CN116368155A - 多互补位抗pd-1抗体及其用途 - Google Patents

多互补位抗pd-1抗体及其用途 Download PDF

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K·L·奥蒂波比
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L·J·爱德华兹
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Abstract

可以用于例如调节PD‑1的活性的多互补位多肽。

Description

多互补位抗PD-1抗体及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求于2020年8月19日提交的美国临时申请号63/067,674、于2021年4月16日提交的美国临时申请号63/175,760、于2021年2月23日提交的美国临时申请号63/152,691的优先权，所述美国临时申请各自在此通过引用以其整体并入。
本申请还涉及于2020年8月19日提交的美国申请号16/997,238，所述美国申请在此通过引用以其整体并入。
技术领域
本文提供的实施方案涉及例如可以结合例如PD-1的互补位抗体。
背景技术
例如如在移植组织排斥或自身免疫性病症中的不需要的免疫应答的情况，构成了全世界数百万人的主要健康问题。关于器官移植的长期结果频繁地以慢性排斥和移植器官的最终衰竭为特征。已知20多种自身免疫性病症，基本上影响身体的每一个器官，并且单独在北美就影响了超过5000万人。在这两种情形下，用于对抗致病性免疫应答的广泛活性免疫抑制性用药均具有严重的副作用。相应地，需要治疗剂和多肽来治疗此类状况。本文提供的实施方案满足了这些需要以及其它需要。
发明内容
本文公开的是可以用于例如调节免疫应答的多肽。在一些实施方案中，免疫应答是降低的，其可以用于例如治疗自身免疫状况或其它免疫系统病症，其中减少免疫应答是有必要或有帮助的。本文提供了此类免疫病症的非限制性实例。
本文公开的实施方案通过引用并入该部分。
在一些实施方案中，本文提供的多肽结合并激动抑制性分子，例如抑制性免疫检查点分子，或者以其它方式抑制或减少免疫细胞的活性，所述免疫细胞例如细胞毒性T细胞、辅助性T细胞、调节性T细胞(Treg)、B细胞、NK细胞、树突细胞例如浆细胞样树突细胞、先天性淋巴样细胞例如ILC2、或髓样细胞例如嗜中性粒细胞或巨噬细胞。
在一些实施方案中，与治疗性化合物未结合其靶时相比，当治疗性化合物结合其靶时，免疫细胞的下调水平更大。在实施方案中，通过靶结合的治疗性化合物的下调水平等于它未结合其靶时所见的水平或者是1.5倍、2倍、4倍、8倍或10倍。在实施方案中，当治疗性化合物未结合靶时，它并不或并不显著下调免疫细胞。因此，抑制性受体例如PD-1的不加区别或不需要的激动降到最低或得到消除。例如，当治疗性化合物结合免疫细胞但未结合靶向部分时，抑制性免疫检查点分子通过治疗性化合物的接合并不导致下调或并不导致基本的下调，例如在治疗性化合物与之结合的免疫细胞上的抑制性受体并未聚簇或并未充分聚簇，以导致足以产生免疫细胞的下调或基本抑制的抑制信号。
在实施方案中，当与免疫细胞上的细胞表面抑制性受体例如PD-1接合时，治疗性化合物并不抑制或并不基本上不抑制细胞表面抑制性受体结合内源性配体的能力。在一些实施方案中，治疗性化合物可以结合PD-1上的PD-L1/2结合位点。因此，抑制性受体例如PD-1的不加区别或不需要的拮抗降到最低或得到消除。在实施方案中，治疗性化合物与免疫细胞上的抑制性受体例如PD-1的结合并不阻碍或基本上阻碍抑制性受体结合天然配体例如PD-L1的能力。在实施方案中，治疗性化合物与免疫细胞上的抑制性受体例如PD-1的结合将天然配体例如PD-L1的结合减少到在治疗性化合物的不存在下所见的结合的小于50、40、30、20、10或5％。在一些实施方案中，该部分是结合PD-1的抗体。在一些实施方案中，抗体是PD-1激动剂。在一些实施方案中，抗体在可溶性PD-1拮抗剂测定中并非PD-1拮抗剂。
在一些实施方案中，如本文提供的那样提供治疗性化合物。
在一些实施方案中，本文所述的多肽包含结合PD-1的第一结合结构域和第二结合结构域。在一些实施方案中，第一结合结构域和第二结合结构域包含如PD-1抗体表4中所示的序列。在一些实施方案中，第一结合结构域和第二结合结构域包含如PD-1抗体表5中所示的序列。在一些实施方案中，第一结合结构域和第二结合结构域包含如PD-1抗体表4和PD-1抗体表5中所示的序列。
在一些实施方案中，本文所述的多肽包含结合PD-1的第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域。在一些实施方案中，结合结构域独立地包含如PD-1抗体表4中所示的序列。在一些实施方案中，结构域独立地包含如PD-1抗体表5中所示的序列。在一些实施方案中，结合结构域独立地包含如PD-1抗体表4和PD-1抗体表5中所示的序列。
在一些实施方案中，多肽包含多个不同的结合结构域，其结合相同的靶例如PD-1。在一些实施方案中，多肽包含结合靶的2个或4个不同的结合结构域。在一些实施方案中，多肽包含结合靶的4个结合结构域。当多肽包含抗体或抗体样序列时，结合结构域也可以被称为抗原识别结构域或抗原结合结构域。在一些实施方案中，每个结合结构域结合靶上的相同表位。在一些实施方案中，两个结合结构域结合靶上的相同表位。在一些实施方案中，例如当存在4个结合结构域时，2个结合结构域结合相同的表位，而剩下的2个结合结构域结合靶上的不同表位。在一些实施方案中，2个靶结合结构域具有等同或几乎等同的靶结合结构域(例如CDR)。在一些实施方案中，每个结构域具有等同或几乎等同的靶结合结构域。在一些实施方案中，多肽包含至少一个结合结构域，其不同于多肽中存在的另一个结合结构域。这也可以被称为具有一组异质的靶结合结构域的多肽。具有所有相同的靶结合结构域的多肽可以被说成具有一组同质的靶结合结构域。在一些实施方案中，当多肽在靶结合结构域方面是异质的时，多肽可以被称为双特异性的。双特异性可以指靶结合结构域与之结合的表位，即它们是不同的。它也可以被称为互补位或多互补位的。
在一些实施方案中，多肽从N末端到C末端包含下式：
(R1-Fc-R2)2，
其中Rl是第一结合结构域，
其中R2是第二结合结构域，
其中R1和R2之一是Fab抗体，而另一个是scFv抗体。
其中R1和R2通过接头进行连接，
其中所述接头包含Fc免疫球蛋白恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，
其中所述接头进一步包含G/S或G/A接头，和
其中G/S或G/A接头包含(GGGGS)n(SEQ ID NO：303)或(GGGGA)n(SEQ ID NO：304)的序列或其组合，其中每个n独立地为1-4。
在一些实施方案中，四链体抗体(tetrad antibodies)从N末端到C末端具有以下通式：
(R2-Fc-R1)2，
其中R1是第一结合结构域，
其中R2是第二结合结构域，
其中R1和R2之一是Fab抗体，而另一个是scFv抗体。
其中R1和R2通过接头进行连接，
其中所述接头包含Fc免疫球蛋白恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，
其中所述接头进一步包含G/S或G/A接头，和
其中G/S或G/A接头包含(GGGGS)n(SEQ ID NO：303)或(GGGGA)n(SEQ ID NO：304)的序列或其组合，其中每个n独立地为1-4。
在一些实施方案中，多肽包含第一多肽链和第二多肽链，其中：
第一多肽链从N末端到C末端具有下式：
[VH-A]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[VH-B]-[接头2]-[VK-B]；或
[VH-A]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[VK-B]-[接头2]-[VH-B]；
第二多肽链从N末端到C末端具有下式：
[VK-A]-[CK]，
其中：
VH-A＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
VK-A＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域
VH-B＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
VK-B＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域
CH1＝人IgG1的恒定重结构域1
CH2＝人IgG1的恒定重结构域2
CH3＝人IgG1的恒定重结构域3
CK＝κ轻链的恒定结构域
接头1是甘氨酸/丝氨酸或甘氨酸/丙氨酸接头
接头2是甘氨酸/丝氨酸或甘氨酸/丙氨酸接头，
其中VH-A、VK-A、VH-B和VK-B可以来自相同或不同的抗体。
在一些实施方案中，多肽包含第一多肽链和第二多肽链，其中：
第一多肽链从N末端到C末端具有下式：
[VH-B]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[VH-A]-[接头2]-[VK-A]；或
[VH-B]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[VK-A]-[接头2]-[VH-A]；
第二多肽链从N末端到C末端具有下式：
[VK-B]-[CK]，
其中：
VH-A＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
VK-A＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域
VH-B＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
VK-B＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域
CH1＝例如本文提供的人IgG1的恒定重结构域1
CH2＝例如本文提供的人IgG1的恒定重结构域2
CH3＝例如本文提供的人IgG1的恒定重结构域3
CK＝例如本文提供的κ轻链的恒定结构域
接头1是甘氨酸/丝氨酸或甘氨酸/丙氨酸接头
接头2是甘氨酸/丝氨酸或甘氨酸/丙氨酸接头，
其中VH-A、VK-A、VH-B和VK-B可以来自相同或不同的抗体。
在一些实施方案中，PD-1抗体包含如PD-1抗体表4中所示的序列。在一些实施方案中，PD-1抗体包含如PD-1抗体表5中所示的序列。在一些实施方案中，PD-1抗体包含如PD-1抗体表4和PD-1抗体表5中所示的序列。
在一些实施方案中，多肽包含2条第一多肽链和2条第二多肽链。本文提供了非限制性实例。
在一些实施方案中，提供了包含与PD-1结合的第一结合结构域和第二结合结构域的多肽，所述第一结合结构域和第二结合结构域包含如PD-1抗体表4或PD-1抗体表5中所示的序列。在一些实施方案中，多肽包含与PD-1结合的第三结合结构域和第四结合结构域。在一些实施方案中，第三结合结构域与第一结合结构域相同。在一些实施方案中，第四结合结构域与第二结合结构域相同。
在一些实施方案中，与以scFv形式的PD-1抗体相比，呈FAb形式的PD-1抗体对于PD-1具有更低的亲和力。在一些实施方案中，与以scFv形式的PD-1抗体相比，呈FAb形式的PD-1抗体对于PD-1具有更高的亲和力。
在一些实施方案中，本文提供了治疗自身免疫性疾病或状况的方法，该方法包括施用本文提供的一种或多种治疗性化合物或多肽。
在一些实施方案中，本文提供了治疗本文所述的疾病或状况的方法，该方法包括施用本文提供的一种或多种治疗性化合物或多肽。
在一些实施方案中，提供了治疗患有炎性肠病的受试者的方法，该方法包括向受试者施用本文提供的治疗性化合物或多肽，以治疗炎性肠病。在一些实施方案中，受试者患有克罗恩氏病或溃疡性结肠炎。
在一些实施方案中，提供了治疗患有自身免疫性肝炎的受试者的方法，该方法包括向受试者施用如本文提供的治疗性化合物或多肽，以治疗自身免疫性肝炎。
在一些实施方案中，提供了治疗原发性硬化性胆管炎的方法，该方法包括向受试者施用如本文提供的治疗性化合物或多肽，以治疗原发性硬化性胆管炎。
在一些实施方案中，提供了治疗(例如，减轻)肠道中的炎症的方法，该方法包括向受试者施用如本文提供的治疗性化合物或多肽，以治疗肠道中的炎症。在一些实施方案中，炎症在小肠中。在一些实施方案中，炎症在大肠中。在一些实施方案中，炎症在肠或结肠中。
在一些实施方案中，提供了治疗(例如，减轻)胰腺中的炎症的方法，该方法包括向受试者施用如本文提供的治疗性化合物或多肽，以治疗胰腺中的炎症。在一些实施方案中，该方法治疗胰腺炎。
在一些实施方案中，提供了治疗1型糖尿病的方法，该方法包括向受试者施用如本文提供的治疗性化合物或多肽，以治疗1型糖尿病。
在一些实施方案中，提供了治疗移植受试者的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的如本文提供的治疗性化合物或多肽，从而治疗移植(接受者)受试者。
在一些实施方案中，提供了治疗具有移植的供体组织的受试者中的移植物抗宿主病(GVHD)的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的如本文提供的治疗性化合物或多肽。
在一些实施方案中，提供了治疗患有自身免疫性病症、或者处于患有自身免疫性病症的风险或升高风险中的受试者的方法，该方法包括施用治疗有效量的如本文提供的治疗性化合物或多肽，从而治疗受试者。
附图说明
图1描绘了本文提供的多肽的非限制性说明。
图2描绘了本文提供的多肽的非限制性说明。
图3描绘了本文提供的多肽的非限制性说明。
具体实施方式
如本文使用的且除非另有说明，否则术语“约”预期意指其修饰的值的±10％。因此，约100意指95至105。
如本文和所附权利要求中使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该/所述”包括复数指示物，除非上下文另有明确规定。
如本文使用的，术语“动物”包括但不限于人和非人脊椎动物，例如野生动物、家养动物和农场动物。
如本文使用的，术语“接触”意指将在体外系统或体内系统中的两种元素结合在一起。例如，使治疗性化合物与个体或患者或细胞“接触”包括将化合物施用于个体或患者例如人，以及例如将化合物引入包含含有靶的细胞或纯化制剂的样品内。
如本文使用的，术语“包含(comprising)”(以及任何形式的包含(comprising)，例如“包含(comprise)”、“包含(comprises)”和“包含(comprised)”)、“具有(having)”(以及任何形式的具有(having)，例如“具有(have)”和“具有(has)”)、“包括(including)”(以及任何形式的包括(including)，例如“包括(includes)”和包括(include)”)、或“含有(containing)”(以及任何形式的含有(containing)，例如“含有(contains)”和“含有(contain)”)是包含在内的或开放式的，并且不排除另外的、未叙述的元件或方法步骤。叙述术语“包含”的任何组合物或方法也应该理解为还描述如由所叙述的组分或元素组成、由所叙述的组分或元素组成、或基本上由所叙述的组分或元素组成的此类组合物。
如本文使用的，在提及具有不同结构域或异源序列的蛋白质中使用时，术语“融合的”或“连接的”意指蛋白质结构域是同一肽链的部分，其通过肽键或其它共价键合彼此连接。结构域或区段可以彼此直接连接或融合，或者另一个结构域或肽序列可以在两个结构域或序列之间，并且此类序列仍被视为彼此融合或连接的。在一些实施方案中，本文提供的各种结构域或蛋白质彼此直接连接或融合，或者连接或融合至接头序列，例如本文所述的将两个结构域连接在一起的甘氨酸/丝氨酸序列。
如本文使用的，可互换使用的术语“个体”、“受试者”或“患者”意指任何动物，包括哺乳动物，例如小鼠、大鼠、其它啮齿类动物、兔、犬、猫、猪、牛、羊、马或灵长类动物，例如人。
如本文使用的，术语“抑制”指与在抑制结果、症状或活性的化合物的不存在下的活性或结果相比，结果、症状或活性是减少的。在一些实施方案中，结果、症状或活性被抑制约或至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％。如果结果、症状或活性是完全消除或消失的，则它也可以是被抑制的。
如本文使用的，短语“有此需要”意指受试者已被鉴定为需要特定方法或治疗。在一些实施方案中，鉴定可以是通过任何诊断手段。在本文所述的任何方法和治疗中，受试者可能是有此需要的。在一些实施方案中，受试者处于其中特定疾病、病症或状况流行的环境中或将到这样的环境旅行。
如本文使用的，短语“从X到Y的整数”意指包括端点的任何整数。例如，短语“从X到Y的整数”意指1、2、3、4或5。
如本文使用的，术语“哺乳动物”意指啮齿类动物(即小鼠、大鼠或豚鼠)、猴、猫、犬、牛、马、猪或人。在一些实施方案中，哺乳动物是人。
在一些实施方案中，本文提供了多肽。多肽也可以被称为化合物。在一些实施方案中，多肽是治疗性化合物。在一些实施方案中，治疗性化合物是蛋白质或多肽，其具有彼此相互作用的多条链。多肽可以通过非共价相互作用或共价相互作用，例如通过二硫键或其它共价键而彼此相互作用。因此，如果一个实施方案指治疗性化合物，则它也可以被说成指如本文提供的蛋白质或多肽，并且反之亦然，如上下文所指示的。
如本文使用的，短语“眼科可接受的”意指对治疗的眼或其功能或者待治疗的受试者的一般健康没有持久的有害作用。然而，应认识到，瞬时效应如轻微刺激或“刺痛”感对于药物的局部眼科施用是常见的，并且此类瞬时效应的存在与如本文定义的所讨论的组合物、制剂或成分(例如赋形剂)是“眼科可接受的”并不矛盾。在一些实施方案中，药物组合物可以是眼科可接受的或适合于眼科施用的。
“特异性结合(Specific binding)”或“特异性结合(specifically binds to)”或“特异于”特定抗原、靶或表位意指可测量地不同于非特异性相互作用的结合。特异性结合可以例如通过确定与对照分子的结合相比的分子的结合来测量，所述对照分子一般是不具有结合活性的具有相似结构的分子。例如，可以通过与类似于靶的对照分子竞争来确定特异性结合。
对于特定抗原、靶或表位的特异性结合可以例如通过对于抗原或表位具有至少约10-4M、至少约10-5M、至少约10-6M、至少约10-7M、至少约10-8M、至少约10-9M、可替代地至少约10-10M、至少约10-11M、至少约10-12M或更大的KD的抗体显示出，其中KD指特定抗体-靶相互作用的解离速率。通常，特异性结合抗原或靶的抗体具有的KD是对照分子相对于抗原或表位的2、4、5、10、20、50、100、500、1000、5,000、10,000或更多倍，或者至少为2、4、5、10、20、50、100、500、1000、5,000、10,000或更多倍。
在一些实施方案中，对于特定抗原、靶或表位的特异性结合可以例如通过抗体显示出，相对于对照对于靶、抗原或表位的KA或Ka，所述抗体对于靶、抗原或表位具有的KA或Ka是至少2、4、5、20、50、100、500、1000、5,000、10,000或更多倍，其中KA或Ka指特定的抗体-抗原相互作用的结合速率。
例如，本公开内容提供了可以充当PD-1激动剂的分子。在一些实施方案中，激动剂是包含结合PD-1的多个抗原结合结构域的抗体或多肽。不受任何特定理论的束缚，PD-1的激动抑制T细胞活化/信号传导，并且可以通过不同的机制来实现。例如，交联可以导致激动，珠结合的功能性PD-1激动剂已得到描述(Akkaya.Ph.D.Thesis：Modulation of thePD-1 pathway by inhibitory antibody superagonists.Christ Church College，Oxford，UK，2012，其在此通过引用并入)。PD-1与结合非重叠表位的两种mAb的交联诱导PD-1信号转导(Davis，US 2011/0171220，其在此通过引用并入)。另一个实例通过使用山羊抗PD-1抗血清(例如AF1086，R&D Systems，其在此通过引用并入)来说明，当可溶时，所述山羊抗PD-1抗血清充当激动剂(Said等人，2010，Nat Med，其在此通过引用并入)。可以用于本文实施方案中的PD-1激动剂的非限制性实例包括但不限于UCB克隆19或克隆10、PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4和PD1AB-5、PD1AB-6(Anaptys/Celgene)、PD1-17、PD1-28、PD1-33和PD1-35(Collins等人，US 2008/0311117 A1，其在此通过引用并入)、针对PD-1的抗体及其用途，或者可以是双特异性、单价抗PD-1/抗CD3(Ono)等等。在一些实施方案中，PD-1激动剂抗体可以是阻断PD-L1与PD-1的结合的抗体。在一些实施方案中，PD-1激动剂抗体可以是并不阻断PD-L1与PD-1的结合的抗体。在一些实施方案中，抗体并不充当PD-1的拮抗剂。在一些实施方案中，激动剂是如本文提供的抗体。
PD-1激动可以通过任何方法，例如实施例中描述的方法进行测量。例如，可以构建表达(包括稳定表达)构建体的细胞，所述构建体包括融合到β-半乳糖苷酶“酶供体”的人PD-1多肽，以及2)融合到β-半乳糖苷酶“酶受体”的SHP-2多肽。不受任何理论的束缚，当PD-1接合时，SHP-2被募集到PD-1。酶受体和酶供体形成可以被测定的完全活性的β-半乳糖苷酶。虽然该测定并不直接显示PD-1激动，但显示了PD-1信号传导的激活。PD-1激动也可以通过测量T细胞活化的抑制来测量，因为不受任何理论的束缚，PD-1激动抑制抗CD3诱导的T细胞活化。例如，PD-1激动可以通过用PHA(对于人T细胞)或ConA(对于小鼠T细胞)预激活T细胞，使得它们表达PD-1来测量。然后可以在抗PD-1(或PD-L1)的存在下，用抗CD3重新激活细胞，用于PD-1激动测定。相对于单独的抗CD3刺激，在抗CD3的存在下接收PD-1激动剂信号的T细胞将显示降低的激活。激活可以通过增殖或细胞因子产生(IL-2、IFNγ、IL-17)或其它标记物例如CD69激活标记物来读出。因此，可以通过细胞因子产生或细胞增殖来测量PD-1激动。其它方法也可以用于测量PD-1激动。
PD-1是在活化的T细胞和其它免疫细胞上表达的Ig超家族成员。关于PD-1的天然配体似乎是PD-L1和PD-L2。不受任何特定理论的束缚，当PD-L1或PD-L2与活化T细胞上的PD-1结合时，启动抑制性信号传导级联，导致活化T效应细胞功能的减弱。因此，用PD-1拮抗剂阻断T细胞上的PD-1与另一个细胞(例如肿瘤细胞)上的PD-L1/2之间的相互作用称为检查点抑制，并且使T细胞从抑制中释放出来。相比之下，PD-1激动剂抗体可以与PD-1结合，并且发送抑制信号并减弱T细胞的功能。因此，PD-1激动剂抗体可以并入本文所述的各个实施方案内。
在一些实施方案中，分子中可以结合PD-1的各部分可以直接或通过接头实体共价或非共价地彼此在物理上栓系，例如，作为多肽中的同一蛋白质分子的成员。在一些实施方案中，这可以被称为融合蛋白，使得不同的结合部分通过化学或肽接头融合在一起。此类接头的非限制性实例在本文中提供。在一些实施方案中，可以结合PD-1的效应物部分(也可以被称为效应物结合/调节部分)在多肽例如但不限于融合蛋白中例如作为分开的结构域提供。在一些实施方案中，效应物结合/调节部分各自包含单链可变片段(scFv)或Fab结构域。在一些实施方案中，可以将治疗性蛋白质分子或编码治疗性蛋白质分子的核酸，例如mRNA或DNA施用于受试者。在一些实施方案中，多个效应分子结合/调节部分连接到第三实体，例如载体，例如聚合载体、树枝状聚合物或颗粒例如纳米颗粒。
本文提供的是通过用本文公开的治疗性化合物，使供体免疫细胞例如供体T细胞介导接受者组织的免疫攻击的能力降到最低，来抑制GVHD的方法。
本文还提供的是通过施用本文公开的治疗性化合物，例如以提供免疫系统的调节，来治疗例如治疗性治疗或预防性治疗(或预防)受试者中的自身免疫性病症或应答的方法。在一些实施方案中，调节是全身性的。在一些实施方案中，该方法提供对受试者组织的耐受性、受试者组织的排斥的最小化、免疫效应细胞介导的对受试者组织的损伤的最小化、或延长受试者组织的功能。非限制性示例性组织包括但不限于胰腺、髓磷脂、唾液腺、滑膜细胞、肠、皮肤、肾、肺和肌细胞。
如本文使用的，关于治疗性治疗的术语“治疗(treat)”、“治疗(treated)”或“治疗(treating)”，其中目的是减缓(减轻)不期望的生理状况、病症或疾病，或者获得有益或期望的临床结果。例如，有益或期望的临床结果包括但不限于症状的减轻；状况、病症或疾病程度的缩小；状况、病症或疾病的稳定(即不恶化)状态；状况、病症或疾病进展的发作延迟或减缓；状况、病症或疾病状态的改善或缓解(无论是部分还是全部的)，无论是可检测的还是不可检测的；患者不一定能辨别的至少一个可测量的物理参数的改善；或者状况、病症或疾病的增强或改善。治疗包括引发临床上显著的应答，而无过度水平的副作用。治疗还包括与如果不接受治疗的预计存活相比延长存活。因此，“自身免疫性疾病/病症的治疗”意指减轻或改善与自身免疫性疾病/病症或本文所述的其它状况相关的任何主要现象或继发症状的活性。在本文中提供了各种疾病或状况。治疗性治疗也可以预防性地施用，以在发作前预防或减轻疾病或状况。
在一些实施方案中，治疗性化合物的施用在病症显而易见之后开始。在一些实施方案中，治疗性化合物的施用在病症发作或完全发作之前开始。在一些实施方案中，治疗性化合物的施用在病症发作或完全发作之前开始，例如在患有病症的受试者、高风险受试者、具有病症风险或存在的生物标记物的受试者、具有病症的家族史或病症风险的其它指标或无症状存在的受试者中。例如，在一些实施方案中，治疗具有胰岛细胞损伤但尚未成为糖尿病患者的受试者。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都具有与这些实施方案所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。尽管下文描述了合适的方法和材料，但与本文所述的方法和材料相似或等价的方法和材料可以用于本文实施方案的实践或测试中。本文提到的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献都通过引用以其整体并入。另外，材料、方法和实例仅是说明性的而不预期是限制性的。标题、副标题或者编号或字母化元素，例如(a)、(b)、(i)等，仅仅为了便于阅读而呈现。本文件中标题或者编号或字母化元素的使用并不要求步骤或元素按字母次序执行，或者步骤或元素必须彼此分离。实施方案的其它特征、目的和优点根据说明书和附图以及权利要求将是显而易见的。
另外的定义
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都具有与实施方案所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。在描述且请求保护本文实施方案时，当提供定义时，将根据它如何定义来使用下述术语以及在本申请自始至终在其它方面提及的术语。
还应理解，本文使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并不预期是限制性的。
如该术语在本文中使用的，抗体指多肽，例如免疫球蛋白链或其片段，其包含至少一个功能性免疫球蛋白可变结构域序列。抗体分子涵盖抗体(例如，全长抗体)和抗体片段。在一些实施方案中，抗体分子包含全长抗体的抗原结合片段或功能片段、或者全长免疫球蛋白链。例如，全长抗体是天然存在或通过正常免疫球蛋白基因片段重组过程形成的免疫球蛋白(Ig)分子(例如，IgG抗体)。在实施方案中，抗体分子指免疫球蛋白分子的具有免疫学活性的抗原结合部分，例如抗体片段。抗体片段，例如功能片段，包含抗体的一部分，例如Fab、Fab′、F(ab′)2、F(ab)2、可变片段(Fv)、结构域抗体(dAb)或单链可变片段(scFv)。功能性抗体片段结合与由完整(例如，全长)抗体所识别的抗原相同的抗原。术语“抗体片段”或“功能片段”还包括由可变区组成的分离的片段，例如由重链和轻链的可变区组成的“Fv”片段、或其中轻链和重链可变区通过肽接头连接的重组单链多肽分子(“scFv蛋白”)。在一些实施方案中，抗体片段并不包括没有抗原结合活性的抗体部分，例如Fc片段或单个氨基酸残基。示例性抗体分子包括全长抗体和抗体片段，例如dAb(结构域抗体)、单链、Fab、Fab’和F(ab’)2片段、以及单链可变片段(scFv)。
术语“抗体”还涵盖了结构域或单结构域抗体的整体或抗原结合片段，其也可以被称为“sdAb”或“VHH”。结构域抗体包含VH或VL，其可以充当独立的抗体片段。另外，结构域抗体包括仅重链抗体(HCAb)。结构域抗体还包括IgG的CH2结构域作为其中移植了CDR环的基础支架。它也可以一般定义为包含氨基酸序列的多肽或蛋白质，所述氨基酸序列由被三个互补决定区中断的四个构架区构成。这表示为FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。sdAb可以在骆驼科动物如美洲驼中产生，但也可以使用本领域众所周知的技术合成生成。sdAb或多肽的氨基酸残基编号根据通过Kabat等人(“Sequence of proteins of immunologicalinterest，”US Public Health Services，NIH Bethesda，MD，公开号91，其在此通过引用并入)给出的关于VH结构域的通用编号。根据此编号，sdAb的FR1包含在位置1-30处的氨基酸残基，sdAb的CDR1包含在位置31-36处的氨基酸残基，sdAb的FR2包含在位置36-49处的氨基酸，sdAb的CDR2包含在位置50-65处的氨基酸残基，sdAb的FR3包含在位置66-94处的氨基酸残基，sdAb的CDR3包含在位置95-102处的氨基酸残基，并且sdAb的FR4包含在位置103-113处的氨基酸残基。结构域抗体也在WO2004041862和WO2016065323中进行描述，所述专利各自在此通过引用并入。
抗体或抗体分子可以是单特异性的(例如，单价或二价的)、双特异性的(例如，二价、三价、四价、五价或六价的)、三特异性的(例如，三价、四价、五价或六价的)，或具有更高阶的特异性(例如，四特异性)和/或高于六价的更高阶的效价。抗体分子可以包含轻链可变区的功能片段和重链可变区的功能片段，或者重链和轻链可以一起融合成单一多肽。
如本文使用的，术语“四链体”在指如本文所述的多肽或抗体时，其中包含两组效应物部分，并且其中所述两组效应物部分各自个别地包含两个结合结构域，在多肽中提供了总共4个结合结构域。
如本文使用的，术语“单互补位的”指如本文所述的治疗性化合物、分子或抗体，其中本文所述的治疗性化合物、分子或抗体包含等同的结合结构域，使得它们结合相同的表位。在一些实施方案中，此处提供的多肽不是单互补位的。例如，在一些实施方案中，多肽包含结合不同表位的至少两个不同的结合结构域。因此，在一些实施方案中，多肽可以被称为“双互补位的”。
如本文使用的，术语“双互补位的”指如本文所述的治疗性化合物、分子或抗体，其中本文所述的治疗性化合物、分子或抗体包含不同的结合结构域，其结合不同的表位，包括彼此并不重叠的表位。在一些实施方案中，多肽仅结合2个不同的表位。在一些实施方案中，多肽结合3或4个不同的表位。
如本文使用的，“单互补位四链体”或“双互补位四链体”指如本文所述的治疗性化合物、分子或抗体，其中本文所述的治疗性化合物、分子或抗体包含两组第一效应物部分和第二效应物部分，其包含结合靶的结合结构域。此类分子的非限制性实例显示于图1、图2和图3中。
例如，图1说明了如本文所述的单互补位四链体分子的非限制性构型。参考图1，它说明了包含连接到如本文所述的Fc分子(30)和(35)的两个Fab部分(结构域)(20)和(25)的第一效应物部分(10)，其经由肽或化学接头(60)和(65)连接到包含两个scFv部分(50)和(55)的第二效应物部分(40)。在一些实施方案中，每个Fab部分(20)和(25)以及每个scFV分子(50)和(55)结合相同的分子和相同的表位。如本文提供的，它们可以结合PD-1。在一些实施方案中，FAb和scFV包含PD1AB4、PD1AB25、PD1AB30、PD1AB53、PD1AB37或如本文提供的任何其它CDR组的CDR。
图2说明了如本文提供的双互补位四链体分子的非限制性构型。例如，参考图2，它说明了包含连接到如本文所述的Fc分子(30)和(一35)的两个Fab分子(20)和(25)的第一效应物部分(10)，其经由肽或化学接头(60)和(65)连接到包含两个scFv分子(50)和(55)的第二效应物部分(40)。在一些实施方案中，每个Fab部分(结构域)(20)和(25)以及每个scFV部分(50)和(55)结合相同的分子，但不同的表位。例如，在一些实施方案中，FAb(20)和FAb(25)结合靶分子上的第一表位，而scFV(50)和(55)结合同一靶分子上的第二表位。在一些实施方案中，表位是不重叠的。在一些实施方案中，FAb(25)和scFv(55)结合第一表位，而FAb(20)和scFv(50)结合同一靶分子上的第二表位。在一些实施方案中，FAb(20)、Fab(25)、scFv(50)和scFv(55)各自结合同一靶分子上的不同表位。在一些实施方案中，FAb(20)、Fab(25)、scFv(50)和scFv(55)中的两个结合靶分子上的第一表位，而FAb(20)、Fab(25)、scFv(50)和scFv(55)中的剩余两个结合靶分子上的第二表位。在一些实施方案中，靶分子是相同的靶分子。在一些实施方案中，靶分子是不同的。当在本公开内容自始至终提及不同的表位时，表位可以是不重叠的，即不共享任何相同的残基，或者它们可以是重叠的，即它们共享一些相同的残基，但不结合确切相同的一组残基。如本文提供的，在一些实施方案中，不同的表位是不重叠的。如本文提供的，本文提及的FAb和scFV可以结合PD-1。在一些实施方案中，FAb和scFV包含PD1AB4、PD1AB25、PD1AB30、PD1AB53、PD1AB37或如本文提供的任何其它CDR组的CDR。
参考图3，在一些实施方案中，分子的scFv部分中的可变链通过二硫键(70)和(75)进行连接(例如得到稳定)。不受任何特定理论的束缚，二硫键可以帮助稳定scFv形式化的结合结构域。在一些实施方案中，分子不包含连接scFv形式的结构域的一个或多个二硫键。
另外，参考图1、图2和图3，FAb结构域可以通过例如在CH1和CH2结构域之间，在链1的多肽的铰链区中的二硫键进行连接。
如该术语在本文中使用的，效应物指介导免疫应答的实体，例如细胞或分子，例如可溶性分子或细胞表面分子。
如本文使用的，效应物配体结合分子指这样的多肽，其具有来自效应物的天然存在的反配体的足够序列，使得它可以以足够的特异性结合效应物，使得它可以充当效应物结合/调节分子。在一些实施方案中，它以天然存在的反配体的至少10、20、30、40、50、60、70、80、90或95％的亲和力结合效应物。在一些实施方案中，它与效应物的天然存在的反配体具有至少60、70、80、90、95、99或100％的序列同一性，或者基本的序列同一性。
如本文使用的，升高的风险指受试者中的病症风险，其中所述受试者具有以下中的一种或多种：病症或病症症状的病史、与病症或病症症状相关的生物标记物、或者病症或病症症状的家族史。
如那些术语在本文使用的，序列同一性、百分比同一性和相关术语指两个序列，例如两个核酸序列或者两个氨基酸或多肽序列的相关性。在氨基酸序列的上下文中，术语“基本上等同的”在本文中用于指含有足够或最少数目的氨基酸残基的第一氨基酸，所述氨基酸残基与第二氨基酸序列中比对的氨基酸残基i)等同，或ii)是其保守取代，使得第一氨基酸序列和第二氨基酸序列可以具有共同的结构结构域和/或共同的功能活性。例如，含有共同的结构结构域的氨基酸序列与参考序列例如本文提供的序列具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
在核苷酸序列的上下文中，术语“基本上等同的”在本文中用于指含有足够或最少数目的核苷酸的第一核酸序列，所述核苷酸与第二核酸序列中比对的核苷酸等同，使得第一核酸序列和第二核苷酸序列编码具有共同功能活性的多肽、或者编码共同的结构多肽结构域或共同功能多肽活性。例如，核苷酸序列与参考序列例如本文提供的序列具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
术语“功能变体”意指这样的多肽，其具有与天然存在的序列基本上等同的氨基酸序列，或由基本上等同的核苷酸序列编码，并且能够具有天然存在的序列的一种或多种活性。
序列之间的同源性或序列同一性(该术语在本文中可互换使用)的计算如下执行。
为了确定两个氨基酸序列或两个核酸序列的同一性百分比，序列就最佳比较目的进行比对(例如，可以在第一和第二氨基酸或核酸序列之一或两者中引入空位以用于最佳比对，并且出于比较目的，可以忽略非同源序列)。在一个优选的实施方案中，为了比较目的进行比对的参考序列的长度是参考序列的长度的至少30％，优选至少40％，更优选至少50％、60％，且甚至更优选至少70％、80％、90％、100％。然后比较在相应的氨基酸位置或核苷酸位置处的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的一个位置被与第二序列中的相应位置相同的氨基酸残基或核苷酸占据时，则分子在该位置处是等同的(如本文使用的，氨基酸或核酸“同一性”等价于氨基酸或核酸“同源性”)。
两个序列之间的同一性百分比是考虑到需要引入用于两个序列的最佳比对的空位数目和每个空位的长度，由序列共享的等同位置数目的函数。
两个序列之间的序列比较和同一性百分比的确定可以使用数学算法来完成。在一个优选的实施方案中，两个氨基酸序列之间的同一性百分比使用Needleman和Wunsch((1970)J.Mo1.Biol.48：444-453)算法进行确定，所述算法已并入GCG软件包(可在www.gcg.com处获得)中的GAP程序内，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，以及16、14、12、10、8、6或4的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重。在再一个优选的实施方案中，两个核苷酸序列之间的同一性百分比使用GCG软件包(可在www.gcg.com处获得)中的GAP程序进行确定，使用NWSgapdna.CMP矩阵以及40、50、60、70或80的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重。一组特别优选的参数(以及除非另有说明，否则应该使用的一组参数)是Blossum 62评分矩阵，伴随空位罚分12、空位扩展罚分4和移码空位罚分5。
两个氨基酸序列或核苷酸序列之间的同一性百分比可以使用E.Meyers和W.Miller((1989)CABIOS，4：11-17)的算法进行确定，所述算法已并入ALIGN程序(版本2.0)内，使用PAM120权重残基表、空位长度罚分12和空位罚分4。
本文所述的核酸序列和蛋白质序列可以用作“查询序列”，以针对公共数据库执行搜索，以例如鉴定其它家族成员或相关序列。此类搜索可以使用Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.215：403-10的NBLAST和XBLAST程序(版本2.0)来执行。BLAST核苷酸搜索可以用NBLAST程序、评分＝100、字长＝12来执行，以获得与例如本文提供的任何核酸序列同源的核苷酸序列。BLAST蛋白质搜索可以用XBLAST程序、评分＝50、字长＝3来执行，以获得与本文提供的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的空位比对，可以利用如Altschul等人，(1997)Nucleic Acids Res.25：3389-3402中所述的Gapped BLAST。当利用BLAST和GappedBLAST程序时，可以使用相应程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。参见www.ncbi.nlm.nih.gov。
