CN109311973A - 含有c端融合的tnf家族配体三聚体的抗原结合分子 - Google Patents

含有c端融合的tnf家族配体三聚体的抗原结合分子 Download PDF

Info

Publication number
CN109311973A
CN109311973A CN201780030382.4A CN201780030382A CN109311973A CN 109311973 A CN109311973 A CN 109311973A CN 201780030382 A CN201780030382 A CN 201780030382A CN 109311973 A CN109311973 A CN 109311973A
Authority
CN
China
Prior art keywords
domain
seq
amino acid
acid sequence
antigen binding
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201780030382.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109311973B (zh
Inventor
P·布鲁恩克
C·F·科勒
S·格拉乌-理查兹
C·克莱恩
E·莫斯纳
P·乌马纳
M·亚曼
C·克劳斯
徐伟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by F Hoffmann La Roche AG filed Critical F Hoffmann La Roche AG
Publication of CN109311973A publication Critical patent/CN109311973A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109311973B publication Critical patent/CN109311973B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6813—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin the drug being a peptidic cytokine, e.g. an interleukin or interferon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70575—NGF/TNF-superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C07K14/7151—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for tumor necrosis factor [TNF], for lymphotoxin [LT]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/14—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from fungi, algea or lichens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3007—Carcino-embryonic Antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明涉及新颖的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含(a)一个能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端,其中该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子对于对该靶细胞抗原的结合是单价的。

