JP2023538891A - 抗cd28組成物 - Google Patents
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Abstract
本明細書では、新規の抗CD28×抗B7H3(「αCD28×αB7H3」とも呼ばれる)ヘテロ二量体二重特異性抗体、及びがんの治療のためにそのような抗体を使用する方法が提供される。主題のαCD28×αB7H3抗体は、T細胞上のCD28共刺激分子にアゴニスト的に結合し、腫瘍細胞上のB7H3を標的とすることができる。したがって、そのような抗体は、末梢の毒性を最小限に抑えながら、腫瘍部位での抗腫瘍活性を選択的に増強する。本明細書で提供される主題の抗体は、他の抗がん療法と組み合わせて使用される場合、抗腫瘍活性を増強するのに特に有用である。【選択図】図1
Description
優先権
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、2020年8月19日に出願された米国仮特許出願第63/067,834号及び2020年10月15日に出願された米国仮特許出願第63/092,272号の利益を主張する。
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、2020年8月19日に出願された米国仮特許出願第63/067,834号及び2020年10月15日に出願された米国仮特許出願第63/092,272号の利益を主張する。
配列表の組み込みの段落
本出願は、ASCIIフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。2021年8月19日に作成された上記のASCIIコピーは067461-5272-WO_SL.txtという名称であり、サイズは1,130,417バイトである。
本出願は、ASCIIフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。2021年8月19日に作成された上記のASCIIコピーは067461-5272-WO_SL.txtという名称であり、サイズは1,130,417バイトである。
腫瘍に対する自然免疫応答は、ナチュラルキラー(NK)細胞及びT細胞などの免疫エフェクター細胞を送り出し、腫瘍細胞を攻撃して破壊する。腫瘍浸潤リンパ球(TIL)は、多くの場合、複数の免疫チェックポイント受容体(PD-1、CTLA-4など)及び共刺激受容体(ICOS、4-1BB、OX40、GITR、CD28など)を発現する。TILは、抑制性免疫チェックポイントのアップレギュレーションにより、時間の経過とともに細胞毒性を失う。チェックポイント遮断は、他の治療オプションと比較して臨床反応率の増加を示しているが、多くの患者は依然としてチェックポイント遮断に対する反応を達成できていない。TIL上の共刺激受容体の関与は、免疫チェックポイントの負のシグナルを克服できる正のシグナルを提供し得る。アゴニスト共刺激受容体抗体の前臨床及び臨床研究は、共刺激受容体のアゴニズムが印象的な抗腫瘍応答をもたらし、T細胞を活性化して腫瘍細胞を攻撃できることを実際に実証した。
末梢毒性を最小限に抑えながら腫瘍細胞を特異的に破壊することにより、抗腫瘍活性を高めることもがん治療にとって重要である。この文脈では、標的腫瘍細胞の存在下でT細胞のみが共刺激シグナルを提供されることが重要である。しかしながら、単一特異性完全長抗体による共刺激受容体のアゴニズムは、TIL対末梢T細胞対自己免疫毒性に寄与する自己抗原反応性T細胞に関して非差別的である可能性が高い。例えば、単一特異性で非差別的なpan-4-1BBアゴニスト抗体であるウレルマブは、初期段階の臨床試験で重大な肝臓毒性を示した(Segal et al.,2016)。したがって、がんの治療のための新規免疫応答増強組成物が依然として必要とされている。
本明細書では、抗CD28×抗TAA(例えば、αCD28×αB7H3)抗体を含む新規抗CD28組成物、及びがんの治療のためにそのような抗体を使用する方法が提供される。主題の抗CD28×抗TAA抗体は、T細胞上のCD28共刺激分子及び腫瘍細胞上の腫瘍関連抗原(例えば、B7H3)にアゴニスト的に結合することができる。したがって、そのような抗体は、末梢の毒性を最小限に抑えながら、腫瘍部位での抗腫瘍活性を選択的に増強する。本明細書で提供される主題の抗体は、例えばチェックポイント阻害剤を含む他の抗がん療法と組み合わせて特に有用である。本明細書ではまた、新規αCD28及びαB7H3結合ドメインも提供される。
第1の態様では、a)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-リンカー-VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第1の単量体であって、VH1が、それぞれ第1の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が、第1のFcドメインである、第1の単量体と、b)N末端からC末端に向かって、VH2-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、VH2が、第2の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が、第2のFcドメインである、第2の単量体と、c)N末端からC末端に向かって、VL-CLを含む共通軽鎖であって、VLが、可変軽鎖ドメインであり、CLが、定常軽鎖ドメインである、共通軽鎖と、を含む、ヘテロ二量体抗体が本明細書に提供され、共通軽鎖は、別々に第1の単量体中の各VH1-CH1及び第2の単量体中のVH2-CH1と対合し、VH1及びVLは、一緒に第1の抗原結合ドメイン(ABD)を形成し、VH2及びVLは、一緒に第2のABDを形成し、第1及び第2のABDのうちの一方はヒトCD28に結合し、第1及び第2のABDのうちの他方はヒトB7H3に結合する。
いくつかの実施形態では、第1のABDはヒトCD28に結合し、第2のABDはヒトB7H3に結合する。ある特定の実施形態では、第1のABDはヒトB7H3に結合し、第2のABDはヒトCD28に結合する。
いくつかの実施形態では、VH1ドメインのアミノ酸配列は、配列番号518、配列番号928、配列番号497、配列番号498、配列番号499、配列番号500、配列番号501、配列番号502、配列番号503、配列番号504、配列番号505、配列番号506、配列番号507、配列番号508、配列番号509、配列番号510、配列番号511、配列番号512、配列番号513、配列番号514、配列番号515、配列番号516、配列番号517、配列番号519、配列番号520、配列番号521、配列番号522、配列番号523、配列番号524、配列番号525、配列番号526、配列番号527、配列番号528、配列番号529、配列番号530、配列番号531、配列番号532、配列番号533、配列番号534、配列番号535、配列番号536、配列番号537、配列番号538、配列番号539、配列番号540、配列番号541、配列番号542、配列番号543、配列番号544、配列番号545、配列番号546、配列番号547、配列番号548、配列番号549、配列番号550、配列番号551、配列番号552、配列番号553、配列番号554、配列番号555、配列番号556、配列番号557、配列番号558、配列番号559、配列番号560、配列番号561、配列番号562、配列番号563、配列番号564、配列番号565、配列番号566、配列番号567、配列番号568、配列番号569、配列番号570、配列番号571、配列番号572、配列番号573、配列番号574、配列番号575、配列番号576、配列番号577、配列番号578、配列番号579、配列番号580、配列番号581、配列番号582、配列番号583、及び配列番号584からなる群から選択され、VLドメインのアミノ酸配列は、配列番号874である。
いくつかの実施形態では、VH2ドメインのアミノ酸配列は、配列番号585、配列番号870、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、及び配列番号651からなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、第1のFcドメイン及び第2のFcドメインは、それぞれバリアントFcドメインである。
ヘテロ二量体抗体のいくつかの実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、以下のヘテロ二量体化バリアント:S364K/E357Q:L368D/K370S;S364K:L368D/K370S;S364K:L368E/K370S;D401K:T411E/K360E/Q362E;及びT366W:T366S/L368A/Y407Vから選択されるヘテロ二量体化スキューバリアントのセットを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。例示的な実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントS364K/E357Q:L368D/K370Sを含む。
いくつかの実施形態では、第1及び第2のFcドメインはそれぞれ、1つ以上の除去バリアントを含む。いくつかの実施形態では、1つ以上の除去バリアントは、E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kであり、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1又は第2の単量体のうちの1つは、pIバリアントを更に含む。いくつかの実施形態では、第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、第1のFcドメインは、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
例示的な実施形態では、第1及び第2のバリアントFcドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント428L/434Sを含む。
いくつかの実施形態では、第2の単量体は、配列番号1019のアミノ酸配列を含み、第1の単量体は、配列番号1020のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号1021のアミノ酸配列を有する。
別の態様では、a)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第1の単量体であって、VH1が、第1の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が、第1のFcドメインである、第1の単量体と、b)N末端からC末端に向かって、VH2-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、VH2が、第2の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が、第2のFcドメインである、第2の単量体と、c)N末端からC末端に向かって、VL-CLを含む共通軽鎖であって、VLが、可変軽鎖ドメインであり、CLが、定常軽鎖ドメインである、共通軽鎖と、を含む、ヘテロ二量体抗体が本明細書に提供され、第1のVHドメイン及びVLドメインは、一緒に第1のABDを形成し、第2のVHドメイン及びVLドメインは、一緒に第2のABDを形成し、第1及び第2のABDのうちの一方はヒトCD28に結合し、第1及び第2のABDのうちの他方はヒトB7H3に結合する。
ある特定の実施形態では、VH1ドメインのアミノ酸配列は、配列番号518、配列番号928、配列番号497、配列番号498、配列番号499、配列番号500、配列番号501、配列番号502、配列番号503、配列番号504、配列番号505、配列番号506、配列番号507、配列番号508、配列番号509、配列番号510、配列番号511、配列番号512、配列番号513、配列番号514、配列番号515、配列番号516、配列番号517、配列番号519、配列番号520、配列番号521、配列番号522、配列番号523、配列番号524、配列番号525、配列番号526、配列番号527、配列番号528、配列番号529、配列番号530、配列番号531、配列番号532、配列番号533、配列番号534、配列番号535、配列番号536、配列番号537、配列番号538、配列番号539、配列番号540、配列番号541、配列番号542、配列番号543、配列番号544、配列番号545、配列番号546、配列番号547、配列番号548、配列番号549、配列番号550、配列番号551、配列番号552、配列番号553、配列番号554、配列番号555、配列番号556、配列番号557、配列番号558、配列番号559、配列番号560、配列番号561、配列番号562、配列番号563、配列番号564、配列番号565、配列番号566、配列番号567、配列番号568、配列番号569、配列番号570、配列番号571、配列番号572、配列番号573、配列番号574、配列番号575、配列番号576、配列番号577、配列番号578、配列番号579、配列番号580、配列番号581、配列番号582、配列番号583、及び配列番号584からなる群から選択され、VLドメインのアミノ酸配列は、配列番号874である。
いくつかの実施形態では、VH2ドメインのアミノ酸配列は、配列番号585、配列番号870、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、及び配列番号651からなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、第1のFcドメイン及び第2のFcドメインは、それぞれバリアントFcドメインである。
いくつかの実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、以下のヘテロ二量体化バリアント:S364K/E357Q:L368D/K370S;S364K:L368D/K370S;S364K:L368E/K370S;D401K:T411E/K360E/Q362E;及びT366W:T366S/L368A/Y407Vから選択されるヘテロ二量体化スキューバリアントのセットを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。ある特定の実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントS364K/E357Q:L368D/K370Sを含む。
いくつかの実施形態では、第1及び第2のFcドメインはそれぞれ、1つ以上の除去バリアントを含む。ある特定の実施形態では、1つ以上の除去バリアントは、E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kであり、番号付けは、EU番号付けに従う。
ある特定の実施形態では、第1又は第2の単量体のうちの1つは、pIバリアントを更に含む。例示的な実施形態では、第1の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、第2のFcドメインは、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1及び第2のバリアントFcドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント428L/434Sを含む。
別の態様では、a)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-第1のドメインリンカー-scFv-第2のドメインリンカー-CH2-CH3を含む第1の単量体であって、VH1が、第1の可変重鎖ドメインであり、scFvが、抗CD28 scFvであり、CH2-CH3が、第1のFcドメインである、第1の単量体と、b)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、CH2-CH3が、第2のFcドメインである、第2の単量体と、c)N末端からC末端に向かって、VL1-CLを含む軽鎖であって、VL1が、可変軽鎖ドメインであり、CLが、定常軽鎖ドメインである、軽鎖とを含む、ヘテロ二量体抗体が本明細書に提供され、VH1ドメイン及び第1のVL1ドメインのそれぞれは、一緒に第1の抗原結合ドメイン(ABD)を形成し、scFvは、第2のVHドメイン(VH2)、scFvリンカー、及び第2のVLドメイン(VL2)を含み、VH2及びVL2は、第2のABDを形成し、第1及び第2のABDのうちの一方はヒトCD28に結合し、第1及び第2のABDのうちの他方は腫瘍標的抗原(TTA)に結合する。
ある特定の実施形態では、第1のABDはヒトCD28に結合し、第2のABDはTTAに結合する。いくつかの実施形態では、第1のABDはTTAに結合し、第2のABDはヒトCD28に結合する。
いくつかの実施形態では、scFvは、N末端からC末端に向かって、VL2-scFvリンカー-VH2を含む。いくつかの実施形態では、scFvは、N末端からC末端に向かって、VH2-scFvリンカー-VL2を含む。
いくつかの実施形態では、VH2のアミノ酸配列は、配列番号870、配列番号585、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、及び配列番号651からなる群から選択され、VL2のアミノ酸配列は、配列番号874、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号660、配列番号661、配列番号662、配列番号663、配列番号664、配列番号665、配列番号666、配列番号667、配列番号668、配列番号669、配列番号670、配列番号671、配列番号672、配列番号NO:673、配列番号674、配列番号675、配列番号676、配列番号677、配列番号678、配列番号679、配列番号680、配列番号681、配列番号682、配列番号683、配列番号684、配列番号685、配列番号686、配列番号687、配列番号688、配列番号689、配列番号690、配列番号691、配列番号692、配列番号693、配列番号694、配列番号695、配列番号696、配列番号697、配列番号698、配列番号699、配列番号700、配列番号701、配列番号702、配列番号703、配列番号704、配列番号705、配列番号706、配列番号707、配列番号708、配列番号709、配列番号710、配列番号711、配列番号712、配列番号713、配列番号714、配列番号715、配列番号716、配列番号717、配列番号718、配列番号719、配列番号720、配列番号721、配列番号722、配列番号723、配列番号724、配列番号725、配列番号726、配列番号727、配列番号728、配列番号729、配列番号730、配列番号731、配列番号732、配列番号733、配列番号734、配列番号735、配列番号736、配列番号737、配列番号738、配列番号739、配列番号740、配列番号741、配列番号742、配列番号743、配列番号744、配列番号745、配列番号746、配列番号747、配列番号748、配列番号749、配列番号750、配列番号751、配列番号752、配列番号753、配列番号754、配列番号755、配列番号1200及び配列番号756からなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、TTAはヒトB7H3である。
いくつかの実施形態では、第1のFcドメイン及び第2のFcドメインは、それぞれバリアントFcドメインである。
例示的な実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、以下のヘテロ二量体化バリアント:S364K/E357Q:L368D/K370S;S364K:L368D/K370S;S364K:L368E/K370S;D401K:T411E/K360E/Q362E;及びT366W:T366S/L368A/Y407Vから選択されるヘテロ二量体化スキューバリアントのセットを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。いくつかの実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントS364K/E357Q:L368D/K370Sを含む。
いくつかの実施形態では、第1及び第2のFcドメインはそれぞれ、1つ以上の除去バリアントを含む。ある特定の実施形態では、1つ以上の除去バリアントは、E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kであり、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1又は第2の単量体のうちの1つは、pIバリアントを更に含む。例示的な実施形態では、第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
例示的な実施形態では、第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、第1のFcドメインは、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
ある特定の実施形態では、第1及び第2のバリアントFcドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント428L/434Sを含む。
一態様では、a)i)第1の可変重鎖ドメイン、scFvリンカー及び第1の可変軽鎖ドメインを含むscFvと、ii)第1のFcドメインとを含む第1の単量体であって、scFvが、ドメインリンカーを用いて第1のFcドメインのN末端に共有結合している、第1の単量体と、b)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、VHが、第1の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が、第2のFcドメインである、第2の単量体と、c)N末端からC末端に向かって、VL1-CLを含む軽鎖であって、VL1が、可変軽鎖ドメインであり、CLが、定常軽鎖ドメインである、軽鎖とを含む、ヘテロ二量体抗体が本明細書に提供され、VH1及びVL1は、一緒に第1のABDを形成し、scFvは、第2のVHドメイン(VH2)、scFvリンカー、及び第2のVLドメイン(VL2)を含み、VH2及びVL2は、第2のABDを形成し、第1のABD及び第2のABDのうちの一方はCD28に結合し、第1のABD及び第2のABDのうちの他方はTTAに結合する。
いくつかの実施形態では、scFvは、N末端からC末端に向かって、VL2-scFvリンカー-VH2を含む。ある特定の実施形態では、scFvは、N末端からC末端に向かって、VH2-scFvリンカー-VL2を含む。
ある特定の実施形態では、第2のABDはヒトCD28に結合し、VH2のアミノ酸配列は、配列番号870、配列番号585、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、及び配列番号651からなる群から選択され、VL2のアミノ酸配列は、配列番号874、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号660、配列番号661、配列番号662、配列番号663、配列番号664、配列番号665、配列番号666、配列番号667、配列番号668、配列番号669、配列番号670、配列番号671、配列番号672、配列番号NO:673、配列番号674、配列番号675、配列番号676、配列番号677、配列番号678、配列番号679、配列番号680、配列番号681、配列番号682、配列番号683、配列番号684、配列番号685、配列番号686、配列番号687、配列番号688、配列番号689、配列番号690、配列番号691、配列番号692、配列番号693、配列番号694、配列番号695、配列番号696、配列番号697、配列番号698、配列番号699、配列番号700、配列番号701、配列番号702、配列番号703、配列番号704、配列番号705、配列番号706、配列番号707、配列番号708、配列番号709、配列番号710、配列番号711、配列番号712、配列番号713、配列番号714、配列番号715、配列番号716、配列番号717、配列番号718、配列番号719、配列番号720、配列番号721、配列番号722、配列番号723、配列番号724、配列番号725、配列番号726、配列番号727、配列番号728、配列番号729、配列番号730、配列番号731、配列番号732、配列番号733、配列番号734、配列番号735、配列番号736、配列番号737、配列番号738、配列番号739、配列番号740、配列番号741、配列番号742、配列番号743、配列番号744、配列番号745、配列番号746、配列番号747、配列番号748、配列番号749、配列番号750、配列番号751、配列番号752、配列番号753、配列番号754、配列番号755、配列番号1200及び配列番号756からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、第1のFcドメイン及び第2のFcドメインは、それぞれバリアントFcドメインである。
ある特定の実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、以下のヘテロ二量体化バリアント:S364K/E357Q:L368D/K370S;S364K:L368D/K370S;S364K:L368E/K370S;D401K:T411E/K360E/Q362E;及びT366W:T366S/L368A/Y407Vから選択されるヘテロ二量体化スキューバリアントのセットを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。例示的な実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントS364K/E357Q:L368D/K370Sを含む。
ある特定の実施形態では、第1及び第2のFcドメインはそれぞれ、1つ以上の除去バリアントを含む。いくつかの実施形態では、1つ以上の除去バリアントは、E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kであり、番号付けは、EU番号付けに従う。
ある特定の実施形態では、第1又は第2の単量体のうちの1つは、pIバリアントを更に含む。例示的な実施形態では、第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
例示的な実施形態では、第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、第1のFcドメインは、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1及び第2のバリアントFcドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント428L/434Sを含む。
別の態様では、a)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3-ドメインリンカー-scFvを含む第1の単量体であって、VH1が、第1の可変重鎖ドメインであり、scFvが、抗CD28 scFvであり、CH2-CH3が、第1のFcドメインである、第1の単量体と、b)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、CH2-CH3が、第2のFcドメインである、第2の単量体と、c)N末端からC末端に向かって、VL1-CLを含む軽鎖であって、VL1が、可変軽鎖ドメインであり、CLが、定常軽鎖ドメインである、軽鎖とを含む、ヘテロ二量体抗体が本明細書に提供され、VH1ドメイン及び第1のVL1ドメインのそれぞれは、一緒に第1の抗原結合ドメイン(ABD)を形成し、scFvは、第2のVHドメイン(VH2)、scFvリンカー、及び第2のVLドメイン(VL2)を含み、VH2及びVL2は、一緒に第2のABDを形成し、第1及び第2のABDのうちの一方はヒトCD28に結合し、第1及び第2のABDのうちの他方は腫瘍標的抗原(TTA)に結合する。
ある特定の実施形態では、第1のABDはヒトCD28に結合し、第2のABDはTTAに結合する。いくつかの実施形態では、第1のABDはTTAに結合し、第2のABDはヒトCD28に結合する。
ある特定の実施形態では、scFvは、N末端からC末端に向かって、VL2-scFvリンカー-VH2を含む。いくつかの実施形態では、scFvは、N末端からC末端に向かって、VH2-scFvリンカー-VL2を含む。
ある特定の実施形態では、VH2のアミノ酸配列は、配列番号870、配列番号585、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、及び配列番号651からなる群から選択され、VL2のアミノ酸配列は、配列番号874、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号660、配列番号661、配列番号662、配列番号663、配列番号664、配列番号665、配列番号666、配列番号667、配列番号668、配列番号669、配列番号670、配列番号671、配列番号672、配列番号NO:673、配列番号674、配列番号675、配列番号676、配列番号677、配列番号678、配列番号679、配列番号680、配列番号681、配列番号682、配列番号683、配列番号684、配列番号685、配列番号686、配列番号687、配列番号688、配列番号689、配列番号690、配列番号691、配列番号692、配列番号693、配列番号694、配列番号695、配列番号696、配列番号697、配列番号698、配列番号699、配列番号700、配列番号701、配列番号702、配列番号703、配列番号704、配列番号705、配列番号706、配列番号707、配列番号708、配列番号709、配列番号710、配列番号711、配列番号712、配列番号713、配列番号714、配列番号715、配列番号716、配列番号717、配列番号718、配列番号719、配列番号720、配列番号721、配列番号722、配列番号723、配列番号724、配列番号725、配列番号726、配列番号727、配列番号728、配列番号729、配列番号730、配列番号731、配列番号732、配列番号733、配列番号734、配列番号735、配列番号736、配列番号737、配列番号738、配列番号739、配列番号740、配列番号741、配列番号742、配列番号743、配列番号744、配列番号745、配列番号746、配列番号747、配列番号748、配列番号749、配列番号750、配列番号751、配列番号752、配列番号753、配列番号754、配列番号755、配列番号1200及び配列番号756からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、TTAはヒトB7H3である。
いくつかの実施形態では、第1のFcドメイン及び第2のFcドメインは、それぞれバリアントFcドメインである。いくつかの実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、以下のヘテロ二量体化バリアント:S364K/E357Q:L368D/K370S;S364K:L368D/K370S;S364K:L368E/K370S;D401K:T411E/K360E/Q362E;及びT366W:T366S/L368A/Y407Vから選択されるヘテロ二量体化スキューバリアントのセットを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。ある特定の実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントS364K/E357Q:L368D/K370Sを含む。
いくつかの実施形態では、第1及び第2のFcドメインはそれぞれ、1つ以上の除去バリアントを含む。ある特定の実施形態では、1つ以上の除去バリアントは、E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kであり、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1又は第2の単量体のうちの1つは、pIバリアントを更に含む。例示的な実施形態では、第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、第1のFcドメインは、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
例示的な実施形態では、第1及び第2のバリアントFcドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント428L/434Sを含む。
別の態様では、a)本明細書に記載のヘテロ二量体抗体のいずれかの第1の単量体をコードする第1の核酸と、b)ヘテロ二量体抗体の第2の単量体をコードする第2の核酸と、c)ヘテロ二量体抗体の軽鎖をコードする第3の核酸とをそれぞれ含む核酸組成物が、本明細書に提供される。第1、第2及び第3の核酸のうちの1つ以上を含む発現ベクターを含む発現ベクター組成物、そのような発現ベクター組成物を含む宿主細胞、並びに本明細書に記載のヘテロ二量体抗体を作製する方法もまた、本明細書に提供される。
別の態様では、がんの治療を必要とする患者においてがんを治療する方法であって、本明細書に記載のヘテロ二量体抗体を患者に投与することを含む方法が本明細書に提供される。
別の態様では、がんの治療を必要とする患者においてがんを治療する方法であって、a)本明細書に記載のヘテロ二量体抗体であって、TTAがヒトB7H3であるヘテロ二量体抗体と、b)CD3及びB7H3に結合する二重特異性抗体とを患者に投与することを含む方法が本明細書に提供される。
更に別の態様では、がんの治療を必要とする患者においてがんを治療する方法であって、a)本明細書に記載のヘテロ二量体抗体であって、TTAがヒトB7H3であるヘテロ二量体抗体と、b)抗PD-1抗体及び抗PD-L1抗体からなる群から選択されるチェックポイント阻害剤とを患者に投与することを含む方法が本明細書に提供される。
更に別の態様では、a)配列番号870、配列番号585、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、配列番号651、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号670、配列番号671及び配列番号672からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、b)配列番号874、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号660、配列番号661、配列番号662、配列番号663、配列番号664、配列番号665、配列番号666、配列番号667、配列番号668、配列番号669、配列番号670、配列番号671、配列番号672、配列番号NO:673、配列番号674、配列番号675、配列番号676、配列番号677、配列番号678、配列番号679、配列番号680、配列番号681、配列番号682、配列番号683、配列番号684、配列番号685、配列番号686、配列番号687、配列番号688、配列番号689、配列番号690、配列番号691、配列番号692、配列番号693、配列番号694、配列番号695、配列番号696、配列番号697、配列番号698、配列番号699、配列番号700、配列番号701、配列番号702、配列番号703、配列番号704、配列番号705、配列番号706、配列番号707、配列番号708、配列番号709、配列番号710、配列番号711、配列番号712、配列番号713、配列番号714、配列番号715、配列番号716、配列番号717、配列番号718、配列番号719、配列番号720、配列番号721、配列番号722、配列番号723、配列番号724、配列番号725、配列番号726、配列番号727、配列番号728、配列番号729、配列番号730、配列番号731、配列番号732、配列番号733、配列番号734、配列番号735、配列番号736、配列番号737、配列番号738、配列番号739、配列番号740、配列番号741、配列番号742、配列番号743、配列番号744、配列番号745、配列番号746、配列番号747、配列番号748、配列番号749、配列番号750、配列番号751、配列番号752、配列番号753、配列番号754、配列番号755、配列番号1200及び配列番号756からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗CD28 ABDを含む、組成物が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、a)VH-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む重鎖と、b)VL-CLを含む軽鎖とを含む抗体である。
別の態様では、a)配列番号518、配列番号928、配列番号497、配列番号498、配列番号499、配列番号500、配列番号501、配列番号502、配列番号503、配列番号504、配列番号505、配列番号506、配列番号507、配列番号508、配列番号509、配列番号510、配列番号511、配列番号512、配列番号513、配列番号514、配列番号515、配列番号516、配列番号517、配列番号519、配列番号520、配列番号521、配列番号522、配列番号523、配列番号524、配列番号525、配列番号526、配列番号527、配列番号528、配列番号529、配列番号530、配列番号531、配列番号532、配列番号533、配列番号534、配列番号535、配列番号536、配列番号537、配列番号538、配列番号539、配列番号540、配列番号541、配列番号542、配列番号543、配列番号544、配列番号545、配列番号546、配列番号547、配列番号548、配列番号549、配列番号550、配列番号551、配列番号552、配列番号553、配列番号554、配列番号555、配列番号556、配列番号557、配列番号558、配列番号559、配列番号560、配列番号561、配列番号562、配列番号563、配列番号564、配列番号565、配列番号566、配列番号567、配列番号568、配列番号569、配列番号570、配列番号571、配列番号572、配列番号573、配列番号574、配列番号575、配列番号576、配列番号577、配列番号578、配列番号579、配列番号580、配列番号581、配列番号582、配列番号583、及び配列番号584からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、b)配列番号874及び配列番号932からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗B7H3 ABDを含む、組成物が本明細書に提供される。
一態様では、a)配列番号946のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、b)配列番号950のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗B7H3 ABDを含む、組成物が本明細書に提供される。
別の態様では、a)配列番号956のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、b)配列番号960のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗B7H3 ABDを含む、組成物が本明細書に提供される。
一態様では、a)配列番号964のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、b)配列番号968のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗B7H3 ABDを含む、組成物が本明細書に提供される。
別の態様では、a)配列番号972のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、b)配列番号976のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗B7H3 ABDを含む、組成物が本明細書に提供される。
いくつかの実施形態では、組成物は、a)-CH1-ヒンジ-CH2-CH3に連結したVHを含む重鎖と、b)-CLに連結したVLを含む軽鎖とを含む抗体である。
別の態様では、a)本明細書に記載の抗CD28 ABD又は抗B7H3 ABDのいずれかのVHをコードする第1の核酸と、b)抗CD28又は抗B7H3 ABDのVLをコードする第2の核酸とをそれぞれ含む核酸組成物が、本明細書に提供される。第1及び第2の核酸のうちの1つ以上を含む発現ベクターを含む発現ベクター組成物、そのような核酸組成物又は発現ベクター組成物を含む宿主細胞、並びに本明細書に記載の抗CD28 ABD又は抗-B7H3 ABD組成物を作製する方法もまた、本明細書に提供される。
一態様では、CD28抗原結合ドメイン(ABD)を含む組成物が、本明細書で提供される。CD28 ABDは、以下のCD28結合ドメインのいずれかの可変重鎖相補性決定領域1-3(vhCDR1-3)及び可変軽鎖相補性決定領域(vlCDR1-3)を含む:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、hu9.3[CD28]_H1L1。
いくつかの実施形態では、CD28 ABDは、以下のCD28結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、hu9.3[CD28]_H1L1。例示的な実施形態では、CD28抗原結合ドメインは、以下のCD28結合ドメインから選択される:CD28結合ドメイン:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、hu9.3[CD28]_H1L1。
別の態様では、CD28抗原結合ドメイン(ABD)を含む抗CD28抗体が本明細書に提供される。CD28抗原結合ドメインは、以下のCD28結合ドメインのいずれかの可変重鎖相補性決定領域1-3(vhCDR1-3)及び可変軽鎖相補性決定領域(vlCDR1-3)を含む:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、hu9.3[CD28]_H1L1。いくつかの実施形態では、CD28 ABDは、以下のCD28結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、hu9.3[CD28]_H1L1。例示的な実施形態では、CD28抗原結合ドメインは、以下のCD28結合ドメインから選択される:CD28結合ドメイン:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、hu9.3[CD28]_H1L1。
いくつかの実施形態では、抗CD28抗体は、a)第1の抗原結合ドメイン及び第1の定常ドメインを含む第1の単量体と、b)第2の抗原結合ドメイン及び第2の定常ドメインを含む第2の単量体と、を含み、第1の抗原結合ドメイン又は第2の抗原結合ドメインのいずれかが、CD28抗原結合ドメインである。
いくつかの実施形態では、第1の抗原結合ドメイン及び第2の抗原結合ドメインは、異なる抗原に結合する。
ある特定の実施形態では、CD28抗原結合ドメインは、抗CD28一本鎖フラグメント(scFv)である。例示的な実施形態では、scFvは、荷電scFvリンカーを含む。
いくつかの実施形態では、第1及び第2の定常ドメインはそれぞれ、CH2-CH3を含む。例示的な実施形態では、第1及び第2の定常ドメインはそれぞれ、バリアント定常ドメインである。ある特定の実施形態では、第1及び第2の定常ドメインは、S364K/E357Q:L368D/K370S;S364K:L368D/K370S;S364K:L368E/K370S;D401K:T411E/K360E/Q362E;及びT366W:T366S/L368A/Y407Vからなる群から選択されるヘテロ二量体化バリアントのセットを含む。ある特定の実施形態では、第1及び第2の単量体それぞれ、1つ以上の除去バリアントを更に含む。例示的な実施形態では、除去バリアントは、E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kである。いくつかの実施形態では、第1又は第2の単量体のうちの少なくとも1つは、1つ以上のpIバリアントを更に含む。特定の実施形態では、pIバリアントは、N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dである。
一態様では、B7H3抗原結合ドメイン(ABD)を含む組成物が、本明細書で提供される。B7H3結合ドメインは、以下のB7H3結合ドメインのいずれかの可変重鎖相補性決定領域1-3(vhCDR1-3)及び可変軽鎖相補性決定領域(vlCDR1-3)を含む:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704。
いくつかの実施形態では、B7H3 ABDは、以下のB7H3結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704。
例示的な実施形態では、B7H3 ABDは、以下のB7H3抗原結合ドメインから選択される:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704。
更に別の態様では、B7H3抗原結合ドメインを含む抗B7H3抗体が本明細書に提供され、B7H3抗原結合ドメインは、以下のB7H3抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖相補性決定領域1-3(vhCDR1-3)及び可変軽鎖相補性決定領域(vlCDR1-3)を含む:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704。
いくつかの実施形態では、抗B7H3抗体は、B7H3抗原結合ドメインを含む。B7H3抗原結合ドメインは、以下のB7H3抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704。例示的な実施形態では、B7H3抗原結合ドメインは、以下のB7H3抗原結合ドメインのいずれか1つから選択される:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704。
いくつかの実施形態では、抗体は、a)第1の抗原結合ドメイン及び第1の定常ドメインを含む第1の単量体と、b)第2の抗原結合ドメイン及び第2の定常ドメインを含む第2の単量体と、を含み、第1の抗原結合ドメイン又は第2の抗原結合ドメインのいずれかが、B7H3抗原結合ドメインである。ある特定の実施形態では、第1の抗原結合ドメイン及び第2の抗原結合ドメインは、異なる抗原に結合する。
例示的な実施形態では、第1の抗原結合ドメインは、B7H3抗原結合ドメインであり、第2の抗原結合ドメインは、CD28結合ドメインである。いくつかの実施形態では、CD28結合ドメインは、以下のCD28結合ドメインのいずれかのvhCDR1-3及びvlCDR1-3を含む:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、及びhu9.3[CD28]_H1L1。いくつかの実施形態では、CD28結合ドメインは、以下のCD28結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、及びhu9.3[CD28]_H1L1。ある特定の実施形態では、CD28結合ドメインは、抗CD28 scFvである。例示的な実施形態では、scFvは、荷電scFvリンカーを含む。
いくつかの実施形態では、第1及び第2の定常ドメインはそれぞれ、CH2-CH3を含む。例示的な実施形態では、第1及び第2の定常ドメインはそれぞれ、バリアント定常ドメインである。
特定の実施形態では、第1及び第2の定常ドメインは、S364K/E357Q:L368D/K370S;S364K:L368D/K370S;S364K:L368E/K370S;D401K:T411E/K360E/Q362E;及びT366W:T366S/L368A/Y407Vから選択されるヘテロ二量体化バリアントのセットを含む。ある特定の実施形態では、第1及び第2の単量体それぞれ、1つ以上の除去バリアントを含む。ある特定の実施形態では、除去バリアントは、E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kである。いくつかの実施形態では、第1又は第2の単量体のうちの少なくとも1つは、1つ以上のpIバリアントを更に含む。特定の実施形態では、pIバリアントは、N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dである。
別の態様では、抗CD28×抗TAA 1+1 Fab-scFv-Fcヘテロ二量体抗体が本明細書に提供される。一実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、a)i)第1の可変軽鎖ドメイン、scFvリンカー及び第1の可変軽鎖ドメインを含む抗CD28 scFvと、ii)第1のFcドメインと、を含む第1の単量体であって、scFvが、ドメインリンカーを使用して第1のFcドメインのN末端に共有結合している、第1の単量体と、b)N末端からC末端に向かって、VH2-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、VH2が、第2の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が、第2のFcドメインである、第2の単量体と、c)第2の可変軽鎖ドメインを含む第3の単量体であって、第2の可変重鎖ドメイン及び第2の可変軽鎖ドメインが、腫瘍関連抗原(TAA)結合ドメインを形成する、第3の単量体と、を含む。
いくつかの実施形態では、抗CD28 scFvは、以下のCD28抗原結合ドメインのいずれかのvhCDR1-3及びvlCDR1-3を含む:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、及びhu9.3[CD28]_H1L1。
ある特定の実施形態では、抗CD28 scFvの第1の可変重鎖ドメイン及び第1の可変軽鎖ドメインは、それぞれ以下のCD28抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインである:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、及びhu9.3[CD28]_H1L1。
特定の実施形態では、TAA結合ドメインは、B7H3結合ドメインである。いくつかの実施形態では、B7H3結合ドメインは、以下のB7H3抗原結合ドメインのいずれかのvhCDR1-3及びvlCDR1-3を含む:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704。
例示的な実施形態では、第2の可変重鎖ドメイン及び第2の可変軽鎖ドメインは、それぞれ以下のB7H3抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインである:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704。
例示的な実施形態では、抗CD28 scFvは、N末端からC末端に向かって、第1の可変軽鎖ドメイン-scFvリンカー-第1の可変重鎖ドメインの方向を向いている。他の実施形態では、抗CD28 scFvは、N末端からC末端に向かって、第1の可変重鎖ドメイン-scFvリンカー-第1の可変軽鎖ドメインの方向を向いている。多くの実施形態では、scFvリンカーは、荷電scFvリンカーである。
ある特定の実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、バリアントFcドメインである。いくつかの実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、S364K/E357Q:L368D/K370S;S364K:L368D/K370S;S364K:L368E/K370S;D401K:T411E/K360E/Q362E;及びT366W:T366S/L368A/Y407Vからなる群から選択されるヘテロ二量体化スキューバリアントのセットを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。例示的な実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントS364K/E357Q:L368D/K370Sを含む。
ある特定の実施形態では、第1及び第2のFcドメインはそれぞれ、1つ以上の除去バリアントを含む。例示的な実施形態では、1つ以上の除去バリアントは、E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kであり、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1又は第2の単量体のうちの1つは、1つ以上のpIバリアントを含む。例示的な実施形態では、第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
例示的な実施形態では、第1のFcドメインは、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
ある特定の実施形態では、scFvリンカーは、アミノ酸配列(GKPGS)4を有する荷電scFvリンカーである。
特定の実施形態では、第1及び第2のFcドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント428/434Sを更に含む。
いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA 1+1 Fab-scFv-Fcヘテロ二量体抗体は、a)N末端からC末端に向かって、抗CD28 scFv-リンカー-CH2-CH3を含む第1の単量体であって、CH2-CH3が、第1のFcドメインである、第1の単量体と、b)N末端からC末端に向かって、VH-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、CH2-CH3が、第2のバリアントFcドメインである、第2の単量体と、c)VL-CLを含む第3の単量体とを含み、第1のバリアントFcドメインは、アミノ酸バリアントS364K/E357Qを含み、第2のバリアントFcドメインは、アミノ酸バリアントL368D/K370Sを含み、第1及び第2のバリアントFcドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアントE233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、アミノ酸バリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、VH及びVLは、腫瘍関連抗原(TAA)結合ドメインを形成し、抗CD28 scFvは、以下のCD28抗原結合ドメイン:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、及びhu9.3[CD28]_H1L1のうちの1つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
ある特定の実施形態では、TAA結合ドメインは、B7H3結合ドメインである。いくつかの実施形態では、VH及びVLは、それぞれ以下のB7H3抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインである:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704。
例示的な実施形態では、scFvは、アミノ酸配列(GKPGS)4を有する荷電scFvリンカーを含む。いくつかの実施形態では、第1及び第2のバリアントFcドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント428/434Sを更に含み、ここで、番号付けは、EU番号付けに従う。
別の態様では、a)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-リンカー1-抗CD28 scFv-リンカー2-CH2-CH3を含む第1の単量体であって、VH1が、第1の可変重鎖ドメインであり、リンカー1及びリンカー2が、それぞれ第1のドメインリンカー及び第2のドメインリンカーであり、CH2-CH3が、第1のFcドメインである、第1の単量体と、b)N末端からC末端に向かって、VH2-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、VH2が、第2の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が、第2のFcドメインである、第2の単量体と、c)可変軽鎖ドメインを含む共通軽鎖と、を含む抗CD28×抗TAA 2+1 Fab2-scFv-Fcが本明細書に提供され、第1の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは、第1の腫瘍関連抗原(TAA)結合ドメインを形成し、第2の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは、第2のTAA結合ドメインを形成する。
