JP2023512446A - 治療的タンパク質の薬物送達システム構成要素への吸着を防ぐ方法および組成物 - Google Patents
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Abstract
本開示は、１つまたは複数の薬物送達システム構成要素上へのタンパク質の吸着に起因する薬物送達中のタンパク質損失を減らす、組成物および方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、１つまたは複数の薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を防止するための組成物を提供し、組成物は、スクシネートおよびポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、治療的タンパク質をさらに含む。【選択図】なし
Description
関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１月１３日に出願された米国特許仮出願第６２／９６０，６０２号に対する優先権を主張する。この仮出願は、本出願において参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２０年１月１３日に出願された米国特許仮出願第６２／９６０，６０２号に対する優先権を主張する。この仮出願は、本出願において参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本開示の分野
本開示は、治療的タンパク質の静脈内送達に関する。より具体的には、本開示は、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素への治療的タンパク質の吸着を防ぐ方法および組成物に関する。本開示は、治療的タンパク質を用いる患者の経静脈治療方法にも関する。
本開示は、治療的タンパク質の静脈内送達に関する。より具体的には、本開示は、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素への治療的タンパク質の吸着を防ぐ方法および組成物に関する。本開示は、治療的タンパク質を用いる患者の経静脈治療方法にも関する。
配列表
本出願は、電子申請された配列表を含み、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。配列表は、２０２１年１月１３日に記録され、ＡＰＶＯ＿０６０＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔと命名され、約３０１キロバイトの大きさである。
本出願は、電子申請された配列表を含み、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。配列表は、２０２１年１月１３日に記録され、ＡＰＶＯ＿０６０＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔと命名され、約３０１キロバイトの大きさである。
タンパク質ベース治療薬は、診療において大きな成果を収めてきた。米国およびヨーロッパにおいて、臨床使用に認可された数百の治療的タンパク質が存在する。承認された治療的タンパク質としては、例えば、抗体ベース薬物、Ｆｃ融合タンパク質、抗凝固剤、血液因子、骨形成タンパク質、改変足場タンパク質、酵素、成長因子、ホルモン、インターフェロン、インターロイキン、および血栓溶解薬が挙げられる。
多くの治療的タンパク質は、静脈内経路を介して投与される。タンパク質を静脈内（ｉ．ｖ．）経路により投与する場合、接触面は、タンパク質がそれらの両親媒性に起因してこのような表面に吸着する傾向があるため、特に懸念される。注入器、ｉ．ｖ．容器（例えば、ｉ．ｖ．バッグ）および管への種々のプラスチック高分子の広範な使用に伴い、吸着によるタンパク質損失のリスクが、特に低濃度で、現実的な問題である。タンパク質の吸着現象は、目的の治療効果を損ない、投与量レベルを高め、および治療コストを増大させる。
１つまたは複数の薬物送達システム構成要素の吸着によるタンパク質損失を減らす、治療的タンパク質の静脈内送達のための改善された組成物および方法の必要性が当該技術分野において残されている。
本開示は、１つまたは複数の薬物送達システム構成要素へのタンパク質吸着を低減または除去するために使用できる組成物を提供する。組成物は、１つまたは複数の薬物送達システム構成要素の表面が治療的タンパク質と接触する前に、その表面に接触され得る。本明細書で記載の組成物は、ＩＶＳＳ（静脈注入溶液安定化剤）組成物とも呼ばれ得る。
本明細書で提供されるのは、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素への治療的タンパク質の吸着を減らすための組成物であり、組成物は、スクシネートおよびポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、および約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約４ｍＭ～約６ｍＭのスクシネート、例えば、約５ｍＭのスクシネートを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、および約０．００２（ｗ／ｖ）％～約０．００８（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、例えば、約０．００４（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは、約５．０～約７．０、例えば、約６．０である。いくつかの実施形態では、組成物は、水中の約５ｍＭのスクシネート、および約０．０００４（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含み、組成物のｐＨは、約６．０であり、組成物は、注入用に処方される。
本明細書で開示の組成物は、サイズ、電荷、および／または他の特性に起因して、静脈内薬物の送達に使用されるプラスチック配管およびバッグに付着するかどうかという傾向を有する任意の治療的タンパク質と共に利用できる。従って、いくつかの実施形態では、組成物は、治療的タンパク質を含む。治療的タンパク質は、単一特異的または多重特異性結合タンパク質であり得る。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、ホモダイマーを形成する。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、ヘテロダイマーを形成する。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ（例えば、ＡＤＡＰＴＩＲ（登録商標））、クアドローマ、Ｋλボディ（Ｋλ－ｂｏｄｙ）、ｄＡｂ、ディアボディ、ＴａｎｄＡｂ、ナノボディ、ＤＯＣＫ－ＡＮＤ－ＬＯＣＫ（登録商標）（ＤＮＬ（登録商標））、ＣｒｏｓｓＭａｂ Ｆａｂ、ＣｒｏｓｓＭａｂ ＶＨ－ＶＬ、鎖交換改変ドメインボディ（ｓｔｒａｎｄ－ｅｘｃｈａｎｇｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｄｏｍａｉｎ ｂｏｄｙ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）、アフィボディ、フィノマー、クニッツドメイン、Ａｌｂｕ－ｄａｂ、交換ＶＨを有する２つの改変Ｆｖフラグメント（ｔｗｏ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｆｖ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｅｘｃｈａｎｇｅｄ ＶＨｓ（例えば、二重親和性親和性再標的化分子（ｄｕａｌ－ａｆｆｉｎｉｔｙ ｒｅ－ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）（Ｄ．Ａ．Ｒ．Ｔ．））、ｓｃＦｖ ｘ ｓｃＦｖ（例えば、ＢｉＴＥ）、ＳＶＤ－ＩＧ、Ｃｏｖｘ－ｂｏｄｙ、ペプチボディ、ｓｃＦｖ－Ｉｇ、ＳＶＤ－Ｉｇ、ｄＡｂ－Ｉｇ、Ｋｎｏｂ－ｉｎ－Ｈｏｌｅｓ、ＣＨ３ドメイン中に一致変異を含むＩｇＧ１抗体（ＩｇＧ１ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ｍａｔｃｈｅｄ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ＣＨ３ ｄｏｍａｉｎ）（例えば、デュオボディ抗体）およびトリオマブからなる群より選択されるフォーマットである。
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、少なくとも第１の結合ドメインを含む。第１の結合ドメインおよびは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であり得る。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、少なくとも第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み、第１の結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であり、第２の結合ドメインはｓｃＦｖであり得る。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、腫瘍抗原結合に特異的に結合し、第２の結合ドメインは、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３ε）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＣＤ３に特異的に結合し、第２の結合ドメインは、腫瘍抗原に特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、腫瘍抗原に特異的に結合し、第２の結合ドメインは、４－１ＢＢまたはＯＸ４０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、４－１ＢＢまたはＯＸ４０に特異的に結合し、第２の結合ドメインは、腫瘍抗原に特異的に結合する。例えば、いくつかの実施形態では、結合ドメインは、４－１ＢＢに特異的に結合し、第２の結合ドメインは、腫瘍抗原に特異的に結合する。
また提供されるのは、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物であり、組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２／０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、４－１ＢＢ結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、および腫瘍抗原ドメイン、またはアミノ末端からカルボキシル末端へ順に、腫瘍抗原結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、および４－１ＢＢ結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、ＯＸ４０に特異的に結合し、第２の結合ドメインは、腫瘍抗原に特異的に結合する。
また提供されるのは、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物であり、組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２／０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、ＯＸ４０結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、および腫瘍抗原ドメイン、またはアミノ末端からカルボキシル末端へ順に、腫瘍抗原結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびＯＸ４０結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは４－１ＢＢに特異的に結合し、第２の結合ドメインはＯＸ４０に特異的に結合する、または第１の結合ドメインは、ＯＸ４０に特異的に結合し、第２の結合ドメインは、４－１ＢＢに特異的に結合する。また提供されるのは、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物であり、組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２／０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、４－１ＢＢ結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびＯＸ４０結合ドメイン、またはアミノ末端からカルボキシル末端へ順に、ＯＸ４０結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、および４－１ＢＢ結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＣＤ１２３に特異的に結合し、および／または第２の結合ドメインは、ＣＤ３εに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、第１の結合ドメイン、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および第２の結合ドメイン、を含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２またはＩｇＤの免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１０を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１１を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１２を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１は配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１４を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号１５を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１０を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１１を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１２を含み；およびＬＣＤＲ１は配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１４を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号１５を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号１８と少なくとも９５％同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１９を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２０を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号２１を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１は配列番号２２を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号２３を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１９を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２０を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号２１を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号２２を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号２３を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、配列番号２７と少なくとも９５％または１００％同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、配列番号３１の配列を含む。
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質の濃度は、約０．０１μｇ／ｍＬ～約２．０μｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質の濃度は、約０．０１、約０．０２、約０．０３、約０．０４、約０．０５、約０．０６、約０．０７、約０．０８、または約０．０９μｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質の濃度は、約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、または約０．９μｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質の濃度は、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、または約１．９、または約２．０μｇ／ｍＬである。
いくつかの実施形態では、組成物は、約２５～約１５０ｍＭのスクシネート、および約０．０１（ｗ／ｖ）％～約０．１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む。組成物は、例えば、１０Ｘ～５０Ｘの濃度であってもよい。いくつかの実施形態では、組成物は２０Ｘの濃度である。いくつかの実施形態では、組成物は、約７５ｍＭ～約１２５ｍＭのスクシネート、例えば、約１００ｍＭのスクシネートを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．０５（ｗ／ｖ）％～約０．１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、例えば、約０．０８（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは、約５．０～約７．０、例えば、約６．０である。いくつかの実施形態では、組成物は、水中の約１００ｍＭのスクシネート、および約０．０８（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含み、組成物のｐＨは、約６．０であり、組成物は、注入用に処方される。
また、本明細書で提供されるのは、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素への治療的タンパク質の吸着を減らすための組成物であり、組成物は、約１００ｍＭのスクシネート、約０．０８（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および治療的有効量の治療的タンパク質を含む。
また提供されるのは、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物であり、組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２／０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、第１の標的に特異的に結合する第１の結合ドメイン、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１の標的は、ＣＤ８６である。いくつかの実施形態では、第１の標的は、ＣＤ１２３である。いくつかの実施形態では、第２の標的は、ＩＬ－１０受容体である。いくつかの実施形態では、第２の標的は、ＣＤ３εである。いくつかの実施形態では、第１の標的はＣＤ８６であり、第２の標的はＩＬ－１０の受容体である。いくつかの実施形態では、第１の標的はＣＤ１２３であり、第２の標的はＣＤ３εである。
また提供されるのは、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物であり、組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２／０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、第１の結合ドメイン、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および第２の結合ドメインを含み、第１の結合ドメインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１０を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１１を含み、およびＨＣＤＲ３は配列番号１２を含み；ならびにＬＣＤＲ１は配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１４を含み、およびＬＣＤＲ３は配列番号１５を含み、第２の結合ドメインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み；ＨＣＤＲ１は配列番号１９を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２０を含み、およびＨＣＤＲ３は配列番号２１を含み、ならびにＬＣＤＲ１は配列番号２２を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号２３を含み、およびＬＣＤＲ３は配列番号２４を含む。
また提供されるのは、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らす組成物であり、組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２．０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、配列番号３１の配列を含む。
また提供されるのは、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物であり、組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２／０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含み、ＣＤ８６結合ドメインは、ＣＤ８６に特異的に結合する可変重鎖および可変軽鎖を含み、免疫グロブリンＦｃドメインは、Ｆｃ受容体ＦｃγＲ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩｂへの結合を防止または有意に低減する２つ以上の変異を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインであり、モノマーＩＬ－１０ドメインは、短いリンカーで分離された２つのヒトＩＬ－１０サブユニットを含み、治療的タンパク質は、ホモダイマーである。
また提供されるのは、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物であり、組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２／０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含み、ＣＤ８６結合ドメインはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号３であり、ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号５であり、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号６であり、モノマーＩＬ－１０ドメインは配列番号２８のアミノ酸配列を有する。
また提供されるのは、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物であり、組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２／０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインであり、ＣＤ８６結合ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含み、モノマーＩＬ－１０ドメインは、配列番号２８のアミノ酸配列を含む。
また提供されるのは、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らす組成物であり、組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２．０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む。
本開示はまた、治療的タンパク質を保持するために適合された容器を提供し、容器の内面は最初に、本開示の組成物と接触され、その後、治療的タンパク質を含む組成物と接触される。いくつかの実施形態では、容器は、実質的にラテックス不含である。いくつかの実施形態では、容器は、実質的にビス（２－エチルヘキシル）フタレート（ＤＥＨＰ）不含である。いくつかの実施形態では、容器は、ＩＶバッグ、注入器、およびチューブからなる群より選択される。
本開示はまた、治療的タンパク質を送達するための静脈内薬物送達システムを作製する方法を提供し、方法は、治療的タンパク質を保持するように適合された少なくとも１つの容器を用意すること、および治療的タンパク質が少なくとも１つの容器に加えられる前に、少なくとも１つの容器の内面を約１～約１０ｍＭのスクシネート、および約０．００１（ｗ／ｖ）％～０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む組成物と接触させること、を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも１つの容器の内面をコートし、治療的タンパク質が容器の内面に結合することを防ぐ。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの容器は、実質的にラテックス不含である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの容器は、実質的にビス（２－エチルヘキシル）フタレート（ＤＥＨＰ）不含である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの容器は、ＩＶバッグ、注入器、およびチューブからなる群より選択される。
本開示はまた、治療的タンパク質の静脈内投与により対象を治療する方法を提供し、方法は、治療的タンパク質を保持するように適合された少なくとも１つの容器を用意すること、容器の内面を、約１～約１０ｍＭのスクシネート、および約０．００１（ｗ／ｖ）％～０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む組成物と接触させること、容器の内面を治療的タンパク質を含む組成物と接触させること、および治療的タンパク質を対象に静脈内投与すること、を含む。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、少なくとも第１の結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、少なくとも第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であり、第２の結合ドメインは、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＣＤ１２３に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＣＤ３εに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、第１の結合ドメイン、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および第２の結合ドメイン、を含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２またはＩｇＤの免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１０を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１１を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１２を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１は配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１４を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号１５を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１０を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１１を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１２を含み、およびＬＣＤＲ１は配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１４を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号１５を含む。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号１８と少なくとも９５％または１００％同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１９を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２０を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号２１を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１は配列番号２２を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号２３を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１９を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２０を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号２１を含み；およびＬＣＤＲ１は配列番号２２を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号２３を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、配列番号２７と少なくとも９５％同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、配列番号３１の配列を含む。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含み、ＣＤ８６結合ドメインは、ＣＤ８６に特異的に結合する可変重鎖および可変軽鎖を含み、免疫グロブリンＦｃドメインは、Ｆｃ受容体ＦｃγＲ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩｂへの結合を防止または有意に低減する２つ以上の変異を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインであり、モノマーＩＬ－１０ドメインは、短いリンカーで分離された２つのヒトＩＬ－１０サブユニットを含み、治療的タンパク質は、ホモダイマーである。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号３であり、ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号５であり、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号６である。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、配列番号７と少なくとも９５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を有する可変重鎖、および配列番号８と少なくとも９５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、配列番号９と少なくとも約９５％または１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、モノマーＩＬ－１０ドメインは、配列番号２８と少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、配列番号３０のアミノ酸配列、または配列番号３０と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、静脈内注入により投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも１つの容器の内面をコートし、治療的タンパク質が容器の内面に結合することを防ぐ。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトなどの哺乳動物である。
また提供されるのは、治療的タンパク質を患者に送達するための薬物送達システムであり、システムは、治療的タンパク質を保持するように適合された少なくとも１つの容器を含み、少なくとも１つの容器の内面は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、および約０．００１（ｗ／ｖ）％～０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む組成物と接触され、その後、治療的タンパク質を含む組成物と接触される。
これらおよび他の実施形態は、以下の詳細説明でさらに詳細に言及される。
本開示は、１つまたは複数の薬物送達システム構成要素上へのタンパク質の吸着に起因する薬物送達中のタンパク質損失を減らす、組成物および方法を提供する。本開示は、表面（例えば、薬物送達システム構成要素の表面）へのタンパク質吸着が、薬物の投与の前にその表面をスクシネートおよびポリソルベート８０を含む組成物と接触させることにより、低減または除去できるという知見に基づく。従って、いくつかの実施形態では、本開示は、１つまたは複数の薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を防止するための組成物を提供し、組成物は、スクシネートおよびポリソルベート８０を含む。
本明細書で使用されるセクション見出しは、単に構成上の目的のためであり、記載主題を限定するものと解釈されるべきではない。限定されないが、本明細書で引用される、特許出願、論文、書籍、および論説を含む全ての文書、または文書の一部は、これにより、明示的に、目的に応じて、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。１種または複数の取り込まれた文書または文書の一部が、本出願中の用語の定義と矛盾する用語を定義する場合には、本出願に記載の定義が優先される。しかし、本明細書で引用される参考文献、論文、刊行物、特許、特許公報、および特許出願への何らかの言及は、それらが有効な先行技術を構成する、または世界の任意の国における共通の一般常識の一部を形成することを承認する、または何らかの形態の示唆をするものではなく、また、そのように受け取られるべきものではない。
本明細書では、なんらかの濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲、または整数範囲は、特に断らない限り、示された範囲内の任意の整数の値および必要に応じて、その端数（整数の１０分の１および１００分の１など）を含むものと理解されるものとする。本明細書で使用される場合、用語「ａ」および「ａｎ」は、特に指示されない限り、列挙された構成要素の「１つまたは複数（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」を意味することが理解されるべきである。離接的接続詞（例えば、「または（ｏｒ）」）の使用は、代替案のいずれか一方、両方、またはそれらの任意の組み合わせを意味すると理解されるべきである。本明細書で使用される場合、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は同義に使用される。加えて、本明細書で記載の成分（例えば、ドメインまたは領域）および置換基の種々の組み合わせを含むポリペプチドが、あたかも、それぞれのポリペプチドが個別に記載されているかと同じ程度に本出願により開示されることを理解されたい。従って、個別のポリペプチドの特定の成分の選択は、本開示の範囲内に含まれる。
定義
数値平均の直前の用語「約」は、数値平均の最大±１０％を意味する。
例えば、「約４０」は、４０の±１０％（すなわち、３６～４４）、±１０％まで、±９％まで、±８％まで、±７％まで、±６％まで、±５％まで、±４％まで、±３％まで、±２％まで、±１％まで、±１％未満、またはほかの値または範囲を意味する。
数値平均の直前の用語「約」は、数値平均の最大±１０％を意味する。
例えば、「約４０」は、４０の±１０％（すなわち、３６～４４）、±１０％まで、±９％まで、±８％まで、±７％まで、±６％まで、±５％まで、±４％まで、±３％まで、±２％まで、±１％まで、±１％未満、またはほかの値または範囲を意味する。
用語の「ｍｃｇ」および「μｇ」は、本明細書では同じ意味で用いられ、マイクログラムを指す。