Description

含有C端融合的TNF家族配体三聚体的抗原结合分子
发明领域
本发明涉及新颖的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端,其中该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子对于对该靶细胞抗原的结合是单价的。本发明进一步涉及生成这些分子的方法和使用它们的方法。
发明背景
与TNF(肿瘤坏死因子)受体超家族的分子相互作用的配体在免疫系统的组织和功能中具有关键作用。在调节正常功能诸如免疫应答,造血和形态发生的同时,TNF家族配体(也称作细胞因子)在肿瘤发生,移植排斥,脓毒性休克,病毒复制,骨吸收,类风湿性关节炎和糖尿病中发挥作用(Aggarwal,2003)。TNF配体家族包含编码19种II型(即细胞内N端和细胞外C端)跨膜蛋白质的18种基因,其特征在于构成“TNF同源域”(THD)的保守C端域的存在。这个域负责受体结合且因此对于TNF配体家族成员的生物学活性是至关紧要的。家族成员之间的序列同一性是约20-30％(Bodmer,2002)。TNF配体家族的成员以自装配的非共价三聚体发挥其生物学功能(Banner等人,1993)。因此,TNF家族配体形成能够结合并活化TNFR超家族的相应受体的三聚体。
TNF受体超家族的一个成员,4-1BB(CD137)最初被鉴定为其表达通过T细胞活化而诱导的分子(Kwon和Weissman,1989)。后续研究证明4-1BB在T和B淋巴细胞(Snell等人,2011；Zhang等人,2010),NK细胞(Lin等人,2008),NKT细胞(Kim等人,2008),单核细胞(Kienzle和von Kempis,2000；Schwarz等人,1995),嗜中性细胞(Heinisch等人,2000),肥大细胞(Nishimoto等人,2005)和树突细胞以及非造血起源的细胞诸如内皮和平滑肌细胞(Broll等人,2001；Olofsson等人,2008)中的表达。4-1BB在不同细胞类型中的表达大多通过各种刺激性信号,诸如T细胞受体(TCR)或B细胞受体触发,以及经由共刺激性分子或促炎性细胞因子的受体诱导的信号传导(Diehl等人,2002；von Kempis等人,1997；Zhang等人,2010)而可诱导和驱动。
4-1BB配体(4-1BBL或CD137L)的表达更受限制且在专职抗原呈递细胞(APC)诸如B细胞,树突细胞(DC)和巨噬细胞上观察到。4-1BBL的可诱导表达对于包括αβ和γδT细胞子集二者在内的T细胞,和内皮细胞是特征性的(综述见Shao和Schwarz,2011)。
已知CD137信号传导刺激NK细胞的IFNγ分泌和增殖(Buechele等人,2012；Lin等人,2008；Melero等人,1998)以及促进DC活化(如通过其升高的存活和分泌细胞因子的能力指示的)并上调共刺激性分子(Choi等人,2009；Futagawa等人,2002；Wilcox等人,2002)。然而,CD137最好表征为调控T细胞的CD4+和CD8+子集二者中的TCR诱导的活化的共刺激性分子。与TCR触发组合,激动性4-1BB特异性抗体增强T细胞的增殖,刺激淋巴因子分泌并降低T淋巴细胞对活化诱导的细胞死亡的敏感性(综述见Snell等人,2011)。
与在体外4-1BB抗体对T细胞的这些共刺激效应一致,在许多实验性肿瘤模型中将其施用于荷瘤小鼠导致有力的抗肿瘤效果(Melero等人,1997；Narazaki等人,2010)。然而,4-1BB经常仅在与其它免疫调控性化合物(Curran等人,2011；Guo等人,2013；Morales-Kastresana等人,2013；Teng等人,2009年；Wei等人,2013),化疗试剂(Ju等人,2008；Kim等人,2009),肿瘤特异性疫苗接种(Cuadros等人,2005；Lee等人,2011),或放疗(Shi和Siemann,2006)组合施用时展现其作为抗肿瘤剂的效力。体内消减实验证明CD8+T细胞在4-1BB特异性抗体的抗肿瘤作用中发挥最关键的作用。然而,取决于肿瘤模型或组合疗法(其包括抗4-1BB),已经报告了其它类型的细胞诸如DC,NK细胞或CD4+T细胞的贡献(Melero等人,1997；Murillo等人,2009；Narazaki等人,2010；Stagg等人,2011)。
在4-1BB激动剂对不同淋巴细胞子集的直接作用以外,经由肿瘤血管内皮上的血管细胞粘附分子1(VCAM1)和细胞间粘附分子1(ICAM1)的4-1BB介导的上调,4-1BB激动剂还能诱导肿瘤中活化的T细胞的浸润和保留(Palazon等人,2011)。
4-1BB触发还可逆转由暴露于可溶性抗原诱导的T细胞无反应性的状态,这可能有助于破坏肿瘤微环境中或慢性感染期间的免疫学耐受(Wilcox等人,2004)。
看来4-1BB激动性抗体在体内的免疫调控特性需要抗体分子上野生型Fc部分的存在,由此暗示Fc受体结合是此类试剂的药理学活性需要的重要事件,正如关于对TNFR超家族的其它凋亡诱导性或免疫调控性成员特异性的激动性抗体已经描述的(Li和Ravetch,2011；Teng等人,2009)。然而,在小鼠中,具有功能性活性Fc域的4-1BB特异性激动性抗体的系统施用也诱导与肝毒性相关的CD8+T细胞扩充(Dubrot等人,2010),这在功能性Fc受体缺失下减弱或显著减轻。在人临床试验(ClinicalTrials.gov,NCT00309023)中,12周里每三周一次施用Fc胜任的4-1BB激动性抗体(BMS-663513)在具有黑素瘤,卵巢或肾细胞癌的患者中诱导疾病的稳定化。然而,在另一项试验(NCT00612664)中给予的相同抗体引起4级肝炎,导致试验终止(Simeone和Ascierto,2012)。
总之,可得的临床前和临床数据清楚地证明,对有效4-1BB激动剂的临床需求较高。然而,新一代药物候选应当不仅有效啮合造血和内皮细胞的表面上的4-1BB,而且能够经由与结合Fc受体不同的机制实现这一点,从而避免不可控制的副作用。后者可以经由对肿瘤特异性或肿瘤相关模块的优先结合和寡聚化来实现。
已经生成了由4-1BB配体的一个细胞外结构域和单链抗体片段(Mueller等人,2008；Hornig等人,2012)或与重链的C端融合的单个4-1BB配体(Zhang等人,2007)构成的融合蛋白。WO 2010/010051公开了由彼此连接并与抗体部分融合的三个TNF配体外域组成的融合蛋白的生成。
然而,仍然需要新的抗原结合分子,其组合能够优选结合肿瘤特异性或肿瘤相关靶的Fab域与能够形成共刺激性TNF配体三聚体的模块且同时具有足够的稳定性,从而在药学上有用。本发明的抗原结合分子包含这两者,而且令人惊讶的是它们提供三聚体且因此有生物学活性的TNF配体,尽管三聚化TNF配体外域之一位于与该分子的其它两个TNF配体外域不同的多肽上。令人惊讶的是,已经发现一个能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域足以提供优选的靶向特性。此发明的抗原结合分子特别稳定且强健。
发明概述
在一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)一个能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端,其中该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子对于对该靶细胞抗原的结合是单价的。
在一个特定方面,该TNF配体家族成员是共刺激人T细胞活化的一种。如此,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含(a)一个能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端,其中该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子对于对该靶细胞抗原的结合是单价的且其中该TNF配体家族成员共刺激人T细胞活化。更加特别地,该TNF配体家族成员选自4-1BBL和OX40L。
在一个方面,该TNF配体家族成员是4-1BBL。
在又一个方面,该TNF配体家族成员的外域包含选自由SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8组成的组的氨基酸序列,特别是SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
在又一个方面,本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(a)一个能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端且其中该包含TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽包含选自由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10组成的组的氨基酸序列且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽包含选自由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5组成的组的氨基酸序列。在一个方面,该包含TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一个特定方面,该包含TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
在又一个方面,提供的是如本文中之前描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该TNF配体家族成员是OX40L。在一个方面,提供的是含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该TNF配体家族成员的外域包含选自由SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12组成的组的氨基酸序列。
在一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)一个能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端。本发明如此涉及一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子对于对该靶细胞抗原的结合是单价的。
在另一个方面,提供的是本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该靶细胞抗原选自由成纤维细胞活化蛋白(FAP),CD19,癌胚抗原(CEA),黑素瘤相关硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP),表皮生长因子受体(EGFR),CD20和CD33组成的组。
在一个特定方面,该靶细胞抗原是成纤维细胞活化蛋白(FAP)。
在一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含
(a)VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR-L3,或
(b)VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的CDR-L3。
在一个特定方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的CDR-L3。
在又一个方面,提供的是如本文中之前描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的可变轻链或其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的可变轻链。
在另一个特定方面,该靶细胞抗原是CD19。
在一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CD19的Fab域包含
(a)VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-L3,或
(b)VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的CDR-L3。
在一个特定方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CD19的Fab域包含VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的CDR-L3。
在又一个方面,提供的是如本文中之前描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CD19的Fab域包含包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的可变轻链或其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的可变轻链。
在另一个特定方面,该靶细胞抗原是CEA。
在一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CEA的Fab域包含VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR-L3。
在一个特定方面,提供的是如本文中之前描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CEA的Fab域包含包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的可变轻链。
在又一个方面,该Fc域是IgG,特别是IgG1Fc域或IgG4Fc域。更加特别地,该Fc域是IgG1Fc域。
特别地,本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,其中该Fab域的VH和CH1域在C端融合至该Fc域中的CH2域的N端。
在另一个方面,本发明涉及如本文中之前限定的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,其中该Fc域包含一处或多处降低对Fc受体,特别是对Fcγ受体的结合的氨基酸替代。
特别地,该Fc域包含IgG重链的位置234和235(编号方式依照Kabat EU索引)和/或329(编号方式依照Kabat EU索引)处的氨基酸替代。更加特别地,提供的是依照本发明的含有三聚体TNF家族配体的抗原结合分子,其包含具有氨基酸替代L234A,L235A和P329G(编号方式依照Kabat EU索引)的IgG1 Fc域。
在又一个方面,该Fc域包含促进Fc域的第一和第二亚基联合的修饰。在一个特定方面,提供的是如本文中之前限定的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该Fc域的第一亚基包含节的氨基酸替代S354C和T366W(编号方式依照Kabat EU索引)且该Fc域的第二亚基包含穴的氨基酸替代Y349C,T366S,L368A和Y407V(编号方式依照Kabat EU索引)。
在又一个方面,提供的是如本文中之前限定的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽在其N端融合至该Fc域的第二亚基(穴)的C端且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽在其N端融合至该Fc域的第一亚基(节)的C端。
在另一个方面,提供的是如本文中之前限定的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽在其N端融合至该Fc域的第一亚基(节)的C端且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽在其N端融合至该Fc域的第二亚基(穴)的C端。
在一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域在C端融合至该Fc域的第一亚基(节)的N端。在另一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域在C端融合至该Fc域的第二亚基(穴)的N端。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域在C端融合至该Fc域的第一亚基(节)的N端,该包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽在其N端融合至该Fc域的第二亚基(穴)的C端且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽在其N端融合至该Fc域的第一亚基(节)的C端。
在又一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的包含节突变的第二亚基的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的包含穴突变的第一亚基的C端且其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的VH和CH1域在C端融合至该Fc域的包含节突变的第二亚基的N端。
在另一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的包含节突变的第二亚基的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的包含穴突变的第一亚基的C端且其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的VH和CH1域在C端融合至该Fc域的包含穴突变的第一亚基的N端。
在还有另一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的包含穴突变的第一亚基的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的包含节突变的第二亚基的C端且其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的VH和CH1域在C端融合至该Fc域的包含节突变的第二亚基的N端。
另外,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的包含穴突变的第一亚基的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的包含节突变的第二亚基的C端且其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的VH和CH1域在C端融合至该Fc域的包含穴突变的第一亚基的N端。
在又一个方面,本发明提供如之前限定的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其进一步包含(d)不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域。如此,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端,和
(d)不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域。
依照本发明的另一个方面,提供有一种分离的多核苷酸,其编码如本文中之前限定的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。本发明进一步提供一种载体,特别是表达载体,其包含本发明的分离的多核苷酸,和一种宿主细胞,其包含本发明的分离的多核苷酸或载体。在一些实施方案中,该宿主细胞是真核细胞,特别是哺乳动物细胞。
在另一个方面,提供的是一种用于生成本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的方法,其包含下述步骤:(i)在适合于该抗原结合分子表达的条件下培养本发明的宿主细胞,和(ii)回收该抗原结合分子。本发明还涵盖通过本发明的方法生成的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。
本发明进一步提供一种药用组合物,其包含本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子和至少一种药学可接受赋形剂。
本发明还涵盖的是本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,或本发明的药用组合物,其供作为药物使用。在一个方面提供的是本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,或本发明的药用组合物,其供在有所需要的个体中治疗疾病中使用。本发明还提供本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,或本发明的药用组合物,其供(i)在刺激T细胞应答中,(ii)在支持活化的T细胞的存活中,(iii)在治疗感染中,(iv)在治疗癌症中,(v)在延迟癌症进展中,或(vi)在延长罹患癌症的患者的存活中使用。在一个具体实施方案中,提供的是本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,或本发明的药用组合物,其供在治疗癌症中使用。
还提供的是本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子用于制造用于在有所需要的个体中治疗疾病的药物,特别是用于制造用于治疗癌症的药物的用途,以及一种在个体中治疗疾病的方法,其包含对所述个体施用治疗有效量的包含药学可接受形式的本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的组合物。在一个具体实施方案中,该疾病是癌症。本发明还提供本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,或本发明的药用组合物在制造用于上调或延长细胞毒性T细胞活性的药物中的用途。还提供的是一种在具有癌症的个体中上调或延长细胞毒性T细胞活性的方法,其包含对该个体施用有效量的本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,或本发明的药用组合物。在任何上述实施方案中,该个体优选是哺乳动物,特别是人。
附图简述
图1显示用于装配分拆三聚体人4-1BB配体的构件。图(1A)显示包含通过肽接头(G4S)2在N端融合至人CH3域的C端的二聚体4-1BB配体的多肽而图(1B)显示包含通过肽接头(G4S)2在N端融合至Fc域内的另一CH3域的C端的单体4-1BB配体的多肽。图(1C)显示通过肽接头(G4S)2在N端融合至人CH3域的C端的二聚体OX40配体而图(1D)显示通过肽接头(G4S)2在N端融合至Fc域内的另一人CH3域的C端的单体配体。
图2A至2D是本发明的单价靶向性含有4-1BBL三聚体的抗原结合分子的结构的示意图。在图2A中显示作为x.11类型构建物的抗原结合分子,其中能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域附着至Fc节链,二聚体4-1BBL融合至Fc穴链的C端而单体4-1BBL融合至Fc节链的C端。构建物2.11,1.11,3.11,4.11,5.11和对照H是对应的例子。x.12类型构建物在图2B中显示。能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域附着至Fc节链,二聚体4-1BBL也融合至Fc节链的C端而单体4-1BBL融合至Fc穴链的C端。构建物2.12,1.12,3.12,4.12,5.12和对照I是这些抗原结合分子的例子。在图2C中显示作为x.13类型构建物的抗原结合分子,其中能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域附着至Fc穴链,二聚体4-1BBL融合至Fc穴链的C端而单体4-1BBL融合至Fc节链的C端。构建物2.13,1.13,3.13,4.13,5.13和对照J是对应的例子。图2D涉及x.14类型的构建物,其中能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域附着至Fc穴链,二聚体4-1BBL也还融合至Fc节链的C端而单体4-1BBL融合至Fc穴链的C端。构建物2.14,1.14,3.14,4.14,5.14和对照K是其例子。所有这些构建物的制备在实施例1中描述。VH,VL,CL和CH1域象征Fab域,粗黑点代表节-入-穴修饰。
图3A至3D是本文中描述的别的分子的示意图。图3A显示对照F,一种具有两个DP47(种系)非靶向性Fab域的hu IgG1。图3B显示对照D,一种非靶向性含有4-1BBL三聚体的抗原结合分子,其中二聚体4-1BBL融合至Fc节重链中的CL域的N端而单体4-1BBL融合至轻链的CH1域的N端。*象征CH1和CL域中的氨基酸修饰(所谓的带电荷的残基)。图3C显示与图3B相同的构建物,然而DP47Fab域用FAP(4B9)Fab域替换。这些构建物的制备和生成在实施例1.11中描述。粗黑点代表节-入-穴修饰。图3D是如实施例3.1中制备的单体4-1BB Fc(kih)构建物的图。
图4A显示用于本发明的单价靶向性分拆三聚体C端含有4-1BB配体的抗原结合分子的同时结合的SPR实验的设置。FAP(4B9)靶向性分拆4-1BBL(71-248)Fc kih抗原结合分子构建物2.11对人4-1BB和人FAP的同时结合在图4B中显示。CD19(8B8-018)靶向性分拆4-1BBL(71-248)Fc kih抗原结合分子(构建物3.11)对人4-1BB和人CD19的同时结合在图4C中显示。CD19(8B8-2B11)靶向性分拆4-1BBL(71-248)Fc kih抗原结合分子(构建物4.11)对人4-1BB和人CD19的同时结合在图4D中显示。
图5A至5D是本发明的包含不能够结合靶细胞抗原的又一个Fab域的单价靶向性含有4-1BBL三聚体的抗原结合分子的结构的示意图。在图5A中显示作为x.15类型构建物的抗原结合分子,其中不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域(DP47种系)附着至Fc节链,能够特异性结合抗原(FAP)的Fab域连接至Fc穴链,二聚体4-1BBL融合至Fc穴链的C端而单体4-1BBL融合至Fc节链的C端。构建物2.15是其例子。x.16类型的构建物在图5B中显示。不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域(DP47种系)附着至Fc节链,能够特异性结合抗原(FAP)的Fab域连接至Fc穴链,二聚体4-1BBL也融合至Fc节链的C端而单体4-1BBL融合至Fc穴链的C端。构建物2.16是其例子。在图5C中显示作为x.17类型构建物的抗原结合分子,其中能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域附着至Fc节链,不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域(DP47种系)连接至Fc穴链,二聚体4-1BBL融合至Fc穴链的C端而单体4-1BBL融合至Fc节链的C端。构建物2.17是其例子。图5D涉及x.18类型的构建物,其中能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域附着至Fc节链,不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域(DP47种系)附着至Fc穴链,二聚体4-1BBL也融合至Fc节链的C端而单体4-1BBL融合至Fc穴链的C端。构建物2.18是其例子。所有这些构建物的制备在实施例4中描述。
图6A显示用于本发明的DP47/单价FAP靶向性分拆三聚体C端含有4-1BB配体的抗原结合分子的同时结合的SPR实验的设置。DP47/FAP(4B9)靶向性分拆4-1BBL(71-254)Fckih抗原结合分子构建物2.15对人4-1BB和人FAP的同时结合在图6B中显示。
在图7A至7H中显示FAP靶向性分拆三聚体4-1BB配体Fc融合抗原结合分子对新鲜分离的PBMC的结合。显示的是PE缀合的检测二抗的荧光强度的几何(geo)均值对测试构建物的浓度。使用作为阴性对照的对照F和对照D和作为阳性对照的构建物2.4(实施例1.11中描述的)。在图7A至7D中图示构建物2.11的结合而在图7E至7H中图示构建物2.15的结合。构建物2.11的结构在图2A中显示而构建物2.15的结构在图5A中显示。在新鲜人CD45+CD3+CD8-CD4+T细胞(图7A或7E),新鲜人CD45+CD3+CD4-CD8+T细胞(图7B或7F),新鲜人CD45+CD3+CD4-CD8-γδT细胞(图7C或7G)和CD45+CD3-CD19+B细胞(图7D或7H)上监测结合。因为大多数新鲜分离的PBMC不表达4-1BB或FAP,所以检测不到结合。
图8A至8F图示FAP靶向性分拆三聚体4-1BB配体Fc融合抗原结合分子对活化的人PBMC的结合。显示的是PE缀合的检测二抗的荧光强度的几何均值对测试构建物的浓度。使用作为阴性对照的对照F和对照D和作为阳性对照的如实施例1.11中描述的构建物2.4。在图8A至8C中图示构建物2.11的结合而在图8D至8F中图示构建物2.15的结合。在用激动性抗人CD28和抗人CD3抗体活化之后,4-1BB表达在大多数CD3+CD8+T细胞上上调而大多数CD3+CD4+和CD3+CD4-CD8-γδT细胞的程度较低。所有含有融合4-1BB分拆三聚体配体的构建物(对照D,构建物2.4,构建物2.11和2.15)以相当相似的亲和力结合人4-1BB,不管它们是FAP(4B9)靶向性的(构建物2.4和2.11)或DP47非靶向性的(对照D),而没有融合4-1BB分拆三聚体配体的非靶向性分子(对照F)不结合活化的人T细胞。
图9A至9D显示FAP靶向性或非靶向性分拆三聚体人4-1BB配体Fc(kih)融合抗原结合分子对表达人FAP的人黑素瘤MV-3细胞和WM-266-4细胞的结合。用R-藻红蛋白-荧光染料缀合的抗人IgG Fcγ特异性山羊IgG F(ab`)2片段检测结合。使用作为阴性对照的对照F和D和作为阳性对照的如实施例1.11中描述的构建物2.4。显示的是荧光强度的几何均值对测试构建物和对照的浓度。在图9A(MV-3细胞)和9B(WM-266-4细胞)中与对照分子相比显示构建物2.11的结合而在图9C(MV-3细胞)和9D(WM-266-4细胞)中与对照分子相比显示构建物2.15的结合。所有FAP靶向性构建物以相似的对人FAP的亲和力结合。
图10显示图示使用报告细胞系的实施例6.3中描述的NFkB活性测定法的一般原理的示意图。显示的是用表达人4-1BB的HeLa报告细胞系设置的活化测定法。在报告细胞上表达的4-1BB的交联诱导NFκB活化和NFκB介导的萤光素酶表达。在细胞裂解之后萤光素酶能催化萤光素氧化成氧化萤光素。这种化学反应与NFκB介导的萤光素酶表达的强度正相关且可通过光发射的强度(释放光单位)来测量。
在图11中显示FAP靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子对NFkB信号传导途径的活化严格依赖于其对表达FAP的靶细胞的结合。将表达人4-1BB的NFkB报告HeLa细胞与展现不同水平的细胞表面FAP表达的指定肿瘤细胞共培养。对0.5s/孔测量释放光单位(URL)并针对构建物2.11或构建物2.15或(作为阳性对照)构建物2.4或(作为阴性对照)对照D或F的使用浓度绘图。在交联性表达人FAP的人黑素瘤细胞系MV-3(见图11B)或3T3-huFAP克隆19(见图11C)存在或缺失(图11A)下将表达人4-1BB的HeLa报告细胞温育6小时,然后如实施例6.3中描述的评估萤光素酶活性。表达4-1BB的HeLa报告细胞对肿瘤细胞的细胞比在每种设置中指示。
图12显示如实施例6.4中描述的人PBMC活化测定法的示意图。在表达FAP的成纤维细胞,激动性抗人CD3抗体和双特异性抗FAP分拆三聚体4-1BBL融合抗原结合分子构建物2.11存在下实现PBMC的活化。板中每孔的内容物是:经45Gy辐照的2x104个NIH/3T3-人FAP克隆19,7.5 x 106个CFSE标记的人PBMC,0.5nM激动性抗人CD3人IgG wt(克隆V9)和10-5nM至10nM滴定浓度的构建物2.11,构建物2.4,对照D或对照F。温育时间是4天。
在图13A和13B中显示在FAP+成纤维细胞,激动性CD3抗体和FAP靶向性分拆三聚体4-1BBL融合分子存在下人PBMC活化测定法中的结果。将表达CD25和CD137(4-1BB)的CD8+T细胞的百分比针对构建物2.11或作为阳性对照的构建物2.4或作为阴性对照分子的对照D和对照F的使用浓度绘图(见实施例1.11)。
图14显示在经NLV肽脉冲的表达FAP的MV-3人黑素瘤细胞和双特异性抗FAP分拆三聚体4-1BBL融合分子构建物2.11存在下NLV特异性CD8+T细胞活化的示意性设置。板中每孔的内容物是:5x104个经无,10-9或10-8M NLV肽脉冲的人黑素瘤细胞MV-3,6250个CFSE标记的NLV特异性CD8T细胞和10-5nM至10nM滴定浓度的构建物2.11,构建物2.4,对照D或对照F。温育时间是24小时+4小时,在布雷菲德菌素A和莫能菌素(Monesin)存在下。
在图15A至15F中显示来自在滴定浓度的不同FAP靶向性或非靶向性分拆三聚体人4-1BB配体Fc(kih)抗原结合分子存在下用HLA-A2-NLV特异性CD8T细胞和经NLV脉冲的HLA-A2+FAP+人黑素瘤细胞系MV-3的活化测定法的结果。将表达CD137(4-1BB)和IFNγ的NLV特异性CD8+T细胞的百分比针对测试化合物(构建物2.11或作为阳性对照的构建物2.4或作为阴性对照的对照D和对照F)的使用浓度绘图。所有FAP靶向性分拆三聚体人4-1BB配体Fc(kih)抗原结合分子显示相似的HLA-A2-NLV肽特异性CD8T细胞的活化改善,显示为刺激24小时之后图15A-C中的CD137(4-1BB)上调(正反馈环)和图15D-F中的IFNγ表达。曲线的差异在正常误差偏差的范围中且是不显著的。
图16A和16B显示CD19靶向性分拆三聚体4-1BBL Fc(kih)抗原结合分子分别对来自人PBMC的表达4-1BB的活化的人CD4和CD8T细胞的结合(见实施例7.1)。在CD4和CD8上对细胞设门,并结合曲线以针对人Fc的二抗的均值荧光强度表达。
图17显示CD19靶向性分拆三聚体4-1BBL融合分子对表达CD19的B淋巴瘤细胞系的结合(实施例7.2)。测试化合物(CD19靶向性分拆三聚体4-1BBL Fc(kih)抗原结合分子和非靶向性对照D)对WSU-DLCL2细胞的结合曲线以针对人Fc的二抗的均值荧光强度表达。
图18显示图示使用报告细胞系和表达CD19的肿瘤细胞系的实施例7.3中描述的NFkB活性测定法的一般原理的示意图。显示的是用表达人4-1BB的HeLa报告细胞系的活化测定法设置。在报告细胞上表达的4-1BB的交联诱导NFκB活化和NFκB介导的萤光素酶表达。在细胞裂解之后萤光素酶能催化萤光素氧化成氧化萤光素。这种化学反应与NFκB介导的萤光素酶表达的强度正相关且可通过光发射的强度(释放光单位)来测量。
图19A至19D显示在表达CD19的肿瘤细胞系和CD19靶向性分拆三聚体4-1BBL Fc(kih)融合抗原结合分子存在下表达4-1BB的报告细胞系中萤光素酶的NFκB活化,如用实施例7.3中描述的测定法测量的。含有抗人CD19结合物克隆8B8-018(构建物3.3和3.11)或抗人CD19结合物克隆8B8-2B11(构建物4.1和4.11)任一的不同测试化合物以不同浓度(作为nM在x轴上显示)与表达4-1BB的报告细胞系和不表达CD19的细胞(图19A)或表达CD19的肿瘤细胞系OCI-Ly18,Nalm6和SU-DHL-8(分别是图19B,图19C和图19D)一起以E:T比1:5温育6小时。单价CD19靶向性分拆三聚体4-1BBL Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物3.11和4.11)能诱导较好的萤光素酶活性,通过释放光单位(URL)测量,对0.5s/孔测量(在y轴上显示),与阳性CD19靶向性对照分子构建物3.4和4.1(如实施例1.11中描述的)相似。非CD19靶向性对照分子对照F和D不诱导萤光素酶活性。所有值通过减去空白对照(不添加构建物或添加对照)来修正基线。
图20显示经由激动性CD3抗体与CD19靶向性分拆三聚体4-1BBL融合分子的组合活化的PBMC中的IFNγ释放。在不同靶向性或非靶向性CD19靶向性分拆三聚体4-1BBL Fc(kih)抗原结合分子存在下在人PBMC的培养物上清液中通过ELISA测量IFN-γ释放。
发明详述
定义
除非另有定义,本文中使用的技术和科学术语具有与此发明所属领域中一般使用的相同的含义。出于解释此说明书的目的,会应用下述定义,而且在适宜时,以单数使用的术语还会包括复数,反之亦然。
如本文中使用的,术语“抗原结合分子”以其最广义指特异性结合抗原性决定簇的分子。抗原结合分子的例子是抗体,抗体片段和支架抗原结合蛋白。
如本文中使用的,术语“能够特异性结合靶细胞抗原的模块”或“能够特异性结合靶细胞抗原的抗原结合域”指特异性结合抗原性决定簇的多肽分子。在一个方面,抗原结合模块能够经由其靶细胞抗原激活信号传导。在一个特定方面,抗原结合模块能够将其附着的实体(例如TNF家族配体三聚体)引导至靶位点,例如携带抗原性决定簇的特定类型的肿瘤细胞或肿瘤基质。能够特异性结合靶细胞抗原的模块包括本文中进一步定义的抗体和其片段。另外,能够特异性结合靶细胞抗原的模块包括本文中进一步定义的支架抗原结合蛋白,例如基于设计的重复蛋白或设计的重复域的结合域(参见例如WO 2002/020565)。
如本文中使用的,术语“能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域”指特异性结合抗原性决定簇的Fab域。在一个方面,抗原结合模块能够经由其靶细胞抗原激活信号传导。在一个特定方面,抗原结合模块能够将其附着的实体(例如TNF家族配体三聚体)引导至靶位点,例如携带抗原性决定簇的特定类型的肿瘤细胞或肿瘤基质。
关于抗体或Fab域,术语“能够特异性结合靶细胞抗原的模块”指分子中包含与抗原的部分或全部特异性结合且互补的区域的部分。可以例如由一个或多个抗体可变域(也称作抗体可变区)提供能够进行特异性抗原结合的模块。特别地,能够进行特异性抗原结合的模块包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)。
术语“抗体”在本文中以最广义使用且涵盖各种抗体结构,包括但不限于单克隆抗体,多克隆抗体,单特异性和多特异性抗体(例如双特异性抗体),和抗体片段,只要它们展现期望的抗原结合活性。
如本文中使用的术语“单克隆抗体”指自实质性同质的抗体群体获得的抗体,即构成该群体的抗体个体是同一的和/或结合相同表位,除了可能的抗体变体,例如,含有天然发生的突变的或在单克隆抗体制备物的生成期间产生的,此类变体一般以微小量存在。与典型地包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物形成对比,单克隆抗体制备物中的每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。
如本文中使用的术语“单特异性”抗体表示具有一个或多个结合位点的抗体,每个该位点结合相同抗原的相同表位。术语“双特异性”意味着抗原结合分子能够特异性结合至少两种截然不同的抗原性决定簇。典型地,双特异性抗原结合分子包含两个抗原结合位点,其每个是对不同抗原性决定簇特异性的。在某些实施方案中,双特异性抗原结合分子能够同时结合两种抗原性决定簇,特别是在两种截然不同的细胞上表达的两种抗原性决定簇。
如本申请内使用的术语“价”表示抗原结合分子中规定数目的结合位点的存在。照此,术语“二价”,“四价”,和“六价”分别表示抗原结合分子中两个结合位点,四个结合位点,和六个结合位点的存在。
如本申请内使用的术语“对抗原单价的”表示抗原结合分子中仅仅一个针对所述抗原的结合位点的存在。如本申请内使用的术语“对靶细胞抗原单价的”表示抗原结合分子中仅仅一个针对所述靶细胞抗原的结合位点的存在。
术语“全长抗体”,“完整抗体”,和“全抗体”在本文中可互换使用,指具有与天然抗体结构实质性相似的结构的抗体。“天然抗体”指具有不同结构的天然发生的免疫球蛋白分子。例如,天然IgG类抗体是约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白,由成二硫键的两条轻链和两条重链构成。自N端至C端,每条重链具有一个可变区(VH),也称作可变重域或重链可变域,接着是三个恒定域(CH1,CH2,和CH3),也称作重链恒定区。类似地,自N端至C端,每条轻链具有一个可变区(VL),也称作可变轻域或轻链可变域,接着是一个轻链恒定域(CL),也称作轻链恒定区。抗体的重链可指派至五种型之一,称作α(IgA),δ(IgD),ε(IgE),γ(IgG),或μ(IgM),其中一些可进一步分成亚型,例如γ1(IgG1),γ2(IgG2),γ3(IgG3),γ4(IgG4),α1(IgA1)和α2(IgA2)。基于其恒定域的氨基酸序列,抗体的轻链可指派至两种型之一,称作卡帕(κ)和拉姆达(λ)。
“抗体片段”指与完整抗体不同的分子,其包含完整抗体中与完整抗体所结合的抗原结合的部分。抗体片段的例子包括但不限于Fv,Fab,Fab’,Fab’-SH,F(ab’)2；双抗体,三抗体,四抗体,交叉Fab片段；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；和单域抗体。关于某些抗体片段的综述,参见Hudson et al.,Nat Med 9,129-134(2003)。关于scFv片段的综述,参见例如Plückthun,in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,vol.113,Rosenburg and Moore eds.,Springer-Verlag,New York,pp.269-315(1994)；还参见WO93/16185；和美国专利No.5,571,894和5,587,458。关于包含挽救受体结合表位残基且具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab’)2片段的讨论,参见美国专利No.5,869,046。双抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段,其可以是二价或双特异性的,参见例如EP 404,097；WO1993/01161；Hudson et al.,Nat Med 9,129-134(2003)；和Hollinger et al.,Proc NatlAcad Sci USA 90,6444-6448(1993)。Hudson et al.,Nat Med 9,129-134(2003)中还描述了三抗体和四抗体。单域抗体是包含抗体的重链可变域的全部或一部分或轻链可变域的全部或一部分的抗体片段。在某些实施方案中,单域抗体是人单域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,MA；参见例如美国专利No.6,248,516 B1)。可以通过各种技术来生成抗体片段,包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)的生成,如本文中描述的。
如本文中使用的术语“Fab域”表示如本文中之后定义的Fab片段或交叉Fab片段。
完整抗体的木瓜蛋白酶消化生成两个同一的抗原结合片段,称作“Fab”片段,每个含有重和轻链可变域,还有轻链的恒定域和重链的第一恒定域(CH1)。如此,如本文中使用的,术语“Fab片段”指包含包含轻链的VL域和恒定域(CL)的轻链片段,和重链的VH域和第一恒定域(CH1)的抗体片段。Fab’片段因在重链CH1域的羧基末端增加少数残基而与Fab片段不同,包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab’-SH是其中恒定域的半胱氨酸残基携带游离硫醇基团的Fab’片段。胃蛋白酶处理产生具有两个抗原结合位点(两个Fab片段)和Fc区的一部分的F(ab’)2片段。
术语“交叉Fab片段”或“xFab片段”或“交换Fab片段”指其中重和轻链的可变区或恒定区任一交换的Fab片段。交换Fab分子的两种不同链组成是可能的且包含在本发明的双特异性抗体中:一方面,Fab重和轻链的可变区交换,即交换Fab分子包含由轻链可变区(VL)和重链恒定区(CH1)构成的肽链,和由重链可变区(VH)和轻链恒定区(CL)构成的肽链。这种交换Fab分子也称作CrossFab(VLVH)。另一方面,当Fab重和轻链的恒定区交换时,交换Fab分子包含由重链可变区(VH)和轻链恒定区(CL)构成的肽链,和由轻链可变区(VL)和重链恒定区(CH1)构成的肽链。这种交换Fab分子也称作CrossFab(CLCH1)。
“单链Fab片段”或“scFab”是由抗体重链可变域(VH),抗体恒定域1(CH1),抗体轻链可变域(VL),抗体轻链恒定域(CL)和接头组成的多肽,其中所述抗体域和所述接头以N端至C端方向具有下述次序之一:a)VH-CH1-接头-VL-CL,b)VL-CL-接头-VH-CH1,c)VH-CL-接头-VL-CH1或d)VL-CH1-接头-VH-CL；且其中所述接头是至少30个氨基酸,优选32至50个氨基酸的多肽。所述单链Fab片段经由CL域和CH1域之间的天然二硫键而稳定化。另外,这些单链Fab分子可通过经由半胱氨酸残基的插入(例如依照Kabat编号方式的可变重链中的位置44和可变轻链中的位置100)生成链间二硫键而进一步稳定化。
“交换单链Fab片段”或“x-scFab”是由抗体重链可变域(VH),抗体恒定域1(CH1),抗体轻链可变域(VL),抗体轻链恒定域(CL)和接头组成的多肽,其中所述抗体域和所述接头以N端至C端方向具有下述次序之一:a)VH-CL-接头-VL-CH1和b)VL-CH1-接头-VH-CL；其中VH和VL一起形成特异性结合抗原的抗原结合位点,且其中所述接头是至少30个氨基酸的多肽。另外,这些x-scFab分子可通过经由半胱氨酸残基的插入(例如依照Kabat编号方式的可变重链中的位置44和可变轻链中的位置100)生成链间二硫键而进一步稳定化。
“单链可变片段(scFv)”是以10至约25个氨基酸的短接头肽连接的抗体的重(VH)和轻(VL)链可变区的融合蛋白。接头经常富含出于柔性的甘氨酸,以及出于溶解性的丝氨酸或苏氨酸,而且可将VH的N端与VL的C端连接,或反之亦然。尽管去除恒定区并引入接头,此蛋白质保留原始抗体的特异性。scFv抗体描述于例如Houston,J.S.,Methods inEnzymol.203(1991)46-96。另外,抗体片段包含具有VH域的特征(即能够与VL域一起装配)或VL域的特征(即能够与VH域一起装配)的单链多肽,VH域与VL域一起装配成功能性抗原结合位点并由此提供全长抗体的抗原结合特性。
“支架抗原结合蛋白”在本领域中是已知的,例如,纤连蛋白和设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)已经用作抗原结合域的备选支架,参见例如Gebauer and Skerra,Engineered protein scaffolds as next-generation antibody therapeutics.CurrOpin Chem Biol 13:245-255(2009)和Stumpp et al.,Darpins:A new generation ofprotein therapeutics.Drug Discovery Today 13:695-701(2008)。在本发明的一个方面,支架抗原结合蛋白选自由CTLA-4(Evibody),脂质运载蛋白(Anticalin),蛋白A衍生的分子,诸如蛋白A的Z域(Affibody),A域(Avimer/Maxibody),血清转铁蛋白(trans-body)；设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin),抗体轻链或重链的可变域(单域抗体,sdAb),抗体重链的可变域(纳米抗体,aVH),VNAR片段,纤连蛋白(AdNectin),C型凝集素域(Tetranectin)；新的抗原受体β-内酰胺酶的可变域(VNAR片段),人γ-晶体蛋白或泛素(Affilin分子)；人蛋白酶抑制剂的kunitz型域,微体,诸如来自knottin家族的蛋白质,肽适体和纤连蛋白(adnectin)组成的组。
与参照分子“结合相同表位的抗原结合分子”指如下的抗原结合分子,抗原结合分子在竞争测定法中将参照分子对其抗原的结合阻断50％或更多,相反,参照分子在竞争测定法中将抗原结合分子对其抗原的结合阻断50％或更多。
术语“抗原结合域”指抗原结合分子中包含与抗原的部分或全部特异性结合且互补的区域的部分。在抗原较大的情况中,抗原结合分子可仅仅结合抗原的特定部分,该部分称作表位。抗原结合域可以由例如一个或多个可变域(也称作可变区)提供。优选地,抗原结合域包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)。
如本文中使用的,术语“抗原性决定簇”与“抗原”和“表位”同义,而且指多肽大分子上的如下位点(例如氨基酸的连续区段或由不连续氨基酸的不同区域构成的构象构造),抗原结合模块与该位点结合,形成抗原结合模块-抗原复合物。有用的抗原性决定簇可以例如在肿瘤细胞的表面上,在病毒感染的细胞的表面上,在其它患病细胞的表面上,在免疫细胞的表面上,游离在血清中,和/或在细胞外基质(ECM)中找到。作为本文中的抗原有用的蛋白质可以是来自任何脊椎动物来源的蛋白质的任何天然形式,包括哺乳动物,诸如灵长类(例如人)和啮齿类(例如小鼠和大鼠),除非另外指明。在一个特定实施方案中,抗原是人蛋白质。在提及本文中的特定蛋白质的情况中,该术语涵盖“全长”未加工的蛋白质以及源自细胞中的加工的任何形式的蛋白质。该术语还涵盖蛋白质的天然发生变体,例如剪接变体或等位变体。
“特异性结合”意味着结合对于抗原是选择性的且可以与不想要的或非特异性的相互作用区分开。抗原结合分子结合特定抗原的能力可经由酶联免疫吸附测定法(ELISA)或本领域技术人员熟悉的其它技术来测量,例如表面等离振子共振(SPR)技术(在BIAcore仪器上分析)(Liljeblad et al.,Glyco J 17,323-329(2000)),和传统的结合测定法(Heeley,Endocr Res 28,217-229(2002))。在一个实施方案中,抗原结合分子对无关蛋白质的结合的程度小于抗原结合分子对抗原的结合的约10％,如通过例如SPR测量的。在某些实施方案中,结合抗原的分子具有≤1μM,≤100nM,≤10nM,≤1nM,≤0.1nM,≤0.01nM,或≤0.001nM(例如10-8M或更小,例如10-8M至10-13M,例如10-9M至10-13M)的解离常数(Kd)。
“亲和力”或“结合亲和力”指分子(例如抗体)的单一结合位点和其结合配偶(例如抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外指明,如本文中使用的,“结合亲和力”指反映结合对(例如抗体和抗原)的成员之间的1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶Y的亲和力一般可以用解离常数(Kd)来代表,它是解离和结合速率常数(分别是koff和kon)的比。如此,等同的亲和力可包含不同的速率常数,只要速率常数的比保持相同。可以通过本领域已知的常用方法来测量亲和力,包括本文中描述的那些。用于测量亲和力的一种特定方法是表面等离振子共振(SPR)。
如本文中使用的“靶细胞抗原”指在靶细胞(例如肿瘤中的细胞,诸如癌细胞或肿瘤基质的细胞)的表面上呈现的抗原性决定簇。在某些实施方案中,靶细胞抗原是肿瘤细胞的表面上的抗原。在一个实施方案中,靶细胞抗原选自由成纤维细胞活化蛋白(FAP),癌胚抗原(CEA),黑素瘤相关硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP),表皮生长因子受体(EGFR),CD19,CD20和CD33组成的组。特别地,靶细胞抗原是成纤维细胞活化蛋白(FAP)。
术语“成纤维细胞活化蛋白(FAP)”,也称作脯氨酰内肽酶FAP或分离酶(Seprase)(EC 3.4.21),指来自任何脊椎动物来源的任何天然FAP,包括哺乳动物,诸如灵长类(例如人),非人灵长类(例如食蟹猴)和啮齿类(例如小鼠和大鼠),除非另外指明。该术语包括“全长”未加工的FAP以及源自细胞中的加工的任何形式的FAP。该术语还涵盖FAP的天然发生变体,例如剪接变体或等位变体。在一个实施方案中,本发明的抗原结合分子能够特异性结合人,小鼠和/或食蟹猴FAP。人FAP的氨基酸序列在UniProt(www.uniprot.org)登录号Q12884(版本149,SEQ ID NO:53),或NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov/)RefSeq NP_004451.2中显示。人FAP的细胞外结构域(ECD)自氨基酸位置26延伸至760。带His标签的人FAP ECD的氨基酸和核苷酸序列分别在SEQ ID NO:54和55中显示。小鼠FAP的氨基酸序列在UniProt登录号P97321(版本126,SEQ ID NO:56),或NCBI RefSeq NP_032012.1中显示。小鼠FAP的细胞外结构域(ECD)自氨基酸位置26延伸至761。SEQ ID NO:57和58分别显示带His标签的小鼠FAPECD的氨基酸和核苷酸序列。SEQ ID NO:59和60分别显示带His标签的食蟹猴FAP ECD的氨基酸和核苷酸序列。优选地,本发明的抗FAP结合分子结合FAP的细胞外结构域。例示性抗FAP结合分子在国际专利申请No.WO 2012/020006 A2中描述。
术语“癌胚抗原(CEA)”,也称作癌胚抗原相关细胞粘附分子5(CEACAM5),指来自任何脊椎动物来源的任何天然CEA,包括哺乳动物,诸如灵长类(例如人),非人灵长类(例如食蟹猴)和啮齿类(例如小鼠和大鼠),除非另外指明。人CEA的氨基酸序列在UniProt登录号P06731(版本151,SEQ ID NO:61)中显示。CEA早已鉴定为肿瘤相关抗原(Gold andFreedman,J Exp Med.,121:439-462,1965；Berinstein N.L.,J Clin Oncol.,20:2197-2207,2002)。最初归类为仅仅在胎儿组织中表达的蛋白质,现在已经在若干正常成体组织中鉴定CEA。这些组织主要是上皮起源的,包括胃肠,呼吸,和泌尿生殖道的细胞,和结肠,子宫颈,汗腺,和前列腺的细胞(Nap et al.,Tumour Biol.,9(2-3):145-53,1988；Nap etal.,Cancer Res.,52(8):2329-23339,1992)。上皮起源的肿瘤以及它们的转移含有CEA作为肿瘤相关抗原。虽然CEA本身的存在不指示转化成癌性细胞,但是CEA的分布是指示性的。在正常组织中,CEA一般在细胞的顶端表面上表达( S.,Semin CancerBiol.9(2):67-81(1999)),使得它对血流中的抗体不可及。与正常组织形成对比,CEA趋于在癌性细胞的整个表面上表达( S.,Semin Cancer Biol.9(2):67-81(1999))。这种表达模式的变化使得CEA变成对于癌性细胞中的抗体结合是可及的。另外,CEA表达在癌性细胞中升高。而且,升高的CEA表达促进细胞间粘附增加,这可导致转移(Marshall J.,Semin Oncol.,30(a Suppl.8):30-6,2003)。CEA表达在各种肿瘤实体中的流行度一般很高。与已发表的数据一致,自己在组织样品中实施的分析确认其高流行度,大约是结肠直肠癌(CRC)中95％,胰腺癌中90％,胃癌中80％,非小细胞肺癌(NSCLC,这种情况中它与HER3共表达)中60％,和乳腺癌中40％；发现小细胞肺癌和成胶质细胞瘤中的低表达。
CEA容易自细胞表面切割并或是直接或是经由淋巴自肿瘤脱落入血流。由于这种特性,血清CEA的水平已用作诊断癌症和筛选癌症,特别是结肠直肠癌复发的临床标志物(Goldenberg D M.,The International Journal of Biological Markers,7:183-188,1992；Chau I.et al.,J Clin Oncol.,22:1420-1429,2004；Flamini et al.,Clin CancerRes.,12(23):6985-6988,2006)。
术语“黑素瘤相关硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP)”,也称作硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4),指来自任何脊椎动物来源的任何天然MCSP,包括哺乳动物,诸如灵长类(例如人),非人灵长类(例如食蟹猴)和啮齿类(例如小鼠和大鼠),除非另外指明。人MCSP的氨基酸序列在UniProt登录号Q6UVK1(版本103,SEQ ID NO:62)中显示。
术语“表皮生长因子受体(EGFR)”,也称作原癌基因c-ErbB-1或受体酪氨酸蛋白质激酶erbB-1,指来自任何脊椎动物来源的任何天然EGFR,包括哺乳动物,诸如灵长类(例如人),非人灵长类(例如食蟹猴)和啮齿类(例如小鼠和大鼠),除非另外指明。人EGFR的氨基酸序列在UniProt登录号P00533(版本211,SEQ ID NO:63)中显示。
术语“CD19”指B淋巴细胞抗原CD19,也称作B淋巴细胞表面抗原B4或T细胞表面抗原Leu-12且包括来自任何脊椎动物来源的任何天然CD19,包括哺乳动物,诸如灵长类(例如人),非人灵长类(例如食蟹猴)和啮齿类(例如小鼠和大鼠),除非另外指明。人CD19的氨基酸序列在Uniprot登录号P15391(版本160,SEQ ID NO:64)中显示。该术语涵盖“全长”未加工的人CD19以及源自细胞中的加工的任何形式的人CD19,只要本文中报道的抗体结合它。CD19是在人B细胞的表面上表达的结构上不同的细胞表面受体,包括但不限于前B细胞,处于早期发育的B细胞(即未成熟B细胞),通过终末分化成浆细胞的成熟B细胞,和恶性B细胞。CD19由大多数前B急性淋巴细胞性白血病(ALL),非霍奇金氏淋巴瘤,B细胞慢性淋巴细胞性白血病(CLL),前淋巴细胞性白血病,毛细胞白血病,常见急性淋巴细胞性白血病,和一些无标志(Null)-急性成淋巴细胞性白血病表达。CD19在浆细胞上的表达进一步提示它可能在已分化的B细胞肿瘤,诸如多发性骨髓瘤上表达。因此,CD19抗原是非霍奇金氏淋巴瘤,慢性淋巴细胞性白血病和/或急性成淋巴细胞性白血病的治疗中的免疫疗法的靶标。
“CD20”指B淋巴细胞抗原CD20,也称作跨膜4域亚家族A成员1(MS4A1),B淋巴细胞表面抗原B1或白细胞表面抗原Leu-16,且包括来自任何脊椎动物来源的任何天然CD20,包括哺乳动物,诸如灵长类(例如人),非人灵长类(例如食蟹猴)和啮齿类(例如小鼠和大鼠),除非另外指明。人CD20的氨基酸序列在Uniprot登录号P11836(版本149,SEQ ID NO:65)中显示。
术语“CD33”指髓样细胞表面抗原CD33,也称作SIGLEC3或gp67,且包括来自任何脊椎动物来源的任何天然CD33,包括哺乳动物,诸如灵长类(例如人),非人灵长类(例如食蟹猴)和啮齿类(例如小鼠和大鼠),除非另外指明。人CD33的氨基酸序列在Uniprot登录号P20138(版本157,SEQ ID NO:66)中显示。
术语“可变区”或“可变域”指抗体重或轻链中牵涉抗原结合分子结合抗原的域。天然抗体的重链和轻链的可变域(分别是VH和VL)一般具有相似的结构,每个域包含四个保守的框架区(FR)和三个高变区(HVR)。参见例如Kindt et al.,Kuby Immunology,6th ed.,W.H.Freeman and Co.,p.91(2007)。单个VH或VL域可足以赋予抗原结合特异性。
如本文中使用的,术语“高变区”或“HVR”指抗体可变域中在序列上高变和/或形成结构上限定的环(“高变环”)的每个区域。一般地,天然四链抗体包含六个HVR:三个在VH中(H1,H2,H3),三个在VL中(L1,L2,L3)。HVR一般包含来自高变环和/或来自“互补决定区”(CDR)的氨基酸残基,后者具有最高的序列变异性和/或牵涉抗原识别。例示性高变环发生于氨基酸残基26-32(L1),50-52(L2),91-96(L3),26-32(H1),53-55(H2),和96-101(H3)(Chothia and Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。例示性CDR(CDR-L1,CDR-L2,CDR-L3,CDR-H1,CDR-H2,和CDR-H3)发生于氨基酸残基24-34(L1),50-56(L2),89-97(L3),31-35B(H1),50-65(H2),和95-102(H3)(Kabat et al.,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD(1991))。
高变区(HVR)也称作互补决定区(CDR),而且在提到可变区中形成抗原结合区的部分时,这些术语在本文中可互换使用。这个特定区域已经由Kabat et al.,U.S.Dept.ofHealth and Human Services,"Sequences of Proteins of Immunological Interest"(1983)和由Chothia et al.,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)描述,其中定义包括在针对彼此比较时的氨基酸残基的交叠或子集。无论如何,应用任一定义来提及抗体的CDR或其变体意图在如本文中定义和使用的术语的范围内。涵盖如由上文引用的每一篇参考文献定义的CDR的适宜氨基酸残基在下文表A中作为比较列出。涵盖特定CDR的确切残基编号会取决于CDR的序列和大小而变化。给予抗体的可变区氨基酸序列,本领域技术人员能例行确定哪些残基构成特定CDR。
表A:CDR定义1
CDR Kabat Chothia AbM<sup>2</sup>
V<sub>H</sub> CDR1 31-35 26-32 26-35
V<sub>H</sub> CDR2 50-65 52-58 50-58
V<sub>H</sub> CDR3 95-102 95-102 95-102
V<sub>L</sub> CDR1 24-34 26-32 24-34
V<sub>L</sub> CDR2 50-56 50-52 50-56
V<sub>L</sub> CDR3 89-97 91-96 89-97
1表A中的所有CDR定义的编号方式依照Kabat等人(见下文)列出的编号规则。
2如表A中使用的具有小写“b”的“AbM”指如由Oxford Molecular的“AbM”抗体建模软件定义的CDR。
Kabat等人还定义了可应用于任何抗体的可变区序列的编号系统。本领域普通技术人员能明确地将“Kabat编号方式”的这种系统指派给任何可变区序列,不依赖于超出序列本身的任何实验数据。如本文中使用的,“Kabat编号方式”是指由Kabat et al.,U.S.Dept.of Health and Human Services,"Sequence of Proteins of ImmunologicalInterest"(1983)中列出的编号系统。除非另有规定,抗体可变区中具体氨基酸残基位置的编号的提及依照Kabat编号系统。
除了VH中的CDR1之外,CDR一般包含形成高变环的氨基酸残基。CDR还包含“特异性决定残基”或“SDR”,它们是接触抗原的残基。SDR包含在称作缩短CDR或a-CDR的CDR区域中。例示性a-CDR(a-CDR-L1,a-CDR-L2,a-CDR-L3,a-CDR-H1,a-CDR-H2,和a-CDR-H3)发生于氨基酸残基31-34(L1),50-55(L2),89-96(L3),31-35B(H1),50-58(H2),和95-102(H3)(参见Almagro and Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))。除非另外指明,HVR残基和可变域中的其它残基(例如FR残基)在本文中依照Kabat等人,见上文编号。
如本文中使用的,在抗原结合分子(例如抗体)的语境中术语“亲和力成熟的”指如下的抗原结合分子,其例如通过突变而自参照抗原结合分子衍生,与参照抗体结合相同抗原,优选结合相同表位；且对抗原具有比参照抗原结合分子要高的亲和力。亲和力成熟一般牵涉修饰抗原结合分子的一个或多个CDR中的一个或多个氨基酸残基。典型地,亲和力成熟的抗原结合分子与初始参照抗原结合分子结合相同表位。
“框架”或“FR”指除了高变区(HVR)残基之外的可变域残基。可变域的FR一般由四个FR域组成:FR1,FR2,FR3,和FR4。因而,HVR和FR序列一般在VH(或VL)中以下述顺序出现:FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
出于本文中的目的,“受体人框架”是包含自如下文定义的人免疫球蛋白框架或人共有框架衍生的轻链可变域(VL)框架或重链可变域(VH)框架的氨基酸序列的框架。“自”人免疫球蛋白框架或人共有框架“衍生”的受体人框架可包含相同的氨基酸序列,或者它可含有氨基酸序列变化。在一些实施方案中,氨基酸变化的数目是10或更少,9或更少,8或更少,7或更少,6或更少,5或更少,4或更少,3或更少,或2或更少。在一些实施方案中,VL受体人框架在序列上与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列同一。
术语“嵌合”抗体指如下的抗体,其中重和/或轻链的一部分自特定来源或物种衍生,而重和/或轻链的剩余部分自不同来源或物种衍生。
抗体的“类”指其重链拥有的恒定域或恒定区的类型。有五大类抗体:IgA,IgD,IgE,IgG,和IgM,而且其中若干可进一步分为亚类(同种型),例如IgG1,IgG2,IgG3,IgG4,IgA1,和IgA2。与不同类的免疫球蛋白对应的重链恒定域分别称作α,δ,ε,γ,和μ。
“人源化”抗体指包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中,人源化抗体会包含至少一个,通常两个实质性整个如下的可变域,其中整个或实质性整个HVR(例如CDR)对应于非人抗体的那些,而且整个或实质性整个FR对应于人抗体的那些。人源化抗体任选可包含自人抗体衍生的抗体恒定区的至少一部分。抗体,例如非人抗体的“人源化形式”指经历人源化的抗体。本发明涵盖的其它形式的“人源化抗体”是其中恒定区已经自原始抗体的恒定区另外修饰或变化以生成依照本发明的特性,尤其是关于C1q结合和/或Fc受体(FcR)结合的那些。
“人”抗体是拥有与由人或人细胞生成的或自利用人抗体全集或其它人抗体编码序列的非人来源衍生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的这种定义专门排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。
本文中的术语“Fc域”或“Fc区”用于定义含有恒定区的至少一部分的抗体重链的C端区。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。IgG Fc区包含IgG CH2和IgG CH3域。人IgG Fc区的“CH2域”通常自约位置231处的氨基酸残基延伸至约位置340处的氨基酸残基。在一个实施方案中,碳水化合物链附着于CH2域。本文中的CH2域可以是天然序列CH2域或变体CH2域。“CH3域”包含Fc区中在CH2域C端的那段残基(即自IgG的约位置341处的氨基酸残基至约位置447处的氨基酸残基)。本文中的CH3区可以是天然序列CH3域或变体CH3域(例如具有在其一条链中引入的“隆起”(“节”)和在其另一条链中相应引入的“空腔”(“穴”)的CH3域；参见美国专利No.5,821,333,通过援引明确收入本文)。如本文中描述的,此类变体CH3域可用于促进两条不相同抗体重链的异二聚化。在一个实施方案中,人IgG重链Fc区自Cys226或自Pro230延伸至重链的羧基末端。然而,Fc区的C末端赖氨酸(Lys447)可以存在或不存在。除非本文中另有规定,Fc区或恒定区中的氨基酸残基的编号依照EU编号系统,也称作EU索引,如Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.PublicHealth Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中描述的。
“节-入-穴”技术在例如US 5,731,168；US 7,695,936；Ridgway et al.,Prot Eng9,617-621(1996)和Carter,J Immunol Meth 248,7-15(2001)中描述。一般地,该方法牵涉在第一多肽的界面处引入隆起(“节”)并在第二多肽的界面中引入相应的空腔(“穴”),使得该隆起可放置在该空腔中,从而促进异二聚体形成并阻碍同二聚体形成。通过将来自第一多肽的界面的小氨基酸侧链用较大侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替换来构建隆起。通过将大氨基酸侧链用较小侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)替换而在第二多肽的界面中创建与隆起相同或相似大小的补偿性空腔。可通过改变编码多肽的核酸,例如通过位点特异性诱变,或通过肽合成来生成隆起和空腔。在一个具体实施方案中,节修饰包含Fc域的两个亚基之一中的氨基酸替代T366W,而穴修饰包含Fc域的两个亚基之另一中的氨基酸替代T366S,L368A和Y407V。在又一个具体实施方案中,Fc域中包含节修饰的亚基另外包含氨基酸替代S354C,而Fc域中包含穴修饰的亚基另外包含氨基酸替代Y349C。引入这两个半胱氨酸残基导致在Fc区的两个亚基之间形成二硫桥,如此进一步稳定化二聚体(Carter,J Immunol Methods248,7-15(2001))。编号方式依照Kabat et al.,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD,1991中的EU索引。
“与免疫球蛋白的Fc区等同的区域”意图包括免疫球蛋白的Fc区的天然发生等位变体以及具有生成替代,添加,或删除的改变但并不实质性降低免疫球蛋白介导效应器功能(诸如抗体依赖性细胞的细胞毒性)的能力的变体。例如,可以自免疫球蛋白的Fc区的N端或C端删除失一个或多个氨基酸,生物学功能没有实质性损失。可以依照本领域已知的一般规则来选择此类变体,从而对活性具有最小限度影响(参见例如Bowie,J.U.et al.,Science 247:1306-10(1990))。
术语“效应器功能”指那些可归于抗体的Fc区的生物学活性,其随抗体同种型而变化。抗体效应器功能的例子包括:C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC),Fc受体结合,抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC),抗体依赖性细胞吞噬(ADCP),细胞因子分泌,免疫复合物介导的抗原呈递细胞对抗原的摄取,细胞表面受体(例如B细胞受体)的下调,和B细胞活化。
“活化性Fc受体”是在受到抗体的Fc区啮合后引发刺激携带该受体的细胞实施效应器功能的信号传导事件的Fc受体。活化性Fc受体包括FcγRIIIa(CD16a),FcγRI(CD64),FcγRIIa(CD32),和FcαRI(CD89)。一种特定活化性Fc受体是人FcγRIIIa(参见UniProt登录号P08637,版本141)。
术语“TNF配体家族成员”或“TNF家族配体”指促炎性细胞因子。细胞因子,特别是TNF配体家族的成员,一般在免疫系统的刺激和协调中发挥至关紧要的作用。目前,基于序列,功能,和结构相似性,已经将19种细胞因子鉴定为TNF(肿瘤坏死因子)配体超家族的成员。所有这些配体都是具有C端细胞外结构域(外域),N端细胞内结构域和单个跨膜结构域的II型跨膜蛋白。称作TNF同源域(THD)的C端细胞外结构域在超家族成员之间具有20-30％氨基酸同一性且负责结合受体。TNF外域还负责TNF配体形成受到其特异性受体识别的三聚体复合物。
TNF配体家族的成员选自由淋巴毒素α(也称作LTA或TNFSF1),TNF(也称作TNFSF2),LTβ(也称作TNFSF3),OX40L(也称作TNFSF4),CD40L(也称作CD154或TNFSF5),FasL(也称作CD95L,CD178或TNFSF6),CD27L(也称作CD70或TNFSF7),CD30L(也称作CD153或TNFSF8),4-1BBL(也称作TNFSF9),TRAIL(也称作APO2L,CD253或TNFSF10),RANKL(也称作CD254或TNFSF11),TWEAK(也称作TNFSF12),APRIL(也称作CD256或TNFSF13),BAFF(也称作CD257或TNFSF13B),LIGHT(也称作CD258或TNFSF14),TL1A(也称作VEGI或TNFSF15),GITRL(也称作TNFSF18),EDA-A1(也称作外胚层发育异常蛋白A1)和EDA-A2(也称作外胚层发育异常蛋白A2)组成的组。该术语指来自任何脊椎动物来源的任何天然TNF家族配体,包括哺乳动物,诸如灵长类(例如人),非人灵长类(例如食蟹猴)和啮齿类(例如小鼠和大鼠),除非另外指明。在本发明的具体实施方案中,TNF配体家族成员选自由OX40L,FasL,CD27L,TRAIL,4-1BBL,CD40L和GITRL组成的组。在一个特定实施方案中,TNF配体家族成员选自4-1BBL和OX40L。
可以自公众可获取的数据库,诸如Uniprot(www.uniprot.org)获得TNF配体家族成员的别的信息,特别是序列。例如,人TNF配体具有下述氨基酸序列:人淋巴毒素α(UniProt登录号P01374,SEQ ID NO:67),人TNF(UniProt登录号P01375,SEQ ID NO:68),人淋巴毒素β(UniProt登录号Q06643,SEQ ID NO:69),人OX40L(UniProt登录号P23510,SEQID NO:70),人CD40L(UniProt登录号P29965,SEQ ID NO:71),人FasL(UniProt登录号P48023,SEQ ID NO:72),人CD27L(UniProt登录号P32970,SEQ ID NO:73),人CD30L(UniProt登录号P32971,SEQ ID NO:74),4-1BBL(UniProt登录号P41273,SEQ ID NO:75),TRAIL(UniProt登录号P50591,SEQ ID NO:76),RANKL(UniProt登录号O14788,SEQ ID NO:77),TWEAK(UniProt登录号O43508,SEQ ID NO:78),APRIL(UniProt登录号O75888,SEQ IDNO:79),BAFF(UniProt登录号Q9Y275,SEQ ID NO:80),LIGHT(UniProt登录号O43557,SEQID NO:81),TL1A(UniProt登录号O95150,SEQ ID NO:82),GITRL(UniProt登录号Q9UNG2,SEQ ID NO:83)和外胚层发育异常蛋白A(UniProt登录号Q92838,SEQ ID NO:84)。
“外域”是膜蛋白中延伸入细胞外空间(即靶细胞以外的空间)的结构域。外域通常是蛋白质中启动与表面接触的部分,这导致信号转导。如此,如本文中定义的TNF配体家族成员的外域指TNF配体蛋白中延伸入细胞外空间的部分(细胞外结构域),但还包括负责三聚化和结合相应的TNF受体的更短部分或其片段。如此,术语“TNF配体家族成员的外域或其片段”指TNF配体家族成员中形成细胞外结构域的细胞外结构域或其仍然能够结合受体的部分(受体结合域)。
术语“共刺激性TNF配体家族成员”或“共刺激性TNF家族配体”指能够共刺激T细胞的增殖和细胞因子生成的TNF配体家族成员亚群。这些TNF家族配体能在与其相应的TNF受体相互作用时共刺激TCR信号,而且与其受体的相互作用导致TNFR相关因子(TRAF)的募集,这启动导致T细胞活化的信号传导级联。共刺激性TNF家族配体选自由4-1BBL,OX40L,GITRL,CD70,CD30L和LIGHT组成的组,更加特别地,共刺激性TNF配体家族成员选自4-1BBL和OX40L。
如本文中之前描述的,4-1BBL是一种II型跨膜蛋白且是TNF配体家族的一个成员。已经描述了具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的完整或全长4-1BBL在细胞的表面上形成三聚体。通过4-1BBL的外域的特定基序而实现三聚体的形成。所述基序在本文中命名为“三聚化区”。人4-1BBL序列的氨基酸50-254(SEQ ID NO:85)形成4-1BBL的细胞外结构域,但是甚至其片段也能够形成三聚体。在本发明的具体实施方案中,术语“4-1BBL的外域或其片段”指具有选自SEQ ID NO:4(人4-1BBL的氨基酸52-254),SEQ ID NO:1(人4-1BBL的氨基酸71-254),SEQ ID NO:3(人4-1BBL的氨基酸80-254)和SEQ ID NO:2(人4-1BBL的氨基酸85-254)的氨基酸序列的多肽或具有选自SEQ ID NO:5(人4-1BBL的氨基酸71-248),SEQ ID NO:8(人4-1BBL的氨基酸52-248),SEQ ID NO:7(人4-1BBL的氨基酸80-248)和SEQ ID NO:6(人4-1BBL的氨基酸85-248)的氨基酸序列的多肽,但是能够三聚化的外域的其它片段也包括在本文中。
如本文中之前描述的,OX40L是另一种II型跨膜蛋白且是TNF配体家族的又一个成员。完整或全长人OX40L具有SEQ ID NO:70的氨基酸序列。人OX40L序列的氨基酸51-183(SEQ ID NO:11)形成OX40L的细胞外结构域,但是甚至其片段也能够形成三聚体。在本发明的具体实施方案中,术语“OX40L的外域或其片段”指具有选自SEQ ID NO:11(人OX40L的氨基酸51-183)或SEQ ID NO:12(人OX40L的氨基酸52-183)的氨基酸序列的多肽,但是能够三聚化的外域的其它片段也包括在本文中。
术语“肽接头”指包含一个或多个氨基酸,典型地约2-20个氨基酸的肽。肽接头在本领域中是已知的或在本文中描述。合适的非免疫原性接头肽是例如(G4S)n,(SG4)n或G4(SG4)n肽接头,其中“n”一般是介于1和10之间,典型地介于1和4之间的数目,特别是2,即肽选自由GGGGS(SEQ ID NO:86),GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:87),SGGGGSGGGG(SEQ ID NO:88),(G4S)3或GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:89),GGGGSGGGGSGGGG或G4(SG4)2(SEQ ID NO:90),和(G4S)4或GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:91)组成的组,但是还包括序列GSPGSSSSGS(SEQ ID NO:92),GSGSGSGS(SEQ ID NO:93),GSGSGNGS(SEQ ID NO:94),GGSGSGSG(SEQ IDNO:95),GGSGSG(SEQ ID NO:96),GGSG(SEQ ID NO:97),GGSGNGSG(SEQ ID NO:98),GGNGSGSG(SEQ ID NO:99)和GGNGSG(SEQ ID NO:100)。特别感兴趣的肽接头是(G4S)1或GGGGS(SEQ ID NO:86),(G4S)2或GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:87)和GSPGSSSSGS(SEQ ID NO:92),更加特别是(G4S)2或GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:87)。
如此申请内使用的术语“氨基酸”表示天然发生羧基α-氨基酸的组,包含丙氨酸(三字母代码:ala,单字母代码:A),精氨酸(arg,R),天冬酰胺(asn,N),天冬氨酸(asp,D),半胱氨酸(cys,C),谷氨酰胺(gln,Q),谷氨酸(glu,E),甘氨酸(gly,G),组氨酸(his,H),异亮氨酸(ile,I),亮氨酸(leu,L),赖氨酸(lys,K),甲硫氨酸(met,M),苯丙氨酸(phe,F),脯氨酸(pro,P),丝氨酸(ser,S),苏氨酸(thr,T),色氨酸(trp,W),酪氨酸(tyr,Y),和缬氨酸(val,V)。
如本文中使用的“单链融合蛋白”指由与抗原结合模块或Fc部分的一部分融合的所述TNF配体家族成员的一个或两个外域构成的单链多肽。融合可通过经由肽接头将抗原结合模块的N端或C端氨基酸与所述TNF配体家族成员的外域的C或N端氨基酸直接连接而发生。
“融合”或“连接”意味着各构件(例如多肽和所述TNF配体家族成员的外域)通过肽键,或是直接地或是经由一个或多个肽接头连接。
关于参照多肽(蛋白质)序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”定义为在比对序列和在必要时引入缺口以实现最大百分比序列同一性之后,而且不考虑任何保守替代作为序列同一性的一部分,候选序列中与参照多肽序列中的氨基酸残基同一的氨基酸残基的百分比。出于确定百分比氨基酸序列同一性目的的比对可以以本领域的技能内的多种方式实现,例如使用公众可得的计算机软件,诸如BLAST,BLAST-2,ALIGN.SAWI或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员能确定用于比对序列的适宜参数,包括在所比较的序列的全长上实现最大比对需要的任何算法。然而,出于本文中的目的,使用序列比较计算机程序ALIGN-2生成％氨基酸序列同一性值。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech公司编写,而且源代码已经与用户文档一起提交美国版权局(Washington D.C.,20559),以美国版权注册号TXU510087注册。公众自Genentech公司(South San Francisco,California)可得到ALIGN-2程序,或者可以自源代码编译。ALIGN-2程序应当编译成在UNIX操作系统,优选数码UNIX V4.0D上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设置且不变。在采用ALIGN-2进行氨基酸序列比较的情况中,给定氨基酸序列A相对于(to),与(with),或针对(against)给定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者可表述为给定氨基酸序列A具有或包含相对于,与,或针对给定氨基酸序列B的某一％氨基酸序列同一性)如下计算:
100乘分数X/Y
其中X是由序列比对程序ALIGN-2在该程序的A和B的比对中打分为同一匹配的氨基酸残基的数目,且其中Y是B中的氨基酸残基的总数。会领会的是,在氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度的情况中,A相对于B的％氨基酸序列同一性会不等于B相对于A的％氨基酸序列同一性。除非另有具体说明,本文中使用的所有％氨基酸序列同一性值是如上一段中所述使用ALIGN-2计算机程序获得的。
在某些实施方案中,涵盖本文中提供的含有TNF配体三聚体的抗原结合分子的氨基酸序列变体。例如,可能想要改善含有TNF配体三聚体的抗原结合分子的结合亲和力和/或其它生物学特性。含有TNF配体三聚体的抗原结合分子的氨基酸序列变体可通过将适宜修饰引入编码该分子的核苷酸序列,或通过肽合成来制备。此类修饰包括例如抗体的氨基酸序列内的残基的删除,和/或插入和/或替代。可进行删除,插入,和替代的任何组合来得到最终的构建物,前提是最终的构建物拥有想要的特征,例如抗原结合。替代诱变感兴趣的位点包括HVR和框架(FR)。保守替代在表B中在标题“优选替代”下提供且在下文中提及氨基酸侧链类别(1)至(6)进一步描述。可将氨基酸替代引入感兴趣的分子并对产物筛选想要的活性,例如保留/改善的抗原结合,降低的免疫原性,或改善的ADCC或CDC。
表B
氨基酸可以依照共同的侧链特性来分组:
(1)疏水性的:正亮氨酸,Met,Ala,Val,Leu,Ile；
(2)中性亲水性的:Cys,Ser,Thr,Asn,Gln；
(3)酸性的:Asp,Glu；
(4)碱性的:His,Lys,Arg；
(5)影响链取向的残基:Gly,Pro；
(6)芳香族的:Trp,Tyr,Phe。
非保守替代会需要用这些类别之一的成员替换另一类别。
术语“氨基酸序列变体”包括其中在亲本抗原结合分子(例如人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基中有氨基酸替代的实质性变体。一般地,为进一步研究选择的所得变体相对于亲本抗原结合分子会具有某些生物学特性的改变(例如改善)(例如升高的亲和力,降低的免疫原性)和/或会实质性保留亲本抗原结合分子的某些生物学特性。例示性的替代变体是亲和力成熟的抗体,其可以例如使用基于噬菌体展示的亲和力成熟技术诸如本文中所描述的那些技术来方便地生成。简言之,将一个或多个HVR残基突变并将变体抗原结合分子在噬菌体上展示并对其筛选特定的生物学活性(例如结合亲和力)。在某些实施方案中,可以在一个或多个HVR内发生替代,插入,或删除,只要此类变化不实质性降低抗原结合分子结合抗原的能力。例如,可以在HVR中进行不实质性降低结合亲和力的保守改变(例如如本文中提供的保守替代)。一种对于鉴定抗体中可以作为诱变靶位的残基或区域有用的方法称作“丙氨酸扫描诱变”,如由Cunningham and Wells(1989)Science,244:1081-1085描述的。在此方法中,鉴定残基或靶残基的组(例如带电荷的残基,诸如Arg,Asp,His,Lys,和Glu)并用中性或带负电荷的氨基酸(例如丙氨酸或多丙氨酸)替换以测定抗体与抗原的相互作用是否受到影响。可以在对初始替代表明功能敏感性的氨基酸位置引入进一步的替代。或者/另外,利用抗原-抗原结合分子复合物的晶体结构来鉴定抗体和抗原之间的接触点。作为替代的候选,可以靶向或消除此类接触残基和邻近残基。可以筛选变体以确定它们是否含有想要的特性。
氨基酸序列插入包括长度范围为1个残基至含有100或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基端融合,以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括具有N端甲硫氨酰基残基的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。分子的其它插入变体包括与延长含有TNF配体三聚体的抗原结合分子的血清半衰期的多肽的N或C端的融合。
在某些实施方案中,改变本文中提供的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子以提高或降低抗体糖基化的程度。可以通过改变氨基酸序列,使得创建或去除一个或多个糖基化位点来方便地获得分子的糖基化变体。在含有TNF配体三聚体的抗原结合分子包含Fc区的情况中,可改变附着于其的碳水化合物。由哺乳动物细胞生成的天然抗体典型地包含分支的双触角寡糖,其一般通过N连接附着至Fc区的CH2域的Asn297。参见例如Wright etal.,TIBTECH 15:26-32(1997)。寡糖可包括各种碳水化合物,例如甘露糖,N-乙酰葡糖胺(GlcNAc),半乳糖,和唾液酸,以及附着于双触角寡糖结构的“主干”中的GlcNAc的岩藻糖。在一些实施方案中,可进行含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子中的寡糖的修饰以创建具有某些改良特性的变体。在一个方面,提供具有缺乏(直接或间接)附着于Fc区的岩藻糖的碳水化合物结构的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的变体。此类岩藻糖基化变体可具有改善的ADCC功能,参见例如美国专利公开号US 2003/0157108(Presta,L.)或US2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的别的变体包括那些具有两分寡糖的,例如,其中附着于Fc区的双触角寡糖通过GlcNAc两分。此类变体可具有降低的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能,参见例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)；美国专利No.6,602,684(Umana等人)；和US 2005/0123546(Umana等人)。还提供附着于Fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的变体。此类抗体变体可具有改善的CDC功能且在例如WO 1997/30087(Patel等人)；WO 1998/58964(Raju,S.)；和WO 1999/22764(Raju,S.)中描述。
在某些实施方案中,可能想要创建本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的半胱氨酸工程化改造的变体,例如“thioMAb”,其中分子的一个或多个残基用半胱氨酸残基替代。在特定实施方案中,替代的残基出现于分子的可及位点。通过用半胱氨酸替代那些残基,由此反应性硫醇基团放置在抗体的可及位点且可用于将抗体与其它模块诸如药物模块或接头-药物模块缀合以创建免疫缀合物。在某些实施方案中,可以用半胱氨酸替代任一个或多个下述残基:轻链的V205(Kabat编号方式)；重链的A118(EU编号方式)；和重链Fc区的S400(EU编号方式)。可以如例如美国专利No.7,521,541中所述生成半胱氨酸工程化改造的抗原结合分子。
在某些方面,可一步修饰本文中提供的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子以含有本领域已知且容易获得的另外的非蛋白质模块。适合于抗体衍生化的模块包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性例子包括但不限于聚乙二醇(PEG),乙二醇/丙二醇共聚物,羧甲基纤维素,右旋糖苷,聚乙烯醇,聚乙烯吡咯烷酮,聚-1,3-二氧戊环,聚-1,3,6-三噁烷,乙烯/马来酸酐共聚物,聚氨基酸(或是均聚物或是随机共聚物),和右旋糖苷或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇,丙二醇均聚物,环氧丙烷/环氧乙烷共聚物,聚氧乙烯化多元醇(例如甘油),聚乙烯醇,及其混合物。由于其在水中的稳定性,聚乙二醇丙醛在制造中可能具有优势。聚合物可以是任何分子量,而且可以是分支的或不分支的。附着于抗体的聚合物的数目可以变化,而且如果附着了超过一个聚合物,那么它们可以是相同或不同的分子。一般而言,可基于下述考虑来确定用于衍生化的聚合物的数目和/或类型,包括但不限于抗体要改进的特定特性或功能,双特异性抗体衍生物是否会用于限定条件下的疗法,等。在另一个方面,提供抗体和可以通过暴露于辐射选择性加热的非蛋白质性质模块的缀合物。在一个实施方案中,非蛋白质性质模块是碳纳米管(Kam,N.W.et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102(2005)11600-11605)。辐射可以是任何波长的,而且包括但不限于对普通细胞没有损害,但是将非蛋白质性质模块加热至抗体-非蛋白质性质模块附近的细胞被杀死的温度的波长。
在另一个方面,可获得本文中提供的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的免疫缀合物。“免疫缀合物”是与包括但不限于细胞毒剂在内的一个或多个异源分子缀合的抗体。
术语“多核苷酸”指分离的核酸分子或构建物,例如信使RNA(mRNA),病毒衍生的RNA,或质粒DNA(pDNA)。多核苷酸可包含常规的磷酸二酯键或非常规键(例如酰胺键,诸如在肽核酸(PNA)中找到的)。术语“核酸分子”指多核苷酸中存在的任一个或多个核酸区段,例如DNA或RNA片段。
“分离的”核酸分子或多核苷酸意指已经自其天然环境移出的核酸分子,DNA或RNA。例如,出于本发明的目的,认为载体中包含的编码多肽的重组多核苷酸是分离的。分离的多核苷酸的别的例子包括在异源宿主细胞中维持的重组多核苷酸或溶液中(部分或实质性)纯化的多核苷酸。分离的多核苷酸包括正常情况下含有该多核苷酸分子的细胞中含有的多核苷酸分子,但是该多核苷酸分子存在于染色体外或与其天然染色体位置不同的染色体位置。分离的RNA分子包括本发明的体内或体外RNA转录物,以及正和负链形式,和双链形式。依照本发明的分离的多核苷酸或核酸进一步包括合成生成的此类分子。另外,多核苷酸或核酸可以是或可以包括调节元件,诸如启动子,核糖体结合位点,或转录终止子。
具有与本发明的参照核苷酸序列至少例如95％“同一”的核苷酸序列的核酸或多核苷酸意指除了该多核苷酸序列可包括至多该参照核苷酸序列的每100个核苷酸的5个点突变之外,该多核苷酸的核苷酸序列与参照序列同一。换言之,为了获得具有与参照核苷酸序列至少95％同一的核苷酸序列的多核苷酸,参照序列中至多5％的核苷酸可以删除或用另一种核苷酸替代,或者,在参照序列中,总核苷酸的至多5％的数目的多个核苷酸可插入参照序列。参照序列的这些改变可发生于参照核苷酸序列的5’或3’端位置或那些末端位置之间的任何地方,或是在参照序列中的残基间个别散布或是以一个或多个连续组在参照序列内散布。实际上,使用已知的计算机程序,诸如上文关于多肽讨论的(例如ALIGN-2),可常规确定任何特定多核苷酸序列是否与本发明的核苷酸序列至少80％,85％,90％,95％,96％,97％,98％或99％同一。
术语“表达盒”指重组或合成生成的多核苷酸,具有允许特定核酸在靶细胞中转录的一系列规定核酸元件。重组表达盒可并入质粒,染色体,线粒体DNA,质体DNA,病毒,或核酸片段。典型地,在其它序列以外,表达载体的重组表达盒部分包括要转录的核酸序列和启动子。在某些实施方案中,本发明的表达盒包含编码本发明的双特异性抗原结合分子或其片段的多核苷酸序列。
术语“载体”或“表达载体”与“表达构建物”同义且指用于将与其可操作联合的特定基因导入靶细胞并指导表达的DNA分子。该术语包括作为自身复制性核酸结构的载体以及并入其已经导入的宿主细胞的基因组的载体。本发明的表达载体包含表达盒。表达载体容许大量稳定mRNA的转录。一旦表达载体在靶细胞内,则由细胞转录和/或翻译机制生成由该基因编码的核糖核酸分子或蛋白质。在一个实施方案中,本发明的表达载体包含包含编码本发明的双特异性抗原结合分子或其片段的多核苷酸序列的表达盒。
术语“宿主细胞”,“宿主细胞系”,和“宿主细胞培养物”可互换使用且指其中已经导入外源核酸的细胞,包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体/转化子”和“转化细胞”,其包括原代转化细胞和自其衍生的后代,不管传代的次数。后代在核酸内容方面与亲本细胞可以不是完全同一,但是可含有突变。具有与在原始转化细胞中筛选或选择相同的功能或生物学活性的突变体后代包括在本文中。宿主细胞是可用于生成本发明的双特异性抗原结合分子的任何类型的细胞系统。宿主细胞包括培养的细胞,例如培养的哺乳动物细胞,诸如CHO细胞,BHK细胞,NS0细胞,SP2/0细胞,YO骨髓瘤细胞,P3X63小鼠骨髓瘤细胞,PER细胞,PER.C6细胞或杂交瘤细胞,酵母细胞,昆虫细胞,和植物细胞,仅列举少数,但是还有转基因动物,转基因植物或培养的植物或动物组织内包含的细胞。
药剂的“有效量”指在接受其施用的细胞或组织中导致生理变化必需的量。
药剂(例如药用组合物)的“治疗有效量”指在剂量和时间段方面有效实现想要的治疗或预防结果必需的量。例如,治疗有效量的药剂消除,减轻/减少,延迟,最小化或预防疾病的不利影响。
“个体”或“受试者”是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养的动物(例如牛,绵羊,猫,犬,和马),灵长类(例如人和非人灵长类,诸如猴),家兔,和啮齿类(例如小鼠和大鼠)。特定地,个体或受试者是人。
术语“药用组合物”指其为此类形式的制剂,所述形式允许其中含有的活性组分的生物学活性是有效的,而且所述制剂不含另外的对会接受该配制剂施用的受试者具有不可接受的毒性的成分。
“药学可接受赋形剂”指药用组合物中除了活性组分以外,对受试者无毒的组分。药学可接受赋形剂包括但不限于缓冲剂,稳定剂,或防腐剂。
术语“包装插页”用于指通常包括在治疗性产品的商业包装中的说明书,其含有关于关注此类治疗性产品的使用的适应症,用法,剂量,施用,组合疗法,禁忌症和/或警告的信息。
如本文中使用的,“治疗/处理”指试图改变所治疗个体的自然进程的临床干预,而且可以或是为了预防或是在临床病理学的过程中实施的。治疗的期望效果包括但不限于预防疾病的发生或复发,缓解症状,削弱疾病的任何直接或间接病理学后果,预防转移,减缓疾病进展的速率,改善或减轻疾病状态,和消退或改善的预后。在一些实施方案中,使用本发明的分子来延迟疾病的发生或减缓疾病的进展。
如本文中使用的术语“癌症”指增殖性疾病,诸如淋巴瘤,癌,淋巴瘤,母细胞瘤,肉瘤,白血病,淋巴细胞性白血病,肺癌,非小细胞肺(NSCL)癌,支气管肺泡细胞肺癌,骨癌,胰腺癌,皮肤癌,头或颈癌,皮肤或眼内黑素瘤,子宫癌,卵巢癌,直肠癌,肛门区癌,胃癌,胃的癌,结肠直肠癌(CRC),胰腺癌,乳腺癌,三重阴性乳腺癌,子宫癌,输卵管癌,子宫内膜癌,宫颈癌,阴道癌,外阴癌,霍奇金(Hodgkin)氏病,食管癌,小肠癌,内分泌系统的癌症,甲状腺癌,甲状旁腺癌,肾上腺癌,软组织肉瘤,尿道癌,阴茎癌,前列腺癌,膀胱癌,肾或输尿管癌,肾细胞癌,肾盂癌,间皮瘤,肝细胞癌,胆道癌,中枢神经系统(CNS)赘生物,脊索瘤,脑干胶质瘤,多形性成胶质细胞瘤,星形细胞瘤,施旺细胞瘤,室管膜瘤,成神经管细胞瘤,脑膜瘤,鳞状细胞癌,垂体腺瘤和尤因氏肉瘤,黑素瘤,多发性骨髓瘤,B细胞癌(淋巴瘤),慢性淋巴细胞性白血病(CLL),急性成淋巴细胞性白血病(ALL),毛细胞白血病,慢性成髓细胞性白血病,包括任何上述癌症的顽固性形式,或一种或多种上述癌症的组合。
本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子
本发明提供新颖的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其具有特别有利特性,诸如可生产性,稳定性,强健性,结合亲和力,生物学活性,靶向效率和降低的毒性。
在第一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端。
在一个特定方面,本发明提供一种含有共刺激性TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的共刺激性TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述共刺激性TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端。如此,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端,其中该TNF配体家族成员共刺激人T细胞活化。
在另一个特定方面,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端,其中该TNF配体家族成员外域在所有情况中是同一的。
在一个特定方面,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含选自4-1BBL和OX40L的共刺激人T细胞活化的TNF配体家族成员。更加特别地,该TNF配体家族成员是4-1BBL。
在又一个方面,该TNF配体家族成员的外域包含选自由SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8组成的组的氨基酸序列,特别是SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
在一个特定方面,该TNF配体家族成员的外域包含选自由SEQ ID NO:5,SEQ IDNO:6,SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8组成的组的氨基酸序列。更加特别地,该TNF配体家族成员的外域包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
在又一个方面,本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端且其中该包含TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽包含选自由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10组成的组的氨基酸序列且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽包含选自由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5组成的组的氨基酸序列。在一个方面,该包含TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一个特定方面,该包含TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
在又一个方面,提供的是如本文中之前描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该TNF配体家族成员是OX40L。在一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该TNF配体家族成员的外域包含选自由SEQ ID NO:11和SEQ IDNO:12组成的组的氨基酸序列。
在一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)一个能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端。本发明如此涉及一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子对于对该靶细胞抗原的结合是单价的。
在另一个方面,提供的是本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该靶细胞抗原选自由成纤维细胞活化蛋白(FAP),CD19,癌胚抗原(CEA),黑素瘤相关硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP),表皮生长因子受体(EGFR),CD20和CD33组成的组。在一个方面,该靶细胞抗原选自由成纤维细胞活化蛋白(FAP),CD19和癌胚抗原(CEA)组成的组。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域是Fab或能够特异性结合靶细胞抗原的交换Fab。
在一个特定方面,该靶细胞抗原是成纤维细胞活化蛋白(FAP)。
在一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含
(a)VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR-L3,或
(b)VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的CDR-L3。
在一个特定方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的CDR-L3。
在又一个方面,提供的是如本文中之前描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的可变轻链或其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的可变轻链。
在另一个特定方面,该靶细胞抗原是CD19。
在一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CD19的Fab域包含
(a)VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-L3,或
(b)VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的CDR-L3。
在一个特定方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CD19的Fab域包含VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的CDR-L3。
在又一个方面,提供的是如本文中之前描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CD19的Fab域包含包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的可变轻链或其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的可变轻链。
在另一个特定方面,该靶细胞抗原是CEA。
在一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CEA的Fab域包含VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR-L3。
在一个特定方面,提供的是如本文中之前描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CEA的Fab域包含包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的可变轻链。
在又一个方面,该Fc域是IgG,特别是IgG1Fc域或IgG4Fc域。更加特别地,该Fc域是IgG1Fc域。在一个特定方面,该Fc域包含促进该Fc域的第一和第二亚基联合的修饰。
特别地,本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,其中该Fab重链在C端融合至该Fc域中的CH2域的N端。
在另一个方面,本发明涉及如本文中之前定义的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,其中该Fc域包含一处或多处降低对Fc受体,特别是对Fcγ受体的结合的氨基酸替代。
降低Fc受体结合和/或效应器功能的Fc域修饰
本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的Fc域由包含免疫球蛋白分子的重链域的一对多肽链组成。例如,免疫球蛋白G(IgG)分子的Fc域是二聚体,其每个亚基包含CH2和CH3IgG重链恒定域。Fc域的两个亚基能够彼此稳定联合。
Fc域对本发明的抗原结合分子赋予有利的药动学特性,包括有助于较好的在靶组织中的积累的长血清半衰期和有利的组织-血液分配比。然而,与此同时,这可能导致不想要的本发明的双特异性抗体对表达Fc受体的细胞而非优选的携带抗原的细胞的靶向。因而,在特定方面,与天然IgG1Fc域相比,本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的Fc域展现降低的对Fc受体的结合亲和力和/或降低的效应器功能。在一个方面,Fc并不实质性结合Fc受体和/或并不诱导效应器功能。在一个特定方面,Fc受体是Fcγ受体。在一个方面,Fc受体是人Fc受体。在一个具体方面,Fc受体是活化性人Fcγ受体,更具体地是人FcγRIIIa,FcγRI或FcγRIIa,最具体地是人FcγRIIIa。在一个方面,Fc域并不诱导效应器功能。降低的效应器功能可包括但不限于下述一种或多种:降低的补体依赖性细胞毒性(CDC),降低的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC),降低的抗体依赖性细胞吞噬(ADCP),降低的细胞因子分泌,降低的免疫复合物介导的抗原呈递细胞对抗原的摄取,降低的对NK细胞的结合,降低的对巨噬细胞的结合,降低的对单核细胞的结合,降低的对多形核细胞的结合,降低的诱导凋亡的直接信号传导,降低的树突细胞成熟,或降低的T细胞引发。
在某些方面,可以将一处或多处氨基酸修饰引入本文中提供的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的Fc区,由此生成Fc区变体。Fc区变体可包含包含一个或多个氨基酸位置处的氨基酸修饰(例如替代)的人Fc区序列(例如人IgG1,IgG2,IgG3或IgG4Fc区)。
在一个特定方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端,其中该Fc域包含一处或多处降低对Fc受体,特别是对Fcγ受体的结合的氨基酸替代。
在一个方面,本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的Fc域包含一处或多处降低Fc域对Fc受体的结合亲和力和/或效应器功能的氨基酸突变。典型地,在Fc域的两个亚基的每一个中存在相同的一处或多处氨基酸突变。特别是,Fc域包含位置E233,L234,L235,N297,P331和P329(EU编号方式)处的氨基酸替代。特别是,Fc域包含IgG重链的位置234和235(EU编号方式)和/或329(EU编号方式)处的氨基酸替代。更特别地,提供的是依照本发明的含有三聚体TNF家族配体的抗原结合分子,其包含具有IgG重链中的氨基酸替代L234A,L235A和P329G(“P329G LALA”,EU编号方式)的Fc域。氨基酸替代L234A和L235A指所谓的LALA突变。“P329G LALA”氨基酸替代组合几乎完全消除人IgG1Fc域的Fcγ受体结合且在国际专利申请公开号WO 2012/130831 A1中描述,其还描述了制备此类突变体Fc域的方法及用于测定其特性诸如Fc受体结合或效应器功能的方法。“EU编号方式”指依照Kabatet al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991的EU索引的编号方式。
具有降低的Fc受体结合和/或效应器功能的Fc域还包括那些具有一个或多个Fc域残基238,265,269,270,297,327和329的替代的(美国专利No.6,737,056)。此类Fc突变体包括具有两个或更多个氨基酸位置265,269,270,297和327处的替代的Fc突变体,包括具有残基265和297替代变成丙氨酸的替代的所谓的“DANA”Fc突变体(美国专利No.7,332,581)。
在另一个方面,Fc域是IgG4Fc域。与IgG1抗体相比,IgG4抗体展现降低的对Fc受体的结合亲和力和降低的效应器功能。在一个更具体方面,Fc域是包含位置S228(Kabat编号方式)处的氨基酸替代,特别是氨基酸替代S228P的IgG4Fc域。在一个更具体方面,Fc域是包含氨基酸替代L235E和S228P和P329G(EU编号方式)的IgG4Fc域。此类IgG4Fc域突变体和其Fcγ受体结合特性也在WO 2012/130831中描述。
突变体Fc域可使用本领域公知的遗传或化学方法通过氨基酸删除,替代,插入或修饰来制备。遗传方法可包括编码DNA序列的位点特异性诱变,PCR,基因合成,等等。正确的核苷酸变化可例如通过测序来验证。
对Fc受体的结合可例如通过ELISA或通过使用标准仪器诸如BIAcore仪(GEHealthcare)的表面等离振子共振(SPR),和Fc受体(诸如可通过重组表达获得的)容易地测定。一种合适的此类结合测定法在本文中描述。或者,Fc域或包含Fc域的细胞活化性双特异性抗原结合分子对Fc受体的结合亲和力可使用已知表达特定Fc受体的细胞系,诸如表达FcγIIIa受体的人NK细胞来评估。
Fc域或包含Fc域的本发明的双特异性抗体的效应器功能可通过本领域已知方法来测量。一种合适的用于测量ADCC的测定法在本文中描述。评估感兴趣分子的ADCC活性的体外测定法的其它例子在美国专利No.5,500,362；Hellstrom et al.,Proc Natl AcadSci USA 83,7059-7063(1986)和Hellstrom et al.,Proc Natl Acad Sci USA 82,1499-1502(1985)；美国专利No.5,821,337；Bruggemann et al.,J Exp Med 166,1351-1361(1987)中描述。或者,可采用非放射性测定法方法(参见例如ACTITM non-radioactivecytotoxicity assay for flow cytometry(CellTechnology,Inc.,Mountain View,CA)；和CytoTox non-radioactive cytotoxicity assay(Promega,Madison,WI))。对于此类测定法有用的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。或者/另外,可以在体内,例如在动物模型中评估感兴趣分子的ADCC活性,诸如Clynes et al.,ProcNatl Acad Sci USA 95,652-656(1998)中公开的。
在一些实施方案中,Fc域对补体成分,具体是C1q的结合降低。因而,在其中将Fc域工程化改造成具有降低的效应器功能的一些实施方案中,所述降低的效应器功能包括降低的CDC。可以进行C1q结合测定来确定本发明的双特异性抗体是否能够结合C1q并因此具有CDC活性。参见例如WO 2006/029879和WO 2005/100402中的C1q和C3c结合ELISA。为了评估补体活化,可实施CDC测定法(参见例如Gazzano-Santoro et al.,J Immunol Methods202,163(1996)；Cragg et al.,Blood 101,1045-1052(2003)；和Cragg and Glennie,Blood 103,2738-2743(2004))。
在一个特定方面,Fc域包含促进Fc域的第一和第二亚基联合的修饰。
促进异二聚化的Fc域修饰
在一个方面,本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端,其中该Fc域包含一处或多处降低对Fc受体,特别是对Fcγ受体的结合的氨基酸替代。如此,它们包含与典型地包含在两条不相同多肽链(“重链”)中的Fc域的两个亚基之一或另一融合的不同模块。这些多肽的重组共表达和后续二聚化导致两条多肽的数种可能组合。为了改善重组生成中含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的产率和纯度,在本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的Fc域中引入促进想要的多肽的联合的修饰如此会是有利的。
因而,本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的Fc域包含促进Fc域的第一和第二亚基联合的修饰。人IgG Fc域的两个亚基之间最广泛蛋白质-蛋白质相互作用的位点在Fc域的CH3域中。如此,所述修饰特别是在Fc域的CH3域中。
在一个具体方面,所述修饰是所谓的“节-入-穴”修饰,包含Fc域的两个亚基之一中的“节”修饰和Fc域的两个亚基之另一中的“穴”修饰。如此,在一个特定方面,本发明涉及如本文中之前描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包括IgG分子,其中第一重链的Fc部分包含第一二聚化模块且第二重链的Fc部分包含第二二聚化模块,容许IgG分子的两条重链异二聚化,而且依照节入穴技术,第一二聚化模块包含节且第二二聚化模块包括穴。
“节-入-穴”技术在例如US 5,731,168；US 7,695,936；Ridgway et al.,Prot Eng9,617-621(1996)和Carter,J Immunol Meth 248,7-15(2001)中描述。一般地,该方法牵涉在第一多肽的界面处引入隆起(“节”)并在第二多肽的界面中引入相应的空腔(“穴”),使得该隆起可放置在该空腔中,从而促进异二聚体形成并阻碍同二聚体形成。通过将来自第一多肽的界面的小氨基酸侧链用较大侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替换来构建隆起。通过将大氨基酸侧链用较小侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)替换而在第二多肽的界面中创建与隆起相同或相似大小的补偿性空腔。
因而,在一个特定方面,在本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的Fc域的第一亚基的CH3域中将氨基酸残基用具有较大侧链体积的氨基酸残基替换,由此在第一亚基的CH3域内生成隆起,其可放置在第二亚基的CH3域内的空腔中,并且在Fc域的第二亚基的CH3域中将氨基酸残基用具有较小侧链体积的氨基酸酸残基替换,由此在第二亚基的CH3域内生成空腔,其内可放置第一亚基的CH3域内的隆起。
可通过改变编码多肽的核酸,例如通过位点特异性诱变,或通过肽合成来生成隆起和空腔。
在一个具体方面,在Fc域的第一亚基的CH3域中将位置366处的苏氨酸残基用色氨酸残基替换(T366W),并且在Fc域的第二亚基的CH3域中将位置407处的酪氨酸残基用缬氨酸残基替换(Y407V)。更特别地,在Fc域的第二亚基中另外将位置366处的苏氨酸残基用丝氨酸残基替换(T366S)并将位置368处的亮氨酸残基用丙氨酸残基替换(L368A)。更特别地,在Fc域的第一亚基中另外将位置354处的丝氨酸残基用半胱氨酸残基替换(S354C),并且在Fc域的第二亚基中将位置349处的酪氨酸残基用半胱氨酸残基替换(Y349C)。引入这两个半胱氨酸残基导致在Fc域的两个亚基之间形成二硫桥。二硫桥进一步稳定化二聚体(Carter,J Immunol Methods 248,7-15(2001))。
如此,在一个特定方面,Fc域包含促进Fc域的第一和第二亚基联合的修饰。在一个特定方面,提供的是如本文中之前限定的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该Fc域的第一亚基包含节的氨基酸替代S354C和T366W(编号方式依照Kabat EU索引)且该Fc域的第二亚基包含穴的氨基酸替代Y349C,T366S,L368A和Y407V(编号方式依照Kabat EU索引)。
在一个备选方面,促进Fc域的第一和第二亚基联合的修饰包括介导静电操纵效应的修饰,例如如PCT公开文本WO 2009/089004中描述的。一般地,这种方法牵涉将两个Fc域亚基的界面处的一个或多个氨基酸残基用带电荷氨基酸残基替换,使得同二聚体形成变成在静电方面不利但异二聚化在静电方面有利。
在又一个方面,提供的是如本文中之前限定的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽在其N端融合至该Fc域的第二亚基(穴)的C端且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽在其N端融合至该Fc域的第一亚基(节)的C端。
在另一个方面,提供的是如本文中之前限定的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽在其N端融合至该Fc域的第一亚基(节)的C端且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽在其N端融合至该Fc域的第二亚基(穴)的C端。
在一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域在C端融合至该Fc域的第一亚基(节)的N端。在另一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域在C端融合至该Fc域的第二亚基(穴)的N端。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域在C端融合至该Fc域的第一亚基(节)的N端,该包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽在其N端融合至该Fc域的第二亚基(穴)的C端且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽在其N端融合至该Fc域的第一亚基(节)的C端。
在又一个方面,本发明提供如之前限定的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其进一步包含(d)不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域。如此,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端,和
(d)不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域。
这些包含不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的分子具有完整IgG样结构,而与此同时它们具有仅仅一个针对靶细胞抗原的结合位点(单价结合)的优点。如此,它们可具有更好的PK概况和/或更少/更轻的由例如抗药物抗体引起的副作用。
CH1/CL域中的修饰
为了进一步改善包含两个不同Fab域的抗原结合分子中的正确配对,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子可含有不同的带电荷氨基酸替代(所谓的“带电荷残基”)。将这些修饰引入交叉或非交叉CH1和CL域。在一个特定方面,本发明涉及一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中在CL域之一中位置123(EU编号方式)处的氨基酸已经用精氨酸(R)替换且位置124(EU编号方式)处的氨基酸已经用赖氨酸(K)替换,且其中在CH1域之一中位置147(EU编号方式)处和位置213(EU编号方式)处的氨基酸已经用谷氨酸(E)替换。
更特别地,本发明涉及一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端,和
(d)不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,其为交换Fab,其中在CL域中位置123(EU编号方式)处的氨基酸已经用精氨酸(R)替代且位置124(EU编号方式)处的氨基酸已经用赖氨酸(K)替代,且其中在邻近该TNF配体家族成员的CH1域中位置147(EU编号方式)处和位置213(EU编号方式)处的氨基酸已经用谷氨酸(E)替代。
特定的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子
在一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的包含该节突变的第二亚基的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的包含该穴突变的第一亚基的C端。
在一个特定方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的包含该节突变的第二亚基的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的包含该穴突变的第一亚基的C端且其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的VH和CH1域在C端融合至该Fc域的包含该节突变的第二亚基的N端。
在另一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的包含该节突变的第二亚基的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的包含该穴突变的第一亚基的C端且其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的VH和CH1域在C端融合至该Fc域的包含该穴突变的第一亚基的N端。
在又一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的包含该穴突变的第一亚基的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的包含该节突变的第二亚基的C端。
在一个特定方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的包含该穴突变的第一亚基的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的包含该节突变的第二亚基的C端且其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的VH和CH1域在C端融合至该Fc域的包含该节突变的第二亚基的N端。
在另一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的包含该穴突变的第一亚基的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的包含该节突变的第二亚基的C端且其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的VH和CH1域在C端融合至该Fc域的包含该穴突变的第一亚基的N端。
含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该靶细胞抗原是FAP
在一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该靶细胞抗原是成纤维细胞活化蛋白(FAP)。
在一个特定方面,提供的是如本文中之前定义的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列的重链可变区和包含与SEQ IDNO:26的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列的轻链可变区。
在另一个特定方面,提供的是如本文中之前定义的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列的重链可变区和包含与SEQ IDNO:28的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个方面,该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链可变区或包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链可变区。在一个特定方面,该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链可变区。在另一个特定方面,该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链可变区。在一个具体方面,该能够特异性结合FAP的Fab域包含由SEQ ID NO:27的氨基酸序列组成的VH域和由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成的VL域。
在又一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合FAP的Fab域,其包含包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的VL域,或包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的VL域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端。
在另一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合FAP的Fab域,其包含包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的VL域,或包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的VL域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端且其中该包含TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽包含选自由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10组成的组的氨基酸序列且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽包含选自由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5组成的组的氨基酸序列。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合FAP的Fab域,其包含包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的VL域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端且其中该包含TNF配体家族成员的两个外域的第一多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域的第二多肽包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
在另一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含该能够特异性结合FAP的Fab域的VL域,
(ii)融合多肽,其包含Fc域的第一亚基和包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的第一亚基的C端,和
(iii)重链,其包含该能够特异性结合FAP的Fab域的VH域,该Fc域的第二亚基和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该能够特异性结合FAP的Fab域的可变重链在其C端融合至该Fc域的第二亚基的N端且其中该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽在其N端融合至该Fc域的第二亚基的C端。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:106的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:104的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:105的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列。
在另一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:114的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:104的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:113的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含(i)轻链,其包含SEQID NO:114的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列。
在又一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:106的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:178的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:177的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:177的氨基酸序列。
在还有另一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:114的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:178的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:182的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列。
在另一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含该能够特异性结合FAP的Fab域的VL域,
(ii)融合多肽,其包含Fc域的第一亚基和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的第一亚基的C端,和
(iii)重链,其包含该能够特异性结合FAP的Fab域的VH域,该Fc域的第二亚基和包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽,其中该能够特异性结合FAP的Fab域的可变重链在其C端融合至该Fc域的第二亚基的N端且其中该包含TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽在其N端融合至该Fc域的第二亚基的C端。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:106的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:109的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:110的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:110的氨基酸序列。
在另一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:114的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:109的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:116的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:106的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:174的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:173的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:174的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:173的氨基酸序列。
在另一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:114的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:174的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:180的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:174的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:180的氨基酸序列。
在又一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)第一轻链,其包含该能够特异性结合FAP的Fab域的VL域,
(ii)第一重链,其包含该能够特异性结合FAP的Fab域的VH域,Fc域的第一亚基和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该能够特异性结合FAP的Fab域的可变重链在其C端融合至该Fc域的第二亚基的N端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的第一亚基的C端,
(iii)第二重链,其包含不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的VH域,该Fc域的第二亚基和包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽,其中该不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的可变重链在其C端融合至该Fc域的第二亚基的N端且其中该包含TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽在其N端融合至该Fc域的第二亚基的C端,和
(iv)第二轻链,其包含该不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的VL域。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)第一轻链,其包含与SEQ ID NO:106的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)第一重链,其包含与SEQ ID NO:217的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(iii)第二重链,其包含与SEQ ID NO:218的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iv)第二轻链,其包含与SEQ ID NO:214的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)第一轻链,其包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列,
(ii)第一重链,其包含SEQ ID NO:217的氨基酸序列,
(iii)第二重链,其包含SEQ ID NO:218的氨基酸序列,和
(iv)第二轻链,其包含SEQ ID NO:214的氨基酸序列。
在另一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:106的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)第一重链,其包含与SEQ ID NO:222的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(iii)第二重链,其包含与SEQ ID NO:221的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iv)第二轻链,其包含与SEQ ID NO:214的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)第一轻链,其包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列,
(ii)第一重链,其包含SEQ ID NO:222的氨基酸序列,
(iii)第二重链,其包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列,和
(iv)第二轻链,其包含SEQ ID NO:214的氨基酸序列。
在另一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)第一轻链,其包含该能够特异性结合FAP的Fab域的VL域,
(ii)第一重链,其包含该能够特异性结合FAP的Fab域的VH域,Fc域的第一亚基和包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽,其中该能够特异性结合FAP的Fab域的可变重链在其C端融合至该Fc域的第二亚基的N端且其中该包含TNF配体家族成员外域或其片段的第一多肽在其N端融合至该Fc域的第一亚基的C端,
(iii)第二重链,其包含不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的VH域,该Fc域的第二亚基和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的可变重链在其C端融合至该Fc域的第二亚基的N端且其中该包含一个TNF配体家族成员的外域或其片段的第二多肽在其N端融合至该Fc域的第二亚基的C端,和
(iv)第二轻链,其包含该不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的VL域。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)第一轻链,其包含与SEQ ID NO:106的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)第一重链,其包含与SEQ ID NO:212的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(iii)第二重链,其包含与SEQ ID NO:213的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iv)第二轻链,其包含与SEQ ID NO:214的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含(i)第一轻链,其包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列,
(ii)第一重链,其包含SEQ ID NO:212的氨基酸序列,
(iii)第二重链,其包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列,和
(iv)第二轻链,其包含SEQ ID NO:214的氨基酸序列。
在另一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:106的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)第一重链,其包含与SEQ ID NO:226的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(iii)第二重链,其包含与SEQ ID NO:225的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iv)第二轻链,其包含与SEQ ID NO:214的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)第一轻链,其包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列,
(ii)第一重链,其包含SEQ ID NO:226的氨基酸序列,
(iii)第二重链,其包含SEQ ID NO:225的氨基酸序列,和
(iv)第二轻链,其包含SEQ ID NO:214的氨基酸序列。
含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该靶细胞抗原是CD19
在一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该靶细胞抗原是CD19。
在一个特定方面,提供的是如本文中之前定义的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CD19的Fab域包含包含与SEQ ID NO:41的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列的重链可变区和包含与SEQ IDNO:42的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列的轻链可变区。
在另一个特定方面,提供的是如本文中之前定义的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CD19的Fab域包含包含与SEQ ID NO:43的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列的重链可变区和包含与SEQID NO:44的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个方面,该能够特异性结合CD19的Fab域包含包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的可变轻链或包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的可变轻链。在一个特定方面,该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQID NO:42的氨基酸序列的轻链可变区。在另一个特定方面,该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的轻链可变区。在一个具体方面,该能够特异性结合FAP的Fab域包含由SEQ ID NO:43的氨基酸序列组成的VH域和由SEQ ID NO:44的氨基酸序列组成的VL域。
在又一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合CD19的Fab域,其包含包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的VL域,或包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的VL域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端。
在另一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合CD19的Fab域,其包含包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的VL域,或包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的VL域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端且其中该包含TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽包含选自由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10组成的组的氨基酸序列且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽包含选自由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5组成的组的氨基酸序列。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合CD19的Fab域,其包含包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的VL域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端且其中该包含TNF配体家族成员的两个外域的第一多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域的第二多肽包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
在另一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含该能够特异性结合CD19的Fab域的可变轻链,
(ii)融合多肽,其包含Fc域的第一亚基和包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的第一亚基的C端,和
(iii)重链,其包含该能够特异性结合CD19的Fab域的可变重链,该Fc域的第二亚基和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该能够特异性结合CD19的Fab域的可变重链在其C端融合至该Fc域的第二亚基的N端且其中该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽在其N端融合至该Fc域的第二亚基的C端。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:120的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:104的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:119的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列。
在另一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:126的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:104的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:125的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:126的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:174的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:125的氨基酸序列。
在又一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:120的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:178的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:186的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列。
在还有另一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:126的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:178的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:190的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:126的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:190的氨基酸序列。
在另一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含该能够特异性结合CD19的Fab域的可变轻链,
(ii)融合多肽,其包含Fc域的第一亚基和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的第一亚基的C端,和
(iii)重链,其包含该能够特异性结合CD19的Fab域的可变重链,该Fc域的第二亚基和包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽,其中该能够特异性结合CD19的Fab域的可变重链在其C端融合至该Fc域的第二亚基的N端且其中该包含TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽在其N端融合至该Fc域的第二亚基的C端。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:120的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:109的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:122的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列。
在另一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:126的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:109的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:128的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:126的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:120的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:174的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:184的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:174的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列。
在另一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:126的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:174的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:188的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:126的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:174的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:188的氨基酸序列。
含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该靶细胞抗原是CEA
在一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该靶细胞抗原是CEA。
在一个特定方面,提供的是如本文中之前定义的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CEA的Fab域包含包含与SEQ ID NO:51的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列的重链可变区和包含与SEQ IDNO:52的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个方面,该能够特异性结合CEA的Fab域包含包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的可变轻链或包含SEQ ID NO:163的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:164的氨基酸序列的可变轻链。在一个特定方面,该能够特异性结合CEA的Fab域包含包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ IDNO:52的氨基酸序列的轻链可变区。在一个具体方面,该能够特异性结合CEA的Fab域包含由SEQ ID NO:51的氨基酸序列组成的VH域和由SEQ ID NO:52的氨基酸序列组成的VL域。
在又一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合CEA的Fab域,其包含包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的VL域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端。
在另一个方面,本发明提供一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合CEA的Fab域,其包含包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的VL域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端且其中该包含TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽包含选自由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10组成的组的氨基酸序列且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽包含选自由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5组成的组的氨基酸序列。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合CEA的Fab域,其包含包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的VL域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端且其中该包含TNF配体家族成员的两个外域的第一多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域的第二多肽包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
在另一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含该能够特异性结合CEA的Fab域的可变轻链,
(ii)融合多肽,其包含Fc域的第一亚基和包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的第一亚基的C端,和
(iii)重链,其包含该能够特异性结合CEA的Fab域的可变重链,该Fc域的第二亚基和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该能够特异性结合CEA的Fab域的可变重链在其C端融合至该Fc域的第二亚基的N端且其中该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽在其N端融合至该Fc域的第二亚基的C端。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:156的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:104的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:155的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:156的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:155的氨基酸序列。
在又一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:156的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:178的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:194的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:156的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:194的氨基酸序列。
在另一个方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含该能够特异性结合CEA的Fab域的可变轻链,
(ii)融合多肽,其包含Fc域的第一亚基和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的第一亚基的C端,和
(iii)重链,其包含该能够特异性结合CEA的Fab域的可变重链,该Fc域的第二亚基和包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽,其中该能够特异性结合CEA的Fab域的可变重链在其C端融合至该Fc域的第二亚基的N端且其中该包含TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽在其N端融合至该Fc域的第二亚基的C端。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:156的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:109的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:158的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:156的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:158的氨基酸序列。
在一个特定方面,提供的是一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含与SEQ ID NO:156的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含与SEQ ID NO:174的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含与SEQ ID NO:192的氨基酸序列至少约95％,96％,97％,98％,99％或100％同一的氨基酸序列。
更加特别地,该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子包含
(i)轻链,其包含SEQ ID NO:156的氨基酸序列,
(ii)融合多肽,其包含SEQ ID NO:174的氨基酸序列,和
(iii)重链,其包含SEQ ID NO:192的氨基酸序列。
多核苷酸
本发明进一步提供分离的多核苷酸,其编码如本文中描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子或其片段。
该分离的编码本发明的含有TNF配体三聚体的抗原结合分子的多核苷酸可以作为编码整个抗原结合分子的单一多核苷酸或作为共表达的多种(例如两种或更多种)多核苷酸表达。由共表达的多核苷酸编码的多肽可经由例如二硫键或其它手段联合以形成功能性抗原结合分子。例如,免疫球蛋白的轻链部分与免疫球蛋白的重链部分可以由分开的多核苷酸编码。当共表达时,重链多肽会与轻链多肽联合以形成免疫球蛋白。
在一些方面,该分离的多核苷酸编码整个依照如本文中描述的发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。特别地,该分离的多核苷酸编码该依照如本文中描述的发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子中包含的多肽。
在一个方面,本发明涉及一种分离的多核苷酸,其编码一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该多核苷酸包含(a)编码能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的序列,(b)编码Fc域的第一亚基和包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽的序列和(c)编码Fc域的第二亚基和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽的序列。
在某些方面,提供的是一种分离的多核苷酸,其编码一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该多核苷酸包含(a)编码能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的序列,(b)编码Fc域的第一亚基和包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽的序列,(c)编码Fc域的第二亚基和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽的序列,和(d)编码不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的序列。
在另一个方面,提供的是一种分离的多核苷酸,其编码一种含有4-1BB配体三聚体的抗原结合分子,其中该多核苷酸包含(a)编码能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的序列,(b)编码Fc域的第一亚基和包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽的序列和(c)编码Fc域的第二亚基和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽的序列。
在又一个方面,本发明涉及一种分离的多核苷酸,其包含编码包含两个4-1BBL片段的多肽的序列,该4-1BBL片段包含与SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3,SEQ IDNO:4,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8中显示的氨基酸序列至少约90％,95％,98％或100％同一的氨基酸序列,且涉及多核苷酸,其包含编码包含一个4-1BBL片段的多肽的序列,该4-1BBL片段包含与SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3,SEQ IDNO:4,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8中显示的氨基酸序列至少约90％,95％,98％或100％同一的氨基酸序列。
而且,提供的是一种分离的多核苷酸,其编码一种含有OX40配体三聚体的抗原结合分子,其中该多核苷酸包含(a)编码能够特异性结合靶细胞抗原的模块的序列,(b)编码包含通过肽接头彼此连接的OX40L的两个外域或两个其片段的多肽的序列和(c)编码包含OX40L的一个外域或其片段的多肽的序列。
在另一个方面,本发明涉及一种分离的多核苷酸,其包含编码包含两个4-1BBL片段的多肽的序列,该4-1BBL片段包含与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10中显示的氨基酸序列至少约90％,95％,98％或100％同一的氨基酸序列,且涉及一种多核苷酸,其包含编码包含一个4-1BBL片段的多肽的序列,该4-1BBL片段包含与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:5中显示的氨基酸序列至少约90％,95％,98％或100％同一的氨基酸序列。
在又一些方面,本发明涉及一种多核苷酸,其包含与本文中公开的具体cDNA序列至少约90％,95％,98％或100％同一的序列。在一个特定方面,本发明涉及一种多核苷酸,其包含与本文中公开的具体cDNA序列之一同一的序列。
在某些方面,该多核苷酸或核酸是DNA。在其它实施方案中,本发明的多核苷酸是RNA,例如以信使RNA(mRNA)的形式。本发明的RNA可以是单链的或双链的。
重组方法
本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子可通过例如固态肽合成(例如Merrifield固相合成)或重组生成来获得。对于重组生成,分离编码例如如上文描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子或其多肽片段的一种或多种多核苷酸并插入一个或多个载体供进一步克隆和/或宿主细胞中的表达。此类多核苷酸可使用常规规程容易地分离和测序。在本发明的一个方面,提供包含本发明的一种或多种多核苷酸的载体,优选表达载体。可使用本领域技术人员公知的方法来构建含有含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子(片段)的编码序列连同适宜的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术,合成技术和体内重组/遗传重组。参见例如Maniatis et al.,MOLECULARCLONING:A LABORATORY MANUAL,Cold Spring Harbor Laboratory,N.Y.(1989)；和Ausubel et al.,CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY,Greene PublishingAssociates and Wiley Interscience,N.Y.(1989)中描述的技术。表达载体可以是病毒,质粒的部分,或者可以是核酸片段。表达载体包括其中与启动子和/或其它转录或翻译控制元件可操作联合地克隆编码含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子或其多肽片段的多核苷酸(即编码区)的表达盒。如本文中使用的,“编码区”是核酸中由翻译成氨基酸的密码子组成的部分。虽然“终止密码子”(TAG,TGA,或TAA)不翻译成氨基酸,但是如果存在的话,它可考虑作为编码区的一部分,但是任何侧翼序列,例如启动子,核糖体结合位点,转录终止子,内含子,5’和3’非翻译区,等等不是编码区的部分。两个或更多个编码区可存在于单个多核苷酸构建物中,例如在单个载体上,或在分开的多核苷酸构建物中,例如在分开的(不同的)载体上。而且,任何载体可含有单个编码区,或者可包含两个或更多个编码区,例如,本发明的载体可编码一种或多种多肽,其经由蛋白水解切割在翻译后或共翻译地分开成最终的蛋白质。另外,本发明的载体,多核苷酸,或核酸可编码异源编码区,或是与编码本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子或其多肽片段,或其变体或衍生物的多核苷酸融合或是不融合。异源编码区包括但不限于专门的元件或基序,诸如分泌信号肽或异源功能域。可操作联合是这样一种方式,当基因产物,例如多肽的编码区与一种或多种调节序列这样联合时,将基因产物的表达置于调节序列的影响或控制下。如果启动子功能的诱导导致编码想要的基因产物的mRNA转录的话且如果两个DNA片段之间的连接的性质不干扰表达提交序列指导基因产物表达的能力或不干扰DNA模板被转录的能力的话,两个DNA片段(诸如多肽编码区和与其联合的启动子)是“可操作联合的”。如此,如果启动子能够影响编码多肽的核酸的转录的话,启动子区与该核酸会是可操作联合的。启动子可以是仅仅在预定细胞中指导DNA实质性转录的细胞特异性启动子。在启动子以外,其它转录控制元件,例如增强子,操纵基因,阻抑物,和转录终止信号可与多核苷酸可操作联合以指导细胞特异性转录。
本文中公开了合适的启动子和其它转录控制区。多种转录控制区是本领域技术人员知道的。这些包括但不限于在脊椎动物细胞中发挥功能的转录控制区,诸如但不限于来自巨细胞病毒(例如立即早期启动子,连同内含子A),猿病毒40(例如早期启动子),和逆转录病毒(诸如例如劳斯(Rous)肉瘤病毒)的启动子和增强子区段。其它转录控制区包括那些自脊椎动物基因诸如肌动蛋白,热休克蛋白,牛生长激素和兔α珠蛋白衍生的,以及能够控制真核细胞中的基因表达的其它序列。另外的合适的转录控制区包括组织特异性启动子和增强子以及诱导型启动子(例如四环素诱导型启动子)。类似地,多种翻译控制元件是本领域普通技术人员知道的。这些包括但不限于核糖体结合位点,翻译起始和终止密码子,和自病毒系统衍生的元件(特别是内部核糖体进入位点或IRES,也称作CITE序列)。表达盒还可包括其它特征,诸如复制起点,和/或染色体整合元件,诸如逆转录病毒长末端重复(LTR),或腺伴随病毒(AAV)反向末端重复(ITR)。
本发明的多核苷酸和核酸编码区可以与另外的编码分泌或信号肽(其指导由本发明的多核苷酸编码的多肽的分泌)的编码区联合。例如,如果想要分泌含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子或其多肽片段的话,可以将编码信号序列的DNA放置在编码本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子或其多肽片段的核酸的上游。依照信号假说,由哺乳动物细胞分泌的蛋白质具有信号肽或分泌前导序列,其在一旦启动生长中的蛋白质链输出穿过粗面内质网时自成熟蛋白质切割下来。本领域普通技术人员知道脊椎动物细胞分泌的多肽一般具有与多肽的N端融合的信号肽,其自翻译的多肽切割下来以生成分泌或“成熟”形式的多肽。在某些实施方案中,使用天然信号肽,例如免疫球蛋白重链或轻链信号肽,或该序列保留指导与其可操作联合的多肽分泌的能力的功能性衍生物。或者,可使用异源哺乳动物信号肽或其功能性衍生物。例如,野生型前导序列可以用人组织纤溶酶原活化物(TPA)或小鼠β-葡糖醛酸糖苷酶的前导序列替代。
编码可用于推动稍后纯化(例如组氨酸标签)或辅助标记融合蛋白的短蛋白质序列的DNA可以包括在编码本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子或其多肽片段的多核苷酸的内部或末端。
在本发明的又一个方面,提供包含本发明的一种或多种多核苷酸的宿主细胞。在某些实施方案中,提供包含本发明的一种或多种载体的宿主细胞。多核苷酸和载体分别可单一地或组合地并入本文中关于多核苷酸和载体描述的任何特征。在一个方面,宿主细胞包含(例如已经转化或转染)包含编码本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子(的一部分)的多核苷酸的载体。如本文中使用的,术语“宿主细胞”指可以工程化改造以生成本发明的融合蛋白或其片段的任何种类的细胞系统。适合于复制和支持抗原结合分子表达的宿主细胞是本领域公知的。可以用特定的表达载体适当地转染或转导此类细胞,并且可以培养大量的含有载体的细胞供接种大规模发酵罐以获得足够数量的抗原结合分子供临床应用。合适的宿主细胞包括原核微生物,诸如大肠杆菌,或各种真核细胞,诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,昆虫细胞,等等。例如,特别是在不需要糖基化时,可以在细菌中生成多肽。表达后,多肽可以在可溶性级分中自细菌细胞糊分离且可以进一步纯化。在原核生物以外,真核微生物诸如丝状真菌或酵母对于编码多肽的载体是合适的克隆或表达宿主,包括其糖基化途径已经“人源化”,导致生成具有部分或完全人糖基化样式的多肽的真菌和酵母株。参见Gerngross,Nat Biotech 22,1409-1414(2004),和Li et al.,Nat Biotech 24,210-215(2006)。
对于表达(糖基化)多肽合适的宿主细胞也源自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的例子包括植物和昆虫细胞。已经鉴定了可以与昆虫细胞联合使用,特别是用于转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞的众多杆状病毒株。植物细胞培养物也可用作宿主。参见例如美国专利No.5,959,177,6,040,498,6,420,548,7,125,978,和6,417,429(描述用于在转基因植物中生成抗体的PLANTIBODIESTM技术)。脊椎动物细胞也可用作宿主。例如,适应在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其它例子是经SV40转化的猴肾CV1系(COS-7),人胚肾细胞系(例如Graham et al.,J Gen Virol 36,59(1977)中描述的293或293T细胞),幼仓鼠肾细胞(BHK),小鼠塞托利(Sertoli)细胞(如例如Mather,Biol Reprod 23,243-251(1980)中描述的TM4细胞),猴肾细胞(CV1),非洲绿猴肾细胞(VERO-76),人宫颈癌细胞(HELA),犬肾细胞(MDCK),牛鼠(buffalo rat)肝细胞(BRL 3A),人肺细胞(W138),人肝细胞(Hep G2),小鼠乳房肿瘤细胞(MMT 060562),TRI细胞(如例如Mather et al.,Annals N.Y.Acad Sci 383,44-68(1982)中描述的),MRC 5细胞,和FS4细胞。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,包括dhfr-CHO细胞(Urlaub et al.,Proc Natl Acad Sci USA 77,4216(1980))；和骨髓瘤细胞系诸如YO,NS0,P3X63和Sp2/0。关于适合于蛋白质生成的某些哺乳动物宿主细胞系的综述,参见例如Yazaki and Wu,Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,NJ),pp.255-268(2003)。宿主细胞包括培养的细胞,例如培养的哺乳动物细胞,酵母细胞,昆虫细胞,细菌细胞和植物细胞,在此仅列举少数,但是还有转基因动物,转基因植物或培养的植物或动物组织内包含的细胞。在一个实施方案中,宿主细胞是真核细胞,优选哺乳动物细胞,诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,人胚肾(HEK)细胞或淋巴样细胞(例如Y0,NS0,Sp20细胞)。在这些系统中表达外来基因的标准技术是本领域已知的。可以工程化改造表达包含免疫球蛋白重链或轻链任一的多肽的细胞,从而还表达另一条免疫球蛋白链,使得所表达的产物是具有重和轻链二者的免疫球蛋白。
在一个方面,提供一种生成本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子或其多肽片段的方法,其中该方法包含在适于本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子或其多肽片段表达的条件下培养如本文中提供的包含编码本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子或其多肽片段的多核苷酸的宿主细胞,和自宿主细胞(或宿主细胞培养液)回收本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子或其多肽片段。
在本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子中,各构件(一个能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,一条包含TNF配体家族成员的两个外域或其片段的多肽和一条包含所述TNF家族配体家族成员的一个外域或其片段的多肽)在遗传上并非彼此融合。多肽设计成使得其构件(TNF配体家族成员的两个外域或其片段和其它构件诸如CH或CL)直接地或经由接头序列彼此融合。可以依照本领域公知的方法确定接头的组成和长度,而且可以测试功效。本发明的抗原结合分子的不同构件之间的接头序列的例子见本文中提供的序列。如果想要的话,还可以包括另外的序列以掺入切割位点以分开融合蛋白的各个构件,例如内肽酶识别序列。
在某些实施方案中,形成抗原结合分子的一部分的能够特异性结合靶细胞抗原的模块(例如Fab片段)至少包含能够结合抗原的免疫球蛋白可变区。可变区可形成天然或非天然发生的抗体和其片段的一部分且自其衍生。生成多克隆抗体和单克隆抗体的方法是本领域公知的(参见例如Harlow and Lane,"Antibodies,a laboratory manual",ColdSpring Harbor Laboratory,1988)。非天然发生抗体可以使用固相肽合成来构建,可以重组生成(例如如美国专利No.4,186,567中描述的)或可以通过例如筛选包含可变重链和可变轻链的组合文库来获得(参见授予McCafferty的美国专利No.5,969,108)。
任何动物物种的免疫球蛋白均可在本发明中使用。在本发明中有用的非限制性免疫球蛋白可以是鼠,灵长类,或人起源的。如果融合蛋白旨在供人使用的话,可使用嵌合形式的免疫球蛋白,其中免疫球蛋白的恒定区来自人。还可依照本领域公知的方法制备人源化或完全人形式的免疫球蛋白(参见例如授予Winter的美国专利No.5,565,332)。人源化可通过多种方法来实现,包括但不限于(a)将非人(例如供体抗体)CDR嫁接到人(例如受体抗体)框架和恒定区上,有或没有保留关键框架残基(例如那些对于保留优秀的抗原结合亲和力或抗体功能重要的残基),(b)仅将非人特异性决定区(SDR或a-CDR；对于抗体-抗原相互作用关键的残基)嫁接到人框架和恒定区上,或(c)移植整个非人可变域,但通过替换表面残基用人样区段“遮盖”它们。人源化抗体和生成它们的方法在例如Almagro andFransson,Front Biosci 13,1619-1633(2008)中综述,而且在例如Riechmann et al.,Nature 332,323-329(1988)；Queen et al.,Proc Natl Acad Sci USA 86,10029-10033(1989)；美国专利No.5,821,337,7,527,791,6,982,321,和7,087,409；Jones et al.,Nature 321,522-525(1986)；Morrison et al.,Proc Natl Acad Sci 81,6851-6855(1984)；Morrison and Oi,Adv Immunol 44,65-92(1988)；Verhoeyen et al.,Science239,1534-1536(1988)；Padlan,Molec Immun 31(3),169-217(1994)；Kashmiri et al.,Methods36,25-34(2005)(描述SDR(a-CDR)嫁接)；Padlan,Mol Immunol 28,489-498(1991)(描述“表面重塑”)；Dall’Acqua et al.,Methods 36,43-60(2005)(描述“FR改组”)；和Osbourn et al.,Methods 36,61-68(2005)和Klimka et al.,Br J Cancer 83,252-260(2000)(描述用于FR改组的“导向选择”办法)中进一步描述。依照本发明的特定免疫球蛋白是人免疫球蛋白。人抗体和人可变区可使用本领域已知的多种技术来生成。人抗体在vanDijk and van de Winkel,Curr Opin Pharmacol 5,368-74(2001)和Lonberg,Curr OpinImmunol 20,450-459(2008)中一般性描述。人可变区能形成通过杂交瘤方法生成的人单克隆抗体的一部分且自其衍生(参见例如Monoclonal Antibody Production Techniquesand Applications,pp.51-63(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987))。人抗体和人可变区还可以通过将免疫原施用于已经修饰以响应抗原性攻击而生成完整人抗体或具有人可变区的完整抗体decision转基因动物来制备(参见例如Lonberg,Nat Biotech 23,1117-1125(2005)。人抗体和人可变区还可以通过分离自人衍生噬菌体展示文库选择的Fv克隆可变区序列来生成(参见例如Hoogenboom et al.,in Methods in Molecular Biology 178,1-37(O’Brien et al.,ed.,Human Press,Totowa,NJ,2001)；和McCafferty et al.,Nature348,552-554；Clackson et al.,Nature 352,624-628(1991))。噬菌体典型地或是以单链Fv(scFv)片段或是作为Fab片段展示抗体片段。
在某些方面,依照例如PCT公开文本WO 2012/020006(参见关于亲和力成熟的实施例)或美国专利申请公开文本No.2004/0132066中公开的方法工程化改造本发明的抗原结合分子中包含的能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域(例如Fab片段)以具有增强的结合亲和力。本发明抗原结合分子结合特定抗原性决定簇的能力可经由酶联免疫吸附测定法(ELISA)或本领域技术人员熟悉的其它技术来测量,例如表面等离振子共振技术(Liljeblad et al.,Glyco J 17,323-329(2000))),和传统的结合测定法(Heeley,EndocrRes 28,217-229(2002))。可使用竞争测定法来鉴定与参照抗体竞争结合特定抗原的抗原结合分子。在某些实施方案中,此类竞争性抗原结合分子结合的表位(例如线性或构象表位)与参照抗原结合分子结合的相同。用于抗原结合分子结合的表位的作图的详细的例示性方法在Morris(1996)“Epitope Mapping Protocols”,in Methods in MolecularBiology vol.66(Humana Press,Totowa,NJ)中提供。在一种例示性竞争测定法中,在包含结合抗原的第一经标记抗原结合分子和第二未标记抗原结合分子(测试其与第一抗原结合分子竞争结合抗原的能力)的溶液中温育固定化抗原。第二抗原结合分子可以存在于杂交瘤上清液中。作为对照,在包含第一经标记抗原结合分子但不包含第二未标记抗原结合分子的溶液中温育固定化抗原。在允许第一抗体与抗原结合的条件下温育后,去除过量的未结合的抗体,并测量与固定化抗原联合的标记物的量。如果在测试样品中与固定化抗原联合的标记物的量相对于对照样品实质性降低,那么这指示第二抗原结合分子与第一抗原结合分子竞争结合抗原。参见Harlow and Lane(1988)Antibodies:A Laboratory Manualch.14(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。
如本文中所述制备的本发明的含有TNF配体三聚体的抗原结合分子可通过本领域已知的技术来纯化,诸如高效液体层析术,离子交换层析术,凝胶电泳,亲和层析术,大小排阻层析术,等等。用于纯化特定蛋白质的实际条件会部分取决于诸如净电荷,疏水性,亲水性等因素,而且对于本领域技术人员会是显而易见的。对于亲和层析术纯化,可使用结合含有TNF配体三聚体的抗原结合分子的抗体,配体,受体或抗原。例如,对于本发明的融合蛋白的亲和层析术纯化,可使用具有蛋白A或蛋白G的基质。可以本质上如实施例中所述使用顺序蛋白A或G亲和层析术和大小排阻层析术来分离抗原结合分子。含有TNF配体三聚体的抗原结合分子或其片段的纯度可通过多种公知的分析方法任一来测定,包括凝胶电泳,高压液体层析术,等等。例如,如实施例中所述表达的含有TNF配体三聚体的抗原结合分子显示是完整的且正确装配的,如通过还原性和非还原性SDS-PAGE证明的。
测定法
本文中提供的抗原结合分子可通过本领域已知的多种测定法来鉴定,筛选,或表征其物理/化学特性和/或生物学活性来。
1.亲和力测定法
本文中提供的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子对相应的TNF受体的亲和力可依照实施例中提出的方法通过表面等离振子共振(SPR),使用标准仪器诸如BIAcore仪器(GE Healthcare),和受体或靶蛋白(诸如可通过重组表达获得的)来测定。含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子对靶细胞抗原的亲和力也可以通过表面等离振子共振(SPR),使用标准仪器诸如BIAcore仪器(GE Healthcare),和受体或靶蛋白(诸如可通过重组表达获得的)来测定。用于测量结合亲和力的一种具体的说明性和例示性实施方案在实施例3中描述。依照一个方面,于25℃使用 T100机器(GE Healthcare)通过表面等离振子共振测量KD。
2.结合测定法和其它测定法
本文中提供的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子对相应的表达受体的细胞的结合可例如通过流式细胞术(FACS),使用表达特定受体或靶抗原的细胞系来评估。在一个方面,在结合测定法中使用表达TNF受体的新鲜外周血单个核细胞(PBMC)(实施例6.1和7.1)。在分离后(幼稚PMBC)或刺激后(活化的PMBC)直接使用这些细胞。在另一个方面,使用活化的小鼠脾细胞(表达TNF受体分子)来证明本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子对相应的表达TNF受体的细胞的结合。
在又一个方面,使用表达靶细胞抗原(例如FAP)的癌细胞系来证明抗原结合分子对靶细胞抗原的结合(实施例6.2)。在另一个方面,使用表达CD19的癌细胞系来证明抗原结合分子对CD19的结合(实施例7.2)。
在另一个方面,可以使用竞争测定法来鉴定与具体抗体或抗原结合分子分别竞争结合靶或TNF受体的抗原结合分子。在某些实施方案中,此类竞争性抗原结合分子结合的表位(例如线性或构象表位)与具体抗靶抗体或具体抗TNF受体抗体结合的相同。用于抗体结合的表位的作图的详细例示性方法在Morris(1996)“Epitope Mapping Protocols”,inMethods in Molecular Biology vol.66(Humana Press,Totowa,NJ)中提供。
3.活性测定法
在一个方面,提供用于鉴定具有生物学活性的结合具体靶细胞抗原和具体TNF受体的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的测定法。生物学活性可包括例如经由表达靶细胞抗原的细胞上的TNF受体的激动性信号传导。还提供通过该测定法鉴定为在体外具有此类生物学活性的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。
在某些方面,对本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子测试此类生物学活性。用于检测本发明的分子的生物学活性的测定法是实施例6和7中描述的那些。而且,用于检测细胞裂解(例如通过测量LDH释放),诱导的凋亡动力学(例如通过测量胱天蛋白酶3/7活性)或凋亡(例如使用TUNEL测定法)的测定法是本领域公知的。另外,此类复合物的生物学活性可通过评估它们对多种淋巴细胞子集诸如NK细胞,NKT细胞或γδT细胞的存活,增殖和淋巴因子分泌的影响或评估它们调控抗原呈递细胞诸如树突细胞,单核细胞/巨噬细胞或B细胞的表型和功能的能力来评估。
药用组合物,配制剂和施用路径
在又一个方面,本发明提供药用组合物,其包含本文中提供的任何含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,例如供任何下述治疗方法中使用。在一个实施方案中,药用组合物包含本文中提供的任何含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子和至少一种药学可接受赋形剂。在另一个实施方案中,药用组合物包含本文中提供的任何含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子和至少一种例如如下文描述的另外的治疗剂。
本发明的药用组合物包含溶解或分散在药学可接受赋形剂中的治疗有效量的一种或多种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。短语“药用或药学可接受”指在采用的剂量和浓度一般对接受者无毒,即在适当施用于动物,诸如例如人时不产生不利的,变应性的或其它不想要的反应的分子实体和组合物。含有至少一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子和任选地另外的活性组分的药用组合物的制备会是本领域技术人员根据本公开内容知道的,如由Remington's Pharmaceutical Sciences,18th Ed.Mack PrintingCompany,1990例示的,通过援引收入本文。特别地,组合物是冻干配制剂或水溶液。如本文中使用的,“药学可接受赋形剂”包括任何和所有溶剂,缓冲剂,分散介质,包衣,表面活性剂,抗氧化剂,防腐剂(例如抗细菌剂,抗真菌剂),等张剂,盐,稳定剂和其组合,正如本领域普通技术人员会知道的。
胃肠外组合物包括那些为通过注射,例如皮下,皮内,损害内,静脉内,动脉内,肌肉内,鞘内或腹膜内注射的施用而设计的。对于注射,可以在水溶液中,优选在生理学相容缓冲液诸如汉克斯(Hanks)氏溶液,林格(Ringer)氏溶液,或生理盐水缓冲液中配制本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。溶液可含有配制用剂,诸如悬浮,稳定和/或分散剂。或者,融合蛋白可处于粉末形式,供在使用前用核酸的媒介,例如无菌无热原水建构。根据需要,通过与下文列举的多种其它组分一起以要求的量在适宜的溶剂中掺入本发明的融合蛋白来制备无菌可注射溶液。无菌性可例如通过穿过无菌滤膜过滤而容易地实现。一般地,通过将多种经过灭菌的活性组分掺入含有基础分散介质和/或其它组分的无菌媒介中来制备分散体。在用于制备无菌可注射溶液,悬浮液或乳状液的无菌粉末的情况中,优选的制备方法是真空干燥或冷冻干燥技术,其自其先前无菌过滤的液体介质产生活性组分加任何另外的想要的组分的粉末。液体介质在必要时应当适当缓冲且在注射前首先用足够的盐水或葡萄糖使得液体稀释剂变成等张。组合物在制造和贮存条件下必须是稳定的,而且针对微生物,诸如细菌和真菌的污染作用防腐。会领会的是,内毒素污染应当最低限度保持在安全水平,例如小于0.5ng/mg蛋白质。合适的药学可接受赋形剂包括但不限于:缓冲剂,诸如磷酸盐,柠檬酸盐,和其它有机酸；抗氧化剂,包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；酚,丁或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯,诸如对羟基苯甲酸甲或丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质,诸如血清清蛋白,明胶,或免疫球蛋白；亲水性聚合物,诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸,诸如甘氨酸,谷氨酰胺,天冬酰胺,组氨酸,精氨酸,或赖氨酸；单糖,二糖,和其它碳水化合物,包括葡萄糖,甘露糖,或糊精；螯合剂,诸如EDTA；糖,诸如蔗糖,甘露醇,海藻糖或山梨醇；成盐反荷离子,诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子型表面活性剂,诸如聚乙二醇(PEG)。水性注射悬浮液可含有提高悬浮液的粘度的化合物,诸如羧甲基纤维素钠,山梨醇,右旋糖酐,等等。任选地,悬浮液还可含有合适的稳定剂或提高化合物的溶解度以容许制备高度浓缩溶液的药剂。另外,活性化合物的悬浮液可制备为适宜的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或媒介包括脂肪油诸如芝麻油,或合成脂肪酸酯,诸如油酸乙酯或甘油三酯,或脂质体。
可以将活性组分包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中(例如分别是羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊),在胶体药物投递系统(例如脂质体,清蛋白微球体,微乳液,纳米颗粒和纳米胶囊)中或在粗乳液中。此类技术在Remington's Pharmaceutical Sciences(18th Ed.Mack Printing Company,1990)中公开。可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适例子包括含有多肽的固体疏水性聚合物的半透性基质,所述基质处于成形物品的形式,例如薄膜,或微胶囊。在特定实施方案中,通过在组合物中使用延迟吸收的药剂,诸如例如单硬脂酸铝,明胶或其组合,可带来延长的可注射组合物的吸收。
本文中的例示性药学可接受赋形剂进一步包括间质药物分散剂,诸如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP),例如人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白,诸如rHuPH20(Baxter International,Inc.)。某些例示性sHASEGP和使用方法(包括rHuPH20)在美国专利公开文本No.2005/0260186和2006/0104968中描述。在一个方面,将sHASEGP与一种或多种另外的糖胺聚糖酶诸如软骨素酶组合。
例示性冻干抗体配制剂在美国专利No.6,267,958中描述。水性抗体配制剂包括美国专利No.6,171,586和WO 2006/044908中描述的那些,后者的配制剂包括组氨酸-乙酸盐缓冲剂。
在先前描述的组合物以外,融合蛋白还可配制成贮库制剂。此类长效配制剂可通过植入(例如皮下或肌肉内)或通过肌肉内注射来施用。如此,例如,融合蛋白可以用合适的聚合或疏水性材料(例如作为可接受油中的乳液)或离子交换树脂,或作为微溶衍生物,例如作为微溶盐配制。
包含本发明的融合蛋白的药用组合物可依靠常规混合,溶解,乳化,封装,包埋或冻干工艺来制造。可以使用推动将蛋白质加工成药学上可使用的制剂的一种或多种生理学可接受载剂,稀释剂,赋形剂或助剂以常规方式配制药用组合物。适当的配制剂取决于所选择的施用路径。
可以以游离酸或碱,中性或盐形式将含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子配制成组合物。药学可接受盐是实质性保留游离酸或碱的生物学活性的盐。这些包括酸加成盐,例如那些与蛋白质性质组合物的游离氨基形成的或那些与无机酸诸如例如盐酸或磷酸,或有机酸诸如乙酸,草酸,酒石酸或扁桃酸形成的。与游离羧基形成的盐也可以衍生自无机碱,诸如例如氢氧化钠,钾,铵,钙或铁；或有机碱,诸如异丙胺,三甲胺,组氨酸或普鲁卡因。与相应的游离碱形式相比,药用盐趋于在水性和其它质子溶剂中溶解度更高。
在所治疗的特定殊适应症需要时,本文中的组合物还可含有超过一种活性组分,优选那些具有彼此没有不利影响的互补活性的。此类活性组分以对于预定目的有效的量适当地组合存在。
要用于体内施用的配制剂一般是无菌的。无菌性可例如通过穿过无菌滤膜过滤而容易地实现。
治疗方法和组合物
本文中提供的任何含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子均可在治疗方法中使用。
为了在治疗方法中使用,本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子可以以符合优秀医学实践的方式配制,定剂量和施用。在这种背景中考虑的因素包括所治疗的特定病症,所治疗的特定哺乳动物,患者个体的临床状况,病症的起因,药剂的投递部位,施用方法,施用进度表,和医学从业人员知道的其它因素。
在一个方面,提供供作为药物使用的本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。在别的方面,提供供在治疗疾病中使用,特别是供在治疗癌症中使用的本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。在某些方面,提供供在治疗方法中使用的本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。在一个方面,本发明提供供在有所需要的个体中治疗疾病中使用的如本文中描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。在某些方面,本发明提供供在治疗具有疾病的个体的方法中使用的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,该方法包含对该个体施用治疗有效量的融合蛋白。在某些方面,要治疗的疾病是癌症。癌症的例子包括实体瘤,膀胱癌,肾细胞癌,脑癌,头和颈癌,胰腺癌,肺癌,乳腺癌,卵巢癌,子宫癌,宫颈癌,子宫内膜癌,食管癌,结肠癌,结肠直肠癌,直肠癌,胃癌,前列腺癌,血癌,皮肤癌,鳞状细胞癌,骨癌,和肾癌,黑素瘤,B细胞淋巴瘤,B细胞白血病,非霍奇金淋巴瘤和急性成淋巴细胞性白血病。如此,提供供在治疗癌症中使用的如本文中描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。需要治疗的受试者,患者,或“个体”典型地是哺乳动物,更具体地是人。
在另一个方面,提供的是供在治疗感染性疾病,特别是供治疗病毒感染中使用的如本文中描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。在又一个方面,提供供治疗自身免疫疾病,诸如例如狼疮疾病至使用的如本文中描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。
在一个方面,提供的是供在治疗头和颈鳞状细胞癌(HNSCC),乳腺癌,结肠直肠癌(CRC),胰腺癌(PAC),胃癌,非小细胞肺癌(NSCLC)和间皮瘤中使用的依照本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中靶细胞抗原是FAP。
在又一个方面,本发明涉及含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子在制造或制备用于在有所需要的个体中治疗疾病的药物中的用途。在一个方面,该药物供在治疗疾病的方法中使用,该方法包含对具有该疾病的个体施用治疗有效量的该药物。在某些实施方案中,要治疗的疾病是增殖性病症,特别是癌症。如此,在一个方面,本发明涉及本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子在制造或制备用于治疗癌症的药物中的用途。癌症的例子包括实体瘤,膀胱癌,肾细胞癌,脑癌,头和颈癌,胰腺癌,肺癌,乳腺癌,卵巢癌,子宫癌,宫颈癌,子宫内膜癌,食管癌,结肠癌,结肠直肠癌,直肠癌,胃癌,前列腺癌,血癌,皮肤癌,鳞状细胞癌,骨癌,和肾癌,黑素瘤,B细胞淋巴瘤,B细胞白血病,非霍奇金淋巴瘤和急性成淋巴细胞性白血病。使用本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子可以治疗的其它细胞增殖病症包括但不限于位于腹部,骨,乳腺,消化系统,肝,胰腺,腹膜,内分泌腺(肾上腺,甲状旁腺,垂体,睾丸,卵巢,胸腺,甲状腺),眼,头和颈,神经系统(中枢和周围),淋巴系统,骨盆,皮肤,软组织,脾,胸区,和泌尿生殖系统中的赘生物。还包括的是癌前状况或损害和癌症转移。在某些实施方案中,癌症选自由肾细胞癌,皮肤癌,肺癌,结肠直肠癌,乳腺癌,脑癌,头和颈癌组成的组。技术人员可认识到在一些情况中含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子可能不提供治愈但可能仅提供部分益处。在一些方面,具有一些益处的生理变化也认为是治疗上有益的。如此,在一些方面,提供生理变化的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的量认为是“有效量”或“治疗有效量”。
在又一个方面,本发明涉及如本文中描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子在制造或制备用于治疗感染性疾病,特别是用于治疗病毒感染或用于治疗自身免疫疾病,例如狼疮疾病的药物中的用途。
在又一个方面,本发明提供依照用于在个体中治疗疾病的方法,该方法包含对所述个体施用治疗有效量的本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。在一个方面,对所述个体施用包含处于药学可接受形式的本发明的融合蛋白的组合物。在某些方面,要治疗的疾病是增殖性病症。在一个特定方面,该疾病是癌症。在另一个方面,该疾病是感染性疾病或自身免疫疾病。在某些方面,该方法进一步包含对该个体施用治疗有效量的至少一种另外的治疗剂,例如抗癌剂,如果要治疗的疾病是癌症的话。依照任何上述实施方案的“个体”可以是哺乳动物,优选人。
为了预防或治疗疾病,本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的适宜剂量(当单独或与一种或多种其它另外的治疗剂组合使用时)会取决于要治疗的疾病的类型,施用路径,患者的体重,融合蛋白的类型,疾病的严重程度和过程,施用融合蛋白是出于预防还是治疗目的,先前或并行的治疗性干预,患者的临床史和对融合蛋白的响应,和主治医师的斟酌。在任何情况下,负责施用的从业人员会决定组合物中活性组分的浓度和对于受试者个体适宜的剂量。本文中涵盖各种剂量给药进度表,包括但不限于在多个时间点上的多次或单次施用,推注施用,和脉冲输注。
以一次或以一系列治疗适当地将含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子施用于患者。取决于疾病的类型和严重程度,约1μg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg-10mg/kg)含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子可以是用于对患者施用的初始候选剂量,例如无论是通过一次或多次分开的施用,还是通过连续输注。取决于上面提到的因素,一种典型的日剂量可能范围为约1μg/kg至100mg/kg或更多。对于数天或更长的反复施用,取决于状况,治疗一般会持续直至发生想要的疾病症状的遏制。融合蛋白的一种例示性剂量会在约0.005mg/kg至约10mg/kg的范围中。在其它例子中,剂量还可以包含每次施用自约1μg/kg体重,约5μg/kg体重,约10μg/kg体重,约50μg/kg体重,约100μg/kg体重,约200μg/kg体重,约350μg/kg体重,约500μg/kg体重,约1mg/kg体重,约5mg/kg体重,约10mg/kg体重,约50mg/kg体重,约100mg/kg体重,约200mg/kg体重,约350mg/kg体重,约500mg/kg体重,至约1000mg/kg体重或更多,和其中可派生的任何范围。在自本文中列出的数字可派生的范围的例子中,基于上文描述的数字,可以施用约5mg/kg体重至约100mg/kg体重,约5μg/kg体重至约500mg/kg体重等范围。如此,可以将约0.5mg/kg,2.0mg/kg,5.0mg/kg或10mg/kg(或其任何组合)的一或多剂施用于患者。此类剂量可以间歇施用,例如每周或每三周(例如,使得患者接受约2剂至约20剂,或例如约6剂融合蛋白)。可以施用一个初始的较高加载剂量,接着是一个或多个较低剂量。然而,其它剂量方案可能是有用的。这种疗法的进展容易通过常规技术和测定法来监测。
本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子一般会以有效实现预定目的的量使用。对于治疗或预防疾病状况的用途,以治疗有效量施用或应用本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子或其药用组合物。治疗有效量的确定完全在本领域技术人员的能力内,尤其是根据本文中提供的详细公开内容。
对于系统施用,可以首先自体外测定法,诸如细胞培养物测定法估算治疗有效剂量。然后可以在动物模型中确定实现包括如在细胞培养物中确定的IC50的循环浓度范围的剂量。此类信息可以用于更精确地确定在人中有用的剂量。
也可以使用本领域公知的技术自体内数据(例如动物模型)估算初始剂量。本领域普通技术人员能容易地基于动物数据优化对人的施用。
可以个别地调整剂量和间隔以提供足以维持治疗效果的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的血浆水平。通过注射施用的常用患者剂量范围为约0.1至50mg/kg/天,典型地是约0.5至1mg/kg/天。治疗有效血浆水平可以通过每天施用多剂来实现。血浆中的水平可以例如通过HPLC来测量。
在局部施用或选择性摄取的情况中,含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。本领域技术人员会能够优化治疗有效局部剂量而无需过度实验。
本文中描述的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的治疗有效剂量一般会提供治疗益处而不引起实质性毒性。融合蛋白的毒性和治疗功效可通过细胞培养物或实验动物中的标准药学规程来确定。可使用细胞培养物测定法和动物研究来确定LD50(对群体的50％致死的剂量)和ED50(在群体的50％中治疗上有效的剂量)。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数,它可以表述为比率LD50/ED50。展现较大治疗指数的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子是优选的。在一个实施方案中,依照本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子展现高治疗指数。自细胞培养物测定法和动物研究获得的数据可以在配制适合于在人中使用的剂量范围中使用。剂量优选在具有很小或没有毒性的包括ED50的循环浓度范围内。剂量可以在这个范围内取决于多种因素而变化,例如所采用的剂型,所利用的施用路径,受试者的状况,等等。考虑到患者的状况,确切的配制剂,施用路径和剂量可以由医师个体选择(参见例如Fingl et al.,1975,in:The Pharmacological Basis ofTherapeutics,Ch.1,p.1,通过援引完整收入本文)。
