EA032828B1 - Иммунотерапевтические средства против комплекса tcr - Google Patents

Abstract

В изобретении предложен гибридный связывающий белок, содержащий связывающий домен, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, таким как TCRα, TCRβ или CD3ε, а также композиция для лечения заболевания, опосредованного T-клетками, содержащая указанный гибридный белок, единичная лекарственная форма, содержащая указанную композицию, полинуклеотид, кодирующий указанный гибридный белок, и вектор экспрессии, содержащий указанный полинуклеотид.

Description

Перекрестная ссылка на родственные заявки

Заявка на настоящий патент согласно 35 U.S.С. §119(е) испрашивает приоритет в соответствии с предварительной патентной заявкой США № 61/104608, поданной 10 октября 2008 г., и предварительной патентной заявкой США № 61/148341, поданной 29 января 2009 г., при этом указанные предварительные заявки включены в настоящее описание в полном объеме посредством ссылки.

Заявление, касающееся перечня последовательностей

Перечень последовательностей, прилагающийся к настоящему изобретению, обеспечивается в текстовом формате вместо бумажной копии, и таким образом включен посредством ссылки в настоящее описание. Название текстового файла, содержащего перечень последовательностей: 910180_416PC_SEQUENCE_LISTING.txt. Размер файла составляет 622 кб, файл создан 9 октября 2009 г. и представлен на рассмотрение в электронном виде посредством EFS-Web одновременно с подачей заявки.

Предпосылки создания изобретения

Область техники

Настоящее описание относится к иммунологически активным, рекомбинантным связывающим белкам и, в частности, к одноцепочечным гибридным белкам, специфичным по отношению к комплексу TCR или его компоненту, такому как CD3. Настоящее описание также относится к композициям и способам лечения аутоиммунных заболеваний и других нарушений или состояний (например, отторжение трансплантата).

Описание уровня техники

Долгое время для лечения отторжения аллотрансплантатов органов использовали направленное действие на комплекс TCR поверхности T-клеток человека моноклональными антителами к CD3. Моноклональные антитела (MAT) мыши, специфичные к CD3 человека, такие как OKT3 (Kung et al. (1979), Science 206: 347-9), были первым поколением препаратов такого типа. Несмотря на то, что OKT3 имеют сильную иммуносупрессивную активность, их клиническому применению препятствовали тяжелые побочные действия, связанные с их иммуногенными и митогенными свойствами (Chatenoud (2003), Nature Reviews 3:123-132). Эти антитела вызывали ответ на глобулины, способствующий быстрому выведению и нейтрализации самих антител (Chatenoud et al. (1982), Eur. J. Immunol. 137:830-8). Также OKT3 вызывали пролиферацию T-клеток и продукцию цитокинов in vitro и приводили к высвобождению цитокинов in vivo в большом количестве (Hirsch et al. (1989), J. Immunol 142: 737-43, 1989). Высвобождение цитокинов (также обозначаемое термином цитокиновый шторм) в свою очередь приводило к синдрому типа простуды, для которого свойственны лихорадка, озноб, головная боль, тошнота, рвота, диарея, нарушение дыхания, септический менингит и пониженное артериальное давление (Chatenoud, 2003). Такие тяжелые побочные эффекты ограничивали более широкое применение OKT3 при трансплантации, а также расширение сферы их применения на другие области медицины, например, при лечении аутоиммунных заболеваний.

Для снижения побочного действия моноклональных антител к CD3 первого поколения методами генной инженерии были получены моноклональные антитела к CD3 второго поколения не только с помощью переноса участков мышиных моноклональных антител к CD3, определяющих комплементарность (CDR), в последовательности IgG человека, но и с помощью введения мутаций в Fc, приводящих к неспособности к связыванию с FcR (Cole et al. (1999), Transplantation 68: 563; Cole et al. (1997), J. Immunol. 159: 3613). Гуманизация мышиных моноклональных антител приводила к пониженной иммуногенности и улучшенному периоду полураспада MAT. Также MAT, не связывающиеся с FcR, обладали пониженной способностью к индукции высвобождения цитокинов и пониженной острой токсичностью in vivo (Chatenoud et al. (1989), N. Engl. J. Med. 320:1420). Однако высвобождение цитокинов даже на пониженном уровне по-прежнему является фактором, ограничивающим величину дозы, и по-прежнему является токсичным при очень низких дозах лекарственного средства (мкг/пациент) (Plevy et al. (2007), Gastroenterology 133:1414-1422).

Существуют некоторые трудности в разработке улучшенной терапии с помощью антител к CD3, направленной на TCR. Например, механизм иммуносупрессии, опосредованной моноклональными антителами к CD3, является сложным и не до конца понятным. Считается, что такие антитела участвуют в 4 процессах: покрытие клетки, снижение количества клеток, снижение активности TCR и передача сигналов клетками, при этом два последних процесса являются основными (Chatenoud (2003), Nature Reviews:123-132). Также предполагают, что для эффективной терапии с использованием антител к CD3, направленной на TCR, необходимы индукция цитокинового шторма и активация T-клеток in vivo (Carpenter et al. (2000), J. Immunology 165:6205-13). В итоге, моноклональные антитела к CD3 второго поколения, считавшиеся не активирующими in vitro, по-прежнему вызывали цитокиновый шторм in vivo.

В настоящее время ряд антител против CD3 исследуют в клинических условиях для лечения пациентов с аутоиммунными заболеваниями, воспалительными заболеваниями и пациентов, перенесших трансплантацию. К указанным антителам относятся hOKT3y1 (Ala-Ala) (Macrogenics), визилицумаб (Nuvion®, PDL), TRX-4 (Tolerx) и N1-0401 (Novlmmune). Однако у пациентов, подвергавшихся лечению каждым из указанных антител, наблюдали побочные эффекты, вызванные высвобождением цитокинов, (от

- 1 032828 умеренных до тяжелых) и иногда повторную активацию вирусов выше уровня, который обычно наблюдается в указанной группе пациентов.

С учетом побочных эффектов, вызываемых высвобождением цитокинов, связанных с применением использующихся в настоящее время антител против T-клеток или других биологических лекарственных средств, сохраняется потребность в создании других лекарственных средств. Настоящее изобретение удовлетворяет такие потребности и, кроме того, обладает другими преимуществами.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает гибридные белки, которые связываются с комплексом TCR или его компонентом, композиции и формы однократных доз, содержащие указанные гибридные белки, полинуклеотиды и векторы экспрессии, которые кодируют указанные гибридные белки, способы снижения отторжения трансплантатов цельных органов или лечения аутоиммунного заболевания и способы определения активации T-клеток.

Согласно одному аспекту настоящее изобретение обеспечивает гибридный белок, содержащий, в основном состоящий или состоящий из (от N-конца к С-концу): а) связывающего домена, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, (б) линкерного полипептида, в) необязательного полипептида C_H2 участка иммуноглобулина, содержащего i) замену аминокислоты аспарагин в положении 297; ii) одну или более аминокислотных замен или делеций в положениях 234 - 238; iii) по меньшей мере одну аминокислотную замену или делецию в положениях 253, 310, 318, 320, 322 или 331; iv) замену аминокислоты аспарагин в положении 297 и одну или более замен или делеций в положениях 234 - 238 v) замену аминокислоты аспарагин в положении 297 и по меньшей мере одну замену или делецию в положениях 253, 310, 318, 320, 322 или 331; vi) одну или более аминокислотных замен или делеций в положениях 234-238, и по меньшей мере одну аминокислотную замену или делецию в положениях 253, 310, 318, 320, 322 или 331; или vi) замену аминокислоты аспарагин в положении 297, одну или более аминокислотных замен или делеций в положениях 234-238, и по меньшей мере одну аминокислотную замену или делецию в положениях 253, 310, 318, 320, 322 или 331; и г) полипептид C_H3 участка иммуноглобулина, отличающийся тем, что гибридный белок не вызывает цитокиновый шторм или вызывает минимально детектируемое высвобождение цитокинов, и отличающийся тем, что аминокислотные остатки C_H2 участка иммуноглобулина пронумерованы согласно системе нумерации ЕС. Дополнительные гибридные белки обеспечиваются согласно пп.2-20 и описываются в настоящем документе.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение обеспечивает композицию, содержащую гибридный белок, представленный в настоящем описании, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение обеспечивает форму однократной дозы, содержащую указанную выше лекарственную композицию.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение обеспечивает полинуклеотид, кодирующий гибридный белок, представленный в настоящем описании.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение обеспечивает вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид, кодирующий гибридный белок, представленный в настоящем описании, который операбельно связан с последовательностью, контролирующую экспрессию.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение обеспечивает способ снижения отторжения трансплантата цельного органа, включающий введение реципиенту трансплантата цельного органа эффективного количества гибридного белка, представленного в настоящем описании.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение обеспечивает способ лечения аутоиммунного заболевания (например, воспалительных заболеваний кишечника, включая болезнь Крона и язвенный колит, сахарного диабета, астмы и артрита), включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества гибридного белка, представленного в настоящем описании.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение обеспечивает способ определения высвобождения цитокинов, вызванного белком, который содержит связывающий домен, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, включающий (а) получение T-клеток, стимулированных митогеном, (б) обработку стимулированных T-клеток, полученных на этапе (а) белком, который содержит связывающий домен, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом (например, гибридный белок и антитело), и (с) определение высвобождения цитокинов из стимулированных T-клеток, которые обработали на этапе (б).

Согласно другому аспекту настоящее изобретение обеспечивает способ определения активации Tклеток, вызванной белком, который содержит связывающий домен, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, включающий (а) получение T-клеток, стимулированных митогеном, (б) обработку стимулированных T-клеток,полученных на этапе (а) белком, который содержит связывающий домен, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом (например, гибридный белок и антитело), и (с) определение активации стимулированных T-клеток, которые обработали на этапе (б).

- 2 032828

Краткое описание фигур

На фиг. 1 показан процент активированных T-клеток, полученных после воздействия на T-клетки человека, стимулированные ФГА, различными антителам и малыми модульными иммунофармацевтическими продуктами (SMIP). Отсутствие Rx обозначает отсутствие обработки, которое принимали за отрицательный контроль.

На фиг. 2 показан процент активированных T-клеток, полученных после обработки иммунореактивных клеток различными антителами и гибридными белками SMIP по результатам анализа реакции смешанной культуры лимфоцитов. MLR обозначает реакцию смешанных лимфоцитов без дополнительной обработки. Только иммунореактивная клетка обозначает реакцию, в которой участвовали только иммунореактивные клетки. Ig G2a обозначает иммунореактивную клетку, обработанную 10 мкг/мл MAT IgG2a.

На фиг. 3 показан процент активированных T-клеток, полученных после обработки иммунореактивных клеток различными антителами и гибридными белками SMIP по результатам анализа реакции смешанной культуры лимфоцитов. MLR обозначает реакцию смешанных лимфоцитов без дополнительной обработки. Только иммунореактивная клетка обозначает реакцию, в которой участвовали только иммунореактивные клетки.

На фиг. 4 показан процент T-клеток,полученных после обработки T-клеток памяти моноклональным антителом и различными гибридными белками SMIP. Иммунореактивная клетка (без ТТ) обозначает реакцию в отсутствии столбнячного токсина.

На фиг. 5А и 5Б показаны диаграммы анализа FACS TCR и CD3 на T-клетках человека, окрашенных А) непосредственно после выделения (0 день) или Б) через 4 дня после обработки моноклональным антителом OKT3 или различными гибридными белками OKT3 SMIP.

На фиг. 6А и 6Б показаны диаграммы анализа FACS TCR и CD3 на T-клетках человека, окрашенных А) непосредственно после выделения (0 день) или Б) через 4 дня после обработки гибридными белками OKT3 IgG1AA или OKT3 НМ1 SMIP.

На фиг. 7 показаны изменения флуоресценции красителя индикатора потока ионов кальция во времени, полученные после обработки очищенных T-клеток человека моноклональными антителами, сочетаниями антител или различными гибридными белками OKT3 SMIP.

На фиг. 8А и 8Б показано А) высвобождение INFy и Б) IP-10 после обработки стимулированных ConA T-клеток моноклональными антителами (2С11 MAT и Н57 MAT) или гибридными белками SMIP (2C11 Null2 и Н57 Null2).

На фиг. 9 показан процент активированных T-клеток, полученных после обработки иммунореактивных клеток различными антителами или гибридными белками SMIP по результатам анализа реакции смешанной культуры лимфоцитов. Только R обозначает реакцию, в которой представлены только иммунореактивные клетки, только S обозначает реакцию, в которой представлены только стимулирующие клетки, и R:S обозначает реакцию, в которой представлены как иммунореактивные, так и стимулирующие клетки.

На фиг. 10А и 10Б показаны изменения (А) веса тела и (Б) клинической оценки с течением времени после внутривенного введения антитела (Н57 MAT) и гибридного белка Н57 Null SMIP в различных концентрациях. PBS и IgG2a использовали в качестве отрицательного контроля.

На фиг. 11А и 11Б показаны концентрации (A) IL-6 и (Б) IL-4 в сыворотке через 2, 24 и 72 ч после внутривенного введения нормальным BALB/c мышам антитела к TCR (H57 MAT) или различных концентраций гибридного белка анти-TCR SMIP (H57 Null2). Антитело IgG2a мыши и PBS (разбавитель) использовали в качестве отрицательного контроля.

На фиг. 12 показан процент T-клеток, обнаруженных в селезенке мыши, которые были обработаны Н57 Null2 SMIP на 1 или 3 день после внутривенного введения различных концентраций гибридного белка анти-TCR SMIP( H57 Null2). PBS и IgG2a использовали в качестве отрицательного контроля.

На фиг. 13 показан процент изменения изначального веса тела мыши-реципиента через 14 дней после переноса донорских клеток на модели острой реакции трансплантат против хозяина (оРТПХ). Наивный реципиент обозначает мышей, которым не переносили донорские клетки в качестве отрицательного контроля. Мышам реципиентам вводили гибридный белок анти-TCR SMIP, дексаметазон (DEX) или контроль (PBS или IgG2a).

На фиг. 14А-14В показаны сывороточные концентрации (A) G-CSF, (Б) KC или (В) INFy на 14 день, на 14 день или на 7 день, соответственно, после переноса донорских клеток.

На фиг. 15 показано отношение лимфоцитов донора к лимфоцитам хозяина на 14 день после переноса донорских клеток. Отсутствие переноса клеток означает мышей из отрицательного контроля, которые не получали донорские клетки. PBS и IgG2a использовали в качестве контрольных обработок.

На фиг. 16 показано выравнивание последовательностей CH2 участков IgG1 человека, IgG2 человека, IgG4 человека и IGHG2c мыши (SEQ ID № 64, 66, 68 и 73 соответственно). Выравнивание проводили с использованием метода Clustal W с параметрами по умолчанию программы MegAlign DNASTAR 5.03 (DNASTAR Inc). Положения аминокислот в IgG1 C_H2 человека основаны на нумерации ЕС согласно Ka

- 3 032828 bat (см. Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5^th ed. Bethesda, MD: Public Health Service, National Institutes of Health (1991)). А именно, считается, что тяжелая цепь вариабельного участка IgG1 человека состоит из 128 аминокислот, таким образом, что аминокислотный остаток константного участка IgG1 человека, расположенный ближе всех к N-концу, находится в положении 129. Положения аминокислот других C_H2 участков указаны на основе положений аминокислотных остатков IgG1 человека, с которым их выравнивали. Остатки Asn в положении 297 (N297) подчеркнуты и выделены жирным шрифтом.

На фиг. 17 показан процент активированных T-клеток, полученных после обработки иммунореактивных клеток антителом или гибридным белком SMIP в реакции смешанной культуры лимфоцитов (MLR). R обозначает реакцию, в которой представлены только иммунореактивные клетки, S обозначает реакцию, в которой представлены только стимулирующие клетки, и R+S обозначает реакцию смешанной культуры лимфоцитов без дополнительной обработки, muIgG2b обозначает иммунореактивные клетки, обработанные 10 мкг/мл IgG2b мыши. Контрольный SMIP обозначает гибридный белок SMIP, содержащий scFv связывающий домен, который не связывается с T-клетками. На клетки подействовали Cris-7 IgG1 N297A (SEQ ID NO: 265).

На фиг. 18 показаны диаграммы FACS анализа TCR и CD3 на поверхности T-клеток человека, окрашенных непосредственно после выделения. На двух верхних панелях изображены T-клетки человека, обработанные MAT Cris-7, на двух нижних панелях показана обработка Cris-7 IgG1 N297A (SEQ ID NO: 265). На левых панелях показано распределение клеток в день обработки (0 день) и на правых панелях показано распределение клеток на 2 сутки после обработки (2 день).

На фиг. 19 показано изменение флуоресценции красителя индикатора потока ионов кальция с течением времени после обработки T-клеток человека BC3 IgG1-N297A (SEQ ID NO: 80, который содержит линкер 87 в виде шарнира между доменами scFv и CH2CH3) по сравнению с гибридным белком, в котором шарнирный линкер 87 заменен на другие шарниры различной длины (в частности, линкеры 115-120 и 122, которые представлены в SEQ ID NO: 212-218 соответственно).

На фиг. 20 показан процент активированных T-клеток, полученных после обработки иммунореактивных клеток антителом или гибридным белком SMIP по результатам анализа MLR. Контрольный SMIP обозначает гибридный белок SMIP, содержащий scFv связывающий домен, который не связывается с T-клетками. Только иммунореактивные обозначает реакцию, в которой представлены только иммунореактивные клетки. Числа в скобках представляют собой идентификационные номера последовательностей гибридных белков SMIP.

На фиг. 21 показан процент активированных T-клеток, полученных после обработки иммунореактивных клеток гибридным белком BC3 IgG1-N297A SMIP, содержащими различные шарнирные участки, в анализе MLR.

На фиг. 22 показан процент активированных T-клеток, полученных после обработки иммунореактивных клеток MAT химерным белком Cris7 или гуманизированным гибридным белком Cris7 SMIP или химерным гибридным белком BC3 SMIP (SEQ ID NO: 80), по результатам анализа MLR. Контрольный SMIP обозначает гибридный белок SMIP, содержащий scFv связывающий домен, который не связывается с T-клетками, и Только иммунореактивные обозначает реакцию, в которой представлены только иммунореактивные клетки. Числа в скобках представляют собой идентификационные номера последовательностей гибридных белков SMIP.

На фиг. 23 показан процент активированных T-клеток, полученных после обработки иммунореактивных клеток гуманизированными гибридными белками Cris7 IgG1-N297, IgG2-AA-N297A и IgG4-AAN297A и НМ1 SMIP или химерными гибридными белками Cris7 IgG1-N297 и НМ1 SMIP, по результатам анализа MLR. Родительские MAT обозначает MAT Cris7 и контрольный SMIP обозначает гибридный белок SMIP, содержащий scFv связывающий домен, который не связывается с T-клетками.

На фиг. 24 показан процент активированных T-клеток после обработки стимулированных ФГА Tклеток гуманизированными Cris7 (VH3-VL1)IgG1-N297A или гуманизированными гибридными белками Cris7 (VH3-VL2)IgG1-N297A SMIP. Контрольный SMIP обозначает гибридный белок SMIP, который не связывается с T-клетками.

На фиг. 25А и 25Б показаны концентрации (A) INFy и (Б) IL-17 в сыворотке через 24 ч (1 день) и 72 ч (3 день) после повторной стимуляции обработанных ФГА T-клеток различными гуманизированными и химерными гибридными белками Cris7 SMIP, гибридным белком BC3 SMIP (SEQ ID№ 80) и различными антителами (MAT BC3, MAT Cris7 и Nuvion FL). Числа в скобках представляют собой идентификационные номера последовательностей гибридных белков SMIP.

На фиг. 26А-26Ж показаны уровни (A) INFy, (Б) IL-10, (В) IL-1B, (Г) IL-17, (Е) IL-4, (Д) TNF-α, (E) IL-6 и (Ж) IL-2 в первичных МКПК, обработанных в течение 24 ч (d1), 48 ч (d2) или 72 ч (d3) гуманизированным гибридным белком Cris7 (VH3-VL1)IgG1-N297A IgG4-AA-N297A SMIP, гуманизированным гибридным белком Cris7 (VH3-VL2)IgG4-AA-N297A SMIP или MAT Cris7.

На фиг. 27 показаны изменения веса тела с течением времени после внутривенного введения MAT IgG2a (411 мкг), MAT H57 (5 мкг), гибридного белка Н57 Null2 SMIP (300 мкг), гибридного белка Н57

- 4 032828 half null SMIP (300 мкг) или гибридного белка Н57 НМ2 SMIP (300 мкг).

На фиг. 28 показаны концентрации T-клеток в периферической крови через 2 ч после внутривенного введения MAT IgG2a, MAT H57, Н57 Null2, H57 half null или Н57 НМ2 в соответствующих дозах, как на показано фиг. 27.

На фиг. 29 показаны концентрации T-клеток в периферической крови через 72 ч после внутривенного введения MAT IgG2a, MAT H57, Н57 Null2, H57 half null или Н57 НМ2 в соответствующих дозах, как на показано фиг. 27.

На фиг. 30А-В показаны концентрации IL-2 в сыворотке (А) через 2 ч, (Б) через 24 ч и (В) через 72 ч после внутривенного введения MAT IgG2a, MATH 57, Н57 Null2, H57 half null или Н57 НМ2 в соответствующих дозах, как на показано фиг. 27.

На фиг. 31А-В показаны концентрации IL-10 в сыворотке (А) через 2 ч, (Б) через 24 ч и (В) через 72 ч после внутривенного введения MAT IgG2a, MAT Н57, Н57 (А) Н57 half null или Н57 НМ2 в соответствующих дозах, как на показано фиг. 27.

На фиг. 32А-В показаны концентрации IP-10 в сыворотке (А) через 2 ч, (Б) через 24 ч и (В) через 72 ч после внутривенного введения MAT IgG2a, MAT H57, Н57 Null2, H57 half null или Н57 НМ2 в соответствующих дозах, как на показано фиг. 27.

На фиг. 33А-В показаны концентрации TNF-α в сыворотке (А) через 2 ч, (Б) через 24 ч и (В) через 72 ч после внутривенного введения MAT IgG2a, MAT H57, Н57 Null2, H57 half null или Н57 НМ2 в соответствующих дозах, как на показано фиг. 27.

На фиг. 34А-В показана концентрация IL-4 в сыворотке (А) через 2 ч, (Б) через 24 ч и (В) через 72 ч после внутривенного введения MAT IgG2a, MAT H57, Н57 Null2, H57 half null или Н57 НМ2 в соответствующих дозах, как на показано фиг. 27.

На фиг. 35 А-В показаны концентрации МСР-1 в сыворотке (А) через 2 ч, (Б) через 24 ч и (В) через 72 ч после внутривенного введения MAT IgG2a, MAT H57, Н57 Null2, H57 half null или Н57 НМ2 в соответствующих дозах, как на показано фиг. 27.

На фиг. 36А-В показаны концентрации KC в сыворотке (А) через 2 ч, (Б) через 24 ч и (В) через 72 ч после внутривенного введения MAT IgG2a, MAT H57, Н57 Null2, H57 half null или Н57 НМ2 в соответствующих дозах, как на показано фиг. 27.

На фиг. 37А-В показана концентрация IL-17 (А) через 2 ч, (Б) через 24 ч и (В) через 72 ч после внутривенного введения MAT IgG2a, MAT H57, Н57 Null2, H57 half null или Н57 HM2 в соответствующих дозах, как на показано фиг. 27.

На фиг. 38 А-В показана концентрация IL-5 (А) через 2 ч, (Б) через 24 ч и (В) через 72 ч после внутривенного введения MAT IgG2a, MAT H57, Н57 Null2, H57 half null или Н57 НМ2 в соответствующих дозах, как на показано фиг. 27.

На фиг. 39А и 39Б изображены диаграммы зависимости средних концентраций в сыворотке или Н57 НМ2 и Н57 half null от времени. Результаты выражены в виде набора данных наблюдений, прогнозируемые величины вычислены с помощью программного обеспечения WinNonLin. Значение Rsq и приведенные значения Rsq представляют собой критерий согласия статистики для конечной фазы исключения, до и после корректировки по количеству использованных точек в оценке HL_Lambda z (6.6 и 40.7 ч).

На фиг. 40 показана концентрация G-CSF в сыворотке через 15 мин, 2 ч, 6, 24 и 48 ч после внутривенного введения Н57-НМ2 или Н57 Null2 (по 200 мкг).

На фиг. 41 показана концентрация INFy в сыворотке через 15 мин, 2 ч, 6, 24 и 48 ч после внутривенного введения Н57-НМ2 или Н57 Null2 (по 200 мкг).

На фиг. 42 показана концентрация IL-2 в сыворотке через 15 мин, 2 ч, 6, 24 и 48 ч после внутривенного введения Н57-НМ2 или Н57 Null2 (по 200 мкг).

На фиг. 43 показана концентрация IL-5 в сыворотке через 15 мин, 2 ч, 6, 24 и 48 ч после внутривенного введения Н57-НМ2 или Н57 Null2 (по 200 мкг).

На фиг. 44 показана концентрация IL-6 в сыворотке через 15 мин, 2 ч, 6, 24 и 48 ч после внутривенного введения Н57-НМ2 или Н57 Null2 (по 200 мкг).

На фиг. 45 показана концентрация IL-10 в сыворотке через 15 мин, 2 ч, 6, 24 и 48 ч после внутривенного введения Н57-НМ2 или Н57 Null2 (по 200 мкг).

На фиг. 46 показана концентрация IL-17 в сыворотке через 15 мин, 2 ч, 6, 24 и 48 ч после внутривенного введения Н57-НМ2 или Н57 Null2 (по 200 мкг).

На фиг. 47 показана концентрация IP-10 в сыворотке через 15 мин, 2 ч, 6, 24 и 48 ч после внутривенного введения Н57-НМ2 или Н57 Null2 (по 200 мкг).

На фиг. 48 показана концентрация KC в сыворотке через 15 мин, 2 ч, 6, 24 и 48 ч после внутривенного введения Н57-НМ2 или Н57 Null2 (по 200 мкг).

На фиг. 49 показана концентрация МСР-1 в сыворотке через 15 мин, 2 ч, 6, 24 и 48 ч после внутривенного введения Н57-НМ2 или Н57 Null2 (по 200 мкг).

На фиг. 50 показан процент активированных T-клеток, полученных после обработки иммунореактивных клеток Н57 Null2, H57 half null, H57-HM2, MAT IgG2a мыши или MAT H57.

- 5 032828

На фиг. 51 показан процент активированных T-клеток,полученных после обработки иммунореактивных клеток Н57 Null2, H57 half null, H57-HM2 или MAT Н57, нормализованных по (R+S) - без обработки = 100%.

На фиг. 52 показан процент стимулированных ConA T-клеток,активированных посредством обработки Н57 Null2, H57 half null, H57-HM2, MAT IgG2a мыши, MAT H57 или MAT 2C11.

Подробное описание изобретения

Настоящее описание обеспечивает гибридные белки, содержащие один или более связывающих доменов, направленных против комплекса TCR, в виде малых модульных иммунофармацевтических (SMIP) продуктов или в виде молекулы SMIP с Fc и связывающим доменом, расположенными в обратной ориентации от N-конца до С-конца (PIMS), которые вызывают специфический профиль передачи сигналов T-клетками. Указанный профиль передачи сигналов характеризуется неопределяемым или малым, минимальным или незначительным высвобождением цитокинов (т.е. отсутствием цитокинового шторма или минимальным цитокиновым штормом), индукцией потока ионов кальция, фосфорилированием сигнальных белков TCR без активации T-клеток или их любым сочетанием. Такой профиль передачи сигналов не повторяется при использовании моноклональных антител, что свидетельствует о неожиданных особенностях передачи сигналов, вызванной связыванием SMIP или PIMS с их мишенями. В настоящее время белковые молекулы, направленные против комплекса TCR либо вызывают сильный сигнал T-клеток (например, цитокиновый шторм) совместно с активацией T-клеток, либо оказывают незначительное действие на клетки в отсутствии перекрестного связывания.

Более того, настоящее описание обеспечивает молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют указанные гибридные белки, а также векторы и клетки-хозяина для получения указанных белков с помощью рекомбинантных технологий, композиции и способы применения гибридных белков согласно настоящему описанию в различных терапевтических целях, включая лечение, а также уменьшение интенсивности по меньшей мере одного симптома заболевания или состояния (например, аутоиммунного заболевания, воспалительного заболевания и отторжения трансплантата органа).

Перед тем, как подробнее раскрыть настоящее описание в целях лучшего понимания описания будет полезно предоставить определения некоторых терминов, используемых в настоящем описании. Дополнительные определения изложены на протяжении всего описания.

В настоящем описании следует понимать, что любые пределы концентраций, пределы процентных величин, пределы пропорций или пределы целых чисел включают значения любых целых чисел в указанных пределах и, при необходимости, их части (например, одна десятая и одна сотая целого числа), если не указано обратное. Также следует понимать, что любой диапазон чисел, включенный в настоящее описание, относящийся к любому физическому свойству такому, как субъединицы полимера, размер или толщина, включает любое целое число в пределах указанного диапазона, если не указано обратное. В настоящем описании термины примерно или состоящий в основном из означают ±20% указанного диапазона, значения или структуры, если не указано обратное. В настоящем описании термины включает и содержит используются взаимозаменяемо. В настоящем описании неопределенный артикль используется для обозначения один или более перечисляемых компонентов. Следует понимать, что использование вариантов (например, или) означает или один, оба варианта или сочетание вариантов. Кроме того следует понимать, что отдельные соединения или группы соединений, полученные из различных сочетаний структур и заменителей, приведенных в настоящем описании, включены в настоящую заявку в той же степени, как, если бы каждое соединение или группа соединений были изложены поотдельности. Таким образом, отбор определенных структур или заменителей находятся в пределах настоящее изобретения.

Аминокислотные остатки C_H2 и C_H3 участков иммуноглобулина согласно настоящему описанию нумеруются согласно системе нумерации ЕС, если не указано иначе (см. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5^th ed. Bethesda, MD: Public Health Service, National Institutes of Health (1991)).

Термин малый модульный иммунофармацевтический SMIP™ белок обозначает одноцепочечный гибридный белок, который содержит от N-конца до С-конца: связывающий домен, который специфично связывает молекулу-мишень, линкерный полипептид (например, шарнир иммуноглобулина или его производное), полипептид C_H2 участка иммуноглобулина и полипептид C_H3 участка иммуноглобулина (см. патенты США № 2003/0133939, 2003/0118592 и 2005/0136049).

Термин белок PIMS обозначает обращенную молекулу SMIP, в которой связывающий домен расположен на С-конце гибридного белка. Конструкции и способы получения белков PIMS описаны в публикации РСТ № WO 2009/023386. В большинстве случаев молекула PIMS представляет собой одноцепочечный полипептид, содержащий в направлении от N-конца до С-конца, необязательный полипептид C_H2 участка, CH3 домен, линкерный пептид (например, шарнирную область иммуноглобулина) и специфический связывающий домен.

В настоящем описании белок состоит в основном из нескольких доменов (например, связывающего домена, который специфично связывает комплекс TCR или его компонент, линкерного полипептида, CH2 участка иммуноглобулина и CH3 участка иммуноглобулина), если другие части белка (например,

- 6 032828 аминокислоты N-конца или С-конца или расположенные между доменами аминокислоты) в сочетании составляют не более 20% (например, не более 15, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 или 1%) длины белка и не влияют существенно (т.е. снижают активность не более чем 50%, например, не более чем на 40, 30, 25, 20, 15, 10 или 5%) на активность белка такую, как сродство к комплексу TCR или его компоненту, способность не вызывать (или вызывать минимально детектируемое) высвобождение цитокинов, способность вызывать поток ионов кальция или фосфорилирование молекулы в сигнальном пути T-клеточного рецептора, способность блокировать ответ T-клеток на аллоантиген, способность блокировать ответ T-клеток памяти на антиген и снижение активности комплекса TCR клетки. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения гибридный белок состоит в основном из связывающего домена, который специфично связывает комплекс TCR или его компонент, линкерного полипептида, необязательного полипептида Сц₂ участка иммуноглобулина и полипептида C_H3 участка иммуноглобулина. Указанные молекулы также могут содержать связывающие аминокислоты на N-конце или С-конце белка или между двумя различными доменами (например, между связывающим доменом и линкерным полипептидом, между линкерным полипептидом и полипептидом C_H2 участка иммуноглобулина, или между полипептидом C_H2 участка иммуноглобулина и полипептидом C_H3 участка иммуноглобулина).

Термины, понятные специалисту в области технологии антител, имеют значения, известные в данной области техники, если в настоящем описании отдельно не подчеркивается другое значение. Известно, что антитела имеют вариабельные участки, шарнирную область и константные домены. Обзор структуры иммуноглобулинов приведен например, в публикации Harlow et al., Eds., Antibodies: A Laboratory Manual, Chapter 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, 1988). Например, термины VL и VH обозначают вариабельный связывающий участок легкой и тяжелой цепи антитела соответственно. Вариабельные связывающие участки состоят из отдельных четко выраженных подучастков, известных как участки, определяющие комплементарность (CDR) и каркасные участки(FR). Термин CL обозначает константный участок легкой цепи иммуноглобулина или константный участок легкой цепи, т.е. константный участок легкой цепи антитела. Термин СН обозначает константный участок тяжелой цепи иммуноглобулина или константный участок тяжелой цепи, который далее можно разделить в зависимости от изотипа антитела на домены: CH1, CH2 и CH3 (IgA, IgD, IgG) или CH1, CH2 и CH3 и CH4 (IgE, IgM). Часть доменов константного участка образует Fc-фрагмент антитела (кристаллизующийся фрагмент) и отвечает за эффекторные функции иммуноглобулина, такие как ADCC (антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность), ADCP (антителозависимый клеточный фагоцитоз), CDC (комплементзависимая цитотоксичность) и связывание комплемента, связывание с Fc-рецепторами (например, CD16, CD32, FcRn), больший период полураспада in vivo по сравнению с полипептидом, у которого отсутствует Fc-фрагмент, связывание протеина А и возможно также перенос через плаценту (см. Capon et al., Nature, 337:525 (1989).

Кроме того, антитела содержат шарнирную последовательность, которая обычно располагается между Fab и Fc- участками (но нижняя часть шарнира может содержать N-концевую часть Fc-фрагмента). В качестве основы, шарнир иммуноглобулина выполняет функцию гибкого промежутка для того, чтобы Fab-участок мог свободно вращаться в пространстве. В отличие от константных участков шарниры структурно различаются как по последовательностям, так и длине среди классов иммуноглобулинов и даже среди подклассов. Например, шарнирный участок IgG1 человека очень гибкий, что позволяет Fabфрагментам вращаться вокруг своих осей симметрии и двигаться внутри сферы, центр которой находится в первом из двух дисульфидных мостиков внутри тяжелой цепи. Для сравнения, шарнир IgG2 человека относительно короткий и содержит жесткую двойную спираль из полипролина, стабилизированную четырьмя дисульфидными мостиками внутри тяжелой цепи, что ограничивает его гибкость. Шарнир IgG3 человека отличается от других подклассов наличием характерного протяженного шарнирного участка (приблизительно в 4 раза длиннее, чем шарнир IgG1), содержащего 62 аминокислоты (включая 21 остаток пролина и 11 остатков цистеина), образующего негибкую двойную спираль из полипролина и обеспечивающего большую гибкость, потому, что Fab-фрагменты расположены относительно далеко от Fc-фрагмента. Шарнир IgG4 человека короче, чем IgG1, но имеет такую же длину, как и IgG2, и по гибкости занимает промежуточное положение между IgG1 и IgG2.

Согласно кристаллографическим исследованиям, шарнирный домен IgG можно функционально и структурно подразделить на три участка: верхние, центральные или средние и нижние шарнирные участки (Shin et al., Immunological Reviews 130:87 (1992)). Примеры верхних шарнирных участков включают EPKSCDKTHT (SEQ ID NO: 359), обнаруженные в IgG1, ERKCCVE (SEQ ID NO: 360), обнаруженные в IgG2, ELKTPLGDTT HT (SEQ ID NO: 361) или EPKSCDTPPP (SEQ ID NO: 362), обнаруженные в IgG3, и ESKYGPP (SEQ ID NO: 363), обнаруженные в IgG4. Примеры центральных или средних шарнирных участков включают. СРРСР (SEQ ID NO: 364), обнаруженные в IgG1 и IgG2, CPRCP (SEQ ID NO: 365), обнаруженные в IgG3, и CPSCP (SEQ ID NO: 366), обнаруженные в IgG4. В отличие от антител IgG1, IgG2 и IgG4, по-видимому, содержащих отдельный верхний и средний шарнирный участок, IgG3 содержит 4 последовательных участка: один из которых представляет собой ELKTPLGDTTHTCPRCP (SEQ ID NO: 367) и три из которых представляют собой EPKSCDTPPPCPRCP (SEQ ID NO: 368).

По-видимому, у антител IgA и IgD отсутствует центральный IgG-подобный участок, и, по

- 7 032828 видимому, IgD содержит два последовательных верхних шарнирных участка (см. ESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNT (SEQ ID NO: 369) и GRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTP (SEQ ID NO: 370). Примерами верхних шарнирных участков дикого типа, обнаруженных в антителах IgA1 и IgA2, являются VPSTPPTPSPSTPPTPSPS (SEQ ID NO: 371) и VPPPPP (SEQ ID NO: 372) соответственно. В отличие от них, у антител IgE и IgM отсутствует типичный шарнирный участок, вместо него у них есть Cm-домен с шарниро-подобными свойствами. Примеры верхних шарниро-подобных последовательностей C_H2 дикого типа IgE и IgM представлены в SEQ ID NO: 373 (VCSRDFTPPTVKILQSSSDGGGHFPPTIQLLCLVSGYTPGTINITWL EDGQVMDVDLSTASTTQEGELASTQSELTLSQKHWLSDRTYTCQVTYQGHTFE DSTKKCA) и SEQ ID NO: 374 (VIAELPPKVSVFVPPRDGFFGNPRKSKLIC QATGFSPRQIQVSWLREGKQVGSGVTTDQVQAEAKESGPTTYKVTSTLTI KESDWLGQSMFTCRVDHRGLTFQQNASSMCVP) соответственно.

В настоящем описании термин шарнирная область или шарнир обозначает (а) шарнирную область иммуноглобулина (состоящую, например, из верхнего и центрального участков) или ее функциональный вариант, (б) лектиновый междоменный участок или его функциональный вариант, или (в) стебельковый участок молекулы кластера дифференцировки (CD) или его функциональный вариант.

Шарнирная область иммуноглобулина может представлять собой шарнирную область иммуноглобулина дикого типа или шарнирную область иммуноглобулина измененного дикого типа или измененную шарнирную область иммуноглобулина.

В настоящем описании термин шарнирная область иммуноглобулина дикого типа обозначает встречающиеся в естественных условиях аминокислотные последовательности верхних и средних шарнирных участков, расположенных между доменами C_H1 и C_H2 и соединяющих их (в случае IgG, IgA и IgD) или расположенных между доменами CH1 и CH3 и соединяющих их (в случае IgE и IgM), входящих в состав тяжелой цепи антитела.

Термин измененная шарнирная область иммуноглобулина дикого типа или измененная шарнирная область иммуноглобулина обозначает (а) шарнирную область иммуноглобулина дикого типа, которая содержит до 30% замен аминокислот (например, до 25, 20, 15, 10 или 5% замен аминокислот или делеций), или (б) часть шарнирной области иммуноглобулина дикого типа, которая содержит от приблизительно 5 аминокислот (например, приблизительно 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 аминокислот) до приблизительно 120 аминокислот (предпочтительно имеющая длину приблизительно от 10 до приблизительно 20 аминокислот или приблизительно от 15 до приблизительно 30 аминокислот или приблизительно от 15 до приблизительно 20 аминокислот или приблизительно от 20 до приблизительно 25 аминокислот), содержит до приблизительно 30% замен аминокислот (например, приблизительно 25, 20, 15, 10, 5, 4, 3, 2 или 1% замен аминокислот или делеций или их сочетаний) и содержит центральный шарнирный участок IgG, представленный в SEQ ID NO: 364, 365 или 366.

Термин последовательность, соединяющая вариабельные домены обозначает последовательность аминокислот, которая соединяет вариабельный участок тяжелой цепи с вариабельным участком легкой цепи и выполняет функцию разделителя, совместимого с взаимодействием двух связывающих субдоменов таким образом, что полученный полипептид сохраняет специфическое связывающее сродство с такой же молекулой-мишенью, как и антитело, которое содержит аналогичные вариабельные участки легкой и тяжелой цепи. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения шарнир, используемый для соединения связывающего домена с полипептидом CH2 или CH3 участка, можно использовать в качестве последовательности, соединяющей вариабельные домены.

Термин линкерный полипептид обозначает последовательность аминокислот, которая соединяет связывающий домен с полипептидами C_H2 или C_H3 участков иммуноглобулина в гибридном белке. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения линкерный полипептид представляет собой шарнир, определенный в настоящем описании. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения последовательность, соединяющую вариабельные домены, используемую для соединения вариабельного участка тяжелой цепи с вариабельным участком легкой цепи, можно использовать в качестве линкерного полипептида.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения между двумя доменами гибридного белка может быть расположен один или несколько (например, 2-8) остатков аминокислот, например, между связывающим доменом и линкерным полипептидом, между линкерным полипептидом и полипептидом C_H2 участка иммуноглобулина, и между полипептидом C_H2 участка иммуноглобулина и полипептидом CH3 участка иммуноглобулина, например, остатки аминокислот, получающиеся из конструкции, созданной для получения гибридного белка (например, остатки аминокислот, получающиеся после введения сайта рестрикции в процессе конструирования молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей одноцепочечный полипептид). Согласно настоящему описанию указанные остатки аминокислот

- 8 032828 могут быть обозначены терминами связывающие аминокислоты или связывающие остатки аминокислот.

Термин производное в настоящем описании обозначает химически или биологически измененный вариант соединения (например, белка), который похож по структуре на родительское соединение и (действительно или теоретически) может быть получен от родительского соединения.

В настоящем описании термин аминокислота обозначает природную аминокислоту (встречающиеся в естественных условиях аминокислоты), замещенную природную аминокислоту, искусственную аминокислоту, замещенную искусственную аминокислоту или их любые сочетания. Обозначения природных аминокислот приведены в настоящем описании в виде стандартного однобуквенного или трехбуквенного кода. Природные полярные аминокислоты включают аспарагин (Asp или N) и глутамин (Gin или Q); а также основные аминокислоты, такие как аргинин (Arg или R), лизин (Lys или K), гистидин (His или Н) и их производные, и кислые аминокислоты, такие как аспарагиновая кислота (Asp или D), глутаминовая кислота (Glu или Е) и их производные.

Природные гидрофобные аминокислоты включают триптофан (Trp или W), фенилаланин (Phe или F), изолейцин (Ile или I), лейцин (Leu или L), метионин (Met или М), валин (Val или V) и их производные, а также другие неполярные аминокислоты, такие как глицин (Gly или G), аланин (Ala или А), пролин (Pro или Р) и их производные. Природные нейтральные аминокислоты включают серин (Ser или S), треонин (Thr или Т), тирозин (Tyr или Y), цистеин (Cys или С) и их производные. Если не указано иное, любая аминокислота, описываемая в настоящей заявке, может находиться как в D-, так и в Lконфигурации.

Аминокислоты можно классифицировать по их физическим свойствам и участию в образовании вторичной и третичной структуры белка. В данной области техники термин консервативная замена обозначает замену аминокислоты на другую аминокислоту, которая имеет похожие свойства. Примеры консервативных замен хорошо известны в данной области техники (см., например, публикацию WO 97/09433, с. 10, опубликовано 13 марта 1997 г., Lehninger, Biochemistry, Second Edition; Worth 20 Publishers, Inc. NY:NY (1975), стр.71-77; Lewin, Genes IV, Oxford University Press, NY and Cell Press, Cambridge, MA (1990), с. 8). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения консервативная замена включает замену лейцина на серин.

В настоящем описании, если не указано иначе, остатку аминокислоты константной области тяжелой цепи IgG1 человека присваивается номер с учетом того, что вариабельный участок IgG1 человека состоит из 128 аминокислотных остатков согласно конвенции Kabat. Затем пронумерованную константную область тяжелой цепи IgG1 человека используют в качестве последовательности сравнения для нумерации остатков аминокислот константных областей тяжелых цепей других иммуноглобулинов. Положение интересующего остатка аминокислот в константной области тяжелой цепи иммуноглобулина, кроме тяжелой цепи IgG1 человека, представляет собой положение остатка аминокислоты тяжелой цепи IgG1 человека, с которой интересующий остаток аминокислоты располагается параллельно. Выравнивание константных областей тяжелой цепи IgG1 человека с тяжелыми цепями других иммуноглобулинов можно осуществить с помощью программного обеспечения, известного в данной области техники, например, программы Megalign 5 (DNASTAR Inc.) с использованием метода Clustal W с заданными параметрами. Примеры выравнивания последовательностей представлены на фиг. 16. Согласно системе нумерации, представленной в настоящем описании, несмотря на то, что в CH2 участке человека есть делеция аминокислоты поблизости от N-конца по сравнению с другими C_H2 участками на фиг. 16, положение подчеркнутого N в C_H2 участке IgG2 человека все же 297, так как указанный остаток соответствует N в положении 297 C_H2 участка IgG1 человека. Гибридные белки, направленные против комплекса TCR.

Согласно одному варианту реализации настоящее изобретение обеспечивает одноцепочечный гибридный белок в форме гибридного белка SMIP, который содержит, в основном состоит или состоит из (в направлении от N-конца к С-концу) (а) связывающего домена, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, (б) линкерного полипептида, (в) необязательного полипептида участка C_H2 иммуноглобулина, и (г) полипептида участка C_H3 иммуноглобулина. Если полипептид участка C_H2 иммуноглобулина присутствует, то он может включать (1) замену аминокислоты аспарагина в положении 297; (2) одну или более замен или делеций аминокислот в положениях 234-238; (3) по меньшей мере, одну замену аминокислоты аспарагина в положении 297 и одну или более замен или делеций в положениях 234-298; (5) замену аминокислоты аспарагина в положении 297 и одну или более замен или делеций в положениях 253, 310, 318, 320, 322 или 331; (6) одну или более замен или делеций аминокислоты в положениях 234-238, 253, 310, 3222 или 331; или (7) замену аминокислоты аспарагина в положении 297 и, по меньшей мере, одну замену или делецию аминокислоты в положениях 234-238, 253, 310, 318, 320, 322 или 331.

Согласно предпочтительным вариантам реализации изобретения одноцепочечный гибридный белок согласно настоящему описанию содержит, в основном состоит или состоит из (в направлении от N-конца к С-концу) (а) связывающего домена, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, (б) линкерного полипептида, (в) полипептида C_H2 участка иммуноглобулина и (г) полипептида C_H3 участка иммуноглобулина, отличающегося тем, что полипептид C_H2 участка иммуноглобулина со

- 9 032828 держит (i) замену аминокислоты аспарагина в положении 297 и одну или более замен или делеций в положениях 234-298; (ii) замену аминокислоты аспарагина в положении 297, замену в положениях 234, 235 и 237 и делецию в положении 236; (iii) по меньшей мере, одну замену или делецию аминокислоты в положениях 234-238, 253, 310, 318, 320, 322 или 331; (iv) замену аминокислоты в положениях 234, 235, 237, 318, 320 и 322, и делецию в положении 236; (v) замену аминокислоты аспарагина в положении 297 и, по меньшей мере, одну замену или делецию в положениях 234-238, 253, 310, 318, 320, 322 или 331; или (vi) замену аминокислоты аспарагина в положении 297, замену аминокислоты в положениях 234, 235, 237, 318, 320 и 322, и делецию в положении 236. Согласно каждому из указанных предпочтительных вариантов реализации используемая для замены аминокислота предпочтительно представляет собой аланин или серин.

Согласно другим предпочтительным вариантам реализации одноцепочечный гибридный белок согласно настоящему изобретению содержит, в основном состоит или состоит из (в направлении от Ν’конца к С-концу) (а) связывающего домена, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, (б) линкерного полипептида, и (в) полипептида участка C_H3 иммуноглобулина, отличающегося тем, что полипептид участка C_H3 иммуноглобулина содержит участок C_H3 IgM человека и участка CH3 IgG человека (предпочтительно IgG1).

Указанный гибридный белок вызывает высвобождение цитокинов (т.н. цитокиновый шторм) или активирует Т клетки на недетектируемом уровне, номинально, минимально или на низком уровне и дополнительно может оказывать одно из следующих действий: (1) вызывать поток ионов кальция, (2) вызывать фосфорилирование молекул сигнального пути TCR, (3) блокировать ответ T-клеток на аллоантигены, (4) блокировать ответ T-клеток памяти на антиген, и (5) снижать активность комплекса TCR.

Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения гибридный белок содержит последовательность аминокислот, приведённой в SEQ ID NO: 293, 294, 298 или 299. Согласно соответствующему варианту реализации настоящего изобретения аминокислоты последовательности шарнирного участка в положениях 247 - 261 SEQ ID NO: 293, 294, 298 и 299 замещены последовательностью аминокислот шарнира, приведённой в SEQ ID NO: 379-434. Согласно следующим предпочтительным вариантам реализации настоящего изобретения полипептид C_H2 участка иммуноглобулина, изображенные на SEQ ID NO: 293, 294, 298 и 299 также содержит замены аминокислот в положениях 318, 320 и 322 согласно нумерации ЕС.

Согласно соответствующему аспекту настоящее описание обеспечивает одноцепочечный гибридный белок в форме белка PIMS, который содержит, в основном состоит или состоит из (в направлении от N-конца к С-концу) (а) необязательного полипептида C_H2 участка иммуноглобулина, (б) полипептида C_H3 участка иммуноглобулина, (в) линкерного полипептида и (г) связывающего домена, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом. Если полипептид участка CH2 иммуноглобулина присутствует, то он может содержать те же типы мутаций, что и гибридные белки SMIP, представленные в настоящем описании. В дополнение белки PIMS обладают одним или более желательными биологическими действиями, которые имеет гибридный белок SMIP, представленный в настоящем описании.

Связывающий домен.

В настоящем описании гибридный белок согласно настоящему описанию содержит связывающий домен, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом (например, CD3, TCRa, TCR[^J> или их любое сочетание).

Термин связывающий домен или связывающий участок согласно настоящему описанию может обозначать, например, любой белок, полипептид, олигопептид или пептид, который обладает способностью специфично распознавать и связываться с биологической молекулой (например, комплексом TCR или его компонентом). Связывающий домен включает любой природный, синтетический, полусинтетический или полученный рекомбинантными методами связывающий партнер интересуемой биологической молекулы. Например, связывающий домен может представлять собой участки вариабельных доменов легкой цепи антитела и тяжелой цепи антитела, или участки вариабельных доменов легкой и тяжелой цепей могут быть соединены вместе в одну цепь в любом порядке (например, VL-VH или VH-VL). Известны различные методики для определения связывающих доменов согласно настоящему описанию, которые специфично связываются с определенной мишенью, включая вестерн-блоттинг, ELISA, проточную цитометрию или анализ Biacore™.

Связывающий домен (или его гибридный белок) специфично связывается с молекулой-мишенью, если он связывается или присоединяется к молекуле-мишени со сродством или Ka (т. е. константой ассоциации равновесия определенных взаимодействий связывания с единицами 1/М), например, большей или равной приблизительно 10⁵ M^-1. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения связывающий домен (или его гибридный белок) связывается с мишенью с Ka большей или равной приблизительно 10⁶ M^-1, 10⁷ M^-1, 10⁸ M^-1, 10⁹ M^-1, 10¹⁰ M^-1, 10¹¹ M^-1, 10¹² M^-1 или 10¹³ M^-1. Термин связывающие домены с высоким сродством (или их одноцепочечные гибридные белки) обозначает связывающие домены с K_a по меньшей мере 10⁷ M^-1, по меньшей мере 10⁸ M^-1, по меньшей мере 10⁹ M^-1, по меньшей мере 10¹⁰ M^-1, по меньшей мере 10¹¹ M^-1, по меньшей мере 10¹² M^-1, по меньшей мере 10¹³ M^-1 или боль

- 10 032828 ше. В другом случае аффинность можно определить как константу равновесия диссоциации (K_d) определенных взаимодействий связывания с единицами М (например, 10^-5-10^-13 М или меньше). Сродство связывающих доменов полипептидов или гибридных белков согласно настоящему описанию можно определить с помощью традиционных методов (см., например, Scatchard et al. (1949) Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660; и патенты США № 5283173; 5468614 или эквиваленты).

Рецептор T-клеток (TCR) представляет собой молекулу, находящуюся на поверхности T-клеток, которая наряду с CD3 обычно отвечает за распознавание антигенов, связанных с молекулами главного комплекса гистосовместимости (MHC). В большинстве T-клеток она состоит из гетеродимера высоко вариабельных а и β цепей, соединенных дисульфидными связями. В других T-клетках экспрессируется альтернативный рецептор, состоящий из вариабельных γ и δ цепей. Каждая цепь TCR является членом суперсемейства иммуноглобулинов и имеет N-терминальный вариабельный домен иммуноглобулинов, один константный домен иммуноглобулинов, трансмембранный участок и короткий цитоплазматический хвост на С-конце (см. Abbas and Lichtman, Cellular and Molecular Immunology (5th Ed.), Editor: Saunders, 30 Philadelphia, 2003; Janeway et al., Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 4^th Ed., Current Biology Publications, с. 148, 149 и 172, 1999). Согласно настоящему описанию TCR может представлять собой TCR различных видов животных, включая человека, мышь, крысу и других млекопитающих.

Термин гибридный белок, SMIP или антитело против TCR обозначает гибридный белок, SMIP или антитело, которое специфично связывается с молекулой TCR или одной из его отдельных цепей (например, TCRa, TCRβ, TCRγ или TCRδ цепь). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения гибридный белок, SMIP или антитело специфично связывается с TCRa и/или TCRβ.

В данной области техники известно, что CD3 представляет собой мультибелковый комплекс, состоящий из 6 цепей (см. Abbas and Lichtman, 2003; Janeway et al., p. 172 and 178, 1999). У млекопитающих указанный комплекс содержит CD3γ цепь, CD3δ цепь, две CD3e цепи и гомодимер CD3ζ цепей. CD3γ, CD3δ и CD3e цепи представляют собой высоко родственные поверхностные белки клетки суперсемейства иммуноглобулинов, содержащие один иммуноглобулиновый домен. Трансмембранные участки CD3γ, CD3δ и CD3e цепей заряжены отрицательно, что позволяет указанным цепям связываться с положительно заряженными цепями рецептора T-клеток. Внутриклеточные хвосты каждой из CD3γ, CD3δ и CD3e цепей содержат одиночный консервативный мотив, который, как известно, является активационным тирозинсодержащим мотивом иммунорецептора или ITAM, тогда как каждая CD3ζ цепь имеет три мотива. Не желая быть связанными теорией, считается, что ITAM важны для способности T-клеток запускать сигнальный путь. В настоящем описании CD3 может представлять собой CD3 различных видов животных, включая человека, мышь, крысу и других млекопитающих.

В настоящем описании термин гибридный белок, SMIP или антитело против CD3 обозначает гибридный белок, SMIP или антитело, которое специфично связывается с отдельными цепями CD3 (например, CD3γ, CD3δ, CD3e цепью) или комплексом, образованным двумя или более отдельными цепями CD3 (например, комплексом, состоящим из более чем одна цепь CD3e, комплексом, образованным цепями CD3γ и CD3e, комплексом, образованным цепями CD3δ и CD3e). Согласно некоторым определенным вариантам реализации настоящего изобретения гибридный белок против CD3, SMIP или антитело специфично связывается с CD3γ, CD3δ, CD3e цепью или их любыми сочетаниями и более предпочтительно с CD3e.

Согласно настоящему описанию термин комплекс TCR обозначает комплекс, образованный путём объединения CD3 и TCR. Например, комплекс TCR может состоять из CD3γ цепи, CD3δ цепи, двух CD3e цепей, гомодимера из CD3ζ цепей, TCRa цепи и TCRβ цепи. В другом случае комплекс TCR может состоять из CD3γ цепи, CD3δ цепи, двух CD3e цепей, гомодимера из CD3ζ цепей, TCRγ цепи и TCRδ цепи.

Термин компонент комплекса TCR согласно настоящему описанию обозначает цепь TCR (т.е. TCRa, TCRβ, TCRγ или TCRδ), CD3 цепь (т.е. CD3γ CD3δ, CD3e или CD3ζ или комплекс, образованный двумя или более TCR цепями или CD3 цепями (например, комплекс TCRa и TCRβ, комплекс CD3δ и CD3e, комплекс CD3γ и CD3e, или под-комплекс TCR, состоящий из TCRa и TCRβ, CD3γ, CD3δ и двух CD3e цепей).

Для справки, комплекс TCR в большинстве случаев отвечает за начало ответа T-клеток на антиген, связанный молекулами MHC. Считается, что связывание лиганда пептид:MHC с TCR и ко-рецептором (т.е. CD4 и CD8) сближает комплекс TCR, ко-рецептор и тирозиновую фосфатазу CD45. Это позволяет CD45 удалить ингибирующие фосфатные группы и благодаря этому активировать протеинкиназы Lck и Fyn. Активация указанных протеинкиназ приводит к фосфорилированию ITAM и CD3ζ цепей, что, в свою очередь, придает указанным цепям способность связывать цитозольную тирозинкиназу ZAP-70. Последующая активация связанной ZAP-70 фосфорилированием запускает три сигнальных каскада, два из которых запускаются фосфорилированием и активацией PLC-γ, которая затем расщепляет фосфатидилинозитол фосфаты (PIPs) до диацилглицерола (DAG) и инозитолтрифосфата (IP3). Активация протеинкиназы С DAG приводит к активации транскрипционного фактора NFkB. Быстрое повышение концен

- 11 032828 трации свободных ионов Са²⁺ внутри клетки в результате активации IP3 активирует цитоплазматическую фосфатазу, кальцинейрин, которая позволяет транскрипционному фактору NFAT (ядерный фактор активированных T-клеток) переноситься из цитоплазмы в ядро. Для полной транскрипционной активности NFAT также необходим член семейства транскрипционных факторов АР-1, димеры членов семейств транскрипционных регуляторов Fos и Jun. Третьим сигнальным путем, запускаемым активированным ZAP-70 является активация RAS и последующая активация каскада MAP киназ. Это завершается активацией транскрипционных факторов Fos и далее АР-1. Вместе NFkB, NFAT, АР-1 действуют на хромосомы T-клеток, запуская транскрипцию новых генов, что приводит к дифференцировке, пролиферации и эффекторному действию на T-клетки. См. Janeway et al., с.178, 1999.

Согласно некоторым вариантам реализации связывающий домен согласно настоящему описанию специфично связывается с отдельной цепью CD3 (например, CD3y CD35, CD3e) или с сочетанием двух или более отдельных цепей CD3 (например, комплексом, образованным CD3y и CD3e, или комплексом, образованным CD35 и CD3e). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения связывающий домен специфично связывается с отдельной цепью CD3 человека (например, CD3y цепью человека, CD35 цепью человека и CD3e цепью человека) или с сочетанием двух или более отдельных цепей CD3 человека (например, комплексом, образованным CD3y и CD3e человека, или комплексом, образованным CD35 и CD3e человека). Согласно некоторым предпочтительным вариантам реализации настоящего изобретения связывающий домен специфично связывается с цепью CD3e человека.

Согласно некоторым вариантам реализации связывающий домен согласно настоящему описанию специфично связывается с TCRa, TCR[^J>. или гетеродимером, образованным TCRa и TCR[^J>. Согласно некоторым предпочтительным вариантам реализации настоящего изобретения связывающий домен специфично связывается с одним или более TCRa человека, TCR[^J> человека или гетеродимером, образованным TCRa человека и TCR[^J> человека.

Согласно некоторым вариантам реализации связывающий домен согласно настоящему описанию связывается с комплексом, образованным одной или более цепями CD3 с одной или более цепями TCR, таким как комплекс, образованный CD3y цепью, CD35 цепью, CD3e цепью, TCRa цепью или TCR[^J> цепью или любое их сочетание. Согласно другим вариантам реализации связывающий домен согласно настоящему описанию связывается с комплексом, образованным одной или более цепями CD3 человека с одной или более TCR цепями человека, таким как комплекс, образованный CD3y цепью человека, CD35 цепью человека, CD3e цепью человека, TCRa цепью человека или TCR[^J> цепью человека или любым их сочетанием. Согласно некоторым вариантам реализации связывающий домен согласно настоящему описанию связывается с комплексом, образованным одной CD3y цепью человека, одной CD35 цепью человека, двумя CD3e цепями человека, одной TCRa цепью человека и одной TCR[^J> цепью человека.

Связывающие домены согласно настоящему описанию могут быть получены методами согласно настоящему описанию или различными методами, известными в данной области техники (см., например, патенты США № 6,291,161; 6,291,158). Источники связывающих доменов включают последовательности нуклеиновых кислот вариабельных доменов антител различных видов (которые могут рассматриваться как антитела, sFvs, scFvs Fabs, как в библиотеке фаг), включая верблюдов, верблюдовых (от верблюдов, дромадеров или лам; Hamers-Casterman et al. (1993) Nature, 363:446 и Nguyen et al. (1998), J. Mol. Biol., 275:413), акул (Roux et al. (1998), Proc Nat'l. Acad. Sci. (USA) 95:11804), рыб (Nguyen et al. (2002), Immunogenetics, 54:39), грызунов, птиц или овечьих. Примеры антител против CD3, из которых можно получить связывающий домен согласно настоящему описанию, включают моноклональное антитело Cris-7 (Reinherz, E. L. et al. (eds.), Leukocyte typing II., Springer Verlag, New York, (1986)), моноклональное антитело BC3 (Anasetti et al. (1990) J. Exp. Med. 172:1691), OKT3 (Ortho multicenter Transplant Study Group (1985) N. Engl. J. Med. 313:337) и их производные, такие как OKT3 ala-ala (Herold et al. (2003), J. Clin. Invest. 11:409), визилицумаб (Carpenter et al. (2002) Blood 99:2712) и моноклональное антитело 145-2С11 (Hirsch et al. (1988) J. Immunol. 140: 3766). Примером антитела против TCR является моноклональное антитело Н57 (Lavasani et al. (2007) Scandinavian Journal of Immunology 65:39-47).