本明細書で使用される場合、「実質的に」は、当該技術分野において使われるその通常の意味を有する。例えば、「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」は、「有意に（ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ）」、「かなり（ｃｏｎｓｉｄｅｒａｂｌｙ）」、「ほとんど（ｌａｒｇｅｌｙ）」、「たいてい（ｍｏｓｔｌｙ）」、または「本質的に（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」を意味し得る。いくつかの実施形態では、「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」は、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％を意味し得る。
本明細書で使用される場合、「結合ドメイン」または「結合領域」という用語は、抗原、リガンド、受容体、基質、または阻害剤などの標的分子を特異的に認識し、それに結合する能力を有するタンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、またはペプチドまたは抗体もしくは抗体から誘導される結合ドメインのドメイン、領域、部分、または部位を指す。例示的結合ドメインとしては、単鎖抗体可変領域（例えば、ドメイン抗体、ｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ）、受容体外部ドメインおよびリガンド（例えば、サイトカイン、ケモカイン）が挙げられる。特定の実施形態では、結合ドメインは、抗原結合部位（例えば、可変重鎖配列および可変軽鎖配列または交互フレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、任意選択で、１種または複数のアミノ酸置換を含むヒトＦＲ）中に配置された抗体由来の３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）および３つの重鎖ＣＤＲ））を含むまたはこれらからなる。ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、ファージディスプレイライブラリースクリーニング、およびＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）相互作用分析を含む、特定の標的を特異的に結合する本開示の結合ドメインを特定するための、種々のアッセイが知られている。
結合ドメインまたはタンパク質は、それが１０５Ｍ－１以上の親和性またはＫａ（すなわち、特定の結合相互作用の１／Ｍの単位の平衡結合定数）で標的を結合するが試験試料中に存在する他の成分を有意に結合しない場合、標的を「特異的に結合する」。結合ドメインは、「高親和性」結合ドメインおよび「低親和性」結合ドメインとして分類できる。「高親和性」結合ドメインは、少なくとも１０７Ｍ－１、少なくとも１０８Ｍ－１、少なくとも１０９Ｍ－１、少なくとも１０１０Ｍ－１、少なくとも１０１１Ｍ－１、少なくとも１０１２Ｍ－１、または少なくとも１０１３Ｍ－１のＫａを有する結合ドメインを指す。「低親和性」結合ドメインは、最大で１０７Ｍ－１、最大で１０６Ｍ－１、最大で１０５Ｍ－１のＫａを有する結合ドメインを指す。あるいは、親和性は、特定の結合相互作用の単位Ｍの平衡解離定数（Ｋｄ）（例えば、１０－５Ｍ～１０－１３Ｍ）として定義できる。本開示による結合ドメインポリペプチドおよび単鎖ポリペプチドの親和性は、従来技術を用いて容易に測定できる（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９４９）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０、および米国特許第５，２８３，１７３号、同第５，４６８，６１４号、または同等文献を参照されたい）。
本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、類似の特性を有する別のアミノ酸の、１つのアミノ酸による置換として、当該技術分野において明確に理解されている。例示的保存的置換［同類置換］は、当該技術分野において周知である（例えば、国際公開第９７／０９４３３号、１０ページ、１９９７年３月１３日公開；Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．ＮＹ：ＮＹ（１９７５），ｐｐ．７１－７７；Ｌｅｗｉｎ，Ｇｅｎｅｓ ＩＶ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ（１９９０），ｐ．８参照）。特定の実施形態では、保存的置換は、ロイシンのセリンへの置換を含む。
本明細書で使用される場合、「誘導体」という用語は、酵素を用いてまたは用いないで、例えば、グリコシル化、アルキル化、アシル化、エステル形成、またはアミド形成などの化学的または生物学的手段による、ペプチドの１種または複数のアミノ酸残基の修飾を指す。
本明細書で使用される場合、指定されたポリペプチドまたはタンパク質「由来の」ポリペプチドまたはアミノ酸配列は、ポリペプチドの起源を指す。特定の実施形態では、特定の配列由来のポリペプチドまたはアミノ酸配列（「出発」または「親（ｐａｒｅｎｔ）」または「親（ｐａｒｅｎｔａｌ）」配列と呼ばれることもある）は、出発配列またはその一部分と本質的に同一であるアミノ酸配列を有し、その部分は、少なくとも１０～２０アミノ酸、少なくとも２０～３０アミノ酸、または少なくとも３０～５０アミノ酸、または少なくとも５０～１５０アミノ酸からなり、または、それは、当業者には、出発配列中にその起源を有するとして他の方法で特定可能である。例えば、結合ドメインは、抗体、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、などから誘導できる。
別のポリペプチドから誘導されたポリペプチドは、出発ポリペプチドに比べて、１種または複数の変異、例えば、別のアミノ酸残基で置換された、または１つまたは複数のアミノ酸残基の挿入または欠失を有する１つまたは複数のアミノ酸残基を有し得る。ポリペプチドは、天然起源ではないアミノ酸配列を含み得る。このような変化は、必然的に、出発ポリペプチドと１００％未満の配列同一性または類似性を有する。一実施形態では、バリアントは、出発ポリペプチドのアミノ酸配列と、約６０％～１００％未満のアミノ酸配列同一性または類似性を有する。別の実施形態では、バリアントは、出発ポリペプチドのアミノ酸配列と、約７５％～１００％未満、約８０％～１００％未満、約８５％～１００％未満、約９０％～１００％未満、約９５％～１００％未満のアミノ酸配列同一性または類似性を有する。
本明細書で使用される場合、特別の定めのない限り、免疫グロブリン分子の可変領域中のアミノ酸残基の位置は、ＩＭＧＴナンバリング規則（Ｂｒｏｃｈｅｔ，Ｘ，ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２００８）３６，Ｗ５０３－５０８）に従ってナンバリングされ、免疫グロブリン分子の定常領域中のアミノ酸残基の位置は、ＥＵ命名法（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５ Ｔｈｅｒａｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：７７－９４）に従ってナンバリングされる。他のナンバリング規則が当技術分野において既知である（例えば、Ｋａｂａｔナンバリング規則（Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ：Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（１９９１）））。
本明細書で使用される場合、「ダイマー」という用語は、共有結合（例えば、ジスルフィド結合）および他の相互作用（例えば、静電相互作用、塩橋、水素結合、および疎水性相互作用）を含む１種または複数の形態の分子内力を介して相互に結合した２つのサブユニットからなり、適切な条件下（例えば、生理的条件下、組換えタンパク質の発現、精製、および／または貯蔵に好適な水溶液中で、または非変性および／または非還元性電気泳動のための条件下）で安定な生物学的実体を指す。本明細書で使用される場合、「ヘテロダイマー」または「ヘテロダイマータンパク質」は、２つの異なるポリペプチドから形成されたダイマーを指す。ヘテロダイマーは、４つのポリペプチド（すなわち、２つの軽鎖および２つの重鎖）から形成された抗体を含まない。本明細書で使用される場合、「ホモダイマー」または「ホモダイマータンパク質」は、２つの同一のポリペプチドから形成されたダイマーを指す。特性および活性（結合およびＲＴＣＣなど）を含む、ポリペプチドの全開示は、そのダイマー型ならびに他のマルチマー型のポリペプチドを含むと理解されるべきである。
本発明のポリペプチドがダイマー型（すなわち、ダイマータンパク質）である場合、それは、アミノ末端に２つの結合部位およびカルボキシル末端に２つの結合部位を含む。結合ドメインは従って、単鎖ポリペプチドがダイマー化される場合、二価（すなわち、各末端に２つの結合部分）と見なされる。
「野性型免疫グロブリンヒンジ領域」は、抗体の重鎖中に認められるＣＨ１およびＣＨ２ドメイン（ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤに対する）間に挿入され、これらを連結する、またはＣＨ１およびＣＨ３ドメイン（ＩｇＥおよびＩｇＭに対する）間に挿入され、これらを連結する天然起源上部ヒンジおよび中間ヒンジアミノ酸配列を指す。特定の実施形態では、野生型免疫グロブリンヒンジ領域配列はヒトであり、ヒトＩｇＧヒンジ領域を含み得る。
「改変野性型免疫グロブリンヒンジ領域」または「改変免疫グロブリンヒンジ領域」は、（ａ）最大で３０％のアミノ酸変化（例えば、最大で２５％、２０％、１５％、１０％、または５％のアミノ酸置換または欠失）を有する野生型免疫グロブリンヒンジ領域、または（ｂ）約５アミノ酸（例えば、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、または約２０アミノ酸）から最大約１２０アミノ酸（例えば、約１０～約４０アミノ酸または約１５～約３０アミノ酸または約１５～約２０アミノ酸または約２０～約２５アミノ酸）の長さを有し、最大で３０％のアミノ酸変化（例えば、最大で約２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、または１％のアミノ酸置換または欠失またはこれらの組み合わせ）を有し、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号および同第２０１３／００９５０９７号で開示のＩｇＧコアヒンジ領域を有する野生型免疫グロブリンヒンジ領域の一部、を指す。
本明細書で使用される場合、「ヒト化」という用語は、遺伝子工学技術を用いて、依然として元の抗体の結合特性を保持しながら、非ヒト種（例えば、マウスまたはラット）由来の抗体または免疫グロブリン結合タンパク質およびポリペプチドをヒトに対しより低い免疫原性にするプロセスを指す。いくつかの実施形態では、抗体または免疫グロブリン結合タンパク質およびポリペプチドの結合ドメイン（例えば、軽鎖および重鎖可変領域、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ）は、ヒト化される。非ヒト結合ドメインは、「再形成（ｒｅｓｈａｐｉｎｇ）」（Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，ｅｔ ａｌ．，１９８８ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，ｅｔ ａｌ．，１９８８ Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３３７；Ｔｅｍｐｅｓｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ １９９１ ９：２６６－２７１）、「超キメラ化（ｈｙｐｅｒｃｈｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）」（Ｑｕｅｅｎ，ｅｔ ａｌ．，１９８９ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３；Ｃｏ，ｅｔ ａｌ．，１９９１ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：２８６９－２８７３；Ｃｏ，ｅｔ ａｌ．，１９９２ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４８：１１４９－１１５４）、および「ベニアリング」（Ｍａｒｋ，ｅｔ ａｌ．，”Ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ａｎｄ ｖｅｎｅｅｒｅｄ ａｎｔｉ－ＣＤ１８ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．” Ｉｎ：Ｍｅｔｃａｌｆ ＢＷ，Ｄａｌｔｏｎ ＢＪ，ｅｄｓ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，１９９４：２９１－３１２）を含む、ＣＤＲグラフティングとして知られる技術（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２（１９８６））およびその変形技術を用いてヒト化できる。非ヒト源から誘導する場合、抗体または免疫グロブリン結合タンパク質およびポリペプチドの、ヒンジ領域および定常領域ドメインなどの他の領域もまたヒト化できる。
本明細書で使用される場合、「免疫グロブリンダイマー化ドメイン」または「免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメイン」は、第２のポリペプチド鎖の異なる免疫グロブリンドメインと選択的に相互作用するまたは結合するポリペプチド鎖の免疫グロブリンドメインを指し、異なる免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインの相互作用は、第１および第２のポリペプチド鎖のヘテロダイマー化（すなわち、２つの異なるポリペプチド鎖間のダイマーの形成、これもまた、「ヘテロダイマー」とも呼ばれる）に実質的に寄与するまたはそれを効率的に促進する。免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメイン間の相互作用は、第１のポリペプチド鎖の免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインおよび／または第２のポリペプチド鎖の免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインの非存在下で、第１および第２のポリペプチド鎖間のダイマー化において統計的に有意な低減が存在する場合、第１および第２のポリペプチド鎖のヘテロダイマー化に「実質的に寄与するまたはこれを効率的に促進する」。特定の実施形態では、第１および第２のポリペプチド鎖が共発現される場合、少なくとも６０％、少なくとも約６０％から約７０％まで、少なくとも約７０％から約８０％まで、少なくとも８０％から約９０％まで、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％の第１および第２のポリペプチド鎖は、相互にヘテロダイマーを形成する。代表的免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、そこで提供される、野生型免疫グロブリンＣＨ１およびＣＬドメインおよび改変（または変異）免疫グロブリンＣＨ１およびＣＬドメインを含む、免疫グロブリンＣＨ１ドメイン、免疫グロブリンＣＬドメイン（例えば、ＣκまたはＣλアイソタイプ）、またはその誘導体を含む。
「免疫グロブリン定常領域」または「定常領域」は、本明細書では、１つまたは複数の定常領域ドメインの一部または全てに対応するまたはそれから誘導されるペプチドまたはポリペプチド配列を指すように定義される用語である。特定の実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、元の抗体の１つまたは複数の定常領域ドメインであるが全ての定常領域ドメインでないドメインの一部または全てに対応するまたはそれから誘導される。特定の実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン、例えば、ＩｇＧ１ ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。特定の実施形態では、定常領域は、ＣＨ１ドメインを含まない。特定の実施形態では、定常領域を構成する定常領域ドメインは、ヒトのものである。いくつかの実施形態では（例えば、ＣＤ３または別のＴ細胞表面抗原に特異的に結合する第２の結合ドメインを含むＣＤ１２３結合ポリペプチドまたはタンパク質の特定の変形例では）、本開示の融合タンパク質の定常領域ドメインは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体活性化および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）のエフェクター機能を欠くか、最小限のエフェクター機能を有するが、いくつかのＦｃ受容体（ＦｃＲｎ、新生児Ｆｃ受容体など）に結合する能力を保持し、比較的長いインビボ半減期を保持する。他の変形例では、本開示の融合タンパク質は、ＡＤＣＣおよびＣＤＣの片方または両方のこのようなエフェクター機能を保持する定常ドメインを含む。特定の実施形態では、本開示の結合ドメインは、ヒトＩｇＧ１定常領域に融合され、ＩｇＧ１定常領域は、１つまたは複数の次の変異されたアミノ酸を有する：位置２３４のロイシン（Ｌ２３４）、位置２３５のロイシン（Ｌ２３５）、位置２３７のグリシン（Ｇ２３７）、位置３１８のグルタミン酸（Ｅ３１８）、位置３２０のリジン（Ｋ３２０）、位置３２２のリジン（Ｋ３２２）、またはこれらの任意の組み合わせ（ＥＵによるナンバリング）。例えば、これらのアミノ酸のいずれか１つまたは複数は、アラニンに変更できる。さらなる実施形態では、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、アラニンに変異されたＬ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、およびＫ３２２（ＥＵナンバリングによる）（すなわち、それぞれ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０Ａ、およびＫ３２２Ａ）のいずれかを有し、および任意選択で、Ｎ２９７Ａ変異も有する（すなわち、ＣＨ２ドメインのグリコシル化を本質的に除去する）。別の実施形態では、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＫ３２２Ａ変異のそれぞれを有する。
「Ｆｃ領域」または「Ｆｃドメイン」は、細胞上の抗体受容体および補体のＣ１ｑ成分に結合に関与する、元の抗体に対応するまたはそれから誘導されるポリペプチド配列を指す。Ｆｃは、タンパク質結晶を容易に形成する抗体のフラグメントである、「結晶性フラグメント」を意味する。元々タンパク分解性消化により説明される、別個のタンパク質フラグメントは、免疫グロブリンタンパク質の全体構造を規定できる。文献で最初に定義されたように、Ｆｃフラグメントは、ジスルフィド結合重鎖ヒンジ領域、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインからなる。しかし、より最近になって、この用語は、ＣＨ３、ＣＨ２、および第２のこのような鎖とジスルフィド結合ダイマーを形成するために十分なヒンジの少なくとも一部分からなる単鎖に適用された。免疫グロブリン構造および機能の概説については、Ｐｕｔｎａｍ，Ｔｈｅ Ｐｌａｓｍａ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｖｏｌ．Ｖ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８７），ｐｐ．４９－１４０；ａｎｄ Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１６９－２１７，１９９４を参照されたい。本明細書で使用する場合、用語のＦｃは、天然起源配列のバリアントを含む。
用語の患者および対象は、同義に使用される。本明細書で使用される場合、「必要としている患者」または「必要としている対象」という用語は、本明細書で提供される治療的タンパク質またはその組成物による治療または改善に適する疾患、障害または状態の危険のある、またはそれらを罹患している対象を指す。必要としている対象は、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｂリンパ性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）、毛様細胞性白血病（ＨＣＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、過剰芽球を伴う難治性貧血（ＲＡＥＢ）、慢性骨髄性白血病およびホジキンリンパ腫などのＣＤ１２３の発現に関連する疾患と診断された患者であり得る。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な」という用語は、当該技術分野において周知の経路を用いて投与される場合、通常、アレルギー性または他の重篤な有害反応を生じない分子実体および組成物を指す。連邦政府または州政府の規制当局により承認されているまたは米国薬局方、またはその他の一般に認められている、動物およびさらに具体的にはヒトに使用される薬局方に列挙されている分子実体および組成物は、「薬学的に許容可能」であると見なされる。
本明細書で使用される場合、「核酸」、「核酸分子」、または「ポリヌクレオチド」という用語は、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド、および一本鎖または二本鎖形態のそのポリマーを指す。特に限定されない限り、この用語は、参照核酸と類似の結合特性を有し天然のヌクレオチドと同様に代謝される、天然ヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸を包含する。特に指示がない限り、特定の核酸配列はまた、その保存的に改変されたそのバリアント変異体（例えば、縮重コドン置換）および相補的配列、ならびに明示的に示された配列を暗黙に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つまたは複数の選択された（または全ての）コドンの第３の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基によって置換される配列を作成することにより達成できる（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８；Ｃａｓｓｏｌ ｅｔ ａｌ．（１９９２）；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１－９８）。用語の核酸は、遺伝子、遺伝子によりコードされたｃＤＮＡ、およびｍＲＮＡと同義に使用される。本明細書で使用される場合、「核酸」、「核酸分子」または「ポリヌクレオチド」という用語は、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ヌクレオチド類似体を用いて生成されたＤＮＡまたはＲＮＡの類似体、およびそれらの誘導体、フラグメントおよびホモログを含むことが意図される。
用語の「発現」は、核酸によりコードされる産物の生合成を指す。例えば、目的のポリペプチドをコードする核酸セグメントの場合、発現は、核酸セグメントのｍＲＮＡへの転写およびｍＲＮＡの１つまたは複数のポリペプチドへの翻訳を含む。
用語「発現ユニット」および「発現カセット」は、本明細書では同義で用いられ、目的のポリペプチドをコードする核酸セグメントを示し、宿主細胞中で核酸セグメントの発現を提供できる。発現ユニットは通常、転写プロモーター、目的のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム、および転写ターミネーターを含み、全ては、動作可能な構成である。転写性プロモーターおよびターミネーターに加えて、発現ユニットは、例えば、エンハンサーまたはポリアデニル化シグナルなどの他の核酸セグメントをさらに含み得る。
本明細書で使用される場合、用語「発現ベクター」は、１つまたは複数の発現ユニットを含む、直鎖または環状の核酸分子を指す。１つまたは複数の発現ユニットに加えて、発現ベクターは、例えば、１つまたは複数の複製起点または１種または複数の選択可能マーカーなどの追加の核酸セグメントも含み得る。発現ベクターは通常、プラスミドまたはウイルス性ＤＮＡ由来であるか、または両方のエレメントを含み得る。
本明細書で使用される場合、「配列同一性」という用語は、２つ以上のポリヌクレオチド配列間または２つ以上のポリペプチド配列間の関連性を指す。１つの配列中の位置が、比較配列の対応する位置の同一の核酸塩基またはアミノ酸残基で占められる場合、その配列は、その位置で「同一」であると言われる。「配列同一性」のパーセントは、両方の配列中に同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が生ずる位置の数を決定し、「同一」の位置の数を得ることにより算出される。「同一」の位置の数は、その後、比較ウインドウ中の位置の総数により除算され、１００を乗じて「配列同一性」のパーセンテージを得る。「配列同一性」のパーセンテージは、２つの最も適切なように整列された配列を比較ウインドウにわたって比較することにより決定される。核酸配列のための比較ウインドウは、例えば、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００または１０００の、もしくはそれを越える核酸長であり得る。ポリペプチド配列のための比較ウインドウは、例えば、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００の、またはそれを超えるアミノ酸長であり得る。比較のために配列を最適整列させるために、比較ウインドウ中のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の一部は、付加またはギャップと呼ばれる欠失を含んでよく、同時に、基準配列は一定に保持される。最適整列は、ギャップを有する場合であっても、参照配列と比較配列との間で最大可能数の「同一」位置を生成する整列である。２つの配列間のパーセンテージ「配列同一性」は、プログラムバージョン「ＢＬＡＳＴ ２ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」を用いて決定でき、これは、２００４年、９月１日現在、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎから入手でき、このプログラムは、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０（１２）：５８７３－５８７７，１９９３）のアルゴリズムをベースにした、プログラムＢＬＡＳＴＮ（ヌクレオチド配列比較用）およびＢＬＡＳＴＰ（ポリペプチド配列比較用）を組み込んでいる。「ＢＬＡＳＴ ２ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」を利用する場合、２００４年９月１日時点のデフォルトパラメーターであったパラメーター、ワードサイズ（３）、オープンギャップペナルティ（１１）、伸長ギャップペナルティ（ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｙ）（１）、ギャップドロップオフ値（ｇａｐ ｄｒｏｐｏｆｆ）（５０）、期待値（１０）および限定されないが、マトリックスオプションを含む任意の他の必要なパラメーターを使用できる。２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列アミノ酸配列は、２つの配列が相互に、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％配列同一性を有する場合、「実質的に類似の配列同一性」または「実質的配列同一性」を有すると見なされる。
「ＣＤ３」は、当該技術分野において、６鎖の多タンパク質複合体として知られており（例えば、Ａｂｂａｓ ａｎｄ Ｌｉｃｈｔｍａｎ，２００３；Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，ｐ．１７２ ａｎｄ １７８，１９９９を参照）、これは、Ｔ細胞受容体複合体のサブユニットである。哺乳動物では、Ｔ細胞受容体複合体のＣＤ３サブユニットは、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、２つのＣＤ３ε鎖、およびＣＤ３ζ鎖のホモダイマーである。ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、およびＣＤ３ε鎖は、単一免疫グロブリンドメインを含む免疫グロブリンスーパーファミリーの高度に関連する細胞表面タンパク質である。ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、およびＣＤ３ε鎖の膜貫通領域は、負に帯電し、これは、これらの鎖が、正に帯電したＴ細胞受容体鎖と結合することを可能にするという特性を示す。ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、およびＣＤ３ε鎖の細胞内テイルはそれぞれ、免疫受容体チロシン活性化モチーフとして知られる単一の保存されたモチーフまたはＩＴＡＭを含み、一方、各ＣＤ３ζ鎖は、３つのＩＴＡＭを有する。ＩＴＡＭは、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達能力に重要であると考えられている。本開示で使用されるＣＤ３は、ヒト、サル、マウス、ラット、または他の哺乳動物を含む、種々の動物種由来であり得る。
用語「ＣＤ１２３」は、表面抗原分類１２３、インターロイキン３受容体アルファ鎖、およびＩＬ３ＲＡとしても知られるＣＤ１２３のいずれかのアイソフォームを指し得る。ＣＤ１２３は、インターロイキン３受容体のβ鎖と結合して、受容体を形成する。ＣＤ１２３は、Ｉ型膜貫通型糖タンパク質であり、予測免疫グロブリン様ドメインおよび２つのＦｎＩＩＩドメインを含む細胞外ドメインを有する。本開示のＣＤ１２３結合ドメインは、ＣＤ１２３の細胞外ドメインに結合する。
ＣＤ１２３は、ヒトインターロイキン３（ＩＬ－３）受容体のアルファ鎖としても知られる。ＣＤ１２３は、Ｉ型膜貫通型糖タンパク質であり、サイトカイン受容体スーパーファミリーのメンバーである。インターロイキン３受容体は、ＣＤ１２３およびベータ鎖（ＣＤ１３１）により形成されたヘテロダイマーである。ＩＬ－３は、ＣＤ１２３に結合し、シグナル伝達がＣＤ１３１により提供される。ＩＬ－３は、造血および免疫細胞の機能と産生を調節し、内皮細胞増殖を刺激する（Ｔｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｒｋ Ｒｅｓ．２：４（２０１４））。
ＣＤ１２３は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｂリンパ性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物（ｂｌａｓｔｉｃ ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｎｅｏｐｌａｓｍ）（ＢＰＤＣＮ）および毛様細胞性白血病のサブセットを含む多くの血液悪性腫瘍中で過剰発現される。ほとんどのＡＭＬ患者は、初期治療法に良好に応答するが、ＡＭＬ患者の大部分は、最終的に再発性または難治性疾患と診断される（Ｒａｍｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．４：６６５－６９５（２０１５））。高められた効率と効力および低い有害作用を有し、かつＣＤ１２３の調節不全に関連する障害の治療に使用し得る、ＣＤ１２３標的化分子が必要とされている。
「ＣＤ８６」は、Ｂ７受容体サブファミリーに属しかつＴ細胞共刺激として機能する表面分子として当該技術分野において既知である（Ｌｕ ｅｔ ａｌ．１９９７；Ｖｉｃｅｎｔｉ ｅｔ ａｌ．２００８）。それは通常、樹状細胞、単球および活性化され休止していないＢ細胞などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）機能を有する細胞上で発現される（Ｌｕ ｅｔ ａｌ．１９９７；Ｖｉｃｅｎｔｉ ｅｔ ａｌ．２００８）。それは、ナイーブヒト単球およびＤＣにより高レベルで発現され、それは、いくつかの活性化条件下でさらに発現上昇される（Ｈａｔｈｃｏｃｋ ｅｔ ａｌ．１９９４）；Ｓａｎｓｏｍ ｅｔ ａｌ．２００３）。ナイーブ単球上のＣＤ８６の発現は、細胞当り２，０００～５，０００コピーの範囲であると推定されている（Ｗｏｌｋ ｅｔ ａｌ．２００７）。高レベルのＣＤ８６発現は、特定の病的状態の炎症性組織と関連し（Ｖｕｃｋｏｖｉｃ ｅｔ ａｌ．２００１；Ｎａｋａｚａｗａ ｅｔ ａｌ．１９９９）、ＣＤ８６およびＣＤ８０（後者はＢ７ファミリーの第２のメンバーである）は、Ｔ細胞共受容体ＣＤ２８との相互作用により、Ｔ細胞活性化を促進する。
「ＣＤ８６」結合ドメインは、ＣＤ８６に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、ＣＤ８６（例えば、ヒトＣＤ８６）の細胞外ドメインに位置するエピトープに結合する。特定の態様では、このエピトープは、不連続な、および／または立体構造的なエピトープである。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、ＣＤ８６を結合するが、ＣＤ８０を結合しない。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、ヒトＣＤ８６を結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、非ヒト霊長類ＣＤ８６を結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、ヒトＣＤ８６を結合し、また、カニクイザルＣＤ８６と交差反応する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、カニクイザル単球および系統陰性集団（ＤＣ）に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、ヒト化される。
「タンパク質」は、１つまたは複数のポリペプチド鎖を含む高分子である。タンパク質はまた、炭水化物基などの、非ペプチド成分も含み得る。炭水化物および他の非ペプチド置換基は、そのタンパク質が産生される細胞によりタンパク質に付加でき、細胞型により変化する。タンパク質は、本明細書では、それらのアミノ酸骨格構造により定義される；炭水化物基などの置換基は通常、明記されないが、それにもかかわらず存在し得る。「タンパク質」、「ポリペプチド」、「治療的タンパク質」、および「治療的ポリペプチド」という用語は、本明細書では同義に使用される。
治療的タンパク質は、抗体または抗体の抗原結合フラグメントであり得る。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質はまた、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ分子、二重特異的Ｔ細胞エンゲージャー（ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ）分子、または二重親和性再標的化分子であり得る。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、組換え多重特異的タンパク質であり得る。他の実施形態では、多重特異的タンパク質は、２つの異なるモノクローナル抗体の化学的連結により、または２つのハイブリドーマ細胞株を融合して、ハイブリッドハイブリドーマを生成することにより、作製され得る。治療的タンパク質のために使用できる他の多価フォーマットは、例えば、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ（例えば、ＡＤＡＰＴＩＲ（商標））、クアドローマ、Ｋλボディ（Ｋλ－ｂｏｄｙ）、ｄＡｂ、ディアボディ、ＴａｎｄＡｂ、ナノボディ、Ｓｍａｌｌ Ｍｏｄｕｌａｒ ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉａｌｓ（ＳＭＩＰ（商標））、ＤＯＣＫ－ＡＮＤ－ＬＯＣＫ（登録商標）（ＤＮＬ（登録商標））、ＣｒｏｓｓＭａｂ Ｆａｂ、ＣｒｏｓｓＭａｂ ＶＨ－ＶＬ、鎖交換改変ドメインボディ（ｓｔｒａｎｄ－ｅｘｃｈａｎｇｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｄｏｍａｉｎ ｂｏｄｙ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）、アフィボディ、フィノマー、クニッツドメイン、Ａｌｂｕ－ｄａｂ、交換ＶＨを有する２つの改変Ｆｖフラグメント（ｔｗｏ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｆｖ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｅｘｃｈａｎｇｅｄ ＶＨｓ（例えば、二重親和性親和性再標的化分子（ｄｕａｌ－ａｆｆｉｎｉｔｙ ｒｅ－ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）（Ｄ．Ａ．Ｒ．Ｔ．））、ｓｃＦｖ ｘ ｓｃＦｖ（例えば、ＢｉＴＥ）、ＳＶＤ－ＩＧ、Ｃｏｖｘ－ｂｏｄｙ、ペプチボディ、ｓｃＦｖ－Ｉｇ、ＳＶＤ－Ｉｇ、ｄＡｂ－Ｉｇ、Ｋｎｏｂ－ｉｎ－Ｈｏｌｅ、ＣＨ３ドメイン中に一致変異を含むＩｇＧ１抗体（ＩｇＧ１ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ｍａｔｃｈｅｄ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ＣＨ３ ｄｏｍａｉｎ）（例えば、デュオボディ抗体）およびトリオマブを含む。例示的二重特異的フォーマットは、Ｇａｒｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ １３：７９９－８０１（２０１４）で考察される。この文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。追加の例示的二重特異的フォーマットは、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：３８ ｄｏｉ：１０．２２８９／ｆｉｍｍｕ．２０１７．０００３８、ならびにＢｒｉｎｋｍａｎｎ ａｎｄ Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，ＭＡＢＳ ９：２，１８２－２１２（２０１７）で考察される。これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、二重特異性抗体は、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントであり得る。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、ヒンジ領域でジスルフィド結合により連結されたテトラマー抗体分子の２つの抗原結合アームを含む。