用本发明的融合蛋白治疗的患者的主治医师会知道如何和何时由于毒性,器官功能障碍,等等而终止,中断,或调整施用。相反,如果临床反应不足(排除毒性),主治医师也会知道将治疗调整至更高水平。在感兴趣的病症的管理中施用的剂量的大小会随着要治疗的状况的严重程度,施用路径,等等而变化。状况的严重程度可以例如部分地通过标准预后评估方法来评估。而且,剂量和可能剂量频率也会依照患者个体的年龄,体重,和响应而变化。
其它药剂和治疗
本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子可以在疗法中与一种或多种其它药剂组合施用。例如,本发明的融合蛋白可以与至少一种另外的治疗剂共施用。术语“治疗剂”涵盖可以为了在需要此类治疗的个体中治疗症状或疾病而施用的任何药剂。此类另外的治疗剂可包含任何适合于所治疗的特定适应症的活性组分,优选那些具有彼此没有不利影响的互补活性的。在某些实施方案中,另外的治疗剂是另一种抗癌剂或免疫疗法。
此类其它药剂以对于预定目的有效的量适当地组合存在。此类其它药剂的有效量取决于所使用的融合蛋白的量,病症或治疗的类型,和上文讨论的其它因素。含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子一般以与本文中所述相同的剂量和施用路径,或本文中描述的剂量的约1至99％,或以凭经验/在临床上确定为适宜的任何剂量和任何路径使用。
上述提到的此类组合疗法涵盖组合施用(其中两种或更多种治疗剂包括在同一组合物或分开的组合物中)和分开施用,在该情况中,本发明的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的施用可以在另外的治疗剂和/或佐剂的施用之前,同时,和/或之后发生。
制品
在本发明的另一个方面,提供一种制品,其含有对于治疗,预防和/或诊断上文描述的病症有用的材料。制品包含容器和在容器上或与容器联合的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶,管形瓶,注射器,IV溶液袋,等。容器可以自多种材料诸如玻璃或塑料形成。容器装有本身或与另一种组合物组合有效治疗,预防和/或诊断状况的组合物且可具有无菌存取口(例如,容器可以是具有皮下注射针可刺穿的塞子的管形瓶或静脉内溶液袋)。组合物中的至少一种活性剂是本发明的含有TNF配体三聚体的抗原结合分子。
标签或包装插页指示组合物用于治疗选择的状况。此外,制品可包含(a)其中装有组合物的第一容器,其中该组合物包含本发明的含有TNF配体三聚体的抗原结合分子；和(b)其中装有组合物的第二容器,其中该组合物包含别的细胞毒性或其它方面的治疗剂。本发明的这个实施方案中的制品可进一步包含指示组合物可用于治疗特定状况的包装插页。
或者/另外,制品可进一步包含第二(或第三)容器,其包含药学可接受缓冲剂,诸如抑菌性注射用水(BWFI),磷酸盐缓冲盐水,林格(Ringer)氏溶液和右旋糖溶液。它可进一步包括从商业和用户立场看想要的其它材料,包括其它缓冲剂,稀释剂,滤器,针,和注射器。
表C(序列)
关于人免疫球蛋白轻和重链的核苷酸序列的一般信息在Kabat,E.A.,et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th ed.,Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)中给出。抗体链的氨基酸依照如上文定义的依照Kabat的EU编号系统(Kabat,E.A.,et al.,Sequences of Proteinsof Immunological Interest,5th ed.,Public Health Service,National Institutesof Health,Bethesda,MD(1991))进行编号和提及。
下述编号段落(段)描述本发明的各方面:
1.一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端。
2.段1的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该TNF配体家族成员共刺激人T细胞活化。
3.段1或2的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该TNF配体家族成员选自4-1BBL和OX40L。
4.段1至3中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该TNF配体家族成员是4-1BBL。
5.段1至4中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该TNF配体家族成员的外域包含选自由SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4,SEQ IDNO:5,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8组成的组的氨基酸序列,特别是SEQ IDNO:1或SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
6.段1至5中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该包含TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽包含选自由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10组成的组的氨基酸序列且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽包含选自由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5组成的组的氨基酸序列。
7.段1至3中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该TNF配体家族成员是OX40L。
8.段1至3或7中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该TNF配体家族成员的外域包含选自由SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12组成的组的氨基酸序列。
9.段1至8中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子对于对该靶细胞抗原的结合是单价的。
10.段1至9中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该靶细胞抗原是选自由成纤维细胞活化蛋白(FAP),黑素瘤相关硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP),表皮生长因子受体(EGFR),癌胚抗原(CEA),CD19,CD20和CD33组成的组。
11.段1至10中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该靶细胞抗原是成纤维细胞活化蛋白(FAP)。
12.段1至11中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含
(a)VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR-L3,或
(b)VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的CDR-L3。
13.段1至12中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的可变轻链或其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的可变轻链。
14.段1至10中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该靶细胞抗原是CD19。
15.段1至10或14中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中能够特异性结合CD19的Fab域包含
(a)VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-L3,或
(b)VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的CDR-L3。
16.段1至10,14或15中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CD19的Fab域包含包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的可变重链和包含SEQID NO:42的氨基酸序列的可变轻链或其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQ IDNO:43的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的可变轻链。
17.段1至10中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该靶细胞抗原是CEA。
18.段1至10或17中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中能够特异性结合CEA的Fab域包含VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR-L3。
19.段1至10,17或18中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CEA的Fab域包含包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的可变重链和包含SEQID NO:52的氨基酸序列的可变轻链。
20.段1至19中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该Fc域是IgG,特别是IgG1Fc域或IgG4Fc域。
21.段1至20中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该Fc域是包含位置234和235(EU编号方式)和/或329(EU编号方式)处的氨基酸替代的IgG1Fc域。
22.段1至21中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该Fc域的第一亚基包含氨基酸替代S354C和T366W(编号方式依照Kabat EU索引)且该Fc域的第二亚基包含氨基酸替代Y349C,T366S,L368A和Y407V(编号方式依照Kabat EU索引)。
23.段1至22中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽在其N端融合至该Fc域的第二亚基的C端且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽在其N端融合至该Fc域的第一亚基的C端。
24.段1至22中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽在其N端融合至该Fc域的第一亚基的C端且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽在其N端融合至该Fc域的第二亚基的C端。
25.段1至24中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域在C端融合至该Fc域的第一亚基的N端。
26.段1至26中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其进一步包含
(d)不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域。
27.一种分离的多核苷酸,其编码段1至16中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。
28.一种载体,特别是表达载体,其包含段27的分离的多核苷酸。
29.一种宿主细胞,其包含段27的分离的多核苷酸或段28的载体。
30.一种用于生成段1至26中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的方法,其包含下述步骤:
(i)在适合于该抗原结合分子表达的条件下培养段29的宿主细胞,和
(ii)回收该抗原结合分子。
31.一种药用组合物,其包含段1至26中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子和至少一种药学可接受赋形剂。
32.段1至26中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,或段31的药用组合物,其供作为药物使用。
33.段1至26中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,或段31的药用组合物,其供在治疗癌症中使用。
34.段1至26中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子用于制造用于治疗癌症的药物的用途。
35.一种在个体中治疗疾病的方法,其包含对所述个体施用治疗有效量的包含药学可接受形式的段1至26中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的组合物。
36.段35的方法,其中所述疾病的癌症。
实施例
下面是本发明的方法和组合物的实施例。理解的是,鉴于上文提供的一般性描述,可以实践多种其它实施方案。
重组DNA技术
使用标准方法来操作DNA,如Sambrook et al.,Molecular cloning:Alaboratory manual；Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NewYork,1989中描述的。依照制造商的说明书使用分子生物学试剂。关于人免疫球蛋白轻和重链的核苷酸序列的一般信息在Kabat,E.A.et al.,(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest,Fifth Ed.,NIH Publication No 91-3242中给出。
DNA测序
通过双链测序测定DNA序列。
基因合成
想要的基因区段或是使用适宜的模板通过PCR来生成或是由Geneart AG(Regensburg,Germany)自合成的寡核苷酸和PCR产物通过自动化基因合成来合成。在确切的基因序列不可得的情况中,基于来自最近同源物的序列设计寡核苷酸引物,并通过RT-PCR自源自适宜组织的RNA分离基因。将侧翼为单一限制性内切核酸酶切割位点的基因区段克隆入标准克隆/测序载体。自转化细菌纯化质粒DNA并通过UV光谱术测定浓度。通过DNA测序确认亚克隆基因片段的DNA序列。基因区段设计成具有合适的限制性位点以容许亚克隆入相应的表达载体。所有构建物均设计成具有编码在真核细胞中将蛋白质靶向分泌的前导肽的5’端DNA序列。
细胞培养技术
使用标准细胞培养技术,如Current Protocols in Cell Biology(2000),Bonifacino,J.S.,Dasso,M.,Harford,J.B.,Lippincott-Schwartz,J.and Yamada,K.M.(eds.),John Wiley&Sons,Inc.中描述的。
蛋白质纯化
参考标准方案,自经过过滤的细胞培养物上清液纯化蛋白质。简言之,将抗体应用于蛋白A Sepharose柱(GE Healthcare)并用PBS清洗。于pH 2.8实现抗体的洗脱,之后立即中和样品。在PBS中或在20mM组氨酸,150mM NaCl(pH 6.0)中通过大小排阻层析术(Superdex 200,GE Healthcare)将聚集的蛋白质从单体抗体分开。合并单体抗体级分,使用例如MILLIPORE Amicon Ultra(30MWCO)离心浓缩机浓缩(在需要时),冷冻并贮存于-20℃或-80℃。提供部分样品用于后续蛋白质分析和分析性表征,例如通过SDS-PAGE,大小排阻层析术(SEC)或质谱术。
SDS-PAGE
依照制造商的说明书使用预制凝胶系统(Invitrogen)。特别地,使用10％或4-12％ Bis-TRIS预制凝胶(pH 6.4)和 MES(还原凝胶,具有抗氧化剂运行缓冲液添加剂)或MOPS(非还原凝胶)运行缓冲液。
分析性大小排阻层析术
通过HPLC层析术实施大小排阻层析术(SEC),用于测定抗体的聚集和寡聚状态。简言之,将经过蛋白A纯化的抗体应用于Agilent HPLC 1100系统上的300mM NaCl,50mMKH2PO4/K2HPO4,pH 7.5中的Tosoh TSKgel G3000SW柱或Dionex HPLC系统上的2x PBS中的Superdex 200柱(GE Healthcare)。通过UV吸光度和峰面积积分量化洗脱的蛋白质。BioRad凝胶过滤标准品151-1901充当标准品。
质谱术
此节描述具有VH/VL交换(VH/VL CrossMab)的多特异性抗体的表征,重点在于它们的正确装配。通过去糖基化的完整CrossMab和去糖基化的/纤溶酶消化的或替代地去糖基化的/有限LysC消化的CrossMab的电喷雾电离质谱术(ESI-MS)分析预期的一级结构。
将VH/VL CrossMab以1mg/ml的蛋白质浓度用磷酸盐或Tris缓冲液中的N-糖苷酶F于37℃去糖基化至多17小时。纤溶酶或有限LysC(Roche)消化用Tris缓冲液pH 8中的100μg去糖基化的VH/VL CrossMab分别于室温实施120小时和于37℃实施40分钟。质谱术前,将样品在Sephadex G25柱(GE Healthcare)上经由HPLC脱盐。在配备有TriVersa NanoMate源(Advion)的maXis 4G UHR-QTOF MS系统(Bruker Daltonik)上经由ESI-MS测定总质量。
使用表面等离振子共振(SPR)(BIACORE)测定多特异性抗体对相应抗原的结合和结合亲和力
使用BIACORE仪器(GE Healthcare Biosciences AB,Uppsala,Sweden)通过表面等离振子共振调查所生成的抗体对相应抗原的结合。简言之,为了亲和力测量,将山羊抗人IgG,JIR 109-005-098抗体经由胺偶联固定化在CM5芯片上,用于呈现针对相应抗原的抗体。于25℃(或替代地于37℃)在HBS缓冲液(HBS-P(10mM HEPES,150mM NaCl,0.005％吐温20,pH 7.4))中测量结合。以溶液中的多种浓度添加抗原(R&D Systems或内部纯化的)。通过80秒至3分钟的抗原注射来测量结合；通过用HBS缓冲液清洗芯片表面3-10分钟来测量解离,并使用1:1朗格缪尔(Langmuir)结合模型来估算KD值。自样品曲线减去阴性对照数据(例如缓冲液曲线),用于修正系统内在基线漂移和噪声信号降低。使用相应的Biacore评估软件进行传感图的分析和亲和力数据的计算。
实施例1
单价靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc融合抗原结合分子的制备
1.1单价FAP靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的制备,其中4-1BB配体是C端融合的(构建物1.11,2.11,1.12和2.12)(FAP在节链上)
依照Uniprot数据库的P41273序列(SEQ ID NO:75)合成编码人4-1BB配体的部分外域(氨基酸71-248)的DNA序列。
将含有通过(G4S)2接头隔开的4-1BB配体的两个外域的多肽同框亚克隆至人IgG1Fc穴或节链的C端(Merchant,Zhu 1998),如图1a中描绘的:人IgG1 Fc,(G4S)2连接头,人4-1BB配体,(G4S)2连接头,人4-1BB配体。将含有4-1BB配体的一个外域的多肽同框亚克隆至人IgG1Fc节或穴链的C端,如图1b中描述的:人IgG1Fc,(G4S)2连接头,人4-1BB配体。
将编码对成纤维细胞活化蛋白(FAP)特异性的结合物,克隆4B9或克隆28H1的重和轻链可变区DNA序列与人IgG1的节恒定重链或恒定轻链任一同框亚克隆。FAP结合物的生成和制备在WO 2012/020006 A2中描述,通过援引将其收入本文中。
已经依照国际专利申请公开文本No.WO 2012/130831 A1中描述的方法在节和穴重链的恒定区中引入Pro329Gly,Leu234Ala和Leu235Ala突变以消除对Fc伽马受体的结合。
对于所有构建物,如Carter,J Immunol Methods 248,7-15(2001)中描述的使用节入穴异二聚化技术。含有CH3域中的Y349C/T366S/L368A/Y407V突变的huIgG1Fc穴链,含有CH3域中的S354C/T366W突变的抗FAP huIgG1节链和抗FAP轻链的组合容许生成包括装配好的三聚体4-1BB配体和一个FAP结合Fab的异二聚体(图2A和2B)。
表1显示单价FAP(4B9)靶向性含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物2.11)的cDNA和氨基酸序列。
表1:FAP(4B9)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物2.11的序列
表2显示单价FAP(4B9)靶向性含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物2.12)的cDNA和氨基酸序列。
表2:FAP(4B9)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物2.12的序列
表3显示单价FAP(28H1)靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物1.11)的cDNA和氨基酸序列。
表3:FAP(28H1)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物1.11的序列
表4显示单价FAP(28H1)靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物1.12)的cDNA和氨基酸序列。
表4:FAP(28H1)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物1.12的序列
1.2单价CD19靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的制备,其中4-1BB配体是C端融合的(构建物3.11,4.11,3.12和4.12)(CD19在节链上)
如实施例1.1中关于单价FAP靶向性构建物描述的制备该分子,唯一的差异在于抗FAP结合物用抗CD19结合物替换。
将编码对CD19特异性的结合物,克隆8B8-018或克隆8B8-2B11的重和轻链可变区DNA序列与人IgG1的节恒定重链或恒定轻链任一同框亚克隆。CD19克隆的生成在实施例1.3中描述。
已经依照国际专利申请公开文本No.WO 2012/130831 A1中描述的方法在节和穴重链的恒定区中引入Pro329Gly,Leu234Ala和Leu235Ala突变以消除对Fc伽马受体的结合。
对于所有构建物,如Carter,J Immunol Methods 248,7-15(2001)中描述的使用节入穴异二聚化技术。含有CH3域中的Y349C/T366S/L368A/Y407V突变的huIgG1Fc穴链,含有CH3域中的S354C/T366W突变的抗FAP huIgG1节链和抗FAP轻链的组合容许生成包括装配好的三聚体4-1BB配体和一个CD19结合Fab的异二聚体(图2A和2B)。
表5显示单价CD19(8B8-018)靶向性含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物3.11)的cDNA和氨基酸序列。
表5:CD19(8B8-018)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物3.11的序列
表6显示单价CD19(8B8-018)靶向性含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物3.12)的cDNA和氨基酸序列。
表2:CD19(B8-018)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物3.12的序列
表7显示单价CD19(8B8-2B11)靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物4.11)的cDNA和氨基酸序列。
表7:CD19(2B11)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物4.11的序列
表8显示单价CD19(8B8-2B11)靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物4.12)的cDNA和氨基酸序列。
表8:CD19(8B8-2B11)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物4.12的序列
1.3抗CD19结合物8B8-018和8B8-2B11的生成
1.3.1抗CD19克隆8B8-018的生成
a)小鼠抗人CD19抗体(杂交瘤)的免疫接种和生成
用CD19转染的HEK293细胞(均值受体密度35,000/细胞)对Balb/c小鼠免疫接种六次并加强。通过用人CD19转染的NIH-3T3细胞上的CD19细胞ELISA测试血清样品来监测免疫应答。使用来自具有足够滴度的抗人CD19抗体的小鼠的脾细胞来通过与小鼠骨髓瘤细胞系P3X63Ag8.653融合而永生化。进行三项融合并通过人CD19转染的NIH-3T3细胞上的细胞ELISA和使用Daudi(CD19+)和CD19-细胞的FACS结合测定法对杂交瘤上清液筛选抗人CD19特异性抗体(见WO 2011/147834的实施例1)。
b)抗CD19抗体的杂交瘤筛选和细胞生物学功能评估
应用细胞ELISA来筛选杂交瘤,及鉴定那些分泌针对人CD19的抗体的杂交瘤。使用经人CD19转染的NIH3T3细胞作为阳性细胞；使用未转染的NIH3T3细胞作为阴性对照细胞。对于阳性杂交瘤的评估,量化经转染和未转染NIH3T3细胞之间的OD比率。
-培养培养基:DMEM高葡萄糖(4.5mg/ml),10％FCS,丙酮酸钠,NEAA,谷氨酰胺
-抗体阳性对照:抗CD19单克隆抗体(IgG1)Pharmingen Cat#555409c＝1mg/ml
-检测抗体:山羊抗小鼠IgG(H+L)HRP缀合物Bio-Rad Cat#170-06516
-在1x ELISA封闭试剂中1:2000稀释
-其它试剂:纤连蛋白Roche Cat#838039c＝1mg/ml
-戊二醛:25％储备溶液//Grade Agar Scientific#R102终浓度:0.05％,在PBS中
-ELISA封闭试剂:10x储备溶液//Roche Cat#1112589
-TMB底物:Roche Cat#11432559
-停止溶液:1M H2SO4
-BioRad Cat#170-6516在1x ELISA封闭试剂中1:2000稀释
第1天:
-纤连蛋白包被:5μg/cm2,在PBS中；96孔板＝32cm2；160μg/板,6ml
-PBS,50μl/孔
-于室温温育45分钟,吸出包被溶液
-在96孔板中在50μl培养培养基中接种1.25 x 104个细胞/孔
-于37℃温育40小时
-添加至板的上半部:表达CD19的NIH3T3细胞
-添加至板的下半部:未转染的NIH3T3细胞
第3天:
-在50μl培养培养基中添加阳性对照抗体或样品(上清液或小鼠血清)
-于4℃温育2小时
-取出培养基,用100μl戊二醛(0.05％,在PBS中)固定细胞
-用200μl PBS清洗两次
-添加检测抗体1:2000,50μl/孔
-于室温温育2小时
-用200μl PBS清洗三次
-添加50μl TMB,于室温温育30分钟
-通过添加25μl 1M H2SO4来停止；读取450nm/620nm处的消光
-计算结果:比率OD NIH3T3CD19:OD NIH3T3未转染
与未转染的NIH3T3细胞相比,所选择的抗体展现对CD19转染的NIH3T3细胞的特异性结合(见WO 2011/147834的实施例2)。
c)抗CD19抗体的人源化
将鼠抗体的CD19结合特异性转移到人受体框架上以消除潜在的源自人体会识别为外来的序列区段的免疫原性问题。这通过将鼠(供体)抗体的整个互补测定区(CDR)嫁接到人(受体)抗体框架上来进行,而且称作CDR嫁接或抗体人源化。
比对鼠氨基酸序列与人种系抗体V基因的集合,并依照序列同一性和同源性分选。在选择一种特定受体序列之前,必须确定供体抗体的所谓的规范环结构(Morea,V.,etal.,Methods,Vol 20,Issue 3(2000)267-279)。通过所谓的规范位置处存在的残基的类型来确定这些规范环结构。这些位置位于(部分)CDR区以外,而且必须在最终的构建物中保持功能上等同,从而保留亲本(供体)抗体的CDR构象。选择人种系序列VBASE_VH1_1作为用于重链的受体并选择序列VBASE_VK2_5用于轻链。
发现野生型人源化抗人CD19抗体8B8具有HVR-L1:NSNGNT(SEQ ID NO:129)中的三个脱酰胺热点。另外,发现在HVR-H2中存在别的脱酰胺热点:KFNG(SEQ ID NO:130)。为了解决HVR-H2中的脱酰胺热点,已经在位置64(编号方式依照Kabat)处引入N(Asn)至Q(Gln)点突变。为了解决轻链中的脱酰胺热点及获得具有改善的脱酰胺稳定性的人源化抗人CD19抗体,引入位置27e处自S(丝氨酸)至P(脯氨酸)(编号方式依照Kabat)的单一突变。如此,生成具有如下文表16中显示的CDR的克隆8B8-018。
表9:8B8-018与人源化野生型CD19抗体8B8的比较
另外,8B8-018维持对食蟹猴CD19的交叉反应性,如下面表10中显示的。
EC<sub>50</sub>[μg/ml] wt 8B8 8B8-018
huCD19 ECD 0.087 0.084
cyCD19 ECD 0.313 0.255
1.3.2用于噬菌体展示计划的CD19抗原Fc融合物的制备,纯化和表征
为了表达和纯化单体状态的人和食蟹猴CD19外域(人CD19见SEQ ID NO:64),将相应的DNA片段与含有“节”突变的人IgG1Fc基因区段融合(人:SEQ ID NO:132；食蟹猴:SEQID NO:135)并用“Fc-穴”(SEQ ID NO:131)对应物(Merchant et al.,1998)转染。在抗原外域和Fc节链之间引入IgA切割位点(PTPPTP)。在抗原-Fc节链的C端引入用于直接生物素化的Avi标签并在Fc穴中引入突变H435R和Y436F用于纯化目的(Jendeberg L.et al,J.Immunological methods,1997)。含有S354C/T366W突变的抗原-Fc节链(人:SEQ ID NO:134；食蟹猴:SEQ ID NO:136)与含有Y349C/T366S/L368A/Y407V突变的Fc穴链(SEQ ID NO:133)的组合容许生成包括单拷贝的CD19外域的异二聚体Fc融合片段(与图3C中的4-1BB构建物类似)。表13列出抗原Fc融合构建物的cDNA和氨基酸序列。
表11:单体人和食蟹猴CD19抗原Fc(kih)融合分子的cDNA和氨基酸序列
对于单体抗原/Fc融合分子的生成,使用标准方法用编码融合蛋白的两个构件(节和穴链)的两种质粒共转染指数式生长的悬浮CHO细胞。
通过使用蛋白A的亲和层析,继以大小排阻层析自细胞培养物上清液纯化分泌的蛋白质。对于亲和层析,将上清液加载到用磷酸钠(20mM),柠檬酸钠(20mM),0.5M氯化钠缓冲液(pH 7.5)平衡的MabSelect Sure柱(柱体积(CV)＝5-15mL,树脂来自GE Healthcare)上。通过用至少6个柱体积的相同缓冲液清洗来去除未结合的蛋白质。使用线性梯度洗脱结合的蛋白质；步骤1,10个CV的自0至60％洗脱缓冲液(20mM柠檬酸钠,500mM氯化钠缓冲液(pH 2.5))；步骤2,2个CV的自60至100％洗脱缓冲液。对于线性梯度,应用另外2个柱体积的用100％洗脱缓冲液的分步洗脱。
通过添加1/40(v/v)的2M Tris,pH8.0来调节收集的级分的pH。浓缩并过滤蛋白质,之后加载到用pH 7.4的2mM MOPS,150mM氯化钠,0.02％(w/v)叠氮化钠溶液平衡的HiLoad Superdex 200柱(GE Healthcare)上。
表12汇总单体人和食蟹猴CD19抗原Fc(kih)融合蛋白的产率和最终单体含量。
表12:单体人和食蟹猴CD19抗原Fc(kih)融合蛋白的生化分析
构建物 单体[％](SEC) 产率[mg/l]
单体人CD19Fc(kih)融合蛋白 91 0.2
单体食蟹猴CD19Fc(kih)融合蛋白 95 3.56
依照制造商的说明书使用BirA生物素-蛋白质连接酶标准反应试剂盒(Avidity,目录号BirA500)对部分经过纯化的抗原进行体外生物素化。含有人CD19的融合物的生物素化程度是94％,相应的食蟹猴CD19构建物是100％。然后使用生物素化蛋白质进行没有脱酰胺热点N27d和N28的亲和力成熟的8B8衍生克隆的选择,筛选和表征。生成两个噬菌体展示文库,其中a)消除位置27d和28处的两个天冬酰胺残基和b)随机化另外的重和轻链CDR以选择具有改善的亲和力的8B8变体。
1.3.3没有CDR-L1热点的8B8亲和力成熟文库的生成
使用标准方案(Silacci et al,2005)通过噬菌体展示进行没有位于CDR-L1中的脱酰胺位点N27d和N28的亲和力成熟的8B8衍生的抗体的生成。在第一步中,人源化亲本克隆8B8的VL和VH DNA序列(SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:138)克隆入噬菌粒,其然后用作随机化的模板。在下一步中,生成两个文库来通过噬菌体展示选择有利的克隆。为了消除上文提到的热点位置,对两个文库使用位置27d和28处只容许氨基酸S T Q E的LCDR1随机化引物(SEQ ID NO:139)。成熟文库1在轻和重链二者的CDR1和2中随机化,而成熟文库2在轻链的CDR1和3中和在重链的CDR3中随机化。对于在轻和该重链二者的CDR1和2中随机化的成熟文库1的生成,通过“交叠延伸剪接”(SOE)PCR装配三种片段并克隆入噬菌体载体。使用下述引物组合来生成文库片段:片段1(LMB3(SEQ ID NO:144)和CD19L1反向随机(SEQ ID NO:139),片段2(CD19L2正向随机(SEQ ID NO:140)和CD19H1反向随机(SEQ ID NO:141),和片段3(CD19H2正向随机(SEQ ID NO:142)和CD19H3反向恒定(SEQ ID NO:143)(表13)。装配足够量的全长随机化片段之后,连同相同处理的受体噬菌粒载体,将它用NcoI/NheI消化。与10μg噬菌粒载体连接3倍摩尔过量的文库插入物。将经过纯化的连接体系用于20次转化,产生2×10exp9个转化子。挽救展示8B8亲和力成熟文库的噬菌粒颗粒并通过PEG/NaCl纯化来纯化,供选择用。
类似地进行在轻链的CDR1和3中和在重链的CDR3中随机化的第二文库的生成。使用下述引物组合来生成文库片段:片段1(LMB3(SEQ ID NO:144)和CD19L1反向随机(SEQ IDNO:139),片段2(CD19L1正向恒定(SEQ ID NO 145)和CD19L3反向随机(SEQ ID NO:146,和片段3(CD19L3正向恒定(SEQ ID NO:147)和CD19H3反向随机(SEQ ID NO:148)(表14)。装配足够量的全长随机化片段之后,连同相同处理的受体噬菌粒载体,将它用NcoI/KpnI消化。与20μg噬菌粒载体连接3倍摩尔过量的文库插入物。将经过纯化的连接体系用于40次转化,产生2×10exp9个转化子。挽救展示8B8亲和力成熟文库的噬菌粒颗粒并通过PEG/NaCl纯化来纯化,供选择用。
表13:用于8B8亲和力成熟和热点去除文库L1_L2/H1_H2的引物
表14:用于8B8亲和力成熟和热点去除文库L1_L3/H3的引物
1.3.4没有CDR-L1热点N27d和N28的亲和力成熟的8B8衍生的克隆的选择
为了选择没有CDR-L1热点N27d和N28的亲和力成熟的克隆,实施通过噬菌体展示的两种选择办法:
在第一种办法中,使用两个噬菌体展示文库在人CD19-Fc融合蛋白上执行选择。依照下述样式在溶液中实施各轮淘选:1.～1012个噬菌粒颗粒对30nM生物素化CD19-Fc蛋白质在1ml的总体积中结合0.5小时,2.通过添加5.4×107个链霉亲合素包被的磁珠达10分钟来捕捉生物素化CD19-Fc蛋白质和特异性结合的噬菌体颗粒,3.使用5x 1ml PBS/Tween20和5x 1ml PBS清洗珠,4.通过添加1ml 100mM TEA达10分钟来洗脱噬菌体颗粒并通过添加500μl 1M Tris/HCl pH 7.4来中和,5.再感染指数式生长的大肠杆菌TG1细菌,和6.用辅助噬菌体VCSM13感染和随后PEG/NaCl沉淀噬菌粒颗粒,供后续选择轮次使用。使用递减的抗原浓度(30x10-9M,10x10-9M,和3x10-9M)在3轮上进行选择。在第2和3轮中,使用中性亲合素板代替链霉亲合素珠实施抗原:噬菌体复合物的捕捉。用5x PBS/Tween20和5x PBS清洗中性亲合素板。在第3轮中,将中性亲合素板在2升PBS中温育过夜进行“解离速率”选择,之后自板洗脱噬菌体。而且,在第2轮中使用食蟹猴CD19-Fc蛋白质以富集交叉反应性结合物。
在第二种选择办法中,对在细胞表面上瞬时表达人或食蟹猴CD19ECD任一的细胞执行噬菌体淘选。为了瞬时转染HEK细胞,生成包含下述蛋白质区段的DNA序列(自5’至3’)的表达质粒:Flag标签,SNAP标签,人或食蟹猴任一起源的CD19ECD,和血小板衍生生长因子受体(PDGFR)的跨膜区(SEQ ID NO:149和150)。使用抗Flag抗体进行检测通过流式细胞术确认相应蛋白质(SEQ ID NO:151和152)在细胞表面上的表达。两个文库在第一轮选择中暴露于表达含有人或食蟹猴CD19ECD的蛋白质融合物任一的细胞。对于后续淘选轮次,CD19ECD的物种相应交替。使用经无关膜蛋白瞬时转染的细胞进行预清洁。
依照下述样式实施各轮淘选:
1.依照之前描述的标准规章用表达CD19ECD或无关跨膜蛋白任一的构建物转染HEK细胞,
2.将细胞在具有5％CO2气氛的温箱中于37℃温育总共48小时,
3.通过离心(3分钟,250×g)分离细胞并分别在PBS/5％BSA中重悬浮1×10E7个CD19ECD阳性细胞和1×10E7个阴性细胞,
4.通过将噬菌体文库与1×107个CD19阴性细胞一起于4℃温育60分钟来预清洁非特异性噬菌体,使用温和旋转的管旋转器,
5.将细胞以250×g离心3分钟并将上清液转移入新鲜的管并添加1×10E7个CD19阳性细胞并于4℃温育60分钟,在管旋转器上温和旋转,
6.通过以250×g离心1分钟,吸出上清液,并在1ml PBS中重悬浮(8次)来清洗细胞,
7.用1ml 100mM TEA洗脱噬菌体,于室温温育5分钟,并用500μl 1M Tris-HCl,pH7.6中和洗出液,
8.再感染指数式生长的大肠杆菌TG1细菌,和
9.用辅助噬菌体VCSM13感染和随后PEG/NaCl沉淀噬菌粒颗粒,供后续选择轮次使用。选择进行3轮。
对于这两种选择办法,如下通过ELISA鉴定特异性结合物:在中性亲合素板上包被100ul 30nM生物素化CD19-Fc蛋白质每孔。添加含有Fab的细菌上清液并使用抗Flag/HRP二抗经由其Flag标签检测结合性Fabs。
在使用经含有人CD19ECD的表达质粒(SEQ ID NO:149)瞬时转染的细胞的基于细胞的ELISA中进一步测试重组人CD19呈ELISA阳性的克隆。如下实施此分析:转染后48小时,收获HEK细胞并以250xg离心5分钟。然后在冰冷的PBS BSA 2％中重悬浮细胞至4x106个细胞/ml并在冰上温育20分钟以封闭非特异性结合位点。将100μl中的4x105个细胞分配至96孔板的每个孔并以250xg和4℃离心3分钟。吸出上清液并用50μl冰冷的PBS/BSA 2％稀释50μl含有可溶性Fab片段的细菌上清液,添加至板,与细胞混合并于4℃温育1小时。之后,将细胞用冰冷的PBS清洗3次,之后每孔添加100μl含有1:2000稀释的抗Fab-HRP抗体的PBS BSA2％。温育时间1小时后,再次将细胞用冰冷的PBS清洗3次。为了显色,每孔添加100μl“1-step ultra TMB-ELISA”底物。温育时间10分钟后,将上清液转移至新的装有40μl H2SO4 1M每孔的96孔板并测量450nm处的吸光度。将展现超出背景的显著信号的克隆提交使用ProteOn XPR36通过SPR分析的动力学筛选实验。
1.3.5亲和力成熟的8B8衍生的变体通过SPR的鉴定
为了进一步表征ELISA阳性克隆,通过表面等离振子共振测量解离速率并与亲本人源化克隆8B8比较。
为了此实验,通过胺偶联(NaAcetate pH4.5,25μl/min,240s)在GLM芯片的所有6个通道上固定化7000RU多克隆抗人Fab抗体(垂直取向)。过滤每份含有抗体的细菌上清液并用PBS2倍稀释,然后以垂直取向以25μl/min注射360秒以实现介于100和400个响应单位(RU)之间的固定化水平。单体CD19-Fc的注射:为了一击动力学测量,将注射方向改成水平取向,沿着分开的通道1-4以50μl/min同时注射经过纯化的单体CD19-Fc的三倍稀释系列(介于150和6nM之间的变化浓度范围),结合时间180秒,解离时间300秒。在通道5中注射人IgG Fc片段(150nM)作为对亲和力成熟的CD19变体的特异性结合的阴性对照,连同在第6通道中注射PBS以提供“在线”空白作为参照。通过10mM甘氨酸pH1.5和50mM NaOH以90μl/min达30秒(水平取向)的两次脉冲实施再生。使用ProteOn Manager v3.1软件中的简单一对一Langmuir结合模型通过同时拟合传感图来计算解离速率常数(koff)。鉴定表达具有最慢的解离速率常数的Fab的克隆。对相应噬菌粒的可变域测序。重要的是,CDR-L1中的两个天冬酰胺残基(位置27d和28)均被丝氨酸或苏氨酸替换,证明两个脱酰胺位点均被去除。
表15:在用细菌上清液的筛选分析中获得的亲本8B8和所选择的克隆2B11的解离常数
克隆 解离常数kd(1/s)
亲本8B8 3.01E-4
2B11 4.37E-6
表16分别显示克隆8B8-018和8B8-2B11的CDR和可变区VH和VL的氨基酸序列。
表16:克隆8B8-018和8B8-2B11的CDR和可变区VH和VL的序列
1.4单价CEA靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的制备,其中4-1BB配体是C端融合的(构建物5.11和5.12)(CEA在节链上)
如实施例1.1中关于单价FAP靶向性构建物描述的制备该分子,唯一的差异在于抗FAP结合物用抗CEA结合物替换。
将编码对癌胚抗原(CEA)特异性的结合物,克隆T84.66-LCHA的重和轻链可变区DNA序列与人IgG1的节恒定重链或恒定轻链任一同框亚克隆。CEA克隆的生成在实施例1.5中描述。
已经依照国际专利申请公开文本No.WO 2012/130831 A1中描述的方法在节和穴重链的恒定区中引入Pro329Gly,Leu234Ala和Leu235Ala突变以消除对Fc伽马受体的结合。
对于所有构建物,如Carter,J Immunol Methods 248,7-15(2001)中描述的使用节入穴异二聚化技术。含有CH3域中的Y349C/T366S/L368A/Y407V突变的huIgG1Fc穴链,含有CH3域中的S354C/T366W突变的抗FAP huIgG1节链和抗FAP轻链的组合容许生成包括装配好的三聚体4-1BB配体和一个CEA结合Fab的异二聚体(图2A和2B)。
表17显示单价CEA(T84.66-LCHA)靶向性含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物5.11)的cDNA和氨基酸序列。
表17:CEA(T84.66-LCHA)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物5.11的序列
表18显示单价CEA(T84.66-LCHA)靶向性含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物5.12)的cDNA和氨基酸序列。
表18:CEA(T84.66-LCHA)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物5.12的序列
1.5抗CEA克隆T84.66-LCHA的生成
1.5.1抗CEA克隆T84.66的人源化
通过将CDR嫁接到人种系框架受体序列上开发了新颖的鼠抗体T84.66的人源化变体(Wagener et al.,J Immunol 130,2308(1983),Neumaier et al.,J Immunol 135,3604(1985))。
来自非人起源的抗体的人源化本质上由将来自非人抗体(供体)的CDR残基移植到人(受体)抗体的框架上组成。正常情况下,通过比对供体序列与潜在受体序列的集合并选择与供体具有合理的同源性或在对结构和活性至关紧要的一些位置处显示相似氨基酸的来选择受体框架。在本情况中,通过比对小鼠T84.66蛋白质(NCBI登录号:重链为CAA36980(SEQ ID NO:159),轻链为CAA36979(SEQ ID NO:160))序列与人种系序列的集合并挑选显示高序列同一性的人序列来实施抗体受体框架的搜索。这里,选择来自IMGT数据库的序列IGHV1-69*08作为重链框架受体序列(IMGT登录号Z14309,SEQ ID NO:161),并选择IGKV3-11*01序列(IMGT登录号X01668,SEQ ID NO:162)作为轻链框架受体。在这两种受体框架上,嫁接小鼠重和轻可变域的三个互补决定区(CDR)。由于框架4(FR4)区不是种系V基因的可变区的一部分,因此个别进行该位置的比对。选择JH4序列用于重链,并选择JK2序列用于轻链。
11.1.2 T84.66 IgG的不同人源化变体对细胞的结合
在表达CEA的人胃腺癌细胞(MKN45,DSMZ ACC 409)上测试T84.66IgG的不同人源化变体的结合。
收获细胞,计数,检查存活力并以2x106个细胞/ml在FACS缓冲液(100μl PBS0.1％BSA)中重悬浮。将100μl细胞悬浮液(含有0.2x106个细胞)在圆底96孔板中与递增浓度的CEA IgG(4ng/ml–60μg/ml)一起于4℃温育30分钟,用冷的PBS 0.1％BSA清洗两次,进一步与PE缀合的AffiniPure F(ab’)2片段山羊抗人IgG Fcg片段特异性二抗(JacksonImmuno Research Lab PE#109-116-170)一起于4℃再温育30分钟,用冷的PBS 0.1％BSA清洗两次并立即使用FACS CantoII(Software FACS Diva)通过FACS分析。使用GraphPadPrism5获得并计算结合曲线和EC50值。
表19显示T84.66IgG的所选择的人源化变体对MKN45细胞上表达的人CEA的不同结合数据。基于计算的EC50结合值,选择人源化变体1用于进一步评估。
表19:T84.66 IgG的不同人源化变体对细胞的结合
EC<sub>50</sub>(μg/ml)
亲本嵌合T84.66 0.99
人源化变体1 1.5
人源化变体2 8.6
人源化变体3 1.4
人源化变体4 3.1
人源化变体1在下面称作T84.66-LCHA。它的CDR和VH和VL的氨基酸序列以及亲本嵌合T84.66克隆的VH和VL域的氨基酸序列在表20中显示。
表20:CEA克隆T84.66-LCHA和其亲本抗体T84.66的可变域的氨基酸序列
1.6单价非靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的制备,其中4-1BB配体是C端融合的(对照H和I)(DP47在节链上)
如实施例1.1中关于单价FAP靶向性构建物描述的制备该分子,唯一的差异在于抗FAP结合物(VH-VL)用称作DP47,不结合该抗原的种系对照替换。
表21显示单价非靶向性含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(对照H)的cDNA和氨基酸序列。
表21:单价DP47非靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子对照H的序列
表22显示单价非靶向性含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(对照I)的cDNA和氨基酸序列。
表22:单价DP47非靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子对照I的序列
1.7单价FAP靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的制备,其中4-1BB配体是C端融合的(构建物1.13,2.13,1.14和2.14)(FAP在穴链上)
将含有通过(G4S)2接头隔开的4-1BB配体的两个外域的多肽同框亚克隆至人IgG1Fc穴或节链的C端(Merchant,Zhu 1998),如图1a中描绘的:人IgG1Fc,(G4S)2连接头,人4-1BB配体,(G4S)2连接头,人4-1BB配体。将含有4-1BB配体的一个外域的多肽同框亚克隆至人IgG1Fc节或穴链的C端,如图1b中描述的:人IgG1Fc,(G4S)2连接头,人4-1BB配体。
将编码对成纤维细胞活化蛋白(FAP)特异性的结合物,克隆4B9或克隆28H1的重和轻链可变区DNA序列与人IgG1的穴恒定重链或恒定轻链任一同框亚克隆。FAP结合物的生成和制备在WO 2012/020006 A2中描述,通过援引将其收入本文中。
已经依照国际专利申请公开文本No.WO 2012/130831 A1中描述的方法在节和穴重链的恒定区中引入Pro329Gly,Leu234Ala和Leu235Ala突变以消除对Fc伽马受体的结合。
对于所有构建物,如Carter,J Immunol Methods 248,7-15(2001)中描述的使用节入穴异二聚化技术。含有CH3域中的Y349C/T366S/L368A/Y407V突变的huIgG1Fc穴链,含有CH3域中的S354C/T366W突变的抗FAP huIgG1节链和抗FAP轻链的组合容许生成包括装配好的三聚体4-1BB配体和一个FAP结合Fab的异二聚体(图2C和2D)。
表23显示单价FAP(4B9)靶向性含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物2.13)的cDNA和氨基酸序列。
表23:FAP(4B9)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物2.13的序列
表24显示单价FAP(4B9)靶向性含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物2.14)的cDNA和氨基酸序列。
表24:FAP(4B9)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物2.14的序列
表25显示单价FAP(28H1)靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物1.13)的cDNA和氨基酸序列。
表25:FAP(28H1)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物1.13的序列
表26显示单价FAP(28H1)靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物1.14)的cDNA和氨基酸序列。
表26:FAP(28H1)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物1.14的序列
1.8单价CD19靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的制备,其中4-1BB配体是C端融合的(构建物3.13,4.13,3.14和4.14)(CD19在穴链上)
如实施例1.7关于单价FAP-靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子中描述的制备该分子,唯一的差异在于抗FAP结合物用抗CD19结合物替换。
将编码对CD19特异性的结合物,克隆8B8-018或8B8-2B11的重和轻链可变区DNA序列与人IgG1的穴恒定重链或恒定轻链任一同框亚克隆。
含有Y349C/T366S/L368A/Y407V突变的抗CD19huIgG1Fc穴链,含有S354C/T366W突变的huIgG1节链和抗CD19轻链的组合容许生成包括装配好的三聚体4-1BB配体和一个CD19结合Fab的异二聚体(图2C或2D)。
表27分别显示单价靶向性CD19(8B8-018)分拆三聚体4-1BB配体(71-248)C端Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物3.13)的cDNA和氨基酸序列。
表27:CD19(8B8-018)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物3.13的序列
表28显示单价CD19(8B8-018)靶向性含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物3.14)的cDNA和氨基酸序列。
表28:CD19(8B8-018)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物3.14的序列
表29显示单价CD19(8B8-2B11)靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物4.13)的cDNA和氨基酸序列。
表29:CD19(8B8-2B11)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物4.13的序列
表30显示单价CD19(8B8-2B11)靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物4.14)的cDNA和氨基酸序列。
表30:CD19(8B8-2B11)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物4.14的序列
1.9单价CEA靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的制备,其中4-1BB配体是C端融合的(构建物5.13和5.14)(CEA在穴链上)
如实施例1.7中关于单价FAP靶向性构建物描述的制备该分子,唯一的差异在于抗FAP结合物用抗CEA结合物替换。
将编码对癌胚抗原(CEA)特异性的结合物,克隆T84.66-LCHA的重和轻链可变区DNA序列与人IgG1的节恒定重链或恒定轻链任一同框亚克隆。CEA克隆的生成在实施例1.5中描述。
含有CH3域中的Y349C/T366S/L368A/Y407V突变的huIgG1Fc穴链,含有CH3域中的S354C/T366W突变的抗CEA huIgG1节链和抗CEA轻链的组合容许生成包括装配好的三聚体4-1BB配体和一个CEA结合Fab的异二聚体(图2C和2D)。
表31显示单价CEA(T84.66-LCHA)靶向性含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物5.13)的cDNA和氨基酸序列。
表31:CEA(T84.66-LCHA)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物5.13的序列
表32显示单价CEA(T84.66-LCHA)靶向性含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物5.14)的cDNA和氨基酸序列。
表32:CEA(T84.66-LCHA)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物5.14的序列
1.10单价非靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的制备,其中4-1BB配体是C端融合的(对照J和K)(DP47在穴链上)
如实施例1.7中关于单价FAP靶向性构建物描述的制备该分子,唯一的差异在于抗FAP结合物(VH-VL)用称作DP47,不结合该抗原的种系对照替换。
表33显示单价非靶向性含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(对照J)的cDNA和氨基酸序列。
表33:单价DP47非靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子对照J的序列
表34显示单价非靶向性含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(对照K)的cDNA和氨基酸序列。
表34:单价DP47非靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子对照K的序列
1.11另外的对照分子的制备
与称作DP47,不结合该抗原的种系对照组合,制备对照D,一种具有N端融合的4-1BBL模块分子,如图3B中描绘的。
依照国际专利申请公开文本No.WO 2012/130831 A1中描述的方法,该分子包含节和穴重链的恒定区中的Pro329Gly,Leu234Ala和Leu235Ala突变以消除对Fc伽马受体的结合。
将编码与人CL域融合的二聚体4-1BB配体的多肽与节上的人IgG1重链CH2和CH3域同框亚克隆并将编码单体4-1BB配体的多肽与人CH1域融合。为了改善正确配对,已经在交叉的CH-CL中引入下述突变。在与人CL融合的二聚体4-1BB配体中,E123R和Q124K。在与人CH1融合的单体4-1BB配体中,K147E和K213E。
表35显示单价“非靶向性”含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(对照D)的cDNA和氨基酸序列。
表35:具有CH-CL交叉且具有带电荷的残基*的单价DP47非靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子(对照D)的序列
制备对照D的FAP靶向性变体,其中代替DP47将编码对成纤维细胞活化蛋白(FAP)特异性的结合物,克隆4B9的重和轻链可变区DNA序列与人IgG1的穴恒定重链或恒定轻链任一同框亚克隆。
表36显示单价FAP靶向性含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物2.4)的cDNA和氨基酸序列。
表36:单价FAP(4B9)靶向性含有人4-1BB配体(71-248)的Fc(kih)融合分子构建物2.4的序列
还制备CD19靶向性变体,其中代替DP47将编码对CD19特异性的结合物,克隆8B8-018和8B8-2B11的重和轻链可变区DNA序列与人IgG1的穴恒定重链或恒定轻链任一同框亚克隆。依照Uniprot数据库的P41273序列合成编码人4-1BB配体的部分外域(氨基酸71-254或氨基酸71-248)的DNA序列。表37a显示具有交叉的CH-CL和带电荷的残基的单价CD19(8B8-018)靶向性分拆三聚体4-1BB配体(71-248)Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物3.4)的cDNA和氨基酸序列。表37b显示单价CD19靶向性含有4-1BB配体(71-254)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子(构建物4.1)的cDNA和氨基酸序列。
表37a:含有CH-CL交叉且具有带电荷的残基的单价CD19(8B8-018)靶向性分拆三聚体4-1BB配体(71-248)Fc(kih)融合物(构建物3.4)的cDNA和氨基酸序列。*带电荷的残基
表37b:单价CD19(8B8-2B11)靶向性含有人4-1BB配体(71-254)的Fc(kih)融合分子构建物4.1的序列
测定法中使用的另外一种对照,称作对照F,是一种非靶向性DP47,种系对照,人IgG1,依照国际专利申请公开文本No.WO 2012/130831 A1中描述的方法含有Pro329Gly,Leu234Ala和Leu235Ala突变(称作PGLALA)以消除对Fc伽马受体的结合。
表38显示“非靶向性”DP47 hu IgG1 PGLALA抗体(对照F)的cDNA和氨基酸序列。
表38:DP47非靶向性人IgG1 PGLALA(对照F)的序列
实施例2
单价靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc融合抗原结合分子的生成
将靶向性和非靶向性单价三聚体4-1BB配体C端Fc(kih)融合抗原结合分子编码序列克隆入质粒载体,其自MPSV启动子驱动插入物表达且含有位于CDS的3’端的合成polyA序列。另外,该载体含有用于质粒的附加体维持的EBV OriP序列。
通过使用聚乙烯亚胺用哺乳动物表达载体共转染HEK293-EBNA细胞来生成分拆三聚体4-1BB配体Fc(kih)融合抗原结合分子。用相应的表达载体转染细胞。对于变体x.11,x.12,x.13,x.14和对照分子H,I,J和K,以1:1:1比率(“载体节链”:“载体穴链“:“载体轻链”)。对于对照D,以比率1:1:1:1(“载体节链”:“载体穴链“:“载体轻链”:“载体轻链2”)而对于人IgG1,对照F,以1:1比例(“载体重链”:“载体轻链)。
对于500mL摇瓶中的生成,在转染之前24小时接种300x106个HEK293EBNA细胞。对于转染,将细胞以210x g离心10分钟,并用20mL预温热的CD CHO培养基替换上清液。在20mLCD CHO培养基中混合表达载体(200μg总DNA)。添加540μL PEI之后,将溶液漩涡震荡15秒并于室温温育10分钟。之后,将细胞与DNA/PEI溶液混合,转移至500mL摇瓶并在具有5％CO2气氛的温箱中于37℃温育3小时。温育之后,添加160mL补充有6mM L-谷氨酰胺,5g/L PEPSOY和1.2mM丙戊酸的Excell培养基并将细胞培养24小时。转染之后一天,添加12％补料。培养7天之后,通过以至少400x g离心30-40分钟来收集上清液。将溶液无菌过滤(0.22μm滤器),补充叠氮化钠至终浓度0.01％(w/v),并保持于4℃。
通过使用蛋白A的亲和层析,继以大小排阻层析,自细胞培养物上清液纯化分泌的蛋白质。对于亲和层析,将上清液加载到用磷酸钠(20mM),柠檬酸钠(20mM)缓冲液(pH 7.5)平衡的MabSelect Sure柱(CV＝5-15mL,树脂来自GE Healthcare)上。通过用至少6个柱体积的相同缓冲液清洗来去除未结合的蛋白质。使用20mM柠檬酸钠,100mM氯化钠,100mM甘氨酸缓冲液(pH2.5)的线性梯度(20个CV)或分步洗脱(8个CV)任一洗脱结合的蛋白质。对于线性梯度,应用另外4个柱体积的分步洗脱。
通过添加1/10(v/v)的0.5M磷酸钠,pH 8.0来调节收集的级分的pH。浓缩蛋白质,之后加载到用pH 6.0的20mM组氨酸,140mM氯化钠,0.01％(v/v)吐温20溶液平衡的HiLoadSuperdex 200柱(GE Healthcare)上。
使用基于氨基酸序列计算的摩尔消光系数,通过测量280nm处的光密度(OD)来确定蛋白质浓度。通过在还原剂(5mM 1,4-二硫苏糖醇)存在和缺失下的SDS-PAGE和用Coomassie SimpleBlueTM SafeStain(Invitrogen USA)的染色或使用Caliper LabChipGXII(Perkin Elmer)的CE-SDS来分析靶向性三聚体4-1BB配体Fc(kih)融合抗原结合分子的纯度和分子量。于25℃使用在25mM K2HPO4,125mM NaCl,200mM L-精氨酸一氢氯化物,0.02％(w/v)NaN3,pH 6.7运行缓冲液中平衡的TSKgel G3000 SW XL分析性大小排阻柱(Tosoh)分析样品的聚集物含量。
表39汇总靶向性分拆三聚体C端4-1BB配体Fc(kih)融合抗原结合分子的产率和最终单体含量。
表39:例示性靶向性分拆三聚体C端4-1BB配体Fc(kih)融合抗原结合分子的生化分析
实施例3
通过表面等离振子共振的亲和力测定
3.1抗原的制备,纯化和表征或表面等离振子共振
人CD19Fc融合蛋白
与人IgG1Fc域融合的人CD19外域的制备,纯化和表征在实施例1.3.2中描述。
人4-1BB
将人4-1BB的外域(Q07011,氨基酸24-186)与avi(GLNDIFEAQKIEWHE,SEQ IDNO.245)和六组氨酸标签同框亚克隆(表40)。
表40:单体人4-1BB His分子的序列
如上文实施例1.3.2中关于CD19Fc融合蛋白描述的实施蛋白质生成。通过螯合层析,继以大小排阻层析自细胞培养物上清液纯化分泌的蛋白质。
在20mM磷酸钠,500nM氯化钠,pH7.4中平衡的NiNTA Superflow筒(5ml,Qiagen)上实施第一个层析步骤。通过应用12个柱体积上自5％至45％洗脱缓冲液(20mM磷酸钠,500nM氯化钠,500mM咪唑,pH7.4)的梯度实施洗脱。
将蛋白质浓缩并过滤,之后加载到用pH7.4的2mM MOPS,150mM氯化钠,0.02％(w/v)叠氮化钠溶液平衡的HiLoad Superdex 75柱(GE Healthcare)上。表41汇总单体人aviHis标签4-1BB的产率和最终单体含量。
表41:单体人4-1BB avi His的生化分析
构建物 单体[％](SEC) 产率[mg/l]
单体人4-1BB avi His 100 16.4
3.2亲和力测定
通过表面等离振子共振(SPR)评估靶向性分拆三聚体C端4-1BB配体抗原结合分子对重组4-1BB或CD19的结合。于25℃在Biacore T200上实施所有SPR实验,用HBS-EP作为运行缓冲液(0.01M HEPES pH7.4,0.15M NaCl,3mM EDTA,0.005％表面活性剂P20,Biacore,Freiburg/Germany)。
对人4-1BB的亲和力
使用标准胺偶联试剂盒(Biacore,Freiburg/Germany)于pH5.0将抗人Fc抗体(Biacore,Freiburg/Germany)直接偶联到CM5芯片上。固定化水平是大约4000RU。以4nM的浓度对靶向性分拆三聚体C端4-1BB配体捕捉90秒。使重组人4-1BB avi his以自2.7至2000nM的浓度范围以30μL/min的流通过流动室达120秒。对解离监测120秒。通过减去在参照流动室上获得的响应来修正本体(bulk)折射率差异。这里,使抗原流过具有固定化的抗人Fc抗体的表面但在其上注射HBS-EP而非抗体。
对人CD19的亲和力
使用标准胺偶联试剂盒(Biacore,Freiburg/Germany)于pH5.0将抗人Fab抗体(Biacore,Freiburg/Germany)直接偶联到CM5芯片上。固定化水平是大约7000RU。以介于75和100nM之间的浓度对靶向性分拆三聚体C端4-1BB配体捕捉60秒。使重组人CD19Fc(kih)以自7.8至500nM的浓度范围以30μL/min的流流过流动室达220秒。对解离监测600/2500秒。通过减去在参照流动室上获得的响应来修正本体折射率差异。这里,使抗原流过具有固定化的抗人Fc抗体的表面但在其上注射HBS-EP而非抗体。
使用Biacore T200评估软件(vAA,Biacore AB,Uppsala/Sweden)推导动力学常数,用于通过数值积分拟合1:1Langmuir结合的速率方程并用于定性估算亲合力。
表42:靶向性分拆三聚体C端4-1BB配体抗原结合分子对重组人4-1BB的结合
通过拟合1:1Langmuir结合来确定靶向性分拆三聚体C端4-1BB配体抗原结合分子和人4-1BB avi his之间的相互作用的亲和常数。结果是来自三项实验的平均值。
表43:靶向性分拆三聚体C端4-1BB配体对重组人CD19的结合
通过拟合1:1Langmuir结合来确定靶向性分拆三聚体C端4-1BB配体抗原结合分子和人CD19Fc(kih)之间的相互作用的亲和常数。结果是来自三项实验的平均值。
3.3通过表面等离振子共振测定靶向性C端4-1BB分拆三聚体配体Fc融合抗原结合分子的同时结合
通过表面等离振子共振(SPR)评估分别同时结合人4-1BB Fc(kih)和人FAP,或人CD19的能力。于25℃在Biacore T200上实施所有SPR实验,用HBS-EP作为运行缓冲液(0.01MHEPES pH7.4,0.15M NaCl,3mM EDTA,0.005％表面活性剂P20,Biacore,Freiburg/Germany)。
将生物素化人4-1BB Fc(kih)直接偶联至链霉亲合素(SA)传感器芯片的流动室。使用高至200个共振单位(RU)的固定化水平。使靶向性三聚体C端4-1BB配体Fc(kih)融合分子以200nM的浓度范围以30μL/min的流流过流动室达90秒并将解离设置成零秒。以500nM的浓度以30μL/min的流作为第二分析物注射人FAP或人CD19Fc(kih)通过流动室达90秒(图4A)。对解离监测120秒。通过减去在参照流动室上获得的响应来修正本体(bulk)折射率差异,那里不固定化蛋白质。双特异性构建物能分别同时结合人4-1BB和人FAP或人CD19(图4B,4C和4D)。
实施例4
FAP-靶向性/DP47含有人4-1BB配体三聚体的Fc融合抗原结合分子的制备和纯化
4.1单价FAP(4B9)-靶向性/DP47含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的制备,其中4-1BB配体是C端融合的(构建物2.15和2.16)(FAP在穴链上)
依照Uniprot数据库的P41273序列合成编码人4-1BB配体的部分外域(氨基酸71-254)的DNA序列。
将含有通过(G4S)2接头隔开的4-1BB配体的两个外域的多肽同框亚克隆至人IgG1Fc穴或节链的C端,如图1A中描绘的:人IgG1Fc,(G4S)2连接头,人4-1BB配体,(G4S)2连接头,人4-1BB配体。将含有4-1BB配体的一个外域的多肽同框亚克隆至人IgG1Fc节或穴链的C端,如图1B中描述的:人IgG1Fc,(G4S)2连接头,人4-1BB配体。
将编码对成纤维细胞活化蛋白(FAP)特异性的结合物,克隆4B9的重和轻链可变区DNA序列与人IgG1的穴恒定重链或恒定轻链任一同框亚克隆。将编码非结合克隆,克隆DP47的重和轻链可变区DNA序列与人IgG1的节恒定重链或恒定轻链任一同框亚克隆。应用Crossmab技术来降低错误配对的轻链的形成(国际专利申请No.WO 2010/145792 A1)。在这个实施例中,将结合物DP47的一个交叉的Fab单元(VHCL)与节链融合。
已经在节和穴重链的恒定区中引入Pro329Gly,Leu234Ala和Leu235Ala突变以消除对Fc伽马受体的结合(国际专利申请公开文本No.WO 2012/130831 A1)。
含有Y349C/T366S/L368A/Y407V突变的抗FAP huIgG1 Fc穴链,含有S354C/T366W突变的DP47 huIgG1 Fc节链和两个轻链,抗FAP和DP47的组合容许生成包括装配好的三聚体4-1BB配体,一个FAP结合性Fab和一个非结合性DP47Fab的异二聚体(图5A和5B)。
表44显示单价FAP(4B9)靶向性含有4-1BB配体(71-254)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的cDNA和氨基酸序列,其中二聚体4-1BBL与穴链融合(构建物2.15)。
表44:FAP(4B9)-靶向性/DP47含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子构建物2.15的序列
表45显示单价FAP(4B9)-靶向性/DP47含有4-1BB配体(71-254)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的cDNA和氨基酸序列,其中二聚体4-1BBL与Fc节链融合(构建物2.16)。
表45:FAP(4B9)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物2.16的序列
4.2单价FAP(4B9)-靶向性/DP47含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的制备,其中4-1BB配体是C端融合的(构建物2.17和2.18)(FAP在节链上)
依照Uniprot数据库的P41273序列合成编码人4-1BB配体的部分外域(氨基酸71-254)的DNA序列。
将含有通过(G4S)2接头隔开的4-1BB配体的两个外域的多肽同框亚克隆至人IgG1Fc穴或节链的C端,中如图1A描绘的:人IgG1Fc,(G4S)2连接头,人4-1BB配体,(G4S)2连接头,人4-1BB配体。将含有4-1BB配体的一个外域的多肽同框亚克隆至人IgG1Fc节或穴链的C端,如图1B中描述的:人IgG1Fc,(G4S)2连接头,人4-1BB配体。
将编码对成纤维细胞活化蛋白(FAP)特异性的结合物,克隆4B9的重和轻链可变区DNA序列与人IgG1的节恒定重链或恒定轻链任一同框亚克隆。将编码一种非结合性克隆,克隆DP47的重和轻链可变区DNA序列与人IgG1的穴恒定重链或恒定轻链任一同框亚克隆。应用Crossmab技术来降低错误配对的轻链的形成(国际专利申请No.WO 2010/145792 A1)。在这个实施例中,将结合物DP47的一个交叉的Fab单元(VHCL)与节链融合。
已经在节和穴重链的恒定区中引入Pro329Gly,Leu234Ala和Leu235Ala突变以消除对Fc伽马受体的结合(国际专利申请公开文本No.WO 2012/130831 A1)。
含有Y349C/T366S/L368A/Y407V突变的DP47 huIgG1 Fc穴链,含有S354C/T366W突变的抗FAP huIgG1 Fc节链和两个轻链,抗FAP和DP47的组合容许生成包括装配好的三聚体4-1BB配体,一个FAP结合性Fab和一个非结合性DP47Fab的异二聚体(图5C和5D)。
表46显示单价DP47/FAP(4B9)靶向性含有4-1BB配体(71-254)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的cDNA和氨基酸序列,其中二聚体4-1BBL与Fc穴链融合(构建物2.17)。
表46:FAP(4B9)-靶向性/DP47含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子构建物2.17的序列
表47显示单价DP47/FAP(4B9)靶向性含有4-1BB配体(71-254)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的cDNA和氨基酸序列,其中二聚体4-1BBL与节链融合(构建物2.18)。
表47:FAP(4B9)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物2.18的序列
4.3单价FAP(4B9)-靶向性/DP47含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的制备,其中4-1BB配体是C端融合的(构建物2.19和2.20)(FAP在穴链上)
依照Uniprot数据库的P41273序列合成编码人4-1BB配体的部分外域(氨基酸71-248)的DNA序列。如实施例4.1中关于构建物2.15和2.16描述的制备构建物2.19和2.20。
表48显示单价FAP(4B9)-靶向性/DP47含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的cDNA和氨基酸序列,其中二聚体4-1BBL与穴链融合(构建物2.19)。
表48:FAP(4B9)-靶向性/DP47含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子构建物2.19的序列
表49显示单价FAP(4B9)-靶向性/DP47含有4-1BB配体(71-248)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的cDNA和氨基酸序列,其中二聚体4-1BBL与Fc节链融合(构建物2.20)。
表49:FAP(4B9)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物2.20的序列
4.4单价DP47/FAP(4B9)靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的制备,其中4-1BB配体是C端融合的(构建物2.21和2.22)(FAP在节链上)
依照Uniprot数据库的P41273序列合成编码人4-1BB配体的部分外域(氨基酸71-248)的DNA序列。如实施例4.2中关于构建物2.17和2.18描述的制备构建物2.21和2.22。
表50显示单价DP47/FAP(4B9)靶向性含有4-1BB配体(71-254)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的cDNA和氨基酸序列,其中二聚体4-1BBL与Fc穴链融合(构建物2.21)。
表50:FAP(4B9)-靶向性/DP47含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子构建物2.21的序列
表51显示单价DP47/FAP(4B9)靶向性含有4-1BB配体(71-254)三聚体的Fc(kih)融合抗原结合分子的cDNA和氨基酸序列,其中二聚体4-1BBL与节链融合(构建物2.22)。
表51:FAP(4B9)靶向性含有人4-1BB配体三聚体的Fc(kih)融合分子构建物2.22的序列
实施例5
单价FAP靶向性人DP47/含有4-1BB配体三聚体的Fc融合抗原结合分子的生成
将单价FAP靶向性三聚体4-1BB配体C端Fc(kih)融合抗原结合分子编码序列克隆入质粒载体,其自MPSV启动子驱动插入物表达且含有位于CDS的3’端的合成polyA序列。另外,该载体含有用于质粒的附加体维持的EBV OriP序列。
通过使用聚乙烯亚胺用哺乳动物表达载体共转染HEK293-EBNA细胞来生成分拆三聚体4-1BB配体Fc(kih)融合分子。用相应的表达载体转染细胞。对于构建物2.15至2.22,以1:1:1:1比率(“载体Fc穴链”:“载体轻链1”:“载体Fc节链“:“载体轻链2”)。如实施例2中描述的进行生成和纯化。
表52汇总例示性DP47/FAP(4B9)靶向性分拆三聚体C端4-1BB配体Fc(kih)融合抗原结合分子的产率和最终单体含量。
表52:例示性靶向性分拆三聚体C端4-1BB配体Fc(kih)融合抗原结合分子的生化分析
实施例5
通过表面等离振子共振测定DP47/FAP(4B9)靶向性C端4-1BB分拆三聚体配体Fc融合抗原结合分子的同时结合
通过表面等离振子共振(SPR)评估同时结合人4-1BB Fc(kih)和人FAP的能力。于25℃在Biacore T200上实施所有SPR实验,用HBS-EP作为运行缓冲液(0.01M HEPES pH7.4,0.15M NaCl,3mM EDTA,0.005％表面活性剂P20,Biacore,Freiburg/Germany)。
将生物素化人4-1BB Fc(kih)直接偶联至链霉亲合素(SA)传感器芯片的流动室。使用高至200个共振单位(RU)的固定化水平。使靶向性三聚体C端4-1BB配体Fc(kih)融合分子以200nM的浓度范围以30μL/min的流流过流动室达90秒并将解离设置成零秒。以500nM的浓度以30μL/min的流作为第二分析物注射人FAP通过流动室达90秒(图6A)。对解离监测120秒。通过减去在参照流动室上获得的响应来修正本体(bulk)折射率差异,那里不固定化蛋白质。所有双特异性构建物能同时结合人4-1BB和人FAP(图6B)。
实施例6
单价FAP靶向性C端4-1BB分拆三聚体配体Fc融合抗原结合分子的功能表征
6.1新鲜和活化的人PBMC上的结合
自苏黎世献血中心获得血沉棕黄层。为了分离新鲜的外周血单个核细胞(PBMC),用相同体积的DPBS(Gibco by Life Technologies,目录号14190 326)稀释血沉棕黄层。对50mL聚丙烯离心管(TPP,目录号91050)供应15mL Histopaque 1077(SIGMA Life Science,目录号10771,聚蔗糖和泛影酸钠,调节至1.077g/mL的密度)并将经过稀释的血沉棕黄层内容物在Histopaque 1077上分层。将管以450x g离心30分钟。自界面收集PBMC,用DPBS清洗三次并在由供应有10％(v/v)胎牛血清(FBS,美国起源,PAN biotech,P30-2009,批号P150307GI,经伽马照射的,无支原体且于56℃热灭活35分钟),1％(v/v)GlutaMAX-I(GIBCOby Life Technologies,目录号35050 038),1mM丙酮酸钠(SIGMA,目录号S8636),1％(v/v)MEM非必需氨基酸(SIGMA,目录号M7145)和50μMβ-巯基乙醇(SIGMA,M3148)的RPMI 1640培养基(Gibco by Life Technology,目录号42401-042)组成的T细胞培养基中重悬浮。
PBMC在分离之后直接使用(新鲜人PBMC上的结合)或刺激它们以诱导T细胞的细胞表面上的4-1BB表达(活化的人PBMC上的结合)。为了诱导人CD8T细胞上的4-1BB上调,将6孔组织培养板(TTP,目录号92006)用10ug/mL抗人CD3(克隆OKT3,小鼠IgG2a,BioLegend,目录号317315)和2ug/mL抗人CD28(克隆CD28.2,小鼠IgG1,BioLegend,目录号302923)在DPBS中于4℃包被过夜；临进一步使用前不久,将板用DPBS清洗两次以去除未包被的抗体。将新鲜分离的PBMC在T细胞培养基(与上文描述的相同的培养基)中设置成1 x 106个细胞/mL,接种至aCD3/aCD28包被的6孔板并于37℃和5％CO2培养3天。
对于结合测定法,将0.1 x 106个新鲜或活化的PBMC添加至圆底悬浮细胞96孔板(greiner bio-one,celltar,目录号650185)的每个孔。将板以350x g且于4℃离心5分钟并丢弃上清液。之后,将细胞在100μL/孔含有1:5000稀释的可固定存活力染料eF660(eBioscience,目录号65-0864-18)的DPBS中于4℃在黑暗中染色30分钟。将细胞用200μL冰冷的DPBS缓冲液清洗一次。接着,添加50μL/孔4℃冷的含有单价FAP靶向性C端4-1BB分拆三聚体配体Fc融合抗原结合分子(特别是构建物2.11或构建物2.15),作为阳性对照的构建物2.4和作为阴性对照的对照D和对照F(如实施例1.11中描述的制备)的FACS缓冲液(供应有2％FBS,5mM EDTA pH8(Amresco,目录号E177)和7.5mM叠氮化钠(Sigma-Aldrich,目录号S2002)的DPBS)并将细胞于4℃温育60分钟,用200μL/孔4℃ FACS缓冲液清洗三次。将细胞进一步在50μL/孔4℃冷的含有0.67μg/mL抗人CD45-AF488(克隆HI30,小鼠IgG1k,BioLegend,目录号304019),0.33μg/mL抗人CD8a-BV510(克隆SK1,小鼠IgG1k,BioLegend,目录号344732),0.23μg/mL抗人CD4-BV421(克隆OKT4,小鼠IgG2bκ,BioLegend,目录号317434),0.67μg/mL抗人CD3-PerCP-Cy5.5(克隆UCHT1,小鼠IgG1k,BioLegend,目录号300430),0.67μg/mL抗人CD19-PE/Cy7(克隆HIB19,小鼠IgG1k,BioLegend,目录号302216),5μg/mL PE缀合的AffiniPure抗人IgG F(ab`)2片段特异性山羊F(ab`)2片段(JacksonImmunoResearch,目录号109 116 098)的FACS缓冲液中重悬浮并于4℃温育30分钟。将细胞用200μL/孔4℃ FACS缓冲液清洗两次,然后用供应有1％甲醛(Sigma,HT501320-9.5L)的DPBS固定。将细胞在100μL/孔FACS缓冲液中重悬浮并使用MACS Quant Analyzer 10(Miltenyi Biotech)获取。使用FlowJo V10(FlowJo,LLC)和GraphPad Prism 6.04(GraphPad Software,Inc)分析数据。
在活的CD45+CD3+CD19-CD8-CD4+T细胞,CD45+CD3+CD19-CD4-CD8+T细胞,CD45+CD3+CD4-CD8-γδT细胞和CD45+CD3-CD19+B细胞上设置门并将PE缀合的AffiniPure抗人IgG IgGFcγ片段特异性山羊F(ab`)2片段的荧光强度的几何均值针对FAP靶向性或非靶向性C端4-1BB分拆三聚体配体Fc融合抗原结合分子的滴定浓度绘图。如图7A-H和图8A-F中显示的,只有在人PBMC活化之后,4-1BB在人CD4+和CD8+T细胞上上调。在表53a和53b中,为对活化的人PBMC的结合曲线汇总EC50值。
表53a:对活化的人PBMC的结合曲线的EC50值(构建物2.11)(见图8A-C)
对照D 构建物2.4 构建物2.11
在活化的CD4<sup>+</sup>T细胞上的EC<sub>50</sub>[nM] 0.37 0.41 0.28
在活化的CD8<sup>+</sup>T细胞上的EC<sub>50</sub>[nM] 0.63 1.13 0.41
在活化的γδT细胞上的EC<sub>50</sub>[nM] 0.28 0.64 0.36
表53b:对活化的人PBMC的结合曲线的EC50值(构建物2.15)(见图8D-F)
对照D 构建物2.4 构建物2.15
在活化的CD4<sup>+</sup>T细胞上的EC<sub>50</sub>[nM] 0.08 0.10 0.11
在活化的CD8<sup>+</sup>T细胞上的EC<sub>50</sub>[nM] 0.15 0.23 0.17
在活化的γδT细胞上的EC<sub>50</sub>[nM] 0.09 0.11 0.12
6.2表达FAP的肿瘤细胞的结合
对于在表达FAP的细胞上的结合测定法,使用表达FAP的不同肿瘤细胞:人黑素瘤细胞系MV-3(首次发表:van Muijen GN,Jansen KF,Cornelissen IM,Smeets DF,Beck JL,Ruiter DJ.Establishment and characterization of a human melanoma cell line(MV3)which is highly metastatic in nude mice.Int J Cancer.1991Apr 22；48(1):85-91)和人黑素瘤细胞系WM-266-4(ATCC CRL-1676)。
将0.1 x 106个在DPBS(Gibco by Life Technologies,目录号14190 326)中重悬浮的肿瘤细胞添加至圆底悬浮细胞96孔板(greiner bio-one,celltar,目录号650185)的每个孔。将细胞用200μL DPBS清洗一次。将细胞在100μL/孔4℃冷的含有1:5000稀释的可固定存活力染料eFluor 660(eBioscience,目录号65-0864-18)的DPBS缓冲液中重悬浮并将板于4℃温育30分钟。将细胞用200μL/孔4℃冷的DPBS缓冲液清洗一次并在50μL/孔4℃冷的以一系列浓度含有构建物2.11或构建物2.15,作为阳性对照的构建物2.4和作为阴性对照的对照D和对照F的FACS缓冲液(供应有2％FBS,5mM EDTA pH 8(Amresco,目录号E177)和7.5mM叠氮化钠(Sigma-Aldrich,S2002)的DPBS)中重悬浮,继以于4℃温育1小时。广泛清洗之后,将细胞进一步用50μL/孔4℃冷的含有5μg/mL PE缀合的AffiniPure抗人IgG F(ab`)2片段特异性山羊F(ab`)2片段(Jackson ImmunoResearch,目录号109 116 098)的FACS缓冲液于4℃染色30分钟。将细胞用200μL/孔4℃ FACS缓冲液清洗两次并在50μL/孔含有1％甲醛(Sigma,HT501320-9.5L)的DPBS中固定细胞。将细胞在100μL/孔FACS缓冲液中重悬浮并使用MACS Quant Analyzer 10(Miltenyi Biotech)获取。使用FlowJo V10(FlowJo,LLC)和GraphPad Prism 6.04(GraphPad Software,Inc)分析数据。
在活的肿瘤细胞上设置门并将PE缀合的AffiniPure抗人IgG IgG Fcγ片段特异性山羊F(ab`)2片段的荧光强度的几何均值针对FAP靶向性或非靶向性C端4-1BB分拆三聚体配体Fc融合抗原结合分子的滴定浓度绘图。如图9A和B中显示的,只有FAP靶向性分拆三聚体4-1BB配体融合分子构建物2.4和构建物2.11结合表达FAP的肿瘤细胞MV-3和WM-266-4而非靶向性同种型对照对照F和非靶向性分拆三聚体4-1BB配体融合分子对照D不结合肿瘤细胞。在图9C和9D中显示的是三特异性DP47/FAP靶向性分拆三聚体4-1BB配体融合分子构建物2.15也结合表达FAP的肿瘤细胞MV-3和WM-266-4。在表54a和54b中列出FAP+肿瘤结合曲线的EC50值。
表54a:对表达FAP的肿瘤细胞的结合曲线的EC50值(图9A和B)
构建物2.4 构建物2.11
在MV-3上的EC<sub>50</sub>[nM] 2.16 0.82
在WM-266-4上的EC<sub>50</sub>[nM] 3.43 1.16
表54a:对表达FAP的肿瘤细胞的结合曲线的EC50值(图9C和D)
构建物2.4 构建物2.11
在MV-3上的EC<sub>50</sub>[nM] 2.21 3.42
在WM-266-4上的EC<sub>50</sub>[nM] 1.18 2.4
6.3生物学活性:表达人4-1BB的HeLa报告细胞系的NF-κB活化
6.3.1表达人4-1BB和NF-κB-萤光素酶的HeLa报告细胞的生成
用基于表达载体pETR10829的质粒转导人乳头瘤病毒18诱发的宫颈癌细胞系HeLa(ATCC CCL-2),该质粒含有在CMV启动子控制下的人4-1BB的序列(Uniprot登录号Q07011)和嘌呤霉素抗性基因。在供应有10％胎牛血清(FBS,GIBCO by Life Technologies,目录号16000-044,批号941273,经伽马照射的,无支原体,于56℃热灭活35分钟),1％GlutaMAX-I(GIBCO by Life Technologies,目录号35050-038)和3μg/mL嘌呤霉素(InvivoGen,目录号ant-pr)的DMEM培养基(Gibco by Life Technologies,目录号42430-025)中培养细胞。通过流式细胞术对经4-1BB转导的HeLa细胞测试4-1BB表达:在含有0.1μg PerCP/Cy5.5缀合的抗人4-1BB小鼠IgG1κ克隆4B4-1(BioLegend,目录号309814)或其同种型对照(PerCP/Cy5.5缀合的小鼠IgG1κ同种型对照抗体克隆MOPC 21,BioLegend,目录号400150)的100μLFACS缓冲液(供应有2％FBS,5mM EDTA pH 8(Amresco,目录号E177)和7.5mM叠氮化钠(Sigma-Aldrich,目录号S2002)的DPBS)中重悬浮0.2 x 106个活的细胞并于4℃温育30分钟。将细胞用FACS缓冲液清洗两次,在300μL含有0.06μg DAPI(Santa Cruz Biotec,目录号Sc-3598)的FACS缓冲液中重悬浮并使用5激光LSR-Fortessa(BD Bioscience,DIVAsoftware)获取。如下实施有限稀释以生成单克隆:将经人4-1BB转导的HeLa细胞在培养基中重悬浮至10,5和2.5个细胞/mL的浓度并将200μL细胞悬浮液转移至经过处理的圆底组织培养96孔板(6块板/细胞浓度,TPP目录号92697)。收获单克隆,扩充并如上文描述的测试4-1BB表达。选择具有最高4-1BB表达的克隆(克隆5)用于后续用NFκB-萤光素酶表达载体5495p Tranlucent HygB的转染。该载体赋予转染细胞以对潮霉素B的抗性和在NFκB应答元件控制下表达萤光素酶的能力二者(Panomics,目录号LR0051)。将人4-1BB HeLa克隆5细胞培养至70％汇合。将50μg(40μL)线性化(限制酶AseI和SalI)5495p Tranlucent HygB表达载体添加至一系列0.4cm Gene Pulser/MicroPulser杯(Biorad,目录号165-2081)。添加400μl无补充物的DMEM中的2.5 x 106个人4-1BB HeLa克隆5细胞并与质粒溶液小心混合。以下述设置使用Gene Pulser Xcell total system(Biorad,目录号165 2660)实施细胞转染:指数式脉冲,电容500μF,电压160V,电阻∞。在脉冲之后立即将转染细胞转移至装有15mL 37℃温热的供应有10％FBS和1％GlutaMAX I(GIBCO by Life Technologies,目录号35050 038)的DMEM培养基(GIBCO by Life Technologies,目录号42430-025)的75cm2的组织培养瓶(TPP,目录号90075)。次日,添加含有3μg/mL嘌呤霉素(InvivoGen,目录号ant pr)和200μg/mL潮霉素B(Roche,目录号10843555001)的培养培养基。扩充存活细胞并如上文描述的实施有限稀释以生成单克隆。如上文描述的对克隆测试4-1BB表达并如下测试NFκB-萤光素酶活性:在选择培养基中收获克隆并使用Cell Counter Vi-cell xr 2.03(BeckmanCoulter,目录号731050)计数。将细胞设置成0.33 x 106个细胞/mL的细胞密度并将150μL这种细胞悬浮液转移至带盖的无菌白色96孔平底组织培养板(greiner bio one,目录号655083)和作为对照的正常96孔平底组织培养板(TPP,目录号92096)的每个孔,次日测试存活和细胞密度。将细胞于37℃和5％CO2温育过夜。次日,将50μL含有不同浓度的重组人肿瘤坏死因子α(rhTNFα,PeproTech,目录号300 01A)的培养基添加至96孔板的每个孔,产生100,50,25,12.5,6.25和0ng/孔的rhTNFα终浓度。将细胞于37℃和5％CO2温育6小时,然后用200μL/孔DPBS清洗三次。将报告物裂解缓冲液(Promega,目录号E3971)添加至每个孔(30μl)并将板于-20℃保存过夜。次日,将冷冻的细胞板和检测缓冲液(萤光素酶1000测定系统,Promega,目录号E4550)融化至室温。将100μL检测缓冲液添加至每个孔并使用SpectraMax M5/M5e微量板读数仪和SoftMax Pro软件(Molecular Devices)尽可能快地测量板。采用测量到的对照(不添加rhTNFα)以上的URL作为萤光素酶活性。选择展现最高萤光素酶活性和可观水平的4-1BB表达的NFκB-luc-4-1BB-HeLa克隆26供进一步使用。
6.3.2与表达FAP的肿瘤细胞共培养的表达人4-1BB的HeLa报告细胞的NF-κB活化
用DPBS(GIBCO by Life Technologies,目录号14190 326)清洗NFκB-luc-4-1BB-HeLa克隆26细胞并用0.05％胰蛋白酶EDTA(GIBCO by Life Technologies,目录号25300054)于37℃处理5分钟。收获细胞并在供应有10％胎牛血清(FBS,美国起源,PAN biotech,P30-2009,批号P150307GI,经伽马照射,无支原体,于56℃热灭活35分钟)和1％GlutaMAX-I(GIBCO by Life Technologies,目录号35050 038)的DMEM培养基(GIBCO by LifeTechnologies,目录号42430 025)中重悬浮。使用Cell Counter Vi-cell xr 2.03(Beckman Coulter,目录号731050)对细胞计数并设置成0.2 x 106个细胞/mL的细胞密度。将100μL(2 x 104个细胞)这种细胞悬浮液转移至带盖的无菌白色96孔平底组织培养板(greiner bio one,目录号655083)的每个孔并将板于37℃和5％CO2温育过夜。次日,添加50μL含有不同滴定浓度的构建物2.11的培养基。添加作为阳性对照的构建物2.4和作为阴性对照的对照D和对照F(如实施例1.11中描述的)。对于FAP结合介导的交联,使用表达FAP的MV-3系(首先发表:van Muijen GN,Jansen KF,Cornelissen IM,Smeets DF,Beck JL,Ruiter DJ.Establishment and characterization of a human melanoma cell line(MV3)which is highly metastatic in nude mice.Int J Cancer.1991 Apr 22；48(1):85-91),人黑素瘤细胞系WM-266-4(ATCC CRL-1676)或经人FAP转染的表达FAP的小鼠成纤维细胞细胞系NIH/3T3(NIH/3T3-huFAP克隆19)。
因此,用DPBS(GIBCO by Life Technologies,目录号14190 326)清洗表达FAP的肿瘤细胞系并用无酶,基于PBS的细胞解离缓冲液(GIBCO by Life Technologies,目录号13151-014)于37℃处理10分钟。之后,收获细胞并使用Cell Counter Vi-cell xr 2.03计数。将细胞在供应有10％FBS和1％L-GlutaMAX-I的DEM中重悬浮至2 x 106个细胞/mL并添加50μL/孔。在添加表达交联FAP的肿瘤细胞之后,将板于37℃和5％CO2温育6小时。将白色平底96孔板用200μL/孔DPBS清洗三次。将40μl新鲜制备的报告物裂解缓冲液(Promega,目录号E3971)添加至每个孔并将板于-20℃保存过夜。次日,将冷冻的板和检测缓冲液(萤光素酶1000测定系统,Promega,目录号E4550)融化至室温。将100uL检测缓冲液添加至每个孔并以下述设置使用SpectraMax M5/M5e微量板读数仪和SoftMax Pro软件(MolecularDevices)尽可能快地测量板:对于萤光素酶(RLU),500ms积分时间,无滤光片,收集所有波长和头等读数。测定法的设置在图10中显示而对构建物2.11,2.15和2.4和对照测量的活性在图11中显示。在表55中列出NFκB活化诱导萤光素酶活性曲线的EC50值。
表55:NFκB活化诱导的萤光素酶活性曲线的EC50值
构建物2.4 构建物2.11 构建物2.15
在MV-3上的EC<sub>50</sub>[nM] 0.15 0.18 0.16
在3T3-huFAP上的EC<sub>50</sub>[nM] 0.06 0.08 0.10
6.4在表达FAP的细胞存在下人PBMC的活化测定法
对于FAP结合介导的交联,使用经人FAP转染的表达FAP的小鼠成纤维细胞细胞系NIH/3T3(NIH/3T3-huFAP克隆19)。通过用在CMV启动子下编码人FAP的pETR4921表达质粒转染小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3细胞(ATCC CRL-1658)来生成该细胞。在1.5μg/mL嘌呤霉素(InvivoGen,目录号ant-pr-5)存在下在供应有10％小牛血清(CS,补充铁,来自配方饲养的小牛,Sigma-Aldrich,C8056-500mL)的DMEM(GIBCO by Life Technologies,目录号42430-025)中维持细胞。
在由供应有10％胎牛血清(FBS,美国起源,PAN biotech,P30-2009,批号P150307GI,经伽马照射,无支原体,于56℃热灭活35分钟),1％L-GlutaMAX-I(GIBCO byLife Technologies,目录号35050-038),1mM丙酮酸钠(SIGMA-Aldrich,目录号S8636),1％MEM非必需氨基酸溶液(SIGMA-Aldrich,目录号M7145),50uMβ-巯基乙醇(Sigma-Aldrich,目录号M3148)的RPMI 1640(GIBCO by Life Technologies,目录号42401-042)组成的T细胞培养基中重悬浮NIH/3T3-huFAP克隆19细胞并以50Gy辐照(X射线辐照器RS 2000,Radsource)。将50μL T细胞培养基中的2 x 104个NIH/3T3-huFAP克隆19细胞接种至圆底组织培养96孔板(TTP,目录号92697)的每个孔。添加50μL含有不同滴定浓度的构建物2.11的T细胞培养基。添加作为阳性对照的构建物2.4和作为阴性对照的对照D和对照F(如实施例1.11中描述的)。将人PBMC在37℃温热的含有40nM CFDA-SE(SIGMA-Aldrich,目录号21888-25MG-F)的DPBS中于37℃标记15分钟。通过添加FBS来停止CFSE标记,将PBMC清洗两次并在T细胞培养基中重悬浮至1.5 x 106个细胞/mL的终浓度。将50μL这种PBMC细胞溶液接种至每个孔以添加7.5 x 104个CFSE标记的PBMC/孔。最后,制备含有2mM激动性抗人CD3抗体(克隆V9,人IgG1,Rodrigues et al.,Int J Cancer Suppl 7,45-50(1992)和美国专利No.6,054,297中描述的)的T细胞培养基的储备溶液并将50μL/孔添加至每个孔,给出0.5mM抗人CD3人IgG1克隆V9的终浓度。
将板于37℃温育4天。用DPBS清洗细胞并用100μL/孔含有1:1000稀释的可固定Aqua死细胞染料试剂盒(Molecular Probes by LifeTechnology,目录号L34957)的DPBS于4℃染色30分钟。将细胞用200μL/孔DPBS清洗一次并用50μL含有0.1μg/mL PerCP-Cy5.5缀合的抗人CD137小鼠IgG1κ(克隆4B4-1,BioLegend,目录号309814),0.1μg/mL PE/Cy7缀合的抗人PD-1小鼠IgG1κ(克隆EH12.2H7,BioLegend,目录号329918),0.03μg/mL APC缀合的抗人CD25小鼠IgG1κ(克隆BC96,BioLegend,目录号302610),0.06μg/mL APC/Cy7缀合的抗人CD8小鼠IgG1κ(克隆RPA-T8,BioLegend,目录号3301016),BV421缀合的抗人CD4小鼠IgG1κ(克隆RPA-T4,BioLegend,目录号300532)的FACS缓冲液(供应有2％FBS,5mM EDTA pH 8(Amresco,目录号E177)和7.5mM叠氮化钠(Sigma-Aldrich,S2002)的DPBS)于4℃染色30分钟。将细胞用200μL/孔DPBS清洗两次并与50μL/孔新鲜制备的FoxP3透化/固定缓冲液(eBioscience目录号00-5123)一起于4℃温育30分钟。将细胞用200μL/孔DPBS清洗两次,在50μL/孔新鲜制备的供应有PE缀合的1:250稀释的抗人粒酶B小鼠IgG1κ(克隆GB11,批号4269803,BD Pharmingen,目录号561142)的透化缓冲液(eBioscience,目录号00-8333)中重悬浮并于4℃温育1小时。将板用200μL/孔DPBS清洗两次并将细胞用含有1％甲醛(Sigma,HT501320-9.5L)的DPBS固定15分钟。在100μL/孔FACS缓冲液中重悬浮细胞并使用MACS Quant Analyzer 10(Miltenyi Biotech)获取。使用FlowJoV10(FlowJo,LLC)和GraphPad Prism 6.04(GraphPad Software,Inc)分析数据。
如图13中显示的,只有FAP(4B9)靶向性分拆三聚体4-1BBL融合分子构建物2.11和阳性对照构建物2.4诱导CD8+T细胞上表面表达的CD25和4-1BB(CD137)的浓度依赖性升高。阴性对照分子对照F和D不诱导这种活化标志物上调。CD8+T细胞上CD25和4-1BB上调的EC50值在表56中显示。
表56:CD8+T细胞上活化标志物4-1BB(CD137)和CD25的诱导的上调的EC50值
构建物2.4 构建物2.11
CD8<sup>+</sup>T细胞上的CD25上调的EC<sub>50</sub>[nM] 0.03 0.07
CD8<sup>+</sup>T细胞上的CD137(4-1BB)上调的EC<sub>50</sub>[nM] 0.08 0.11
6.5在表达FAP的细胞存在下CMV-NLV特异性CD8+T细胞的活化测定法
6.5.1 NLV抗原特异性CD8T细胞的分离和培养
自HLA-A2+CMV感染的志愿者获得新鲜血液。通过Ficoll密度离心分离PBMC并依照制造商的推荐(Miltenyi Biotec,目录号130-094-156)使用负选择人CD8T细胞分离试剂盒自PBMC纯化CD8+T细胞。连同50μL PE标记的含有CMV衍生的NLVPMVATV肽的HLA-A2五聚物(ProImmune,目录号F008-2B)在1mL补充有1％(v/v)FBS的无菌DPBS中重悬浮10x106个分离的CD8T细胞并于室温温育10分钟。将细胞用3mL供应有1％(v/v)FBS的无菌DPBS清洗两次。在1mL含有1μg/mL抗人CD8-FITC(克隆LT8,Abcam,目录号Ab28010)的供应有1％(v/v)FBS的细胞DPBS中重悬浮细胞并于4℃温育30分钟。清洗细胞两次,在供应有1％(v/v)FBS的DPBS中重悬浮至5x106个细胞/mL的浓度,并通过30μm预分开尼龙网细胞过滤器(MiltenyiBiotec,目录号130-041-407)过滤。以下述设置使用ARIA细胞分选仪(BD Bioscience,带有DIVA软件)通过FACS分选分离NLV肽特异性CD8+T细胞:100μm喷嘴和纯度分选掩模。在装有5ml供应有10％(v/v)FBS,1％(v/v)GlutaMAX-I和400U/mL Proleukin的RPMI 1640培养基的15ml聚丙烯离心管(TPP,目录号91015)中收集分选的细胞。将分选的细胞于室温以350xg离心7分钟并在相同培养基中重悬浮至0.53 x 106个细胞/mL的浓度。将100μL/孔这种细胞悬浮液添加至先前制备的饲养板的每个孔。如先前描述的(Levitsky et al.,1998)自PBMC制备PHA-L活化的经辐照的异基因饲养细胞并以2x105个饲养细胞/孔分配至96孔培养板。培养一天之后,自装有分选的CD8+T细胞的孔取出100μL培养液/孔并用新的补充有10％(v/v)FBS和1％(v/v)GlutaMAX-I和400U/mL Proleukin的RPMI 1640培养基替换,这在培养期间定期(每2-4天)重复。细胞一开始增殖,就将它们转移至24孔平底组织培养板(TPP,92024)。扩充/分拆细胞并定期用新的饲养细胞制备物再活化。
6.5.2 NLV抗原特异性CD8+T细胞的活化测定法
收获MV-3细胞(早就在实施例6.2中描述)并在由补充有10％(v/v)FBS,1％(v/v)GlutaMAX I,1mM丙酮酸钠,1％(v/v)MEM非必需氨基酸和50μMβ-巯基乙醇的RPMI 1640培养基组成的T细胞培养基中重悬浮至1 x 106个细胞/mL并分开入三个管。添加合成的NLVPMVATV肽(自Thinkpeptides获得)至1x10-9M或1x10-8M的终浓度并将细胞温育90分钟。将NLV肽脉冲的MV-3细胞用T细胞培养基清洗一次并重悬浮至0.5 x 106个细胞/mL的密度,分配(100μL/孔)至96孔圆底细胞悬浮板(Greiner bio-one,celltar,目录号650185)并于37℃和5％CO2温育过夜。次日,以一定范围的终浓度(自10至0.0004nM)在50μLT细胞培养基中添加FAP靶向性含有4-1BB配体三聚体的Fc融合抗原结合分子(构建物2.11和作为对照的构建物2.4和对照F和D)。收获NLV特异性CD8T细胞,清洗并在50μL培养基中添加至每个孔(最终的肿瘤:CD8T细胞比0.125)。该测定法的原理在图14中显示。
将细胞温育24小时并用含有2.64μL/mL Golgi stop(含有莫能菌素的蛋白质转运抑制剂,BD Bioscience,目录号554724,终浓度0.66μl/mL)和4μL/mL Golgi plug(含有布雷菲德菌素A的蛋白质转运蛋白抑制剂,BD Bioscience,目录号555029,终浓度1μg/mL)的T细胞培养基替换50μL/孔,添加至每个孔。
将细胞温育4小时,然后用200μL/孔DPBS清洗板并用100μL 4℃含有1:1000稀释的活的/死的可固定Aqua死细胞染料(Molecular Probes,目录号L34957)的DPBS于4℃染色30分钟。用200μL DPBS清洗细胞并在50μL/孔含有1μg/mL抗人CD137-PerCP-Cy5.5(BioLegend,克隆4B4-1,目录号309814),0.67μg/mL抗人CD8-APC-Cy7(BioLegend,克隆RPA-T8,目录号301016)和0.67μg/mL抗人PD-1-PE-Cy7(BioLegend,克隆EH12.2H7,目录号329918)的FACS缓冲液(含有2％FBS,5mM EDTA,7.5mM叠氮化钠的DPBS)中于4℃染色30分钟。将细胞用200μL/孔DBPS清洗两次,在50uL新鲜制备的透化/固定缓冲液(eBioscience,目录号00-5123-43和目录号00-5223-56)中重悬浮并于4℃温育30分钟。将细胞用200uLDPBS清洗两次并在50uL新鲜制备的含有6ng/mL抗人Eomes-eF660(eBioscience,克隆WD1928,目录号50-4877-42),抗人IFNγ-BV421(BioLegend,克隆4S.B3,目录号502532)和4μL/mL抗人粒酶B-PE(BD,克隆GB11,目录号561142)的透化缓冲液(eBioscience目录号00-8333-56)中重悬浮。将细胞于4℃温育1小时并用200uL/孔DPBS清洗两次。对于固定,添加50μL/孔含有1％甲醛的DPBS并温育15分钟。在100μL/孔FACS缓冲液中重悬浮细胞并使用MACSQuant Analyzer 10(Miltenyi Biotech)获取。用FlowJo v10.0.7和Graph Pad Prism6.04分析数据。
如图15中显示的,只有FAP(4B9)靶向性分拆三聚体4-1BBL融合分子构建物2.11和阳性对照构建物2.4诱导NLV特异性CD8+T细胞上表达的4-1BB(CD137)(图15A)和IFNγ(图15B)的浓度依赖性升高。阴性对照分子对照F和D不诱导这种活化标志物上调。NLV特异性CD8+T细胞上的4-1BB和IFNγ上调的EC50值在表57中显示。
表57:NLV活化的CD8+T细胞上活化标志物4-1BB(CD137)和IFNγ的诱导的上调的EC50值
TCR刺激 参数 构建物2.4 构建物2.11
10-9M肽 CD137<sup>+</sup>CD8上的EC<sub>50</sub>[nM] 0.023 0.006
10-8M肽 CD137<sup>+</sup>CD8上的EC<sub>50</sub>[nM] 0.017 0.006
10-8M肽 IFNγ<sup>+</sup>CD8上的EC<sub>50</sub>[nM] 0.021 0.011
实施例7
单价CD19靶向性C端4-1BB分拆三聚体配体Fc融合抗原结合分子的功能表征
7.1活化的人PBMC上的结合
为了检查4-1BBL对表达4-1BB的T细胞的结合,通过TCR刺激以上调T细胞上的4-1BB达48小时来预活化人PBMC。通过Ficoll(GE Healthcare,目录号17-1440-03)梯度离心自血沉棕黄层纯化PBMC,然后稀释成2.8 x 106/ml的浓度,在RPMI培养基(Gibco,目录号72400-054)+10％FBS(Gibco,目录号20012-068)和1％青霉素-链霉素(Gibco,目录号15070-063)和50uM 2-巯基乙醇(Gibco,目录号31350-010)中重悬浮。将90ul细胞添加至圆底96孔板(greiner bio-one,celltar,目录号650185)的每个孔。然后以8 x 105个珠/ml将另外50ul抗CD3和抗CD28微珠(Life Technologies,目录号11131D)添加至孔。两天后,将细胞用冷的PBS(Gibco,20012-068)清洗1次,并用90ul冷的PBS重悬浮,并与10ul含有构建物4.11,构建物3.11,阳性对照构建物4.1和阴性对照对照D的溶液一起于4℃温育1小时。广泛清洗之后,将细胞进一步用50μL/孔冷的含有5μg/mL PE缀合的AffiniPure抗人IgG F(ab`)2片段特异性山羊F(ab`)2片段(Jackson ImmunoResearch,目录号109 116 098),和另外的抗人CD3(Biolegend,目录号300312),CD4(Biolegend,目录号317434)和CD8(Biolegend,目录号344710)抗体的FACS缓冲液于4℃染色30分钟。将细胞用200μL/孔4℃ FACS缓冲液清洗两次并在50μL/孔含有1％甲醛(Sigma,HT501320-9.5L)的DPBS中固定细胞。在100μL/孔FACS缓冲液中重悬浮细胞并使用FACS LSR II(BD Biosciences)获取。使用FlowJo V10(FlowJo,LLC)和GraphPad Prism 6.04(GraphPad Software,Inc)分析数据。
在CD4和CD8细胞的纯群体上对特异性结合设门。所有构建物以剂量依赖性方式显示与表达4-1BB的CD4或CD8T细胞相似的结合特性(图16)。在表58中列出结合曲线的EC50值。
表58:对4-1BB+人T细胞的结合曲线的EC50值
构建物4.11 构建物3.11 构建物4.1 对照D
在CD4上的EC<sub>50</sub>[nM] 0.13 0.13 0.11 0.17
在CD4上的EC<sub>50</sub>[μg/ml] 0.02 0.02 0.02 0.03
在CD8上的EC<sub>50</sub>[nM] 0.32 0.38 0.28 0.23
在CD8上的EC<sub>50</sub>[μg/ml] 0.05 0.06 0.05 0.04
7.2表达CD19的肿瘤细胞的结合
为了检查对肿瘤抗原CD19的结合,使用CD19+WSU-DLCL2细胞(DSMZ No.ACC 575)。将0.1 x 106个在DPBS(GIBCO by Life Technologies,目录号14190 326)中重悬浮的肿瘤细胞添加至圆底悬浮细胞96孔板(greiner bio-one,celltar,目录号650185)的每个孔。将细胞用200μL DPBS清洗一次。在100μL/孔4℃冷的含有1:5000稀释的可固定存活力染料eFluor 660(eBioscience,目录号65-0864-18)的DPBS缓冲液中重悬浮细胞并将板于4℃温育30分钟。将细胞用200μL/孔4℃冷的DPBS缓冲液清洗一次并以一系列浓度在50μL/孔4℃冷的含有构建物4.11,构建物3.11,作为阳性对照的构建物4.1和作为阴性对照的对照D的FACS缓冲液(供应有2％FBS,5mM EDTA pH8(Amresco,目录号E177)和7.5mM叠氮化钠(Sigma-Aldrich,S2002)的DPBS)中重悬浮,继以于4℃温育1小时。广泛清洗之后,将细胞进一步用50μL/孔4℃冷的含有5μg/mL PE缀合的AffiniPure抗人IgG F(ab`)2片段特异性山羊F(ab`)2片段(Jackson ImmunoResearch,目录号109 116 098)的FACS缓冲液于4℃染色30分钟。将细胞用200μL/孔4℃ FACS缓冲液清洗两次并在50μL/孔含有1％甲醛(Sigma,HT501320-9.5L)的DPBS中固定细胞。在100μL/孔FACS缓冲液中重悬浮细胞并使用FACS LSRII(BD Biosciences)获取。使用FlowJo V10(FlowJo,LLC)和GraphPad Prism 6.04(GraphPad Software,Inc)分析数据。
在活的肿瘤细胞上设置门并将PE缀合的AffiniPure抗人IgG IgG Fcγ片段特异性山羊F(ab`)2片段的荧光强度的几何均值针对CD19靶向性或非靶向性C端4-1BB分拆三聚体配体Fc融合抗原结合分子的滴定浓度绘图。如图17中显示的,只有CD19靶向性分拆三聚体4-1BB配体融合分子构建物4.11和构建物3.11和构建物4.1结合表达CD19的肿瘤细胞WSU-DLCL2,而非靶向性分拆三聚体4-1BB配体融合分子对照D不结合肿瘤细胞。在表59中,列出CD19+肿瘤结合曲线的EC50值。
表59:对CD19+肿瘤细胞的结合曲线的EC50值
构建物4.11 构建物3.11 构建物4.1
EC<sub>50</sub>[nM] 0.26 0.38 0.17
EC<sub>50</sub>[μg/ml] 0.04 0.06 0.03
7.3生物学活性:与表达CD19的B细胞淋巴瘤细胞共培养的表达人4-1BB的HeLa报告细胞的NF-κB活化
7.3.1表达人4-1BB和NF-κB-萤光素酶的HeLa报告细胞的生成
如实施例6.3.1中早就描述的生成HeLa-人-4-1BB-NFκN-luc报告细胞系。
7.3.2与表达FAP的肿瘤细胞共培养的表达人4-1BB的HeLa报告细胞的NF-κB活化
用DPBS(GIBCO by Life Technologies,目录号14190 326)清洗NFκB-luc-4-1BB-HeLa克隆26细胞并用0.05％胰蛋白酶EDTA(GIBCO by Life Technologies目录号25300054)于37℃处理5分钟。收获细胞并在供应有10％胎牛血清(FBS,美国起源,PAN biotech,P30-2009,批号P150307GI,经伽马照射,无支原体,于56℃热灭活35分钟)和1％GlutaMAX-I(GIBCO by Life Technologies,目录号35050 038)的DMEM培养基(GIBCO by LifeTechnologies目录号42430 025)中重悬浮。使用细胞计数器Vi-cell xr 2.03(BeckmanCoulter,目录号731050)对细胞计数并设置成0.2 x 106个细胞/mL的细胞密度。将100μL(2x 104个细胞)这种细胞悬浮液转移至带盖的无菌白色96孔平底组织培养板(greiner bioone,目录号655083)的每个孔并将板于37℃和5％CO2温育过夜。次日,添加50μL含有不同滴定浓度的构建物3.11和构建物4.11的培养基。添加作为阳性对照的构建物3.4和4.1和作为阴性对照的对照D和对照F,它们已经在实施例1.11中描述。对于CD19结合介导的交联,使用下述表达CD19的细胞系:弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞系OCI-Ly18(DMSZ ACC 699),急性成淋巴细胞性白血病(ALL)细胞系Nalm6(DSMZ ACC-128)和非霍奇金氏B细胞淋巴瘤(B-NHL)细胞系SU-DHL-8(DSMZ ACC-573)。因此,收获表达CD19的悬浮细胞系OCI-Ly18,Nalm6和SU-DHL-8并使用细胞计数器Vi-cell xr 2.03计数并在供应有10％FBS和1％L-GlutaMAX-I的DEM中重悬浮至2 x 106细胞/mL并添加50μL/孔。添加表达交联CD19的肿瘤细胞系之后,将板于37℃和5％CO2温育6小时。将白色平底96孔板用200μL/孔DPBS清洗三次。将40μl新鲜制备的报告物裂解缓冲液(Promega,目录号E3971)添加至每个孔并将板于-20℃保存过夜。次日,将冷冻的板和检测缓冲液(萤光素酶1000测定系统,Promega,目录号E4550)融化至室温。将100uL检测缓冲液添加至每个孔并以下述设置使用SpectraMax M5/M5e微量板读数仪和SoftMax Pro软件(Molecular Devices)尽可能快地测量板:对于萤光素酶(RLUs),500ms积分时间,无滤光片,收集所有波长和头等读数。该测定法的设置在图18中显示而对构建物3.4,4.1,3.11和4.11和对照D和F测量的活性在图19中显示。在表60中列出对表达CD19的肿瘤细胞系的结合曲线的EC50值。
表60:对表达CD19的肿瘤细胞系的结合曲线的EC50值
7.4生物学活性:人PBMC活化测定法
为了在生理学相关设置中测定生物学活性,通过经由4-1BBL共刺激T细胞和NK细胞,我们测量活化的人PBMC中效应器功能分子IFNγ的释放。通过Ficoll(GE Healthcare,目录号17-1440-03)梯度离心自血沉棕黄层纯化PBMC,然后稀释成2.2 x 106/ml的浓度,在RPMI培养基(Gibco,目录号72400-054)+10％FBS(Gibco,目录号20012-068)和1％青霉素-链霉素(Gibco,目录号15070-063)和50uM 2-巯基乙醇(Gibco,目录号31350-010)中重悬浮。将90μl细胞添加至圆底96孔板(greiner bio-one,celltar,目录号650185)的每个孔。然后以一系列浓度将10μl含有构建物4.11,构建物3.11,阳性对照构建物4.1和阴性对照对照D的溶液添加至孔,并以8 x 105个珠/ml提供另外的50μl抗CD3和抗CD28微珠(LifeTechnologies,目录号11131D)。温育48小时之后,收集上清液供通过ELISA(DuoSet人IFNgELISA试剂盒,R&D Systems,目录号DY285)测量IFN-γ。
图20显示构建物4.11,构建物3.11和阳性对照构建物4.1刺激PBMC生成相似量的IFNγ,而阴性对照D由于缺乏交联而不活化T或NK细胞。在表61中列出活化的人PBMC上的IFNγ曲线的EC50值。
表61:活化的人PBMC上的IFNγ曲线的EC50值
构建物4.11 构建物3.11 构建物4.1
EC<sub>50</sub>[nM] 0.19 0.13 0.06
EC<sub>50</sub>[μg/ml] 0.03 0.02 0.01
引用:
Ascierto,P.A.,E.Simeone,M.Sznol,Y.X.Fu,and I.Melero(2010),Clinicalexperiences with anti-CD137 and anti-PD1 therapeutic antibodies.Semin Oncol37:508-516.
Aggarwal B.B.(2003),Signalling pathways of the TNF superfamily:adouble-edged sword.Nat.Rev.Immunol.3(9),745-56.
Banner D.et al(1993),Crystal structure of the soluble human 55kd TNFreceptor-human TNF beta complex:implications for TNF receptor activation.Cell73,431-445.
Bodmer J.,Schneider P.and Tschopp,J.(2002),The molecular architectureof the TNF superfamily.Trends in Biochemical Sciences 27(1),19-26.
Broll,K.,Richter,G.,Pauly,S.,Hofstaedter,F.,and Schwarz,H.(2001).CD137 expression in tumor vessel walls.High correlation with malignanttumors.Am J Clin Pathol 115,543-549.
Buechele,C.,Baessler,T.,Schmiedel,B.J.,Schumacher,C.E.,Grosse-Hovest,L.,Rittig,K.,and Salih,H.R.(2012).4-1BB ligand modulates direct andRituximab-induced NK-cell reactivity in chronic lymphocytic leukemia.Eur JImmunol 42,737-748.
Choi,B.K.,Kim,Y.H.,Kwon,P.M.,Lee,S.C.,Kang,S.W.,Kim,M.S.,Lee,M.J.,andKwon,B.S.(2009).4-1BB functions as a survival factor in dendritic cells.JImmunol 182,4107-4115.
Cuadros,C.,Dominguez,A.L.,Lollini,P.L.,Croft,M.,Mittler,R.S.,Borgstrom,P.,and Lustgarten,J.(2005).Vaccination with dendritic cells pulsedwith apoptotic tumors in combination with anti-OX40 and anti-4-1BB monoclonalantibodies induces T cell-mediated protective immunity in Her-2/neutransgenic mice.Int J Cancer 116,934-943.
Curran,M.A.,Kim,M.,Montalvo,W.,Al-Shamkhani,A.,and Allison,J.P.(2011).Combination CTLA-4 blockade and 4-1BB activation enhances tumorrejection by increasing T-cell infiltration,proliferation,and cytokineproduction.PLoS One 6,e19499.
Diehl,L.,van Mierlo,G.J.,den Boer,A.T.,van der Voort,E.,Fransen,M.,van Bostelen,L.,Krimpenfort,P.,Melief,C.J.,Mittler,R.,Toes,R.E.,and Offringa,R.(2002).In vivo triggering through 4-1BB enables Th-independent priming ofCTL in the presence of an intact CD28 costimulatory pathway.J Immunol 168,3755-3762.
Dubrot,J.,Milheiro,F.,Alfaro,C.,Palazon,A.,Martinez-Forero,I.,Perez-Gracia,J.L.,Morales-Kastresana,A.,Romero-Trevejo,J.L.,Ochoa,M.C.,Hervas-Stubbs,S.,et al.(2010).Treatment with anti-CD137 mAbs causes intenseaccumulations of liver T cells without selective antitumor immunotherapeuticeffects in this organ.Cancer Immunol Immunother 59,1223-1233.
Futagawa,T.,Akiba,H.,Kodama,T.,Takeda,K.,Hosoda,Y.,Yagita,H.,andOkumura,K.(2002).Expression and function of 4-1BB and 4-1BB ligand on murinedendritic cells.Int Immunol 14,275-286.
Guo,Z.,Cheng,D.,Xia,Z.,Luan,M.,Wu,L.,Wang,G.,and Zhang,S.(2013).Combined TIM-3 blockade and CD137 activation affords the long-termprotection in a murine model of ovarian cancer.J Transl Med 11,215.
Heinisch,I.V.,Daigle,I.,Knopfli,B.,and Simon,H.U.(2000).CD137activation abrogates granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-mediated anti-apoptosis in neutrophils.Eur J Immunol 30,3441-3446.
Hornig,N.,Kermer,V.,Frey,K.,Diebolder,P.,Kontermann,R.E.,Mueller,D.(2012),Combination of a bispecific antibody and costimulatory antibody-ligandfusion proteins for targeted cancer immunotherapy.J.Immunother.35,418-429.
Ju,S.A.,Cheon,S.H.,Park,S.M.,Tam,N.Q.,Kim,Y.M.,An,W.G.,and Kim,B.S.(2008).Eradication of established renal cell carcinoma by a combination of 5-fluorouracil and anti-4-1BB monoclonal antibody in mice.Int J Cancer 122,2784-2790.
Kienzle,G.,and von Kempis,J.(2000).CD137(ILA/4-1BB),expressed byprimary human monocytes,induces monocyte activation and apoptosis of Blymphocytes.Int Immunol 12,73-82.
Kim,D.H.,Chang,W.S.,Lee,Y.S.,Lee,K.A.,Kim,Y.K.,Kwon,B.S.,and Kang,C.Y.(2008).4-1BB engagement costimulates NKT cell activation and exacerbatesNKT cell ligand-induced airway hyperresponsiveness and inflammation.J Immunol180,2062-2068.
Kim,Y.H.,Choi,B.K.,Oh,H.S.,Kang,W.J.,Mittler,R.S.,and Kwon,B.S.(2009).Mechanisms involved in synergistic anticancer effects of anti-4-1BBand cyclophosphamide therapy.Mol Cancer Ther 8,469-478.
Kwon,B.S.,and Weissman,S.M.(1989).cDNA sequences of two inducible T-cell genes.Proc Natl Acad Sci U S A 86,1963-1967.
Lee,H.,Park,H.J.,Sohn,H.J.,Kim,J.M.,and Kim,S.J.(2011).Combinatorialtherapy for liver metastatic colon cancer:dendritic cell vaccine and low-doseagonistic anti-4-1BB antibody co-stimulatory signal.J Surg Res 169,e43-50.
Levitsky,V.,de Campos-Lima,P.O.,Frisan,T.,and Masucci,M.G.(1998).Theclonal composition of a peptide-specific oligoclonal CTL repertoire selectedin response to persistent EBV infection is stable over time.J Immunol 161,594-601.
Li,F.,and Ravetch,J.V.(2011).Inhibitory Fcgamma receptor engagementdrives adjuvant and anti-tumor activities of agonistic CD40antibodies.Science 333,1030-1034.
Lin,W.,Voskens,C.J.,Zhang,X.,Schindler,D.G.,Wood,A.,Burch,E.,Wei,Y.,Chen,L.,Tian,G.,Tamada,K.,et al.(2008).Fc-dependent expression of CD137 onhuman NK cells:insights into"agonistic"effects of anti-CD137 monoclonalantibodies.Blood 112,699-707.
Melero,I.,Johnston,J.V.,Shufford,W.W.,Mittler,R.S.,and Chen,L.(1998).NK1.1 cells express 4-1BB(CDw137)costimulatory molecule and are required fortumor immunity elicited by anti-4-1BB monoclonal antibodies.Cell Immunol 190,167-172.
Melero,I.,Shuford,W.W.,Newby,S.A.,Aruffo,A.,Ledbetter,J.A.,Hellstrom,K.E.,Mittler,R.S.,and Chen,L.(1997).Monoclonal antibodies against the 4-1BBT-cell activation molecule eradicate established tumors.Nat Med 3,682-685.
Merchant,A.M.,Zhu,Z.,Yuan,J.Q.,Goddard,A.,Adams,C.W.,Presta,L.G.,andCarter,P.(1998).An efficient route to human bispecific IgG.Nat Biotechnol 16,677-681.
Morales-Kastresana,A.,Sanmamed,M.F.,Rodriguez,I.,Palazon,A.,Martinez-Forero,I.,Labiano,S.,Hervas-Stubbs,S.,Sangro,B.,Ochoa,C.,Rouzaut,A.,et al.(2013).Combined immunostimulatory monoclonal antibodies extend survival in anaggressive transgenic hepatocellular carcinoma mouse model.Clin Cancer Res19,6151-6162.
Mueller,D.,Frey,K.,Kontermann,R.E.(2008),A novel antibody-4-1BBlfusion protein for targeted costimulation in cancer immunotherapy,J.Immunother.31,714-722.
Murillo,O.,Dubrot,J.,Palazon,A.,Arina,A.,Azpilikueta,A.,Alfaro,C.,Solano,S.,Ochoa,M.C.,Berasain,C.,Gabari,I.,et al.(2009).In vivo depletion ofDC impairs the anti-tumor effect of agonistic anti-CD137 mAb.Eur J Immunol39,2424-2436.
Narazaki,H.,Zhu,Y.,Luo,L.,Zhu,G.,and Chen,L.(2010).CD137 agonistantibody prevents cancer recurrence:contribution of CD137 on bothhematopoietic and nonhematopoietic cells.Blood 115,1941-1948.
Nishimoto,H.,Lee,S.W.,Hong,H.,Potter,K.G.,Maeda-Yamamoto,M.,Kinoshita,T.,Kawakami,Y.,Mittler,R.S.,Kwon,B.S.,Ware,C.F.,et al.(2005).Costimulation of mast cells by 4-1BB,a member of the tumor necrosis factorreceptor superfamily,with the high-affinity IgE receptor.Blood 106,4241-4248.
Olofsson,P.S.,Soderstrom,L.A.,Wagsater,D.,Sheikine,Y.,Ocaya,P.,Lang,F.,Rabu,C.,Chen,L.,Rudling,M.,Aukrust,P.,et al.(2008).CD137 is expressed inhuman atherosclerosis and promotes development of plaque inflammation inhypercholesterolemic mice.Circulation 117,1292-1301.
Palazon,A.,Teijeira,A.,Martinez-Forero,I.,Hervas-Stubbs,S.,Roncal,C.,Penuelas,I.,Dubrot,J.,Morales-Kastresana,A.,Perez-Gracia,J.L.,Ochoa,M.C.,etal.(2011).Agonist anti-CD137 mAb act on tumor endothelial cells to enhancerecruitment of activated T lymphocytes.Cancer Res 71,801-811.
Schwarz,H.,Valbracht,J.,Tuckwell,J.,von Kempis,J.,and Lotz,M.(1995).ILA,the human 4-1BB homologue,is inducible in lymphoid and other celllineages.Blood 85,1043-1052.
Shao,Z.,and Schwarz,H.(2011).CD137 ligand,a member of the tumornecrosis factor family,regulates immune responses via reverse signaltransduction.J Leukoc Biol 89,21-29.
Shi,W.,and Siemann,D.W.(2006).Augmented antitumor effects ofradiation therapy by 4-1BB antibody(BMS-469492)treatment.Anticancer Res 26,3445-3453.
Simeone,E.,and Ascierto,P.A.(2012).Immunomodulating antibodies in thetreatment of metastatic melanoma:the experience with anti-CTLA-4,anti-CD137,and anti-PD1.J Immunotoxicol 9,241-247.
Snell,L.M.,Lin,G.H.,McPherson,A.J.,Moraes,T.J.,and Watts,T.H.(2011).T-cell intrinsic effects of GITR and 4-1BB during viral infection and cancerimmunotherapy.Immunol Rev 244,197-217.
Stagg,J.,Loi,S.,Divisekera,U.,Ngiow,S.F.,Duret,H.,Yagita,H.,Teng,M.W.,and Smyth,M.J.(2011).Anti-ErbB-2 mAb therapy requires type I and IIinterferons and synergizes with anti-PD-1 or anti-CD137 mAb therapy.Proc NatlAcad Sci U S A 108,7142-7147.
Teng,M.W.,Sharkey,J.,McLaughlin,N.M.,Exley,M.A.,and Smyth,M.J.(2009).CD1d-based combination therapy eradicates established tumors in mice.JImmunol 183,1911-1920.
von Kempis,J.,Schwarz,H.,and Lotz,M.(1997).Differentiation-dependentand stimulus-specific expression of ILA,the human 4-1BB-homologue,in cells ofmesenchymal origin.Osteoarthritis Cartilage 5,394-406.
Wei,H.,Zhao,L.,Li,W.,Fan,K.,Qian,W.,Hou,S.,Wang,H.,Dai,M.,Hellstrom,I.,Hellstrom,K.E.,and Guo,Y.(2013).Combinatorial PD-1 blockade and CD137activation has therapeutic efficacy in murine cancer models and synergizeswith cisplatin.PLoS One 8,e84927.
Wilcox,R.A.,Chapoval,A.I.,Gorski,K.S.,Otsuji,M.,Shin,T.,Flies,D.B.,Tamada,K.,Mittler,R.S.,Tsuchiya,H.,Pardoll,D.M.,and Chen,L.(2002).Cuttingedge:Expression of functional CD137 receptor by dendritic cells.J Immunol168,4262-4267.
Wilcox,R.A.,Tamada,K.,Flies,D.B.,Zhu,G.,Chapoval,A.I.,Blazar,B.R.,Kast,W.M.,and Chen,L.(2004).Ligation of CD137 receptor prevents and reversesestablished anergy of CD8+cytolytic T lymphocytes in vivo.Blood 103,177-184.
Zhang,N.,Sadun,R.E.,Arias,R.S.,Flanagan,M.L.,Sachsman,S.M.,Nien,Y,Khawli,L.A.,Hu,P.,Epstein,A.L.(2007).Targeted and untargeted CD137L fusionproteins for the immunotherapy of experimental solid tumors.Clin.CancerRes.13,2758-2767.
Zhang,X.,Voskens,C.J.,Sallin,M.,Maniar,A.,Montes,C.L.,Zhang,Y.,Lin,W.,Li,G.,Burch,E.,Tan,M.,et al.(2010).CD137 promotes proliferation andsurvival of human B cells.J Immunol 184,787-795.
序列表
&lt;110&gt; 豪夫迈·罗氏有限公司（F. Hoffmann-La Roche AG）
&lt;120&gt; 含有C端融合的TNF家族配体三聚体的抗原结合分子
&lt;130&gt; P33591-WO
&lt;150&gt; EP16169237.1
&lt;151&gt; 2016-05-11
&lt;160&gt; 245
&lt;170&gt; PatentIn version 3.5
&lt;210&gt; 1
&lt;211&gt; 184
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 1
Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp
1 5 10 15
Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu
20 25 30
Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val
35 40 45
Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val
50 55 60
Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg
65 70 75 80
Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His
85 90 95
Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr
100 105 110
Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly
115 120 125
Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val
130 135 140
His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln
145 150 155 160
Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
165 170 175
Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
180
&lt;210&gt; 2
&lt;211&gt; 170
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 2
Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val
1 5 10 15
Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala
20 25 30
Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu
35 40 45
Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu
50 55 60
Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala
65 70 75 80
Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala
85 90 95
Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala
100 105 110
Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu
115 120 125
Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu
130 135 140
Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile
145 150 155 160
Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
165 170
&lt;210&gt; 3
&lt;211&gt; 175
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 3
Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu
1 5 10 15
Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser
20 25 30
Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys
35 40 45
Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val
50 55 60
Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly
65 70 75 80
Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly
85 90 95
Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu
100 105 110
Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser
115 120 125
Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg
130 135 140
His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg
145 150 155 160
Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
165 170 175
&lt;210&gt; 4
&lt;211&gt; 203
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 4
Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser
1 5 10 15
Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly
20 25 30
Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn
35 40 45
Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu
50 55 60
Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys
65 70 75 80
Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu
85 90 95
Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu
100 105 110
Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu
115 120 125
Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser
130 135 140
Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg
145 150 155 160
Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln
165 170 175
Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu
180 185 190
Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
195 200
&lt;210&gt; 5
&lt;211&gt; 178
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 5
Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp
1 5 10 15
Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu
20 25 30
Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val
35 40 45
Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val
50 55 60
Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg
65 70 75 80
Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His
85 90 95
Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr
100 105 110
Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly
115 120 125
Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val
130 135 140
His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln
145 150 155 160
Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
165 170 175
Gly Leu
&lt;210&gt; 6
&lt;211&gt; 164
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 6
Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val
1 5 10 15
Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala
20 25 30
Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu
35 40 45
Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu
50 55 60
Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala
65 70 75 80
Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala
85 90 95
Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala
100 105 110
Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu
115 120 125
Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu
130 135 140
Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile
145 150 155 160
Pro Ala Gly Leu
&lt;210&gt; 7
&lt;211&gt; 169
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 7
Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu
1 5 10 15
Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser
20 25 30
Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys
35 40 45
Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val
50 55 60
Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly
65 70 75 80
Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly
85 90 95
Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu
100 105 110
Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser
115 120 125
Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg
130 135 140
His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg
145 150 155 160
Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
165
&lt;210&gt; 8
&lt;211&gt; 197
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 8
Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala Ala Ser
1 5 10 15
Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly
20 25 30
Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn
35 40 45
Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu
50 55 60
Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys
65 70 75 80
Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu
85 90 95
Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu
100 105 110
Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu
115 120 125
Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser
130 135 140
Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg
145 150 155 160
Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln
165 170 175
Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu
180 185 190
Ile Pro Ala Gly Leu
195
&lt;210&gt; 9
&lt;211&gt; 378
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 通过(G4S)2接头连接的二聚体hu 4-1BBL (71-254)
&lt;400&gt; 9
Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp
1 5 10 15
Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu
20 25 30
Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val
35 40 45
Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val
50 55 60
Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg
65 70 75 80
Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His
85 90 95
Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr
100 105 110
Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly
115 120 125
Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val
130 135 140
His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln
145 150 155 160
Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
165 170 175
Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
180 185 190
Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu
195 200 205
Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val
210 215 220
Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala
225 230 235 240
Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu
245 250 255
Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu
260 265 270
Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala
275 280 285
Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala
290 295 300
Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala
305 310 315 320
Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu
325 330 335
Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu
340 345 350
Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile
355 360 365
Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
370 375
&lt;210&gt; 10
&lt;211&gt; 366
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 通过(G4S)2接头连接的二聚体hu 4-1BBL (71-248)
&lt;400&gt; 10
Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp
1 5 10 15
Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu
20 25 30
Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val
35 40 45
Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val
50 55 60
Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg
65 70 75 80
Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His
85 90 95
Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr
100 105 110
Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly
115 120 125
Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val
130 135 140
His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln
145 150 155 160
Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
165 170 175
Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro
180 185 190
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
195 200 205
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
210 215 220
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
225 230 235 240
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
245 250 255
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
260 265 270
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
275 280 285
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
290 295 300
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
305 310 315 320
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
325 330 335
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
340 345 350
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
355 360 365
&lt;210&gt; 11
&lt;211&gt; 133
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 11
Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe
1 5 10 15
Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu
20 25 30
Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp
35 40 45
Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn
50 55 60
Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys
65 70 75 80
Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys
85 90 95
Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp
100 105 110
Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly
115 120 125
Glu Phe Cys Val Leu
130
&lt;210&gt; 12
&lt;211&gt; 132
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 12
Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe Thr
1 5 10 15
Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu Asp
20 25 30
Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp Gly
35 40 45
Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn Ile
50 55 60
Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys Lys
65 70 75 80
Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys Asp
85 90 95
Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp Phe
100 105 110
His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly Glu
115 120 125
Phe Cys Val Leu
130
&lt;210&gt; 13
&lt;211&gt; 5
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP(28H1) CDR-H1
&lt;400&gt; 13
Ser His Ala Met Ser
1 5
&lt;210&gt; 14
&lt;211&gt; 16
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP(28H1) CDR-H2
&lt;400&gt; 14
Ala Ile Trp Ala Ser Gly Glu Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
&lt;210&gt; 15
&lt;211&gt; 8
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP(28H1) CDR-H3
&lt;400&gt; 15
Gly Trp Leu Gly Asn Phe Asp Tyr
1 5
&lt;210&gt; 16
&lt;211&gt; 12
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP(28H1) CDR-L1
&lt;400&gt; 16
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
&lt;210&gt; 17
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP(28H1) CDR-L2
&lt;400&gt; 17
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
&lt;210&gt; 18
&lt;211&gt; 9
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP(28H1) CDR-L3
&lt;400&gt; 18
Gln Gln Gly Gln Val Ile Pro Pro Thr
1 5
&lt;210&gt; 19
&lt;211&gt; 5
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP(4B9) CDR-H1
&lt;400&gt; 19
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
&lt;210&gt; 20
&lt;211&gt; 17
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP(4B9) CDR-H2
&lt;400&gt; 20
Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
&lt;210&gt; 21
&lt;211&gt; 8
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP(4B9) CDR-H3
&lt;400&gt; 21
Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr
1 5
&lt;210&gt; 22
&lt;211&gt; 12
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP(4B9) CDR-L1
&lt;400&gt; 22
Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
&lt;210&gt; 23
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP(4B9) CDR-L2
&lt;400&gt; 23
Val Gly Ser Arg Arg Ala Thr
1 5
&lt;210&gt; 24
&lt;211&gt; 9
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP(4B9) CDR-L3
&lt;400&gt; 24
Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro Pro Thr
1 5
&lt;210&gt; 25
&lt;211&gt; 116
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP(28H1) VH
&lt;400&gt; 25
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Trp Ala Ser Gly Glu Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Gly Trp Leu Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
&lt;210&gt; 26
&lt;211&gt; 108
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP(28H1) VL
&lt;400&gt; 26
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Ile Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Val Ile Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 27
&lt;211&gt; 117
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP(4B9) VH
&lt;400&gt; 27
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
&lt;210&gt; 28
&lt;211&gt; 108
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP(4B9) VL
&lt;400&gt; 28
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 29
&lt;211&gt; 5
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8-018) CDR-H1
&lt;400&gt; 29
Asp Tyr Ile Met His
1 5
&lt;210&gt; 30
&lt;211&gt; 17
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8-018) CDR-H2
&lt;400&gt; 30
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
&lt;210&gt; 31
&lt;211&gt; 12
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8-018) CDR-H3
&lt;400&gt; 31
Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
&lt;210&gt; 32
&lt;211&gt; 16
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8-018) CDR-L1
&lt;400&gt; 32
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Pro Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
&lt;210&gt; 33
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8-018) CDR-L2
&lt;400&gt; 33
Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser
1 5
&lt;210&gt; 34
&lt;211&gt; 9
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8-018) CDR-L3
&lt;400&gt; 34
Leu Gln Leu Thr His Val Pro Tyr Thr
1 5
&lt;210&gt; 35
&lt;211&gt; 5
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8-2B11) CDR-H1
&lt;400&gt; 35
Asp Tyr Ile Met His
1 5
&lt;210&gt; 36
&lt;211&gt; 17
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8-2B11) CDR-H2
&lt;400&gt; 36
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
&lt;210&gt; 37
&lt;211&gt; 12
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8-2B11) CDR-H3
&lt;400&gt; 37
Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
&lt;210&gt; 38
&lt;211&gt; 16
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8-2B11) CDR-L1
&lt;400&gt; 38
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
&lt;210&gt; 39
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8-2B11) CDR-L2
&lt;400&gt; 39
Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser
1 5
&lt;210&gt; 40
&lt;211&gt; 9
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8-2B11) CDR-L3
&lt;400&gt; 40
Leu Gln Leu Leu Glu Asp Pro Tyr Thr
1 5
&lt;210&gt; 41
&lt;211&gt; 121
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8-018) VH
&lt;400&gt; 41
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
&lt;210&gt; 42
&lt;211&gt; 112
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8-018) VL
&lt;400&gt; 42
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Pro
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
&lt;210&gt; 43
&lt;211&gt; 121
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8-2B11) VH
&lt;400&gt; 43
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
&lt;210&gt; 44
&lt;211&gt; 112
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8-2B11) VL
&lt;400&gt; 44
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser
20 25 30
Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu
85 90 95
Leu Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
&lt;210&gt; 45
&lt;211&gt; 5
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CEA CDR-H1
&lt;400&gt; 45
Asp Thr Tyr Met His
1 5
&lt;210&gt; 46
&lt;211&gt; 17
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CEA CDR-H2
&lt;400&gt; 46
Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
&lt;210&gt; 47
&lt;211&gt; 12
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CEA CDR-H3
&lt;400&gt; 47
Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr
1 5 10
&lt;210&gt; 48
&lt;211&gt; 15
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CEA CDR-L1
&lt;400&gt; 48
Arg Ala Gly Glu Ser Val Asp Ile Phe Gly Val Gly Phe Leu His
1 5 10 15
&lt;210&gt; 49
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CEA CDR-L2
&lt;400&gt; 49
Arg Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
&lt;210&gt; 50
&lt;211&gt; 9
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CEA CDR-L3
&lt;400&gt; 50
Gln Gln Thr Asn Glu Asp Pro Tyr Thr
1 5
&lt;210&gt; 51
&lt;211&gt; 121
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 人源化CEA结合物VH
&lt;400&gt; 51
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
&lt;210&gt; 52
&lt;211&gt; 111
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 人源化CEA结合物VL
&lt;400&gt; 52
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Gly Glu Ser Val Asp Ile Phe
20 25 30
Gly Val Gly Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
&lt;210&gt; 53
&lt;211&gt; 760
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 53
Met Lys Thr Trp Val Lys Ile Val Phe Gly Val Ala Thr Ser Ala Val
1 5 10 15
Leu Ala Leu Leu Val Met Cys Ile Val Leu Arg Pro Ser Arg Val His
20 25 30
Asn Ser Glu Glu Asn Thr Met Arg Ala Leu Thr Leu Lys Asp Ile Leu
35 40 45
Asn Gly Thr Phe Ser Tyr Lys Thr Phe Phe Pro Asn Trp Ile Ser Gly
50 55 60
Gln Glu Tyr Leu His Gln Ser Ala Asp Asn Asn Ile Val Leu Tyr Asn
65 70 75 80
Ile Glu Thr Gly Gln Ser Tyr Thr Ile Leu Ser Asn Arg Thr Met Lys
85 90 95
Ser Val Asn Ala Ser Asn Tyr Gly Leu Ser Pro Asp Arg Gln Phe Val
100 105 110
Tyr Leu Glu Ser Asp Tyr Ser Lys Leu Trp Arg Tyr Ser Tyr Thr Ala
115 120 125
Thr Tyr Tyr Ile Tyr Asp Leu Ser Asn Gly Glu Phe Val Arg Gly Asn
130 135 140
Glu Leu Pro Arg Pro Ile Gln Tyr Leu Cys Trp Ser Pro Val Gly Ser
145 150 155 160
Lys Leu Ala Tyr Val Tyr Gln Asn Asn Ile Tyr Leu Lys Gln Arg Pro
165 170 175
Gly Asp Pro Pro Phe Gln Ile Thr Phe Asn Gly Arg Glu Asn Lys Ile
180 185 190
Phe Asn Gly Ile Pro Asp Trp Val Tyr Glu Glu Glu Met Leu Ala Thr
195 200 205
Lys Tyr Ala Leu Trp Trp Ser Pro Asn Gly Lys Phe Leu Ala Tyr Ala
210 215 220
Glu Phe Asn Asp Thr Asp Ile Pro Val Ile Ala Tyr Ser Tyr Tyr Gly
225 230 235 240
Asp Glu Gln Tyr Pro Arg Thr Ile Asn Ile Pro Tyr Pro Lys Ala Gly
245 250 255
Ala Lys Asn Pro Val Val Arg Ile Phe Ile Ile Asp Thr Thr Tyr Pro
260 265 270
Ala Tyr Val Gly Pro Gln Glu Val Pro Val Pro Ala Met Ile Ala Ser
275 280 285
Ser Asp Tyr Tyr Phe Ser Trp Leu Thr Trp Val Thr Asp Glu Arg Val
290 295 300
Cys Leu Gln Trp Leu Lys Arg Val Gln Asn Val Ser Val Leu Ser Ile
305 310 315 320
Cys Asp Phe Arg Glu Asp Trp Gln Thr Trp Asp Cys Pro Lys Thr Gln
325 330 335
Glu His Ile Glu Glu Ser Arg Thr Gly Trp Ala Gly Gly Phe Phe Val
340 345 350
Ser Thr Pro Val Phe Ser Tyr Asp Ala Ile Ser Tyr Tyr Lys Ile Phe
355 360 365
Ser Asp Lys Asp Gly Tyr Lys His Ile His Tyr Ile Lys Asp Thr Val
370 375 380
Glu Asn Ala Ile Gln Ile Thr Ser Gly Lys Trp Glu Ala Ile Asn Ile
385 390 395 400
Phe Arg Val Thr Gln Asp Ser Leu Phe Tyr Ser Ser Asn Glu Phe Glu
405 410 415
Glu Tyr Pro Gly Arg Arg Asn Ile Tyr Arg Ile Ser Ile Gly Ser Tyr
420 425 430
Pro Pro Ser Lys Lys Cys Val Thr Cys His Leu Arg Lys Glu Arg Cys
435 440 445
Gln Tyr Tyr Thr Ala Ser Phe Ser Asp Tyr Ala Lys Tyr Tyr Ala Leu
450 455 460
Val Cys Tyr Gly Pro Gly Ile Pro Ile Ser Thr Leu His Asp Gly Arg
465 470 475 480
Thr Asp Gln Glu Ile Lys Ile Leu Glu Glu Asn Lys Glu Leu Glu Asn
485 490 495
Ala Leu Lys Asn Ile Gln Leu Pro Lys Glu Glu Ile Lys Lys Leu Glu
500 505 510
Val Asp Glu Ile Thr Leu Trp Tyr Lys Met Ile Leu Pro Pro Gln Phe
515 520 525
Asp Arg Ser Lys Lys Tyr Pro Leu Leu Ile Gln Val Tyr Gly Gly Pro
530 535 540
Cys Ser Gln Ser Val Arg Ser Val Phe Ala Val Asn Trp Ile Ser Tyr
545 550 555 560
Leu Ala Ser Lys Glu Gly Met Val Ile Ala Leu Val Asp Gly Arg Gly
565 570 575
Thr Ala Phe Gln Gly Asp Lys Leu Leu Tyr Ala Val Tyr Arg Lys Leu
580 585 590
Gly Val Tyr Glu Val Glu Asp Gln Ile Thr Ala Val Arg Lys Phe Ile
595 600 605
Glu Met Gly Phe Ile Asp Glu Lys Arg Ile Ala Ile Trp Gly Trp Ser
610 615 620
Tyr Gly Gly Tyr Val Ser Ser Leu Ala Leu Ala Ser Gly Thr Gly Leu
625 630 635 640
Phe Lys Cys Gly Ile Ala Val Ala Pro Val Ser Ser Trp Glu Tyr Tyr
645 650 655
Ala Ser Val Tyr Thr Glu Arg Phe Met Gly Leu Pro Thr Lys Asp Asp
660 665 670
Asn Leu Glu His Tyr Lys Asn Ser Thr Val Met Ala Arg Ala Glu Tyr
675 680 685
Phe Arg Asn Val Asp Tyr Leu Leu Ile His Gly Thr Ala Asp Asp Asn
690 695 700
Val His Phe Gln Asn Ser Ala Gln Ile Ala Lys Ala Leu Val Asn Ala
705 710 715 720
Gln Val Asp Phe Gln Ala Met Trp Tyr Ser Asp Gln Asn His Gly Leu
725 730 735
Ser Gly Leu Ser Thr Asn His Leu Tyr Thr His Met Thr His Phe Leu
740 745 750
Lys Gln Cys Phe Ser Leu Ser Asp
755 760
&lt;210&gt; 54
&lt;211&gt; 748
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; hu FAP外域+poly-lys标签+his6标签
&lt;400&gt; 54
Arg Pro Ser Arg Val His Asn Ser Glu Glu Asn Thr Met Arg Ala Leu
1 5 10 15
Thr Leu Lys Asp Ile Leu Asn Gly Thr Phe Ser Tyr Lys Thr Phe Phe
20 25 30
Pro Asn Trp Ile Ser Gly Gln Glu Tyr Leu His Gln Ser Ala Asp Asn
35 40 45
Asn Ile Val Leu Tyr Asn Ile Glu Thr Gly Gln Ser Tyr Thr Ile Leu
50 55 60
Ser Asn Arg Thr Met Lys Ser Val Asn Ala Ser Asn Tyr Gly Leu Ser
65 70 75 80
Pro Asp Arg Gln Phe Val Tyr Leu Glu Ser Asp Tyr Ser Lys Leu Trp
85 90 95
Arg Tyr Ser Tyr Thr Ala Thr Tyr Tyr Ile Tyr Asp Leu Ser Asn Gly
100 105 110
Glu Phe Val Arg Gly Asn Glu Leu Pro Arg Pro Ile Gln Tyr Leu Cys
115 120 125
Trp Ser Pro Val Gly Ser Lys Leu Ala Tyr Val Tyr Gln Asn Asn Ile
130 135 140
Tyr Leu Lys Gln Arg Pro Gly Asp Pro Pro Phe Gln Ile Thr Phe Asn
145 150 155 160
Gly Arg Glu Asn Lys Ile Phe Asn Gly Ile Pro Asp Trp Val Tyr Glu
165 170 175
Glu Glu Met Leu Ala Thr Lys Tyr Ala Leu Trp Trp Ser Pro Asn Gly
180 185 190
Lys Phe Leu Ala Tyr Ala Glu Phe Asn Asp Thr Asp Ile Pro Val Ile
195 200 205
Ala Tyr Ser Tyr Tyr Gly Asp Glu Gln Tyr Pro Arg Thr Ile Asn Ile
210 215 220
Pro Tyr Pro Lys Ala Gly Ala Lys Asn Pro Val Val Arg Ile Phe Ile
225 230 235 240
Ile Asp Thr Thr Tyr Pro Ala Tyr Val Gly Pro Gln Glu Val Pro Val
245 250 255
Pro Ala Met Ile Ala Ser Ser Asp Tyr Tyr Phe Ser Trp Leu Thr Trp
260 265 270
Val Thr Asp Glu Arg Val Cys Leu Gln Trp Leu Lys Arg Val Gln Asn
275 280 285
Val Ser Val Leu Ser Ile Cys Asp Phe Arg Glu Asp Trp Gln Thr Trp
290 295 300
Asp Cys Pro Lys Thr Gln Glu His Ile Glu Glu Ser Arg Thr Gly Trp
305 310 315 320
Ala Gly Gly Phe Phe Val Ser Thr Pro Val Phe Ser Tyr Asp Ala Ile
325 330 335
Ser Tyr Tyr Lys Ile Phe Ser Asp Lys Asp Gly Tyr Lys His Ile His
340 345 350
Tyr Ile Lys Asp Thr Val Glu Asn Ala Ile Gln Ile Thr Ser Gly Lys
355 360 365
Trp Glu Ala Ile Asn Ile Phe Arg Val Thr Gln Asp Ser Leu Phe Tyr
370 375 380
Ser Ser Asn Glu Phe Glu Glu Tyr Pro Gly Arg Arg Asn Ile Tyr Arg
385 390 395 400
Ile Ser Ile Gly Ser Tyr Pro Pro Ser Lys Lys Cys Val Thr Cys His
405 410 415
Leu Arg Lys Glu Arg Cys Gln Tyr Tyr Thr Ala Ser Phe Ser Asp Tyr
420 425 430
Ala Lys Tyr Tyr Ala Leu Val Cys Tyr Gly Pro Gly Ile Pro Ile Ser
435 440 445
Thr Leu His Asp Gly Arg Thr Asp Gln Glu Ile Lys Ile Leu Glu Glu
450 455 460
Asn Lys Glu Leu Glu Asn Ala Leu Lys Asn Ile Gln Leu Pro Lys Glu
465 470 475 480
Glu Ile Lys Lys Leu Glu Val Asp Glu Ile Thr Leu Trp Tyr Lys Met
485 490 495
Ile Leu Pro Pro Gln Phe Asp Arg Ser Lys Lys Tyr Pro Leu Leu Ile
500 505 510
Gln Val Tyr Gly Gly Pro Cys Ser Gln Ser Val Arg Ser Val Phe Ala
515 520 525
Val Asn Trp Ile Ser Tyr Leu Ala Ser Lys Glu Gly Met Val Ile Ala
530 535 540
Leu Val Asp Gly Arg Gly Thr Ala Phe Gln Gly Asp Lys Leu Leu Tyr
545 550 555 560
Ala Val Tyr Arg Lys Leu Gly Val Tyr Glu Val Glu Asp Gln Ile Thr
565 570 575
Ala Val Arg Lys Phe Ile Glu Met Gly Phe Ile Asp Glu Lys Arg Ile
580 585 590
Ala Ile Trp Gly Trp Ser Tyr Gly Gly Tyr Val Ser Ser Leu Ala Leu
595 600 605
Ala Ser Gly Thr Gly Leu Phe Lys Cys Gly Ile Ala Val Ala Pro Val
610 615 620
Ser Ser Trp Glu Tyr Tyr Ala Ser Val Tyr Thr Glu Arg Phe Met Gly
625 630 635 640
Leu Pro Thr Lys Asp Asp Asn Leu Glu His Tyr Lys Asn Ser Thr Val
645 650 655
Met Ala Arg Ala Glu Tyr Phe Arg Asn Val Asp Tyr Leu Leu Ile His
660 665 670
Gly Thr Ala Asp Asp Asn Val His Phe Gln Asn Ser Ala Gln Ile Ala
675 680 685
Lys Ala Leu Val Asn Ala Gln Val Asp Phe Gln Ala Met Trp Tyr Ser
690 695 700
Asp Gln Asn His Gly Leu Ser Gly Leu Ser Thr Asn His Leu Tyr Thr
705 710 715 720
His Met Thr His Phe Leu Lys Gln Cys Phe Ser Leu Ser Asp Gly Lys
725 730 735
Lys Lys Lys Lys Lys Gly His His His His His His
740 745
&lt;210&gt; 55
&lt;211&gt; 2244
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; hu FAP外域+poly-lys标签+his6标签的核苷酸序列
&lt;400&gt; 55
cgcccttcaa gagttcataa ctctgaagaa aatacaatga gagcactcac actgaaggat 60
attttaaatg gaacattttc ttataaaaca ttttttccaa actggatttc aggacaagaa 120
tatcttcatc aatctgcaga taacaatata gtactttata atattgaaac aggacaatca 180
tataccattt tgagtaatag aaccatgaaa agtgtgaatg cttcaaatta cggcttatca 240
cctgatcggc aatttgtata tctagaaagt gattattcaa agctttggag atactcttac 300
acagcaacat attacatcta tgaccttagc aatggagaat ttgtaagagg aaatgagctt 360
cctcgtccaa ttcagtattt atgctggtcg cctgttggga gtaaattagc atatgtctat 420
caaaacaata tctatttgaa acaaagacca ggagatccac cttttcaaat aacatttaat 480
ggaagagaaa ataaaatatt taatggaatc ccagactggg tttatgaaga ggaaatgctt 540
gctacaaaat atgctctctg gtggtctcct aatggaaaat ttttggcata tgcggaattt 600
aatgatacgg atataccagt tattgcctat tcctattatg gcgatgaaca atatcctaga 660
acaataaata ttccataccc aaaggctgga gctaagaatc ccgttgttcg gatatttatt 720
atcgatacca cttaccctgc gtatgtaggt ccccaggaag tgcctgttcc agcaatgata 780
gcctcaagtg attattattt cagttggctc acgtgggtta ctgatgaacg agtatgtttg 840
cagtggctaa aaagagtcca gaatgtttcg gtcctgtcta tatgtgactt cagggaagac 900
tggcagacat gggattgtcc aaagacccag gagcatatag aagaaagcag aactggatgg 960
gctggtggat tctttgtttc aacaccagtt ttcagctatg atgccatttc gtactacaaa 1020
atatttagtg acaaggatgg ctacaaacat attcactata tcaaagacac tgtggaaaat 1080
gctattcaaa ttacaagtgg caagtgggag gccataaata tattcagagt aacacaggat 1140
tcactgtttt attctagcaa tgaatttgaa gaataccctg gaagaagaaa catctacaga 1200
attagcattg gaagctatcc tccaagcaag aagtgtgtta cttgccatct aaggaaagaa 1260
aggtgccaat attacacagc aagtttcagc gactacgcca agtactatgc acttgtctgc 1320
tacggcccag gcatccccat ttccaccctt catgatggac gcactgatca agaaattaaa 1380
atcctggaag aaaacaagga attggaaaat gctttgaaaa atatccagct gcctaaagag 1440
gaaattaaga aacttgaagt agatgaaatt actttatggt acaagatgat tcttcctcct 1500
caatttgaca gatcaaagaa gtatcccttg ctaattcaag tgtatggtgg tccctgcagt 1560
cagagtgtaa ggtctgtatt tgctgttaat tggatatctt atcttgcaag taaggaaggg 1620
atggtcattg ccttggtgga tggtcgagga acagctttcc aaggtgacaa actcctctat 1680
gcagtgtatc gaaagctggg tgtttatgaa gttgaagacc agattacagc tgtcagaaaa 1740
ttcatagaaa tgggtttcat tgatgaaaaa agaatagcca tatggggctg gtcctatgga 1800
ggatacgttt catcactggc ccttgcatct ggaactggtc ttttcaaatg tggtatagca 1860
gtggctccag tctccagctg ggaatattac gcgtctgtct acacagagag attcatgggt 1920
ctcccaacaa aggatgataa tcttgagcac tataagaatt caactgtgat ggcaagagca 1980
gaatatttca gaaatgtaga ctatcttctc atccacggaa cagcagatga taatgtgcac 2040
tttcaaaact cagcacagat tgctaaagct ctggttaatg cacaagtgga tttccaggca 2100
atgtggtact ctgaccagaa ccacggctta tccggcctgt ccacgaacca cttatacacc 2160
cacatgaccc acttcctaaa gcagtgtttc tctttgtcag acggcaaaaa gaaaaagaaa 2220
aagggccacc accatcacca tcac 2244
&lt;210&gt; 56
&lt;211&gt; 761
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 小鼠（mus musculus）
&lt;400&gt; 56
Met Lys Thr Trp Leu Lys Thr Val Phe Gly Val Thr Thr Leu Ala Ala
1 5 10 15
Leu Ala Leu Val Val Ile Cys Ile Val Leu Arg Pro Ser Arg Val Tyr
20 25 30
Lys Pro Glu Gly Asn Thr Lys Arg Ala Leu Thr Leu Lys Asp Ile Leu
35 40 45
Asn Gly Thr Phe Ser Tyr Lys Thr Tyr Phe Pro Asn Trp Ile Ser Glu
50 55 60
Gln Glu Tyr Leu His Gln Ser Glu Asp Asp Asn Ile Val Phe Tyr Asn
65 70 75 80
Ile Glu Thr Arg Glu Ser Tyr Ile Ile Leu Ser Asn Ser Thr Met Lys
85 90 95
Ser Val Asn Ala Thr Asp Tyr Gly Leu Ser Pro Asp Arg Gln Phe Val
100 105 110
Tyr Leu Glu Ser Asp Tyr Ser Lys Leu Trp Arg Tyr Ser Tyr Thr Ala