Альтернативный источник связывающих доменов согласно настоящему описанию включает последовательности, которые кодируют неупорядоченные библиотеки пептидов, или последовательности, которые кодируют полученное методами инженерии разнообразие аминокислот в петлевых участках альтернативных структур, непохожих на антитело, таких, как домены фибриногена, домены Кунитца, домены липокаина, V-подобные домены, домены лектина С-типа, MAT² или Fcab™ и т.п. Например, связывающие домены согласно настоящему описанию можно выбрать с помощью поиска в библиотеке фагов Fab Fab-фрагментов, которые специфично связываются с цепью CD3.

Также для создания связывающих доменов согласно настоящему описанию можно использовать традиционные подходы получения гибридом с использованием цепи CD3 в качестве иммуногена в подходящей системе (например, мыши, мыши HuMAb®, мыши ТС™, мыши KM®, ламы, цыплята, крысы, хомячки, кролики и т.д.).

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения связывающий домен пред

- 12 032828 ставляет собой одноцепочечный Fv- фрагмент (scFv), который сдержит VH и VL домены, специфичные в отношении TCR комплекса или его компонента. Согласно предпочтительным вариантам реализации настоящего изобретения V_H V_L домены представляют собой гуманизированные домены V_H и V_L или V_H V_L домены человека. Примеры V_H доменов включают домены BC3 V_H, OKT3 V_H, Н57 V_H и 2С11 V_H, приведённые в SEQ ID NO: 2,6, 49 и 58 соответственно. Другие примеры V_H доменов включают домены Cris-7 V_H, приведённые в SEQ ID NO: 220, 243, 244 и 245. Примеры V_L доменов включают домены BC3 V_L, OKT3 V_L, H57 V_L и 2C11 V_L, приведённые в SEQ ID NO: 4, 8, 51 и 60 соответственно. Другие примеры VL доменов включают домены Cris-7 VL, приведённые в SEQ ID NO: 222, 241 и 242. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения связывающий домен содержит или представляет собой последовательность, которая, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичны аминокислотной последовательности вариабельного участка легкой цепи (V_L) (например, SEQ ID NO: 4, 8, 51, 60, 222, 241 или 242) или вариабельного участка тяжелой цепи (V_H) (например, SEQ ID NO: 2, 6, 49, 58, 220, 243, 244 или 245) или обеим последовательностям моноклонального антитела или его фрагмента или его производного, которое специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, таким как CD3e, TCRa, TCR[^J>. TCRy и TCR5 или их сочетаниями.

Термин идентичность последовательностей в настоящем описании обозначает процент остатков аминокислот в данной последовательности, которые совпадают с остатками аминокислот другой сравниваемой последовательности полипептида после выравнивания последовательностей и введения пробелов при необходимости для достижения максимальной идентичности последовательностей, не рассматривая любые консервативные замены в качестве части идентичности последовательностей. Значения процента идентичности последовательностей можно получить с использованием программного обеспечения NCBI BLAST2.0 согласно by Altschul et al. (1997), Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, с параметрами, заданными по умолчанию.

Согласно некоторым вариантам реализации V_H участок связывающего домена согласно настоящему описанию может быть получен или основан на V_H известного моноклонального антитела (например, Cris-7, BC3, OKT3, включая их производные) и содержать одну или более вставок, одну или более делеций, одну или более замен аминокислот (например, консервативные замены аминокислот или неконсервативные замены аминокислот) или сочетание перечисленных выше изменений при сравнении с VH известного моноклонального антитела. Вставка(и), делеция(и) или замена(ы) могут располагаться в любой части участка VH, включая N- или С-конец или оба конца данного участка, при условии, что связывающий домен, содержащий измененный участок VH по-прежнему способен связывать его мишень с тем же сродством, что и связывающий домен дикого типа.

Согласно некоторым вариантам реализации участок VL связывающего домена согласно настоящему описанию может быть получен или основан на V_L известного моноклонального антитела (например, Cris-7, BC3, OKT3, включая их производные) и содержать одну или более вставок, одну или более делеций, одну или более замену аминокислот (например, консервативные замены аминокислот или неконсервативные замены аминокислот) или сочетание перечисленных выше изменений при сравнении с V_L известного моноклонального антитела. Вставка(и), делеция(и) или замена(ы) могут располагаться в любой части VL участка, включая N- или С-конец или оба конца данного участка, при условии, что связывающий домен, содержащий измененный VL участок по-прежнему способен связывать его мишень с тем же сродством, что и связывающий домен дикого типа.

V_H и V_L домены могут располагаться в любом порядке (т.е. от N-конца к С-концу V_H-V_LV_L-V_H) и могут быть разделены связывающей последовательностью вариабельных доменов. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения связывающие последовательности вариабельных доменов включают последовательности, принадлежащие к семейству GlySer, Gly₂Ser (SEQ ID NO: 339), Gly₃Ser (SEQ ID NO: 340), Gly₄Ser (SEQ ID NO: 341) и Gly₅Ser (SEQ ID NO: 342), включая (Gly3Ser)1(Gly4Ser)1(SEQ ID NO: 343), (Gly3Ser)2(Gly4Ser)1(SEQ ID NO: 344), (Gly3Ser)3(Gly4Ser)1(SEQ ID NO: 345), (Gly3Ser)4(Gly4Ser)1(SEQ ID NO: 346), (Gly3Ser)5(Gly4Ser)1 (SEQ ID NO: 347), (Gly₃Ser)j(Gly₄Ser)! (SEQ ID NO: 348), (Gly₃Ser)j(Gly₄Ser)₂(SEQ ID NO: 349), (Gly₃Ser)j(Gly₄Ser)₃(SEQ ID NO: 350), (Gly₃Ser)1(Gly4Ser)4(SEQ ID NO: 351), (Gly₃Ser)1(Gly4Ser)₃(SEQ ID NO: 352), (Gly₃Ser)₃(Gly4Ser)₃ (SEQ ID NO: 353), (Gly₃Ser)4(Gly4Ser)4 (SEQ ID NO: 354), (GlwSerHGlwSer), (SEQ ID NO: 355) или (Gly4Ser)2 (SEQ ID NO: 356), (Gly4Ser)₃ (SEQ ID NO: 145), (Gly4Ser)4 (SEQ ID NO: 357) или (Gly₄Ser)₅ (SEQ ID NO: 358). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения связывающая последовательность вариабельных доменов представляет собой GGGGSGGGGSGGGGSAQ (SEQ ID NO: 98). Согласно предпочтительным вариантам реализации настоящего изобретения указанные линкерные последовательности, основанные на (Gly_xSer), применяются для соединения вариабельных доменов и не применяются для соединения связывающего домена (например, scFv) с Fc- хвостом (например, IgG CH2CH3). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения линкерная последовательность вариабельных доменов содержит от приблизительно 5 до приблизительно 35 аминокислот предпочтительно содержит от приблизительно 15 до приблизительно 25 аминокислот.

- 13 032828

Любая вставка(и), делеция(и) или замена(ы) в N-конце или С-конце определенного домена или участка согласно настоящему описанию может являться результатом, например, того, что указанный вариабельный участок методами инженерии был соединен с другим вариабельным участком (например, замены аминокислот в соединении между участками V_L и V_H или участками V_L и V_H), или того, что методами инженерии связывающий домен соединен с константной областью (например, замены аминокислот в соединении связывающего домена и шарнирного линкера). Например, может быть добавлена, удалена или замещена одна или более (например, 2-8) аминокислот в одном или более соединениях гибридного белка согласно более подробному описанию ниже. Примеры связывающих доменов согласно настоящему описанию включают домены, представленные в SEQ ID NO:18, 20, 48, 62 и 258-264. Согласно некоторым предпочтительным вариантам реализации одноцепочечный гибридный белок согласно настоящему описанию содержит связывающий домен, содержащий последовательность аминокислот, представленную в одной из SEQ ID NO: 258-264.

Линкерный полипептид.

Согласно настоящему описанию гибридные белки согласно настоящему описанию содержат линкерный полипептид, который соединяет связывающий домен, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, с C_H2 участком иммуноглобулина или C_H3 участком иммуноглобулина. Кроме выполнения функции разнесения связывающего домена и остальной части гибридного белка, линкер может обеспечивать гибкость или жесткость для соответствующей ориентации связывающего домена гибридного белка для взаимодействия с его мишенью (т.е. комплексом TCR или его компонентом, таким как CD3). Также линкер может способствовать экспрессии полноразмерного гибридного белка и обеспечивать стабильность очищенного белка как in vitro, так и in vivo после введения пациенту, нуждающемуся в таком лечении, например, человеку, и предпочтительно не является иммуногенным или является слабо иммуногенным для указанного пациента.

Линкеры, предполагаемые в настоящем описании, включают, например, пептиды, полученные от междоменного участка члена суперсемейства иммуноглобулинов, междоменного участка иммуноглобулинов (например, шарнирный участок иммуноглобулина) или стебелького участка лектинов типа С, семейство мембранных белков 2 типа (см. примеры последовательностей стебелькового участка лектинов изложены в публикации заявки РСТ № WO 2007/146968, такие как SEQ ID NO: 111,113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 167, 169, 231, 233, 235, 237, 239, 241, 243, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 287, 289, 297, 305, 307, 309-311, 313-331, 346, 373-377, 380 или 381 указанной публикации, которые включены в настоящее описание посредством ссылки) и стебельковый участок молекул кластера дифференцировки (CD).

Линкер, подходящий для применения в гибридных белках согласно настоящему описанию, включает шарнирную область антител, выбранных из шарнирной области IgG, IgA, IgD, IgE CH2, IgM CH2 или их фрагментов или вариантов. Согласно некоторым предпочтительным вариантам реализации линкер может представлять собой шарнирную область антитела, выбранную из IgG1 человека, IgG2 человека, IgG3 человека, IgG4 человека или их фрагментов или вариантов. Согласно некоторым вариантам реализации линкер представляет собой шарнирную область дикого типа иммуноглобулина такого, как шарнирная область иммуноглобулина дикого типа человека. Примерами линкеров являются шарнирная область IgG1 дикого типа человека и шарнирная область IGHG2c дикого типа мыши, последовательности которых представлены в SEQ ID NO: 63 и 72 соответственно.

Согласно некоторым вариантам реализации один или более остатков аминокислот могут быть добавлены к N-концу или С-концу шарнирной области иммуноглобулина дикого типа в качестве этапа при создании конструкции гибридного белка. Примеры модифицированных линкеров могут содержать дополнительные связующие остатки аминокислот на N-конце, такие как один RT (например, показанный в SEQ ID NO: 100 и 52), RSS (например, показанный в SEQ ID NO: 328 и 331-338), TG (например, показанный в SEQ ID NO: 177) или Т (например, показанный в SEQ ID NO: 300); на С-конце, такие как SG (например, показанный в SEQ ID NO: 212 и 213);или делецию, дополненную добавлением, таким как AP с SG, добавленной на С-конце (например, показанные в SEQ ID NO: 212).

Согласно предпочтительным вариантам реализации настоящего изобретения линкер представляет собой мутантную шарнирную область иммуноглобулина такую, как мутантная шарнирная область иммуноглобулина IgG. Например, шарнирная область иммуноглобулина человека IgG1 дикого типа содержит три остатка цистеина: цистеин, расположенный на самом N-конце обозначается как первый цистеин, тогда как цистеин, расположенный на самом С-конце шарнирной области обозначается как третий цистеин. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения линкер представляет собой мутантную шарнирную область иммуноглобулина IgG человека с только двумя остатками цистеина, такую как шарнирная область иммуноглобулина IgG1 человека, в которой первый цистеин заменен на серин. Согласно некоторым другим вариантам реализации настоящего изобретения линкер представляет собой мутантную шарнирную область иммуноглобулина IgG человека с только одним остатком цистеина, например, первым, вторым или третьим цистеином. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения первый остаток пролина, расположенный на С-конце от третьего цистеина в шар- 14 032828 нирной области, IgG1 человека заменен, например, на серин. Примеры мутантных шарнирных областей IgG1 человека, которые могут быть использованы в качестве линкерного пептида между связывающим доменом и остальной частью гибридного белка приведены в списке последовательностей, такие как линкеры 47-49, 51 и 53-60 (SEQ ID NO: 99, 146-148 и 150-157 соответственно). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения один или более остатков аминокислот могут быть добавлены к N-концу или С-концу мутантной шарнирной области иммуноглобулина в качестве этапа при создании конструкции гибридного белка. Примеры подобных модифицированных линкеров представлены на SEQ ID NO: 10, 335 и 300, отличающиеся тем, что остатки аминокислот RT, RSS или Т, соответственно, добавлены на N-конце мутантной шарнирной области IgG1 человека.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения линкер может содержать один или более остатков цистеина, но только один остаток цистеина участвует в образовании межцепочечных дисульфидных связей, например, второй или третий цистеин IgG1. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения линкер может содержать более двух остатков цистеинов, но в образовании межцепочечных дисульфидных связей участвуют оба остатка цистеина.

Согласно некоторым вариантам реализации линкерные полипептиды согласно настоящему описанию получают из шарнирных областей иммуноглобулина дикого типа (например, шарнирной области IgG1), и они содержат одну или более (например, 1, 2, 3 или 4) вставок, одну или более (например, 1, 2, 3 или 4) делеций, одну или более (например, 1, 2, 3 или 4) замен аминокислот (например, консервативные замены аминокислот и неконсервативные замены аминокислот) или сочетание перечисленных выше мутаций при сравнении с шарнирной областью иммуноглобулина дикого типа и при условии, что модифицированная шарнирная область сохраняет гибкость или жесткость, подходящую для правильного расположения связывающего домена гибридного белка для взаимодействия с его мишенью. Вставка(и), делеция(и) или замена(ы) могут быть в любом месте шарнирной области иммуноглобулина дикого типа, включая N- или С-конце или оба конца. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения линкерный полипептид содержит или представляет собой последовательность, которая по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 81%, по меньшей мере на 82%, по меньшей мере на 83%, по меньшей мере на 84%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 86%, по меньшей мере на 87%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 89%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% идентична шарнирной области иммуноглобулина дикого типа, такой как шарнирная область IgG1 дикого типа человека, шарнирная область IgG2 дикого типа человека или шарнирная область IgG4 дикого типа человека.

Другие варианты шарнирных областей или линкерных последовательностей можно получить на основе частей поверхностных рецепторов клетки, которые соединяют IgV-подобные или IgC-подобные домены. Участки, расположенные между IgV-подобными доменами, где рецептор поверхности клеток содержит большое количество повторяющихся IgV-подобных доменов, и между IgC-подобными доменами, где рецептор поверхности клеток содержит множество IgC-подобных участков, также могут быть использованы в качестве соединяющего участка или линкерного пептида. Примеры шарнирных областей или линкерных последовательностей междоменных участков между IgV-подобными или IgC-подобными или между IgC-подобными или IgV-подобными доменами обнаруживаются в CD2, CD4, CD22, CD33, CD48, CD58, CD66, CD80, CD86, CD96, CD 150, CD 166 и CD244. Больше других шарнирных областей можно получить от участков, содержащих дисульфидные связи рецепторов второго типа членов суперсемейства не иммуноглобулинов, таких, как CD69, CD72 и CD161.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения последовательности шарнирной области или линкера содержат 2-150 аминокислот, 5-60 аминокислот, 2-40 аминокислот, предпочтительно имеют 8-20, более предпочтительно, 12-15 аминокислот и могут быть преимущественно гибкими, но также могут придавать более жесткие свойства или могут иметь преимущественно а-спиральную структуру с минимальным количеством β-листов. Предпочтительно, шарнирные и линкерные последовательности стабильны в плазме и сыворотке и устойчивы к протеолитическому расщеплению. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения первый лизин в верхней шарнирной области IgG1 мутирован для сведения к минимуму протеолитического расщепления, предпочтительно лизин замещен на метионин, треонин, аланин или глицин, или удален (см., например, SEQ ID NO: 379-434, которые могут включать соединяющие аминокислоты на N-конце, предпочтительно RT). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения последовательности могут содержать естественные или добавленные мотивы, такие как центральная структура СРРС (SEQ ID NO: 330), которая придает способность образовывать дисульфидную связь или множественные дисульфидные связи для стабилизации С-конца молекулы. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения последовательности могут содержать один или более сайтов гликозилирования. Неожиданной особенностью изменения длины шарнирной области является модуляция уровня ток ионов кальция, вызванная одноцепочечным гибридным белком согласно настоящему описанию (см., Пример 5). Примеры шарнирных областей для

- 15 032828 модуляции тока ионов кальция включают SEQ ID NO: 212-218. Также длина и/или последовательность шарнира могут влиять на активность гибридного белка блокировать ответ T-клеток на аллоантиген (см. Пример 10). Линкеры, применимые в качестве соединительных участков в гибридных участках согласно настоящему описанию, представлены на SEQ ID NO: 379-434.

Полипептид CH2 участка иммуноглобулина.

Согласно настоящему описанию гибридный белок согласно настоящему описанию может содержать C_H2 участок иммуноглобулина, который содержит замену аминокислоты аспарагин в положении 297 (например, аспарагин на аланин). Такие замены аминокислот снижают или удаляют гликозилирование в указанном сайте и отменяет эффективное связывание Fc с FcyR и C1q.

Согласно некоторым вариантам реализации гибридный белок согласно настоящему описанию может содержать CH2 участок иммуноглобулина, который содержит по меньшей мере одну замену или делецию в положениях 234-238. Например, C_H2 участок иммуноглобулина может содержать замену в положении 234, 235, 236, 237 или 238, положениях 234 и 235, положениях 234 и 236, положениях 234 и 237, положениях 234 и 238, положениях 234-236, положениях 234, 235 и 237, положениях 234, 236 и 238, положениях 234, 235, 237 и 238, положениях 236-238 или любые другие сочетания двух, трех, четырех или пяти аминокислот в положениях 234-238. Также или в другом случае мутантный C_H2 участок может содержать одну или более (например, две, три, четыре или пять) делеций аминокислот в положениях 234238, предпочтительно в положении 236 или 237, при этом в других положениях произошли замены. Перечисленные выше мутации снижают или устраняют антитело-зависимую опосредованную клеточную токсичность (ADCC) или способность связываться с рецептором Fc гибридного белка. Согласно некоторым предпочтительным вариантам реализации настоящего изобретения остатки аминокислот в одном или более положениях 234-238 были заменены на один или более остатков аланина. Согласно другим предпочтительным вариантам реализации настоящего изобретения был удален только один из остатков аминокислот в положениях 234-238, при этом один или более из оставшихся остатков аминокислот в положениях 234-238 были замещены на другие аминокислоты (например, аланин или серин).

Согласно некоторым другим вариантам реализации гибридный белок согласно настоящему описанию может содержать C_H2 участок иммуноглобулина, который содержит по меньшей мере одну или более замену аминокислот в положениях 253, 310, 318, 320, 322 и 331. Например, C_H2 участок иммуноглобулина может содержать замену в положениях 253, 310, 318, 320, 322 или 331, положениях 318 и 320, положениях 318 и 322, положениях 318, 320 и 322 или другие сочетания двух, трех, четырех, пяти или шести аминокислот в положениях 253, 310, 318, 320, 322 и 331. Перечисленные выше мутации снижают или устраняют комплемент-зависимую цитотоксичность (CDC) гибридного белка.

Согласно некоторым другим вариантам реализации настоящего изобретения кроме замены аминокислоты в положении 297, мутантный C_H2 участок гибридного белка может также содержать одну или более (например, две, три, четыре или пять) дополнительных замен в положениях 234-238. Например, мутантный участок C_H2 гибридного белка может содержать в положениях 234 и 297, положениях 234, 235 и 297, положениях 234, 236 и 297, положениях 234-236 и 297, положениях 234, 235, 237 и 297, положениях 234, 236, 238 и 297, положениях 234, 235, 237, 238 и 297, положениях 236-238 и 297 или любые сочетания двух, трех, четырех или пяти аминокислот в положениях 234-238 кроме положения 297В дополнение или в качестве альтернативы мутантный C_H2 участок может содержать одну или более (например, две, три, четыре или пять) делеций аминокислот в положениях 234-238, таких, как положение 236 или положение 237. Дополнительные мутации снижают или устраняют антитело-зависимую опосредованную клеточную токсичность (ADCC) или способность связываться с рецептором Fc гибридного белка. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения остатки аминокислот в одном или более положениях 234-238 были заменены на один или более остаток аланина. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения только один из остатков аминокислот в положениях 234238 был удален, при этом одна или более оставшихся аминокислот в положениях 234-238 были замещены на другую аминокислоту (например, предпочтительно аланин или серин).

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения кроме одной или более (например, 2, 3, 4 или 5) замен аминокислот в положениях 234-238, мутантный C_H2 участок гибридного белка согласно настоящему описанию может содержать одну или более (например, 2, 3, 4, 5 или 6) дополнительных замен аминокислот (например, замещенных на аланин) в одном или более положениях, участвующих в связывании комплемента (например, в положениях 1253, Н310, Е318, K320, K322 или Р331). Предпочтительные мутантные CH2 участки иммуноглобулина содержат IgG1, IgG2, IgG4 человека и CH2 участки IgG2a мыши с заменами на аланин в положениях 234, 235, 237 (при наличии), 318, 320 и 322. Примером мутантного CH2 участка иммуноглобулина является CH2 участок IGHG2c мыши с заменами на аланин в положениях L234, L235, G237, Е318, K320 и K322 (SEQ ID NO: 50).

Также согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения кроме замены аминокислоты в положении 297 и дополнительных делеции(й) или замены(н) в положениях 234-238, мутантный C_H2 участок гибридного белка согласно настоящему описанию также может содержать одну или более (например, две, три, четыре, пять или шесть) дополнительных замен в положениях 253, 310, 318, 320, 322 и 331. Например, C_H2 участок иммуноглобулина может содержать (1) замену в положении 297, (2) одну

- 16 032828 или более замен или делеций или их сочетание в положениях 234-238, и одну или более (например, 2, 3, 4, 5, или 6) замен аминокислот в положениях I253, Н310, Е318, K320, K322 и Р331, таких как одна, две, три замены в положениях Е318, K320 и K322. Предпочтительно аминокислоты в указанных выше положениях заменены на аланин или серин.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения полипептид C_H2 участка иммуноглобулина содержит (i) замену аминокислоты аспарагина в положении 297 и одну замену аминокислот в положении 234, 235, 236 или 237; (ii) замену аминокислоты аспарагина в положении 297 и замены аминокислот в двух положениях из 234-237; (iii) замену аминокислоты аспарагина в положении 297 и замены аминокислот в трех положениях из 234-237; (iv) замену аминокислоты аспарагина в положении 297, замены аминокислот в положениях 234, 235 и 237 и делецию аминокислоты в положении 236; (v) замены аминокислот в трех положениях из 234-237 и замены аминокислот в положениях 318, 320 и 322; или (vi) замены аминокислот в трех положениях из 234-237, делецию аминокислоты в положении 236 и замены аминокислот в положениях 318, 320 и 322.

Примеры мутантных C_H2 участков иммуноглобулина с заменами аминокислоты аспарагин в положении 297 в гибридных белках согласно настоящему описанию включают: C_H2 участок IgG1 человека с заменами на аланин в положениях L234, L235, G237 и N297 и делецией в положении G236 (SEQ ID NO:

103) , C_H2 участок IgG2 человека с заменами аминокислот в положениях V234, G236, и N297 (SEQ ID NO:

104) , C_H2 участок IgG4 человека с заменами на аланин в положениях F234, L235, G237 и N297 и делецией в положении G236 (SEQ ID NO: 75), C_H2 участок IgG4 человека с заменами на аланин в положениях F234 и N297 (SEQ ID NO: 375), C_H2 участок IgG4 человека с заменами на аланин в положениях L235 и N297 (SEQ ID NO: 376), C_H2 участок IgG4 человека с заменами на аланин в положениях G236 и N297 (SEQ ID NO: 377), и C_H2 участок IgG4 человека с заменами на аланин в положениях G237 и N297 (SEQ ID NO: 378).

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения, кроме указанных выше замен аминокислот мутантный C_H2 участок гибридного белка согласно настоящему описанию может содержать одну или более дополнительных замен аминокислот в других положениях. Такие замены аминокислот могут быть консервативными или неконсервативными заменами аминокислот. Например, согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения, Р233 может быть заменен на Е233 в мутантном C_H2 участке IgG2 (см., например, SEQ ID NO: 104). В дополнение или в качестве альтернативы согласно некоторым вариантам реализации мутантный CH2 участок гибридного белка согласно настоящему описанию может содержать одну или более вставок, делеций аминокислот или и вставок, и делеций. Вставка(и), делеция(и) или замена(ы) могут располагаться в любом месте C_H2 участка иммуноглобулина, например, на N- или С-концах C_H2 участка дикого типа иммуноглобулина, полученные после объединения CH2 участка с другим участком (например, вариабельным участком) с помощью линкера.

Согласно некоторым вариантам реализации мутантный CH2 участок гибридного белка согласно настоящему описанию содержит или представляет собой последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% идентична C_H2 участку иммуноглобулина дикого типа, такому как C_H2 участку дикого типа IgG1, IgG2 IgG4 человека или IgG2a мыши (например, IGHG2c).

Мутантный C_H2 участок гибридного белка согласно настоящему описанию может быть получен из C_H2 участка различных изотипов иммуноглобулина, таких как IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, и IgD, различных видов (включая человека, крысу, мышь и других млекопитающих). Согласно некоторым предпочтительным вариантам реализации мутантный CH2 участок гибридного белка согласно настоящему описанию может быть получен из CH2 участка IgG1, IgG2 или IgG4 человека или IgG2a мыши (например, IGHG2c), последовательности которых представлены в SEQ ID NO: 64, 66, 68 и 73.

В данной области техники известны способы введения мутаций в пределах или за пределами Fcдомена, которые могут изменить взаимодействия Fc с рецепторами Fc (CD16, CD32, CD64, CD89, FceR1, FcRn) или компонентом комплемента C1q (см., например, патент США № 5624821; Presta (2002), Curr. Pharma. Biotechnol. 3:237).

Согласно некоторым вариантам реализации гибридный белок согласно настоящему описанию не содержит CH2 участок иммуноглобулина.

Полипептид CH3 участка иммуноглобулина.

Согласно настоящему описанию гибридный белок согласно настоящему описанию содержит один или более полипептидов CH3 участка иммуноглобулина. Согласно некоторым вариантам реализации гибридный белок согласно настоящему описанию не содержит CH2 участок. Согласно таким вариантам реализации связывающий домен, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, непосредственно связан с CH3 участком полипептида посредством линкерного полипептида (например, шарнира). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения, в которых отсутствует C_H2 участок, гибридный белок согласно настоящему описанию может содержать только один C_H3 участок. Альтернативные варианты реализации настоящего изобретения включают гибридный белок согласно настоящему описанию, который содержит два CH3 участка и не содержит CH2 участок.

- 17 032828

Согласно вариантам реализации настоящего изобретения, в которых гибридный белок содержит мутантный C_H2 участок иммуноглобулина и C_H3 участок иммуноглобулина, C_H2 и C_H3 участки могут быть получены из одного или различных изотипов иммуноглобулинов, антител или аллельных вариантов. Предпочтительно, чтобы C_H2 участок был непосредственно связан с N-концом C_H3 участка. Примеры последовательностей, которые содержат C_H2 участок, непосредственно связанный с N-концом C_H3 участка представлены в SEQ ID NO: 11-14 и 101. В другом случае C_H2 участок может быть связан с C_H3 участком с помощью одной или более аминокислот или с помощью линкера (см., например, линкеры, представленные в Перечне последовательностей).

Согласно некоторым вариантам реализации гибридный белок согласно настоящему описанию может содержать два C_H3 участка иммуноглобулина. Указанные C_H3 участки могут быть участками дикого типа или мутантными C_H3 участками одного изотипа иммуноглобулина или различных изотипов иммуноглобулинов. Например, согласно некоторым вариантам реализации гибридный белок содержит C_H3 участок IgM человека и C_H3 участок IgG1 человека. Примеры последовательностей, в которых C_H3 участок IgM человека и C_H3 участок IgG1 человека соединены вместе, включают SEQ ID NO: 15 и 74. Согласно некоторым другим вариантам реализации настоящего изобретения гибридный белок содержит C_H3g участок мыши и C_H3y участок мыши. Примерами последовательностей, в которых C_H3p участок мыши и C_H3y участок мыши соединены вместе, являются SEQ ID NO: 308 и 309.

Согласно вариантам реализации настоящего изобретения, в которых гибридный белок содержит два C_H3 участка иммуноглобулина, C_H3 участок, расположенный на N-конце по отношению к другому C_H3 участку, обозначается термином первый C_H3 участок. Другой C_H3 участок обозначается термином второй CH3 участок. Согласно таким вариантам реализации два C_H3 участка иммуноглобулина могут быть соединены друг с другом непосредственно. Другими словами С-конец первого C_H3 участка непосредственно соединен со вторым C_H3 участком без промежуточных остатков аминокислот между ними (т.е. без линкера). В другом случае два C_H3 участка могут быть соединены с помощью одной или более аминокислот (например, 2-8) или с помощью линкера (см., например, линкеры, представленные в Перечне последовательностей).

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения C_H3 участок иммуноглобулина в гибридном белке согласно настоящему описанию может содержать одну или более (например, 2-8) дополнительных замен аминокислот. Такие замены аминокислот могут быть консервативными или неконсервативными. В дополнение или в качестве альтернативы согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения C_H3 участок иммуноглобулина в гибридном белке согласно настоящему описанию может содержать одну или более (например, 2-8) вставок, делеций аминокислот или и вставок и делеций. Вставка(и), делеция(и) или замена(ы) могут быть в любом месте C_H3 участка иммуноглобулина, включая N-конец и С-конец или оба.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения C_H3 участок иммуноглобулина в гибридном белке согласно настоящему описанию содержит или представляет собой последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% идентична C_H3 участку дикого типа иммуноглобулина, такому как C_H3 участок IgM, IgG1, IgG2 или IgG4 дикого типа человека.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения полипептид C_H3 участка иммуноглобулина представляет собой полипептид C_H3 участка дикого типа иммуноглобулина, включая C_H3 участок дикого типа одного из различных изотипов иммуноглобулинов (например, IgA, IgD, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgE, или IgM) различных видов (т.е. человека, крысы, мыши или других видов). Например, C_H3 участок иммуноглобулина может представлять собой C_H3 участок дикого типа IgG1 человека (например, SEQ ID NO: 65), C_H3 участок дикого типа IgG2 человека (например, SEQ ID NO: 67), C_H3 участок дикого типа IgG4 человека (например, SEQ ID NO: 69), CH3 участок дикого типа IgM человека (например, SEQ ID NO: 71), C_H3p участок дикого типа мыши (например, SEQ ID NO: 329) или C_H3 участок дикого типа IGHG2c мыши (например, SEQ ID NO: 54). Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения полипептид C_H3 участка иммуноглобулина представляет собой мутантный полипептид C_H3 участка иммуноглобулина. Мутации C_H3 участка иммуноглобулина могут находиться в одном или более положениях, которые участвуют в связывании комплемента, таких как Н433 или N434.

Дополнительные последовательности и модификации.

Согласно настоящему описанию одноцепочечный гибридный белок согласно настоящему описанию может содержать от N-конца к С-концу (а) связывающий домен, который специфично связывается с CD3 (например, CD3e), (б) линкерный полипептид, (в) необязательный полипептид C_H2 участка иммуноглобулина, и (г) полипептид C_H3 участка иммуноглобулина. Также гибридный белок согласно настоящему описанию может содержать один или более дополнительных участков, таких как лидерная последовательность на его N-конце для экспрессии гибридного белка, дополнительный Fc-подучасток (например, мутантный или дикого типа C_H4 участок IgM или IgE) или хвостовую последовательность на его Сконце для идентификации или очистки. Примеры хвостовых последовательностей могут содержать мет

- 18 032828 ки эпитопов для определения или очистки, такие как участок из 6 остатков гистидина или эпитоп FLAG.

Например, гибридный белок может содержать дополнительные остатки аминокислот, которые образуются при использовании специфических систем экспрессии. Например, использование коммерчески доступных векторов, которые экспрессируют желаемый полипептид в виде части химерного продукта глутатион^-трансферазы (GST) приводит к тому, что желаемый полипептид содержит дополнительный остаток глицина в положении -1 после отщепления части GST от желаемого пептида. Также включаются варианты, которые получаются в результате экспрессии в других векторах или системах, включая те, в которых гистидиновые метки встраивают в последовательность аминокислот, обычно на С- и/или Nконце последовательности. Примеры дополнительных последовательностей, которые могут присутствовать на С- или N-конце гибридного белка, включают три копии эпитопа FLAG, одну копию метки AVI и шесть остатков гистидина, представленные на SEQ ID NO: 70.

Согласно некоторым вариантам реализации гибридный белок согласно настоящему описанию содержит лидерный пептид на его N-конце. Лидерный пептид способствует секреции экспрессированного гибридного белка. Подразумевается использование любого из традиционных лидерных пептидов (сигнальных последовательностей) для транспорта только что синтезированных полипептидов или гибридных белков к секреторному пути для отщепления лидерного пептида от зрелого гибридного белка в месте соединения лидерного пептида с гибридным белком или поблизости от него. Определенные лидерные последовательности выбирают на основе соображений, известных в данной области техники, таких как использование последовательностей, кодируемых молекулами нуклеиновых кислот, которые обеспечивают легкое встраивание сайтов рестрикции в начале или конце последовательности, кодирующей лидерный пептид, чтобы упростить процесс молекулярной инженерии, при условии, что такие введенные последовательности кодируют аминокислоты, которые не мешают желаемому процессингу лидерного пептида только что синтезированного гибридного белка или не нарушают желаемую функцию полипептида или гибридного белка, если лидерная последовательность не отщепляется в процессе созревания полипептидов или гибридных белков. Примеры лидерных последовательностей согласно настоящему описанию включают природные лидерные последовательности или другие, такие как H₃NMDFQVQIFSFLLISASVIMSRG-CO2H (SEQ ID NO: 9).

Согласно некоторым вариантам реализации гибридный белок согласно настоящему описанию подвергается гликозилированию, при этом паттерн гликозилирования зависит от различных факторов, включая клетку-хозяин, в которой экспрессируется белок (при получении в рекомбинантных клеткаххозяинах), и условий культивирования.

Согласно другим вариантам реализации C_H2 или C_H3 участки иммуноглобулина гибридного белка согласно настоящему описанию могут иметь измененный паттерн гликозилирования по сравнению с CH2 или CH3 участками контрольной последовательности иммуноглобулина. Например, для изменения одной или более аминокислотных остатков, которые образуют сайт гликозилирования, могут быть использованы различные генетические методы (см. Со et al. (1993) Mol. Immunol. 30:1361; Jacquemon et al. (2006) J. Thromb. Haemost. 4:1047; Schuster et al. (2005) Cancer Res. 65:7934; Warnock et al. (2005) Biotechnol. Bioeng. 92:831). В другом случае методами инженерии можно получить клетки хозяина, в которых гибридные белки согласно настоящему описанию производятся для получения измененного паттерна гликозилирования.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящее описание также обеспечивает производные гибридных белков, описанных в настоящей заявке. Указанные производные включают гибридные белки, несущие модификации кроме вставок, делеций или замен остатков аминокислот. Предпочтительно модификации являются ковалентными по природе и включают, например, образование химических связей с полимерами, липидами, другими органическими и неорганическими функциональными группами. Могут быть получены производные согласно настоящему описанию для увеличения периода полураспада гибридного белка в циркуляции или для улучшения способности гибридного белка проникать в желаемые клетки, ткани или органы.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения in vivo период полураспада гибридного белка согласно настоящему описанию можно увеличить с использованием методов, известных в данной области техники, или увеличивая период полураспада больших молекул. Например, настоящее описание включает гибридные белки, которые ковалентно модифицированы или получены их производные для включения одного или более полимеров, таких как полиэтиленгликоль, полиоксиэтиленгликоль или полипропиленгликоль (см., например, патенты США № 4640835; 4496689; 4301144; 4670417; 4791192; 4179337). Другие полезные полимеры, известные в данной области техники, включают монометокси-полиэтиленгликоль, декстран, целлюлозу и другие основанные на углеводах полимеры, поли -Щ-винилпирролидон)-полиэтиленгликоль, гомополимеры пропиленгликоля, сополимер полипропиленоксида/этиленоксида, полиоксиэтилированные полиолы (например, глицерин) и поливиниловый спирт, а также смеси указанных полимеров. Особенно предпочтительными являются белки, модифицированные полиэтиленгликолем (PEG). Водорастворимые белки могут быть присоединены в определенных положениях, например, на N-конце гибридных белков согласно настоящему описанию или случайно присоединены к одной или более боковым цепям полипептида. Использование PEG для улучшения тера

- 19 032828 певтических свойств описано в патенте США № 6133426.

Согласно некоторым вариантам реализации гибридный белок согласно настоящему описанию представляет собой молекулу PIMS, которая также содержит шарнирную область иммуноглобулина, расположенную на N-конце. N-терминальная шарнирная область может быть аналогичной или может отличаться от линкера между C_H3 участком иммуноглобулина и связывающим доменом. Согласно некоторым вариантам реализации N-терминальный ликер содержит естественный или добавленный мотив (такой как СРРС, SEQ ID NO: 330) для обеспечения образования по меньшей мере одной дисульфидной связи для стабилизации N-конца димеризованной или мультимерной молекулы.

Способы получения и очистки гибридных белков.

Гибридные белки согласно настоящему описанию могут быть получены методами, известными в данной области. Например, способы получения гибридных белков SMIP описаны в публикациях Патентов США № 2003/0133939, 2003/0118592 и 2005/0136049, и способы получения PIMS белков описаны, например, в публикации заявки РСТ № WO 2009/023386.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящее описание обеспечивает очищенные гибридные белки согласно настоящему описанию. Термин очищенный в настоящем описании обозначает композицию, которую можно отделить от других компонентов, отличающуюся тем, что гибридный белок очищают до некоторой степени по сравнению с его природным состоянием. Термин очищенный белок, таким образом, также обозначает такой белок, выделенный из его природной среды. Согласно некоторым вариантам реализации настоящее описание обеспечивает существенно очищенные гибридные белки согласно настоящему описанию. Термин существенно очищенный обозначает белковую композицию, в которой белок является основным компонентом композиции, такую как, состоящую по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, а приблизительно на 70%, приблизительно на 80%, приблизительно на 90%, приблизительно на 95%, приблизительно на 99% из белка по весу.

Способы очистки белков хорошо известны специалистам в данной области техники. Указанные способы включают на одном уровне грубое фракционирование на полипептидную и неполипептидную фракции. Часто желательно проводить дополнительную очистку с помощью методов хроматографии и электрофореза для достижения частичной или полной очистки (или очистки до гомогенности). Аналитическими методами, особенно полезными для получения чистого гибридного белка, являются ионообменная хроматография, эксклюзионная хроматография, электрофорез в полиакриламидном геле и изоэлектрическое фокусирование. Особенно эффективными методами очистки пептидов являются жидкостная экспресс-хроматография белков и ВЭЖХ.

Специалисту в данной области техники известны различные способы определения степени очистки в свете настоящего описания. Они включают, например, определение специфической связывающей активности активной фракции или определение количества белка во фракции методом SDS/PAGE. Предпочтительным методом оценки чистоты белковой фракции является определение связывающей активности фракции для сравнения ее со связывающей активностью изначального субстрата и с помощью этого вычисление степени очистки, в настоящем описании выраженную термином -порядок числа очистки. Фактические единицы, использованные для выражения связывающей активности, будут, конечно, зависеть от выбранного способа после очистки и от того, проявляет ли экспрессированный белок определяемую связывающую активность.

Примеры гибридных белков.

Примеры одноцепочечных гибридных белков согласно настоящему описанию включают BC3 IgG1 N297, BC3 IgG1AA, BC3 IgG2AA, BC3 IgG4AA, BC3 НМ1, BC3 AC_H2, OKT3 IgG1AA, OKT3 IgG2AA, OKT3 IgG4AA, OKT3 НМ1, OKT3 AC_H2, Н57 null2, и 2С11 null2, представленные в SEQ ID NO: 80-85, 88-93, 96 и 97 соответственно. Примеры предпочтительных одноцепочечных гибридных белков согласно настоящему описанию включают химерный Cris-7 IgG1AA, химерный Cris-7 IgG2AA, химерный Cris-7 IgG4AA, химерный Cris-7 HM1, гуманизированный Cris-7 IgG1AA, гуманизированный Cris-7 IgG2AA, гуманизированный Cris-7 IgG4AA, и гуманизированный Cris-7 HM1, представленные в SEQ ID NO: 265299 соответственно. Дополнительные примеры одноцепочечных гибридных белков включают BC3 НМ1, BC3 AC_H2, OKT3 НМ1, и OKT3 AC_H2 без меток на С-конце, представленные на SEQ ID NO: 86, 87, 94, и 95 соответственно. Также примеры гибридных белков включают приведенные выше гибридные белки с лидерными последовательностями на N-конце, представленные на SEQ ID NO22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 47, 56, 76-79, 224, 226, 228, 230, 232, 234, 236, 238, 240, 247, 249, 251, 253, 255, и 257. Кроме этого примеры гибридных белков с лидерными последовательностями на N-конце включают Н57 half null (SEQ ID NO: 304) и Н57 HM2 (SEQ ID NO: 306). Другими примерами гибридных белков являются BC3 IgG1 N297 с различными линкерными последовательностями, представленными на SEQ ID NO: 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325 и 327. Некоторые из указанных примеров одноцепочечных гибридных белков подробно описаны в разделе Примеры ниже.

Функциональные признаки.

Согласно настоящему описанию одноцепочечный гибридный белок согласно настоящему описа

- 20 032828 нию может обладать одним или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7) или сочетанием следующих особенностей или функциональных признаков: (1) не активировать T-клетки, (2) не вызывать или вызывать минимальное высвобождение цитокинов, (3) вызывать фосфорилирование молекул сигнального пути TCR, (4) усиливать поток ионов кальция сильнее, чем соответствующее моноклональное антитело, (5) блокировать ответ T-клеток на антиген, (6) блокировать ответ T-клеток памяти на антиген; и (7) снижать активность комплекса TCR.

Согласно некоторым предпочтительным вариантам реализации одноцепочечный гибридный белок согласно настоящему описанию не активирует или минимально активирует T-клетки. Гибридный белок не активирует или минимально активирует T-клетки, если при действии на T-клетки (например, Tклетки, стимулированные ФГА или ConA) гибридный белок не вызывает статистически значимое увеличение количества активированных T-клеток по сравнению с необработанными клетками по меньшей мере по результатам одного in vitro или in vivo анализа, представленного в примерах настоящего описания. Предпочтительно активацию T-клеток измеряют в анализе активации стимулированных T-клеток in vitro, описанном в примере 1.

Согласно другим предпочтительным вариантам реализации гибридный белок согласно настоящему описанию не вызывает цитокиновый шторм или не вызывает клинически значимое высвобождение цитокинов. Гибридный белок не вызывает цитокиновый шторм (также обозначается термином вызывающий недетектируемое, номинальное или минимальное высвобождение цитокинов или не вызывает или вызывает минимально детектируемое высвобождение цитокинов), если при действии на T-клетки, он не вызывает статистически значимое увеличение количества по меньшей мере одного цитокина, включая IFNy; предпочтительно по меньшей мере двух цитокинов, включая IFNy и TNFa или IL-6 и TNFa; предпочтительно трех цитокинов, включая IL-6, IFNy, и TNFa; предпочтительно четырех цитокинов, включая IL-2, IL-6, IFNy, и TNFa; и предпочтительно по меньшей мере пяти цитокинов, включая IL2, IL-6, IL-10, IFNy, и TNFa; высвобождаемого обработанными клетками по сравнению с отсутствием обработки по результатам по меньшей мере одного in vitro или in vivo анализа, известного в данной области техники или описанного в примерах настоящего описания. Предпочтительно цитокиновый шторм измеряют по результатам анализа in vitro высвобождения цитокинов стимулированными T-клетками, описанного в примере 1. Клинически синдром высвобождения цитокинов характеризуется лихорадкой, ознобом, сыпью, тошнотой и в некоторых случаях одышкой и тахикардией, что соответствует максимальному высвобождению некоторых цитокинов, таких как IFNy, а также IL-2, IL-6, и TNFa. Цитокины, которые могут быть исследованы в анализе in vitro или in vivo, включают G-CSF, GM-CSF, IL-2, IL-4, IL-

5, IL-6, IL-10, IL-13, IL-17, IP-10, KC, МСР1, IFNy и TNFa; и более предпочтительно включают IL-2, IL-

6, IL-10, IFNy и TNFa.

Согласно другим предпочтительным вариантам реализации гибридный белок согласно настоящему описанию вызывает увеличение потока ионов кальция в клетки, такие как T-клетки. Гибридный белок вызывает повышение содержания кальция, если при обработке T-клеток он вызывает статистически значимое быстрое повышение потока ионов кальция в обработанные клетки (предпочтительно через 300 с, более предпочтительно через 200 с, и наиболее предпочтительно через 100 с после обработки) по сравнению с клетками, обработанными соответствующим антителом (т.е. антителом с таким же связывающим доменом, что и у одноцепочечного гибридного белка согласно настоящему описанию) по результатам анализа in vitro, известного в данной области техники или описанного в настоящей заявке. Предпочтительно поток ионов кальция, вызванный одноцепочечным гибридным белком согласно настоящему описанию сравним с потоком ионов, вызванным соответствующим антителом по результатам анализа потока ионов кальция in vitro, описанном в примере 5 и наблюдается или измеряется по меньшей мере в первые 100-300 с после обработки.

Согласно другим вариантам реализации одноцепочечный гибридный белок согласно настоящему описанию вызывает фосфорилирование молекулы сигнального пути TCR. Термин сигнальный путь TCR обозначает путь передачи сигнала, начинающийся со связывания лиганда пептида:MHC с TCR и его корепецтором или (CD4 или CD8). Термин молекула сигнального пути TCR обозначает молекулу, которая непосредственно участвует в сигнальном пути TCR, такую как молекула, фосфорилированное состояние которой (например, является ли молекула фосфорилированной или нет), связывающее сродство с другой молекулой которой или ферментативная активность которой меняется в ответ на сигнал от связывания лиганда пептид :MHC с TCR и его корецептором. Примеры молекул сигнального пути TCR включают комплекс TCR или его компоненты (например, CD3ζ цепи), ZAP-70, Fyn, Lck, фосфолипазу cy, протеинкиназу С, транскрипционный фактор NFkB, фосфатазу кальцинейрин, транскрипционный фактор NFAT, фактор обмена гуаниновых нуклеотидов (GEF), Ras, киназу MAP киназы киназы (MAPKKK), киназу MAP киназы (MAPKK), MAP киназу (ERK1/2) и Fos.

Одноцепочечный гибридный белок согласно настоящему описанию вызывает фосфорилирование молекулы сигнального пути TCR, если при обработке T-клеток он вызывает статистически значимое повышение фосфорилирования молекулы сигнального пути TCR (например, CD3ζ цепей, ZAP-70 и ERK1/2) по результатам in vitro или in vivo анализа, описанного в примерах настоящей заявки или анали

- 21 032828 зов передачи сигналов рецепторов, известных в данной области техники. Результаты большинства анализов передачи сигналов рецепторов, известных в данной области техники, определяют с помощью иммуногистохимических методов, таких как вестерн-блоттинг или флуоресцентная микроскопия.

Согласно другим вариантам реализации одноцепочечный гибридный белок согласно настоящему описанию может блокировать ответ T-клеток на аллоантиген. Термином аллоантиген обозначают антиген, существующий в альтернативной аллельной форме у видов, благодаря чему развивается иммунный ответ, когда форму переносят другому виду, у которого нет аллоантигена. Примеры аллоантигенов можно найти, например, на клетках крови (т.е. антигены групп крови) или на тканевых трансплантатах (т.е. аллотрансплантаты).

Одноцепочечный белок согласно настоящему описанию блокирует ответ T-клеток на аллоантиген, если при обработке T-клеток, он вызывает статистически значимое снижение количества T-клеток, активированных в ответ на аллоантиген по результатам in vitro или in vivo анализа, такого как реакция смешанных культур лимфоцитов человека (MLR) и модели острой реакции трансплантат против хозяина (оРТПХ), представленных в примерах настоящего писания. Другие анализы в данной области техники, такие как анализы связывания и кожные тесты, например, анализы распухания подушечек пальцев мышей, в которых определяют ответы гиперчувствительности замедленного типа, также могут быть использованы для определения реактивности на аллоантиген.

Согласно другим вариантам реализации гибридный белок согласно настоящему описанию блокирует ответ T-клеток памяти на антиген. Одноцепочечный гибридный белок блокирует ответ T-клеток памяти на антиген, если при обработке T-клеток памяти он вызывает статистически значимое снижение количества T-клеток, активированных в ответ на определенный антиген (например, столбнячный токсин) по результатам in vitro или in vivo анализа, такого как анализ, в котором исследуют активацию T-клеток с использованием столбнячного токсина, представленный в примерах настоящего описания. Также для определения вторичного антиген-специфичного ответа T-клеток можно использовать модель иммунизации животных in vivo и ex vivo методами презентации антигена. Кроме описанных выше анализы гиперчувствительности замедленного типа, анализы цитотоксичности, такие как анализы высвобождения ⁵¹Cr, могут быть использованы для определения активности T-клеток (Lavie et al. (2000), International Immunology 12(4):479-486).

Согласно другим вариантам реализации гибридный белок согласно настоящему описанию подавляет комплекс TCR поверхности T-клеток. Одноцепочечный гибридный белок подавляет комплекс TCR, если при обработке T-клеток он вызывает статистически значимое снижение количества комплексов TCR на поверхности популяции T-клеток по результатам in vitro или in vivo анализа. Полезные in vitro или in vivo анализы включают анализ измерения снижения количества TCR и CD3 на поверхности Tклеток, приведенный в примерах настоящего описания. В таких анализах сравнивается количество экспрессируемых TCR или CD3 на поверхности клеток до и после стимуляции методами, известными в данной области техники, такими как проточная цитометрия и иммунофлуоресцентная микроскопия.

Способы определения активации T-клеток и высвобождения цитокинов.

Согласно соответствующему варианту реализации настоящее описание обеспечивает метод определения активации T-клеток, вызванной белком, который содержит связывающий домен, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, включающий (а) получение T-клеток, стимулированных митогеном, (б) обработку стимулированных T-клеток этапа (а) белком, который содержит связывающий домен, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, и (в) определение активации стимулированных T-клеток, обработанных на этапе (б).

В настоящем описании термин митоген обозначает химическое вещество, которое вызывает деление лимфоцитов различной специфичности и клонального происхождения. Примерами митогенов, которые могут быть использованы для стимуляции T-клеток, включают фитогемагглютинин (ФГА), конканавалин А (ConA), липополисахарид (LPS), митоген фитолакки (PWM), и форболмиристатацетат (РМА).

Согласно некоторым вариантам реализации методов активации T-клеток согласно настоящему описанию белок, который содержит связывающий домен, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, представляет собой гибридный белок согласно настоящему описанию. Согласно некоторым другим вариантам реализации белок, который содержит связывающий домен, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, представляет собой моноклональное антитело.

Активацию T-клеток можно определять посредством измерения экспрессии маркеров активации, известных в данной области техники, таких как CD25, CD40 лиганд и CD69. Также активированные Tклетки можно определять с помощью анализов пролиферации клеток, таких как мечение CFSE и анализ поглощения тимидина (Adams (1969) Exp. Cell Res. 56:55).

Согласно соответствующему варианту реализации настоящее описание обеспечивает метод определения высвобождения цитокинов, вызванный белком, который содержит связывающий домен, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, включающий (а) обеспечение Tклеток, стимулированных митогеном, (б) обработку стимулированных T-клеток этапа (а) белком, который содержит связывающий домен, который специфично связывается с комплексом TCR или его компо

- 22 032828 нентом, и (в) определение высвобождения цитокинов стимулированными T-клетками, обработанными на этапе (б).

Согласно некоторым вариантам реализации способов определения высвобождения цитокинов согласно настоящему описанию белок, который содержит связывающий домен, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, представляет собой гибридный белок согласно настоящему описанию. Согласно некоторым другим вариантам реализации белок, который содержит связывающий домен, который специфично связывается с комплексом TCR или его компонентом, представляет собой моноклональное антитело.

Полинуклеотиды, векторы экспрессии и клетки-хозяева.

Настоящее описание обеспечивает полинуклеотиды (выделенные или очищенные или чистые полинуклеотиды), кодирующие гибридные белки согласно настоящему описанию, векторы (включая векторы клонирования и векторы экспрессии) и клетки (например, клетки-хозяева), трансформированные или трансфицированные полинуклеотидом или вектором согласно настоящему описанию.

Согласно некоторым вариантам реализации предполагается полинуклеотид (ДНК или РНК), кодирующий гибридный белок согласно настоящему описанию. Примерами полинуклеотидов являются SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 46, 55, 303, 306, 310, 312, 314, 316, 318, 320, 322, 324 и 326.

Также настоящее изобретение относится к векторам, которые содержат полинуклеотид согласно настоящему описанию и, в частности, к рекомбинантным конструктам экспрессии. Согласно одному варианту реализации настоящее описание предполагает вектор, содержащий полинуклеотид, кодирующий гибридный белок согласно настоящему описанию, вместе с другими полинуклеотидными последовательностями, которые могут вызывать или способствовать транскрипции, трансляции или процессингу гибридного белка.

Описаны соответствующие векторы клонирования и экспрессии для использования вместе с хозяевами прокариотами и эукариотами, например, в публикации Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, NY, (1989). Примеры векторов экспрессии/клонирования включают векторы клонирования, челночные векторы, конструкции экспрессии, которые могут быть на основе плазмид, фагмид, фазмид, космид, вирусов, искусственных хромосом или любых переносчиков нуклеиновых кислот, известных в данной области техники, подходящих для амплификации, переноса и/или экспрессии полинуклеотида согласно настоящему описанию.

В настоящем описании термин вектор обозначает молекулу нуклеиновой кислоты, способную к переносу другой нуклеиновой кислоты, с которой она соединена. Примеры векторов включают плазмиды, искусственные хромосомы дрожжей и вирусные геномы. Некоторые векторы могут автономно реплицироваться в клетке-хозяине и благодаря этому реплицироваться вместе с геномом хозяина. Кроме этого, некоторые векторы в настоящем описании обозначаются терминами вектор рекомбинантной экспрессии (или просто вектор экспрессии), которые содержат последовательности нуклеиновых кислот, которые операбельно соединены с контрольной последовательностью, и поэтому способны управлять экспрессией указанных последовательностей.

Согласно некоторым вариантам реализации конструкции экспрессии получают от плазмидных векторов. Примеры конструкций включают модифицированный pNASS вектор (Clontech, Palo Alto, CA), который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую ген устойчивости к ампициллину, сигнал полиаденилирования и сайт промотора Т7; pDEF38 и pNEF38 (CMC ICOS Biologies, Inc.), которые имеют промотор CHEF1; и рЕЕ12.4 (Lonza), которая имеет промотор CMV. Хорошо известны другие подходящие векторы экспрессии млекопитающих (см., например, Ausubel et al., 1995; Sambrook et al., supra; см, также, например, каталоги Invitrogen, San Diego, CA; Novagen, Madison, WI; Pharmacia, Piscataway, NJ). Могут быть получены полезные конструкции, которые включают последовательность, кодирующую дигидрофолатредуктазу (DHFR), под соответствующим промотором, или обеспечивающие повышенный уровень продукции гибридных белков, которые возникают в результате амплификации гена после применения соответствующего агента селекции (например, метотрексата).

В большинстве случаев векторы рекомбинантной экспрессии включают ориджин репликации и селективный маркер, облегчающий трансформацию клетки-хозяина, и промотор, полученный от высоко экспрессируемого гена, для направленной транскрипции последовательности, расположенной за ним, как описано выше. Вектор, операбельно соединенный с полинуклеотидом согласно настоящему описанию дает конструкцию клонирования или экспрессии. Примеры конструкций клонирования/экспрессии содержат по меньшей мере один элемент контроля экспрессии, например, промотор, операбельно соединенный с полинуклеотидом согласно настоящему описанию. Также предполагаются дополнительные элементы контроля экспрессии, такие как энхансеры, сайты связывания специфических факторов, терминаторы и сайты связывания рибосом, в векторах и конструкциях клонирования/экспрессии согласно настоящему описанию. Гетерологичные структурные последовательности полинуклеотида согласно настоящему описанию собирают в соответствующем порядке с последовательностями инициации и терминации транскрипции. Таким образом, например, нуклеиновые кислоты, кодирующие гибридный белок, согласно настоящему описанию могут быть включены в любой из различных векторов или конструкций

- 23 032828 экспрессии в виде рекомбинантных конструкций экспрессии для экспрессии указанного белка в клеткехозяине.

Соответствующие последовательности ДНК могут быть вставлены в вектор, например, различными способами. В большинстве случаев последовательность ДНК вставляют в соответствующий(ие) сайт(ы) рестрикции методами, известными в данной области техники. Предполагаются стандартные методы клонирования, выделения, амплификации и очистки ДНК, ферментативных реакций с участием ДНК лигазы, полимеразы, эндонуклеаз рестрикции и т.д. и различные методы разделения. Некоторые стандартные методы описаны, например, в публикации Ausubel et al. (1993 Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publ. Assoc. Inc. & John Wiley & Sons, Inc., Boston, MA); Sambrook et al. (1989 Molecular Cloning, Second Ed., Cold Spring Harb или Laboratory, Plainview, NY); Maniatis et al. (1982 Molecular Cloning, Cold Spring Harb или Laboratory, Plainview, NY); Glover (Ed.) (1985 DNA Cloning Vol. I и II, IRL Press, Oxford, UK); Hames и Higgins (Eds.), (1985 Nucleic Acid Hybridization, IRL Press, Oxford, UK); и в других источниках.

ДНК последовательность в векторе экспрессии операбельно соединена по меньшей мере с одной соответствующей последовательностью контроля экспрессии (например, конститутивным промотором или регулируемым промотором) для осуществления синтеза мРНК. Примеры таких последовательностей контроля экспрессии включают промоторы эукариотических клеток или их вирусов, как описано выше. Промоторные участки можно выбирать из любого желаемого гена с использованием векторов CAT (хлорамфениколтрансфераза) или других векторов с маркерами отбора. Промоторы эукариот включают непосредственный ранний промотор CMV, промотор тимидинкиназы HSV, ранний и поздний промотор SV40, LTRs ретровирусов и металлотионеина-I мыши. Специалист в данной области техники способен выбрать соответствующий вектор и промотор и в настоящей заявке описывается получение некоторых особенно предпочтительных конструкций рекомбинантной экспрессии, содержащих по меньшей мере один промотор или регулируемый промотор, операбельно связанный с нуклеиновой кислотой, кодирующей белок или полипептид согласно настоящему описанию.

Также предполагаются варианты полинуклеотидов согласно настоящему описанию. Варианты полинуклеотидов по меньшей мере на 90% и предпочтительно на 95, 99 или 99.9% идентичны одному из полинуклеотидов с известной последовательностью согласно настоящему описанию, или тому, который гибридизуется с одним из полинуклеотидов с известной последовательностью при жестких условиях гибридизации 0.015 М хлорида натрия, 0.0015 М цитрата натрия при приблизительно 65-68°С или 0.015 М хлорида натрия, 0.0015 М цитрата натрия, и 50% формамида при 42°С. Варианты полинуклеотидов сохраняют способность кодировать связывающий домен или его гибридный белок, обладающие описанными свойствами.

Термин жесткие обозначает условия, которые обычно понимаются в данной области техники как жесткие. Жесткость гибридизации в основном определяется температурой, ионной силой и концентрацией денатурирующих агентов, таких как формамид. Примерами жестких условий гибридизации или промывки являются 0.015 М хлорида натрия, 0.0015 М цитрата натрия при приблизительно 65-68°С или 0.015 М хлорида натрия, 0.0015 М цитрата натрия, и 50% формамида при приблизительно 42°С (см. Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harb или Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y. 1989).

Можно применять более жесткие условия (такие как более высокая температура, более низкая ионная сила и повышенные концентрации формамида или другого денатурирующего агента), но это повлияет на скорость гибридизации.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения могут применять менее жесткие условия (такие как пониженная температура, повышенная ионная сила, пониженная концентрация формамида и другого денатурирующего агента). Примерами менее жестких условий гибридизации и отмывки являются 0.015 М хлорида натрия, 0.0015 М цитрата натрия при приблизительно 42°С). Варианты полинуклеотидов сохраняют способность кодировать связывающий домен или его гибридный белок, обладающие описанными свойствами.

В другом аспекте настоящего описания обеспечивается клетка-хозяин, трансформированная или трансфицированная или содержащая каким-либо образом любой полинуклеотид или конструкцию вектора/экспрессии согласно настоящему описанию. Полинуклеотиды или конструкции вектора/экспрессии согласно настоящему описанию вводят в соответствующую клетку методами, известными в данной области техники, включая трансформацию, трансфекцию и трансдукцию. Клетки-хозяева включают клетки пациента, переносящего ex vivo клеточную терапию, включая, например, ex vivo генную терапию. Эукариотические клетки-хозяева, предлагаемые в аспекте согласно настоящему описанию при несении полинуклеотида, вектора или белка согласно настоящему описанию включают, кроме собственных клеток пациента (например, собственные клетки пациента человека), клетки VERO, HeLa; линии клеток яичника китайского хомячка (СНО) (включая модифицированные клетки СНО, способные изменять паттерн гликозилирования экспрессированных мультивалентных связывающих молекул, см, заявка на патент США № 2003/0115614), клетки COS (такие как COS-7), W138, BHK, HepG2, 3T3, RIN, MDCK, А549, РС12, K562, HEK293, HepG2, N, 3T3 клетки, клетки Spodoptera frugiperda (например, клетки Sf9), клетки Sac

- 24 032828 charomyces cerevisiae и другие клетки эукариот, которые, как известно в данной области техники, пригодны для экспрессии и выделения белка или пептида согласно настоящему описанию. Также предлагаются клетки прокариот, включая Escherichia coli, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium, Streptomycete, или любые клетки прокариот, которые, как известно в данной области техники, пригодны для экспрессии и выделения белка или пептида согласно настоящему описанию. Предполагается, что при выделении белка или пептида из клетки прокариот, в частности, можно использовать методы выделения белка из телец включения, известные в данной области техники. Выбор соответствующего хозяина находится в пределах знаний специалиста в данной области техники из содержания настоящего описания. Предлагаются клетки-хозяева, которые гликозилируют гибридные белки согласно настоящему описанию.

