RS55229 B1 RS 55229B1 RS 20160812 A RS20160812 A RS 20160812A RS P20160812 A RSP20160812 A RS P20160812A RS 55229 B1 RS55229 B1 RS 55229B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
region
polypeptide
domain
chain
immunoglobulin
Prior art date
Application number
RS20160812A
Other languages
English (en)
Inventor
John W Blankenship
Philip Tan
Original Assignee
Emergent Product Dev Seattle
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Emergent Product Dev Seattle filed Critical Emergent Product Dev Seattle
Publication of RS55229B1 publication Critical patent/RS55229B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

IZJAVA U VEZI SA LISTOM SEKVENCI
Lista sekvenci priložena uz ovu prijavu data je u tekst-formatu umesto papirne kopije i time je kao referenca uključena u specifikaciju. Naziv teksta koji sadrži Listu sekvenci je 910180_422PC_SEQUENCE_LISTING.txt. Tekst ima 839 KB, kreiran je 29. decembra 2010. i elektronski je podnet preko EPS-WEB, u isto vreme sa podnošenjem specifikacije.
OSNOV PRONALASKA
Oblast tehnike
Predmetna objava, uopšteno, obezbeđuje polipeptidne heterodimere, njihove smeše i metode spravljanja i korišćenja takvih polipeptidnih heterodimera. Preciznije, polipeptidni heterodimeri dati u ovom tekstu, formiraju se, đelom, prirodnom heterodimerizacijom CH1 regiona imunoglobulina i konstantnog regiona lakog lanca imunoglobulina (CL). Pored toga, polipeptidni heterodimeri dati u ovom tekstu sadrže dva ili više vezujućih domena koji se specifično vezuju sa jednim ili više ciljeva. Pored toga, oba jednolančana polipeptida polipeptidnih heterodimera datih u ovom tekstu sadrže Fc region-deo (npr., CH2 i CH3 domen imunoglobulina).
Opis srodnog stanja tehnike
Proces prenosa signala često uključuje receptorske proteine koji imaju vanćelijske domene, transmembranske domene i unutarćelijske domene. Tokom vezivanja liganda, receptorski molekuli na površini ćelije često podležu oligomerizaciji ili multimerizaciji (označeno i kao "unakrsno povezivanje"), da bi se signal efikasno preneo u unutrašnjost ćelije. Stimulacija ili blokada ove interakcije receptora i liganda ili posledične oligomerizacije ili multimerizacije receptora od velikog su terapijskog značaja u različitim oboljenjima.
Primeri molekula korisnih za modulisanje interakcija receptora i liganda uključuju antitcla ili molekule izvedene iz antitela. Na primer, antitelo ili njegov derivat mogu funkcionisati kao antagonist receptora, koji se vezuje za receptor na površini ćelije i inaktivira ga blokiranjem mesta za vezivanje aktivirajućeg liganda ili sprečavanjem dimerizacije ili multimerizacije receptora potrebne za aktivaciju. U nekim drugim slučajevima, antitelo ili njegov derivat mogu funkcionisati kao agonisti, vezivanjem i unakrsnim povezivanjem više membranskih receptora. imitirajući funkciju prirodnog liganda. Još jedan primer je derivat bispecifičnog antitela, koji može da se koristi za usmeravanje citotoksičnih sredstava ili imunskih efektorskih ćelija ka ciljnim mestima kao što su tumori.
Bispecifična antitela su molekuli na bazi antitela, koji mogu istovremeno da se vezuju za dva odvojena i različita antigena (ili za različite epitope istog antigena). Jedna upotreba bispecifićnih antitela bila je preusmeravanje citotoksičnih imunskih efektorskih ćelija da bi se pojačalo ubijanje tumorskih ćelija ćelijskom citotoksićnošću zavisnom od antitela (antibodv dependent cellular cytotoxicity, ADCC). U tom kontekstu, jedna ručica bispecifičnog antitela vezuje se za antigen na tumorskoj ćeliji, a druga ručica se vezuje za determinantu eksprimiranu na efektorskim ćelijama. Unakrsnim povezivanjem tumorske i efektorske ćelije, bispecifično antitelo ne samo što dovodi efektorsku ćeliju u blizinu tumorske ćelije, nego i istovremeno pokreće njenu aktivaciju, dovodeći do efikasnog ubijanja tumorske ćelije. Bispecifična antitela upotrebljavaju se i za koncentrisanje hemo-ili radioterapijskih sredstava u tumorskim tkivima, kako bi se štetni efekti na normalno tkivo sveli na najmanju meru. U ovoj postavci, jedna ručica bispecifičnog antitela vezuje se za antigen eksprimiran na ćeliji koju treba uništiti, a druga ručica dostavlja hemoterapijski lek, radioizotop ili toksin.
Glavna prepreka u opštem razvoju bispecifićnih antitela je teškoća da se proizvedu materijali dovoljnog kvaliteta i kvantiteta za pretkliničke i kliničke studije. U početku, glavni put proizvodnje bispecifićnih antitela bio je koekspresija oba laka lanca i oba teška lanca dva roditeljska antitela različitih specifičnosti, u istoj ćeliji. Međutim, bispecifična antitela sa željenom vezujućom kompetentnošću proizvode se u maloj meri, a njihovo prečišćavanje od drugih proizvoda veoma je teško. Drugi tradicionalni metod proizvodnje bispecifićnih antitela je hemijska konjugacija dva antitela ili njihovih fragmenata koji imaju različite specifičnosti. Međutim, i ovaj metod je komplikovan i proces hemijske modifikacije može da dovede do inaktivacije antitela ili pokretanja njihove agregacije. Zbog toga Što je prečišćavanje od neželjenih proizvoda i dalje otežano, rezultujući niski prinos i loš kvalitet bispecifićnih antitela čine ovaj proces nepogodnim za proizvodnju u velikom opsegu, potrebnu za klinički razvoj.
Nedavno, različite tehnike heterodimerizacije korišćene su za poboljšanje proizvodnje bispecifićnih antitela. Međutim, fuzija jednostavnih heterodimerizacionih domena kao stoje Jun/Fos "namotani kalem" ("coiled coil") sa scFv domenima dovela je do nastanka mešavine homo- i heterodimera i potrebe za asambliranjem ponovnim nabiranjem (de Kruif and Logtenberg, J. Biol. Chem. 271:7630-4, 1996). Fuzija scFv fragmenata sa celim antitelima takođe je korišćena za dimerizaciju (Coloma and Morrison, Nat. Biotechnol. 15: 159-63, 1997). Međutim, rezultat takve fuzije bio je veliki molekul sa lošom sposobnošću prodiranja u čvrsto tkivo. Fuzija dva scFv fragmenta takođe je korišćena za stvaranje bispecifićnih proteina (npr., BITE® antitela, Micromet Inc., Bethesda, MD. U.S. Patent No. 7,635,472). Međutim, takvi proteini nisu sadržali Fc region i time nisu omogućavali manipulisanje njihovim aktivnostima preko Fc regiona. Pored toga, ovi proteini su mali (-55 kDa) i, prema tome, imaju relativno kratak poluživot u serumu.
WO 2006/4399 A2 objavljuje multispecifične vezujuće molekule koji sadrže sintetske povezujuće peptide.
WO 02/02781 Al odnosi se na proizvodnju bispecifićnih ili multispecifičnih bi-ili tetravalentnih antitela uz korišćenje metoda rekombinantne DNK i metoda rekombinantne proizvodnje. Dobijeno antitelo sastoji se od jednog ili dva molekula dijatela, koji se heterodimerizuju stvaranjem fuzionog proteina sa CL i CH1 konstantnim domenima imunoglobulina.
US 6 809 185 BI opisuje klasu navedenih molekula kao nove derivate višenamenskih antitela.
US 2007/014794 Al objavljuje metod pripremanja heteromultimernih polipeptida kao što su bispecifična antitela, bispecifični imunoadhezini i himere antitelo-imunoadhezin.
Do danas tehnologija fuzije imunoglobulina nije dala komercijalno vijabilne heterodimerne proteine ili metode njihovog spravijanja. Prema tome, u stanju tehnike postoji potreba za alternativnim multispecifičnim heterodimernim proteinima, kao i za efikasnim metodima njihove proizvodnje.
U prvom aspektu predmetnog pronalaska, obezbeđuje se polipeptidni heterodimer koji sadrži: (a) prvi jednolančani polipetid (first single chain polvpeptide, SCP-I) koji sadrži jedan do četiri vezujuća domena koja se specifično vezuju za jedan do četiri cilja, zglob (H-I), imunoglobulinski heterodimerizacioni domen (heterodimerization domain, HD-I) i imunoglobulinski CH2 i CH3 domen IgGl, IgG2, IgG3, igG4, IgAl, IgA2, IgD, ili bilo koju njihovu kombinaciju (CH2CH3-I); i (b) drugi jednolančani polipetid (SCP-I1) koji sadrži nula do četiri vezujuća domena koja se specifično vezuju za nula do Četiri cilja, zglob (hinge, H-II), imunoglobulinski heterodimerizacioni domen (HD-1I) i imunoglobulinski CH2 i CH3 domen IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAI, lg.A2, IgD, ili bilo koju njihovu kombinaciju (CH2CH3-II);
gde se
(i) imunoglobulinski heterodimerizacioni domen prvog jednolančanog polipeptiđa (HD-I) i imunoglobulinski heterodimerizacioni domen drugog jednolančanog polipeptiđa (HD-II) preferencijalno se udružuju jedan sa drugim da formiraju polipeptidni heterodimer sačinjen od prvog jednolančanog polipeptiđa (SCP-I) i drugog jednolančanog polipetida (SCP-II), i
(1) imunoglobulinski heterodimerizacioni domen prvog jednolančanog polipeptiđa (HD-I) sadrži prvi imunoglobulinski CH-I region, i imunoglobulinski heterodimerizacioni domen drugog jednolančanog polipeptiđa (HD-II) sadrži prvi imunoglobulinski CL region, ili (2) imunoglobulinski heterodimerizacioni domen prvog jednolančanog polipeptiđa (HD-I) sadrži prvi imunoglobulinski CL region, i imunoglobulinski heterodimerizacioni domen drugog jednolančanog polipeptiđa (HD-II) sadrži prvi imunoglobulinski CH-I region; (ii) pri čemu je prvi imunoglobulinski CL region izmenjeni humani imunoglobulinski Ckregion sa jednom ili više amino-kiselina humanog Ckregiona divljeg tipa, supstituisanih naN29, N30, Q52, V55, T56, S68 ili T70,
uz uslov da polipeptidni heterodimer sadrži najmanje dva vezujuća domena koja se specifično vezuju za najmanje dva različita cilja.
U sledećem aspektu pronalaska, obezbeđuje se i smeša koja sadrži polipeptidni heterodimer predmetnog pronalaska i farmaceutski prihvatljivi ekscipijent.
U sledećem aspektu predmetnog pronalaska, obezbeđuje se i polipeptidni heterodimer predmetnog pronalaska za upotrebu u
a) metodu usmeravanja aktivacije T-ćelija, pri čemu polipeptidni heterodimer sadrži vezujući domen koji se specifično vezuje za TCRct, TCRp\ CD3y, CD35, CD3s ili
njihovu kombinaciju, i drugi vezujući domen koji se specifično vezuje za različiti cilj, ili b) inhibiranju rasta, metastaze ili metastatskog rasta maligniteta, pri čemu polipeptidni heterodimer sadrži vezujući domen koji se specifično vezuje za TCRct,
TCRp, CD3y, CD35, CD3e, c-Met ili Ron,
c) lečenju autoimunskog ili zapaljenskog stanja, pri čemu polipeptidni heterodimer sadrži vezujući domen koji se specifično vezuje za TCRa, TCRp, CD3y,
CD3S, CD3e, ili CD28.
U sledećem aspektu predmetnog pronalaska, obezbeđuje se ekspresioni efektor sposoban da eksprimira polipeptidni heterodimer predmetnog pronalaska, koji sadrži ekspresioni vektor sposoban da eksprimira polipeptidni heterodimer predmetnog pronalaska, koji sadrži prvi polinukleotid koji kodira prvi jednolančani polipeptid i drugi polinukleotid koji kodira drugi jednolančani polipeptid.
Predmetni pronalazak obezbeđuje i ćeliju-domaćina koja sadrži ekspresioni vektor predmetnog pronalaska i ćeliju-domaćina koja sadrži prvi i drugi ekspresioni vektor sposoban da eksprimira prvi i drugi jednolančani polipeptid, respektivno, polipeptidnog heterodimera predmetnog pronalaska.
U sledećem aspektu predmetnog pronalaska, obezbeđuje se metod spravljanja polipeptidnog heterodimera, koji uključuje (a) kultivisanje ćelije-domaćina u skladu sa predmetnim pronalaskom, pod uslovima pogodnim za ekspresiju prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa, i (b) opciono izolovanje ili prečišćavanje heterodimera formiranih od prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa, iz kulture.
Predmetna objava obezbeđuje polipeptidne heterodimere formirane između dva različita jednolančana polipeptiđa putem prirodne heterodimerizacije imunoglobulinskog CH1 regiona i konstantnog regiona lakog lanca (LC) imunoglobulina. Predmetna objava obezbeđuje i nukleinske kiseline, vektore, ćelije-domaćine i metode spravljanja polipeptidnih heterodimera, kao i metode korišćenja takvih polipeptidnih heterodimera, kao što su usmerena aktivacija T-ćelija, inhibicija rasta solidnih maligniteta, lečenje autoimunskih ili zapaljenskih stanja ili lečenje poremećaja ili oboljenja vezanih za B-ćelije.
U jednom aspektu, predmetna objava obezbeđuje polipeptidni heterodimer koji sadrži (a) prvi jednolančani polipetid (SCP-I) koji sadrži jedan do četiri vezujuća domena koja se specifično vezuju za jedan do četiri cilja, zglob (H-I), imunoglobulinski heterodimerizacioni domen (HD-I) i Fc region-deo (Fc region portion, FRP-I); i (b) drugi jednolančani polipetid (SCP-II) koji sadrži nula do četiri vezujuća domena koja se specifično vezuju za nula do četiri cilja, zglob (hinge, H-II), imunoglobulinski heterodimerizacioni domen (HD-II) i Fc region-deo (FRP-I 1); pri čemu se (i) imunoglobulinski HD-I i imunoglobulinski HD-II preferencijalno udružuju jedan sa drugim da formiraju polipeptidni heterodimer koji se sastoji od SCP-1 i SCP-II i (1) imunoglobulinski heterodimerizacioni domen prvog jednolančanog polipeptiđa (HD-I) sadrži prvi imunoglobulinski CHI region i imunoglobulinski heterodimerizacioni domen drugog jednolančanog polipeptiđa (HD-il) sadrži prvi imunoglobulinski CL region, ili (2) imunoglobulinski heterodimerizacioni domen prvog jednolančanog polipeptiđa (HD-I) sadrži prvi imunoglobulinski CL region i imunoglobulinski heterodimerizacioni domen drugog jednolančanog polipeptiđa (HD-II) sadrži prvi imunoglobulinski CHI region; i (ii) Fc region-deo SCP-I i Fc region-deo SCP-II sadrže imunoglobulinski CH2 i CH3 domen IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl, IgA2, IgD ili bilo koju njihovu kombinaciju; jedan ili dva imunoglobulinska CH3 domena IgGl, IgG2, lgG3, lgG4, IgAl, lgA2, IgD, IgE, IgM ili bilo koju njihovu kombinaciju; ili imunoglobulinski CH3 i CH4 domen IgE, IgM ili bilo koju njihovu kombinaciju, uz uslov da polipeptidni heterodimer sadrži najmanje dva vezujuća domena koja se specifično vezuju za cilj, na primer najmanje dva različita cilja.
U određenim formama, vezujući domeni polipeptidnih heterodimera su jednolančani Fv (scFv) polipeptidi.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži dva vezujuća domena (binding domain, BD) (BD1 i BD2). U jednoj formi, dva vezujuća domena (BDI i BD2) su na prvom jednolančanom polipeptiđa (SCP-1) i pri čemu su HD-1 i FRP-I smešteni između BDI i BD2. U sledećoj formi, prvi vezujući domen (BDI) je na prvom jednolančanom polipeptidu (SCP-1) i drugi vezujući domen (BD2) je na drugom jednolančanom polipeptidu (SCP-II). Na primer, prvi vezujući domen (BDI) može biti aminoterminalan u odnosu na Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa (FRP-I) i drugi vezujući domen (BD2) može biti aminoterminalan u odnosu na Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa (FRP-ll). Alternativno, prvi vezujući domen (BDI) može biti aminoterminalan u odnosu na Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa (FRP-1) i drugi vezujući domen (BD2) može biti karboksiterminalan u odnosu na Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa (FRP-N). Isto tako alternativno, prvi vezujući domen (BDI) može biti karboksiterminalan u odnosu na Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa (FRP-I) i drugi vezujući domen (BD2) može biti karboksiterminalan u odnosu na Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa (FRP-II).
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži tri vezujuća domena (BDI, BD2 i BD3). U jednoj formi, HD-I i FRP-I smešteni su između BDI i BD2, i treći vezujući domen (BD3) je aminoterminalan u odnosu na Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa (FRP-II). U alternativnoj formi, HD-I i FRP-I smešteni su između BDI i BD2, i treći vezujući domen (BD3) je karboksiteriminalan u odnosu na Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa (FRP-1 f ).
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži četiri vezujuća domena (BDI, BD2, BD3 i BD4). Na primer, HD-I i FRP-I mogu bili smešteni između BDI i BD2 i HD-II i FRP-ll mogu biti smešteni između BD3 i BD4.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži pet do osam vezujućih domena (npr., 5, 6, 7 ili 8 vezujućih domena).
U određenim formama, najmanje jedan od vezujućih domena polipeptidnih heterodimera datih u ovom tekstu specifično se vezuje ili je antagonist: TCRa, TCRp, CD3y, CD38, CD3e, CD28, CD79b, hiperlL-6, monolL-IO, CD86, CD20, PSMA, CDI9, HLA-DR, Ron, c-Met, CEACAM-6, LfGHT, G1TRL, CD40, PDL1, PDL2, HVEM, LTBR, EGFR, EGFRulll, ErbB2, ErbB3, ErbB4, IGF IR, EphA2, PDGFR, VEGRFI-4, angiopoetin 2, CD64, CD32A, CD 16, CD71, TNFR1, TNFR2, TWEAKR, TACI, BAFF-R, BCMA, FAS, CD32B, CD21, CD22, CD30, CD33, CD37, CD38, CD70, TNFct, IL-6, hiperIL-6, IL-2, IL-l, 1L-7, IL-8, IL-17A/C, IP-10, IFNv, IFNa. RAN KL, FASL, TGFp, 1L10, ILI7A/F, CSF2, 1GFI, IGF2, BI vS APRIL. HGF, MSP, EGF (uključujući epiregulin, heregulin, p-regulin, neuregulin), HIF-Ia, VEGFA, VEGFB. VEGFC, VEGFD, TNFa, Wnt, sHH, TGFp, PDGF, TWEAK, EpCAM, CEA, PCTA-1, STEAP-1, PSCA, ALCAM (CD166), EphA2, CD151, CA-125, MUC-1, MAGE-1, TROP2. CCR5, HER-3, HER-4, EGFR, CEA, MUC2, MUC3, MUC4, MUC5AC, MUC5b. MUC7. phCG, Lewis-Y, gangliozidaGD3, 9-0-acetiI-GD3, GM2, globo FI. fukozil GM1, poliSA, GD2, karboanhidraze IX (MN/CA IX), CD44i>6, sonic heđgehog (Shh), Wue-1, plazma-ćelijskog antigena, (za membranu vezanog) IgE, sa melanomom udruženog hondroitin-sulfatnog proteoglikana (MCSP), CCR8, TNF-alfa prekursora, STEAP, mezotelina, A33 antigena, antigena matičnih ćelija prostate (prostate stem cei I antigen, PSCA), Ly-6, dezmogleina 4, E-kadherin neoepitopa, fetalnog acetilholinskog receptora, CD25, CA19-9 markera, CA-125 markera i Muellerian-ove inhibitorne supstance (MlS)-receptor tipa II, sTn (sijalizovani Tn antigen; TAG-72), FAP (fibroblastni aktivacioni antigen), endosijalina, EGFRuIll, LG, SAS, CD63, 1GF1R, CDI51, TGFBR2, GHRHR, GHR, 1L-6R, gp!30, TNFR2, OSMRp, Patched-I, Frizzled, Robol, CD80, CD8I, CD86, OX40, CD40, CD137, L1FRP, TLR7 ili TLR9.
U određenim drugim formama, najmanje jedan od vezujućih domena polipeptidnog heterodimera je agonist IL-10, HLA-G, HGF. IL-35, PD-I, BTLA, TNFR1, TNFR2, DR4, DR5, T\VEAKR ili FAS.
U određenim polipeptidnim heterodimerima datim u ovom tekstu, najmanje jedan vezujući domen specifično se vezuje za TCR kompleks ili njegovu komponentu, i najmanje jedan drugi vezuući domen se specifično vezuje za PSMA, CD79b, CDI9, HLA-DR, CD20, RON, c-Met ili CEACAM-6.
U određenim drugim polipeptidnim heterodimerima datim u ovom tekstu, najmanje jedan vezujući domen specifično se vezuje za CD28 i najmanje jedan drugi vezujući domen se specifično vezuje ili je antagonist CD79b, hiperlL-6, PDL2, monoIL-10, CD86, LIGHT, GITRL, CD40, PDLI, HV EM, ili 1.1 BK.
U određenim drugim polipeptidnim heterodimerima datim u ovom tekstu, najmanje jedan vezujući domen specifično se vezuje za CD28 i i najmanje jedan drugi vezujući domen je agonist 1L-10, HLA-G, HGF, IL-35, PD-1 ili BTLA.
U određenim formama, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen prvog jednolančanog polipeptiđa (HD-I) sadrži prvi imunoglobulinski CHI region i imunoglobulinski heterodimerizacioni domen drugog jednolančanog polipeptiđa (HD-II) sadrži prvi imunoglobulinski CL region. U jednoj formi, prvi CHI region je aminoterminalan u odnosu na Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa, i prvi CL region je aminoterminalan u odnosu na Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa. U sledećoj formi, prvi CHI region je karboksiterminalan u odnosu na Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa, i prvi CL region je karboksiterminalan u odnosu na Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa.
U određenim formama u kojima imunoglobulinski heterodimerizacioni domen prvog jednolančanog polipeptiđa (HD-f) sadrži prvi imunoglobulinski CHI region i imunoglobulinski heterodimerizacioni domen drugog jednolančanog polipeptiđa (HD-II) sadrži prvi imunoglobulinski CL region, prvi jednolančani polipeptid sadrži još i drugi CHI region i drugi jednolančani polipeptid sadrži još i drugi CL region, i drugi CHI region prvog jednolančanog polipeptiđa i drugi CL region drugog jednolančanog polipeptiđa udružuju se jedan sa drugim u polipeptidni heterodimer. Na primer, Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa može biti smešten između prvog i drugog CHI regiona, i Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa može biti smešten između prvog i drugog CL regiona. Alternativno, i prvi i drugi CHI region mogu biti aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa, i prvi i drugi CL region mogu biti aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa. Isto tako alternativno, i prvi i drugi CH I region mogu biti karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa. i prvi i drugi CL region mogu biti karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa.
U određenim drugim formama u kojima imunoglobulinski heterodimerizacioni domen prvog jednolančanog polipeptiđa (HD-I) sadrži prvi imunoglobulinski CHI region i imunoglobulinski heterodimerizacioni domen drugog jednolančanog polipeptiđa (HD-II) sadrži prvi imunoglobulinski CL region, prvi jednolančani polipeptid sadrži još i drugi CL region i drugi jednolančani polipeptid sadrži još i drugi CHI region, i drugi CL region prvog jednolančanog polipeptiđa i drugi CHI region drugog jednolančanog polipeptiđa udružuju se jedan sa drugim u polipeptidni heterodimer. Na primer, u jednoj formi, u prvom jednolančanom polipeptidu, prvi CFI1 region je aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo i drugi CL region je karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo; i u drugom jednolančanom polipeptidu, prvi CL region je aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo, i drugi CHI region je karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo. U sledećoj formi, u prvom jednolančanom polipeptidu, prvi CHI region je karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo, i drugi CL region je aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo; i u drugom jednolančanom polipeptidu, prvi CL region je karboksiterminalno u odnosu na Fc region-đeo i drugi CHI region je aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo. U još jednoj formi, u prvom jednolančanom polipeptidu, prvi CHI region i drugi CL region su aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo. i prvi CFII region je aminoterminalno u odnosu na drugi CL region; i u drugom jednolančanom polipeptidu, prvi CL region i drugi CHI region su aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo, i prvi CL region je aminoterminalno u odnosu na drugi CHI region. U još jednoj formi, u prvom jednolančanom polipeptidu, prvi CHI region i drugi CL region su aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo, i drugi CL region je aminoterminalno u odnosu na prvi CHI region; i u drugom jednolančanom polipeptidu, prvi CL region i drugi CHI region su aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo, i drugi CHI region je aminoterminalno u odnosu na prvi CL region. U još jednoj formi, u prvom jednolančanom polipeptidu, prvi CHI region i drugi CL region su karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo, i prvi CHI region je aminoterminalno u odnosu na drugi CL region; i u drugom jednolančanom polipeptidu, prvi CL region i drugi CHI region su karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo, i prvi CL region je aminoterminalno u odnosu na drugi CHI region. U sledećoj formi, u prvom jednolančanom polipeptidu, prvi CHI region i drugi CL region su karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo, i drugi CL region je aminoterminalno u odnosu na prvi CHI region: i u drugom jednolančanom polipeptidu, prvi CL region i drugi CHI region su karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo, i drugi CHI region je aminoterminalno u odnosu na prvi CL region.
U određenim formama, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen prvog jednolančanog polipeptiđa (HD-I) sadrži prvi imunoglobulinski CL region, i imunoglobulinski heterodimerizacioni domen drugog jednolančanog polipeptiđa (HD-II) sadrži prvi imunoglobulinski CHI region. U jednoj formi, prvi CL region je aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa, i prvi CHI region je aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa. U sledećoj formi, prvi CL region je karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa, i prvi CHI region je karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa. U još jednoj formi, prvi jednolančani polipeptid sadrži još i drugi CL region i drugi jednolančani polipeptid sadrži još i drugi CHI region, i drugi CL region prvog jednolančanog polipeptiđa i drugi CHI region drugog jednolančanog polipeptiđa udružuju se jedan sa drugim u polipeptidni heterodimer. Na primer, Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa može biti smešten između prvog i drugog CL regiona. i Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa može biti smešten između prvog i drugog CHI regiona. Alternativno, prvi i drugi CL region mogu biti aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa, i prvi i drugi CHI region mogu biti aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa. Isto tako alternativno, prvi i drugi CL region mogu biti karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa. i prvi i drugi CHI region mogu biti karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa.
U određenim formama, prvi CL region je Ckregion. U drugim formama, prvi CL region jeCkregion.
U određenim formama, drugi CL region je Ckregion. U drugim formama, drugi CL region jeCkregion.
U određenim formama, Ckregion je humani imunoglobulinski Ckregion divljeg tipa. U određenim drugim formama, Ckregion je izmenjeni humani imunoglobulinski Ckregion sa jednom ili više amino-kiselina humanog Ckregiona divljeg tipa supstituisanih na N29, N30, Q52, V55, T56, S68 ili T70. Na primer, jedna ili više aminokiselinskih supstitucija mogu da se biraju između Ala (A), Arg (R), Trp (W), Tyr (Y), Glu (E), Gln (0), 1 ys (K), Asp (D). Met (M), Ser (S) i Phe (F).
U određenim formama. CHI region je izmenjeni humani imunoglobulinski CHI region, koji sadrži aminokiselinsku supstituciju kojom se Val (V) na poziciji 68 supstituiše sa Lys (K), Arg (R) ili His ili), i gde je Ck region izmenjeni humani imunoglobulinski Ckregion koji sadrži aminokiselinsku supstituciju kojom se Leu (L) na poziciji 29 supstituiše sa Asp (D) ili Glu (E). U određenim drugim formama, CH 1 region je izmenjeni humani imunoglobulinski CHI region koji sadrži aminokiselinsku supstituciju kojom se Val (V) na poziciji 68 menja u Asp (D) ili Glu (E). i pri čemu je Ckregion izmenjeni humani imunoglobulinski Ck region koji sadrži aminokiselinsku supstituciju kojom se Leu (L) na poziciji 29 menja u Lys (K), Arg (R) ili His (H).
U određenim formama,CX regionje humani imunoglobulinskiCkregion divljeg tipa.
U određenim formama, prvi CHI region ili drugi CHI region. kada je prisutan, predstavljeni su humanim imunoglobulinskim CHI regionom divljeg tipa, kao što je humani IgGl CH 1 region divljeg tipa.
U određenim formama, prvi CHI region ili drugi CHI region. kada je prisutan, predstavljeni su izmenjenim humanim imunoglobulinskim CHI regionom. kao što je izmenjeni humani IgGl CHI region, sa uklonjenim ili supstituisanim cisteinom humanog imunogfobulinskog CHI regiona divljeg tipa. uključenim u formiranje disulfidne veze sa humanim imunoglobulinskim CL regionom divljeg tipa.
U određenim formama, Ckregion je izmenjeni humani imunoglobulinski Ckregion, na primer sa uklonjenom ili supstituisanoin cisieinskom reziduom humanog Ck regiona divljeg tipa uključenom u formiranje disulfidne veze sa humanim imunoglobulinskim CHI regionom divljeg tipa.
U određenim formama.Ckregion je izmenjeni humani imunoglobulinski CX region, sa uklonjenom ili supstituisanoin cisteinskom reziduom humanogCkregiona divljeg tipa uključenom u formiranje disulfidne veze sa humanim imunoglobulinskim CHI regionom divljeg tipa.
U određenim formama, prvi CHI region i drugi CHI region su, kada je prisutan, predstavljeni polipeptidom koji sadrži SEQ ID NO: I 14, 844 ili 845.
U određenim formama, Ckregion se. kada je prisutan, između bilo kog od polipeptiđa koji sadrže SEO ID NO: 141-178, 202 i 838-843.
U određenim formama. CX region je, kada je prisutan, predstavljen polipeptidom koji sadrži SEQ ID NO: 140.
U određenim formama, Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa (FRP-I) i Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa (FRP-ll). svaki, sadrži imunoglobulinski CH2 domen, kao stoje CH2 domen IgGl. ili Cl 12 domen lgG2, lgG3, lgG4, IgAl, IgA2 ili IgD.
U određenim formama, Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa (FRP-I) i Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa (FRP-ll), svaki, sadrži imunoglobulinski CH3 domen, kao stoje CH3 domen IgGl, ili CFI3 domen lgG2. lgG3, lgG4. IgAl. lgA2, IgD, IgE ili IgM.
U određenim formama, Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa (FRP-1) i Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa (FRP-ll), svaki, sadrži imunoglobulinski CF12 domen i imunoglobulinski CH3 domen, kao što su CH2 i CH3 domeni IgGl, lgG2, lgG3, IgG4, IgAl, lgA2 ili IgD.
U nekim formama u kojima Fc region-deo sadrži imunoglobulinski ( 113 domen koji je neposredno aminoterminalno u odnosu na imunoglobulinski heterodimerizacini domen (npr.. CHI domen ili Ckdomen), imunoglobulinski CH3 domen je vezan za CHI domen neposredno karboksiterminalno u odnosu na imunoglobulinski CH3 domen u jednom jednolančanom polipeptidu preko peptiđa koji sadrži SEQ ID NO:846. 847, 848, ili 849, i imunoglobulinski CH3 domen je vezan za Ckdomenom neposredno karboksiterminalno u odnosu na CH3 domen u drugom jednolančanom polipeptidu preko peptiđa koji sadrži SEQ 1 DNO:846. 850. 951 ili 852.
U određenim formama, Fc region-deo prvog jednolančanog polipeptiđa (FRP-1) i Fc region-deo drugog jednolančanog polipeptiđa (FRP-ll). sadrže CH3 i CFI4 domene IgM ili IgE.
U određenim formama u kojima Fc region-deo sadrži imunoglobulinski CFI2 domen, CH2 domen može biti izmenjeni humani CH2 domen IgGl, !gG2, lgG3 ili lgG4. Primeri izmenjenih humanih CH2 domena IgGl, lgG2. lgG3 ili lgG4 uključuju one koji sadrže (a) aminokiselinsku supstituciju na poziciji 297 i najmanje jednu dodatnu supstituciju ili deleciju na pozicijama 234 do 238; (b) jednu ili više aminokiselinskih mutacija na pozicijama 234-238 i najmanje jednu supstituciju na poziciji 253. 310, 318. 320, 322 ili 331. ili (c) aminokiselinsku supstituciju asparagina na poziciji 297. jednu ili više supstitucija ili delecija na pozicijama 234 do 238, i najmanje jednu supstituciju na poziciji 253, 310, 318, 320, 322 ili 331. Još jedan primer CH2 domena je izmenjeni CH2 domen humanog IgGl koji sadrži aminokiselinske supstitucije na pozicijama L234. L235, G237, E318, K320 i K322,
U određenim formama. CH3 domen prvog jednolančanog polipeptiđa je izmenjeni CH3 domen humanog IgGl, lgG2, lgG3 ili lgG4, koji sadrži T366VV. i CH3 domen drugog jednolančanog polipeptiđa je izmenjeni CH3 domen humanog IgG 1. lgG2, lgG3 ili lgG4 koji sadrži Y407A supstituciju. U određenim drugim formama. CH3 domen prvog jednolančanog polipeptiđa je izmenjeni CH3 domen humanog IgGl, lgG2, lgG3 ili lgG4, koji sadrži T366Y supstituciju, i CH3 domen drugog jednolančanog polipeptiđa je izmenjeni CH3 domen humanog IgGl, lgG2, lgG3 ili lgG4 koji sadrži Y407T supstituciju. U određenim drugim formama. Cl 13 domen prvog jednolančanog polipeptiđa je izmenjeni CH3 domen humanog IgGl. lgG2, IgG3 ili lgG4. koji sadrži T366VV supstituciju, i CH3 domen drugog jednolančanog polipeptiđa je izmenjeni CH3 domen humanog IgGl, lgG2, lgG3 ili lgG4 koji sadrži T366S. L368A i Y407V supstitucije. U određenim drugim formama, CH3 domen prvog jednolančanog polipeptiđa je izmenjeni CH3 domen humanog IgGl. lgG2, IgG3 ili lgG4, koji sadrži Y407A supstituciju, i CF13 domen drugog jednolančanog polipeptiđa je izmenjeni CH3 domen humanog IgGl, lgG2. IgG3 ili 1«G4 koji sadrži T366VV supstituciju. U određenim drugim formama, CH3 domen prvog jednolančanog polipeptiđa je izmenjeni CH3 domen humanog IgGl, lgG2, IgG3 ili !gG4, koji sadrži Y407T supstituciju, i CH3 domen drugog jednolančanog polipeptiđa je izmenjeni CH3 domen humanog IgGl. lgG2. lgG3 ili IgG4 koji sadrži T366Y supstituciju. U određenim drugim formama, CH3 domen prvog jednolančanog polipeptiđa je izmenjeni Cl 13 domen humanog IgGl, lgG2, lgG3 ili lgG4, koji sadrži T366S, L368A i Y407W supstitucije, i i CH3 domen drugog jednolančanog polipeptiđa je izmenjeni CH3 domen humanog IgGl, lgG2, lgG3 ili lgG4 koji sadrži T366W supstituciju.
U određenim formama, zglob prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa je zglobni region imunoglobulina, kao stoje zglob IgGl, lgG2. lgG3, lgG4, IgAl, lgA2, IgD ili IgE. U određenim formama, imunoglobulinski zglob je imunoglobulinski zglob divljeg tipa. U određenim drugim formama, imunoglobulinski zglob je izmenjeni imunoglobulinski zglob odabran između SF.O !D NO:232. 234. 240,664-673. 675 i 676.
U određenim formama, zglobni region je (a) aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo, (b) smešten između vezujućeg domena i imunoglobulinskog heterodimerizacionog domena, (c) smešten između imunoglobulinskog heterodimerizacionog domena i Fc region-dela. (d) na amino-terminusu prvog ili drugog jednolančanog polipeptiđa. (e) smešten između Fc region-dela i vezujućeg domena, ili (f) na karboksi-terminusu prvog ili drugog jednolančanog polipeptiđa.
U određenim formama, najmanje jedan od zglobova prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa je zglobni region lektinalipa C, npr., NKg2A ili NKg2D peptid ili derivat istog.
U određenim formama, zglobovi prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa su identični. U određenim drugim formama, zglobovi prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa su različiti.
U određenim formama, prvi jednolančani polipeptid sadrži vezujući domen koji se specifčno vezuje za TCR kompleks ili njegovu komponentu, i drugi jednolančani polipeptid sadrži vezujući domen koji se specifčno vezuje za CD19. CD79b, HLA-DR ili CD20.
LJ određenim formama, prvi jednolančani polipeptid sadrži vezujući domen koji se specifčno vezuje za CD28. i drugi jednolančani polipeptid sadrži vezujući domen (a) koji se specifčno vezuje za CD79b, hiperlL-6 ili CDS6 ili (b )koji sadrži PDL ektođomen ili monolL-10.
U određenim formama, prvi jednolančani polipeptid sadrži vezujući domen koji se specifčno vezuje za c-Met, i drugi jednolančani polipeptid sadrži vezujući domen koji se specifično vezuje za RON.
U određenim formama, prvi i drugi jednolančani polipeptid sadrže SEQ ID NO: SEQ ID NO:2 i 4, SEQ ID NO:6 i 8, SEO ID NO:iO i 12. SEQ ID N0:I4 i 16. SEQ ID NO: 18 i 20, SEQ ID NO:20 i 22, SEO ID NO:20 i 24. SEQ ID NO:30 i 32. SEO ID NO:29 i 31, SEQ ID NO:29 i 32, SEQ ID NO:30 i 72. SEQ ID NO:53 i 72, SEO ID NO:54 i 72, SEQ ID NO:55 i 72, SEQ ID NO:70 i 72. SEO ID NO:7l i 72, SEQ ID NO:63 i 56. SEO ID NO:64 i 57. SEO ID NO:65 i 60, SEO ID NO:66 i 58, SEO ID NO:67 i 59, SEQ ID NO:68 i 61, SEO ID NO:69 i 62. SEO ID NO:54 i 81 1. SEQ ID NO:54 i 812. SEQ ID NO:54 i 813, SEQ ID NO:814 i 818. SEO ID N0:8I5 i 818. SEO ID NO:816 i 818, SEQ ID NO:817 i 818, SEO ID NO:814 i 820. SEQ ID NO:814 i 82 I. SEQ ID NO:54 i 819, SEQ ID NO:8l4 i 826, SEQ ID NO:8l4 i 822. SEQ ID NO:814 i 823, SEQ ID NO:814 i 824, SEQ ID NO:859 i 862. SEQ ID NO:860 i 863, SEQ ID NO:86l i 864, SEQ ID NO:874 i 825. SEO ID NO:875 i 879. SEQ ID NO:876 i 880, SEO ID NO:877 i 881 ili SEQ ID NO:878 i 882.
U još jednom aspektu, predmetna objava obezbeđuje smešu koja sadrži polipeptidni heterodimer dat u ovom tekstu i farmaceutski prihvatljivi ekscipijent.
U još jednom aspektu, predmetna objava obezbeđuje ekspresioni vektor sposoban da eksprimira polipeptidni heterodimer dat u ovom tekstu, koji sadrži prvi polinukleotid koji kodira prvi jednolančani polipeptid i drugi polinukleotid koji kodira drugi jednolančani polipeptid.
U još jednom aspektu, predmetna ob java obezbeđuje ćeliju-domaćina koja sadrži gornji ekspresioni vektor.
U još jednom aspektu, predmetna objava obezbeđuje ćeliju-domaćina koja sadrži prvi i drugi ekspresioni vektor sposoban da eksprimira prvi odnosno drugi jednolančani polipeptid polipeptidnog heterodimera datog ti ovom tekstu.
U još jednom aspektu, predmetna objava obezbeđuje metod spra vijanja polipeptidnog heterodimera, koji uključuje (a) kultivisanje ćelije-domaćina date u ovom tekstu pod uslovima pogodim za ekspresiju prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa, i (b) opciono izolovanje ili prečišćavanje heterodimera formiranih od prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa, iz kulture.
U još jednom aspektu, predmetna objava obezbeđuje metod usmeravanja aktivacije T-ćelija, koji uključuje davanje pacijentu kojem je to potrebno, efikasne količine polipeptidnog heterodimera koji sadrži vezujući domen koji se specifično vezuje za TCRct, TCRp, CD3y. CD35, CD3s ili njihovu kombinaciju, i drugi vezujući domen koji se specifično vezuje za različiti cilj, na primer. tumor-specifični antigen ili drugi antigen izbora, na mestu ili ćeliji gde je poželjna aktivacija T-ćelija.
U još jednom aspektu, predmetna objava obezbeđuje metod inhibiranja rasta, metastaza, ili metastatskog rasta maligniteta, koji uključuje davanje pacijentu kojem je to potrebno, efikasne količine polipeptidnog heterodimera koji sadrži vezujući domen koji se specifično vezuje za TCRct, TCRp, CD3y. CD35, CD3e. c-Met, RON ili njihovu kombinaciju. U određenim formama, metod uključuje još i davanje paci jentu kojem je to potrebno, hemoterapijskog sredstva Ili jonizujućeg zračenja.
U još jednom aspektu, predmetna objava obezbeđuje metod lečenja autoimunskog ili zapaljenskog stanja, koji uključuje davanje pacijentu kojem je to potrebno, efikasne količine polipeptidnog heterodimera koji sadrži vezujući domen koji se specifično vezuje za TCRa, TCRp, CD3y, CD35. CD3e ili CD28.
U još jednom aspektu, predmetna objava obezbeđuje metod lečenja poremećaja ili oboljenja vezanih za B-ćelije, koji uključuje davanje pacijentu kojem je to potrebno, efikasne količine polipeptidnog heterodimera koji sadrži vezujući domen koji se specifično vezuje za TCRa, TCRp, CD3y, CD35 ili CD3e, i drugi vezujući domen koji se specifično vezuje za CD 19, CD20, CD79b, ili HLA-DR.
U određenim formama, metodi korišćenja polipeptidnih heterodimera đatih u ovom tekstu mogu uključivati još i davanje pacijentu kojem je to potrebno, drugog aktivnog sredstva, na primer drugog polipeptidnog heterodimera, monoklonskog antitela ili fuzionog proteina izvedenog iz imunoglobulina.
KRATAK OPIS CRTEŽA
Slika 1 predstavlja šematski prikaz bivalentnog anti-CD28 polipeptidnog heterodimera X0172 (levo) i SDS-PAGE analizu X0I72 (desno). "NR" označava "neredukujući" i "Red" označava "redukujući".
Slika 2 pokazuje da i monovalentni (X0124) i bivalentni (X0l72) anti-CD28 polipeptidni heterodimer sinergiziraju sa suboptimalnom koncentracijom PMA u stimulisanju prečišćenih humanih T-ćelija, u poredenju sa anti-CD28 scFv (2EI2 scFv). ali manje nego bivalentni anti-CD28 SMIP protein (2EI2 SM1P).
Slika 3 pokazuje da se bivalentni polipeptidni heterodimer X0I72 vezuje za CD4" T-ćelije bolje nego 2E12 scFv i monovalentni polipeptidni heterodimer X0I24.
Slika 4 pokazuje katjonsko-izmenjivačku hromatografiju polipeptidnih heterodimera X0251, X0252 i X0253 (levn) i SDS-PAGE elektroforetsku analizu istih polipeptidnih heterodimera pod neređukujućim (NR) i redukujućim (Red) uslovima (desno).
Slika 5 pokazuje masene spektre polipeptidnog heterodimera X0252, koji pokazuju daje heterodimer preovlađujuća vrsta.
Slika 6 pokazuje SDS-PAGE elektroforetsku analizu polipeptidnih heterodimera X0283 i X0284 pod neređukujućim (NR) i redukujućim (Red) uslovima (levo) i katjonsko-izmenjivačku hromatografsku analizu polipeptidnog heterodimera X0283.
Slika 7 pokazuje direktno vezivanje polipeptidnog heterodimera X0283 sa CD86, kako je ispitivano B1ACORE® analizom, sa jedinicama odgovora (response unils, Ru) nanetim u odnosu na vreme (levo), i šematski prikaz X0283.
Slike 8A i 8B pokazuju vezivanje bispecifićnih anti-RON i anti-CD3 konstrukata (polipeptidni heterodimer S0268 i Scorpion protein S0266) za MDA-MB-453 ćelije (A) i za izolovane T-ćelije (B).
Slike 9A i 9B pokazuju specifičnost vezivanja za (A) Reci (CD 19'. CD2(T) ćelije ili (B) Jurkat (CD3<1>) ćelije, bispecifićnih heterodimera koji imaju anti-CDI9 i anti-CD3 vezujuće domene (TSC020) ili anti-CD20 i anti-CD3 vezujuće domene (TSC02 I).
Slike 10A-10D pokazuju proliferaciju CD4+ i CD8+ T-ćelija u odgovoru na bispecifične polipeptidne heterodimere TSC054. TSC078. TSC079 i bscl9x3 (TSC036), sa (A i B) Daudi (CD19<+>) ćelijama ili (C i D) MDA-MB-453 (CD 19 ) ćelijama.
Slike 1 IA i 11B pokazuju usmerenu T-ćelijsku citotoksičnost indukovanu bispecifičnim polipeptidnim heterodimerima TSC054, TSC078. TSC079 i S0268 u testu oslobađanja hroma (<5l>Cr), sa (A) Daudi (RON\ CD191 ćelijama ili (B) BxPC-3 (RON\ CD 19") ćelijama.
Slika 12 pokazuje ciljno-zavisnu proliferaciju T-ćelija indukovanu CD 19+ ćelijskom linijom (Daudi), uz korišćenje bispecifićnih polipeptidnih heterodimera
TSC165, TSC166, TSC167, TSC168 1 TSC100 u koncentracijama od 0.1 pM do 10 000 pM.
Slika 13 pokazuje ciljno-zavisnu proliferaciju T-ćelija indukovanu CD 19+ ćelijskom linijom (Daudi) uz korišcenje bispecifićnih polipeptidnih heterodimera TSC127 i TSC165, sa bscl9x3BiTE kao kontrolom, u koncentracijama od (1001 pM do 1000 pM.
Slika 14 pokazuje ciljno-zavisno preusmeravanje T-ćelijske ciioloksičnosti na CD 19+ ćelijsku liniju (Daudi) uz korišcenje bispecifićnih polipeptidnih heterodimera TSC100, TSC165, TSC166, TSC167. i TSC 168.
DETALJAN OPIS
Predmetna objava obezbeđuje polipeptidne hcterodimere koji se formiraju između dva različita jednolančana polipeptiđa putem prirodne heterodimerizacije imunoglobulinskog CHI regiona i imunoglobulinskog lakolančanog konstantnog regiona (CL). Polipeptidni heterodimer ima dva ili više vezujućih domena koji se specifično vezuju za jedan ili više ciljeva (npr., antigen, receptor ili ligand). Pored toga. svaki od dva lanca heterodimera sadrži još i Fc-region-deo (npr.. imunoglobulinski CH2 i/ili CH3 domen). Predmetna objava obezbeđuje i nukleinske kiseline, vektore, ćelije-đomaćine i metode spravljanja polipeptidnih heterodimera.
Tehnologija heterodimerizacije opisana u ovom tekstu ima jednu ili više od sleđećih prednosti: (1) potencijal za minimalnu imunogenost polipeptidnih heterodimera, zbog toga što se dimeri formiraju putem prirodne heterodimerizacije imunoglobulinskog CHI regiona i imunoglobulinskog CL regiona; (2) efikasna proizvodnja i prečišćavanje polipeptidnih heterodimera predmetne objave mogući su zahvaljujući koeksprimiranju dva različita jednolančana polipeptiđa, kako je pokazano u primerima; (3) sposobnost posredovanja Fc efektorskih funkcija (npr., CDC, ADCC. ADCP), koja se može pozitivno ili negativno modifikovati mutagenezom, i duži poluživot u serumu zbog toga što svaki lanac polipeptidnog heterodimera prema predmetnoj objavi ima Fc region-deo (npr., imunoglobulinski CH2 i CF13 domen; i (4) polipeptidni heterodimeri predmetne objave imaju veličinu koja je tipično manja od molekula antitela. što dopušta bolje prodiranje u tkivo, na primer u solidni malignitet.
Polipeptidni heterodimeri dati u ovom tekstu korisni su za usmeravanje terapijskih sredstava ili imunskih efektorskih ćelija ka ciljnim ćelijama. Na primer. u određenim formama, polipeptidni heterodimeri mogu sadržati vezujući domen koji se specifično vezuje za TCR kompleks ili njegove komponente (npr.. TCRa. TCRJ3, CD3y, CD35 i CD3e). i drugi vezujući domen koji se specifično vezuje za drugi različiti cilj, kao što je onkološki cilj (npr., c-Met, RON, CEACAM-6 i PSMA) ili cilj na B-ćeliji (npr.. CD 19, CD79b, IILA-DR i CD20). Vezujući domen specifičan za drugi različiti cilj može imati veći afinitet za svoj cilj nego što je afinitet vezujućeg domena za TCR kompleks ili njegovu komponentu, kao što je CD3. Takvi polipeptidni heterodimeri će se preferencijalno prvo vezivati za onkološki cilj ili cilj na B-ćelijama, a zatim će regrutovati T-ćelije ka tumorskim ili kancerskim ćelijama koje eksprmiiraju onkološki cilj ili B-ćelijski cilj. i korisni su za inhibiranje rasta, metastaza ili metastatskog rasta maligniteta (uključujući kancere B-ćelija). Dodatne upotrebe polipeptidnih heterodimera dat ih u ovom tekstu uključuju usmerenu aktivaciju T-ćelija i lečenje atitoimunskih ili zapaljenskih stanja.
Naslovi odeljaka upotrebljeni u ovom tekstu služe samo za organizovanje teksta i ne treba da se shvate kao da ograničavaju opisanulemu. Svi dokumenti ili delovi dokumenata navedeni u ovom tekstu, uključujući, ali ne ograničavajući se na patente, patentne prijave, članke, knjige i sporazume, ovde su jasno inkorporisani kao reference u cei ini, za bilo koju namenu. U slučaju da jedan ili više inkorporisanih dokumenata ili delova dokumenata definišu pojam koji je u suprotnosti sa definicijom log pojma u prijavi, važeća je definicija u ovoj prijavi.
