TW202227490A - 多重特異性抗ｐｄ－１抗體及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明係提供多重特異性多肽，其能使用於如調節PD-1活性。

Description

多重特異性抗PD-1抗體及其用途
[相關申請的交叉引用]
本申請要求2020年08月19日申請的美國臨時申請案第63/067,674號、2021年04月16日申請的美國臨時申請案第63/175,760號、2021年02月23日申請的美國臨時申請案第63/152,691號的優先權益，個別的全部內容以引用的方式併入本文中。
本申請係亦相關於2020年08月19日申請的美國專利案第16/997,238號，其全部內容以引用的方式併入本文中。
本發明提供之實施例係相關於，例如，能與如PD-1結合之特異性抗體。
如於移植組織或於免疫疾病中的排斥反應等非所欲免疫反應情況為全世界造成數百萬人健康問題的主因。器官移植所帶來的長期後果經常係特徵化為慢性排斥反應並最終造成移植器官之衰竭。目前已知超過二十種自體免疫疾病係影響近乎全身所有器官，且單獨於北美洲即有超 過五千萬人受到影響。目前於二種況用於對抗兩種致病性免疫反應的廣泛活性免疫抑制藥物具有嚴重之副作用。因此，對於治療此種病症的藥物治療與多肽係所需的。本發明提供之實施例即滿足此項及其他項需求。
本文內之揭露係能使用於如調節免疫反應之多肽。於某些實施例中，其係降低該免疫反應，使其能用於例如必須或有助於降低免疫反應以治療自體免疫病症或其他免疫系統疾病。本文內係提供此種免疫疾病之非限制性實例。
本文內的實施例內容係結合引用至此章節中。
於某些實施例中，本文提供之多肽結合於並促效如抑制免疫檢查點分子的抑制分子，或另一方面抑制或降低免疫細胞，如毒殺型T細胞、輔助型T細胞、調節型T細胞(Treg)、B細胞、NK細胞、樹突細胞如漿細胞樣樹突狀細胞、先天性淋巴細胞如ILC2、或髓細胞如嗜中性球或巨噬細胞的活性。
於某些實施例中，當治療化合物結合於其目標時，相較於治療化合物不結合於其目標時，免疫細胞之負調節量級惟覺大。於實施例中，藉由目標結合的治療化合物所致之負調節量級係等同於或1.5倍、2倍、4倍、8倍或10倍較大於當該化合物不結合於其目標時所觀察者。於實施例中，當治療化合物不結合於目標時不會或不明顯負調節免疫細胞。因此，對抑制受體如PD-1之無區別或非所欲之促效作用係最小化或去除的。例如，當治療化合物結合於免疫細胞但不結合於目標部分體時，治療化合物 與抑制免疫檢查點分子之接合並不導致負調節作用或並不實質上導致負調節作用，例如，免疫細胞上與治療化合物結合之抑制受體係非聚集或非足夠程度地聚集以導致足夠之抑制訊號以給予免疫細胞負調節或實質上抑制。
於實施例中，當治療化合物於免疫細胞接合於細胞表面之抑制受體如PD-1時，不抑制或不實質上抑制細胞表面抑制受體結合於內生性配體的能力。於某些實施例中，治療化合物能結合於PD-1之PD-L1/2結合位點。因此，抑制受體如PD-1之無區別或非所欲之促效作用係最小化或去除的。於實施例中，治療化合物對免疫細胞之抑制受體如PD-1之結合並不妨礙或不實質上妨礙該抑制受體結合自然性配體如PD-L1之能力。於實施例中，治療化合物對免疫細胞之抑制受體如PD-1之結合，將自然性配體如PD-L1之結合降低治療化合物不存在於所觀察的少於50、40、30、20、10、或5%。於某些實施例中，該部分體係結合於PD-1之抗體。於某些實施例中，該抗體係PD-1促效劑。於某些實施例中，該抗體於可溶性PD-1拮抗劑測定中不是PD-1拮抗劑。
於某些實施例中，治療化合物係本文內提供之化合物。
於某些實施例中，本文內所述多肽包含第一及第二結合域以結合至PD-1。於某些實施例中，該第一及第二結合域包含PD-1抗體表4所述之序列。於某些實施例中，該第一及第二結合域包含PD-1抗體表5所述之序列。於某些實施例中，該第一及第二結合域包含PD-1抗體表4及PD-1抗體表5所述之序列。
於某些實施例中，本文內所述多肽包含第一、第二、第三、及第四結合域以結合至PD-1。於某些實施例中，該結合域獨立地包含一PD-1抗體表4所述之序列。於某些實施例中，該結合域獨立地包含一PD-1抗體表5所述之序列。於某些實施例中，該結合域獨立地包含一PD-1抗體表4及PD-1抗體表5所述之序列。
於某些實施例中，多肽包含結合至相同目標如PD-1之複數種區別之結合域。於某些實施例中，多肽包含結合至目標的2或4個別之結合域。於某些實施例中，多肽包含結合治標的4格結合域。當該多肽包含抗體或抗體類似序列，該結合域亦能係指稱抗原辨識域或抗原結合域。於某些實施例中，結合域之各者結合至目標之相同抗原表位。於某些實施例中，結合域之二者結合至目標之相同抗原表位。於某些實施例中，如其具有4個結合域，2個結合域結合至相同抗原表位且剩餘2個結合域結合至目標的\不同抗原表位。於某些實施例中，目標結合域之2者具有相同或近似之目標結合域(如CDRs)。於某些實施例中，該結合域之特者具有相同或近似之目標結合域。於某些實施例中，該多肽包含至少一不同於多肽上呈現之另一結合域的結合域。此亦能係指稱為多肽具有目標結合域之異質組。具有全部相同目標結合域之多肽能係指具有目標結合域之同質組。於某些實施例中，當該多肽於目標結合域為異質性時，該多肽能係指稱為雙特異性。該雙特異性能所指為該目標結合域結合之抗原表位係不同的。其亦能係指為特異性或多重特異性。
於某些實施例中，該多肽包含一自N端至C端之通式：
(R1-Fc-R2)2，
其中R1係第一結合域，
其中R2係第二結合域，
其中R1及R2之一者係Fab抗體且另一者係scFv抗體，
其中R1及R2藉由連接子連接，
其中該連接子包含Fc免疫球蛋白恆定區，如IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4，
其中該連接子進一步包含G/S或G/A連接子，且
其中該G/S或G/A連接子包含(GGGGS)n或(GGGGA)n序列，或其組合，其中各n係獨立地為1-4。
於某些實施例中，該四分體抗體具有自N端至C端之通式：
(R2-Fc-R1)2，
其中R1係第一結合域，
其中R2係第二結合域，
其中R1及R2中一者係Fab抗體且另一者係scFv抗體，
其中R1及R2藉由連接子連接，
其中該連接子包含Fc免疫球蛋白恆定區如IgG1、IgG2、IgG3、或
IgG4，
其中該連接子進一步包含G/S或G/A連接子，且
其中該G/S或G/A連接子包含(GGGGS)n或(GGGGA)n序列，或其
組合，其中各n係獨立地為1-4。
於某些實施例中，該多肽包含第一多肽鏈及一第二多肽鏈，其中：
該第一多肽鏈具有自N端至C端之通式：
[VH-A]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[VH-B]-[連接子2]-[VK-B]；或
[VH-A]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[VK-B]-[連接子2]-[VH-B]；
該第二多肽鏈具有自N端至C端之通式：
[VK-A]-[CK]，
其中：
VH-A=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
VK-A=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
VH-B=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
VK-B=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
CH1=人類IgG1之恆定重鏈域1；
CH2=人類IgG1之恆定重鏈域2；
CH3=人類IgG1之恆定重鏈域3；
CK=kappa輕鏈之恆定域；
連接子1係甘胺酸/絲胺酸或甘胺酸/丙胺酸連接子；
連接子2係甘胺酸/絲胺酸或甘胺酸/丙胺酸連接子，
其中VH-A、VK-A、VH-B能係來自相同或不同之抗體。
於某些實施例中，該多肽包含第一多肽鏈及第二多肽鏈，其中：
該第一多肽鏈具有自N端至C端之通式：
[VH-B]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[VH-A]-[連接子2]-[VK-A]；或
[VH-B]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[VK-A]-[連接子2]-[VH-A]；
該第二多肽鏈具有自N端至C端之通式：
[VK-B]-[CK]，
其中：
VH-A=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
VK-A=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
VH-B=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
VK-B=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
CH1=人類IgG1之恆定重鏈域1，如本發明所提供；
CH2=人類IgG1之恆定重鏈域2，如本發明所提供；
CH3=人類IgG1之恆定重鏈域3，如本發明所提供；
CK=kappa輕鏈之恆定域，如本發明所提供；
連接子1係一甘胺酸/絲胺酸或甘胺酸/丙胺酸連接子；
連接子2係一甘胺酸/絲胺酸或甘胺酸/丙胺酸連接子，
其中VH-A、VK-A、VH-B、及VK-B能係來自相同或不同之抗體。
於某些實施例中該PD-1抗體包含PD-1抗體表4所述之序列。於某些實施例中該PD-1抗體包含PD-1抗體表5所述之序列。於某些實施例中該PD-1抗體包含PD-1抗體表4及PD-1抗體表5所述之序列。
於某些實施例中，該多肽包含2個第一多肽鏈及2個第二多肽鏈。其非限制性實例係於本文內提供。
於某些實施例中，提供之多肽係包含結合於PD-1之第一及第二結合域，第一及第二結合域包含PD-1抗體表4或PD-1抗體表5所述的序列。於某些實施例，該多肽包含結合於PD-1之第三及第四結合域。於某些實施例中，該第三結合域係與第一結合域相同。於某些實施例中，該第四結合域係與第二結合域相同。
於某些實施例中，呈Fab型式之PD-1抗體相較於呈scFv型式之PD-1抗體對PD-1具有較低的親和力。於某些實施例中，呈Fab型式之PD-1抗體相較於呈scFv型式之PD-1抗體對PD-1具有較高的親和力。
於某些實施例中，本發明係提供治療自體免疫疾病或病症之方法，該方法包含給藥本發明提供之一或多個治療化合物或多肽。
於某些實施例中，本發明係提供治療疾病或病症之方法，該方法包含給藥本發明提供之一或多個治療化合物或多肽。
於某些實施例中，本發明係提供治療罹患炎症性腸病之受試者的方法，該方法包含給藥本發明提供之治療化合物或多肽予受試者以治療該炎症性腸病。於某些實施例中，該受試者具有克羅恩氏症或潰瘍性結腸炎。
於某些實施例中，本發明係提供治療罹患自體免疫性肝炎之受試者的方法，該方法包含給藥本發明提供之治療化合物或多肽予受試者以治療該自體免疫性肝炎。
於某些實施例中，本發明係提供治療原發性硬化性膽管炎之方法，該方法包含給藥本發明提供之治療化合物或多肽予受試者以治療該原發性硬化性膽管炎。
於某些實施例中，本發明係提供治療(如降低)腸內炎症反應之方法，該方法包含給藥本發明提供之治療化合物或多肽予受試者以治療該腸內炎症。於某些實施例中，該炎症係位於小腸中。於某些實施例中，該炎症係位於大腸中。於某些實施例中，該炎症係位於腸或結腸中。
於某些實施例中，本發明係提供(如降低)胰臟內炎症之方法，該方法包含給藥本發明提供之治療化合物或多肽予受試者以治療該胰臟內炎症。於某些實施例中，該方法治療胰臟炎。
於某些實施例中，本發明係提供治療第一型糖尿病之方法，該方法包含給藥本發明提供之治療化合物或多肽予受試者以治療該第一型糖尿病。
於某些實施例中，本發明係提供治療移植受試者之方法，該方法包含給藥治療有效量之本發明提供之治療化合物或多肽予受試者，由此治療移植(接受)的受試者。
於某些實施例中，本發明係提供治療具有移植的捐贈者組織之受試者中移植物抗宿主疾病(GVHD)之方法，該方法包含給藥治療上有效量之本發明提供之治療化合物或多肽予受試者。
於某些實施例中，本發明係提供治療罹患、或具風險、或具較高風險患有自體免疫疾病之受試者的方法，該方法包含給藥治療有效量之本發明提供之治療化合物或多肽，由此治療該受試者。
10:第一作用體部分體
20:Fab
25:Fab
30:Fc
35:Fc
40:第二作用體部分體
50:scFv
55:scFv
60:連接子
65:連接子
圖1描繪本發明提供之多肽的非限制性圖例。
圖2描繪本發明提供之多肽的一非限制性圖例。
圖3描繪本發明提供之多肽的一非限制性圖例。
本文中所用且除非另行指示，術語“約”意指其修飾的值的平均±10%。由此，約100意指95至105。
本文中所用及隨附的請求項，除非上下文具有明顯矛盾，該單數型“一”及“該”係引申為同時包含單數及複數。
本文中所用術語“動物”包括但不限於人類及非人脊椎動物如野生動物、家畜、及農畜。
本文中所用術語“接觸”意旨於體外或體內系統將兩元件集合一起。舉例而言，治療化合物與個體或患者或細胞“接觸”包括給藥該化合物予個體或患者(如人類)，及如引入化合物至含有細胞或含有純化製備之目標的樣品中。
於本文中所用，術語“包含”(及其任一時態變化，如“包含”、“已包含”)、“具有”(及其任一時態變化)、“包括”(及其任一時態變化)、或“含有”(及其任一時態變化)係為包含在內或可擴展且不排除附加、未宣稱之元件或方法步驟。任一宣稱該術語“包含”之組成物或方法應理解為其亦描述此組成由所引述的組分或元件組成、由其組成或主要由其組成。
於本文中所用，當使用該術語“融合”或“連接”於具有不同域或異質序列之蛋白質時，意指該蛋白質域為以肽鍵或其他共價鍵相互連結的同一胜肽鏈的一部分。該域或段能互相直接連接或融合或另一域或肽序列能位於兩域或序列之間且此序列仍被當作互相融合或連接於彼此。於某些實施例中，本發明提供之多樣域或蛋白質係互相直接連接或融合或至一連接子序列，如本文內提及之將兩域連接一起的甘胺酸/絲胺酸序列。
於本文中所用，術語“個體”、“受試者”、或“患者”能互相交換使用，意指任何包括哺乳類如小鼠、大鼠、其他齧齒動物動物、兔子、犬、貓、豬、牛、羊、馬、或靈長類如人類。
於本文中所用，術語“抑制”係指結果、症狀、或活性當相較於無抑制結果、症狀、或活性之化合物存在下的活性或結果，為降低。於某些實施例中，該結果、症狀、或活性受到約，或至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、或99%之抑制。結果、症狀、或活性亦為受到抑制若其完全消除或消退。
於本文中所用，片語“有需要的”意指該受試者已經確認具有特定方法或療法的需求。於某些實施例中，該確認能係藉由任何診斷。於本文內所述任一方法或療法，該受試者能係有需要的。於某些實施例中，該受試者係處於或將旅行至特定疾病、障礙、或病症盛行的環境。
於本文中所用，片語“自X至Y之整數”意指包括端點之任一整數。例如，片語“自X至Y之整數”意指1、2、3、4、或5。
於本文中所用，術語“哺乳動物”意至齧齒動物(即小鼠、大鼠、或天竺鼠)、猴、貓、犬、牛、馬、豬、或人類。於某些實施例中，該哺乳動物係人類。
於某些實施例中，本發明係提供多肽。該多肽亦能指稱為化合物。於某些實施例中，該多肽係治療化合物。於某些實施例中，治療化合物係具互相交互作用的多個鏈的蛋白質或多肽。該多肽能經非共價鍵交互作用或共價鍵交互作用而互相交互作用，例如經雙硫鍵或其他共價鍵。因此，若實施例係指稱治療化合物，其亦能謂之指稱本發明提供之蛋白質或多肽，反之亦然。
於本文中所用，術語“眼科上能接受的”意指於受治療的眼或其之功能、或受治療之受試者的整體健康上不具有持續性的危害效果。然而，短暫效果如輕微刺激或螫刺感係普遍見於藥物的局部眼科給藥且此類短暫效果的存在與本文討論之“眼科上能接受的”定義之組成物、調配物、或成分(如賦形劑)非係為不一致。於某些實施例中，該藥物組成物能係眼科上能接受的或適宜於眼部給藥。
“特異性結合”、“特異性地結合”或係“特異性於”具體抗原、目標、或抗原表位意指該結合不同於非特異性交互作用係具有可偵測到之不同處。特異性結合能藉由，例如，比較對照分子(通常係具有相似結構但不具有結合活性之分子)之結合以判定分子之結合。舉例而言，特異性結合能係藉由和與目標相似之對照分子競爭以進行判別。
於具體抗原、目標、或抗原表位之特異性結合係能藉由，例如，具有對抗原或抗原表位之KD值至少約10-4M、至少約10-5M、至少約 10-6M、至少約10-7M、至少約10-8M、至少約10-9M、或至少約10-10M、至少約10-11M、至少約10-12M、或以上之抗體所展示。其中KD值係指具體抗體-目標交互作用之解離率。典型地，特異性結合於抗原或目標之抗體具有KD值係，或至少2-、4-、5-、10-、20-、50-、100-、500-、1000-、5000-、10000-、或更多倍較大於對照分子相對於該抗原或抗原表位之值。
於某些實施例中，具體抗原、目標、或抗原表位之特異性結合係能展示為，例如，藉由對目標、抗原、或抗原表位具有KA值或Ka值至少2-、4-、5-、20-、50-、100-、500-、1000-、5000-、10000-、或更多倍較大於對照分子相關於該目標、抗原、或抗原表位之值，其中KA值或Ka值係指具體抗體-抗原交互作用之結合率。
本發明之揭露提供，例如，能作用為PD-1促效劑之分子。於某些實施例中，該促效劑係包含結合至PD-1之複數個抗原結合域的抗體或多肽。不受任何具體理論束縛，PD-1抑制T細胞活化/訊息傳導之促效作用且能藉由不同機制完成。例如交聯作用能導致促效作用，結合磁珠之功能性PD-1促效劑係已見於文獻中(Akkaya.Ph.D.Thesis：Modulation of the PD-1 pathway by inhibitory antibody superagonists.Christ Church College,Oxford,UK,2012)，該文獻係結合於本文中作為參考資料。PD-1與結合於非重疊性抗原表位之二個mAb的交聯作用誘導PD-1之訊息傳導作用(Davis,US 2011/0171220)，其係結合於本文中作為參考資料。另一實例係經羊抗PD-1抗血清(如AF1086,R&D Systems)(結合於本文中作為參考資料)進行說明，當其溶解時作用為一種促效劑(Said et al.,2010,Nat Med，結合於本文中作為參考資料)。能用於本發明實施例之PD-1促效劑的 非限制性實例包括，但不限於，UCB純株19或純株10、PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、及PD1AB-5、PD1AB-6(Anaptys/Celgene)、PD1-17、PD1-28、PD1-33、及PD1-35(Collins et al,US 2008/0311117 A1)，抗PD-1抗體及其用途，其係結合於本文中作為參考資料，或能係雙特異性單價抗PD-1/抗-CD3(Ono)及其類似物。於某些實施例中，PD-1促效劑抗體能係阻斷PD-L1至PD-1結合之抗體。於某些實施例中，該PD-1促效劑抗體能係不阻斷PD-L1至PD-1結合之抗體。於某些實施例中，該促效劑係本發明提供之抗體。
PD-1促效作用能係藉由任何方法測量，如實例所述之方法。舉例而言，細胞能經建構以表現(包括穩定地表現)包括人類PD-1多肽融合於β-半乳糖苷酶“酵素予體”及2)SHP-2多肽融合於β-半乳糖苷酶“酵素受體”之建構體。不受任何理論束縛，當PD-1接合，即招募SHP-2至PD-1。該酵素受體及酵素予體形成能被測定的完全活性的β-半乳糖苷酶。儘管該測定無直接展示PD-1促效作用，但展示PD-1訊息傳導之活化作用。PD-1促效作用亦能藉測量T細胞活化之抑制作用進行測量，因為不受任何理論束縛，PD-1促效作用抑制抗-CD3-誘導的T細胞活化。例如，PD-1促效作用能藉T細胞與PHA(於人體T細胞)或ConA(於小鼠T細胞)進行預活化致使其表現PD-1以測量。該細胞而後能於抗PD-1(或PD-L1)存在下，與抗CD3進行再活化作為PD-1促效作用測定。於抗CD3存在下，接收一PD-1促效劑訊息之T細胞相對於僅有抗CD3的刺激，展示減少之活化作用。活化作用能藉由增生或細胞激素產生(IL-2,IFNγ,IL-17)或其他如 CD69活化標記等標記被讀取。因此，PD-1促效作用能藉由細胞激素產生或細胞增生進行測量。其他方法亦能使用以測量PD-1促效作用。
PD-1係表現於活化T細胞及其他免疫細胞之Ig超家族成員。該PD-1之自然性配體係為PD-L1及PD-L2。不受任何具體理論束縛，當PD-L1或PD-L2於結合至經活化T細胞的PD-1時，抑制性訊息傳導之串接反應始啟動，導致活化T細胞作用體細胞功能衰減。因此，以PD-1拮抗劑阻斷該T細胞之PD-1及另一細胞於另一細胞上(如腫瘤細胞)之PD-L1/2之交互作用係已知為抑制檢查點，且自抑制作用釋放該T細胞。相對於此，PD-1促效劑抗體能結合於PD-1及傳送抑制訊息及衰減T細胞之功能。因此，PD-1促效劑抗體係能結合於本文所述之多樣實施例中。
於某些實施例中，該能與PD-1結合之部分能為物理繫連、共價或非共價、直接或經連接子個體至另一者，如做為多肽中同一蛋白質分子中的成員。於某些實施例中，此能指稱不同結合部分體經化學或肽連接子融合於一起之融合蛋白。此種連接子之非限制性實例係提供於本文內。於某些實施例中，該能結合於PD-1之作用體部分體(亦能指稱作用體結合/調節部分體)係提供於一多肽中，例如，但不限於如分離域之融合蛋白。於某些實施例中，作用體結合/調節部分體各包含單鏈片段(scFv)或Fab域。於某些實施例中，治療蛋白質分子或編碼治療蛋白質分子的如mRNA或DNA之核酸能給藥予受試者。於某些實施例中，複數個作用體分子結合/調節部分體係連接於第三個體，如載體、聚合載體、樹枝狀聚合物、或如奈米粒子之粒子。
本發明係提供以本文揭露之治療化合物藉由最小化予體免疫細胞(如予體T細胞)之能力抑制GVHD以調節接受者組織之免疫攻擊的方法。
本發明係亦提供藉由給藥以本文揭露之治療化合物治療如治療性或預防性治療受試者內之自體免疫疾病或反應之方法，例如，提供免疫系統之調節作用。於某些實施例中，該調節係全身性的。於某些實施例中，該方法提供耐受性於最小化受試者組織的排斥性、最小化受試者組織免疫作用體細胞介導的傷害、或延長受試者組織之功能。非限制性例示性組織包括但不限於，胰臟、髓磷脂、唾腺、滑膜細胞、腸、皮膚、肺、及肌細胞。
於本文中所用，該相關於受試者內治療性療法之術語“治療”、“經治療”或“治療中”係減緩(減輕)非所欲之生理病症、障礙、或疾病，或得到有益或預想之臨床結果。舉例而言，有益或預想之臨床結果包括，但不限於，症狀減輕；病症、障礙或疾病之範圍遞減；穩定(即不惡化)病症、障礙或疾病之狀態；延遲發症或減緩病症、障礙或疾病之進程；改善病症、障礙或疾病之狀態或不論可偵測或不可偵測到的緩解(不論部分或整體)；改善至少一可偵測的物理參數，其非必須為患者可辨；或增強或改進病症、障礙或疾病。治療包括於無過度副作用下激發臨床上顯著之反應。治療亦包括相比於未受治療之預期存活率的存活率延長。因此“自體免疫疾病/障礙之療法”意指減輕或改善任一相關於該自體免疫疾病/障礙或其他本文內所述之病症的初級現象或次級症狀之活動。該多樣之疾病或病症係提供於本文內。治療性療法亦能係預防性給藥以預防或降低該疾病或病症發症。
於某些實施例中，治療化合物之給藥始於該障礙係明顯時。於某些實施例中，治療化合物之給藥始於該障礙發症或完全發症前。於某些實施例中，治療化合物之給藥始於該障礙發症或完全發症前，如於具有該障礙之受試者、高風險受試者、具有生物標記風險或呈現該障礙之受試者、具有該障礙家族病史之受試者、或其他該障礙之風險指示或無症狀之呈現。舉例而言，於某些實施例中，係治療於具有胰島細胞損傷但尚無糖尿病之受試者。
除非另行定義，本文內所有技術及科學術語具有本領域通常技藝人員對這些實施例所通常理解之涵義。儘管類似或相同於本文內所述方法與材料之方法與材料能用於實踐或測試本發明之實施例，適宜的方法與材料係於下方敘述。所有公開文獻、專利申請、專利、及其他本文內提及之參考資料均係引用於本案作為參考資料。此外，該材料、方法、及實例係僅為說明用途而非限制本發明。標題、次標題或標號或字母元素如(a)、(b)、(i)等係僅用以方便閱讀。本文中標題或標號或字母元素之用途非表示該步驟或元件係需依照字母順序進行或該步驟或要素係分立於彼此。實施例之其他特性、物件、及優點係明示於敘述或圖式及來自請求項中。
附加定義
除非另行定義，本文內所有技術及科學術語具有本領域通常技藝人員對這些實施例相關內容所通常理解之涵義。於本發明實施例之敘述與請求中，以下術語學及本申請內另參考之術語學的定義係提供以對應使用之。
亦應理解本文內所用之術語學係僅以敘述具體實施例之目的所使用而非意圖限制本發明。
本文中所用術語抗體係指多肽，如包含至少一功能性免疫球蛋白可變域序列之免疫球蛋白鏈或其片段。抗體分子涵蓋抗體(如全長抗體)及抗體片段。於某些實施例中，抗體分子包含全長抗體之抗原結合片段或功能性片段，或全長之免疫球蛋白鏈。舉例而言，全長抗體係藉由正常免疫球蛋白基因片段重組過程自然出現或形成之免疫球蛋白(Ig)分子(如IgG抗體)。於實施例中，抗體分子係指免疫性活化的免疫球蛋白分子之抗原結合部分(如抗體片段)。抗體片段如功能性片段包含抗體的部分體，如Fab、Fab’、F(ab’)2、F(ab)2、可變片段(Fv)、域抗體(dAb)、或單鏈可變片段(scFv)。功能性抗體片段藉由完整(如全長)之抗體辨識結合於同抗原。術語“抗體片段”或“功能性片段”亦包括由可變域組成之分離片段，如由重鏈及輕鏈或重組單戀多肽分子所組成的“Fv”片段，其中輕可變域及重可變域藉由肽連接子連結(“scFv蛋白”)。於某些實施例中，抗體片段不包括無抗原結合活性之抗體的部分體(如Fc片段或單胺基酸殘基)。例示性抗體分子包括全長抗體及抗體片段(如dAb(域抗體))、單鏈、Fab、Fab’、及F(ab’)2片段，以及單鏈可變片段(scFvs)。
該術語“抗體”亦涵蓋域、或單域、抗體之整體或抗原結合片段，其亦能指稱為“sdAb”或“VHH”。域抗體包含能作為獨立作用之抗體片段的VH或VL。除此之外，域抗體包括僅重鏈抗體(HCAbs)。當CDR環係嫁接於基礎支架時，域抗體亦包括IgG之CH2域。其亦能通常定義為或包含藉由三個互補決定區阻斷之四的框架區的胺基酸序列之蛋白質。此係以 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4呈現。sdAbs能係以駝科(如羊駝)製造，但亦能以領域中習知技術系統性地製造。該sdAb或多肽之胺基酸殘基編號係根據Kabat等人(“Sequence of proteins of immunological interest,”US Public Health Services,NIH Bethesda,MD,Publication No.91，結合於本文內作為參考資料)給予之VH域的通常順序。根據此編號，sdAb之FR1包含於位置1-30之胺基酸殘基、sdAb之CDR1包含於位置31-36之胺基酸殘基、sdAb之FR2包含於位置36-49之胺基酸殘基、sdAb之CDR2包含於位置50-65之胺基酸殘基、sdAb之FR3包含於位置66-94之胺基酸殘基、sdAb之CDR3包含於位置95-102之胺基酸殘基、及sdAb之FR4包含於位置103-113之胺基酸殘基。域抗體係亦揭露於WO2004041862及WO2016065323中，其個別係結合於本文中作為參考資料。
抗體或抗體分子能係單特異性(如單價或二價)、雙特異性(如二價、三價、四價、五價、或六價)、三特異性(如三價、四價、五價、或六價)、或更高之特異性(如四特異性)及/或六價上之更高價。抗體分子能包含輕鏈可變域之功能性片段及重鏈可變域之功能性片段，或者重鏈及輕鏈係能融合一起於單一多肽中。
於本文中所用，當係指於本文內所述之多肽或抗體時，術語“四價體”中包含兩組作用體部分體，且其中所稱之兩組作用體部分體其個別獨立包含兩結合域，整體係於多肽中提供4個結合域。
於本文中所用，術語“單特異性”係指本文所述之治療化合物、分子、或抗體，其中，本文所述之治療化合物、分子、或抗體包含相 同結合域使其結合於相同抗原表位。於某些實施例中，本發明提供之多肽係非單特異性。例如，於某些實施例中，該多肽包含至少兩個不同結合域以結合至不同抗原表位。因此，於某些實施例中，該多肽能指稱為“雙特異性”。
於本文中所用，術語“雙特異性”係指本文所述之治療化合物、分子、或抗體，其中，本文所述之治療化合物、分子、或抗體包含不同結合域以結合至包括彼此不重複之不同抗原表位。於某些實施例中，該多肽僅結合至2個不同抗原表位。於某些實施例中，該多肽結合至3或4個不同抗原表位。
於本文中所用，術語“單特異性四價體”或“雙特異性四價體”係指本文所述之治療化合物、分子、或抗體，其中，本文所述之治療化合物、分子、或抗體包括兩組包含結合至目標之結合域的第一及第二作用體部分體。此分子之非限制性實例係展示於圖1、圖2、及圖3。
舉例而言，圖1圖解本文所述之單特異性四價體分子的非限制性構型。參照圖1，其描繪連接於本文所述之Fc分子(30)及(35)之包含兩Fab部分體(域)(20)及(25)之第一作用體部分體(10)，其經多肽或化學連接子(60)及(65)連接至包含兩scFv部份(50)及(55)之第二作用體部分體(40)。於某些實施例中，各Fab部分體(20)及(25)及各scFv分子(50)及(55)結合至同一分子及同一抗原表位。如本發明所提供，其能結合至PD-1。於某些實施例中，該FAb及該scFV包含PD1AB4、PD1AB25、PD1AB30、PD1AB53、PD1AB37之CDRs、或任一其他本文內所述之CDR組。
圖2描繪本發明之雙特異性四價體分子的非限制性構型。例如，參照於圖2，其描繪連接於本文所述之Fc分子(30)及(35)之包含兩Fab分子(20)及(25)之第一作用體部分體(10)，其經多肽或化學連接子(60)及(65)連接至包含兩scFv分子(50)及(55)之第二作用體部分體(40)。於某些實施例中，各Fab部分體(域)(20)及(25)及各scFv部分體(50)及(55)結合至同一分子但不同抗原表位。舉例而言，於某些實施例中，該FAb(20)及FAb(25)結合至目標分子之第一抗原表位及該scFV(50)及(55)結合至同一目標分子之第二抗原表位。於某些實施例中，該抗原表位係非重疊的。於某些實施例中，FAb(25)及scFv(55)結合至目標分子上第一抗原表位且FAb(20)及scFv(50)結合至第二抗原表位。於某些實施例中，各FAb(20)、FAb(25)、scFv(50)、及scFv(55)結合至同一目標分子之不同抗原表位。於某些實施例中，FAb(20)、Fab(25)、scFv(50)、及scFv(55)之二者結合至目標分子之第一抗原表位且剩餘之二者結合至目標分子之第二抗原表位。於某些實施例中，該目標分子係同一目標分子。於某些實施例中，該目標分子係不同之分子。當本發明揭露之參考係以產生不同抗原表位時，該抗原表位能係非重疊(即其非具有任一相同殘基)，或重疊(即其具有某些相同殘基)但不結合至完全一致之殘基組。如本發明所提供，於某些實施例中，該不同抗原表位係非重疊的。如本發明所提供，本文參考之該FAb及scFV能結合至PD-1。於某些實施例中，該FAb及scFV包含PD1AB4、PD1AB25、PD1AB30、PD1AB53、PD1AB37之CDRs、或任一其他本文內所述之CDR組。
參照圖3，於某些實施例中，於分子內scFv部分體之該可變鏈係藉由一雙硫鍵(70)及(75)所連接(如俾其穩定)。不受任一具體理論束縛，該雙硫鍵能幫助穩定該scFv型式之結合域。於某些實施例中，該分子不包含一或多個連接至scFv型式之域的雙硫鍵。
附加地，參照圖1、圖2、及圖3，該FAb域能係藉由於鏈1之多肽的鉸鏈區中之雙硫鍵連接(如於CH1及CH2域之間)。
本文中所用術語“作用體”係指調節免疫反應之個體(如細胞或分子(如可溶性或細胞表面分子))。
本文所用之作用體配體結合分子係指具有來自作用體的自然出現之反配體的充足序列的多肽，其可以足夠特異性能結合作用體使其能作為結合/調節分子的作用體。於某些實施例中，其以自然出現之返配體的至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、或95%親和力結合於作用體。於某些實施例中，其與作用體之自然出現的反配體具有至少60、70、80、90、95、99或100%序列相同性，或實質上的序列相同性。
本文中所用之高風險係指於受試者之障礙之風險，其中，該受試者具有該障礙或該障礙之症狀之一或多個病史、相關於該障礙或該障礙之症狀之生物標記、或該障礙或該障礙之症狀之家族病史。
如本文中所用之術語“序列相同性”、“百分比相同性”、及相關術語係指兩序列(如兩核酸序列或兩胺基酸序列或多肽序列)之關聯性。於一胺基酸序列之上下文中，所用該術語“實質上相同”係指含有足夠或最小數目的第一胺基酸序列i)相同於，或ii)保守替換第二胺基酸序列中配對胺基酸之殘基數，俾該第一及第二胺基酸序列能具有共同結構域及/或共同 功能活性。例如，包含具有至少約85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同於參考序列(如本文內所提供之序列)之共同結構域的胺基酸序列。
於核苷酸序列之上下文中，本文中所用之該術語“實質上相同”係指第一核苷酸序列含有足夠或最小數目之核苷酸相同於第二核苷酸序列中配對之核苷酸，俾該第一及第二核苷酸所編碼之多肽具有共同功能活性或編碼共同結構多肽域或共同功能多肽活性。例如具有至少約85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%相同於參考序列(本文內所提供之序列)之核苷酸序列。
該術語“功能性變體”係指具有與自然出現序列實質上相同之胺基酸序列，或係藉由實質上相同之核苷酸序列所編碼且能具有自然出現序列之一或多個活性的多肽。
序列(此處可替換該使用術語)間同源性或序列相同性之計算係於下文提供。
為了測定兩胺基酸序列或兩核苷酸序列之百分比相同性。，該序列係以最適比對之目的進行排比(如可於第一及第二胺基酸或核苷酸序列之一或二者導入間隙以進行最適排比，且為了比對之目的能無視非同源性序列)。於較佳實施例中，該為了比對目的之排比參考序列的長度係該參考序列的至少30%，較佳係至少40%，更佳係至少50%、60%，及甚佳係至少70%、80%、90%、100%之長度。然後比較於對應之胺基酸位置或核苷酸位置之胺基酸殘基或核甘酸。當該第一序列中之位置係被第二序列中於對應位置之胺基酸殘基或核苷酸佔據時，則該分子於該位置係相同的 (本文中所用胺基酸或核苷酸之“相同性”係等同於胺基酸或核苷酸之“同源性”)。
