KR20240067092A - 항-klb 항체 및 용도 - Google Patents
항-klb 항체 및 용도 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20240067092A KR20240067092A KR1020247012346A KR20247012346A KR20240067092A KR 20240067092 A KR20240067092 A KR 20240067092A KR 1020247012346 A KR1020247012346 A KR 1020247012346A KR 20247012346 A KR20247012346 A KR 20247012346A KR 20240067092 A KR20240067092 A KR 20240067092A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- acid sequence
- variable region
- chain variable
- Prior art date
Links
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 278
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 91
- 101001139095 Homo sapiens Beta-klotho Proteins 0.000 claims description 80
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 80
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 63
- 102100020683 Beta-klotho Human genes 0.000 claims description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 52
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 51
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 46
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 37
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 36
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 34
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 32
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 30
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 30
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 28
- 102000051661 human KLB Human genes 0.000 claims description 28
- 102000003973 Fibroblast growth factor 21 Human genes 0.000 claims description 27
- 108090000376 Fibroblast growth factor 21 Proteins 0.000 claims description 27
- 206010053219 non-alcoholic steatohepatitis Diseases 0.000 claims description 26
- 101000846394 Homo sapiens Fibroblast growth factor 19 Proteins 0.000 claims description 21
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 21
- 102100031734 Fibroblast growth factor 19 Human genes 0.000 claims description 19
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 17
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 13
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 12
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 11
- 108091008794 FGF receptors Proteins 0.000 claims description 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 8
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 claims description 7
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 claims description 7
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 claims description 7
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 7
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims description 6
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 6
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 claims description 5
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 5
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 claims description 5
- 102000052178 fibroblast growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 238000012492 Biacore method Methods 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 101710104526 Beta-klotho Proteins 0.000 claims description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 192
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 58
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 47
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 47
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 47
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 37
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 36
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 35
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 description 28
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 24
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 23
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 23
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 20
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 20
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 19
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 16
- 101100540120 Caenorhabditis elegans vab-3 gene Proteins 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 101710117290 Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 13
- 230000008859 change Effects 0.000 description 13
- 230000006870 function Effects 0.000 description 13
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 12
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 12
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 12
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 12
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 12
- 101000827746 Homo sapiens Fibroblast growth factor receptor 1 Proteins 0.000 description 11
- 102000055705 human FGFR1 Human genes 0.000 description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 11
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 9
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 8
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 8
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 8
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 7
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 7
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 7
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 7
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 7
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 7
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 102000011690 Adiponectin Human genes 0.000 description 6
- 108010076365 Adiponectin Proteins 0.000 description 6
- 102100023600 Fibroblast growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 6
- 101710182389 Fibroblast growth factor receptor 2 Proteins 0.000 description 6
- 101000998952 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-3 Proteins 0.000 description 6
- 102100036886 Immunoglobulin heavy variable 1-3 Human genes 0.000 description 6
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 6
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- 102000044168 Fibroblast Growth Factor Receptor Human genes 0.000 description 5
- 101001047619 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3-20 Proteins 0.000 description 5
- 101001090250 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 6-21 Proteins 0.000 description 5
- 102100022964 Immunoglobulin kappa variable 3-20 Human genes 0.000 description 5
- 102100034806 Immunoglobulin kappa variable 6-21 Human genes 0.000 description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 5
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 5
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 5
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 102220600740 Calmodulin-binding transcription activator 1_Q1E_mutation Human genes 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- 102220580964 Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1_P44Y_mutation Human genes 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 4
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 4
- 239000006481 glucose medium Substances 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 238000012317 liver biopsy Methods 0.000 description 4
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 4
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 4
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 4
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101001138089 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-39 Proteins 0.000 description 3
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 3
- 102100020910 Immunoglobulin kappa variable 1-39 Human genes 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 3
- 101710099301 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 101100510280 Mus musculus Klb gene Proteins 0.000 description 3
- 241000221961 Neurospora crassa Species 0.000 description 3
- 238000003725 ONE-Glo Luciferase Assay System Methods 0.000 description 3
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 3
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000005888 antibody-dependent cellular phagocytosis Effects 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- -1 e.g. Proteins 0.000 description 3
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 3
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 102200046323 rs2066524 Human genes 0.000 description 3
- 102200082919 rs35857380 Human genes 0.000 description 3
- 102220215717 rs767741687 Human genes 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 2
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 2
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 2
- 101000846529 Homo sapiens Fibroblast growth factor 21 Proteins 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 2
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000320412 Ogataea angusta Species 0.000 description 2
- 241001489174 Ogataea minuta Species 0.000 description 2
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- 241000529953 Phaffomyces thermotolerans Species 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 2
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 2
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 2
- 208000001435 Thromboembolism Diseases 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 2
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 2
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 102220352716 c.4A>G Human genes 0.000 description 2
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 102000047000 human FGF19 Human genes 0.000 description 2
- 102000056713 human FGF21 Human genes 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 238000010827 pathological analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 102200133466 rs115923556 Human genes 0.000 description 2
- 102200090662 rs137852491 Human genes 0.000 description 2
- 102220209667 rs146472353 Human genes 0.000 description 2
- 102220292724 rs184704920 Human genes 0.000 description 2
- 102200105384 rs387906979 Human genes 0.000 description 2
- 102220137027 rs886056062 Human genes 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyinosine Chemical group C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 3-Methylhistidine Natural products CN1C=NC(CC(N)C(O)=O)=C1 BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940117976 5-hydroxylysine Drugs 0.000 description 1
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 description 1
- WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N Ala-Ala-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- YYAVDNKUWLAFCV-ACZMJKKPSA-N Ala-Ser-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O YYAVDNKUWLAFCV-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- PTVGLOCPAVYPFG-CIUDSAMLSA-N Arg-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PTVGLOCPAVYPFG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- PTNFNTOBUDWHNZ-GUBZILKMSA-N Asn-Arg-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O PTNFNTOBUDWHNZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MECFLTFREHAZLH-ACZMJKKPSA-N Asn-Glu-Cys Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N MECFLTFREHAZLH-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- KHCNTVRVAYCPQE-CIUDSAMLSA-N Asn-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KHCNTVRVAYCPQE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000351920 Aspergillus nidulans Species 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102220549033 B-cell linker protein_Y91F_mutation Human genes 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 241000151861 Barnettozyma salicaria Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 241000288950 Callithrix jacchus Species 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 241000123346 Chrysosporium Species 0.000 description 1
- 241001674013 Chrysosporium lucknowense Species 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 description 1
- 206010012655 Diabetic complications Diseases 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 208000017701 Endocrine disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 101150021185 FGF gene Proteins 0.000 description 1
- 108010021468 Fc gamma receptor IIA Proteins 0.000 description 1
- 108010021472 Fc gamma receptor IIB Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241001149959 Fusarium sp. Species 0.000 description 1
- 241000567178 Fusarium venenatum Species 0.000 description 1
- 102100039556 Galectin-4 Human genes 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- WQWMZOIPXWSZNE-WDSKDSINSA-N Gln-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O WQWMZOIPXWSZNE-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- YYOBUPFZLKQUAX-FXQIFTODSA-N Glu-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YYOBUPFZLKQUAX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 208000002705 Glucose Intolerance Diseases 0.000 description 1
- 206010018429 Glucose tolerance impaired Diseases 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 101000690301 Homo sapiens Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 1
- 101000967216 Homo sapiens Eosinophil cationic protein Proteins 0.000 description 1
- 101000917134 Homo sapiens Fibroblast growth factor receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000608765 Homo sapiens Galectin-4 Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101001116548 Homo sapiens Protein CBFA2T1 Proteins 0.000 description 1
- 101000779418 Homo sapiens RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 101000712530 Homo sapiens RAF proto-oncogene serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 101000617830 Homo sapiens Sterol O-acyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010060378 Hyperinsulinaemia Diseases 0.000 description 1
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 1
- IOVUXUSIGXCREV-DKIMLUQUSA-N Ile-Leu-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IOVUXUSIGXCREV-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- 206010021518 Impaired gastric emptying Diseases 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 102000015834 Klotho Human genes 0.000 description 1
- 108050004036 Klotho Proteins 0.000 description 1
- 241001138401 Kluyveromyces lactis Species 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QEFRNWWLZKMPFJ-ZXPFJRLXSA-N L-methionine (R)-S-oxide Chemical compound C[S@@](=O)CC[C@H]([NH3+])C([O-])=O QEFRNWWLZKMPFJ-ZXPFJRLXSA-N 0.000 description 1
- QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N L-methionine sulphoxide Natural products CS(=O)CCC(N)C(O)=O QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 description 1
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 1
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 1
- 101150018665 MAPK3 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N N(pros)-methyl-L-histidine Chemical compound CN1C=NC=C1C[C@H](N)C(O)=O JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 241001452677 Ogataea methanolica Species 0.000 description 1
- 241000489470 Ogataea trehalophila Species 0.000 description 1
- 241000826199 Ogataea wickerhamii Species 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000530350 Phaffomyces opuntiae Species 0.000 description 1
- WEMYTDDMDBLPMI-DKIMLUQUSA-N Phe-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N WEMYTDDMDBLPMI-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- KIQUCMUULDXTAZ-HJOGWXRNSA-N Phe-Tyr-Tyr Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(O)=O KIQUCMUULDXTAZ-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- 241000195887 Physcomitrella patens Species 0.000 description 1
- 241000235062 Pichia membranifaciens Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 1
- 102100033479 RAF proto-oncogene serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- QMCDMHWAKMUGJE-IHRRRGAJSA-N Ser-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QMCDMHWAKMUGJE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N Ser-Ser-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 102100021993 Sterol O-acyltransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 101000697584 Streptomyces lavendulae Streptothricin acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 230000037453 T cell priming Effects 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N Thr-Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 1
- 241000499912 Trichoderma reesei Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- KHPLUFDSWGDRHD-SLFFLAALSA-N Tyr-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC3=CC=C(C=C3)O)N)C(=O)O KHPLUFDSWGDRHD-SLFFLAALSA-N 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000370136 Wickerhamomyces pijperi Species 0.000 description 1
- 241000235015 Yarrowia lipolytica Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003756 cervix mucus Anatomy 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 108010047295 complement receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006834 complement receptors Human genes 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical class N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004041 dendritic cell maturation Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 230000007783 downstream signaling Effects 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N gamma-carboxy-L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(C(O)=O)C(O)=O UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 208000001288 gastroparesis Diseases 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000004153 glucose metabolism Effects 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 102000055699 human FGFR4 Human genes 0.000 description 1
- 102000054751 human RUNX1T1 Human genes 0.000 description 1
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000003451 hyperinsulinaemic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008980 hyperinsulinism Diseases 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 241001515942 marmosets Species 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical class CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010068617 neonatal Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 208000030613 peripheral artery disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000008298 phosphoramidates Chemical class 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 108010054442 polyalanine Proteins 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 102200056122 rs11570605 Human genes 0.000 description 1
- 102220138687 rs201607115 Human genes 0.000 description 1
- 102200156936 rs28934878 Human genes 0.000 description 1
- 102220047535 rs587783040 Human genes 0.000 description 1
- 102220063853 rs794726848 Human genes 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000004911 serous fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 1
- 230000007863 steatosis Effects 0.000 description 1
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-O sulfonium Chemical compound [SH3+] RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Obesity (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
본 개시내용은 항-KLB 항체 및 용도에 관한 것이다.
Description
본 개시내용은 생명공학 분야에 속하며, 구체적으로, 항-KLB 항체 및 이의 용도에 관한 것이다.
본원의 진술은 단지 본 발명과 관련된 배경 정보를 제공할 뿐이며, 필수적으로 선행 기술을 구성하는 것은 아니다.
KLB(클로소-베타(Klotho-beta) 또는 β-클로소)는 클로소 단백질 계열의 구성원 중 하나이며 세포외 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 도메인으로 이루어진다. KLB 및 섬유아세포 성장 인자 수용체(FGFR1-4 및 이의 대체 스플라이싱 변이체, 예를 들어 FGFR1c, FGFR2c 및 FGFR3c를 포함하는 FGFR)는 섬유아세포 성장 인자(FGF, 예를 들어 FGF19 및 FGF21)에 대한 공통 수용체 역할을 하는 복합체를 형성한다. KLB는 FGF21/FGF19에 대한 세포 반응의 결정인자로서, 간, 지방세포 및 췌장에서 고도로 발현된다(문헌[Kurosu, H. et al., (2007) J Biol Chem. 282, 26687-95]). 섬유아세포 성장 인자 수용체는 리간드에 결합 시 활성화되어 MAPK(Erk1/2), RAF1, AKT1, STAT 등을 생성하여 하류 신호전달 경로를 활성화하는, 세포내 티로신 키나제 도메인을 함유한다(문헌[Kharitonenkov, A. et al., (2008) BioDrugs. 22: 37-44]).
섬유아세포 성장 인자 21(FGF21)은 섬유아세포 성장 인자 계열의 구성원 중 하나이며, 간 및 췌장에서 고도로 발현된다(문헌[Itoh et al., (2004) Trend Genet. 20: 563-69]). FGF21은 C 말단을 통해 KLB에 결합하고 N 말단을 통해 FGFR에 결합하여 수용체-리간드 복합체를 형성함으로써 FGFR 하류의 신호전달 경로를 활성화한다. 연구에 따르면 FGF21은 대사와 관련된 다양한 표적 기관(예를 들어, 간, 지방 조직, 췌장, CNS의 부신 등)에서 KLB&FGFR1c, KLB&FGFR2c, 및 KLB&FGFR3c와 복합체를 형성함으로써 글루코스 대사, 지질 대사, 에너지 소비 등을 조절하는 기능을 발휘하는 것으로 나타났다. FGF21을 과발현하는 트랜스제닉 마우스는 낮은 인슐린, 낮은 콜레스테롤, 낮은 트라이글리세라이드 및 증가된 인슐린 민감성을 나타내었으며, 고지방 식품으로 인한 체중 증가가 예방되었다(문헌[Kharitonenkov et al., (2005) J Clin Invest. 115: 1627-35]). FGF21 유사체(예를 들어, AKR001, WO 2010/129503 A1의 서열번호 47 참조)는 간 지질을 유의미하게 감소시키고, NASH 분해를 증가시키며, 섬유증을 완화시킬 수 있는 등, 임상 시험에서 충분히 확인되었다.
본 개시내용은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-KLB 항체를 구축하고, 이때 상기 중쇄 가변 영역은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고,
(i) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 각각 서열번호 40 내지 48 중 어느 하나의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 서열번호 34의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함하거나; 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 각각 서열번호 2의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 서열번호 3의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함하거나;
(ii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 각각 서열번호 49의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 서열번호 56 내지 68 중 어느 하나의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함하거나; 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 각각 서열번호 4의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 서열번호 5의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함하거나;
(iii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 각각 서열번호 18의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 서열번호 19의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, i) 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 각각 서열번호 40의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 서열번호 34의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함하거나; ii) 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 각각 서열번호 49의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 서열번호 57의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함하거나; iii) 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 각각 서열번호 18의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 서열번호 19의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은 각각 서열번호 40의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 각각 서열번호 34의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 카밧(Kabat), IMGT, Chothia, AbM 및 Contact로 이루어지는 군으로부터 선택된 동일한 넘버링 방식에 따라 정의된다. 일부 양태에서, 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 카밧 넘버링 방식에 따라 정의되고; 일부 양태에서, 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 IMGT 넘버링 방식에 따라 정의되며; 일부 양태에서, 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 Chothia 넘버링 방식에 따라 정의되고; 일부 양태에서, 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 AbM 넘버링 방식에 따라 정의되며; 일부 양태에서, 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 Contact 넘버링 방식에 따라 정의된다.
일부 양태에서, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때
i) 중쇄 가변 영역에서, HCDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 37, 38, 39 또는 7의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역에서, LCDR1은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하거나;
ii) 중쇄 가변 영역에서, HCDR1은 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역에서, LCDR1은 서열번호 15, 69, 70, 71, 72, 73 또는 74의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 16 또는 75의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하거나;
iii) 중쇄 가변 영역에서, HCDR1은 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역에서, LCDR1은 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때
i) 중쇄 가변 영역에서, HCDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역에서, LCDR1은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하거나;
ii) 중쇄 가변 영역에서, HCDR1은 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역에서, LCDR1은 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 카밧 넘버링 방식에 따라 정의된다.
일부 양태에서, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때 상기 항-KLB 항체는 쥐 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 또는 완전히 인간-유래된 항체이다. 일부 양태에서, 항체는 인간-유래된 항체이다. 일부 양태에서, 항체는 완전히 인간 항체이다.
일부 양태에서, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때: (i) 중쇄 가변 영역은 서열번호 40, 30, 31, 32, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 또는 48, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 34, 33, 35 또는 36, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
(ii) 중쇄 가변 영역은 서열번호 49, 50 또는 51, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 57, 52, 53, 54, 55, 56, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67 또는 68, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
(iii) 중쇄 가변 영역은 서열번호 18, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 19, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
(iv) 중쇄 가변 영역은 서열번호 2, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 3, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
(v) 중쇄 가변 영역은 서열번호 4, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 5, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때 상기 항체에서, 중쇄 가변 영역은 그의 프레임워크 영역(framework region)에 1, 24, 44, 71 및 91번 위치(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 역 돌연변이(back mutation)를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 그의 프레임워크 영역에 2, 4, 36, 38, 43, 44 및 58번 위치(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 역 돌연변이를 포함한다. 일부 양태에서, 중쇄 가변 영역에서 HCDR1이 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열번호 37, 38, 39 또는 7의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역에서 LCDR1이 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 항체에서, 상기 중쇄 가변 영역이 그의 프레임워크 영역에 1E, 24T, 44G, 71S 및 91F(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 역 돌연변이를 포함하고/하거나, 상기 경쇄 가변 영역이 그의 프레임워크 영역에 2V, 4I, 36F, 38E, 43T, 44N 및 58I(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 역 돌연변이를 포함하는, 항-KLB 항체를 제공한다.
일부 양태에서, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때 상기 항체에서, 중쇄 가변 영역은 그의 프레임워크 영역에 1, 24, 48, 67, 69, 71 및 73번 위치(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 그의 프레임워크 영역에 2, 45, 47, 49, 58 및 71번 위치(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 역 돌연변이를 포함한다. 일부 양태에서, 중쇄 가변 영역에서 HCDR1이 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역에서 LCDR1이 서열번호 15, 69, 70, 71, 72, 73 또는 74의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열번호 16 또는 75의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 항체에서, 상기 중쇄 가변 영역이 그의 프레임워크 영역에 1E, 24G, 48I, 67A, 69V, 71V 및 73K(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하고/하거나, 상기 경쇄 가변 영역이 그의 프레임워크 영역에 2N, 45K, 47W, 49Y, 58V 및 71Y(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 역 돌연변이를 포함하는, 항-KLB 항체를 제공한다. 돌연변이 위치는 카밧 넘버링 방식에 따라 넘버링된다; 예를 들어 "2N"은 2번 위치(카밧 넘버링 방식에 상응하는)의 잔기가 "N"임을 가리킨다.
일부 양태에서, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때
(i) 중쇄 가변 영역은 서열번호 40, 30, 31, 32, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 또는 48, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 34, 33, 35 또는 36, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
(ii) 중쇄 가변 영역은 서열번호 49, 50 또는 51, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 57, 52, 53, 54, 55, 56, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67 또는 68, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
(iii) 중쇄 가변 영역은 서열번호 18, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 19, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
(iv) 중쇄 가변 영역은 서열번호 2, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 3, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
(v) 중쇄 가변 영역은 서열번호 4, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 5, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때
(i) 중쇄 가변 영역은 서열번호 40, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 34, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
(ii) 중쇄 가변 영역은 서열번호 49, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 57, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
(iii) 중쇄 가변 영역은 서열번호 18, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 19, 또는 이에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때 중쇄 가변 영역은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함하는, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하며; 일부 양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG 중쇄 불변 영역이고; 일부 양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 중쇄 불변 영역이고; 일부 양태에서, 상기 경쇄 불변 영역은 인간 λ 또는 κ 경쇄 불변 영역이고; 일부 양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역이고 상기 경쇄 불변 영역은 인간 κ 경쇄 불변 영역이고; 일부 양태에서, 상기 중쇄 불변 영역의 Fc 영역은 Fc 수용체에 대한 Fc 영역의 결합을 감소시킬 수 있는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는다. 일부 양태에서, 상기 Fc 영역은 L234A 및 L235A 돌연변이, S228P 돌연변이 및/또는 YTE 돌연변이(M252Y, S254T 및 T256E)를 가지며, 상기 돌연변이의 넘버링은 EU 인덱스에 따른다. 일부 양태에서, 상기 중쇄 불변 영역은 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 불변 영역은 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때
(i) 상기 중쇄는 서열번호 78에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄는 서열번호 79에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
(ii) 상기 중쇄는 서열번호 80에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄는 서열번호 81에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
(iii) 상기 중쇄는 서열번호 20에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄는 서열번호 21에 대해 적어도 90%(예를 들어, 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때 (i) 상기 중쇄는 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄는 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하거나; (ii) 상기 중쇄는 서열번호 80의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄는 서열번호 81의 아미노산 서열을 포함하거나; (iii) 상기 중쇄는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄는 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 항원-결합 단편인, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하며; 일부 양태에서, 상기 항원-결합 단편은 Fab, F(ab')2, Fab', Fd, Fv, dsFv, scFv, Fab 및 다이아바디로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 인간 및/또는 원숭이 KLB에의 결합에 대해 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체와 경쟁하는 단리된 항-KLB 항체를 제공하고; 일부 양태에서, 본 개시내용은 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 단리된 항-KLB 항체를 제공한다.