U predmetnom opisu, treba razumeti da svaki opseg koncentracija, opseg procenata, opseg odnosa ili opseg cei ih brojeva, uključuje vrednost svakog celog broja unutar navedenog opsega i, kada je pogodno, njihove frakcije (na primer. jedan deseti deo ijedan stoti deo celog broja), osim ako nije drugačije naznačeno. Kako se koristi u ovom tekstu, "oko" označava ± 20% od navedenog opsega, vrednosti, sekvence ili strukture, ukoliko nije drugačije naznačeno. Treba razumeti da se pojmovi navedeni u jednini, kada se koriste u ovom tekstu, odnose na "jednu ili više" nabrojanih komponenti, ukoliko nije drugačije naznačeno ili određeno kontekstom. Upotrebu alternative (npr., "ili") treba razumeti tako da označava jedno, oba ili bilo koju kombinaciju alternativa. Kada se koriste u ovom tekstu, izrazi "uključuje" i "sadrži" koriste se kao sinonimi. Pored toga, treba razumeti da su pojedinačni jednolančani polipeptidi ili heterodimeri izvedeni iz različitih kombinacija struktura i supstituenata (npr., domeni, regioni, zglobovi i linkeri) opisanih u ovom tekstu, objavljeni predmetnom prijavom u istoj meri kao da je svaki jednolančani polipeptid ili heterodimer naveden pojedinačno. Tako je izbor određenih komponenti za formiranje pojedinačnih jednolančanih polipeptiđa ili heterodimera. u okviru predmetne objave.
Kako se koristi u ovom tekstu, protein se "sastoji suštinski od" nekoliko domena (npr., vezujući domen koji se specifično vezuje za cilj. zglob, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen. i Pc region-deo) ako drugi đelovi proteina (npr.. amino-kiseline na amino- ili karboksi-terrninusu ili između dva domena) u kombinaciji, doprinose sa najviše 20% (npr., najviše 15%. 10%. 8%, 6%, 5%, 4%. 3%, 2% ili 1%) dužini proteina i suštinski ne utiču (tj., smanjuju aktivnost za ne više od 50%. na primer, ne više od 40%, 30%. 25%, 20%, 15%, 10% ili 5%) na aktivnosti različitih domena (npr., afinitet vezivanja za cilj vezujućeg domena, aktivnosti Fc region-dela, i sposobnost imunoglobulinskog heterodimerizacionog domena da olakša heterodimerizaciju). U određenim formama, protein (npr., jednolančani polipeptid) koji se sastoji suštinski od vezujućeg domena koji se specifično vezuje za cilj. imunoglobulinskog heterodmerizacionog domena, zgloba i Fc region-dela može sadržati sp<p>jne amino-kiseline na amino- i/ili karboksi-terrninusu proteina i/ili između dva različita domena (npr., između vezujućeg domena i imunoglobulinskog heterodimerizacionog domena, između imunoglobulinskog heterodimerizacionog domena i zgloba i/ili između zgloba i Fc region- dela).
"Polipeptidni heterodimer" ili "heterodimer", kako se koristi u ovom tekstu, odnosi se na dimer formiran od dva različita jednolančana polipeptiđa. Ovaj pojam ne uključuje antitelo formirano od četiri jednolančana polipeptiđa (tj.. dva laka lanca i dva teška lanca). "Dimer" se odnosi na biološki entitet koji se sastoji od dve subjedinice koje su jedna sa drugom udružene preko jednog ili više oblika mcđumolekulskih sila. uključujući kovalentne veze (npr., disulfidne veze) i druge interakcije (npr..
elektrostatičke interakcije, slane mostove, vodonične veze i hidrofobne interakcije), i stabilan je pod odgovarajućim uslovima (npr., fiziološkim uslovima, u vodenom rastvoru pogodnom za ekspresiju, prečišćavanje i/ili skladištenje rekombinantnih proteina, ili pod uslovima za nedenaturišuću i/ili neredukujuću elektroforezu).
"Jednolančani polipeptid" je pojedinačni, linearni i kontinuirani aranžman kovalentno povezanih amino-kiselina. On ne uključuje dva polipeptidna lanca povezana na nelinearan način. npr. preko međulančane disulfidne veze (npr., polovina imunoglobulinskog molekula n kojem je laki lanac povezan sa teškim lancem preko disulfidne veze). U određenim formama, jednolančani polipeptid može imati ili formirati jednu ili više unutarlančanih disullldnih veza.
"Imunoglobulinski heterodimerizacioni domen", kako se koristi u ovom tekstu, označava imunoglobulinski domen jednolančanog polipeptiđa, koji preferencijalno interaguje ili se udružuje sa različitim imunoglobulinskim domenom drugog jednolančanog polipeptiđa, pri čemu interakcija različitih heterodimerizacionih domena suštinski doprinosi ili efikasno pokreće heterodimerizaciju prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa (tj., formiranje dimera između dva različita jednolančana polipeptiđa, koji se označava i kao"heterodimer"). Interakcija ili interakcije između heterodimerizacionih domena "suštinski doprinose ili efikasno pokreću" heterodimerizaciju prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa ukoliko postoji statistički značajno smanjenje đimerizacije između prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa u odsustvu heterodimerizacionog domena prvog jednolančanog polipeptiđa (HD-I) i/ili heterodimerizacionog domena drugog jednolančanog polipeptiđa (HD-II). U određenim formama, kada se prvi i drugi jednolančani polipeptid koeksprimiraju, najmanje 60%. najmanje oko 60% do oko 70%, najmanje oko 70% do oko 80%, najmanje oko 80% do oko 90%. 91%, 92%. 93%, 94%, 95%, 96%. 97%. 98%, 99% ili 100% i najmanje oko 90% do oko 92%, 93%, 94%. 95%, 96%, 97%, 98% ili 99% prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa formira heterodimere jedan sa drugim. Reprezentativni imunoglobulinski heterodimerizacioni domeni predmetne objave uključuju imunoglobulinski CHI region, imunoglobulinski CL region (npr., CkiliCXizotipovi) ili njihove derivate, uključujući imunoglobulinske CHI i CL regione divljeg tipa i izmenjene (ili mutirane) imunoglobulinske CH I i CL regione, kako je dato u ovom tekstu.
"Vezujući domen" ili "vezujući region", kako se koristi u ovom tekstu, odnosi se na protein, polipeptid, oligopeptid ili peptid, sa sposobnošću specifičnog prepoznavanja i vezivanja za cilj (npr., CD3. TCR, CD28, c-Met. RON). Vezujući domen uključuje svakog prirodnog, sintetskog, polusintetskog ili rekombinantno proizvedenog vezujućeg partnera za biološki molekul ili drugi cilj od interesa. Primeri vezujućih domena uključuju varijabilne regione jednolančanih antitela (npr . domenska antitela. sFv, scFv. Fab), receptorske ektodomene (npr., c-Met, RON) ili ligande (npr. citokine. hcmokine). Poznati su različiti testovi za identifikovanjc vezujućih domena predmetne objave, koji se specifično vezuju za određeni cilj, uključujući analize VVcstern blot, ELISA i Biacore.
Vezujući domen i njegov fuzioni protein "specifično se vezuju" za cilj ako se vezuju za cilj sa afinitetom ili Ka(tj., ravnotežna konstanta asocijacije određene vezujuće interakcije, sa jedinicama l/M) jednakim ili većim od KP M"\ a u isto vreme se ne vezuju u značajnoj meri sa drugim komponentama prisutnim u testnom uzorku. Vezujući domeni (ili njihovi fuzioni proteini) mogu da se klasifikuju kao "visokoafinitetni" vezujući domeni (ili njihovi fuzioni proteini) i "niskoafinitetni" vezujući domeni (ili njihovi fuzioni proteini). "Visokoafinitetni" vezujući domeni označavaju vezujuće domene sa Kaod najmanje IO<7>M"<1>,najmanje IO15 M"\ najmanje 10<l>) M"', najmanje IO<1>" M"', najmanje 10" M"<1>, najmanje 10'- M"'. ili najmanje IO'<3>M'V "Niskoafinitetni" vezujući domeni označavaju vezujuće domene sa Ka do IO<7>M'1. do IO<6>M'<!>. do 10' M"<1>. Alternativno, afinitet može da se definiše kao ravnotežna konstanta disocijacije (Kj) određene vezujuće interakcije, sa jedinicama M (npr.. 10° M do 10'<lj>M). Afiniteti vezujućih domena polipeptiđa i jednolančanih polipeptiđa prema predmetnoj objavi mogu lako da se odrede korišćenjem konvencinalnih tehnika (vidi. npr., Scatchardet al.,
(1949) Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660: i U.S. Patent No. 5.283.173, 5.468,614 ili ekvivalentno).
"T-ćelijski receptor" (TCR) je molekul koji se nalazi na površini T-ćelija. koji je. zajedno sa CD3, uopšleno odgovoran za prepoznavanje antigena vezanih za molekule glavnog kompleksa histokompatibilnosti (major histocompatibilitv complex, MHC). Kod većine T-ćelija sastoji se od heterodimera visokovai ijabilnih lanaca a i fi spojenih disulfidnom vezom. Kod drugih T-ćelija. eksprimira se alternativni receptor koji se sastoji od varijabilnih lanaca y i 8. Svaki lanac TCR član je imunoglobulinske
superfamilije i poseduje jedan N-terminalni imunoglobulinski varijabilni domen, jedan imunoglobulinski konstantni domen, transmembranski region i kratki citoplazmatski rep na C-terminalnom kraju (vidi, Abbas and Lichtman,Cellular umi Ma/ ecuhtr Immimologv(5"' Ed.), Editor: Saunders, Philadelphia. 2003): .lanevvavel al., Imnitinobiologv: The Imimme Svsfem hi Health and Di. sea. se.4<lh>Ed., Current Biologv Publications. p 148, 149 i 172. 1999). TCR, kako se koristi u predmetnoj objavi, može biti iz različitih životinjskih vrsta, uključujući, čoveka, miša, pacova ili druge sisare.
"CD3" je u struci poznat kao multiproteinski kompleks od šest lanaca (vidi, Abbas and Lichtman, 2003; Janevvavei al.,p. 172 i 178. 1999). Kod sisara. kompleks sadrži CD3y lanac, CD38 lanac, dva CD3c lanca i homodimer CD3C, lanaca. CD3y. CD38 i CD3e lanci su visoko srodni čelijski površinski proteini imunoglobulinske superfamilije, koji sadrže jedan imunoglobulinski domen. Transmembranski regioni CD3y, CD3S i CD3e lanaca su negativno naelektrisani. što je karakteristika koja omogućava ovim lancima da se udružuju sa pozitivno naelektrisanim T-ćelijskim receptorskim lancima. Unutarćelijski rep svakog od CD3y, CD35 i CD3e lanca sadrži jedan konzervirani motiv poznat kao imunoreceptorski na tirozinu bazirani aktivacioni motiv ili ITAM (immunoreceptor tyrosine-based activation motif), dok ih svaki CD3ČJ lanac ima tri. Veruje se da su ITAM važni za signalizacioni kapacitet TCR kompleksa. CD3. kako se koristi u predmetnoj objavi, može biti iz različitih životinjskih vrsta, uključujući, čoveka, miša, pacova ili druge sisare.
"TCR kompleks", kako se koristi u ovom tekstu, označava kompleks formiran udruživanjem CD3 sa TCR. Na primer. TCR kompleks može biti sastavljen od CD3y lanca, CD38 lanca, dva CD3c lanca i homodimera CD3C. lanaca. TCRa lanca i TCRp lanca. Alternativno, TCR kompleks može biti sastavljen od CD3y lanca. CD35 lanca, dva CD3e lanca, homodimera CD3čj lanaca, TCRy lanca i TCR8 lanca.
"Komponenta TCR kompleksa", kako se koristi u ovom tekstu, označava TCR lanac (tj., TCRa. TCRp, TCRy ili TCR5), CD3 lanac (tj.. CD3y. CD38. CD3e ili CD3Q, ili kompleks koji formiraju dva ili više TCR lanaca ili CD3 lanaca (npr., kompleks TCRa i TCRP, kompleks TCRy i TCR5, kompleks CD3s i CD3S, kompleks CD3y i CD3e. ili sub-TCR kompleks koiji formiraju TCRa, TCRp, CD3y, CD35 i dva CD3e lanca).
Svaki od termina koje razumeju stručnjaci u oblasti tehnologije antitela ima značenje stečeno u oblasti, ukoliko u ovom tekstu nije jasno đefinisano drugačije. Poznato je da antitela imaju varijabilne regione. zglobni region. i konstantne domene. Pregled strukture i funkcije imunoglobulina dat je na primer u Harlovvel al.,Eds.. Antibodies: A Laboratorv Manual, Chapter 14 (Cold Spring Harbor Laboratorv. Cold Spring Harbor, 1988).
Na primer, pojmovi "VL" i "VH" označavaju varijabilni vezujući region lakog odnosno teškog lanca antitela. Varijabilni vezujući region i sastoje se od zasebnih, jasno definisanih podregiona poznatih kao "regioni koji određuju komplementarnost"
(complementarity determinig regions, CDR) i "regiona okvira" (framevvork regions, FR). Izraz "CL" odnosi se na "konstantni region lakog lanca imunoglobulina" ili "lakolančani konstantni region", tj., konstantni region iz lakog lanca antitela. Izraz "CH" odnosi se na "konstantni region teškog lanca imunoglobulina" ili "teškolančani konstantni region". koji se dalje može podeliti, zavisno od izotipa anitela. na CH 1. CH2 i CH3 domen (IgA, IgD, IgG), ili na CHI. CH2, CH3 i CH4 domen (IgE. IgM). "Fab" (fragment antigen binding, fragment za vezivanje sa antigenom) je deo antitela koji se vezuje za antigene i uključuje varijabilni region i CHI teškog lanca, koji su povezani sa lakim lancem preko međulančanih disulfidnih veza.
Kako se koristi u ovom tekstu. "Fc region konstantnog domena-deo" ili "Fc region-deo" odnosi se na segment konstantnog regiona teškog lanca Fc fragmenta (fragment-krista I izu j uć i" region ili Fc region) antitela, koji može uključivati jedan ili više konstantnih domena kao što su CH2, CH3. CH4 ili bilo koju njihovu kombinaciju. Prema stanju tehnike, Fc region je odgovoran za efektorske funkcije imunoglobulina, kao što su ADCC (antibodv-dependent cell-mediated cytotoxicity. ćelijska citotoksičnost zavisna od antitela), ADCP (antibodv-dependent cellular phagocvtosis, fagocitoza ćelija zavisna od antitela), CDC (complement-depenđent cytotoxicity, ćelijska citotoksičnost zavisna od komplementa) i fiksacija komplementa, vezivanje za Fc receptore (npr.. CD 16, CD32, FcRn), produženje poluživotahi vivou odnosu na polipeptid koji nema Fc region, vezivanje sa proteinom A. a moguće čak i prolaz kroz placentu (vidi, Caponel al..Nature, 337:525 (1989)).
Pored toga, antitela imaju zglobnu sekvencu koja se tipično nalazi između Fab i Fc regiona (ali niži odeljak zgloba može uključivati amino-tenninalni deo Fc regiona). Prema stanju tehnike, imunoglobulinski zglob deluje kao fleksibilni spejser koji omogućava Fab đelu da se slobodno pokreće u prostoru. Nasuprot konstantnim regionima, zglobovi se razlikuju po strukturi, pri čemu njihova struktura i sekvenca variraju među klasama imunoglobulina, pa čak i među potklasama. Na primer, zglobni region humanog IgGl je slobodno fleksibilan, što omogućava Fab fragmentima da rotiraju oko svojih osa simetrije i da se pokreću unutar sfere centrirane oko prvog od dva disulfidna mosta između teških lanaca. U poređenju salim, zglob humanog lgG2 je relativno kratak i sadrži rigidni poliprolinski dvostruki heliks stabilisan pomoću četiri disulfidna mosta između teških lanaca, što ograničava fleksibilnost. Zglob humanog lgG3 razlikuje se od drugih potklasa po svom jedinstvenom produženom zglobnom regionu (njegova dužina iznosi oko četiri dužine zgloba IgGl), koji sadrži 62 amino-kiseline (uključujući 21 prolin i I 1 cisteina), i formira nefleksibilni poliprolinski dvostruki heliks i daje veću fleksibilnost jer su Fab fragmenti relativno daleko od Fc fragmenta. Zglob humanog IgG4 je kraći nego kod IgGl, ali ima istu dužinu kao lgG2. a njegova fleksibilnost je na prelazu između fleksibilnosti kod IgG I i lgG2.
Prema kristalografskim studijama, IgG zglobni domen može biti funkcionalno i strukturno podeljen na tri regiona: gornji, sržni ili središnji i niži zglobni region (Shine! al., Imnnmological Reviews130:87 (1992)). Primeri gornjih zglobnih regiona uključuju EPKSCDKTHT (SEQ ID NO:227) kako je nađeno u IgGl, ERKCCVE (SEO !D NO:2Il) kako je nađeno u lgG2, ELKTPLGDTTFIT (SEO ID NO:245) ili EPKSCDTPPP (SEQ ID NO:246) kako je nađeno u lgG3 i ESKYGPP (SEQ !D NO:247) kako je nađeno u lgG4. Primeri središnjih ili sržnih zglobnih regiona uključuju CPPCP (SEQ ID NO:228) kako je nađeno u IgG I i lgG2, CPRCP (SEQ ID NO:248) kako je nađeno u IgG3, i CPSCP (SEO ID NO:249) kako je nađeno u lgG4. Dok izgleda da IgGl, lgG2 i IgG4 antitelo imaju po jedan gornji i srednji region zgloba, lgG3 ih ima četiri u tandemu - jedan je ELKTPLGDTTHTCPRCP (SEQ ID NO:250), a tri su
EPKSCDTPPPCPRCP (SEQ ID NO:251).
Antitela IgA i IgD izgleda da nemaju sržni region sličan onome u IgG, a IgD izgleda da ima dva gornja zglobna regiona u tandemu (vidi SEQ ID NO:222 i 252). Primeri gornjih zglobnih regiona divljeg tipa nađenih u IgAl i lgA2 antitelima navedeni su u SEQ IDN0:215 i 216.
Antitela IgE i IgM, nasuprot tome, nemaju tipičan zglobni region i umesto toga imaju CH2 domen sa osobinama sličnim osobinama zgloba. Primeri CH2 sekvenci IgE i IgM divljeg tipa, sličnih gornjem regionu zgloba, navedeni su u SEQ ID NO 253
(VCSRDFTPPTVKILQSSSDGGGHFPPTIQLLCLVSGYTPGTINITWLEDGQVMDV DLSTASTTQEGELASTQSELTLSQKIIWLSDRTYTCQVTYQGIITFEDSTKKCA)
odnosno SEQ ID NO 254 (VIAELPPKVSVFVPPRDGFFGNPRKSKLICQATG
FSPROIQVSWLREGKQVGSGVTTDQVQAEAKESGPTTYKVTSTLTIKESDWLGQ SMFTCRVDF1RGLTFQQNASSMCVP).
Kako se koristi u ovom tekstu, "zglobni region" ili "zglob" odnosi se na (a) imunoglobulinski zglobni region (sačinjen od, na primer, gornjeg i sržnog regiona) ili njegovu funkcionalnu varijantu, uključujući zglob divljeglipa i izmenjeni imunoglobulinski zglob, (b) lektinski međudomenski region ili njegovu funkcionalnu varijantu, (c) region drške molekula klastera diferencijacije (cluster of differentiation, CD) ili njegovu funkcionalnu varijantu, ili (d) deo ćelijskog površinskog receptora (međudomenski region) koji povezuje imunoglobulinske V-slične ili imunoglobulinske C-slične domene.
Kako se koristi u ovom tekstu, "imunoglobulinski zglobni region divljeg tipa" odnosi se na aminokiselinske sekvence prirodnog gornjeg i srednjeg zglobnog regiona, koje su umetnute i povezuju CHI i CH2 domen (za IgG, IgA i IgD) ili su umetnute i povezuju CHI i CH3 domen (za IgE i IgM), nađene u teškom lancu antitela. U određenim formama, sekvenca imunoglobulinskog zglobnog regiona divljeg lipa je humana i može sadržati zglobni region humanog IgG. Primeri humanih imtinoglobulinskih zglobnih regiona divljeg tipa navedeni su u SEQ ID NO; 215 (IgAl zglob), 216 (IgA2 zglob), 217 (IgD zglob), 667 (IgGl zglob), 219 (igG2 zglob), 220 (lgG3 zglob) i 221 (lgG4 zglob).
"Izmenjeni imunoglobulinski zglobni region divljeg tipa" ili "izmenjeni imunoglobulinski zglobni region" odnosi se na (a) imunoglobulinski zglobni region divljeg tipa sa do 30% aminokiselinskih pramena (npr., do 25%, 20%, 15%, 10% ili 5% aminokiselinskih supstitucija ili delecija), ili (b) deo imunoglobulinskog zglobnog
regiona divljeg tipa dužine od oko 5 amino-kiselina (npr.. oko 5, 6, 7, 8. 9, 10, II, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ili 20 amino-kiselina) do oko 120 amino-kiselina (na primer, dužine od oko 10 do oko 40 amino-kiselina ili oko od 15 do oko 30 amino-kiselina ili od oko 15 do oko 20 amino-kiselina ili od oko 20 do oko 25 amino-kiselina), ima do oko 30% aminokiselinskih promcna (npr., do oko 25%, 20%, 15%, 10%, 5%. 4%, 3%, 2% ili 1% aminokiselinskih supstitucija ili delecija ili kombinaciju istih), i ima IgG sržni region zgloba kako je navedeno u SEO ID NO 228, 248 ili 249.
"Peptidni linker" odnosi se na aminokiselinsku sekvencu koja povezuje varijabilni region teškog lanca sa varijabilnim regionom lakog lanca i obezbeđuje spejsersku funkciju kompatibilnu sa interakcijom dva subvezujuća domena, tako da rezultujući polipeptid zadržava specifični vezujući afinitet za isti ciljni molekul kao antitelo koje sadrži iste lakolančane i teškolančane varijabilne regione. U određenim formama, linker se sastoji od pet do oko 35 amino-kiselina, na primer, oko 15 do oko 25 amino-kiselina.
"Spojne amino-kiseline" ili Ispojne aminokiselinske rezidue", odnose se na jednu ili više (npr., oko 2-10) aminokiselinskih rezidua između dva susedna regiona ili domena jednolančanog polipeptiđa, na primer između zgloba i susednog Fc region-dela ili između zgloba i susednog vezujućeg domena ili između peptiđnog linkera koji povezuje dva imunoglobulinska varijabilna domena i susednog imunoglobulinskog varijabilnog domena. Spojne amino-kiseline mogu biti rezultat dizajna konstrukta jednolančanog polipeptiđa (npr., aminokiselinske rezidue koje su rezultat upotrebe mesta restrikcionog enzima tokom konstruisanja molekula nukleinske kiseline koji kodira jednolančani polipeptid).
"Linker između CH3 i CHI ili CL" odnosi se na jednu ili više (npr., oko 2-12) aminokiselinskih rezidua između C-terminusa CH3 domena (npr.. CH3 divljeg tipa ili imitiranog CH3) i N-terminusa CHI domena ili CL domena (npr., Ck).
"Imunoglobulinski region divljeg tipa" ili "imunoglobulinski domen divljeg tipa" odnosi se na prirodni imunoglobulinski region ili domen (npr., prirodni VL, VH, zglob, CL, CHI, CH2, CH3 ili CH4) iz različitih klasa ili potklasa imunoglobulina (uključujući, na primer, IgGl, lgG2, IgG3, lgG4, IgAl, lgA2, IgD, IgE i IgM) i iz različitih vrsta (uključujući, na primer, čoveka, ovcu, miša, pacova i druge sisare). Primeri humanog CHI regiona divljeg tipa navedeni su u SEQ ID NO: 1 14, 186-192 i 194, humanog Ck
regiona divljeg tipa u SEQ ID NO: 112, humanog CX regiona divljeg tipa u SEQ ID NO: 113 i 224-226, humanog CH2 domena divljeg tipa u SEQ ID NO: II5, 195-201 i 203. humanog CH3 domena divljeg tipa u SEQ ID NO:l 16. 204-210 i 212 i humanog CH4 domena divljeg tipa u SEQ ID NO:213 i 214.
"Izmenjeni imunoglobulinski region", "izmenjeni imunoglobulinski domen", "imitirani imunoglobulinski domen" ili slično, odnose se na region imunoglobulina čija sekvenciona identičnost sa imunoglobulinskim regionom ili domenom divljeg tipa (npr., VL, VH.zglob, CL, CHI, CH2. CH3 ili CH4 divljeg tipa) iznosi najmanje 75% (npr.. 80%, 82%, 84%, 86%, 88%, 90%, 91%, 92%. 93%, 94%. 95%, 96%. 97%, 98%, 99% ili 99.5%). Na primer, "izmenjeni imunoglobulinski CHI region" ili "izmenjeni CHI region" odnosi se na CHI region čija sekvenciona identičnost sa imunoglobulinskim CHI regionom divljeg tipa (npr., humani CHI) iznosi najmanje 75% (npr.. 80%, 82%, 84%, 86%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%. 96%, 97%, 98%. 99% ili 99.5%). Slično tome, "izmenjeni imunoglobulinski CH2 region" ili "izmenjeni CH2 domen", odnosi se na CH2 domen čija sekvenciona identičnost sa imunoglobulinskim CH2 regionom divljeg tipa (npr., humani CH2) iznosi najmanje 75% (npr., 80%, 82%, 84%, 86%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 99.5%).
"Sekvenciona identičnost/identičnost sekvenci", kako se koristi u ovom tekstu, odnosi se na procenat aminokiselinskih rezidua u jednoj sekvenci, koje su identične sa aminokiselinkim rezidualna u drugoj referentnoj polipeptid no j sekvenci posle poravnavanja sekvenci i uvođenja procepa, ako je potrebno, da bi se postigao maksimalni procenat sekvencione identičnosti, ne razmatrajući bilo kakve konzervativne supstitucije kao deo sekvencione identičnosti. Vrednosti za procenat sekvencione identičnosti generišu se pomoću NCB1 BLAST2.0 softvera, kako je definisano u Altschuiel al.,
(1997) "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, uz parametre podešene na unapred određene vrednosti (default).
U određenim formama, izmenjeni imunoglobulinski domen sadrži samo konzervativne aminokiselinske supstitucije imunoglobulinskog domena divljeg tipa. U određenim drugim formama, izmenjeni imunoglobulinski domen sadrži samo nekonzervativne aminokiselinske supstitucije imunoglobulinskog domena divljeg tipa. U još nekim drugim formama, izmenjeni imunoglobulinski domen sadrži i konzervativne i nekonzervativne aminokiselinske supstitucije. "Konzervativna supstitucija" prepoznaje se u struci kao supstitucija jedne amino-kiseline drugom amino-kiselinom koja ima slične osobine. Primeri konzervativnih supstitucija dobro su poznati u struci (vidi, npr., WO 97/09433. str. 10, publikovano 13. marta 1997; Lehninger, Biochemistrv, Second Edition; VVorth Publishers, Inc. NY:NY
(1975), str.71-77; Levvin, Genes IV. Oxlbrđ Universilv Press, NY and Ccll Press, Cambridge, MA (1990), str. S). U određenim formama, konzervativna supstitucija uključuje supstituciju leucina u serin.
Kako se koristi u ovom tekstu, pojam "derivat" odnosi se na modifikaciju jedne ili više aminokiselinskih rezidua peptiđa hemijskim ili biološkim putem, sa ili bez enzima, npr., glikozilacijom, alkilacijom, acilacijom, formiranjem estra ili formiranjem amida. Uopšteno, "derivat" se razlikuje od "analoga" po tome što roditeljski polipeptid može biti polazni materijal za stvaranje "derivata", pri čemu roditeljski polipeptid ne mora obavezno da se koristi kao polazni materijal za stvaranje "analoga". Derivat može imati različite hemijske, biološke ili fizičke osobine u odnosu na roditeljski polipeptid. Na primer, derivat može biti hidrofilniji ili može imati izmenjenu reaktivnost (npr., CDR koji ima aminokiselinske izmene koje menjaju njegov afinitet za cilj) u poređenju sa roditeljskim polipeptidom.
Kako se koristi u ovom tekstu, ako nije drugačije navedeno, pozicija aminokiselinske rezidue u varijabilnm regionu imunoglobulinskog molekula numerisna je prema Kabat-ovoj konvenciji numerisanja (Kabat,Secjiiences oj Proteins oj Immunological Interesi,5"<1>ed. Bethesda, MD: Public Health Service, National Institute of Health, (1991)) i pozicija aminokiselinske rezidue u konstantnom regionu imunoglobulinskog molekula numerisana je prema EU nomenklaturi (Ward et al., 1995Therap. Immunol.2:77-94). "Receptor" je proteinski molekul prisutan u plazminoj membrani ili u citoplazmi ćelije za koju signalni molekul (tj., ligand kao što je hormon, neurotransmiter. toksin, citokin) može da se prikači. Vezivanje signalnog molekula za receptor rezultuje konformacionom promenom receptora, koja obično inicira odgovor ćelije. Međutim, neki ligandi samo blokiraju receptore, ne indukujući nikakav odgovor ćelije (npr., antagonisti). Neki receptorni proteini su periferni membranski proteini. Mnogi receptori hormona i neurotransmitera su transmembranski proteini koji su ukotvljeni u fosfolipidni dvosloj ćelijske membrane, a drugu veliku klasu receptora čine unutareelijski proteini kao što su receptori za steroide i receptori za intrakrine peptidne hormone. "Poremećaj ili bolest vezan za B-ćelije" ili "bolest ili poremećaj vezan sa aberantnom aktivnošću B-ćelija", odnosi se na bolest ili poremećaj udružen sa (npr,, prouzrokovan ili nastaje zbog) aberantnom aktivnošćui B-ćelija ili aktivnošću koja odstupa od normalnog, odgovarajućeg ili očekivanog toka. Na primer, poremećaj ili bolest u vezi sa B-ćelijama može uključivati neodgovarajuću proliferaciju B-ćelija sa oštećenjima ili defektima DNK ili drugih ćelijskih komponenti. Aberanlna aktivnost B-ćelija može uključivati proliferaciju ćelija, koja se karakteriše neodgovarajuće visokim nivoima deoba B-ćelija, neodgovarajuće niskim nivoima apoptoze B-ćelija, ili i jednim i drugim. Takve bolesti mogu imati, na primer, jednu ili više lokalnih abnormalnih proliferacija B-ćelija, grupa B-ćelija ili tkiva, bilo da su kancerozne ili nekancerozne, benigne ili maligne. Poremećaj ili bolest u vezi sa B-ćelijama može uključivati i aberantnu proizvodnju antitela, kao sto je na primer proizvodnja autoantitela ili preterana proizvodnja antitela koja su poželjnija kada se proizvode u normalnim nivoima. U ovom tekstu se takođe ima u vidu da aberantna aktivnost B-ćelija može da se sretne u određenim subpopulacijama B-ćelija, ali ne i u drugim subpopulacijama, ili može uključivati neodgovarajuću stimulaciju T-ćelija, na primer neodgovarajućom prezentacijom antigena T-ćelijama, ili drugim B-ćelijskim putevima. Primeri poremećaja ili bolesti udruženih sa B-ćelijama uključuju malignitet B-ćelija ili kancer B-ćelija (npr., limfom B-ćelija, leukemiju B-ćelija ili mijelom B-ćelija), bolest koja se karakteriše proizvodnjom autoantitela (npr., autoimune bolesti) ili zapaljenjem, ili bolest koja se karakteriše neodgovarajućom stimulacijom T-ćelija prouzrokovanom neodgovarajućom B-ćelijskom prezentacijom antigena T-ćelijama ili do koje dolazi drugim putevima koji su vezani za B-ćelije. "Tretman/Iečenje", "tretirati/lečiti" ili "ublažiti", odnosi se na terapijski tretman ili profilaktički preventivni tretman. Tretman je terapijski ako se bar jedan simptom bolesti, koji se sreće kod osobe koja prima tretman, poboljšava ili ako tretman može da odloži pogoršanje ili napredovanje bolesti kod osobe, ili da spreći pojavu dodatnih pridruženih bolesti. "Terapijski efikasna količina (ili doza)" ili "efikasna količina (ili doza)" specifičnog vezujućeg molekula ili jedinjenja odnosi se na količinu jedinjenja koja je dovoljna da u statistički značajnoj meri ublaži jedan ili više simptoma bolesti koja se leći. Kada se odnosi na pojedinačni aktivni sastojak, primenjen sam, terapijski efikasna doza odnosi se samo na taj sastojak. Kada se odnosi na kombinaciju, terapijski efikasna doza se odnosi na kombinovane količine aktivnih sastojaka, koje rezultuju terapijskim efektom, kada se primene jedna za drugom ili istovremeno (u istoj formulaciji ili u isto vreme u različitim formulacijama).
Pojam "farmaceutski prihvatljiv" odnosi se na molekulske entitete i smeše koji ne proizvode alergijske ili druge ozbiljne neželjene reakcije kada se primenjuju putevima dobro poznatim u struci. "Pacijent kod kojeg postoji potreba" odnosi se na pacijenta koji je pod rizikom ili koji je oboleo od bolesti, poremećaja ili stanja koje reaguje na lečenje ili ublažavanje polipeptidnim heterodimerom ili njegovom smešom, datim u ovom tekstu.
Pojam "fuzioni protein izveden iz imunoglobulina" kako se koristi u ovom tekstu, odnosi se na fuzioni protein koji sadrži najmanje jedan imunoglobulinski region kao što je VL. VH, CL, CHI, CH2, CH3 ili CH4 domen. Imunoglobulinski region može biti imunoglobulinski region divljeg tipa ili izmenjeni imunoglobulinski region. Primeri fuzionih proteina izvedenih iz imunoglobulina uključuju jednolančane varijabilne fragmente antitela (scFv) (vidi, npr., Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-83, 1988), SMIP™ proteine (vidi US Patent Publication No. 2003/0133939, 2003/0118592 i 2005/0136049), PIMS proteine (vidi PCT Application Publication No. VVO 2009/023386) i multifunkcionalne vezujuće proteine (npr., SCORPION™, i Xceptor proteini) (vidi PCT Application Publication No.VVO 2007/146968, U.S Patent Application Publication No. 2006/0051844 i U.S. Patent No. 7.166,707).
Dodatne definicije date su u predmetnoj objavi.
Polipeptidni heterodimeri
U jednom aspektu, predmetna objava obezbeđuje polipeptidni heterodimer koji nastaje udruživanjem dva različita jednolančana polipeptiđa. Prvi jednolančani polipeptid (SCP-I) sadrži, sastoji se suštinski od, ili sastoji se od jednog do četiri vezujuća domena koja se specifično vezuju za od jedan do četiri cilja, zgloba (H-I), imunoglobulinskog heterodimerizacionog domena (HD-I) i Fc region-dela (FRP-I), dok drugi jednolančani polipeptid (SCP-II) sadrži, sastoji se suštinski od, ili sastoji se od nula do četiri vezujuća domena koja se specifično vezuju za od nula do četiri cilja, zgloba (H-1I), imunoglobulinskog heterodimerizacionog domena (HD-II) i Fc region-dela (FRP-ll). uz uslov da polipeptidni heterodimer sadrži najmanje dva vezujuća domena koja se specifično vezuju za jedan ili više ciljeva, na primer, najmanje dva različita cilja. H-I i H-II mogu imati istu sekvencu, ali mogu biti i različiti. HD-1 može sadržati imunoglobulinski CHI region, i HD-II može sadržati imunoglobulinski CL region. Alternativno, HD-I može sadržati imunoglobulinski CL region i HD-II može sadržati imunoglobulinski CHI region. FRP-1 i FRP-ll mogu imati istu sekvencu, ali mogu biti i različiti. Pojedinačne komponente polipeptidnih heterodimera predmetne objave opisane su detaljno u ovom tekstu.
V ezujući domeni
Kako je gore naznačeno, polipeptidni heterodimer predmetne objave sadrži dva jednolančana polipeptiđa. Jedan jednolančani polipeptid sadrži jedan do četiri vezujuća domena koja se specifično vezuju za jedan do četiri cilja, i drugi jednolančani polipeptid polipeptidnog heterodimera sadrži nula do četiri vezujuća domena koja se vezuju za nula do četiri cilja. Ukupan broj vezujućih domena polipeptidnog heterodimera u opsegu je od oko dva do osam i ukupan broj različitih ciljeva za koje se vezuju vezujući domeni u opsegu je od oko jednog do osam, na primer, od dva do osam, dva do četiri, dva do tri ili dva cilja.
Ako jednolančani polipeptid polipeptidnog heterodimera sadrži jedan vezujući domen, vezujući domen može biti lociran amino- ili karboksi-terminalno u odnosu na Fc region-deo jednolančanog polipeptiđa. Na primer, jednolančani polipeptid koji sadrži dva vezujuća domena može imati jedan vezujući domen lociran aminoterminalno i drugi karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo jednolančanog polipeptiđa, ili oba vezujuća domena mogu biti aminoterminalno, ili oba karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo. U drugom primeru. jednolančani polipeptid može imati tri vezujuća domena, pri čemu (a) dva vezujuća domena su aminoterminalno na različitim jednolančanim proteinima i treći vezujući domen je karboksiterminalno. u odnosu na Fc region-deo, na SCP-I ili SCP-II, (b) dva vezujuća domena su karboksiterminalno na različitim jednolančanim proteinima i treći vezujući domen je aminoterminalno, u odnosu na Fc region-deo, na SCP-I ili SCP-II. U još jednom primeru, polipeptidni heterodimer može sadržati četiri vezujuća domena, pri čemu su dva vezujuća domena locirana aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo na različitim lancima i druga dva vezujuća domena su locirana karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo na različitim lancima. Alternativno, u bilo kojoj od ovih formi, dva vezujuća domena mogu biti povezana jedan sa drugim u tandemu i locirana na SCP-I ili SCP-II ili oba, zavisno od broja prisutnih vezujućih domena - slaganje u tandem koristi se kada je pet do osam kombinovanih vezujućih domena prisutno u SCP-1 i SCP-II.
Vezivane vezujućeg domena za cilj moduliše interakciju između cilja (npr., receptor ili ligand) i drugog molekula. U određenim formama, vezivanje vezujućeg domena za cilj (npr., receptor) stimuliše određene funkcije cilja (npr., signalnu transđukciju) ili približava različite ciljeve jedan drugom, za postizanje biološkog efekta (npr., usmeravanje T-ćelija ka tumoru što onda aktivira T-ćelije). U određenim drugim formama, vezivanje vezujućeg domena za cilj, blokira interakciju između cilja i drugog molekula i tako interferira, redukuje ili eliminiše određene funkcije cilja.
Ciljni molekul, koji je specifično vezan za vezujući domen sadržan u polipeptidnom heterodimeru predmetne objave može se nalaziti na ili biti udružen sa ćelijom od interesa ("ciljna ćelija"). Primeri ciljnih ćelija uključuju kancerske ćelije, ćelije udružene sa autoimunskoni bolešću ili poremećajem ili sa zapaljenskom bolešću ili poremećajem, B-ćelije i T-ćelije. Ciljni molekul može i da ne bude udružen sa ćelijom. Primeri ciljnih molekula koji nisu udruženi sa ćelijom uključuju rastvorljive proteine, sekretovane proteine, deponovane proteine i vanćelijske strukturne (matriksne) proteine.
U određenim formama, vezujući domeni polipeptidnih heterodimera predmetne objave specifično se vezuju za cilj koji se bira između T-eelijskih ciljeva, tumorskih antgena, B-ćelijskih ciljeva, proinfiamatomih citokina ili hemokina. proonkogenih citokina ili faktora rasta, angiogenih agenasa. fc receptora, transferinskog receptora, receptorskih tirozin kinaza (receptor tyrosine kinases, RTK), TNFSFR, ili bilo koje njihove kombinacije. Na primer, polipeptidni heterodimeri predmetne objave se specifično vezuju za cilj na T-ćeliji i tumorski cilj.
U određenim formama, vezujući domen polipeptidnog heterodimera predmetne objave specifično se vezuje za T-ćelijski cilj kao što je TCR kompleks ili njegova komponenta (npr,, TCRa, TCRp, CD37. CD3S. i CD3e). CD28, PD-I. HV HM. BTLA, CD80, CD86, G1TR i TGFBRI.
U određenim formama, vezujući domen polipeptidnog heterodimera predmetne objave specifično se vezuje za TCR kompleks ili njegovu komponentu. Na primer, u određenim formama, vezujući domen se specifično vezuje za pojedinačni humani CD3 lanac (npr., humani CD3y lanac, humani CD3S lanac i humani i CD3s lanac) ili kombinaciju dva ili više pojedinačnih humanih CD3 lanaca (npr.. kompleks humanog CD3y i humanog CD3s ili kompleks humanog CD35 i humanog CD3s). U određenim formama, vezujući domen se specifično vezuje za humani CD3s lanac. U određenim drugim formama, vezujući domen se specifično vezuje za jedan ili više od: humani TCRa. humani TCRp ili heteodimer formiran od humanog TCRa i humanog TCRp. U određenim drugim formama, vezujući domen predmetne objave vezuje se za kompleks formiran od jednog ili više humanih CD3 lanaca sa jednim ili više humanih TCR lanaca, kao stoje kompleks koji se formira od humanog CD3y lanca, humanog CD35 lanca ili humanog CD3e lanca sa humanim TCRa lancem ili humanim TCRp lancem. U svakoj od ovih formi, polipeptidni heterodimer predmetne objave može da se vezuje i za tumorski cilj.
U određenim formama, jedan ili više vezujućih domena polipeptidnog heterodimera predmetne objave specifično se vezuju za tumorski cilj uključujući RON, c-Met. CEACAM-6, PSMA, EpCAM, CEA, PCTA-I, STEAP-I, PSCA, ALCAM
(CD166), EphA2, CD151, CA-125. MUC-I. MAGE-1. TROP2. IGFIR, CD44u6, CDI51, TGFBR2, GHRHR, GHR, IL-6R, gp!30. TNFR2, OSMRp, Patched-1, Frizzled, Robol, LTpT, CD80, CD81, CD86. CCR5. HER-3. HER-4, EGFR, CEA, MUC2, MUC3, MUC4, MUCSac, MUC5b, MUC7. phCG. Lewis-Y, CD33, CD30., gangliozid CD3, 9-0-acetil-GD3, GM2, Globo H. fukozil GM1, Poly SA, GD2, karboanhidrazu IX
(MM/CA IX), CD44u6, sonic heđgeliog (Shh). Wue-I, antigen plazma-eelija, (za membranu vezani) IgE, sa melanomom udruženi hondroitin-sulfalni proteoglikan (MCSP), CCR8, TNF-alfa prekursor, STEAP-2, mezotelin, A33 antigen, prostatni antigen matičnih ćelija (PSCA), Ly-6, dezmoglein 4, E-kadherinski neoepitop, fetalni acetilholinski receptor, CD25, CAI9-9 marker, CA-125 marker i receptor tipa II za Muellerian-ovu inhibitornu supstancu (MIS). sTn (sijalizovani Tn antigen, TAG-72). FAP (fibroblast-aktivacioni antigen), endosijalin. F.GFRvIll, LG, SAS, CD63, B7-H3 ili bilo koju njihovu kombinaciju.
U određenim formama, jedan ili više vezujućih domena polipeptidnog heterodimera predmetne objave specifično se vezuju za cilj na B-ćelijama. na primer, CD 19, CD20, CD2L CD22, CD30. CD33. CD37. CD38, CD70. CD79b. HLA-DR, ili bilo koju njihovu kombinaciju.
U određenim formama, jedan ili više vezujućih domena polipeptidnog heterodimera predmetne objave specifično se vezuju za proinflamatorne citokine ili hemokine kao što su TNFtt, 1L-6, hvperlL-6, IL-2. IL-1. IL-8, IP-10, lFNy, IFNu, RAN KL, FASL, TGFp, 1L-7, IL-10. ILI7A/F, TVVEAK, CSF2, IGF1, IGF2 ili BLyS/APRIL ili bilo koju njihovu kombinaciju.
U određenim formama, jedan ili više vezujućih domena polipeptidnog heterodimera predmetne objave specifično se vezuju za proonkogene citokine ili faktore rasta, kao što su HGF, MSP, EGF (uključujući epiregulin, herregulin, p-regulin, neuregulin), HIF-la, VEGFA, VEGFB. VEGFC. VEGFD, TNFa, IL-6, hiperlL-6. IL-8, VVnt, sHH, TGFp, PDGF, ili bilo koju njihovu kombinaciju.
U određenim formama, jedan ili više vezujućih domena polipeptidnog heterodimera predmetne objave specifično se vezuju za angiogene agense kao što su PDGFR, VEGFR1-4, NRP1, angiopoetin 2, c-Met. ili bilo koju njihovu kombinaciju.
U određenim formama, jedan ili više vezujućih domena polipeptidnog heterodimera predmetne objave specifično se vezuju za Fc receptore kao što su (1)61. CD32A, CD32B, CD16, FcRn, ili bilo koju njihovu kombinaciju.
U određenim formama, vezujući domen polipeptidnog heterodimera predmetne objave specifično se vezuje za transferinski receptor kao što je CD71.
U određenim formama, jedan ili više vezujućih domena polipeptidnog heterodimera predmetne objave specifično se vezuju za receptorske tirozin kinaze kao što su EGFR. EGFRvllL ErbB2, ErbB3, ErbB4, IGFIR, EphA2, c-Met. RON, ili bilo koju njihovu kombinaciju.
U određenim formama, jedan ili više vezujućih domena polipeptidnog heterodimera predmetne objave specifično se vezuju za TNFSFR kao što su TNFR1, TNFR2. TWEAKR, TACI, BAFF-R, BCMA. FAS. OX40, GITR. 4-i-BB, LThetaR, HVEM, RANK , ili bilo koju njihovu kombinaciju.
U određenim formama, jedan ili više vezujućih domena polipeptidnog heterodimera predmetne objave specifično se vezuju za hyperlL-6, 1L-I0. L1GMT, CD40, PDL1, PDL2, ili bilo koju njihovu kombinaciju.
U određenim formama, jedan ili više vezujućih domena polipeptidnog heterodimera predmetne objave su agonisti jednog ili više od sledećih molekula: IL-10, HLA-G, HGF, IL-35, PD-1, BTLA, TNFR1. TNFR2. DR4, DR5, TNVEAKR, FAS ili bilo koje njihove kombinacije.
Vezujući domen može biti svaki peptiđ koji se specifično vezuje za cilj od interesa. Izvori vezujućih domena uključuju varijabilne regione antitela iz različitih vrsta (koji mogu biti formatirani kao antitela, sFV, scFv, Fab, ili solubilni VH domen ili domenska antitela) uključujući čoveka. glodara. pticu i ovcu. Dodatni izvori vezujućih domena uključuju varijabilne regione antitela iz iz drugih vrsta kao što su kamelide (jednogrbe kamile, dvogrbe kamile ili lame, Ghahroudi et al., (1997) FEBS Letters 414(3):52l-526; Vincke et al. (2009) Journal of Biological Chemistry (2009) 284:3273-3284; Hamers-Casterman et al. (1991), Nature. 363-446 i Nguven et al., (1998) J. Mol. Biol., 275:413), ajkula-dadilja (Roux et al, (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:11804) pegava riba-pacov (Nguyen et al. (2002) Immunogenetics, 54:39), ili paklar (Herrin et al. (2008) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 105:2040-2045 i Adler et al. (2008) Nature !mmunology 9:319-327). Ova antitela mogu prividno formirati antigen-vezujuće regione koristeći samo varijabilni region teškog lanca tj. ova funkcionalna antitela su heterodimeri samo teških lanaca (označena kao "teškolančana antitela") (Jaspers et al.
(2004) Nature Biotechnology 22:1161-1165; Cortez-Retamozo et al.. (2004) Cancer
Research 64:2853-2857; Bara! et al. (2006) Nature Medicine 12:580-584 i Barthelemv et al., (2008) Journal of Biological Chemistrv 283:3639-3654).
Primeri anti-CD3 antitela iz kojih se mogu izvesti vezujući domeni ove objave uključuju Cris-7 monoklonsko antitelo (Reinherz, E. L. et al. (eds.), Leukocvte typing II., Springer Verlag, Nevv York (1986)), BC3 monoklonsko antitelo (Anasetti et al. (1990) J. Exp. Med. 172:1691). OKT3 (Ortho multicenter Transplant Studv Group (1985) N- Engl. J. Med. 3 13:337) i njihovi derivati kao šio su OKT3-ala-ala (Herold et al. (2003) .1. CHn. Invest. 11:409), vizilizumab (Carpenter et al. (2002) Blood 99:2712) i 145-2C11 monoklonsko antitelo (Hirsch et al., (1988) J. tmmunol. 140:1776). Primer anli-TCR antitela je H57 monoklonsko antitelo (Lavassani et al. (2007) Scandinavian Journal of lminunology 65:39-47).
Alternativni izvor vezujućih domena objave uključuje sekvence koje kodiraju nasumične peptidne biblioteke ili sekvence koje kodiraju inženjerisani diverzitet amino-kiselina u regionima petlji alternativnih ne-antitelo skafolda, kao što su domeni fibrinogena (vidi, npr., Weisel et al. (1985) Science 230:1388), Kunitz domeni vidi, npr., U.S. Patent No. 6,423,498) ankirin-ponavljajući proteini (Binz et al. (2003) Journal of Molecular Biologv 332:489-503 i Binz et al. (2004) Nature Biotechnology 22(5):575-582), fibronektin-vezujući domeni (Richards et al. (2003) Journal of Molecular Biology 326:1475-1488; Parker etal. (2005) Protein Eneineering Design and Selection I8(9):435-444 i Hackel et al. (2008) Journal of Molecular Biology 381:1238-1252), miniproteini sa strukturnim motivom "cisteinski čvor" (Vita el al. (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 92:6404-6408; Martin et ai. (2002) Nature Biotechnologv 21:71-76 i Huang et al (2005) Structure 13:755-768), telratrikopeptid-ponavljajući domeni (Main et al. (2003) Structure 11:497-508 i Cortajarena et al. (2008) ACS Chemical Biologv 3:161-166). leucinom bogati ponavljajući domeni (Stumpp et al. (2003) Journal of Molecular Biologv 332:471-487), lipokalinski domeni (vidi, npr., VVO 2006/095164, Beste et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 96:1898-1903 i Schonfeld et al. (2009) Proc, Natl. Acad. Sci. (USA) 106:8198-8203, V-slični domeni (vidi, npr., U.S. Patent Application Publication No. 2007/0065431), domeni tipa lektin C (Zelensky and Gerady (2005) FEBS J. 272:6179; Beavil et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 89:753-757 i Sato et al. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 100: 7779-7784), mAb<2>ili FCAB™ (vidi. npr., PCT Patent
Application Publication No. WO 2007/098934; WO 2006/072620) ili slično (Nord et al.
(1995) Protein Engineering 8(6):601-608; Nord et al. (1997) Nature Biotechnology 15:772-777; Nord et al. (200!) European Journal of Biochemistrv 268(I5):4269-4277 i Binz et al. (2005) Nature Biotechnologv 23:1257-1268).