如本文使用的，术语“在低严格性、中等严格性、高严格性或极高严格性条件下杂交”描述了用于杂交和洗涤的条件。用于执行杂交反应的指南可以在Current Protocolsin Molecular Biology，John Wiley&Sons，N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6中找到，所述参考文献通过引用并入。水性和非水性方法在该参考文献中进行描述，并且可以使用任一种。本文提及的具体杂交条件如下：1)在6X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中在约45℃下的低严格性杂交条件，随后为在0.2X SSC、0.1％SDS中至少在50℃下的两次洗涤(对于低严格性条件，洗涤温度可以增加到55℃)；2)在6X SSC中在约45℃下的中等严格性杂交条件，随后为在0.2XSSC、0.1％SDS中在60℃下的一次或多次洗涤；3)在6X SSC中在约45℃下的高严格性杂交条件，随后为在0.2X SSC、0.1％SDS中在65℃下的一次或多次洗涤；并且优选地4)极高严格性杂交条件是在65℃下的0.5M磷酸钠、7％SDS，随后为在0.2X SSC、1％SDS中在65℃下的一次或多次洗涤。极高严格性条件(4)是优选条件，并且除非另有说明，否则应该使用这些条件。
应理解，本文实施方案的分子和化合物可以具有另外的保守或非必需氨基酸取代，这对其功能没有基本作用。
术语“氨基酸”预期涵盖这样的所有分子，无论是天然的还是合成的，其包括氨基官能团和酸官能团两者，并且能够包括在天然存在的氨基酸的聚合物中。示例性氨基酸包括天然存在的氨基酸；其类似物、衍生物和同类物；具有不同侧链的氨基酸类似物；以及前述任何的所有立体异构体。如本文使用的，术语“氨基酸”包括D-或L-旋光异构体和肽模拟物。
“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替换的取代。具有相似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中进行定义。这些家族包括具有碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、非荷电的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-支链侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。
如该术语在本文中使用的，受试者指哺乳动物受试者，例如人受试者。在一些实施方案中，受试者是非人哺乳动物，例如马、犬、猫、牛、山羊或猪。
尽管本文提供了特定的抗PD-1抗体，但也可以使用其它抗PD-1抗体。已惊讶地发现了，本文提供的四链体形式提供了出乎意料的在未预测的水平上成为PD-1激动剂并提供PD-1激动的能力。不受任何特定理论的束缚，认为四链体双互补位形式提供了比单体抗体或四链体单互补位可以提供的更大的激动剂能力，这是令人惊讶的结果。
PD-L1/PD-1途径
程序性细胞死亡蛋白1(经常被称为PD-1)是属于免疫球蛋白超家族的细胞表面受体。PD-1在T细胞和其它细胞类型上表达，所述其它细胞类型包括但不限于B细胞、髓样细胞、树突细胞、单核细胞、T调节细胞、iNK T细胞。PD-1结合两种配体PD-L1和PD-L2，并且是一种抑制性免疫检查点分子。在装载抗原的MHC与T细胞上的T细胞受体接合的背景下，与同源配体PD-L1或PD-L2的接合使T细胞的活化和功能降到最低或得到阻止。PD-1的抑制效应可以包括既促进淋巴结中的抗原特异性T细胞的细胞凋亡(程序性细胞死亡)，又减少调节性T细胞(抑制性T细胞)的细胞凋亡。
自身免疫性病症
本文提供的多肽及其使用方法可以用于治疗患有或处于患有不需要的自身免疫应答的风险中的受试者，所述不需要的自身免疫应答例如1型糖尿病、多发性硬化、心肌炎、白癜风、脱发、炎性肠病(IBD，例如克罗恩氏病或溃疡性结肠炎)、干燥综合征、局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)、硬皮病/系统性硬化(SSc)或类风湿性关节炎中的自身免疫应答。在一些实施方案中，治疗使受试者组织的排斥降到最低，使免疫效应细胞介导的对受试者组织的损伤降到最低，或延长受试者组织的存活，所述受试者组织经历自身免疫攻击或处于自身免疫攻击的风险中。在一些实施方案中，病症是系统性红斑狼疮(SLE)。
可以用本文所述的化合物治疗的自身免疫性病症和疾病的其它实例包括但不限于心肌炎、心肌梗塞后综合征、心包切开术后综合征、亚急性细菌性心内膜炎、抗肾小球基底膜肾炎、间质性膀胱炎、狼疮性肾炎、膜性肾小球肾病、慢性肾疾病(“CKD”)、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、抗合成酶综合征、斑秃、自身免疫性血管性水肿、自身免疫性孕酮性皮炎、自身免疫性荨麻疹、大疱性类天疱疮、瘢痕性类天疱疮、疱疹样皮炎、盘状狼疮红斑、获得性大疱性表皮松解症、结节性红斑、妊娠性类天疱疮、化脓性汗腺炎、扁平苔藓、硬化性苔藓、线状IgA病(lad)、硬斑病、寻常型天疱疮、急性痘疮样苔藓样糠疹、Mucha-Habermann病、牛皮癣、系统性硬皮病、白癜风、艾迪生氏病、自身免疫性多内分泌腺病综合征(APS)1型、自身免疫性多内分泌腺病综合征(APS)2型、自身免疫性多内分泌腺病综合征(APS)3型、自身免疫性胰腺炎(AIP)、1型糖尿病、自身免疫性甲状腺炎、Ord氏甲状腺炎、格雷夫斯氏病、自身免疫性卵巢炎、子宫内膜异位症、自身免疫性睾丸炎、干燥综合征、自身免疫性肠病、乳糜泻、克罗恩氏病、显微镜下结肠炎、溃疡性结肠炎、血小板减少症、痛性肥胖症、成人斯蒂尔病、强直性脊柱炎、CREST综合征、药物诱发性狼疮、与附着点炎症相关的关节炎、嗜酸细胞性筋膜炎、费尔蒂综合征、IgG4相关疾病、幼年型关节炎、莱姆病(慢性)、混合性结缔组织病(MCTD)、复发性风湿病、帕罗二氏综合征、Parsonage-Turner综合征、牛皮癣关节炎、反应性关节炎、复发性多软骨炎、腹膜后纤维化、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、施尼茨勒综合征、系统性红斑狼疮(SLE)、未分化结缔组织病(UCTD)、皮肌炎、纤维肌痛、包涵体肌炎、肌炎、重症肌无力、神经性肌强直、副肿瘤性小脑变性、多肌炎、急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、急性运动轴索性神经病、抗N-甲基-D-天冬氨酸(抗NMDA)受体脑炎、巴洛同心性硬化、比克斯塔夫氏脑炎、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、格巴二氏综合征、桥本氏脑病、特发性炎症性脱髓鞘疾病、兰伯特-伊顿肌无力综合征、多发性硬化、Oshtoran综合征、与链球菌相关的儿童自身免疫性神经精神障碍(PANDAS)、进行性炎症性神经病、不宁腿综合征、僵人综合征、小舞蹈病、横贯性脊髓炎、自身免疫性视网膜病变、自身免疫性葡萄膜炎、科根综合征、格拉夫斯眼病、中间葡萄膜炎、木样结膜炎、蚕蚀性角膜溃疡、视神经脊髓炎、眼阵挛肌阵挛综合征、视神经炎、巩膜炎、Susac氏综合征、交感性眼炎、托亨二氏综合征、自身免疫性内耳病(AIED)、梅尼埃病、白塞氏病、嗜酸性肉芽肿性多血管炎(EGPA)、巨细胞动脉炎、肉芽肿性多血管炎(GPA)、IgA血管炎(IgAV)、川崎病、白细胞破碎性血管炎、狼疮性血管炎、类风湿性血管炎、显微镜下多血管炎(MPA)、结节性多动脉炎(PAN)、风湿性多肌痛、血管炎、原发性免疫缺陷等等。
可以用本文所述的化合物治疗的潜在自身免疫性病症和疾病以及自身免疫性并存病的其它实例包括但不限于慢性疲劳综合征、复杂性区域疼痛综合征、嗜酸性粒细胞性食管炎、胃炎、间质性肺病、POEMS综合征、雷诺现象、原发性免疫缺陷、坏疽性脓皮病、无丙种球蛋白血症、淀粉样变性、肌萎缩侧索硬化、抗肾小管基底膜肾炎、特应性变态反应、特应性皮炎、自身免疫性周围神经病、Blau综合征、卡斯尔曼氏病、南美锥虫病、慢性阻塞性肺病、慢性复发性多灶性骨髓炎、补体成分2缺乏症、接触性皮炎、库欣氏综合征、皮肤白细胞破碎性血管炎、德戈斯病、湿疹、嗜酸性粒细胞性胃肠炎、嗜酸性粒细胞性肺炎、胎儿成红细胞增多症、进行性骨化性纤维发育不良、胃肠道类天疱疮、低丙种球蛋白血症、特发性巨细胞性心肌炎、特发性肺纤维化、IgA肾病、免疫调节脂蛋白、IPEX综合征、木样结膜炎、马吉德综合征、发作性睡病、Rasmussen氏脑炎、精神分裂症、血清病、脊椎关节病、Sweet氏综合征、高安氏动脉炎、杜兴氏肌营养不良、贝克型肌营养不良、先天性肌营养不良、强直性肌营养不良、面肩肱型(FHSD)肌营养不良、肢带型肌营养不良、眼咽型肌营养不良(OPMD)、远端型肌营养不良、埃德二氏肌营养不良、肺动脉高压、哮喘、慢性鼻-鼻窦炎、过敏性肺炎、非特异性间质性肺炎、先兆子痫、流产、复发性流产、再生障碍性贫血、自身免疫性嗜中性粒细胞减少症、自身免疫性溶血性贫血、癌症免疫治疗相关的自身免疫性疾病等等。
在一些实施方案中，自身免疫性病症不包含寻常型天疱疮、天疱疮。在一些实施方案中，自身免疫性病症不包含落叶型天疱疮。在一些实施方案中，自身免疫性病症不包含大疱性类天疱疮。在一些实施方案中，自身免疫性病症不包含古德帕斯彻氏病。在一些实施方案中，自身免疫性病症不包含牛皮癣。在一些实施方案中，自身免疫性病症不包含皮肤病症。在一些实施方案中，病症不包含肿瘤性病症，例如癌症。
另外，如本文提供的，已发现TLR9激活导致浆细胞样树突细胞中的PD-1表达增加。还发现通过CpGA的TLR9激活增加干扰素的产生。尽管不希望受任何特定理论的束缚，但利用本文提供的PD-1激动剂导致干扰素产生的降低。因此，在一些实施方案中，本文提供的化合物和组合物可以用于治疗干扰素病，发现PD-1可以在浆细胞样树突细胞的表面上表达，这是以前未知的并且令人惊讶的出乎意料的结果。因此，本文提供的PD-1结合双互补位分子可以用于调节TLR9介导的免疫应答。Toll样受体(TLR)对于先天免疫应答是必需的，因为它们识别几种不同的抗原并启动免疫/炎症应答，例如细胞因子的产生以及树突细胞和巨噬细胞的激活。尤其地，TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9识别病毒或细菌配体，例如糖蛋白、单链或双链RNA以及含有未甲基化的5′-CG-3′序列的多核苷酸。另外，免疫刺激性核酸分子通过与哺乳动物TLR9受体相互作用并通过其信号传导来刺激免疫应答。(Hemmi等人(2002)Nat.Immunol.3：196-200)浆细胞样树突细胞(PDC)，树突细胞(DC)的独特子集，能够通过内体TLR激活响应病毒感染而快速分泌大量I型干扰素(IFN)。不受任何特定理论的束缚，通过自身核酸对PDC和B细胞中的TLR7和TLR9的触发是系统性红斑狼疮(SLE)的发病机制中的关键。这可以导致来自PDC的I型IFN的产生，其可以通过以下进行检测：患者的血液中的IFN调控基因的上调(IFN特征)，以及与来自濒死细胞的DNA或RNA形成免疫复合物(IC)、来自B细胞的抗DNA和抗RNP抗体(Barrat和Coffman，2008；Marshak-Rothstein，2006)。一旦被激活，PDC就从血液迁移到发炎组织包括皮肤和肾脏内。已提议IFN和PDC还促成以IFN特征为特征的其它自身免疫性疾病的发病机制。实际上，产生I型IFN的PDC分别在受糖尿病、皮肌炎和干燥综合征影响的人的胰腺、肌肉和唾液腺中累积，强烈提示了失调的PDC激活可以是自身免疫性疾病的更普遍特征(Barrat和Coffman，2008；Guiducci等人，2009；Ueno等人，2007)。
不希望受特定理论的束缚，本公开内容发现了TLR9激活也可以导致在PDC上的PD-1表达的诱导。PD-1激动可以导致抑制TLR9介导的PDC的激活和效应子功能。在一些实施方案中，PD-1激动可以导致PDC中的IFN产生减少或不产生。在一些实施方案中，本文公开的分子是PD-1激动剂。在一些实施方案中，本公开内容的PD-1激动剂可以抑制PDC中的TLR-9活性。在一些实施方案中，通过使用本公开内容的PD-1激动剂介导的TLR-9活性的抑制可以导致PDC中的IFN产生减少或缺乏。
在一些实施方案中，本公开内容的PD-1激动剂可以用于治疗干扰素病。在一些实施方案中，干扰素病是I型干扰素病。在一些实施方案中，I型干扰素病是Aicardi-Goutières综合征、双侧纹状体坏死、慢性非典型嗜中性粒细胞性皮肤病伴脂肪营养不良和高温(CANDLE)、完全不外显、遗传性对称性色素异常症、家族性冻疮样狼疮、日本自身炎症性综合征伴脂肪营养不良(JASL)，关节挛缩、肌肉萎缩、小细胞性贫血、脂膜炎和脂肪营养不良(JMP)，孟德尔遗传易感分枝杆菌病(Mendelian susceptibility to mycobacterialdisease)(MSMD)、中条-西村综合征(Nakajo-Nishimura syndrome)、视网膜血管病变伴脑白质营养不良(RVCL)、痉挛性截瘫、STING相关的婴儿期发病的血管病(SAVI)、辛-梅二氏综合征(Singleton-Merten syndrome)或脊椎软骨瘤病(spondylochondromatosis，SPENCD)。如本文使用的，术语干扰素病意指先天性或获得性的干扰素系统的一般病理状况，其包括下述类型的IFN系统病症：缺乏症；IFN系统瘫痪；对病毒、细菌和突变的肿瘤细胞的应答不足；以及I型干扰素的过度产生。在一些实施方案中，干扰素病包含自身免疫性疾病。在一些实施方案中，自身免疫性疾病是系统性红斑狼疮(SLE)。
在一些实施方案中，待治疗干扰素病的受试者是有此需要的受试者。即，受试者正在用本文提供的组合物和分子进行治疗，目的是治疗此类干扰素病。
在一些实施方案中，提供了治疗干扰素病的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者(包括有此需要的受试者)施用如本文提供的分子或组合物。在一些实施方案中，该方法包括抑制来自浆细胞样树突细胞的干扰素产生。在一些实施方案中，与在本文提供的互补位PD-1激动剂的不存在下产生的干扰素的量相比，干扰素的产生减少了约或至少10、20、30、40、50、60、70、80、90或95％。
在一些实施方案中，提供了减少干扰素产生的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者(包括有此需要的受试者)施用如本文提供的分子或组合物。在一些实施方案中，在一些实施方案中，与在本文提供的互补位PD-1激动剂的不存在下产生的干扰素的量相比，干扰素的产生减少了约或至少10、20、30、40、50、60、70、80、90或95％。
在一些实施方案中，提供了抑制受试者中TLR9介导的干扰素产生的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者(包括有此需要的受试者)施用如本文提供的分子或组合物。在一些实施方案中。在一些实施方案中，与在本文提供的互补位PD-1激动剂的不存在下产生的干扰素的量相比，干扰素的产生减少了约或至少10、20、30、40、50、60、70、80、90或95％。
在一些实施方案中，提供了治疗TLR9介导的病症的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者(包括有此需要的受试者)施用如本文提供的分子或组合物。在一些实施方案中，TLR9介导的病症是I型干扰素病。本文提供了I型干扰素病的非限制性实例。
在一些实施方案中，提供了抑制患者的血液中IFN调控的基因(IFN-特征)上调的方法。在一些实施方案中，在一些实施方案中，该方法包括向受试者(包括有此需要的受试者)施用如本文提供的分子或组合物。在一些实施方案中，被抑制的基因是OAS1、IFIT3、MX1和/或IFN-β1。
在一些实施方案中，提供了抑制细胞或受试者中的OAS1、IFIT3、MX1和IFN-β1表达的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者施用如本文提供的多肽、蛋白质或抗体，或者使细胞与如本文提供的多肽、蛋白质或抗体接触。在一些实施方案中，OAS1、IFIT3、MX1和IFN-β1的表达是基因表达。在一些实施方案中，细胞是浆细胞样树突细胞。在一些实施方案中，浆细胞样树突细胞是活化的浆细胞样树突细胞。在一些实施方案中，与未施用或接触如本文提供的多肽、蛋白质或抗体的相同细胞或受试者相比，如通过基因的mRNA水平测量的基因表达被抑制了10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％，或者被抑制了至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％。
在一些实施方案中，本公开内容的PD-1激动剂可以用于治疗IgG4相关疾病。在一些实施方案中，IgG4相关疾病是慢性炎症。在一些实施方案中，IgG4相关疾病是一系列复杂的纤维炎性病症。本文提供的多肽可以例如包含多个效应物结合/调节部分。任何合适的接头或平台可以用于呈现多个部分。接头通常可以偶联或融合到一个或多个效应物结合/调节部分。
接头区域
如其它地方讨论的，效应物结合/调节部分可以通过接头区域进行连接。接头可以是肽接头或化学接头(例如小分子)。本文所述的任何接头区域都可以用作接头。例如，接头可以包含Fc区。这部分地在图1和图2中进行说明。在一些实施方案中，治疗性化合物包含可以自结合的接头。在一些实施方案中，治疗性化合物包含具有使自结合降到最低的部分的接头。接头还包括甘氨酸/丝氨酸接头。在一些实施方案中，接头是甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸接头。在一些实施方案中，接头是丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸接头。在一些实施方案中，接头是甘氨酸/丙氨酸接头。在一些实施方案中，接头可以包含GGGGS(SEQ ID NO：4)的一个或多个重复。在一些实施方案中，接头包含SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：8的1、2、3或4个重复。在一些实施方案中，接头包含GGGGS(SEQ ID NO：4)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：5)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：6)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：7)、GGGGA(SEQ ID NO：8)、GGGGAGGGGA(SEQ ID NO：9)、GGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：10)、或GGGGAGGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：11)。在一些实施方案中，接头包含GGGSEGGGSEGGGSE(SEQ ID NO：1)。在一些实施方案中，接头包含GGGSKGGGSKGGGSK(SEQ ID NO：258)。在一些实施方案中，接头包含AEEEKAEEEKAEEEK(SEQ ID NO：260)。这些接头可以用于本文提供的任何治疗性化合物、多肽或组合物中。
接头区可以包含已进行修饰(例如，突变)以产生异源二聚体的Fc区。在一些实施方案中，Fc区的CH3结构域可以是突变的。此类Fc区的实例可以在例如美国专利号9,574,010中找到，所述专利在此通过引用以其整体并入。如本文定义的Fc区包含CH3结构域或其片段，并且可以另外包含一个或多个另外的恒定区结构域或其片段，包括铰链、CH1或CH2。应理解，Fc氨基酸残基的编号是如Kabat等人1991，NIH Publication 91-3242，NationalTechnical Information SerVice，Springfield，Va中的EU索引的编号。“如Kabat中所示的EU索引”指人IgG1 Kabat抗体的EU索引编号。为方便起见，美国专利号9,574,010的表B提供了根据如Kabat中所示的EU索引编号的，来自人IgG1的CH2和CH3结构域的氨基酸，其在此通过引用并入。美国专利号9,574,010的表1.1提供了可以用作接头区域的变体Fc异源二聚体的突变。美国专利号9,574,010的表1.1在此通过引用并入。
在一些实施方案中，接头包含第一CH3结构域多肽和/或第二CH3结构域多肽，与野生型CH3结构域多肽相比，所述第一CH3结构域多肽和第二CH3结构域多肽独立地包含氨基酸修饰，其中所述第一CH3结构域多肽包含在位置T350、L351、F405和Y407处的氨基酸修饰，并且所述第二CH3结构域多肽包含在位置T350、T366、K392和T394处的氨基酸修饰，其中在位置T350处的氨基酸修饰是T350V、T3501、T350L或T350M；在位置L351处的氨基酸修饰是L351Y；在位置F405处的氨基酸修饰是F405A、F405V、F405T或F405S；在位置Y407处的氨基酸修饰是Y407V、Y407A或Y407I；在位置T366处的氨基酸修饰是T366L、T366I、T366V或T366M；在位置K392处的氨基酸修饰是K392F、K392L或K392M；并且在位置T394处的氨基酸修饰是T394W，并且其中所述氨基酸残基的编号根据如Kabat中所示的EU索引。
在一些实施方案中，在位置K392处的氨基酸修饰是K392M或K392L。在一些实施方案中，在位置T350处的氨基酸修饰是T350V。在一些实施方案中，第一CH3结构域多肽进一步包含选自Q347R和S400R或S400E之一的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，第二CH3结构域多肽进一步包含选自L351Y、K360E和N390R、N390D或N390E之一的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，第一CH3结构域多肽进一步包含选自Q347R和S400R或S400E之一的一种或多种氨基酸修饰，并且第二CH3结构域多肽进一步包含选自L351Y、K360E和N390R、N390D或N390E之一的一种或多种氨基酸修饰。在一些实施方案中，在位置T350处的氨基酸修饰是T350V。在一些实施方案中，在位置F405处的氨基酸修饰是F405A。在一些实施方案中，在位置Y407处的氨基酸修饰是Y407V。在一些实施方案中，在位置T366处的氨基酸修饰是T366L或T366I。在一些实施方案中，在位置F405处的氨基酸修饰是F405A，在位置Y407处的氨基酸修饰是Y407V，在位置T366处的氨基酸修饰是T366L或T366I，并且在位置K392处的氨基酸修饰是K392M或K392L。在一些实施方案中，第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、L351Y、S400E、F405V和Y407V，并且第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、T366L、N390R、K392M和T394W。在一些实施方案中，第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、L351Y、S400E、F405T和Y407V，并且第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、T366L、N390R、K392M和T394W。在一些实施方案中，第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、L351Y、S400E、F405S和Y407V，并且第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、T366L、N390R、K392M和T394W。在一些实施方案中，第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、L351Y、S400E、F405A和Y407V，并且第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、L351Y、T366L、N390R、K392M和T394W。在一些实施方案中，第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰Q347R、T350V、L351Y、S400E、F405A和Y407V，并且第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、K360E、T366L、N390R、K392M和T394W。在一些实施方案中，第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、L351Y、S400R、F405A和Y407V，并且第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、T366L、N390D、K392M和T394W。在一些实施方案中，第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、L351Y、S400R、F405A和Y407V，并且第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、T366L、N390E、K392M和T394W。在一些实施方案中，第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、L351Y、S400E、F405A和Y407V，并且第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、T366L、N390R、K392L和T394W。在一些实施方案中，第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、L351Y、S400E、F405A和Y407V，并且第-二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T350V、T366L、N390R、K392F和T394W。
在一些实施方案中，分离的异源多聚体包括包含第一CH3结构域多肽和第二CH3结构域多肽的异源二聚体CH3结构域，所述第一CH3结构域多肽包含在位置F405和Y407处的氨基酸修饰，并且所述第二CH3结构域多肽包含在位置T366和T394处的氨基酸修饰，其中：(i)第一CH3结构域多肽进一步包含在位置L351处的氨基酸修饰，和(ii)第二CH3结构域多肽进一步包含在位置K392处的氨基酸修饰，其中在位置F405处的氨基酸修饰是F405A、F405T、F405S或F405V；并且在位置Y407处的氨基酸修饰是Y407V、Y407A、Y407L或Y407I；在位置T394处的氨基酸修饰是T394W；在位置L351处的氨基酸修饰是L351Y；在位置K392处的氨基酸修饰是K392L、K392M、K392V或K392F，并且在位置T366处的氨基酸修饰是T366I、T366L、T366M或T366V，其中所述异源二聚体CH3结构域具有约70℃或更高的解链温度(Tm)以及大于约90％的纯度，其中所述氨基酸残基的编号根据如Kabat中所示的EU索引。
在一些实施方案中，接头包含第一CH3结构域多肽和/或第-二CH3结构域多肽，其中所述第一CH3结构域多肽包含在位置F405和Y407处的氨基酸修饰，并且所述第二CH3结构域多肽包含在位置T366和T394处的氨基酸修饰，其中：(i)第一CH3结构域多肽进一步包含在位置L351处的氨基酸修饰，和(ii)第CH3结构域多肽进一步包含在位置K392处的氨基酸修饰，其中在位置F405处的氨基酸修饰是F405A、F405T、F405S或F405V；并且在位置Y407处的氨基酸修饰是Y407V、Y407A、Y407L或Y407I；在位置T394处的氨基酸修饰是T394W；在位置L351处的氨基酸修饰是L351Y；在位置K392处的氨基酸修饰是K392L、K392M、K392V或K392F，并且在位置T366处的氨基酸修饰是T366I、T366L、T366M或T366V，其中所述异源二聚体CH3结构域具有约70℃或更高的解链温度(Tm)以及大于约90％的纯度，其中所述氨基酸残基的编号根据如Kabat中所示的EU索引。在一些实施方案中，在位置F405处的氨基酸修饰是F405A。在一些实施方案中，在位置T366处的氨基酸修饰是T366I或T366L。在一些实施方案中，在位置Y407处的氨基酸修饰是Y407V。在一些实施方案中，在位置F405处的氨基酸修饰是F405A，在位置Y407处的氨基酸修饰是Y407V，在位置T366处的氨基酸修饰是T366I或T366L，并且在位置K392处的氨基酸修饰是K392L或K392M。在一些实施方案中，在位置F405处的氨基酸修饰是F405A，在位置Y407处的氨基酸修饰是Y407V，在位置T366处的氨基酸修饰是T366L，并且在位置K392处的氨基酸修饰是K392M。在一些实施方案中，在位置F405处的氨基酸修饰是F405A，在位置Y407处的氨基酸修饰是Y407V，在位置T366处的氨基酸修饰是T366L，并且在位置K392处的氨基酸修饰是K392L。在一些实施方案中，在位置F405处的氨基酸修饰是F405A，在位置Y407处的氨基酸修饰是Y407V，在位置T366处的氨基酸修饰是T366I，并且K392处的氨基酸修饰是K392M。在一些实施方案中，在位置F405处的氨基酸修饰是F405A，在位置Y407处的氨基酸修饰是Y407V，在位置T366处的氨基酸修饰是T366I，并且在位置K392处的氨基酸修饰是K392L。在一些实施方案中，第一CH3结构域多肽进一步包含在位置S400处选自S400D和S400E的氨基酸修饰，并且第二CH3结构域多肽进一步包含氨基酸修饰N390R。在一些实施方案中，在位置F405处的氨基酸修饰是F405A，在位置Y407处的氨基酸修饰是Y405V，在位置S400处的氨基酸修饰是S400E，在位置T366处的氨基酸修饰是T366L，并且在位置K392处的氨基酸修饰是K392M。
在一些实施方案中，修饰的第一CH3结构域和第二CH3结构域由基于G型免疫球蛋白(IgG)的Fc构建体包含。IgG可以是例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
包含变体CH3结构域的其它接头在美国专利号9,499,634和9，562，109中进行描述，所述专利各自通过引用以其整体并入。
在一些实施方案中，接头可以是蛋白质的互补片段，所述蛋白质例如天然存在的蛋白质，例如人血清白蛋白。在一些实施方案中，分段位点位于白蛋白多肽的环上，所述环具有高溶剂可及表面积(SASA)以及与白蛋白结构的剩余部分的有限接触。在一些实施方案中，分段导致转运蛋白多肽之间的互补界面。这些分段位点在例如美国专利号9,388,231中进行描述，所述专利在此通过引用以其整体并入。
在一些实施方案中，第一多肽包含具有本文所述的一种或多种突变的白蛋白多肽的残基1-337或残基1-293。在一些实施方案中，第二多肽包含具有本文所述的一种或多种突变的白蛋白多肽的残基342-585或304-585。在一些实施方案中，第一多肽包含白蛋白的残基1-339、1-300、1-364、1-441、1-83、1-171、1-281、1-293、1-114、1-337或1-336。在一些实施方案中，第二多肽包含白蛋白的残基301-585、365-585、442-585、85-585、172-585、282-585或115-585、304-585、340-585或342-585。
在一些实施方案中，第一多肽和第二多肽包含如下表中所示的白蛋白的残基。白蛋白的序列在下文进行描述。
第一多肽残基 第二多肽残基
1-300 301-585
1-364 365-585
1-441 442-585
1-83 85-585
1-171 172-585
1-281 282-585
1-114 115-585
1-339 340-585
1-337 342-585
1-293 304-585
1-336 342-585
在一些实施方案中，第一多肽和第二多肽包含可以彼此形成共价键例如二硫键的接头。接头的非限制性实例是肽接头。在一些实施方案中，肽接头包含GGGGS(SEQ ID NO：4)。接头可以融合到第一多肽的C末端和第二多肽的N末端。接头也可以用于附着本文所述的部分，而不消除接头形成二硫键的能力。在一些实施方案中，第一多肽和第二多肽不包含可以形成共价键的接头。在一些实施方案中，第一多肽和第二多肽具有下述取代。
第一多肽取代 第二多肽取代
A217C V343C
L331C A350C
A217C L346C
W214C V343C
A335C L346C
L198C V455C
A217C A335C
A217C L331C
L198C N458C
A194C V455C
白蛋白多肽的序列可以是以去除N末端信号传导残基的后蛋白形式，如所示的人白蛋白的序列(MKWVTFISLLFLFSSAYSRGVFRR)(SEQ ID NO：3)
Figure BDA0004186038980000301
Figure BDA0004186038980000302
(人白蛋白，SEQ ID NO：2)
在一些实施方案中，多肽在N末端处包含抗体，所述抗体由与IgG Fc主链的C末端上的scFv融合的IgG1 Fc主链上的F(ab′)2构成。在一些实施方案中，IgG Fc主链是IgG1 Fc主链。在一些实施方案中，IgG1 主链被IgG4主链、IgG2主链或其它类似的IgG主链替换。本段中描述的IgG主链可以在本申请自始至终使用，其中Fc区被称为治疗性化合物的部分。因此，在一些实施方案中，由IgG1 Fc主链上的F(ab′)2构成的抗体可以是在IgG1 Fc上的抗PD-1抗体或本文提供的任何其它效应物结合/调节部分。在一些实施方案中，如果N末端区域是抗PD-1抗体，则融合到C末端的scFv区段可以是抗PD-1抗体。在这个非限制性实例中，N末端可以是效应物结合/调节部分，例如本文提供的任何一种，并且C末端可以是另一种效应物结合/调节部分，例如本文提供的任何一种。在一些实施方案中，效应物结合/调节部分与另一种效应物结合/调节部分相同。在一些实施方案中，效应物结合/调节部分与另一种效应物结合/调节部分不同。
在一些实施方案中，多肽从N末端到C末端包含下式：
(R1-Fc-R2)2，
其中R1是第一结合结构域，
其中R2是第二结合结构域，
其中R1和R2之一是Fab抗体，而另一个是scFv抗体。
其中Rl和R2通过接头进行连接，
其中所述接头包含Fc免疫球蛋白恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，
其中所述接头进一步包含G/S或G/A接头，和
其中G/S或G/A接头包含(GGGGS)n(SEQ ID NO：303)或(GGGGA)n(SEQ ID NO：304)的序列或其组合，其中每个n独立地为1-4。
在一些实施方案中，四链体抗体从N末端到C末端具有以下通式：
(R2-Fc-R1)2，
其中R1是第一结合结构域，
其中R2是第二结合结构域，
其中R1和R2之一是Fab抗体，而另一个是scFv抗体。
其中R1和R2通过接头进行连接，
其中所述接头包含Fc免疫球蛋白恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，
其中所述接头进一步包含G/S或G/A接头，和
其中G/S或G/A接头包含(GGGGS)n(SEQ ID NO：303)或(GGGGA)n(SEQ ID NO：304)的序列或其组合，其中每个n独立地为1-4。
在一些实施方案中，多肽包括包含通过第一接头连接到scFv抗体的Fab重链结构域的第一多肽链、以及包含Fab轻(κ)链结构域的第二多肽链，其中所述Fab重链和轻链结合PD-1，并且所述scFv抗体在相同或不同的表位处结合PD-1。在一些实施方案中，第一接头包含Fc免疫球蛋白恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，并且进一步包含(GGGGS)n(SEQ IDNO：303)或(GGGGA)n(SEQ ID NO：304)的序列或其组合，其中每个n独立地为1-4。在一些实施方案中，scFv包含通过scFv接头连接到轻链可变结构域的重链可变结构域，其中所述scFv接头包含(GGGGS)n(SEQ ID NO：303)、(GGGGA)n(SEQ ID NO：304)、(GGGSE)n(SEQ IDNO：305)、(GGGSK)n(SEQ ID NO：306)或(AEEEK)n(SEQ ID NO：307)的序列或其组合，其中每个n独立地为1-4。
彼此独立的第一接头和scFv接头的序列可以是相同或不同的，以及如本申请自始至终另外描述的。因此，在一些实施方案中，第一接头包含GGGGS(SEQ ID NO：4)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：5)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：6)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQID NO：7)、GGGGA(SEQ ID NO：8)、GGGGAGGGGA(SEQ ID NO：9)、GGGGAGGGGAGGGGA(SEQ IDNO：10)、或GGGGAGGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：11)。在一些实施方案中，scFv接头包含GGGGS(SEQ ID NO：4)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：5)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：6)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：7)、GGGGA(SEQ ID NO：8)、GGGGAGGGGA(SEQ ID NO：9)、GGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：10)、或GGGGAGGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：11)、或GGGSEGGGSEGGGSE(SEQ ID NO：1)。在一些实施方案中，接头包含GGGSKGGGSKGGGSK(SEQ IDNO：258)。在一些实施方案中，接头包含AEEEKAEEEKAEEEK(SEQ ID NO：260)。
在一些实施方案中，多肽包含第一多肽链和第二多肽链，其中：
第一多肽链从N末端到C末端具有下式：
[VH-A]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[VH-B]-[接头2]-[VK-B]；或
[VH-A]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[VK-B]-[接头2]-[VH-B]；
第二多肽链从N末端到C末端具有下式：
[VK-A]-[CK]，
其中：
VH-A＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
VK-A＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域