該兩序列間之百分比相同性係該序列共享之相同位置數量的函數，考量間隙數及間隙長度，為了該兩序列的最適排比而其需要引入。
兩序列間之序列比較及百分比相同性之測定能使用數學演算法完成。於較佳實施例中，該兩胺基酸間之百分比相同性係使用已結合入GCG套裝軟體(可取得於www.gcg.com)之GAP程式的Needleman及Wunsch((1970)J.Mol.Biol.48：444-453)演算法，使用Blossum 62矩陣或PAM250矩陣，及間隙權重16、14、12、10、8、6、或4，級長度權重1、2、3、4、5、或6測定。於另一較佳實施例中，該兩核苷酸序列間之百分比相同性係使用GCG套裝軟體(可取得於www.gcg.com)之GAP程式，使用NWSgapdna.CMP矩陣，及間隙權重40、50、60、70、或80，及長度權重1、2、3、4、5、或6測定。具體較佳參數組(及除非另行規定，應使用之參數)係Blossum 62打分矩陣與間隙罰分12、間隙延伸罰分4、及移碼突變間隙罰分5。
該兩胺基酸或核苷酸序列間之百分比相同性係能使用已結合入ALIGN程式(版本2.0)之E.Meyers及W.Miller((1989)CABIOS,4：11-17)之演算法，使用PAM120權重殘基表，間隙長度罰分12及間隙罰分4而測定。
本文所述之核苷酸及蛋白質序列係能作為“查詢序列”以對公開之資料庫進行如確認其他家族成員或相關序列之檢索。此檢索能係使用Altschul等人，(1990)分子生物雜誌.215：403-10之NBLAST及 XBLAST程式(版本2.0)進行。BLAST核苷酸檢索能係以該NBLAST程式，打分=100，字長=12進行以獲得同源於如任一本文內提供之核苷酸序列的核苷酸序列。BLAST蛋白質檢索能係以XBLAST程式，打分=50，字長=3進行以獲得同源於如任一本文內提供之蛋白質分子的胺基酸序列。為比較目的而獲得間隙排比，能使用Altschul等人，(1997)Nucleic Acids Res.25：3389-3402.所敘述之Gapped BLAST。使用BLAST及Gapped BLAST程式時，能使用各自程式(如XBLAST及NBLAST)之預設參數。參見www.ncbi.nlm.nih.gov。
於本文中所用，該術語“於低嚴格度、中等嚴格度、高嚴格度、或極高嚴格度進行雜交”係描述雜交與清洗之條件。進行雜交反應之指南能見於分子生物學實驗操作手冊，John Wiley及Sons，紐約(1989),6.3.1-6.3.6，其係結合於本文內做為參考資料。於參考資料內所提及之水溶液及非水溶液之方法皆能使用。本文內特定的雜交條件係如下：1)低嚴格度雜交條件係於約45℃於6X氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中，接續以兩次於至少50℃(該清洗溫度於低嚴格度條件下能增加至55℃)，0.2X SSC，0.1% SDS之清洗；2)中等嚴格度雜交條件係於約45℃於6X SSC中，接續以一或多次60℃，0.2X SSC，0.1% SDS之清洗；3)高嚴格度雜交條件係於約45℃於6X SSC中，接續以一或多次於65℃，0.2X SSC，0.1% SDS之清洗；及較佳地，4)極高嚴格度雜交條件係於65℃於0.5M檸檬酸鈉、7% SDS中，接續以一或多次於65℃，0.2X SSC，0.1% SDS之清洗。極高嚴格度條件(4)係較佳及除非另行規定外所應使用之條件。
應理解，本實施例之分子及化合物能具有不對其功能造成實際效果的附加保守或非必需胺基酸之替換。
該術語“胺基酸”係意指包含不論自然或合成之具有胺基功能性及酸功能性且係能包括於自然出現之胺基酸之聚合物的所有分子。例示性胺基酸包括自然出現之胺基酸；其類似物、衍生物、及同類物；具有變體側鏈之胺基酸類似物；及任一前述之任何立體異構物。本文中所用該術語“胺基酸”包括D-或L-光學異構物及擬肽。“保守胺基酸替換”係其中胺基酸殘基為具有相似側鏈之胺基酸所置換者。具有相似側鏈之胺基酸殘基家族係已於本領域中定義。此些家族包括胺基酸具有鹼性側鏈(如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(如天門冬胺酸、麩胺酸)、極性不帶電側鏈(如甘胺酸、天門冬醯胺酸、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸)、非極性側鏈(如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)、β-分支側鏈(如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)、及芳香環側鏈(如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。
本文內所用之術語“受試者”係指哺乳類受試者(如人類受試者)。於某些實施例中，該受試者係非人類哺乳類動物(如馬、犬、貓、牛、羊、或豬)。
儘管本發明係提供特定之抗PD-1抗體，本發明能係使用其他抗PD-1抗體。已意外地發現本文所提供之四價體型式提供以無法預測的量級作為PD-1促效劑的無法預期的能力以及提供PD-1促效作用。不受任一具體理論束縛，四價雙特異性型式提供相較於單特異性抗體或四價單特異性抗體所能提供為更大的促效能力，其係意想不到之成果。
PD-L1/PD-1途徑
程序性細胞死亡蛋白1(通常稱為PD-1)係屬於免疫球蛋白超家族之細胞表面受體。PD-1係表現於T細胞及其他細胞類型包括但不限於，B細胞、髓細胞、樹突細胞、單核球、調節型T細胞、iNKT細胞。PD-1結合兩配體PD-L1及PD-L2，且係抑制性免疫檢查點分子。於T細胞之載有抗原之MHC與T細胞受體接合的情況時，與同源配體PD-L1或PD-L2的接合最小化或預防T細胞的活化與功能。PD-1之抑制效果能包括促進淋巴結中抗原特異性T細胞的細胞凋亡(程序性細胞死亡)及降低調節型T細胞中之細胞凋亡(壓制T細胞)。
自體免疫疾病
本發明提供之多肽及其使用方法係能用於治療具有或具有高風險之非所欲自體免疫反應的受試者，如於第一型糖尿病、多發性硬化症、心肌炎、白斑症、脫毛症、炎症性腸病(IBD，如克羅恩氏症或潰瘍性腸炎)、薛格連氏症候群、局部部份腎絲球硬化症、硬皮症/全身性硬化症(SSc)或類風濕性關節炎之自體免疫反應。於某些實施例中，該治療最小化自體免疫攻擊的排斥、受試者組織經受或於具風險之自體免疫攻擊之排斥反應、最小化對自體免疫攻擊的經免疫作用體細胞介導之損傷、延長受到或處於自體免疫攻擊風險的受試者組織的存活。於某些實施例中，該疾病係全身性紅斑性狼瘡(SLE)。
能以本文所述之化合物治療之自體免疫障礙與疾病之其他實例包括但不限於心肌炎、後心肌梗塞症候群、心包膜切開術後症候群、亞急性細菌性心內膜炎、抗絲球體基底膜腎炎、間質性膀胱炎、狼瘡腎炎、 膜性腎絲球病變、慢性腎臟病(“CKD”)、自體免疫性肝炎、原發性膽道肝硬化症、原發性硬化性膽管炎、抗合成酶抗體症候群、圓禿、自體免疫性血管性水腫、自體免疫性黃體素皮膚炎、自體免疫性蕁麻疹、類天疱瘡、瘢痕性類天疱瘡、皰疹樣皮炎、圓盤狀紅斑狼瘡、後天性水疱性表皮鬆解症、結節性紅斑、妊娠期類天皰瘡、化膿性汗腺炎、扁平苔藓、硬化性苔癬、線狀IgA疾病(lad)、硬斑病、尋常型天皰瘡、急性痘瘡樣苔蘚樣糠疹、Mucha-Habermann二氏病、乾癬、全身性硬皮症、白斑症、艾迪森氏病、自體免疫多發性內分泌症候群(APS)第一型、自體免疫多發性內分泌症候群(APS)第二型、自體免疫多發性內分泌症候群(APS)第三型、自體免疫性胰臟炎(AIP)、第一型糖尿病、自體免疫甲狀腺炎、奥德氏甲狀腺炎、格雷氏病、自體免疫性卵巢炎、子宮內膜異位症、自身免疫性睪丸炎、薛格連氏症候群、自體免疫性腸病、乳糜瀉、克羅恩氏症、顯微結腸炎、潰瘍性結腸炎、血小板減少症、肥胖病、成人史迪爾氏症、僵直性脊椎炎、CREST症候群、藥物引起的狼瘡、接骨點發炎相關關節炎、嗜酸性筋膜炎、費爾蒂症候群、IgG4相關性疾病、兒童關節炎、萊姆病(慢性)、混合型結締組織疾病(MCTD)、復發性風濕病、漸行性半臉萎縮症、Parsonage-Turner氏症、乾癬性關節炎、反應性關節炎、復發性多軟骨炎、原發性後腹腔纖維化、風濕熱、類風濕性關節炎、類肉瘤病、Schnitzler氏症候群、全身性紅斑性狼瘡(SLE)、未分化結締組織病(UCTD)、皮肌炎、纖維肌痛、包涵體肌炎、肌炎、重症肌無力症、神經性肌強直、共濟失調性神經病變、多發性肌炎、急性瀰漫性腦脊髓炎(ADEM)、急性運動軸突神經病變、抗N-甲基-D-天門冬胺酸(NMDA)受體腦炎、巴洛病、畢氏腦幹腦炎、慢性脫髓鞘 性神經炎、格林-巴利症候群、橋本氏腦病變、自發炎症性脫髓鞘性神經病變、藍伯-伊頓肌無力症候群、多發性硬化症、Oshtoran症候群、伴隨鏈球菌感染的小兒自體免疫神經精神疾病(PANDAS)、漸進性炎症性神經病變、肢體不安症候群、僵硬人症候群、西德納姆舞蹈症、貫穿性脊髓炎、自體免疫性視網膜病變、自體免疫性葡萄膜炎、Cogan氏症候群、葛瑞夫茲氏眼病變、中間葡萄膜炎、木樣結膜炎、莫倫氏潰瘍、視神經脊髓炎、眼睛肌肉陣攣症候群、視神經炎、鞏膜炎、蘇薩克氏症候群、交感性眼炎、痛性眼肌麻痹症候群、自體免疫內耳疾病(AIED)、美尼爾氏綜合症、貝西氏症、嗜酸性肉芽腫性多血管炎(EGPA)、巨細胞動脈炎、肉芽腫併多發性血管炎(GPA)、IgA血管炎(IgAV)、川崎病、白血球破碎性血管炎、狼瘡血管炎、類風濕性血管炎、顯微多血管炎(MPA)、結節性多動脈炎(PAN)、風濕性多發性肌痛症、血管炎、原發性免疫缺陷、及其類似障礙。
其他能以本文所述之化合物治療之潛在自體免疫障礙及疾病，以及自體免疫合併症之實例包括但不限於慢性疲勞症候群、複雜性局部疼痛症候群、嗜酸性食道炎、胃炎、間質性肺部疾病、POEMS症候群、Raynaud氏現象、原發性免疫缺陷病、壞疽性膿皮症、加馬球蛋白缺乏症、類澱粉變性症、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症、抗腎小管基底膜腎炎、異位性過敏、異位性皮膚炎、自體免疫性周邊神經病變、Blau症候群、卡斯爾曼氏病、Chagas氏病、慢性阻塞性肺臟疾病、慢性復發性多灶性骨髓炎、補體成份2缺乏症、接觸性皮膚炎、庫興氏症候群、皮膚白血球破碎性血管炎、Degos氏病、濕疹、嗜酸性球性胃腸炎、嗜酸性白血球肺炎、胎兒紅血球母細胞增多症、進行性肌肉骨化症、胃腸類天疱瘡、低加馬球蛋白血 症、特發性巨細胞心肌炎、特發性肺纖維化、A型免疫球蛋白腎病、免疫調節性脂蛋白、IPEX症候群、木樣結膜炎、馬吉德症候群、猝睡症、Rasmussen腦炎、思覺失調症、血清病、脊椎關節病變、史維特症候群、高安氏動脈炎、裘馨氏肌肉失養症、貝克型肌肉失養症、先天性肌失養症、強直性肌肉失養症、顏面肩胛肱骨型(FHSD)肌肉失養症、肢帶型肌肉失養症、眼咽型肌肉失養症(OPMD)、遠端肌肉失養症、Emery-Dreifuss二氏肌肉失養症、肺動脈高血壓、哮喘、慢性鼻竇炎、過敏性肺炎、非特異性間質性肺炎、子癇前症、流產、復發性流產、再生障礙性貧血、自體免疫性嗜中性球減少症、自體免疫溶血性貧血、癌症免疫療法相關自體免疫疾病、及其類似障礙。
於某些實施例中，該自體免疫障礙不包含尋常型天皰瘡、天皰瘡。於某些實施例中，該自體免疫障礙不包含落葉型天皰瘡。於某些實施例中，該自體免疫障礙不包含類天疱瘡。於某些實施例中，該自體免疫障礙不包含古巴斯捷氏症候群。於某些實施例中，該自體免疫障礙不包含乾癬。於某些實施例中，該自體免疫障礙不包含皮膚障礙。於某些實施例中，該自體免疫疾病不包含如癌症之腫瘤病。
附加地，如本發明所發現之TLR9活化作用於漿細胞樣樹突狀細胞提升PD-1之表現量。本發明亦發現藉由CpGA之TLR9活化作用提升干擾素之產生。儘管不欲受任一具體理論束縛，使用本發明之PD-1促效劑係導致干擾素產生的減少。因此，於某些實施例中，本發明所提供之該化合物及組成物能使用以治療干擾素病，此發現PD-1能於漿細胞樣樹突狀細胞表面上表現之結果係之前所未發現且令人意外之結果。因此，本 發明提供之該PD-1結合雙特異性分子能使用於調節TLR9介導之免疫反應。類鐸受體(TLRs)係先天免疫反應之基礎，因其識別數種不同抗原及如細胞因子產生、及樹突細胞與巨噬細胞活化之起始免疫/發炎反應。特別是TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8、及TLR9識別如醣蛋白、單股或雙股RNA及含有未甲基化5'-CG-3'序列之多肽等的病毒或細菌配體。附加地，免疫刺激核酸分子經與TLR9受體之交互作用與通訊以刺激免疫反應(Hemmi et al.(2002)Nat.Immunol.3：196-200)。樹突細胞之子集漿細胞樣樹突細胞(PDCs)能快速分泌大量第一型干擾素(IFN)以應對於經胞內TLR活化作用之病毒感染。不受任一具體理論束縛，該PDCs與B細胞中藉由自核酸觸發之TLR7與TLR9係全身性紅斑性狼瘡發病的原因。此能導致自PDCs之第一型IFN的產生，其能為患者(IFN-印記)血液中IFN-調節基因之正調控以及自B細胞之抗DNA與抗RNP抗體所形成之具有凋亡細胞DNA或RNA之免疫複合物所偵測(Barrat及Coffman,2008；Marshak-Rothstein,2006)。一旦經活化，PDCs即自血液移動至包括皮膚及腎之發炎組織。IFN及PDC亦被認作相關於其他藉由IFN印記定性之免疫疾病的發病原因。的確，產生第一型IFN之PDC累積於個別受糖尿病、皮肌炎、薛格連氏症候群感染人類之胰臟、肌肉及唾腺中，強烈指出PDC活化作用的失調可能係自體免疫疾病的一普遍特性(Barrat及Coffman,2008；Guiducci等人.,2009；Ueno等人.,2007)。
不欲受任一具體理論束縛，本發明之揭露發現TLR9活化作用亦能導致PDCs之PD-1表現。PD-1促效作用能導致TLR9介導之活化作用及該PDCs之作用體功能的抑制。於某些實施例中，PD-1促效作用能 導致PDCs中減少或阻斷IFN之產生。於某些實施例中，本發明揭露之該分子係PD-1促效劑。於某些實施例中，該揭露之PD-1促效劑能抑制PDCs中之TLR-9活性。於某些實施例中，使用該揭露之PD-1促效劑所介導之TLR-9活性抑制作用能導致PDCs中減少或阻斷IFN產生。
於某些實施例中，該揭露之PD-1促效劑能使用於治療干擾素病。於某些實施例中，該干擾素病係第一型干擾素病。於某些實施例中，該第一型干擾素係Aicardi-Goutieres症候群、對稱紋狀體壞死、伴有脂質失養症及升溫的慢性非典型嗜中性白血球皮膚炎(CANDLE)、完全不穿透(complete non-penetrance)、遺傳性對稱性色素異常、家族性凍瘡樣狼瘡、日本自體免疫症候群與脂質失養(Japanese autoinflammatory syndrome with lipodystrophy(JASL))、關節攣縮、肌肉萎縮、小球性貧血、脂膜炎、及脂質失養(JMP)、孟德爾易感性分枝桿菌病(Mendelian susceptibility to mycobacterial disease(MSMD))、Nakajo-Nishimura症候群、視網膜血管病變與腦白質失養(retinal vasculopathy with cerebral leukodystrophy(RVCL))、痙攣性癱瘓、嬰兒期STING相關血管樣病變(STING-associated vasculopathy with onset in infancy(SAVI))、Singleton-Merten症候群、或脊椎軟骨瘤(spondylochondromatosis(SPENCD)).本文中所用該術語“干擾素病”係意指該干擾素全身性、先天性、或後天獲得之通常病理，其包含以下IFN系統之障礙類型：缺失；IFN系統之癱瘓；於病毒、細菌、及突變腫瘤細胞之不足反應；第一型IFN之過量產生。於某些實施例中，干擾素病包含自體免疫疾病。於某些實施例中，該自體免疫疾病為全身性性紅斑性狼瘡(SLE)。
於某些實施例中，該受治療干擾素病之受試者係有其需要的受試者。即該受試者係接受本發明所提供之化合物及分子以意圖治療此干擾素病。
於某些實施例中，本發明係提供治療干擾素病之方法。於某些實施例中，該方法包含給藥予包括有其需要的受試者之受試者本發明所提供之分子或組成物。於某些實施例中，該方法包含抑制自漿細胞樣樹突狀細胞之干擾素的產生。於某些實施例中，該干擾素之產生相較於無本發明所提供之特異性PD-1促效劑存在下，係減少約或至少10、20、30、40、50、60、70、80、90或95%。
於某些實施例中，本發明係提供減少干擾素產生之方法。於某些實施例中，該方法包含給藥予包含有其需要的受試者之受試者本發明所提供之分子或組成物。於某些實施例中，該干擾素之產生相較於無本發明所提供之特異性PD-1促效劑存在下，係減少約或至少10、20、30、40、50、60、70、80、90或95%。
於某些實施例中，本發明係提供受試者內TLR9介導之干擾素產生的抑制方法。於某些實施例中，該方法包含給藥予包含有其需要的受試者之受試者本發明所提供之分子或組成物。於某些實施例中，該干擾素之產生相較於無本發明所提供之特異性PD-1促效劑存在下，係減少約或至少10、20、30、40、50、60、70、80、90或95%。
於某些實施例中，本發明係提供治療TLR9介導障礙之方法。於某些實施例中，該方法包含給藥予包含有其需要的受試者之受試者本發 明所提供之分子或組成物。於某些實施例中，該TLR9介導障礙係第一型干擾素病。第一型干擾素病之非限制型實施例係提供於本文內。
於某些實施例中，本發明係提供抑制病患(IFN印記)血液中IFN調節基因之正調控的方法。於某些實施例中，該方法包含給藥予包含有其需要的受試者之受試者本發明所提供之分子或組成物。於某些實施例中，該受抑制之基因係OAS1、IFIT3、MX1、及/或IFN-β1。
於某些實施例中，本發明係提供於細胞或受試者中抑制OAS1、IFIT3、MX1、及IFN-β1表現之方法。於某些實施例中，該包含以本發明提供之多肽、蛋白質、或抗體給藥予該受試者或接觸於細胞。於某些實施例中，該OAS1、IFIT3、MX1、及IFN-β1之表現係基因表現。於某些實施例中，該細胞係漿細胞樣樹突狀細胞。於某些實施例中，該漿細胞樣樹突狀細胞係活化的漿細胞樣樹突狀細胞。於某些實施例中，藉由基因的mRNA表現等級測量之該基因表現相較於未給藥以本發明提供之多肽、蛋白質、或抗體予相同受試者或細胞，係受(或至少受)10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、或95%之抑制程度。
於某些實施例中，該揭露之PD-1促效劑能使用於治療IgG4相關疾病。於某些實施例中，該IgG4相關疾病係慢性發炎。於某些實施例中，該IgG4相關疾病係纖維素炎複合障礙系譜。本發明提供之多肽能例如包含複數種作用體結合/調節部分體。任一適宜之連接子或平台能使用以呈現該複數種部分體。該連接子係通常接合或融合於一或多個作用體結合/調節部分體。
連接子域
如其他部分體所提，作用體結合/調節部分體能藉由連接子域進行連接。該連接子能係多肽連接子或化學連接子(如小分子)。任一本文所述之連接子域能作為連接子使用。舉例而言，該連接子能包含Fc域。此係部分體描繪於圖1及圖2之部分體中。於某些實施例中，治療化合物包含能自締合之連接子。於某些實施例中，治療化合物包含具有能最小化自締合作用之部份的連接子。連接子亦包括甘胺酸/絲胺酸連接子。於某些實施例中，該連接子係一甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸連接子。於某些實施例中，該連接子係丙胺酸/麩胺酸/離胺酸連接子。於某些實施例中，該連接子係甘胺酸/丙胺酸連接子。於某些實施例中，該連接子能包含一或多個GGGGS(SEQ ID NO：4)重複序列。於某些實施例中，該連接子包含1、2、3、或4個SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：8之重複序列。於某些實施例中，該連接子包含GGGGS(SEQ ID NO：4)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：5)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：6)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：7)、GGGGA(SEQ ID NO：8)、GGGGAGGGGA(SEQ ID NO：9)、GGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：10)、或GGGGAGGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：11)。於某些實施例中，該連接子包含GGGSKGGGSKGGGSK(SEQ ID NO：258)。於某些實施例中，該連接子包含AEEEKAEEEKAEEEK(SEQ ID NO：260)。此些連接子能使用於任一本發明所提供之治療化合物、多肽、或組成物。
該連接子區能包含一經修飾(如突變)之Fc區以產生異二聚體。於某些實施例中，能突變該Fc區之CH3域。此種Fc區之實例能見於 如結合於本文內作為參考資料之美國專利案第9,574,010號。本文所定義之該Fc區包含CH3域或其片段，及能附加地包含一或多個包括鉸鏈、CH1、或CH2之額外恆定區域或其片段。應理解，該Fc胺基酸殘基之編號係為Kabat等人(1991)，國家衛生院文獻91-3242，國家技術資訊局，春田市，維吉尼亞州內之EU索引(Kabat et al 1991,NIH Publication 91-3242,National Technical Information Service,Springfield,Va)。該“Kabat所述之EU索引”意旨人類IgG1 Kabt抗體之該EU索引編號。為了方便閱讀，結合美國專利案第9,574,010號中提供根據該Kabat所述EU索引之自人類IgG1CH2及CH3域編號的該胺基酸之表B於本文中作為參考資料。美國專利案第9,574,010號中表1.1提供能作為連接子區使用之Fc異二聚體變體之突變。美國專利案第9,574,010號之表1.1係結合於本文中作為參考資料。
於某些實施例中，該連接子包含一第一CH3域多肽及/或一第二CH3域多肽。該第一及第二CH3域多肽相比於野生型CH3域多肽個別包含胺基酸修飾，其中，該第一CH3域多肽包含胺基酸修飾於T350、L351、F405及Y407位置；該第二CH3域多肽包含胺基酸修飾於T350、T366、K392及T394位置，其中該於T350位置之修飾係T350V、T3501、T350L或T350M；該於L351位置之修飾係L351Y；該於F405位置之修飾係F405A、F405V、F405T或F405S；該於Y407位置之修飾係Y407V、Y407A或Y407I；該於T366位置之修飾係T366L、T366I、T366V、或T366M；該於K392位置之修飾係K392F、K392L或K392M；該於T394 位置之修飾係T394W，其中該胺基酸殘基之編號係根據Kabat所述之EU索引。
於某些實施例中，該於K392位置之胺基酸修飾係K392M或K392L。於某些實施例中，該於T350位置之胺基酸修飾係T350V。於某些實施例中，該第一CH3域多肽進一步包含一或多個選自Q347R及一個S400R或S400E之胺基酸修飾。於某些實施例中，該第二CH3域多肽進一步包含一或多個選自L351Y、K360E、及一個N390R、N390D或N390E之胺基酸修飾。於某些實施例中，該第一CH3域多肽進一步包含一或多個選自Q347R及一個S400R或S400E之胺基酸修飾，以及該第二CH3域多肽進一步包含一或多個選自L351Y、K360E、及一個N390R、N390D或N390E之胺基酸修飾。於某些實施例中，該於T350位置之胺基酸修飾係T350V。於某些實施例中，該於F405位置之胺基酸修飾係F405A。於某些實施例中，該於Y407位置之胺基酸修飾係Y407V。於某些實施例中，該於T366位置之胺基酸修飾係T366L或T366I。於某些實施例中，該於F405位置之胺基酸修飾係F405A、該於Y407位置之胺基酸修飾係Y407V、該於T366位置之胺基酸修飾係T366L或T366I、及該於K392位置之胺基酸修飾係K392M或K392L。於某些實施例中，該第一CH3域多肽包含該胺基酸修飾T350V、L351Y、S400E、F405V及Y407V，且該第二CH3域多肽包含該胺基酸修飾T350V、T366L、N390R、K392M及T394W。於某些實施例中，該第一CH3域多肽包含該胺基酸修飾T350V、L351Y、S400E、F405T及Y407V，且該第二CH3域多肽包含該胺基酸修飾T350V、T366L、N390R、K392M及T394W。於某些實施例中，該第一CH3域多 肽包含該胺基酸修飾T350V、L351Y、S400E、F405S及Y407V，且該第二CH3域多肽包含該胺基酸修飾T350V、T366L、N390R、K392M及T394W。於某些實例中，該第一CH3域多肽包含該胺基酸修飾T350V、L351Y、S400E、F405A及Y407V，且該第二CH3域多肽包含該胺基酸修飾T350V、L351Y、T366L、N390R、K392M及T394W。於某些實施例中，該第一CH3域多肽包含該胺基酸修飾Q347R、T350V、L351Y、S400E、F405A及Y407V，且該第二CH3域多肽包含該胺基酸修飾T350V、K360E、T366L、N390R、K392M及T394W。於某些實施例中，該第一CH3域多肽包含該胺基酸修飾T350V、L351Y、S400R、F405A及Y407V，且該第二CH3域多肽包含該胺基酸修飾T350V、T366L、N390D、K392M及T394V。於某些實施例中，該第一CH3域多肽包含該胺基酸修飾T350V、L351Y、S400R、F405A及Y407V，且該第二CH3域多肽包含該胺基酸修飾T350V、T366L、N390E、K392M及T394W。於某些實施例中，該第一CH3域多肽包含該胺基酸修飾T350V、L351Y、S400E、F405A及Y407V，且該第二CH3域多肽包含該胺基酸修飾T350V、T366L、N390R、K392L及T394W。於某些實施例中，該第一CH3域多肽包含該胺基酸修飾T350V、L351Y、S400E、F405A及Y407V，且該第二CH3域多肽包含該胺基酸修飾T350V、T366L、N390R、K392F及T394W。
於某些實施例中，經單離異多聚體包含一二具體CH3域，該域包含第一CH3域多肽及第二CH3域多肽，該第一CH3域多肽包含於F405及Y407位置具胺基酸修飾及該第二CH3域多肽包含於T366及T394位置具胺基酸修飾，其中：(i)該第一CH3域多肽進一步包含於L351位置 之胺基酸修飾，且(ii)該第二CH3域多肽進一步包含於K392位置之胺基酸修飾，其中該於F405之胺基酸修飾係F405A、F405T、F405S或F405V；及該於Y407位置之胺基酸修飾係Y407V、Y407A、Y407L或Y407I；該於T394位置之胺基酸修飾係T394W；該於L351位置之修飾係L351Y；該於K392位置之胺基酸修飾係K392L、K392M、K392V或K392F，及該於T366位置之胺基酸修飾係T366I、T366L、T366M或T366V，其中該異二聚體CH3域具有約70℃或更高之熔點(Tm)與大於約90%之純度，且其中該胺基酸殘基之編號係根據Kabat所述之EU索引。
於某些實施例中，該連接子包含第一CH3域多肽及/或第二CH3域多肽，其中該第一CH3域多肽包含於F405及Y407位置具胺基酸修飾及/或該第二CH3域多肽包含於T366及T394位置具胺基酸修飾，其中：(i)該第一CH3域多肽進一步包含於L351位置之胺基酸修飾，且(ii)該第二CH3域多肽進一步包含於K392位置之胺基酸修飾，其中該於F405位置之胺基酸修飾係F405A、F405T、F405S或F405V；且該於Y407位置之胺基酸修飾係Y407V、Y407A、Y407L或Y407I；該於T394位置之胺基酸修飾係T394W；該於L351位置之胺基酸修飾係L351Y；該於K392位置之胺基酸修飾係K392L、K392M、K392V或K392F，且該於位置T366之胺基酸修飾係T366I、T366L、T366M或T366V，其中該異二聚體CH3域具有約70℃或更高之熔點(Tm)與大於約90%之純度，且其中該胺基酸殘基之編號係根據Kabat所述之EU索引。於某些實施例中，該於F405位置之胺基酸修飾係F405A。於某些實施例中，該於T366位置之胺基酸修飾係T366I或T366L。於某些實施例中，該於Y407位置之胺基酸修飾係 Y407V。於某些實施例中，該於F405位置之胺基酸修飾係F405A、該於Y407位置之胺基酸修飾係Y407V、該於T366位置之胺基酸修飾係T366I或T366L、該於K392位置之胺基酸修飾係K392L或K392M。於某些實施例中，該於F405位置之胺基酸修飾係F405A、該於Y407位置之胺基酸修飾係Y407V、該於T366位置之胺基酸修飾係T366L、該於K392位置之胺基酸修飾係K392M。於某些實施例中，該於F405位置之胺基酸修飾係F405A、該於Y407位置之胺基酸修飾係Y407V、該於T366位置之胺基酸修飾係T366L、該於K392位置之胺基酸修飾係K392L。於某些實施例中，該於F405位置之胺基酸修飾係F405A、該於Y407位置之胺基酸修飾係Y407V、該於T366位置之胺基酸修飾係T366I、該於K392位置之胺基酸修飾係K392M。於某些實施例中，該於F405位置之胺基酸修飾係F405A、該於Y407位置之胺基酸修飾係Y407V、該於T366位置之胺基酸修飾係T366I、該於K392位置之胺基酸修飾係K392L。於某些實施例中，該第一CH3域多肽進一步包含於S400位置之選自S400D及S400E的胺基酸修飾，且該第二CH3域多肽進一步包含該胺基酸N390R。於某些實施例中，該於F405位置之胺基酸修飾係F405A、該於Y407位置之胺基酸修飾係Y405V、該於S400位置之胺基酸修飾係S400E、該於T366位置之胺基酸修飾係T366L、及該於K392位置之胺基酸修飾係K392M。
於某些實施例中，該經修飾之第一及第二CH3域係包含基於G型免疫球蛋白(IgG)之Fc構型。該IgG能係如IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4。
其他包含CH3域變體之連接子係描述於美國專利案第9,499,634及第9,562,109號中，其個別內容係結合於本文內作為參考資料。
於某些實施例中，該連接子能係如自然出現之蛋白質(如人類血清蛋白)的蛋白質之互補片段。於某些實施例中，該段點坐落於該具有高溶媒露出表面積(SASA)之白蛋白多肽之環且有限地與剩餘白蛋白之結構接觸。於某些實施例中，該片段導致傳輸多肽間之互補介面。此段點係描述於如結合於本文作為參考資料之美國專利案第9,388,231號。
於某些實施例中，該第一多肽包含具有本文所述一或多個突變之白蛋白多肽的殘基1-337或殘基1-293。於某些實施例中，該第二多肽包含具有本文所述一或多個突變之白蛋白多肽的殘基342-585或殘基304-585。於某些實施例中，該第一多肽包含白蛋白之殘基1-339、1-300、1-364、1-441、1-83、1-171、1-281、1-293、1-114、1-337、或1-336。於某些實施例中，該第二多肽包含白蛋白之殘基301-585、365-585、442-585、85-585、172-585、282-585、或115-585、304-585、340-585、或342-585。
於某些實施例中，該第一及第二多肽所包含之白蛋白殘基展示於下方表中。該白蛋白序列係下方所示。
Figure 110130703-A0202-12-0042-427
於某些實施例中，該第一及第二多肽包含能彼此形成如雙硫鍵之共價鍵的連接子。該連接子之非限制性實施例係多肽連接子。於某些實施例中，該多肽連接子包含GGGGS(SEQ ID NO：4)。該連接子能融合於該第一多肽之C端及該第二多肽之N端。該連接子亦能使用於不去除該連接子形成雙硫鍵的能力下，附加於本文所述之該部分體。於某些實施例中，該第一及第二多肽不包含能形成共價鍵之連接子。於某些實施例中，該第一及第二多肽具有以下取代。
Figure 110130703-A0202-12-0043-428
該白蛋白多肽之序列能係展示之人類白蛋白序列，於N端訊息傳導殘基移除(MKWVTFISLLFLFSSAYSRGVFRR)(SEQ ID NO：3)後之後蛋白型式
Figure 110130703-A0202-12-0043-429
Figure 110130703-A0202-12-0044-430
Figure 110130703-A0202-12-0044-431
(人類白蛋白，SEQ ID NO：2)
於某些實施例中，該多肽於N端包含由IgG1 Fc骨架之F(ab’)2與IgG Fc骨架的C端之scFvs融合所成的抗體。於某些實施例中，該IgG Fc骨架係IgG1 Fc骨架。於某些實施例中，該IgG1骨架係替換為IgG4骨架、IgG2骨架、或其他相似之IgG骨架。本段落所述之IgG骨架能通篇於本申請中使用，其中Fc區係引用為治療化合物之一部分。因此，於某些實施例中，該包含於IgG1 Fc骨架之F(ab’)2的抗體能於IgG1或任一本發明所提供之其他作用體結合/調節部分體上作為抗PD-1抗體。於某些實施例中，若該N端域域係抗PD-1抗體，則該融合於C端之scFv分段能作為抗PD-1抗體。於此非限制性實例中，該N端能係如本發明所提供之任一或多個作用體結合/調節部分體，且該C端能係另一如本發明所提供之任一或多個作用體結合/調節部分體。於某些實施例中，該作用體結合/調節部分體係相同於另一作用體結合/調節部分體。與某些實施例中，該作用體結合/調節部分體係不同於另一作用體結合/調節部分體。
於某些實施例中，該多肽包含自N端至C端之通式：
(R1-Fc-R2)2，
其中R1係該第一結合域，
其中R2係該第二結合域，
其中R1及R2之一者係Fab抗體且另一者係scFv抗體，