Vezujući domeni ove objave mogu da se naprave kako je opisano u ovom tekstu ili različitim metodima poznatim u struci (vidi. npr., U.S. Patent No. 6.291,161 i 6,291,158). Na primer, vezujući domeni ove objave mogu da se identifikuju skriningom biblioteke Fab faga na Fab fragmente koji se specifično vezuju za cilj od interesa (vidi Hoel et al. (2005) Nature Biotechnology 23:344). Pored toga, za razvijane vezujućih domena ove objave mogu da se koriste tradicionalne strategije razvijanja hibridoma uz korišcenje cilja od interesa kao imunogena u pogodnim sistemima (npr.. miš HUMAB MOUSE®, TC MOUSE™, KM-MOUSE<®>, lame, pilići, pacovi, hrčci, zečevi, itd.).
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži CD86-vezujući domen kao stoje CTLA4 ektodomen, CD28 ektođomen, ili vezujući domen varijabilnog regiona imunoglobulina (kao što je scFv) specifičan za CD86 (npr., iz monoklonskih antitela 3D! ili FUN1). U nekim formama, koristi se manje od celog ektodomena. Na primer, mogu da se koriste domeni unutar CTLA4 ektodomena, koji se vezuju za CD86 i preveniraju vezivanje CD86 za CD28. CD86-vezujući domen može da blokira vezivanje CD86 za CD28 i time negativno reguliše aktivaciju T-ćelija.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži IL-10 agonist. npr., 1L-I0, monolL-10 ili funkcionalni region istog. "MonolL-10" odnosi se na IL-10 molekul koji ima kratki linker (GGGSGG, SEO ID NO.760) koji razdvaja dva subdomena molekula (domene amino- i karboksi-kraja) tako da ovi subdomeni mogu da formiraju intramolekulski dimer.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži HLA-G agonist npr.. HLA-G5, HLA-G1, HLA-G mutein ili funkcionalni region toga; ektodomen HLA-G5. HLA-G 1 ili HLA-G mutein; ili vezujući domen varijabilnog regiona imunoglobulina (kao scFv) specifičan za 1LT2. ILT4 ili K1R2DL4.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži HGF agonist kao sto je HGF ili njegov subdomen.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži 1L35 agonist kao Stoje vezujući domen varijabilnog regiona imunoglobulina (kao scFv) specifičan za 1L35R ili IL35, ili njegov funkcionalni region.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži L1GHT antagonist, kao što je vezujući domen varijabilnog regiona imunoglobulina (kao scFv) specifičan za LIGHT, ili HVEM ektodomen ili funkcionalni region istog.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži PD-1 agonist. kao što je vezujući domen varijabilnog regiona imunoglobulina (kao scFv) specifičan za PD-1 ili PD-1 llgand (npr. PD-L1 ili PD-L2) ili njegov funkcionalni region.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži BTLA agonist. kao što je vezujući domen imunoglobulin-sličnog varijabilnog regiona (kao scFv) specifičan za BTLA, ili FIVEM ektodomen ili njegov funkcionalni region.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži G1TRL antagonist kao što je vezujući domen imunoglobulin-sličnog varijabilnog regiona (kao scFv) specifičan za G1TRLGITR ektodomen, solubilni G1TR. ili njegov fuinkcionalnu region.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži CD40 antagonist kao što je vezujući domen imunoglobulin-sličnog varijabilnog regiona (kao scFv) specifičan za CD40.
U nekim formama, vezujući domen je jednolančani Fv fragment (scFv) koji sadrži regione VH i VL specifične za cilj od interesa. U određenim formama, Vu i Vldomeni su humani. Primeri VH regiona uključuju VH region 2EI2 (anti-CD2S) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO 106, VH region P2C2 (anti-CD79b) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO: 184, VH region 5D5 (anti-c-Met) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO:258, VH region A2 (anti-hiperlL-6) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO:80, VH region 3D1 (anti-CD86) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO:92, VH region MET021 (anti-c-Met) scFv kako je navedeno u SEO ID NO: 100. VH region GI9-4 (anti-CD3) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO: 103, VH region HD37 (anti-CD!9) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO: 117, VH region M0042 (anti-HLA-DR) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO: 121, VH region BMA031 (anti-TCR) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO:828, VH region OKT3-M (anti-CD3) ) scFv kako je navedeno u SEO ID NO:831 i VH region HuM291 (anti-CD3) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO:835. Nukleotidne sekvence koje kodiraju VH regione A2 (anti-hiperll-6) i 3D1 (anti-CD86) scFv navedene su u SEO ID NO:79 odnosno 91.
Primeri VL domena su VL region 2EI2 (anti-CD28) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO: 107, VL region P2C2 (anti-CD79b) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO:182, VL region 5D5 (anti-c-Met) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO:259, VL region A2 (anti-hiperlL-6) scFv kako je navedeno u SEO ID NO:S4, VL region 3D1 (anti-CD86) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO:96, VL region MET021 (anti-c-Met) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO: 101. VL region 019-4 (anti-CD3) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO: 104. VL region HD37 (anti-CDI9) scFv region kako je navedeno u SEQ ID NO: 119, VL region M0042 (anti-HLA-DR) scFv kako je navedeno li SEO ID NO: 122, VL region BMA03I (anti-TCR) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO:829, VL region OKT3-M (anti-CD3) scFv kako je navedeno u SEO ID NO:833 i VL region HuM291 (anti-CD3) scFv kako je navedeno u SEQ ID NO:836. Nukieotiđne sekvence koje kodiraju VL regione A2 (anti-hiperIL-6) i 3DI (anti-CD86) scFv navedeni su u SEQ ID NO:83 odnosno 95.
U nekim formama, vezujući domen je jednolančani Fv fragment (scFv) koji sadrži Vh i Vldomene specifične za TCR kompleks ili njegovu komponentu. U određenim formama, Vh i Vldomeni su humani ili humanizovani Vh i Vldomeni. Primeri Vh domena uključuju BC3 (anti-CD3) VH, OKT3 (anti-CD3) Vh, 1457 (anti-TCR) VM, i 2C1I (anti-CD3) Vh, domene kako je navedeno u SEQ ID NO:30I. 303, 313 i 317. respektivno. Drugi primeri Vhdomena uuključuju Cris-7 (anti-CD3) Vhdomene, kao što su oni navedeni u SEQ ID N0.327 i 331-333.Primeri Vi. domena su BC3 (anti-CD3) Vl, OKT3 (anti-CD3) V,., H57 (anti-TCR) VL. 2C11 (anti-CD3) VL domeni kako je navedeno u SEQ ID NO:302, 304. 315 i 318 respektivno. Drugi primeri Vl domena uključuju Cris-7 (anti-CD3) Vldomene, kan što su oni navedeni u SEO ID NO:328, 329 i 330.
U određenim formama, vezujući domen sadrži ili je sekvenca koja je najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, najmanje 99.5%, ili 100% identična sa aminokiseiinskom sekvencom varijabilnog regiona lakog lanca (Vl) ili varijabilnog regiona teškog lanca (Vh) ili oba, gde svaki CDR sadži nula promena ili najviše jednu, dve, ili tri promene u odnosu na monoklonsko antitelo ili fragment ili derivat istog, koje se specifično vezuju za cilj od interesa (npr., c-Met, RON, CD28, CD79b, CD3e, TCRa, TCRp, hiperlL-6, CD86, CD 19, i HLA-DR). i takav mutant ili derivat se i dalje vezuje za svoj cilj.
U određenim formama, vezujući domen VH ili VL regiona predmetne objave može biti izveden ili baziran na VH ili VL poznatog monoklonskog antitela i sadržati jednu ili više (npr., 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. 9, 10) insercija, jednu ili više (npr., 2, 3, 4, 5, 6. 7, 8, 9, 10) delecija ili jednu ili više (npr., 2. 3. 4. 5, 6, 7. 8, 9, 10) aminokiselinskih supstitucija (npr., konzervativne aminokiselinske supstitucije ili nekonzervativne aminokiselinske supstitucije), ili kombinaciju gore pomenutih promena. u poređenju sa VH ili VL poznatog monoklonskog antitela. Insercija ili insercije, delecija ili delecije ili supstitucija ili supstitucije mogu se nalaziti bilo gde u VH regionu, uključujući amino- ili karboksi-terminus ili oba kraja ovog regiona, uz uslov da CDR sadrži nula promena ili najviše jednu, dve ili tri promene i uz uslov da se vezujući domen koji sadrži modifikovani VH ili VL region i dalje specifično vezuje za svoj cilj sa afinitetom približno istim kao vezujući domen divljeg tipa.
VH i VL domeni mogu biti aranžirani u obe orijentacije (tj. od amino-terminusa ka karboksi-terrninusu, VH-VL ili VL-VH) i mogu biti spojeni aminokiselinskom sekvencom (npr., dugom oko pet do oko 35 amino-kiselina) sposobnom da obezbedi funkciju spejsera tako da dva subvezujuća domena mogu da interaguju da bi formirala funkcionalni vezujući domen. U određenim formama, aminokiselinska sekvenca koja spaja domene VH i VL (ovde označena i kao "linker") uključuje one koje propadaju (GlvnSer) familiji, kao što su (Gly3Ser)n(Gly.tSer)i, (G ly3Ser)i (G ly4Ser)„, (G!y3Ser)„(Gly4Ser)„, ili (G^Ser),,, gde je n ceo broj od I do 5. U određenim formama, linker je GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 183) ili GGGGSGGGGSGGGGSGCGGS (SEQ ID NO: 108). Dodatni primer linkera je GGGGSGGGGSGGGGAS (SEQ ID NO:739). U određenim formama, ovi linkeri na bazi (GlynSer) koriste se da povežu domene VH i VL u vezujući domen, ali se ne koriste da povezu vezujući domen za imunoglobulinski heterodimerizacioni domen ili Fc region-deo.
Primeri vezujućih domena specifičnih za CD28 uključuju 2EI2 scFv kako je navedeno u SEQ ID NO: 109, vezujući domeni specifični za CD79b uključuju P2C2 scFv kako je navedeno u SEQ ID NO: 185, vezujući domeni specifični za c-Met uključuju 5D5 scFv kako je navedeno u SEQ ID NO:257, vezujući domeni specifični za RON uključuju 4C04 scFv kako je navedeno u SEO ID NO:261 i 111109 scFv kako je navedeno u SEQ lDNO:265; vezujući domeni specifični za hiperlL-6 uključuju A2 scFv kako je navedeno ti SEQ ID NO;86, vezujući domeni specifični za CD86 uključuju 3DI scFv kako je navedeno u SEQ ID NO:98, vezujući domeni specifični za HLA-DR uključuju M0042 scFv kako je navedeno u SEQ ID NO: 120, vezujući domeni specifični za CD3 uključuju G19-4 scFv kako je navedeno u SEQ ID NO: 102, OK.T3-M scFv kako navedeno u SEQ ID NO: 834 i HuM29l scFv kako je navedeno u SEQ ID NO:837; vezujući domeni specifični za CD 19 uključuju H37 scFv kako je navedeno u SEQ ID NO: 105. i vezujući domeni specifični za c-Met uključuju MET02I scFv kako je navedeno u SEQ ID NO:120 (sa lakolančanim CDR1, CDR2, CDR3 i teškolančanim CDRi. CDR2, CDR3 kako je navedeno u SEQ ID NO:296-298 i 464-466, respektivno). Nukleotidne sekvence koje kodiraju A2 (anti-hiperlL-6), i 3D1 (anli-CD86) scFv navedene su u SEQ ID NO:85, odnosno 97. Primeri vezujućih domena koji se vezuju za TCR kompleks ili njegovu komponenetu uključuju BMA031 scFv kako je navedeno u SEQ ID NO: 830 i i druge scFv kako je navedeno u SEO ID NO:310. 311, 312, 319 i 334-340.
Dodatni primeri vezujućih domena uključuju PDL2 ektodomen kako je navedeno u SEO ID NO:88 i monolL-10 kako je navedeno u SEQ ID NO:90. Nukleotidne sekvence koje kodiraju PDL2 ektodomen i monolL-10 navedene su u SEQ ID NO: 87, odnosno 89.
Lakoiančana aminokiselnska sekvenca 4C04 (anti-RON) scFv navedena je u SEQ ID NO.602 i njeni CDRI, CDR2 i CDR3 navedeni su u SEQ ID NO:604-606, respektivno. Teškolančana aminokiselinska sekvenca 4C04 (anti-RON) scFv navedena je u SEQ ID NO:603 i njeni CDRI, CDR2 i CDR3 navedeni su u SEO ID NO.607-609. respektivno.
Lakoiančana aminokiselnska sekvenca 1IH09 (anti-RON) scFv navedena je u SEQ ID NO:6IO i njeni CDRI, CDR2 i CDR3 navedeni su u SEQ ID N0:612-614, respektivno. Teškolančana aminokiselinska sekvenca 111109 (anti-RON) scFv navedena je u SEQ ID M0:611 i njeni CDRI, CDR2 i CDR3 navedeni su u SEQ ID N0:6I5-6I7, respektivno.
Vezujući domen može biti lociran aminoterminalno ili karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo jednolančanog polipeptiđa predmetne objave. U određenim formama, vezujući domen je lociran na amino-terminusu jednolančanog polipeptiđa. U određenim drugim formama, vezujući domen je lociran na karboksi-terrninusu jednolančanog polipeptiđa. U određenim drugim formama, vezujući domen je lociran i na amino- i na karboksi-terrninusu jednolančanog polipeptiđa.
Heterodimerizacioni domeni
Kako je gore naznačeno, polipeptidni heterodimer predmetne objave sadrži imunoglobulinski heterodimerizacioni domen u svakom polipeptidnom lancu. Imunoglobulinski heterodimerizacioni domeni u dva jednolančana polipeptiđa polipeptidnog heterodimera razlikuju se jedan od drugog i prema tome mogu biti diferencijalno modifikovani da bi se olakšala heterodimerizacija oba lanca i minimizirala homodimerizacija lanaca. Kako je pokazano u primerima, imunoglobulinski heterodimerizacioni domeni dati u ovom tekstu omogućavaju efikasnu heterodimerizaciju različitih polipeptiđa i olakšavaju prečišćavanje dobijenih polipeptidnih heterodimera.
Kako je dato u ovom tekstu, imunoglobulinski heterodimerizacioni domeni korisni u pokretanju heterodimerizacije dva različita jednolančana polipeptiđa (npr., jednog kratkog i jednog dugog) prema predmetnoj objavi uključuju imunoglobulinski CHI i CL domen, na primer, humani CHI i CL domen. U određenim formama, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen je CFI1 region divljeg tipa, npr., CHI region IgGl, !gG2, lgG3, lgG4, IgAl, lgA2, IgD, IgE ili IgM divljeg tipa. U sledećim formama, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen je CHI region humanog IgGl, lgG2, lgG3, IgG4, IgAl, lgA2, IgD, IgE ili IgM divljeg tipa kako je navedeno u SEO ID N0:I14, 186-192 i 194, respektivno. U određenim formama, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen je CH 1 region humanog IgGl divljeg tipa kako je navedeno u SEQ IDNO:l 14.
U sledećim formama, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen je izmenjeni imunoglobulinski CHI region, npr izmenjeni CHI region IgG 1, IgG2, lgG3, lgG4. IgAl. lgA2, IgD, IgE ili IgM. U određenim formama, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen je izmenjeni CHI region humanog IgG!, lgG2, lgG3, IgG4, IgA I, IgA2, IgD, IgE ili IgM. U sledećim formama, cisteinska rezidua CHI regiona divljeg tipa (npr.. humani CHI) uključena u formiranje disulfidne veze sa imunoglobulinskim CL domenom divljeg tipa (npr., humani CL) uklonjena je ili supstitiiisana, u izmenjenom imunoglobulinskom CHI regionu, tako da se ne formira disulfidna veza između izmenjenog CHI regiona i CL domena divljeg tipa.
U određenim formama, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen je CL domen divljeg tipa, npr., Ckdomen divljeg tipa ili O, domen divljeg tipa. U posebnim formama, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen je humaniCkiliCXdomen divljeg tipa, kako je navedeno u SEQ ID NO: I 12. odnosno 1 13. U sledećim formama, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen je izmenjeni imunoglobulinski CL domen, kao izmenjeni CkiliCk domen,na primer izmenjeni humani Ckili humaniCX domen.
U određenim formama, cisteinska rezidua CL domena divljeg tipa (npr., humani CL), uključena u formiranje disulfidne veze sa imunoglobulinskim CH I regionom divljeg tipa (npr., humani CHI) uklonjena je ili supstitiiisana, u izmenjenom imunoglobulinskom CL domenu. Tako izmenjeni CL domeni mogu sadržati i aminokiselinsku deleciju na svojim amino-terminusima. Primer Ckdomena naveden je u SEQ ID NO: 141, gde su prvi arginin i poslednji cistein humanog Ckdomena divljeg tipa uklonjeni. U određenim formama, u izmenjenom Ckdomenu uklonjen je samo poslednji cistein humanog Ckdomena divljeg tipa, pošto prvi uklonjeni arginin iz humanog Ck domena divljeg tipa može da bude obezbeđen od strane linkera koji ima arginin na karboksi-terrninusu i povezuje amino-terminus izmenjenog Ckdomena sa drugim domenom (npr., Fc region-deo). PrimerCX domenanaveden je u SEQ ID NO: 140. gde je prvi argininCXdomena divljeg tipa uklonjen, a cistein uključen u formiranje disulfidne veze sa cisteinom u CHI regionu je supstituisan serinom.
U sledećim formama, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen je izmenjeni Ckdomen koji sadrži jednu ili više aminokiselinskih supstitucija u poredenju sa Ckdomenom divljeg tipa, na pozicijama koje mogu biti uključene u formiranje mreže međulanćanih vodoničnih veza na Ck- Ckinterfejsu. Na primer, u određenim formama, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen je izmenjeni humani Ck domen koji sadrži jednu ili više amino-kiselina na pozicijama N29. N30, Q52. V55, T56, S68 ili T70 koje su supstituisane različitom amino-kiselinom. Numerisanje amino-kiselina bazirano je na njihovim pozicijama u izmenjenoj humanojCksekvenci kako je navedeno u SEQ ID NO: 141. U određenim formama, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen je izmenjeni Ck domen koji sadrži jednu, dve, tri ili četiri aminokiselinske supstitucije na pozicijama N29, N30, V55, ili T70. Amino-kiselina upotrebljena kao zamena za gore navedene pozicije može biti alanin ili aminokiselinska rezidua sa velikim bočnim lancem kao arginin, triptofan, tirozin, glutamat ili lizin. Dodatne aminokiselinske rezidue koje mogu da se koriste za supstituisanje aminokiselinskih rezidua humane Ck sekvence divljeg tipa na gore navedenim pozicijama (npr., N30) uključuju aspartat. metionin, serin, i fenilalanin. Primeri izmenjenih humanih Ckdomena navedeni su u SEO ID NO: 142-178. Izmenjeni humani Ckdomeni su oni koji olakšavaju heterodimerizaciju sa CHI regionom, ali minimizuju homodimerizaciju sa drugim Ckdomenom. Reprezentativni izmenjeni humani Ckdomeni navedeni su u SEQ ID NO: 160 (N29W V55A T70A), 161 (N29Y V55A T70A), 202 (T70E N29A N30A V55A), 167 (N30R V55A T70A), 168 (N30K V55A T70A), 170 (N30E V55A T70A). 172 (V55R N29A N30A), 175 (N29W N30Y V55A T70E), 176 (N29Y N30Y V55A T70E), 177 (N30E V55A T70E), 178 (N30Y V55A T70E), 838 (N30D V55A T70E), 839 (N30M V55A T70E), 840 (N30S V55A T70E) i 841 (N30F V55A T70E).
U određenim formama, u dodatku ili kao alternativa mutacijama u Ckdomenima, opisanim u ovom tekstu, oba imunoglobulinska heterodimerizaciona domena (tj., imunoglobulinski domeni CHI i CL) polipeptidnog heterodimera imaju mutacije tako da rezultujući imunoglobulinski heterodimerizacioni domeni formiraju slane mostove (tj.. jonske interakcije) između aminokiselinskih rezidua na imitiranim mestima. Na primer, imunoglobulinski heterodimerizacioni domeni polipeptidnog heterodimera mogu biti predstavljeni imitiranim CHI domenom u kombinaciji sa miniranim Ck domenom. U mutiranom CHI domenu, valin na poziciji 68 (V68) humanog CHI domena divljeg tipa susptituisan je aminokiselinskom reziduom koja ima negativno naelektrisanje (npr., aspartat ili glutamat), dok je leucin na poziciji 29 (L29) imitiranog humanog Ckdomena, u kojem su prvi arginin i poslednji cistein uklonjeni, supslituisan aminokiselinskom reziduom koja ima pozitivno naelektrisanje (npr., lizin, arginin ili histidin). Interakcija između naelektrisanja aminokiselinske rezidue rezultujućeg miniranog CHI domena, koja ima negativno naelektrisanje i aminokiselinske rezidue rezultujućeg Ck domena, koja ima pozitivno naeletrisanje, formira slani most koji stabiliše heterodimerni interfejs između mutiranih domena CHI i Ck. Alternativno, V68 CHI divljeg tipa može biti supstituisan aminokiselinskom reziduom koja ima pozitivno naelektrisanje. dok L29 mutiranog humanog Ckdomena u kojem su prvi arginin i poslednji cistein uklonjeni, može biti supstituisan aminokiselinskom reziduom koja ima negativno naelektrisanje. Primeri mutiranih CHI sekvenci u kojima je V68 supstituisan amino-kiselinom sa negativnim ili pozitivnim nalektrisanjem navedeni su u S£Q ID N0.844 i 845. Primeri mutiranih Cksekvenci u kojima je L29 supstituisan amino-kiselinom sa negativnim ili pozitivnim nalektrisanjem navedeni su u SEQ ID NO:842 i 843.
Pozicije različite od V68 humanog CH I domena i L29 humanog Ckdomena mogu biti supstituisane amino-kiselinama koje imaju suprotna naelektrisanja, da bi se proizvele jonske interakcije između amino-kiselina, pored ili alternativno mutacijama u V68 CHI domena i L29 Ck domena. Takve pozicije mogu se iđentifikovati bilo kojim pogodnim metodom uključujući nasumičnu mutagenezu, analizu kristalne strukture Clll-Ck para za identifikaciju aminokiselinskih rezidua na CHI-Ckinterfejsu i dalju identifikaciju pogodnih pozicija među aminokiselinskim reziduama na CHI-Ckinterfejsu, uz korišcenje seta kriterijuma (npr., sklonost ka učestvovanju u jonskim interakcijama, približenost potencijalnoj partnerskoj reziđui itd).
U određenim formama, polipeptidni heterodimeri predmetne objave sadrže samo jedan par imunoglobulinskih heterodimerizacionih domena. Na primer, prvi lanac polipeptidnog heterodimera može sadržati CHI region kao imunoglobulinski heterodimerizacioni domen, dok drugi lanac može sadržati CL domen (npr., Ck ili CX) kao imunoglobulinski heterodimerizacioni domen. Alternativno, prvi lanac može sadržati CL region (npr., Ck ili CX) kao imunoglobulinski heterodimerizacioni domen, dok drugi lanac može sadržati CHI region kao imunoglobulinski heterodimerizacioni domen. Kako je navedeno u ovom tekstu, imunoglobulinski heterodimerizacioni domeni prvog i drugog lanca sposobni su da se udružuju formirajući polipeptidni heterodimer ove objave.
U određenim drugim formama, polipeptidni heterodimeri predmetne objave mogu imati đva para imunoglobulinskih heterodimerizacionih domena. Na primer, prvi lanac polipeptidnog heterodimera može sadržati dva CHI regiona. dok drugi lanac može sadržati dva CL domena koja se udružuju sa dva CH I regiona prvog lanca. Alternativno, prvi lanac može sadržati dva CL domena, dok drugi lanac može sadržati dva CH I regiona koja se udružuju sa dva CL domena prvog lanca. U određenim formama, polipeptid prvog lanca sadrži CHI region i CL domen. dok polipeptid drugog lanca sadrži CL domen i CHI region koji se udružuju sa CHI regionom i CL domenom respektivno, polipeptiđa prvog lanca.
U formama u kojima polipeptidni heterodimer sadrži samo jedan heterodimerizacioni par (tj., po jedan imunoglobulinski heterodimerizacioni domen u svakom lancu) imunoglobulinski heterodimerizacioni domen svakog lanca može biti lociran aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo tog lanca. Alternativno, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen svakog lanca može biti lociran karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo tog lanca.
U formama u kojima polipeptidni heterodimer sadrži dva heterodimerizaciona para (tj., po dva imunoglobulinska heterodimerizaciona domena u svakom lancu) oba imunoglobulinska heterodimerizaciona domena u svakom lancu mogu biti locirana aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo tog lanca. Alternativno, oba imunoglobulinska heterodimerizaciona domena u svakom lancu mogu biti locirana karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo tog lanca. U sledećim formama, jedan imunoglobulinski heterodimerizacioni domen u svakom lancu može biti lociran aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo tog lanca, dok drugi imunoglobulinski heterodimerizacioni domen svakog lanca može biti lociran karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo tog lanca. Drugim rećima, u ovim formama, Fc region-deo je umetnut između dva imunoglobulinska heterodimerizaciona domena svakog lanca.
Fc region- deo
Kako je navedeno u ovom tekstu, u svakom polipeptidnom lancu, polipeptidni heterodimeri predmetne objave sadrže Fc region konstantnog doinena-deo (označen i kao Fc region-deo). Uključivanje Fc region-dela usporava klirens heterodimera iz cirkulacije, posle primene kod subjekta. Mutacije ili druge izmenea Fc region-dela omogućavaju relativno laku modulaciju efektorskih funkcija heterodimernog polipeptiđa (npr., ADCC, ADCP, CDC, fiksacija komplementa i vezivanje za Fc rcceptore), koje se mogu smanjiti ili pojačati, u zavisnosti od bolesti koja se leči. sto je poznato u struci i opisano u ovom tekstu. U određenim formama, Fc region-deo polipeptidnih heterodemra predmetne objave biće sposoban da posreduje u jednoj ili više od ovih efektorskih funkcija.
Fc region-deo prisutan u jednolančanim polipeptidima koji formiraju deo polipepetidnih heterodimera predmetne objave može sadržati CH2 domen, CH3 domen. CF14 domen ili bilo koju njihovu kombinaciju. Na primer. Fc region-deo može sadržati CH2 domen, CH3 domen. i CH2 i CI43 domen, i CH3 i CH4 domen, dva CH3 domena, CH4 domen ili dva CH4 domena.
CH2 domen koji može formirati Fc region-deo jednolančanog polipeptiđa heterodimera predmetne objave može biti imunoglobulinski CH2 domen divljeg tipa ili izmenjeni imunoglobulinski CH2 domen istog, iz određenih imunoglobulinskih klasa ili potklasa (npr., IgGl, lgG2, lgG3, lgG4. IgAl. lgA2 ili IgD) i iz različitih vrsta (uključujući čoveka, miša, pacova i druge sisare).
U određenim formama, CTI2 domen je humani imunoglobulinski CH2 domen divljeg tipa, kao npr. CH2 domen divljeg tipa humanog IgGl, lgG2, lgG3. lgG4, IgAl, lgA2 ili IgD, kako je navedeno u SEQ ID NO: 115, 199-201 i 195-197. respektivno. U određenim formama, CH2 domen je CH2 domen humanog IgGl divljeg tipa, kako je navedeno u SEQ 1DNO: 115.
U određenim formama, CH2 domen je izmenjeni imunoglobulinski CH2 region (npr., izmenjeni CH2 domen humanog IgGl), koji sadrži aminokiselinsku supstituciju na asparaginu na poziciji 297 (npr., asparagin u alanin).Takva aminokiselinska supstitucija smanjuje ili eliminiše glikozilaciju na ovom mestu i efikasno obustavlja vezivanje Fc za FcyR i Clq. Sekvenca izmenjenog CH2 domena humanog IgGl, sa supstitucijom Asn u Ala na poziciji 297, navedena je u SEQ ID NO:324,
( j određenim formama, CH2 domen je izmenjeni imunoglobulinski CH2 region (npr., izmenjeni CF12 domen humanog IgGl). koji sadrži najmanje jednu supstituciju ili deleciju na pozicijama 234 do 238. Na primer, imunoglobulinski CH2 region može sadržati supstituciju na poziciji 234, 235, 236, 237 ili 238. pozicijama 234 i 235, pozicijama 234 i 236, pozicijama 234 i 237, pozicijama 234 i 238, pozicijama 234-236, pozicijama 234, 235 i 237, pozicijama 234, 236 i 238, pozicijama 234, 235 237 i 238,
pozicijama 236-238, ili bilo koju drugu kombinaciju dve, tri, četiri ili pet amino-kiselina na pozicijama 234-238. Dodatno ili alternativno, izmenjeni CH2 region može sadržati jednu ili više (npr., dve, tri. Četiri ili pet) aminokiselinskih delecija na pozicijama 234-238, na primer na jednoj od pozicija 236 ili 237, dok je druga pozicija supstitiiisana. Gore pomenuta mutacija ili mutacije smanjuju ili climinišu aktivnost ćelijama posredovane citotoksičnost i zavisne od antitela (ADCC) ili sposobnost vezivanja polipeptidnog heterodimera sa izmenjenim CH2 domenom za Fc-receplore. U određenim formama, aminokiselinske rezidue na jednoj ili više pozicija 234-238 zamenjene su jednom ili više alaninskih rezidua. U drugim formama, deletovana je samo jedna od aminokiselinskih rezidua na pozicijama 234-238, dok jedna ili više aminokiselinskih rezidua na pozicijama 234-238 mogu biti supstituisane drugom aminokiselinom (npr., alaninom ili serinotn).
U određenim drugim formama, CH2 domen je izmenjeni imunoglobulinski CH2 region (npr., izmenjeni CH2 domen humanog IgGl) koji sadrži jednu ili više aminokiselinskih supstitucija na pozicijama 253. 310, 318. 320, 322 i 331. Na primer, imunoglobulinski CH2 region može sadržati supstituciju na poziciji 253. 310. 318.320,322 ili 331, pozicijama 318 i 320, pozicijama 318 i 322. pozicijama 318, 320 i 322, ili bilo koju drugu kombinaciju dve, tri, četiri, pet ili šet amino-kiselina na pozicijama 253, 310, 318, 320, 322 i 331. Gore navedena mutacija ili mutacije smanjuju ili climinišu komplement-zavisnu citotoksičnost (CDC) polipeptidnog heterodimera koji sadrži izmenjeni Cl12 domen.
U određenim drugim formama, pored aminokiselinske supstitucije na poziciji 297, izmenjeni CH2 region (npr., izmenjeni C112 domen humanog IgGl) može sadržati još i jednu ili više (npr., dve, tri. četiri ili pet) dodatnih supstitucija na pozicijama 234-238. Na primer, imunoglobulinski C112 region može sadržati supstituciju na pozicijama 234 i 297, pozicijama 234, 235 i 297, pozicijama 234, 236 i 297, pozicijama 234-236 i 297, pozicijama 234, 235, 237 i 297, pozicijama 234, 236, 238 i 297, pozicijama 234. 235, 237, 238 i 297, pozicijama 236-238 i 297, ili bilo koju kombinaciju dve, tri, četiri ili pet amino-kiselina na pozicijama 234-238, pored pozicije 297. Dodatno ili alternativno, izmenjeni CH2 region može sadržati jednu ili više (npr., dve. tri, četiri ili pet) aminokiselinskih delecija na pozicijama 234-238, na primer na poziciji 236 ili poziciji 237. Dodatna mutacija ili mutacije smanjuju ili eliminišu aktivnost ćelijama posredovane citotoksičnosti zavisne od antitela (ADCC) ili sposobnost vezivanja polipeptidnog heterodimera sa izmenjenim CH2 domenom za Fc-receptor. U određenim formama, aminokiselinske rezidue na jednoj ili više pozicija 234-238 zamenjene su jednom ili više alaninskih rezidua. U drugim formama, deletovana je samo jedna od aminokiselinskih rezidua na pozicijama 234-238, dok jedna ili više preostalih amino-kiselina na pozicijama 234-238 mogu biti supstituisane drugom amino-kiselinom (npr., alaninom ili serinom).
U određenim formama, pored jedne ili više (npr., 2. 3, 4. ili 5) aminokiselinskih supstitucija na pozicijama 234-238, mutirani CH2 region (npr., izmenjeni CH2 domen humanog IgGl) u fuzionom proteinu predmetne objave može sadržati jednu ili više (npr., 2, 3, 4, 5 ili 6) dodatnih aminokiselinskih supstitucija (npr., supstitucija alaninom) na jednoj ili više pozicija uključenih u fiksaciju komplementa (npr., na pozicijama 1253, H3I0, E318, K320, K322 ili P331). Primeri mutiranih imunoglobulinskih CH2 regiona uključuju CH2 regione humanog IgGl, lgG2, lgG4 i mišjeg lgG2a, sa alaninskim supstitucijama na pozicijama 234, 235, 237 (ako je prisutna), 318, 320 i 322. Primer imitiranog imunoglobulinskog CH2 regiona je mišji lGHG2c CH2 region sa alaninskim supstitucijama na L234, L235, G237, E3I8, K320 i K322 (SEQ ID N0:3I4).
U sledećim formama, pored aminokiselinske supstitucije na poziciji 297 i dodatne delecije ili delecija ili supstitucije ili supstitucija na pozicijama 234-238, izmenjeni CH2 region (npr., izmenjeni CH2 domen humanog IgGl) može sadržati još i jednu ili više (npr., dve, tri, četiri, pet ili Šest) dodatnih supstitucija na pozicijama 253. 310, 318, 320. 322 i 331. Na primer, imunoglobulinski CH2 region može sadržati (1) supstituciju na poziciji 297, (2) jednu ili više supstitucija ili delecija, ili njihovu kombinaciju, na pozicijama 234-238, i jednu ili više (npr., 2, 3, 4. 5 ili 6) aminokiselinskih supstitucija na pozicijama 1253, H310, E318, K320, K322 i P331, na primer jednu, dve, tri supstitucije na pozicijama E318, K.320 i K.322. Amino-kiseline na gore pomenutim pozicijama mogu biti supstituisane alaninom ili serinom.
U određenim formama, polipeptid imunoglobulinskog CII2 regiona sadrži (i) aminokiselinsku supstituciju na asparaginu na poziciji 297 i jednu aminokiselinsku supstituciju na poziciji 234, 235, 236 ili 237: (ii) aminokiselinsku supstituciju na asparaginu na poziciji 297 i aminokiselinske supstitucije na dve od pozicija 234-237; (iii) aminokiselinsku supstituciju na asparaginu na poziciji 297 i aminokiselinske supstitucije na tri od pozicija 234-237; (iv) aminokiselinsku supstituciju na asparaginu na poziciji 297, aminokiselinske supstitucije na pozicijama 234, 235 i 237, i aminokiselinsku deleciju na poziciji 236; (v) aminokiselinske supstitucije na tri od pozicija 234-237 i aminokiselinske supstitucije na pozicijama 318, 320 i 322; ili (vi) aminokiselinske supstitucije na tri od pozicija 234-237. aminokiselinsku deleciju na poziciji 236 i aminokiselinske supstitucije na pozicijama 318, 320 i 322.
Primeri izmenjenih imunolgobuiinskih CH2 regiona sa aminokiselinskim supstitucijama na asparaginu na poziciji 207, uključuju C112 region humanog IgGl sa alaninskim supstitucijama na L234, L235. G237 i N297 i delecijom na G236 (SEQ ID NO:325), CH2 region humanog igG2 sa alaninskim supstitucijama na V234, G236 i N297 (SEQ ID NO:326), CH2 region humanog !gG4 sa alaninskim supstitucijama na F234, L235, G237 i N297 i delecijom na G236 (SEO ID NO:322), CH2 region humanog [gG4 sa alaninskim supstitucijama na F234 i N297 (SEQ ID NO;343), CH2 region humanog lgG4 sa alaninskim supstitucijama na L235 i N297 (SEQ ID NO:344), CH2 region humanog IgG4 sa alaninskim supstitucijama na G236 i N297 (SEQ ID NO:345), i CH2 region humanog IgG4 sa alaninskim supstitucijama na G237 i N297 (SEQ ID NO:346).
U određenim formama, pored gore opisanih aminokiselinskih supstitucija, izmenjeni CH2 region (npr., izmenjeni CH2 domen humanog IgGl) može sadržati jednu ili više dodatnih aminokiselinskih supstitucija, na jednoj ili više pozicija koje su različite od gore pomenutih pozicija. Takve aminokiselinske supstitucije mogu biti konzervativne ili nekonzervativne aminokiselinske supstitucije. Na primer, u određeni formama, u izmenjenom CH2 regionu IgG2, P233 može biti protnenjen u E233 (vidi. npr.. SEQ ID NO: 326). Dodatno ili alternativno, u određenim formama izmenjeni C142 region može sadržati jednu ili više aminokiselinskih insercija, delecija, ili obe. Insercija ili insercije, delecija ili delecije ili supstitucija ili supstitucije mogu da se nađu bilo gde u imunoglobulinskom CH2 regionu, na primer na N- ili C-terminusu imunoglobulinskog CH2 regiona divljeg tipa, kao rezultat povezivanja CH2 regiona sa drugim regionom (npr., vezujućim domenom ili imunoglobulinskim heterodimerizacionim domenom), preko zgloba.
U određenim formama, izmenjeni CH2 region u polipeptidnom heterodimeri! predmetne objave sadrži sekvencu koja je najmanje 90%. najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, identična sa imunoglobulinskim CH2 regionom divljeg tipa kao što je CH2 region humanog IgGl, lgG2 ili lgG4 divljeg tipa ili mišjeg lgG2a (npr., lGHG2c).
Izmenjeni imunoglobulinski CH2 region u polipeptidnom heterodimeri! predmetne objave može biti izveden iz CH2 regiona različitih izotipova imunoglobulina, npr., IgGl, lgG2, lgG3, lgG4, IgAl, lgA2 i IgD, iz različitih vrsta (uključujući čoveka, miša, pacova i druge sisare). U određenim formama, izmenjeni imunoglobulinski CH2 region u fuzionom proteinu predmetne objave može biti izveden iz CI 12 regiona humanog IgGl, lgG2 ili IgG4 ili mišjeg lgG2a (npr., IGHG2c), čije su sekvence navedene u SEQ ID NO: 11 5, 199, 201 i 320.
U određenim formama, izmenjeni CH2 domen je CH2 domen humanog IgGl sa alaninskim supstitucijama na pozicijama 235, 318, 320 i 322 (tj., CH2 domen humanog IgGl sa supstitucijama L235A, E3I8A, K.320A i K322A) (SEO ID NO:595) i opciono mutacijom N297 (npr., u alanin), U određenim drugim formama, izmenjeni CH2 domen je CH2 domen humanog IgGl sa alaninskim supstitucijama na pozicijama 234, 235, 237, 318, 320 i 322 (tj., CH2 domen humanog IgGl sa supstitucijama L234A L235A, G237A, K318A, K320A i K322A) (SEQ ID NO.-596) i opciono mutacijom N297 (npr., u alanin),
U određenim formama, izmenjeni CH2 domen je izmenjeni CH2 domen humanog IgGl, sa u struci poznatim mutacijama koje pojačavaju imunološke aktivnosti kao što su ADCC, ADCP CDC, fiksacija komplementa, vezivanje za Fc receptor, ili bilo koja njihova kombinacija.
CH3 domen koji može formirati Fc region-deo jednolančanog polipeptiđa heterodimera predmetne objave može biti imunoglobulinski CH3 domen divljeg tipa ili izmenjeni imunoglobulinski domen istog, iz određenih imunoglobulinskih klasa ili potklasa (npr., IgGl, lgG2, IgG3, !gG4, IgAl, lgA2, IgD, IgE i IgM) iz različitih vrsta (ukjučujući čoveka, miša, pacova i druge sisare). U određenim formama, CH3 domen je humani imunoglobulinski CH3 domen divljeg tipa, npr. CH3 domen humanog IgGl. IgG2, IgG3, !gG4, IgAl, lgA2, IgD, IgE ili IgM divljeg tipa, kako je navedeno u SEQ ID NO: 116, 208-210, 204-207 i 212, respektivno. U određenim formama, CH3 domen je CH3 domen humanog IgGl divljeg tipa, kako je navedeno u SEQ ID NO: I 16. U određenim formama, CH3 domen je izmenjeni humani imunoglobulinski CH3 domen kao što je izmenjeni CH3 domen baziran ili izveden iz CH3 domena humanog IgGl, lgG2, lgG3, lgG4, IgAl, lgA2, IgD, IgE ili IgM antitela divljeg tipa. Na primer, izmenjeni CH3 domen može biti CH3 domen humanog IgGl sa jednom ili više mutacija na pozicijama H433 i N434 (pozicije su numensane prema EU numeraciji). Mutacije na tim pozicijama mogu biti uključene u fiksaciju komplementa. U određenim drugim formama, izmenjeni CH3 domen može biti CH3 domen humanog IgGl, ali sa jednom ili dve aminokiselinske supstitucije na poziciji F405 ili Y407. Amino-kiseline na tim pozicijama uključene su u interakciju sa drugim CH3 domenom. U određenim formama. CH3 domen može biti izmenjeni CH3 domen humanog IgGl sa deletovanim poslednjim lizinom. Sekvenca ovog izmenjenog CH3 domena navedena je u SEQ ID NO:76l.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži CH3 par koji uključuje takozvane "knobs-into-holes" ("ključ-brava") mutacije (vidi, Marvin and Zhu, Acta Pharmacologica Sinica 26:649-58, 2005: Ridgway et al. Protein Engineering 9:617-21,1966). Preciznije, mutacije mogu da se uvedu u svaki od dva CH3 domena, tako da sterična komplementarnost potrebna za udruživanje CH3/CH3 domena primorava ova dva CH3 domena da se spare. Na primer, CH3 domen jednog jednolančanog polipeptiđa polipeptidnog heterodimera može sadržati T366W mutaciju ("knob" mutaciju u kojoj je mala amino-kiselina zamenjena većom), a Ci 13 domen drugog jednolančanog polipeptiđa polipeptidnog heterodimera može sadržati Y407A mutaciju ("hole" mutaciju u kojoj je velika amino-kiselina zamenjena manjom). Drugi primeri "knob-into-hole" mutacija uključuju (1) T366Y mutaciju u jednom CH3 domenu i Y407T u druom CH3 domenu, i (2) T366W mutaciju u jednom CH3 domenu i T366S, L368A i Y407V mutacije u drugom CH3 domenu.
CH4 domen koji može formirati Fc region-deo jednolančanog polipeptiđa heterodimera predmetne objave može biti imunoglobulinski CH4 domen divljeg tipa ili izmenjeni imunoglobulinski CH4 domen istog, iz IgE ili IgM molekula. U određenim formama, CFI4 domen je humani imunoglobulinski Cl 14 domen divljeg tipa, npr. CH4 domen humanog IgE i IgM molekula divljeg tipa, kako je navedeno u SEQ ID N0:2I3 i 214, respektivno. U određenim formama. CH4 domen je izmenjeni humani imunoglobulinski CH4 domen, kao što je izmenjeni CH4 domen baziran ili izveden iz CH4 domena humanog IgE ili IgM molekula, sa mutacijama koje pojačavaju ili smanjuju imunološku aktivnost za koju se zna daje udružena sa Fc regionom IgE ili IgM.
U određenim formama, Fc region konstantnog domena-deo u heterodimerima predmetne objave sadrži kombinaciju CF12, CH3 ili C1I4 domena (tj., više od jednog konstantnog subdomena koji se biraju između CFI2, CH3 i CF14). Na primer, Fc region-deo može sadržati domene CF12 i CH3 ili domene CH3 i CH4. U određenim drugim formama. Fc region-deo može sadržati dva CFI3 domena i ne sadržati domene CH2 ili Cl 14 (tj., može imati samo dva ili više CII3). Veći broj konstantnih subdomena koji formiraju Fc region-deo može se bazirati ili biti izveden iz istog imunoglobulinskog molekula, ili iste klase ili potklase imunoglobulinskih molekula. U određenim formama, Fc region-deo je IgG CH2CH3 (npr., IgGl CH2CH3. lgG2 CFI2CH3 i lgG4 CH2CH3) i može biti humani (npr., humani IgGl, lgG2 i lgG4) CH2CH3. Na primer, u određenim formama, Fc region-deo sadrži (1) domene CH2 i CH3 humanog IgGl divljeg tipa, (2) CH2 humanog IgGl sa supstitucijom N297A (tj.. CH2(N297A)) i CH3 humanog IgGl divljeg tipa, ili (3) CH2(N297A) humanog IgGl i izmenjeni CH3 humanog IgGl sa delecijom poslednjeg lizina.
Alternativno, veći broj konstantnih subdomena može da se bazira ili izvede iz različitih imunoglobulinskih molekula, ili različitih klasa ili potklasa imunoglobulinskih molekula. Na primer, u određenim formama. Fc region-deo sadrži CF13 domen humanog IgM i CFI3 domen humanog IgGl. Više konstantnih subdomena koji formiraju Fc region-deo mogu direktno da se povežu jedan sa drugim ili mogu da se povezu jedan sa drugim preko jedne ili više (npr., oko 2-10) amino-kiselina.
Primeri Fc region-dela navedeni su u SEO ID NO: 305-309, 321, 323, 341, 342 i 762.
U određenim formama, Fc region-delovi oba jednolančana polipeptiđa polipeptidnog heterodimera međusobno su identični. U određenim drugim formama, Fc region-deo jednolančanog polipeptiđa polipeptidnog heterodimera je različit od Fc region-dela drugog jednolančanog polipeptiđa heterodimera. Na primer, jedan Fc region-deo može sadržati CH3 domen sa "knob" mutacijom, dok drugi Fc region-deo može sadržati CH3 domen sa "hole" mutacijom.
Zglob
Zglobni region koji se nalazi u jednolančanom polipeptidu polipeptidnog heterodimera prema predmetnoj objavi može biti smešten (a) neposredno aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo (npr.. zavisno od izotipa. aminoterminalno u odnosu na CH2 domen gde je Fc region-deo OI2CH3, ili aminoterminalno u odnosu na CH3 domen gde je Fc region-deo CH3CH4), (b) između i da spaja vezujući domen (npr., scFv) i imunoglobulinski heterodimerizacioni domen, (c) između i đa spaja imunoglobulinski heterodimerizacioni domen i Fc region-deo (npr.. gde je Fc region-deo CH2CH3 Ili CH3CH4, zavisno od izotipa ili izotipova). (d) između i da spaja Fc region-deo i vezujući domen, (e) na amino-terminusu jednolančanog polipeptiđa, ili (0 na karboksi-terrninusu jednolančanog polipeptiđa. jednolančani polipeptid koji sadrži zglobni region kako je opisano u ovom tekstu, biće u stanju đa se udruži sa različitim jednolančanim fuzionim polipeptidom, da formira polipeptidni heterodimer dat u ovom tekstu, i formirani polipeptidni heterodimer sadržaće vezujući domen koji zadržava svoju ciljnu specifičnost ili svoj specifični ciljno-vezujući afinitet.
U određenim formama, zglob prisutan u jednolančanom polipeptidu koji sa drugim jednolančanim polipeptidom formira polipeptidni heterodimer, može biti imunoglobulinski zglobni region, kao što je imunoglobulinski zglobni region divljeg tipa ili izmenjeni imunoglobulinski zglobni region istog.
U određenim formama, zglob je humani imunoglobulinski zglobni region divljeg tipa (npr., humani imunoglobulinski zglobni regioni navedeni u SEQ ID NO:215-221). U određenim drugim formama, jedna ili više aminokiselinskih rezidua mogu se dodati na amino-ili karboksi-terrninusu imunoglobulinskog zglobnog regiona divljeg tipa kao deo dizajna fuzionog proteinskog konstrukta. Na primer, dodatne spojne aminokiselinske rezidue na zglobnom amino-terminusu mogu biti "RT". "RSS", "TG" ili "T" ili na karboksi-terrninusu zgloba mogu biti "SG", ili zglobna delecija može da se kombinuje sa adicijom, npr., AP sa "SG" đodatim na karboksi-terrninusu.
U određenim formama, zglob je izmenjeni imunoglobulinski zglob u kojem su jedna ili više cisteinskih rezidua u imunoglobulinskom zgiobnom regionu divljeg tipa supstituisane jednom ili većim brojem drugih aminokiselinskih rezidua (npr., serinom ili alaninom). Na primer, zglob može biti izmenjeni imunoglobulinski zglob baziran ili izveden iz zgloba humanog IgGl divljeglipa, kako je navedeno u SEQ ID NO: 667. koji od amino-terminusa ka karboksi-terrninusu sadrži gornji zglobni region (EPKSCDKTHT (SEO 1DN0:227) i sržni zglobni region CPPCP (SEO ID NO:228). Primeri izmenjenih imunoglobulinskih zglobova uključuju imunoglobulinski zglobni region humanog IgGl, u kojem su jedna, dve ili tri cisteinske rezidue zgloba humanog IgGl divljeg tipa supstituisane jednom, dvema ili trima različitim aminokiselinskim reziduama (npr., serinom ili alaninom). Izmenjeni imunoglobulinski zglob može dodatno imati prolin supstituisan drugom amino-kiselinom (npr., serinom ili alaninom). Na primer, gore opisani izmenjeni zglob humanog IgGl može dodatno imati prolin. lociran karboksiterminalno u odnosu na tri cisteina humanog IgGl zglobnog regiona divljeg tipa, supstituisan drugom aminokiselinskom reziduom (npr., serinom ili alaninom). U jednoj formi, prolini sržnog zglobnog regiona nisu supstituisani. Primeri izmenjenih imunoglobulinskih zglobova navedeni su u SEQ ID NO:229-240. 255. 664-677 i 748-759. Primer izmenjenog IgGl zgloba je izmenjeni zglob humanog IgGl, u kojem je prvi cistein supstituisan serinom. Sekvenca ovog izmenjenog IgGl zgloba navedena je u SEO ID NO:664 i označena je kao " SCC-P zglob humanog IgGl" ili "SCC-P zglob". U određenim formama, jedna ili više aminokiselinskih rezidua (npr., "RT", "RSS", ili "T") mogu se dodati na amino- ili karboksi-terminus imitiranog imunoglobulinskog zglobnog regiona, kao deo dizajna fuzionog proteinskog konstrukta.
U određenim formama, zglobni polipeptid sadrži ili je sekvenca koja je najmanje 80%, najmanje 8I%>, najmanje 82%, najmanje 83%, najmanje 84%, najmanje 85%, najmanje 86%, najmanje 87%, najmanje 88%. najmanje 89%. najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%. najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, identična sa imunoglobulinskim zglobnim regionom divljeg tipa, kao što je zglob humanog IgG I divl jeg tipa, zglob humanog lgG2 divljeg tipa, ili zglob humanog lgG4 divljeg tipa.