用語「アミノ末端」および「カルボキシル末端」は、本明細書では、ポリペプチド内の位置を示すために使用される。文脈が許容する場合、これらの用語は、近似度または相対位置を示すために、ポリペプチドの特定の配列または部分を基準として使用される。例えば、ポリペプチド内の基準配列に対してカルボキシル末端に位置する特定の配列は、基準配列のカルボキシル末端の近位に位置するが、完全なポリペプチドのカルボキシル末端にあるとは限らない。
本明細書で使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、または「回復すること（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｎｇ）」という用語は、治療的処置または予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）処置／予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）処置を指す。処置は、処置を受けている個体における疾患の少なくとも１つの症状が改善する、または処置が個体における進行性疾患の悪化を遅らせることができる、または追加の関連疾患の発症を防止することができる場合、治療的である。
本明細書で使用される場合、特異的結合分子または化合物の「治療的有効量（または治療的有効投与量）」または「有効量（または有効投与量）」という用語は、統計的に有意な方式で、または統計的に有意な臓器機能の改善の観点で治療されている疾患の１種または複数の症状の回復を生ずるのに十分な、化合物の量を指す。単独で投与される個別の有効成分に言及する場合、治療的有効量はその成分単独を指す。組み合わせに言及する場合、治療的有効量は、順次または同時に（同じ製剤中で、または別の製剤で同時に）投与されたかにかかわらず、治療的効果を生ずる有効成分の組み合わされた量を指す。
用語「軽鎖可変領域」（「軽鎖可変ドメイン」または「ＶＬ」または「ＶＬ」とも呼ばれる）および「重鎖可変領域」（「重鎖可変ドメイン」または「ＶＨ」または「ＶＨ」とも呼ばれる）は、それぞれ、抗体軽鎖および重鎖由来の可変結合領域を指す。可変結合領域は、通常、アミノ末端からカルボキシル末端へ、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の順に含む、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）および「フレームワーク領域」（ＦＲ）として知られる別々の明確な小領域から構成される。一実施形態では、ＦＲはヒト化されている。用語「ＣＬ」は、「免疫グロブリン軽鎖定常領域」または「軽鎖定常領域」、すなわち、抗体軽鎖由来の定常領域を指す。用語「ＣＨ」は、「免疫グロブリン重鎖定常領域」または「重鎖定常領域」を指し、これは、抗体アイソタイプに応じて、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ）、またはＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメイン（ＩｇＥ、ＩｇＭ）にさらに分割できる。「Ｆａｂ」（抗原結合性フラグメント）は、抗原に結合する抗体の一部であり、鎖間ジスルフィド結合を介して軽鎖に結合された重鎖の可変領域およびＣＨ１ドメインを含む。
本明細書で使用される場合、「治療的タンパク質を保持するように適合された容器」は、治療的タンパク質の保持および／または運搬に好適な任意の臨床的に許容可能な容器を指す。このような容器の非限定的例としては、例えば、ＩＶバッグ、注入器、チューブ／配管が挙げられる。いくつかの実施形態では、容器は、ラテックスおよび／またはビス（２－エチルヘキシル）フタレート（ＤＥＨＰ）を実質的に不含である。
「静脈内薬物送達システム」は、調製する（例えば、希釈．混合など）および／または対象または患者に静脈内に薬物を静脈内に送達するために使用される任意の臨床的に許容可能なシステムを指し得る。このようなシステムは、例えば、ＩＶバッグ、注入器、チューブ／配管、ポンプ、針、などを含み得る。
タンパク質吸着を防止するための組成物
治療的タンパク質は多くの場合、薬物送達システムを用いて静脈内に投与される。例えば、タンパク質治療薬を含む無菌溶液は、ＩＶバッグまたは他の容器で提供され、患者の静脈に挿入される針に取り付けられたチューブを経由して患者の身体中に注入／輸注される。従って、治療的タンパク質の投与の間、タンパク質は、薬物送達システムの１つまたは複数の表面、例えばＩＶバッグまたはチューブの内面と接触する。治療的タンパク質は、例えばタンパク質の表面上の荷電アミノ酸が表面と交互作用する時に、このような表面に吸着することが知られている。タンパク質が表面に付着した状態で残る傾向は、表面エネルギー、構造、および相対的電荷分布などの、材料特性に大きく依存する。より大きなタンパク質は、アミノ酸と表面との間のより多い数の接触部位に起因して、吸着し表面に付着したまま残る可能性がより高い。
治療的タンパク質は多くの場合、薬物送達システムを用いて静脈内に投与される。例えば、タンパク質治療薬を含む無菌溶液は、ＩＶバッグまたは他の容器で提供され、患者の静脈に挿入される針に取り付けられたチューブを経由して患者の身体中に注入／輸注される。従って、治療的タンパク質の投与の間、タンパク質は、薬物送達システムの１つまたは複数の表面、例えばＩＶバッグまたはチューブの内面と接触する。治療的タンパク質は、例えばタンパク質の表面上の荷電アミノ酸が表面と交互作用する時に、このような表面に吸着することが知られている。タンパク質が表面に付着した状態で残る傾向は、表面エネルギー、構造、および相対的電荷分布などの、材料特性に大きく依存する。より大きなタンパク質は、アミノ酸と表面との間のより多い数の接触部位に起因して、吸着し表面に付着したまま残る可能性がより高い。
タンパク質吸着は、治療的タンパク質の患者への投与の間の大きな懸念であり得る。例えば、治療的タンパク質の薬物送達システムの表面への吸着は、患者に送達されるタンパク質の投与量を低減する可能性がある。タンパク質吸着は、低投与量および／または低濃度（すなわち、≦１０ｍｃｇ／ｍＬ）でのタンパク質治療薬の投与中に特に問題であり得る。
本開示は、１つまたは複数の薬物送達システム構成要素へのタンパク質吸着を低減するまたは除去するために使用できる、組成物を提供する。組成物を、治療的タンパク質の投与の前に、１つまたは複数の薬物送達システム構成要素の表面と接触させ得る。いくつかの実施形態では、組成物は、薬物送達システムの少なくとも１つの構成要素の内面をコートし、治療的タンパク質がその構成要素の内面に結合することを防ぐ。
タンパク質吸着を防ぐための組成物は、緩衝液および界面活性物質を含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、治療的タンパク質をさらに含み得る。組成物のｐＨは、約５．０～約７．０、例えば、約５．０、約５．２５、約５．５、約５．７５、約６．０、約６．２５、約６．５、約６．７５、または約７．０の範囲であり得る。
いくつかの実施形態では、組成物は、約１～約１０ｍＭの緩衝液、および約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％の界面活性物質を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約４ｍＭ～約６ｍＭの緩衝液、例えば約５ｍＭの緩衝液を含む。
さらなる実施形態では、組成物は、約２５ｍＭ～約１５０ｍＭの緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約７５ｍＭ～約１２５ｍＭの緩衝液、例えば約１００ｍＭの緩衝液を含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、約０．００２（ｗ／ｖ）％～約０．００８（ｗ／ｖ）％の界面活性物質を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．００４（ｗ／ｖ）％の界面活性物質を含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、約０．０５（ｗ／ｖ）％～約０．１（ｗ／ｖ）％の界面活性物質を含む。例えば、組成物は、約０．０５（ｗ／ｖ）％～約０．１（ｗ／ｖ）％の界面活性物質を含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．０８（ｗ／ｖ）％の界面活性物質を含む。
いくつかの実施形態では、緩衝液は、スクシネート緩衝液である。いくつかの実施形態では、界面活性物質は、ポリソルベート８０であり得る。さらなる実施形態では、緩衝液はスクシネートであり、界面活性物質はポリソルベート８０であり得る。スクシネートは、コハク酸の塩またはエステルである。ポリソルベート８０は、非イオン性界面活性剤および乳化剤である。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素への治療的タンパク質の吸着を減らすための組成物は、スクシネートおよびポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約２５ｍＭ～約１５０ｍＭのスクシネートを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約７５ｍＭ～約１２５ｍＭのスクシネート、例えば、約１００ｍＭのスクシネートを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．００２（ｗ／ｖ）％～約０．００８（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．００４（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．０５（ｗ／ｖ）％～約０．１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む。例えば、組成物は、約０．０５（ｗ／ｖ）％～約０．１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．０８（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、約４ｍＭ～約６ｍＭのスクシネート、例えば、約５ｍＭのスクシネートを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、および約０．００２（ｗ／ｖ）％～約０．００８（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、例えば、約０．００４（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、および約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、水中の約５ｍＭのスクシネート、および約０．０００４（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含み、組成物のｐＨは、約６．０であり、組成物は、注入用に処方される。
いくつかの実施形態では、組成物は、治療的タンパク質をさらに含み得る。治療的タンパク質の濃度は、約０．０１μｇ／ｍＬ～約２．０μｇ／ｍＬであり得る。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質の濃度は、約０．０１、約０．０２、約０．０３、約０．０４、約０．０５、約０．０６、約０．０７、約０．０８、または約０．０９μｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質の濃度は、約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、または約０．９μｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質の濃度は、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、または約１．９、または約２．０μｇ／ｍＬである。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物は、約１００ｍＭのスクシネート、約０．０８（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および治療有効量の治療的タンパク質を含む。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２／０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、第１の標的に特異的に結合する第１の結合ドメイン、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１の標的は、ＣＤ８６である。いくつかの実施形態では、第１の標的は、ＣＤ１２３である。いくつかの実施形態では、第２の標的は、ＩＬ－１０の受容体である。いくつかの実施形態では、第２の標的は、ＣＤ３εである。いくつかの実施形態では、第１の標的はＣＤ８６であり、第２の標的はＩＬ－１０の受容体である。いくつかの実施形態では、第１の標的はＣＤ１２３であり、第２の標的はＣＤ３εである。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２／０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、第１の結合ドメイン、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および第２の結合ドメインを含み、第１の結合ドメインは、（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１０を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１１を含み、およびＨＣＤＲ３は配列番号１２を含み；ならびにＬＣＤＲ１は配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１４を含み、およびＬＣＤＲ３は配列番号１５を含み、第２の結合ドメインは、（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み；ＨＣＤＲ１は配列番号１９を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２０を含み、およびＨＣＤＲ３は配列番号２１を含み、ならびにＬＣＤＲ１は配列番号２２を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号２３を含み、およびＬＣＤＲ３は配列番号２４を含む。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２．０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、配列番号３１の配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２／０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含み、ＣＤ８６結合ドメインは、ＣＤ８６に特異的に結合する可変重鎖および可変軽鎖を含み、免疫グロブリンＦｃドメインは、Ｆｃ受容体ＦｃγＲ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩｂへの結合を防止または有意に低減する２つ以上の変異を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインであり、モノマーＩＬ－１０ドメインは、短いリンカーで分離された２つのヒトＩＬ－１０サブユニットを含み、治療的タンパク質は、ホモダイマーである。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２／０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含み、ＣＤ８６結合ドメインはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号３であり、ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号５であり、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号６であり、モノマーＩＬ－１０ドメインは配列番号２８のアミノ酸配列を有する。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２／０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含み、ＣＤ８６結合ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含み、モノマーＩＬ－１０ドメインは、配列番号２８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らす組成物は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および約０．０１μｇ／ｍＬ～約２．０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質を含み、治療的タンパク質は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、１Ｘを越える濃度で提供され得る。例えば、組成物は、１０Ｘ～５０Ｘの濃度であり得る。いくつかの実施形態では、組成物は、２Ｘ、５Ｘ、１０Ｘ、１５Ｘ、２０Ｘ、２５Ｘ、３０Ｘ、３５Ｘ、４０Ｘ、４５Ｘ、または５０Ｘの濃度であり得る。いくつかの実施形態では、組成物は、２０Ｘの濃度である。本文脈中で使用される場合、「Ｘ」は、溶液が、使用のために、通常、１Ｘの濃度に希釈される必要がある濃縮形態にあることを示す。例えば、５Ｘ濃縮液は、５倍希釈される必要があり、一方、１００Ｘ濃縮液は、１００倍希釈される必要がある。希釈は、例えば、水または生理食塩水を用いて実施され得る。
いくつかの実施形態では、組成物は、約２５～約１５０ｍＭのスクシネート、および約０．０１（ｗ／ｖ）％～約０．１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約７５ｍＭ～約１２５ｍＭのスクシネート、例えば、約１００ｍＭのスクシネートを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．０５（ｗ／ｖ）％～約０．１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、例えば、約０．０８（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは、約５．０～約７．０、例えば、約６．０である。いくつかの実施形態では、組成物は、水中の約１００ｍＭのスクシネート、および約０．０８（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含み、組成物のｐＨは、約６．０であり、組成物は、注入用に処方される。
いくつかの実施形態では、２０Ｘ ＩＶＳＳ溶液が提供され、約２０Ｘ溶液は、約２５ｍＭ～約１５０ｍＭのスクシネート、および約０．０１（ｗ／ｖ）％～約０．１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、２０Ｘ ＩＶＳＳ溶液は、約１００ｍＭのスクシネート、および約０．０８（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、２０Ｘ ＩＶＳＳ溶液は、水中の約１００ｍＭのスクシネートおよび約０．０８（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含み、組成物のｐＨは、約６．０であり、組成物は、注入用に処方される。
いくつかの実施形態では、２０Ｘ ＩＶＳＳ溶液は、１Ｘの濃度に希釈される。いくつかの実施形態では、１Ｘ ＩＶＳＳ溶液は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、および約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、１Ｘ ＩＶＳＳ溶液は、約５ｍＭのスクシネート、および約０．００４（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、１Ｘ ＩＶＳＳ溶液は、水中の約５ｍＭのスクシネートおよび約０．００４（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含み、組成物のｐＨは、約６．０であり、組成物は、注入用に処方される。いくつかの実施形態では、１Ｘ ＩＶＳＳ溶液は、抗ＣＤ１２３ ｘ 抗ＣＤ３二重特異的結合タンパク質、または抗ＣＤ８ ｘ モノマーＩＬ－１０結合タンパク質などの、治療的タンパク質をさらに含む。
いくつかの実施形態では、１Ｘ ＩＶＳＳ溶液（治療的タンパク質含有または不含）は、治療的タンパク質の送達の前に、少なくとも１種の治療的タンパク質の送達に適合された薬物送達システム構成要素をコートするために使用される。
いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容可能な担体または賦形剤などの１種または複数の追加の成分をさらに含み得る。
治療的タンパク質
本明細書で記載の組成物および方法を、多くの異なるタイプの治療的タンパク質の調製、貯蔵、および／または投与に関連して使用して、１つまたは複数の表面へのその吸着を防ぎ得る。治療的タンパク質は、例えば、抗体ベース薬物、Ｆｃ融合タンパク質、抗凝固剤、血液因子、骨形成タンパク質、改変足場タンパク質、酵素、成長因子、ホルモン、サイトカイン、インターフェロン、インターロイキン、および血栓溶解薬であり得る。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、標的受容体に対するリガンドである。
本明細書で記載の組成物および方法を、多くの異なるタイプの治療的タンパク質の調製、貯蔵、および／または投与に関連して使用して、１つまたは複数の表面へのその吸着を防ぎ得る。治療的タンパク質は、例えば、抗体ベース薬物、Ｆｃ融合タンパク質、抗凝固剤、血液因子、骨形成タンパク質、改変足場タンパク質、酵素、成長因子、ホルモン、サイトカイン、インターフェロン、インターロイキン、および血栓溶解薬であり得る。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、標的受容体に対するリガンドである。
結合ドメイン
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、少なくとも１つの結合ドメインを含む。結合ドメインは、少なくとも１種の細胞表面分子（例えば、細胞表面受容体）への特異的結合を提供し得る。結合ドメインは、抗体またはそのフラグメント、または異なるフォーマットのいずれかの融合タンパク質の形態であり得る（例えば、融合タンパク質は、二重特異的または多重特異的分子の形態であり得る）。他の実施形態では、結合ドメインは、例えば、結合ドメインポリペプチドを、例えば、特定の細胞型、毒素、追加の細胞受容体、または抗体に向ける特定のサイトカインまたは分子を含み得る。
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、少なくとも１つの結合ドメインを含む。結合ドメインは、少なくとも１種の細胞表面分子（例えば、細胞表面受容体）への特異的結合を提供し得る。結合ドメインは、抗体またはそのフラグメント、または異なるフォーマットのいずれかの融合タンパク質の形態であり得る（例えば、融合タンパク質は、二重特異的または多重特異的分子の形態であり得る）。他の実施形態では、結合ドメインは、例えば、結合ドメインポリペプチドを、例えば、特定の細胞型、毒素、追加の細胞受容体、または抗体に向ける特定のサイトカインまたは分子を含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で記載の結合ドメインは、抗体由来であり、可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）を含む。例えば、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）はＶＨおよびＶＬ鎖を含む。これらの結合ドメインおよび可変鎖は、標的に対しある程度の結合を依然として保持する任意の順で配置され得る。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドおよびタンパク質は、ｓｃＦｖである結合ドメインを含む。このような実施形態では、結合ドメインは、ｓｃＦｖドメインと呼ばれる場合もある。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、目的の標的に特異的なＶＨおよびＶＬ領域を含む単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態では、ＶＨおよびＶＬ領域は、ヒトのものであるまたはヒト化される。いくつかの変形例では、結合ドメインは、ペプチドリンカーで連結されたＶＬおよびＶＨ領域を含む単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。
特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドの結合ドメインは、（ｉ）ＣＤＲ ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）、および（ｉｉ）ＣＤＲ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド構築物に対し提供されるアミノ酸配列は、ヒト免疫グロブリンリーダー配列を含まない。示されるＣＤＲ配列およびアミノ酸置換位置は、ＩＭＧＴ基準（Ｂｒｏｃｈｅｔ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２００８）３６，Ｗ５０３－５０８）を用いて定義されるものである。
特定の実施形態では、本開示の結合ドメインＶＬおよび／またはＶＨ領域は、親ＶＬおよび／またはＶＨ領域のＶＬおよび／またはＶＨ由来であり（例えば、国際公開第２０１６／１８５０１６号に記載の１６１８／１６１９）、既知のモノクローナル抗体のＶＬおよび／またはＶＨ配列に比べた場合、約１つまたは複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の挿入、約１つまたは複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の欠失、約１つまたは複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換または非保存的アミノ酸置換）、または上記変化の組み合わせを任意選択で含む。挿入、欠失または置換は、各ＣＤＲがゼロ変化または最大で１、２、または３つの変化を含むことを条件として、この領域のアミノまたはカルボキシル末端または両末端を含む、ＶＬおよび／またはＶＨ領域中のどこにでも存在し得る。いくつかの実施形態では、改変ＶＬおよび／またはＶＨ領域を含む結合ドメインは依然として、親結合ドメインと類似の、またはそれより高い親和性で、その標的に特異的に結合できる。
ＶＬおよびＶＨ領域の連結のためのペプチドリンカーの使用は、当該技術分野において周知であり、多数の論文がこの特定の分野において存在する。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、１５マーであり、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号１２８）の３回反復（（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３）（配列番号５９）からなる。他のリンカーが使用されてきており、ファージディスプレイ技術、ならびに選択的感染ファージ技術（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ ｐｈａｇｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）がリンカー配列を多様化し、適切なリンカー配列を選択するために使用された（Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１，１５６８２－１５６８６，１９９６；Ｈｅｎｎｅｃｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１１，４０５－４１０，１９９８）。特定の実施形態では、ＶＬおよびＶＨ領域が、式（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（式中ｎ＝１～５）（配列番号１２９）を含むアミノ酸配列を有するペプチドリンカーにより連結される。例えば、本発明の一実施形態では、リンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号６１）を含む。他の好適なリンカーは、ランダム変異誘発により単純なリンカーを最適化することにより得ることができる。いくつかの実施形態では、本明細書で記載のｓｃＦｖのＶＨ領域は、リンカー配列に対しＮ末端に配置され得る。いくつかの実施形態では、本明細書で記載のｓｃＦｖのＶＬ領域は、リンカー配列に対しＣ末端に配置され得る。
ヒンジ
結合ドメインに加えて、治療的ポリペプチドは、ヒンジ領域をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、ヒンジは、野生型免疫グロブリンヒンジ領域の１つまたは複数のシステイン残基が１つまたは複数のアミノ酸残基（例えば、セリンまたはアラニン）で置換される、改変免疫グロブリンヒンジである。例示的な改変免疫グロブリンヒンジ、カルボキシル末端リンカーおよびアミノ末端リンカーは、野生型ヒトＩｇＧ１ヒンジ中に認められる１、２または３つのシステイン残基が、１、２または３つの異なるアミノ酸残基（例えば、セリンまたはアラニン）により置換された、免疫グロブリンヒトＩｇＧ１ヒンジ領域を含む。改変免疫グロブリンヒンジは、別のアミノ酸（例えば、セリンまたはアラニン）で置換されたプロリンを追加で有し得る。例えば、上述した改変ヒトＩｇＧ１ヒンジは、野生型ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域の３つのシステインに対しカルボキシル末端に位置する別のアミノ酸残基で置換されたプロリンを追加で有し得る。一実施形態では、コアヒンジ領域のプロリンは、置換されない。特定の実施形態では、ヒンジ、カルボキシル末端リンカー、またはアミノ末端リンカーポリペプチドは、野生型ヒトＩｇＧ１ヒンジ、野生型ヒトＩｇＧ２ヒンジ、または野生型ヒトＩｇＧ４ヒンジなどの野生型免疫グロブリンヒンジ領域と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含む、またはその配列である。
結合ドメインに加えて、治療的ポリペプチドは、ヒンジ領域をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、ヒンジは、野生型免疫グロブリンヒンジ領域の１つまたは複数のシステイン残基が１つまたは複数のアミノ酸残基（例えば、セリンまたはアラニン）で置換される、改変免疫グロブリンヒンジである。例示的な改変免疫グロブリンヒンジ、カルボキシル末端リンカーおよびアミノ末端リンカーは、野生型ヒトＩｇＧ１ヒンジ中に認められる１、２または３つのシステイン残基が、１、２または３つの異なるアミノ酸残基（例えば、セリンまたはアラニン）により置換された、免疫グロブリンヒトＩｇＧ１ヒンジ領域を含む。改変免疫グロブリンヒンジは、別のアミノ酸（例えば、セリンまたはアラニン）で置換されたプロリンを追加で有し得る。例えば、上述した改変ヒトＩｇＧ１ヒンジは、野生型ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域の３つのシステインに対しカルボキシル末端に位置する別のアミノ酸残基で置換されたプロリンを追加で有し得る。一実施形態では、コアヒンジ領域のプロリンは、置換されない。特定の実施形態では、ヒンジ、カルボキシル末端リンカー、またはアミノ末端リンカーポリペプチドは、野生型ヒトＩｇＧ１ヒンジ、野生型ヒトＩｇＧ２ヒンジ、または野生型ヒトＩｇＧ４ヒンジなどの野生型免疫グロブリンヒンジ領域と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含む、またはその配列である。
免疫グロブリン定常ドメイン
治療的タンパク質はまた、免疫グロブリン定常（Ｆｃ）ドメイン（本明細書では、定常領域、Ｆｃドメイン、Ｆｃ領域、などとも呼ばれる）を含み得る。特定の実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン、例えば、ＩｇＧ１ ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。特定の実施形態では、定常領域は、ＣＨ１ドメインを含まない。特定の実施形態では、定常領域を構成する定常ドメインは、ヒトまたはヒト配列由来である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、位置２３４、２３５、２３７および３２２に変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、位置２３４、２３５、２３７、３１８、３２０および３２２に変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＫ３２２Ａを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０Ａ、およびＫ３２２Ａを含む。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ１由来である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１由来であるＦｃドメインは、患者に投与された場合ポリペプチドがＣＤ８６および／またはＩＬ－１０Ｒ発現細胞を枯渇させるのを防ぐ、２つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン中の２つ以上の変異は、Ｆｃ媒介架橋を介したシグナル伝達を防ぐまたは実質的に低減する。
治療的タンパク質はまた、免疫グロブリン定常（Ｆｃ）ドメイン（本明細書では、定常領域、Ｆｃドメイン、Ｆｃ領域、などとも呼ばれる）を含み得る。特定の実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン、例えば、ＩｇＧ１ ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。特定の実施形態では、定常領域は、ＣＨ１ドメインを含まない。特定の実施形態では、定常領域を構成する定常ドメインは、ヒトまたはヒト配列由来である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、位置２３４、２３５、２３７および３２２に変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、位置２３４、２３５、２３７、３１８、３２０および３２２に変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＫ３２２Ａを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０Ａ、およびＫ３２２Ａを含む。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ１由来である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１由来であるＦｃドメインは、患者に投与された場合ポリペプチドがＣＤ８６および／またはＩＬ－１０Ｒ発現細胞を枯渇させるのを防ぐ、２つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン中の２つ以上の変異は、Ｆｃ媒介架橋を介したシグナル伝達を防ぐまたは実質的に低減する。
いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、配列番号３２～３５のいずれか１つのアミノ酸配列、またはそのバリアントを含む。免疫グロブリン定常領域の包含は、対象への投与後の本発明のポリペプチドおよびタンパク質の循環からの排出を遅らせる。変異または他の変化により、免疫グロブリン定常領域は、ポリペプチドエフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、ＣＤＣ、補体結合、およびＦｃ受容体への結合）の比較的容易な調節をさらに可能にし、これは、当技術分野において既知のように、および本明細書で記載のように、治療される疾患に応じて、増大されるまたは低減され得る。特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドおよびタンパク質は、１種または複数のこれらのエフェクター機能を媒介できる免疫グロブリン定常領域を含む。他の実施形態では、１種または複数のこれらのエフェクター機能は、本開示で記載のポリペプチドまたはタンパク質の免疫グロブリン定常領域において、対応する野性型免疫グロブリン定常領域に比べて、低減されるか、または存在しない。