일부 양태에서, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때 상기 항체는 하기의 특징 중 하나 이상을 갖는다:
A. 상기 항-KLB 항체는 hKLB&hFGFR1c를 발현하는 세포에 대해 활성화 활성을 가지며; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 hKLB&hFGFR1c를 발현하는 세포에 대해 높은 활성화 활성을 가지며; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 hKLB&hFGFR1c를 발현하는 CHOK1 세포에 대해 10 초과의 활성화 배수(activation fold)를 야기하고/하거나 상기 항-KLB 항체는 HEK293T-hKLB&hFGFR1c 세포에 대해 2 초과의 활성화 배수를 야기하고; 일부 양태에서, 상기 활성화 배수는 블랭크 대조군(blank control)에 대한 항체의 활성화 배수이고; 일부 양태에서, 상기 활성화 배수는 본 개시내용의 시험 실시예 4 및 5에 따라 검출됨;
B. 상기 항-KLB 항체는 hFGFR1c를 발현하는 재조합 세포(hFGFR1c만, hKLB를 발현하지 않음)에 대해 약한 활성화 활성을 가지며; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 HEK293-hFGFR1c 세포에 대해 1 미만의 활성화 배수를 야기하고; 일부 양태에서, 상기 활성화 배수는 블랭크 대조군에 대한 항체의 활성화 배수이고; 일부 양태에서, 상기 활성화 배수는 본 개시내용의 시험 실시예 6에 따라 검출됨;
C. 상기 항-KLB 항체는 hKLB&hFGFR2c, hKLB&hFGFR3c 및 hKLB&hFGFR4를 발현하는 세포에 대해 약한 활성화 활성을 가지며; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 L6-hKLB&hFGFR2c 및/또는 L6-hKLB&hFGFR4 세포에 대해 약한 활성화 활성을 갖고; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 L6-hKLB&hFGFR2c 및/또는 L6-hKLB&hFGFR4 세포에 대해 2 미만의 활성화 배수를 야기하고; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 L6-hKLB&hFGFR2c, hKLB&hFGFR3c 및/또는 L6-hKLB&hFGFR4 세포에 대해 약한 활성화 활성을 가지며, 일부 양태에서 상기 항-KLB 항체는 L6-hKLB&hFGFR2c, hKLB&hFGFR3c 및/또는 L6-hKLB&hFGFR4 세포에 대해 2 미만의 활성화 배수를 야기하고; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 L6-hKLB&hFGFR2c 및 L6-hKLB&hFGFR4 세포에 대해 2 미만의 활성화 배수 및 L6-hKLB&hFGFR3c 세포에 대해 5 미만의 활성화 배수를 야기하고; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 L6-hKLB&hFGFR2c 세포에 대해 1.4 미만의 활성화 배수, L6-hKLB&hFGFR4 세포에 대해 1.6 미만의 활성화 배수, 및 L6-hKLB&hFGFR3c 세포에 대해 5 미만의 활성화 배수를 야기하고; 일부 양태에서, 상기 활성화 배수는 블랭크 대조군에 대한 항체의 활성화 배수이고; 일부 양태에서, 상기 활성화 배수는 본 개시내용의 시험 실시예 7에 따라 검출됨;
D. 상기 항-KLB 항체는 인간 KLB 및 원숭이 KLB 둘 다에 결합할 수 있고; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 2.0E-9 M 미만의 EC50 값으로 인간 및/또는 원숭이 KLB에 결합할 수 있고, 상기 EC50 값은 유세포 분석법에 의해 검출됨; 및
E. 상기 항-KLB 항체는 높은 친화도로 인간 KLB에 결합할 수 있고; 일부 양태에서, 상기 항체는 3.0E-9 M 미만의 KD 값으로 인간 KLB에 결합할 수 있고, 상기 KD 값은 비아코어(Biacore) 방법에 의해 검출됨.
일부 양태에서, 항-KLB 항체는 hKLB&hFGFR1c를 발현하는 세포에 대해 높은 활성화 활성을 갖고, hKLB&hFGFR2c, hKLB&hFGFR3c 및 hKLB&hFGFR4를 발현하는 세포에 대해 약한 활성화 활성을 가지며; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 hKLB&hFGFR1c를 발현하는 CHOK1 세포에 대해 10 초과의 활성화 배수 및 L6-hKLB&hFGFR2c 및/또는 L6-hKLB&hFGFR4 세포에 대해 2 미만의 활성화 배수를 야기하고, 상기 활성화 배수는 블랭크 대조군에 대한 항체의 활성화 배수이다.
또 다른 양상에서, 본 개시내용은 치료 효과량의 상기 기재된 항-KLB 항체 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 희석제, 완충제 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 개시내용은 상기 기재된 항-KLB 항체를 암호화하는 단리된 핵산을 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 개시내용은 상기 기재된 핵산 분자를 포함하는 벡터를 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 개시내용은 상기 기재된 핵산을 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 개시내용은 대상에게 상기 기재된 항-KLB 항체 또는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 질환의 치료 방법을 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 개시내용은 질환 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 상기 기재된 항-KLB 항체 또는 약학 조성물의 용도를 추가로 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 개시내용은 약제로서 사용하기 위한 상기 기재된 항-KLB 항체 또는 약학 조성물을 추가로 제공하고; 일부 양태에서, 상기 약제는 질환을 치료하기 위해 사용된다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 대상(예를 들어, 환자)에게 치료 효과량의 상기 기재된 항-KLB 항체 또는 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 인간 FGF21 및/또는 인간 FGF19와 연관된 질환, 장애 또는 상태를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 상기 기재된 질환은 FGF21 및/또는 FGF19와 연관된 장애이다. 일부 양태에서, 상기 장애는 대사 장애, 내분비 장애 및 심혈관 장애로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 상기 장애는 비만, 당뇨병(제1형 당뇨병 및 제2형 당뇨병), 췌장염, 이상지질혈증, 비알코올성 지방간 질환(NAFLD), 비알코올성 지방간염(NASH), 인슐린 저항성, 고인슐린혈증, 글루코스 불내증, 고혈당증, 대사증후군, 급성 심근경색, 고혈압, 죽상동맥경화증, 말초동맥질환, 뇌졸중, 심부전, 관상동맥심질환, 신장질환, 당뇨병 합병증, 신경학적 질환, 및 위마비로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 상기 질환은 제2형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, NASH, 심혈관 질환 및 대사 증후군으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 상기 질환은 비알코올성 지방간염이다.
또 다른 양상에서, 본 개시내용은 KLB 및 FGFR을 발현하는 세포를 상기 기재된 항-KLB 항체와 접촉시키는 것을 포함하는, FGF21 및/또는 FGF19 신호전달을 유도하는 방법을 추가로 제공한다.
용어
본 개시내용의 이해를 돕기 위해, 일부 기술 및 과학 용어를 하기에 설명한다. 본원에서 달리 구체적으로 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.
상세한 설명 및 청구범위에 사용되는 바와 같이, 단수형은 문맥에서 달리 명확하게 표시되지 않는 한 복수형을 포함한다.
문맥상 달리 명확하게 언급되지 않는 한, 상세한 설명 및 청구범위 전반에 걸쳐, "포함하다", "갖다", "내포하다" 등의 단어는 배타적이거나 총 망라되는 의미가 아닌 포괄적인 의미로 해석되어야 한다.
"및/또는"이라는 용어는 "및"과 "또는"이라는 두 가지 의미를 포함하도록 의도된다. 예를 들어, "A, B 및/또는 C"라는 문구는 하기 각각을 포함하도록 의도된다: A, B 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).
본원에 사용된 아미노산에 대한 3-문자 및 단일-문자 코드는 문헌[J. Biol. Chem. 243, p3558 (1968)]에 기재된 바와 같다.
"아미노산"이라는 용어는 자연 발생 및 합성 아미노산뿐만 아니라 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체를 의미한다. 자연 발생 아미노산은 유전자 코드에 의해 암호화된 아미노산 및 나중에 변형된 아미노산(예를 들어, 하이드록시프롤린, γ-카복시글루탐산 및 O-포스포세린)이다. 아미노산 유사체는 자연 발생 아미노산과 실질적으로 동일한 화학 구조(즉, 수소, 카복실, 아미노 및 R 기에 결합하는 α 탄소)를 갖는 화합물, 예를 들어 호모세린, 노르류신, 메티오닌 설폭사이드 및 메티오닌메틸 설포늄을 지칭한다. 이러한 유사체는 변형된 R 기(예를 들어, 노르류신) 또는 변형된 펩타이드 골격을 갖지만 자연 발생 아미노산과 실질적으로 동일한 화학 구조를 유지한다. 아미노산 모방체는 아미노산과 구조는 다르지만 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 화합물을 지칭한다.
"아미노산 돌연변이"라는 용어에는 아미노산 치환(또한 아미노산 대체로서 알려짐), 결실, 삽입 및 변형이 포함된다. 최종 구축물이 원하는 특성, 예를 들어, Fc 수용체에 대한 감소된 결합을 보유하는 한, 치환, 결실, 삽입 및 변형의 임의의 조합을 통해 최종 구축물을 수득할 수 있다. 아미노산 서열 결실 및 삽입에는 폴리펩타이드 쇄의 아미노 말단 및/또는 카복실 말단에서의 결실 및 삽입이 포함된다. 특정 아미노산 돌연변이는 아미노산 치환일 수 있다. 한 양태에서, 아미노산 돌연변이는 비-보존적 아미노산 치환, 즉 하나의 아미노산을 상이한 구조적 및/또는 화학적 특성을 갖는 다른 아미노산으로 대체하는 것이다. 아미노산 치환에는 비-자연 발생 아미노산 또는 20개의 고유 아미노산의 유도체(예를 들어, 4-하이드록시프롤린, 3-메틸히스티딘, 오르니틴, 호모세린 및 5-하이드록시리신)에 의한 대체가 포함된다. 아미노산 돌연변이는 당업계에 주지된 유전적 또는 화학적 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 유전적 방법에는 부위 지정 돌연변이 유발, PCR, 유전자 합성 등이 포함될 수 있다. 화학적 변형과 같은 유전 공학 이외의 아미노산 측쇄 기을 변경시키는 방법도 사용될 수 있는 것으로 고려된다. 본원에서 동일한 아미노산 돌연변이를 나타내기 위해 다양한 명칭이 사용될 수 있다. 본원에서, "위치 + 아미노산 잔기"라는 표현은 특정 위치의 아미노산 잔기를 나타내는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 366W는 366번 위치의 아미노산 잔기가 W라는 것을 나타낸다. T366W는 366번 위치의 아미노산 잔기가 원래의 T에서 W로 돌연변이되었음을 나타낸다.
"항체"라는 용어는 가장 넓은 의미로 사용되며 단클론 항체, 다클론 항체; 단일특이성 항체, 다중특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체); 및 전장 항체 및 원하는 항원-결합 활성을 나타내는 한 항체 단편(또는 항원-결합 단편 또는 항원-결합 모이어티(moiety))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. "천연 항체"는 자연 발생 면역글로불린 분자를 지칭한다. 예를 들어, 천연 IgG 항체는 디설파이드 결합에 의해 연결된 2개의 동일한 경쇄와 2개의 동일한 중쇄로 구성된 약 150,000 달톤의 이종사량체성 당단백질이다. N-말단에서 C-말단까지 각 중쇄에는 하나의 가변 영역(VH)(또한 가변 중 도메인 또는 중쇄 가변 영역으로 알려져 있음)에 이어서, 중쇄 불변 영역(CH)이 있다. 일반적으로, 고유 IgG 중쇄 불변 영역은 3개의 불변 도메인(CH1, CH2 및 CH3)을 포함한다. 유사하게, N-말단에서 C-말단까지 각각의 경쇄는 하나의 가변 영역(VL)(또한 가변 경 도메인 또는 경쇄 가변 도메인으로도 알려짐)에 이어서, 하나의 불변 경 도메인(경쇄 불변 영역, CL)을 갖는다. "전장 항체", "온전한 항체" 및 "전체 항체"라는 용어는 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 고유 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 본원에 정의된 바와 같은 Fc 영역에 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다. 천연의 온전한 항체에서, 경쇄는 경쇄 가변 영역 VL 및 불변 영역 CL을 포함하고, 이때 VL은 경쇄의 아미노 말단에 위치하고, 경쇄 불변 영역은 κ 쇄 및 λ 쇄를 포함하고; 중쇄는 가변 영역 VH 및 불변 영역(CH1, CH2 및 CH3)을 포함하고, 이때 VH는 중쇄의 아미노 말단(또한 N 말단으로도 알려짐)에 위치하고, 불변 영역은 카복실 말단(또한 C 말단으로도 알려짐)에 위치하고, 이때 CH3이 폴리펩타이드의 카복실 말단에 가장 가깝고, 중쇄는 IgG(하위유형 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 포함), IgA(하위유형 IgA1 및 IgA2 포함), IgM 및 IgE를 포함하여, 임의의 아이소타입(isotype)을 가질 수 있다.
"가변 영역" 또는 "가변 도메인"이라는 용어는 항원에 결합하는 항체 내의 도메인을 지칭한다. 본원에서, 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)은 각각 4개의 보존된 프레임워크 영역(FR) 및 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"이라는 용어는 주로 항원-결합에 기여하는 가변 도메인의 영역을 지칭하며; "프레임워크" 또는 "FR"은 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 지칭한다. VH는 3개의 CDR 영역: HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고; VL은 3개의 CDR 영역: LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 각각의 VH 및 VL은 하기의 순서로 아미노 말단(또한 N-말단으로도 알려짐)에서 카복실 말단(또한 C-말단으로도 알려짐)으로 배열된 3개의 CDR과 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4. 각각의 VH 및 VL은 하기의 순서로 아미노 말단에서 카복실 말단으로 배열된 3개의 CDR과 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4. 특정 항체의 경우, 단일 VH 또는 VL이면 항원-결합 특이성을 제공하기에 충분할 수 있다.
CDR의 아미노산 서열 경계는 다양한 주지된 방식, 예를 들어 "카밧" 넘버링 방식(문헌[Kabat et al., (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD] 참조), "Chothia" 넘버링 방식, "ABM" 넘버링 방식, "contact" 넘버링 방식(문헌[Martin, ACR. Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains [J]. 2001] 참조), 및 ImMunoGenTics(IMGT) 넘버링 방식(문헌[Lefranc, M.P. et al., Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003); Front Immunol. 2018 Oct 16; 9: 2278] 참조) 등에 의해 결정될 수 있다. 다양한 넘버링 방식 간의 대응 관계는 하기 표 1에 표시된 바와 같이 당업자에게 주지되어 있으며 예시적이다.
| CDR | IMGT | 카밧 |
AbM | Chothia | Contact |
| HCDR1 | 27-38 | 31-35 | 26-35 | 26-32 | 30-35 |
| HCDR2 | 56-65 | 50-65 | 50-58 | 52-56 | 47-58 |
| HCDR3 | 105-117 | 95-102 | 95-102 | 95-102 | 93-101 |
| LCDR1 | 27-38 | 24-34 | 24-34 | 24-34 | 30-36 |
| LCDR2 | 56-65 | 50-56 | 50-56 | 50-56 | 46-55 |
| LCDR3 | 105-117 | 89-97 | 89-97 | 89-97 | 89-96 |
"항체 단편" 또는 "항원-결합 단편"이라는 용어는 온전한 항체와 상이한 분자를 지칭하며; 이는 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 온전한 항체의 모이어티를 포함한다. 항체 단편의 예에는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, 단일 도메인 항체, 단쇄 Fab(scFab), 다이아바디(diabody), 선형 항체, 단쇄 항체(scFv), 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체가 포함되지만 이에 제한되지 않는다.
"Fc 영역" 또는 "단편 결정화 가능 영역"이라는 용어는 고유 Fc 영역 및 변형된 Fc 영역을 포함하는 항체 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는 데 사용된다. 일부 양태에서, Fc 영역은 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 서브유닛을 포함한다. 일부 양태에서, 인간 IgG 중쇄의 Fc 영역은 Cys226 위치의 아미노산 잔기로부터, 또는 Pro230으로부터 그의 카복실 말단까지 연장되는 것으로서 정의된다. 본원에 기재된 항체에 사용되는 적합한 Fc 영역에는 인간 IgG1, IgG2(IgG2A 및 IgG2B), IgG3 및 IgG4의 Fc 영역이 포함된다. 일부 양태에서, Fc 영역의 경계는 또한, 예를 들어 Fc 영역의 C-말단 리신(EU 넘버링 방식에 따른 잔기 447)을 결실시키거나 Fc 영역의 C-말단 글리신 및 리신(EU 넘버링 방식에 따른 잔기 446 및 447)을 결실시킴으로써 변화될 수 있다. 달리 명시하지 않는 한, Fc 영역에 대한 넘버링 방식은 EU 인덱스로서도 공지된 EU 넘버링 방식이다.
"키메라" 항체라는 용어는 항체 중 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 공급원 또는 종으로부터 유래되고, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지 부분은 또 다른 상이한 공급원 또는 종으부터 유래된 항체를 지칭한다.
"인간화" 항체라는 용어는 인간에서 낮은 면역원성을 갖지만 비-인간 항체의 반응성을 유지하는 항체를 지칭한다. 예를 들어, 이는 비-인간 CDR 영역을 유지하고 항체의 나머지 부분을 그의 인간 대응부(즉, 불변 영역 및 가변 영역의 프레임워크 영역 부분)로 대체함으로써 달성될 수 있다.
"인간 항체", "인간 유래 항체", "완전히 인간 항체" 및 "완전한 인간 항체"라는 용어는 상호교환적으로 사용되고 가변 영역과 불변 영역이 인간 서열인 항체를 지칭한다. 이 용어는 인간 유전자로부터 유래되지만, 예를 들어 가능한 면역원성을 감소시키거나, 친화력을 증가시키거나, 바람직하지 않은 폴딩을 야기할 수 있는 시스테인을 제거하거나 글리코실화 부위를 생성하도록 변경된 서열을 갖는 항체를 포함한다. 이 용어는 비-인간 세포에서 재조합적으로 생성된 항체(인간 세포의 특징이 아닌 글리코실화를 부여할 수 있음)를 포함한다. 이 용어는 또한 인간 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 유전자좌의 일부 또는 전부를 포함하는 트랜스제닉 마우스에서 배양된 항체를 포함한다. 인간 항체의 의미는 구체적으로 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 제외한다.
"친화도"라는 용어는 분자(예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 이의 결합 상대(예를 들어, 항원) 사이의 비-공유 상호작용의 전반적인 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 결합 "친화도"는 결합 쌍의 구성원(예를 들어 항체와 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 내부 결합 친화도를 지칭한다. 리간드 Y에 대한 분자 X의 친화도는 일반적으로 해리 상수(KD)로 표시될 수 있다. 친화도는 본원에 기재된 방법을 포함하여 당업계에 공지된 통상적인 방법에 의해 결정될 수 있다.
본원에 사용된 "kassoc" 또는 "ka"라는 용어는 특정 항체-항원 상호작용의 결합 속도를 의미하는 반면, "kdis" 또는 "kd"라는 용어는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 속도를 지칭한다. "KD"라는 용어는 kd 대 ka의 비(즉, kd/ka)로부터 획득되고 몰 농도(M)로 표시되는 해리 상수를 지칭한다. 항체의 KD 값은 당업계에 주지된 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 표면 플라스몬 공명은 바이오센싱(biosensing) 시스템과 같은 시스템을 사용하여 결정되거나, 또는 용액 내 친화도는 용액 평형 적정(SET)에 의해 결정된다. 일부 양태에서, KD 값은 Biacore에 의해 검출된다.
"효과기 기능"이라는 용어는, 항체의 Fc 영역(고유 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변형 Fc 영역)에 기인할 수 있고 항체 아이소타입에 따라 달라질 수 있는 생물학적 활성을 지칭한다. 항체의 효과기 기능의 예에는 C1q 결합 및 보체-의존성 세포독성, Fc 수용체 결합, 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC), 식세포작용, 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체)의 하향-조절 및 B 세포 활성화가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
"항체-의존성 세포 독성", "항체-의존성 세포-매개 세포 독성" 또는 "ADCC"라는 용어는 세포사를 유도하는 기전으로, 이는 효과기 세포에서 발현된 Fcγ 수용체(FcγR)를 통한 자연 살해 세포(NK), 단핵구, 대식세포, 및 호중구와 같은, 용해 활성을 갖는 효과기 세포와 항체-코팅된 표적 세포와의 상호 작용에 따라 달라진다. 예를 들어, NK 세포는 FcγRIIIa를 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIIIa를 발현한다. 본원에 제공된 항체의 ADCC 활성은 항원을 발현하는 세포를 표적 세포로서 사용하고 NK 세포를 효과기 세포로서 사용하여 시험관내 분석에 의해 평가될 수 있다. 세포 용해는 용해된 세포로부터 표지(예를 들어, 방사성 기질, 형광 염료 또는 천연 세포내 단백질)의 방출을 기반으로 검출된다.
"항체-의존성 세포 식세포작용"("ADCP")이란 용어는 항체-코팅된 표적 세포가 대식세포 또는 수지상 세포와 같은 식세포의 내재화에 의해 제거되는 기전을 지칭한다.
"보체-의존성 세포독성" 또는 "CDC"라는 용어는 표적 결합 항체의 Fc 효과기 도메인이 보체 성분인 C1q에 결합하여 이를 활성화시키고, 이후 C1q가 보체 캐스케이드를 활성화시켜 표적 세포의 사멸을 유도하는 기전을 지칭한다. 보체의 활성화는 또한 백혈구상의 보체 수용체(예를 들어, CR3)에 결합하여 CDC를 촉진하는 표적 세포 표면상에 보체 성분의 침착을 생성시킬 수 있다.