U sledećim formama, zglob prisutan u jednolančanom polipeptidu koji sa drugim jednolančanim polipeptidom formira polipeptidni heterodimer, može biti zglob koji se ne bazira ili izvodi iz imunoglobulinskog zgloba (npr., nije imunoglobulinski zglob divljeg tipa ili izmenjeni imunoglobulinski zglob). Ovi tipovi zglobova koji nisu bazirani na imunoglobulinima mogu se koristiti na ili u blizini karboksi-kiaja (npr., locirani su karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo) jednolančanih polipeptiđa koji formiraju polipeptidne heterodimere. Primeri takvih zglobova uključuju peptide od oko pet do oko 150 amino-kiselina interdomenskog regiona ili regiona drške C-lektina tipa II ili CD molekula, na primer, peptide od oko osam do 25 amino-kiselina i peptide od oko sedam do 18 amino-kiselina i njihove derivate.
"Interdomenski region ili region drške" C-lektina tipa II ili CD molekula, odnosi se na deo vanćelijskog domena C-lektina tipa II ili CD molekula, lociran između domena sličnog lektinu C-tipa (C-type lectin domain, CTLD, npr., slično CTLD receptora ćelija prirodnih ubica) i transmembranskog domena. Na primer, u humanom CD94 molekulu (GenBank Accession No. AAC50291.I. PRI 30. novembar 1995), vanćelijski domen odgovara aminokiselinskim reziduama 34-179. dok C TLD odgovara aininokiselinskim reziduama 61-176. Prema tome, interdomenski region ili region drške humanog CD94 molekula uključuje aminokiselinske rezidue 34-60, koje se nalaze između membrane i CTDL (vidi, Boyington et al., !mmunity 10:75, 1990: za opise drugih regiona drške, vidi i Beavil et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:753. 1992 i Figdor et al.. Nature Rev, Immunol. 2:77, 2002). Ovi molekuli C-lektina tipa II ili CD molekuli mogu imati od šest do 10 spojnih amino-kiselina između regiona drške i transmembranskog regiona ili CTLD. U drugom primeru, humani NKG2A protein od 233 amino-kiseline (GenBank Accession No. P26715.1, PRI 15. jun 2010) ima transmembranski domen koji obuhvata amino-kiseline 71-93 i vanćelijski domen koji obuhvata arnino-kiseline 94-233. CTLD se sastoji od amino-kiselina 119-231, i region drške se sastoji od amino-kiselina 99-116, sa čijih bokova se nalaze spojevi od pet i dve amino-kiseline. Drugi molekuli C-lektina tipa II ili CD molekuli, kao i njihovi vanćelijski ligand-vezujući domeni, interdomeni ili region i drške, i CTLD, poznati su u struci (vidi, npr.. GenBank Accession No.NP OOl993.2; AAFI07037.1, PRI 15. jul 2006: NP 001773.1. PRI 20 jun 2010;
AAL65234J. PRI 17. januar 2002 i CAA04925.I, PRI 14. novembar 2006, za sekvence humanog CD23, CD69, CD72, NKG2A i NKG2D i njihove opise, respektivno).
"Derivat" interdomena ili regiona drške, ili fragment istog. C-lektina tipa II ili CD molekula uključuje sekvencu od oko osam do oko 150 amino-kiselina. u kojoj su jedna, dve ili tri amino-kiseline regiona drške C-lektina tipa II ili CD molekula divljeg tipa deletovane, insertovane ili supstituisane, ili bilo koja kombinacija toga, na primer. jedna ili više izmena su supstitucije, ili, jedna ili više mutacija uključuju samo jednu deleciju, U drugim formama, derivat interdomena ili regiona drške rezistentniji je na proteolitičko sečenje nego sekvence interdomena ili regiona drške divljeg tipa, kao što su one izvedene iz oko osam do oko 20 amino-kiselina NKG2A. NKG2D, CD23, CD64, CD72 ili CD94.
U određenim formama, zglobovi interdomenskog ili regiona drške imaju sedam do 18 amino-kiselina i mogu formirati a-helijačnu strukturu "namotani kalem". U određenim formama, zglobovi interdomena ili regiona drške sadrže 0, I, 2, 3 ili 4 cisteina. Primeri zglobova interdomena ili regiona drške su peptidni fragmenti interdomena ili regiona drške, kao što su fragmenti od deset do 150 aminokiselina regiona drške CD69, CD72, CD94, NKG2A i NKG2D, kako je navedeno u SEO ID NO:24l-244, 716 i 601. Dodatni Primeri zglobova regiona drške ili interdomena uključuju navedene u SEQ ID NO:78, 734-737. 742-747 i 766-790.
Alternativni zglobovi koji mogu da se koriste u jednolančanim polipeptidima polipeptidnih heterodimera potiču iz delova ćelijskih površinskih receptora (interdomenski regioni) koji povezuju imunoglobulinske V-slične ili imunoglobulinske C-sliČne domene. Regioni između lg V-slićnih domena, kada ćelijski površinski receptor sadrži više lg V-sličnih domena u tandemu, i između lg C-sličnih domena, kada ćelijski površinski receptor sadrži više tandemskih lg C-sličnih regiona, takođe se razmatraju kao zglobovi korisni u jednolančanim polipeptidima polipeptidnih heterodimera. U određenim formama, zglobne sekvence sastavl jene od interdomenskih regiona ćeiijskog površinskog receptora mogu sadržati još i prirodne ili dodate motive kao što su sržna sekvenca zgloba IgG, koja obezbeđuje jednu ili više disulfidnih veza za stabilisanje formacija polipeptidnog heterodimera. Primeri zglobova uključuju interdomenske regione između lg V-sličnih i lg C-sličnih regiona CD2. CD4, CD22, CD33, CD48, CD58, CD66, CD80,CD86, CD150, CDI66 I CD244.
U određenim formama, zglobne sekvence imaju oko 5 do 150 amino-kiselina, 5 do 10 amino-kiselina, 10 do 20 amino-kiselina, 20 do 30 amino-kiselina, 30 do 40 amino-kiselina, 40 do 50 amino-kiselina, 50 do 60 amino-kiselina, 5 do 60 amino-kiselina, 5 do 40 amino-kiselina, 8 do 20 amino-kiselina, ili 10 do 15 amino-kiselina. Zglob može biti primarno fleksibilan, ali može davati i rigidnije karakteristike, ili može sadržati primarno a-helijačnu strukturu, uz minimalnu strukturu p-pioee. Dužine ili sekvence zglobova mogu uticati na afinitete vezivanja vezujućih domena sa kojima su zglobovi direktno ili indirektno (preko drugog regiona ili domena kao što je imunoglobulinski heterodimerizacioni domen) povezani, kao i na jednu ili više aktivnosti Fc region-dela sa kojima su zglobovi direktno ili indirektno povezani (vidi Primere 9 i 10).
U određenim formama, zglobne sekvence su stabilne u plazmi i serumu i rezistentne su na proteolizu. Prvi lizin u gornjem zglobnom regionu IgGl može biti mutiran da bi se na najmanju moguću meru svela proteoliza. na primer, lizin može biti supstituisan metioninom, treoninom, alaninom ili glicinom ili može biti deletovan (vidi, npr., SEQ ID NO:379-434, koje mogu uključivati spojne amino-kiseline na amino-terminusu, npr., RT).
U nekim formama, zglobne sekvence mogu sadržati prirodne ili dodate motive kao što je imunoglobulinska sržna zglobna struktura CPPCP (SEQ ID N0.228), koja daje kapacitet za formiranje disulfidne veze ili više disulfidnih veza, za stabilisanje karboksi-terminusa molekula. U drugim formama, zglobne sekvence mogu sadržati jedno ili više mesta glikozilacije.
Primeri zglobova uključujući izmenjene imunoglobulinske zglobove, navedeni su kao SEQ IDNO: 379-434, 618-749 i 763-791.
U određenim formama, jednolančani polipeptid polipeptidnog heterodimera prema predmetnoj objavi sadrži više od jednog zgloba. Na primer, jednolančani polipeptid koji ima dva vezujuća domena, od kojih je jedan na amino-terminusu, a drugi na karboksi-terrninusu. može imati dva zgloba. Jedan zglob može biti direktno ili indirektno (npr., preko imunoglobulinskog heterodimerizacionog domena) spojen sa vezujućim domenom na ili blizu amino-terminusa. a drugi zglob može biti spojen (tj., direktno spojen) sa drugim vezujućim domenom na ili u blizini karboksi-terminusa. U određenim formama, čak i ako jednolančani polipeptid ima samo jedan vezujući domen, on može imati više od jednog zgloba, na primer. na svom amino- ili karboksi-terrninusu. Takvi zglobovi mogu interagovati sa odgovarajućim zglobom u drugom lancu heterodimera formirajući jednu ili više međulančanih disulfidnih veza za olakšavanje ili pojačavanje heterodimerizacije dva lanca. Zglob (H-I) SCP-I polipeptidnog heterodimera "odgovara" zglobu (H-ll) SCP-1! heterodimera kada su H-I i H-IIlocirani na amino-kraju Fc region-dela respektivnog jednolančanog polipeptiđa. Na primer, polipeptidni heterodimer može sadržati sledeća dva jednolančana polipeptiđa: polipeptid prvog lanca, od amino- do karboksi-terminusa sadrži prvi vezujući domen. CH I. zglob, CM2 i CH3, i polipeptid drugog lanca od amino- do karboksi-terminusa sadrži Ck, prvi zglob, CH2. CH3, drugi zglob, i drugi vezujući domen. Zglob u prvom lancu smatrao bi se kao "odgovarajući" prvom zglobu drugog lanca jer su oba aminoterminalno u odnsu na Fc region-deo sa kojim su spojeni.
U određenim formama, kada jednolančani polipeptid polipeptidnog heterodimera sadrži vezujući domen na ili u blizini karboksi-terminusa, zglob može biti prisutan da spoji vezujući domen sa drugim delom jednolančanog polipeptiđa (npr., Fc region-đelom ili imunoglobulinskim heterodimerizacionim domenom). U jednoj formi, takav zglob je neimunoglobulinski zglob (tj., zglob nije baziran ili izveden iz imunoglobulinskog zgloba divljeg tipa) i može da bude region drške C-lektina tipa II ili CD molekula, interdomenski region koji spaja lg V-slične ili lg C-slične domene ćelijskog površinskog receptora, ili derivat ili funkcionalna varijanta toga. Primeri karboksiterminalnih zglobova, nekad označenih kao zglobovi "zadnjeg kraja", uključuju navedene u SEQ !D NO:78, 734-737, 742-747 i 766-790.
U određenim formama, zglob jednog jednolančanog polipeptiđa polipeptidnog heterodimera identičan je sa odgovarajućim zglobom drugog jednolančanog polipeptiđa heterodimera. U određenim drugim formama, zglob jednog lanca razlikuje se od zgloba drugog lanca (po dužini ili sekvenci). Različiti zglobovi u različitim lancima dopuštaju različite manipulacije vezujućih afiniteta vezujućih domena sa kojima su zglobovi spojeni, tako da heterodimer može đa se prefereneijalno vezuje za cilj jednog vezujućeg domena u odnosu na cilj drugog vezujućeg domena. Na primer, u određenim formama, polipeptidni heterodimer ima CD3 ili TCR vezujući domen na jednom lancu, i vezujući domen za tumorski antigen na drugom lancu. Posedovanjem dva različita zgloba u dva lanca, može se postići da se heterodimer veže prvo za tumorski antigen, a zatim za CD3 ili TCR molekul. Prema tome, heterodimer može. regrutovati CD3<*>T-ćelije ka tumorskim ćelijama koje nose tumorski antigen, što dalje dovodi do oštećenja ili uništenja tumorskih ćelija.
Druge komponente ili modifikacije
U određenim formama, jednolančani polipeptid koji sa drugim jednolančanim polipeptidom formira heterodimer, može sadržali jedan ili više dodatnih domena ili regiona. Takav dodatni region može biti liderska sekvenca (označena i kao "signalni peptid") na amino-terminusu, za sekreciju eksprimiranog jednolančanog polipeptiđa. Primeri liderskih peptiđa ove objave uključuju prirodne liderske sekvence ili druge, kao što su one navedene u SEQ ID NO: 110 i III.
Dodatni regioni mogu biti i sekvence na karboksi-terrninusu, za iđentifikovanje ili prečišćavanje jednolančanih polipeptiđa (npr., epitopski markeri za detektovanje ili prečišćavanje, npr., histidinski marker, biotin. FLAG® epitop ili bilo koja njihova kombinacija).
Drugi opcioni regioni mogu biti dodatne aminokiselinske rezidue (označene kao "spojne amino-kiseline" ili " spojne aminokiselinske rezidue") dužine od I do oko 10 amino-kiselina (npr., oko 2 do 5 amino-kiselina), koje mogu biti rezultat upotrebe specifičnih ekspresionih sistema ili dizajna konstrukta za jednolančane polipeptiđe predmetne objave. Takve dodatne aminokiselinske rezidue (na primer. jedna, dve, tri, četiri ili pet dodatnih amino-kiselina) mogu biti prisutne na amino- ili karboksi-terrninusu ili između različitih regiona ili domena jednolančanog polipeptiđa, npr., između vezujućeg domena i imunoglobulinskog heterodimerizacionog domena, između imunoglobulinskog heterodimerizacionog domena i zgloba, između zgloba i Fc region-dela, između domena Fc region-dela (npr.. između CH2 i CH3 domena ili između dva CH3 domena), između vezujućeg domena i zgloba, između Fc region-dela i imunoglobulinskog heterodimerizacionog domena ili između varijabilnog domena i linkera. Primeri spojnih amino-kiselina, aminoterminalnih u odnosu na zglob, uključuju RDQ (SEQ ID NO:598), RT, SS, SASS (SEO ID NO:599) i SSS (SEO ID NO:600), Primeri spojnih amino-kiselina, karboksiterminalnih u odnosu na zglob, uključuju amino-kiseline SG. Dodatni primer spojnih amino-kiselina uključuje SR.
U određenim formama, spojne amino-kiseline prisutne su između Fc region-dela koji sadrži CH2 i CH3 domen i imunoglobulinskog heterodimerizacionog domena (CHI ili CL). Ove spojne amino-kiseline se označavaju i kao "linker između CH3 i CFII ili CL", ako su prisutne između C-terminusa CH3 i N- termin tisa CHI ili CL. Takvi linkeri mogu biti dugi 2-12 amino-kiselina. U određenim formama, Fc region-đen sadrži domene CH2 i CH3 humanog IgGl. gde je C-terminalna lizinska reziduaCH3 humanog IgGl deletovana. Primeri linkera između CH3 i CH! uključuju navedene u SFQ ID NO: 847-849. Primeri linkera između CH3 i Ckuključuju navedene u SEQ ID NO:S50-S52 (gde karboksiterminalni arginin u Iinkerima može alternativno da se razmatra kao prvi arginin Ck). U određenim formama, prisustvo takvih linkera ili linkerskih parova (npr.. SEO ID NO:847 kao CH3-CH I linker u jednom jednolančanom polipeptidu heterodimera i SEQ ID NO:850 kao CH3- Cklinker u drugom jednolančanom polipeptidu heterodimera; SEQ ID NO:848 kao CH3-CH1 linker i SEQ ID NO:851 kao CH3-Ck linker; i SEQ ID NO:849 kao CH3-CH1 linker i SEQ ID N0.852 kao CH3-Cklinker) poboljšava proizvodnju heterodimera u poređenju sa prisustvom referentnog linkera navedenog u SEQ ID N0:846 (gde je poslednji lizin CH3 uključen kao deo linkera) u oba jednolančana polipeptiđa heterodimera.
U određenim formama, imunoglobulinski Fc region (npr., CH2, 043, i/ili CH4 region) polipeptidnog heterodimera predmetne objave može imati izmenjeni obrazac glikozilacije u odnosu na imunoglobulinsku referentnu sekvencu. Na primer, bilo koja od različitih genetičkih tehnika može da se upotrebi za promenu jedne ili više određenih aminokiselinskih rezidua koje formiraju mesto glikozilacije (vidi.. Co et al.,(l993) Mol. Immunol. 30:1361; Jacquemon et al, (2006) .1. Throm Haemost. 4:1047: Schuster et al.
(2005) Caner Res. 65:7934; Warnock et at. (2005) Biotechnol. Bioeng. 92:831), npr., N297 CH2 domena (EU numeracija). Alternativno, ćeiije-đomaćini koje proizvode polipeptiđne heterodimere ove objave mogu da se inženjerišu tako da proizvode izmenjeni obazac glikozilacije. Jedan metod poznat u struci, na primer. obezbeđuje promenjenu glikozilaciju u vidu bisekujućih, nefukozilovanih varijanti, koja povećava ADCC. Varijante nastaju kao rezultat ekspresije u ćeliji-domaćinu koja sadrži oligosaharid-modifikujući enzim. Alternativno, za redukovanje sadržaja fukoze giikozilovanog molekula prema ovo objavi, razmatra se POTELLIGENTE© tehnologija BioWa/Kyowa Hakko. U jednom poznatom metodu, obezbeđena je CHO ćelija-domaćin za rekombinantnu proizvodnju imunoglobulina. koja modifikuje obrazac glikozilacije imunoglobulinskog Fc regiona putem proizvodnje GDP-fukoze.
Alternativno, za promenu obrasca glikozilacije polipeptidnih heterodimera ove objave koriste se hemijske tehnike. Na primer, različiti inhibitori glikozidaze i/ili manozidaze obezbeđuju jedan ili više od sledeeih željenih efekata: pojačavanje ADCC aktivnosti, povećavanje vezivanja za Fc receptor i izmena obrasca glikozilacije. U određenim formama, ćelije koje eksprimiraju polipeptidne heterodimere ove objave rastu u kultivacionom medijumu koji sadrži ugljenohidratni modifikator u koncentraciji koja povećava ADCC imunoglikoproteinskih molekula proizvedenih u pomenutoj ćeliji-domaćinu, pri čemu je pomenuti ugljenohidratni modifikator prisutan u koncentraciji manjoj od 800 uM. U jednoj formi, ćelije koje eksprimiraju ove polipeptidne heterodimere rastu u kultivacionom medijumu koji sadrži kastanospermin ili kifunenzin, na primer, kastanospermin u koncentraciji od 100-800 uM, npr. 100 uM. 200 pM 300 uM, 400 uM, 500 uM, 600 uM, 700 uM. ili 800 uM. Metodi izmene glikozilacije ugljenohidratnim modifikatorom kao Što je kastanospermin dati su u U.S. Patent No. 7,846,434 ili PCT Publication No VVO 2008/052030.
Strukturni aranžmani i primeri heterodimera
Da bi se formirao polipeptidni heterodimer prema predmetnom pronalasku, dizajnirana su dva jednolančana polipeptiđa, tako da je imunoglobulinski heterodimerizacioni domen prvog jednolančanog polipeptiđa pravilno poravnat i interaguje sa imunoglobulinskim heterođimerizacionmi domenom drugog jednolančanog polipeptiđa. U određenim formama, heterodimer može sadržati drugi par imunoglobulinskih heterodimerizacionih domena, za olakšavanje ili pojačavanje heterodimerizacije dva lanca. U određenim formama, pored interakcije dva imunoglobulinska heterodimerizaciona domena, Fc region-deo fnpr.. CH3 domen) prvog lanca može da ineteraguje sa Fc regionom drugog lanca, da bi se pojačala heterodimerizacija (npr., interakcija dva CH3 domena divljeg tipa ili para CH3 domena sa "knob-into-holes" mutacijama). Pored toga, u određenim formama, zglob prvog lanca (npr., izmenjeni humani IgGl zglob sa dve cisteinske rezidue, kako je navedeno u SEQ ID MO:664) može da interaguje sa zglobom drugog lanca (npr., isti izmenjeni humani IgGl zglob, kako je navedeno u SEQ ID NO:664) da bi formirali, na primer. disulfidne veze, što može dalje da ojača interakciju između prvog i drugog jednolančanog polipetida, da bi se formirao polipeptidni heterodimer predmetne objave. Poreci toga, u određenim formama, prvi i drugi lanac mogu sadržati drugi zglobni par (npr., na karboksi-terminusima dva lanca) da bi se dodatno pojačala interakcija između dva lanca.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer predmetne objave sadrži dva vezujuća domena (BDI i BD2), pri čemu se vezujući domeni vezuju za dva različita ciljna molekula. U određenim formama, dva vezujuća domena (BDI i BD2) su oba na SCP-1, sa imunoglobulinskim heterodimerizacioni domenom (HD-I) i Fc region-delom (FRP-1) smeštenim između BDI i BD2. U određenim drugim formama, prvi vezujući domen (BDI) je na SCP-1 i drugi vezujući domen (BD2) je na SCP-II. U određenim formama, BDI i BD2 su aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo SCP-I. odnosno SCP-11. U određenim drugim formama, BDI je aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo SCP-I i BD2 je karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo SCP-II. U određenim drugim formama, BDI je karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo SCP-1 i BD2 je aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo SCP-II. U određenim drugim formama, BDI i BD2 su karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo SCP-I, odnosno SCP-II.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži tri vezujuća domena (BDI. BD2 i BD3). pri čemu se vezujući domeni vezuju za dva ili tri različita ciljna molekula. Na primer, svaki od BDI. BD2 i BD3 se vezuje za različiti cilj ili se BDI i BD2 vezuju za prvi cilj, dok se BD3 vezuje za drugi cilj. ili se BDI i BD3 vezuju za prvi cilj, dok se BD2 vezuje za drugi cilj, ili se BD2 i BD3 vezuju za prvi cilj, dok se BDI vezuje za drugi cilj. U određenim formama, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen i Fc region-deo smešteni su između BDI i BD2 na SCP-I i BD3 je aminoterminalno u odnosu na Fc region-deo SCP-II. U drugim formama, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen i Fc region-deo smešteni su između BDI i BD2 na SCP-11 i BD3 je karboksiterminalno u odnosu na Fc region-deo SCP-I.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži četiri vezujuća domena (BDI. BD2, BD3 i BD4), pri čemu se vezujući domeni vezuju za dva do četiri različita ciljna molekula. U određenim formama, imunoglobulinski heterodimerizacioni domen i Fc region-deo SCP-1 smešteni su između BDI i BD2 i imunoglobulinski heterodimerizacioni domen i Fc region-deo SCP-11 smešteni su između BD3 i BD4.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži pet vezujućih domena (BDI, BD2, BD3, BD4 i BD5). pri čemu se vezujući domeni vezuju za dva do četiri različita ciljna molekula. U određenim formama, SCP-1 sadrži tri vezujuća domena (BDI, BD2 i BD3) i SCP-11 sadrži dva vezujuća domena (BD4 i BD5). U drugim formama, BDI i BD2 mogu biti, na primer, povezani u tandemu jedan sa drugim (direktno ili preko peptidnog linkera od oko 2 do osam amino-kiselina) na amino- (ili karboksi-) terminusu SCP-1, sa BD3 lociranim na karboksi- (ili amino-) terminusu SCP-1 ili SCP-II, pri čemu su BD4 i BD5 na SCP-II ako je BD3 na SCP-I, ili, BD4 ili BD5 su na SCP-I ako je BD3 na SCP-11.
U još nekim formama, polipeptidni heterodimer sadrži šest vezujućih domena (BD1-BD6). U određenim formama, svaki od SCP-I i SCP-II sadrži tri vezujuća domena (npr., BDI-BD3 na SCP-1 i BD4-BD6 na SCP-11). U takvim formama, na primer, BDI i BD2 mogu biti povezani u tandem i locirani na SCP-I amino- (ili karboksi-) terminusu, i BD3 može biti lociran na SCP-1 karboksi- (ili amino-) terminusu. Slično, BD4 i BD5 mogu biti povezani u tandem i locirani na SCP-11 amino- (ili karboksi-) terminusu, i BD6 može biti lociran na SCP-II karboksi- (ili amino-) terminusu. U određenim drugim formama, prvi jednolančani polipeptid (SCP-I) sadrži četiri vezujuća domena (BD1-BD4), i drugi jednolančani polipeptid (SCP-11) sadrži dva vezujuća domena (BD5 i BD6). U takvim formama, BDI i BD2 mogu biti povezani u tandem i smešteni na ili blizu amino-terminusa SCP-I, BD3 i BD4 mogu biti povezani u tandem i smešteni na ili blizu karboksi- terminusa SCP-1, i BD5 i BD6 mogu biti smešteni na ili blizu amino- i karboksi- terminusa SCP-11, respektivno.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži sedam vezujućih domena (BD1-BD7). U takvim formama, SCP-1 može da sadrži četiri vezujuća domena (BD1-BD4), i SCP-11 može da sadrži preostala tri vezujuća domena (BD5-BD7). Na primer, BDI i BD2 mogu biti povezani u tandem i smešteni na ili blizu amino-terminusa SCP-I. i BD3 i BD4 mogu biti povezani u tandem i smešteni na ili blizu karboksi-terminusa SCP-II. BD5 i BD6 mogu biti povezani u tandem i smešteni na ili blizu amino- (ili karboksi-) terminusa SCP-11 i BD7 može biti lociran na ili blizu karboksi- (ili amino-) terminusa SCP-11.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer sadrži osam vezujućih domena (BD1-BD8). U takvim formama, prvi i drugi jednolančani polipeptid mogu sadržati po Četiri vezujuća domena. U svakom lancu, dva vezujuća domena mogu biti locirana na ili blizu amino-terminusa, i druga dva vezujuća domena mogu hiti locirana na ili blizu karboksi- terminusa.
Da bi se pojednostavio opis načina na koji različite komponenete mogu biti aranžirane da bi se dobili prvi i drugi jednolančani polipeptid koji formiraju polipeptidne heterodimere predmetne objave, dole u ovom tekstu dati su aranžmani u formama za primer (I) do (50) u kojima su u svaki heterodimer uključena samo dva vezujuća domena.
U formi (1) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa. prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CHI region, zglob i Fc region-deo; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, CL region (npr.. Ck.CX),zglob i Fc region-deo.
U formi (2) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, zglob, Fc region-deo i CHI region; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, zglob, Fc region-deo, i CL region.
U formi (3) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CHI region, zglob i Fc region-deo. i drugi CHI region; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen. CL region, zglob, Fc region-deo i drugi CL region.
U formi (4) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CH I region, drugi CH I region. zglob i Fc region-deo: i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, CL region. drugi CL region, zglob, Fc region-deo.
U formi (5) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen. zglob. Fc region-deo, CHI region, i drugi CHI region; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, zglob, Fc region-deo, CL region i drugi CL region.
U formi (6) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži CHI region, zglob, Fc region-deo, drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region, zglob, Fc region-deo. drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (7) polipeptidni heterodimer formiraju sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob, Fc region-deo, CHI region, drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob, Fc region-deo, CL region, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (8) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži CHI region, zglob, Fc region-deo, drugi CHI region, drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region, zglob, Fc region-deo. drugi CL region, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (9) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži CHI region, drugi CHI region, zglob, Fc region-deo, drugi zglob i prvi vezujući domen: i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region, drugi CL region. zglob, Fc region-deo, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (10) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob, Fc region-deo, CHI region, drugi CHI region. drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob. Fc region-deo, CL region, drugi CL region, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (11) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CL region, zglob i Fc region-deo: i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, CH I region. zglob i Fc region-deo.
U formi (12) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa. prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, zglob, Fc region-deo i CL region; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, zglob, Fc region-deo i CHI region.
U formi (13) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća đva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CL region, zglob, Fc region-deo i drugi CL region; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, CHI region, zglob, Fc region-deo i drugi CHI region.
U formi (14) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća đva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CL region, drugi CL region. zglob i Fc region-deo; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen. CHI region, drugi CHI region, zglob i Fc region-deo.
U formi (15) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, zglob, Fc region-deo. CL region i drugi CL region; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, zglob, Fc region-deo, CHI region i drugi CHI region.
U formi (16) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region, zglob, Fc region-deo, drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CHI region, zglob, Fc region-deo, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (17) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa. prvi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob, Fc region-deo, CL region. drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob, Fc region-deo, CH 1 region, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (18) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa đo karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region, zglob, Fc region-deo, drugi CL region. drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CFII region, zglob, Fc region-deo, drugi CH I region, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (19) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region, drugi CL region, zglob, Fc region-deo, drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CHI region, drugi CHI region, zglob, Fc region-deo, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (20) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob, Fc region-deo, CL region, drugi CL region. drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob. Fc region-deo, CHI region, drugi CH I region, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (21) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa. prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CHI region, zglob, Fc region-deo i CL region; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, CL region, zglob, Fc region-deo i CH I region.
U formi (22) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CL region, zglob, Fc region-deo i CHI region: i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, CHI region, zglob, Fc region-deo i CL region.
U formi (23) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa. prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CHI region, CL region. zglob i Fc region-deo; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen. CL region, CHI region, zglob i Fc region-deo.
U formi (24) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa. prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CL region, CHI region, zglob i Fc region-deo: i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, CHI region. CL region, zglob i Fc region-deo.
U formi (25) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća đva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, zglob, Fc region-deo. Cl i I region i CL region: i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, zglob. Fc region-deo, CL region i CHI region.
U formi (26) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa đo karboksi-terminusa. prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, zglob, Fc region-deo, CL region i CHI region; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, zglob, Fc region-deo. CH! region i CL region.
U formi (27) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži CHI region, zglob, Fc region-deo. CL region, drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region, zglob. Fc region-deo. CHI region, drugu zglob i drugi vezujući domen.
U formi (28) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa. prvi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region, zglob, Fc region-deo, CHI region. drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CHI region, zglob. Fc region-deo, CL region, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (29) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži CHI region, CL region, zglob. Fc region-deo, drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region. CHI region. zglob, Fc region-deo, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (30) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region, CH 1 region, zglob, Fc region-deo. drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CH I region. Cl region, zglob, Fc region-deo. drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (31) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob, Fc region-đeo, CHI region, CL region, drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob, Fc region-deo. CL region, CFU region, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (32) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća đva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob, Fc region-deo, CL region. CH I region, drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob, Fc region-deo, CHI region, CL region, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (33) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CHI region, zglob, Fc region-deo, drugi zglob i drugi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region, zglob i Fc region-đeo.
U formi (34) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća đva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CL region, zglob, Fc region-deo. drugi zglob i drugi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CHI region, zglob i Fc region-deo.
U formi (35) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen. CHI region. zglob i Fc region-deo; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region, zglob, Fc region-deo, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (36) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži CHI region, zglob, Fc region-deo, drugi zglob i prvi vezujući domen: i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, CL region, zglob i Fc region-deo.
U formi (37) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: ođ amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CHI region, zglob, Fc region-deo i drugi zglob: i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, CL region, zglob, Fc region-deo i drugi zglob.
U formi (38) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, zglob, Fc region-deo, CHI region, drugi zglob, i drugi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob, Fc region-deo i CL region.
U formi (39) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa đo karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob, Fc region-đeo i CH I region; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen. zglob, Fc region-deo, CL region, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (40) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa. prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, zglob, Fc region-deo i CHI region; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob, Fc region-đeo, CL region. drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (41) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: ođ amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob, Fc region-deo, CHI region, drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, zglob. Fc region-deo i CL region.
U formi (42) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, zglob. Fc region-deo. CHI region i drugi zglob; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, zglob. Fc region-deo. CL region i drugi zglob.
U formi (43) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa. prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CHI region, zglob. Fc region-đeo, CL region. drugi zglob i drugi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region, zglob, Fc region-deo i CHI region.
U formi (44) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: ođ amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži CH 1 region, zglob, Fc region-deo i CL region; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CL region, zglob, Fc region, CHI region, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (45) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća đva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen. CHI region. zglob, Fc region-đeo i CL region; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region. zglob, Fc region-deo, CHI region, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (46) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća đva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži CHI region, zglob, Fc region-deo, CL region, drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen, CL region, zglob, Fc region-deo i CHI region,
U formi (47) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CF1I region, zglob, Fc region-deo. drugi CHI region, drugi zglob i drugi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region, zglob, Fc region-deo i drugi CL region.
U formi (48) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži CH I region, zglob, Fc region-deo i drugi CH 1 region; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CL region. zglob. Fc region-deo, drugi CL region, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (49) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća đva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CH! region, zglob, Fc region-deo i drugi CHI region; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region. zglob, Fc region-deo. drugi CL region, drugi zglob i drugi vezujući domen.
U formi (50) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: ođ amino-terminusa đo karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži CH I region, zglob, Fc region-deo, CHI region, drugi zglob i prvi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen. CL region, zglob, Fc region-deo i drugi CL region.
Primeri formi (51) do (60) takođe su dati dole i kod njih svaki heterodimer uključuje tri ili četiri vezujuća domena. Mogu se uključiti i dodatni vezujući domeni da bi se napravili polipeptidni heterodimeri koji sadrže pet do osam vezujućih domena prema predmetnoj objavi, a u svetlu opšteg opisa datog u ovom tekstu.
U formi (51) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CHI region, zglob. Fc region-deo. drugi zglob i drugi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži treći vezujući domen, CL region, zglob i Fc region-deo.
U formi (52) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa; ođ amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CHI region, zglob, Fc region-deo, drugi zglob i drugi vezujući domen: i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CL region, zglob, Fc region-deo, drugi zglob i treći vezujući domen.
U formi (53) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CL region, zglob, Fc region-deo, drugi zglob i drugi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži treći vezujući domen, CHI region, zglob i Fc region-deo.
U formi (54) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, CL region, zglob, Fc region-deo. drugi zglob i drugi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži CHI region, zglob, Fc region-deo, drugi zglob i treći vezujući domen.
U formi (55) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, zglob, Fc region-deo, CFU region, drugi zglob i drugi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži treći vezujući domen. zglob, Fc region-deo i CL region.
U formi (56) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, zglob, Fc region-deo, CHI region, drugi zglob i drugi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob, Fc region-deo, CL region, drugi zglob i treći vezujući domen.
U formi (57) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, zglob, Fc region-đeo, CL region. drugi zglob i drugi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži treći vezujući domen, zglob, Fc region-deo i CH I region.
U formi (58) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, zglob, Fc region-đeo, CL region, drugi zglob i drugi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži zglob, Fc region-deo, CHI region, drugi zglob i treći vezujući domen.
U formi (59) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino- do karboksi-terminusa: prvi vezujući domen. CHI region, zglob. Fc region-deo, drugi zglob i drugi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži treći vezujući domen, CL region, zglob, Fc region-deo, drugi zglob i četvrti vezujući domen.
U formi (60) polipeptidni heterodimer sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: od amino-terminusa do karboksi-terminusa, prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen, zglob, Fc region-deo, CHI region, drugi zglob i drugi vezujući domen; i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži treći vezujući domen, zglob, Fc region-deo, CL region, drugi zglob i četvrti vezujući domen.
U formama (1) do (32) polipeptidni heterodimer predmetne objave sadrži sledeća dva jednolančana polipeptiđa: prvi jednolančani polipeptid koji sadrži prvi vezujući domen (BDI) koji se specifično vezuje za cilj na T-ćelijama (npr., TCR kompleks ili njegova komponenta, uključujući TCRa, TCRp, CD3y, CD35 i CD3e), zglob koji je SCC-P IgGl zglob, Fc region-deo koji je divlji tip ili izmenjeni humani IgGl CH2CH3, i CL region koji je divlji tip ili izmenjeni humani Ckregion sa N30Y V55A T70E (YAE) supstitucijama; i i drugi jednolančani polipeptid koji sadrži drugi vezujući domen (BD2) koji se specifično vezuje za cilj na B-ćelijama (npr., CD 19, CD79b, FILA-DR, CD37, CD20) ili tumorski ili kancerski antigen (npr., RON, c-Met, EpCAM, CEACAM-6, PSMA), zglob koji je takođe SCC-P IgG! zglob, Fc region-deo koji je divlji tip ili izmenjeni humani IgGl CH2CH3, i CHI region koji je humani CHI region.
U sledećim formama, polipeptidni heterodimer formi (I) do (32) može sadržati još i treći vezujući domen (BD3) koji je identičan sa BDI ili BD2 i povezan je sa jednolančanim polipeptidom preko drugog zgloba (npr , linker H75 ili H68, kako je navedeno u SEQ ID NO:742 i 78, respektivno). U drugim formama, polipeptidni heterodimer forme formi (1) do (32) može sadržati još i treći i četvrti vezujući domen (BD3) i (BD4), od kojih je svaki identičan ili različit u odnosu na BDI ili BD2 i povezan je sa jednolančanim polipeptidom/polipeptidima preko drugog zgloba (npr.. linker H75 ili H68 kako je navedeno u SEQ ID NO:742 i 78).
U određenim formama, polipeptidni heterodimeri predmetne objave mogu biti inženjsrisani tako da imaju vezujuće domene sa različitim afinitetima za ćelijske tipove koji su im specifični ciljevi. Na primer. za polipeptidni heterodimer koji ima vezujući domen za TCR kompleks ili njegovu komponentu i drugi vezujući domen za tumorski antigen (ili cilj na B-ćeliji), može biti poželjno da se prefereneijaino vezuje za tumorske ćelije koje imaju tumorski antigen (ili B-ćelije koje nose B-ćelijski cilj), sa većim afinitetom, tako da se polipeptidni heterodimer prvo veže za tumorske ćelije (ili B-ćelije), a da zatim regrutuje T-ćelije, preko njihovih TCR/CD3 vezujućih domena, na mesto tumora ili tumorskih ćelija. Diferencijalni vezujući afiniteti mogu da se dobiju, na primer, tako što se za jedan cilj bira vezujući domen sa većim vezujućim afinitetom nego sto je vezujući afinitet drugog vezujućeg domena za njegov cilj. ili tako što se u polipeptidni heterodimer za jedan cilj uključi više vezujućih domena ili se za drugi cilj/ciljeve uključi manje vezujućih domena. Pored toga, korišcenje različitih zglobova (npr., korišćenje zglobova različite dužine) može uticati na to da se jedan domen vezuje u većoj meri nego drugi, ili se različiti zglobovi mogu koristiti za različite vezujuće domene da bi se izmenila vezujuća aktivnost vezujućih domena.
U određenim formama, može biti potrebno da više vezujućih domena bude locirano na odgovarajućoj međusobnoj udaljenosti, tako da njihove interakcije sa ciljevima proizvedu željeni efekat. Na primer. u određenim formama, polipeptidni heterodimer koji sadrži vezujući domen za TCR kompleks ili njegovu koponentu u prvom jednolančanom polipeptidu i drugi vezujući domen za tumorski antigen ili B-ćelijski cilj u drugom jednolančanom polipeptidu može imati oba vezujuća domena na amino- ili karboksi-terrninusu odgovarajućih lanaca tako da su oni fizički blizu jedan drugome u polipeptidnom heterodimeru.
Primeri heterodimera mogu da se formiraju od para jednolančanih polipeptiđa opisanih u ovom tekstu. Ako ovde navedeni identifikacioni brojevi sekvenci sadrže signalne peptidne sekvence (npr., prvih 20 amino-kiselina) takve signalne peptidne sekvence nisu deo zrelih jednolančanih polipeptiđa koji formiraju polipeptidni heterodimer za primer i, prema tome, treba ih smatrati za isključene.
Primeri jednolančanih polipeptiđa navedeni su u SEO ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 29-32, 53-72, 74, 810-826, 859-864 i 874-882.
Primeri heterodimera mogu da se formiraju ođ sledećih parova jednolančanih polipeptiđa: SEQ ID NO:2 i 4, SEO 1DN0:6 i 8, SEQ 1DNO:10 i 12, SECi IDNO:14 i 16, SEQ ID NO: 18 i 20, SEQ ID NO:20 i 22, SEO ID NO:20 i 24, SEQ ID NO:30 i 32, SEO ID NO:29 i 31, SEO ID NO:29 i 32, SEQ ID NO:30 i 72, SEQ ID NO:53 i 72, SEQ ID NO:54 i 72, SEQ ID NO:55 i 72, SEQ ID NO:70 i 72. SEO ID NO:71 i 72, SEQ ID NO:63 i 56, SEO ID NO:64 i 57, SEQ ID NO:65 i 60, SEO ID NO:66 i 58, SEQ ID NO:67 i 59, SEQ ID NO:68 i 61, SEQ ID N0.69 i 62, SEQ ID NO:54 i 811, SEQ ID NO:54 1812, SEQ ID NO:54 i 813. SEQ ID N0:8I4 i 818, SEO ID NO:8!5 i 818, SEQ ID NO:816 i 818, SEO 1DN0.817 i 818, SEO 1DNO.SI4 i 820, SEO IDN0:8I4 i 821, SEO IDNO.54 i 819, SEQ IDNO:814 i 826, SEO ID NO:814 i 822. SEQ 1DN0:8I4 i 823, SEO ID N0:814 i 824, SEO ID NO:859 i 862, SEO ID NO.860 i 863, SEO ID NO:86l i 864, SEQ ID NO:874 i 825, SEQ ID NO:875 i 879, SEQ ID NO:876 i 880, SEQ ID NO:877 i 881 ili SEO ID NO:87S i 882.
Nukleinske kiseline, vektori, ćelije- domaćini i metodi pravljenja heterodimera
U srodnom aspektu, predmetna objava obezbeđuje izolovane molekule nukleinske kiseline (koristi se naizmenično sa "polinukleotid"), koji kodiraju jednolančane polipeptide date u ovom tekstu. Primeri molekula mikleinskih kiselina (sa ili bez nukleotidne sekvence koja kodira sekvencu signalnog peptiđa) navedeni su u SEQ ID NO: 1,3, 5,7,9, 11, 13, 15, 17, 19,21,23,25-28,33-52 i 792-808.
Predmetna objava obezbeđuje i vektore koji sadrže sekvencu nukleinske kiseline koja kodira jednolančane polipeptide date u ovom tekstu. Kako se koristi u ovom tekstu, "vektor" se odnosi na molekul nukleinske kiseline koji može da transportuje drugu nukleinsku kiselinu sa kojom je povezan. Primeri vektora uključuju plazmide, arteficijalne hromozome kvasca, i virusne genome. Određeni vektori mogu da se autonomno repliciraju u ćeliji-domaćinu, dok drugi vektori mogu da se inlegrišu u genom ćelije-domaćina i tako repliciraju sa genomom domaćina.
U određenim formama, vektori mogu bili rekombinantni ekspresioni vektori. "Rekombinantni ekspresioni vektori" ili "ekspresioni vektori" odnosi se na vektore koji sadrže sekvence nukleinske kiseline operativno povezane sa ekspresionom kontrolnom sekvencom (npr., promotor) i koji su, prema tome sposobni da usmeravaju ekspresiju tih sekvenci.
Promotorske sekvence korisne u ovde datim ekspresionim vektorima mogu da se odaberu iz bilo kog željenog gena, uz korišcenje CAT (hloramfenikol-transferaza) vektora ili drugih vekora sa selektabilnim markerima. Eukariotski promotori uključuju CMV neposredni rani, HSV timidin-kinazni, rani i kasni SV40, LTR iz retrovirusa. i mišji metalotionin-l. U određenim formama, promotori su inđucibilni promotori,
U određenim formama, vektor je ekspresioni vektor koji sadrži sekvencu nukleinske kiseline koja kodira prvi jednolančani polipeptid ovde datog polipeptidnog heterodimera. U određenim drugim formama, vektor je ekspresioni vektor koji sadrži sekvencu nukleinske kiseline koja kodira drugi jednolančani polipeptid ovde datog polipeptidnog heterodimera.
U određenim formama, vektor je ekspresioni vektor koji sadrži sekvence koje kodiraju i prvi i drugi jednolančani polipeptid polipeptidnog heterodimera. Promotor za sekvencu nukleinske kiseline koja kodira prvi jednolančani polipeptid može biti isti kao promotor za nukleinsku kiselinu koja kodira drugi jednolančani polipeptid. Alternativno, promotor za sekvencu nukleinske kiseline koja kodira prvi jednolančani polipeptid može biti različit od promotor za nukleinsku kiselinu koja kodira drugi jednolančani polipeptid, tako da ekspresioni nivoi prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa mogu da se diferencijalno modulišu da bi se postigla maksimalna heterodimerizacija prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa. U određenim formama, jedan ili oba promotora za nukleinsku kiselinu kodirajuću za prvi i drugi jednolančani polipeptid su inđucibilni promotori.
Predmetna objava obezbeđuje i ćeliju-domaćina koja je transformisana ili transfektovana ili je na drugi način stekla neku od nukleinskih kiselina ili vektora datih u ovom tekstu. Primeri ćelija-domaćina ukljućujju VERO ćelije, HeLa ćelije, ćelijske linije ovarijuma kineskog hrčka (Chinese hamster ovary, CHO) (uključujući modifikovane CHO) sposobne da modifikuju obrazac glikozilacije eksprimiranih multivalentnih vezujućih molekula, vidi, U.S. Patent Application Publication No. 2003/0115614), COS ćelije (kao COS-7), V7138, BHK, HepG2, 3T3. R1N. MDCK, A549. PC 12, K562. HEK293 ćelije, HepG2 ćelije, N ćelije, 3T3 ćelije,Spadoplera fragiperdaćelije (npr.. Sf9 ćelije),Saccharomyces cerevisiaećelije,Escherichia col i. Bacihis subfUis, Salmonella typhinmrium,ili članove familije Streptomycete.
U određenim formama, ćelija-đomaćin sadrži prvi ekspresioni vektor koji sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira prvi jednolančani polipeptid i drugi ekspresioni vektor koji sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira drugi jednolančani polipeptid.
U određenim drugim formama, ćelija-domaćin sadrži ekspresioni vektor koji sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira i prvi i drugi jednolančani polipeptid.
Objava takođe uključuje metod proizvodnje polipeptidnih heterodimera opisanih u ovom tekstu. U određenim formama, metod uključuje kultivisanje oelije-domaćina koja sadrži nukleinske kiseline koje kodiraju prvi i drugi jednolančani polipeptid, pod uslovima pogodnim za ekspresiju polipeptiđa i, opciono, izolovanje i prečišćavanje iz kulture heterodimera koji se formiraju od prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa. Nukleinska kiselina koja kodira prvi jednolančani polipeptid i nnkleinska kiselina koja kodira drugi jednolančani polipeptid mogu biti prisutne u jednom ekspresionom vektoru u ćeliji-domaćinu ili u dva različita ekspresiona vektora u ćelijama-đomaćinima. U ovom drugom slučaju, odnos između dva ekspresiona vekta može da se kontroliše da bi se heterodimerizacija prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa dovela do maksimuma.
Predmetna objava obezbeđuje prečišćene polipeptidne heterodimere, kako je ovde opisano. Izraz "prečišćen", kako se koristi u ovom tekstu, označava smešu koja se može odvojiti od drugih komponenti, pri čemu je polipeptidni heterodimer prisutan u većoj količini nego prilikom prirodnog dobijanja. U određenim formama, predmetna objava obezbeđuje suštinski prečišćene polipeptidne heterodimere, kako je ovde opisano. "Suštinski prečišćen" odnosi se na smešu polipeptidnog heterodimera u kojoj polipeptidni heterodimer čini glavnu komponentu smeše, npr., čini najmanje oko 50%, na primer najmanje oko 60%, oko 70%, oko 80%, oko 90%, oko 95%. oko 99% polipeptiđa, težinski, u smeši.
Tehnike prečišćavanja proteina dobro su poznate stručnjacima u oblasti, Te tehnike uključuju, na jednom nivou, grubo frak c ion i sanje na polipeptiđnu i nepolipeptidnu frakciju. Često je poželjno dodatno prečišćavanje uz korišcenje tehnika hromatografije i elektroforeze, za postizanje delimičnog ili potpunog prečišćavanja (ili prečišćavanja do homogenosti). Analitički metodi posebno prilagođeni pripremanju Čistog fuzionog proteina su jonoizmenjivačka hromatografija. ekskluziona hromatografija zasnovana na veličini čestica, elektroforeza na poliakrilamiđnom gelu i izoelektrično fokusiranje. Posebno efikasni metodi prečišćavanja peptiđa su brza proteinska tečna hromatografija i HPLC.
Različiti metodi kvantifikovanja stepena prečišćenosli poznati su stručnjacima n oblasti, u svetlu predmetnog pronalaska. Oni uključuju na primer, procenti količine polipeptidnih heterodimera u frakciji pomoću SDS/PAGE analize i HPLC, i ilustrovani su u ovde datim primerima.
Metod pravljenja ovde datih polipeptidnih heterodimera pogodniji je u odnosu na metod prema kojem se prvo zasebno eksprimiraju i prečišćavaju pojedinačni jednolančani polipeptid, a zatim se prečišćeni pojedinačni jednolančani polipeptiđi inkubtraju da bi formirali polipeptidne heterodimere. Na primer, određeni jednolančani polipeptiđi (npr., određeni polipeptiđi koji sadrže samo CHI regione kao imunoglobulinske heterodimerizacione domene) nestabilni su kada se eksprimiraju zasebno. Pored toga, zasebna ekspresija i prečišćavanje pojedinačnih jednolančanih polipeptiđa. za kojima sledi kombinovanje prečišćenih pojedinačnih jednolančanih polipeptiđa, uključuje više koraka i u celini je manje efikasna nego koekspresija oba jednolančana polipeptiđa, za kojom sledi prečišćavanje đobijenih polipeptidnih heterodimera.
Smeše i metodi upotrebe heterodimera
Pored polipeptidnih heterodimera, predmetna objava obezbeđuje i farmaceutske smeše i jedinične đozne forme koje sadrže polipeptidne heterodimere, kao i metode upotrebe polipeptidnih heterodimera, farmaceutskih smeša i jediničnih doznih formi.
Smeše polipeptidnih heterodimera ove objave obično sadrže ovde dati polipeptidni heterodimer u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijentom, uključujući farmaceutski prihvatljive nosače i razblaživače. Farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti biće netoksični za primaoca u upotrebljenim dozama i koncentracijama. Oni su dobro poznati u farmaceutskoj struci i opisani su na primer u Rovve et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients: A Comprehensive Guide to Uses. Properties and Safetv. 5"<1>Ed., 2006.
Farmaceutski prihvatljivi nosači za terapijsku upotrebu takođe su dobro poznati u farmaceutskoj struci i opisani su na primer u Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro (Cd.) 1985). Primeri farmaceutski prihvatljivih nosača uključuju sterilni slani rastvor i fosfatom puferisani slani rastvor, na fiziološkom pH. U farmaceutske smeše mogu biti uključeni prezervansi, stabilizeri, boje i slično. Pored toga. mogu da se koriste i antioksidanti i suspenđujuća sredstva.
Farmaceutske smeše mogu sadržati i razblaživače kao što su puferk antioksidante kao askorbinska kiselina, polipeptide male molekulske težine (manje od oko 10 rezidua). proteine, amino-kiseline, ugljene hidrate (npr., glukoza, sahnroza, dekstrini), helirajuća sredstva (npr., EDTA), glutation i druge stabilizere i ekscipijente. Neutralno puferisani slani rastvor i slani rastvor pomešan sa nespecifičnim serum albuminom primeri su razblaživača. Na primer, proizvod može da se formuliše kao liofilizat korišćenjem pogodnih ekscipijentnih rastvora (npr., saharoza) kao razblaživača.