例示的な実施形態では、第1のTAA結合ドメイン及び第2のTAA結合ドメインは、それぞれB7H3結合ドメインである。例示的な実施形態では、第1及び第2のB7H3結合ドメインはそれぞれ、以下のB7H3抗原結合ドメインのいずれかのvhCDR1-3及びvlCDR1-3を含む:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704。いくつかの実施形態では、第1及び第2の可変重鎖ドメインはそれぞれ、B7H3結合ドメインの可変重鎖ドメインを含み、可変軽鎖ドメインは、B7H3結合ドメインの可変軽鎖ドメインを含み、B7H3結合ドメインは、以下のB7H3結合ドメインのいずれかである:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704。
抗CD28×抗TAA 2+1 Fab2-scFv-Fc抗体のいくつかの実施形態では、抗CD28 scFvは、scFv可変重鎖ドメイン、scFv可変軽鎖ドメイン、及びscFv可変重鎖ドメインとscFv可変軽鎖ドメインとを接続するscFvリンカーを含む。ある特定の実施形態では、抗CD28 scFvは、以下のCD28抗原結合ドメインのいずれかのvhCDR1-3及びvlCDR1-3を含む:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、及びhu9.3[CD28]_H1L1。ある特定の実施形態では、抗CD28 scFvのscFv可変重鎖ドメイン及びscFv可変軽鎖ドメインは、それぞれ以下のCD28抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、及びhu9.3[CD28]_H1L1。
いくつかの実施形態では、scFv可変重鎖ドメインは、第1のドメインリンカーを使用して第1の単量体のCH1のC末端に結合され、scFv可変軽鎖ドメインは、第2のFcドメインリンカーを使用して第1のFcドメインのN末端に共有結合している。他の実施形態では、scFv可変軽鎖ドメインは、第1のドメインリンカーを使用して第1の単量体のCH1のC末端に結合され、scFv可変重鎖ドメインは、第2のFcドメインリンカーを使用して第1のFcドメインのN末端に共有結合している。いくつかの実施形態では、scFvリンカーは、荷電scFvリンカーである。
ある特定の実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、バリアント定常ドメインである。第1及び第2のFcドメインは、以下のヘテロ二量体化スキューバリアント:S364K/E357Q:L368D/K370S;S364K:L368D/K370S;S364K:L368E/K370S;D401K:T411E/K360E/Q362E;及びT366W:T366S/L368A/Y407Vから選択されるヘテロ二量体化バリアントのセットを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。いくつかの実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントS364K/E357Q:L368D/K370Sを含む。
いくつかの実施形態では、第1及び第2のFcドメインはそれぞれ、1つ以上の除去バリアントを含む。例示的な実施形態では、1つ以上の除去バリアントは、E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kであり、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1又は第2の単量体のうちの1つは、1つ以上のpIバリアントを含む。特定の実施形態では、第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
例示的な実施形態では、第1の単量体の第1のFcドメインは、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、アミノ酸バリアントN208D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/Q295E/L368D/K370S/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、抗CD28 scFvは、アミノ酸配列(GKPGS)4を有する荷電scFvリンカーを含む。ある特定の実施形態では、第1及び第2のバリアントFcドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント428/434Sを更に含み、ここで、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA 2+1 Fab2-scFv-Fc抗体は、a)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-リンカー1-抗CD28 scFv-リンカー2-CH2-CH3を含む第1の単量体であって、CH2-CH3が、第1のバリアントFcドメインである、第1の単量体と、b)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、CH2-CH3が、第2のバリアントFcドメインである、第2の単量体と、c)VL-CLを含む共通軽鎖とを含み、第1のバリアントFcドメインは、アミノ酸バリアントS364K/E357Qを含み、第2のバリアントFcドメインは、アミノ酸バリアントL368D/K370Sを含み、第1及び第2のバリアントFcドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアントE233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、アミノ酸バリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、VH1及びVLはそれぞれ、腫瘍関連抗原(TAA)結合ドメインを形成し、抗CD28 scFvは、以下のCD28抗原結合ドメイン:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、及びhu9.3[CD28]_H1L1のいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、VH1及びVLは、B7H3結合ドメインを形成する。例示的な実施形態では、VH1及びVLは、以下のB7H3抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインである:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704。
いくつかの実施形態では、scFvは、アミノ酸配列(GKPGS)4を有する荷電scFvリンカーを含む。ある特定の実施形態では、第1及び第2のバリアントFcドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント428/434Sを更に含む。
別の態様では、a)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第1の単量体であって、VH1が、第1の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が、第1のFcドメインである、第1の単量体と、b)N末端からC末端に向かって、VH2-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、VH2が、第2の可変重鎖ドメインであり、CH2-C3が、第2のFcドメインである、第2の単量体と、c)N末端からC末端に向かって、VL-CLを含む共通軽鎖であって、VLが、可変軽鎖ドメインであり、CLが、定常軽鎖ドメインである、共通軽鎖と、を含む、抗CD28×抗-TAA 1+1 CLCヘテロ二量体抗体が本明細書に提供され、第1の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは、第1の抗原結合ドメインを形成し、第2の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは、第2の抗原結合ドメインを形成する。
いくつかの実施形態では、第1のFcドメイン及び第2のFcドメインは、それぞれバリアントFcドメインである。ある特定の実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、以下のヘテロ二量体化バリアント:S364K/E357Q:L368D/K370S;S364K:L368D/K370S;S364K:L368E/K370S;D401K:T411E/K360E/Q362E;及びT366W:T366S/L368A/Y407Vから選択されるヘテロ二量体化スキューバリアントのセットを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。例示的な実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントS364K/E357Q:L368D/K370Sを含む。
ある特定の実施形態では、第1及び第2のFcドメインはそれぞれ、1つ以上の除去バリアントを含む。例示的な実施形態では、1つ以上の除去バリアントは、E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kであり、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1又は第2の単量体のうちの1つは、pIバリアントを更に含む。特定の実施形態では、第1の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
ある特定の実施形態では、第1の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、第2のFcドメインは、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1及び第2のバリアントFcドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント428/434Sを含む。
ある特定の実施形態では、第1の抗原結合ドメイン又は第2の結合ドメインはCD28に結合し、他の抗原結合ドメインは腫瘍関連抗原(TAA)に結合する。
ある特定の実施形態では、第2の抗原結合ドメインはCD28に結合し、VH2及びVLは、それぞれ以下のCD28結合ドメインのいずれか1つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、及びhu9.3[CD28]_H1L1。
いくつかの実施形態では、第1の抗原結合ドメインはTTAに結合する。例示的な実施形態では、TAAはB7H3である。例示的な実施形態では、VH1及びVLは、それぞれ以下のB7H3結合ドメインのいずれか1つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704。
例示的な実施形態では、第1の抗原結合ドメインはB7H3に結合し、第2の抗原結合ドメインはCD28に結合し、VH1は可変重鎖ドメイン2E4A3.189[B7H3]_H1.22であり、VH2は可変重鎖ドメイン1A7[CD28]_H1.14であり、VLは可変軽鎖ドメイン1A7[CD28]_L1である。
一態様では、a)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-リンカー-VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第1の単量体であって、VH1がそれぞれ、第1の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が、第1のFcドメインである、第1の単量体と、b)N末端からC末端に向かって、VH2-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、VH2が、第2の可変重鎖ドメインであり、CH2-C3が、第2のFcドメインである、第2の単量体と、c)N末端からC末端に向かって、VL-CLを含む共通軽鎖であって、VLが、可変軽鎖ドメインであり、CLが、定常軽鎖ドメインである、共通軽鎖と、を含む、抗CD28×抗-TAA 2+1 CLCヘテロ二量体抗体が本明細書に提供され、第1の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインはそれぞれ、第1の抗原結合ドメインを形成し、第2の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは、第2の抗原結合ドメインを形成する。
いくつかの実施形態では、第1のFcドメイン及び第2のFcドメインは、それぞれバリアントFcドメインである。いくつかの実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、以下のヘテロ二量体化バリアント:S364K/E357Q:L368D/K370S;S364K:L368D/K370S;S364K:L368E/K370S;D401K:T411E/K360E/Q362E;及びT366W:T366S/L368A/Y407Vから選択されるヘテロ二量体化スキューバリアントのセットを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。ある特定の実施形態では、第1及び第2のFcドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントS364K/E357Q:L368D/K370Sを含む。
いくつかの実施形態では、第1及び第2のFcドメインはそれぞれ、1つ以上の除去バリアントを含む。例示的な実施形態では、1つ以上の除去バリアントは、E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kであり、番号付けは、EU番号付けに従う。
特定の実施形態では、第1又は第2の単量体のうちの1つは、pIバリアントを更に含む。例示的な実施形態では、第1の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
抗CD28×抗TAA 2+1 CLCヘテロ二量体抗体のいくつかの実施形態では、第1の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、第2のFcドメインは、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1及び第2のバリアントFcドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント428/434Sを含む。
ある特定の実施形態では、第1の抗原結合ドメインはCD28に結合し、第2の抗原結合ドメインは腫瘍関連抗原(TAA)に結合する。例示的な実施形態では、VH1及びVLは、それぞれ以下のCD28結合ドメインのいずれか1つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、及びhu9.3[CD28]_H1L1。
いくつかの実施形態では、TAAはB7H3である。例示的な実施形態では、VH2及びVLは、それぞれ以下のB7H3結合ドメインのいずれか1つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704。
いくつかの実施形態では、VH1は可変重鎖ドメイン1A7[CD28]_H1.14であり、VH2は可変重鎖ドメイン2E4A3.189[B7H3]_H1.22であり、VLは可変軽鎖ドメイン1A7[CD28]_L1である。
別の態様では、以下のヘテロ二量体抗体から選択されるヘテロ二量体抗体が本明細書に提供される:XENP34730、XENP34389、XENP34728、XENP34717及びXENP34339。
また、本明細書に提供される組成物及び抗体をコードする核酸組成物、そのような核酸を含む発現ベクター、並びに発現ベクターを含む宿主細胞も本明細書に提供される。
別の態様では、本明細書に提供される抗体(例えば、抗CD28×抗TAA抗体)をそれを必要とする患者に投与することを含む、がんを治療する方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、患者にはがん治療薬も投与される。特定の実施形態では、治療薬は、チェックポイント阻害剤(例えば、抗PD1抗体)又は抗CD3×抗TAA二重特異性抗体である。
I.概要
がんの治療におけるT細胞の活性化は、広く研究されている。T細胞は、完全な活性化及び分化のために複数のシグナルを必要とする。図40に示されるように、T細胞受容体(TCR)によるペプチド-MHC(pMHC)複合体の認識によって促進されるシグナル1は、T細胞の活性化に絶対に必要である。シグナル1と相乗作用してそれを増幅するシグナル2は、典型的には、CD28リガンドCD80及びCD86とCD28自体との相互作用によって提供される。CD28の関与だけでは典型的には不活性であるが、シグナル1の活性化と組み合わせると、IL2分泌を含む更なる活性化、生存、及び増殖シグナルが促進される。CD80及びCD86は専門的な抗原提示細胞(APC)によってのみ自然に発現されるため、腫瘍環境におけるCD28共刺激の程度は非常に変動する可能性がある。したがって、本発明は、新規クラスの腫瘍標的化CD28二重特異性抗体(本明細書でより十分に説明されるB7H3×CD28を含む)を対象とし、CD28のCD80/CD86の関与を模倣して、シグナル2の人工的な供給源を提供することができる。特に、シグナルは、腫瘍細胞の自然なTCR:pMHC認識によって提供され得るか、又はCD28二重特異性とCD3二重特異性(シグナル1を模倣することができる)の組み合わせによって提供され得る。
がんの治療におけるT細胞の活性化は、広く研究されている。T細胞は、完全な活性化及び分化のために複数のシグナルを必要とする。図40に示されるように、T細胞受容体(TCR)によるペプチド-MHC(pMHC)複合体の認識によって促進されるシグナル1は、T細胞の活性化に絶対に必要である。シグナル1と相乗作用してそれを増幅するシグナル2は、典型的には、CD28リガンドCD80及びCD86とCD28自体との相互作用によって提供される。CD28の関与だけでは典型的には不活性であるが、シグナル1の活性化と組み合わせると、IL2分泌を含む更なる活性化、生存、及び増殖シグナルが促進される。CD80及びCD86は専門的な抗原提示細胞(APC)によってのみ自然に発現されるため、腫瘍環境におけるCD28共刺激の程度は非常に変動する可能性がある。したがって、本発明は、新規クラスの腫瘍標的化CD28二重特異性抗体(本明細書でより十分に説明されるB7H3×CD28を含む)を対象とし、CD28のCD80/CD86の関与を模倣して、シグナル2の人工的な供給源を提供することができる。特に、シグナルは、腫瘍細胞の自然なTCR:pMHC認識によって提供され得るか、又はCD28二重特異性とCD3二重特異性(シグナル1を模倣することができる)の組み合わせによって提供され得る。
したがって、本明細書では、新規の抗CD28×抗B7H3(「αCD28×αB7H3」及び時折「CD28 X B7H3」とも呼ばれる)二重特異性抗体、及びがんの治療のためにそのような抗体を使用する方法が提供される。多くの場合、これらの二重特異性抗体は、ヘテロ二量体である。主題のαCD28×αB7H3抗体は、T細胞上のCD28共刺激分子にアゴニスト的に結合し、腫瘍細胞上のB7H3を標的とすることができる。したがって、そのような抗体は、末梢の毒性を最小限に抑えながら、腫瘍部位での抗腫瘍活性を選択的に増強する。本明細書で提供される主題の抗体は、本明細書でより十分に説明されるように、単独で、単剤療法として、又は他の抗がん療法と組み合わせて使用される場合、抗腫瘍活性を増強するのに特に有用である。
したがって、一態様では、2つの異なる抗原に結合するヘテロ二量体抗体が本明細書で提供され、例えば、抗体は、本明細書に記載の2つの異なる標的抗原、一般にCD28及びB7H3に結合するという点で「二重特異性」である。これらのヘテロ二量体抗体は、標的抗原のそれぞれに一価(例えば、可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインのペアなどの単一の抗原結合ドメインがある)又は二価(それぞれが独立して抗原に結合する2つの抗原結合ドメインがある)のいずれかに結合することができる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるヘテロ二量体抗体は、1つのCD28結合ドメイン及び1つのB7H3結合ドメイン(例えば、本明細書に記載の「1+1 Fab-scFv-Fc」フォーマットのヘテロ二量体抗体、したがってこれは二重特異性及び二価である)を含む。他の実施形態では、本明細書で提供されるヘテロ二量体抗体は、1つのCD28結合ドメイン及び2つのB7H3結合ドメイン(例えば、本明細書に記載の「2+1 Fab2-scFv-Fc」フォーマットのヘテロ二量体抗体、したがってこれは二重特異性であるが、3つの抗原結合ドメイン(ABD)を含有するため三価である)を含む。本明細書で提供されるヘテロ二量体抗体は、以下でより完全に概説されるように、ホモ二量体上でヘテロ二量体の形成を「ゆがめる」アミノ酸置換を含む(すなわち「スキューバリアント」)異なる単量体の使用に基づいている。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体はまた、以下で同様に概説されるように、ホモ二量体から離れたヘテロ二量体の単純な精製を可能にする「pIバリアント」と連結される。提供されるヘテロ二量体二重特異性抗体は、一般に、産生細胞で自己集合してヘテロ二量体タンパク質を産生することができる操作された又はバリアントのFcドメインの使用、及びそのようなヘテロ二量体タンパク質を生成及び精製する方法に依存する。
II.命名法
本明細書に提供される抗体は、いくつかの異なるフォーマットで列挙されている。場合によっては、特定の抗体の各単量体には、固有の「XENP」番号が与えられるが、当該技術分野において離解されるように、より長い配列はより短いものを含み得る。例えば、1+1Fab-scFv-Fcフォーマット抗体の「scFv-Fc」単量体は第1のXENP番号を有し得るが、scFvドメイン自体は異なるXENP番号を有する。いくつかの分子には3つのポリペプチドがあるため、XENP番号が構成要素とともに名称として使用される。したがって、2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマットの分子XENP34389は、3つの配列(図28Aを参照されたい)「Fab-Fc重鎖」単量体;2)「Fab-scFv-Fc重鎖」単量体;及び3)「軽鎖」単量体又は同等物を含むが、当業者であれば、配列アラインメントを通してこれらを容易に同定することができるであろう。これらのXENP番号は、配列表並びに識別子にあり、図で使用される。加えて、3つの構成要素を含む1つの分子は、複数の配列識別子を生成する。例えば、Fabのリストは、完全な重鎖配列、可変重鎖ドメイン配列、及び可変重鎖ドメイン配列の3つのCDR、完全な軽鎖配列、可変の軽鎖ドメイン配列、及び可変軽鎖ドメイン配列の3つのCDRを含む。Fab-scFv-Fc単量体は、全長配列、可変重鎖ドメイン配列、3つの重鎖CDR配列、及びscFv配列(scFv可変重鎖ドメイン配列、scFv可変軽鎖ドメイン配列及びscFvリンカーを含む)を含む。本明細書ではいくつかのscFvドメインを有する分子の中は、単一の荷電scFvリンカー(+H)を使用するが、他のものを使用できることに留意されたい。加えて、特定の抗原結合ドメイン(例えば、B7H3及びCD28結合ドメイン)の命名法は、「Hx.xx_Ly.yy」タイプのフォーマットを使用し、数字は特定の可変鎖配列に対する固有の識別子である。したがって、B7H3結合ドメイン6A[B7H3]のFab側の可変ドメイン(例えば、図28A)は「H1_L1」であり、これは、可変重鎖ドメインH1が軽鎖ドメインL1と組み合わされたことを示している。これらの配列がscFvとして使用される場合、名称「H1_L1」は、可変重鎖ドメインH1が軽鎖ドメインL1と組み合わされ、NからC末端に向かってVH-リンカー-VL方向にあることを示す。重可変ドメイン及び軽可変ドメインの同一の配列を有するが逆の順序(VL-リンカー-VH方向、N末端からC末端に向かって)であるこの分子は、「L1_H1」と命名されるであろう。同様に、異なる構築物は、配列表及び図から明らかになるように、重鎖及び軽鎖を「混合及び適合させる」ことができる。
本明細書に提供される抗体は、いくつかの異なるフォーマットで列挙されている。場合によっては、特定の抗体の各単量体には、固有の「XENP」番号が与えられるが、当該技術分野において離解されるように、より長い配列はより短いものを含み得る。例えば、1+1Fab-scFv-Fcフォーマット抗体の「scFv-Fc」単量体は第1のXENP番号を有し得るが、scFvドメイン自体は異なるXENP番号を有する。いくつかの分子には3つのポリペプチドがあるため、XENP番号が構成要素とともに名称として使用される。したがって、2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマットの分子XENP34389は、3つの配列(図28Aを参照されたい)「Fab-Fc重鎖」単量体;2)「Fab-scFv-Fc重鎖」単量体;及び3)「軽鎖」単量体又は同等物を含むが、当業者であれば、配列アラインメントを通してこれらを容易に同定することができるであろう。これらのXENP番号は、配列表並びに識別子にあり、図で使用される。加えて、3つの構成要素を含む1つの分子は、複数の配列識別子を生成する。例えば、Fabのリストは、完全な重鎖配列、可変重鎖ドメイン配列、及び可変重鎖ドメイン配列の3つのCDR、完全な軽鎖配列、可変の軽鎖ドメイン配列、及び可変軽鎖ドメイン配列の3つのCDRを含む。Fab-scFv-Fc単量体は、全長配列、可変重鎖ドメイン配列、3つの重鎖CDR配列、及びscFv配列(scFv可変重鎖ドメイン配列、scFv可変軽鎖ドメイン配列及びscFvリンカーを含む)を含む。本明細書ではいくつかのscFvドメインを有する分子の中は、単一の荷電scFvリンカー(+H)を使用するが、他のものを使用できることに留意されたい。加えて、特定の抗原結合ドメイン(例えば、B7H3及びCD28結合ドメイン)の命名法は、「Hx.xx_Ly.yy」タイプのフォーマットを使用し、数字は特定の可変鎖配列に対する固有の識別子である。したがって、B7H3結合ドメイン6A[B7H3]のFab側の可変ドメイン(例えば、図28A)は「H1_L1」であり、これは、可変重鎖ドメインH1が軽鎖ドメインL1と組み合わされたことを示している。これらの配列がscFvとして使用される場合、名称「H1_L1」は、可変重鎖ドメインH1が軽鎖ドメインL1と組み合わされ、NからC末端に向かってVH-リンカー-VL方向にあることを示す。重可変ドメイン及び軽可変ドメインの同一の配列を有するが逆の順序(VL-リンカー-VH方向、N末端からC末端に向かって)であるこの分子は、「L1_H1」と命名されるであろう。同様に、異なる構築物は、配列表及び図から明らかになるように、重鎖及び軽鎖を「混合及び適合させる」ことができる。
追加的に、配列表に関して、配列番号1~88は、USSN63/092,272の図17に以前に示された抗原結合ドメインに対応し、配列番号89~496は、USSN63/092,272の図24に以前に示された抗原結合ドメインに対応する。追加的に、配列番号497~584は全て、2E4A3.189[B7H3]親抗体のバリアント可変重鎖ドメインであり、以下により十分に概説するように、それらの全てが本発明で使用される。配列番号585~651は全て、1A7[CD28]親抗体のバリアント可変重鎖ドメインであり、その全てが本発明で使用される。配列番号652~756は全て、1A7[CD28]親抗体のバリアント可変軽鎖ドメインであり、その全てが本発明で使用される。
III.定義
本出願をより完全に理解できるようにするため、いくつかの定義を以下に示す。そのような定義は、文法的同等物を包含することを意図する。
本出願をより完全に理解できるようにするため、いくつかの定義を以下に示す。そのような定義は、文法的同等物を包含することを意図する。
本明細書における「CD28」、「分化のクラスター28」、及び「Tp44」(例えば、Genebank寄託番号NP_001230006(ヒト)、NP_001230007(ヒト)、NP_006130(ヒト)、及びNP_031668(マウス))は、T細胞の活性化及び生存に必要な共刺激シグナルを提供するT細胞上に発現されたB7受容体を意味する。T細胞受容体(TCR)に加えてCD28を介したT細胞刺激は、様々なインターロイキンの産生に強力なシグナルを提供する。CD28は、CD80(B7.1)及びCD86(B7.2)タンパク質の受容体である。CD28は、SH2ドメイン含有タンパク質、特にPI3Kの動員に重要なYMNMモチーフを有する細胞間ドメインを含む。CD28はまた、SH3含有タンパク質に結合できる2つのプロリンリッチモチーフを含む。例示的なCD28配列を図1に示す。別段の記載がない限り、CD28への言及はヒトCD28配列に対するものである。
本明細書における「B7H3」、「B7-H3」、「B7RP-2」、「CD276」、「分化のクラスター276」(例えば、Genebank寄託番号NP_001019907(ヒト)、NP_001316557(ヒト)、NP_001316558(ヒト)、NP_079516(ヒト)、及びNP_598744(マウス))は、単一のIgV-IgCドメイン対で構成される外部ドメインを保有するB7ファミリーのメンバーである1型膜貫通タンパク質を意味する。B7H3は免疫チェックポイント分子であり、多くの種類のがんで異常に過剰発現している。例示的なB7H3配列を図2A及びBに示す。別段の記載がない限り、B7H3への言及はヒトB7H3配列に対するものである。
本明細書において「除去」は、活性の低下又は排除を意味する。したがって、例えば、「FcγR結合を切除する」とは、特定のバリアントを含有しないFc領域と比較して、Fc領域アミノ酸バリアントが、開始結合の50%未満を有することを意味し、活性を70~80~90~95~98%超えて喪失していることが好ましく、一般に、活性は、Biacore、SPR、又はBLIアッセイにおいて、検出可能な結合レベルを下回る。FcγR結合の切除において特に使用されるものは、図5に示すものであり、これらは一般に両方の単量体に付加される。
本明細書で使用される「ADCC」又は「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」は、FcγRを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応を意味する。ADCCは、FcγRIIIaへの結合と相関し、FcγRIIIaへの結合の増加はADCC活性の増加をもたらす。
本明細書で使用される「ADCP」又は「抗体依存性細胞媒介性細胞食作用」とは、FcγRを発現する非特異的食細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的細胞の食作用を引き起こす細胞媒介反応を意味する。
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語が一般的に使用される。本発明で提供される抗体は、本明細書に記載の従来の抗体並びに抗体誘導体、フラグメント及び模倣物を含む、本明細書に記載されているようにいくつかのフォーマットをとることができる。
従来の免疫グロブリン(Ig)抗体は、「Y」字型の四量体である。各四量体は、典型的には、2本の同一のポリペプチド鎖対からなり、各対は、1本の「軽鎖」単量体(典型的には、約25kDaの分子量を有する)と、1本の「重鎖」単量体(典型的には、約50~70kDaの分子量を有する)とを有する。
他の有用な抗体フォーマットには、本明細書で提供される「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」、及び「2+1共通軽鎖」フォーマット(例えば図33を参照されたい)が挙げられるが、これらに限定されない。追加の有用な抗体フォーマットには、参照により本明細書に組み込まれるUS20180127501A1、特に抗体フォーマットに関係する関連部分(例えばUS20180127501A1の図2)に開示されているように、「mAb-Fv」、「mAb-scFv」、「セントラル-Fv」、「ワンアームscFv-mAb」、「scFv-mAb」、「デュアルscFv」、及び「トライデント」フォーマットの抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
抗体重鎖は、典型的には、vhCDR1~3を含む可変重鎖(VH)ドメインと、CH2-CH3単量体を含むFcドメインとを含む。いくつかの実施形態では、抗体重鎖は、ヒンジ及びCH1ドメインを含む。従来の抗体重鎖は、N末端からC末端に向かって組織化された単量体:VH-CH1-ヒンジ-CH2-CH3である。CH1-ヒンジ-CH2-CH3は、抗体、5つの異なるカテゴリー又は「アイソタイプ」:IgA、IgD、IgG、IgE、及びIgMがあるものの、重鎖「定常ドメイン」又は「定常領域」として総称される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、IgG1、IgG2、IgG3、及びIgG4を含むがこれらに限定されないいくつかのサブクラスを有するIgGアイソタイプ定常ドメインを含む。免疫グロブリンのIgGサブクラスには、重鎖においていくつかの免疫グロブリンドメインがある。本明細書における「免疫グロブリン(Ig)ドメイン」は、明確に異なる三次構造を有する免疫グロブリンの領域を意味する。定常重(CH)ドメイン及びヒンジドメインを含む重鎖ドメインが本発明における関心対象である。IgG抗体の関連において、IgGアイソタイプは、それぞれ3つのCH領域を有する。したがって、IgGとの関連における「CH」ドメインは以下の通りである。「CH1」は、KabatにあるようなEU指数による位置118~215を指す。「ヒンジ」とは、Kabatにあるような、EU指数による位置216~230を指す。「CH2」は、KabatにあるようなEU指数による位置231~340を指し、「CH3」は、KabatにあるようなEU指数による位置341~447を指す。表1に示すように、重鎖ドメインの正確な付番及び配置は、異なる付番システムで異なり得る。本明細書に示され、以下に記載されるように、pIバリアントは、以下に考察されるヒンジ領域と同様に1つ以上のCH領域にあり得る。
IgG1は、356(D又はE)及び358(L又はM)で多型を有する異なるアロタイプを有することに留意すべきである。本明細書に示される配列は356E/358Mアロタイプを使用するが、他のアロタイプも本明細書に含まれる。すなわち、本明細書に含まれるIgG1 Fcドメインを含む任意の配列は、356E/358Mアロタイプの代わりに356D/358Lを有することができる。治療用抗体は、アイソタイプ及び/又はサブクラスのハイブリッドも含み得ることを理解されたい。例えば、参照により組み込まれる、米国特許出願公開第2009/0163699号に示されるように、本抗体は、いくつかの実施形態ではIgG1/G2ハイブリッドを含む。
本明細書で使用される「Fc」又は「Fc領域」又は「Fcドメイン」とは、抗体の定常領域を含む、いくつかの場合では、第1の定常領域免疫グロブリンドメイン(例えば、CH1)の全て又はその一部を除外し、いくつかの場合では、任意にヒンジの全部又は一部を含む、ポリペプチドを意味する。IgGの場合、Fcドメインは免疫グロブリンドメインCH2及びCH3(Cγ2及びCγ3)、並びに任意選択的に、CH1(Cγ1)とCH2(Cγ2)との間のヒンジ領域の全て又は一部を含む。したがって、いくつかの場合では、Fcドメインは、N末端からC末端に向かって、CH2-CH3及びヒンジ-CH2-CH3を含む。いくつかの実施形態では、Fcドメインは、IgG1、IgG2、IgG3又はIgG4からのものであり、IgG1ヒンジ-CH2-CH3及びIgG4ヒンジ-CH2-CH3は、多くの実施形態において特定の用途が見出される。追加的に、ヒトIgG1 Fcドメインの場合では、ヒンジはC220Sアミノ酸置換を含み得る。更に、ヒトIgG4 Fcドメインの場合では、ヒンジはS228Pアミノ酸置換を含み得る。Fc領域の境界は異なり得るが、ヒトIgG重鎖Fc領域は、通常、そのカルボキシ末端に残基E216、C226、又はA231を含むものと定義され、ここでの番号付けはKabatと同様のEUインデックスに従う。いくつかの実施形態では、以下でより詳細に説明されるように、例えば、1つ以上のFcγR又はFcRnへの連結を変化させるために、Fc領域に対してアミノ酸修飾が行われる。
本明細書における「重鎖定常領域」とは、可変重鎖ドメインを除く、抗体(又はそのフラグメント)のCH1-ヒンジ-CH2-CH3部分を意味し、ヒトIgG1のEU番号付けでは、これはアミノ酸118~447である。本明細書における「重鎖定常領域フラグメント」とは、N末端及びC末端のいずれか又は両方からのアミノ酸がより少ない重鎖定常領域を意味するが、別の重鎖定常領域と二量体を形成する能力を依然として保持する重鎖定常領域を意味する。
重鎖のドメインの別の種類は、ヒンジ領域である。本明細書において「ヒンジ」又は「ヒンジ領域」又は「抗体ヒンジ領域」又は「ヒンジドメイン」とは、抗体の第1の及び第2の定常ドメイン間のアミノ酸を含む可動性ポリペプチドを意味する。構造的に、IgG CH1ドメインはEU位置215で終わり、IgG CH2ドメインは残基EU位置231で始まる。したがって、IgGについては、抗体ヒンジは、本明細書では、216位(IgG1中のE216)~230位(IgG1中のP230)を含むように定義され、付番はKabatにあるようにEUインデックスによる。場合によっては、「ヒンジフラグメント」が使われ、それは、ヒンジドメインのN末端又はC末端のいずれか又は両方でより少ないアミノ酸を含む。本明細書に記載の通り、pIバリアントはヒンジ領域にも同様に作製することができる。本明細書の抗体の多くは、セリンで置き換えられたEU番号付け(ヒンジ領域)による位置220に少なくとも1つのシステインを有する。一般に、この修飾は、本明細書に示される配列のほとんどについて「scFv単量体」側にある(1+1又は2+1フォーマットが使用される場合)が、ジスルフィド形成を低減するために「Fab単量体」側、又はその両方にあることもできる。本明細書中の配列内に具体的に含まれるのは、これらのシステインの一方又は両方が置き換えられたもの(C220S)である。
当業者には理解されるように、重鎖定常領域ドメイン(すなわちCH1、ヒンジ、CH2及びCH3ドメイン)の正確な番号付け及び配置は、異なる番号付けシステムで異なり得る。EU及びKabatによる重定常領域の番号付けの有用な比較は以下の通りであり、Edelman et al.,1969,Proc Natl Acad Sci USA 63:78-85、及びKabat et al.,1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.,United States Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda(参照によりその全体が組み込まれる)を参照されたい。
抗体軽鎖は、一般に、2つのドメイン:軽鎖CDR vlCDR1~3を含む可変軽鎖ドメイン(VL)と、定常軽鎖領域(しばしば、CL又はCκとして称される)と、を含む。抗体軽鎖は通常、N末端からC末端に向かって組織化されている:VL-CL。
本明細書において「抗原連結ドメイン」又は「ABD」とは、ポリペプチド配列の一部として存在する場合、本明細書で考察されるような標的抗原(例えば、B7H3又はCD28)に特異的に連結する6つの相補性決定領域(CDR)のセットを意味する。当技術分野で知られるように、これらのCDRは、一般に、可変重鎖CDRの第1のセット(vhCDR又はVHCDR)及び可変軽鎖CDRの第2のセット(vlCDR又はVLCDR)として存在し、それぞれが3つのCDR:vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3可変重鎖CDR、及びvlCDR1、vlCDR2、vlCDR3 vhCDR3可変軽鎖CDRを含む。CDRは、可変重鎖ドメイン(vhCDR1~3)と可変軽鎖ドメイン(vlCDR1~3)に存在する。Fv領域からの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメイン。
本発明は、多数の異なるCDRセットを提供する。この場合、「完全CDRセット」は、3つの可変軽鎖CDR及び3つの可変重鎖CDR、例えばvlCDR1、vlCDR2、vlCDR3、vhCDR1、vhCDR2及びvhCDR3を含む。これらは、それぞれ、より大きな可変軽鎖又は可変重鎖ドメインの一部であってもよい。加えて、本明細書により完全に概説されているように、可変重及び可変軽鎖ドメインは、重鎖及び軽鎖が使用されるとき(例えば、Fabが使用されるとき)には別々のポリペプチド鎖上に、又はscFv配列の場合には単一ポリペプチド鎖上にあり得る。
当業者には理解されるように、CDRの正確な番号付け及び配置は、異なる番号付けシステムで異なり得る。しかしながら、可変重鎖及び/又は可変軽鎖配列の開示は、関連する(固有の)CDRの開示を含むことが理解されるべきである。したがって、各可変重領域の開示は、vhCDR(例えば、vhCDR1、vhCDR2及びvhCDR3)の開示であり、各可変軽領域の開示は、vlCDR(例えば、vlCDR1、vlCDR2及びvlCDR3)の開示である。CDR番号付けの有用な比較は以下の通りであり、Lafranc et al.,Dev.Comp.Immunol.27(1):55-77(2003)を参照されたい。
本明細書全体を通して、Kabat番号付けシステムは概して、可変ドメイン内の残基(およそ、軽鎖可変領域の残基1~107及び重鎖可変領域の残基1~113)を参照するときに使用され、EU番号付けシステムは、Fc領域に対するものである(例えば、Kabat et al.,上述(1991)を参照)。
CDRは、抗原結合の形成、又はより具体的には、抗原結合ドメイン及び抗体のエピトープ結合部位の形成に寄与する。「エピトープ」とは、パラトープとして知られている抗体分子の可変領域内の特異的抗原結合部位と相互作用する決定基を指す。エピトープは、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の群分けであり、通常、特異的構造特性、並びに特異的電荷特性を有する。単一抗原が、2つ以上のエピトープを有してもよい。
エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基(エピトープの免疫優性構成要素とも称される)及び結合に直接関与しない他のアミノ酸残基、例えば、特異的抗原結合ペプチドによって効果的に遮断されるアミノ酸残基、換言すると、特異的抗原結合ペプチドのフットプリント内にあるアミノ酸残基を含み得る。
エピトープは、立体配座又は直線状のいずれかであってもよい。立体配座エピトープは、直線状のポリペプチド鎖の異なるセグメントからのアミノ酸の空間的な並置によって生成される。直線状エピトープは、ポリペプチド鎖内の隣接アミノ酸残基によって生成されるものである。立体配座エピトープ及び非立体配座エピトープは、変性溶媒の存在下で前者への結合は失われるが、後者への結合は失われないという点で区別され得る。
エピトープは、典型的には、固有の空間立体構造内に、少なくとも3個、より通常には、少なくとも5個、又は8~10個のアミノ酸を含む。同一のエピトープを認識する抗体は、ある抗体の別の抗体の標的抗原への結合を遮断する能力、例えば、「ビニング」を示す単純な免疫アッセイにおいて検証され得る。以下に概説するように、本発明は、列挙された抗原結合ドメイン及び本明細書の抗体を含むだけでなく、列挙された抗原結合ドメインによって結合されるエピトープとの結合について競合するものも含む。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインの6つのCDRには、可変重鎖及び可変軽鎖ドメインが寄与する。「Fab」フォーマットにおいて、6つのCDRのセットは、2つの異なるポリペプチド配列、可変重鎖ドメイン(vh又はVH;vhCDR1、vhCDR2及びvhCDR3を含有する)及び可変軽鎖ドメイン(vl又はVL;vlCDR1、vlCDR2及びvlCDR3を含有する)によって与えられ、vhドメインのC末端が重鎖のCH1ドメインのN末端と結合し、vlドメインのC末端が定常軽鎖ドメインのN末端と結合している(その結果、軽鎖を形成している)。scFvフォーマットでは、vh及びvlドメインは、一般に本明細書に概説されているように、リンカー(「scFvリンカー」)の使用によって、単一のポリペプチド配列に共有結合され、それは(N末端から開始して)vh-リンカー-vl又はvl-リンカー-vhのいずれかであってよく、前者が一般的に好ましい(使用されるフォーマットに応じて、両側の任意選択的なドメインリンカーを含む)。一般に、scFvドメインのC末端は、第2の単量体のヒンジの全て又は一部のN末端に結合される。
本明細書で使用される「可変領域」又は「可変ドメイン」とは、カッパ、ラムダ、及び重鎖免疫グロブリン遺伝子座をそれぞれ構成するVκ、Vλ、及び/又はVH遺伝子のいずれかによって実質的にコードされる1つ以上のIgドメインを含み、抗原特異性を付与するCDRを含有する、免疫グロブリンの領域を意味する。したがって、「可変重鎖ドメイン」は「可変軽鎖ドメイン」と対になって抗原結合ドメイン(「ABD」)を形成する。加えて、各可変ドメインは、3つの超可変領域(「相補性決定領域」、「CDR」)(可変重鎖ドメインではvhCDR1、vhCDR2及びvhCDR3、可変軽鎖ドメインではvlCDR1、vlCDR2及びvlCDR3)と4つのフレームワーク(FR)領域とを含み、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、次の順序で配置される:FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
本明細書で使用される「Fab」又は「Fab領域」とは、概して2つの異なるポリペプチド鎖の(例えば、一方の鎖のVH-CH1、他方の鎖のVL-CL)、VH、CH1、VL、及びCL免疫グロブリンドメインを含む抗体領域を意味する。Fabは、この領域単独、又は本発明の二重特異性抗体との関係においてこの領域を指し得る。Fabの関連で、Fabは、CH1及びCLドメインに加えてFv領域を含む。
本明細書で使用される「Fv」又は「Fvフラグメント」又は「Fv領域」は、VLドメイン及びVHドメインを含む抗体領域を意味する。Fv領域は、Fab(上述の通り、概して上記に概説されている定常領域も含む2つの異なるポリペプチド)と単鎖Fv(scFv)の両方としてフォーマットすることができ、vl及びvhドメインは、一般に本明細書で考察されるリンカーで結合した単鎖ペプチドに含まれる。
本明細書における「一本鎖Fv」又は「scFv」は概して、本明細書で論じられるscFvリンカーを使用してscFv又はscFvドメインを形成する、可変軽鎖ドメインに共有結合した可変重鎖ドメインを意味する。scFvドメインは、N末端からC末端に向かっていずれかの配向(vh-リンカー-vl又はvl-リンカー-vh)であり得る。配列表及び図に示す配列では、vh及びvlドメインの順序が名前に示される。例えば、H.X_L.Yは、N末端からC末端方向に、vh-リンカー-vl、及びL.Y_H.Xがvl-リンカー-vhであることを意味する。
本明細書に提供される主題の抗体のいくつかの実施形態は、少なくとも1つのscFvドメインを含み、scFvドメインは、天然に存在しないが、一般に、scFvリンカーによってともに連結された可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む。本明細書に概説されるように、scFvドメインは、一般に、VH-scFvリンカー-VLとしてN末端からC末端まで配向されているが、これは、scFvドメイン(又は、Fab由来のvh及びvl配列を使用して構築されたドメイン)のいずれに関しても、フォーマットに応じて一方又は両方の端部に任意選択的なリンカーを用いて、VL-scFvリンカー-VHへと逆転させることができる。
本明細書における「修飾」又は「バリアント」とは、ポリペプチド配列におけるアミノ酸の置換、挿入、及び/若しくは欠失、又はタンパク質と化学的に連結された部分に対する改変を意味する。例えば、修飾は、タンパク質に結合した改変された炭水化物又はPEG構造であってもよい。本明細書における「アミノ酸修飾」は、ポリペプチド配列中のアミノ酸の置換、挿入、及び/又は欠失を意味する。明確にするために、別段の記載がない限り、アミノ酸修飾は常に、DNAによってコードされるアミノ酸、例えば、DNA及びRNA中にコドンを有する20個のアミノ酸に対するものである。
本明細書における「アミノ酸置換」又は「置換」は、親ポリペプチド配列中の特定の位置のアミノ酸を異なるアミノ酸で置き換えることを意味する。特に、いくつかの実施形態では、置換は、特定の位置で天然に存在しない(生物内で天然に存在しないか、又はいずれの生物中にも存在しないかのいずれか)アミノ酸に対するものである。例えば、置換E272Yは、272位のグルタミン酸がチロシンで置換されているバリアントポリペプチド、この場合はFcバリアントを指す。明確にするために、核酸コード配列を変化させるが、開始アミノ酸を変化させない(例えば、宿主生物発現レベルを増加させるためにCGG(アルギニンをコードする)をCGA(アルギニンをなおコードする)に交換する)ように操作されたタンパク質は、「アミノ酸置換」ではない。すなわち、同じタンパク質をコードする新たな遺伝子の創出にもかかわらず、タンパク質は、それが開始される特定の位置に同じアミノ酸を有する場合、それはアミノ酸置換ではない。
本明細書で使用される「アミノ酸挿入」又は「挿入」は、親ポリペプチド配列の特定の位置にアミノ酸配列を付加することを意味する。例えば、-233E又は233Eは、233位の後、及び234位の前のグルタミン酸の挿入を示す。追加的に、-233ADE又はA233ADEは、233位の後、及び234位の前のAlaAspGluの挿入を示す。
本明細書で使用される「アミノ酸欠失」又は「欠失」は、親ポリペプチド配列中の特定の位置でアミノ酸配列を除去することを意味する。例えば、E233-又はE233#、E233()又はE233delは、233位のグルタミン酸の欠失を示す。追加的に、EDA233-又はEDA233#は、233位で始まる配列GluAspAlaの欠失を示す。
本明細書で使用される「バリアントタンパク質」又は「タンパク質バリアント」又は「バリアント」は、少なくとも1つのアミノ酸修飾に基づいて親タンパク質のそれとは異なるタンパク質を意味する。タンパク質バリアントは、親タンパク質と比較して少なくとも1つのアミノ酸修飾を有するが、バリアントタンパク質は、以下に記載されるようなアラインメントプログラムを使用して親タンパク質と整列しないほど多くはない。一般に、本明細書で概説するバリアントタンパク質(バリアントFcドメインなど)は、BLASTなど、以下に説明するアラインメントプログラムを使用して親タンパク質に対して、一般に少なくとも75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、又は99%同一である。
本明細書で使用される「バリアント」はまた、特定の機能を付与する特定のアミノ酸修飾(例えば、「ヘテロ二量体化バリアント」、「pIバリアント」、「除去バリアント」など)を指す。
以下に記載するように、いくつかの実施形態では、親ポリペプチド、例えばFc親ポリペプチドは、IgG1、IgG2、IgG3、又はIgG4由来の重鎖定常ドメイン又はFc領域などのヒト野生型配列であるが、バリアントを有するヒト配列もまた、「親ポリペプチド」として機能することができ、例えば、米国公開第2006/0134105号のIgG1/2ハイブリッドを含めることができる。本明細書のタンパク質バリアントの配列は、好ましくは、親タンパク質配列と少なくとも約80%の同一性、最も好ましくは少なくとも約90%の同一性、より好ましくは少なくとも約95-98-99%の同一性を有する。したがって、本明細書で使用される「抗体バリアント」又は「バリアント抗体」とは、少なくとも1つのアミノ酸修飾に基づいて親抗体とは異なる抗体を意味し、本明細書で使用される「IgGバリアント」又は「バリアントIgG」とは、少なくとも1つのアミノ酸修飾に基づいて親IgG(ここでも、多くの場合はヒトIgGに由来)とは異なる抗体を意味し、本明細書で使用される「免疫グロブリンバリアント」又は「バリアント免疫グロブリン」とは、少なくとも1つのアミノ酸修飾に基づいて親免疫グロブリン配列のそれとは異なる免疫グロブリン配列を意味する。本明細書で使用される「Fcバリアント」又は「バリアントFc」は、ヒトIgG1、IgG2、又はIgG4のFcドメインと比較してアミノ酸修飾を含むタンパク質を意味する。
本明細書で使用される「Fcバリアント」又は「バリアントFc」とは、Fcドメインにアミノ酸修飾を含むタンパク質を意味する。修飾は、付加、欠失、又は置換であり得る。Fcバリアントは、それらを構成するアミノ酸修飾に従って定義される。したがって、例えば、N434S又は434Sは、親Fcポリペプチドに対して434位に置換セリンを有するFcバリアントであり、番号付けはEUインデックスによるものである。同様に、M428L/N434Sは、親Fcポリペプチドに対して置換M428L及びN434Sを有するFcバリアントを定義する。WTアミノ酸の同一性は特定されていなくてもよく、その場合、前述のバリアントは428L/434Sと称される。置換が提供される順序は任意であり、すなわち、例えば、428L/434Sは434S/428Lと同じFcバリアントなどであることが留意される。抗体又は誘導体及びそれらのフラグメント(例えば、Fcドメイン)に関連する本発明において議論される全ての位置について、特に明記しない限り、アミノ酸位置の番号付けはEUインデックスによるものである。「EUインデックス」又は「KabatのようなEUインデックス」若しくは「EU番号付け」スキームは、EU抗体の番号付けを指す(Edelman et al.,1969,Proc Natl Acad Sci USA63:78-85、これにより完全に参照により組み込まれる)。修飾は、付加、欠失、又は置換であり得る。
一般に、バリアントFcドメインは、対応する親ヒトIgGFcドメインに対して少なくとも約80、85、90、95、97、98又は99パーセントの同一性を有する(以下に考察する同一性アルゴリズム(一実施形態では当技術分野で既知のBLASTアルゴリズム)をデフォルトパラメータを用いて使用する)。代替的に、バリアントFcドメインは、親Fcドメインに対する1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、11、12、13、14、15、16、17、18、19、又は20のアミノ酸修飾を有し得る。代替的に、バリアントFcドメインは、親Fcドメインに対する1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、11、12、13、14、15、16、17、18、19、又は20までのアミノ酸修飾を有し得る。追加的に、本明細書で考察されるように、本明細書に記載のバリアントFcドメインは、非変性ゲル電気泳動などの本明細書に記載の既知の技術を使用して測定される別のFcドメインとともに二量体を形成する能力を依然として保持する。
本明細書で使用される場合、「タンパク質」は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、及びペプチドを含む、少なくとも2つの共有結合したアミノ酸を意味する。加えて、本発明の抗体を作成するポリペプチドには、1つ以上の側鎖又は末端の合成誘導体化、グリコシル化、PEG化、円順列、環化、他の分子へのリンカー、タンパク質又はタンパク質ドメインへの融合、及びペプチドタグ又は標識の付加が含まれ得る。
本明細書で使用される「残基」は、タンパク質における位置及びその関連するアミノ酸素性を意味する。例えば、アスパラギン297(Asn297又はN297とも称される)は、ヒト抗体IgG1中の297位の残基である。
本明細書で使用される「IgGサブクラス修飾」又は「アイソタイプ修飾」とは、1つのIgGアイソタイプの1つのアミノ酸を、異なる、整合したIgGアイソタイプの対応するアミノ酸に変換するアミノ酸修飾を意味する。例えば、EU位置296においてIgG1はチロシンを含み、IgG2はフェニルアラニンを含むので、IgG2におけるF296Y置換は、IgGサブクラス修飾であると考えられる。
本明細書で使用される「天然に存在しない修飾」は、アイソタイプ性ではないアミノ酸修飾を意味する。例えば、ヒトIgGのうちのいずれも434位にセリンを含まないので、IgG1、IgG2、IgG3、又はIgG4(又はそれらのハイブリッド)における置換434Sは、天然に生じない修飾であるとみなされる。
本明細書で使用される「アミノ酸」及び「アミノ酸同一性」は、DNA及びRNAによってコードされている20種の天然に存在するアミノ酸のうちの1つを意味する。
本明細書で使用される「エフェクター機能」は、抗体Fc領域とFc受容体又はリガンドとの相互作用から生じる生化学的事象を意味する。エフェクター機能には、ADCC、ADCP、及びCDCが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「IgG Fcリガンド」とは、IgG抗体のFc領域と結合してFc/Fcリガンド複合体を形成する任意の生物由来の分子、好ましくはポリペプチドを意味する。Fcリガンドには、FcγRI、FcγRII、FcγRIII、FcRn、C1q、C3、マンナン結合レクチン、マンノース受容体、staphylococcalプロテインA、streptococcalプロテインG、及びウイルスFcγRが含まれるが、これらに限定されない。Fcリガンドにはまた、FcγRと相同なFc受容体のファミリーである、Fc受容体相同体(FcRH)が含まれる(Davis et al.,2002,Immunological Reviews 190:123-136(参照により全体が組み込まれる))。Fcリガンドは、Fcに結合する未発見の分子を含み得る。特定のIgG Fcリガンドは、FcRn及びFcガンマ受容体である。本明細書で使用される「Fcリガンド」とは、抗体のFc領域と結合してFc/Fcリガンド複合体を形成する任意の生物由来の分子、好ましくはポリペプチドを意味する。