"단클론 항체"라는 용어는 실질적으로 균질한 항체 집단을 지칭한다, 즉 집단에 포함된 항체 분자의 아미노산 서열이, 존재할 수 있는 소수의 천연 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 대조적으로, 다클론 항체 제형은 일반적으로 상이한 에피토프에 특이적인 가변 도메인에 상이한 아미노산 서열을 갖는 다수의 상이한 항체를 포함한다. "단클론성"은 실질적으로 균질한 항체 집단에서 획득된 항체의 특성을 지칭하며, 특정 방법에 의한 항체 생성을 요구하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 의해 제공되는 항체는 단클론 항체이다.
"항원"이라는 용어는 항원-결합 단백질(예를 들어 항체 포함)과 같은 선택성 결합제에 의해 결합될 수 있고, 그렇지 않으면 항원에 결합할 수 있는 항체를 생산하는 동물에 사용될 수 있는 분자 또는 분자의 일부를 지칭한다. 항원은 다양한 항원-결합 단백질(예를 들어, 항체)과 상호작용할 수 있는 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다.
"에피토프"라는 용어는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 특이적으로 결합할 수 있는 항원상의 구역 또는 영역을 지칭한다. 에피토프는 인접한 아미노산 스트링(선형 에피토프)으로부터 형성될 수 있거나, 예를 들어 항원의 폴딩으로 인해(즉, 단백질성 항원의 3차 폴딩에 의해) 공간적으로 근접하게 되는 비-인접 아미노산(입체형태적 에피토프)을 포함할 수 있다. 입체형태적 에피토프와 선형 에피토프의 차이점은, 변성 용매의 존재 하에서 상기 입체형태적 에피토프에 대한 항체의 결합이 상실되는 것이다. 에피토프는 독특한 공간 형태로 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 또는 8 내지 10개의 아미노산을 포함한다. 특정 에피토프에 결합하는 항체(즉, 동일한 에피토프에 결합하는 항체)에 대한 스크리닝(screening)은 당업계의 일상적인 방법, 예를 들어 알라닌 스캐닝, 펩타이드 블롯팅, 펩타이드 절단 분석, 에피토프 절제, 에피토프 추출, 항원의 화학적 변형(문헌[Prot. Sci. 9 (2000) 487-496]), 및 교차-차단을 사용하여 수행될 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
"특이적으로 결합할 수 있는", "특이적으로 결합하는" 또는 "결합하는"이라는 용어는 항체(예를 들어, 항-KLB 항체)가 다른 항원 또는 에피토프보다 더 높은 친화도로 특정 항원 또는 상기 항원 내 에피토프에 결합할 수 있음을 의미한다. 일반적으로, 항체는 약 1 x 10-7 M 이하(예를 들어, 약 1 x 10-8 M 이하)의 평형 해리 상수(KD)로 항원 또는 항원 내의 에피토프에 결합한다. 일부 양태에서, 항원에 대한 항체의 결합에 대한 KD는, 비-특이적 항원(예를 들어, BSA 또는 카제인)에 대한 항체의 결합에 대한 KD의 10% 이하(예를 들어, 1%)이다. KD는 공지된 방법을 사용하여, 예를 들어 BIACORE® 표면 플라스몬 공명 분석에 의해 결정될 수 있다. 그러나 항원 또는 항원 내의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체는 다른 관련 항원, 예를 들어 인간 또는 원숭이, 예를 들어 마카카 파시큘라리스(Macaca fascicularis)(사이노몰구스, 사이노), 판 트로글로디테스(Pan troglodytes)(침팬지, 침프), 또는 칼리트릭스 자쿠스(Callithrix jacchus)(비단 마모셋, 마모셋)와 같은 다른 종(상동성)의 상응하는 항원에 대해 교차-반응성을 가질 수 있다.
"핵산"이라는 용어는 본원에서 "폴리뉴클레오타이드"라는 용어와 상호교환적으로 사용되며, 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태의 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드 및 이의 중합체를 지칭한다. 이 용어는, 합성, 자연 발생 및 비-자연 발생이고, 참조 핵산과 유사한 결합 특성을 가지며 참조 뉴클레오타이드와 유사한 방식으로 대사되는 공지된 뉴클레오타이드 유사체 또는 변형된 주쇄 잔기 또는 연결을 포함하는 핵산을 포함한다. 이러한 유사체의 예에는 포스포로티오에이트, 포스포르아미데이트, 메틸포스포네이트, 키랄-메틸포스포네이트, 2-O-메틸 리보뉴클레오타이드 및 펩타이드-핵산(PNA)이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. "단리된" 핵산은 그의 자연 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 일반적으로 핵산 분자를 포함하는 세포에 포함된 핵산 분자를 포함하지만, 상기 핵산 분자는 염색체 외에 또는 자연 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 존재한다. 항-KLB 항체를 암호화하는 단리된 핵산은 단일 벡터 또는 별도의 벡터에 이러한 하나 이상의 핵산 분자를 포함하는 항-KLB 항체를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자를 지칭하며, 이러한 하나 이상의 핵산 분자는 숙주 세포의 하나 이상의 위치에 존재한다. 달리 명시되지 않는 한, 특정 핵산 서열은 또한 그의 보존적으로 변형된 변이체(예를 들어 축퇴 코돈 치환) 및 상보적 서열뿐만 아니라 명시적으로 표시된 서열을 명시적으로 포함한다. 구체적으로, 하기에 상세히 설명된 바와 같이, 축퇴 코돈 치환은 하나 이상의 선택된(또는 모든) 코돈의 세 번째 위치가 혼합된 염기 및/또는 데옥시이노신 잔기로 치환되는 서열을 생성시킴으로써 획득될 수 있다.
"폴리펩타이드" 및 "단백질"이라는 용어는 본원에서 상호교환적으로 사용되며 아미노산 잔기의 중합체를 지칭한다. 상기 용어는 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 자연 발생 아미노산의 인공 화학적 모방물인 아미노산 중합체뿐만 아니라 자연 발생 아미노산 중합체 및 비-천연 발생 아미노산 중합체에도 적용된다. 달리 명시되지 않는 한, 특정 폴리펩타이드 서열은 또한 그의 보존적으로 변형된 변이체를 명시적으로 포함한다.
서열 "일치성"이라는 용어는 2개 서열이 최적으로 정렬되었을 때 상기 두 서열의 아미노산/핵산이 등가 위치에서 일치하는 정도(백분율)를 나타내며, 최대 서열 일치성을 달성하기 위해 필요한 만큼 간격이 도입되고, 서열 일치성의 일부로 보존적 치환이 고려되지 않는다. 서열 일치성 백분율을 결정하기 위해, 당업자에게 공지된 기법, 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 정렬을 수행할 수 있다. 당업자는 정렬된 서열의 전체 길이의 최대 정렬을 달성하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여 정렬 측정에 적합한 매개변수를 결정할 수 있다.
"융합" 또는 "연결"이라는 용어는 성분(예를 들어, Fv의 VH 및 VL)이 직접 연결되거나 하나 이상의 링커를 통해 공유 결합에 의해 연결되는 것을 의미한다.
"벡터"라는 용어는 연결된 다른 폴리뉴클레오타이드를 수송할 수 있는 폴리뉴클레오타이드 분자를 지칭한다. 벡터의 한 유형은, 추가 DNA 분절이 결찰될 수 있는 원형 이중 가닥 DNA 루프를 지칭하는 "플라스미드"이다. 또 다른 유형의 벡터는 아데노 관련 바이러스 벡터(AAV 또는 AAV2)와 같은 바이러스 벡터이며, 여기서 추가 DNA 분절이 바이러스 게놈에 결찰될 수 있다. 특정 벡터는 이것이 도입되는 숙주 세포에서 자율 복제가 가능하다(예를 들어, 세균 복제 기원을 갖는 세균 벡터 및 에피솜 포유동물 벡터). 다른 벡터(예를 들어, 비-에피솜 포유동물 벡터)는 숙주 세포 내로 도입 시 숙주 세포의 게놈 내로 통합될 수 있으며, 이로써 숙주 게놈과 함께 복제된다. "발현 벡터" 또는 "발현 구축물"이라는 용어는, 숙주 세포로 형질전환될 수 있고 이에 작동적으로 연결된 하나 이상의 이종 암호화 영역의 발현을 (숙주 세포와 함께) 지시 및/또는 조절하는 핵산 서열을 포함하는 벡터를 지칭한다. 발현 구축물은, 전사 및 번역에 영향을 주거나 이를 조절하고, 인트론의 존재 하에서 이에 작동 가능하게 연결된 암호화 영역의 RNA 스플라이싱에 영향을 미치는 서열을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
"숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"이라는 용어는 상호교환적으로 사용되며, 외인성 핵산이 도입된 세포(이러한 세포의 자손 포함)를 지칭한다. 숙주 세포에는 계대수에 관계없이 1차 형질전환된 세포 및 이로부터 유래된 자손을 포함하는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"가 포함된다. 자손은 핵산 함량에 관해 모 세포와 완전히 동일하지 않을 수 있으며 돌연변이를 함유할 수 있다. 스크리닝된 세포와 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖거나 초기 형질전환된 세포로 이루어지는 군으로부터 선택된 돌연변이 자손이 본원에 포함된다. 숙주 세포에는 원핵 및 진핵 숙주 세포가 포함되며, 진핵 숙주 세포에는 포유동물 세포, 곤충 세포주, 식물 세포 및 진균 세포가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 포유동물 숙주 세포에는 인간, 마우스, 래트, 개, 원숭이, 돼지, 염소, 소, 말 및 햄스터 세포가 포함되며, 여기에는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, NSO, SP2 세포, HeLa 세포, 새끼 햄스터 신장(BHK) 세포, 원숭이 신장 세포(COS), 인간 간세포 암종 세포(예를 들어, Hep G2), A549 세포, 3T3 세포 및 HEK-293 세포가 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 진균 세포에는 예를 들어 피키아파스토리스(Pichiapastoris), 피키아 핀란디카(Pichia finlandica), 피키아 트레할로필라(Pichia trehalophila), 피키아 코클라마에(Pichia koclamae), 피키아 멤브라나에파시엔스(Pichia membranaefaciens), 피키아 미누타(Pichia minuta)(오가타에아 미누타(Ogataea minuta), 피키아 린드네리(Pichia lindneri)), 피키아오푼티아에(Pichiaopuntiae), 피키아 써모톨레란스(Pichia thermotolerans), 피키아 살리크타리아(Pichia salictaria), 피키아 구에르쿠움(Pichia guercuum), 피키아 피지페리(Pichia pijperi), 피키아 스티프티스(Pichia stiptis), 피키아 메타놀리카(Pichia methanolica), 피키아, 사카로마이세스세레비지아에(Saccharomycescerevisiae), 사카로마이세스, 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha), 클루이베로마이세스(Kluyveromyces), 클루이베로마이세스 락티스(Kluyveromyces lactis), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 아스페르길루스 니둘란스(Aspergillus nidulans), 아스페르길루스 니거(Aspergillus niger), 아스페르길루스 오리자에(Aspergillus oryzae), 트리코데르마 레에세이(Trichoderma reesei), 크리소스포리움 룩크노웬세(Chrysosporium lucknowense), 푸사리움 스페시즈(Fusarium sp.), 푸사리움 그라미네움(Fusarium gramineum), 푸사리움 베네타움(Fusarium venenatum), 피스코미트렐라 파텐스(Physcomitrella patens) 및 뉴로스포라 크라싸(Neurospora crassa), 피키아, 임의의 사카로마이세스, 한세눌라 폴리모르파, 임의의 클루이베로마이세스, 칸디다 알비칸스, 임의의 아스페르길루스, 트리코데르마 레에세이, 크리소스포리움 룩크노웬시스, 임의의 푸사리움, 야로위아 리포리티카(Yarrowia lipolytica) 및 뉴로스포라 크라싸를 포함한, 효모 및 섬사상(filamentous) 진균 세포가 포함된다.
본원에 사용된 "세포", "세포주" 및 "세포 배양물"이라는 표현은 상호교환적으로 사용되며, 이러한 모든 명칭에는 이들의 자손이 포함된다. 따라서, "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"라는 단어는 계대수에 상관없이 1차 대상 세포 및 이로부터 유래된 배양물을 포함한다. 또한 고의적이거나 부주의한 돌연변이로 인해 모든 자손이 정확히 동일한 DNA 함량을 갖지는 않는 것으로 이해된다. 선택된 원래의 형질전환된 세포와 동일한 기능이나 생물학적 활성을 갖는 변이체 자손이 포함된다.
"임의적" 또는 "임의적으로"는, 이후 기재되는 사건 또는 상황이 반드시 발생하지는 않지만 발생할 수 있으며 상기 기재는 사건 또는 상황이 발생하거나 발생하지 않는 경우를 포함한다는 것을 의미한다.
"약학 조성물"이라는 용어는 본원에 기재된 항-KLB 항체 중 하나 이상 및 다른 화학적 성분, 예를 들어 생리학적/약학적으로 허용되는 담체 및 부형제를 포함하는 혼합물을 지칭한다.
"약학적으로 허용되는 담체"라는 용어는, 활성 성분과 상이하고 대상에게 독성이 없는 약학 제형 중의 성분을 지칭한다. 약학적으로 허용되는 담체에는 완충제, 부형제, 안정제 또는 보존제가 포함되지만 이에 제한되지 않는다.
"대상" 또는 "개체"라는 용어에는 인간 및 비-인간 동물이 모두 포함된다. 비-인간 동물에는 비-인간 영장류(예를 들어, 사이노몰구스 원숭이), 양, 개, 소, 닭, 양서류 및 파충류와 같은 모든 척추동물(예를 들어, 포유동물 및 비-포유동물)이 포함된다. 명시되지 않는 한, "환자" 및 "대상"라는 용어는 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 본원에 사용된 "사이노몰구스 원숭이(사이노)" 또는 "사이노몰구스"는 마카카 파시큘라리스를 지칭한다. 특정 양태에서, 개체 또는 대상은 인간이다.
동물, 인간, 실험 대상, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체에 적용될 때 "투여하는" 또는 "제공하는"은 외인성 약물, 치료제, 진단제 또는 조성물과 동물, 인간, 대상, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체와의 접촉을 지칭한다.
"샘플"이라는 용어는 대상로부터 단리된 유사한 유체, 세포 또는 조직뿐만 아니라 대상 내에 존재하는 유체, 세포 또는 조직의 모음을 지칭한다. 예시적인 샘플은 생물학적 유체(예를 들어, 혈액; 혈청; 장액; 혈장; 림프; 소변; 타액; 낭포성 유체; 눈물; 배설물; 가래; 분비 조직 및 기관의 점막 분비물; 질 분비물; 복수; 흉막 내 유체; 심낭; 복막; 복강 및 기타 체강 중의 유체; 기관지 세척액에서 수집한 유체; 윤활액; 대상 또는 생물학적 공급원과 접촉하는 액체 용액, 예를 들어 세포 및 기관 배양 배지(세포 또는 기관 순화 배지 포함); 세척액 등); 조직 생검 샘플, 미세한 바늘 천자, 외과적으로 절제된 조직, 기관 배양물 또는 세포 배양물이다.
"치료" 또는 "치료하다"(및 이의 문법적 변형)는 예방을 위해 또는 임상 병리학 과정 중에 수행될 수 있는, 치료받는 개체의 자연 경과를 변경하려는 시도의 임상 개입을 지칭한다. 치료의 바람직한 효과에는 질환의 발생 또는 재발 예방, 증상 완화, 질환의 직간접적 병리학적 결과 완화/감소, 전이 예방, 질환 진행 속도 감소, 질환 상태의 호전 또는 완화, 및 예후의 회귀 또는 개선이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 항체는 질환의 발병을 지연시키거나 질환의 진행을 늦추는 데 사용된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 항-KLB 항체(인간 및/또는 사이노몰구스 원숭이 KLB에 결합하는 항체 포함)는 FGF21 및/또는 FGF19의 생체내 효과를 모방하고 FGF21-유사 신호전달 및/또는 FGF19-유사 신호전달을 유도하는 독특한 특성을 가지며; 일부 양태에서, 항체는 FGF21의 고유의 생물학적 기능과 일치하는 활성을 나타낸다. 이러한 특성으로 인해 항-KLB 항체는 제2형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, NASH, 심혈관 질환 또는 대사 증후군과 같은 FGF21 및/또는 FGF19와 관련된 대사 질환의 치료, 및 FGF19 및/또는 FGF21의 생체내 효과를 모방하거나 향상시키는 것을 요구하는 임의의 질환, 장애 또는 상태의 치료에 유용하다.
"효과량"은 일반적으로 증상의 중증도 및/또는 빈도를 감소시키고, 증상 및/또는 근본 원인을 제거하고, 증상 및/또는 근본 원인의 출현을 예방하고/하거나, 질환 상태에 의해 유발되거나 이와 연관된 손상(예를 들어, 폐 질환)을 개선 또는 향상시키기에 충분한 양이다. 일부 양태에서, 효과량은 치료 효과량 또는 예방 효과량이다. "치료 효과량"은 질환 상태 또는 병태, 특히 질환 상태와 연관된 상태 또는 병태를 치료하거나, 또는 질환 상태 또는 어떤 식으로든 질환과 연관된 기타 바람직하지 않은 증상의 진행을 달리 예방, 방해, 지연 또는 역전시키기에 충분한 양이다. "예방 효과량"은 대상에게 투여되었을 때 미리 결정된 예방 효과, 예를 들어 질환 상태의 발병(또는 재발)을 예방 또는 지연시키거나, 또는 질환 상태 또는 관련 증상의 발병(또는 재발)의 가능성을 감소시키는 양이다. 완전한 치료 또는 예방 효과는 1회 용량을 투여한 후에 반드시 나타나는 것은 아니며 일련의 용량을 투여한 후에 나타날 수도 있다. 따라서, 치료 또는 예방 효과량은 하나 이상의 용량으로 투여될 수 있다. "치료 효과량" 및 "예방 효과량"은 개체의 질환 상태, 연령, 성별, 체중, 및 개체에서 원하는 반응을 이끌어내는 치료제 또는 치료제 조합의 능력과 같은 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다. 유효 치료제 또는 치료제 조합의 예시적인 지표는 예를 들어 환자의 개선된 건강 상태를 포함한다.
본 개시내용의 항-KLB 항체
한 양상에서, 본 개시내용에서, KLB에 특이적으로 결합하는 항체는 다수의 실험에 의해 획득된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 항-KLB 항체는 높은 친화성, 인간-원숭이 교차 반응성, hKLB&hFGFR1c 세포에서는 강한 활성화 활성을 갖지만 hFGFR1c 재조합 세포에서는 약한 활성화 활성, hKLB&hFGFR2c, hKLB&hFGFR3c 및 hKLB&hFGFR4 세포에 대한 선택성, 약동학적 특성, 및/또는 약물기량성(druggability)으로 항원에 결합하는 것과 같은 다수의 유리한 특성을 갖는다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 KLB에 특이적으로 결합하는 항체를 제공하고; 일부 양태에서, 항체는 전장 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, 단일 도메인 항체, 단쇄 Fab(scFab), 다이아바디, 선형 항체 또는 단쇄 항체(scFv))이고; 일부 양태에서, 항체는 하기의 기능적 활성 중 하나 이상을 갖는다:
A. 상기 항-KLB 항체는 hKLB&hFGFR1c를 발현하는 세포에 대해 활성화 활성을 가지며; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 hKLB&hFGFR1c를 발현하는 세포에 대해 높은 활성화 활성을 가지며; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 hKLB&hFGFR1c를 발현하는 CHOK1 세포에 대해 10 초과의 활성화 배수를 야기하고/하거나 상기 항-KLB 항체는 HEK293T-hKLB&hFGFR1c 세포에 대해 2 초과의 활성화 배수를 야기하고; 일부 양태에서, 상기 활성화 배수는 블랭크 대조군에 대한 항체의 활성화 배수이고; 일부 양태에서, 상기 활성화 배수는 본 개시내용의 시험 실시예 4 및 5에 따라 검출됨;
B. 상기 항-KLB 항체는 hFGFR1c를 발현하는 재조합 세포(hFGFR1c만, hKLB를 발현하지 않음)에 대해 약한 활성화 활성을 가지며; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 HEK293-hFGFR1c 세포에 대해 1 미만의 활성화 배수를 야기하고; 일부 양태에서, 상기 활성화 배수는 블랭크 대조군에 대한 항체의 활성화 배수이고; 일부 양태에서, 상기 활성화 배수는 본 개시내용의 시험 실시예 6에 따라 검출됨;
C. 상기 항-KLB 항체는 hKLB&hFGFR2c, hKLB&hFGFR3c 및 hKLB&hFGFR4를 발현하는 세포에 대해 약한 활성화 활성을 가지며; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 L6-hKLB&hFGFR2c 및/또는 L6-hKLB&hFGFR4 세포에 대해 약한 활성화 활성을 갖고; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 L6-hKLB&hFGFR2c 및/또는 L6-hKLB&hFGFR4 세포에 대해 2 미만의 활성화 배수를 야기하고; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 L6-hKLB&hFGFR2c, hKLB&hFGFR3c 및/또는 L6-hKLB&hFGFR4 세포에 대해 약한 활성화 활성을 가지며, 일부 양태에서 상기 항-KLB 항체는 L6-hKLB&hFGFR2c, hKLB&hFGFR3c 및/또는 L6-hKLB&hFGFR4 세포에 대해 2 미만의 활성화 배수를 야기하고; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 L6-hKLB&hFGFR2c 및 L6-hKLB&hFGFR4 세포에 대해 2 미만의 활성화 배수 및 L6-hKLB&hFGFR3c 세포에 대해 5 미만의 활성화 배수를 야기하고; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 L6-hKLB&hFGFR2c 세포에 대해 1.4 미만의 활성화 배수, L6-hKLB&hFGFR4 세포에 대해 1.6 미만의 활성화 배수, 및 L6-hKLB&hFGFR3c 세포에 대해 5 미만의 활성화 배수를 야기하고; 일부 양태에서, 상기 활성화 배수는 블랭크 대조군에 대한 항체의 활성화 배수이고; 일부 양태에서, 상기 활성화 배수는 본 개시내용의 시험 실시예 7에 따라 검출됨;
D. 상기 항-KLB 항체는 인간 KLB 및 원숭이 KLB 둘 다에 결합할 수 있고; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 2.0E-9 M 미만의 EC50 값으로 인간 및/또는 원숭이 KLB에 결합할 수 있고, 상기 EC50 값은 유세포 분석법에 의해 검출됨; 및
E. 상기 항-KLB 항체는 높은 친화도로 인간 KLB에 결합할 수 있고; 일부 양태에서, 상기 항체는 3.0E-9 M 미만의 KD 값으로 인간 KLB에 결합할 수 있으며, 상기 KD 값은 Biacore 방법에 의해 검출됨.