其中R1及R2係藉由連接子連接，
其中所稱連接子包含如IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4之Fc免疫球蛋白恆定區。
其中該連接子進一步包含G/S或G/A連接子，且
其中該G/S或G/A連接子包含(GGGGS)n或(GGGGA)n序列或其組合，其中各n係獨立地為1-4。
於某些實施例中，該多肽包含自N端至C端之通式：
(R2-Fc-R1)2，
其中R1係該第一結合域，
其中R2係該第二結合域，
其中R1及R2之一者係Fab抗體且另一者係scFv抗體，
其中R1及R2係藉由連接子連接，
其中該連接子包含如IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4之Fc免疫球蛋白恆定區。
其中所稱連接子進一步包含G/S或G/A連接子，且
其中該G/S或G/A連接子包含(GGGGS)n或(GGGGA)n序列或其組合，其中箇n係獨立地為1-4。
於某些實施例中，該多肽包含第一多肽鏈及第二多肽鏈，該第一多肽鏈包含藉由第一連接子連接至scFv抗體之Fab重鏈域，及該第二多肽鏈包含Fab輕(kappa)鏈域，其中該Fab重鏈及輕鏈域結合至PD-1且該scFv抗體結合至PD-1於相同或不同之抗原表位。於某些實施例中，該第一連接子包含如IgG1、IgG2、IgG3、或 IgG4之Fc免疫球蛋白恆定區，且進一步包含(GGGGS)n或(GGGGA)n序列或其組合，其中各n係獨立地為1-4。於某些實施例中，該scFv包含以scFv連接子連接重鏈可變域至輕鏈可變域，其中該scFv連接子包含(GGGGS)n、(GGGGA)n、(GGGSE)n、(GGGSK)n、或(AEEEK)n序列或其組合，其中各n係獨立地為1-4。
該第一連接子及該scFv連接子之序列係各自獨立，其能係相同或不同之序列及係如於本申請通篇所述之序列。因此，於某些實施例中，該第一連接子包含GGGGS(SEQ ID NO：4)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：5)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：6)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：7)、GGGGA(SEQ ID NO：8)、GGGGAGGGGA(SEQ ID NO：9)、GGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：10)、或GGGGAGGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：11)。於某些實施例中，該scFv連接子包含GGGGS(SEQ ID NO：4)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：5)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：6)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：7)、GGGGA(SEQ ID NO：8)、GGGGAGGGGA(SEQ ID NO：9)、GGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：10)、或GGGGAGGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：11)、或GGGSEGGGSEGGGSE(SEQ ID NO：1)。於某些實施例中，該連接子包含GGGSKGGGSKGGGSK(SEQ ID NO：258)。於某些實施例中，該連接子包含AEEEKAEEEKAEEEK(SEQ ID NO：260)。
於某些實施例中，該多肽包含第一多肽鏈及一第二多肽鏈，其中：
該第一多肽鏈具有自N端至C端之通式：
[VH-A]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[VH-B]-[連接子2]-[VK-B]；或
[VH-A]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[VK-B]-[連接子2]-[VH-B]；
該第二多肽鏈具有自N端至C端之通式：
[VK-A]-[CK],
其中：
VH-A=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
VK-A=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
VH-B=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
VK-B=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
CH1=人類IgG1之恆定重鏈域1；
CH2=人類IgG1之恆定重鏈域2；
CH3=人類IgG1之恆定重鏈域3；
CK=kappa輕鏈之恆定域；
連接子1係甘胺酸/絲胺酸或甘胺酸/丙胺酸連接子；
連接子2係甘胺酸/絲胺酸或甘胺酸/丙胺酸連接子，
其中VH-A、VK-A、VH-B、及VK-B能係來自相同或不同之抗體。
於某些實施例中，該多肽包含第一多肽鏈及一第二多肽鏈，其中：
該第一多肽鏈具有自N端至C端之通式：
[VH-B]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[VH-A]-[連接子2]-[VK-A]；或
[VH-B]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[VK-A]-[連接子2]-[VH-A]；
該第二多肽鏈具有自N端至C端之通式：
[VK-B]-[CK]，
其中：
VH-A=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
VK-A=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
VH-B=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
VK-B=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
CH1=人類IgG1之恆定重鏈域1，如本發明所提供；
CH2=人類IgG1之恆定重鏈域2，如本發明所提供；
CH3=人類IgG1之恆定重鏈域3，如本發明所提供；
CK=kappa輕鏈之恆定域，如本發明所提供；
連接子1係甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、丙胺酸/麩胺酸/離胺酸或甘胺酸/丙胺酸連接子，或其他本發明所提供之連接子；
連接子2係甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、丙胺酸/麩胺酸/離胺酸或甘胺酸/丙胺酸連接子，或其他本發明所提供之連接子，
其中VH-A、VK-A、VH-B、及VK-B能係來自相同或不同之抗體。
於某些實施例中，CH1、CH2、及CH3係自IgG Fc之域域。該CH1-CH2-CH3之序列能係如：
Figure 110130703-A0202-12-0049-432
Figure 110130703-A0202-12-0049-433
(SEQ ID NO：12)
於某些實施例中，連接子1包含1、2、3、或4個GGGGS(SEQ ID NO：4)及/或GGGGA(SEQ ID NO：8)及/或GGGSE(SEQ ID NO：300)之重複序列。於某些實施例中，連接子2包含1、2、3、或4個GGGGS(SEQ ID NO：4)、GGGSE(SEQ ID NO：300)、及/或GGGGA(SEQ ID NO：8)之重複序列。為避免疑慮，使用於本申請通篇之連接子1及連接子2序列係個別獨立的。因此，於某些實施例中，連接子1及連接子2能係相同或不同之序列。於某些實施例中，連接子1包含GGGGS(SEQ ID NO：4)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：5)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：6)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：7)、GGGGA(SEQ ID NO：8)、GGGGAGGGGA(SEQ ID NO：9)、GGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：10)、或GGGGAGGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：11)。於某些實施例中， 連接子2包含GGGGS(SEQ ID NO：4)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：5)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：6)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：7)、GGGGA(SEQ ID NO：8)、GGGGAGGGGA(SEQ ID NO：9)、GGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：10)、GGGGAGGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：11)、GGGSE(SEQ ID NO：300)、GGGSEGGGSE(SEQ ID NO：301)、GGGSEGGGSEGGGSE(SEQ ID NO：1)、或GGGSEGGGSEGGGSEGGGSE(SEQ ID NO：302)。
於某些實施例中，該多肽包含輕鏈及重鏈。於某些實施例中，該輕與重鏈以該第一作用體部分體之VH域起始於N端，接續以融合至人類IgG1 Fc區(如CH2-CH3)的人類IgG1之CH1域。於某些實施例中，於Fc區之C端係與本發明提供之連接子融合，該連接子包括但不限於，GGGGS(SEQ ID NO：4)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：5)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：6)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：7)、GGGGA(SEQ ID NO：8)、GGGGAGGGGA(SEQ ID NO：9)、GGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：10)、或GGGGAGGGGAGGGGAGGGGA(SEQ ID NO：11)、GGGSE(SEQ ID NO：300)、GGGSEGGGSE(SEQ ID NO：301)、GGGSEGGGSEGGGSE(SEQ ID NO：1)、或GGGSEGGGSEGGGSEGGGSE(SEQ ID NO：302)。該連接子而後能融合至如scFv抗體之該第二作用體部分體。於某些實施例中，該第一及第二作用體部分體係PD-1抗體。於某些實施例中，該PD-1抗體係選自PD-1抗 體表4。於某些實施例中，該PD-1抗體係選自PD-1抗體表5。於某些實施例中，該PD-1抗體係選自PD-1抗體表4及PD-1抗體表5。該多肽能經重鏈同源二聚作用同源二聚化，導致治療化合物具有如兩抗PD-1抗體組之兩作用體部分體組。
於某些實施例中，本發明提供之多肽具有以下通式：
鏈1：FAbVH-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[scFv VK]-[連接子2]-[scFv VH]；及/或
鏈2：FAbVL-CK，其中：
FAbVH=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
scFv VK=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
scFv VH=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
FAbVL=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
CH1=人類IgG1之恆定重鏈域1，如本發明所提供；
CH2=人類IgG1之恆定重鏈域2，如本發明所提供；
CH3=人類IgG1之恆定重鏈域3，如本發明所提供；
CK=kappa輕鏈之恆定域，如本發明所提供或其他能經kappa輕鏈恆定域取代之輕鏈之恆定域；
連接子1係甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、丙酸/麩胺酸/離胺酸、或甘胺酸/丙胺酸連接子，或其他如本發明所提供之連接子(如(GGGSE)n，其中n係1-4)；
連接子2係甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、丙酸/麩胺酸/離胺酸、或甘胺酸/丙胺酸連接子，或其他如本發明所提供之連接子(如(GGGSE)n，其中n係1-4)。
於某些實施例中，鏈1具有以下通式FAbVH-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[scFv VH]-[連接子2]-[scFv VK]；其中：
FAbVH=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
scFv VK=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
scFv VH=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
FAbVL=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
CH1=人類IgG1之恆定重鏈域1，如IgG1，如本發明之提供；
CH2=人類IgG1之恆定重鏈域2，如IgG1，如本發明之提供；
CH3=人類IgG1之恆定重鏈域3，如IgG1，如本發明之提供；
CK=kappa輕鏈之恆定域，如本發明所提供或其他能經kappa輕鏈恆定域取代之輕鏈之恆定域；
連接子1係甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、丙酸/麩胺酸/離胺酸、或甘胺酸/丙胺酸連接子，或其他如本發明所提供之連接子(如(GGGSE)n，其中n係1-4)；
連接子2係甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、丙酸/麩胺酸/離胺酸、或甘胺酸/丙胺酸連接子，或其他如本發明所提供之連接子(如(GGGSE)n，其中n係1-4)。
於某些實施例中，本發明提供之多肽具有以下通式：
鏈1：[scFv VK]-[連接子2]-[scFv-VH]-[連接子1]-[FabVH]-[CH1]-[CH2]-[CH3]；及/或
鏈2：FAbVL-CK，其中：
FAbVH=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
scFv VK=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
scFv VH=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
FAbVL=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
CH1=人類IgG1之恆定重鏈域1，如IgG1，如本發明之提供；
CH2=人類IgG1之恆定重鏈域2，如IgG1，如本發明之提供；
CH3=人類IgG1之恆定重鏈域3，如IgG1，如本發明之提供；
CK=kappa輕鏈之恆定域，如本發明所提供或其他能經kappa輕鏈恆定域取代之輕鏈之恆定域；
連接子1係甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、丙酸/麩胺酸/離胺酸、或甘胺酸/丙胺酸連接子，或其他如本發明所提供之連接子(如(GGGSE)n，其中n係1-4)；
連接子2係甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、丙酸/麩胺酸/離胺酸、或甘胺酸/丙胺酸連接子，或其他如本發明所提供之連接子(如(GGGSE)n，其中n係1-4)。
於某些實施例中，本發明提供之多肽具有以下通式：
鏈1：[scFv VH]-[連接子2]-[scFv-VK]-[連接子1]-[FabVH]-[CH1]-[CH2]-[CH3]；及/或
鏈2：FAbVL-CK，其中：
FAbVH=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
scFv VK=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
scFv VH=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
FAbVL=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
CH1=人類IgG1之恆定重鏈域1，如IgG1，如本發明之提供；
CH2=人類IgG1之恆定重鏈域2，如IgG1，如本發明之提供；
CH3=人類IgG1之恆定重鏈域3，如IgG1，如本發明之提供；
CK=kappa輕鏈之恆定域，如本發明所提供或其他能經kappa輕鏈恆定域取代之輕鏈之恆定域；
連接子1係甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、丙酸/麩胺酸/離胺酸、或甘胺酸/丙胺酸連接子，或其他如本發明所提供之連接子(如(GGGSE)n，其中n係1-4)；
連接子2係甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、丙酸/麩胺酸/離胺酸、或甘胺酸/丙胺酸連接子，或其他如本發明所提供之連接子(如(GGGSE)n，其中n係1-4)。
於某些實施例中，該多肽包含複數個鏈1及複數個鏈2。於某些實施例中，該多肽包含兩鏈1多肽及兩鏈2多肽。於某些實施例中，該複數(如兩個)鏈1多肽係連接於彼此。於某些實施例中，該複數(如兩個)鏈1多肽係經雙硫鍵連接於彼此。於某些實施例中，該連接複數鏈1多肽於彼此之雙硫鍵係經多肽之[CH1]-[CH2]-[CH3]域。於某些實施例中，該連接複數鏈1多肽於彼此之雙硫鍵係經多肽之[CH1]-[CH2]域間之鉸鏈區。
對應地，於某些實施例中，該多肽能包含於4多肽鏈中提供之四結合域，其中該第一結合域係藉由第一鏈1及第一鏈2之FAbVH及FAbVL形成，第二結合域係藉由第二鏈1及第二鏈2之FAbVH及FAbVL形成，第三結合域係藉由第一鏈1之[scFv VH/VK]-[連接子2]-[scFv VK/VH]形成，及第四結合域係藉由第二鏈1之[scFv VH/VK]-[連接子2]-[scFv VK/VH]形成以創造包含4結合至PD-1之結合域的多肽。於某些實施例中，個別結合域作為PD-1促效劑作用。於某些實施例中，該4多肽結合域包含本發明所提供之序列或抗體序列。該scFV及FAb序列(如域)係如本文所提供之序列。
於某些實施例中，該FAbVH、FAbVL、scFv VH、及scFv VH包含本發明所提供之重鏈或輕鏈序列。於某些實施例中，該FAbVH、FAbVL、scFv VH、及scFv VK包含本文所提供之CDR1、CDR2、CDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
於某些實施例中，藉由該FAbVH及該FAbVL形成之結合域相較於藉由scFv VK及scFv VH形成之結合域結合至PD-1之不同抗原表位。
於某些實施例中，藉由該FAbVH及該FAbVL形成之結合域相較於藉由scFv VK及scFv VH形成之結合域以較高之親和力結合至PD-1。
於某些實施例中，該scFv VK及scFvVH係藉由雙硫鍵連接。此實施例之非限制性實例係描繪於如圖3(70)及(75)中。
於某些實施例中，該PD-1抗體係選自以下表：
Figure 110130703-A0202-12-0056-434
Figure 110130703-A0202-12-0057-435
Figure 110130703-A0202-12-0058-436
Figure 110130703-A0202-12-0059-437
Figure 110130703-A0202-12-0060-438
Figure 110130703-A0202-12-0061-439
Figure 110130703-A0202-12-0062-440
Figure 110130703-A0202-12-0063-441
Figure 110130703-A0202-12-0064-442
Figure 110130703-A0202-12-0065-443
於某些實施例中，該抗體包含前述PD-1抗體表4之CDR組。於某些實施例中，該抗體包含PD-1抗體表4之純株ID：PD1AB4、或PD1AB30之該CDRs。
於某些實施例中，FAbVH,FAbVL、scFv VH、及scFv VH包含前述本文內參考表之CDR組。
儘管PD-1抗體表4所描繪之重鏈與輕鏈能被認作Fab型式，該重鏈與輕鏈能使用多肽或其他類型之連接子以scFV型式連接該重鏈與輕鏈於一單鏈型式。
於某些實施例中，該於Fab型式之PD-1抗體相比於scFv型式之該PD-1抗體於PD-1具有較低之親和力。於某些實施例中，該於Fab型式之PD-1抗體相比於scFv型式之該PD-1抗體於PD-1具有較高之親和力。於某些實施例中，該親和力係約或至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、200%、300%、400%、或500%較高或較低。
於某些實施例中，本發明係提供以下純株之CDRs，其係基於不同型式以能用於定性CDRs。
Figure 110130703-A0202-12-0067-444
Figure 110130703-A0202-12-0068-445
因此，於某些實施例中，本發明提供之結合於PD-1之抗體包含上述表提供之LCDR組或HCDR組。
於某些實施例中，本發明係提供以下純株之Fab CDRs，其係基於不同型式以用於定性CDRs。
Figure 110130703-A0202-12-0069-446
Figure 110130703-A0202-12-0070-447
因此，於某些實施例中，本發明係提供包含本文所提供之表的Fab LCDR組或Fab HCDR組。
於某些實施例中，本發明係提供以下純株之scFv CDRs，其係基於不同型式以能用於定性CDRs。
Figure 110130703-A0202-12-0071-448
Figure 110130703-A0202-12-0072-449
因此，於某些實施例中，本發明係提供包含本文內表所提供之scFv LCDR組或scFv HCDR組之結合於PD-1的抗體。於某些實施例中，本發明係提供包含上述PD-1抗體Fab表6及PD-1抗體scFv表7所提供之Fab LCDR及Fab HCDR組，或scFv LCDR及scFv HCDR組之結合於PD-1的一抗體。
於某些實施例中，該PD-1抗體包含選自於下表之多肽：
Figure 110130703-A0202-12-0073-450
Figure 110130703-A0202-12-0074-451
Figure 110130703-A0202-12-0075-452
Figure 110130703-A0202-12-0076-453
Figure 110130703-A0202-12-0077-454
Figure 110130703-A0202-12-0078-455
Figure 110130703-A0202-12-0079-456
Figure 110130703-A0202-12-0080-457
Figure 110130703-A0202-12-0081-458
於某些實施例中，該PD-1抗體包含選自PD-1抗體表8之多肽。
於某些實施例中，該PD-1抗體包含選自下表之多肽：
Figure 110130703-A0202-12-0082-459
Figure 110130703-A0202-12-0083-460
Figure 110130703-A0202-12-0084-461
Figure 110130703-A0202-12-0085-462
Figure 110130703-A0202-12-0086-463
Figure 110130703-A0202-12-0087-464
Figure 110130703-A0202-12-0088-465
Figure 110130703-A0202-12-0089-466
Figure 110130703-A0202-12-0090-467
Figure 110130703-A0202-12-0091-468
Figure 110130703-A0202-12-0092-469
Figure 110130703-A0202-12-0093-470
Figure 110130703-A0202-12-0094-471
Figure 110130703-A0202-12-0095-472
Figure 110130703-A0202-12-0096-473
於某些實施例中，該PD-1抗體包含選自PD-1抗體表9之多肽。
於某些實施例中，該PD-1抗體包含選自下表之多肽：
Figure 110130703-A0202-12-0097-474
於某些實施例中，該PD-1抗體包含選自PD-1抗體表10之多肽。
於某些實施例中，該PD-1抗體包含選自下表之多肽：
Figure 110130703-A0202-12-0098-475
Figure 110130703-A0202-12-0099-476
於某些實施例中，該PD-1抗體包含選自PD-1抗體表11之多肽。
如本發明所提供之抗體或多肽能具有複數個本文內表中所提供之多肽鏈，例如兩鏈1及兩鏈2以形成特異性分子。此係非限制性實例。
於某些實施例中，本發明提供之多肽包含複數種結合至PD-1之抗體。複數種抗體包含超過一種具有相同或不同CDR域之抗體。
於某些實施例中，該PD-1抗體包含展示於PD-1抗體表4之序列。於某些實施例中，該抗體係於描繪於PD-1抗體表4之scFV型式。於某些實施例中，該抗體包含自PD-1抗體表4之純株的CDR1、自PD-1抗體表4之純株的CDR2、自PD-1抗體表4之純株的CDR3。於某些實施 例中，該抗體包含自PD-1抗體表4之任純株的LCDR1、自PD-1抗體表4之任純株的LCDR2、及自PD-1抗體表4之任純株的LCDR3。於某些實施例中，上述展示CDRs之胺基酸殘基含有突變。於某些實施例中，該CDRs含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個取代或突變。於某些實施例中，該取代係保守性取代。
於某些實施例中，該PD-1抗體具有選自PD-1抗體表4中任一純株之VH區及選自PD-1抗體表4中任一純株之VL區。
於某些實施例中，該分子包含結合至PD-1之抗體。於某些實施例中，該抗體包含(i)包含重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列之重鏈可變區，其中該重鏈CDR1序列具有前述PD-1抗體表4之任CDR1序列之胺基酸序列；該重鏈CDR2序列具有前述PD-1抗體表4之任一CDR2序列之胺基酸序列；及該重鏈CDR3序列具有前述PD-1抗體表4之任CDR3序列之胺基酸序列；或前述任一者之變體；以及(ii)包含輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列之輕鏈可變區，其中該輕鏈CDR1序列具有前述PD-1抗體表4之任一LCDR1序列之胺基酸序列；該輕鏈CDR2序列具有前述PD-1抗體表4之任一LCDR2序列之胺基酸序列；該輕鏈CDR3序列具有前述PD-1抗體表4之任LCDR3序列之胺基酸序列；或前述任一者之變體。
於某些實施例中，該抗體包含包含重鏈CDR1、CDR2、CDR3序列之重鏈可變區，其中該重鏈CDR1、CDR2、CDR3序列具有前述PD-1抗體表4之PD1AB4中之胺基酸序列，或前述任一者之變體；及(ii)包含輕鏈CDR1、CDR2、CDR3序列之輕鏈可變區，其中該輕鏈CDR1、 CDR2、及CDR3序列具有前述PD-1抗體表4之PD1AB4中之胺基酸序列，或前述任一者之變體。
於某些實施例中，該抗體包含包含重鏈CDR1、CDR2、CDR3序列之重鏈可變區，其中該重鏈CDR1、CDR2、CDR3序列具有前述PD-1抗體表4之PD1AB30中之胺基酸序列，或前述任一者之變體；及(ii)包含輕鏈CDR1、CDR2、CDR3序列之輕鏈可變區，其中該輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列具有前述PD-1抗體表4之PD1AB30中之胺基酸序列，或前述任一者之變體。
上述係非限制性的說明實例，該抗體能具有本發明所提供之表中的CDRs且無須將個別CDR組依前述段落一一寫出即可顯而易見地引用。
於某些實施例中，該PD-1抗體包含本發明提供之如列舉於PD-1抗體表4中的VH及VL(VK)鏈。
於某些實施例中，該PD-1抗體包含展示於PD-1抗體Fab表6及PD-1抗體scFv表7之序列。於某些實施例中，該抗體係於如描繪於PD-1抗體scFv表7之scFv型式。於某些實施例中，該抗體包含自PD-1抗體Fab表6及PD-1抗體scFv表7之任一純株之CDR1、自PD-1抗體Fab表6及PD-1抗體scFv表7之任一純株之CDR2、及自PD-1抗體Fab表6及PD-1抗體scFv表7之任一純株之CDR3。於某些實施例中，該抗體包含一自PD-1抗體Fab表6及PD-1抗體scFv表7之任一純株之LCDR1、自PD-1抗體Fab表6及PD-1抗體scFv表7之任一純株之LCDR2、及自PD-1抗體Fab表6及PD-1抗體scFv表7之任一純株之 LCDR3。於某些實施例中，該上述展示之CDRs的胺基酸殘基含有突變。於某些實施例中，該CDRs含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個取代或突變。於某些實施例中，該取代係保守性取代。
於某些實施例中，該PD-1抗體具有選自PD-1抗體表8及PD-1抗體表9中任一純株之VH區及選自PD-1抗體表8及PD-1抗體表9中任一純株之VL區。
於某些實施例中，該分子包含結合至PD-1之抗體。於某些實施例中，該抗體包含(i)包含重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列之重鏈可變區，其中該重鏈CDR1序列具有前述PD-1抗體Fab表6及PD-1抗體scFv表7之任一CDR1序列之胺基酸序列；該重鏈CDR2序列具有前述PD-1抗體Fab表6及PD-1抗體scFv表7之任一CDR2序列之胺基酸序列；及該重鏈CDR3序列具有前述PD-1抗體Fab表6及PD-1抗體scFv表7之任一CDR3序列之胺基酸序列；或任一前述者之變體；以及(ii)包含輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列之輕鏈可變區，其中該輕鏈CDR1序列具有前述PD-1抗體Fab表6及PD-1抗體scFv表7之任一LCDR1序列之胺基酸序列；該輕鏈CDR2序列具有前述PD-1抗體Fab表6及PD-1抗體scFv表7之任一LCDR2序列之胺基酸序列；該輕鏈CDR3序列具有前述PD-1抗體Fab表6及PD-1抗體scFv表7之任一LCDR3序列之胺基酸序列；或任一前述者之變體。
於某些實施例中，該抗體具有該抗體包含Fab重鏈可變區，其包含Fab重鏈CDR1、CDR2、CDR3序列，其中該Fab重鏈CDR1、CDR2、CDR3序列具有前述PD-1抗體Fab表6之PD1AB37中之胺基酸 序列，或前述任一者之變體；及(ii)包含Fab輕鏈可變區，其包含輕鏈CDR1、CDR2、CDR3序列，其中該Fab輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列具有前述PD-1抗體Fab表6之PD1AB37中之胺基酸序列，或前述任一者之變體。
於某些實施例中，該抗體包含scFv重鏈可變區，其包含scFv重鏈CDR1、CDR2、CDR3序列，其中該scFv重鏈CDR1、CDR2、CDR3序列具有前述PD-1抗體Fab表7之PD1AB37中之胺基酸序列，或前述任一者之變體；及(ii)包含輕鏈CDR1、CDR2、CDR3序列之scFv輕鏈可變區，其中該scFv輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列具有前述PD-1抗體Fab表7之PD1AB37中之胺基酸序列，或前述任一者之變體。
於某些實施例中，該抗體具有該抗體包含Fab重鏈可變域，其包含Fab重鏈CDR1、CDR2、CDR3序列，其中該Fab重鏈CDR1、CDR2、CDR3序列具有前述PD-1抗體Fab表6之PD1AB53中之胺基酸序列，或前述任一者之變體；及(ii)包含輕鏈CDR1、CDR2、CDR3序列之Fab輕鏈可變區，其中該Fab輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列具有前述PD-1抗體Fab表6之PD1AB53中之胺基酸序列，或前述任一者之變體。