VH-B＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
VK-B＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域
CH1＝人IgG1的恒定重结构域1
CH2＝人IgG1的恒定重结构域2
CH3＝人IgG1的恒定重结构域3
CK＝κ轻链的恒定结构域
接头1是甘氨酸/丝氨酸或甘氨酸/丙氨酸接头
接头2是甘氨酸/丝氨酸或甘氨酸/丙氨酸接头，
其中VH-A、VK-A、VH-B和VK-B可以来自相同或不同的抗体。
在一些实施方案中，多肽包含第一多肽链和第二多肽链，其中：
第一多肽链从N末端到C末端具有下式：
[VH-B]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[VH-A]-[接头2]-[VK-A]；或
[VH-B]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[VK-A]-[接头2]-[VH-A]；
第二多肽链从N末端到C末端具有下式：
[VK-B]-[CK]，
其中：
VH-A＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
VK-A＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域
VH-B＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
VK-B＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域
CH1＝例如本文提供的人IgG1的恒定重结构域1
CH2＝例如本文提供的人IgG1的恒定重结构域2
CH3＝例如本文提供的人IgG1的恒定重结构域3
CK＝例如本文提供的κ轻链的恒定结构域
接头1是甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸、或甘氨酸/丙氨酸接头、或如本文提供的其它接头；
接头2是甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸、或甘氨酸/丙氨酸接头、或如本文提供的其它接头；
其中VH-A、VK-A、VH-B和VK-B可以来自相同或不同的抗体。
在一些实施方案中，CH1、CH2和CH3是来自IgG Fc区的结构域。CH1-CH2-CH3的顺序可以是例如：
Figure BDA0004186038980000341
在一些实施方案中，接头1包含1、2、3或4个GGGGS(SEQ ID NO：4)和/或GGGGA(SEQID NO：8)和/或GGGSE(SEQ ID NO：300)重复。在一些实施方案中，接头2包含1、2、3或4个GGGGS(SEQ ID NO：4)、GGGSE(SEQ ID NO：300)和/或GGGGA(SEQ ID NO：8)重复。为避免疑义，在本申请自始至终使用的接头1和接头2的序列是彼此独立的。因此，在一些实施方案中，接头1和接头2可以是相同或不同的。在一些实施方案中，接头1包含GGGGS(SEQ ID NO：4)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：5)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：6)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：7)、GGGGA(SEQ ID NO：8)、GGGGAGGGGA(SEQ ID NO：9)、GGGGAGGGGAGGGGA(SEQID NO：10)、或GGGGAGGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：11)。在一些实施方案中，接头2包含GGGGS(SEQ ID NO：4)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：5)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：6)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：7)、GGGGA(SEQ ID NO：8)、GGGGAGGGGA(SEQ ID NO：9)、GGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：10)、GGGGAGGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：11)、GGGSE(SEQ IDNO：300)、GGGSEGGGSE(SEQ ID NO：301)、GGGSEGGGSEGGGSE(SEQ ID NO：1)、或GGGSEGGGSEGGGSEGGGSE(SEQ ID NO：302)。
在一些实施方案中，多肽包含轻链和重链。在一些实施方案中，轻链和重链在N末端处始于第一效应物部分的VH结构域，随后为人IgG1的CH1结构域，其与人IgG1的Fc区(例如，CH2-CH3)融合。在一些实施方案中，在Fc区处的C末端与如本文提供的接头融合，所述接头例如但不限于GGGGS(SEQ ID NO：4)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：5)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQID NO：6)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：7)、GGGGA(SEQ ID NO：8)、GGGGAGGGGA(SEQID NO：9)、GGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：10)、或GGGGAGGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：11)、GGGSE(SEQ ID NO：300)、GGGSEGGGSE(SEQ ID NO：301)、GGGSEGGGSEGGGSE(SEQ ID NO：1)、或GGGSEGGGSEGGGSEGGGSE(SEQ ID NO：302)。然后可以将接头融合到第二效应物部分，例如scFv抗体。在一些实施方案中，第一效应物部分和第二效应物部分是PD-1抗体。在一些实施方案中，PD-1抗体选自PD-1抗体表4。在一些实施方案中，PD-1抗体选自PD-1抗体表5。在一些实施方案中，PD-1抗体选自PD-1抗体表4和PD-1抗体表5。多肽可以通过重链同源二聚化进行同源二聚化，其导致具有两个效应部分组例如两个抗PD-1抗体组的治疗性化合物。
在一些实施方案中，提供了具有下式的多肽：
链1：FAbVH-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[scFv VK]-[接头2]-[scFv VH]；和/或
链2：FAbVL-CK，其中：
FAbVH＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
scFv VK＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域；
scFv VH＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
FAbVL＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域；
CH1＝例如本文提供的人免疫球蛋白例如IgG1的恒定重结构域1；
CH2＝例如本文提供的人免疫球蛋白例如IgG1的恒定重结构域2；
CH3＝例如本文提供的人免疫球蛋白例如IgG1的恒定重结构域3；
CK＝例如本文提供的κ轻链的恒定结构域或可以取代κ轻链的恒定结构域的其它轻链恒定结构域；
接头1是甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸、或甘氨酸/丙氨酸接头、或如本文提供的其它接头(例如(GGGSE)n，其中n是1-4)；
接头2是甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸、或甘氨酸/丙氨酸接头、或如本文提供的其它接头(例如(GGGSE)n，其中n是1-4)。
在一些实施方案中，链1具有下式FAbVH-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[scFvVH]-[接头2]-[scFv VK]；其中：
AbVH＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
scFv VK＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域；
scFv VH＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
FAbVL＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域；
CH1＝例如本文提供的人免疫球蛋白例如IgG1的恒定重结构域1；
CH2＝例如本文提供的人免疫球蛋白例如IgG1的恒定重结构域2；
CH3＝例如本文提供的人免疫球蛋白例如IgG1的恒定重结构域3；
CK＝例如本文提供的κ轻链的恒定结构域或可以取代κ轻链的恒定结构域的其它轻链恒定结构域；
接头1是甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸、或甘氨酸/丙氨酸接头、或如本文提供的其它接头(例如(GGGSE)n，其中n是1-4)；
接头2是甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸、或甘氨酸/丙氨酸接头、或如本文提供的其它接头(例如(GGGSE)n，其中n是1-4)。
在一些实施方案中，提供了具有下式的多肽：
链1：[scFv VK]-[接头2]-[scFv VH]-[接头1]-[FAbVH]-[CH1]-[CH2]-[CH3]，和/或
链2：FAbVL-CK，其中：
FAbVH＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
scFv VK＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域；
scFv VH＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
FAbVL＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域；
CH1＝例如本文提供的人免疫球蛋白例如IgG1的恒定重结构域1；
CH2＝例如本文提供的人免疫球蛋白例如IgG1的恒定重结构域2；
CH3＝例如本文提供的人免疫球蛋白例如IgG1的恒定重结构域3；
CK＝例如本文提供的κ轻链的恒定结构域或可以取代κ轻链的恒定结构域的其它轻链恒定结构域；
接头1是甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸、或甘氨酸/丙氨酸接头、或如本文提供的其它接头(例如(GGGSE)n，其中n是1-4)；
接头2是甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸、或甘氨酸/丙氨酸接头、或如本文提供的其它接头(例如(GGGSE)n，其中n是1-4)。
在一些实施方案中，提供了具有下式的多肽：
链1：[scFvVH]-[接头2]-[scFv VK]-[接头1]-[FAbVH]-[CH1]-[CH2]-[CH3]，和/或
链2：FAbVL-CK，其中：
FAbVH＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
scFv VK＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域；
scFv VH＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
FAbVL＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域；
CH1＝例如本文提供的人免疫球蛋白例如IgG1的恒定重结构域1；
CH2＝例如本文提供的人免疫球蛋白例如IgG1的恒定重结构域2；
CH3＝例如本文提供的人免疫球蛋白例如IgG1的恒定重结构域3；
CK＝例如本文提供的κ轻链的恒定结构域或可以取代κ轻链的恒定结构域的其它轻链恒定结构域；
接头1是甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸、或甘氨酸/丙氨酸接头、或如本文提供的其它接头(例如(GGGSE)n，其中n是1-4)；
接头2是甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸、或甘氨酸/丙氨酸接头、或如本文提供的其它接头(例如(GGGSE)n，其中n是1-4)。
在一些实施方案中，多肽包含多个链1和多个链2。在一些实施方案中，多肽包含链1的两个多肽和链2的2个多肽。在一些实施方案中，链1的多个(例如，两个)多肽彼此连接。在一些实施方案中，链1的多个(例如两个)多肽通过二硫键彼此连接。在一些实施方案中，将多个链1多肽彼此连接的二硫键是通过多肽的[CH1]-[CH2]-[CH3]结构域。在一些实施方案中，将多个链1多肽彼此连接的二硫键是通过存在于多肽的[CH1]-[CH2]结构域之间的铰链区。
相应地，在一些实施方案中，多肽可以包含在4条多肽链中提供的4个结合结构域，其中第一结合结构域由第一个链1和第一个链2的FAbVH和FAbVL形成，第二结合结构域由第二个链1和第二个链2的FAbVH和FAbVL形成，第三结合结构域由第一个链1的[scFv VH/VK]-[接头2]-[scFv VK/VH]形成，并且第四结合结构域由第二个链1的[scFv VH/VK]-[接头2]-[scFv VK/VH]形成，以产生包含结合PD-1的四(4)个结合结构域的多肽。在一些实施方案中，每个结合结构域充当PD-1激动剂。在一些实施方案中，4个多肽结合结构域包含如本文提供的序列或抗体序列。scFV和FAb序列(例如结构域)是例如如本文提供的。
在一些实施方案中，FAbVH、FAbVL、scFv VH和scFv VH包含如本文提供的重链或轻链序列。在一些实施方案中，FAbVH、FAbVL、scFv VH和scFv VK包含如本文提供的CDR1、CDR2、CDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些实施方案中，与由scFv VK和scFv VH形成的结合结构域相比，由FAbVH和FAbVL形成的结合结构域结合PD-1上的不同表位。
在一些实施方案中，与由scFv VK和scFv VH形成的结合结构域相比，由FAbVH和FAbVL形成的结合结构域以更高的亲和力结合PD-1。
在一些实施方案中，与由scFv VK和scFv VH形成的结合结构域相比，由FAbVH和FAbVL形成的结合结构域以更高的亲和力结合PD-1。
在一些实施方案中，scFvVK和scFv VH通过二硫键连接。该实施方案的非限制性实例例如在图3(70)和(75)中进行说明。
在一些实施方案中，PD-1抗体选自下表：
Figure BDA0004186038980000381
/>
Figure BDA0004186038980000391
/>
Figure BDA0004186038980000401
/>
Figure BDA0004186038980000411
/>
Figure BDA0004186038980000421
/>
Figure BDA0004186038980000431
/>
Figure BDA0004186038980000441
/>
Figure BDA0004186038980000451
/>
Figure BDA0004186038980000461
/>
Figure BDA0004186038980000471
/>
Figure BDA0004186038980000481
/>
Figure BDA0004186038980000491
/>
Figure BDA0004186038980000501
/>
Figure BDA0004186038980000511
/>
Figure BDA0004186038980000521
/>
Figure BDA0004186038980000531
/>
Figure BDA0004186038980000541
/>
Figure BDA0004186038980000551
/>
Figure BDA0004186038980000561
/>
Figure BDA0004186038980000571
在一些实施方案中，抗体包含如PD-1抗体表4中所示的CDR组。在一些实施方案中，抗体包含PD-1抗体表4的克隆ID：PD1AB4或PD1AB30的CDR。
在一些实施方案中，FAbVH、FAbVL、scFv VH和scFv VH包含如本文提及的表中所示的CDR组。
尽管PD-1抗体表4说明了可以被视为Fab形式的重链和轻链，但重链和轻链可以使用肽或其它类型的接头以scFV形式进行连接，以连接以单链形式的重链和轻链。
在一些实施方案中，与以scFv形式的PD-1抗体相比，呈FAb形式的PD-1抗体对于PD-1具有更低的亲和力。在一些实施方案中，与以scFv形式的PD-1抗体相比，呈FAb形式的PD-1抗体对于PD-1具有更高的亲和力。在一些实施方案中，亲和力高或低约或至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％或500％，如本文提供的。
在一些实施方案中，提供了下述克隆的CDR，其基于可以用于表征CDR的不同形式。
Figure BDA0004186038980000581
/>
Figure BDA0004186038980000591
/>
Figure BDA0004186038980000601
/>
Figure BDA0004186038980000611
相应地，在一些实施方案中，提供了结合PD-1的抗体，其包含如上表中提供的LCDR组或HCDR组。
在一些实施方案中，提供了下述克隆的Fab CDR，其基于可以用于表征CDR的不同形式。
Figure BDA0004186038980000621
/>
Figure BDA0004186038980000631
/>
Figure BDA0004186038980000641
相应地，在一些实施方案中，提供了结合PD-1的抗体，其包含如本文的表中提供的Fab LCDR组或Fab HCDR组。
在一些实施方案中，提供了下述克隆的scFv CDR，其基于可以用于表征CDR的不同形式。
Figure BDA0004186038980000651
/>
Figure BDA0004186038980000661
/>
Figure BDA0004186038980000671
相应地，在一些实施方案中，提供了结合PD-1的抗体，其包含如本文的表中提供的scFv LCDR组或scFv HCDR组。在一些实施方案中，提供了结合PD-1的抗体，其包含如上文的PD-1抗体Fab表6和PD-1抗体scFv表7中提供的Fab LCDR和Fab HCDR组、或scFvLCDR和scFvHCDR组。
在一些实施方案中，PD-1抗体包含选自下表的多肽：
Figure BDA0004186038980000681
/>
Figure BDA0004186038980000691
/>
Figure BDA0004186038980000701
/>
Figure BDA0004186038980000711
/>
Figure BDA0004186038980000721
/>
Figure BDA0004186038980000731
/>
Figure BDA0004186038980000741
/>
Figure BDA0004186038980000751
/>
Figure BDA0004186038980000761
/>
Figure BDA0004186038980000771
/>
Figure BDA0004186038980000781
/>
Figure BDA0004186038980000791
/>
Figure BDA0004186038980000801
/>
Figure BDA0004186038980000811
/>
Figure BDA0004186038980000821
/>
Figure BDA0004186038980000831
在一些实施方案中，PD-1抗体包含选自PD-1抗体表8的多肽。在一些实施方案中，PD-1抗体包含选自下表的多肽：
Figure BDA0004186038980000841
/>
Figure BDA0004186038980000851
/>
Figure BDA0004186038980000861
/>
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在一些实施方案中，PD-1抗体包含选自PD-1抗体表9的多肽。在一些实施方案中，PD-1抗体包含选自下表的多肽：
Figure BDA0004186038980001121
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Figure BDA0004186038980001131
在一些实施方案中，PD-1抗体包含选自PD-1抗体表10的多肽。在一些实施方案中，PD-1抗体包含选自下表的多肽：
Figure BDA0004186038980001141
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Figure BDA0004186038980001151
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Figure BDA0004186038980001161
在一些实施方案中，PD-1抗体包含选自PD-1抗体表11的多肽。
如本文提供的，抗体或多肽可以具有如本文的表中提供的多条多肽链，例如链1中的两条和链2中的两条以制备互补位分子。这些是非限制性实例。
在一些实施方案中，提供了包含结合PD-1的多种抗体的多肽。多种抗体包含具有相同或不同CDR区的多于一种抗体。
在一些实施方案中，PD-1抗体包含如PD-1抗体表4中所示的序列。在一些实施方案中，抗体以如PD-1抗体表4中所示的scFV形式。在一些实施方案中，抗体包含来自PD-1抗体表4的任何一个克隆的CDR1、来自PD-1抗体表4的任何一个克隆的CDR2、以及来自PD-1抗体表4的任何一个克隆的CDR3。在一些实施方案中，抗体包含来自PD-1抗体表4的任何一个克隆的LCDR1、来自PD-1抗体表4的任何一个克隆的LCDR2、以及来自PD-1抗体表4的任何一个克隆的LCDR3。在一些实施方案中，上文显示的CDR的氨基酸残基含有突变。在一些实施方案中，CDR含有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个取代或突变。在一些实施方案中，取代是保守取代。
在一些实施方案中，PD-1抗体具有选自PD-1抗体表4的任何一个克隆的VH区、以及选自如PD-1抗体表4中所示的任何一个克隆的VL区。
在一些实施方案中，分子包含结合PD-1的抗体。在一些实施方案中，抗体包括(i)包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区，其中所述重链CDR1序列具有PD-1抗体表4中所示的任何CDR1序列的氨基酸序列；所述重链CDR2具有PD-1抗体表4中所示的任何CDR2序列的氨基酸序列，并且所述重链CDR3具有PD-1抗体表4中所示的任何CDR3序列的氨基酸序列；或前述任一种的变体；以及(ii)包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中所述轻链CDR1序列具有PD-1抗体表4中所示的任何LCDR1序列的氨基酸序列；所述轻链LCDR2具有PD-1抗体表4中所示的任何LCDR2序列的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3具有PD-1抗体表4中所示的任何LCDR3序列的氨基酸序列，或前述任一种的变体。
在一些实施方案中，抗体包括包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3序列具有如PD-1抗体表4的PD1AB4中所示的氨基酸序列，或前述任一种的变体；以及(ii)包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中所述轻链CDR1、CDR2和CDR3序列具有如PD-1抗体表4的PD1AB4中所示的氨基酸序列，或前述任一种的变体。
在一些实施方案中，抗体包括包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3序列具有如PD-1抗体表4的PD1AB30中所示的氨基酸序列，或前述任一种的变体；以及(ii)包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中所述轻链CDR1、CDR2和CDR3序列具有如PD-1抗体表4的PD1AB30中所示的氨基酸序列，或前述任一种的变体。
这些是非限制性说明性实例，并且抗体可以具有如本文提供的表中所示的CDR，并且在没有写出关于每个CDR组的先前段落的情况下被明确提及。
在一些实施方案中，PD-1抗体包含如本文提供的VH和VL(VK)链，例如PD-1抗体表4中列出的那些链。
在一些实施方案中，PD-1抗体包含如PD-1抗体Fab表6和PD-1抗体scFv表7中所示的序列。在一些实施方案中，抗体以如PD-1抗体Fab表6中所示的Fab形式。在一些实施方案中，抗体以如PD-1抗体scFv表7中所示的scFv形式。在一些实施方案中，抗体包含来自PD-1抗体Fab表6和PD-1抗体scFv表7的任何一个克隆的CDR1、来自PD-1抗体Fab表6和PD-1抗体scFv表7的任何一个克隆的CDR2、以及来自PD-1抗体Fab表6和PD-1抗体scFv表7的任何一个克隆的CDR3。在一些实施方案中，抗体包含来自PD-1抗体Fab表6和PD-1抗体scFv表7的任何一个克隆的LCDR1、来自PD-1抗体Fab表6和PD-1抗体scFv表7的任何一个克隆的LCDR2、以及来自PD-1抗体Fab表6和PD-1抗体scFv表7的任何一个克隆的LCDR3。在一些实施方案中，上文显示的CDR的氨基酸残基含有突变。在一些实施方案中，CDR含有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个取代或突变。在一些实施方案中，取代是保守取代。
在一些实施方案中，PD-1抗体具有选自PD-1抗体表8和PD-1抗体表9的任何一个克隆的VH区、以及选自如PD-1抗体表8和PD-1抗体表9中所示的任何一个克隆的VL区。
在一些实施方案中，分子包含结合PD-1的抗体。在一些实施方案中，抗体包括(i)包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区，其中所述重链CDR1序列具有PD-1抗体Fab表6和PD-1抗体scFv表7中所示的任何CDR1序列的氨基酸序列；所述重链CDR2具有PD-1抗体Fab表6和PD-1抗体scFv表7中所示的任何CDR2序列的氨基酸序列，并且所述重链CDR3具有PD-1抗体Fab表6和PD-1抗体scFv表7中所示的任何CDR3序列的氨基酸序列；或前述任一种的变体；以及(ii)包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中所述轻链CDR1序列具有PD-1抗体Fab表6和PD-1抗体scFv表7中所示的任何LCDR1序列的氨基酸序列；所述轻链LCDR2具有PD-1抗体Fab表6和PD-1抗体scFv表7中所示的任何LCDR2序列的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3具有PD-1抗体Fab表6和PD-1抗体scFv表7中所示的任何LCDR3序列的氨基酸序列，或前述任一种的变体。
在一些实施方案中，抗体包括包含Fab重链CDR1、CDR2和CDR3序列的Fab重链可变区，其中所述Fab重链CDR1、CDR2和CDR3序列具有如PD-1抗体Fab表6的PD1AB37中所示的氨基酸序列，或前述任一种的变体；以及(ii)包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列的Fab轻链可变区，其中所述Fab轻链CDR1、CDR2和CDR3序列具有如PD-1抗体Fab表6的PD1AB37中所示的氨基酸序列，或前述任一种的变体。
在一些实施方案中，抗体包括包含scFv重链CDR1、CDR2和CDR3序列的scFv重链可变区，其中所述scFv重链CDR1、CDR2和CDR3序列具有如PD-1抗体scFv表7的PD1AB37中所示的氨基酸序列，或前述任一种的变体；以及(ii)包含scFv轻链CDR1、CDR2和CDR3序列的scFv轻链可变区，其中所述scFv轻链CDR1、CDR2和CDR3序列具有如PD-1抗体scFv表7的PD1AB37中所示的氨基酸序列，或前述任一种的变体。
在一些实施方案中，抗体包括包含Fab重链CDR1、CDR2和CDR3序列的Fab重链可变区，其中所述Fab重链CDR1、CDR2和CDR3序列具有如PD-1抗体Fab表6的PD1AB53中所示的氨基酸序列，或前述任一种的变体；以及(ii)包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列的Fab轻链可变区，其中所述Fab轻链CDR1、CDR2和CDR3序列具有如PD-1抗体Fab表6的PD1AB53中所示的氨基酸序列，或前述任一种的变体。
在一些实施方案中，抗体包括包含scFv重链CDR1、CDR2和CDR3序列的scFv重链可变区，其中所述scFv重链CDR1、CDR2和CDR3序列具有如PD-1抗体scFv表7的PD1AB53中所示的氨基酸序列，或前述任一种的变体；以及(ii)包含scFv轻链CDR1、CDR2和CDR3序列的scFv轻链可变区，其中所述scFv轻链CDR1、CDR2和CDR3序列具有如PD-1抗体scFv表7的PD1AB53中所示的氨基酸序列，或前述任一种的变体。
这些是非限制性说明性实例，并且抗体可以具有如本文提供的表中所示的CDR，并且在没有写出关于每个CDR组的先前段落的情况下被明确提及。
在一些实施方案中，PD-1抗体包含如本文提供的Fab VH和VL(VK)链，例如PD-1抗体表8和PD-1抗体表9中列出的那些链。在一些实施方案中，Fab VH肽包含SEQ ID NO：256或260的序列。在一些实施方案中，Fab VK链包含SEQ ID NO：259或263的序列。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO：256的Fab VH和SEQ ID NO：259的FabVK。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO：260的Fab VH和SEQ ID NO：263的Fab VK。在一些实施方案中，PD-1抗体包含如本文提供的scFv VH和VL(VK)链，例如PD-1抗体表8和PD-1抗体表9中列出的那些链。在一些实施方案中，scFv VH肽包含SEQ ID NO：257或261的序列。在一些实施方案中，scFvVK链包含SEQ ID NO：258或262的序列。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO：257的scFvVH和SEQ ID NO：258的scFv VK。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO：261的scFv VH和SEQ ID NO：262的scFv VK。
在一些实施方案中，PD-1抗体包含如本文提供的Fab VH和VL(VK)以及scFv VH和VL(VK)链，例如PD-1抗体表8和PD-1抗体表9中列出的那些链。在一些实施方案中，Fab VH肽包含SEQ ID NO：256或260的序列，并且scFv VH肽包含SEQ ID NO：257或261的序列。在一些实施方案中，Fab vK链包含SEQ ID NO：259或263的序列，并且scFv VK链包含SEQ ID NO：258或262的序列。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO：256的Fab VH和SEQ ID NO：259的Fab VK、以及SEQ ID NO：257的scFv VH和SEQ ID NO：258的scFv VK。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO：260的Fab VH和SEQ ID NO：263的FabVK、以及SEQ ID NO：261的scFvVH和SEQ ID NO：262的scFv VK。
在一些实施方案中，scFv从N末端到C末端包含VH和VL。在一些实施方案中，从N末端到C末端，VH经由接头连接到VL。在一些实施方案中，接头是本文提供的任何接头。在一些实施方案中，scFv包含N末端至C末端的VL和VH。在一些实施方案中，从N末端到C末端，VL经由接头连接到VH。在一些实施方案中，接头是本文提供的任何接头。
在一些实施方案中，PD-1抗体包含如PD-1抗体表4中所示的序列。在一些实施方案中，抗体以scFV形式。在一些实施方案中，抗体包含来自PD-1抗体表4的任何一个克隆的VH序列。在一些实施方案中，抗体包含来自PD-1抗体表4的任何一个克隆的VK序列。在一些实施方案中，上文所示的VH或VK的氨基酸残基含有突变。在一些实施方案中，VH或VK含有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个取代或突变。在一些实施方案中，取代是保守取代。
在一些实施方案中，如果治疗性化合物包含Fc部分，则Fc结构域(部分)带有突变，以致使Fc区“无效应子(effectorless)”，使得它不能结合FcR。致使Fc区无效应子的突变是已知的。在一些实施方案中，根据已知的编号系统，Fc区中的突变选自：K322A、L234A、L235A、G237A、L234F、L235E、N297、P331S或其任何组合。在一些实施方案中，Fc突变包含在L234和/或L235和/或G237处的突变。在一些实施方案中，Fc突变包含L234A和/或L235A突变，其可以被称为LALA突变。在一些实施方案中，Fc突变包含L234A、L235A和G237A突变。
本文公开的是接头多肽、治疗性肽和编码多肽(例如，治疗性化合物)的核酸、包含核酸序列的载体和包含核酸或载体的细胞。
如图1和图2中说明的FAb(20)和(25)以及scFV(50)和(55)结构域可以包含单独的或者如表中所示以及如本文和上文所述的提供的任何重链和轻链或CDR序列。
药物组合物和试剂盒
在实施方案中，本文实施方案提供了组合物，例如药学上可接受的组合物，其包括连同药学上可接受的载体一起配制的本文提供的治疗性化合物或多肽。如本文使用的，“药学上可接受的载体”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、等渗剂和吸收延迟剂等等。
载体可以适合于静脉内、肌内、皮下、肠胃外、直肠、局限性、眼科、局部、脊柱或表皮施用(例如，通过注射或输注)。如本文使用的，术语“载体”意指化合物与之一起施用的稀释剂、佐剂或赋形剂。在一些实施方案中，药物载体也可以是液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等等。药物载体还可以是盐水、阿拉伯树胶、明胶、淀粉糊、滑石、角蛋白、胶体二氧化硅、尿素等等。另外，还可以使用助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂。载体可以用于包含本文提供的治疗性化合物的药物组合物中。
本文提供的实施方案的组合物和化合物可以以各种形式。这些包括例如液体、半固体和固体剂型，例如液体溶液(例如，可注射和可输注溶液)、分散体或悬浮液、脂质体和栓剂。优选的形式取决于预期的施用模式和治疗应用。通常的组合物以可注射或可输注溶液的形式。在一些实施方案中，施用模式是肠胃外的(例如，静脉内、皮下、腹膜内、肌内)。在一些实施方案中，治疗分子通过静脉内输注或注射进行施用。在另一个实施方案中，治疗分子通过肌内或皮下注射进行施用。在另一个实施方案中，治疗分子例如通过注射或局部应用而局限性地施用于靶位点。
如本文使用的，短语“肠胃外施用”和“肠胃外施用的”意指除肠内和局部施用外的施用模式，通常通过注射，并且包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注。
药物组合物通常应该是无菌的，并且在一些实施方案中，在制造和贮存条件下是稳定的。组合物可以配制为溶液、微乳剂、分散体、脂质体或适合高治疗分子浓度的其它有序结构。无菌可注射溶液可以通过以下进行制备：根据需要将所需量的活性化合物(即治疗性分子)与上文列举的成分之一或组合掺入适当的溶剂中，随后为过滤灭菌。一般地，通过将活性化合物掺入无菌媒介物内来制备分散体，所述无菌媒介物含有基本分散介质和来自上文列举的那些的所需其它成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，这由其先前无菌过滤的溶液产生活性成分加上任何另外所需成分的粉末。溶液的适当流动性可以例如通过以下得到维持：使用包衣例如卵磷脂、在分散体的情况下维持所需的粒度以及使用表面活性剂。可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸盐和明胶，来达到可注射组合物的延长吸收。
如本领域技术人员应了解的，施用途径和/或模式将取决于所需的结果而变。在某些实施方案中，活性化合物可以与保护化合物免于快速释放的载体一起制备，例如控释制剂，包括植入物、经皮贴剂和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此类制剂的许多方法已获得专利或是本领域技术人员一般已知的。参见例如，Sustained and ControlledRelease Drug Delivery Systems，J.R.Robinson，编辑，Marcel Dekker，Inc.，New York，1978。
在某些实施方案中，治疗性化合物可以例如与惰性稀释剂或可吸收的可食用载体一起经口施用。该化合物(和其它成分，如果需要的话)也可以封装在硬壳或软壳明胶胶囊中，压制成片剂，或直接掺入受试者的饮食内。对于经口治疗施用，化合物可以与赋形剂一起掺入，并且以可摄取片剂、口含片、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆剂、糯米纸囊剂(wafer)等等的形式使用。为了通过除肠胃外施用外的方式施用化合物，可能需要用材料包被化合物或将化合物与材料共施用以防止其失活。治疗组合物也可以用本领域已知的医疗装置进行施用。