일부 양태에서, 항-KLB 항체는 hKLB&hFGFR1c를 발현하는 세포에 대해 높은 활성화 활성을 갖고, hKLB&hFGFR2c, hKLB&hFGFR3c 및 hKLB&hFGFR4를 발현하는 세포에 대해 약한 활성화 활성을 가지며; 일부 양태에서, 상기 항-KLB 항체는 hKLB&hFGFR1c를 발현하는 CHOK1 세포에 대해 10 초과의 활성화 배수 및 L6-hKLB&hFGFR2c 및/또는 L6-hKLB&hFGFR4 세포에 대해 2 미만의 활성화 배수를 야기하고, 상기 활성화 배수는 블랭크 대조군에 대한 항체의 활성화 배수이다.
일부 양태에서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때
i) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 서열은 각각 서열번호 40 내지 48 중 어느 하나의 HCDR1, HCDR2, HCDR3의 서열과 일치하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2, LCDR3의 서열은 각각 서열번호 34의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열과 일치하거나; 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 서열은 각각 서열번호 2의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열과 일치하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 서열은 각각 서열번호 3의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열과 일치하거나;
ii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 서열은 각각 서열번호 49의 HCDR1, HCDR2, HCDR3의 아미노산 서열과 일치하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2, LCDR3의 서열은 각각 서열번호 56 내지 68 중 어느 하나의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열과 일치하거나; 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 서열은 각각 서열번호 4의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열과 일치하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 서열은 각각 서열번호 5의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열과 일치하거나;
iii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 서열은 각각 서열번호 18의 HCDR1, HCDR2, HCDR3의 아미노산 서열과 일치하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2, LCDR3의 서열은 각각 서열번호 19의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열과 일치한다.
일부 양태에서, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때 CDR은 카밧, IMGT, Chothia, AbM 및 Contact로 이루어지는 군으로부터 선택된 넘버링 방식에 따라 정의된다. 일부 양태에서,
i) 중쇄 가변 영역에서, HCDR1은 서열번호 6에 제시되고, HCDR2는 서열번호 37, 38, 39, 또는 7에 제시되고, HCDR3은 서열번호 8에 제시되고;
경쇄 가변 영역에서, LCDR1은 서열번호 9에 제시되고, LCDR2는 서열번호 10에 제시되고, LCDR3은 서열번호 11에 제시되거나;
ii) 중쇄 가변 영역에서, HCDR1은 서열번호 12에 제시되고, HCDR2는 서열번호 13에 제시되고, HCDR3은 서열번호 14에 제시되고;
경쇄 가변 영역에서, LCDR1은 서열번호 15, 69, 70, 71, 72, 73 또는 74에 제시되고, LCDR2는 서열번호 16 또는 75에 제시되고, LCDR3은 서열번호 17에 제시되거나;
iii) 중쇄 가변 영역에서, HCDR1은 서열번호 24에 제시되고, HCDR2는 서열번호 25에 제시되고, HCDR3은 서열번호 26에 제시되고;
경쇄 가변 영역에서, LCDR1은 서열번호 27에 제시되고, LCDR2는 서열번호 28에 제시되고, LCDR3은 서열번호 29에 제시된다.
바람직하게,
i) 중쇄 가변 영역에서, HCDR1은 서열번호 6에 제시되고, HCDR2는 서열번호 37에 제시되고, HCDR3은 서열번호 8에 제시되고;
경쇄 가변 영역에서, LCDR1은 서열번호 9에 제시되고, LCDR2는 서열번호 10에 제시되고, LCDR3은 서열번호 11에 제시되거나;
ii) 중쇄 가변 영역에서, HCDR1은 서열번호 12에 제시되고, HCDR2는 서열번호 13에 제시되고, HCDR3은 서열번호 14에 제시되고;
경쇄 가변 영역에서, LCDR1은 서열번호 69에 제시되고, LCDR2는 서열번호 75에 제시되고, LCDR3은 서열번호 17에 제시된다.
일부 양태에서, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때 상기 항체에서, 중쇄 가변 영역의 프레임워크 영역은 IGHV1-3*01/IGHJ6*01의 중쇄 프레임워크 영역에 1, 24, 44, 71 및 91번 위치(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 역 돌연변이를 포함하는 것이고, 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역은 IGKV1-39*01/IGKJ4*01의 경쇄 프레임워크 영역에 2, 4, 36, 38, 43, 44 및 58번 위치(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 역 돌연변이를 포함하는 것이다. 일부 양태에서, 항-KLB 항체를 제공하고, 이때 중쇄 가변 영역에서 HCDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 37, 38, 39 또는 7의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역에서 LCDR1은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하며; 상기 항체에서, 상기 중쇄 가변 영역의 프레임워크 영역은 IGHV1-3*01/IGHJ6*01의 중쇄 프레임워크 영역에 1E, 24T, 44G, 71S 및 91F(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 역 돌연변이를 추가로 포함하는 것이고, 상기 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역은 IGKV1-39*01/IGKJ4*01의 경쇄 프레임워크 영역에 2V, 4I, 36F, 38E, 43T, 44N 및 58I(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 역 돌연변이를 포함하는 것이다.
일부 양태에서, 상기 중 어느 하나에 따른 항-KLB 항체를 제공하고, 이때 상기 항체에서, 중쇄 가변 영역의 프레임워크 영역은 IGHV1-3*01/IGHJ6*01의 중쇄 프레임워크 영역에 1, 24, 48, 67, 69, 71 및 73번 위치(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하는 것이고, 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역은 IGKV6-21*02/JGKJ2*01 또는 IGKV3-20*02/JGKJ2*01의 경쇄 프레임워크 영역에 2, 45, 47, 49, 58 및 71번 위치(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 역 돌연변이를 포함하는 것이다. 일부 양태에서, 항-KLB 항체를 제공하고, 이때 중쇄 가변 영역에서 HCDR1은 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역에서 LCDR1은 서열번호 15, 69, 70, 71, 72, 73 또는 74의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 16 또는 75의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하며; 상기 항체에서, 상기 중쇄 가변 영역의 프레임워크 영역은 IGHV1-3*01/IGHJ6*01의 중쇄 프레임워크 영역에 1E, 24G, 48I, 67A, 69V, 71V 및 73K(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하는 것이고, 상기 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역은 IGKV6-21*02/JGKJ2*01 또는 IGKV3-20*02/JGKJ2*01의 경쇄 프레임워크 영역에 2N, 45K, 47W, 49Y, 58V 및 71Y(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 역 돌연변이를 포함하는 것이다. 돌연변이 위치는 카밧 넘버링 방식에 따라 넘버링된다; 예를 들어, "2N"은 2번 위치(카밧 넘버링에 따라)의 잔기가 "N"임을 가리킨다.
항-KLB 항체의 변이체
특정 양태에서, 본원에 제공된 항-KLB 항체의 아미노산 서열 변이체가 포함된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화성 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는, 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열에 적절한 변형을 도입하거나 펩타이드 합성을 통해 제조될 수 있다. 이러한 변형에는 예를 들어 항-KLB 항체의 아미노산 서열 내 잔기로부터의 결실, 및/또는 삽입 및/또는 치환이 포함된다. 최종 구축물이 원하는 특성(예를 들어, 항원-결합)을 보유한다면, 결실, 삽입 및 치환의 모든 조합을 통해 최종 구축물에 도달할 수 있다.
치환, 삽입 및 결실을 갖는 변이체
특정 양태에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항-KLB 항체의 변이체를 제공한다. 치환 돌연변이 유발에 대한 관심 부위에는 CDR 및 FR이 포함된다. 보존적 치환은 표 2에서 "바람직한 치환"이라는 제목 아래에 나와 있다. 보다 실질적인 변화는 표 2에서 "예시적인 치환"이라는 제목 아래에 제공되며, 아미노산 측쇄 부류와 관련하여 하기에 추가로 기재된다. 아미노산 치환을 관심 항체에 도입시킬 수 있으며, 생성물을 원하는 활성, 예를 들어 유지/개선된 항원-결합, 감소된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대해 스크리닝한다.
| 원래 잔기 | 예시적인 치환 | 바람직한 치환 |
| Ala (A) | Val, Leu, Ile | Val |
| Arg (R) | Lys, Gln, Asn | Lys |
| Asn (N) | Gln, His, Asp, Lys, Arg | Gln |
| Asp (D) | Glu, Asn | Glu |
| Cys (C) | Ser, Ala | Ser |
| Gln (Q) | Asn, Glu | Asn |
| Glu (E) | Asp, Gln | Asp |
| Gly (G) | Ala | Ala |
| His (H) | Asn, Gln, Lys, Arg | Arg |
| Ile (I) | Leu; Val; Met; Ala; Phe; 노르류신 | Leu |
| Leu (L) | 노르류신; Ile; Val; Met; Ala; Phe | Ile |
| Lys (K) | Arg, Gln, Asn | Arg |
| Met (M) | Leu, Phe, Ile | Leu |
| Phe (F) | Trp, Leu, Val, Ile, Ala, Tyr | Tyr |
| Pro (P) | Ala | Ala |
| Ser (S) | Thr | Thr |
| Thr (T) | Ser | Ser |
| Trp (W) | Tyr, Phe | Tyr |
| Tyr (Y) | Trp, Phe, Thr, Ser | Phe |
| Val (V) | Ile; Leu; Met; Phe; Ala; 노르류신 | Leu |
공통 측쇄 특성에 따라 아미노산은 하기와 같이 분류될 수 있다:
(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성, 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비-보존적 치환은 이러한 부류 중 하나의 구성원을 다른 부류의 구성원으로 치환시키는 것을 수반할 것이다.
치환 변이체의 한 유형은 모 항체(예를 들어, 인간화 또는 인간 항체)의 하나 이상의 CDR 잔기를 치환하는 것을 포함한다. 일반적으로, 추가 연구를 위해 선택된 생성 변이체는 모 항체에 비해 특정한 생물학적 특성(예를 들어, 증가된 친화도, 감소된 면역원성)이 변화(예를 들어, 개선)되고/되거나 모 항체의 특정한 생물학적 특성이 실질적으로 유지될 것이다. 예시적인 치환 변이체는 친화성-성숙 항체이며, 이는 예를 들어 본원에 기재된 것과 같은 파지 디스플레이 기반 친화성 성숙 기법을 사용하여 편리하게 생성될 수 있다. 간략하게, 하나 이상의 CDR 잔기를 돌연변이시키고 변이 항체를 파지 상에 디스플레이하고 특정 생물학적 활성(예를 들어, 결합 친화성)에 대해 스크리닝한다. 예를 들어, 항체 친화성을 개선시키기 위해 CDR에 변화(예를 들어, 치환)를 수행할 수 있다. 이러한 변화는 CDR "핫스팟", 즉 체세포 성숙 과정 동안 높은 빈도로 돌연변이를 겪는 코돈에 의해 암호화된 잔기 및/또는 항원 접촉 잔기에서 이루어질 수 있으며, 한편 생성된 변이체 VH 또는 VL을 결합 친화성에 대해 시험한다. 친화성 성숙의 일부 양태에서, 다양한 방법(예를 들어, 오류 유발 PCR, 쇄 셔플링(chain shuffling) 또는 올리고뉴클레오타이드 지정 돌연변이 유발) 중 어느 하나에 의해 성숙을 위해 선택된 가변 유전자에 다양성을 도입한다. 이어서 2차 라이브러리를 생성시킨다. 이어서 상기 라이브러리를 스크리닝하여 원하는 친화성을 갖는 임의의 항체 변이체를 식별한다. 다양성을 도입하기 위한 또 다른 방법은 여러 CDR 잔기(예를 들어, 한 번에 4 내지 6개의 잔기)를 무작위화하는 CDR-지정 방법을 포함한다. 항원-결합에 관여하는 CDR 잔기는 예를 들어 알라닌 스캐닝 돌연변이 유발 또는 모델링을 사용하여 구체적으로 식별될 수 있다. 특히 HCDR3 및 LCDR3이 종종 표적화된다.
특정 양태에서, 치환, 삽입 또는 결실이 항원에 결합하는 항체의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 이러한 변화는 하나 이상의 CDR 내에서 발생할 수 있다. 예를 들어, 결합 친화성을 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변화(예를 들어, 본원에 제공된 보존적 치환)가 CDR에서 이루어질 수 있다. 이러한 변화는 예를 들어 CDR의 항원 접촉 잔기 외부에 있을 수 있다.
돌연변이 유발 표적으로 사용될 수 있는 항체의 잔기 또는 영역을 식별하는 유용한 방법을 "알라닌 스캐닝 돌연변이 유발"이라고 한다. 이 방법에서는 잔기 또는 표적 잔기 기(예를 들어, Arg, Asp, His, Lys 및 Glu와 같은 하전된 잔기)를 식별하고 이를 중성 또는 음으로 하전된 아미노산(예를 들어, Ala 또는 폴리알라닌)으로 대체시켜, 항체와 항원의 상호작용이 영향을 받는 지의 여부를 결정한다. 추가 치환을, 초기 치환에 대한 기능적 민감성을 나타내는 아미노산 위치에 도입시킬 수 있다. 또한, 항원-항체 복합체의 결정 구조를 연구하여 항체와 항원 간의 접촉점을 식별할 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 인접 잔기는 치환 후보로서 표적화되거나 제거될 수 있다. 변이체를 스크리닝하여 상기 변이체가 원하는 특성을 포함하는지를 결정할 수 있다.
아미노산 서열 삽입에는 1개 잔기에서 100개 이상 잔기를 함유하는 폴리펩타이드 길이 범위의 아미노- 및/또는 카복실-말단 융합, 및 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입이 포함된다. 말단 삽입의 예에는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체가 포함된다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체에는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 효소 또는 폴리펩타이드에 대한 항체의 N- 또는 C-말단의 융합이 포함된다.
Fc 영역의 조작
한 양상에서, 본 개시내용의 항-KLB 항체의 Fc 영역은, Fc 수용체에 대한 이의 결합, 예를 들어 Fcγ 수용체에 대한 이의 결합을 감소시키고 효과기 기능을 감소시키거나 제거하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 천연 IgG Fc 영역, 구체적으로 IgG1 Fc 영역 또는 IgG4 Fc 영역은 본 개시내용의 항-KLB 항체가 항원을 발현하는 세포보다는 Fc 수용체를 발현하는 세포를 표적화하게 할 수 있다. 본 개시내용의 조작된 Fc 영역은 Fc 수용체에 대한 감소된 결합 친화성 및/또는 감소된 효과기 기능을 나타낸다. 일부 양태에서, 조작된 Fc 영역은 고유의 Fc 영역과 비교하여 Fc 수용체에 대한 결합 친화도의 50%, 80%, 90% 또는 95% 이상의 감소를 나타낸다. 일부 양태에서, Fc 수용체는 Fcγ 수용체이다. 일부 양태에서, Fc 수용체는 인간 Fcγ 수용체, 예를 들어 FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIB 또는 FcγRIIIa이다. 일부 양태에서, 조작된 Fc 영역은 또한 고유 Fc 영역과 비교하여 보체(예를 들어, C1q)에 대해 감소된 결합 친화성을 갖는다. 일부 양태에서, 조작된 Fc 영역은 고유 Fc 영역과 비교하여 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 결합 친화성을 갖지 않는다. 일부 양태에서, 조작된 Fc 영역은 감소된 효과기 기능을 가지며, 이는 하기 중 하나 이상을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다: 감소된 보체-의존성 세포독성(CDC), 감소된 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC), 감소된 항체-의존성 세포 식세포작용(ADCP), 감소된 사이토카인 분비, 감소된 항원 제시 세포에 의한 면역 복합체-매개 항원 흡수, 감소된 NK 세포에 대한 결합, 감소된 대식세포에 대한 결합, 감소된 단핵구에 대한 결합, 감소된 다형핵 세포에 대한 결합, 감소된 직접적인 신호전달-유도된 세포자멸사, 감소된 수지상 세포 성숙, 및 감소된 T 세포 프라이밍. IgG1 Fc 영역의 경우, 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329번 위치와 같은 위치에서의 아미노산 잔기 치환은 효과기 기능을 감소시킬 수 있다. 일부 양태에서, Fc 영역은 인간 IgG1 Fc 영역이고, 234 및 235번 위치의 아미노산 잔기는 EU 인덱스에 따라 넘버링 시, A이다. IgG4 Fc 영역의 경우, 228번 위치와 같은 위치에서의 아미노산 잔기 치환은 효과기 기능을 감소시킬 수 있다.
항-KLB 항체는 제1 서브유닛의 354C 및 제2 서브유닛의 349C와 같은 다이설파이드 결합 조작을 추가로 포함할 수 있다.
항-KLB 항체는 Fc 영역의 2개의 서브유닛에 융합된 상이한 항원-결합 모이어티를 포함할 수 있고, 따라서 바람직하지 않은 동종이량체화를 초래할 수 있다. 수율 및 순도를 개선시키기 위해, 따라서 본 개시내용의 항-KLB 항체의 Fc 영역에 이종이량체화를 촉진하는 변형을 도입하는 것이 유리하다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 Fc 영역은 서브유닛의 경계면에 돌기 구조(손잡이)를 도입하고 또 다른 서브유닛의 계면에 기공 구조(구멍)를 도입하는 것을 포함하는 구멍에 손잡이(KIH) 기법에 따른 조작을 포함한다. 이와 같이 돌기 구조가 기공 구조 내에 위치하게 되어, 이종이량체의 형성을 촉진하고 동종이량체의 생성을 억제할 수 있다. 돌기 구조는, 서브유닛의 경계면에 있는 작은 아미노산 측쇄를 더 큰 측쇄(예를 들어, 티로신 또는 트립토판)로 치환시켜 구성된다. 기공 구조는, 큰 아미노산 측쇄를 더 작은 아미노산 측쇄(예를 들어, 알라닌 또는 트레오닌)로 치환시킴으로써 또 다른 서브유닛의 경계면에서 생성된다. 돌기 및 기공 구조는 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 하기 표 3에 제시된 임의적 아미노산 치환으로 변경시킴으로써 제조된다:
| 제1 서브유닛 |
T366Y | T366W | T394W | F405W | T366W | T366Y F405A |
T366W F405W |
F405W Y407A |
| 제2 서브유닛 |
Y407T | Y407A | F405A | T394S | T366S L358A Y407V |
T394W Y407T |
T394W Y407A |
T366W T394S |
구멍에 손잡이 기법 이외에, 이종이량체화를 달성하기 위해 다중특이성 항체의 중쇄의 CH3 도메인을 변형시키는 다른 기법이 또한 당업계에, 예를 들어 WO 96/27011, WO 98/050431, EP 1870459, WO 2007/110205, WO 007/147901, WO 2009/089004, WO 2010/129304, WO 2011/90754, WO 2011/143545, WO 2012/058768, WO 2013/157954, 및 WO 013/096291에 공지되어 있다.
Fc 영역의 C-말단은 아미노산 잔기 PGK로 끝나는 온전한 C-말단이거나 단축된 C-말단, 예를 들어 1개 또는 2개의 C-말단 아미노산 잔기가 제거된 단축된 C-말단일 수 있다. 바람직한 양상에서, 중쇄의 C-말단은 PG로 끝나는 단축된 C-말단이다. 따라서, 일부 양태에서, 온전한 항체의 조성물은 모든 K447 잔기 및/또는 G446 + K447 잔기가 제거된 항체 집단을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 온전한 항체의 조성물은 K447 잔기 및/또는 G446 + K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 온전한 항체의 조성물은 K447 잔기 및/또는 G446 + K447 잔기가 있거나 없는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함한다.
재조합 방법
항-KLB 항체(예를 들어, 항체)를 재조합 방법을 사용하여 생성시킬 수 있다. 이들 방법을 위해, 항-KLB 항체를 암호화하는 하나 이상의 단리된 핵산을 제공한다.
한 양태에서, 본 개시내용은 상기 기재된 항-KLB 항체를 암호화하는 단리된 핵산을 제공한다. 이러한 핵산은 각각 독립적으로 상기에 기재된 폴리펩타이드 쇄 중 어느 하나를 암호화할 수 있다. 또 다른 양상에서, 본 개시내용은 이러한 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터(예를 들어, 발현 벡터)를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 개시내용은 이러한 핵산을 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 한 양태에서, 항-KLB 항체를 제조하는 방법을 제공하고, 이때 방법은 발현에 적합한 조건 하에서 상기 제공된 바와 같은 항-KLB 항체를 암호화하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 배양하고, 임의적으로 상기 숙주 세포(또는 숙주 세포 배지)로부터 항-KLB 항체를 수집하는 것을 포함한다.
항-KLB 항체의 재조합 생성을 위해, 단백질을 암호화하는 핵산을 단리하고 숙주 세포에서의 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해 하나 이상의 벡터에 삽입한다. 이러한 핵산은 통상적인 절차를 사용하여 쉽게 단리 및 서열분석되거나, 또는 재조합 방법에 의해 생성되거나 화학적 합성에 의해 수득될 수 있다.