於某些實施例中，該抗體包含scFv重鏈可變區，其包含scFv重鏈CDR1、CDR2、CDR3序列，其中該scFv重鏈CDR1、CDR2、CDR3序列具有前述PD-1抗體Fab表7之PD1AB53中之胺基酸序列，或前述任一者之變體；及(ii)包含scFv輕鏈CDR1、CDR2、CDR3序列之scFv輕鏈可變區，其中該scFv輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列具有前述PD-1抗體Fab表7之PD1AB53中之胺基酸序列，或前述任一者之變體。
上述係非限制性的說明實例，該抗體能具有本發明所提供之表中的CDRs且無須將個別CDR組依前述段落一一寫出即可顯而易見地引用。
於某些實施例中，該PD-1抗體包含如列舉於PD-1抗體表8及PD-1抗體表9之本發明的FabVH及VL(VK)鏈。於某些實施例中，該Fab VH肽包含SEQ ID NO：256或260之序列。於某些實施例中，該Fab VK鏈包含SEQ ID NO：259或263之序列。於某些實施例中，該抗體包含SEQ ID NO：256之Fab VH及SEQ ID NO：259之Fab VK。於某些實施例中，該抗體包含SEQ ID NO：260之Fab VH及一SEQ ID NO：263之Fab VK。於某些實施例中，該PD-1抗體包含如列舉於PD-1抗體表8及PD-1抗體表9之本發明的scFv VH及VL(VK)。於某些實施例中，該scFv VH肽包含SEQ ID NO：257或261之序列。於某些實施例中，該scFv VH肽包含SEQ ID NO：258或262之序列。於某些實施例中，該抗體包含SEQ ID NO：257之scFv VH及SEQ ID NO：258之scFv VK。於某些實施例中，該抗體包含SEQ ID NO：261之scFv VH及SEQ ID NO：262之scFv VK。
於某些實施例中，該PD-1抗體包含如列舉於PD-1抗體表8及PD-1抗體表9之本發明的FabVH與VL(VK)鏈及scFv VH與VL(VK)鏈。於某些實施例中，該Fab VH肽包含SEQ ID NO：256或260之序列且該scFv VH肽包含SEQ ID NO：257或261之序列。於某些實施例中，該Fab VK鏈包含SEQ ID NO：259或263之序列且該scFv VH肽包含SEQ ID NO：258或262之序列。於某些實施例中，該抗體包含SEQ ID NO：256之Fab VH及SEQ ID NO：259之Fab VK以及SEQ ID NO：257之scFv VH及SEQ ID NO：258之scFv VK。於某些實施例中，該抗體包含SEQ ID NO：260之Fab VH及SEQ ID NO：263之Fab VK以及SEQ ID NO：261之scFv VH及SEQ ID NO：262之scFv VK。
於某些實施例中，該scFv包含自N至C端之VH及VL。於某些實施例中，自N至C端之VH係經連接子連接至VL。於某些實施例中，該連接子係本發明之任一連接子。於某些實施例中，該scFv包含此N至C端VL及VH。於某些實施例中，自N至C端之VL係經連接子連接至VH。於某些實施例中，該連接子係本發明之任一連接子。
於某些實施例中，該PD-1抗體包含展示於PD-1抗體表4之序列。於某些實施例中，該抗體係於scFv型式。於某些實施例中，該抗體包含自PD-1抗體表4中任一純株之VH序列。於某些實施例中，該抗體包含自PD-1抗體表4中任一純株之VK序列。於某些實施例中，該展示之VH或VK胺基酸殘基含有突變。於某些實施例中，該VH或VK含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個取代或突變。於某些實施例中，該取代係保守性取代。
於某些實施例中，若藥物化合物包含Fc部分，該Fc域(部分)帶有突變以呈現該無法結合至FcRs之“無作用體”Fc域。呈現無作用體Fc區之該突變係已知的。於某些實施例中，對應於已知編號系統的於Fc區之突變係選自具有K322A、L234A、L235A、G237A、L234F、L235E、N297、P331S之群組或其任一結合。於某些實施例中，該Fc突變包含於L234及/或L235及/或G237位置之突變。於某些實施例中，該Fc突變包 含能引用為LALA突變之L234A及/或L235A。於某些實施例中，該Fc突變包含L234A、L235A、及G237A。
本發明之揭露係連接子多肽、藥物多肽、及編碼該多肽(如藥物化合物)之核酸、包含該核酸序列之載體、及包含該核酸或載體之細胞。
該描繪於圖1及圖2之Fab(20)與(25)及scFV(50)與(55)域能包含重與輕鏈或CDR序列或其單一者，或前述表及本文所內所提供之任一者。
醫藥組成物與套組
於實施例中，本發明實施例提供如包括本發明之治療化合物或多肽，及其與藥學上可接受之載劑之共同配方的藥學上可接受之組成物的醫藥組成物。本文所用術語“藥學上可接受的載劑”包括任一及全部之溶劑、分散劑媒介、等張及緩吸收劑，及其生理上可相容之類似物。
該載劑能適宜於靜脈內、肌肉內、皮下、非消化道、直腸、局部、眼部、外用、脊椎或表皮施藥(如藉由注射或輸液)。本文所用術語“載劑”意指與化合物施藥之稀釋劑、佐劑、或賦形劑。於某些實施例中，藥物載劑亦能係如水及油之液體，包括來源自石油、動物、植物或合成之如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油、及其類似物。該藥物載劑亦能係鹽水、阿拉伯膠、明膠、澱粉糊、滑石、動物性角蛋白、矽酸膠、尿素、及其類似物。此外，輔助、安定、稠化、潤滑、及著色劑亦能使用。該載劑能係使用於包含本發明藥物化合物之醫藥組成物。
本發明實施例之該組成物及化合物能係多種形態。其包括例如液體、半固體及固體劑型。例如液體溶液(如可注射或輸液之液體)、分 散劑或懸浮劑、脂質體及栓劑。較佳型態係視給藥之目標模式及用藥指標而定。通常組成物係於可注射或輸液之溶液型態。於某些實施例中，該給藥模式係非消化道的(如靜脈內、皮下、腹膜內、肌肉內)。於某些實施例中治療分子係藉由靜脈輸液或注射給藥。於另一實施例中，治療分子係藉由肌肉內或皮下注射給藥。於另一實施例中，治療分子係局部給藥(如藉由注射或外部用藥至一目標處)。
本文中所用片語“非消化道給藥”意旨不同於腸內及外用之給藥模式。通常係藉由注射及包括但不限於靜脈內、肌肉內、動脈間、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛膜下、脊椎內、硬膜上及胸骨內之注射或輸液。
該醫藥組成物通常應係滅菌的，且於某些實施例中，於製造及貯存中係穩定的。該組成物能配方以一溶液、微乳化液、分散劑、脂質體、或其他適宜於高藥物分子濃度之規則結構。滅菌注射溶液能係藉由結合所需量之該活性化合物(即治療分子)於適當溶劑，佐以一或一組合所需之上述內容物，並接續以過濾滅菌製備。通常而言，分散劑係藉由結合該活性化合物至含有基本分散劑介質及其他所需之上述內容物的滅菌載體中製備。於用以製備滅菌注射液之滅菌粉末方面，較佳之製備方法係真空乾燥與冷凍乾燥以生成活性內容物之粉末外加任一附加之自其預滅菌溶液的預想內容物。該溶液之適宜流動性係能保持的，例如，藉由使用如卵磷脂進行外層包覆、藉由保持分散劑中所需之粒子尺寸及藉由使用界面活性劑。注射組成物之延長吸收能藉由於該組成物中包入延緩吸收劑(如單硬脂酸鹽及明膠)。
如領域中技藝人員所能理解，給藥途徑及/或模式將視預想結果而變化。於特定實施例中，該活性化合物能係製備以具有保護該化合物不致快速釋放之載劑，例如包括植入物、經皮貼布、及微膠囊傳遞系統之控制釋放配方。能使用生物可分解的、生物可相容的聚合物如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯、及聚乳酸。許多製備此種配方之方法係具有專利或為領域中技藝人員所習知，如參見文獻Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems,J.R.Robinson,ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978。
於特定實施例中，治療化合物能係口服給藥。例如與惰性稀釋劑或可同化之可食載劑。該化合物(及若必要時其他內容物)亦能密封於一硬質或軟質明膠膠囊殼中、壓縮至錠劑、或直接結合至該受試者之膳食中。對於口服藥物給藥，該化合物能係結合於賦形劑並以可消化錠、口頰錠、口含錠、膠囊、酏劑、懸浮劑、糖漿、薄片、及其類似物之型式使用。為以非消化道給藥以外之方式給藥該化合物，必須以預防其活化的材料將該化合物包覆或共同施藥。醫藥組成物亦能以領域中習知的醫藥裝置進行給藥。
劑量方案係經調整以提供最適之預想反應(如藥效)。舉例而言，其能係以藥丸給藥、逐步數次給藥以分配之劑量或藉由療程之緊急情況等比例地減少或增加該劑量。非消化道組成物係特別有利以劑量單位型式配方以方便劑量之給藥及齊一性。本文所用劑量單位型式係指適合作為受治療之受試者的單一劑量之物理上釋出單位；每一單位含有經計算之預定量的活性化合物以產生與所需藥物載劑一同產生預想之藥效。劑量單位 型式之規格係藉由口授及直接視(a)該活性化合物之單一特性與欲達之具體藥效而定，及(b)此活性化合物於個體內治療敏感度之領域中固有的限制。
例示性、非限制範圍之治療性或預防性有效治療化合物之量係0.1-30mg/kg，較佳為1-25mg/kg。治療化合物之劑量與治療方案能係取決於領域中技藝人員。於某些實施例中，治療化合物係藉由注射(如皮下或靜脈內)給藥以約1至40mg/kg(如1至30mg/kg、5至25mg/kg)、約10至20mg/kg、約1至5mg/kg、1至10mg/kg、5至15mg/kg、10至20mg/kg、15至25mg/kg、或約3mg/kg的量。該給藥行程能變化於如一週一次至每2、3、或4週一次。於一實施例中，治療化合物係給藥以每隔一週約10至20mg/kg。治療化合物能係藉由速率為多於20mg/分鐘(如20-40mg/分鐘)，及通常大於或等於40mg/分鐘以達約35至440mg/m2，通常約70至310mg/m2，及更通常約110至130mg/m2之劑量之靜脈內輸液進行給藥。於實施例中，該約110至130mg/m2之輸液率達到約3mg/kg之程度。於一實施例中，治療化合物能係藉由小於10mg/分鐘，如小於或等於5mg/分鐘以達約1至100mg/m2之劑量，如約5至50mg/m2，約7至25mg/m2，或約10mg/m2之速率的靜脈內輸液進行給藥。於某些實施例中，治療化合物係以約30分鐘之時間進行輸液。須注意劑量值能依該症狀之病症與嚴重程度進行減輕。應進一步理解，對於任一具體受試者，特定劑量方案應根據該個體所需及給藥或指示給藥該組成物之人的專業判斷進行調整，且本文前述劑量範圍僅係示範且非意圖於限制本聲明組成物之範圍與應用。
該藥物組成物能包括多肽之“治療上有效量”或“預防性有效量”。“治療上有效量”係指於劑量及所必要之時間達到預想治療效果之有效的量。多肽之治療上有效量能根據如疾病狀態、年紀、性別、及個體體重、及於個體內藥物化合物所能引出之預想反應等因素而變化。治療上有效量亦係治療分子之治療上有益效果超過該分子之任一毒性或有害效果之量。“治療上有效劑量”相比於未受治療之受試者較佳抑制可測量參數(如免疫攻擊)至少20%，更佳為至少約40%，甚佳為至少約60%，及更甚佳為至少80%。化合物抑制可測量參數(如免疫攻擊)之能力能於預期移植排斥反應或自體免疫障礙效果之動物模型系統進行評估。可替換地，組成物之此特性能藉由檢驗該化合物之抑制能力進行評估，此體外抑制作用藉由領域中技藝人員所習知之測定方法測定。
“預防性有效量”係指於劑量及所必要之時間達到預想治療效果之有效的量。通常來說，因預防性劑量係用於受試者罹病前或罹病早期，該預防性劑量將係少於治療上有效劑量。
同時，於實施例範圍內係提供包含本發明治療化合物之套組。該套組能包括一或多個其他要件，包括：使用指引；其他試劑(如標示物、治療試劑、或有用於螯合或偶合之劑、標示物或其他治療劑之治療分子、或放射性保護組成物)；用於製備該藥物分子以給藥之裝置或其他材料；藥學上可接受之載劑；及用於給藥於受試者之裝置或其他材料。
於某些實施例中，本發明之實施例亦包括，但不限於：
1.包含第一、第二、第三、及第四結合域以結合至PD-1之多肽，其中該第一及第二結合域結合至PD-1之第一抗原表位且該第三及第四結合域結合至PD-1之第二抗原表位，其中該第一及第二抗原表位不相同。
2.如實施例1之多肽，其中該多肽係PD-1促效劑。
3.如實施例1之多肽，其中該第一及第二結合域相比於結合至PD-1之該第三及第四結合域對於PD-1具有一較低之親和力。
4.如實施例1之多肽，其中該第一及第二結合域相比於結合至PD-1之該第三及第四結合域對於PD-1具有一較高之親和力。
5.如實施例1至4中任一者之多肽，其中該第一、第二、第三、及第四結合域係結合於PD-1之抗體或抗體片段。
6.如實施例5之多肽，其中該第一及第二結合域抗體係於Fab型式且該第三及第四結合域抗體係於scFv型式。
7.如實施例6之多肽，其中該於Fab型式之抗體具有相比於scFv型式之抗體對於PD-1具有較高之親和力。
8.如實施例6之多肽，其中該於Fab型式之抗體具有相比於scFv型式之抗體對於PD-1具有較低之親和力。
9.如前述實施例中任一者之多肽，其中該多肽包含本發明之序列或抗體，如該多肽鏈或片段PD1AB4、PD1AB25、PD1AB30、PD1AB53、PD1AB37。
10.包含結合至PD-1之第一及第二結合域的多肽，其中該第一及第二結合域包含前述本發明之系列，如於PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD- 1抗體表8、PD-1抗體表9、PD-1抗體表10、或PD-1抗體表11所提供之序列。
11.如實施例1之多肽，其中該多肽包含結合至PD-1之第三及第四結合域，其中該第三結合域結合至與該第一結合域相同之抗原表位且該第四節結合域結合至與該第二結合域相同之抗原表位。
12.如實施例11之多肽，其中該第一及第三結合域包含具有相同序列之多肽。
13.如實施例11及12之多肽，其中該第二及第四結合域包含具有相同序列之多肽。
14.如實施例11至13中任一者之多肽，其中該第一及第二結合域具有不同之多肽序列。
15.如實施例10之多肽，其中該第一及第二結合域係結合至PD-1之抗體。
16.如實施例10及15之多肽，其中該第一及第二結合域具有完全相同之序列。
17.如實施例10及之多肽，其中該第一及第二結合域具有不同之序列。
18.如實施例15至16之多肽，其中該第一及第二結合域結合至相同抗原表位。
19.如實施例15至16之多肽，其中該第一及第二結合域結合至不同抗原表位。
20.如實施例15至16中任一者之多肽，其中該第一結合域及第二結合域之一者係Fab抗體且另一者係scFv抗體。
21.如實施例15至20中任一者之多肽，其中該第一及第二結合域係藉由連接子連接。
22.如實施例21之多肽，其中該連接子包含免疫球蛋白恆定區，如IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4恆定區。
23.如實施例21之多肽，其中該連接子包含IgG1免疫球蛋白恆定區。
24.如實施例21至23中任一者之多肽，其中該連接子進一步包含甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/丙胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、或丙胺酸/麩胺酸/絲胺酸連接子。
25.如實施例24之多肽，其中該甘胺酸/絲胺酸連接子包含(GGGGS)n、(GGGSE)n、或(GGGGA)n之序列或其組合，其中個n獨立地係1-4。
26.如實施例1及10之多肽，其中該多肽包含包含連接至scFv抗體之Fab重鏈可變域的第一多肽鏈及包含Fab輕(kappa)鏈可變域之第二多肽鏈，其中該Fab重及輕鏈結合至PD-1且該scFv抗體結合至PD-1之相同或不同之抗原表位。
27.如實施例26之多肽，其中該scFv包含以scFv連接子連接至一輕鏈可變域之重鏈可變域。
28.如實施例27之多肽，其中該scFV連接子包含(GGGGS)n、(GGGSE)n、或(GGGGA)n之序列或其組合，其中各n獨立地係1-4。
29.如實施例1至22中任一者之多肽，其中該第一結合域包含本發明PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體表8、PD-1抗體表9、PD-1抗體表10、或PD-1抗體表11之序列且該第二結合域包含本發明PD-1抗體 表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體表8、PD-1抗體表9、PD-1抗體表10、或PD-1抗體表11之序列。
30.如實施例1至28中任一者之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的本發明之抗體或其抗原結合片段。
31.如實施例30之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含：
(i)包含重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列之重鏈可變域，其中該重鏈CDR1序列具有前述於PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之CDR1序列的任一胺基酸序列；該重鏈CDR2序列具有前述於PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之CDR2序列之任一胺基酸序列；及該重鏈CDR3序列具有前述於PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之CDR3序列之任一胺基酸序列，或前述任一者之變體；以及
(ii)包含輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列之輕鏈可變域，其中該輕鏈CDR1序列具有前述於PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之LCDR1序列的任一胺基酸序列；該輕鏈CDR2序列具有前述於PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之LCDR2序列之任一胺基酸序列；及該輕鏈CDR3序列具有前述於PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之LCDR3序列之任一胺基酸序列，或前述任一者之變體。
32.如實施例30之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含展示於PD-1抗體表4、PD-1抗體表8、PD-1抗體表9、PD-1抗體表10、或PD-1抗體表11之VK序列。
33.如實施例30之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含展示於PD-1抗體表4、PD-1抗體表8、PD-1抗體表9、PD-1抗體表10、或PD-1抗體表11之VH序列。
34.如實施例30之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含展示於本發明PD-1抗體表之VK序列及展示於本發明PD-1抗體表之VH序列。
35.如實施例30之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段獨立地包含PD-1抗體表4之純株ID：PD1AB4(SEQ ID NO：35)、PD1AB30(SEQ ID NO：185)、PD1AB17(SEQ ID NO：113)、PD1AB18(SEQ ID NO：120)、PD1AB20(SEQ ID NO：135)、PD1AB25(SEQ ID NO：169)；PD-1抗體表8之純株ID：PD1AB37 Fab(SEQ ID NO：256)、PD1AB37 scFv(SEQ ID NO：257)；及PD-1抗體表9之純株ID：PD1AB53 Fab(SEQ ID NO：260)、PD1AB53 scFv(SEQ ID NO：261)之重鏈可變區。
36.如實施例30之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段獨立地包含PD-1抗體表4之PD1AB4,PD1AB30,PD1AB17,PD1AB18,PD1AB20, PD1AB25；PD-1抗體Fab表6及PD-1抗體scFv表7之PD1AB37，或PD1AB53之重鏈域的CDRs。
37.如實施例30之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段獨立地包含包含SEQ ID NO：37、171、115、122、137、171、267、238、279之第一CDR；SEQ ID NO：38、172、116、123、138、172、229、239之第二CDR；及SEQ ID NO：39、173、117、124、139、173、230、240之第三CDR的重鏈。
38.如實施例30之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段獨立地包含重鏈，該重鏈包含：
SEQ ID NO：37之第一CDR、SEQ ID NO：38之第二CDR、及SEQ ID NO：39之第三CDR；
SEQ ID NO：171之第一CDR、SEQ ID NO：172之第二CDR、及SEQ ID NO：173之第三CDR；
SEQ ID NO：115之第一CDR、SEQ ID NO：116之第二CDR、及SEQ ID NO：117之第三CDR；
SEQ ID NO：122之第一CDR、SEQ ID NO：123之第二CDR、及SEQ ID NO：124之第三CDR；
SEQ ID NO：137之第一CDR、SEQ ID NO：138之第二CDR、及SEQ ID NO：139之第三CDR；
SEQ ID NO：267之第一CDR、SEQ ID NO：229之第二CDR、及SEQ ID NO：230之第三CDR；
SEQ ID NO：238之第一CDR、SEQ ID NO：239之第二CDR、及SEQ ID NO：240之第三CDR；
SEQ ID NO：279之第一CDR、SEQ ID NO：239之第二CDR、及SEQ ID NO：240之第三CDR；或
SEQ ID NO：267之第一CDR、SEQ ID NO：229之第二CDR、SEQ ID NO：230之第三CDR。
39.如實施例30及35-38之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段獨立地包含PD-1抗體表4之純株ID：PD1AB4(SEQ ID NO：36)、PD1AB30(SEQ ID NO：170)、PD1AB17(SEQ ID NO：114)、PD1AB18(SEQ ID NO：121)、PD1AB20(SEQ ID NO：136)、PD1AB25(SEQ ID NO：170)；PD-1抗體表8之純株ID：PD1AB37 Fab(SEQ ID NO：259)、PD1AB37 scFv(SEQ ID NO：258)；及PD-1抗體表9之純株ID：PD1AB53 Fab(SEQ ID NO：263)、PD1AB53 scFv(SEQ ID NO：262)的輕鏈可變區。
40.如實施例30及35-38之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段獨立地包含PD-1抗體表4之PD1AB4、PD1AB30、PD1AB17、PD1AB18、PD1AB20、或PD1AB25；或PD-1抗體Fab表6及PD-1抗體scFv表之PD1AB37之輕鏈域的CDRs之輕鏈可變區。
41.如實施例30及35-38之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段獨立地包含包含SEQ ID NO：40、118、125、140、174、276之一第一CDR；SEQ ID NO：19、126、47、175、227、237之一第二CDR，及SEQ ID NO：41、119、127、141、176之一第三CDR之輕鏈可變區。
42.如實施例30及35至38之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段獨立地包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：
SEQ ID NO：40之第一CDR、SEQ ID NO：19之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR；
SEQ ID NO：118之第一CDR、SEQ ID NO：19之第二CDR、及SEQ ID NO：119之第三CDR；
SEQ ID NO：125之第一CDR、SEQ ID NO：126之第二CDR、及SEQ ID NO：127之第三CDR；
SEQ ID NO：140之第一CDR、SEQ ID NO：47之第二CDR、及SEQ ID NO：141之第三CDR；
SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：175之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR；
SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：227之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR；
SEQ ID NO：40之第一CDR、SEQ ID NO：237之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR；
SEQ ID NO：276之第一CDR、SEQ ID NO：237之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR；或
SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：227之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR。
43.如實施例30及35至38之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段獨立地包含：
包含SEQ ID NO：37之第一CDR、SEQ ID NO：38之第二CDR、及SEQ ID NO：39之第三CDR的重鏈可變域及包含SEQ ID NO：40之第一CDR、SEQ ID NO：19之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：171之第一CDR、SEQ ID NO：172之第二CDR、及SEQ ID NO：173之第三CDR的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：175一第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：115之第一CDR、SEQ ID NO：116之第二CDR、及SEQ ID NO：117之第三CDR的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：118之第一CDR、SEQ ID NO：19之第二CDR、及SEQ ID NO：119之第三CDR的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：122之第一CDR、SEQ ID NO：123之第二CDR、及SEQ ID NO：124之第三CDR的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：125 之第一CDR、SEQ ID NO：126之第二CDR、及SEQ ID NO：127之第三CDR的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：137之第一CDR、SEQ ID NO：138之第二CDR、及SEQ ID NO：139之第三CDR的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：140之第一CDR、SEQ ID NO：47之第二CDR、及SEQ ID NO：141之第三CDR的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：171之第一CDR、SEQ ID NO：172之第二CDR、及SEQ ID NO：173之第三CDR的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：175之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：267之第一CDR、SEQ ID NO：229之第二CDR、及SEQ ID NO：230之第三CDR的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：227之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：238之第一CDR、SEQ ID NO：239之第二CDR、及SEQ ID NO：240之第三CDR的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：40之第一CDR、SEQ ID NO：237之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：279之第一CDR、SEQ ID NO：239之第二CDR、及SEQ ID NO：240之第三CDR的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：276之第一CDR、SEQ ID NO：237之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：267之第一CDR、SEQ ID NO：229之第二CDR、及SEQ ID NO：230之第三CDR的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：227之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR的輕鏈可變區；
44.如實施例30及35至38之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段獨立地包含重鏈，其包含SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：185、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：256、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：260、或SEQ ID NO：261之序列，及輕鏈，其包含SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：258、SEQ ID NO：263、或SEQ ID NO：262之序列。
45.如實施例30及35至38之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段獨立地包含：
包含SEQ ID NO：35之序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：36之序列的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：113之序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：114之序列的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：120之序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：121之序列的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：135之序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：136之序列的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：169之序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：170之序列的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：185之序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：170之序列的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：256之序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：259之序列的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：257之序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：258之序列的輕鏈可變區；
包含SEQ ID NO：260之序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：263之序列的輕鏈可變區；或
包含SEQ ID NO：261之序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：262之序列的輕鏈可變區。
46.如實施例1及10之多肽，其中該多肽包含第一多肽鏈及第二多肽鏈，其中：
該第一多肽鏈具有自N端至C端之通式：