Термин рекомбинантная клетка-хозяин (или просто клетка-хозяин) обозначает клетку, содержащую вектор рекомбинантной экспрессии. Следует понимать, что указанные термины относятся не только к определенной клетке пациента, но и к ее потомству. Поскольку некоторые изменения могут произойти в следующих поколениях клетки из-за мутаций или факторов среды, потомство может на самом деле не быть идентичной родительской клетке, но все равно обозначается термином клетка-хозяин в настоящем описании.

Рекомбинантные клетки-хозяева можно культивировать в традиционной питательной среде, модифицированной при необходимости, для активации промоторов, отбора трансформантов или амплификации определенных генов. Условия культивирования определенных клеток-хозяев, отобранных по экспрессии, такие как температура, рН и т.д., будут знакомы специалисту в данной области. Для экспрессии рекомбинантного белка можно использовать различные клеточные культуры млекопитающих. Примеры систем экспрессии млекопитающих включают линии COS-7 фибробластов почек мыши, описанные Gluzman (1981) Cell 23:175 и другие клеточные линии, способные экспрессировать совместимый вектор, например, клеточные линии С127, 3T3, СНО, HeLa и BHK. Векторы экспрессии млекопитающих содержат ориджин репликации, соответствующий промотор и дополнительно энхансер и также любой необходимый сайт связывания рибосом, сайт полиаденилирования, сайт донора сплайсинга и акцептора сплайсинга, последовательности терминации транскрипции и 5'-фланкирующие нетранскрибируемые последовательности, например, согласно настоящему описанию, относительно получения конструкций экспрессии мультиваллентных связывающих белков. Последовательности ДНК, полученные при сплайсинге SV40, и сайты полиаденилирования могут быть использованы для обеспечения требуемых нетранскрибируемых элементов. Введение конструкции в клетку-хозяин может осуществить с помощью разнообразных методов, известных специалисту в данной области техники, включая трансфекцию фосфатом кальция, трансфекцию опосредованную DEAE-декстраном или электропорацией (Davis et al. (1986) Basic Methods in Molecular Biology).

Согласно одному варианту реализации клетку-хозяина трансдуцируют рекомбинантной вирусной конструкцией, направляющей экспрессию белка или полипептида согласно настоящему описанию. Трансдуцированная клетка-хозяин производит вирусные частицы, содержащие экспрессируемый белок или полипептид, полученные из части мембраны клетки-хозяина, встроенные вирусными частицами при почковании.

Композиции и способы применения.

Кроме гибридных белков, направленных против комплекса TCR или его компонента настоящее описание также обеспечивает фармацевтические композиции и формы единичных доз, которые содержат гибридные белки, а также способы применения гибридных белков, фармацевтических композиций и форм единичных доз.

Для лечения человека или млекопитающего не являющегося человеком, страдающего от болезненного состояния, вызванного сигнальным путем TCR, пациенту вводят гибридный белок в количестве, эффективном для облегчения симптомов болезненного состояния после курса из одного или более введений. Будучи полипептидами, белки согласно настоящему описанию могут быть ресуспендированы или растворены в фармацевтически приемлемом разбавителе, дополнительно включающем стабилизатор или другой фармацевтически доступный наполнитель, который может быть использован для внутривенного введения с помощью инъекции или инфузии, что более подробно описано ниже.

Фармацевтически эффективное количество или доза представляет собой количество или дозу, необходимую для предотвращения, подавления или лечения (облегчения симптома в некоторой степени, предпочтительно всех симптомов) болезненного состояния. Согласно предпочтительному варианту реализации фармацевтически эффективное количество одноцепочечных гибридных белков согласно настоящему описанию используют для лечения заболеваний, опосредованных T-клетками. Фармацевтически эффективная доза зависит от типа заболевания, используемой композиции, способа введения, типа пациента, которого лечат, физических особенностей пациента, который находится на рассмотрении возможности лечения, сопутствующих лекарственных средств и других факторов, которые известны специалисту в области медицины. Например, от 0.1 и 100 мг/кг массы тела (которое можно вводить в виде однократной дозы, ежедневно, еженедельно, ежемесячно или с любым приемлемым интервалом) активного ингредиента может быть введено в зависимости от эффективности гибридного белка согласно настоящему описанию.

- 25 032828

Согласно выше приведенному описанию и как показано в примерах, гибридные белки, направленные против комплекса TCR или его компонента, такого как CD3, обеспечиваемые настоящим описанием, участвуют в сигнальном пути TCR без индукции митогенности T-клеток. Предварительные исследования показали, что функция и дифференцировка периферических T-клеток может быть запущена посредством манипуляции сигнальных каскадов, связанных с TCR. Например, анергия и адаптивные регуляторные Tклетки могут индуцироваться сильными не активирующими сигналами. Также некоторые подгруппы Tклеток могут быть более склонны к смерти клеток после получения сильного сигнала TCR. Таким образом, гибридные белки согласно настоящему описанию могут быть использованы для изменения функционирования и судьбы T-клеток, обеспечивая благодаря этому лечение заболевания, опосредованного T-клетками, включая аутоиммунные и воспалительные заболевания, в которых T-клетки являются важными участниками. Более того, так как гибридные белки согласно настоящему описанию не активируют T-клетки и/или не вызывают высвобождение цитокинов, они имеют преимущества по сравнению с другими молекулами, направленными против комплекса TCR (например, антителами к CD3) из-за отсутствия или пониженных побочных эффектов, таких как синдром высвобождения цитокинов и острая токсичность.

Примеры аутоиммунных и воспалительных заболеваний (AND), которые могут быть вылечены с помощью гибридных белков и их композиции и однократных доз, включают воспалительное заболевание кишечника (например, болезнь Крона или язвенный колит), сахарный диабет (например, диабет 1 типа), дерматомиозит, полимиозит, злокачественную анемию, билиарный первичный цирроз печени, острый рассеянный энцефаломиелит (ADEM), болезнь Эдисона, анкилозирующий спондилит, синдром антител к фосфолипидам (APS), аутоиммунный гепатит, синдром Гудпасчера, болезнь Грейва, Синдром Гийена-Барре (GBS), болезнь Хашимото, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, системную красную волчанку, волчаночный нефрит, психоневрологическую волчанку, рассеянный склероз (MS), миастению, пузырчатку обыкновенную, астму, псориатический артрит, ревматоидный артрит, синдром Шегрена, височный артериит (также известный как гигантоклеточный артериит), аутоиммунную гемолитическую анемию, буллёзный пемфигоид, васкулит, целиакию, хроническое обструктивное заболевание легких, эндометриоз, гнойный гидраденит, интерстициальный цистит, кольцевидную склеродермию, склеродерму, нарколепсию, нейромиотонию, витилиго и аутоиммунное заболевание внутреннего уха, но не ограничиваются ими.

Согласно некоторым вариантам реализации гибридные белки и композиции согласно настоящему описанию могут быть использованы в качестве иммунодепрессантов без побочных эффектов или с минимальными или пониженными побочными эффектами, вызванными высвобождением цитокинов. Например, одноцепочечные белки и композиции и формы однократных доз согласно настоящему описанию могут использоваться как для индукции, так и для предотвращения (т.е. снижения риска) или снижения острого отторжения, отсроченной функции трансплантата и гибели трансплантата при трансплантации цельных органов (например, трансплантатов почек, печени, легких, сердца). Также ввиду отсутствии активации T-клеток, согласно некоторым вариантам реализации, одноцепочечные гибридные белки согласно настоящему описанию могут являться более эффективными антидепрессантами, чем другие молекулы, направленные против комплекса TCR, известные как иммуносупрессивные молекулы и молекулы, вызывающие деление T-клеток. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения гибридные белки и композиции и формы однократных доз согласно настоящему описанию можно применять для лечения заболеваний, опосредованных T-клетками, таких как острая реакция трансплантат против хозяина (РТПХ) и аутоиммунные и воспалительные заболевания (AND).

Согласно другому аспекту обеспечиваются композиции гибридных белков. Фармацевтические композиции согласно настоящему описанию обычно содержат гибридный белок согласно настоящему описанию в сочетании с фармацевтически доступным носителем, наполнителем или разбавителем. Такие носители должны быть нетоксичными для реципиента в используемых дозах и концентрациях. Фармацевтически доступные носители для терапевтического применения известны в данной области фармацевтики и описываются, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A.R. Gennaro (Ed.), 1985). Например, можно использовать стерильные физраствор и фосфатный буфер при физиологических рН. В фармацевтической композиции могут обеспечиваться стабилизаторы, консерванты, красители и т.п. В качестве консервантов можно добавлять, например, бензоат натрия, сорбиновую кислоту или эфиры р-гидроксибензойной кислоты. Id. at 1449, также можно использовать антиоксиданты и суспендирующие агенты. Id. Вещества согласно настоящему изобретению могут применяться в форме свободного основания или солей, при этом обе формы находится в рамках настоящего изобретения.

Фармацевтические композиции также могут содержать разбавители, такие как буферы, антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, низкомолекулярные пептиды (менее 10 остатков), белки, аминокислоты, углеводы (например, глюкоза, сахароза, декстрины), хелатирующие агенты (например, EDTA), глутатион и другие стабилизаторы и наполнители. Примерами разбавителей являются физраствор или физраствор, смешанный с неспецифическим сывороточным альбумином. Предпочтительно продукт формулируют в виде лиофилизата с использованием приемлемых растворов наполнителей (например, сахарозы) в качестве разбавителей.

- 26 032828

Также предполагается ведение белковых композиций согласно настоящему описанию в сочетании со вторым агентом. Второй агент может представлять собой принятый в данной области техники стандарт лечения определенного заболевания или нарушения, такого как трансплантационные, воспалительные или аутоиммунные заболевания. Примеры вторых агентов включают стероиды, NSAIDs, mT или ингибиторы (например, рапамицин (сиролимус)), темсиролимус, дефоролимус, эверолимус, зотаролимус, куркумин, фарнезилсалициловая кислота), ингибитора кальциневрина (например, циклоспорин, такролимус), антиметаболиты (например, микофеноловая кислота, мофетила микофенолат), поликлональные антитела (например, антитимотический глобулин), моноклональные антитела (например, даклицумаб, базиликсимаб) или другие активные или вспомогательные агенты или их любые сочетания.

Фармацевтически доступная соль обозначает соль гибридного белка, SMIP или антитела согласно настоящему описанию, которая является фармацевтически доступной и обладает желательным фармакологическим действием родительского соединения. Такие соли включают следующие соли: (1) соли, полученные при добавлении кислоты, образованные неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и т.п.; или образованные с органическими солями, такими как уксусная кислота, пропионовая кислота, гексановая кислота, циклопентанпропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, молочная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, 3-(4-гидроксибензол)бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, 1,2-этандисульфоновая кислота, 2-гидроксиэтансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, 4хлорбензенсульфоновая кислота, 2-нафталинсульфоновая кислота, 4-толуолсульфоновая кислота, камфорсульфоновая кислота, 4-метилбицикло[2.2.2]-окт-2-ен-1-карбоновая кислота, глюконефтоновая кислота, лаурилсульфат серной кислоты, 3 фенилпропионовая кислота, триметилуксусная кислота, третичная бутилуксусная кислота, глюконовая кислота, глютаминовая кислота, гидроксинафтойная кислота, салициловая кислота, стеариновая кислота, муконовая кислота и т.п.; или (2) соли, образованные, когда кислотный протон родительского соединения замещается на ион металла, например, ион щелочного металла, щелочноземельного металла или алюминия, или образуется связь с органическим основанием, таким как этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, N метилглюкамин и т. п.

Согласно показательным вариантам реализации гибридный белок согласно настоящему описанию вводят внутривенно, например, с помощью болюсной инъекции или инфузии. Способы введения кроме внутривенного включают оральное, топическое, парентеральное (например, подъязычное или буккальное), подъязычное, ректальное, вагинальное и интраназальное введения. Термин парентеральное в настоящем описании включает подкожные инъекции, внутривенные, внутримышечные, внутригрудинные, интракавернозные, интрамеатальные, внутриуретральные инъекции или инфузии. Фармацевтическая композиция составляется таким образом, чтобы активные ингредиенты, содержащиеся в ней, были биодоступными при введении композиции пациенту. Композиции, вводимые пациенту, могут быть в форме одной или более единиц дозировки, где, например, таблетка представляет собой одну единицу дозирования, или контейнер с одним или более соединениями согласно настоящему описанию в виде аэрозоля может заключать множество единиц дозирования.

В случае орального введения могут присутствовать наполнитель и/или связующий агент, такие как сахароза, каолин, глицерин, крахмал декстран, циклодекстрин, альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлоза и этил целлюлоза. Также дополнительно могут присутствовать подсластители, консерванты, краситель/пигмент, ароматизатор или усилитель, или любое их сочетание. Также дополнительно можно применять композиции, покрытые оболочкой.

В состав композиции, предназначенной для введения путем инъекции, могут быть включены один или более поверхностно-активных веществ, консервантов, увлажнителей, диспергирующих агентов, суспедирующих агентов, буферов, стабилизаторов, изотонических агентов или любая их комбинация.

Лекарственные формы, основанные на нуклеиновых кислотах или лекарственные формы, содержащие продукты экспрессии согласно настоящему описанию вводят приблизительно от 0.01 мкг/кг до 100 мг/кг массы тела, например, внутрикожно, подкожно, внутримышечно или внутривенно или другим путем, известным в данной области техники в зависимости от обстоятельств. Предпочтительная доза составляет, например, приблизительно от 1 мкг/кг до 20 мкг/кг, особенно предпочтительными являются дозы от приблизительно 5 мкг/кг до приблизительно 10 мг/кг. Специалисту в данной области будет очевидно, что частота введения будет зависеть от ответа хозяина.

Фармацевтические композиции согласно настоящему описанию могут находиться в любой форме, которая подходит для введения пациенту, такой как, например, в виде твердого вещества, жидкости или аэрозоля. Композиции могут находиться в форме жидкости, например, эликсира, сиропа, раствора, эмульсии или суспензии. Жидкость можно вводить, например, оральным путем или с помощью инъекции.

Жидкая фармацевтическая композиция согласно настоящему описанию, находящаяся в виде раствора, суспензии или других подобных формах, может включать один или несколько из следующих компонентов: стерильные разбавители, такие как вода для инъекций, физиологический раствор, предпочти

- 27 032828 тельно физиологический раствор, раствор Рингера, изотонический раствор хлорида натрия, жирные масла, такие как синтетические моно или диглицериды, которые могут служить в качестве растворителя или стабилизатора среды, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие растворители; антибактериальные средства, такие как бензиловый спирт или метилпарабен, антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатирующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота; буферы, такие как ацетаты, цитраты или фосфаты и агенты для корректировки тоничности, такие как натрий, хлор, или декстроза. Парентеральный препарат может быть заключен в ампулы, одноразовые шприцы или флаконы множественных доз, изготовленные из пластика или стекла. Физиологический раствор является предпочтительной добавкой. Инъекционная фармацевтическая композиция предпочтительно является стерильной.

Также желательно включать другие компоненты в лекарственную форму, включая соли алюминия, биодеградируемые масляные носители, биодеградируемые микрокапсулы, эмульсии типа вода в масле и липосомы. Примеры адъювантов для указанных носителей включают №ацетилмурамил-Ь-аланин-Оизоглютамин (MDP), липополисахариды (LPS), глюкан, IL-12, GM-CSF, γ-интерферон и IL-15.

Хотя любой подходящий носитель, известный специалистам в данной области техники, может быть использован в фармацевтических композициях согласно настоящему описанию, тип носителя будет различаться в зависимости от способа введения и желательного замедленного высвобождения. Для парентерального введения носитель может включать воду, спирт, жир, воск, буфер или их сочетание. Для орального введения может быть использован любой из указанных выше носителей или твердых носителей, такой как маннитол, лактоза, крахмал, стеарат магния, натрия сахарин, тальк, целлюлоза, глюкоза, сахароза, карбонат магния или их любое сочетание.

Настоящее описание предлагает однократную дозу, содержащую фармацевтическую композицию согласно настоящему описанию. Такие однократные дозы включают дозировки, например, флакон или шприц с однократной или несколькими дозами, включая двухкамерные флакон или шприц, один из которых содержит фармацевтическую композицию согласно настоящему описанию в лиофилизированной форме и другой содержит разбавитель для разведения. Многодозовые единицы дозирования также могут представлять собой, например, сумку или трубку для подключения к устройству для внутривенной инфузии.

Настоящее описание также предусматривает набор, включающий фармацевтическую композицию согласно настоящему описанию в однократной дозе или нескольких дозах, контейнер, например, флакон и набор инструкций для введения композиции пациентам, страдающим расстройством, таким как расстройство описанное выше.

Примеры

Моноклональные антитела и примеры одноцепочечных гибридных белков.

Примеры моноклональных антител (связывающие домены и варианты которых использовали для получения примеров одноцепочечных гибридных белков) и одноцепочечные гибридные белки вкратце описаны в настоящем изобретении.

Cris-7 (также обозначаемое термином Cris-7 MAT или Cris-7 FL) представляет собой моноклональное антитело (MAT) мыши против CD3e IgG2a человека (Reinherz, E.L. et al. (eds.), Leukocyte typing II., Springer Verlag, New York, (1986)). Показано, что MAT Cris-7 связывается с T-клетками человека, бабуина, яванского макака (данные не представлены). Также было показано, что каждый из одноцепочечных гибридных белков Cris-7, описываемых в настоящей заявке, имеет межвидовую реактивность (данные не представлены).

Химерные и гуманизированные Cris-7 IgG1-N297A (SEQ ID NO265, 270, 275, 280, 285, 290, 295) содержат от N-конца к С-концу: химерную или гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи Cris-7, линкер, который содержит три повтора (Gly)4-Ser, соединенных последовательно, химерную или гуманизированную вариабельную область легкой цепи Cris-7, мутантную шарнирную область IgG1 (SCC-P), C_H2 участок IgG1 человека с заменой на аланин в положении 297 и C_H3 участок IgG1 человека.

Химерные и гуманизированные Cris-7 IgG1-AA-N297A (SEQ ID NO: 266, 271, 276, 281, 286, 291,

296) содержат от N-конца к С-концу: химерную или гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи Cris-7, линкер, который содержит три повтора (Gly)₄-Ser, соединенных последовательно, химерную или гуманизированную вариабельную область легкой цепи Cris-7, мутантную шарнирную область IgG1 (SCC-P), C_H2 участок IgG1 человека с четырьмя заменами на аланин в положениях L234, L235, G237 и N297 и делецией в G236 (т.е. LLGG(234-237)AAA), и C_H3 участок IgG1 человека.

Химерные и гуманизированные Cris-7 IgG2-AA-N297A (SEQ ID NO: 267, 272, 277, 282, 287, 292,

297) содержат от N-конца к С-концу: химерную или гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи Cris-7, линкер, который содержит три повтора (Gly)4-Ser, соединенных последовательно, химерную или гуманизированную вариабельную область легкой цепи Cris-7, мутантную шарнирную область IgG1 (SCC-P), C_H2 участок IgG2 человека с тремя заменам на аланин в положениях V234, G236 и N297, и C_H3 участок IgG2 человека.

Химерные и гуманизированные Cris7 IgG4-AA-N297A (SEQ ID NO: 268, 273, 278, 283, 288, 293,

- 28 032828

298) содержат от N-конца к С-концу: химерную или гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи Cris-7, линкер, который содержит три повтора (Gly)4-Ser, соединенных последовательно, химерную или гуманизированную вариабельную область легкой цепи Cris-7, мутантную шарнирную область IgG1 (SCC-P), C_H2 участок IgG4 человека с четырьмя заменами на аланин в положениях F234, L235, G237 и N297 и делецией G236 (т.е. FLGG (234-237)ААА) и C_H3 участок IgG4 человека.

Химерные и гуманизированные Cris-7 HM1 (SEQ ID NO: 269, 274, 279, 284, 289, 294, 299) содержат от N-конца к С-концу: химерную или гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи Cris-7, линкер, который содержит по меньшей мере три повтора (Gly)₄-Ser, соединенные последовательно, вариабельную область легкой цепи Cris-7, шарнирную область IgG1 человека дикого типа, CH3 участок IgM человека и C_H3 участок IgG1 человека и хвостовую последовательность, которая содержит три копии эпитопа FLAG, одну копию метки AVI и 6 остатков гистидина.

BC3 (также обозначаемый термином MAT BC3 или BC3 FL) представляет собой немитогенное MAT мыши против CD3e IgG2b человека (Anasetti et al., J. Exp. Med. 172: 1691-1700, 1990).

BC3-HM1 (также обозначаемый термином BC3 НМ1) (SEQ ID NO: 84) содержит от N-конца к Сконцу: вариабельную область тяжелой цепи BC3, линкер, который содержит по меньшей мере три повтора (Gly)₄-Ser, соединенные последовательно, вариабельную область легкой цепи BC3, шарнирную область IgG1 дикого типа человека, C_H3 участок IgM человека и C_H3 участок IgG1 человека и хвостовую последовательность, которая содержит три копии эпитопа FLAG, одну копию метки AVI и шесть остатков гистидина.

BC3-AC_H2 (также обозначаемый термином BC3 AC_H2) (SEQ ID NO: 85) содержит от N-конца к Сконцу: вариабельную область тяжелой цепи BC3, линкер, который содержит по меньшей мере три повтора (Gly)₄-Ser, соединенные последовательно, вариабельную область легкой цепи BC3, шарнирную область IgG1 дикого типа человека, CH3 участок IgG1 человека и последовательность хвоста, которая содержит три копии эпитопа FLAG, одну копию метки AVI и шесть остатков гистидина.

BC3-G1 N297A (также обозначаемый термином BC3 N297A) (SEQ ID NO: 80) содержит от Nконца к С-концу: вариабельную область тяжелой цепи BC3, линкер, который содержит по меньшей мере три повтора (Gly)4-Ser, соединенные последовательно, вариабельную область легкой цепи BC3, мутантную шарнирную область IgG1 (SCC-P), CH2 участок IgG1 человека с заменой аспарагина в положении 297 на аланин и CH3 участок IgG1 человека.

BC3-G1 АА N297A (также обозначаемый термином BC3 IgG1AA) (SEQ ID NO: 81) содержит от N-конца к С-концу: вариабельную область тяжелой цепи BC3, линкер, который содержит по меньшей мере три повтора (Gly)₄-Ser, соединенные последовательно, вариабельную область легкой цепи BC3, мутантную шарнирную область IgG1 (SCC-P), CH2 участок IgG1 человека с четырьмя заменами на аланин в положениях L234, L235, 237 и N297 и делецией G236 (т.е. LLGG(234-237)AAA), и C_H3 участок IgG1 человека.

BC3-G2 АА N297A (также обозначаемый термином BC3 IgG2AA) (SEQ ID NO: 82) содержит от N-конца к С-концу: вариабельную область тяжелой цепи BC3, линкер, который содержит три повтора (Gly)4-Ser, соединенные последовательно, вариабельную область легкой цепи BC3, мутантную шарнирную область IgG1(SCC-P), C_H2 участок IgG2 человека с тремя заменами на аланин в положениях V234, G236 и N297 и C_H3 участок IgG2 человека.

BC3-G4 АА N297A (также обозначаемый термином BC3 IgG4AA) (SEQ ID NO: 83) содержит от N-конца к С-концу: вариабельную область тяжелой цепи BC3, линкер, который содержит три повтора (Gly)4-Ser, соединенные последовательно, вариабельную область легкой цепи BC3, мутантную шарнирную область IgG1(SCC-P), CH2 участок IgG4 человека с четырьмя заменами на аланин в положениях F234, L235, G237 и N297 и делецией G236 (т.е. FLGG(234-237)AAA) и C_H3 участок IgG4 человека.

OKT3 (также обозначаемый термином MAT OKT3 или OKT3 FL) представляет собой митогенное MAT мыши против CD3e IgG2a человека (Ortho Multicencer Transplant Study Group, N. Engl. J. Med. 313: 337, 1985).

OKT3-HM1 (также обозначаемый термином OKT3 НМ1) (SEQ ID NO: 92) содержит от N-конца к С-концу: вариабельную область тяжелой цепи OKT3, линкер, который содержит по меньшей мере три повтора (Gly)₄-Ser, соединенные последовательно, вариабельную область легкой цепи OKT3, шарнирную область IgG1 дикого типа человека, C_H3 участок IgM человека и C_H3 участок IgG1 человека и хвостовую последовательность, которая содержит три копии эпитопа FLAG, одну копию метки AVI и шесть остатков гистидина.

OKT3-AC_H2 (также обозначаемый термином OKT AC_H2) (SEQ ID NO: 93) содержит от N-конца к С-концу: вариабельную область тяжелой цепи OKT3, линкер, который содержит по меньшей мере три повтора (Gly)₄-Ser, соединенные последовательно, вариабельную область легкой цепи OKT3, шарнирную область IgG1 дикого типа человека, CH3 участок IgM человека и CH3 участок IgG1 человека и дополнительную хвостовую последовательность, которая содержит по меньшей мере три копии эпитопа FLAG, одну копию метки AVI и шесть остатков гистидина.

OKT3-G1 N297A (также обозначаемый термином OKT N297A) (SEQ ID NO: 88) содержит от N

- 29 032828 конца к С-концу: вариабельную область тяжелой цепи OKT3, линкер, который содержит три повтора (Gly)₄-Ser, соединенные последовательно, вариабельную область легкой цепи OKT3, мутантную шарнирную область IgG1 человека (SCC-P), CH3 участок IgG1 человека и CH2 участок IgG1 человека с заменой на аланин в положении 297 и C_H3 участок IgG1 человека.

OKT3-G1 АА N297A (также обозначаемый термином OKT3 IgG1AA) (SEQ ID NO: 89) содержит от N-конца к С-концу: лидерную последовательность, полученную от лидерной последовательности 2Н7 человека, вариабельную область тяжелой цепи OKT3, линкер, который содержит три повтора (Gly)₄-Ser, соединенных последовательно, вариабельную область легкой цепи OKT3, мутантную шарнирную область IgG1 (SCC-P), C_H2 участок IgG1 человека с четырьмя заменами на аланин в положениях L234, L235, G237 и N297 и делецией в положении G236 (т.е., LLGG(234-237)AAA), и C_H3 участок IgG1 человека.

OKT3-G2 АА N297A (также обозначаемый термином OKT3 IgG2AA) (SEQ ID NO: 90) содержит от N-конца к С-концу: вариабельную область тяжелой цепи OKT3, линкер, который содержит три повтора (Gly)₄-Ser, соединенных последовательно, вариабельную область легкой цепи OKT3, мутантную шарнирную область IgG1 (SCC-P), C_H2 участок IgG2 человека с тремя заменами на аланин в положениях V234, G236 и N297 и C_H3 участок IgG2 человека.

OKT3-G4 AA N297A (также обозначаемый термином OKT3 IgG4AA) (SEQ ID NO: 91) содержит от N-конца к С-концу: вариабельную область тяжелой цепи OKT3, линкер, который содержит три повтора (Gly)₄-Ser, соединенных последовательно, вариабельную область легкой цепи OKT3, мутантную шарнирную область IgG1 (SCC-P), C_H2 участок IgG4 человека с четырьмя заменами на аланин в положениях F234, L235, G237 и N297 и делецией в положении G236 (т.е. FLGG(234-237)AAA) и C_H3 участок IgG4 человека.

Также были получены и исследованы OKT3 IgG4-N297A (т.е. C_H2 участок IgG4 человека, содержащий только замену N297A, также известный как OKT3 IgG4-WT-N297A или OKT3 IgG4-FLGG-N297A; SEQ ID NO: 232, последовательность которого включает лидерную последовательность из 22 аминокислот, которая не является частью зрелого гибридного белка). Также были введены замены на один остаток аланина в каждом из четырех положений (F234, L235, G236 и G237) в сочетании с замещением N297A (т.е. OKT3 IgG4-ALGG-N297A, OKT3 IgG4-FAGG-N297A, OKT3 IgG4-FLAG-N297A и OKT3 IgG4FLGA-N297A, которые соответствуют SEQ ID NO234, 236, 238 и 240, соответственно они также включают лидерную последовательность из 22 аминокислот, которая не является частью зрелого гибридного белка).

OKT3 ala-ala (также обозначаемый термином OKT3 AA-FL или OKT3 FL) представляет собой гуманизированное MAT против CD3, мутантное по Fc, которое содержит замены на аланин в положениях 234 и 235 (Herold et al. (2003) J. Clin. Invest. 11(3): 409-18).

Визилицумаб (также обозначаемый термином Nuvion FL) представляет собой гуманизированное мутантное по Fc MAT против CD3, направленное против CD3e цепи TCR. Оно представляет собой изотип IgG2 человека и содержит мутации в положениях 234 и 237 (Carpenter et al., Blood 99: 2712-9, 2002).

MAT H57-457 представляет собой моноклональное антитело хомяка против TCR. Оно является митогенным и действует аналогично MAT OKT3 (Lavasani et al. (2007) Scandinavian Journal of Immunology 65:39). Последовательности V_H и V_L областей MAT H57-457 приведены на SEQ ID NO: 49 и 51.

H57 half null (SEQ ID NO: 304) представляет собой одноцепочечный гибридный белок IgG2a мыши, содержащий связывающий домен Н57 и мутации в C_H2 участке, которые вызывают потерю ADCC, а также замещение N297A. Он содержит от N-конца до С-конца: вариабельную область тяжелой цепи Н57, линкер, который содержит три повтора (Gly)₄-Ser, соединенных последовательно, вариабельную область легкой цепи Н57, шарнирную область IGHG2c мыши дикого типа, C_H2 участок IGHG2c мыши с четырьмя заменами на аланин в положениях L234, L235, G237 и N297 и C_H3 участок IGHG2c мыши.

Н57 НМ2 (SEQ ID NO: 306) представляет собой одноцепочечный гибридный белок мыши, который содержит от N-конца до С-конца: вариабельную область тяжелой цепи Н57, линкер, который содержит три повтора (Gly)₄-Ser, соединенных последовательно, вариабельную область легкой цепи Н57, шарнирную область IGHG2c мыши дикого типа, C_H3p участок мыши и C_H3y участок мыши.

Н57 Null2 (SEQ ID NO: 96) представляет собой одноцепочечный гибридный белок IgG2a мыши, содержащий связывающий домен Н57 и мутации в C_H2, которые вызывают потерю способностей ADCC и CDC. Он содержит от N-конца до С-конца: вариабельную область тяжелой цепи Н57, линкер, который содержит три повтора (Gly)₄-Ser, соединенных последовательно, вариабельную область легкой цепи Н57, шарнирную область IGHG2c дикого типа мыши, CH2 участок IGHG2c мыши с шестью заменами на аланин в положениях L234, L235, G237, Е318, K320, и K322 и C_H3 участок IGHG2c мыши.

MAT 145-2C11 (также обозначаемый термином MAT 2C11) представляет собой моноклональное антитело хомяка против CD3e цепи комплекса TCR мыши (Hirsch et al., J. Immunol. 140: 3766, 1988). Также оно является митогенным и действует аналогично моноклональному антителу OKT3. Последовательности областей V_H и V_L MAT145-2C11 представлены на SEQ ID NO: 58 и 60.

2С11 Null2 (SEQ ID NO: 56) представляет собой одноцепочечный гибридный белок IgG2a мыши,

- 30 032828 содержащий связывающий домен 2С11 и мутации в CH2, которые вызывают потерю активности ADCC и CDC. Он содержит от N-конца до С-конца: вариабельную область тяжелой цепи 2С11, линкер, который содержит три повтора (Gly)₄-Ser, соединенные последовательно, вариабельную область легкой цепи 2С11, шарнирную область IGHG2c дикого типа мыши, C_H2 участок IGHG2c мыши с шестью заменами на аланин в положениях L234, L235, G237, Е318, K320 и K322 и C_H3 участок IGHG2c мыши.

Пример 1. Гибридные белки не активируют стимулированные T-клетки и не вызывают высвобождение цитокинов стимулированными T-клетками или A-клетками.

Выделение мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) человека.

Свежую периферическую кровь человека забирали в 30 мл шприцы, содержащие гепарин (до 25 мл крови на шприц) и выдерживали в течение 2 ч при комнатной температуре перед обработкой. Кровь разбавляли в конической пробирке (на 50 мл) равным объемом RPMI-1640 комнатной температуры (без добавок). Разбавленную кровь перемешивали 2-3 раза, аккуратно переворачивая. С помощью пипетки на 25 мл 20-25 мл разбавленной крови аккуратно наносили на 15 мл среды для разделения лимфоцитов (МР Biomedicals) в конической пробирке на 50 мл. Пробирки центрифугировали при 400 g в течение 30 мин при комнатной температуре. Клетки собирали с границы раздела фаз по градиенту плотности и переносили в 50-мл коническую пробирку в количестве не более 30 мл суспензии клеток в пробирке. Пробирки, содержащие суспензию клеток, наполняли RPMI-1640, содержащей 10% FBS, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 2 мМ L-глютамина (полная RPMI-1640). Пробирки центрифугировали при 1500 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре и удаляли супернатант. Клетки промывали два раза, ресуспендируя их в 20 мл полной среды RPMI, центрифугируя при 1500 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре и удаляя супернатант. Количество отмытых клеток определяли с помощью гемацитометра и ресуспенидировали согласно протоколу анализа, для которого клетки использовали.

Мечение МКПК человека карбоксифлуоресцеинсукцинимидиловым эфиром (CFSE).

Концентрацию спленоцитов мыши доводили до 1х10⁶/мл стерильным PBS. Клетки переносили в 50-мл конические пробирки в количестве не более 25 мл (25 х10⁶ клеток) в пробирке. Клетки метили CFSE с использованием набора для пролиферации клеток CELLTRACE™ CFSE Cell Proliferation Kit (Molecular probes) после оптимизации условий использования. 5 мМ раствор CFSE в DMSO для культур клеток готовили непосредственно перед использованием посредством добавления 18 мкл химически чистого ДМСО (компонент В набора) в пробирку, содержащую 50 мкг лиофилизированного CFSE (компонент А набора). Раствор FSE добавляли в суспензию МКПК для получения конечной концентрации 50 нМ CFSE, затем суспензию клеток инкубировали при 37°С и 5% CO₂ в течение 15 мин. Реакцию мечения клеток останавливали заполнением пробирок полной RPMI (RPMI-1640, содержащей 10% FBS, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 2 мМ глютамина). Клетки центрифугировали при 1500 об/мин в течение 7 мин при комнатной температуре. Из каждой пробирки удаляли супернатант и клетки ресуспендировали в полной RPMI. Проводили подсчет количества клеток и доводили полной RPMI для получения желаемой плотности клеток для использования в анализах.

Анализ митогенности и высвобождения цитокинов с использованием стимулированных ФГА Tклеток.

МКПК человека ресуспендировали в концентрации 2х10⁶ кл/мл в полной среде RPMI (RPMI-1640, содержащей 10% АВ сыворотки человека, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 2 мМ глютамина) и стимулировали 2.5 мкг/мл ФГА (Sigma) при 37°С в течение 3 дней. После инкубации клетки промывали два раза полной RPMI и сеяли в концентрации приблизительно 2х10⁶ клеток/мл в новый флакон без стимуляции. Затем клетки культивировали при 37°С в течение еще 4 дней, позволяя Tклеткам отдохнуть перед второй стимуляцией. В конце 4 дневного периода покоя собирали клетки, промывали их PBS и метили CFSE согласно приведенному выше описанию. После мечения клетки суспендировали в концентрации 2х10⁶ клеток/мл в полной (с сывороткой человека) среде RPMI (RPMI-1640, содержащая 10% АВ сыворотки человека, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 2 мМ глутамина). В это время свежие МКПК получали от того же донора и использовали их в качестве Аклеток для повторной стимуляции. Для получения А-клеток, T-клетки выделяли из популяции МКПК методом магнитной сепарации с использованием метода EasySep (Stem Cell Technologies Cat# 18051). Магнитные наночастицы вместе с декстраном и коктейлем антител против CD3 инкубировали со свежевыделенными МКПК согласно протоколу изготовителя. Затем смесь клеток и бусин оставляли в первой пробирке с фиолетовым магнитом EasySep в течение 5 мин и после этого суспензию клеток переносили во вторую 5 мл FACS пробирку. CD3⁺ клетки (T-клетки) оставались в первой пробирке, а А-клетки переносили во вторую пробирку. А-клетки, отобранные с помощью негативной селекции, обрабатывали митомицином С (ММС согласно приведенному ниже описанию) для подавления пролиферации. CFSEмеченые ФГА бластные и обработанные ММС А-клетки суспендировали в полной (АВ сыворотка человека) среде RPMI в концентрации 2х10⁶ кл/мл. каждую популяцию клеток сеяли в 48-луночные планшеты (0,5 мл/лунка) с указанной обработкой. Клетки инкубировали еще 4 дня при 37°С и 50 мкл супернатанта отбирали через 24 ч после стимуляции. Клетки и оставшийся супернатант отбирали через 4 дня после стимуляции. Полученные клетки окрашивали флуоресцентно меченными антителами против CD5

- 31 032828 (340697, BDBiosciences) CD25 (557741, BDBiosciences) и 7AAD (559925, BD Biosciences) и анализировали на проточном цитометре (LSRII, Becton Dickenson). Данные анализировали с помощью программного обеспечения для проточных цитометров FlowJo (TreeStar). Гейты устанавливали согласно описанию ниже: клетки, попадающие в гейт лимфоцитов по прямому рассеянию (FSC): боковому рассеянию (SSC) анализировали на экспрессию 7AAD. Клетки, попадающие в 7AAD- отрицательный гейт затем анализировали на экспрессию CD5 и клетки, попадавшие в гейт CD5+ затем исследовали по разведению CFSE и положительной экспрессии CD25. CD5+, CFSE^to и CD25^hi клетки считали активированными T-клетками. Образцы супернатанта исследовали на наличие цитокинов и хемокинов с использованием специального 11-плексного основанного на Luminex набора для определения Millipore (серия Milliplex) согласно протоколу изготовителя. С помощью набора исследовали 11 веществ: IL-β, IL-1RA, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17, IP-10, МСР1, IFNy и TNFa.

На фиг. 1 показано, что гибридные белки OKT3 IgG2AA, OKT3 IgG4AA и OKT3 НМ1 не активировали стимулированные ФГА T-клетки по сравнению с известными антителами препарата визилицумаби OKT3 ala-ala. Похожие данные были получены с использованием молекул, содержащих связывающий домен BC3.

В табл. 1 показано, что гибридные белки OKT3 IgG2AA, OKT3 IgG4AA и OKT3 НМ1 не вызывали высвобождение цитокинов стимулированными T-клетками или А-клетками в отличие от известных антител препарата визилицумаб и OKT3 ala-ala.

Таблица 1 Данные по высвобождению цитокинов

		IL-lb	IL-2	IL-4	IL-6	IL-10	IL-17	IFN-g	TNF-a	МСР-1	IP-10	IL-1RA
Необработанные		20.0	2.1	7.4	15804	469.6	27.1	136	1952	1393.9	234.1	4227.5
ФГА	2.5 мкг/мл	22.9	7.7	53.6	2293.6	1498.1	59.4	41.9	159.7	1467.2	625.0	5760.6
ОКТЗ МАТ	10 мкг/мл	77.6	101.0	168.0	3300 2	8196.0	203.0	971.6	877.9	2310.7	1010.7	9097.7
ВСЗ МАТ	10 мкг/мл	14.7	0.2	1.1	1440.0	3325	3.2	1.8	222.7	1899.4	73.9	4330.3
lgG2a	10 мкг/мл	46.1	3.5	6.4	3926.0	980.7	36.7	31.4	281.9	1566.5	368.8	5503.0
ОКТЗ N297A	7.3 мкг/мл	44.5	1.5	6.2	1677.8	401.8	17.8	17.7	341.9	1702.5	272.9	8803.2
.73 мкг/мл	31 5	3.2	14.6	1625.5	649.9	35.7	359	365 0	1508.5	433.3	8523.6
.073 мкг/мл	26.8	6.5	31.7	1784.8	1642.0	67.2	74.8	358.3	1637.3	775.6	8072.2
ОКТЗ IgGlAA	7.3 мкг/мл	474.4	0.8	5.0	21297.4	9133.1	6.6	142.5	2082.9	2973.3	111.4	10077.3
.73 мкг/мл	109.8	0.3	3.7	14723.7	2088.2	5.8	17.3	375.2	1777.4	145.5	5081.0
.073 мкг/мл	24.6	0.6	3.9	1805.7	454.6	13.0	13.2	180.7	1401.7	352.3	4186.9
ОКТЗ lgG2AA	7.3 мкг/мл	19.8	0.4	4.1	1345.3	280.2	4.0	1.5	144.8	16752	106.6	3884.5
.73 мкг/мл	19.6	0.4	3.2	1701.8	278.9	5.1	3.2	126.9	15183	143.7	3152.2
.073 мкг/мл	17.9	0.7	2.8	1659.4	305.3	11.4	6.9	160.7	1517.7	282.3	3586.4
ОКТЗ lgG4AA	7.3 мкг/мл	20.3	0.3	2.6	1632.4	265.0	4.1	2.1	140.4	1081.2	76.8	3020.9
.73 мкг/мл	17.6	0.4	0.5	1532 5	249.8	6.2	4.9	1553	1281.8	231.8	3639.6
.073 мкг/мл	24.5	0.4	0.0	1470.7	294.7	9.2	5.9	163.7	13075	167.1	3346.4
ОКТЗ НМ1	7.3 мкг/мл	9.2	0.2	3.2	862.1	185.6	1.2	0.8	122.4	1128.9	34.8	3118.8
.73 мкг/мл	13.7	0.2	1.1	1045.2	233.8	1.6	0.8	131.1	986.7	40.2	3284.7
.073 мкг/мл	17.3	0.6	0.0	1743.4	274.3	8.2	2.4	149.1	1216.2	107.4	3260.2
Nuvion FL	10 мкг/мл	12.8	7.9	63.0	2149.0	2132.3	65.9	92.6	245.9	1732.0	972.5	7923.9
1 мкг/мл	18.7	10.0	57.1	1936.9	2129.4	78.1	100.6	245.8	1791.8	1207.6	6553.7
.1 мкг/мл	19.8	7.6	43.8	2204.3	2076.4	73.5	99.0	274.9	1273.0	1386.4	7469.3
ОКТЗ ala-ala FL	10 мкг/мл	382	6.9	44.4	2033.5	2052.8	82.1	105.6	373.7	2309.6	720.8	7791.7
1 мкг/мл	32 3	6.8	43.2	2958 7	1999.5	82.7	1026	3927	2812.7	841.2	8950.2
.1 мкг/мл	28.0	7.3	32.0	2710.9	1595.1	74.0	66.4	268.7	2692.8	631.8	6825.3

Пример 2. Гибридный белок блокирует ответ T-клеток на аллоантиген.

Реакция смешанной культуры лимфоцитов человека (MLR).

МКПК человека от двух доноров выделяли согласно описанию выше и хранили отдельно. На основе полученных ранее данных МКПК первого донора использовали в качестве стимулирующей популяции, и МКПК второго донора использовали в качестве реагирующей популяции. Клетки обоих доноров метили CFSE согласно описанию выше. МКПК донора, выбранные в качестве стимулирующей популяции, обрабатывали митомицином С (ММС) для предотвращения деления клеток. ММС (Sigma) ресуспендировали в полной (HS) среде RPMI (RPMI-1640, содержащая 10% АВ сыворотки человека, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 2 мМ глютамина) до концентрации 0,5 мг/мл. МКПК суспендировали в концентрации приблизительно 1х10⁶/мл и добавляли ММС до получения конечной концентрации 25 мкг/мл. Смесь клеток и ММС затем инкубировали при 37°С в течение 30 мин, после чего клетки промывали трижды полной (HS) средой RPMI. Подготовленные стимулирующие и реагирующие клетки суспендировали в концентрации приблизительно 2х10⁶/мл в полной (сыворотка человека АВ) среде RPMI (RPMI-1640 содержащая 10% АВ сыворотки человека, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 2 мМ глютамина) и 0.25 мл каждой популяции клеток добавляли в лунки 48луночного планшета. Все вещества добавляли в планшет одновременно с клетками (в концентрациях, показанных на фиг. 2, 3 и 17; учтите, что концентрации даны для антител и молярные эквиваленты концентраций использовали для гибридных белков, как показано на фиг. 17) и затем образцы инкубировали при 37°С на протяжении эксперимента. Эксперимент продолжали в течение 7-8 дней. Собранные клетки окрашивали флуоресцентно мечеными антителами против CD5 (340697, BDBiosciences), CD25 (555433, BDBiosciences) и 7AAD (559925, BD Biosciences) и анализировали с помощью проточного цитометра.

- 32 032828 (LSRII, Becton Dickenson). Данные анализировали с помощью программного обеспечения для проточных цитометров FlowJo (TreeStar). Гейты устанавливали следующим образом: клетки, попадавшие в гейт лимфоцитов по FSC:SSC исследовали на экспрессию 7AAD. После этого клетки, попавшие в 7AADотрицательный гейт, исследовали на экспрессию CD5+, а клетки CD5+ исследовали по разбавлению CFSE и CD25 повышенной экспрессии. CD5+, CFSE^lo и CD25^hi клетки считали активированными Tклетками.

На фиг. 2 показано, что гибридные белки BC3 IgG2AA и BC3 IgG4AA блокировали ответ T-клеток на аллоантиген эффективнее, чем известные MAT BC3 и в отличие от антитела OKT3 ala-ala. Аналогичные данные были получены с использованием молекул, экспрессирующих связывающий домен OKT3.

На фиг. 3 показано, что гибридные белки BC3 НМ1 и BC3 AC_H2 также блокировали ответ T-клеток на аллоантиген. Аналогичные данные были получены с использованием молекул, экспрессирующих связывающий домен OKT3.

На фиг. 17 показано, что частично очищенные Cris-7 IgG1-N297A (50% является интересующий пик) эффективно блокировали ответ T-клеток на аллоантиген.

Пример 3. Гибридный белок блокирует ответ T-клеток памяти на вторичное предъявление антигена.

МКПК человека получали от донора, признанного положительным в предыдущем исследовании реактивности к токсину столбняка. МКПК метили CFSE согласно описанию выше и затем ресуспендировали в концентрации 2х10⁶/мл в полной среде (АВ сыворотка человека) RPMI (RPMI-1640, содержащая 10% АВ сыворотки человека, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 2 мМ L-глютамина). 0.5 мл клеток, меченых CFSE и 1 мкг/мл токсина столбняка (EMD), вместе с исследуемыми веществами добавляли в лунки 48-луночного планшета. Клетки инкубировали при 37°С и 5% CO₂ на протяжении всего эксперимента. Эксперименты прекращали через 8 дней после начала. Полученные клетки окрашивали флуоресцентными антителами против CD5 (340697, BDBiosciences) и CD25 (555433, BDBiosciences) и анализировали на проточном цитометре (LSRII, Becton Dickenson). Данные анализировали с использованием программного обеспечения для проточного цитометра FlowJo (TreeStar). Гейты устанавливали следующим образом: клетки, попадавшие в гейт лимфоцитов FSC:SSC анализировали на экспрессию CD5, после этого клетки, которые затем попадали в гейт CD5+, анализировали по разведению CFSE и повышенной экспрессии CD25. CD5+, CFSE^l,J и CD25^hl клетки считали активированными T-клетками.

На фиг. 4 показано, что гибридные белки BC3 IgG2AA, BC3 IgG4 АА и BC3 НМ1 способны блокировать ответ T-клеток памяти на повторное предъявление антигена, токсина столбняка. Аналогичные данные были получены при исследовании гибридных белков, содержащих связывающий домен OKT3.

Пример 4. Гибридные белки вызывают снижение количества TCR и CD3 на поверхности клеток.

МКПК человека были получены согласно описанию примера 1 и суспендировали в концентрации приблизительно 2х10⁶ клеток/мл. Часть МКПК отбирали для незамедлительного окрашивания поверхности клеток, а остальные МКПК инкубировали с различными реагентами против CD3 в течение 4 дней перед проведением анализа. МКПК, которые окрашивали, охлаждали на льду в течение 30 мин, после чего их центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 мин при 4°С и полученный супернатант удаляли. Клетки суспендировали в ледяном буфере FACS (dPBS, 2.5% FBS) в концентрации 1х10⁶/мл. 1 мл клеток переносили в 5 мл пробирку FACS (BD Falcon) для каждого исследуемого реагента. Дополнительно 1 мл ледяного буфера FACS добавляли к 1 мл аликвотам клеток и клетки центрифугировали при 1500 об/мин при 4°С. Пробирки переворачивали и сливали осадок таким образом, что в пробирке оставалось приблизительно 0.1 мл буфера FACS вместе с осадком клеток, затем пробирки помещали на лед. Готовили маточный раствор красящих антител (90 мкл ледяного буфера FACS, 5 мкл антител против CD5 (eBioscience) и 5 мкл антител против TCR (BDBiosciences)) для анализа образцов непосредственно после выделения. Маточный раствор (100 мкл) добавляли в каждую пробирку FACS вместе с 1 мкг/мл или 0.1 мкг/мл гибридных белков против CD3 или моноклонального антитела (примечание: указанные концентрации даны для антител, для гибридных белков концентрации выражали в молярных эквивалентах). Затем образцы инкубировали на льду в темноте в течение 30 мин. После инкубации образцы промывали дважды 2 мл ледяного буфера FACS и добавляли вторичные антитела, меченые РЕ, специфичные для реагента, направленного против CD3, в конечном разведении 1:400. Затем образцы инкубировали на льду в темноте в течение 30 мин и затем промывали дважды 2 мл ледяного буфера FACS. Степень окрашивания затем измеряли с помощью проточного цитометра LSRII (Becton Dickenson).

МКПК, предназначенные для обработки в течение 4 дней и последующей окраски поверхности клеток, сеяли в количестве 0,5 мл на лунку (концентрация клеток составляла приблизительно 2х10⁶ клеток/мл в полной (АВ сыворотка человека) среде RPMI) в 48-луночные планшеты. Реагенты, направленные против CD3, добавляли к клеткам в концентрациях 1, 0.5 и 0.1 мкг/мл (примечание: указанные концентрации даны для антител, для гибридных белков концентрации выражали в молярных эквивалентах) и клетки инкубировали при 37°С на протяжении 2-4 дней. После инкубации клетки собирали и окрашивали согласно описанию выше.

Результаты (фиг. 5А, 5Б, 6А и 6Б) показали, что гибридные белки, содержащие связывающий домен OKT3, вызывают уменьшение количества TCR и CD3 на поверхности T-клеток тогда, как моноклональ

- 33 032828 ное антитело OKT3 снижало количество TCR, но не CD3. Аналогичные результаты были получены при исследовании гибридных белков, содержащих связывающий домен BC3.

На фиг. 18 показано, что гибридный белок Cris-7 IgG1-N297A вызывает снижение количества TCR и CD3 на поверхности T-клеток тогда, как моноклональное антитело Cris-7 снижает количество только TCR. Аналогичные результаты были получены при исследовании Cris-7 IgG2-AA-N297A, Cris-7 IgG4AA-N297A и Cris-7 HM1.

Пример 5. Гибридный белок вызывает устойчивый поток ионов кальция в T-клетки.

МКПК человека получали согласно описанию выше. Клетки, не являющиеся T-клетками, отделяли методом магнитной сепарации от T-клеток с использованием технологии MACS Miltenyi. Нетронутые Tклетки выделяли с помощью набора для выделения всех T-клеток The Pan T Cell Isolation Kit II (Miltenyi). Супермагнитные бусины, покрытые антителами против всех клеток МКПК, кроме T-клеток, инкубировали со свежевыделенными МКПК согласно инструкции производителя. Затем клетки и смесь бусин наносили на колонку, содержащую матрикс, который образовывал магнитное поле при помещении в MACS Separater (Miltenyi), сильный постоянный магнит. T-клетки проходили сквозь колонку, а все другие клетки оставались на колонке. Обычно чистота T-клеток составляла 87-93%. Очищенные T-клетки суспендировали в полной среде RPMI (RPMI-1640, 10% АВ сыворотка человека, 2 мМ L-глютамина, пируват натрия, неосновные аминокислоты, пенициллин/стрептомицин) в концентрации приблизительно 2х10⁶ клеток/мл и инкубировали при 37°С во флаконе соответствующего размера в течение ночи. На следующее утро 100 мкл клеток (200000 клеток) переносили в лунки 96-луночного черного планшета из поли-Э-лизина и инкубировали при 37°С в течение 3 ч. Во время инкубации готовили индикаторный краситель потока ионов кальция согласно инструкции производителя (Molecular Devices FLIPR Calcium 4 assay). Дополнительно готовили исследуемые вещества в U-образных планшетах. Лекарственные вещества для обработки клеток готовили в 5х концентрации в планшете для обработки в объеме 75 мкл. Все вещества (гибридные белки и перекрестные линкеры) исследовали в трех повторах. 100 мкл индикаторного красителя добавляли к клеткам за 1 час перед считыванием планшетов. После добавления индикаторного красителя планшет ставили обратно в инкубатор еще на 45 мин. Планшеты центрифугировали при 1200 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре и затем ставили обратно в инкубатор еще на 15 мин. В конце инкубации планшетов с веществами и клетками помещали в FlexStation 3 (Molecular Devices), настольное устройство для считывания планшетов со встроенным переносом жидкостей. С помощью робота Flexstation добавляет 50 мкл вещества в планшет с клетками и затем считывает полученную флуоресценцию красителя индикатора флуоресценции и каждые 7 сек через серию 750 с. Полученные данные затем экспортировали в Excel (Microsoft Office) для анализа.

Результаты (фиг. 7) показывают, что в отличие от антител, имеющих такой же связывающий домен, одноцепочечные гибридные белки согласно настоящему описанию в отсутствии перекрестного линкера (т.е. молекулы, которая соединяет две или более молекул SMIP таких, как антитело против IgG) вызывают активный поток ионов кальция в T-клетки. Аналогичные результаты были получены при исследовании структур молекул, экспрессирующих связывающий домен BC3, а также при использовании стимулированных T-клеток.

На фиг. 19 показано влияние различных шарниров на уровень потока ионов кальция, вызванный одноцепочечными гибридными белками, имеющими связывающий домен BC3. В данном случае гибридные белки добавляли на 20 с, а поперечные линкеры добавляли на 600 с. Гибридный белок с самым коротким шарниром (линкер 122, полученный от шарнира IgA2) вызывал наибольший поток ионов кальция, тогда как гибридные белки, имеющие более длинные шарниры (линкеры 115 и 116, полученные от IgE CH2 и UBA соответственно) вызывали меньший поток ионов кальция. Но во всех случаях одноцепочечные гибридные белки, содержащие связывающий домен BC3, вызывали большее усиление потока ионов кальция, чем антитела. Таким образом, шарнир можно регулировать для изменения тока ионов кальция при необходимости.

Пример 6. In vitro анализ молекул против TCR/CD3 мыши.

Выделение спленоцитов мыши.

В асептических условиях извлекали селезенки и удаляли большие фрагменты жира и ткани. В ламинарных шкафах селезенки помещали на малые чашки с 5 мл стерильного раствора 1xPBS и затем зажимали между стеклами, замороженными с одной стороны. Во время этого процесса стекла держали под углом над чашкой Петри для того, чтобы кровь и клетки стекли обратно в чашку. Этот этап завершали, когда капсула селезенки теряла всю красную окраску. Суспензию клеток в чашке Петри переносили в 15мл коническую пробирку и перемешивали на вихревой мешалке для того, чтобы разбить все комки клеток. Затем пробирку наполняли 12 мл стерильного раствора 1xPBS, удерживали в вертикальном положении, и содержимое оседало в течение 5 мин. Супернатант переносили во вторую 15-мл коническую пробирку, оставляя нетронутым осевший дебрис в первой пробирке. Затем клетки осаждали при 1500 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре. Удаляли супернатант и осадок клеток суспендировали в 4 мл буфера для лизирования эритроцитов ACK Red Blood Cell Lysing Buffer (Quality Biologics, номер по каталогу. 118-156-101) и инкубировали температуре в течение 5 мин. Затем коническую пробирку на

- 34 032828 полняли полной средой RPMI (RPMI-1640, содержащая 10% FBS, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 2 мМ L-глютамина). Суспензию клеток пропускали через краситель клеток и переносили в другую 15-мл коническую пробирку. Клетки промывали трижды полной средой RPMI и затем подсчитывали с помощью гемацитометра.

Мечение спленоцитов мыши карбоксифлуоресцеинсукцинимидиловым эфиром (CFSE).

Плотность спленоцитов мыши доводили до 1х10⁶/мл стерильным PBS. Клетки переносили в 50-мл конические пробирки в количестве не более 25 мл (25х10⁶ клеток) в пробирке. Клетки метили CFSE с использованием набора для пролиферации клеток CELLTRACE™ CFSE Cell Proliferation Kit Molecular Probes (номер по каталогу С34554), после оптимизации условий для использования МКПК человека и спленоцитов мыши. 5 мМ раствора CFSE в DMSO для клеточных культур готовили непосредственно перед использованием посредством добавления 18 мкл химически чистого DMSO (компонент В набора) в пробирку, содержащую 50 мкг лиофилизированного CFSE (компонент А набора). Из-за чувствительности CFSE к свету были предприняты меры предосторожности при приготовлении реагентов и последующей процедуре мечения клеток для защиты реагента от света. Раствор CFSE добавляли к суспензии МКПК до конечной концентрации 50 нМ CFSE. Крышки пробирок, содержащих суспензию клеток, свободно заворачивали для обеспечения газообмена и пробирки помещали в инкубатор при 37°С, 5% СО₂ на 15 мин. Реакцию мечения клеток останавливали, заполняя пробирки полной RPMI (RPMI-1640, содержащей 10% FBS, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 2 мМ L-глютамина), т.к. сыворотка останавливает реакцию мечения. Клетки центрифугировали при 1500 об/мин в течение 7 мин при комнатной температуре. Супернатант удаляли из каждой пробирки и клетки повторно суспендировали в полной RPMI. Клетки подсчитывали (обычные потери клеток до 25% от начального количества) и доводили полной RPMI до желаемой для анализа плотности.

Активированный ConA лимфобласт.

Спленоциты выделяли из BALB/c мышей согласно описанию выше и суспендировали в концентрации 2х10⁶ клеток/мл в полной среде RPMI (RPMI, 10% FBS, 2 мМ L-глюамина, пируват натрия, неосновные аминокислоты, пенициллин/стрептомицин и 1% ВМЕ) и стимулировали 1 мкг/мл конканавалина А (Sigma) в течение 3 дней. Через 3 дня клетки отмывали два раза полной средой RPMI и пересевали в новый флакон без стимуляции на 4 дня. В конце этого 4 дневного периода покоя клетки собирали и метили CFSE согласно описанию выше.

В это время вторую селезенку извлекали из мышей BALB/c и выделяли спленоциты. Эти свежевыделенные спленоциты использовали в качестве А-клеток во время фазы повторной стимуляции. Для получения популяции А-клеток из свежих спленоциов выделяли T-клетки (CD5⁺ клетки) методом магнитной сепарации с использованием технологии MACS Miltenyi. Нетронутые T-клетки выделяли с помощью набора для выделения всех T-клеток The Pan T Cell Isolation Kit II (Miltenyi). Супермагнитные бусины, покрытые антителами против CD5 (Miltenyi, номер по каталогу. 130-049-301), инкубировали со свежевыделенными спленоцитами согласно инструкции производителя. Затем клетки и смесь бусин наносили на колонку (Miltenyi, номер по каталогу 130-042-401), содержащую матрикс, который образовывал магнитное поле при помещении в MACS Separater (Miltenyi номер по каталогу 130-042-301), сильный постоянный магнит. CD5⁺ клетки (T-клетки) оставались на колонке, несвязанные А-клетки проходили через колонку. А-клетки, отобранные методом негативной селекции, обрабатывали митомицином М (согласно описанию выше) для подавления пролиферации.

Меченые CFSE ConA бласты и обработанные ММС А-клетки ресуспендировали в полной среде в концентрации 2х10⁶ клеток/мл. 0.5 мл каждой популяции клеток добавляли в 48-луночный планшет для культур клеток наряду с указанными веществами. Отобрали 50 мкл супернатанта через 24 ч после стимуляции и оставшийся супернатант отбирали на 4 день после повторной стимуляции. Клетки красили флуоресцентно меченными антителами против CD5 (45-0051, eBioscience) и CD25 (25-0251, eBioscience), пропускали через проточный цитометр (LSRII, Becton Dickenson) и анализировали с помощью программного обеспечения Flow Jo (TreeStar). Гейты устанавливали следующим образом: клетки, попадавшие в гейт лимфоцитов FSC:SSC анализировали на экспрессию CD5, клетки, которые в дальнейшем попадали в гейт CD5+, затем анализировали по разбавлению CFSE и повышенной экспрессии CD25. CD5+, CFSE^l,J и CD25^hl клетки считали активированными T-клетками. Образцы супернатанта исследовали на наличие цитокинов и хемокинов с использованием набора для определения 22 веществ, Linco-plex, основанного на Luminex (Linco Research), согласно инструкции производителя со следующими изменениями: стоковые растворы бусин для анализируемых веществ, антител для определения стрептавидин-РЕ разводили 1:2 перед использованием в анализе. С помощью указанного набора определили 22 вещества: MIP1a, GMCSF, МСР-1, KC, RANTES, IFNy, IL-1B, IL-1a, G-CSF, IP-10, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-10, IL12, TNFa, IL-9, IL-13, IL-15 и IL-17.

Моноклональные антитела Both H57-457 и 145-2С11, но не Н57 Null2 или 2С11 Null2 SMIP вызывали высвобождение цитокинов из стимулированных ConA T-клеток. Результаты выделения типичных цитокинов, IFNy и IP-10, после обработки стимулированных ConA T-клеток представлены на фиг. 8А и 8Б. Также SMIP Н57 Null2 (совпадает с Н57 Mu Null на фиг. 9) и 2С11 Null2 (совпадает 2С11 Mu null

- 35 032828

SMIP на фиг. 9), но не моноклональные антитела Н57-457 или 145-2С11 блокировали ответ T-клеток на антиген (см. фиг. 9). Аналогичные результаты были получены при измерении высвобождения других цитокинов.

Пример 7. In vivo исследования типичных smip против TCR.