항-KLB 항체를 암호화하는 벡터를 클로닝하거나 발현시키기에 적합한 숙주 세포에는 본원에 기재된 원핵 또는 진핵 세포가 포함된다. 예를 들어, 폴리펩타이드 또는 항원-결합 분자는 특히 글리코실화 및 Fc 효과기 기능이 필요하지 않은 경우 세균에서 생성될 수 있다. 발현 후, 폴리펩타이드 또는 항원-결합 분자를 가용성 분획 중에서 세균 세포 페이스트로부터 단리할 수 있으며 추가로 정제할 수 있다.
원핵생물 이외에, 섬사상 진균 또는 효모와 같은 진핵 미생물은 진균 및 효모 균주를 포함하여 항-KLB 항체를 암호화하는 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 항-KLB 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체(무척추동물 및 척추동물)로부터 유래될 수 있으며; 무척추 세포의 예로는 식물 및 곤충 세포가 있다. 특히 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포의 형질감염을 위해 곤충 세포와 조합하여 사용될 수 있는 다수의 바큘로바이러스 균주가 식별되었으며; 식물 세포 배양물을 또한 숙주로서 사용할 수 있고(예를 들어 US 5959177, US 6040498, US 6420548, US 7125978, 및 US 6417429를 참고한다); 척추동물 세포를 또한 숙주, 예를 들어 현탁액에서의 성장을 위해 조정된 포유동물 세포주로서 사용할 수 있다. 적합한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예에는 SV40-형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주(COS-7); 인간 배아 신장 세포주(293 또는 293T 세포); 새끼 햄스터 신장 세포(BHK); 마우스 세르톨리 세포(TM4 세포); 원숭이 신장 세포(CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76); 인간 자궁경부암 세포(HELA); 개 신장 세포(MDCK); 버팔로 래트 간 세포(BRL3A); 인간 폐 세포(W138); 인간 간 세포(Hep G2); 마우스 유방 종양 세포(MMT 060562); TRI 세포; MRC5 세포; 및 FS4 세포가 있다. 다른 적합한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR-CHO 세포를 포함한 중국 햄스터 난소(CHO) 세포; 및 Y0, NS0 및 Sp2/0과 같은 골수종 세포주를 포함한다. 항체 생성에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토를 위해, 예를 들어 하기 문헌을 참고한다: Yazaki, P. and Wu, A.M., Methods in Molecular Biology, Vol. 248, Lo, B.K.C. (eds.), Humana Press, Totowa, NJ (2004), pp. 255-268.
검출 및 진단
본원에 제공된 항-KLB 항체를 당업계에 공지된 다양한 분석에 의해 그의 물리적/화학적 특성 및/또는 생물학적 활성에 대해 확인, 스크리닝 또는 특성화할 수 있다. 한 양상에서, 본 개시내용의 항-KLB 항체를 예를 들어 ELISA 및 웨스턴 블롯과 같은 공지된 방법에 의해 활성에 대해 시험한다.
특정 양태에서, 본 개시내용에 제공된 항-KLB 항체를 생물학적 샘플에서 KLB의 존재를 검출하는 데 사용할 수 있다. 본원에 사용된 "검출"이라는 용어는 정량적 또는 정성적 검출을 포함한다. 특정 양태에서, 생물학적 샘플은 종양 조직과 같은 세포 또는 조직을 포함한다.
한 양태에서, 진단 또는 검출 방법에 사용하기 위한 항-KLB 항체를 제공한다. 한 양상에서, 생물학적 샘플에서 KLB의 존재를 검출하는 방법을 제공한다. 특정 양태에서, 방법은 생물학적 샘플을 적합한 조건 하에서 항-KLB 항체와 접촉시키는 단계 및 검출제와 항원 사이에 복합체가 형성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다. 이러한 방법은 시험관내 또는 생체내 방법일 수 있다. 한 양태에서, 항-KLB 항체를 사용하여 치료에 적합한 대상을 선택하며; 예를 들어 KLB는 환자를 선택하기 위한 생물마커이다.
본 개시내용의 항-KLB 항체를 사용하여 진단할 수 있는 예시적인 장애는 예를 들어 당뇨병, 심혈관 질환, 인슐린 저항성, 고혈압, 혈전색전성 질환 또는 이상지질혈증, 특히 비알코올성 지방간염 및 당뇨병이다.
특정 양태에서, 표지된 항-KLB 항체를 제공한다. 표지는 직접적으로 검출되는 표지 또는 모듈(예를 들어, 형광성, 발색성, 전자 밀도, 화학 발광 및 방사성 표지) 및 간접적으로 검출되는 모듈(예를 들어, 효소 반응 또는 분자 상호 작용을 통해 간접적으로 검출되는 모듈, 예를 들어 효소 또는 리간드)을 포함하나 이들로 제한되지 않는다.
치료 방법 및 투여 경로
본원에 제공된 임의의 항-KLB 항체(예를 들어 항체)를 치료 방법에 사용할 수 있다. 또 다른 양상에서, 본 개시내용은 약제의 제조 또는 준비에 있어서 항-KLB 항체의 용도를 제공한다. 일부 양태에서, 질환은 KLB와 연관된 질환 또는 장애이다. 일부 양태에서, 질환은 당뇨병, 심혈관 질환, 인슐린 저항성, 고혈압, 혈전색전성 질환 및 이상지질혈증, 특히 비알코올성 지방간염 및 당뇨병으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 이러한 한 양태에서, 용도는 효과량의 하나 이상의 추가 치료제(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 추가 치료제)를 대상에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 상기 구현예 중 어느 하나에 따른 "대상"는 인간일 수 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 항-KLB 항체(인간 및/또는 사이노몰구스 원숭이 KLB에 결합하는 항체 포함)는 FGF21 및/또는 FGF19의 생체내 효과를 모방하고 FGF21-유사 신호전달 및/또는 F19-유사 신호전달을 유도하는 독특한 특성을 가지며; 일부 양태에서, 항체는 FGF21의 고유의 생물학적 기능과 일치하는 활성을 나타낸다. 이러한 특성으로 인해 본 개시내용의 항-KLB 항체는 FGF21 및/또는 FGF19와 관련된 대사 질환, 예를 들어 제2형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, NASH, 심혈관 질환 또는 대사 증후군의 치료, 및 FGF19 및/또는 FGF21의 생체내 효과를 모방하거나 향상시키는 것을 요구하는 임의의 질환, 장애 또는 상태의 치료에 유용하게 된다.
더욱 또 다른 양상에서, 예를 들어 임의의 상기 약학적 용도 또는 치료 방법을 위한 항-KLB 항체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 한 양태에서, 약학 조성물은 본원에 제공된 임의의 항-KLB 항체 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 다른 양태에서, 약학 조성물은 하나 이상의 추가 치료제를 추가로 포함한다.
본 개시내용의 항-KLB 항체는 단독으로 또는 치료를 위한 다른 작용제와 조합하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 항체는 하나 이상의 추가 치료제와 공-투여될 수 있다.
본 개시내용의 항-KLB 항체(및 임의의 추가 치료제)는 비경구, 폐내 및 비강내 투여를 포함하는 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있고, 국소 치료에 필요한 경우 병변내 투여가 가능하다. 비경구 주입에는 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여가 포함된다. 투여는, 부분적으로 투여가 단기인지 장기인지에 따라 임의의 적합한 경로, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사와 같은 주사에 의해 수행될 수 있다. 단일 투여 또는 여러 시점에서의 다중 투여, 볼루스 투여 및 펄스 주입을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 투여 일정이 본원에서 고려된다.
본 개시내용의 항-KLB 항체는 우수 의료 행위(Good Medical Practice)와 일치하는 방식으로 제형화, 투여 및 적용될 것이다. 이러한 맥락에서 고려되는 인자에는 치료할 특정 상태, 치료할 특정 포유동물, 개별 환자의 임상 상태, 장애의 원인, 작용제 전달 부위, 투여 방법, 투여 타이밍, 및 의료 종사자에게 알려진 기타 인자가 포함된다. 항-KLB 항체는 장애를 예방하거나 치료하기 위해 현재 사용되는 하나 이상의 작용제와 함께 또는 상기 작용제 없이 제형화될 수 있다. 이러한 추가 작용제의 효과량은 약학 조성물에 존재하는 양, 장애 또는 치료 유형, 및 기타 인자에 따라 달라진다. 상기 효과량은 일반적으로 본원에 기재된 것과 동일한 투여량 및 투여 경로로 사용되거나, 본원에 기재된 투여량의 약 1% 내지 99%로, 또는 다른 투여량으로, 및 경험적으로/임상적으로 적절하다고 결정된 임의의 경로에 의해 사용된다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, 본 개시내용의 항-KLB 항체의 적절한 투여량(단독으로 사용되거나 하나 이상의 다른 추가 치료제와 조합하여 사용되는 경우)은 치료할 질환의 유형, 치료 분자의 유형, 질환의 중증도 및 경과, 치료 분자가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 선행 치료, 환자의 임상 병력 및 치료 분자에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 따라 달라질 것이다. 치료 분자는 하나 또는 일련의 치료로 환자에게 적합하게 투여된다. 예를 들어, 일일 용량은 상기에서 언급한 인자에 따라, 약 1 ㎍/㎏ 내지 100 ㎎/㎏일 수 있다.
제조 물품
본 개시내용의 또 다른 양상에서, 상기 장애의 치료, 예방 및/또는 진단에 유용한 물질을 포함하는 제조 물품을 제공한다. 제조 물품은 용기, 및 용기 상에 있거나 용기와 결합된 표지 또는 포장 삽입물을 포함한다. 적합한 용기에는 예를 들어 병, 바이알, 주사기, IV 용액 주머니 등이 포함된다. 용기는 유리나 플라스틱 등 다양한 재료로 만들어질 수 있다. 용기는, 단독으로 또는 다른 조성물과 조합하여 질환의 치료, 예방 및/또는 진단에 유효한 조성물을 함유하며, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어, 용기는 피하 주사 바늘로 관통될 수 있는 마개가 있는 정맥 용액 주머니 또는 바이알일 수 있다). 조성물 중 하나 이상의 활성제는 본 개시내용의 항-KLB 항체이다. 표지 또는 패키지 삽입물은 해당 조성물이 선택된 상태를 치료하는 데 사용된다는 것을 가리킨다. 추가로, 제조 물품은 (a) 본 개시내용의 항-KLB 항체를 포함하는 조성물을 함유하는 제1 용기; 및 (b) 다른 세포독성제 또는 추가적인 치료제를 포함하는 조성물을 함유하는 제2 용기를 포함할 수 있다. 본 개시내용의 이러한 양태에서 제조 물품은 조성물이 특정 상태를 치료하는 데 사용될 수 있음을 나타내는 패키지 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 제조 물품은 약학적으로 허용되는 완충제를 함유하는 제2(또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 상업적인 관점과 사용자의 관점에서 볼 때, 필요에 따라 기타 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기를 비롯한 기타 물질을 추가로 포함할 수 있다.
실시예 및 시험 실시예
본 개시내용은 하기 실시예 및 시험 실시예를 참조하여 하기에 추가로 기재되지만, 이는 본 개시내용을 제한하지 않는다. 구체적인 조건이 명시되지 않은 본 개시내용의 실시예 및 시험 실시예의 실험 방법은 일반적으로 문헌[Antibodies: A Laboratory Manual and Molecular Cloning: A Laboratory Manual by Cold Spring Harbor Laboratory]과 같은 통상적인 조건 하에서, 또는 출발 물질 또는 상업용 제품의 제조사가 권장하는 조건 하에서 수행된다. 구체적인 출처가 명시되지 않은 시약은 시중에서 판매되는 통상적인 시약이다.
실시예 1: 재조합 세포주의 구성
인간 KLB&FGFR1c 복합체(인간 KLB 서열에 대해 Uniprot ID: Q86Z14를 참조하고, 인간 FGFR1c 서열에 대해 Uniprot ID: P11362를 참고한다), 사이노몰구스 원숭이 KLB&FGFR1c 복합체(사이노몰구스 원숭이 KLB 서열에 대해 Genebank ID: EHH53620.1을 참조하고, 사이노몰구스 원숭이 FGFR1c 서열에 대해 서열번호 1을 참고한다), 마우스 KLB&FGFR1c 복합체(마우스 KLB 서열에 대해 Uniprot Q99N32를 참조하고, 인간 FGFR1c에 대해 Uniprot ID: P16092를 참고한다), 및 인간 FGFR1c 단독을 발현하는 세포주를 구성하였다.
방법: 인간 KLB, 원숭이 KLB, 마우스 KLB, 인간 FGFR1c, 원숭이 FGFR1c 및 마우스 FGFR1c의 전장 유전자를 각각 렌티바이러스 발현 벡터 pCDH(System bioscience, 01. SBI. CD514B-1)에 클로닝하였으며, 여기서 상기 KLB의 바이러스 발현 벡터 및 FGFR1c의 바이러스 발현 벡터는 상이한 내성 유전자를 가지고 있으며, 상이한 종의 KLB 및 FGFR1c 바이러스를 패키징하였고, 3개의 플라스미드, 즉 pVSV-G, pCMV-dR8.91 및 pCDH-KLB 또는 pCDH-FGFR1c를 바이러스 패키징을 위해 HEK293T 세포(ATCC® CRL-11268)에 공동-형질감염시켰다. 상기 복합체를 과발현하는 세포주를 구성하기 위해, CHOK1(ATCC, CCL-61) 또는 HEK293(ATCC, CRL-1573) 세포주를, KLB 및 FGFR1c 유전자를 특정 비로 함유하는 패키징된 바이러스로 감염시켰다. 인간 FGFR1c를 과발현하는 세포주를 구성하기 위해, CHOK1 또는 HEK293 세포주를, FGFR1c 유전자를 함유하는 바이러스만으로 감염시켰다. 감염 48시간 후, 바이러스-함유 배양 상등액을 제거하고, 상응하는 항생제로 5일간 압박 스크리닝한 후, 유세포 분석법 분류에 의해 KLB&FGFR1c 복합체 또는 FGFR1c를 고도로 발현하는 CHOK1 또는 HEK293 단클론 세포를 획득하였다. 최종적으로, 재조합 세포, 예를 들어 CHOK1-hKLB&hFGFR1c, CHOK1-mKLB&mFGFR1c, CHOK1-hFGFR1c, CHOK1-hKLB, HEK293-hKLB, HEK293T-hKLB&hFGFR1c 등을 획득하였다.
사이노몰구스 원숭이 FGFR1c의 아미노산 서열:
서열번호 1
각주: 상기 서열에서, 신호 펩타이드(밑줄 그은 부분), 세포외 영역(밑줄 긋지 않은 부분), , 및 이 순차적으로 존재한다
인간 FGF21의 아미노산 서열:
HHHHHHHPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS
서열번호 76
인간 FGF19의 아미노산 서열:
HHHHHHLAFSDAGPHVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK
서열번호 77
실시예 2: 항-인간 β-클로소(KLB) 하이브리도마 단클론 항체의 제조
1. 마우스 면역화 및 하이브리도마 융합
본 개시내용의 실시예 1에서 구성된 인간 KLB&FGFR1c 복합체를 발현하는 재조합 세포주 CHOK1-hKLB&hFGFR1c 및 마우스 KLB&FGFR1c 복합체를 과발현하는 재조합 세포주 CHOK1-mKLB&mFGFR1c를, SJL 또는 Balb/C 마우스를 면역화하기 위해 혼합하거나 또는 마우스의 교차-면역화에 사용하였으며, 상기 면역화를 복강내 주사에 의해 수행하였고, 역가가 원하는 값에 도달할 때까지 상기 마우스를 수회 면역화하였으며; 이어서 혈청 내 항체 역가가 높은 마우스를 비장 세포 융합을 위해 선택하고, CHOK1-hKLB&hFGFR1c 재조합 세포주에 특이적으로 결합하지만 인간 FGFR1c 재조합 세포주 CHOK1-hFGFR1c에는 결합하지 않는 클론을 선택하였다. 양호한 활성을 갖는 하이브리도마 세포주 mAb-99 및 mAb-18을 스크리닝에 의해 획득하고 서열 증폭을 수행하였다. 대수 증식기의 하이브리도마 세포를 수확하고, 키트 설명서의 절차에 따라 Trizol(Invitrogen, Cat No. 15596-018)로 RNA를 추출하고 PrimeScript™ 역전사 키트(Takara, Cat No. 2680A)를 사용하여 역전사시켰다. 역전사를 통해 획득한 cDNA를 마우스 Ig-프라이머 세트(Novagen, TB326 Rev.B 0503)를 사용하여 PCR 증폭시키고, 이어서 서열분석 업체에 보내 서열분석을 의뢰하였으며, 획득된 하이브리도마 클론, 쥐 항체 mAb-99 및 mAb-18의 가변 영역 서열은 하기와 같았다:
> mAb-99의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
EVQLQQSGAELVRPGSSVKMSCKTSGYTFTNYGINWVKQRPRQGLEWIGYIYIGNGDIEYNAKFKGKATLTSDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAIYFCARGRGLGHFDVWGTGTTVTVSS
서열번호 2
> mAb-99의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
DVQITQSPSYLAASPGETITINCRASKSISKFLAWFQEKPGKTNKLLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISGLEPEDFAMYYCQQHNEYPWTFGGGTKLEIK
서열번호 3
> mAb-18의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
QVQLQQSGPELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYAMHWVKQTHAKSLEWIGVISTYSGTTNYNQNFKGKATVTVDKSSSTAYMELARLTSEDSAIYYCARSGPLDYWGQGTSLTVSS
서열번호 4
> mAb-18의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
ENVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCRASSSVSSSYLHWYQQKSGASPKLWIYSTSNLASGVPERFSGSGSGTSYSLTISSVEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGSGTKLEIK
서열번호 5
쥐 항체 mAb-99 및 mAb-18의 CDR 서열을 표 4에 나타낸다:
| 항체 번호 | 중쇄 | 경쇄 | ||
| mAb-99 | HCDR1 | NYGIN (서열번호 6) |
LCDR1 | RASKSISKFLA (서열번호 9) |
| HCDR2 | YIYIGNGDIEYNAKFKG (서열번호 7) |
LCDR2 | SGSTLQS (서열번호 10) |
|
| HCDR3 | GRGLGHFDV(서열번호 8) | LCDR3 | QQHNEYPWT (서열번호 11) |
|
| mAb-18 | HCDR1 | DYAMH (서열번호 12) |
LCDR1 | RASSSVSSSYLH (서열번호 15) |
| HCDR2 | VISTYSGTTNYNQNFKG (서열번호 13) |
LCDR2 | STSNLAS (서열번호 16) |
|
| HCDR3 | SGPLDY(서열번호 14) | LCDR3 | QQYSGYPLT (서열번호 17) |
|
각주: 표에서 CDR의 아미노산 잔기를, 카밧 넘버링 방식을 사용하여 식별하고 각주를 달았다.
2. 인간 천연 파지 라이브러리의 스크리닝
인간 PBMC, 비장 및 림프절 조직으로부터 B 세포를 단리하고 RNA를 추출하여 천연 단쇄 파지 항체 라이브러리를 구성하였다. 상기 구성된 천연 단쇄 파지 항체 라이브러리를 패키징하여 파지 입자를 형성시킨 후, 인간 KLB를 과발현하는 재조합 세포주를 사용하여 패닝을 수행하고, CHOK1-hKLB(실시예 1 참조) 및 HEK293T-hKLB(실시예 1 참조) 재조합 세포를 사용하여 교차-패닝을 수행하였다. 3회 패닝 후 단쇄 항체를 함유한 파지를 단클론 콜로니 중에서 선택하고, 인간 KLB 단백질에 대한 파지의 결합 활성을 ELISA에 의해 시험하였다. 양성 클론을 선택하고, 이의 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 각각 항체의 중쇄/경쇄 불변 영역(서열번호 22에 제시된 중쇄 불변 영역, 및 서열번호 23에 제시된 경쇄 불변 영역)과 융합시켜, IgG 항체를 구성하였다. CHOK1-hKLB&FGFR1c, CHOK1-사이노KLB&FGFR1c, 및 CHOK1-hFGFR1c에 대한 항체의 결합 활성을 검출하였으며, 최종적으로 생물학적 활성이 양호한 완전한 인간 항체 hAb-23을 획득하였다. 구체적인 서열은 하기와 같다:
> hAb-23의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARELVSYYYGMDVWGQGTMVTVSS
서열번호 18
> hAb-23의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYDNLPLTFGGGTKVEIK
서열번호 19
> hAb-23의 중쇄의 아미노산 서열
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARELVSYYYGMDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 20
> hAb-23의 경쇄의 아미노산 서열
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYDNLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열번호 21
> 인간 IgG1 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열(돌연변이 L234A 및 L235A 함유)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 22
> 인간 κ 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열번호 23
인간-유래된 항체 hAb-23의 CDR을 표 5에 나타낸다.
| 항체 번호 | 중쇄 | 경쇄 | ||
| hAb-23 | HCDR1 | SYAIS (서열번호 24) |
LCDR1 | QASQDISNYLN (서열번호 27) |
| HCDR2 | GIIPIFGTANYAQKFQG (서열번호 25) |
LCDR2 | DASNLET (서열번호 28) |
|
| HCDR3 | ELVSYYYGMDV(서열번호 26) | LCDR3 | QQYDNLPLT (서열번호 29) |
|
각주: 표에서 항체 CDR의 아미노산 잔기를, 카밧 넘버링 방식을 사용하여 식별하고 각주를 달았다.