本開示のポリペプチドおよびタンパク質中に存在する定常領域は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメイン、またはこれらの任意の組み合わせの一部または全てを含み得る、またはこれらから誘導され得る。例えば、免疫グロブリン定常領域は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインの両方、ＣＨ３およびＣＨ４ドメインの両方、２つのＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメイン、２つのＣＨ４ドメイン、およびＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインの一部を含み得る。特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質は、ＣＨ１ドメインを含まない。
本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質は、特定の免疫グロブリンクラスまたはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、またはＩｇＤ）由来の、および種々の種（ヒト、マウス、ラット、および他の哺乳動物を含む）由来の野生型免疫グロブリンＣＨ２ドメインまたは改変免疫グロブリンＣＨ２ドメインを含み得る。特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質のＣＨ２ドメインは、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１１５、１９９～２０１および１９５～１９７でそれぞれ示されるヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、またはＩｇＤの野生型ＣＨ２ドメインなどの、野生型野生型免疫グロブリンＣＨ２ドメインである（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、ＣＨ２ドメインは、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１１５で示される野生型ヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメインである（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。
特定の実施形態では、本開示のポリペプチドまたはタンパク質中の改変ＣＨ２領域は、野生型ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４、またはマウスＩｇＧ２ａ（例えば、ＩＧＨＧ２ｃ）のＣＨ２領域などの野生型免疫グロブリンＣＨ２領域と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一である配列を含む、またはその配列である。
本開示のポリペプチドまたはタンパク質中の改変免疫グロブリンＣＨ２領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、またはＩｇＤなどの種々の免疫グロブリンアイソタイプ、および種々の種（ヒト、マウス、ラット、および他の哺乳動物を含む）のＣＨ２領域から誘導できる。特定の実施形態では、本開示の融合タンパク質中の改変免疫グロブリンＣＨ２領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４、またはマウスマウスＩｇＧ２ａ（例えば、ＩＧＨＧ２ｃ）のＣＨ２領域から誘導でき、これらの配列は、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１１５、１９９、２０１、および３２０で示される（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の改変ＣＨ２ドメインは、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、ＣＤＣ、補体結合、Ｆｃ受容体結合、またはこれらの任意の組み合わせなどの免疫学的活性（すなわち、エフェクター機能）を高めるまたは低減する当該技術分野において既知の変異を有する改変ヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメインである。
特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質のＣＨ２ドメインは、１種または複数のアミノ酸欠失または置換を含む、改変免疫グロブリンＣＨ２領域（例えば、改変ヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメイン）である。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、位置２９７の位置のアスパラギンのアミノ酸置換を含む（例えば、アスパラギンからアラニンへの置換）。このようなアミノ酸置換は、この位置でのグリコシル化を低減または除去し、ＦｃγＲおよびＣ１ｑへの効率的Ｆｃ結合を抑止する。位置２９７でＡｓｎからＡｌａへの置換を有する改変ヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメインの配列は、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３２４で示される（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ２ドメインは、位置２３４～２３８で少なくとも１つの置換または欠失を含む。例えば、免疫グロブリンＣＨ２領域は、位置２３４、２３５、２３６、２３７または２３８；位置２３４および２３５；位置２３４および２３６；位置２３４および２３７；位置２３４および２３８；位置２３４～２３６；位置２３４、２３５および２３７；位置２３４、２３６および２３８；位置２３４、２３５、２３７、および２３８；位置２３６～２３８での置換；または位置２３４～２３８での２、３、４、または５つのアミノ酸の任意の他の組み合わせの置換を含み得る。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ２領域は、位置２３４～２３８で、１つまたは複数（例えば、２つ、３つ、４つまたは５つ）の、例えば、位置２３６また配置２３７の１つで、アミノ酸欠失を含み、同時に、他の位置は置換される。特定の実施形態では、位置２３４～２３８の１つまたは複数でアミノ酸残基が、１つまたは複数のアラニン残基で置換されている。さらなる実施形態では、位置２３４～２３８で１つのみのアミノ酸残基が、欠失されており、同時に、位置２３４～２３８で残りのアミノ酸の１つまたは複数が、別のアミノ酸（例えば、アラニンまたはセリン）で置換され得る。
いくつかの実施形態では、上記変異は、改変ＣＨ２ドメインを含むポリペプチドのＡＤＣＣ活性またはＦｃ受容体結合能力を低減するまたは除去する。
特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質のＣＨ２ドメインは、位置２５３、３１０、３１８、３２０、３２２、おび３３１での１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、改変免疫グロブリンＣＨ２領域（例えば、改変ヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメイン）である。例えば、免疫グロブリンＣＨ２領域は、位置２５３、３１０、３１８、３２０、３２２、または３３１、位置３１８および３２０、位置３１８および３２２、位置３１８、３２０および３２２での置換、または位置２５３、３１０、３１８、３２０、３２２、または３３１での２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのアミノ酸の任意の他の組み合わせの置換を含み得る。このような実施形態では、上記変異は、改変ＣＨ２ドメインを含むポリペプチドのＣＤＣ活性を低減するまたは除去する。
特定の実施形態では、位置２９７でのアミノ酸置換に加えて、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の改変ＣＨ２領域（例えば、改変ヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメイン）は、位置２３４～２３８で１つまたは複数（例えば、２つ、３つ、４つ、または５つ）の追加の置換をさらに含み得る。例えば、免疫グロブリンＣＨ２領域は、位置２３４および２９７、位置２３４、２３５、および２９７、位置２３４、２３６、および２９７、位置２３４～２３６、および２９７、位置２３４、２３５、２３７および２９７、位置２３４、２３６、２３８および２９７、位置２３４、２３５、２３７、２３８および２９７、位置２３６～２３８および２９７での置換、または位置２９７に加えて位置２３４～２３８での２つ、３つ、４つ、または５つのアミノ酸の任意の他の組み合わせの置換を含み得る。追加して、または代わりに、改変ＣＨ２領域は、位置２３６また配置２３７などの位置２３４～２３８で、１つまたは複数（例えば、２つ、３つ、４つまたは５つ）のアミノ酸欠失を含み得る。追加の変異は、改変ＣＨ２ドメインを含むポリペプチドのＡＤＣＣ活性またはＦｃ受容体結合能力を低減するまたは除去する。特定の実施形態では、位置２３４～２３８の１つまたは複数でアミノ酸残基が、１つまたは複数のアラニン残基で置換されている。さらなる実施形態では、位置２３４～２３８で１つのみのアミノ酸残基が、欠失されており、同時に、位置２３４～２３８で残りのアミノ酸の１つまたは複数が、別のアミノ酸（例えば、アラニンまたはセリン）で置換され得る。
特定の実施形態では、位置２３４～２３８での１つまたは複数（例えば、２つ、３つ、４つ、または５つ）のアミノ酸置換に加えて、本開示の融合タンパク質中の本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の変異ＣＨ２領域（例えば、改変ヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメイン）は、補体結合に関与する１つまたは複数の位置（例えば、位置Ｉ２５３、Ｈ３１０、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、またはＰ３３１）で１つまたは複数（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）の追加のアミノ酸置換（例えば、アラニンでの置換）を含み得る。変異免疫グロブリンＣＨ２領域の例は、位置２３４、２３５、２３７（存在する場合）、３１８、３２０および３２２でアラニン置換を有するヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４、およびマウスＩｇＧ２ａ ＣＨ２領域を含む。例示的変異免疫グロブリンＣＨ２領域は、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、およびＫ３２２でアラニン置換を有するマウスＩＧＨＧ２ｃ ＣＨ２領域である。
またさらなる実施形態では、位置２９７でのアミノ酸置換および位置２３４～２３８での追加の欠失または置換に加えて、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の改変ＣＨ２領域（例えば、改変ヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメイン）は、位置２５３、３１０、３１８、３２０、３２２、および３３１で１つまたは複数（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）の追加の置換をさらに含み得る。例えば、免疫グロブリンＣＨ２領域は、（１）位置２９７で置換、（２）位置２３４～２３８で１つまたは複数の置換または欠失またはこれらの組み合わせ、および位置Ｉ２５３、Ｈ３１０、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、およびＰ３３１で１つまたは複数（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）のアミノ酸置換、例えば、位置Ｅ３１８、Ｋ３２０およびＫ３２２で１つ、２つ、３つの置換を含み得る。上記位置でアミノ酸は、アラニンまたはセリンにより置換され得る。
特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の置換ＣＨ２領域は、（ｉ）位置２９７のアスパラギンのアミノ酸置換および位置２３４、２３５、２３６または２３７での１つのアミノ酸置換；（ｉｉ）位置２９７のアスパラギンのアミノ酸置換および位置２３４～２３７の２つの位置でのアミノ酸置換；（ｉｉｉ）位置２９７のアスパラギンのアミノ酸置換および位置２３４～２３７の３つの位置でのアミノ酸置換；（ｉｖ）位置２９７のアスパラギンのアミノ酸置換、位置２３４、２３５および２３７でのアミノ酸置換、および位置２３６でのアミノ酸欠失；（ｖ）位置２３４～２３７の３つの位置でのアミノ酸置換および位置３１８、３２０および３２２でのアミノ酸置換；または（ｖｉ）位置２３４～２３７の３つの位置でのアミノ酸置換、位置２３６でのアミノ酸欠失、および位置３１８、３２０および３２２でのアミノ酸置換、を含む。
位置２９７のアスパラギンのアミノ酸置換を有する例示的改変免疫グロブリンＣＨ２領域は、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７およびＮ２９７にアラニン置換およびＧ２３６に欠失を有するヒトＩｇＧ１ ＣＨ２領域（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３２５、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）、Ｖ２３４、Ｇ２３６、およびＮ２９７にアラニン置換を有するヒトＩｇＧ２ ＣＨ２領域（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３２６、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）、Ｆ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７およびＮ２９７にアラニン置換およびＧ２３６の欠失を有するヒトＩｇＧ４ ＣＨ２領域（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３２２、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）、Ｆ２３４およびＮ２９７にアラニン置換を有するヒトＩｇＧ４ ＣＨ２領域（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３４３、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）、Ｌ２３５およびＮ２９７にアラニン置換を有するヒトＩｇＧ４ ＣＨ２領域（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３４４、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）、Ｇ２３６およびＮ２９７にアラニン置換を有するヒトＩｇＧ４ ＣＨ２領域（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３４５、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）、およびＧ２３７およびＮ２９７にアラニン置換を有するヒトＩｇＧ４ ＣＨ２領域（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３４６、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）を含む。これらのＣＨ２領域は、本開示のポリペプチド中で使用できる。
特定の実施形態では、上記アミノ酸置換に加えて、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の改変ＣＨ２領域（例えば、改変ヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメイン）は、上記位置以外の１つまたは複数の位置で１つまたは複数の追加のアミノ酸置換を含み得る。このようなアミノ酸置換は、保存的または非保存的アミノ酸置換であり得る。例えば、特定の実施形態では、改変ＩｇＧ２ ＣＨ２領域中では、Ｐ２３３は、Ｅ２３３に変更できる（例えば、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３２６を参照、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）。追加で、または代わりに、特定の実施形態では、改変ＣＨ２領域は、１つまたは複数のアミノ酸挿入、欠失、またはその両方を含み得る。挿入、欠失または置換は、ＣＨ２領域と別の領域（例えば、結合ドメインまたは免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメイン）とのヒンジを介した連結から得られる野生型免疫グロブリンＣＨ２領域のＮまたはＣ末端の位置などの、免疫グロブリンＣＨ２領域のどこにでも存在し得る。
特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の改変ＣＨ２ドメインは、位置２３５、３１８、３２０、および３２２でのアラニン置換（すなわち、Ｌ２３５Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０ＡおよびＫ３２２Ａ置換を有するヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメイン）を有するヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメイン（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号５９５、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）であり、任意選択で、Ｎ２９７変異（例えば、アラニンへの変異）を有する。特定の実施形態では、改変ＣＨ２ドメインは、位置２３４、２３５、２３７、３１８、３２０、および３２２でのアラニン置換（すなわち、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０ＡおよびＫ３２２Ａ置換を有するヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメイン）を有するヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメイン（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号５９６、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）であり、任意選択で、Ｎ２９７変異（例えば、アラニンへの変異）を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の免疫グロブリン定常領域は、ＥＵナンバリングシステムによる、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、およびＫ３２２Ａを含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメインを含む。
本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の免疫グロブリン定常領域を形成できるＣＨ３ドメインは、種々の種（ヒト、マウス、ラット、および他の哺乳動物を含む）の特定の免疫グロブリンクラスまたはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ）由来の野生型免疫グロブリンＣＨ３ドメインまたはその改変免疫グロブリンＣＨ３ドメインであり得る。特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドのＣＨ３ドメインは、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１１６、２０８～２１０、２０４～２０７、および２１２でそれぞれ示されるヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、またはＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭの野生型ＣＨ３ドメインなどの野生型ヒト免疫グロブリンＣＨ３ドメインである（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、ＣＨ３ドメインは、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１１６で示される野生型ヒトＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインである（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。
特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドのＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、またはＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭの野生型ＣＨ３ドメインをベースにした、またはそれから誘導される改変ＣＨ３ドメインなどの、改変ヒト免疫グロブリンＣＨ３ドメインである。例えば、改変ＣＨ３ドメインは、位置Ｈ４３３およびＮ４３４（位置は、ＥＵナンバリングに従ってナンバリングされる）で１つまたは２つの変異を有するヒトＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインであり得る。このような位置での変異は、補体結合に関与できる。特定の他の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドの改変ＣＨ３ドメインは、位置Ｆ４０５またはＹ４０７で１つまたは２つのアミノ酸置換を有すること以外は、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインであり得る。このような位置でのアミノ酸は、別のＣＨ３ドメインとの相互作用に関与する。特定の他の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドの改変ＣＨ３ドメインは、その最後のリジンが欠失された改変ヒトＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインであり得る。この改変ＣＨ３ドメインの配列は、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号７６１で示される（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。
特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質は、所謂「ノブイントゥホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ）」変異（Ｍａｒｖｉｎ ａｎｄ Ｚｈｕ，Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ ２６：６４９－５８，２００５；Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ９：６１７－２１，１９６６を参照）を含む、ＣＨ３ドメインを含む。より具体的には、ＣＨ３／ＣＨ３結合のために必要な立体的相補性のために、これらの２つのＣＨ３ドメインを相互に対形成させるように、変異を各ポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインのそれぞれ中に導入できる。例えば、ポリペプチドヘテロダイマーの１つの単鎖ポリペプチド中のＣＨ３ドメインは、Ｔ３６６Ｗ変異（「ノブ」変異、これは、小さいアミノ酸をより大きなアミノ酸と置換する）を含み、ポリペプチドヘテロダイマーの他の単鎖ポリペプチド中のＣＨ３ドメインは、Ｙ４０７Ａ変異（「ホール」変異、これは、大きなアミノ酸を小さいアミノ酸と置換する）を含んでよい。他の例示的ノブイントゥホール変異は、（１）１つのＣＨ３ドメイン中のＴ３６６Ｙ変異、およびほかのＣＨ３ドメイン中のＹ４０７Ｔ変異、および（２）１つのＣＨ３ドメイン中のＴ３６６Ｗ変異および他のＣＨ３ドメイン中のＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖ変異、を含む。
本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の免疫グロブリン定常領域を形成できるＣＨ４ドメインは、ＩｇＥまたはＩｇＭ分子由来の、野生型免疫グロブリンＣＨ４ドメインまたはその改変免疫グロブリンＣＨ４ドメインであり得る。特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドのＣＨ４ドメインは、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号２１３およびおよび２１４でそれぞれ示されるヒトＩｇＥおよびＩｇＭの野生型ＣＨ４ドメインなどの、野生型ヒト免疫グロブリンＣＨ４ドメインである（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドのＣＨ４ドメインは、ヒトＩｇＥまたはＩｇＭのＣＨ４ドメインをベースにした、またはそれから誘導される改変ＣＨ４ドメインなどの改変ヒト免疫グロブリンＣＨ４ドメインであり、これは、ＩｇＥまたはＩｇＭ Ｆｃ領域と結合することが既知の免疫学的活性を増大または低減させる変異を有する。
特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の免疫グロブリン定常領域は、ＣＨ２、ＣＨ３またはＣＨ４ドメインの組み合わせ（すなわち、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４から選択される２つ以上の定常領域ドメイン）を含む。例えば、免疫グロブリン定常領域は、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインまたはＣＨ３およびＣＨ４ドメインを含み得る。特定の他の実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、２つのＣＨ３ドメインを含み、ＣＨ２またはＣＨ４ドメインを不含であり得る（すなわち、２つ以上のＣＨ３のみ）。本明細書で記載のポリペプチドの免疫グロブリン定常領域を形成する複数の定常領域ドメインは、同じ免疫グロブリン分子、または同じクラスまたはサブクラスの免疫グロブリン分子をベースにでき、またはそれから誘導できる。特定の実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ ＣＨ２－ＣＨ３（例えば、ＩｇＧ１ ＣＨ２－ＣＨ３、ＩｇＧ２ ＣＨ２－ＣＨ３、およびＩｇＧ４ ＣＨ２－ＣＨ３）であり、ヒトの（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４）ＣＨ２ＣＨ３であり得る。例えば、特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドの免疫グロブリン定常領域は、（１）野生型ヒトＩｇＧ１ ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン、（２）Ｎ２９７Ａ変異を有するヒトＩｇＧ１ ＣＨ２（すなわち、ＣＨ２（Ｎ２９７Ａ））および野生型ヒトＩｇＧ１ ＣＨ３、または（３）ヒトＩｇＧ１ ＣＨ２（Ｎ２９７Ａ）および最後のリジンが欠失された改変ヒトＩｇＧ１ ＣＨ３、を含む。あるいは、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の複数の定常領域ドメインは、異なる免疫グロブリン分子、または異なるクラスまたはサブクラスの免疫グロブリン分子をベースにでき、またはそれから誘導できる。例えば、特定の実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ヒトＩｇＭ ＣＨ３ドメインおよびヒトＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインの両方を含む。本明細書で記載のポリペプチドの免疫グロブリン定常領域を形成する複数の定常領域ドメインは、直接一緒に連結でき、または１つまたは複数の（例えば、約２～１０個の）アミノ酸を介して、相互に連結できる。
本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質で使用できる例示的免疫グロブリン定常領域は、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３０５～３０９、３２１、３２３、３４１、３４２、および７６２で示される（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質で使用できるさらなる例示的免疫グロブリン定常領域は、下表で提供される。
特定の実施形態では、本明細書で記載のホモダイマーまたはヘテロダイマータンパク質の各ポリペプチド鎖の免疫グロブリン定常領域は、相互に同一である。特定の他の実施形態では、ヘテロダイマーの１つのポリペプチド鎖の免疫グロブリン定常領域は、ヘテロダイマーの他のポリペプチド鎖の免疫グロブリン定常領域とは異なる。例えば、ヘテロダイマータンパク質の１つの免疫グロブリン定常領域は、「ノブ」変異を有するＣＨ３ドメインを含んでよく、一方、ヘテロダイマータンパク質の他の免疫グロブリン定常領域は、「ホール」変異を有するＣＨ３ドメインを含んでよい。
Ｆｃ結合ドメインリンカー
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、結合ドメインを連結する（例えば、ｓｃＦｖドメインを連結する）Ｆｃ結合ドメインリンカーをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、Ｇｌｙ４Ｓｅｒリンカー（配列番号１２８）である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、２０マーであり、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号１２８）アミノ酸配列の４回反復（（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４）（配列番号６１）からなる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、配列番号５０～７０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。他のリンカーが使用されてきており、ファージディスプレイ技術、ならびに選択的感染ファージ技術（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ ｐｈａｇｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）がリンカー配列を多様化し、適切なリンカー配列を選択するために使用されている（Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１，１５６８２－１５６８６，１９９６；Ｈｅｎｎｅｃｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１１，４０５－４１０，１９９８）。特定の実施形態では、ＶＬおよびＶＨ領域は、式（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（式中ｎ＝１～５）（配列番号１２９）を含むアミノ酸配列を有するペプチドリンカーにより連結される。他の好適なリンカーは、ランダム変異誘発により単純なリンカーを最適化することにより得ることができる。いくつかの実施形態では、二重特異的分子は、ヒンジ領域または定常領域を含まない。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、結合ドメインを連結する（例えば、ｓｃＦｖドメインを連結する）Ｆｃ結合ドメインリンカーをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、Ｇｌｙ４Ｓｅｒリンカー（配列番号１２８）である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、２０マーであり、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号１２８）アミノ酸配列の４回反復（（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４）（配列番号６１）からなる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、配列番号５０～７０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。他のリンカーが使用されてきており、ファージディスプレイ技術、ならびに選択的感染ファージ技術（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ ｐｈａｇｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）がリンカー配列を多様化し、適切なリンカー配列を選択するために使用されている（Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１，１５６８２－１５６８６，１９９６；Ｈｅｎｎｅｃｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１１，４０５－４１０，１９９８）。特定の実施形態では、ＶＬおよびＶＨ領域は、式（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（式中ｎ＝１～５）（配列番号１２９）を含むアミノ酸配列を有するペプチドリンカーにより連結される。他の好適なリンカーは、ランダム変異誘発により単純なリンカーを最適化することにより得ることができる。いくつかの実施形態では、二重特異的分子は、ヒンジ領域または定常領域を含まない。
特定の実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、グリシン－セリン（例えば、Ｇｌｙ４Ｓｅｒ、配列番号１２８）反復を含むフレキシブルリンカー配列である。特定の実施形態では、リンカーは、３回のＧｌｙ４Ｓｅｒ反復（配列番号６１）と、これに続くプロリン残基を含む。特定の実施形態では、プロリン残基は、その後に、グリシン、アルギニンおよびセリンからなる群より選択されるアミノ酸が続く。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、配列番号５０～７０から選択される配列を含む、またはそれからなる。
本開示による使用に好適な、いくつかの例示的ヒンジおよびＦｃ結合ドメインリンカー配列を下表２および３に示す。追加の例示的ヒンジおよびリンカー領域は、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号２４１～２４４、６０１、７８、７６３～７９１、２２８、３７９～４３４、６１８～７４９で示される（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。
上述のドメインに加えて、治療ポリペプチドは、免疫グロブリンダイマー化／ヘテロダイマー化ドメイン、接合アミノ酸、タグ、追加の結合ドメイン、などをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドおよびタンパク質は、薬物または毒性部分に結合される。
二重特異的／多重特異的タンパク質
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、二重特異的または多重特異的タンパク質であり得る。二重特異的分子の非限定的例には、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ分子、ｓｃＦｖ－Ｉｇ分子およびｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ分子を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載の二重特異的分子は、第２の結合ドメインｓｃＦｖに結合された第１の結合ドメインｓｃＦｖを含む、またはこれからなり、免疫グロブリン定常領域などの他の配列を含まない。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へと、またはカルボキシル末端からアミノ末端へと順に、（ｉ）第１の結合ドメイン、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、（ｉｖ）（任意選択で）Ｆｃ結合ドメインリンカー、および（ｖ）第２の結合ドメインを含む、二重特異的または多重特異的タンパク質であり得る。
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、二重特異的または多重特異的タンパク質であり得る。二重特異的分子の非限定的例には、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ分子、ｓｃＦｖ－Ｉｇ分子およびｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ分子を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載の二重特異的分子は、第２の結合ドメインｓｃＦｖに結合された第１の結合ドメインｓｃＦｖを含む、またはこれからなり、免疫グロブリン定常領域などの他の配列を含まない。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へと、またはカルボキシル末端からアミノ末端へと順に、（ｉ）第１の結合ドメイン、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、（ｉｖ）（任意選択で）Ｆｃ結合ドメインリンカー、および（ｖ）第２の結合ドメインを含む、二重特異的または多重特異的タンパク質であり得る。