12-недельных самок мышей BALB/c (Harlan) делили на группы по 6 мышей и через боковую хвостовую вену вводили им 7.3 мкг, 37 мкг, 75 мкг или 185 мкг Н57 Null2 SMIP, 5 мкг (максимальная переносимая доза) MAT H57, 250 мкг изотипического контроля IgG2a (молярный эквивалент наибольшей дозы SMIP) или 200 мкл PBS. Объем инъекций составлял 200 мкл и во всех вводимых материалах уровень эндотоксина был ниже 0.5 EU/мг. Трех мышей в каждой группе, выбранных случайным образом, умерщвляли через 24 ч и оставшихся трех мышей в группах умерщвляли в конце эксперимента через 3 дня после введения инъекций. Следили за клиническими симптомами токсичности, вызванной лекарственным средством, в виде потери веса и улучшения клинического показателя параметров у мышей. Исследователь, оценивающий клинический показатель, не знал, какое лечение получали животные в каждой группе. Показатели задавали соответственно следующим обозначениям: О=нормальное; 1=слабая пилоэрекция; 2=умеренная пилоэрекция и/или воспаление или раздражение глаз; 3=напряженная поза/вялость; 4=агония. У всех мышей отбирали кровь через 2 ч после инъекции и в конце эксперимента. Извлекали селезенку и паховые лимфатические узлы в конце эксперимента. Исследовали образцы сыворотки на наличие цитокинов и хемокинов с использованием специализированного 14-плексного набора для определения, основанного на Luminex, Millipore (серия Milliplex) согласно инструкции производителя со следующими изменениями: маточные растворы бусин анализируемого вещества, антител для определения и стрептовидин-РЕ разбавляли 1:2 перед использованием в анализе. Также анализировали неразбавленные образцы сывороток (в отличие от рекомендуемого разведения 1:2). С помощью набора определяли следующие 14 веществ: G-CSF, GM-CSF, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13, IL-17, IP-10, KC, МСР1, IFNy и TNFa. Суспензию клеток селезенки и лимфатических узлов окрашивали антителами против CD5 (eBioscience, номер по каталогу 45-0051) и IgG2a мыши (BDBiosciences, номер по каталогу 553390) для определения процента T-клеток в указанных двух органах, которые были покрыты SMIP.

На фиг. 10А показано, что внутривенное введение Н57 Null2 SMIP не вызывало потерю веса. На фиг. 10Б показано, что указанное вещество также не вызывало улучшение клинических параметров. Полученные результаты показывают, что данный Null2 SMIP имеет желаемый профиль безопасности.

На фиг. 11 показано, что внутривенное введение Н57 Null2 SMIP не вызывает цитокиновый шторм у нормальных мышей BALB/c в отличие от родительского антитела. Показаны два типичных цитокина IL-6 и IL-4 панели для 14 анализируемых веществ.

На фиг. 12 показано, что после внутривенного введения Н57 Null2 SMIP Н57 Null2 в селезенке были обнаружены T-клетки, покрытые SMIP.

Пример 8. Гибридный белок подавляет острую реакцию трансплантат против хозяина in vivo.

Для определения того, являются ли эффективными молекулы-заменители на мышиной модели острой реакции трансплантат против хозяина (оРТПХ), мышей обрабатывали типичными гибридными белками и затем наблюдали за потерей веса, соотношением донорских и хозяйских лимфоцитов и продукцией цитокинов и хемокинов.

оРТПХ вызывали у самок мышей C57BL/6xDBA2 F1 (Taconic) посредством переноса спленоцитов от самки-донора C57BL/6 (Taconic). У мышей-доноров изымали селезенку и опускали ее в холодную RPMI, содержащую 10% FBS. Полученные селезенки разрушали с использованием стерильных замороженных стекол. Отбирали супернатанты, центрифугировали и клетки промывали согласно описанию выше. Затем промытые спленоциты ресуспендировали в стерильном PBS в концентрации 65х10⁶ на 200 мкл. Непосредственно перед введением смесь спленоцитов пропускали через 100 мкм клеточный фильтр (BD Falcon) для удаления дебриса и больших комков клеток. 200 мкл клеточной суспензии спленоцитов донора вводили внутривенно (IV) через боковую хвостовую вену мыши реципиента F1. При IV инъекциях через боковую хвостовую вену на мышей непродолжительно действовали ИК лампой и мышей помещали в пластиковую клетку для иммунизации. Инъекции вводили с использованием иглы 27,5. У реципиентов на 14 день наблюдали выраженную болезнь и в это время эксперимент прекращали и оценивали результаты. Развитие болезни было связано с потерей веса и пролиферацией клеток донора с сопутствующей потерей из-за атак T-клеток хозяина, вызванных донорскими клетками в селезенке животных, которым вводили спленоциты. Маркеры сыворотки, такие как IFNy, также коррелировали с развитием заболевания.

Для оценки эффективности клетки донора вводили реципиентам F1 в первый день (DO) исследования согласно описанию выше. SMIP, контроль IgG2a и PBS вводили на D0, D1, D3, D5, D7, D9 и D11, эксперимент прекращали на D14. Все вещества вводили IV, кроме инъекции D0, которую делали в ретроорбитальный синус перед переносом клеток донора. С инъекцией вводили 100 мкг Н57 Null2 SMIP или 100 мкл IgG2a или 100 мкл PBS. Все белки, использованные в исследованиях in vivo, содержали менее 0.5 EU/мг эндотоксина. Мышам, обработанным иммуносупрессантом дексаметазоном (DEX; Sigma), вводили дексаметазон 10 мг/кг/день посредством интраперитонеальной инъекции (IP).

- 36 032828

На протяжении эксперимента мышей взвешивали через день до тех пор, пока они не начинали терять вес и тогда их взвешивали каждый день. Процент потери веса мышей реципиентов от начального уровня показан на фиг. 13. Введение Н57 Null2 SMIP предотвращало потерю веса, вызванную развитием оРТПХ в отличие от мышей, которым вводили PBS или контроль IgG2a.

На 7 день у мышей брали кровь на анализ биологических маркеров сыворотки. На 14 день в конце эксперимента из каждого животного извлекали кровь и селезенку. Определяли вес и общее количество клеток в каждой селезенке. Образцы сыворотки анализировали на наличие цитокинов и хемокинов с использованием специализированного 14-плексного набора для определения, основанного на Luminex, Millipore (серия Milliplex) согласно инструкции производителя. С помощью набора определяли следующие 14 веществ: G-CSF, GM-CSF, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13, IL-17, IP-10, KC, МСР1, IFNy и TNFa. Продукция цитокинов и хемокинов была подавлена у мышей, обработанных SMIP, включая G-CSF (фиг. 14А), KC (фиг. 14Б) и IFNy (фиг. 14В). Приведенные результаты показывают, что введение SMIP подавляло продукцию цитокинов и хемокинов, вызванную оРТПХ, особенно продукцию IFNy (которая обычно повышается на 7 день в мышей, страдающих от оРТПХ). На 14 день выделяли спленоциты согласно описанию выше и окрашивали антителами против H-2b (don или клетки донора) и H2-d (H2b+, H2-d+ клетки хозяина) для анализа с использованием проточного цитометра LSRII (BD Biosciences). У мышей, получавших гибридный белок Н57 Null2, соотношение между лимфоцитами донора и хозяина было похоже на соотношение у мышей, которые получали DEX, и у мышей отрицательного контроля, которые не получали клетки донора (фиг. 15). Эти результаты показывают, что гибридный белок согласно настоящему описанию подавляет пролиферацию лимфоцитов донора, что совпадает со снижением количества лимфоцитов хозяина, вызванным оРТПХ, у мышей, которые получали PBS и контроль IgG2a.

Указанные исследования in vivo показывают, что гибридные белки подавляют развитие оРТПХ, о чем свидетельствует недостаток пролиферации лимфоцитов донора, продукции цитокинов и хемокинов и потеря веса. Аналогичную эффективность также обнаружили в предварительных результатах с использованием мышиной модели хронической РТПХ.

Также были выполнены экспериментальные работы на модели оРТПХ для исследования Н57 half null, H57 null2 и 2C11null2. Обнаружили, что Н57 half null и Н57 null2 являются эффективными с такими же результатами по исследованным параметрам, несмотря на раннее высвобождение некоторых цитокинов в исследованиях биомаркеров. Гибридный белок 2C11null2 был также эффективным, и обнаружили, что он предотвращает пролиферацию клеток донора на модели оРТПХ.

Пример 9. Гибридные белки с N297A и одна дополнительная замена на аланин в участке C_H2 IGG4 блокирует ответ T-клеток на аллоантиген.

Проводили анализ MLR человека согласно описанию в примере 2 с использованием следующих гибридных белков: OKT3 IgG4-WT-N297A (SEQ ID NO: 232), OKT3 IgG4-ALGG-N297A (SEQ ID NO: 234), OKT3 IgG4-FAGG-N297A (SEQ ID NO: 236), OKT3 IgG4-FLAG-N297A (SEQ ID NO: 238), OKT3 IgG4FLGA-N297A (SEQ ID NO: 240), OKT3 IgG4-AA-N297 (SEQ ID NO: 91), OKT3 FL и MAT OKT3.

На фиг. 20 показано, что гибридные белки OKT3 IgG4, содержащие (а) одну замену на аланин в положении N297, или (б) как замену на аланин в положении N297, так и дополнительную замену на аланин в положении F234, L235, G236 или F237, блокируют ответ T-клеток на аллоантиген эффективнее, чем известное MAT OKT3 и антитело OKT3 ala-ala.

Пример 10. На реакцию MLR может влиять выбор шарнирных областей.

Анализ MLR человека проводили согласно описанию в примере 2 с использованием гибридных белков, полученных из BC3 IgG1-N297A (SEQ ID NO: 80) и содержащих шарнирные области с различной длинной и последовательностями: линкер 125, полученный из UBA (SEQ ID NO: 329), линкер 126, полученный из IgE C_H2 (SEQ ID NO: 330), линкер 127, полученный из шарнирной области IgD (SEQ ID NO: 331), линкер 128, полученный из шарнирной области IgA2 (SEQ ID NO: 332), и линкер 129, полученный из шарнирной области IgG1 (SEQ ID NO: 333). Последовательности аминокислот SMIPs BC3 IgG2-N297A, содержащих указанные выше линкеры, представлены в SEQ ID NO: 325, 323, 319, 315 и 311 соответственно. Последовательности нуклеотидов, кодирующие указанные SMIPs BC3 IgG2-N297A, представлены в SEQ ID NO: 324, 322, 318, 314 и 310 соответственно.

На фиг. 21 показано влияние различных шарнирных областей на способность гибридных белков BC3 IgG1-N297A блокировать ответ T-клеток на аллоантиген. По-видимому, гибридные белки с более короткими шарнирными областями эффективнее блокируют ответ T-клеток. Однако во всех случаях одноцепочечный гибридный белок, содержащий связывающий домен BC3, эффективнее блокировал ответ T-клеток на аллоантиген, чем HuIg1 BC3 (молекула антитела, которая содержит вариабельный участок MAT BC3 и константную область IgG1).

- 37 032828

Пример 11. In vitro анализ гуманизированных гибридных белков CRIS7.

Анализы MLR человека проводили согласно описанию в примере 2 с использованием различных гуманизированных гибридных белков Cris7: гуманизированного Cris7 (VH3-VL1) IgG1-N297A (SEQ ID NO: 290), гуманизированного Cris7 (VH3-VL2) IgG1-N297A (SEQ ID NO: 295), гуманизированного Cris7 (VH3-VL1) IgG2-AA-N297A (SEQ ID NO: 292), гуманизированного Cris7 (VH3-VL2) IgG2-AA-N297A (SEQ ID NO: 297), гуманизированного Cris7 (VH3-VL1) IgG4-AA-N297A (SEQ ID NO: 293), гуманизированного Cris7 (VH3-VL2) IgG4-AA-N297A (SEQ ID NO: 298), химерного Cris7 IgG1-N297A (SEQ ID NO: 265), гуманизированного Cris7 (VH3-VL1) HM1 (SEQ ID NO: 294), гуманизированного Cris7 (VH3-VL2) HM1 (SEQ ID NO: 299) и химерного Cris7 HM1 (SEQ ID NO: 269).

На фиг. 22 показано, что гуманизированные гибридные белки Cris7 IgG1-N297A, IgG2-AA-N297A и IgG4-AA-N297A и химерный гибридный белок Cris7 IgG1-N297A блокировали ответ T-клеток на аллоантиген эффективнее, чем известное MAT Cris7.

Также на фиг. 23 показано, что гуманизированные гибридные белки Cris7 IgG1-N297A, IgG2-AAN297A и IgG4-AA-N297A и химерный гибридный белок Cris7 IgG1- блокировали ответ T-клеток на аллоантиген эффективнее, чем известное MAT Cris7. Также гуманизированные и химерные белки Cris7 HM1 блокировали ответ T-клеток эффективнее, чем MAT Cris7.

Исследовали митогенный потенциал и высвобождение цитокинов стимулированными ФГА Tклетками, которые повторно стимулировали гуманизированными гибридными белками Cris7 (VH3-VL1) IgG1-N297A и Cris7 (VH3-VL2) IgG1-N297A, с использованием методов, описанных в примере 1. Исследовали следующие цитокины: IL-1b, IL-10, IL-17, IFNy, TNFa, IL6, МСР-1, IP-10, IL-2 и IL4.

На фиг. 24 показано, что гуманизированные гибридные белки Cris7 (VH3-VL1) IgG1-N297A и Cris7 (VH3-VL2) IgG1-N297A не активировали стимулированные ФГА T-клетки. Аналогичные данные были получены при исследовании гуманизированных гибридных белков Cris7 (VH3-VL1) IgG2-AA-N297A, Cris7 (VH3-VL2) IgG2-AA-N297A, Cris7 (VH3-VL1) IgG4-AA-N297A и Cris7 (VH3-VL2) IgG4-AAN297A.

Результаты высвобождения цитокинов показали, что (1) гуманизированные гибридные белки Cris7 IgG1-N297A, Cris7-IgG2-AA-N297A, Cris7-IgG4-AA-N297A и химерный гибридный белок Cris7 IgG1N297A не отличались от контрольного, не связывающегося с T-клетками белка SMIP, (2) родительское MAT Cris7 было сравнимо с гуманизированными гибридными белками Cris7 IgG1-N297A, Cris7-IgG2AA-N297A и Cris7-IgG4-AA-N297A, кроме IL-17 (родительское MAT Cris7 вызывало большее высвобождение IL-17, чем гуманизированные гибридные белки Cris7), (3) Nuvion FL активировало продукцию клетками IL-10, IFNy, IL-17, TNFa и IL-6, и (4) все исследованные молекулы (включая контрольные, не связывающие T-клетки SMIP) вызывали секрецию МСР-1 на уровнях, сравнимых с повторной стимуляцией ФГА. Результаты высвобождения IFNy и IL-17 представлены на фиг. 25А и 25В соответственно.

Уровни цитокинов при проведении анализа первичной митогенности МКПК яванского макака in vitro измеряли следующим образом: выделяли МКПК примата (яванского макака) согласно описанию в примере 1 за исключением использования 90% среды для разделения лимфоцитов в PBS 1X (CMF) и приготовления градиента плотности в 15-мл конических пробирках. Клетки ресуспендировали в концентрации 4х10⁶ клеток/мл в полной среде RPMI (RPMI-1640, содержащая 10% сыворотки АВ человека, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 2 мМ L-глютамина) и вносили в лунки 96-луночного плоскодонного планшета в количестве 100 мкг/лунка вместе с исследуемыми веществами. Клетки инкубировали при 37°С. из каждой лунки отбирали супернатанты на 1, 2 и 3 день и анализировали наличие цитокинов не человекообразного примата с использованием специального 9-плексного основанного на Luminex набора для определения Millipore согласно инструкции производителя. С помощью набора определяли 9 веществ: IL-1₽, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17, MCP1, IFNy и TNFa.

Результаты (фиг. 26А-Ж) показывают, что гуманизированные гибридные белки Cris7 (VH3-VL1) IgG4-AA-N297A и Cris7 (VH3-VL2) IgG4-AA-N297A вызывали меньшее высвобождение IFNy, IL-17, IL4, TNFa, IL-6 и IL-10 по сравнению с MAT Cris7, тогда как уровни IL-1B и IL-2 были сравнимы после обработки гуманизированными гибридными белками Cris7 IgG4-AA-N297A и MAT Cris7.

Пример 12. Исследование типичных гибридных белков, содержащих связывающий домен Н57, с использованием биомаркеров.

Десятинедельных самок C57BL/6xDBA2 F1 мышей подобрали по весу и разделили на 5 групп по 8 животных в группе. Животным вводили IV через ретроорбитальный синус (200 мкл молярного эквивалента 300 мкг Н57 Null2 SMIP) изотипический контроль IgG2a, H57 Null2 SMIP (SEQ ID NO: 96), H57 '/₂ Null SMIP (SEQ ID NO: 304), H57 HM2 SMIP (SEQ ID NO: 306) или 5 мкг MAT H57. В каждой группе 4 мышей умерщвляли через 24 ч, а оставшихся 4 мышей в группе умерщвляли в конце эксперимента через 3 дня после инъекции. Наблюдали за клиническими симптомами токсичности, вызванной препаратами, согласно описанию выше. У всех мышей брали кровь на исследование через 2 ч после инъекции и в конце эксперимента. Образцы сыворотки анализировали по наличию цитокинов и хемокинов с использованием индивидуального 14-плексного основанного на Luminex набора для определения Millipore согласно описанию выше. Кроме сбора крови для анализа сыворотки аликвоты цельной крови забирали в пробир

- 38 032828 ки Microtainer (содержащие ЭДТА) для окрашивания лейкоцитов в образцах периферической крови. Вкратце 5 мкл цельной крови вносили в лунки 96-луночного планшета с U-образным дном. Добавляли 5 мкл блокирующих антител крысы против 10 мкг/мл CD16/CD32 Fc мыши (BD Pharmingen) и инкубировали планшеты при комнатной температуре в течение 15 мин при перемешивании со средней скоростью на шейкере планшетов. 10 мкл коктейля антител (или подходящих контролей из одного красителя) против CD5 (РЕ-Су5), CD19 (FITC, eBioscience,) и CD45 (РЕ, eBioscience,) добавляли до получения конечного разведения 1:4000. Планшеты инкубировали еще 20 мин при комнатной температуре в защищенном от света месте на шейкере планшетов при перемешивании со средней скоростью. Добавляли 180 мкл лизирующего буфера 1Х BD Pharm Lyse, тщательно перемешивали содержимое лунок и оставляли в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем 50 мкл каждого образца анализировали с помощью прибора для отбора проб с высокой пропускной способностью BD LSRII High Throughput Sampler (HTS). Гейты устанавливали следующим образом: клетки, попадавшие в гейт лимфоцитов по FSC:SSC анализировали на экспрессию CD45, затем клетки, попадавшие в гейт CD45+, анализировали на экспрессию CD5 и CD19. Концентрацию клеток в мл в каждой лунке определяли исходя из объема полученного образца (50 мкл) и фактора разведения 40. Концентрацию клеток в мл в каждой лунке определяли по результатам измерений, исходя из объема образца (50 мкл) и фактора разведения 40.

На фиг. 27 показано, что внутривенное введение белков Н57 Null2, half null и НМ2 SMIP не вызывало потерю веса, тогда как внутривенное введение MAT H57 вызывало потерю веса. Все мыши выглядели здоровыми без явных признаков расстройства в период от 0 до 3 дня.

На фиг. 28 показано, что внутривенное введение Н57 Null2, H57 half Null, Н57 НМ2 или MAT H57 приводит к временному снижению циркулирующих T-клеток CD5+ (кл/мл) по сравнению с изотипическим контролем IgG2a. Уровни циркулирующих T-клеток CD5+ (клеток/мл) различались незначительно между группами через 72 ч после инъекции (фиг. 29).

На фиг. 30А-В показано, что (1) Н57 Null2 и Н57 НМ2 не вызывали увеличение продукции цитокинов по сравнению с IgG2a, и (2) обработка Н57 half null повышала уровни IL-2, IL-10, IP-10, TNFa и IL17 через 2 ч после инъекции, но уровни всех цитокинов, кроме IL-5 возвращались к нормальному уровню через 24 ч после инъекции.

Пример 13. Фармакокинетическое исследование типичных гибридных белков, содержащих связывающий домен Н57.

Самкам мышей BALB/c внутривенно (IV) в первый день вводили 200 мкл PBS, содержащего 200 мкг белка Н57 Null2 (SEQ ID NO: 96), Н57-НМ2 (SEQ ID NO: 306) или Н57 half null SMIP (SEQ ID NO: 304). В каждый момент времени трем мышам делали инъекции. В случае белка Н57-НМ2 SMIP образцы сыворотки забирали через 15 мин и 2, 6, 8, 24, 30, 48, 72, 168 и 336 ч, и в случае Н57 Null2 и Н57 half null дополнительно забирали образцы через 96 и 504 ч, пропуская 8 и 30 ч. У мышей под анестезией брали кровь из плечевого нервного сплетения или посредством пункции сердца в указанные моменты времени после инъекций и забирали образцы сыворотки согласно описанию ниже.

Определяли концентрацию BC3 IgG4-AA-N297A и BC3 IgG2-AA-N297A в сыворотке методом сэндвич-ELISA с использованием антител козы, специфичных к Fc IgG человека, в качестве иммобилизованного антитела, и конъюгатов HRP с антителами против IgG4 или IgG2 человека для определения связывания BC3 IgG4-AA-N297A или BC3-IgG2-AA-N297A SMIP соответственно. Концентрации OKT3IgG4-AA-N297A и BC3-НМ1 в сыворотке определяли с помощью анализа связывания, основанного на FACS, с использованием линии клеток CD3⁺ Jurkat. Клетки Jurkat инкубировали в лунках 96луночного плоскодонного планшета вместе с образцами сывороток мышей, которым вводили OKT3 IgG4-AA-N297A или BC3-НМ1. Каждый образец сыворотки анализировали в трех повторах в одном разведении. Разведения образцов различались от 1:20 до 1:15,000 в случае OKT3 IgG4-AA-N297A и от 1:20 до 1:1000 в случае BC3-НМ1 (накопленные образцы из мышей, которым вводили OKT3 IgG2-AA-N297A или BC3-НМ1, исследовали в предварительном анализе таким образом, что было известно оптимальное разведение для каждого образца). Клетки инкубировали в течение 1 ч с разбавленными образцами сыворотки или стандартами (см. ниже) и промывали перед добавлением реагента определения. Связывание OKT3 Ig4-AA-N297A с клетками Jurkat определяли с использованием антитела козы, специфичного к Fcy фрагменту IgG человека, конъюгированного с РЕ, а связывание BC3-НМ1 с клетками Jurkat определяли с использованием антитела против His, конъюгированного с РЕ. Концентрации Н57 Null2, H57-HM2 и Н57 half null в сыворотке определяли методом анализа связывания, основанного на FACS, с использованием клеток EL4, линии T-клеток мыши. Клетки EL4 блокировали антителами к CD16/CD32 мыши и затем инкубировали в 96-луночных планшетах вместе с образцами сывороток мышей, которым вводили H57null2. Каждый образец сыворотки анализировали в трех повторах в одном разведении. Разведения образцов различались в зависимости от моментов времени, но находились в пределах от 1:500 до 1:10,000 (накопленные образцы из мышей, которым вводили H57-null2, исследовали в предварительном анализе таким образом, что было известно оптимальное разведение для каждого образца). Стандартные кривые состояли из различных известных концентраций Н57 Null2 в буфере FACS, исследованных в трех повторах. Сыворотку не добавляли к стандартным кривым, потому что в предварительной работе было пока

- 39 032828 зано, что сыворотка в разведениях больше 1:50 не влияет на стандартные кривые и для образцов РК требовались намного большие разведения (минимум 1:500) сыворотки.

Клетки EL4 инкубировали в течение 1 ч в присутствии разбавленных образцов сыворотки и промывали перед добавлением реагента определения. Связывание H57Null2 и Н57 half null с клетками EL4 определяли с использованием антитела против His, конъюгированного с РЕ. Образцы анализировали методом проточной цитометрии. Средние значения флуоресценции (MFI) импортировали в программное обеспечение Softmax Pro для вычисления концентраций в сыворотке и определения точности и достоверности стандартных кривых.

Исследовали образцы сыворотки на наличие цитокинов и хемокинов с использованием специального 14-плексного основанного на Luminex набора для определения Millipore согласно описанию выше. Показатели фармакокинетики каждого белка измеряли методом анализа без использования камерной модели с использованием программного обеспечения WinNonlin™ Professional software (v5.0.1) и применением предварительно скомпилированной модели 201 для IV болюсного введения и редкого забора проб. Результаты фармакокинетики (РК) представлены на фиг. 40, вычисленные периоды полураспада приведены в табл. 2, тогда как результаты цитокинов представлены на фиг. 40-49.

Таблица 2

Результаты фармакокинетики

Исследуемое вещество	Период полураспада в сыворотке (часы)
Н57 Null2 (SEQ ID N0:96)	83.5
Н57 half null (SEQ ID N0:304)	40.7
H57-HM2 (SEQ ID N0:306)	6.6
BC3-HM1 (SEQ ID N0:84)	3.2
BC3 lgG2-AA-N297A (SEQ ID N0:82)	87.5
BC3lgG4-AA-N297A (SEQ ID N0:83)	99.7
0KT3 lgG2-AA-N297A (SEQ ID N0:90)	42.4

Результаты исследования PK показывают, что белки SMIP, которые содержат CH2CH3 хвост, обладают большим периодом полураспада, чем те, которые содержат CH3 хвосты.

На фиг. 39-48 показано, что белок Н57-НМ2 SMIP обычно не вызывает повышенные уровни большинства цитокинов (IFN-γ, IL-2, IL-5, IL-6 или IL-17) во все моменты времени. Это может в какой-то степени объясняться более коротким периодом полураспада данной молекулы. Также наблюдаемые незначительные повышенные уровни цитокинов были обычно периодическими и всегда ниже, чем уровни, наблюдаемые при введении гибридного белка Н57 half null SMIP.

Пример 14. In vitro исследования типичных гибридных белков, содержащих связывающий домен Н57.

Согласно методам, описанным в примере 6, проводили исследования повторной стимуляции MLR и ConA бласт.

Результаты показали, что гибридные белки Н57 Null2, H57 half null и Н57-НМ2 (SEQ ID NO: 96, 304 и 306 соответственно), но не MAT H57 блокировали ответ первичных T-клеток на антиген (фиг. 50 и 51). Также гибридные белки Н57 Null2, H57 half null и Н57-НМ2 и IgG2a не вызывали активацию стимулированных ConA T-клеток, MAT H57 слегка вызывало активацию стимулированных ConA T-клеток и MAT 2C11 вызывало активацию стимулированных ConA T-клеток (фиг. 52). Гибридные белки Н57 Null2 и Н57-НМ2 не вызывали высвобождение цитокинов по результатам анализа повторной стимуляции ConA бласт, тогда как гибридный белок Н57 half null приводил к повышенному уровню некоторых исследованных цитокинов (например, GM-CSF, IFN-γ, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-17, IP-10 и TNF-α) по сравнению с гибридными белками Н57 Null2 и Н57-НМ2 (данные не представлены).

Различные варианты реализации настоящего изобретения, описанные выше, могут быть скомбинированы с получением дополнительных вариантов реализации настоящего изобретения. Все патенты США, публикации патентных заявок США, зарубежные патенты, заявки на получение зарубежных патентов и непатентные публикации, на которые присутствуют ссылки в настоящем описании и/или перечисленные в настоящее заявке, включены в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

Эти и другие изменения могут быть сделаны в вариантах реализации согласно приведенному выше описанию. В общем, в следующих пунктах формулы использованные термины не следует рассматривать с целью ограничения пунктов специфическими вариантами реализации, приведенными в настоящем описании, и пунктами формулы, но следует рассматривать включающими все возможные варианты наряду с полным объёмом эквивалентов, которые охватывают указанные пункты формулы. Соответственно пункты формулы не ограничиваются настоящим описанием.

- 40 032828

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> Trubion Pharmaceuticals Inc.

Odegard, Valerie

McMahan, Catherine J. Baum, Peter R.

Thompson, Peter A.

Tan, Philip Blankenship, John W.

Natarajan, Sateesh Kumar <120> ИММУНОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА ПРОТИВ КОМПЛЕКСА TCR <130> 910180.416PC <140> PCT <141> 2009-10-09 <160> 434 <170> FastSEQ для Windows версии 4.0 <210> 1 <211> 357 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотидная последовательность VH OKT3 <400> 1 caggtccagc tgcagcagtc tggggctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtacacga tgcactgggt aaaacagagg120 cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gccgtggtta tactaattac180 aatcagaagt tcaaggacaa ggccacattg actacagaca aatcctccag cacagcctac240 atgcaactga gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagatattat300 gatgatcatt actgccttga ctactggggc caaggcacca cggtcaccgt ctcaagc357 <210> 2 <211> 119 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Аминокислотная последовательность VH OKT3 <400> 2

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

100

105

110

- 41 032828

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 <210> 3 <211> 318 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотидная последовательность VL OKT3 <400> 3 caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc60 atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgaact ggtaccagca gaagtcaggc120 acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggagt ccctgctcac180 ttcaggggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcggcat ggaggctgaa240 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtaacc cattcacgtt cggctcgggg300 acaaagttgg aaataaac318 <210> 4 <211> 106 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Аминокислотная последовательность VL OKT3 <400> 4

Gln 1

Ile

Val

Leu

Thr 5

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile 10

Met

Ser

Ala

Ser

Pro 15

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

20

25

30

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

35

40

45

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

50

55

60

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

65

70

75

80

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

85

90

95

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Asn

100

105

<210> 5 <211> 369 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотидная последовательность VH BC3 <400> 5 caggtccagc tgcagcagtc tgcagctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtacacga tgcagtgggt aaaacagagg120 cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gtagtggata tattgggtac180 agtcagaagt tcaaggacaa gaccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac240 atgcaactga gcagtctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagatcgaag300 gtctactatg attacgacgt ttattctatg gactactggg gtcaaggaac ctcggtcacc360 gtctcaagc369 <210> 6

- 42 032828 <211> 123 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Аминокислотная последовательность VH BC3 <400> 6

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

115

120

<210> 7 <211> 318 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотидная последовательность VL BC3 <400> 7 caaattattc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc60 atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggtaccagca gaagtcaggc120 acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cctctggcgt ccctgctcgc180 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa240 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtaatc cactcacgtt cggtgctggg300 accaagctgg agctgaaa318 <210> 8 <211> 106 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Аминокислотная последовательность VL BC3 <400> 8

Gln 1

Ile

Ile

Leu

Thr 5

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile 10

Met

Ser

Ala

Ser

Pro 15

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

20

25

30

His

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

35

40

45

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

50

55

60

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

65

70

75

80

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

85

90

95

- 43 032828

Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105 <210> 9 <211> 22 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Модифицированная лидерная последовательность 2H7 человека (для BC3, OKT3, 2C11 и H57) <400> 9

Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser 1 5 10 15

Val Ile Met Ser Arg Gly <210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Модифицированная huIgG1-SCCP петля; Линкер 87 <220>

<221> SITE <222> (1)...(2) <223> связывающие аминокислоты <400> 10

Arg Thr Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

5 10 15

Pro <210> 11 <211> 217 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> G1 N297A CH2-CH3 (N297ST - A297ST) <400> 11

Ala 1

Pro

Glu

Leu

Leu 5

Gly

Gly

Pro

Ser

Val 10

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro 15

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

20

25

30

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

35

40

45

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

50

55

60

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

65

70

75

80

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

85

90

95

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

100

105

110

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

- 44 032828

115

120

125

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

130

135

140

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

145

150

155

160

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

165

170

175

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

180

185

190

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

195

200

205

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

210

215

<210> 12 <211> 216 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> IgG1 AA N297A CH2CH3 (замены Ala на 234,

235, 237 и 297; 236 удален) <400> 12

Ala Pro Glu Ala

Lys Asp Thr Leu

Val Asp Val Ser

Asp Gly Val Glu

Tyr Ala Ser Thr

Asp Trp Leu Asn

Leu Pro Ala Pro

100

Arg Glu Pro Gln

115

Lys Asn Gln Val

130

Asp Ile Ala Val

145

Lys Thr Thr Pro

Ser Lys Leu Thr

180

Ser Cys Ser Val

195

Ser Leu Ser Leu

210

Ala Ala Pro Ser

Met Ile Ser Arg

His Glu Asp Pro

Val His Asn Ala

Tyr Arg Val Val

Gly Lys Glu Tyr

Ile Glu Lys Thr

Val Tyr Thr Leu

120

Ser Leu Thr Cys

135

Glu Trp Glu Ser

150

Pro Val Leu Asp

165

Val Asp Lys Ser

Met His Glu Ala

200

Ser Pro Gly Lys

215

Val Phe Leu Phe

Thr Pro Glu Val

Glu Val Lys Phe

Lys Thr Lys Pro

Ser Val Leu Thr

Lys Cys Lys Val

Ile Ser Lys Ala

105

Pro Pro Ser Arg

Leu Val Lys Gly

140

Asn Gly Gln Pro

155

Ser Asp Gly Ser

170

Arg Trp Gln Gln

185

Leu His Asn His

Pro Pro Lys Pro

Thr Cys Val Val

Asn Trp Tyr Val

Arg Glu Glu Gln

Val Leu His Gln

Ser Asn Lys Ala

Lys Gly Gln Pro

110

Asp Glu Leu Thr

125

Phe Tyr Pro Ser

Glu Asn Asn Tyr

160

Phe Phe Leu Tyr

175

Gly Asn Val Phe

190

Tyr Thr Gln Lys

205 <210> 13 <211> 216 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> G2 AA N297A CH2CH3 (Замена Ala на 234, 236 и 297)

- 45 032828

<400> 13

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

1

5

10

15

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

20

25

30

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

35

40

45

Asp

Gly

Met

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

50

55

60

Phe

Ala

Ser

Thr

Phe

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Val

His

Gln

65

70

75

80

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

85

90

95

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Thr

Lys

Gly

Gln

Pro

100

105

110

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Glu

Glu

Met

Thr

115

120

125

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

130

135

140

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

145

150

155

160

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Met

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

165

170

175

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

180

185

190

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

195

200

205

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

210

215

<210> 14 <211> 216 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> G4 AA N297A CH2CH3 (замены Ala на 234, 235,

237 и 297; 236 удален)

<400> 14

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

1

5

10

15

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

20

25

30

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

35

40

45

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

50

55

60

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

65

70

75

80

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

85

90

95

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

100

105

110

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Gln

Glu

Glu

Met

Thr

115

120

125

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

130

135

140

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

145

150

155

160

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

- 46 032828

165

170

175

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

180

185

190

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

195

200

205

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

210

215

<210> 15 <211> 259 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HM1 (IgM-CH3::IgG1-CH3) с хвостом на C-конце <400> 15

Asp 1

Gln

Asp

Thr

Ala 5

Ile

Arg

Val

Phe

Ala 10

Ile

Pro

Pro

Ser

Phe 15

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

20

25

30

Leu

Thr

Thr

Tyr

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

Ser

Trp

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

35

40

45

Glu

Ala

Val

Lys

Thr

His

Thr

Asn

Ile

Ser

Glu

Ser

His

Pro

Asn

Ala

50

55

60

Thr

Phe

Ser

Ala

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

Ile

Cys

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

65

70

75

80

Ser

Gly

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

Thr

His

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

85

90

95

Pro

Leu

Lys

Gln

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

100

105

110

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

115

120

125

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

130

135

140

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

145

150

155

160

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

165

170

175

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

180

185

190

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

195

200

205

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

Ile

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

210

215

220

Ile

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

225

230

235

240

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

His

His

His

245

250

255

His

His

His

<210> 16 <211> 153 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> DeltaCH2 (только g1CH3) <400> 16

- 47 032828

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

1

5

10

15

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

20

25

30

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

35

40

45

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

50

55

60

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

65

70

75

80

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

85

90

95

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

100

105

110

Ile

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

115

120

125

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

130

135

140

Asp

Asp

Lys

His

His

His

His

His

His

145 150 <210> 17 <211> 738 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид BC3-VH-VL (включает линкер g4s) <400> 17 caggtccagc tcctgcaagg cctggacagg agtcagaagt atgcaactga gtctactatg gtctcaagcg caaattattc atgacctgca acctccccca ttcagtggca gatgctgcca accaagctgg tgcagcagtc cttctggcta gtctggaatg tcaaggacaa gcagtctgac attacgacgt gtggcggagg tcacccagtc gtgccagctc aaagatggat gtgggtctgg cttattactg agctgaaa tgcagctgaa cacctttact gattggatac gaccacattg atctgaggac ttattctatg gtctgggggt tccagcaatc aagtgtaagt ttatgacaca gacctcttac ccagcagtgg ctggcaagac aggtacacga attaatccta actgcagaca tctgcggtct gactactggg ggcggatccg atgtctgcat tacatgcact tccaaactgg tctctcacaa agtagtaatc ctggggcctc tgcagtgggt gtagtggata aatcctccag attactgtgc gtcaaggaac gaggtggtgg ctccagggga ggtaccagca tctctggcgt tcagcagcat cactcacgtt agtgaagatg aaaacagagg tattgggtac cacagcctac aagatcgaag ctcggtcacc ctctgcacaa gaaggtcacc gaagtcaggc ccctgctcgc ggaggctgaa cggtgctggg

120

180

240

300

360

420

480

540

600

660

720

738 <210> 18 <211> 246 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Аминокислотная последовательность BC3-VH-VL (включает линкер g4s) <400> 18

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

- 48 032828

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

245

<210> 19 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид OKT3-VH-VL (включает линкер g4s) <400> 19 caggtccagc tgcagcagtc tggggctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtacacga tgcactgggt aaaacagagg120 cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gccgtggtta tactaattac180 aatcagaagt tcaaggacaa ggccacattg actacagaca aatcctccag cacagcctac240 atgcaactga gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagatattat300 gatgatcatt actgccttga ctactggggc caaggcacca cggtcaccgt ctcaagcggt360 ggcggagggt ctgggggtgg cggatccgga ggtggtggct ctgcacaaca aattgttctc420 acccagtctc cagcaatcat gtctgcatct ccaggggaga aggtcaccat gacctgcagt480 gccagctcaa gtgtaagtta catgaactgg taccagcaga agtcaggcac ctcccccaaa540 agatggattt atgacacatc caaactggct tctggagtcc ctgctcactt caggggcagt600 gggtctggga cctcttactc tctcacaatc agcggcatgg aggctgaaga tgctgccact660 tattactgcc agcagtggag tagtaaccca ttcacgttcg gctcggggac aaagttggaa720 ataaac726 <210> 20 <211> 242 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Аминокислотная последовательность OKT3-VH-VL (включает линкер g4s) <400> 20

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

- 49 032828

Gly Tyr

Ile Asn Pro

Ser Arg Gly 55

Tyr Thr

Asn

Tyr 60

Asn

Gln

Lys

Phe

50

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

100

105

110

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

115

120

125

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

130

135

140

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

145

150

155

160

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

165

170

175

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

180

185

190

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

195

200

205

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

210

215

220

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

225

230

235

240

Ile

Asn

<210> 21 <211> 1509 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид BC3-G1 N297A - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена

CH3 <400> 21 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcg60 cgaggacagg tccagctgca gcagtctgca gctgaactgg caagacctgg ggcctcagtg120 aagatgtcct gcaaggcttc tggctacacc tttactaggt acacgatgca gtgggtaaaa180 cagaggcctg gacagggtct ggaatggatt ggatacatta atcctagtag tggatatatt240 gggtacagtc agaagttcaa ggacaagacc acattgactg cagacaaatc ctccagcaca300 gcctacatgc aactgagcag tctgacatct gaggactctg cggtctatta ctgtgcaaga360 tcgaaggtct actatgatta cgacgtttat tctatggact actggggtca aggaacctcg420 gtcaccgtct caagcggtgg cggagggtct gggggtggcg gatccggagg tggtggctct480 gcacaacaaa ttattctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatctcc aggggagaag540 gtcaccatga cctgcagtgc cagctcaagt gtaagttaca tgcactggta ccagcagaag600 tcaggcacct cccccaaaag atggatttat gacacatcca aactggtctc tggcgtccct660 gctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagcatggag720 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtaatccact cacgttcggt780 gctgggacca agctggagct gaaacgaact gagcccaaat cttctgacaa aactcacaca840 tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg ggtggaccgt cagtcttcct cttcccccca900 aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac960 gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat1020 aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag tacgccagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc1080 ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac1140 aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa1200 ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg1260 acctgcctgg tcaaaggctt ctatccaagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg1320 cagccggaga acaactacaa gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc1380 ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc1440

- 50 032828 tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg 1500 ggtaaatga 1509 <210> 22 <211> 502 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Аминокислотная последовательность BC3-g1 N297A - лидерная последовательность 2H7L черездо домена CH3 <400> 22

Met 1

Asp

Phe

Gln

Val 5

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe 10

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala 15

Ser

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

65

70

75

80

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

115

120

125

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

130

135

140

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

145

150

155

160

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

165

170

175

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

180

185

190

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

195

200

205

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

225

230

235

240

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

245

250

255

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Thr

Glu

Pro

260

265

270

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

275

280

285

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

290

295

300

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

305

310

315

320

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

325

330

335

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

340

345

350

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

355

360

365

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

370

375

380

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

385

390

395

400

- 51 032828

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr 405

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg 410

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys 415

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

420

425

430

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

435

440

445

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

450

455

460

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

465

470

475

480

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

485

490

495

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

500 <210> 23 <211> 1506 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид BC3-g1 AA N297A - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена CH3 <400> 23 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcg60 cgaggacagg tccagctgca gcagtctgca gctgaactgg caagacctgg ggcctcagtg120 aagatgtcct gcaaggcttc tggctacacc tttactaggt acacgatgca gtgggtaaaa180 cagaggcctg gacagggtct ggaatggatt ggatacatta atcctagtag tggatatatt240 gggtacagtc agaagttcaa ggacaagacc acattgactg cagacaaatc ctccagcaca300 gcctacatgc aactgagcag tctgacatct gaggactctg cggtctatta ctgtgcaaga360 tcgaaggtct actatgatta cgacgtttat tctatggact actggggtca aggaacctcg420 gtcaccgtct caagcggtgg cggagggtct gggggtggcg gatccggagg tggtggctct480 gcacaacaaa ttattctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatctcc aggggagaag540 gtcaccatga cctgcagtgc cagctcaagt gtaagttaca tgcactggta ccagcagaag600 tcaggcacct cccccaaaag atggatttat gacacatcca aactggtctc tggcgtccct660 gctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagcatggag720 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtaatccact cacgttcggt780 gctgggacca agctggagct gaaacgaact gagcccaaat cttctgacaa aactcacaca840 tgcccaccgt gcccagcacc tgaagccgca gctccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa900 cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg960 agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat1020 gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc1080 accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa1140 gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca1200 caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc1260 tgcctggtca aaggcttcta tccaagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag1320 ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc1380 tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc1440 gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt1500 aaatga1506 <210> 24 <211> 501 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3-g1 AA N297A - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена CH3 <400> 24

- 52 032828

Met 1

Asp

Phe

Gln

Val 5

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe 10

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala 15

Ser

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

65

70

75

80

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

115

120

125

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

130

135

140

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

145

150

155

160

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

165

170

175

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

180

185

190

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

195

200

205

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

225

230

235

240

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

245

250

255

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Thr

Glu

Pro

260

265

270

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

275

280

285

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

290

295

300

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

305

310

315

320

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

325

330

335

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

340

345

350

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

355

360

365

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

370

375

380

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

385

390

395

400

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

405

410

415

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

420

425

430

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

435

440

445

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

450

455

460

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

465

470

475

480

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

485

490

495

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

- 53 032828

500 <210> 25 <211> 1506 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид BC3-g2 AA N297A - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена CH3 <400> 25 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcg60 cgaggacagg tccagctgca gcagtctgca gctgaactgg caagacctgg ggcctcagtg120 aagatgtcct gcaaggcttc tggctacacc tttactaggt acacgatgca gtgggtaaaa180 cagaggcctg gacagggtct ggaatggatt ggatacatta atcctagtag tggatatatt240 gggtacagtc agaagttcaa ggacaagacc acattgactg cagacaaatc ctccagcaca300 gcctacatgc aactgagcag tctgacatct gaggactctg cggtctatta ctgtgcaaga360 tcgaaggtct actatgatta cgacgtttat tctatggact actggggtca aggaacctcg420 gtcaccgtct caagcggtgg cggagggtct gggggtggcg gatccggagg tggtggctct480 gcacaacaaa ttattctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatctcc aggggagaag540 gtcaccatga cctgcagtgc cagctcaagt gtaagttaca tgcactggta ccagcagaag600 tcaggcacct cccccaaaag atggatttat gacacatcca aactggtctc tggcgtccct660 gctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagcatggag720 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtaatccact cacgttcggt780 gctgggacca agctggagct gaaacgaact gagcccaaat cttctgacaa aactcacaca840 tgcccaccgt gcccagcacc tgaagccgca gctccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa900 cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg960 agccacgaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg acggcatgga ggtgcataat1020 gccaagacaa agccacggga ggagcagttc gccagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc1080 accgtcgtgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa1140 ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaaacca aagggcagcc ccgagaacca1200 caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc1260 tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag1320 ccggagaaca actacaagac cacacctccc atgctggact ccgacggctc cttcttcctc1380 tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc1440 gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acacagaaga gcctctccct gtctccgggt1500 aaatga1506 <210> 26 <211> 501 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3-g2 AA N297A - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена CH3 <400> 26

Met 1

Asp

Phe

Gln

Val 5

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe 10

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala 15

Ser

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

65

70

75

80

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

- 54 032828

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

115

120

125

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

130

135

140

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

145

150

155

160

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

165

170

175

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

180

185

190

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

195

200

205

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

225

230

235

240

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

245

250

255

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Thr

Glu

Pro

260

265

270

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

275

280

285

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

290

295

300

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

305

310

315

320

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Met

325

330

335

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

340

345

350

Thr

Phe

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Val

His

Gln

Asp

Trp

Leu

355

360

365

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ala

370

375

380

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Thr

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

385

390

395

400

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

405

410

415

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

420

425

430

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

435

440

445

Pro

Pro

Met

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

450

455

460

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

465

470

475

480

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

485

490

495

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

500 <210> 27 <211> 1506 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид BC3-g4 AA N297A - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена CH3 <400> 27

- 55 032828 atggattttc cgaggacagg aagatgtcct cagaggcctg gggtacagtc gcctacatgc tcgaaggtct gtcaccgtct gcacaacaaa gtcaccatga tcaggcacct gctcgcttca gctgaagatg gctgggacca tgcccaccgt cccaaggaca agccaggaag gccaagacaa accgtcctgc ggcctcccgt caggtgtaca tgcctggtca ccggagaaca tacagcaggc gtgatgcatg aaatga aagtgcagat tccagctgca gcaaggcttc gacagggtct agaagttcaa aactgagcag actatgatta caagcggtgg ttattctcac cctgcagtgc cccccaaaag gtggcagtgg ctgccactta agctggagct gcccagcacc ccctcatgat accccgaggt agccgcggga accaggactg cctccatcga ccctgccccc aaggcttcta actacaagac taaccgtgga aggctctgca tttcagcttc gcagtctgca tggctacacc ggaatggatt ggacaagacc tctgacatct cgacgtttat cggagggtct ccagtctcca cagctcaagt atggatttat gtctgggacc ttactgccag gaaacgaact tgaagccgca ctcccggacc ccagttcaac ggagcagttc gctgaacggc gaaaaccatc atcccaggag ccccagcgac cacgcctccc caagagccgg caaccactac ctgctaatca gctgaactgg tttactaggt ggatacatta acattgactg gaggactctg tctatggact gggggtggcg gcaatcatgt gtaagttaca gacacatcca tcttactctc cagtggagta gagcccaaat gctccgtcag cctgaggtca tggtacgtgg gccagcacgt aaggagtaca tccaaagcca gagatgacca atcgccgtgg gtgctggact tggcaggagg acacagaaga gtgcttcagt caagacctgg acacgatgca atcctagtag cagacaaatc cggtctatta actggggtca gatccggagg ctgcatctcc tgcactggta aactggtctc tcacaatcag gtaatccact cttctgacaa tcttcctctt cgtgcgtggt atggcgtgga accgtgtggt agtgcaaggt aagggcagcc agaaccaggt agtgggagag ccgacggctc ggaatgtctt gcctctccct cataatgtcg ggcctcagtg gtgggtaaaa tggatatatt ctccagcaca ctgtgcaaga aggaacctcg tggtggctct aggggagaag ccagcagaag tggcgtccct cagcatggag cacgttcggt aactcacaca ccccccaaaa ggtggacgtg ggtgcataat cagcgtcctc ctccaacaaa ccgagagcca cagcctgacc caatgggcag cttcttcctc ctcatgctcc gtctccgggt

120

180

240

300

360

420

480

540

600

660

720

780

840

900

960

1020

1080

1140

1200

1260

1320

1380

1440

1500

1506 <210> 28 <211> 501 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3-g4 домена CH3

AA

N297A -

лидерная последовательность

2H7

человека черездо

<400> 28

Met

Asp

Phe

Gln

Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

65

70

75

80

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

115

120

125

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

130

135

140

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

145

150

155

160

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

165

170

175

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

180

185

190

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

195

200

205

- 56 032828

Ile

Tyr 210

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu 215

Ala

Ser Gly

Val

Pro 220

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

225

230

235

240

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

245

250

255

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Thr

Glu

Pro

260

265

270

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

275

280

285

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

290

295

300

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

305

310

315

320

Ser

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

325

330

335

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

340

345

350

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

355

360

365

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

370

375

380

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

385

390

395

400

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Gln

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

405

410

415

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

420

425

430

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

435

440

445

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

450

455

460

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

465

470

475

480

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

485

490

495

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

500

<210> 29 <211> 1635 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид BC3-HM1 - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена g1

CH3 <400> 29 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcg60 cgaggacagg tccagctgca gcagtctgca gctgaactgg caagacctgg ggcctcagtg120 aagatgtcct gcaaggcttc tggctacacc tttactaggt acacgatgca gtgggtaaaa180 cagaggcctg gacagggtct ggaatggatt ggatacatta atcctagtag tggatatatt240 gggtacagtc agaagttcaa ggacaagacc acattgactg cagacaaatc ctccagcaca300 gcctacatgc aactgagcag tctgacatct gaggactctg cggtctatta ctgtgcaaga360 tcgaaggtct actatgatta cgacgtttat tctatggact actggggtca aggaacctcg420 gtcaccgtct caagcggtgg cggagggtct gggggtggcg gatccggagg tggtggctct480 gcacaacaaa ttattctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatctcc aggggagaag540 gtcaccatga cctgcagtgc cagctcaagt gtaagttaca tgcactggta ccagcagaag600 tcaggcacct cccccaaaag atggatttat gacacatcca aactggtctc tggcgtccct660 gctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagcatggag720

- 57 032828 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtaatccact cacgttcggt780 gctgggacca agctggagct gaaacgaact gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca840 tgcccaccgt gcccagatca agacacagcc atccgggtct tcgccatccc cccatccttt900 gccagcatct tcctcaccaa gtccaccaag ttgacctgcc tggtcacaga cctgaccacc960 tatgacagcg tgaccatctc ctggacccgc cagaatggcg aagctgtgaa aacccacacc1020 aacatctccg agagccaccc caatgccact ttcagcgccg tgggtgaggc cagcatctgc1080 gaggatgact ggaattccgg ggagaggttc acgtgcaccg tgacccacac agacctgccc1140 tcgccactga agcagaccat ctcccggccc aaggggcagc cccgagaacc acaggtgtac1200 accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc1260 aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac1320 aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctatagcaag1380 ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat1440 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtccccggg taaaaccggt1500 ctgaacgaca tcttcgaggc tcagaaaatc gaatggcacg aagattacaa ggatgacgac1560 gataaggatt acaaggatga cgacgataag gattacaagg atgacgacga taagcatcat1620 catcatcatc actga1635 <210> 30 <211> 544 <212> PRT <213> Искусственная последовательность

<220> <223> BC3-HM1 - CH3

лидерная последовательность

2H7

человека

1 черездо домена g1

<400> 30

Met

Asp

Phe

Gln

Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

65

70

75

80

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

115

120

125

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

130

135

140

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

145

150

155

160

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

165

170

175

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

180

185

190

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

195

200

205

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

225

230

235

240

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

245

250

255

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Thr

Glu

Pro

260

265

270

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Asp

Gln

Asp

275

280

285

- 58 032828

Thr Ala

Ile

Arg

Val

Phe

Ala 295

Ile

Pro

Pro

Ser

Phe 300

Ala

Ser

Ile

Phe

290

Leu

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

Leu

Thr

Thr

305

310

315

320

Tyr

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

Ser

Trp

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

Glu

Ala

Val

325

330

335

Lys

Thr

His

Thr

Asn

Ile

Ser

Glu

Ser

His

Pro

Asn

Ala

Thr

Phe

Ser

340

345

350

Ala

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

Ile

Cys

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

Ser

Gly

Glu

355

360

365

Arg

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

Thr

His

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

Pro

Leu

Lys

370

375

380

Gln

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

385

390

395

400

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

405

410

415

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

420

425

430

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

435

440

445

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

450

455

460

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

465

470

475

480

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

485

490

495

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

Ile

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

500

505

510

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

515

520

525

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

His

His

His

His

His

His

530

535

540

<210> 31 <211> 1317 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид BC3-delta CH2 - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена g1 CH3 <400> 31 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcg60 cgaggacagg tccagctgca gcagtctgca gctgaactgg caagacctgg ggcctcagtg120 aagatgtcct gcaaggcttc tggctacacc tttactaggt acacgatgca gtgggtaaaa180 cagaggcctg gacagggtct ggaatggatt ggatacatta atcctagtag tggatatatt240 gggtacagtc agaagttcaa ggacaagacc acattgactg cagacaaatc ctccagcaca300 gcctacatgc aactgagcag tctgacatct gaggactctg cggtctatta ctgtgcaaga360 tcgaaggtct actatgatta cgacgtttat tctatggact actggggtca aggaacctcg420 gtcaccgtct caagcggtgg cggagggtct gggggtggcg gatccggagg tggtggctct480 gcacaacaaa ttattctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatctcc aggggagaag540 gtcaccatga cctgcagtgc cagctcaagt gtaagttaca tgcactggta ccagcagaag600 tcaggcacct cccccaaaag atggatttat gacacatcca aactggtctc tggcgtccct660 gctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagcatggag720 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtaatccact cacgttcggt780 gctgggacca agctggagct gaaacgaact gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca840 tgcccaccgt gcccagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg900 gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc960 gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct1020 cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctatagca agctcaccgt ggacaagagc1080 aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac1140

- 59 032828 tacacgcaga agagcctctc cctgtccccg ggtaaaaccg gtctgaacga catcttcgag1200 gctcagaaaa tcgaatggca cgaagattac aaggatgacg acgataagga ttacaaggat1260 gacgacgata aggattacaa ggatgacgac gataagcatc atcatcatca tcactga1317 <210> 32 <211> 438 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3-delta CH2 - лидерная последовательность 2H7 человека через g1 CH3 <400> 32

Met 1

Asp

Phe

Gln

Val 5

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe 10

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala 15

Ser

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

65

70

75

80

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

115

120

125

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

130

135

140

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

145

150

155

160

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

165

170

175

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

180

185

190

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

195

200

205

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

225

230

235

240

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

245

250

255

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Thr

Glu

Pro

260

265

270

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Gly

Gln

Pro

275

280

285

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

290

295

300

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

305

310

315

320

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

325

330

335

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

340

345

350

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

355

360

365

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

370

375

380

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

Ile

Phe

Glu

385

390

395

400

- 60 032828

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

405

410

415

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

420

425

430

His

His

His

His

His

His

435

<210> 33 <211> 1497 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид OKT3-G1 N297A - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена CH3 <400> 33 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcg60 cgaggacagg tccagctgca gcagtctggg gctgaactgg caagacctgg ggcctcagtg120 aagatgtcct gcaaggcttc tggctacacc tttactaggt acacgatgca ctgggtaaaa180 cagaggcctg gacagggtct ggaatggatt ggatacatta atcctagccg tggttatact240 aattacaatc agaagttcaa ggacaaggcc acattgacta cagacaaatc ctccagcaca300 gcctacatgc aactgagcag cctgacatct gaggactctg cagtctatta ctgtgcaaga360 tattatgatg atcattactg ccttgactac tggggccaag gcaccacggt caccgtctca420 agcggtggcg gagggtctgg gggtggcgga tccggaggtg gtggctctgc acaacaaatt480 gttctcaccc agtctccagc aatcatgtct gcatctccag gggagaaggt caccatgacc540 tgcagtgcca gctcaagtgt aagttacatg aactggtacc agcagaagtc aggcacctcc600 cccaaaagat ggatttatga cacatccaaa ctggcttctg gagtccctgc tcacttcagg660 ggcagtgggt ctgggacctc ttactctctc acaatcagcg gcatggaggc tgaagatgct720 gccacttatt actgccagca gtggagtagt aacccattca cgttcggctc ggggacaaag780 ttggaaataa accgaactga gcccaaatct tctgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc840 ccagcacctg aactcctggg tggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac900 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa960 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca1020 aagccgcggg aggagcagta cgccagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg1080 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca1140 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac1200 accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc1260 aaaggcttct atccaagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac1320 aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag1380 ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat1440 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaatga1497 <210> 34 <211> 498 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3-G1 N297A - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена CH3 <400> 34

Met

Asp

Phe

Gln

Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

- 61 032828

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

115

120

125

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

145

150

155

160

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

165

170

175

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

180

185

190

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

195

200

205

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

225

230

235

240

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

245

250

255

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

260

265

270

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

275

280

285

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

290

295

300

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

305

310

315

320

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

325

330

335

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

340

345

350

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

355

360

365

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

370

375

380

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

385

390

395

400

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

405

410

415

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

420

425

430

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

435

440

445

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

450

455

460

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

465

470

475

480

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

485

490

495

Gly

Lys

<210> 35 <211> 1494 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

- 62 032828 <223> Нуклеотид OKT3-G1 AA N297A - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена CH3 <400> 35 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcg60 cgaggacagg tccagctgca gcagtctggg gctgaactgg caagacctgg ggcctcagtg120 aagatgtcct gcaaggcttc tggctacacc tttactaggt acacgatgca ctgggtaaaa180 cagaggcctg gacagggtct ggaatggatt ggatacatta atcctagccg tggttatact240 aattacaatc agaagttcaa ggacaaggcc acattgacta cagacaaatc ctccagcaca300 gcctacatgc aactgagcag cctgacatct gaggactctg cagtctatta ctgtgcaaga360 tattatgatg atcattactg ccttgactac tggggccaag gcaccacggt caccgtctca420 agcggtggcg gagggtctgg gggtggcgga tccggaggtg gtggctctgc acaacaaatt480 gttctcaccc agtctccagc aatcatgtct gcatctccag gggagaaggt caccatgacc540 tgcagtgcca gctcaagtgt aagttacatg aactggtacc agcagaagtc aggcacctcc600 cccaaaagat ggatttatga cacatccaaa ctggcttctg gagtccctgc tcacttcagg660 ggcagtgggt ctgggacctc ttactctctc acaatcagcg gcatggaggc tgaagatgct720 gccacttatt actgccagca gtggagtagt aacccattca cgttcggctc ggggacaaag780 ttggaaataa accgaactga gcccaaatct tctgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc840 ccagcacctg aagccgcagc tccgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc900 ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac960 cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag1020 ccgcgggagg agcagtacgc cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac1080 caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc1140 cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc1200 ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa1260 ggcttctatc caagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac1320 tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc1380 accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag1440 gctctgcaca accactacac gcagaagagc ctctccctgt ctccgggtaa atga1494 <210> 36 <211> 497 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3-G1 AA N297A - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена CH3 <400> 36

Met

Asp

Phe

Gln

Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

115

120

125

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

145

150

155

160

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

165

170

175

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

- 63 032828

180

185

190

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

195

200

205

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

225

230

235

240

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

245

250

255

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

260

265

270

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

275

280

285

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

290

295

300

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

305

310

315

320

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

325

330

335

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

340

345

350

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

355

360

365

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

370

375

380

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

385

390

395

400

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

405

410

415

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

420

425

430

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

435

440

445

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

450

455

460

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

465

470

475

480

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

485 490 495

Lys <210> 37 <211> 1494 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид OKT3-G2 AA N297A - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена CH3 <400> 37 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcg60 cgaggacagg tccagctgca gcagtctggg gctgaactgg caagacctgg ggcctcagtg120 aagatgtcct gcaaggcttc tggctacacc tttactaggt acacgatgca ctgggtaaaa180 cagaggcctg gacagggtct ggaatggatt ggatacatta atcctagccg tggttatact240 aattacaatc agaagttcaa ggacaaggcc acattgacta cagacaaatc ctccagcaca300 gcctacatgc aactgagcag cctgacatct gaggactctg cagtctatta ctgtgcaaga360 tattatgatg atcattactg ccttgactac tggggccaag gcaccacggt caccgtctca420 agcggtggcg gagggtctgg gggtggcgga tccggaggtg gtggctctgc acaacaaatt480 gttctcaccc agtctccagc aatcatgtct gcatctccag gggagaaggt caccatgacc540 tgcagtgcca gctcaagtgt aagttacatg aactggtacc agcagaagtc aggcacctcc600

- 64 032828 cccaaaagat ggatttatga cacatccaaa ctggcttctg gagtccctgc tcacttcagg660 ggcagtgggt ctgggacctc ttactctctc acaatcagcg gcatggaggc tgaagatgct720 gccacttatt actgccagca gtggagtagt aacccattca cgttcggctc ggggacaaag780 ttggaaataa accgaactga gcccaaatct tctgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc840 ccagcacctg aagccgcagc tccgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc900 ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac960 cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac ggcatggagg tgcataatgc caagacaaag1020 ccacgggagg agcagttcgc cagcacgttc cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcgtgcac1080 caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc1140 cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc1200 ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa1260 ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac1320 tacaagacca cacctcccat gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc1380 accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag1440 gctctgcaca accactacac acagaagagc ctctccctgt ctccgggtaa atga1494 <210> 38 <211> 497 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3-G2 AA N297A - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена CH3 <400> 38