실시예 3: 항-인간 KLB 쥐 항체의 인간화
인간 항체 중쇄 및 경쇄 가변 영역 생식세포계열 유전자 데이터베이스를 MOE 소프트웨어와 비교함으로써, 상동성이 높은 중쇄 및 경쇄 가변 영역 생식세포계열 유전자를 주형으로서 선택하고, 쥐 항체의 CDR을 상응하는 인간화 주형에 접목하여 하기의 순서로 가변 영역 서열을 형성시키고: FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4, 이어서 상기 가변 영역 서열을 인간 불변 영역 서열과 융합시켜 인간화 항체를 획득하였다. 쥐 항체 mAb-99 및 mAb-18의 인간화를 하기에 예시적으로 기재한다:
1. mAb-99의 인간화
IGHV1-3*01/IGHJ6*01을 항체 mAb-99 인간화 중쇄의 주형으로서 선택하였으며, 즉 인간 생식세포계열 중쇄 IGHV1-3*01의 FR1, FR2 및 FR3, 및 IGHJ6*01의 JH6 영역(FR4로서)을 인간화 항체 중쇄 프레임워크 영역으로서 선택하였으며; 경쇄 주형은 IGKV1-39*01/IGKJ4*01이었다, 즉 인간 생식세포계열 경쇄 IGKV1-39*01의 FR1, FR2 및 FR3, 및 IGKJ4*01의 JK4 영역(FR4로서)을 인간화 항체 경쇄 프레임워크 영역으로서 선택하였다. 먼저, 쥐 항체 mAb-99의 CDR 영역을 상기 선택된 인간화 주형에 접목시켜 인간화 주형의 CDR 영역을 대체하여, mAb-99의 인간화 항체 가변 영역 서열을 획득하였다. 이어서, 인간화 항체의 중쇄 가변 영역의 1, 24, 44, 71 및/또는 91번 위치(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)의 아미노산 잔기를 역 돌연변이시키고, 경쇄 가변 영역의 2, 4, 36, 38, 43, 44 및/또는 58번 위치(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)의 아미노산 잔기를 역 돌연변이시켜, 인간화 항체 중/경쇄 가변 영역을 획득하였다. 구체적인 서열은 하기와 같다:
> hAb99VH1의 아미노산 서열(접목 + Q1E, R71S)
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGINWVRQAPGQRLEWMGYIYIGNGDIEYNAKFKGRVTITSDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRGLGHFDVWGQGTTVTVSS
서열번호 30
> hAb99VH2의 아미노산 서열(접목 + Q1E, R44G, R71S)
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGINWVRQAPGQGLEWMGYIYIGNGDIEYNAKFKGRVTITSDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRGLGHFDVWGQGTTVTVSS
서열번호 31
> hAb99VH3의 아미노산 서열(접목 + Q1E, A24T, R44G, R71S, Y91F)
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFTNYGINWVRQAPGQGLEWMGYIYIGNGDIEYNAKFKGRVTITSDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARGRGLGHFDVWGQGTTVTVSS
서열번호 32
> hAb99VL1의 아미노산 서열(접목 + P44N)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASKSISKFLAWYQQKPGKANKLLIYSGSTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHNEYPWTFGGGTKVEIK
서열번호 33
> hAb99VL2의 아미노산 서열(접목 + Y36F, A43T, P44N)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASKSISKFLAWFQQKPGKTNKLLIYSGSTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHNEYPWTFGGGTKVEIK
서열번호 34
> hAb99VL3의 아미노산 서열(접목 + I2V, M4I, Y36F, A43T, P44N)
DVQITQSPSSLSASVGDRVTITCRASKSISKFLAWFQQKPGKTNKLLIYSGSTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHNEYPWTFGGGTKVEIK
서열번호 35
> hAb99VL4의 아미노산 서열(접목 + I2V, M4I, Y36F, Q38E, A43T, P44N, V58I)
DVQITQSPSSLSASVGDRVTITCRASKSISKFLAWFQEKPGKTNKLLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHNEYPWTFGGGTKVEIK
서열번호 36
또한, 항체 중쇄 가변 영역 중 HCDR2(YIYIGNGDIEYNAKFKG)의 6번 및 7번 위치의 아미노산 잔기를 NG에서 NV, NL 또는 QG로 돌연변이시켜 새로운 인간화 항체 가변 영역 서열을 획득하였다. 구체적인 서열은 하기와 같다:
> hAb99VH1-NV의 아미노산 서열
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGINWVRQAPGQRLEWMGYIYIGNVDIEYNAKFKGRVTITSDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRGLGHFDVWGQGTTVTVSS
서열번호 40
> hAb99VH2-NV의 아미노산 서열
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGINWVRQAPGQGLEWMGYIYIGNVDIEYNAKFKGRVTITSDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRGLGHFDVWGQGTTVTVSS
서열번호 41
> hAb99VH3-NV의 아미노산 서열
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFTNYGINWVRQAPGQGLEWMGYIYIGNVDIEYNAKFKGRVTITSDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARGRGLGHFDVWGQGTTVTVSS
서열번호 42
> hAb99VH1-NL의 아미노산 서열
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGINWVRQAPGQRLEWMGYIYIGNLDIEYNAKFKGRVTITSDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRGLGHFDVWGQGTTVTVSS
서열번호 43
> hAb99VH2-NL의 아미노산 서열
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGINWVRQAPGQGLEWMGYIYIGNLDIEYNAKFKGRVTITSDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRGLGHFDVWGQGTTVTVSS
서열번호 44
> hAb99VH3-NL의 아미노산 서열
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFTNYGINWVRQAPGQGLEWMGYIYIGNLDIEYNAKFKGRVTITSDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARGRGLGHFDVWGQGTTVTVSS
서열번호 45
> hAb99VH1-QG의 아미노산 서열
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGINWVRQAPGQRLEWMGYIYIGQGDIEYNAKFKGRVTITSDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRGLGHFDVWGQGTTVTVSS
서열번호 46
> hAb99VH2-QG의 아미노산 서열
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGINWVRQAPGQGLEWMGYIYIGQGDIEYNAKFKGRVTITSDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRGLGHFDVWGQGTTVTVSS
서열번호 47
> hAb99VH3-QG의 아미노산 서열
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFTNYGINWVRQAPGQGLEWMGYIYIGQGDIEYNAKFKGRVTITSDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARGRGLGHFDVWGQGTTVTVSS
서열번호 48
hAb99 중쇄 가변 영역의 HCDR2 돌연변이된 서열을 하기 표 6에 나타낸다:
| 중쇄 가변 영역 | 가변 영역 서열번호 | 상응하는 HCDR2 서열 (카밧 넘버링 방식) |
| hAb99VH1-NV | 서열번호 40 | YIYIGNVDIEYNAKFKG (서열번호 37) |
| hAb99VH2-NV | 서열번호 41 | YIYIGNVDIEYNAKFKG (서열번호 37) |
| hAb99VH3-NV | 서열번호 42 | YIYIGNVDIEYNAKFKG (서열번호 37) |
| hAb99VH1-NL | 서열번호 43 | YIYIGNLDIEYNAKFKG (서열번호 38) |
| hAb99VH2-NL | 서열번호 44 | YIYIGNLDIEYNAKFKG (서열번호 38) |
| hAb99VH3-NL | 서열번호 45 | YIYIGNLDIEYNAKFKG (서열번호 38) |
| hAb99VH1-QG | 서열번호 46 | YIYIGQGDIEYNAKFKG (서열번호 39) |
| hAb99VH2-QG | 서열번호 47 | YIYIGQGDIEYNAKFKG (서열번호 39) |
| hAb99VH3-QG | 서열번호 48 | YIYIGQGDIEYNAKFKG (서열번호 39) |
상기 중쇄 가변 영역을 중쇄 불변 영역(서열번호 22)에 융합시키고, 경쇄 가변 영역을 경쇄 불변 영역(서열번호 23에 제시된)에 융합시켜 항-KLB 항체를 구성하고, CHOK1-hKLB에 대한 상기 획득된 항체의 결합 활성을 검출하였다(실험 방법에 대해서 본 개시내용의 시험 실시예 2를 참고한다). 실험 결과를 표 7에 나타낸다.
| 항체 | 중쇄 가변 영역 (VH) | 경쇄 가변 영역 (VL) | EC 50 (nM) |
| hAb99-1 | 서열번호 30 | 서열번호 33 | 0.61 |
| hAb99-2 | 서열번호 30 | 서열번호 34 | 0.35 |
| hAb99-3 | 서열번호 30 | 서열번호 35 | 0.35 |
| hAb99-4 | 서열번호 30 | 서열번호 36 | 0.37 |
| hAb99-5 | 서열번호 31 | 서열번호 33 | 0.50 |
| hAb99-6 | 서열번호 31 | 서열번호 34 | 0.41 |
| hAb99-7 | 서열번호 31 | 서열번호 35 | 0.35 |
| hAb99-8 | 서열번호 31 | 서열번호 36 | 0.39 |
| hAb99-9 | 서열번호 32 | 서열번호 33 | 0.47 |
| hAb99-10 | 서열번호 32 | 서열번호 34 | 0.36 |
| hAb99-11 | 서열번호 32 | 서열번호 35 | 0.33 |
| hAb99-12 | 서열번호 32 | 서열번호 36 | 0.33 |
| hAb99-13 | 서열번호 40 | 서열번호 34 | 0.32 |
| hAb99-14 | 서열번호 43 | 서열번호 34 | 0.60 |
| hAb99-15 | 서열번호 46 | 서열번호 34 | 0.41 |
| hAb99-16 | 서열번호 41 | 서열번호 34 | 0.47 |
| hAb99-17 | 서열번호 44 | 서열번호 34 | 0.43 |
| hAb99-18 | 서열번호 47 | 서열번호 34 | 0.43 |
| hAb99-19 | 서열번호 42 | 서열번호 34 | 0.38 |
| hAb99-20 | 서열번호 45 | 서열번호 34 | 0.41 |
| hAb99-21 | 서열번호 48 | 서열번호 34 | 0.45 |
| mAb99-hIgG1 | 서열번호 2 | 서열번호 3 | 0.97 |
각주: mAb99-hIgG1은 mAb의 키메라 항체이고, 이의 중쇄 불변 영역은 서열번호 22에 제시되며, 이의 경쇄 불변 영역은 서열번호 23에 제시된다.
예시적으로, 항체 hAb99-13의 경쇄 및 중쇄 서열은 하기와 같다:
> 항체 hAb99-13의 중쇄의 아미노산 서열
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGINWVRQAPGQRLEWMGYIYIGNVDIEYNAKFKGRVTITSDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRGLGHFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 78
> 항체 hAb99-13 경쇄의 아미노산 서열
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASKSISKFLAWFQQKPGKTNKLLIYSGSTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHNEYPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열번호 79
2. mAb-18의 인간화
항체 mAb-18 인간화 중쇄의 주형은 IGHV1-3*01/IGHJ6*01이었으며, 즉 인간 생식세포계열 중쇄 IGHV1-3*01의 FR1, FR2 및 FR3, 및 IGHJ6*01의 JH6 영역(FR4로서)을 인간화 항체 중쇄 프레임워크 영역으로서 선택하였으며; 경쇄 주형은 IGKV6-21*02/JGKJ2*01 또는 IGKV3-20*02/JGKJ2*01이었다, 즉 인간 생식세포계열 경쇄 IGKV6-21*02 또는 IGKV3-20*02 및 JGKJ2*01의 JK2 영역(FR4로서)을 인간화 항체 경쇄 프레임워크 영역으로서 선택하였다. 먼저, 쥐 항체 mAb-18의 CDR 영역을 상기 선택된 인간화 주형에 접목시켜 인간화 주형의 CDR 영역을 대체하여, mAb-18의 인간화 항체 가변 영역 서열을 획득하였다. 추가로, 인간화 항체의 중쇄 가변 영역의 24, 48, 67, 69, 71, 및/또는 73번 위치(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)의 아미노산 잔기를 역 돌연변이시키고, 1번 위치(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)의 아미노산 잔기를 또한 돌연변이시킬 수 있었으며, 경쇄 가변 영역의 2, 45, 47, 49, 58, 및/또는 71번 위치(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)의 아미노산 잔기를 역 돌연변이시켜, 인간화 항체 가변 영역을 획득하였다. 구체적인 서열은 하기와 같다:
> hAb18VH1의 아미노산 서열(접목 + Q1E, R71V, T73K)
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMHWVRQAPGQRLEWMGVISTYSGTTNYNQNFKGRVTITVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGPLDYWGQGTTVTVSS
서열번호 49
> hAb18VH2의 아미노산 서열(접목 + Q1E, A24G, I69V, R71V, T73K)
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKGSGYTFTDYAMHWVRQAPGQRLEWMGVISTYSGTTNYNQNFKGRVTVTVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGPLDYWGQGTTVTVSS
서열번호 50
> hAb18VH3의 아미노산 서열(접목 + Q1E, A24G, M48I, V67A, I69V, R71V, T73K)
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKGSGYTFTDYAMHWVRQAPGQRLEWIGVISTYSGTTNYNQNFKGRATVTVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGPLDYWGQGTTVTVSS
서열번호 51
> hAb18VL1의 아미노산 서열(접목(IGKV6-21*02/JGKJ2*01) + L47W, K49Y)
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASSSVSSSYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 52
> hAb18VL2의 아미노산 서열(접목(IGKV6-21*02/JGKJ2*01) + I2N, L47W, K49Y, F71Y)
ENVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASSSVSSSYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 53
> hAb18VL3의 아미노산 서열(접목(IGKV3-20*02/JGKJ2*01) + R45K, L47W, I58V)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVSSSYLHWYQQKPGQAPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 54
> hAb18VL4의 아미노산 서열(접목(IGKV3-20*02/JGKJ2*01) + I2N, R45K, L47W, I58V, F71Y)
ENVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVSSSYLHWYQQKPGQAPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISRLEPEDFAVYQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 55
또한, hAb18VL2의 경쇄 가변 영역의 LCDR1의 2, 3, 5, 6, 7 및 8번 위치의 아미노산 잔기(RASSSVSSSYLH(서열번호 15)) 및 LCDR2의 4번 위치의 아미노산 잔기(STSNLAS(서열번호 16))를 돌연변이시켜 새로운 인간화 항체 경쇄 가변 영역 서열을 획득하였다. 구체적인 서열은 하기와 같다:
> hAb18VL2-1의 아미노산 서열
ENVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASSSVSSSYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTS Q LASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 56
> hAb18VL2-2의 아미노산 서열
ENVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRA T SSVSSSYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTS Q LASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 57
> hAb18VL2-3의 아미노산 서열
ENVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCR V SSSVSSSYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTS Q LASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 58
> hAb18VL2-4의 아미노산 서열
ENVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASSSVS T SYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTS Q LASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 59
> hAb18VL2-5의 아미노산 서열
NVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASSSV T SSYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTS Q LASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 60
> hAb18VL2-6의 아미노산 서열
ENVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASSS L SSSYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTS Q LASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 61
> hAb18VL2-7의 아미노산 서열
ENVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASS N VSSSYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTS Q LASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 62
> hAb18VL2-8의 아미노산 서열
ENVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRA T SSVSSSYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 63
> hAb18VL2-9의 아미노산 서열
ENVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCR V SSSVSSSYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 64
> hAb18VL2-10의 아미노산 서열
ENVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASSSVS T SYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 65
> hAb18VL2-11의 아미노산 서열
ENVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASSSV T SSYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 66
> hAb18VL2-12의 아미노산 서열
ENVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASSS L SSSYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 67
> hAb18VL2-13의 아미노산 서열
ENVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASS N VSSSYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGQGTKLEIK
서열번호 68
hAb18VL2 경쇄 가변 영역의 돌연변이된 서열의 CDR을 하기 표 8에 나타낸다:
| 경쇄 가변 영역 | LCDR1 | LCDR2 | LCDR3 |
| hAb18VL2 | RASSSVSSSYLH (서열번호 15) |
STSNLAS (서열번호 16) |
QQYSGYPLT (서열번호 17) |
| hAb18VL2-1 | RASSSVSSSYLH (서열번호 15) |
STSQLAS (서열번호 75) |
QQYSGYPLT (서열번호 17) |
| hAb18VL2-2 | RATSSVSSSYLH (서열번호 69) |
STSQLAS (서열번호 75) |
QQYSGYPLT (서열번호 17) |
| hAb18VL2-3 | RVSSSVSSSYLH (서열번호 70) |
STSQLAS (서열번호 75) |
QQYSGYPLT (서열번호 17) |
| hAb18VL2-4 | RASSSVSTSYLH (서열번호 71) |
STSQLAS (서열번호 75) |
QQYSGYPLT (서열번호 17) |
| hAb18VL2-5 | RASSSVTSSYLH (서열번호 72) |
STSQLAS (서열번호 75) |
QQYSGYPLT (서열번호 17) |
| hAb18VL2-6 | RASSSLSSSYLH (서열번호 73) |
STSQLAS (서열번호 75) |
QQYSGYPLT (서열번호 17) |
| hAb18VL2-7 | RASSNVSSSYLH (서열번호 74) |
STSQLAS (서열번호 75) |
QQYSGYPLT (서열번호 17) |
| hAb18VL2-8 | RATSSVSSSYLH (서열번호 69) |
STSNLAS (서열번호 16) |
QQYSGYPLT (서열번호 17) |
| hAb18VL2-9 | RVSSSVSSSYLH (서열번호 70) |
STSNLAS (서열번호 16) |
QQYSGYPLT (서열번호 17) |
| hAb18VL2-10 | RASSSVSTSYLH (서열번호 71) |
STSNLAS (서열번호 16) |
QQYSGYPLT (서열번호 17) |
| hAb18VL2-11 | RASSSVTSSYLH (서열번호 72) |
STSNLAS (서열번호 16) |
QQYSGYPLT (서열번호 17) |
| hAb18VL2-12 | RASSSLSSSYLH (서열번호 73) |
STSNLAS (서열번호 16) |
QQYSGYPLT (서열번호 17) |
| hAb18VL2-13 | RASSNVSSSYLH (서열번호 74) |
STSNLAS (서열번호 16) |
QQYSGYPLT (서열번호 17) |
상기 중쇄 가변 영역을 중쇄 불변 영역(서열번호 22에 제시됨)에 융합시키고, 상기 경쇄 가변 영역을 경쇄 불변 영역(서열번호 23에 제시됨)에 융합시켜 항-KLB 항체를 구성하고, CHOK1-hKLB에 대한 획득된 항체의 결합 활성을 검출하였다(실험방법에 대해서 본 개시내용의 시험 실시예 2를 참고한다). 실험 결과를 표 9에 나타낸다.
| 항체 | 중쇄 가변 영역 (VH) | 경쇄 가변 영역 (VL) | EC 50 (nM) |
| hAb18-1 | 서열번호 49 | 서열번호 52 | 1.34 |
| hAb18-2 | 서열번호 49 | 서열번호 53 | 1.58 |
| hAb18-3 | 서열번호 50 | 서열번호 52 | 1.9 |
| hAb18-4 | 서열번호 50 | 서열번호 53 | 2 |
| hAb18-5 | 서열번호 51 | 서열번호 52 | 1.8 |
| hAb18-6 | 서열번호 51 | 서열번호 53 | 2 |
| hAb18-7 | 서열번호 49 | 서열번호 56 | 2.4 |
| hAb18-8 | 서열번호 49 | 서열번호 57 | 2.5 |
| hAb18-9 | 서열번호 49 | 서열번호 58 | 2.4 |
| hAb18-10 | 서열번호 49 | 서열번호 59 | 2.7 |
| hAb18-11 | 서열번호 49 | 서열번호 60 | 2.7 |
| hAb18-12 | 서열번호 49 | 서열번호 61 | 1.9 |
| hAb18-13 | 서열번호 49 | 서열번호 62 | 5.4 |
| hAb18-14 | 서열번호 49 | 서열번호 63 | 1.6 |
| hAb18-15 | 서열번호 49 | 서열번호 64 | 1.9 |
| hAb18-16 | 서열번호 49 | 서열번호 65 | 2.4 |
| hAb18-17 | 서열번호 49 | 서열번호 66 | 1.8 |
| hAb18-18 | 서열번호 49 | 서열번호 67 | 1.7 |
| hAb18-19 | 서열번호 49 | 서열번호 68 | 4.1 |
| mAb18-hIgG1 | 서열번호 4 | 서열번호 5 | 2.16 |
각주: mAb18-hIgG1은 mAb18의 키메라 항체이며, 이의 중쇄 불변 영역은 서열번호 22에 제시되고, 이의 경쇄 불변 영역은 서열번호 23에 제시된다.
예시적으로, 항체 hAb18-8의 경쇄 및 중쇄 서열은 하기와 같다:
> 항체 hAb18-8의 중쇄의 아미노산 서열
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAMHWVRQAPGQRLEWMGVISTYSGTTNYNQNFKGRVTITVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGPLDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 80
> 항체 hAb18-8의 경쇄의 아미노산 서열
ENVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRATSSVSSSYLHWYQQKPDQSPKLWIYSTSQLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYSGYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열번호 81
실시예 4. 항체의 제조
1. 항체의 분자 클로닝
설계된 항체 서열을 코돈 최적화하여 인간 코돈 선호도를 갖는 암호화 유전자 서열을 생성시키고, 프라이머를 설계하고, PCR에 의해 각 항체의 VH/VK 유전자 단편을 구성하고 발현 벡터 pHr(신호 펩타이드 및 불변 영역 유전자(CH1-FC/CL) 단편을 갖는다)과 상동 재조합하였다. 따라서, 항체 전장 발현 플라스미드 VH-CH1-FC-pHr/VK-CL-pHr을 구성하였다.