ホモダイマー／ヘテロダイマー
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、ホモダイマーまたはヘテロダイマーであり得る。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、２つの同一のポリペプチドのダイマーであり、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端へと順に、またはカルボキシル末端からアミノ末端へと順に、（ｉ）第１の結合ドメイン、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、（ｉｖ）（任意選択で）Ｆｃ結合ドメインリンカー、および（ｖ）第２の結合ドメイン、を含む。いくつかの実施形態では、二重特異的または多重特異的タンパク質は、２つの同一のポリペプチドのダイマーであり、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端へと順に、またはカルボキシル末端からアミノ末端へと順に、（ｉ）第１の結合ドメイン、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、（ｉｖ）（任意選択で）Ｆｃ結合ドメインリンカー、および（ｖ）第２の結合ドメイン、を含む。他の実施形態では、本明細書で記載の二重特異的タンパク質は、ディアボディである。
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、ホモダイマーまたはヘテロダイマーであり得る。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、２つの同一のポリペプチドのダイマーであり、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端へと順に、またはカルボキシル末端からアミノ末端へと順に、（ｉ）第１の結合ドメイン、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、（ｉｖ）（任意選択で）Ｆｃ結合ドメインリンカー、および（ｖ）第２の結合ドメイン、を含む。いくつかの実施形態では、二重特異的または多重特異的タンパク質は、２つの同一のポリペプチドのダイマーであり、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端へと順に、またはカルボキシル末端からアミノ末端へと順に、（ｉ）第１の結合ドメイン、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、（ｉｖ）（任意選択で）Ｆｃ結合ドメインリンカー、および（ｖ）第２の結合ドメイン、を含む。他の実施形態では、本明細書で記載の二重特異的タンパク質は、ディアボディである。
特定の実施形態では、別のポリペプチド鎖とヘテロダイマーを形成するポリペプチド中に存在するヒンジは、野性型免疫グロブリンヒンジ領域またはその改変免疫グロブリンヒンジ領域などの、免疫グロブリンヒンジであり得る。特定の他の実施形態では、ヘテロダイマータンパク質の１つのポリペプチド鎖のヒンジは、ヘテロダイマーの他のポリペプチド鎖の対応するヒンジと同一である。特定の他の実施形態では、１つの鎖のヒンジは、他の鎖（それらの長さまたは配列中の）のヒンジとは異なる。異なる鎖中の異なるヒンジは、ヒンジが連結される結合ドメインの種々の結合親和性の操作を可能にし、それにより、ヘテロダイマーは、他の結合ドメインの標的よりも、１つの結合ドメインの標的に選択的に結合できる。
他の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドおよびタンパク質は、第２の同一でないポリペプチド鎖中の異なるヘテロダイマー化ドメインとヘテロダイマー化できる、ヘテロダイマー化ドメインを含む。特定の変形例では、ヘテロダイマー化のための第２のポリペプチド鎖は、第２の結合ドメインを含む。従って、本開示の特定の実施形態では、１つが第１の結合ドメインを含みかつ２つ目が任意選択で第２の結合ドメインを含む、２つの同一でないポリペプチド鎖が、ダイマー化してヘテロダイマー結合タンパク質を形成する。片方または両方のポリペプチド鎖が結合ドメインを含み、２つの同一でないポリペプチド鎖からヘテロダイマーを形成することが望ましい場合、ダイマー化／ヘテロダイマー化ドメインを使用できる。特定の実施形態では、本明細書で記載の特定のヘテロダイマーの１つのポリペプチド鎖メンバーは、結合ドメインを含まない。ヘテロダイマーのタイプの例は、米国特許出願公開第２０１３／００９５０９７号および同第２０１３／０１２９７２３号、および国際公開第２０１６／０９４８７３号に記載されているものを含む。
特定の実施形態では、第１および第２のポリペプチド鎖は、「免疫グロブリンダイマー化ドメイン」または「免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメイン」の含有を介してダイマー化する。本明細書では、「免疫グロブリンダイマー化ドメイン」または「免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメイン」は、第２のポリペプチド鎖の異なる免疫グロブリンドメインと選択的に相互作用または結合する第１のポリペプチド鎖の免疫グロブリンドメインを指し、異なる免疫グロブリンドメインの相互作用は、第１および第２のポリペプチド鎖のヘテロダイマー化（すなわち、２つの異なるポリペプチド鎖間のダイマーの形成、これもまた「ヘテロダイマー」とも呼ばれる）に実質的に寄与するまたはそれを効率的に促進する。ヘテロダイマーのポリペプチド鎖中の免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、相互に異なり、従って、両鎖のヘテロダイマー化を促進し、かつどちらかの鎖のホモダイマー化を最小化するように差次的に改変できる。本明細書で提供される免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、異なるポリペプチド間の効率的ヘテロダイマー化を可能にし、得られるヘテロダイマータンパク質の精製を容易にする。
本明細書で提供されるように、本開示によるによる２つの異なるポリペプチド鎖のヘテロダイマー化の促進に有用な免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、野性型および改変免疫グロブリンＣＨ１およびＣＬドメイン、例えば、ヒトＣＨ１およびＣＬドメインを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、例えば、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１１４、１８６～１９２および１９４、または米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１１４で、それぞれ示されるヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ ＣＨ１ドメインなどの、野生型ＣＨ１ドメインである（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。さらなる実施形態では、野生型免疫グロブリンＣＬドメイン（例えば、ヒトＣＬ）とのジスルフィド結合の形成に関与する野性型ＣＨ１ドメイン（例えば、ヒトＣＨ１）のシステイン残基は、改変免疫グロブリンＣＨ１ドメイン中で欠失または置換され、それによりジスルフィド結合は、改変ＣＨ１ドメインと野性型ＣＬドメインの間で形成されない。
特定の実施形態では、免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、例えば、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１１２および１１３で、それぞれ示される野生型Ｃκドメインまたは野生型Ｃλドメインなどの、野性型ＣＬドメインである（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。さらなる実施形態では、免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、改変ＣκまたはＣλドメイン、例えば、改変ヒトＣκまたはヒトＣλドメインなどの、改変免疫グロブリンＣＬドメインである。特定の実施形態では、野生型免疫グロブリンＣＨ１ドメインとのジスルフィド結合の形成に関与する野性型ＣＬドメインのシステイン残基は、改変免疫グロブリンＣＬドメイン、例えば、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１４１で示されるＣκまたは米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１４０で示されるＣλ中で欠失されるまたは置換される（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、野生型ヒトＣκドメインの最後のシステインのみが、改変Ｃκドメイン中で欠失される。理由は、野生型ヒトＣκドメインから欠失される最初のアルギニンは、そのカルボキシル末端にアルギニンを有しかつ改変Ｃκドメインのアミノ末端を別のドメイン（例えば、免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む小領域などの免疫グロブリン小領域）と連結するリンカーにより提供できるからである。
さらなる実施形態では、免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、野生型Ｃκドメインと比較して、Ｃκ－Ｃκ境界で鎖間水素結合ネットワークの形成に関与し得る位置に１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、改変Ｃκドメインである。例えば、特定の実施形態では、免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、異なるアミノ酸で置換される、位置Ｎ２９、Ｎ３０、Ｑ５２、Ｖ５５、Ｔ５６、Ｓ６８またはＴ７０に１つまたは複数のアミノ酸を有する改変ヒトＣκドメインである。アミノ酸のナンバリングは、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１４１で示される改変ヒトＣκ中のそれらの位置に基づく（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、位置Ｎ２９、Ｎ３０、Ｖ５５、またはＴ７０に１、２、３または４つのアミノ酸置換を有する改変ヒトＣκドメインである。上記位置の置換基として使用されるアミノ酸は、アラニン、またはアルギニン、トリプトファン、チロシン、グルタミン酸、グルタミン、リジン、アスパラギン酸、メチオニン、セリンもしくはフェニルアラニンなどのバルク側鎖部分を有するアミノ酸残基であり得る。改変ヒトＣκドメインは、ＣＨ１ドメインとのヘテロダイマー化を促進するが別のＣκドメインとのホモダイマー化を最小化するものである。代表的な改変ヒトＣκドメインは、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１４２～１７８；米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１６０（Ｎ２９Ｗ Ｖ５５Ａ Ｔ７０Ａ）、１６１（Ｎ２９Ｙ Ｖ５５Ａ Ｔ７０Ａ）、２０２（Ｔ７０Ｅ Ｎ２９Ａ Ｎ３０Ａ Ｖ５５Ａ）、１６７（Ｎ３０Ｒ Ｖ５５Ａ Ｔ７０Ａ）、１６８（Ｎ３０Ｋ Ｖ５５Ａ Ｔ７０Ａ）、１７０（Ｎ３０Ｅ Ｖ５５Ａ Ｔ７０Ａ）、１７２（Ｖ５５Ｒ Ｎ２９Ａ Ｎ３０Ａ）、１７５（Ｎ２９Ｗ Ｎ３０Ｙ Ｖ５５Ａ Ｔ７０Ｅ）、１７６（Ｎ２９Ｙ Ｎ３０Ｙ Ｖ５５Ａ Ｔ７０Ｅ）、１７７（Ｎ３０Ｅ Ｖ５５Ａ Ｔ７０Ｅ）、１７８（Ｎ３０Ｙ Ｖ５５Ａ Ｔ７０Ｅ）、８３８（Ｎ３０Ｄ Ｖ５５Ａ Ｔ７０Ｅ）、８３９（Ｎ３０Ｍ Ｖ５５Ａ Ｔ７０Ｅ）、８４０（Ｎ３０Ｓ Ｖ５５Ａ Ｔ７０Ｅ）、および８４１（Ｎ３０Ｆ Ｖ５５Ａ Ｔ７０Ｅ）で示される（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。
特定の実施形態では、本明細書で記載のＣκドメイン中の変異に加えて、またはその代わりに、ポリペプチドヘテロダイマーの両方の免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメイン（すなわち、免疫グロブリンＣＨ１およびＣＬドメイン）は、得られる免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインが変異部位のアミノ酸残基間で塩橋（すなわち、イオン相互作用）を形成するように、変異を有する。例えば、ポリペプチドヘテロダイマーの免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、変異Ｃκドメインと組み合わせた変異ＣＨ１ドメインであり得る。変異ＣＨ１ドメインでは、野生型ヒトＣＨ１ドメインの位置６８でのバリン（Ｖ６８）は、負電荷を有するアミノ酸残基（例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸）により置換され、一方、最初のアルギニンおよび最後のシステインが欠失されている変異ヒトＣκドメインの位置２９でのロイシン（Ｌ２９）は、正電荷を有するアミノ酸残基（例えば、リジン、アルギニンまたはヒスチジン）により置換される。得られる変異ＣＨ１ドメインの負電荷を有するアミノ酸残基と、得られる変異Ｃκドメインの正電荷を有するアミノ酸残基との間の電荷－電荷相互作用は、塩橋を形成し、これは、変異ＣＨ１とＣκドメインの間のヘテロダイマー境界を安定化する。あるいは、野生型ＣＨ１のＶ６８は、正電荷を有するアミノ酸残基により置換され、一方、最初のアルギニンおよび最後のシステインが欠失されている変異ヒトＣκドメインのＬ２９は、負電荷を有するアミノ酸残基により置換できる。Ｖ６８が負電荷または正電荷を有するアミノ酸により置換される例示的変異ＣＨ１配列は、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号８４４および８４５で示される（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。Ｌ２９が負電荷または正電荷を有するアミノ酸により置換される例示的変異Ｃκ配列は、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号８４２および８４３で示される（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。
ヒトＣＨ１ドメインのＶ６８およびヒトＣκドメインのＬ２９以外の位置は、反対電荷を有するアミノ酸で置換されて、ＣＨ１ドメインのＶ６８およびＣκドメインのＬ２９の変異に加えて、またはその代わりに、アミノ酸間のイオン相互作用を生成できる。このような位置は、ランダム変異誘発、ＣＨ１－Ｃκ境界のアミノ酸残基を特定するためのＣＨ１－Ｃκ対の結晶構造の分析を含む、任意の好適な方法により特定でき、および一連の基準（例えば、イオン相互作用に関与する傾向、潜在的パートナー残基に対する近似度、など）を用いるＣＨ１－Ｃκ境界でのアミノ酸残基中の好適な位置をさらに特定する。
特定の実施形態では、本開示のポリペプチドヘテロダイマーは、１対のみの免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインを含む。例えば、ポリペプチドヘテロダイマーの第１の鎖は、免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインとしてＣＨ１ドメインを含み得、一方、第２の鎖は、ＣＬドメイン（例えば、ＣκまたはＣλ）を免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインとして含み得る。あるいは、第１の鎖は、免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインとしてＣＬドメイン（例えば、ＣκまたはＣλ）を含み得、一方、第２の鎖は、ドメインドメインを免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインとして含み得る。本明細書で示すように、第１および第２の鎖の免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、本開示のヘテロダイマータンパク質を形成するために結合できる。
特定の実施形態では、本開示のヘテロダイマータンパク質は、２対の免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインを有し得る。例えば、ヘテロダイマーの第１の鎖は、２つのＣＨ１ドメインを含み得、一方、第２の鎖は、第１の鎖中の２つのＣＨ１ドメインと結合する２つのＣＬドメインを有し得る。あるいは、第１の鎖は、２つのＣＬドメインを含み得、一方、第２の鎖は、第１の鎖中の２つのＣＬドメインと結合する２つのＣＨ１ドメインを有し得る。特定の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、ＣＨ１ドメインおよびＣＬドメインを含み、一方、第２のポリペプチド鎖は、第１のポリペプチド鎖のＣＨ１ドメインおよびＣＬにそれぞれ結合するＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインを含む。
ヘテロダイマータンパク質が１つのみのヘテロダイマー化対（すなわち、各鎖中に１つの免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメイン）を含むいくつかの実施形態では、各鎖の免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、その鎖の免疫グロブリン定常領域に対しアミノ末端に位置し得る。あるいは、各鎖の免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、その鎖の免疫グロブリン定常領域に対しカルボキシル末端に位置し得る。
ヘテロダイマータンパク質が２つのヘテロダイマー化対（すなわち、各鎖中に２つの免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメイン）を含むいくつかの実施形態では、各鎖の両方の免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、その鎖の免疫グロブリン定常領域に対しアミノ末端に位置し得る。あるいは、各鎖の両方の免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、その鎖の免疫グロブリン定常領域に対しカルボキシル末端に位置し得る。さらなる実施形態では、各鎖の１つの免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、その鎖の免疫グロブリン定常領域に対しアミノ末端に位置し得、一方、各鎖の他の免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、その鎖の免疫グロブリン定常領域に対してカルボキシル末端に位置し得る。換言すれば、これらの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、各鎖の２つの免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインの間に挿入される。
本明細書で記載のポリペプチドおよびタンパク質は、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号および同第２０１３／００９５０９７号で一般的に開示されるような足場を用いて作製され得る。これらの特許出願公開は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書で記載のポリペプチドは、２つの同一でないポリペプチド鎖を含み得、それぞれのポリペプチド鎖は、免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインを含む。相互作用する免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、異なる。一実施形態では、免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、ＣＨ１ドメインまたはその誘導体を含む。別の実施形態では、免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、ＣＬドメインまたはその誘導体を含む。一実施形態では、ＣＬドメインは、ＣκまたはＣλアイソタイプまたはその誘導体である。
例示的治療的タンパク質：抗ＣＤ８６ ｘ モノＩＬ－１０ポリペプチドおよびそのダイマー
いくつかの実施形態では、本明細書で記載の組成物中に含まれる治療的タンパク質は、ＣＤ８６結合ドメインおよびモノマーＩＬ－１０ドメインを含むＩＬ－１０送達ポリペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含むＩＬ－１０送達ポリペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、タンパク質治療薬は、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、（任意選択で）Ｆｃ結合ドメインリンカーおよびモノマーＩＬ－１０ドメインを含むＩＬ－１０送達ポリペプチドであり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で記載の組成物中に含まれる治療的タンパク質は、ＣＤ８６結合ドメインおよびモノマーＩＬ－１０ドメインを含むＩＬ－１０送達ポリペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含むＩＬ－１０送達ポリペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、タンパク質治療薬は、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、（任意選択で）Ｆｃ結合ドメインリンカーおよびモノマーＩＬ－１０ドメインを含むＩＬ－１０送達ポリペプチドであり得る。
従って、いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、ＣＤ８６結合ドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含み得る、またはこれらからなり得る。本開示のＩＬ－１０送達ポリペプチドは、融合タンパク質として記載されてもよい。また提供されるのは、このようなＩＬ－１０送達ポリペプチドのダイマー、例えば、ホモダイマーおよびヘテロダイマーである。
ＣＤ８６表面分子は、Ｂ７受容体サブファミリーに属し、Ｔ細胞共刺激として機能する（Ｌｕ ｅｔ ａｌ．１９９７；Ｖｉｃｅｎｔｉ ｅｔ ａｌ．２００８）。それは通常、樹状細胞、単球および活性化されるが休止していないＢ細胞などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）機能を有する細胞上で発現される（Ｌｕ ｅｔ ａｌ．１９９７；Ｖｉｃｅｎｔｉ ｅｔ ａｌ．２００８）。それは、ナイーブヒト単球およびＤＣにより高レベルで発現され、それは、いくつかの活性化条件下でさらに発現上昇される（Ｈａｔｈｃｏｃｋ ｅｔ ａｌ．１９９４；Ｓａｎｓｏｍ ｅｔ ａｌ．２００３）。ナイーブ単球上のＣＤ８６の発現は、細胞当り２，０００～５，０００コピーの範囲であると推定されている（Ｗｏｌｋ ｅｔ ａｌ．２００７）。高レベルのＣＤ８６発現は、特定の病的状態の炎症性組織に関連し（Ｖｕｃｋｏｖｉｃ ｅｔ ａｌ．２００１；Ｎａｋａｚａｗａ ｅｔ ａｌ．１９９９）、ＣＤ８６およびＣＤ８０（後者はＢ７ファミリーの第２のメンバーである）は、Ｔ細胞共受容体ＣＤ２８との相互作用により、Ｔ細胞活性化を促進する。
ＣＤ８６結合ドメインは、ＣＤ８６に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、ＣＤ８６（例えば、ヒトＣＤ８６）の細胞外ドメインに位置するエピトープに結合する。特定の態様では、このエピトープは、不連続な、および／または立体構造的なエピトープである。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、ＣＤ８６を結合するが、ＣＤ８０を結合しない。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、ヒトＣＤ８６を結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、非ヒト霊長類ＣＤ８６に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、ヒトＣＤ８６に結合し、また、カニクイザルＣＤ８６と交差反応する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、カニクイザル単球および系統陰性集団（ＤＣ）に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、ヒト化される。
いくつかの事例では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドのＣＤ８６結合ドメインは、ＦＵＮ－１抗体由来のヒト化ＣＤ８６結合ドメインであり得る（例えば、Ｎｏｚａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９９３；１６９（３）：３０９－３１５、を参照）。例えば、ＣＤ８６結合ドメインポリペプチドは、（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および（２）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み得る。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の少なくとも１つは、ＦＵＮ１抗体由来である。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、配列番号１、２、および３をそれぞれ含む。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３は、配列番号４、５、および６をそれぞれ含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号３であり、ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号５であり、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号６である。
特定の実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、配列番号８の軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列と、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または１００％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインポリペプチドは、配列番号７の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を有する可変重鎖および配列番号８のアミノ酸配列を有する可変軽鎖を含む。
本開示のポリペプチドでの使用に好適なＣＤ８６結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み得る、またはこれからなり得る。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＨ－ＶＬ方向またはＶＬ－ＶＨ方向であり得る。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＨおよびＶＬ領域間のリンカーを含み得る。いくつかの理由で、リンカーは、（Ｇｌｙ－Ｓｅｒ４）ｎ、（ｎ＝１～５の整数）（配列番号１２９）を含み得る。特定の実施形態では、ｎ＝４（配列番号６１）である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列と、少なくとも約８２％、少なくとも約８５％、少なくとも約８７％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一である抗ＣＤ８６ ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、配列番号９と少なくとも約９５％または１００％同一性を有するアミノ酸配列を含む。
サイトカインＩＬ－１０は、炎症の抑制におけるキープレーヤーである。前臨床およびヒト試験において炎症過程を制限するＩＬ－１０の重要な役割は、２０年前のその発見以来、広範に実証されてきた（Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，２００１）。しかし、ＩＬ－１０を種々の炎症性疾患のための療法として開発する複数の試みは、医院において限られた成功を示したに過ぎなかった。ＩＬ－１０は抗原提示を抑制し抗原特異的耐性を促進するが、それはまた種々のリンパ球集団のエフェクター機能を刺激する、という臨床的証拠が増えつつある。これは、細胞傷害性Ｔ細胞の刺激により、癌患者の抗腫瘍応答を高める点でのＩＬ－１０の最近の臨床的成果により、最もよく示される（Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．２０１５）。従って、その短い半減期と組み合わせたＩＬ－１０の多面的効果およびＩＬ－１０Ｒの広範囲の発現は、臨床試験での局所炎症を抑制するその能力を妨害していた可能性がある。
ＩＬ－１０は、抑制的なおよび刺激的な機能の両方を発揮するサイトカインである。ＩＬ－１０は通常、Ｔ細胞ならびに単球マクロファージ、マクロファージ、および樹状細胞により発現される。ＩＬ－１０の主要な機能の１つは、樹状細胞（ＤＣ）およびマクロファージによる抗原提示の抑制によるＴ細胞活性化を妨げることである（Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，２００１）。抗原提示機能の誘導に加えて、ＩＬ－１０はまた、調節性ＤＣの分化を誘導する（Ａｍｏｄｉｏ ｅｔ ａｌ．２０１２）。通常のＤＣとは異なり、調節性ＤＣは、抗原依存性制御性Ｔ細胞（Ｔｒ１）の分化を誘導する（Ｇｒｅｇｏｒｉ ｅｔ ａｌ．２０１０，Ｐａｃｃｉａｎｉ ｅｔ ａｌ．２０１０，Ｇｒｅｇｏｒｉ ｅｔ ａｌ．２０１１）。複数の動物モデルおよびヒト疾患での炎症過程の抑制におけるＩＬ－１０の重要な役割は、広範に実証されてきた（Ｋｕｈｎ ｅｔ ａｌ．１９９３；Ｓｔｅｉｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．２０００；Ｌｉｎｄｓａｙ ｅｔ ａｌ．２００３）。その明確に特徴づけられた免疫抑制機能に加えて、ＩＬ－１０はまた、他の細胞型の機能も刺激する。その刺激機能は特に、Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌の強化（Ｒｏｕｓｓｅｔ ｅｔ ａｌ．１９９２；Ｆｌｕｃｋｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．１９９３；Ｂａｃｈｅｒｅａｕ ｅｔ ａｌ．１９９４）およびＴ細胞による細胞毒性効果の強化（Ｍｕｍｍ ｅｔ ａｌ．２０１１；Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ ２０１５）である。患者の自己免疫状態の治療のための療法としてのＩＬ－１０の開発で複数の試みが行われた（Ｃｏｌｏｍｂｅｌ ｅｔ ａｌ．２００１；Ｆｅｄｏｒａｋ ｅｔ ａｌ．２０００；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ ｅｔ ａｌ．２０００；Ｋｉｍｂａｌｌ ｅｔ ａｌ．２００２）。しかし、ＩＬ－１０の多面的効果、その短い半減期およびＩＬ－１０Ｒの広範な発現は、炎症を抑制する薬剤としてＩＬ－１０を使用する有効性の欠如の理由である可能性が極めて高い（Ｈｅｒｆａｒｔｈ ｅｔ ａｌ．２００２）。
ＩＬ－１０は、ＩＬ－１０受容体（ＩＬ－１０Ｒ）に結合する。ＩＬ－１０Ｒは、ほとんどの造血細胞の表面上で、細胞当り数百個程度の受容体であると推定される、非常に低いコピー数で発現される（Ｃａｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．１９９５；Ｊｕｒｌａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．１９９７）。ＩＬ－１０Ｒは、二本鎖：ＩＬ－１０に親和性を有して結合するＩＬ－１０Ｒ１鎖、およびＩＬ－１０と低親和性相互作用を有し他のクラス２サイトカインファミリーメンバーとの受容体複合体に関与するＩＬ－１０Ｒ２鎖、から構成される（Ｗａｌｔｅｒ ２０１４）。両鎖は、シグナル伝達に寄与するが、全てのＩＬ－１０特異的機能は、ＩＬ－１０Ｒ１鎖中に存在するように見える。ＩＬ－１０は、Ｔ細胞および単球／マクロファージにより発現される、２つの組み合わされたポリペプチド鎖の非共有結合ホモダイマーである。ＩＬ－１０は、主に、リン酸化を介してシグナル伝達およびＳＴＡＴ３の転写因子の活性化を引き起こす２つのＩＬ－１０Ｒ複合体のダイマー化を誘導するが、ＳＴＡＴ１もまた活性化され得る（Ｗａｌｔｅｒ ２０１４；Ｄｏｎｎｅｌｌｙ ｅｔ ａｌ．１９９９）。前述の通り、ＩＬ－１０は、細胞型に応じて抑制的なまたは刺激的な機能を媒介できる。それは、炎症性サイトカイン活性化を抑制し、骨髄細胞、例えば、ＤＣならびに単球およびマクロファージによる炎症性サイトカインの分泌を抑制する（Ｓａｂａｔ ｅｔ ａｌ．２０１０；Ｍｏｓｓｅｒ ｅｔ ａｌ．２００８；Ｏｕｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１１）。それは、調節性ＤＣの分化を誘導し、調節性ＤＣは制御性Ｔ細胞（Ｔｒ１）の分化を誘導する（Ｒｏｎｃａｒｏｌｏ）。しかし、それはまた、Ｂ細胞の成長および分化（Ｒｏｕｓｓｅｔ ｅｔ ａｌ．１９９２；Ｆｌｕｃｋｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．１９９３；Ｂａｃｈｅｒｅａｕ ｅｔ ａｌ．１９９４）および細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞のエフェクター機能（Ｍｕｍｍ ｅｔ ａｌ．２０１１；Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．２０１５）も促進する。ＩＬ－１０の炎症の重要な負の調節因子としての重要な役割は、種々の動物モデルでのＩＬ－１０の欠損の結果により明らかにされている（Ｋｕｈｎ ｅｔ ａｌ．１９９３；Ｓｔｅｉｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．２０００；Ｌｉｎｄｓａｙ ｅｔ ａｌ．２００３）。
本明細書で記載されるのは、その抑制機能を維持すると同時に、その刺激特性を低減するＩＬ－１０の改変バージョンである（モノマーＩＬ－１０またはモノＩＬ１０またはモノ－ＩＬ１０）。ＩＬ－１０のモノマー型は、ＩＬ－１０Ｒと依然として相互作用できるが、もはやヒトリンパ球に対する下流イベントを誘発せず、同時に、骨髄細胞に対するわずかに弱められた機能を示す。より具体的には、モノマーＩＬ－１０は、ＩＬ－１０Ｒと相互作用し、およびＩＬ－１０Ｒを介してシグナル伝達するが、ＩＬ－１０Ｒに対しより低い親和性を示し（Ｊｏｓｅｐｈｓｏｎ ｅｔ ａｌ．２０００）、それは、１：１でのモノＩＬ１０／可溶性ＩＬ－１０Ｒに対し１：２での野生型ＩＬ－１０：野生型ＩＬ－１０ダイマー／可溶性ＩＬ－１０Ｒ１とは異なる配置で受容体と相互作用する。低減された親和性にもかかわらず、モノマーＩＬ－１０は、細胞に対する生物活性を保持するが、効力は低減される。製造の観点から、モノマーＩＬ－１０が野生型ＩＬ－１０より大きな熱安定性を示す（Ｊｏｓｅｐｈｓｏｎ ｅｔ ａｌ，２０００；Ｗｅｓｔｅｒｈｏｆ ｅｔ ａｌ．２０１２）ことは、注目すべきである。
いくつかの態様では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、サブドメインの分子内折り畳みを可能にするＩＬ－１０サブドメイン間のＤＥループ中にアミノ酸挿入を含む、モノマーＩＬ－１０ドメインを含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸挿入は、４～８アミノ酸の長さである。いくつかの実施形態では、アミノ酸挿入は、５～１０アミノ酸の長さである。いくつかの実施形態では、アミノ酸挿入は、６アミノ酸の長さである。本明細書で記載のモノマーＩＬ－１０の例は、モノマーの分子内の折り畳みをもたらす野生型ＩＬ－１０のＤＥループ中に６アミノ酸（ＧＧＧＳＧＧ、配列番号１３０）の導入により改変された（Ｊｏｓｅｐｈｓｏｎ ｅｔ ａｌ．２０００）。従って、いくつかの態様では、モノマーＩＬ－１０は、サブドメインの分子内の折り畳みを可能にするＩＬ－１０サブドメイン間のＤＥループ中に６アミノ酸挿入を含む。特定の実施形態では、モノマーＩＬ－１０は、配列番号２８配列と、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含む、またはこれらからなるＩＬ－１０送達ポリペプチドは、免疫グロブリンＦｃドメインをさらに含み得る。特定の実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン、例えば、ＩｇＧ１ ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。特定の実施形態では、定常領域は、ＣＨ１ドメインを含まない。特定の実施形態では、定常領域を構成する定常ドメインは、ヒトのものまたはヒト配列由来である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、位置２３４、２３５、２３７および３２２に変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、位置２３４、２３５、２３７、３１８、３２０および３２２に変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＫ３２２Ａを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０Ａ、およびＫ３２２Ａを含む。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ１由来である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１由来であるＦｃドメインは、患者に投与された場合ポリペプチドがＣＤ８６および／またはＩＬ－１０Ｒ発現細胞を枯渇させるのを防ぐ、２つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン中の２つ以上の変異は、Ｆｃ媒介架橋を介したシグナル伝達を防ぐまたは実質的に低減する。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ペプチドは、Ｆｃ結合ドメインリンカーをさらに含み得る。Ｆｃ結合ドメインリンカーは、１～１００個のアミノ酸、例えば、８～１５つのアミノ酸を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、ＩＩ型Ｃレクチンタンパク質由来のアミノ酸配列を含み、ＩＩ型Ｃレクチンタンパク質は、ＮＫＧ２Ａであり得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、配列番号５０～７０のいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ、（ｎ＝１～５）（配列番号１２９）を含むアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ｎ＝４（配列番号６１）である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、プロテアーゼ切断部位を含まない。