[VH-A]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[VH-B]-[連接子2]-[VK-B]；或
[VH-A]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[VK-B]-[連接子2]-[VH-B]；
該第二多肽鏈具有自N端至C端之通式：
[VK-A]-[CK]，
其中：
VH-A=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
VK-A=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
VH-B=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
VK-B=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
CH1=人類IgG1之恆定重鏈域1；
CH2=人類IgG1之恆定重鏈域2；
CH3=人類IgG1之恆定重鏈域3；
CK=kappa輕鏈之恆定域；
連接子1係甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/丙胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、或丙胺酸/麩胺酸/絲胺酸連接子；
連接子2係甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/丙胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、或丙胺酸/麩胺酸/絲胺酸連接子，
其中VH-A、VK-A、VH-B、及VK-B能係來自相同或不同之抗體。
47.如實施例1及10之多肽，其中該多肽包含第一多肽鏈及第二多肽鏈，其中：
該第一多肽鏈具有自N端至C端之通式：
[VH-B]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[VH-A]-[連接子2]-[VK-A]；或
[VH-B]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[VK-A]-[連接子2]-[VH-A]；
該第二多肽鏈具有自N端至C端之通式：
[VK-B]-[CK]，
其中：
VH-A=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
VK-A=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
VH-B=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
VK-B=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
CH1=人類IgG1之恆定重鏈域1，如本文內之提供；
CH2=人類IgG1之恆定重鏈域2，如本文內之提供；
CH3=人類IgG1之恆定重鏈域3，如本文內之提供；
CK=kappa輕鏈之恆定域，如本文內之提供；
連接子1係甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/丙胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、或丙胺酸/麩胺酸/絲胺酸連接子；
連接子2係甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/丙胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、或丙胺酸/麩胺酸/絲胺酸連接子，
其中VH-A、VK-A、VH-B、及VK-B能係來自相同或不同之抗體。
48.如實施例46或47之多肽，其中VH-A及VH-B獨立地包含：
(i)一包含重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列之重鏈可變域，其中該重鏈CDR1序列具有前述PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之CDR1序列之任一胺基酸序列；該重鏈CDR2具有前述PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之CDR2序列之任一胺基酸序列；該重鏈CDR3序列 具有前述PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之CDR3序列之任一胺基酸序列，或前述任一者之變體。
49.如實施例48之多肽，其中VH-A及VH-B係不同的。
50.如實施例46至49中任一者之多肽，其中VH-A包含包含一SEQ ID NO：37之第一CDR、SEQ ID NO：38之第二CDR、SEQ ID NO：39之第三CDR的重鏈可變域。
51.如實施例46至49中任一者之多肽，其中VH-B包含包含一SEQ ID NO：37之第一CDR、SEQ ID NO：38之第二CDR、SEQ ID NO：39之第三CDR的重鏈可變域。
52.如實施例46之多肽，其中VH-A包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：37之第一CDR、SEQ ID NO：38之第二CDR、SEQ ID NO：39之第三CDR的，且VH-B包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：37之第一CDR、SEQ ID NO：38之第二CDR、SEQ ID NO：39之第三CDR。
53.如實施例46至49中任一者之多肽，其中VH-A包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：171之第一CDR、SEQ ID NO：172之第二CDR、及SEQ ID NO：173之第三CDR。
54.如實施例46至49中任一者之多肽，其中VH-B包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：171之第一CDR、SEQ ID NO：172之第二CDR、及SEQ ID NO：173之第三CDR。
55.如實施例46至49中任一者之多肽，其中VH-A包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：267之第一CDR、SEQ ID NO：229之第二CDR、及SEQ ID NO：230之第三CDR區。
56.如實施例46至49中任一者之多肽，其中VH-B包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：267之第一CDR、SEQ ID NO：229之第二CDR、及SEQ ID NO：230之第三CDR。
57.如實施例46至49中任一者之多肽，其中VH-A包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：238之第一CDR、SEQ ID NO：239之第二CDR、及SEQ ID NO：240之第三CDR。
58.如實施例46至49中任一者之多肽，其中VH-B包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：238之第一CDR、SEQ ID NO：239之第二CDR、及SEQ ID NO：240之第三CDR。
59.如實施例46至49中任一者之多肽，其中VH-A包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：279之第一CDR、SEQ ID NO：239之第二CDR、及SEQ ID NO：240之第三CDR。
60.如實施例46至49中任一者之多肽，其中VH-B包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：279之第一CDR、SEQ ID NO：239之第二CDR、及SEQ ID NO：240之第三CDR。
61.如實施例46至49中任一者之多肽，其中VH-A包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：267之第一CDR、SEQ ID NO：229之第二CDR、及SEQ ID NO：230之第三CDR。
62.如實施例46至49中任一者之多肽，其中VH-B包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：267之第一CDR、SEQ ID NO：229之第二CDR、及SEQ ID NO：230之第三CDR。
63.如實施例46至49中任一者之多肽，其中VH-A包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：279之第一CDR、SEQ ID NO：239之第二CDR、及SEQ ID NO：240之第三CDR且VH-B包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：267之第一CDR、SEQ ID NO：229之第二CDR、及SEQ ID NO：230之第三CDR。
64.如實施例46至49中任一者之多肽，其中VH-A包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：267之第一CDR、SEQ ID NO：229之第二CDR、及SEQ ID NO：230之第三CDR且VH-B包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：238之第一CDR、SEQ ID NO：239之第二CDR、及SEQ ID NO：240之第三CDR。
65.如實施例46至63中任一者之多肽，其中VK-A及VK-B各自獨立地包含輕鏈可變區，其包含輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列之輕鏈，其中該輕鏈CDR1序列具有前述PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之LCDR1序列的任一胺基酸序列；該輕鏈CDR2序列具有前述PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之LCDR2序列的任一胺基酸序列；該輕鏈CDR3序列具有前述PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之LCDR3序列的任一胺基酸序列，或前述任一者之變體。
66.如實施例46至65中任一者之多肽，其中VK-A或VK-B包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：40之第一CDR、SEQ ID NO：19之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR的輕鏈可變區。
67.如實施例46至65中任一者之多肽，其中VK-A或VK-B包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：175之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR的輕鏈可變區。
68.如實施例46至65中任一者之多肽，其中VK-A或VK-B包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：227之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR的輕鏈可變區。
69.如實施例46至65中任一者之多肽，其中VK-A或VK-B包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：40之第一CDR、SEQ ID NO：237之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR的輕鏈可變區。
70.如實施例46至65中任一者之多肽，其中VK-A或VK-B包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：276之第一CDR、SEQ ID NO：237之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR。
71.如實施例46至65中任一者之多肽，其中VK-A或VK-B包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：227之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR。
72.如實施例46或47之多肽，其中：
VH-A包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：37之第一CDR、SEQ ID NO：38之第二CDR、及SEQ ID NO：39之第三CDR；
VH-B包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：171之第一CDR、SEQ ID NO：172之第二CDR、及SEQ ID NO：173之第三CDR；
VK-A包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：40之第一CDR、SEQ ID NO：19之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR；
VK-B包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：175之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR；
VK-A包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：276之第一CDR、SEQ ID NO：237之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR；
VK-B包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：227之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR；或
VK-A包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：227之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR；
VK-B包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：40之第一CDR、SEQ ID NO：237之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR。
73.如實施例46至72中任一者之多肽，其中連接子1係(GGGGS)n，其中n係1-4。
74.如實施例46至72中任一者之多肽，其中連接子2係(GGGGS)n，其中n係1-4。
75.一雙特異性多肽，其包含第一、第二、第三、及第四結合域，其中該第一、第二、第三、及第四結合域中之二者結合至PD-1之第一抗原結合位且剩餘二者結合至PD-1之第二抗原表位，其中該第一及第二抗原表位係不同之抗原表位。
76.如實施例75之雙特異性多肽，其中該第一及第二抗原表位係非重疊之抗原表位。
77.如實施例75或76之雙特異性多肽，其中該第一、第二、第三、及第四結合域包含PD-1抗體，如本文所提供之抗體。
78.如實施例75至77中任一者之雙特異性多肽，其中該第一、第二、第三、及第四結合域中二者包含自PD1AB4、PD1AB30、PD1AB17、PD1AB18、PD1AB20、PD1AB25、PD1AB37、或PD1AB53中一者之CDRs，且剩餘二者包含自PD1AB4、PD1AB30、PD1AB17、PD1AB18、PD1AB20、PD1AB25、PD1AB37、或PD1AB53中一者之CDRs，其中該結合域不全然相同。
79.包含實施例1至78中任一者之多肽、蛋白質、或抗體的醫藥組成物。
80.一種用於治療受試者內紅斑性狼瘡(SLE)、Aicardi-Goutieres症候群、對稱紋狀體壞死、伴有脂質失養症及升溫的慢性非典型嗜中性白血球皮膚炎(CANDLE)、完全不穿透(complete non-penetrance)、遺傳性對稱性色素異常、家族性凍瘡樣狼瘡、日本自體免疫症候群與脂質失養(Japanese autoinflammatory syndrome with lipodystrophy(JASL))、關節攣縮、肌肉萎縮、小球性貧血、脂膜炎、及脂質失養(JMP)、孟德爾易感性分枝桿菌病(Mendelian susceptibility to mycobacterial disease(MSMD))、Nakajo-Nishimura症候群、視網膜血管病變與腦白質失養(retinal vasculopathy with cerebral leukodystrophy(RVCL))、痙攣性癱瘓、嬰兒期STING相關血管樣病變(STING-associated vasculopathy with onset in infancy(SAVI))、Singleton-Merten症候群、或脊椎軟骨瘤(spondylochondromatosis(SPENCD))之方法，該方法包含給藥予受試者實施例1至65中任一者之多肽或實施例66之組成物。
81.一種用於治療罹患炎症性腸病之受試者的方法，該方法包含給藥以實施例1至65中任一者之多肽、蛋白質或抗體或實施例79之醫藥組成物予受試者以治療該炎症性腸病。
82.如實施例81之方法，其中該罹患炎症性腸病之受試者具有克羅恩氏症。
83.如實施例81之方法，其中該罹患炎症性腸病之受試者具有潰瘍性結腸炎。
84.一種用於治療罹患自體免疫性肝炎之患者的方法，該方法包含給藥以實施例1至78中任一者之多肽、蛋白質或抗體或實施例79之醫藥組成物予受試者以治療該自體免疫性肝炎。
85.一種用於治療罹患原發性硬化性膽管炎之患者的方法，該方法包含給藥以實施例1至78中任一者之多肽、蛋白質或抗體或實施例79之醫藥組成物予受試者以治療該原發性硬化性膽管炎。
86.一種用於治療罹患第一型糖尿病之患者的方法，該方法包含給藥以實施例1至78中任一者之多肽、蛋白質或抗體或實施例79之醫藥組成物予受試者以治療該第一型糖尿病。
87.一種用於治療受移植受試者的方法，該方法包含給藥以治療上有效量之實施例1至78中任一者之多肽、蛋白質或抗體或實施例79之醫藥組成物予該受試者，因此治療受移植之受試者。
88.一種用於治療具有移植捐贈組織之受試者內移植物抗宿主疾病的方法，該方法包含給藥以治療上有效量之實施例1至78中任一者之多肽、蛋白質或抗體或實施例79之醫藥組成物予該受試者。
89.一種用於治療具有、或具風險、或具較高風險患有自體免疫障礙之受試者的方法，該方法包含給藥以治療上有效量之實施例1至78中任一者之多肽、蛋白質或抗體或實施例79之醫藥組成物予該受試者，由此治療該受試者。
90.一種用於促效於受試者內PD-1活性之方法，該方法包含給藥以治療上有效量之實施例1至78中任一者之多肽、蛋白質或抗體或實施例79之醫藥組成物予該受試者，由此治療該受試者。
91.一種治療受試者內干擾素病之方法，該方法包含給藥以治療上有效量之實施例1至78中任一者之多肽、蛋白質或抗體或實施例79之醫藥組成物予該受試者，由此治療該受試者。
92.如實施例91之方法，其中該干擾素病係第一型干擾素病。
93.如實施例91或92之方法，其中該受試者係有需要的受試者。
94.如實施例例91至93中任一者之方法，其中該第一型干擾素病係紅斑性狼瘡(SLE)、Aicardi-Goutieres症候群、對稱紋狀體壞死、伴有脂質失養症及升溫的慢性非典型嗜中性白血球皮膚炎(CANDLE)、完全不穿透(complete non-penetrance)、遺傳性對稱性色素異常、家族性凍瘡樣狼瘡、日本自體免疫症候群與脂質失養(Japanese autoinflammatory syndrome with lipodystrophy(JASL))、關節攣縮、肌肉萎縮、小球性貧血、脂膜炎、及脂質失養(JMP)、孟德爾易感性分枝桿菌病(Mendelian susceptibility to mycobacterial disease(MSMD))、Nakajo-Nishimura症候群、視網膜血管病變與腦白質失養(retinal vasculopathy with cerebral leukodystrophy(RVCL))、痙攣性癱瘓、嬰兒期STING相關血管樣病變(STING-associated vasculopathy with onset in infancy(SAVI))、Singleton-Merten症候群、或脊椎軟骨瘤(spondylochondromatosis(SPENCD))。
95.一種用於抑制自漿細胞樣樹突狀細胞產生之干擾素的方法，該方法包含給藥予該受試者以一治療上有效量之實施例1至78中任一者之一多肽、蛋白質或抗體或實施例79之醫藥組成物。
96.如實施例95之方法，其中該漿細胞樣樹突狀細胞係活化的漿細胞樣樹突狀細胞。
97.如實施例95或96之方法，其中該活化的漿細胞樣樹突狀細胞係藉TLR9介導所活化。
98.如實施例95至97中任一者之方法，其中該干擾素之產生相較於無該實施例1至78中任一者之多肽、蛋白質或抗體或實施例79之醫藥組成物存在下，減少約或至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、或95%。
99.一種用於治療TLR9介導之障礙的方法，該方法包含給藥予該受試者以治療上有效量之實施例1至78中任一者之多肽、蛋白質或抗體或實施例79之醫藥組成物。
100.如實施例99之方法，其中該TLR9介導之障礙係紅斑性狼瘡(SLE)、Aicardi-Goutieres症候群、對稱紋狀體壞死、伴有脂質失養症及升溫的慢性非典型嗜中性白血球皮膚炎(CANDLE)、完全不穿透(complete non-penetrance)、遺傳性對稱性色素異常、家族性凍瘡樣狼瘡、日本自體免疫症候群與脂質失養(Japanese autoinflammatory syndrome with lipodystrophy(JASL))、關節攣縮、肌肉萎縮、小球性貧血、脂膜炎、及脂質失養(JMP)、孟德爾易感性分枝桿菌病(Mendelian susceptibility to mycobacterial disease(MSMD))、Nakajo-Nishimura症候群、視網膜血管病變與腦白質失養(retinal vasculopathy with cerebral leukodystrophy(RVCL))、痙攣性癱瘓、嬰兒期STING相關血管樣病變(STING-associated vasculopathy with onset in infancy(SAVI))、Singleton-Merten症候群、或脊椎軟骨瘤(spondylochondromatosis(SPENCD))
101.一種用於抑制於細胞或受試者內OAS1、IFIT3、MX1及IFN-β1表現的方法，該方法包含給藥予該受試者以治療上有效量之實施例1至78中任一者之多肽、蛋白質或抗體或實施例79之醫藥組成物。
102.如實施例101之方法，其中該OAS1、IFIT3、MX1及IFN-β1表現係基因表現。
103.如實施例101或102之方法，其中該細胞係漿細胞樣樹突狀細胞。
104.如實施例101至103之方法，其中該漿細胞樣樹突狀細胞係活化的漿細胞樣樹突狀細胞。
105.一種編碼實施例1至78中任一者之多肽、蛋白質或抗體的核酸。
106.一種包含實施例105之核酸的載體。
107.一種包含實施例105之核酸或實施例106之載體的細胞。
108.一種製造實施例1至78中任一者之多肽、蛋白質或抗體的方法，該方法包含培養實施例107之細胞以製造實施例1至78中任一者之該多肽、蛋白質或抗體。
109.一種用於製造一編碼實施例1至78中任一者之該多肽、蛋白質或抗體之核酸序列的方法，包含
a)提供包含編碼目標部分體之序列的載體並插入編碼作用體結合/調節部分體之序列至該載體中以形成編碼治療化合物之序列；或
b)提供包含編碼作用體結合/調節部分體之序列的載體並插入編碼目標部分體之序列以形成編碼治療化合物之序列，由此製造編碼實施例1至78中任一者之該多肽、蛋白質或抗體之序列。
實例
實例1.雙特異性PD-1促效劑展示強可溶性的PD-1促效作用
製造包含PD1AB4、PD1AB30、PD1AB17、PD1AB18、PD1AB20、或PD1AB25中二者之CDRs的雙特異性多肽並測試其促效PD-1活性之能力。所造之該抗體型式係描繪於例圖2中。本實例發現該雙特異性抗體相比於非雙特異性之分子於促效PD-1具有令人意外且不可預期的優異能力。
實例2.藉由生物感應器分析分析雙特異性分子結合於人類或小鼠之PD-1
抗人類IgG Fc(AHC)生物感應器係置於分析緩衝液中平衡20分鐘。測試標的係於分析緩衝液(1x PBS,1% BSA,0.05%Tween 20)中稀釋至濃度為10μg/mL。製備人類PD-1之七位點連續稀釋(自1000nM降至15.625nM(人類PD-1)或2000nM降至31.25nM(小鼠PD-1))於分析緩衝液中。測試標的係加載於管尖180秒，接續以180秒之與PD-1的結合階段及180秒之與分析緩衝液的解離階段。PD1AB43以1.87E-08之Kd(M)、3.21E-10之KD誤差、6.38E+04之Kon(1/ms)、3.74E+02之Kon誤差、1.20E-03之Kdis(1/s)、1.93E-05之Kdis誤差、及0.1549之響應 度結合於人類PD-1；且PD1AB53展示6.29E-10之Kd、1.64E-10之KD誤差、6.76E+04之Kon、2.42E+02之Kon誤差、4.26E+02之Kdis、1.11E-05之Kdis誤差、及0.2273之響應度。PD1AB43以1.43E-06之Kd(M)、5.88E-08之KD誤差、2.82E+04之Kon(1/ms)、9.91E+04之Kon誤差、4.04E-02之Kdis(1/s)、8.53E-04之Kdis誤差、及0.0546之響應度結合於小鼠PD-1；且PD1AB53展示3.84E-06之Kd、4.27E-07之KD誤差、5.94E+03之Kon、6.33E+02之Kon誤差、2.28E-02之Kdis、7.00E-04之Kdis誤差、及0.0367之響應度。該雙特異性抗體展示其於人類及小鼠之PD-1之結合。
實例.3 藉由ELISA分析雙特異性分子結合人類、犬、或小鼠之PD-1
在孔盤中塗覆於PBS中的2μg/mL huPD-1並放置於4℃過夜。以1x PBS與1%BSA阻抗該孔盤。抗體自50nM至0.05nM的3倍連續稀釋抗體進行結合力之重複測試。抗體之結合係藉由抗Kappa-HRP抗體偵測，訊號為去除背景後與二抗結合之訊號。PD1AB43、PD1AB86、PD1AB87、PD1AB88、PD1AB53、PD1AB69、PD1AB64、及PD1AB76展示其於人類、犬、或小鼠之PD-1的結合。雙特異性分子展示其於人類、犬、或小鼠之PD-1的結合。
實例4.藉由生物感應器分析分析雙特異性分子結合至人類、犬、或小鼠之PD-1
抗人類IgG Fc(AHC)生物感應器係置於分析緩衝液中平衡20分鐘。測試標的係於分析緩衝液(1x PBS,1% BSA,0.05%Tween 20)中稀釋至濃度為10μg/mL。製備人類PD-1之七位點連續稀釋(自1000nM降 至15.625nM(人類PD-1)或2000nM降至31.25nM(小鼠PD-1))於分析緩衝液中。測試標的係加載於管尖180秒，接續以180秒之與PD-1的結合階段及180秒之與分析緩衝液的解離階段。PD1AB53以3.30E-08之Kd(M)、4.13E+04之Kon(1/ms)、及1.36E-03之Kdis(1/s)結合於人類PD-1；且PD1AB64展示2.13E-08之Kd、3.95E+04之Kon、8.41E-04之Kdis；PD1AB37以1.83E-08之Kd(M)、4.50E+04之Kon(1/ms)、8.24E-04之Kdis(1/s)；且PD1AB38展示5.07E-08之Kd、5.64E+04之Kon、2.86E-03之Kdis。PD1AB53以1.35E-08之Kd(M)、3.94E+04之Kon(1/ms)、及5.31E-04之Kdis(1/s)結合於犬之PD-1；PD1AB64展示1.66E-08之Kd、3.87E+04之Kon、及6.41E-04之Kdis；PD1AB37展示1.54E-08之Kd、3.68E+04之Kon、及5.66E-04之Kdis；且PD1AB38展示2.83E-08之Kd、3.79E+04之Kon、及1.08E-03之Kdis。PD1AB53以bound to mouse PD-12.46E-05之Kd(M)、2.67E+03之Kon(1/ms)、及6.57E-02之Kdis(1/s)結合於小鼠之PD-1上；PD1AB64係弱結合；PD1AB37展示4.86E-06之Kd、5.05E+03之Kon、及2.45E-02之Kdis；且PD1AB38展示9.79E-07之Kd、2.34E+04之Kon、及2.29E-02之Kdis。雙特異性分子展示其於人類、犬、或小鼠之PD-1的結合。
實例.5 藉由生物感應器分析雙特異性分子以一致之親和力結合至人類、犬、或小鼠之PD-1
抗人類IgG Fc(AHC)或卵白素(SA)生物感應器係置於分析緩衝液中平衡20分鐘。於分析緩衝液(1x PBS,1% BSA,0.05%Tween 20)中稀釋Fc-標記之小鼠及犬PD-1至濃度為5μg/mL及生物素化huPD-1標 的至濃度為5μg/mL。製備測試標的Fab及scFv片段之七位點連續稀釋於分析緩衝液PD1AB53 Fab(500nM),PD1AB37及PD1AB38 Fab(1000nM)；scFv Fragments(2000nM)中。PD-1係加載於管尖180秒，接續以180秒之與PD-1的結合階段及180秒之於分析緩衝液的解離階段。PD1AB37之該Fab部分體以330nM之Kd結合至人類PD-1，同時該scFv部分體以89.9nM Kd結合；PD1AB38以140nM之Kd結合至人類PD-1，同時該scFv部分體以89.9nM Kd結合；PD1AB53之該Fab部分體以32.6nM之Kd結合至人類PD-1，同時該scFv部分體以1.35uM Kd結合；PD1AB37之該Fab部分體以497nM之Kd結合至犬PD-1，同時該scFv部分體以58.6nM Kd結合；PD1AB38之該Fab部分體以172nM之Kd結合至犬PD-1，同時該scFv部分體以58.6nM Kd結合；PD1AB53之該Fab部分體以30.3nM之Kd結合至犬PD-1，同時該scFv部分體以1.17uM Kd結合；PD1AB37之該Fab部分體以1.35uM之Kd結合至小鼠PD-1，同時該scFv部分體未展示結合；PD1AB38以176nM之Kd結合至小鼠PD-1，同時該scFv部分體未展示結合；PD1AB53之該Fab部分體未展示結合於小鼠PD-1，同時該scFv部分體以1.06uM Kd結合。
實例.6 藉由SEC-MALS分析雙特異性分子展示預期之分子量
PD1AB53、PD1AB37、及PD1AB38之分子量係使用SEC-MALS根據標準指南取得。簡而言之，20μL之測試標的係注入Zenix SEC-300管柱並於0.35mL/分鐘之速率洗滌10分鐘。PD1AB53之預期分子量係198.4kDa，實際展示之分子量係205.7kDa，包含3.4%之誤差及0.025kDa之多醣。PD1AB37之預期分子量係197.7kDa，實際展示之分子 量係188.9kDa，包含4.3%之誤差及0.028kDa之多醣。PD1AB38之預期分子量係197.9kDa，實際展示之分子量係195.4kDa，包含3.1%之誤差及0.049kDa之多醣。雙特異性分子反應接近於其預期之大小且未展示出非預期之醣化作用。
實例.7 雙特異性分子PD1AB53具有良好之貯存穩定性特性
測試標的係濃縮至濃度約30mg/mL並於4℃及37℃中培養0、3、14、21及28天。約15μg之測試標的係注射於AdvanceBio SEC-300Å管柱並於於0.35mL/分鐘之速率洗滌10分鐘。PD1AB53係配置於：a)25mM醋酸鈉、100mM氯化鈉，pH 6.0；b)25mM醋酸鈉、100mM氯化鈉、200mM蔗糖，pH 6.0；及c)25mM磷酸鈉、250mM氯化鈉，pH7.0之配方中。穩定度係以%POI進行計算，第0天於a)中係99.2%且於b)中係99.3%；第3天於a)中係99.1%、於b)中係99.3%、且於c)中係99.1%；第14天於a)中係98.9%、於b)中係99.2%、且於c)中係99.0%；第21天於a)中係98.9%、於b)中係99.0%、且於c)中係98.7%；及第28天於a)中係98.9%、於b)中係99.0%、且於c)中係93.6%。PD1AB53於4℃中具有28天以內於醋酸鈉緩衝液中濃度約23mg/ml之良好的穩定性，並於37℃時展示聚合作用。
實例.8 雙特異性分子PD1AB37具有良好之貯存穩定性特性
測試標的係濃縮至濃度約30mg/mL並於4℃及37℃中培養0、3、14、21及28天。約15μg之測試標的係注射於AdvanceBio SEC-300Å管柱並於於0.35mL/分鐘之速率洗滌10分鐘。PD1AB37係配置於：a)25mM磷酸鈉、250mM氯化鈉，pH 7.0；b)25mM磷酸鈉、250mM氯 化鈉、200mM蔗糖，pH 7.0；及c)25mM磷酸鈉、250mM氯化鈉、200mM麩胺酸，pH7.0之配方中。穩定度係以%POI進行計算，第0天於a)中係61.9%、於b)中係63.7%、且於c)中係62.6%；第3天於a)中係60.1%、於b)中係61.6%、且於c)中係62.2%；第14天於a)中係57.2%、於b)中係64.9%、且於c)中係62.2%；第21天於a)中係60.5%、於b)中係65.1%、且於c)中係62.3%；及第28天於a)中係59.1%、於b)中係65.2%、且於c)中係60.8%。PD1AB37於4℃中具有28天以內於磷酸鈉緩衝液中濃度約15mg/ml之良好的穩定性且展示聚合作用，並於進一步之貯存病症37℃時展示聚合作用及輕微之降解作用以示證明。
實例.9 雙特異性分子PD1AB38具有良好之貯存穩定性特性
測試標的係濃縮至濃度約30mg/mL並於4℃及37℃中培養0、3、14、21及28天。約15μg之測試標的係注射於AdvanceBio SEC-300Å管柱並於於0.35mL/分鐘之速率洗滌10分鐘。PD1AB38係配置於：a)25mM磷酸鈉、250mM氯化鈉，pH 7.0；b)25mM磷酸鈉、250mM氯化鈉、200mM蔗糖，pH 7.0之配方中。穩定度係以%POI進行計算，第0天於a)中係72.8%、於b)中係78.0%；第3天於a)中係70.3%、於b)中係77.1%；第14天於a)中係67.6%、於b)中係77.1%；第21天於a)中係66.6%、於b)中係77.2%；及第28天於a)中係71.9%、於b)中係76.9%。PD1AB38於4℃中具有28天以內於磷酸鈉緩衝液中濃度約15mg/ml之良好的穩定性且展示聚合作用，並於進一步之貯存病症37℃時展示聚合作用及輕微之降解作用以示證明。
實例.10 雙特異性分子具有低多反應性
多反應性結合係能相關於人體內的藥物動力(PK)低下。簡而言之，在孔盤中塗以於1x PBS中的1μg/mL dsDNA並放置於4℃過夜。以1x PBS與1%BSA阻抗該孔盤。抗體係測試於100nM以三重複試驗其結合能力。抗體之結合係藉由抗Kappa-HRP抗體偵測，訊號為去背後與二抗結合之訊號。測試標的包括PD1AB53、PD1AB37、PD1AB38、陰性對照組及陽性對照組，其各自於100nM、1-nM、或1nM。PD1AB53、PD1AB37、及PD1AB38於所有濃度中皆展示出低多反應性，且PD1AB53於所有測試標的中展示最低之多反應性。PD1AB37展示出相較於PD1AB38較低之多反應性。雙特異性分子展示低多反應性。
實例.11 雙特異性分子展示非自交互作用
抗體自交互作用能係以PK低下或高稠度作為指標。簡而言之，塗以抗人類Ig捕捉抗體之奈米金粒子係與100nM測試標的、控制組抗體、或緩衝液一同培養2小時。吸收值係測量自510-570nm以判定個別抗體之最大吸收值波長(電漿子波長)。Δ波峰吸收值波長係計算以與緩衝液控制組進行比較。藉由AC-SINS分析，雙特異性分子展示最大吸收值波長之偏移，顯示出非常低之自交互作用。據此，雙特異性抗體展示出低自交互作用。
實例.12 雙特異性分子展示良好熱穩定性
測試標的螢光係以1℃/分鐘之增加速率測量自25-95℃。Tm係計算自一階微分方程式之極值且Tagg係藉由於266及nm之吸收值測量。一般來說，Tagg266係起始小聚合結構之溫度的指標，同時Tagg473係起始大聚合結構之溫度的指標。PD1AB53顯示68℃之Tm1，同時其Tm2 及3皆稍高於80℃。PD1AB37及PD1AB38顯示67℃之類似的Tm1測量值，及73℃之Tm2與75℃之Tm3。PD1AB53顯示僅低於80℃之Tagg266及稍高於80℃之Tagg473。PD1AB37顯示稍低於70℃之Tagg266及稍高於70℃以上之Tagg473。PD1AB38顯示稍低於70℃之Tagg266及稍高於70℃以上之Tagg473。據此，雙特異性分子展示出熱穩定性。
實例.13 雙特異性分子展示低電荷異質性
該樣品係稀釋於一甲基纖維素、4M尿素、3-10 Pharmalyte®兩性電解質(4%)、5mM精胺酸、及pI標記(如下指示)之矩陣中。該混合物係送至iCE3 IEF分析儀(ProteinSimple)中並預聚焦於1500V接續以聚焦至3000V。個別波峰之等電位點係計算自pI標記之囊括範圍。PD1AB53與PD1AB38展示出大於8.0之pI值。PD1AB53 and PD1AB38具有優異於配方及純化步驟開發之pI性質。
實例.14 藉由質譜儀分析PD1AB53具有正確之質量
樣品係藉由胍及DTT變性及/或還原並藉由PNGase F(MEDNA Bio M3104)去醣基化。該樣品係藉由結合Waters ACQUITY UPLC偵測器之Xevo G2-XS QTOF質譜儀使用ACQUITY UPLC Protein BEH SEC管柱進行分析。醣基化狀態假設醣基化質量為G0F(1445Da)。非還原狀態假設雙硫鍵質量為各二硫化物(22)具-2Da。經驗性判斷PD1AB53於非還原醣基化狀態之分子質量係201295Da，且預期質量係201296Da。經驗性判斷PD1AB53於非還原去醣基化狀態之分子質量係198406Da，且預期質量係198412Da。經驗性判斷PD1AB53於還原醣基化狀態之分子質量係76416Da及24255Da，且預期質量係個別為76415Da 及24258Da。經驗性判斷PD1AB53於還原去醣基化狀態之分子質量係74970Da及24253Da，且預期質量係個別為74970Da及24258Da。經驗性判斷之質量係於每狀態中6Da以內之誤差相符合於該計算之質量。
實例.15 藉由質譜儀分析PD1AB37具有正確之質量
樣品係藉由胍及DTT變性及/或還原並藉由PNGase F(MEDNA Bio M3104)去醣基化。該樣品係藉由結合Waters ACQUITY UPLC偵測器之Xevo G2-XS QTOF質譜儀使用ACQUITY UPLC Protein BEH SEC管柱進行分析。醣基化狀態假設醣基化質量為G0F(1445Da)。非還原狀態假設雙硫鍵質量為各二硫化物(22)具-2Da。經驗性判斷PD1AB37於非還原醣基化狀態之分子質量係200545Da，且預期質量係200545Da。經驗性判斷PD1AB37於非還原去醣基化狀態之分子質量係197655Da，且預期質量係197658Da。經驗性判斷PD1AB37於還原醣基化狀態之分子質量係77122Da及23174Da，且預期質量係個別為77121Da及23175Da。經驗性判斷PD1AB37於還原去醣基化狀態之分子質量係75676Da及23174Da，且預期質量係個別為65675Da及23175Da。經驗性判斷之質量係於每狀態中2Da以內之誤差相符合於該計算之質量。
實例.16 藉由質譜儀分析PD1AB38具有正確之質量
樣品係藉由胍及DTT變性及/或還原並藉由PNGase F(MEDNA Bio M3104)去醣基化。該樣品係藉由結合Waters ACQUITY UPLC偵測器之Xevo G2-XS QTOF質譜儀使用ACQUITY UPLC Protein BEH SEC管柱進行分析。醣基化狀態假設醣基化質量為G0F(1445Da)。非還原狀態假設雙硫鍵質量為各二硫化物(22)具-2Da。經驗性判斷 PD1AB38於非還原醣基化狀態之分子質量係200765Da，且預期質量係200767Da。經驗性判斷PD1AB38於非還原去醣基化狀態之分子質量係197877Da，且預期質量係197880Da。經驗性判斷PD1AB38於還原醣基化狀態之分子質量係77134Da及23266Da，且預期質量係個別為77134Da及23271Da。經驗性判斷PD1AB38於還原去醣基化狀態之分子質量係75690Da及23264Da，且預期質量係個別為75689Da及23271Da。經驗性判斷之質量係於每狀態中7Da以內之誤差相符合於該計算之質量。
實例.17 PD1AB38、PD1AB37、及PD1AB53於可變域CDRs中展示最小限度之轉譯後修飾
以DTT及IAM處理樣品，接續以胰蛋白/Lys-C進行分解。該分解後樣品係藉由結合Waters ACQUITY UPLC偵測器之Xevo G2-XS QTOF質譜儀使用Protein BEH C18管柱進行分析。數據顯示於PD1AB38、PD1AB37、及PD1AB53中可變域CDRs具最小限度之轉譯後修飾，然無主要氧化或脫胺作用。PD1AB38、PD1AB37、及PD1AB53展示優異於製造之性質。
實例.18 PD1AB53、PD1AB37、及PD1AB38展示相似之醣基化模式
樣品係以Waters GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glycan試劑處理。該樣品係藉由結合Waters ACQUITY UPLC偵測器之Xevo G2-XS QTOF質譜儀使用ACQUITY UPLC Glycan BEH Amide管柱進行分析。以整體百分比計算醣種類。PD1AB53包含0.98%之G0-GN；8.6% G0F-GN；0.67% G0；77.37% G0F；7.9% Man5；1.78% G0F+GN；2.31% G1F；及0.39% Man6.PD1AB37包含1.11% G0-GN；9.57% G0P-GN； 0.68% G0；77.02% G0F；7.96% Man5；2.02% G0F+GN；0.99% G1F；0.29% Man6；及0.37%未知物(1368.6).PD1AB38包含1.28% G0-GN；10.5% G0F-GN；0.76% G0；73.29% G0F；9.44% Man5；2.26% G0F+GN；1.31% G1F；0.28% Man6；0.29%未知物(1725.73)；及0.59%未知物(1368.6).據此，所測試之雙特異性分子中，突出之醣種類包括G0F、G0F-GN、及Mannose 5。
實例.19 抗原表位定位顯示於PD-1之單一性結合
抗原表位定位係根據標準指南使用肽交聯質譜研究接續以電腦分子模型確認多種抗原表位之重疊百分比製成。結果顯示於下方與其他分子之重疊百分比：
Figure 110130703-A0202-12-0145-65
據此，抗原表位定位揭露PD-1促效劑及拮抗劑中結合位之多樣性。
實例.20 雙特異性分子不具有PD-1拮抗劑活性
PD-1表現體Jurkat細胞係與指示濃度之測試標的一同培養1小時。而後加入PD-L1表現細胞並於2小時後評估SHP-2之招募作用。PD1AB43、PD1AB38、PD1AB37、及PD1AB53、LY3462817陰性對照組、及TTJ2陰性對照組相比於帕博利珠單抗(Pembrolizumab)陽性對照組 展示無拮抗劑活性。據此，雙特異性分子PD1AB43、PD1AB38、PD1AB37、及PD1AB53並不展現拮抗劑活性。
實例.21 雙特異性分子具有PD-1促效劑活性
PD-1表現體Jurkat細胞係與濃度自0.001至100nM之可溶性測試標的一同培養。於2小時後評估SHP-2之招募作用。PD1AB43展示EC50(nM)為0.5736；PD1AB38展示EC50為0.3022；PD1AB37展示EC50為0.3700；及PD1AB53展示EC50為1.210。
於另一實驗中，孔盤係塗以抗人類IgG，阻礙，並加入自濃度範圍0.001至100nM之繫以Ig的測試標的處理1小時。洗滌孔盤並加入PD-1表現體Jurkat細胞。於2小時後評估SHP-2之招募作用。PD1AB43展示EC50(nM)為8.507；PD1AB38展示EC50為20.85；PD1AB37展示EC50為24.48；PD1AB53展示EC50為4.835；及LY3462817展示EC50為5.686。據此，可溶性及繫以Ig之雙特異性抗體展示出促效劑活性。
實例.22 雙特異性分子於體外(in Vitro)抑制T細胞增生
於100nM之對照組測試標的、LY3462817、PD1AB38、PD1AB37、或PD1AB53缺席或存在下，以葡萄球菌腸毒素(Staphylococcus enterotoxin B(SEB))或含有自CMV、EBV、及流感之抗原表位的胜肽池刺激人類PBMCs。於刺激後3至6天藉由細胞內Ki67染色評估增生作用。正向事件之Ki67百分比對應於無測試標的之病症進行標準化。數據顯示出受SEB或CEF胜肽池刺激之T細胞增生的抑制作用。據此，雙特異性分子係抑制人類T細胞之增生作用。
實例.23 雙特異性分子於體外(in Vitro)抑制T細胞增生
人類PBMCs係以載體或200nM PD1AB53於37℃中預處理2小時。而後於阻抗PD-L1及PD-L2(個別濃度2μg/ml)之抗體存在下，以破傷風類毒素(5μg/ml)刺激該人類PBMCs。於刺激後4天藉由MSD ELISA測量干擾素γ(IFN-γ)、IL-2、及腫瘤壞死因子(TNF-α)之表現程度以計算抑制作用。數據顯示出IFN-γ、IL-2、及TNF-α之減少。PD1AB53於PBMCs中降低破傷風類毒素引起之細胞激素產生。
實例.24 雙特異性分子於體外(in Vitro)漿細胞樣樹突狀細胞抑制CpGA引起之第一型干擾反應
不欲受一具體理論束縛，TLR9活化作用能引起漿細胞樣樹突狀細胞之PD-1之表現。純化後之漿細胞樣樹突狀細胞係以CpGA刺激6或24小時，接著蒐集細胞及萃取RNA以使用qRT-PCR測量PD-1、IFN-β1、MX1、MX2、及IFIT3，並且蒐集上清液以藉由MSD分析細胞激素。基因表現數據顯示相比於未受刺激之細胞，受刺激細胞於刺激後6小時即表現出PD-1、IFN-β1、MX1、MX2、及IFIT3。上清液分析顯示相比於未受刺激之細胞，受刺激細胞於刺激後6及24小時釋出IFN-β1、TNF-α、及IL-13。
接著，於PD1AB38、PD1AB37、或PD1AB53缺席或存在下，以CpGA刺激純化的漿細胞樣樹突狀細胞。CpGA刺激係引起細胞表面上PD-1之表現及引起第一型IFN反應基因OAS1、IFIT3、MX1及IFN-β1。CpGA所引起之這些基因表現係於PD1AB38、PD1AB37、或PD1AB53 存在下受到抑制。據此，雙特異性PD-1促效劑遏止CpGA引起第一型IFN之反應基因。
實例.25 PD1AB43於xGVHD中延長存活率及改善皮膚表型
藉由轉移人類PBMC至免疫缺乏小鼠引起異源基因之移植物抗宿主疾病。於轉移後10天開始，每週以載體或PD1AB43經皮下治療小鼠。皮膚之發炎程度由以下指數紀錄之：0：健康、1：脫毛面積<1公分x1公分、2：脫毛面積>1公分x1公分，但未完全脫毛、3：完全脫毛，外加一0.3之值以記錄於尾部、耳朵、腿部之發炎。PD1AB43改善皮膚表型，且其相較於載體治療組之53天，延長中位數存活時間至70.5天。
實例.26 PD1AB53於xGVHD中減少皮膚發炎之嚴重度
藉由轉移人類PBMC至免疫缺乏小鼠引起異源基因之移植物抗宿主疾病。於轉移後10天開始，每2週以載體或PD1AB53經皮下治療小鼠。皮膚之發炎程度由以下指數紀錄之：0：健康、1：脫毛面積<1公分x1公分、2：脫毛面積>1公分x1公分，但未完全脫毛、3：完全脫毛，外加一0.3之值以記錄於尾部、耳朵、腿部之發炎。PD1AB53相比於載體實驗組展示出改善之皮膚指數。
實例.27 PD1AB43於xGVHD中減少皮膚及結腸之T細胞滲透
藉由轉移人類PBMC至免疫缺乏小鼠引起異源基因之移植物抗宿主疾病。於轉移後10天開始，每週以載體或PD1AB43經皮下治療小鼠。於植入後>100天犧牲小鼠取得皮膚或結腸。樣品係經福馬林固定及石蠟包覆或分解以分離出滲透之細胞。滲透之CD4+及CD8+ T細胞係藉由IHC之自動圖像分析或分解組織之流式細胞儀數據進行定量。皮膚之組 織病理學係藉由病理學家對各組別進行盲測評分。藉由IHC或流式細胞儀之測量結果，受PD1AB43治療之小鼠展現於皮膚及結腸中較低程度之CD4+及CD8+細胞。受PD1AB43治療之小鼠亦於血中展示較低程度之CD4+細胞，及降低之組織病理學評分，指向皮膚表型的改善。PD1AB43有效地降低皮膚及結腸之T細胞，及於xGVHD中改善皮膚表型。
實例.28 雙特異性分子於人類PD-1基因敲入小鼠中增加調節型T細胞與活化作用標記之共表現
八週大之人類PD-1基因敲入小鼠係於背頸處經皮下給藥以PD1AB43、PD1AB38、PD1AB37、PD1AB53、PD1AB64、LY3462817、或載體。於第4、7、或10天犧牲小鼠、切割出胰臟並以抗表面及細胞內的免疫表現型T細胞組之標記抗體染色脾細胞後測量該活化作用標記LAG3及CTLA4之表現量。數據顯示脾臟的調節型T細胞(Treg)與LAG3及CTLA4之共表現於注射後4、7及10天具有頻率及次數的增加。PD1AB43、PD1AB38、PD1AB37、PD1AB53、及PD1AB64雙特異性分子增加調節型T細胞活化作用標記於人類PD-1基因敲入小鼠中的表現。
實例.29 雙特異性分子增加調節型T細胞與活化作用標記之共表現於劑量依賴方式
八週大之人類PD-1基因敲入小鼠係於背頸處經皮下給藥以低、中、及高劑量之PD1AB43、PD1AB37、PD1AB38、D1.3、LY3462817、或載體。於七天後犧牲小鼠、切割出胰臟並以抗表面及細胞內的免疫表現型T細胞組之標記抗體染色脾細胞後測量該活化作用標記LAG3及CTLA4之表現量。數據顯示劑量依賴增加脾臟的調節型T細胞與LAG3及CTLA4 之共表現的頻率及次數。PD1AB38、PD1AB37、及PD1AB53雙特異性分子於劑量依賴方式增加調節型T細胞活化作用標記的表現。
實例.30 雙特異性分子於人類CD34+移植NSG小鼠中增加調節型T細胞與活化作用標記之共表現
人類CD34+造血幹細胞移植小鼠係於背頸處經皮下給藥以PD1AB38、PD1AB37、PD1AB53、D1.3、LY3462817、或載體。於七天後犧牲小鼠、切割出胰臟並以抗表面及細胞內的免疫表現型T細胞組之標記抗體染色脾細胞後測量該活化作用標記LAG3及CTLA4之表現量。數據顯示數據顯示脾臟的調節型T細胞(Treg)與LAG3及CTLA4之共表現具有頻率及次數的增加。PD1AB38、PD1AB37、及PD1AB53雙特異性分子於人類CD34+移植NSG小鼠中增加調節型T細胞活化作用標記之表現。
這次數據展示了該PD-1抗體能作為促效劑作用且相比於單特異性型式(各結合域結合至同一抗原表位)，該雙特異性型式(如描繪於圖2之例子)於功能上具有更好的效果。
本發明中每一個別專利、專利申請、及公開文獻之揭露均係引用於本案作為參考資料。當本發明揭露對應於特定態樣的多種實施例時，領域中其他技術人員係能顯而易見地在不偏離該實施例之真諦與範圍下，構思出其他態樣及變化。該附加請求項係預期以建立在包括所有此種態樣及同等變化下。
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<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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<223> 合成序列
<400> 3
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<223> 合成序列
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<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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<223> 合成序列
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Figure 110130703-A0202-12-0181-148
Figure 110130703-A0202-12-0182-149
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 74
Figure 110130703-A0202-12-0183-152
<210> 75
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 75
Figure 110130703-A0202-12-0183-153
<210> 76
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 76
Figure 110130703-A0202-12-0183-154
<210> 77
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 77
Figure 110130703-A0202-12-0183-155
<210> 78
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 78
Figure 110130703-A0202-12-0184-156
<210> 79
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 79
Figure 110130703-A0202-12-0184-157
Figure 110130703-A0202-12-0185-158
<210> 80
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 80
Figure 110130703-A0202-12-0185-159
<210> 81
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 81
Figure 110130703-A0202-12-0185-160
<210> 82
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 82
Figure 110130703-A0202-12-0186-161
<210> 83
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 83
Figure 110130703-A0202-12-0186-162
<210> 84
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 84
Figure 110130703-A0202-12-0187-163
<210> 85
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 85
Figure 110130703-A0202-12-0187-164
<210> 86
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 86
Figure 110130703-A0202-12-0188-165
<210> 87
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 87
Figure 110130703-A0202-12-0188-166
<210> 88
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 88
Figure 110130703-A0202-12-0188-167
<210> 89
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 89
Figure 110130703-A0202-12-0188-168
Figure 110130703-A0202-12-0189-169
<210> 90
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 90
Figure 110130703-A0202-12-0189-170
<210> 91
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 91
Figure 110130703-A0202-12-0190-171
<210> 92
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 92
Figure 110130703-A0202-12-0190-172
<210> 93
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 93
Figure 110130703-A0202-12-0190-173
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 94
Figure 110130703-A0202-12-0190-174
<210> 95
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 95
Figure 110130703-A0202-12-0191-175
<210> 96
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 96
Figure 110130703-A0202-12-0191-176
<210> 97
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 97
Figure 110130703-A0202-12-0192-177
<210> 98
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 98
Figure 110130703-A0202-12-0192-178
Figure 110130703-A0202-12-0193-179
<210> 99
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 99
Figure 110130703-A0202-12-0193-180
<210> 100
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 100
Figure 110130703-A0202-12-0193-181
<210> 101
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 101
Figure 110130703-A0202-12-0194-182
<210> 102
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 102
Figure 110130703-A0202-12-0194-183
<210> 103
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 103
Figure 110130703-A0202-12-0194-184
<210> 104
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 104
Figure 110130703-A0202-12-0194-185
<210> 105
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 105
Figure 110130703-A0202-12-0195-186
<210> 106
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 106
Figure 110130703-A0202-12-0195-187
Figure 110130703-A0202-12-0196-188
<210> 107
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 107
Figure 110130703-A0202-12-0196-189
<210> 108
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 108
Figure 110130703-A0202-12-0196-190
<210> 109
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 109
Figure 110130703-A0202-12-0196-191
<210> 110
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 110
Figure 110130703-A0202-12-0197-192
<210> 111
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 111
Figure 110130703-A0202-12-0197-193
<210> 112
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 112
Figure 110130703-A0202-12-0197-194
Figure 110130703-A0202-12-0198-195
<210> 113
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 113
Figure 110130703-A0202-12-0198-196
<210> 114
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 114
Figure 110130703-A0202-12-0199-197
<210> 115
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 115
Figure 110130703-A0202-12-0199-198
<210> 116
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 116
Figure 110130703-A0202-12-0200-199
<210> 117
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 117
Figure 110130703-A0202-12-0200-200
<210> 118
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 118
Figure 110130703-A0202-12-0200-201
<210> 119
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 119
Figure 110130703-A0202-12-0200-202
<210> 120
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 120
Figure 110130703-A0202-12-0201-203
<210> 121
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 121
Figure 110130703-A0202-12-0201-204
Figure 110130703-A0202-12-0202-205
<210> 122
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 122
Figure 110130703-A0202-12-0202-206
<210> 123
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 123
Figure 110130703-A0202-12-0202-207
<210> 124
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 124
Figure 110130703-A0202-12-0202-208
<210> 125
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 125
Figure 110130703-A0202-12-0203-209
<210> 126
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 126
Figure 110130703-A0202-12-0203-210
<210> 127
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 127
Figure 110130703-A0202-12-0203-211
<210> 128
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 128
Figure 110130703-A0202-12-0203-212
Figure 110130703-A0202-12-0204-213
<210> 129
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 129
Figure 110130703-A0202-12-0204-214
Figure 110130703-A0202-12-0205-215
<210> 130
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 130
Figure 110130703-A0202-12-0205-216
<210> 131
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 131
Figure 110130703-A0202-12-0205-217
<210> 132
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 132
Figure 110130703-A0202-12-0205-218
<210> 133
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 133
Figure 110130703-A0202-12-0206-219
<210> 134
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 134
Figure 110130703-A0202-12-0206-220
<210> 135
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 135
Figure 110130703-A0202-12-0206-221
Figure 110130703-A0202-12-0207-222
<210> 136
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 136
Figure 110130703-A0202-12-0207-223
<210> 137
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 137
Figure 110130703-A0202-12-0207-224
Figure 110130703-A0202-12-0208-225
<210> 138
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 138
Figure 110130703-A0202-12-0208-226
<210> 139
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 139
Figure 110130703-A0202-12-0208-227
<210> 140
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 140
Figure 110130703-A0202-12-0208-228
<210> 141
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 141
Figure 110130703-A0202-12-0209-229
<210> 142
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 142
Figure 110130703-A0202-12-0209-230
<210> 143
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 143
Figure 110130703-A0202-12-0210-231
<210> 144
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 144
Figure 110130703-A0202-12-0210-232
<210> 145
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 145
Figure 110130703-A0202-12-0210-233
<210> 146
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 146
Figure 110130703-A0202-12-0211-234
<210> 147
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 147
Figure 110130703-A0202-12-0211-235
<210> 148
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 148
Figure 110130703-A0202-12-0211-236
Figure 110130703-A0202-12-0212-237
<210> 149
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 149
Figure 110130703-A0202-12-0212-238
<210> 150
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 150
Figure 110130703-A0202-12-0213-239
<210> 151
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 151
Figure 110130703-A0202-12-0213-240
<210> 152
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 152
Figure 110130703-A0202-12-0213-241
<210> 153
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 153
Figure 110130703-A0202-12-0213-242
<210> 154
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 154
Figure 110130703-A0202-12-0214-244
<210> 155
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 155
Figure 110130703-A0202-12-0214-245
<210> 156
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 156
Figure 110130703-A0202-12-0214-246
Figure 110130703-A0202-12-0215-248
<210> 157
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 157
Figure 110130703-A0202-12-0215-249
<210> 158
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 158
Figure 110130703-A0202-12-0215-251
<210> 159
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 159
Figure 110130703-A0202-12-0216-252
<210> 160
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 160
Figure 110130703-A0202-12-0216-253
<210> 161
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 161
Figure 110130703-A0202-12-0216-254
<210> 162
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 162
Figure 110130703-A0202-12-0216-255
<210> 163
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 163
Figure 110130703-A0202-12-0217-256
<210> 164
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 164
Figure 110130703-A0202-12-0217-257
Figure 110130703-A0202-12-0218-258
<210> 165
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 165
Figure 110130703-A0202-12-0218-259
<210> 166
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 166
Figure 110130703-A0202-12-0218-260
<210> 167
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 167
Figure 110130703-A0202-12-0219-261
<210> 168
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 168
Figure 110130703-A0202-12-0219-426
<210> 169
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 169
Figure 110130703-A0202-12-0219-262
Figure 110130703-A0202-12-0220-263
<210> 170
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 170
Figure 110130703-A0202-12-0220-264
<210> 171
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 171
Figure 110130703-A0202-12-0221-265
<210> 172
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 172
Figure 110130703-A0202-12-0221-266
<210> 173
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 173
Figure 110130703-A0202-12-0221-267
<210> 174
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 174
Figure 110130703-A0202-12-0221-268
<210> 175
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 175
Figure 110130703-A0202-12-0222-269
<210> 176
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 176
Figure 110130703-A0202-12-0222-270
<210> 177
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 177
Figure 110130703-A0202-12-0222-271
Figure 110130703-A0202-12-0223-272
<210> 178
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 178
Figure 110130703-A0202-12-0223-273
<210> 179
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 179
Figure 110130703-A0202-12-0223-274
Figure 110130703-A0202-12-0224-275
<210> 180
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 180
Figure 110130703-A0202-12-0224-276
Figure 110130703-A0202-12-0225-277
<210> 181
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 181
Figure 110130703-A0202-12-0225-278
<210> 182
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 182
Figure 110130703-A0202-12-0225-279
<210> 183
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 183
Figure 110130703-A0202-12-0225-280
<210> 184
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 184
Figure 110130703-A0202-12-0226-281
<210> 185
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 185
Figure 110130703-A0202-12-0226-282
<210> 186
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 186
Figure 110130703-A0202-12-0227-283
<210> 187
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 187
Figure 110130703-A0202-12-0227-284
<210> 188
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 188
Figure 110130703-A0202-12-0228-285
<210> 189
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 189
Figure 110130703-A0202-12-0228-286
Figure 110130703-A0202-12-0229-287
<210> 190
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 190
Figure 110130703-A0202-12-0229-288
<210> 191
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 191
Figure 110130703-A0202-12-0229-289
<210> 192
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 192
Figure 110130703-A0202-12-0229-290
Figure 110130703-A0202-12-0230-291
<210> 193
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 193
Figure 110130703-A0202-12-0230-292
<210> 194
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 194
Figure 110130703-A0202-12-0230-293
<210> 195
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 195
Figure 110130703-A0202-12-0230-294
Figure 110130703-A0202-12-0231-295
<210> 196
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 196
Figure 110130703-A0202-12-0231-296
<210> 197
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 197
Figure 110130703-A0202-12-0232-297
<210> 198
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 198
Figure 110130703-A0202-12-0232-298
<210> 199
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 199
Figure 110130703-A0202-12-0232-299
<210> 200
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 200
Figure 110130703-A0202-12-0232-300
<210> 201
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 201
Figure 110130703-A0202-12-0233-301
<210> 202
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 202
Figure 110130703-A0202-12-0233-302
<210> 203
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 203
Figure 110130703-A0202-12-0234-303
<210> 204
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 204
Figure 110130703-A0202-12-0234-304
<210> 205
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 205
Figure 110130703-A0202-12-0235-425
<210> 206
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 206
Figure 110130703-A0202-12-0235-305
<210> 207
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 207
Figure 110130703-A0202-12-0236-306
<210> 208
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 208
Figure 110130703-A0202-12-0236-307
<210> 209
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 209
Figure 110130703-A0202-12-0237-308
<210> 210
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 210
Figure 110130703-A0202-12-0237-309
<210> 211
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 211
Figure 110130703-A0202-12-0237-310
<210> 212
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 212
Figure 110130703-A0202-12-0237-311
<210> 213
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 213
Figure 110130703-A0202-12-0238-312
<210> 214
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 214
Figure 110130703-A0202-12-0238-313
<210> 215
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 215
Figure 110130703-A0202-12-0238-314
<210> 216
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 216
Figure 110130703-A0202-12-0238-315
<210> 217
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 217
Figure 110130703-A0202-12-0239-316
<210> 218
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 218
Figure 110130703-A0202-12-0239-317
<210> 219
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 219
Figure 110130703-A0202-12-0239-318
<210> 220
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 220
Figure 110130703-A0202-12-0239-319
<210> 221
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 221
Figure 110130703-A0202-12-0240-320
<210> 222
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 222
Figure 110130703-A0202-12-0240-322
<210> 223
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 223
Figure 110130703-A0202-12-0240-323
<210> 224
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 224
Figure 110130703-A0202-12-0240-324
<210> 225
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 225
Figure 110130703-A0202-12-0241-325
<210> 226
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 226
Figure 110130703-A0202-12-0241-326
<210> 227
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 227
Figure 110130703-A0202-12-0241-327
<210> 228
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 228
Figure 110130703-A0202-12-0241-328
<210> 229
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 229
Figure 110130703-A0202-12-0242-329
<210> 230
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 230
Figure 110130703-A0202-12-0242-330
<210> 231
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 231
Figure 110130703-A0202-12-0242-331
<210> 232
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 232
Figure 110130703-A0202-12-0242-332
<210> 233
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 233
Figure 110130703-A0202-12-0243-333
<210> 234
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 234
Figure 110130703-A0202-12-0243-334
<210> 235
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 235
Figure 110130703-A0202-12-0243-335
<210> 236
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 236
Figure 110130703-A0202-12-0243-336
<210> 237
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 237
Figure 110130703-A0202-12-0244-337
<210> 238
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 238
Figure 110130703-A0202-12-0244-338
<210> 239
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 239
Figure 110130703-A0202-12-0244-339
<210> 240
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 240
Figure 110130703-A0202-12-0245-340
<210> 241
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 241
Figure 110130703-A0202-12-0245-341
<210> 242
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 242
Figure 110130703-A0202-12-0245-342
<210> 243
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 243
Figure 110130703-A0202-12-0245-343
<210> 244
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 244
Figure 110130703-A0202-12-0245-344
Figure 110130703-A0202-12-0246-345
<210> 245
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 245
Figure 110130703-A0202-12-0246-346
<210> 246
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 246
Figure 110130703-A0202-12-0246-347
<210> 247
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 247
Figure 110130703-A0202-12-0246-348
<210> 248
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 248
Figure 110130703-A0202-12-0247-349
<210> 249
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 249
Figure 110130703-A0202-12-0247-350
<210> 250
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 250
Figure 110130703-A0202-12-0247-351
<210> 251
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 251
Figure 110130703-A0202-12-0247-352
<210> 252
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 252
Figure 110130703-A0202-12-0248-353
<210> 253
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 253
Figure 110130703-A0202-12-0248-354
<210> 254
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 254
Figure 110130703-A0202-12-0248-355
<210> 255
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 255
Figure 110130703-A0202-12-0248-356
<210> 256
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 256
Figure 110130703-A0202-12-0249-357
<210> 257
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 257
Figure 110130703-A0202-12-0249-358
Figure 110130703-A0202-12-0250-359
<210> 258
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 258
Figure 110130703-A0202-12-0250-360
<210> 259
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 259
Figure 110130703-A0202-12-0250-361
Figure 110130703-A0202-12-0251-362
<210> 260
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 260
Figure 110130703-A0202-12-0251-363
<210> 261
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 261
Figure 110130703-A0202-12-0251-364
Figure 110130703-A0202-12-0252-365
<210> 262
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 262
Figure 110130703-A0202-12-0252-366
Figure 110130703-A0202-12-0253-367
<210> 263
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 263
Figure 110130703-A0202-12-0253-368
<210> 264
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 264
Figure 110130703-A0202-12-0253-369
Figure 110130703-A0202-12-0254-370
<210> 265
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 265
Figure 110130703-A0202-12-0254-371
<210> 266
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 266
Figure 110130703-A0202-12-0254-372
<210> 267
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 267
Figure 110130703-A0202-12-0254-373
<210> 268
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 268
Figure 110130703-A0202-12-0255-374
<210> 269
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 269
Figure 110130703-A0202-12-0255-375
<210> 270
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 270
Figure 110130703-A0202-12-0255-376
<210> 271
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 271
Figure 110130703-A0202-12-0255-377
<210> 272
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 272
Figure 110130703-A0202-12-0256-378
<210> 273
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 273
Figure 110130703-A0202-12-0256-379
<210> 274
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 274
Figure 110130703-A0202-12-0256-380
<210> 275
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 275
Figure 110130703-A0202-12-0257-381
<210> 276
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 276
Figure 110130703-A0202-12-0257-382
<210> 277
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 277
Figure 110130703-A0202-12-0258-383
<210> 278
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 278
Figure 110130703-A0202-12-0258-384
<210> 279
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 279
Figure 110130703-A0202-12-0259-385
<210> 280
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 280
Figure 110130703-A0202-12-0259-386
Figure 110130703-A0202-12-0260-387
<210> 281
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 281
Figure 110130703-A0202-12-0260-388
Figure 110130703-A0202-12-0261-389
<210> 282
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 282
Figure 110130703-A0202-12-0261-390
<210> 283
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 283
Figure 110130703-A0202-12-0261-391
Figure 110130703-A0202-12-0262-392
<210> 284
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 284
Figure 110130703-A0202-12-0262-393
Figure 110130703-A0202-12-0263-394
<210> 285
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 285
Figure 110130703-A0202-12-0263-395
<210> 286
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 286
Figure 110130703-A0202-12-0263-396
Figure 110130703-A0202-12-0264-397
<210> 287
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 287
Figure 110130703-A0202-12-0264-398
Figure 110130703-A0202-12-0265-399
<210> 288
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 288
Figure 110130703-A0202-12-0265-400
<210> 289
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 289
Figure 110130703-A0202-12-0265-401
Figure 110130703-A0202-12-0266-402
<210> 290
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 290
Figure 110130703-A0202-12-0266-403
Figure 110130703-A0202-12-0267-404
<210> 291
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 291
Figure 110130703-A0202-12-0267-405
<210> 292
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 292
Figure 110130703-A0202-12-0268-406
<210> 293
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 293
Figure 110130703-A0202-12-0268-407
Figure 110130703-A0202-12-0269-408
<210> 294
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 294
Figure 110130703-A0202-12-0269-409
<210> 295
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 295
Figure 110130703-A0202-12-0270-410
<210> 296
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 296
Figure 110130703-A0202-12-0270-411
Figure 110130703-A0202-12-0271-412
<210> 297
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 297
Figure 110130703-A0202-12-0271-413
<210> 298
<211> 197
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 298
Figure 110130703-A0202-12-0272-414
Figure 110130703-A0202-12-0273-415
<210> 299
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 299
Figure 110130703-A0202-12-0273-416
Figure 110130703-A0202-12-0274-417
<210> 300
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 300
Figure 110130703-A0202-12-0274-418
<210> 301
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 301
Figure 110130703-A0202-12-0274-419
<210> 302
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 302
Figure 110130703-A0202-12-0274-420
Figure 110130703-A0202-12-0275-421
10:第一作用體部分體
20:Fab
25:Fab
30:Fc
35:Fc
40:第二作用體部分體
50:scFv
55:scFv
60:連接子
65:連接子

Claims (50)

  1. 一種多肽，其包含結合至PD-1之第一、第二、第三、及第四結合域，其中該第一及第二結合域結合至PD-1之第一抗原表位且該第三及第四結合域結合至PD-1之第二抗原表位，其中該第一及第二抗原表位不相同。
  2. 如請求項1所述之多肽，其中該多肽係PD-1促效劑。
  3. 如請求項1所述之多肽，其中該第一、第二、第三及第四結合域對於PD-1具有相等、或近似之親和力。
  4. 如請求項1所述之多肽，其中：
    該第一及第二結合域相比於結合至PD-1之該第三及第四結合域對於PD-1具有較低之親和力；或
    該第一及第二結合域相比於結合至PD-1之該第三及第四結合域對於PD-1具有較高之親和力。
  5. 如請求項1所述之多肽，其中該第一、第二、第三、及第四結合域係結合於PD-1之抗體或抗體片段。
  6. 如請求項5所述之多肽，其中該第一及第二結合域抗體係呈Fab型式且該第三及第四結合域抗體係呈scFv型式。
  7. 如請求項6所述之多肽，其中：
    該呈Fab型式之第一及第二結合域抗體具有相比於該呈scFv型式之該第三及第四結合域抗體對於PD-1具有較高之親和力；或
    該呈Fab型式之第一及第二結合域抗體具有相比於該呈scFv型式之該第三及第四結合域抗體對於PD-1具有較低之親和力。
  8. 一種多肽，其包含結合至PD-1之第一及第二結合域的多肽，其中該第一及第二結合域包含本發明前述之序列，如於PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體表8、PD-1抗體表9、PD-1抗體表10、或PD-1抗體表11所提供之序列。
  9. 如請求項8所述之多肽，其中該多肽包含結合至PD-1之第三及第四結合域，其中該第三結合域結合至與該第一結合域相同之抗原表位且該第四節結合域結合至與該第二結合域相同之抗原表位。
  10. 如請求項9所述之多肽，其中：
    該第一及第三結合域包含具有相同序列之多肽；
    該第二及第四結合域包含具有相同序列之多肽；
    該第一及第二結合域具有不同之多肽序列；及
    該第三及第四結合域具有不同之多肽序列。
  11. 如請求項9所述之多肽，其中：
    該第一及第三結合域包含具有相同序列之多肽；
    該第二及第四結合域包含具有相同序列之多肽；
    該第一及第二結合域具有相同之多肽序列；及
    該第三及第四結合域具有相同之多肽序列。
  12. 如請求項9所述之多肽，其中該第一及第二結合域係結合至PD-1之抗體。
  13. 如請求項9所述之多肽，其中該第一及第二結合域結合至相同或不同的抗原表位。
  14. 如請求項8所述之多肽，其中該第一結合域及第二結合域之一者係Fab抗體且另一者係scFv抗體。
  15. 如請求項8之多肽，其中該第一及第二結合域係藉由包含免疫球蛋白恆定區如IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4恆定區之甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/丙胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、或丙胺酸/麩胺酸/絲胺酸連接子連接。
  16. 如請求項1所述之多肽，其中該多肽包含第一多肽鏈，其包含連接至scFv抗體之Fab重鏈可變域及包含Fab輕(kappa)鏈可變域之第二多肽鏈，其中該Fab重及輕鏈結合至PD-1且該scFv抗體結合至PD-1之相同或不同之抗原表位；及其中該scFv包含以scFv連接子連接至輕鏈可變域的重鏈可變域，其中該scFv連接子包含(GGGGS)n、(GGGSE)n、或(GGGGA)n之序列或其組合，其中各n獨立地係1-4。
  17. 如請求項1所述之多肽，其中該第一結合域包含本發明PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體表8、PD-1抗體表9、PD-1抗體表10、或PD-1抗體表11之序列且該第二結合域包含本發明PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體表8、PD-1抗體表9、PD-1抗體表10、或PD-1抗體表11之序列。
  18. 如請求項1所述之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的本發明所提供之抗體或其抗原結合片段。
  19. 如請求項1所述之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段，包含：
    包含重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列之重鏈可變區，其中該重鏈CDR1序列具有前述於PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之CDR1序列的所述胺基酸序列；該重鏈CDR2序列具有前述於PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之CDR2序列之所述胺基酸序列；及該重鏈CDR3序列具有前述於PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之CDR3序列之所述胺基酸序列，或前述任一者之變體；以及
    包含輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列之輕鏈可變區，其中該輕鏈CDR1序列具有前述於PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之LCDR1序列的任一胺基酸序列；該輕鏈CDR2序列具有前述於PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之LCDR2序列之任一胺基酸序列；及該輕鏈CDR3序列具有前述於PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之LCDR3序列之任一胺基酸序列，或前述任一者之變體。
  20. 如請求項1所述之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段獨立地包含：
    包含SEQ ID NO：37、171、115、122、137、171、267、238、279之第一CDR；SEQ ID NO：38、172、116、123、138、172、229、239之 第二CDR；及SEQ ID NO：39、173、117、124、139、173、230、240之第三CDR的重鏈；及
    包含SEQ ID NO：40、118、125、140、174、276之第一CDR；SEQ ID NO：19、126、47、175、227、237之第二CDR，及SEQ ID NO：41、119、127、141、176之第三CDR的輕鏈可變區。
  21. 如請求項1所述之多肽，其中該第一結合域及該第二結合域係獨立選擇的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段獨立地包含包含SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：185、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：256、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：260、或SEQ ID NO：262、或SEQ ID NO：275之重鏈，及包含SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：170)、SEQ ID NO：258、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、或SEQ ID NO：263之輕鏈可變區。
  22. 如請求項1所述之多肽，其中該多肽包含第一多肽鏈及第二多肽鏈，其中：
    該第一多肽鏈具有自N端至C端之通式：
    [VH-A]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[VH-B]-[連接子2]-[VK-B]；或
    [VH-A]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[VK-B]-[連接子2]-[VH-B]；
    該第二多肽鏈具有自N端至C端之通式：
    [VK-A]-[CK]；或
    該第一多肽鏈具有自N端至C端之通式：
    [VH-B]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[VH-A]-[連接子2]-[VK-A]；或
    [VH-B]-[CH1]-[CH2]-[CH3]-[連接子1]-[VK-A]-[連接子2]-[VH-A]；
    該第二多肽鏈具有自N端至C端之通式：
    [VK-B]-[CK]，
    其中：
    VH-A=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
    VK-A=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
    VH-B=本發明所提供之PD1抗體的可變重鏈域；
    VK-B=本發明所提供之PD1抗體的可變輕鏈域；
    CH1=人類IgG1之恆定重鏈域1；
    CH2=人類IgG1之恆定重鏈域2；
    CH3=人類IgG1之恆定重鏈域3；
    CK=kappa輕鏈之恆定域；
    連接子1係甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/丙胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、或丙胺酸/麩胺酸/絲胺酸連接子；
    連接子2係甘胺酸/絲胺酸、甘胺酸/丙胺酸、甘胺酸/麩胺酸/絲胺酸、或丙胺酸/麩胺酸/絲胺酸連接子，
    其中VH-A、VK-A、VH-B、及VK-B能係來自相同或不同之抗體。
  23. 如請求項22所述之多肽，其中VH-A及VH-B獨立地包含：
    包含重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列之重鏈可變區，其中該重鏈CDR1序列具有前述PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之CDR1序列之任一胺基酸序列；該重鏈CDR2具有前述PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之CDR2序列之任一胺基酸序列；該重鏈CDR3序列具有前述PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之CDR3序列之任一胺基酸序列，或前述任一者之變體；及
    包含重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列之輕鏈可變區，其中該輕鏈CDR1序列具有前述PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之LCDR1序列之任一胺基酸序列；該輕鏈CDR2具有前述PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之LCDR2序列之任一胺基酸序列；該輕鏈CDR3序列具有前述PD-1抗體表4、PD-1抗體表5、PD-1抗體Fab表6、或PD-1抗體scFv表7之LCDR3序列之任一胺基酸序列，或前述任一者之變體。
  24. 如請求項22所述之多肽，其中VH-A包含：
    包含SEQ ID NO：37之第一CDR、SEQ ID NO：38之第二CDR、SEQ ID NO：39之第三CDR的重鏈可變區；
    包含SEQ ID NO：171之第一CDR、SEQ ID NO：172之第二CDR、及SEQ ID NO：173之第三CDR的重鏈可變區；
    包含SEQ ID NO：238之第一CDR、SEQ ID NO：239之第二CDR、及SEQ ID NO：240之第三CDR的重鏈可變區；
    包含SEQ ID NO：279之第一CDR、SEQ ID NO：239之第二CDR、及SEQ ID NO：240之第三CDR的重鏈可變區；或
    包含SEQ ID NO：267之第一CDR、SEQ ID NO：229之第二CDR、及SEQ ID NO：230之第三CDR的重鏈可變區。
  25. 如請求項22所述之多肽，其中VH-B包含：
    包含SEQ ID NO：37之第一CDR、SEQ ID NO：38之第二CDR、SEQ ID NO：39之第三CDR的重鏈可變區；
    包含SEQ ID NO：171之第一CDR、SEQ ID NO：172之第二CDR、SEQ ID NO：173之第三CDR的重鏈可變區；
    包含SEQ ID NO：238之第一CDR、SEQ ID NO：239之第二CDR、SEQ ID NO：240之第三CDR的重鏈可變區；
    包含SEQ ID NO：279之第一CDR、SEQ ID NO：239之第二CDR、SEQ ID NO：240之第三CDR的重鏈可變區；或
    包含SEQ ID NO：267之第一CDR、SEQ ID NO：229之第二CDR、SEQ ID NO：230之第三CDR的重鏈可變區。
  26. 如請求項22所述之多肽，其中VK-A或VK-B包含：
    包含SEQ ID NO：40之第一CDR、SEQ ID NO：19之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR的輕鏈可變區；
    包含SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：175之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR的輕鏈可變區；
    包含SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：227之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR的輕鏈可變區；
    包含SEQ ID NO：40之第一CDR、SEQ ID NO：237之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR的輕鏈可變區；或
    包含SEQ ID NO：276之第一CDR、SEQ ID NO：237之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR的輕鏈可變區。
  27. 如請求項22所述之多肽，其中：
    VH-A包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：37之第一CDR、SEQ ID NO：38之第二CDR、及SEQ ID NO：39之第三CDR；
    VH-B包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：171之第一CDR、SEQ ID NO：172之第二CDR、及SEQ ID NO：173之第三CDR的重鏈可變域；
    VK-A包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：40之第一CDR、SEQ ID NO：19之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR；
    VK-B包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：175之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR；
    VK-A包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：276之第一CDR、SEQ ID NO：237之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR；
    VK-B包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：227之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR；或
    VK-A包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：174之第一CDR、SEQ ID NO：227之第二CDR、及SEQ ID NO：176之第三CDR；
    VK-B包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：40之第一CDR、SEQ ID NO：237之第二CDR、及SEQ ID NO：41之第三CDR。
  28. 如請求項22所述之多肽，其中連接子1係(GGGGS)n，其中n係1-4。
  29. 一種雙特異性多肽，其包含一第一、第二、第三、及第四結合域，其中該第一、第二、第三、及第四結合域中之二者結合至PD-1之第一抗原結合位且剩餘二者結合至PD-1之第二抗原表位，其中該第一及第二抗原表位係不同之抗原表位；且其中該第一、第二、第三、及第四結合域包含本發明所提供之PD-1抗體。
  30. 如請求項29所述之雙特異性多肽，其中該第一及第二抗原表位係非重疊之抗原表位。
  31. 如請求項29所述之雙特異性多肽，其中該第一、第二、第三、及第四結合域中二者包含包含SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：185、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：256、SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：260、或SEQ ID NO：262、或SEQ ID NO：275之序列的重鏈，及一包含SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：258、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：261、或SEQ ID NO：263之序列的輕鏈可變區。
  32. 如請求項29所述之雙特異性多肽，其中該第一、第二、第三、及第四結合域中二者包含：
    包含SEQ ID NO：37、115、122、137、171、267、238、279之第一CDR；SEQ ID NO：38、116、123、138、172、229、239之第二CDR；及SEQ ID NO：39、117、124、139、173、230、240之第三CDR的重鏈；及
    一包含SEQ ID NO：40、118、125、140、174、276之第一CDR；SEQ ID NO：19、126、47、175、227、237之第二CDR，及SEQ ID NO：41、119、127、141、176之第三CDR的輕鏈可變區；且
    其中並非所有的結合域係完全相同的。
  33. 一種包含如請求項1所述之多肽的醫藥組成物。
  34. 一種包含如請求項31所述之雙特異性多肽的醫藥組成物。
  35. 一種用於治療受試者內紅斑性狼瘡(SLE)、Aicardi-Goutieres症候群、對稱紋狀體壞死、伴有脂質失養症及升溫的慢性非典型嗜中性白血球皮膚炎(CANDLE)、完全不穿透(complete non-penetrance)、遺傳性對稱性色素異常、家族性凍瘡樣狼瘡、日本自體免疫症候群與脂質失養(Japanese autoinflammatory syndrome with lipodystrophy(JASL))、關節攣縮、肌肉萎縮、小球性貧血、脂膜炎、及脂質失養(JMP)、孟德爾易感性分枝桿菌病(Mendelian susceptibility to mycobacterial disease(MSMD))、Nakajo-Nishimura症候群、視網膜血管病變與腦白質失養(retinal vasculopathy with cerebral leukodystrophy(RVCL))、痙攣性癱瘓、嬰兒期STING相關血管樣病變(STING-associated vasculopathy with onset in infancy(SAVI))、Singleton-Merten症候群、或脊椎軟骨瘤 (spondylochondromatosis(SPENCD))之方法，該方法包含給藥予受試者如請求項1所述之多肽。
  36. 一種用於治療罹患炎症性腸病、自體免疫性肝炎、原發性硬化性膽管炎、第一型糖尿病、移植物抗宿主疾病、或具有或具風險或具較高風險有自體免疫障礙之受試者的方法，該方法包含給藥以如請求項1所述之多肽予該受試者以治療該炎症性腸病、自體免疫性肝炎、原發性硬化性膽管炎、第一型糖尿病、移植物抗宿主疾病、或具有或具風險或具較高風險有自體免疫障礙。
  37. 如請求項36之方法，其中該罹患炎症性腸病之受試者具有克羅恩氏症或潰瘍性結腸炎。
  38. 一種於受試者用於促效PD-1活性之方法，該方法包含給藥以治療上有效量之如請求項1所述之多肽以由此治療該受試者。
  39. 一種於有需要的受試者治療干擾素病之方法，該方法包含給藥以如請求項1所述之多肽，由此治療該受試者。
  40. 如請求項39之方法，其中該干擾素病係第一型干擾素病，如紅斑性狼瘡(SLE)、Aicardi-Goutieres症候群、對稱紋狀體壞死、伴有脂質失養症及升溫的慢性非典型嗜中性白血球皮膚炎(CANDLE)、完全不穿透(complete non-penetrance)、遺傳性對稱性色素異常、家族性凍瘡樣狼瘡、日本自體免疫症候群與脂質失養(Japanese autoinflammatory syndrome with lipodystrophy(JASL))、關節攣縮、肌肉萎縮、小球性貧血、脂膜炎、及脂質失養(JMP)、孟德爾易感性分枝桿菌病(Mendelian susceptibility to mycobacterial disease(MSMD))、Nakajo-Nishimura症候群、視網膜血管 病變與腦白質失養(retinal vasculopathy with cerebral leukodystrophy(RVCL))、痙攣性癱瘓、嬰兒期STING相關血管樣病變(STING-associated vasculopathy with onset in infancy(SAVI))、Singleton-Merten症候群、或脊椎軟骨瘤(spondylochondromatosis(SPENCD))。
  41. 一種用於抑制自漿細胞樣樹突狀細胞產生之干擾素的方法，該方法包含給藥以如請求項1所述之多肽予該受試者。
  42. 如請求項41所述之方法，其中該漿細胞樣樹突狀細胞係活化的漿細胞樣樹突狀細胞。
  43. 如請求項42所述之方法，其中該干擾素之產生相較於無該請求項1所述之多肽存在下，減少約或至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、或95%。
  44. 一種用於治療TLR9介導之障礙的方法，該方法包含給藥以如請求項1所述之多肽予該受試者以治療該TLR9介導之障礙，如紅斑性狼瘡(SLE)、Aicardi-Goutieres症候群、對稱紋狀體壞死、伴有脂質失養症及升溫的慢性非典型嗜中性白血球皮膚炎(CANDLE)、完全不穿透(complete non-penetrance)、遺傳性對稱性色素異常、家族性凍瘡樣狼瘡、日本自體免疫症候群與脂質失養(Japanese autoinflammatory syndrome with lipodystrophy(JASL))、關節攣縮、肌肉萎縮、小球性貧血、脂膜炎、及脂質失養(JMP)、孟德爾易感性分枝桿菌病(Mendelian susceptibility to mycobacterial disease(MSMD))、Nakajo-Nishimura症候群、視網膜血管病變與腦白質失養(retinal vasculopathy with cerebral leukodystrophy(RVCL))、痙攣性癱瘓、嬰兒期STING相關血管樣病變(STING-associated vasculopathy with onset in infancy(SAVI))、Singleton-Merten症候群、或脊椎軟骨瘤(spondylochondromatosis(SPENCD))
  45. 一種用於抑制於細胞或受試者之OAS1、IFIT3、MX1及IFN-β1表現的方法，該方法包含以如請求項1所述之多肽給藥予該受試者或接觸細胞。
  46. 一種核酸，其編碼如請求項1所述之多肽、蛋白質或抗體。
  47. 一種載體，其包含如請求項4所述6之核酸。
  48. 一種細胞，其包含如請求項46所述之核酸或如請求項47所述之載體。
  49. 一種製造如請求項1所述之多肽的方法，該方法包含培養如請求項48所述之細胞以製造如請求項1所述之多肽。
  50. 一種製造編碼如請求項1所述之多肽的核酸序列的方法，包含
    提供包含編碼一目標部分體之序列的載體並插入編碼作用體結合/調節部分體之序列至該載體中以形成編碼'治療化合物之序列；或
    提供包含編碼作用體結合/調節部分體之序列的載體並插入編碼目標部分體之序列以形成編碼治療化合物之序列，由此製造編碼如請求項1所述之該多肽之序列。
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