2. 항체의 발현 및 정제
HEK293E 세포를, 항체의 중쇄 및 경쇄를 1:1.5의 비로 발현하는 플라스미드로 형질감염시키고, 6일 후에 발현 상등액을 수집하고, 고속 원심분리시켜 불순물을 제거하고, Protein A 컬럼을 사용하여 정제시켰다. A280 판독값이 기준선으로 떨어질 때까지 컬럼을 PBS로 세척하였다. 표적 단백질을 100 mM 아세트산(pH 3.0)으로 용출시키고 1 M Tris-HCl(pH 8.0)로 중화시켰다. 용출된 샘플을 적절하게 농축시키고, PBS로 평형화된 젤 크로마토그래피 Superdex200(GE)에 의해 추가로 정제시켜 응집체를 제거하고, 단량체 피크가 있는 용출물을 수집하여 나중에 사용하기 위해 분액하였다.
생화학적 시험 방법을 통한 본 개시내용 항체의 기술적 효과의 검증
시험 실시예 1: BIAcore에 의한 항-hKLB 항체의 친화성 검출
Protein A 바이오센서 칩(Cat. # 29127556, GE)이 항체를 친화성 포획하게 하고, 이어서 일정 농도의 hKLB(R&D, Cat. # 5889-KB)를 칩 표면을 통해 흐르게 하였다. 반응 신호를 Biacore T200 장비를 사용하여 실시간으로 검출하여 결합 및 해리 곡선을 획득하였다. 각 실험 주기에서 해리가 완료된 후, 바이오센서 칩을 재생을 위해 Glycine1.5(Cat. # BR-1003-54, GE)로 세척하였다. 항체 친화성 데이터를 획득하기 위해 1:1 모델을 사용하여 데이터를 피팅하였으며, 구체적인 실험 결과를 하기 표 10에 나타낸다.
| 항체 | ka (1/Ms) | kd (1/s) | KD (M) |
| hAb99-13 | 2.98E+05 | 6.26E-04 | 2.10E-09 |
| hAb18-8 | 1.06E+05 | 1.03E-04 | 9.77E-10 |
| hAb-23 | 2.47E+05 | 4.91E-05 | 1.99E-10 |
실험 결과는 본 개시내용의 항체가 인간 KLB에 대해 양호한 결합 기능을 가짐을 보여준다.
시험 실시예 2: 유세포 분석법에 의한 세포막 표면상의 KLB에 대한 항체 결합 검출
각각 인간 KLB 및 원숭이 KLB를 과발현하는 CHOK1 세포주 CHOK1-hKLB 및 CHOK1-사이노KLB(구체적인 제조 절차에 대해서 실시예 1을 참고한다)에 대한 항체의 결합 능력을 유세포 분석법에 의해 검출하였다. 구체적인 절차는 하기와 같았다: 상기 세포를 10% FBS-함유 IMDM 배지에서 배양하고 37℃ 및 5% CO2에서 2일 동안 배양기에서 배양하였다. 이어서, 세포를 웰당 1 x 105 세포/웰로 세포 플레이트에 첨가하고, 300 g에서 5분 동안 원심분리하고, 이어서 1% BSA로 1회 세척하였다. 구배 희석된 항체를 웰당 100 ㎕씩 세포 플레이트에 첨가하고, 혼합물을 4℃에서 1시간 동안 배양하고 1% BSA로 1회 세척하였다. 희석된(1:400) APC-염소 항-인간 IgG Fc 형광 2차 항체를 웰당 100 ㎕로 첨가하고, 생성된 혼합물을 4℃에서 1시간 동안 배양하였다. 플레이트를 1% BSA로 3회 세척하고, PBS를 웰당 100 ㎕로 첨가하고, 플레이트를 판독하였다. 실험 결과를 하기 표 11에 나타낸다.
| 항체 | 인간에의 결합에 대한 EC50 (nM) | 원숭이 KLB에의 결합에 대한 EC50 (nM) |
| hAb99-13 | 0.44±0.01 | 0.27±0.06 |
| hAb18-8 | 1.93±0.6 | 1.90±0.35 |
| hAb-23 | 0.39±0.09 | 0.13±0.04 |
실험 결과는 본 개시내용의 항체 hAb99-13, hAb18-8 및 hAb-23이 모두 세포막 표면상의 인간 KLB 및 원숭이 KLB에 강한 결합 능력으로 결합할 수 있음을 나타낸다.
시험 실시예 3: KLB에의 결합에 대한 항체와 FGF19/FGF21의 경쟁
Bio-FGF21/Bio-FGF19(FGF21 및 FGF19를 비오틴 표지화 키트(Biotin Labeling Kit)-NH2(DOJINDO Molecular Technologies Inc., LK03에서 입수할 수 있다)로 비오틴 표지화하여 획득하였으며, 여기서 FGF21은 서열번호 76에 제시되고 FGF19는 서열번호 77에 제시된다)를 SA 센서에 2 ㎍/㎖의 농도로 고정화하고(80초 동안 배양), 이어서 상기 센서를 180초의 결합을 위해, KLB(R&D, 5889-KB-1 ㎎) 또는 KLB + 항체 프리믹스(적어도 15분 동안 사전-배양)를 함유하는 샘플 웰로 옮겼다. 반응 신호를 ForteBio OCTET HTX 장비를 사용하여 실시간으로 검출하여 결합 곡선을 획득하였다. 실험 결과를 하기 표 12에 나타낸다.
| 군 | FGF21 | FGF19 |
| hAb99-13+KLB | 108% | 99% |
| hAb18-8+KLB | 108% | 101% |
| hAb-23+KLB | 113% | 99% |
| KLB | 100% | 100% |
각주: Bio-FGF21 또는 Bio-FGF19에 대한 KLB 단백질 단독의 결합 신호를 100%로 정의한다.
실험 결과는 본 개시내용의 hAb99-13, hAb18-8 및 hAb-23 중 어느 것도 KLB에의 결합에 대해 FGF21 또는 FGF19와 경쟁하지 않는다는 것을 나타낸다.
시험 실시예 4: 재조합 세포주 CHOK1-hKLB&hFGFR1c에 대한 항체의 효능 활성 검출
시험 항체에 의한 재조합 세포주 CHOK1-hKLB&hFGFR1c(실시예 1 참조)의 활성화를 시험관내 분석에 의해 결정하였다. GAL4 결합 요소에 의해 조절되는 루시퍼라제 리포터 유전자 및 GAL4-Elk1 융합 단백질 유전자를 재조합 세포주에 일시적으로 형질감염시키고, 활성화 활성을 EC50 값으로 표현하였다. 실험 절차는 하기와 같았다:
실험 1일차에, CHOK1-hKLB&hFGFR1c 세포를 10% FBS, 10 ㎍/㎖ 퓨로마이신, 및 800 ㎍/㎖ G418을 함유하는 DME/F12 배지를 사용하여 15000 세포/웰의 밀도로 96-웰 플레이트(Corning, #3903)에 시딩하여 웰당 100 ㎕의 세포 현탁액을 형성시키고, 96-웰 플레이트의 주변에는 오직 100 ㎕의 PBS만을 첨가하였다. 플레이트를 37℃ 및 5% CO2의 세포 배양기에서 밤새 배양하였다. 2일차에, 배지를 버리고 단식(starvation) 배지(FBS가 없는 DME/F12)를 웰당 50 ㎕씩 첨가하였다. 세포를 리포펙타민 3000을 사용하여 1:6 비로 pFA2-Elk1 및 pFR-Luc로 형질감염시켰으며, 이때 플라스미드와 리포펙타민 3000의 혼합물 10 ㎕를 각 웰에 첨가하였다. 형질감염 후, 플레이트를 37℃ 및 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 3일차에, 단식 배지로 구배 희석된 시험 항체를 웰당 60 ㎕로 첨가하였다. 항체의 최종 농도는 200 nM부터 4배 구배 희석하여 획득된 9개 농도점이었다. 단식 배지를 블랭크 대조용 웰에 첨가하였다. 플레이트를 37℃ 및 5% CO2의 세포 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 4일차에, 96-웰 세포 배양 플레이트를 꺼내고, One-glo 루시퍼라제 분석 시스템(신호 활성화를 위한 형광 검출 시약, Promega, E6120)을 웰당 55 ㎕씩 첨가하고, 다기능 마이크로플레이트 판독기(EnVision2015, PerkinElmer)를 사용하여 발광 신호 값을 판독하였다. 항체의 로그 농도 및 신호 값에 기반하여 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism)을 사용하여 곡선 피팅(Curve Fitting)을 수행하고 EC50 값을 계산하였다. 활성화 배수 = 샘플의 최대 신호 값/블랭크 대조군의 신호 값; 최고 농도에서 항체에 의한 KLB&FGFR1c 수용체의 활성화 정도와 관련하여, 더 큰 활성화 배수는 더 큰 활성화 정도를 나타냈다. MK3655(WO2015112886A2의 항-KLB 항체 h5H23 참조)를 대조군으로서 실험에 사용하였으며, 실험 결과를 하기 표 13에 나타낸다.
| 항체 | EC50 (nM) | 활성화 배수 |
| hAb99-13 | 0.19 | 14.28 |
| MK3655 | 0.64 | 5.62 |
실험 결과는 본 개시내용의 항체가 CHOK1-hKLB&hFGFR1c 세포에 대해 유의미한 활성화 활성을 가지며, 활성화 정도가 대조용 분자의 경우보다 더 강하다는 것을 나타낸다.
시험 실시예 5: 인간 KLB 및 인간 FGFR1c를 발현하는 HEK293T에 대한 항체의 효능 활성 검출
시험 항체에 의한, HEK293T-hKLB&hFGFR1c(실시예 1 참조), 인간 KLB 및 인간 FGFR1c를 일시적으로 발현하는 HEK293T 세포의 활성화를 시험관내 세포 분석에 의해 결정하였다. 인산화된 Elk에 의해 조절되는 인간 KLB, 인간 FGFR1c 및 루시퍼라제 리포터 유전자를 세포주에 일시적으로 형질감염시키고, 활성화 활성을 EC50 값으로 나타내었다. 구체적인 절차는 하기와 같았다:
실험 1일차에, HEK293T 세포를, 10% FBS를 함유하는 DMEM/HIGH GLUCOSE 배지를 사용하여 40000 세포/웰의 밀도로 96-웰 플레이트(Corning BioCoat, #356692)에 시딩하여 웰당 100 ㎕의 세포 현탁액을 형성시키고, 상기 96-웰 플레이트의 주변에는 오직 PBS 100 ㎕만을 첨가하였다. 플레이트를 37℃ 및 5% CO2의 세포 배양기에서 밤새 배양하였다. 2일차에, 원래 배지를 버리고, 단식 배지(FBS가 없는 DMEM/HIGH GLUCOSE)를 웰당 50 ㎕로 첨가하였다. 세포를 리포펙타민 3000을 사용하여 30:9:1의 비로 SRE-Luc2P(Promega, E1340), hKLB(서열에 대해서는 Uniprot ID: Q86Z14 참조) 및 hFGFR1c(서열에 대해서는 Uniprot ID: P11362 참조)로 형질감염시켰으며, 이때 플라스미드와 리포펙타민 3000의 혼합물 10 ㎕를 각 웰에 첨가하였다. 형질감염 후, 플레이트를 37℃ 및 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 3일차에, 단식 배지로 구배 희석된 시험 항체를 웰당 60 ㎕로 첨가하였다. 항체의 최종 농도는 200 nM부터 4배 구배 희석하여 획득한 9개 농도점이었다. 단식 배지를 블랭크 대조용 웰에 첨가하였다. 플레이트를 37℃ 및 5% CO2의 세포 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 4일차에, 96-웰 세포 배양 플레이트를 꺼내고, One-glo 루시퍼라제 분석 시스템(Promega, E6120)을 웰당 60 ㎕로 첨가하고, 다기능 마이크로플레이트 판독기(EnVision2015, PerkinElmer)를 사용하여 발광 신호 값을 판독하였다. 항체의 로그 농도 및 신호 값에 기반하여 그래프패드 프리즘을 사용하여 곡선 피팅을 수행하고 EC50 값을 계산하였다. 활성화 배수 = 샘플의 최대 신호 값/블랭크 대조군의 신호 값; 최고 농도에서 항체에 의한 KLB&FGFR1c 수용체의 활성화 정도와 관련하여, 더 큰 활성화 배수는 더 큰 활성화 정도를 나타냈다. 실험 결과를 표 14에 나타낸다.
| 항체 | EC50 (nM) | 활성화 배수 |
| hAb99-13 | 2.62 | 3.57 |
| hAb18-8 | 5.35 | 2.29 |
| MK3655 | 5.06 | 1.65 |
실험 결과는 본 개시내용의 항체가 HEK293T-hKLB&hFGFR1c에 대해 유의미한 활성화 활성을 가지며, 그 활성화 활성이 대조용 분자의 활성보다 더 강하다는 것을 나타낸다.
시험 실시예 6: 항체에 의한 재조합 세포주 HEK293-hFGFR1c의 활성화 검출
항체에 의한 인간 KLB 및 인간 FGFR1c 안정한 세포주의 활성화가 인간 KLB 의존적인지 검증하기 위해서, 본 시험 실시예에서는 시험 항체에 의한, HEK293-hFGFR1c, 인간 FGFR1c(서열에 대해서 Uniprot ID: P11362 참조)를 안정적으로 발현하는 HEK293(ATCC, CRL-1573) 세포의 활성화를 결정하였다. 구체적인 실험 절차는 하기와 같았다:
실험 1일차에, HEK293T-hFGFR1c 세포를, 10% FBS를 함유하는 DMEM/HIGH GLUCOSE 배지를 사용하여 25000 세포/웰의 밀도로 96-웰 플레이트(Corning, #3903)에 시딩하여 웰당 100 ㎕의 세포 현탁액을 형성시키고, 상기 96-웰 플레이트의 주변에는 오직 PBS 100 ㎕만 첨가하였다. 플레이트를 37℃ 및 5% CO2의 세포 배양기에서 밤새 배양하였다. 2일차에, 세포를 리포펙타민 3000을 사용하여 SRE-Luc2P로 형질감염시켰으며, 이때 플라스미드와 리포펙타민 3000의 혼합물 10 ㎕를 각 웰에 첨가하였다. 형질감염 후, 플레이트를 37℃ 및 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 3일차에, 플레이팅(plating) 배지로 구배 희석된 시험 항체를 웰당 10 ㎕로 첨가하였다. 항체의 최종 농도는 200 nM부터 4배 구배 희석하여 획득한 9번째 농도점이었다. 플레이팅 배지를 블랭크 대조용 웰에 첨가하였다. 플레이트를 37℃ 및 5% CO2의 세포 배양기에서 16시간 동안 배양하였다. 4일차에, 96-웰 세포 배양 플레이트를 꺼내고 One-glo 루시퍼라제 분석 시스템(신호 활성화를 위한 형광 검출 시약, Promega, E6120)을 웰당 60 ㎕로 첨가한 후, 다기능 마이크로플레이트 판독기(EnVision2015, PerkinElmer)를 사용하여 발광 신호 값을 판독하였다. 시험 항체의 신호 값 대 블랭크 대조군의 판독 비는 FGFR1c에 대한 항체의 활성화 활성을 나타내었으며, 활성화 배수 = 샘플의 최대 신호 값/블랭크 대조군의 신호 값; 최고 샘플 농도에서 항체에 의한 HEK293-hFGFR1c의 활성화 정도와 관련하여, 더 큰 활성화 배수는 더 큰 활성화 정도를 나타냈다. FGF2(Sino Biological, 10014-HNAE)를 실험의 대조군으로서 사용하였다. 실험 결과를 표 15에 나타낸다.
| 단클론 항체 | 활성화 배수 |
| hAb99-13 | 0.77 |
| hAb18-8 | 0.81 |
| hAb-23 | 0.86 |
| FGF2 | 11.59 |
실험 결과는 본 개시내용의 항체가 HEK293-hFGFR1c에 대해 약한 활성화 활성을 가짐을 나타내며, 이는 본 개시내용의 항체에 의한 인간 KLB 및 인간 FGFR1c 안정한 세포주의 활성화가 인간 KLB 의존적임을 가리킨다.
시험 실시예 7: FGFR2c/FGFR3c/FGFR4를 발현하는 L6/hKLB 세포의 ERK 인산화 수준에 대한 항체의 효과 결정
시험관내 분석에서 인간 FGFR2c, FGFR3c 또는 FGFR4를 발현하는 L6/hKLB 세포주의 ERK 인산화 수준을 증가시키는 데 있어서 시험 항체의 효과를 결정함으로써, FGFR2c, FGFR3c 또는 FGFR4에 대한 항체의 선택성을 결정하였다. 구체적인 절차는 하기와 같았다:
먼저, 인간 KLB(서열에 대해서 Uniprot ID: Q86Z14 참조)를 안정적으로 발현하는 L6-hKLB 단클론 세포주(L6 세포는 ATCC, CRL-1458로부터 유래되었다)를 렌티바이러스 감염에 의해 구성하고, 이어서 인간 FGFR2c(인간 FGF 수용체 2c), 인간 FGFR3c(인간 FGF 수용체 3c) 및 인간 FGFR4(인간 FGF 수용체 4)를 각각 안정적으로 발현하는 L6-hKLB&hFGFR2c, L6-hKLB&hFGFR3c 및 L6-hKLB&hFGFR4 세포를 렌티바이러스 감염에 의해 구성하였다. 실험 1일차에, L6-hKLB&hFGFR2c, L6-hKLB&hFGFR3c, 및 L6-hKLB&hFGFR4 세포를 각각 10% FBS(Gibco, 10099-141C)를 함유하는 DMEM/HIGH GLUCOSE 배지(GE, SH30243.01)를 사용하여 웰당 25000 세포의 밀도로 96-웰 플레이트에 시딩하여 웰당 100 ㎕의 세포 현탁액을 형성시켰다. 플레이트를 37℃ 및 5% CO2의 세포 배양기에서 밤새 배양하였다. 2일차에, 플레이트의 완전 배지를 흔들어서 버리고, 0.1% 무-지방 BSA(Sangon Biotech, A602448)를 함유하는 DMEM/HIGH GLUCOSE 배지를 웰당 90 ㎕로 첨가하였다. 플레이트를 37℃ 및 5% CO2 배양기에서 1시간 동안 배양하였다. 이어서, PBS로 구배 희석된 시험 항체를 웰당 10 ㎕씩 첨가하였다. 항체의 최종 농도는 50 nM 또는 500 nM로부터 4배 구배 희석하여 획득한 9개 농도점이었다. 항체가 없는 블랭크 대조용 웰을 제공하였다. 플레이트를 37℃ 및 5% CO2 배양기에서 15분 동안 배양하였다. 세포 용해물 내 pERK 및 총 ERK 수준을 설명서에 명시된 절차에 따라 Advanced ERK phospho-T202/Y204 키트(Cisbio, 64AERPEH) 및 ERK 총 키트(Cisbio, 64NRKPEH)를 사용하여 결정하였다. PHERAstar 다기능 마이크로플레이트 판독기(BMG Labtech)를 사용하여 여기 파장 337 ㎚ 및 방출 파장 665 ㎚ 및 620 ㎚에서의 형광 값을 판독하였다. 화합물의 각 농도에 상응하는 pERK 및 총 ERK 비를 하기 식에 따라 계산하였다: 비 = 신호 값665 ㎚/신호 값620 ㎚. 최고 농도의 항체의 pERK/총 ERK 비를 블랭크 대조용 웰의 비로 나누어 S/N 값, 즉 활성화 배수를 계산하였으며, 더 큰 활성화 배수는 더 큰 활성화 정도를 나타냈다. ERK 인산화 수준에 대한 본 개시내용의 항체의 활성화 활성을 상기 검출에 의해 결정하였으며, AKR001(WO2010129503A1의 서열번호 47의 FGF21 유사체 참조)을 대조군으로 사용하였다. 실험 결과를 하기 표 16에 나타낸다.
| 항체 | 활성화 배수 | ||
| L6-hKLB&hFGFR2c | L6-hKLB&hFGFR3c | L6-hKLB&hFGFR4 | |
| hAb99-13 | 1.38±0.28 | 4.95±0.81 | 1.54±0.20 |
| hAb18-8 | 1.08±0.13 | 1.41±0.21 | 0.98±0.06 |
| hAb-23 | 0.93±0.05 | 1.08±0.19 | 0.91±0.04 |
| AKR001 | 5.81±0.41 | 10.19±2.20 | 2.11±0.49 |
실험 결과는 본 발명의 항체에 의한 L6-hKLB&hFGFR2c, L6-hKLB&hFGFR3c 및 L6-hKLB&hFGFR4 세포의 활성화가 대조용 분자 AKR001에 의한 것보다 약하다는 것을 나타낸다.
시험 실시예 8: 항체의 생체내 효능 실험
본 실험에서, 붉은 털 원숭이의 자발적 비알코올성 지방간염(NASH) 모델을 선택하였으며, 간 지질 함량, NAS(NAFLD 활성 점수), 체중, BMI(체질량 지수), 복부 둘레 및 당지질 대사에 대한 항체의 효과를, MRI 영상 기법 및 간 생검 기법을 사용하여 평가하였다.
실험 절차: NASH 붉은 털 원숭이에게 35일 동안 적응형 섭식을 실시하였으며, 이러는 동안 붉은 털 원숭이의 당지질 대사 지표를 검출하고, 병리학적 분석을 위해 초음파 유도 하에 간 생검을 실시하였다. MRI(GE, 3T)를 사용하여 간내 지질 함량을 정량분석하였으며, 간내 지질 함량 지수가 안정적인 붉은 털 원숭이를 선택하여 평균적으로 3개의 군, 즉 hAb99-13 군(13 ㎎/㎏), hAb18-8 군(13 ㎎/㎏) 및 위약 군(비히클 대조군, 10 mM 빙초산, 9% 슈크로스, pH 5.2)으로 나누었다. 각 군별로 2주에 1회 정맥주사로 약물을 투여하였으며, 총 5회 제공하였다. 투여 후 MRI(GE, 3T)에 의해 간내 지질 함량을 정량분석하고, GE 초음파 유도 하에 간생검을 실시하고, 투여 전후 붉은 털 원숭이의 앉은키와 복부 둘레를 조사하였으며; 붉은 털 원숭이의 당지질 대사, 간 기능 지수 및 체중을 주기적으로 검출하고 평균값을 계산하였다. 실험 결과를 표 17-1 내지 표 17-10에 나타낸다.