ＩＬ－１０送達ペプチドは、ＩｇＧ由来のヒンジ領域などのヒンジ領域をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、１つまたは複数の変異システイン残基を有する。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列番号７１～１０９のいずれか１つを含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端へ、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、Ｆｃ結合ドメインリンカーおよびモノマーＩＬ－１０ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、配列番号９を含む、または配列番号９と少なくとも約９５％～１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、モノマーＩＬ－１０ドメインは、配列番号２８を含む、または配列番号２８と少なくとも約９５％～１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端へ、配列番号９のＣＤ８６結合ドメイン、および配列番号２８のモノマーＩＬ－１０ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端へ、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、（任意選択で）Ｆｃ結合ドメインリンカー、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含み、ＣＤ８６結合ドメインは、ＣＤ８６を特異的に結合する可変重鎖および可変軽鎖を含み、免疫グロブリンＦｃドメインは、Ｆｃ受容体ＦｃγＲ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂへの結合を防止または有意に低減する２つ以上の変異を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインであり、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、８～２０アミノ酸の長さでグリコシル化部位不含のフレキシブルリンカーを含み、モノマーＩＬ－１０ドメインは、短いリンカーで分離された２つのヒトＩＬ－１０サブユニットを含み、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、同一のＩＬ－１０送達ポリペプチドとダイマータンパク質を形成する。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、配列番号３０、または配列番号３０と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、配列番号３０から本質的になる、または配列番号３０からなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、配列番号２９の配列、または配列番号２９と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一である配列を有する核酸によりコードされる。Ｑ０１２８は、配列番号３０のアミノ酸配列を有するＩＬ－１０送達ポリペプチド（または融合タンパク質）の例である。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ペプチドは、ＩＬ－１０ＲおよびＣＤ８６を発現する細胞に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、ホモダイマーまたはヘテロダイマーなどの、ダイマーである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、モノマーである。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、同一のＩＬ－１０送達ポリペプチドにダイマー化されると、単球および樹状細胞中でＳＴＡＴ３リン酸化を誘導する。樹状細胞は、免疫寛容原性樹状細胞であり得る。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、同一のＩＬ－１０送達ポリペプチドとダイマー化されると、Ｂ、ＴおよびＮＫリンパ球に対しリン酸化を誘導しない、またはＢ、ＴおよびＮＫリンパ球に対し、ＩＬ－１０に対する場合と比較して、最小限のリン酸化を誘導する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ８６ドメインは、ＣＤ８６結合ドメイン結合ドメインを含まないＦｃモノマーＩＬ－１０またはＦｃ－ＩＬ－１０分子と比較して、インビボでモノマーＩＬ－１０ドメインのシグナルを高める。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、同一のＩＬ－１０送達ポリペプチドとダイマー化されると、ＩＬ－１０に対する場合と比較して、高められた効力を示す。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、同一のＩＬ－１０送達ポリペプチドとダイマー化されると、活性化Ｔ細胞を刺激しない。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、同一のＩＬ－１０送達ポリペプチドとダイマー化されると、ＩＬ－１０に対する場合と比較して、Ｂ細胞を刺激しない、または活性化Ｂ細胞を最小限に刺激する。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、同一のＩＬ－１０送達ポリペプチドとダイマー化されると、ＩＬ－１０に対する場合と比較して、ＩｇＭ分泌を誘導しない、またはＩｇＭ分泌を最小限に誘導する。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、同一のＩＬ－１０送達ポリペプチドとダイマー化されると、Ｔ細胞増殖性を抑制する。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０送達ポリペプチドは、同一のＩＬ－１０送達ポリペプチドとダイマー化されると、抗原提示細胞機能を抑制する。
いくつかの実施形態では、単球上の２０％未満のＣＤ８６受容体占有率が、ＩＬ－１０送達ポリペプチドが同一のＩＬ－１０送達ポリペプチドとダイマー化されヒトまたは非ヒト霊長類に投与される場合、抗原提示の最大抑制を達成するために必要である。
本明細書で記載の抗ＣＤ８６ ｘ モノ－ＩＬ１０分子は、改変バージョンのＩＬ－１０（モノマーＩＬ－１０）の抗原提示細胞への送達により、乾癬などの炎症状態を治療するようにデザインされる。これらの分子は、その抑制機能を維持すると同時に、その刺激特性を低減する、改善されたバージョンのＩＬ－１０として機能する。それらは、２つの機序の組み合わせによりこの二重の目標を達成する。第１に、これらの分子中に存在するＩＬ－１０のモノマー型は、ＩＬ－１０Ｒと依然として相互作用できるが、もはやヒトリンパ球に対する下流イベントを誘発せず、同時に、骨髄細胞に対するわずかに弱められた機能を示す。第２に、モノマーＩＬ－１０の抗ＣＤ８６標的化アームへの結合は、ＣＤ８６発現細胞に対し特異的にモノマーＩＬ－１０のシグナルを高める。分子中のＦｃ部分の含有は、４時間未満である野生型ＩＬ－１０の半減期に比べて、その半減期を延長する（Ｈｕｈｎ ｅｔ ａｌ．１９９６）。得られた分子は、抗原提示機能およびＴ細胞活性化を抑制し、調節性ＤＣを誘導するが、ナイーブまたは活性化ＢまたはＴ細胞の機能を刺激しない。これらの分子がインビトロおよびインビボで最適機能を誘発する最小濃度は、ＣＤ８６受容体飽和のために必要なレベル未満である。従って、これらの分子は、モノＩＬ１０の送達を介しかつＣＤ８６遮断を介さずに機能する。
本発明の組成物で使用するための治療的タンパク質は、上記治療的タンパク質のいずれかから選択され得る。例えば、治療的結合タンパク質は、第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含み得、任意選択で少なくとも免疫グロブリン定常領域により分離される。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインおよび／または第２の結合ドメインは、薬物または毒素に結合される。
いくつかの実施形態では、第１のまたは第２の結合ドメインは、（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨまたはＶＬ、またはＶＨとＶＬの両方は、ヒト化される。ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号３であり、ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号５であり、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号６であり得る。ＶＨは、配列番号７、または配列番号７と少なくとも約９０％、少なくとも約９２％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号８、または配列番号８と少なくとも約９０％、少なくとも約９２％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号７を含み、ＶＬは、配列番号８を含む。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインまたは第２の結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域は、ｓｃＦｖの重鎖可変領域に対しカルボキシ末端またはアミノ末端であり得る。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖはリンカーポリペプチドを含み、これは、ｓｃＦｖの軽鎖可変領域と重鎖可変領域の間に位置し得る。リンカーポリペプチドは、式（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ、式中ｎ＝１～５（配列番号１２９）を含み得る。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインまたは第２の結合ドメインは、抗原提示細胞に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインまたは第２の結合ドメインは、ＩＬ－１０の受容体に結合する。
いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインまたは第２の結合ドメインは、ＣＤ８６に特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、結合ドメインは、配列番号１のＨＣＤＲ１、配列番号２のＨＣＤＲ２、および配列番号３のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号４のＬＣＤＲ１、配列番号５のＬＣＤＲ２、および配列番号６のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、結合ドメインは、配列番号７、またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号８、またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、結合ドメインは、配列番号９、またはそれと少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１または第２の結合ドメインは、サイトカイン受容体に特異的に結合する。サイトカイン受容体は、例えば、ＩＬ－１０受容体（ＩＬ－１０Ｒ）であり得る。
いくつかの実施形態では、第１または第２の結合ドメインは、サイトカインまたはサイトカインの組換えバリアントを含む。サイトカインまたは組換えバリアントは、モノマーＩＬ－１０であり得る。いくつかの実施形態では、モノマーＩＬ－１０は、ＩＬ－１０受容体（ＩＬ－１０Ｒ）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、モノマーＩＬ－１０は、サブドメインの分子内の折り畳みを可能にするＩＬ－１０サブドメイン間のＤＥループ中にアミノ酸挿入を含む。アミノ酸挿入は、４～８つのアミノ酸または５～１０個のアミノ酸であり得る。いくつかの実施形態では、モノマーＩＬ－１０は、配列番号２８を含む。
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、免疫グロブリン定常領域を含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ヒトＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２またはＩｇＤの免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＥＵナンバリングシステムに従って、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、およびＫ３２２Ａを含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメインを含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＥＵナンバリングシステムに従って、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０ＡおよびＫ３２２Ａを含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメインを含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、配列番号１３１を含む。
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、ヒンジ領域、例えば、免疫グロブリンヒンジ領域由来のヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列番号４７を含む。
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、Ｆｃ結合ドメインリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、Ｇｌｙ４Ｓｅｒ（配列番号１２８）配列、例えば、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎを含み、式中ｎ＝１～５である（配列番号１２９）。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、ＩＩ型Ｃレクチンタンパク質のストーク領域由来の配列を含む。ＩＩ型Ｃレクチンタンパク質は、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ９４、ＮＫＧ２ＡまたはＮＫＧ２Ｄであり得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、配列番号１３２を含む。
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含み、ＣＤ８６結合ドメインは、ＣＤ８６を特異的に結合する可変重鎖および可変軽鎖を含み、免疫グロブリンＦｃドメインは、Ｆｃ受容体ＦｃγＲ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩｂへの結合を防止するまたは有意に低減する２つ以上の変異を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインであり、モノマーＩＬ－１０ドメインは、短いリンカーで分離された２つのヒトＩＬ－１０サブユニットを含み、治療的タンパク質は、ホモダイマーである。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１であり、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号２であり、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号３であり、ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号４であり、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号５であり、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号６である。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、配列番号７と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する可変重鎖、および配列番号８と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８６結合ドメインは、配列番号９と少なくとも約９５％または１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、モノマーＩＬ－１０ドメインは、配列番号２８と少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、配列番号３０のアミノ酸配列、または配列番号３０と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１または第２の結合ドメインは、抗原提示細胞、例えば、単球または樹状細胞に特異的に結合する。抗原提示細胞は、ＣＤ８６発現単球またはＣＤ８６発現樹状細胞などの、単球または樹状細胞であり得る。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質の第１または第２の結合ドメインは、ＣＤ８６に特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を示さない、またはそれらを最小限に示す。
いくつかの実施形態では、組成物中の治療的タンパク質の約８０重量％以上、約８５重量％以上、または約９０重量％以上または約９５重量％以上は、凝集体として存在しない。凝集体パーセンテージは、サイズ排除高速液体クロマトグラフィーにより測定され得る。
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、少なくとも１回の凍結イベントおよびそれに続く解凍イベント後に、凝集しない、または最小限に凝集する。いくつかの実施形態では、グルタメート緩衝液を含む本開示の組成物は、サイズ排除高速液体クロマトグラフィーにより測定して、少なくとも１回の凍結イベントおよびそれに続く解凍イベント後に高分子量種として存在する、非グルタメート緩衝液および同じ多重特異的タンパク質を含む組成物中の相対量と比べて、より少ない相対量の多重特異的タンパク質を有する。凍結イベントは、例えば、－８０℃または－２０℃で行われ得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で記載の組成物は、１～２０ｍｇ／ｍｌ、１～１２ｍｇ／ｍｌ、または５～１０ｍｇ／ｍｌの治療的タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｍｇ／ｍｌ～約１２ｍｇ／ｍｌ、または約５ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌの治療的タンパク質を含む。さらなる実施形態では、組成物は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、または約１２ｍｇ／ｍｌの治療的タンパク質を含む。特定の実施形態では、組成物は、約２ｍｇ／ｍｌの治療的タンパク質を含む。
例示的タンパク質治療薬：抗ＣＤ１２３ ｘ 抗ＣＤ３ポリペプチドおよびそのダイマー
例示的タンパク質治療薬は、Ｔ細胞上のＣＤ１２３発現細胞およびＴ細胞受容体複合体の両方を結合して、標的依存性Ｔ細胞細胞傷害性、活性化および増殖を誘導し得る。
例示的タンパク質治療薬は、Ｔ細胞上のＣＤ１２３発現細胞およびＴ細胞受容体複合体の両方を結合して、標的依存性Ｔ細胞細胞傷害性、活性化および増殖を誘導し得る。
従って、特定の実施形態では、本明細書で記載の方法および組成物に関連して使用される治療的タンパク質は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む二重特異的単鎖分子である。いくつかの実施形態では、ＣＤ１２３および／またはＣＤ３結合ドメインは、抗体由来であり、可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）を含む。例えば、ＣＤ１２３および／またはＣＤ３結合ドメインは、ＶＨおよびＶＬを含むｓｃＦｖであり得る。これらの結合ドメインおよび可変鎖は、標的に対するある程度の結合を依然として保持する、任意の順に配置され得る。例えば、可変ドメインは、（ＶＨ ＣＤ１２３）－（ＶＬ ＣＤ１２３）－（ＶＨ ＣＤ３）－（ＶＬ ＣＤ３）、（ＶＬ ＣＤ１２３）－（ＶＨ ＣＤ１２３）－（ＶＨ ＣＤ３）－（ＶＬ ＣＤ３）、（ＶＨ ＣＤ１２３）－（ＶＬ ＣＤ１２３）－（ＶＬ ＣＤ３）－（ＶＨ ＣＤ３）、（ＶＬ ＣＤ１２３）－（ＶＨ ＣＤ１２３）－（ＶＬ ＣＤ３）－（ＶＨ ＣＤ３）、（ＶＨ ＣＤ３）－（ＶＬ ＣＤ３）－（ＶＨ ＣＤ１２３）－（ＶＬ ＣＤ１２３）、（ＶＬ ＣＤ３）－（ＶＨ ＣＤ３）－（ＶＬ ＣＤ１２３）－（ＶＨ ＣＤ１２３）、（ＶＨ ＣＤ３）－（ＶＬ ＣＤ３）－（ＶＬ ＣＤ１２３）－（ＶＨ ＣＤ１２３）、または（ＶＬ ＣＤ３）－（ＶＨ ＣＤ３）－（ＶＨ ＣＤ１２３）－（ＶＬ ＣＤ１２３）などの順で配置され得る。ＣＤ３に結合する結合ドメイン中のＶＨ領域およびＶＬ領域の対は、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）のフォーマットであり得る。ＶＨおよびＶＬ領域は、ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＨの順で配置される。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、同じ方向で同じＶＨおよびＶＬ領域配列を含む抗体よりも高い効率でＣＤ１２３に結合し得る。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＨ－ＶＬ方向よりもＶＬ－ＶＨ方向中で高い効率でＣＤ１２３に結合し得る。ＶＨ領域は、リンカー配列に対しＮ末端に配置され得る。ＶＬ領域は、リンカー配列に対しＣ末端に配置され得る。二重特異的単鎖分子のＣＤ３結合ドメイン中のドメイン配置は、ＶＨ－ＶＬであり得、ＣＤ３結合ドメインは、ＣＤ１２３結合ドメインに対しＣ末端に配置される。二重特異的分子は、ＣＤ１２３に結合するｓｃＦｖに連結される、ＣＤ３に結合するｓｃＦｖを含み得る。これらのｓｃＦｖは、短鎖ペプチドで連結される。いくつかの実施形態では、二重特異的単鎖分子は、ヒンジ領域または定常領域を含まない（例えば、米国特許出願公開第２０１３／０２９５１２１号、国際公開第２０１０／０３７８３６号、同第２００４／１０６３８１号および同第２０１１／１２１１１０号を参照されたい；それぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
ＣＤ１２３－二重特異的結合構築物は、表４、表５、および／または表６に示す１つまたは複数の配列を含み得る。
特定の実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインは、（ｉ）ＣＤＲ ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１４４で示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１４６で示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１４８で示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインは、（ｉ）ＣＤＲ ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）、および（ｉｉ）ＣＤＲ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかのこのような実施形態では、（ｉ）ＬＣＤＲ１は、配列番号１３８で示されるアミノ酸配列または少なくとも１つのアミノ酸置換により配列番号１３８とは異なる配列を有し；（ｉｉ）ＬＣＤＲ２は、配列番号１４０で示されるアミノ酸配列または少なくとも１つのアミノ酸置換により配列番号１４０とは異なる配列を有し；（ｉｉｉ）ＬＣＤＲ３は、配列番号１４２で示されるアミノ酸配列または少なくとも１つのアミノ酸置換により配列番号１４２とは異なる配列を有し；（ｉｖ）ＨＣＤＲ１は、配列番号１４４で示されるアミノ酸配列または少なくとも１つのアミノ酸置換により配列番号１４４とは異なる配列を有し；（ｖ）ＨＣＤＲ２は、配列番号１４６で示されるアミノ酸配列または少なくとも１つのアミノ酸置換により配列番号１４６とは異なる配列を有し；および（ｖｉ）ＨＣＤＲ３は、配列番号１４８で示されるアミノ酸配列または少なくとも１つのアミノ酸置換により配列番号１４８とは異なる配列を有する。上記のアミノ酸置換は、保存的または非保存的アミノ酸置換であり得る。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、および／またはＨＣＤＲ３は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸だけ詳述した配列とは異なる。特定の実施形態では、本開示のＣＤＲは、既知のモノクローナル抗体のＣＤＲ配列と比較して、約１つまたは複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の挿入、約１つまたは複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の欠失、約１つまたは複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換または非保存的アミノ酸置換）、または上記変化の組み合わせを含む。例えば、本発明は、（ｉ）配列番号１３８で示されるアミノ酸配列または１つまたは２つのアミノ酸置換により配列番号１３８とは異なる配列を有するＬＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号１４０で示されるアミノ酸配列または１つまたは２つのアミノ酸置換により配列番号１４０とは異なる配列を有するＬＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号１４２で示されるアミノ酸配列または１つまたは２つのアミノ酸置換により配列番号１４２とは異なる配列を有するＬＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１４４で示されるアミノ酸配列または１つまたは２つのアミノ酸置換により配列番号１４４とは異なる配列を有するＨＣＤＲ１；（ｖ）配列番号１４６で示されるアミノ酸配列または１つまたは２つのアミノ酸置換により配列番号１４６とは異なる配列を有するＨＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号１４８で示されるアミノ酸配列または１つまたは２つのアミノ酸置換により配列番号１４８とは異なる配列を有するＨＣＤＲ３、を含む組換えポリペプチドを含む。上記のアミノ酸置換は、保存的または非保存的アミノ酸置換であり得る。
関連実施形態では、本発明の組換えポリペプチドは、軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列（例えば、配列番号１３４）、または重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列（例えば、配列番号１３６）、または両方と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８８％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または１００％同一である配列を含む、またはその配列である。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドのＣＤ１２３結合ドメインは、ＶＨＶＬ方向で、配列番号１３６を含む可変重鎖および配列番号１３４を含む可変軽鎖を含むｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドのＣＤ１２３結合ドメインは、ＶＬＶＨ方向で、配列番号１３４を含む可変軽鎖および配列番号１３６を含む可変重鎖を含むｓｃＦｖである。例えば、いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドは、配列番号３３７のアミノ酸配列を含む。本発明は、配列番号３３７のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８８％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または１００％同一である組換えポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインは、（ｉ）ＣＤＲ ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）、および（ｉｉ）ＣＤＲ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかのこのような実施形態では、（ｉ）ＬＣＤＲ１は、配列番号１５４で示されるアミノ酸配列または少なくとも１つのアミノ酸置換により配列番号１５４とは異なる配列を有し；（ｉｉ）ＬＣＤＲ２は、配列番号１５６で示されるアミノ酸配列または少なくとも１つのアミノ酸置換により配列番号１５６とは異なる配列を有し；（ｉｉｉ）ＬＣＤＲ３は、配列番号１５８で示されるアミノ酸配列または少なくとも１つのアミノ酸置換により配列番号１５８とは異なる配列を有し；（ｉｖ）ＨＣＤＲ１は、配列番号１６０で示されるアミノ酸配列または少なくとも１つのアミノ酸置換により配列番号１６０とは異なる配列を有し；（ｖ）ＨＣＤＲ２は、配列番号１６２で示されるアミノ酸配列または少なくとも１つのアミノ酸置換により配列番号１６２とは異なる配列を有し；および（ｖｉ）ＨＣＤＲ３は、配列番号１６４で示されるアミノ酸配列または少なくとも１つのアミノ酸置換により配列番号１６４とは異なる配列を有する。上記のアミノ酸置換は、保存的または非保存的アミノ酸置換であり得る。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、および／またはＨＣＤＲ３は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸だけ詳述した配列とは異なる。いくつかの実施形態では、本開示のＣＤＲは、既知のモノクローナル抗体のＣＤＲ配列と比較して、約１つまたは複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の挿入、約１つまたは複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の欠失、約１つまたは複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換または非保存的アミノ酸置換）、または上記変化の組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインは、軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列（例えば、配列番号１５０）、または重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列（例えば、配列番号１５２）、または両方と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８８％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または１００％同一である配列を含む、またはその配列である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインは、ヒト化免疫グロブリンＶＬおよび／またはＶＨ領域を含む。免疫グロブリンＶＬおよびＶＨ領域をヒト化する技術は当技術分野において既知であり、例えば、米国特許出願公開第２００６／０１５３８３７号で考察されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインは、ヒト免疫グロブリンＶＬおよび／またはＶＨ領域を含む。
本質的に、ＣＤＲグラフト化によるヒト化は、非ヒト抗体のＣＤＲのみを、ヒト可変領域フレームワークおよびヒト定常領域に対し組み換えることを含む。理論的には、これは、免疫原性を実質的に低減または除去するはずである（アロタイプまたはイディオタイプ差異が存在する場合を除いて）。しかし、元の抗体のいくつかのフレームワーク残基はまた、保存される必要があることも報告されている（Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：１０，０２９（１９８９））。
保存される必要があるフレームワーク残基は、コンピューターモデル化により特定できる。あるいは、不可欠なフレームワーク残基は、既知の抗原結合部位構造を比較することにより特定できる可能性がある（Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３１（３）：１６９－２１７（１９９４），ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ ｈｅｒｅｉｎ ｂｙ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）。
抗原結合に影響を与える可能性のある残基は、いくつかのグループに分類される。第１のグループは、抗原部位表面と隣接している残基を含み、これは従って、抗原と直接接触し得る。これらの残基は、アミノ末端残基およびＣＤＲに隣接する残基を含む。第２のグループは、抗体中でＣＤＲまたは別のペプチド鎖に接触することにより、ＣＤＲの構造またはその相対的整列を変え得る残基を含む。第３のグループは、可変ドメインの構造健全性に影響を与え得る受け込まれた側鎖を有するアミノ酸を含む。これらのグループの残基は通常、同じ位置で見つかる（Ｐａｄｌａｎ，１９９４、前出）が、特定されたそれらの位置は、ナンバリングシステムに応じて異なり得る（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｐｕｂ．Ｎｏ．９１－３２４２，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ ＆ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１を参照）。