Predmetna objava obezbeđuje i metod lečenja bolesti ili poremećaja udruženih sa, na primer, suvišnim receptorima posredovanim prenosom signala, koji uključuje primenu, kod pacijenta kojem je to potrebno, efikasne količine polipeptidnog heterodimera koji sadrži vezujući domen koji se specifično vezuje za receptor kao što je receptorska tirozin-kinaza, uključujući EGFR. EGFRuili. ErbB2, ErbB3, ErbB4, 1GF1R, c-Met, RON i EphA2.
Primeri bolesti ili poremećaja udruženih sa suvišnim receptorima posredovanim prenosom signala uključuju kancer (npr. solidne malignitete i hematološke malignitete). autoimunske ili zapaljenske bolesti ili stanja, sepsu nastalu kao rezultat bakterijske infekcije i virusnu infekciju.
U jednom aspektu, predmetna objava obezbeđuje metod usmeravanja aktivacije T-ćelija, koji uključuje primenu, kod pacijenta kojem je to potrebno, efikasne količine polipeptidnog heterodimera koji sadrži vezujući domen koji se specifično vezuje za TCRa, TCRp, CD3y. CD35, CD3s ili njihovu kombinaciju, i drugi vezujući domen koji se specifično vezuje za različiti cilj, na primer. tumor-specifični antigen ili drugi antigen po izboru, na mestu ili ćeliji gde je poželjna aktivacija T-ćelije,
U drugom aspektu, predmetna objava obezbeđuje metod inhibiranja rasta, metastaza ili metastatskog rasta maligniteta (npr., solidnog maligniteta ili hematološkog maligniteta), koji uključuje primenu, kod pacijenta kojem je to potrebno, efikasne količine ovde datog polipeptidnog heterodimera ili njegove smeše.
Raznovrsni kanceri, uključujući solidne malignitete i hematološke malignitete, osetljivi su na ovde objavljene smeše i metode. Tipovi kancera koji mogu da se lece uključuju, ali se ne ograničavaju na adenokareinom dojke, prostate, pankreasa, kolona i rektuma; sve forme bronhogenih karcinoma pluća (uključujući karcinom skvamoznih ćelija, adenokareinom, sitnoćelijski plućni kancer i nesitnoćelijski plućni kancer); mijeloidne kancere, melanom; hepatom; neuroblastom: papilom; apudom; horiostom; branhiom; maligni karcinoidni sindrom; karcinoidno srčano oboljenje; i karcinome (npr., Walker-ov, bazalnih ćelija, bazoskvamozni, Brown-Pearce-ov. đuktusni. Ehrlich-ov tumor, Krebs 2, Merkelovih ćelija, mucinozni. nesitnoćelijski plućni, sitnoćelijski, papilarni, scirozni, bronhiolarni, bronhogeni. skvamoznih ćelija, i prelaznih ćelija). Dodatni tipovi kancera koji se mogu lećiti uključuju histiocitozne poremećaje; leukemije; histiocitozni malignitet; Hodgkin-ovu bolest; imunoproliferativnu bolest tankog creva; ne-Hodgkin-ov limfom; plazmocitom; retikuloendoteliozu; melanom: hondroblastom; hondrom; hondrosarkom; fibrom; fibrosarkom; tumore džinovskih ćelija; histiocitom; lipom; liposarkom; mezoteliom; miksom; miksosarkom; osteom; osteosarkom; hordom; kraniofaringeom; disgerminom; hemartom; mezenhimom; mezonefrom; miosarkom; ameloblastom; cementom; odontom; teratom; timom; tumor trofoblasta;. Pored toga, sledeći tipovi kancera takođe se razmatraju kao osetljivi na lečenje: ađenom; holangiom; holesteatom; ciklindrom; cistadenokarcinom; cistadenom; tumor granuloza ćelija; ginandroblastom; hepatom; hidradenoin; tumor ćelija ostrvaca; tumor Leydig-ovih ćelija; papilom; tumor Sertoli-jevih ćelija; tumor teka ćelija; lejomiom, lejomiosarkom: mioblastom; miom; miosarkom; rabdoiniom; rabdomiosarkoni: ependimom: ganglioneurom; gliom; meduloblastom; meningeom; neurilemom; neuroblastom; neuroepiteliom; neurofibrom; neuroni; paragangliom; nehromatlni paragangliom; i multiformni glioblastom. Tipovi kancera koji takođe mogu đa se leće uključuju, ali se ne ograničavaju na angiokeratom, angiolimfoidnu hiperplaziju sa eozinofllijom; sklerotizujući angiom; angiomatozu,; giomanaiom; hemangioendoteliom; hemangiom: hemangiopericitom; hemangiosarkom: limfangiom; limfangiomiom; limfangiosarkom; pinealom; karcinosarkom; hondrosarkom; filoidni cistosarkom; fibrosarkom; hemangiosarkom; lejomiosarkom; leukosarkom; liposarkom; limfangiosarkom; miosarkom; miksosarkom; karcinom ovarijuma; rabdomiosarkom; sarkom: neoplazme; neurofibromatoza i displazija cerviksa.
Dodatni primeri kancera koji su takođe osetljivi na smeše i metode objavljene u ovom tekstu su kanceri B-ćelija, uključujući limfom B-ćelija [kao što su različiti oblici Hodgkin-ove bolesti, ne-Hodgkin-ov limfom (NHL), ili limfom centralnog nervnog sistema], leukemije [npr. akutna limfoblastna leukemija (ALL), hronična limfocitna leukemija (CLL), leukemija vlasastih ćelija i hronična mijeloblastna leukemija], i mijelomi (kao multipli mijelom). Dodatni kanceri B-ćelija uključuju limfom malih iimfocita, prolimfocitnu leukemiju B-ćelija, limfoplazmocitni limfom, limfom slezinske marginalne zone, mijelom plazma-ćelija, solitarni plazmacitom kosti, vankoštani plazmacitom, nenodusni limfom B-ćelija marginalne zone limfoidnog tkiva pridruženog mukozi (MALT), limfom B-ćelija nođusne marginalne zone, folikularni limfom, limfom plaštanih ćelija, difuzni limfom krupnih B-ćelija, limfom krupnih B-ćelija medijastinuma (timusni), intravaskularni limfom krupnih B-ćelija, primami efuzioni limfom, Burkitt-ov limfom/leukemiju, proliferaciju B-ćelija nepoznatog malignog potencijala, limfomatoidnu granulomatozu i postransplantacioni limfoproliferativni poremećaj.
U određenim formama, polipeptidni heterodimeri korisni za inhibiranje rasta solidnih maligniteta ili metastaza ili metastatskog rasta solidnih maligniteta ili hematoloških maligniteta, uključuju one koji se specifično vezuju za tumorski ili kancerski antigen i cilj na T-ćelijama. Takvi heterodimeri su tipično dizajnirani tako da imaju viši vezujući afinitet za tumorski ili kancerski antigen (npr., najmanje oko 5, 10, 15. 20, 25, 50, 75 ili 100 puta viši) nego za cilj na T-ćelijama, tako da se preferentno vezuju prvo za tumorski ili kancerski antigen, pa za cilj na T-ćelijama, što zatiru pokreće i aktivira T-ćelije da oštete ili unište tumorske ili kancerske ćelije koje nose tumorski ili kancerski antigen na svojoj površini. Primeri tumorskih ili kancerskih antigena i ciljeva na T-ćelijama uključuje one koji su navedeni u odeljkti koji opisuje vezujuće domene polipeptidnih heterodimera. Na primer, T-ćelijski cilj može biti CD3 ili PSMA.
U određenim formama, polipeptidni heterodimeri korisni za inhibiranje rasta, metastaza ili metastatskog rasta maligniteta, usinerenom aktivacijom T-ćelija, sadrže najmanje jedan vezujući domen koji sc specifično vezuje za onkološki cilj (uključujući tumorski ili ćelijski antigen kao RON, c-Met, CEACAM-6, ili PSMA) i drugi vezujući domen koji se specifično vezuje za TCR kompleks ili njegovu komponentu (npr., TCRa, TCR|3, CD3y, CD35 i CD3e).
U određenim drugim formama, polipeptidni heterodimeri korisni za inhibiranje rasta, metastaza ili metastatskog rasla maligniteta sadrže najmanje jedan vezujući domen koji se specifično vezuje za CD28 i drugi vezujući domen koji se specifično vezuje za CD79b. Takvi polipeptidni heterodimeri mogu sadržati još i vezujući domen koji sadrži PDL2 ektodomen. vezujući domen koji se specifično vezuje za hiperlL-6, ili oba vezujuća domena.
U određenim drugim formama, polipeptidni heterodimeri korisni za inhibiranje rasta, metastaza ili metastatskog rasta maligniteta sadrže najmanje jedan vezujući domen koji se specifično vezuje za RON i drugi vezujući domen koji se specifično vezuje za c-Met.
U određenim drugim formama, polipeptidni heterodimeri korisni za inhibiranje rasta, metastaza ili metastatskog rasta maligniteta sadrže vezujući domen koji se specifično vezuje za jednu ili više sledećih receptorskih tirozin-kinaza: c-Met, RON, EGFR, EGFRulII, Her2, ErbB3, ErbB4, i IGF IR. EphA2. U određenim formama, heterodimeri mogu sadržati još i jedan ili više vezujućih domena koji se specifično vezuju za jedno ili više sledećih antiangiogenih sredstava: PDGFR. VEGFR1-4, i angiopoetin 2. U određenim formama, gornji heterodimeri mogu sadržati još i jedan ili više vezujućih domena koji se specifično vezuju za jedan ili više sledećih Fc receptora. za pojačavanje usmeravanja citotoksične efektorske funkci je: CD64, CD32A, i CD 16. U određenim formama, gornji heterodimeri mogu sadržati još i vezujući domen koji se specifično vezuje za transferinski receptor (CD7I), za omogućavanje degradacije receptora.
U određenim drugim formama, polipeptidni heterodimeri korisni za inhibiranje rasta, metastaza ili metastatskog rasla maligniteta sadrže vezujuće domene koji su antagonisti dva ili više ođ sledećeg: TNFSFRa, TNFRI. TNFR2. DR4, DR5, TVVEAKR i
FAS.
U određenim drugim formama, polipeptidni heterodimeri korisni za inhibiranje rasta, metastaza ili metastatskog rasta maligniteta sadrže vezujuće domene koji se koji se specifično vezuj za dva ili više sledećih proonkogenih citokina ili faktora rasta: HGF, MSP, EGF (uključujući epiregulin. herregulin. (3-iegtilin. neuregulin). HlF-la. VEGFA. VEGFB, VEGFC, VEGFD, TNFa, IL-6, hiperlL-6, IL-8. Wnt. si il i, TGFp, ili PDGF.
U određenim formama, polipeptidni heterodimeri korisni za inhibiranje rasta solidnih maligniteta ili metastaza ili metastatskog rasta solidnih maligniteta uključuju one koji se specifično vezuju za, na primer. EGFR, ErbB3, ErbB4, c-Met. RON. EphA2. IGFIR, V EGFR I, VEGFR2, VEGFR3, CD44u6, CDI51, EpCAM, CEACAM6, TGFBR2, GHR, IL-6R, gp!30, TNFR2, PD1, TVVEAR-R, OSMRp, Patcheđ-1. Frizzleđ ili Robol.
Polipeptidni heterodimeri korisni za inhibiranje metastaza ili metastatskog rasta hematoloških maligniteta uključuju one koji se specifično vezuju za. na primer. EGFR, ErbB3, c-Met. RON, EphA2, IGFIR, TGFBR2. IL-6R, gp!30, TNFR2. PDI. OSMRfi, LTpR, CD 19, CD80, CD8I ili CD86.
U sledećem aspektu, predmetna objava obezbeđuje metod lečenja autoimunskog ili izapaljenskog oboljenja, poremećaja ili stanja, koji uključuje davanje pacijentu kojem je to potrebno, efikasne količine ovde datog polipeptidnog heterodimera ili njegove smeše.
Primeri autoimunskih ili inflamatornih oboljenja, poremećaja ili stanja koji mogu da se leće fuzionim proteinima i smešama i njihovim jediničnim doznim formama uključuju, ali se ne ograničavaju na zapaljensku bolest creva (npr., Crohnova bolest ili ulcerativni kolitis), dijabetes melitus (npr., dijabetes tipa I), đermatomiozitis, polimiozitis, pernicioznu anemiju, primarnu bilijarnu cirozu, akutni diseminovani eneefalomijelitis (ADEM), Addison-ovu bolest, ankilozni spondilitis. sindrom antifosfolipidnih antitela (APS), autoimunski hepatitis, Goodpasture-ov sindrom, Graves-ovu bolest, Guillain-Barr-ov sindrom (GBS). I lashimoto-ovu bolest, idiopatsku trombocitopenijsku purpuru, sistemski eritemski lupus, lupusni nefritis. neuropsihijatrijski lupus, multiplu skleroza (MS), mijasteniju gravis, pemfigus vulgaris, astmu, psorijatični artritis, reumatoidni artritis, Sjogren-ov sindrom, temporalni arteiitis (poznat i kao arteritis džinovskih ćelija), autoiinunsku hemolitićku anemiju, bulozni pemfigus, vaskulitis, celijakiju, hronično opstruktivno plućno oboljenje, enđometriozu, hidradenitis suppurativa, intersticijalni cistitis. morfeu, sklerodermu. narkolepsiju, neuromiotoniju, vililigo, i autoimunsko oboljenje unutrašnjeg uva.
Primeri polipeptidnih heterodimera korisnih za lečenje autoimunskih ili zapaljenskih oboljenja, poremećaja ili stanja mogu sadržati jedan ili više vezujućih domena koji se specifično vezuju za CD28 i jedan, dva ili tri sledeća dodatna vezujuća domena koja sadrže PDL2 ektodomen. vezujući domen koji uključuje monolL-10 t vezujući domen koji se specifično vezuje za CD86. Na primer, polipeptidni heterodimer može sadržati vezujući domen koji se specifično vezuje za CD28 i jedan do tri vezujuća domena koji se specifično vezuju za CD86.
Dodatni primer polipeptidnih heterodimera korisnih za lečenje autoimunskih ili zapaljenskih oboljenja, poremećaja ili stanja mogu sadržali jedan ili više vezujućih domena koji se specifično vezuju za CD28 i jedan ili više vezujućih domena koji su: IL-10 agonist (npr., monoII-10), HLA-G agonist. HGF agonist, 11-35 agonist. PD-1 agonist, BTLA agonist, LIGHT antagonist, GITRL antagonist, ili CD40 antagonist. Alternativno, polipeptidni heterodimeri mogu sadržati dva ili više vezujućih domena odabranih između IL-10 agonista (npr., monolL-10), HLA-G ago ništa, 1 IGF agonista, 1L-35 agonista, PD-1 agonista, BTLA agonista, LIGHT antagonista, GITRL antagonista, ili CD40 antagonista.
Dodatni primer polipeptidnih heterodimera korisnih za lečenje autoimunskih ili zapaljenskih oboljenja, poremećaja ili stanja mogu sadržati jedan ili više vezujućih domena koji se specifično vezuju za CD32B ijedan ili više vezujućih domena koji su: IL-10 agonist (npr., monoll-10), HLA-G agonist, HGF agonist, 1L-35 agonist. PD-1 agonist, BTLA agonist, LIGHT antagonist, GITRL antagonist, ili CD40 antagonist.
Dodatni primer polipeptidnih heterodimera korisnih za lečenje autoimunskog ili zapaljenskog oboljenja, poremećaja ili slanja mogu sadržati vezujuće domene koji se specifično vezuje za jedan ili više od sleđećeg: TNFSFR. TNFRI, TNFR2, HVEW,
LT'PR, TVVEAKR, TACI, BAFF-R, BCMA, ili FAS.
Dodatni primer polipeptidnih heterodimera korisnih za lečenje autoimunskog ili zapaljenskog oboljenja, poremećaja ili stanja mogu sadržati vezujuće domene koji se specifično vezuje za dva ili više od sledećih proinflarnatornih citokina/hemokina, kao što suTNFu, IL-6, IL-2, IL-1, IL-8, 1P-I0, lFNv. IFNa, RAN KL. FASL, TGFp, IL7, IL10, 1L17A/F, TVVEAK, CSF2, IGFI, IGF2, ili BLvS/APRIL.
Polipeptidni heterodimeri korisni za lečenje autoimunskog ili zapaljenskog oboljenja, poremećaja ili stanja uključuju one koji se specifično vezuju za, na primer, TGFBR2, IL-6R, gp!30, TNFRl, TNFR2, PD1. HVEM, OX4U, CD40, CD137, TWEAK-R, LTpR, LIFRp, OSMRp, CD3, TCRa, TCR<p>. CD19, CD28. CD80, CD8I, CD86, TLR7, TLR9, ili bilo koju njihovu kombinaciju.
U drugom aspektu, predmetni pronalazak uključuje metod lečenja poremećaja ili bolesti udruženih sa B-ćelijama. koji uključuje primenu. kod pacijenta kojem je to potrebno (npr., kod pacijenta koji ima ili se veruje da ima poremećaj ili oboljenje udruženo sa B-ćelijama) efikasne količine ovde datog polipeptidnog heterodimera. na primer onog koji se specifično vezuju za cilj na B-ćelijama.
Polipeptidni heterodimeri korisni za lečenje poremećaja ili bolesti udruženih sa B-ćelijama mogu sadržati vezujuće domene koji se specifično vezuju za jedan ili više ciljeva na B-ćelijama kao što su CD79b. CD 19. HLA-DR. CD20. (.1)21. CD22, CD30, CD33.CD37, CD38, ili CD70. Polipeptidni heterodimeri mogu sadržati i vezujući domen koji se specifično vezuje za cilj na T-ćelijama kao što su TCR kompleks ili njegova komponenta, uključujući TCRa, TCRP, CD3y. CD3o ili CD3e.
Polipeptidni heterodimeri korisni za lečenje poremećaja ili bolesti udruženih sa B-ćelijama mogu sadržati vezujući domen koji se specifično vezuje za cilj na B-ćelijama kao CD79b, CD 19, HLA-DR, CD20, CD21, CD22, CD30, CD33, CD37, CD38. i CD70 i vezujući domen koji se specifično vezuje za CD64, CD32A, ili CD 16. za pojačano usmeravanja citotoksične efektorske funkcije.
Polipeptidni heterodimeri ili njihove smeše predmetne objave mogu da se primenjuju oralno, površinski, transdermalno. parenteralno. inhalacijom spreja. vaginalno. rektalno ili intrakranijalnom injekcijom, ili bilo kojom njihovom kombinacijom. U jednoj formi, polipeptidni heterodimeri ili njihove smeše primenjuju se parenteralno. Izraz "parenteralno", kako se koristi u ovom tekstu, uključuje subkutane injekcije, intravenske, intrainuskularne, intracistemalne injekcione ili infuzione tehnike. Primene intravenskom, intradermalnom. intramuskularnom. intramamalnom, intraperitonealnom, intratekalnom, retrobulbalnom, intrapulmonalnom injekcijom i/ili hirurškom implantacijom na određeno mesto, takođe se razmatraju. Na primer, pronalazak uključuje primenu polipeptidnih heterodimera ili njihovih smeša intravenskom injekcijom.
Farmaceutski efikasna doza zavisi od tipa bolesti, smeše koja se koristi, puta primene, tipa subjekta koji se leci, fizičkih karakteristika specifičnog subjekta koji se razmatra za lečenje, lekova koji se istovremeno uzimaju, i drugih faktora koje ce prepoznati stručnjaci u oblasti. Na primer, može se primeniti količina između 0.01 mg/kg i 1000 mg/kg (npr., oko 0.1 do I mg/kg. oko 1 do 10 mg/kg. oko 10-50 mg/kg. oko 50-100 mg/kg, oko 100-500 mg/kg, ili oko 500-1000 mg/kg.) telesne težine (koja se može primeniti u vidu jedne doze, dnevno, nedeljno. mesečno. ili u bilo kom pogodnom intervalu), aktivnog sastojka, zavisno od potencije polipeptidnog heterodimera ove objave.
Isto tako, razmatra se primena polipeptidnih heterodimera ili njihovih smeša u kombinaciji sa drugim sredstvom. Drugo sredstvo može biti ono koje je prihvaćeno u struci kao standard za lečenje određenog bolesnog stanja ili poremećaja, na primer kancera, zapaljenja, autoimunosti i infekcije. Primeri drugih sredstava koja se razmatraju uključuju polipeptidne heterodimere koji se vezuju za ciljeve različite od onih za koje se vezuju primarni polipeptidni heterodimeri. polikolonska antitela. monoklonska antitela, fuzioni proteini izvedeni iz imunoglobulina, hemoterapeutici. jonizujuća radijacija, steroidi, NSA1D, antiinfektivna sredstva ili aktivna i pomoćna sredstva, ili bilo koja njihova kombinacija.
U određenim formama, polipeptidni heterodimer i drugo sredstvo deluju sinergistički. Drugim rečima. ova dva jedinjenja interaguju iako daje kombinovani efekat jedinjenja veći od zbira pojedinačnih efekata jedinjenja kada bi se svako primenjivalo samo (vidi, npr., Berenbaum. Pharmacol. Rev. 41:93. 1989).
U određenim drugim formama, polipeptidni heterodimer i drugo sredstvo deluju aditivno. Drugim rečima, ova đva jedinjenja interaguju tako đa je kombinovani efekat jedinjenja isti kao zbir pojedinačnih efekata jedinjenja kada bi se svako primenjivalo samo.
Druga sredstva korisna u kombinaciji sa polipeptidnim heterodimerima ili njihovim smešama, datim u ovom tekstu, mogu biti steroidi, NSAID, mTOR inhibitori (npr., rapamicin (sirolimus), temsirolimus, deforolimus, everolimus, zotarolimus, kurkumin, farneziItiosaliciIna kiselina), inhibitori kalcineurina (npr., ciklosporin. takrolimus), antimetaboliti (npr.. mikofenolna kiselina, mikofenolat-mofetil). poliklonska antitela (npr., antitimocitni globulin), monoklonska antitela (npr.. đaklizumab, baziliksimab), i CTLA4-lg fuzioni proteini (npr. abatacept ili belataeept).
Druga sredstva korisna za inhibiranje rasta solidnih maligniteta, inhibiranje metastaza ili metastatskog rasta solidnih maligniteta, ili lečenje ili ublažavanje hematoloških maligniteta uključuju hemoterapijska sredstva, jonizujuću radijaciju i druge antikancerske lekove. Primeri hemoterapijskih sredstava koja se razmatraju kao dodatna terapijska sredstva uključuju alkilirajuća sredstva, kao azotni iperiti (npr., mehloretamin, ciklofosfamid, ifosfamid. melfalan i hlorainbucil), bifunkcionalne hemoterapeutike (npr., bendamustin), nitrozouree (npr.. karmustin (BCNU). lomuslin (CCNU), i semustin (metil-CCNU), etilenimine i metil-melamine (npr.. trietilenmelamin (TEM), trietilen-tiofosforamid (liotepa), i heksametilmelamin (HMM, ahrelamin)); alkil-sulfonate (npr., busulfan); i triazine (npr., dakabazin (DT1C)); antiinetabolite kao analozi folne kiseline (npr., metotreksal, trimetreksat i pemetreksed (antifolat koji deluje na više ciljeva)); primidinske analoge (kao 5-fluorouracil (5-FU), fluorodeoksiuridin. gemcitabin. citozin arabinozid (AraC, citarabin), 5-azacitidin i 2.2'-difluorodeoksicitiđin), i purinske analoge (npr., 6-merkaptopurin, 6-tioguanin, azatioprin, 2-deoksikoformicin (pentostatin), eritrohidroksinoniladenin (EHNA), fludarabin fosfat. 2-hlorodeoksiadenozin (kladribin,2-CdA)); inhibitori topoizomeraze tipa I kao kamptotecin (CPT). topotekan i irinotekan; prirodne proizvode kao epipodotllotoksini (npr.. etopozid i tenipozid) i alkaloidi vinke (npr., vinblastin, vinkristin i vinorelbin); antilumorske antibiotike kao aktinomicin D, doksorubicin i bleomicin; radiosenzitizere kao 5-bromocleoksiuridin. 5-jododeoksiuridin, i bromodeoksicitidin; koordinacione komplekse platine kao cisplatin, karboplatin i oksaliplatin; supstituisane uree. kao hidroksiurea; i metilhidrazinske derivate kao N-metilhidrazin (MIH) i prokarbazin.
U određenim formama, druga sredstva korisna za inhibiranje rasta, metastaza ili metastatskog rasta maligniteta uključuju polipeptidne heterodimere prema predmetnoj objavi, koji se vezuju za ciljeve na kancerskim ćelijama različite nego što su ciljevi za koje se vezuje prvi polipeptidni heterodimer. U određenim drugim formama, druga sredstva korisna u takvim tretmanima uključuju poliklonska antitela. monoklonska antitela i fuzione proteine izvedene iz imunoglobulina, koji se vezuju za ciljeve na kancerskim ćelijama. Primeri ciljeva na kancerskoj ćeliji dati su gore u kontekstu opisivanja ciljeva polipeptidnih heteroidmera korisnih u gore pomenutom tretmanu.
Dodatna terapijska sredstva koja se u ovoj objavi razmatraju za lečenje autoimunskih bolesti označena su kao itnunosupresivna sredstva koja deluju tako što supsrimiraju ili maskiraju imunski sistem individue koja se leći. Imunosupresivna sredstva uključuju, na primer, nesteroidne antiinflamatorne lekove (non-steroidal antiinflammatory drugs, NSA1D). analgetike, glukokoitikoide, antireumatske lekove modiflkatore bolesti (disease-modifving antirhcumatic drugs, DMARD) za lečenje artritisa, ili modifikatori biološkog odgovora. Smeše opisane kao DMARD korisne su i za lečenje mnogih drugih autoimunskih bolesti, pored reumatoidnog artritisa.
Primeri NSAID biraju se iz grupe koja sadrži ibuprofen, naprokseu, naproksen-natrijum, inhibitore Co\-2 kao Vioxx i Celebrex i si ja 1 i late. Primeri analgetika biraju se iz grupe koja sadrži acetaminofen, oksikodon, tramadol ili proporksifen hidrohlorid. Primeri glukokorlikoida biraju sc iz grupe koja sadrži kortizon, deksametazon, hidrokortizon, metilprednizolon, prednizolon, ili prednizon. Primeri modifikatora biološkog odgovora uključuju molekule usmerene prema ćelijskim površinskim markerima (npr., CD4, CD5, itd), inhibitore citckina kao što su antagonisti TNF (npr., etanercept (Enbrel), adalimumab (Huinira) i infliksimab (Remicade), inhibitore hemokina i inhibitore adhezionih molekula. Modifikatori biološkog odgovora uključuju monoklonska antitela kao i rekombinantne forme molekula. Primeri DMARD uključuju azatioprin. ciklofosfamid, cikklosporin. metolreksat. penicilamin, letlunomid, sulfasalazin, hidroksihlorohinon. zlato (oralno (auranofn) i intramuskularno) i minociklin.
Dodatna druga sredstva korisna za lečenje autoimunske ili zapaljenske bolesti, poremećaja ili stanja mogu biti poliklonska ili monoklonska antitela, fuzioni protein izveden iz imunoglobulina (npr.. scFv, SMIP™. PIMS, SCORPIO"N<IM>fuzioni proteini) ili polipeptidni heterodimer prema predmetnoj objavi koji se specifično vezuje za cilj udružen sa takvom bolešću, poremećajem ili stanjem. Primeri takvih ciljeva dati su gore, u kontekstu ciljeva polipeptidnih heterodimera predmetne objave korisnih u gore pomenutom lečenju.
Razmatra se da se smeša vezujućeg molekula i drugo aktivno sredstvo mogu dati odjednom, u istoj formulaciji. Alternativno, drugo sredstvo može đa se primeni u vidu zasebne formulacije, ali istovremeno (tj., da razmak između njihovog davanja bude manji od jednog sata).
U određenim formama, drugo aktivno sredstvo može da se primeni pre polipeptidnog heterodimera ili njegove smeše. Pod ovim "pre" podrazumeva se davanje drugog aktivnog sredstva najmanje jedan sat pre tretmana polipetidnim heterođimerom ili njegovom smešotn. Razmatra se i to da aktivno sredstvo može da se primeni posle primene smeše vezujućeg molekula. Pod ovim "posle" podrazumeva se primena najmanje jedan sat posle davanja polipeptidnog heterodimera ili njegove smeše.
Ova objava razmatra doznu jedinicu koja sadrži farmaceutsku smešu objave. Takve đozne jedinice uključuju, na primer, jednodoznu ili višedoznu fiolu ili špric, uključujući fiolu ili špric sa dva odeljka, jednim koji sadrži farmaceutsku smešu ove objave u liofilizovanoj formi i drugim sa diluentom za rekonstituciju. Multidozna dozirajuća jedinica može da bude i npr., kesica ili epruveta, koje će se povezati sa uređajem za intravensku infuziju.
Ova objava takođe razmatra kit koji sadrži farmaceutsku smešu ove objave u jednodoznoin ili multidoznom kontejneru npr., fioli i set instrukcija za davanje smeše pacijentu koji pati od poremećaja kao što su gore opisani poremećaji.
PRIMERI
PRIMER 1
BIVALENTNI POLIPEPTIDNI HETERODIMER SA DVA PARA
HETERODIMERIZACIONIH DOMENA
Polipeptidni heterodimer X0172 napravljen je koeksprimiranjem jednolančanih polipeptiđa X0I30 (2E12 CHI CH2 CH3 Ck) i X0I68 (CkCH2 CH3 CHI H68 2EI2). Jednolančani polipeptid X0130 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: 2EI2 (anti-CD28) scFv, humani IgGl CHI, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2, humani IgGl CH3 i izmenjeni humani Ck(bez prvog Arg ili posleđnjeg Cvs). Sekvence nukleinske kiseline i amino-kiselina X0i30 navedene su u SEQ ID NO: I, odnosno 2. Jednolančani polipeptid X()I68 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: izmenjeni humani Ck(bez prvog Arg ili posleđnjeg Cvs), humani IgG I SCC-P zglob, humani IgG I CH2, humani IgGl CH3, humani IgGl CHI, H6S linker i 2E12 (anti-CD28) scFv. Sekvence nukleinske kiseline i amino-kiselina X0168 navedene su u SEQ ID NO:3, odnosno 4. Aminokiselinska sekvenca linkera H68 navedena je u SEO ID NO:78.
Radi poređenja, polipeptidni heterodimer X0124 napravljen je koeksprimiranjem jednolančanih polipeptiđa X01 12 (2E12 CHI CH2 CH3) i X0113 (Ck CH2 CH3). jednolančani polipeptid X0I 12 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: 2EI2 (anti-CD28) scFv, humani IgGl CHI. humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 i humani IgGl CH3. Sekvence nukleinske kiseline i amino-kiselina X0112 navedene su u SEQ ID NO:5 odnosno 6. Jednolančani polipeptid X0II3 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: izmenjeni humani Ck(bez prvog Arg ili posleđnjeg Cys), humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl Cl 12 i humani IgGl CH3. Sekvence nukleinske kiseline 1 amino-kiselina X0113 navedene su u SEQ ID NO:7, odnosno 8.
Ekspresija
Dan pre transfekcije. HEK293 ćelije suspenduju se pri koncentraciji ćelija od 0.5xI06 ćel/ml u Freestvle 293 ekspresionom medijumu (Gibco). Za veliku transtekciju, koristi se 250 ml ćelija, a za malu transtekciju koristi se 60 ml ćelija. Na dan transfekcije, 320 u.I 293fectin reagensa (lnvitrogen) pomeša se sa 8 ml međijuma. U isto vreme 250 pg DNK za svaki od dva lanca takođe se pomeša sa 8 ml međijuma i inktibira 5 minuta. Posle 15 minuta inkubacije DNK-293feclin mesa vina doda se u 250 ml 293 ćelija i vrati na šejker na 37°C i šejkira pri brzini od 120 RPM. Za manju transfekciju koristiti 60 ml ćelija, četvrtinu DNK, 293fectina i međijuma.
Prečišćavanje
Afinitetna hromatografija pomoću proteina A koristi se za prečišćavanje proteina.
2 ml pakovanog protein A-agaroze (Repligen) nanese se na Biorad kolonu (Econo-column hromatografska kolona, veličina 2.5x10 cm), dobro ispere PBS-om (I0x zapremina kolone) i supematanti se nanesu, ponovo se izvrši ispiranje PBS-om i eluiranje Pierce IgG elucionim puferom u količini od 3 zapremine kolone. Proteini se zatim dijaliziraju ekstenzivno naspram PBS. Proteini se zatim koneentmju uz korišcenje Amicon centrifugalnog filter-uređaja, do finalne zapremine od oko 0.5 ml.
Za drugi korak prečišćavanja, koriste se protein L afinitetna hromatografija ili katjonsko-izmenjivačka hromatografija. Za prečišćavanje pomoću proteina L, polipetidni heterodimer prečišćen pomoću proteina A propušta se preko protein L-agarozne kolone koja je prethodno ekvilibrisana PBS-om, ispira PBS-om (10x zapremina kolone), i zatim eluira Pierce IgG elucionim puferom. Proteini se zatim ekstenzivno dijaliziraju naspram PBS i koneentmju uz korišcenje Amicon centrifugalnog filter-uređaja do finalne zapremine od oko 0.5 ml.
Uzorci (200-300 pg) prethodno afinitetno prečišćenih (pomoću proteina A ili proteina L) polipetidnih heterodimernih konstrukata dijaliziraju se u 20 mM MES, pH 6.0 (pufer A) i nanesu na MonoS 5/50 GL katjonsko-izmenjivačku kolonu (GE Healthcare) pri stopi protoka od 2 ml/min, korišćenjem AKTA Explorer FPLC. Kolona se ostavi da se ekvilibriše sa 5 zapremina kolone (colone volumes, CV) i zatim se pušta u formatu gradijenta, sa mešavinom od 50%:50% pufera A:pufera B (pufer B je 20 mM MES, I M NaCI, pH 6.0), 20 CV. Sledeća mešavina, 100% pufera B. propusti se u količini od 5 CV. da se kolona očisti, a zatim se sistem pušta za sledećih 5 CV. sa 100% pufera A, da se izvrši reekvilibrisanje, pre sledećeg injektiranja. Pikovi se sakupe i analiziraju pomoću SDS-PAGE i elektrosprej masene spektometrije.
SDS- PAGE analiza
Prečišćeni proteini analiziraju se na 10% SDS-PAGE gelu uz korišcenje Invitrogen X-cell Surelock gel boksa.
Sinergija sa suboptimalnom koncentracijom PMA
Mononuklearne ćelije periferne krvi (peripheral blood mononuclear cells, PBMC), izoluju se iz heparinizovane cele krvi uzete od kolega-donora. centrifugiranjem na limfocitnom separacionom medijumu (MP Biomeđicals, Aurora, OFI) i isperu đva puta RPM1 medijumom (Gibco-lnvitrogen, Cailsbad, CA). CD4+ T-ćelije se zatim izdvoje iz PBMC negativnom selekcijom uz korišcenje MACS CD4+ I -ceiI Isolating Kit (Miltenvl Biotec, Auburn, CA). CD4+ T-ćelije (>95% zastupljenosti) se zatim resuspenduju, u koncentraciji od lxl0<6>ćel/ml, u kompletnom RPMI/10% FCS. Testni reagensi se pripreme u koncentraciji od 40 u g/m I (dajući finalnu koncentraciju od 10 ug/ml), u kompletnom RPMI/10% FCS i dodaju, 50 ul/bunarčiću, na ploče sa 96 bunarčića sa ravnim dnom (BD Falcon, San Jose. CA). PMA (forbol-12-iniristai-13-acetat: A.G.Scientific, Inc., San Diego, CA) u kompletnom RPMI/10% FCS doda se u količini od 50 ul/bunarčiću, pri 4 ng/ml (finalna koncentracija I ng/ml). Zatim se dodaju T-ćelije u kompletnom RPMI/10% FCS. u koncentraciji od 5x10"' ćei/bunarčiću. u zapremini od 50 pl, i na kraju se u svaki bunarčić doda odgovarajuća količina kompletnog RPMI/10% FCS (tipično 50 pl). da se dobije finalna zapremina od 200 ul/bunarčiću. Ćelije se tretiraju testnim uzorcima +/- PMA i inkubiraju 72 sata na 37°C u 5% CO;, Jedan rnikrolitar tricijum-timidina (Amersham Biosciences, Pisctavvay, NJ) u 1:50 razblaženju kompletnog RPMI/10% FCS (50 ul/bunarčiću) doda se u bunarčiće, tokom poslednjib 6 sati kultivacije. Sakupljanje sa ploča vrši se pomoću Unifiiter-96. GF/C microplate (Perkin Elmer, Boston, MA), sa Packard Filtermate Harvesler (Perkin Elmer, Boston, MA). Brojevi se izražavaju kao cpm i predstavljaju srednju vrednost ponovljenih uzoraka.
Slika 2 pokazuje da polipeptidni heterodimer X0172 ima diferencijalne osobine u poređenju sa 2EI2 SM1P M0039 (SEO ID NO:77). On ne sinergizira sa PMA, kao i SM1P. Ovaj bivalentni polipeptidni heterodimer ima osobine bliže monovalentnom polipeptidnom heterodimeru X0124, nego bivalentnom SM1P.
Slika 3 pokazuje da se bivalentni polipeptidni heterodimer X0172 vezuje za CD4<+>ćelije bolje nego 2E12 scFv (SEQ ID NO: 109) i monovalentni polipeptidni heterodimer X0124.
PRIMER 2
DVOVALENTN1, TROVALENTNI. TETR A VALENTNI POLIPEPTIDNI HETERODIMERI KOJI KORISTE JEDAN HETERODIMERIZACIONI DOMENSK1
PAR
Bivalentni polipeptidni heterodimer X025l napravljen je koeksprimiranjem jednolančanih polipeptiđa X0244 (Ck(YAE) CH2(N297A) CH3 H68 2EI2) i X0245 (2EI2 CHI CH2(N297A) CH3). Jednolančani polipeptid X0244 sadrži, od svog amino-do karboksi-terminusa: humani Ck(YAE) (tj., humani Ckbez prvog Arg ili posleđnjeg Cys, ali sa N30Y, V55A i T70E supstitucijama), humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (N297A) (tj., humani IgG I CI 12 sa N297A supstitucijom), humani IgGl CH3, 1168 linker i 2EI2 (anti-CD28) scFv. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca X0244 navedene su u SEQ ID NO:9, odnosno 10. Jednolančani polipeptid X0245 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: 2EI2 (anti-CD28) scfv. humani IgGl CHI. humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (N297A) i humani IgGl CH3. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca X0245 navedene su u SEO ID NO: I I, odnosno 12.
Trivalentni, bispecifični polipeptidni heterodimer X()252 napravljen je koeksprimiranjem jednolančanih polipeptiđa X0246 (P2C2 Ck(YAE) CH2(N297A) CH3) i X0247 (2E12 CHI CH2(N297A) CH3 H68 2E12). Jednolančani polipeptid X0246 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: P2C2 (anti-CD79b) scFv, humani Ck(YAE), humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (N297A) i humani IgGl CH3. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca X0246 navedene su u SEQ ID NO: 13. odnosno 14. Jednolančani polipeptid X0247 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: 2EI2 (anti-CD28) scFv, humani IgGl CHI, humani IgG! SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (N297A), humani IgGl CH3, H68 linker i 2EI2 (anti-CD28) scFv. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca X0247 navedene su u SEQ ID NO: 15. odnosno 16.
Tetravalentni, trispecifićni polipeptidni heterodimer X0253 napravljen je koeksprimiranjem jednolančanih polipeptiđa X0248 (P2C2 Ck(YAE) CH2(N297A) CH3 H68 A2) i X0249 (PDL2 ECD CHI CH2(N297A) CH3 H68 2EI2). Jednolančani polipeptid X0248 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: P2C2 (anti-CD79b) scFv, humani Ck(YAE), humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (N297A). humani IgGl CH3, H68 linker i A2 (anti-hiperlL-6) scFv. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca X0248 navedene su u SEQ ID NO: 17, odnosno 18. Jednolančani polipeptid X0249 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: PDL2 ECD (tj., PDL2 ektodomen), humani IgGl CHI. humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2
(N297A), humani IgGl CH3. H68 linker i'2EI2 (anti-CD2S) scFv. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca X0249 navedene su u SEO ID NO: 19, odnosno 20.
Drugi tetravalentni, tetraspecifični polipeptidni heterodimer X0283 napravljen je koeksprimiranjem jednolančanih polipeptiđa X0249 (PDL2 ECD CHI CH2(N297A) CH3 H68 2E12) i X0281 (monolL-10 Ck(YAE) CH2(N297A) CH3 H68 3DI). Jednolančani polipeptid X028l sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: monoIL-10, humani Ck(YAE), humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (N297A). humani IgGl Cl 13, 1168 linker i 3D1 (anti-CD86) scFv. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca X0281 navedene su u SEQ 1D NO:21, odnosno 22.
Kao kontrola za polipeptidni heterodimer X0283, tetravalentni heterodimer, napravljen je polipeptidni heterodimer X0284 koeksprimiranjem jednolančanih polipeptiđa X0249 (PDL2 ECD CH I CH2(N297A) CH3 H68 2E12) i X0282 (monoIL-10 CkCH2(N297A) CH3 H68 3D1). Jednolančani polipeptid X0282 identičan je sa X0281 osim što ne sadrži N30Y V55A T70E supstitucije u humanoj Cksekvenci. Tako, jednolančani polipeptid X0282 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: monolL-10, izmenjeni humani Ck (bez prvog Arg ili posleđnjeg C>s). humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (N297A), humani IgGl CH3, H68 linker i 3D1 (anti-CD86) scFv. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca X0282 navedene su u SEQ !D NO:23, odnosno 24.
Polipeptidni heterodimerni molekuli eksprimiraju se i preći sca vaju prema Primeru I. Prečišćeni proteini se analiziraju pomoću SDS-PAGE elektroforeze pod redukujućim i neređukujućim uslovima. Ekskluziona hromatografija zasnovana na veličini čestica obavlja se na AKTA Explorer FPLC (Pharmacia Biotech) uz korišcenje Superdex200 10/300 GL kolone. Neki proteini se analiziraju elektrosprej masenom spektrometrijom, uz korišcenje Agi tent 6120 TOF ES/MS.
Merenja rezonancije površinskog plazmona (surface palsmon resonance, SPR) obavljaju se na Biacore TI00 SPR uz korišćenje HBS-P+ (GE Healthcare) kao pufera za propuštanje. Cilj se direktno imobiliše na CMS ćipu. korišćenjem standardne hernije kuplovanja amina (BIACORE® Amine Coupling Kit, GE Healthcare), sa finalnim nivoom imobilizacije između 800 i 1900 Ru (rezonantne jedinice). Polipeptidni heterodimer X0283 injektira se, na 25°C ili 37"C, 150 sekundi, pri stopi protoka od 30 ul/min u nizu koncentracija od 10 nM do luM. Disocijacija se prati tokom 1200 sekundi, a površina se regeneriše injektiranjem 50 mM NaOH. 60 sekundi. Vezujuće interakcije sa površinom su stabilne kroz najmanje 60 ciklusa regeneracije. Podaci se analiziraju korišćenjem BiaEvaluation za T100 softvera ( verzija 2.0. GE Healthcare).
Analize SDS-PAGE elektroforezom i katjonsko-izmenjivačkom hromatografijom pokazuju da se polipeptidni heterodimeri X0251. X0252 i X0253 razumno dobro eksprimiraju i prečišćavaju (Slika 4). Analiza X0252 masenom spektrometrijom pokazuje daje protein u najvećoj meri homogen, sa nedetektabilnom količinom homodimera (Slika 5). Pored toga, analize SDS-PAGE elektroforezom i katjonsko-izmenjivaćkom hromatografijom polipeptidnih heterodimera X0283 i X0284 pokazuju da se polipeptidni heterodimer X0283 koji ima CH1/Ck(YAE) heterodimerizacione domene efikasno asambiira kao heterodimer, u poređenju sa kontrolnim polipeptidnim heterodimerom X0284 koji ima CHI/Ckheterodimerizacione domene, pri čijem asambliranju se formiraju i homodimeri (Slika 6). Biocore analiza pokazuje i to da se 3DI (anti-CD86) vezujući domen na karboksi-terrninusu jednolančanog polipeptiđa X028l monovalentno vezuje za CD86 (Slika 7).
PRIMER 3
POLIPEPTIDNI HETERODIMERI SA ANTI-RON 1 ANTI-C-MET VEZUJUĆIM
DOMENIMA
Napravljeni su jedan bivalentni polipeptidni heterodimer sa anti-RON vezujućim domenima (ORN15I) i dva bispecifična polipeptidna heterodimera sa anti-RON i anti-c-Met vezujućim domenima (ORN152 i ORN 153).
Bivalentni polipeptidni heterodimer ORN 151 sadrži jednolančane polipeptide ORN 145 (4C04 CH2 CH3 CHI) i ORN 148 (1 IH09 Cl 12 Cl 13 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid ORN 145 sadrži, od svog amino- đo karboksi-terminusa: 4C04 (anti-RON) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2. humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca ORN 145 navedene su u SEQ ID NO:26, odnosno 30. Jednolančani polipeptid ORN 148 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: I 1H09 (anti-RON) scFv, humani IgG i SCC-P zglob, humani CH2, humani CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca ORN 148 navedene su u SEQ ID NO:28, odnosno 32.
Bispecifični (c-Met, RON) polipeptidni heterodimer ORN 152 sadrži jednolančane polipeptide ORNI 16 (MET021 CH2 CH3 CHI) i ORN 146 (4C04 CH2 CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid ORNI 16 sadrži, od svog amino- do karboksi- terminusa: MET021 (anti-c-Met) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2, humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca ORNI 16 navedene su u SEQ ID NO:25, odnosno 29. Jednolančani polipeptid ORN 146 sadrži, od svog amino-do karboksi-terminusa: 4C04 (anti-RON) scFv. humani IgGl SCC-P zglob, humani CH2. humani CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca ORN 146 navedene su u SEQ ID NO:27, odnosno 31.
Bispecifični (c-Met, RON) polipeptidni heterodimer ORN 153 sadrži jednolančane polipeptide ORNI 16 (MET02I CH2 CH3 CHI) i ORN 148 (I1H09 CH2 CH3 Ck(YAE)).
Polipeptidni heterodimeri ORN 151. ORN 152 i ORN 153 eksprimiraju se prema Primeru I. Dobijem su sledeći ekspresioni nivoi: 1.9 pg proteina/ml kulture za ORN 151, 3.1 pg proteina/ml kulture za ORN 152, i 4.9 pg proteina/ml kulture za ORN 153,
PRIMER 4
POLIPEPTIDNI HETERODIMERI SA ANTI-CD3 VEZUJUĆIM DOMENIMA
Napravljeno je nekoliko bispecifićnih polipeptidnih heterodimera sa anti-CD3 vezujućim domenom: polipeptidni heterodimeri S0268, S0269. i TSC02U do TSC030. Polipeptidni heterodimer S0268 sadrži jednolančane polipeptide ORN 145 (4C04 CH2 CH3 CHI) i TSC019 (GI9-4 CH2 CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC0I9 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: GI9-4 (anti-CD3) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani CH2, humani CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC019 navedene su u SEQ ID NO:52. odnosno 72.
Bispecifični (CD3, c-Met) polipeptidni heterodimer S0269 sadrži jednolančane polipeptide ORN 160 (5D5 CH2 CH3 CHI) i TSC0I9 (GI9-4 CH2 CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid ORN 160 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: 5D5 (anti-c-Met) scFv, humani IgG I SCC-P zglob, humani IgGl CH2, humani IgGl CH3 i humani IgG 1 CH I. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca ORN 160 navedene su u SEQ 1DN0:33, odnosno 53.
Bivalentni (CD19) polipeptidni heterodimer TSC020 sadrži jednolančane polipeptide TSC001 (HD37 CH2 CH3 CHI) i I SCO 19 (G19-4 CH2 CH3 Ck(YAE». Jednolančani polipeptid TSC001 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: HD37 (anti-CD19) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2. humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC001 navedene su u SEQ ID NO.-34, odnosno 54.
Bispecifični (CD20, CD3) polipeptidni heterodimer TSC021 sadrži jednolančane polipeptide TSC002 (2H7 CH2 CH3 CHI) i TSC019 (G19-4 CH2 CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC002 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: 2H7 (anti-CD20) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2. humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC002 navedene su u SEQ IDNO:35, odnosno 55.
Bispecifični (CD79b, CD3) polipeptidni heterodimer TSC022 sadrži jednolančane polipeptide TSC017 (P2C2 H2 CH3 CHI) i TSC019 (G19-4 CH2 CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC0I7 sadrži, od svog amino- do karboksi- terminusa: P2C2 (anti-CD79b) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl Cl 12, humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC017 navedene su u SEQ IDNO:50, odnosno 70.
Bispecifični (HLA-DR, CD3) polipeptidni heterodimer TSC023 sadrži jednolančane polipeptide TSC0I8 (M0042 CH2 CH3 CHI) i TSC0I9 (G19-4 CH2 CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC0I8 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: M0042 (anti-HLA-DR) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2, humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC018 navedene su u SEQ ID NO:51, odnosno 71.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSC024 sadrži jednolančane polipeptide TSC010 (HD37-"lgAI zglob"-CH2 Cl 13 CHI) i TSC003 (G19-4-"lgAI zglob"-CH2 CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC010 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: HD37 (anti-CD19) scFv, izmenjeni humani IgAl zglob (PSTPPTPSPSTPPTPSPSCPPCP, SEO ID NO:752). humani IgGl CH2. humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukotidna i aminokiselinska sekvenca TSCOI0 navedene su u SEQ !D NO:43, odnosno 63. Jednolančani polipeptid TSC003 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: G19-4 (anti-CD3) scFv, izmenjeni humani Ig.A! zglob (SPO ID NO:752), humani IgGl CH2, humani IgG! Cl 13 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC003 navedene su u SEQ ID NO:36, odnosno 56.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSC025 sadrži jednolančane polipeptide TSC011 (HD37-"lgA2 zg!ob"-CH2 CH3 CHI) i TSC004 (Gl9-4-"IgA2 zglob"-CH2 CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC011 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: HD37 (anti-CDI9) scFv, izmenjeni humani lgA2 zglob (PPPPPCPPCP, SEQ IDNO:748), humani IgGl CH2. humani IgGl CH3 i humani iGgl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC01 I navedene su u SEQ ID NO:44. odnosno 64. Jednolančani polipeptid TSC004 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: G19-4 (anti-CD3) scFv, izmenjeni humani !gA2 zglob (SEQ ID NO:748), humani IgGl CH2, humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC004 navedene su u SEQ ID NO:37, odnosno 57.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSC026 sadrži jednolančane polipeptide TSC012 (HD37-"lgGI zglob"-CH2 CH3 CHI) i TSC007 (G19-4-"lgGI zglob"-CH2 CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC0I2 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: HD37 (anti-CD19) scFv. izmenjeni humani IgGl zglob (EPKSSDKTHTSPPSPCPPCP, SEQ ID NO:750), humani IgGl CH2. humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC012 navedene su u SEQ ID NO:45, odnosno 65. Jednolančani polipeptid TSC007 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: G19-4 (anti-CD3) scFv, izmenjeni humani IgGl zglob (SEQ ID NO:750), humani IgGl CH2, humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC007 navedene su u SEQ ID NO:4(J. odnosno 60.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSC027 sadrži jednolančane polipeptide TSC013 (HD37-"lgG3 zglob"-CH2 CH3 CHI) i TSC005 (Gl9-4-"IgG3 zglob"-CH2 CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC013 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: HD37<anti-CD19) scFv, izmenjeni humani IgG3 zglob (EPKSSDTPPPSPRSPCPPCP, SEQ 1DN0:75I), humani IgGl CH2. humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC0I3 navedene su u SEQ ID NO:46, odnosno 66. Jednolančani polipeptid TSCOOS sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: GI9-4 (anti-CD3) scFv, izmenjeni humani i<g>G3 zglob (SEQ ID NO:75l), humani IgGl CH2, humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC005 navedene su u SEO ID NO:38. odnosno 58.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSC028 sadrži jednolančane polipeptide TSC014 (HD37-"lgD zg!ob"-CH2 CH3 CHI) i TSC006 (Gl9-4-"lgD zglob"-CH2 CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC0I4 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: HD37 (anti-CD19) scFv, izmenjeni humani IgD zglob
(ESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTCPPCP. SF.O ID NO:754).
humani IgGl CH2, humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC014 navedene su u SEQ ID NO:47, odnosno 67. Jednolančani polipeptid TSC006 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: G19-4 (anti-CD3) scFv, izmenjeni humani IgD zglob (SEQ ID NO:754), humani IgGl CH2, humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC006 navedene su u SEQ ID NO:39, odnosno 59.