本明細書で使用される「Fcガンマ受容体」、「FcγR」、又は「FcガンマR」は、IgG抗体Fc領域に結合し、かつFcγR遺伝子によってコードされるタンパク質ファミリーの任意のメンバーを意味する。ヒトにおいて、このファミリーには、アイソフォームであるFcγRIa、FcγRIb、及びFcγRIcを含むFcγRI(CD64);アイソフォームであるFcγRIIa(アロタイプであるH131及びR131を含む)、FcγRIIb(FcγRIIb-1及びFcγRIIb-2を含む)、並びにFcγRIIcを含むFcγRII(CD32);並びにアイソフォームであるFcγRIIIa(アロタイプであるV158及びF158を含む)、並びにFcγRIIIb(アロタイプであるFcγRIIb-NA1及びFcγRIIb-NA2を含む)を含むFcγRIII(CD16)(参照により全体が組み込まれるJefferis et al.,2002,Immunol Lett 82:57-65)、並びに任意の発見されていないヒトFcγR又はFcγRアイソフォーム若しくはアロタイプが含まれるが、これらに限定されない。FcγRは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルを含むが、これらに限定されない任意の生物由来であり得る。マウスFcγRには、FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)、FcγRIII(CD16)、及びFcγRIII-2(CD16-2)、並びに任意の未発見のマウスFcγR又はFcγRアイソフォーム若しくはアロタイプが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「FcRn」又は「新生児Fc受容体」は、IgG抗体のFc領域に結合し、少なくとも部分的にFcRn遺伝子によってコードされるタンパク質を意味する。FcRnは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルを含むが、これらに限定されない任意の生物由来であり得る。当技術分野において既知のように、機能的FcRnタンパク質は、しばしば重鎖及び軽鎖と称される2つのポリペプチドを含む。軽鎖はβ-2-ミクログロブリンであり、重鎖はFcRn遺伝子によってコードされている。本明細書において別段の記載がない限り、FcRn又はFcRnタンパク質は、FcRn重鎖とβ-2-ミクログロブリンとの複合体を指す。FcRn受容体への結合を増加させるために、いくつかの場合には血清半減期を増加させるために使用される様々なFcRnバリアントが使用できる。「FcRnバリアント」とは、FcRn受容体への結合の増加に寄与するアミノ酸修飾であり、好適なFcRnバリアントを以下に示す。
本明細書で使用される「親ポリペプチド」は、バリアントを生成するように後に修飾される出発ポリペプチドを意味する。親ポリペプチドは、天然に存在するポリペプチド、又は天然に存在するポリペプチドのバリアント若しくは操作されたバージョンであってもよい。したがって、本明細書で使用される「親免疫グロブリン」とは、バリアントを生成するように修飾される非修飾免疫グロブリンポリペプチドを意味し、本明細書で使用される「親抗体」とは、バリアント抗体を生成するように修飾される非修飾抗体を意味する。「親抗体」には、以下に概説するように、既知の市販の組換えで産生した抗体が含まれることに注意すべきである。このような関係では、「親Fcドメイン」は、列挙されたバリアントに関連するものであり、したがって、「バリアントヒトIgG1 Fcドメイン」はヒトIgG1の親Fcドメインと比較され、「バリアントヒトIgG4 Fcドメイン」は親FcドメインヒトIgG4と比較される等である。
本明細書で使用される「位置」は、タンパク質の配列中の場所を意味する。位置は、順次に、又は確立された形式、例えば、抗体ドメイン(例えば、CH1、CH2、CH3又はヒンジドメイン)の番号付けのためのEUインデックスに従って、番号付けされ得る。
「標的抗原」は、本明細書で使用されるとき、所与の抗体の可変領域を含む抗体結合ドメインによって特異的に結合される分子を意味する。
本明細書中の本発明のヘテロ二量体抗体の単量体に牽連して「撚り度(strandedness)」は、「マッチ」する2本鎖DNAと同様に、「マッチ」してヘテロ二量体を形成する能力を保持するようにヘテロ二量体化バリアントを各単量体に組み込むことを意味する。例えば、いくつかのpIバリアントが単量体Aへと操作される(例えば、pIをより高くする)場合、同様に利用され得る「電荷対」である立体バリアントはpIバリアントを妨害せず、例えば、pIを高くした電荷バリアントが同一の「鎖」又は「単量体」に置かれ、両方の機能性を保持する。同様に、以下により詳細に概説されるように、対のセットになる「スキュー(skew)」バリアントついて、当業者は、対の1つのセットが、どちらの鎖又は単量体に入るかを決定する際に、pIを考慮し、そのため、pI分離もまた、スキューのpIを使用して最大化される。
本明細書で使用される「標的細胞」とは、標的抗原を発現する細胞を意味する。
本明細書の本発明による二重特異性抗体を製造する文脈における「宿主細胞」とは、二重特異性抗体の構成要素をコードする外因性核酸を含み、好適な条件下で二重特異性抗体を発現できる細胞を意味する。好適な宿主細胞について以下で説明する。
本明細書における「野生型又はWT」は、対立遺伝子変異を含む、天然に見出されるアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を意味する。WTタンパク質は、意図的に修飾されていないアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を有する。
本明細書には、ヒト抗体ドメインと配列同一性を有するいくつかの抗体ドメイン(例えばFcドメイン)が提供される。2つの類似した配列(抗体可変ドメインなど)間の配列同一性は、Smith,T.F.& Waterman,M.S.(1981)”Comparison Of Biosequences,”Adv.Appl.Math.2:482[local homology algorithm]、Needleman,S.B.& Wunsch,CD.(1970)”A General Method Applicable To The Search For Similarities In The Amino Acid Sequence Of Two Proteins,”J.Mol.Biol.48:443[homology alignment algorithm]、Pearson,W.R.& Lipman,D.J.(1988)”Improved Tools For Biological Sequence Comparison,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)85:2444[search for similarity method]、又はAltschul,S.F.et al,(1990)”Basic Local Alignment Search Tool,“J.Mol.Biol.215:403-10,the”BLAST”algorithm(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi参照されたい)などのアルゴリズムによって測定できる。前述のアルゴリズムのいずれかを使用する場合、デフォルトパラメータ(ウィンドウの長さ、ギャップペナルティなど)が使用される。一実施形態では、配列同一性は、デフォルトパラメータを使用して、BLASTアルゴリズムを使用して測定される。
本発明の抗体は一般に、単離されるか、又は組換えである。本明細書に開示される様々なポリペプチドを説明するために使用される「単離された」とは、それが発現された細胞又は細胞培養物から特定及び分離及び/又は回収されたポリペプチドを意味する。通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも1つの精製工程によって調製されるであろう。「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す。「組換え体」は、外来性宿主細胞において組換え核酸技術を用いて抗体が生成されることを意味し、それらも単離され得る。
特定の抗原又はエピトープへの「特異的結合」、あるいは、特定の抗原又はエピトープ「~に特異的に結合する」若しくは「~に対して特異的である」とは、測定し得るほどに非特異的相互作用とは異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、一般に、結合活性を持たない同様の構造の分子である対照分子の結合と比較した分子の結合を決定することによって、測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似する対照分子との競合によって決定することができる。
特定の抗原又はエピトープに対する特異的結合は、例えば、抗原又はエピトープに対して少なくとも約10-4M、少なくとも約10-5M、少なくとも約10-6M、少なくとも約10-7M、少なくとも約10-8M、少なくとも約10-9M、代替的に少なくとも約10-10M、少なくとも約10-11M、少なくとも約10-12M、又はそれ以上のKDを有する抗体によって示され得、KDとは特定の抗体-抗原相互作用の解離速度を指す。典型的には、抗原に特異的に結合する抗体は、抗原又はエピトープと比べて、対照分子に対して20倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、5,000倍、10,000倍、又はそれを超えて大きいKDを有することになる。
また、特定の抗原又はエピトープへの特異的結合は、例えば、抗原又はエピトープに対するKA又はKaが、対照と比べて、そのエピトープに対して少なくとも20倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、5,000倍、10,000倍、又はそれを超えて大きい抗体によって示され得、KA又はKaは、特定の抗体-抗原相互作用の会合速度を指す。結合親和性は一般的に、Biacore、SPR又はBLIアッセイを用いて測定される。
IV.CD28及びB7H3抗原結合ドメイン
本明細書では、B7H3又はCD28のいずれかに結合する抗原結合ドメイン(ABD)及びABD組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ABDの1つ以上が、例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」及び「2+1共通軽鎖」抗体を含む本明細書に記載の抗体フォーマットに含まれる。
本明細書では、B7H3又はCD28のいずれかに結合する抗原結合ドメイン(ABD)及びABD組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ABDの1つ以上が、例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」及び「2+1共通軽鎖」抗体を含む本明細書に記載の抗体フォーマットに含まれる。
A.CD28抗原結合ドメイン及び抗体
一態様では、ヒトCD28に結合するCD28抗原結合ドメイン(ABD)、及びそのようなCD28抗原結合ドメインを含む組成物(例えば、本明細書に提供されるヘテロ二量体抗体を含む抗体)が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のCD28抗原結合ドメインは、共刺激活性を有利に提供するアゴニストCD28 ABDである。したがって、本明細書で提供されるそのようなCD28 ABDは、例えば、単剤療法として、又は他の治療法(例えば、特定のがんの治療のための抗がん治療薬)と組み合わせて使用される場合、免疫応答を増強するのに有用である。
一態様では、ヒトCD28に結合するCD28抗原結合ドメイン(ABD)、及びそのようなCD28抗原結合ドメインを含む組成物(例えば、本明細書に提供されるヘテロ二量体抗体を含む抗体)が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のCD28抗原結合ドメインは、共刺激活性を有利に提供するアゴニストCD28 ABDである。したがって、本明細書で提供されるそのようなCD28 ABDは、例えば、単剤療法として、又は他の治療法(例えば、特定のがんの治療のための抗がん治療薬)と組み合わせて使用される場合、免疫応答を増強するのに有用である。
当業者によって理解されるように、好適なCD28結合ドメインは、下線が引かれているか、又は、本明細書に記載され、表2に示されるように異なる番号付けスキームが使用される場合、図18~21及び23並びに配列表に示されるような可変重鎖(VH)ドメイン及び可変軽鎖ドメイン(VL)配列内の他のアラインメントを使用して同定されるCDRとして、配列表及び図に示されるような6つのCDRのセットを含むことができる。好適なCD28 ABDはまた、scFv又はFabとして使用される、これらの配列及び図に示されるようなVH及びVLの全体の配列をも含み得る。
一実施形態では、CD28抗原結合ドメインは、図及び配列表を含む、本明細書に記載のCD28結合ドメインのいずれかの6つのCDR(すなわち、vhCDR1~3及びvlCDR1~3)を含む。いくつかの実施形態では、ヒトCD28 に結合するCD28 ABDは、以下のうちの1つである:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、hu9.3[CD28]_H1L1(図18~21及び23、並びに配列表)。例示的な実施形態では、CD28 ABDはCD28 ABD:1A7[CD28]_H1L1又は1A7[CD28]_H1.14L1である。
CD28に対するABDを形成する図及び配列表に開示される親CDRセットに加えて、本明細書に開示されるCD28 ABD CDRの少なくとも1つの修飾を含むCDRを有するバリアントCD28 ABDSが本明細書に提供される(例えば、図18~21及び23、並びに配列表)。一実施形態では、CD28 ABDは、図及び配列表を含む、本明細書に記載のCD28 ABDの6つのCDRと比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10のアミノ酸修飾を有する6つのCDRのセットを含む。例示的な実施形態では、CD28 ABDは、以下のCD28 ABDのうちの1つの6つのCDRと比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10のアミノ酸修飾を有する6つのCDRのセットを含む:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、及びhu9.3[CD28]_H1L1(図18~21及び23、並びに配列表)。例示的な実施形態では、CD28 ABDはCD28 ABD:1A7[CD28]_H1L1又は1A7[CD28]_H1.14L1である。
ある特定の実施形態では、CD28 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、CD28抗原に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、CD28 ABDは、ヒトCD28抗原に結合することができる(図1を参照されたい)。
いくつかの実施形態では、CD28 ABDは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるCD28 ABDの6つのCDRと少なくとも90、95、97、98又は99%同一である6つのCDRを含む。例示的な実施形態では、CD28 ABDは、以下のCD28 ABDのうちの1つの6つのCDRと少なくとも90、95、97、98又は99%同一である6つのCDRを含む:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、及びhu9.3[CD28]_H1L1(図18~21及び23、並びに配列表)。ある特定の実施形態では、CD28 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、CD28に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、CD28 ABDは、ヒトCD28抗原に結合することができる(図1を参照されたい)。
別の例示的な実施形態では、CD28 ABDは、図及び配列表を含む、本明細書に記載のCD28 ABDのうちのいずれか1つの可変重鎖(VH)ドメイン及び可変軽鎖(VL)ドメインを含む。例示的な実施形態では、CD28 ABDは、以下のCD28 ABDのうちの1つである:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、及びhu9.3[CD28]_H1L1(図18~21及び23、並びに配列表)。
本明細書に開示される親CD28可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインに加えて、本明細書に開示されるCD28 ABD VH及びVLドメインのバリアントである可変重鎖ドメイン及び/又は可変軽鎖ドメインを含むCD28 ABDが本明細書に提供される。一実施形態では、バリアントVHドメイン及び/又はVLドメインは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるCD28 ABDのVH及び/又はVLドメインからの1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10のアミノ酸変化を有する。例示的な実施形態では、バリアントVHドメイン及び/又はVLドメインは、以下のCD28 ABDのうちの1つのVH及び/又はVLドメインからの1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10のアミノ酸変化を有する:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、及びhu9.3[CD28]_H1L1(図18~21及び23、並びに配列表)。ある特定の実施形態では、CD28 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、CD28に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、CD28 ABDは、ヒトCD28抗原に結合することができる(図1を参照されたい)。
一実施形態では、バリアントVH及び/又はVLドメインは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるCD28 ABDのVH及び/又はVLと少なくとも90、95、97、98又は99%同一である。例示的な実施形態では、バリアントVH及び/又はVLドメインは、以下のCD28 ABDのうちの1つのVH及び/又はVLと少なくとも90、95、97、98又は99%同一である:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、及びhu9.3[CD28]_H1L1(図18~21及び23、並びに配列表)。ある特定の実施形態では、CD28 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、CD28に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、CD28 ABDは、ヒトCD28抗原に結合することができる(図1を参照されたい)。
一実施形態では、CD28抗原結合ドメインは、1A7_H1.14のvhCDR1-3(すなわち、vhCDR1-3)を有する可変重鎖ドメイン(VH)を含む(図19)。いくつかの実施形態では、CD28抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるCD28結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、1A7_L1(図18)又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、CD28 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、CD28抗原に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、CD28 ABDは、ヒトCD28抗原に結合することができる(図1を参照されたい)。そのようなCD28結合ドメインは、例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」、及び「2+1共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。
一実施形態では、CD28 ABDは、1A7_H1.14のvhCDR1-3と比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個のアミノ酸修飾を有するvhCDR1-3を有する可変重鎖ドメイン(VH)を含む(図19)。いくつかの実施形態では、CD28抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるCD28結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、1A7_L1(図18)又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、CD28 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、CD28抗原に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、CD28 ABDは、ヒトCD28抗原に結合することができる(図1を参照されたい)。そのようなCD28結合ドメインは、例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」、及び「2+1共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。
いくつかの実施形態では、CD28 ABDは、1A7_H1.14の6つのvhCDR1-3と少なくとも90、95、97、98又は99%同一であるvhCDR1-3を有する可変重鎖ドメイン(VH)を含む(図19)。いくつかの実施形態では、CD28抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるCD28結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、1A7_L1(図18)又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、CD28 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、CD28に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、CD28 ABDは、ヒトCD28抗原に結合することができる(図1を参照されたい)。そのようなCD28結合ドメインは、例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」、及び「2+1共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。
別の例示的な実施形態では、CD28 ABDは、可変重鎖(VH)ドメイン1A7_H1.14を含む(図19)。いくつかの実施形態では、CD28抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるCD28結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、1A7_L1(図18)又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、CD28 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、CD28に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、CD28 ABDは、ヒトCD28抗原に結合することができる(図1を参照されたい)。そのようなCD28結合ドメインは、例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」、及び「2+1共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。
本明細書に開示される親CD28重鎖可変ドメインに加えて、1A7_H1.14のバリアントである重鎖可変ドメインを含むCD28 ABDが本明細書に提供される(図16)。一実施形態では、バリアントVHドメインは、1A7_H1.14(図19)からの1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10のアミノ酸変化を有する。いくつかの実施形態では、CD28抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるCD28結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、1A7_L1(図18)又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、CD28 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、CD28に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、CD28 ABDは、ヒトCD28抗原に結合することができる(図1を参照されたい)。そのようなCD28結合ドメインは、例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」、及び「2+1共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。
一実施形態では、バリアントVHドメインは、1A7_H1.14(図19)と少なくとも90、95、97、98又は99%同一である。いくつかの実施形態では、CD28抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるCD28結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、1A7_L1(図18)又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、CD28 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、CD28に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、CD28 ABDは、ヒトCD28抗原に結合することができる(図1を参照されたい)。そのようなCD28結合ドメインは、例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」、及び「2+1共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。
関心対象となる特定の抗CD28 ABDは、配列番号874のVLドメインと対をなした、配列番号870、配列番号585、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、配列番号651、配列番号1198及び配列番号1199からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVHドメインを含む。
他の場合では、抗CD28 VHドメインは、配列番号870、配列番号585、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、配列番号651、配列番号1198、及び配列番号1199から選択されるアミノ酸配列を有し、VLドメインは、配列番号874、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号660、配列番号661、配列番号662、配列番号663、配列番号664、配列番号665、配列番号666、配列番号667、配列番号668、配列番号669、配列番号670、配列番号671、配列番号672、配列番号673、配列番号674、配列番号675、配列番号676、配列番号677、配列番号678、配列番号679、配列番号680、配列番号681、配列番号682、配列番号683、配列番号684、配列番号685、配列番号686、配列番号687、配列番号688、配列番号689、配列番号690、配列番号691、配列番号692、配列番号693、配列番号694、配列番号695、配列番号696、配列番号697、配列番号698、配列番号699、配列番号700、配列番号701、配列番号702、配列番号703、配列番号704、配列番号705、配列番号706、配列番号707、配列番号708、配列番号709、配列番号710、配列番号711、配列番号712、配列番号713、配列番号714、配列番号715、配列番号716、配列番号717、配列番号718、配列番号719、配列番号720、配列番号721、配列番号722、配列番号723、配列番号724、配列番号725、配列番号726、配列番号727、配列番号728、配列番号729、配列番号730、配列番号731、配列番号732、配列番号733、配列番号734、配列番号735、配列番号736、配列番号737、配列番号738、配列番号739、配列番号740、配列番号741、配列番号742、配列番号743、配列番号744、配列番号745、配列番号746、配列番号747、配列番号748、配列番号749、配列番号750、配列番号751、配列番号752、配列番号753、配列番号754、配列番号755、配列番号1200及び配列番号756からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
いくつかの場合では、抗CD28結合ドメインは、a)配列番号1及び5、b)配列番号9及び13、c)配列番号17及び21、d)配列番号25及び29、e)配列番号33及び37、f)配列番号41及び45、g)配列番号49及び53、h)配列番号57及び61、i)配列番号65及び69、j)配列番号73及び77、並びにk)配列番号81及び85の対から選択されるアミノ酸配列を有するVHドメイン及びVLドメインを有する。
B.B7H3抗原連結ドメイン
一態様では、B7H3抗原結合ドメイン(ABD)、及び抗B7H3抗体を含むそのようなB7H3抗原結合ドメイン(ABD)を含む組成物が本明細書で提供される。そのようなB7H3結合ドメイン及び関連する抗体(例えば、抗B7H3×抗CD28二重特異性抗体)は、例えば、B7H3関連がんの治療に使用される。
一態様では、B7H3抗原結合ドメイン(ABD)、及び抗B7H3抗体を含むそのようなB7H3抗原結合ドメイン(ABD)を含む組成物が本明細書で提供される。そのようなB7H3結合ドメイン及び関連する抗体(例えば、抗B7H3×抗CD28二重特異性抗体)は、例えば、B7H3関連がんの治療に使用される。
当業者によって理解されるように、好適なB7H3結合ドメインは、下線が引かれているか、又は、本明細書に記載され、表2に示されるように異なる番号付けスキームが使用される場合、図26~31及び配列表(表2を参照されたい)に示されるような可変重鎖(VH)ドメイン及び可変軽鎖ドメイン(VL)配列内の他のアラインメントを使用して同定されるCDRとして、配列表及び図26~31に示されるような6つのCDRのセットを含むことができる。好適なB7H3 ABDはまた、scFv又はFabドメインとして使用される、これらの配列及び図に示されるようなVH及びVLの全体の配列をも含み得る。
一実施形態では、B7H3抗原結合ドメインは、図及び配列表を含む、本明細書に記載のB7H3 ABDの6つのCDR(すなわち、vhCDR1~3及びvlCDR1~3)を含む。例示的な実施形態では、B7H3 ABDは、以下のB7H3 ABDのうちの1つである:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704(図26~31及び配列表)。
B7H3に対するABDを形成する図及び配列表に開示される親CDRセットに加えて、本明細書に開示されるB7H3 ABD CDRの少なくとも1つの修飾を含むCDRを有するバリアントB7H3 ABDSが本明細書に提供される。一実施形態では、B7H3 ABDは、図及び配列表を含む、本明細書に記載のB7H3 ABDの6つのCDRと比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10のアミノ酸修飾を有する6つのCDRのセットを含む。例示的な実施形態では、B7H3 ABDは、以下のB7H3 ABDのうちの1つの6つのCDRと比較して、1、2、3、4、5、6、7、6、9、10のアミノ酸修飾を有する6つのCDRのセットを含む:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704(図26~31及び配列表)。ある特定の実施形態では、バリアントB7H3 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、B7H3抗原に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、B7H3 ABDは、ヒトB7H3抗原に結合することができる(図2を参照されたい)。
一実施形態では、B7H3 ABDは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるB7H3 ABDの6つのCDRと少なくとも90、95、97、98又は99%同一である6つのCDRを含む。例示的な実施形態では、B7H3 ABDは、以下のB7H3 ABDのうちの1つの6つのCDRと少なくとも90、95、97、98又は99%同一である6つのCDRを含む:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704(図26~31及び配列表)。ある特定の実施形態では、B7H3 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、B7H3抗原に対して結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、B7H3 ABDは、ヒトB7H3抗原に結合することができる(図2を参照されたい)。
別の例示的な実施形態では、B7H3 ABDは、図及び配列表を含む、本明細書に記載のB7H3 ABDのうちのいずれか1つの可変重鎖(VH)ドメイン及び可変軽鎖(VL)ドメインを含む。例示的な実施形態では、B7H3 ABDは、以下のB7H3 ABDのうちの1つである:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704(図26~31及び配列表)。例示的な実施形態では、B7H3 ABDは、以下のうちの1つである:B7H3 ABD:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、又は6A1[B7H3]_H1L1。
本明細書に開示される親B7H3可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインに加えて、本明細書に開示されるB7H3 ABD VH及びVLドメインのバリアントである可変重鎖ドメイン及び/又は可変軽鎖ドメインを含むB7H3 ABDが本明細書に提供される。一実施形態では、バリアントVHドメイン及び/又はVLドメインは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるB7H3 ABDのVH及び/又はVLドメインからの1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10のアミノ酸変化を有する。例示的な実施形態では、バリアントVHドメイン及び/又はVLドメインは、以下のB7H3 ABDのうちの1つのVH及び/又はVLドメインからの1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10のアミノ酸変化を有する:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704(図26~31及び配列表)。ある特定の実施形態では、B7H3 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、B7H3に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、B7H3 ABDは、ヒトB7H3抗原に結合することができる(図2を参照されたい)。
一実施形態では、バリアントVH及び/又はVLドメインは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるB7H3 ABDのVH及び/又はVLと少なくとも90、95、97、98又は99%同一である。例示的な実施形態では、バリアントVH及び/又はVLドメインは、以下のB7H3 ABDのうちの1つのVH及び/又はVLと少なくとも90、95、97、98又は99%同一である:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704(図26~31及び配列表)。ある特定の実施形態では、B7H3 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、B7H3に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、B7H3 ABDは、ヒトB7H3抗原に結合することができる(図2を参照されたい)。
一実施形態では、B7H3抗原結合ドメインは、2E4A3.189_H1.22のvhCDR1-3(すなわち、vhCDR1-3)を有する可変重鎖ドメイン(VH)を含む(図27)。いくつかの実施形態では、B7H3抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるB7H3又はCD28結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、2E4A3.189_L1(図26)、1A7_L1(図18)又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、B7H3 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、B7H3抗原に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、B7H3 ABDは、ヒトB7H3抗原に結合することができる(図2を参照されたい)。そのようなB7H3結合ドメインは、例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」、及び「2+1共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。
一実施形態では、B7H3 ABDは、2E4A3.189_H1.22のvhCDR1-3と比較して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個のアミノ酸修飾を有するvhCDR1-3を有する可変重鎖ドメイン(VH)を含む(図27)。いくつかの実施形態では、B7H3抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるB7H3又はCD28結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、2E4A3.189_L1(図26)、1A7_L1(図18)又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、B7H3 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、B7H3抗原に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、B7H3 ABDは、ヒトB7H3抗原に結合することができる(図2を参照されたい)。そのようなB7H3結合ドメインは、例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」、及び「2+1共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。
いくつかの実施形態では、B7H3 ABDは、2E4A3.189_ H1.22の6つのvhCDR1-3と少なくとも90、95、97、98又は99%同一であるvhCDR1-3を有する可変重鎖ドメイン(VH)を含む(図27)。いくつかの実施形態では、B7H3抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるB7H3又はCD28結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、2E4A3.189_L1(図26)、1A7_L1(図18)又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、B7H3 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、B7H3に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、B7H3 ABDは、ヒトB7H3抗原に結合することができる(図2を参照されたい)。そのようなB7H3結合ドメインは、例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」、及び「2+1共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。
別の例示的な実施形態では、B7H3 ABDは、可変重鎖(VH)ドメイン2E4A3.189_H1.22を含む(図27)。いくつかの実施形態では、B7H3抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるB7H3又はCD28結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、2E4A3.189_L1(図26)、1A7_L1(図18)又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、B7H3 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、B7H3に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、B7H3 ABDは、ヒトB7H3抗原に結合することができる(図1を参照されたい)。そのようなB7H3結合ドメインは、例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」、及び「2+1共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。
本明細書に開示される親B7H3重鎖可変ドメインに加えて、可変重鎖(VH)ドメイン2E4A3.189_H1.22のバリアントである重鎖可変ドメインを含むB7H3 ABDが本明細書に提供される(図27)。一実施形態では、バリアントVHドメインは、可変重鎖(VH)ドメイン2E4A3.189_H1.22(図27)からの1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10のアミノ酸変化を有する。いくつかの実施形態では、B7H3抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるB7H3又はCD28結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、2E4A3.189_L1(図26)、1A7_L1(図18)又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、B7H3 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、B7H3に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、B7H3 ABDは、ヒトB7H3抗原に結合することができる(図2を参照されたい)。そのようなB7H3結合ドメインは、例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」、及び「2+1共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。
一実施形態では、バリアントVHドメインは、2E4A3.189_H1.22(図27)と少なくとも90、95、97、98又は99%同一である。いくつかの実施形態では、B7H3抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるB7H3又はCD28結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、2E4A3.189_L1(図26)、1A7_L1(図18)又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、B7H3 ABDは、Biacore、表面プラズモン共鳴(SPR)及び/又はBLI(バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ)アッセイの少なくとも1つによって測定される場合、B7H3に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、B7H3 ABDは、ヒトB7H3抗原に結合することができる(図2を参照されたい)。そのようなB7H3結合ドメインは、例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」、及び「2+1共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、a)オンブラマブからの配列番号89及び93、b)エノブリツズマブからの配列番号97及び101、c)BRCA84Dからの配列番号105及び109、d)BRCA69Dからの配列番号113及び117、e)PRCA157からの配列番号121及び125、f)huPRCA157からの配列番号129及び133、g)Mab-Dからの配列番号137及び141、h)配列番号145及び149のhumAb-D、i)m30からの配列番号153及び157、j)M30-H1-L4からの配列番号161及び165、k)配列番号169及び173のSP265、l)S10-H50L58からの配列番号177及び181、m)8H9からの配列番号185及び189、n)m852からの配列番号193及び197、o)m857からの配列番号201及び205、p)m8524からの配列番号209及び213、q)1-1からの配列番号217及び221、r)1-2からの配列番号225及び229、s)1-4からの配列番号233及び237、t)1-5からの配列番号241及び245、u)1-7からの配列番号249及び253、v)2-5からの配列番号257及び261、w)2-8からの配列番号265及び269、x)chAb2からの配列番号273及び277、y)配列番号281及び285のchAb3、z)chAb4からの配列番号289及び293、aa)chAb18からの配列番号297及び301、bb)chAb13からの配列番号305及び309、cc)chAb12からの配列番号313及び317、dd)chAb14からの配列番号321及び325、ee)chAb6からの配列番号329及び333、ff)chAb11からの配列番号337及び341、gg)chAB16からの配列番号345及び349、hh)chAb10からの配列番号353及び357、ii)ChAb7からの配列番号361及び365、jj)chAb8からの配列番号369及び373、kk)chAb17からの配列番号377及び381、ll)chAb5からの配列番号385及び389、mm)huAb3v2.5からの配列番号393及び397、nn)huAb3v2.6からの配列番号401及び405、pp)huAb13v1からの配列番号409及び413、qq)TPP-5706からの配列番号417及び421、rr)TPP-6642からの配列番号425及び429、ss)TPP-6850からの配列番号433及び437、tt)TPP-3803からの配列番号441及び445、uu)TRL4542からの配列番号449及び453、vv)h1702からの配列番号457及び461、ww)h1703からの配列番号465及び469、xx)huA3からの配列番号473及び477、yy)huA9からの配列番号481及び485、並びにzz)m1704からの配列番号489及び493の対から選択されるアミノ酸配列を有するVHドメイン及びVLドメインを有する。USSN63/092,272の図17を参照されたい。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号942(2E4A3.189_H1.22)のアミノ酸配列を有するVHドメイン、及び配列番号874(1A7[CD28]_L1、これはB7H3及びCD28の両方の共通軽鎖である)のアミノ酸配列を有するVLドメインを有する。
V.抗体
一態様では、抗CD28抗体及び抗B7H3抗体が本明細書で提供される。本明細書で提供される抗体は、本明細書で提供されるB7H3及び/又はCD28結合ドメインのいずれかを含み得る(例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」及び「2+1共通軽鎖」抗体)。
一態様では、抗CD28抗体及び抗B7H3抗体が本明細書で提供される。本明細書で提供される抗体は、本明細書で提供されるB7H3及び/又はCD28結合ドメインのいずれかを含み得る(例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」及び「2+1共通軽鎖」抗体)。
本明細書で提供される抗体は、異なる抗体ドメインを含む。本明細書中に記載され、当該技術分野において既知であるように、本明細書に記載のヘテロ二量体抗体は、重鎖及び軽鎖内に異なるドメインを含み、これもまた重複し得る。これらのドメインは、Fcドメイン、CH1ドメイン、CH2ドメイン、CH3ドメイン、ヒンジドメイン、重鎖定常ドメイン(CH1-ヒンジ-Fcドメイン又はCH1-ヒンジ-CH2-CH3)、可変重鎖ドメイン、可変軽鎖ドメイン、軽鎖定常ドメイン、Fabドメイン、及びscFvドメインを含むが、これらに限定されない。
本明細書に示されるように、好適なリンカー(ドメインリンカー又はscFvリンカーのいずれかとして使用)にはいくつかあり、列挙されたドメイン(例えば、scFv、Fab、Fcドメインなど)に共有結合(組換え技術により生成される従来型ペプチド結合を含む)するために使用することができる。対象の抗体のドメインを互いに取り付けるための例示的なリンカーを図7に示す。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、主に、以下のアミノ酸残基Gly、Ser、Ala、又はThrを含み得る。リンカーペプチドは、それらが所望の活性を保持するように互いに対して正しい立体配座をとるような方法で2つの分子を結合させるのに十分な長さを有するべきである。一実施形態では、リンカーは、約1~50アミノ酸長、好ましくは約1~30アミノ酸長である。一実施形態では、1~20アミノ酸長のリンカーが使用され得、いくつかの実施形態では、約5~約10アミノ酸が使用されている。有用なリンカーには、例えば、nが少なくとも1つの整数(一般に3~4)である(GS)n、(GSGGS)n、(GGGGS)n、及び(GGGS)n、グリシン-アラニンポリマー、アラニン-セリンポリマー、並びに他の可動性リンカーを含むグリシンセリンポリマーが含まれる。代替的に、ポリエチレングリコール(PEG)、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、又はポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーを含むがこれらに限定されない様々な非タンパク質性ポリマーが、リンカーとして有用であり得る。
他のリンカー配列は、任意の長さのCL/CH1ドメインの任意の配列を含むが、CL/CH1ドメインの全ての残基を含まない場合があり、例えば、CL/CH1ドメインの最初の5~12アミノ酸残基である。リンカーは、免疫グロブリン軽鎖、例えば、Cκ又はCλに由来し得る。リンカーは、例えば、Cγ1、Cγ2、Cγ3、Cγ4、Cα1、Cα2、Cδ、Cε、及びCμを含む任意のアイソタイプの免疫グロブリン重鎖に由来し得る。リンカー配列はまた、Ig様タンパク質(例えば、TCR、FcR、KIR)、ヒンジ領域由来配列、及び他のタンパク質からの他の天然配列などの他のタンパク質に由来し得る。
いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に概説される任意の2つのドメインをともに連結するために使用される「ドメインリンカー」である。例えば、2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマットにおいて、FabのCH1ドメインのC末端をscFvのN末端に結合するドメインリンカーがあってよく、別の任意のドメインリンカーはscFvのC末端をCH2ドメインに結合している(ただし、多くの実施形態では、このドメインリンカーとしてヒンジが使用される)。任意の好適なリンカーを使用することができるが、多くの実施形態は、例えば、nが少なくとも1(一般に3~4~5)の整数である、(GS)n、(GSGGS)n、(GGGGS)n、及び(GGGS)nを含むドメインリンカーとしてグリシン-セリンポリマー、並びに各ドメインがその生物学的機能を保持できるように十分な長さ及び柔軟性を有する2つのドメインの組換え結合を可能にする任意のペプチド配列を利用する。場合によっては、以下に概説する「鎖性(strandedness)」に注意を払って、scFvリンカーのいくつかの実施形態において使用されるように、荷電ドメインリンカーを使用することができる。例示的な有用なドメインリンカーが、図7に示されている。
いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書で考察されるVH及びVLドメインを共有結合するために使用される「scFvリンカー」である。多くの場合では、scFvリンカーは、荷電scFvリンカーであり、そのいくつかは図6に示されている。したがって、第1の単量体と第2の単量体との間のpIの分離を促進するための荷電scFvリンカーが本明細書で提供される。すなわち、正又は負のいずれかの荷電scFvリンカー(又は異なる単量体上にscFvを使用する足場の場合は両方)を組み込むことによって、これは、Fcドメインを更に変化させることなく、荷電リンカーを含む単量体のpIを変えることを可能にする。これらの荷電リンカーは、標準的なリンカーを含む任意のscFv中に置換することができる。また、当業者には理解されるように、pIの所望の変化に従って、荷電scFvリンカーが正しい「鎖」又は単量体上に使用される。例えば、本明細書中で論じられるように、1+1 Fab-scFv-Fcフォーマットヘテロ二量体抗体を作製するために、所望の抗原連結ドメインのそれぞれについてのFv領域の元のpIが計算され、そしてscFvを作製するために1つが選択され、pIに応じて、正又は負のリンカーのいずれかが選択される。
荷電ドメインリンカーも同様に、本発明の単量体のpI分離を増加させるために使用することができ、したがって、図6に含まれるものは、リンカーが利用される、本明細書の任意の実施形態で使用することができる。
提供されるB7H3結合ドメイン及びCD28結合ドメインは、例えば、標準的な免疫グロブリン、並びに本明細書で提供される「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」及び「2+1共通軽鎖」フォーマットを含む任意の有用な抗体フォーマットに含めることができる(例えば図25を参照されたい)。他の有用な抗体フォーマットには、参照により本明細書に組み込まれるUS20180127501A1、特に抗体フォーマットに関係する関連部分(例えば図2を参照されたい)に開示されているように、「mAb-Fv」、「mAb-scFv」、「セントラル-Fv」、「ワンアームscFv-mAb」、「scFv-mAb」、「デュアルscFv」、及び「トライデント」フォーマットの抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、対象抗体は、本明細書で提供されるB7H3 ABDのうちの1つ以上を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、1つのB7H3 ABDを含む。他の実施形態では、抗体は、2つのB7H3 ABDを含む。例示的な実施形態では、B7H3 ABDは、以下のB7H3 ABDのうちの1つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704(図26~31及び配列表)。いくつかの実施形態では、B7H3 ABDは、以下のB7H3 ABDのうちの1つである:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、m1704(図26~31及び配列表)。