115 120 125
Thr Tyr Tyr Ile Tyr Asp Leu Gln Asn Gly Glu Phe Val Arg Gly Tyr
130 135 140
Glu Leu Pro Arg Pro Ile Gln Tyr Leu Cys Trp Ser Pro Val Gly Ser
145 150 155 160
Lys Leu Ala Tyr Val Tyr Gln Asn Asn Ile Tyr Leu Lys Gln Arg Pro
165 170 175
Gly Asp Pro Pro Phe Gln Ile Thr Tyr Thr Gly Arg Glu Asn Arg Ile
180 185 190
Phe Asn Gly Ile Pro Asp Trp Val Tyr Glu Glu Glu Met Leu Ala Thr
195 200 205
Lys Tyr Ala Leu Trp Trp Ser Pro Asp Gly Lys Phe Leu Ala Tyr Val
210 215 220
Glu Phe Asn Asp Ser Asp Ile Pro Ile Ile Ala Tyr Ser Tyr Tyr Gly
225 230 235 240
Asp Gly Gln Tyr Pro Arg Thr Ile Asn Ile Pro Tyr Pro Lys Ala Gly
245 250 255
Ala Lys Asn Pro Val Val Arg Val Phe Ile Val Asp Thr Thr Tyr Pro
260 265 270
His His Val Gly Pro Met Glu Val Pro Val Pro Glu Met Ile Ala Ser
275 280 285
Ser Asp Tyr Tyr Phe Ser Trp Leu Thr Trp Val Ser Ser Glu Arg Val
290 295 300
Cys Leu Gln Trp Leu Lys Arg Val Gln Asn Val Ser Val Leu Ser Ile
305 310 315 320
Cys Asp Phe Arg Glu Asp Trp His Ala Trp Glu Cys Pro Lys Asn Gln
325 330 335
Glu His Val Glu Glu Ser Arg Thr Gly Trp Ala Gly Gly Phe Phe Val
340 345 350
Ser Thr Pro Ala Phe Ser Gln Asp Ala Thr Ser Tyr Tyr Lys Ile Phe
355 360 365
Ser Asp Lys Asp Gly Tyr Lys His Ile His Tyr Ile Lys Asp Thr Val
370 375 380
Glu Asn Ala Ile Gln Ile Thr Ser Gly Lys Trp Glu Ala Ile Tyr Ile
385 390 395 400
Phe Arg Val Thr Gln Asp Ser Leu Phe Tyr Ser Ser Asn Glu Phe Glu
405 410 415
Gly Tyr Pro Gly Arg Arg Asn Ile Tyr Arg Ile Ser Ile Gly Asn Ser
420 425 430
Pro Pro Ser Lys Lys Cys Val Thr Cys His Leu Arg Lys Glu Arg Cys
435 440 445
Gln Tyr Tyr Thr Ala Ser Phe Ser Tyr Lys Ala Lys Tyr Tyr Ala Leu
450 455 460
Val Cys Tyr Gly Pro Gly Leu Pro Ile Ser Thr Leu His Asp Gly Arg
465 470 475 480
Thr Asp Gln Glu Ile Gln Val Leu Glu Glu Asn Lys Glu Leu Glu Asn
485 490 495
Ser Leu Arg Asn Ile Gln Leu Pro Lys Val Glu Ile Lys Lys Leu Lys
500 505 510
Asp Gly Gly Leu Thr Phe Trp Tyr Lys Met Ile Leu Pro Pro Gln Phe
515 520 525
Asp Arg Ser Lys Lys Tyr Pro Leu Leu Ile Gln Val Tyr Gly Gly Pro
530 535 540
Cys Ser Gln Ser Val Lys Ser Val Phe Ala Val Asn Trp Ile Thr Tyr
545 550 555 560
Leu Ala Ser Lys Glu Gly Ile Val Ile Ala Leu Val Asp Gly Arg Gly
565 570 575
Thr Ala Phe Gln Gly Asp Lys Phe Leu His Ala Val Tyr Arg Lys Leu
580 585 590
Gly Val Tyr Glu Val Glu Asp Gln Leu Thr Ala Val Arg Lys Phe Ile
595 600 605
Glu Met Gly Phe Ile Asp Glu Glu Arg Ile Ala Ile Trp Gly Trp Ser
610 615 620
Tyr Gly Gly Tyr Val Ser Ser Leu Ala Leu Ala Ser Gly Thr Gly Leu
625 630 635 640
Phe Lys Cys Gly Ile Ala Val Ala Pro Val Ser Ser Trp Glu Tyr Tyr
645 650 655
Ala Ser Ile Tyr Ser Glu Arg Phe Met Gly Leu Pro Thr Lys Asp Asp
660 665 670
Asn Leu Glu His Tyr Lys Asn Ser Thr Val Met Ala Arg Ala Glu Tyr
675 680 685
Phe Arg Asn Val Asp Tyr Leu Leu Ile His Gly Thr Ala Asp Asp Asn
690 695 700
Val His Phe Gln Asn Ser Ala Gln Ile Ala Lys Ala Leu Val Asn Ala
705 710 715 720
Gln Val Asp Phe Gln Ala Met Trp Tyr Ser Asp Gln Asn His Gly Ile
725 730 735
Ser Ser Gly Arg Ser Gln Asn His Leu Tyr Thr His Met Thr His Phe
740 745 750
Leu Lys Gln Cys Phe Ser Leu Ser Asp
755 760
&lt;210&gt; 57
&lt;211&gt; 749
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 鼠FAP外域+poly-lys标签+his6标签
&lt;400&gt; 57
Arg Pro Ser Arg Val Tyr Lys Pro Glu Gly Asn Thr Lys Arg Ala Leu
1 5 10 15
Thr Leu Lys Asp Ile Leu Asn Gly Thr Phe Ser Tyr Lys Thr Tyr Phe
20 25 30
Pro Asn Trp Ile Ser Glu Gln Glu Tyr Leu His Gln Ser Glu Asp Asp
35 40 45
Asn Ile Val Phe Tyr Asn Ile Glu Thr Arg Glu Ser Tyr Ile Ile Leu
50 55 60
Ser Asn Ser Thr Met Lys Ser Val Asn Ala Thr Asp Tyr Gly Leu Ser
65 70 75 80
Pro Asp Arg Gln Phe Val Tyr Leu Glu Ser Asp Tyr Ser Lys Leu Trp
85 90 95
Arg Tyr Ser Tyr Thr Ala Thr Tyr Tyr Ile Tyr Asp Leu Gln Asn Gly
100 105 110
Glu Phe Val Arg Gly Tyr Glu Leu Pro Arg Pro Ile Gln Tyr Leu Cys
115 120 125
Trp Ser Pro Val Gly Ser Lys Leu Ala Tyr Val Tyr Gln Asn Asn Ile
130 135 140
Tyr Leu Lys Gln Arg Pro Gly Asp Pro Pro Phe Gln Ile Thr Tyr Thr
145 150 155 160
Gly Arg Glu Asn Arg Ile Phe Asn Gly Ile Pro Asp Trp Val Tyr Glu
165 170 175
Glu Glu Met Leu Ala Thr Lys Tyr Ala Leu Trp Trp Ser Pro Asp Gly
180 185 190
Lys Phe Leu Ala Tyr Val Glu Phe Asn Asp Ser Asp Ile Pro Ile Ile
195 200 205
Ala Tyr Ser Tyr Tyr Gly Asp Gly Gln Tyr Pro Arg Thr Ile Asn Ile
210 215 220
Pro Tyr Pro Lys Ala Gly Ala Lys Asn Pro Val Val Arg Val Phe Ile
225 230 235 240
Val Asp Thr Thr Tyr Pro His His Val Gly Pro Met Glu Val Pro Val
245 250 255
Pro Glu Met Ile Ala Ser Ser Asp Tyr Tyr Phe Ser Trp Leu Thr Trp
260 265 270
Val Ser Ser Glu Arg Val Cys Leu Gln Trp Leu Lys Arg Val Gln Asn
275 280 285
Val Ser Val Leu Ser Ile Cys Asp Phe Arg Glu Asp Trp His Ala Trp
290 295 300
Glu Cys Pro Lys Asn Gln Glu His Val Glu Glu Ser Arg Thr Gly Trp
305 310 315 320
Ala Gly Gly Phe Phe Val Ser Thr Pro Ala Phe Ser Gln Asp Ala Thr
325 330 335
Ser Tyr Tyr Lys Ile Phe Ser Asp Lys Asp Gly Tyr Lys His Ile His
340 345 350
Tyr Ile Lys Asp Thr Val Glu Asn Ala Ile Gln Ile Thr Ser Gly Lys
355 360 365
Trp Glu Ala Ile Tyr Ile Phe Arg Val Thr Gln Asp Ser Leu Phe Tyr
370 375 380
Ser Ser Asn Glu Phe Glu Gly Tyr Pro Gly Arg Arg Asn Ile Tyr Arg
385 390 395 400
Ile Ser Ile Gly Asn Ser Pro Pro Ser Lys Lys Cys Val Thr Cys His
405 410 415
Leu Arg Lys Glu Arg Cys Gln Tyr Tyr Thr Ala Ser Phe Ser Tyr Lys
420 425 430
Ala Lys Tyr Tyr Ala Leu Val Cys Tyr Gly Pro Gly Leu Pro Ile Ser
435 440 445
Thr Leu His Asp Gly Arg Thr Asp Gln Glu Ile Gln Val Leu Glu Glu
450 455 460
Asn Lys Glu Leu Glu Asn Ser Leu Arg Asn Ile Gln Leu Pro Lys Val
465 470 475 480
Glu Ile Lys Lys Leu Lys Asp Gly Gly Leu Thr Phe Trp Tyr Lys Met
485 490 495
Ile Leu Pro Pro Gln Phe Asp Arg Ser Lys Lys Tyr Pro Leu Leu Ile
500 505 510
Gln Val Tyr Gly Gly Pro Cys Ser Gln Ser Val Lys Ser Val Phe Ala
515 520 525
Val Asn Trp Ile Thr Tyr Leu Ala Ser Lys Glu Gly Ile Val Ile Ala
530 535 540
Leu Val Asp Gly Arg Gly Thr Ala Phe Gln Gly Asp Lys Phe Leu His
545 550 555 560
Ala Val Tyr Arg Lys Leu Gly Val Tyr Glu Val Glu Asp Gln Leu Thr
565 570 575
Ala Val Arg Lys Phe Ile Glu Met Gly Phe Ile Asp Glu Glu Arg Ile
580 585 590
Ala Ile Trp Gly Trp Ser Tyr Gly Gly Tyr Val Ser Ser Leu Ala Leu
595 600 605
Ala Ser Gly Thr Gly Leu Phe Lys Cys Gly Ile Ala Val Ala Pro Val
610 615 620
Ser Ser Trp Glu Tyr Tyr Ala Ser Ile Tyr Ser Glu Arg Phe Met Gly
625 630 635 640
Leu Pro Thr Lys Asp Asp Asn Leu Glu His Tyr Lys Asn Ser Thr Val
645 650 655
Met Ala Arg Ala Glu Tyr Phe Arg Asn Val Asp Tyr Leu Leu Ile His
660 665 670
Gly Thr Ala Asp Asp Asn Val His Phe Gln Asn Ser Ala Gln Ile Ala
675 680 685
Lys Ala Leu Val Asn Ala Gln Val Asp Phe Gln Ala Met Trp Tyr Ser
690 695 700
Asp Gln Asn His Gly Ile Leu Ser Gly Arg Ser Gln Asn His Leu Tyr
705 710 715 720
Thr His Met Thr His Phe Leu Lys Gln Cys Phe Ser Leu Ser Asp Gly
725 730 735
Lys Lys Lys Lys Lys Lys Gly His His His His His His
740 745
&lt;210&gt; 58
&lt;211&gt; 2247
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 鼠FAP外域+poly-lys标签+his6标签的核苷酸序列
&lt;400&gt; 58
cgtccctcaa gagtttacaa acctgaagga aacacaaaga gagctcttac cttgaaggat 60
attttaaatg gaacattctc atataaaaca tattttccca actggatttc agaacaagaa 120
tatcttcatc aatctgagga tgataacata gtattttata atattgaaac aagagaatca 180
tatatcattt tgagtaatag caccatgaaa agtgtgaatg ctacagatta tggtttgtca 240
cctgatcggc aatttgtgta tctagaaagt gattattcaa agctctggcg atattcatac 300
acagcgacat actacatcta cgaccttcag aatggggaat ttgtaagagg atacgagctc 360
cctcgtccaa ttcagtatct atgctggtcg cctgttggga gtaaattagc atatgtatat 420
caaaacaata tttatttgaa acaaagacca ggagatccac cttttcaaat aacttatact 480
ggaagagaaa atagaatatt taatggaata ccagactggg tttatgaaga ggaaatgctt 540
gccacaaaat atgctctttg gtggtctcca gatggaaaat ttttggcata tgtagaattt 600
aatgattcag atataccaat tattgcctat tcttattatg gtgatggaca gtatcctaga 660
actataaata ttccatatcc aaaggctggg gctaagaatc cggttgttcg tgtttttatt 720
gttgacacca cctaccctca ccacgtgggc ccaatggaag tgccagttcc agaaatgata 780
gcctcaagtg actattattt cagctggctc acatgggtgt ccagtgaacg agtatgcttg 840
cagtggctaa aaagagtgca gaatgtctca gtcctgtcta tatgtgattt cagggaagac 900
tggcatgcat gggaatgtcc aaagaaccag gagcatgtag aagaaagcag aacaggatgg 960
gctggtggat tctttgtttc gacaccagct tttagccagg atgccacttc ttactacaaa 1020
atatttagcg acaaggatgg ttacaaacat attcactaca tcaaagacac tgtggaaaat 1080
gctattcaaa ttacaagtgg caagtgggag gccatatata tattccgcgt aacacaggat 1140
tcactgtttt attctagcaa tgaatttgaa ggttaccctg gaagaagaaa catctacaga 1200
attagcattg gaaactctcc tccgagcaag aagtgtgtta cttgccatct aaggaaagaa 1260
aggtgccaat attacacagc aagtttcagc tacaaagcca agtactatgc actcgtctgc 1320
tatggccctg gcctccccat ttccaccctc catgatggcc gcacagacca agaaatacaa 1380
gtattagaag aaaacaaaga actggaaaat tctctgagaa atatccagct gcctaaagtg 1440
gagattaaga agctcaaaga cgggggactg actttctggt acaagatgat tctgcctcct 1500
cagtttgaca gatcaaagaa gtaccctttg ctaattcaag tgtatggtgg tccttgtagc 1560
cagagtgtta agtctgtgtt tgctgttaat tggataactt atctcgcaag taaggagggg 1620
atagtcattg ccctggtaga tggtcggggc actgctttcc aaggtgacaa attcctgcat 1680
gccgtgtatc gaaaactggg tgtatatgaa gttgaggacc agctcacagc tgtcagaaaa 1740
ttcatagaaa tgggtttcat tgatgaagaa agaatagcca tatggggctg gtcctacgga 1800
ggttatgttt catccctggc ccttgcatct ggaactggtc ttttcaaatg tggcatagca 1860
gtggctccag tctccagctg ggaatattac gcatctatct actcagagag attcatgggc 1920
ctcccaacaa aggacgacaa tctcgaacac tataaaaatt caactgtgat ggcaagagca 1980
gaatatttca gaaatgtaga ctatcttctc atccacggaa cagcagatga taatgtgcac 2040
tttcagaact cagcacagat tgctaaagct ttggttaatg cacaagtgga tttccaggcg 2100
atgtggtact ctgaccagaa ccatggtata ttatctgggc gctcccagaa tcatttatat 2160
acccacatga cgcacttcct caagcaatgc ttttctttat cagacggcaa aaagaaaaag 2220
aaaaagggcc accaccatca ccatcac 2247
&lt;210&gt; 59
&lt;211&gt; 748
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 食蟹猴FAP外域+poly-lys标签+his6标签
&lt;400&gt; 59
Arg Pro Pro Arg Val His Asn Ser Glu Glu Asn Thr Met Arg Ala Leu
1 5 10 15
Thr Leu Lys Asp Ile Leu Asn Gly Thr Phe Ser Tyr Lys Thr Phe Phe
20 25 30
Pro Asn Trp Ile Ser Gly Gln Glu Tyr Leu His Gln Ser Ala Asp Asn
35 40 45
Asn Ile Val Leu Tyr Asn Ile Glu Thr Gly Gln Ser Tyr Thr Ile Leu
50 55 60
Ser Asn Arg Thr Met Lys Ser Val Asn Ala Ser Asn Tyr Gly Leu Ser
65 70 75 80
Pro Asp Arg Gln Phe Val Tyr Leu Glu Ser Asp Tyr Ser Lys Leu Trp
85 90 95
Arg Tyr Ser Tyr Thr Ala Thr Tyr Tyr Ile Tyr Asp Leu Ser Asn Gly
100 105 110
Glu Phe Val Arg Gly Asn Glu Leu Pro Arg Pro Ile Gln Tyr Leu Cys
115 120 125
Trp Ser Pro Val Gly Ser Lys Leu Ala Tyr Val Tyr Gln Asn Asn Ile
130 135 140
Tyr Leu Lys Gln Arg Pro Gly Asp Pro Pro Phe Gln Ile Thr Phe Asn
145 150 155 160
Gly Arg Glu Asn Lys Ile Phe Asn Gly Ile Pro Asp Trp Val Tyr Glu
165 170 175
Glu Glu Met Leu Ala Thr Lys Tyr Ala Leu Trp Trp Ser Pro Asn Gly
180 185 190
Lys Phe Leu Ala Tyr Ala Glu Phe Asn Asp Thr Asp Ile Pro Val Ile
195 200 205
Ala Tyr Ser Tyr Tyr Gly Asp Glu Gln Tyr Pro Arg Thr Ile Asn Ile
210 215 220
Pro Tyr Pro Lys Ala Gly Ala Lys Asn Pro Phe Val Arg Ile Phe Ile
225 230 235 240
Ile Asp Thr Thr Tyr Pro Ala Tyr Val Gly Pro Gln Glu Val Pro Val
245 250 255
Pro Ala Met Ile Ala Ser Ser Asp Tyr Tyr Phe Ser Trp Leu Thr Trp
260 265 270
Val Thr Asp Glu Arg Val Cys Leu Gln Trp Leu Lys Arg Val Gln Asn
275 280 285
Val Ser Val Leu Ser Ile Cys Asp Phe Arg Glu Asp Trp Gln Thr Trp
290 295 300
Asp Cys Pro Lys Thr Gln Glu His Ile Glu Glu Ser Arg Thr Gly Trp
305 310 315 320
Ala Gly Gly Phe Phe Val Ser Thr Pro Val Phe Ser Tyr Asp Ala Ile
325 330 335
Ser Tyr Tyr Lys Ile Phe Ser Asp Lys Asp Gly Tyr Lys His Ile His
340 345 350
Tyr Ile Lys Asp Thr Val Glu Asn Ala Ile Gln Ile Thr Ser Gly Lys
355 360 365
Trp Glu Ala Ile Asn Ile Phe Arg Val Thr Gln Asp Ser Leu Phe Tyr
370 375 380
Ser Ser Asn Glu Phe Glu Asp Tyr Pro Gly Arg Arg Asn Ile Tyr Arg
385 390 395 400
Ile Ser Ile Gly Ser Tyr Pro Pro Ser Lys Lys Cys Val Thr Cys His
405 410 415
Leu Arg Lys Glu Arg Cys Gln Tyr Tyr Thr Ala Ser Phe Ser Asp Tyr
420 425 430
Ala Lys Tyr Tyr Ala Leu Val Cys Tyr Gly Pro Gly Ile Pro Ile Ser
435 440 445
Thr Leu His Asp Gly Arg Thr Asp Gln Glu Ile Lys Ile Leu Glu Glu
450 455 460
Asn Lys Glu Leu Glu Asn Ala Leu Lys Asn Ile Gln Leu Pro Lys Glu
465 470 475 480
Glu Ile Lys Lys Leu Glu Val Asp Glu Ile Thr Leu Trp Tyr Lys Met
485 490 495
Ile Leu Pro Pro Gln Phe Asp Arg Ser Lys Lys Tyr Pro Leu Leu Ile
500 505 510
Gln Val Tyr Gly Gly Pro Cys Ser Gln Ser Val Arg Ser Val Phe Ala
515 520 525
Val Asn Trp Ile Ser Tyr Leu Ala Ser Lys Glu Gly Met Val Ile Ala
530 535 540
Leu Val Asp Gly Arg Gly Thr Ala Phe Gln Gly Asp Lys Leu Leu Tyr
545 550 555 560
Ala Val Tyr Arg Lys Leu Gly Val Tyr Glu Val Glu Asp Gln Ile Thr
565 570 575
Ala Val Arg Lys Phe Ile Glu Met Gly Phe Ile Asp Glu Lys Arg Ile
580 585 590
Ala Ile Trp Gly Trp Ser Tyr Gly Gly Tyr Val Ser Ser Leu Ala Leu
595 600 605
Ala Ser Gly Thr Gly Leu Phe Lys Cys Gly Ile Ala Val Ala Pro Val
610 615 620
Ser Ser Trp Glu Tyr Tyr Ala Ser Val Tyr Thr Glu Arg Phe Met Gly
625 630 635 640
Leu Pro Thr Lys Asp Asp Asn Leu Glu His Tyr Lys Asn Ser Thr Val
645 650 655
Met Ala Arg Ala Glu Tyr Phe Arg Asn Val Asp Tyr Leu Leu Ile His
660 665 670
Gly Thr Ala Asp Asp Asn Val His Phe Gln Asn Ser Ala Gln Ile Ala
675 680 685
Lys Ala Leu Val Asn Ala Gln Val Asp Phe Gln Ala Met Trp Tyr Ser
690 695 700
Asp Gln Asn His Gly Leu Ser Gly Leu Ser Thr Asn His Leu Tyr Thr
705 710 715 720
His Met Thr His Phe Leu Lys Gln Cys Phe Ser Leu Ser Asp Gly Lys
725 730 735
Lys Lys Lys Lys Lys Gly His His His His His His
740 745
&lt;210&gt; 60
&lt;211&gt; 2244
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 食蟹猴FAP外域+poly-lys标签+his6标签的核苷酸序列
&lt;400&gt; 60
cgccctccaa gagttcataa ctctgaagaa aatacaatga gagcactcac actgaaggat 60
attttaaatg ggacattttc ttataaaaca ttttttccaa actggatttc aggacaagaa 120
tatcttcatc aatctgcaga taacaatata gtactttata atattgaaac aggacaatca 180
tataccattt tgagtaacag aaccatgaaa agtgtgaatg cttcaaatta tggcttatca 240
cctgatcggc aatttgtata tctagaaagt gattattcaa agctttggag atactcttac 300
acagcaacat attacatcta tgaccttagc aatggagaat ttgtaagagg aaatgagctt 360
cctcgtccaa ttcagtattt atgctggtcg cctgttggga gtaaattagc atatgtctat 420
caaaacaata tctatttgaa acaaagacca ggagatccac cttttcaaat aacatttaat 480
ggaagagaaa ataaaatatt taatggaatc ccagactggg tttatgaaga ggaaatgctt 540
gctacaaaat atgctctctg gtggtctcct aatggaaaat ttttggcata tgcggaattt 600
aatgatacag atataccagt tattgcctat tcctattatg gcgatgaaca atatcccaga 660
acaataaata ttccataccc aaaggccgga gctaagaatc cttttgttcg gatatttatt 720
atcgatacca cttaccctgc gtatgtaggt ccccaggaag tgcctgttcc agcaatgata 780
gcctcaagtg attattattt cagttggctc acgtgggtta ctgatgaacg agtatgtttg 840
cagtggctaa aaagagtcca gaatgtttcg gtcttgtcta tatgtgattt cagggaagac 900
tggcagacat gggattgtcc aaagacccag gagcatatag aagaaagcag aactggatgg 960
gctggtggat tctttgtttc aacaccagtt ttcagctatg atgccatttc atactacaaa 1020
atatttagtg acaaggatgg ctacaaacat attcactata tcaaagacac tgtggaaaat 1080
gctattcaaa ttacaagtgg caagtgggag gccataaata tattcagagt aacacaggat 1140
tcactgtttt attctagcaa tgaatttgaa gattaccctg gaagaagaaa catctacaga 1200
attagcattg gaagctatcc tccaagcaag aagtgtgtta cttgccatct aaggaaagaa 1260
aggtgccaat attacacagc aagtttcagc gactacgcca agtactatgc acttgtctgc 1320
tatggcccag gcatccccat ttccaccctt catgacggac gcactgatca agaaattaaa 1380
atcctggaag aaaacaagga attggaaaat gctttgaaaa atatccagct gcctaaagag 1440
gaaattaaga aacttgaagt agatgaaatt actttatggt acaagatgat tcttcctcct 1500
caatttgaca gatcaaagaa gtatcccttg ctaattcaag tgtatggtgg tccctgcagt 1560
cagagtgtaa ggtctgtatt tgctgttaat tggatatctt atcttgcaag taaggaaggg 1620
atggtcattg ccttggtgga tggtcgggga acagctttcc aaggtgacaa actcctgtat 1680
gcagtgtatc gaaagctggg tgtttatgaa gttgaagacc agattacagc tgtcagaaaa 1740
ttcatagaaa tgggtttcat tgatgaaaaa agaatagcca tatggggctg gtcctatgga 1800
ggatatgttt catcactggc ccttgcatct ggaactggtc ttttcaaatg tgggatagca 1860
gtggctccag tctccagctg ggaatattac gcgtctgtct acacagagag attcatgggt 1920
ctcccaacaa aggatgataa tcttgagcac tataagaatt caactgtgat ggcaagagca 1980
gaatatttca gaaatgtaga ctatcttctc atccacggaa cagcagatga taatgtgcac 2040
tttcaaaact cagcacagat tgctaaagct ctggttaatg cacaagtgga tttccaggca 2100
atgtggtact ctgaccagaa ccacggctta tccggcctgt ccacgaacca cttatacacc 2160
cacatgaccc acttcctaaa gcagtgtttc tctttgtcag acggcaaaaa gaaaaagaaa 2220
aagggccacc accatcacca tcac 2244
&lt;210&gt; 61
&lt;211&gt; 702
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 61
Met Glu Ser Pro Ser Ala Pro Pro His Arg Trp Cys Ile Pro Trp Gln
1 5 10 15
Arg Leu Leu Leu Thr Ala Ser Leu Leu Thr Phe Trp Asn Pro Pro Thr
20 25 30
Thr Ala Lys Leu Thr Ile Glu Ser Thr Pro Phe Asn Val Ala Glu Gly
35 40 45
Lys Glu Val Leu Leu Leu Val His Asn Leu Pro Gln His Leu Phe Gly
50 55 60
Tyr Ser Trp Tyr Lys Gly Glu Arg Val Asp Gly Asn Arg Gln Ile Ile
65 70 75 80
Gly Tyr Val Ile Gly Thr Gln Gln Ala Thr Pro Gly Pro Ala Tyr Ser
85 90 95
Gly Arg Glu Ile Ile Tyr Pro Asn Ala Ser Leu Leu Ile Gln Asn Ile
100 105 110
Ile Gln Asn Asp Thr Gly Phe Tyr Thr Leu His Val Ile Lys Ser Asp
115 120 125
Leu Val Asn Glu Glu Ala Thr Gly Gln Phe Arg Val Tyr Pro Glu Leu
130 135 140
Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Lys Pro Val Glu Asp Lys
145 150 155 160
Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Thr Gln Asp Ala Thr Tyr
165 170 175
Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg Leu Gln
180 185 190
Leu Ser Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Phe Asn Val Thr Arg Asn
195 200 205
Asp Thr Ala Ser Tyr Lys Cys Glu Thr Gln Asn Pro Val Ser Ala Arg
210 215 220
Arg Ser Asp Ser Val Ile Leu Asn Val Leu Tyr Gly Pro Asp Ala Pro
225 230 235 240
Thr Ile Ser Pro Leu Asn Thr Ser Tyr Arg Ser Gly Glu Asn Leu Asn
245 250 255
Leu Ser Cys His Ala Ala Ser Asn Pro Pro Ala Gln Tyr Ser Trp Phe
260 265 270
Val Asn Gly Thr Phe Gln Gln Ser Thr Gln Glu Leu Phe Ile Pro Asn
275 280 285
Ile Thr Val Asn Asn Ser Gly Ser Tyr Thr Cys Gln Ala His Asn Ser
290 295 300
Asp Thr Gly Leu Asn Arg Thr Thr Val Thr Thr Ile Thr Val Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Pro Pro Lys Pro Phe Ile Thr Ser Asn Asn Ser Asn Pro Val Glu
325 330 335
Asp Glu Asp Ala Val Ala Leu Thr Cys Glu Pro Glu Ile Gln Asn Thr
340 345 350
Thr Tyr Leu Trp Trp Val Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg
355 360 365
Leu Gln Leu Ser Asn Asp Asn Arg Thr Leu Thr Leu Leu Ser Val Thr
370 375 380
Arg Asn Asp Val Gly Pro Tyr Glu Cys Gly Ile Gln Asn Lys Leu Ser
385 390 395 400
Val Asp His Ser Asp Pro Val Ile Leu Asn Val Leu Tyr Gly Pro Asp
405 410 415
Asp Pro Thr Ile Ser Pro Ser Tyr Thr Tyr Tyr Arg Pro Gly Val Asn
420 425 430
Leu Ser Leu Ser Cys His Ala Ala Ser Asn Pro Pro Ala Gln Tyr Ser
435 440 445
Trp Leu Ile Asp Gly Asn Ile Gln Gln His Thr Gln Glu Leu Phe Ile
450 455 460
Ser Asn Ile Thr Glu Lys Asn Ser Gly Leu Tyr Thr Cys Gln Ala Asn
465 470 475 480
Asn Ser Ala Ser Gly His Ser Arg Thr Thr Val Lys Thr Ile Thr Val
485 490 495
Ser Ala Glu Leu Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Lys Pro
500 505 510
Val Glu Asp Lys Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Ala Gln
515 520 525
Asn Thr Thr Tyr Leu Trp Trp Val Asn Gly Gln Ser Leu Pro Val Ser
530 535 540
Pro Arg Leu Gln Leu Ser Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Phe Asn
545 550 555 560
Val Thr Arg Asn Asp Ala Arg Ala Tyr Val Cys Gly Ile Gln Asn Ser
565 570 575
Val Ser Ala Asn Arg Ser Asp Pro Val Thr Leu Asp Val Leu Tyr Gly
580 585 590
Pro Asp Thr Pro Ile Ile Ser Pro Pro Asp Ser Ser Tyr Leu Ser Gly
595 600 605
Ala Asn Leu Asn Leu Ser Cys His Ser Ala Ser Asn Pro Ser Pro Gln
610 615 620
Tyr Ser Trp Arg Ile Asn Gly Ile Pro Gln Gln His Thr Gln Val Leu
625 630 635 640
Phe Ile Ala Lys Ile Thr Pro Asn Asn Asn Gly Thr Tyr Ala Cys Phe
645 650 655
Val Ser Asn Leu Ala Thr Gly Arg Asn Asn Ser Ile Val Lys Ser Ile
660 665 670
Thr Val Ser Ala Ser Gly Thr Ser Pro Gly Leu Ser Ala Gly Ala Thr
675 680 685
Val Gly Ile Met Ile Gly Val Leu Val Gly Val Ala Leu Ile
690 695 700
&lt;210&gt; 62
&lt;211&gt; 2322
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 62
Met Gln Ser Gly Pro Arg Pro Pro Leu Pro Ala Pro Gly Leu Ala Leu
1 5 10 15
Ala Leu Thr Leu Thr Met Leu Ala Arg Leu Ala Ser Ala Ala Ser Phe
20 25 30
Phe Gly Glu Asn His Leu Glu Val Pro Val Ala Thr Ala Leu Thr Asp
35 40 45
Ile Asp Leu Gln Leu Gln Phe Ser Thr Ser Gln Pro Glu Ala Leu Leu
50 55 60
Leu Leu Ala Ala Gly Pro Ala Asp His Leu Leu Leu Gln Leu Tyr Ser
65 70 75 80
Gly Arg Leu Gln Val Arg Leu Val Leu Gly Gln Glu Glu Leu Arg Leu
85 90 95
Gln Thr Pro Ala Glu Thr Leu Leu Ser Asp Ser Ile Pro His Thr Val
100 105 110
Val Leu Thr Val Val Glu Gly Trp Ala Thr Leu Ser Val Asp Gly Phe
115 120 125
Leu Asn Ala Ser Ser Ala Val Pro Gly Ala Pro Leu Glu Val Pro Tyr
130 135 140
Gly Leu Phe Val Gly Gly Thr Gly Thr Leu Gly Leu Pro Tyr Leu Arg
145 150 155 160
Gly Thr Ser Arg Pro Leu Arg Gly Cys Leu His Ala Ala Thr Leu Asn
165 170 175
Gly Arg Ser Leu Leu Arg Pro Leu Thr Pro Asp Val His Glu Gly Cys
180 185 190
Ala Glu Glu Phe Ser Ala Ser Asp Asp Val Ala Leu Gly Phe Ser Gly
195 200 205
Pro His Ser Leu Ala Ala Phe Pro Ala Trp Gly Thr Gln Asp Glu Gly
210 215 220
Thr Leu Glu Phe Thr Leu Thr Thr Gln Ser Arg Gln Ala Pro Leu Ala
225 230 235 240
Phe Gln Ala Gly Gly Arg Arg Gly Asp Phe Ile Tyr Val Asp Ile Phe
245 250 255
Glu Gly His Leu Arg Ala Val Val Glu Lys Gly Gln Gly Thr Val Leu
260 265 270
Leu His Asn Ser Val Pro Val Ala Asp Gly Gln Pro His Glu Val Ser
275 280 285
Val His Ile Asn Ala His Arg Leu Glu Ile Ser Val Asp Gln Tyr Pro
290 295 300
Thr His Thr Ser Asn Arg Gly Val Leu Ser Tyr Leu Glu Pro Arg Gly
305 310 315 320
Ser Leu Leu Leu Gly Gly Leu Asp Ala Glu Ala Ser Arg His Leu Gln
325 330 335
Glu His Arg Leu Gly Leu Thr Pro Glu Ala Thr Asn Ala Ser Leu Leu
340 345 350
Gly Cys Met Glu Asp Leu Ser Val Asn Gly Gln Arg Arg Gly Leu Arg
355 360 365
Glu Ala Leu Leu Thr Arg Asn Met Ala Ala Gly Cys Arg Leu Glu Glu
370 375 380
Glu Glu Tyr Glu Asp Asp Ala Tyr Gly His Tyr Glu Ala Phe Ser Thr
385 390 395 400
Leu Ala Pro Glu Ala Trp Pro Ala Met Glu Leu Pro Glu Pro Cys Val
405 410 415
Pro Glu Pro Gly Leu Pro Pro Val Phe Ala Asn Phe Thr Gln Leu Leu
420 425 430
Thr Ile Ser Pro Leu Val Val Ala Glu Gly Gly Thr Ala Trp Leu Glu
435 440 445
Trp Arg His Val Gln Pro Thr Leu Asp Leu Met Glu Ala Glu Leu Arg
450 455 460
Lys Ser Gln Val Leu Phe Ser Val Thr Arg Gly Ala Arg His Gly Glu
465 470 475 480
Leu Glu Leu Asp Ile Pro Gly Ala Gln Ala Arg Lys Met Phe Thr Leu
485 490 495
Leu Asp Val Val Asn Arg Lys Ala Arg Phe Ile His Asp Gly Ser Glu
500 505 510
Asp Thr Ser Asp Gln Leu Val Leu Glu Val Ser Val Thr Ala Arg Val
515 520 525
Pro Met Pro Ser Cys Leu Arg Arg Gly Gln Thr Tyr Leu Leu Pro Ile
530 535 540
Gln Val Asn Pro Val Asn Asp Pro Pro His Ile Ile Phe Pro His Gly
545 550 555 560
Ser Leu Met Val Ile Leu Glu His Thr Gln Lys Pro Leu Gly Pro Glu
565 570 575
Val Phe Gln Ala Tyr Asp Pro Asp Ser Ala Cys Glu Gly Leu Thr Phe
580 585 590
Gln Val Leu Gly Thr Ser Ser Gly Leu Pro Val Glu Arg Arg Asp Gln
595 600 605
Pro Gly Glu Pro Ala Thr Glu Phe Ser Cys Arg Glu Leu Glu Ala Gly
610 615 620
Ser Leu Val Tyr Val His Arg Gly Gly Pro Ala Gln Asp Leu Thr Phe
625 630 635 640
Arg Val Ser Asp Gly Leu Gln Ala Ser Pro Pro Ala Thr Leu Lys Val
645 650 655
Val Ala Ile Arg Pro Ala Ile Gln Ile His Arg Ser Thr Gly Leu Arg
660 665 670
Leu Ala Gln Gly Ser Ala Met Pro Ile Leu Pro Ala Asn Leu Ser Val
675 680 685
Glu Thr Asn Ala Val Gly Gln Asp Val Ser Val Leu Phe Arg Val Thr
690 695 700
Gly Ala Leu Gln Phe Gly Glu Leu Gln Lys Gln Gly Ala Gly Gly Val
705 710 715 720
Glu Gly Ala Glu Trp Trp Ala Thr Gln Ala Phe His Gln Arg Asp Val
725 730 735
Glu Gln Gly Arg Val Arg Tyr Leu Ser Thr Asp Pro Gln His His Ala
740 745 750
Tyr Asp Thr Val Glu Asn Leu Ala Leu Glu Val Gln Val Gly Gln Glu
755 760 765
Ile Leu Ser Asn Leu Ser Phe Pro Val Thr Ile Gln Arg Ala Thr Val
770 775 780
Trp Met Leu Arg Leu Glu Pro Leu His Thr Gln Asn Thr Gln Gln Glu
785 790 795 800
Thr Leu Thr Thr Ala His Leu Glu Ala Thr Leu Glu Glu Ala Gly Pro
805 810 815
Ser Pro Pro Thr Phe His Tyr Glu Val Val Gln Ala Pro Arg Lys Gly
820 825 830
Asn Leu Gln Leu Gln Gly Thr Arg Leu Ser Asp Gly Gln Gly Phe Thr
835 840 845
Gln Asp Asp Ile Gln Ala Gly Arg Val Thr Tyr Gly Ala Thr Ala Arg
850 855 860
Ala Ser Glu Ala Val Glu Asp Thr Phe Arg Phe Arg Val Thr Ala Pro
865 870 875 880
Pro Tyr Phe Ser Pro Leu Tyr Thr Phe Pro Ile His Ile Gly Gly Asp
885 890 895
Pro Asp Ala Pro Val Leu Thr Asn Val Leu Leu Val Val Pro Glu Gly
900 905 910
Gly Glu Gly Val Leu Ser Ala Asp His Leu Phe Val Lys Ser Leu Asn
915 920 925
Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Glu Val Met Glu Arg Pro Arg His Gly Arg
930 935 940
Leu Ala Trp Arg Gly Thr Gln Asp Lys Thr Thr Met Val Thr Ser Phe
945 950 955 960
Thr Asn Glu Asp Leu Leu Arg Gly Arg Leu Val Tyr Gln His Asp Asp
965 970 975
Ser Glu Thr Thr Glu Asp Asp Ile Pro Phe Val Ala Thr Arg Gln Gly
980 985 990
Glu Ser Ser Gly Asp Met Ala Trp Glu Glu Val Arg Gly Val Phe Arg
995 1000 1005
Val Ala Ile Gln Pro Val Asn Asp His Ala Pro Val Gln Thr Ile
1010 1015 1020
Ser Arg Ile Phe His Val Ala Arg Gly Gly Arg Arg Leu Leu Thr
1025 1030 1035
Thr Asp Asp Val Ala Phe Ser Asp Ala Asp Ser Gly Phe Ala Asp
1040 1045 1050
Ala Gln Leu Val Leu Thr Arg Lys Asp Leu Leu Phe Gly Ser Ile
1055 1060 1065
Val Ala Val Asp Glu Pro Thr Arg Pro Ile Tyr Arg Phe Thr Gln
1070 1075 1080
Glu Asp Leu Arg Lys Arg Arg Val Leu Phe Val His Ser Gly Ala
1085 1090 1095
Asp Arg Gly Trp Ile Gln Leu Gln Val Ser Asp Gly Gln His Gln
1100 1105 1110
Ala Thr Ala Leu Leu Glu Val Gln Ala Ser Glu Pro Tyr Leu Arg
1115 1120 1125
Val Ala Asn Gly Ser Ser Leu Val Val Pro Gln Gly Gly Gln Gly
1130 1135 1140
Thr Ile Asp Thr Ala Val Leu His Leu Asp Thr Asn Leu Asp Ile
1145 1150 1155
Arg Ser Gly Asp Glu Val His Tyr His Val Thr Ala Gly Pro Arg
1160 1165 1170
Trp Gly Gln Leu Val Arg Ala Gly Gln Pro Ala Thr Ala Phe Ser
1175 1180 1185
Gln Gln Asp Leu Leu Asp Gly Ala Val Leu Tyr Ser His Asn Gly
1190 1195 1200
Ser Leu Ser Pro Arg Asp Thr Met Ala Phe Ser Val Glu Ala Gly
1205 1210 1215
Pro Val His Thr Asp Ala Thr Leu Gln Val Thr Ile Ala Leu Glu
1220 1225 1230
Gly Pro Leu Ala Pro Leu Lys Leu Val Arg His Lys Lys Ile Tyr
1235 1240 1245
Val Phe Gln Gly Glu Ala Ala Glu Ile Arg Arg Asp Gln Leu Glu
1250 1255 1260
Ala Ala Gln Glu Ala Val Pro Pro Ala Asp Ile Val Phe Ser Val
1265 1270 1275
Lys Ser Pro Pro Ser Ala Gly Tyr Leu Val Met Val Ser Arg Gly
1280 1285 1290
Ala Leu Ala Asp Glu Pro Pro Ser Leu Asp Pro Val Gln Ser Phe
1295 1300 1305
Ser Gln Glu Ala Val Asp Thr Gly Arg Val Leu Tyr Leu His Ser
1310 1315 1320
Arg Pro Glu Ala Trp Ser Asp Ala Phe Ser Leu Asp Val Ala Ser
1325 1330 1335
Gly Leu Gly Ala Pro Leu Glu Gly Val Leu Val Glu Leu Glu Val
1340 1345 1350
Leu Pro Ala Ala Ile Pro Leu Glu Ala Gln Asn Phe Ser Val Pro
1355 1360 1365
Glu Gly Gly Ser Leu Thr Leu Ala Pro Pro Leu Leu Arg Val Ser
1370 1375 1380
Gly Pro Tyr Phe Pro Thr Leu Leu Gly Leu Ser Leu Gln Val Leu
1385 1390 1395
Glu Pro Pro Gln His Gly Ala Leu Gln Lys Glu Asp Gly Pro Gln
1400 1405 1410
Ala Arg Thr Leu Ser Ala Phe Ser Trp Arg Met Val Glu Glu Gln
1415 1420 1425
Leu Ile Arg Tyr Val His Asp Gly Ser Glu Thr Leu Thr Asp Ser
1430 1435 1440
Phe Val Leu Met Ala Asn Ala Ser Glu Met Asp Arg Gln Ser His
1445 1450 1455
Pro Val Ala Phe Thr Val Thr Val Leu Pro Val Asn Asp Gln Pro
1460 1465 1470
Pro Ile Leu Thr Thr Asn Thr Gly Leu Gln Met Trp Glu Gly Ala
1475 1480 1485
Thr Ala Pro Ile Pro Ala Glu Ala Leu Arg Ser Thr Asp Gly Asp
1490 1495 1500
Ser Gly Ser Glu Asp Leu Val Tyr Thr Ile Glu Gln Pro Ser Asn
1505 1510 1515
Gly Arg Val Val Leu Arg Gly Ala Pro Gly Thr Glu Val Arg Ser
1520 1525 1530
Phe Thr Gln Ala Gln Leu Asp Gly Gly Leu Val Leu Phe Ser His
1535 1540 1545
Arg Gly Thr Leu Asp Gly Gly Phe Arg Phe Arg Leu Ser Asp Gly
1550 1555 1560
Glu His Thr Ser Pro Gly His Phe Phe Arg Val Thr Ala Gln Lys
1565 1570 1575
Gln Val Leu Leu Ser Leu Lys Gly Ser Gln Thr Leu Thr Val Cys
1580 1585 1590
Pro Gly Ser Val Gln Pro Leu Ser Ser Gln Thr Leu Arg Ala Ser
1595 1600 1605
Ser Ser Ala Gly Thr Asp Pro Gln Leu Leu Leu Tyr Arg Val Val
1610 1615 1620
Arg Gly Pro Gln Leu Gly Arg Leu Phe His Ala Gln Gln Asp Ser
1625 1630 1635
Thr Gly Glu Ala Leu Val Asn Phe Thr Gln Ala Glu Val Tyr Ala
1640 1645 1650
Gly Asn Ile Leu Tyr Glu His Glu Met Pro Pro Glu Pro Phe Trp
1655 1660 1665
Glu Ala His Asp Thr Leu Glu Leu Gln Leu Ser Ser Pro Pro Ala
1670 1675 1680
Arg Asp Val Ala Ala Thr Leu Ala Val Ala Val Ser Phe Glu Ala
1685 1690 1695
Ala Cys Pro Gln Arg Pro Ser His Leu Trp Lys Asn Lys Gly Leu
1700 1705 1710
Trp Val Pro Glu Gly Gln Arg Ala Arg Ile Thr Val Ala Ala Leu
1715 1720 1725
Asp Ala Ser Asn Leu Leu Ala Ser Val Pro Ser Pro Gln Arg Ser
1730 1735 1740
Glu His Asp Val Leu Phe Gln Val Thr Gln Phe Pro Ser Arg Gly
1745 1750 1755
Gln Leu Leu Val Ser Glu Glu Pro Leu His Ala Gly Gln Pro His
1760 1765 1770
Phe Leu Gln Ser Gln Leu Ala Ala Gly Gln Leu Val Tyr Ala His
1775 1780 1785
Gly Gly Gly Gly Thr Gln Gln Asp Gly Phe His Phe Arg Ala His
1790 1795 1800
Leu Gln Gly Pro Ala Gly Ala Ser Val Ala Gly Pro Gln Thr Ser
1805 1810 1815
Glu Ala Phe Ala Ile Thr Val Arg Asp Val Asn Glu Arg Pro Pro
1820 1825 1830
Gln Pro Gln Ala Ser Val Pro Leu Arg Leu Thr Arg Gly Ser Arg
1835 1840 1845
Ala Pro Ile Ser Arg Ala Gln Leu Ser Val Val Asp Pro Asp Ser
1850 1855 1860
Ala Pro Gly Glu Ile Glu Tyr Glu Val Gln Arg Ala Pro His Asn
1865 1870 1875
Gly Phe Leu Ser Leu Val Gly Gly Gly Leu Gly Pro Val Thr Arg
1880 1885 1890
Phe Thr Gln Ala Asp Val Asp Ser Gly Arg Leu Ala Phe Val Ala
1895 1900 1905
Asn Gly Ser Ser Val Ala Gly Ile Phe Gln Leu Ser Met Ser Asp
1910 1915 1920
Gly Ala Ser Pro Pro Leu Pro Met Ser Leu Ala Val Asp Ile Leu
1925 1930 1935
Pro Ser Ala Ile Glu Val Gln Leu Arg Ala Pro Leu Glu Val Pro
1940 1945 1950
Gln Ala Leu Gly Arg Ser Ser Leu Ser Gln Gln Gln Leu Arg Val
1955 1960 1965
Val Ser Asp Arg Glu Glu Pro Glu Ala Ala Tyr Arg Leu Ile Gln
1970 1975 1980
Gly Pro Gln Tyr Gly His Leu Leu Val Gly Gly Arg Pro Thr Ser
1985 1990 1995
Ala Phe Ser Gln Phe Gln Ile Asp Gln Gly Glu Val Val Phe Ala
2000 2005 2010
Phe Thr Asn Phe Ser Ser Ser His Asp His Phe Arg Val Leu Ala
2015 2020 2025
Leu Ala Arg Gly Val Asn Ala Ser Ala Val Val Asn Val Thr Val
2030 2035 2040
Arg Ala Leu Leu His Val Trp Ala Gly Gly Pro Trp Pro Gln Gly
2045 2050 2055
Ala Thr Leu Arg Leu Asp Pro Thr Val Leu Asp Ala Gly Glu Leu
2060 2065 2070
Ala Asn Arg Thr Gly Ser Val Pro Arg Phe Arg Leu Leu Glu Gly
2075 2080 2085
Pro Arg His Gly Arg Val Val Arg Val Pro Arg Ala Arg Thr Glu
2090 2095 2100
Pro Gly Gly Ser Gln Leu Val Glu Gln Phe Thr Gln Gln Asp Leu
2105 2110 2115
Glu Asp Gly Arg Leu Gly Leu Glu Val Gly Arg Pro Glu Gly Arg
2120 2125 2130
Ala Pro Gly Pro Ala Gly Asp Ser Leu Thr Leu Glu Leu Trp Ala
2135 2140 2145
Gln Gly Val Pro Pro Ala Val Ala Ser Leu Asp Phe Ala Thr Glu
2150 2155 2160
Pro Tyr Asn Ala Ala Arg Pro Tyr Ser Val Ala Leu Leu Ser Val
2165 2170 2175
Pro Glu Ala Ala Arg Thr Glu Ala Gly Lys Pro Glu Ser Ser Thr
2180 2185 2190
Pro Thr Gly Glu Pro Gly Pro Met Ala Ser Ser Pro Glu Pro Ala
2195 2200 2205
Val Ala Lys Gly Gly Phe Leu Ser Phe Leu Glu Ala Asn Met Phe
2210 2215 2220
Ser Val Ile Ile Pro Met Cys Leu Val Leu Leu Leu Leu Ala Leu
2225 2230 2235
Ile Leu Pro Leu Leu Phe Tyr Leu Arg Lys Arg Asn Lys Thr Gly
2240 2245 2250
Lys His Asp Val Gln Val Leu Thr Ala Lys Pro Arg Asn Gly Leu
2255 2260 2265
Ala Gly Asp Thr Glu Thr Phe Arg Lys Val Glu Pro Gly Gln Ala
2270 2275 2280
Ile Pro Leu Thr Ala Val Pro Gly Gln Gly Pro Pro Pro Gly Gly
2285 2290 2295
Gln Pro Asp Pro Glu Leu Leu Gln Phe Cys Arg Thr Pro Asn Pro
2300 2305 2310
Ala Leu Lys Asn Gly Gln Tyr Trp Val
2315 2320
&lt;210&gt; 63
&lt;211&gt; 1209
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 63
Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala Ala
1 5 10 15
Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln Gly
20 25 30
Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln Leu Gly Thr Phe Glu Asp His Phe Leu
35 40 45
Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn Asn Cys Glu Val Val Leu Gly Asn Leu
50 55 60
Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg Asn Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys Thr
65 70 75 80
Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr Val Leu Ile Ala Leu Asn Thr Val Glu
85 90 95
Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu Gln Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr Tyr
100 105 110
Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala Val Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn Lys
115 120 125
Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro Met Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu His
130 135 140
Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn Asn Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu Ser
145 150 155 160
Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val Ser Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met Ser
165 170 175
Met Asp Phe Gln Asn His Leu Gly Ser Cys Gln Lys Cys Asp Pro Ser
180 185 190
Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp Gly Ala Gly Glu Glu Asn Cys Gln Lys
195 200 205
Leu Thr Lys Ile Ile Cys Ala Gln Gln Cys Ser Gly Arg Cys Arg Gly
210 215 220
Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys His Asn Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr
225 230 235 240
Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys Leu Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp Glu
245 250 255
Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys Pro Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro Thr
260 265 270
Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly Ala
275 280 285
Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro Arg Asn Tyr Val Val Thr Asp His Gly
290 295 300
Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu Asp
305 310 315 320
Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val Cys
325 330 335
Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala
340 345 350
Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu
355 360 365
His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro
370 375 380
Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile
385 390 395 400
Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu
405 410 415
His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His
420 425 430
Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly
435 440 445
Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly
450 455 460
Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe
465 470 475 480
Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn
485 490 495
Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu
500 505 510
Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val
515 520 525
Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu
530 535 540
Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu
545 550 555 560
Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp
565 570 575
Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys
580 585 590
Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys
595 600 605
Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr
610 615 620
Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro
625 630 635 640
Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu
645 650 655
Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met Arg Arg Arg His Ile
660 665 670
Val Arg Lys Arg Thr Leu Arg Arg Leu Leu Gln Glu Arg Glu Leu Val
675 680 685
Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly Glu Ala Pro Asn Gln Ala Leu Leu Arg
690 695 700
Ile Leu Lys Glu Thr Glu Phe Lys Lys Ile Lys Val Leu Gly Ser Gly
705 710 715 720
Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Leu Trp Ile Pro Glu Gly Glu Lys
725 730 735
Val Lys Ile Pro Val Ala Ile Lys Glu Leu Arg Glu Ala Thr Ser Pro
740 745 750
Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Ser Val
755 760 765
Asp Asn Pro His Val Cys Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr
770 775 780
Val Gln Leu Ile Thr Gln Leu Met Pro Phe Gly Cys Leu Leu Asp Tyr
785 790 795 800
Val Arg Glu His Lys Asp Asn Ile Gly Ser Gln Tyr Leu Leu Asn Trp
805 810 815
Cys Val Gln Ile Ala Lys Gly Met Asn Tyr Leu Glu Asp Arg Arg Leu
820 825 830
Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Thr Pro Gln
835 840 845
His Val Lys Ile Thr Asp Phe Gly Leu Ala Lys Leu Leu Gly Ala Glu
850 855 860
Glu Lys Glu Tyr His Ala Glu Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met
865 870 875 880
Ala Leu Glu Ser Ile Leu His Arg Ile Tyr Thr His Gln Ser Asp Val
885 890 895
Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ser Lys
900 905 910
Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala Ser Glu Ile Ser Ser Ile Leu Glu Lys
915 920 925
Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met
930 935 940
Ile Met Val Lys Cys Trp Met Ile Asp Ala Asp Ser Arg Pro Lys Phe
945 950 955 960
Arg Glu Leu Ile Ile Glu Phe Ser Lys Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg
965 970 975
Tyr Leu Val Ile Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro Thr
980 985 990
Asp Ser Asn Phe Tyr Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp Asp
995 1000 1005
Val Val Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe Phe
1010 1015 1020
Ser Ser Pro Ser Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu Ser Ser Leu Ser
1025 1030 1035
Ala Thr Ser Asn Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn Gly
1040 1045 1050
Leu Gln Ser Cys Pro Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg Tyr
1055 1060 1065
Ser Ser Asp Pro Thr Gly Ala Leu Thr Glu Asp Ser Ile Asp Asp
1070 1075 1080
Thr Phe Leu Pro Val Pro Glu Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro Lys
1085 1090 1095
Arg Pro Ala Gly Ser Val Gln Asn Pro Val Tyr His Asn Gln Pro
1100 1105 1110
Leu Asn Pro Ala Pro Ser Arg Asp Pro His Tyr Gln Asp Pro His
1115 1120 1125
Ser Thr Ala Val Gly Asn Pro Glu Tyr Leu Asn Thr Val Gln Pro
1130 1135 1140
Thr Cys Val Asn Ser Thr Phe Asp Ser Pro Ala His Trp Ala Gln
1145 1150 1155
Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu Asp Asn Pro Asp Tyr Gln Gln
1160 1165 1170
Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro Asn Gly Ile Phe Lys Gly
1175 1180 1185
Ser Thr Ala Glu Asn Ala Glu Tyr Leu Arg Val Ala Pro Gln Ser
1190 1195 1200
Ser Glu Phe Ile Gly Ala
1205
&lt;210&gt; 64
&lt;211&gt; 556
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 64
Met Pro Pro Pro Arg Leu Leu Phe Phe Leu Leu Phe Leu Thr Pro Met
1 5 10 15
Glu Val Arg Pro Glu Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp
20 25 30
Asn Ala Val Leu Gln Cys Leu Lys Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln
35 40 45
Gln Leu Thr Trp Ser Arg Glu Ser Pro Leu Lys Pro Phe Leu Lys Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Leu Pro Gly Leu Gly Ile His Met Arg Pro Leu Ala Ile
65 70 75 80
Trp Leu Phe Ile Phe Asn Val Ser Gln Gln Met Gly Gly Phe Tyr Leu
85 90 95
Cys Gln Pro Gly Pro Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr
100 105 110
Val Asn Val Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp
115 120 125
Leu Gly Gly Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro
130 135 140
Ser Ser Pro Ser Gly Lys Leu Met Ser Pro Lys Leu Tyr Val Trp Ala
145 150 155 160
Lys Asp Arg Pro Glu Ile Trp Glu Gly Glu Pro Pro Cys Leu Pro Pro
165 170 175
Arg Asp Ser Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro
180 185 190
Gly Ser Thr Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser
195 200 205
Arg Gly Pro Leu Ser Trp Thr His Val His Pro Lys Gly Pro Lys Ser
210 215 220
Leu Leu Ser Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Ala Arg Asp Met Trp
225 230 235 240
Val Met Glu Thr Gly Leu Leu Leu Pro Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala
245 250 255
Gly Lys Tyr Tyr Cys His Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu
260 265 270
Glu Ile Thr Ala Arg Pro Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly
275 280 285
Gly Trp Lys Val Ser Ala Val Thr Leu Ala Tyr Leu Ile Phe Cys Leu
290 295 300
Cys Ser Leu Val Gly Ile Leu His Leu Gln Arg Ala Leu Val Leu Arg
305 310 315 320
Arg Lys Arg Lys Arg Met Thr Asp Pro Thr Arg Arg Phe Phe Lys Val
325 330 335
Thr Pro Pro Pro Gly Ser Gly Pro Gln Asn Gln Tyr Gly Asn Val Leu
340 345 350
Ser Leu Pro Thr Pro Thr Ser Gly Leu Gly Arg Ala Gln Arg Trp Ala
355 360 365
Ala Gly Leu Gly Gly Thr Ala Pro Ser Tyr Gly Asn Pro Ser Ser Asp
370 375 380
Val Gln Ala Asp Gly Ala Leu Gly Ser Arg Ser Pro Pro Gly Val Gly
385 390 395 400
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Glu Gly Tyr Glu Glu Pro Asp Ser Glu Glu
405 410 415
Asp Ser Glu Phe Tyr Glu Asn Asp Ser Asn Leu Gly Gln Asp Gln Leu
420 425 430
Ser Gln Asp Gly Ser Gly Tyr Glu Asn Pro Glu Asp Glu Pro Leu Gly
435 440 445
Pro Glu Asp Glu Asp Ser Phe Ser Asn Ala Glu Ser Tyr Glu Asn Glu
450 455 460
Asp Glu Glu Leu Thr Gln Pro Val Ala Arg Thr Met Asp Phe Leu Ser
465 470 475 480
Pro His Gly Ser Ala Trp Asp Pro Ser Arg Glu Ala Thr Ser Leu Gly
485 490 495
Ser Gln Ser Tyr Glu Asp Met Arg Gly Ile Leu Tyr Ala Ala Pro Gln
500 505 510
Leu Arg Ser Ile Arg Gly Gln Pro Gly Pro Asn His Glu Glu Asp Ala
515 520 525
Asp Ser Tyr Glu Asn Met Asp Asn Pro Asp Gly Pro Asp Pro Ala Trp
530 535 540
Gly Gly Gly Gly Arg Met Gly Thr Trp Ser Thr Arg
545 550 555
&lt;210&gt; 65
&lt;211&gt; 297
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 65
Met Thr Thr Pro Arg Asn Ser Val Asn Gly Thr Phe Pro Ala Glu Pro
1 5 10 15
Met Lys Gly Pro Ile Ala Met Gln Ser Gly Pro Lys Pro Leu Phe Arg
20 25 30
Arg Met Ser Ser Leu Val Gly Pro Thr Gln Ser Phe Phe Met Arg Glu
35 40 45
Ser Lys Thr Leu Gly Ala Val Gln Ile Met Asn Gly Leu Phe His Ile
50 55 60
Ala Leu Gly Gly Leu Leu Met Ile Pro Ala Gly Ile Tyr Ala Pro Ile
65 70 75 80
Cys Val Thr Val Trp Tyr Pro Leu Trp Gly Gly Ile Met Tyr Ile Ile
85 90 95
Ser Gly Ser Leu Leu Ala Ala Thr Glu Lys Asn Ser Arg Lys Cys Leu
100 105 110
Val Lys Gly Lys Met Ile Met Asn Ser Leu Ser Leu Phe Ala Ala Ile
115 120 125
Ser Gly Met Ile Leu Ser Ile Met Asp Ile Leu Asn Ile Lys Ile Ser
130 135 140
His Phe Leu Lys Met Glu Ser Leu Asn Phe Ile Arg Ala His Thr Pro
145 150 155 160
Tyr Ile Asn Ile Tyr Asn Cys Glu Pro Ala Asn Pro Ser Glu Lys Asn
165 170 175
Ser Pro Ser Thr Gln Tyr Cys Tyr Ser Ile Gln Ser Leu Phe Leu Gly
180 185 190
Ile Leu Ser Val Met Leu Ile Phe Ala Phe Phe Gln Glu Leu Val Ile
195 200 205
Ala Gly Ile Val Glu Asn Glu Trp Lys Arg Thr Cys Ser Arg Pro Lys
210 215 220
Ser Asn Ile Val Leu Leu Ser Ala Glu Glu Lys Lys Glu Gln Thr Ile
225 230 235 240
Glu Ile Lys Glu Glu Val Val Gly Leu Thr Glu Thr Ser Ser Gln Pro
245 250 255
Lys Asn Glu Glu Asp Ile Glu Ile Ile Pro Ile Gln Glu Glu Glu Glu
260 265 270
Glu Glu Thr Glu Thr Asn Phe Pro Glu Pro Pro Gln Asp Gln Glu Ser
275 280 285
Ser Pro Ile Glu Asn Asp Ser Ser Pro
290 295
&lt;210&gt; 66
&lt;211&gt; 364
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 66
Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala
1 5 10 15
Met Asp Pro Asn Phe Trp Leu Gln Val Gln Glu Ser Val Thr Val Gln
20 25 30
Glu Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His Pro Ile Pro
35 40 45
Tyr Tyr Asp Lys Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Glu Gly
50 55 60
Ala Ile Ile Ser Arg Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys Leu Asp Gln
65 70 75 80
Glu Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Pro
85 90 95
Ser Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg Arg Arg Asp
100 105 110
Asn Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ser
115 120 125
Tyr Lys Ser Pro Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu Thr His Arg
130 135 140
Pro Lys Ile Leu Ile Pro Gly Thr Leu Glu Pro Gly His Ser Lys Asn
145 150 155 160
Leu Thr Cys Ser Val Ser Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile
165 170 175
Phe Ser Trp Leu Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Pro Arg Thr Thr
180 185 190
His Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr
195 200 205
Asn Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Ala Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu
210 215 220
Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val Thr Tyr Val Pro Gln Asn Pro Thr Thr
225 230 235 240
Gly Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Glu Thr Arg Ala Gly
245 250 255
Val Val His Gly Ala Ile Gly Gly Ala Gly Val Thr Ala Leu Leu Ala
260 265 270
Leu Cys Leu Cys Leu Ile Phe Phe Ile Val Lys Thr His Arg Arg Lys
275 280 285
Ala Ala Arg Thr Ala Val Gly Arg Asn Asp Thr His Pro Thr Thr Gly
290 295 300
Ser Ala Ser Pro Lys His Gln Lys Lys Ser Lys Leu His Gly Pro Thr
305 310 315 320
Glu Thr Ser Ser Cys Ser Gly Ala Ala Pro Thr Val Glu Met Asp Glu
325 330 335
Glu Leu His Tyr Ala Ser Leu Asn Phe His Gly Met Asn Pro Ser Lys
340 345 350
Asp Thr Ser Thr Glu Tyr Ser Glu Val Arg Thr Gln
355 360
&lt;210&gt; 67
&lt;211&gt; 205
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 67
Met Thr Pro Pro Glu Arg Leu Phe Leu Pro Arg Val Cys Gly Thr Thr
1 5 10 15
Leu His Leu Leu Leu Leu Gly Leu Leu Leu Val Leu Leu Pro Gly Ala
20 25 30
Gln Gly Leu Pro Gly Val Gly Leu Thr Pro Ser Ala Ala Gln Thr Ala
35 40 45
Arg Gln His Pro Lys Met His Leu Ala His Ser Thr Leu Lys Pro Ala
50 55 60
Ala His Leu Ile Gly Asp Pro Ser Lys Gln Asn Ser Leu Leu Trp Arg
65 70 75 80
Ala Asn Thr Asp Arg Ala Phe Leu Gln Asp Gly Phe Ser Leu Ser Asn
85 90 95
Asn Ser Leu Leu Val Pro Thr Ser Gly Ile Tyr Phe Val Tyr Ser Gln
100 105 110
Val Val Phe Ser Gly Lys Ala Tyr Ser Pro Lys Ala Thr Ser Ser Pro
115 120 125
Leu Tyr Leu Ala His Glu Val Gln Leu Phe Ser Ser Gln Tyr Pro Phe
130 135 140
His Val Pro Leu Leu Ser Ser Gln Lys Met Val Tyr Pro Gly Leu Gln
145 150 155 160
Glu Pro Trp Leu His Ser Met Tyr His Gly Ala Ala Phe Gln Leu Thr
165 170 175
Gln Gly Asp Gln Leu Ser Thr His Thr Asp Gly Ile Pro His Leu Val
180 185 190
Leu Ser Pro Ser Thr Val Phe Phe Gly Ala Phe Ala Leu
195 200 205
&lt;210&gt; 68
&lt;211&gt; 233
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 68
Met Ser Thr Glu Ser Met Ile Arg Asp Val Glu Leu Ala Glu Glu Ala
1 5 10 15
Leu Pro Lys Lys Thr Gly Gly Pro Gln Gly Ser Arg Arg Cys Leu Phe
20 25 30
Leu Ser Leu Phe Ser Phe Leu Ile Val Ala Gly Ala Thr Thr Leu Phe
35 40 45
Cys Leu Leu His Phe Gly Val Ile Gly Pro Gln Arg Glu Glu Phe Pro
50 55 60
Arg Asp Leu Ser Leu Ile Ser Pro Leu Ala Gln Ala Val Arg Ser Ser
65 70 75 80
Ser Arg Thr Pro Ser Asp Lys Pro Val Ala His Val Val Ala Asn Pro
85 90 95
Gln Ala Glu Gly Gln Leu Gln Trp Leu Asn Arg Arg Ala Asn Ala Leu
100 105 110
Leu Ala Asn Gly Val Glu Leu Arg Asp Asn Gln Leu Val Val Pro Ser
115 120 125
Glu Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr Ser Gln Val Leu Phe Lys Gly Gln Gly
130 135 140
Cys Pro Ser Thr His Val Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala
145 150 155 160
Val Ser Tyr Gln Thr Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro
165 170 175
Cys Gln Arg Glu Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp Tyr Glu
180 185 190
Pro Ile Tyr Leu Gly Gly Val Phe Gln Leu Glu Lys Gly Asp Arg Leu
195 200 205
Ser Ala Glu Ile Asn Arg Pro Asp Tyr Leu Asp Phe Ala Glu Ser Gly
210 215 220
Gln Val Tyr Phe Gly Ile Ile Ala Leu
225 230
&lt;210&gt; 69
&lt;211&gt; 244
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 69
Met Gly Ala Leu Gly Leu Glu Gly Arg Gly Gly Arg Leu Gln Gly Arg
1 5 10 15
Gly Ser Leu Leu Leu Ala Val Ala Gly Ala Thr Ser Leu Val Thr Leu
20 25 30
Leu Leu Ala Val Pro Ile Thr Val Leu Ala Val Leu Ala Leu Val Pro
35 40 45
Gln Asp Gln Gly Gly Leu Val Thr Glu Thr Ala Asp Pro Gly Ala Gln
50 55 60
Ala Gln Gln Gly Leu Gly Phe Gln Lys Leu Pro Glu Glu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Thr Asp Leu Ser Pro Gly Leu Pro Ala Ala His Leu Ile Gly Ala Pro
85 90 95
Leu Lys Gly Gln Gly Leu Gly Trp Glu Thr Thr Lys Glu Gln Ala Phe
100 105 110
Leu Thr Ser Gly Thr Gln Phe Ser Asp Ala Glu Gly Leu Ala Leu Pro
115 120 125
Gln Asp Gly Leu Tyr Tyr Leu Tyr Cys Leu Val Gly Tyr Arg Gly Arg
130 135 140
Ala Pro Pro Gly Gly Gly Asp Pro Gln Gly Arg Ser Val Thr Leu Arg
145 150 155 160
Ser Ser Leu Tyr Arg Ala Gly Gly Ala Tyr Gly Pro Gly Thr Pro Glu
165 170 175
Leu Leu Leu Glu Gly Ala Glu Thr Val Thr Pro Val Leu Asp Pro Ala
180 185 190
Arg Arg Gln Gly Tyr Gly Pro Leu Trp Tyr Thr Ser Val Gly Phe Gly
195 200 205
Gly Leu Val Gln Leu Arg Arg Gly Glu Arg Val Tyr Val Asn Ile Ser
210 215 220
His Pro Asp Met Val Asp Phe Ala Arg Gly Lys Thr Phe Phe Gly Ala
225 230 235 240
Val Met Val Gly
&lt;210&gt; 70
&lt;211&gt; 183
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 70
Met Glu Arg Val Gln Pro Leu Glu Glu Asn Val Gly Asn Ala Ala Arg
1 5 10 15
Pro Arg Phe Glu Arg Asn Lys Leu Leu Leu Val Ala Ser Val Ile Gln
20 25 30
Gly Leu Gly Leu Leu Leu Cys Phe Thr Tyr Ile Cys Leu His Phe Ser
35 40 45
Ala Leu Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val
50 55 60
Gln Phe Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln
65 70 75 80
Lys Glu Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn
85 90 95
Cys Asp Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu
100 105 110
Val Asn Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln
115 120 125
Leu Lys Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr
130 135 140
Tyr Lys Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu
145 150 155 160
Asp Asp Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn
165 170 175
Pro Gly Glu Phe Cys Val Leu
180
&lt;210&gt; 71
&lt;211&gt; 261
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 71
Met Ile Glu Thr Tyr Asn Gln Thr Ser Pro Arg Ser Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Leu Pro Ile Ser Met Lys Ile Phe Met Tyr Leu Leu Thr Val Phe Leu
20 25 30
Ile Thr Gln Met Ile Gly Ser Ala Leu Phe Ala Val Tyr Leu His Arg
35 40 45
Arg Leu Asp Lys Ile Glu Asp Glu Arg Asn Leu His Glu Asp Phe Val
50 55 60
Phe Met Lys Thr Ile Gln Arg Cys Asn Thr Gly Glu Arg Ser Leu Ser
65 70 75 80
Leu Leu Asn Cys Glu Glu Ile Lys Ser Gln Phe Glu Gly Phe Val Lys
85 90 95
Asp Ile Met Leu Asn Lys Glu Glu Thr Lys Lys Glu Asn Ser Phe Glu
100 105 110
Met Gln Lys Gly Asp Gln Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser
115 120 125
Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly
130 135 140
Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln
145 150 155 160
Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr
165 170 175
Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser
180 185 190
Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala
195 200 205
Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His
210 215 220
Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn
225 230 235 240
Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe
245 250 255
Gly Leu Leu Lys Leu
260
&lt;210&gt; 72
&lt;211&gt; 281
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 72
Met Gln Gln Pro Phe Asn Tyr Pro Tyr Pro Gln Ile Tyr Trp Val Asp
1 5 10 15
Ser Ser Ala Ser Ser Pro Trp Ala Pro Pro Gly Thr Val Leu Pro Cys
20 25 30
Pro Thr Ser Val Pro Arg Arg Pro Gly Gln Arg Arg Pro Pro Pro Pro
35 40 45
Pro Pro Pro Pro Pro Leu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Leu Pro
50 55 60
Pro Leu Pro Leu Pro Pro Leu Lys Lys Arg Gly Asn His Ser Thr Gly
65 70 75 80
Leu Cys Leu Leu Val Met Phe Phe Met Val Leu Val Ala Leu Val Gly
85 90 95
Leu Gly Leu Gly Met Phe Gln Leu Phe His Leu Gln Lys Glu Leu Ala
100 105 110
Glu Leu Arg Glu Ser Thr Ser Gln Met His Thr Ala Ser Ser Leu Glu
115 120 125
Lys Gln Ile Gly His Pro Ser Pro Pro Pro Glu Lys Lys Glu Leu Arg
130 135 140
Lys Val Ala His Leu Thr Gly Lys Ser Asn Ser Arg Ser Met Pro Leu
145 150 155 160
Glu Trp Glu Asp Thr Tyr Gly Ile Val Leu Leu Ser Gly Val Lys Tyr
165 170 175
Lys Lys Gly Gly Leu Val Ile Asn Glu Thr Gly Leu Tyr Phe Val Tyr
180 185 190
Ser Lys Val Tyr Phe Arg Gly Gln Ser Cys Asn Asn Leu Pro Leu Ser
195 200 205
His Lys Val Tyr Met Arg Asn Ser Lys Tyr Pro Gln Asp Leu Val Met
210 215 220
Met Glu Gly Lys Met Met Ser Tyr Cys Thr Thr Gly Gln Met Trp Ala
225 230 235 240
Arg Ser Ser Tyr Leu Gly Ala Val Phe Asn Leu Thr Ser Ala Asp His
245 250 255
Leu Tyr Val Asn Val Ser Glu Leu Ser Leu Val Asn Phe Glu Glu Ser
260 265 270
Gln Thr Phe Phe Gly Leu Tyr Lys Leu
275 280
&lt;210&gt; 73
&lt;211&gt; 193
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 73
Met Pro Glu Glu Gly Ser Gly Cys Ser Val Arg Arg Arg Pro Tyr Gly
1 5 10 15
Cys Val Leu Arg Ala Ala Leu Val Pro Leu Val Ala Gly Leu Val Ile
20 25 30
Cys Leu Val Val Cys Ile Gln Arg Phe Ala Gln Ala Gln Gln Gln Leu
35 40 45
Pro Leu Glu Ser Leu Gly Trp Asp Val Ala Glu Leu Gln Leu Asn His
50 55 60
Thr Gly Pro Gln Gln Asp Pro Arg Leu Tyr Trp Gln Gly Gly Pro Ala
65 70 75 80
Leu Gly Arg Ser Phe Leu His Gly Pro Glu Leu Asp Lys Gly Gln Leu
85 90 95
Arg Ile His Arg Asp Gly Ile Tyr Met Val His Ile Gln Val Thr Leu
100 105 110
Ala Ile Cys Ser Ser Thr Thr Ala Ser Arg His His Pro Thr Thr Leu
115 120 125
Ala Val Gly Ile Cys Ser Pro Ala Ser Arg Ser Ile Ser Leu Leu Arg
130 135 140
Leu Ser Phe His Gln Gly Cys Thr Ile Ala Ser Gln Arg Leu Thr Pro
145 150 155 160
Leu Ala Arg Gly Asp Thr Leu Cys Thr Asn Leu Thr Gly Thr Leu Leu
165 170 175
Pro Ser Arg Asn Thr Asp Glu Thr Phe Phe Gly Val Gln Trp Val Arg
180 185 190
Pro
&lt;210&gt; 74
&lt;211&gt; 234
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 74
Met Asp Pro Gly Leu Gln Gln Ala Leu Asn Gly Met Ala Pro Pro Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ala Met His Val Pro Ala Gly Ser Val Ala Ser His Leu Gly
20 25 30
Thr Thr Ser Arg Ser Tyr Phe Tyr Leu Thr Thr Ala Thr Leu Ala Leu
35 40 45
Cys Leu Val Phe Thr Val Ala Thr Ile Met Val Leu Val Val Gln Arg
50 55 60
Thr Asp Ser Ile Pro Asn Ser Pro Asp Asn Val Pro Leu Lys Gly Gly
65 70 75 80
Asn Cys Ser Glu Asp Leu Leu Cys Ile Leu Lys Arg Ala Pro Phe Lys
85 90 95
Lys Ser Trp Ala Tyr Leu Gln Val Ala Lys His Leu Asn Lys Thr Lys
100 105 110
Leu Ser Trp Asn Lys Asp Gly Ile Leu His Gly Val Arg Tyr Gln Asp
115 120 125
Gly Asn Leu Val Ile Gln Phe Pro Gly Leu Tyr Phe Ile Ile Cys Gln
130 135 140
Leu Gln Phe Leu Val Gln Cys Pro Asn Asn Ser Val Asp Leu Lys Leu
145 150 155 160
Glu Leu Leu Ile Asn Lys His Ile Lys Lys Gln Ala Leu Val Thr Val
165 170 175
Cys Glu Ser Gly Met Gln Thr Lys His Val Tyr Gln Asn Leu Ser Gln
180 185 190
Phe Leu Leu Asp Tyr Leu Gln Val Asn Thr Thr Ile Ser Val Asn Val
195 200 205
Asp Thr Phe Gln Tyr Ile Asp Thr Ser Thr Phe Pro Leu Glu Asn Val
210 215 220
Leu Ser Ile Phe Leu Tyr Ser Asn Ser Asp
225 230
&lt;210&gt; 75
&lt;211&gt; 254
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 75
Met Glu Tyr Ala Ser Asp Ala Ser Leu Asp Pro Glu Ala Pro Trp Pro
1 5 10 15
Pro Ala Pro Arg Ala Arg Ala Cys Arg Val Leu Pro Trp Ala Leu Val
20 25 30
Ala Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ala Cys Ala Val Phe
35 40 45
Leu Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser
50 55 60
Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp
65 70 75 80
Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val
85 90 95
Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp
100 105 110
Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu
115 120 125
Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe
130 135 140
Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser
145 150 155 160
Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala
165 170 175
Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala
180 185 190
Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala
195 200 205
Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His
210 215 220
Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val
225 230 235 240
Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
245 250
&lt;210&gt; 76
&lt;211&gt; 281
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 76
Met Ala Met Met Glu Val Gln Gly Gly Pro Ser Leu Gly Gln Thr Cys
1 5 10 15
Val Leu Ile Val Ile Phe Thr Val Leu Leu Gln Ser Leu Cys Val Ala
20 25 30
Val Thr Tyr Val Tyr Phe Thr Asn Glu Leu Lys Gln Met Gln Asp Lys
35 40 45
Tyr Ser Lys Ser Gly Ile Ala Cys Phe Leu Lys Glu Asp Asp Ser Tyr
50 55 60
Trp Asp Pro Asn Asp Glu Glu Ser Met Asn Ser Pro Cys Trp Gln Val
65 70 75 80
Lys Trp Gln Leu Arg Gln Leu Val Arg Lys Met Ile Leu Arg Thr Ser
85 90 95
Glu Glu Thr Ile Ser Thr Val Gln Glu Lys Gln Gln Asn Ile Ser Pro
100 105 110
Leu Val Arg Glu Arg Gly Pro Gln Arg Val Ala Ala His Ile Thr Gly
115 120 125
Thr Arg Gly Arg Ser Asn Thr Leu Ser Ser Pro Asn Ser Lys Asn Glu
130 135 140
Lys Ala Leu Gly Arg Lys Ile Asn Ser Trp Glu Ser Ser Arg Ser Gly
145 150 155 160
His Ser Phe Leu Ser Asn Leu His Leu Arg Asn Gly Glu Leu Val Ile
165 170 175
His Glu Lys Gly Phe Tyr Tyr Ile Tyr Ser Gln Thr Tyr Phe Arg Phe
180 185 190
Gln Glu Glu Ile Lys Glu Asn Thr Lys Asn Asp Lys Gln Met Val Gln
195 200 205
Tyr Ile Tyr Lys Tyr Thr Ser Tyr Pro Asp Pro Ile Leu Leu Met Lys
210 215 220
Ser Ala Arg Asn Ser Cys Trp Ser Lys Asp Ala Glu Tyr Gly Leu Tyr
225 230 235 240
Ser Ile Tyr Gln Gly Gly Ile Phe Glu Leu Lys Glu Asn Asp Arg Ile
245 250 255
Phe Val Ser Val Thr Asn Glu His Leu Ile Asp Met Asp His Glu Ala
260 265 270
Ser Phe Phe Gly Ala Phe Leu Val Gly
275 280
&lt;210&gt; 77
&lt;211&gt; 317
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 77
Met Arg Arg Ala Ser Arg Asp Tyr Thr Lys Tyr Leu Arg Gly Ser Glu
1 5 10 15
Glu Met Gly Gly Gly Pro Gly Ala Pro His Glu Gly Pro Leu His Ala
20 25 30
Pro Pro Pro Pro Ala Pro His Gln Pro Pro Ala Ala Ser Arg Ser Met
35 40 45
Phe Val Ala Leu Leu Gly Leu Gly Leu Gly Gln Val Val Cys Ser Val
50 55 60
Ala Leu Phe Phe Tyr Phe Arg Ala Gln Met Asp Pro Asn Arg Ile Ser
65 70 75 80
Glu Asp Gly Thr His Cys Ile Tyr Arg Ile Leu Arg Leu His Glu Asn
85 90 95
Ala Asp Phe Gln Asp Thr Thr Leu Glu Ser Gln Asp Thr Lys Leu Ile
100 105 110
Pro Asp Ser Cys Arg Arg Ile Lys Gln Ala Phe Gln Gly Ala Val Gln
115 120 125
Lys Glu Leu Gln His Ile Val Gly Ser Gln His Ile Arg Ala Glu Lys
130 135 140
Ala Met Val Asp Gly Ser Trp Leu Asp Leu Ala Lys Arg Ser Lys Leu
145 150 155 160
Glu Ala Gln Pro Phe Ala His Leu Thr Ile Asn Ala Thr Asp Ile Pro
165 170 175
Ser Gly Ser His Lys Val Ser Leu Ser Ser Trp Tyr His Asp Arg Gly
180 185 190
Trp Ala Lys Ile Ser Asn Met Thr Phe Ser Asn Gly Lys Leu Ile Val
195 200 205
Asn Gln Asp Gly Phe Tyr Tyr Leu Tyr Ala Asn Ile Cys Phe Arg His
210 215 220
His Glu Thr Ser Gly Asp Leu Ala Thr Glu Tyr Leu Gln Leu Met Val
225 230 235 240
Tyr Val Thr Lys Thr Ser Ile Lys Ile Pro Ser Ser His Thr Leu Met
245 250 255
Lys Gly Gly Ser Thr Lys Tyr Trp Ser Gly Asn Ser Glu Phe His Phe
260 265 270
Tyr Ser Ile Asn Val Gly Gly Phe Phe Lys Leu Arg Ser Gly Glu Glu
275 280 285
Ile Ser Ile Glu Val Ser Asn Pro Ser Leu Leu Asp Pro Asp Gln Asp
290 295 300
Ala Thr Tyr Phe Gly Ala Phe Lys Val Arg Asp Ile Asp
305 310 315
&lt;210&gt; 78
&lt;211&gt; 249
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 78
Met Ala Ala Arg Arg Ser Gln Arg Arg Arg Gly Arg Arg Gly Glu Pro
1 5 10 15
Gly Thr Ala Leu Leu Val Pro Leu Ala Leu Gly Leu Gly Leu Ala Leu
20 25 30
Ala Cys Leu Gly Leu Leu Leu Ala Val Val Ser Leu Gly Ser Arg Ala
35 40 45
Ser Leu Ser Ala Gln Glu Pro Ala Gln Glu Glu Leu Val Ala Glu Glu
50 55 60
Asp Gln Asp Pro Ser Glu Leu Asn Pro Gln Thr Glu Glu Ser Gln Asp
65 70 75 80
Pro Ala Pro Phe Leu Asn Arg Leu Val Arg Pro Arg Arg Ser Ala Pro
85 90 95
Lys Gly Arg Lys Thr Arg Ala Arg Arg Ala Ile Ala Ala His Tyr Glu
100 105 110
Val His Pro Arg Pro Gly Gln Asp Gly Ala Gln Ala Gly Val Asp Gly
115 120 125
Thr Val Ser Gly Trp Glu Glu Ala Arg Ile Asn Ser Ser Ser Pro Leu
130 135 140
Arg Tyr Asn Arg Gln Ile Gly Glu Phe Ile Val Thr Arg Ala Gly Leu
145 150 155 160
Tyr Tyr Leu Tyr Cys Gln Val His Phe Asp Glu Gly Lys Ala Val Tyr
165 170 175
Leu Lys Leu Asp Leu Leu Val Asp Gly Val Leu Ala Leu Arg Cys Leu
180 185 190
Glu Glu Phe Ser Ala Thr Ala Ala Ser Ser Leu Gly Pro Gln Leu Arg
195 200 205
Leu Cys Gln Val Ser Gly Leu Leu Ala Leu Arg Pro Gly Ser Ser Leu
210 215 220
Arg Ile Arg Thr Leu Pro Trp Ala His Leu Lys Ala Ala Pro Phe Leu
225 230 235 240
Thr Tyr Phe Gly Leu Phe Gln Val His
245
&lt;210&gt; 79
&lt;211&gt; 250
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 79
Met Pro Ala Ser Ser Pro Phe Leu Leu Ala Pro Lys Gly Pro Pro Gly
1 5 10 15
Asn Met Gly Gly Pro Val Arg Glu Pro Ala Leu Ser Val Ala Leu Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Gly Ala Ala Leu Gly Ala Val Ala Cys Ala Met Ala Leu
35 40 45
Leu Thr Gln Gln Thr Glu Leu Gln Ser Leu Arg Arg Glu Val Ser Arg
50 55 60
Leu Gln Gly Thr Gly Gly Pro Ser Gln Asn Gly Glu Gly Tyr Pro Trp
65 70 75 80
Gln Ser Leu Pro Glu Gln Ser Ser Asp Ala Leu Glu Ala Trp Glu Asn
85 90 95
Gly Glu Arg Ser Arg Lys Arg Arg Ala Val Leu Thr Gln Lys Gln Lys
100 105 110
Lys Gln His Ser Val Leu His Leu Val Pro Ile Asn Ala Thr Ser Lys
115 120 125
Asp Asp Ser Asp Val Thr Glu Val Met Trp Gln Pro Ala Leu Arg Arg
130 135 140
Gly Arg Gly Leu Gln Ala Gln Gly Tyr Gly Val Arg Ile Gln Asp Ala
145 150 155 160
Gly Val Tyr Leu Leu Tyr Ser Gln Val Leu Phe Gln Asp Val Thr Phe
165 170 175
Thr Met Gly Gln Val Val Ser Arg Glu Gly Gln Gly Arg Gln Glu Thr
180 185 190
Leu Phe Arg Cys Ile Arg Ser Met Pro Ser His Pro Asp Arg Ala Tyr
195 200 205
Asn Ser Cys Tyr Ser Ala Gly Val Phe His Leu His Gln Gly Asp Ile
210 215 220
Leu Ser Val Ile Ile Pro Arg Ala Arg Ala Lys Leu Asn Leu Ser Pro
225 230 235 240
His Gly Thr Phe Leu Gly Phe Val Lys Leu
245 250
&lt;210&gt; 80
&lt;211&gt; 285
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 80
Met Asp Asp Ser Thr Glu Arg Glu Gln Ser Arg Leu Thr Ser Cys Leu
1 5 10 15
Lys Lys Arg Glu Glu Met Lys Leu Lys Glu Cys Val Ser Ile Leu Pro
20 25 30
Arg Lys Glu Ser Pro Ser Val Arg Ser Ser Lys Asp Gly Lys Leu Leu
35 40 45
Ala Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu Leu Ser Cys Cys Leu Thr Val Val
50 55 60
Ser Phe Tyr Gln Val Ala Ala Leu Gln Gly Asp Leu Ala Ser Leu Arg
65 70 75 80
Ala Glu Leu Gln Gly His His Ala Glu Lys Leu Pro Ala Gly Ala Gly
85 90 95
Ala Pro Lys Ala Gly Leu Glu Glu Ala Pro Ala Val Thr Ala Gly Leu
100 105 110
Lys Ile Phe Glu Pro Pro Ala Pro Gly Glu Gly Asn Ser Ser Gln Asn
115 120 125
Ser Arg Asn Lys Arg Ala Val Gln Gly Pro Glu Glu Thr Val Thr Gln
130 135 140
Asp Cys Leu Gln Leu Ile Ala Asp Ser Glu Thr Pro Thr Ile Gln Lys
145 150 155 160
Gly Ser Tyr Thr Phe Val Pro Trp Leu Leu Ser Phe Lys Arg Gly Ser
165 170 175
Ala Leu Glu Glu Lys Glu Asn Lys Ile Leu Val Lys Glu Thr Gly Tyr
180 185 190
Phe Phe Ile Tyr Gly Gln Val Leu Tyr Thr Asp Lys Thr Tyr Ala Met
195 200 205
Gly His Leu Ile Gln Arg Lys Lys Val His Val Phe Gly Asp Glu Leu
210 215 220
Ser Leu Val Thr Leu Phe Arg Cys Ile Gln Asn Met Pro Glu Thr Leu
225 230 235 240
Pro Asn Asn Ser Cys Tyr Ser Ala Gly Ile Ala Lys Leu Glu Glu Gly
245 250 255
Asp Glu Leu Gln Leu Ala Ile Pro Arg Glu Asn Ala Gln Ile Ser Leu
260 265 270
Asp Gly Asp Val Thr Phe Phe Gly Ala Leu Lys Leu Leu
275 280 285
&lt;210&gt; 81
&lt;211&gt; 240
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 81
Met Glu Glu Ser Val Val Arg Pro Ser Val Phe Val Val Asp Gly Gln
1 5 10 15
Thr Asp Ile Pro Phe Thr Arg Leu Gly Arg Ser His Arg Arg Gln Ser
20 25 30
Cys Ser Val Ala Arg Val Gly Leu Gly Leu Leu Leu Leu Leu Met Gly
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Val Gln Gly Trp Phe Leu Leu Gln Leu His Trp Arg
50 55 60
Leu Gly Glu Met Val Thr Arg Leu Pro Asp Gly Pro Ala Gly Ser Trp
65 70 75 80
Glu Gln Leu Ile Gln Glu Arg Arg Ser His Glu Val Asn Pro Ala Ala
85 90 95
His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu Thr Gly Ser Gly Gly Pro Leu
100 105 110
Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala Phe Leu Arg Gly Leu Ser Tyr
115 120 125
His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys Ala Gly Tyr Tyr Tyr Ile Tyr
130 135 140
Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly Cys Pro Leu Gly Leu Ala Ser
145 150 155 160
Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg Thr Pro Arg Tyr Pro Glu Glu
165 170 175
Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser Pro Cys Gly Arg Ala Thr Ser
180 185 190
Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser Phe Leu Gly Gly Val Val His
195 200 205
Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val Val Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Leu
210 215 220
Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser Tyr Phe Gly Ala Phe Met Val
225 230 235 240
&lt;210&gt; 82
&lt;211&gt; 251
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 82
Met Ala Glu Asp Leu Gly Leu Ser Phe Gly Glu Thr Ala Ser Val Glu
1 5 10 15
Met Leu Pro Glu His Gly Ser Cys Arg Pro Lys Ala Arg Ser Ser Ser
20 25 30
Ala Arg Trp Ala Leu Thr Cys Cys Leu Val Leu Leu Pro Phe Leu Ala
35 40 45
Gly Leu Thr Thr Tyr Leu Leu Val Ser Gln Leu Arg Ala Gln Gly Glu
50 55 60
Ala Cys Val Gln Phe Gln Ala Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser
65 70 75 80
His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg
85 90 95
Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn
100 105 110
Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr
115 120 125
Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser
130 135 140
Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser
145 150 155 160
Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser
165 170 175
Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr
180 185 190
Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp
195 200 205
Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp
210 215 220
Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys
225 230 235 240
Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu
245 250
&lt;210&gt; 83
&lt;211&gt; 199
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 83
Met Thr Leu His Pro Ser Pro Ile Thr Cys Glu Phe Leu Phe Ser Thr
1 5 10 15
Ala Leu Ile Ser Pro Lys Met Cys Leu Ser His Leu Glu Asn Met Pro
20 25 30
Leu Ser His Ser Arg Thr Gln Gly Ala Gln Arg Ser Ser Trp Lys Leu
35 40 45
Trp Leu Phe Cys Ser Ile Val Met Leu Leu Phe Leu Cys Ser Phe Ser
50 55 60
Trp Leu Ile Phe Ile Phe Leu Gln Leu Glu Thr Ala Lys Glu Pro Cys
65 70 75 80
Met Ala Lys Phe Gly Pro Leu Pro Ser Lys Trp Gln Met Ala Ser Ser
85 90 95
Glu Pro Pro Cys Val Asn Lys Val Ser Asp Trp Lys Leu Glu Ile Leu
100 105 110
Gln Asn Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr Gly Gln Val Ala Pro Asn Ala Asn
115 120 125
Tyr Asn Asp Val Ala Pro Phe Glu Val Arg Leu Tyr Lys Asn Lys Asp
130 135 140
Met Ile Gln Thr Leu Thr Asn Lys Ser Lys Ile Gln Asn Val Gly Gly
145 150 155 160
Thr Tyr Glu Leu His Val Gly Asp Thr Ile Asp Leu Ile Phe Asn Ser
165 170 175
Glu His Gln Val Leu Lys Asn Asn Thr Tyr Trp Gly Ile Ile Leu Leu
180 185 190
Ala Asn Pro Gln Phe Ile Ser
195
&lt;210&gt; 84
&lt;211&gt; 391
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 84
Met Gly Tyr Pro Glu Val Glu Arg Arg Glu Leu Leu Pro Ala Ala Ala
1 5 10 15
Pro Arg Glu Arg Gly Ser Gln Gly Cys Gly Cys Gly Gly Ala Pro Ala
20 25 30
Arg Ala Gly Glu Gly Asn Ser Cys Leu Leu Phe Leu Gly Phe Phe Gly
35 40 45
Leu Ser Leu Ala Leu His Leu Leu Thr Leu Cys Cys Tyr Leu Glu Leu
50 55 60
Arg Ser Glu Leu Arg Arg Glu Arg Gly Ala Glu Ser Arg Leu Gly Gly
65 70 75 80
Ser Gly Thr Pro Gly Thr Ser Gly Thr Leu Ser Ser Leu Gly Gly Leu
85 90 95
Asp Pro Asp Ser Pro Ile Thr Ser His Leu Gly Gln Pro Ser Pro Lys
100 105 110
Gln Gln Pro Leu Glu Pro Gly Glu Ala Ala Leu His Ser Asp Ser Gln
115 120 125
Asp Gly His Gln Met Ala Leu Leu Asn Phe Phe Phe Pro Asp Glu Lys
130 135 140
Pro Tyr Ser Glu Glu Glu Ser Arg Arg Val Arg Arg Asn Lys Arg Ser
145 150 155 160
Lys Ser Asn Glu Gly Ala Asp Gly Pro Val Lys Asn Lys Lys Lys Gly
165 170 175
Lys Lys Ala Gly Pro Pro Gly Pro Asn Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly
180 185 190
Pro Pro Gly Pro Gln Gly Pro Pro Gly Ile Pro Gly Ile Pro Gly Ile
195 200 205
Pro Gly Thr Thr Val Met Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly
210 215 220
Pro Gln Gly Pro Pro Gly Leu Gln Gly Pro Ser Gly Ala Ala Asp Lys
225 230 235 240
Ala Gly Thr Arg Glu Asn Gln Pro Ala Val Val His Leu Gln Gly Gln
245 250 255
Gly Ser Ala Ile Gln Val Lys Asn Asp Leu Ser Gly Gly Val Leu Asn
260 265 270
Asp Trp Ser Arg Ile Thr Met Asn Pro Lys Val Phe Lys Leu His Pro
275 280 285
Arg Ser Gly Glu Leu Glu Val Leu Val Asp Gly Thr Tyr Phe Ile Tyr
290 295 300
Ser Gln Val Glu Val Tyr Tyr Ile Asn Phe Thr Asp Phe Ala Ser Tyr
305 310 315 320
Glu Val Val Val Asp Glu Lys Pro Phe Leu Gln Cys Thr Arg Ser Ile
325 330 335
Glu Thr Gly Lys Thr Asn Tyr Asn Thr Cys Tyr Thr Ala Gly Val Cys
340 345 350
Leu Leu Lys Ala Arg Gln Lys Ile Ala Val Lys Met Val His Ala Asp
355 360 365
Ile Ser Ile Asn Met Ser Lys His Thr Thr Phe Phe Gly Ala Ile Arg
370 375 380
Leu Gly Glu Ala Pro Ala Ser
385 390
&lt;210&gt; 85
&lt;211&gt; 205
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人（Homo sapiens）
&lt;400&gt; 85
Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser Ala
1 5 10 15
Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro
20 25 30
Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala
35 40 45
Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro
50 55 60
Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp
65 70 75 80
Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe
85 90 95
Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val
100 105 110
Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala
115 120 125
Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg
130 135 140
Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly
145 150 155 160
Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala
165 170 175
Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr
180 185 190
Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
195 200 205
&lt;210&gt; 86
&lt;211&gt; 5
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 肽接头G4S
&lt;400&gt; 86
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
&lt;210&gt; 87
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 肽接头(G4S)2
&lt;400&gt; 87
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
&lt;210&gt; 88
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 肽接头(SG4)2
&lt;400&gt; 88
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5 10
&lt;210&gt; 89
&lt;211&gt; 15
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 肽接头(G4S)3
&lt;400&gt; 89
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
&lt;210&gt; 90
&lt;211&gt; 14
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 肽接头G4(SG4)2
&lt;400&gt; 90
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5 10
&lt;210&gt; 91
&lt;211&gt; 20
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 肽接头(G4S)4
&lt;400&gt; 91
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
&lt;210&gt; 92
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 肽接头GSPGSSSSGS
&lt;400&gt; 92
Gly Ser Pro Gly Ser Ser Ser Ser Gly Ser
1 5 10
&lt;210&gt; 93
&lt;211&gt; 8
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 肽接头GSGSGSGS
&lt;400&gt; 93
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5
&lt;210&gt; 94
&lt;211&gt; 8
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 肽接头GSGSGNGS
&lt;400&gt; 94
Gly Ser Gly Ser Gly Asn Gly Ser
1 5
&lt;210&gt; 95
&lt;211&gt; 8
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 肽接头GGSGSGSG
&lt;400&gt; 95
Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5
&lt;210&gt; 96
&lt;211&gt; 6
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 肽接头GGSGSG
&lt;400&gt; 96
Gly Gly Ser Gly Ser Gly
1 5
&lt;210&gt; 97
&lt;211&gt; 4
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 肽接头GGSG
&lt;400&gt; 97
Gly Gly Ser Gly
1
&lt;210&gt; 98
&lt;211&gt; 8
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; GGSGNGSG
&lt;400&gt; 98
Gly Gly Ser Gly Asn Gly Ser Gly
1 5
&lt;210&gt; 99
&lt;211&gt; 8
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 肽接头GGNGSGSG
&lt;400&gt; 99
Gly Gly Asn Gly Ser Gly Ser Gly
1 5
&lt;210&gt; 100
&lt;211&gt; 6
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 肽接头GGNGSG
&lt;400&gt; 100
Gly Gly Asn Gly Ser Gly
1 5
&lt;210&gt; 101
&lt;211&gt; 1806
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; Fc穴二聚体4-1BB配体(71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 101
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ctgcaggggg accgtcagtc 60
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 120
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 180
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 240
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 300
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggcgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 360
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtgcacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 420
aaccaggtca gcctctcgtg cgcagtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 480
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 540
gacggctcct tcttcctcgt gagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 600
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 660
ctctccctgt ctccgggtgg aggcggcgga agcggaggag gaggatccag agagggccct 720
gagctgagcc ctgatgatcc tgccggactg ctggacctgc ggcagggaat gtttgcccag 780
ctggtggccc agaacgtgct gctgatcgat ggccccctgt cctggtacag cgatcctgga 840
ctggctggcg tgtcactgac aggcggcctg agctacaaag aggacaccaa agaactggtg 900
gtggccaagg ccggcgtgta ctacgtgttc tttcagctgg aactgcggag agtggtggcc 960
ggcgaaggat ctggctctgt gtctctggcc ctgcatctgc agcctctgag atctgctgct 1020
ggcgccgctg ctctggcact gacagtggat ctgcctcctg ccagcagcga ggcccggaat 1080
agcgcatttg ggtttcaagg caggctgctg cacctgtctg ccggccagag gctgggagtg 1140
catctgcaca cagaggccag ggctagacac gcctggcagc tgacacaggg cgctacagtg 1200
ctgggcctgt tcagagtgac ccccgagatt ccagcaggcc tgggaggcgg cggatctggc 1260
ggcggaggat ctagagaagg acccgagctg tcccccgacg atcccgctgg gctgctggat 1320
ctgagacagg gcatgttcgc tcagctggtg gctcagaatg tgctgctgat tgacggacct 1380
ctgagctggt actccgaccc agggctggca ggggtgtccc tgactggggg actgtcctac 1440
aaagaagata caaaagaact ggtggtggct aaagctgggg tgtactatgt gttttttcag 1500
ctggaactga ggcgggtggt ggctggggag ggctcaggat ctgtgtccct ggctctgcat 1560
ctgcagccac tgcgctctgc agcaggggct gcagcactgg ccctgactgt ggacctgccc 1620
ccagcttctt ccgaggccag aaacagcgcc ttcgggttcc aaggacgcct gctgcatctg 1680
agcgccggac agcgcctggg agtgcatctg catactgaag ccagagcccg gcatgcttgg 1740
cagctgactc agggggcaac tgtgctggga ctgtttcgcg tgacacctga gatcccagcc 1800
gggctc 1806
&lt;210&gt; 102
&lt;211&gt; 1902
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(4B9) Fc节单体4-1BB (71-248)配体的核苷酸序列
&lt;400&gt; 102
gaggtgcagc tgctcgaaag cggcggagga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
tcttgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt ccgccaggcc 120
cctggcaagg gactggaatg ggtgtccgcc atcatcggct ctggcgccag cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagggatgg 300
ttcggcggct tcaactactg gggacagggc accctggtca cagtgtccag cgctagcacc 360
aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ctgcaggggg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggcgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccct gcagagatga gctgaccaag 1080
aaccaggtgt ccctgtggtg tctggtcaag ggcttctacc ccagcgatat cgccgtggag 1140
tgggagagca acggccagcc tgagaacaac tacaagacca ccccccctgt gctggacagc 1200
gacggcagct tcttcctgta ctccaaactg accgtggaca agagccggtg gcagcagggc 1260
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320
ctgagcctga gccccggcgg aggcggcgga agcggaggag gaggatccag agagggccct 1380
gagctgagcc ctgatgatcc tgccggactg ctggacctgc ggcagggaat gtttgcccag 1440
ctggtggccc agaacgtgct gctgatcgat ggccccctgt cctggtacag cgatcctgga 1500
ctggctggcg tgtcactgac aggcggcctg agctacaaag aggacaccaa agaactggtg 1560
gtggccaagg ccggcgtgta ctacgtgttc tttcagctgg aactgcggag agtggtggcc 1620
ggcgaaggat ctggctctgt gtctctggcc ctgcatctgc agcctctgag atctgctgct 1680
ggcgccgctg ctctggcact gacagtggat ctgcctcctg ccagcagcga ggcccggaat 1740
agcgcatttg ggtttcaagg caggctgctg cacctgtctg ccggccagag gctgggagtg 1800
catctgcaca cagaggccag ggctagacac gcctggcagc tgacacaggg cgctacagtg 1860
ctgggcctgt tcagagtgac ccccgagatt cctgccgggc tc 1902
&lt;210&gt; 103
&lt;211&gt; 645
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(4B9)轻链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 103
gagatcgtgc tgacccagtc ccccggcacc ctgtctctga gccctggcga gagagccacc 60
ctgtcctgca gagcctccca gtccgtgacc tcctcctacc tcgcctggta tcagcagaag 120
cccggccagg cccctcggct gctgatcaac gtgggcagtc ggagagccac cggcatccct 180
gaccggttct ccggctctgg ctccggcacc gacttcaccc tgaccatctc ccggctggaa 240
cccgaggact tcgccgtgta ctactgccag cagggcatca tgctgccccc cacctttggc 300
cagggcacca aggtggaaat caagcgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 360
ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 420
tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 480
caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 540
acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600
ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 645
&lt;210&gt; 104
&lt;211&gt; 602
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; Fc穴二聚体4-1BB (71-248)配体链
&lt;400&gt; 104
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro
225 230 235 240
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
245 250 255
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
260 265 270
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
275 280 285
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
290 295 300
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
305 310 315 320
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
325 330 335
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
340 345 350
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
355 360 365
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
370 375 380
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
385 390 395 400
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly Gly
405 410 415
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro
420 425 430
Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln
435 440 445
Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr
450 455 460
Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr
465 470 475 480
Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr
485 490 495
Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser
500 505 510
Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala
515 520 525
Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser
530 535 540
Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu
545 550 555 560
Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala
565 570 575
Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe
580 585 590
Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
595 600
&lt;210&gt; 105
&lt;211&gt; 634
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(4B9) Fc节单体41-BB (71-248)配体
&lt;400&gt; 105
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly
435 440 445
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro
450 455 460
Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln
465 470 475 480
Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr
485 490 495
Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr
500 505 510
Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr
515 520 525
Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser
530 535 540
Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala
545 550 555 560
Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser
565 570 575
Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu
580 585 590
Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala
595 600 605
Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe
610 615 620
Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630
&lt;210&gt; 106
&lt;211&gt; 215
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(4B9)轻链
&lt;400&gt; 106
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Asn Val Gly Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Met Leu Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
&lt;210&gt; 107
&lt;211&gt; 1212
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; Fc穴单体4-1BBL (71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 107
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ctgcaggggg accgtcagtc 60
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 120
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 180
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 240
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 300
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggcgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 360
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtgcacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 420
aaccaggtca gcctctcgtg cgcagtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 480
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 540
gacggctcct tcttcctcgt gagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 600
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 660
ctctccctgt ctccgggtag agagggccct gagctgagcc ctgatgatcc tgccggactg 720
ctggacctgc ggcagggaat gtttgcccag ctggtggccc agaacgtgct gctgatcgat 780
ggccccctgt cctggtacag cgatcctgga ctggctggcg tgtcactgac aggcggcctg 840
agctacaaag aggacaccaa agaactggtg gtggccaagg ccggcgtgta ctacgtgttc 900
tttcagctgg aactgcggag agtggtggcc ggcgaaggat ctggctctgt gtctctggcc 960
ctgcatctgc agcctctgag atctgctgct ggcgccgctg ctctggcact gacagtggat 1020
ctgcctcctg ccagcagcga ggcccggaat agcgcatttg ggtttcaagg caggctgctg 1080
cacctgtctg ccggccagag gctgggagtg catctgcaca cagaggccag ggctagacac 1140
gcctggcagc tgacacaggg cgctacagtg ctgggcctgt tcagagtgac ccccgagatt 1200
cctgccgggc tc 1212
&lt;210&gt; 108
&lt;211&gt; 2436
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(4B9) Fc节二聚体4-1BB配体(71-248)的核苷酸序列
&lt;400&gt; 108
gaggtgcagc tgctcgaaag cggcggagga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
tcttgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt ccgccaggcc 120
cctggcaagg gactggaatg ggtgtccgcc atcatcggct ctggcgccag cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagggatgg 300
ttcggcggct tcaactactg gggacagggc accctggtca cagtgtccag cgctagcacc 360
aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ctgcaggggg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggcgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccct gcagagatga gctgaccaag 1080
aaccaggtgt ccctgtggtg tctggtcaag ggcttctacc ccagcgatat cgccgtggag 1140
tgggagagca acggccagcc tgagaacaac tacaagacca ccccccctgt gctggacagc 1200
gacggcagct tcttcctgta ctccaaactg accgtggaca agagccggtg gcagcagggc 1260
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320
ctgagcctga gccccggcag agagggccct gagctgagcc ctgatgatcc tgccggactg 1380
ctggacctgc ggcagggaat gtttgcccag ctggtggccc agaacgtgct gctgatcgat 1440
ggccccctgt cctggtacag cgatcctgga ctggctggcg tgtcactgac aggcggcctg 1500
agctacaaag aggacaccaa agaactggtg gtggccaagg ccggcgtgta ctacgtgttc 1560
tttcagctgg aactgcggag agtggtggcc ggcgaaggat ctggctctgt gtctctggcc 1620
ctgcatctgc agcctctgag atctgctgct ggcgccgctg ctctggcact gacagtggat 1680
ctgcctcctg ccagcagcga ggcccggaat agcgcatttg ggtttcaagg caggctgctg 1740
cacctgtctg ccggccagag gctgggagtg catctgcaca cagaggccag ggctagacac 1800
gcctggcagc tgacacaggg cgctacagtg ctgggcctgt tcagagtgac ccccgagatt 1860
ccagcaggcc tgggaggcgg cggatctggc ggcggaggat ctagagaagg acccgagctg 1920
tcccccgacg atcccgctgg gctgctggat ctgagacagg gcatgttcgc tcagctggtg 1980
gctcagaatg tgctgctgat tgacggacct ctgagctggt actccgaccc agggctggca 2040
ggggtgtccc tgactggggg actgtcctac aaagaagata caaaagaact ggtggtggct 2100
aaagctgggg tgtactatgt gttttttcag ctggaactga ggcgggtggt ggctggggag 2160
ggctcaggat ctgtgtccct ggctctgcat ctgcagccac tgcgctctgc agcaggggct 2220
gcagcactgg ccctgactgt ggacctgccc ccagcttctt ccgaggccag aaacagcgcc 2280
ttcgggttcc aaggacgcct gctgcatctg agcgccggac agcgcctggg agtgcatctg 2340
catactgaag ccagagcccg gcatgcttgg cagctgactc agggggcaac tgtgctggga 2400
ctgtttcgcg tgacacctga gatcccagcc gggctc 2436
&lt;210&gt; 109
&lt;211&gt; 404
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; Fc穴单体4-1BB配体(71-248)链
&lt;400&gt; 109
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu
225 230 235 240
Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val
245 250 255
Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala
260 265 270
Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu
275 280 285
Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu
290 295 300
Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala
305 310 315 320
Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala
325 330 335
Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala
340 345 350
Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu
355 360 365
Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu
370 375 380
Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile
385 390 395 400
Pro Ala Gly Leu
&lt;210&gt; 110
&lt;211&gt; 812
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(4B9) Fc节二聚体4-1BB配体(71-248)
&lt;400&gt; 110
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Arg Glu
435 440 445
Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg
450 455 460
Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp
465 470 475 480
Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu
485 490 495
Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala
500 505 510
Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val
515 520 525
Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln
530 535 540
Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp
545 550 555 560
Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln
565 570 575
Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu
580 585 590
His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala
595 600 605
Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
610 615 620
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu
625 630 635 640
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
645 650 655
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
660 665 670
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
675 680 685
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
690 695 700
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
705 710 715 720
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
725 730 735
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
740 745 750
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
755 760 765
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
770 775 780
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
785 790 795 800
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
805 810
&lt;210&gt; 111
&lt;211&gt; 1899
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(28H1) Fc节单体4-1BB配体(71-248)的核苷酸序列
&lt;400&gt; 111
gaagtgcagc tgctggaatc cggcggaggc ctggtgcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcctgcgccg cctccggctt caccttctcc tcccacgcca tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gcctggaatg ggtgtccgcc atctgggcct ccggcgagca gtactacgcc 180
gactctgtga agggccggtt caccatctcc cgggacaact ccaagaacac cctgtacctg 240
cagatgaact ccctgcgggc cgaggacacc gccgtgtact actgtgccaa gggctggctg 300
ggcaacttcg actactgggg acagggcacc ctggtcaccg tgtccagcgc tagcaccaag 360
ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420
ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480
gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540
ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660
aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagctg cagggggacc gtcagtcttc 720
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccctgca gagatgagct gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgtggtgtct ggtcaagggc ttctacccca gcgatatcgc cgtggagtgg 1140
gagagcaacg gccagcctga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgac 1200
ggcagcttct tcctgtactc caaactgacc gtggacaaga gccggtggca gcagggcaac 1260
gtgttcagct gcagcgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1320
agcctgagcc ccggcggagg cggcggaagc ggaggaggag gatccagaga gggccctgag 1380
ctgagccctg atgatcctgc cggactgctg gacctgcggc agggaatgtt tgcccagctg 1440
gtggcccaga acgtgctgct gatcgatggc cccctgtcct ggtacagcga tcctggactg 1500
gctggcgtgt cactgacagg cggcctgagc tacaaagagg acaccaaaga actggtggtg 1560
gccaaggccg gcgtgtacta cgtgttcttt cagctggaac tgcggagagt ggtggccggc 1620
gaaggatctg gctctgtgtc tctggccctg catctgcagc ctctgagatc tgctgctggc 1680
gccgctgctc tggcactgac agtggatctg cctcctgcca gcagcgaggc ccggaatagc 1740
gcatttgggt ttcaaggcag gctgctgcac ctgtctgccg gccagaggct gggagtgcat 1800
ctgcacacag aggccagggc tagacacgcc tggcagctga cacagggcgc tacagtgctg 1860
ggcctgttca gagtgacccc cgagattcct gccgggctc 1899
&lt;210&gt; 112
&lt;211&gt; 645
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(28H1)轻链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 112
gagatcgtgc tgacccagtc ccccggcacc ctgtctctga gccctggcga gagagccacc 60
ctgtcctgca gagcctccca gtccgtgtcc cggtcctacc tcgcctggta tcagcagaag 120
cccggccagg cccctcggct gctgatcatc ggcgcctcta ccagagccac cggcatccct 180
gaccggttct ccggctctgg ctccggcacc gacttcaccc tgaccatctc ccggctggaa 240
cccgaggact tcgccgtgta ctactgccag cagggccagg tcatccctcc cacctttggc 300
cagggcacca aggtggaaat caagcgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 360
ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 420
tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 480
caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 540
acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600
ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 645
&lt;210&gt; 113
&lt;211&gt; 633
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(28H1) Fc节单体4-1BB配体(71-248)
&lt;400&gt; 113
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Trp Ala Ser Gly Glu Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Gly Trp Leu Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly
435 440 445
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp
450 455 460
Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu
465 470 475 480
Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser
485 490 495
Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys
500 505 510
Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val
515 520 525
Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly
530 535 540
Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly
545 550 555 560
Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu
565 570 575
Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser
580 585 590
Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg
595 600 605
His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg
610 615 620
Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630
&lt;210&gt; 114
&lt;211&gt; 215
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(28H1)轻链
&lt;400&gt; 114
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Ile Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Val Ile Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
&lt;210&gt; 115
&lt;211&gt; 2433
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(28H1) Fc节二聚体4-1BB配体(71-248)的核苷酸序列
&lt;400&gt; 115
gaagtgcagc tgctggaatc cggcggaggc ctggtgcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcctgcgccg cctccggctt caccttctcc tcccacgcca tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gcctggaatg ggtgtccgcc atctgggcct ccggcgagca gtactacgcc 180
gactctgtga agggccggtt caccatctcc cgggacaact ccaagaacac cctgtacctg 240
cagatgaact ccctgcgggc cgaggacacc gccgtgtact actgtgccaa gggctggctg 300
ggcaacttcg actactgggg acagggcacc ctggtcaccg tgtccagcgc tagcaccaag 360
ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420
ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480
gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540
ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660
aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagctg cagggggacc gtcagtcttc 720
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccctgca gagatgagct gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgtggtgtct ggtcaagggc ttctacccca gcgatatcgc cgtggagtgg 1140
gagagcaacg gccagcctga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgac 1200
ggcagcttct tcctgtactc caaactgacc gtggacaaga gccggtggca gcagggcaac 1260
gtgttcagct gcagcgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1320
agcctgagcc ccggcagaga gggccctgag ctgagccctg atgatcctgc cggactgctg 1380
gacctgcggc agggaatgtt tgcccagctg gtggcccaga acgtgctgct gatcgatggc 1440
cccctgtcct ggtacagcga tcctggactg gctggcgtgt cactgacagg cggcctgagc 1500
tacaaagagg acaccaaaga actggtggtg gccaaggccg gcgtgtacta cgtgttcttt 1560
cagctggaac tgcggagagt ggtggccggc gaaggatctg gctctgtgtc tctggccctg 1620
catctgcagc ctctgagatc tgctgctggc gccgctgctc tggcactgac agtggatctg 1680
cctcctgcca gcagcgaggc ccggaatagc gcatttgggt ttcaaggcag gctgctgcac 1740
ctgtctgccg gccagaggct gggagtgcat ctgcacacag aggccagggc tagacacgcc 1800
tggcagctga cacagggcgc tacagtgctg ggcctgttca gagtgacccc cgagattcca 1860
gcaggcctgg gaggcggcgg atctggcggc ggaggatcta gagaaggacc cgagctgtcc 1920
cccgacgatc ccgctgggct gctggatctg agacagggca tgttcgctca gctggtggct 1980
cagaatgtgc tgctgattga cggacctctg agctggtact ccgacccagg gctggcaggg 2040
gtgtccctga ctgggggact gtcctacaaa gaagatacaa aagaactggt ggtggctaaa 2100
gctggggtgt actatgtgtt ttttcagctg gaactgaggc gggtggtggc tggggagggc 2160
tcaggatctg tgtccctggc tctgcatctg cagccactgc gctctgcagc aggggctgca 2220
gcactggccc tgactgtgga cctgccccca gcttcttccg aggccagaaa cagcgccttc 2280
gggttccaag gacgcctgct gcatctgagc gccggacagc gcctgggagt gcatctgcat 2340
actgaagcca gagcccggca tgcttggcag ctgactcagg gggcaactgt gctgggactg 2400
tttcgcgtga cacctgagat cccagccggg ctc 2433
&lt;210&gt; 116
&lt;211&gt; 811
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(28H1) Fc节二聚体4-1BB配体(71-248)
&lt;400&gt; 116
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Trp Ala Ser Gly Glu Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Gly Trp Leu Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Arg Glu Gly
435 440 445
Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln
450 455 460
Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly
465 470 475 480
Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr
485 490 495
Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys
500 505 510
Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val
515 520 525
Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro
530 535 540
Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu
545 550 555 560
Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly
565 570 575
Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His
580 585 590
Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr
595 600 605
Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly
610 615 620
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser
625 630 635 640
Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala
645 650 655
Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp
660 665 670
Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser
675 680 685
Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr
690 695 700
Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly
705 710 715 720
Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala
725 730 735
Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser
740 745 750
Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His
755 760 765
Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg
770 775 780
Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu
785 790 795 800
Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
805 810
&lt;210&gt; 117
&lt;211&gt; 1914
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-018) Fc节单体4-1BB (71-248)配体的核苷酸序列
&lt;400&gt; 117
caggtccagc tggtgcagtc cggcgccgag gtcaagaaac ccggggcttc tgtgaaggtt 60
tcatgcaagg caagcggata caccttcacc gactatatca tgcattgggt caggcaggcc 120
cctggccaag gtctcgaatg gatgggctac attaacccat ataatgatgg ctccaaatac 180
accgagaagt ttcagggaag agtcactatg acatctgaca ccagtatcag cactgcttac 240
atggagctgt cccgccttcg gtctgatgac accgcagtgt attactgtgc caggggcaca 300
tattactacg gctcagctct gttcgactat tgggggcagg gaaccacagt aaccgtgagc 360
tccgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc ctgcagagat 1080
gagctgacca agaaccaggt gtccctgtgg tgtctggtca agggcttcta ccccagcgat 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cctgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tactccaaac tgaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaagt ccctgagcct gagccccggc ggaggcggcg gaagcggagg aggaggatcc 1380
agagagggcc ctgagctgag ccctgatgat cctgccggac tgctggacct gcggcaggga 1440
atgtttgccc agctggtggc ccagaacgtg ctgctgatcg atggccccct gtcctggtac 1500
agcgatcctg gactggctgg cgtgtcactg acaggcggcc tgagctacaa agaggacacc 1560
aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg 1620
agagtggtgg ccggcgaagg atctggctct gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg 1680
agatctgctg ctggcgccgc tgctctggca ctgacagtgg atctgcctcc tgccagcagc 1740
gaggcccgga atagcgcatt tgggtttcaa ggcaggctgc tgcacctgtc tgccggccag 1800
aggctgggag tgcatctgca cacagaggcc agggctagac acgcctggca gctgacacag 1860
ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg acccccgaga ttcctgccgg gctc 1914
&lt;210&gt; 118
&lt;211&gt; 657
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-018)轻链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 118
gacatcgtca tgacccagac acccctgtcc ctctctgtga cccctggcca gccagcctca 60
attagctgca agtcctctca aagtctggag aaccccaatg ggaacactta ccttaattgg 120
tatctgcaga aacccggaca atcccctcaa ctcctgatct acagggtctc taagagattc 180
tcaggcgtgc cagatcgctt tagcggttcc gggtctggca cagacttcac cttgaagatt 240
agtcgggttg aagctgagga tgtgggagtc tattactgtc tgcagctcac tcatgtgccc 300
tacacctttg gtcagggcac aaaactggag atcaagcgga ccgtggccgc tccctccgtg 360
ttcatcttcc caccctccga cgagcagctg aagtccggca ccgccagcgt ggtgtgcctg 420
ctgaacaact tctacccccg cgaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480
tccggcaact cccaggaatc cgtgaccgag caggactcca aggacagcac ctactccctg 540
tcctccaccc tgaccctgtc caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgaa 600
gtgacccacc agggcctgtc cagccccgtg accaagtcct tcaaccgggg cgagtgc 657
&lt;210&gt; 119
&lt;211&gt; 638
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-018) Fc节单体4-1-BB (71-248)配体
&lt;400&gt; 119
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro
450 455 460
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
465 470 475 480
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
485 490 495
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
500 505 510
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
515 520 525
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
530 535 540
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
545 550 555 560
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
565 570 575
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
580 585 590
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
595 600 605
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
610 615 620
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630 635
&lt;210&gt; 120
&lt;211&gt; 219
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-018)轻链
&lt;400&gt; 120
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Pro
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
&lt;210&gt; 121
&lt;211&gt; 2448
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-018) Fc节二聚体4-1BB (71-248)配体的核苷酸序列
&lt;400&gt; 121
caggtccagc tggtgcagtc cggcgccgag gtcaagaaac ccggggcttc tgtgaaggtt 60
tcatgcaagg caagcggata caccttcacc gactatatca tgcattgggt caggcaggcc 120
cctggccaag gtctcgaatg gatgggctac attaacccat ataatgatgg ctccaaatac 180
accgagaagt ttcagggaag agtcactatg acatctgaca ccagtatcag cactgcttac 240
atggagctgt cccgccttcg gtctgatgac accgcagtgt attactgtgc caggggcaca 300
tattactacg gctcagctct gttcgactat tgggggcagg gaaccacagt aaccgtgagc 360
tccgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc ctgcagagat 1080
gagctgacca agaaccaggt gtccctgtgg tgtctggtca agggcttcta ccccagcgat 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cctgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tactccaaac tgaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaagt ccctgagcct gagccccggc agagagggcc ctgagctgag ccctgatgat 1380
cctgccggac tgctggacct gcggcaggga atgtttgccc agctggtggc ccagaacgtg 1440
ctgctgatcg atggccccct gtcctggtac agcgatcctg gactggctgg cgtgtcactg 1500
acaggcggcc tgagctacaa agaggacacc aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg 1560
tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg agagtggtgg ccggcgaagg atctggctct 1620
gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg agatctgctg ctggcgccgc tgctctggca 1680
ctgacagtgg atctgcctcc tgccagcagc gaggcccgga atagcgcatt tgggtttcaa 1740
ggcaggctgc tgcacctgtc tgccggccag aggctgggag tgcatctgca cacagaggcc 1800
agggctagac acgcctggca gctgacacag ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg 1860
acccccgaga ttccagcagg cctgggaggc ggcggatctg gcggcggagg atctagagaa 1920
ggacccgagc tgtcccccga cgatcccgct gggctgctgg atctgagaca gggcatgttc 1980
gctcagctgg tggctcagaa tgtgctgctg attgacggac ctctgagctg gtactccgac 2040
ccagggctgg caggggtgtc cctgactggg ggactgtcct acaaagaaga tacaaaagaa 2100
ctggtggtgg ctaaagctgg ggtgtactat gtgttttttc agctggaact gaggcgggtg 2160
gtggctgggg agggctcagg atctgtgtcc ctggctctgc atctgcagcc actgcgctct 2220
gcagcagggg ctgcagcact ggccctgact gtggacctgc ccccagcttc ttccgaggcc 2280
agaaacagcg ccttcgggtt ccaaggacgc ctgctgcatc tgagcgccgg acagcgcctg 2340
ggagtgcatc tgcatactga agccagagcc cggcatgctt ggcagctgac tcagggggca 2400
actgtgctgg gactgtttcg cgtgacacct gagatcccag ccgggctc 2448
&lt;210&gt; 122
&lt;211&gt; 816
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-018) Fc节二聚体4-1BB (71-248)配体
&lt;400&gt; 122
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu
450 455 460
Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val
465 470 475 480
Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala
485 490 495
Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu
500 505 510
Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu
515 520 525
Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala
530 535 540
Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala
545 550 555 560
Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala
565 570 575
Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu
580 585 590
Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu
595 600 605
Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile
610 615 620
Pro Ala Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu
625 630 635 640
Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg
645 650 655
Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp
660 665 670
Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu
675 680 685
Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala
690 695 700
Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val
705 710 715 720
Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln
725 730 735
Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp
740 745 750
Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln
755 760 765
Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu
770 775 780
His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala
785 790 795 800
Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
805 810 815
&lt;210&gt; 123
&lt;211&gt; 1914
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-2B11) Fc节单体4-1BB (71-248)配体的核苷酸序列
&lt;400&gt; 123
caggtgcaat tggttcaatc tggtgctgaa gtaaaaaaac cgggcgcttc cgttaaagtg 60
agctgcaaag catctggtta caccttcact gactatatca tgcactgggt tcgtcaggcc 120
ccgggccagg gtctggagtg gatgggctac attaacccat acaacgacgg ttccaaatat 180
accgagaaat tccagggccg cgtcacgatg accagcgaca cttctatctc caccgcgtac 240
atggaactgt ctagactgcg ttctgacgac accgctgttt actattgtgc acgcggtacc 300
tactactacg gtccacagct gtttgattac tggggccaag gtaccacggt gaccgtaagc 360
tctgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc ctgcagagat 1080
gagctgacca agaaccaggt gtccctgtgg tgtctggtca agggcttcta ccccagcgat 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cctgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tactccaaac tgaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaagt ccctgagcct gagccccggc ggaggcggcg gaagcggagg aggaggatcc 1380
agagagggcc ctgagctgag ccctgatgat cctgccggac tgctggacct gcggcaggga 1440
atgtttgccc agctggtggc ccagaacgtg ctgctgatcg atggccccct gtcctggtac 1500
agcgatcctg gactggctgg cgtgtcactg acaggcggcc tgagctacaa agaggacacc 1560
aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg 1620
agagtggtgg ccggcgaagg atctggctct gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg 1680
agatctgctg ctggcgccgc tgctctggca ctgacagtgg atctgcctcc tgccagcagc 1740
gaggcccgga atagcgcatt tgggtttcaa ggcaggctgc tgcacctgtc tgccggccag 1800
aggctgggag tgcatctgca cacagaggcc agggctagac acgcctggca gctgacacag 1860
ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg acccccgaga ttcctgccgg gctc 1914
&lt;210&gt; 124
&lt;211&gt; 1314
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-2B11)轻链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 124
gatattgtca tgactcaaac tccactgtct ctgtccgtga ccccgggtca gccagcgagc 60
atttcttgca aatccagcca atctctggaa acctccaccg gcaccacgta cctgaactgg 120
tatctccaga aaccgggtca gagcccgcag ctgctgatct accgtgtatc taagcgcttc 180
tccggcgttc ctgatcgttt cagcggttct ggatccggca ccgactttac tctgaaaatc 240
agccgtgtgg aagctgaaga cgttggcgtc tactattgtc tgcagctgct ggaagatcca 300
tacaccttcg gtcaaggaac taaactggaa attaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgtgat 660
attgtcatga ctcaaactcc actgtctctg tccgtgaccc cgggtcagcc agcgagcatt 720
tcttgcaaat ccagccaatc tctggaaacc tccaccggca ccacgtacct gaactggtat 780
ctccagaaac cgggtcagag cccgcagctg ctgatctacc gtgtatctaa gcgcttctcc 840
ggcgttcctg atcgtttcag cggttctgga tccggcaccg actttactct gaaaatcagc 900
cgtgtggaag ctgaagacgt tggcgtctac tattgtctgc agctgctgga agatccatac 960
accttcggtc aaggaacgaa actggaaatt aaacgtacgg tggctgcacc atctgtcttc 1020
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 1080
aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 1140
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 1200
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 1260
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 1314
&lt;210&gt; 125
&lt;211&gt; 638
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗 CD19(8B8-2B11) Fc节单体4-1BB配体(71-248)
&lt;400&gt; 125
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro
450 455 460
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
465 470 475 480
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
485 490 495
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
500 505 510
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
515 520 525
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
530 535 540
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
545 550 555 560
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
565 570 575
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
580 585 590
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
595 600 605
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
610 615 620
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630 635
&lt;210&gt; 126
&lt;211&gt; 219
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗 CD19(8B8-2B11)轻链
&lt;400&gt; 126
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser
20 25 30
Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu
85 90 95
Leu Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
&lt;210&gt; 127
&lt;211&gt; 2448
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-2B11) Fc节二聚体4-1BB (71-248)配体的核苷酸序列
&lt;400&gt; 127
caggtgcaat tggttcaatc tggtgctgaa gtaaaaaaac cgggcgcttc cgttaaagtg 60
agctgcaaag catctggtta caccttcact gactatatca tgcactgggt tcgtcaggcc 120
ccgggccagg gtctggagtg gatgggctac attaacccat acaacgacgg ttccaaatat 180
accgagaaat tccagggccg cgtcacgatg accagcgaca cttctatctc caccgcgtac 240
atggaactgt ctagactgcg ttctgacgac accgctgttt actattgtgc acgcggtacc 300
tactactacg gtccacagct gtttgattac tggggccaag gtaccacggt gaccgtaagc 360
tctgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc ctgcagagat 1080
gagctgacca agaaccaggt gtccctgtgg tgtctggtca agggcttcta ccccagcgat 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cctgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tactccaaac tgaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaagt ccctgagcct gagccccggc agagagggcc ctgagctgag ccctgatgat 1380
cctgccggac tgctggacct gcggcaggga atgtttgccc agctggtggc ccagaacgtg 1440
ctgctgatcg atggccccct gtcctggtac agcgatcctg gactggctgg cgtgtcactg 1500
acaggcggcc tgagctacaa agaggacacc aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg 1560
tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg agagtggtgg ccggcgaagg atctggctct 1620
gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg agatctgctg ctggcgccgc tgctctggca 1680
ctgacagtgg atctgcctcc tgccagcagc gaggcccgga atagcgcatt tgggtttcaa 1740
ggcaggctgc tgcacctgtc tgccggccag aggctgggag tgcatctgca cacagaggcc 1800
agggctagac acgcctggca gctgacacag ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg 1860
acccccgaga ttccagcagg cctgggaggc ggcggatctg gcggcggagg atctagagaa 1920
ggacccgagc tgtcccccga cgatcccgct gggctgctgg atctgagaca gggcatgttc 1980
gctcagctgg tggctcagaa tgtgctgctg attgacggac ctctgagctg gtactccgac 2040
ccagggctgg caggggtgtc cctgactggg ggactgtcct acaaagaaga tacaaaagaa 2100
ctggtggtgg ctaaagctgg ggtgtactat gtgttttttc agctggaact gaggcgggtg 2160
gtggctgggg agggctcagg atctgtgtcc ctggctctgc atctgcagcc actgcgctct 2220
gcagcagggg ctgcagcact ggccctgact gtggacctgc ccccagcttc ttccgaggcc 2280
agaaacagcg ccttcgggtt ccaaggacgc ctgctgcatc tgagcgccgg acagcgcctg 2340
ggagtgcatc tgcatactga agccagagcc cggcatgctt ggcagctgac tcagggggca 2400
actgtgctgg gactgtttcg cgtgacacct gagatcccag ccgggctc 2448
&lt;210&gt; 128
&lt;211&gt; 816
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-2B11) Fc节二聚体4-1BB配体(71-248)
&lt;400&gt; 128
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu
450 455 460
Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val
465 470 475 480
Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala
485 490 495
Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu
500 505 510
Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu
515 520 525
Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala
530 535 540
Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala
545 550 555 560
Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala
565 570 575
Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu
580 585 590
Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu
595 600 605
Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile
610 615 620
Pro Ala Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu
625 630 635 640
Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg
645 650 655
Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp
660 665 670
Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu
675 680 685
Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala
690 695 700
Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val
705 710 715 720
Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln
725 730 735
Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp
740 745 750
Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln
755 760 765
Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu
770 775 780
His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala
785 790 795 800
Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
805 810 815
&lt;210&gt; 129
&lt;211&gt; 6
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19 8B8的HVR-L1
&lt;400&gt; 129
Asn Ser Asn Gly Asn Thr
1 5
&lt;210&gt; 130
&lt;211&gt; 4
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19 8B8的HVR-L2
&lt;400&gt; 130
Lys Phe Asn Gly
1
&lt;210&gt; 131
&lt;211&gt; 681
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 具有HYRF突变的Fc穴链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 131
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ctgcaggggg accgtcagtc 60
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 120
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 180
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 240
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 300
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggcgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 360
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtgcacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 420
aaccaggtca gcctctcgtg cgcagtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 480
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 540
gacggctcct tcttcctcgt gagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 600
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accgcttcac gcagaagagc 660
ctctccctgt ctccgggtaa a 681
&lt;210&gt; 132
&lt;211&gt; 1602
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 人CD19抗原Fc节链avi标签的核苷酸序列
&lt;400&gt; 132
cccgaggaac ccctggtcgt gaaggtggaa gagggcgaca atgccgtgct gcagtgcctg 60
aagggcacct ccgatggccc tacccagcag ctgacctggt ccagagagag ccccctgaag 120
cccttcctga agctgtctct gggcctgcct ggcctgggca tccatatgag gcctctggcc 180
atctggctgt tcatcttcaa cgtgtcccag cagatgggcg gcttctacct gtgtcagcct 240
ggccccccat ctgagaaggc ttggcagcct ggctggaccg tgaacgtgga aggatccggc 300
gagctgttcc ggtggaacgt gtccgatctg ggcggcctgg gatgcggcct gaagaacaga 360
tctagcgagg gccccagcag ccccagcggc aaactgatga gccccaagct gtacgtgtgg 420
gccaaggaca gacccgagat ctgggagggc gagcctcctt gcctgccccc tagagacagc 480
ctgaaccaga gcctgagcca ggacctgaca atggcccctg gcagcacact gtggctgagc 540
tgtggcgtgc cacccgactc tgtgtctaga ggccctctga gctggaccca cgtgcaccct 600
aagggcccta agagcctgct gagcctggaa ctgaaggacg acaggcccgc cagagatatg 660
tgggtcatgg aaaccggcct gctgctgcct agagccacag cccaggatgc cggcaagtac 720
tactgccaca gaggcaacct gaccatgagc ttccacctgg aaatcaccgc cagacccgtg 780
ctgtggcact ggctgctgag aacaggcggc tggaaggtcg acgctagcgg tggtagtccg 840
acacctccga cacccggggg tggttctgca gacaaaactc acacatgccc accgtgccca 900
gcacctgaag ccgcaggggg accgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc 960
ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac 1020
cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag 1080
ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac 1140
caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggagcc 1200
cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc 1260
ctgcccccat gccgggatga gctgaccaag aaccaggtca gcctgtggtg cctggtcaaa 1320
ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac 1380
tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc 1440
accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag 1500
gctctgcaca accactacac gcagaagagc ctctccctgt ctccgggtaa atccggaggc 1560
ctgaacgaca tcttcgaggc ccagaagatt gaatggcacg ag 1602
&lt;210&gt; 133
&lt;211&gt; 227
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 具有HYRF突变的Fc穴链
&lt;400&gt; 133
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
&lt;210&gt; 134
&lt;211&gt; 534
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 人CD19抗原Fc节链avi标签
&lt;400&gt; 134
Pro Glu Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp Asn Ala Val
1 5 10 15
Leu Gln Cys Leu Lys Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln Gln Leu Thr
20 25 30
Trp Ser Arg Glu Ser Pro Leu Lys Pro Phe Leu Lys Leu Ser Leu Gly
35 40 45
Leu Pro Gly Leu Gly Ile His Met Arg Pro Leu Ala Ile Trp Leu Phe
50 55 60
Ile Phe Asn Val Ser Gln Gln Met Gly Gly Phe Tyr Leu Cys Gln Pro
65 70 75 80
Gly Pro Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr Val Asn Val
85 90 95
Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp Leu Gly Gly
100 105 110
Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro Ser Ser Pro
115 120 125
Ser Gly Lys Leu Met Ser Pro Lys Leu Tyr Val Trp Ala Lys Asp Arg
130 135 140
Pro Glu Ile Trp Glu Gly Glu Pro Pro Cys Leu Pro Pro Arg Asp Ser
145 150 155 160
Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro Gly Ser Thr
165 170 175
Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser Arg Gly Pro
180 185 190
Leu Ser Trp Thr His Val His Pro Lys Gly Pro Lys Ser Leu Leu Ser
195 200 205
Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Ala Arg Asp Met Trp Val Met Glu
210 215 220
Thr Gly Leu Leu Leu Pro Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala Gly Lys Tyr
225 230 235 240
Tyr Cys His Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu Glu Ile Thr
245 250 255
Ala Arg Pro Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly Gly Trp Lys
260 265 270
Val Asp Ala Ser Gly Gly Ser Pro Thr Pro Pro Thr Pro Gly Gly Gly
275 280 285
Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
290 295 300
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
305 310 315 320
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
325 330 335
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
340 345 350
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
355 360 365
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
370 375 380
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala
385 390 395 400
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
405 410 415
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
420 425 430
Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
435 440 445
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
450 455 460
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
465 470 475 480
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
485 490 495
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
500 505 510
Leu Ser Pro Gly Lys Ser Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln
515 520 525
Lys Ile Glu Trp His Glu
530
&lt;210&gt; 135
&lt;211&gt; 1605
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 食蟹猴CD19抗原Fc节链avi标签的核苷酸序列
&lt;400&gt; 135
ccccaggaac ccctggtcgt gaaggtggaa gagggcgaca atgccgtgct ccagtgcctg 60
gaaggcacct ccgatggccc tacacagcag ctcgtgtggt gcagagacag ccccttcgag 120
cccttcctga acctgtctct gggcctgcct ggcatgggca tcagaatggg ccctctgggc 180
atctggctgc tgatcttcaa cgtgtccaac cagaccggcg gcttctacct gtgtcagcct 240
ggcctgccaa gcgagaaggc ttggcagcct ggatggaccg tgtccgtgga aggatctggc 300
gagctgttcc ggtggaacgt gtccgatctg ggcggcctgg gatgcggcct gaagaacaga 360
agcagcgagg gccctagcag ccccagcggc aagctgaata gcagccagct gtacgtgtgg 420
gccaaggaca gacccgagat gtgggagggc gagcctgtgt gtggcccccc tagagatagc 480
ctgaaccaga gcctgagcca ggacctgaca atggcccctg gcagcacact gtggctgagc 540
tgtggcgtgc cacccgactc tgtgtccaga ggccctctga gctggacaca cgtgcggcca 600
aagggcccta agagcagcct gctgagcctg gaactgaagg acgaccggcc cgaccgggat 660
atgtgggtgg tggatacagg cctgctgctg accagagcca cagcccagga tgccggcaag 720
tactactgcc acagaggcaa ctggaccaag agcttttacc tggaaatcac cgccagaccc 780
gccctgtggc actggctgct gagaatcgga ggctggaagg tcgacgctag cggtggtagt 840
ccgacacctc cgacacccgg gggtggttct gcagacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 900
ccagcacctg aagccgcagg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 960
accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 1020
gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 1080
aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 1140
caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctcgga 1200
gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1260
accctgcccc catgccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgtg gtgcctggtc 1320
aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1380
aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1440
ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1500
gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaatccgga 1560
ggcctgaacg acatcttcga ggcccagaag attgaatggc acgag 1605
&lt;210&gt; 136
&lt;211&gt; 535
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 食蟹猴CD19抗原Fc节链avi标签
&lt;400&gt; 136
Pro Gln Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp Asn Ala Val
1 5 10 15
Leu Gln Cys Leu Glu Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln Gln Leu Val
20 25 30
Trp Cys Arg Asp Ser Pro Phe Glu Pro Phe Leu Asn Leu Ser Leu Gly
35 40 45
Leu Pro Gly Met Gly Ile Arg Met Gly Pro Leu Gly Ile Trp Leu Leu
50 55 60
Ile Phe Asn Val Ser Asn Gln Thr Gly Gly Phe Tyr Leu Cys Gln Pro
65 70 75 80
Gly Leu Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr Val Ser Val
85 90 95
Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp Leu Gly Gly
100 105 110
Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro Ser Ser Pro
115 120 125
Ser Gly Lys Leu Asn Ser Ser Gln Leu Tyr Val Trp Ala Lys Asp Arg
130 135 140
Pro Glu Met Trp Glu Gly Glu Pro Val Cys Gly Pro Pro Arg Asp Ser
145 150 155 160
Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro Gly Ser Thr
165 170 175
Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser Arg Gly Pro
180 185 190
Leu Ser Trp Thr His Val Arg Pro Lys Gly Pro Lys Ser Ser Leu Leu
195 200 205
Ser Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Asp Arg Asp Met Trp Val Val
210 215 220
Asp Thr Gly Leu Leu Leu Thr Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala Gly Lys
225 230 235 240
Tyr Tyr Cys His Arg Gly Asn Trp Thr Lys Ser Phe Tyr Leu Glu Ile
245 250 255
Thr Ala Arg Pro Ala Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Ile Gly Gly Trp
260 265 270
Lys Val Asp Ala Ser Gly Gly Ser Pro Thr Pro Pro Thr Pro Gly Gly
275 280 285
Gly Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
290 295 300
Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
305 310 315 320
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
325 330 335
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
340 345 350
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
355 360 365
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
370 375 380
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly
385 390 395 400
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
405 410 415
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
420 425 430
Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
435 440 445
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
450 455 460
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
465 470 475 480
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
485 490 495
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
500 505 510
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ser Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala
515 520 525
Gln Lys Ile Glu Trp His Glu
530 535
&lt;210&gt; 137
&lt;211&gt; 363
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8) VH亲本克隆的核苷酸序列
&lt;400&gt; 137
caagttcaat tggttcaatc tggtgctgaa gtaaaaaaac cgggcgcttc cgttaaagtg 60
agctgcaaag catctggtta caccttcact gactatatca tgcactgggt tcgtcaggcc 120
ccgggccagg gtctggagtg gatgggctac attaacccat acaacgacgg ttccaaatat 180
accgagaaat tccagggccg cgtcacgatg accagcgaca cttctatctc caccgcgtac 240
atggaactgt ctagactgcg ttctgacgac accgctgttt actattgtgc acgcggtact 300
tactactacg gttccgccct ctttgattac tggggccaag gtaccacggt gaccgtaagc 360
tct 363
&lt;210&gt; 138
&lt;211&gt; 336
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 (8B8) VL亲本克隆的核苷酸序列
&lt;400&gt; 138
gatattgtta tgactcaaac tccactgtct ctgtccgtga ccccgggtca gccagcgagc 60
atttcttgca aatccagcca atctctggaa aactccaacg gcaacacgta cctgaactgg 120
tatctccaga aaccgggtca gagcccgcag ctgctgatct accgtgtatc taagcgcttc 180
tccggcgttc ctgatcgttt cagcggttct ggatccggca ccgactttac tctgaaaatc 240
agccgtgtgg aagctgaaga cgttggcgtc tactattgtc tgcagttgac ccacgttccg 300
tacaccttcg gtcaaggaac taaactggaa attaaa 336
&lt;210&gt; 139
&lt;211&gt; 94
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 43-45: 40% Y, 6% A/S/T/G/P/D/N/E/Q/V, 49-51: 40% N, 6%
A/S/T/Y/G/P/D/E/Q/V, 55-57: 25% S/T/Q/E, 61-63: 25% S/T/Q/E
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (43)..(45)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (49)..(51)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (55)..(57)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (61)..(63)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;400&gt; 139
cagctgcggg ctctgacccg gtttctggag ataccagttc agnnncgtnn ngccnnngga 60
nnnttccaga gattggctgg atttgcaaga aatg 94
&lt;210&gt; 140
&lt;211&gt; 99
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 40-42: 30% R, 20% E, 5% A/S/T/Y/G/P/D/N/Q/V. 49-51: 30% K, 20% S,
5% A/N/T/Y/G/P/D/E/Q/V, 55-57: 40% F, 5% A/S/T/Y/G/P/D/E/Q/V/I/L,
58-60: 40% S, 6.6% A/T/Y/G/P/D/E/Q/V, 67-69: 50% P, 50% L
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (40)..(42)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (49)..(51)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (55)..(57)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (58)..(60)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (67)..(69)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;400&gt; 140
ctccagaaac cgggtcagag cccgcagctg ctgatctacn nngtatctnn ncgcnnnnnn 60
ggcgttnnng atcgtttcag cggttctgga tccggcacc 99
&lt;210&gt; 141
&lt;211&gt; 99
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 40-42: 52% H, 4% G/A/S/P/T/N/Y/D/E/Q/V/I, 46-48: 30% I, 15% Y, 5%
G/A/S/T/P/N/H/D/E/Q/V, 49-51: 52% Y, 4% G/A/S/P/T/N/H/D/E/Q/V/I,
52-54: 30% D, 15% G, 5% A/S/P/Y/N/H/D/E/Q/V/I, 55-57: 52% T, 4%
G/A/S/P/Y/N/H/D/E/Q/V/I, 61-63: 52% T, 4% G/A/S/P/Y/N/H/D/E/Q/V/I
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (40)..(42)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (46)..(48)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (49)..(51)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (52)..(54)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (55)..(57)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (61)..(63)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;400&gt; 141
catccactcc agaccctggc ccggggcctg acgaacccan nncatnnnnn nnnnnnngaa 60
nnngtaacca gatgctttgc agctcacttt aacggaagc 99
&lt;210&gt; 142
&lt;211&gt; 99
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 34-36: 45% Y, 5% 其它, 40-42: 52% N, 4% 其它, 46-48: 40% Y,
5% 其它, 49-51: 30% N, 15% S, 5% 其它, 52-54: 30% D, 15% G,
5% 其它, 55-57: 52% G, 4% 其它, 61-63: 30% K, 15% N, 4%
其它, 70-72: 30% E, 15% Q, 5% 其它
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (34)..(36)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (40)..(42)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (46)..(48)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (49)..(51)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (52)..(54)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (55)..(57)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (61)..(63)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (70)..(72)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;400&gt; 142
caggccccgg gccagggtct ggagtggatg ggcnnnattn nnccannnnn nnnnnnntcc 60
nnntataccn nnaaattcca gggccgcgtc acgatgacc 99
&lt;210&gt; 143
&lt;211&gt; 33
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 H3反向恒定
&lt;400&gt; 143
cgtcaccggt tcggggaagt agtccttgac cag 33
&lt;210&gt; 144
&lt;211&gt; 26
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; LMB3
&lt;400&gt; 144
caggaaacag ctatgaccat gattac 26
&lt;210&gt; 145
&lt;211&gt; 33
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 L1正向恒定
&lt;400&gt; 145
tggtatctcc agaaaccggg tcagagcccg cag 33
&lt;210&gt; 146
&lt;211&gt; 84
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 34-36: 52% Y, 4% 其它, 37-39: 52% P, 4% 其它, 40-42: 42% V,
10% L, 4% 其它, 43-45: 52% H, 4% 其它, 46-48: 42% T, 10% I,
4% 其它, 49-51: 45% L, 11% G, 4% 其它
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (34)..(36)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (37)..(39)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (40)..(42)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (43)..(45)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (46)..(48)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (49)..(51)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;400&gt; 146
tttaatttcc agtttagttc cttgaccgaa ggtnnnnnnn nnnnnnnnnn nctgcagaca 60
atagtagacg ccaacgtctt cagc 84
&lt;210&gt; 147
&lt;211&gt; 35
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19 L3正向恒定
&lt;400&gt; 147
accttcggtc aaggaactaa actggaaatt aaacg 35
&lt;210&gt; 148
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 位置59-61: 50% L, 3.8% 其它, 62-64: 50% A, 4.2% 其它, 65-67:
50% S, 4.2% 其它, 68-70: 50% G, 4.2% 其它, 71-73: 50% Y, 4.2%
其它, 74-76: 50% Y, 4.2% 其它, 77-79: 50% Y, 4.2% 其它,
80-82: 50% T, 4.2% 其它, 83-85: 50% G, 4.2% 其它。
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (54)..(58)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g, 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (59)..(61)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (62)..(64)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (65)..(67)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (68)..(70)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (71)..(73)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (74)..(76)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (77)..(79)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (80)..(82)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; 混杂特征
&lt;222&gt; (83)..(85)
&lt;223&gt; n 是 a, c, g 或 t
&lt;400&gt; 148
ttggtgctag cagagcttac ggtcaccgtg gtaccttggc cccagtaatc aaannnnnnn 60
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn gcgtgcacaa tagtaaacag cggtgtc 107
&lt;210&gt; 149
&lt;211&gt; 1615
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; SNAP标签人 CD19 ECD- PDGFR DNA
&lt;400&gt; 149
ggccgccgct agcggcatcg actacaagga cgacgatgac aaggccggca tcgatgccat 60
catggacaaa gactgcgaaa tgaagcgcac caccctggat agccctctgg gcaagctgga 120
actgtctggg tgcgaacagg gcctgcacga gatcaagctg ctgggcaaag gaacatctgc 180
cgccgacgcc gtggaagtgc ctgccccagc cgccgtgctg ggcggaccag agccactgat 240
gcaggccacc gcctggctca acgcctactt tcaccagcct gaggccatcg aggagttccc 300
tgtgccagcc ctgcaccacc cagtgttcca gcaggagagc tttacccgcc aggtgctgtg 360
gaaactgctg aaagtggtga agttcggaga ggtcatcagc taccagcagc tggccgccct 420
ggccggcaat cccgccgcca ccgccgccgt gaaaaccgcc ctgagcggaa atcccgtgcc 480
cattctgatc ccctgccacc gggtggtgtc tagctctggc gccgtggggg gctacgaggg 540
cgggctcgcc gtgaaagagt ggctgctggc ccacgagggc cacagactgg gcaagcctgg 600
gctgggtgat atccccgagg aacccctggt cgtgaaggtg gaagagggcg acaatgccgt 660
gctgcagtgc ctgaagggca cctccgatgg ccctacccag cagctgacct ggtccagaga 720
gagccccctg aagcccttcc tgaagctgtc tctgggcctg cctggcctgg gcatccatat 780
gaggcctctg gccatctggc tgttcatctt caacgtgtcc cagcagatgg gcggcttcta 840
cctgtgtcag cctggccccc catctgagaa ggcttggcag cctggctgga ccgtgaacgt 900
ggaaggatcc ggcgagctgt tccggtggaa cgtgtccgat ctgggcggcc tgggatgcgg 960
cctgaagaac agatctagcg agggccccag cagccccagc ggcaaactga tgagccccaa 1020
gctgtacgtg tgggccaagg acagacccga gatctgggag ggcgagcctc cttgcctgcc 1080
ccctagagac agcctgaacc agagcctgag ccaggacctg acaatggccc ctggcagcac 1140
actgtggctg agctgtggcg tgccacccga ctctgtgtct agaggccctc tgagctggac 1200
ccacgtgcac cctaagggcc ctaagagcct gctgagcctg gaactgaagg acgacaggcc 1260
cgccagagat atgtgggtca tggaaaccgg cctgctgctg cctagagcca cagcccagga 1320
tgccggcaag tactactgcc acagaggcaa cctgaccatg agcttccacc tggaaatcac 1380
cgccagaccc gtgctgtggc actggctgct gagaacaggc ggctggaagg tcgacgaaca 1440
aaaactcatc tcagaagagg atctgaatgc tgtgggccag gacacgcagg aggtcatcgt 1500
ggtgccacac tccttgccct ttaaggtggt ggtgatctca gccatcctgg ccctggtggt 1560
gctcaccatc atctccctta tcatcctcat catgctttgg cagaagaagc cacgt 1615
&lt;210&gt; 150
&lt;211&gt; 1620
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; SNAP标签食蟹猴CD19 ECD- PDGFR DNA
&lt;400&gt; 150
ccggccgccg ctagcggcat cgactacaag gacgacgatg acaaggccgg catcgatgcc 60
atcatggaca aagactgcga aatgaagcgc accaccctgg atagccctct gggcaagctg 120
gaactgtctg ggtgcgaaca gggcctgcac gagatcaagc tgctgggcaa aggaacatct 180
gccgccgacg ccgtggaagt gcctgcccca gccgccgtgc tgggcggacc agagccactg 240
atgcaggcca ccgcctggct caacgcctac tttcaccagc ctgaggccat cgaggagttc 300
cctgtgccag ccctgcacca cccagtgttc cagcaggaga gctttacccg ccaggtgctg 360
tggaaactgc tgaaagtggt gaagttcgga gaggtcatca gctaccagca gctggccgcc 420
ctggccggca atcccgccgc caccgccgcc gtgaaaaccg ccctgagcgg aaatcccgtg 480
cccattctga tcccctgcca ccgggtggtg tctagctctg gcgccgtggg gggctacgag 540
ggcgggctcg ccgtgaaaga gtggctgctg gcccacgagg gccacagact gggcaagcct 600
gggctgggtg atatccccca ggaacccctg gtcgtgaagg tggaagaggg cgacaatgcc 660
gtgctccagt gtctcgaggg cacctccgat ggccctacac agcagctcgt gtggtgcaga 720
gacagcccct tcgagccctt cctgaacctg tctctgggcc tgcctggcat gggcatcaga 780
atgggccctc tgggcatctg gctgctgatc ttcaacgtgt ccaaccagac cggcggcttc 840
tacctgtgtc agcctggcct gccaagcgag aaggcttggc agcctggatg gaccgtgtcc 900
gtggaaggat ctggcgagct gttccggtgg aacgtgtccg atctgggcgg cctgggatgc 960
ggcctgaaga acagaagcag cgagggccct agcagcccca gcggcaagct gaatagcagc 1020
cagctgtacg tgtgggccaa ggacagaccc gagatgtggg agggcgagcc tgtgtgtggc 1080
ccccctagag atagcctgaa ccagagcctg agccaggacc tgacaatggc ccctggcagc 1140
acactgtggc tgagctgtgg cgtgccaccc gactctgtgt ccagaggccc tctgagctgg 1200
acacacgtgc ggcctaaggg ccctaagagc agcctgctga gcctggaact gaaggacgac 1260
cggcccgacc gggatatgtg ggtggtggat acaggcctgc tgctgaccag agccacagcc 1320
caggatgccg gcaagtacta ctgccacaga ggcaactgga ccaagagctt ttacctggaa 1380
atcaccgcca gacccgccct gtggcactgg ctgctgagaa tcggaggctg gaaggtcgac 1440
gagcagaagc tgatctccga agaggacctg aacgccgtgg gccaggatac ccaggaagtg 1500
atcgtggtgc cccacagcct gcccttcaag gtggtcgtga tcagcgccat tctggccctg 1560
gtggtgctga ccatcatcag cctgatcatc ctgattatgc tgtggcagaa aaagccccgc 1620
&lt;210&gt; 151
&lt;211&gt; 539
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; SNAP标签人CD19 ECD- PDGFR
&lt;400&gt; 151
Pro Ala Ala Ala Ser Gly Ile Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Ala
1 5 10 15
Gly Ile Asp Ala Ile Met Asp Lys Asp Cys Glu Met Lys Arg Thr Thr
20 25 30
Leu Asp Ser Pro Leu Gly Lys Leu Glu Leu Ser Gly Cys Glu Gln Gly
35 40 45
Leu His Glu Ile Lys Leu Leu Gly Lys Gly Thr Ser Ala Ala Asp Ala
50 55 60
Val Glu Val Pro Ala Pro Ala Ala Val Leu Gly Gly Pro Glu Pro Leu
65 70 75 80
Met Gln Ala Thr Ala Trp Leu Asn Ala Tyr Phe His Gln Pro Glu Ala
85 90 95
Ile Glu Glu Phe Pro Val Pro Ala Leu His His Pro Val Phe Gln Gln
100 105 110
Glu Ser Phe Thr Arg Gln Val Leu Trp Lys Leu Leu Lys Val Val Lys
115 120 125
Phe Gly Glu Val Ile Ser Tyr Gln Gln Leu Ala Ala Leu Ala Gly Asn
130 135 140
Pro Ala Ala Thr Ala Ala Val Lys Thr Ala Leu Ser Gly Asn Pro Val
145 150 155 160
Pro Ile Leu Ile Pro Cys His Arg Val Val Ser Ser Ser Gly Ala Val
165 170 175
Gly Gly Tyr Glu Gly Gly Leu Ala Val Lys Glu Trp Leu Leu Ala His
180 185 190
Glu Gly His Arg Leu Gly Lys Pro Gly Leu Gly Asp Ile Pro Glu Glu
195 200 205
Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp Asn Ala Val Leu Gln Cys
210 215 220
Leu Lys Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln Gln Leu Thr Trp Ser Arg
225 230 235 240
Glu Ser Pro Leu Lys Pro Phe Leu Lys Leu Ser Leu Gly Leu Pro Gly
245 250 255
Leu Gly Ile His Met Arg Pro Leu Ala Ile Trp Leu Phe Ile Phe Asn
260 265 270
Val Ser Gln Gln Met Gly Gly Phe Tyr Leu Cys Gln Pro Gly Pro Pro
275 280 285
Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr Val Asn Val Glu Gly Ser
290 295 300
Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp Leu Gly Gly Leu Gly Cys
305 310 315 320
Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro Ser Ser Pro Ser Gly Lys
325 330 335
Leu Met Ser Pro Lys Leu Tyr Val Trp Ala Lys Asp Arg Pro Glu Ile
340 345 350
Trp Glu Gly Glu Pro Pro Cys Leu Pro Pro Arg Asp Ser Leu Asn Gln
355 360 365
Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro Gly Ser Thr Leu Trp Leu
370 375 380
Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser Arg Gly Pro Leu Ser Trp
385 390 395 400
Thr His Val His Pro Lys Gly Pro Lys Ser Leu Leu Ser Leu Glu Leu
405 410 415
Lys Asp Asp Arg Pro Ala Arg Asp Met Trp Val Met Glu Thr Gly Leu
420 425 430
Leu Leu Pro Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala Gly Lys Tyr Tyr Cys His
435 440 445
Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu Glu Ile Thr Ala Arg Pro
450 455 460
Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly Gly Trp Lys Val Asp Glu
465 470 475 480
Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn Ala Val Gly Gln Asp Thr
485 490 495
Gln Glu Val Ile Val Val Pro His Ser Leu Pro Phe Lys Val Val Val
500 505 510
Ile Ser Ala Ile Leu Ala Leu Val Val Leu Thr Ile Ile Ser Leu Ile
515 520 525
Ile Leu Ile Met Leu Trp Gln Lys Lys Pro Arg
530 535
&lt;210&gt; 152
&lt;211&gt; 540
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; SNAP标签食蟹猴CD19 ECD- PDGFR
&lt;400&gt; 152
Pro Ala Ala Ala Ser Gly Ile Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Ala
1 5 10 15
Gly Ile Asp Ala Ile Met Asp Lys Asp Cys Glu Met Lys Arg Thr Thr
20 25 30
Leu Asp Ser Pro Leu Gly Lys Leu Glu Leu Ser Gly Cys Glu Gln Gly
35 40 45
Leu His Glu Ile Lys Leu Leu Gly Lys Gly Thr Ser Ala Ala Asp Ala
50 55 60
Val Glu Val Pro Ala Pro Ala Ala Val Leu Gly Gly Pro Glu Pro Leu
65 70 75 80
Met Gln Ala Thr Ala Trp Leu Asn Ala Tyr Phe His Gln Pro Glu Ala
85 90 95
Ile Glu Glu Phe Pro Val Pro Ala Leu His His Pro Val Phe Gln Gln
100 105 110
Glu Ser Phe Thr Arg Gln Val Leu Trp Lys Leu Leu Lys Val Val Lys
115 120 125
Phe Gly Glu Val Ile Ser Tyr Gln Gln Leu Ala Ala Leu Ala Gly Asn
130 135 140
Pro Ala Ala Thr Ala Ala Val Lys Thr Ala Leu Ser Gly Asn Pro Val
145 150 155 160
Pro Ile Leu Ile Pro Cys His Arg Val Val Ser Ser Ser Gly Ala Val
165 170 175
Gly Gly Tyr Glu Gly Gly Leu Ala Val Lys Glu Trp Leu Leu Ala His
180 185 190
Glu Gly His Arg Leu Gly Lys Pro Gly Leu Gly Asp Ile Pro Gln Glu
195 200 205
Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp Asn Ala Val Leu Gln Cys
210 215 220
Leu Glu Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln Gln Leu Val Trp Cys Arg
225 230 235 240
Asp Ser Pro Phe Glu Pro Phe Leu Asn Leu Ser Leu Gly Leu Pro Gly
245 250 255
Met Gly Ile Arg Met Gly Pro Leu Gly Ile Trp Leu Leu Ile Phe Asn
260 265 270
Val Ser Asn Gln Thr Gly Gly Phe Tyr Leu Cys Gln Pro Gly Leu Pro
275 280 285
Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr Val Ser Val Glu Gly Ser
290 295 300
Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp Leu Gly Gly Leu Gly Cys
305 310 315 320
Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro Ser Ser Pro Ser Gly Lys
325 330 335
Leu Asn Ser Ser Gln Leu Tyr Val Trp Ala Lys Asp Arg Pro Glu Met
340 345 350
Trp Glu Gly Glu Pro Val Cys Gly Pro Pro Arg Asp Ser Leu Asn Gln
355 360 365
Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro Gly Ser Thr Leu Trp Leu
370 375 380
Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser Arg Gly Pro Leu Ser Trp
385 390 395 400
Thr His Val Arg Pro Lys Gly Pro Lys Ser Ser Leu Leu Ser Leu Glu
405 410 415
Leu Lys Asp Asp Arg Pro Asp Arg Asp Met Trp Val Val Asp Thr Gly
420 425 430
Leu Leu Leu Thr Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala Gly Lys Tyr Tyr Cys
435 440 445
His Arg Gly Asn Trp Thr Lys Ser Phe Tyr Leu Glu Ile Thr Ala Arg
450 455 460
Pro Ala Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Ile Gly Gly Trp Lys Val Asp
465 470 475 480
Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn Ala Val Gly Gln Asp
485 490 495
Thr Gln Glu Val Ile Val Val Pro His Ser Leu Pro Phe Lys Val Val
500 505 510
Val Ile Ser Ala Ile Leu Ala Leu Val Val Leu Thr Ile Ile Ser Leu
515 520 525
Ile Ile Leu Ile Met Leu Trp Gln Lys Lys Pro Arg
530 535 540
&lt;210&gt; 153
&lt;211&gt; 1914
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CEA(T84.66-LCHA) Fc节单体4-1BB (71-248)配体的核苷酸序列
&lt;400&gt; 153
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ccggcagcag cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggctt caacatcaag gacacctaca tgcactgggt gcgccaggcc 120
cctggacagg gactggaatg gatgggcaga atcgaccccg ccaacggcaa cagcaaatac 180
gtgcccaagt tccagggcag agtgaccatc accgccgaca ccagcacctc caccgcctac 240
atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgtgc ccccttcggc 300
tactacgtgt ccgactacgc catggcctat tggggccagg gcacactcgt gaccgtgtcc 360
tctgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc ctgcagagat 1080
gagctgacca agaaccaggt gtccctgtgg tgtctggtca agggcttcta ccccagcgat 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cctgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tactccaaac tgaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaagt ccctgagcct gagccccggc ggaggcggcg gaagcggagg aggaggatcc 1380
agagagggcc ctgagctgag ccctgatgat cctgccggac tgctggacct gcggcaggga 1440
atgtttgccc agctggtggc ccagaacgtg ctgctgatcg atggccccct gtcctggtac 1500
agcgatcctg gactggctgg cgtgtcactg acaggcggcc tgagctacaa agaggacacc 1560
aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg 1620
agagtggtgg ccggcgaagg atctggctct gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg 1680
agatctgctg ctggcgccgc tgctctggca ctgacagtgg atctgcctcc tgccagcagc 1740
gaggcccgga atagcgcatt tgggtttcaa ggcaggctgc tgcacctgtc tgccggccag 1800
aggctgggag tgcatctgca cacagaggcc agggctagac acgcctggca gctgacacag 1860
ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg acccccgaga ttcctgccgg gctc 1914
&lt;210&gt; 154
&lt;211&gt; 654
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CEA(T84.66-LCHA)轻链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 154
gagatcgtgc tgacccagag ccctgccacc ctgtcactgt ctccaggcga gagagccacc 60
ctgagctgta gagccggcga gagcgtggac atcttcggcg tgggatttct gcactggtat 120
cagcagaagc ccggccaggc ccccagactg ctgatctaca gagccagcaa ccgggccaca 180
ggcatccccg ccagattttc tggctctggc agcggcaccg acttcaccct gacaatcagc 240
agcctggaac ccgaggactt cgccgtgtac tactgccagc agaccaacga ggacccctac 300
acctttggcc agggcaccaa gctggaaatc aagcgtacgg tggctgcacc atctgtcttc 360
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420
aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 654
&lt;210&gt; 155
&lt;211&gt; 638
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CEA (T84.66-LCHA) Fc节单体4-1-BB (71-248)配体
&lt;400&gt; 155
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro
450 455 460
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
465 470 475 480
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
485 490 495
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
500 505 510
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
515 520 525
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
530 535 540
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
545 550 555 560
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
565 570 575
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
580 585 590
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
595 600 605
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
610 615 620
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630 635
&lt;210&gt; 156
&lt;211&gt; 218
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CEA(T84.66-LCHA)轻链
&lt;400&gt; 156
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Gly Glu Ser Val Asp Ile Phe
20 25 30
Gly Val Gly Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
&lt;210&gt; 157
&lt;211&gt; 2448
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CEA(T84.66-LCHA) Fc节二聚体4-1BB (71-248)配体的核苷酸序列
&lt;400&gt; 157
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ccggcagcag cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggctt caacatcaag gacacctaca tgcactgggt gcgccaggcc 120
cctggacagg gactggaatg gatgggcaga atcgaccccg ccaacggcaa cagcaaatac 180
gtgcccaagt tccagggcag agtgaccatc accgccgaca ccagcacctc caccgcctac 240
atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgtgc ccccttcggc 300
tactacgtgt ccgactacgc catggcctat tggggccagg gcacactcgt gaccgtgtcc 360
tctgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc ctgcagagat 1080
gagctgacca agaaccaggt gtccctgtgg tgtctggtca agggcttcta ccccagcgat 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cctgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tactccaaac tgaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaagt ccctgagcct gagccccggc agagagggcc ctgagctgag ccctgatgat 1380
cctgccggac tgctggacct gcggcaggga atgtttgccc agctggtggc ccagaacgtg 1440
ctgctgatcg atggccccct gtcctggtac agcgatcctg gactggctgg cgtgtcactg 1500
acaggcggcc tgagctacaa agaggacacc aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg 1560
tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg agagtggtgg ccggcgaagg atctggctct 1620
gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg agatctgctg ctggcgccgc tgctctggca 1680
ctgacagtgg atctgcctcc tgccagcagc gaggcccgga atagcgcatt tgggtttcaa 1740
ggcaggctgc tgcacctgtc tgccggccag aggctgggag tgcatctgca cacagaggcc 1800
agggctagac acgcctggca gctgacacag ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg 1860
acccccgaga ttccagcagg cctgggaggc ggcggatctg gcggcggagg atctagagaa 1920
ggacccgagc tgtcccccga cgatcccgct gggctgctgg atctgagaca gggcatgttc 1980
gctcagctgg tggctcagaa tgtgctgctg attgacggac ctctgagctg gtactccgac 2040
ccagggctgg caggggtgtc cctgactggg ggactgtcct acaaagaaga tacaaaagaa 2100
ctggtggtgg ctaaagctgg ggtgtactat gtgttttttc agctggaact gaggcgggtg 2160
gtggctgggg agggctcagg atctgtgtcc ctggctctgc atctgcagcc actgcgctct 2220
gcagcagggg ctgcagcact ggccctgact gtggacctgc ccccagcttc ttccgaggcc 2280
agaaacagcg ccttcgggtt ccaaggacgc ctgctgcatc tgagcgccgg acagcgcctg 2340
ggagtgcatc tgcatactga agccagagcc cggcatgctt ggcagctgac tcagggggca 2400
actgtgctgg gactgtttcg cgtgacacct gagatcccag ccgggctc 2448
&lt;210&gt; 158
&lt;211&gt; 816
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CEA(T84.66-LCHA) Fc节二聚体4-1BB (71-248)配体
&lt;400&gt; 158
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu
450 455 460
Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val
465 470 475 480
Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala
485 490 495
Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu
500 505 510
Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu
515 520 525
Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala
530 535 540
Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala
545 550 555 560
Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala
565 570 575
Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu
580 585 590
Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu
595 600 605
Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile
610 615 620
Pro Ala Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu
625 630 635 640
Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg
645 650 655
Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp
660 665 670
Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu
675 680 685
Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala
690 695 700
Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val
705 710 715 720
Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln
725 730 735
Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp
740 745 750
Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln
755 760 765
Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu
770 775 780
His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala
785 790 795 800
Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
805 810 815
&lt;210&gt; 159
&lt;211&gt; 140
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗mu CEA T84.66 VH
&lt;400&gt; 159
Met Lys Cys Ser Trp Val Ile Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly
1 5 10 15
Val Asn Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Glu
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile
35 40 45
Lys Asp Thr Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val
65 70 75 80
Pro Lys Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn
85 90 95
Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Thr Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala
115 120 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
&lt;210&gt; 160
&lt;211&gt; 131
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗mu CEA T84.66 VL
&lt;400&gt; 160
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala
20 25 30
Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Gly Glu Ser
35 40 45
Val Asp Ile Phe Gly Val Gly Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
65 70 75 80
Gly Ile Pro Val Arg Phe Ser Gly Thr Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Ile Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
Gln Gln Thr Asn Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
115 120 125
Glu Ile Lys
130
&lt;210&gt; 161
&lt;211&gt; 392
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 重链框架受体序列
&lt;400&gt; 161
taaggggctt cctagtccta aggctgagga agggatcctg gtttagttaa agaggatttt 60
attcacccct gtgtcctctc cacaggtgtc cagtcccagg tccagctggt gcaatctggg 120
gctgaggtga agaagcctgg gtcctcggtg aaggtctcct gcaaggcttc tggaggcacc 180
ttcagcagct atactatcag ctgggtgcga caggcccctg gacaagggct tgagtggatg 240
ggaaggatca tccctatcct tggtacagca aactacgcac agaagttcca gggcagagtc 300
acgattaccg cggacaaatc cacgagcaca gcctacatgg agctgagcag cctgagatct 360
gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgcgaga ga 392
&lt;210&gt; 162
&lt;211&gt; 797
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 轻链框架受体序列
&lt;400&gt; 162
ctgcagctgg aagctcagct cccacccagc tgctttgcat gtccctccca gctgccctac 60
cttccagagc ccatatcaat gcctgtgtca gagccctggg gaggaactgc tcagttagga 120
cccagaggga accatggaag ccccagctca gcttctcttc ctcctgctac tctggctccc 180
aggtgagggg aacatgaggt ggttttgcac attagtgaaa actcttgcca cctctgctca 240
gcaagaaata taattaaaat tcaaagtata tcaacaattt tggctctact caaagacagt 300
tggtttgatc ttgattacat gagtgcattt ctgttttatt tccaatttca gataccaccg 360
gagaaattgt gttgacacag tctccagcca ccctgtcttt gtctccaggg gaaagagcca 420
ccctctcctg cagggccagt cagagtgtta gcagctactt agcctggtac caacagaaac 480
ctggccaggc tcccaggctc ctcatctatg atgcatccaa cagggccact ggcatcccag 540
ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcactct caccatcagc agcctagagc 600
ctgaagattt tgcagtttat tactgtcagc agcgtagcaa ctggcctccc acagtgattc 660
cacatgaaac aaaaacccca acaagaccat cagtgtttac tagattatta taccagctgc 720
ttcctttaca gacagctagt ggggtggcca ctcagtgtta gcatctcagc tctatttggc 780
cattttggag ttcaagt 797
&lt;210&gt; 163
&lt;211&gt; 121
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 亲本CEA结合物VH
&lt;400&gt; 163
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Glu Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Thr Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
&lt;210&gt; 164
&lt;211&gt; 111
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 亲本CEA结合物VL
&lt;400&gt; 164
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Gly Glu Ser Val Asp Ile Phe
20 25 30
Gly Val Gly Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Val
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Thr Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Ile Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
&lt;210&gt; 165
&lt;211&gt; 1896
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 Fc节单体4-1BB (71-248)配体的核苷酸序列
&lt;400&gt; 165
gaggtgcaat tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttagc agttatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggcagc 300
ggatttgact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cgagtgctag caccaagggc 360
ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 420
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600
aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 660
actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagctgcag ggggaccgtc agtcttcctc 720
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960
gtctccaaca aagccctcgg cgcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccctgcagag atgagctgac caagaaccag 1080
gtgtccctgt ggtgtctggt caagggcttc taccccagcg atatcgccgt ggagtgggag 1140
agcaacggcc agcctgagaa caactacaag accacccccc ctgtgctgga cagcgacggc 1200
agcttcttcc tgtactccaa actgaccgtg gacaagagcc ggtggcagca gggcaacgtg 1260
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg cacaaccact acacccagaa gtccctgagc 1320
ctgagccccg gcggaggcgg cggaagcgga ggaggaggat ccagagaggg ccctgagctg 1380
agccctgatg atcctgccgg actgctggac ctgcggcagg gaatgtttgc ccagctggtg 1440
gcccagaacg tgctgctgat cgatggcccc ctgtcctggt acagcgatcc tggactggct 1500
ggcgtgtcac tgacaggcgg cctgagctac aaagaggaca ccaaagaact ggtggtggcc 1560
aaggccggcg tgtactacgt gttctttcag ctggaactgc ggagagtggt ggccggcgaa 1620
ggatctggct ctgtgtctct ggccctgcat ctgcagcctc tgagatctgc tgctggcgcc 1680
gctgctctgg cactgacagt ggatctgcct cctgccagca gcgaggcccg gaatagcgca 1740
tttgggtttc aaggcaggct gctgcacctg tctgccggcc agaggctggg agtgcatctg 1800
cacacagagg ccagggctag acacgcctgg cagctgacac agggcgctac agtgctgggc 1860
ctgttcagag tgacccccga gattcctgcc gggctc 1896
&lt;210&gt; 166
&lt;211&gt; 645
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47轻链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 166
gaaatcgtgt taacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcttgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggagcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg atccgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccgct gacgttcggc 300
caggggacca aagtggaaat caaacgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 360
ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 420
tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 480
caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 540
acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600
ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 645
&lt;210&gt; 167
&lt;211&gt; 632
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 Fc节单体4-1-BB (71-248)配体
&lt;400&gt; 167
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys
340 345 350
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly
435 440 445
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp
450 455 460
Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val
465 470 475 480
Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp
485 490 495
Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu
500 505 510
Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe
515 520 525
Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser
530 535 540
Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala
545 550 555 560
Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala
565 570 575
Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala
580 585 590
Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His
595 600 605
Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val
610 615 620
Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630
&lt;210&gt; 168
&lt;211&gt; 215
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47轻链
&lt;400&gt; 168
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
&lt;210&gt; 169
&lt;211&gt; 2430
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 Fc节二聚体4-1BBL (71-248)的核苷酸序列
&lt;400&gt; 169
gaggtgcaat tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttagc agttatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggcagc 300
ggatttgact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cgagtgctag caccaagggc 360
ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 420
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600
aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 660
actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagctgcag ggggaccgtc agtcttcctc 720
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960
gtctccaaca aagccctcgg cgcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccctgcagag atgagctgac caagaaccag 1080
gtgtccctgt ggtgtctggt caagggcttc taccccagcg atatcgccgt ggagtgggag 1140
agcaacggcc agcctgagaa caactacaag accacccccc ctgtgctgga cagcgacggc 1200
agcttcttcc tgtactccaa actgaccgtg gacaagagcc ggtggcagca gggcaacgtg 1260
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg cacaaccact acacccagaa gtccctgagc 1320
ctgagccccg gcagagaggg ccctgagctg agccctgatg atcctgccgg actgctggac 1380
ctgcggcagg gaatgtttgc ccagctggtg gcccagaacg tgctgctgat cgatggcccc 1440
ctgtcctggt acagcgatcc tggactggct ggcgtgtcac tgacaggcgg cctgagctac 1500
aaagaggaca ccaaagaact ggtggtggcc aaggccggcg tgtactacgt gttctttcag 1560
ctggaactgc ggagagtggt ggccggcgaa ggatctggct ctgtgtctct ggccctgcat 1620
ctgcagcctc tgagatctgc tgctggcgcc gctgctctgg cactgacagt ggatctgcct 1680
cctgccagca gcgaggcccg gaatagcgca tttgggtttc aaggcaggct gctgcacctg 1740
tctgccggcc agaggctggg agtgcatctg cacacagagg ccagggctag acacgcctgg 1800
cagctgacac agggcgctac agtgctgggc ctgttcagag tgacccccga gattccagca 1860
ggcctgggag gcggcggatc tggcggcgga ggatctagag aaggacccga gctgtccccc 1920
gacgatcccg ctgggctgct ggatctgaga cagggcatgt tcgctcagct ggtggctcag 1980
aatgtgctgc tgattgacgg acctctgagc tggtactccg acccagggct ggcaggggtg 2040
tccctgactg ggggactgtc ctacaaagaa gatacaaaag aactggtggt ggctaaagct 2100
ggggtgtact atgtgttttt tcagctggaa ctgaggcggg tggtggctgg ggagggctca 2160
ggatctgtgt ccctggctct gcatctgcag ccactgcgct ctgcagcagg ggctgcagca 2220
ctggccctga ctgtggacct gcccccagct tcttccgagg ccagaaacag cgccttcggg 2280
ttccaaggac gcctgctgca tctgagcgcc ggacagcgcc tgggagtgca tctgcatact 2340
gaagccagag cccggcatgc ttggcagctg actcaggggg caactgtgct gggactgttt 2400
cgcgtgacac ctgagatccc agccgggctc 2430
&lt;210&gt; 170
&lt;211&gt; 810
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 Fc节二聚体4-1BBL (71-248)
&lt;400&gt; 170
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys
340 345 350
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Arg Glu Gly Pro
435 440 445
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
450 455 460
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
465 470 475 480
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
485 490 495
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
500 505 510
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
515 520 525
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
530 535 540
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
545 550 555 560
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
565 570 575
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
580 585 590
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
595 600 605
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly Gly
610 615 620
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro
625 630 635 640
Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln
645 650 655
Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr
660 665 670
Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr
675 680 685
Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr
690 695 700
Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser
705 710 715 720
Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala
725 730 735
Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser
740 745 750
Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu
755 760 765
Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala
770 775 780
Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe
785 790 795 800
Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
805 810
&lt;210&gt; 171
&lt;211&gt; 2466
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(4B9) Fc穴二聚体4-1BB配体(71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 171
gaggtgcagc tgctcgaaag cggcggagga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
tcttgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt ccgccaggcc 120
cctggcaagg gactggaatg ggtgtccgcc atcatcggct ctggcgccag cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagggatgg 300
ttcggcggct tcaactactg gggacagggc accctggtca cagtgtccag cgctagcacc 360
aagggcccct ccgtgttccc cctggccccc agcagcaaga gcaccagcgg cggcacagcc 420
gctctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgagcccg tgaccgtgtc ctggaacagc 480
ggagccctga cctccggcgt gcacaccttc cccgccgtgc tgcagagttc tggcctgtat 540
agcctgagca gcgtggtcac cgtgccttct agcagcctgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaacc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aggtggagcc caagagctgc 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ctgcaggggg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggcgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtgcacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 1080
aaccaggtca gcctctcgtg cgcagtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcgt gagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtgg aggcggcgga agcggaggag gaggatccag agagggccct 1380
gagctgagcc ctgatgatcc tgccggactg ctggacctgc ggcagggaat gtttgcccag 1440
ctggtggccc agaacgtgct gctgatcgat ggccccctgt cctggtacag cgatcctgga 1500
ctggctggcg tgtcactgac aggcggcctg agctacaaag aggacaccaa agaactggtg 1560
gtggccaagg ccggcgtgta ctacgtgttc tttcagctgg aactgcggag agtggtggcc 1620
ggcgaaggat ctggctctgt gtctctggcc ctgcatctgc agcctctgag atctgctgct 1680
ggcgccgctg ctctggcact gacagtggat ctgcctcctg ccagcagcga ggcccggaat 1740
agcgcatttg ggtttcaagg caggctgctg cacctgtctg ccggccagag gctgggagtg 1800
catctgcaca cagaggccag ggctagacac gcctggcagc tgacacaggg cgctacagtg 1860
ctgggcctgt tcagagtgac ccccgagatt ccagcaggcc tgggaggcgg cggatctggc 1920
ggcggaggat ctagagaagg acccgagctg tcccccgacg atcccgctgg gctgctggat 1980
ctgagacagg gcatgttcgc tcagctggtg gctcagaatg tgctgctgat tgacggacct 2040
ctgagctggt actccgaccc agggctggca ggggtgtccc tgactggggg actgtcctac 2100
aaagaagata caaaagaact ggtggtggct aaagctgggg tgtactatgt gttttttcag 2160
ctggaactga ggcgggtggt ggctggggag ggctcaggat ctgtgtccct ggctctgcat 2220
ctgcagccac tgcgctctgc agcaggggct gcagcactgg ccctgactgt ggacctgccc 2280
ccagcttctt ccgaggccag aaacagcgcc ttcgggttcc aaggacgcct gctgcatctg 2340
agcgccggac agcgcctggg agtgcatctg catactgaag ccagagcccg gcatgcttgg 2400
cagctgactc agggggcaac tgtgctggga ctgtttcgcg tgacacctga gatcccagcc 2460
gggctc 2466
&lt;210&gt; 172
&lt;211&gt; 1242
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; Fc节单体4-1BB (71-248)配体的核苷酸序列
&lt;400&gt; 172
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ctgcaggggg accgtcagtc 60
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 120
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 180
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 240
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 300
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggcgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 360
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccct gcagagatga gctgaccaag 420
aaccaggtgt ccctgtggtg tctggtcaag ggcttctacc ccagcgatat cgccgtggag 480
tgggagagca acggccagcc tgagaacaac tacaagacca ccccccctgt gctggacagc 540
gacggcagct tcttcctgta ctccaaactg accgtggaca agagccggtg gcagcagggc 600
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 660
ctgagcctga gccccggcgg aggcggcgga agcggaggag gaggatccag agagggccct 720
gagctgagcc ctgatgatcc tgccggactg ctggacctgc ggcagggaat gtttgcccag 780
ctggtggccc agaacgtgct gctgatcgat ggccccctgt cctggtacag cgatcctgga 840
ctggctggcg tgtcactgac aggcggcctg agctacaaag aggacaccaa agaactggtg 900
gtggccaagg ccggcgtgta ctacgtgttc tttcagctgg aactgcggag agtggtggcc 960
ggcgaaggat ctggctctgt gtctctggcc ctgcatctgc agcctctgag atctgctgct 1020
ggcgccgctg ctctggcact gacagtggat ctgcctcctg ccagcagcga ggcccggaat 1080
agcgcatttg ggtttcaagg caggctgctg cacctgtctg ccggccagag gctgggagtg 1140
catctgcaca cagaggccag ggctagacac gcctggcagc tgacacaggg cgctacagtg 1200
ctgggcctgt tcagagtgac ccccgagatt cctgccgggc tc 1242
&lt;210&gt; 173
&lt;211&gt; 822
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(4B9) Fc穴二聚体4-1BB (71-248)配体链
&lt;400&gt; 173
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly
435 440 445
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro
450 455 460
Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln
465 470 475 480
Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr
485 490 495
Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr
500 505 510
Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr
515 520 525
Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser
530 535 540
Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala
545 550 555 560
Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser
565 570 575
Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu
580 585 590
Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala
595 600 605
Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe
610 615 620
Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly
625 630 635 640
Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala
645 650 655
Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln
660 665 670
Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly
675 680 685
Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr
690 695 700
Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln
705 710 715 720
Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser
725 730 735
Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala
740 745 750
Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn
755 760 765
Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln
770 775 780
Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp
785 790 795 800
Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro
805 810 815
Glu Ile Pro Ala Gly Leu
820
&lt;210&gt; 174
&lt;211&gt; 414
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; Fc节单体41-BBL (71-248)
&lt;400&gt; 174
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro
225 230 235 240
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
245 250 255
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
260 265 270
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
275 280 285
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
290 295 300
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
305 310 315 320
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
325 330 335
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
340 345 350
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
355 360 365
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
370 375 380
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
385 390 395 400
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
405 410
&lt;210&gt; 175
&lt;211&gt; 1902
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(4B9) Fc穴单体4-1BBL (71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 175
gaggtgcagc tgctcgaaag cggcggagga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
tcttgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt ccgccaggcc 120
cctggcaagg gactggaatg ggtgtccgcc atcatcggct ctggcgccag cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagggatgg 300
ttcggcggct tcaactactg gggacagggc accctggtca cagtgtccag cgctagcacc 360
aagggcccct ccgtgttccc cctggccccc agcagcaaga gcaccagcgg cggcacagcc 420
gctctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgagcccg tgaccgtgtc ctggaacagc 480
ggagccctga cctccggcgt gcacaccttc cccgccgtgc tgcagagttc tggcctgtat 540
agcctgagca gcgtggtcac cgtgccttct agcagcctgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaacc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aggtggagcc caagagctgc 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ctgcaggggg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggcgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtgcacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 1080
aaccaggtca gcctctcgtg cgcagtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcgt gagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtgg aggcggcgga agcggaggag gaggatccag agagggccct 1380
gagctgagcc ctgatgatcc tgccggactg ctggacctgc ggcagggaat gtttgcccag 1440
ctggtggccc agaacgtgct gctgatcgat ggccccctgt cctggtacag cgatcctgga 1500
ctggctggcg tgtcactgac aggcggcctg agctacaaag aggacaccaa agaactggtg 1560
gtggccaagg ccggcgtgta ctacgtgttc tttcagctgg aactgcggag agtggtggcc 1620
ggcgaaggat ctggctctgt gtctctggcc ctgcatctgc agcctctgag atctgctgct 1680
ggcgccgctg ctctggcact gacagtggat ctgcctcctg ccagcagcga ggcccggaat 1740
agcgcatttg ggtttcaagg caggctgctg cacctgtctg ccggccagag gctgggagtg 1800
catctgcaca cagaggccag ggctagacac gcctggcagc tgacacaggg cgctacagtg 1860
ctgggcctgt tcagagtgac ccccgagatt cctgccgggc tc 1902
&lt;210&gt; 176
&lt;211&gt; 1806
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; Fc节二聚体4-1BB配体(71-248)的核苷酸序列
&lt;400&gt; 176
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ctgcaggggg accgtcagtc 60
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 120
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 180
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 240
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 300
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggcgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 360
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccct gcagagatga gctgaccaag 420
aaccaggtgt ccctgtggtg tctggtcaag ggcttctacc ccagcgatat cgccgtggag 480
tgggagagca acggccagcc tgagaacaac tacaagacca ccccccctgt gctggacagc 540
gacggcagct tcttcctgta ctccaaactg accgtggaca agagccggtg gcagcagggc 600
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 660
ctgagcctga gccccggcgg aggcggcgga agcggaggag gaggatccag agagggccct 720
gagctgagcc ctgatgatcc tgccggactg ctggacctgc ggcagggaat gtttgcccag 780
ctggtggccc agaacgtgct gctgatcgat ggccccctgt cctggtacag cgatcctgga 840
ctggctggcg tgtcactgac aggcggcctg agctacaaag aggacaccaa agaactggtg 900
gtggccaagg ccggcgtgta ctacgtgttc tttcagctgg aactgcggag agtggtggcc 960
ggcgaaggat ctggctctgt gtctctggcc ctgcatctgc agcctctgag atctgctgct 1020
ggcgccgctg ctctggcact gacagtggat ctgcctcctg ccagcagcga ggcccggaat 1080
agcgcatttg ggtttcaagg caggctgctg cacctgtctg ccggccagag gctgggagtg 1140
catctgcaca cagaggccag ggctagacac gcctggcagc tgacacaggg cgctacagtg 1200
ctgggcctgt tcagagtgac ccccgagatt ccagcaggcc tgggaggcgg cggatctggc 1260
ggcggaggat ctagagaagg acccgagctg tcccccgacg atcccgctgg gctgctggat 1320
ctgagacagg gcatgttcgc tcagctggtg gctcagaatg tgctgctgat tgacggacct 1380
ctgagctggt actccgaccc agggctggca ggggtgtccc tgactggggg actgtcctac 1440
aaagaagata caaaagaact ggtggtggct aaagctgggg tgtactatgt gttttttcag 1500
ctggaactga ggcgggtggt ggctggggag ggctcaggat ctgtgtccct ggctctgcat 1560
ctgcagccac tgcgctctgc agcaggggct gcagcactgg ccctgactgt ggacctgccc 1620
ccagcttctt ccgaggccag aaacagcgcc ttcgggttcc aaggacgcct gctgcatctg 1680
agcgccggac agcgcctggg agtgcatctg catactgaag ccagagcccg gcatgcttgg 1740
cagctgactc agggggcaac tgtgctggga ctgtttcgcg tgacacctga gatcccagcc 1800
gggctc 1806
&lt;210&gt; 177
&lt;211&gt; 634
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(4B9) Fc穴单体4-1BB配体(71-248)链
&lt;400&gt; 177
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly
435 440 445
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro
450 455 460
Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln
465 470 475 480
Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr
485 490 495
Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr
500 505 510
Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr
515 520 525
Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser
530 535 540
Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala
545 550 555 560
Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser
565 570 575
Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu
580 585 590
Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala
595 600 605
Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe
610 615 620
Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630
&lt;210&gt; 178
&lt;211&gt; 602
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; Fc节二聚体4-1BB配体(71-248)
&lt;400&gt; 178
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro
225 230 235 240
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
245 250 255
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
260 265 270
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
275 280 285
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
290 295 300
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
305 310 315 320
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
325 330 335
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
340 345 350
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
355 360 365
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
370 375 380
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
385 390 395 400
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly Gly
405 410 415
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro
420 425 430
Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln
435 440 445
Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr
450 455 460
Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr
465 470 475 480
Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr
485 490 495
Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser
500 505 510
Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala
515 520 525
Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser
530 535 540
Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu
545 550 555 560
Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala
565 570 575
Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe
580 585 590
Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
595 600
&lt;210&gt; 179
&lt;211&gt; 2463
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(28H1) Fc穴二聚体4-1BB配体(71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 179
gaagtgcagc tgctggaatc cggcggaggc ctggtgcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcctgcgccg cctccggctt caccttctcc tcccacgcca tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gcctggaatg ggtgtccgcc atctgggcct ccggcgagca gtactacgcc 180
gactctgtga agggccggtt caccatctcc cgggacaact ccaagaacac cctgtacctg 240
cagatgaact ccctgcgggc cgaggacacc gccgtgtact actgtgccaa gggctggctg 300
ggcaacttcg actactgggg acagggcacc ctggtcaccg tgtccagcgc tagcaccaag 360
ggcccctccg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgct 420
ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gagcccgtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480
gccctgacct ccggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagttctgg cctgtatagc 540
ctgagcagcg tggtcaccgt gccttctagc agcctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgcgac 660
aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagctg cagggggacc gtcagtcttc 720
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020
cagccccgag aaccacaggt gtgcaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080
caggtcagcc tctcgtgcgc agtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200
ggctccttct tcctcgtgag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320
tccctgtctc cgggtggagg cggcggaagc ggaggaggag gatccagaga gggccctgag 1380
ctgagccctg atgatcctgc cggactgctg gacctgcggc agggaatgtt tgcccagctg 1440
gtggcccaga acgtgctgct gatcgatggc cccctgtcct ggtacagcga tcctggactg 1500
gctggcgtgt cactgacagg cggcctgagc tacaaagagg acaccaaaga actggtggtg 1560
gccaaggccg gcgtgtacta cgtgttcttt cagctggaac tgcggagagt ggtggccggc 1620
gaaggatctg gctctgtgtc tctggccctg catctgcagc ctctgagatc tgctgctggc 1680
gccgctgctc tggcactgac agtggatctg cctcctgcca gcagcgaggc ccggaatagc 1740
gcatttgggt ttcaaggcag gctgctgcac ctgtctgccg gccagaggct gggagtgcat 1800
ctgcacacag aggccagggc tagacacgcc tggcagctga cacagggcgc tacagtgctg 1860
ggcctgttca gagtgacccc cgagattcca gcaggcctgg gaggcggcgg atctggcggc 1920
ggaggatcta gagaaggacc cgagctgtcc cccgacgatc ccgctgggct gctggatctg 1980
agacagggca tgttcgctca gctggtggct cagaatgtgc tgctgattga cggacctctg 2040
agctggtact ccgacccagg gctggcaggg gtgtccctga ctgggggact gtcctacaaa 2100
gaagatacaa aagaactggt ggtggctaaa gctggggtgt actatgtgtt ttttcagctg 2160
gaactgaggc gggtggtggc tggggagggc tcaggatctg tgtccctggc tctgcatctg 2220
cagccactgc gctctgcagc aggggctgca gcactggccc tgactgtgga cctgccccca 2280
gcttcttccg aggccagaaa cagcgccttc gggttccaag gacgcctgct gcatctgagc 2340
gccggacagc gcctgggagt gcatctgcat actgaagcca gagcccggca tgcttggcag 2400
ctgactcagg gggcaactgt gctgggactg tttcgcgtga cacctgagat cccagccggg 2460
ctc 2463
&lt;210&gt; 180
&lt;211&gt; 821
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(28H1) Fc穴二聚体4-1BB配体(71-248)链
&lt;400&gt; 180
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Trp Ala Ser Gly Glu Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Gly Trp Leu Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly
435 440 445
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp
450 455 460
Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu
465 470 475 480
Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser
485 490 495
Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys
500 505 510
Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val
515 520 525
Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly
530 535 540
Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly
545 550 555 560
Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu
565 570 575
Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser
580 585 590
Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg
595 600 605
His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg
610 615 620
Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
625 630 635 640
Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly
645 650 655
Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn
660 665 670
Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu
675 680 685
Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys
690 695 700
Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu
705 710 715 720
Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu
725 730 735
Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu
740 745 750
Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser
755 760 765
Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg
770 775 780
Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln
785 790 795 800
Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu
805 810 815
Ile Pro Ala Gly Leu
820
&lt;210&gt; 181
&lt;211&gt; 1899
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(28H1) Fc穴单体4-1BB配体(71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 181
gaagtgcagc tgctggaatc cggcggaggc ctggtgcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcctgcgccg cctccggctt caccttctcc tcccacgcca tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gcctggaatg ggtgtccgcc atctgggcct ccggcgagca gtactacgcc 180
gactctgtga agggccggtt caccatctcc cgggacaact ccaagaacac cctgtacctg 240
cagatgaact ccctgcgggc cgaggacacc gccgtgtact actgtgccaa gggctggctg 300
ggcaacttcg actactgggg acagggcacc ctggtcaccg tgtccagcgc tagcaccaag 360
ggcccctccg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgct 420
ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gagcccgtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480
gccctgacct ccggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagttctgg cctgtatagc 540
ctgagcagcg tggtcaccgt gccttctagc agcctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgcgac 660
aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagctg cagggggacc gtcagtcttc 720
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020
cagccccgag aaccacaggt gtgcaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080
caggtcagcc tctcgtgcgc agtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200
ggctccttct tcctcgtgag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320
tccctgtctc cgggtggagg cggcggaagc ggaggaggag gatccagaga gggccctgag 1380
ctgagccctg atgatcctgc cggactgctg gacctgcggc agggaatgtt tgcccagctg 1440
gtggcccaga acgtgctgct gatcgatggc cccctgtcct ggtacagcga tcctggactg 1500
gctggcgtgt cactgacagg cggcctgagc tacaaagagg acaccaaaga actggtggtg 1560
gccaaggccg gcgtgtacta cgtgttcttt cagctggaac tgcggagagt ggtggccggc 1620
gaaggatctg gctctgtgtc tctggccctg catctgcagc ctctgagatc tgctgctggc 1680
gccgctgctc tggcactgac agtggatctg cctcctgcca gcagcgaggc ccggaatagc 1740
gcatttgggt ttcaaggcag gctgctgcac ctgtctgccg gccagaggct gggagtgcat 1800
ctgcacacag aggccagggc tagacacgcc tggcagctga cacagggcgc tacagtgctg 1860
ggcctgttca gagtgacccc cgagattcct gccgggctc 1899
&lt;210&gt; 182
&lt;211&gt; 633
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(28H1) Fc穴单体4-1BBL (71-248)链
&lt;400&gt; 182
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Trp Ala Ser Gly Glu Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Gly Trp Leu Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly
435 440 445
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp
450 455 460
Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu
465 470 475 480
Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser
485 490 495
Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys
500 505 510
Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val
515 520 525
Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly
530 535 540
Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly
545 550 555 560
Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu
565 570 575
Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser
580 585 590
Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg
595 600 605
His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg
610 615 620
Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630
&lt;210&gt; 183
&lt;211&gt; 2478
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-018) Fc穴二聚体4-1BB配体(71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 183
caggtccagc tggtgcagtc cggcgccgag gtcaagaaac ccggggcttc tgtgaaggtt 60
tcatgcaagg caagcggata caccttcacc gactatatca tgcattgggt caggcaggcc 120
cctggccaag gtctcgaatg gatgggctac attaacccat ataatgatgg ctccaaatac 180
accgagaagt ttcagggaag agtcactatg acatctgaca ccagtatcag cactgcttac 240
atggagctgt cccgccttcg gtctgatgac accgcagtgt attactgtgc caggggcaca 300
tattactacg gctcagctct gttcgactat tgggggcagg gaaccacagt aaccgtgagc 360
tccgctagca ccaagggccc ctccgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
tcctggaaca gcggagccct gacctccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagt 540
tctggcctgt atagcctgag cagcgtggtc accgtgcctt ctagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggtggag 660
cccaagagct gcgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtgca ccctgccccc atcccgggat 1080
gagctgacca agaaccaggt cagcctctcg tgcgcagtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc gtgagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt ggaggcggcg gaagcggagg aggaggatcc 1380
agagagggcc ctgagctgag ccctgatgat cctgccggac tgctggacct gcggcaggga 1440
atgtttgccc agctggtggc ccagaacgtg ctgctgatcg atggccccct gtcctggtac 1500
agcgatcctg gactggctgg cgtgtcactg acaggcggcc tgagctacaa agaggacacc 1560
aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg 1620
agagtggtgg ccggcgaagg atctggctct gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg 1680
agatctgctg ctggcgccgc tgctctggca ctgacagtgg atctgcctcc tgccagcagc 1740
gaggcccgga atagcgcatt tgggtttcaa ggcaggctgc tgcacctgtc tgccggccag 1800
aggctgggag tgcatctgca cacagaggcc agggctagac acgcctggca gctgacacag 1860
ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg acccccgaga ttccagcagg cctgggaggc 1920
ggcggatctg gcggcggagg atctagagaa ggacccgagc tgtcccccga cgatcccgct 1980
gggctgctgg atctgagaca gggcatgttc gctcagctgg tggctcagaa tgtgctgctg 2040
attgacggac ctctgagctg gtactccgac ccagggctgg caggggtgtc cctgactggg 2100
ggactgtcct acaaagaaga tacaaaagaa ctggtggtgg ctaaagctgg ggtgtactat 2160
gtgttttttc agctggaact gaggcgggtg gtggctgggg agggctcagg atctgtgtcc 2220
ctggctctgc atctgcagcc actgcgctct gcagcagggg ctgcagcact ggccctgact 2280
gtggacctgc ccccagcttc ttccgaggcc agaaacagcg ccttcgggtt ccaaggacgc 2340
ctgctgcatc tgagcgccgg acagcgcctg ggagtgcatc tgcatactga agccagagcc 2400
cggcatgctt ggcagctgac tcagggggca actgtgctgg gactgtttcg cgtgacacct 2460
gagatcccag ccgggctc 2478
&lt;210&gt; 184
&lt;211&gt; 826
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-018) Fc穴二聚体4-1BB (71-248)配体链
&lt;400&gt; 184
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro
450 455 460
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
465 470 475 480
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
485 490 495
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
500 505 510
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
515 520 525
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
530 535 540
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
545 550 555 560
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
565 570 575
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
580 585 590
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
595 600 605
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
610 615 620
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly Gly
625 630 635 640
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro
645 650 655
Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln
660 665 670
Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr
675 680 685
Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr
690 695 700
Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr
705 710 715 720
Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser
725 730 735
Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala
740 745 750
Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser
755 760 765
Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu
770 775 780
Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala
785 790 795 800
Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe
805 810 815
Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
820 825
&lt;210&gt; 185
&lt;211&gt; 1914
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-018) Fc穴单体4-1BBL (71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 185
caggtccagc tggtgcagtc cggcgccgag gtcaagaaac ccggggcttc tgtgaaggtt 60
tcatgcaagg caagcggata caccttcacc gactatatca tgcattgggt caggcaggcc 120
cctggccaag gtctcgaatg gatgggctac attaacccat ataatgatgg ctccaaatac 180
accgagaagt ttcagggaag agtcactatg acatctgaca ccagtatcag cactgcttac 240
atggagctgt cccgccttcg gtctgatgac accgcagtgt attactgtgc caggggcaca 300
tattactacg gctcagctct gttcgactat tgggggcagg gaaccacagt aaccgtgagc 360
tccgctagca ccaagggccc ctccgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
tcctggaaca gcggagccct gacctccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagt 540
tctggcctgt atagcctgag cagcgtggtc accgtgcctt ctagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggtggag 660
cccaagagct gcgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtgca ccctgccccc atcccgggat 1080
gagctgacca agaaccaggt cagcctctcg tgcgcagtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc gtgagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt ggaggcggcg gaagcggagg aggaggatcc 1380
agagagggcc ctgagctgag ccctgatgat cctgccggac tgctggacct gcggcaggga 1440
atgtttgccc agctggtggc ccagaacgtg ctgctgatcg atggccccct gtcctggtac 1500
agcgatcctg gactggctgg cgtgtcactg acaggcggcc tgagctacaa agaggacacc 1560
aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg 1620
agagtggtgg ccggcgaagg atctggctct gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg 1680
agatctgctg ctggcgccgc tgctctggca ctgacagtgg atctgcctcc tgccagcagc 1740
gaggcccgga atagcgcatt tgggtttcaa ggcaggctgc tgcacctgtc tgccggccag 1800
aggctgggag tgcatctgca cacagaggcc agggctagac acgcctggca gctgacacag 1860
ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg acccccgaga ttcctgccgg gctc 1914
&lt;210&gt; 186
&lt;211&gt; 638
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-018) Fc穴单体4-1BB配体(71-248)链
&lt;400&gt; 186
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro
450 455 460
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
465 470 475 480
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
485 490 495
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
500 505 510
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
515 520 525
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
530 535 540
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
545 550 555 560
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
565 570 575
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
580 585 590
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
595 600 605
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
610 615 620
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630 635
&lt;210&gt; 187
&lt;211&gt; 2478
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-2B11) Fc穴二聚体4-1BB配体(71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 187
caggtgcaat tggttcaatc tggtgctgaa gtaaaaaaac cgggcgcttc cgttaaagtg 60
agctgcaaag catctggtta caccttcact gactatatca tgcactgggt tcgtcaggcc 120
ccgggccagg gtctggagtg gatgggctac attaacccat acaacgacgg ttccaaatat 180
accgagaaat tccagggccg cgtcacgatg accagcgaca cttctatctc caccgcgtac 240
atggaactgt ctagactgcg ttctgacgac accgctgttt actattgtgc acgcggtacc 300
tactactacg gtccacagct gtttgattac tggggccaag gtaccacggt gaccgtaagc 360
tctgctagca ccaagggccc ctccgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
tcctggaaca gcggagccct gacctccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagt 540
tctggcctgt atagcctgag cagcgtggtc accgtgcctt ctagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggtggag 660
cccaagagct gcgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtgca ccctgccccc atcccgggat 1080
gagctgacca agaaccaggt cagcctctcg tgcgcagtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc gtgagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt ggaggcggcg gaagcggagg aggaggatcc 1380
agagagggcc ctgagctgag ccctgatgat cctgccggac tgctggacct gcggcaggga 1440
atgtttgccc agctggtggc ccagaacgtg ctgctgatcg atggccccct gtcctggtac 1500
agcgatcctg gactggctgg cgtgtcactg acaggcggcc tgagctacaa agaggacacc 1560
aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg 1620
agagtggtgg ccggcgaagg atctggctct gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg 1680
agatctgctg ctggcgccgc tgctctggca ctgacagtgg atctgcctcc tgccagcagc 1740