Bivalentni polipeptidni heterodimer ISC029 sadrži jednolančane polipeptide TSC0I5 (HD37-"lgE CH2 zglob"-CH2 Cl 13 CHI) i TSCOOS (G19-4 "IgE CH2 zglob"-CH2 CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC015 sadrži, od svog amino- do karboksi- terminusa: HD37 (anti-CD19) scFv. izmenjeni humani IgE CH2 zglob (SEQ ID NO:757), humani IgGl CH2, humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC0I4 navedene su u SEQ ID N'0:48. odnosno 68. Jednolančani polipeptid TSCOOS sadrži, od svog amino do karboksi terminusa: G19-4 (anti-CD3) scFv, izmenjeni humani IgE CH2 zglob (SEO ID NO:757). humani IgGl CH2, humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC008 navedene su u SEQ ID N0.41, odnosno 61.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSC030 sadrži jednolančane polipeptide TSC016 (HD37-"IgM CH2 zglob"-CH2 CH3 CH I) i TSC009 (G19-4- "IgM CH2 zglob"-CH2 CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC0I6 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: HD37 (anti-CD19) scFv. izmenjeni humani IgM CH2 zglob (SEO IDN0.759), humani IgGl CH2, humani IgGl CH3 i humani IgG! CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC015 navedene su u SEQ ID NO:49, odnosno 69. Jednolančani polipeptid TSC009 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: GI9-4 (anti-CD3) scFv. izmenjeni humani IgM CH2 zglob (SEQ ID NO:759). humani IgGl CH2, humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC009 navedene su u SEQ ID NO:42. odnosno 62.
Bispecifični polipeptidni heterodimeri S0268 (RON, CD3) i S0269 (CD3. c-Met) eksprimiraju se prema Primeru I. Dobijeni su sledeci nivoi ekspresije: 2.2 pg proteina/ml kulture za S0268 i 2.7 pg proteina/ml za S0269.
PRIMER 5
VEZIVANJE BISPECIFIĆNIH POLIPEPTIDNIH HETERODIMERA ZA ĆELIJE
Da bi se uporedila efikasnost bispecifićnih polipeptidnih heterodimernih molekula u ciljanju antigena tumorskih ćelija i T-ćelija, upoređivane su karakteristike vezivanja za ćeliju anti-RON (4C04 vezujući domen)\anti-CD3 (GI9-4 vezujući domen)-polipeptidnog heterodimera, S0268 (kako je opisano u Primeru 4) sa različitim bispecifičnim skafoldom (SCORP!ON,<M>protein) koji sadrži iste vezujuće domene, S0266. Pored toga, upoređivane su karakteristike vezivanja za ćeliju dva bispecifična polipeplidna heterodimera, TSC020 i TSC021 (kako je opisano u Primeru 4), koji ciljaju različite antigene na B-ćelijama (CD19 za TSC020 i CD20 za TSC02I). kao i T-ćelijski antigen (CD3). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca SCORPION proteina S0266 navedene su u SEO ID NO:73, odnosno 74. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca jednolančanih polipeptiđa koji čine bispecifične polipeptidne heterodimere S0268, TSC020 i TSC021 navedene su u SEQ ID NO:26 i 52 (nukleotidna), 30 i 72 (aminokiselinska), 34 i 52 (nukleotidna), 54 i 72 (aminokiselinska) i 35 i 52 (nukleotidna i 55 i 72 (aminokiselinska, respektivno (vidi i Primer 4). Prolazna transfekcija u humane 293 ćelije proizvela je 6.9 pg proteina/ml kulture za S0266; 2.3 u g/m I kulture za S0268: 3.0 ng/ml kulture za TSC020; i 3.2 ug proteina/ml kulture za TSC021.
MDA-MB-453 (RON+) ćelije karcinoma dojke, Reci (CDI9\ CD20') ćelije limfoma plaštane zone i Jurkat (CD3<1>) leukemijske T-ćelije, dobijene su od ATCC (Manassas, VA) i kultivisane po datom protokolu. T-ćelije su izolovane iz donorskih PBMC korišćenjem Pan T-cell Isolation Kit. Miltenvi Biotec (Bergisch Gladbach. Germanv). Ne-T-ćelije izdvojene su iz PBMC tako što su indirektno magnetno obeležene biotin-konjugovanim monoklonskim antitelima i anti-biotin magnetnim mikroperlicama. Ove ćelije se zatim izdvajaju lako što se zadržavaju u koloni okruženoj magnetnim poljem. T-ćelije se ne zadržavaju u koloni i sakupljaju iz protoka.
Vezivanje se procenjuje inkubiranjem 5xl0' T-ćelija ili ciljnih (MDA-MB-453, Reci, Jurkat) ćelija, 30 minuta na 4°C, sa serijskim razblaženjima bispecifićnih molekula S0266 (aRON x aCD3 SCORPION™ protein) ili SCI268 (aRON x aCD3 polipeptidni heterodimer) (za MDA-MB-453 ćelije i izolvane T-ćelije) ili TSC020 (aCDI9 x aCD3) ili TSC021 (aCD20 x aCD3) za Reci i Jurkat ćelije, u koncentracijama od 100 nM do 0.I nM. Ćelije se isperu tri puta i zatim inkubiraju sa kozjim antihumanim IgG-FITC (1:200 razblaženje) još 30 minuta na 4°C. Ćelije se zatim ponovo isperu tri puta. fiksiraju u l% paraformaldehidu i očitavaju na FACS-Calibur instrumentu.
Analiza FSC-high, SSC-high subscta u FlowJo v7.5 (Tree Star, Inc.. Ashland. OR) pokazala je dozno-zavisno vezivanje bispecifićnih molekula S0266 i S0268 za MDA-MB-453 i izolovane T-ćelije (Slike 8A i 8B). Neočekivano, polipeptidni heterodimer S0268 vezuje se sa afinitetom sličnim sa komparabilnim SCORPION™ molekulom (S0266), na MDA-MB-453 i T-ćelije, iako on nema potencijal za avidnost. Više zasićenje na oba ciljna ćelijska lipa zapaženo je i sa polipeptidnim heterodimerom, što bi bio slučaj ako bi se polipeptidni heterodimer vezivao pri višoj stehiometriji (l: I vezivanje polipeptidnog heterodimera za površinski antigen) nego ekvivalentni SCORPION<IM>(potencijal 1:2 vezivanja bivalentnog Scorpion za površinske antigene). Upoređivanje CD 19-ciljajućeg bispecifičnog heterodimera (TSC020; HD37 i GI9-4 vezujući domeni) i CD20-ciljajućeg bispecifičnog heterodimera (TSC02I; 2H7 i GI9-4 vezujući domeni) na Reci i Jurkat ćelijama otkrilo je da TSC020 heterodimer ima viši afinitet za Reci ćelije nego TSC02I heterodimer (Slika 9A). međutim. TSC020 i TSC02I heterodimeri pokazuju slično vezivanje za CD3" Jurkat ćelije, što se i očekuje pošto oba heterodimera poseduju isti anti-CD3 vezujući domen (G19-4) (Slika 9B).
PRIMER 6
DODATNI BIVALENTNI I TRIVALENTNI POLIPEPTIDNI HETERODIMERI KOJI
KORISTE JEDAN HETERODIMERIZACIONI DOMENSKI PAR
Napravljeni su dodatni multispecifični heterodimeri: TSC046. TSC047, TSC048, TSC054, TSC055, TSC056, TSC057, TSC078. TSC079, TSC080. TSC099. TSCIOO, TSC101 i TSCI02.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSC046 sadrži jednolančane polipeptide TSCOOI (HD37 CH2 CH3 CHI) i TSC039 (BMA03I CH2 CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSCOOI sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: HD37 (anti-CDI9) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2, humani IgGl Cl 13 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSCOOI navedene su u SEQ ID NO:34, odnosno 54. Jednolančani polipeptid TSC039 sadrži, od svog amino- do karboksi- terminusa: BMA03I (anti-TCR) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2, humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC039 navedene su u SEQ ID NO:793, odnosno 811.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSC047 sadrži jednolančane polipeptide TSCOOI (HD37 CH2 CH3 CHI) i TSC04I (CR1S7 CH2 CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC04I sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: CRIS7 (anti-CD3) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2. humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC04I navedene su u SEO ID NO:794, odnosno 812.
Bivalentni polipeptidni heterodimer ISC048 sadrži jednolančane polipeptide TSCOOI (HD37 CH2 CH3 CHI) i TSC043 (OKT3-M CH2 CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC043 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: OKT3-M (mikromet varijantni anti-CD3, vidi i U.S 7.635,472) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgG I CH2, humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC043 navedene su u SRQ ID NO:7Q5, odnosno 813.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSC054 sadrži jednolančane polipeptide TSC049 (HD37 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 CHI) i TSC053 (GI9-4 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid 1 SU»49 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: HD37 (anti-CD19) scFv. humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula) (tj., humani IgGl CH2 sa L234A, 1.235A, G237A, E3I8A, K320A i K322A supstitcijama), humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC049 navedene su u SEQ ID NO:796, odnosno 814. Jednolančani polipeptid TSC053 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: G19-4 (anti-CD3) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula) (tj., humani IgGl CH2 sa L234A, L235A, G237A. E318A, K320A i K322A supstitcijama), humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC053 navedene su u SEQ ID NO:800, odnosno 818.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSC055 sadrži jednolančane polipeptide TSC050 (2117 CII2(ADCC/CDC nula) CH3 CHI) i TSC053 (GI9-4 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC050 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: 2H7 (anti-CD20) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula), humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC050 navedene su u SEO ID NO:797. odnosno 815.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSC056 sadrži jednolančane polipeptide TSC05I (P2C2 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 CHI') i TSC053 (GI9-4 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC051 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: P2C2 (anti-CD79) scFv. humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula), humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC051 navedene su u SEQ ID NO:798. odnosno 816.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSC057 sadrži jednolančane polipeptide TSC052 (5D5 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 CHI) i TSC053 (GI9-4 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC052 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: 5D5 (anti-c-Met) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula), humani IgGl Cl 13 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC052 navedene su u SEO ID NO:799, odnosno 817.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSC078 sadrži jednolančane polipeptide TSC049 (HD37 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 CHI) i TSC076 (OKT3 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC076 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: OKT3 (anti-CD3) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula), humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvencaTSC076 navedene su u SEO ID NO:802. odnosno 820.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSC079 sadrži jednolančane polipeptide TSC049 (HD37 CH2(ADCC/CDC nula) Cl 13 CHI) i TSC077 (Nuvion CH2(ADCC/CDC nula) CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC077 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: Nuvion (anti-CD3) scFv. humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl Cl 12 (ADCC/CDC nula), humani IgGl CH3 i humani Ck (YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC077 navedene su u SEQ ID NO:803. odnosno 821.
Trivalentni polipeptidni heterodimer TSC080 sadrži jednolančane polipeptide TSCOOI (HD37 CH2 CH3 CHI) i TSC064 (G 19-4 CH2 CH3 Ck(YAE) 1175 Met021)). Jednolančani polipeptid TSC064 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: G19-4 (anti-CD3) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl Cl 12. humani IgGl CH3, humani Ck (YAE), H75 linker, i V1et()21 (anti-c-Met) scFv (sa uklonjene tri serinske rezidue na C-terminusu). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC064 navedene su u SEO ID NO:801, odnosno 819.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSC099 sadrži jednolančane polipeptide TSC049 (HD37 CIF2(ADCC/CDC nula) CH3 CH 1) i TSC097 (4C04 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC097 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: 4C04 (anti-RON) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula), humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC097 navedene su u SEQ ID NO:808. odnosno 826.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSCIOO sadrži jednolančane polipeptide TSC049 (HD37 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 CHI) i TSC093 (CRIS7 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC093 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: CRIS7 (anti-CD3) scFv, humani IgG 1 SCC-P zglob, humani IgGl CH2(ADCC/CDC nula), humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC093 navedene su n SEQ ID NO:804, odnosno 822.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSCI01 sadrži jednolančane polipeptide TSC049 (HD37 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 CHI) i TSC094 (OKT3-M CH2(ADCC/CDC nula) CH3 Ck(YAE)}. jednolančani polipeptid TSC094 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: OKT3-M (mikromet varijantni anti-CD3) scFv, humani IgG I SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula), humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC094 navedene su u SEQ IDNO:805, odnosno 823.
Bivalentni polipeptidni heterodimer TSCI02 sadrži jednolančane polipeptide TSC049 (HD37 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 CHI) i TSC095 (BMA031 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC095 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: BMA031 (anti-TCR) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula), humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC095 navedene su u SEO ID NO:806, odnosno 824.
Polipeptidni heterodimerni molekuli eksprimiraju se i prečišćavaju prema Primeru
I.
PRIMER 7
CILJNO-ZAVISNA PROL1FERAC1.IA T-ĆELIJA INDUKOVANA POLIPEPTIDNIM
HETERODIMERIMA
Da bi se uporedila efikasnost različitih bispecifićnih polipeptidnih heterodimernih molekula u indukovanju ciljno-zavisne aktivacije i proliferacije T-ćelija. upoređivana su tri različita bispecifična molekula (TSC054, TSC078 i TSC079. opisana u Primeru 6) sa zajedničkim anti-CDI9 vezujućim domenom (FID37) i tri različita anti-CD3 vezujuća domena (GI9-4 za TSC054. OKT3 za TSC078, HuM291 za TSO079). Kao pozitivna kontrola pripremljen je Bispecific T-Cell Engaging molekul (BiTE) poznat kao bsc 19x3 (vidi U.S. Patent 7,635.472). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca bsc 19x3 navedene su u SEQ ID NO:809, odnosno 827. Prolazno transfektovanje humanih 293 ćelija proizvelo je 2.33 ug/ml proteina za TSC054, 0.67 u g/m I proteina za TSC078 i 3.5 u g/m I za TSC079.
Ćelije Daudi Burkitt-ovog limfoma (CDI9 ) i MDA-MB-453 :CI)!<)•) ćelije karcinoma dojke dobijene su od ATCC (Manassas. VA) i kultivisane prema datom protokolu. Mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) izolovane su iz krvi čoveka korišćenjem standardnog fikolnog gradijenta. Izolovane ćelije su isprane u puferisanom slanom rastvoru. T-ćelije su dodatno izolovane korišćenjem Pan T-cell Isolation Kit II. Miltenyi Biotec (Bergisch Gladbach, Gemanv) prema protokolu proizvođača (vidi Primer 5 za više informacija).
Proliferacija se procenjuje obeležavanjetn populacija izolovanih PBMC ili T-ćelija karboksifluorescein-diacetat-stikcinimidil cstrom (CFSE). CFSE-obeležene PBMC ili T-ćelije zaseju se na ploče sa 96 bunarčića sa U-dnom. pri 150 000 ili 100 000 ćelija/bunarčiću, respektivno, sa različitim brojem tumorskih ćelija, da se postigne odnos T-ćelija prema tumorskim ćelijama ođ 10:1 do 3:1. Koncentracije testnih molekula u opsegu od 8 nM do 0.08 pM dodaju se u mešavine ćelija, do ukupno 200 ul/bunarčiću, u RPM1 1640 medijumu dopunjenom 10% humanim ili goveđim serumom, natrijum-piruvatom i neesencijalnim amino-kiselinama. Ploče se inkubirajti na 37"C, 5% CO:, u humidifikovanim inkubatorima. Posle 3 dana. ćelije se obeleže anlitelima za citomelrijsku analizu. Ćelije se obeležavaju i ispiraju na svojim originalnim pločama, đa bi se na minimum sveo gubitak tokom prenošenja, i sva obeležavanja se vrše u puferisanom slanom rastvoru sa 0.2% goveđeg serum albumina. Prvo, ćelije se preinkubiraju sa 100 ug/ml humanog IgG na sobnoj temperaturi, 15 min Zatim se ćelije inkubiraju sa mešavinom (ukupna zapremina 50 ul) sledećih bojom obeleženih antitela: CD5-PE, CD4-APC, CD8-Pacific blue, CD25-PE-Cy7, kao i 7-amino-aktinomicin D (7AAD ovde kasnije), 40 min. Ploče se isperu dva puta, vrši se resuspendovanje u zapremini od 80 do 120 ul i odmah propuštanje kroz BD LSR1I citometar, da se dobije 80%o sadržaja svakog bunarčića. Uzorački podaci analiziraju se korišćenjem FlovvJo softvera za izračunavanje procenata i broja ćelija koje su pođlegle najmanje jednoj ćelijskoj deobi, prema njihovom CFSE profilu, sekvencijalnim gejtingom na aktivirane žive CD4+ ili CD8+ T-ćelije (7AAD-, CD5+, CD25+. CD4+ ili 7AAD- CD5+ CD25+ CD8+ respektivno). Srednje vrednosti i standardne devijacije izračunavaju se korišćenjem Microsoft Excel softvera. Grafikoni se prave korišćenjem Microsoft Excel softvera ili Graphpađ Prism.
Analiza živih CD4+ i CD8+ popilacija iz Daudi ćelija ili MDA-MB-453 ćelija tretiranih ćelom PBMC (Slike 10A-I0D) pokazuju značajan porast broja ćelija i procenta proliferišućih ćelija u prisustvu Daudi ćelija koje ispoljavaju ciljni CD 19 antigen (Slike I0A, I0B), ali izostaje značajna proliferacija u prisustvu MDA-MB-453 ćelija koje nemaju CD19 antigen (Slike 10C, 10D). Nešto proliferacije zapaža se pri nižim nivoima sa MDA-MB-453 ćelijama i ćelom PBMC, jer su B-ćellije (CD 19+) prisutne u PBMC, ali ukupna proliferacija je značajno smanjena kada se izvrši poređenje. Ova selektivnost je zapažena i sa izolovanim T-ćelijama. Viša je proliferacija CD8+ T-ćelija nego CD4+ T-ćelija, u prisustvu Daudi ćelija ili MDA-MB-453 ćelija tretiranih sa PBMC (Slike 10A-10D), i proliferacija indukovana sa TSC078 (HD37xOKT3) bila je generalno viša pri svim koncentracijama u odnosu na odgovor indukovan sa TSC054 (DD37xGI9-4) ili TSC079 (HD37xHuM29l) (Slike I0A-10D). Indukovana proliferacija CD4+ T-ćelija bila je niža u svim slučajevima za TSC054, TSC078 i TSC079 nego BiTE bscl9x3 (Slika I0A), iako TSC078 i TSC079 pokazuju superiornu indukciju proliferacije CD8+ ćelija pri nižim koncentracijama (npr., 5 pM) nego BiTE molekul (Slika 10B).
PRIMER 8
PREUSMERAVAMJE CITOTOKSIĆNOSTI T-ĆELIJA POLIPEPTIDNIM
HETERODIMERIMA
Da bi se uporedila efikasnost različitih bispecifićnih polipetidnih heterodimernih molekula u indukovanju ciljno-zavisne T-ćelijske citotoksićnosli, četiri različita bispecifična molekula su upoređivana u testu oslobađanja hroma Ć'Cr). Tri različita bispecifična molekula (TSC054, TSC078 i TSC079, opisana u Primeru 6) sa zajedničkim anti-CDI9 vezujućim domenom (HD37) i tri različita anti-CD3 vezujuća domena (G 19-4 za TSC054, 0KT3 za TSC078 i HuM29l za TSC079) testirana su zajedno sa četvrtim bispecifićnim molekuom (S0268, opisan u Primeru 4) sa anti-RON vezujućim domenom (4C04) i anti-CD3 vezujućim domeno (GI9-4). Prolazno transfektovanje humanih 293 ćelija proizvodi oko 2.33 ug/ml proteina za TSC054. oko 0.67 pg/ml proteinazaTSC078 i oko 3.5 pg/ml proteina za TSC079.
Ćelije Daudi Burkitt-ovog limfoma (CDI9+, RON-) i BxPC-3 ćelije (CDI9-, RON+) dobijene su od ATCC (Manassas, VA) i kultivisane prema datom protokolu. Mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) izolovane su iz krvi čoveka korišćenjem standardnog fikolnog gradijenta. Izolovane ćelije su isprane u puferisanom slanom rastvoru. T-ćelije su dodatno izolovane korišćenjem Pan T-cell Isolation Kit II, Miltcnvi Biotec (Bergisch Gladbach, Gemanv) korišćenjem protokola proizvođača {vidi Primer 5 za više informacija).
Citotoksičnost je procenjivana teslom oslobađanja ^'Cr. Približno 5x10° Daudi ili BxPC-3 ćelija tretira se sa 0.3 mCi'^'Cr i inkubira 75 minuta na 37°C. Posle 75 minuta, ćelije se isperu 3 puta medijumom (RPMI + 10% FBS) i resuspenduju u 11.5 ml međijuma. Iz ove suspenzije. 50 ul se dispenduje po bunarčiću ploča sa 96 bunarčića sa U-dnom (približno 20 000 ćelija/bunarćiću). Koncentracije bispecifićnih molekula u opsegu od 10 nM do 0.1 pM dodaju se ciljnim (Daudi, BxPC-3) ćelijama đo ukupne zapremine od 100 ul/bunarčiću. Ciljne ćelije se mkubiraju na sobnoj temperaturi 15 minuta. Zatim se doda 100 pl izolovanih T-ćelija (približno 200 000) da postigne odnos T-ćelija prema ciljnim ćelijama od 10:1. 50 pl 0.8% NP-40 doda se u kontrolne bunarćiće koji sadrže ciljne ćellije, ostavi se 15 minuta, zatim se doda 100 pl međijuma da se obezbedi kontrola za totalnu I izu.
Ploče se inkubiraju 4 sata, spinuju na 1500 rpm 3 minuta i 25 pl supernatanta se prenese iz svakog bunarčića u odgovarajući bunarčić Luma uzoračke ploče sa 96 bunarčića. Uzoračke ploče se ostave da se osuše na vazduhu u hemijski bezbednoj komori, 18 sati i zatim se radioaktivnost očitava na Topcount scintilacionom brojaču uz korišćenje standardnog protokola.
Analiza podataka o citotoksičnosti pokazala je izostanak citotoksičnosti van cilja kod Daudi (RON-) ćelija, anti-RON-usmerenog bispecifičnog molekula S0268 (Slika I1A). Slično, nije zapažena direktna citotoksičnost kada su Daudi ćelije tretirane sa TSC054 u odsustvu T-ćelija (Slika IIA). Međutim, jaka T-ćelijska tismerena citotoksičnost zapažena je sa Daudi ćelijama u prisustvu T-ćelija i anti-CDI9 usmerenog bispecifičnog molekula (TSC054), dostižući maksimalnu ližu pri koncentraciji između 10 i 100 pM (Slika I I A). Slično tome, uz korišcenje drugog đonora T-ćelija (Slika I IB) nije zapažena vanciljna citotoksičnost BxPC-3 (CD19-) ćelija, kod CD-19-usmerenih bispecifićnih TSC054, TSC078 ili TSC079 ili CD 19-usmerenog BiTE bsc19x3. Anti-RON-usmereni A0268 bispecifični molekul indukovao je citotoksičnost BxPC-3 (RON+) ćelija dostižući maksimum između 10 i 100 pM (Slika I IB)
PRIMER 9
MODULACIJA CILTNO-ZAVISNE PROLIFERACIJE T-ĆELIJA HETERODIMERIMA SA IZMENJENIM ZGLOBNIM SEKVENCAMA
Da bi se uporedila efikasnost različitih bispecifićnih polipetidnih heterodimernih molekula sa izmenjenim zglobnim sekvencama u indukovanju ciljno-zavisne aktivacije i proliferacije T-ćelija, vršeno je poređenje šest različitih bispecifićnih heterodimera (TSCI00, TSC127, TSC165, TSC166, TSCI67 i TSC168 sa zajedničkim anti-CD19 vezujućim domenom (HD37), zajedničkim anti-CD3 vezujućim domenom (Cris7) i pet različitih zglobnih konstrukata (IgGl SCC-P zglob za TSCI00 i TSCI27. IgA2 zglob bez prve Val rezidue povezan sa humanim IgGl sržnim zglobom za TSCI65. IgGl SSS-P zglob povezan sa humanim IgGl sržnim zglobom za TSCI66, deo miniranog IgG3 zgloba povezan sa IgGl sržnim zglobom za TSCI67 i IgM Cl 12 domen bez prvog Val povezan sa IgG I sržnim zglobom za TSC168.
Preciznije, bispecifični heterodimer TSC 100 opisan je u Primeru 6.
Bispecifični heterodimer TSC 127 sadrži jednolančane polipeptide TSCI25 (Cris7 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 CHI) i TSC096 (HD37 CH2(ADCC/CDC nula) CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC 125 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: Cris7 (anti-CD3) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula), humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC 125 navedene su u SEQ ID NO:865, odnosno 874. Jednolančani polipeptid TSC096 sadrži, od svog amino- do karboksi.terminusa: HD37 (anti-CDI9) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani IgGl CH2 ( ADCC/ CDC nula) humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC0% navedene su u SEQ ID NO:807, odnosno 825.
Bispecifični heterodimer TSC 165 sadrži jednolančane polipeptide TSCI57 (Cris7 lgA2UH CH2(ADCC/CDC nula) CH3 CHI) i TSC 161 (HD37 lgA2UH CH2(ADCC/CDC nula) CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC 157 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: Cris7 (anli-CD3) scFv. humani lgA2 zglob bez prvog Val povezan sa humanim IgGl sržnim zglobom, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula), humani IgGl CFI3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC157 navedene su u SEQ ID NO:866, odnosno 875. Jednolančani polipeptid TSC 161 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: HD37 (anti-CD19) scFv. humani lgA2 zglob bez prvog Val povezan sa humanim IgGl sržnim zglobom, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula), humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC161 navedene su u SEO ID NO:870, odnosno 879. Aminokiselinska sekvenca zgloba upotrebijenog u TSC 157 i TSC 161 navedena je u SEQ !DNO:748.
Bispecifični heterodimer TSC 166 sadrži jednolančane polipeptide TSC 158 (Cris7 IgGIminiUH CH2(ADCC/CDC nula) CH3 CHI) i TSC 162 (HD37 IgGIminiUH CH2(ADCC/CDC nula) CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC 158 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: Cris7 (anti-CD3) scFv. humani IgGl SSC-P zglob povezan sa humanim IgGl sržnim zglobom, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula), humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC 158 navedene su u SEQ ID NO:867. odnosno 876. Jednolančani polipeptid TSC 162 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: HD37 (anti-CD 19) scFv. humani IgGl SSC-P zglob povezan sa humanim IgGl sržnim zglobom, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula), humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC 162 navedene su u SEQ ID NO:87l, odnosno 880. Aminokiselinska sekvenca zgloba upotrebljenog u TSC158 i TSC162 navedena je u SEO ID NO:750.
Bispecifični heterodimer TSC 167 sadrži jednolančane polipeptide TSC 159 (Cris7 lgG3UH CH2(ADCC/CDC nula) CH3 CHI) i TSC 163 (HD37 lgG3UH
CH2(ADCC/CDC nula) CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC 159 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: Cris7 (anti-CD3) scFv, deo imitiranog humanog lgG3 zgloba povezan sa humanim IgGl sržnim zglobom, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula), humani IgGl CFI3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC 159 navedene su u SEO ID NO:868, odnosno 877. Jednolančani polipeptid TSC 163 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: HD37 (anti-CD19) scFv, deo mutiranog humanog lgG3 zgloba povezan sa humanim IgGl sržnim zglobom, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula), humani IgGl CH3 i humani Ck(YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC 163 navedene su u SEQ ID NO:872, odnosno 881. Aminokiselinska sekvenca zgloba upotrebljenog u TSC 159 i TSC 163 navedena je u SEQ IDNO:75I.
Bispecifični heterodimer TSC168 sadrži jednolančane polipeptide TSC 160 (Cris7 lgMCH2UH CH2 (ADCC/CDC nula) CH3 CHI) i TSC 164 (HD37 lgMCH2UH CH2 (ADCC/CDC nula), CH3 Ck(YAE)). Jednolančani polipeptid TSC 160 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: humanizovani Cris7 (anti-CD3) scFv, humani IgM CFI2 bez prvog Val povezan sa humanim IgGl sržnim zglobom, humani IgG I CH2 (ADCC/CDC nula), humani IgGl CH3 i humani IgGl CHI. Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC 160 navedene su u SEQ ID NO:869, odnosno 878. Jednolančani polipeptid TSC 163 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: HD37 (anti-CD19) scFv, humani IgM CH2 bez prvog Val povezan sa humanim IgG I sržnim zglobom, humani IgGl CH2 (ADCC/CDC nula), humani IgGl CH3 i humani Ck (YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC 164 navedene sli li SEO ID NO:873, odnosno 882. Aminokiselinska sekvenca zgloba upotrebljenog u TSC 160 i TSC 164 navedena je u SEQ ID NO:759.
Kao pozitivna kontrola, pripremljen je BispecificT-Cell Engaging molekul (BiTE) poznat kao bsc 19x3 (vidi U.S. Patent 7,635.472). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca bsc 19x3 navedene su u SEQ ID NO:809. odnosno 827.
Prolazno transfektovanje humanih 293 ćelija proizvodi 3.2 pg proteina/ml kulture za TSC 100, 6.1 iig proteina/ml kulture za TSC 127, 4.8 pg proteina/ml kulture zaTSC 165,6.2 ug proteina/ml kulture za TSC 166, 6.4 ug proteina/ml kulture za TSC 167 i 6.4 pg/ml proteina za TSC 168.
Ćelije Daudi Burkitt-ovog iimfoma (CDlQ<t>) i C4-2 (CD19"), ćelije karcinoma prostate dobijene su od ATCC (Manassas. VA) i MD Anderson Cancer Center (Flouston, TX) i kultivisane prema datom protokolu. T-ćelije su izolovane korišćenjem Pan T-cell Isolation Kit 11, Miltenvi Biotec (Bergisch Gladbach. Gemany) prema protokolu proizvođača (vidi Primer 5 za više informacija).
Proliferacija se procenjuje obeležavanjein populacije izolovanih T-ćelija karboksifluorescein-diacetat-sukcininiidil estrom (CFSE). CFSE-obeležene T-ćelije zaseju se na ploče sa 96 bunarčića sa U-đnom. u količini ođ 100 000 ćelija/bunarčiću, sa 10 000 tumorskih ćelija/bunarčiću, đa se postigne odnos T-ćelija prema tumorskim ćelijama od 10:1. Koncentracijelestnih molekula u opsegu od 5 nM do 0.005 pM dodaju se u mešavine ćelija, đo ukupno 200 ul/bunarčiću, u RPMI 1640 medijumu dopunjenom 10% humanim ili goveđim serumom, natrijum-piruvatom i neesencijalnim amino-kiselinama. Ploče se inkubiraju na 37°C, 5% CCh, u humidifikovanim inkubatorima. Posle 3 dana, ćelije se obeleže antitelima za analizu protočnom citometrijom. Ćelije se obeležavaju i ispiraju u svojim originalnim pločama da bi se na minimum sveo gubitak tokom prenošenja i sva obeležavanja se vrše u puferisanom slanom rastvoru sa 0.2% goveđeg serum albumima. Prvo, ćelije se preinkubiraju sa 100 ug/ml humanog IgG na sobnoj temperaturi. 15 min Zatim se ćelije inkubiraju sa mešavinom (ukupna zapremina 50 ul) sledećih antitela obeleženih bojom: CD5-PE, CD4-APC, CD8-Pacific blue, CD25-PE-Cy7, kao i 7-amino-aktinomicin D (7AAD ovde kasnije), 40 min. Ploče se isperu dva puta, izvrši se resuspendovanje u zapremini od 80 đo 120 pl i odmah zatim propuštanje kroz BD LSRI1 protočni citometar da se dobije 80% sadržaja svakog bunarčića. Uzorački podaci analiziraju se korišćenjem FIovvJo softvera za izračunavanje procenata i broja ćelija koje su podlegle najmanje jednoj ćelijskoj deobi, prema njihovom CFSE profilu, sekvencijalnim gejtingom na aktivirane žive CD4+ ili CD8+ T-ćelije (7AAD-, CD5+, CD25+, CD4+ ili 7AAD-. CD5+, CD25+. CD8+, respektivno). Srednje vrednosti i standardne devijacije izračunavaju se korišćenjem Microsoft E.\cel softvera. Grafikoni se prave korišćenjem Microsoft Excel softvera ili Graphpad Prism.
Analiza populacija živih CD4+ i CD8+ iz Daudi ćelija ili C4-2 ćelija tretiranih izolovanim T-ćelijama pokazuje značajan porast ukupnog broja ćelija i procenta proliferišućih ćelija u prisustvu Daudi ćelija koje ispoljavaju ciljni CD 19, ali izostaje značajna proliferacija u prisustvu C4-2 ćelija koje nemaju CD 19 antigen (Slika 12). Proliferacija CD8+ ćelija bila je veoma slična za bispecifične molekule sa uobičajenim ("default") IgGl zglobom (TSC 100). kao i za one sa dužim zglobovima (TSC166, TSC 167, TSC 168). Malo viša proliferacija CD8+ pri niskim koncentracijama zapažena je sa bispecificima sa kraćim lgA2 gornjim zglobom (TSC 165). Slične ali upadljivije razlike zapažene su za proliferaciju CD4+ ćelija, gde molekul koji sadrži kraći lgA2 zglob (TSC165) pokazuje višu proliferaciju pri većini koncentracija nego onaj sa standardnim IgGl zglobom (TSC 100). a molekuli sa dužim zglobovima (TSC 166, TSC 167, TSC 168) pokazuju nižu proliferaciju.
Da bi se potvrdila diferencijalna aktivnost lgA2 zgloba, izveden je drugi eksperiment proliferacije sa titracijom ka nižim proteinskim koncentracijama (Slika 13), u kojem je bispecifik sa IgA2 zglobom (TSC165) upoređen sa dve različite proizvodne partije bispecifika sa "default" IgGl zglobom (TSC127) i bsc 19x3 BiTE molekulom. Slično prethodnom eksperimentu, manja varijacija je zapažena za proliferaciju CD8+ ćelija, pri čemu TSC 165 pokazuje komparabilnu ili veću indukciju proliferacije u odnosu na bsc 19x3 koji s druge strane pokazuju malo višu ili komparabilnu proliferaciju u odnosu na TSC) 27. Ponovo, slično prethodnom eksperimentu ovi trendovi se ponavljaju, ali pojačani, kod proliferacije CD4+ ćelija, gde TSC 165 i bsc 19x3 pokazuju komparabilnu prolifraciju, koja je pametno veća nego ona sa TSC 127.
PRIMER 10
MODULACIJA PREUSMEREIME CITOTOKSIČNOST! T-ĆELIJA POLIPEPTIDNIM
HETERODIMERIMA SA IZMENJENIM ZGLOBN1M SEKVENCAMA
Da bi se uporedila efikasnost menjanja sastava zgloba bispecifićnih polipeptidnih heterodimernih molekula u indukovanju ciljno-zavisne T-ćelijske citotoksičnosti. pet različitih bispecifićnih molekula je upoređivane u testu oslobađan ja hroma ć'Cr). Vršeno je poređenje pet različitih bispecifićnih molekula (TSC 100, TSC 165, TSC 166, TSC 167 i TSC 168, opisani u Primeru 9) sa zajedničkim anti-CDI9 vezujućim domenom (HD37). zajedničkim anti-CD3 vezujućim domenom (Cris7) i pet različitih zglobnih konstrukata
(IgGl SCC-P zglob za TSC 100 i TSC 127, lgA2 zglob bez prve Val rezidue povezan sa humanim IgGl sržnim zglobom za TSC 165, IgGl SSS-P zglob povezan sa humanim IgGl sržnim zglobom za TSC 166, deo imitiranog lgG3 zgloba povezan sa humanim IgGl sržnim zglobom za TSC 167 i IgM CH2 domen bez prvog Val povezan sa humanim IgG 1 sržnim zglobom za TSC 168.
Ćelije Daudi Burkitt-ovog limtbma (CD 19+. RON-) dobijene su od ATCC (Manassas, VA) i kultivisane prema datom protokolu. T-ćelije su izolovane korišćenjem Pan T-eell Isolation Kit II, Miltenvi Biotee (Bergisch Gladbach. Gemany) prema protokolu proizvođača (vidi Primer 5 za više informacija).
Citotoksičnost je procenjivana testom oslobađanja "''Cr. Približno 5x10<6>Daudi ćelija tretira se sa 0.3 mCi<5l>Cr i inkubira 75 minuta na 37°C. Posle 75 minuta, ćelije se isperu 3 puta medijumom (RPM1 + 10% FBS) i resuspenduju u I 1.5 ml međijuma. Iz ove suspenzije, 50 pl se dispenduje po bunarčiću ploča sa 96 bunarčića sa U-dnom (približno 20 000 ćelija/bunarčiću). Različite koncentracije bispecifićnih molekula, u opsegu ođ 10 nM do 0.1 pM, dodaju se ciljnim (Daudi) ćelijama, do ukupne zapremine ođ 100 pl/bunarčiću. Ciljne ćelije se inkubiraju na sobnoj temperaturi 15 minuta. Zatim se doda 100 pl izolovanih T-ćelija (približno 200 000) da se postigne odnos T-ćelija prema ciljnim ćelijama od 10:1. 50 pl 0.8% NP-40 doda se u kontrolne bunarčiće koji sadrže ciljne ćeli i je, ostavi se 15 minuta, zatim se doda 100 pl međijuma, đa se obezbeđi kontrola za totalnu ližu.
Ploče se inkubiraju 4 sata, spinuju na 1500 rpm 3 minuta i 25 pl supernatanta se prenese iz svakog bunarčića u odgovarajući bunarčić Luma uzoračke ploče sa 96 bunarčića. Uzoračke ploče se ostave da se osuše na vazduhu u hemijski bezbednoj komori, 18 sati, i zatim se očitava radioaktivnost na Topcount scintilacionom brojaču prema standardnom protokolu.
Analiza podataka o citotoksičnosti pokazala je jaku usmerenu citotoksičnost T-ćelija, sa Daudi ćelijama, u prisustvu T-ćelija i anti-CD!9-usmerenog bispecifičnog molekula (TSC 100 - TSC 168), uz dostizan je maksimalne lize pri koncentraciji između 5 i 50 pM (Slika 14). Slično trendovima zapaženim u Primeru 9. bispecifični molekul sa kraćim lgA2 gornjim zglobnim regionom (TSC 165) pokazuje komparabilnu ili veću citotoksičnost u odnosu na molekul sa standardnim IgGl gornjim zglobnim regionom
(TSC 100), dok su molekuli sa dužim gornjim zglobnim regionom (TSC 166, TSC 167, TSC 168) manje potentni u indukovanju citotoksičnosti).
PRIMER I I
BISPECIFIČNI HETERODIMERI SA VARIJACIJAMA LINKERA IZMEĐU CH3-CH1 1 CH3-Ck
Napravljeni su sledeći bispecifični heterodimeri sa CH3-CH1 i CH3-Ck linkerskim varijacijama: Bispecifični heterodimer TSC 151 sadrži jednolančane polipeptide TSC 145 i TSC 148. Jednolančani polipeptid TSC 145 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: humanizovani Cris7 (anti-CD3) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani CH2 (ADCC/CDC nula), humani CH3 i humani IgG 1 CHI. Humani CH3 i humani IgGl CHI povezani su linkerom koji ima sekvencu GGGSS (SEQ ID NO:847). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC 145 navedene su u SEO ID NO:853, odnosno 859. Jednolančani polipeptid TSC 148 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: HD37 (anti-CD19) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani CH2 (ADCC/CDC nula), humani CFI3 i humani Ck(YAE). Humani CH3 i humani Ck(YAE) povezani su linkerom koji ima sekvencu GGGSR (SEQ ID NO:850) u kojoj R može alternativno da se razmatra kao prvi arginin humanog Ck (YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC 148 navedene su u SEQ ID NO:856, odnosno 862.
Bispecifični heterodimer TSC 152 sadrži jednolančane polipeptide TSC 146 i TSC 149. Jednolančani polipeptid TSC 146 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: humanizovani Cris7 (anti-CD3) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani CH2 (ADCC/CDC nula), humani CH3 i humani IgGl CHI. Humani CI 13 i humani IgG I CHI povezani su linkerom koji ima sekvencu SYSPNS (SEQ ID N0.848). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC146 navedene su u SEO 'D NO:854, odnosno 860. Jednolančani polipeptid TSC 149 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: HD37 (anti-CD19) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani CH2 (ADCC/CDC nula), humani CH3 i humani Ck (YAE). Humani CH3 i humani Ck(YAE) povezani su linkerom koji ima sekvencu SYSPNSR (SEQ ID NO:851) u kojoj R može alternativno da se razmatra kao prvi arginin humanog Ck (YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC 149 navedene su u SEQ ID NO:857, odnosno 863.
Bispecifični heterodimer TSC 153 sadrži jednolančane polipeptide TSC 147 i TSCI50. Jednolančani polipeptid TSC147 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: humanizovani Cris7 (anti-CD3) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani Cl42 (ADCC/CDC nula), humani CH3 i humani IgGl CHI. Humani CH3 i humani IgGl CHI povezani su linkerom koji ima sekvencu SSLNTPNS (SEO ID NO:849). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC 147 navedene su u SEO ID N0.855. odnosno 861. Jednolančani polipeptid TSC 150 sadrži, od svog amino- do karboksi-terminusa: HD37 (anti-CD19) scFv, humani IgGl SCC-P zglob, humani CH2 (ADCC/CDC nula), humani CH3 i humani Ck(YAE). Humani CH3 i humani Ck(YAE) povezani su linkerom koji ima sekvencu SSLNTPNSR (SEQ ID N0.852) u kojoj R može alternativno đa se razmatra kao prvi arginin humanog Ck (YAE). Nukleotidna i aminokiselinska sekvenca TSC 150 navedene su u SEQ ID N0:858, odnosno 864.
Gornji bispecifični heterodimeri eksprimiraju se prema Primeru I. Dobijeni su sledeći nivoi ekspresije: 9.2 pg proteina/ml kulture za TSC 151. 11.2 ug proteina/ml kulture za TSC 152 i 14.7 pg proteina/ml kulture za TSC 153 U poređenju sa tim, oko 6 ug proteina/ml kulture dobijeno je za heterodimere čiji CH3-CH I i CH3-Cklinkeri imaju aminokiselinsku sekvencu KSR (SEQ ID NO: 846).
Različite gore opisane forme mogu da se kombinuju da bi se dobile druge forme. Aspekti formi mogu da se modifikuju, po potrebi uz korišcenje koncepata različitih patenata, prijava i publikacija, da bi se obezbedile dodatne forme.
Ove i druge izmene formi mogu da se obave u svetlu gornjeg detaljnog opisa. Uopšteno, u patentnim zahtevitna koji slede, upotrebljene izraze ne treba shvatiti kao da ograničavaju zahteve na specifične forme objavljene u specifikaciji i patentnim zahtevitna, već ih treba shvatiti tako đa uključuju sve moguće forme zajedno sa punim obimom ekvivalenata na koje se ti zahtevi odnose. Prema tome, zahtevi nisu ograničeni objavom.

Claims (21)

1. Polipeptidni heterodimer, naznačen time, što sadrži: (a) prvi jednolančani polipetid (SCP-I) koji sadrži jedan do četiri vezujuća domena koja se specifično vezuju za jedan do četiri cilja, zglob (H-I), imunoglobulinski heterodimerizacioni domen (HD-1) i imunoglobulinski CH2 i CH3 domen IgGl, lgG2, IgG3, IgG4, IgAl, lgA2, IgD ili bilo koju njihovu kombinaciju (CH2CH3-I): i (b) drugi jednolančani polipetid (SCP-11) koji sadrži nula do četiri vezujuća domena koja se specifično vezuju za nula do četiri cilja, zglob (hinge, H-ll), imunoglobulinski heterodimerizacioni domen (IID-11) i imunoglobulinski CH2 i CH3 domen IgGl, lgG2, lgG3, lgG4, IgAl, lgA2, IgD ili bilo koju njihovu kombinaciju (CH2CH3-II); pri čemu (i) imunoglobulinski heterodimerizacioni domen prvog jednolančanog polipeptiđa (HD-I) i imunoglobulinski heterodimerizacioni domen drugog jednolančanog polipeptiđa (HD-II) preferencijalno se udružuju jedan sa drugim da formiraju polipeptidni heterodimer sačinjen od prvog jednolančanog polipeptiđa (SCP-I) i drugog jednolančanog polipetida (SCP-II), i (1) imunoglobulinski heterodimerizacioni domen prvog jednolančanog polipeptiđa (HD-I) sadrži prvi imunoglobulinski CH-1 region, i imunoglobulinski heterodimerizacioni domen drugog jednolančanog polipeptiđa (HD-II) sadrži prvi imunoglobulinski CL region, ili (2) imunoglobulinski heterodimerizacioni domen prvog jednolančanog polipeptiđa (HD-I) sadrži prvi imunoglobulinski CL region, i imunoglobulinski heterodimerizacioni domen drugog jednolančanog polipeptiđa (HD-II) sadrži prvi imunoglobulinski CH-1 region; (ii) pri čemu je prvi imunoglobulinski CL region izmenjeni humani imunoglobulinski Ckregion sa jednom ili više amino-kiselina humanog Ckregiona divljeg tipa, supstituisanih na N29, N30, Q52, V55, T56, S68 ili T70, uz uslov da polipeptidni heterodimer sadrži najmanje đva vezujuća domena koja se specifično vezuju za najmanje đva različita cilja.
2. Polipeptidni heterodimer iz zahteva I, naznačen time, Sto su vezujući domeni jednolančani Fv (scFv) polipeptiđi.
3. Polipeptidni heterodimer iz zahteva I, naznačen time, što polipeptidni heterodimer sadrži đva vezujuća domena (BDI i BD2). pri čemu je poželjno prvi vezujući domen (BDI) na prvom jednolančanom polipeptidu (SCP-I), a drugi vezujući domen (BD2) je na drugom jednolančanom polipeptidu (SCP-II).
4. Polipeptidni heterodimer iz zahteva 3, naznačen time, što se prvi vezujući domen (BDI) nalazi aminoterminalno u odnosu na CH2CH3-I prvog jednolančanog polipeptiđa. a drugi vezujući domen (BD2) se nalazi aminoterminalno u odnosu na CH2CH3-I1 drugog jednolančanog polipeptiđa.
5. Polipeptidni heterodimer iz zahteva 1 ili 2, naznačen time, što polipeptidni heterodimer sadrži tri vezujuća domena (BDI. BD2 i BD3).
6. Polipeptidni heterodimer iz zahteva 1, naznačen time, što polipeptidni heterodimer sadrži četiri vezujuća domena (BDI, BD2, BD3 i BD4), pri čemu su poželjno HD-I i CH2CH3-1 smešteni između BDI i BD2 i HD-II i CH2CH3-II su smešteni između BD3 i BD4.
7. Polipeptidni heterodimer iz zahteva I ili 2, naznačen time, što polipeptidni heterodimer sadrži pet đo osam vezujućih domena.
8. Polipeptidni heterodimer iz bilo kojeg od zahteva 1 do 7, naznačen time, što se najmanje jedan od vezujućih domena specifično vezuje, ili je antagonist, TCR kompleksa, TCRa, TCR[3, CD3y, CD35, CD3e, CD28, CD79b, hiperlL-6, monolL-10, CD86, CD20, PSMA, CD 19, HLA-DR, Ron, c-Met, CEACAM-6, LIGHT, GITRL, CD40. PDLI, PDL2, HVEM, LTBR, EGFR. EGFRolll, ErbB2, ErbB3, ErbB4, IGFIR, EphA2, PDGFR, VEGFR1-4, angiopoetina 2, CD64, CD32A, CDI6, CD71. TNFRI, TNFR2. TWEAKR, TACI, BAFF-R, BCMA, FAS, CD32B, CD2I, CD22, CD30, CD33, CD37, CD38, CD70, TNFa, IL-6, hiperlL-6, IL-2, IL-I, 1L-7, IL-8, IL-I7A/C, IP-10, lFNy, IFNa, RAN KL, FASL, TGFp, IL10, 1L17A/F, CSF2, IGF1, 1GF2. BLvS/APRIL, HGF, MSP, EGF (uključujući epiregulin. herregulin, p-regulin, neuregulin), HIF-la, VEGFA, VEGFB, VEGFC, VEGFD, TNFa. Wnt, sHH. TGFp, PDGF, TVVEAK, EpCAM, CEA, PCTA-1, STEAP-1, PSCA, ALCAM (CDI66), EphA2, CD15I. CA-125, MUC-L MAGE-1, TROP2, CCR5, HER-3. HER-4, EGFR, CEA, MUC2, MUC3, MUC4, MUCSac, MUC5b, MUC7, phCG, Lewis-Y. ganglioziđa GD3. 9-0-acetil-GD3, GM2, globo H, fukozil-GMI, poli SA, GD2, karboanhidraze IX (MN/'CA IX). CD44u6, sonic hedgehog (Shh), Wue-1, plazma-ćelijski antigen, (za membranu vezanog) IgE, sa melanomom udruženog hondroitin-sulfatnog proteoglikana (MCSP), CCR8. TNF-alfa prekursora, STEAP, mezotelina, A33 antigena, antigena matičnih ćelija prostate (PSCA), Ly-6, dezmogieina 4, E-kadherin neoepitopa, fetalnog acetilholinskog receptora, CD25, CA19-9 markera, CA-125 markera i receptora tipa II Muellerian-ove inhibitorne supstance (MIS), sTn (sijalizovani Tn antigen; TAG-72), FAP (fibrobiastni aktivacioni antigen), enđosijalina, EGFRulll, LG, SAS, CD63, IGFIR. CD 151, TGFBR2, GHRHR, GHR, IL-6R, gp!30, TNFR2, OSMRfi, Patched-1, Frizzled, Robo I, CD80, CD81, CD86. OX40, CD40, CD 137, LIFRp. TLR7 ili TLR9.