Met 1

Asp

Phe

Gln

Val 5

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe 10

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala 15

Ser

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

115

120

125

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

145

150

155

160

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

165

170

175

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

180

185

190

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

195

200

205

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

225

230

235

240

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

245

250

255

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

260

265

270

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

275

280

285

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

- 65 032828

290

295

300

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

305

310

315

320

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Met

Glu

Val

His

Asn

325

330

335

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Phe

Arg

Val

340

345

350

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Val

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

355

360

365

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

370

375

380

Thr

Ile

Ser

Lys

Thr

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

385

390

395

400

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

405

410

415

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

420

425

430

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Met

Leu

435

440

445

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

450

455

460

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

465

470

475

480

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

485

490

495

Lys

<210> 39 <211> 1494 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид OKT3-G4 AA N297A - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена CH3 <400> 39 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcg60 cgaggacagg tccagctgca gcagtctggg gctgaactgg caagacctgg ggcctcagtg120 aagatgtcct gcaaggcttc tggctacacc tttactaggt acacgatgca ctgggtaaaa180 cagaggcctg gacagggtct ggaatggatt ggatacatta atcctagccg tggttatact240 aattacaatc agaagttcaa ggacaaggcc acattgacta cagacaaatc ctccagcaca300 gcctacatgc aactgagcag cctgacatct gaggactctg cagtctatta ctgtgcaaga360 tattatgatg atcattactg ccttgactac tggggccaag gcaccacggt caccgtctca420 agcggtggcg gagggtctgg gggtggcgga tccggaggtg gtggctctgc acaacaaatt480 gttctcaccc agtctccagc aatcatgtct gcatctccag gggagaaggt caccatgacc540 tgcagtgcca gctcaagtgt aagttacatg aactggtacc agcagaagtc aggcacctcc600 cccaaaagat ggatttatga cacatccaaa ctggcttctg gagtccctgc tcacttcagg660 ggcagtgggt ctgggacctc ttactctctc acaatcagcg gcatggaggc tgaagatgct720 gccacttatt actgccagca gtggagtagt aacccattca cgttcggctc ggggacaaag780 ttggaaataa accgaactga gcccaaatct tctgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc840 ccagcacctg aagccgcagc tccgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc900 ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac960 cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag1020 ccgcgggagg agcagttcgc cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac1080 caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc1140 tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc1200 ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa1260 ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac1320 tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaggcta1380 accgtggaca agagccggtg gcaggagggg aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag1440

- 66 032828 gctctgcaca accactacac acagaagagc ctctccctgt ctccgggtaa atga <210> 40 <211> 497 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3-G4 AA N297A - лидерная последовательность 2H7 человека домена CH3 <400> 40

1494 черездо

Met 1

Asp

Phe

Gln

Val 5

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe 10

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala 15

Ser

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

115

120

125

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

145

150

155

160

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

165

170

175

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

180

185

190

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

195

200

205

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

225

230

235

240

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

245

250

255

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

260

265

270

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

275

280

285

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

290

295

300

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

Asp

305

310

315

320

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

325

330

335

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

340

345

350

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

355

360

365

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

370

375

380

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

385

390

395

400

Leu

Pro

Pro

Ser

Gln

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

- 67 032828

405

410

415

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

420

425

430

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

435

440

445

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

450

455

460

Ser

Arg

Trp

Gln

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

465

470

475

480

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

485

490

495

Lys <210> 41 <211> 1623 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид OKT3-HM1 - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена g1

CH3 <400> 41 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcg60 cgaggacagg tccagctgca gcagtctggg gctgaactgg caagacctgg ggcctcagtg120 aagatgtcct gcaaggcttc tggctacacc tttactaggt acacgatgca ctgggtaaaa180 cagaggcctg gacagggtct ggaatggatt ggatacatta atcctagccg tggttatact240 aattacaatc agaagttcaa ggacaaggcc acattgacta cagacaaatc ctccagcaca300 gcctacatgc aactgagcag cctgacatct gaggactctg cagtctatta ctgtgcaaga360 tattatgatg atcattactg ccttgactac tggggccaag gcaccacggt caccgtctca420 agcggtggcg gagggtctgg gggtggcgga tccggaggtg gtggctctgc acaacaaatt480 gttctcaccc agtctccagc aatcatgtct gcatctccag gggagaaggt caccatgacc540 tgcagtgcca gctcaagtgt aagttacatg aactggtacc agcagaagtc aggcacctcc600 cccaaaagat ggatttatga cacatccaaa ctggcttctg gagtccctgc tcacttcagg660 ggcagtgggt ctgggacctc ttactctctc acaatcagcg gcatggaggc tgaagatgct720 gccacttatt actgccagca gtggagtagt aacccattca cgttcggctc ggggacaaag780 ttggaaataa accgaactga gcccaaatct tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc840 ccagatcaag acacagccat ccgggtcttc gccatccccc catcctttgc cagcatcttc900 ctcaccaagt ccaccaagtt gacctgcctg gtcacagacc tgaccaccta tgacagcgtg960 accatctcct ggacccgcca gaatggcgaa gctgtgaaaa cccacaccaa catctccgag1020 agccacccca atgccacttt cagcgccgtg ggtgaggcca gcatctgcga ggatgactgg1080 aattccgggg agaggttcac gtgcaccgtg acccacacag acctgccctc gccactgaag1140 cagaccatct cccggcccaa ggggcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca1200 tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat1260 cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc1320 acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct atagcaagct caccgtggac1380 aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac1440 aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tccccgggta aaaccggtct gaacgacatc1500 ttcgaggctc agaaaatcga atggcacgaa gattacaagg atgacgacga taaggattac1560 aaggatgacg acgataagga ttacaaggat gacgacgata agcatcatca tcatcatcac1620 tga1623 <210> 42 <211> 540 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3-HM1 - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена g1 CH3

- 68 032828 <400> 42

Met 1

Asp

Phe

Gln

Val 5

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe 10

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala 15

Ser

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

115

120

125

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

145

150

155

160

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

165

170

175

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

180

185

190

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

195

200

205

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

225

230

235

240

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

245

250

255

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

260

265

270

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Asp

Gln

Asp

Thr

Ala

Ile

Arg

275

280

285

Val

Phe

Ala

Ile

Pro

Pro

Ser

Phe

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

Thr

Lys

Ser

290

295

300

Thr

Lys

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

Leu

Thr

Thr

Tyr

Asp

Ser

Val

305

310

315

320

Thr

Ile

Ser

Trp

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

Glu

Ala

Val

Lys

Thr

His

Thr

325

330

335

Asn

Ile

Ser

Glu

Ser

His

Pro

Asn

Ala

Thr

Phe

Ser

Ala

Val

Gly

Glu

340

345

350

Ala

Ser

Ile

Cys

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

Ser

Gly

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

355

360

365

Thr

Val

Thr

His

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

Pro

Leu

Lys

Gln

Thr

Ile

Ser

370

375

380

Arg

Pro

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

385

390

395

400

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

405

410

415

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

420

425

430

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

435

440

445

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

450

455

460

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

465

470

475

480

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

Thr

Gly

- 69 032828

485

490

495

Leu

Asn

Asp

Ile

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

500

505

510

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

515

520

525

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

His

His

His

His

His

His

530

535

540

<210> 43 <211> 1305 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид OKT3 delta CH2 - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена g1 CH3 <400> 43 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcg60 cgaggacagg tccagctgca gcagtctggg gctgaactgg caagacctgg ggcctcagtg120 aagatgtcct gcaaggcttc tggctacacc tttactaggt acacgatgca ctgggtaaaa180 cagaggcctg gacagggtct ggaatggatt ggatacatta atcctagccg tggttatact240 aattacaatc agaagttcaa ggacaaggcc acattgacta cagacaaatc ctccagcaca300 gcctacatgc aactgagcag cctgacatct gaggactctg cagtctatta ctgtgcaaga360 tattatgatg atcattactg ccttgactac tggggccaag gcaccacggt caccgtctca420 agcggtggcg gagggtctgg gggtggcgga tccggaggtg gtggctctgc acaacaaatt480 gttctcaccc agtctccagc aatcatgtct gcatctccag gggagaaggt caccatgacc540 tgcagtgcca gctcaagtgt aagttacatg aactggtacc agcagaagtc aggcacctcc600 cccaaaagat ggatttatga cacatccaaa ctggcttctg gagtccctgc tcacttcagg660 ggcagtgggt ctgggacctc ttactctctc acaatcagcg gcatggaggc tgaagatgct720 gccacttatt actgccagca gtggagtagt aacccattca cgttcggctc ggggacaaag780 ttggaaataa accgaactga gcccaaatct tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc840 ccagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc900 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg960 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac1020 tccgacggct ccttcttcct ctatagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag1080 gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag1140 agcctctccc tgtccccggg taaaaccggt ctgaacgaca tcttcgaggc tcagaaaatc1200 gaatggcacg aagattacaa ggatgacgac gataaggatt acaaggatga cgacgataag1260 gattacaagg atgacgacga taagcatcat catcatcatc actga1305 <210> 44 <211> 434 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3 delta CH2 - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена g1 CH3 <400> 44

Met

Asp

Phe

Gln

Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

- 70 032828

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

115

120

125

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

145

150

155

160

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

165

170

175

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

180

185

190

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

195

200

205

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

225

230

235

240

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

245

250

255

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

260

265

270

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

275

280

285

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

290

295

300

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

305

310

315

320

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

325

330

335

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

340

345

350

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

355

360

365

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

370

375

380

Ser

Pro

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

Ile

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

Ile

385

390

395

400

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

405

410

415

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

His

His

His

His

420

425

430

His

His

<210> 45 <211> 266 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> H57 Лидерная последовательность-VH-Линкер-VL <400> 45

Met 1

Asp

Phe

Gln

Val 5

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe 10

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala 15

Ser

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Glu

Val

Tyr

Leu

Val

Glu

Ser

Gly

Gly

Asp

20

25

30

Leu

Val

Gln

Pro

Gly

Ser

Ser

Leu

Lys

Val

Ser

Cys

Ala

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Phe

Thr

Phe

Ser

Asp

Phe

Trp

Met

Tyr

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

- 71 032828

50

55

60

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Val

Gly

Arg

Ile

Lys

Asn

Lys

Pro

Asn

Asn

Tyr

65

70

75

80

Ala

Thr

Glu

Tyr

Ala

Asp

Ser

Val

Arg

Gly

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Arg

85

90

95

Asp

Asp

Ser

Arg

Asn

Ser

Ile

Tyr

Leu

Gln

Met

Asn

Arg

Leu

Arg

Val

100

105

110

Asp

Asp

Thr

Ala

Ile

Tyr

Tyr

Cys

Thr

Arg

Ala

Gly

Arg

Phe

Asp

His

115

120

125

Phe

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Met

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Tyr

145

150

155

160

Glu

Leu

Ile

Gln

Pro

Ser

Ser

Ala

Ser

Val

Thr

Val

Gly

Glu

Thr

Val

165

170

175

Lys

Ile

Thr

Cys

Ser

Gly

Asp

Gln

Leu

Pro

Lys

Asn

Phe

Ala

Tyr

Trp

180

185

190

Phe

Gln

Gln

Lys

Ser

Asp

Lys

Asn

Ile

Leu

Leu

Leu

Ile

Tyr

Met

Asp

195

200

205

Asn

Lys

Arg

Pro

Ser

Gly

Ile

Pro

Glu

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Thr

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Thr

Ala

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Ala

Gln

Pro

Glu

Asp

Glu

225

230

235

240

Ala

Ala

Tyr

Tyr

Cys

Leu

Ser

Ser

Tyr

Gly

Asp

Asn

Asn

Asp

Leu

Val

245

250

255

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Gln

Leu

Thr

Val

Leu

260

265

<210> 46 <211> 1521 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид H57 Null2 - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена muG2a CH3 <400> 46 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcg60 cgaggagaag tttacctggt ggagtcaggg ggagatttag tgcagcctgg aagttccctg120 aaagtctcct gtgcagcctc tggattcacc ttcagtgact tctggatgta ctgggtccgc180 caggctccag ggaaggggct ggagtgggtt ggtagaatta aaaacaaacc taataattat240 gcaacagaat atgcggattc cgtgagaggc agattcacca tctcaagaga cgactcaaga300 aacagcatct atctgcaaat gaataggtta agagtcgatg acacagccat ttattactgt360 actagagccg ggaggttcga ccacttcgat tactggggcc aaggaaccat ggtcaccgtc420 tcaagcggtg gcggagggtc tgggggtggc ggatccggag gtggtggctc tgcacaatat480 gagctgatcc aaccatcttc agcatcagtc actgtaggag agacggtcaa aatcacttgc540 tctggggacc agttgccaaa aaattttgct tattggtttc agcaaaagtc agacaagaac600 attttactac tcatatacat ggataataag cgaccatcag ggatcccaga acgattctct660 gggtccactt caggtacaac agccaccttg accatcagtg gagcccagcc tgaggatgag720 gctgcctatt actgtttgtc ttcatatggt gataataacg atttagtttt tggcagcgga780 acccagctca ccgtcctacg aactgagccc agagtgccca taacacagaa cccctgtcct840 ccactcaaag agtgtccccc atgcgcagct ccagacgcag cgggtgcgcc atccgtcttc900 atcttccctc caaagatcaa ggatgtactc atgatctccc tgagccccat ggtcacatgt960 gtggtggtgg atgtgagcga ggatgaccca gacgtccaga tcagctggtt tgtgaacaac1020 gtggaagtac acacagctca gacacaaacc catagagagg attacaacag tactctccgg1080 gtggtcagtg ccctccccat ccagcaccag gactggatga gtggcaaggc gttcgcatgc1140 gcggtcaaca acagagccct cccatccccc atcgagaaaa ccatctcaaa acccagaggg1200 ccagtaagag ctccacaggt atatgtcttg cctccaccag cagaagagat gactaagaaa1260 gagttcagtc tgacctgcat gatcacaggc ttcttacctg ccgaaattgc tgtggactgg1320 accagcaatg ggcgtacaga gcaaaactac aagaacaccg caacagtcct ggactctgat1380

- 72 032828 ggttcttact tcatgtacag caagctcaga gtacaaaaga gcacttggga aagaggaagt 1440 cttttcgcct gctcagtggt ccacgagggt ctgcacaatc accttacgac taagaccatc 1500 tcccggtctc tgggtaaatg a 1521 <210> 47 <211> 506 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> H57 Null2 SMIP - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена g2a CH3 мыши

<400> 47

Met

Asp

Phe

Gln

Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Glu

Val

Tyr

Leu

Val

Glu

Ser

Gly

Gly

Asp

20

25

30

Leu

Val

Gln

Pro

Gly

Ser

Ser

Leu

Lys

Val

Ser

Cys

Ala

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Phe

Thr

Phe

Ser

Asp

Phe

Trp

Met

Tyr

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

50

55

60

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Val

Gly

Arg

Ile

Lys

Asn

Lys

Pro

Asn

Asn

Tyr

65

70

75

80

Ala

Thr

Glu

Tyr

Ala

Asp

Ser

Val

Arg

Gly

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Arg

85

90

95

Asp

Asp

Ser

Arg

Asn

Ser

Ile

Tyr

Leu

Gln

Met

Asn

Arg

Leu

Arg

Val

100

105

110

Asp

Asp

Thr

Ala

Ile

Tyr

Tyr

Cys

Thr

Arg

Ala

Gly

Arg

Phe

Asp

His

115

120

125

Phe

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Met

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Tyr

145

150

155

160

Glu

Leu

Ile

Gln

Pro

Ser

Ser

Ala

Ser

Val

Thr

Val

Gly

Glu

Thr

Val

165

170

175

Lys

Ile

Thr

Cys

Ser

Gly

Asp

Gln

Leu

Pro

Lys

Asn

Phe

Ala

Tyr

Trp

180

185

190

Phe

Gln

Gln

Lys

Ser

Asp

Lys

Asn

Ile

Leu

Leu

Leu

Ile

Tyr

Met

Asp

195

200

205

Asn

Lys

Arg

Pro

Ser

Gly

Ile

Pro

Glu

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Thr

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Thr

Ala

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Ala

Gln

Pro

Glu

Asp

Glu

225

230

235

240

Ala

Ala

Tyr

Tyr

Cys

Leu

Ser

Ser

Tyr

Gly

Asp

Asn

Asn

Asp

Leu

Val

245

250

255

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Gln

Leu

Thr

Val

Leu

Arg

Thr

Glu

Pro

Arg

Val

260

265

270

Pro

Ile

Thr

Gln

Asn

Pro

Cys

Pro

Pro

Leu

Lys

Glu

Cys

Pro

Pro

Cys

275

280

285

Ala

Ala

Pro

Asp

Ala

Ala

Gly

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

290

295

300

Lys

Ile

Lys

Asp

Val

Leu

Met

Ile

Ser

Leu

Ser

Pro

Met

Val

Thr

Cys

305

310

315

320

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Glu

Asp

Asp

Pro

Asp

Val

Gln

Ile

Ser

Trp

325

330

335

Phe

Val

Asn

Asn

Val

Glu

Val

His

Thr

Ala

Gln

Thr

Gln

Thr

His

Arg

340

345

350

Glu

Asp

Tyr

Asn

Ser

Thr

Leu

Arg

Val

Val

Ser

Ala

Leu

Pro

Ile

Gln

355

360

365

His

Gln

Asp

Trp

Met

Ser

Gly

Lys

Ala

Phe

Ala

Cys

Ala

Val

Asn

Asn

370

375

380

- 73 032828

Arg

Ala

Leu

Pro

Ser

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Pro

Arg

Gly

385

390

395

400

Pro

Val

Arg

Ala

Pro

Gln

Val

Tyr

Val

Leu

Pro

Pro

Pro

Ala

Glu

Glu

405

410

415

Met

Thr

Lys

Lys

Glu

Phe

Ser

Leu

Thr

Cys

Met

Ile

Thr

Gly

Phe

Leu

420

425

430

Pro

Ala

Glu

Ile

Ala

Val

Asp

Trp

Thr

Ser

Asn

Gly

Arg

Thr

Glu

Gln

435

440

445

Asn

Tyr

Lys

Asn

Thr

Ala

Thr

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Tyr

Phe

450

455

460

Met

Tyr

Ser

Lys

Leu

Arg

Val

Gln

Lys

Ser

Thr

Trp

Glu

Arg

Gly

Ser

465

470

475

480

Leu

Phe

Ala

Cys

Ser

Val

Val

His

Glu

Gly

Leu

His

Asn

His

Leu

Thr

485

490

495

Thr

Lys

Thr

Ile

Ser

Arg

Ser

Leu

Gly

Lys

500

505

<210> 48 <211> 244 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> H57 VH-Линкер-VL (без лидерной последовательности) <400> 48

Glu

Val

Tyr

Leu Val

Glu

Ser

Gly

Gly Asp

Leu Val

Gln

Pro

Gly

Ser

1

5

10

15

Ser

Leu

Lys

Val

Ser

Cys

Ala

Ala

Ser

Gly

Phe

Thr

Phe

Ser

Asp

Phe

20

25

30

Trp

Met

Tyr

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Val

35

40

45

Gly

Arg

Ile

Lys

Asn

Lys

Pro

Asn

Asn

Tyr

Ala

Thr

Glu

Tyr

Ala

Asp

50

55

60

Ser

Val

Arg

Gly

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Arg

Asp

Asp

Ser

Arg

Asn

Ser

65

70

75

80

Ile

Tyr

Leu

Gln

Met

Asn

Arg

Leu

Arg

Val

Asp

Asp

Thr

Ala

Ile

Tyr

85

90

95

Tyr

Cys

Thr

Arg

Ala

Gly

Arg

Phe

Asp

His

Phe

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

100

105

110

Gly

Thr

Met

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Tyr

Glu

Leu

Ile

Gln

Pro

Ser

130

135

140

Ser

Ala

Ser

Val

Thr

Val

Gly

Glu

Thr

Val

Lys

Ile

Thr

Cys

Ser

Gly

145

150

155

160

Asp

Gln

Leu

Pro

Lys

Asn

Phe

Ala

Tyr

Trp

Phe

Gln

Gln

Lys

Ser

Asp

165

170

175

Lys

Asn

Ile

Leu

Leu

Leu

Ile

Tyr

Met

Asp

Asn

Lys

Arg

Pro

Ser

Gly

180

185

190

Ile

Pro

Glu

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Thr

Ser

Gly

Thr

Thr

Ala

Thr

Leu

195

200

205

Thr

Ile

Ser

Gly

Ala

Gln

Pro

Glu

Asp

Glu

Ala

Ala

Tyr

Tyr

Cys

Leu

210

215

220

Ser

Ser

Tyr

Gly

Asp

Asn

Asn

Asp

Leu

Val

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Gln

225

230

235

240

Leu

Thr

Val

Leu

<210> 49 <211> 120 <212> PRT <213> Искусственная последовательность

- 74 032828 <220>

<223> H57 Null2 SMIP - аминокислота VH <400> 49

Glu

Val

Tyr

Leu

Val

Glu

Ser

Gly Gly Asp

Leu Val

Gln

Pro

Gly

Ser

1

5

10

15

Ser

Leu

Lys

Val

Ser

Cys

Ala

Ala

Ser

Gly

Phe

Thr

Phe

Ser

Asp

Phe

20

25

30

Trp

Met

Tyr

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Val

35

40

45

Gly

Arg

Ile

Lys

Asn

Lys

Pro

Asn

Asn

Tyr

Ala

Thr

Glu

Tyr

Ala

Asp

50

55

60

Ser

Val

Arg

Gly

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Arg

Asp

Asp

Ser

Arg

Asn

Ser

65

70

75

80

Ile

Tyr

Leu

Gln

Met

Asn

Arg

Leu

Arg

Val

Asp

Asp

Thr

Ala

Ile

Tyr

85

90

95

Tyr

Cys

Thr

Arg

Ala

Gly

Arg

Phe

Asp

His

Phe

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

100

105

110

Gly

Thr

Met

Val

Thr

Val

Ser

Ser

115

120

<210>	50
<211>	110
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220> <223>	Мутантный	CH2	IGHG2c мыши (замены аланина	в
	положениях	L234, L235, G237, E318, K320 и	K322

<400> 50

Ala 1

Pro

Asp

Ala

Ala 5

Gly

Ala

Pro

Ser

Val 10

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro 15

Lys

Ile

Lys

Asp

Val

Leu

Met

Ile

Ser

Leu

Ser

Pro

Met

Val

Thr

Cys

Val

20

25

30

Val

Val

Asp

Val

Ser

Glu

Asp

Asp

Pro

Asp

Val

Gln

Ile

Ser

Trp

Phe

35

40

45

Val

Asn

Asn

Val

Glu

Val

His

Thr

Ala

Gln

Thr

Gln

Thr

His

Arg

Glu

50

55

60

Asp

Tyr

Asn

Ser

Thr

Leu

Arg

Val

Val

Ser

Ala

Leu

Pro

Ile

Gln

His

65

70

75

80

Gln

Asp

Trp

Met

Ser

Gly

Lys

Ala

Phe

Ala

Cys

Ala

Val

Asn

Asn

Arg

85

90

95

Ala

Leu

Pro

Ser

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Pro

Arg

100

105

110

<210> 51 <211> 107 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> H57 Null2 SMIP - аминокислотная последовательность VL <400> 51

Tyr 1

Glu

Leu

Ile

Gln 5

Pro

Ser

Ser

Ala

Ser 10

Val

Thr

Val

Gly

Glu 15

Thr

Val

Lys

Ile

Thr

Cys

Ser

Gly

Asp

Gln

Leu

Pro

Lys

Asn

Phe

Ala

Tyr

20

25

30

Trp

Phe

Gln

Gln

Lys

Ser

Asp

Lys

Asn

Ile

Leu

Leu

Leu

Ile

Tyr

Met

- 75 032828

35

40

45

Asp

Asn

Lys

Arg

Pro

Ser

Gly

Ile

Pro

Glu

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Thr

50

55

60

Ser

Gly

Thr

Thr

Ala

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Ala

Gln

Pro

Glu

Asp

65

70

75

80

Glu

Ala

Ala

Tyr

Tyr

Cys

Leu

Ser

Ser

Tyr

Gly

Asp

Asn

Asn

Asp

Leu

85

90

95

Val

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Gln

Leu

Thr

Val

Leu

100

105

<210>	52
<211>	23
<212>	PRT
<213>	Искусственная последовательность
<220>
<223>	H57 Null2	SMIP -	Спейсер и шарнир	(RT	как часть
	дизайна);	Линкер	112
<400>	52
Arg Thr Glu Pro	Arg Val	Pro Ile Thr Gln	Asn	Pro Cys Pro	Pro Leu
1		5	10			15

Lys Glu Cys Pro Pro Cys Ala <210> 53 <211> 110 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> H57 Null2 SMIP - аминокислота CH2 (аналогичный домену 2C11 CH2; представляет собой мутантный домен CH2 (аллель изотипа IgG2a) IGHG2c мыши) <400> 53

Ala 1

Pro

Asp

Ala

Ala 5

Gly

Ala

Pro

Ser

Val 10

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro 15

Lys

Ile

Lys

Asp

Val

Leu

Met

Ile

Ser

Leu

Ser

Pro

Met

Val

Thr

Cys

Val

20

25

30

Val

Val

Asp

Val

Ser

Glu

Asp

Asp

Pro

Asp

Val

Gln

Ile

Ser

Trp

Phe

35

40

45

Val

Asn

Asn

Val

Glu

Val

His

Thr

Ala

Gln

Thr

Gln

Thr

His

Arg

Glu

50

55

60

Asp

Tyr

Asn

Ser

Thr

Leu

Arg

Val

Val

Ser

Ala

Leu

Pro

Ile

Gln

His

65

70

75

80

Gln

Asp

Trp

Met

Ser

Gly

Lys

Ala

Phe

Ala

Cys

Ala

Val

Asn

Asn

Arg

85

90

95

Ala

Leu

Pro

Ser

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Pro

Arg

100

105

110

<210> 54 <211> 107 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Участок CH3 H57 Null2 <400> 54

- 76 032828

Gly 1

Pro

Val

Arg

Ala 5

Pro

Gln

Val

Tyr Val 10

Leu

Pro

Pro

Pro

Ala 15

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Lys

Glu

Phe

Ser

Leu

Thr

Cys

Met

Ile

Thr

Gly

Phe

20

25

30

Leu

Pro

Ala

Glu

Ile

Ala

Val

Asp

Trp

Thr

Ser

Asn

Gly

Arg

Thr

Glu

35

40

45

Gln

Asn

Tyr

Lys

Asn

Thr

Ala

Thr

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Tyr

50

55

60

Phe

Met

Tyr

Ser

Lys

Leu

Arg

Val

Gln

Lys

Ser

Thr

Trp

Glu

Arg

Gly

65

70

75

80

Ser

Leu

Phe

Ala

Cys

Ser

Val

Val

His

Glu

Gly

Leu

His

Asn

His

Leu

85

90

95

Thr

Thr

Lys

Thr

Ile

Ser

Arg

Ser

Leu

Gly

Lys

100

105

<210> 55 <211> 1509 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотидная последовательность 2C11 Null2 SMIP <400> 55 atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcg60 cgaggagagg tgcagctggt ggagtctggg ggaggcttgg tgcagcctgg aaagtccctg120 aaactctcct gtgaggcctc tggattcacc ttcagcggct atggcatgca ctgggtccgc180 caggctccag ggagggggct ggagtcggtc gcatacatta ctagtagtag tattaatatc240 aaatatgctg acgctgtgaa aggccggttc accgtctcca gagacaatgc caagaactta300 ctgtttctac aaatgaacat tctcaagtct gaggacacag ccatgtacta ctgtgcaaga360 ttcgactggg acaaaaatta ctggggccaa ggaaccatgg tcaccgtctc aagcggtggc420 ggagggtctg ggggtggcgg atccggaggt ggtggctctg cacaagacat ccagatgacc480 cagtctccat catcactgcc tgcctccctg ggagacagag tcactatcaa ttgtcaggcc540 agtcaggaca ttagcaatta tttaaactgg taccagcaga aaccagggaa agctcctaag600 ctcctgatct attatacaaa taaattggca gatggagtcc catcaaggtt cagtggcagt660 ggttctggga gagattcttc tttcactatc agcagcctgg aatccgaaga tattggatct720 tattactgtc aacagtatta taactatccg tggacgttcg gacctggcac caagctggaa780 atcaaacgaa ctgagcccag agtgcccata acacagaacc cctgtcctcc actcaaagag840 tgtcccccat gcgcagctcc agacgcagcg ggtgcgccat ccgtcttcat cttccctcca900 aagatcaagg atgtactcat gatctccctg agccccatgg tcacatgtgt ggtggtggat960 gtgagcgagg atgacccaga cgtccagatc agctggtttg tgaacaacgt ggaagtacac1020 acagctcaga cacaaaccca tagagaggat tacaacagta ctctccgggt ggtcagtgcc1080 ctccccatcc agcaccagga ctggatgagt ggcaaggcgt tcgcatgcgc ggtcaacaac1140 agagccctcc catcccccat cgagaaaacc atctcaaaac ccagagggcc agtaagagct1200 ccacaggtat atgtcttgcc tccaccagca gaagagatga ctaagaaaga gttcagtctg1260 acctgcatga tcacaggctt cttacctgcc gaaattgctg tggactggac cagcaatggg1320 cgtacagagc aaaactacaa gaacaccgca acagtcctgg actctgatgg ttcttacttc1380 atgtacagca agctcagagt acaaaagagc acttgggaaa gaggaagtct tttcgcctgc1440 tcagtggtcc acgagggtct gcacaatcac cttacgacta agaccatctc ccggtctctg1500 ggtaaatga1509 <210> 56 <211> 502 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> 2C11 Null2 SMIP - лидерная последовательность 2H7 человека черездо домена g2a CH3 мыши <400> 56

- 77 032828

Met 1

Asp

Phe

Gln

Val 5

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe 10

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala 15

Ser

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Glu

Val

Gln

Leu

Val

Glu

Ser

Gly

Gly

Gly

20

25

30

Leu

Val

Gln

Pro

Gly

Lys

Ser

Leu

Lys

Leu

Ser

Cys

Glu

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Phe

Thr

Phe

Ser

Gly

Tyr

Gly

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

50

55

60

Arg

Gly

Leu

Glu

Ser

Val

Ala

Tyr

Ile

Thr

Ser

Ser

Ser

Ile

Asn

Ile

65

70

75

80

Lys

Tyr

Ala

Asp

Ala

Val

Lys

Gly

Arg

Phe

Thr

Val

Ser

Arg

Asp

Asn

85

90

95

Ala

Lys

Asn

Leu

Leu

Phe

Leu

Gln

Met

Asn

Ile

Leu

Lys

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Thr

Ala

Met

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Phe

Asp

Trp

Asp

Lys

Asn

Tyr

Trp

115

120

125

Gly

Gln

Gly

Thr

Met

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

130

135

140

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

145

150

155

160

Gln

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Pro

Ala

Ser

Leu

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

165

170

175

Asn

Cys

Gln

Ala

Ser

Gln

Asp

Ile

Ser

Asn

Tyr

Leu

Asn

Trp

Tyr

Gln

180

185

190

Gln

Lys

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Leu

Leu

Ile

Tyr

Tyr

Thr

Asn

Lys

195

200

205

Leu

Ala

Asp

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Arg

210

215

220

Asp

Ser

Ser

Phe

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Glu

Ser

Glu

Asp

Ile

Gly

Ser

225

230

235

240

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Tyr

Tyr

Asn

Tyr

Pro

Trp

Thr

Phe

Gly

Pro

Gly

245

250

255

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

Thr

Glu

Pro

Arg

Val

Pro

Ile

Thr

Gln

260

265

270

Asn

Pro

Cys

Pro

Pro

Leu

Lys

Glu

Cys

Pro

Pro

Cys

Ala

Ala

Pro

Asp

275

280

285

Ala

Ala

Gly

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Lys

Ile

Lys

Asp

290

295

300

Val

Leu

Met

Ile

Ser

Leu

Ser

Pro

Met

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

305

310

315

320

Val

Ser

Glu

Asp

Asp

Pro

Asp

Val

Gln

Ile

Ser

Trp

Phe

Val

Asn

Asn

325

330

335

Val

Glu

Val

His

Thr

Ala

Gln

Thr

Gln

Thr

His

Arg

Glu

Asp

Tyr

Asn

340

345

350

Ser

Thr

Leu

Arg

Val

Val

Ser

Ala

Leu

Pro

Ile

Gln

His

Gln

Asp

Trp

355

360

365

Met

Ser

Gly

Lys

Ala

Phe

Ala

Cys

Ala

Val

Asn

Asn

Arg

Ala

Leu

Pro

370

375

380

Ser

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Pro

Arg

Gly

Pro

Val

Arg

Ala

385

390

395

400

Pro

Gln

Val

Tyr

Val

Leu

Pro

Pro

Pro

Ala

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Lys

405

410

415

Glu

Phe

Ser

Leu

Thr

Cys

Met

Ile

Thr

Gly

Phe

Leu

Pro

Ala

Glu

Ile

420

425

430

Ala

Val

Asp

Trp

Thr

Ser

Asn

Gly

Arg

Thr

Glu

Gln

Asn

Tyr

Lys

Asn

435

440

445

Thr

Ala

Thr

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Tyr

Phe

Met

Tyr

Ser

Lys

450

455

460

Leu

Arg

Val

Gln

Lys

Ser

Thr

Trp

Glu

Arg

Gly

Ser

Leu

Phe

Ala

Cys

465

470

475

480

Ser

Val

Val

His

Glu

Gly

Leu

His

Asn

His

Leu

Thr

Thr

Lys

Thr

Ile

485

490

495

Ser

Arg

Ser

Leu

Gly

Lys

- 78 032828

500 <210> 57 <400> 57

000 <210> 58 <211> 116 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> 2C11 Null2 SMIP - аминокислота VH <400> 58

Glu

Val

Gln

Leu

Val

Glu

Ser

Gly

Gly

Gly

Leu

Val

Gln

Pro

Gly

Lys

1

5

10

15

Ser

Leu

Lys

Leu

Ser

Cys

Glu

Ala

Ser

Gly

Phe

Thr

Phe

Ser

Gly

Tyr

20

25

30

Gly

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Arg

Gly

Leu

Glu

Ser

Val

35

40

45

Ala

Tyr

Ile

Thr

Ser

Ser

Ser

Ile

Asn

Ile

Lys

Tyr

Ala

Asp

Ala

Val

50

55

60

Lys

Gly

Arg

Phe

Thr

Val

Ser

Arg

Asp

Asn

Ala

Lys

Asn

Leu

Leu

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asn

Ile

Leu

Lys

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Met

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Phe

Asp

Trp

Asp

Lys

Asn

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Met

Val

100

105

110

Thr

Val

Ser

Ser

115

<210> 59 <211> 480 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> 2C11 Null2 SMIP без лидерной последовательности <400> 59

Glu

Val

Gln

Leu

Val

Glu

Ser

Gly

Gly

Gly

Leu

Val

Gln

Pro

Gly

Lys

1

5

10

15

Ser

Leu

Lys

Leu

Ser

Cys

Glu

Ala

Ser

Gly

Phe

Thr

Phe

Ser

Gly

Tyr

20

25

30

Gly

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Arg

Gly

Leu

Glu

Ser

Val

35

40

45

Ala

Tyr

Ile

Thr

Ser

Ser

Ser

Ile

Asn

Ile

Lys

Tyr

Ala

Asp

Ala

Val

50

55

60

Lys

Gly

Arg

Phe

Thr

Val

Ser

Arg

Asp

Asn

Ala

Lys

Asn

Leu

Leu

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asn

Ile

Leu

Lys

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Met

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Phe

Asp

Trp

Asp

Lys

Asn

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Met

Val

100

105

110

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

130

135

140

Pro

Ala

Ser

Leu

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Asn

Cys

Gln

Ala

Ser

Gln

- 79 032828

145

150

155

160

Asp

Ile

Ser

Asn

Tyr

Leu

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Pro

Gly

Lys

Ala

165

170

175

Pro

Lys

Leu

Leu

Ile

Tyr

Tyr

Thr

Asn

Lys

Leu

Ala

Asp

Gly

Val

Pro

180

185

190

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Arg

Asp

Ser

Ser

Phe

Thr

Ile

195

200

205

Ser

Ser

Leu

Glu

Ser

Glu

Asp

Ile

Gly

Ser

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Tyr

210

215

220

Tyr

Asn

Tyr

Pro

Trp

Thr

Phe

Gly

Pro

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

225

230

235

240

Arg

Thr

Glu

Pro

Arg

Val

Pro

Ile

Thr

Gln

Asn

Pro

Cys

Pro

Pro

Leu

245

250

255

Lys

Glu

Cys

Pro

Pro

Cys

Ala

Ala

Pro

Asp

Ala

Ala

Gly

Ala

Pro

Ser

260

265

270

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Lys

Ile

Lys

Asp

Val

Leu

Met

Ile

Ser

Leu

275

280

285

Ser

Pro

Met

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Glu

Asp

Asp

Pro

290

295

300

Asp

Val

Gln

Ile

Ser

Trp

Phe

Val

Asn

Asn

Val

Glu

Val

His

Thr

Ala

305

310

315

320

Gln

Thr

Gln

Thr

His

Arg

Glu

Asp

Tyr

Asn

Ser

Thr

Leu

Arg

Val

Val

325

330

335

Ser

Ala

Leu

Pro

Ile

Gln

His

Gln

Asp

Trp

Met

Ser

Gly

Lys

Ala

Phe

340

345

350

Ala

Cys

Ala

Val

Asn

Asn

Arg

Ala

Leu

Pro

Ser

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

355

360

365

Ile

Ser

Lys

Pro

Arg

Gly

Pro

Val

Arg

Ala

Pro

Gln

Val

Tyr

Val

Leu

370

375

380

Pro

Pro

Pro

Ala

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Lys

Glu

Phe

Ser

Leu

Thr

Cys

385

390

395

400

Met

Ile

Thr

Gly

Phe

Leu

Pro

Ala

Glu

Ile

Ala

Val

Asp

Trp

Thr

Ser

405

410

415

Asn

Gly

Arg

Thr

Glu

Gln

Asn

Tyr

Lys

Asn

Thr

Ala

Thr

Val

Leu

Asp

420

425

430

Ser

Asp

Gly

Ser

Tyr

Phe

Met

Tyr

Ser

Lys

Leu

Arg

Val

Gln

Lys

Ser

435

440

445

Thr

Trp

Glu

Arg

Gly

Ser

Leu

Phe

Ala

Cys

Ser

Val

Val

His

Glu

Gly

450

455

460

Leu

His

Asn

His

Leu

Thr

Thr

Lys

Thr

Ile

Ser

Arg

Ser

Leu

Gly

Lys

465

470

475

480

<210> 60 <211> 107 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> 2C11 Null2 SMIP - аминокислота VL <400> 60

Asp 1

Ile

Gln

Met

Thr 5

Gln

Ser

Pro

Ser

Ser 10

Leu

Pro

Ala

Ser

Leu 15

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Asn

Cys

Gln

Ala

Ser

Gln

Asp

Ile

Ser

Asn

Tyr

20

25

30

Leu

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Leu

Leu

Ile

35

40

45

Tyr

Tyr

Thr

Asn

Lys

Leu

Ala

Asp

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

50

55

60

Ser

Gly

Ser

Gly

Arg

Asp

Ser

Ser

Phe

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Glu

Ser

65

70

75

80

Glu

Asp

Ile

Gly

Ser

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Tyr

Tyr

Asn

Tyr

Pro

Trp

- 80 032828

Thr Phe Gly Pro Gly

100

Thr Lys Leu Glu Ile Lys

105 <210> 61 <211> 262 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> 2C11 Лидерная последовательность-ОТ-Линкер^ <400> 61

Met

Asp

Phe

Gln

Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Glu

Val

Gln

Leu

Val

Glu

Ser

Gly

Gly

Gly

20

25

30

Leu

Val

Gln

Pro

Gly

Lys

Ser

Leu

Lys

Leu

Ser

Cys

Glu

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Phe

Thr

Phe

Ser

Gly

Tyr

Gly

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

50

55

60

Arg

Gly

Leu

Glu

Ser

Val

Ala

Tyr

Ile

Thr

Ser

Ser

Ser

Ile

Asn

Ile

65

70

75

80

Lys

Tyr

Ala

Asp

Ala

Val

Lys

Gly

Arg

Phe

Thr

Val

Ser

Arg

Asp

Asn

85

90

95

Ala

Lys

Asn

Leu

Leu

Phe

Leu

Gln

Met

Asn

Ile

Leu

Lys

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Thr

Ala

Met

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Phe

Asp

Trp

Asp

Lys

Asn

Tyr

Trp

115

120

125

Gly

Gln

Gly

Thr

Met

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

130

135

140

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

145

150

155

160

Gln

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Pro

Ala

Ser

Leu

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

165

170

175

Asn

Cys

Gln

Ala

Ser

Gln

Asp

Ile

Ser

Asn

Tyr

Leu

Asn

Trp

Tyr

Gln

180

185

190

Gln

Lys

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Leu

Leu

Ile

Tyr

Tyr

Thr

Asn

Lys

195

200

205

Leu

Ala

Asp

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Arg

210

215

220

Asp

Ser

Ser

Phe

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Glu

Ser

Glu

Asp

Ile

Gly

Ser

225

230

235

240

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Tyr

Tyr

Asn

Tyr

Pro

Trp

Thr

Phe

Gly

Pro

Gly

245

250

255

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

260

<210> 62 <211> 240 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> 2C11 VH-Линкер-VL (без лидерной последовательности) <400> 62

Glu

Val

Gln

Leu

Val

Glu

Ser

Gly

Gly

Gly

Leu

Val

Gln

Pro

Gly

Lys

1

5

10

15

Ser

Leu

Lys

Leu

Ser

Cys

Glu

Ala

Ser

Gly

Phe

Thr

Phe

Ser

Gly

Tyr

20

25

30

- 81 032828

Gly Met

His 35

Trp

Val

Arg Gln Ala 40

Pro Gly Arg

Gly

Leu 45

Glu

Ser

Val

Ala

Tyr

Ile

Thr

Ser

Ser

Ser

Ile

Asn

Ile

Lys

Tyr

Ala

Asp

Ala

Val

50

55

60

Lys

Gly

Arg

Phe

Thr

Val

Ser

Arg

Asp

Asn

Ala

Lys

Asn

Leu

Leu

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asn

Ile

Leu

Lys

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Met

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Phe

Asp

Trp

Asp

Lys

Asn

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Met

Val

100

105

110

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

130

135

140

Pro

Ala

Ser

Leu

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Asn

Cys

Gln

Ala

Ser

Gln

145

150

155

160

Asp

Ile

Ser

Asn

Tyr

Leu

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Pro

Gly

Lys

Ala

165

170

175

Pro

Lys

Leu

Leu

Ile

Tyr

Tyr

Thr

Asn

Lys

Leu

Ala

Asp

Gly

Val

Pro

180

185

190

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Arg

Asp

Ser

Ser

Phe

Thr

Ile

195

200

205

Ser

Ser

Leu

Glu

Ser

Glu

Asp

Ile

Gly

Ser

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Tyr

210

215

220

Tyr

Asn

Tyr

Pro

Trp

Thr

Phe

Gly

Pro

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

225

230

235

240

<210> 63 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Петля IgG1 человека; Линкер 50 <400> 63

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

5 10 15 <210> 64 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>

<223> IgG1 CH2 человека <400> 64

Ala 1

Pro

Glu

Leu

Leu 5

Gly

Gly

Pro

Ser

Val 10

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro 15

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

20

25

30

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

35

40

45

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

50

55

60

Gln

Tyr

Asn

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

65

70

75

80

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

85

90

95

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

- 82 032828

100

105

110 <210> 65 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>

<223> IgG1 CH3 человека <400> 65

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

1

5

10

15

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

20

25

30

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

35

40

45

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

50

55

60

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

65

70

75

80

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

85

90

95

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

100

105

<210> 66 <211> 109 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>

<223> IgG2 CH2 человека <400> 66

Ala

Pro

Pro

Val

Ala

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

1

5

10

15

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

20

25

30

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

35

40

45

Asp

Gly

Met

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

50

55

60

Phe

Asn

Ser

Thr

Phe

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Val

His

Gln

65

70

75

80

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

85

90

95

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Thr

Lys

100

105

<210> 67 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>

<223> IgG2 CH3 человека <400> 67

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu

- 83 032828

1

5

10

15

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

20

25

30

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

35

40

45

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Met

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

50

55

60

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

65

70

75

80

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

85

90

95

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

100

105

<210>	68
<211>	110
<212>	PRT
<213>	Homo sapiens

<220>

<223> IgG4 CH2 человека <400> 68

Ala 1

Pro

Glu

Phe

Leu 5

Gly

Gly

Pro

Ser

Val 10

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro 15

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

20

25

30

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

35

40

45

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

50

55

60

Gln

Phe

Asn

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

65

70

75

80

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

85

90

95

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

100

105

110

<210>	69
<211>	107
<212>	PRT
<213>	Homo sapiens

<220>

<223> IgG4 CH3 человека <400> 69

Gly Gln 1

Pro

Arg

Glu 5

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr 10

Leu

Pro

Pro

Ser

Gln 15

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

20

25

30

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

35

40

45

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

50

55

60

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Glu

Gly

65

70

75

80

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

85

90

95

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

100

105

- 84 032828 <210> 70 <211> 46 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Хвостовая последовательность на C-конце <400> 70

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

Ile

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

His

Glu

1

5

10

15

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

20

25

30

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

His

His

His

His

His

His

40 45 <210> 71 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>

<223> IgM CH3 человека <400> 71

Asp 1

Gln Asp

Thr

Ala 5

Ile

Arg

Val

Phe

Ala 10

Ile

Pro

Pro

Ser

Phe 15

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

20

25

30

Leu

Thr

Thr

Tyr

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

Ser

Trp

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

35

40

45

Glu

Ala

Val

Lys

Thr

His

Thr

Asn

Ile

Ser

Glu

Ser

His

Pro

Asn

Ala

50

55

60

Thr

Phe

Ser

Ala

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

Ile

Cys

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

65

70

75

80

Ser

Gly

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

Thr

His

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

85

90

95

Pro

Leu

Lys

Gln

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

Lys

100

105

<210> 72 <211> 21 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Петля IGHG2c мыши; Линкер 107 <400> 72

Glu 1	Pro Arg Val	Pro Ile Thr Gln Asn Pro Cys	Pro Pro Leu Lys Glu 15
5	10
Cys	Pro	Pro	Cys 20	Ala

<210> 73 <211> 110 <212> PRT <213> Mus musculus

- 85 032828 <220>

<223> Домен IGHG2c CH2 человека <400> 73

Ala

Pro

Asp

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Lys

1

5

10

15

Ile

Lys

Asp

Val

Leu

Met

Ile

Ser

Leu

Ser

Pro

Met

Val

Thr

Cys

Val

20

25

30

Val

Val

Asp

Val

Ser

Glu

Asp

Asp

Pro

Asp

Val

Gln

Ile

Ser

Trp

Phe

35

40

45

Val

Asn

Asn

Val

Glu

Val

His

Thr

Ala

Gln

Thr

Gln

Thr

His

Arg

Glu

50

55

60

Asp

Tyr

Asn

Ser

Thr

Leu

Arg

Val

Val

Ser

Ala

Leu

Pro

Ile

Gln

His

65

70

75

80

Gln

Asp

Trp

Met

Ser

Gly

Lys

Glu

Phe

Lys

Cys

Lys

Val

Asn

Asn

Arg

85

90

95

Ala

Leu

Pro

Ser

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Pro

Arg

100

105

110

<210> 74 <211> 213 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HM1 (IgM CH3:IgG1 CH3) без хвоста на C-конце <400> 74

Asp 1

Gln Asp

Thr

Ala 5

Ile

Arg

Val

Phe

Ala 10

Ile

Pro

Pro

Ser

Phe 15

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

20

25

30

Leu

Thr

Thr

Tyr

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

Ser

Trp

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

35

40

45

Glu

Ala

Val

Lys

Thr

His

Thr

Asn

Ile

Ser

Glu

Ser

His

Pro

Asn

Ala

50

55

60

Thr

Phe

Ser

Ala

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

Ile

Cys

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

65

70

75

80

Ser

Gly

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

Thr

His

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

85

90

95

Pro

Leu

Lys

Gln

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

100

105

110

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

115

120

125

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

130

135

140

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

145

150

155

160

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

165

170

175

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

180

185

190

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

195

200

205

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

<210> 75 <211> 109 <212> PRT

210

- 86 032828 <213> Искусственная последовательность <220>

<223> IgG4 AA CH2 <400> 75

Ala 1

Pro

Glu

Ala

Ala 5

Ala

Pro

Ser

Val

Phe 10

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys 15

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

20

25

30

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

35

40

45

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

50

55

60

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

65

70

75

80

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

85

90

95

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

100

105

<210> 76 <211> 498 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3 HM1 SMIP без хвоста на C-конце <400> 76

Met

Asp

Phe

Gln

Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

65

70

75

80

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

115

120

125

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

130

135

140

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

145

150

155

160

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

165

170

175

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

180

185

190

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

195

200

205

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

225

230

235

240

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

245

250

255

- 87 032828

Leu

Thr

Phe

Gly 260

Ala

Gly

Thr

Lys

Leu 265

Glu

Leu

Lys

Arg

Thr 270

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Asp

Gln

Asp

275

280

285

Thr

Ala

Ile

Arg

Val

Phe

Ala

Ile

Pro

Pro

Ser

Phe

Ala

Ser

Ile

Phe

290

295

300

Leu

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

Leu

Thr

Thr

305

310

315

320

Tyr

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

Ser

Trp

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

Glu

Ala

Val

325

330

335

Lys

Thr

His

Thr

Asn

Ile

Ser

Glu

Ser

His

Pro

Asn

Ala

Thr

Phe

Ser

340

345

350

Ala

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

Ile

Cys

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

Ser

Gly

Glu

355

360

365

Arg

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

Thr

His

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

Pro

Leu

Lys

370

375

380

Gln

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

385

390

395

400

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

405

410

415

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

420

425

430

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

435

440

445

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

450

455

460

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

465

470

475

480

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

485

490

495

Gly

Lys

<210> 77 <211> 392 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3 delta CH2 SMIP без хвоста на C-конце <400> 77

Met

Asp

Phe

Gln

Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

65

70

75

80

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

115

120

125

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

130

135

140

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

145

150

155

160

- 88 032828

Ala Gln

Gln

Ile

Ile 165

Leu

Thr Gln

Ser

Pro 170

Ala

Ile

Met

Ser

Ala 175

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

180

185

190

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

195

200

205

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

225

230

235

240

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

245

250

255

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Thr

Glu

Pro

260

265

270

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Gly

Gln

Pro

275

280

285

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

290

295

300

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

305

310

315

320

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

325

330

335

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

340

345

350

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

355

360

365

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

370

375

380

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

385

390

<210> 78 <211> 494 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3 HM1 SMIP без хвоста на C-конце <400> 78

Met

Asp

Phe Gln

Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

115

120

125

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

145

150

155

160

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

165

170

175

- 89 032828

Val

Thr

Met

Thr 180

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser 185

Ser Val

Ser

Tyr

Met 190

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

195

200

205

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

225

230

235

240

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

245

250

255

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

260

265

270

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Asp

Gln

Asp

Thr

Ala

Ile

Arg

275

280

285

Val

Phe

Ala

Ile

Pro

Pro

Ser

Phe

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

Thr

Lys

Ser

290

295

300

Thr

Lys

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

Leu

Thr

Thr

Tyr

Asp

Ser

Val

305

310

315

320

Thr

Ile

Ser

Trp

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

Glu

Ala

Val

Lys

Thr

His

Thr

325

330

335

Asn

Ile

Ser

Glu

Ser

His

Pro

Asn

Ala

Thr

Phe

Ser

Ala

Val

Gly

Glu

340

345

350

Ala

Ser

Ile

Cys

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

Ser

Gly

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

355

360

365

Thr

Val

Thr

His

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

Pro

Leu

Lys

Gln

Thr

Ile

Ser

370

375

380

Arg

Pro

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

385

390

395

400

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

405

410

415

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

420

425

430

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

435

440

445

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

450

455

460

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

465

470

475

480

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

485

490

<210> 79 <211> 388 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3 delta CH2 SMIP без хвоста на C-конце <400> 79

Met

Asp

Phe

Gln

Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

85

90

95

- 90 032828

Ser

Ser

Ser

Thr 100

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu 105

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser 110

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

115

120

125

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

145

150

155

160

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

165

170

175

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

180

185

190

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

195

200

205

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

225

230

235

240

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

245

250

255

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

260

265

270

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

275

280

285

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

290

295

300

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

305

310

315

320

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

325

330

335

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

340

345

350

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

355

360

365

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

370

375

380

Ser

Pro

Gly

Lys

385

<210> 80 <211> 480 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3 G1 N297A SMIP без лидерной последовательности <400> 80

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

- 91 032828

Trp

Gly

Gln Gly 115

Thr

Ser Val

Thr Val 120

Ser

Ser

Gly Gly 125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

245

250

255

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

260

265

270

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

275

280

285

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

290

295

300

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

305

310

315

320

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

325

330

335

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

340

345

350

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

355

360

365

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

370

375

380

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

385

390

395

400

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

405

410

415

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

420

425

430

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

435

440

445

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

450

455

460

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

480

<210> 81 <211> 479 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3 G1 AA SMIP без лидерной последовательности <400> 81

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

- 92 032828

Gly Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser 55

Gly Tyr

Ile

Gly

Tyr 60

Ser

Gln

Lys

Phe

50

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

245

250

255

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

260

265

270

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

275

280

285

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

290

295

300

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

305

310

315

320

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

325

330

335

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

340

345

350

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

355

360

365

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

370

375

380

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

385

390

395

400

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

405

410

415

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

420

425

430

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

435

440

445

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

450

455

460

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 82 <211> 479 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <223> BC3 G2 AA SMIP без лидерной последовательности <220>

- 93 032828

<400> 82

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

245

250

255

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

260

265

270

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

275

280

285

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

290

295

300

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Met

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

305

310

315

320

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Phe

Arg

Val

Val

Ser

325

330

335

Val

Leu

Thr

Val

Val

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

340

345

350

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

355

360

365

Ser

Lys

Thr

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

370

375

380

Pro

Ser

Arg

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

385

390

395

400

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

405

410

415

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Met

Leu

Asp

Ser

420

425

430

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

435

440

445

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

450

455

460

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

- 94 032828 <210> 83 <211> 479 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3 G4 AA SMIP без лидерной последовательности <400> 83

Gln 1

Val

Gln

Leu Gln Gln 5

Ser

Ala

Ala Glu 10

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly 15

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

245

250

255

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

260

265

270

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

275

280

285

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

290

295

300

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

305

310

315

320

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

325

330

335

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

340

345

350

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

355

360

365

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

370

375

380

Pro

Ser

Gln

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

385

390

395

400

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

405

410

415

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

- 95 032828

420

425

430

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

435

440

445

Trp

Gln

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

450

455

460

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 84 <211> 522 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3 HM1 SMIP без лидерной последовательности <400> 84

Gln 1

Val

Gln Leu

Gln 5

Gln

Ser

Ala Ala

Glu 10

Leu Ala

Arg

Pro

Gly 15

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

245

250

255

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Asp

Gln

Asp

Thr

Ala

Ile

Arg

Val

Phe

260

265

270

Ala

Ile

Pro

Pro

Ser

Phe

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

275

280

285

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

Leu

Thr

Thr

Tyr

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

290

295

300

Ser

Trp

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

Glu

Ala

Val

Lys

Thr

His

Thr

Asn

Ile

305

310

315

320

Ser

Glu

Ser

His

Pro

Asn

Ala

Thr

Phe

Ser

Ala

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

325

330

335

Ile

Cys

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

Ser

Gly

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

340

345

350

Thr

His

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

Pro

Leu

Lys

Gln

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

- 96 032828

355

360

365

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

370

375

380

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

385

390

395

400

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

405

410

415

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

420

425

430

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

435

440

445

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

450

455

460

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

465

470

475

480

Asp

Ile

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

485

490

495

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

500

505

510

Asp

Asp

Asp

Lys

His

His

His

His

His

His

515 520 <210> 85 <211> 416 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3 delta CH2 SMIP без лидерной последовательности <400> 85

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

- 97 032828

245

250

255

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

260

265

270

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

275

280

285

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

290

295

300

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

305

310

315

320

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

325

330

335

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

340

345

350

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

355

360

365

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

Ile

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

370

375

380

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

385

390

395

400

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

His

His

His

His

His

His

405

410

415

<210> 86 <211> 476 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3 HM1 SMIP без лидерной последовательности на N-конце или хвоста на

C-конце

<400> 86

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

- 98 032828

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu 245

Lys

Arg

Thr

Glu

Pro 250

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys 255

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Asp

Gln

Asp

Thr

Ala

Ile

Arg

Val

Phe

260

265

270

Ala

Ile

Pro

Pro

Ser

Phe

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

275

280

285

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

Leu

Thr

Thr

Tyr

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

290

295

300

Ser

Trp

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

Glu

Ala

Val

Lys

Thr

His

Thr

Asn

Ile

305

310

315

320

Ser

Glu

Ser

His

Pro

Asn

Ala

Thr

Phe

Ser

Ala

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

325

330

335

Ile

Cys

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

Ser

Gly

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

340

345

350

Thr

His

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

Pro

Leu

Lys

Gln

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

355

360

365

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

370

375

380

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

385

390

395

400

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

405

410

415

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

420

425

430

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

435

440

445

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

450

455

460

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465 470 475 <210> 87 <211> 370 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3 delta CH2 SMIP без лидерной последовательности на N-конце хвоста или на C-конце <400> 87

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

- 99 032828

Met

Thr

Cys

Ser

Ala 165

Ser

Ser

Ser

Val

Ser 170

Tyr

Met

His

Trp

Tyr 175

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

245

250

255

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

260

265

270

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

275

280

285

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

290

295

300

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

305

310

315

320

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

325

330

335

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

340

345

350

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

355

360

365

Gly Lys

370 <210> 88 <211> 476 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3 G1 N297A SMIP без лидерной последовательности <400> 88

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

100

105

110

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

115

120

125

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

130

135

140

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

145

150

155

160

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

165

170

175

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

180

185

190

- 100 032828

Val

Pro

Ala 195

His

Phe

Arg

Gly

Ser Gly 200

Ser

Gly

Thr

Ser 205

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

210

215

220

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

225

230

235

240

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

245

250

255

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

260

265

270

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

275

280

285

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

290

295

300

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

305

310

315

320

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

325

330

335

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

340

345

350

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

355

360

365

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

370

375

380

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

385

390

395

400

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

405

410

415

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

420

425

430

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

435

440

445

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

450

455

460

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 89 <211> 475 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3 G1 AA SMIP без лидерной последовательности <400> 89

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

100

105

110

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

115

120

125

- 101 032828

Ser

Gly 130

Gly

Gly Gly

Ser

Ala 135

Gln

Gln

Ile

Val

Leu 140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

145

150

155

160

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

165

170

175

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

180

185

190

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

195

200

205

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

210

215

220

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

225

230

235

240

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

245

250

255

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

260

265

270

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

275

280

285

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

290

295

300

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

305

310

315

320

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

325

330

335

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

340

345

350

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

355

360

365

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

370

375

380

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

385

390

395

400

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

405

410

415

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

420

425

430

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

435

440

445

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

450

455

460

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 90 <211> 475 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3 G2 AA SMIP без лидерной последовательности <400> 90

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

- 102 032828

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

100

105

110

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

115

120

125

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

130

135

140

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

145

150

155

160

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

165

170

175

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

180

185

190

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

195

200

205

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

210

215

220

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

225

230

235

240

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

245

250

255

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

260

265

270

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

275

280

285

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

290

295

300

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Met

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

305

310

315

320

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Phe

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

325

330

335

Val

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

340

345

350

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Thr

Lys

355

360

365

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Glu

370

375

380

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

385

390

395

400

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

405

410

415

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Met

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

420

425

430

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

435

440

445

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

450

455

460

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 91 <211> 475 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3 G4 AA SMIP без лидерной последовательности <400> 91

- 103 032828

Gln Val 1

Gln

Leu Gln 5

Gln

Ser Gly

Ala

Glu 10

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly 15

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

100

105

110

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

115

120

125

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

130

135

140

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

145

150

155

160

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

165

170

175

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

180

185

190

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

195

200

205

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

210

215

220

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

225

230

235

240

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

245

250

255

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

260

265

270

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

275

280

285

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

290

295

300

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

305

310

315

320

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

325

330

335

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

340

345

350

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

355

360

365

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Gln

Glu

370

375

380

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

385

390

395

400

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

405

410

415

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

420

425

430

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Glu

Gly

435

440

445

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

450

455

460

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 92

- 104 032828 <211> 518 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3 HM1 SMIP без лидерной последовательности <400> 92

Gln 1

Val

Gln

Leu Gln Gln 5

Ser

Gly

Ala Glu 10

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly 15

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

100

105

110

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

115

120

125

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

130

135

140

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

145

150

155

160

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

165

170

175

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

180

185

190

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

195

200

205

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

210

215

220

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

225

230

235

240

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

245

250

255

Pro

Cys

Pro

Asp

Gln

Asp

Thr

Ala

Ile

Arg

Val

Phe

Ala

Ile

Pro

Pro

260

265

270

Ser

Phe

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

Leu

Thr

Cys

Leu

275

280

285

Val

Thr

Asp

Leu

Thr

Thr

Tyr

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

Ser

Trp

Thr

Arg

290

295

300

Gln

Asn

Gly

Glu

Ala

Val

Lys

Thr

His

Thr

Asn

Ile

Ser

Glu

Ser

His

305

310

315

320

Pro

Asn

Ala

Thr

Phe

Ser

Ala

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

Ile

Cys

Glu

Asp

325

330

335

Asp

Trp

Asn

Ser

Gly

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

Thr

His

Thr

Asp

340

345

350

Leu

Pro

Ser

Pro

Leu

Lys

Gln

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

Lys

Gly

Gln

Pro

355

360

365

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

370

375

380

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

385

390

395

400

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

405

410

415

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

420

425

430

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

- 105 032828

435

440

445

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

450

455

460

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

Ile

Phe

Glu

465

470

475

480

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

485

490

495

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

500

505

510

His

His

His

His

His

His

515 <210> 93 <211> 412 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3 delta CH2 SMIP без лидерной последовательности <400> 93

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

100

105

110

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

115

120

125

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

130

135

140

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

145

150

155

160

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

165

170

175

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

180

185

190

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

195

200

205

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

210

215

220

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

225

230

235

240

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

245

250

255

Pro

Cys

Pro

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

260

265

270

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

275

280

285

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

290

295

300

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

305

310

315

320

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

- 106 032828

325

330

335

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

340

345

350

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

Thr

Gly

355

360

365

Leu

Asn

Asp

Ile

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

370

375

380

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

385

390

395

400

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

His

His

His

His

His

His

405

410

<210> 94 <211> 472 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3 HM1 SMIP без лидерной последовательности на N-конце или хвоста на