간내 지질 함량 실험 결과를 표 17-1에 나타내며, 실험 결과는 위약 군에서, 투여 전 및 투여 후 60일차(D60)에 ROI(관심 영역) 백분율이 유의미하게 변화하였음을 보이고; hAb99-13 군에서는 ROI% 값이 투여 전(D0) 8.4%에서 투여 후 60일차에 6.6%로 유의미하게 감소하였다(P<0.05).
[표 17-1]
NASH 붉은 털 원숭이의 간 지질 함량에 대한 항체 효과의 검출 결과
각주: 표에서, 변화율 = (현재 값 - 기준선 값)/기준선 값 * 100%, 여기서 기준선 값은 투여 전 ROI(%)이고 현재 값은 검출 시점(D60)에서의 ROI(%)이다.
간 생검에 대한 병리학적 분석 결과를 표 17-2에 나타내며, 실험 결과는 위약 군에서, 투여 전후 간 조직의 병리학적 결과가 유의미한 개선을 보이지 않았고; hAb99-13 투여 군에서, 투여 전 값과 비교하여 투여 후 65일차에 평균 NAS 점수가 3.7에서 2.7로 감소하였으며, 지방증 점수도 유의미하게 감소하였음을 나타낸다.
[표 17-2]
NASH 붉은 털 원숭이의 간 병리학에 대한 항체의 효과
각주: D0은 투여 전 검출된 값을 지칭하고, D65는 최초 투여 후 65일차에 검출된 값을 지칭한다.
섬세포(islet) 기능에 대한 항체 효과의 실험 결과를 표 17-3 및 표 17-4에 나타낸다. 실험 결과는 각 실험 군에서 AUCIns0-30min이 감소하였고, hAb99-13 군 및 hAb18-8 군에서 감소율이 50%를 초과하였으며; hAb99-13 군 및 hAb18-8 군에서 HOMA-IR(인슐린 저항성 지수에 대한 항상성 모델 평가, 인슐린 저항성 수준을 평가하는데 사용되며, 인슐린 저항성 수준이 증가함에 따라 증가한다)이 투여 후 비교적 큰 감소를 나타내었음을 보인다.
[표 17-3]
NASH 붉은 털 원숭이의 IVGTT 인슐린 지수에 대한 항체의 효과
각주: 변화율 = (현재 값 - 기준선 값)/기준선 값 * 100%, 여기서 기준선 값은 투여 전 AUCIns0-30min(U*min/L)이고, 현재 값은 검출 시점(D65)에서의 AUCIns0-30min(U*min/L)이다.
[표 17-4]
NASH 붉은 털 원숭이의 HOMA-IR 변화율(%)에 대한 항체 효과의 실험 결과
각주: HOMA-IR 변화율 = (현재 값 - 기준선 값)/기준선 값 * 100%, 여기서 기준선 값은 투여 전 HOMA-IR이고 현재 값은 검출 시점에서의 HOMA-IR이다.
NASH 붉은 털 원숭이의 공복 혈장 글루코스(FPG) 및 공복 혈장 인슐린(FPI)에 대한 항체의 효과에 대한 실험 결과를 표 17-5 및 표 17-6에 나타낸다. 실험 결과는 위약 군에서, 동물의 FPG 및 FPI가 투여 전후에 유의미하게 변하지 않았고; 항체 투여 군의 FPG와 FPI는 유의미한 감소를 보였음을 나타낸다.
[표 17-5]
NASH 붉은 털 원숭이의 FPG에 대한 항체 효과의 실험 결과
각주: D0은 투여 전을 나타내고, D7은 1차 투여 후 7일차를 나타내며; FPG 변화율 = (현재 값 - 기준선 값)/기준선 값 * 100%, 여기서 기준선 값은 투여 전 FPG 값이고, 현재 값은 검출 시점에서의 FPG 값이다.
[표 17-6]
NASH 붉은 털 원숭이의 FPI에 대한 항체 효과의 실험 결과
각주: D0은 투여 전을 나타내고, D7은 1차 투여 후 7일차를 나타내며; 변화율 = (현재 값 - 기준선 값)/기준선 값 * 100%, 여기서 기준선 값은 투여 전 FPI 값이고, 현재 값은 검출 시점에서의 FPI 값이다.
NASH 붉은 털 원숭이의 TG에 대한 항체 효과의 실험 결과를 표 17-7에 나타낸다. 실험 결과는 위약 군에서, TG에 유의미한 변화가 없었고; hAb99-13 투여 군에서는 TG가 어느 정도 감소하였음을 나타낸다.
[표 17-7]
NASH 붉은 털 원숭이의 TG에 대한 항체의 효과
각주: D0은 투여 전을 나타내고, D7은 1차 투여 후 7일차를 나타내며; 변화율 = (현재 값 - 기준선 값)/기준선 값 * 100%, 여기서 기준선 값은 투여 전 TG 값이고, 현재 값은 검출 시점에서의 TG 값이다.
NASH 붉은 털 원숭이의 아디포넥틴에 대한 항체의 효과를 표 17-8에 나타내며, 실험 결과는 위약 군에서 동물의 아디포넥틴이 감소하는 경향을 보였으며; 아디포넥틴은 본 개시내용의 항체 투여 군에서 어느 정도 증가를 보였음을 나타낸다.
[표 17-8]
NASH 붉은 털 원숭이의 아디포넥틴에 대한 항체의 효과
각주: D0은 투여 전을 나타내고, D7은 1차 투여 후 7일차를 나타내며; 변화율 = (현재 값 - 기준선 값)/기준선 값 * 100%, 여기서 기준선 값은 투여 전 아디포넥틴 값이고, 현재 값은 검출 시점에서의 아디포넥틴 값이다.
붉은 털 원숭이의 복부 둘레 및 BMI에 대한 항체의 효과에 대한 실험 결과를 표 17-9 및 표 17-10에 나타낸다. 실험 결과는 위약 군에서, 동물의 복부 둘레와 BMI가 유의미하게 변하지 않았고; 항체 투여 군에서 복부 둘레 및 BMI는 유의미하게 감소하였음을 나타낸다.
[표 17-9]
NASH 붉은 털 원숭이의 복부 둘레에 대한 항체의 효과
각주: 변화율 = (현재 값 - 기준선 값)/기준선 값 * 100%, 여기서 기준선 값은 투여 전 검출된 값이고, 현재 값은 투여 후 검출 시점(D60)에서 검출된 값이다.
[표 17-10]
NASH 붉은 털 원숭이의 BMI에 대한 항체의 효과
각주: BMI = 체중/앉은 키; 변화율 = (현재 값 - 기준선 값)/기준선 값 * 100%, 여기서 기준선 값은 투여 전 검출된 값이고, 현재 값은 투여 후 검출 시점(D60)에서 검출된 값이다.
전술한 발명은 이해의 명확성을 위해 도면 및 실시예를 통해 상세히 기재되었지만, 이 기재 및 실시예는 본 개시내용의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본원에 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 개시내용은 그 전체가 참고로 명확하게 포함된다.
서열목록 전자파일 첨부
Claims (15)
- 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-KLB(클로소-베타(Klotho-beta) 또는 β-클로소) 항체로서, 상기 중쇄 가변 영역이 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역이 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고,
(i) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3이 각각 서열번호 40 내지 48 중 어느 하나의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3이 각각 서열번호 34의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함하거나; 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3이 각각 서열번호 2의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3이 각각 서열번호 3의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함하거나;
(ii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3이 각각 서열번호 49의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3이 각각 서열번호 56 내지 68 중 어느 하나의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함하거나; 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3이 각각 서열번호 4의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3이 각각 서열번호 5의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함하거나;
(iii) 상기 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3이 각각 서열번호 18의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3이 각각 서열번호 19의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 아미노산 서열을 포함하는,
항-KLB 항체. - 제1항에 있어서,
i) 중쇄 가변 영역에서, HCDR1이 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열번호 37, 38, 39 또는 7의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역에서, LCDR1이 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하거나;
ii) 중쇄 가변 영역에서, HCDR1이 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역에서, LCDR1이 서열번호 69, 15, 70, 71, 72, 73 또는 74의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열번호 75 또는 16의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하거나;
iii) 중쇄 가변 영역에서, HCDR1이 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역에서, LCDR1이 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고;
바람직하게는
i) 중쇄 가변 영역에서, HCDR1이 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역에서, LCDR1이 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하거나;
ii) 중쇄 가변 영역에서, HCDR1이 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역에서, LCDR1이 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는,
항-KLB 항체. - 제1항 또는 제2항에 있어서,
쥐 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 또는 완전히 인간-유래된 항체인 항-KLB 항체. - 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
i) 중쇄 가변 영역이 서열번호 40, 30, 31, 32, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 또는 48, 또는 이에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열번호 34, 33, 35 또는 36, 또는 이에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
ii) 중쇄 가변 영역이 서열번호 49, 50 또는 51, 또는 이에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열번호 57, 52, 53, 54, 55, 56, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67 또는 68, 또는 이에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
iii) 중쇄 가변 영역이 서열번호 18, 또는 이에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열번호 19, 또는 이에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
iv) 중쇄 가변 영역이 서열번호 2, 또는 이에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열번호 3, 또는 이에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
v) 중쇄 가변 영역이 서열번호 4, 또는 이에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열번호 5, 또는 이에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는,
항-KLB 항체. - 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
i) 중쇄 가변 영역이 서열번호 40, 또는 이에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열번호 34, 또는 이에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 바람직하게는 상기 중쇄 가변 영역이 이의 프레임워크 영역에 1E, 24T, 44G, 71S 및 91F(카밧(Kabat) 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 역 돌연변이(back mutation)를 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역이 이의 프레임워크 영역에 2V, 4I, 36F, 38E, 43T, 44N 및 58I(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 역 돌연변이를 포함하거나;
ii) 중쇄 가변 영역이 서열번호 49, 또는 이에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열번호 57, 또는 이에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 바람직하게는 상기 중쇄 가변 영역이 이의 프레임워크 영역에 1E, 24G, 48I, 67A, 69V, 71V 및 73K(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 역 돌연변이를 포함하고/하거나, 상기 경쇄 가변 영역이 이의 프레임워크 영역에 2N, 45K, 47W, 49Y, 58V 및 71Y(카밧 넘버링 방식에 따른 넘버링)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 역 돌연변이를 포함하거나;
iii) 중쇄 가변 영역이 서열번호 18, 또는 이에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열번호 19, 또는 이에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는,
항-KLB 항체. - 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함하고,
바람직하게는, 상기 중쇄 불변 영역이 인간 IgG1 중쇄 불변 영역이고, 상기 경쇄 불변 영역이 인간 κ 경쇄 불변 영역이고;
보다 바람직하게는, 상기 중쇄 불변 영역이 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 불변 영역이 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는,
항-KLB 항체. - 제6항에 있어서,
중쇄 및 경쇄를 포함하고,
i) 상기 중쇄가 서열번호 78에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄가 서열번호 79에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
ii) 상기 중쇄가 서열번호 80에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄가 서열번호 81에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
iii) 상기 중쇄가 서열번호 20에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄가 서열번호 21에 대해 적어도 90%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는,
항-KLB 항체. - 제6항에 있어서,
중쇄 및 경쇄를 포함하고,
i) 상기 중쇄가 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄가 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하거나;
ii) 상기 중쇄가 서열번호 80의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄가 서열번호 81의 아미노산 서열을 포함하거나;
iii) 상기 중쇄가 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄가 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는,
항-KLB 항체. - 인간 KLB 또는 원숭이 KLB에의 결합에 대해 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 항-KLB 항체와 경쟁하는 단리된 항-KLB 항체.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
A. hKLB&hFGFR1c를 발현하는 세포에 대해 활성화 활성을 갖고; 바람직하게는, CHOK1-hKLB&hFGFR1c에 대해 10 초과의 활성화 배수(activation fold)를 야기하고/하거나, HEK293T-hKLB&hFGFR1c 세포에 대해 2 초과의 활성화 배수를 야기함;
B. hFGFR1c를 발현하는 재조합 세포에 대해 약한 활성화 활성을 갖고; 바람직하게는, HEK293-hFGFR1c 세포에 대해 1 미만의 활성화 배수를 야기함;
C. hKLB&hFGFR2c, hKLB&hFGFR3c 및/또는 hKLB&hFGFR4를 발현하는 세포에 대해 약한 활성화 활성을 갖고; 바람직하게는, L6-hKLB&hFGFR2c 및/또는 L6-hKLB&hFGFR4에 대해 2 미만의 활성화 배수를 야기함;
D. 인간 KLB 및 원숭이 KLB 둘 다에 결합할 수 있고; 바람직하게는, 2.0E-9 M 미만의 EC50 값으로 인간 KLB 및 원숭이 KLB에 결합할 수 있고, 상기 EC50 값이 유세포 분석에 의해 검출됨; 및
E. 인간 KLB에 결합할 수 있고; 바람직하게는, 3.0E-9 M 미만의 KD 값으로 인간 KLB에 결합할 수 있고, 상기 KD 값이 비아코어(Biacore) 방법에 의해 검출됨
중 하나 이상의 특징을 갖는 항-KLB 항체. - 치료 효과량의 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항-KLB 항체; 및
하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 희석제, 완충제 또는 부형제
를 포함하고, 바람직하게는, 하나 이상의 제2 치료제를 추가로 포함하는 약학 조성물. - 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항-KLB 항체를 암호화하는 단리된 핵산.
- 제12항에 따른 핵산을 포함하는 숙주 세포.
- 질환의 치료가 필요한 대상에게 치료 효과량의 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항-KLB 항체 또는 제11항에 따른 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 질환을 치료하는 방법으로서,
바람직하게는, 상기 질환이 FGF21 및/또는 FGF19와 연관된 질환이고;
보다 바람직하게는, 상기 질환이 NASH, 제2형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, 심혈관 질환 및 대사 증후군으로 이루어지는 군으로부터 선택되는,
방법. - KLB 및 FGFR을 발현하는 세포를 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항-KLB 항체와 접촉시키는 단계를 포함하는, FGF21 및/또는 FGF19 신호전달을 유도하는 방법.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111110895.0 | 2021-09-23 | ||
| CN202111110895 | 2021-09-23 | ||
| PCT/CN2022/120887 WO2023046071A1 (zh) | 2021-09-23 | 2022-09-23 | 抗klb抗体及用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20240067092A true KR20240067092A (ko) | 2024-05-16 |
Family
ID=85719315
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020247012346A KR20240067092A (ko) | 2021-09-23 | 2022-09-23 | 항-klb 항체 및 용도 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20240067092A (ko) |
| CN (1) | CN117813323A (ko) |
| CA (1) | CA3232472A1 (ko) |
| TW (1) | TW202323277A (ko) |
| WO (1) | WO2023046071A1 (ko) |
Family Cites Families (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5959177A (en) | 1989-10-27 | 1999-09-28 | The Scripps Research Institute | Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies |
| US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
| DE69830901T2 (de) | 1997-05-02 | 2006-05-24 | Genentech Inc., San Francisco | ein verfahren zur herstellung multispezifischer antikörper die heteromultimere und gemeinsame komponenten besitzen |
| US6040498A (en) | 1998-08-11 | 2000-03-21 | North Caroline State University | Genetically engineered duckweed |
| US7125978B1 (en) | 1999-10-04 | 2006-10-24 | Medicago Inc. | Promoter for regulating expression of foreign genes |
| DE60022369T2 (de) | 1999-10-04 | 2006-05-18 | Medicago Inc., Sainte Foy | Verfahren zur regulation der transkription von fremden genen in gegenwart von stickstoff |
| CN1162704C (zh) * | 2002-06-17 | 2004-08-18 | 北京大学 | 一种检测人血液中Klotho蛋白的方法 |
| DK3050963T3 (da) | 2005-03-31 | 2019-12-09 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Fremgangsmåde til fremstilling af polypeptid ved regulering af arrangement |
| CA2646965C (en) | 2006-03-24 | 2016-06-21 | Jonathan H. Davis | Engineered heterodimeric protein domains |
| WO2007147901A1 (en) | 2006-06-22 | 2007-12-27 | Novo Nordisk A/S | Production of bispecific antibodies |
| LT2550972T (lt) * | 2007-04-02 | 2018-05-10 | Genentech, Inc. | Kloto-beta agonistinis antikūnas, skirtas cukrinio diabeto arba atsparumo insulinui gydymui |
| EP2235064B1 (en) | 2008-01-07 | 2015-11-25 | Amgen Inc. | Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects |
| WO2010129304A2 (en) | 2009-04-27 | 2010-11-11 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Method for making heteromultimeric molecules |
| PE20160718A1 (es) | 2009-05-05 | 2016-08-03 | Amgen Inc | Polipeptidos mutantes fgf21 |
| UA109888C2 (uk) * | 2009-12-07 | 2015-10-26 | ІЗОЛЬОВАНЕ АНТИТІЛО АБО ЙОГО ФРАГМЕНТ, ЩО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З β-КЛОТО, РЕЦЕПТОРАМИ FGF І ЇХНІМИ КОМПЛЕКСАМИ | |
| PL2519543T3 (pl) | 2009-12-29 | 2016-12-30 | Białka wiążące heterodimery i ich zastosowania | |
| CA2797981C (en) | 2010-05-14 | 2019-04-23 | Rinat Neuroscience Corporation | Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them |
| US9562109B2 (en) | 2010-11-05 | 2017-02-07 | Zymeworks Inc. | Stable heterodimeric antibody design with mutations in the Fc domain |
| RS60499B1 (sr) | 2011-12-20 | 2020-08-31 | Medimmune Llc | Modifikovani polipeptidi za bispecifične skelete antitela |
| AU2013249985B2 (en) | 2012-04-20 | 2017-11-23 | Merus N.V. | Methods and means for the production of Ig-like molecules |
| MY191944A (en) | 2014-01-24 | 2022-07-20 | Ngm Biopharmaceuticals Inc | Binding proteins and methods of use thereof |
| CN111518208B (zh) * | 2019-02-01 | 2024-03-15 | 启晨佰泰(北京)医药科技有限公司 | 抗cd47抗体及其应用 |
-
2022
- 2022-09-23 KR KR1020247012346A patent/KR20240067092A/ko unknown
- 2022-09-23 CN CN202280056275.XA patent/CN117813323A/zh active Pending
- 2022-09-23 TW TW111136150A patent/TW202323277A/zh unknown
- 2022-09-23 WO PCT/CN2022/120887 patent/WO2023046071A1/zh active Application Filing
- 2022-09-23 CA CA3232472A patent/CA3232472A1/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117813323A (zh) | 2024-04-02 |
| CA3232472A1 (en) | 2023-03-30 |
| WO2023046071A1 (zh) | 2023-03-30 |
| TW202323277A (zh) | 2023-06-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2022223152A1 (en) | Anti-gprc5d×bcma×cd3 trispecific antibody and use thereof | |
| KR20230157933A (ko) | 감마-델타 t 세포 수용체에 결합하는 항체 | |
| KR20210109552A (ko) | 이중특이적 단백질 | |
| EP4372001A1 (en) | Antigen-binding molecule specifically binding to hgfr and egfr, and pharmaceutical use thereof | |
| KR20240067092A (ko) | 항-klb 항체 및 용도 | |
| WO2022156739A1 (zh) | 特异性结合bcma和cd3的抗原结合分子及其医药用途 | |
| WO2023284806A1 (zh) | 特异性结合cd38、bcma和cd3的抗原结合分子及其医药用途 | |
| WO2024027815A1 (zh) | 特异性结合gucy2c和cd3的抗原结合分子及其医药用途 | |
| WO2023051786A1 (zh) | 特异性结合cgrp和pacap的抗原结合分子及其医药用途 | |
| WO2023147784A1 (zh) | 特异性结合psma和cd3的抗原结合分子及其医药用途 | |
| EP4317175A1 (en) | Truncated taci polypeptide and fusion protein and use thereof | |
| WO2023165514A1 (zh) | 特异性结合flt3和cd3的抗原结合分子及其医药用途 | |
| WO2023198015A1 (zh) | 特异性结合psma和cd28的抗原结合分子及其医药用途 | |
| WO2023051798A1 (zh) | 抗il23抗体融合蛋白及用途 | |
| WO2023174238A1 (zh) | 特异性结合gprc5d和cd3的抗原结合分子及其医药用途 | |
| WO2022237882A1 (zh) | 一种抗原结合分子 | |
| WO2023083298A1 (zh) | 抗icosl抗体融合蛋白及用途 | |
| WO2024051804A1 (zh) | 抗ilt4抗体及其医药用途 | |
| WO2023208182A1 (zh) | 抗ccr8抗体及其用途 | |
| TW202413437A (zh) | 特異性結合ｇｕｃｙ２ｃ和ｃｄ３的抗原結合分子及其醫藥用途 | |
| CN116410319A (zh) | 抗par2抗体及其用途 | |
| TW202413416A (zh) | 特異性結合ｅｇｆｒ和ｃｄ２８的抗原結合分子及其醫藥用途 | |
| TW202405004A (zh) | 特異性結合dll3和cd3的抗原結合分子及其醫藥用途 | |
| CN115850499A (zh) | 特异性结合angptl3和pcsk9的抗原结合分子及其医药用途 | |
| CN117003872A (zh) | 含有突变轻链可变区骨架的单链抗体片段 |