9. Polipeptidni heterodimer iz bilo kojeg od prethodnih zahteva, naznačen time, što se jedna ili više amino-kiselina humanog Ck regiona divljeg tipa supstituišu jednom ili više aminokiselinskih supstitucija koje se biraju između Ala (A), Arg (R). Trp (VV), Tyr (Y), Glu (E), Gln (Q), Lys (K). Asp (D). Met (M) Ser (S) i Phe (F).
10. Polipeptidni heterodimer iz bilo kojeg od prethodnih zahteva, naznačen time, što izmenjeni humani imunoglobulinski Ck region sadrži sledeće supstitucije: (i) N30Y V55A T70E; ili N30M V55A T70E.
11. Polipeptidni heterodimer iz bilo kojeg od prethodnih zahteva, naznačen time, što je CHI region izmenjeni humani imunoglobulinski CHI region koji sadrži aminokiselinsku supstituciju kojom je Val (V) na poziciji 68 supstituisan Lys (K), Arg (R) ili His (H), i gde je Ckregion izmenjeni humani imunoglobulinski Ckregion koji sadrži aminokiselinsku supstituciju kojom je Leu (L) na poziciji 27 supstituisan Asp (D) ili Glu (E) ili gde je CHI region izmenjeni humani imunoglobulinski CHI region koji sadrži aminokiselinsku supstituciju kojom je Val (V) na poziciji 68 supstituisan Asp (D) ili Glu (E), i gde je Ck region izmenjeni humani imunoglobulinski Ck region koji sadrži aminokiselinsku supstituciju kojom je Leu (L) na poziciji 27 promenjen u Lys (K), Arg (R) ili His(H).
12. Polipeptidni heterodimer iz bilo kojeg od zahteva 1 do 1 I, naznačen time, stoje prvi CHI region izmenjeni humani imunoglobulinski CHI region, sa cisteinom humanog imunoglobulinskog CHI regiona divljeg tipa uključenim u formiranje disulfidne veze sa humanim imunoglobulinskim CL regionom divljeg tipa, uklonjenim ili supstituisanim.
13. Polipeptidni heterodimer iz bilo kojeg od prethodnih zahteva, naznačen time, što je Ckregion izmenjeni humani imunoglobulinski Ck region, sa cisteinskom reziduom humanog Ckregiona divljeg tipa uključenom u formiranje disulfidne veze sa humanim imunoglobulinskim CHI regionom divljeg tipa. uklonjenom ili supstituisanoin.
14. Polipeptidni heterodimer iz bilo kojeg od zahteva 1 do 13, naznačen time, stoje zglob i prvog i drugog jednolančanog polipeptiđa imunoglobulinski zglobni region.
15. Polipeptidni heterodimer iz bilo kojeg od zahteva I do 14, naznačen time, što je zglobni region (a) aminoterminalno u odnosu na CH2CH3-I ili CH2CH3-II, (b) smešten između vezujućeg domena i imunoglobulinskog heterodimerizacionog domena prvog jednolančanog polipeptiđa (HD-I) i/ili imunoglobulinskog heterodimerizacionog domena drugog jednolančanog polipeptiđa (HD-II), (c) smešten između imunoglobulinskog heterodimerizacionog domena i CH2CH3-I ili CH2CH3-II, (đ) na amino-terminusu prvog ili drugog jednolančanog polipeptiđa. (e) zglobni region lektina tipa C, (f) NKg2A ili NKg2D peptiđ ili njihov derivat. (g) smešten između CH2CH3-I i vezujućeg domena, ili (h) na karboksi-terrninusu prvog ili drugog jednolančanog polipeptiđa.
16. Heterodimer iz bilo kojeg od prethodnih zahteva,naznačen time,što prvi jednolančani polipeptid sadrži vezujući domen koji se specifično vezuje za TCR kompleks ili njegovu komponentu, i drugi jednolančani polipeptid sadrži vezujući domen koji se specifično vezuje za tumor-specifični antigen.
17. Smeša,naznačena time,što sadrži polipeptidni heterodimer iz bilo kojeg od zahteva I do 16 i farmaceutski prihvatljivi ekscipijent.
18. Polipeptidni heterodimer prema bilo kojem od zahteva 1 do 17,naznačen time,što se upotrebljava u: a) metodu usmeravanja aktivacije T-ćelija, pri čemu polipeptidni heterodimer sadrži vezujući domen koji se specifično vezuje za TCRa, TCRp, CD3y, CD3S, CD3e ili njihovu kombinaciju, i drugi vezujući domen koji se specifično vezuje za različiti cilj; ili (b) inhibiranju rasta, metastaza ili metastatskog rasta maligniteta, pri čemu polipeptidni heterodimer sadrži vezujući domen koji se specifično vezuje za TCRa, TCRP, CD3y, CD3S, CD3e, c-Met ili Ron. (c) lečenju autoimunskog ili zapaljenskog stanja, pri čemu polipeptidni heterodimer sadrži vezujući domen koji se specifično vezuje za TCRa, TCRp, CD3y, CD35, CD3s ili CD28. (d) lečenju poremećaja ili bolesti vezanih za B-ćelije. pri Čemu polipeptidni heterodimer sadrži vezujući domen koji se specifično vezuje za TCRa, TCRp. CD3y, CD35, CD3e i drugi vezujući domen koji se specifično vezuje za CD 19, CD20. CD79b ili HLA-DR.
19. Ekspresioni vektor, naznačen time, što je sposoban za ekspresiju polipeptidnog heterodimera iz bilo kojeg od zahteva 1 do 16, koji sadrži prvi polinukleotid koji kodira prvi jednolančani polipeptid i drugi polinukleotid koji kodira drugi jednolančani polipeptid.
20. Celija-đomaćin, naznačena time. što sadrži (i) ekspresioni vektor iz zahteva 19 ili (ii) prvi i drugi ekspresioni vektor sposoban za ekspresiju prvog odnosno drugog jednolančanog poiipeptida polipeptidnog heterodimera iz bilo kojeg od zahteva 1 do 16.
21. Metod pravljenja polipeptidnog hterodimera, naznačen time, što uključuje (a) kuitivisanje ćelije-domaćina iz zahteva 20 pod uslovima pogodnim za ekspresiju prvog i drugog jednolančanog poiipeptida, i (b) opciono izolovanje ili prečišćavanje iz kulture, heterodimera formiranih od prvog i drugog jednolančanog poiipeptida.
RS20160812A 2009-12-29 2010-12-29 Heterodimerni vezujući proteini i njihove upotrebe RS55229B1 (sr)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US29084009P 2009-12-29 2009-12-29
US36526610P 2010-07-16 2010-07-16
US36674310P 2010-07-22 2010-07-22
PCT/US2010/062436 WO2011090762A1 (en) 2009-12-29 2010-12-29 Heterodimer binding proteins and uses thereof
EP10803713.6A EP2519543B1 (en) 2009-12-29 2010-12-29 Heterodimer binding proteins and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS55229B1 true RS55229B1 (sr) 2017-02-28

Family

ID=43768719

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20160812A RS55229B1 (sr) 2009-12-29 2010-12-29 Heterodimerni vezujući proteini i njihove upotrebe

Country Status (26)

Country Link
US (4) US20130089554A1 (sr)
EP (4) EP3112382A1 (sr)
JP (4) JP5856073B2 (sr)
KR (1) KR20120125611A (sr)
CN (3) CN103124743A (sr)
AU (3) AU2010343056A1 (sr)
BR (1) BR112012016135A2 (sr)
CA (3) CA2785907A1 (sr)
CY (1) CY1118008T1 (sr)
DK (1) DK2519543T3 (sr)
EA (3) EA201492253A1 (sr)
ES (1) ES2592385T3 (sr)
HR (1) HRP20160819T1 (sr)
HU (1) HUE029257T2 (sr)
IL (1) IL220398A (sr)
LT (1) LT2519543T (sr)
ME (1) ME02505B (sr)
MX (1) MX341796B (sr)
NZ (1) NZ600820A (sr)
PL (1) PL2519543T3 (sr)
PT (1) PT2519543T (sr)
RS (1) RS55229B1 (sr)
SG (1) SG181952A1 (sr)
SI (1) SI2519543T1 (sr)
SM (1) SMT201600335B (sr)
WO (3) WO2011090762A1 (sr)

Families Citing this family (615)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6136311A (en) 1996-05-06 2000-10-24 Cornell Research Foundation, Inc. Treatment and diagnosis of cancer
TWI671403B (zh) 2005-03-31 2019-09-11 中外製藥股份有限公司 控制組裝之多肽的製造方法
JP2009531324A (ja) 2006-03-20 2009-09-03 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 癌標的化のための操作された抗前立腺幹細胞抗原（ｐｓｃａ）抗体
WO2007114325A1 (ja) 2006-03-31 2007-10-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 二重特異性抗体を精製するための抗体改変方法
IN2014DN10515A (sr) 2006-03-31 2015-08-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd
WO2009032949A2 (en) 2007-09-04 2009-03-12 The Regents Of The University Of California High affinity anti-prostate stem cell antigen (psca) antibodies for cancer targeting and detection
DK3059246T3 (en) 2007-09-26 2018-10-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Modified constant region of an antibody
MX336725B (es) 2007-09-26 2016-01-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Metodo de modificacion del punto isoelectrico de anticuerpos medinate la sustitucion de aminoacidos en region de determinacion de complementariedad (cdr).
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
JP2012531885A (ja) 2008-07-02 2012-12-13 エマージェント プロダクト デベロップメント シアトル， エルエルシー Ｉｌ６免疫治療剤
BRPI0920749A8 (pt) 2008-10-02 2017-12-12 Emergent Product Dev Seattle Proteínas de ligação de antagonista multialvo cd86
WO2010096486A1 (en) 2009-02-17 2010-08-26 Cornell Research Foundation, Inc. Methods and kits for diagnosis of cancer and prediction of therapeutic value
JP5787446B2 (ja) 2009-03-19 2015-09-30 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
EP2409991B1 (en) 2009-03-19 2017-05-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variant
CN102369214B (zh) 2009-04-07 2019-04-12 罗氏格黎卡特股份公司 三价、双特异性抗体
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
US9493578B2 (en) 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
WO2011034605A2 (en) 2009-09-16 2011-03-24 Genentech, Inc. Coiled coil and/or tether containing protein complexes and uses thereof
US10150808B2 (en) 2009-09-24 2018-12-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant regions
EP2506876B1 (en) 2009-12-02 2016-10-12 Imaginab, Inc. J591 minibodies and cys-diabodies for targeting human prostate specific membrane antigen (psma) and methods for their use
EP2543730B1 (en) * 2010-03-04 2018-10-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variant
SMT201900549T1 (it) 2010-03-12 2019-11-13 Debiopharm Int Sa Molecole leganti il cd37 e loro immunoconiugati
AR080793A1 (es) 2010-03-26 2012-05-09 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos
WO2012006341A2 (en) * 2010-07-06 2012-01-12 Aveo Pharmaceuticals, Inc. Anti-ron antibodies
EP3029066B1 (en) 2010-07-29 2019-02-20 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points
SG189043A1 (en) 2010-11-10 2013-05-31 Hoffmann La Roche Pyrazole aminopyrimidine derivatives as lrrk2 modulators
CN110251668A (zh) 2010-11-30 2019-09-20 霍夫曼-拉罗奇有限公司 低亲和力血脑屏障受体抗体及其用途
CA2824824A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Monovalent antigen binding proteins
JP5764677B2 (ja) 2011-02-28 2015-08-19 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗原結合タンパク質
SG193447A1 (en) 2011-04-01 2013-10-30 Immunogen Inc Cd37-binding molecules and immunoconjugates thereof
RU2632647C2 (ru) * 2011-04-22 2017-10-06 Аптево Рисерч Энд Девелопмент Ллс Белки, связывающие специфический мембранный антиген простаты, и соответствующие композиции и способы
US9738707B2 (en) * 2011-07-15 2017-08-22 Biogen Ma Inc. Heterodimeric Fc regions, binding molecules comprising same, and methods relating thereto
CA2842368A1 (en) * 2011-07-29 2013-02-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Switch costimulatory receptors
CN107586340B (zh) 2011-08-23 2022-01-21 罗切格利卡特公司 对t细胞活化性抗原和肿瘤抗原特异性的双特异性抗体及使用方法
US12466897B2 (en) 2011-10-10 2025-11-11 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
US8524234B2 (en) 2011-11-03 2013-09-03 Tolera Therapeutics, Inc Antibody for selective inhibition of T-cell responses
US20130273089A1 (en) 2011-11-03 2013-10-17 Tolera Therapeutics, Inc. Antibody and methods for selective inhibition of t-cell responses
TW201326193A (zh) 2011-11-21 2013-07-01 Genentech Inc 抗－ｃ－ｍｅｔ抗體之純化
HRP20201004T1 (hr) * 2011-12-20 2020-10-16 Medimmune, Llc Modificirani polipeptidi za skelete bispecifičnog protutijela
WO2013152860A2 (en) 2012-04-11 2013-10-17 Dutalys Gmbh Improved antibody light chains
US10202452B2 (en) * 2012-04-20 2019-02-12 Aptevo Research And Development Llc CD3 binding polypeptides
CA2872908C (en) 2012-05-10 2023-11-14 Gerhard Frey Multi-specific monoclonal antibodies
SI2870247T1 (sl) * 2012-07-05 2019-10-30 Hoffmann La Roche Ekspresijski in sekrecijski sistem
US20140154253A1 (en) * 2012-07-13 2014-06-05 Zymeworks Inc. Bispecific Asymmetric Heterodimers Comprising Anti-CD3 Constructs
JOP20200236A1 (ar) * 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
EP2905290B1 (en) * 2012-10-05 2019-12-04 Kyowa Kirin Co., Ltd. Heterodimeric protein composition
BR112015007120A2 (pt) 2012-10-08 2017-12-12 Roche Glycart Ag anticorpo biespecífico, composição farmacêutica, uso, célula hospedeira e método de produção de um anticorpo
CN105051069B (zh) 2013-01-14 2019-12-10 Xencor股份有限公司 新型异二聚体蛋白
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US9738722B2 (en) 2013-01-15 2017-08-22 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
HK1218930A1 (zh) * 2013-02-08 2017-03-17 Abbvie Stemcentrx Llc 新型多特异性结构
PT3613439T (pt) 2013-02-15 2021-05-12 Univ California Recetor de antigénio quimérico e métodos de utilização do mesmo
UA119320C2 (uk) 2013-02-26 2019-06-10 Рош Глікарт Аг Активуюча т-клітини біспецифічна антигензв'язувальна молекула
CN110845618A (zh) 2013-02-26 2020-02-28 罗切格利卡特公司 双特异性t细胞活化抗原结合分子
EP3421495A3 (en) 2013-03-15 2019-05-15 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
TWI654206B (zh) 2013-03-16 2019-03-21 諾華公司 使用人類化抗－ｃｄ１９嵌合抗原受體治療癌症
EP3628685A1 (en) 2013-04-29 2020-04-01 F. Hoffmann-La Roche AG Human fcrn-binding modified antibodies and methods of use
SG10201810481UA (en) 2013-04-29 2018-12-28 Hoffmann La Roche Fcrn-binding abolished anti-igf-1r antibodies and their use in the treatment of vascular eye diseases
US20160068613A1 (en) 2013-04-29 2016-03-10 Hoffmann-La Roche Inc. Fc-receptor binding modified asymmetric antibodies and methods of use
KR102243062B1 (ko) 2013-05-02 2021-04-21 아납티스바이오, 아이엔씨. 예정된 사멸-1에 대한 항체
JP2016520595A (ja) * 2013-05-22 2016-07-14 メタボリック エンジニアリング ラボラトリーズ カンパニー リミテッド 抗ＴＮＦ−α／ＣＸＣＬ１０二重ターゲット抗体及びその用途
US20160355588A1 (en) * 2013-07-12 2016-12-08 Zymeworks Inc. Bispecific CD3 and CD19 Antigen Binding Constructs
SG10201803449VA (en) 2013-09-27 2018-05-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for producing polypeptide heteromultimer
BR112016006929A2 (pt) 2013-10-11 2017-09-19 Hoffmann La Roche Anticorpo, ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira, métodos de preparação de anticorpo, de tratamento de pacientes e de geração de um anticorpo, composição farmacêutica e uso do anticorpo
WO2015066413A1 (en) 2013-11-01 2015-05-07 Novartis Ag Oxazolidinone hydroxamic acid compounds for the treatment of bacterial infections
CA2929181A1 (en) 2013-11-13 2015-05-21 Novartis Ag Mtor inhibitors for enhancing the immune response
KR102225489B1 (ko) * 2013-12-17 2021-03-10 제넨테크, 인크. 항-cd3 항체 및 이의 사용 방법
CA2931684C (en) 2013-12-19 2024-02-20 Novartis Ag Human mesothelin chimeric antigen receptors and uses thereof
AU2014368696A1 (en) 2013-12-20 2016-06-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Humanized anti-Tau(pS422) antibodies and methods of use
ES2895752T3 (es) 2014-01-03 2022-02-22 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecíficos anti-hapteno/anti-receptor de la barrera hematoencefálica, complejos de los mismos y su uso como lanzaderas a través de la barrera hematoencefálica
CA2932547C (en) 2014-01-06 2023-05-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Monovalent blood brain barrier shuttle modules
WO2015109131A2 (en) * 2014-01-15 2015-07-23 Zymeworks Inc. Bi-specific cd3 and cd19 antigen-binding constructs
WO2015107026A1 (en) 2014-01-15 2015-07-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-region variants with modified fcrn- and maintained protein a-binding properties
JO3517B1 (ar) 2014-01-17 2020-07-05 Novartis Ag ان-ازاسبيرو الكان حلقي كبديل مركبات اريل-ان مغايرة وتركيبات لتثبيط نشاط shp2
ES2716685T3 (es) 2014-01-24 2019-06-14 Dana Farber Cancer Inst Inc Moléculas de anticuerpo para PD-1 y usos de las mismas
DK3099717T3 (da) 2014-01-31 2019-07-01 Novartis Ag Antistofmolekyler med tim-3 og anvendelser deraf
MX381141B (es) * 2014-02-10 2025-03-12 Merck Patent Gmbh INHIBICIÓN DIRIGIDA DEL FACTOR DE CRECIMIENTO TRANSFORMADOR ß (TGF ß).
US20170066827A1 (en) * 2014-03-05 2017-03-09 Ucl Business Plc Chimeric antigen receptor
US20230027993A1 (en) 2014-03-05 2023-01-26 Autolus Limited Methods
US11385233B2 (en) 2015-03-05 2022-07-12 Autolus Limited Methods of depleting malignant T-cells
WO2015138925A1 (en) * 2014-03-14 2015-09-17 University Of Utah Research Foundation Ron inhibitors for use in preventing and treating bone loss
TWI777174B (zh) 2014-03-14 2022-09-11 瑞士商諾華公司 針對lag-3之抗體分子及其用途
JP2017513818A (ja) 2014-03-15 2017-06-01 ノバルティス アーゲー キメラ抗原受容体を使用する癌の処置
TWI701042B (zh) 2014-03-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
WO2015148379A1 (en) 2014-03-24 2015-10-01 Novartis Ag Monobactam organic compounds for the treatment of bacterial infections
KR102497443B1 (ko) 2014-03-28 2023-02-08 젠코어 인코포레이티드 Cd38 및 cd3에 결합하는 이중특이적 항체
KR102376287B1 (ko) 2014-04-02 2022-03-17 에프. 호프만-라 로슈 아게 다중특이적 항체 경쇄 잘못짝짓기의 검출 방법
UA117289C2 (uk) 2014-04-02 2018-07-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Мультиспецифічне антитіло
KR102380402B1 (ko) 2014-04-03 2022-03-31 아이쥐엠 바이오사이언스 인코포레이티드 변형된 j-사슬
SI3888674T1 (sl) 2014-04-07 2024-08-30 Novartis Ag Zdravljenje raka z uporabo antigenskega himernega receptorja proti-CD19
RU2577226C2 (ru) * 2014-04-10 2016-03-10 Общество с ограниченной ответственностью, "Международный биотехнологический центр "Генериум" ("МБЦ "Генериум") Способ получения биспецифических антител против cd3*cd19 формата флексибоди в клетках млекопитающих
EP3143154B1 (en) * 2014-05-10 2020-01-29 Sorrento Therapeutics, Inc. Chemically-locked bispecific antibodies
EP3164419B1 (en) 2014-06-26 2024-07-24 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-brdu antibodies and methods of use
AR100978A1 (es) 2014-06-26 2016-11-16 Hoffmann La Roche LANZADERAS CEREBRALES DE ANTICUERPO HUMANIZADO ANTI-Tau(pS422) Y USOS DE LAS MISMAS
US20170218091A1 (en) * 2014-07-03 2017-08-03 Abbvie Inc. Monovalent binding proteins
WO2016014553A1 (en) 2014-07-21 2016-01-28 Novartis Ag Sortase synthesized chimeric antigen receptors
SG10201913765YA (en) 2014-07-21 2020-03-30 Novartis Ag Treatment of cancer using a cd33 chimeric antigen receptor
US10174095B2 (en) 2014-07-21 2019-01-08 Novartis Ag Nucleic acid encoding a humanized anti-BCMA chimeric antigen receptor
EP3193915A1 (en) 2014-07-21 2017-07-26 Novartis AG Combinations of low, immune enhancing. doses of mtor inhibitors and cars
EP4205749A1 (en) 2014-07-31 2023-07-05 Novartis AG Subset-optimized chimeric antigen receptor-containing cells
EP2982692A1 (en) 2014-08-04 2016-02-10 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA
SMT202400235T1 (it) 2014-08-04 2024-07-09 Hoffmann La Roche Molecole bispecifiche leganti l’antigene di attivazione delle cellule t
CN107001316A (zh) 2014-08-06 2017-08-01 诺华股份有限公司 作为抗菌剂的喹诺酮衍生物
AU2015301460B2 (en) 2014-08-14 2021-04-08 Novartis Ag Treatment of cancer using GFR alpha-4 chimeric antigen receptor
RU2020117196A (ru) 2014-08-19 2020-10-15 Новартис Аг Химерный антигенный рецептор (car) против cd123 для использования в лечении злокачественных опухолей
SG11201701627PA (en) 2014-09-12 2017-03-30 Genentech Inc Anti-cll-1 antibodies and immunoconjugates
US11142577B2 (en) 2014-09-12 2021-10-12 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University WNT signaling agonist molecules
EP3191126B1 (en) 2014-09-13 2020-05-13 Novartis AG Combination therapies of alk inhibitors
JP6839074B2 (ja) 2014-09-17 2021-03-03 ノバルティス アーゲー 養子免疫療法のためのキメラ受容体での細胞毒性細胞のターゲティング
EP3662903A3 (en) 2014-10-03 2020-10-14 Novartis AG Combination therapies
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
KR20170063946A (ko) * 2014-10-08 2017-06-08 에프. 호프만-라 로슈 아게 Fap 및 dr5에 특이적인 이중특이성 항체와 화학요법제의 병용요법
CA2963935A1 (en) 2014-10-08 2016-04-14 Novartis Ag Biomarkers predictive of therapeutic responsiveness to chimeric antigen receptor therapy and uses thereof
AU2015329965A1 (en) 2014-10-09 2017-04-27 Engmab Sàrl Bispecific antibodies against CD3epsilon and ROR1
UY36351A (es) 2014-10-14 2016-06-01 Novartis Ag Moléculas de anticuerpo que se unen a pd-l1 y usos de las mismas
EP3209769B1 (en) * 2014-10-24 2020-08-05 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University Compositions and methods for inducing phagocytosis of mhc class i positive cells and countering anti-cd47/sirpa resistance
WO2016065245A1 (en) 2014-10-24 2016-04-28 Incept, Llc Extra luminal scaffold
SI3215528T1 (sl) 2014-11-06 2019-11-29 Hoffmann La Roche Variante regije Fc s spremenjeno vezavo FcRn in postopki uporabe
EP3215524B1 (en) 2014-11-06 2021-01-13 F.Hoffmann-La Roche Ag Fc-region variants with modified fcrn- and protein a-binding properties
AU2015350075B2 (en) 2014-11-17 2021-06-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for tumor treatment using CD3xCD20 bispecific antibody
RS61010B1 (sr) 2014-11-20 2020-11-30 Hoffmann La Roche Bispecifični antigen vezujući molekuli koji aktiviraju t ćelije protiv folr1 i cd3
RU2753902C2 (ru) 2014-11-20 2021-08-24 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Комбинированная терапия на основе активирующих т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул против cd3 и фолатного рецептора 1 (folr1) и антагонистов, связывающихся с осью pd-1
EP3023437A1 (en) 2014-11-20 2016-05-25 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA
BR112017010513A2 (pt) 2014-11-20 2018-04-03 F. Hoffmann-La Roche Ag ?cadeias leves comuns e métodos de uso?
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
BR112017011166A2 (pt) 2014-11-26 2018-02-27 Xencor, Inc. anticorpos heterodiméricos que se ligam a cd3 e cd38
CA2967426A1 (en) 2014-11-26 2016-06-02 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and tumor antigens
US20180334490A1 (en) 2014-12-03 2018-11-22 Qilong H. Wu Methods for b cell preconditioning in car therapy
WO2016087416A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies
HRP20192009T1 (hr) 2014-12-16 2020-02-07 Novartis Ag Spojevi izoksazol hidroksamske kiseline kao inhibitori lpxc-a
AU2015364396B2 (en) 2014-12-19 2018-08-09 Alkermes, Inc. Single chain Fc fusion proteins
EP3233918A1 (en) 2014-12-19 2017-10-25 Novartis AG Combination therapies
EP3237449A2 (en) 2014-12-22 2017-11-01 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
IL253149B2 (en) 2014-12-29 2023-11-01 Novartis Ag Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
UA120286C2 (uk) 2015-01-08 2019-11-11 Ґенмаб А/С Біспецифічне антитіло проти cd3 і cd20
EP3750918A1 (en) 2015-01-20 2020-12-16 IGM Biosciences, Inc. Tumor necrosis factor (tnf) superfamily receptor binding molecules and uses thereof
US11161907B2 (en) 2015-02-02 2021-11-02 Novartis Ag Car-expressing cells against multiple tumor antigens and uses thereof
JP6792559B2 (ja) * 2015-02-04 2020-11-25 ウニヴェルズィテート チューリッヒ 癌治療のためのｈｌａホモ二量体の使用
CN115093479A (zh) 2015-03-04 2022-09-23 Igm生物科学股份有限公司 Cd20结合分子及其用途
WO2016141387A1 (en) 2015-03-05 2016-09-09 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
ES2884844T3 (es) 2015-03-09 2021-12-13 Agensys Inc Conjugados de anticuerpo fármaco (ADC) que se unen a proteínas FLT3
CA2979215A1 (en) 2015-03-10 2016-09-15 Aduro Biotech, Inc. Compositions and methods for activating "stimulator of interferon gene"-dependent signalling
WO2016154585A1 (en) 2015-03-26 2016-09-29 Charles Sentman Anti-mica antigen binding fragments, fusion molecules, cells which express and methods of using
WO2016161088A2 (en) * 2015-03-31 2016-10-06 Fundamental Solutions Corporation Biosensor system for the rapid detection of analytes
US9752199B2 (en) 2015-03-31 2017-09-05 Fundamental Solutions Corporation Biosensor system for the rapid detection of analytes
JP7082484B2 (ja) 2015-04-01 2022-06-08 中外製薬株式会社 ポリペプチド異種多量体の製造方法
EP3280795B1 (en) 2015-04-07 2021-03-24 Novartis AG Combination of chimeric antigen receptor therapy and amino pyrimidine derivatives
IL303972A (en) 2015-04-08 2023-08-01 Novartis Ag CD20 treatments, CD22 treatments and combined treatments with CD19 chimeric antigen receptor expressing cell
WO2016168595A1 (en) 2015-04-17 2016-10-20 Barrett David Maxwell Methods for improving the efficacy and expansion of chimeric antigen receptor-expressing cells
EP3286211A1 (en) 2015-04-23 2018-02-28 Novartis AG Treatment of cancer using chimeric antigen receptor and protein kinase a blocker
ES2889906T3 (es) 2015-05-21 2022-01-14 Harpoon Therapeutics Inc Proteínas de unión triespecíficas y usos médicos
CN108472361B (zh) 2015-06-08 2022-12-27 德彪发姆国际有限公司 抗cd37免疫缀合物及抗cd20抗体组合物
TW201718647A (zh) 2015-06-16 2017-06-01 建南德克公司 抗-cll-1抗體及使用方法
EP3916018A1 (en) 2015-06-16 2021-12-01 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
ES2957567T3 (es) 2015-06-16 2024-01-22 Hoffmann La Roche Anticuerpos humanizados y de afinidad madurada contra FcRH5 y procedimientos de uso
CN113929779B (zh) 2015-06-24 2025-02-25 豪夫迈·罗氏有限公司 人源化的抗-Tau(pS422)抗体和使用方法
WO2017008169A1 (en) 2015-07-15 2017-01-19 Zymeworks Inc. Drug-conjugated bi-specific antigen-binding constructs
AU2016297014B2 (en) 2015-07-21 2021-06-17 Novartis Ag Methods for improving the efficacy and expansion of immune cells
CN108025051B (zh) 2015-07-29 2021-12-24 诺华股份有限公司 包含抗pd-1抗体分子的联合疗法
EP3316902A1 (en) 2015-07-29 2018-05-09 Novartis AG Combination therapies comprising antibody molecules to tim-3
LT3317301T (lt) 2015-07-29 2021-07-26 Novartis Ag Kombinuotos terapijos, apimančios antikūno molekules prieš lag-3
WO2017027325A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Imaginab, Inc. Antigen binding constructs to target molecules
CN108699144B (zh) 2015-08-28 2022-07-19 德彪发姆国际有限公司 用于检测cd37的抗体和测定
US11747346B2 (en) 2015-09-03 2023-09-05 Novartis Ag Biomarkers predictive of cytokine release syndrome
CN108349985A (zh) 2015-09-14 2018-07-31 无限药品股份有限公司 异喹啉酮的固体形式、其制备方法、包含其的组合物及其使用方法
MX2018003292A (es) * 2015-09-21 2018-08-01 Aptevo Res & Development Llc Polipéptidos de unión a cd3.
US11639389B2 (en) 2015-09-30 2023-05-02 Igm Biosciences, Inc. Binding molecules with modified J-chain
DK3355913T3 (da) 2015-09-30 2024-12-02 Igm Biosciences Inc Bindingsmolekyler med modificeret j-kæde
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
WO2017055395A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-cd3xrob04 bispecific t cell activating antigen binding molecules
EP3150637A1 (en) 2015-10-02 2017-04-05 F. Hoffmann-La Roche AG Multispecific antibodies
WO2017055392A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-cd3xcd44v6 bispecific t cell activating antigen binding molecules
EP3913000A1 (en) 2015-10-02 2021-11-24 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific anti-cd19xcd3 t cell activating antigen binding molecules
WO2017055385A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-cd3xgd2 bispecific t cell activating antigen binding molecules
WO2017055393A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-cd3xtim-3 bispecific t cell activating antigen binding molecules
SMT202100506T1 (it) 2015-10-02 2021-11-12 Hoffmann La Roche Anticorpi bispecifici specifici per pd1 e tim3
US20170096485A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific t cell activating antigen binding molecules
KR20180073561A (ko) 2015-10-02 2018-07-02 에프. 호프만-라 로슈 아게 이중특이적 항-ceaxcd3 t 세포 활성화 항원 결합 분자
EP3356409A2 (en) 2015-10-02 2018-08-08 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bispecific t cell activating antigen binding molecules
EP3356821B1 (en) 2015-10-02 2019-10-23 H. Hoffnabb-La Roche Ag Cellular based fret assay for the determination of simultaneous binding
CN106565836B (zh) * 2015-10-10 2020-08-18 中国科学院广州生物医药与健康研究院 高亲和力的可溶性pdl-1分子
MX2018005036A (es) 2015-10-29 2018-08-01 Hoffmann La Roche Anticuerpos y metodos de uso de anti-regiones de fragmentos cristalizables (fc) variantes.
SMT202200118T1 (it) 2015-11-03 2022-05-12 Janssen Biotech Inc Anticorpi che legano specificamente pd-1 e loro usi
CN108699136B (zh) 2015-12-07 2022-03-18 Xencor股份有限公司 结合cd3和psma的异二聚抗体
EP3178848A1 (en) 2015-12-09 2017-06-14 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies
ES2901794T3 (es) 2015-12-09 2022-03-23 Hoffmann La Roche Anticuerpo anti-CD20 de tipo II para reducir la formación de anticuerpos antifármaco
CN106883297B (zh) 2015-12-16 2019-12-13 苏州康宁杰瑞生物科技有限公司 基于ch3结构域的异二聚体分子、其制备方法及用途
ES2986067T3 (es) 2015-12-17 2024-11-08 Novartis Ag Moléculas de anticuerpos frente a PD-1 y usos de las mismas
UY37030A (es) 2015-12-18 2017-07-31 Novartis Ag Anticuerpos dirigidos a cd32b y métodos de uso de los mismos
US11413340B2 (en) 2015-12-22 2022-08-16 Novartis Ag Mesothelin chimeric antigen receptor (CAR) and antibody against PD-L1 inhibitor for combined use in anticancer therapy
CA3004288C (en) 2015-12-28 2025-05-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha METHOD FOR PROMOTING THE CLEARANCE EFFICIENCY OF A POLYPEPTIDE CONTAINING THE FC REGION
AU2016380262B2 (en) 2015-12-28 2023-02-09 Novartis Ag Methods of making chimeric antigen receptor -expressing cells
AR107303A1 (es) 2016-01-08 2018-04-18 Hoffmann La Roche Métodos de tratamiento de cánceres positivos para ace utilizando antagonistas de unión a eje pd-1 y anticuerpos biespecíficos anti-ace / anti-cd3, uso, composición, kit
BR112018013914A2 (pt) * 2016-01-08 2018-12-11 Univ California polipeptídeos heterodiméricos condicionalmente ativos e métodos de utilização deste
BR112018014150A2 (en) 2016-01-11 2018-12-11 Novartis Ag immunostimulating humanized monoclonal antibodies to human interleukin-2, and fusion proteins thereof
AU2017219216B2 (en) 2016-02-19 2019-12-19 Novartis Ag Tetracyclic pyridone compounds as antivirals
WO2017149515A1 (en) 2016-03-04 2017-09-08 Novartis Ag Cells expressing multiple chimeric antigen receptor (car) molecules and uses therefore
JP6980196B2 (ja) 2016-03-08 2021-12-15 ウニヴェルズィテート チューリッヒ Ｈｌａ−ｂ５７オープンコンフォーマー
PL3433280T3 (pl) 2016-03-22 2023-07-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Dwuswoiste cząsteczki limfocytów T aktywowane przez proteazy
WO2017165681A1 (en) 2016-03-24 2017-09-28 Gensun Biopharma Inc. Trispecific inhibitors for cancer treatment
FI3433257T3 (fi) 2016-03-24 2024-01-08 Novartis Ag Alkynyylinukleosidianalogeja ihmisen rinoviruksen estäjinä
AU2017250191A1 (en) 2016-04-13 2018-11-08 Orimabs Ltd. Anti-PSMA antibodies and use thereof
CA3019524A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 F. Hoffmann-La Roche Ag The contorsbody - a single chain target binder
IL321475A (en) * 2016-05-06 2025-08-01 Medimmune Llc Bispecific binding proteins and their uses
US11339225B2 (en) 2016-05-12 2022-05-24 Asclepius (Suzhou) Technology Company Group, Co., Ltd. Bispecific antigen-binding construct and preparation method and use thereof
CN107365387B (zh) 2016-05-12 2022-03-15 阿思科力(苏州)生物科技有限公司 一种双特异性抗原结合构建体及其制备方法和应用
PT3461261T (pt) 2016-05-20 2025-07-31 Harpoon Therapeutics Inc Proteínas de ligação ao cd3 de fragmento variável de cadeia única
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
CA3024723A1 (en) 2016-05-20 2017-11-23 Robert B. Dubridge Single domain serum albumin binding protein
WO2017202786A1 (en) 2016-05-25 2017-11-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Materials and methods relating to dosage regimen design
CA3059010A1 (en) 2016-06-02 2018-12-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
EP3252078A1 (en) 2016-06-02 2017-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
CA3026151A1 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Xencor, Inc. Bispecific checkpoint inhibitor antibodies
SG11201810656WA (en) 2016-06-14 2018-12-28 Novartis Ag Crystalline form of (r)-4-(5-(cyclopropylethynyl)isoxazol-3-yl)-n-hydroxy-2-methyl-2-(methylsulfonyl)butanamide as an antibacterial agent
WO2017216685A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 Novartis Ag Pentacyclic pyridone compounds as antivirals
WO2017216686A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 Novartis Ag 8,9-fused 2-oxo-6,7-dihydropyrido-isoquinoline compounds as antivirals
EP3474884A4 (en) 2016-06-22 2020-08-19 Alkermes, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING THE IMMUNOSTIMULANT AND ANTI-INFLAMMATORY PROPERTIES OF IL-10
CA3028718A1 (en) 2016-06-24 2017-12-28 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
MX2018016265A (es) 2016-06-28 2019-07-04 Xencor Inc Anticuerpos heterodimericos que se unen al receptor 2 de somatostatina.
EP3478717B1 (en) 2016-07-04 2022-01-05 F. Hoffmann-La Roche AG Novel antibody format
WO2018009466A1 (en) 2016-07-05 2018-01-11 Aduro Biotech, Inc. Locked nucleic acid cyclic dinucleotide compounds and uses thereof
CN116769050A (zh) 2016-07-20 2023-09-19 犹他大学研究基金会 Cd229 car t细胞及其使用方法
US11279747B2 (en) 2016-08-10 2022-03-22 Universitat Zurich MHC class Ia fusion dimers for treatment of cancer
JP7366742B2 (ja) * 2016-08-26 2023-10-23 サノフイ 選択的な軽鎖対形成を容易にする多重特異性抗体
SG10201913858WA (en) 2016-08-26 2020-03-30 Agency Science Tech & Res Macrophage stimulating protein receptor (or ron - recepteur d' origine nantais) antibodies and uses thereof
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
TW201811788A (zh) 2016-09-09 2018-04-01 瑞士商諾華公司 作為抗病毒劑之多環吡啶酮化合物
US11242400B2 (en) 2016-09-21 2022-02-08 Aptevo Research And Development Llc CD123 binding proteins and related compositions and methods
EP3515475B1 (en) 2016-09-21 2024-05-01 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Chimeric antigen receptor (car) that targets chemokine receptor ccr4 and its use
JOP20190061A1 (ar) 2016-09-28 2019-03-26 Novartis Ag مثبطات بيتا-لاكتاماز
EP3519820B1 (en) 2016-09-30 2020-12-09 H. Hoffnabb-La Roche Ag Spr-based dual-binding assay for the functional analysis of multispecific molecules
JP7022123B2 (ja) 2016-09-30 2022-02-17 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｃｄ３に対する二重特異性抗体
MY200337A (en) 2016-10-07 2023-12-20 Novartis Ag Nucleic acid molecules encoding chimeric antigen receptors comprising a cd20 binding domain
AU2017341936B2 (en) * 2016-10-14 2024-10-31 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Modular tetravalent bispecific antibody platform
PE20240950A1 (es) 2016-10-14 2024-05-06 Xencor Inc PROTEINAS DE FUSION FC HETERODIMERICAS IL 15/IL 15R(alfa)
WO2018073753A1 (en) 2016-10-18 2018-04-26 Novartis Ag Fused tetracyclic pyridone compounds as antivirals
EP3666794A1 (en) 2016-11-01 2020-06-17 AnaptysBio, Inc. Antibodies directed against programmed death- 1 (pd-1)
US11278629B2 (en) 2016-11-02 2022-03-22 Debiopharm International, S.A. Methods for improving anti-CD37 immunoconjugate therapy
US11466094B2 (en) 2016-11-15 2022-10-11 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-CD20/anti-CD3 bispecific antibodies
TW201829463A (zh) 2016-11-18 2018-08-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗hla-g抗體及其用途
EP3544997A4 (en) 2016-11-23 2020-07-01 Harpoon Therapeutics, Inc. PROSTATE SPECIFIC MEMBRANE ANTIGEN BINDING PROTEIN
KR20190087539A (ko) * 2016-11-23 2019-07-24 하푼 테라퓨틱스, 인크. Psma 표적화 삼중특이성 단백질 및 사용 방법
JP7227131B2 (ja) 2016-12-03 2023-02-21 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド Ｃａｒ－ｔ細胞の投薬を決定するための方法
US10613083B2 (en) 2016-12-22 2020-04-07 Fundamental Solutions Corporation Universal biosensor system for analyte detection
NZ754994A (en) 2016-12-22 2022-12-23 Amgen Inc Benzisothiazole, isothiazolo[3,4-b]pyridine, quinazoline, phthalazine, pyrido[2,3-d]pyridazine and pyrido[2,3-d]pyrimidine derivatives as kras g12c inhibitors for treating lung, pancreatic or colorectal cancer
CN109071656B (zh) 2017-01-05 2021-05-18 璟尚生物制药公司 检查点调节物拮抗剂
BR112019014187A2 (pt) 2017-01-09 2020-02-11 Tesaro, Inc. Métodos de tratamento de câncer com anticorpos anti-pd-1
WO2018140845A2 (en) * 2017-01-27 2018-08-02 Duke University Bi-specific antibodies to cd64 and a disease antigen
US11266745B2 (en) 2017-02-08 2022-03-08 Imaginab, Inc. Extension sequences for diabodies
CN106832002A (zh) * 2017-02-16 2017-06-13 上海科医联创生物科技有限公司 一种靶向pd‑1的融合蛋白及其相关应用
US11535668B2 (en) 2017-02-28 2022-12-27 Harpoon Therapeutics, Inc. Inducible monovalent antigen binding protein
CN110402253B (zh) 2017-03-10 2024-01-05 豪夫迈·罗氏有限公司 用于生产多特异性抗体的方法
AU2018247767B2 (en) 2017-04-03 2025-01-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to STEAP-1
KR20190121816A (ko) 2017-04-03 2019-10-28 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-pd-1 항체와 돌연변이 il-2 또는 il-15의 면역접합체
JP2020515637A (ja) 2017-04-03 2020-05-28 オンコロジー、インコーポレイテッド 免疫腫瘍剤を伴うｐｓ標的化抗体を用いる癌の治療方法
EP3606947B1 (en) 2017-04-03 2022-12-21 F. Hoffmann-La Roche AG Immunoconjugates of il-2 with an anti-pd-1 and tim-3 bispecific antibody
PL3606955T3 (pl) 2017-04-05 2025-02-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Przeciwciała dwuswoiste swoiście wiążące się z PD1 i LAG3
JP2020516638A (ja) 2017-04-13 2020-06-11 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がんを処置する方法における使用のための、インターロイキン２イムノコンジュゲート、ｃｄ４０アゴニスト、および任意選択のｐｄ−１軸結合アンタゴニスト
AR111419A1 (es) 2017-04-27 2019-07-10 Novartis Ag Compuestos fusionados de indazol piridona como antivirales
WO2018201056A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Novartis Ag Cells expressing a bcma-targeting chimeric antigen receptor, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
UY37695A (es) 2017-04-28 2018-11-30 Novartis Ag Compuesto dinucleótido cíclico bis 2’-5’-rr-(3’f-a)(3’f-a) y usos del mismo
US20200179511A1 (en) 2017-04-28 2020-06-11 Novartis Ag Bcma-targeting agent, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
UY37718A (es) 2017-05-05 2018-11-30 Novartis Ag 2-quinolinonas triciclicas como agentes antibacteriales
BR112019023855B1 (pt) 2017-05-12 2021-11-30 Harpoon Therapeutics, Inc Proteínas de ligação à mesotelina
CN115028727A (zh) 2017-05-12 2022-09-09 哈普恩治疗公司 靶向msln的三特异性蛋白质及使用方法
JOP20190272A1 (ar) 2017-05-22 2019-11-21 Amgen Inc مثبطات kras g12c وطرق لاستخدامها
AU2018273914A1 (en) 2017-05-24 2019-11-14 Pandion Operations, Inc. Targeted immunotolerance
WO2018223004A1 (en) 2017-06-01 2018-12-06 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind cd20 and cd3
KR20200041834A (ko) 2017-06-01 2020-04-22 젠코어 인코포레이티드 Cd123 및 cd3에 결합하는 이중특이성 항체
KR20200054160A (ko) 2017-06-02 2020-05-19 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 입양 세포 요법을 사용한 치료를 위한 물품 제조 및 방법
EP3635009B1 (en) * 2017-06-07 2026-02-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for internalizing enzymes
CA3061959A1 (en) 2017-06-09 2018-12-13 Providence Health & Services - Oregon Utilization of cd39 and cd103 for identification of human tumor reactive t cells for treatment of cancer
WO2019006427A1 (en) 2017-06-29 2019-01-03 Juno Therapeutics, Inc. WALL MODEL FOR ASSESSING TOXICITIES ASSOCIATED WITH IMMUNOTHERAPIES
AU2018291497A1 (en) 2017-06-30 2020-01-16 Xencor, Inc. Targeted heterodimeric Fc fusion proteins containing IL-15/IL-15Ra and antigen binding domains
AR112603A1 (es) 2017-07-10 2019-11-20 Lilly Co Eli Anticuerpos biespecíficos inhibidores de punto de control
US20190016802A1 (en) 2017-07-14 2019-01-17 Immatics Biotechnologies Gmbh Dual specificity polypeptide molecule
CA3070272A1 (en) 2017-07-20 2019-01-24 Aptevo Research And Development Llc Antigen binding proteins binding to 5t4 and 4-1bb and related compositions and methods
ES2928576T3 (es) 2017-09-08 2022-11-21 Amgen Inc Inhibidores de KRAS G12C y métodos de uso de los mismos
CN111094356B (zh) * 2017-09-25 2022-11-01 苏州丁孚靶点生物技术有限公司 一种蛋白质异二聚体及其用途
IL315737A (en) 2017-10-13 2024-11-01 Harpoon Therapeutics Inc B-cell maturation antigen-binding proteins
JP7084990B2 (ja) 2017-10-13 2022-06-15 ハープーン セラピューティクス，インク． 三重特異性タンパク質と使用方法
WO2019077092A1 (en) 2017-10-20 2019-04-25 F. Hoffmann-La Roche Ag METHOD FOR GENERATING MULTISPECIFIC ANTIBODIES FROM MONOSPECIFIC ANTIBODIES
RU2020116579A (ru) 2017-10-25 2021-11-25 Новартис Аг Способы получения клеток, экспрессирующих химерный антигенный рецептор
CN109721657B (zh) * 2017-10-27 2021-11-02 北京比洋生物技术有限公司 阻断pd-1/pd-l1信号传导途径且活化t细胞的融合蛋白及其用途
KR102831164B1 (ko) 2017-10-30 2025-07-07 에프. 호프만-라 로슈 아게 단일특이적 항체로부터 다중특이적 항체의 생체내 생성 방법
CN111246884A (zh) 2017-11-01 2020-06-05 豪夫迈·罗氏有限公司 新颖的含有tnf家族配体三聚体的抗原结合分子
MY205342A (en) 2017-11-01 2024-10-16 Hoffmann La Roche Bispecific 2+1 contorsbodies
KR20200074997A (ko) 2017-11-01 2020-06-25 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 B-세포 성숙 항원에 특이적인 항체 및 키메릭 항원 수용체
JP2021500930A (ja) 2017-11-01 2021-01-14 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ Ｃｏｍｐボディ−多価標的結合物質
MX2020004196A (es) 2017-11-01 2020-11-09 Hoffmann La Roche Trifab-contorsbody.
WO2019089858A2 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods of assessing or monitoring a response to a cell therapy
KR102845789B1 (ko) 2017-11-01 2025-08-14 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 B 세포 성숙 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
KR20200085828A (ko) 2017-11-08 2020-07-15 젠코어 인코포레이티드 신규의 항-pd-1 서열을 사용한 이중특이적 및 단일특이적 항체
JP2021503458A (ja) 2017-11-17 2021-02-12 ノバルティス アーゲー 新規のジヒドロイソキサゾール化合物及びｂ型肝炎治療のためのそれらの使用
CN111989106A (zh) 2017-12-01 2020-11-24 朱诺治疗学股份有限公司 基因工程化细胞的给药和调节方法
US10946068B2 (en) 2017-12-06 2021-03-16 Pandion Operations, Inc. IL-2 muteins and uses thereof
US10174091B1 (en) 2017-12-06 2019-01-08 Pandion Therapeutics, Inc. IL-2 muteins
WO2019118937A1 (en) 2017-12-15 2019-06-20 Juno Therapeutics, Inc. Anti-cct5 binding molecules and methods of use thereof
EP3728323A4 (en) 2017-12-19 2022-01-26 Surrozen Operating, Inc. ANTI-FRIZZLED ANTIBODIES AND METHODS OF USE
WO2019126398A1 (en) 2017-12-19 2019-06-27 Surrozen, Inc. Wnt surrogate molecules and uses thereof
EP3728302A1 (en) 2017-12-19 2020-10-28 Xencor, Inc. Engineered il-2 fc fusion proteins
AU2018393076B2 (en) 2017-12-19 2025-11-20 Surrozen Operating, Inc. Anti-LRP5/6 antibodies and methods of use
WO2019123285A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Novartis Ag Fused tricyclic pyrazolo-dihydropyrazinyl-pyridone compounds as antivirals
EP3728317A2 (en) 2017-12-21 2020-10-28 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies binding to hla-a2/wt1
EP3728327A1 (en) 2017-12-22 2020-10-28 F. Hoffmann-La Roche AG Depletion of light chain mispaired antibody variants by hydrophobic interaction chromatography
WO2019129137A1 (zh) 2017-12-27 2019-07-04 信达生物制药(苏州)有限公司 抗lag-3抗体及其用途
CN109970856B (zh) 2017-12-27 2022-08-23 信达生物制药(苏州)有限公司 抗lag-3抗体及其用途
WO2019136311A2 (en) * 2018-01-05 2019-07-11 Biograph 55, Inc. Compositions and methods for cancer immunotherapy
US12247060B2 (en) 2018-01-09 2025-03-11 Marengo Therapeutics, Inc. Calreticulin binding constructs and engineered T cells for the treatment of diseases
US12398209B2 (en) 2018-01-22 2025-08-26 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating cancers with antagonistic anti-PD-1 antibodies
CN119770646A (zh) 2018-02-06 2025-04-08 豪夫迈·罗氏有限公司 眼科疾病的治疗
CN118772287A (zh) 2018-02-08 2024-10-15 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗原结合分子和使用方法
TWI829667B (zh) 2018-02-09 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合gprc5d之抗體
US20200407365A1 (en) 2018-02-28 2020-12-31 Novartis Ag Indole-2-carbonyl compounds and their use for the treatment of hepatitis b
EP3773911A2 (en) 2018-04-04 2021-02-17 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
AR114789A1 (es) 2018-04-18 2020-10-14 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-hla-g y uso de los mismos
MX2020010910A (es) 2018-04-18 2021-02-09 Xencor Inc Proteinas de fusion heterodimericas dirigidas a pd-1 que contienen proteinas de fusion il-15 / il-15ra fc y dominios de union al antigeno pd-1 y usos de los mismos.