C-конце

<400> 94

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

100

105

110

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

115

120

125

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

130

135

140

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

145

150

155

160

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

165

170

175

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

180

185

190

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

195

200

205

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

210

215

220

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

225

230

235

240

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

245

250

255

Pro

Cys

Pro

Asp

Gln

Asp

Thr

Ala

Ile

Arg

Val

Phe

Ala

Ile

Pro

Pro

260

265

270

Ser

Phe

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

Leu

Thr

Cys

Leu

275

280

285

Val

Thr

Asp

Leu

Thr

Thr

Tyr

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

Ser

Trp

Thr

Arg

290

295

300

Gln

Asn

Gly

Glu

Ala

Val

Lys

Thr

His

Thr

Asn

Ile

Ser

Glu

Ser

His

- 107 032828

305

310

315

320

Pro

Asn

Ala

Thr

Phe

Ser

Ala

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

Ile

Cys

Glu

Asp

325

330

335

Asp

Trp

Asn

Ser

Gly

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

Thr

His

Thr

Asp

340

345

350

Leu

Pro

Ser

Pro

Leu

Lys

Gln

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

Lys

Gly

Gln

Pro

355

360

365

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

370

375

380

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

385

390

395

400

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

405

410

415

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

420

425

430

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

435

440

445

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

450

455

460

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

<210> 95 <211> 366 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3 delta CH2 без лидерной последовательности на N-конце или хвоста на

C-конце

<400> 95

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

100

105

110

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

115

120

125

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

130

135

140

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

145

150

155

160

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

165

170

175

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

180

185

190

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

195

200

205

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

210

215

220

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

- 108 032828

225

230

235

240

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

245

250

255

Pro

Cys

Pro

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

260

265

270

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

275

280

285

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

290

295

300

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

305

310

315

320

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

325

330

335

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

340

345

350

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

355

360

365

<210> 96 <211> 484 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> H57 null2 SMIP без лидерной последовательности <400> 96

Glu Val

Tyr

Leu

Val

Glu

Ser

Gly

Gly Asp

Leu

Val

Gln

Pro

Gly

Ser

1

5

10

15

Ser

Leu

Lys

Val

Ser

Cys

Ala

Ala

Ser

Gly

Phe

Thr

Phe

Ser

Asp

Phe

20

25

30

Trp

Met

Tyr

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Val

35

40

45

Gly

Arg

Ile

Lys

Asn

Lys

Pro

Asn

Asn

Tyr

Ala

Thr

Glu

Tyr

Ala

Asp

50

55

60

Ser

Val

Arg

Gly

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Arg

Asp

Asp

Ser

Arg

Asn

Ser

65

70

75

80

Ile

Tyr

Leu

Gln

Met

Asn

Arg

Leu

Arg

Val

Asp

Asp

Thr

Ala

Ile

Tyr

85

90

95

Tyr

Cys

Thr

Arg

Ala

Gly

Arg

Phe

Asp

His

Phe

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

100

105

110

Gly

Thr

Met

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Tyr

Glu

Leu

Ile

Gln

Pro

Ser

130

135

140

Ser

Ala

Ser

Val

Thr

Val

Gly

Glu

Thr

Val

Lys

Ile

Thr

Cys

Ser

Gly

145

150

155

160

Asp

Gln

Leu

Pro

Lys

Asn

Phe

Ala

Tyr

Trp

Phe

Gln

Gln

Lys

Ser

Asp

165

170

175

Lys

Asn

Ile

Leu

Leu

Leu

Ile

Tyr

Met

Asp

Asn

Lys

Arg

Pro

Ser

Gly

180

185

190

Ile

Pro

Glu

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Thr

Ser

Gly

Thr

Thr

Ala

Thr

Leu

195

200

205

Thr

Ile

Ser

Gly

Ala

Gln

Pro

Glu

Asp

Glu

Ala

Ala

Tyr

Tyr

Cys

Leu

210

215

220

Ser

Ser

Tyr

Gly

Asp

Asn

Asn

Asp

Leu

Val

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Gln

225

230

235

240

Leu

Thr

Val

Leu

Arg

Thr

Glu

Pro

Arg

Val

Pro

Ile

Thr

Gln

Asn

Pro

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Leu

Lys

Glu

Cys

Pro

Pro

Cys

Ala

Ala

Pro

Asp

Ala

Ala

260

265

270

Gly

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Lys

Ile

Lys

Asp

Val

Leu

- 109 032828

275

280

285

Met

Ile

Ser

Leu

Ser

Pro

Met

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

290

295

300

Glu

Asp

Asp

Pro

Asp

Val

Gln

Ile

Ser

Trp

Phe

Val

Asn

Asn

Val

Glu

305

310

315

320

Val

His

Thr

Ala

Gln

Thr

Gln

Thr

His

Arg

Glu

Asp

Tyr

Asn

Ser

Thr

325

330

335

Leu

Arg

Val

Val

Ser

Ala

Leu

Pro

Ile

Gln

His

Gln

Asp

Trp

Met

Ser

340

345

350

Gly

Lys

Ala

Phe

Ala

Cys

Ala

Val

Asn

Asn

Arg

Ala

Leu

Pro

Ser

Pro

355

360

365

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Pro

Arg

Gly

Pro

Val

Arg

Ala

Pro

Gln

370

375

380

Val

Tyr

Val

Leu

Pro

Pro

Pro

Ala

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Lys

Glu

Phe

385

390

395

400

Ser

Leu

Thr

Cys

Met

Ile

Thr

Gly

Phe

Leu

Pro

Ala

Glu

Ile

Ala

Val

405

410

415

Asp

Trp

Thr

Ser

Asn

Gly

Arg

Thr

Glu

Gln

Asn

Tyr

Lys

Asn

Thr

Ala

420

425

430

Thr

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Tyr

Phe

Met

Tyr

Ser

Lys

Leu

Arg

435

440

445

Val

Gln

Lys

Ser

Thr

Trp

Glu

Arg

Gly

Ser

Leu

Phe

Ala

Cys

Ser

Val

450

455

460

Val

His

Glu

Gly

Leu

His

Asn

His

Leu

Thr

Thr

Lys

Thr

Ile

Ser

Arg

465

470

475

480

Ser

Leu

Gly

Lys

<210> 97 <211> 480 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> 2C11 null2 SMIP без лидерной последовательности <400> 97

Glu

Val

Gln

Leu

Val

Glu

Ser

Gly

Gly

Gly

Leu

Val

Gln

Pro

Gly

Lys

1

5

10

15

Ser

Leu

Lys

Leu

Ser

Cys

Glu

Ala

Ser

Gly

Phe

Thr

Phe

Ser

Gly

Tyr

20

25

30

Gly

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Arg

Gly

Leu

Glu

Ser

Val

35

40

45

Ala

Tyr

Ile

Thr

Ser

Ser

Ser

Ile

Asn

Ile

Lys

Tyr

Ala

Asp

Ala

Val

50

55

60

Lys

Gly

Arg

Phe

Thr

Val

Ser

Arg

Asp

Asn

Ala

Lys

Asn

Leu

Leu

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asn

Ile

Leu

Lys

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Met

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Phe

Asp

Trp

Asp

Lys

Asn

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Met

Val

100

105

110

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

130

135

140

Pro

Ala

Ser

Leu

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Asn

Cys

Gln

Ala

Ser

Gln

145

150

155

160

Asp

Ile

Ser

Asn

Tyr

Leu

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Pro

Gly

Lys

Ala

165

170

175

Pro

Lys

Leu

Leu

Ile

Tyr

Tyr

Thr

Asn

Lys

Leu

Ala

Asp

Gly

Val

Pro

180

185

190

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Arg

Asp

Ser

Ser

Phe

Thr

Ile

- 110 032828

195

200

205

Ser

Ser

Leu

Glu

Ser

Glu

Asp

Ile

Gly

Ser

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Tyr

210

215

220

Tyr

Asn

Tyr

Pro

Trp

Thr

Phe

Gly

Pro

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

225

230

235

240

Arg

Thr

Glu

Pro

Arg

Val

Pro

Ile

Thr

Gln

Asn

Pro

Cys

Pro

Pro

Leu

245

250

255

Lys

Glu

Cys

Pro

Pro

Cys

Ala

Ala

Pro

Asp

Ala

Ala

Gly

Ala

Pro

Ser

260

265

270

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Lys

Ile

Lys

Asp

Val

Leu

Met

Ile

Ser

Leu

275

280

285

Ser

Pro

Met

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Glu

Asp

Asp

Pro

290

295

300

Asp

Val

Gln

Ile

Ser

Trp

Phe

Val

Asn

Asn

Val

Glu

Val

His

Thr

Ala

305

310

315

320

Gln

Thr

Gln

Thr

His

Arg

Glu

Asp

Tyr

Asn

Ser

Thr

Leu

Arg

Val

Val

325

330

335

Ser

Ala

Leu

Pro

Ile

Gln

His

Gln

Asp

Trp

Met

Ser

Gly

Lys

Ala

Phe

340

345

350

Ala

Cys

Ala

Val

Asn

Asn

Arg

Ala

Leu

Pro

Ser

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

355

360

365

Ile

Ser

Lys

Pro

Arg

Gly

Pro

Val

Arg

Ala

Pro

Gln

Val

Tyr

Val

Leu

370

375

380

Pro

Pro

Pro

Ala

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Lys

Glu

Phe

Ser

Leu

Thr

Cys

385

390

395

400

Met

Ile

Thr

Gly

Phe

Leu

Pro

Ala

Glu

Ile

Ala

Val

Asp

Trp

Thr

Ser

405

410

415

Asn

Gly

Arg

Thr

Glu

Gln

Asn

Tyr

Lys

Asn

Thr

Ala

Thr

Val

Leu

Asp

420

425

430

Ser

Asp

Gly

Ser

Tyr

Phe

Met

Tyr

Ser

Lys

Leu

Arg

Val

Gln

Lys

Ser

435

440

445

Thr

Trp

Glu

Arg

Gly

Ser

Leu

Phe

Ala

Cys

Ser

Val

Val

His

Glu

Gly

450

455

460

Leu

His

Asn

His

Leu

Thr

Thr

Lys

Thr

Ile

Ser

Arg

Ser

Leu

Gly

Lys

465

470

475

480

<210> 98 <211> 17 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Модифицированный (G4S)3 линкер (AQ в качестве связывающих аминокислот); Линкер 85 <400> 98

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala

5 10 15

Gln <210> 99 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Шарнир мутантного IgG1 человека (SCC-P); Линкер 47 <400> 99

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

- 111 032828 <210> 100 <211> 17 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Шарнир IgG1 дикого типа человека (RT в качестве связывающих аминокислот);

Линкер 86 <400> 100

Arg Thr Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
1 Pro	5	10	15

<210>	101
<211>	217
<212>	PRT
<213>	Искусственная последовательность
<220>
<223>	Null2 CH2-CH3

<400> 101

Ala 1

Pro

Asp

Ala

Ala 5

Gly Ala

Pro

Ser

Val 10

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro 15

Lys

Ile

Lys

Asp

Val

Leu

Met

Ile

Ser

Leu

Ser

Pro

Met

Val

Thr

Cys

Val

20

25

30

Val

Val

Asp

Val

Ser

Glu

Asp

Asp

Pro

Asp

Val

Gln

Ile

Ser

Trp

Phe

35

40

45

Val

Asn

Asn

Val

Glu

Val

His

Thr

Ala

Gln

Thr

Gln

Thr

His

Arg

Glu

50

55

60

Asp

Tyr

Asn

Ser

Thr

Leu

Arg

Val

Val

Ser

Ala

Leu

Pro

Ile

Gln

His

65

70

75

80

Gln

Asp

Trp

Met

Ser

Gly

Lys

Ala

Phe

Ala

Cys

Ala

Val

Asn

Asn

Arg

85

90

95

Ala

Leu

Pro

Ser

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Pro

Arg

Gly

Pro

100

105

110

Val

Arg

Ala

Pro

Gln

Val

Tyr

Val

Leu

Pro

Pro

Pro

Ala

Glu

Glu

Met

115

120

125

Thr

Lys

Lys

Glu

Phe

Ser

Leu

Thr

Cys

Met

Ile

Thr

Gly

Phe

Leu

Pro

130

135

140

Ala

Glu

Ile

Ala

Val

Asp

Trp

Thr

Ser

Asn

Gly

Arg

Thr

Glu

Gln

Asn

145

150

155

160

Tyr

Lys

Asn

Thr

Ala

Thr

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Tyr

Phe

Met

165

170

175

Tyr

Ser

Lys

Leu

Arg

Val

Gln

Lys

Ser

Thr

Trp

Glu

Arg

Gly

Ser

Leu

180

185

190

Phe

Ala

Cys

Ser

Val

Val

His

Glu

Gly

Leu

His

Asn

His

Leu

Thr

Thr

195

200

205

Lys

Thr

Ile

Ser

Arg

Ser

Leu

Gly

Lys

210

215

<210> 102 <211> 110 <212> PRT <213> Искусственная последовательность

- 112 032828 <220>

<223> IgG1 N297A CH2 <400> 102

Ala 1

Pro

Glu

Leu

Leu 5

Gly

Gly

Pro

Ser

Val 10

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro 15

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

20

25

30

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

35

40

45

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

50

55

60

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

65

70

75

80

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

85

90

95

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

100

105

110

<210> 103 <211> 109 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> IgG1 AA CH2 <400> 103

Ala 1

Pro

Glu

Ala

Ala 5

Ala

Pro

Ser

Val

Phe 10

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys 15

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

20

25

30

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

35

40

45

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

50

55

60

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

65

70

75

80

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

85

90

95

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

100

105

<210> 104 <211> 108 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> IgG2 AA CH2 <400> 104

Ala 1

Pro

Glu

Ala

Ala 5

Ala

Pro

Ser

Val

Phe 10

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys 15

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

20

25

30

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

35

40

45

Asp

Gly

Met

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

50

55

60

- 113 032828

Phe

Ala

Ser

Thr

Phe

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Val

His

Gln

65

70

75

80

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

85

90

95

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Thr

100

105

<210>	105
<211>	8
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 6
<400>	105
Gly Ser Pro Pro Ser	Pro Asn Ser
1	5

<210>	106
<211>	8
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 7
<400>	106
Gly Cys Pro Pro Cys	Pro Asn Ser
1	5

<210>	107
<211>	8
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 8
<400>	107
Gly Cys Pro Pro Cys	Pro Asn Ser
1	5

<210>	108
<211>	9
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 9
<400>	108
Gly Cys Pro Pro Cys	Pro Gly Asn Ser
1	5

<210> 109 <211> 9 <212> PRT

- 114 032828 <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 10 <400> 109

Gly Cys Pro Pro Cys Pro Ala Asn Ser

5 <210> 110 <211> 9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 11 <400> 110

Gly Cys Pro Pro Cys Pro Ala Asn Ser

5 <210> 111 <211> 9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 12 <400> 111

Glu Glu Glu Glu Asp Glu Gly Asn Ser

5 <210> 112 <211> 10 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 13 <400> 112

Asn Tyr Gly Gly Gly

5

Gly Ser Gly Asn Ser <210> 113 <211> 10 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 14 <400> 113

Val Ser Glu Arg Pro

5

Phe Pro Pro Asn Ser <210> 114

- 115 032828 <211> 11 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 15 <400> 114

Glu Pro Lys Ser Cys

5

Asp Lys Thr Cys Cys Pro

<210>	115
<211>	11
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 16
<400>	115
Ser Gln Pro Glu Ile	Val Pro Ile Ser Asn Ser
1	5	10

<210>	116
<211>	12
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 17
<400>	116
Gly Gly Gly Gly Ser	Cys Pro Pro Cys Pro Asn Ser
1	5	10

<210>	117
<211>	12
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 18
<400>	117
Lys Ala Asp Phe Leu	Thr Pro Ser Ile Gly Asn Ser
1	5	10

<210>	118
<211>	12
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 19
<400>	118
Gln Met Asn Ser Glu	Leu Ser Val Leu Ala Asn Ser
1	5	10

- 116 032828 <210> 119 <211> 13 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 20 <400> 119

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Cys Pro

5 10

<210>	120
<211>	13
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 21
<400>	120
Glu Pro Lys Ser Cys	Asp Lys Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1	5	10

<210>	121
<211>	13
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 22
<400>	121
Gly Gly Gly Gly Ser	Gly Gly Gly Gly Ser Gly Asn Ser
1	5	10

<210> 122 <211> 13 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 23 <400> 122

Gly Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ser

5 10 <210> 123 <211> 13 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 24 <400> 123

Gly Gly Gly Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Gly Asn Ser

- 117 032828

<210>	124
<211>	13
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 25
<400>	124
Gly Cys Pro Pro Cys	Pro Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ser
1	5	10

<210>	125
<211>	13
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 26
<400>	125
Gly Gly Gly Ala Ser	Cys Pro Pro Cys Pro Gly Asn Ser
1	5	10

<210>	126
<211>	13
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 27
<400>	126
Gly Gly Gly Ala Ser	Cys Pro Pro Cys Ala Gly Asn Ser
1	5	10

<210>	127
<211>	13
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 28
<400>	127
Gly Gly Gly Ala Ser	Cys Pro Pro Cys Ala Gly Asn Ser
1	5	10

<210> 128 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <223> Линкер 29 <220>

- 118 032828 <400> 128

Asn Tyr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Asn Ser

5 10 15

<210>	129
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер 30 <400> 129

Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Leu Thr Pro Ser Ile Gly Asn Ser
1	5	10	15

<210>	130
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 31
<400>	130
Leu Ser Val Leu Ala	Asn Phe Ser Gln Pro Glu	Ile Gly Asn Ser
1	5	10	15

<210>	131
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 32
<400>	131
Leu Lys Ile Gln Glu	Arg Val Ser Lys Pro Lys	Ile Ser Asn Ser
1	5	10	15

<210>	132
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 33
<400>	132
Leu Asp Val Ser Glu	Arg Pro Phe Pro Pro His	Ile Gln Asn Ser
1	5	10	15

<210> 133 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

- 119 032828 <223> Линкер 34 <400> 133

Arg Glu Gln Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Leu Lys Ala Asn Ser

5 10 15

<210>	134
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 35
<400>	134
Arg Ile His Gln Met	Asn Ser Glu Leu Ser Val	Leu Ala Asn Ser
1	5	10	15

<210> 135 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 36 <400> 135

Asp Thr Lys Gly Lys Asn Val Leu Glu Lys Ile Phe Ser Asn Ser

5 10 15

<210>	136
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 37
<400>	136
Leu Pro Pro Glu Thr	Gln Glu Ser Gln Glu Val	Thr Leu Asn Ser
1	5	10	15

<210>	137
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 38
<400>	137
Arg Ile His Leu Asn	Val Ser Glu Arg Pro	Phe Pro Pro Asn Ser
1	5	10	15
<210>	138
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность

<220>

- 120 032828 <223> Линкер 39 <400> 138

Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Leu Thr Pro Ser Ile Gly Asn Ser
1	5	10	15

<210>	139
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 40
<400>	139
Leu Ser Val Leu Ala	Asn Phe Ser Gln Pro Glu	Ile Gly Asn Ser
1	5	10	15

<210>	140
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 41
<400>	140
Leu Ser Val Leu Ala	Asn Phe Ser Gln Pro Glu	Ile Gly Asn Ser
1	5	10	15

<210>	141
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 42
<400>	141
Arg Ile His Gln Met	Asn Ser Glu Leu Ser Val	Leu Ala Asn Ser
1	5	10	15

<210> 142 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 43 <400> 142

Lys Pro Phe Phe Thr Cys	Gly Ser Ala Asp Thr Cys Pro Asn Ser
1	5	10	15

<210> 143 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность

- 121 032828 <220>

<223> Линкер 44 <400> 143

Lys Pro Phe Phe Thr Cys	Gly Ser Ala Asp Thr Cys Pro Asn Ser
1	5	10	15

<210>	144
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер 45 <400> 144

Gln Tyr Asn Cys Pro Gly Gln Tyr Thr Phe Ser Met	Pro Asn Ser 15
1	5	10
<210>	145
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 46
<400>	145

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

5 10 15

<210>	146
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 48
<400>	146
Glu Pro Lys Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Cys Ser
1	5	10	15

<210>	147
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 49
<400>	147
Glu Pro Lys Ser Cys	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Cys Ser
1	5	10	15

<210> 148 <211> 15 <212> PRT

- 122 032828

<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 51
<400>	148
Glu Pro Lys Ser	Cys	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Ser Ser
1		5	10	15

<210> 149 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 52 <400> 149

Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro	Pro Cys Lys Cys Pro
1	5	10	15

<210>	150
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 53
<400>	150
Glu Pro Lys Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Ser Ser
1	5	10	15

<210>	151
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 54
<400>	151
Glu Pro Lys Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Cys Ser
1	5	10	15

<210>	152
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 55
<400>	152
Glu Pro Lys Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Ser Ser
1	5	10	15

<210> 153

- 123 032828

<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 56
<400>	153
Glu Pro Lys Ser Cys	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Cys Pro
1	5	10	15

<210>	154
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 57
<400>	154
Glu Pro Lys Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Ser Pro
1	5	10	15

<210>	155
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 58
<400>	155
Glu Pro Lys Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Cys Pro
1	5	10	15

<210>	156
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 59
<400>	156
Glu Pro Lys Ser Cys	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Ser Pro
1	5	10	15

<210>	157
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 60
<400>	157
Glu Pro Lys Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Ser Pro
1	5	10	15

- 124 032828

<210>	158
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 61
<400>	158
Gly Gly Gly Gly Cys	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Cys Pro
1	5	10	15

<210> 159 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 62 <400> 159

Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Gly Cys Pro Pro Cys Pro

5 10 15 <210> 160 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 63 <400> 160

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Gly Gly Cys Pro

5 10 15 <210> 161 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 64 <400> 161

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Gly

5 10 15 <210> 162 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 65 <400> 162

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Ser Pro

- 125 032828 <210> 163 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 66 <400> 163

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Cys His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

5 10 15 <210> 164 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 67 <400> 164

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr Cys Cys Cys Pro Pro Cys Pro

5 10 15

<210>	165
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 68
<400>	165
Glu Pro Lys Ser Cys	Pro Pro Pro Pro Pro Cys	Pro Pro Cys Pro
1	5	10	15

<210>	166
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 69
<400>	166
Pro Pro Pro Pro Cys	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Cys Pro
1	5	10	15

<210> 167 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <223> Линкер 70 <220>

- 126 032828

Pro

<400> 167
Glu Pro Lys	Ser Cys Asp Lys	Thr His Thr Cys Trp Trp Cys
1	5	10

<210>	168
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер 71 <400> 168

Glu Pro Lys	Ser Cys Asp Trp Trp His Thr Cys Pro Pro Cys
1	5	10

Pro

<210>	169
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер 72 <400> 169

Glu Pro Lys Cys	Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
1	5	10

Pro

<210>	170
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер 73 <400> 170

Glu Pro Lys	Ser Asp Cys Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
1	5	10

Pro

<210>	171
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер 74 <400> 171

Glu Pro Lys Ser Asp Cys Trp Trp His Thr Cys Pro Pro Cys

5 10

Pro <210> 172 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

- 127 032828 <223> Линкер 75 <400> 172

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Phe Phe His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

5 10 15

<210>	173
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер 76 <400> 173

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Trp Trp Trp Thr Cys Pro Pro Cys Pro

5 10 15 <210> 174 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 77 <400> 174

Glu Pro Lys Ser Cys Trp Trp Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

5 10 15 <210> 175 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 78 <400> 175

Glu Pro Trp Trp Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

5 10 15

<210>	176
<211>	16
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 79
<400>	176
Ser Gln Pro Glu Ile	Val Pro Ile Ser Cys	Pro Pro Cys Pro Asn Ser
1	5	10	15

<210> 177 <211> 17 <212> PRT <213> Искусственная последовательность

- 128 032828 <220>

<223> Линкер 80 <400> 177

Thr Gly Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
1 Pro	5	10	15

<210>	178
<211>	17
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 81
<400>	178
Glu Pro Lys Ser Thr	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Cys Pro Asn
1	5	10	15
Ser

<210>	179
<211>	17
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 82
<400>	179
Glu Pro Lys Ser Thr	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Ser Pro Asn
1	5	10	15
Ser

<210>	180
<211>	17
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 83
<400>	180
Glu Pro Lys Ser Thr	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Cys Pro Asn
1	5	10	15
Ser

<210> 181 <211> 17 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 84

- 129 032828 <400> 181

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Asn
1 Ser	5	10	15

<210> 182 <211> 18 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 88 <400> 182

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Gly Gly Gly Pro
1 Cys Pro	5	10	15

<210> 183 <211> 18 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 89 <400> 183

Glu Pro Lys	Ser Cys	Asp Gly Gly Gly Lys	Thr His Thr Cys Pro Pro
1	5	10	15
Cys Pro

<210>	184
<211>	18
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 90
<400>	184
Glu Pro Lys Ser Cys	Asp Pro Pro Pro Lys	Thr His Thr Cys Pro Pro
1	5	10	15
Cys Pro

<210> 185 <211> 18 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 91 <400> 185

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Pro Pro Pro

- 130 032828

Cys Pro <210> 186 <211> 18 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 92 <400> 186

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1	5	10	15
Asn Ser

<210> 187 <211> 18 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 93 <400> 187

Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

1	5	10	15
Ser Ala

<210> 188 <211> 19 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 94 <400> 188

Asn Tyr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

1	5	10	15
Ser Asn Ser

<210>	189
<211>	19
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 95
<400>	189
Leu Ser Val Lys Ala	Asp Phe Leu Thr Pro	Ser Ile Ser Pro Pro Cys
1	5	10	15

Pro Asn Ser

- 131 032828 <210> 190 <211> 19 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 96 <400> 190

Ser Val	Leu Ala Asn Phe Ser Gln Pro Glu Ile Ser Cys	Pro Pro Cys
1			5	10	15
Pro	Asn	Ser

<210> 191 <211> 20 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 97 <400> 191

Gly Gln Arg His Asn Asn Ser Ser Leu Asn Thr Arg Thr Gln Lys Ala 1 5 10 15

Arg His Ser Pro

<210>	192
<211>	20
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер	98
<400>	192
Leu Ser Val	Leu	Ala	Asn Phe Ser Gln Pro
1			5	10
Cys Pro Asn	Ser
		20

Glu

Ile

Ser

Cys

Pro

Pro

<210>	193
<211>	20
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 99
<400>	193
Leu Lys Ile Gln Glu	Arg Val Ser Lys Pro Lys	Ile Ser Cys Pro Pro
1	5	10	15

Cys Pro Asn Ser <210> 194

- 132 032828 <211> 20 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 100 <400> 194

Arg Glu Gln Leu Ala Glu Val	Thr Leu Ser Leu Lys Ala Cys 10	Pro Pro 15
1	5
Cys	Pro	Asn	Ser 20

<210> 195 <211> 20 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 101

<400> 195
Arg Ile	His	Gln	Met	Asn Ser Glu Leu Ser Val	Leu Ala Cys Pro Pro
1			5	10	15
Cys Pro	Asn	Ser
		20

<210>	196
<211>	20
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер	102
<400>	196
Arg Ile His	Leu Asn	Val Ser Glu Arg Pro
1		5	10
Cys Pro Asn	Ser
		20

Phe

Pro

Pro

Cys

Pro

Pro

<210>	197
<211>	20
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 103
<400>	197
Asn Ser Leu Phe Asn	Gln Glu Val Gln Ile	Pro Leu Thr Glu Ser Tyr
1	5	10	15

Cys Pro Asn Ser <210> 198 <211> 20 <212> PRT <213> Искусственная последовательность

- 133 032828 <220>

<223> Линкер 104 <400> 198

Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Asp Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Glu

5 10 15

Asp Gly Asn Ser <210> 199 <211> 21 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 105 <400> 199

Leu Asp Val	Ser Glu Arg Pro	Phe Pro Pro His	Ile Gln Ser Cys Pro
1				5	10	15
Pro	Cys	Pro	Asn	Ser
			20

<210> 200 <211> 21 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 106 <400> 200

Asp	Thr	Lys	Gly	Lys Asn Val	Leu Glu Lys	Ile Phe Asp Ser Cys Pro
1				5	10	15
Pro	Cys	Pro	Asn	Ser
			20

<210> 201 <211> 21 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 108 <400> 201

Leu	Pro	Pro Glu Thr Gln Glu	Ser Gln Glu Val	Thr Leu Ser Cys Pro
1				5	10	15
Pro	Cys	Pro	Asn	Ser
			20

<210> 202 <211> 21 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 109

- 134 032828

<400> 202
Glu Pro	Ala	Phe	Thr	Pro Gly Pro Asn Ile	Glu Leu Gln Lys Asp Ser
1			5	10	15
Asp Cys	Pro	Asn	Ser
		20

<210> 203 <211> 21 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 110 <400> 203

Gln	Arg	His	Asn	Asn Ser	Ser Leu Asn Thr Arg	Thr Gln Lys Ala Arg
1				5	10	15
His	Cys	Pro	Asn	Ser
			20

<210> 204 <211> 21 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 111 <400> 204

Gln	Arg	His	Asn Asn Ser Ser Leu Asn Thr Arg	Thr Gln Lys Ala Arg
1				5	10	15
His	Ser	Pro	Asn	Ser
			20

<210> 205 <211> 36 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 113 <400> 205

Asn

Tyr

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

1

5

10

15

Ser

Asn

Tyr

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

20

25

30

Gly

Ser

Asn 35

Ser

<210> 206 <211> 122 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 114

- 135 032828 <400> 206

Arg

Thr

Arg

Tyr

Leu

Gln

Val

Ser

Gln

Gln

Leu

Gln

Gln

Thr

Asn

Arg

1

5

10

15

Val

Leu

Glu

Val

Thr

Asn

Ser

Ser

Leu

Arg

Gln

Gln

Leu

Arg

Leu

Lys

20

25

30

Ile

Thr

Gln

Leu

Gly

Gln

Ser

Ala

Glu

Asp

Leu

Gln

Gly

Ser

Arg

Arg

35

40

45

Glu

Leu

Ala

Gln

Ser

Gln

Glu

Ala

Leu

Gln

Val

Glu

Gln

Arg

Ala

His

50

55

60

Gln

Ala

Ala

Glu

Gly

Gln

Leu

Gln

Ala

Cys

Gln

Ala

Asp

Arg

Gln

Lys

65

70

75

80

Thr

Lys

Glu

Thr

Leu

Gln

Ser

Glu

Glu

Gln

Gln

Arg

Arg

Ala

Leu

Glu

85

90

95

Gln

Lys

Leu

Ser

Asn

Met

Glu

Asn

Arg

Leu

Lys

Pro

Phe

Phe

Thr

Cys

100

105

110

Gly

Ser

Ala

Asp

Thr

Cys

Cys

Pro

Asn

Ser

115

120

<210> 207 <211> 2 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 1 <400> 207

Asn Ser

<210>	208
<211>	6
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 2
<400>	208
Ser Cys Pro Pro Cys	Pro
1	5

<210>	209
<211>	8
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 3
<400>	209
Gly Gly Gly Gly Ser	Gly Asn Ser
1	5

<210> 210 <211> 8 <212> PRT <213> Искусственная последовательность

- 136 032828 <220>

<223> Линкер 4 <400> 210

Gly Cys Pro Pro Cys Pro Asn Ser

5 <210> 211 <211> 8 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 5 <400> 211

Gly Ser Pro Pro Ser Pro Asn Ser

5 <210> 212 <211> 111 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 115 <400> 212

Ser 1

Arg

Asp

Phe

Thr 5

Pro

Pro

Thr

Val

Lys 10

Ile

Leu

Gln

Ser

Ser 15

Ser

Asp

Gly

Gly

Gly

His

Phe

Pro

Pro

Thr

Ile

Gln

Leu

Leu

Cys

Leu

Val

20

25

30

Ser

Gly

Tyr

Thr

Pro

Gly

Thr

Ile

Asn

Ile

Thr

Trp

Leu

Glu

Asp

Gly

35

40

45

Gln

Val

Met

Asp

Val

Asp

Leu

Ser

Thr

Ala

Ser

Thr

Thr

Gln

Glu

Gly

50

55

60

Glu

Leu

Ala

Ser

Thr

Gln

Ser

Glu

Leu

Thr

Leu

Ser

Gln

Lys

His

Trp

65

70

75

80

Leu

Ser

Asp

Arg

Thr

Tyr

Thr

Cys

Gln

Val

Thr

Tyr

Gln

Gly

His

Thr

85

90

95

Phe

Glu

Asp

Ser

Thr

Lys

Lys

Ser

Ala

Cys

Pro

Pro

Cys

Ser

Gly

100

105

110

<210> 213 <211> 52 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 116 <400> 213

Gln 1

Glu

Lys

Glu Ala 5

Ile

Glu Arg

Leu

Lys 10

Ala Ala Gly

Ala

Pro 15

Glu

Ser

Leu

Val

Ile

Gln

Ala

Tyr

Phe

Ala

Ser

Glu

Lys

Asn

Glu

Asn

Leu

20

25

30

Ala

Ala

Asn

Phe

Leu

Leu

Ser

Gln

Asn

Phe

Asp

Asp

Glu

Cys

Pro

Pro

35

40

45

Cys

Pro

Ser

Gly

- 137 032828 <210> 214 <211> 39 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 117 <400> 214

Glu 1

Ser

Pro

Lys

Ala 5

Gln

Ala

Ser

Ser

Val 10

Pro

Thr

Ala Gln

Pro 15

Gln

Ala

Glu

Gly

Ser

Leu

Ala

Lys

Ala

Thr

Thr

Ala

Pro

Ala

Thr

Thr

Arg

20

25

30

Asn

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

35

<210>

<211>

<212>

<213>

215

PRT

Искусственная последовательность <220>

<223>

Линкер 118

215

Thr

Ser

Thr Pro Ser Pro Ser

Thr

Thr

Pro

Pro

Pro

Pro

Pro <400> Pro Ser

1 Pro Ser Cys	5	Pro	10	15
Pro Pro 20	Cys
<210>	216
<211>	20
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220> <223>	Линкер	119
<400>	216
Glu Pro Lys	Ser Ser	Asp	Lys Thr His	Thr Ser Pro	Pro Ser Pro
1		5			10	15
Pro Pro Cys	Pro
		20

Cys

<210>	217
<211>	20
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер	120
<400>	217
Glu Pro Lys	Ser Ser	Asp Thr Pro Pro Pro
1		5	10
Pro Pro Cys	Pro
		20

Ser

Pro

Arg

Ser

Pro

Cys

- 138 032828 <210> 218 <211> 10 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 122 <400> 218

Pro Pro Pro Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

5 10 <210> 219 <211> 363 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид Cris7-VH гибридомы мыши <400> 219 caggtccagc tgcagcagtc tggggctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggcta cacctttact agatctacga tgcactgggt aaaacagagg120 cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gcagtgctta tactaattac180 aatcagaaat tcaaggacaa ggccacattg actgcagaca aatcctccag tacagcctac240 atgcaactga gtagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagtccgcaa300 gtccactatg attacaacgg gtttccttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct360 gca363 <210> 220 <211> 121 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Аминокислота Cris7-VH гибридомы мыши <220>

<221> ACT_SITE <222> (31)...(35) <223> участок, определяющий комплементарность <220>

<221> ACT_SITE <222> (50)...(66) <223> участок, определяющий комплементарность <220>

<221> ACT_SITE <222> (100)...(110) <223> участок, определяющий комплементарность <400> 220

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

- 139 032828

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Ser

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ala

115

120

<210> 221 <211> 321 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид Cris7-VL гибридомы мыши <400> 221 caagttgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ttccagggga gaaggtcacc60 atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgaact ggtaccagca gaagtcaggc120 acctccccca aaagatggat ttatgactca tccaaactgg cttctggagt ccctgctcgc180 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttat tctctcacaa tcagcagcat ggagactgaa240 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtcgtaacc cacccacgtt cggagggggg300 accaagctac aaattacacg g321 <210> 222 <211> 107 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Аминокислота Cris7-VL гибридомы мыши <220>

<221> ACT_SITE <222> (24)...(33) <223> участок, определяющий комплементарность <220>

<221> ACT_SITE <222> (49)...(55) <223> участок, определяющий комплементарность <220>

<221> ACT_SITE <222> (88)...(96) <223> участок, определяющий комплементарность <400> 222

Gln 1

Val

Val

Leu

Thr 5

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile 10

Met

Ser

Ala

Phe

Pro 15

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

20

25

30

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

35

40

45

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

50

55

60

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Thr

Glu

65

70

75

80

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

85

90

95

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

- 140 032828

100

105 <210> 223 <211> 1545 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид химерного Cris7-(VH-VL) N297A <400> 223 aagcttccgc catggatttt caagtgcaga ttttcagctt cctgctaatc agtgcttcag60 tcataatgtc gcgaggacag gtccagctgc agcagtctgg ggctgaactg gcaagacctg120 gggcctcagt gaagatgtcc tgcaaggctt ctggctacac ctttactaga tctacgatgc180 actgggtaaa acagaggcct ggacagggtc tggaatggat tggatacatt aatcctagca240 gtgcttatac taattacaat cagaaattca aggacaaggc cacattgact gcagacaaat300 cctccagtac agcctacatg caactgagta gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt360 actgtgcaag tccgcaagtc cactatgatt acaacgggtt tccttactgg ggccaaggga420 ctctggtcac tgtctctgca ggtggcggag ggtctggggg tggcggatcc ggaggtggtg480 gctctgcaca acaagttgtt ctcacccagt ctccagcaat catgtctgca tttccagggg540 agaaggtcac catgacctgc agtgccagct caagtgtaag ttacatgaac tggtaccagc600 agaagtcagg cacctccccc aaaagatgga tttatgactc atccaaactg gcttctggag660 tccctgctcg cttcagtggc agtgggtctg ggacctctta ttctctcaca atcagcagca720 tggagactga agatgctgcc acttattact gccagcagtg gagtcgtaac ccacccacgt780 tcggaggggg gaccaagcta caaattacac ggcgaactga gcccaaatct tctgacaaaa840 ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg tggaccgtca gtcttcctct900 tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg960 tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg1020 aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta cgccagcacg taccgtgtgg1080 tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg1140 tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc1200 cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg1260 tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atccaagcga catcgccgtg gagtgggaga1320 gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct1380 ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagccg gtggcagcag gggaacgtct1440 tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc1500 tgtctccggg taaatgaaat gtacagcggc cgcctcgagt ctaga1545 <210> 224 <211> 501 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Химерный Cris7-(VH-VL) N297A (22 aa лидерная последовательность) <400> 224

Met 1

Asp

Phe

Gln

Val 5

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe 10

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala 15

Ser

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Ser

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

- 141 032828

115

120

125

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ala

Gly

130

135

140

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

145

150

155

160

Gln

Val

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Phe

Pro

Gly

165

170

175

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

180

185

190

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

195

200

205

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Thr

Glu

225

230

235

240

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

245

250

255

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

260

265

270

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

275

280

285

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

290

295

300

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

305

310

315

320

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

325

330

335

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

340

345

350

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

355

360

365

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

370

375

380

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

385

390

395

400

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

405

410

415

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

420

425

430

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

435

440

445

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

450

455

460

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

465

470

475

480

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

485

490

495

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

500

<210> 225 <211> 1534 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид химерного Cris7-(VH-VL) IgG2-AA-N297A <400> 225 aagcttccgc catggatttt caagtgcaga ttttcagctt cctgctaatc agtgcttcag60 tcataatgtc gcgaggacag gtccagctgc agcagtctgg ggctgaactg gcaagacctg120 gggcctcagt gaagatgtcc tgcaaggctt ctggctacac ctttactaga tctacgatgc180

- 142 032828 actgggtaaa gtgcttatac cctccagtac actgtgcaag ctctggtcac gctctgcaca agaaggtcac agaagtcagg tccctgctcg tggagactga tcggaggggg ctcacacatg ccccaaaacc tggacgtgag tgcataatgc gcgtcctcac ccaacaaagg gagaaccaca gcctgacctg atgggcagcc tcttcctcta catgctccgt ctccgggtaa acagaggcct taattacaat agcctacatg tccgcaagtc tgtctctgca acaagttgtt catgacctgc cacctccccc cttcagtggc agatgctgcc gaccaagcta cccaccgtgc caaggacacc ccacgaagac caagacaaag cgtcgtgcac cctcccagcc ggtgtacacc cctggtcaaa ggagaacaac cagcaagctc gatgcatgag atgagtgcca ggacagggtc cagaaattca caactgagta cactatgatt ggtggcggag ctcacccagt agtgccagct aaaagatgga agtgggtctg acttattact caaattacac ccagcacctg ctcatgatct cccgaggtcc ccacgggagg caggactggc cccatcgaga ctgcccccat ggcttctacc tacaagacca accgtggaca gctctgcaca cggctagctc tggaatggat aggacaaggc gcctgacatc acaacgggtt ggtctggggg ctccagcaat caagtgtaag tttatgactc ggacctctta gccagcagtg ggcgaactga aagccgcagc cccggacccc agttcaactg agcagttcgc tgaacggcaa aaaccatctc cccgggagga ccagcgacat cacctcccat agagcaggtg accactacac taga tggatacatt cacattgact tgaggactct tccttactgg tggcggatcc catgtctgca ttacatgaac atccaaactg ttctctcaca gagtcgtaac gcccaaatct tccgtcagtc tgaggtcacg gtacgtggac cagcacgttc ggagtacaag caaaaccaaa gatgaccaag cgccgtggag gctggactcc gcagcagggg acagaagagc aatcctagca gcagacaaat gcagtctatt ggccaaggga ggaggtggtg tttccagggg tggtaccagc gcttctggag atcagcagca ccacccacgt tctgacaaaa ttcctcttcc tgcgtggtgg ggcatggagg cgtgtggtca tgcaaggtct gggcagcccc aaccaggtca tgggagagca gacggctcct aacgtcttct ctctccctgt

240

300

360

420

480

540

600

660

720

780

840

900

960

1020

1080

1140

1200

1260

1320

1380

1440

1500

1534 <210> 226 <211> 500 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Химерный Cris7-(VH-VL) IgG2-AA-N297A (22 aa лидерная последовательность)

<400> 226

Met

Asp

Phe

Gln

Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Ser

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

115

120

125

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ala

Gly

130

135

140

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

145

150

155

160

Gln

Val

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Phe

Pro

Gly

165

170

175

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

180

185

190

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

195

200

205

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Thr

Glu

- 143 032828

225

230

235

240

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

245

250

255

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

260

265

270

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

275

280

285

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

290

295

300

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

305

310

315

320

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Met

Glu

325

330

335

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

340

345

350

Phe

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Val

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

355

360

365

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ala

Pro

370

375

380

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Thr

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

385

390

395

400

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

405

410

415

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

420

425

430

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

435

440

445

Pro

Met

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

450

455

460

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

465

470

475

480

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

485

490

495

Ser

Pro

Gly

Lys

500 <210> 227 <211> 1528 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид химерного Cris7-(VH-VL) IgG4-AA-N297A <400> 227 aagcttccgc catggatttt caagtgcaga ttttcagctt cctgctaatc agtgcttcag60 tcataatgtc gcgaggacag gtccagctgc agcagtctgg ggctgaactg gcaagacctg120 gggcctcagt gaagatgtcc tgcaaggctt ctggctacac ctttactaga tctacgatgc180 actgggtaaa acagaggcct ggacagggtc tggaatggat tggatacatt aatcctagca240 gtgcttatac taattacaat cagaaattca aggacaaggc cacattgact gcagacaaat300 cctccagtac agcctacatg caactgagta gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt360 actgtgcaag tccgcaagtc cactatgatt acaacgggtt tccttactgg ggccaaggga420 ctctggtcac tgtctctgca ggtggcggag ggtctggggg tggcggatcc ggaggtggtg480 gctctgcaca acaagttgtt ctcacccagt ctccagcaat catgtctgca tttccagggg540 agaaggtcac catgacctgc agtgccagct caagtgtaag ttacatgaac tggtaccagc600 agaagtcagg cacctccccc aaaagatgga tttatgactc atccaaactg gcttctggag660 tccctgctcg cttcagtggc agtgggtctg ggacctctta ttctctcaca atcagcagca720 tggagactga agatgctgcc acttattact gccagcagtg gagtcgtaac ccacccacgt780 tcggaggggg gaccaagcta caaattacac ggcgaactga gcccaaatct tctgacaaaa840 ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aagccgcagc tccgtcagtc ttcctcttcc900 ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg tgcgtggtgg960 tggacgtgag ccaggaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat ggcgtggagg1020

- 144 032828 tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagttcgc cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaggcta accgtggaca agagccggtg gcaggagggg aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac acagaagagc ctctccctgt ctccgggtaa atgagtgcta gctctaga <210> 228 <211> 500 <212> PRT <213> Искусственная последовательность

1080

1140

1200

1260

1320

1380

1440

1500

1528 <220>

<223> Химерный Cris7-(VH-VL) IgG4-AA-N297A (22 aa лидерная последовательность)

<400> 228

Met

Asp

Phe

Gln

Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Ser

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

115

120

125

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ala

Gly

130

135

140

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

145

150

155

160

Gln

Val

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Phe

Pro

Gly

165

170

175

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

180

185

190

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

195

200

205

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Thr

Glu

225

230

235

240

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

245

250

255

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

260

265

270

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

275

280

285

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

290

295

300

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

305

310

315

320

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

325

330

335

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

- 145 032828

340

345

350

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

355

360

365

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

370

375

380

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

385

390

395

400

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Gln

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

405

410

415

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

420

425

430

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

435

440

445

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

450

455

460

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

465

470

475

480

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

485

490

495

Ser Pro Gly Lys

500 <210> 229 <211> 1649 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид химерного Cris7-(VH-VL) HM1 <400> 229 aagcttccgc catggatttt caagtgcaga ttttcagctt cctgctaatc agtgcttcag60 tcataatgtc gcgaggacag gtccagctgc agcagtctgg ggctgaactg gcaagacctg120 gggcctcagt gaagatgtcc tgcaaggctt ctggctacac ctttactaga tctacgatgc180 actgggtaaa acagaggcct ggacagggtc tggaatggat tggatacatt aatcctagca240 gtgcttatac taattacaat cagaaattca aggacaaggc cacattgact gcagacaaat300 cctccagtac agcctacatg caactgagta gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt360 actgtgcaag tccgcaagtc cactatgatt acaacgggtt tccttactgg ggccaaggga420 ctctggtcac tgtctctgca ggtggcggag ggtctggggg tggcggatcc ggaggtggtg480 gctctgcaca acaagttgtt ctcacccagt ctccagcaat catgtctgca tttccagggg540 agaaggtcac catgacctgc agtgccagct caagtgtaag ttacatgaac tggtaccagc600 agaagtcagg cacctccccc aaaagatgga tttatgactc atccaaactg gcttctggag660 tccctgctcg cttcagtggc agtgggtctg ggacctctta ttctctcaca atcagcagca720 tggagactga agatgctgcc acttattact gccagcagtg gagtcgtaac ccacccacgt780 tcggaggggg gaccaagcta caaattacac ggcgaactga gcccaaatct tgtgacaaaa840 ctcacacatg cccaccgtgc ccagatcaag acacagccat ccgggtcttc gccatccccc900 catcctttgc cagcatcttc ctcaccaagt ccaccaagtt gacctgcctg gtcacagacc960 tgaccaccta tgacagcgtg accatctcct ggacccgcca gaatggcgaa gctgtgaaaa1020 cccacaccaa catctccgag agccacccca atgccacttt cagcgccgtg ggtgaggcca1080 gcatctgcga ggatgactgg aattccgggg agaggttcac gtgcaccgtg acccacacag1140 acctgccctc gccactgaag cagaccatct cccggcccaa ggggcagccc cgagaaccac1200 aggtgtacac cctgccccca tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct1260 gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc1320 cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct1380 acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg1440 tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tccccgggta1500 aaaccggtct gaacgacatc ttcgaggctc agaaaatcga atggcacgaa gattacaagg1560 atgacgacga taaggattac aaggatgacg acgataagga ttacaaggat gacgacgata1620 agcatcatca tcatcatcac tgatctaga1649 <210> 230 <211> 543

- 146 032828 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Химерный Cris7-(VH-VL) HM1 (22 aa лидерная последовательность) <400> 230

Met 1

Asp

Phe

Gln

Val 5

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe 10

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala 15

Ser

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Ser

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

115

120

125

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ala

Gly

130

135

140

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

145

150

155

160

Gln

Val

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Phe

Pro

Gly

165

170

175

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

180

185

190

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

195

200

205

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Thr

Glu

225

230

235

240

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

245

250

255

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

260

265

270

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Asp

Gln

Asp

Thr

275

280

285

Ala

Ile

Arg

Val

Phe

Ala

Ile

Pro

Pro

Ser

Phe

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

290

295

300

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

Leu

Thr

Thr

Tyr

305

310

315

320

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

Ser

Trp

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

Glu

Ala

Val

Lys

325

330

335

Thr

His

Thr

Asn

Ile

Ser

Glu

Ser

His

Pro

Asn

Ala

Thr

Phe

Ser

Ala

340

345

350

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

Ile

Cys

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

Ser

Gly

Glu

Arg

355

360

365

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

Thr

His

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

Pro

Leu

Lys

Gln

370

375

380

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

385

390

395

400

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

405

410

415

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

420

425

430

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

435

440

445

- 147 032828

Asp

Ser 450

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe 455

Leu

Tyr

Ser Lys

Leu 460

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

465

470

475

480

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

485

490

495

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

Ile

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

His

500

505

510

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

515

520

525

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

His

His

His

His

His

His

530

535

540

<210> 231 <211> 1524 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид OKT3-IgG4-WT-N297A <400> 231 aagcttgccg ccatggattt tcaagtgcag attttcagct tcctgctaat cagtgcttca60 gtcataatgt cgcgaggaca ggtccagctg cagcagtctg gggctgaact ggcaagacct120 ggggcctcag tgaagatgtc ctgcaaggct tctggctaca cctttactag gtacacgatg180 cactgggtaa aacagaggcc tggacagggt ctggaatgga ttggatacat taatcctagc240 cgtggttata ctaattacaa tcagaagttc aaggacaagg ccacattgac tacagacaaa300 tcctccagca cagcctacat gcaactgagc agcctgacat ctgaggactc tgcagtctat360 tactgtgcaa gatattatga tgatcattac tgccttgact actggggcca aggcaccacg420 gtcaccgtct caagcggtgg cggagggtct gggggtggcg gatccggagg tggtggctct480 gcacaacaaa ttgttctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatctcc aggggagaag540 gtcaccatga cctgcagtgc cagctcaagt gtaagttaca tgaactggta ccagcagaag600 tcaggcacct cccccaaaag atggatttat gacacatcca aactggcttc tggagtccct660 gctcacttca ggggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cggcatggag720 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtaacccatt cacgttcggc780 tcggggacaa agttggaaat aaaccgaact gagcccaaat cttctgacaa aactcacaca840 tgcccaccgt gcccagcacc tgaattcctg gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca900 aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac960 gtgagccagg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcat1020 aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag ttcgccagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc1080 ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac1140 aaaggcctcc cgtcctccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagag1200 ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccag gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg1260 acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg1320 cagccggaga acaactacaa gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc1380 ctctacagca ggctaaccgt ggacaagagc cggtggcagg aggggaatgt cttctcatgc1440 tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacacaga agagcctctc cctgtctccg1500 ggtaaatgag tgctagctct agag1524 <210> 232 <211> 498 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3-(VH-VL) IgG4-WT-N297A (22 aa лидерная последовательность) <400> 232

Met 1

Asp

Phe

Gln

Val 5

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe 10

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala 15

Ser

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

- 148 032828

Leu Ala Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val 40

Lys

Met

Ser

Cys

Lys 45

Ala

Ser

Gly

35

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

115

120

125

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

145

150

155

160

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

165

170

175

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

180

185

190

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

195

200

205

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

225

230

235

240

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

245

250

255

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

260

265

270

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Phe

Leu

Gly

Gly

275

280

285

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

290

295

300

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

305

310

315

320

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

325

330

335

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

340

345

350

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

355

360

365

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

370

375

380

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

385

390

395

400

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Gln

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

405

410

415

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

420

425

430

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

435

440

445

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

450

455

460

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

465

470

475

480

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

485

490

495

Gly

Lys

<210> 233

- 149 032828 <211> 1524 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид OKT3-(VH-VL) IgG4-ALGG-N297A <400> 233 aagcttgccg ccatggattt tcaagtgcag attttcagct tcctgctaat cagtgcttca60 gtcataatgt cgcgaggaca ggtccagctg cagcagtctg gggctgaact ggcaagacct120 ggggcctcag tgaagatgtc ctgcaaggct tctggctaca cctttactag gtacacgatg180 cactgggtaa aacagaggcc tggacagggt ctggaatgga ttggatacat taatcctagc240 cgtggttata ctaattacaa tcagaagttc aaggacaagg ccacattgac tacagacaaa300 tcctccagca cagcctacat gcaactgagc agcctgacat ctgaggactc tgcagtctat360 tactgtgcaa gatattatga tgatcattac tgccttgact actggggcca aggcaccacg420 gtcaccgtct caagcggtgg cggagggtct gggggtggcg gatccggagg tggtggctct480 gcacaacaaa ttgttctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatctcc aggggagaag540 gtcaccatga cctgcagtgc cagctcaagt gtaagttaca tgaactggta ccagcagaag600 tcaggcacct cccccaaaag atggatttat gacacatcca aactggcttc tggagtccct660 gctcacttca ggggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cggcatggag720 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtaacccatt cacgttcggc780 tcggggacaa agttggaaat aaaccgaact gagcccaaat cttctgacaa aactcacaca840 tgcccaccgt gcccagcacc tgaagccctg gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca900 aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac960 gtgagccagg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcat1020 aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag ttcgccagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc1080 ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac1140 aaaggcctcc cgtcctccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagag1200 ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccag gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg1260 acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg1320 cagccggaga acaactacaa gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc1380 ctctacagca ggctaaccgt ggacaagagc cggtggcagg aggggaatgt cttctcatgc1440 tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacacaga agagcctctc cctgtctccg1500 ggtaaatgag tgctagctct agag1524 <210> 234 <211> 498 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3-(VH-VL) IgG4-ALGG-N297A (22 aa лидерная последовательность) <400> 234

Met

Asp

Phe

Gln Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

115

120

125

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

- 150 032828

145

150

155

160

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

165

170

175

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

180

185

190

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

195

200

205

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

225

230

235

240

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

245

250

255

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

260

265

270

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Leu

Gly

Gly

275

280

285

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

290

295

300

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

305

310

315

320

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

325

330

335

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

340

345

350

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

355

360

365

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

370

375

380

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

385

390

395

400

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Gln

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

405

410

415

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

420

425

430

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

435

440

445

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

450

455

460

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

465

470

475

480

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

485

490

495

Gly

Lys

<210> 235 <211> 1524 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид OKT3-(VH-VL) IgG4-FAGG-N297A <400> 235 aagcttgccg ccatggattt tcaagtgcag attttcagct tcctgctaat cagtgcttca60 gtcataatgt cgcgaggaca ggtccagctg cagcagtctg gggctgaact ggcaagacct120 ggggcctcag tgaagatgtc ctgcaaggct tctggctaca cctttactag gtacacgatg180 cactgggtaa aacagaggcc tggacagggt ctggaatgga ttggatacat taatcctagc240 cgtggttata ctaattacaa tcagaagttc aaggacaagg ccacattgac tacagacaaa300 tcctccagca cagcctacat gcaactgagc agcctgacat ctgaggactc tgcagtctat360 tactgtgcaa gatattatga tgatcattac tgccttgact actggggcca aggcaccacg420 gtcaccgtct caagcggtgg cggagggtct gggggtggcg gatccggagg tggtggctct480

- 151 032828 gcacaacaaa gtcaccatga tcaggcacct gctcacttca gctgaagatg tcggggacaa tgcccaccgt aaacccaagg gtgagccagg aatgccaaga ctcaccgtcc aaaggcctcc ccacaggtgt acctgcctgg cagccggaga ctctacagca tccgtgatgc ggtaaatgag ttgttctcac cctgcagtgc cccccaaaag ggggcagtgg ctgccactta agttggaaat gcccagcacc acaccctcat aagaccccga caaagccgcg tgcaccagga cgtcctccat acaccctgcc tcaaaggctt acaactacaa ggctaaccgt atgaggctct tgctagctct ccagtctcca cagctcaagt atggatttat gtctgggacc ttactgccag aaaccgaact tgaattcgca gatctcccgg ggtccagttc ggaggagcag ctggctgaac cgagaaaacc cccatcccag ctaccccagc gaccacgcct ggacaagagc gcacaaccac agag gcaatcatgt gtaagttaca gacacatcca tcttactctc cagtggagta gagcccaaat gggggaccgt acccctgagg aactggtacg ttcgccagca ggcaaggagt atctccaaag gaggagatga gacatcgccg cccgtgctgg cggtggcagg tacacacaga ctgcatctcc tgaactggta aactggcttc tcacaatcag gtaacccatt cttctgacaa cagtcttcct tcacgtgcgt tggatggcgt cgtaccgtgt acaagtgcaa ccaaagggca ccaagaacca tggagtggga actccgacgg aggggaatgt agagcctctc aggggagaag ccagcagaag tggagtccct cggcatggag cacgttcggc aactcacaca cttcccccca ggtggtggac ggaggtgcat ggtcagcgtc ggtctccaac gccccgagag ggtcagcctg gagcaatggg ctccttcttc cttctcatgc cctgtctccg

540

600

660

720

780

840

900

960

1020

1080

1140

1200

1260

1320

1380

1440

1500

1524 <210> 236 <211> 498 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3-(VH-VL) IgG4-FAGG-N297A (22 aa лидерная последовательность) <400> 236

Met

Asp

Phe

Gln Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

115

120

125

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

145

150

155

160

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

165

170

175

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

180

185

190

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

195

200

205

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

225

230

235

240

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

245

250

255

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

260

265

270

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Phe

Ala

Gly

Gly

- 152 032828

275

280

285

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

290

295

300

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

305

310

315

320

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

325

330

335

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

340

345

350

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

355

360

365

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

370

375

380

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

385

390

395

400

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Gln

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

405

410

415

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

420

425

430

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

435

440

445

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

450

455

460

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

465

470

475

480

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

485

490

495

Gly Lys <210> 237 <211> 1524 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид OKT3-(VH-VL) IgG4-FLAG-N297A <400> 237 aagcttgccg ccatggattt tcaagtgcag attttcagct tcctgctaat cagtgcttca60 gtcataatgt cgcgaggaca ggtccagctg cagcagtctg gggctgaact ggcaagacct120 ggggcctcag tgaagatgtc ctgcaaggct tctggctaca cctttactag gtacacgatg180 cactgggtaa aacagaggcc tggacagggt ctggaatgga ttggatacat taatcctagc240 cgtggttata ctaattacaa tcagaagttc aaggacaagg ccacattgac tacagacaaa300 tcctccagca cagcctacat gcaactgagc agcctgacat ctgaggactc tgcagtctat360 tactgtgcaa gatattatga tgatcattac tgccttgact actggggcca aggcaccacg420 gtcaccgtct caagcggtgg cggagggtct gggggtggcg gatccggagg tggtggctct480 gcacaacaaa ttgttctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatctcc aggggagaag540 gtcaccatga cctgcagtgc cagctcaagt gtaagttaca tgaactggta ccagcagaag600 tcaggcacct cccccaaaag atggatttat gacacatcca aactggcttc tggagtccct660 gctcacttca ggggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cggcatggag720 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtaacccatt cacgttcggc780 tcggggacaa agttggaaat aaaccgaact gagcccaaat cttctgacaa aactcacaca840 tgcccaccgt gcccagcacc tgaattcctg gctggaccgt cagtcttcct cttcccccca900 aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac960 gtgagccagg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcat1020 aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag ttcgccagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc1080 ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac1140 aaaggcctcc cgtcctccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagag1200 ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccag gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg1260 acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg1320 cagccggaga acaactacaa gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc1380

- 153 032828 ctctacagca ggctaaccgt ggacaagagc cggtggcagg aggggaatgt cttctcatgc 1440 tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacacaga agagcctctc cctgtctccg 1500 ggtaaatgag tgctagctct agag 1524 <210> 238 <211> 498 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3-(VH-VL) IgG4-FLAG-N297A (22 aa лидерная последовательность) <400> 238

Met 1

Asp

Phe

Gln

Val 5

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe 10

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala 15

Ser

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

115

120

125

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

145

150

155

160

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

165

170

175

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

180

185

190

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

195

200

205

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

225

230

235

240

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

245

250

255

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

260

265

270

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Phe

Leu

Ala

Gly

275

280

285

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

290

295

300

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

305

310

315

320

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

325

330

335

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

340

345

350

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

355

360

365

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

370

375

380

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

385

390

395

400

- 154 032828

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser Gln 405

Glu Glu

Met

Thr 410

Lys

Asn

Gln

Val

Ser 415

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

420

425

430

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

435

440

445

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

450

455

460

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

465

470

475

480

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

485

490

495

Gly Lys <210> 239 <211> 1524 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид OKT3-(VH-VL) IgG4-FLGA-N297A <400> 239 aagcttgccg ccatggattt tcaagtgcag attttcagct tcctgctaat cagtgcttca60 gtcataatgt cgcgaggaca ggtccagctg cagcagtctg gggctgaact ggcaagacct120 ggggcctcag tgaagatgtc ctgcaaggct tctggctaca cctttactag gtacacgatg180 cactgggtaa aacagaggcc tggacagggt ctggaatgga ttggatacat taatcctagc240 cgtggttata ctaattacaa tcagaagttc aaggacaagg ccacattgac tacagacaaa300 tcctccagca cagcctacat gcaactgagc agcctgacat ctgaggactc tgcagtctat360 tactgtgcaa gatattatga tgatcattac tgccttgact actggggcca aggcaccacg420 gtcaccgtct caagcggtgg cggagggtct gggggtggcg gatccggagg tggtggctct480 gcacaacaaa ttgttctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatctcc aggggagaag540 gtcaccatga cctgcagtgc cagctcaagt gtaagttaca tgaactggta ccagcagaag600 tcaggcacct cccccaaaag atggatttat gacacatcca aactggcttc tggagtccct660 gctcacttca ggggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cggcatggag720 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtaacccatt cacgttcggc780 tcggggacaa agttggaaat aaaccgaact gagcccaaat cttctgacaa aactcacaca840 tgcccaccgt gcccagcacc tgaattcctg ggggctccgt cagtcttcct cttcccccca900 aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac960 gtgagccagg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcat1020 aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag ttcgccagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc1080 ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac1140 aaaggcctcc cgtcctccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagag1200 ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccag gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg1260 acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg1320 cagccggaga acaactacaa gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc1380 ctctacagca ggctaaccgt ggacaagagc cggtggcagg aggggaatgt cttctcatgc1440 tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacacaga agagcctctc cctgtctccg 1500 ggtaaatgag tgctagctct agag1524 <210> 240 <211> 498 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> OKT3-(VH-VL) IgG4-FLGA-N297A (22 aa лидерная последовательность) <400> 240

Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser

5 10 15

- 155 032828

Val

Ile Met

Ser 20

Arg Gly Gln Val

Gln Leu 25

Gln

Gln

Ser

Gly 30

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Arg

Gly

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Thr

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Tyr

Tyr

Asp

Asp

His

Tyr

Cys

Leu

115

120

125

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

145

150

155

160

Val

Leu

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

165

170

175

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

180

185

190

Tyr

Gln

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

195

200

205

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

His

Phe

Arg

Gly

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

225

230

235

240

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Phe

Thr

Phe

Gly

245

250

255

Ser

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Asn

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

260

265

270

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Phe

Leu

Gly

Ala

275

280

285

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

290

295

300

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

305

310

315

320

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

325

330

335

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

340

345

350

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

355

360

365

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

370

375

380

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

385

390

395

400

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Gln

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

405

410

415

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

420

425

430

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

435

440

445

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

450

455

460

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

465

470

475

480

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

485

490

495

Gly

Lys

- 156 032828 <210> 241 <211> 107 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7 VL.1 <220>

<221> ACT_SITE <222> (24)...(33) <223> участок, определяющий комплементарность <220>

<221> ACT_SITE <222> (49)...(55) <223> участок, определяющий комплементарность <220>

<221> ACT_SITE <222> (88)...(96) <223> участок, определяющий комплементарность <400> 241

Asp 1

Ile

Gln

Met

Thr 5

Gln

Ser

Pro

Ser

Ser 10

Leu

Ser

Ala

Ser

Val 15

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

20

25

30

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

35

40

45

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

50

55

60

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

65

70

75

80

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

85

90

95

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

100

105

<210> 242 <211> 107 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7 VL.2 <400> 242

Asp 1

Ile

Gln

Met

Thr 5

Gln

Ser

Pro

Ser

Ser 10

Leu

Ser

Ala

Ser

Val 15

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

20

25

30

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

35

40

45

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

50

55

60

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

65

70

75

80

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

85

90

95

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

- 157 032828

100 105 <210> 243 <211> 121 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7 VH.1 <220>

<221> ACT_SITE <222> (31)...(35) <223> участок, определяющий комплементарность <220>

<221> ACT_SITE <222> (50)...(66) <223> участок, определяющий комплементарность <220>

<221> ACT_SITE <222> (100)...(110) <223> участок, определяющий комплементарность <400> 243

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Val

Lys

Lys

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Val

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

115

120

<210> 244 <211> 121 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7 VH.2 <400> 244

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Asn

Thr

Ala

Tyr

- 158 032828

65

70

75

80

Met

Glu

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

115

120

<210> 245 <211> 121 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCRIS7 VH.3 <400> 245

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Ser

Thr

Ala

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asp

Ser

Leu

Arg

Pro

Glu

Asp

Thr

Gly

Val

Tyr

Phe

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Pro

Val

Thr

Val

Ser

Ser

115

120

<210> 246 <211> 1540 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид HuCRIS7 H1-L1 N297A <400> 246 aagcttgccg ccatggattt tcaagtgcag attttcagct tcctgctaat cagtgcttca60 gtcataatgt cgcgaggaca ggtccagctg gtgcagtctg gggctgaagt gaagaagcct120 ggggcctcag tgaaggtgtc ctgcaaggct tctggctaca cctttactag atctacgatg180 cactgggtaa aacaggcccc tggacagggt ctggaatgga ttggatacat taatcctagc240 agtgcttata ctaattacaa tcagaaattc aaggacaagg ccacattgac tgcagacaaa300 tcctccagta cagcctacat gcaactgagt agcctgaggt ctgaggacac cgcagtctat360 tactgtgcac ggccccaagt ccactatgat tacaacgggt ttccttactg gggccaaggg420 actctggtca ctgtctctag cggtggcgga gggtctgggg gtggcggatc cggaggtggt480 ggctctgcac aagacatcca gatgacccag tctccaagca gcctgtctgc aagcgtgggg540 gacagggtca ccatgacctg cagtgccagc tcaagtgtaa gttacatgaa ctggtaccag600 cagaagcccg gcaaggcccc caaaagatgg atttatgact catccaaact ggcttctgga660 gtccctgctc gcttcagtgg cagtgggtct gggaccgact ataccctcac aatcagcagc720 ctgcagcccg aagatttcgc cacttattac tgccagcagt ggagtcgtaa cccacccacg780 ttcggagggg ggaccaagct acaaattaca cgacgaactg agcccaaatc ttctgacaaa840 actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaactcctgg gtggaccgtc agtcttcctc900 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg960 gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg1020 gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acgccagcac gtaccgtgtg1080

- 159 032828 gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag1140 gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag1200 ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag1260 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatccaagcg acatcgccgt ggagtgggag1320 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc1380 tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagcc ggtggcagca ggggaacgtc1440 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc1500 ctgtctccgg gtaaatgaaa tgtacagcgg ccgcctcgag1540 <210> 247 <211> 501 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Аминокислота HuCRIS7 H1-L1 N297A (22 aa лидерная последовательность) <400> 247

Met 1

Asp

Phe

Gln

Val 5

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe 10

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala 15

Ser

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Val

Lys

Lys

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Val

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Ala

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

115

120

125

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

130

135

140

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

145

150

155

160

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

165

170

175

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

180

185

190

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

195

200

205

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

225

230

235

240

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

245

250

255

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

260

265

270

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

275

280

285

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

290

295

300

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

305

310

315

320

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

325

330

335

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

340

345

350

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

- 160 032828

355

360

365

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

370

375

380

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

385

390

395

400

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

405

410

415

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

420

425

430

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

435

440

445

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

450

455

460

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

465

470

475

480

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

485

490

495

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

500

<210> 248 <211> 1543 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид HuCRIS7 H1-L2 N297A <400> 248 aagcttgccg ccatggattt tcaagtgcag attttcagct tcctgctaat cagtgcttca60 gtcataatgt cgcgaggaca ggtccagctg gtgcagtctg gggctgaagt gaagaagcct120 ggggcctcag tgaaggtgtc ctgcaaggct tctggctaca cctttactag atctacgatg180 cactgggtaa aacaggcccc tggacagggt ctggaatgga ttggatacat taatcctagc240 agtgcttata ctaattacaa tcagaaattc aaggacaagg ccacattgac tgcagacaaa300 tcctccagta cagcctacat gcaactgagt agcctgaggt ctgaggacac cgcagtctat360 tactgtgcac ggccccaagt ccactatgat tacaacgggt ttccttactg gggccaaggg420 actctggtca ctgtctctag cggtggcgga gggtctgggg gtggcggatc cggaggtggt480 ggctctgcac aagacatcca gatgacccag tctccaagca gcctgtctgc aagcgtgggg540 gacagggtca ccatcacctg cagtgccagc tcaagtgtaa gttacatgaa ctggtaccag600 cagacccccg gcaaggcccc caaaagatgg atttatgact catccaaact ggcttctgga660 gtccctagcc gcttcagtgg cagtgggtct gggaccgact tcaccctcac aatcagcagc720 ctgcagcccg aagatatcgc cacttattac tgccagcagt ggagtcgtaa cccacccacg780 ttcggacagg ggaccaagct acaaattaca cgaactgagc ccaaatcttc tgacaaaact840 cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa ctcctgggtg gaccgtcagt cttcctcttc900 cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg960 gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag1020 gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtacg ccagcacgta ccgtgtggtc1080 agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc1140 tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc1200 cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc1260 agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat ccaagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc1320 aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc1380 ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagccggt ggcagcaggg gaacgtcttc1440 tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg1500 tctccgggta aatgaaatgt acagcggccg cctcgagtct aga1543 <210> 249 <211> 500 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

- 161 032828 <223> Аминокислота HuCRIS7 H1-L2 N297A (22 aa лидерная последовательность) <400> 249

Met 1

Asp

Phe

Gln

Val 5

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe 10

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala 15

Ser

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

20

25

30

Val

Lys

Lys

Pro

Gly

Ala

Ser

Val

Lys

Val

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Ala

Pro

Gly

50

55

60

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

115

120

125

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

130

135

140

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

145

150

155

160

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

165

170

175

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

180

185

190

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

195

200

205

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

225

230

235

240

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

245

250

255

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

260

265

270

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

275

280

285

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

290

295

300

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

305

310

315

320

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

325

330

335

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

340

345

350

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

355

360

365

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

370

375

380

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

385

390

395

400

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

405

410

415

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

420

425

430

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

435

440

445

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

450

455

460

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

465

470

475

480

- 162 032828

Met His Glu Ala Leu His Asn His	Tyr Thr Gln Lys 490	Ser Leu Ser Leu 495
	485
Ser	Pro	Gly	Lys
			500

<210> 250 <211> 1543 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид HuCRIS7 H2-L1 N297A <400> 250 aagcttgccg ccatggattt tcaagtgcag attttcagct tcctgctaat cagtgcttca60 gtcataatgt cgcgaggaca ggtccagctg gtgcagtctg ggggcggagt ggtgcagcct120 gggcggtcac tgaggctgtc ctgcaaggct tctggctaca cctttactag atctacgatg180 cactgggtaa ggcaggcccc tggaaagggt ctggaatgga ttggatacat taatcctagc240 agtgcttata ctaattacaa tcagaaattc aaggacaagg ccacattgac tgcagacaaa300 tccaagaaca cagcctacat ggagctgagt agcctgaggt ctgaggacac cgcagtctat360 tactgtgcac ggccccaagt ccactatgat tacaacgggt ttccttactg gggccaaggg420 actctggtca ctgtctctag cggtggcgga gggtctgggg gtggcggatc cggaggtggt480 ggctctgcac aagacatcca gatgacccag tctccaagca gcctgtctgc aagcgtgggg540 gacagggtca ccatgacctg cagtgccagc tcaagtgtaa gttacatgaa ctggtaccag600 cagaagcccg gcaaggcccc caaaagatgg atttatgact catccaaact ggcttctgga660 gtccctgctc gcttcagtgg cagtgggtct gggaccgact ataccctcac aatcagcagc720 ctgcagcccg aagatttcgc cacttattac tgccagcagt ggagtcgtaa cccacccacg780 ttcggagggg ggaccaagct acaaattaca cgaactgagc ccaaatcttc tgacaaaact840 cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa ctcctgggtg gaccgtcagt cttcctcttc900 cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg960 gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag1020 gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtacg ccagcacgta ccgtgtggtc1080 agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc1140 tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc1200 cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc1260 agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat ccaagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc1320 aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc1380 ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagccggt ggcagcaggg gaacgtcttc1440 tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg1500 tctccgggta aatgaaatgt acagcggccg cctcgagtct aga1543 <210> 251 <211> 500 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Аминокислота HuCRIS7 H2-L1 N297A (22 aa лидерная последовательность) <400> 251

Met

Asp

Phe

Gln

Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

20

25

30

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

50

55

60

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

85

90

95

- 163 032828

Ser

Lys

Asn

Thr 100

Ala

Tyr

Met

Glu

Leu 105

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser 110

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

115

120

125

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

130

135

140

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

145

150

155

160

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

165

170

175

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

180

185

190

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

195

200

205

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

225

230

235

240

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

245

250

255

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

260

265

270

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

275

280

285

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

290

295

300

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

305

310

315

320

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

325

330

335

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

340

345

350

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

355

360

365

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

370

375

380

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

385

390

395

400

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

405

410

415

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

420

425

430

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

435

440

445

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

450

455

460

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

465

470

475

480

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

485

490

495

Ser

Pro

Gly

Lys

500 <210> 252 <211> 1543 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид HuCRIS7 H2-L2 N297A <400> 252

- 164 032828 aagcttgccg ccatggattt tcaagtgcag attttcagct tcctgctaat cagtgcttca60 gtcataatgt cgcgaggaca ggtccagctg gtgcagtctg ggggcggagt ggtgcagcct120 gggcggtcac tgaggctgtc ctgcaaggct tctggctaca cctttactag atctacgatg180 cactgggtaa ggcaggcccc tggaaagggt ctggaatgga ttggatacat taatcctagc240 agtgcttata ctaattacaa tcagaaattc aaggacaagg ccacattgac tgcagacaaa300 tccaagaaca cagcctacat ggagctgagt agcctgaggt ctgaggacac cgcagtctat360 tactgtgcac ggccccaagt ccactatgat tacaacgggt ttccttactg gggccaaggg420 actctggtca ctgtctctag cggtggcgga gggtctgggg gtggcggatc cggaggtggt480 ggctctgcac aagacatcca gatgacccag tctccaagca gcctgtctgc aagcgtgggg540 gacagggtca ccatcacctg cagtgccagc tcaagtgtaa gttacatgaa ctggtaccag600 cagacccccg gcaaggcccc caaaagatgg atttatgact catccaaact ggcttctgga660 gtccctagcc gcttcagtgg cagtgggtct gggaccgact tcaccctcac aatcagcagc720 ctgcagcccg aagatatcgc cacttattac tgccagcagt ggagtcgtaa cccacccacg780 ttcggacagg ggaccaagct acaaattaca cgaactgagc ccaaatcttc tgacaaaact840 cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa ctcctgggtg gaccgtcagt cttcctcttc900 cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg960 gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag1020 gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtacg ccagcacgta ccgtgtggtc1080 agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc1140 tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc1200 cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc1260 agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat ccaagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc1320 aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc1380 ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagccggt ggcagcaggg gaacgtcttc1440 tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg1500 tctccgggta aatgaaatgt acagcggccg cctcgagtct aga1543 <210> 253 <211> 500 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Аминокислота HuCRIS7 H2-L2 N297A (22 aa лидерная последовательность) <400> 253

Met

Asp

Phe

Gln

Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

20

25

30

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

50

55

60

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Lys

Asn

Thr

Ala

Tyr

Met

Glu

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

100

105

110

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

115

120

125

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

130

135

140

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

145

150

155

160

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

165

170

175

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

180

185

190

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

195

200

205

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

- 165 032828

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

225

230

235

240

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

245

250

255

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

260

265

270

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

275

280

285

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

290

295

300

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

305

310

315

320

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

325

330

335

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

340

345

350

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

355

360

365

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

370

375

380

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

385

390

395

400

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

405

410

415

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

420

425

430

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

435

440

445

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

450

455

460

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

465

470

475

480

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

485

490

495

Ser Pro Gly Lys

500 <210> 254 <211> 1540 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид HuCRIS7 H3-L1 N297A <400> 254 aagcttgccg ccatggattt tcaagtgcag attttcagct tcctgctaat cagtgcttca60 gtcataatgt cgcgaggaca ggtccagctg gtgcagtctg ggggcggagt ggtgcagcct120 gggcggtcac tgaggctgtc ctgcaaggct tctggctaca cctttactag atctacgatg180 cactgggtaa ggcaggcccc tggaaagggt ctggaatgga ttggatacat taatcctagc240 agtgcttata ctaattacaa tcagaaattc aaggacaggt tcacaatcag cgcagacaaa300 tccaagagca cagccttcct gcagatggac agcctgaggc ccgaggacac cggcgtctat360 ttctgtgcac ggccccaagt ccactatgat tacaacgggt ttccttactg gggccaaggg420 actcccgtca ctgtctctag cggtggcgga gggtctgggg gtggcggatc cggaggtggt480 ggctctgcac aagacatcca gatgacccag tctccaagca gcctgtctgc aagcgtgggg540 gacagggtca ccatgacctg cagtgccagc tcaagtgtaa gttacatgaa ctggtaccag600 cagaagcccg gcaaggcccc caaaagatgg atttatgact catccaaact ggcttctgga660 gtccctgctc gcttcagtgg cagtgggtct gggaccgact ataccctcac aatcagcagc720 ctgcagcccg aagatttcgc cacttattac tgccagcagt ggagtcgtaa cccacccacg780 ttcggagggg ggaccaagct acaaattaca cgacgaactg agcccaaatc ttctgacaaa840 actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaactcctgg gtggaccgtc agtcttcctc900

- 166 032828 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg960 gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg1020 gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acgccagcac gtaccgtgtg1080 gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag1140 gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag1200 ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag1260 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatccaagcg acatcgccgt ggagtgggag1320 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc1380 tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagcc ggtggcagca ggggaacgtc1440 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc1500 ctgtctccgg gtaaatgaaa tgtacagcgg ccgcctcgag1540 <210> 255 <211> 501 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Аминокислота HuCRIS7 H3-L1 N297A (22 aa лидерная последовательность) <400> 255

Met

Asp

Phe

Gln Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

20

25

30

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

50

55

60

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Lys

Ser

Thr

Ala

Phe

Leu

Gln

Met

Asp

Ser

Leu

Arg

Pro

Glu

Asp

100

105

110

Thr

Gly

Val

Tyr

Phe

Cys

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

115

120

125

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Pro

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

130

135

140

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

145

150

155

160

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

165

170

175

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

180

185

190

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

195

200

205

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

225

230

235

240

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

245

250

255

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

260

265

270

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

275

280

285

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

290

295

300

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

305

310

315

320

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

325

330

335

- 167 032828

Glu Val

His

Asn 340

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro 345

Arg Glu

Glu

Gln

Tyr 350

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

355

360

365

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

370

375

380

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

385

390

395

400

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

405

410

415

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

420

425

430

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

435

440

445

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

450

455

460

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

465

470

475

480

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

485

490

495

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

500

<210> 256 <211> 1540 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотид HuCRIS7 H3-L2 N297A <400> 256 aagcttgccg ccatggattt tcaagtgcag attttcagct tcctgctaat cagtgcttca60 gtcataatgt cgcgaggaca ggtccagctg gtgcagtctg ggggcggagt ggtgcagcct120 gggcggtcac tgaggctgtc ctgcaaggct tctggctaca cctttactag atctacgatg180 cactgggtaa ggcaggcccc tggaaagggt ctggaatgga ttggatacat taatcctagc240 agtgcttata ctaattacaa tcagaaattc aaggacaggt tcacaatcag cgcagacaaa300 tccaagagca cagccttcct gcagatggac agcctgaggc ccgaggacac cggcgtctat360 ttctgtgcac ggccccaagt ccactatgat tacaacgggt ttccttactg gggccaaggg420 actcccgtca ctgtctctag cggtggcgga gggtctgggg gtggcggatc cggaggtggt480 ggctctgcac aagacatcca gatgacccag tctccaagca gcctgtctgc aagcgtgggg540 gacagggtca ccatcacctg cagtgccagc tcaagtgtaa gttacatgaa ctggtaccag600 cagacccccg gcaaggcccc caaaagatgg atttatgact catccaaact ggcttctgga660 gtccctagcc gcttcagtgg cagtgggtct gggaccgact tcaccctcac aatcagcagc720 ctgcagcccg aagatatcgc cacttattac tgccagcagt ggagtcgtaa cccacccacg780 ttcggacagg ggaccaagct acaaattaca cgacgaactg agcccaaatc ttctgacaaa840 actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaactcctgg gtggaccgtc agtcttcctc900 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg960 gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg1020 gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acgccagcac gtaccgtgtg1080 gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag1140 gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag1200 ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag1260 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatccaagcg acatcgccgt ggagtgggag1320 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc1380 tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagcc ggtggcagca ggggaacgtc1440 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc1500 ctgtctccgg gtaaatgaaa tgtacagcgg ccgcctcgag1540 <210> 257 <211> 501 <212> PRT

- 168 032828 <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Аминокислота HuCRIS7 H3-L2 N297A (22 aa лидерная последовательность) <400> 257

Met 1

Asp

Phe

Gln

Val 5

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe 10

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala 15

Ser

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

20

25

30

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

50

55

60

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

65

70

75

80

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Ala

Asp

Lys

85

90

95

Ser

Lys

Ser

Thr

Ala

Phe

Leu

Gln

Met

Asp

Ser

Leu

Arg

Pro

Glu

Asp

100

105

110

Thr

Gly

Val

Tyr

Phe

Cys

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

115

120

125

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Pro

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

130

135

140

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

145

150

155

160

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

165

170

175

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

180

185

190

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

195

200

205

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

210

215

220

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

225

230

235

240

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

245

250

255

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

260

265

270

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

275

280

285

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

290

295

300

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

305

310

315

320

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

325

330

335

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

340

345

350

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

355

360

365

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

370

375

380

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

385

390

395

400

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

405

410

415

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

420

425

430

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

435

440

445

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

- 169 032828

450

455

460

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

465

470

475

480

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

485

490

495

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

500 <210> 258 <211> 245 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Cris7-(VH-VL) <220>

<221> SITE <222> (122)...(138) <223> Линкер <400> 258

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Ser

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ala

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Val

Val

Leu

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Phe

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

195

200

205

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Thr

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

<210> 259 <211> 245 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

245

- 170 032828 <223> HuCris7-(VH1-VL1) <220>

<221> SITE <222> (122)...(138) <223> Линкер <400> 259

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Val

Lys

Lys

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Val

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Ala

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

245

<210> 260 <211> 245 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH1-VL2) <220>

<221> SITE <222> (122)...(138) <223> Линкер <400> 260

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Val

Lys

Lys

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Val

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Ala

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

- 171 032828

55 60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

245

<210> 261 <211> 245 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH2-VL1) <220>

<221> SITE <222> (122)...(138) <223> Линкер <400> 261

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Asn

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Glu

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

- 172 032828

Pro

Gly

Lys

Ala 180

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile 185

Tyr Asp

Ser

Ser

Lys 190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

245 <210> 262 <211> 245 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH2-VL2) <220>

<221> SITE <222> (122)...(138) <223> Линкер <400> 262

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Asn

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Glu

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

245

<210> 263 <211> 245 <212> PRT

- 173 032828 <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH3-VL1) <220>

<221> SITE <222> (122)...(138) <223> Линкер <400> 263

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Ser

Thr

Ala

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asp

Ser

Leu

Arg

Pro

Glu

Asp

Thr

Gly

Val

Tyr

Phe

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Pro

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

245 <210> 264 <211> 245 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH3-VL2) <220>

<221> SITE <222> (122)...(138) <223> Линкер <400> 264

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

- 174 032828

Thr

Met

His 35

Trp

Val

Arg

Gln Ala 40

Pro

Gly Lys

Gly

Leu 45

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Ser

Thr

Ala

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asp

Ser

Leu

Arg

Pro

Glu

Asp

Thr

Gly

Val

Tyr

Phe

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Pro

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

245

<210> 265 <211> 479 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Химерный Cris7 IgG1-N297A (лидерная последовательность отсутствует) <400> 265

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Ser

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ala

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Val

Val

Leu

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Phe

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

- 175 032828

Ser

Gly

Val 195

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser 200

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly 205

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Thr

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

245

250

255

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

260

265

270

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

275

280

285

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

290

295

300

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

305

310

315

320

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

325

330

335

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

340

345

350

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

355

360

365

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

370

375

380

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

385

390

395

400

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

405

410

415

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

420

425

430

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

435

440

445

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

450

455

460

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 266 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Химерный Cris7-(VH-VL) IgG1-AA-N297A (лидерная последовательность отсутствует)

<400> 266

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Ser

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ala

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

- 176 032828

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Val

Val

Leu

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Phe

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

195

200

205

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Thr

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 267 <211> 478 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Химерный Cris7-(VH-VL) IgG2-AA-N297A (лидерная последовательность отсутствует) <400> 267

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

- 177 032828

Gly Tyr

Ile Asn

Pro

Ser

Ser Ala 55

Tyr

Thr

Asn

Tyr 60

Asn

Gln

Lys

Phe

50

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Ser

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ala

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Val

Val

Leu

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Phe

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

195

200

205

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Thr

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

245

250

255

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

260

265

270

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

275

280

285

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

290

295

300

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Met

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

305

310

315

320

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Phe

Arg

Val

Val

Ser

Val

325

330

335

Leu

Thr

Val

Val

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

340

345

350

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

355

360

365

Lys

Thr

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

370

375

380

Ser

Arg

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

385

390

395

400

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

405

410

415

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Met

Leu

Asp

Ser

Asp

420

425

430

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

435

440

445

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

450

455

460

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 268 <211> 478 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Химерный Cris7-(VH-VL) IgG4-AA-N297A (лидерная последовательность

- 178 032828 отсутствует) <400> 268

Gln Val 1

Gln

Leu Gln 5

Gln

Ser Gly

Ala

Glu 10

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly 15

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Ser

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ala

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Val

Val

Leu

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Phe

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

195

200

205

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Thr

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

245

250

255

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

260

265

270

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

275

280

285

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

290

295

300

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

305

310

315

320

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

325

330

335

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

340

345

350

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

355

360

365

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

370

375

380

Ser

Gln

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

385

390

395

400

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

405

410

415

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

420

425

430

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

435

440

445

Gln

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

450

455

460

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

- 179 032828 <210> 269 <211> 521 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Химерный Cris7-(VH-VL) HM1 (лидерная последовательность отсутствует) <400> 269

Gln Val 1

Gln

Leu Gln Gln 5

Ser

Gly

Ala

Glu 10

Leu Ala

Arg

Pro

Gly 15

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Ser

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ala

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Val

Val

Leu

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Phe

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

195

200

205

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Thr

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

245

250

255

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Asp

Gln

Asp

Thr

Ala

Ile

Arg

Val

Phe

Ala

260

265

270

Ile

Pro

Pro

Ser

Phe

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

Leu

275

280

285

Thr

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

Leu

Thr

Thr

Tyr

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

Ser

290

295

300

Trp

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

Glu

Ala

Val

Lys

Thr

His

Thr

Asn

Ile

Ser

305

310

315

320

Glu

Ser

His

Pro

Asn

Ala

Thr

Phe

Ser

Ala

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

Ile

325

330

335

Cys

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

Ser

Gly

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

Thr

340

345

350

His

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

Pro

Leu

Lys

Gln

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

Lys

355

360

365

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

370

375

380

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

385

390

395

400

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

405

410

415

- 180 032828

Asn

Asn

Tyr

Lys 420

Thr Thr

Pro

Pro Val 425

Leu Asp

Ser

Asp

Gly 430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

435

440

445

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

450

455

460

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

465

470

475

480

Ile

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

485

490

495

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

500

505

510

Asp

Asp

Lys

His

His

His

His

His

His

515 520 <210> 270 <211> 478 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH1-VL1) IgG1-N297A (лидерная последовательность отсутствует) <400> 270

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Val

Lys

Lys

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Val

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Ala

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

260

265

270

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

275

280

285

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

- 181 032828

290

295

300

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

305

310

315

320

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

325

330

335

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

340

345

350

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

355

360

365

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

370

375

380

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

385

390

395

400

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

405

410

415

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

420

425

430

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

435

440

445

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

450

455

460

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 271 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH1-VL1) IgG1-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 271 отсутст-

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Val

Lys

Lys

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Val

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Ala

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

- 182 032828

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 272 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH1-VL1) IgG2-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 272 отсутст-

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Val

Lys

Lys

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Val

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Ala

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

- 183 032828

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Met

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Phe

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Val

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Thr

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Arg

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Met

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 273 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH1-VL1) IgG4-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 273 отсутст-

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Val

Lys

Lys

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Val

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Ala

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

- 184 032828

Met

Gln

Leu

Ser

Ser 85

Leu Arg

Ser

Glu Asp 90

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr 95

Cys

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Gln

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 274 <211> 520 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH1-VL1) HM1 (лидерная последовательность отсутствует) <400> 274

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

5 10 15

- 185 032828

Ser Val

Lys

Val 20

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser 25

Gly

Tyr Thr

Phe

Thr 30

Arg

Ser

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Ala

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Asp

Gln

Asp

Thr

Ala

Ile

Arg

Val

Phe

Ala

Ile

260

265

270

Pro

Pro

Ser

Phe

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

Leu

Thr

275

280

285

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

Leu

Thr

Thr

Tyr

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

Ser

Trp

290

295

300

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

Glu

Ala

Val

Lys

Thr

His

Thr

Asn

Ile

Ser

Glu

305

310

315

320

Ser

His

Pro

Asn

Ala

Thr

Phe

Ser

Ala

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

Ile

Cys

325

330

335

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

Ser

Gly

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

Thr

His

340

345

350

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

Pro

Leu

Lys

Gln

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

Lys

Gly

355

360

365

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

370

375

380

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

385

390

395

400

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

405

410

415

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

420

425

430

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

435

440

445

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

450

455

460

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

Ile

465

470

475

480

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

485

490

495

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

500

505

510

Asp

Lys

His

His

His

His

His

His

- 186 032828

515 520 <210> 275 <211> 478 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH1-VL2) IgG1-N297A (лидерная последовательность отсутствует) <400> 275

Gln Val 1

Gln

Leu Val 5

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu Val 10

Lys

Lys

Pro

Gly 15

Ala

Ser

Val

Lys

Val

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Ala

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

260

265

270

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

275

280

285

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

290

295

300

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

305

310

315

320

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

325

330

335

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

340

345

350

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

355

360

365

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

370

375

380

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

385

390

395

400

- 187 032828

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro 405

Ser

Asp

Ile

Ala

Val 410

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn 415

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

420

425

430

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

435

440

445

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

450

455

460

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 276 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH1-VL2) IgG1-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 276 отсутст-

Gln 1

Val

Gln

Leu

Val 5

Gln

Ser

Gly Ala

Glu 10

Val

Lys

Lys

Pro

Gly 15

Ala

Ser

Val

Lys

Val

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Ala

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

- 188 032828

325

330

335

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 277 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH1-VL2) IgG2-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 277 отсутст-

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Val

Lys

Lys

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Val

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Ala

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

- 189 032828

Cys

Pro

Pro

Cys 260

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala 265

Ala

Ala

Pro

Ser

Val 270

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Met

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Phe

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Val

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Thr

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Arg

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Met

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 278 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH1-VL2) IgG4-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 278 отсутст-

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Val

Lys

Lys

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Val

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Ala

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

- 190 032828

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Gln

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 279 <211> 520 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH1-VL2) HM1 (лидерная последовательность отсутствует) <400> 279

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Ala

Glu

Val

Lys

Lys

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Val

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Lys

Gln

Ala

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

- 191 032828

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Asp

Gln

Asp

Thr

Ala

Ile

Arg

Val

Phe

Ala

Ile

260

265

270

Pro

Pro

Ser

Phe

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

Leu

Thr

275

280

285

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

Leu

Thr

Thr

Tyr

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

Ser

Trp

290

295

300

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

Glu

Ala

Val

Lys

Thr

His

Thr

Asn

Ile

Ser

Glu

305

310

315

320

Ser

His

Pro

Asn

Ala

Thr

Phe

Ser

Ala

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

Ile

Cys

325

330

335

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

Ser

Gly

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

Thr

His

340

345

350

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

Pro

Leu

Lys

Gln

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

Lys

Gly

355

360

365

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

370

375

380

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

385

390

395

400

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

405

410

415

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

420

425

430

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

435

440

445

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

450

455

460

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

Ile

465

470

475

480

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

485

490

495

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

500

505

510

Asp

Lys

His

His

His

His

His

His

515

520

<210> 280 <211> 478 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH2-VL1) IgG1-N297A (лидерная последовательность отсутствует) <400> 280

- 192 032828

Gln

Val

Gln Leu Val

Gln

Ser

Gly Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Asn

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Glu

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

260

265

270

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

275

280

285

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

290

295

300

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

305

310

315

320

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

325

330

335

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

340

345

350

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

355

360

365

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

370

375

380

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

385

390

395

400

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

405

410

415

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

420

425

430

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

435

440

445

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

450

455

460

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 281

- 193 032828 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH2-VL1) IgG1-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 281 отсутст-

Gln Val

Gln

Leu Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Asn

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Glu

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

- 194 032828

Ser

Phe

Phe 435

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu 440

Thr

Val

Asp

Lys

Ser 445

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 282 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH2-VL1) IgG2-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 282 отсутст-

Gln Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser Gly Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Asn

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Glu

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Met

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Phe

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Val

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

- 195 032828

355

360

365

Thr

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Arg

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Met

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 283 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH2-VL1) IgG4-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 283 отсутст-

Gln Val

Gln

Leu

Val

Gln Ser Gly

Gly

Gly Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Asn

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Glu

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

- 196 032828

Val

Thr 290

Cys

Val

Val

Val

Asp 295

Val

Ser

Gln Glu

Asp 300

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Gln

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 284 <211> 520 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH2-VL1) HM1 (лидерная последовательность отсутствует) <400> 284

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Asn

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Glu

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

- 197 032828

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Asp

Gln

Asp

Thr

Ala

Ile

Arg

Val

Phe

Ala

Ile

260

265

270

Pro

Pro

Ser

Phe

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

Leu

Thr

275

280

285

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

Leu

Thr

Thr

Tyr

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

Ser

Trp

290

295

300

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

Glu

Ala

Val

Lys

Thr

His

Thr

Asn

Ile

Ser

Glu

305

310

315

320

Ser

His

Pro

Asn

Ala

Thr

Phe

Ser

Ala

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

Ile

Cys

325

330

335

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

Ser

Gly

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

Thr

His

340

345

350

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

Pro

Leu

Lys

Gln

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

Lys

Gly

355

360

365

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

370

375

380

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

385

390

395

400

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

405

410

415

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

420

425

430

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

435

440

445

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

450

455

460

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

Ile

465

470

475

480

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

485

490

495

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

500

505

510

Asp

Lys

His

His

His

His

His

His

515

520

<210> 285 <211> 478 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH2-VL2) IgG1-N297A (лидерная последовательность отсутствует) <400> 285

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Asn

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Glu

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

- 198 032828

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

260

265

270

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

275

280

285

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

290

295

300

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

305

310

315

320

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

325

330

335

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

340

345

350

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

355

360

365

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

370

375

380

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

385

390

395

400

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

405

410

415

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

420

425

430

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

435

440

445

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

450

455

460

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465 470 475 <210> 286 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH2-VL2) IgG1-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 286 отсутст-

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly Val

Val

Gln

Pro

Gly Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg Ser

20

25

30

- 199 032828

Thr

Met

His 35

Trp

Val

Arg

Gln

Ala 40

Pro

Gly Lys

Gly

Leu 45

Glu

Trp

Ile

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Asn

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Glu

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 287 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность

- 200 032828 <220>

<223> HuCris7-(VH2-VL2) IgG2-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 287 отсутст-

Gln

Val

Gln

Leu Val

Gln

Ser

Gly Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Asn

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Glu

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Met

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Phe

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Val

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Thr

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Arg

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Met

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

- 201 032828

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

465 470 475 <210> 288 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH2-VL2) IgG4-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 288 отсутст-

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser Gly Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Asn

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Glu

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Gln

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

- 202 032828

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 289 <211> 520 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH2-VL2) HM1 (лидерная последовательность отсутствует) <400> 289

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Ala

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Asn

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Glu

Leu

Ser

Ser

Leu

Arg

Ser

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Asp

Gln

Asp

Thr

Ala

Ile

Arg

Val

Phe

Ala

Ile

260

265

270

Pro

Pro

Ser

Phe

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

Leu

Thr

275

280

285

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

Leu

Thr

Thr

Tyr

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

Ser

Trp

290

295

300

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

Glu

Ala

Val

Lys

Thr

His

Thr

Asn

Ile

Ser

Glu

305

310

315

320

Ser

His

Pro

Asn

Ala

Thr

Phe

Ser

Ala

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

Ile

Cys

- 203 032828

325

330

335

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

Ser

Gly

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

Thr

His

340

345

350

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

Pro

Leu

Lys

Gln

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

Lys

Gly

355

360

365

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

370

375

380

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

385

390

395

400

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

405

410

415

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

420

425

430

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

435

440

445

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

450

455

460

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

Ile

465

470

475

480

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

485

490

495

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

500

505

510

Asp

Lys

His

His

His

His

His

His

515

520

<210> 290 <211> 478 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH3-VL1) IgG1-N297A (лидерная последовательность отсутствует) <400> 290

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Ser

Thr

Ala

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asp

Ser

Leu

Arg

Pro

Glu

Asp

Thr

Gly

Val

Tyr

Phe

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Pro

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

- 204 032828

Thr

Leu 210

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu 215

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe 220

Ala

Thr

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

260

265

270

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

275

280

285

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

290

295

300

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

305

310

315

320

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

325

330

335

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

340

345

350

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

355

360

365

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

370

375

380

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

385

390

395

400

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

405

410

415

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

420

425

430

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

435

440

445

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

450

455

460

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 291 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH3-VL1) IgG1-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 291 отсутст-

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Ser

Thr

Ala

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asp

Ser

Leu

Arg

Pro

Glu

Asp

Thr

Gly

Val

Tyr

Phe

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Pro

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

- 205 032828

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 292 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH3-VL1) IgG2-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 292 отсутст-

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

- 206 032828

Lys

Asp

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Ser

Thr

Ala

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asp

Ser

Leu

Arg

Pro

Glu

Asp

Thr

Gly

Val

Tyr

Phe

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Pro

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Met

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Phe

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Val

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Thr

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Arg

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Met

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 293 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH3-VL1) IgG4-AA-N297A (лидерная последовательность вует) отсутст- 207 032828 <400> 293

Gln

Val

Gln Leu Val

Gln

Ser

Gly Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Ser

Thr

Ala

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asp

Ser

Leu

Arg

Pro

Glu

Asp

Thr

Gly

Val

Tyr

Phe

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Pro

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Gln

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

- 208 032828 <210> 294 <211> 520 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH3-VL1) HM1 (лидерная последовательность отсутствует) <400> 294

Gln Val

Gln

Leu Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Ser

Thr

Ala

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asp

Ser

Leu

Arg

Pro

Glu

Asp

Thr

Gly

Val

Tyr

Phe

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Pro

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Met

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Lys

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Tyr

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gly

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Asp

Gln

Asp

Thr

Ala

Ile

Arg

Val

Phe

Ala

Ile

260

265

270

Pro

Pro

Ser

Phe

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

Leu

Thr

275

280

285

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

Leu

Thr

Thr

Tyr

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

Ser

Trp

290

295

300

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

Glu

Ala

Val

Lys

Thr

His

Thr

Asn

Ile

Ser

Glu

305

310

315

320

Ser

His

Pro

Asn

Ala

Thr

Phe

Ser

Ala

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

Ile

Cys

325

330

335

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

Ser

Gly

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

Thr

His

340

345

350

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

Pro

Leu

Lys

Gln

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

Lys

Gly

355

360

365

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

370

375

380

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

385

390

395

400

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

405

410

415

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

420

425

430

- 209 032828

Leu Tyr

Ser 435

Lys

Leu

Thr Val

Asp 440

Lys

Ser Arg

Trp Gln 445

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

450

455

460

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

Ile

465

470

475

480

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

485

490

495

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

500

505

510

Asp

Lys

His

His

His

His

His

His

515 520 <210> 295 <211> 478 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH3-VL2) IgG1-N297A (лидерная последовательность отсутствует) <400> 295

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Ser

Thr

Ala

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asp

Ser

Leu

Arg

Pro

Glu

Asp

Thr

Gly

Val

Tyr

Phe

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Pro

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

260

265

270

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

275

280

285

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

290

295

300

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

305

310

315

320

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

- 210 032828

325

330

335

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

340

345

350

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

355

360

365

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

370

375

380

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

385

390

395

400

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

405

410

415

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

420

425

430

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

435

440

445

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

450

455

460

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 296 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH3-VL2) IgG1-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 296 отсутст-

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Ser

Thr

Ala

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asp

Ser

Leu

Arg

Pro

Glu

Asp

Thr

Gly

Val

Tyr

Phe

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Pro

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

- 211 032828

Cys

Pro

Pro

Cys 260

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala 265

Ala

Ala

Pro

Ser

Val 270

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 297 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH3-VL2) IgG2-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 297 отсутст-

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Ser

Thr

Ala

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asp

Ser

Leu

Arg

Pro

Glu

Asp

Thr

Gly

Val

Tyr

Phe

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Pro

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

- 212 032828

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Met

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Phe

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Val

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Thr

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Arg

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Met

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 298 <211> 477 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH3-VL2) IgG4-AA-N297A (лидерная последовательность вует) <400> 298 отсутст-

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Ala

Tyr

Thr

Asn

Tyr

Asn

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Ser

Thr

Ala

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asp

Ser

Leu

Arg

Pro

Glu

Asp

Thr

Gly

Val

Tyr

Phe

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

- 213 032828

Gln

Gly

Thr 115

Pro Val

Thr

Val

Ser 120

Ser Gly

Gly

Gly

Gly 125

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Ala

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

260

265

270

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

275

280

285

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

290

295

300

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

305

310

315

320

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Phe

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

325

330

335

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

340

345

350

Val

Ser

Asn

Lys

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

355

360

365

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

370

375

380

Gln

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

385

390

395

400

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

405

410

415

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

420

425

430

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Arg

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

435

440

445

Glu

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

450

455

460

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 299 <211> 520 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HuCris7-(VH3-VL2) HM1 (лидерная последовательность отсутствует) <400> 299

Gln

Val

Gln

Leu

Val

Gln

Ser

Gly

Gly

Gly

Val

Val

Gln

Pro

Gly

Arg

1

5

10

15

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Ser

20

25

30

Thr

Met

His

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

- 214 032828

Gly

Tyr 50

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser Ala 55

Tyr

Thr

Asn

Tyr 60

Asn Gln

Lys

Phe

Lys

Asp

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Ala

Asp

Lys

Ser

Lys

Ser

Thr

Ala

Phe

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asp

Ser

Leu

Arg

Pro

Glu

Asp

Thr

Gly

Val

Tyr

Phe

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Pro

Gln

Val

His

Tyr

Asp

Tyr

Asn

Gly

Phe

Pro

Tyr

Trp

Gly

100

105

110

Gln

Gly

Thr

Pro

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

115

120

125

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Asp

Ile

Gln

Met

Thr

Gln

130

135

140

Ser

Pro

Ser

Ser

Leu

Ser

Ala

Ser

Val

Gly

Asp

Arg

Val

Thr

Ile

Thr

145

150

155

160

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

Asn

Trp

Tyr

Gln

Gln

Thr

165

170

175

Pro

Gly

Lys

Ala

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Ser

Ser

Lys

Leu

Ala

180

185

190

Ser

Gly

Val

Pro

Ser

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

195

200

205

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Leu

Gln

Pro

Glu

Asp

Ile

Ala

Thr

Tyr

Tyr

210

215

220

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Arg

Asn

Pro

Pro

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

225

230

235

240

Leu

Gln

Ile

Thr

Arg

Thr

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

Thr

245

250

255

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Asp

Gln

Asp

Thr

Ala

Ile

Arg

Val

Phe

Ala

Ile

260

265

270

Pro

Pro

Ser

Phe

Ala

Ser

Ile

Phe

Leu

Thr

Lys

Ser

Thr

Lys

Leu

Thr

275

280

285

Cys

Leu

Val

Thr

Asp

Leu

Thr

Thr

Tyr

Asp

Ser

Val

Thr

Ile

Ser

Trp

290

295

300

Thr

Arg

Gln

Asn

Gly

Glu

Ala

Val

Lys

Thr

His

Thr

Asn

Ile

Ser

Glu

305

310

315

320

Ser

His

Pro

Asn

Ala

Thr

Phe

Ser

Ala

Val

Gly

Glu

Ala

Ser

Ile

Cys

325

330

335

Glu

Asp

Asp

Trp

Asn

Ser

Gly

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

Thr

Val

Thr

His

340

345

350

Thr

Asp

Leu

Pro

Ser

Pro

Leu

Lys

Gln

Thr

Ile

Ser

Arg

Pro

Lys

Gly

355

360

365

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

370

375

380

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

385

390

395

400

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

405

410

415

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

420

425

430

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

435

440

445

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

450

455

460

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

Ile

465

470

475

480

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

485

490

495

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

500

505

510

Asp

Lys

His

His

His

His

His

His

515

520

<210> 300

- 215 032828 <211> 16 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 121 <400> 300

Thr Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

5 10 15 <210> 301 <211> 110 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 123 <400> 301

Ser 1

Arg

Asp

Phe

Thr 5

Pro

Pro

Thr

Val

Lys 10

Ile

Leu

Gln

Ser

Ser 15

Ser

Asp

Gly

Gly

Gly

His

Phe

Pro

Pro

Thr

Ile

Gln

Leu

Leu

Cys

Leu

Val

20

25

30

Ser

Gly

Tyr

Thr

Pro

Gly

Thr

Ile

Asn

Ile

Thr

Trp

Leu

Glu

Asp

Gly

35

40

45

Gln

Val

Met

Asp

Val

Asp

Leu

Ser

Thr

Ala

Ser

Thr

Thr

Gln

Glu

Gly

50

55

60

Glu

Leu

Ala

Ser

Thr

Gln

Ser

Glu

Leu

Thr

Leu

Ser

Gln

Lys

His

Trp

65

70

75

80

Leu

Ser

Asp

Arg

Thr

Tyr

Thr

Cys

Gln

Val

Thr

Tyr

Gln

Gly

His

Thr

85

90

95

Phe

Glu

Asp

Ser

Thr

Lys

Lys

Ser

Ala

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

100

105

110

<210> 302 <211> 50 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 124 <400> 302

Gln 1

Glu

Lys

Glu Ala 5

Ile

Glu Arg

Leu

Lys 10

Ala

Ala

Gly

Ala

Pro 15

Glu

Ser

Leu

Val

Ile

Gln

Ala

Tyr

Phe

Ala

Ser

Glu

Lys

Asn

Glu

Asn

Leu

20

25

30

Ala

Ala

Asn

Phe

Leu

Leu

Ser

Gln

Asn

Phe

Asp

Asp

Glu

Cys

Pro

Pro

35

40

45

Cys Pro <210> 303 <211> 1615 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

- 216 032828 <223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая последовательность H57 Half null SMIP, содержащего лидерную последовательность 2H7 человека <400> 303 aagcttgccg ccatggattt tcaagtgcag attttcagct tcctgctaat cagtgcttca60 gtcataatgt cgcgaggaga agtttacctg gtggagtcag ggggagattt agtgcagcct120 ggaagttccc tgaaagtctc ctgtgcagcc tctggattca ccttcagtga cttctggatg180 tactgggtcc gccaggctcc agggaagggg ctggagtggg ttggtagaat taaaaacaaa240 cctaataatt atgcaacaga atatgcggat tccgtgagag gcagattcac catctcaaga300 gacgactcaa gaaacagcat ctatctgcaa atgaataggt taagagtcga tgacacagcc360 atttattact gtactagagc cgggaggttc gaccacttcg attactgggg ccaaggaacc420 atggtcaccg tctcaagcgg tggcggaggg tctgggggtg gcggatccgg aggtggtggc480 tctgcacaat atgagctgat ccaaccatct tcagcatcag tcactgtagg agagacggtc540 aaaatcactt gctctgggga ccagttgcca aaaaattttg cttattggtt tcagcaaaag600 tcagacaaga acattttact actcatatac atggataata agcgaccatc agggatccca660 gaacgattct ctgggtccac ttcaggtaca acagccacct tgaccatcag tggagcccag720 cctgaggatg aggctgccta ttactgtttg tcttcatatg gtgataataa cgatttagtt780 tttggcagcg gaacccagct caccgtccta cgaactgagc ccagagtgcc cataacacag840 aacccctgtc ctccactcaa agagtgtccc ccatgcgcag ctccagacgc agcgggtgcg900 ccatccgtct tcatcttccc tccaaagatc aaggatgtac tcatgatctc cctgagcccc960 atggtcacat gtgtggtggt ggatgtgagc gaggatgacc cagacgtcca gatcagctgg1020 tttgtgaaca acgtggaagt acacacagct cagacacaaa cccatagaga ggattacgcc1080 agtactctcc gggtggtcag tgccctcccc atccagcacc aggactggat gagtggcaag1140 gagttcaaat gcaaggtcaa caacagagcc ctcccatccc ccatcgagaa aaccatctca1200 aaacccagag ggccagtaag agctccacag gtatatgtct tgcctccacc agcagaagag1260 atgactaaga aagagttcag tctgacctgc atgatcacag gcttcttacc tgccgaaatt1320 gctgtggact ggaccagcaa tgggcgtaca gagcaaaact acaagaacac cgcaacagtc1380 ctggactctg atggttctta cttcatgtac agcaagctca gagtacaaaa gagcacttgg1440 gaaagaggaa gtcttttcgc ctgctcagtg gtccacgagg gtctgcacaa tcaccttacg1500 actaagacca tctcccggtc tctgggtaaa tgagctcagc acacacaatg ctcctgggtc1560 gaccgccggc gaagggcaag ggcgaattcg cccttagctc ggcctcgagt ctaga1615 <210> 304 <211> 506 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Аминокислотная последовательность H57 Half null SMIP, содержащего лидерную последовательность 2H7 человека <400> 304

Met

Asp

Phe

Gln Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Glu

Val

Tyr

Leu

Val

Glu

Ser

Gly

Gly

Asp

20

25

30

Leu

Val

Gln

Pro

Gly

Ser

Ser

Leu

Lys

Val

Ser

Cys

Ala

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Phe

Thr

Phe

Ser

Asp

Phe

Trp

Met

Tyr

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

50

55

60

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Val

Gly

Arg

Ile

Lys

Asn

Lys

Pro

Asn

Asn

Tyr

65

70

75

80

Ala

Thr

Glu

Tyr

Ala

Asp

Ser

Val

Arg

Gly

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Arg

85

90

95

Asp

Asp

Ser

Arg

Asn

Ser

Ile

Tyr

Leu

Gln

Met

Asn

Arg

Leu

Arg

Val

100

105

110

Asp

Asp

Thr

Ala

Ile

Tyr

Tyr

Cys

Thr

Arg

Ala

Gly

Arg

Phe

Asp

His

115

120

125

Phe

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Met

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Tyr

- 217 032828

145

150

155

160

Glu

Leu

Ile

Gln

Pro

Ser

Ser

Ala

Ser

Val

Thr

Val

Gly

Glu

Thr

Val

165

170

175

Lys

Ile

Thr

Cys

Ser

Gly

Asp

Gln

Leu

Pro

Lys

Asn

Phe

Ala

Tyr

Trp

180

185

190

Phe

Gln

Gln

Lys

Ser

Asp

Lys

Asn

Ile

Leu

Leu

Leu

Ile

Tyr

Met

Asp

195

200

205

Asn

Lys

Arg

Pro

Ser

Gly

Ile

Pro

Glu

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Thr

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Thr

Ala

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Ala

Gln

Pro

Glu

Asp

Glu

225

230

235

240

Ala

Ala

Tyr

Tyr

Cys

Leu

Ser

Ser

Tyr

Gly

Asp

Asn

Asn

Asp

Leu

Val

245

250

255

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Gln

Leu

Thr

Val

Leu

Arg

Thr

Glu

Pro

Arg

Val

260

265

270

Pro

Ile

Thr

Gln

Asn

Pro

Cys

Pro

Pro

Leu

Lys

Glu

Cys

Pro

Pro

Cys

275

280

285

Ala

Ala

Pro

Asp

Ala

Ala

Gly

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

290

295

300

Lys

Ile

Lys

Asp

Val

Leu

Met

Ile

Ser

Leu

Ser

Pro

Met

Val

Thr

Cys

305

310

315

320

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

Glu

Asp

Asp

Pro

Asp

Val

Gln

Ile

Ser

Trp

325

330

335

Phe

Val

Asn

Asn

Val

Glu

Val

His

Thr

Ala

Gln

Thr

Gln

Thr

His

Arg

340

345

350

Glu

Asp

Tyr

Ala

Ser

Thr

Leu

Arg

Val

Val

Ser

Ala

Leu

Pro

Ile

Gln

355

360

365

His

Gln

Asp

Trp

Met

Ser

Gly

Lys

Glu

Phe

Lys

Cys

Lys

Val

Asn

Asn

370

375

380

Arg

Ala

Leu

Pro

Ser

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Pro

Arg

Gly

385

390

395

400

Pro

Val

Arg

Ala

Pro

Gln

Val

Tyr

Val

Leu

Pro

Pro

Pro

Ala

Glu

Glu

405

410

415

Met

Thr

Lys

Lys

Glu

Phe

Ser

Leu

Thr

Cys

Met

Ile

Thr

Gly

Phe

Leu

420

425

430

Pro

Ala

Glu

Ile

Ala

Val

Asp

Trp

Thr

Ser

Asn

Gly

Arg

Thr

Glu

Gln

435

440

445

Asn

Tyr

Lys

Asn

Thr

Ala

Thr

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Tyr

Phe

450

455

460

Met

Tyr

Ser

Lys

Leu

Arg

Val

Gln

Lys

Ser

Thr

Trp

Glu

Arg

Gly

Ser

465

470

475

480

Leu

Phe

Ala

Cys

Ser

Val

Val

His

Glu

Gly

Leu

His

Asn

His

Leu

Thr

485

490

495

Thr

Lys

Thr

Ile

Ser

Arg

Ser

Leu

Gly

Lys

500

505

<210> 305 <211> 1669 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая последовательность H57HM2

SMIP, содержащего лидерную последовательность 2H7 человека <400> 305 aagcttgccg ccatggattt tcaagtgcag attttcagct tcctgctaat cagtgcttca60 gtcataatgt cgcgaggaga agtttacctg gtggagtcag ggggagattt agtgcagcct120 ggaagttccc tgaaagtctc ctgtgcagcc tctggattca ccttcagtga cttctggatg180 tactgggtcc gccaggctcc agggaagggg ctggagtggg ttggtagaat taaaaacaaa240 cctaataatt atgcaacaga atatgcggat tccgtgagag gcagattcac catctcaaga300 gacgactcaa gaaacagcat ctatctgcaa atgaataggt taagagtcga tgacacagcc360

- 218 032828 atttattact gtactagagc cgggaggttc gaccacttcg attactgggg ccaaggaacc420 atggtcaccg tctcaagcgg tggcggaggg tctgggggtg gcggatccgg aggtggtggc480 tctgcacaat atgagctgat ccaaccatct tcagcatcag tcactgtagg agagacggtc540 aaaatcactt gctctgggga ccagttgcca aaaaattttg cttattggtt tcagcaaaag600 tcagacaaga acattttact actcatatac atggataata agcgaccatc agggatccca660 gaacgattct ctgggtccac ttcaggtaca acagccacct tgaccatcag tggagcccag720 cctgaggatg aggctgccta ttactgtttg tcttcatatg gtgataataa cgatttagtt780 tttggcagcg gaacccagct aaccgtccta cgaactgagc ccagagtgcc cataacacag840 aacccctgtc ctccactcaa agagtgtccc ccatgcgcag ctagtccctc cacagacatc900 ctaaccttca ccatcccccc ctcctttgcc gacatcttcc tcagcaagtc cgctaacctg960 acctgtctgg tctcaaacct ggcaacctat gaaaccctga atatctcctg ggcttctcaa1020 agtggtgaac cactggaaac caaaattaaa atcatggaaa gccatcccaa tggcaccttc1080 agtgctaagg gtgtggctag tgtttgtgtg gaagactgga ataacaggaa ggaatttgtg1140 tgtactgtga ctcacaggga tctgccttca ccacagaaga aattcatctc aaaacccaat1200 gggccagtaa gagctccaca ggtatatgtc ttgcctccac cagcagaaga gatgactaag1260 aaagagttca gtctgacctg catgatcaca ggcttcttac ctgccgaaat tgctgtggac1320 tggaccagca atgggcgtac agagcaaaac tacaagaaca ccgcaacagt cctggactct1380 gatggttctt acttcatgta cagcaagctc agagtacaaa agagcacttg ggaaagagga1440 agtcttttcg cctgctcagt ggtccacgag ggtctgcaca atcaccttac gactaagacc1500 atctcccggt ctctgggtaa aaccggtctg aacgacatct tcgaggctca gaaaatcgaa1560 tggcacgaag attacaagga tgacgacgat aaggattaca aggatgacga cgataaggat1620 tacaaggatg acgacgataa gcatcatcat catcatcact gactctaga1669 <210> 306 <211> 549 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Аминокислотная последовательность H57-HM2 SMIP, содержащего лидерную последовательность 2H7 человека <400> 306

Met

Asp

Phe

Gln

Val

Gln

Ile

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Ser

Ala

Ser

1

5

10

15

Val

Ile

Met

Ser

Arg

Gly

Glu

Val

Tyr

Leu

Val

Glu

Ser

Gly

Gly

Asp

20

25

30

Leu

Val

Gln

Pro

Gly

Ser

Ser

Leu

Lys

Val

Ser

Cys

Ala

Ala

Ser

Gly

35

40

45

Phe

Thr

Phe

Ser

Asp

Phe

Trp

Met

Tyr

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

50

55

60

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Val

Gly

Arg

Ile

Lys

Asn

Lys

Pro

Asn

Asn

Tyr

65

70

75

80

Ala

Thr

Glu

Tyr

Ala

Asp

Ser

Val

Arg

Gly

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Arg

85

90

95

Asp

Asp

Ser

Arg

Asn

Ser

Ile

Tyr

Leu

Gln

Met

Asn

Arg

Leu

Arg

Val

100

105

110

Asp

Asp

Thr

Ala

Ile

Tyr

Tyr

Cys

Thr

Arg

Ala

Gly

Arg

Phe

Asp

His

115

120

125

Phe

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Met

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

130

135

140

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Tyr

145

150

155

160

Glu

Leu

Ile

Gln

Pro

Ser

Ser

Ala

Ser

Val

Thr

Val

Gly

Glu

Thr

Val

165

170

175

Lys

Ile

Thr

Cys

Ser

Gly

Asp

Gln

Leu

Pro

Lys

Asn

Phe

Ala

Tyr

Trp

180

185

190

Phe

Gln

Gln

Lys

Ser

Asp

Lys

Asn

Ile

Leu

Leu

Leu

Ile

Tyr

Met

Asp

195

200

205

Asn

Lys

Arg

Pro

Ser

Gly

Ile

Pro

Glu

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Thr

Ser

210

215

220

Gly

Thr

Thr

Ala

Thr

Leu

Thr

Ile

Ser

Gly

Ala

Gln

Pro

Glu

Asp

Glu

225

230

235

240

- 219 032828

Ala

Ala

Tyr

Tyr

Cys 245

Leu

Ser

Ser

Tyr Gly 250

Asp

Asn Asn

Asp

Leu 255

Val

Phe

Gly

Ser

Gly

Thr

Gln

Leu

Thr

Val

Leu

Arg

Thr

Glu

Pro

Arg

Val

260

265

270

Pro

Ile

Thr

Gln

Asn

Pro

Cys

Pro

Pro

Leu

Lys

Glu

Cys

Pro

Pro

Cys

275

280

285

Ala

Ala

Ser

Pro

Ser

Thr

Asp

Ile

Leu

Thr

Phe

Thr

Ile

Pro

Pro

Ser

290

295

300

Phe

Ala

Asp

Ile

Phe

Leu

Ser

Lys

Ser

Ala

Asn

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

305

310

315

320

Ser

Asn

Leu

Ala

Thr

Tyr

Glu

Thr

Leu

Asn

Ile

Ser

Trp

Ala

Ser

Gln

325

330

335

Ser

Gly

Glu

Pro

Leu

Glu

Thr

Lys

Ile

Lys

Ile

Met

Glu

Ser

His

Pro

340

345

350

Asn

Gly

Thr

Phe

Ser

Ala

Lys

Gly

Val

Ala

Ser

Val

Cys

Val

Glu

Asp

355

360

365

Trp

Asn

Asn

Arg

Lys

Glu

Phe

Val

Cys

Thr

Val

Thr

His

Arg

Asp

Leu

370

375

380

Pro

Ser

Pro

Gln

Lys

Lys

Phe

Ile

Ser

Lys

Pro

Asn

Gly

Pro

Val

Arg

385

390

395

400

Ala

Pro

Gln

Val

Tyr

Val

Leu

Pro

Pro

Pro

Ala

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

405

410

415

Lys

Glu

Phe

Ser

Leu

Thr

Cys

Met

Ile

Thr

Gly

Phe

Leu

Pro

Ala

Glu

420

425

430

Ile

Ala

Val

Asp

Trp

Thr

Ser

Asn

Gly

Arg

Thr

Glu

Gln

Asn

Tyr

Lys

435

440

445

Asn

Thr

Ala

Thr

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Tyr

Phe

Met

Tyr

Ser

450

455

460

Lys

Leu

Arg

Val

Gln

Lys

Ser

Thr

Trp

Glu

Arg

Gly

Ser

Leu

Phe

Ala

465

470

475

480

Cys

Ser

Val

Val

His

Glu

Gly

Leu

His

Asn

His

Leu

Thr

Thr

Lys

Thr

485

490

495

Ile

Ser

Arg

Ser

Leu

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

Ile

Phe

Glu

Ala

500

505

510

Gln

Lys

Ile

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

515

520

525

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

His

530

535

540

His

His

His

His

His

545

<210> 307 <211> 216 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Участки Half null CH2-CH3 <400> 307

Pro 1

Asp

Ala Ala

Gly 5

Ala

Pro

Ser

Val

Phe 10

Ile

Phe

Pro

Pro

Lys 15

Ile

Lys

Asp

Val

Leu

Met

Ile

Ser

Leu

Ser

Pro

Met

Val

Thr

Cys

Val

Val

20

25

30

Val

Asp

Val

Ser

Glu

Asp

Asp

Pro

Asp

Val

Gln

Ile

Ser

Trp

Phe

Val

35

40

45

Asn

Asn

Val

Glu

Val

His

Thr

Ala

Gln

Thr

Gln

Thr

His

Arg

Glu

Asp

50

55

60

Tyr

Ala

Ser

Thr

Leu

Arg

Val

Val

Ser

Ala

Leu

Pro

Ile

Gln

His

Gln

65

70

75

80

Asp

Trp

Met

Ser

Gly

Lys

Glu

Phe

Lys

Cys

Lys

Val

Asn

Asn

Arg

Ala

85

90

95

- 220 032828

Leu

Pro

Ser

Pro 100

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile 105

Ser

Lys

Pro

Arg

Gly 110

Pro

Val

Arg

Ala

Pro

Gln

Val

Tyr

Val

Leu

Pro

Pro

Pro

Ala

Glu

Glu

Met

Thr

115

120

125

Lys

Lys

Glu

Phe

Ser

Leu

Thr

Cys

Met

Ile

Thr

Gly

Phe

Leu

Pro

Ala

130

135

140

Glu

Ile

Ala

Val

Asp

Trp

Thr

Ser

Asn

Gly

Arg

Thr

Glu

Gln

Asn

Tyr

145

150

155

160

Lys

Asn

Thr

Ala

Thr

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Tyr

Phe

Met

Tyr

165

170

175

Ser

Lys

Leu

Arg

Val

Gln

Lys

Ser

Thr

Trp

Glu

Arg

Gly

Ser

Leu

Phe

180

185

190

Ala

Cys

Ser

Val

Val

His

Glu

Gly

Leu

His

Asn

His

Leu

Thr

Thr

Lys

195

200

205

Thr

Ile

Ser

Arg

Ser

Leu

Gly

Lys

210

215

<210> 308 <211> 259 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HM2 (мыши CH3mu-CH3gamma) с хвостом на C-конце <400> 308