gaggcccgga atagcgcatt tgggtttcaa ggcaggctgc tgcacctgtc tgccggccag 1800
aggctgggag tgcatctgca cacagaggcc agggctagac acgcctggca gctgacacag 1860
ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg acccccgaga ttccagcagg cctgggaggc 1920
ggcggatctg gcggcggagg atctagagaa ggacccgagc tgtcccccga cgatcccgct 1980
gggctgctgg atctgagaca gggcatgttc gctcagctgg tggctcagaa tgtgctgctg 2040
attgacggac ctctgagctg gtactccgac ccagggctgg caggggtgtc cctgactggg 2100
ggactgtcct acaaagaaga tacaaaagaa ctggtggtgg ctaaagctgg ggtgtactat 2160
gtgttttttc agctggaact gaggcgggtg gtggctgggg agggctcagg atctgtgtcc 2220
ctggctctgc atctgcagcc actgcgctct gcagcagggg ctgcagcact ggccctgact 2280
gtggacctgc ccccagcttc ttccgaggcc agaaacagcg ccttcgggtt ccaaggacgc 2340
ctgctgcatc tgagcgccgg acagcgcctg ggagtgcatc tgcatactga agccagagcc 2400
cggcatgctt ggcagctgac tcagggggca actgtgctgg gactgtttcg cgtgacacct 2460
gagatcccag ccgggctc 2478
&lt;210&gt; 188
&lt;211&gt; 826
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-2B11) Fc穴二聚体4-1BB配体(71-248)链
&lt;400&gt; 188
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro
450 455 460
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
465 470 475 480
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
485 490 495
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
500 505 510
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
515 520 525
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
530 535 540
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
545 550 555 560
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
565 570 575
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
580 585 590
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
595 600 605
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
610 615 620
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly Gly
625 630 635 640
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro
645 650 655
Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln
660 665 670
Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr
675 680 685
Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr
690 695 700
Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr
705 710 715 720
Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser
725 730 735
Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala
740 745 750
Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser
755 760 765
Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu
770 775 780
Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala
785 790 795 800
Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe
805 810 815
Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
820 825
&lt;210&gt; 189
&lt;211&gt; 1914
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-2B11) Fc穴单体4-1BB配体(71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 189
caggtgcaat tggttcaatc tggtgctgaa gtaaaaaaac cgggcgcttc cgttaaagtg 60
agctgcaaag catctggtta caccttcact gactatatca tgcactgggt tcgtcaggcc 120
ccgggccagg gtctggagtg gatgggctac attaacccat acaacgacgg ttccaaatat 180
accgagaaat tccagggccg cgtcacgatg accagcgaca cttctatctc caccgcgtac 240
atggaactgt ctagactgcg ttctgacgac accgctgttt actattgtgc acgcggtacc 300
tactactacg gtccacagct gtttgattac tggggccaag gtaccacggt gaccgtaagc 360
tctgctagca ccaagggccc ctccgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
tcctggaaca gcggagccct gacctccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagt 540
tctggcctgt atagcctgag cagcgtggtc accgtgcctt ctagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggtggag 660
cccaagagct gcgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtgca ccctgccccc atcccgggat 1080
gagctgacca agaaccaggt cagcctctcg tgcgcagtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc gtgagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt ggaggcggcg gaagcggagg aggaggatcc 1380
agagagggcc ctgagctgag ccctgatgat cctgccggac tgctggacct gcggcaggga 1440
atgtttgccc agctggtggc ccagaacgtg ctgctgatcg atggccccct gtcctggtac 1500
agcgatcctg gactggctgg cgtgtcactg acaggcggcc tgagctacaa agaggacacc 1560
aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg 1620
agagtggtgg ccggcgaagg atctggctct gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg 1680
agatctgctg ctggcgccgc tgctctggca ctgacagtgg atctgcctcc tgccagcagc 1740
gaggcccgga atagcgcatt tgggtttcaa ggcaggctgc tgcacctgtc tgccggccag 1800
aggctgggag tgcatctgca cacagaggcc agggctagac acgcctggca gctgacacag 1860
ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg acccccgaga ttcctgccgg gctc 1914
&lt;210&gt; 190
&lt;211&gt; 638
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-2B11) Fc穴单体4-1BBL (71-248)链
&lt;400&gt; 190
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro
450 455 460
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
465 470 475 480
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
485 490 495
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
500 505 510
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
515 520 525
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
530 535 540
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
545 550 555 560
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
565 570 575
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
580 585 590
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
595 600 605
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
610 615 620
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630 635
&lt;210&gt; 191
&lt;211&gt; 2478
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CEA(T84.66-LCHA) Fc穴二聚体4-1BB配体(71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 191
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ccggcagcag cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggctt caacatcaag gacacctaca tgcactgggt gcgccaggcc 120
cctggacagg gactggaatg gatgggcaga atcgaccccg ccaacggcaa cagcaaatac 180
gtgcccaagt tccagggcag agtgaccatc accgccgaca ccagcacctc caccgcctac 240
atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgtgc ccccttcggc 300
tactacgtgt ccgactacgc catggcctat tggggccagg gcacactcgt gaccgtgtcc 360
tctgctagca ccaagggccc ctccgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
tcctggaaca gcggagccct gacctccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagt 540
tctggcctgt atagcctgag cagcgtggtc accgtgcctt ctagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggtggag 660
cccaagagct gcgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtgca ccctgccccc atcccgggat 1080
gagctgacca agaaccaggt cagcctctcg tgcgcagtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc gtgagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt ggaggcggcg gaagcggagg aggaggatcc 1380
agagagggcc ctgagctgag ccctgatgat cctgccggac tgctggacct gcggcaggga 1440
atgtttgccc agctggtggc ccagaacgtg ctgctgatcg atggccccct gtcctggtac 1500
agcgatcctg gactggctgg cgtgtcactg acaggcggcc tgagctacaa agaggacacc 1560
aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg 1620
agagtggtgg ccggcgaagg atctggctct gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg 1680
agatctgctg ctggcgccgc tgctctggca ctgacagtgg atctgcctcc tgccagcagc 1740
gaggcccgga atagcgcatt tgggtttcaa ggcaggctgc tgcacctgtc tgccggccag 1800
aggctgggag tgcatctgca cacagaggcc agggctagac acgcctggca gctgacacag 1860
ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg acccccgaga ttccagcagg cctgggaggc 1920
ggcggatctg gcggcggagg atctagagaa ggacccgagc tgtcccccga cgatcccgct 1980
gggctgctgg atctgagaca gggcatgttc gctcagctgg tggctcagaa tgtgctgctg 2040
attgacggac ctctgagctg gtactccgac ccagggctgg caggggtgtc cctgactggg 2100
ggactgtcct acaaagaaga tacaaaagaa ctggtggtgg ctaaagctgg ggtgtactat 2160
gtgttttttc agctggaact gaggcgggtg gtggctgggg agggctcagg atctgtgtcc 2220
ctggctctgc atctgcagcc actgcgctct gcagcagggg ctgcagcact ggccctgact 2280
gtggacctgc ccccagcttc ttccgaggcc agaaacagcg ccttcgggtt ccaaggacgc 2340
ctgctgcatc tgagcgccgg acagcgcctg ggagtgcatc tgcatactga agccagagcc 2400
cggcatgctt ggcagctgac tcagggggca actgtgctgg gactgtttcg cgtgacacct 2460
gagatcccag ccgggctc 2478
&lt;210&gt; 192
&lt;211&gt; 826
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CEA(T84.66-LCHA) Fc穴二聚体4-1BB (71-248)配体链
&lt;400&gt; 192
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro
450 455 460
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
465 470 475 480
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
485 490 495
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
500 505 510
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
515 520 525
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
530 535 540
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
545 550 555 560
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
565 570 575
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
580 585 590
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
595 600 605
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
610 615 620
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly Gly
625 630 635 640
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro
645 650 655
Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln
660 665 670
Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr
675 680 685
Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr
690 695 700
Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr
705 710 715 720
Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser
725 730 735
Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala
740 745 750
Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser
755 760 765
Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu
770 775 780
Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala
785 790 795 800
Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe
805 810 815
Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
820 825
&lt;210&gt; 193
&lt;211&gt; 1914
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CEA(T84.66-LCHA) Fc穴单体4-1BBL (71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 193
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ccggcagcag cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggctt caacatcaag gacacctaca tgcactgggt gcgccaggcc 120
cctggacagg gactggaatg gatgggcaga atcgaccccg ccaacggcaa cagcaaatac 180
gtgcccaagt tccagggcag agtgaccatc accgccgaca ccagcacctc caccgcctac 240
atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgtgc ccccttcggc 300
tactacgtgt ccgactacgc catggcctat tggggccagg gcacactcgt gaccgtgtcc 360
tctgctagca ccaagggccc ctccgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
tcctggaaca gcggagccct gacctccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagt 540
tctggcctgt atagcctgag cagcgtggtc accgtgcctt ctagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggtggag 660
cccaagagct gcgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtgca ccctgccccc atcccgggat 1080
gagctgacca agaaccaggt cagcctctcg tgcgcagtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc gtgagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt ggaggcggcg gaagcggagg aggaggatcc 1380
agagagggcc ctgagctgag ccctgatgat cctgccggac tgctggacct gcggcaggga 1440
atgtttgccc agctggtggc ccagaacgtg ctgctgatcg atggccccct gtcctggtac 1500
agcgatcctg gactggctgg cgtgtcactg acaggcggcc tgagctacaa agaggacacc 1560
aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg 1620
agagtggtgg ccggcgaagg atctggctct gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg 1680
agatctgctg ctggcgccgc tgctctggca ctgacagtgg atctgcctcc tgccagcagc 1740
gaggcccgga atagcgcatt tgggtttcaa ggcaggctgc tgcacctgtc tgccggccag 1800
aggctgggag tgcatctgca cacagaggcc agggctagac acgcctggca gctgacacag 1860
ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg acccccgaga ttcctgccgg gctc 1914
&lt;210&gt; 194
&lt;211&gt; 638
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CEA(T84.66-LCHA) Fc穴单体4-1BB配体(71-248)链
&lt;400&gt; 194
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Val Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro
450 455 460
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
465 470 475 480
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
485 490 495
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
500 505 510
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
515 520 525
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
530 535 540
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
545 550 555 560
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
565 570 575
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
580 585 590
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
595 600 605
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
610 615 620
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630 635
&lt;210&gt; 195
&lt;211&gt; 2460
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 Fc穴二聚体4-1BB配体(71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 195
gaggtgcaat tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttagc agttatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggcagc 300
ggatttgact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cgagtgctag caccaagggc 360
ccctccgtgt tccccctggc ccccagcagc aagagcacca gcggcggcac agccgctctg 420
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgag cccgtgaccg tgtcctggaa cagcggagcc 480
ctgacctccg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gttctggcct gtatagcctg 540
agcagcgtgg tcaccgtgcc ttctagcagc ctgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600
aaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaggtgg agcccaagag ctgcgacaaa 660
actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagctgcag ggggaccgtc agtcttcctc 720
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960
gtctccaaca aagccctcgg cgcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020
ccccgagaac cacaggtgtg caccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag 1080
gtcagcctct cgtgcgcagt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200
tccttcttcc tcgtgagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320
ctgtctccgg gtggaggcgg cggaagcgga ggaggaggat ccagagaggg ccctgagctg 1380
agccctgatg atcctgccgg actgctggac ctgcggcagg gaatgtttgc ccagctggtg 1440
gcccagaacg tgctgctgat cgatggcccc ctgtcctggt acagcgatcc tggactggct 1500
ggcgtgtcac tgacaggcgg cctgagctac aaagaggaca ccaaagaact ggtggtggcc 1560
aaggccggcg tgtactacgt gttctttcag ctggaactgc ggagagtggt ggccggcgaa 1620
ggatctggct ctgtgtctct ggccctgcat ctgcagcctc tgagatctgc tgctggcgcc 1680
gctgctctgg cactgacagt ggatctgcct cctgccagca gcgaggcccg gaatagcgca 1740
tttgggtttc aaggcaggct gctgcacctg tctgccggcc agaggctggg agtgcatctg 1800
cacacagagg ccagggctag acacgcctgg cagctgacac agggcgctac agtgctgggc 1860
ctgttcagag tgacccccga gattccagca ggcctgggag gcggcggatc tggcggcgga 1920
ggatctagag aaggacccga gctgtccccc gacgatcccg ctgggctgct ggatctgaga 1980
cagggcatgt tcgctcagct ggtggctcag aatgtgctgc tgattgacgg acctctgagc 2040
tggtactccg acccagggct ggcaggggtg tccctgactg ggggactgtc ctacaaagaa 2100
gatacaaaag aactggtggt ggctaaagct ggggtgtact atgtgttttt tcagctggaa 2160
ctgaggcggg tggtggctgg ggagggctca ggatctgtgt ccctggctct gcatctgcag 2220
ccactgcgct ctgcagcagg ggctgcagca ctggccctga ctgtggacct gcccccagct 2280
tcttccgagg ccagaaacag cgccttcggg ttccaaggac gcctgctgca tctgagcgcc 2340
ggacagcgcc tgggagtgca tctgcatact gaagccagag cccggcatgc ttggcagctg 2400
actcaggggg caactgtgct gggactgttt cgcgtgacac ctgagatccc agccgggctc 2460
&lt;210&gt; 196
&lt;211&gt; 820
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 Fc穴二聚体4-1BB配体(71-248)链
&lt;400&gt; 196
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly
435 440 445
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp
450 455 460
Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val
465 470 475 480
Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp
485 490 495
Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu
500 505 510
Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe
515 520 525
Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser
530 535 540
Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala
545 550 555 560
Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala
565 570 575
Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala
580 585 590
Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His
595 600 605
Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val
610 615 620
Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
625 630 635 640
Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu
645 650 655
Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val
660 665 670
Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala
675 680 685
Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu
690 695 700
Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu
705 710 715 720
Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala
725 730 735
Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala
740 745 750
Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala
755 760 765
Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu
770 775 780
Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu
785 790 795 800
Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile
805 810 815
Pro Ala Gly Leu
820
&lt;210&gt; 197
&lt;211&gt; 1896
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 Fc穴单体4-1BBL (71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 197
gaggtgcaat tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttagc agttatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggcagc 300
ggatttgact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cgagtgctag caccaagggc 360
ccctccgtgt tccccctggc ccccagcagc aagagcacca gcggcggcac agccgctctg 420
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgag cccgtgaccg tgtcctggaa cagcggagcc 480
ctgacctccg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gttctggcct gtatagcctg 540
agcagcgtgg tcaccgtgcc ttctagcagc ctgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600
aaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaggtgg agcccaagag ctgcgacaaa 660
actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagctgcag ggggaccgtc agtcttcctc 720
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960
gtctccaaca aagccctcgg cgcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020
ccccgagaac cacaggtgtg caccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag 1080
gtcagcctct cgtgcgcagt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200
tccttcttcc tcgtgagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320
ctgtctccgg gtggaggcgg cggaagcgga ggaggaggat ccagagaggg ccctgagctg 1380
agccctgatg atcctgccgg actgctggac ctgcggcagg gaatgtttgc ccagctggtg 1440
gcccagaacg tgctgctgat cgatggcccc ctgtcctggt acagcgatcc tggactggct 1500
ggcgtgtcac tgacaggcgg cctgagctac aaagaggaca ccaaagaact ggtggtggcc 1560
aaggccggcg tgtactacgt gttctttcag ctggaactgc ggagagtggt ggccggcgaa 1620
ggatctggct ctgtgtctct ggccctgcat ctgcagcctc tgagatctgc tgctggcgcc 1680
gctgctctgg cactgacagt ggatctgcct cctgccagca gcgaggcccg gaatagcgca 1740
tttgggtttc aaggcaggct gctgcacctg tctgccggcc agaggctggg agtgcatctg 1800
cacacagagg ccagggctag acacgcctgg cagctgacac agggcgctac agtgctgggc 1860
ctgttcagag tgacccccga gattcctgcc gggctc 1896
&lt;210&gt; 198
&lt;211&gt; 632
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 Fc穴单体4-1BBL (71-248)链
&lt;400&gt; 198
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly
435 440 445
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp
450 455 460
Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val
465 470 475 480
Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp
485 490 495
Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu
500 505 510
Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe
515 520 525
Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser
530 535 540
Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala
545 550 555 560
Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala
565 570 575
Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala
580 585 590
Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His
595 600 605
Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val
610 615 620
Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630
&lt;210&gt; 199
&lt;211&gt; 2130
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 二聚体4-1BB配体(71-248) - CL* Fc节链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 199
agagagggcc ctgagctgag ccccgatgat cctgctggac tgctggacct gcggcagggc 60
atgtttgctc agctggtggc ccagaacgtg ctgctgatcg atggccccct gtcctggtac 120
agcgatcctg gactggctgg cgtgtcactg acaggcggcc tgagctacaa agaggacacc 180
aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg 240
agagtggtgg ccggcgaagg atctggctct gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg 300
agatctgctg ctggcgccgc tgctctggca ctgacagtgg atctgcctcc tgccagcagc 360
gaggcccgga atagcgcatt tgggtttcaa ggcaggctgc tgcacctgtc tgccggccag 420
aggctgggag tgcatctgca cacagaggcc agggctagac acgcctggca gctgacacag 480
ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg acccccgaga ttccagccgg actgggaggc 540
ggcggatctg gcggcggagg atctagagaa ggacccgagc tgtcccctga cgatccagcc 600
gggctgctgg atctgagaca gggaatgttc gcccagctgg tggctcagaa tgtgctgctg 660
attgacggac ctctgagctg gtactccgac ccagggctgg caggggtgtc cctgactggg 720
ggactgtcct acaaagaaga tacaaaagaa ctggtggtgg ctaaagctgg ggtgtactat 780
gtgttttttc agctggaact gaggcgggtg gtggctgggg agggctcagg atctgtgtcc 840
ctggctctgc atctgcagcc actgcgctct gcagcagggg ctgcagcact ggccctgact 900
gtggacctgc ccccagcttc ttccgaggcc agaaacagcg ccttcgggtt ccaaggacgc 960
ctgctgcatc tgagcgccgg acagcgcctg ggagtgcatc tgcatactga agccagagcc 1020
cggcatgctt ggcagctgac tcagggggca actgtgctgg gactgtttcg cgtgacacct 1080
gagatccccg ctggactggg cggaggcggt tccggagggg gaggatctcg tacggtggct 1140
gcaccatctg tctttatctt cccacccagc gaccggaagc tgaagtctgg cacagccagc 1200
gtcgtgtgcc tgctgaataa cttctacccc cgcgaggcca aggtgcagtg gaaggtggac 1260
aatgccctgc agagcggcaa cagccaggaa agcgtgaccg agcaggacag caaggactcc 1320
acctacagcc tgagcagcac cctgaccctg agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg 1380
tacgcctgcg aagtgaccca ccagggcctg tctagccccg tgaccaagag cttcaaccgg 1440
ggcgagtgcg acaagaccca cacctgtcct ccatgccctg cccctgaagc tgctggcggc 1500
cctagcgtgt tcctgttccc cccaaagccc aaggacaccc tgatgatcag ccggacccct 1560
gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgtcc cacgaggacc ctgaagtgaa gttcaattgg 1620
tacgtggacg gcgtggaagt gcacaatgcc aagaccaagc cgcgggagga gcagtacaac 1680
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 1740
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcggcgccc ccatcgagaa aaccatctcc 1800
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatg ccgggatgag 1860
ctgaccaaga accaggtcag cctgtggtgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1920
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1980
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 2040
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 2100
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 2130
&lt;210&gt; 200
&lt;211&gt; 873
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 单体4-1BBL (71-248) -CH1*的核苷酸序列
&lt;400&gt; 200
agagagggcc ctgagctgag ccccgatgat cctgctggac tgctggacct gcggcagggc 60
atgtttgctc agctggtggc ccagaacgtg ctgctgatcg atggccccct gtcctggtac 120
agcgatcctg gactggctgg cgtgtcactg acaggcggcc tgagctacaa agaggacacc 180
aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg 240
agagtggtgg ccggcgaagg atctggctct gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg 300
agatctgctg ctggcgccgc tgctctggca ctgacagtgg atctgcctcc tgccagcagc 360
gaggcccgga atagcgcatt tgggtttcaa ggcaggctgc tgcacctgtc tgccggccag 420
aggctgggag tgcatctgca cacagaggcc agggctagac acgcctggca gctgacacag 480
ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg acccccgaga ttccagccgg actgggaggc 540
ggaggttccg gaggcggagg atctgctagc acaaagggcc ccagcgtgtt ccctctggcc 600
cctagcagca agagcacatc tggcggaaca gccgccctgg gctgcctggt ggaagattac 660
ttccccgagc ccgtgaccgt gtcctggaat tctggcgccc tgacaagcgg cgtgcacacc 720
tttccagccg tgctgcagag cagcggcctg tactctctga gcagcgtcgt gacagtgccc 780
agcagctctc tgggcaccca gacctacatc tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc 840
aaggtggacg agaaggtgga acccaagtcc tgc 873
&lt;210&gt; 201
&lt;211&gt; 1335
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 Fc穴链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 201
gaggtgcaat tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttagc agttatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggcagc 300
ggatttgact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cgagtgctag caccaagggc 360
ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 420
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600
aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 660
actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagctgcag ggggaccgtc agtcttcctc 720
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960
gtctccaaca aagccctcgg cgcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020
ccccgagaac cacaggtgtg caccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag 1080
gtcagcctct cgtgcgcagt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200
tccttcttcc tcgtgagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320
ctgtctccgg gtaaa 1335
&lt;210&gt; 202
&lt;211&gt; 710
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 二聚体4-1BB配体(71-248) - CL* Fc节链
&lt;400&gt; 202
Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp
1 5 10 15
Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu
20 25 30
Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val
35 40 45
Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val
50 55 60
Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg
65 70 75 80
Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His
85 90 95
Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr
100 105 110
Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly
115 120 125
Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val
130 135 140
His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln
145 150 155 160
Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
165 170 175
Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro
180 185 190
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
195 200 205
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
210 215 220
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
225 230 235 240
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
245 250 255
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
260 265 270
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
275 280 285
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
290 295 300
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
305 310 315 320
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
325 330 335
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
340 345 350
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly Gly
355 360 365
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val
370 375 380
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
385 390 395 400
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
405 410 415
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
420 425 430
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
435 440 445
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
450 455 460
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
465 470 475 480
Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
485 490 495
Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
500 505 510
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
515 520 525
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
530 535 540
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
545 550 555 560
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
565 570 575
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly
580 585 590
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
595 600 605
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
610 615 620
Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
625 630 635 640
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
645 650 655
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
660 665 670
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
675 680 685
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
690 695 700
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
705 710
&lt;210&gt; 203
&lt;211&gt; 291
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 单体4-1BBL (71-248) -CH1*
&lt;400&gt; 203
Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp
1 5 10 15
Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu
20 25 30
Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val
35 40 45
Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val
50 55 60
Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg
65 70 75 80
Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His
85 90 95
Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr
100 105 110
Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly
115 120 125
Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val
130 135 140
His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln
145 150 155 160
Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
165 170 175
Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ser Thr Lys
180 185 190
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
195 200 205
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
210 215 220
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
225 230 235 240
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
245 250 255
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
260 265 270
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro
275 280 285
Lys Ser Cys
290
&lt;210&gt; 204
&lt;211&gt; 445
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 Fc穴链
&lt;400&gt; 204
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
&lt;210&gt; 205
&lt;211&gt; 1335
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47重链(huIgG1 PGLALA)的核苷酸序列
&lt;400&gt; 205
gaggtgcaat tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttagc agttatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggcagc 300
ggatttgact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cgagtgctag caccaagggc 360
ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 420
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600
aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 660
actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagctgcag ggggaccgtc agtcttcctc 720
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960
gtctccaaca aagccctcgg cgcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag 1080
gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200
tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320
ctgtctccgg gtaaa 1335
&lt;210&gt; 206
&lt;211&gt; 445
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47重链(huIgG1 PGLALA)
&lt;400&gt; 206
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
&lt;210&gt; 207
&lt;211&gt; 594
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 人4-1BB His的核苷酸序列
&lt;400&gt; 207
ctgcaggacc cctgcagcaa ctgccctgcc ggcaccttct gcgacaacaa ccggaaccag 60
atctgcagcc cctgcccccc caacagcttc agctctgccg gcggacagcg gacctgcgac 120
atctgcagac agtgcaaggg cgtgttcaga acccggaaag agtgcagcag caccagcaac 180
gccgagtgcg actgcacccc cggcttccat tgtctgggag ccggctgcag catgtgcgag 240
caggactgca agcagggcca ggaactgacc aagaagggct gcaaggactg ctgcttcggc 300
accttcaacg accagaagcg gggcatctgc cggccctgga ccaactgtag cctggacggc 360
aagagcgtgc tggtcaacgg caccaaagaa cgggacgtcg tgtgcggccc cagccctgct 420
gatctgtctc ctggggccag cagcgtgacc cctcctgccc ctgccagaga gcctggccac 480
tctcctcagg tcgacgaaca gttatatttt cagggcggct caggcctgaa cgacatcttc 540
gaggcccaga agatcgagtg gcacgaggct cgagctcacc accatcacca tcac 594
&lt;210&gt; 208
&lt;211&gt; 198
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 人4-1BB His
&lt;400&gt; 208
Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn
1 5 10 15
Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser
20 25 30
Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val
35 40 45
Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp
50 55 60
Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu
65 70 75 80
Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp
85 90 95
Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro
100 105 110
Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys Ser Val Leu Val Asn Gly Thr
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro
130 135 140
Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala Pro Ala Arg Glu Pro Gly His
145 150 155 160
Ser Pro Gln Val Asp Glu Gln Leu Tyr Phe Gln Gly Gly Ser Gly Leu
165 170 175
Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu Ala Arg Ala
180 185 190
His His His His His His
195
&lt;210&gt; 209
&lt;211&gt; 2502
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(4B9) Fc穴二聚体4-1BB配体(71-254)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 209
gaggtgcagc tgctcgaaag cggcggagga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
tcttgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt ccgccaggcc 120
cctggcaagg gactggaatg ggtgtccgcc atcatcggct ctggcgccag cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagggatgg 300
ttcggcggct tcaactactg gggacagggc accctggtca cagtgtccag cgctagcacc 360
aagggcccct ccgtgttccc cctggccccc agcagcaaga gcaccagcgg cggcacagcc 420
gctctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgagcccg tgaccgtgtc ctggaacagc 480
ggagccctga cctccggcgt gcacaccttc cccgccgtgc tgcagagttc tggcctgtat 540
agcctgagca gcgtggtcac cgtgccttct agcagcctgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaacc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aggtggagcc caagagctgc 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ctgcaggggg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggcgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtgcacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 1080
aaccaggtca gcctctcgtg cgcagtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcgt gagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtgg aggcggcgga agcggaggag gaggatccag agagggccct 1380
gagctgagcc ccgatgatcc tgctggactg ctggacctgc ggcagggcat gtttgctcag 1440
ctggtggccc agaacgtgct gctgatcgat ggccccctgt cctggtacag cgatcctgga 1500
ctggctggcg tgtcactgac aggcggcctg agctacaaag aggacaccaa agaactggtg 1560
gtggccaagg ccggcgtgta ctacgtgttc tttcagctgg aactgcggag agtggtggcc 1620
ggcgaaggat ctggctctgt gtctctggcc ctgcatctgc agcctctgag aagcgctgct 1680
ggcgctgcag ctctggcact gacagtggat ctgcctcctg ccagctccga ggcccggaat 1740
agcgcatttg ggtttcaagg caggctgctg cacctgtctg ccggccagag gctgggagtg 1800
catctgcaca cagaggccag ggctagacac gcctggcagc tgacacaggg cgctacagtg 1860
ctgggcctgt tcagagtgac ccccgagatt ccagccggcc tgccttctcc aagaagcgaa 1920
ggcggaggcg gatctggcgg cggaggatct agagagggac ccgaactgtc ccctgacgat 1980
ccagccgggc tgctggatct gagacaggga atgttcgccc agctggtggc tcagaatgtg 2040
ctgctgattg acggacctct gagctggtac tccgacccag ggctggcagg ggtgtccctg 2100
actgggggac tgtcctacaa agaagataca aaagaactgg tggtggctaa agctggggtg 2160
tactatgtgt tttttcagct ggaactgagg cgggtggtgg ctggggaggg ctcaggatct 2220
gtgtccctgg ctctgcatct gcagccactg cgctctgctg ctggcgcagc tgcactggct 2280
ctgactgtgg acctgccacc agcctctagc gaggccagaa acagcgcctt cgggttccaa 2340
ggacgcctgc tgcatctgag cgccggacag cgcctgggag tgcatctgca tactgaagcc 2400
agagcccggc atgcttggca gctgactcag ggggcaactg tgctgggact gtttcgcgtg 2460
acacctgaga tccctgccgg actgccaagc cctagatcag aa 2502
&lt;210&gt; 210
&lt;211&gt; 1926
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 (VHCL) Fc节单体4-1BB (71-254)配体的核苷酸序列
&lt;400&gt; 210
gaggtgcaat tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttagc agttatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggcagc 300
ggatttgact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cgagcgctag tgtggccgct 360
ccctccgtgt ttatctttcc cccatccgat gaacagctga aaagcggcac cgcctccgtc 420
gtgtgtctgc tgaacaattt ttaccctagg gaagctaaag tgcagtggaa agtggataac 480
gcactgcagt ccggcaactc ccaggaatct gtgacagaac aggactccaa ggacagcacc 540
tactccctgt cctccaccct gacactgtct aaggctgatt atgagaaaca caaagtctac 600
gcctgcgaag tcacccatca gggcctgagc tcgcccgtca caaagagctt caacagggga 660
gagtgtgaca agacccacac ctgtccccct tgtcctgccc ctgaagctgc tggcggccct 720
tctgtgttcc tgttcccccc aaagcccaag gacaccctga tgatcagccg gacccccgaa 780
gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtcccac gaggaccctg aagtgaagtt caattggtac 840
gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ggcgccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccctgcag agatgagctg 1080
accaagaacc aggtgtccct gtggtgtctg gtcaagggct tctaccccag cgatatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaacgg ccagcctgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 1200
gacagcgacg gcagcttctt cctgtactcc aaactgaccg tggacaagag ccggtggcag 1260
cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320
aagtccctga gcctgagccc cggcggaggc ggcggaagcg gaggaggagg atccagagag 1380
ggccctgagc tgagccccga tgatcctgct ggactgctgg acctgcggca gggcatgttt 1440
gctcagctgg tggcccagaa cgtgctgctg atcgatggcc ccctgtcctg gtacagcgat 1500
cctggactgg ctggcgtgtc actgacaggc ggcctgagct acaaagagga caccaaagaa 1560
ctggtggtgg ccaaggccgg cgtgtactac gtgttctttc agctggaact gcggagagtg 1620
gtggccggcg aaggatctgg ctctgtgtct ctggccctgc atctgcagcc tctgagaagc 1680
gctgctggcg ctgcagctct ggcactgaca gtggatctgc ctcctgccag ctccgaggcc 1740
cggaatagcg catttgggtt tcaaggcagg ctgctgcacc tgtctgccgg ccagaggctg 1800
ggagtgcatc tgcacacaga ggccagggct agacacgcct ggcagctgac acagggcgct 1860
acagtgctgg gcctgttcag agtgaccccc gagattccag ccggcctgcc ttctccaaga 1920
agcgaa 1926
&lt;210&gt; 211
&lt;211&gt; 639
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 (VL-CH1)轻链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 211
gaaatcgtgt taacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcttgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggagcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg atccgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccgct gacgttcggc 300
caggggacca aagtggaaat caagagctcc gctagcacca aaggcccttc cgtgtttcct 360
ctggctccta gctccaagtc cacctctgga ggcaccgctg ctctcggatg cctcgtgaag 420
gattattttc ctgagcctgt gacagtgtcc tggaatagcg gagcactgac ctctggagtg 480
catactttcc ccgctgtgct gcagtcctct ggactgtaca gcctgagcag cgtggtgaca 540
gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc tacatctgca acgtgaacca caagcccagc 600
aacaccaagg tggacaagaa ggtggaaccc aagtcttgt 639
&lt;210&gt; 212
&lt;211&gt; 834
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(4B9) Fc穴二聚体4-1BB配体(71-254)链
&lt;400&gt; 212
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly
435 440 445
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro
450 455 460
Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln
465 470 475 480
Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr
485 490 495
Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr
500 505 510
Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr
515 520 525
Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser
530 535 540
Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala
545 550 555 560
Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser
565 570 575
Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu
580 585 590
Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala
595 600 605
Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe
610 615 620
Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
625 630 635 640
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu
645 650 655
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
660 665 670
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
675 680 685
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
690 695 700
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
705 710 715 720
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
725 730 735
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
740 745 750
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
755 760 765
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
770 775 780
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
785 790 795 800
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
805 810 815
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg
820 825 830
Ser Glu
&lt;210&gt; 213
&lt;211&gt; 642
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 (VH-CL) Fc节单体4-1BB (71-254)配体
&lt;400&gt; 213
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
115 120 125
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
130 135 140
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
145 150 155 160
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
165 170 175
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
180 185 190
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
195 200 205
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu
450 455 460
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
465 470 475 480
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
485 490 495
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
500 505 510
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
515 520 525
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
530 535 540
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
545 550 555 560
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
565 570 575
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
580 585 590
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
595 600 605
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
610 615 620
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg
625 630 635 640
Ser Glu
&lt;210&gt; 214
&lt;211&gt; 213
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 (VL-CH1)轻链
&lt;400&gt; 214
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser
100 105 110
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
115 120 125
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
130 135 140
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
145 150 155 160
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
180 185 190
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
195 200 205
Glu Pro Lys Ser Cys
210
&lt;210&gt; 215
&lt;211&gt; 1920
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(4B9) Fc穴单体4-1BBL (71-254)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 215
gaggtgcagc tgctcgaaag cggcggagga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
tcttgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt ccgccaggcc 120
cctggcaagg gactggaatg ggtgtccgcc atcatcggct ctggcgccag cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagggatgg 300
ttcggcggct tcaactactg gggacagggc accctggtca cagtgtccag cgctagcacc 360
aagggcccct ccgtgttccc cctggccccc agcagcaaga gcaccagcgg cggcacagcc 420
gctctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgagcccg tgaccgtgtc ctggaacagc 480
ggagccctga cctccggcgt gcacaccttc cccgccgtgc tgcagagttc tggcctgtat 540
agcctgagca gcgtggtcac cgtgccttct agcagcctgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaacc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aggtggagcc caagagctgc 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ctgcaggggg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggcgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtgcacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 1080
aaccaggtca gcctctcgtg cgcagtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcgt gagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtgg aggcggcgga agcggaggag gaggatccag agagggccct 1380
gagctgagcc ccgatgatcc tgctggactg ctggacctgc ggcagggcat gtttgctcag 1440
ctggtggccc agaacgtgct gctgatcgat ggccccctgt cctggtacag cgatcctgga 1500
ctggctggcg tgtcactgac aggcggcctg agctacaaag aggacaccaa agaactggtg 1560
gtggccaagg ccggcgtgta ctacgtgttc tttcagctgg aactgcggag agtggtggcc 1620
ggcgaaggat ctggctctgt gtctctggcc ctgcatctgc agcctctgag aagcgctgct 1680
ggcgctgcag ctctggcact gacagtggat ctgcctcctg ccagctccga ggcccggaat 1740
agcgcatttg ggtttcaagg caggctgctg cacctgtctg ccggccagag gctgggagtg 1800
catctgcaca cagaggccag ggctagacac gcctggcagc tgacacaggg cgctacagtg 1860
ctgggcctgt tcagagtgac ccccgagatt ccagccggcc tgccttctcc aagaagcgaa 1920
&lt;210&gt; 216
&lt;211&gt; 2508
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 (VH-CL) Fc节二聚体4-1BB配体(71-254)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 216
gaggtgcaat tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttagc agttatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggcagc 300
ggatttgact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cgagcgctag tgtggccgct 360
ccctccgtgt ttatctttcc cccatccgat gaacagctga aaagcggcac cgcctccgtc 420
gtgtgtctgc tgaacaattt ttaccctagg gaagctaaag tgcagtggaa agtggataac 480
gcactgcagt ccggcaactc ccaggaatct gtgacagaac aggactccaa ggacagcacc 540
tactccctgt cctccaccct gacactgtct aaggctgatt atgagaaaca caaagtctac 600
gcctgcgaag tcacccatca gggcctgagc tcgcccgtca caaagagctt caacagggga 660
gagtgtgaca agacccacac ctgtccccct tgtcctgccc ctgaagctgc tggcggccct 720
tctgtgttcc tgttcccccc aaagcccaag gacaccctga tgatcagccg gacccccgaa 780
gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtcccac gaggaccctg aagtgaagtt caattggtac 840
gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ggcgccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccctgcag agatgagctg 1080
accaagaacc aggtgtccct gtggtgtctg gtcaagggct tctaccccag cgatatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaacgg ccagcctgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 1200
gacagcgacg gcagcttctt cctgtactcc aaactgaccg tggacaagag ccggtggcag 1260
cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320
aagtccctga gcctgagccc cggcggaggc ggcggaagcg gaggaggagg atccagagag 1380
ggccctgagc tgagccccga tgatcctgct ggactgctgg acctgcggca gggcatgttt 1440
gctcagctgg tggcccagaa cgtgctgctg atcgatggcc ccctgtcctg gtacagcgat 1500
cctggactgg ctggcgtgtc actgacaggc ggcctgagct acaaagagga caccaaagaa 1560
ctggtggtgg ccaaggccgg cgtgtactac gtgttctttc agctggaact gcggagagtg 1620
gtggccggcg aaggatctgg ctctgtgtct ctggccctgc atctgcagcc tctgagaagc 1680
gctgctggcg ctgcagctct ggcactgaca gtggatctgc ctcctgccag ctccgaggcc 1740
cggaatagcg catttgggtt tcaaggcagg ctgctgcacc tgtctgccgg ccagaggctg 1800
ggagtgcatc tgcacacaga ggccagggct agacacgcct ggcagctgac acagggcgct 1860
acagtgctgg gcctgttcag agtgaccccc gagattccag ccggcctgcc ttctccaaga 1920
agcgaaggcg gaggcggatc tggcggcgga ggatctagag agggacccga actgtcccct 1980
gacgatccag ccgggctgct ggatctgaga cagggaatgt tcgcccagct ggtggctcag 2040
aatgtgctgc tgattgacgg acctctgagc tggtactccg acccagggct ggcaggggtg 2100
tccctgactg ggggactgtc ctacaaagaa gatacaaaag aactggtggt ggctaaagct 2160
ggggtgtact atgtgttttt tcagctggaa ctgaggcggg tggtggctgg ggagggctca 2220
ggatctgtgt ccctggctct gcatctgcag ccactgcgct ctgctgctgg cgcagctgca 2280
ctggctctga ctgtggacct gccaccagcc tctagcgagg ccagaaacag cgccttcggg 2340
ttccaaggac gcctgctgca tctgagcgcc ggacagcgcc tgggagtgca tctgcatact 2400
gaagccagag cccggcatgc ttggcagctg actcaggggg caactgtgct gggactgttt 2460
cgcgtgacac ctgagatccc tgccggactg ccaagcccta gatcagaa 2508
&lt;210&gt; 217
&lt;211&gt; 640
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(4B9) Fc穴单体4-1BBL (71-254)链
&lt;400&gt; 217
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly
435 440 445
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro
450 455 460
Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln
465 470 475 480
Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr
485 490 495
Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr
500 505 510
Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr
515 520 525
Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser
530 535 540
Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala
545 550 555 560
Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser
565 570 575
Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu
580 585 590
Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala
595 600 605
Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe
610 615 620
Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
625 630 635 640
&lt;210&gt; 218
&lt;211&gt; 836
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 (VH-CL) Fc节二聚体4-1BB配体(71-254)链
&lt;400&gt; 218
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
115 120 125
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
130 135 140
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
145 150 155 160
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
165 170 175
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
180 185 190
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
195 200 205
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu
450 455 460
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
465 470 475 480
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
485 490 495
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
500 505 510
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
515 520 525
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
530 535 540
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
545 550 555 560
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
565 570 575
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
580 585 590
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
595 600 605
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
610 615 620
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg
625 630 635 640
Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro
645 650 655
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
660 665 670
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
675 680 685
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
690 695 700
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
705 710 715 720
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
725 730 735
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
740 745 750
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
755 760 765
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
770 775 780
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
785 790 795 800
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
805 810 815
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser
820 825 830
Pro Arg Ser Glu
835
&lt;210&gt; 219
&lt;211&gt; 2508
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47(VH-CL) Fc穴二聚体4-1BB配体(71-254)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 219
gaggtgcaat tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttagc agttatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggcagc 300
ggatttgact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cgagcgctag tgtggccgct 360
ccctccgtgt ttatctttcc cccatccgat gaacagctga aaagcggcac cgcctccgtc 420
gtgtgtctgc tgaacaattt ttaccctagg gaagctaaag tgcagtggaa agtggataac 480
gcactgcagt ccggcaactc ccaggaatct gtgacagaac aggactccaa ggacagcacc 540
tactccctgt cctccaccct gacactgtct aaggctgatt atgagaaaca caaagtctac 600
gcctgcgaag tcacccatca gggcctgagc tcgcccgtca caaagagctt caacagggga 660
gagtgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaagctgc agggggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ggcgccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tgcaccctgc ccccatcccg ggatgagctg 1080
accaagaacc aggtcagcct ctcgtgcgca gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctcgtgagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtggaggc ggcggaagcg gaggaggagg atccagagag 1380
ggccctgagc tgagccccga tgatcctgct ggactgctgg acctgcggca gggcatgttt 1440
gctcagctgg tggcccagaa cgtgctgctg atcgatggcc ccctgtcctg gtacagcgat 1500
cctggactgg ctggcgtgtc actgacaggc ggcctgagct acaaagagga caccaaagaa 1560
ctggtggtgg ccaaggccgg cgtgtactac gtgttctttc agctggaact gcggagagtg 1620
gtggccggcg aaggatctgg ctctgtgtct ctggccctgc atctgcagcc tctgagaagc 1680
gctgctggcg ctgcagctct ggcactgaca gtggatctgc ctcctgccag ctccgaggcc 1740
cggaatagcg catttgggtt tcaaggcagg ctgctgcacc tgtctgccgg ccagaggctg 1800
ggagtgcatc tgcacacaga ggccagggct agacacgcct ggcagctgac acagggcgct 1860
acagtgctgg gcctgttcag agtgaccccc gagattccag ccggcctgcc ttctccaaga 1920
agcgaaggcg gaggcggatc tggcggcgga ggatctagag agggacccga actgtcccct 1980
gacgatccag ccgggctgct ggatctgaga cagggaatgt tcgcccagct ggtggctcag 2040
aatgtgctgc tgattgacgg acctctgagc tggtactccg acccagggct ggcaggggtg 2100
tccctgactg ggggactgtc ctacaaagaa gatacaaaag aactggtggt ggctaaagct 2160
ggggtgtact atgtgttttt tcagctggaa ctgaggcggg tggtggctgg ggagggctca 2220
ggatctgtgt ccctggctct gcatctgcag ccactgcgct ctgctgctgg cgcagctgca 2280
ctggctctga ctgtggacct gccaccagcc tctagcgagg ccagaaacag cgccttcggg 2340
ttccaaggac gcctgctgca tctgagcgcc ggacagcgcc tgggagtgca tctgcatact 2400
gaagccagag cccggcatgc ttggcagctg actcaggggg caactgtgct gggactgttt 2460
cgcgtgacac ctgagatccc tgccggactg ccaagcccta gatcagaa 2508
&lt;210&gt; 220
&lt;211&gt; 1920
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP (4B9) Fc节单体4-1BB (71-254)配体的核苷酸序列
&lt;400&gt; 220
gaggtgcagc tgctcgaaag cggcggagga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
tcttgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt ccgccaggcc 120
cctggcaagg gactggaatg ggtgtccgcc atcatcggct ctggcgccag cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagggatgg 300
ttcggcggct tcaactactg gggacagggc accctggtca cagtgtccag cgctagcacc 360
aagggcccct ccgtgttccc cctggccccc agcagcaaga gcaccagcgg cggcacagcc 420
gctctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgagcccg tgaccgtgtc ctggaacagc 480
ggagccctga cctccggcgt gcacaccttc cccgccgtgc tgcagagttc tggcctgtat 540
agcctgagca gcgtggtcac cgtgccttct agcagcctgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaacc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aggtggagcc caagagctgc 660
gacaagaccc acacctgtcc cccttgtcct gcccctgaag ctgctggcgg cccttctgtg 720
ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatca gccggacccc cgaagtgacc 780
tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cctgaagtga agttcaattg gtacgtggac 840
ggcgtggaag tgcacaacgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggcgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccct gcagagatga gctgaccaag 1080
aaccaggtgt ccctgtggtg tctggtcaag ggcttctacc ccagcgatat cgccgtggag 1140
tgggagagca acggccagcc tgagaacaac tacaagacca ccccccctgt gctggacagc 1200
gacggcagct tcttcctgta ctccaaactg accgtggaca agagccggtg gcagcagggc 1260
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320
ctgagcctga gccccggcgg aggcggcgga agcggaggag gaggatccag agagggccct 1380
gagctgagcc ccgatgatcc tgctggactg ctggacctgc ggcagggcat gtttgctcag 1440
ctggtggccc agaacgtgct gctgatcgat ggccccctgt cctggtacag cgatcctgga 1500
ctggctggcg tgtcactgac aggcggcctg agctacaaag aggacaccaa agaactggtg 1560
gtggccaagg ccggcgtgta ctacgtgttc tttcagctgg aactgcggag agtggtggcc 1620
ggcgaaggat ctggctctgt gtctctggcc ctgcatctgc agcctctgag aagcgctgct 1680
ggcgctgcag ctctggcact gacagtggat ctgcctcctg ccagctccga ggcccggaat 1740
agcgcatttg ggtttcaagg caggctgctg cacctgtctg ccggccagag gctgggagtg 1800
catctgcaca cagaggccag ggctagacac gcctggcagc tgacacaggg cgctacagtg 1860
ctgggcctgt tcagagtgac ccccgagatt ccagccggcc tgccttctcc aagaagcgaa 1920
&lt;210&gt; 221
&lt;211&gt; 836
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47(VH-CL) Fc穴二聚体4-1BB配体(71-254)链
&lt;400&gt; 221
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
115 120 125
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
130 135 140
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
145 150 155 160
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
165 170 175
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
180 185 190
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
195 200 205
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu
450 455 460
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
465 470 475 480
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
485 490 495
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
500 505 510
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
515 520 525
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
530 535 540
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
545 550 555 560
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
565 570 575
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
580 585 590
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
595 600 605
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
610 615 620
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg
625 630 635 640
Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro
645 650 655
Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly
660 665 670
Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro
675 680 685
Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly
690 695 700
Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala
705 710 715 720
Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala
725 730 735
Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu
740 745 750
Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro
755 760 765
Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg
770 775 780
Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr
785 790 795 800
Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val
805 810 815
Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser
820 825 830
Pro Arg Ser Glu
835
&lt;210&gt; 222
&lt;211&gt; 640
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP (4B9) Fc节单体4-1BB (71-254)配体
&lt;400&gt; 222
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly
435 440 445
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro
450 455 460
Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln
465 470 475 480
Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr
485 490 495
Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr
500 505 510
Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr
515 520 525
Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser
530 535 540
Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala
545 550 555 560
Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser
565 570 575
Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu
580 585 590
Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala
595 600 605
Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe
610 615 620
Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
625 630 635 640
&lt;210&gt; 223
&lt;211&gt; 1926
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 (VH-CL) Fc穴单体4-1BBL (71-254)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 223
gaggtgcaat tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttagc agttatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggcagc 300
ggatttgact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cgagcgctag tgtggccgct 360
ccctccgtgt ttatctttcc cccatccgat gaacagctga aaagcggcac cgcctccgtc 420
gtgtgtctgc tgaacaattt ttaccctagg gaagctaaag tgcagtggaa agtggataac 480
gcactgcagt ccggcaactc ccaggaatct gtgacagaac aggactccaa ggacagcacc 540
tactccctgt cctccaccct gacactgtct aaggctgatt atgagaaaca caaagtctac 600
gcctgcgaag tcacccatca gggcctgagc tcgcccgtca caaagagctt caacagggga 660
gagtgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaagctgc agggggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ggcgccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tgcaccctgc ccccatcccg ggatgagctg 1080
accaagaacc aggtcagcct ctcgtgcgca gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctcgtgagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtggaggc ggcggaagcg gaggaggagg atccagagag 1380
ggccctgagc tgagccccga tgatcctgct ggactgctgg acctgcggca gggcatgttt 1440
gctcagctgg tggcccagaa cgtgctgctg atcgatggcc ccctgtcctg gtacagcgat 1500
cctggactgg ctggcgtgtc actgacaggc ggcctgagct acaaagagga caccaaagaa 1560
ctggtggtgg ccaaggccgg cgtgtactac gtgttctttc agctggaact gcggagagtg 1620
gtggccggcg aaggatctgg ctctgtgtct ctggccctgc atctgcagcc tctgagaagc 1680
gctgctggcg ctgcagctct ggcactgaca gtggatctgc ctcctgccag ctccgaggcc 1740
cggaatagcg catttgggtt tcaaggcagg ctgctgcacc tgtctgccgg ccagaggctg 1800
ggagtgcatc tgcacacaga ggccagggct agacacgcct ggcagctgac acagggcgct 1860
acagtgctgg gcctgttcag agtgaccccc gagattccag ccggcctgcc ttctccaaga 1920
agcgaa 1926
&lt;210&gt; 224
&lt;211&gt; 2502
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; FAP (4B9) Fc节二聚体4-1BB配体(71-254)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 224
gaggtgcagc tgctcgaaag cggcggagga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
tcttgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt ccgccaggcc 120
cctggcaagg gactggaatg ggtgtccgcc atcatcggct ctggcgccag cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagggatgg 300
ttcggcggct tcaactactg gggacagggc accctggtca cagtgtccag cgctagcacc 360
aagggcccct ccgtgttccc cctggccccc agcagcaaga gcaccagcgg cggcacagcc 420
gctctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgagcccg tgaccgtgtc ctggaacagc 480
ggagccctga cctccggcgt gcacaccttc cccgccgtgc tgcagagttc tggcctgtat 540
agcctgagca gcgtggtcac cgtgccttct agcagcctgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaacc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aggtggagcc caagagctgc 660
gacaagaccc acacctgtcc cccttgtcct gcccctgaag ctgctggcgg cccttctgtg 720
ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatca gccggacccc cgaagtgacc 780
tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cctgaagtga agttcaattg gtacgtggac 840
ggcgtggaag tgcacaacgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggcgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccct gcagagatga gctgaccaag 1080
aaccaggtgt ccctgtggtg tctggtcaag ggcttctacc ccagcgatat cgccgtggag 1140
tgggagagca acggccagcc tgagaacaac tacaagacca ccccccctgt gctggacagc 1200
gacggcagct tcttcctgta ctccaaactg accgtggaca agagccggtg gcagcagggc 1260
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320
ctgagcctga gccccggcgg aggcggcgga agcggaggag gaggatccag agagggccct 1380
gagctgagcc ccgatgatcc tgctggactg ctggacctgc ggcagggcat gtttgctcag 1440
ctggtggccc agaacgtgct gctgatcgat ggccccctgt cctggtacag cgatcctgga 1500
ctggctggcg tgtcactgac aggcggcctg agctacaaag aggacaccaa agaactggtg 1560
gtggccaagg ccggcgtgta ctacgtgttc tttcagctgg aactgcggag agtggtggcc 1620
ggcgaaggat ctggctctgt gtctctggcc ctgcatctgc agcctctgag aagcgctgct 1680
ggcgctgcag ctctggcact gacagtggat ctgcctcctg ccagctccga ggcccggaat 1740
agcgcatttg ggtttcaagg caggctgctg cacctgtctg ccggccagag gctgggagtg 1800
catctgcaca cagaggccag ggctagacac gcctggcagc tgacacaggg cgctacagtg 1860
ctgggcctgt tcagagtgac ccccgagatt ccagccggcc tgccttctcc aagaagcgaa 1920
ggcggaggcg gatctggcgg cggaggatct agagagggac ccgaactgtc ccctgacgat 1980
ccagccgggc tgctggatct gagacaggga atgttcgccc agctggtggc tcagaatgtg 2040
ctgctgattg acggacctct gagctggtac tccgacccag ggctggcagg ggtgtccctg 2100
actgggggac tgtcctacaa agaagataca aaagaactgg tggtggctaa agctggggtg 2160
tactatgtgt tttttcagct ggaactgagg cgggtggtgg ctggggaggg ctcaggatct 2220
gtgtccctgg ctctgcatct gcagccactg cgctctgctg ctggcgcagc tgcactggct 2280
ctgactgtgg acctgccacc agcctctagc gaggccagaa acagcgcctt cgggttccaa 2340
ggacgcctgc tgcatctgag cgccggacag cgcctgggag tgcatctgca tactgaagcc 2400
agagcccggc atgcttggca gctgactcag ggggcaactg tgctgggact gtttcgcgtg 2460
acacctgaga tccctgccgg actgccaagc cctagatcag aa 2502
&lt;210&gt; 225
&lt;211&gt; 642
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 (VH-CL) Fc穴单体4-1BBL (71-254)链
&lt;400&gt; 225
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
115 120 125
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
130 135 140
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
145 150 155 160
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
165 170 175
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
180 185 190
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
195 200 205
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu
450 455 460
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
465 470 475 480
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
485 490 495
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
500 505 510
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
515 520 525
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
530 535 540
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
545 550 555 560
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
565 570 575
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
580 585 590
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
595 600 605
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
610 615 620
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg
625 630 635 640
Ser Glu
&lt;210&gt; 226
&lt;211&gt; 834
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP(4B9) Fc节二聚体4-1BB配体(71-254)链
&lt;400&gt; 226
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly
435 440 445
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro
450 455 460
Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln
465 470 475 480
Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr
485 490 495
Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr
500 505 510
Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr
515 520 525
Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser
530 535 540
Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala
545 550 555 560
Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser
565 570 575
Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu
580 585 590
Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala
595 600 605
Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe
610 615 620
Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
625 630 635 640
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu
645 650 655
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
660 665 670
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
675 680 685
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
690 695 700
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
705 710 715 720
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
725 730 735
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
740 745 750
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
755 760 765
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
770 775 780
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
785 790 795 800
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
805 810 815
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg
820 825 830
Ser Glu
&lt;210&gt; 227
&lt;211&gt; 1908
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 (VHCL) Fc节单体4-1BB (71-248)配体的核苷酸序列
&lt;400&gt; 227
gaggtgcaat tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttagc agttatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggcagc 300
ggatttgact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cgagcgctag tgtggccgct 360
ccctccgtgt ttatctttcc cccatccgat gaacagctga aaagcggcac cgcctccgtc 420
gtgtgtctgc tgaacaattt ttaccctagg gaagctaaag tgcagtggaa agtggataac 480
gcactgcagt ccggcaactc ccaggaatct gtgacagaac aggactccaa ggacagcacc 540
tactccctgt cctccaccct gacactgtct aaggctgatt atgagaaaca caaagtctac 600
gcctgcgaag tcacccatca gggcctgagc tcgcccgtca caaagagctt caacagggga 660
gagtgtgaca agacccacac ctgtccccct tgtcctgccc ctgaagctgc tggcggccct 720
tctgtgttcc tgttcccccc aaagcccaag gacaccctga tgatcagccg gacccccgaa 780
gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtcccac gaggaccctg aagtgaagtt caattggtac 840
gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ggcgccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccctgcag agatgagctg 1080
accaagaacc aggtgtccct gtggtgtctg gtcaagggct tctaccccag cgatatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaacgg ccagcctgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 1200
gacagcgacg gcagcttctt cctgtactcc aaactgaccg tggacaagag ccggtggcag 1260
cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320
aagtccctga gcctgagccc cggcggaggc ggcggaagcg gaggaggagg atccagagag 1380
ggccctgagc tgagccctga tgatcctgcc ggactgctgg acctgcggca gggaatgttt 1440
gcccagctgg tggcccagaa cgtgctgctg atcgatggcc ccctgtcctg gtacagcgat 1500
cctggactgg ctggcgtgtc actgacaggc ggcctgagct acaaagagga caccaaagaa 1560
ctggtggtgg ccaaggccgg cgtgtactac gtgttctttc agctggaact gcggagagtg 1620
gtggccggcg aaggatctgg ctctgtgtct ctggccctgc atctgcagcc tctgagatct 1680
gctgctggcg ccgctgctct ggcactgaca gtggatctgc ctcctgccag cagcgaggcc 1740
cggaatagcg catttgggtt tcaaggcagg ctgctgcacc tgtctgccgg ccagaggctg 1800
ggagtgcatc tgcacacaga ggccagggct agacacgcct ggcagctgac acagggcgct 1860
acagtgctgg gcctgttcag agtgaccccc gagattcctg ccgggctc 1908
&lt;210&gt; 228
&lt;211&gt; 636
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 (VH-CL) Fc节单体4-1BB (71-248)配体
&lt;400&gt; 228
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
115 120 125
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
130 135 140
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
145 150 155 160
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
165 170 175
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
180 185 190
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
195 200 205
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu
450 455 460
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
465 470 475 480
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
485 490 495
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
500 505 510
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
515 520 525
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
530 535 540
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
545 550 555 560
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
565 570 575
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
580 585 590
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
595 600 605
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
610 615 620
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630 635
&lt;210&gt; 229
&lt;211&gt; 2472
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 (VH-CL) Fc节二聚体4-1BB配体(71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 229
gaggtgcaat tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttagc agttatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggcagc 300
ggatttgact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cgagcgctag tgtggccgct 360
ccctccgtgt ttatctttcc cccatccgat gaacagctga aaagcggcac cgcctccgtc 420
gtgtgtctgc tgaacaattt ttaccctagg gaagctaaag tgcagtggaa agtggataac 480
gcactgcagt ccggcaactc ccaggaatct gtgacagaac aggactccaa ggacagcacc 540
tactccctgt cctccaccct gacactgtct aaggctgatt atgagaaaca caaagtctac 600
gcctgcgaag tcacccatca gggcctgagc tcgcccgtca caaagagctt caacagggga 660
gagtgtgaca agacccacac ctgtccccct tgtcctgccc ctgaagctgc tggcggccct 720
tctgtgttcc tgttcccccc aaagcccaag gacaccctga tgatcagccg gacccccgaa 780
gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtcccac gaggaccctg aagtgaagtt caattggtac 840
gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ggcgccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccctgcag agatgagctg 1080
accaagaacc aggtgtccct gtggtgtctg gtcaagggct tctaccccag cgatatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaacgg ccagcctgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 1200
gacagcgacg gcagcttctt cctgtactcc aaactgaccg tggacaagag ccggtggcag 1260
cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320
aagtccctga gcctgagccc cggcggaggc ggcggaagcg gaggaggagg atccagagag 1380
ggccctgagc tgagccctga tgatcctgcc ggactgctgg acctgcggca gggaatgttt 1440
gcccagctgg tggcccagaa cgtgctgctg atcgatggcc ccctgtcctg gtacagcgat 1500
cctggactgg ctggcgtgtc actgacaggc ggcctgagct acaaagagga caccaaagaa 1560
ctggtggtgg ccaaggccgg cgtgtactac gtgttctttc agctggaact gcggagagtg 1620
gtggccggcg aaggatctgg ctctgtgtct ctggccctgc atctgcagcc tctgagatct 1680
gctgctggcg ccgctgctct ggcactgaca gtggatctgc ctcctgccag cagcgaggcc 1740
cggaatagcg catttgggtt tcaaggcagg ctgctgcacc tgtctgccgg ccagaggctg 1800
ggagtgcatc tgcacacaga ggccagggct agacacgcct ggcagctgac acagggcgct 1860
acagtgctgg gcctgttcag agtgaccccc gagattccag caggcctggg aggcggcgga 1920
tctggcggcg gaggatctag agaaggaccc gagctgtccc ccgacgatcc cgctgggctg 1980
ctggatctga gacagggcat gttcgctcag ctggtggctc agaatgtgct gctgattgac 2040
ggacctctga gctggtactc cgacccaggg ctggcagggg tgtccctgac tgggggactg 2100
tcctacaaag aagatacaaa agaactggtg gtggctaaag ctggggtgta ctatgtgttt 2160
tttcagctgg aactgaggcg ggtggtggct ggggagggct caggatctgt gtccctggct 2220
ctgcatctgc agccactgcg ctctgcagca ggggctgcag cactggccct gactgtggac 2280
ctgcccccag cttcttccga ggccagaaac agcgccttcg ggttccaagg acgcctgctg 2340
catctgagcg ccggacagcg cctgggagtg catctgcata ctgaagccag agcccggcat 2400
gcttggcagc tgactcaggg ggcaactgtg ctgggactgt ttcgcgtgac acctgagatc 2460
ccagccgggc tc 2472
&lt;210&gt; 230
&lt;211&gt; 824
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 (VH-CL) Fc节二聚体4-1BB配体(71-248)链
&lt;400&gt; 230
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
115 120 125
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
130 135 140
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
145 150 155 160
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
165 170 175
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
180 185 190
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
195 200 205
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu
450 455 460
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
465 470 475 480
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
485 490 495
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
500 505 510
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
515 520 525
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
530 535 540
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
545 550 555 560
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
565 570 575
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
580 585 590
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
595 600 605
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
610 615 620
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Gly Gly Gly Gly
625 630 635 640
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp
645 650 655
Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val
660 665 670
Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp
675 680 685
Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu
690 695 700
Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe
705 710 715 720
Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser
725 730 735
Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala
740 745 750
Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala
755 760 765
Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala
770 775 780
Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His
785 790 795 800
Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val
805 810 815
Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
820
&lt;210&gt; 231
&lt;211&gt; 1908
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47(VH-CL) Fc穴二聚体4-1BB配体(71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 231
gaggtgcaat tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttagc agttatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggcagc 300
ggatttgact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cgagcgctag tgtggccgct 360
ccctccgtgt ttatctttcc cccatccgat gaacagctga aaagcggcac cgcctccgtc 420
gtgtgtctgc tgaacaattt ttaccctagg gaagctaaag tgcagtggaa agtggataac 480
gcactgcagt ccggcaactc ccaggaatct gtgacagaac aggactccaa ggacagcacc 540
tactccctgt cctccaccct gacactgtct aaggctgatt atgagaaaca caaagtctac 600
gcctgcgaag tcacccatca gggcctgagc tcgcccgtca caaagagctt caacagggga 660
gagtgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaagctgc agggggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ggcgccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tgcaccctgc ccccatcccg ggatgagctg 1080
accaagaacc aggtcagcct ctcgtgcgca gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctcgtgagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtggaggc ggcggaagcg gaggaggagg atccagagag 1380
ggccctgagc tgagccctga tgatcctgcc ggactgctgg acctgcggca gggaatgttt 1440
gcccagctgg tggcccagaa cgtgctgctg atcgatggcc ccctgtcctg gtacagcgat 1500
cctggactgg ctggcgtgtc actgacaggc ggcctgagct acaaagagga caccaaagaa 1560
ctggtggtgg ccaaggccgg cgtgtactac gtgttctttc agctggaact gcggagagtg 1620
gtggccggcg aaggatctgg ctctgtgtct ctggccctgc atctgcagcc tctgagatct 1680
gctgctggcg ccgctgctct ggcactgaca gtggatctgc ctcctgccag cagcgaggcc 1740
cggaatagcg catttgggtt tcaaggcagg ctgctgcacc tgtctgccgg ccagaggctg 1800
ggagtgcatc tgcacacaga ggccagggct agacacgcct ggcagctgac acagggcgct 1860
acagtgctgg gcctgttcag agtgaccccc gagattcctg ccgggctc 1908
&lt;210&gt; 232
&lt;211&gt; 636
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47(VH-CL) Fc穴二聚体4-1BB配体(71-248)链
&lt;400&gt; 232
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
115 120 125
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
130 135 140
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
145 150 155 160
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
165 170 175
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
180 185 190
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
195 200 205
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu
450 455 460
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
465 470 475 480
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
485 490 495
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
500 505 510
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
515 520 525
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
530 535 540
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
545 550 555 560
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
565 570 575
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
580 585 590
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
595 600 605
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
610 615 620
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630 635
&lt;210&gt; 233
&lt;211&gt; 1908
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 (VH-CL) Fc穴单体4-1BBL (71-248)链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 233
gaggtgcaat tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctccggatt cacctttagc agttatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggcagc 300
ggatttgact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cgagcgctag tgtggccgct 360
ccctccgtgt ttatctttcc cccatccgat gaacagctga aaagcggcac cgcctccgtc 420
gtgtgtctgc tgaacaattt ttaccctagg gaagctaaag tgcagtggaa agtggataac 480
gcactgcagt ccggcaactc ccaggaatct gtgacagaac aggactccaa ggacagcacc 540
tactccctgt cctccaccct gacactgtct aaggctgatt atgagaaaca caaagtctac 600
gcctgcgaag tcacccatca gggcctgagc tcgcccgtca caaagagctt caacagggga 660
gagtgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaagctgc agggggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ggcgccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tgcaccctgc ccccatcccg ggatgagctg 1080
accaagaacc aggtcagcct ctcgtgcgca gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctcgtgagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtggaggc ggcggaagcg gaggaggagg atccagagag 1380
ggccctgagc tgagccctga tgatcctgcc ggactgctgg acctgcggca gggaatgttt 1440
gcccagctgg tggcccagaa cgtgctgctg atcgatggcc ccctgtcctg gtacagcgat 1500
cctggactgg ctggcgtgtc actgacaggc ggcctgagct acaaagagga caccaaagaa 1560
ctggtggtgg ccaaggccgg cgtgtactac gtgttctttc agctggaact gcggagagtg 1620
gtggccggcg aaggatctgg ctctgtgtct ctggccctgc atctgcagcc tctgagatct 1680
gctgctggcg ccgctgctct ggcactgaca gtggatctgc ctcctgccag cagcgaggcc 1740
cggaatagcg catttgggtt tcaaggcagg ctgctgcacc tgtctgccgg ccagaggctg 1800
ggagtgcatc tgcacacaga ggccagggct agacacgcct ggcagctgac acagggcgct 1860
acagtgctgg gcctgttcag agtgaccccc gagattcctg ccgggctc 1908
&lt;210&gt; 234
&lt;211&gt; 636
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; DP47 (VH-CL) Fc穴单体4-1BBL (71-248)链
&lt;400&gt; 234
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
115 120 125
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
130 135 140
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
145 150 155 160
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
165 170 175
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
180 185 190
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
195 200 205
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu
450 455 460
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
465 470 475 480
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
485 490 495
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
500 505 510
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
515 520 525
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
530 535 540
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
545 550 555 560
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
565 570 575
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
580 585 590
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
595 600 605
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
610 615 620
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630 635
&lt;210&gt; 235
&lt;211&gt; 1341
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP (4B9) Fc穴链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 235
gaggtgcagc tgctcgaaag cggcggagga ctggtgcagc ctggcggcag cctgagactg 60
tcttgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt ccgccaggcc 120
cctggcaagg gactggaatg ggtgtccgcc atcatcggct ctggcgccag cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagggatgg 300
ttcggcggct tcaactactg gggacagggc accctggtca cagtgtccag cgctagcacc 360
aagggcccct ccgtgttccc cctggccccc agcagcaaga gcaccagcgg cggcacagcc 420
gctctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgagcccg tgaccgtgtc ctggaacagc 480
ggagccctga cctccggcgt gcacaccttc cccgccgtgc tgcagagttc tggcctgtat 540
agcctgagca gcgtggtcac cgtgccttct agcagcctgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaacc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aggtggagcc caagagctgc 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ctgcaggggg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggcgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtgcacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 1080
aaccaggtca gcctctcgtg cgcagtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcgt gagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtaa a 1341
&lt;210&gt; 236
&lt;211&gt; 447
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗FAP (4B9) Fc穴链
&lt;400&gt; 236
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ile Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Trp Phe Gly Gly Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
&lt;210&gt; 237
&lt;211&gt; 1353
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-018) Fc穴链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 237
caggtccagc tggtgcagtc cggcgccgag gtcaagaaac ccggggcttc tgtgaaggtt 60
tcatgcaagg caagcggata caccttcacc gactatatca tgcattgggt caggcaggcc 120
cctggccaag gtctcgaatg gatgggctac attaacccat ataatgatgg ctccaaatac 180
accgagaagt ttcagggaag agtcactatg acatctgaca ccagtatcag cactgcttac 240
atggagctgt cccgccttcg gtctgatgac accgcagtgt attactgtgc caggggcaca 300
tattactacg gctcagctct gttcgactat tgggggcagg gaaccacagt aaccgtgagc 360
tccgctagca ccaagggccc ctccgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
tcctggaaca gcggagccct gacctccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagt 540
tctggcctgt atagcctgag cagcgtggtc accgtgcctt ctagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggtggag 660
cccaagagct gcgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtgca ccctgccccc atcccgggat 1080
gagctgacca agaaccaggt cagcctctcg tgcgcagtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc gtgagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353
&lt;210&gt; 238
&lt;211&gt; 451
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-018) Fc穴链
&lt;400&gt; 238
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
&lt;210&gt; 239
&lt;211&gt; 2166
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 二聚体hu 4-1BBL (71-254) - CL* Fc节链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 239
agagagggcc ctgagctgag ccccgatgat cctgctggac tgctggacct gcggcagggc 60
atgtttgctc agctggtggc ccagaacgtg ctgctgatcg atggccccct gtcctggtac 120
agcgatcctg gactggctgg cgtgtcactg acaggcggcc tgagctacaa agaggacacc 180
aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg 240
agagtggtgg ccggcgaagg atctggctct gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg 300
agaagcgctg ctggcgctgc agctctggca ctgacagtgg atctgcctcc tgccagctcc 360
gaggcccgga atagcgcatt tgggtttcaa ggcaggctgc tgcacctgtc tgccggccag 420
aggctgggag tgcatctgca cacagaggcc agggctagac acgcctggca gctgacacag 480
ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg acccccgaga ttccagccgg cctgccttct 540
ccaagaagcg aaggcggagg cggatctggc ggcggaggat ctagagaggg acccgaactg 600
tcccctgacg atccagccgg gctgctggat ctgagacagg gaatgttcgc ccagctggtg 660
gctcagaatg tgctgctgat tgacggacct ctgagctggt actccgaccc agggctggca 720
ggggtgtccc tgactggggg actgtcctac aaagaagata caaaagaact ggtggtggct 780
aaagctgggg tgtactatgt gttttttcag ctggaactga ggcgggtggt ggctggggag 840
ggctcaggat ctgtgtccct ggctctgcat ctgcagccac tgcgctctgc tgctggcgca 900
gctgcactgg ctctgactgt ggacctgcca ccagcctcta gcgaggccag aaacagcgcc 960
ttcgggttcc aaggacgcct gctgcatctg agcgccggac agcgcctggg agtgcatctg 1020
catactgaag ccagagcccg gcatgcttgg cagctgactc agggggcaac tgtgctggga 1080
ctgtttcgcg tgacacctga gatccctgcc ggactgccaa gccctagatc agaagggggc 1140
ggaggttccg gagggggagg atctcgtacg gtggctgcac catctgtctt tatcttccca 1200
cccagcgacc ggaagctgaa gtctggcaca gccagcgtcg tgtgcctgct gaataacttc 1260
tacccccgcg aggccaaggt gcagtggaag gtggacaatg ccctgcagag cggcaacagc 1320
caggaaagcg tgaccgagca ggacagcaag gactccacct acagcctgag cagcaccctg 1380
accctgagca aggccgacta cgagaagcac aaggtgtacg cctgcgaagt gacccaccag 1440
ggcctgtcta gccccgtgac caagagcttc aaccggggcg agtgcgacaa gacccacacc 1500
tgtcctccat gccctgcccc tgaagctgct ggcggcccta gcgtgttcct gttcccccca 1560
aagcccaagg acaccctgat gatcagccgg acccctgaag tgacctgcgt ggtggtggat 1620
gtgtcccacg aggaccctga agtgaagttc aattggtacg tggacggcgt ggaagtgcac 1680
aatgccaaga ccaagccgcg ggaggagcag tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc 1740
ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac 1800
aaagccctcg gcgcccccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa 1860
ccacaggtgt acaccctgcc cccatgccgg gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg 1920
tggtgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg 1980
cagccggaga acaactacaa gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc 2040
ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc 2100
tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg 2160
ggtaaa 2166
&lt;210&gt; 240
&lt;211&gt; 891
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 单体hu 4-1BBL (71-254) - CH1*的核苷酸序列
&lt;400&gt; 240
agagagggcc ctgagctgag ccccgatgat cctgctggac tgctggacct gcggcagggc 60
atgtttgctc agctggtggc ccagaacgtg ctgctgatcg atggccccct gtcctggtac 120
agcgatcctg gactggctgg cgtgtcactg acaggcggcc tgagctacaa agaggacacc 180
aaagaactgg tggtggccaa ggccggcgtg tactacgtgt tctttcagct ggaactgcgg 240
agagtggtgg ccggcgaagg atctggctct gtgtctctgg ccctgcatct gcagcctctg 300
agaagcgctg ctggcgctgc agctctggct ctgacagtgg atctgcctcc tgccagctcc 360
gaggcccgga atagcgcatt tgggtttcaa ggccggctgc tgcacctgtc tgccggccag 420
agactgggag tgcatctgca cacagaggcc agagccaggc acgcctggca gctgacacag 480
ggcgctacag tgctgggcct gttcagagtg acccccgaga ttcctgccgg cctgcctagc 540
cctagatctg aaggcggcgg aggttccgga ggcggaggat ctgctagcac aaagggcccc 600
agcgtgttcc ctctggcccc tagcagcaag agcacatctg gcggaacagc cgccctgggc 660
tgcctggtgg aagattactt ccccgagccc gtgaccgtgt cctggaattc tggcgccctg 720
acaagcggcg tgcacacctt tccagccgtg ctgcagagca gcggcctgta ctctctgagc 780
agcgtcgtga cagtgcccag cagctctctg ggcacccaga cctacatctg caacgtgaac 840
cacaagccca gcaacaccaa ggtggacgag aaggtggaac ccaagtcctg c 891
&lt;210&gt; 241
&lt;211&gt; 1353
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 抗CD19(8B8-2B11) Fc穴链的核苷酸序列
&lt;400&gt; 241
caggtgcaat tggttcaatc tggtgctgaa gtaaaaaaac cgggcgcttc cgttaaagtg 60
agctgcaaag catctggtta caccttcact gactatatca tgcactgggt tcgtcaggcc 120
ccgggccagg gtctggagtg gatgggctac attaacccat acaacgacgg ttccaaatat 180
accgagaaat tccagggccg cgtcacgatg accagcgaca cttctatctc caccgcgtac 240
atggaactgt ctagactgcg ttctgacgac accgctgttt actattgtgc acgcggtacc 300
tactactacg gtccacagct gtttgattac tggggccaag gtaccacggt gaccgtaagc 360
tctgctagca ccaagggccc ctccgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
tcctggaaca gcggagccct gacctccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagt 540
tctggcctgt atagcctgag cagcgtggtc accgtgcctt ctagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaggtggag 660
cccaagagct gcgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agctgcaggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggcg cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtgca ccctgccccc atcccgggat 1080
gagctgacca agaaccaggt cagcctctcg tgcgcagtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc gtgagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353
&lt;210&gt; 242
&lt;211&gt; 722
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 二聚体hu 4-1BBL (71-254) - CL* Fc节链
&lt;400&gt; 242
Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp
1 5 10 15
Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu
20 25 30
Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val
35 40 45
Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val
50 55 60
Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg
65 70 75 80
Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His
85 90 95
Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr
100 105 110
Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly
115 120 125
Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val
130 135 140
His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln
145 150 155 160
Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
165 170 175
Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
180 185 190
Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu
195 200 205
Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val
210 215 220
Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala
225 230 235 240
Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu
245 250 255
Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu
260 265 270
Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala
275 280 285
Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala
290 295 300
Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala
305 310 315 320
Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu
325 330 335
Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu
340 345 350
Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile
355 360 365
Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly
370 375 380
Gly Gly Gly Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
385 390 395 400
Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
405 410 415
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
420 425 430
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
435 440 445
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
450 455 460
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
465 470 475 480
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Asp
485 490 495
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly
500 505 510
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
515 520 525
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
530 535 540
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
545 550 555 560
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
565 570 575
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
580 585 590
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu
595 600 605
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
610 615 620
Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
625 630 635 640
Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
645 650 655
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
660 665 670
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
675 680 685
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
690 695 700
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
705 710 715 720
Gly Lys
&lt;210&gt; 243
&lt;211&gt; 297
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; 单体hu 4-1BBL (71-254) - CH1*
&lt;400&gt; 243
Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp
1 5 10 15
Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu
20 25 30
Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val
35 40 45
Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val
50 55 60
Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg
65 70 75 80
Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His
85 90 95
Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr
100 105 110
Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly
115 120 125
Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val
130 135 140
His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln
145 150 155 160
Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
165 170 175
Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
180 185 190
Gly Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
195 200 205
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu
210 215 220
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
225 230 235 240
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
245 250 255
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
260 265 270
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
275 280 285
Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
290 295
&lt;210&gt; 244
&lt;211&gt; 451
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; CD19(8B8-2B11) Fc穴链
&lt;400&gt; 244
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
&lt;210&gt; 245
&lt;211&gt; 15
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;220&gt;
&lt;223&gt; avi标签
&lt;400&gt; 245
Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu
1 5 10 15