KR20210003814A (ko) 2018-04-18 2021-01-12 젠코어 인코포레이티드 IL-15/IL-15Rα Fc-융합 단백질 및 TIM-3 항원 결합 도메인을 함유하는 TIM-3 표적화 이종이량체 융합 단백질
AR115052A1 (es) 2018-04-18 2020-11-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos multiespecíficos y utilización de los mismos
WO2019210153A1 (en) 2018-04-27 2019-10-31 Novartis Ag Car t cell therapies with enhanced efficacy
EP3788369A1 (en) 2018-05-01 2021-03-10 Novartis Ag Biomarkers for evaluating car-t cells to predict clinical outcome
CA3099118A1 (en) 2018-05-04 2019-11-07 Amgen Inc. Kras g12c inhibitors and methods of using the same
MA52501A (fr) 2018-05-04 2021-03-10 Amgen Inc Inhibiteurs de kras g12c et leurs procédés d'utilisation
EP3790886B1 (en) 2018-05-10 2024-06-26 Amgen Inc. Kras g12c inhibitors for the treatment of cancer
WO2019222283A1 (en) 2018-05-14 2019-11-21 Harpoon Therapeutics, Inc. Binding moiety for conditional activation of immunoglobulin molecules
EP3801769A1 (en) 2018-05-25 2021-04-14 Novartis AG Combination therapy with chimeric antigen receptor (car) therapies
KR20210014684A (ko) 2018-05-30 2021-02-09 데비오팜 인터네셔날 에스 에이 항-cd37 면역접합체 투약 용법
EP3802535B1 (en) 2018-06-01 2022-12-14 Amgen, Inc Kras g12c inhibitors and methods of using the same
KR20250151605A (ko) 2018-06-01 2025-10-21 노파르티스 아게 Bcma에 대한 결합 분자 및 이의 용도
CA3102256A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Novartis Ag Dosing of a bispecific antibody that bind cd123 and cd3
CA3099799A1 (en) 2018-06-11 2019-12-19 Amgen Inc. Kras g12c inhibitors for treating cancer
MA51848A (fr) 2018-06-12 2021-04-21 Amgen Inc Inhibiteurs de kras g12c et leurs procédés d'utilisation
JP7438988B2 (ja) 2018-06-13 2024-02-27 ノバルティス アーゲー Ｂｃｍａキメラ抗原受容体及びその使用
KR20210009421A (ko) 2018-06-14 2021-01-26 바이오아트라, 엘엘씨 다중 특이적 항체 구조체
AU2019290192A1 (en) * 2018-06-21 2021-01-07 Shattuck Labs, Inc. Heterodimeric proteins and uses thereof
WO2020004490A1 (ja) 2018-06-26 2020-01-02 協和キリン株式会社 コンドロイチン硫酸プロテオグリカン－５に結合する抗体
CN112424358B (zh) 2018-06-26 2025-07-01 协和麒麟株式会社 与细胞粘附分子3结合的抗体
EP3813864A4 (en) 2018-06-29 2022-07-20 Gensun Biopharma Inc. Antitumor antagonists
CA3105448A1 (en) 2018-07-03 2020-01-09 Elstar Therapeutics, Inc. Anti-tcr antibody molecules and uses thereof
IL280875B2 (en) 2018-08-31 2024-12-01 Regeneron Pharma Dosing strategy that mitigates cytokine release syndrome for cd3/c20 bispecific antibodies
EP3844265A2 (en) 2018-08-31 2021-07-07 Novartis AG Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
EP3844267B1 (en) 2018-08-31 2025-06-25 Novartis AG Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
AU2019336197A1 (en) 2018-09-07 2021-02-18 Pfizer Inc. Anti-avb8 antibodies and compositions and uses thereof
WO2020053654A1 (en) 2018-09-12 2020-03-19 Novartis Ag Antiviral pyridopyrazinedione compounds
US12195544B2 (en) 2018-09-21 2025-01-14 Harpoon Therapeutics, Inc. EGFR binding proteins and methods of use
CN113286817B (zh) 2018-09-25 2025-01-28 哈普恩治疗公司 Dll3结合蛋白及使用方法
WO2020069405A1 (en) 2018-09-28 2020-04-02 Novartis Ag Cd22 chimeric antigen receptor (car) therapies
US20210347851A1 (en) 2018-09-28 2021-11-11 Novartis Ag Cd19 chimeric antigen receptor (car) and cd22 car combination therapies
IL305106B2 (en) 2018-09-29 2025-08-01 Novartis Ag Process of manufacture of a compound for inhibiting the activity of shp2
MX2021003765A (es) 2018-10-03 2021-07-15 Xencor Inc Proteínas il-12 de fusión a fc heterodimérico.
KR102467349B1 (ko) 2018-10-29 2022-11-16 에프. 호프만-라 로슈 아게 항체 제형
MX2021005024A (es) 2018-11-01 2021-07-21 Juno Therapeutics Inc Metodos de tratamiento que utilizan receptores de antigenos quimericos especificos para antigeno de maduracion de celulas b.
CA3116413A1 (en) 2018-11-01 2020-05-07 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for g protein-coupled receptor class c group 5 member d (gprc5d)
JP7516029B2 (ja) 2018-11-16 2024-07-16 アムジエン・インコーポレーテツド Ｋｒａｓ ｇ１２ｃ阻害剤化合物の重要な中間体の改良合成法
SG11202105084VA (en) 2018-11-16 2021-06-29 Juno Therapeutics Inc Methods of dosing engineered t cells for the treatment of b cell malignancies
JP7377679B2 (ja) 2018-11-19 2023-11-10 アムジエン・インコーポレーテツド がん治療のためのｋｒａｓｇ１２ｃ阻害剤及び１種以上の薬学的に活性な追加の薬剤を含む併用療法
US11053226B2 (en) 2018-11-19 2021-07-06 Amgen Inc. KRAS G12C inhibitors and methods of using the same
FI3886875T3 (fi) 2018-11-30 2024-07-23 Juno Therapeutics Inc Adoptiivista soluterapiaa käyttäviä hoitomenetelmiä
CA3121699A1 (en) 2018-12-05 2020-06-11 Morphosys Ag Multispecific antigen-binding molecules
AU2019401495B2 (en) 2018-12-20 2025-06-26 Amgen Inc. Heteroaryl amides useful as KIF18A inhibitors
MA54546A (fr) 2018-12-20 2022-03-30 Amgen Inc Amides d'hétéroaryle utiles en tant qu'inhibiteurs de kif18a
MA54550A (fr) 2018-12-20 2022-03-30 Amgen Inc Inhibiteurs de kif18a
EA202191730A1 (ru) 2018-12-20 2021-08-24 Эмджен Инк. Ингибиторы kif18a
TWI829831B (zh) 2018-12-21 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合cd3之抗體
CN113795508A (zh) 2018-12-24 2021-12-14 赛诺菲 具有突变型Fab结构域的多特异性结合蛋白
CN113412123A (zh) 2018-12-28 2021-09-17 豪夫迈·罗氏有限公司 用于免疫应答增强的患者的治疗性用途的肽-mhc-i-抗体融合蛋白
CN111378045B (zh) * 2018-12-28 2022-08-02 长春金赛药业有限责任公司 二价双特异性抗体及其制备方法、编码基因、宿主细胞、组合物
US20220089752A1 (en) * 2019-01-14 2022-03-24 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for modulating cellular internalization
CN113365660A (zh) 2019-01-29 2021-09-07 朱诺治疗学股份有限公司 对受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)具特异性的抗体及嵌合抗原受体
GB2597851B (en) 2019-02-21 2024-05-29 Marengo Therapeutics Inc Antibody molecules that bind to NKP30 and uses thereof
EP3927744A1 (en) 2019-02-21 2021-12-29 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to t cell related cancer cells and uses thereof
CN114127112A (zh) * 2019-02-21 2022-03-01 马伦戈治疗公司 与t细胞结合的多功能分子及其治疗自身免疫性病症的用途
CN113727758A (zh) 2019-03-01 2021-11-30 锐新医药公司 双环杂环基化合物及其用途
KR20210146287A (ko) 2019-03-01 2021-12-03 레볼루션 메디슨즈, 인크. 이환식 헤테로아릴 화합물 및 이의 용도
AU2020232605A1 (en) 2019-03-01 2021-10-21 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind ENPP3 and CD3
WO2020200941A1 (en) 2019-03-29 2020-10-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Spr-based binding assay for the functional analysis of multivalent molecules
CN113677701B (zh) 2019-03-29 2025-02-07 豪夫迈·罗氏有限公司 产生亲合结合多特异性抗体的方法
WO2020201527A1 (en) * 2019-04-04 2020-10-08 Umc Utrecht Holding B.V. Modified immune receptor constructs
US20220168389A1 (en) 2019-04-12 2022-06-02 Novartis Ag Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
EP3959320A1 (en) 2019-04-24 2022-03-02 Novartis AG Compositions and methods for selective protein degradation
WO2020216879A1 (en) 2019-04-25 2020-10-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Therapeutic multispecific polypeptides activated by polypeptide chain exchange
CA3133898A1 (en) 2019-04-25 2020-10-29 Ulrich Brinkmann Activatable therapeutic multispecific polypeptides with extended half-life
CA3132275A1 (en) 2019-04-25 2020-10-29 Ulrich Brinkmann Generation of antibody-derived polypeptides by polypeptide chain exchange
EP3969907B1 (en) 2019-05-13 2025-09-24 F. Hoffmann-La Roche AG Interference-suppressed pharmacokinetic immunoassay
EP3738593A1 (en) 2019-05-14 2020-11-18 Amgen, Inc Dosing of kras inhibitor for treatment of cancers
IL288024B2 (en) 2019-05-14 2025-12-01 Provention Bio Inc Methods and compositions for preventing type
US12516128B2 (en) 2019-05-14 2026-01-06 Harpoon Therapeutics, Inc. EpCAM binding proteins and methods of use
TW202110885A (zh) 2019-05-20 2021-03-16 美商潘迪恩治療公司 靶向ＭＡｄＣＡＭ之免疫耐受性
TWI905099B (zh) 2019-05-21 2025-11-21 瑞士商諾華公司 Cd19 結合分子及其用途
EP3972973A1 (en) 2019-05-21 2022-03-30 Amgen Inc. Solid state forms
WO2020243315A1 (en) * 2019-05-29 2020-12-03 Cue Biopharma, Inc. Multimeric t-cell modulatory polypeptides and methods of use thereof
CN114206926B (zh) * 2019-06-10 2022-06-17 山东博安生物技术股份有限公司 抗PDL1和TGFβ的双功能融合蛋白及其用途
MX2021015536A (es) 2019-06-19 2022-02-10 Hoffmann La Roche Metodo para la generacion de una celula que expresa proteina mediante integracion dirigida usando acido ribonucleico mensajero (arnm) de cre.
HRP20250475T1 (hr) 2019-06-26 2025-06-06 F. Hoffmann - La Roche Ag Stanične linije sisavaca s deaktivacijom gena sirt-1
WO2020263312A1 (en) 2019-06-28 2020-12-30 Gensun Biopharma, Inc. ANTITUMOR ANTAGONIST CONSISTING OF A MUTATED TGFβ1 - RII EXTRACELLULAR DOMAIN AND AN IMMUNOGLOBULIN SCAFFOLD
WO2021001289A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Immunoconjugates comprising a mutant interleukin-2 and an anti-cd8 antibody
CN110327458B (zh) * 2019-07-09 2022-02-25 上海交通大学医学院 自分泌vegfb在t细胞代谢与功能以及肿瘤免疫治疗中的应用
AR119393A1 (es) 2019-07-15 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a nkg2d
SG11202112491WA (en) 2019-07-31 2021-12-30 Hoffmann La Roche Antibodies binding to gprc5d
WO2021018925A1 (en) 2019-07-31 2021-02-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to gprc5d
JP7640521B2 (ja) 2019-08-02 2025-03-05 アムジエン・インコーポレーテツド Ｋｉｆ１８ａ阻害剤として有用なヘテロアリールアミド
CN114391012B (zh) 2019-08-02 2025-10-31 美国安进公司 作为kif18a抑制剂的吡啶衍生物
ES3051918T3 (en) 2019-08-02 2025-12-30 Amgen Inc Kif18a inhibitors
WO2021026098A1 (en) 2019-08-02 2021-02-11 Amgen Inc. Kif18a inhibitors
US20220275089A1 (en) * 2019-08-02 2022-09-01 Akeso Pharmaceuticals, Inc. Anti-ctla4-anti-pd-1 bispecific antibody and uses thereof
EP4013494A1 (en) 2019-08-12 2022-06-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Macrophage stimulating 1 receptor (mst1r) variants and uses thereof
AU2020329217A1 (en) 2019-08-12 2022-07-28 Aptevo Research And Development Llc 4-1BB and OX40 binding proteins and related compositions and methods, antibodies against 4-1BB, antibodies against OX40
MX2022003507A (es) * 2019-09-25 2022-04-25 Univ Stuttgart Modulos de union que comprenden dominios ehd2 modificados.
CN114667285B (zh) 2019-09-26 2025-08-08 诺华股份有限公司 抗病毒吡唑并吡啶酮化合物
KR20220070215A (ko) * 2019-10-01 2022-05-30 엡실로겐 리미티드 하이브리드 항체
WO2021073626A1 (zh) * 2019-10-17 2021-04-22 北京门罗生物科技有限公司 嵌合抗原受体和其中表达有嵌合抗原受体的t细胞
EP4048671B1 (en) 2019-10-24 2026-03-18 Amgen Inc. Pyridopyrimidine derivatives useful as kras g12c and kras g12d inhibitors in the treatment of cancer
KR20220109407A (ko) 2019-11-04 2022-08-04 레볼루션 메디슨즈, 인크. Ras 억제제
EP4054719B1 (en) 2019-11-04 2026-02-11 Revolution Medicines, Inc. Ras inhibitors
JP7823816B2 (ja) 2019-11-04 2026-03-04 レヴォリューション・メディスンズ，インコーポレイテッド Ｒａｓ阻害剤
BR112022008858A2 (pt) 2019-11-08 2022-09-06 Revolution Medicines Inc Composto, composição farmacêutica e métodos para inibir sos1 em um sujeito, para inibir a interação de sos1 e uma proteína, para tratar ou prevenir uma doença e para tratar ou prevenir câncer
JP2023501528A (ja) 2019-11-14 2023-01-18 アムジエン・インコーポレーテツド Ｋｒａｓ ｇ１２ｃ阻害剤化合物の改善された合成
WO2021097207A1 (en) 2019-11-14 2021-05-20 Amgen Inc. Improved synthesis of kras g12c inhibitor compound
KR20220104033A (ko) * 2019-11-25 2022-07-25 아케소 바이오파마, 인크. 항-pd-1-항-vegfa 이중특이항체, 약학 조성물 및 이의 용도
PT4065585T (pt) 2019-11-25 2025-09-30 Alkermes Inc Compostos macrocíclicos substituídos e métodos de tratamento relacionados
CN114761037A (zh) 2019-11-26 2022-07-15 诺华股份有限公司 结合bcma和cd19的嵌合抗原受体及其用途
IL292924A (en) 2019-11-26 2022-07-01 Novartis Ag Chimeric antigen receptors cd19 and cd22 and their uses
WO2021108683A1 (en) 2019-11-27 2021-06-03 Revolution Medicines, Inc. Covalent ras inhibitors and uses thereof
PE20221511A1 (es) 2019-12-13 2022-10-04 Genentech Inc Anticuerpos anti-ly6g6d y metodos de uso
KR20220100963A (ko) 2019-12-18 2022-07-18 에프. 호프만-라 로슈 아게 Hla-a2/mage-a4에 결합하는 항체
BR112022012010A2 (pt) 2019-12-18 2022-08-30 Hoffmann La Roche Anticorpos, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, formulação farmacêutica, uso do anticorpo, método de produção de um anticorpo, método de tratamento de um indivíduo que tem câncer e método de tratamento de um indivíduo que tem uma doença inflamatória ou autoimune
US11913945B2 (en) 2020-01-02 2024-02-27 Hoffmann-La Roche Inc. Method for determining the amount of a therapeutic antibody in the brain
EP4084823A4 (en) 2020-01-03 2024-05-15 Marengo Therapeutics, Inc. ANTI-TCR ANTIBODY MOLECULES AND THEIR USES
CN114929279A (zh) 2020-01-07 2022-08-19 锐新医药公司 Shp2抑制剂给药和治疗癌症的方法
WO2021146328A1 (en) 2020-01-13 2021-07-22 Aptevo Research And Development Llc Formulations for protein therapeutics
JP2023512446A (ja) 2020-01-13 2023-03-27 アプティーボ リサーチ アンド デベロップメント エルエルシー 治療的タンパク質の薬物送達システム構成要素への吸着を防ぐ方法および組成物
JP2023511331A (ja) * 2020-01-16 2023-03-17 カイロス セラピューティクス， インコーポレイテッド 骨髄腫細胞および卵巣がん細胞に特異的なヒト化抗体
CA3165045A1 (en) * 2020-01-23 2021-07-29 Adagene Ag Heterodimeric proteins with fc mutations
EP4104187A1 (en) 2020-02-14 2022-12-21 Novartis AG Method of predicting response to chimeric antigen receptor therapy
WO2021168079A1 (en) 2020-02-21 2021-08-26 Pandion Operations, Inc. Tissue targeted immunotolerance with a cd39 effector
IL295448A (en) 2020-02-21 2022-10-01 Harpoon Therapeutics Inc flt3 binding proteins and methods of use
BR112022016633A2 (pt) 2020-02-27 2022-12-13 Novartis Ag Métodos para produzir células que expressam receptor de antígeno quimérico
WO2021171264A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 Novartis Ag Dosing of a bispecific antibody that binds cd123 and cd3
CA3172201A1 (en) 2020-03-18 2021-09-23 Arthur Tinkelenberg Anti-ceramide antibodies
EP4126927A1 (en) * 2020-03-27 2023-02-08 Biotest AG Protein comprising at least one regulatory t cell activating epitope
BR112022020333A2 (pt) 2020-04-10 2022-11-22 Juno Therapeutics Inc Métodos e usos relacionados à terapia celular projetada com um receptor de antígeno quimérico que alveja o antígeno de maturação de células b
CN115485028A (zh) 2020-04-15 2022-12-16 豪夫迈·罗氏有限公司 免疫缀合物
US20230172923A1 (en) 2020-04-30 2023-06-08 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating cytokine-related adverse events
CA3176436A1 (en) 2020-05-08 2021-11-11 Tahamtan Ahmadi Bispecific antibodies against cd3 and cd20
US20230181712A1 (en) 2020-05-11 2023-06-15 Hoffmann-La Roche Inc. Combination therapy with modified pbmcs and an immunoconjugate
US11919956B2 (en) 2020-05-14 2024-03-05 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (PSMA) and CD3
US12006366B2 (en) 2020-06-11 2024-06-11 Provention Bio, Inc. Methods and compositions for preventing type 1 diabetes
CA3183032A1 (en) 2020-06-18 2021-12-23 Mallika Singh Methods for delaying, preventing, and treating acquired resistance to ras inhibitors
CN111675763B (zh) * 2020-06-18 2024-02-09 美国德州精准药靶有限公司 抗met和ron双特异性抗体及其抗体-药物偶联物的制备和应用
KR20230025665A (ko) 2020-06-19 2023-02-22 에프. 호프만-라 로슈 아게 Cd3에 결합하는 항체
WO2021255146A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3 and cea
TWI852680B (zh) 2020-06-19 2024-08-11 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 與 cd3 及 cd19 結合之抗體
AU2021291005A1 (en) 2020-06-19 2023-01-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to CD3 and FolR1
BR112022025250A2 (pt) 2020-06-19 2022-12-27 Hoffmann La Roche Moléculas, um ou mais polinucleotídeos, um ou mais vetores, célula hospedeira, métodos para produzir uma molécula e induzir a lise de uma célula, composição farmacêutica, uso da molécula, métodos de tratamento de uma doença e invenção
JP7821773B2 (ja) 2020-07-08 2026-02-27 アストラゼネカ・アクチエボラーグ タンパク質発現を改善する方法
WO2022036495A1 (en) 2020-08-17 2022-02-24 Utc Therapeutics Inc. Lymphocytes-antigen presenting cells co-stimulators and uses thereof
CN116368155A (zh) * 2020-08-19 2023-06-30 潘迪恩运营公司 多互补位抗pd-1抗体及其用途
JP7773528B2 (ja) 2020-08-19 2025-11-19 ゼンコア インコーポレイテッド 抗ｃｄ２８組成物
WO2022042576A1 (zh) * 2020-08-27 2022-03-03 盛禾(中国)生物制药有限公司 一种多功能融合蛋白及其用途
MX2023002248A (es) 2020-09-03 2023-05-16 Revolution Medicines Inc Uso de inhibidores de sos1 para tratar neoplasias malignas con mutaciones de shp2.
CN116406293A (zh) 2020-09-10 2023-07-07 健玛保 用于治疗滤泡性淋巴瘤的联合疗法中的针对cd3和cd20的双特异性抗体
JP2023541858A (ja) 2020-09-10 2023-10-04 ジェンマブ エー／エス 慢性リンパ球性白血病を治療するためのｃｄ３及びｃｄ２０に対する二重特異性抗体
JP2023542289A (ja) 2020-09-10 2023-10-06 ジェンマブ エー／エス 濾胞性リンパ腫を治療するための併用療法におけるｃｄ３及びｃｄ２０に対する二重特異性抗体
JP2023542291A (ja) 2020-09-10 2023-10-06 ジェンマブ エー／エス びまん性大細胞型ｂ細胞リンパ腫を治療するための併用療法におけるｃｄ３及びｃｄ２０に対する二重特異性抗体
US20240034812A1 (en) 2020-09-10 2024-02-01 Genmab A/S Bispecific antibody against cd3 and cd20 in combination therapy for treating diffuse large b-cell lymphoma
CR20230165A (es) 2020-09-15 2023-06-02 Revolution Medicines Inc Derivados indólicos como inhibidores de ras en el tratamiento del cáncer
US20220154207A1 (en) 2020-09-24 2022-05-19 Hoffmann-La Roche Inc. Mammalian cell lines with gene knockout
IL302400A (en) 2020-11-04 2023-06-01 Genentech Inc Subcutaneous dosing of bispecific anti-CD20/anti-CD3 antibodies
CA3196539A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Chi-Chung Li Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
CA3196191A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Chi-Chung Li Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and anti-cd79b antibody drug conjugates
WO2022100613A1 (zh) 2020-11-10 2022-05-19 上海齐鲁制药研究中心有限公司 针对密蛋白18a2和cd3的双特异性抗体及其应用
MX2023005609A (es) 2020-11-13 2023-05-29 Novartis Ag Terapias de combinacion con celulas que expresan receptores quimericos para el antigeno (car).
US20240301086A1 (en) 2020-12-01 2024-09-12 Aptevo Research And Development Llc Tumor-associated antigens and cd3-binding proteins, related compositions, and methods
WO2022117065A1 (zh) * 2020-12-03 2022-06-09 江苏恒瑞医药股份有限公司 多特异性抗原结合蛋白
CA3204091A1 (en) 2020-12-08 2022-06-16 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Eganelisib for use in the treatment of pd-l1 negative cancer
EP4263609A1 (en) 2020-12-17 2023-10-25 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-hla-g antibodies and use thereof
EP4263595A1 (en) 2020-12-18 2023-10-25 F. Hoffmann-La Roche AG Precursor proteins and kit for targeted therapy
US11760747B2 (en) 2020-12-21 2023-09-19 Alkermes, Inc. Substituted piperidino compounds and related methods of treatment
WO2022136140A1 (en) 2020-12-22 2022-06-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Oligonucleotides targeting xbp1
CN117396472A (zh) 2020-12-22 2024-01-12 上海齐鲁锐格医药研发有限公司 Sos1抑制剂及其用途
MX2023007846A (es) 2021-01-06 2023-07-07 Hoffmann La Roche Tratamiento conjunto que usa un anticuerpo biespecifico contra pd1-lag3 y un anticuerpo biespecifico de linfocitos t cd20.
WO2022148853A1 (en) 2021-01-11 2022-07-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Immunoconjugates
JP2024508746A (ja) 2021-02-17 2024-02-28 アプティーボ リサーチ アンド デベロップメント エルエルシー ４－１ｂｂおよびｏｘ４０結合タンパク質を含む組成物および使用方法
EP4295154A1 (en) 2021-02-18 2023-12-27 F. Hoffmann-La Roche AG Method for resolving complex, multistep antibody interactions
CA3212665A1 (en) 2021-03-09 2022-09-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6
KR20230154311A (ko) 2021-03-10 2023-11-07 젠코어 인코포레이티드 Cd3 및 gpc3에 결합하는 이종이량체 항체
WO2022206872A1 (zh) 2021-03-31 2022-10-06 江苏恒瑞医药股份有限公司 截短的taci多肽及其融合蛋白和用途
AU2021443318A1 (en) 2021-04-30 2023-09-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for combination treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and anti-cd79b antibody drug conjugate
EP4329800A1 (en) 2021-04-30 2024-03-06 F. Hoffmann-La Roche AG Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody
AU2022270361A1 (en) 2021-05-05 2023-11-16 Immatics Biotechnologies Gmbh Antigen binding proteins specifically binding prame
WO2022235866A1 (en) 2021-05-05 2022-11-10 Revolution Medicines, Inc. Covalent ras inhibitors and uses thereof
IL308193A (en) 2021-05-05 2024-01-01 Revolution Medicines Inc RAS inhibitors
CR20230558A (es) 2021-05-05 2024-01-24 Revolution Medicines Inc Inhibidores de ras para el tratamiento del cáncer
CA3218542A1 (en) 2021-05-12 2022-11-17 Hua Ying Antigen binding molecule specifically binding to rankl and ngf, and medical use thereof
WO2022241235A1 (en) 2021-05-14 2022-11-17 Genentech, Inc. Methods for treatment of cd20-positive proliferative disorder with mosunetuzumab and polatuzumab vedotin
MX2023013307A (es) 2021-05-14 2023-12-04 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co Ltd Molecula de union a antigeno.
JP2024519964A (ja) 2021-05-21 2024-05-21 アプティーボ リサーチ アンド デベロップメント エルエルシー タンパク質治療薬のための投薬レジメン
MX2023013851A (es) 2021-05-24 2023-12-08 Provention Bio Inc Metodos para el tratamiento de diabetes tipo 1.
WO2022254337A1 (en) 2021-06-01 2022-12-08 Novartis Ag Cd19 and cd22 chimeric antigen receptors and uses thereof
BR112023022097A2 (pt) 2021-06-07 2023-12-19 Agonox Inc Cxcr5, pd-1 e icos expressando células t cd4 reativas de tumor e seu uso
AR126161A1 (es) 2021-06-17 2023-09-27 Boehringer Lngelheim Int Gmbh Moléculas de fijación triespecíficas novedosas
JP2024523034A (ja) 2021-06-18 2024-06-25 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 二重特異性抗ｃｃｌ２抗体
TW202309078A (zh) 2021-07-02 2023-03-01 美商建南德克公司 治療癌症之方法及組成物
CN117480180A (zh) 2021-07-14 2024-01-30 江苏恒瑞医药股份有限公司 特异性结合hgfr和egfr的抗原结合分子及其医药用途
AU2022315528A1 (en) 2021-07-22 2023-10-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterodimeric fc domain antibodies
CA3227537A1 (en) 2021-07-27 2023-02-02 Morphosys Ag Combinations of antigen binding molecules
CA3224180A1 (en) 2021-07-28 2023-02-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating cancer
CA3231180A1 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Redona Therapeutics, Inc. Papd5 and/or papd7 inhibiting 4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxylic acid derivatives
KR20240067092A (ko) 2021-09-23 2024-05-16 지앙수 헨그루이 파마슈티컬스 컴퍼니 리미티드 항-klb 항체 및 용도
AU2022353119A1 (en) * 2021-09-24 2024-04-11 Synergy Imt, Inc. Composition of recombinant antigen binding molecules and method of making and using thereof
EP4410841A4 (en) 2021-09-30 2025-08-13 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co Ltd ANTI-IL23 ANTIBODY FUSION PROTEIN AND USES THEREOF
AR127308A1 (es) 2021-10-08 2024-01-10 Revolution Medicines Inc Inhibidores ras
JP2024537335A (ja) 2021-10-14 2024-10-10 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 新規インターロイキン－７イムノコンジュゲート
WO2023062048A1 (en) 2021-10-14 2023-04-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Alternative pd1-il7v immunoconjugates for the treatment of cancer
IL312692A (en) 2021-11-16 2024-07-01 Genentech Inc Methods and compositions for the treatment of systemic lupus erythematosus (SLE) with musontuzumab
EP4437344A1 (en) 2021-11-25 2024-10-02 F. Hoffmann-La Roche AG Quantification of low amounts of antibody sideproducts
AR127887A1 (es) 2021-12-10 2024-03-06 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3 y plap
JP2025500878A (ja) 2021-12-17 2025-01-15 ジェンザイム・コーポレーション Ｓｈｐ２阻害剤としてのピラゾロピラジン化合物
CN115490771A (zh) * 2021-12-24 2022-12-20 合肥天港免疫药物有限公司 重组抗体及其应用
WO2023135519A1 (en) 2022-01-13 2023-07-20 Astrazeneca Ab Methods of improving protein expression
CN118574855A (zh) 2022-02-07 2024-08-30 江苏恒瑞医药股份有限公司 特异性结合psma和cd3的抗原结合分子及其医药用途
CN118510815A (zh) 2022-02-11 2024-08-16 江苏恒瑞医药股份有限公司 免疫缀合物及其用途
EP4227307A1 (en) 2022-02-11 2023-08-16 Genzyme Corporation Pyrazolopyrazine compounds as shp2 inhibitors
TWI864587B (zh) 2022-02-14 2024-12-01 美商基利科學股份有限公司 抗病毒吡唑并吡啶酮化合物
IL314883A (en) 2022-03-07 2024-10-01 Amgen Inc A process for preparing 4-methyl-2-propan-2-yl-pyridine-3-carbonitrile
CN119136806A (zh) 2022-03-08 2024-12-13 锐新医药公司 用于治疗免疫难治性肺癌的方法
US20250215083A1 (en) 2022-03-14 2025-07-03 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. Antigen-binding molecule specifically binding to gprc5d and cd3 and medical use thereof
MX2024011468A (es) 2022-03-23 2024-09-25 Hoffmann La Roche Tratamiento conjunto de un anticuerpo biespecifico anti-cd20/anti-cd3 y quimioterapia.
WO2023201291A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Genentech, Inc. Pharmaceutical compositions of mosunetuzumab and methods of use
AU2023251832A1 (en) 2022-04-13 2024-10-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical compositions of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and methods of use
JP2025513335A (ja) 2022-04-19 2025-04-24 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 改良された産生細胞
EP4532526A1 (en) 2022-06-03 2025-04-09 F. Hoffmann-La Roche AG Improved production cells
WO2023240263A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Revolution Medicines, Inc. Macrocyclic ras inhibitors
US20250381272A1 (en) 2022-06-22 2025-12-18 Juno Therapeutics, Inc. Treatment methods for second line therapy of cd19-targeted car t cells
CN119256017A (zh) 2022-06-23 2025-01-03 江苏恒瑞医药股份有限公司 特异性结合dll3和cd3的抗原结合分子及其医药用途
KR20250047766A (ko) 2022-08-05 2025-04-04 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Gprc5d 및 bcma에 특이적인 키메라 항원 수용체
TW202423970A (zh) 2022-10-10 2024-06-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 Ｇｐｒｃ５ｄ ｔｃｂ及ｃｄ３８抗體之組合療法
TW202423969A (zh) 2022-10-10 2024-06-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 Ｇｐｒｃ５ｄ ｔｃｂ及蛋白酶體抑制劑之組合療法
TW202430211A (zh) 2022-10-10 2024-08-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 Ｇｐｒｃ５ｄ ｔｃｂ及ｉｍｉｄ之組合療法
WO2024079069A1 (en) 2022-10-12 2024-04-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for classifying cells
PE20251879A1 (es) 2022-10-14 2025-07-22 Black Diamond Therapeutics Inc Metodos de tratamiento del cancer usando derivados de isoquinolina o 6-aza-quinolina
WO2024094017A1 (zh) 2022-11-01 2024-05-10 上海齐鲁制药研究中心有限公司 一种针对磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的双特异性抗体及其应用
WO2024100170A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to hla-a*02/foxp3
CN120187748A (zh) 2022-11-15 2025-06-20 豪夫迈·罗氏有限公司 抗原结合分子
JP2025537782A (ja) 2022-11-15 2025-11-20 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 活性化可能なエフェクタードメインを有する組換え結合タンパク質
WO2024114676A1 (zh) 2022-11-29 2024-06-06 江苏恒瑞医药股份有限公司 Cldn18.2/4-1bb结合蛋白及其医药用途
CN120712102A (zh) 2022-12-13 2025-09-26 朱诺治疗学股份有限公司 对baff-r和cd19具特异性的嵌合抗原受体及其方法和用途
JP2026501724A (ja) 2023-01-06 2026-01-16 アプティーボ リサーチ アンド デベロップメント エルエルシー 二重特異性ｐｄ－ｌ１及びｃｄ４０結合分子ならびにその使用
AU2024209384A1 (en) 2023-01-20 2025-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Recombinant fc domain - il2 variant polypeptides and combination therapy with membrane-anchored antigen binding polypeptides
JP2026505747A (ja) 2023-01-25 2026-02-18 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｃｓｆ１ｒおよびｃｄ３に結合する抗体
WO2024163009A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating urothelial bladder cancer
WO2024163494A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating non-small cell lung cancer and triple-negative breast cancer
WO2024175031A1 (zh) 2023-02-21 2024-08-29 江苏恒瑞医药股份有限公司 Il-36r结合蛋白及其医药用途
CN120826234A (zh) 2023-03-06 2025-10-21 豪夫迈·罗氏有限公司 抗EGFRvIII/抗CD3抗体与肿瘤靶向性4-1BB激动剂的组合疗法
EP4680635A1 (en) 2023-03-13 2026-01-21 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy employing a pd1-lag3 bispecific antibody and an hla-g t cell bispecific antibody
TW202440636A (zh) 2023-03-21 2024-10-16 美商傳記５５有限公司 Ｃｄ１９／ｃｄ３８多特異性抗體
AU2024241633A1 (en) 2023-03-30 2025-11-06 Revolution Medicines, Inc. Compositions for inducing ras gtp hydrolysis and uses thereof
WO2024206820A1 (en) * 2023-03-30 2024-10-03 Dna Twopointo, Inc. Fc engineering for heterodimeric antibody format
WO2024208777A1 (en) 2023-04-03 2024-10-10 F. Hoffmann-La Roche Ag All-in-one agonistic antibodies
WO2024208776A1 (en) 2023-04-03 2024-10-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic split antibodies
WO2024211663A1 (en) 2023-04-07 2024-10-10 Revolution Medicines, Inc. Condensed macrocyclic compounds as ras inhibitors
PE20260039A1 (es) 2023-04-07 2026-01-09 Revolution Medicines Inc Inhibidores macrociclicos de ras
CN121175072A (zh) 2023-04-11 2025-12-19 浙江博锐生物制药有限公司 抗ror1抗体及其药物偶联物
TW202448897A (zh) 2023-04-14 2024-12-16 美商銳新醫藥公司 Ｒａｓ抑制劑之結晶形式、含有其之組合物及其使用方法
CN121100123A (zh) 2023-04-14 2025-12-09 锐新医药公司 Ras抑制剂的结晶形式
WO2024229406A1 (en) 2023-05-04 2024-11-07 Revolution Medicines, Inc. Combination therapy for a ras related disease or disorder
AU2024269754A1 (en) 2023-05-08 2025-10-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Targeted interferon alpha fusion proteins and methods of use
IL324480A (en) 2023-05-15 2026-01-01 Genmab As Highly purified epcoritamab compositions
KR20260013467A (ko) 2023-05-15 2026-01-28 젠맵 에이/에스 Cd20 발현 b-세포 암을 치료하는 방법
TW202509065A (zh) 2023-05-16 2025-03-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 經ｐｄ－１調節之ｉｌ－２免疫結合物及其用途
WO2024263195A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Genentech, Inc. Methods for treatment of liver cancer
WO2024263904A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Genentech, Inc. Methods for treatment of liver cancer
US12351650B2 (en) 2023-06-30 2025-07-08 Genmab A/S Antibodies binding to fibroblast activation protein alpha and death receptor 4
KR20260033048A (ko) * 2023-07-03 2026-03-10 네오이뮨텍, 인코퍼레이티드 이종이합체 fc 분자 및 이의 용도
WO2025021838A1 (en) 2023-07-26 2025-01-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3
WO2025027511A1 (en) 2023-07-30 2025-02-06 Janssen Biotech, Inc. Molecules that bind to mutant calreticulin and uses thereof
US20250049810A1 (en) 2023-08-07 2025-02-13 Revolution Medicines, Inc. Methods of treating a ras protein-related disease or disorder
CN121666400A (zh) 2023-08-09 2026-03-13 豪夫迈·罗氏有限公司 单特异性和多特异性抗trem2抗体、其方法和用途
WO2025032069A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Mono and multispecific anti-trem2 antibodies, methods and uses thereof
CN121712801A (zh) 2023-08-14 2026-03-20 莫佛塞斯有限责任公司 包含空间位阻部分的CyCAT半体分子
WO2025042742A1 (en) 2023-08-18 2025-02-27 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising antibodies that bind bcma and cd3 and methods of treatment
WO2025059162A1 (en) 2023-09-11 2025-03-20 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Car-engager containing il-2 variants to enhance the functionality of car t cells
TW202530228A (zh) 2023-10-12 2025-08-01 美商銳新醫藥公司 Ｒａｓ抑制劑
WO2025082777A1 (en) 2023-10-17 2025-04-24 Morphosys Ag Dual-targeting of muc16 and mesothelin co-expressing tumor cells by functional complementation of cycat® halfbody molecules
CN117659172A (zh) * 2023-10-28 2024-03-08 郑州大学 抗PRV gD蛋白单克隆抗体、其制备方法及应用
WO2025125386A1 (en) 2023-12-14 2025-06-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies that bind to folr1 and methods of use
TW202542151A (zh) 2023-12-22 2025-11-01 美商銳格醫藥有限公司 Ｓｏｓ１抑制劑及其用途
WO2025181189A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3
WO2025202147A1 (en) 2024-03-27 2025-10-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Interleukin-7 immunoconjugates
WO2025219504A1 (en) 2024-04-19 2025-10-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Treatment of ophthalmologic diseases
WO2025237931A1 (en) 2024-05-15 2025-11-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Recombinant binding proteins with conditionally activatable t cell and nk cell recruiting effector domains
TW202547461A (zh) 2024-05-17 2025-12-16 美商銳新醫藥公司 Ｒａｓ抑制劑
WO2025255438A1 (en) 2024-06-07 2025-12-11 Revolution Medicines, Inc. Methods of treating a ras protein-related disease or disorder
WO2025265060A1 (en) 2024-06-21 2025-12-26 Revolution Medicines, Inc. Therapeutic compositions and methods for managing treatment-related effects
WO2026003224A2 (en) 2024-06-26 2026-01-02 Iomx Therapeutics Ag Bispecific antigen binding proteins (abp) targeting immune checkpoint molecules and both leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily b1 (lilrb1) and lilrb2; combinations and uses thereof
WO2026006747A1 (en) 2024-06-28 2026-01-02 Revolution Medicines, Inc. Ras inhibitors
WO2026015796A1 (en) 2024-07-12 2026-01-15 Revolution Medicines, Inc. Methods of treating a ras related disease or disorder
WO2026015801A1 (en) 2024-07-12 2026-01-15 Revolution Medicines, Inc. Methods of treating a ras related disease or disorder
WO2026015790A1 (en) 2024-07-12 2026-01-15 Revolution Medicines, Inc. Methods of treating a ras related disease or disorder
WO2026015825A1 (en) 2024-07-12 2026-01-15 Revolution Medicines, Inc. Use of ras inhibitor for treating pancreatic cancer
WO2026041568A1 (en) 2024-08-20 2026-02-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3 and dotam
WO2026044177A1 (en) 2024-08-23 2026-02-26 Janssen Biotech, Inc. Methods of treatment with gprc5d antibodies with enhanced effector function
WO2026050446A1 (en) 2024-08-29 2026-03-05 Revolution Medicines, Inc. Ras inhibitors
WO2026052654A1 (en) 2024-09-03 2026-03-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Cytokine receptor agonist
WO2026052652A1 (en) 2024-09-03 2026-03-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Cytokine receptor agonist

Family Cites Families (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
EP0206448B1 (en) 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
AU600575B2 (en) * 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
US6291161B1 (en) 1989-05-16 2001-09-18 Scripps Research Institute Method for tapping the immunological repertiore
US6291158B1 (en) 1989-05-16 2001-09-18 Scripps Research Institute Method for tapping the immunological repertoire
US5283173A (en) 1990-01-24 1994-02-01 The Research Foundation Of State University Of New York System to detect protein-protein interactions
PT1489097E (pt) 1994-01-11 2012-01-04 Dyax Corp Inibidores de plasmina humana derivados de domínios kunitz e ácidos nucleicos codificando os mesmos
US5731168A (en) * 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
GB9518220D0 (en) 1995-09-06 1995-11-08 Medical Res Council Checkpoint gene
US6133426A (en) 1997-02-21 2000-10-17 Genentech, Inc. Humanized anti-IL-8 monoclonal antibodies
DK1049787T3 (da) * 1998-01-23 2005-04-04 Vlaams Interuniv Inst Biotech Antistofderivater med flere anvendelsesmuligheder
AUPP221098A0 (en) 1998-03-06 1998-04-02 Diatech Pty Ltd V-like domain binding molecules
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
AU2001270609A1 (en) * 2000-06-30 2002-01-14 Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw Heterodimeric fusion proteins
DE10046960A1 (de) * 2000-09-22 2002-04-11 Roche Diagnostics Gmbh Verfahren zur Herstellung einer aktiven, heterodimeren AMW-RT in prokaryotischen Zellen
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7829084B2 (en) * 2001-01-17 2010-11-09 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding constructs and methods for use thereof
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
CA2433877C (en) 2001-01-17 2014-11-18 Aptevo Research And Development Llc Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
JP2008501621A (ja) 2003-05-31 2008-01-24 マイクロメット アクツィエン ゲゼルシャフト Ｂ細胞関連疾患を処置するための二重特異性抗ｃｄ３、抗ｃｄ１９抗体構築物を含む薬学的組成物
CA2550551C (en) * 2004-01-16 2013-10-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fusion polypeptides capable of activating receptors
US7276585B2 (en) * 2004-03-24 2007-10-02 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the Fc region
WO2005120557A2 (en) * 2004-05-13 2005-12-22 Imclone Systems Incorporated Inhibition of macrophage-stimulating protein receptor (ron)
JP2008512352A (ja) * 2004-07-17 2008-04-24 イムクローン システムズ インコーポレイティド 新規な四価の二重特異性抗体
US7393662B2 (en) 2004-09-03 2008-07-01 Centocor, Inc. Human EPO mimetic hinge core mimetibodies, compositions, methods and uses
KR20130105885A (ko) 2005-01-05 2013-09-26 에프-스타 비오테크놀로기쉐 포르슝스 운드 엔트비클룽스게스.엠.베.하. 상보성 결정부위와 다른 분자의 부위에서 처리된 결합성을 갖는 합성 면역글로불린 영역
WO2006074399A2 (en) * 2005-01-05 2006-07-13 Biogen Idec Ma Inc. Multispecific binding molecules comprising connecting peptides
GB0504767D0 (en) 2005-03-08 2005-04-13 Ares Trading Sa Lipocalin protein
US7759888B2 (en) 2005-04-15 2010-07-20 Hitachi, Ltd. AC motor controller
CN1891716B (zh) * 2005-07-08 2012-11-21 北京天广实生物技术股份有限公司 一种无丝裂原活性抗cd3小分子抗体的设计方法
TW200732350A (en) * 2005-10-21 2007-09-01 Amgen Inc Methods for generating monovalent IgG
WO2007095338A2 (en) * 2006-02-15 2007-08-23 Imclone Systems Incorporated Functional antibodies
EP1829895A1 (en) 2006-03-03 2007-09-05 f-star Biotechnologische Forschungs- und Entwicklungsges.m.b.H. Bispecific molecule binding TLR9 and CD32 and comprising a T cell epitope for treatment of allergies
GEP20135917B (en) * 2006-03-17 2013-09-10 Biogen Idec Inc Stabilized polypeptide compositions
CN101490085A (zh) * 2006-06-12 2009-07-22 特鲁比昂药品公司 具有效应功能的单链多价结合蛋白
EP2418223A3 (en) * 2006-06-12 2013-01-16 Emergent Product Development Seattle, LLC Single-chain multivalent binding proteins with effector function
US7846434B2 (en) 2006-10-24 2010-12-07 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Materials and methods for improved immunoglycoproteins
JP2010507394A (ja) 2006-10-24 2010-03-11 トルービオン ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド 改良免疫糖タンパク質のための物質および方法
CA2691819A1 (en) 2007-07-06 2009-02-19 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding peptides having a c-terminally disposed specific binding domain
UY31478A1 (es) * 2007-11-21 2009-07-17 Inhibicion del receptor para la proteina estimulante del macrofago (ron) y métodos para el tratamiento de lo mismo
US9266967B2 (en) * 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US8227577B2 (en) * 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US8242247B2 (en) * 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
SI2235064T1 (sl) * 2008-01-07 2016-04-29 Amgen Inc. Metoda za izdelavo heterodimernih molekul - protitelesa fc z uporabo elektrostatičnih usmerjevalnih učinkov
KR20100106590A (ko) * 2008-01-22 2010-10-01 바이오겐 아이덱 엠에이 인코포레이티드 Ｒｏｎ 항체 및 이들의 용도
WO2010014629A1 (en) * 2008-07-28 2010-02-04 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Multi-specific binding proteins targeting b cell disorders
BRPI0919382A2 (pt) * 2008-09-26 2016-01-05 Roche Glycart Ag anticorpos bi-específicos anti-egfr/anti-igf-1r
US8268314B2 (en) * 2008-10-08 2012-09-18 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific anti-VEGF/anti-ANG-2 antibodies
EA032828B1 (ru) * 2008-10-10 2019-07-31 Аптево Рисёрч Энд Девелопмент Ллс Иммунотерапевтические средства против комплекса tcr
EP2435473B1 (en) * 2009-05-27 2013-10-02 F.Hoffmann-La Roche Ag Tri- or tetraspecific antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
NZ600820A (en) 2014-12-24
AU2010343049A1 (en) 2012-07-19
AU2010343049A2 (en) 2015-04-02
PL2519543T3 (pl) 2016-12-30
BR112012016135A2 (pt) 2017-03-07
CN103124743A (zh) 2013-05-29
HK1170741A1 (zh) 2013-03-08
WO2011090762A1 (en) 2011-07-28
JP5851419B2 (ja) 2016-02-03
ES2592385T3 (es) 2016-11-29
CA2784814C (en) 2019-09-10
EA023674B1 (ru) 2016-06-30
EA201492253A1 (ru) 2015-06-30
SI2519543T1 (sl) 2016-08-31
MX2012007533A (es) 2012-07-30
JP2015180226A (ja) 2015-10-15
CN102958942A (zh) 2013-03-06
EA022984B1 (ru) 2016-04-29
SMT201600335B (it) 2016-11-10
KR20120125611A (ko) 2012-11-16
DK2519543T3 (en) 2016-09-26
CA2785661A1 (en) 2011-07-28
PT2519543T (pt) 2016-10-07
CA2784814A1 (en) 2011-07-28
AU2010343056A1 (en) 2012-08-02
JP2013515509A (ja) 2013-05-09
EA201290570A1 (ru) 2013-02-28
HUE029257T2 (en) 2017-02-28
JP2015221829A (ja) 2015-12-10
EP2519543A1 (en) 2012-11-07
AU2010343057B2 (en) 2017-02-23
HRP20160819T1 (hr) 2016-08-12
ME02505B (me) 2017-02-20
US20150274844A1 (en) 2015-10-01
IL220398A (en) 2017-12-31
EP2519544A1 (en) 2012-11-07
CA2785907A1 (en) 2011-07-28
EP2519541A1 (en) 2012-11-07
AU2010343057A2 (en) 2015-04-02
MX341796B (es) 2016-09-02
WO2011090761A1 (en) 2011-07-28
WO2011090754A1 (en) 2011-07-28
US20130089554A1 (en) 2013-04-11
JP5856073B2 (ja) 2016-02-09
CY1118008T1 (el) 2017-05-17
LT2519543T (lt) 2016-10-10
EP2519543B1 (en) 2016-06-29
CN105693861A (zh) 2016-06-22
EA201290568A1 (ru) 2013-02-28
US20130095097A1 (en) 2013-04-18
SG181952A1 (en) 2012-07-30
US20180273642A1 (en) 2018-09-27
EP3112382A1 (en) 2017-01-04
JP2013515508A (ja) 2013-05-09
AU2010343057A1 (en) 2012-07-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2010343057B2 (en) Heterodimer binding proteins and uses thereof
US20130129723A1 (en) Heterodimer Binding Proteins and Uses Thereof
US11236170B2 (en) Bispecific checkpoint inhibitor antibodies
JP7148539B2 (ja) 免疫抱合体
US11618776B2 (en) Targeted heterodimeric Fc fusion proteins containing IL-15/IL-15RA and NKG2D antigen binding domains
JP2025060983A (ja) 免疫細胞機能をモジュレートするための変異体インターロイキン－２ポリペプチドと抗原結合分子の融合体
JP2019527047A (ja) ソマトスタチン受容体２に結合するヘテロ二量体抗体
US20240262913A1 (en) Combination therapy of pd-1-targeted il-2 variant immunoconjugate and anti-tyrp1/anti-cd3 bispecific antibodies
TW202221015A (zh) 單一及雙靶定配體誘導之t細胞銜接體組合物
US20250339519A1 (en) Combination of cytokine fusion proteins with cd8 antigen binding molecules
HK1170741B (en) Heterodimer binding proteins and uses thereof
HK1182402A (zh) 異二聚體結合蛋白及其應用
HK40016394B (zh) 双特异性检查点抑制剂抗体