Ser 1

Pro

Ser

Thr

Asp 5

Ile

Leu

Thr

Phe

Thr 10

Ile

Pro

Pro

Ser

Phe 15

Ala

Asp

Ile

Phe

Leu

Ser

Lys

Ser

Ala

Asn

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Ser

Asn

20

25

30

Leu

Ala

Thr

Tyr

Glu

Thr

Leu

Asn

Ile

Ser

Trp

Ala

Ser

Gln

Ser

Gly

35

40

45

Glu

Pro

Leu

Glu

Thr

Lys

Ile

Lys

Ile

Met

Glu

Ser

His

Pro

Asn

Gly

50

55

60

Thr

Phe

Ser

Ala

Lys

Gly

Val

Ala

Ser

Val

Cys

Val

Glu

Asp

Trp

Asn

65

70

75

80

Asn

Arg

Lys

Glu

Phe

Val

Cys

Thr

Val

Thr

His

Arg

Asp

Leu

Pro

Ser

85

90

95

Pro

Gln

Lys

Lys

Phe

Ile

Ser

Lys

Pro

Asn

Gly

Pro

Val

Arg

Ala

Pro

100

105

110

Gln

Val

Tyr

Val

Leu

Pro

Pro

Pro

Ala

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Lys

Glu

115

120

125

Phe

Ser

Leu

Thr

Cys

Met

Ile

Thr

Gly

Phe

Leu

Pro

Ala

Glu

Ile

Ala

130

135

140

Val

Asp

Trp

Thr

Ser

Asn

Gly

Arg

Thr

Glu

Gln

Asn

Tyr

Lys

Asn

Thr

145

150

155

160

Ala

Thr

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Tyr

Phe

Met

Tyr

Ser

Lys

Leu

165

170

175

Arg

Val

Gln

Lys

Ser

Thr

Trp

Glu

Arg

Gly

Ser

Leu

Phe

Ala

Cys

Ser

180

185

190

Val

Val

His

Glu

Gly

Leu

His

Asn

His

Leu

Thr

Thr

Lys

Thr

Ile

Ser

195

200

205

Arg

Ser

Leu

Gly

Lys

Thr

Gly

Leu

Asn

Asp

Ile

Phe

Glu

Ala

Gln

Lys

210

215

220

Ile

Glu

Trp

His

Glu

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

225

230

235

240

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

Asp

Tyr

Lys

Asp

Asp

Asp

Asp

Lys

His

His

His

245

250

255

His

His

His

- 221 032828 <210> 309 <211> 213 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> HM2 (мыши CH3mu-CH3gamma) без хвоста на C-конце <400> 309

Ser 1

Pro

Ser

Thr

Asp 5

Ile

Leu

Thr

Phe

Thr 10

Ile

Pro

Pro

Ser

Phe 15

Ala

Asp

Ile

Phe

Leu

Ser

Lys

Ser

Ala

Asn

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Ser

Asn

20

25

30

Leu

Ala

Thr

Tyr

Glu

Thr

Leu

Asn

Ile

Ser

Trp

Ala

Ser

Gln

Ser

Gly

35

40

45

Glu

Pro

Leu

Glu

Thr

Lys

Ile

Lys

Ile

Met

Glu

Ser

His

Pro

Asn

Gly

50

55

60

Thr

Phe

Ser

Ala

Lys

Gly

Val

Ala

Ser

Val

Cys

Val

Glu

Asp

Trp

Asn

65

70

75

80

Asn

Arg

Lys

Glu

Phe

Val

Cys

Thr

Val

Thr

His

Arg

Asp

Leu

Pro

Ser

85

90

95

Pro

Gln

Lys

Lys

Phe

Ile

Ser

Lys

Pro

Asn

Gly

Pro

Val

Arg

Ala

Pro

100

105

110

Gln

Val

Tyr

Val

Leu

Pro

Pro

Pro

Ala

Glu

Glu

Met

Thr

Lys

Lys

Glu

115

120

125

Phe

Ser

Leu

Thr

Cys

Met

Ile

Thr

Gly

Phe

Leu

Pro

Ala

Glu

Ile

Ala

130

135

140

Val

Asp

Trp

Thr

Ser

Asn

Gly

Arg

Thr

Glu

Gln

Asn

Tyr

Lys

Asn

Thr

145

150

155

160

Ala

Thr

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Tyr

Phe

Met

Tyr

Ser

Lys

Leu

165

170

175

Arg

Val

Gln

Lys

Ser

Thr

Trp

Glu

Arg

Gly

Ser

Leu

Phe

Ala

Cys

Ser

180

185

190

Val

Val

His

Glu

Gly

Leu

His

Asn

His

Leu

Thr

Thr

Lys

Thr

Ile

Ser

195

200

205

Arg

Ser

Leu

Gly

Lys

210

<210> 310 <211> 1446 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая BC3 G1 N297A, содержащий шарнир IgG1 SCC-P и связывающие аминокислоты RSS <400> 310 caggtccagc tgcagcagtc tgcagctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtacacga tgcagtgggt aaaacagagg120 cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gtagtggata tattgggtac180 agtcagaagt tcaaggacaa gaccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac240 atgcaactga gcagtctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagatcgaag300 gtctactatg attacgacgt ttattctatg gactactggg gtcaaggaac ctcggtcacc360 gtctcaagcg gtggcggagg gtctgggggt ggcggatccg gaggtggtgg ctctgcacaa420 caaattattc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc480 atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggtaccagca gaagtcaggc540 acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggcgt ccctgctcgc600 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa660 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtaatc cactcacgtt cggtgctggg720 accaagctgg agctgaaacg ctcgagcgag cccaaatctt ctgacaaaac tcacacatgc780 ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggt ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa840

- 222 032828 cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tccaagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaatga <210> 311 <211> 481 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3 G1 N297A, содержащий шарнир IgG1 SCC-P и связывающие аминокислоты RSS

900

960

1020

1080

1140

1200

1260

1320

1380

1440

1446

<400> 311

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Ser

Ser

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

245

250

255

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

260

265

270

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

275

280

285

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

290

295

300

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

305

310

315

320

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

- 223 032828

325

330

335

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

340

345

350

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

355

360

365

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

370

375

380

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

385

390

395

400

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

405

410

415

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

420

425

430

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

435

440

445

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

450

455

460

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

465

470

475

480

Lys <210> 312 <211> 1470 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая BC3 G1 N297A, содержащий шарнир, полученный из IgA1, и связывающие аминокислоты RSS <400> 312 caggtccagc tgcagcagtc tgcagctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtacacga tgcagtgggt aaaacagagg120 cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gtagtggata tattgggtac180 agtcagaagt tcaaggacaa gaccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac240 atgcaactga gcagtctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagatcgaag300 gtctactatg attacgacgt ttattctatg gactactggg gtcaaggaac ctcggtcacc360 gtctcaagcg gtggcggagg gtctgggggt ggcggatccg gaggtggtgg ctctgcacaa420 caaattattc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc480 atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggtaccagca gaagtcaggc540 acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggcgt ccctgctcgc600 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa660 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtaatc cactcacgtt cggtgctggg720 accaagctgg agctgaaacg ctcgagcccc tcaactccac ctaccccatc tccctcaact780 ccacctaccc catctccctc atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct gggtggaccg840 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag900 gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac960 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacgccagc1020 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag1080 tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa1140 gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg1200 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatccaag cgacatcgcc1260 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg1320 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag ccggtggcag1380 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1440 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga1470 <210> 313 <211> 489 <212> PRT <213> Искусственная последовательность

- 224 032828 <220>

<223> BC3 G1 N297A, содержащий шарнир, полученный из IgA1, и связывающие аминокислоты RSS <400> 313

Gln 1

Val

Gln

Leu Gln 5

Gln

Ser

Ala

Ala Glu 10

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly 15

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Ser

Ser

Pro

Ser

Thr

Pro

Pro

Thr

Pro

245

250

255

Ser

Pro

Ser

Thr

Pro

Pro

Thr

Pro

Ser

Pro

Ser

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

260

265

270

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

275

280

285

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

290

295

300

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

305

310

315

320

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

325

330

335

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

340

345

350

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

355

360

365

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

370

375

380

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

385

390

395

400

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

405

410

415

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

420

425

430

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

435

440

445

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

- 225 032828

	450					455				460
Phe	Ser	Cys	Ser	Val	Met	His	Glu	Ala	Leu His	Asn His	Tyr Thr Gln
465					470				475		480
Lys	Ser	Leu	Ser	Leu	Ser	Pro	Gly	Lys
				485

<210> 314 <211> 1431 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая BC3 G1 N297A, содержащий шарнир, полученный из IgA2, и связывающие аминокислоты RSS <400> 314 caggtccagc tgcagcagtc tgcagctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtacacga tgcagtgggt aaaacagagg120 cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gtagtggata tattgggtac180 agtcagaagt tcaaggacaa gaccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac240 atgcaactga gcagtctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagatcgaag300 gtctactatg attacgacgt ttattctatg gactactggg gtcaaggaac ctcggtcacc360 gtctcaagcg gtggcggagg gtctgggggt ggcggatccg gaggtggtgg ctctgcacaa420 caaattattc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc480 atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggtaccagca gaagtcaggc540 acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggcgt ccctgctcgc600 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa660 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtaatc cactcacgtt cggtgctggg720 accaagctgg agctgaaacg ctcgagcccc ccacctcccc catgcccacc gtgcccagca780 cctgaactcc tgggtggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc840 atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct900 gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg960 cgggaggagc agtacgccag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag1020 gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cccagccccc1080 atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg1140 cccccatccc gggatgagct gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc1200 ttctatccaa gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac1260 aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctacag caagctcacc1320 gtggacaaga gccggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct1380 ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggtaaatg a1431 <210> 315 <211> 476 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3 G1 N297A, содержащий шарнир, полученный из IgA2, и связывающие аминокислоты RSS

<400> 315

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

- 226 032828

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Ser

Ser

Pro

Pro

Pro

Pro

Pro

Cys

Pro

245

250

255

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

260

265

270

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

275

280

285

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

290

295

300

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

305

310

315

320

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

325

330

335

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

340

345

350

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

355

360

365

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

370

375

380

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

385

390

395

400

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

405

410

415

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

420

425

430

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

435

440

445

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

450

455

460

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

465

470

475

<210> 316 <211> 1461 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая BC3 G1 N297A, содержащий минишарнир IgG3 и связывающие аминокислоты RSS <400> 316 caggtccagc tgcagcagtc tgcagctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtacacga tgcagtgggt aaaacagagg 120

- 227 032828 cctggacagg agtcagaagt atgcaactga gtctactatg gtctcaagcg caaattattc atgacctgca acctccccca ttcagtggca gatgctgcca accaagctgg ccacggtccc ctcttccccc gtggtggtgg gtggaggtgc gtggtcagcg aaggtctcca cagccccgag caggtcagcc gagagcaatg ggctccttct gtcttctcat tccctgtctc gtctggaatg tcaaggacaa gcagtctgac attacgacgt gtggcggagg tcacccagtc gtgccagctc aaagatggat gtgggtctgg cttattactg agctgaaacg catgcccacc caaaacccaa acgtgagcca ataatgccaa tcctcaccgt acaaagccct aaccacaggt tgacctgcct ggcagccgga tcctctacag gctccgtgat cgggtaaatg gattggatac gaccacattg atctgaggac ttattctatg gtctgggggt tccagcaatc aagtgtaagt ttatgacaca gacctcttac ccagcagtgg ctcgagcgag gtgcccagca ggacaccctc cgaagaccct gacaaagccg cctgcaccag cccagccccc gtacaccctg ggtcaaaggc gaacaactac caagctcacc gcatgaggct a attaatccta actgcagaca tctgcggtct gactactggg ggcggatccg atgtctgcat tacatgcact tccaaactgg tctctcacaa agtagtaatc cccaaatcta cctgaactcc atgatctccc gaggtcaagt cgggaggagc gactggctga atcgagaaaa cccccatccc ttctatccaa aagaccacgc gtggacaaga ctgcacaacc gtagtggata aatcctccag attactgtgc gtcaaggaac gaggtggtgg ctccagggga ggtaccagca cttctggcgt tcagcagcat cactcacgtt gcgacacacc tgggtggacc ggacccctga tcaactggta agtacgccag atggcaagga ccatctccaa gggatgagct gcgacatcgc ctcccgtgct gccggtggca actacacgca tattgggtac cacagcctac aagatcgaag ctcggtcacc ctctgcacaa gaaggtcacc gaagtcaggc ccctgctcgc ggaggctgaa cggtgctggg tcccccaagc gtcagtcttc ggtcacatgc cgtggacggc cacgtaccgt gtacaagtgc agccaaaggg gaccaagaac cgtggagtgg ggactccgac gcaggggaac gaagagcctc

180

240

300

360

420

480

540

600

660

720

780

840

900

960

1020

1080

1140

1200

1260

1320

1380

1440

1461 <210> 317 <211> 486 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3 G1 N297A, содержащий минишарнир IgG3 и связывающие аминокислоты RSS

<400> 317

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

- 228 032828

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Ser

Ser

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Thr

245

250

255

Pro

Pro

Pro

Ser

Pro

Arg

Ser

Pro

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

260

265

270

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

275

280

285

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

290

295

300

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

305

310

315

320

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

325

330

335

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

340

345

350

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

355

360

365

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

370

375

380

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

385

390

395

400

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

405

410

415

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

420

425

430

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

435

440

445

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

450

455

460

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

465

470

475

480

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

485 <210> 318 <211> 1518 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая BC3 G1 N297A, содержащий шарнир, полученный из IgD, и связывающие аминокислоты RSS <400> 318 caggtccagc tgcagcagtc tgcagctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtacacga tgcagtgggt aaaacagagg120 cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gtagtggata tattgggtac180 agtcagaagt tcaaggacaa gaccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac240 atgcaactga gcagtctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagatcgaag300 gtctactatg attacgacgt ttattctatg gactactggg gtcaaggaac ctcggtcacc360 gtctcaagcg gtggcggagg gtctgggggt ggcggatccg gaggtggtgg ctctgcacaa420 caaattattc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc480 atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggtaccagca gaagtcaggc540 acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggcgt ccctgctcgc600 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa660 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtaatc cactcacgtt cggtgctggg720 accaagctgg agctgaaacg ctcgagcgag tctccaaagg cacaggcctc ctccgtgccc780 actgcacaac cccaagcaga gggcagcctc gccaaggcaa ccacagcccc agccaccacc840 cgtaacacat gcccaccgtg cccagcacct gaactcctgg gtggaccgtc agtcttcctc900 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg960 gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg1020 gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acgccagcac gtaccgtgtg1080

- 229 032828 gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag1140 gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag1200 ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag1260 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatccaagcg acatcgccgt ggagtgggag1320 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc1380 tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagcc ggtggcagca ggggaacgtc1440 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc1500 ctgtctccgg gtaaatga1518 <210> 319 <211> 505 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3 G1 N297A, содержащий шарнир, полученный из IgD, и связывающие аминокислоты RSS

<400> 319

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Ser

Ser

Glu

Ser

Pro

Lys

Ala

Gln

Ala

245

250

255

Ser

Ser

Val

Pro

Thr

Ala

Gln

Pro

Gln

Ala

Glu

Gly

Ser

Leu

Ala

Lys

260

265

270

Ala

Thr

Thr

Ala

Pro

Ala

Thr

Thr

Arg

Asn

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

275

280

285

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

290

295

300

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

305

310

315

320

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

325

330

335

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

340

345

350

- 230 032828

Gln

Tyr

Ala 355

Ser

Thr

Tyr Arg

Val 360

Val

Ser

Val

Leu

Thr 365

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

370

375

380

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

385

390

395

400

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

405

410

415

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

420

425

430

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

435

440

445

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

450

455

460

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

465

470

475

480

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

485

490

495

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

500

505

<210> 320 <211> 1461 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая BC3 G1 N297A, содержащий шарнир, полученный из IgG, и связывающие аминокислоты RSS <400> 320 caggtccagc tgcagcagtc tgcagctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtacacga tgcagtgggt aaaacagagg120 cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gtagtggata tattgggtac180 agtcagaagt tcaaggacaa gaccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac240 atgcaactga gcagtctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagatcgaag300 gtctactatg attacgacgt ttattctatg gactactggg gtcaaggaac ctcggtcacc360 gtctcaagcg gtggcggagg gtctgggggt ggcggatccg gaggtggtgg ctctgcacaa420 caaattattc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc480 atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggtaccagca gaagtcaggc540 acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggcgt ccctgctcgc600 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa660 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtaatc cactcacgtt cggtgctggg720 accaagctgg agctgaaacg ctcgagcgag cccaaatctt ctgacaaaac tcacacaagc780 ccaccgagcc catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tgggtggacc gtcagtcttc840 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc900 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc960 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacgccag cacgtaccgt1020 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc1080 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg1140 cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac1200 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccaa gcgacatcgc cgtggagtgg1260 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac1320 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gccggtggca gcaggggaac1380 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc1440 tccctgtctc cgggtaaatg a1461 <210> 321 <211> 486 <212> PRT <213> Искусственная последовательность

- 231 032828 <220>

<223> BC3 G1 N297A, содержащий шарнир, полученный из IgG, и связывающие аминокислоты RSS

<400> 321

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Ser

Ser

Glu

Pro

Lys

Ser

Ser

Asp

Lys

245

250

255

Thr

His

Thr

Ser

Pro

Pro

Ser

Pro

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

260

265

270

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

275

280

285

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

290

295

300

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

305

310

315

320

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

325

330

335

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

340

345

350

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

355

360

365

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

370

375

380

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

385

390

395

400

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

405

410

415

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

420

425

430

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

435

440

445

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

450

455

460

- 232 032828

Ser Val 465	Met	His	Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys	Ser Leu 480
470	475
Ser	Leu	Ser	Pro	Gly 485	Lys

<210> 322 <211> 1734 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая BC3 G1 N297A, содержащий шарнир, полученный из IgE CH2, и связывающие аминокислоты RSS <400> 322 caggtccagc tgcagcagtc tgcagctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtacacga tgcagtgggt aaaacagagg120 cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gtagtggata tattgggtac180 agtcagaagt tcaaggacaa gaccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac240 atgcaactga gcagtctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagatcgaag300 gtctactatg attacgacgt ttattctatg gactactggg gtcaaggaac ctcggtcacc360 gtctcaagcg gtggcggagg gtctgggggt ggcggatccg gaggtggtgg ctctgcacaa420 caaattattc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc480 atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggtaccagca gaagtcaggc540 acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggcgt ccctgctcgc600 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa660 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtaatc cactcacgtt cggtgctggg720 accaagctgg agctgaaacg ctcgagctcc agggacttca ccccgcccac cgtgaagatc780 ttacagtcgt ccagcgacgg cggcgggcac ttccccccga ccatccagct cctgtgcctc840 gtctctgggt acaccccagg gactatcaac atcacctggc tggaggacgg gcaggtcatg900 gacgtggact tgtccaccgc ctctaccacg caggagggtg agctggcctc cacacaaagc960 gagctcaccc tcagccagaa gcactggctg tcagaccgca cctacacctg ccaggtcacc1020 tatcaaggtc acacctttga ggacagcacc aagaagtctg catgcccacc gtgctccgga1080 gcacctgaac tcctgggtgg accgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc1140 ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac1200 cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag1260 ccgcgggagg agcagtacgc cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac1320 caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc1380 cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc1440 ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa1500 ggcttctatc caagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac1560 tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc1620 accgtggaca agagccggtg gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag1680 gctctgcaca accactacac gcagaagagc ctctccctgt ctccgggtaa atga1734 <210> 323 <211> 577 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3 G1 N297A, содержащий шарнир, полученный из IgE CH2 и связывающие аминокислоты RSS

<400> 323

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

- 233 032828

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Ser

Ser

Ser

Arg

Asp

Phe

Thr

Pro

Pro

245

250

255

Thr

Val

Lys

Ile

Leu

Gln

Ser

Ser

Ser

Asp

Gly

Gly

Gly

His

Phe

Pro

260

265

270

Pro

Thr

Ile

Gln

Leu

Leu

Cys

Leu

Val

Ser

Gly

Tyr

Thr

Pro

Gly

Thr

275

280

285

Ile

Asn

Ile

Thr

Trp

Leu

Glu

Asp

Gly

Gln

Val

Met

Asp

Val

Asp

Leu

290

295

300

Ser

Thr

Ala

Ser

Thr

Thr

Gln

Glu

Gly

Glu

Leu

Ala

Ser

Thr

Gln

Ser

305

310

315

320

Glu

Leu

Thr

Leu

Ser

Gln

Lys

His

Trp

Leu

Ser

Asp

Arg

Thr

Tyr

Thr

325

330

335

Cys

Gln

Val

Thr

Tyr

Gln

Gly

His

Thr

Phe

Glu

Asp

Ser

Thr

Lys

Lys

340

345

350

Ser

Ala

Cys

Pro

Pro

Cys

Ser

Gly

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

355

360

365

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

370

375

380

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

385

390

395

400

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

405

410

415

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

420

425

430

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

435

440

445

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

450

455

460

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

465

470

475

480

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

485

490

495

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

500

505

510

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

515

520

525

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

530

535

540

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

545

550

555

560

- 234 032828

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 565 570 575

Lys <210> 324 <211> 1557 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая BC3 G1 N297A, содержащий шарнир UBA и связывающие аминокислоты RSS <400> 324 caggtccagc tgcagcagtc tgcagctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtacacga tgcagtgggt aaaacagagg120 cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gtagtggata tattgggtac180 agtcagaagt tcaaggacaa gaccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac240 atgcaactga gcagtctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagatcgaag300 gtctactatg attacgacgt ttattctatg gactactggg gtcaaggaac ctcggtcacc360 gtctcaagcg gtggcggagg gtctgggggt ggcggatccg gaggtggtgg ctctgcacaa420 caaattattc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc480 atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggtaccagca gaagtcaggc540 acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggcgt ccctgctcgc600 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa660 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtaatc cactcacgtt cggtgctggg720 accaagctgg agctgaaacg ctcgagccag gagaaagaag ctatagagag gttgaaggcc780 gcaggcgccc cagagagcct ggtcatccag gcctatttcg cgagtgagaa gaatgagaac840 ttggctgcca acttcctcct gagtcagaac tttgatgacg agtgcccacc gtgcccatcc900 ggagcacctg aactcctggg tggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac960 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa1020 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca1080 aagccgcggg aggagcagta cgccagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg1140 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca1200 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac1260 accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc1320 aaaggcttct atccaagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac1380 aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag1440 ctcaccgtgg acaagagccg gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat1500 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaatga1557 <210> 325 <211> 518 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3 G1 N297A, содержащий шарнир UBA и связывающие аминокислоты RSS <400> 325

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

- 235 032828

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

Pro

Ala

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

195

200

205

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Ser

Ser

Gln

Glu

Lys

Glu

Ala

Ile

Glu

245

250

255

Arg

Leu

Lys

Ala

Ala

Gly

Ala

Pro

Glu

Ser

Leu

Val

Ile

Gln

Ala

Tyr

260

265

270

Phe

Ala

Ser

Glu

Lys

Asn

Glu

Asn

Leu

Ala

Ala

Asn

Phe

Leu

Leu

Ser

275

280

285

Gln

Asn

Phe

Asp

Asp

Glu

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ser

Gly

Ala

Pro

Glu

290

295

300

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

305

310

315

320

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

325

330

335

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

340

345

350

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

355

360

365

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

370

375

380

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

385

390

395

400

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

405

410

415

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

420

425

430

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

435

440

445

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

450

455

460

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

465

470

475

480

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

485

490

495

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

500

505

510

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

515

<210> 326 <211> 1533 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

- 236 032828 <223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая BC3 G1 N297A, содержащий шарнир FOS и связывающие аминокислоты RSS <400> 326 caggtccagc tgcagcagtc tgcagctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg60 tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtacacga tgcagtgggt aaaacagagg120 cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gtagtggata tattgggtac180 agtcagaagt tcaaggacaa gaccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac240 atgcaactga gcagtctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagatcgaag300 gtctactatg attacgacgt ttattctatg gactactggg gtcaaggaac ctcggtcacc360 gtctcaagcg gtggcggagg gtctgggggt ggcggatccg gaggtggtgg ctctgcacaa420 caaattattc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc480 atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggtaccagca gaagtcaggc540 acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggcgt ccctgctcgc600 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa660 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtaatc cactcacgtt cggtgctggg720 accaagctgg agctgaaacg ctcgagcgag ctgactgata cactccaagc ggagacagac780 caactagaag atgagaagtc tgctttgcag accgagattg ccaacctgct gaaggagaag840 gaaaaactag agttcatctg cccaccgtgc ccatccggag cacctgaact cctgggtgga900 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct960 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg1020 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc1080 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag1140 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc1200 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag1260 ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc aagcgacatc1320 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg1380 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg1440 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg1500 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa tga1533 <210> 327 <211> 510 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> BC3 G1 N297A, содержащий шарнир FOS и связывающие аминокислоты RSS <400> 327

Gln

Val

Gln

Leu

Gln

Gln

Ser

Ala

Ala

Glu

Leu

Ala

Arg

Pro

Gly

Ala

1

5

10

15

Ser

Val

Lys

Met

Ser

Cys

Lys

Ala

Ser

Gly

Tyr

Thr

Phe

Thr

Arg

Tyr

20

25

30

Thr

Met

Gln

Trp

Val

Lys

Gln

Arg

Pro

Gly

Gln

Gly

Leu

Glu

Trp

Ile

35

40

45

Gly

Tyr

Ile

Asn

Pro

Ser

Ser

Gly

Tyr

Ile

Gly

Tyr

Ser

Gln

Lys

Phe

50

55

60

Lys

Asp

Lys

Thr

Thr

Leu

Thr

Ala

Asp

Lys

Ser

Ser

Ser

Thr

Ala

Tyr

65

70

75

80

Met

Gln

Leu

Ser

Ser

Leu

Thr

Ser

Glu

Asp

Ser

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

85

90

95

Ala

Arg

Ser

Lys

Val

Tyr

Tyr

Asp

Tyr

Asp

Val

Tyr

Ser

Met

Asp

Tyr

100

105

110

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Ser

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

115

120

125

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Ala

Gln

Gln

Ile

Ile

Leu

130

135

140

Thr

Gln

Ser

Pro

Ala

Ile

Met

Ser

Ala

Ser

Pro

Gly

Glu

Lys

Val

Thr

145

150

155

160

Met

Thr

Cys

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Val

Ser

Tyr

Met

His

Trp

Tyr

Gln

165

170

175

Gln

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Pro

Lys

Arg

Trp

Ile

Tyr

Asp

Thr

Ser

Lys

180

185

190

- 237 032828

Leu

Ala

Ser 195

Gly

Val

Pro

Ala Arg 200

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly 205

Ser

Gly

Thr

Ser

Tyr

Ser

Leu

Thr

Ile

Ser

Ser

Met

Glu

Ala

Glu

Asp

Ala

Ala

Thr

210

215

220

Tyr

Tyr

Cys

Gln

Gln

Trp

Ser

Ser

Asn

Pro

Leu

Thr

Phe

Gly

Ala

Gly

225

230

235

240

Thr

Lys

Leu

Glu

Leu

Lys

Arg

Ser

Ser

Glu

Leu

Thr

Asp

Thr

Leu

Gln

245

250

255

Ala

Glu

Thr

Asp

Gln

Leu

Glu

Asp

Glu

Lys

Ser

Ala

Leu

Gln

Thr

Glu

260

265

270

Ile

Ala

Asn

Leu

Leu

Lys

Glu

Lys

Glu

Lys

Leu

Glu

Phe

Ile

Cys

Pro

275

280

285

Pro

Cys

Pro

Ser

Gly

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

290

295

300

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

305

310

315

320

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

325

330

335

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

340

345

350

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Ala

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

355

360

365

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

370

375

380

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

385

390

395

400

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

Pro

Pro

405

410

415

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

420

425

430

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

435

440

445

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

Ser

Asp

450

455

460

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

465

470

475

480

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

485

490

495

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

500

505

510

<210> 328 <211> 47 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 133 <400> 328

Arg 1

Ser

Ser

Glu

Leu 5

Thr

Asp

Thr

Leu

Gln Ala Glu 10

Thr

Asp

Gln Leu 15

Glu

Asp

Glu

Lys

Ser

Ala

Leu

Gln

Thr

Glu

Ile

Ala

Asn

Leu

Leu

Lys

20

25

30

Glu

Lys

Glu

Lys

Leu

Glu

Phe

Ile

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ser

Gly

35

40

45

<210> 329 <211> 106 <212> PRT <213> Искусственная последовательность

- 238 032828 <220>

<223> участок CH3 mu мыши <400> 329

Ser 1

Pro

Ser

Thr

Asp 5

Ile

Leu

Thr

Phe

Thr 10

Ile

Pro

Pro

Ser

Phe 15

Ala

Asp

Ile

Phe

Leu

Ser

Lys

Ser

Ala

Asn

Leu

Thr

Cys

Leu

Val

Ser

Asn

20

25

30

Leu

Ala

Thr

Tyr

Glu

Thr

Leu

Asn

Ile

Ser

Trp

Ala

Ser

Gln

Ser

Gly

35

40

45

Glu

Pro

Leu

Glu

Thr

Lys

Ile

Lys

Ile

Met

Glu

Ser

His

Pro

Asn

Gly

50

55

60

Thr

Phe

Ser

Ala

Lys

Gly

Val

Ala

Ser

Val

Cys

Val

Glu

Asp

Trp

Asn

65

70

75

80

Asn

Arg

Lys

Glu

Phe

Val

Cys

Thr

Val

Thr

His

Arg

Asp

Leu

Pro

Ser

85

90

95

Pro

Gln

Lys

Lys

Phe

Ile

Ser

Lys

Pro

Asn

100 105 <210> 330 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 330

Cys Pro Pro Cys <210> 331 <211> 55 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 125 <400> 331

Arg

Ser

Ser

Gln

Glu

Lys

Glu

Ala

Ile

Glu

Arg

Leu

Lys

Ala

Ala

Gly

1

5

10

15

Ala

Pro

Glu

Ser

Leu

Val

Ile

Gln

Ala

Tyr

Phe

Ala

Ser

Glu

Lys

Asn

20

25

30

Glu

Asn

Leu

Ala

Ala

Asn

Phe

Leu

Leu

Ser

Gln

Asn

Phe

Asp

Asp

Glu

35

40

45

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ser

Gly

50

55

<210> 332 <211> 111 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 126 <400> 332

Ser 1

Arg

Asp

Phe

Thr 5

Pro

Pro

Thr

Val

Lys 10

Ile

Leu

Gln

Ser

Ser 15

Ser

Asp

Gly

Gly

Gly

His

Phe

Pro

Pro

Thr

Ile

Gln

Leu

Leu

Cys

Leu

Val

20

25

30

- 239 032828

Ser Gly Tyr

Thr

Pro

Gly

Thr

Ile 40

Asn

Ile

Thr

Trp

Leu 45

Glu Asp

Gly

35

Gln

Val

Met

Asp

Val

Asp

Leu

Ser

Thr

Ala

Ser

Thr

Thr

Gln

Glu

Gly

50

55

60

Glu

Leu

Ala

Ser

Thr

Gln

Ser

Glu

Leu

Thr

Leu

Ser

Gln

Lys

His

Trp

65

70

75

80

Leu

Ser

Asp

Arg

Thr

Tyr

Thr

Cys

Gln

Val

Thr

Tyr

Gln

Gly

His

Thr

85

90

95

Phe

Glu

Asp

Ser

Thr

Lys

Lys

Ser

Ala

Cys

Pro

Pro

Cys

Ser

Gly

100

105

110

<210> 333 <211> 42 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 127 <400> 333

Arg 1

Ser

Ser

Glu

Ser 5

Pro

Lys

Ala Gln

Ala 10

Ser

Ser

Val

Pro

Thr 15

Ala

Gln

Pro

Gln

Ala

Glu

Gly

Ser

Leu

Ala

Lys

Ala

Thr

Thr

Ala

Pro

Ala

20

25

30

Thr

Thr

Arg

Asn

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

35

40

<210>	334
<211>	13
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 128
<400>	334
Arg Ser Ser Pro Pro	Pro Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1	5	10

<210>	335
<211>	18
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 129
<400>	335
Arg Ser Ser Glu Pro	Lys Ser Ser Asp Lys	Thr His Thr Cys Pro Pro
1	5	10	15
Cys Pro

<210> 336 <211> 23 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

- 240 032828 <223> Линкер 130 <400> 336

Arg	Ser	Ser	Glu	Pro	Lys	Ser	Ser Asp Thr Pro	Pro Pro Ser Pro Arg
1				5			10	15
Ser	Pro	Cys	Pro	Pro	Cys	Pro
			20

<210> 337 <211> 23 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 131 <400> 337

Arg	Ser	Ser	Glu	Pro	Lys	Ser	Ser Asp Lys	Thr His Thr Ser Pro Pro
1				5			10	15
Ser	Pro	Cys	Pro	Pro	Cys	Pro
			20

<210> 338 <211> 26 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 132 <400> 338

Arg 1	Ser	Ser	Pro	Ser 5	Thr	Pro	Pro Thr Pro Ser Pro 10	Ser Thr Pro Pro 15
Thr	Pro	Ser	Pro	Ser	Cys	Pro	Pro	Cys	Pro
			20					25

<210> 339 <211> 3 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер <400> 339

Gly Gly Ser <210> 340 <211> 4 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер <400> 340

Gly Gly Gly Ser

- 241 032828

<210> <211> <212> <213>

341 5 PRT Искусственная последовательность

<220> <223>

Линкер

<400> 341

Gly Gly Gly Gly Ser

1	5
<210> <211> <212> <213>	342 6 PRT Искусственная последовательность

<220> <223>

Линкер

<400> 342

Gly Gly Gly Gly Gly Ser

1	5
<210> <211> <212> <213>	343 9 PRT Искусственная последовательность

<220> <223>

Линкер

<400> 343

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1	5
<210> <211> <212> <213>	344 13 PRT Искусственная последовательность

<220> <223>

Линкер

<400> 344

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1	5 10
<210> <211> <212> <213>	345 17 PRT Искусственная последовательность

<220> <223>	Линкер
<400>	345

- 242 032828

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1	5	10	15
Ser

<210> 346 <211> 21 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер <400> 346

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser

1	5	10	15
Gly	Gly Gly Gly Ser
	20

<210> 347 <211> 25 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер <400> 347

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

25 <210> 348 <211> 9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер <400> 348

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

5

<210>	349
<211>	14
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер
<400>	349
Gly Gly Gly Ser Gly	Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1	5	10

<210> 350

- 243 032828 <211> 19 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер <400> 350

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

5 10 15

Gly Gly Ser <210> 351 <211> 24 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер <400> 351

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 1 5 10 15

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser <210> 352 <211> 29 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер <400> 352

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

5 10 15

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

25 <210> 353 <211> 27 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер

<400> 353
Gly	Gly	Gly	Ser	Gly	Gly	Gly	Ser	Gly	Gly	Gly	Ser Gly Gly Gly Gly
1				5					10		15
Ser	Gly	Gly	Gly	Gly	Ser	Gly	Gly	Gly	Gly	Ser
			20					25

<210> 354 <211> 36 <212> PRT <213> Искусственная последовательность

- 244 032828 <220>

<223> Линкер <400> 354

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Ser

1

5

10

15

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

20

25

30

Gly

Gly

Gly 35

Ser

<210> 355 <211> 45 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер <400> 355

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Ser

1

5

10

15

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

20

25

30

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

Gly

Gly

Gly

Gly

Ser

35

40

45

<210>	356
<211>	10
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер
<400>	356
Gly Gly Gly Gly Ser	Gly Gly Gly Gly Ser
1	5	10

<210>	357
<211>	20
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер
<400>	357
Gly Gly Gly Gly Ser	Gly Gly Gly Gly Ser	Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1	5	10	15

Gly Gly Gly Ser <210> 358 <211> 25 <212> PRT <213> Искусственная последовательность

- 245 032828

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

15

Ser <220>

<223> Линкер

<400> 358
Gly	Gly	Gly	Gly	Ser	Gly	Gly	Gly
1				5
Gly	Gly	Gly	Ser	Gly	Gly	Gly	Gly
			20

<210> 359 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>

<223> верхний шарнирный участок IgG1 человека <400> 359

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

5 10 <210> 360 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>

<223> верхний шарнирный <400> 360

Glu Arg Lys Cys Cys Val

5 участок IgG2 человека

Glu <210> 361 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>

<223> верхний шарнирный участок IgG3 человека <400> 361

Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr

5 10 <210> 362 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>

<223> верхний шарнирный участок IgG3 человека

<400> 362
Glu Pro Lys	Ser Cys Asp Thr Pro	Pro Pro
1	5	10

<210> 363

- 246 032828

<211> <212> <213>

7 PRT Homo sapiens

<220> <223>	верхний шарнирный участок IgG4 человека
<400>	363

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro

1	5
<210> <211> <212> <213>	364 5 PRT Homo sapiens

<220> <223>	центральный шарнир IgG1 человека
<400>	364

Cys Pro Pro Cys Pro

1	5
<210> <211> <212> <213>	365 5 PRT Homo sapiens

<220> <223>	центральный шарнир IgG3 человека
<400>	365

Cys Pro Arg Cys Pro

1	5
<210> <211> <212> <213>	366 5 PRT Homo sapiens

<220> <223>	центральный шарнир IgG4
<400>	366

Cys Pro Ser Cys Pro

1	5
<210> <211> <212> <213>	367 17 PRT Homo sapiens

<220> <223>	верхний и центральный шарнир IgG4
<400>	367

Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Arg Cys

1 Pro

5 10 15

- 247 032828 <210> 368 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>

<223> верхний и центральный шарнир IgG4 <400> 368

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro

5 10 15 <210> 369 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>

<223> верхний шарнирный участок IgD человека <400> 369

Glu 1

Ser

Pro

Lys

Ala 5

Gln

Ala

Ser

Ser

Val 10

Pro

Thr

Ala Gln

Pro 15

Gln

Ala

Glu

Gly

Ser

Leu

Ala

Lys

Ala

Thr

Thr

Ala

Pro

Ala

Thr

Thr

Arg

20

25

30

Asn

Thr

<210> 370 <211> 24 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>

<223> верхний шарнирный участок IgD человека <400> 370

Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln 1 5 10 15

Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro <210> 371 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>

<223> верхний шарнир IgA1 человека <400> 371

Val Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro

5 10 15

Ser Pro Ser

- 248 032828 <210> 372 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>

<223> верхний шарнир IgA2 человека <400> 372

Val Pro Pro Pro Pro Pro

5 <210> 373 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>

<223> последовательность, подобная последовательности верхнего шарнира IgE

CH2 человека

<400> 373

Val

Cys

Ser

Arg

Asp

Phe

Thr

Pro

Pro

Thr

Val

Lys

Ile

Leu

Gln

Ser

1

5

10

15

Ser

Ser

Asp

Gly

Gly

Gly

His

Phe

Pro

Pro

Thr

Ile

Gln

Leu

Leu

Cys

20

25

30

Leu

Val

Ser

Gly

Tyr

Thr

Pro

Gly

Thr

Ile

Asn

Ile

Thr

Trp

Leu

Glu

35

40

45

Asp

Gly

Gln

Val

Met

Asp

Val

Asp

Leu

Ser

Thr

Ala

Ser

Thr

Thr

Gln

50

55

60

Glu

Gly

Glu

Leu

Ala

Ser

Thr

Gln

Ser

Glu

Leu

Thr

Leu

Ser

Gln

Lys

65

70

75

80

His

Trp

Leu

Ser

Asp

Arg

Thr

Tyr

Thr

Cys

Gln

Val

Thr

Tyr

Gln

Gly

85

90

95

His

Thr

Phe

Glu

Asp

Ser

Thr

Lys

Lys

Cys

Ala

100

105

<210> 374 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>

<223> последовательность, подобная последовательности верхнего шарнира IgM

CH2 человека

<400> 374

Val

Ile

Ala

Glu

Leu

Pro

Pro

Lys

Val

Ser

Val

Phe

Val

Pro

Pro

Arg

1

5

10

15

Asp

Gly

Phe

Phe

Gly

Asn

Pro

Arg

Lys

Ser

Lys

Leu

Ile

Cys

Gln

Ala

20

25

30

Thr

Gly

Phe

Ser

Pro

Arg

Gln

Ile

Gln

Val

Ser

Trp

Leu

Arg

Glu

Gly

35

40

45

Lys

Gln

Val

Gly

Ser

Gly

Val

Thr

Thr

Asp

Gln

Val

Gln

Ala

Glu

Ala

50

55

60

Lys

Glu

Ser

Gly

Pro

Thr

Thr

Tyr

Lys

Val

Thr

Ser

Thr

Leu

Thr

Ile

65

70

75

80

Lys

Glu

Ser

Asp

Trp

Leu

Gly

Gln

Ser

Met

Phe

Thr

Cys

Arg

Val

Asp

85

90

95

- 249 032828

His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro

100

105

110 <210> 375 <211> 110 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> IgG4 AA CH2 человека с заменой аланина в F234 и N297

<400> 375

Ala

Pro

Glu

Ala

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

1

5

10

15

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

20

25

30

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

35

40

45

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

50

55

60

Gln

Phe

Asn

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

65

70

75

80

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

85

90

95

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

100

105

110

<210> 376 <211> 110 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> IgG4 AA CH2 человека с заменой аланина в

L235 и N297

<400> 376

Ala

Pro

Glu

Phe

Ala

Gly

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

1

5

10

15

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

20

25

30

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

35

40

45

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

50

55

60

Gln

Phe

Asn

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

65

70

75

80

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

85

90

95

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

100

105

110

<210> 377 <211> 110 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> IgG4 AA CH2 человека с заменой аланина в

- 250 032828

G236 и N297 <400> 377

Ala

Pro

Glu

Phe

Leu

Ala

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

1

5

10

15

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

20

25

30

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

35

40

45

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

50

55

60

Gln

Phe

Asn

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

65

70

75

80

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

85

90

95

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

100

105

110

<210> 378 <211> 110 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> IgG4 AA CH2 человека с заменой аланина в

G237 и N297

<400> 378

Ala

Pro

Glu

Phe

Leu

Gly

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

1

5

10

15

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

20

25

30

Val

Val

Asp

Val

Ser

Gln

Glu

Asp

Pro

Glu

Val

Gln

Phe

Asn

Trp

Tyr

35

40

45

Val

Asp

Gly

Val

Glu

Val

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

50

55

60

Gln

Phe

Asn

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

65

70

75

80

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

85

90

95

Gly

Leu

Pro

Ser

Ser

Ile

Glu

Lys

Thr

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

100

105

110

<210>	379
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 134
<400>	379
Glu Pro Met Ser Cys	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Cys Pro
1	5	10	15

<210> 380 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность

- 251 032828 <220>

<223> Линкер 135 <400> 380

Glu Pro Met Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

5 10 15 <210> 381 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 136 <400> 381

Glu Pro Met Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Cys Pro

5 10 15 <210> 382 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 137 <400> 382

Glu Pro Met Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Ser Pro

5 10 15

<210>	383
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 138
<400>	383
Glu Pro Met Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Cys Pro
1	5	10	15

<210>	384
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 139
<400>	384
Glu Pro Met Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Ser Pro
1	5	10	15

<210> 385 <211> 15 <212> PRT

- 252 032828 <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 140 <400> 385

Glu Pro Met Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
1	5	10	15

<210>	386
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 141
<400>	386
Glu Pro Met Ser Cys	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Cys Ser
1	5	10	15

<210>	387
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 142
<400>	387
Glu Pro Met Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Cys Ser
1	5	10	15

<210>	388
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 143
<400>	388
Glu Pro Met Ser Cys	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Cys Ser
1	5	10	15

<210>	389
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 144
<400>	389
Glu Pro Met Ser Cys	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Ser Ser
1	5	10	15

<210> 390

- 253 032828

<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 145
<400>	390
Glu Pro Met Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Cys Ser
1	5	10	15

<210>	391
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 146
<400>	391
Glu Pro Met Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Ser Pro
1	5	10	15

<210>	392
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 147
<400>	392
Glu Pro Met Ser Cys	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Ser Ser
1	5	10	15

<210> 393 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 148 <400> 393

Glu Pro Thr Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1	5	10	15

<210>	394
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 149
<400>	394
Glu Pro Thr Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Cys Pro
1	5	10	15

- 254 032828 <210> 395 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 150 <400> 395

Glu Pro Thr Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Cys Pro
1	5	10	15

<210>	396
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер 151 <400> 396

Glu Pro Thr Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Ser Pro
1	5	10	15

<210>	397
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 152
<400>	397
Glu Pro Thr Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Cys Pro
1	5	10	15

<210>	398
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 153
<400>	398
Glu Pro Thr Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Ser Pro
1	5	10	15

<210> 399 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 154 <400> 399

Glu Pro Thr Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro

- 255 032828 <210> 400 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 155 <400> 400

Glu Pro Thr Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Ser

5 10 15 <210> 401 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 156 <400> 401

Glu Pro Thr Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Ser

5 10 15

<210>	402
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 157
<400>	402
Glu Pro Thr Ser Cys	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Cys Ser
1	5	10	15

<210>	403
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 158
<400>	403
Glu Pro Thr Ser Cys	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Ser Ser
1	5	10	15

<210> 404 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 159

- 256 032828 <400> 404

Glu Pro Thr Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Cys Ser
1	5	10	15

<210>	405
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 160
<400>	405
Glu Pro Thr Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Ser Ser
1	5	10	15

<210>	406
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 161
<400>	406
Glu Pro Thr Ser Cys	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Ser Ser
1	5	10	15

<210> 407 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 162 <400> 407

Glu Pro Ala Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

5 10 15 <210> 408 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 163 <400> 408

Glu Pro Ala Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

5 10 15 <210> 409 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

- 257 032828 <223> Линкер 164 <400> 409

Glu Pro Ala Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Cys Pro

5 10 15

<210>	410
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 165
<400>	410
Glu Pro Ala Ser Cys	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Ser Pro
1	5	10	15

<210>	411
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 166
<400>	411
Glu Pro Ala Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Cys Pro
1	5	10	15

<210>	412
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 167
<400>	412
Glu Pro Ala Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Ser Pro
1	5	10	15

<210>	413
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 168
<400>	413
Glu Pro Ala Ser Cys	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Ser Pro
1	5	10	15

<210> 414 <211> 15 <212> PRT <213> Искусственная последовательность

- 258 032828 <220>

<223> Линкер 169 <400> 414

Glu Pro Ala Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Ser
1	5	10	15

<210>	415
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер 170 <400> 415

Glu Pro Ala Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Ser
1	5	10	15

<210>	416
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 171
<400>	416
Glu Pro Ala Ser Cys	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Cys Ser
1	5	10	15

<210>	417
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 172
<400>	417
Glu Pro Ala Ser Cys	Asp Lys Thr His Thr Cys	Pro Pro Ser Ser
1	5	10	15

<210>	418
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 173
<400>	418
Glu Pro Ala Ser Ser	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Cys Ser
1	5	10	15

<210> 419 <211> 15

- 259 032828 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 174 <400> 419

Glu Pro Ala Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Ser Ser
1	5	10	15

<210>	420
<211>	15
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 175
<400>	420
Glu Pro Ala Ser Cys	Asp Lys Thr His Thr Ser Pro	Pro Ser Ser
1	5	10	15

<210>	421
<211>	14
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 176
<400>	421
Glu Pro Ser Cys Asp	Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1	5	10

<210>	422
<211>	14
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 177
<400>	422
Glu Pro Ser Ser Asp	Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1	5	10

<210>	423
<211>	14
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 178
<400>	423
Glu Pro Ser Cys Asp	Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Cys Pro
1	5	10

- 260 032828 <210> 424 <211> 14 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 179 <400> 424

Glu Pro	Ser Cys Asp Lys	Thr His Thr Cys Pro Pro Ser Pro
1	5	10

<210>	425
<211>	14
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 180
<400>	425
Glu Pro Ser Ser Asp	Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Cys Pro
1	5	10

<210>	426
<211>	14
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 181
<400>	426
Glu Pro Ser Ser Asp	Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Ser Pro
1	5	10

<210> 427 <211> 14 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 182 <400> 427

Glu Pro Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro

5 10 <210> 428 <211> 14 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 183 <400> 428

Glu Pro Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Ser

5 10

- 261 032828 <210> 429 <211> 14 <212> PRT

<213> Искусственная <220> <223> Линкер 184 <400> 429 Glu Pro Ser Ser Asp	последовательность
Lys	Thr	His	Thr	Cys 10	Pro	Pro	Cys	Ser
1	5
<210>	430
<211>	14
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 185
<400>	430
Glu Pro Ser Cys Asp	Lys	Thr	His	Thr	Ser	Pro	Pro	Cys	Ser
1	5					10
<210>	431
<211>	14
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 186
<400>	431
Glu Pro Ser Cys Asp	Lys	Thr	His	Thr	Cys	Pro	Pro	Ser	Ser
1	5					10
<210>	432
<211>	14
<212>	PRT
<213>	Искусственная	последовательность
<220>
<223>	Линкер 187
<400>	432
Glu Pro Ser Ser Asp	Lys	Thr	His	Thr	Ser	Pro	Pro	Cys	Ser
1	5					10

<210> 433 <211> 14 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 188 <400> 433

- 262 032828

Glu Pro Ser Ser Asp

5

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Ser Ser <210> 434 <211> 14 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Линкер 189 <400> 434

Glu Pro Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Ser

Claims (28)

1. Гибридный связывающий белок, содержащий связывающий домен, который специфически связывается с комплексом TCR или его компонентом, при этом указанный связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина (V_H), содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 245, и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина (V_L), содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 241.

2. Гибридный белок по п.1, отличающийся тем, что указанная V_H содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 245 и указанная V_L содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 241.

3. Гибридный белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 95% идентичны последовательностям SEQ ID NO: 245 и 241, или аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 245 и 241 соединены с помощью линкера, содержащего GlySer, Gly2Ser (SEQ ID NO: 339), Gly3Ser (SEQ ID NO: 340), Gly4Ser (SEQ ID NO: 341) и Gly5Ser (SEQ ID NO: 342), в том числе (Gly3Ser)1(Gly4Ser)1 (SEQ ID NO: 343), (Gly3Ser)2(Gly4Ser)1 (SEQ ID NO: 344), (Gly₃Ser)3(Gly4Ser)1 (SEQ ID NO: 345), (Gly₃Ser)4(Gly4Ser)1 (SEQ ID NO: 346), (Gly₃Ser)₃(Gly4Ser)1 (SEQ ID NO: 347), (Gly₃Ser)1(Gly4Ser)2 (SEQ ID NO: 349), (Gly₃Ser)1(Gly4Ser)₃ (SEQ ID NO: 350), (Gly₃Ser)1(Gly4Ser)4 (SEQ ID NO: 351), (Gly₃Ser)1(Gly4Ser)₃ (SEQ ID NO: 352), (Gly₃Ser)₃(Gly4Ser)₃ (SEQ ID NO: 353), (Gly3Ser)4(Gly4Ser)4 (SEQ ID NO: 354), (Gly3Ser)5(Gly4Ser)5 (SEQ ID NO: 355), (Gly4Ser)2 (SEQ ID NO: 356), (Gly4Ser)₃ (SEQ ID NO: 145), (Gly4Ser)4 (SEQ ID NO: 357), (GlwSer), (SEQ ID NO: 358) или GGGGSGGGGSGGGGSAQ (SEQ ID NO: 98).

4. Гибридный белок по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанный связывающий домен представляет собой одноцепочечный Fv (ScFv), который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 263.

5. Гибридный белок по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что указанный гибридный белок дополнительно содержит полипептид области C_H2 иммуноглобулина и полипептид области C_H3 иммуноглобулина, при этом:

(i) указанный связывающий домен располагается со стороны С-конца относительно указанного полипептида области C_H2 иммуноглобулина и указанного полипептида области C_H3 иммуноглобулина; или (ii) указанный связывающий домен располагается со стороны N-конца относительно указанного полипептида области CH2 иммуноглобулина и указанного полипептида области CH3 иммуноглобулина.

6. Гибридный белок по п.5, отличающийся тем, что указанный полипептид области C_H2 иммуноглобулина содержит последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 90% идентична последовательности IgG1 человека SEQ ID NO: 64; последовательности IgG2 человека SEQ ID NO: 66; последовательности IgG4 человека SEQ ID NO: 68 или последовательности IGHG2c мыши SEQ ID NO: 73, причем указанная область CH2 содержит:

(I) замену остатка аминокислоты аспарагина, который соответствует положению 297 IgG1 человека, при этом указанный аспарагин в положении 297 замещен на аланин, и по меньшей мере одну замену и по меньшей мере одну делецию остатков, которые соответствуют положениям 234-238 IgG1 человека, при этом по меньшей мере один остаток в положении с 234 по 238 замещен на аланин или серин;

(II) одну или более замен или делеций остатков, которые соответствуют положениями 234-238 IgG1 человека, при этом по меньшей мере один остаток в положении с 234 по 238 замещен на аланин или серин, и по меньшей мере одну замену остатков аминокислот, которые соответствуют положениям 253,

- 263 032828

310, 318, 320, 322 или 331 IgG1 человека, при этом по меньшей мере один остаток в положении 253, 310, 318, 320, 322 или 331 замещен на аланин или серин; или (III) замену остатка аминокислоты аспарагина, который соответствует положению 297 IgG1 человека, при этом указанный аспарагин в положении 297 замещен на аланин, одну или более замен или делеций остатков, которые соответствуют положениям 234-238 IgG1 человека, при этом по меньшей мере один остаток в положении с 234 по 238 замещен на аланин или серин, и по меньшей мере одну замену остатка, который соответствует положениям 253, 310, 318, 320, 322 или 331 IgG1 человека, при этом по меньшей мере один остаток в положении 253, 310, 318, 320, 322 или 331 замещен на аланин или серин.

7. Гибридный белок по п.5, отличающийся тем, что указанный связывающий домен связан с полипептидом CH2 области иммуноглобулина или полипептидом CH3 области иммуноглобулина посредством полипептида шарнирной области иммуноглобулина.

8. Гибридный белок по п.7, отличающийся тем, что указанный полипептид шарнирной области иммуноглобулина выбран из группы, состоящей из шарнирной области IgG1 человека дикого типа, шарнирной области IgG1 человека, в которой по меньшей мере один цистеин замещен на серин, и шарнирной области IGHG2c мыши дикого типа.

9. Гибридный белок по п.7, отличающийся тем, что указанный полипептид шарнирной области иммуноглобулина содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 212-218, 300, 379-434, и аминокислот 3-17 SEQ ID NO: 10.

10. Гибридный белок по любому из пп.6-9, отличающийся тем, что полипептид области CH2 иммуноглобулина содержит замену остатка аминокислоты аспарагина, который соответствует положению 297 IgG1 человека, при этом указанный аспарагин в положении 297 замещен на аланин, и по меньшей мере одну замену и по меньшей мере одну делецию остатков аминокислот, которые соответствуют положениям остатков 234-238 IgG1 человека, при этом по меньшей мере один остаток в положении с 234 по 238 замещен на аланин или серин.

11. Гибридный белок по любому из пп.6-9, отличающийся тем, что указанный полипептид области C_H2 иммуноглобулина содержит одну или более замен или делеций остатков аминокислот, которые соответствуют положениям остатков 234-238 IgG1 человека, при этом по меньшей мере один остаток в положении с 234 по 238 замещен на аланин или серин, и по меньшей мере одну замену остатков аминокислот, которые соответствуют положениям остатков 253, 310, 318, 320, 322 или 331 IgG1 человека, при этом по меньшей мере один остаток в положении 253, 310, 318, 320, 322 или 331 замещен на аланин или серин.

12. Гибридный белок по любому из пп.6-9, отличающийся тем, что указанный полипептид области CH2 иммуноглобулина содержит замену остатка аминокислоты аспарагина, который соответствует положению 297 IgG1 человека, при этом указанный аспарагин в положении 297 замещен на аланин, одну или несколько замен или делеций остатков аминокислот, которые соответствуют положениям остатков 234238 IgG1 человека, при этом по меньшей мере один остаток в положении с 234 по 238 замещен на аланин или серин, и по меньшей мере одну замену остатка, который соответствует положению 253, 310, 318, 320, 322 или 331 IgG1 человека, при этом по меньшей мере один остаток в положении 253, 310, 318, 320, 322 или 331 замещен на аланин или серин.

13. Гибридный белок по любому из пп.6-12, в котором полипептид области C_H2 иммуноглобулина содержит:

(I) замену остатка аминокислоты аспарагина, который соответствует положению 297 IgG1 человека, при этом указанный аспарагин в положении 297 замещен на аланин, и одну замену аминокислоты в положении, которое соответствует положению остатков 234, 235, 236 или 237 IgG1 человека, при этом указанный остаток в положении 234, 235, 236 или 237 замещен на аланин или серин;

(II) замену остатка аминокислоты аспарагина, который соответствует положению 297 IgG1 человека, при этом указанный аспарагин в положении 297 замещен на аланин, и замены двух остатков аминокислот в положениях, которые соответствуют положениям 234-237 IgG1 человека, при этом указанные два остатка в положениях с 234-237 замещены на аланин или серин;

(III) замену остатка аминокислоты аспарагина, который соответствует положению 297 IgG1 человека, при этом указанный аспарагин в положении 297 замещен на аланин, и замены трех остатков аминокислот в положениях, которые соответствуют положениям 234-237 IgG1 человека, при этом указанные три остатка в положениях с 234 по 237 замещены на аланин или серин;

(IV) замену остатка аминокислоты аспарагина, который соответствует положению 297 IgG1 человека, при этом указанный аспарагин в положении 297 замещен на аланин, замены аминокислот в положениях, которые соответствуют положениям 234, 235 и 237 IgG1 человека, при этом указанные остатки в положениях 234, 235 и 237 замещены на аланин или серин, и делецию остатка аминокислоты, который соответствует положению 236 IgG1 человека;

(V) замены трех остатков аминокислот, которые соответствуют положениям 234-237 IgG1 человека, при этом указанные остатки в трех положениях с 234 по 237 замещены на аланин или серин, и замены остатков аминокислот, которые соответствуют положениям 318, 320 и 322 IgG1 человека, при этом указанные остатки в положениях 318, 320 и 322 замещены на аланин или серин; или (VI) замены трех остатков аминокислот, которые соответствуют положениям 234-237 IgG1 челове

- 264 032828 ка, при этом остатки в трех положениях с 234 по 237 замещены на аланин или серин, делецию остатка аминокислоты, который соответствует положению 236 IgG1 человека, и замены аминокислот в положениях, которые соответствуют положениям 318, 320 и 322 IgG1 человека, при этом остатки в положениях 318, 320 и 322 замещены на аланин или серин.

14. Гибридный белок по п.5, отличающийся тем, что указанный полипептид области C_H2 иммуноглобулина содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 75, 102-104 и 375-378.

15. Гибридный белок по п.5, отличающийся тем, что указанные полипептиды области CH2 и области C_H3 иммуноглобулина получены из IgG2 человека или IgG4 человека.

16. Гибридный белок по любому из пп.1-15, отличающийся тем, что комплекс TCR или его компонент представляет собой TCRa, TCRP или CD3r.

17. Гибридный белок по любому из пп.1-16, отличающийся тем, что указанный гибридный белок не индуцирует или индуцирует на минимальном обнаруживаемом уровне высвобождение цитокина.

18. Гибридный белок по любому из пп.1-17, отличающийся тем, что указанный гибридный белок дополнительно обладает по меньшей мере одной из активностей, выбранной из группы, состоящей из индукции потока кальция, индукции фосфорилирования молекулы сигнального пути рецептора T-клеток, блокировки ответа T-клеток на аллоантиген, блокировки ответа T-клеток памяти на антиген и понижающей модуляции указанного комплекса TCR.

19. Гибридный белок по п.4, отличающийся тем, что указанный связывающий домен представляет собой полипептид одноцепочечного связывающего домена Fv (scFv), содержащий последовательность аминокислот SEQ ID NO: 263, и при этом VH и VL соединены линкером, который содержит аминокислоты 3-17 SEQ ID NO: 10.

20. Гибридный белок по п.6, отличающийся тем, что указанный полипептид области CH2 иммуноглобулина содержит последовательность аминокислот SEQ ID NO: 68, за исключением делеции аминокислоты в положении 236 и замен аминокислот F234, L235, G237, Е318, K320 и K322 на аланин.

21. Гибридный белок по п.5, отличающийся тем, что указанный полипептид области CH3 иммуноглобулина содержит последовательность аминокислот SEQ ID NO: 69.

22. Гибридный белок по п.6, отличающийся тем, что указанный полипептид области CH2 иммуноглобулина содержит последовательность аминокислот SEQ ID NO: 68, за исключением делеции аминокислоты в положении 236 и замен аминокислот F234, L235, G237 и N297 на аланин.

23. Гибридный белок по п.5, отличающийся тем, что указанные области CH2 и CH3 иммуноглобулина совместно содержат последовательность аминокислот SEQ ID NO: 14.

24. Композиция для лечения заболевания, опосредованного T-клетками, содержащая указанный гибридный белок по любому из пп.1-23 и фармацевтический приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель, при этом указанное заболевание, опосредованное T-клетками, выбрано из группы, состоящей из реакции трансплантат против хозяина (РТПХ) и аутоиммунных и воспалительных расстройств (AIID).

25. Композиция по п.24, отличающаяся тем, что указанное аутоиммунное и воспалительное расстройство выбрано из группы, состоящей из воспалительного заболевания кишечника, болезни Крона, язвенного колита, сахарного диабета, астмы и артрита.

26. Единичная лекарственная форма, содержащая композицию по п.24.

27. Полинуклеотид, кодирующий гибридный белок по любому из пп.1-23.

28. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по п.27, функционально связанный с последовательностью, контролирующей экспрессию.

I 1 1 1 п 1 Ь'И А СКТЗ ВСЗ ЙО2! ОКТЗЯ2Э7° OKT3lgG1M OmigGiAA CW3lgG4AA OKT3HM1 NuwonFL OKT3 ala-als FJ.|