当該技術分野におけるヒト化抗体についての知識は、本開示によるポリペプチドが抗体ではないとしても、それらに適用可能である。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＤ１２３結合ドメインに関し、（ｉ）免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号１３４で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、および免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号１３６で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号１５０で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、および免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号１５２で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号１５０で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、および免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号１６８で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号１５０で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、および免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号１８４で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｖ）免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号１９８で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、および免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号２００で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｖｉ）免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号２１４で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、および免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号２１６で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｖｉｉ）免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号２３０で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、および免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号２３２で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｖｉｉｉ）免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号１６６で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、および免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号２９６で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｉｘ）免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号１６６で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、および免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号２４８で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｘ）免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号１６６で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、および免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号２６４で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、または（ｘｉ）免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号１６６で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、および免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号２８０で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、各ＣＤＲは、目的の標的（例えば、ＣＤ１２３）に特異的に結合する、モノクローナル抗体またはそのフラグメントまたは誘導体由来のものに比べて、１つ、２つ、または３つ以下の置換、挿入または欠失を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインは、ＣＤ１２３へのＩＬ－３結合を阻害しない。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１２３結合分子またはタンパク質は、ＣＤ１２３を発現する標的細胞へのＴ細胞の動員のための細胞結合ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＣＤ１２３結合タンパク質は、（ｉ）ＴＣＲ複合体またはその成分（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、およびＣＤ３ε）に特異的に結合する結合ドメイン、および（ｉｉ）ＣＤ１２３に特異的に結合する別の結合ドメイン、を含み得る。ＣＤ１２３結合タンパク質は、Ｔ細胞を結合する任意の結合ドメイン、例えば、抗体由来結合ドメインを、本質的に利用できる。ＣＤ３結合ドメインが誘導できる例示的抗ＣＤ３抗体としては、ＣＲＩＳ－７モノクローナル抗体（Ｒｅｉｎｈｅｒｚ，Ｅ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｔｙｐｉｎｇ ＩＩ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９８６）；配列番号３４１（ＱＶＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＦＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＳＳＫＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＴＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＲＮＰＰＴＦＧＧＧＴＫＬＱＩＴＲ）配列番号３４２（ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＳＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＳＡＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＳＰＱＶＨＹＤＹＮＧＦＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ））でそれぞれ示されるＶＬおよびＶＨアミノ酸配列；ＨｕＭ２９１（Ｃｈａｕ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ７１：９４１－９５０；配列番号３４３（ｄｉｑｍｔｑｓｐｓｓｌｓａｓｖｇｄｒｖｔｉｔｃｓａｓｓｓｖｓｙｍｎｗｙｑｑｋｐｇｋａｐｋｒｌｉｙｄｔｓｋｌａｓｇｖｐｓｒｆｓｇｓｇｓｇｔｄｆｔｌｔｉｓｓｌｑｐｅｄｆａｔｙｙｃｑｑｗｓｓｎｐｐｔｆｇｇｇｔｋｖｅｉｋ）および配列番号３４４（ｑｖｑｌｖｑｓｇａｅｖｋｋｐｇａｓｖｋｖｓｃｋａｓｇｙｔｆｉｓｙｔｍｈｗｖｒｑａｐｇｑｇｌｅｗｍｇｙｉｎｐｒｓｇｙｔｈｙｎｑｋｌｋｄｋａｔｌｔａｄｋｓａｓｔａｙｍｅｌｓｓｌｒｓｅｄｔａｖｙｙｃａｒｓａｙｙｄｙｄｇｆａｙｗｇｑｇｔｌｖｔｖｓｓ））でそれぞれ示されるＶＬおよびＶＨアミノ酸配列；ＢＣ３モノクローナル抗体（Ａｎａｓｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：１６９１）；ＯＫＴ３モノクローナル抗体（Ｏｒｔｈｏ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｓｔｕｄｙ Ｇｒｏｕｐ（１９８５）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１３：３３７）およびＯＫＴ３ ａｌａ－ａｌａ（ＯＫＴ３ ＡＡ－ＦＬまたはＯＫＴ３ ＦＬとも呼ばれる）、位置２３４および２３５にアラニン置換を有するヒト化、Ｆｃバリアント（Ｈｅｒｏｌｄ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１：４０９）などのその誘導体；ビジリズマブ（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｂｌｏｏｄ ９９：２７１２）、Ｇ１９－４モノクローナル抗体（Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６：３９４５）、１４５－２Ｃ１１モノクローナル抗体（Ｈｉｒｓｃｈ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：３７６６）およびＩ２Ｃモノクローナル抗体（例えば、米国特許出願公開第２０１１／０２９３６１９号および同第２０１２０２４４１６２号を参照）が挙げられる。
例えば、ＣＤ３結合ドメインは、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１６２号で開示のＣＤ３結合ドメインを含み得、これは、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１６２号の配列番号１７、２１、３５、３９、５３、５７、７１、７５、８９、８３、１０７、１１１、１２５、１２９、１４３、１４７、１６１、１６５、１７９および１８３から選択されるＶＬ領域および／または米国特許出願公開第２０１２／０２４４１６２号の配列番号１５、１９、３３、３７、５１、５５、６９、７３、８７、９１、１０５、１０９、１２３、１２７、１４１、１４５、１５９、１６３、１７７および１８１から選択されるＶＨ領域を含むＣＤ３結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１６２号の配列番号２３、２５、４１、４３、５９、６１、７７、７９、９５、９７、１１３、１１５、１３１、１３３、１４９、１５１、１６７、１６９、１８５、および１８７から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、国際公開第２００４／１０６３８０号、同第２００５／０４０２２０Ａ１、米国特許出願公開第２０１４／００９９３１８号に記載のもの、またはそのＣＤ３結合ドメイン由来のものである。例示的抗ＴＣＲ抗体は、ＢＭＡ０３１モノクローナル抗体である（Ｂｏｒｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２９：１７５－１８８）。ＣＤ３結合ドメインは、国際公開第２０１３／１５８８５６号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載の抗体または配列のいずれか由来であり得る。
例えば、ＣＤ３結合ドメインは、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１６２号で開示のＣＤ３結合ドメインを含み得、これは、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１６２号の配列番号１７、２１、３５、３９、５３、５７、７１、７５、８９、８３、１０７、１１１、１２５、１２９、１４３、１４７、１６１、１６５、１７９および１８３から選択されるＶＬ領域および／または米国特許出願公開第２０１２／０２４４１６２号の配列番号１５、１９、３３、３７、５１、５５、６９、７３、８７、９１、１０５、１０９、１２３、１２７、１４１、１４５、１５９、１６３、１７７および１８１から選択されるＶＨ領域を含むＣＤ３結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１６２号の配列番号２３、２５、４１、４３、５９、６１、７７、７９、９５、９７、１１３、１１５、１３１、１３３、１４９、１５１、１６７、１６９、１８５、および１８７から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、国際公開第２００４／１０６３８０号、同第２００５／０４０２２０Ａ１、米国特許出願公開第２０１４／００９９３１８号に記載のもの、またはそのＣＤ３結合ドメイン由来のものである。例示的抗ＴＣＲ抗体は、ＢＭＡ０３１モノクローナル抗体である（Ｂｏｒｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２９：１７５－１８８）。ＣＤ３結合ドメインは、国際公開第２０１３／１５８８５６号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載の抗体または配列のいずれか由来であり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＣＤ１２３結合ポリペプチドの第２の結合ドメインは、（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域、および（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域を含み、（ａ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３４８、３４９および３５０で示されるアミノ酸配列を有し、およびＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３４５、３４６および３４７で示されるアミノ酸配列を有する；または（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３５４、配列番号３５５、および配列番号３５６で示されるアミノ酸配列を有し、およびＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３５１、配列番号３５２、および配列番号３５３で示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＣＤ１２３結合ポリペプチドの第２の結合ドメインは、（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域、および（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域を含み、（ａ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３５１、３５２および３５３で示されるアミノ酸配列を有し、およびＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３５７、３５９および３５９で示されるアミノ酸配列を有し；または（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３５９、３６７および３６８で示されるアミノ酸配列を有し、およびＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３６３、３６４および３６５で示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＣＤ１２３結合ポリペプチドの第２の結合ドメインは、（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域、および（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域を含み、（ａ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３７２、３７３および３７４で示されるアミノ酸配列を有し、およびＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３６９、３７０および３７１で示されるアミノ酸配列を有し；または（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３７８、３７９および３８０で示されるアミノ酸配列を有し、およびＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３７５、３７６および３７７で示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、本段落中で詳述したＣＤＲ配列を含む第２の結合ドメインはヒト化される。
ＣＤ３εを特異的に結合する２の結合ドメインを含むＣＤ１２３結合タンパク質のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＣＤ３εへの結合についてＣＲＩＳ－７、ＨｕＭ２９１またはＩ２Ｃモノクローナル抗体と競合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、ＣＲＩＳ－７、ＨｕＭ２９１またはＩ２Ｃモノクローナル抗体由来の免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）および免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）を含む（例えば、第２の結合ドメインのＶＬおよびＶＨは、それぞれモノクローナル抗体の軽鎖ＣＤＲおよび重鎖ＣＤＲを含むヒト化可変領域であり得る）。第２の結合ドメインは、ＤＲＡ２２２、ＴＳＣ４５５、またはＴＳＣ４５６ ＣＤ３結合ドメインの軽鎖可変領域、重鎖可変領域、またはその両方を含み得る。ＤＲＡ２２２、ＴＳＣ４５５、およびＴＳＣ４５６のアミノ酸配列は、表４で提供される。ＤＲＡ２２２結合ドメインは、国際公開第２０１３／１５８８５６号にも記載されている。ＴＳＣ４５５は、ＴＳＣ３９４ Ｆ８７Ｙとも呼ばれる。ＴＳＣ４５５は、ＴＳＣ３９４ Ｅ８６Ｄ Ｆ８７ＹまたはＴＳＣ３９４ ＤＹとも呼ばれる。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＣＤ３を特異的に結合し、免疫グロブリン軽鎖可変領域および免疫グロブリン重鎖可変領域を含み；免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号３８４のアミノ酸配列と、少なくとも９３％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列；または配列番号３８５のアミノ酸配列と、少なくとも９４％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み；免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号３８３のアミノ酸配列と少なくとも８２％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも８７％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインをさらに含むＣＤ１２３結合ポリペプチドまたはタンパク質は、ポリペプチドまたはタンパク質の組換え発現の間に生成された低レベルの高分子量凝集体を有し得る。ＣＤ３結合ドメインをさらに含むＣＤ１２３結合ポリペプチドまたはタンパク質は、ポリペプチドまたはタンパク質中に存在するＣＤ３結合ドメインに応じて、ヒト血清中で比較的長い安定性を示し得る。
特定の変形例では、ＣＤ３結合ドメインは、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７３０号、同第２０１１／０２９３６１９、米国特許第７，６３５，４７２号、国際公開第２０１０／０３７８３６号、同第２００４／１０６３８１号、または同第２０１１／１２１１１０号で開示の１種または複数のＣＤ３結合配列（例えば、ＣＤＲまたは可変領域）を含む。それぞれの特許文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、表７に示す１つまたは複数の配列を含む。
種々の実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、表８に示す１つまたは複数の配列を含む。
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端への順に、第１の結合ドメイン、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および第２の結合ドメイン、を含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２またはＩｇＤの免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１０を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１１を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１２を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１は配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１４を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号１５を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１０を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１１を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１２を含み；およびＬＣＤＲ１は配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１４を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号１５を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１６の配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号１７の配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号１８と少なくとも９５％同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１９を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２０を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号２１を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１は配列番号２２を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号２３を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１９を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２０を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号２１を含み；およびＬＣＤＲ１は配列番号２２を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号２３を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２５の配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号２６の配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、配列番号２７と少なくとも９５％または１００％同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、配列番号３１の配列を含む。
薬物送達システム
本明細書で記載のタンパク質吸着を防ぐための組成物は、当業者に既知の多くの異なるタイプの薬物送達システムで使用可能である。
本明細書で記載のタンパク質吸着を防ぐための組成物は、当業者に既知の多くの異なるタイプの薬物送達システムで使用可能である。
本開示による薬物送達システムは、液体を保持するように構成された１つまたは複数の構成要素、例えば、ＩＶバッグを含み得る。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、ＩＶバッグの内側の液体中に懸濁される。液体を保持するように構成された構成要素は、約５０、約１００、約１５０、約２００、約２５０、約３５０、約４５０、または約５００ｍｌの容積を有し得る。構成要素は、例えば、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、エチレン酢酸ビニル、ポリプロピレン、またはコポリエステルエーテルから作製され得る。
薬物送達システムは、１種または複数のチューブをさらに含み得る。チューブは、液体を保持するように構成された構成要素に取り付けられ得る。
本開示の薬物送達システムは、患者に挿入するための針をさらに含み得る。
治療的タンパク質を患者に送達するための薬物送達システムは、治療的タンパク質を送達するように適合された少なくとも１つの構成要素を含み、その構成要素は、液体を保持するように構成された容器、チューブ、および針からなる群より選択され、少なくとも１つの構成要素の内面は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、および約０．００１（ｗ／ｖ）％～０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む組成物と接触され、その後それは、治療的タンパク質を含む組成物と接触される。
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質を患者に送達するための薬物送達システムは、治療的タンパク質を保持するように適合された少なくとも１つの容器を含み、少なくとも１つの容器の内面は、約１～約１０ｍＭのスクシネート、および約０．００１（ｗ／ｖ）％～０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む組成物と接触され、その後それは、治療的タンパク質を含む組成物と接触される。
治療的タンパク質を保持するように適合された容器も、提供される。いくつかの実施形態では、容器の内面を、最初に、本開示の組成物と接触させ、その後それを、治療的タンパク質を含む組成物と接触させる。いくつかの実施形態では、容器は、実質的にラテックス不含である。いくつかの実施形態では、容器は、実質的にビス（２－エチルヘキシル）フタレート（ＤＥＨＰ）不含である。いくつかの実施形態では、容器は、ＩＶバッグ、注入器、およびチューブからなる群より選択される。
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質を送達するための静脈内薬物送達システムを作製する方法は、治療的タンパク質を保持するように適合された少なくとも１つの容器を用意すること、および治療的タンパク質が少なくとも１つの容器に加えられる前に、少なくとも１つの容器の内面を約１～約１０ｍＭのスクシネート、および約０．００１（ｗ／ｖ）％～０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む組成物と接触させること、を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも１つの容器の内面をコートし、治療的タンパク質が容器の内面に結合することを防ぐ。
治療の方法
本開示はまた、治療的タンパク質の静脈内投与（例えば、静脈内注入）により対象を治療する方法を提供する。対象は、例えば、哺乳動物であり得る。いくつかの実施形態では、対象は、ヒト、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウス、ウマ、または雌ウシである。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
本開示はまた、治療的タンパク質の静脈内投与（例えば、静脈内注入）により対象を治療する方法を提供する。対象は、例えば、哺乳動物であり得る。いくつかの実施形態では、対象は、ヒト、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウス、ウマ、または雌ウシである。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
いくつかの実施形態では、方法は、治療的タンパク質を保持するように適合された少なくとも１つの容器を用意すること、容器の内面を、約１～約１０ｍＭのスクシネート、および約０．００１（ｗ／ｖ）％～０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む組成物と接触させること、容器の内面を治療的タンパク質を含む組成物と接触させること、および治療的タンパク質を対象に静脈内投与すること、を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも１つの容器の内面をコートし、治療的タンパク質が容器の内面に結合することを防ぐ。
実施例
以下の実施例への言及により、本発明はさらに詳細に説明される。これらの実施例は、例示のみの目的のために提供され、別段の指定がない限り、限定する意図はない。従って、本発明は、次の実施例に限定されるものと解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書で提供される教示の結果として明らかになる任意のおよびすべての変形例を包含するものと解釈されるべきである。
以下の実施例への言及により、本発明はさらに詳細に説明される。これらの実施例は、例示のみの目的のために提供され、別段の指定がない限り、限定する意図はない。従って、本発明は、次の実施例に限定されるものと解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書で提供される教示の結果として明らかになる任意のおよびすべての変形例を包含するものと解釈されるべきである。
さらに記載がなくても、当業者なら、前の記載および次の実例を用いて、本発明の化合物を作製および利用し、請求方法を実施できると考えられる。以下の実施例は、従って、本発明の好ましい実施形態を具体的に示し、開示の残部を多少なりとも限定すると解釈されるべきではない。
実施例１：ＩＶＳＳ溶液の調製
Ｔ＝１日目に、ｐＨ６．０で１０ｍＭのスクシネートおよび０．０８％のポリソルベート８０を含む２０Ｘ ＩＶＳＳ組成物を調製した。組成物を、１０ｍＬの透明ガラスバイアル中に置き表面を窒素で覆い、２０ｍｍのストッパー／フリップオフオーバーシールを用いて密閉した。この組成物を、実施例を通して、「スクシネート配合物」と呼ぶ。
Ｔ＝１日目に、ｐＨ６．０で１０ｍＭのスクシネートおよび０．０８％のポリソルベート８０を含む２０Ｘ ＩＶＳＳ組成物を調製した。組成物を、１０ｍＬの透明ガラスバイアル中に置き表面を窒素で覆い、２０ｍｍのストッパー／フリップオフオーバーシールを用いて密閉した。この組成物を、実施例を通して、「スクシネート配合物」と呼ぶ。
比較配合物の２０Ｘ ＩＶＳＳ組成物を、ｐＨ６．０で３３３ｍＭのヒスチジンおよび０．０６７％のポリソルベート８０を含み調製した。この組成物を同様に、１０ｍＬの透明ガラスバイアル中に置き表面を窒素で覆い、２０ｍｍのストッパー／フリップオフオーバーシールを用いて密閉した。この組成物を、実施例を通して、「ヒスチジン配合物」と呼ぶ。
実施例２：スクシネートおよびヒスチジン配合物中のポリソルベートの安定性
スクシネート配合物中およびヒスチジン配合物中のポリソルベート８０の安定性を、ポリソルベート８０のＨＰＬＣによる定量化および／またはＵＶスペクトルスキャンプロファイルの定性的評価により測定した。ＨＰＬＣの場合、両配合物のポリソルベート濃度を、ＥＬＳＤ検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ（登録商標）ＨＰＬＣで測定した。ＵＶスペクトルスキャンの場合、両配合物の１００～６００ｎｍの吸光度を、分光光度計を用いてスキャンした。
スクシネート配合物中およびヒスチジン配合物中のポリソルベート８０の安定性を、ポリソルベート８０のＨＰＬＣによる定量化および／またはＵＶスペクトルスキャンプロファイルの定性的評価により測定した。ＨＰＬＣの場合、両配合物のポリソルベート濃度を、ＥＬＳＤ検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ（登録商標）ＨＰＬＣで測定した。ＵＶスペクトルスキャンの場合、両配合物の１００～６００ｎｍの吸光度を、分光光度計を用いてスキャンした。
安定性データを、表９に示す。スクシネート配合物中のポリソルベート８０は、４０℃で少なくとも２７０日間安定であり、一方、ヒスチジン配合物中のポリソルベート８０は、２５℃で２か月未満の期間安定である。この結果は、ポリソルベート８０がヒスチジン配合物中と比較してスクシネート配合物中でより安定であることを実証する。
表１０は、ＨＰＬＣ法によるスクシネート配合物中のポリソルベート８０の定量化を示す。試料を、４０℃で２７０日間保持した。スクシネート緩衝液中のポリソルベート８０は、２７０日後でもまだ規格値内にあり、ポリソルベート８０は０．０７％と定量化された。（ポリソルベート８０の規格値は、０．０６％～０．１％ポリソルベート８０に設定される）。
安定性はまた、ＵＶスキャン法を用いて評価された。ＵＶスキャンデータは、ＨＰＬＣ法により得られたデータを裏付けた（図１Ａ～Ｄ）。Ｔ＝４１日（図１Ｂ）では、ヒスチジン配合物は、ＵＶスペクトルスキャンプロファイルの変化を示し、ポリソルベート８０の分解を示す。Ｔ＝７７日（図１Ｃ）およびＴ＝１４４日（図１Ｄ）では、ヒスチジン配合物は、Ｔ＝４１日に比べてさらなるポリソルベート８０の分解を示した。この実験の期間中、スクシネート配合物のスペクトルスキャンプロファイルの変化はなかった。
スクシネート配合物の継続的な安定性もまた、２～８℃および２５℃で保持した試料で６か月にわたり観察された。スクシネート配合物は、試験した全ての時点および温度で安定であった。下表１１（ａ）は、初期、１か月、２か月、３か月、および６か月時点での、外観データ、ｐＨ、オスモル濃度、ポリソルベート８０濃度、スペクトルスキャン、およびマイクロフロー画像（ＭＦＩ）を示す。値は、整数に丸められる（例えば、１．２は１．０に丸められる）。
下表１１（ｂ）は、初期（Ｔ０）、１か月（Ｔ１）、２か月（Ｔ２）、３か月（Ｔ３）、６か月（Ｔ６）、９か月（Ｔ９）、および１２か月（Ｔ１２）時点の種々の温度（２～８℃、２５℃）および条件（転倒、直立）での、外観データ、ｐＨ、オスモル濃度、スペクトルスキャン情報、ポリソルベート８０濃度、スペクトルスキャン、およびマイクロフロー画像（ＭＦＩ）データを示す。表１１（ｂ）では、データは、観察されたミリリットル当りの粒子数を示し、粒子は、≧２μｍ、≧５μｍ、≧１０μｍ、または≧２５μｍの直径を有した。値は、整数に切り上げられる（例えば、１．２は２に切り上げられる）。
まとめると、このデータは、ポリソルベート８０がヒスチジンベース配合物中でよりもスクシネートベース配合物中で遙かに安定であることを示唆する。
実施例３：ＴＲＩ１３０と共にＩＶＳＳ溶液を使用する方法
ＩＶＳＳは、臨床試験において、ＴＲＩ１３０、ＣＤ１２３ ｘ ＣＤ３二重特異的タンパク質と共に供給される。
ＩＶＳＳは、臨床試験において、ＴＲＩ１３０、ＣＤ１２３ ｘ ＣＤ３二重特異的タンパク質と共に供給される。
ＩＶＳＳは、使い捨ての１０ｍＬのバイアル中で冷蔵されて臨床試験実施施設に輸送される。ＩＶＳＳは、使用まで２～８℃にて薬局または指定の鍵のかかった場所で貯蔵される。
患者へのＴＲＩ１３０の投与の前に、ＴＲＩ１３０は、希釈されて、最終投与量を調製する。ＴＲＩ１３０希釈は、空のＩＶバッグ中で調製され、これは、薬物希釈バッグと呼ばれる。
薬物希釈バッグを準備するために、ＴＲＩ１３０のバイアルを転倒させないで穏やかに５～６回かき混ぜ（震盪はしない）て、生成物が投与量製剤で使用のために適切に混合されていることを確認する。１９０ｍＬの生理食塩水を、空の薬物希釈バッグに加える。９．７ｍＬのＩＶＳＳを、薬物希釈バッグ中に加え、バッグを、５～６回転倒させることにより穏やかに混合する。０．３ｍＬのＴＲＩ１３０を、薬物希釈バッグ中に加え、バッグを、５～６回転倒させることにより穏やかに混合する。
患者への投与用の注入器を準備するために、次の手順に従う。５０～６０ｍＬの注入器を、患者名、試験番号、薬物名、投与量、および調製の日付および時間で標識する。これは、患者投与注入器と呼ばれる。生理食塩水の量（「Ａ」ｍＬ）を、この標識した空の６０ｍＬの注入器に加える。添加される生理食塩水の量、「Ａ］は投与量コホートに依存するので、表１３を参照されたい。
ＩＶＳＳのある量（「Ｂ」ｍＬ）を次に、注入器および針を使って１つのＩＶＳＳバイアルから添加する。添加されるＩＶＳＳの量、「Ｂ］は投与量コホートに依存するので、表１３を参照されたい。針を次に、取り除き、その体積（「Ｂ」ｍＬ）を、Ｂａｘｔｅｒ ＲＡＰＩＤＦＩＬＬコネクター（ルアーロック／ルアーロック）（ｌｕｅｒ ｌｏｃｋ－ｔｏ－ｌｕｅｒ ｌｏｃｋ）を用いて６０ｍＬの患者投与注入器に移す。ＩＶＳＳを含む注入器の内容物を、６０ｍＬの患者投与注入器に押し込む。患者投与注入器を次に、コネクターからわずかに緩め、プランジャを、さらに１ｍＬ引き戻して、注入器およびコネクターから全てのＩＶＳＳを確実に移す。注入器をその後、コネクターに再締め付けし、患者投与注入器の内容物を、５または６回穏やかに転倒させることにより混合する。ＩＶＳＳ注入器およびコネクターをその後、切り離し、廃棄する。
ＴＲＩ１３０の量（「Ｃ」ｍＬ）は、注入器および針を用いて、薬物希釈バッグ（上述のように調製された）から採取される。薬物希釈バッグから添加される薬物の量、「Ｃ］は投与量コホートに依存するので、表１３を参照されたい。針を次に、取り除き、ＴＲＩ１３０（体積「Ｃ」）を、Ｂａｘｔｅｒ ＲＡＰＩＤＦＩＬＬコネクターを用いて患者投与注入器に移す。
ＴＲＩ１３０（「Ｃ」ｍＬ）を含む注入器の内容物を、６０ｍＬの患者投与注入器に押し込む。患者投与注入器を、コネクターからわずかに緩め、プランジャを、さらに１ｍＬ引き戻して、注入器およびコネクターから全てのＴＲＩ１３０を確実に移す。注入器をその後、コネクターに再締め付けし、患者投与注入器の内容物を、５または６回穏やかに転倒させることにより混合する。ＴＲＩ１３０注入器およびコネクターを、切り離し、廃棄する。