调整剂量方案以提供最佳的所需应答(例如，治疗应答)。例如，可以施用单次推注，可以在一段时间内施用几个分份剂量，或者可以如通过治疗情形的紧急状况指示的按比例减少或增加剂量。以剂量单位形式配制肠胃外组合物用于施用的容易和剂量的均匀性是尤其有利的。如本文使用的剂量单位形式指适合作为用于待治疗的受试者的单位剂量的物理上离散的单位；每个单位含有预定数量的活性化合物，其计算为与所需的药物载体结合产生所需的疗效。关于剂量单位形式的规格由以下决定并直接取决于以下：(a)活性化合物的独特特性和待实现的特定疗效，以及(b)配合用于治疗个体中的敏感性的此类活性化合物的领域中固有的局限性。
关于治疗性化合物的治疗或预防有效量的示例性非限制性范围是0.1-30mg/kg，更优选1-25mg/kg。治疗性化合物的剂量和治疗方案可以通过技术人员进行确定。在某些实施方案中，治疗性化合物通过注射(例如皮下或静脉内)以下述剂量进行施用：约1至40mg/kg，例如1至30mg/kg，例如约5至25mg/kg、约10至20mg/kg、约1至5mg/kg、1至10mg/kg、5至15mg/kg、10至20mg/kg、15至25mg/kg、或约3mg/kg。给药时间表可以从例如每周一次到每2、3或4周一次不等。在一个实施方案中，治疗性化合物每隔一周以约10至20mg/kg的剂量进行施用。治疗性化合物可以通过静脉内输注以超过20mg/分钟，例如20-40mg/分钟，且通常大于或等于40mg/分钟的速率进行施用，以达到约35至440mg/m2，通常为约70至310mg/m2，且更通常为约110至130mg/m2的剂量。在实施方案中，约110至130mg/m2的输注速率达到约3mg/kg的水平。在其它实施方案中，治疗性化合物可以通过静脉内输注以小于10mg/分钟，例如小于或等于5mg/分钟的速率进行施用，以达到约1至100mg/m2，例如约5至50mg/m2、约7至25mg/m2、或约10mg/m2的剂量。在一些实施方案中，治疗性化合物在约30分钟的时期内进行输注。应注意，剂量值可能随着待缓解的状况的类型和严重程度而变。应进一步理解，对于任何特定受试者，具体剂量方案应该根据个体需要以及施用或监督组合物施用的个人的专业判断随着时间过去进行调整，并且本文阐述的剂量范围仅是示例性的，并不预期限制请求保护的组合物的范围或实践。
药物组合物可以包括“治疗有效量”或“预防有效量”的多肽。“治疗有效量”指在必要的剂量和时间段内有效实现所需治疗结果的量。多肽的治疗有效量可以根据因素而变，所述因素例如个体的疾病状态、年龄、性别和重量，以及治疗性化合物在个体中引发所需应答的能力。治疗有效量也是其中治疗分子的治疗有益效应超过任何毒性或有害效应的量。相对于未治疗的受试者，“治疗有效剂量”优选将可测量的参数例如免疫攻击抑制至少约20％，更优选至少约40％，甚至更优选至少约60％，且还更优选至少约80％。化合物抑制可测量的参数例如免疫攻击的能力可以在预测移植排斥或自身免疫性病症中的功效的动物模型系统中进行评估。可替代地，组合物的这种性质可以通过检查化合物抑制的能力进行评估，此类抑制在体外通过技术人员已知的测定。
“预防有效量”指在必要的剂量和时间段内有效实现所需预防结果的量。通常，由于预防剂量在疾病之前或在疾病的较早阶段用于受试者中，因此预防有效量将小于治疗有效量。
还在实施方案的范围内的是包含本文所述的治疗性化合物的试剂盒。试剂盒可以包括一种或多种其它元素，其包括：使用说明书；其它试剂，例如标记、治疗剂、或者可用于将治疗分子螯合或以其它方式偶联至标记或其它治疗剂的试剂、或放射保护性组合物；用于制备用于施用的治疗分子的装置或其它材料；药学上可接受的载体；以及用于对受试者施用的装置或其它材料。
在一些实施方案中，本文提供的实施方案还包括但不限于：
1.一种包含结合PD-1的第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域结合PD-1上的第一表位，并且所述第三结合结构域和第四结合结构域结合PD-1上的第二表位，其中所述第一表位和第二表位不相同。
2.实施方案1的多肽，其中所述多肽是PD-1激动剂。
3.实施方案1的多肽，其中与结合PD-1的第三结合结构域和第四结合结构域相比，所述第一结合结构域和第二结合结构域对于PD-1具有更低的亲和力。
4.实施方案1的多肽，其中与结合PD-1的第三结合和第四结合相比，所述第一结合结构域和第二结合结构域对于PD-1具有更高的亲和力。
5.实施方案1-4中任何一个的多肽，其中所述第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域是结合PD-1的抗体或抗体片段。
6.实施方案5的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域抗体呈Fab形式，并且所述第三结合结构域和第四结合结构域以scFv形式。
7.实施方案6的多肽，其中与以scFv形式的抗体相比，呈Fab形式的抗体对于PD-1具有更高的亲和力。
8.实施方案6的多肽，其中与以scFv形式的抗体相比，呈Fab形式的抗体对于PD-1具有更低的亲和力。
9.前述实施方案中任何一个的多肽，其中所述多肽包含如本文提供的序列或抗体，例如PD1AB4、PD1AB25、PD1AB30、PD1AB53或PD1AB37的多肽链或片段。
10.一种包含结合PD-1的第一结合结构域和第二结合结构域的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域包含如本文所示，例如如本文提供的PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体表8、PD-1抗体表9、PD-1抗体表10或PD-1抗体表11中的序列。
11.实施方案1的多肽，其中所述多肽包含结合PD-1的第三结合结构域和第四结合结构域，其中所述第三结合结构域结合与第一结合结构域相同的表位，并且所述第四结合结构域结合与第二结合结构域相同的表位。
12.实施方案11的多肽，其中所述第一结合结构域和第三结合结构域包含具有相同序列的多肽。
13.实施方案11和12的多肽，其中所述第二结合结构域和第四结合结构域包含具有相同序列的多肽。
14.实施方案11-13中任何一个的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域包含不同的多肽序列。
15.实施方案10的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是结合PD-1的抗体。
16.实施方案10和的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域具有等同的序列。
17.实施方案10和15的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域具有不同的序列。
18.实施方案15-16的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域结合相同的表位。
19.实施方案15-16的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域结合不同的表位。
20.实施方案15-16中任何一个的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域之一是Fab抗体，而另一个是scFv抗体。
21.实施方案15-20中任何一个的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域通过接头进行连接。
22.实施方案21的多肽，其中所述接头包含免疫球蛋白恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区。
23.实施方案21的多肽，其中所述接头包含IgG1的免疫球蛋白恒定区。
24.实施方案21-23的多肽，其中所述接头进一步包含甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/丙氨酸接头、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、或丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸。
25.实施方案24的多肽，其中所述甘氨酸/丝氨酸接头包含(GGGGS)n(SEQ ID NO：303)、(GGGSE)n(SEQ ID NO：305)或(GGGGA)n(SEQ ID NO：304)的序列或其组合，其中每个n独立地为1-4。
26.实施方案1和10的多肽，其中所述多肽包括包含与scFv抗体连接的Fab重链结构域的第一多肽链、以及包含Fab轻(κ)链结构域的第二多肽链，其中所述Fab重链和轻链结合PD-1，并且所述scFv抗体在相同或不同的表位处结合PD-1。
27.实施方案26的多肽，其中所述scFv包含通过scFv接头连接到轻链可变结构域的重链可变结构域。
28.实施方案27的多肽，其中所述scFV接头包含(GGGGS)n(SEQ ID NO：303)、(GGGSE)n(SEQ ID NO：305)或(GGGGA)n(SEQ ID NO：304)的序列或其组合，其中每个n独立地为1-4。
29.实施方案1-22中任何一个的多肽，其中所述第一结合结构域包含如PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体表8、PD-1抗体表9、PD-1抗体表10、或PD-1抗体表11中提供的序列，并且所述第二结合结构域包含如PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体表8、PD-1抗体表9、PD-1抗体表10、或PD-1抗体表11中提供的序列。
30.实施方案1-28中任何一个的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的如本文提供的抗体或其抗原结合片段。
31.实施方案30的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其包括：
(i)包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区，其中所述重链CDR1序列具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何CDR1序列的氨基酸序列；所述重链CDR2具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何CDR2序列的氨基酸序列，并且所述重链CDR3具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何CDR3序列的氨基酸序列，或前述任一种的变体；和
(ii)包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中所述轻链CDR1序列具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何LCDR1序列的氨基酸序列；所述轻链LCDR2具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何LCDR2序列的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何LCDR3序列的氨基酸序列，或前述任一种的变体。
32.实施方案30的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如PD-1抗体表4、PD-1抗体表8、PD-1抗体表9、PD-1抗体表10、或PD-1抗体表11中所示的VK序列。
33.实施方案30的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如PD-1抗体表4、PD-1抗体表8、PD-1抗体表9、PD-1抗体表10、或PD-1抗体表11中所示的VH序列。
34.实施方案30的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如本文提供的PD-1抗体表中所示的VK序列、以及如本文提供的PD-1抗体表中所示的VH序列。
35.实施方案30的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段独立地包含以下克隆ID的重链可变区：PD-1抗体表4的PD1AB4(SEQ ID NO：35)、PD1AB30(SEQ ID NO：185)、PD1AB17(SEQID NO：113)、PD1AB18(SEQ ID NO：120)、PD1AB20(SEQ ID NO:135)、PD1AB25(SEQ ID NO：169)；PD-1抗体表8的PD1AB37 Fab(SEQ ID NO：256)、PD1AB37 scFv(SEQ ID NO：257)；以及PD-1抗体表9的PD1AB53Fab(SEQ ID NO：260)、PD1AB53 scFV(SEQ ID NO：261)。
36.实施方案30的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段独立地包含以下的重链结构域的CDR：PD-1抗体表4的PD1AB4、PD1AB30、PD1AB17、PD1AB18、PD1AB20、PD1AB25；PD-1抗体Fab表6和PD-1抗体scFv表7的PD1AB37或PD1AB53。
37.实施方案30的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段独立地包括包含以下的重链：SEQ ID NO：37、171、115、122、137、171、267、238、279的第一CDR；SEQ ID NO：38、172、116、123、138、172、229、239的第二CDR；以及SEQ ID NO：39、173、117、124、139、173、230、240的第三CDR。
38.实施方案30的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段独立地包括包含以下的重链：
SEQ ID NO：37的第一CDR、SEQ ID NO：38的第二CDR和SEQ ID NO：39的第三CDR；
SEQ ID NO：171的第一CDR、SEQ ID NO：172的第二CDR和SEQ ID NO：173的第三CDR；
SEQ ID NO：115的第一CDR、SEQ ID NO：116的第二CDR和SEQ ID NO：117的第三CDR；
SEQ ID NO：122的第一CDR、SEQ ID NO：123的第二CDR和SEQ ID NO：124的第三CDR；
SEQ ID NO：137的第一CDR、SEQ ID NO：138的第二CDR和SEQ ID NO：139的第三CDR；
SEQ ID NO：267的第一CDR、SEQ ID NO：229的第二CDR和SEQ ID NO：230的第三CDR；
SEQ ID NO：238的第一CDR、SEQ ID NO：239的第二CDR和SEQ ID NO：240的第三CDR；
SEQ ID NO：279的第一CDR、SEQ ID NO：239的第二CDR和SEQ ID NO：240的第三CDR；或
SEQ ID NO：267的第一CDR、SEQ ID NO：229的第二CDR和SEQ ID NO：230的第三CDR。
39.实施方案30和35-38的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段独立地包含以下克隆ID的轻链可变区：PD-1抗体表4的PD1AB4(SEQ ID NO：36)、PD1AB30(SEQ ID NO：170)、PD1AB17(SEQ ID NO：114)、PD1AB18(SEQ ID NO：121)、PD1AB20(SEQ ID NO：136)、PD1AB25(SEQ ID NO：170)；PD-1抗体表8的PD1AB37 Fab(SEQ ID NO：259)、PD1AB37 scFv(SEQ IDNO：258)；以及PD-1抗体表9的PD1AB53Fab(SEQ ID NO：263)、PD1AB53 scFv(SEQ ID NO：262)。
40.实施方案30和35-38的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段独立地包含轻链可变区，其包含以下的轻链结构域的CDR：PD-1抗体表4的PD1AB4、PD1AB30、PD1AB17、PDlAB18、PD1AB20或PD1AB25；PD-1抗体Fab表6和PD-1抗体scFv表7的PD1AB37或PD1AB53。
41.实施方案30和35-38的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段独立地包括包含以下的轻链可变区：SEQ ID NO：40、118、125、140、174、276的第一CDR；SEQ ID NO：19、126、47、175、227、237的第二CDR，以及SEQ ID NO：41、119、127、141、176的第三CDR。
42.实施方案30和35-38的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段独立地包括包含以下的轻链可变区：
SEQ ID NO：40的第一CDR、SEQ ID NO：19的第二CDR和SEQ ID NO：41的第三CDR；
SEQ ID NO：118的第一CDR、SEQ ID NO：19的第二CDR和SEQ ID NO：119的第三CDR；
SEQ ID NO：125的第一CDR、SEQ ID NO：126的第二CDR和SEQ ID NO：127的第三CDR；
SEQ ID NO：140的第一CDR、SEQ ID NO：47的第二CDR和SEQ ID NO：141的第三CDR；
SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：175的第二CDR和SEQ ID NO：176的第三CDR；
SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：227的第二CDR和SEQ ID NO：176的第三CDR；
SEQ ID NO：40的第一CDR、SEQ ID NO:237的第二CDR和SEQ ID NO：41的第三CDR；
SEQ ID NO：276的第一CDR、SEQ ID NO：237的第二CDR和SEQ ID NO：41的第三CDR；或
SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：227的第二CDR和SEQ ID NO：176的第三CDR。
43.实施方案30和35-38的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段独立地包括：
包含SEQ ID NO：37的第一CDR、SEQ ID NO：38的第二CDR和SEQ ID NO：39的第三CDR的重链可变区，以及包含SEQ ID NO：40的第一CDR、SEQ ID NO：19的第二CDR和SEQ IDNO：41的第三CDR的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：171的第一CDR、SEQ ID NO：172的第二CDR和SEQ ID NO：173的第三CDR的重链可变区，以及包含SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：175的第二CDR和SEQID NO：176的第三CDR的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：115的第一CDR、SEQ ID NO：116的第二CDR和SEQ ID NO：117的第三CDR的重链可变区，以及包含SEQ ID NO：118的第一CDR、SEQ ID NO：19的第二CDR和SEQID NO：119的第三CDR的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：122的第一CDR、SEQ ID NO：123的第二CDR和SEQ ID NO：124的第三CDR的重链可变区，以及包含SEQ ID NO：125的第一CDR、SEQ ID NO：126的第二CDR和SEQID NO：127的第三CDR的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：137的第一CDR、SEQ ID NO：138的第二CDR和SEQ ID NO：139的第三CDR的重链可变区，以及包含SEQ ID NO：140的第一CDR、SEQ ID NO：47的第二CDR和SEQID NO：141的第三CDR的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：171的第一CDR、SEQ ID NO：172的第二CDR和SEQ ID NO：173的第三CDR的重链可变区，以及包含SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：175的第二CDR和SEQID NO：176的第三CDR的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：267的第一CDR、SEQ ID NO：229的第二CDR和SEQ ID NO：230的第三CDR的重链可变区，以及包含SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：227的第二CDR和SEQID NO：176的第三CDR的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：238的第一CDR、SEQ ID NO：239的第二CDR和SEQ ID NO:240的第三CDR的重链可变区，以及包含SEQ ID NO：40的第一CDR、SEQ ID NO：237的第二CDR和SEQID NO：41的第三CDR的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：279的第一CDR、SEQ ID NO：239的第二CDR和SEQ ID NO：240的第三CDR的重链可变区，以及包含SEQ ID NO：276的第一CDR、SEQ ID NO：237的第二CDR和SEQID NO：41的第三CDR的轻链可变区；或
包含SEQ ID NO：267的第一CDR、SEQ ID NO：229的第二CDR和SEQ ID NO：230的第三CDR的重链可变区，以及包含SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：227的第二CDR和SEQID NO：176的第三CDR的轻链可变区。
44.实施方案30和35-38的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段独立地包括包含SEQID NO：35、SEQ ID NO：185、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：256、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：260或SEQ ID NO：261的序列的重链，以及包含SEQ ID NO:36、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：136、SEQID NO：170、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：258、SEQ ID NO：263或SEQ ID NO：262的序列的轻链可变区。
45.实施方案30和35-38的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段独立地包括：
包含SEQ ID NO：35的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：36的序列的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：113的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：114的序列的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：120的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：121的序列的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：135的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：136的序列的轻链可变区；
包含SEQ ID NO:169的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：170的序列的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：185的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：170的序列的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：256的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：259的序列的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：257的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：258的序列的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：260的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：263的序列的轻链可变区；或
包含SEQ ID NO：261的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：262的序列的轻链可变区。
46.实施方案1和10的多肽，其中所述多肽包含第一多肽链和第二多肽链，其中：
所述第一多肽链从N末端到C末端具有下式：
[VH-A]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[VH-B]-[接头2]-[VK-B]；或
[VH-A]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[VK-B]-[接头2]-[VH-B]；
所述第二多肽链从N末端到C末端具有下式：
[VK-A]-[CK]，
其中：
VH-A＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
VK-A＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域
VH-B＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
VK-B＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域
CH1＝人IgG1的恒定重结构域1
CH2＝人IgG1的恒定重结构域2
CH3＝人IgG1的恒定重结构域3
CK＝κ轻链的恒定结构域
接头1是甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/丙氨酸、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、或丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸接头
接头2是甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/丙氨酸、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、或丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸接头，
其中VH-A、VK-A、VH-B和VK-B可以来自相同或不同的抗体。
47.实施方案1和10的多肽，其中所述多肽包含第一多肽链和第二多肽链，其中：
所述第一多肽链从N末端到C末端具有下式：
[VH-B]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[VH-A]-[接头2]-[VK-A]；或
[VH-B]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[VK-A]-[接头2]-[VH-A]；
所述第二多肽链从N末端到C末端具有下式：
[VK-B]-[CK]，
其中：
VH-A＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
VK-A＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域
VH-B＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
VK-B＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域
CH1＝例如本文提供的人IgG1的恒定重结构域1
CH2＝例如本文提供的人IgG1的恒定重结构域2
CH3＝例如本文提供的人IgG1的恒定重结构域3
CK＝例如本文提供的κ轻链的恒定结构域
接头1是甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/丙氨酸、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、或丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸接头；
接头2是甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/丙氨酸、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、或丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸接头；
其中VH-A、VK-A、VH-B和VK-B可以来自相同或不同的抗体。
48.实施方案46或47的多肽，其中VH-A和VH-B独立地包括：
(i)包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区，其中所述重链CDR1序列具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何CDR1序列的氨基酸序列；所述重链CDR2具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何CDR2序列的氨基酸序列，并且所述重链CDR3具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何CDR3序列的氨基酸序列，或前述任一种的变体。
49.实施方案48的多肽，其中VH-A和VH-B是不同的。
50.实施方案46-49中任何一个的多肽，其中VH-A包括包含SEQ ID NO：37的第一CDR、SEQ ID NO：38的第二CDR和SEQ ID NO：39的第三CDR的重链可变区。
51.实施方案46-49中任何一个的多肽，其中VH-B包括包含SEQ ID NO：37的第一CDR、SEQ ID NO：38的第二CDR和SEQ ID NO：39的第三CDR的重链可变区。
52.46的多肽，其中VH-A包括包含SEQ ID NO：37的第一CDR、SEQ ID NO：38的第二CDR和SEQ ID NO：39的第三CDR的重链可变区，并且VH-B包括包含SEQ ID NO：37的第一CDR、SEQ ID NO：38的第二CDR和SEQ ID NO：39的第三CDR的重链可变区。
53.实施方案46-49中任何一个的多肽，其中VH-A包括包含SEQ ID NO：171的第一CDR、SEQ ID NO：172的第二CDR和SEQ ID NO：173的第三CDR的重链可变区。
54.实施方案46-49中任何一个的多肽，其中VH-B包括包含SEQ ID NO：171的第一CDR、SEQ ID NO：172的第二CDR和SEQ ID NO：173的第三CDR的重链可变区。
55.实施方案46-49中任何一个的多肽，其中VH-A包括包含SEQ ID NO：267的第一CDR、SEQ ID NO：229的第二CDR和SEQ ID NO：230的第三CDR的重链可变区。
56.实施方案46-49中任何一个的多肽，其中VH-B包括包含SEQ ID NO：267的第一CDR、SEQ ID NO：229的第二CDR和SEQ ID NO：230的第三CDR的重链可变区。
57.实施方案46-49中任何一个的多肽，其中VH-A包括包含SEQ ID NO：238的第一CDR、SEQ ID NO：239的第二CDR和SEQ ID NO：240的第三CDR的重链可变区。
58.实施方案46-49中任何一个的多肽，其中VH-B包括包含SEQ ID NO：238的第一CDR、SEQ ID NO：239的第二CDR和SEQ ID NO：240的第三CDR的重链可变区。
59.实施方案46-49中任何一个的多肽，其中VH-A包括包含SEQ ID NO：279的第一CDR、SEQ ID NO：239的第二CDR和SEQ ID NO：240的第三CDR的重链可变区。
60.实施方案46-49中任何一个的多肽，其中VH-B包括包含SEQ ID NO：279的第一CDR、SEQ ID NO：239的第二CDR和SEQ ID NO：240的第三CDR的重链可变区。
61.实施方案46-49中任何一个的多肽，其中VH-A包括包含SEQ ID NO:267的第一CDR、SEQ ID NO：229的第二CDR和SEQ ID NO：230的第三CDR的重链可变区。
62.实施方案46-49中任何一个的多肽，其中VH-B包括包含SEQ ID NO：267的第一CDR、SEQ ID NO：229的第二CDR和SEQ ID NO：230的第三CDR的重链可变区。
63.46-49的多肽，其中VH-A包括包含SEQ ID NO：279的第一CDR、SEQ ID NO：239的第二CDR和SEQ ID NO：240的第三CDR的重链可变区，并且VH-B包括包含SEQ ID NO：267的第一CDR、SEQ ID NO：229的第二CDR和SEQ ID NO：230的第三CDR的重链可变区。
64.46-49的多肽，其中VH-A包括包含SEQ ID NO：267的第一CDR、SEQ ID NO：229的第二CDR和SEQ ID NO：230的第三CDR的重链可变区，并且VH-B包括包含SEQ ID NO：238的第一CDR、SEQ ID NO：239的第二CDR和SEQ ID NO：240的第三CDR的重链可变区。
65.实施方案46-63中任何一个的多肽，其中VK-A和VK-B各自独立地包括包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中所述轻链CDR1序列具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何LCDR1序列的氨基酸序列；所述轻链LCDR2具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何LCDR2序列的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何LCDR3序列的氨基酸序列，或前述任一种的变体。
66.实施方案46-65中任何一个的多肽，其中VK-A或VK-B包括包含SEQ ID NO：40的第一CDR、SEQ ID NO：19的第二CDR和SEQ ID NO：41的第三CDR的轻链可变区。
67.实施方案46-65中任何一个的多肽，其中VK-A或VK-B包括包含SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：175的第二CDR和SEQ ID NO：176的第三CDR的轻链可变区。
68.实施方案46-65中任何一个的多肽，其中VK-A或VK-B包括包含SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：227的第二CDR和SEQ ID NO：176的第三CDR的轻链可变区。
69.实施方案46-65中任何一个的多肽，其中VK-A或VK-B包括包含SEQ ID NO：40的第一CDR、SEQ ID NO：237的第二CDR和SEQ ID NO：41的第三CDR的轻链可变区。
70.实施方案46-65中任何一个的多肽，其中VK-A或VK-B包括包含SEQ ID NO：276的第一CDR、SEQ ID NO：237的第二CDR和SEQ ID NO：41的第三CDR的轻链可变区。
71.实施方案46-65中任何一个的多肽，其中VK-A或VK-B包括包含SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：227的第二CDR和SEQ ID NO：176的第三CDR的轻链可变区。
72.实施方案46或47的多肽，其中：
VH-A包括包含SEQ ID NO：37的第一CDR、SEQ ID NO：38的第二CDR和SEQ ID NO：39的第三CDR的重链可变区；
VH-B包括包含SEQ ID NO：171的第一CDR、SEQ ID NO：172的第二CDR和SEQ ID NO：173的第三CDR的重链可变区；
VK-A包括包含SEQ ID NO：40的第一CDR、SEQ ID NO：19的第二CDR和SEQ ID NO：41的第三CDR的轻链可变区；
VK-B包括包含SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：175的第二CDR和SEQ ID NO：176的第三CDR的轻链可变区；
VK-A包括包含SEQ ID NO：276的第一CDR、SEQ ID NO：237的第二CDR和SEQ ID NO：41的第三CDR的轻链可变区；
VK-B包括包含SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：227的第二CDR和SEQ ID NO：176的第三CDR的轻链可变区；或
VK-A包括包含SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：227的第二CDR和SEQ ID NO：176的第三CDR的轻链可变区；
VK-B包括包含SEQ ID NO：40的第一CDR、SEQ ID NO：237的第二CDR和SEQ ID NO：41的第三CDR的轻链可变区。
73.实施方案46-72中任何一个的多肽，其中所述接头1是(GGGGS)n(SEQ ID NO：303)，其中n是1-4。
74.实施方案46-72中任何一个的多肽，其中所述接头2是(GGGGS)n(SEQ ID NO：303)，其中n是1-4。
75.一种双互补位多肽，其包含第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域，其中所述第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域中的两个结合PD-1上的第一表位，而第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域中的另外两个结合PD-1上的第二表位，其中所述第一表位和第二表位是不同的。