例示的な実施形態では、抗体は、本明細書で提供されるB7H3 ABDのいずれかを含む、1つ又は2つのB7H3 ABDを含む二重特異性抗体である。そのようなB7H3 ABDを含む二重特異性抗体には、例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」及び「2+1共通軽鎖」二重特異性フォーマット抗体が挙げられる(図25)。例示的な実施形態では、B7H3 ABDは、以下のB7H3 ABDのうちの1つである:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、m1704(図26~31及び配列表)。例示的な実施形態では、B7H3結合ドメインはFabである。いくつかの実施形態では、そのような二重特異性抗体は、本明細書に記載のヘテロ二量体化スキューバリアント、pIバリアント及び/又は除去バリアントのいずれかを含むヘテロ二量体二重特異性抗体である。図8を参照されたい。
いくつかの実施形態では、対象抗体は、本明細書で提供されるCD28 ABDのうちの1つ以上を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、1つのCD28 ABDを含む。他の実施形態では、抗体は、2つのCD28 ABDを含む。例示的な実施形態では、抗体は、以下のCD28 ABDのうちの1つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、hu9.3[CD28]_H1L1(図18~21及び23、並びに配列表)。
例示的な実施形態では、抗体は、本明細書で提供されるCD28 ABDのいずれかを含む、1つ又は2つのCD28 ABDを含む二重特異性抗体である。そのようなCD28 ABDを含む二重特異性抗体には、例えば、「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」及び「2+1共通軽鎖」二重特異性フォーマット抗体が挙げられる(図25)。例示的な実施形態では、CD28 ABDは、以下のCD28 ABDのうちの1つである:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、hu9.3[CD28]_H1L1(図18~21及び23、並びに配列表)。例示的な実施形態では、CD28 ABDは、「1+1 Fab-scFv-Fc」又は「2+1 Fab2-scFv-Fc」二重特異性フォーマット抗体」に含まれる抗CD28 scFvである(図25)。いくつかの実施形態では、そのような二重特異性抗体は、本明細書に記載のヘテロ二量体化スキューバリアント、pIバリアント及び/又は除去バリアントのいずれかを含むヘテロ二量体二重特異性抗体である。図8を参照されたい。
A.キメラ及びヒト化抗体
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される主題の抗体は、特定の生殖細胞系列重鎖免疫グロブリン遺伝子由来の重鎖可変領域及び/又は特定の生殖細胞系列軽鎖免疫グロブリン遺伝子由来の軽鎖可変領域を含む。例えば、そのような抗体は、特定の生殖細胞系列配列「の産物」である又はそれ「に由来する」重鎖又は軽鎖可変領域を含むヒト抗体を含み得るか又はそれからなり得る。ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」である又はそれ「に由来する」ヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列をヒト生殖細胞系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較することと、ヒト抗体の配列に最も近い配列である(すなわち、最も高い同一性%)ヒト生殖細胞系列免疫グロブリンを選択することとによって(本明細書に概説される方法を使用する)、そのようなものとして同定され得る。特定のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」である又はそれ「に由来する」ヒト抗体は、例えば、天然に生じる体細胞突然変異又は部位特異的突然変異の意図的導入に起因して、生殖細胞系列配列と比較してアミノ酸の相違を含み得る。しかしながら、ヒト化抗体は、典型的には、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とアミノ酸配列において少なくとも90%同一であり、他の種の生殖細胞系列免疫グロブリンアミノ酸配列(例えば、マウス生殖細胞系列配列)と比較したときに、抗体をヒト配列に由来するものとして特定するアミノ酸残基を含む。ある特定の場合には、ヒト化抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸配列において少なくとも95、96、97、98若しくは99%、又は少なくとも96%、97%、98%、又は99%までも同一であり得る。典型的には、特定のヒト生殖細胞系配列に由来するヒト化抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と10~20個以下のアミノ酸差しか示さない(本明細書中の任意のスキューバリアント、pIバリアント、及び除去バリアントの導入前、すなわち、本発明のバリアントの導入前は、バリアントの数は一般に少ない)。ある特定の場合には、ヒト化抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とは5個以下、又は更には4、3、2、若しくは1個以下のアミノ酸差しか示さない場合がある(同様に、本明細書における任意のスキューバリアント、pIバリアント、及び除去バリアントの導入前、すなわち、本発明のバリアントの導入前は、バリアントの数は一般に少ない)。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される主題の抗体は、特定の生殖細胞系列重鎖免疫グロブリン遺伝子由来の重鎖可変領域及び/又は特定の生殖細胞系列軽鎖免疫グロブリン遺伝子由来の軽鎖可変領域を含む。例えば、そのような抗体は、特定の生殖細胞系列配列「の産物」である又はそれ「に由来する」重鎖又は軽鎖可変領域を含むヒト抗体を含み得るか又はそれからなり得る。ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」である又はそれ「に由来する」ヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列をヒト生殖細胞系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較することと、ヒト抗体の配列に最も近い配列である(すなわち、最も高い同一性%)ヒト生殖細胞系列免疫グロブリンを選択することとによって(本明細書に概説される方法を使用する)、そのようなものとして同定され得る。特定のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」である又はそれ「に由来する」ヒト抗体は、例えば、天然に生じる体細胞突然変異又は部位特異的突然変異の意図的導入に起因して、生殖細胞系列配列と比較してアミノ酸の相違を含み得る。しかしながら、ヒト化抗体は、典型的には、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とアミノ酸配列において少なくとも90%同一であり、他の種の生殖細胞系列免疫グロブリンアミノ酸配列(例えば、マウス生殖細胞系列配列)と比較したときに、抗体をヒト配列に由来するものとして特定するアミノ酸残基を含む。ある特定の場合には、ヒト化抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸配列において少なくとも95、96、97、98若しくは99%、又は少なくとも96%、97%、98%、又は99%までも同一であり得る。典型的には、特定のヒト生殖細胞系配列に由来するヒト化抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と10~20個以下のアミノ酸差しか示さない(本明細書中の任意のスキューバリアント、pIバリアント、及び除去バリアントの導入前、すなわち、本発明のバリアントの導入前は、バリアントの数は一般に少ない)。ある特定の場合には、ヒト化抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とは5個以下、又は更には4、3、2、若しくは1個以下のアミノ酸差しか示さない場合がある(同様に、本明細書における任意のスキューバリアント、pIバリアント、及び除去バリアントの導入前、すなわち、本発明のバリアントの導入前は、バリアントの数は一般に少ない)。
一実施形態では、親抗体は、当技術分野で既知の通り、親和性成熟されたものである。構造に基づく方法が、例えば、USSN11/004,590に記載されているように、ヒト化及び親和性成熟のために用いられ得る。選択に基づく方法を使用して、抗体可変領域をヒト化及び/又は親和性成熟してもよく、限定されないが、Wuら、1999、J.Mol.Biol.294:151-162;Bacaら、1997、J.Biol.Chem.272(16):10678-10684;Rosokら、1996、J.Biol.Chem.271(37):22611-22618;Raderら、1998、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95:8910-8915;Kraussら、2003、Protein Engineering 16(10):753-759に記載される方法を含み、全て全体が参照により組み込まれる。他のヒト化方法は、CDRの一部のみを移植することを含んでいてもよく、限定されないが、USSN09/810,510;Tanら、2002、J.Immunol.169:1119-1125;De Pascalisら、2002、J.Immunol.169:3076-3084に記載される方法を含み、全て全体が参照により組み込まれる。
B.抗CD28×抗腫瘍関連抗原(TAA)抗体
別の態様では、抗CD28×抗TAA抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、CD28結合ドメイン、及び腫瘍関連抗原に結合する1つ以上の結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体のCD28結合ドメインは、T細胞上のCD28に結合することによって共刺激機能を提供するアゴニストCD28結合ドメインである。したがって、本明細書で提供される抗CD28×抗TAA抗体は、特定のTAA(例えばB7H3)を発現する腫瘍部位で選択的に免疫応答を増強する。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、三重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、二価抗体である。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、三価抗体である。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、二重特異性二価抗体である。例示的な実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、二重特異性三価抗体である。
別の態様では、抗CD28×抗TAA抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、CD28結合ドメイン、及び腫瘍関連抗原に結合する1つ以上の結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体のCD28結合ドメインは、T細胞上のCD28に結合することによって共刺激機能を提供するアゴニストCD28結合ドメインである。したがって、本明細書で提供される抗CD28×抗TAA抗体は、特定のTAA(例えばB7H3)を発現する腫瘍部位で選択的に免疫応答を増強する。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、三重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、二価抗体である。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、三価抗体である。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、二重特異性二価抗体である。例示的な実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、二重特異性三価抗体である。
本明細書でより詳細に概説されるように、抗CD28×抗TAA抗体は、以下に概説されるように、様々なフォーマットであり得る。例示的なフォーマットには、本明細書で提供される「1+1 Fab-scFv-Fc」、「2+1 Fab2-scFv-Fc」、「1+1共通軽鎖」、及び「2+1共通軽鎖」フォーマットが挙げられる(例えば図25を参照されたい)。他の有用な抗体フォーマットには、参照により本明細書に組み込まれるUS20180127501A1、特に抗体フォーマットに関係する関連部分(例えば図2を参照されたい)に開示されているように、「mAb-Fv」、「mAb-scFv」、「セントラル-Fv」、「ワンアームscFv-mAb」、「scFv-mAb」、「デュアルscFv」、及び「トライデント」フォーマットの抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
抗CD28×抗TAA抗体は、本明細書に記載されているものを含む、任意の好適なCD28 ABDを含み得る。いくつかの実施形態では、CD28 ABDは、CD28に結合すると共刺激機能を提供するアゴニストABDである。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、以下のCD28結合ドメインのうちの1つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含むCD28結合ドメインを含む:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、及びhu9.3[CD28]_H1L1(図18~21及び23、並びに配列表)又はそれらのバリアント。
本明細書で提供される抗CD28×抗TAA抗体は、1つ以上のTAA結合ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、1つのTAA結合ドメインを含む。ある特定の実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、2つのTAA結合ドメインを含む。標的化に選択された腫瘍に応じて、任意の好適なTAA結合ドメインを対象の抗CD28×抗TAA抗体に含めることができる。本明細書で提供される抗CD28×抗TAA抗体によって標的化され得るTAAには、B7H、CD20、CD38、CD123;ROR1、ROR2、BCMA;PSMA;SSTR2;SSTR5、CD19、FLT3、CD33、PSCA、ADAM 17、CEA、Her2、EGFR、EGFR-vIII、CD30、FOLR1、GD-2、CA-IX、Trop-2、CD70、CD38、メソテリン、EphA2、CD22、CD79b、GPNMB、CD56、CD138、CD52、CD74、CD30、CD123、RON、ERBB2、及びEGFRが挙げられるが、これらに限定されない。追加のTAAは、例えば、US2016/0355608及びUS2017/0209492に記載されており、腫瘍関連抗原に関係する関連部分において本明細書に組み込まれる。主題の抗CD28×抗TAA抗体に含めることができる好適なTAA結合ドメインは、例えば、US2019/0248898A1(SSTR2)、US2020/0165356A1(FAP)、US2017/0320947A1(PSMA)に開示されており、これらは全てTAA結合ドメインに関係する関連部分において参照により組み込まれる。
ある特定の実施形態では、抗CD28×抗TAA抗体は、B7H3結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、そのような抗CD28×抗B7H3(本明細書では「αB7H3×αCD28」又は「αCD28×αB7H3」とも呼ばれる)二重特異性抗体は、少なくとも1つのB7H3 ABD及び少なくとも1つのCD28結合ドメインを含む。例示的な実施形態では、抗CD28×抗B7H3二重特異性抗体は、2つのB7H3結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体のCD28結合ドメインは、T細胞上のCD28に結合することによって共刺激機能を提供するアゴニストCD28結合ドメインである。したがって、本明細書で提供される二重特異性αB7H3×αCD28は、B7H3を発現する腫瘍部位において選択的に免疫応答を増強する。
抗CD28×抗B7H3二重特異性抗体は、本明細書に記載のものを含む、任意の好適なCD28 ABD及びB7H3 ABDを含み得る。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗B7H3二重特異性抗体は、以下のCD28結合ドメインのうちの1つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含むCD28結合ドメインを含む:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、hCD28.3[CD28]_H1L1、5.11A1[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、hu9.3[CD28]_H1L1(図18~21及び23、並びに配列表)又はそれらのバリアント。いくつかの実施形態では、B7H3 ABDは、以下のB7H3 ABDのうちの1つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704(図26~31及び配列表)又はそれらのバリアント。
本明細書で指定されていない限り、名前の抗原リストの順序は構造を与えないことに注意されたく、すなわち、抗B7H3×抗CD28 1+1 Fab-scFv-Fc抗体は、scFvをB7H3又はCD28に結合させることができるが、場合によっては、指示されている通りの順序で構造が指定される。
加えて、主題の抗体がscFvを含む実施形態では、scFvは、VH-scFvリンカー-VL又はVL-scFvリンカー-VHのN末端からC末端への配向であり得る。いくつかのフォーマットでは、ABDの1つ以上は、概して、1つのタンパク質鎖上にVHドメインを(概して重鎖の構成要素として)、及び別のタンパク質鎖上にVLを(概して軽鎖の構成要素として)含むFabである。
当業者には理解されるように、6個のCDR又はVH及びVLドメインの任意のセットはscFvフォーマット又はFabフォーマットにすることができ、次いでこれを重鎖及び軽鎖の定常ドメインに付加し、ここで重鎖定常ドメインは変異(CH1ドメイン及びFcドメイン内を含む)を含む。配列表に含まれるscFv配列は特定の荷電リンカーを利用するが、本明細書に概説するように、図6に示されるものを含めて、非荷電又は他の荷電リンカーを使用できる。
加えて、上記のように、CDRの同定のために配列表において使用される番号付けはKabatであるが、異なる番号付けを使用することができ、それは表2に示されるようにCDRのアミノ酸配列を変化させるであろう。
本明細書に記載されている全ての可変重鎖及び軽鎖ドメインについて、更なるバリアントを作製することができる。本明細書で概説されるように、いくつかの実施形態では、6つのCDRのセットは、0、1、2、3、4又は5のアミノ酸修飾(特に使用されるアミノ酸置換による)を有し、並びに、可変重鎖及び軽鎖ドメインのフレームワーク領域であって、このフレームワーク(CDRを除く)が、図と説明文が組み込まれている米国特許第7,657,380号の図1に列挙されているもの(その図及び説明文は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。)から選択されたヒト生殖系列配列と少なくとも約80、85、又は90%の同一性を保持している限りにおいてそのフレームワーク領域の変化を、有することができる。したがって、例えば、フレームワーク領域が米国特許第7,657,380号の図1に列挙されたものから選択されたヒト生殖系列配列と少なくとも80、85又は90%の同一性を保持している限り、本明細書に記載の同一のCDRをヒト生殖系列配列由来の異なるフレームワーク配列と組み合わせることができる。代替的に、CDRは、アミノ酸改変(例えば、CDRのセットにおいて1、2、3、4、又は5個のアミノ酸改変を有し得(すなわち、CDRは、6個のCDRのセット中の変化の全数が6アミノ酸改変未満である限り、任意の組み合わせのCDRが変更され、例えば、vlCDR1において1つの変更、vhCDR2において2つの変更、vhCDR3において変更がないなどであり得る))、同様に、フレームワーク領域が、米国特許第7,657,380号の図1に列挙されるものから選択されるヒト生殖細胞系列の配列に対して少なくとも80、85、又は90%同一性を保持する限り、フレームワーク領域の変更を有する。
C.ヘテロ二量体抗体
例示的な実施形態では、本明細書で提供される抗CD28×抗TAA(例えば、抗CD28×抗B7H3)抗体は、2つのバリアントFcドメイン配列を含むヘテロ二量体二重特異性抗体である。そのようなバリアントFcドメインは、ヘテロ二量体抗体の自己組織化及び/又は精製を容易にするためのアミノ酸修飾を含む。
例示的な実施形態では、本明細書で提供される抗CD28×抗TAA(例えば、抗CD28×抗B7H3)抗体は、2つのバリアントFcドメイン配列を含むヘテロ二量体二重特異性抗体である。そのようなバリアントFcドメインは、ヘテロ二量体抗体の自己組織化及び/又は精製を容易にするためのアミノ酸修飾を含む。
抗体技術における継続的な問題は、2つの異なる抗原に同時に結合する「二重特異性」抗体であって、一般に、異なる抗原を近接させ、新しい機能と新しい治療法をもたらすことができる、「二重特異性」抗体に対する要望である。一般に、これらの抗体は、各重鎖及び軽鎖の遺伝子を宿主細胞に含めることによって作成される。これにより、一般に、2つのホモ二量体(A-A及びB-B(軽鎖ヘテロ二量体の問題は含まない))だけでなく、所望のヘテロ二量体(A-B)が形成される。しかしながら、二重特異性抗体形成における主な障壁は、ホモ二量体形成を上回るようにヘテロ二量体形成に偏らせること及び/又はホモ二量体から離してヘテロ二量体抗体を精製することが困難であるということである。
対象のヘテロ二量体抗体を生成するために使用することができる多くの機構が存在する。加えて、当業者には理解されるように、これらの異なる機構を組み合わせて高いヘテロ二量体化を確実にすることができる。ヘテロ二量体の生成と精製を容易にするアミノ酸修飾は、総称して「ヘテロ二量体化バリアント」と呼ばれる。以下に議論するように、ヘテロ二量体化バリアントには、「スキュー」バリアント(例えば、以下に議論する「ノブアンドホール」及び「電荷対」バリアント)、並びにホモ二量体からのヘテロ二量体の精製を可能にする「pIバリアント」が含まれる。その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第US9,605,084号に一般的に記載されるように、また、具体的には、ヘテロ二量体化バリアントの議論について以下のように、ヘテロ二量体化に有用な機構としては、米国特許第9,605,084号に記載される「ノブアンドホール」(「KIH」)、米国特許第9,605,084号に記載される「静電ステアリング」又は「電荷対」、米国特許第9,605,084号に記載されるpIバリアント、及び米国特許第9,605,084号及び以下に概説される一般的な更なるFcバリアントが挙げられる。
対象のヘテロ二量体抗体(例えば、二重特異性抗体)の形成及び精製に有用なヘテロ二量体化バリアントについて、以下で更に詳細に議論する。
1.スキューバリアント
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、第1のFcドメイン(A)及び/又は第2のFcドメイン(B)における1つ以上のアミノ酸修飾であるスキューバリアントを含み、スキューバリアントは、Fcホモ二量体(第1のFcドメインの2つ又は第2のFcドメインの2つを含むFc二量体;A-A又はB-B)を上回って第1及び第2のFcドメインを含むFc二量体;A-B)の形成を促す。好適なスキューバリアントは、米国特許出願公開第2016/0355608号の図29に含まれ、全体的に、特に、スキューバリアントの開示について、並びに図3及び9において、参照により本明細書に組み込まれている。
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、第1のFcドメイン(A)及び/又は第2のFcドメイン(B)における1つ以上のアミノ酸修飾であるスキューバリアントを含み、スキューバリアントは、Fcホモ二量体(第1のFcドメインの2つ又は第2のFcドメインの2つを含むFc二量体;A-A又はB-B)を上回って第1及び第2のFcドメインを含むFc二量体;A-B)の形成を促す。好適なスキューバリアントは、米国特許出願公開第2016/0355608号の図29に含まれ、全体的に、特に、スキューバリアントの開示について、並びに図3及び9において、参照により本明細書に組み込まれている。
スキューバリアントの1つの特定の種類は、一般に、当該技術分野において「ノブアンドホール」と称され、USSN61/596,846、Ridgway et al.,Protein Engineering 9(7):617(1996)、Atwell et al.,J.Mol.Biol.1997 270:26、米国特許第8,216,805号(その全てが、全体的に、特に、「ノブアンドホール」変異の開示について、参照により本明細書に組み込まれている)に記載されるように、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を促進しないような立体的影響を作り出すアミノ酸操作を指す。これは、本明細書において、時に「立体バリアント」と称されることがある。これらの図は、「ノブアンドホール」に依存するいくつかの「単量体A-単量体B」対を特定する。加えて、Merchant et al.,Nature Biotech.16:677(1998)に記載されているように、これらの「ノブアンドホール」変異をジスルフィド結合と組み合わせ、Fcヘテロ二量体の生成を更に促進することができる。
ヘテロ二量体の生成に使用される別の方法は、参照によりその全てが本明細書に組み込まれる、Gunasekaran et al.,J.Biol.Chem.285(25):19637(2010)に記載されているように、時に「静電ステアリング」と呼ばれる。これは、本明細書において、時に「電荷対」と称される。この実施形態では、静電学を使用して、ヘテロ二量体化に向けて形成をスキューさせる。当業者には理解されるように、これらは、pI、すなわち精製にも影響を及ぼす可能性があり、したがっていくつかの場合ではpIバリアントとみなすこともできる。しかしながら、これらはヘテロ二量体化を強制するために生成され、精製手段として使用されなかったので、それらは「スキューバリアント」として分類される。これらには、D221R/P228R/K409Rと対になったD221E/P228E/L368E(例えば、これらは「単量体の対応セット」である)、及びC220R/E224R/P228R/K409Rと対になったC220E/P228E/368Eが含まれるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、スキューバリアントは、有利かつ同時に、「ノブアンドホール」機構及び「静電ステアリング」機構の両方に基づくヘテロ二量体化を促進する。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、そのようなヘテロ二量体化スキューバリアントの1つ以上のセットを含む。これらのバリアントは、「セット」の「対」になる。すなわち、一方のセットの対が第1の単量体に組み込まれ、他のセットの対が第2の単量体に組み込まれる。これらのセットは、必ずしも「ノブアンドホール」バリアントとして挙動するわけではなく、一方の単量体の残基と他方の単量体の残基との間の一対一の対応を有することを留意すべきである。すなわち、セットのこれらの対は、その代わりに、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を促進しない2つの単量体間の界面を形成する可能性があり、生物学的条件下で自発的に形成するヘテロ二量体の割合は、予想される50%(25%ホモ二量体A/A:50%ヘテロ二量体A/B:25%ホモ二量体B/B)ではなく、90%を超える。例示的なヘテロ二量体化「スキュー」バリアントを図4に示す。例示的な実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、S364K/E357Q:L368D/K370S;L368D/K370S:S364K;L368E/K370S:S364K;T411T/E360E/Q362E:D401K;L368D/K370S:S364K/E357L;K370S:S364K/E357Q;又はT366S/L368A/Y407V:T366W(任意に、架橋ジスルフィドを含む、T366S/L368A/Y407V/Y349C:T366W/S354C)「スキュー」バリアントアミノ酸置換セットを含む。例示的な実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、「S364K/E357Q:L368D/K370S」アミノ酸置換セットを含む。命名法に関して、「S364K/E357Q:L368D/K370S」の対は、単量体の1つが、アミノ酸置換S364K及びE357Qを含むFcドメインを含み、他方の単量体が、アミノ酸置換L368D及びK370Sを含むFcドメインを含むことを意味する。上述のように、これらの対の「撚り度」は、開始時のpIに依存する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるスキューバリアントは、ヘテロ二量体抗体の第1及び第2のFcドメインの片方又は両方に、他のスキューバリアント(例えば、米国特許出願公開第2012/0149876号の図37、特に、スキューバリアントの開示について、参照により本明細書に組み込まれるものを参照)、pIバリアント、アイソタイプバリアント、FcRnバリアント、除去バリアントなどを含むがこれらに限定されない他の修飾とともに独立して組み込まれる。更に、個々の修飾はまた、独立して、かつ任意に、ヘテロ二量体抗体を対象に含めるか、又は対象から除外することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説されるスキューバリアントは、任意のpIバリアント(又はFcバリアント、FcRnバリアントなどの他のバリアント)を一方又は両方の重鎖単量体に任意にかつ独立して組み込むことができ、本発明のタンパク質に独立してかつ任意に含むか又は除外することができる。
2.ヘテロ二量体のpI(等電点)バリアント
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、ホモ二量体タンパク質からのヘテロ二量体抗体(例えば、抗B7H3×抗CD28二重特異性抗体)の分離を有利に可能にする精製バリアントを含む。
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、ホモ二量体タンパク質からのヘテロ二量体抗体(例えば、抗B7H3×抗CD28二重特異性抗体)の分離を有利に可能にする精製バリアントを含む。
ヘテロ二量体抗体の精製を容易にし得るいくつかの基本的な機構が存在する。例えば、各単量体が異なるpIを有するように抗体重鎖単量体A及びBの一方又は両方への修飾は、単量体A-A及びB-Bタンパク質からのヘテロ二量体A-B抗体の等電点精製を可能にする。代替的に、「1+1 Fab-scFv-Fc」フォーマット、「2+1 Fab2-scFv-Fc」フォーマット及び「2+1 CLC」フォーマットなどのいくつかの足場フォーマットは、サイズに基づいて分離を可能にする。上記のように、スキューバリアントを使用してホモ二量体上にヘテロ二量体の形成を「スキュー」することもまた可能である。したがって、ヘテロ二量体化スキューバリアントとpIバリアントとの組み合わせは、本明細書で提供されるヘテロ二量体抗体において特定の用途を見出す。
追加的に、以下でより完全に概説されるように、ヘテロ二量体抗体のフォーマットに応じて、単量体の定常領域及び/又はFcドメイン内に含まれるpIバリアント、及び/又はドメインリンカーを使用することができる。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、Fc、FcRn及びKOバリアントなどの、pI変化を作り出すこともできる代替機能のための追加の修飾を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される対象のヘテロ二量体抗体は、単量体のpIを変更する1つ以上の修飾を有する少なくとも1つの単量体(すなわち、「pIバリアント」)を含む。一般に、当業者には理解されるように、pIバリアントには2つの一般的なカテゴリー:タンパク質のpIを増加させるもの(塩基性変化)とタンパク質のpIを減少させるもの(酸性変化)がある。本明細書中に記載されるように、これらのバリアントの全ての組み合わせがなされ得る:一方の単量体は野生型、又は野生型と顕著に異なるpIを示さないバリアントであり得、他方がより塩基性又はより酸性のいずれかであり得る。代替的に、各単量体は、1つがより塩基性に、1つがより酸性へと変化する。
ヘテロ二量体抗体のフォーマットに応じて、pI変異は単量体の定常及び/又はFcドメイン内に含まれるか、又は荷電リンカー、ドメインリンカー又はscFvリンカーのいずれかが使用され得る。すなわち、「1+1Fab-scFv-Fc」などのscFvを利用する抗体フォーマットには、精製目的のために更にpIブーストを与える荷電scFvリンカー(正又は負のいずれか)を含むことができる。当業者には理解されるように、本明細書は、単量体の一方又は両方にあるpIバリアント、及び/又は荷電ドメインリンカーも提供するが、いくつかの1+1 Fab-scFv-Fc及び2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマットは、荷電scFvリンカーのみで有用であり、追加のpI調整はない。加えて、代替の機能性のための更なるアミノ酸操作もまた、Fc、FcRn、及びKOバリアントなどのpI変化を付与し得る。
ヘテロ二量体タンパク質の精製を可能にする分離機構としてpIを利用する対象のヘテロ二量体抗体では、アミノ酸バリアントが単量体ポリペプチドの一方又は両方に導入される。すなわち、単量体の1つ(単純化のため本明細書では、簡「単量体A」として称される)のpIは、単量体Bから離れるように操作させることができ、又は単量体AのpIを増加させ、単量体BのpIを減少させつつ、単量体AとBの両方の変化を変化させることができる。下記により完全に概説されるように、いずれか又は両方の単量体のpI変化は、荷電残基を除去又は付加することによって(例えば、中性アミノ酸を正又は負に荷電したアミノ酸残基で置換する、例えばグリシンからグルタミン酸)、正又は負から反対の電荷への荷電残基の変更によって(アスパラギン酸からリジンへ)、又は荷電残基の中性残基への変更によって(例えば、電荷の消失、リジンからセリンへ)、実施することができる。いくつかのこれらのバリアントを図3及び4に示す。
したがって、いくつかの実施形態では、対象のヘテロ二量体抗体は、二量体タンパク質の単量体の両方ではないにしても少なくとも1つの等電点(pI)を、アミノ酸置換(「pIバリアント」又は「pI置換」)を単量体の一方又は両方に組み込むことによって変更する定常領域におけるアミノ酸修飾を含む。本明細書中に示されるように、2つのホモ二量体からのヘテロ二量体の分離は、2つの単量体のpIが0.1pH単位とわずかに異なる場合に達成でき、0.2、0.3、0.4、及び0.5以上異なるものが全て本発明において使用される。
当業者には理解されるように、良好な分離を得るために各単量体又は両方の単量体に含まれるべきpI変異の数は、構成要素の出発pI、例えば、1+1 Fab-scFv-Fc、2+1 Fab2-scFv-Fc、1+1 CLC及び2+1 CLCフォーマットにおいて、関心対象のscFv(1+1 Fab-scFv-Fc、2+1 Fab2-scFv-Fc)及びFabの出発pIに部分的に依存するであろう。すなわち、どの単量体を操作するか、又はどの「方向」(例えば、より正又はより負)かを決定するために、2つの標的抗原のFv配列が計算され、そしてそこから決定がなされる。当技術分野において既知のように、異なるFvは、本発明において利用される異なる出発pIを有するであろう。一般に、本明細書に概説されるように、pIは、少なくとも約0.1logの各単量体の総pI差をもたらすように操作され、本明細書に概説されるように0.2~0.5が好ましい。
重鎖の定常領域を使用することによって、ヘテロ二量体を達成するためにpIバリアントが使用される場合、抗体を含む二重特異性タンパク質を設計及び精製するためのよりモジュール方式のアプローチが提供される。したがって、いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体化変異(スキュー及びpIヘテロ二量体化バリアントを含む)は可変領域に含まれず、そのため各個々の抗体を操作しなければならない。加えて、いくつかの実施形態では、pIバリアントから生じる免疫原性の可能性は、顕著な免疫原性を導入することなくpIが変化するように、異なるIgGアイソタイプからのpIバリアントを移入することによって顕著に低減する。したがって、解決されるべき更なる問題は、高いヒト配列含有量を有する低いpI定常ドメインの解明、例えば、任意の特定位置における非ヒト残基の最小化又は回避である。アイソタイプ置換に代えて、又はこれに加え、pIバリアントから生じる免疫原性の可能性は、等配電子置換(例えば、AsnからAsp及びGlnからGlu)を利用することによって、有意に低減する。
以下に議論するように、このpI工学で起こり得る副次的な利益はまた、血清半減期の延長及びFcRn連結の増加である。すなわち、米国特許出願公開第2012/0028304号(その全体が参照により本明細書に組み込まれる)に記載されているように、抗体定常ドメイン(抗体及びFc融合体に見られるものを含む)のpIを低下させるとインビボでより長い血清保持をもたらし得る。血清半減期を延長するためのこれらのpIバリアントはまた、精製のためのpI変化を促進する。
加えて、pIバリアントは、ホモ二量体が存在するときを排除、最小化、及び区別する能力が顕著であるので、二重特異性抗体の分析及び品質管理プロセスに更なる利益を与える。同様に、ヘテロ二量体抗体産生の再現性を確実に試験する能力は重要である。
一般に、特に使用される実施形態は、スキューバリアントを含むバリアントのセットに依存し、これは、2つの単量体間でpI差異を増加させるpIバリアントと組み合わせて、ホモ二量体化形成より優先してヘテロ二量体化形成を促し、ホモ二量体を除去してヘテロ二量体の精製を容易にする。
pIバリアントの例示的な組み合わせは、米国特許出願公開第2016/0355608号の図4及び5、及び図30に示されており、これらの全ては、全体的に、特に、pIバリアントの開示について、参照により本明細書に組み込まれる。pIバリアントの好ましい組み合わせを、図3及び4に示す。本明細書に概説し、図に示すように、これらの変化はIgG1と比較して示されているが、全てのアイソタイプをこのように変更することができ、アイソタイプハイブリッドも同様である。重鎖定常ドメインがIgG2~4に由来する場合、R133E及びR133Qもまた使用され得る。
一実施形態では、pIバリアントの好ましい組み合わせは、208D/295E/384D/418E/421Dバリアント(ヒトIgG1に対しての場合、N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D)を含む1つの単量体(負のFab側)と、(GKPGS)4(配列番号796)を含む正に荷電したscFvリンカーを含む第2の単量体(正のscFv側)とを有する。しかしながら、当業者によって理解されるように、第1の単量体は、位置208を含むCH1ドメインを含む。したがって、CH1ドメインを含まない構築物(例えば、ドメインの1つにCH1ドメインを利用しない抗体の場合)において、好ましい負のpI変異Fcセットは、295E/384D/418E/421D変異(ヒトIgG1と比較するときQ295E/N384D/Q418E/N421D)を含む。
したがって、いくつかの実施形態では、一方の単量体は図4からの置換のセットを有し、他方の単量体は荷電リンカー(フォーマットに示されるように、その単量体がscFv又は荷電ドメインリンカーを含むため荷電scFvリンカーのフォーマットのいずれかで、図6に示されているものから選択できる)を有する。
いくつかの実施形態では、修飾は、EU番号付けに基づき、位置216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229及び230を含む、Fcドメインのヒンジで生じる。したがって、pIバリアント、特に置換は、位置216~230の1つ以上で行うことができ、用途を見出す1、2、3、4又は5個の変異を有する。同様に、全ての可能な組み合わせが、単独で、又は他のドメイン中の他のpIバリアントとともに企図されている。
ヒンジドメインのpIを低下させるのに使用される具体的な置換は、221位の欠失、222位の非天然バリン又はトレオニン、223位の欠失、224位の非天然グルタミン酸、225位の欠失、235位の欠失、及び236位の欠失又は非天然アラニンを含むが、これらに限定されない。場合によっては、ヒンジドメインにおいてはpI置換のみが行われ、他の例では、これらの置換は他のドメイン内の他のpIバリアントに任意の組み合わせで加えられる。
いくつかの実施形態では、EU番号付けに基づき、位置233、234、235、236、274、296、300、309、320、322、326、327、334及び339を含むCH2領域内に変異を生じさせることができる。233~236における変化は、IgG2骨格における(327Aとともに)エフェクター機能を増加させるためになされ得ることに留意されたい。同様に、これら14の位置の全ての可能な組み合わせを作ることができ、例えば、本明細書で提供される抗CD28又は抗B7H3抗体は、1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10のCH2のpI置換を有するバリアントFcドメインを含み得る。
CH2ドメインのpIを低下させるのに使用される具体的な置換は、274位の非天然グルタミン又はグルタミン酸、296位の非天然フェニルアラニン、300位の非天然フェニルアラニン、309位の非天然バリン、320位の非天然グルタミン酸、322位の非天然グルタミン酸、326位の非天然グルタミン酸、327位の非天然グリシン、334位の天然グルタミン酸、339位の非天然トレオニン、及びCH2内及び他のドメインとの全ての可能な組み合わせを含むが、これらに限定されない。
この実施形態では、修飾は、CH3領域の位置355、359、362、384、389、392、397、418、419、444及び447(EU番号付け)から独立して、かつ任意選択で選択され得る。CH3ドメインのpIを低下させるのに使用される具体的な置換としては、355位の非天然グルタミン又はグルタミン酸、384位の非天然セリン、392位の非天然アスパラギン又はグルタミン酸、397位の非天然メチオニン、419位の非天然グルタミン酸、359位の非天然グルタミン酸、362位の非天然グルタミン酸、389位の非天然グルタミン酸、418位の非天然グルタミン酸、444位の非天然グルタミン酸、及び447位の欠失又は非天然アスパラギン酸が含まれるがこれらに限定されない。
3.アイソタイプバリアント
加えて、主題のヘテロ二量体抗体の多くの実施形態は、あるIgGアイソタイプから別のIgGアイソタイプへの特定の位置でのpIアミノ酸の「移入」に依存し、したがって、バリアントに望ましくない免疫原性が導入される可能性を低減又は排除する。これらのいくつかは、参照により本明細書に組み込まれている、米国特許出願公開第2014/0370013号の図21に示されている。すなわち、IgG1は、高いエフェクター機能を含む様々な理由から治療用抗体の一般的なアイソタイプである。しかしながら、IgG1の重定常領域は、IgG2のそれよりも高いpIを有する(8.10対7.31)。特定の位置でIgG2残基をIgG1骨格に導入することによって、得られる単量体のpIは低下(又は上昇)し、追加的により長い血清半減期を示す。例えば、IgG1は137位にグリシン(pI5.97)を有し、IgG2はグルタミン酸(pI3.22)を有し、グルタミン酸を移入すると、得られるタンパク質のpIに影響を与える。以下に記載されるように、いくつかのアミノ酸置換は一般に、バリアント抗体のpIに顕著な影響を与えるために必要とされる。しかしながら、IgG2分子中の変化でさえも血清半減期の増加を可能にすることが以下に論じられるように留意されるべきである。
加えて、主題のヘテロ二量体抗体の多くの実施形態は、あるIgGアイソタイプから別のIgGアイソタイプへの特定の位置でのpIアミノ酸の「移入」に依存し、したがって、バリアントに望ましくない免疫原性が導入される可能性を低減又は排除する。これらのいくつかは、参照により本明細書に組み込まれている、米国特許出願公開第2014/0370013号の図21に示されている。すなわち、IgG1は、高いエフェクター機能を含む様々な理由から治療用抗体の一般的なアイソタイプである。しかしながら、IgG1の重定常領域は、IgG2のそれよりも高いpIを有する(8.10対7.31)。特定の位置でIgG2残基をIgG1骨格に導入することによって、得られる単量体のpIは低下(又は上昇)し、追加的により長い血清半減期を示す。例えば、IgG1は137位にグリシン(pI5.97)を有し、IgG2はグルタミン酸(pI3.22)を有し、グルタミン酸を移入すると、得られるタンパク質のpIに影響を与える。以下に記載されるように、いくつかのアミノ酸置換は一般に、バリアント抗体のpIに顕著な影響を与えるために必要とされる。しかしながら、IgG2分子中の変化でさえも血清半減期の増加を可能にすることが以下に論じられるように留意されるべきである。
他の実施形態では、非アイソタイプのアミノ酸変化を行って、(例えば、高pIのアミノ酸から低pIのアミノ酸へと変化させることによって)得られるタンパク質の全体的な荷電状態を低減させるか、又は以下で更に詳細に説明する安定性などのための構造の調整を可能にする。
加えて、重定常ドメイン及び軽定常ドメインの両方をpI操作することによって、ヘテロ二量体の各単量体における顕著な変化を見ることができる。本明細書で論じるように、2つの単量体のpIが少なくとも0.5だけ異なることは、イオン交換クロマトグラフィー若しくは等電点電気泳動、又は等電点に感受性の他の方法による分離を可能にし得る。
4.pIを計算する
本明細書で提供される抗体の各単量体のpIは、バリアント重鎖定常ドメインのpI及び全単量体のpIに依存し、バリアント重鎖定常ドメイン及び融合パートナーを含み得る。したがって、いくつかの実施形態において、pIの変化は、米国特許出願公開第2014/0370013号の図19のチャートを用いて、バリアント重鎖定常ドメインに基づいて計算される。本明細書で論じるように、どの単量体を操作するかは概して、Fv及び足場の固有のpIによって決定される。代替的に、各単量体のpIを比較することができる。
本明細書で提供される抗体の各単量体のpIは、バリアント重鎖定常ドメインのpI及び全単量体のpIに依存し、バリアント重鎖定常ドメイン及び融合パートナーを含み得る。したがって、いくつかの実施形態において、pIの変化は、米国特許出願公開第2014/0370013号の図19のチャートを用いて、バリアント重鎖定常ドメインに基づいて計算される。本明細書で論じるように、どの単量体を操作するかは概して、Fv及び足場の固有のpIによって決定される。代替的に、各単量体のpIを比較することができる。
5.より良好なインビボ結合のFcRnも付与するpIバリアント
pIバリアントが単量体のpIを減少させる場合、pIバリアントはインビボでの血清保持を改善するという更なる利点を有することができる。
pIバリアントが単量体のpIを減少させる場合、pIバリアントはインビボでの血清保持を改善するという更なる利点を有することができる。
まだ検討中ではあるが、エンドソーム内のpH6でFcRnに結合するとFcが隔離されるため、Fc領域はインビボでより長い半減期を有すると考えられている(参照により全体的に組み込まれる、Ghetie and Ward,1997 Immunol Today.18(12):592-598)。次いでエンドソーム区画はFcを細胞表面にリサイクルする。区画が細胞外空間に開くと、約7.4のより高いpHが、血中へのFcの放出を誘導する。マウスにおいて、Dall’Acquaらは、pH6及びpH7.4でのFcRn結合が増加したFc変異は実際に低下した血清濃度及び野生型Fcと同一の半減期を有することを示した(参照により全体的に組み込まれる、Dall’ Acqua et al.2002,J.Immunol.169:5171-5180)。pH7.4でのFcRnに対するFcの親和性の増加は、血中へのFcの放出を妨げると考えられる。したがって、インビボでのFcの半減期を増加させるFc変異は、理想的には、より高いpHでのFcの放出をなお可能にしながら、より低いpHでのFcRn結合を増加させる。アミノ酸ヒスチジンは、6.0~7.4のpH範囲でその荷電状態を変化させる。それ故、Fc/FcRn複合体中の重要な位置にHis残基を見出すことは驚くべきことではない。
最近、より低い等電点を有する可変領域を有する抗体もまたより長い血清半減期を有し得ることが示唆されている(Igawa et al.,2010 PEDS.23(5):385-392、参照により全てが本明細書に組み込まれる)。しかし、この機構はまだよくわかっていない。更に、可変領域は抗体ごとに異なる。本明細書に記載されるように、pIが低下し半減期が延長された定常領域バリアントは、抗体の薬物動態特性を改善するためのよりモジュール化されたアプローチを提供するであろう。
D.追加の機能性のための追加のFcバリアント
上記に概説されているヘテロ二量体化バリアントに加えて、限定されないが、以下に概説されているように、1つ以上のFcγR受容体との結合を変化させること、FcRnへの変化された結合を含む、様々な理由から行われ得るいくつかの有用なFcアミノ酸修飾がある。
上記に概説されているヘテロ二量体化バリアントに加えて、限定されないが、以下に概説されているように、1つ以上のFcγR受容体との結合を変化させること、FcRnへの変化された結合を含む、様々な理由から行われ得るいくつかの有用なFcアミノ酸修飾がある。
したがって、本明細書で提供される抗体(ヘテロ二量体、並びにホモ二量体)は、本明細書で概説されるヘテロ二量体化バリアント(例えば、pIバリアント及び立体バリアント)を伴うか、又は伴わないそのようなアミノ酸修飾を含み得る。バリアントの各セットは独立してかつ任意選択で特定のヘテロ二量体タンパク質に含み得るか又はそれから除外し得る。
1.FcγRバリアント
FcγR受容体のうちの1つ以上への結合を改変するために実施され得るいくつかの有用なFc置換が存在する。ある特定の実施形態では、対象の抗体は、1つ以上のFcγR受容体(すなわち、「FcγRバリアント」)への結合を変更する修飾を含む。結合の増加並びに結合の減少をもたらす置換が有用であり得る。例えば、FcγRIIIaへの結合の増加は、一般に、ADCC(抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性、すなわち、FcγRを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の連結抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応)の増加をもたらすことが知られている。同様に、いくつかの状況下では、FcγRIIb(阻害性受容体)との結合の減少も有益であり得る。主題の抗体で使用されるアミノ酸置換には、米国特許第8,188,321号(特に図41)及び同第8,084,582号、並びに米国特許公開出願第2006/0235208号及び同第2007/0148170号に列挙されるものが挙げられ、これらは全て、参照によりその全体が、特にそこに開示されているFcγ受容体結合に影響するバリアントについて明示的に、本明細書に組み込まれている。使用される特定のバリアントは、236A、239D、239E、332E、332D、239D/332E、267D、267E、328F、267E/328F、236A/332E、239D/332E/330Y、239D、332E/330L、243A、243L、264A、264V、及び299Tを含むが、これらに限定されない。そのような修飾は、対象抗体の一方又は両方のFcドメインに含まれ得る。
FcγR受容体のうちの1つ以上への結合を改変するために実施され得るいくつかの有用なFc置換が存在する。ある特定の実施形態では、対象の抗体は、1つ以上のFcγR受容体(すなわち、「FcγRバリアント」)への結合を変更する修飾を含む。結合の増加並びに結合の減少をもたらす置換が有用であり得る。例えば、FcγRIIIaへの結合の増加は、一般に、ADCC(抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性、すなわち、FcγRを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の連結抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応)の増加をもたらすことが知られている。同様に、いくつかの状況下では、FcγRIIb(阻害性受容体)との結合の減少も有益であり得る。主題の抗体で使用されるアミノ酸置換には、米国特許第8,188,321号(特に図41)及び同第8,084,582号、並びに米国特許公開出願第2006/0235208号及び同第2007/0148170号に列挙されるものが挙げられ、これらは全て、参照によりその全体が、特にそこに開示されているFcγ受容体結合に影響するバリアントについて明示的に、本明細書に組み込まれている。使用される特定のバリアントは、236A、239D、239E、332E、332D、239D/332E、267D、267E、328F、267E/328F、236A/332E、239D/332E/330Y、239D、332E/330L、243A、243L、264A、264V、及び299Tを含むが、これらに限定されない。そのような修飾は、対象抗体の一方又は両方のFcドメインに含まれ得る。
いくつかの実施形態では、主題の抗体は、血清半減期を増加させる1つ以上のFc修飾を含む。FcRn受容体への結合の増加及び血清半減期の増加に使用されるFc置換は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるUSSN12/341,769に具体的に開示されているように、434S、434A、428L、308F、259I、428L/434S、259I/308F、436I/428L、436I又はV/434S、436V/428L、及び259I/308F/428Lを含むがこれらに限定されない。そのような修飾は、対象抗体の一方又は両方のFcドメインに含まれ得る。
2.除去バリアント
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体(例えば、抗B7H3×抗CD28二重特異性抗体)は、Fcγ受容体(例えば、FcγR1、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIaなど)のうちの1つ以上又は全てへのFcドメインの通常の結合を低減又は除去して追加の作用機序を回避する1つ以上の修飾を含む。そのような修飾は、「FcγR除去バリアント」又は「Fcノックアウト(FcKO又はKO)」バリアントと呼ばれる。これらの実施形態では、いくつかの治療用途のために、追加の作用機序を回避するために、1つ以上又は全てのFcγ受容体(例えば、FcγR1、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIaなど)へのFcドメインの正常な結合を低減又は除去することが望ましい。すなわち、例えば、多くの実施形態では、特にCD28に一価的に結合する二重特異性抗体の使用において、ADCC活性を排除又は顕著に低下させるためにFcγRIIIa結合を除去することが概して望ましい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の主題の抗体のうち、Fcドメインの少なくとも1つは、1つ以上のFcγ受容体除去バリアントを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の主題の抗体のうち、Fcドメインの両方が、1つ以上のFcγ受容体除去バリアントを含む。これらの切除バリアントは、図5に示され、それぞれは、G236R/L328R、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K、E233P/L234V/L235A/G236del/S267K、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G、E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G、及びE233P/L234V/L235A/G236delからなる群から選択される切除バリアントを用いる好ましい態様で、独立して任意選択的に含まれるか除外することができる。本明細書で言及される除去バリアントは、FcγR結合を除去するが、FcRn結合を除去しないことに留意されたい。
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体(例えば、抗B7H3×抗CD28二重特異性抗体)は、Fcγ受容体(例えば、FcγR1、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIaなど)のうちの1つ以上又は全てへのFcドメインの通常の結合を低減又は除去して追加の作用機序を回避する1つ以上の修飾を含む。そのような修飾は、「FcγR除去バリアント」又は「Fcノックアウト(FcKO又はKO)」バリアントと呼ばれる。これらの実施形態では、いくつかの治療用途のために、追加の作用機序を回避するために、1つ以上又は全てのFcγ受容体(例えば、FcγR1、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIaなど)へのFcドメインの正常な結合を低減又は除去することが望ましい。すなわち、例えば、多くの実施形態では、特にCD28に一価的に結合する二重特異性抗体の使用において、ADCC活性を排除又は顕著に低下させるためにFcγRIIIa結合を除去することが概して望ましい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の主題の抗体のうち、Fcドメインの少なくとも1つは、1つ以上のFcγ受容体除去バリアントを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の主題の抗体のうち、Fcドメインの両方が、1つ以上のFcγ受容体除去バリアントを含む。これらの切除バリアントは、図5に示され、それぞれは、G236R/L328R、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K、E233P/L234V/L235A/G236del/S267K、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G、E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G、及びE233P/L234V/L235A/G236delからなる群から選択される切除バリアントを用いる好ましい態様で、独立して任意選択的に含まれるか除外することができる。本明細書で言及される除去バリアントは、FcγR結合を除去するが、FcRn結合を除去しないことに留意されたい。
当技術分野で知られているように、ヒトIgG1のFcドメインはFcγ受容体への結合が最も高く、したがってヘテロ二量体抗体の骨格の定常ドメイン(又はFcドメイン)がIgG1である場合、除去バリアントを使用できる。代替的に、又はIgG1バックグラウンドの除去バリアントに加えて、グリコシル化位置297(一般にA又はSへの)での変異は、例えば、FcγRIIIaへの結合を有意に除去することができる。ヒトIgG2及びIgG4は、Fcγ受容体への結合が自然に低下しているため、これらの骨格は、除去バリアントの有無にかかわらず使用できる。
E.ヘテロ二量体とFcバリアントとの組み合わせ
当業者には理解されるように、列挙されたヘテロ二量体化バリアント(スキューバリアント及び/又はpIバリアントを含む)は全て、それらの「鎖性(strandedness)」又は「単量体分割」を保持する限り、任意選択で、かつ独立して組み合わせることができる。加えて、これらのバリアントは全て、ヘテロ二量体化フォーマットのいずれにも組み合わせることができる。
当業者には理解されるように、列挙されたヘテロ二量体化バリアント(スキューバリアント及び/又はpIバリアントを含む)は全て、それらの「鎖性(strandedness)」又は「単量体分割」を保持する限り、任意選択で、かつ独立して組み合わせることができる。加えて、これらのバリアントは全て、ヘテロ二量体化フォーマットのいずれにも組み合わせることができる。
pIバリアントの場合、特に使用される実施形態が図に示されている一方、精製を促進するために2つの単量体間のpIの差異を変えるという基本的な規則に従って、他の組み合わせを生成できる。
加えて、ヘテロ二量体化バリアント、スキュー、及びpIのいずれも、本明細書で一般的に概説されるように、Fc除去バリアント、Fcバリアント、FcRnバリアントと、独立してかつ任意選択で組み合わせることができる。
ヘテロ二量体1+1 Fab-scFv-Fc、2+1 Fab2-scFv-Fc、1+1 CLC及び2+1 CLCフォーマット抗体のいくつかの実施形態に含まれるバリアントの例示的な組み合わせが図8に含まれている。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、図8に示されるように、バリアントの組み合わせを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、ヘテロ二量体11+1 Fab-scFv-Fc、2+1 Fab2-scFv-Fc、1+1 CLC又は2+1 CLCフォーマット抗体である。
F.有用な抗体フォーマット
当業者には理解され、以下でより詳細に説明するように、概して図33及び34に示すように、本明細書に提供される二重特異性ヘテロ二量体抗体は、いくつかの異なる構成をとることができる。
当業者には理解され、以下でより詳細に説明するように、概して図33及び34に示すように、本明細書に提供される二重特異性ヘテロ二量体抗体は、いくつかの異なる構成をとることができる。
当業者には理解されるように、本発明のヘテロ二量体フォーマットは、異なる価数を有し得るとともに、二重特異性であり得る。すなわち、本発明のヘテロ二量体抗体は、二価及び二重特異性、又は三価及び二重特異性であり得、第1の抗原は2つの結合ドメインによって結合され、第2の抗原は第2の結合ドメインによって結合される。本明細書に概説されるように、CD28が標的抗原の1つである場合、CD28は一価的のみに結合することが好ましい。
本発明は、CD28抗原結合ドメインをB7H3結合ドメインと組み合わせて利用する。当業者によって理解されるように、図のいずれか(特に図16~21を参照されたい)に示されるような抗CD28 CDR、抗CD28可変軽鎖ドメイン及び可変重鎖ドメイン、Fab並びにscFvの任意のコレクションを使用することができる。同様に、抗B7H3抗原結合ドメインのいずれかを使用することができ、図のいずれか(例えば、図29~31)に示されるように、CDR、可変軽鎖ドメイン及び可変重鎖ドメイン、Fab並びにscFvのいずれかを、任意選択で、かつ独立して任意の組み合わせで組み合わせて使用することができる。
1.1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット(「ボトルオープナー」)
本明細書で提供される主題の二重特異性抗体(例えば、抗CD28×抗B7H3抗体)において特に使用される1つのヘテロ二量体抗体フォーマットは、図33Aに示されるような「1+1 Fab-scFv-Fc」又は「ボトルオープナー」フォーマットである。1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット抗体は、「通常の」重鎖(VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3)である第1の単量体を含み、VH1は第1の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3は第1のFcドメインである。1+1 Fab-scFv-Fcはまた、第1の可変軽鎖ドメインVL1及び定常軽鎖ドメインCLを含む軽鎖を含む。軽鎖は、第1の単量体のVH1-CH1と相互作用して、Fabである第1の抗原結合ドメインを形成する。抗体の第2の単量体は、単鎖Fv(以下に定義される「scFv」)である第2の結合ドメイン及び第2のFcドメインを含む。scFvは、第2の可変重鎖ドメイン(VH2)及び第2の可変軽鎖ドメイン(VL2)を含み、VH2は、荷電可能なscFvリンカーを使用してVL2に結合されている(例えば、図6を参照されたい)。scFvは、ドメインリンカーを使用して重鎖に結合される(例えば、図7を参照されたい)。2つの単量体は、以下により詳細に記載されるように、ヘテロ二量体抗体の形成を促進する定常領域(例えば、Fcドメイン、CH1ドメイン及び/又はヒンジ領域)におけるアミノ酸バリアント(例えば、上述したヘテロ二量体化バリアント)の使用により一緒にされる。この構造は、ボトルオープナーと視覚的に大まかに似ているため、本明細書では「ボトルオープナー」(フォーマットと称されることがある。いくつかの実施形態では、1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット抗体は、二価抗体である。
本明細書で提供される主題の二重特異性抗体(例えば、抗CD28×抗B7H3抗体)において特に使用される1つのヘテロ二量体抗体フォーマットは、図33Aに示されるような「1+1 Fab-scFv-Fc」又は「ボトルオープナー」フォーマットである。1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット抗体は、「通常の」重鎖(VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3)である第1の単量体を含み、VH1は第1の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3は第1のFcドメインである。1+1 Fab-scFv-Fcはまた、第1の可変軽鎖ドメインVL1及び定常軽鎖ドメインCLを含む軽鎖を含む。軽鎖は、第1の単量体のVH1-CH1と相互作用して、Fabである第1の抗原結合ドメインを形成する。抗体の第2の単量体は、単鎖Fv(以下に定義される「scFv」)である第2の結合ドメイン及び第2のFcドメインを含む。scFvは、第2の可変重鎖ドメイン(VH2)及び第2の可変軽鎖ドメイン(VL2)を含み、VH2は、荷電可能なscFvリンカーを使用してVL2に結合されている(例えば、図6を参照されたい)。scFvは、ドメインリンカーを使用して重鎖に結合される(例えば、図7を参照されたい)。2つの単量体は、以下により詳細に記載されるように、ヘテロ二量体抗体の形成を促進する定常領域(例えば、Fcドメイン、CH1ドメイン及び/又はヒンジ領域)におけるアミノ酸バリアント(例えば、上述したヘテロ二量体化バリアント)の使用により一緒にされる。この構造は、ボトルオープナーと視覚的に大まかに似ているため、本明細書では「ボトルオープナー」(フォーマットと称されることがある。いくつかの実施形態では、1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット抗体は、二価抗体である。
現在の「1+1 Fab-scFv-Fc」フォーマットにはいくつかの明確な利点が存在する。当技術分野で知られているように、2つのscFv構築物に依存する抗体類似体は、安定性及び凝集の問題を有することが多く、本発明では、「通常の」重鎖及び軽鎖の対合を加えることによって軽減できる。加えて、2つの重鎖及び2つの軽鎖に依存するフォーマットとは対照的に、重鎖と軽鎖の誤った対合(例えば、重鎖1と軽鎖2の対合など)の問題はない。
1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット抗体のいくつかの実施形態では、第1又は第2の抗原結合ドメインのうちの一方がCD28結合ドメインであり、他方の結合ドメインが腫瘍関連抗原(TAA)結合ドメインである。1+1 Fab-scFv-FcがCD28結合ドメイン及び腫瘍関連抗原(TAA)結合ドメインを含むいくつかの実施形態では、CD28に結合するのはscFvであり、TAAに結合するのはFabである。いくつかの実施形態では、TAAはB7H3である。1+1 Fab-scFv-Fcフォーマットの例示的な抗B7H3×抗CD28二重特異性抗体を図35Aに示す。
いくつかの実施形態では、1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット抗体の第1及び第2のFcドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアント(例えば、図3及び9に示されるアミノ酸置換のセット)を含むバリアントFcドメインである。特に有用なヘテロ二量体化スキューバリアントは、S364K/E357Q:L368D/K370S、L368D/K370S:S364K、L368E/K370S:S364K、T411T/E360E/Q362E:D401K、L368D/K370S:S364K/E357L、K370S:S364K/E357Q、T366S/L368A/Y407V:T366W及びT366S/L368A/Y407V/Y349C:T366W/S354C(EU番号付け))を含む。例示的な実施形態では、第1又は第2のバリアントFcドメインのうちの一方はヘテロ二量体化スキューバリアントL368D/K370Sを含み、第1又は第2のバリアントFcドメインの他方はヘテロ二量体化スキューバリアントS364K/E357Qを含み、番号付けはEU番号付けに従う。例示的な実施形態では、第1のバリアントFcドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントL368D/K370Sを含み、第2のバリアントFcドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントS364K/E357Qを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、バリアントFcドメインは、除去バリアント(図5に示されるものを含む)を含む。いくつかの実施形態では、第1及び第2のバリアントFcドメインのそれぞれが、除去バリアントE233P/L234V/L235A/G236_/S267Kを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1の単量体の定常ドメイン(CH1-ヒンジ-CH2-CH3)は、pIバリアント(図4に示されるものを含む)を含む。例示的な実施形態では、第1の単量体の定常ドメイン(CH1-ヒンジ-CH2-CH3)は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
例示的な実施形態では、第1の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、第2のFcドメインは、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット抗体のscFvは、荷電scFvリンカー(図6に示されるものを含む)を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット抗体は、FcRnバリアントM428L/N434Sを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
例示的な実施形態では、第1のバリアントFcドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントL368D/K370Sを含み、第2のバリアントFcドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントS364K/E357Qを含み、第1及び第2のバリアントFcドメインのそれぞれは、除去バリアントE233P/L234V/L235A/G236_/S267Kを含み、第1の単量体の定常ドメイン(CH1-ヒンジ-CH2-CH3)は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けはEU番号付けに従う。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット抗体のscFvは、(GKPGS)4荷電scFvリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット抗体は、FcRnバリアントM428L/N434Sを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1の結合ドメイン又は第2の結合ドメインのうちの一方はCD28に結合し、他方の結合ドメインは腫瘍関連抗原(TAA)に結合する(図34Aを参照されたい)。本明細書で提供されるCD28結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なCD28結合ドメインを、主題の1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、CD28結合ドメインは、以下のCD28結合ドメインの1つ又はそのバリアントである:1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、hu9.3[CD28]_H1L1(図18~21及び23、並びに配列表)。
mAb-scFvフォーマットのいくつかの実施形態では、抗CD28 ABDは、配列番号870、配列番号585、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、配列番号651、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号670、配列番号671及び配列番号672からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号874、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号660、配列番号661、配列番号662、配列番号663、配列番号664、配列番号665、配列番号666、配列番号667、配列番号668、配列番号669、配列番号670、配列番号671、配列番号672、配列番号NO:673、配列番号674、配列番号675、配列番号676、配列番号677、配列番号678、配列番号679、配列番号680、配列番号681、配列番号682、配列番号683、配列番号684、配列番号685、配列番号686、配列番号687、配列番号688、配列番号689、配列番号690、配列番号691、配列番号692、配列番号693、配列番号694、配列番号695、配列番号696、配列番号697、配列番号698、配列番号699、配列番号700、配列番号701、配列番号702、配列番号703、配列番号704、配列番号705、配列番号706、配列番号707、配列番号708、配列番号709、配列番号710、配列番号711、配列番号712、配列番号713、配列番号714、配列番号715、配列番号716、配列番号717、配列番号718、配列番号719、配列番号720、配列番号721、配列番号722、配列番号723、配列番号724、配列番号725、配列番号726、配列番号727、配列番号728、配列番号729、配列番号730、配列番号731、配列番号732、配列番号733、配列番号734、配列番号735、配列番号736、配列番号737、配列番号738、配列番号739、配列番号740、配列番号741、配列番号742、配列番号743、配列番号744、配列番号745、配列番号746、配列番号747、配列番号748、配列番号749、配列番号750、配列番号751、配列番号752、配列番号753、配列番号754、配列番号755、配列番号1200及び配列番号756からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVLドメインとを有する。
いくつかの実施形態では、1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット抗体の第1の結合ドメイン又は第2の結合ドメインの1つは、腫瘍関連抗原(TAA)に結合する。好適なTAAには、本明細書に開示されるTAAのいずれかが含まれる。例示的な実施形態では、TAAはB7H3である。本明細書で提供されるB7H3結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なB7H3結合ドメインを、主題の1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、B7H3結合ドメインは、以下のB7H3結合ドメイン又はそれらのバリアントのうちの1つである:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、m1704(図26~31及び配列表)。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号518、配列番号928、配列番号497、配列番号498、配列番号499、配列番号500、配列番号501、配列番号502、配列番号503、配列番号504、配列番号505、配列番号506、配列番号507、配列番号508、配列番号509、配列番号510、配列番号511、配列番号512、配列番号513、配列番号514、配列番号515、配列番号516、配列番号517、配列番号519、配列番号520、配列番号521、配列番号522、配列番号523、配列番号524、配列番号525、配列番号526、配列番号527、配列番号528、配列番号529、配列番号530、配列番号531、配列番号532、配列番号533、配列番号534、配列番号535、配列番号536、配列番号537、配列番号538、配列番号539、配列番号540、配列番号541、配列番号542、配列番号543、配列番号544、配列番号545、配列番号546、配列番号547、配列番号548、配列番号549、配列番号550、配列番号551、配列番号552、配列番号553、配列番号554、配列番号555、配列番号556、配列番号557、配列番号558、配列番号559、配列番号560、配列番号561、配列番号562、配列番号563、配列番号564、配列番号565、配列番号566、配列番号567、配列番号568、配列番号569、配列番号570、配列番号571、配列番号572、配列番号573、配列番号574、配列番号575、配列番号576、配列番号577、配列番号578、配列番号579、配列番号580、配列番号581、配列番号582、配列番号583、及び配列番号584からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVLドメインと、配列番号874及び配列番号932からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVLドメインとを有する。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号946のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号950のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号956のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号960のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号964のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号968のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号972のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号976のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット抗体は、CD28に結合する第1の結合ドメインと、B7H3に結合する第2の結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、CD28結合ドメインは、以下のCD28結合ドメインの1つ又はそのバリアントである:1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、hu9.3[CD28]_H1L1(図18~21及び23、並びに配列表)。
いくつかの実施形態では、B7H3結合ドメインは、以下のB7H3結合ドメイン又はそれらのバリアントのうちの1つである:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、及びm1704(図26~31及び配列表)。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、a)オンブラマブからの配列番号89及び93、b)エノブリツズマブからの配列番号97及び101、c)BRCA84Dからの配列番号105及び109、d)BRCA69Dからの配列番号113及び117、e)PRCA157からの配列番号121及び125、f)huPRCA157からの配列番号129及び133、g)Mab-Dからの配列番号137及び141、h)配列番号145及び149のhumAb-D、i)m30からの配列番号153及び157、j)M30-H1-L4からの配列番号161及び165、k)配列番号169及び173のSP265、l)S10-H50L58からの配列番号177及び181、m)8H9からの配列番号185及び189、n)m852からの配列番号193及び197、o)m857からの配列番号201及び205、p)m8524からの配列番号209及び213、q)1-1からの配列番号217及び221、r)1-2からの配列番号225及び229、s)1-4からの配列番号233及び237、t)1-5からの配列番号241及び245、u)1-7からの配列番号249及び253、v)2-5からの配列番号257及び261、w)2-8からの配列番号265及び269、x)chAb2からの配列番号273及び277、y)配列番号281及び285のchAb3、z)chAb4からの配列番号289及び293、aa)chAb18からの配列番号297及び301、bb)chAb13からの配列番号305及び309、cc)chAb12からの配列番号313及び317、dd)chAb14からの配列番号321及び325、ee)chAb6からの配列番号329及び333、ff)chAb11からの配列番号337及び341、gg)chAB16からの配列番号345及び349、hh)chAb10からの配列番号353及び357、ii)ChAb7からの配列番号361及び365、jj)chAb8からの配列番号369及び373、kk)chAb17からの配列番号377及び381、ll)chAb5からの配列番号385及び389、mm)huAb3v2.5からの配列番号393及び397、nn)huAb3v2.6からの配列番号401及び405、pp)huAb13v1からの配列番号409及び413、qq)TPP-5706からの配列番号417及び421、rr)TPP-6642からの配列番号425及び429、ss)TPP-6850からの配列番号433及び437、tt)TPP-3803からの配列番号441及び445、uu)TRL4542からの配列番号449及び453、vv)h1702からの配列番号457及び461、ww)h1703からの配列番号465及び469、xx)huA3からの配列番号473及び477、yy)huA9からの配列番号481及び485、並びにzz)m1704からの配列番号489及び493の対から選択されるアミノ酸配列を有するVHドメイン及びVLドメインを有する。USSN63/092,272の図17を参照されたい。
図10は、1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット抗体で有用ないくつかの例示的なFcドメイン配列を示している。図10に示される「単量体1」配列は、典型的には、「Fab-Fc重鎖」のFcドメインを指し、「単量体2」配列は、「scFv-Fc重鎖」のFcドメインを指す。加えて、図12~15は、1+1 Fab-scFv-Fcフォーマットの第1又は第2の単量体に含まれ得る例示的なCH1ヒンジドメイン、CH1ドメイン、及びヒンジドメインを示している。更に、図16は、このフォーマットで使用され得る便利なCL配列を示している。
図10は、1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット抗体で有用ないくつかの例示的なFcドメイン配列を示している。図10に示される「単量体1」配列は、典型的には、「Fab-Fc重鎖」のFcドメインを指し、「単量体2」配列は、「scFv-Fc重鎖」のFcドメインを指す。加えて、図12~15は、1+1 Fab-scFv-Fcフォーマットの第1又は第2の単量体に含まれ得る例示的なCH1ヒンジドメイン、CH1ドメイン、及びヒンジドメインを示している。更に、図16は、このフォーマットで使用され得る便利なCL配列を示している。
2.2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット(セントラル-scFvフォーマット)
本明細書で提供される主題の二重特異性抗体(例えば、抗CD28×抗B7H3抗体)において特に使用される1つのヘテロ二量体抗体フォーマットは、図33Bに示される2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット(「セントラル-scFvフォーマット」とも呼ばれる)である。この抗体フォーマットには、2つのFab部分、及び単量体のうちの1つのVH-CH1領域とCH2-CH3領域との間に挿入されたscFvの3つの抗原結合ドメインが含まれる。このフォーマットのいくつかの実施形態では、Fab部分はそれぞれ腫瘍関連抗原(TAA)に結合し、「余分な」scFvドメインはCD28に結合する。いくつかの実施形態では、2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット抗体は、三価抗体である。
本明細書で提供される主題の二重特異性抗体(例えば、抗CD28×抗B7H3抗体)において特に使用される1つのヘテロ二量体抗体フォーマットは、図33Bに示される2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット(「セントラル-scFvフォーマット」とも呼ばれる)である。この抗体フォーマットには、2つのFab部分、及び単量体のうちの1つのVH-CH1領域とCH2-CH3領域との間に挿入されたscFvの3つの抗原結合ドメインが含まれる。このフォーマットのいくつかの実施形態では、Fab部分はそれぞれ腫瘍関連抗原(TAA)に結合し、「余分な」scFvドメインはCD28に結合する。いくつかの実施形態では、2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット抗体は、三価抗体である。
2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマットのいくつかの実施形態では、第1の単量体は、標準的重鎖(すなわち、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3)を含み、VH1は第1の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3は第1のFcドメインである。第2の単量体は、別の第1の可変重鎖ドメイン(VH1)、CH1ドメイン(及び任意選択的なヒンジ)、第2のFcドメイン、並びにscFv可変軽鎖ドメイン(VL2)、scFvリンカー及びscFv可変重鎖ドメイン(VH2)を含むscFvを含む。scFvは、任意選択的なドメインリンカーを使用して、第2の単量体のCH1ドメインのC末端と第2のFcドメインのN末端の間に共有結合している(VH1-CH1-[任意選択的なリンカー]-VH2-scFvリンカー-VH2-[任意選択的なリンカー]-CH2-CH3、又はscFvに対して反対方向の、VH1-CH1-[任意選択的なリンカー]-VL2-scFvリンカー-VH2-[任意選択的なリンカー]-CH2-CH3)。任意選択的なリンカーは、例えば、図7に含まれるドメインリンカーを含む、任意の好適なペプチドリンカーであり得る。この実施形態は更に、可変軽鎖ドメイン(VL1)及び定常軽鎖ドメイン(CL)を含む共通軽鎖を利用する。共通軽鎖は、第1及び第2の単量体のVH1-CH1と会合して、2つの同一のFabを形成する。いくつかの実施形態では、同一のFabはそれぞれ、腫瘍関連抗原(例えば、B7H3)に結合する。本明細書の実施形態の多くに関して、これらの構築物には、本明細書で所望され、説明されるように、スキューバリアント、pIバリアント、除去バリアント、追加のFcバリアントなどが含まれ得る。
いくつかの実施形態では、2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット抗体の第1及び第2のFcドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアント(例えば、図3及び9に示されるアミノ酸置換のセット)を含むバリアントFcドメインである。特に有用なヘテロ二量体化スキューバリアントは、S364K/E357Q:L368D/K370S、L368D/K370S:S364K、L368E/K370S:S364K、T411T/E360E/Q362E:D401K、L368D/K370S:S364K/E357L、K370S:S364K/E357Q、T366S/L368A/Y407V:T366W及びT366S/L368A/Y407V/Y349C:T366W/S354C(EU番号付け))を含む。例示的な実施形態では、第1又は第2のバリアントFcドメインのうちの一方はヘテロ二量体化スキューバリアントL368D/K370Sを含み、第1又は第2のバリアントFcドメインの他方はヘテロ二量体化スキューバリアントS364K/E357Qを含み、番号付けはEU番号付けに従う。例示的な実施形態では、第1のバリアントFcドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントL368D/K370Sを含み、第2のバリアントFcドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントS364K/E357Qを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、バリアントFcドメインは、除去バリアント(図5に示されるものを含む)を含む。いくつかの実施形態では、第1及び第2のバリアントFcドメインのそれぞれが、除去バリアントE233P/L234V/L235A/G236_/S267Kを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1の単量体の定常ドメイン(CH1-ヒンジ-CH2-CH3)は、pIバリアント(図4に示されるものを含む)を含む。例示的な実施形態では、第1の単量体の定常ドメイン(CH1-ヒンジ-CH2-CH3)は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット抗体のscFvは、荷電scFvリンカー(図6に示されるものを含む)を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット抗体は、FcRnバリアントM428L/N434Sを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
例示的な実施形態では、第1のバリアントFcドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントL368D/K370Sを含み、第2のバリアントFcドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントS364K/E357Qを含み、第1及び第2のバリアントFcドメインのそれぞれは、除去バリアントE233P/L234V/L235A/G236_/S267Kを含み、第1の単量体の定常ドメイン(CH1-ヒンジ-CH2-CH3)は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けはEU番号付けに従う。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット抗体のscFvは、(GKPGS)4荷電scFvリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット抗体は、FcRnバリアントM428L/N434Sを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、第2のFcドメインは、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット抗体の第2の単量体のscFvはCD28結合であり、第1及び第2の単量体のVH1並びに共通軽鎖のVL1はそれぞれ、腫瘍関連抗原(TAA、例えばB7H3)に結合する結合ドメインを形成する(図34Bを参照されたい)。本明細書で提供されるCD28結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なCD28結合ドメインを、主題の2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、CD28結合ドメインは、以下のCD28結合ドメインの1つ又はそのバリアントである:1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、hu9.3[CD28]_H1L1(図18~21及び23、並びに配列表)。mAb-scFvフォーマットのいくつかの実施形態では、抗CD28 ABDは、配列番号870、配列番号585、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、配列番号651、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号670、配列番号671及び配列番号672からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号874、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号660、配列番号661、配列番号662、配列番号663、配列番号664、配列番号665、配列番号666、配列番号667、配列番号668、配列番号669、配列番号670、配列番号671、配列番号672、配列番号NO:673、配列番号674、配列番号675、配列番号676、配列番号677、配列番号678、配列番号679、配列番号680、配列番号681、配列番号682、配列番号683、配列番号684、配列番号685、配列番号686、配列番号687、配列番号688、配列番号689、配列番号690、配列番号691、配列番号692、配列番号693、配列番号694、配列番号695、配列番号696、配列番号697、配列番号698、配列番号699、配列番号700、配列番号701、配列番号702、配列番号703、配列番号704、配列番号705、配列番号706、配列番号707、配列番号708、配列番号709、配列番号710、配列番号711、配列番号712、配列番号713、配列番号714、配列番号715、配列番号716、配列番号717、配列番号718、配列番号719、配列番号720、配列番号721、配列番号722、配列番号723、配列番号724、配列番号725、配列番号726、配列番号727、配列番号728、配列番号729、配列番号730、配列番号731、配列番号732、配列番号733、配列番号734、配列番号735、配列番号736、配列番号737、配列番号738、配列番号739、配列番号740、配列番号741、配列番号742、配列番号743、配列番号744、配列番号745、配列番号746、配列番号747、配列番号748、配列番号749、配列番号750、配列番号751、配列番号752、配列番号753、配列番号754、配列番号755、配列番号1200及び配列番号756からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVLドメインとを有する。
いくつかの実施形態では、2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット抗体の第1及び第2の単量体のVH1並びに共通軽鎖のVL1はそれぞれ、腫瘍関連抗原(TAA)に結合する結合ドメインを形成する(図34Bを参照されたい)。好適なTAAには、本明細書に開示されるTAAのいずれかが含まれる。例示的な実施形態では、TAAはB7H3である。本明細書で提供されるB7H3結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なB7H3結合ドメインを、主題の2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、B7H3結合ドメインは、以下のB7H3結合ドメイン又はそれらのバリアントのうちの1つである:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、m1704(図26~31及び配列表)。いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、a)オンブラマブからの配列番号89及び93、b)エノブリツズマブからの配列番号97及び101、c)BRCA84Dからの配列番号105及び109、d)BRCA69Dからの配列番号113及び117、e)PRCA157からの配列番号121及び125、f)huPRCA157からの配列番号129及び133、g)Mab-Dからの配列番号137及び141、h)配列番号145及び149のhumAb-D、i)m30からの配列番号153及び157、j)M30-H1-L4からの配列番号161及び165、k)配列番号169及び173のSP265、l)S10-H50L58からの配列番号177及び181、m)8H9からの配列番号185及び189、n)m852からの配列番号193及び197、o)m857からの配列番号201及び205、p)m8524からの配列番号209及び213、q)1-1からの配列番号217及び221、r)1-2からの配列番号225及び229、s)1-4からの配列番号233及び237、t)1-5からの配列番号241及び245、u)1-7からの配列番号249及び253、v)2-5からの配列番号257及び261、w)2-8からの配列番号265及び269、x)chAb2からの配列番号273及び277、y)配列番号281及び285のchAb3、z)chAb4からの配列番号289及び293、aa)chAb18からの配列番号297及び301、bb)chAb13からの配列番号305及び309、cc)chAb12からの配列番号313及び317、dd)chAb14からの配列番号321及び325、ee)chAb6からの配列番号329及び333、ff)chAb11からの配列番号337及び341、gg)chAB16からの配列番号345及び349、hh)chAb10からの配列番号353及び357、ii)ChAb7からの配列番号361及び365、jj)chAb8からの配列番号369及び373、kk)chAb17からの配列番号377及び381、ll)chAb5からの配列番号385及び389、mm)huAb3v2.5からの配列番号393及び397、nn)huAb3v2.6からの配列番号401及び405、pp)huAb13v1からの配列番号409及び413、qq)TPP-5706からの配列番号417及び421、rr)TPP-6642からの配列番号425及び429、ss)TPP-6850からの配列番号433及び437、tt)TPP-3803からの配列番号441及び445、uu)TRL4542からの配列番号449及び453、vv)h1702からの配列番号457及び461、ww)h1703からの配列番号465及び469、xx)huA3からの配列番号473及び477、yy)huA9からの配列番号481及び485、並びにzz)m1704からの配列番号489及び493の対から選択されるアミノ酸配列を有するVHドメイン及びVLドメインを有する。USSN63/092,272の図17を参照されたい。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号518、配列番号928、配列番号497、配列番号498、配列番号499、配列番号500、配列番号501、配列番号502、配列番号503、配列番号504、配列番号505、配列番号506、配列番号507、配列番号508、配列番号509、配列番号510、配列番号511、配列番号512、配列番号513、配列番号514、配列番号515、配列番号516、配列番号517、配列番号519、配列番号520、配列番号521、配列番号522、配列番号523、配列番号524、配列番号525、配列番号526、配列番号527、配列番号528、配列番号529、配列番号530、配列番号531、配列番号532、配列番号533、配列番号534、配列番号535、配列番号536、配列番号537、配列番号538、配列番号539、配列番号540、配列番号541、配列番号542、配列番号543、配列番号544、配列番号545、配列番号546、配列番号547、配列番号548、配列番号549、配列番号550、配列番号551、配列番号552、配列番号553、配列番号554、配列番号555、配列番号556、配列番号557、配列番号558、配列番号559、配列番号560、配列番号561、配列番号562、配列番号563、配列番号564、配列番号565、配列番号566、配列番号567、配列番号568、配列番号569、配列番号570、配列番号571、配列番号572、配列番号573、配列番号574、配列番号575、配列番号576、配列番号577、配列番号578、配列番号579、配列番号580、配列番号581、配列番号582、配列番号583、及び配列番号584からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVLドメインと、配列番号874及び配列番号932からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVLドメインとを有する。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号946のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号950のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号956のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号960のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号964のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号968のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号972のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号976のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
図11は、2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマットで有用ないくつかの例示的なFcドメイン配列を示している。図11に示される「単量体1」配列は、典型的には「Fab-Fc重鎖」のFcドメインを指し、「単量体2」配列は「Fab-scFv-Fc重鎖」のFcドメインを指す。加えて、図12~15は、2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマットの第1又は第2の単量体に含めることができる例示的なCH1ヒンジドメイン、CH1ドメイン、及びヒンジドメインを提供する。更に、図16は、このフォーマットで使用され得る便利なCL配列を示している。2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマットの例示的な抗B7H3×抗CD28二重特異性抗体を図36に示す。
3.1+1 CLCフォーマット
本明細書で提供される主題の二重特異性抗体(例えば、抗CD28×抗B7H3抗体)において特に使用される1つのヘテロ二量体抗体フォーマットは、図33Cに示される「1+1共通軽鎖」又は「1+1 CLC」フォーマットである。1+1 CLCフォーマット抗体は、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第1の単量体であって、VH1が、第1の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が、第1のFcドメインである、第1の単量体と、VH2-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、VH2が、第2の可変重鎖ドメインであり、CH2-C3が、第2のFcドメインである、第2の単量体と、VL-CLを含む第3の単量体「共通軽鎖」であって、VLが、共通の可変軽鎖ドメインであり、CLが、定常軽鎖ドメインである、第3の単量体「共通軽鎖」とを含む。そのような実施形態では、VLはVH1と対になって、第1の抗原結合特異性を有する第1の結合ドメインを形成し、VLはVH2と対になって、第2の抗原結合特異性を有する第2の結合ドメインを形成する。いくつかの実施形態では、1+1 CLCフォーマット抗体は、二価抗体である。
本明細書で提供される主題の二重特異性抗体(例えば、抗CD28×抗B7H3抗体)において特に使用される1つのヘテロ二量体抗体フォーマットは、図33Cに示される「1+1共通軽鎖」又は「1+1 CLC」フォーマットである。1+1 CLCフォーマット抗体は、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第1の単量体であって、VH1が、第1の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が、第1のFcドメインである、第1の単量体と、VH2-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、VH2が、第2の可変重鎖ドメインであり、CH2-C3が、第2のFcドメインである、第2の単量体と、VL-CLを含む第3の単量体「共通軽鎖」であって、VLが、共通の可変軽鎖ドメインであり、CLが、定常軽鎖ドメインである、第3の単量体「共通軽鎖」とを含む。そのような実施形態では、VLはVH1と対になって、第1の抗原結合特異性を有する第1の結合ドメインを形成し、VLはVH2と対になって、第2の抗原結合特異性を有する第2の結合ドメインを形成する。いくつかの実施形態では、1+1 CLCフォーマット抗体は、二価抗体である。
いくつかの実施形態では、1+1 CLCフォーマットの第1及び第2のFcドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアント(例えば、図3及び9に示されるアミノ酸置換のセット)を含むバリアントFcドメインである。特に有用なヘテロ二量体化スキューバリアントは、S364K/E357Q:L368D/K370S、L368D/K370S:S364K、L368E/K370S:S364K、T411T/E360E/Q362E:D401K、L368D/K370S:S364K/E357L、K370S:S364K/E357Q、T366S/L368A/Y407V:T366W及びT366S/L368A/Y407V/Y349C:T366W/S354C(EU番号付け))を含む。例示的な実施形態では、第1又は第2のバリアントFcドメインのうちの一方はヘテロ二量体化スキューバリアントL368D/K370Sを含み、第1又は第2のバリアントFcドメインの他方はヘテロ二量体化スキューバリアントS364K/E357Qを含み、番号付けはEU番号付けに従う。例示的な実施形態では、第1のバリアントFcドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントL368D/K370Sを含み、第2のバリアントFcドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントS364K/E357Qを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、バリアントFcドメインは、除去バリアント(図5に示されるものを含む)を含む。いくつかの実施形態では、第1及び第2のバリアントFcドメインのそれぞれが、除去バリアントE233P/L234V/L235A/G236_/S267Kを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1又は第2の単量体の定常ドメイン(CH1-ヒンジ-CH2-CH3)は、pIバリアント(図4に示されるものを含む)を含む。例示的な実施形態では、第1又は第2の単量体の定常ドメイン(CH1-ヒンジ-CH2-CH3)は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される1+1 CLCフォーマット抗体は、FcRnバリアントM428L/N434Sを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
例示的な実施形態では、第1のバリアントFcドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントL368D/K370Sを含み、第2のバリアントFcドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントS364K/E357Qを含み、第1及び第2のバリアントFcドメインのそれぞれは、除去バリアントE233P/L234V/L235A/G236_/S267Kを含み、第1の単量体の定常ドメイン(CH1-ヒンジ-CH2-CH3)は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、第2のFcドメインは、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される1+1 CLCフォーマット抗体は、FcRnバリアントM428L/N434Sを更に含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1の結合ドメイン又は第2の結合ドメインのうちの一方はCD28に結合し、他方の結合ドメインは腫瘍関連抗原(TAA)に結合する(図34Cを参照されたい)。本明細書で提供されるCD28結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なCD28結合ドメインを、主題の1 + 1 CLCフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、CD28結合ドメインは、以下のCD28結合ドメインの1つ又はそのバリアントである:1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、hu9.3[CD28]_H1L1(図18~21及び23、並びに配列表)。例示的な実施形態では、CD28結合ドメインは、1A7[CD28]_H1.14可変重鎖ドメインを含む。いくつかの実施形態では、CD28結合ドメインは、本明細書で提供されるCD28結合ドメインのいずれかの1A7[CD28]_H1.14可変重鎖ドメイン又はそのバリアント及び可変軽鎖ドメインを含む。例示的な実施形態では、CD28結合ドメインは、1A7[CD28]_H1.14L1又はそのバリアントである。mAb-scFvフォーマットのいくつかの実施形態では、抗CD28 ABDは、配列番号870、配列番号585、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、配列番号651、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号670、配列番号671及び配列番号672からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号874、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号660、配列番号661、配列番号662、配列番号663、配列番号664、配列番号665、配列番号666、配列番号667、配列番号668、配列番号669、配列番号670、配列番号671、配列番号672、配列番号NO:673、配列番号674、配列番号675、配列番号676、配列番号677、配列番号678、配列番号679、配列番号680、配列番号681、配列番号682、配列番号683、配列番号684、配列番号685、配列番号686、配列番号687、配列番号688、配列番号689、配列番号690、配列番号691、配列番号692、配列番号693、配列番号694、配列番号695、配列番号696、配列番号697、配列番号698、配列番号699、配列番号700、配列番号701、配列番号702、配列番号703、配列番号704、配列番号705、配列番号706、配列番号707、配列番号708、配列番号709、配列番号710、配列番号711、配列番号712、配列番号713、配列番号714、配列番号715、配列番号716、配列番号717、配列番号718、配列番号719、配列番号720、配列番号721、配列番号722、配列番号723、配列番号724、配列番号725、配列番号726、配列番号727、配列番号728、配列番号729、配列番号730、配列番号731、配列番号732、配列番号733、配列番号734、配列番号735、配列番号736、配列番号737、配列番号738、配列番号739、配列番号740、配列番号741、配列番号742、配列番号743、配列番号744、配列番号745、配列番号746、配列番号747、配列番号748、配列番号749、配列番号750、配列番号751、配列番号752、配列番号753、配列番号754、配列番号755、配列番号1200及び配列番号756からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVLドメインとを有する。
いくつかの実施形態では1+1 CLCフォーマット抗体の第1の結合ドメイン又は第2の結合ドメインの1つは、腫瘍関連抗原(TAA)に結合する。好適なTAAには、本明細書に開示されるTAAのいずれかが含まれる。例示的な実施形態では、TAAはB7H3である。本明細書で提供されるB7H3結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なB7H3結合ドメインを、主題の1+1 CLCフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、B7H3結合ドメインは、以下のB7H3結合ドメイン又はそれらのバリアントのうちの1つである:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、m1704(図26~31及び配列表)。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号518、配列番号928、配列番号497、配列番号498、配列番号499、配列番号500、配列番号501、配列番号502、配列番号503、配列番号504、配列番号505、配列番号506、配列番号507、配列番号508、配列番号509、配列番号510、配列番号511、配列番号512、配列番号513、配列番号514、配列番号515、配列番号516、配列番号517、配列番号519、配列番号520、配列番号521、配列番号522、配列番号523、配列番号524、配列番号525、配列番号526、配列番号527、配列番号528、配列番号529、配列番号530、配列番号531、配列番号532、配列番号533、配列番号534、配列番号535、配列番号536、配列番号537、配列番号538、配列番号539、配列番号540、配列番号541、配列番号542、配列番号543、配列番号544、配列番号545、配列番号546、配列番号547、配列番号548、配列番号549、配列番号550、配列番号551、配列番号552、配列番号553、配列番号554、配列番号555、配列番号556、配列番号557、配列番号558、配列番号559、配列番号560、配列番号561、配列番号562、配列番号563、配列番号564、配列番号565、配列番号566、配列番号567、配列番号568、配列番号569、配列番号570、配列番号571、配列番号572、配列番号573、配列番号574、配列番号575、配列番号576、配列番号577、配列番号578、配列番号579、配列番号580、配列番号581、配列番号582、配列番号583、及び配列番号584からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVLドメインと、配列番号874及び配列番号932からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVLドメインとを有する。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号946のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号950のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号956のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号960のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号964のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号968のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号972のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号976のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、a)オンブラマブからの配列番号89及び93、b)エノブリツズマブからの配列番号97及び101、c)BRCA84Dからの配列番号105及び109、d)BRCA69Dからの配列番号113及び117、e)PRCA157からの配列番号121及び125、f)huPRCA157からの配列番号129及び133、g)Mab-Dからの配列番号137及び141、h)配列番号145及び149のhumAb-D、i)m30からの配列番号153及び157、j)M30-H1-L4からの配列番号161及び165、k)配列番号169及び173のSP265、l)S10-H50L58からの配列番号177及び181、m)8H9からの配列番号185及び189、n)m852からの配列番号193及び197、o)m857からの配列番号201及び205、p)m8524からの配列番号209及び213、q)1-1からの配列番号217及び221、r)1-2からの配列番号225及び229、s)1-4からの配列番号233及び237、t)1-5からの配列番号241及び245、u)1-7からの配列番号249及び253、v)2-5からの配列番号257及び261、w)2-8からの配列番号265及び269、x)chAb2からの配列番号273及び277、y)配列番号281及び285のchAb3、z)chAb4からの配列番号289及び293、aa)chAb18からの配列番号297及び301、bb)chAb13からの配列番号305及び309、cc)chAb12からの配列番号313及び317、dd)chAb14からの配列番号321及び325、ee)chAb6からの配列番号329及び333、ff)chAb11からの配列番号337及び341、gg)chAB16からの配列番号345及び349、hh)chAb10からの配列番号353及び357、ii)ChAb7からの配列番号361及び365、jj)chAb8からの配列番号369及び373、kk)chAb17からの配列番号377及び381、ll)chAb5からの配列番号385及び389、mm)huAb3v2.5からの配列番号393及び397、nn)huAb3v2.6からの配列番号401及び405、pp)huAb13v1からの配列番号409及び413、qq)TPP-5706からの配列番号417及び421、rr)TPP-6642からの配列番号425及び429、ss)TPP-6850からの配列番号433及び437、tt)TPP-3803からの配列番号441及び445、uu)TRL4542からの配列番号449及び453、vv)h1702からの配列番号457及び461、ww)h1703からの配列番号465及び469、xx)huA3からの配列番号473及び477、yy)huA9からの配列番号481及び485、並びにzz)m1704からの配列番号489及び493の対から選択されるアミノ酸配列を有するVHドメイン及びVLドメインを有する。USSN63/092,272の図17を参照されたい。
例示的な実施形態では、B7H3結合ドメインは、1A7[CD28]_H1.14可変重鎖ドメインを含む。いくつかの実施形態では、B7H3結合ドメインは、本明細書で提供されるCD28又はB7H3結合ドメインのいずれかの2E4A3.189[B7H3]_H1.22可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む。例示的な実施形態では、B7H3結合ドメインは、2E4A3.189[B7H3]_H1.22可変重鎖ドメイン又はそのバリアント、及び1A7[CD28]_L1可変軽鎖ドメイン又はそのバリアントを含む。
いくつかの実施形態では、1+1 CLCフォーマット抗体は、CD28に結合する第1の結合ドメインと、B7H3に結合する第2の結合ドメインとを含む。特定の実施形態では、第1の結合ドメインの可変重鎖ドメイン(すなわち、CD28結合ドメイン)は、1A7[CD28]_H1.14可変重鎖ドメイン又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、第2の結合ドメインの可変重鎖ドメイン(すなわち、B7H3結合ドメイン)は、2E4A3.189[B7H3]_H1.22可変重鎖ドメイン又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、1+1 CLCフォーマット抗体は、本明細書で提供されるCD28又はB7H3結合ドメインのいずれかの可変軽鎖ドメインを含む共通軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、可変軽鎖ドメインは、1A7[CD28]_L1可変軽鎖ドメイン又はそのバリアントである。1+1 CLCフォーマットの例示的な抗B7H3×抗CD28二重特異性抗体を図37に示す。
4.2+1 CLCフォーマット
本明細書で提供される主題の二重特異性抗体(例えば、抗CD28×抗B7H3抗体)において特に使用される別のヘテロ二量体抗体フォーマットは、図33Dに示される「2+1共通軽鎖」又は「2+1 CLC」フォーマットである。2+1 CLCフォーマットは、VH1-CH1-リンカー-VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第1の単量体であって、VH1が、それぞれ第1の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が、第1のFcドメインである、第1の単量体と、VH2-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、VH2が、第2の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が、第2のFcドメインである、第2の単量体と、「共通軽鎖」VL-CLを含む第3の単量体であって、VLが、共通可変軽鎖ドメインであり、CLが、定常軽鎖ドメインである、第3の単量体とを含む。VLは、第1の単量体のVH1のそれぞれと対になって、それぞれが第1の抗原結合特異性を有する2つの第1の結合ドメインを形成し、VLはVH2と対になって、第2の抗原結合特異性を有する第2の結合ドメインを形成する。第1の単量体のリンカーは、図7に記載されているドメインリンカー又はそれらの組み合わせのいずれか1つを含む、任意の好適なリンカーであり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、EPKSCGKPGSGKPGS(配列番号1182)である。いくつかの実施形態では、2+1 CLCフォーマット抗体は、三価抗体である。
本明細書で提供される主題の二重特異性抗体(例えば、抗CD28×抗B7H3抗体)において特に使用される別のヘテロ二量体抗体フォーマットは、図33Dに示される「2+1共通軽鎖」又は「2+1 CLC」フォーマットである。2+1 CLCフォーマットは、VH1-CH1-リンカー-VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第1の単量体であって、VH1が、それぞれ第1の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が、第1のFcドメインである、第1の単量体と、VH2-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、VH2が、第2の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が、第2のFcドメインである、第2の単量体と、「共通軽鎖」VL-CLを含む第3の単量体であって、VLが、共通可変軽鎖ドメインであり、CLが、定常軽鎖ドメインである、第3の単量体とを含む。VLは、第1の単量体のVH1のそれぞれと対になって、それぞれが第1の抗原結合特異性を有する2つの第1の結合ドメインを形成し、VLはVH2と対になって、第2の抗原結合特異性を有する第2の結合ドメインを形成する。第1の単量体のリンカーは、図7に記載されているドメインリンカー又はそれらの組み合わせのいずれか1つを含む、任意の好適なリンカーであり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、EPKSCGKPGSGKPGS(配列番号1182)である。いくつかの実施形態では、2+1 CLCフォーマット抗体は、三価抗体である。
いくつかの実施形態では、2+1 CLCフォーマットの第1及び第2のFcドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアント(例えば、図3及び9に示されるアミノ酸置換のセット)を含むバリアントFcドメインである。特に有用なヘテロ二量体化スキューバリアントは、S364K/E357Q:L368D/K370S、L368D/K370S:S364K、L368E/K370S:S364K、T411T/E360E/Q362E:D401K、L368D/K370S:S364K/E357L、K370S:S364K/E357Q、T366S/L368A/Y407V:T366W及びT366S/L368A/Y407V/Y349C:T366W/S354C(EU番号付け))を含む。例示的な実施形態では、第1又は第2のバリアントFcドメインのうちの一方はヘテロ二量体化スキューバリアントL368D/K370Sを含み、第1又は第2のバリアントFcドメインの他方はヘテロ二量体化スキューバリアントS364K/E357Qを含み、番号付けはEU番号付けに従う。例示的な実施形態では、第1のバリアントFcドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントL368D/K370Sを含み、第2のバリアントFcドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントS364K/E357Qを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、バリアントFcドメインは、除去バリアント(図5に示されるものを含む)を含む。いくつかの実施形態では、第1及び第2のバリアントFcドメインのそれぞれが、除去バリアントE233P/L234V/L235A/G236_/S267Kを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1又は第2の単量体の定常ドメイン(CH1-ヒンジ-CH2-CH3)は、pIバリアント(図4に示されるものを含む)を含む。例示的な実施形態では、第1又は第2の単量体の定常ドメイン(CH1-ヒンジ-CH2-CH3)は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される2+1 CLCフォーマット抗体は、FcRnバリアントM428L/N434Sを更に含み、番号付けはEU番号付けに従う。
例示的な実施形態では、第1のバリアントFcドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントL368D/K370Sを含み、第2のバリアントFcドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントS364K/E357Qを含み、第1及び第2のバリアントFcドメインのそれぞれは、除去バリアントE233P/L234V/L235A/G236_/S267Kを含み、第1の単量体の定常ドメイン(CH1-ヒンジ-CH2-CH3)は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けはEU番号付けに従う。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される2+1 CLCフォーマット抗体は、FcRnバリアントM428L/N434Sを更に含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3は、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、第1のFcドメインは、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、番号付けは、EU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、2つの第1の結合ドメインのそれぞれが腫瘍関連抗原(TAA)に結合し、第2の結合ドメインがCD28に結合する(図34Dを参照されたい)。本明細書で提供されるCD28結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なCD28結合ドメインを、主題の2+1 CLCフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、CD28結合ドメインは、以下のCD28結合ドメインの1つ又はそのバリアントである:1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、hu9.3[CD28]_H1L1(図18~21及び23、並びに配列表)。例示的な実施形態では、CD28結合ドメインは、1A7[CD28]_H1.14可変重鎖ドメインを含む。いくつかの実施形態では、CD28結合ドメインは、本明細書で提供されるCD28結合ドメインのいずれかの1A7[CD28]_H1.14可変重鎖ドメイン又はそのバリアント及び可変軽鎖ドメインを含む。例示的な実施形態では、CD28結合ドメインは、1A7[CD28]_H1.14L1又はそのバリアントである。
mAb-scFvフォーマットのいくつかの実施形態では、抗CD28 ABDは、配列番号870、配列番号585、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、配列番号651、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号670、配列番号671及び配列番号672からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号874、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号660、配列番号661、配列番号662、配列番号663、配列番号664、配列番号665、配列番号666、配列番号667、配列番号668、配列番号669、配列番号670、配列番号671、配列番号672、配列番号NO:673、配列番号674、配列番号675、配列番号676、配列番号677、配列番号678、配列番号679、配列番号680、配列番号681、配列番号682、配列番号683、配列番号684、配列番号685、配列番号686、配列番号687、配列番号688、配列番号689、配列番号690、配列番号691、配列番号692、配列番号693、配列番号694、配列番号695、配列番号696、配列番号697、配列番号698、配列番号699、配列番号700、配列番号701、配列番号702、配列番号703、配列番号704、配列番号705、配列番号706、配列番号707、配列番号708、配列番号709、配列番号710、配列番号711、配列番号712、配列番号713、配列番号714、配列番号715、配列番号716、配列番号717、配列番号718、配列番号719、配列番号720、配列番号721、配列番号722、配列番号723、配列番号724、配列番号725、配列番号726、配列番号727、配列番号728、配列番号729、配列番号730、配列番号731、配列番号732、配列番号733、配列番号734、配列番号735、配列番号736、配列番号737、配列番号738、配列番号739、配列番号740、配列番号741、配列番号742、配列番号743、配列番号744、配列番号745、配列番号746、配列番号747、配列番号748、配列番号749、配列番号750、配列番号751、配列番号752、配列番号753、配列番号754、配列番号755、配列番号1200及び配列番号756からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVLドメインとを有する。
いくつかの実施形態では、2つの第1の結合ドメインのそれぞれが腫瘍関連抗原(TAA)に結合する。ある特定の実施形態では、2つの第1の結合ドメインは同じTAAに結合する。好適なTAAには、本明細書に開示されるTAAのいずれかが含まれる。例示的な実施形態では、TAAはB7H3である。本明細書で提供されるB7H3結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なB7H3結合ドメインを、主題の2+1 CLCフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、B7H3結合ドメインは、以下のB7H3結合ドメイン又はそれらのバリアントのうちの1つである:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、m1704(図26~31及び配列表)。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号518、配列番号928、配列番号497、配列番号498、配列番号499、配列番号500、配列番号501、配列番号502、配列番号503、配列番号504、配列番号505、配列番号506、配列番号507、配列番号508、配列番号509、配列番号510、配列番号511、配列番号512、配列番号513、配列番号514、配列番号515、配列番号516、配列番号517、配列番号519、配列番号520、配列番号521、配列番号522、配列番号523、配列番号524、配列番号525、配列番号526、配列番号527、配列番号528、配列番号529、配列番号530、配列番号531、配列番号532、配列番号533、配列番号534、配列番号535、配列番号536、配列番号537、配列番号538、配列番号539、配列番号540、配列番号541、配列番号542、配列番号543、配列番号544、配列番号545、配列番号546、配列番号547、配列番号548、配列番号549、配列番号550、配列番号551、配列番号552、配列番号553、配列番号554、配列番号555、配列番号556、配列番号557、配列番号558、配列番号559、配列番号560、配列番号561、配列番号562、配列番号563、配列番号564、配列番号565、配列番号566、配列番号567、配列番号568、配列番号569、配列番号570、配列番号571、配列番号572、配列番号573、配列番号574、配列番号575、配列番号576、配列番号577、配列番号578、配列番号579、配列番号580、配列番号581、配列番号582、配列番号583、及び配列番号584からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVLドメインと、配列番号874及び配列番号932からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVLドメインとを有する。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号946のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号950のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号956のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号960のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号964のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号968のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号972のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号976のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、a)オンブラマブからの配列番号89及び93、b)エノブリツズマブからの配列番号97及び101、c)BRCA84Dからの配列番号105及び109、d)BRCA69Dからの配列番号113及び117、e)PRCA157からの配列番号121及び125、f)huPRCA157からの配列番号129及び133、g)Mab-Dからの配列番号137及び141、h)配列番号145及び149のhumAb-D、i)m30からの配列番号153及び157、j)M30-H1-L4からの配列番号161及び165、k)配列番号169及び173のSP265、l)S10-H50L58からの配列番号177及び181、m)8H9からの配列番号185及び189、n)m852からの配列番号193及び197、o)m857からの配列番号201及び205、p)m8524からの配列番号209及び213、q)1-1からの配列番号217及び221、r)1-2からの配列番号225及び229、s)1-4からの配列番号233及び237、t)1-5からの配列番号241及び245、u)1-7からの配列番号249及び253、v)2-5からの配列番号257及び261、w)2-8からの配列番号265及び269、x)chAb2からの配列番号273及び277、y)配列番号281及び285のchAb3、z)chAb4からの配列番号289及び293、aa)chAb18からの配列番号297及び301、bb)chAb13からの配列番号305及び309、cc)chAb12からの配列番号313及び317、dd)chAb14からの配列番号321及び325、ee)chAb6からの配列番号329及び333、ff)chAb11からの配列番号337及び341、gg)chAB16からの配列番号345及び349、hh)chAb10からの配列番号353及び357、ii)ChAb7からの配列番号361及び365、jj)chAb8からの配列番号369及び373、kk)chAb17からの配列番号377及び381、ll)chAb5からの配列番号385及び389、mm)huAb3v2.5からの配列番号393及び397、nn)huAb3v2.6からの配列番号401及び405、pp)huAb13v1からの配列番号409及び413、qq)TPP-5706からの配列番号417及び421、rr)TPP-6642からの配列番号425及び429、ss)TPP-6850からの配列番号433及び437、tt)TPP-3803からの配列番号441及び445、uu)TRL4542からの配列番号449及び453、vv)h1702からの配列番号457及び461、ww)h1703からの配列番号465及び469、xx)huA3からの配列番号473及び477、yy)huA9からの配列番号481及び485、並びにzz)m1704からの配列番号489及び493の対から選択されるアミノ酸配列を有するVHドメイン及びVLドメインを有する。USSN63/092,272の図17を参照されたい。
例示的な実施形態では、B7H3結合ドメインは、1A7[CD28]_H1.14可変重鎖ドメインを含む。いくつかの実施形態では、B7H3結合ドメインは、本明細書で提供されるCD28又はB7H3結合ドメインのいずれかの2E4A3.189[B7H3]_H1.22可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む。例示的な実施形態では、B7H3結合ドメインは、2E4A3.189[B7H3]_H1.22可変重鎖ドメイン又はそのバリアント、及び1A7[CD28]_L1可変軽鎖ドメイン又はそのバリアントを含む。
いくつかの実施形態では、2+1 CLCフォーマット抗体は、それぞれがB7H3に結合する2つの第1の結合ドメインと、CD28に結合する第2の結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、第1の結合ドメインのそれぞれの可変重鎖ドメイン(すなわち、B7H3結合ドメイン)は、2E4A3.189[B7H3]_H1.22可変重鎖ドメイン又はそのバリアントである。特定の実施形態では、第2の結合ドメインの可変重鎖ドメイン(すなわち、CD28結合ドメイン)は、1A7[CD28]_H1.14可変重鎖ドメイン又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、2+1 CLCフォーマット抗体は、本明細書で提供されるCD28又はB7H3結合ドメインのいずれかの可変軽鎖ドメインを含む共通軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、可変軽鎖ドメインは、1A7[CD28]_L1可変軽鎖ドメイン又はそのバリアントである。2+1 CLCフォーマットの例示的な抗B7H3×抗CD28二重特異性抗体を図38に示す。
図13は、2+1 CLCフォーマットの実施形態で使用される「CH1+ハーフヒンジ」ドメインリンカーの配列を示す。2+1 CLCフォーマットでは、「CH1+ハーフヒンジ」配列は、第1の可変重鎖ドメイン(VH)を二重特異性抗体のFab-Fab-Fc側の第2のVHドメインに連結するのに使用される。
いくつかの実施形態では、第2の単量体は、配列番号1019のアミノ酸配列を含み、第1の単量体は、配列番号1020のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号1021のアミノ酸配列を有する。
5.2+1 mAb-scFvフォーマット
本明細書で提供される主題の二重特異性抗体(例えば、抗CD28×抗B7H3抗体)において特に使用される1つのヘテロ二量体抗体フォーマットは、図33Eに示される2+1 mAb-scFvフォーマットである。この抗体フォーマットには、2つのFab部分、及び重鎖のうちの1つのC末端に結合したscFvの3つの抗原結合ドメインが含まれる。このフォーマットのいくつかの実施形態では、Fab部分はそれぞれ腫瘍関連抗原(TAA)、この場合はヒトB7H3に結合し、「余分な」scFvドメインはCD28に結合する。すなわち、このmAb-scFvフォーマットは、三価抗体である。
本明細書で提供される主題の二重特異性抗体(例えば、抗CD28×抗B7H3抗体)において特に使用される1つのヘテロ二量体抗体フォーマットは、図33Eに示される2+1 mAb-scFvフォーマットである。この抗体フォーマットには、2つのFab部分、及び重鎖のうちの1つのC末端に結合したscFvの3つの抗原結合ドメインが含まれる。このフォーマットのいくつかの実施形態では、Fab部分はそれぞれ腫瘍関連抗原(TAA)、この場合はヒトB7H3に結合し、「余分な」scFvドメインはCD28に結合する。すなわち、このmAb-scFvフォーマットは、三価抗体である。
これらの実施形態では、第1の鎖又は単量体は、N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含み、第2の単量体は、N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3-ドメインリンカー-scFvドメインを含み、scFvドメインは、第2のVH(VH2)、第2のVL(VL2)及びscFvリンカーを含む。本明細書の全てのscFvドメインに関して、scFvドメインは、N末端からC末端に向かって、VH2-scFvリンカー-VL2又はVL2-scFvリンカー-VH2のいずれかの配向であり得る。したがって、第2の単量体は、N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3-ドメインリンカー-VH2-scFvリンカー-VL2又はVH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3-ドメインリンカー-VL2-scFvリンカー-VH2を含み得る。この組成物は、軽鎖VL1-CLも含む。これらの実施形態では、VH1-VL1はそれぞれ第1のABDを形成し、VH2-VL2は第2のABDを形成する。いくつかの実施形態では、第1のABDはヒトB7H3を含む腫瘍標的抗原に結合し、第2のABDはヒトCD28に結合する。
いくつかの実施形態では、2+1 mAb-scFvフォーマット抗体の第1及び第2のFcドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアント(例えば、図3及び9に示されるアミノ酸置換のセット)を含むバリアントFcドメインである。特に有用なヘテロ二量体化スキューバリアントは、S364K/E357Q:L368D/K370S、L368D/K370S:S364K、L368E/K370S:S364K、T411T/E360E/Q362E:D401K、L368D/K370S:S364K/E357L、K370S:S364K/E357Q、T366S/L368A/Y407V:T366W及びT366S/L368A/Y407V/Y349C:T366W/S354C(EU番号付け))を含む。例示的な実施形態では、第1又は第2のバリアントFcドメインのうちの一方はヘテロ二量体化スキューバリアントL368D/K370Sを含み、第1又は第2のバリアントFcドメインの他方はヘテロ二量体化スキューバリアントS364K/E357Qを含み、番号付けはEU番号付けに従う。例示的な実施形態では、第1のバリアントFcドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントL368D/K370Sを含み、第2のバリアントFcドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントS364K/E357Qを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、バリアントFcドメインは、除去バリアント(図5に示されるものを含む)を含む。いくつかの実施形態では、第1及び第2のバリアントFcドメインのそれぞれが、除去バリアントE233P/L234V/L235A/G236_/S267Kを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第1の単量体の定常ドメイン(CH1-ヒンジ-CH2-CH3)は、pIバリアント(図4に示されるものを含む)を含む。例示的な実施形態では、第1の単量体の定常ドメイン(CH1-ヒンジ-CH2-CH3)は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される2+1 mAb-scFvフォーマット抗体のscFvは、荷電scFvリンカー(図6に示されるものを含む)を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される2+1 mAb-scFvフォーマット抗体は、FcRnバリアントM428L/N434Sを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
例示的な実施形態では、第1のバリアントFcドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントL368D/K370Sを含み、第2のバリアントFcドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントS364K/E357Qを含み、第1及び第2のバリアントFcドメインのそれぞれは、除去バリアントE233P/L234V/L235A/G236_/S267Kを含み、第1の単量体の定常ドメイン(CH1-ヒンジ-CH2-CH3)は、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けはEU番号付けに従う。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される2+1 mAb-scFvフォーマット抗体のscFvは、(GKPGS)4荷電scFvリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される2+1 mAb-scFvフォーマットの抗体は、FcRnバリアントM428L/N434Sを含み、番号付けはEU番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット抗体の第2の単量体のscFvはCD28結合であり、第1及び第2の単量体のVH1並びに共通軽鎖のVL1はそれぞれ、腫瘍関連抗原(TAA、例えばB7H3)に結合する結合ドメインを形成する(図26Bを参照されたい)。本明細書で提供されるCD28結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なCD28結合ドメインを、主題の2+1 mAb-scFvフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、CD28結合ドメインは、以下のCD28結合ドメインの1つ又はそのバリアントである:1A7[CD28]_H1L1、1A7[CD28]_H1.14L1、1A7[CD28]_H1_L1.71、1A7[CD28]_H1.1_L1.71、1A7[CD28]_H1.14_L1.71、CD28.3[CD28]_H0L0、TGN1412_H1L1、341VL34[CD28]_H1L1、341VL36[CD28]_H1L1、281VL4[CD28]_H1L1、HuTN228[CD28]_H1L1、PV1[CD28]_H0L0、m9.3[CD28]_H0L0、hu9.3[CD28]_H1L1(図18~21及び23、並びに配列表)。
mAb-scFvフォーマットのいくつかの実施形態では、抗CD28 ABDは、配列番号870、配列番号585、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、配列番号651、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号670、配列番号671及び配列番号672からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号874、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号660、配列番号661、配列番号662、配列番号663、配列番号664、配列番号665、配列番号666、配列番号667、配列番号668、配列番号669、配列番号670、配列番号671、配列番号672、配列番号NO:673、配列番号674、配列番号675、配列番号676、配列番号677、配列番号678、配列番号679、配列番号680、配列番号681、配列番号682、配列番号683、配列番号684、配列番号685、配列番号686、配列番号687、配列番号688、配列番号689、配列番号690、配列番号691、配列番号692、配列番号693、配列番号694、配列番号695、配列番号696、配列番号697、配列番号698、配列番号699、配列番号700、配列番号701、配列番号702、配列番号703、配列番号704、配列番号705、配列番号706、配列番号707、配列番号708、配列番号709、配列番号710、配列番号711、配列番号712、配列番号713、配列番号714、配列番号715、配列番号716、配列番号717、配列番号718、配列番号719、配列番号720、配列番号721、配列番号722、配列番号723、配列番号724、配列番号725、配列番号726、配列番号727、配列番号728、配列番号729、配列番号730、配列番号731、配列番号732、配列番号733、配列番号734、配列番号735、配列番号736、配列番号737、配列番号738、配列番号739、配列番号740、配列番号741、配列番号742、配列番号743、配列番号744、配列番号745、配列番号746、配列番号747、配列番号748、配列番号749、配列番号750、配列番号751、配列番号752、配列番号753、配列番号754、配列番号755、配列番号1200及び配列番号756からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVLドメインとを有する。
いくつかの実施形態では、2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット抗体の第1及び第2の単量体のVH1並びに共通軽鎖のVL1はそれぞれ、腫瘍関連抗原(TAA)に結合する結合ドメインを形成する(図26Bを参照されたい)。好適なTAAには、本明細書に開示されるTAAのいずれかが含まれる。例示的な実施形態では、TAAはB7H3である。本明細書で提供されるB7H3結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なB7H3結合ドメインを、主題の2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、B7H3結合ドメインは、以下のB7H3結合ドメイン又はそれらのバリアントのうちの1つである:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、BRCA84D、BRCA69D、PRCA157、huPRCA157、mAb-D、humAb-D、M30、M30-H1-L4、SP265、S10-H50L58、8H9、m852、m857、m8524、1-1、1-2、1-4、1-5、1-7、2-5、2-8、chAb2、chAb3、chAb4、chAb18、chAb13、chAb12、chAb14、chAb6、chAb11、chAb16、chAb10、chAb7、chAb8、chAb17、chAb5、huAb3v2.5、huAb3v2.6、huAb13v1、TPP-5706、TPP-6642、TPP-6850、TPP-3803、TRL4542、h1702、h1703、huA3、huA9、m1704(図26~31及び配列表)。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号518、配列番号928、配列番号497、配列番号498、配列番号499、配列番号500、配列番号501、配列番号502、配列番号503、配列番号504、配列番号505、配列番号506、配列番号507、配列番号508、配列番号509、配列番号510、配列番号511、配列番号512、配列番号513、配列番号514、配列番号515、配列番号516、配列番号517、配列番号519、配列番号520、配列番号521、配列番号522、配列番号523、配列番号524、配列番号525、配列番号526、配列番号527、配列番号528、配列番号529、配列番号530、配列番号531、配列番号532、配列番号533、配列番号534、配列番号535、配列番号536、配列番号537、配列番号538、配列番号539、配列番号540、配列番号541、配列番号542、配列番号543、配列番号544、配列番号545、配列番号546、配列番号547、配列番号548、配列番号549、配列番号550、配列番号551、配列番号552、配列番号553、配列番号554、配列番号555、配列番号556、配列番号557、配列番号558、配列番号559、配列番号560、配列番号561、配列番号562、配列番号563、配列番号564、配列番号565、配列番号566、配列番号567、配列番号568、配列番号569、配列番号570、配列番号571、配列番号572、配列番号573、配列番号574、配列番号575、配列番号576、配列番号577、配列番号578、配列番号579、配列番号580、配列番号581、配列番号582、配列番号583、及び配列番号584からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVLドメインと、配列番号874及び配列番号932からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するVLドメインとを有する。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号946のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号950のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号956のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号960のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号964のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号968のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、抗B7H3 ABDは、配列番号972のアミノ酸配列を有するVHドメインと、配列番号976のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。
図10~11は、2+1 mAb-scFvフォーマットで有用ないくつかの例示的なFcドメイン配列を示している。図10に示される「単量体1」配列は、典型的には、「Fab-Fc重鎖」のFcドメインを指し、「単量体2」配列は、「Fab-Fc-scFv」重鎖のFcドメインを指す。加えて、図12~14は、「Fab-Fc重鎖」単量体又は「Fab-Fc-scFv」重鎖のいずれかで使用され得る例示的なCH1(任意せんたくてきにヒンジ又はハーフヒンジドメインを含む)を示している。図15は、「Fab-Fc重鎖」単量体又は「Fab-Fc-scFv」重鎖のいずれかで使用され得る例示的なヒンジドメインを示している。更に、図16は、このフォーマットで使用され得る有用なCL配列を示している。
6.単一特異性モノクローナル抗体
当業者によって理解されるように、本明細書に概説される新規のFv配列はまた、単一特異性抗体(例えば、「従来のモノクローナル抗体」)又は非ヘテロ二重特異性フォーマットの両方で使用することができる。したがって、本発明は、図からの6つのCDR及び/又はvh及びvl配列を含み、一般にIgG1、IgG2、IgG3又はIgG4定常領域を有する、モノクローナル(単一特異性)抗体を提供し、IgG1、IgG2及びIgG4(S228Pアミノ酸置換を含むIgG4定常領域を含む)を有する場合、いくつかの実施形態において特に使用される。すなわち、本明細書で「H_L」の名称を有する任意の配列は、ヒトIgG1抗体の定常領域に連結することができる。
当業者によって理解されるように、本明細書に概説される新規のFv配列はまた、単一特異性抗体(例えば、「従来のモノクローナル抗体」)又は非ヘテロ二重特異性フォーマットの両方で使用することができる。したがって、本発明は、図からの6つのCDR及び/又はvh及びvl配列を含み、一般にIgG1、IgG2、IgG3又はIgG4定常領域を有する、モノクローナル(単一特異性)抗体を提供し、IgG1、IgG2及びIgG4(S228Pアミノ酸置換を含むIgG4定常領域を含む)を有する場合、いくつかの実施形態において特に使用される。すなわち、本明細書で「H_L」の名称を有する任意の配列は、ヒトIgG1抗体の定常領域に連結することができる。
いくつかの実施形態では、単一特異性抗体は、B7H3単一特異性抗体である。ある特定の実施形態では、単一特異性抗B7H3抗体は、以下のB7H3抗原結合ドメインのいずれかの6つのCDRを含む:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1、6A1[B7H3]_H1L1、3C4[B7H3]_H1L1.1、及び4F12[B7H3]_H2L1.1(図26~31)。いくつかの実施形態では、単一特異性B7H3抗体は、以下のB7H3抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む:2E4A3.189[B7H3]_H1L1、2E4A3.189[B7H3]_H1/1A7[CD28]_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22_L1、2E4A3.189[B7H3]_H1.22/1A7[CD28]_L1,6A1[B7H3]_H1L1、3C4[B7H3]_H1L1.1、及び4F12[B7H3]_H2L1.1(図26~31)。
いくつかの実施形態では、単一特異性抗体は、CD28単一特異性抗体である。ある特定の実施形態では、単一特異性抗CD28抗体は、以下のCD28抗原結合ドメインのいずれかの6つのCDRを含む:1A7[CD28]_H1L1、及び1A7[CD28]_H1.14_L1(図18及び19)。いくつかの実施形態では、単一特異性抗CD28抗体は、以下のCD28抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む:1A7[CD28]_H1L1、及び1A7[CD28]_H1.14_L1(図18及び19)。
VI.核酸
別の態様では、本明細書で提供される抗原結合ドメイン並びに抗B7H3及び抗CD28抗体(例えば、αB7H3×αCD28二重特異性抗体)をコードする核酸組成物が、本明細書で提供される。
別の態様では、本明細書で提供される抗原結合ドメイン並びに抗B7H3及び抗CD28抗体(例えば、αB7H3×αCD28二重特異性抗体)をコードする核酸組成物が、本明細書で提供される。
当業者には理解されるように、核酸組成物はヘテロ二量体タンパク質の形式及び足場に依存する。したがって、例えば、1+1 Fab-scFv-Fc又は2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット、1+1 CLC 及び2+1 CLCフォーマットなど、フォーマットが3つのアミノ酸配列を必要とする場合、3つのポリヌクレオチドを発現のために1つ以上の発現ベクターに組み込むことができる。例示的な実施形態では、各ポリヌクレオチドは、異なる発現ベクターに組み込まれる。
当該技術分野で知られているように、本明細書で開示される結合ドメイン及び抗体の構成要素をコードする核酸は、本発明のヘテロ二量体抗体を産生するために使用される宿主細胞に応じて、当該技術分野で知られているように、発現ベクターに組み込むことができる。一般に、核酸は任意の数の制御性エレメント(プロモーター、複製起点、選択可能マーカー、リボソーム結合部位、インデューサーなど)に作動可能に連結されている。発現ベクターは、染色体外ベクター又は組み込みベクターであり得る。
次いで、本発明のポリヌクレオチド及び/又は発現ベクターを、多くの実施形態において使用される、哺乳動物、細菌、酵母、昆虫及び/又は真菌細胞を含む当技術分野において周知の任意の数の異なる種類の宿主細胞に哺乳動物細胞(例えば、CHO細胞)で形質転換する。
いくつかの実施形態では、各単量体をコードするポリヌクレオチドは、それぞれ一般に異なる又は同じプロモーター制御下で単一の発現ベクター内に含まれる。本発明において特に使用される実施形態では、これらのポリヌクレオチドの各々は異なる発現ベクターに含まれる。本明細書及び参照により本明細書に組み込まれるUS62/025,931に示されるように、ヘテロ二量体形成を推進するために異なるベクター比を使用することができる。すなわち、驚くべきことに、(ヘテロ二量体抗体を含む3つのポリペプチド有する本明細書の実施形態の多くの場合)タンパク質は、第1の単量体:第2の単量体:軽鎖を1:1:2の比率で含むが、これらは最高の結果が得られる比率ではない。
本明細書に記載の抗体及びABDは、当該技術分野において周知のように、発現ベクターを含む宿主細胞を培養することによって作製される。一旦製造されると、イオン交換クロマトグラフィー工程を含む従来の抗体精製工程が実施される。本明細書で論じるように、2つの単量体のpIが少なくとも0.5だけ異なることは、イオン交換クロマトグラフィー若しくは等電点電気泳動、又は等電点に感受性の他の方法による分離を可能にし得る。すなわち、各単量体異なるpIを有し、かつヘテロ二量体も異なるpIを有するようになるように各単量体の等電点(pI)を変化させるpI置換を含むことによって、「1+1 Fab-scFv-Fc」ヘテロ二量体の等電点精製(例えば、陰イオン交換カラム、陽イオン交換カラム)を促進する。これらの置換はまた、精製後、混入したデュアルscFv-Fc及びmAbホモ二量体の決定及びモニタリングにも役立つ(例えば、IEFゲル、cIEF、及び分析用IEXカラム)。
VII.抗CD28×抗TAA抗体の生物学的及び生化学的機能性
一般に、本明細書に記載の二重特異性抗CD28×抗TAA抗体(例えば抗CD28×抗B7H3)は、がん(例えばB7H3関連がん)を有する患者に投与され、有効性は、本明細書中に記載されるようないくつかの方法で評価される。このため、がん量、腫瘍のサイズ、転移の存在又は程度の評価などの、有効性の標準的なアッセイを実行し得るが、免疫腫瘍学的治療もまた免疫状態評価に基づいて評価され得る。これは、インビトロアッセイ及びインビボアッセイの両方を含むいくつかの方法で行うことができる。
一般に、本明細書に記載の二重特異性抗CD28×抗TAA抗体(例えば抗CD28×抗B7H3)は、がん(例えばB7H3関連がん)を有する患者に投与され、有効性は、本明細書中に記載されるようないくつかの方法で評価される。このため、がん量、腫瘍のサイズ、転移の存在又は程度の評価などの、有効性の標準的なアッセイを実行し得るが、免疫腫瘍学的治療もまた免疫状態評価に基づいて評価され得る。これは、インビトロアッセイ及びインビボアッセイの両方を含むいくつかの方法で行うことができる。
A.インビボ投与のための抗体組成物
本発明に従って使用される抗体の製剤は、所望の純度の抗体を任意選択の薬学的に許容される担体、賦形剤、又は安定化剤と混合することによって、保存のために、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で調製される(Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.[1980])。許容される担体、賦形剤、又は安定剤は、使用される用量及び濃度において、レシピエントに対して非毒性でありリン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝液;アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤;防腐剤(塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム;塩化ヘキサメトニウム;塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム;フェノール、ブチル、又はベンジルアルコール;メチル又はプロピルパラベン等のアルキルパラベン;カテコール;レゾルシノール;シクロヘキサノール;3-ペンタノール;及びm-クレゾール);低分子量(約10残基未満)ポリペプチド;血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン等のタンパク質;ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー;グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン等のアミノ酸;単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、又はデキストリンを含む他の炭水化物;EDTA等のキレート剤;スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール等の糖類;ナトリウム等の塩形成対イオン;金属錯体(例えば、Zn-タンパク質錯体);及び/又はTWEEN(商標)、PLURONICS(商標)又はポリエチレングリコール(PEG)等の非イオン性界面活性剤を含む。
本発明に従って使用される抗体の製剤は、所望の純度の抗体を任意選択の薬学的に許容される担体、賦形剤、又は安定化剤と混合することによって、保存のために、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で調製される(Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.[1980])。許容される担体、賦形剤、又は安定剤は、使用される用量及び濃度において、レシピエントに対して非毒性でありリン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝液;アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤;防腐剤(塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム;塩化ヘキサメトニウム;塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム;フェノール、ブチル、又はベンジルアルコール;メチル又はプロピルパラベン等のアルキルパラベン;カテコール;レゾルシノール;シクロヘキサノール;3-ペンタノール;及びm-クレゾール);低分子量(約10残基未満)ポリペプチド;血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン等のタンパク質;ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー;グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン等のアミノ酸;単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、又はデキストリンを含む他の炭水化物;EDTA等のキレート剤;スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール等の糖類;ナトリウム等の塩形成対イオン;金属錯体(例えば、Zn-タンパク質錯体);及び/又はTWEEN(商標)、PLURONICS(商標)又はポリエチレングリコール(PEG)等の非イオン性界面活性剤を含む。
VIII.治療
一旦作製されると、本発明の組成物は、特に抗PD1及び抗腫瘍二重特異性抗体などの抗がん療法とともに使用される場合に、一般に免疫応答(例えば、T細胞の活性化及び増殖)を増強することによりがんを治療することによって、いくつかの腫瘍学用途に使用される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、対象のTAA(例えば、B7H3)を発現する腫瘍の微小環境においてT細胞のアゴニスト共刺激を提供することにより、免疫応答(例えば、T細胞の活性化及び増殖)を増強する。
一旦作製されると、本発明の組成物は、特に抗PD1及び抗腫瘍二重特異性抗体などの抗がん療法とともに使用される場合に、一般に免疫応答(例えば、T細胞の活性化及び増殖)を増強することによりがんを治療することによって、いくつかの腫瘍学用途に使用される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、対象のTAA(例えば、B7H3)を発現する腫瘍の微小環境においてT細胞のアゴニスト共刺激を提供することにより、免疫応答(例えば、T細胞の活性化及び増殖)を増強する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗CD28×抗TAA二重特異性抗体は、例えば、チェックポイント阻害剤(例えば、抗PD1抗体)又は抗腫瘍二重特異性抗体を含む抗腫瘍療法とともに投与される。
A.抗CD28×抗TAA/抗TAA二重特異性抗体
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗CD28×抗TAA二重特異性抗体は、ヒトCd3に結合するものなどのT細胞結合二重特異性抗体である抗腫瘍二重特異性抗体とともに投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗CD28×抗TAA二重特異性抗体は、ヒトCd3に結合するものなどのT細胞結合二重特異性抗体である抗腫瘍二重特異性抗体とともに投与される。
古典的T細胞/APC相互作用では、ペプチド-MHCとのTCR反応性によって提供される第1のシグナル(シグナル1)、及びAPC上に発現するCD80/CD86によるCD28架橋によって提供される第2のシグナル(シグナル2)があり、これらが一緒になってT細胞を完全に活性化する(図31Aを参照されたい)。対照的に、TAAを標的化するCD3二重特異性抗体(すなわち、抗CD3×抗TAA二重特異性抗体)による処理では、第1のシグナルのみが提供される。
いかなる特定の作用理論にも束縛されることなく、本明細書で提供される抗CD28×抗TAA二重特異性抗体は、CD28共刺激によって抗CD3×抗TAA二重特異性抗体の抗腫瘍応答を増強できると考えられる(図31B並びに実施例4E及び4Fを参照されたい)。したがって、一態様では、本明細書で提供される抗CD3×抗TAA二重特異性抗体及び抗CD28×抗TAA二重特異性抗体を患者に投与することによって、患者のがんを治療する方法の方法が本明細書で提供される。いくつかの場合では、TTAは両方の抗体で同じであり、したがって、例えば、抗CD28×B7H3二重特異性抗体と抗CD3×B7H3抗体との同時投与があり得る。いくつかの場合では、TTAは異なる。いくつかの実施形態では、抗CD3×抗TAA二重特異性抗体及び抗CD28×抗TAA二重特異性抗体の投与は、患者の腫瘍に対する免疫応答を増強する。いくつかの実施形態では、抗CD3×抗TAA二重特異性抗体及び抗CD28×抗TAAは、同じ腫瘍上の異なるTAAに結合する。例示的な実施形態では、抗CD28×抗TAAは、本明細書で提供される抗CD28×抗B7H3抗体である。
B.抗CD28×抗TTA/チェックポイント阻害剤
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗CD28×抗TAA二重特異性抗体は、チェックポイント阻害剤(例えば、抗PD1抗体)とともに投与される。いかなる特定の作用理論にも束縛されることなく、チェックポイント遮断(例えば、PD-1遮断)は、アゴニスト抗CD28×抗TAA二重特異性抗体によるTIL上のT細胞共刺激受容体の関与と合った有用な治療様式であると考えられているが、これは、固形腫瘍において幅広い実用性を提供し、CD28経路のCTLA4阻害を回避するためである。したがって、別の態様では、本明細書で提供される抗CD28×抗TAA二重特異性抗体及びチェックポイント阻害剤を患者に投与することにより、患者のがんを治療する方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA二重特異性抗体及びチェックポイント阻害剤の投与は、患者の腫瘍に対する免疫応答を増強する。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、PD-1、PD-L1、又はCTLA4阻害剤である。例示的な実施形態では、PD-1阻害剤は、抗PD-1、抗PD-L1又は抗CTLA4抗体である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗CD28×抗TAA二重特異性抗体は、チェックポイント阻害剤(例えば、抗PD1抗体)とともに投与される。いかなる特定の作用理論にも束縛されることなく、チェックポイント遮断(例えば、PD-1遮断)は、アゴニスト抗CD28×抗TAA二重特異性抗体によるTIL上のT細胞共刺激受容体の関与と合った有用な治療様式であると考えられているが、これは、固形腫瘍において幅広い実用性を提供し、CD28経路のCTLA4阻害を回避するためである。したがって、別の態様では、本明細書で提供される抗CD28×抗TAA二重特異性抗体及びチェックポイント阻害剤を患者に投与することにより、患者のがんを治療する方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗CD28×抗TAA二重特異性抗体及びチェックポイント阻害剤の投与は、患者の腫瘍に対する免疫応答を増強する。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、PD-1、PD-L1、又はCTLA4阻害剤である。例示的な実施形態では、PD-1阻害剤は、抗PD-1、抗PD-L1又は抗CTLA4抗体である。
C.投与様式
本明細書で提供される抗体及び化学療法剤は、ボーラスとしての静脈内投与又はある期間にわたる持続注入などの既知の方法に従って対象に投与される。
本明細書で提供される抗体及び化学療法剤は、ボーラスとしての静脈内投与又はある期間にわたる持続注入などの既知の方法に従って対象に投与される。
D.治療様式
本発明の方法において、治療は、疾患又は病状に関して肯定的な治療応答を提供するために使用される。
本発明の方法において、治療は、疾患又は病状に関して肯定的な治療応答を提供するために使用される。
「肯定的な治療応答」は、疾患若しくは病状の改善、及び/又は疾患又は病状に関連する症状の改善を意図する。例えば、肯定的な治療応答は、疾患における以下の改善のうちの1つ以上を指し得る:(1)腫瘍細胞の数の減少、(2)腫瘍細胞死の増加、(3)腫瘍細胞の生存の阻害、(5)腫瘍増殖の阻害(すなわち、ある程度の減速、好ましくは停止)、(6)患者生存率の増加、及び(7)疾患又は病状に関連する1つ以上の症状からのいくらかの解放。
任意の所与の疾患又は病状における肯定的な治療応答は、その疾患又は病状に特有の標準化された応答基準によって決定され得る。腫瘍応答は、磁気共鳴画像(MRI)スキャン、X線撮影、コンピュータ断層撮影(CT)スキャン、骨スキャン撮影、内視鏡検査、並びに骨髄穿刺(BMA)及び循環中の腫瘍細胞の計数を含む腫瘍生検サンプリングなどのスクリーニング技法を使用して、腫瘍形態(すなわち、全身腫瘍組織量、腫瘍サイズなど)の変化について評価され得る。
これらの肯定的な治療応答に加えて、治療を受けている対象は、疾患に関連する症状の改善の有益な効果を経験し得る。
本発明に従う治療には、使用される医薬品の「治療有効量」が含まれる。「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するために、必要な投薬量及び期間で有効な量をいう。
治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、並びに個体において所望の応答を誘発する薬剤の能力などの因子によって異なり得る。治療有効量はまた、抗体又は抗体部分のいずれの毒性又は有害な効果よりも治療上有益な効果が勝る量である。
腫瘍療法のための「治療有効量」は、疾患の進行を安定化する能力によっても測定することができる。がんを阻害する化合物の能力は、ヒト腫瘍における有効性を予測する動物モデル系において評価してもよい。
代替的に、組成物のこの特性は、当業者に知られているインビトロアッセイによって、化合物が細胞増殖を阻害するか、又はアポトーシスを誘導する能力を検査することによって評価してもよい。治療有効量の治療用化合物は、腫瘍サイズを減少させるか、さもなければ対象の症状を軽減し得る。当業者であれば、対象のサイズ、対象の症状の重症度、及び選択される特定の組成物又は投与経路などの因子に基づいて、そのような量を決定することができるであろう。
投薬レジメンは、最適な所望の応答(例えば、治療応答)を提供するように調節される。例えば、単回のボーラスを投与してもよく、いくつかの分割用量を経時的に投与してもよく、又は治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例して減少又は増加させてもよい。非経口組成物は、投与の容易性及び投薬量の均一性のために、単位剤形で処方され得る。本明細書で使用される単位剤形は、治療される対象のための単一投薬量として好適な物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要とされる薬学的担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有する。
本発明の単位剤形形態の仕様は、(a)活性化合物の固有の特徴及び達成すべき特定の治療効果、並びに(b)個体における感受性の治療に対してそのような活性化合物を調合する分野に付いて回る制限に影響され、またそれらに直接的に依存する。
本発明で使用される二重特異性抗体の効率的な投薬量及び投薬レジメンは、治療される疾患又は病状に依存し、当業者によって決定され得る。
全ての引用文献は、本明細書にそれらの全体が参照により明示的に組み込まれる。
本発明の特定の実施形態を例示の目的で上述のように説明してきたが、添付の特許請求の範囲に記載の本発明から逸脱することなく詳細の多数の変形をなし得ることが当業者には理解されよう。
本発明を説明するために実施例を以下に提供する。これらの実施例は、本発明を任意の特定の用途又は動作理論に限定することを意味するものではない。本発明で論じられる全ての定常領域位置について、付番は、Kabat(Kabat et al.,1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.,United States Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda、参照により全体が組み込まれる)と同様のEUインデックスに従う。抗体の技術分野の当業者は、この規則が免疫グロブリン配列の特定の領域における非連続的な付番からなり、免疫グロブリンファミリーにおける保存された位置への標準的な基準を可能にすることを理解するであろう。したがって、EUインデックスによって定義されるような任意の所与の免疫グロブリンの位置は必ずしもその連続配列に対応しない。
一般的及び具体的な科学技術は、米国特許出願公開第2015/0307629号、同第2014/0288275号、及びWO2014/145806に概説されており、それらは全て、特にその中に概説されている技術に関して、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。
背景
チェックポイント遮断免疫療法は効果的であることが証明されているが、それでも多くの患者は応答を達成できない。アゴニスト抗体によるTIL上のT細胞共刺激受容体の関与は、免疫チェックポイントの負のシグナルを克服し得る追加の正のシグナルを提供し得、またチェックポイント遮断と合った有用な治療様式となり得る。しかしながら、それにもかかわらず、共刺激受容体の全身アゴニズムは、全身毒性をもたらす可能性がある。B7H3は、がん細胞及び腫瘍血管細胞で広く過剰発現していることが判明しており、腫瘍標的として有用となり得る。したがって、αB7H3×αCD28二重特異性抗体(bsAb)は、アゴニストCD28結合ドメインを腫瘍環境に標的化し、それによって全身毒性の可能性を低減することを目的として設計された。
チェックポイント遮断免疫療法は効果的であることが証明されているが、それでも多くの患者は応答を達成できない。アゴニスト抗体によるTIL上のT細胞共刺激受容体の関与は、免疫チェックポイントの負のシグナルを克服し得る追加の正のシグナルを提供し得、またチェックポイント遮断と合った有用な治療様式となり得る。しかしながら、それにもかかわらず、共刺激受容体の全身アゴニズムは、全身毒性をもたらす可能性がある。B7H3は、がん細胞及び腫瘍血管細胞で広く過剰発現していることが判明しており、腫瘍標的として有用となり得る。したがって、αB7H3×αCD28二重特異性抗体(bsAb)は、アゴニストCD28結合ドメインを腫瘍環境に標的化し、それによって全身毒性の可能性を低減することを目的として設計された。
実施例1:CD28結合ドメイン
1A:新規CD28結合ドメイン
TGN1412に関連するスーパーアゴニズムを回避するために考えられたアプローチは、TGN1412よりも低親和性のCD28への結合及び/又は異なるCD28エピトープへの結合を有する新規CD28結合ドメインを生成することであった。そのような新規CD28結合ドメインを生成する1つのキャンペーンにおいて、社内のデノボファージライブラリーがCD28に対してパニングされた。別のキャンペーンでは、ラットハイブリドーマを使用して追加のCD28結合ドメインを生成した。
1A:新規CD28結合ドメイン
TGN1412に関連するスーパーアゴニズムを回避するために考えられたアプローチは、TGN1412よりも低親和性のCD28への結合及び/又は異なるCD28エピトープへの結合を有する新規CD28結合ドメインを生成することであった。そのような新規CD28結合ドメインを生成する1つのキャンペーンにおいて、社内のデノボファージライブラリーがCD28に対してパニングされた。別のキャンペーンでは、ラットハイブリドーマを使用して追加のCD28結合ドメインを生成した。
1A(a):ファージ由来クローン1A7
このファージライブラリーは、LCDR3に多様性が導入されたヒト生殖系列VLを利用したことに留意されたい。例示的なファージ由来クローン1A7のアミノ酸配列を図18に示す。
このファージライブラリーは、LCDR3に多様性が導入されたヒト生殖系列VLを利用したことに留意されたい。例示的なファージ由来クローン1A7のアミノ酸配列を図18に示す。
ファージ由来クローンを、それらの結合特性を調査するために二価mAbとしてフォーマットした。選択したクローンの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含むプラスミドをギブソンアセンブリによって構築し、IgG1定常領域のコード配列を含むpTT5発現ベクターにサブクローニングした(E233P/L234V/L235A/G236del/S67K除去バリアントを使用)。発現のためにDNAをHEK293Eにトランスフェクトし、得られた二価mAbをプロテインAクロマトグラフィーを使用して上清から精製した。
CD28に対するファージ由来二価mAbの親和性は、BioLayer Interferometry(BLI)ベースの方法であるオクテットを使用してスクリーニングした。オクテットの実験工程は、一般的に以下を含む。試験物質の親和性を決定するための、固定化(バイオセンサ上へのリガンドの捕捉)、会合(分析物を含むウェルにリガンドコーティングしたバイオセンサの浸漬)、及び解離(緩衝液を含むウェルにバイオセンサを戻すこと)。XENP28428(クローン1A7に基づく)及び追加のファージ由来コンパレータについて得られた見かけの解離定数(KDapp)を図24に示す。
ファージ由来二価mAbの細胞表面CD28への結合を調査した。ヒトPBMCを、示された濃度のXENP28428又は比較ファージ由来mAbとともに4℃で1時間インキュベートした。次いで、細胞をAlexa Fluor(登録商標)647 AffiniPure F(ab’)2フラグメントヤギ抗ヒトIgG、Fcγフラグメント特異的二次抗体(Jackson ImmunoResearch、West Grove、West Grove,Penn)で4℃で1時間染色し、フローサイトメトリーで分析した。データ(図25)は、先行技術の抗CD28 mAb HuTN228(XENP27181、配列を図23に示す)よりもはるかに弱い最大結合であるが、ファージ由来mAbがヒトPBMCに結合できたことを示している。
より弱いCD28結合を考慮して、VH及び/又はVLに置換を導入することにより、1A7を更に親和性操作した。そのような親和性操作されたVH及びVL領域の配列は、配列番号585~756として示されており(例示的な配列が図19~20に示されている)、例示的な親和性操作されたVH/VL対の配列は、図21に示されている。FR及びCDRのコンセンサス配列を図44に示す。CD28に対する親和性操作された例示的な1A7 VH/VL対の親和性を図22に示す。特に、scFvに関連するVH及びVLドメインの配向は、結合親和性に影響する。追加的に、scFvとは対照的に、(共通軽鎖二重特異性mAbフォーマットで使用するための)Fabドメインに関連するVH及びVLドメインのフォーマットも、結合親和性に影響する。
1B:追加のCD28結合ドメイン
本発明のαB7H3×αCD28 bsAbにおいて使用され得る更なるCD28結合ドメインのVH、VL、及びCDR配列は、配列番号1~88として示される。
本発明のαB7H3×αCD28 bsAbにおいて使用され得る更なるCD28結合ドメインのVH、VL、及びCDR配列は、配列番号1~88として示される。
実施例2:B7H3結合ドメイン
2A:新規B7H3結合ドメイン
新規B7H3結合ドメインを生成する1つのキャンペーンにおいて、社内のデノボファージライブラリーがB7H3に対してパニングされた。別のキャンペーンでは、ラットハイブリドーマを使用して追加のB7H3結合ドメインを生成した。
2A:新規B7H3結合ドメイン
新規B7H3結合ドメインを生成する1つのキャンペーンにおいて、社内のデノボファージライブラリーがB7H3に対してパニングされた。別のキャンペーンでは、ラットハイブリドーマを使用して追加のB7H3結合ドメインを生成した。
2A(a):ファージ由来クローン2E4A3.189
このファージライブラリーは、一般的な軽鎖二重特異性抗体フォーマットでの使用に好適な結合ドメインを発見することを意図していたことに留意されたい。したがって、いかなる多様性もないことを除いて、実施例1A(a)と同じヒト生殖系列VLを利用した。例示的なファージ由来クローン2E4A3.189のアミノ酸配列を図26に示す。このファージ由来クローンは、共通軽鎖二重特異性抗体フォーマットを可能にするのに役立つが、B7H3に対する結合親和性が非常に弱く、親和性操作が必要であった。実施例3Bに更に記載されるように、2E4A3.189のVHは1A7のVLと生産的に対合するが、1A7のVHは2E4A3.189のVLと生産的に対合しない(1つのアミノ酸の違いにもかかわらず)。したがって、親和性を改善するために、2E4A3.189は、配列番号497~584及び図27に示される配列のVHのみへの置換を用いて操作され、1A7のVLと対になった。FR及びCDRのコンセンサス配列を図75に示す。
このファージライブラリーは、一般的な軽鎖二重特異性抗体フォーマットでの使用に好適な結合ドメインを発見することを意図していたことに留意されたい。したがって、いかなる多様性もないことを除いて、実施例1A(a)と同じヒト生殖系列VLを利用した。例示的なファージ由来クローン2E4A3.189のアミノ酸配列を図26に示す。このファージ由来クローンは、共通軽鎖二重特異性抗体フォーマットを可能にするのに役立つが、B7H3に対する結合親和性が非常に弱く、親和性操作が必要であった。実施例3Bに更に記載されるように、2E4A3.189のVHは1A7のVLと生産的に対合するが、1A7のVHは2E4A3.189のVLと生産的に対合しない(1つのアミノ酸の違いにもかかわらず)。したがって、親和性を改善するために、2E4A3.189は、配列番号497~584及び図27に示される配列のVHのみへの置換を用いて操作され、1A7のVLと対になった。FR及びCDRのコンセンサス配列を図75に示す。
2B:ハイブリドーマ由来クローン
B7H3結合ドメインは、ラット及びウサギのハイブリドーマから得られ、ストリング含有量の最適化を使用してヒト化された(例えば、2010年2月2日発行の米国特許第7,657,380号を参照されたい)。例示的なヒト化ラットハイブリドーマ由来クローン6A1及び3C4並びにヒト化ウサギハイブリドーマ由来クローン4F12及び38E2のアミノ酸配列を、それぞれ図28~31に示す。ヒト及びカニクイザルB7H3に対するハイブリドーマクローン(及び親和性操作された2E4A3.189ファージクローン)の結合親和性を、1+1 bsAbフォーマットに関連して決定し(一価の結合親和性を得るため)、そのデータを図32に示す。
B7H3結合ドメインは、ラット及びウサギのハイブリドーマから得られ、ストリング含有量の最適化を使用してヒト化された(例えば、2010年2月2日発行の米国特許第7,657,380号を参照されたい)。例示的なヒト化ラットハイブリドーマ由来クローン6A1及び3C4並びにヒト化ウサギハイブリドーマ由来クローン4F12及び38E2のアミノ酸配列を、それぞれ図28~31に示す。ヒト及びカニクイザルB7H3に対するハイブリドーマクローン(及び親和性操作された2E4A3.189ファージクローン)の結合親和性を、1+1 bsAbフォーマットに関連して決定し(一価の結合親和性を得るため)、そのデータを図32に示す。
2C:追加のB7H3結合ドメイン
本発明のB7H3×CD28 bsAbにおいて使用され得る更なるB7H3結合ドメインのVH、VL、及びCDR配列は、配列番号89~96として示される。
本発明のB7H3×CD28 bsAbにおいて使用され得る更なるB7H3結合ドメインのVH、VL、及びCDR配列は、配列番号89~96として示される。
実施例3:αB7H3×αCD28 bsAbの操作
B7H3×CD28 bsAbのいくつかのフォーマットが考案され、その例示的なフォーマットは、以下及び図33に概説されている。いずれの場合も、CD28二重特異性抗体はCD28に対して一価であり、潜在的なスーパーアゴニズムを回避するためにFcγR結合を除去するように設計されたFcバリアント(図5に示すものなど)を組み込むことに留意されたい。
B7H3×CD28 bsAbのいくつかのフォーマットが考案され、その例示的なフォーマットは、以下及び図33に概説されている。いずれの場合も、CD28二重特異性抗体はCD28に対して一価であり、潜在的なスーパーアゴニズムを回避するためにFcγR結合を除去するように設計されたFcバリアント(図5に示すものなど)を組み込むことに留意されたい。
3A:Fab-scFv-Fcフォーマット
3A(a):1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット
Fabドメイン及びscFvを利用する1つのフォーマットは、第1のヘテロ二量体Fcドメインに共有結合した第1の抗原結合特異性を有する単鎖Fv(「scFv」)を含む第1の単量体と、相補的な第2のヘテロ二量体Fcドメインに共有結合した重鎖可変領域(VH)を含む第2の単量体と、第2の抗原結合特異性を有するFabドメインが可変重鎖ドメインで形成されるように別々にトランスフェクトされた軽鎖(LC)とを含む、1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット(図34Aに概略的に示される)である。1+1 Fab-scFv-Fcフォーマットにおける例示的なαB7H3×αCD28 bsAb(実施例1及び2に記載の結合ドメインに基づく)の配列を、図35に示す。
3A(a):1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット
Fabドメイン及びscFvを利用する1つのフォーマットは、第1のヘテロ二量体Fcドメインに共有結合した第1の抗原結合特異性を有する単鎖Fv(「scFv」)を含む第1の単量体と、相補的な第2のヘテロ二量体Fcドメインに共有結合した重鎖可変領域(VH)を含む第2の単量体と、第2の抗原結合特異性を有するFabドメインが可変重鎖ドメインで形成されるように別々にトランスフェクトされた軽鎖(LC)とを含む、1+1 Fab-scFv-Fcフォーマット(図34Aに概略的に示される)である。1+1 Fab-scFv-Fcフォーマットにおける例示的なαB7H3×αCD28 bsAb(実施例1及び2に記載の結合ドメインに基づく)の配列を、図35に示す。
3A(b):2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット
別のそのようなフォーマットは、第1のヘテロ二量体Fcドメインに共有結合したscFv(第1の抗原結合特異性を有する)に共有結合したVHドメインを含む第1の単量体と、相補的な第2のヘテロ二量体Fcドメインに共有結合したVHドメインを含む第2の単量体と、第2の抗原結合特異性を有するFabドメインがVHドメインで形成されるように別々にトランスフェクトされたLCとを含む、2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット(図34Bに概略的に示される)である。2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマットにおける例示的なαB7H3×αCD28 bsAb(実施例1及び2に記載の結合ドメインに基づく)の配列を、図36に示す。
別のそのようなフォーマットは、第1のヘテロ二量体Fcドメインに共有結合したscFv(第1の抗原結合特異性を有する)に共有結合したVHドメインを含む第1の単量体と、相補的な第2のヘテロ二量体Fcドメインに共有結合したVHドメインを含む第2の単量体と、第2の抗原結合特異性を有するFabドメインがVHドメインで形成されるように別々にトランスフェクトされたLCとを含む、2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット(図34Bに概略的に示される)である。2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマットにおける例示的なαB7H3×αCD28 bsAb(実施例1及び2に記載の結合ドメインに基づく)の配列を、図36に示す。
3B:共通軽鎖フォーマット
実施例1及び2で上述したように、CD28及びB7H3結合ドメインを発見するためのファージライブラリーは、同じヒト生殖系列VLを利用したが、CD28ライブラリーはLCDR3に多様性を含んでいた。クローン1A7の可変軽鎖ドメインは、抗B7H3クローン2E4A3.189の可変軽鎖ドメインとは、LCDR3のアミノ酸が1つだけ異なることが判明した。したがって、共通軽鎖構築物におけるクローン1A7及びクローン2E4A3.189の使用の可能性が考慮された。しかしながら、驚くべきことに、2E4A3.189のVHは1A7のVLと生産的に対合するが、1A7のVHはLCDR3に1つのアミノ酸の違いしかないにもかかわらず、2E4A3.189のVLと生産的に対合することが判明した。更に、上記のように、ファージ由来クローン1A7は、親和性最適化の機会を提供する先行技術の抗CD28 mAb HuTN228よりもはるかに弱い結合を示した。したがって、親和性最適化ライブラリーは、まず1A7及び2E4A3.189の重鎖可変ドメインのみの置換に焦点を当てて作成された。例示的な親和性最適化1A7可変ドメインH1.1及びH1.14並びに親和性最適化2E4A3.189可変重鎖ドメインH1.3及びH1.22のアミノ酸配列を、それぞれ図19及び27に示す。
実施例1及び2で上述したように、CD28及びB7H3結合ドメインを発見するためのファージライブラリーは、同じヒト生殖系列VLを利用したが、CD28ライブラリーはLCDR3に多様性を含んでいた。クローン1A7の可変軽鎖ドメインは、抗B7H3クローン2E4A3.189の可変軽鎖ドメインとは、LCDR3のアミノ酸が1つだけ異なることが判明した。したがって、共通軽鎖構築物におけるクローン1A7及びクローン2E4A3.189の使用の可能性が考慮された。しかしながら、驚くべきことに、2E4A3.189のVHは1A7のVLと生産的に対合するが、1A7のVHはLCDR3に1つのアミノ酸の違いしかないにもかかわらず、2E4A3.189のVLと生産的に対合することが判明した。更に、上記のように、ファージ由来クローン1A7は、親和性最適化の機会を提供する先行技術の抗CD28 mAb HuTN228よりもはるかに弱い結合を示した。したがって、親和性最適化ライブラリーは、まず1A7及び2E4A3.189の重鎖可変ドメインのみの置換に焦点を当てて作成された。例示的な親和性最適化1A7可変ドメインH1.1及びH1.14並びに親和性最適化2E4A3.189可変重鎖ドメインH1.3及びH1.22のアミノ酸配列を、それぞれ図19及び27に示す。
3B(a):1+1共通軽鎖フォーマット
1つの共通軽鎖フォーマットは、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第1の単量体と、VH2-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体と、VL-CLを含む第3の単量体とを含む、1+1共通軽鎖(CLC)フォーマット(図34Cに概略的に示されている)である。VLはVH1と対になって、第1の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成し、VLはVH2と対になって、第2の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成する。1+1 CLCフォーマットにおける例示的なαB7H3×αCD28 bsAb(本明細書に記載の結合ドメインに基づく)の配列を、図37に示す。
1つの共通軽鎖フォーマットは、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第1の単量体と、VH2-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体と、VL-CLを含む第3の単量体とを含む、1+1共通軽鎖(CLC)フォーマット(図34Cに概略的に示されている)である。VLはVH1と対になって、第1の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成し、VLはVH2と対になって、第2の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成する。1+1 CLCフォーマットにおける例示的なαB7H3×αCD28 bsAb(本明細書に記載の結合ドメインに基づく)の配列を、図37に示す。
3B(b):2+1共通軽鎖フォーマット
別の共通軽鎖フォーマットは、VH1-CH1-ヒンジ-VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第1の単量体と、VH2-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体と、VL-CLを含む第3の単量体とを含む、2+1 CLCフォーマット(図34Dに概略的に示されている)である。VLは第1及び第2のVH1と対になって、第1の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成し、VLはVH2と対になって、第2の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成する。2+1 CLCフォーマットにおける例示的なαB7H3×αCD28 bsAb(本明細書に記載の結合ドメインに基づく)の配列を、図38に示す。
別の共通軽鎖フォーマットは、VH1-CH1-ヒンジ-VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第1の単量体と、VH2-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体と、VL-CLを含む第3の単量体とを含む、2+1 CLCフォーマット(図34Dに概略的に示されている)である。VLは第1及び第2のVH1と対になって、第1の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成し、VLはVH2と対になって、第2の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成する。2+1 CLCフォーマットにおける例示的なαB7H3×αCD28 bsAb(本明細書に記載の結合ドメインに基づく)の配列を、図38に示す。
3C:2+1 mAb-scFvフォーマット
Fabドメイン及びscFvを利用する更なるフォーマットは、scFv(第1の抗原結合特異性を有する)に共有結合した第1のヘテロ二量体Fcドメインに共有結合したVHドメインを含む第1の単量体と、相補的な第2のヘテロ二量体Fcドメインに共有結合したVHドメインを含む第2の単量体と、第2の抗原特異性を有するFabドメインがVHドメインで形成されるように別々にトランスフェクトされたLCとを含む、2+1 mAb-scFvフォーマット(図34Eに概略的に示される)である。2+1 mAb-scFvフォーマットにおける例示的なαB7H3×αCD28 bsAb(本明細書に記載の結合ドメインに基づく)の配列を、図39に示す。
Fabドメイン及びscFvを利用する更なるフォーマットは、scFv(第1の抗原結合特異性を有する)に共有結合した第1のヘテロ二量体Fcドメインに共有結合したVHドメインを含む第1の単量体と、相補的な第2のヘテロ二量体Fcドメインに共有結合したVHドメインを含む第2の単量体と、第2の抗原特異性を有するFabドメインがVHドメインで形成されるように別々にトランスフェクトされたLCとを含む、2+1 mAb-scFvフォーマット(図34Eに概略的に示される)である。2+1 mAb-scFvフォーマットにおける例示的なαB7H3×αCD28 bsAb(本明細書に記載の結合ドメインに基づく)の配列を、図39に示す。
実施例4:B7H3×CD28 bsAbの開発
古典的T細胞/APC相互作用では、ペプチド-MHCとのTCR反応性によって提供される第1のシグナル(シグナル1)、及びAPC上に発現するCD80/CD86によるCD28架橋によって提供される第2のシグナル(シグナル2)があり、これらが一緒になってT細胞を完全に活性化する(図40Aを参照されたい)。対照的に、CD3二重特異性での処理では、第1のシグナルのみが提供される。固形腫瘍の治療などの一部の設定では、CD28共刺激により活性化及び増殖を促進するという考えのもと、CD28二重特異性によって提供され得るCD28シグナルを組み込むことが有用な場合がある(図40Bを参照されたい)。代替的に、シグナル1がネオエピトープとの内因性TCR反応性によってすでに提供されている場合、シグナル2だけをCD28二重特異性抗体とともに提供するだけで、抗腫瘍活性を高めるのに十分となり得る。それにもかかわらず、追加されたCD28シグナルの任意のチェックポイント媒介抑制を軽減するために、CD28シグナルをチェックポイント遮断と合わせることが有用となり得る(図41)。以下のセクションは、上記に関連して本発明のB7H3×CD28二重特異性抗体を特徴付けている。このセクションでは、治療特性を最適化する目的で、B7H3×CD28 bsAbを様々なフォーマット及び様々な結合ドメインで操作した。
古典的T細胞/APC相互作用では、ペプチド-MHCとのTCR反応性によって提供される第1のシグナル(シグナル1)、及びAPC上に発現するCD80/CD86によるCD28架橋によって提供される第2のシグナル(シグナル2)があり、これらが一緒になってT細胞を完全に活性化する(図40Aを参照されたい)。対照的に、CD3二重特異性での処理では、第1のシグナルのみが提供される。固形腫瘍の治療などの一部の設定では、CD28共刺激により活性化及び増殖を促進するという考えのもと、CD28二重特異性によって提供され得るCD28シグナルを組み込むことが有用な場合がある(図40Bを参照されたい)。代替的に、シグナル1がネオエピトープとの内因性TCR反応性によってすでに提供されている場合、シグナル2だけをCD28二重特異性抗体とともに提供するだけで、抗腫瘍活性を高めるのに十分となり得る。それにもかかわらず、追加されたCD28シグナルの任意のチェックポイント媒介抑制を軽減するために、CD28シグナルをチェックポイント遮断と合わせることが有用となり得る(図41)。以下のセクションは、上記に関連して本発明のB7H3×CD28二重特異性抗体を特徴付けている。このセクションでは、治療特性を最適化する目的で、B7H3×CD28 bsAbを様々なフォーマット及び様々な結合ドメインで操作した。
4A:B7H3×CD28 bsAb活性の調整
腫瘍関連抗原への一価結合を有する1+1 CD28二重特異性フォーマットの活性を、腫瘍関連抗原への二価結合を有する2+1 CD28二重特異性フォーマットの活性と比較した。50,000個のCD3+ T細胞を、A549又はSKOV-3がん細胞とともに10:1のエフェクター:標的比でインキュベートし、指定されたB7H3×CD28抗体の用量滴定で処理し、1μg/mLプレート結合CD3抗体(OKT3)でプレート結合した。T細胞播種から1日後、MSDアッセイ(Meso Scale Discovery、Rockville、Md)を用いてサイトカインを測定した。図42に示されるデータは、両方のB7H3×CD28二重特異性抗体がT細胞によるサイトカイン放出を誘導したことを示している。特に、二価B7H3結合を有するXENP34339は、一価B7H3結合を有するXENP34717より強力にサイトカイン放出を誘導した。より高い親和性結合を有するB7H3結合ドメインを使用する場合、効力の差はそれほど顕著ではないことに留意されたい(データは示さず)。
腫瘍関連抗原への一価結合を有する1+1 CD28二重特異性フォーマットの活性を、腫瘍関連抗原への二価結合を有する2+1 CD28二重特異性フォーマットの活性と比較した。50,000個のCD3+ T細胞を、A549又はSKOV-3がん細胞とともに10:1のエフェクター:標的比でインキュベートし、指定されたB7H3×CD28抗体の用量滴定で処理し、1μg/mLプレート結合CD3抗体(OKT3)でプレート結合した。T細胞播種から1日後、MSDアッセイ(Meso Scale Discovery、Rockville、Md)を用いてサイトカインを測定した。図42に示されるデータは、両方のB7H3×CD28二重特異性抗体がT細胞によるサイトカイン放出を誘導したことを示している。特に、二価B7H3結合を有するXENP34339は、一価B7H3結合を有するXENP34717より強力にサイトカイン放出を誘導した。より高い親和性結合を有するB7H3結合ドメインを使用する場合、効力の差はそれほど顕著ではないことに留意されたい(データは示さず)。
別の実験では、活性に対するCD28結合親和性の影響を調査した。MCF7がん細胞(「シグナル1」を提供するために抗CD3 scFvを発現するようにトランスフェクトされた)を、1:1のエフェクター:標的比でエフェクター細胞とともに、また示された濃度のXENP34339、XENP35612、XENP35611、及びXENP34336とともにインキュベートした。bsAbはそれぞれ、2+1 CLCフォーマットであった。XENP34339、XENP35612、及びXENP35611はそれぞれ、2E4A3.189_H1.22_1A7_L1 B7H3結合ドメインを含み、一方XENP34336はより親和性の低い2E4A3.189_H1.3_1A7_L1 B7H3 結合ドメインを含んでいた。XENP34339、XENP35612、XENP35611、及びXENP34336はそれぞれ、77nM、270nM、610nM、及び440nMの結合親和性を有するCD28結合ドメインを含んでいた。図43に示されるデータは、CD28に対する親和性の増加がB7H3×CD28 bsAbの効力を高めることを示している。
別の一連の実験では、追加のがん細胞の存在下でのB7H3×CD28 bsAbのパネルの活性を調査した。CD3+ T細胞を、MDA-MB-2331、LnCAP、又はDU145がん細胞と、1:1のE:T比、例示的なB7H33×CD3 bsAbの一定用量、及びB7H3×CD28 bsAbの用量滴定でインキュベートした。データは、図43に示される。上記と一致して、CD28に対する親和性の増加は、B7H3×CD28 bsAbの効力を高める(XENP34398>XENP37808)。追加的に、データはまた、B7H3に対する親和性の増加が、B7H3×CD28 bsAbの効力を高めることを示している(例えば、XENP34398>XENP37810;XENP35151及びXENP35153>XENP34732;並びにXENP37807>XENP37982)。追加的に、データは、2+1 CLC フォーマットが2+1 mAb-scFvフォーマットと比較してIL-2分泌の増強においてより強力であることを示している(XENP34398>XENP37807)。
4B:CD28 bsAb薬物動態プロファイルの調整
次に、本発明の様々なB7H3×CD28 bsAbの薬物動態プロファイルを調査した。
次に、本発明の様々なB7H3×CD28 bsAbの薬物動態プロファイルを調査した。
第1の研究では、XENP34398(2+1 CLCフォーマットを有する)、XENP36781(2+1 mAb-scFvフォーマットを有する)、及びXENP34395(2+1セントラルscFvフォーマットを有する)の薬物動態を、全てカニクイザルで投与レベルの範囲で試験した。図45に示されるように、2+1 CLCフォーマットのXENP34398は、2+1 mAb-scFvフォーマットよりも有意に優れた薬物動態を有することが判明し、これは一方で試験された各用量レベル2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマットより若干良好であった。フォーマットに加えてこれらの分子間に他の違いが見られたが(例えば、B7H3結合ドメインの違い)、データは、B7H3×CD28 bsAbに関連して2+1 CLCフォーマットが有利となり得ることを示唆している。
追加のB7H3×CD28 bsAbを、実施例2に記載されるように様々なB7H3結合ドメイン(及び様々なフォーマット)を用いて操作し、薬物動態プロファイルを別のカニクイザル研究で調査した。図46A~Cは、XENP34398、XENP37808、及びXENP37810の比較を示し、これらはそれぞれ2+1 CLCフォーマットのbsAbである。XENP34398及びXENP37810は、同じCD28結合ドメイン(1A7_H1.14_L1 Fab)を有するが、異なる親和性のB7H3結合ドメインを有する(同じファージ由来クローンに基づくが、XENP34398のバリアントは、XENP37810のバリアントよりも高い親和性のB7H3結合を有していた)。XENP34398及びXENP37808は、同じB7H3結合ドメイン(2E4A3.189_H1.22_1A7_L1)を有するが、異なる親和性のCD28結合ドメインを有する(1A7に基づくが、XENP34398のバリアントは、XENP37808のバリアントよりも密接な結合親和性を有していた)。図46D~Fは、XENP34732、XENP35151、及びXENP35153の比較を示し、これらはそれぞれ1+1 Fab-scFv-FcフォーマットのbsAbであり、同じCD28結合ドメイン(1A7_H1.14_L1 scFv)を有するが異なるB7H3結合ドメイン(それぞれ、6A1、4F12、及び38E2)を有する。データは、異なるB7H3結合ドメインを有する3つの分子のそれぞれが、それ以外は同一であるにもかかわらず、異なるPKプロファイルを有していたことを示している。特に、XENP35151(実施例2Bに記載されるように、6A1及び38E2のいずれよりもはるかに密接な結合親和性を有する4F12結合ドメインを有する)は、XENP34732及びXENP35153(それぞれ6A1及び38E2結合ドメインを有する)の両方と比較して、より悪いPKプロファイルを示した。これは、少なくとも1+1フォーマットでは、B7H3に対する結合親和性が薬物動態プロファイルに影響を与える可能性があることを示唆している。図46G~Hは、XENP37807及びXENP37982の比較を示し、これらはそれぞれ2+1 mAb-scFvフォーマットのbsAbであり、同じCD28結合ドメイン(1A7_H1.14_L1 scFv)を有するが異なるB7H3結合ドメイン(それぞれ2E4及び3C4)を有する。
4C:選択されたB7H3×CD28 bsAbの概要
図47は、本発明のいくつかのB7H3×CD28 bsAbの特性の要約を示す。この要約表に示されているデータの一部は、開発の初期段階の実験データを示しているため、そのようなデータの一部は実施例の他の場所に示されている実験データと同じではない可能性があることに留意されたい。
図47は、本発明のいくつかのB7H3×CD28 bsAbの特性の要約を示す。この要約表に示されているデータの一部は、開発の初期段階の実験データを示しているため、そのようなデータの一部は実施例の他の場所に示されている実験データと同じではない可能性があることに留意されたい。
実施例5:例示的B7H3×CD28二重特異性抗体の追加の特徴付け
例示的B7H3×CD28 bsAb XENP34339(又はXtend類似体XENP34398)及びXENP35612(又はXtend類似体XENP37808)を更に特徴付けて、本発明のB7H3×CD28二重特異性抗体の有用な特性を全般的に実証した。
例示的B7H3×CD28 bsAb XENP34339(又はXtend類似体XENP34398)及びXENP35612(又はXtend類似体XENP37808)を更に特徴付けて、本発明のB7H3×CD28二重特異性抗体の有用な特性を全般的に実証した。
5A:XENP34339はCD28シグナル伝達を回復する
CTLA-4は、CD28リガンドCD80及びCD86についてCD28と競合する免疫チェックポイント受容体であり、したがって、CTLA-4の存在下では(腫瘍環境で見られるように)CD28シグナル伝達が抑制される。本発明のCD28二重特異性抗体によるCD28シグナル伝達の回復を、混合リンパ球反応において調査した。100,000個のCD3+ T細胞を、高B7H3発現を有する10,000個の樹状細胞(STEMCELL Technologies、Vancouver、Canada)とともにインキュベートし、1μg/mL CTLA-4-FcをB7H3×CD28二重特異性抗体XENP34339の用量滴定で処理した。T細胞播種から3日後、MSDアッセイを使用してサイトカインを測定した。図48に示されるデータは、XENP34339が内因性CD28シグナル伝達レベルを可能にする(すなわち、CTLA-4-Fcによる遮断が導入されない)ことを示している。
CTLA-4は、CD28リガンドCD80及びCD86についてCD28と競合する免疫チェックポイント受容体であり、したがって、CTLA-4の存在下では(腫瘍環境で見られるように)CD28シグナル伝達が抑制される。本発明のCD28二重特異性抗体によるCD28シグナル伝達の回復を、混合リンパ球反応において調査した。100,000個のCD3+ T細胞を、高B7H3発現を有する10,000個の樹状細胞(STEMCELL Technologies、Vancouver、Canada)とともにインキュベートし、1μg/mL CTLA-4-FcをB7H3×CD28二重特異性抗体XENP34339の用量滴定で処理した。T細胞播種から3日後、MSDアッセイを使用してサイトカインを測定した。図48に示されるデータは、XENP34339が内因性CD28シグナル伝達レベルを可能にする(すなわち、CTLA-4-Fcによる遮断が導入されない)ことを示している。
5B:XENP34339はPD-1遮断を生産的に組み合わせる
チェックポイント遮断(例えば、PD-1遮断)は、アゴニスト抗体によるTIL上のT細胞共刺激受容体の関与と合った有用な治療様式であり得るが、これは、固形腫瘍において幅広い実用性を提供し、CD28経路のCTLA4阻害を回避するためである。したがって、B7H3×CD28二重特異性抗体XENP34339及びXENP34389とXENP16432(ニボルマブの可変領域に基づく二価抗PD-1 mAb;配列は図17に示される)との組み合わせを調査した。10,000個のMDA-MB-231がん細胞を、100ng/mlのHLA-A2*0201拘束CMV pp65(NLVPMVATV)ペプチド(NLVペプチド)で一晩処理した。翌日、CMV+ドナーからの100,000個のCD3濃縮細胞を、XENP16432(PD-1遮断、10μg/ml)、XENP34339(2E4A3.189に基づくB7H3結合ドメイン及び1A7に基づくCD28結合ドメインを有する2+1 CLCフォーマットのB7H3×CD28、1μg/ml)、XENP34389(6A1に基づくB7H3結合ドメイン及び1A7に基づくCD28結合ドメインを有する2+1 Fab2-scFv-FcフォーマットのB7H3×CD28、1μg/ml)、及びB7H3×CD28とXENP16432との組み合わせとともに添加した。処理から1日後、MSDアッセイを用いてサイトカインについて細胞上清をアッセイした(そのデータは、2人の異なるドナーからのCD3+ T細胞を用いた実験について図50に示されている)。データは、XENP34339単独でのインキュベーションがT細胞からのサイトカイン放出を誘導し、PD-1遮断と相乗的に組み合わされてサイトカイン放出を増強することを示している。特に、XENP34389(2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット)はPD-1遮断と相乗的に結合しなかった。同様の実験において、20,000個のMCF7がん細胞を100ng/mLのNLVペプチドの存在下で播種した。24時間後、CMV+PBMCドナーから分離された200,000個のCD3+ T細胞(10:1のE:T)及び試験物質(PBS対照、XENP34339のみ、PD-1 mAb XENP16432のみ、又はXENP34339+XENP16432)を添加した。6日後、細胞をフローサイトメトリーで評価した。上記と一致して、データは、図51において、PD-1遮断により、XENP34339によるNLV-四量体陽性CD8+ T細胞の増殖が促進されることを示している。
チェックポイント遮断(例えば、PD-1遮断)は、アゴニスト抗体によるTIL上のT細胞共刺激受容体の関与と合った有用な治療様式であり得るが、これは、固形腫瘍において幅広い実用性を提供し、CD28経路のCTLA4阻害を回避するためである。したがって、B7H3×CD28二重特異性抗体XENP34339及びXENP34389とXENP16432(ニボルマブの可変領域に基づく二価抗PD-1 mAb;配列は図17に示される)との組み合わせを調査した。10,000個のMDA-MB-231がん細胞を、100ng/mlのHLA-A2*0201拘束CMV pp65(NLVPMVATV)ペプチド(NLVペプチド)で一晩処理した。翌日、CMV+ドナーからの100,000個のCD3濃縮細胞を、XENP16432(PD-1遮断、10μg/ml)、XENP34339(2E4A3.189に基づくB7H3結合ドメイン及び1A7に基づくCD28結合ドメインを有する2+1 CLCフォーマットのB7H3×CD28、1μg/ml)、XENP34389(6A1に基づくB7H3結合ドメイン及び1A7に基づくCD28結合ドメインを有する2+1 Fab2-scFv-FcフォーマットのB7H3×CD28、1μg/ml)、及びB7H3×CD28とXENP16432との組み合わせとともに添加した。処理から1日後、MSDアッセイを用いてサイトカインについて細胞上清をアッセイした(そのデータは、2人の異なるドナーからのCD3+ T細胞を用いた実験について図50に示されている)。データは、XENP34339単独でのインキュベーションがT細胞からのサイトカイン放出を誘導し、PD-1遮断と相乗的に組み合わされてサイトカイン放出を増強することを示している。特に、XENP34389(2+1 Fab2-scFv-Fcフォーマット)はPD-1遮断と相乗的に結合しなかった。同様の実験において、20,000個のMCF7がん細胞を100ng/mLのNLVペプチドの存在下で播種した。24時間後、CMV+PBMCドナーから分離された200,000個のCD3+ T細胞(10:1のE:T)及び試験物質(PBS対照、XENP34339のみ、PD-1 mAb XENP16432のみ、又はXENP34339+XENP16432)を添加した。6日後、細胞をフローサイトメトリーで評価した。上記と一致して、データは、図51において、PD-1遮断により、XENP34339によるNLV-四量体陽性CD8+ T細胞の増殖が促進されることを示している。
XENP34339で観察された違いがB7H3結合ドメインの違いによるものか、二重特異性抗体フォーマットの違いによるものかを調査するために、XENP34339及びXENP34389の構成要素結合ドメインを、オクテットを使用して生物物理学的に特徴付けた。B7H3抗原に対する2E4A3.189及び6A1の結合親和性を決定する第1の実験では、XENP34339及びXENP34389を、B7H3抗原に一価的に結合するように再フォーマット化した(それぞれXENP34717及びXENP34728として、その配列は図37及び36に示されている)。抗マウスFcバイオセンサを使用して、B7H3のマウスFc融合体(完全な細胞外V1C1-V2V2ドメイン又は個々のV1C1若しくはV2C2ドメイン)を捕捉し、複数の濃度のXENP34717又はXENP34728に浸漬した。1:1ラングミュア結合モデルを使用した結合データのグローバルフィッティングによって、動力学的分析を実行した。得られた解離定数(KD)を図52に示すが、データは、6A1結合ドメインが2E4A3.189よりもB7H3に対してわずかに密接な結合を提供したことを示している。次に、2+1 CLCフォーマット及び2+1 Fab2-scFv-FcフォーマットにおけるCD28抗原に対するCD28結合ドメインの結合親和性を調査した。抗HIS捕捉(HIS1K)バイオセンサを使用して、CD28-Fc-Hisタンパク質を捕捉し、複数の濃度のXENP34339又はXENP34389に浸漬した。1:1ラングミュア結合モデル及び定常状態モデルを使用した結合データのグローバルフィッティングによって、動力学的分析を実行した。得られた解離定数(KD)を図53に示す。データは、2+1 CLCフォーマットが、2+1 Fab2-scFc-FcフォーマットよりもCD28抗原へのはるかに密接な結合を可能にしたことを示している。まとめると、データは、XENP34339及びXENP34389の活性で観察された違いが、二重特異性抗体フォーマットの違いによるものであったことを示唆している。
5C:XENP34339は、低いエフェクター対標的比で、CD3二重特異性に対するがん細胞耐性を克服する。
文献では、前立腺がんなどの炎症を起こしていない非炎症性腫瘍(cold tumor)では、エフェクター:標的比が低いことが報告されている。したがって、1:1のエフェクター:標的での細胞死滅を、xCELLigenceリアルタイム細胞分析機器(ACEA Biosciences、San Diego、CA)を使用して評価した。2,500個のLNCaPがん細胞をまず播種した。48時間後、エフェクター:標的が1:1の新たに濃縮されたCD3+ T細胞を、示された濃度の抗体(αPSMA×αCD3 XENP31602単独又はXENP34339と組み合わせたXENP31602、XENP31602の配列を図54に示す)とともに添加した。T細胞播種後5日間、細胞死滅を記録した。図55に示されるデータは、XENP31602単独では、がん及びT細胞単独のインキュベーションと比較して、細胞死滅を増強するのが困難であったことを示しており、1:1の低いエフェクター対標的比ではCD3二重特異性に対する耐性があることを示している。
文献では、前立腺がんなどの炎症を起こしていない非炎症性腫瘍(cold tumor)では、エフェクター:標的比が低いことが報告されている。したがって、1:1のエフェクター:標的での細胞死滅を、xCELLigenceリアルタイム細胞分析機器(ACEA Biosciences、San Diego、CA)を使用して評価した。2,500個のLNCaPがん細胞をまず播種した。48時間後、エフェクター:標的が1:1の新たに濃縮されたCD3+ T細胞を、示された濃度の抗体(αPSMA×αCD3 XENP31602単独又はXENP34339と組み合わせたXENP31602、XENP31602の配列を図54に示す)とともに添加した。T細胞播種後5日間、細胞死滅を記録した。図55に示されるデータは、XENP31602単独では、がん及びT細胞単独のインキュベーションと比較して、細胞死滅を増強するのが困難であったことを示しており、1:1の低いエフェクター対標的比ではCD3二重特異性に対する耐性があることを示している。
特に、B7H3×CD28の追加は、CD3二重特異性に対するがん細胞の耐性を克服する。この実験はPSMA×CD3二重特異性抗体を利用したが、本発明のB7H3×CD28二重特異性抗体を、図56に示されるCD3結合ドメインを利用するものを含む他のCD3二重特異性抗体と組み合わせることで同様の結果を期待することは理にかなっている。
5D:XENP34339はPSMA×CD3二重特異性と結合して、B7H3及びPSMAの両方の存在下でのみ活性を高める
10,000個のがん細胞(LNCaP[PSMA+B7H3+]、22RV1[PSMA+B7H3+]、SKOV-3[PSMA-B7H3+]、又はOVCAR-8[PSMA-B7H3+])をまず播種した。翌日、新たに濃縮されたCD3+ T細胞を、エフェクター:標的比1:1で1μg/mlのXENP34339とともに例示的なCD3二重特異性(αPSMA×αCD3 XENP31602)の用量滴定と組み合わせて添加した。T細胞播種から1日後、MSDアッセイを使用してサイトカインを測定し、フローサイトメトリーを使用してCD3+ T細胞を計数したが、そのデータを図57~60に示す。データは、CD3二重特異性XENP31602単独では、1:1の低いエフェクター:標的比でT細胞活性及び増殖がほとんど又はまったく誘導されなかったことを示している。しかしながら、PSMA+B7H3+であるLNCaP及び22Rv1の存在下では、αB7H3×αCD28 XENP34339の添加は、αPSMA×αCD3 XENP31602の活性を増強する。しかしながら、特に、PSMA-B7H3+であるSKOV-2及びOVCAR-8の存在下では、XENP343398の添加は活性を増強しない。CD28二重特異性抗体に関連する腫瘍抗原及びCD3二重特異性抗体に関連する腫瘍抗原の両方に対するこの要件は、複数の腫瘍関連抗原を共発現する可能性が高い腫瘍細胞に対する免疫応答を選択的に標的とするために有用なANDゲートを形成する。この相乗的ANDゲートはまた、腫瘍細胞が低密度ではあるが複数の腫瘍関連抗原を発現し得る、より低い標的密度を有する腫瘍に対する活性を可能にし得る。
10,000個のがん細胞(LNCaP[PSMA+B7H3+]、22RV1[PSMA+B7H3+]、SKOV-3[PSMA-B7H3+]、又はOVCAR-8[PSMA-B7H3+])をまず播種した。翌日、新たに濃縮されたCD3+ T細胞を、エフェクター:標的比1:1で1μg/mlのXENP34339とともに例示的なCD3二重特異性(αPSMA×αCD3 XENP31602)の用量滴定と組み合わせて添加した。T細胞播種から1日後、MSDアッセイを使用してサイトカインを測定し、フローサイトメトリーを使用してCD3+ T細胞を計数したが、そのデータを図57~60に示す。データは、CD3二重特異性XENP31602単独では、1:1の低いエフェクター:標的比でT細胞活性及び増殖がほとんど又はまったく誘導されなかったことを示している。しかしながら、PSMA+B7H3+であるLNCaP及び22Rv1の存在下では、αB7H3×αCD28 XENP34339の添加は、αPSMA×αCD3 XENP31602の活性を増強する。しかしながら、特に、PSMA-B7H3+であるSKOV-2及びOVCAR-8の存在下では、XENP343398の添加は活性を増強しない。CD28二重特異性抗体に関連する腫瘍抗原及びCD3二重特異性抗体に関連する腫瘍抗原の両方に対するこの要件は、複数の腫瘍関連抗原を共発現する可能性が高い腫瘍細胞に対する免疫応答を選択的に標的とするために有用なANDゲートを形成する。この相乗的ANDゲートはまた、腫瘍細胞が低密度ではあるが複数の腫瘍関連抗原を発現し得る、より低い標的密度を有する腫瘍に対する活性を可能にし得る。
5E:XENP34339又はXENP35612をCD3二重特異性抗体と組み合わせることで、インビボでの抗腫瘍活性が高まる
インビボ研究において、-23日目に、NSGマウスの右脇腹に、2×106個のpp-65発現MDA-MB-231細胞を皮内生着させた。-1日目に、マウスに5×106個のヒトPBMCを腹腔内生着させた。次いでマウスを、0、8、14、21、及び28日目に、第1の例示的なB7H3×CD3二重特異性抗体(CD3bsAb1)(0.5mg/kg)のみ、第2の例示的なB7H3×CD3二重特異性抗体(CD3bsAb2)(0.5mg/kg)単独、又はXENP34339(5.0mg/kg)とCD3bsAb1若しくはCD3bsAb2との組み合わせで処理した。腫瘍体積はキャリパー測定によりモニタリングし、そのデータを図61~62に示す(初回投与後の日数)。週に1回採血してリンパ球の増殖を調査したが、そのデータを14日目のCD45+細胞について図63に示す。データは、CD3二重特異性にCD28共刺激を追加すると、インビボでの抗腫瘍活性が増加することを示している。特に、CD28共刺激は、リンパ球の増殖を最大600倍増加させることができる。
インビボ研究において、-23日目に、NSGマウスの右脇腹に、2×106個のpp-65発現MDA-MB-231細胞を皮内生着させた。-1日目に、マウスに5×106個のヒトPBMCを腹腔内生着させた。次いでマウスを、0、8、14、21、及び28日目に、第1の例示的なB7H3×CD3二重特異性抗体(CD3bsAb1)(0.5mg/kg)のみ、第2の例示的なB7H3×CD3二重特異性抗体(CD3bsAb2)(0.5mg/kg)単独、又はXENP34339(5.0mg/kg)とCD3bsAb1若しくはCD3bsAb2との組み合わせで処理した。腫瘍体積はキャリパー測定によりモニタリングし、そのデータを図61~62に示す(初回投与後の日数)。週に1回採血してリンパ球の増殖を調査したが、そのデータを14日目のCD45+細胞について図63に示す。データは、CD3二重特異性にCD28共刺激を追加すると、インビボでの抗腫瘍活性が増加することを示している。特に、CD28共刺激は、リンパ球の増殖を最大600倍増加させることができる。
別のインビボ研究では、MHC I/II-DKO(NSG-DKO)であり、したがってGVHD及び別のCD3二重特異性(PSMA×CD3)に耐性のあるNSGマウスを使用した。-7日目に、NSG-DKOマウスにそれぞれ5×106個の22RV1腫瘍細胞を接種した。0日目に、マウスに無作為ドナーからの5×106個のヒトPBMCを生着させた。次いで、マウスを0、7、14、及び21日目に低濃度又は高濃度用量の例示的なPSMA×CD3二重特異性抗体XENP32220(図54に示す配列)単独又はXENP34339と組み合わせて腹腔内処置した。血液及び血清を毎週採取した。CD3及びCD28 bsAbの両方による処理は、CD3 bsAb単独での処理と比較して、T細胞の増殖(図64A~Cのリンパ球数及び図64D~EのKi67増殖マーカーを発現する特異的T細胞によって示されるように)並びにT細胞活性化(図65におけるCD4+及びCD8+ T細胞でのCD25及びPD1発現によって示されるように)を増強した。
別の研究において、宿主に対して反応性のない機能的なヒト免疫系を発達させるために、ジャクソン研究所(Bar Harbor,Maine)から入手したヒトCD34+造血幹細胞を移植したNSGマウスであるCD34+Hu-NSGを使用した。-15日目に、マウスに4×106個のpp65-MDA-MB231細胞を皮内接種した。次いで、0、7、及び14日目に、B7H3×CD3 bsAb単独、XENP35612単独、B7H3×CD3 bsAbとXENP35612との組み合わせ、又はB7H3×CD3 bsAbとXENP34339との組み合わせでマウスを腹腔内処理した。腫瘍体積はキャリパー測定によりモニタリングし、そのデータを図66~67に示す(初回投与後の日数)。23日目に腫瘍を採取して、腫瘍浸潤リンパ球の増殖を調査したが、そのデータを図68に示す。データは、XENP35612がCD3 bsAbとよく結合して腫瘍成長を抑制することを示している。特に、B7H3×CD28とB7H3×CD3との組み合わせは、B7H3×CD3単独での処理と比較して、初期の時点(すなわち6日目及び9日目)での抗腫瘍活性の大幅な増強を可能にする。追加的に、単剤としてのXENP35612は、腫瘍浸潤リンパ球の増殖を有意に拡大し、XENP35612とB7H3×CD3 bsAbとの組み合わせは、B7H3×CD3 bsAb単独と比較して、腫瘍浸潤リンパ球の増殖を有意に増強する。
5F:XENP34339及びXENP37808はスーパーアゴニストではない
XENP34339及びXENP37808の潜在的なスーパーアゴニスト特性を、Stebbingsプロトコル(Stebbings R. et al.2007)に従って風乾によって評価した。試験物質の風乾は、SpeedVac(商標)で2時間、室温で乾燥することにより行った。ヒトPBMCを10μgの風乾XENP34339又はXENP37808で24時間処理し、活性をスーパーアゴニストTGN1412(XENP29154、その配列を図69に示す)又はPBS対照と比較した。風乾TGN1412は、非刺激ヒトPBMCからのIFNγ、IL-6、IL-2、及びTNFサイトカイン分泌を促進した。比較すると、風乾XENP34339及びXENP37808で処理されたPBMCのサイトカインレベルは、PBSの陰性対照と同様のままであった(データは図70~71に示される)。
XENP34339及びXENP37808の潜在的なスーパーアゴニスト特性を、Stebbingsプロトコル(Stebbings R. et al.2007)に従って風乾によって評価した。試験物質の風乾は、SpeedVac(商標)で2時間、室温で乾燥することにより行った。ヒトPBMCを10μgの風乾XENP34339又はXENP37808で24時間処理し、活性をスーパーアゴニストTGN1412(XENP29154、その配列を図69に示す)又はPBS対照と比較した。風乾TGN1412は、非刺激ヒトPBMCからのIFNγ、IL-6、IL-2、及びTNFサイトカイン分泌を促進した。比較すると、風乾XENP34339及びXENP37808で処理されたPBMCのサイトカインレベルは、PBSの陰性対照と同様のままであった(データは図70~71に示される)。
5G:XENP37808は、ヒト及びカニクイザルPBMCの両方のCD3活性を増強する
カニクイザルが毒物学研究の優れたモデルになるかどうかを調査するために、抗CD3 scFvでトランスフェクトしたHEK細胞の存在下で、11人のユニークなヒトドナー又は12人のユニークなカニクイザルドナーからのPBMCにXENP37808を投与する実験を10:1のE:T 比で行った(「シグナル1」を提供するため)。1日後又は5日後、MSDアッセイを使用してIL-2放出を測定した。図72に示される結果(1人のヒトドナー及び1匹のカニクイザルドナーからのデータ)は、カニクイザルが比較的関連性のある種であることを立証している。追加的に、抗CD3 scFvでトランスフェクトされたがB7H3発現がノックアウトされたHEK細胞もまた試験した。実施例5Dのデータと一致して、これらの結果は、XENP37808がB7H3の存在下でのみヒトPBMCのCD3活性を増強することを示している。
カニクイザルが毒物学研究の優れたモデルになるかどうかを調査するために、抗CD3 scFvでトランスフェクトしたHEK細胞の存在下で、11人のユニークなヒトドナー又は12人のユニークなカニクイザルドナーからのPBMCにXENP37808を投与する実験を10:1のE:T 比で行った(「シグナル1」を提供するため)。1日後又は5日後、MSDアッセイを使用してIL-2放出を測定した。図72に示される結果(1人のヒトドナー及び1匹のカニクイザルドナーからのデータ)は、カニクイザルが比較的関連性のある種であることを立証している。追加的に、抗CD3 scFvでトランスフェクトされたがB7H3発現がノックアウトされたHEK細胞もまた試験した。実施例5Dのデータと一致して、これらの結果は、XENP37808がB7H3の存在下でのみヒトPBMCのCD3活性を増強することを示している。
5H:XENP34398及びXENP37808の追加のインビトロ比較
第1の一連の実験では、1,250個の22RV1-NLR(約170KのB7H3抗原のMESF値を有する)又はDU145-NLRがん細胞(約270KのB7H3抗原を有する)をウェルごとに播種した。48時間後、示された量のB7H3×CD3及び1ug/mLのB7H3×CD28とともにCD3+ T細胞を1:1のエフェクター対標的比で添加し、細胞数をIncucyteで記録した。図73に示される結果は、B7H3×CD3二重特異性と組み合わせて、XENP34398及びXENP37808の両方が非常に類似したレベルのRTCCを誘導することを示している。
第1の一連の実験では、1,250個の22RV1-NLR(約170KのB7H3抗原のMESF値を有する)又はDU145-NLRがん細胞(約270KのB7H3抗原を有する)をウェルごとに播種した。48時間後、示された量のB7H3×CD3及び1ug/mLのB7H3×CD28とともにCD3+ T細胞を1:1のエフェクター対標的比で添加し、細胞数をIncucyteで記録した。図73に示される結果は、B7H3×CD3二重特異性と組み合わせて、XENP34398及びXENP37808の両方が非常に類似したレベルのRTCCを誘導することを示している。
追加のセットの実験において、ウェル当たり10,000個の標的がん細胞(約20KのB7H3表面密度を有するOVCAR8、約170KのB7H3抗原密度を有する22RV1-NLR、又は約270KのB7H3抗原密度を有するDU145-NLR)を播種した。翌日、1:1のエフェクター対標的比のT細胞を、1μg/mLの例示的B7H3×CD3 bsAbの存在下で、示された量のB7H3×CD28 mAbとともに添加した。播種の24時間後に、IL-2を評価した。図74に示される結果は、様々な密度の細胞株におけるXENP34398及びXENP37808のIL-2誘導によって測定される、非常に類似したレベルの機能を示している。
まとめると、これらのデータは、XENP37808及びXENP34398の両方が非常に類似した活性を示し、同等に有効であることを示している。しかしながら、臨床現場では、それぞれに独自の利点がある可能性がある。
Claims (91)
- ヘテロ二量体抗体であって、
a)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-リンカー-VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第1の単量体であって、VH1がそれぞれ第1の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が第1のFcドメインである、第1の単量体と、
b)N末端からC末端に向かって、VH2-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、VH2が第2の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が第2のFcドメインである、第2の単量体と、
c)N末端からC末端に向かって、VL-CLを含む共通軽鎖であって、VLが可変軽鎖ドメインであり、CLが定常軽鎖ドメインである、共通軽鎖と、を含み、
前記共通軽鎖は、前記第1の単量体中の各VH1-CH1及び前記第2の単量体中のVH2-CH1と別々に対を形成し、
前記VH1及び前記VLは、一緒に第1の抗原結合ドメイン(ABD)を形成し、前記VH2及び前記VLは、一緒に第2のABDを形成し、前記第1及び第2のABDのうちの一方はヒトCD28に結合し、前記第1及び第2のABDのうちの他方はヒトB7H3に結合する、ヘテロ二量体抗体。 - 前記第1のABDがヒトCD28に結合し、前記第2のABDがヒトB7H3に結合する、請求項A1に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1のABDがヒトB7H3に結合し、前記第2のABDがヒトCD28に結合する、請求項A1に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記VH1ドメインのアミノ酸配列が、配列番号518、配列番号928、配列番号497、配列番号498、配列番号499、配列番号500、配列番号501、配列番号502、配列番号503、配列番号504、配列番号505、配列番号506、配列番号507、配列番号508、配列番号509、配列番号510、配列番号511、配列番号512、配列番号513、配列番号514、配列番号515、配列番号516、配列番号517、配列番号519、配列番号520、配列番号521、配列番号522、配列番号523、配列番号524、配列番号525、配列番号526、配列番号527、配列番号528、配列番号529、配列番号530、配列番号531、配列番号532、配列番号533、配列番号534、配列番号535、配列番号536、配列番号537、配列番号538、配列番号539、配列番号540、配列番号541、配列番号542、配列番号543、配列番号544、配列番号545、配列番号546、配列番号547、配列番号548、配列番号549、配列番号550、配列番号551、配列番号552、配列番号553、配列番号554、配列番号555、配列番号556、配列番号557、配列番号558、配列番号559、配列番号560、配列番号561、配列番号562、配列番号563、配列番号564、配列番号565、配列番号566、配列番号567、配列番号568、配列番号569、配列番号570、配列番号571、配列番号572、配列番号573、配列番号574、配列番号575、配列番号576、配列番号577、配列番号578、配列番号579、配列番号580、配列番号581、配列番号582、配列番号583、及び配列番号584からなる群から選択され、前記VLドメインのアミノ酸配列が、配列番号874である、請求項3に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記VH2ドメインのアミノ酸配列が、配列番号585、配列番号870、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、及び配列番号651からなる群から選択される、請求項1~4のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1のFcドメイン及び第2のFcドメインがそれぞれバリアントFcドメインである、請求項1~5のいずれか一項に記載のヘテロ二量化抗体。
- 前記第1及び第2のFcドメインが、以下のヘテロ二量体化バリアント:S364K/E357Q:L368D/K370S;S364K:L368D/K370S;S364K:L368E/K370S;D401K:T411E/K360E/Q362E;及びT366W:T366S/L368A/Y407Vから選択されるヘテロ二量体スキューバリアントのセットを含み、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項6に記載のテロ二量体抗体。
- 前記第1及び第2のFcドメインが、ヘテロ二量化スキューバリアントS364K/E357Q:L368D/K370Sを含む、請求項7に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1及び第2のFcドメインが、それぞれ1つ以上の除去バリアントを含む、請求項1~7のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記1つ以上の除去バリアントが、E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kであり、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項9に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1又は第2の単量体のうちの1つが、pIバリアントを更に含む、請求項1~10のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3が、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項11に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3が、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、
前記第1のFcドメインが、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、
番号付けが、EU番号付けに従う、請求項1~12のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。 - 前記第1及び第2のバリアントFcドメインが、それぞれアミノ酸バリアント428L/434Sを含む、請求項1~13のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第2の単量体が、配列番号1019のアミノ酸配列を含み、前記第1の単量体が、配列番号1020のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号1021のアミノ酸配列を有する、請求項1~14のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- ヘテロ二量体抗体であって、
a)N末端からC末端まで、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第1の単量体であって、VH1が第1の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が第1のFcドメインである、第1の単量体と、
b)N末端からC末端に向かって、VH2-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、VH2が第2の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が第2のFcドメインである、第2の単量体と、
c)N末端からC末端に向かって、VL-CLを含む共通軽鎖であって、VLが可変軽鎖ドメインであり、CLが定常軽鎖ドメインである、共通軽鎖と、を含み、
前記第1のVHドメイン及び前記VLドメインは、一緒に第1のABDを形成し、前記第2のVHドメイン及び前記VLドメインは、一緒に第2のABDを形成し、前記第1及び第2のABDのうちの一方は、ヒトCD28に結合し、前記第1及び第2のABDのうちの他方は、ヒトB7H3に結合する、ヘテロ二量体抗体。 - 前記VH1ドメインのアミノ酸配列が、配列番号518、配列番号928、配列番号497、配列番号498、配列番号499、配列番号500、配列番号501、配列番号502、配列番号503、配列番号504、配列番号505、配列番号506、配列番号507、配列番号508、配列番号509、配列番号510、配列番号511、配列番号512、配列番号513、配列番号514、配列番号515、配列番号516、配列番号517、配列番号519、配列番号520、配列番号521、配列番号522、配列番号523、配列番号524、配列番号525、配列番号526、配列番号527、配列番号528、配列番号529、配列番号530、配列番号531、配列番号532、配列番号533、配列番号534、配列番号535、配列番号536、配列番号537、配列番号538、配列番号539、配列番号540、配列番号541、配列番号542、配列番号543、配列番号544、配列番号545、配列番号546、配列番号547、配列番号548、配列番号549、配列番号550、配列番号551、配列番号552、配列番号553、配列番号554、配列番号555、配列番号556、配列番号557、配列番号558、配列番号559、配列番号560、配列番号561、配列番号562、配列番号563、配列番号564、配列番号565、配列番号566、配列番号567、配列番号568、配列番号569、配列番号570、配列番号571、配列番号572、配列番号573、配列番号574、配列番号575、配列番号576、配列番号577、配列番号578、配列番号579、配列番号580、配列番号581、配列番号582、配列番号583、及び配列番号584からなる群から選択され、前記VLドメインのアミノ酸配列が、配列番号874である、請求項15に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記VH2ドメインのアミノ酸配列が、配列番号585、配列番号870、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、及び配列番号651からなる群から選択される、請求項16又は17に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1のFcドメイン及び第2のFcドメインが、それぞれバリアントFcドメインである、請求項16~18のいずれか一項に記載のヘテロ二量化抗体。
- 前記第1及び第2のFcドメインが、以下のヘテロ二量体化バリアント:S364K/E357Q:L368D/K370S;S364K:L368D/K370S;S364K:L368E/K370S;D401K:T411E/K360E/Q362E;及びT366W:T366S/L368A/Y407Vから選択されるヘテロ二量体スキューバリアントのセットを含み、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項19に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1及び第2のFcドメインが、ヘテロ二量化スキューバリアントS364K/E357Q:L368D/K370Sを含む、請求項20に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1及び第2のFcドメインが、それぞれ1つ以上の除去バリアントを含む、請求項16~21のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記1つ以上の除去バリアントが、E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kであり、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項22に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1又は第2の単量体のうちの1つが、pIバリアントを更に含む、請求項16~23のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3が、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項24に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3が、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、
前記第2のFcドメインが、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、
番号付けが、EU番号付けに従う、請求項16~25のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。 - 前記第1及び第2のバリアントFcドメインが、それぞれアミノ酸バリアント428L/434Sを含む、請求項16~28のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- ヘテロ二量体抗体であって、
a)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-第1のドメインリンカー-scFv-第2のドメインリンカー-CH2-CH3を含む、第1の単量体であって、
VH1が、第1の可変重鎖ドメインであり、scFvが、抗CD28 scFvであり、CH2-CH3が、第1のFcドメインである、第1の単量体と、
b)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、CH2-CH3が、第2のFcドメインである、第2の単量体と、
c)N末端からC末端に向かって、VL1-CLを含む軽鎖であって、VL1が可変軽鎖ドメインであり、CLが定常軽鎖ドメインである、軽鎖と、を含み、
前記VH1ドメイン及び前記第1のVL1ドメインのそれぞれは、一緒に第1の抗原結合ドメイン(ABD)を形成し、前記scFvは第2のVHドメイン(VH2)、scFvリンカー、及び第2のVLドメイン(VL2)を含み、前記VH2及び前記VL2は、第2のABDを形成し、前記第1及び第2のABDのうちの一方はヒトCD28に結合し、前記第1及び第2のABDのうちの他方は腫瘍標的抗原(TTA)に結合する、ヘテロ二量体抗体。 - 前記第1のABDがヒトCD28に結合し、前記第2のABDがTTAに結合する、請求項28に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1のABDがTTAに結合し、前記第2のABDがヒトCD28に結合する、請求項28に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記scFvが、N末端からC末端に向かって、VL2-scFvリンカー-VH2を含む、請求項28~30のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記scFvが、N末端からC末端に向かって、VH2-scFvリンカー-VL2を含む、請求項28~30のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記VH2のアミノ酸配列が、配列番号870、配列番号585、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、及び配列番号651からなる群から選択され、前記VL2のアミノ酸配列は、配列番号874、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号660、配列番号661、配列番号662、配列番号663、配列番号664、配列番号665、配列番号666、配列番号667、配列番号668、配列番号669、配列番号670、配列番号671、配列番号672、配列番号NO:673、配列番号674、配列番号675、配列番号676、配列番号677、配列番号678、配列番号679、配列番号680、配列番号681、配列番号682、配列番号683、配列番号684、配列番号685、配列番号686、配列番号687、配列番号688、配列番号689、配列番号690、配列番号691、配列番号692、配列番号693、配列番号694、配列番号695、配列番号696、配列番号697、配列番号698、配列番号699、配列番号700、配列番号701、配列番号702、配列番号703、配列番号704、配列番号705、配列番号706、配列番号707、配列番号708、配列番号709、配列番号710、配列番号711、配列番号712、配列番号713、配列番号714、配列番号715、配列番号716、配列番号717、配列番号718、配列番号719、配列番号720、配列番号721、配列番号722、配列番号723、配列番号724、配列番号725、配列番号726、配列番号727、配列番号728、配列番号729、配列番号730、配列番号731、配列番号732、配列番号733、配列番号734、配列番号735、配列番号736、配列番号737、配列番号738、配列番号739、配列番号740、配列番号741、配列番号742、配列番号743、配列番号744、配列番号745、配列番号746、配列番号747、配列番号748、配列番号749、配列番号750、配列番号751、配列番号752、配列番号753、配列番号754、配列番号755、配列番号1200及び配列番号756からなる群から選択される、請求項28~32のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記TTAが、ヒトB7H3である、請求項28~33のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1のFcドメイン及び第2のFcドメインが、それぞれバリアントFcドメインである、請求項28~34のいずれか一項に記載のヘテロ二量化抗体。
- 前記第1及び第2のFcドメインが、以下のヘテロ二量体化バリアント:S364K/E357Q:L368D/K370S;S364K:L368D/K370S;S364K:L368E/K370S;D401K:T411E/K360E/Q362E;及びT366W:T366S/L368A/Y407Vから選択されるヘテロ二量体スキューバリアントのセットを含み、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項35に記載のテロ二量体抗体。
- 前記第1及び第2のFcドメインが、ヘテロ二量化スキューバリアントS364K/E357Q:L368D/K370Sを含む、請求項36に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1及び第2のFcドメインが、それぞれ1つ以上の除去バリアントを含む、請求項28~37のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記1つ以上の除去バリアントが、E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kであり、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項38に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1又は第2の単量体のうちの1つが、pIバリアントを更に含む、請求項28~39のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3が、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項40に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3が、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、
前記第1のFcドメインが、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、
番号付けが、EU番号付けに従う、請求項28~41のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。 - 前記第1及び第2のバリアントFcドメインが、それぞれアミノ酸バリアント428L/434Sを含む、請求項28~42のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- ヘテロ二量体抗体であって、
a)第1の単量体であって、
i)第1の可変重鎖ドメイン、scFvリンカー、及び第1の可変軽鎖ドメインを含むscFvと、
ii)第1のFcドメインと、を含み、前記scFvが、ドメインリンカーを使用して前記第1のFcドメインのN末端に共有結合している、第1の単量体と、
b)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、VHが第1の可変重鎖ドメインであり、CH2-CH3が第2のFcドメインである、第2の単量体と、
c)N末端からC末端に向かって、VL1-CLを含む軽鎖であって、VL1が可変軽鎖ドメインであり、CLが定常軽鎖ドメインである、軽鎖と、を含み、
前記VH1及び前記VL1は、一緒に第1のABDを形成し、前記scFvは第2のVHドメイン(VH2)、scFvリンカー、及び第2のVLドメイン(VL2)を含み、前記VH2及びVL2は、一緒に第2のABDを形成し、前記第1のABD及び第2のABDのうちの一方はCD28に結合し、前記第1のABD及び第2のABDのうちの他方はTTAに結合する、ヘテロ二量体抗体。 - 前記scFvが、N末端からC末端に向かって、VL2-scFvリンカー-VH2を含む、請求項44に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記scFvが、N末端からC末端に向かって、VH2-scFvリンカー-VL2を含む、請求項44に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第2のABDが、ヒトCD28に結合し、前記VH2のアミノ酸配列が、配列番号870、配列番号585、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、及び配列番号651からなる群から選択され、前記VL2のアミノ酸配列は、配列番号874、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号660、配列番号661、配列番号662、配列番号663、配列番号664、配列番号665、配列番号666、配列番号667、配列番号668、配列番号669、配列番号670、配列番号671、配列番号672、配列番号NO:673、配列番号674、配列番号675、配列番号676、配列番号677、配列番号678、配列番号679、配列番号680、配列番号681、配列番号682、配列番号683、配列番号684、配列番号685、配列番号686、配列番号687、配列番号688、配列番号689、配列番号690、配列番号691、配列番号692、配列番号693、配列番号694、配列番号695、配列番号696、配列番号697、配列番号698、配列番号699、配列番号700、配列番号701、配列番号702、配列番号703、配列番号704、配列番号705、配列番号706、配列番号707、配列番号708、配列番号709、配列番号710、配列番号711、配列番号712、配列番号713、配列番号714、配列番号715、配列番号716、配列番号717、配列番号718、配列番号719、配列番号720、配列番号721、配列番号722、配列番号723、配列番号724、配列番号725、配列番号726、配列番号727、配列番号728、配列番号729、配列番号730、配列番号731、配列番号732、配列番号733、配列番号734、配列番号735、配列番号736、配列番号737、配列番号738、配列番号739、配列番号740、配列番号741、配列番号742、配列番号743、配列番号744、配列番号745、配列番号746、配列番号747、配列番号748、配列番号749、配列番号750、配列番号751、配列番号752、配列番号753、配列番号754、配列番号755、配列番号1200及び配列番号756からなる群から選択される、請求項44~46のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1のFcドメイン及び第2のFcドメインが、それぞれバリアントFcドメインである、請求項44~47のいずれか一項に記載のヘテロ二量化抗体。
- 前記第1及び第2のFcドメインが、以下のヘテロ二量体化バリアント:S364K/E357Q:L368D/K370S;S364K:L368D/K370S;S364K:L368E/K370S;D401K:T411E/K360E/Q362E;及びT366W:T366S/L368A/Y407Vから選択されるヘテロ二量体スキューバリアントのセットを含み、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項48に記載のテロ二量体抗体。
- 前記第1及び第2のFcドメインが、ヘテロ二量化スキューバリアントS364K/E357Q:L368D/K370Sを含む、請求項49に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1及び第2のFcドメインが、それぞれ1つ以上の除去バリアントを含む、請求項44~50のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記1つ以上の除去バリアントが、E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kであり、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項51に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1又は第2の単量体のうちの1つが、pIバリアントを更に含む、請求項44~52のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3が、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項53に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3が、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、
前記第1のFcドメインが、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、
番号付けが、EU番号付けに従う、請求項44~54のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。 - 前記第1及び第2のバリアントFcドメインが、それぞれアミノ酸バリアント428L/434Sを含む、請求項44~55のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- ヘテロ二量体抗体であって、
a)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3-ドメインリンカー-scFvを含む第1の単量体であって、
VH1が、第1の可変重鎖ドメインであり、scFvが、抗CD28 scFvであり、CH2-CH3が、第1のFcドメインである、第1の単量体と、
b)N末端からC末端に向かって、VH1-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む第2の単量体であって、CH2-CH3が、第2のFcドメインである、第2の単量体と、
c)N末端からC末端に向かって、VL1-CLを含む軽鎖であって、VL1が可変軽鎖ドメインであり、CLが定常軽鎖ドメインである、軽鎖と、を含み、
前記VH1ドメイン及び前記第1のVL1ドメインのそれぞれは、一緒に第1の抗原結合ドメイン(ABD)を形成し、前記scFvは第2のVHドメイン(VH2)、scFvリンカー、及び第2のVLドメイン(VL2)を含み、前記VH2及び前記VL2は、一緒に第2のABDを形成し、前記第1及び第2のABDのうちの一方はヒトCD28に結合し、前記第1及び第2のABDのうちの他方は腫瘍標的抗原(TTA)に結合する、ヘテロ二量体抗体。 - 前記第1のABDがヒトCD28に結合し、前記第2のABDがTTAに結合する、請求項57に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1のABDがTTAに結合し、前記第2のABDがヒトCD28に結合する、請求項57に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記scFvが、N末端からC末端に向かって、VL2-scFvリンカー-VH2を含む、請求項57~59のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記scFvが、N末端からC末端に向かって、VH2-scFvリンカー-VL2を含む、請求項57~59のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記VH2のアミノ酸配列が、配列番号870、配列番号585、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、及び配列番号651からなる群から選択され、前記VL2のアミノ酸配列は、配列番号874、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号660、配列番号661、配列番号662、配列番号663、配列番号664、配列番号665、配列番号666、配列番号667、配列番号668、配列番号669、配列番号670、配列番号671、配列番号672、配列番号NO:673、配列番号674、配列番号675、配列番号676、配列番号677、配列番号678、配列番号679、配列番号680、配列番号681、配列番号682、配列番号683、配列番号684、配列番号685、配列番号686、配列番号687、配列番号688、配列番号689、配列番号690、配列番号691、配列番号692、配列番号693、配列番号694、配列番号695、配列番号696、配列番号697、配列番号698、配列番号699、配列番号700、配列番号701、配列番号702、配列番号703、配列番号704、配列番号705、配列番号706、配列番号707、配列番号708、配列番号709、配列番号710、配列番号711、配列番号712、配列番号713、配列番号714、配列番号715、配列番号716、配列番号717、配列番号718、配列番号719、配列番号720、配列番号721、配列番号722、配列番号723、配列番号724、配列番号725、配列番号726、配列番号727、配列番号728、配列番号729、配列番号730、配列番号731、配列番号732、配列番号733、配列番号734、配列番号735、配列番号736、配列番号737、配列番号738、配列番号739、配列番号740、配列番号741、配列番号742、配列番号743、配列番号744、配列番号745、配列番号746、配列番号747、配列番号748、配列番号749、配列番号750、配列番号751、配列番号752、配列番号753、配列番号754、配列番号755、配列番号1200及び配列番号756からなる群から選択される、請求項57~61のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記TTAが、ヒトB7H3である、請求項57~62のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1のFcドメイン及び第2のFcドメインが、それぞれバリアントFcドメインである、請求項57~63のいずれか一項に記載のヘテロ二量化抗体。
- 前記第1及び第2のFcドメインが、以下のヘテロ二量体化バリアント:S364K/E357Q:L368D/K370S;S364K:L368D/K370S;S364K:L368E/K370S;D401K:T411E/K360E/Q362E;及びT366W:T366S/L368A/Y407Vから選択されるヘテロ二量体スキューバリアントのセットを含み、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項64に記載のテロ二量体抗体。
- 前記第1及び第2のFcドメインが、ヘテロ二量化スキューバリアントS364K/E357Q:L368D/K370Sを含む、請求項65に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1及び第2のFcドメインが、それぞれ1つ以上の除去バリアントを含む、請求項57~66のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記1つ以上の除去バリアントが、E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kであり、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項67に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第1又は第2の単量体のうちの1つが、pIバリアントを更に含む、請求項57~68のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3が、pIバリアントN208D/Q295E/N384D/Q418E/N421Dを含み、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項69に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第2の単量体のCH1-ヒンジ-CH2-CH3が、アミノ酸バリアントL368D/K370S/N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、
前記第1のFcドメインが、アミノ酸バリアントS364K/E357Q/E233P/L234V/L235A/G236del/S267Kを含み、
番号付けが、EU番号付けに従う、請求項57~70のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。 - 前記第1及び第2のバリアントFcドメインが、それぞれアミノ酸バリアント428L/434Sを含む、請求項57~71のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- a)請求項1~72のいずれか一項に記載の第1の単量体をコードする第1の核酸と、
b)請求項1~72のいずれか一項に記載の第2の単量体をコードする第2の核酸と、
c)請求項1~72のいずれか一項に記載の軽鎖をコードするa第3の核酸とをそれぞれ含む、核酸組成物。 - a)請求項73に記載の第1の核酸を含む第1の発現ベクターと、
b)請求項73に記載の第2の核酸を含む第2の発現ベクターと、
c)請求項73に記載の第3の核酸を含む第3の発現ベクターとをそれぞれ含む、発現ベクター組成物。 - 請求項74に記載の発現ベクター組成物を含む、宿主細胞。
- 請求項1~72のいずれか一項に記載の二量体抗体を作製する方法であって、前記二量体抗体が発現される条件下で請求項75に記載の宿主細胞を培養することと、前記二量体抗体を回収することと、を含む、方法。
- がんの治療を必要とする患者のがんを治療する方法であって、請求項1~72のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体を前記患者に投与することを含む、方法。
- がんの治療を必要とする患者においてがんを治療する方法であって、
a)前記TTAがヒトB7H3である、請求項1~72のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体と、
b)CD3及びB7H3に結合する二重特異性抗体とを前記患者に投与することを含む、方法。 - がんの治療を必要とする患者においてがんを治療する方法であって、
a)前記TTAがヒトB7H3である、請求項1~72のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体と、
b)抗PD-1抗体及び抗PD-L1抗体からなる群から選択されるチェックポイント阻害剤とを前記患者に投与することを含む、方法。 - a)配列番号870、配列番号585、配列番号586、配列番号587、配列番号588、配列番号589、配列番号590、配列番号591、配列番号592、配列番号593、配列番号594、配列番号595、配列番号596、配列番号597、配列番号598、配列番号599、配列番号600、配列番号601、配列番号602、配列番号603、配列番号604、配列番号605、配列番号606、配列番号607、配列番号608、配列番号609、配列番号610、配列番号611、配列番号612、配列番号613、配列番号614、配列番号615、配列番号616、配列番号617、配列番号618、配列番号619、配列番号620、配列番号621、配列番号622、配列番号623、配列番号624、配列番号1198、配列番号1199、配列番号625、配列番号626、配列番号627、配列番号628、配列番号629、配列番号630、配列番号631、配列番号632、配列番号633、配列番号634、配列番号635、配列番号636、配列番号637、配列番号638、配列番号639、配列番号640、配列番号641、配列番号642、配列番号643、配列番号644、配列番号645、配列番号646、配列番号647、配列番号648、配列番号649、配列番号650、配列番号651、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号670、配列番号671及び配列番号672からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、
b)配列番号874、配列番号652、配列番号653、配列番号654、配列番号655、配列番号656、配列番号657、配列番号658、配列番号659、配列番号660、配列番号661、配列番号662、配列番号663、配列番号664、配列番号665、配列番号666、配列番号667、配列番号668、配列番号669、配列番号670、配列番号671、配列番号672、配列番号673、配列番号674、配列番号675、配列番号676、配列番号677、配列番号678、配列番号679、配列番号680、配列番号681、配列番号682、配列番号683、配列番号684、配列番号685、配列番号686、配列番号687、配列番号688、配列番号689、配列番号690、配列番号691、配列番号692、配列番号693、配列番号694、配列番号695、配列番号696、配列番号697、配列番号698、配列番号699、配列番号700、配列番号701、配列番号702、配列番号703、配列番号704、配列番号705、配列番号706、配列番号707、配列番号708、配列番号709、配列番号710、配列番号711、配列番号712、配列番号713、配列番号714、配列番号715、配列番号716、配列番号717、配列番号718、配列番号719、配列番号720、配列番号721、配列番号722、配列番号723、配列番号724、配列番号725、配列番号726、配列番号727、配列番号728、配列番号729、配列番号730、配列番号731、配列番号732、配列番号733、配列番号734、配列番号735、配列番号736、配列番号737、配列番号738、配列番号739、配列番号740、配列番号741、配列番号742、配列番号743、配列番号744、配列番号745、配列番号746、配列番号747、配列番号748、配列番号749、配列番号750、配列番号751、配列番号752、配列番号753、配列番号754、配列番号755、配列番号1200及び配列番号756からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む、抗CD28 ABDを含む、組成物。 - a)VH-CH1-ヒンジ-CH2-CH3を含む重鎖と、
VL-CLを含む軽鎖とを含む抗体である、請求項80に記載の組成物。 - a)配列番号518、配列番号928、配列番号497、配列番号498、配列番号499、配列番号500、配列番号501、配列番号502、配列番号503、配列番号504、配列番号505、配列番号506、配列番号507、配列番号508、配列番号509、配列番号510、配列番号511、配列番号512、配列番号513、配列番号514、配列番号515、配列番号516、配列番号517、配列番号519、配列番号520、配列番号521、配列番号522、配列番号523、配列番号524、配列番号525、配列番号526、配列番号527、配列番号528、配列番号529、配列番号530、配列番号531、配列番号532、配列番号533、配列番号534、配列番号535、配列番号536、配列番号537、配列番号538、配列番号539、配列番号540、配列番号541、配列番号542、配列番号543、配列番号544、配列番号545、配列番号546、配列番号547、配列番号548、配列番号549、配列番号550、配列番号551、配列番号552、配列番号553、配列番号554、配列番号555、配列番号556、配列番号557、配列番号558、配列番号559、配列番号560、配列番号561、配列番号562、配列番号563、配列番号564、配列番号565、配列番号566、配列番号567、配列番号568、配列番号569、配列番号570、配列番号571、配列番号572、配列番号573、配列番号574、配列番号575、配列番号576、配列番号577、配列番号578、配列番号579、配列番号580、配列番号581、配列番号582、配列番号583、及び配列番号584からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、
b)配列番号874及び配列番号932からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗B7H3 ABDを含む、組成物。 - a)配列番号946のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、
b)配列番号950のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗B7H3 ABDを含む、組成物。 - a)配列番号956のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、
b)配列番号960のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗B7H3 ABDを含む、組成物。 - a)配列番号964のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、
b)配列番号968のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗B7H3 ABDを含む、組成物。 - a)配列番号972のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、
b)配列番号976のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗B7H3 ABDを含む、組成物。 - a)-CH1-ヒンジ-CH2-CH3に結合したVHを含む重鎖と、
b)-CLに結合したVLを含む軽鎖とを含む抗体である、請求項82~86のいずれか一項に記載の組成物。 - a)請求項80又は82に記載のVHをコードする第1の核酸と、
b)請求項80又は82に記載のVLをコードする第2の核酸とをそれぞれ含む、核酸組成物。 - (a)請求項88に記載の第1の核酸を含む第1の発現ベクターと、
(b)請求項88に記載の第2の核酸を含む第2の発現ベクターとを含む、発現ベクター組成物。 - 請求項88に記載の核酸組成物、又は請求項89に記載の発現ベクター組成物を含む、宿主細胞。
- 組成物を作製する方法であって、前記組成物が発現する条件下で請求項90に記載の宿主細胞を培養することと、前記組成物を回収することとを含む、方法。
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