Claims (37)

1.一种含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)一个能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的亚基之一的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的另一亚基的C端,
其中该含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子对于对该靶细胞抗原的结合是单价的。
2.权利要求1的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该TNF配体家族成员共刺激人T细胞活化。
3.权利要求1或2的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该TNF配体家族成员选自4-1BBL和OX40L。
4.权利要求1至3中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该TNF配体家族成员是4-1BBL。
5.权利要求1至4中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该TNF配体家族成员的外域包含选自由SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4,SEQID NO:5,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8组成的组的氨基酸序列,特别是SEQ IDNO:1或SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
6.权利要求1至5中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该包含TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽包含选自由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10组成的组的氨基酸序列且该包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽包含选自由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5组成的组的氨基酸序列。
7.权利要求1至3中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该TNF配体家族成员是OX40L。
8.权利要求1至3或7中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该TNF配体家族成员的外域包含选自由SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12组成的组的氨基酸序列。
9.权利要求1至8中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该靶细胞抗原选自由成纤维细胞活化蛋白(FAP),黑素瘤相关硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP),表皮生长因子受体(EGFR),癌胚抗原(CEA),CD19,CD20和CD33组成的组。
10.权利要求1至9中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该靶细胞抗原是成纤维细胞活化蛋白(FAP)。
11.权利要求1至10中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含
(a)VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR-L3,或
(b)VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的CDR-L3。
12.权利要求1至11中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ IDNO:26的氨基酸序列的可变轻链或其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的可变轻链。
13.权利要求1至9中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该靶细胞抗原是CD19。
14.权利要求1至9或13中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中能够特异性结合CD19的Fab域包含
(a)VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-L3,或
(b)VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的CDR-L3。
15.权利要求1至9,13或14中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CD19的Fab域包含包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的可变轻链或其中该能够特异性结合FAP的Fab域包含包含SEQID NO:43的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的可变轻链。
16.权利要求1至9中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该靶细胞抗原是CEA。
17.权利要求1至9或16中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中能够特异性结合CEA的Fab域包含VH域和VL域,该VH域包含(i)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-H1,(ii)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的CDR-H3,该VL域包含(iv)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR-L1,(v)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR-L2和(vi)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR-L3。
18.权利要求1至9,16或17中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该能够特异性结合CEA的Fab域包含包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的可变重链和包含SEQID NO:52的氨基酸序列的可变轻链。
19.权利要求1至18中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域是IgG域,特别是IgG1域。
20.权利要求1至19中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该Fc域包含一处或多处降低对Fc受体,特别是对Fcγ受体的结合的氨基酸替代。
21.权利要求1至20中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该Fc域是包含位置234和235(编号方式依照Kabat EU索引)和/或329(编号方式依照Kabat EU索引)处的氨基酸替代的IgG1Fc域。
22.权利要求1至21中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其中该Fc域的第一亚基包含氨基酸替代S354C和T366W(编号方式依照Kabat EU索引)且该Fc域的第二亚基包含氨基酸替代Y349C,T366S,L368A和Y407V(编号方式依照Kabat EU索引)。
23.权利要求1至22中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的包含节突变的第二亚基的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的包含穴突变的第一亚基的C端且其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的VH和CH1域在C端融合至该Fc域的包含节突变的第二亚基的N端。
24.权利要求1至22中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的包含节突变的第二亚基的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的包含穴突变的第一亚基的C端且其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的VH和CH1域在C端融合至该Fc域的包含穴突变的第一亚基的N端。
25.权利要求1至22中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的包含穴突变的第一亚基的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的包含节突变的第二亚基的C端且其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的VH和CH1域在C端融合至该Fc域的包含节突变的第二亚基的N端。
26.权利要求1至22中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其包含
(a)能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域,
(b)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的Fc域,和
(c)包含通过肽接头彼此连接的TNF配体家族成员的两个外域或其片段的第一多肽和包含所述TNF配体家族成员的一个外域或其片段的第二多肽,其中该第一多肽在其N端融合至该Fc域的包含穴突变的第一亚基的C端且其中该第二多肽在其N端融合至该Fc域的包含节突变的第二亚基的C端且其中该能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域的VH和CH1域在C端融合至该Fc域的包含穴突变的第一亚基的N端。
27.权利要求1至26中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,其进一步包含
(d)不能够特异性结合靶细胞抗原的Fab域。
28.一种分离的多核苷酸,其编码权利要求1至27中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子。
29.一种载体,特别是表达载体,其包含权利要求28的分离的多核苷酸。
30.一种宿主细胞,其包含权利要求28的分离的多核苷酸或权利要求29的载体。
31.一种用于生成权利要求1至27中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的方法,其包含在适合于该抗原结合分子表达的条件下培养权利要求30的宿主细胞和回收该抗原结合分子。
32.一种药用组合物,其包含权利要求1至27中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子和至少一种药学可接受赋形剂。
33.权利要求1至27中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,或权利要求32的药用组合物,其供作为药物使用。
34.权利要求1至27中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子,或权利要求32的药用组合物,其供在治疗癌症中使用。
35.权利要求1至27中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子用于制造用于治疗癌症的药物的用途。
36.一种在个体中治疗疾病的方法,其包含对所述个体施用治疗有效量的包含药学可接受形式的权利要求1至27中任一项的含有TNF家族配体三聚体的抗原结合分子的组合物。
37.权利要求36的方法,其中所述疾病是癌症。
CN201780030382.4A 2016-05-11 2017-05-08 含有c端融合的tnf家族配体三聚体的抗原结合分子 Active CN109311973B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16169237.1A EP3243836A1 (en) 2016-05-11 2016-05-11 C-terminally fused tnf family ligand trimer-containing antigen binding molecules
EP16169237.1 2016-05-11
PCT/EP2017/060863 WO2017194438A1 (en) 2016-05-11 2017-05-08 C-terminally fused tnf family ligand trimer-containing antigen binding molecules