76.实施方案75的双互补位多肽，其中所述第一表位和第二表位是不重叠的。
77.实施方案75或76的双互补位多肽，其中所述第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域包含PD-1抗体，例如本文提供的那些抗体。
78.实施方案75-77中任何一个的双互补位多肽，其中所述第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域中的两个包含来自PD1AB4、PD1AB30、PD1AB17、PD1AB18、PD1AB20、PD1AB25、PD1AB37或PD1AB53之一的CDR，而另外两个包含来自PD1AB4、PD1AB30、PD1AB17、PD1AB18、PD1AB20、PD1AB25、PD1AB37或PD1AB53之一的CDR，其中并非所有的结合结构域都是相同的。
79.一种药物组合物，其包含实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体。
80.一种治疗受试者中的系统性红斑狼疮(SLE)、Aicardi-Goutières综合征、双侧纹状体坏死、慢性非典型嗜中性粒细胞性皮肤病伴脂肪营养不良和高温(CANDLE)、完全不外显、遗传性对称性色素异常症、家族性冻疮样狼疮、日本自身炎症性综合征伴脂肪营养不良(JASL)，关节挛缩、肌肉萎缩、小细胞性贫血、脂膜炎和脂肪营养不良(JMP)，孟德尔遗传易感分枝杆菌病(MSMD)、中条-西村综合征、视网膜血管病变伴脑白质营养不良(RVCL)、痉挛性截瘫、STING相关的婴儿期发病的血管病(SAVI)、辛-梅二氏综合征或脊椎软骨瘤病(SPENCD)的方法，所述方法包括向受试者施用实施方案1-65中任何一个的多肽或实施方案66的组合物。
81.一种治疗患有炎性肠病的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用实施方案1-65中任何一个的多肽、蛋白质或抗体，或者实施方案79的药物组合物，以治疗炎性肠病。
82.实施方案81的方法，其中所述患有炎性肠病的受试者患有克罗恩氏病。
83.实施方案81的方法，其中所述患有炎性肠病的受试者患有溃疡性结肠炎。
84.一种治疗患有自身免疫性肝炎的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体，或者实施方案79的药物组合物，以治疗自身免疫性肝炎。
85.一种治疗原发性硬化性胆管炎的方法，所述方法包括向所述受试者施用实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体，或者实施方案79的药物组合物，以治疗原发性硬化性胆管炎。
86.一种治疗1型糖尿病的方法，所述方法包括向所述受试者施用实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体，或者实施方案79的药物组合物，以治疗1型糖尿病。
87.一种治疗移植受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体，或者实施方案79的药物组合物，从而治疗移植(接受者)受试者。
88.一种治疗具有移植的供体组织的受试者中的GVHD的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体，或者实施方案79的药物组合物。
89.一种治疗患有自身免疫性病症、或者处于患有自身免疫性病症的风险或升高风险中的受试者的方法，其包括施用治疗有效量的实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体，或者实施方案79的药物组合物，从而治疗所述受试者。
90.一种在受试者中激动PD-1的活性的方法，所述方法包括施用治疗有效量的实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体，或者实施方案79的药物组合物，从而治疗所述受试者。
91.一种治疗受试者中的干扰素病的方法，所述方法包括向所述受试者施用实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体，或者实施方案79的药物组合物，从而治疗所述受试者。
92.实施方案91的方法，其中所述干扰素病是I型干扰素病。
93.实施方案91或92的方法，其中所述受试者是有此需要的受试者。
94.实施方案91-93中任何一个的方法，其中所述I型干扰素病是系统性红斑狼疮(SLE)、Aicardi-Goutières综合征、双侧纹状体坏死、慢性非典型嗜中性粒细胞性皮肤病伴脂肪营养不良和高温(CANDLE)、完全不外显、遗传性对称性色素异常症、家族性冻疮样狼疮、日本自身炎症性综合征伴脂肪营养不良(JASL)，关节挛缩、肌肉萎缩、小细胞性贫血、脂膜炎和脂肪营养不良(JMP)，孟德尔遗传易感分枝杆菌病(MSMD)、中条-西村综合征、视网膜血管病变伴脑白质营养不良(RVCL)、痉挛性截瘫、STING相关的婴儿期发病的血管病(SAVI)、辛-梅二氏综合征或脊椎软骨瘤病(SPENCD)。
95.一种抑制来自浆细胞样树突细胞的干扰素产生的方法，所述方法包括向所述受试者施用实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体，或者实施方案79的药物组合物。
96.实施方案95的方法，其中所述浆细胞样树突细胞是活化的浆细胞样树突细胞。
97.实施方案95或96的方法，其中所述活化的浆细胞样树突细胞是TLR9介导的活化。
98.实施方案95-97中任何一个的方法，其中与在实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体，或者实施方案79的药物组合物的不存在下产生的干扰素的量相比，所述干扰素的产生减少了约或至少10、20、30、40、50、60、70、80、90或95％。
99.一种治疗TLR9介导的病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用实施方案1-77中任何一个的多肽、蛋白质或抗体，或者实施方案78的药物组合物。
100.实施方案99的方法，其中所述TLR9介导的病症是系统性红斑狼疮(SLE)、Aicardi-Goutières综合征、双侧纹状体坏死、慢性非典型嗜中性粒细胞性皮肤病伴脂肪营养不良和高温(CANDLE)、完全不外显、遗传性对称性色素异常症、家族性冻疮样狼疮、日本自身炎症性综合征伴脂肪营养不良(JASL)，关节挛缩、肌肉萎缩、小细胞性贫血、脂膜炎和脂肪营养不良(JMP)，孟德尔遗传易感分枝杆菌病(MSMD)、中条-西村综合征、视网膜血管病变伴脑白质营养不良(RVCL)、痉挛性截瘫、STING相关的婴儿期发病的血管病(SAVI)、辛-梅二氏综合征或脊椎软骨瘤病(SPENCD)。
101.一种抑制细胞或受试者中的OAS1、IFIT3、MX1和IFN-β1表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下或使细胞与以下接触：实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体，或者实施方案79的药物组合物。
102.实施方案101的方法，其中所述OAS1、IFIT3、MX1和IFN-β1的表达是基因表达。
103.实施方案101或102的方法，其中所述细胞是浆细胞样树突细胞。
104.实施方案101-103的方法，其中所述浆细胞样树突细胞是活化的浆细胞样树突细胞。
105.一种核酸，其编码实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体。
106.一种载体，其包含实施方案105的核酸。
107.一种细胞，其包含实施方案105的核酸或实施方案106的载体。
108.一种制备实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体的方法，其包括培养实施方案107的细胞，以制备实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体。
109.一种制备编码实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体的核酸序列的方法，其包括
a)提供包含编码靶向部分的序列的载体，并且将编码效应物结合/调节部分的序列插入载体内，以形成编码治疗性化合物的序列；或
b)提供包含编码效应物结合/调节部分的序列的载体，并且将编码靶向部分的序列插入载体内，以形成编码治疗性化合物的序列，
从而制备编码实施方案1-78中任何一个的多肽、蛋白质或抗体的序列。
实施例
实施例1.双互补位PD-1激动剂显示了强可溶性PD-1激动。
产生了包含PD1AB4、PD1AB30、PD1AB17、PD1AB18、PD1AB20或PD1AB25中的两个的CDR的双互补位多肽，并且测试了其激动PD-1活性的能力。制备的形式在图2中进行说明。发现与并非双互补位的分子相比，双互补位分子具有令人惊讶和出乎意料的激动PD-1的优异能力。
实施例2.通过生物传感器测定，双互补位分子结合人或小鼠PD-1。
抗人IgG Fc(AHC)生物传感器在测定缓冲液中平衡20分钟。测试物品在测定缓冲液(1x PBS、1％BSA、0-05％Tween20)中稀释至10μg/mL。在测定缓冲液中制备人PD-1的七点连续稀释物，从1000nM开始降至15.625nM(人PD-1)或从2000nM降至31.25nM(小鼠PD-1)。将测试物品装载到尖端上180秒，随后为与PD-1的180秒结合阶段以及在测定缓冲液中的180秒解离阶段。PD1AB43与人PD-1结合，伴随1.87E-08的Kd(M)、3.21E-10的KD误差、6.38E+04的Kon(1/ms)、3.74E+02的Kon误差、1.20E-03的Kdis(1/s)、1.93E-05的Kdis误差和0.1549的应答；并且PD1AB53显示了6.29E-10的Kd、1.64E-10的KD误差、6.76E+04的Kon、2.42E+02的Kon误差、4.26E+02的Kdis、1.11E-05的Kdis误差和0.2273的应答。PD1AB43与小鼠PD-1结合，伴随1.43E-06的Kd(M)、5.88E-08的KD误差、2.82E+04的Kon(1/ms)、9.91E+04的Kon误差、4.04E-02的Kdis(1/s)、8.53E-04的Kdis误差和0.0546的应答；并且PD1AB53显示了3.84E-06的Kd、4.27E-07的KD误差、5.94E+03的Kon、6.33E+02的Kon误差、2.28E-02的Kdis、7.00E-04的Kdis误差和0.0367的应答。双互补位分子显示了与人和小鼠PD-1的结合。
实施例3.通过ELISA，双互补位分子结合人、食蟹猴或小鼠PD-1。
板用2μg/mL huPD-1的1x PBS溶液在4℃下包被过夜。板用具有1％BSA的1x PBS进行封闭。抗体就与从50nM到0.05nM的3倍稀释系列的结合一式两份地进行测试。抗体结合通过抗κ-HRP抗体进行检测，对于仅具有2°抗体的包被孔，信号进行背景扣除。PD1AB43、PD1AB86、PD1AB87、PD1AB88、PD1AB53、PD1AB69、PD1AB64和PD1AB76与人、食蟹猴或小鼠PD-1结合。双互补位分子显示了与人、食蟹猴和小鼠PD-1的结合。
实施例4.通过生物传感器测定，双互补位分子与人、食蟹猴或小鼠PD-1结合。
抗人IgG Fc(AHC)生物传感器在测定缓冲液中平衡20分钟。测试物品在测定缓冲液(1x PBS、1％BSA、0.05％Tween20)中稀释至10μg/mL。在测定缓冲液中制备人PD-1的七点连续稀释物，从1000nM开始降至15.625nM(人和食蟹猴PD-1)或从2000nM降至31.25nM(小鼠PD-1)。将测试物品装载到尖端上180秒，随后为与PD-1的180秒结合阶段以及在测定缓冲液中的180秒解离阶段。PD1AB53与人PD-1结合，伴随3.30E-08的Kd(M)、4.13E+04的Kon(1/ms)和1.36E-03的Kdis(1/s)；PD1AB64显示了2.13E-08的Kd、3.95E+04的Kon和8.41E-04的Kdis；PD1AB37显示了1.83E-08的Kd、4.50E+04的Kon和8.24E-04的Kdis；并且PD1AB38显示了5.07E-08的Kd、5.64E+04的Kon和2.86E-03的Kdis。PD1AB53与食蟹猴PD-1结合，伴随1.35E-08的Kd(M)、3.94E+04的Kon(1/ms)和5.31E-04的Kdis(1/s)；PD1AB64显示了1.66E-08的Kd、3.87E+04的Kon和6.41E-04的Kdis；PD1AB37显示了1.54E-08的Kd、3.68E+04的Kon和5.66E-04的Kdis；并且PD1AB38显示了2.83E-08的Kd、3.79E+04的Kon和1.08E-03的Kdis。PD1AB53与小鼠PD-1结合，伴随2.46E-05的Kd(M)、2.67E+03的Kon(1/ms)和6.57E-02的Kdis(1/s)；PD1AB64弱结合；PD1AB37显示了4.86E-06的Kd、5.05E+03的Kon和2.45E-02的Kdis；并且PD1AB38显示了9.79E-07的Kd、2.34E+04的Kon和2.29E-02的Kdis。双互补位分子显示了与人、食蟹猴和小鼠PD-1的结合。
实施例5.通过生物传感器测定，双互补位分子以跨越物种一致的亲和力与人、食蟹猴或小鼠PD-1结合。
抗人IgG Fc(AHC)或链霉抗生物素蛋白(SA)生物传感器在测定缓冲液中平衡20分钟。加上Fc标签的小鼠和食蟹猴PD-1在测定缓冲液(1x PBS、1％BSA、0.05％Tween20)中稀释至5μg/mL，并且生物素化的huPD-1物品稀释至0.5μg/mL。在测定缓冲液中制备测试物品Fab和scFv片段的七点连续稀释物：PD1AB53Fab(500nM)、PD1AB37和PD1AB38Fab(1000nM)；scFv片段(2000nM)。将PD-1装载到尖端上180秒，随后为与PD-1的180秒结合阶段以及在测定缓冲液中的180秒解离阶段。PD1AB37的Fab部分以330nM的Kd与人PD-1结合，而scFv部分以89.9nM的Kd结合；PD1AB38的Fab部分以140nM的Kd与人PD-1结合，而scFv部分以89.9nM的Kd结合；PD1AB53的Fab部分以32.6nM的Kd与人PD-1结合，而scFv部分以1.35uM的Kd结合。PD1AB37的Fab部分以497nM的Kd与食蟹猴PD-1结合，而scFv部分以58.6nM的Kd结合；PD1AB38的Fab部分以172nM的Kd与食蟹猴PD-1结合，而scFv部分以58.6nM的Kd结合；PD1AB53的Fab部分以30.3nM的Kd与食蟹猴PD-1结合，而scFv部分以1.17uM的Kd结合。PD1AB37的Fab部分以1.35uM的Kd与小鼠PD-1结合，而scFv部分未显示结合；PD1AB38的Fab部分以176nM的Kd与小鼠PD-1结合，而scFv部分未显示结合；PD1AB53的Fab部分未显示与小鼠PD-1的结合，而scFv部分以1.06uM的Kd结合。
实施例6.双互补位分子通过SEC-MALS显示了预计的分子量。
根据标准方案，使用SEC-MALS来评价PD1AB53、PD1AB37和PD1AB38的分子量。简言之，将20μL测试物品注入ZenixSEC-300柱上，并且以0.35mL/分钟的流速洗脱10分钟。PD1AB53预测为具有198.4kDa的大小，并且显示了205.7kDa的实际分子量，包含3.4％的误差和0.025kDa的聚糖。PD1AB37预测为具有197.7kDa的大小，并且显示了188.9kDa的实际分子量，包含4.3％的误差和0.028kDa的聚糖。PD1AB38预测为具有197.9kDa的大小，并且显示了195.4kDa的实际分子量，包含3.1％的误差和0.049kDa的聚糖。双互补位分子密切反映了其预计的大小，并且没有显示出乎意料的糖基化。
实施例7.双互补位分子PD1AB53具有有利的贮存稳定性概况。
将测试物品浓缩至大约30mg/mL，并且在4℃和37℃下温育0、3、14、21和28天。将大约15μg测试物品注入AdvanceBio SEC-
Figure BDA0004186038980001441
柱上，并且以0.35mL/分钟洗脱10分钟。PD1AB53在以下中进行配制：a)25mM乙酸钠、100mM氯化钠，pH 6.0；b)25mM乙酸钠、100mM氯化钠、200mm蔗糖，pH 6.0；以及c)25mM磷酸钠、250mM氯化钠，pH 7.0。稳定性计算为％POI，并且在第0天时在a)中显示为99.2％，且在b)中为99.3％；在第3天时在a)中为99.1％，在b)中为99.3％，且在c)中为99.1％；在第14天时在a)中为98.9％，在b)中为99.2％，且在c)中为99.0％；在第21天时在a)中为98.9％)，在b)中为99.0％，且在c)中为98.7％；并且在第28天时在a)中为98.9％，在b)中为99.0％，且在c)中为93.6％。PD1AB53在乙酸钠缓冲液中在大约23mg/m1下，在4℃下长达28天具有良好的稳定性，并且在37℃下随着时间过去显示了聚集。
实施例8.双互补位分子PD1AB37具有有利的贮存稳定性概况。
将测试物品浓缩至大约30mg/mL，并且在4℃和37℃下温育0、3、14、21和28天。将大约15μg测试物品注入AdvanceBio SEC-
Figure BDA0004186038980001442
柱上，并且以0.35mL/分钟洗脱10分钟。PD1AB37在以下中进行配制：a)25mM磷酸钠、250mM氯化钠，pH 7.0；b)25mM磷酸钠、250mM氯化钠、200mm蔗糖，pH 7.0；以及c)25mM磷酸钠、250mM氯化钠、200mM谷氨酸盐，pH 7.0。稳定性计算为％POI，并且在第0天时在a)中显示为61.9％，在b)中为63.7％，且在c)中为62.6％；在第3天时在a)中为60.1％，在b)中为61.6％，且在c)中为62.2％；在第14天时在a)为57.2％，在b)为64.9％，且在c)中为62.2％；在第21天时在a)中为60.5％，在b)中为65.1％，且在c)中为62.3％；并且在第28天在a)中为59.1％，在b)中为65.2％，且在c)中为60.8％。PD1AB37在乙酸钠缓冲液中在大约15mg/ml下，在4℃下稳定长达28天，并且作为浓缩的结果结果显示聚集。在37℃下的加速贮存条件下，随着时间过去的聚集和轻微降解是显而易见的。
实施例9.双互补位分子PD1AB38具有有利的贮存稳定性概况。
将测试物品浓缩至大约30mg/mL，并且在4℃和37℃下温育0、3、14、21和28天。将大约15μg测试物品注入AdvanceBio SEC-
Figure BDA0004186038980001451
柱上，并且以0.35mL/分钟洗脱10分钟。PD1AB37在以下中进行配制：a)25mM磷酸钠、250mM氯化钠，pH 7.0；b)25mM磷酸钠、250mM氯化钠、200mm蔗糖pH 7.0。稳定性计算为％POI，并且在第0天时在a)中显示为72.8％，且在b)中为78.0％；在第3天时在a)中为70.3％，且在b)中为77.1％；在第14天时在a)中为67.6％，且在b)中为77.1％；在第21天时在a)中为66.6％，且在b)中为77.2％；并且在第28天时在a)中为71.9％，且在b)中为76.9％。PD1AB38在乙酸钠缓冲液中在大约15mg/ml下，在4℃下稳定长达28天，并且作为浓缩的结果结果显示聚集。在37℃下的加速贮存条件下，随着时间过去的聚集和轻微降解是显而易见的。
实施例10.双互补位分子具有低多反应性。
多反应性结合可以与在人中的弱PK结果相关联。简言之，板用1μg/mL dsDNA的1xPBS溶液在4℃下包被过夜。板用具有1％BSA的1x PBS进行封闭。抗体就在100nM下的结合一式三份地进行测试。抗体结合通过抗κ-HRP抗体进行检测，对于仅具有二抗的包被孔，信号进行背景扣除。测试物品包括各自以100nM、1-nM或1nM的PD1AB53、PD1AB37、PD1AB38、阴性对照和阳性对照。PD1AB53、PD1AB37和PD1AB38在所有浓度下都显示了低多反应性，而PD1AB53在所有测试物品中显示了最低的多反应性。PD1AB37显示了比PD1AB38更低的多反应性。双互补位分子显示了低多反应性。
实施例11.双互补位分子并未显示自身相互作用。
抗体自身相互作用可能指示了弱PK或制剂的高粘度的潜在风险。简言之，使用抗人Ig捕获抗体包被的金纳米颗粒与100nM测试物品、对照抗体或缓冲液一起温育2小时。测量来自510-570nm的吸光度，以确定关于每种抗体的最大吸光度的波长(等离子体波长)。Δ峰值吸光度波长与缓冲液对照比较进行计算。双特异性分子通过AC-SINS显示了极少的自身相互作用，其通过最大吸光度波长的偏移显示。相应地，双互补位分子显示出低自身相互作用。
实施例12.双互补位分子显示了良好的热稳定性。
以1℃/分钟的增量测量来自25-95℃的测试物品荧光。Tm由一阶微分方程的局部最大值进行计算，并且Tagg通过在266和473nm处的吸光度进行测量。一般地，Tagg266指示初始小聚集体形成的温度，而Tagg473指示初始大聚集体形成的温度。PD1AB53显示了68℃的Tm1，其中Tm2和3均略高于80℃。PD1AB37和PD1AB38显示了对于Tm1为67℃且对于Tm2为73且对于Tm3为75℃的类似测量。PD1AB53显示了刚好低于80℃的Tagg266和略高于80℃的Tagg473。PD1AB37显示了略低于70℃的Tagg266和略高于70℃的Tagg473。PD1AB38显示了略低于70℃的Tagg266和略高于70℃的Tagg473。相应地，双互补位分子显示了热稳定性。
实施例13.双互补位分子显示了低电荷异质性。
样品在甲基纤维素、4M尿素、3-10
Figure BDA0004186038980001461
两性电解质(4％)、5mM精氨酸和pI标记物(下文指示)的基质中进行稀释。将混合物提交给iCE3IEF分析仪(ProteinSimple)，并且在1,500V下预聚焦，随后为在3，000V下的聚焦。每个峰的等电点根据包围(bracketing)pI标记物进行计算。PD1AB53和PD1AB38显示了大于8.0的pI值。PD1AB53和PD1AB38具有有利于配制和纯化工艺开发的pI概况。
实施例14.通过质谱法，PD1AB53具有正确的质量。
样品通过胍和DTT进行变性和/或还原，然后通过PNGase F(MEDNA Bio M3104)进行脱糖基化。使用ACQUITY UPLC Protein BEH SEC柱，通过与Xevo G2-XS QTOF质谱仪联用的Waters ACQUITY UPLC来分析样品。糖基化条件采取G0F(1445Da)的糖基化重量。非还原条件采取-2Da/二硫化物(22)的二硫键重量。在非还原的糖基化状态下凭经验确定的PD1AB53的分子量为201295Da，而预计分子量为201296Da。在非还原的脱糖基化状态下凭经验确定的PD1AB53的分子量为198406Da，而预计分子量为198412Da。在还原的糖基化状态下凭经验确定的PD1AB53的分子量分别为76416Da和24255Da，而预计分子量分别为76415Da和24258Da。在还原的脱糖基化状态下凭经验确定的PD1AB53的分子量分别为74970Da和24253Da，而预计分子量分别为74970Da和24258Da。凭经验确定的质量与对于每种条件计算的质量在6Da内一致。
实施例15.通过质谱法，PD1AB37具有正确的质量。
样品通过胍和DTT进行变性和/或还原，然后通过PNGase F(MEDNA Bio M3104)进行脱糖基化。使用ACQUITY UPLC Protein BEH SEC柱，通过与Xevo G2-XS QTOF质谱仪联用的Waters ACQUITY UPLC来分析样品。糖基化条件采取G0F(1445Da)的糖基化重量。非还原条件采取-2Da/二硫化物(22)的二硫键重量。在非还原的糖基化状态下凭经验确定的PD1AB37的分子量为200545Da，而预计分子量为200545Da。在非还原的脱糖基化状态下凭经验确定的PD1AB37的分子量为197655Da，而预计分子量为197658Da。在还原的糖基化状态下凭经验确定的PD1AB37的分子量分别为77122Da和23174Da，而预计分子量分别为77121Da和23175Da。在还原的脱糖基化状态下凭经验确定的PD1AB37的分子量分别为75676Da和23174Da，而预计分子量分别为65675Da和23175Da。凭经验确定的质量与对于每种条件计算的质量在2Da内一致。
实施例16.通过质谱法，PD1AB38具有正确的质量。
样品通过胍和DTT进行变性和/或还原，然后通过PNGase F(MEDNA Bio M3104)进行脱糖基化。使用ACQUITY UPLC Protein BEH SEC柱，通过与Xevo G2-XS QTOF质谱仪联用的Waters ACQUITY UPLC来分析样品。糖基化条件采取G0F(1445Da)的糖基化重量。非还原条件采取-2Da/二硫化物(22)的二硫键重量。在非还原的糖基化状态下凭经验确定的PD1AB38的分子量为200765Da，而预计分子量为200767Da。在非还原的脱糖基化状态下凭经验确定的PD1AB38的分子量为197877Da，而预计分子量为197880Da。在还原的糖基化状态下凭经验确定的PD1AB38的分子量分别为77134Da和23266Da，而预计分子量分别为77134Da和23271Da。在还原的脱糖基化状态下凭经验确定的PD1AB38的分子量分别为75690Da和23264Da，而预计分子量分别为75689Da和23271Da。凭经验确定的质量与对于每种条件计算的质量在7Da内一致。
实施例17.PD1AB38、PD1AB37和PD1AB53显示出在可变结构域CDR中最低限度的翻译后修饰。
样品用DTT和IAM进行处理，随后为胰蛋白酶/Lys-C消化。然后使用Protein BEHC18柱，通过与Xevo G2-XS QTOF质谱仪联用的Waters ACQUITY UPLC来分析消化的样品。数据显示了在PD1AB38、PD1AB37和PD1AB53的可变结构域CDR中最低限度的修饰，但没有主要的氧化或脱氨作用。PD1AB38、PD1AB37和PD1AB53显示了用于制造的有利性质。
实施例18.PD1AB53、PD1AB37和PD1AB38显示了相似的糖基化模式。
用Waters GlycoWorks RapiFluor-MS N-G1ycan Kit处理样品。使用ACQUITYUPLC Glycan BEH Amide柱，通过与Xevo G2-XS QTOF质谱仪联用的Waters ACQUITY UPLC来分析样品。聚糖种类计算为％总计。PD1AB53包含0.98％的G0-GN；8.6％GOF-GN；0.67％G0；77.37％G0F；7.9％Man5；1.78％G0F+GN；2.31％G1F；和0.39％Man6。PD1AB37包含1.11％G0-GN；9.57％G0F-GN；0.68％G0；77.02％G0F；7.96％Man5；2.02％G0F+GN；0.99％G1F；0.29％Man6；和0.37％未知(1368.6)。PD1AB38包含1.28％G0-GN；10.5％G0F-GN；0.76％G0；73.29％G0F；9.44％Man5；2.26％G0F+GN；1.31％G1F；0.28％Man6；0.29％未知(1725.73)；和0.59％未知(1368.6)。相应地，跨越测试的双互补位分子，占优势的种类包括G0F、G0F-GN和甘露糖5。
实施例19.表位作图提示了与PD-1的独特结合。
表位作图使用肽交联质谱法进行，随后为计算分子建模，以验证各种表位的％重叠，并且根据标准方案。结果显示了与其它分子的下述％重叠：
Figure BDA0004186038980001481
相应地，表位作图揭示了位于PD-1激动剂和拮抗剂之间结合的多样性。
实施例20.双互补位分子并不具有PD-1拮抗剂活性。
使PD-1报告分子Jurkat细胞与指示浓度的测试物品一起温育1小时。然后加入PD-L1表达细胞，并且在2小时后评价SHP-2募集。与帕博利珠单抗阳性对照相比，PD1AB43、PD1AB38、PD1AB37和PD1AB53、LY3462817阴性对照和TTJ2阴性对照并未显示拮抗剂活性。相应地，双互补位分子PD1AB43、PD1AB38、PD1AB37和PD1AB53并未显示出拮抗剂活性。
实施例21.双互补位分子具有PD-1激动剂活性。
使PD-1报告分子Jurkat细胞与浓度范围为0.001至100nM的可溶性测试物品一起温育。在2小时后评价SHP-2募集。PD1AB43显示了0.5736的EC50(nM)；PD1AB38显示了0.3022的EC50；PD1AB37显示了0.3700的EC50；并且PD1AB53显示了1.210的EC50。
在另一项实验中，板用抗人IgG进行包被，封闭，并且Ig栓系的测试物品以0.001至100nM的浓度范围添加1小时。将板洗涤并且加入PD-1报告分子Jurkat细胞。在2小时后评价SHP-2募集。PD1AB43显示了8.507的EC50(nM)；PD1AB38显示了20.85的EC50；PD1AB37显示了24.48的EC50；PD1AB53显示了4.835的EC50；并且LY3462817显示了5.686的EC50。相应地，可溶性和Ig栓系的双互补位分子显示了激动剂活性。
实施例22.双互补位分子在体外抑制T细胞增殖。
在100nM对照测试物品、LY3462817、PD1AB38、PD1AB37或PD1AB53的不存在或存在下，用葡萄球菌肠毒素B(SEB)或含有来自CMV、EBV和流感的表位的肽库刺激人PBMC。在刺激后3至6天，通过关于Ki67的细胞内染色来评价增殖。百分比Ki67阳性事件相对于无测试物品条件进行标准化。数据显示了SEB或CEF肽库刺激的T细胞增殖的抑制。相应地，双互补位分子抑制人T细胞的增殖。
实施例23.双互补位分子在体外抑制T细胞增殖。
人PBMC在37℃下用媒介物或200nM PD1AB53预处理2小时，然后在封闭PD-L1和PD-L2的抗体(各2μg/ml)的存在下，用破伤风类毒素(5μg/ml)进行刺激。在刺激4天后，通过MSDELISA测量干扰素γ(IFN-γ)、IL-2和肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平，并且用于计算％抑制。数据显示了IFN-γ、IL-2和TNF-α的降低。PD1AB53降低了PBMC中的破伤风类毒素诱导的细胞因子产生。
实施例24.双互补位分子在体外抑制浆细胞样树突细胞中CpGA诱导的I型干扰素应答。
不希望受特定理论的束缚，TLR9激活可以诱导浆细胞样树突细胞上的PD-1表达。纯化的人浆细胞样树突细胞用CpGA刺激6或24小时，随后为用于PD-1、IFN-β1、MX1、MX2和IFIT3的qRT-PCR测量的细胞收集和RNA提取，以及用于通过MSD的细胞因子分析的上清液收集。与未受刺激的细胞相比，基因表达数据显示了仅在刺激之后6小时的PD-1、IFN-β、MX1、MX2和IFIT3表达。与来自未受刺激的细胞的上清液相比，上清液的分析显示了在刺激之后的6小时和24小时的IFN-β1、TNFα和IL-13分泌。
接下来，在PD1AB38、PD1AB37或PD1AB53的存在或不存在下，纯化的人浆细胞样树突细胞用CpGA刺激24小时。CpGA刺激诱导细胞表面上的PD-1表达，并且诱导I型IFN应答基因OAS1、IFIT3、MX1和IFN-β1。在PD1AB38、PD1AB37和PD1AB53的存在下，CpGA诱导的这些基因的表达受到抑制。相应地，双互补位PD-1激动剂压制CpGA诱导的I型IFN应答基因。
实施例25.PD1AB43延长了xGVHD中的存活并改善皮肤表型。
通过人PBMC转移到免疫缺陷小鼠内，来诱导异种移植物抗宿主病。在细胞转移后10天开始，小鼠每周一次用媒介物或PD1AB43进行皮下治疗。皮肤炎症如下进行评分：0：健康，1：脱毛＜1cm x 1cm，2：脱毛＞1cm x 1cm，但并非全部，3：全部脱毛，加上对于发炎的尾巴、耳、足各另外0.3。PD1AB43改善了皮肤表型，并且与关于媒介物的53天相比，将中值存活时间延长至70.5天。
实施例26.PD1AB53降低了xGVHD中的皮肤炎症的严重程度。
通过人PBMC转移到免疫缺陷小鼠内，来诱导异种移植物抗宿主病。在细胞转移后10天开始，小鼠每2周用媒介物或PD1AB53进行皮下治疗。皮肤炎症如下进行评分：0：健康，1：脱毛＜1cm x 1cm，2：脱毛＞1cm x 1cm，但并非全部，3：全部脱毛，加上对于发炎的尾巴、耳、足各另外0.3。与媒介物相比，PD1AB53显示了改善的皮肤评分。
实施例27.PD1AB43降低了xGVHD中的皮肤和结肠的T细胞浸润。
通过人PBMC转移到免疫缺陷小鼠内，来诱导异种移植物抗宿主病。在细胞转移后10天开始，小鼠每周一次用媒介物或PD1AB43进行皮下治疗。在植入后＞100天收获皮肤或结肠。样品进行福尔马林固定和石蜡包埋或消化，以分离浸润细胞。浸润性CD4+和CD8+ T细胞通过IHC样品的自动化图像分析或消化组织的流式细胞术进行定量。皮肤组织病理学通过对各组不知情的病理学家进行评分。如通过IHC或流式细胞术测量的，PD1AB43治疗的小鼠显示出在皮肤和结肠中较低水平的CD4+和CD8+细胞。PD1AB43治疗的小鼠也显示了在血液中较低水平的CD4+细胞以及降低的组织病理学评分，指示了改善的皮肤表型。PD1AB43有效地降低了皮肤和结肠的T细胞浸润，并且改善了xGVHD中的皮肤表型。
实施例28.双互补位分子增加了人PD-1敲入小鼠中的调节性T细胞共表达激活标记物。
八周龄的人PD-1敲入小鼠在颈背处用PD1AB43、PD1AB38、PD1AB37、PD1AB53、PD1AB64、LY3462817或媒介物进行皮下给药。在第4、7或10天，对小鼠实施安乐死，解剖脾脏并且用针对表面和细胞内标记物的抗体对脾细胞进行染色，以对T细胞亚群进行免疫表型分析，并且测量激活标记物LAG3和CTLA4的表达。数据显示了在注射之后的第4、7和10天，共表达LAG3和CTLA4的脾脏Treg的频率和数目增加。PD1AB43、PD1AB38、PD1AB37、PD1AB53和PD1AB64双互补位分子增加了人PD-1敲入小鼠中的调节性T细胞激活标记物的表达。
实施例29.双互补位分子以剂量依赖性方式增加了调节性T细胞共表达激活标记物。
八周龄的人PD-1敲入小鼠在颈背处用低、中和高剂量的PD1AB53、PD1AB37、PD1AB38、D1.3、LY3462817或媒介物进行皮下给药。在7天后，对小鼠实施安乐死，解剖脾脏并且用针对表面和细胞内标记物的抗体对脾细胞进行染色，以对T细胞亚群进行免疫表型分析，并且测量激活标记物LAG3和CTLA4的表达。数据显示了共表达LAG3和CTLA4的脾脏Treg的频率和数目的剂量依赖性增加。PD1AB38、PD1AB37和PD1AB53双互补位分子以剂量依赖性方式增加了调节性T细胞激活标记物的表达。
实施例30.双互补位分子增加了人CD34+植入的NSG小鼠中的调节性T细胞共表达激活标记物。
人CD34阳性造血干细胞植入的NSG小鼠在颈背处用PD1AB38、PD1AB37、PD1AB53、D1.3、LY3462817或媒介物进行皮下给药。在7天后，对小鼠实施安乐死，解剖脾脏并且用针对表面和细胞内标记物的抗体对脾细胞进行染色，以对人T细胞亚群进行免疫表型分析，并且测量激活标记物LAG3和CTLA4的表达。数据显示了共表达LAG3和CTLA4的脾脏人Treg的频率和数目增加。PD1AB38、PD1AB37和PD1AB53双互补位分子增加了人CD34+植入的NSG小鼠中的调节性T细胞激活标记物的表达。
这些数据证实了PD-1抗体可以充当激动剂，并且与其中每个结合结构域结合相同表位的单互补位形式相比，以双互补位形式例如图2中所示的那些形式发挥更大的有效性。
本文引用的每个和每一个专利、专利申请和出版物的公开内容在此通过引用以其整体并入本文。虽然已参考特定方面公开了各个实施方案，但显而易见的是，这些实施方案的其它方面和变化可以通过本领域的其它技术人员进行设计，而不脱离实施方案的真实精神和范围。所附权利要求预期被解释为包括所有此类方面和等价变化。
序列表
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<151> 2021-02-23
<150> 63175760
<151> 2021-04-16
<160> 307
<170> PatentIn version 3.5
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Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
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Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
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Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
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Gly Gly Gly Ala
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Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
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1 5
<210> 21
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 21
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gln Gly Asp Tyr Gly Gly Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 22
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Thr Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 23
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 23
Gly Thr Phe Ser Arg Tyr Ala Val Ser
1 5
<210> 24
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 24
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Ser Tyr Ala
1 5 10
<210> 25
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 25
Cys Ala Lys Gln Gly Asp Tyr Gly Gly Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 26
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 26
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 27
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 27
Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
<210> 28
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 28
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe Thr
1 5
<210> 29
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 29
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Gly Tyr Ser Tyr Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 30
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 30
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 31
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 31
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 32
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 32
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala
1 5 10
<210> 33
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 33
Cys Ala Arg Val Gly Tyr Ser Tyr Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp
1 5 10 15
<210> 34
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 34
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 35
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 35
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Trp Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 36
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 36
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Arg Asp Ile Lys Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 37
Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr Tyr Met His
1 5
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 38
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala
1 5 10
<210> 39
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 39
Cys Ala Ser Gly Trp Val Tyr Trp
1 5
<210> 40
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 40
Gln Ala Ser Arg Asp Ile Lys Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 41
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 41
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr
1 5
<210> 42
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 42
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Trp Ser Asp Gly Ser His Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Gly Val Glu Arg Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 43
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 43
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 44
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 44
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 45
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 45
Ala Ala Ile Trp Ser Asp Gly Ser His Gln Tyr Tyr Ala
1 5 10
<210> 46
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 46
Cys Ala Arg Gly Leu Gly Val Glu Arg Gly Leu Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 47
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 47
Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 48
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 49
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 49
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Leu Ile Ser Asp Asp Gly Thr Asn Glu His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ser Lys Phe Ala Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Asp Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 50
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 50
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 51
Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Pro Met His
1 5
<210> 52
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 52
Ala Leu Ile Ser Asp Asp Gly Thr Asn Glu His Tyr Ala
1 5 10
<210> 53
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 53
Cys Ala Arg Asp Ser Lys Phe Ala Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Asp Met
1 5 10 15
Asp Val Trp
<210> 54
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 54
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 55
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 55
Ser Asn Leu Glu Thr
1 5
<210> 56
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 56
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly His
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Asn Gly Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Lys Phe Asp Phe Tyr Gly Asp Tyr Val Thr Ala Phe Asp
100 105 110
Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 57
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 57
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Arg Asp Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Gln Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Ile Pro Val Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 58
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 58
Tyr Ser Phe Thr Gly His Tyr Ile His
1 5
<210> 59
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 59
Gly Ile Ile Asn Pro Asn Gly Gly Ser Thr Thr Tyr Ala
1 5 10
<210> 60
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 60
Cys Ala Arg Gly Lys Phe Asp Phe Tyr Gly Asp Tyr Val Thr Ala Phe
1 5 10 15
Asp Ile Trp
<210> 61
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 61
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Arg Asp Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 62
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 62
Ser Thr Arg Gln Ser
1 5
<210> 63
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 63
Gln Gln Tyr Tyr Ser Ile Pro Val Thr
1 5
<210> 64
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 64
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly His Thr Gly Ser Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Phe Gly Leu His Leu Gly Glu Leu Ser Leu His Tyr
100 105 110
Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 65
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 65
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 66
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 66
Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr Asp Met Asn
1 5
<210> 67
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 67
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly His Thr Gly Ser Ala
1 5 10
<210> 68
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 68
Cys Ala Arg Gly Ala Phe Gly Leu His Leu Gly Glu Leu Ser Leu His
1 5 10 15
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
20
<210> 69
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 69
Ser Ser Leu Gln Gly
1 5
<210> 70
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 70
Gln Gln Ser Tyr Ser Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 71
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 71
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Lys Ile Val Pro Met Phe Asp Ala Ala Asn Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Pro Lys Trp Glu Leu Asp Thr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 72
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 72
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Val
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 73
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 73
Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 74
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 74
Gly Lys Ile Val Pro Met Phe Asp Ala Ala Asn Tyr Ala
1 5 10
<210> 75
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 75
Cys Ala Arg Gly Pro Lys Trp Glu Leu Asp Thr Trp
1 5 10
<210> 76
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 76
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 77
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 77
Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Val Thr
1 5
<210> 78
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 78
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Thr Ala Gly Tyr Asp Trp Leu Pro Ser Gly Leu Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 79
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 79
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Val Pro Leu
85 90 95
Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 80
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 80
Cys Ala Lys Thr Ala Gly Tyr Asp Trp Leu Pro Ser Gly Leu Gly Met
1 5 10 15
Asp Val Trp
<210> 81
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 81
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 82
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 82
Gln Gln Gly Tyr Ser Val Pro Leu Ser
1 5
<210> 83
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 83
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Ser Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys
50 55 60
Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala
65 70 75 80
Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Trp Arg Ser Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 84
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 84
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 85
<211> 9
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 85
Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr Gly Ile Thr
1 5
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<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 86
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Ser Thr Ala Ser Tyr Ala
1 5 10
<210> 87
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 87
Cys Ala Arg Trp Arg Ser Asp Ala Phe Asp Ile Trp
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 88
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 89
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 89
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Ile Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Asn Tyr Asp Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 90
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Asn Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 91
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 91
Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Ile Ser
1 5
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 92
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala
1 5 10
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 93
Cys Ala Arg Val Asn Tyr Asp Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
1 5 10 15
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 94
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 95
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1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 96
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Asn Tyr Asp Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 97
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Pro Tyr Gly Met Gly Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 98
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 98
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ala Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Val Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 99
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 99
Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Asp Met Ser
1 5
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 100
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala
1 5 10
<210> 101
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 101
Cys Ala Ser Pro Tyr Gly Met Gly Tyr Met Asp Val Trp
1 5 10
<210> 102
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 102
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ala Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 103
Ser Ser Val Gln Thr
1 5
<210> 104
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 104
Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 105
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 105
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Ser Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Ser Tyr Gly Val Gly Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 106
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 106
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Arg Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 107
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 107
Gly Ser Phe Asn Asn Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 108
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 108
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Ser Tyr Ala
1 5 10
<210> 109
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 109
Cys Ala Arg Val Ser Tyr Gly Val Gly Tyr Tyr Met Asp Val Trp
1 5 10 15
<210> 110
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 110
Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Arg Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 111
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 111
Ser Asn Leu Gln Ser
1 5
<210> 112
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 112
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Arg Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Ser Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 113
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 113
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asp
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Thr Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Gly Arg Leu Asp Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 114
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 114
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Gly Asn Ala
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Tyr Ser Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 115
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 115
Tyr Thr Phe Thr Asp Asp Tyr Ile His
1 5
<210> 116
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 116
Gly Trp Met Asn Thr Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala
1 5 10
<210> 117
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 117
Cys Ala Arg Gly Gly Ser Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Gly Arg Leu Asp
1 5 10 15
Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
20
<210> 118
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 118
Arg Ala Ser Gln Gly Val Gly Asn Ala Leu Gly
1 5 10
<210> 119
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 119
Gln Gln Ala Tyr Ser Phe Pro Trp Thr
1 5
<210> 120
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 120
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Leu Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Ala Ala Gly Leu Phe Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 121
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 121
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Arg Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 122
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 122
Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ala Met His
1 5
<210> 123
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 123
Gly Trp Leu Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala
1 5 10
<210> 124
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 124
Cys Ala Ala Gly Leu Phe Ile Trp
1 5
<210> 125
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 125
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Arg Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 126
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 126
Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 127
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 127
Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Ile Thr
1 5
<210> 128
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 128
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Gly Phe Gly Ser Pro Asn Tyr Ala Pro Asn Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Glu Tyr Cys Ser Ser Thr Ser Cys Ser Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 129
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 129
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Gly Ser Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 130
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 130
Gly Gly Ile Ile Pro Gly Phe Gly Ser Pro Asn Tyr Ala
1 5 10
<210> 131
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 131
Cys Thr Thr Glu Tyr Cys Ser Ser Thr Ser Cys Ser Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 132
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 132
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 133
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 133
Ser Asn Arg Ala Pro
1 5
<210> 134
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 134
Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 135
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 135
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp His
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Asn Pro Ser Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Asn Gly His Ala Ser Gly Trp Leu Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 136
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 136
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Trp
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Ser Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 137
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 137
Tyr Thr Phe Ser Asp His Tyr Met His
1 5
<210> 138
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 138
Gly Thr Ile Asn Pro Ser Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Ala
1 5 10
<210> 139
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 139
Cys Ala Ala Asp Asn Gly His Ala Ser Gly Trp Leu Tyr Tyr Tyr Gly
1 5 10 15
Met Asp Val Trp
20
<210> 140
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 140
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Trp Val Ala
1 5 10
<210> 141
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 141
Gln Gln Ser His Ser Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 142
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 142
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Gly Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Glu Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 143
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 143
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Asn Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 144
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 144
Ser Gly Ile Ser Gly Gly Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala
1 5 10
<210> 145
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 145
Cys Ala Ser Glu Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
1 5 10
<210> 146
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 146
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 147
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 147
Gln Gln Tyr Arg Asn Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 148
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 148
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Glu Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 149
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 149
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Gly Arg Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Thr Thr Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 150
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 150
Tyr Thr Phe Ser Gly Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 151
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 151
Gly Val Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala
1 5 10
<210> 152
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 152
Cys Ala Glu Gly Phe Asp Tyr Trp
1 5
<210> 153
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 153
Arg Ala Ser Gln Gly Val Gly Arg Ser Leu Ala
1 5 10
<210> 154
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 154
Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
<210> 155
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 155
Gln Gln Tyr Tyr Thr Thr Pro Ile Thr
1 5
<210> 156
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 156
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 157
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 157
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asp Asn Leu Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 158
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 158
Gly Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 159
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 159
Cys Ala Arg Val Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
1 5 10 15
<210> 160
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 160
Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 161
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 161
Ser Thr Leu Lys Ser
1 5
<210> 162
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 162
Gln Gln Ala Asp Asn Leu Pro Phe Thr
1 5
<210> 163
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 163
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Trp Gly Trp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 164
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 164
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Arg Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 165
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 165
Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 166
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 166
Cys Ala Arg Asp Trp Gly Trp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
Trp
<210> 167
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 167
Gln Ala Ser Arg Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 168
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 168
Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
<210> 169
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 169
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Thr Ile Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Gly Gly Ser Gly Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 170
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 170
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Pro Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 171
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 171
Phe Thr Phe Ser Asn Ser Asp Met Ser
1 5
<210> 172
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 172
Ser Gly Ile Thr Ile Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala
1 5 10
<210> 173
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 173
Cys Ala Arg Gly Arg Gly Gly Ser Gly Trp Leu Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 174
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 174
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Pro Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 175
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 175
Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 176
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 176
Gln Gln Tyr Tyr Thr Thr Pro Pro Thr
1 5
<210> 177
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 177
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Val
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 178
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 178
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Val
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 179
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 179
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Asp Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Phe Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro His Asn Gly Asp Thr Met Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Ser Tyr Gly Tyr Thr Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 180
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 180
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 181
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 181
Gly Asp Phe Ser Asn Tyr Phe Val Ser
1 5
<210> 182
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 182
Gly Trp Ile Asn Pro His Asn Gly Asp Thr Met Tyr Ala
1 5 10
<210> 183
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 183
Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Ser Tyr Gly Tyr Thr Phe Asp Ile Trp
1 5 10 15
<210> 184
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 184
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 185
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 185
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Thr Ile Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Gly Gly Ser Gly Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 186
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 186
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Pro Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ile Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 187
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 187
Gln Gln Tyr Tyr Ile Thr Pro Pro Thr
1 5
<210> 188
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 188
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Trp Thr Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 189
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 189
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Thr Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Thr Thr Ser Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 190
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 190
His Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 191
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 191
Cys Ala Ser Gly Trp Thr Asp Trp
1 5
<210> 192
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 192
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 193
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 193
Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 194
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 194
Gln Gln Tyr Thr Thr Ser Pro Ile Thr
1 5
<210> 195
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 195
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Phe Pro Val Phe Gly Ser Ser Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp His Gly Ser Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 196
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 196
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Lys Asp Leu His Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Glu Ser Phe Ser Thr Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 197
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 197
Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 198
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 198
Gly Gly Ile Phe Pro Val Phe Gly Ser Ser Thr Tyr Ala
1 5 10
<210> 199
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 199
Cys Ala Arg Asp His Gly Ser Gly Leu Asp Val Trp
1 5 10
<210> 200
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 200
Lys Asp Leu His Pro
1 5
<210> 201
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 201
Gln Glu Ser Phe Ser Thr Leu Thr
1 5
<210> 202
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 202
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Ala Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Trp Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 203
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 203
Gly Ile Ile Ala Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala
1 5 10
<210> 204
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 204
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Gly Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Trp Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 205
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 205
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp His
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Ala Pro Ser Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Asn Gly His Ala Ser Gly Trp Leu Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 206
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 206
Gly Thr Ile Ala Pro Ser Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Ala
1 5 10
<210> 207
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 207
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp His
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Gly Pro Ser Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Asn Gly His Ala Ser Gly Trp Leu Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 208
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 208
Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 209
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 209
Asp Tyr Ala Met His
1 5
<210> 210
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 210
Trp Leu Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 211
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 211
Ala Ala Gly Leu Phe Ile
1 5
<210> 212
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 212
Gln Ser Ile Asn Arg Trp
1 5
<210> 213
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 213
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ala
1 5
<210> 214
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 214
Leu Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 215
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 215
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
1 5
<210> 216
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 216
Asn Pro Asn Ser Gly Asn
1 5
<210> 217
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 217
Arg Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 218
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 218
Asp His Tyr Met His
1 5
<210> 219
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 219
Thr Ile Asn Pro Ser Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 220
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 220
Ala Ala Asp Asn Gly His Ala Ser Gly Trp Leu Tyr Tyr Tyr Gly Met
1 5 10 15
Asp Val
<210> 221
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 221
Gln Ser Ile Ser Asn Trp
1 5
<210> 222
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 222
Gly Tyr Thr Phe Ser Asp His Tyr
1 5
<210> 223
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 223
Ile Asn Pro Ser Gly Gly Arg Thr
1 5
<210> 224
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 224
Gly Tyr Thr Phe Ser Asp His
1 5
<210> 225
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 225
Asn Pro Ser Gly Gly Arg
1 5
<210> 226
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 226
Asn Gly His Ala Ser Gly Trp Leu Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
1 5 10
<210> 227
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 227
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 228
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 228
Asn Ser Asp Met Ser
1 5
<210> 229
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 229
Gly Ile Thr Ile Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 230
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 230
Ala Arg Gly Arg Gly Gly Ser Gly Trp Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 231
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 231
Gln Ser Val Leu Tyr Ser Pro Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 232
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 232
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser Asp
1 5
<210> 233
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 233
Ile Thr Ile Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 234
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 234
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser
1 5
<210> 235
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 235
Thr Ile Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 236
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 236
Arg Gly Gly Ser Gly Trp Leu Asp
1 5
<210> 237
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 237
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 238
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 238
Thr Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 239
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 239
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 240
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 240
Ala Ser Gly Trp Val Tyr
1 5
<210> 241
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 241
Arg Asp Ile Lys Asn Tyr
1 5
<210> 242
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 242
Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr Tyr
1 5
<210> 243
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 243
Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 244
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 244
Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
1 5
<210> 245
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 245
Asn Pro Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 246
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 246
Gly Ile Thr Ile Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 247
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 247
Asp Asp Tyr Ile His
1 5
<210> 248
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 248
Trp Met Asn Thr Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 249
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 249
Ala Arg Gly Gly Ser Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Gly Arg Leu Asp Tyr
1 5 10 15
Tyr Tyr Gly Met Asp Val
20
<210> 250
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 250
Gln Gly Val Gly Asn Ala
1 5
<210> 251
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 251
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asp Tyr
1 5
<210> 252
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 252
Met Asn Thr Asn Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 253
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 253
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asp
1 5
<210> 254
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 254
Asn Thr Asn Ser Gly Asn
1 5
<210> 255
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 255
Gly Ser Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Gly Arg Leu Asp Tyr Tyr Tyr Gly
1 5 10 15
Met Asp
<210> 256
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 256
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Trp Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 257
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 257
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Thr Ile Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Gly Gly Ser Gly Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 258
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 258
Gly Gly Gly Ser Lys Gly Gly Gly Ser Lys Gly Gly Gly Ser Lys
1 5 10 15
<210> 259
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 259
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 260
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 260
Ala Glu Glu Glu Lys Ala Glu Glu Glu Lys Ala Glu Glu Glu Lys
1 5 10 15
<210> 261
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 261
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Arg Asp Ile Lys Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 262
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 262
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Trp Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 263
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 263
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Pro Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 264
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 264
Ile Ile Ala Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 265
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 265
Ile Ala Pro Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 266
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 266
Ala Pro Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 267
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 267
Ser Tyr Asp Met Ser
1 5
<210> 268
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 268
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp
1 5
<210> 269
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 269
Ile Thr Ile Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 270
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 270
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
1 5
<210> 271
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 271
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 272
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 272
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 273
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 273
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
1 5
<210> 274
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 274
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 275
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 275
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Trp Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 276
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 276
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 277
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 277
Ala Ala Ala Glu Lys Ala Ala Ala Glu Lys Ala Ala Ala Glu Lys
1 5 10 15
<210> 278
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 278
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Thr Ile Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Gly Gly Ser Gly Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 279
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 279
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Pro Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Cys Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 280
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 280
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 281
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 281
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Trp Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 282
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 282
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 283
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 283
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Arg Asp Ile Lys Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 284
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 284
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 285
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 285
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Arg Asp Ile Lys Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 286
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 286
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Arg Asp Ile Leu Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 287
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 287
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 288
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 288
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Arg Asp Ile Lys Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 289
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 289
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Arg Asp Ile Lys Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 290
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 290
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 291
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 291
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Asn Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Trp Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 292
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 292
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Arg Asp Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 293
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 293
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Asn Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Trp Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 294
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 294
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Leu Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 295
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 295
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 296
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 296
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Trp Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 297
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 297
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Trp Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 298
<211> 197
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 298
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg
195
<210> 299
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 299
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Trp Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
115 120 125
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
130 135 140
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
145 150 155 160
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
180 185 190
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
<210> 300
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 300
Gly Gly Gly Ser Glu
1 5
<210> 301
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 301
Gly Gly Gly Ser Glu Gly Gly Gly Ser Glu
1 5 10
<210> 302
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<400> 302
Gly Gly Gly Ser Glu Gly Gly Gly Ser Glu Gly Gly Gly Ser Glu Gly
1 5 10 15
Gly Gly Ser Glu
20
<210> 303
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(5)
<223> n是1, 2, 3, 4
<400> 303
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 304
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(5)
<223> n是1, 2, 3, 4
<400> 304
Gly Gly Gly Gly Ala
1 5
<210> 305
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(5)
<223> n是1, 2, 3, 4
<400> 305
Gly Gly Gly Ser Glu
1 5
<210> 306
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(5)
<223> n是1, 2, 3, 4
<400> 306
Gly Gly Gly Ser Lys
1 5
<210> 307
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(5)
<223> n是1, 2, 3, 4
<400> 307
Ala Glu Glu Glu Lys
1 5

Claims (50)

1.一种包含结合PD-1的第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域结合PD-1上的第一表位，并且所述第三结合结构域和第四结合结构域结合PD-1上的第二表位，其中所述第一表位和第二表位不相同。
2.权利要求1的多肽，其中所述多肽是PD-1激动剂。
3.权利要求1的多肽，其中所述第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域对于PD-1具有相等或相似的亲和力。
4.权利要求1的多肽，其中：
与结合PD-1的第三结合结构域和第四结合结构域相比，所述第一结合结构域和第二结合结构域对于PD-1具有更低的亲和力；或
与结合PD-1的第三结合结构域和第四结合结构域相比，所述第一结合结构域和第二结合结构域对于PD-1具有更高的亲和力。
5.权利要求1的多肽，其中所述第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域是结合PD-1的抗体或抗体片段。
6.权利要求5的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域抗体呈Fab形式，并且所述第三结合结构域和第四结合结构域呈scFv形式。
7.权利要求6的多肽，其中：
与呈scFv形式的第三结合结构域抗体和第四结合结构域抗体相比，呈Fab形式的第一结合结构域抗体和第二结合结构域抗体对于PD-1具有更高的亲和力；或
与呈scFv形式的第三结合结构域抗体和第四结合结构域抗体相比，呈Fab形式的第一结合结构域抗体和第二结合结构域抗体对于PD-1具有更低的亲和力。
8.一种包含结合PD-1的第一结合结构域和第二结合结构域的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域包含如本文所示，例如如本文提供的PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体表8、PD-1抗体表9、PD-1抗体表10或PD-1抗体表11中的序列。
9.权利要求8的多肽，其中所述多肽包含结合PD-1的第三结合结构域和第四结合结构域，其中所述第三结合结构域结合与第一结合结构域相同的表位，并且所述第四结合结构域结合与第二结合结构域相同的表位。
10.权利要求9的多肽，其中
所述第一结合结构域和第三结合结构域包含具有相同序列的多肽；
所述第二结合结构域和第四结合结构域包含具有相同序列的多肽；
所述第一结合结构域和第二结合结构域包含不同的多肽序列；和
所述第三结合结构域和第四结合结构域包含不同的多肽序列。
11.权利要求9的多肽，其中
所述第一结合结构域和第三结合结构域包含具有相同序列的多肽；
所述第二结合结构域和第四结合结构域包含具有相同序列的多肽；
所述第一结合结构域和第二结合结构域包含相同的多肽序列；和
所述第三结合结构域和第四结合结构域包含相同的多肽序列。
12.权利要求9的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是结合PD-1的抗体。
13.权利要求9的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域结合相同的表位或不同的表位。
14.权利要求8的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域之一是Fab抗体，而另一个是scFv抗体。
15.权利要求8的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域通过包含免疫球蛋白恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区的甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/丙氨酸接头、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、或丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸接头进行连接。
16.权利要求1的多肽，其中所述多肽包括包含与scFv抗体连接的Fab重链结构域的第一多肽链、以及包含Fab轻(例如κ)链结构域的第二多肽链，其中所述Fab重链和轻链结合PD-1，并且所述scFv抗体在相同或不同的表位处结合PD-1；并且其中所述scFv包含通过scFv接头连接到轻链可变结构域的重链可变结构域，所述scFV接头包含(GGGGS)n(SEQ IDNO：303)、(GGGSE)n(SEQ ID NO：305)或(GGGGA)n(SEQ ID NO：304)的序列或其组合，其中每个n独立地为1-4。
17.权利要求1的多肽，其中所述第一结合结构域包含如PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体表8、PD-1抗体表9、PD-1抗体表10、或PD-1抗体表11中提供的序列，并且所述第二结合结构域包含如PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体表8、PD-1抗体表9、PD-1抗体表10、或PD-1抗体表11中提供的序列。
18.权利要求1的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的如本文提供的抗体或其抗原结合片段。
19.权利要求1的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其包括：
(i)包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区，其中所述重链CDR1序列具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何CDR1序列的氨基酸序列；所述重链CDR2具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何CDR2序列的氨基酸序列，并且所述重链CDR3具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何CDR3序列的氨基酸序列，或前述任一种的变体；和
(ii)包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中所述轻链CDR1序列具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何LCDR1序列的氨基酸序列；所述轻链LCDR2具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何LCDR2序列的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何LCDR3序列的氨基酸序列，或前述任一种的变体。
20.权利要求1的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段独立地包括：
包含SEQ ID NO：37、115、122、137、171、267、238、279的第一CDR；SEQ ID NO：38、116、123、138、172、229、239的第二CDR；以及SEQ ID NO：39、117、124、139、173、230、240的第三CDR的重链；和
包含SEQ ID NO：40、118、125、140、174、276的第一CDR；SEQ ID NO：19、126、47、175、227、237的第二CDR，以及SEQ ID NO：41、119、127、141、176的第三CDR的轻链可变区。
21.权利要求1的多肽，其中所述第一结合结构域和第二结合结构域是独立地选择的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段独立地包括包含SEQ ID NO：35、SEQID NO：113、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：185、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：256、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：260、或SEQ ID NO：262、或SEQ ID NO：275的序列的重链，以及包含SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：258、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、或SEQ ID NO：263的序列的轻链可变区。
22.权利要求1的多肽，其中所述多肽包含第一多肽链和第二多肽链，其中：
所述第一多肽链从N末端到C末端具有下式：
[VH-A]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[VH-B]-[接头2]-[VK-B]；或
[VH-A]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[VK-B]-[接头2]-[VH-B]；
所述第二多肽链从N末端到C末端具有下式：
[VK-A]-[CK]；或
所述第一多肽链从N末端到C末端具有下式：
[VH—B]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[VH-A]-[接头2]-[VK-A]；或
[VH-B]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[接头1]-[VK-A]-[接头2]-[VH-A]；
所述第二多肽链从N末端到C末端具有下式：
[VK-B]-[CK]，
其中：
VH-A＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
VK-A＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域；
VH-B＝如本文提供的PD1抗体的可变重链结构域；
VK-B＝如本文提供的PD1抗体的可变轻结构域；
CH1＝例如本文提供的人IgG1的恒定重结构域1；
CH2＝例如本文提供的人IgG1的恒定重结构域2；
CH3＝例如本文提供的人IgG1的恒定重结构域3；
CK＝例如本文提供的κ轻链的恒定结构域；
接头1是甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/丙氨酸、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、或丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸接头；
接头2是甘氨酸/丝氨酸、甘氨酸/丙氨酸、甘氨酸/谷氨酸/丝氨酸、或丙氨酸/谷氨酸/赖氨酸接头；
其中VH-A、VK-A、VH-B和VK-B可以来自相同或不同的抗体。
23.权利要求22的多肽，其中VH—A和VH—B独立地包括：
(i)包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区，其中所述重链CDR1序列具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何CDR1序列的氨基酸序列；所述重链CDR2具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何CDR2序列的氨基酸序列，并且所述重链CDR3具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何CDR3序列的氨基酸序列，或前述任一种的变体；和
(ii)包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中所述轻链CDR1序列具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何LCDR1序列的氨基酸序列；所述轻链LCDR2具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何LCDR2序列的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3具有PD-1抗体表4、PD-1抗体表5、PD-1抗体Fab表6或PD-1抗体scFv表7中所示的任何LCDR3序列的氨基酸序列，或前述任一种的变体。
24.权利要求22的多肽，其中VH-A包括：
包含SEQ ID NO：37的第一CDR、SEQ ID NO：38的第二CDR和SEQ ID NO：39的第三CDR的重链可变区；
包含SEQ ID NO：171的第一CDR、SEQ ID NO：172的第二CDR和SEQ ID NO：173的第三CDR的重链可变区；
包含SEQ ID NO：238的第一CDR、SEQ ID NO：239的第二CDR和SEQ ID NO：240的第三CDR的重链可变区；
包含SEQ ID NO：279的第一CDR、SEQ ID NO：239的第二CDR和SEQ ID NO：240的第三CDR的重链可变区；或
包含SEQ ID NO：267的第一CDR、SEQ ID NO：229的第二CDR和SEQ ID NO：230的第三CDR的重链可变区。
25.权利要求22的多肽，其中VH-B包括：
包含SEQ ID NO：37的第一CDR、SEQ ID NO：38的第二CDR和SEQ ID NO：39的第三CDR的重链可变区；
包含SEQ ID NO：171的第一CDR、SEQ ID NO：172的第二CDR和SEQ ID NO：173的第三CDR的重链可变区；
包含SEQ ID NO：238的第一CDR、SEQ ID NO：239的第二CDR和SEQ ID NO：240的第三CDR的重链可变区；
包含SEQ ID NO：279的第一CDR、SEQ ID NO：239的第二CDR和SEQ ID NO：240的第三CDR的重链可变区；或
包含SEQ ID NO：267的第一CDR、SEQ ID NO：229的第二CDR和SEQ ID NO：230的第三CDR的重链可变区。
26.权利要求22的多肽，其中VK-A或VK-B包括：
包含SEQ ID NO：40的第一CDR、SEQ ID NO：19的第二CDR和SEQ ID NO：41的第三CDR的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：175的第二CDR和SEQ ID NO：176的第三CDR的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：227的第二CDR和SEQ ID NO：176的第三CDR的轻链可变区；
包含SEQ ID NO：40的第一CDR、SEQ ID NO：237的第二CDR和SEQ ID NO：41的第三CDR的轻链可变区；或
包含SEQ ID NO：276的第一CDR、SEQ ID NO：237的第二CDR和SEQ ID NO：41的第三CDR的轻链可变区。
27.权利要求22的多肽，其中：
VH—A包括包含SEQ ID NO：37的第一CDR、SEQ ID NO：38的第二CDR和SEQ ID NO：39的第三CDR的重链可变区；
VH-B包括包含SEQ ID NO：171的第一CDR、SEQ ID NO：172的第二CDR和SEQ ID NO：173的第三CDR的重链可变区；
VK-A包括包含SEQ ID NO：40的第一CDR、SEQ ID NO：19的第二CDR和SEQ ID NO：41的第三CDR的轻链可变区；
VK-B包括包含SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：175的第二CDR和SEQ ID NO：176的第三CDR的轻链可变区；
VK-A包括包含SEQ ID NO：276的第一CDR、SEQ ID NO：237的第二CDR和SEQ ID NO：41的第三CDR的轻链可变区；
VK-B包括包含SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：227的第二CDR和SEQ ID NO：176的第三CDR的轻链可变区；或
VK-A包括包含SEQ ID NO：174的第一CDR、SEQ ID NO：227的第二CDR和SEQ ID NO：176的第三CDR的轻链可变区；
VK-B包括包含SEQ ID NO：40的第一CDR、SEQ ID NO：237的第二CDR和SEQ ID NO：41的第三CDR的轻链可变区。
28.权利要求22的多肽，其中所述接头1是(GGGGS)n(SEQ ID NO：303)，其中n是1-4；并且其中接头2是(GGGGS)n(SEQ ID NO：303)，其中n是1-4。
29.一种双互补位多肽，其包含第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域，其中所述第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域中的两个结合PD-1上的第一表位，而第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域中的另外两个结合PD-1上的第二表位，其中所述第一表位和第二表位是不同的，并且其中所述第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域包含PD-1抗体，例如本文提供的那些抗体。
30.权利要求29的双互补位多肽，其中所述第一表位和第二表位是不重叠的。
31.权利要求29的双互补位多肽，其中所述第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域中的两个包括包含SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：185、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：256、SEQID NO：257、SEQ ID NO：260、或SEQ ID NO：262、或SEQ ID NO：275的序列的重链，以及包含SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：170、SEQ IDNO：258、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、或SEQ ID NO：263的序列的轻链可变区。
32.权利要求29的双互补位多肽，其中所述第一结合结构域、第二结合结构域、第三结合结构域和第四结合结构域中的两个包括：
包含SEQ ID NO：37、115、122、137、171、267、238、279的第一CDR；SEQ ID NO：38、116、123、138、172、229、239的第二CDR；以及SEQ ID NO：39、117、124、139、173、230、240的第三CDR的重链；
包含SEQ ID NO：40、118、125、140、174、276的第一CDR；SEQ ID NO：19、126、47、175、227、237的第二CDR，以及SEQ ID NO：41、119、127、141、176的第三CDR的轻链可变区；和
其中并非所有的结合结构域都是相同的。
33.一种药物组合物，其包含权利要求1的多肽。
34.一种药物组合物，其包含权利要求31的双互补位多肽。
35.一种治疗受试者中的系统性红斑狼疮(SLE)、Aicardi-Goutières综合征、双侧纹状体坏死、慢性非典型嗜中性粒细胞性皮肤病伴脂肪营养不良和高温(CANDLE)、完全不外显、遗传性对称性色素异常症、家族性冻疮样狼疮、日本自身炎症性综合征伴脂肪营养不良(JASL)，关节挛缩、肌肉萎缩、小细胞性贫血、脂膜炎和脂肪营养不良(JMP)，孟德尔遗传易感分枝杆菌病(MSMD)、中条-西村综合征、视网膜血管病变伴脑白质营养不良(RVCL)、痉挛性截瘫、STING相关的婴儿期发病的血管病(SAVI)、辛-梅二氏综合征或脊椎软骨瘤病(SPENCD)的方法，所述方法包括向所述受试者施用权利要求1的多肽。
36.一种治疗患有炎性肠病、自身免疫性肝炎、原发性硬化性胆管炎、1型糖尿病、移植、GVHD，或者患有自身免疫性病症、或者处于患有自身免疫性病症的风险或升高风险中的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用权利要求1的多肽，以治疗炎性肠病、自身免疫性肝炎、原发性硬化性胆管炎、1型糖尿病、移植、GVHD，或者患有自身免疫性病症、或者处于患有自身免疫性病症的风险或升高风险中。
37.权利要求36的方法，其中所述患有炎性肠病的受试者患有克罗恩氏病或溃疡性结肠炎。
38.一种在受试者中激动PD-1的活性的方法，所述方法包括施用治疗有效量的权利要求1的多肽，从而治疗所述受试者。
39.一种治疗有此需要的受试者中的干扰素病的方法，所述方法包括向所述受试者施用权利要求1的多肽，从而治疗所述受试者。
40.权利要求39的方法，其中所述干扰素病是I型干扰素病，例如系统性红斑狼疮(SLE)、Aicardi-Goutières综合征、双侧纹状体坏死、慢性非典型嗜中性粒细胞性皮肤病伴脂肪营养不良和高温(CANDLE)、完全不外显、遗传性对称性色素异常症、家族性冻疮样狼疮、日本自身炎症性综合征伴脂肪营养不良(JASL)，关节挛缩、肌肉萎缩、小细胞性贫血、脂膜炎和脂肪营养不良(JMP)，孟德尔遗传易感分枝杆菌病(MSMD)、中条-西村综合征、视网膜血管病变伴脑白质营养不良(RVCL)、痉挛性截瘫、STING相关的婴儿期发病的血管病(SAVI)、辛-梅二氏综合征或脊椎软骨瘤病(SPENCD)。
41.一种抑制来自浆细胞样树突细胞的干扰素产生的方法，所述方法包括向所述受试者施用权利要求1的多肽。
42.权利要求42的方法，其中所述浆细胞样树突细胞是活化的浆细胞样树突细胞。
43.权利要求42的方法，其中与在权利要求1的多肽的不存在下产生的干扰素的量相比，所述干扰素的产生减少了约或至少10、20、30、40、50、60、70、80、90或95％。
44.一种治疗TLR9介导的病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用权利要求1的多肽，以治疗TLR9介导的病症，例如系统性红斑狼疮(SLE)、Aicardi-Goutières综合征、双侧纹状体坏死、慢性非典型嗜中性粒细胞性皮肤病伴脂肪营养不良和高温(CANDLE)、完全不外显、遗传性对称性色素异常症、家族性冻疮样狼疮、日本自身炎症性综合征伴脂肪营养不良(JASL)，关节挛缩、肌肉萎缩、小细胞性贫血、脂膜炎和脂肪营养不良(JMP)，孟德尔遗传易感分枝杆菌病(MSMD)、中条-西村综合征、视网膜血管病变伴脑白质营养不良(RVCL)、痉挛性截瘫、STING相关的婴儿期发病的血管病(SAVI)、辛-梅二氏综合征或脊椎软骨瘤病(SPENCD)。
45.一种抑制细胞或受试者中的OAS1、IFIT3、MX1和IFN-β1表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用权利要求1的多肽或使细胞与权利要求1的多肽接触。
46.一种核酸，其编码权利要求1的多肽、蛋白质或抗体。
47.一种载体，其包含权利要求46的核酸。
48.一种细胞，其包含权利要求46的核酸或权利要求47的载体。
49.一种制备权利要求1的多肽的方法，其包括培养权利要求48的细胞，以制备权利要求1的多肽。
50.一种制备编码权利要求1的多肽的核酸序列的方法，其包括
a)提供包含编码靶向部分的序列的载体，并且将编码效应物结合/调节部分的序列插入载体内，以形成编码治疗性化合物的序列；或
b)提供包含编码效应物结合/调节部分的序列的载体，并且将编码靶向部分的序列插入载体内，以形成编码治疗性化合物的序列，
从而制备编码权利要求1的多肽的序列。
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