その後、フィルター付きＩＶ延長管を患者投与注入器に取り付け、エンドキャップを、ＩＶ管から取り外す。患者投与注入器からの１ｍＬの溶液を、ＩＶ延長管およびフィルターを通して押し出して管を準備する。ＩＶ延長管およびフィルターは、約０．８４ｍＬを使用するので、約０．１６ｍＬが、ＩＶ配管を出て行き、適切に廃棄される必要がある。ＩＶ管のエンドキャップは、再度取り付けされる。患者投与注入器およびＩＶ管ならびにフィルターはその後、患者投与のために、病院フロアまたは輸液センターに送られる。
種々のコホートでの患者への投与のためのＴＲＩ１３０の調製に関するさらなる詳細は、表１２（ａ）、１２（ｂ）、１３（ａ）、および１３（ｂ）に示される。表１２（ａ）および１２（ｂ）は、薬物希釈バッグの調製のための生理食塩水、ＩＶＳＳ、およびＴＲＩ１３０製剤の体積を与える。表１３（ａ）および１３（ｂ）は、患者投与注入器の調製のための生理食塩水、ＩＶＳＳ、およびＴＲＩ１３０薬液（薬物希釈バッグからの）の体積を与える。
参考文献
１．Ｃｌｅｌａｎｄ，Ｊ．，Ｐｏｗｅｌｌ Ｍ．，ｅｔ ａｌ；Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｔｈｅｒ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ １０（４）：３０７－３７７；Ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｔａｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ：ａ ｃｌｏｓｅ ｌｏｏｋ ａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ，ｄｅａｍｉｄａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ
２．Ｓｈｉｒｅ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ；Ｊ Ｐｈａｒｍａ Ｓｃｉｅｎｃｅ ９３（６）：１３９０－１４０２（２００４）；Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｈｉｇｈ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ
３．Ｂｒｕｃｅ Ｋｅｒｗｉｎ；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ９７（８）：２９２４－２９３５（２００８）；Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ２０ ａｎｄ ８０ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙｓ
４．Ｎｅｍａ，Ｓ ａｎｄ Ｂｒｅｎｄｅｌ Ｒ；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ ６５，Ｎｏ ３，Ｍａｙ－Ｊｕｎｅ ２０１１；Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｏｌｅ ｉｎ ａｐｐｒｏｖｅｄ ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ ｕｓａｇｅ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓ
１．Ｃｌｅｌａｎｄ，Ｊ．，Ｐｏｗｅｌｌ Ｍ．，ｅｔ ａｌ；Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｔｈｅｒ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ １０（４）：３０７－３７７；Ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｔａｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ：ａ ｃｌｏｓｅ ｌｏｏｋ ａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ，ｄｅａｍｉｄａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ
２．Ｓｈｉｒｅ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ；Ｊ Ｐｈａｒｍａ Ｓｃｉｅｎｃｅ ９３（６）：１３９０－１４０２（２００４）；Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｈｉｇｈ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ
３．Ｂｒｕｃｅ Ｋｅｒｗｉｎ；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ９７（８）：２９２４－２９３５（２００８）；Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ２０ ａｎｄ ８０ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙｓ
４．Ｎｅｍａ，Ｓ ａｎｄ Ｂｒｅｎｄｅｌ Ｒ；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ ６５，Ｎｏ ３，Ｍａｙ－Ｊｕｎｅ ２０１１；Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｏｌｅ ｉｎ ａｐｐｒｏｖｅｄ ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ ｕｓａｇｅ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓ
Claims (105)
- １つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素への治療的タンパク質の吸着を減らすための組成物であって、スクシネートおよびポリソルベート８０を含む、組成物。
-
約１～約１０ｍＭのスクシネート、および
約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０
を含む、請求項１に記載の組成物。 - 約４ｍＭ～約６ｍＭのスクシネートを含む、請求項２に記載の組成物。
- 約５ｍＭのスクシネートを含む、請求項３に記載の組成物。
- 約０．００２（ｗ／ｖ）％～約０．００８（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む、請求項２～４のいずれか１項に記載の組成物。
- 約０．００４（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む、請求項５に記載の組成物。
- 前記組成物のｐＨが、約５．０～約７．０である、請求項２～６のいずれか１項に記載の組成物。
- 前記組成物のｐＨが、約６．０である、請求項７に記載の組成物。
- 治療的タンパク質を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の組成物。
- 前記治療的タンパク質が、少なくとも第１の結合ドメインを含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。
- 前記第１の結合ドメインが、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項１０に記載の組成物。
- 前記治療的タンパク質が、少なくとも第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。
- 前記第１の結合ドメインが、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）でありかつ前記第２の結合ドメインが、ｓｃＦｖである、請求項１２に記載の組成物。
- 前記第１の結合ドメインが、ＣＤ１２３に特異的に結合する、請求項１２または１３に記載の組成物。
- 前記第２の結合ドメインが、ＣＤ３εに特異的に結合する、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の組成物。
- 前記治療的タンパク質が、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、
（ａ）前記第一の結合ドメイン、
（ｂ）ヒンジ領域、
（ｃ）免疫グロブリン定常領域、および
（ｄ）前記第２の結合ドメイン、
を含む、請求項１２～１５のいずれ１項に記載の組成物。 - 前記免疫グロブリン定常領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２またはＩｇＤの免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む、請求項１６に記載の組成物。
- 前記第１の結合ドメインが、
（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および
（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）、
を含む、請求項１２～１７のいずれか１項に記載の組成物。 - 前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１０を含み、前記ＨＣＤＲ２が、配列番号１１を含み、および前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１２を含む、請求項１８に記載の組成物。
- 前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１３を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号１４を含み、および前記ＬＣＤＲ３が、配列番号１５を含む、請求項１８に記載の組成物。
- 前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１０を含み、前記ＨＣＤＲ２が、配列番号１１を含み、および前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１２を含み、ならびに
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１３を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号１４を含み、前記ＬＣＤＲ３が、配列番号１５を含む、
請求項１８に記載の組成物。 - 前記第１の結合ドメインが、配列番号１８と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１２～２１のいずれか１項に記載の組成物。
- 前記第２の結合ドメインが、
（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および
（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）、
を含む、請求項１２～２２のいずれか１項に記載の組成物。 - 前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１９を含み、前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２０を含み、および前記ＨＣＤＲ３が、配列番号２１を含む、請求項２３に記載の組成物。
- 前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、および前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２４を含む、請求項２３に記載の組成物。
- 前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１９を含み、前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２０を含み、および前記ＨＣＤＲ３が、配列番号２１を含み、ならびに
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、および前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２４を含む、
請求項２３に記載の組成物。 - 前記第２の結合ドメインが、配列番号２７と少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含む、請求項１２～２６のいずれか１項に記載の組成物。
- 前記治療的タンパク質が、配列番号３１の配列を含む、請求項１２～２７のいずれか１項に記載の組成物。
- 前記治療的タンパク質が、アミノ末端からカルボキシ末端へ順に、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含み、
前記ＣＤ８６結合ドメインが、ＣＤ８６を特異的に結合する可変重鎖および可変軽鎖を含み、
前記免疫グロブリンＦｃドメインが、Ｆｃ受容体ＦｃγＲ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩｂへの結合を防止または有意に低減する２つ以上の変異を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインであり、
前記モノマーＩＬ－１０ドメインが、短いリンカーにより分離される２つのヒトＩＬ－１０サブユニットを含み、および
前記治療的タンパク質が、ホモダイマーである、
請求項１２または１３に記載の組成物。 - 前記ＣＤ８６結合ドメインが、（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項２９に記載の組成物。
- 前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が、配列番号１であり、前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が、配列番号２であり、前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が、配列番号３であり、前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が、配列番号４であり、前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が、配列番号５であり、および前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、配列番号６である、請求項３０に記載の組成物。
- 前記ＣＤ８６結合ドメインが、配列番号７と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する可変重鎖、および配列番号８と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を含む、請求項２９～３１のいずれか１項に記載の組成物。
- 前記ＣＤ８６結合ドメインが、配列番号９と少なくとも約９５％または１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項２９～３２のいずれか１項に記載の組成物。
- 前記モノマーＩＬ－１０ドメインが、配列番号２８と少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項２９～３３のいずれか１項に記載の組成物。
- 前記治療的タンパク質が、配列番号３０、または配列番号３０と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２９～３４のいずれか１項に記載の組成物。
- 前記治療的タンパク質の濃度が、約０．０１μｇ／ｍＬ～約２．０μｇ／ｍＬである、請求項９～３６のいずれか１項に記載の組成物。
- 前記治療的タンパク質の濃度が、約０．０１、約０．０２、約０．０３、約０．０４、約０．０５、約０．０６、約０．０７、約０．０８、または約０．０９μｇ／ｍＬである、請求項３６に記載の組成物。
- 前記治療的タンパク質の濃度が、約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、または約０．９μｇ／ｍＬである、請求項３６に記載の組成物。
- 前記治療的タンパク質の濃度が、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、または約２．０μｇ／ｍＬである、請求項３６に記載の組成物。
- 水中の約５ｍＭのスクシネートおよび約０．０００４（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含み、前記組成物のｐＨが、約６．０であり、かつ注入用に処方される、請求項１～３９のいずれ１項に記載の組成物。
- 約２５～約１５０ｍＭのスクシネート、および約０．０１（ｗ／ｖ）％～約０．１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む、請求項１に記載の組成物。
- １０Ｘ～５０Ｘの濃度である、請求項４１に記載の組成物。
- ２０Ｘの濃度である、請求項４２に記載の組成物。
- 約７５ｍＭ～約１２５ｍＭのスクシネートを含む、請求項４１～４３のいずれか１項に記載の組成物。
- 約１００ｍＭのスクシネートを含む、請求項４４に記載の組成物。
- 約０．０５（ｗ／ｖ）％～約０．１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む、請求項４１～４５のいずれか１項に記載の組成物。
- 約０．０８（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む、請求項４６に記載の組成物。
- 前記組成物のｐＨが、約５．０～約７．０である、請求項４１～４７のいずれか１項に記載の組成物。
- 前記組成物のｐＨが、約６．０である、請求項４８に記載の組成物。
- 水中の約１００ｍＭのスクシネートおよび約０．０８（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含み、前記組成物のｐＨが、約６．０であり、かつ注入用に処方される、請求項４１～４９のいずれ１項に記載の組成物。
- １つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物であって、
約１００ｍＭのスクシネート、
約０．０８（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および
約治療有効量の治療的タンパク質、
を含む、組成物。 - １つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物であって、
約１～約１０ｍＭのスクシネート、
約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および
約０．０１μｇ／ｍＬ～約２．０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質、
を含み、
前記治療的タンパク質が、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、
（ａ）第１の標的に特異的に結合する第１の結合ドメイン、
（ｂ）ヒンジ領域、
（ｃ）免疫グロブリン定常領域、および
（ｄ）第２の標的に特異的に結合する第２の結合ドメイン、
を含む、組成物。 - 前記第１の標的が、ＣＤ８６である、請求項５２に記載の組成物。
- 前記第１の標的が、ＣＤ１２３である、請求項５２に記載の組成物。
- 前記第２の標的が、ＩＬ－１０の受容体である、請求項５２に記載の組成物。
- 前記第２の標的が、ＣＤ３εである、請求項５２に記載の組成物。
- 前記第１の標的が、ＣＤ８６でありかつ前記第２の標的が、ＩＬ－１０の受容体である、請求項５２に記載の組成物。
- 前記第１の標的が、ＣＤ１２３でありかつ前記第２の標的が、ＣＤ３εである、請求項５２に記載の組成物。
- １つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物であって、
約１～約１０ｍＭのスクシネート、
約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および
約０．０１μｇ／ｍＬ～約２．０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質、
を含み、
前記治療的タンパク質が、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、
（ａ）第１の結合ドメイン、
（ｂ）ヒンジ領域、
（ｃ）免疫グロブリン定常領域、および
（ｄ）第２の結合ドメイン、
を含み、
前記第１の結合ドメインが、（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１０を含み、前記ＨＣＤＲ２が、配列番号１１を含み、前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１２を含み；および前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１３を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号１４を含み、前記ＬＣＤＲ３が、配列番号１５を含み、
前記第２の結合ドメインが、（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１９を含み、前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２０を含み、前記ＨＣＤＲ３が、配列番号２１を含み；および前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２４を含む、
組成物。 - １つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物であって、
約１～約１０ｍＭのスクシネート、
約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および
約０．０１μｇ／ｍＬ～約２．０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質、
を含み、
前記治療的タンパク質が、配列番号３１の配列を含む、
組成物。 - １つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物であって、
約１～約１０ｍＭのスクシネート、
約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および
約０．０１μｇ／ｍＬ～約２．０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質、
を含み、
前記治療的タンパク質が、アミノ末端からカルボキシ末端へ順に、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含み、
前記ＣＤ８６結合ドメインが、ＣＤ８６を特異的に結合する可変重鎖および可変軽鎖を含み、
前記免疫グロブリンＦｃドメインが、Ｆｃ受容体ＦｃγＲ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩｂへの結合を防止するまたは有意に低減する２つ以上の変異を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインであり、
前記モノマーＩＬ－１０ドメインが、短いリンカーにより分離される２つのヒトＩＬ－１０サブユニットを含み、および
前記治療的タンパク質が、ホモダイマーである、
組成物。 - １つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物であって、
約１～約１０ｍＭのスクシネート、
約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および
約０．０１μｇ／ｍＬ～約２．０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質、
を含み、
前記治療的タンパク質が、アミノ末端からカルボキシ末端へ順に、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含み、
前記ＣＤ８６結合ドメインが、（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに（２）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が、配列番号１であり、前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が、配列番号２であり、前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が、配列番号３であり、前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が、配列番号４であり、前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が、配列番号５であり、および前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、配列番号６であり、
前記モノマーＩＬ－１０ドメイン、が配列番号２８のアミノ酸配列を有する、
組成物。 - １つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物であって、
約１～約１０ｍＭのスクシネート、
約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および
約０．０１μｇ／ｍＬ～約２．０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質、
を含み、
前記治療的タンパク質が、アミノ末端からカルボキシ末端へ順に、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含み、
前記ＣＤ８６結合ドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を含み、および
前記モノマーＩＬ－１０ドメインが、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、
組成物。 - １つまたは複数の静脈内薬物送達システム構成要素へのタンパク質の吸着を減らすための組成物であって、
約１～約１０ｍＭのスクシネート、
約０．００１（ｗ／ｖ）％～約０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０、および
約０．０１μｇ／ｍＬ～約２．０μｇ／ｍＬの治療的タンパク質、
を含み、
前記治療的タンパク質が、配列番号３０の配列を含む、
組成物。 - 治療的タンパク質を保持するために適合される容器であって、前記容器の内面が、請求項１～６４のいずれか１項に記載の組成物と最初に接触されその後それが、治療的タンパク質を含む組成物と接触される、容器。
- 実質的にラテックスを含まない、請求項６５に記載の容器。
- 実質的にビス（２－エチルヘキシル）フタレート（ＤＥＨＰ）を含まない、請求項６５または６６に記載の容器。
- ＩＶバッグ、注入器、およびチューブからなる群より選択される、請求項６５～６７のいずれか１項に記載の容器。
- 治療的タンパク質の送達のための静脈内薬物送達システムを作製する方法であって、
前記治療的タンパク質を保持するように適合された少なくとも１つの容器を用意すること、および
前記治療的タンパク質を前記少なくとも１つの容器に加える前に、約１～約１０ｍＭのスクシネート、および約０．００１（ｗ／ｖ）％～０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む組成物と前記少なくとも１つの容器の内面を接触させること、
を含む、方法。 - 前記組成物が、前記少なくとも１つの容器の内面をコートしかつ前記治療的タンパク質が前記容器の内面に結合することを防ぐ、請求項６９に記載の方法。
- 前記少なくとも１つの容器が、実質的にラテックスを含まない、請求項６９または７０に記載の方法。
- 前記少なくとも１つの容器が、実質的にビス（２－エチルヘキシル）フタレート（ＤＥＨＰ）を含まない、請求項６９～７１のいずれ１項に記載の方法。
- 前記少なくとも１つの容器が、ＩＶバッグ、注入器、およびチューブからなる群より選択される、請求項６９～７２のいずれか１項に記載の方法。
- 治療的タンパク質の静脈内投与により対象を治療する方法であって、
前記治療的タンパク質を保持するように適合された少なくとも１つの容器を用意すること、
約１～約１０ｍＭのスクシネート、および約０．００１（ｗ／ｖ）％～０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む組成物と前記容器の内面を接触させること、
前記治療的タンパク質を含む組成物と前記容器の内面を接触させること、および
前記患者に前記治療的タンパク質を静脈内投与すること、
を含む、方法。 - 前記治療的タンパク質が、少なくとも第１の結合ドメインを含む、請求項７４に記載の方法。
- 前記第１の結合ドメインが、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項７５に記載の方法。
- 前記治療的タンパク質が、少なくとも第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインを含む、請求項７４に記載の方法。
- 前記第１の結合ドメインが、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）でありかつ前記第２の結合ドメインが、ｓｃＦｖである、請求項７７に記載の方法。
- 前記第１の結合ドメインが、ＣＤ１２３に特異的に結合する、請求項７７または７８に記載の方法。
- 前記第２の結合ドメインが、ＣＤ３εを特異的に結合する、請求項７７～７９のいずれか１項に記載の方法。
- 前記治療的タンパク質が、アミノ末端からカルボキシル末端へ順に、
（ａ）前記第一の結合ドメイン、
（ｂ）ヒンジ領域、
（ｃ）免疫グロブリン定常領域、および
（ｄ）前記第２の結合ドメイン、
を含む、請求項７７～８０のいずれか１項に記載の方法。 - 前記免疫グロブリン定常領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２またはＩｇＤの免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む、請求項８１に記載の方法。
- 前記第１の結合ドメインが、
（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および
（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）、
を含む、請求項７７～８２のいずれか１項に記載の方法。 - 前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１０を含み、前記ＨＣＤＲ２が、配列番号１１を含み、および前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１２を含む、請求項８３に記載の方法。
- 前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１３を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号１４を含み、および前記ＬＣＤＲ３が、配列番号１５を含む、請求項８３に記載の方法。
- 前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１０を含み、前記ＨＣＤＲ２が、配列番号１１を含み、および前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１２を含み、および
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１３を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号１４を含み、前記ＬＣＤＲ３が、配列番号１５を含む、
請求項８３に記載の方法。 - 前記第１の結合ドメインが、配列番号１８と少なくとも９５％または１００％同一の配列を含む、請求項７７～８６のいずれか１項に記載の方法。
- 前記第２の結合ドメインが、
（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、および
（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）、
を含む、請求項７７に記載の方法。 - 前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１９を含み、前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２０を含み、および前記ＨＣＤＲ３が、配列番号２１を含む、請求項８８に記載の方法。
- 前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、および前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２４を含む、請求項８８に記載の方法。
- 前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１９を含み、前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２０を含み、および前記ＨＣＤＲ３が、配列番号２１を含み、および
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、および前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２４を含む、
請求項８８に記載の方法。 - 前記第２の結合ドメインが、配列番号２７と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項７７～９１のいずれか１項に記載の方法。
- 前記治療的タンパク質が、配列番号３１の配列を含む、請求項７７～９１のいずれか１項に記載の方法。
- 前記治療的タンパク質が、アミノ末端からカルボキシ末端へ順に、ＣＤ８６結合ドメイン、免疫グロブリンヒンジドメイン、免疫グロブリンＦｃドメイン、およびモノマーＩＬ－１０ドメインを含み、
前記ＣＤ８６結合ドメインが、ＣＤ８６に特異的に結合する可変重鎖および可変軽鎖を含み、
前記免疫グロブリンＦｃドメインが、Ｆｃ受容体ＦｃγＲ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩｂへの結合を防止するまたは有意に低減する２つ以上の変異を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインであり、
前記モノマーＩＬ－１０ドメインが、短いリンカーにより分離される２つのヒトＩＬ－１０サブユニットを含み、および
前記治療的タンパク質が、ホモダイマーである、
請求項７７～８０のいずれか１項に記載の方法。 - 前記ＣＤ８６結合ドメインが、（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項９４に記載の方法。
- 前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が、配列番号１であり、前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が、配列番号２であり、前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が、配列番号３であり、前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が、配列番号４であり、前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が、配列番号５であり、および前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、配列番号６である、請求項９５に記載の方法。
- 前記ＣＤ８６結合ドメインが、配列番号７と少なくとも９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を有する可変重鎖、および配列番号８と少なくとも９５％または１００％同一であるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を含む、請求項９４～９６のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ＣＤ８６結合ドメインが、配列番号９と少なくとも約９５％または１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項９４～９７のいずれか１項に記載の方法。
- 前記モノマーＩＬ－１０ドメインが、配列番号２８と少なくとも９５％または１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項９４～９８のいずれか１項に記載の方法。
- 前記治療的タンパク質が、配列番号３０または配列番号３０と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項９４～９９のいずれか１項に記載の方法。
- 治療的タンパク質が、静脈内注入により投与される、請求項７４～１００のいずれか１項に記載の方法。
- 前記組成物が、前記少なくとも１つの容器の内面をコートしかつ前記治療的タンパク質が前記容器の内面に結合することを防ぐ、請求項７４～１０１のいずれか１項に記載の方法。
- 前記対象が、哺乳動物である請求項７４～１０２のいずれか１項に記載の方法。
- 前記対象が、ヒトである、請求項１０３に記載の方法。
- 患者へ治療的タンパク質を送達するための薬物送達システムであって、
前記治療的タンパク質を保持するように適合された少なくとも１つの容器を含み、
前記少なくとも１つの容器の内面が、約１～約１０ｍＭのスクシネート、および約０．００１（ｗ／ｖ）％～０．０１（ｗ／ｖ）％のポリソルベート８０を含む組成物と接触されその後それが、前記治療的タンパク質を含む組成物と接触される、システム。
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