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109311973A true CN109311973A (zh) 2019-02-05
CN109311973B CN109311973B (zh) 2023-04-04

Family

ID=56026654

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780030382.4A Active CN109311973B (zh) 2016-05-11 2017-05-08 含有c端融合的tnf家族配体三聚体的抗原结合分子

Country Status (5)

Country Link
US (2) US20190194291A1 (zh)
EP (2) EP3243836A1 (zh)
JP (1) JP7043422B2 (zh)
CN (1) CN109311973B (zh)
WO (1) WO2017194438A1 (zh)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3224275B1 (en) 2014-11-14 2020-03-04 F.Hoffmann-La Roche Ag Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
CA2992853A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies specific for pd1 and tim3
PL3559034T3 (pl) 2016-12-20 2021-04-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Terapia skojarzona dwuswoistymi przeciwciałami anty-CD20/anty-CD3 i agonistami 4-1BB (CD137)
CN110461873B (zh) 2017-01-03 2023-05-12 豪夫迈·罗氏有限公司 包含抗4-1bb克隆20h4.9的双特异性抗原结合分子
JP7196094B2 (ja) 2017-03-29 2022-12-26 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 共刺激ｔｎｆ受容体のための二重特異性抗原結合分子
CN117003887A (zh) 2017-04-03 2023-11-07 豪夫迈·罗氏有限公司 抗pd-1抗体与突变体il-2或与il-15的免疫缀合物
MY199406A (en) 2017-04-05 2023-10-25 Hoffmann La Roche Bispecific antibodies specifically binding to pd1 and lag3
WO2019086499A1 (en) * 2017-11-01 2019-05-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel tnf family ligand trimer-containing antigen binding molecules
WO2019129053A1 (zh) * 2017-12-26 2019-07-04 南京金斯瑞生物科技有限公司 以抗体Fc区为骨架的融合蛋白二聚体及其应用
JP7366908B2 (ja) 2018-01-15 2023-10-23 ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー，リミテッド Ｐｄ－１に対する単一ドメイン抗体及びその変異体
CN111741979B (zh) * 2018-04-13 2024-07-02 豪夫迈·罗氏有限公司 包含4-1BBL的Her2靶向性抗原结合分子
TW202011988A (zh) * 2018-04-16 2020-04-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 螯合型放射核種之抗體及清除劑
KR20210005885A (ko) * 2018-04-16 2021-01-15 에프. 호프만-라 로슈 아게 킬레이트화된 방사성핵종에 대한 항체
CN109536476A (zh) * 2018-05-21 2019-03-29 沣潮医药科技（上海）有限公司 具备透明质酸酶活性的靶向融合蛋白、制备方法及用途
EP3802617A4 (en) * 2018-06-07 2022-04-27 Cullinan Oncology, Inc. MULTI-SPECIFIC BINDING PROTEINS AND METHODS OF USE THEREOF
UA126188C2 (uk) 2018-10-01 2022-08-25 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка містить домен зв'язування з fap та домен зв'язування з сd40
CN113286821A (zh) 2018-12-21 2021-08-20 豪夫迈·罗氏有限公司 靶向肿瘤的激动性cd28抗原结合分子
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
AU2021276332A1 (en) 2020-05-19 2022-11-17 Boehringer Ingelheim International Gmbh Binding molecules for the treatment of cancer
US11780920B2 (en) 2020-06-19 2023-10-10 Hoffmann-La Roche Inc. Antibodies binding to CD3 and CD19
WO2023088889A1 (en) * 2021-11-16 2023-05-25 Apogenix Ag CD137 ligands
EP4255924A4 (en) * 2022-02-21 2024-02-14 CTCells, Inc. FUSION PROTEIN WITH AN ANTIGEN BINDING DOMAIN AND A CYTOKINE TRIMER
WO2023186756A1 (en) * 2022-03-28 2023-10-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Interferon gamma variants and antigen binding molecules comprising these

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101970492A (zh) * 2007-10-31 2011-02-09 Xencor公司 与FcRn结合改变的Fc变体
WO2012020006A2 (en) * 2010-08-13 2012-02-16 Roche Glycart Ag Anti-fap antibodies and methods of use
US20130287802A1 (en) * 2012-04-30 2013-10-31 Biocon Limited Targeted/immunomodulatory fusion proteins and methods for making same
CN103703129A (zh) * 2011-03-30 2014-04-02 中外制药株式会社 改变抗原结合分子的血浆中滞留性和免疫原性的方法
WO2014180754A1 (en) * 2013-05-07 2014-11-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Trimeric antigen binding molecules
WO2015184203A1 (en) * 2014-05-29 2015-12-03 Macrogenics, Inc. Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
WO2015183902A1 (en) * 2014-05-29 2015-12-03 Medimmune, Llc Ox40l fusion proteins and uses thereof

Family Cites Families (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2388385B1 (fr) 1977-04-18 1982-01-08 Hitachi Metals Ltd Piece d'ornement fixee par des aimants permanents
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
KR0184860B1 (ko) 1988-11-11 1999-04-01 메디칼 리써어치 카운실 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법)
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
ES2206447T3 (es) 1991-06-14 2004-05-16 Genentech, Inc. Anticuerpo humanizado para heregulina.
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993016185A2 (en) 1992-02-06 1993-08-19 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic binding protein for cancer marker
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
ES2244066T3 (es) 1997-06-24 2005-12-01 Genentech, Inc. Procedimiento y composiciones de glicoproteinas galactosiladas.
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
DE69840412D1 (de) 1997-10-31 2009-02-12 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
CA2312208C (en) 1997-12-05 2011-01-25 The Scripps Research Institute Humanization of murine antibody
PT2180007E (pt) 1998-04-20 2013-11-25 Roche Glycart Ag Engenharia de glicosilação de anticorpos para melhorar a citotoxicidade celular dependente de anticorpos
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
WO2001025454A2 (en) 1999-10-04 2001-04-12 Medicago Inc. Method for regulating transcription of foreign genes in the presence of nitrogen
WO2002020565A2 (en) 2000-09-08 2002-03-14 Universität Zürich Collections of repeat proteins comprising repeat modules
CA2455365C (en) 2001-08-03 2014-07-29 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
HUP0600342A3 (en) 2001-10-25 2011-03-28 Genentech Inc Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US7432063B2 (en) 2002-02-14 2008-10-07 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Methods for affinity maturation
EP1558640B1 (en) * 2002-10-29 2011-04-13 Anaphore, Inc. Trimeric binding proteins for trimeric cytokines
ES2367749T3 (es) * 2002-10-29 2011-11-08 Anaphore, Inc. Proteínas de unión triméricas para citocinas triméricas.
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
TR201809892T4 (tr) 2003-11-05 2018-07-23 Roche Glycart Ag Fc reseptörüne bağlanma afinitesi ve artırılmış efektör fonksiyonu bulunan antijen bağlayan moleküller.
CN1961003B (zh) 2004-03-31 2013-03-27 健泰科生物技术公司 人源化抗TGF-β抗体
DK1737891T3 (da) 2004-04-13 2013-03-25 Hoffmann La Roche Anti-p-selectin-antistoffer
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
EP3088004B1 (en) 2004-09-23 2018-03-28 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
AU2011265482B2 (en) * 2005-05-06 2013-08-29 Providence Health & Services - Oregon Trimeric OX40L-immunoglobulin fusion protein and methods of use
AU2006244497B2 (en) * 2005-05-06 2011-09-22 Providence Health & Services - Oregon Trimeric OX40L-immunoglobulin fusion protein and methods of use
MX350962B (es) 2008-01-07 2017-09-27 Amgen Inc Metodo para fabricar moleculas heterodimericas de fragmentos cristalizables de anticuerpo, utilizando efectos electrostaticos de direccion.
DK2604693T3 (en) * 2008-07-21 2016-05-30 Apogenix Gmbh Single-chain TNFSF molecules
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
WO2011147834A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Roche Glycart Ag Antibodies against cd19 and uses thereof
CA2828289C (en) 2011-03-29 2020-07-21 Roche Glycart Ag Antibody fc variants
WO2012130471A1 (en) * 2011-04-01 2012-10-04 Universität Stuttgart Recombinant tnf ligand family member polypeptides with antibody binding domain and uses thereof
UA118028C2 (uk) * 2013-04-03 2018-11-12 Рош Глікарт Аг Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування
EP3224275B1 (en) * 2014-11-14 2020-03-04 F.Hoffmann-La Roche Ag Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer
CN114751989A (zh) * 2015-03-31 2022-07-15 豪夫迈·罗氏有限公司 包含三聚体tnf家族配体的抗原结合分子

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101970492A (zh) * 2007-10-31 2011-02-09 Xencor公司 与FcRn结合改变的Fc变体
WO2012020006A2 (en) * 2010-08-13 2012-02-16 Roche Glycart Ag Anti-fap antibodies and methods of use
CN103703129A (zh) * 2011-03-30 2014-04-02 中外制药株式会社 改变抗原结合分子的血浆中滞留性和免疫原性的方法
US20130287802A1 (en) * 2012-04-30 2013-10-31 Biocon Limited Targeted/immunomodulatory fusion proteins and methods for making same
WO2014180754A1 (en) * 2013-05-07 2014-11-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Trimeric antigen binding molecules
WO2015184203A1 (en) * 2014-05-29 2015-12-03 Macrogenics, Inc. Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
WO2015183902A1 (en) * 2014-05-29 2015-12-03 Medimmune, Llc Ox40l fusion proteins and uses thereof

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DAFNE MULLER等: "A Novel Antibody–4-1BBL Fusion Protein for Targeted Costimulation in Cancer Immunotherapy", 《J IMMUNOTHER》 *
EDWIN BREMER: "Targeting of the Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily for Cancer Immunotherapy", 《ISRN ONCOLOGY》 *
柴青等: "激发型鼠抗人4-1BBL单克隆抗体的研制", 《实验动物与比较医学》 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20210009656A1 (en) 2021-01-14
EP3455253A1 (en) 2019-03-20
EP3455253B1 (en) 2021-04-07
EP3243836A1 (en) 2017-11-15
WO2017194438A1 (en) 2017-11-16
JP2019521655A (ja) 2019-08-08
CN109311973B (zh) 2023-04-04
JP7043422B2 (ja) 2022-03-29
US20190194291A1 (en) 2019-06-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2020264337B2 (en) Antigen binding molecules comprising a TNF family ligand trimer
CN109311973B (zh) 含有c端融合的tnf家族配体三聚体的抗原结合分子
US20230340160A1 (en) Bispecific t cell activating antigen binding molecules
RU2761115C1 (ru) Биспецифические антитела, специфические в отношении костимуляторного tnf-рецептора
CN107207579B (zh) 包含三聚体tnf家族配体的抗原结合分子
KR102648966B1 (ko) Folr1 및 cd3에 대한 t 세포 활성화 이중특이적 항원 결합 분자
KR102665542B1 (ko) T 세포 활성화 이중특이적 항원 결합 분자 CD3 ABD 엽산 수용체 1(FolR1) 및 PD-1 축 결합 길항물질의 조합 요법
CN109563146B (zh) 包含tnf家族配体三聚体和pd1结合模块的抗原结合分子
AU2021254602A1 (en) Humanized anti-MUC1* antibodies
AU2016334623A1 (en) Bispecific antibodies with tetravalency for a costimulatory TNF receptor
CN109071652B (zh) 包含tnf家族配体三聚体和生腱蛋白结合模块的抗原结合分子
KR20150122203A (ko) T 세포 활성화 이중특이적 항원 결합 분자
KR20210013156A (ko) 항-cd33 항체, 항-cd33/항-cd3 이중특이성 항체, 및 이의 용도
CN110845618A (zh) 双特异性t细胞活化抗原结合分子
KR20210094673A (ko) 이중특이적 t 세포 활성화 항원 결합 분자
KR20130133300A (ko) 면역접합체
CN110382542A (zh) 针对共刺激性tnf受体的双特异性抗原结合分子

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40003984

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant